(57)【要約】【課題】皮膚のツヤを客観的に評価する評価方法、皮膚のツヤ向上剤及び該皮膚のツヤ向上剤の探索方法を提供する。【解決手段】皮膚のツヤの評価方法は、皮膚の表面に偏光を入射させた後、鏡面反射率と拡散反射率を求め所定の条件を満たす場合に皮膚にツヤがあると判定する。皮膚のツヤ向上剤を、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びトリメチルグリシンを配合することにより提供する。皮膚のツヤ向上剤の探索方法は、表面粗さの有意な減少を指標とすることにより、鏡面反射率を向上させることが可能である試料を探索することができる。【選択図】図１０
2020073933.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
角層細胞の表面粗さを測定するステップと、
角層細胞に試料を塗布するステップと、
該試料が塗布された角層細胞の表面粗さを測定するステップを有し、
前記試料が塗布されていない角層細胞の表面粗さに対して、前記試料が塗布された角層細胞の表面粗さが有意に減少している場合に、前記試料が皮膚の鏡面反射率を向上させることが可能であると判定することを特徴とする皮膚のツヤ向上剤の探索方法。
【請求項２】
皮膚の表面に偏光を入射させた後、該入射した偏光の偏光方向と平行な方向に偏光している反射光を受光することにより第一の反射率を測定するステップと、
前記皮膚の表面に前記偏光を入射させた後、該入射した偏光の偏光方向と垂直な方向の反射光を受光することにより第二の反射率を測定するステップと、
前記第一の反射率及び前記第二の反射率から、拡散反射率及び鏡面反射率を求めるステップを有し、
前記拡散反射率及び前記鏡面反射率が所定の条件を満たす場合に、前記皮膚にツヤがあると判定することを特徴とする皮膚のツヤの評価方法。
【請求項３】
前記第一の反射率及び前記第二の反射率を測定する前の皮膚に試料を塗布するステップをさらに有することを特徴とする請求項２に記載の皮膚のツヤの評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚のツヤの評価方法、皮膚のツヤ向上剤の探索方法及び皮膚のツヤ向上剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、皮膚の見え方を表現するものとして透明感を指標とするものが知られていた。皮膚の透明感は、必要に応じて、皮膚外用剤を塗布した上で、美容技術者の視覚により、官能評価されていた。
【０００３】
しかしながら、皮膚の透明感を的確に評価するためには、長年の経験を必要とすることに加え、経験が豊富な被験者が皮膚の透明感を評価しても、評価のばらつきを完全に解消することは困難であった。
【０００４】
例えば、従来では、皮膚表面にＰ偏光を入射させてＳ偏光成分の反射光を受光するとともに、皮膚表面にＳ偏光を入射させてＰ偏光成分の反射光を受光し、得られるＳ偏光成分及びＰ偏光成分の２つの反射光の反射率の合計値に基づいて皮膚の透明感を評価する方法が知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
一方、美白効果を有する皮膚外用剤として、アルコキシサリチル酸及び／又はその塩の一種又は二種以上を含有する皮膚外用剤が知られている（例えば、特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００４−２１５９９１号公報
【特許文献２】特開平６−４０８８６号公報
【特許文献３】特開２０１３−１８９３９６号公報
【特許文献４】特開２０１３−４０１１４号公報
【特許文献５】特開２０００−６３２５５号公報
【特許文献６】特開２０１２−６９０２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、皮膚のツヤを客観的に評価する方法がなかった。このため、皮膚のツヤの評価方法が望まれている。また、皮膚のツヤを向上させることが可能な化合物又は組成物、即ち、皮膚のツヤ向上剤及び該皮膚のツヤ向上剤の探索方法が望まれている。
【０００８】
本発明の一態様は、上記の従来技術が有する問題に鑑み、皮膚のツヤの評価方法、皮膚のツヤ向上剤及び該皮膚のツヤ向上剤の探索方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の一態様は、皮膚のツヤの評価方法において、皮膚の表面に偏光を入射させた後、該入射した偏光の偏光方向と平行な方向に偏光している反射光を受光することにより第一の反射率を測定するステップと、前記皮膚の表面に前記偏光を入射させた後、該入射した偏光の偏光方向と垂直な方向の反射光を受光することにより第二の反射率を測定するステップと、前記第一の反射率及び前記第二の反射率から、拡散反射率及び鏡面反射率を求めるステップを有し、前記拡散反射率及び前記鏡面反射率が所定の条件を満たす場合に、前記皮膚にツヤがあると判定することを特徴とする。
【００１０】
本発明の一態様は、皮膚のツヤ向上剤の探索方法において、角層細胞の表面粗さを測定するステップと、角層細胞に試料を塗布するステップと、該試料が塗布された角層細胞の表面粗さを測定するステップを有し、前記試料が塗布されていない角層細胞の表面粗さに対して、前記試料が塗布された角層細胞の表面粗さが有意に減少している場合に、前記試料が皮膚の鏡面反射率を向上させることが可能であると判定することを特徴とする。
【００１１】
本発明の一態様は、皮膚のツヤ向上剤において、サリチル酸のアルカリ金属塩、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びグリコール酸からなる群より選択される一種以上を含むことを特徴とする。
【００１２】
より具体的に、本発明は以下に関する：
［１]  アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びトリメチルグリシンを含む、皮膚のツヤ向上剤。
［２]  前記アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩が、４−メトキシサリチル酸カリウムである、項目１に記載の皮膚のツヤ向上剤。
［３]  ０．５％〜３％の４−メトキシサリチル酸カリウムを含む、項目２に記載の皮膚のツヤ向上剤。
［４］  ２％〜１０％のトリメチルグリシンを含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の皮膚のツヤ向上剤。
［５］  角層細胞の表面粗さを測定するステップと、
角層細胞に試料を塗布するステップと、
該試料が塗布された角層細胞の表面粗さを測定するステップを有し、
前記試料が塗布されていない角層細胞の表面粗さに対して、前記試料が塗布された角層細胞の表面粗さが有意に減少している場合に、前記試料が皮膚の鏡面反射率を向上させることが可能であると判定することを特徴とする皮膚のツヤ向上剤の探索方法。
［６］  皮膚の表面に偏光を入射させた後、該入射した偏光の偏光方向と平行な方向に偏光している反射光を受光することにより第一の反射率を測定するステップと、
前記皮膚の表面に前記偏光を入射させた後、該入射した偏光の偏光方向と垂直な方向の反射光を受光することにより第二の反射率を測定するステップと、
前記第一の反射率及び前記第二の反射率から、拡散反射率及び鏡面反射率を求めるステップを有し、
前記拡散反射率及び前記鏡面反射率が所定の条件を満たす場合に、前記皮膚にツヤがあると判定することを特徴とする皮膚のツヤの評価方法。
［７］  前記第一の反射率及び前記第二の反射率を測定する前の皮膚に試料を塗布するステップをさらに有することを特徴とする項目６に記載の皮膚のツヤの評価方法。
［８］  皮膚のツヤ向上剤又は鏡面反射率増加剤の製造のための、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びトリメチルグリシンの使用。
［９］  前記アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩が、４−メトキシサリチル酸カリウムである、項目８に記載の使用。
［１０]  ０．５％〜３％の４−メトキシサリチル酸カリウムを含む、項目９に記載の使用。
［１１］  ２％〜１０％のトリメチルグリシンを含む、項目８〜１０のいずれか一項に記載の使用。
［１２］  皮膚のツヤ向上方法、鏡面反射率増加方法、又は美容方法であって、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びトリメチルグリシンを適用することを含む方法。
［１３］  前記アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩が、４−メトキシサリチル酸カリウムである、項目１２に記載の方法。
［１４]  ０．５％〜３％の４−メトキシサリチル酸カリウムを含む、項目１３に記載の方法。
［１５］  ２％〜１０％のトリメチルグリシンを含む、項目８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の一態様によれば、皮膚のツヤの評価方法、皮膚のツヤ向上剤及び該皮膚のツヤ向上剤の探索方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本実施形態における皮膚のツヤの評価方法の一例を示すフローチャートである。
【図２】本実施形態における皮膚の鏡面反射率向上剤の探索方法の一例を示すフローチャートである。
【図３】実施例１における拡散反射率に対する鏡面反射率の関係を示すマップである。
【図４】実施例２における拡散反射率に対する鏡面反射率の関係を示すマップである。
【図５】実施例３における化粧水及び乳液を塗布する前後の拡散反射率に対する鏡面反射率の関係を示すマップである。
【図６】実施例３における化粧水及び乳液を塗布する前後の鏡面反射率を示す図である。
【図７】実施例４における角層細胞の算術平均粗さＳａに対する鏡面反射率の関係を示す図である。
【図８】４−メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）の濃度を変化させて添加した後における角層細胞の算術平均粗さＳａの変化率を示す。
【図９】トリメチルグリシン（ＴＭＧ）の濃度を変化させて添加した後における角層細胞の算術平均粗さＳａの変化率を示す。
【図１０】４−メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）単独、及び４-メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）及びトリメチルグリシン（ＴＭＧ）の組合せを、濃度を変化させて添加した後における角層細胞の算術平均粗さＳａの変化率を示す。
【図１１】試料１−１及び水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す図である。
【図１２】試料１−１及び水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す図である。
【図１３】試料１−１、１−２を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す図である。
【図１４】試料２を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す図である。
【図１５】試料２及び水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す図である。
【図１６】試料３を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す図である。
【図１７】試料３及び水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す図である。
【図１８】試料４−１を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す図である。
【図１９】試料４−１及び水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す図である。
【図２０】試料４−１、４−２を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す図である。
【図２１】試料５を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す図である。
【図２２】試料５及び水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す図である。
【図２３】候補化粧料連用後におけるアンケート結果を示す。
【図２４】候補化粧料連用後３ヶ月目における角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。
【図２５】候補化粧料連用後３ヶ月目におけるキメ画素数の変化を示す。
【図２６】候補化粧料連用後３ヶ月目における鏡面反射率及び拡散反射率の変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
次に、本発明を実施するための形態を図面と共に説明する。
【００１６】
皮膚のツヤとは、皮膚の性状のうちの一つであり、皮膚を美しくみせる性状である。皮膚を美しくみせる皮膚表面の性状としては、透明感、ツヤなどが挙げられる。透明感は、皮膚の色に影響があると考えられている。透明感には、皮膚における光の拡散反射が寄与すると考えられており（肌の透明感測定とその対応化粧品の有用性評価：J. Soc. Cosmet. Chem. Japan, 2005; 39: 201-208）、美白を行うことにより皮膚における光の拡散反射が増大することで、透明感が増加する。美白以外にも、保湿や血行促進も透明感の増加に寄与している。ツヤは、皮膚の光沢のことを指すが、美容上好ましくない皮膚性状であるてかり(glossy又はgreasy shine)も光沢と関連があり、区別して評価することが困難であることから、ツヤの適切な評価は行われていなかった。本発明者らの研究により、拡散反射が増大した透明感のある皮膚において、さらに鏡面反射を増大することで、ツヤ肌を実現できることが見出されており（図３）、ツヤ肌は、拡散反射と鏡面反射の両方が関与すると考えられる。皮膚のツヤには、いくつかの表現があり、例えば輝き（glow, luminous, sheen）、光沢（luster）、艶（sheen）などと呼ばれることもある。したがって、本発明の皮膚のツヤ向上剤には、皮膚の輝き又は光沢向上剤ということもできる。
【００１７】
皮膚へ入射した光の一部が反射されて反射光となる。反射光は、鏡面反射と拡散反射に大別される。鏡面反射とは、一方向からの光が別の一方向に反射されることをいい、皮膚における鏡面反射は、主に皮膚の表面で生じる反射のことをいう。皮膚における鏡面反射は、皮膚の光沢に寄与していると考えられるが、皮膚の光沢に関する皮膚性状としては、ツヤのみならず、てかりも含まれる。ツヤは、皮膚を美しくみせる性状である一方で、てかりは、大量に分泌された皮脂によりもたらされることから、美容上好ましくない皮膚性状と考えられている。拡散反射は、入射光が様々な方向に反射されることをいい、皮膚の内部における反射のことをいう。皮膚における拡散反射は、皮膚の透明感に寄与しており、拡散反射が少ない皮膚はくすんだ印象を与える（図３）。
【００１８】
本発明者らの研究により、単に鏡面反射を高めた場合には、てかりが生じてしまう一方で、拡散反射が高い透明感のある皮膚において、鏡面反射を高めた場合に限り、ツヤのある皮膚となることが明らかになった（図３）。これらの知見をもとに、本発明は、下記に説明するように、皮膚の表面に偏光を入射させた後、入射した偏光の偏光方向と平行な方向に偏光している反射光及び偏光方向と垂直な方向に偏光している反射光を指標とした皮膚のツヤの評価方法に関する。
【００１９】
＜皮膚のツヤの評価方法＞
本発明の皮膚のツヤの評価方法は、
皮膚の表面に偏光を入射させる工程、
入射した偏光の偏光方向と平行な方向に偏光している反射光（平行反射光）及び偏光方向と垂直な方向に偏光している反射光（垂直反射光）を測定する工程、
平行反射光及び垂直反射光の反射率を計算する工程、
平行反射率及び垂直反射率に基づき皮膚のツヤを決定する工程
を含む。
【００２０】
平行反射率及び垂直反射率に基づき皮膚のツヤを決定する工程は、予め決定された平行反射率及び垂直反射率と皮膚のツヤとの関係を示すグラフに基づき決定することができるし、予め決定された閾値に基づいて決定することもできる。さらに別の態様では、平行反射率及び垂直反射率に基づき皮膚のツヤを決定する工程は、平行反射率及び垂直反射率から、鏡面反射率及び拡散反射率を計算する工程を含んでもよい。この場合、予め決定された鏡面反射率及び拡散反射率と皮膚のツヤとの関係を示すグラフに基づき決定することができるし、予め決定された閾値に基づいて決定することもできる。
【００２１】
この発明により、従来、美容技術者の視覚に頼る官能評価によってしか評価できなかった皮膚のツヤを、客観的に評価することが可能になる。
【００２２】
本発明の具体的実施形態における皮膚のツヤの評価方法について、図１を用いて説明する。
【００２３】
まず、皮膚の表面に偏光を入射させた後、入射した偏光の偏光方向と平行な方向に偏光している反射光を受光することにより第一の反射率（平行反射率）を測定する（Ｓ０１）。
【００２４】
なお、入射した偏光の偏光方向と平行な方向とは、入射した偏光が皮膚の表面で偏光方向を変化させずに反射した場合の偏光方向と平行な方向を意味する。
【００２５】
次に、皮膚の表面に偏光を入射させた後、入射した偏光の偏光方向と垂直な方向の反射光を受光することにより第二の反射率（垂直反射率）を測定する（Ｓ０２）。ここで、偏光を入射させる皮膚の表面及び皮膚の表面に入射させる偏光は、Ｓ０１と同一である。
【００２６】
なお、入射した偏光の偏光方向と垂直な方向とは、入射した偏光が皮膚の表面で偏光方向を変化させずに反射した場合の偏光方向と垂直な方向を意味する。
【００２７】
このとき、Ｓ０１及びＳ０２の順序は、特に限定されない。
【００２８】
さらに、第一の反射率及び第二の反射率から、拡散反射率及び鏡面反射率を求める（Ｓ０３）。
【００２９】
次に、Ｓ０３で求められた拡散反射率に対する鏡面反射率の関係を示すマップを作成する（Ｓ０４）。ここで、拡散反射率及び鏡面反射率が所定の条件を満たす場合に、皮膚にツヤがあると判定する。このとき、複数の予備被験者の拡散反射率及び鏡面反射率を求めると共に、複数の予備被験者の皮膚のツヤを美容技術者の視覚により官能評価することにより、判定基準を決定することができる。
【００３０】
一例として、拡散反射率が所定値以上であると共に、鏡面反射率が所定値以上である場合に、皮膚にツヤがあると判定する。この場合、皮膚にツヤがあると判定する拡散反射率は、通常、２５％以上であり、２７％以上であることが好ましい。また、皮膚にツヤがあると判定する鏡面反射率は、通常、１０％以上であり、１２％以上であることが好ましい。
【００３１】
全反射率、第一の反射率及び第二の反射率を測定する皮膚の部位としては、特に限定されないが、頬（特に、頬上部の目尻の直下（頬骨部））等が挙げられる。
【００３２】
なお、第一の反射率及び第二の反射率は、公知の方法を用いて、測定することができる（例えば、特許文献１参照）。
【００３３】
本実施形態における皮膚のツヤの評価方法は、第一の反射率及び第二の反射率を測定する前の皮膚に試料を塗布するステップをさらに有していてもよい。この場合、試料を皮膚に塗布する前後の拡散反射率及び鏡面反射率を求めることにより、皮膚のツヤ向上剤を探索することができる。
【００３４】
＜拡散反射率及び鏡面反射率の算出方法＞
第一の反射率（平行反射率）及び第二の反射率（垂直反射率）を、それぞれｘ1［％］及びｘ2［％］とすると、拡散反射率は、式（１）：
２ｘ2・・・（１）
から算出することができ、鏡面反射率は、式（２）：
ｘ1−ｘ2・・・（２）
から算出することができる。
【００３５】
次に、皮膚のツヤ向上剤の探索方法について説明する。ここでは、図１の皮膚のツヤの評価方法を用いて、皮膚のツヤ向上剤を探索する方法よりも簡便な皮膚のツヤ向上剤の探索方法について説明する。
【００３６】
＜皮膚のツヤ向上剤の探索方法＞
皮膚のツヤを向上させるためには、前述したように、皮膚の鏡面反射率及び拡散反射率を向上させる必要がある。ここで、皮膚の拡散反射率は、一般に、キメが細かく、メラニン・ヘモグロビン量が少なく、角層水分量が多い肌で高いことが知られている。また、美白剤（アルブチン、エチルビタミンＣ）、血行促進剤（ビタミンＥアセテート）、保湿剤（グリセリン他）を配合した化粧料を塗布すると、皮膚の拡散反射率が上昇することが知られている（例えば、Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｏｓｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．Ｊｐｎ．３９（３）  ２０１−２０８（２００５）参照）。
【００３７】
一方、皮膚の鏡面反射率については、皮膚のどのような特性に起因しているかが知られておらず、皮膚の鏡面反射率を上昇させる方法は知られていない。
【００３８】
そこで、皮膚のツヤを向上剤を探索するためには、皮膚の鏡面反射率を向上させる化合物又は組成物、即ち、皮膚の鏡面反射率向上剤を探索する必要がある。
【００３９】
本発明者らの研究により、鏡面反射を高めるためには、皮膚の表面粗さを減少させることが有効であることが見いだされた（図７）。本明細書でいう皮膚の表面粗さとは、皮溝や皮丘により表される凹凸を指しているのではなく、さらに小さい皮丘上の角層細胞の表面の凹凸のことを指している。理論に限定されることを意図するものではないが、皮丘部の表面の凹凸が平滑化することで、入射光の乱反射が減少し、鏡面反射率が増大するものと考えられる。したがって、角層平滑化作用は、鏡面反射率増大作用ともいうことができ、角層平滑化剤を、鏡面反射率増加剤ということもできる。
【００４０】
皮膚の表面粗さは、テープストリップなどにより採取された角層細胞表面を、顕微鏡、例えば原子間力顕微鏡を用いることで測定することができる。皮膚の表面粗さは、原子間力顕微鏡を用いて撮影された３Ｄスキャン画像を自作の解析プログラムを用いて半値幅２μｍガウシアンフィルター適用画像を減算することで、３Ｄ形状の傾きを補正し、表示し、ＸＹ各座標におけるＺ座標の絶対値の平均を計算することでＩＳＯ２５１７８に定義される算術平均粗さ（Ｓａ）を算出することができる。
【００４１】
本実施形態における皮膚の鏡面反射率向上剤の探索方法について、図２を用いて説明する。
【００４２】
まず、角層細胞の算術平均粗さＳａを測定する（Ｓ１１）。次に、角層細胞に試料を塗布する（Ｓ１２）。さらに、試料が塗布された角層細胞の算術平均粗さＳａを測定する（Ｓ１３）。次に、試料が塗布されていない角層細胞の算術平均粗さＳａに対する試料が塗布された角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を求める（Ｓ１４）。ここで、試料が塗布されていない角層細胞の算術平均粗さＳａに対して、試料が塗布された角層細胞の算術平均粗さＳａが有意に減少している場合に、試料が皮膚の鏡面反射率を向上させることが可能であると判定する。
【００４３】
なお、本実施形態においては、皮膚の鏡面反射率向上剤を探索する指標として、角層細胞の算術平均粗さＳａが用いられているが、角層細胞の表面粗さであれば、特に限定されない。本発明の皮膚の鏡面反射率向上剤の探索方法を用いてスクリーニングを行った結果、鏡面反射率を向上できる薬剤として、下記の薬剤を選別することができた。鏡面反射率向上剤は、透明感を改善する作用を有する薬剤と一緒に用いることにより、又は鏡面反射率向上剤自体が、透明感を改善する効果を有している場合、或いはもともと十分な透明感の皮膚を有する対象に用いられる場合に、ツヤ向上作用を発揮することができる。したがって、鏡面反射率向上剤は、ツヤ向上剤と言うこともできる。
【００４４】
＜皮膚のツヤ向上剤＞
皮膚のツヤ向上剤は、例えばサリチル酸のアルカリ金属塩、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びグリコール酸からなる群より選択される一種以上を含む。アルカリ金属塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩などが挙げられる。
【００４５】
サリチル酸のアルカリ金属塩としては、特に限定されないが、サリチル酸ナトリウム（２−ヒドロキシ安息香酸ナトリウム）等が挙げられる。
【００４６】
アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩としては、特に限定されないが、４−メトキシサリチル酸カリウム（２−ヒドロキシ−４−メトキシ安息香酸カリウム）等が挙げられる。４-メトキシサリチル酸カリウムは、角質剥離作用、メラニン生成阻害作用、ターンオーバーの正常化作用などが知られている美容成分であり、主に美白作用を謳った化粧料に配合される成分である（特許文献３及び４）。美白作用は、拡散反射を高めて皮膚の透明感の向上に寄与するが、４-メトキシサリチル酸カリウムの鏡面反射率向上作用及びツヤ向上作用については知られていなかった。
【００４７】
アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩の配合量は、任意に選択することができるが、例えば化粧料中に０．５質量％〜５質量％の濃度で配合することができる。ツヤ向上作用を発揮する観点から、１質量％以上が好ましい。一方で、効果な薬剤であることから、ツヤ向上作用が発揮される限りにおいて配合量を少なくすることが望ましく、３質量％以下で配合することが好ましい。ツヤ向上作用を発揮しつつ、配合量を少なくすることから、１質量％〜３質量％、例えば１質量％、１．５質量％、２質量％、２．５質量％、又は３質量％で配合することが好ましい。
【００４８】
皮膚のツヤ向上剤は、トリメチルグリシンをさらに含んでいてもよい。これにより、皮膚のツヤをさらに向上させることができる。トリメチルグリシンは、保湿剤として化粧料に配合されることが多い（特許文献５及び６）。一方で、本発明者らの試験により、トリメチルグリシンは、角層平滑化効果を有さず、ツヤ向上作用は有さなかった（図９）。本発明者らが、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩として４-メトキシサリチル酸カリウムと、トリメチルグリシンとを配合したところ、驚くべきことに、角層平滑化効果について相乗効果が見られた（図１０）。４-メトキシサリチル酸カリウムは、高価な薬剤であることから、ツヤ向上作用を保ちつつ、使用量を抑えることが肝要である。
【００４９】
トリメチルグリシンの配合量は、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩とのツヤ向上作用についての相乗作用を発揮させる限りにおいて任意に選択することができ、例えば化粧料中に１質量％〜１０質量％の濃度で配合することができる。アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩とのツヤ向上作用についての相乗効果を発揮させる観点から、２質量％以上が好ましく、２．５％質量％以上がより好ましく、３質量％以上がさらに好ましく、５質量％がさらにより好ましい。安定性、使用性の観点から、８質量％以下が好ましく、６質量％以下がさらに好ましい。
【００５０】
本発明は、皮膚のツヤ向上剤又は鏡面反射率増加剤の製造のための、サリチル酸のアルカリ金属塩、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びグリコール酸からなる群より選択される一種以上の使用にも関する。さらに別の態様では、ツヤ向上剤又は鏡面反射率増加剤の製造のための、サリチル酸のアルカリ金属塩、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びグリコール酸からなる群より選択される一種以上、及びトリメチルグリシンの使用に関する。使用される具体的な薬剤及びその濃度は上に記載される通りである。
【００５１】
本発明の一の態様では、皮膚のツヤ向上方法又は鏡面反射率増加方法であって、サリチル酸のアルカリ金属塩、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びグリコール酸からなる群より選択される一種以上を適用することを含む方法に関する。この方法には、さらにトリメチルグリシンを適用することを含んでもよい。このような方法を適用する対象としては、任意の対象であってもよく、例えば皮膚のツヤ向上又は鏡面反射率の増加を望む対象であり、例えばくすみ、てかりなどの皮膚トラブルを有する対象、並びに皮膚の透明感を有する対象に適用することができる。使用される具体的な薬剤及びその濃度は上に記載される通りである。任意の方式で適用可能であるが、経皮、経口、経腸などで適用することもできるが、特に塗布による経皮適用が好ましい。
【００５２】
本発明の別の態様では、美容方法であって、サリチル酸のアルカリ金属塩、アルコキシサリチル酸のアルカリ金属塩及びグリコール酸からなる群より選択される一種以上を適用することを含む方法に関する。この方法には、さらにトリメチルグリシンを適用することを含んでもよい。このような方法を適用する対象としては、任意の対象であってもよく、例えば皮膚のツヤ向上又は鏡面反射率の増加を望む対象、例えばくすみ、てかりなどの皮膚トラブルを有する対象、並びに皮膚の透明感を有する対象に適用することができる。使用される具体的な薬剤及びその濃度は上に記載される通りである。
【００５３】
皮膚のツヤ向上剤としては、特に限定されないが、化粧水、乳液、美容液、クリーム等が挙げられるし、これらの化粧料に配合されてもよい。また、医薬品、医薬部外品などに配合することもでき、特に皮膚外用剤に配合することができる。これらの化粧料に一般に添加できる薬剤、例えば保湿剤、美白剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、着色剤、香料、水、溶媒、防腐剤、保存剤、ｐH調整剤、ゲル化剤、その他活性成分を含むことができる。
【００５４】
本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【００５５】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
【実施例】
【００５６】
［実施例１］皮膚のツヤの評価
肌光沢測定装置ＳＡＭＢＡ  ＦＡＣＥ（Ｂｏｓｓａ  Ｎｏｖａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて、何も塗布していない２８名の被験者を対象として、ツヤのある頬、テカリがある頬、透明感がある頬及びくすみがある頬の拡散反射率及び鏡面反射率を求めた。このとき、照射光源の前面及び受光カメラの前部に、それぞれ偏光フィルターを設置した。ここで、受光カメラの前部における偏光フィルターの偏光方向が照射光源における偏光フィルターの偏光方向と平行又は垂直な方向になるようにして、平行偏光画像及び直交偏光画像を取得し、式（１）及び（２）から、拡散反射率及び鏡面反射率を求めた。また、頬のツヤ、テカリ、透明感、くすみの分類は、複数の美容技術者の視覚に基づき、官能評価することにより決定した。
【００５７】
なお、偏光フィルターの偏光方向と平行（又は垂直）な方向とは、偏光フィルターを通過した偏光が皮膚の表面で偏光方向を変化させずに反射した場合の偏光方向と平行（又は垂直）な方向を意味する。
【００５８】
図３に、拡散反射率に対して鏡面反射率をプロットし、その被験者の官能評価の結果を併せて表示した。
【００５９】
図３から、ツヤのある頬は、拡散反射率が３０％以上であると共に、鏡面反射率が１２％以上であることがわかる。
【００６０】
［実施例２］年代別の被験者におけるツヤの評価
肌光沢測定装置ＳＡＭＢＡ  ＦＡＣＥ（Ｂｏｓｓａ  Ｎｏｖａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて、何も塗布していない２０、３０代、４０、５０代及び６０、７０代のそれぞれ２０名の被験者を対象として、頬の拡散反射率及び鏡面反射率を、実施例１と同様にして、求めた。
【００６１】
図４に、拡散反射率に対して鏡面反射率をプロットし、その被験者の年代を併せて表示した。
【００６２】
［実施例３］化粧料の塗布によるツヤの変化
［化粧水の調製］
水（残余）、エタノール（５質量％）、グリセリン（１０質量％）、ジプロピレングリコール（１０質量％）、ポリオキシエチレン（１０）メチルグルコシド（１質量％）、エリスリトール（１質量％）、トレハロース（１質量％）、ヒアルロン酸ナトリウム（０．１質量％）、ポリオキシエチレン（１４）ポリオキシプロピレン（７）ジメチルエーテル（１質量％）、カルボキシビニルポリマー（０．１質量％）、苛性カリ（適量）、ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油（０．２質量％）、ジイソステアリン酸ポリグリセリル（０．１質量％）、ジフェニルシロキシフェニルトリメチコン（０．２質量％）、イソステアリルアルコール（０．１質量％）、イソステアリン酸（０．１質量％）、エデト酸三ナトリウム（適量）、フェノキシエタノール（適量）及び香料（適量）を混合し、化粧水を得た。
【００６３】
［乳液の調製］
水（残余）、エタノール（５質量％）、グリセリン（４質量％）、ジプロピレングリコール（５質量％）、ヒアルロン酸ナトリウム（０．１質量％）、カルボキシビニルポリマー（０．１質量％）、キサンタンガム（０．１質量％）、苛性カリ（適量）、イソステアリン酸（０．５質量％）、ステアリン酸（０．５質量％）、ベヘニン酸（０．５質量％）、自己乳化型モノステアリン酸グリセリル（１質量％）、モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン（１質量％）、ベヘニルアルコール（１質量％）、ワセリン（３質量％）、テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット（５質量％）、オレフィンオリゴマー（３質量％）、ジフェニルシロキシフェニルトリメチコン（２質量％）、エデト酸三ナトリウム（適量）、メタリン酸ソーダ（適量）、フェノキシエタノール（適量）及び香料（適量）を混合し、乳液を得た。
【００６４】
被験者の頬に化粧水及び乳液を塗布すると、物理化学的な作用により、一見ツヤが増したと感じられた。
【００６５】
肌光沢測定装置ＳＡＭＢＡ  ＦＡＣＥ（Ｂｏｓｓａ  Ｎｏｖａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて、何も塗布していない１０名の被験者を対象として、頬の拡散反射率及び鏡面反射率を、実施例１と同様にして、求めた。次に、被験者の頬に化粧水及び乳液を塗布した後、上記と同様にして、頬の拡散反射率及び鏡面反射率を求めた。化粧水及び乳液を塗布する前後の拡散反射率に対する鏡面反射率の関係を図５に示す。また、化粧水及び乳液を塗布する前後の鏡面反射率の変化を図６に示す。
【００６６】
図６から、化粧水及び乳液を塗布することにより、頬の鏡面反射率が増大することがわかる。化粧水及び乳液の塗布の前後で拡散反射率の変化は少ない一方で、鏡面反射率は塗布後に増加する傾向がある。化粧水や乳液は、皮膚に潤いを与える結果、角層表面の凹凸を一時的に平滑化するため、鏡面反射率が増加すると考えられる。一方で、化粧水や乳液などを塗布していない状態で、鏡面反射率を増加できる薬剤の探索を可能にする指標について下記の通り検討した。
【００６７】
[実施例４]皮膚の鏡面反射率に相関する指標の探索
肌光沢測定装置ＳＡＭＢＡ  ＦＡＣＥ（Ｂｏｓｓａ  Ｎｏｖａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて、皮膚外用剤を塗布していない２０、３０代、４０、５０代及び６０、７０代のそれぞれ２０名の被験者を対象として、頬の拡散反射率及び鏡面反射率を求めた。
【００６８】
一方、ポスト・イット（３Ｍ社製）を用いて、被験者の頬から角層細胞を剥離した。次に、スライドガラスに両面テープを貼付した後、剥離した角層細胞をスライドガラスに転写した。さらに、３ＣＣＤリアルカラーコンフォーカル顕微鏡ＯＰＴＥＬＩＣＳ  Ｈ１２００Ａ（レーザーテック社製）に装着されているＡＦＭを用いて、５個の角層細胞の算術平均粗さＳａを測定し、平均値を求めた。
【００６９】
図７に、角層細胞の算術平均粗さＳａに対する鏡面反射率の関係を示す。
【００７０】
図７から、角層細胞の算術平均粗さＳａと鏡面反射率との間の相関係数が−０．２２２であり、負の相関が見られることがわかる。すなわち、角層細胞の算術平均粗さＳａが低下することで、鏡面反射率が向上することが判明した。そこで、角層細胞の算術平均粗さＳａを指標として用い、皮膚の鏡面反射率向上剤を探索した。
【００７１】
[実施例５]  鏡面反射率向上剤のスクリーニング
ポスト・イット（３Ｍ社製）を用いて、被験者の頬から角層細胞を剥離した。次に、スライドガラスに両面テープを貼付した後、剥離した角層細胞をスライドガラスに転写した。さらに、３ＣＣＤリアルカラーコンフォーカル顕微鏡ＯＰＴＥＬＩＣＳ  Ｈ１２００Ａ（レーザーテック社製）に装着されているＡＦＭを用いて、５個の角層細胞の算術平均粗さＳａを測定し、平均値を求めた。次に、角層細胞に候補試料１００μＬを滴下した後、３７℃で３０分間インキュベーションした。さらに、上記の５個の角層細胞の算術平均粗さＳａを同様に測定し、平均値を求めた。候補試料が塗布されていない角層細胞の表面粗さに対して、前記試料が塗布された角層細胞の表面粗さが有意に減少している場合に、前記試料が皮膚の鏡面反射率を向上させることが可能であると判定した。
【００７２】
候補試料として、化粧品素材９種についてスクリーニングを行った結果、４-メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）、サリチル酸ナトリウム、及びグリコール酸を鏡面反射率向上剤としてスクリーニングすることができた。スクリーニングにより得られた候補試料を下記の処方でさらに分析を行った。
【００７３】
［試料の調製１］
０質量％、０．１質量％、１．０質量％、３．０質量％、及び１０．０質量％の濃度の４-メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）の候補試料を調製した。
【００７４】
候補試料を添加前後における角層細胞の算術平均粗さＳａの変化率を図８に示す。４-メトキシサリチル酸カリウムは、３．０質量％まで用量依存的に算術平均粗さＳａの減少率が増加し、角層細胞の表面が平滑化していることが示される。これにより、鏡面反射率の向上が期待できる。なお、４−メトキシサリチル酸カリウムは、美白効果を有する化合物であることから、透明度と、鏡面反射率の両方を増加することにより、ツヤ向上剤として作用できる。
【００７５】
［試料の調製２］
０質量％、５質量％及び１０質量％の濃度のトリメチルグリシン（ＴＭＧ）の候補試料を調製した。
【００７６】
候補試料を添加前後における角層細胞の算術平均粗さＳａの変化率を図９に示す。トリメチルグリシンは、どの濃度においても算術平均粗さＳａの減少率に差はなかった。
【００７７】
［試料の調製３］
上記試料の調製１に加えて、１．０質量％の濃度の４-メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）及び１質量％の濃度のトリメチルグリシン（ＴＭＧ）、１．０質量％の濃度の４-メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）及び３質量％の濃度のトリメチルグリシン（ＴＭＧ）、１．０質量％の濃度の４-メトキシサリチル酸カリウム（４-ＭＳＫ）及び５質量％の濃度のトリメチルグリシン（ＴＭＧ）を含む候補試料を調製した。
【００７８】
候補試料を添加前後における角層細胞の算術平均粗さＳａの変化率を図１０に示す。１．０質量％の４-メトキシサリチル酸カリウムと比較すると、ＴＭＧをさらに添加した場合、用量依存的にＳａ減少率が増加した。トリメチルグリシン単独では、Ｓａ減少率に影響がなかった一方で、４-メトキシサリチル酸カリウムと組み合わせると有意にＳａ減少率が増加しており、相乗効果であるといえる。
【００７９】
［試料１−１の調製］
４−メトキシサリチル酸カリウム３質量％及び水９７質量％を混合し、試料１−１を得た。
【００８０】
［試料１−２の調製］
４−メトキシサリチル酸カリウム１０質量％及び水９０質量％を混合し試料１−２を得た。
【００８１】
図１１に、試料１−１を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す。ここで、図１１には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａも併せて示す。
【００８２】
図１２に、試料１−１を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。ここで、図１２には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率も併せて示す。
【００８３】
図１２から、試料１−１は、水と比較して、角層細胞の算術平均粗さＳａを有意に減少させることができ、その結果、皮膚の鏡面反射率を向上させることができる。
【００８４】
図１３に、試料１−１、１−２を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。ここで、図１３には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率も併せて示す。
【００８５】
図１３から、試料中の４−メトキシサリチル酸カリウムの濃度が３〜１０質量％であると、角層細胞の算術平均粗さＳａを有意に減少させることがわかる。
【００８６】
［試料２の調製］
４−メトキシサリチル酸カリウム１質量％、トリメチルグリシン５質量％及び水９４質量％を混合し、試料２を得た。
【００８７】
図１４に、試料２を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す。ここで、図１１には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａも併せて示す。
【００８８】
図１５に、試料２を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。ここで、図１５には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率も併せて示す。
【００８９】
図１５から、試料２は、水と比較して、角層細胞の算術平均粗さＳａを有意に減少させることができ、その結果、皮膚の鏡面反射率を向上させることができる。なお、トリメチルグリシン単独では、皮膚の鏡面反射率が向上しないことを確認している。
【００９０】
［試料３の調製］
サリチル酸ナトリウム３質量％及び水９７質量％を混合し、試料３を得た。
【００９１】
図１６に、試料３を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す。ここで、図１３には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａも併せて示す。
【００９２】
図１７に、試料３を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。ここで、図１７には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率も併せて示す。
【００９３】
図１７から、試料３は、水と比較して、角層細胞の算術平均粗さＳａを有意に減少させることができ、その結果、皮膚の鏡面反射率を向上させることができる。
【００９４】
［試料４−１の調製］
グリコール酸４質量％及び水９６質量％を混合し、試料４−１を得た。
【００９５】
［試料４−２の調製］
グリコール酸４０質量％及び水６０質量％を混合し、試料４−２を得た。
【００９６】
図１８に、試料４−１を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す。ここで、図１８には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａも併せて示す。
【００９７】
図１９に、試料４−１を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。
ここで、図１９には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率も併せて示す。
【００９８】
図１９から、試料４−１は、水と比較して、角層細胞の算術平均粗さＳａを有意に減少させることができ、その結果、皮膚の鏡面反射率を向上させることができる。
【００９９】
図２０に、試料４−１、４−２を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。ここで、図２０には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率も併せて示す。
【０１００】
図２０から、皮膚外用剤中のグリコール酸の濃度が４〜４０質量％であると、角層細胞の算術平均粗さＳａを有意に減少させることがわかる。
【０１０１】
［試料５の調製］
グリコール酸２質量％、トリメチルグリシン５質量％及び水９３質量％を混合し、試料５を得た。
【０１０２】
図２１に、試料５を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａを示す。ここで、図２３には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａも併せて示す。
【０１０３】
図２２に、試料５を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率を示す。ここで、図２２には、水を塗布する前後の角層細胞の算術平均粗さＳａの減少率も併せて示す。
【０１０４】
図２２から、試料５は、水と比較して、角層細胞の算術平均粗さＳａを有意に減少させることができ、その結果、皮膚の鏡面反射率を向上させることができる。
【０１０５】
［実施例６］皮膚への適用試験
３１歳〜５９歳の女性被験者６０人を３群に分け、候補美容液を、入浴後１日１回、３ヶ月間、顔に適用した。適用開始前、適用開始後１ヶ月目、２ヶ月目、及び３ヶ月目において、アンケートを行った。また、同時に角層試料を取得して、肌理及び角層粗さを測定した。さらにSambaFaceにより鏡面反射率及び拡散反射率を測定しツヤを評価した。
【０１０６】
［候補美容液］
候補美容液として下記のものを用いた：
A：薬剤無配合の乳液状美容液（対照群）
B：１％４-メトキシサリチル酸カリウム＋５％トリメチルグリシン配合の乳液状美容液（１％４-ＭＳＫ＋５％ＴＭＧ群）
C:３％４−メトキシサリチル酸カリウム配合の乳液状美容液（３％４-ＭＳＫ群）
乳液状美容液としては、下記の美容液を用いた：
（配合成分）                                    （質量％）
エタノール                                        ５％
グリセリン                                        ２％
ジプロピレングリコール                            ４％
１，３−ブチレングリコール                        ２％
キサンタンガム                                ０．１％
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル      １％
新油型モノステアリン酸グリセリル                  ２％
バチルアルコール                                  １％
ベヘニルアルコール                              ２．５％
メチルポリシロキサン                                ５％
硬化油                                          ２．５％
ホホバ油                                            ３％
エチルヘキサン酸セチル                              ３％
クエン酸                                            適量
クエン酸Ｎａ                                        適量
ＥＤＴＡ−３Ｎａ                                    適量
メチルパラベン                                      適量
水                                              残余
１００％
【０１０７】
［アンケート］
アンケートの項目は、肌のツヤが良くなった：５点、やや良くなった：４点、変わらない：３点、やや悪くなった：２点、悪くなった：１点とし、その平均点を計算した。１ヶ月目、２ヶ月目、及び３ヶ月目の結果を図２３に示す。
【０１０８】
［角層粗さ測定］
被験者の皮膚から、ポストイット（登録商標）（３Ｍ社）を用いて表面の角層試料を剥離した。実施例４に記載の方法に従い、算術平均粗さＳａを測定し平均値を求め、適用開始前からの減少率の結果を図２４に示す。
【０１０９】
［キメの測定］
被験者の皮膚から、ポストイット（登録商標）（３Ｍ社）を用いて表面の角層試料を剥離した。走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）台のカーボンテープに転写し、ＳＥＭで撮影した。画像処理（Skin Res Technol 2014; 20: 299-306参照）を用いて、キメ画素数を測定した。結果を図２５に示す。
【０１１０】
［ツヤの評価］
被験者に対し、実施例１に記載の方法を用いて、鏡面反射率及び拡散反射率を測定した。適用前の鏡面反射率及び拡散反射率に対する３ヶ月後の鏡面反射率及び拡散反射率の結果を図２６に示す。
【０１１１】
アンケートの結果及びツヤの評価結果の両方において、１％４-ＭＳＫ＋５％ＴＭＧ群及び３％４-ＭＳＫ群の両方で、肌のツヤの改善が見られており、その改善度は、１％４-ＭＳＫ＋５％ＴＭＧ群の方が優れていることが示された。また、角層粗さによるツヤの評価においても、同じ傾向が見られた。さらに、キメの測定結果から、１％４-ＭＳＫ＋５％ＴＭＧ群及び３％４-ＭＳＫ群の両方でキメが細かくなっているという結果を得た。鏡面反射率は、キメが荒くなることでも増加することが知られているが、１％４-ＭＳＫ＋５％ＴＭＧ及び３％４-ＭＳＫは、それぞれキメを荒くすることなく鏡面反射率を増加できることが示された。
【図１】
2020073933.tif 000003
【図２】
2020073933.tif 000004
【図３】
2020073933.tif 000005
【図４】
2020073933.tif 000006
【図５】
2020073933.tif 000007
【図６】
2020073933.tif 000008
【図７】
2020073933.tif 000009
【図８】
2020073933.tif 000010
【図９】
2020073933.tif 000011
【図１０】
2020073933.tif 000012
【図１１】
2020073933.tif 000013
【図１２】
2020073933.tif 000014
【図１３】
2020073933.tif 000015
【図１４】
2020073933.tif 000016
【図１５】
2020073933.tif 000017
【図１６】
2020073933.tif 000018
【図１７】
2020073933.tif 000019
【図１８】
2020073933.tif 000020
【図１９】
2020073933.tif 000021
【図２０】
2020073933.tif 000022
【図２１】
2020073933.tif 000023
【図２２】
2020073933.tif 000024
【図２３】
2020073933.tif 000025
【図２４】
2020073933.tif 000026
【図２５】
2020073933.tif 000027
【図２６】
2020073933.tif 000028