(57)【要約】【課題】免疫低下された個体における免疫応答の増強を提供する。【解決手段】本発明は、同等なアジュバント化されていないまたは標準用量ワクチンと比較して、被験体が、ワクチンに含有される同じ抗原（複数可）に対してより優れた免疫応答を誘発することができるように、（ｉ）アジュバント化されたおよび／または（ｉｉ）高用量抗原を含有するワクチン組成物を有効量で被験体に投与することにより、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法、インターフェロン療法および／または抗精神病療法等、免疫調節療法（例えば、薬物療法）のレシピエントを含むある特定の標的集団を免疫化するための方法を提供する。本発明によれば、本明細書に記載されている方法は、有害な免疫抑制を引き起こす薬物療法のために、この方法がなければワクチンに対して所望の免疫応答を生じない被験体に、特に有益な免疫保護をもたらすことができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、全般的に、薬物療法によってまたは他の理由により免疫低下された個体における免疫応答の増強に関する。
【背景技術】
【０００２】
被験体における薬物または他の理由によって誘導される免疫抑制は、被験体の有効なワクチン接種を達成する妨げとなる。例えば、免疫抑制に関連する疾患または障害、年齢（例えば、高齢者）、および個体の免疫応答を抑制または他の仕方で干渉する薬物療法または医学的手技を受けていることを含む種々の理由により、個体が免疫低下され得ることに留意することが重要である。
【０００３】
スタチン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、インターフェロン、ならびにクロザピンおよびハロペリドール等のある特定の抗精神病薬を含む、ある特定の薬物は、患者における免疫調節の発生に関係付けられてきた。斯かる免疫調節効果は、患者、特に、長期治療レジメンを受けている患者における有害なまたは望まれない免疫抑制を含む。
【０００４】
スタチンは、酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを阻害することによるコレステロールレベルの低減に使用される薬物の１クラスである。コレステロールレベル上昇および心血管疾患リスクの間の関連により、また、スタチンがこのリスクを低減し得ることを示す試験により、スタチンは、多数の個体（その大半は老齢の成人）に与えられてきた（Lewington  S、Whitlock  G、Clarke  R、Sherliker  P、Emberson  J、Halsey  J、Qizilbash  N、Peto  R、Collins  R.（２００７年）「Blood  cholesterol  and  vascular  mortality  by  age,  sex,  and  blood  pressure:  a  meta-analysis  of  individual  data  from  61  prospective  studies  with  55,000  vascular  deaths.」Lancet  ３７０巻（９６０２号）：１８２９〜３９頁）。スタチン療法の一次目的は、コレステロールを低減することであったが、この薬物クラスが、免疫調節および抗炎症効果を含む他の効果を有することが認識された（Jain,  M.  K.、およびRidker,  P.  M.（２００５年）「Anti-inflammatory  effects  of  statins:  clinical  evidence  and  basic  mechanisms.」Nature  Reviews  Drug  Discovery、４巻（１２号）：９７７〜９８７頁）。
【０００５】
高齢者および非高齢者集団の両方を含む個体におけるスタチン療法の二次効果は、文献において幾分議論の余地があったが、大部分の試験は、スタチンが免疫調節効果を誘発し得ること、また、斯かる効果が複合的であることを結論付けた。
【０００６】
非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、鎮痛（痛み止め）および解熱（熱冷まし）効果、ならびにより高い用量では抗炎症効果をもたらす薬物の１クラスである。ＮＳＡＩＤは、非ステロイド性抗炎症剤／鎮痛剤（ＮＳＡＩＡ）または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＭ）と称されることもある。疼痛管理の重要性のため、ＮＳＡＩＤの使用は、ここ数十年間で劇的に増加した。しかし、全てのＮＳＡＩＤは、免疫応答の潜在的に望まれない抑制を含む、ある特定の有害効果の可能性を有する。
【０００７】
インターフェロン（ＩＦＮ）は、ウイルス、細菌、寄生生物または腫瘍細胞等、病原体の存在に応答して宿主細胞によって生成および放出されるシグナル伝達タンパク質の一群である。典型的なシナリオにおいて、ウイルスに感染した細胞は、インターフェロンを放出し、近隣の細胞に、その抗ウイルス防御を高めさせるであろう。インターフェロンベータ−１ａおよびインターフェロンベータ−１ｂは、多発性硬化症、自己免疫障害の処置および制御に使用される。この処置は、再発寛解型多発性硬化症における発作の低下ならびに二次性進行型多発性硬化症における疾患進行および活動性の遅延に有効である。
【０００８】
インターフェロン療法を受けている患者によって報告される最も高頻度の有害効果は、インフルエンザ様症状である：体温上昇、気分が悪い、疲労、頭痛、筋痛、痙攣、眩暈、髪が薄くなるおよび抑うつ。紅斑、疼痛および注射スポットにおける硬さも頻繁に観察される。ＩＦＮ療法は、特に好中球減少症を介して免疫抑制を引き起こし、尋常でない仕方で顕在化するいくつかの感染をもたらし得る。ＩＦＮ療法は、インフルエンザ等、ウイルス感染後の二次感染に対する易罹患性増加を示すこともできる。このような場合、一次病原体（インフルエンザウイルス等）および二次病原体（細菌感染等）に同時感染した患者は、二次感染による合併症の発症リスクが上昇している可能性がある。
【０００９】
ある特定の抗精神病化合物は、被験体における免疫抑制を含む副作用を引き起こすことが報告されている。
【００１０】
インターフェロン療法は、一部のがんのための処置として使用される（化学療法および放射線照射と組み合わせて）。［２６］この処置は、血液学的悪性病変；ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄性白血病、結節性リンパ腫および皮膚Ｔ細胞リンパ腫を含む白血病およびリンパ腫の処置に使用することができる。［２６］反復性メラノーマを有する患者は、組換えＩＦＮ−α２ｂを受ける。［２７］Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎は両者共に、ＩＦＮ−αで処置されるが、これは他の抗ウイルス薬と組み合わせることが多い。［２８］［２９］インターフェロンで処置された者の一部は、持続したウイルス学的応答を有し、肝炎ウイルスを排出することができる。最も有害な株であるＣ型肝炎遺伝子型Ｉウイルスは、インターフェロン−α、リバビリンおよびテラプレビル（インシベック）２０１１年５月、ボセプレビル（ビクトレリス）２０１１年５月等の近年承認されたプロテアーゼ阻害剤またはヌクレオチドアナログポリメラーゼ阻害剤ソホスブビル（ソバルディ）２０１３年１２月による現在の標準治療処置により、６０〜８０％成功率で処置することができる［３０］。処置を与えた患者の生検は、肝臓の損傷および硬変の低下を示す。いくつかの証拠は、感染直後のインターフェロン投与が、慢性Ｃ型肝炎を予防することができるが、初期Ｃ型肝炎感染における身体的症状が希薄であることから、感染初期の診断が困難であることを示す。ＩＦＮによる慢性Ｃ型肝炎の制御は、肝細胞癌の低下に関連する。［３１］
【００１１】
単純ヘルペスウイルス上皮角膜炎を患う個体においてインターフェロン処置を評価した。局所インターフェロン療法は、特により高濃度では、有効な処置であることが示された。［３２］単独でまたはデブリードマンと組み合わせて使用されるインターフェロンは、ヌクレオシド抗ウイルス剤と同程度有効であると思われる。［３２］インターフェロンおよび別のヌクレオシド抗ウイルス剤の組合せは、治癒過程を加速させることができる。［３２］
全身性療法において使用される場合、ＩＦＮは、大抵は筋肉内注射によって投与される。筋肉または皮下におけるＩＦＮの注射は、一般に耐容性が良い。最も高頻度の有害効果は、インフルエンザ様症状である：体温上昇、気分が悪い、疲労、頭痛、筋痛、痙攣、眩暈、髪が薄くなるおよび抑うつ。紅斑、疼痛および注射スポットにおける硬さも頻繁に観察される。ＩＦＮ療法は、特に好中球減少症を介して免疫抑制を引き起こし、尋常でない仕方で顕在化するいくつかの感染をもたらし得る。［３３］
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Lewington  S、Whitlock  G、Clarke  R、Sherliker  P、Emberson  J、Halsey  J、Qizilbash  N、Peto  R、Collins  R.（２００７年）「Blood  cholesterol  and  vascular  mortality  by  age,  sex,  and  blood  pressure:  a  meta-analysis  of  individual  data  from  61  prospective  studies  with  55,000  vascular  deaths.」Lancet  ３７０巻（９６０２号）：１８２９〜３９頁
【非特許文献２】Jain,  M.  K.、およびRidker,  P.  M.（２００５年）「Anti-inflammatory  effects  of  statins:  clinical  evidence  and  basic  mechanisms.」Nature  Reviews  Drug  Discovery、４巻（１２号）：９７７〜９８７頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
現在までに、当技術分野において、これらの薬物の薬物動態と、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける免疫機能の様々な側面におけるこれらのモジュレート効果との間の相互関係、また、患者における健康の管理全体において斯かる効果をどのように考慮に入れるべきかに関するコンセンサスは存在していない。
【００１４】
現在、ある特定のワクチン組成物および／またはワクチンレジメンを有効に使用して、その免疫系が損なわれた個体において望ましい免疫応答を増強し得ることが判明した。特に、本発明は、スタチン療法等、ある特定の療法中である患者集団が、ワクチンに対する免疫原性低下を示し、アジュバント化（adjuvanted）ワクチン（例えば、水中油型アジュバントと共に製剤化されたワクチン）および／または高用量抗原の使用が、斯かるワクチンに対する免疫応答を回復またはさらには増強し得るという認識を含む。
【００１５】
広義では、本発明は、１つまたは複数の理由によりその免疫系が損なわれた被験体の免疫化について記載する。したがって、本発明は、同等なアジュバント化されていないまたは標準用量ワクチンと比較して、被験体が、ワクチンに含有される同じ抗原（複数可）に対してより優れた免疫応答を誘発することができるように、（ｉ）アジュバント化されたおよび／または（ｉｉ）高用量抗原を含有するワクチン組成物を有効量で被験体に投与することにより、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法、インターフェロン療法および／または抗精神病療法等、免疫調節療法（例えば、薬物療法）のレシピエントを含むある特定の標的集団を免疫化するための方法を提供する。本発明によれば、本明細書に記載されている方法は、有害な免疫抑制を引き起こす薬物療法のために、この方法がなければワクチンに対して所望の免疫応答を生じない被験体に、特に有益な免疫保護をもたらすことができる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
被験体における免疫応答を増強するためのワクチンであって、
該ワクチンが、（ａ）アジュバント、（ｂ）高用量抗原、または（ａ）および（ｂ）の組合せを含み、
該被験体が、スタチン療法中であるワクチン。
（項目２）
前記アジュバントが、アルミニウム塩アジュバントまたは水中油型エマルションアジュバントである、項目１に記載のワクチン。
（項目３）
前記水中油型エマルションアジュバントが、スクアレンを含み、任意選択で、該水中油型エマルションアジュバントが、界面活性剤をさらに含む、項目１または２に記載のワクチン。
（項目４）
前記水中油型アジュバントが、スクアレン、ポリソルベート８０およびソルビタントリオレエートを含み、
該水中油型アジュバントが、重量で約４．３％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０および約０．４８％ソルビタントリオレエートを任意選択で含む、
項目１〜３のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目５）
標準用量抗原の量の１／８〜１０倍の間の量、任意選択で、標準用量抗原の量の２倍〜１０倍の間の量を含む、項目１〜４のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目６）
前記ワクチンが、インフルエンザワクチンであり、該インフルエンザワクチンが、任意選択で、多価インフルエンザワクチンである、項目１〜５のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目７）
前記インフルエンザワクチンが、株当たり約３０μｇ〜約１５０μｇの間の抗原、任意選択で、株当たり約６０μｇの抗原を含む、項目５または６に記載のワクチン。
（項目８）
前記インフルエンザワクチンが、Ｈ１Ｎ１株、Ｈ３Ｎ２株、Ｂ株またはこれらのいずれかの組合せを含む、項目６または７に記載のワクチン。
（項目９）
水中油型エマルションアジュバントを含有しない、項目１〜８のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目１０）
前記被験体が、
ａ）現在、スタチン療法中であり、任意選択で、該被験体が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間もしくはそれよりも長くスタチン療法中である、
ｂ）現在はスタチン療法中ではないが、最近の３カ月間以内にスタチン療法を受けることが終了した、または
ｃ）現在はスタチン療法中ではないが、今後３カ月間にスタチン療法を受けることを予定している、
項目１〜９のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目１１）
前記被験体が、
ａ）６５歳もしくはそれを超える、
ｂ）６０歳もしくはそれを超える、
ｃ）４５〜６４歳の間である、または
ｄ）１８〜６４歳の間である、
項目１〜１０のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目１２）
前記被験体が、免疫障害に関連する疾患または障害を有する、項目１〜１１のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目１３）
前記スタチン療法が、合成スタチン、非合成スタチンまたはこれらの組合せを含み、
任意選択で、該スタチン療法が、
プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチンおよびメバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチン
からなる群から選択されるスタチンを含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載のワクチン。
（項目１４）
前記スタチン療法が、
フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチン
からなる群から選択される合成スタチンを含む、項目１３に記載のワクチン。
【００１６】
したがって、本発明は、「リスクあり（at-risk）」であると考慮される被験体のワクチン接種に適している。一部の実施形態では、リスクあり判断基準として、次のいずれかについて確認された病歴を有する個体が挙げられるが、これらに限定されない：内分泌障害、慢性心血管疾患、慢性肺疾患、慢性腎または肝疾患、神経学的および神経発生的状態、血液障害、代謝障害、衰弱した免疫系、肥満、長期アスピリン療法および／または上に収載されている療法のいずれかを受けること。一部の実施形態では、リスクあり被験体は、一次感染後の二次感染の発症に対する易罹患性がより高いこと、また、同時感染（すなわち、一次および二次感染）による合併症発症のリスクがより高いことを特徴とする。特定の理論に制約されることは望まないが、インフルエンザ感染等、一次感染は、免疫抑制により、人の二次感染に対する易罹患性をより高くする可能性があると考えられる。その結果、被験体は、典型的に（atypically）重篤な二次感染を発症し得る。一部の実施形態では、二次感染は、細菌感染、例えば、呼吸器感染、皮膚感染等である。よって、本発明は、その後により有効に二次感染と戦うように被験体の免疫系をブーストすることができる、アジュバント、高用量抗原またはこれらの組合せを含む保護的インフルエンザワクチンの使用により、斯かる免疫抑制効果に対抗することを目標とする。よって、一部の実施形態では、リスクあり被験体におけるインフルエンザ感染からのより優れた保護は、二次感染による合併症を発症する被験体の確率をより低くする。
【００１７】
一部の実施形態では、本発明は、ワクチン抗原（複数可）に対する防御免疫応答を誘発するのに有効な量で、インフルエンザワクチンをリスクあり被験体に投与するための方法を提供する。好ましくは、斯かるインフルエンザワクチンは、アジュバント化ワクチンである。被験体が、複数用量のインフルエンザ免疫化（例えば、プライミング用量およびブースター用量）を受ける状況において、アジュバント化されたインフルエンザワクチンは、１用量または複数用量において、いずれかの順序で投与することが可能である。例えば、プライミング用量は、アジュバント化されていなくてよいが、その後のブースター用量は、アジュバント化されていてよい、またはその逆もまた同じである。
【００１８】
一部の実施形態では、本発明は、ワクチン抗原（複数可）に対する防御免疫応答を誘発するのに有効な量で、インフルエンザワクチンを、免疫抑制を引き起こす療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法、インターフェロン療法、抗精神病療法等）を受けている被験体に投与するための方法を提供する。好ましくは、斯かるインフルエンザワクチンは、アジュバント化ワクチンである。被験体が、複数用量のインフルエンザ免疫化（例えば、プライミング用量およびブースター用量）を受ける状況において、アジュバント化されたインフルエンザワクチンは、１用量または複数用量において、いずれかの順序で投与することが可能である。例えば、プライミング用量は、アジュバント化されていなくてよいが、その後のブースター用量は、アジュバント化されていてよい、またはその逆もまた同じである。
【００１９】
本発明は、免疫抑制を引き起こす療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法、インターフェロン療法、抗精神病療法等）を受けている被験体を含む、被験体における免疫応答を増強するための方法における使用のための関連するワクチン組成物をさらに提供する。本発明の一部の実施形態では、斯かるワクチン組成物は、アジュバントと共に製剤化される。好ましいアジュバントは、スクアレンを含むアジュバント等、水中油型エマルションに基づくアジュバントを含む。それに加えてまたはそれに代えて、本発明のワクチン組成物は、高用量抗原、標準用量抗原または低用量抗原を含むことができる。関連するキットについても記載されている。
【００２０】
本発明は、スタチン処置患者のためのインフルエンザワクチン、特に、スタチン処置患者、好ましくは、合成スタチンで処置した患者のためのアジュバント化または高用量インフルエンザワクチンも提供する。一部の実施形態では、患者は、６５歳またはそれを超える。代替的な実施形態では、患者は、６５歳未満であるが１８歳またはそれを超える（すなわち、１８〜６４歳の間）。
【００２１】
本発明は、スタチン処置患者における使用のためのインフルエンザワクチン、特に、スタチン処置患者、好ましくは、合成スタチンで処置した患者における使用のためのアジュバント化または高用量インフルエンザワクチンを含む。一部の実施形態では、患者は、６５歳またはそれを超える。代替的な実施形態では、患者は、６５歳未満であるが１８歳またはそれを超える（すなわち、１８〜６４歳の間）。
【００２２】
本発明は、スタチン処置患者等、リスクあり被験体におけるインフルエンザの予防のためのインフルエンザワクチン、特に、スタチン処置患者、好ましくは、合成スタチンで処置した患者におけるインフルエンザの予防のためのアジュバント化または高用量インフルエンザワクチンをさらに含む。一部の実施形態では、患者は、６５歳またはそれを超える。代替的な実施形態では、患者は、６５歳を下回るが１８歳またはそれを超える（すなわち、１８〜６４歳の間）。
【００２３】
本発明は、また、医薬としての使用のための本発明の組成物を提供し、スタチン処置した被験体、好ましくは、合成スタチンで処置した患者において免疫応答を生じるための医薬の製造のための本発明の組成物の使用を提供する。一部の実施形態では、患者は、６５歳またはそれを超える。代替的な実施形態では、患者は、６５歳未満であるが１８歳またはそれを超える（すなわち、１８〜６４歳の間）。
【００２４】
本発明は、アジュバント化または高用量インフルエンザワクチンを製造するための方法をさらに提供し、それにより、次のステップが実行される：インフルエンザウイルスが、卵または適した細胞株において生育される；ウイルスが、収集および精製され、任意選択で、ウイルスがスプリットされ、抗原が単離される；任意選択で、ウイルスまたは抗原が、最終ワクチンとして製剤化および充填され、それにより、ワクチンは、スタチン処置患者、好ましくは、合成スタチンで処置した患者における使用のためのものとなる。一部の実施形態では、患者は、６５歳またはそれを超える。代替的な実施形態では、患者は、６５歳未満であるが１８歳またはそれを超える（すなわち、１８〜６４歳の間）。
【００２５】
アジュバントが、本明細書におけるインフルエンザ抗原と組み合わせて使用される場合、ワクチンの抗原構成成分およびアジュバント構成成分は、予め混合されていても、あるいは、投与前にエンドユーザー／医療提供者が混合するために別々の容器において提供されてもよい。抗原構成成分およびアジュバント構成成分は、同じ生産拠点または異なる生産拠点で生産することができる。本発明の一態様は、アジュバント構成成分と共にキットにおいて製剤化および／またはパッケージングするための抗原構成成分（複数可）の使用であり、このキットは、スタチン処置した患者、好ましくは、合成スタチンで処置した患者における使用のためのものである。本発明の別の態様は、スタチン処置した患者、好ましくは、合成スタチンで処置した患者等、リスクあり患者における使用のための、抗原構成成分と共にキットにおいて製剤化および／またはパッケージングするためのアジュバント構成成分の使用である。一部の実施形態では、患者は、６５歳またはそれを超える。代替的な実施形態では、患者は、６５歳を下回るが１８歳またはそれを超える（すなわち、１８〜６４歳の間）。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
多数の因子が、被験体における免疫機能の１つまたは複数の側面の機能障害を引き起こして、被験体を免疫低下させることができる。スタチン、ＮＳＡＩＤ、インターフェロンおよび抗精神病薬等、ある特定の薬物療法は、望まれない免疫モジュレーションを引き起こすことが公知である。本開示の文脈において、語句「免疫抑制を引き起こす療法」は、望まれない免疫抑制効果によって特徴付けられる副作用を伴う医学的介入または処置を指す（refers  tp）。斯かる療法の非限定例として、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法、インターフェロン療法、抗精神病療法等が挙げられる。
【００２７】
スタチンは、高コレステロール血症の処置に使用される薬物の１クラスであり、心血管疾患のリスク低下に頻繁に使用される。しかし、スタチンは、インフルエンザワクチンを含む、スタチン療法中の個体におけるワクチン応答に影響を与え得る、ある特定の免疫調節効果を発揮することが報告された。同様に、ある特定の状態を処置または軽減するために広く投与される他の薬物も、免疫抑制的副作用を伴う。
【００２８】
本明細書においてさらに詳述する通り、スタチン療法中であるまたは療法中でない個体から得られる、アジュバント化された対アジュバント化されていないインフルエンザワクチンの免疫原性測定値は、スタチン療法を受けていない対照個体と比較して、スタチンを受けている個体におけるスタチンの有意な免疫抑制効果を明らかにした。後述でさらに実証する通り（後述の例証（EXAMPLIFICATION）セクションを参照）、ワクチン免疫応答におけるスタチンのこのような免疫抑制効果は、合成スタチンを受けている個体において特に劇的である。これらの効果は、アジュバント化されたおよびアジュバント化されていないワクチン群の両方において観察される。しかし際だったことに、ワクチン応答におけるスタチン療法のマイナスの影響は、アジュバント化ワクチンおよび／または高用量抗原（単数または複数）の使用によって少なくとも部分的に相殺され得る。
【００２９】
したがって、本発明は、その免疫系が損なわれている被験体、例えば、免疫抑制されたまたは免疫抑制発症のリスクがある被験体におけるワクチンに対する免疫応答を増強するための方法を提供する。斯かる方法は、斯かる被験体への、ワクチンに対するその免疫応答の増強に有効な量での、（ｉ）アジュバント化されている、（ｉｉ）１種または複数の高用量抗原を含有する、のいずれかであるワクチン組成物の投与を含む。
【００３０】
免疫調節療法
本明細書において、「免疫調節療法」は、患者における免疫応答にモジュレーションを引き起こす、薬物療法等のいずれかの医学的介入を指す。斯かるモジュレート効果は、ワクチンに対する免疫応答の低下を引き起こし、該療法のレシピエントを、感染または関連する疾患に対してより易罹患性の状態にしておくことができる、免疫抑制を含む。免疫調節療法の例として、スタチン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、インターフェロン、抗精神病薬等が挙げられる。
【００３１】
スタチン
本明細書において、スタチンは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤として一般に公知の薬物の１クラスを指し、同等な生物学的活性（すなわち、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ活性を阻害する能力）を有する他の化合物も包含する。本開示において参照されるスタチンは、非合成（例えば、発酵由来または天然起源）または合成となることができる。非合成スタチンの非限定例として、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチンおよびメバスタチンが挙げられる。合成スタチンの非限定例として、フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチンが挙げられる。いずれかのスタチンを組み合わせて使用して、同時に、または別々にただし互いに併用して投与することができる。スタチンは、少なくとも１種のスタチンおよび少なくとも１種の非スタチン化合物を含む組合せ製剤として投与することもできる。スタチン含有製品の例として、ＡＤＶＩＣＯＲ（登録商標）（ナイアシン徐放およびロバスタチン）、ＣＡＤＵＥＴ（登録商標）（アムロジピンベシル酸塩／アトルバスタチンカルシウム）、ＶＹＴＯＲＩＮ（登録商標）（シンバスタチンおよびエゼチミブ）およびＳＩＭＣＯＲ（登録商標）（シンバスタチンナイアシン徐放）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
したがって「スタチン療法」は、スタチン（単数または複数）が投与される原因である特定の状態に関係なく、単独での、またはいずれかの組合せでの、１種または複数のスタチンを含むレジメンを指す。一部の実施形態では、スタチン療法は、少なくとも１種の合成スタチンを含む。
【００３３】
ＮＳＡＩＤ
通常、ＮＳＡＩＤと省略される非ステロイド性抗炎症薬は、鎮痛（痛み止め）および解熱（熱冷まし）効果、ならびにより高用量では抗炎症効果をもたらす薬物の１クラスである。ＮＳＡＩＤは、その化学構造または作用機序に基づき分類することができる。典型的には、より古いＮＳＡＩＤは、その作用機序が解明されるよりも相当に以前から公知であり、そのため、化学構造または起源によって分類された。他方では、より新しい物質は、作用機序によって分類されることが多い。
【００３４】
ＮＳＡＩＤの非限定例として、サリチル酸塩（例えば、アスピリン（アセチルサリチル酸）、ジフルニサル（Ｄｏｌｏｂｉｄ（商標））、サルサレート（Salsalate）（Ｄｉｓａｌｃｉｄ（商標））およびトリサリチル酸コリンマグネシウム（Ｔｒｉｌｉｓａｔｅ（商標）））；プロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、デクスイブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジンおよびロキソプロフェン）；酢酸誘導体（例えば、インドメタシン、トルメチン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、ジクロフェナク、アセクロフェナクおよびナブメトン）；エノール酸（Enolic  acid）（オキシカム（Oxicam））誘導体（例えば、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカムおよびイソキシカム（Isoxicam））；アントラニル酸誘導体（フェナム酸塩）（例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸およびトルフェナム酸）；選択的ＣＯＸ−２阻害剤（コキシブ）（例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、エトリコキシブおよびフィロコキシブ（Firocoxib））；スルホンアニリド（Sulfonanilide）（例えば、ニメスリド）、ならびにリコフェロン（Licofelone）、Ｈ−ハルパジド（harpagide）およびリシンクロニキシネート（clonixinate）等のその他が挙げられる。
【００３５】
インターフェロン
市場に出回っている治療用インターフェロンの非限定例として、インターフェロンアルファ２ａ（例えば、Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ａ）；インターフェロンアルファ２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ／Ｒｅｌｉｆｅｒｏｎ／Ｕｎｉｆｅｒｏｎ）；ヒト白血球インターフェロン−アルファ（ＨｕＩＦＮ−アルファ−Ｌｅ）（Ｍｕｌｔｉｆｅｒｏｎ）；インターフェロンベータ１ａ、液状（Ｒｅｂｉｆ）；インターフェロンベータ１ａ、凍結乾燥型（Ａｖｏｎｅｘ）；インターフェロンベータ１ａ、バイオジェネリック（イラン（Iran））（Ｃｉｎｎｏｖｅｘ）；インターフェロンベータ１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ）；インターフェロンガンマ１ｂ（Ａｃｔｉｍｍｕｎｅ）；ペグ化インターフェロンアルファ２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ）；ペグ化インターフェロンアルファ２ａ（エジプト）（Ｒｅｉｆｅｒｏｎ  Ｒｅｔａｒｄ）；ペグ化インターフェロンアルファ２ｂ（ＰｅｇＩｎｔｒｏｎ）；およびペグ化インターフェロンアルファ２ｂプラスリバビリン（カナダ）（Ｐｅｇｅｔｒｏｎ）が挙げられる。
【００３６】
抗精神病薬および抗うつ薬
免疫抑制を引き起こし得る抗精神病薬および／または抗うつ薬の非限定例として、クロザピン、ハロペリドールならびにセロトニン受容体および／またはドーパミン受容体の阻害剤が挙げられる。追加の例として、ＳＢ−２５８７１９（ＧＳＫから入手できる中性５ＨＴ７Ｒアンタゴニスト）、ＳＢ−２５８７４１（「ＡＦＺ」；ＧＳＫから入手できる部分的インバース５ＨＴ７Ｒアゴニスト）、ＳＢ−２６９９７０（ＧＳＫから入手できる頑強な５ＨＴ７Ｒインバースアゴニスト）、リスペリドン（Ｄ１およびＤ２ドーパミン受容体のアンタゴニストならびに５ＨＴ７セロトニン受容体のインバースアゴニスト；Ｈ１およびＨ２ヒスタミン受容体のインバースアゴニストでもある）、セルチンドール（Ｄ２、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ２Ｃ、５−ＨＴ６、５−ＨＴ７、Ｄ３、ａ１に結合）；ジプラシドン（Ｄ２、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ１Ａ、５−ＨＴ１Ｄ、５−ＨＴ２Ｃ、５−ＨＴ７、Ｄ３、ａ１、ＮＲＩ、ＳＲＩに結合）；ロキサピン（Ｄ２、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ６、５−ＨＴ７、Ｄ１、Ｄ４、ａ１、Ｍ１、Ｈ１、ＮＲＩに結合）；ゾテピン（Ｄ２、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ２Ｃ、５−ＨＴ６、５−ＨＴ７、Ｄ１、Ｄ３、Ｄ４、ａ１、Ｈ１、ＮＲＩに結合）；クロザピン（Ｄ２、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ１Ａ、５−ＨＴ３、５−ＨＴ６、５−ＨＴ７、Ｄ１、Ｄ３、Ｄ４、ａ１、ａ２、Ｍ１、Ｈ１に結合）；オランザピン（Ｄ２、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ２Ｃ、５−ＨＴ３、５−ＨＴ６、Ｄ１、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５、ａ１、Ｍ１−５、Ｈ１に結合）、クエチアピン（Ｄ２、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ６、５−ＨＴ７、ａ１、ａ２、Ｈ１に結合）；プロメタジン（５ＨＴ２ａ／ｃセロトニン受容体およびドーパミンＤ２受容体に対し弱い〜中等度親和性を有する、Ｈ１ヒスタミン受容体の強力なアンタゴニスト；Ｎａ＋チャネルの遮断薬でもある）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定のイオンチャネル遮断薬も適する場合がある。例として、ジブカイン（ブチンエステラーゼ（butynesterase）阻害剤）等、脂質輸送および代謝に関与する電位依存性Ｎａ＋チャネルおよびコリンエステラーゼの阻害剤および遮断薬；電位開口型Ｌ型カルシウムチャネルの阻害剤および遮断薬（ニモジピン等）；アプリンジン（クラス１ｂ抗不整脈膜安定化剤）、アミロライド（上皮ナトリウムチャネルＥＮａＣの直接的な遮断薬）等、ナトリウムチャネルの阻害剤および遮断薬；ならびにイブチリドヘミフマル酸塩（hemifumarate）（クラスＩＩＩ抗不整脈剤）等、遅延型内向き整流性カリウムチャネルおよびＬ型カルシウムチャネルの阻害剤および遮断薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
被験体
用語「被験体」、「患者」および「個体」は、本明細書において互換的に使用することができる。既に暗示されている通り、本明細書に記載されている方法および組成物は、免疫低下された被験体または免疫抑制発症のリスクがある被験体の免疫化に有用である。記載されている方法および組成物は、被験体を感染に対し脆弱にし得るある特定の薬物療法により免疫抑制されたまたは免疫抑制発症のリスクがある被験体における、十分な免疫保護の誘発に特に有用である。
【００３８】
よって、本発明の文脈において、適した標的集団は、ある特定の療法、特に長期療法中の被験体を含む。これは、被験体の年齢に関係なく、スタチンの長期使用を含むスタチン療法中の被験体を含む。これは、被験体の年齢に関係なく、ＮＳＡＩＤの長期使用を含むＮＳＡＩＤ療法中の被験体も含む。標的集団は、２種以上の斯かる療法中の被験体も含む。例えば、被験体は、１種もしくは複数のスタチン療法、１種もしくは複数のＮＳＡＩＤ療法または両者の組合せを受けていてよい。
【００３９】
個体の免疫系が、正しく機能していない場合、個体は一般に、「免疫低下した」と言われる。よって、「免疫低下した被験体」は、宿主関連の、医学関連のまたは薬理学関連の因子のいずれかにより、適切な免疫応答を誘発する能力が低下した被験体である。免疫低下した個体は、免疫抑制（例えば、衰弱した免疫）、免疫不全、変更したもしくは過活動の免疫系、自己免疫またはこれらのいずれかの組合せ等、免疫系の１種または複数の機能障害を示すことができる。よって、免疫低下した個体は、十分に免疫適格性ではない。
【００４０】
一部の集団群において、被験体は、特異的な疾患または障害に関連するのではなく、加齢に伴う状態等、正常な発生の一部として免疫低下し得る。例えば、非常に若年の小児（例えば、乳児）および高齢者は、十分に免疫適格性ではないと考慮することができる。本発明において、特に興味深い標的集団は、現在免疫調節療法（例えば、スタチン、ＮＳＡＩＤ等を服用）中である個体、免疫調節療法（例えば、スタチン、ＮＳＡＩＤ等を服用）を近年受けた個体と共に、免疫調節療法（例えば、スタチン、ＮＳＡＩＤ等を服用）、例えば、合成スタチンを含む療法を開始しようとするまたはこれを予定する個体を含む。斯かる患者亜集団のいずれかは、「免疫調節療法中である」、例えば、「スタチン療法中である」とまとめて言うことができる。一部の実施形態では、標的集団は、少なくとも１種の合成スタチン中の個体を含むまたはからなる。
【００４１】
一部の実施形態では、被験体は、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間またはそれよりも長く、免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）中であった（およびそうであり続ける）。一部の実施形態では、被験体は、上述の通り、以前に免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）中であったが、この６週間、５週間、４週間、３週間、２週間、１週間、６日間、５日間、４日間、３日間または２日間以内に斯かる療法を止めた。さらに他の実施形態では、被験体は、未だ免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）中ではないが、翌日、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１０日間、２週間、３週間、４週間、５週間または６週間以内に斯かる療法を始めることを予定しているまたはそれをしようとする。免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）の長期または慢性使用は、包括的に少なくとも４週間の持続時間を指すことができる。
【００４２】
本開示の文脈において、被験体が、抑制された免疫応答を含む状態を発症する傾向を有する場合、または被験体が、免疫抑制のリスク上昇または損なわれた免疫系を有することに対する易罹患性に関連する集団のためのある特定の判断基準を満たす場合、被験体は、「免疫抑制のリスクがある」ことを理解されたい。用語「易罹患性」は、一般的な集団において観察されるものよりも、何らかの、すなわち、疾患、障害または状態（例えば、損なわれた免疫応答等）のリスクおよび／または傾向が増加すること（典型的には、年齢、遺伝的素因、環境因子、個人歴またはこれらの組合せに基づく）を意味する。例えば、免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）を開始しようとする被験体は、免疫抑制のリスクがあるため、ワクチンに対する免疫応答をブーストするために、本明細書に記載されている方法から利益を得ることができる。
【００４３】
被験体は、ある特定の判断基準に基づいて選択することができる（すなわち、標的集団）。一例として、スタチンレシピエントのうち、少なくとも１種の合成スタチンに関連する個体の集団は、非合成スタチンに関連するものよりも免疫抑制のリスクが高い可能性がある。
【００４４】
ある特定の疾患および障害は、罹患個体における免疫障害に関連することが公知である。免疫障害は、抑制された免疫系、過活動免疫系、自己免疫またはこれらのいずれかの組合せが関与し得る。免疫抑制は、一次免疫欠損および二次または後天性免疫欠損を限定することなく含む。一次免疫欠損は、遺伝的異常に起因し得る。二次または後天性免疫欠損は一般的に、ＡＩＤＳ等のある特定の疾患と共に、スタチン、ＮＳＡＩＤ、化学療法剤または臓器移植後に投与される免疫抑制剤等のある特定の薬物による一時的後天性免疫欠損に関連する。被験体の免疫系は、喫煙、アルコール消費および栄養不足を含むある特定の生活条件または環境因子によっても衰弱し得る。
【００４５】
例えば、標的集団は、乳児および高齢者被験体等、ある一年齢群の被験体からなることができる。本明細書において、「高齢者被験体」は、６５歳またはそれを超えるヒト個体である。「乳児」は、０〜１２カ月齢の間（０は新生児）、例えば、０〜３カ月齢の間、０〜６カ月齢の間、０〜９カ月齢の間および６〜１２カ月齢の間のヒト個体である。一部の実施形態では、標的集団は、１８〜６５歳の間、１８〜６０歳の間、１８〜５５歳の間、１８〜５０歳の間、１８〜４５歳の間、４５〜６５歳の間、４５〜６０歳の間、１８〜２４歳の間、１８〜３５歳の間等のヒト被験体からなることができる。斯かる標的集団のうちいずれか１種において、被験体は、慢性または遺伝的疾患または障害および薬物療法／治療法を限定することなく含む、少なくとも１種のリスク因子にさらに関連することができる。
【００４６】
一部の実施形態では、適した被験体は、非高齢者被験体、例えば、６５歳未満のヒト個体である。別の実施形態では、被験体は、６５歳を下回るが１８歳またはそれを超える。斯かる被験体は、免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）、例えば、少なくとも１種の合成スタチンを取り込むスタチン療法中となることができる。
【００４７】
本明細書において、「免疫応答の増強」は、例えば、当技術分野で公知のまたは受け入れられているいずれか適した方法によって測定される、免疫原性の改善または増大が関与し得る。「増強された免疫応答」は、１種の測定または測定の組合せにおける免疫応答の統計的に有意な増大が、ある特定の判断基準を満たす被験体集団、すなわち、標的集団の中で観察されたときに達成される。標的集団は、免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）中の個体からなることができる。一部の実施形態では、斯かる集団のサブセットは、年齢群等、個体の特定のカテゴリーを表すことができる。語句「免疫応答のブースト」は、被験体における以前に予備刺激された免疫応答の増強を指すことができる。
【００４８】
アジュバント
「アジュバント化ワクチン」は、１種または複数のアジュバントを含む。したがって、一部の実施形態では、本発明の組成物は、この組成物を受ける患者において誘発される免疫応答（体液性および／または細胞性）を増強するように機能することができるアジュバントを含む。有用なアジュバントとして、アルミニウム塩に基づくアジュバント（例えば、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウム）、Ｔｏｌｌ様受容体のアゴニスト（例えば、ヒトＴＬＲ１アゴニスト、ヒトＴＬＲ２アゴニスト、ヒトＴＬＲ３アゴニスト、ヒトＴＬＲ４アゴニスト、ヒトＴＬＲ５アゴニスト、ヒトＴＬＲ６アゴニスト、ヒトＴＬＲ７アゴニスト、ヒトＴＬＲ８アゴニスト、ヒトＴＬＲ９アゴニストおよびヒトＴＬＲ１０アゴニスト）、エマルションに基づくアジュバントおよびビロソーム等のウイルス様粒子に基づくアジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
一部の実施形態では、本発明による使用のためのワクチンアジュバントは、水中油型エマルションを含む。
【００５０】
水中油型エマルションは、インフルエンザウイルスワクチン等、ウイルスワクチンを含むワクチンのアジュバント化における使用に特に適することが判明した。様々な斯かるエマルションは、公知であり、典型的に、少なくとも１種の油および少なくとも１種の界面活性剤を含み、このような油（複数可）および界面活性剤（複数可）は、生分解性（代謝可能）かつ生体適合性である。エマルション中の油滴は、一般に、５μｍ未満の直径であり、理想的には、エマルション中の油滴の大部分は、サブミクロン直径を有し（例えば、油滴数で少なくとも９０％は、サブミクロン直径を有し）、このような小さいサイズは、マイクロフルイダイザー（microfluidiser）により達成されて、安定的なエマルションをもたらす。濾過滅菌に付すことができるため、２２０ｎｍ未満（例えば、２２０ｎｍ未満、２００ｎｍ未満、１９０ｎｍ未満、１８０ｎｍ未満、１７０ｎｍ未満、１６０ｎｍ未満、１５０ｎｍ未満、１４０ｎｍ未満、１３０ｎｍ未満、１２０ｎｍ未満、１１０ｎｍ未満、１００ｎｍ未満等）のサイズを有する液滴が好ましい。例えば、適した水中油型エマルションは、約１００〜２００ｎｍ、約１１０〜２００ｎｍ、約１２０〜２００ｎｍ、約１３０〜２００ｎｍ、約１４０〜２００ｎｍ、約１００〜１９０ｎｍ、１００〜１８０ｎｍ、１００〜１７０ｎｍ、１００〜１６０ｎｍ、１００〜１５０ｎｍ、１３０〜１９０ｎｍ、１３５〜１８５ｎｍ、１４０〜１８０ｎｍ、１４５〜１７５ｎｍまたは１５０〜１７０ｎｍの間に及ぶ平均油滴サイズを有するものを含む。
【００５１】
エマルションは、動物（魚類等）または植物源由来の油等、油を含むことができる。植物油の供給源は、堅果、種子および穀物を含む。最も一般的に利用できるものとして、ピーナッツ油、ダイズ油、ココナツ油およびオリーブ油が、堅果油を例証する。例えば、ホホバ豆から得られるホホバ油を使用することができる。種子油は、ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ種子油等を含む。穀物群において、トウモロコシ油は、最も容易に利用できるが、コムギ、カラスムギ、ライムギ、イネ、テフ、ライコムギその他等、他の穀類の油を使用することもできる。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０炭素脂肪酸エステルは、種子油において天然には発生しないが、堅果および種子油から出発して、適切な材料の加水分解、分離およびエステル化により調製することができる。哺乳動物のミルク由来の脂肪および油は、代謝可能であり、したがって、本発明の実施において使用することができる。動物源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、けん化および他の手段のための手順は、当技術分野で周知である。大部分の魚類は、容易に回収することができる代謝可能な油を含有する。例えば、タラ肝油、サメ肝油および鯨ろう等の鯨油は、本明細書において使用することができる魚油のいくつかを例証する。多数の分枝鎖油は、５炭素イソプレン単位において生化学的に合成され、一般に、テルペノイドと称される。サメ肝油は、本明細書において特に好ましいスクアレン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエン（tetracosahexaene）として公知の分枝不飽和テルペノイドを含有する。スクアレンの飽和アナログであるスクアランもまた、好ましい油である。スクアレンおよびスクアランを含む魚油は、商業的供給源から容易に入手することができる、または当技術分野で公知の方法によって得ることができる。他の好ましい油は、トコフェロール（後述を参照）である。油の混合物を使用することができる。
【００５２】
界面活性剤は、その「ＨＬＢ」（親水性／親油性バランス）によって分類することができる。本発明の好ましい界面活性剤は、少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６のＨＬＢを有する。本発明は、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般的に、Ｔｗｅｅｎと称される）、特に、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０；直鎖状ＥＯ／ＰＯブロックコポリマー等、ＤＯＷＦＡＸ（商標）の商品名で販売されるエチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー；反復するエトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が変動し得るオクトキシノール、オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が特に興味深い；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；ホスファチジルコリン（レシチン）等、リン脂質；Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）ＮＰシリーズ等、ノニルフェノールエトキシレート；トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ  ３０）等、ラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知）；ならびにソルビタントリオレエート（trioleate）（Ｓｐａｎ  ８５）およびソルビタンモノラウレート等、ソルビタンエステル（一般的に、ＳＰＡＮとして公知）が挙げられるが、これらに限定されない、界面活性剤と共に使用することができる。非イオン性界面活性剤が好ましい。エマルションに含むのに好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ  ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートまたはポリソルベート８０）、Ｓｐａｎ  ８５（ソルビタントリオレエート）、レシチンおよびＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００である。
【００５３】
界面活性剤の混合物、例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０／Ｓｐａｎ  ８５混合物を使用することができる。ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）等のポリオキシエチレンソルビタンエステルと、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）等のオクトキシノールとの組合せも適している。別の有用な組合せは、ラウレス９プラスポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールを含む。
【００５４】
界面活性剤の好ましい量（重量％）を次に示す：ポリオキシエチレンソルビタンエステル（ポリソルベート８０等）０．０１〜１％、特に、約０．１％；オクチルまたはノニルフェノキシポリオキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他の洗剤等）０．００１〜０．１％、特に、０．００５〜０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（ラウレス９等）０．１〜２０％、好ましくは、０．１〜１０％、特に、０．１〜１％または約０．５％。
【００５５】
好ましいエマルションアジュバントは、＜１μｍ、例えば、＜７５０ｎｍ、＜５００ｎｍ、＜４００ｎｍ、＜３００ｎｍ、＜２５０ｎｍ、＜２２０ｎｍ、＜２００ｎｍ、＜１９０ｎｍ、＜１８０ｎｍ、＜１７０ｎｍ、＜１６０ｎｍ、＜１５０ｎｍまたはそれよりも小さい平均液滴サイズを有する。このような液滴サイズは、マイクロフルイダイゼーションおよび適した濾過等の技法によって簡便に達成することができる（例えば、その内容を本明細書に援用する、国際特許公開：ＷＯ２０１１／０６７６６９、ＷＯ２０１１／０６７６７３およびＷＯ２０１１／０６７６７２を参照）。
【００５６】
本発明に有用な具体的な水中油型エマルションアジュバントの例を下に示す：
・  スクアレン、ポリソルベート８０およびソルビタントリオレエートのサブミクロンエマルション。これら３種の構成成分は、１０：１：１の容量比または３９：４７：４７の重量比で存在することができる。容量によるエマルションの組成は、約５％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０および約０．５％ソルビタントリオレエートとなることができる。重量単位では、これらの比は、４．３％＞スクアレン、０．５％＞ポリソルベート８０および０．４８％＞ソルビタントリオレエートになる。このアジュバントは、以前に記載された通り、「ＭＦ５９」として公知である。ＭＦ５９エマルションは、クエン酸イオン、例えば、１０ｍＭクエン酸ナトリウムバッファー等のバッファーを有利に含むことができる。
・  スクアレン、トコフェロールおよびポリソルベート８０のエマルション。エマルションは、リン酸緩衝食塩水を含むことができる。これは、Ｓｐａｎ  ８５（例えば、１％＞で）および／またはレシチンを含むこともできる。このようなエマルションは、２〜１０％＞スクアレン、２〜１０％＞トコフェロールおよび０．３〜３％＞ポリソルベート８０を有することができ、スクアレン：トコフェロールの重量比は、より安定的なエマルションをもたらすことから、好ましくは＜１である。スクアレンおよびポリソルベート８０は、約５：２の容量比または約１１：５の重量比で存在することができる。よって、３種の構成成分（スクアレン、トコフェロール、ポリソルベート８０）は、１０６８：１１８６：４８５または５５：６１：２５前後の重量比で存在することができる。斯かるエマルションの１種（「ＡＳ０３」）は、ＰＢＳにＴｗｅｅｎ  ８０を溶解して２％＞溶液を得て、続いてこの溶液の９０ｍｌを（５ｇのＤＬ−ａ−トコフェロールおよび５ｍｌスクアレン）の混合物と混合し、続いてこの混合物をマイクロフルイダイズすることによって作製することができる。その結果得られるエマルションは、例えば、１００〜２５０ｎｍの間、好ましくは、約１８０ｎｍの平均直径を有するサブミクロン油滴を有することができる。エマルションは、３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３ｄ−ＭＰＬ）を含むこともできる。この型の別の有用なエマルションは、ヒト用量当たり、０．５〜１０ｍｇスクアレン、０．５〜１１ｍｇトコフェロールおよび０．１〜４ｍｇポリソルベート８０を、例えば上記に論じた比で含むことができる。
・  スクアレン、トコフェロールおよびＴｒｉｔｏｎ洗剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）のエマルション。このエマルションは、３ｄ−ＭＰＬ（後述を参照）を含むこともできる。これは、リン酸塩バッファー等のバッファーを含有することができる。
・  ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎ洗剤（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）およびトコフェロール（例えば、ａ−トコフェロールコハク酸塩）を含むエマルション。このエマルションは、これら３種の構成成分を約７５：１１：１０の質量比で（例えば、７５０μｇ／ｍｌポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌ  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および１００μｇ／ｍｌ  ａ−トコフェロールコハク酸塩）含むことができ、これらの濃度は、抗原からのこれらの構成成分の何らかの寄与を含むべきである。このエマルションは、スクアレンを含むこともできる。このエマルションは、３ｄ−ＭＰＬ（後述を参照）を含むこともできる。水相は、リン酸塩バッファー等のバッファーを含有することができる。
・  スクアラン、ポリソルベート８０およびポロクサマー４０１（「プルロニック（商標）Ｌ１２１」）のエマルション。このエマルションは、リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４において製剤化することができる。このエマルションは、ムラミルジペプチドに有用な送達媒体であり、「ＳＡＦ−１」アジュバントにおいてスレオニル−ＭＤＰと共に使用されてきた（０．０５〜１％Ｔｈｒ−ＭＤＰ、５％スクアラン、２．５％プルロニックＬ１２１および０．２％ポリソルベート８０）。これは、「ＡＦ」アジュバントにおけるものとして、Ｔｈｒ−ＭＤＰなしで使用することもできる（５％スクアラン、１．２５％プルロニックＬ１２１および０．２％＞ポリソルベート８０）。マイクロフルイダイゼーションが好ましい。
・  スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）および疎水性非イオン性界面活性剤（例えば、モノオレイン酸ソルビタンまたは「Ｓｐａｎ  ８０」等のソルビタンエステルまたはマンニド（mannide）エステル）を含むエマルション。このエマルションは、好ましくは、熱可逆性である、および／または２００ｎｍ未満のサイズを有する少なくとも９０％の油滴（容量で）を有する。このエマルションは、アルジトール；凍結保護剤（例えば、ドデシルマルトシドおよび／またはショ糖等の糖）；および／またはアルキルポリグリコシドのうち１種または複数を含むこともできる。このエマルションは、ＴＬＲ４アゴニストを含むことができる。斯かるエマルションは、凍結乾燥することができる。
・  スクアレン、ポロクサマー１０５およびＡｂｉｌ−Ｃａｒｅのエマルション。アジュバント化ワクチンにおけるこれらの構成成分の最終濃度（重量）は、５％スクアレン、４％ポロクサマー１０５（プルロニックポリオール）および２％Ａｂｉｌ−Ｃａｒｅ  ８５（Ｂｉｓ−ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６  ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６ジメチコン；トリカプリル／トリカプリン酸グリセリル（caprylic/capric  triglyceride））である。
・  ０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質および０．０５〜５％の非イオン性界面活性剤を有するエマルション。好ましいリン脂質構成成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロン液滴サイズが有利である。
・  代謝不能な油（軽油等）および少なくとも１種の界面活性剤（レシチン、Ｔｗｅｅｎ  ８０またはＳｐａｎ  ８０等）のサブミクロン水中油型エマルション。ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン−親油性コンジュゲート（グルクロン酸のカルボキシル基を介したデスアシル（desacyl）サポニンへの脂肪族アミンの付加によって産生されるＧＰＩ−０１００等）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（dimethyidioctadecylammonium）ブロミドおよび／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミン等、添加物が含まれていてもよい。
・  サポニン（例えば、ＱｕｉｌＡおよびＱＳ２１）およびステロール（例えば、コレステロール）がらせん状ミセルとして会合したエマルション。
・  鉱物油、非イオン性親油性エトキシ化脂肪アルコールおよび非イオン性親水性界面活性剤（例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含むエマルション。
・  鉱物油、非イオン性親水性エトキシ化脂肪アルコールおよび非イオン性親油性界面活性剤（例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含むエマルション。
【００５７】
一部の実施形態では、エマルションは、送達時に、即時に抗原と混合することができるため、アジュバントおよび抗原は、使用時に最終製剤の用意が出来る状態で、パッケージングまたは分配されたワクチンにおいて別々に維持することができる。他の実施形態では、エマルションは、製造の際に抗原と混合されるため、組成物は、ＦＬＵＡＤ（商標）製品と同様に、液体アジュバント化形態でパッケージングされる。２種の液体を混合することによってワクチンが最終的に調製されるように、抗原は一般に、水性形態である。混合用の２種の液体の容量比は、変動し得る（例えば、５：１〜１：５の間）が、一般に、約１：１である。構成成分の濃度が、具体的なエマルションに関する上述に示されている場合、これらの濃度は、典型的に、無希釈組成物に関するものであるため、抗原溶液との混合後の濃度は減少することになる。
【００５８】
抗原およびアジュバントが混合された後に、赤血球凝集素抗原は、一般に、水溶液中に残るであろうが、油／水界面の周囲に分布することができる。一般に、赤血球凝集素は、エマルションの油相にほとんど進入せず、進入するとしてもごく僅かであろう。
【００５９】
組成物が、トコフェロールを含む場合、α、β、γ、δ、εまたはξトコフェロールのうちいずれかを使用することができる（単独でまたは組み合わせて）が、α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールは、数種類の形態、例えば、異なる塩および／または異性体を取ることができる。塩は、コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩等、有機塩を含む。Ｄ−ａ−トコフェロールおよびＤＬ−ａ−トコフェロールは、両者共に使用することができる。トコフェロールは、高齢患者（例えば、６０歳もしくはそれを超えるまたは６５歳もしくはそれを超える年齢）における使用のためのワクチンに有利に含まれるが、その理由は、ビタミンＥが、この患者群における免疫応答においてプラスの効果を有することが報告されたからである。これは、エマルションの安定化に役立ち得る抗酸化特性も有する。好ましいａ−トコフェロールは、ＤＬ−ａ−トコフェロールであり、このトコフェロールの好ましい塩は、コハク酸塩である。コハク酸塩は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴＮＦ関連のリガンドと協同することが見出された。さらに、ａ−トコフェロールコハク酸塩は、インフルエンザワクチンと適合性であり、水銀化合物の代替として有用な保存料であることが公知である。
【００６０】
高用量ワクチン
本開示の文脈において、高用量ワクチンは、標準用量ワクチンに含有される同じ抗原の量の少なくとも約２倍の、例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍および１０倍の（あるいは、それぞれ２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×および１０×と表現することができる）抗原（すなわち、免疫原）を含有するワクチンを指す。標準用量ワクチンは、高用量または低用量と特に標識または販売されている訳ではない、典型的に市販されているワクチンである。インフルエンザワクチンの場合、標準用量は、株当たり約１５μｇの抗原である（さらなる詳細については後述を参照）。
【００６１】
インフルエンザウイルス抗原
本発明は、被験体を免疫化するために、赤血球凝集素を典型的に含むインフルエンザウイルス抗原を使用する。抗原は、典型的には、インフルエンザビリオンから調製されるであろうが、代替として、赤血球凝集素等の抗原は、組換え宿主において（例えば、バキュロウイルスベクターを使用して、昆虫細胞株において）発現させて、精製形態で使用することができる。しかし一般に、抗原は、ビリオンに由来することができる。
【００６２】
抗原は、生きたウイルスまたはより好ましくは、不活性化されたウイルスの形態を取ることができる。ウイルスを不活性化するための化学的手段は、次の薬剤のうち１種または複数の有効量による処理を含む：洗剤、ホルムアルデヒド、ホルマリン、β−プロピオラクトンまたはＵＶ光。不活性化のための追加的な化学的手段は、メチレンブルー、ソラレン、カルボキシフラーレン（Ｃ６０）またはこれらのいずれかの組合せによる処理を含む。例えば、バイナリーエチルアミン、アセチルエチレンイミンまたはガンマ線照射等、ウイルス不活性化の他の方法は、当技術分野で公知である。ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品は、全ビリオン不活性化ワクチンである。
【００６３】
不活性化されたウイルスが使用される場合、ワクチンは、全ビリオン、スプリットビリオンまたは精製された表面抗原（赤血球凝集素を含み、通常、ノイラミニダーゼも含む）を含むことができる。
【００６４】
不活性化されているが非全細胞のワクチン（例えば、スプリットウイルスワクチンまたは精製された表面抗原ワクチン）は、この抗原内に位置する追加的なＴ細胞エピトープから利益を得るために、マトリックスタンパク質を含むことができる。よって、赤血球凝集素およびノイラミニダーゼを含む非全細胞ワクチン（特に、スプリットワクチン）は、Ｍ１および／またはＭ２マトリックスタンパク質をその上含むことができる。核タンパク質が存在していてもよい。
【００６５】
ビリオンは、様々な方法によってウイルス含有液から収集することができる。例えば、精製プロセスは、ビリオンを破壊するために洗剤を含む直線ショ糖勾配溶液を使用した、ゾーン遠心分離を含むことができる。続いて、ダイアフィルトレーションにより、任意選択の希釈後に抗原を精製することができる。
【００６６】
スプリットビリオンは、洗剤および／または溶媒で精製されたビリオンを処理して、サブビリオン調製物を産生することにより得られ、これは、「Ｔｗｅｅｎ−エーテル」スプリットプロセスを含む。インフルエンザウイルスをスプリットする方法は、当技術分野で周知である。ウイルスのスプリットは、典型的に、感染性であれ非感染性であれ、破壊濃度のスプリット剤により、全ウイルスを破壊または断片化することによって行われる。破壊は、ウイルスタンパク質の完全または部分的な可溶化をもたらし、ウイルスの統合性を変更する。好ましいスプリット剤は、非イオン性およびイオン性（例えば、カチオン性）界面活性剤である。適したスプリット剤として、エチルエーテル、ポリソルベート８０、デオキシコール酸塩、トリ−Ｎ−ブチルリン酸塩、アルキルグリコシド、アルキルチオグリコシド、アシル糖、スルホベタイン、ベタイン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジアルキル−グルカミド（Glucamide）、ヘカメグ（Hecameg）、アルキルフェノキシ−ポリエトキシエタノール、第四級アンモニウム化合物、サルコシル、ＣＴＡＢ（セチルトリメチルアンモニウム臭化物）、トリ−Ｎ−ブチルリン酸塩、セタブロン（Cetavlon）、ミリスチルトリメチルアンモニウム塩、リポフェクチン、リポフェクタミンおよびＤＯＴ−ＭＡ、オクチルまたはノニルフェノキシポリオキシエタノール（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００またはＴｒｉｔｏｎ  Ν１０１等、Ｔｒｉｔｏｎ界面活性剤）、ノノキシノール９（ΝΡ９）Ｓｙｍｐａｔｅｎｓ−ＮＰ／０９０）、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（Ｔｗｅｅｎ界面活性剤）、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレン（polyoxyethlene）エステル等が挙げられるが、これらに限定されない。有用なスプリット手順の１種は、デオキシコール酸ナトリウムおよびホルムアルデヒドの継続的効果を使用し、スプリットは、初期ビリオン精製において（例えば、ショ糖密度勾配溶液中で）行うことができる。よって、スプリットプロセスは、ビリオン含有材料の清澄化（非ビリオン材料を除去するため）、収集されたビリオンの濃縮（例えば、ＣａＨＰ０４吸着等、吸着方法を使用）、非ビリオン材料からの全ビリオンの分離、密度勾配遠心分離ステップにおけるスプリット剤を使用したビリオンのスプリット（例えば、デオキシコール酸ナトリウム等のスプリット剤を含有するショ糖勾配を使用）およびその後に、望まれない材料を除去するための濾過（例えば、限外濾過）を含むことができる。スプリットビリオンは、リン酸ナトリウムで緩衝した等張性塩化ナトリウム溶液において有用に再懸濁することができる。ＢＥＧＲＩＶＡＣ（商標）、ＦＬＵＡＲＩＸ（商標）、ＦＬＵＺＯＮＥ（商標）およびＦＬＵＳＨＩＥＬＤ（商標）製品は、スプリットワクチンである。
【００６７】
精製された表面抗原ワクチンは、インフルエンザ表面抗原、赤血球凝集素を含み、典型的には、ノイラミニダーゼも含む。これらのタンパク質を精製形態で調製するためのプロセスは、当技術分野で周知である。ＦＬＵＶＩＲＩＮ（商標）、ＡＧＲＩＰＰＡＬ（商標）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ（商標）製品は、サブユニットワクチンである。
【００６８】
不活性化インフルエンザ抗原の別の形態は、ビロソーム（核酸フリーのウイルス様リポソーム粒子）である。ビロソームは、洗剤によるインフルエンザウイルスの可溶化と、続くヌクレオカプシドの除去およびウイルス糖タンパク質を含有する膜の再構成により調製することができる。ビロソームを調製するための代替方法は、ウイルス膜糖タンパク質を過剰量のリン脂質に添加して、その膜にウイルスタンパク質を有するリポソームを得ることを含む。本発明は、ＩＮＦＬＥＸＡＬ  Ｖ（商標）製品と同様に、バルクビロソームの貯蔵に使用することができる。一部の実施形態では、インフルエンザ抗原は、ビロソームの形態ではない。
【００６９】
インフルエンザウイルスは、弱毒化されていてよい。インフルエンザウイルスは、温度感受性であってよい。インフルエンザウイルスは、低温適応されていてよい。これら３種の特色は、ワクチン抗原として生きたウイルスを使用する場合に特に有用である。
【００７０】
現在利用できる不活性化インフルエンザワクチンに関して、ＨＡが主な免疫原であり、ワクチン用量は、典型的にはＳＲＩＤによって測定される、ＨＡレベルの参照により標準化される。現存しているワクチンは、典型的には、株当たり約１５μｇのＨＡを含有するが、例えば、小児用に、またはパンデミック状況において、またはアジュバントと併用して使用する際には、より低用量を使用することができる。より高用量（例えば、２×、３×または９×用量）と同様に、１／２（例えば、株当たり７．５μｇ  ＨＡ）、１／４および１／８等、分数の用量が使用されてきた。
【００７１】
よって、本発明のワクチンは、約０．１〜約１５０μｇの間の抗原を含むことができる。例えば、インフルエンザ株当たりのＨＡは、好ましくは、０．１〜５０μｇの間、例えば、０．１〜２０μｇ、０．１〜１５μｇ、０．１〜１０μｇ、０．１〜７μｇ、０．５〜５μｇ等である。特定の用量は、株当たり例えば、約４５μｇ、約３０μｇ、約１５μｇ、約１０μｇ、約７．５μｇ、約５μｇ、約３．８μｇ、約１．９μｇ、約１．５μｇ等を含む。
【００７２】
生ワクチンに関して、投薬は、ＨＡ含量よりも中位組織培養感染性用量（ＴＣＩＤ５０）によって測定され、株当たり１０６〜１０８の間（好ましくは１０６．５〜１０７．５の間）のＴＣＩＤ５０が典型的である。
【００７３】
本明細書において、「高用量インフルエンザワクチン」は、株当たり１５μｇの抗原（例えば、ＨＡ）を典型的に含有する標準用量ワクチンとは対照的に、株当たり約３０μｇ〜１５０μｇの間の抗原（例えば、ＨＡ）を含有することができる。よって、一部の実施形態では、高用量ワクチンは、株当たり約３０μｇ、約３５μｇ、約４０μｇ、約４５μｇ、約５０μｇ、約５５μｇ、約６０μｇ、約６５μｇ、約７０μｇ、約７５μｇ、約８０μｇ、約８５μｇ、約９０μｇ、約１００μｇ、約１１０μｇ、約１２０μｇ、約１３０μｇ、約１４０μｇ、約１５０μｇの抗原を含有する。
【００７４】
他方では、「低用量インフルエンザワクチン」は、株当たり１５μｇ未満の抗原（例えば、ＨＡ）、例えば、約１２．５μｇ、約１０μｇ、約７．５μｇ、約５μｇ、約４μｇ、約３μｇ、約２．５μｇを含有するワクチン組成物を指す。一部の実施形態では、高用量ワクチン、標準用量ワクチンおよび低用量ワクチンのいずれかをアジュバント化することができる。
【００７５】
ワクチンにおける使用のためのインフルエンザウイルス株は、季節毎に変化する。現在の大流行間期の期間において、ワクチンは、典型的には、２種のインフルエンザＡ型の株（Ｈ１Ｎ１およびＨ３Ｎ２）および１種または２種のインフルエンザＢ型の株を含み、本発明による使用に関して、三価または四価ワクチンが典型的である。本発明の組成物は、インフルエンザＢ型ウイルス由来の抗原を含み、少なくとも１種のインフルエンザＡ型ウイルス由来の抗原を任意選択で含む。本発明の組成物が、インフルエンザＡ型ウイルス（複数可）由来の抗原を含む場合、本発明は、季節性および／またはパンデミック株を使用することができる。季節およびワクチンに含まれる抗原の性質に応じて、本発明は、インフルエンザＡ型ウイルス赤血球凝集素サブタイプＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５またはＨ１６のうち１種または複数を含む（およびこれから保護する）ことができる。ワクチンは、ＮＡサブタイプＮ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ４、Ｎ５、Ｎ６、Ｎ７、Ｎ８またはＮ９のいずれかに由来するノイラミニダーゼをその上含むことができる。
【００７６】
よって、本発明は、パンデミックインフルエンザＡ型ウイルス株と共に使用することができる。パンデミック株の特徴：（ａ）ワクチンレシピエントおよび一般的ヒト集団が、当該株の赤血球凝集素に対して免疫学的にナイーブとなるような、現在循環しているヒト株における赤血球凝集素と比較して、新しい赤血球凝集素、すなわち、十年間超にわたってヒト集団において明らかではない（例えば、Ｈ２）、またはヒト集団においてこれまで全く見られたことがない（例えば、一般に、鳥類集団のみにおいて見出されたＨ５、Ｈ６またはＨ９）赤血球凝集素を含有する；（ｂ）ヒト集団において水平に伝播することができる；ならびに（ｃ）ヒトに対して病原性である。パンデミック株として、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ７またはＨ９サブタイプ株、例えば、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ３、Ｈ９Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ７Ｎ１およびＨ７Ｎ７株が挙げられるが、これらに限定されない。Ｈ５サブタイプ内において、ウイルスは、多数のクレード、例えば、クレード１またはクレード２に分けることができる。クレード２の６種のサブクレードが同定されており、サブクレード１、２および３は、別々の地理的分布を有し、ヒト感染におけるその関係により特に関連性がある。
【００７７】
インフルエンザＢ型ウイルスは現在、異なるＨＡサブタイプを呈していないが、インフルエンザＢ型ウイルス株は、２種の別々の系列に分けられる。これらの系列は、１９８０年代後半に出現し、互いに抗原性によりおよび／または遺伝的に区別することができるＨＡを有する。現在のインフルエンザＢ型ウイルス株は、Ｂ／ビクトリア／２／８７様またはＢ／山形／１６／８８様のいずれかである。これらの株は通常、抗原性により区別されるが、２系列を区別するためのアミノ酸配列の差についても記載されており、例えば、Ｂ／山形／１６／８８様株は、アミノ酸残基１６４（「Ｌｅｅ４０」ＨＡ配列と比べて番号を振る）に欠失を有するＨＡタンパク質を有することが多い（ただし、必ずしもそうであるとは限らない）。本発明は、いずれかの系列のＢ型ウイルス由来の抗原、または両方の系列由来の抗原と共に使用することができる。
【００７８】
ワクチンが、インフルエンザの２種以上の株を含む場合、異なる株は、典型的に、別々に生育され、ウイルスが収集され抗原が調製された後に混合される。よって、本発明の製造プロセスは、２種以上のインフルエンザ株由来の抗原を混合するステップを含むことができる。
【００７９】
本発明により使用されるインフルエンザウイルスは、リアソータント株となることができ、逆遺伝学技法によって得ることができる。逆遺伝学技法は、所望のゲノムセグメントを有するインフルエンザウイルスが、プラスミドを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製されることを可能にする。典型的には、この技法は、細胞における両方の種類のＤＮＡの発現が、完全インタクトな感染性ビリオンのアセンブリをもたらすように、（ａ）例えば、ｐｏｌ  ＩプロモーターまたはバクテリオファージＲＮＡポリメラーゼプロモーターから、所望のウイルスＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ分子、および（ｂ）例えば、ｐｏｌ  ＩＩプロモーターから、ウイルスタンパク質をコードするＤＮＡ分子を発現させることを含む。ＤＮＡは、好ましくは、ウイルスＲＮＡおよびタンパク質の全てを提供するが、ヘルパーウイルスを使用して、ＲＮＡおよびタンパク質の一部を提供することも可能である。各ウイルスＲＮＡを産生するために別々のプラスミドを使用した、プラスミドに基づく方法を使用することができ、これらの方法は、ウイルスタンパク質の全てまたは一部（例えば、ＰＢ１、ＰＢ２、ＰＡおよびＮＰタンパク質のみ）を発現させるためのプラスミドの使用も含み、一部の方法においては、最大１２種のプラスミドが使用されるであろう。必要とされるプラスミドの数を低下させるために、近年のアプローチは、同じプラスミドにおいて複数のＲＮＡポリメラーゼＩ転写カセット（ウイルスＲＮＡ合成用の）（例えば、１、２、３、４、５、６、７または全８種のインフルエンザＡ型ｖＲＮＡセグメントをコードする配列）を、別のプラスミドにおいてＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターによる複数のタンパク質コード領域（例えば、１、２、３、４、５、６、７または全８種のインフルエンザＡ型ｍＲＮＡ転写物をコードする配列）を組み合わせる。本発明の一部の実施形態では、方法は、（ａ）単一のプラスミドにおけるＰＢ１、ＰＢ２およびＰＡ  ｍＲＮＡコード領域；ならびに（ｂ）単一のプラスミドにおける全８種のｖＲＮＡコードセグメントを含む。１個のプラスミドにＮＡおよびＨＡセグメントを含み、別のプラスミドに６種の他のセグメントを含むことにより、問題を容易にすることもできる。
【００８０】
ウイルスＲＮＡセグメントをコードするためのｐｏｌ  Ｉプロモーターの使用の代替として、バクテリオファージポリメラーゼプロモーターを使用することが可能である。例えば、ＳＰ６、Ｔ３またはＴ７ポリメラーゼのためのプロモーターを簡便に使用することができる。ｐｏｌ  Ｉプロモーターの種特異性のため、バクテリオファージポリメラーゼプロモーターは、多くの細胞型（例えば、ＭＤＣＫ）にとってより簡便になることができるが、細胞は、外因的ポリメラーゼ酵素をコードするプラスミドによってもトランスフェクトされなくてはならない。
【００８１】
他の技法において、デュアルｐｏｌ  Ｉおよびｐｏｌ  ＩＩプロモーターを使用して、単一の鋳型からウイルスＲＮＡおよび発現可能ｍＲＮＡを同時にコードすることが可能である。
【００８２】
よって、インフルエンザＡ型ウイルスは、Ａ／ＰＲ／８／３４ウイルス由来の１種または複数のＲＮＡセグメントを含むことができる（典型的には、Ａ／ＰＲ／８／３４由来の６種のセグメントであり、ＨＡおよびＮセグメントは、ワクチン株に由来する、すなわち、６：２リアソータント）。これは、Ａ／ＷＳＮ／３３ウイルス由来の、またはワクチン調製のためのリアソータントウイルスの作出に有用な他のいずれかのウイルス株由来の１種または複数のＲＮＡセグメントを含むこともできる。インフルエンザＡ型ウイルスは、ＡＡ／６／６０インフルエンザウイルス（Ａ／アナーバー／６／６０）由来の６種未満（例えば、０、１、２、３、４または５種）のウイルスセグメントを含むことができる。インフルエンザＢ型ウイルスは、ＡＡ／１／６６インフルエンザウイルス（Ｂ／アナーバー／１／６６）由来の６種未満（例えば、０、１、２、３、４または５種）のウイルスセグメントを含むことができる。典型的には、本発明は、ヒトからヒトへと伝播することができる株から保護し、このような株のゲノムは、哺乳動物（例えば、ヒト）インフルエンザウイルスに起源をもつ少なくとも１種のＲＮＡセグメントを通常含むであろう。これは、トリインフルエンザウイルスに起源をもつＮＳセグメントを含むことができる。
【００８３】
その抗原が本組成物に含まれ得る株は、抗ウイルス療法に対して抵抗性となることができ（例えば、オセルタミビルおよび／またはザナミビルに対し抵抗性）、抵抗性パンデミック株を含む。
【００８４】
本発明により使用されるＨＡは、ウイルスに見出される天然ＨＡであっても、あるいは改変されていてもよい。例えば、トリ種においてウイルスを高度に病原性にする決定基（例えば、ＨＡ１およびＨＡ２の間の切断部位周囲の超塩基性（hyper-basic）領域）を除去するためにＨＡを改変することが公知であるが、その理由として、この操作を行わなければ、このような決定基が、卵におけるウイルスの生育を防止し得ることが挙げられる。
【００８５】
抗原の供給源として使用されるウイルスは、卵（例えば、特異的な病原体フリーの卵）または細胞培養物のいずれかにおいて生育することができる。インフルエンザウイルス生育のための現在の標準方法は、発育鶏卵を使用し、ウイルスは、卵の内容物（尿膜腔液）から精製される。しかしさらに近年では、ウイルスは、動物細胞培養物において生育されるようになり、スピードおよび患者アレルギーの理由から、この生育方法が好ましい。
【００８６】
細胞株は、典型的には、哺乳動物起源となるであろう。起源の適した哺乳動物細胞として、ハムスター、ウシ、霊長類（ヒトおよびサルを含む）およびイヌ細胞が挙げられるが、これらに限定されない、ただし、霊長類細胞の使用は、好ましくない。腎臓細胞、線維芽細胞、網膜細胞、肺細胞等、様々な細胞型を使用することができる。適したハムスター細胞の例は、ＢＨＫ２１またはＨＫＣＣの名称を有する細胞株である。適したサル細胞は、例えば、Ｖｅｒｏ細胞株と同様に腎臓細胞等、アフリカミドリザル細胞である。適したイヌ細胞は、例えば、ＣＬＤＫおよびＭＤＣＫ細胞株と同様に腎臓細胞である。
【００８７】
よって、適した細胞株として、ＭＤＣＫ；ＣＨＯ；ＣＬＤＫ；ＨＫＣＣ；２９３Ｔ；ＢＨＫ；Ｖｅｒｏ；ＭＲＣ−５；ＰＥＲ．Ｃ６；ＦＲｈＬ２；ＷＩ−３８；等が挙げられるが、これらに限定されない。適した細胞株は、例えば、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（American  Type  Cell  Culture）（ＡＴＣＣ）コレクション、コリエル細胞レポジトリー（Coriell  Cell  Repositories）または欧州細胞カルチャーコレクション（European  Collection  of  Cell  Cultures）（ＥＣＡＣＣ）から幅広く入手することができる。例えば、ＡＴＣＣは、カタログ番号ＣＣＬ−８１、ＣＣＬ−８１．２、ＣＲＬ−１５８６およびＣＲＬ−１５８７の下に様々な異なるＶｅｒｏ細胞を供給し、カタログ番号ＣＣＬ−３４の下にＭＤＣＫ細胞を供給する。ＰＥＲ．Ｃ６は、寄託番号９６０２２９４０の下にＥＣＡＣＣから入手することができる。
【００８８】
最も好ましい細胞株は、哺乳動物型グリコシル化を有する細胞株である。哺乳動物細胞株のあまり好ましくない代替として、ウイルスは、アヒル（例えば、アヒル網膜）または雌鶏（hen）に由来する細胞株を含むトリ細胞株において生育することができる。トリ細胞株の例として、トリ胚性幹細胞およびアヒル網膜細胞が挙げられる。適したトリ胚性幹細胞は、ニワトリ胚性幹細胞に由来するＥＢｘ細胞株、ＥＢ４５、ＥＢ１４およびＥＢ１４−０７４を含む。ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）を使用することもできる。しかし、トリ細胞を使用するよりも、哺乳動物細胞の使用の方が、ワクチンが、トリＤＮＡおよび卵タンパク質（オボアルブミンおよびオボムコイド等）を含まず、これにより、アレルゲン性を低下させることができることを意味する。
【００８９】
インフルエンザウイルスの生育に最も好ましい細胞株は、メイディン・ダービー・イヌ腎臓に由来するＭＤＣＫ細胞株である。オリジナルのＭＤＣＫ細胞株は、ＣＣＬ−３４としてＡＴＣＣから入手することができるが、この細胞株の派生体を使用することもできる。例えば、ＭＤＣＫ細胞株は、懸濁培養における生育に適応されている（「ＭＤＣＫ  ３３０１６」、ＤＳＭ  ＡＣＣ  ２２１９として寄託）。同様に、無血清培養において懸濁して生育する、ＭＤＣＫ由来細胞株が開発された（「Ｂ−７０２」、ＦＥＲＭ  ＢＰ−７４４９として寄託）。「ＭＤＣＫ−Ｓ」（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６５００）、「ＭＤＣＫ−ＳＦ１０１」（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６５０１）、「ＭＤＣＫ−ＳＦ１０２」（ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−６５０２）および「ＭＤＣＫ−ＳＦ１０３」（ＰＴＡ−６５０３）を含む、非腫瘍原性ＭＤＣＫ細胞について記載されている。「ＭＤＣＫ．５Ｆ１」細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１２０４２）を含む、感染に対し高い易罹患性を有するＭＤＣＫ細胞株が開発された。これらのＭＤＣＫ細胞株のいずれを使用してもよい。
【００９０】
ウイルスは、接着培養または懸濁下の細胞において生育することができる。マイクロキャリア培養を使用することもできる。よって、一部の実施形態では、細胞は、懸濁下の生育に適応させることができる。
【００９１】
細胞株は、好ましくは、無血清培養培地および／または無タンパク質培地において生育される。培地は、本発明の文脈において、ヒトまたは動物起源の血清由来の添加物が存在しない無血清培地と称される。斯かる培養において生育する細胞それ自体はタンパク質を天然に含有するが、無タンパク質培地は、タンパク質、増殖因子、他のタンパク質添加物および非血清タンパク質の排除により細胞の増殖が起こるが、ウイルス生育に必要となり得るトリプシンまたは他のプロテアーゼ等のタンパク質を任意選択で含むことができる培地を意味するものと理解される。
【００９２】
インフルエンザウイルス複製を支持する細胞株は、好ましくは、ウイルス複製の際に、３７℃を下回って（例えば、３０〜３６℃または約３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃で）生育される。
【００９３】
培養細胞においてインフルエンザウイルスを繁殖させるための方法は、一般に、細胞培養物に、生育しようとする株の接種材料を接種するステップと、例えば、ウイルス力価または抗原発現によって決定される通り（例えば、接種後２４〜１６８時間の間）等、ウイルス繁殖のための所望の期間、感染細胞を培養するステップと、繁殖したウイルスを捕集するステップとを含む。培養細胞には、ウイルス（ＰＦＵまたはＴＣＩＤ５０によって測定）対細胞比１：５００〜１：１、好ましくは１：１００〜１：５、より好ましくは１：５０〜１：１０で接種する。ウイルスは、細胞懸濁液に添加される、または細胞単層にアプライされ、ウイルスは、少なくとも６０分間、ただし通常３００分間未満、好ましくは９０〜２４０分間の間、２５℃〜４０℃、好ましくは２８℃〜３７℃で細胞において吸収される。感染細胞培養物（例えば、単層）を、凍結融解または酵素作用のいずれかにより除去して、収集された培養上清のウイルス含量を増加させることができる。次に、収集された液体を不活性化する、または凍結貯蔵する。培養細胞は、約０．０００１〜１０、好ましくは０．００２〜５、より好ましくは０．００１〜２の感染多重度（「ｍ．ｏ．ｉ．」）で感染させることができる。さらにより好ましくは、細胞は、約０．０１のｍ．ｏ．ｉ．で感染させる。感染細胞は、感染３０〜６０時間後に収集することができる。好ましくは、細胞は、感染３４〜４８時間後に収集される。さらにより好ましくは、細胞は、感染３８〜４０時間後に収集される。プロテアーゼ（典型的にはトリプシン）は、一般に、細胞培養中に添加されてウイルスを放出させるが、プロテアーゼは、培養中のいずれか適したステージにおいて、例えば、接種前に、接種と同時に、または接種後に添加することができる。
【００９４】
好ましい実施形態では、特に、ＭＤＣＫ細胞により、細胞株は、４０集団倍加レベルを越えてマスター作業用細胞バンクから継代されない。
【００９５】
ウイルス接種材料およびウイルス培養物は、好ましくは、単純ヘルペスウイルス、呼吸器多核体ウイルス、パラインフルエンザウイルス３、ＳＡＲＳコロナウイルス、アデノウイルス、ライノウイルス、レオウイルス、ポリオーマウイルス、ビルナウイルス、サーコウイルスおよび／またはパルボウイルスを含まない（すなわち、その混入に関して検査したら、陰性結果が得られるであろう）。単純ヘルペスウイルスの非存在が特に好ましい。
【００９６】
ウイルスが、細胞株において生育された場合、ＤＮＡのいかなる発癌活性も最小化するために、最終ワクチンにおける残渣細胞株ＤＮＡの量を最小化することが標準的習慣である。
【００９７】
よって、本発明に従って調製されるワクチン組成物は、好ましくは、用量当たり１０ｎｇ未満（好ましくは、１ｎｇ未満、より好ましくは１００ｐｇ未満）の残渣宿主細胞ＤＮＡを含有するが、微量の宿主細胞ＤＮＡが存在していてもよい。
【００９８】
０．２５ｍｌ容量当たり＜１０ｎｇ（例えば、＜１ｎｇ、＜１００ｐｇ）宿主細胞ＤＮＡを含有するワクチンと同様に、１５μｇの赤血球凝集素当たり＜１０ｎｇ（例えば、＜１ｎｇ、＜１００ｐｇ）宿主細胞ＤＮＡを含有するワクチンが好ましい。
【００９９】
０．５ｍｌ容量当たり＜１０ｎｇ（例えば、＜１ｎｇ、＜１００ｐｇ）宿主細胞ＤＮＡを含有するワクチンと同様に、５μｇの赤血球凝集素当たり＜１０ｎｇ（例えば、＜１ｎｇ、＜１００ｐｇ）宿主細胞ＤＮＡを含有するワクチンがより好ましい。
【０１００】
いずれかの残渣宿主細胞ＤＮＡの平均長が、５００ｂｐ未満、例えば、４００ｂｐ未満、３００ｂｐ未満、２００ｂｐ未満、１００ｂｐ未満等であることが好ましい。
【０１０１】
混入ＤＮＡは、標準精製手順、例えば、クロマトグラフィー等を使用して、ワクチン調製の際に除去することができる。残渣宿主細胞ＤＮＡの除去は、ヌクレアーゼ処理によって、例えば、ＤＮａｓｅを使用することによって増強することができる。宿主細胞ＤＮＡ混入を低下させるための簡便な方法は、文献に記載されており、２ステップ処理、先ず、ウイルス生育の際に使用することができるＤＮａｓｅ（例えば、ベンゾナーゼ（Benzonase））を使用するステップと、続いて、ビリオン破壊の際に使用することができるカチオン性洗剤（例えば、ＣＴＡＢ）を使用するステップとを含む。β−プロピオラクトン処理による除去を使用することもできる。
【０１０２】
残渣宿主細胞ＤＮＡの測定は、現在、生物製剤にとってルーチンの規制上の要件であり、当業者の通常技能範囲内にある。ＤＮＡの測定に使用されるアッセイは、典型的には、検証アッセイとなるであろう。検証アッセイの性能特徴は、数学的および数量化できる用語で記載することができ、その可能な誤差源が同定されているであろう。アッセイは、一般に、精度、正確さ、特異性等の特徴に関して検査されている。アッセイが較正（例えば、宿主細胞ＤＮＡの公知の標準含量に対して）および検査されたら、定量的ＤＮＡ測定をルーチンに行うことができる。ＤＮＡ定量化のための３種の主な技法を使用することができる：サザンブロットまたはスロットブロット等、ハイブリダイゼーション方法；Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ（商標）システム等、イムノアッセイ方法；および定量的ＰＣＲ。これらの方法は全て、当業者にはなじみ深いが、各方法の正確な特徴、例えば、ハイブリダイゼーションのためのプローブの選択、増幅のためのプライマーおよび／またはプローブの選択等は、問題になっている宿主細胞に依存するであろう。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ製のＴｈｒｅｓｈｏｌｄ（商標）システムは、ピコグラムレベルの総ＤＮＡのための定量的アッセイであり、生物医薬品における混入ＤＮＡのレベルをモニターするために使用されてきた。典型的なアッセイは、ビオチン化ｓｓＤＮＡ結合タンパク質、ウレアーゼにコンジュゲートされた抗ｓｓＤＮＡ抗体およびＤＮＡの間での反応複合体の非配列特異的な形成を含む。全てのアッセイ構成成分は、メーカーから入手することができる完全な総ＤＮＡアッセイキットに含まれる。様々な商業的メーカーが、残渣宿主細胞ＤＮＡを検出するための定量的ＰＣＲアッセイを提供し、例えば、ＡｐｐＴｅｃ（商標）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＢｉｏＲｅｌｉａｎｃｅ（商標）、Ａｌｔｈｅａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ等が挙げられる。ヒトウイルスワクチンの宿主細胞ＤＮＡ混入を測定するための、化学発光ハイブリダイゼーションアッセイおよび総ＤＮＡのＴｈｒｅｓｈｏｌｄ（商標）システムの比較について記載されている。
【０１０３】
医薬組成物
本発明の組成物は、薬学的に許容される。本発明の組成物は、ワクチンを含む。これは、抗原およびアジュバントに加えて構成成分を含むことができ、例えば、典型的には、当技術分野で周知の１種または複数の医薬品担体（複数可）および／または賦形剤（複数可）を含むであろう。
【０１０４】
組成物は、チオメルサールまたは２−フェノキシエタノール等、保存料を含むことができる。しかし、ワクチンは、水銀材料を実質的に含まない（例えば、５μｇ／ｍｌ未満）、例えば、チオメルサール不含であることが好ましい。水銀を含有しないワクチンが、より好ましく、ａ−トコフェロールコハク酸塩が、水銀化合物の代替として含まれてよい。保存料不含ワクチンが、最も好ましい。
【０１０５】
浸透圧を制御するために、ナトリウム塩等、生理的な塩を含むことが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好まれ、これは、１〜２０ｍｇ／ｍｌの間で存在することができる。存在することができる他の塩は、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二ナトリウム脱水、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等を含む。
【０１０６】
組成物は、一般に、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの間の重量オスモル濃度を有し、より好ましくは、２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内に収まるであろう。重量オスモル濃度は、ワクチン接種に起因する疼痛に影響がないことが以前に報告されているが、この範囲内における重量オスモル濃度の維持がやはり好ましい。
【０１０７】
組成物は、１種または複数のバッファーを含むことができる。典型的なバッファーは、リン酸塩バッファー；Ｔｒｉｓバッファー；ホウ酸塩バッファー；コハク酸塩バッファー；ヒスチジンバッファー（特に、水酸化アルミニウムアジュバントと共に）；またはクエン酸塩バッファーを含む。バッファーは、典型的には、５〜２０ｍＭ範囲で含まれるであろう。
【０１０８】
組成物のｐＨは、一般に、５．０〜８．１の間、より典型的には、６．０〜８．０の間、例えば、６．５〜７．５の間または７．０〜７．８の間になるであろう。したがって、本発明の製造プロセスは、パッケージングに先立ちバルクワクチンのｐＨを調整するステップを含むことができる。
【０１０９】
組成物は、好ましくは、滅菌されている。組成物は、好ましくは、非発熱性である、例えば、用量当たり＜１ＥＵ（エンドトキシン単位、標準尺度）、好ましくは、用量当たり＜０．１ＥＵを含有する。組成物は、好ましくは、グルテン不含である。
【０１１０】
本発明の組成物は、特に、スプリットまたは表面抗原ワクチンのために、洗剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（「Ｔｗｅｅｎ」として公知）、オクトキシノール（オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール等）、セチルトリメチルアンモニウム臭化物（「ＣＴＡＢ」）またはデオキシコール酸ナトリウムを含むことができる。洗剤は、微量でのみ存在することができる。よって、ワクチンは、各１ｍｇ／ｍｌ未満のオクトキシノール−１０およびポリソルベート８０を含むことができる。微量の他の残渣構成成分は、抗生物質（例えば、ネオマイシン、カナマイシン、ポリミキシンＢ）となることができる。
【０１１１】
組成物は、単一の免疫化のための材料を含むことができる、または複数の免疫化のための材料を含むことができ、これは、「複数用量」キットとも称される。複数用量構成において、保存料の包接が好ましい。複数用量組成物における保存料の包接の代替として（またはそれに加えて）、組成物は、材料の除去のための無菌的アダプタを有する容器内に入れられていてよい。
【０１１２】
インフルエンザワクチンは、典型的には、約０．５ｍｌの投薬量容量（単位用量）において投与されるが、本発明において、小児には半用量（すなわち、約０．２５ｍｌ）を投与することができる。
【０１１３】
組成物およびキットは、好ましくは、２℃〜８℃の間で貯蔵される。これらは、凍結するべきではない。これらは、理想的には、直射光を避けるべきである。
【０１１４】
組成物における抗原およびエマルションは、典型的には、混合物中に存在するべきであるが、最初は、即時混合するための別々の構成成分のキットの形態で提供することができる。組成物は、一般に、被験体に投与されるときには水性形態となるであろう。
【０１１５】
本発明のキット
本発明の組成物は、送達時に即時に調製することができる。よって、本発明は、混合の用意が出来た様々な構成成分を含むキットを提供する。キットは、アジュバントおよび抗原が、使用時まで別々に維持されることを可能にする。
【０１１６】
構成成分は、キット内で互いに物理的に分離しており、この分離状態は、様々な仕方で達成することができる。例えば、この２種の構成成分は、バイアル等、２個の別々の容器に存在することができる。続いて、この２本のバイアルの内容物は、例えば、一方のバイアルの内容物を除去し、これを他方のバイアルに加えることにより、または両方のバイアルの内容物を別々に除去し、これらを第３の容器内で混合することにより、混合することができる。
【０１１７】
好ましい構成において、キット構成成分の一方は、シリンジ内に存在し、他方は、バイアル等の容器内に存在する。シリンジを使用して（例えば、針により）、混合するためにその内容物を第２の容器へと挿入し、続いて、この混合物をシリンジへと引き戻すことができる。次に、典型的には新しい滅菌針により、シリンジの混合された内容物を患者に投与することができる。シリンジにおいて１種の構成成分をパックすることにより、患者投与のために別々のシリンジを使用する必要を取り除く。
【０１１８】
別の好ましい構成において、２種のキット構成成分は、同じシリンジ、例えば、デュアルチャンバーシリンジにおいて一緒に保持されるが、別々に存在する。斯かるシリンジが駆動されると（例えば、患者への投与において）、２個のチャンバーの内容物が混合される。この構成は、使用時における別々の混合ステップの必要を回避する。
【０１１９】
キット構成成分は、一般に、水性形態となるであろう。一部の構成において、構成成分（典型的には、アジュバント構成成分ではなく抗原構成成分）は、乾燥形態（例えば、凍結乾燥された形態）であり、他方の構成成分は、水性形態となる。乾燥構成成分を再活性化し、患者への投与のための水性組成物を得るために、この２種の構成成分を混合することができる。凍結乾燥された構成成分は、典型的には、シリンジではなくバイアル内に配置されるであろう。乾燥された構成成分は、ラクトース、ショ糖またはマンニトール、およびこれらの混合物、例えば、ラクトース／ショ糖混合物、ショ糖／マンニトール混合物等、安定剤を含むことができる。可能な構成の１つは、予め充填されたシリンジ内の水性アジュバント構成成分およびバイアル内の凍結乾燥された抗原構成成分を使用する。
【０１２０】
組成物またはキット構成成分のパッケージング
本発明の組成物（またはキット構成成分）に適した容器は、バイアル、シリンジ（例えば、使い捨てシリンジ）、鼻腔用スプレー等を含む。これらの容器は、滅菌されているべきである。
【０１２１】
組成物／構成成分が、バイアル等、容器内に配置されている場合、斯かる容器は、任意選択で、ガラスまたはプラスチック材料でできている。一部の実施形態では、斯かる容器は、シリコン処理された容器である。バイアルは、好ましくは、組成物を入れる前に滅菌されている。ラテックス感受性患者による問題を回避するために、バイアルは、好ましくは、ラテックス不含ストッパで封着されており、あらゆるパッケージング材料におけるラテックスの非存在が好ましい。バイアルは、単一用量のワクチンを含むことができる、または２以上の用量（すなわち、「複数用量」バイアル）、例えば、１０用量を含むことができる。一部の実施形態では、バイアルは、無色ガラスでできている。
【０１２２】
バイアルは、予め充填されたシリンジをキャップに挿入し、シリンジの内容物をバイアル内に排出し（例えば、その中にある凍結乾燥された材料を再構成するために）、バイアルの内容物をシリンジに戻すことができるように適応されたキャップ（例えば、ルアーロック）を有することができる。バイアルからのシリンジの除去後に、針を取り付け、組成物を患者に投与することができる。キャップは、好ましくは、キャップにアクセスできる前に封着またはカバーを除去する必要があるように、封着またはカバーの内側に配置される。バイアルは、特に、複数用量バイアルのために、その内容物の無菌的除去を可能にするキャップを有することができる。
【０１２３】
構成成分が、シリンジ内にパッケージングされている場合、シリンジは、針が取り付けられていてよい。針が、取り付けられていない場合、アセンブリおよび使用のために、シリンジと共に別々の針を供給することができる。斯かる針には鞘を付けることができる。安全針が好ましい。１インチ２３ゲージ、１インチ２５ゲージおよび５／８インチ２５ゲージ針が典型的である。シリンジには、記録管理を容易にするために、ロット番号、インフルエンザ季節および内容物の有効期限が印刷され得る剥離式の標識が付いていてよい。シリンジにおけるプランジャは、好ましくは、吸引の際にプランジャが偶発的に除去されることを防止するためのストッパを有する。シリンジは、ラテックスゴムキャップおよび／またはプランジャを有することができる。使い捨てシリンジは、単一用量のワクチンを含有する。シリンジは、一般に、針の取り付けに先立ち先端を封着するために先端キャップを有し、先端キャップは、好ましくは、ブチルゴムでできている。シリンジおよび針が、別々にパッケージングされる場合、針は、好ましくは、ブチルゴムシールドを装着される。有用なシリンジは、商品名「Ｔｉｐ−Ｌｏｋ」（商標）で販売されているシリンジである。
【０１２４】
容器は、例えば、小児への送達を容易にするために、半用量の容量を示すためのマークを付けることができる。例えば、０．５ｍｌ用量を含有するシリンジは、０．２５ｍｌ容量を示すマークを有することができる。
【０１２５】
ガラス容器（例えば、シリンジまたはバイアル）が使用される場合、ソーダ石灰ガラスよりもホウケイ酸塩ガラスで作製された容器を使用することが好ましい。一部の実施形態では、容器は、シリコン処理されたガラス容器等、シリコン処理された容器である。
【０１２６】
キットまたは組成物は、ワクチンに関する詳細、例えば、投与のための説明書、ワクチン内の抗原についての詳細等を含むパンフレットと共に、パッケージングすることができる（例えば、同じ箱の中に）。説明書は、例えば、ワクチン接種後のアナフィラキシー反応に備えて、アドレナリンの溶液を直ちに利用できる状態を維持する、等の警告を含有することもできる。
【０１２７】
処置の方法およびワクチンの投与
本発明の組成物は、ヒト患者への投与に適しており、本発明は、本発明の組成物を患者に投与するステップを含む、患者における免疫応答を生じる方法を提供する。上に記載されている通り、一部の実施形態では、患者は、免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）中の免疫低下された個体である。
【０１２８】
これらの方法および使用は、一般に、抗体応答、好ましくは、保護的抗体応答を生じるために使用されるであろう。インフルエンザウイルスワクチン接種後に抗体応答、中和能力および保護を査定するための方法は、当技術分野で周知である。ヒト試験は、ヒトインフルエンザウイルスの赤血球凝集素に対する抗体価が、保護と相関することを示した（約３０〜４０の血清試料赤血球凝集阻害力価は、相同ウイルスによる感染からの５０％前後の保護を生じる）。抗体応答は、典型的には、赤血球凝集阻害（ＨＩ）、マイクロ中和試験（Ｍｉｃｒｏ−ＮＴ）および／または一元放射溶血反応（single  radial  hemolysis）（ＳＲＨ）によって測定されるが、他のいずれか適した方法を用いることもできる。斯かるアッセイ技法は、当技術分野で周知である。
【０１２９】
本明細書において、用語「投与する」、「投与」等は、被験体の身体が、いずれか適した経路（複数可）により局所的にまたは全身的に、医薬組成物（ワクチン等）を利用できるようにすることを指す。本発明の組成物は、様々な仕方で投与することができる。最も好ましい免疫化経路は、筋肉内注射（例えば、腕または脚への）によるものであるが、他の利用できる経路は、皮下注射、鼻腔内、経口、粘膜、経粘膜的、非経口的、皮内、経皮的、経皮性等を含む。投与経路のより完全なリストは、次のサイトで見ることができる：www.fda.gov/Drugs/DevelopmentApprovalProcess/FormsSubmissionRequirements/ElectronicSubmissions/DataStandardsManualmonographs/ucm071667.htm。
【０１３０】
本発明の好ましい組成物は、小児に投与される場合であっても、インフルエンザ株毎の成人有効性のためのＣＨＭＰ判断基準のうち１、２または３種を満たすであろう。このような判断基準は、（１）＞７０％抗体保有率；（２）＞４０％抗体陽転もしくは有意な増加；および／または（３）＞２．５倍のＧＭＴ増加である。高齢者（＞６５歳）におけるこのような判断基準は、（１）＞６０％抗体保有率；（２）＞３０％抗体陽転；および／または（３）＞２倍のＧＭＴ増加である。
【０１３１】
本発明は、ＡおよびＢ型ウイルス株等、異なるインフルエンザウイルス株に対して保護的な免疫応答を生じるために特に有用である。
【０１３２】
本明細書において、用語「有効量」および「有効用量」は、その意図された目的（複数可）を果たすのに、すなわち、許容されるベネフィット／リスク比で、組織または被験体において所望の生物学的または薬用的応答を誘発するのに十分な化合物または組成物の量または用量を指す。例えば、本発明のある特定の実施形態では、目的（複数可）は、被験体において所望の免疫応答を誘導または増大することとなり得る。関連性がある意図された目的は、客観的（すなわち、いくつかの検査またはマーカーによって測定可能である）または主観的（すなわち、被験体が指標を与えるまたは効果を感じる）となることができる。一部の実施形態では、有効量は、ある特定の判断基準（例えば、病歴または処置歴、遺伝的または年齢プロファイル等によって決定）を満たす被験体の集団に投与されると、該集団内で統計的に有意な応答が得られる量である。有効量は、一般的に、複数の単位用量を含むことができる投薬レジメンにおいて投与される。いずれか特定の医薬剤に関して、有効量（および／または有効投薬レジメン内の適切な単位用量）は、例えば、投与経路、集団プロファイル等々に応じて変動し得る。当業者であれば、本発明の一部の実施形態では、単位投薬量は、前向きな結果と相関する投薬量レジメンの文脈において投与に適切な量を含有する場合、有効量を含有すると考慮され得ることを認めるであろう。
【０１３３】
本発明の組成物による処置は、単一用量スケジュールまたは複数用量スケジュールによるものとなることができる。よって、いずれか特定のインフルエンザ季節（例えば、所定の１２カ月間の期間、典型的には、秋または冬）において、患者は、単一用量の本発明の組成物または２以上の用量の本発明の組成物（例えば、２用量）を受けることができる。処置が、２またはそれを超える用量の本発明の組成物の投与を含む場合、各用量は、一般に、実質的に同時には与えられないであろう、すなわち、ワクチン接種センターへの同じ来診の際に投与されないであろう。本発明の組成物の連続的投与の間の時間は、典型的には、少なくともｎ日間であり、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４２、４９、５６またはそれ超から選択される。典型的には、２用量は、少なくとも１週間置いて（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１２週間、約１６週間等）投与される。２５〜３０日間（例えば、２８日間）離して２用量を与えることが、特に有用である。用量の間の時間は、典型的には、６カ月間以下となるであろう。用量は、互いに約４週間置いて、例えば、０日目に、続いて約２８日目に与えることができる。このような投薬の分離は、良好な免疫応答を生じることが判明している。
【０１３４】
本発明の組成物が、一次免疫化スケジュールにおいて使用される場合、本発明の組成物による用量（複数可）に続いて、１回または複数のブースターワクチン（例えば、１、２、３回またはそれを超えるブースターワクチン）の投与が行われる。プライミングおよびブースターワクチンの投与の間の適したタイミングは、ルーチンに決定することができる。プライミング用量の投与およびブースターワクチンの投与の間の時間は、典型的には、少なくともｐカ月間であり、ｐは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２またはそれ超から選択される。理想的には、ｐは、９またはそれを超え、９〜３０の範囲内となることができる。
【０１３５】
複数用量スケジュールにおいて、様々な用量を、同じまたは異なる経路によって与えることができ、例えば、非経口的プライムおよび粘膜ブースト、粘膜プライムおよび非経口的ブースト等。典型的には、ただし必ずしもそうでなくてもよいが、用量は、同じ経路によって与えられるであろう。本発明によって産生されるワクチンは、他のワクチンと実質的に同時に（例えば、医療専門家またはワクチン接種センターへの同じ医学的診察または来診の際に）、例えば、麻疹ワクチン、ムンプスワクチン、風疹ワクチン、ＭＭＲワクチン、水痘ワクチン、ＭＭＲＶワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、ＤＴＰワクチン、コンジュゲートされたＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂ型ワクチン、不活性化ポリオウイルスワクチン、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌コンジュゲートワクチン（四価Ａ−Ｃ−Ｗ１３５−Ｙワクチン等）、肺炎球菌コンジュゲートワクチン等と実質的に同時に、患者に投与することができる。
【０１３６】
同様に、本発明のワクチンは、抗ウイルス化合物、特に、インフルエンザウイルスに対して活性がある抗ウイルス化合物（例えば、オセルタミビルおよび／またはザナミビル）と実質的に同時に（例えば、医療専門家への同じ医学的診察または来診の際に）患者に投与することができる。これらの抗ウイルス薬は、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−アセチルアミノ−５−アミノ−３（１−エチルプロポキシ）−１−シクロヘキセン−１−カルボン酸（(l-ethylpropoxy)-l-cyclohexene-l-carboxylic  acid）または５−（アセチルアミノ）−４−［（アミノイミノメチル）−アミノ］−２，６−アンヒドロ−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクトノン（galactonon）−２−エノン酸（これらのエステル（例えば、エチルエステル）およびこれらの塩（例えば、リン酸塩）を含む）等、ノイラミニダーゼ阻害剤を含む。好ましい抗ウイルス薬は、オセルタミビルリン酸塩（ＴＡＭＩＦＬＵ（商標））としても公知の、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−アセチルアミノ−５−アミノ−３（１−エチルプロポキシ（l-ethylpropoxy））−１−シクロヘキセン−１−カルボン酸、エチルエステル、リン酸塩（１：１）である。
【０１３７】
スタチンレシピエントのための高用量インフルエンザワクチン
標的集団の被験体に高用量ワクチンが投与される実施形態のため、斯かるワクチンは、アジュバント化されていないワクチンとなることができる。一部の実施形態では、本発明の標的集団は、被験体の年齢に関係なく、免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）中のヒト被験体を指すが、他の実施形態では、本発明の標的集団は、特定の年齢群、例えば、６５歳またはそれ超；１８〜６４歳の間等でもある、免疫調節療法（例えば、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法等）中のヒト被験体を指す。斯かる被験体は、非合成スタチン、合成スタチンまたはこれらの組合せを含むスタチン療法中となることができる。斯かる集団のいずれかが、本明細書に記載されている本発明から利益を得るであろうが、これは、合成スタチン療法中の被験体、長期スタチン療法中の被験体またはその両方にとって特に有益となり得る。
【０１３８】
高用量ワクチンは、一価および多価（例えば、三価および四価）インフルエンザワクチンを含み、株それぞれの高用量（例えば、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ）を含有することができる。斯かるワクチン組成物は、適した抗原（複数可）を含有する注射用滅菌懸濁液（例えば、０．５ｍＬ）として製剤化することができる。斯かる組成物の産生に使用されるウイルスは、任意選択で、発育鶏卵において産生することができ、任意選択で、不活性化することができ（例えば、ホルムアルデヒドにより）、任意選択で、スプリットすることができ（例えば、非イオン性洗剤により）、Ａ／（Ｈ１Ｎ１）様株、Ａ／（Ｈ３Ｎ２）様株およびＢ株を含むことができる。ほんの数例を挙げると、Ａ／カリフォルニア／７／２００９（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／ビクトリア／２１０／２００９（Ｈ３Ｎ２）およびＢ／ブリスベン／６０／２００８株は、ある１季節のために製剤化することができるが、Ａ／カリフォルニア／７／２００９（Ｈ１Ｎ１）、Ａ／ビクトリア／３６１／２０１１（Ｈ３Ｎ２）およびＢ／テキサス／６／２０１１（Ｂ／ウィスコンシン／１／２０１０様ウイルス）株は、別の季節のために製剤化することができる。斯かるワクチン組成物は、任意選択で、すぐに使える（ready-to-use）シリンジ（０．５ｍＬ等）において提供し、スタチン療法中の患者の、任意選択で三角筋の区域に筋肉内（ＩＭ）投与することができる。
【０１３９】
総則
特許請求の範囲を含む本明細書を通して、文脈が許すのであれば、用語「含む（comprising）」およびその異形「含み（comprises）」または「含んでいる（comprising）」等は、他のいずれかの要素（例えば、整数）を必ずしも除外することなく、言及されている要素（単数または複数）（例えば、整数（単数または複数））を含む（including）ものと解釈されたい。
【０１４０】
用語「実質的に」は、「完全に」を除外しない、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まないことができる。必要に応じて、単語「実質的に」は、本発明の定義から省略することができる。
【０１４１】
数値ｎとの関連における用語「約」は、典型的であるまたは許容されると考慮される、例えば、ある特定の測定または解析に関して関連性があるデータセットを得た特定の集団内の統計的誤差、偏差または変動内の数値の範囲を指す。当業者であれば、斯かる範囲を容易に理解することができる。例えば、数値ｎは、（ｎ±１％）、（ｎ±１％）、（ｎ±２％）、（ｎ±３％）、（ｎ±４％）、（ｎ±５％）、（ｎ±６％）、（ｎ±７％）、（ｎ±８％）、（ｎ±９％）、（ｎ±１０％）、（ｎ±１％）、（ｎ±１２％）、（ｎ±１３％）、（ｎ±１４％）、（ｎ±１５％）、（ｎ±１６％）、（ｎ±１７）、（ｎ±１８％）、（ｎ±１９％）、（ｎ±２０％）等々を意味することができる。
【０１４２】
特に言及がなければ、２種またはそれを超える構成成分を混合するステップを含むプロセスは、いずれか特異的な順序の混合を要求しない。よって、構成成分は、いずれかの順序で混合することができる。３種の構成成分が存在する場合、２種の構成成分を互いに組み合わせ、続いてこの組合せを第３の構成成分と組み合わせることができる、等。
【０１４３】
細胞の培養において動物（特にウシ）材料が使用される場合、この材料は、伝達性海綿状脳症（encaphalopathies）（ＴＳＥ）を含まない、特に、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）を含まない供給源から得るべきである。全体的に見て、動物由来材料の全くの非存在下で細胞を培養することが好ましい。
【０１４４】
化合物が、組成物の一部として身体に投与される場合、該化合物は、代替的に、適したプロドラッグによって置き換えることができる。
【０１４５】
再集合または逆遺伝学手順のために細胞基質が使用される場合、これは、好ましくは、例えば、欧州薬局方総則（European  Pharmacopoeia  general  chapter）５．２．３．「Cell  substrates  for  production  of  vaccines  for  human  use」に記載されたような、ヒトワクチン産生における使用のために承認されたものである。
【０１４６】
したがって、本発明は、次の実施形態を包含するが、これらに限定されるものではない：
１．被験体における免疫応答を増強するための方法であって、
免疫低下したまたは免疫抑制のリスクがある被験体を選択するステップと、
アジュバント、高用量抗原またはこれらの組合せを含むワクチンを、被験体におけるワクチンに対する免疫応答の増強に有効な量で被験体に投与するステップと
を含む方法。
２．免疫応答を増強するための方法であって、
アジュバント、高用量抗原またはこれらの組合せを含むワクチンを、被験体におけるワクチンに対する免疫応答の増強に有効な量で被験体に投与するステップ
を含み、被験体が、免疫低下したまたは免疫抑制のリスクがある方法。
３．ワクチン抗原（複数可）に対する防御免疫応答を誘発するのに有効な量で、免疫調節療法を受けている被験体にワクチンを投与するための方法。
４．免疫低下した被験体を処置するための方法であって、被験体における免疫応答の誘発に有効な量で、医薬組成物を被験体に投与するステップを含む方法。
５．被験体における免疫応答の増強に有効な量での、免疫調節療法を受けている被験体における免疫応答を増強するための方法における使用のための組成物。
６．免疫調節療法中の患者のためのワクチン組成物。
７．免疫調節療法中の患者における使用のためのワクチン組成物。
８．免疫調節療法中の患者における感染の予防のためのワクチン組成物。
９．免疫低下した被験体を処置するための医薬としての使用のための組成物。
１０．免疫低下した被験体における免疫応答を生じるための医薬の製造のための組成物の使用。
１１．アジュバント化および／または高用量ワクチンを製造するための方法であって、ワクチンが、免疫低下した被験体における使用のためのものである方法。
１２．被験体が、損なわれた免疫に関連する状態を有する、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１３．被験体が、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法またはこれらの組合せを受けている、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１４．被験体が、
６５歳もしくはそれを超える、
６０歳もしくはそれを超える、
４５歳もしくはそれを超える、
４５〜６４歳の間である、
１８〜６４歳の間である、または
乳児である、
先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１５．被験体が、免疫障害に関連する疾患または障害を有する、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１６．被験体が、免疫調節療法中である、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１７．被験体が、少なくとも１週間療法中である、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１８．被験体が、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間またはそれよりも長く療法中である、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１８．被験体が、現在は療法中ではないが、最近の３カ月間以内に療法を受けることが終了した、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
１９．被験体が、現在は療法中ではないが、今後３カ月間に療法を受けることを予定している、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２０．被験体が、スタチン療法、ＮＳＡＩＤ療法、インターフェロン療法、抗精神病薬および／または抗うつ薬療法、またはこれらのいずれかの組合せを受けている、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２１．スタチン療法が、合成スタチン、非合成スタチンまたはこれらの組合せを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２２．スタチン療法が、
プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチンおよびメバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチン
からなる群から選択されるスタチンを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２３．スタチン療法が、
フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチンおよびピタバスタチン
からなる群から選択される合成スタチンを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２４．ＮＳＡＩＤ療法が、次に挙げる、
サリチル酸塩（例えば、アスピリン（アセチルサリチル酸）、ジフルニサル（Ｄｏｌｏｂｉｄ（商標））、サルサレート（Ｄｉｓａｌｃｉｄ（商標））およびトリサリチル酸コリンマグネシウム（Ｔｒｉｌｉｓａｔｅ（商標）））；プロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、デクスイブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジンおよびロキソプロフェン）；酢酸誘導体（例えば、インドメタシン、トルメチン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、ジクロフェナク、アセクロフェナクおよびナブメトン）；エノール酸（オキシカム）誘導体（例えば、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカムおよびイソキシカム）；アントラニル酸誘導体（フェナム酸塩）（例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸およびトルフェナム酸）；選択的ＣＯＸ−２阻害剤（コキシブ）（例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、ルミラコキシブ、エトリコキシブおよびフィロコキシブ）；スルホンアニリド（例えば、ニメスリド）、ならびにリコフェロン、Ｈ−ハルパジドおよびリシンクロニキシネート等のその他
のうち１種または複数を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２５．組成物が、アジュバントを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２６．組成物が、界面活性剤を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２７．組成物が、水中油型エマルションを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２８．組成物が、アルミニウム塩アジュバントを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
２９．組成物が、リン酸アルミニウムアジュバントおよび／または水酸化アルミニウムアジュバントを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３０．組成物が、ＴＬＲアゴニストを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３１．組成物が、ビロソームを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３２．組成物が、スクアレンを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３３．組成物が、ポリソルベートを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３４．組成物が、スクアレン、ポリソルベート８０およびソルビタントリオレエートを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３５．組成物が、重量で約４．３％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０および約０．４８％ソルビタントリオレエートを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３６．組成物が、ワクチンであるまたはこれを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３７．組成物が、抗原であるまたはこれを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３８．組成物が、高用量抗原、標準用量抗原または低用量抗原であるまたはこれを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
３９．組成物が、標準用量抗原の量の１／８〜１０倍の間の量を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４０．組成物が、標準用量抗原の量の２倍〜１０倍の間の量を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４１．組成物が、アジュバントを含有しない、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４２．組成物が、水中油型エマルションアジュバントを含有しない、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４３．組成物が、インフルエンザワクチンである、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４４．組成物が、多価インフルエンザワクチンである、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４５．インフルエンザワクチンが、株当たり約３０μｇ〜約１５０μｇの間の抗原を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４６．インフルエンザワクチンが、株当たり約６０μｇの抗原を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
４７．インフルエンザワクチンが、Ｈ１Ｎ１株、Ｈ３Ｎ２株、Ｂ株またはこれらのいずれかの組合せを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の組成物、方法または使用。
【０１４７】
例証
上述の通り、スタチン療法は、免疫系における二次効果に関連付けられてきた。この効果は、免疫調節および抗炎症効果を含む。スタチンをルーチンに服用する多くの患者は、高齢者であり、高齢者は、インフルエンザの合併症のリスクがより高いため（Thompson,  W.  W.、Shay,  D.  K.、Weintraub,  E.、Brammer,  L.、Cox,  N.、Anderson,  L.  J.、およびFukuda,  K.（２００３年）、Mortality  associated  with  influenza  and  respiratory  syncytial  virus  in  the  United  States、Jama、２８９巻（２号）：１７９〜１８６頁）、本出願人らは、高齢者におけるアジュバント化されたおよびアジュバント化されていないインフルエンザワクチンの大規模な比較免疫原性試験由来のデータを利用して、インフルエンザワクチンに対する免疫応答におけるスタチン療法の影響を評価した。
【０１４８】
本出願人らは、患者におけるアジュバント化された対アジュバント化されていないインフルエンザワクチンの比較治験から入手できる免疫原性測定値を利用して、ワクチン接種に対する免疫応答におけるスタチン療法の影響を評価した。全体的に見て、５，０００名を超える治験参加者に関するデータを解析に利用した。慢性スタチン療法を受けているおよび受けていない個体におけるインフルエンザＨ１Ｎ１、Ｈ３Ｎ２およびＢ株に対するＨＡＩ幾何平均抗体価の比較は、スタチンレシピエントにおける力価が、スタチンを受けていない個体よりも、スタチンレシピエントにおいてそれぞれ３８％、６７％および３８％低かったことを明らかにした。ワクチン免疫応答におけるスタチンのこのような免疫抑制効果は、合成スタチン中の個体において特に劇的であった。このような効果は、アジュバント化されたおよびアジュバント化されていないワクチン群の両方において見られた。しかし、アジュバント化ワクチン群における力価がより高かったため、ワクチン応答におけるスタチン療法の影響は、アジュバント化ワクチンの使用によって少なくとも部分的に相殺された。このような結果は、将来の臨床治験設計および高齢者におけるワクチン使用推奨の両方に意味を持つ。
【０１４９】
方法
２００９〜２０１０年および２０１０〜２０１１年のインフルエンザ季節において、コロンビア、パナマ、フィリピンおよび米国で、６５歳よりも年上の１４，０００名を超える成人においてＭＦ−５９アジュバント化された三価インフルエンザワクチン（「ａＴＩＶ」）およびアジュバント化されていないＴＩＶの安全性および免疫原性を比較する、ランダム化、対照、観察者盲検法臨床治験を行った（Frey  SE、Aplasca-De  Los  Reyes  MR、Reynales  H、Bermal  NN、Nicolay  U、Narasimhan  V、Forleo-Neto  EおよびArora  AK、Comparison  of  the  Safety  and  Immunogeniciy  of  an  MF-59  adjuvanted  with  a  Non-adjuvanted  seasonal  influenza  vaccine  in  Elderly  Subjects、Vaccine、印刷中）。この評価の一部として、スタチン使用に関する情報を収集し、これを比較解析における潜在的な交絡要因として考慮した。
【０１５０】
ワクチン接種日および季節的に適切なインフルエンザワクチンを受けてから２８日後に血液試料を得た。標準方法論を使用して、ＨＡＩ力価を決定した（Murphy,  B.  R.、Phelan,  M.  A.、Nelson,  D.  L.、Yarchoan,  R.、Tierney,  E.  L.、Alling,  D.  W.、およびChanock,  R.  M.（１９８１年）、Hemagglutinin-specific  enzyme-linked  immunosorbent  assay  for  antibodies  to  influenza  A  and  B  viruses、Journal  of  clinical  microbiology、１３巻（３号）：５５４〜５６０頁）。
【０１５１】
本出願人らの現在の事後解析の目的のため、ワクチン接種に先立ち２８日間またはそれを超えて、およびワクチン接種後２２日目まで薬物療法を服用していたら、スタチン療法中であると患者を分類した。この時間ウィンドウ内でスタチンを受けていない個体は、対照であると考慮した。いずれの群にも適合しなかった少数の個体は、解析から除いた。合成または天然起源のスタチンを受けているかに関して患者をさらに層別化した。
【０１５２】
次に、スタチンおよび対照群の間で、ワクチン相同インフルエンザＡ株Ｈ１Ｎ１（カリフォルニア）、Ｈ３Ｎ２（パース）およびインフルエンザＢ型（ブリスベン）に対して、幾何平均抗体価（ＧＭＴ）およびＧＭＴ比を比較した。調整された比較において、ＡＮＣＯＶＡ解析は、次の変数を含んだ：ワクチン群（ａＴＩＶ、ＴＩＶ）、−２８日目〜２２日目におけるスタチン使用者（はい／いいえ）、高リスク状態（はい／いいえ）、性別、ｌｏｇ−ワクチン接種前力価および年齢（両者共に連続変数）。ワクチン型およびスタチンの間の相互作用の評価は、免疫応答におけるスタチンの影響におけるワクチンの型の影響を明らかにしなかったため（ｐ＞０．０５）、組み合わせた試験群に関してスタチンレシピエントおよび対照におけるＧＭＴの比を計算した。
【０１５３】
結果
合計６９６１名の被験体（うち３４７９名はＭＦ−５９アジュバント化されたＴＩＶ群（「ａＴＩＶ」）および３４８２名はアジュバント化されていないＴＩＶ群（「ＴＩＶ」））が、解析に利用できる２２日目のＨＡＩ力価を有した。全体的に見て、それぞれ２７９８および２７８６名のａＴＩＶおよびＴＩＶレシピエントが対照であり、それぞれ６８１および６９６名の個体が、スタチン使用者の定義を満たすと決定された。スタチン使用者のうち、ａＴＩＶスタチン使用者の７６％およびＴＩＶスタチン使用者の７４％は、発酵由来のスタチン（プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、アドビコール（Adivocor））を服用し、残りは、合成スタチン（フルバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン）を服用していた。全体的に見て、スタチン使用者の７５％が、高リスクの医学的状態を有すると考慮された。最も一般的なカテゴリーは、根底にある神経性疾患であり、続いてＣＯＰＤ、喘息、うっ血性心不全、腎不全および肝疾患であった。（表１）。全体的に見て、スタチン使用者の５５％および対照の６８％が男性であり、対照の７４％およびスタチン使用者の６７％が、６５〜７５歳の間であり、残りは７５歳よりも年上であった。３種のインフルエンザワクチン株に対するＨＡＩ  ＧＭＴの結果を表２に示し、１日目の比を年齢、リスク群およびワクチンに関して調整し、２２日目の比も前力価（pre-titer）に関して調整した。
【０１５４】
【表１】
2020073547.tif 000002
【０１５５】
【表２−１】
2020073547.tif 000003
【表２−２】
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【０１５６】
表２から分かる通り、全体的な前力価は、３株のそれぞれに関して各ワクチン群において等しかった。しかし、スタチン中の個体は、Ｈ１Ｎ１およびインフルエンザＢ型に対してより高い前力価を有した一方、インフルエンザＨ３Ｎ２にはその逆が当てはまった。ワクチン接種後２２日目の力価は、全３種の抗原に関してａＴＩＶレシピエントにおいて有意により高かった。ワクチン型に関係なくスタチンレシピエントと対照とを比較する解析において、ＧＭＴ力価比は、Ｈ１Ｎ１に関しては対照において３８％高く、Ｈ３Ｎ２に関しては６７％高く、インフルエンザＢ型に関しては３８％高く、年齢、高リスク群状態、前力価および受けたワクチンの型に対する調整にもかかわらず、全３種の抗原に関してスタチンレシピエントにおける免疫原性の顕著な低下を示す。インフルエンザＢ型（マレーシア）およびＨ３Ｎ２（ブリスベンおよびウィスコンシン）の異種株に対して検査した場合、同様のデータを得た（データ図示せず）。
【０１５７】
スタチン型によって層別化した結果を表３に示す。
【０１５８】
【表３】
2020073547.tif 000005
【０１５９】
発酵由来のスタチンを受けている患者は、合成スタチン中の患者よりも高い力価を有し、後者が、インフルエンザワクチン応答においてより大きい免疫抑制効果を有することを示す。同様の非統計的に（statically）有意な傾向が、異種株に対する検査においても観察された。
【０１６０】
考察
発展途上国では、平均余命は着実に増加しつつあり、発展途上国における高齢者の人口割合は、増加している（Mathers,  C.  D.、Sadana,  R.、Salomon,  J.  A.、Murray,  C.  J.、およびLopez,  A.  D.（２００１年）、Healthy  life  expectancy  in  191  countries、１９９９年、The  Lancet、３５７巻（９２６９頁）：１６８５〜１６９１頁）。斯かる改善は、スタチン等、ワクチン接種や薬物療法を含む公衆衛生対策に起因した（www.who.int/bulletin/volumes/86/2/07-040089/en/、２０１４年７月１６日にアクセス）。スタチンは、高コレステロール血症の処置のために、成人および高齢者において広く使用されている。本出願人らは、このクラスの薬物、特に、合成に由来するスタチンが、評価した集団におけるアジュバント化されたおよびアジュバント化されていないインフルエンザワクチンの両方に対する免疫応答を劇的に抑制することを示した。驚くべきことに、３株のうち２株に関して、アジュバント化ワクチンは、この免疫抑制効果を少なくとも相殺することができた。検査したＨ３Ｎ２株に関して、アジュバント化ワクチン力価は、ＴＩＶよりも高かったが、スタチンレシピエントにおける力価は、ａＴＩＶ後に、アジュバント化されていないワクチンを受けている対照よりも低かった。
【０１６１】
高齢者およびある特定の薬物療法、特に長期療法中の被験体を含む高リスク集団における健康介入のますます複雑な性質を考慮すると、斯かる介入の間の潜在的な相互作用を査定することが重要になるであろう。
【０１６２】
本出願人らの結果は、若年成人におけるＡ型肝炎ワクチンおよび破傷風トキソイドに対するワクチン免疫応答におけるスタチンの影響に関する試験と正反対である。Ｓｅｉｇｒｉｓｔらによる試験において、被験体の平均年齢は、２４歳であった。この試験において、健康被験体をランダム化して、アトルバスチン（atorvastin）またはプラセボを受けさせた。ワクチンを受けてから２８日後に、Ａ型肝炎ワクチンに対する応答を査定した。２群の間で、免疫応答の差は観察されなかった。しかし、ワクチン接種時にスタチンレシピエントが慢性療法中であった本出願人らの試験とは対照的に、このＡ型肝炎試験においては、試験参加者は、ワクチン接種日までスタチン療法を始めていなかったことに留意することが重要である（Packard  RS、Schlegel  S、Senouf  D、Burger  F、Sigaud  P、Perneger  T、Seigrist  CAおよびMach  F、Atorvastin  Treatment  and  Vaccination  Efficacy、J  Clin  Pharmacology  ２００７年、４７巻：１０２２〜１０２７頁）。別の試験において、Ｂｒａｎｔｌｙらは、健康なボランティアにおける破傷風トキソイドに対する応答を評価した。Ａ型肝炎試験と同様に、健康な試験参加者をランダム化して、アトルバスチンまたはプラセボを受けさせ、ワクチン接種日に薬物療法を始めた。驚くべきことに、スタチン群に割り当てられたこの試験における試験参加者は、３倍高い抗ＴＴ  ＩｇＧレベルを有した（Lee  PY、Sumpia  PO、Byars  JA、Kelly  KM、Zhuang  H、Shuster  JS、Theriaque  DW、Segal  MS、Reeves  WHおよびBrantly  ML、Short-term  atorvastin  treatment  enhances  specific  antibody  production  following  tetanus  toxoid  vaccination  in  healthy  volunteers、Vaccine  ２００６年、２４巻：４０３５〜４０４０頁）。これらの試験と本明細書で本出願人らが報告する結果との間の２種の明らかな差は、本出願人らの試験群は非常に年齢が高いことと、破傷風トキソイドおよびＡ型肝炎試験において、参加者が、ワクチン接種時にスタチンに慢性に曝露されていなかったという事実である。当然ながら、これらの因子の一方または両方が、このように対照的な試験結果に寄与する可能がある。しかし、大部分のスタチン使用者は、薬物療法を長期服用するため、これら２試験の結果は、ルーチンのスタチン療法の影響の評価に対する有用性が限られている。
【０１６３】
高齢者におけるインフルエンザワクチン有効性の試験は、最適以下レベルの有効性を明らかにした。Ｍｏｎｔｏによる、高齢者養護ホームの患者における試験において、ワクチン接種は、インフルエンザ様疾病に対して３３％であり、肺炎に対して４３％であった（Monto,  A.  S.、Hornbuckle,  K.、およびOhmit,  S.  E.（２００１年）、Influenza  vaccine  effectiveness  among  elderly  nursing  home  residents:  a  cohort  study、American  journal  of  epidemiology、１５４巻（２号）１５５〜１６０頁）。１９７０年代〜１９８０年代の間に大規模に行われた２０種の観察試験由来のデータを使用した初期メタ解析試験において、Ｇｒｏｓｓは、呼吸器疾病の予防に関する５６％（９５％ＣＩ、３９％〜６８％）、肺炎の予防に関する５３％（ＣＩ、３５％〜６６％）、入院の予防に関する５０％（ＣＩ、２８％〜６５％）および死亡の予防に関する６８％（ＣＩ、５６％〜７６％）の、ワクチン有効性のより高い統合推定値を見出した（Gross,  P.  A.、Hermogenes,  A.  W.、Sacks,  H.  S.、Lau,  J.、およびLevandowski,  R.  A.（１９９５年）、The  efficacy  of  influenza  vaccine  in  elderly  personsA  meta-analysis  and  review  of  the  literature、Annals  of  Internal  medicine、１２３巻（７号）５１８〜５２７頁）。スタチン使用が一般的でなかった昔における呼吸器疾病および肺炎に対する有効性の推定値が、より近年の試験よりも高いことが興味深い。本明細書に開示されている解析を踏まえると、これらの差が、異なるインフルエンザ株および他の集団因子によるものである可能性もある。
【０１６４】
スタチンは、その免疫抑制効果が、ベースライン炎症状態、よって、肺炎の重症度を低減し得るため、肺炎の予防における補助剤として考慮されてきた。ＣＯＰＤにおけるスタチン使用の観察試験は、スタチン使用者における肺炎または感染性増悪後の３０％〜５０％の死亡率の低下を報告した（Young  R、Hopkins  RJ、Statin  Use  in  Pneumonia、The  American  Journal  of  Medicine、１２６巻、７号、ｅ１１〜ｅ１２頁）。他の試験は、肺炎および敗血症リスクにおけるスタチンの影響を見出さなかった（Yende  S、Milbrandt  EB、Kellum  JA、Kong  L、Delude  RL、Weissfeld  LAおよびAngus  DC、Understanding  the  potential  role  of  statins  in  pneumonia  and  sepsis、Critical  Care  Medicine  ２０１１年、３９巻（８号）：１８７１〜１８７８頁）。Ｆｅｄｓｏｎは、高齢者における肺炎の処置における治療剤としてスタチンを考慮することを推奨した（Fedson,  D.  S.（２０１３年）、Treating  influenza  with  statins  and  other  immunomodulatory  agents、Antiviral  research、９９巻（３号）４１７〜４３５頁）。解説において、彼は、システム生物学者は、インフルエンザの処置におけるスタチン等の免疫調節剤の使用を示唆したが、このアプローチでのランダム化臨床治験は、被験体によるそのルーチン使用に先行する必要があることについて言及した。Ｆｅｄｓｏｎは、特に、重篤疾患がワクチンを入手できるまでに何カ月間も進行し得るパンデミックにおいて、炎症、したがって疾患重症度を低下させる有望な薬剤としてのスタチンを評価することを考慮するべきであることを同様に指摘する（Fedson,  D.  S.（２０１３年）、How  will  physicians  respond  to  the  next  influenza  pandemic?、Clinical  infectious  diseases、cit695）。
【０１６５】
明らかに、免疫系および結果としてワクチン応答ならびに疾患リスクにおけるスタチンの影響は、複雑である。スタチンの免疫抑制効果は、急性疾患状態において望ましくなり得るが、同じ効果は、ワクチン応答に影響する場合に有害になることがある。本出願人らは、被験集団において、インフルエンザワクチンに対する免疫応答における長期スタチン使用の劇的な効果を示した。このマイナスの効果は、罹患集団におけるインフルエンザワクチンの免疫原性および有効性を評価する際に考慮に入れるべきであり、薬物誘導性の免疫抑制を相殺するために、斯かる被験体集団におけるアジュバント化ワクチンおよび／または高用量ワクチンの優先的使用の可能性を考慮する。
【０１６６】
上述の個々のセクションにおいて言及されている本発明の様々な特色および実施形態は、変更すべきところは変更しつつ、他のセクションに適宜適用される。結果的に、あるセクションにおいて特定される特色は、他のセクションにおいて特定される特色と適宜組み合わせることができる。
【０１６７】
当業者であれば、単なるルーチン実験法を使用して、本明細書に記載されている本発明の特異的な実施形態の多くの均等物を認識するであろう、またはこれを確認することができる。斯かる均等物は、次の特許請求の範囲による包含が意図される。
【外国語明細書】
2020073547000001.pdf