(57)【要約】      （修正有）【課題】ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを用いたアルポート症候群の処置のための方法。【解決手段】ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、アルポート症候群を有する被検体の腎機能を改善する、および／または線維症を減少させる。ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドの投与は、アルポート症候群を有する被検体の末期腎臓病の発症を遅延させる。ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、アルポート症候群を有する被検体の透析または腎臓移植の必要性を遅延させる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルポート症候群を処置する方法であって、アルポート症候群を有するまたはそれを有
する疑いがある被検体に、１２〜２５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレ
オチドを投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２
１と相補的である方法。
【請求項２】
前記被検体は前記修飾オリゴヌクレオチドを投与する前にアルポート症候群を有すると
診断されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被検体は、前記修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、前記被検体の腎臓中、尿中
または血液中のｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定された、請求項１に記載の方
法。
【請求項４】
前記投与は、
ａ．  腎機能を改善する；
ｂ．  末期腎臓病の発症を遅延させる；
ｃ．  透析までの時間を遅延させる；
ｄ．  腎移植までの時間を遅延させる；および／または
ｅ．  平均余命を改善する
請求項１〜３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記投与は、
ａ．  血尿を減少させる；
ｂ．  血尿の発症を遅延させる；
ｃ．  タンパク尿を減少させる；
ｄ．  タンパク尿の発症を遅延させる；
ｅ．  腎線維症を抑制する；
ｆ．  線維症の更なる進行を遅延させる；および／または
ｇ．  線維症の更なる進行を阻止する
請求項１〜４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記被検体は、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖をコードする遺伝子の突然変異、ＩＶ型コラ
ーゲンのα４鎖をコードする遺伝子の突然変異、またはＩＶ型コラーゲンのα５鎖をコー
ドする遺伝子の突然変異から選択される突然変異を有する、請求項１〜５の何れか一項に
記載の方法。
【請求項７】
前記被検体は男性（雄）である、請求項１〜６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記被検体は女性（雌）である、請求項１〜７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記被検体は血尿および／またはタンパク尿を有すると確認される、請求項１〜８の何
れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記被検体は腎機能が低下している、請求項１〜９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記被検体は腎機能の改善を必要としている、請求項１〜１０の何れか一項に記載の方
法。
【請求項１２】
ａ．  前記被検体の血液中の血中尿素窒素を測定すること；
ｂ．  前記被検体の血液中のクレアチニンを測定すること；
ｃ．  前記被検体のクレアチニンクリアランスを測定すること；
ｄ．  前記被検体のタンパク尿を測定すること；
ｅ．  前記被検体のアルブミン：クレアチニン比を測定すること；
ｆ．  前記被検体の糸球体濾過量を測定すること；
ｇ．  前記被検体のシスタチンＣを測定すること；
ｈ．  前記被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）を測定すること；
ｉ．  前記被検体の血液中の２−ミクログロブリンを測定すること；
ｊ．  前記被検体の尿中のＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）タン
パク質を測定すること；
ｋ．  前記被検体の尿中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質
を測定すること；
ｌ．  前記被検体の尿中の腎臓傷害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質を測定すること
；
ｍ．  前記被検体の尿中のインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）タンパク質を測定す
ること；
ｎ．  前記被検体の尿中の単球走化性タンパク質（ＭＣＰ１）レベルを測定すること；
ｏ．  前記被検体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルを測定すること；
ｐ．  前記被検体の尿中のコラーゲンＩＶフラグメントを測定すること；
ｑ．  前記被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩフラグメントを測定すること；および／ま
たは
ｒ．  前記被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベルを測定することであって、前記有
足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される測定すること、
を含む、請求項１〜１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記投与は、
ａ．  前記被検体の血中尿素窒素の低下；
ｂ．  前記被検体の血液中のクレアチニンの低下；
ｃ．  前記被検体のクレアチニンクリアランスの改善；
ｄ．  前記被検体のタンパク尿の減少；
ｅ．  前記被検体のアルブミン：クレアチニン比の低下；
ｆ．  前記被検体の糸球体濾過量の改善；
ｇ．  前記被検体の血液中のシスタチンＣの低下；
ｈ．  前記被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）の低下；
ｉ．  被検体の血液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の低下；
ｊ．  前記被検体の尿中のＮＡＧタンパク質の低下；
ｋ．  前記被検体の尿中のＮＧＡＬタンパク質の低下；
ｌ．  前記被検体の尿中のＫＩＭ−１タンパク質の低下；
ｍ．  前記被検体の尿中のＩＬ−１８タンパク質の低下；
ｎ．  前記被検体の尿中の単球走化性タンパク質（ＭＣＰ１）レベルの低下；
ｏ．  前記被検体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルの低下；
ｐ．  前記被検体の尿中のコラーゲンＩＶフラグメントの低下；
ｑ．  前記被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩフラグメントの低下；および／または
ｒ．  前記被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベルの低下であって、前記有足細胞タ
ンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される低下
から選択される前記被検体の腎機能の１つまたは複数のマーカーの改善を行う、請求項１
〜１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記タンパク尿はアルブミン尿である、請求項５、１２または１３の何れか一項に記載
の方法。
【請求項１５】
前記アルブミン尿は正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿または顕性アルブミン尿
である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記アルポート症候群はＸ連鎖型アルポート症候群である、請求項１〜１５の何れか一
項に記載の方法。
【請求項１７】
前記アルポート症候群は常染色体性型のアルポート症候群である、請求項１〜１６の何
れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬
（ＡＲＢ）、降圧薬、ビタミンＤアナログ、経口リン吸着薬、透析および腎臓移植から選
択される少なくとも１つの追加治療を行うことを含む、請求項１〜１７の何れか一項に記
載の方法。
【請求項１９】
前記アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤はカプトプリル、エナラプリル、
リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルおよびラミプリルから選択され
る、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）はカンデサルタン、イルベサルタン
、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタンか
ら選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基配列（配列番号
１）と少なくとも９０％相補的、少なくとも９５％相補的または１００％相補的である、
請求項１〜２０の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記修飾オリゴヌクレオチドは１５〜２５個連結したヌクレオシドからなる、請求項１
〜２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記修飾オリゴヌクレオチドは１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２
１個または２２個連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜２２の何れか一項に記載の
方法。
【請求項２４】
前記修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも１個の修飾ヌクレオシドを含む、請求項１〜
２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記修飾ヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオ
シドおよびＬＮＡヌクレオシドから選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求
項１〜２５の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合で
ある、請求項１〜２６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項
２３または２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡ
ＧＣＳＴＡＥ−３’を有し、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキ
シリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌ
クレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシド
を示し、ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請
求項１〜２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
１２〜２５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、前記修
飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１と相補的である修飾オリゴヌクレオ
チドの、アルポート症候群の処置のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書で提供されるのは、アルポート症候群を処置するための方法および組成物であ
る。
【背景技術】
【０００２】
基底膜の主要成分であるＩＶ型コラーゲンは、６種のα鎖：α１コラーゲン（ＩＶ型）
鎖、α２コラーゲン（ＩＶ型）鎖、α３コラーゲン（ＩＶ型）鎖、α４コラーゲン（ＩＶ
型）鎖、α５コラーゲン（ＩＶ型）鎖およびα６コラーゲン（ＩＶ型）のファミリーであ
る。コラーゲンＩＶのα３鎖、α４鎖およびα６鎖は、腎臓による血液の濾過という重要
な機能を行う糸球体基底膜（ＧＢＭ）のコラーゲンネットワークの基本成分である。
【０００３】
アルポート症候群は、異常型の糸球体基底膜（ＧＢＭ）が出現して、間質線維症、糸球
体硬化をきたし、最終的に腎機能の喪失に至る遺伝性の腎疾患である。本疾患はさらに、
難聴および眼球異常を特徴とする場合が多い。アルポート症候群は、それぞれＩＶ型コラ
ーゲンのα３（ＩＶ）鎖、α４（ＩＶ）鎖およびα５（ＩＶ）鎖をコードするＣｏｌ４ａ
３、Ｃｏｌ４ａ４またはＣｏｌ４ａ５の突然変異により引き起こされる。Ｘ染色体上のＣ
ｏｌ４ａ５遺伝子の突然変異はＸ連鎖型アルポート症候群を引き起こし、本疾患の全症例
の８５％を占める。常染色体劣性型は、各々２番染色体上に位置するＣｏｌ４ａ３あるい
はＣｏｌ４ａ４の何れかのコピーの突然変異がそれぞれ遺伝することによる。稀な常染色
体優性型は、Ｃｏｌ４ａ３あるいはＣｏｌ４ａ４遺伝子の何れかのドミナントネガティブ
突然変異の遺伝による。Ｘ連鎖型は女性より男性の方が症状が重く、男性の大部分の症例
は末期腎臓病（ＥＳＲＤ）に進行する。常染色体性型は、男女の重症度が同程度である。
本疾患の大部分の症例は遺伝性突然変異によるが、一部の症例は、Ｃｏｌ４ａＡ遺伝子の
１つの新規突然変異によるものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本明細書で提供されるのは、アルポート症候群を処置するための方法であって、アルポ
ート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体に、１２〜２５個連結したヌク
レオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを投与することを含み、修飾オリゴヌクレオチ
ドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１と相補的である方法である。ある種の実施形態では、被
検体は修飾オリゴヌクレオチドを投与する前にアルポート症候群を有すると診断されてい
る。ある種の実施形態では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、被検体の
腎臓組織においてｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定された。ある種の実施形態
では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、被検体の尿中または血液中のｍ
ｉＲ−２１のレベルが増加していると判定された。
【０００５】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、アルポート症候群を有するまたはそれを
有する疑いがある被検体への、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与は
、腎機能を改善する；末期腎臓病の発症を遅延させる；透析までの時間を遅延させる；腎
移植までの時間を遅延させる；および／または被検体の平均余命を改善することができる
。
【０００６】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、アルポート症候群を有するまたはそれを
有する疑いがある被検体への、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与は
、血尿を減少させる；血尿の発症を遅延させる；タンパク尿を減少させる；タンパク尿の
発症を遅延させる；腎線維症を減少させる；線維症の更なる進行を遅延させる；および／
または線維症の更なる進行を阻止することができる。
【０００７】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、被検体は、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖を
コードする遺伝子の突然変異、ＩＶ型コラーゲンのα４鎖をコードする遺伝子の突然変異
、またはＩＶ型コラーゲンのα５鎖をコードする遺伝子の突然変異から選択される突然変
異を有し得る。ある種の実施形態では、被検体は男性（雄）である。ある種の実施形態で
は、被検体は女性（雌）である。ある種の実施形態では、被検体は血尿および／またはタ
ンパク尿を有すると確認される。ある種の実施形態では、被検体は腎機能が低下している
。ある種の実施形態では、被検体は腎機能の改善を必要としている。
【０００８】
本明細書に提供される実施形態の何れかは、被検体の血液中の血中尿素窒素を測定する
こと；被検体の血液中のクレアチニンを測定すること；被検体のクレアチニンクリアラン
スを測定すること；被検体のタンパク尿を測定すること；被検体のアルブミン：クレアチ
ニン比を測定すること；および／または被検体の糸球体濾過量を測定することを含んでも
よい。
【０００９】
本明細書に提供される実施形態の何れかは、被検体の尿中のＮ−アセチル−β−Ｄ−グ
ルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）タンパク質を測定すること；被検体の尿中の好中球ゼラチナ
ーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を測定すること；被検体の尿中の腎臓傷害分
子−１（ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｊｕｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ：ＫＩＭ−１）タンパク質を測
定すること；被検体の尿中のインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）タンパク質を測定す
ること；被検体の尿中の単球走化性タンパク質（ＭＣＰ１）レベルを測定すること；被検
体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルを測定すること；被検体の尿中のコラー
ゲンＩＶ（Ｃｏｌ  ＩＶ）フラグメントを測定すること；被検体の尿中のコラーゲンＩＩ
Ｉ（Ｃｏｌ  ＩＩＩ）フラグメントを測定すること；および／または被検体の尿中の有足
細胞タンパク質（有足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される）レベル
を測定することを含んでもよい。本明細書に提供される実施形態の何れかは、被検体の血
液中のシスタチンＣタンパク質を測定すること；被検体の血液中のβトレースタンパク質
（ＢＴＰ）を測定すること；および被検体の血液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）を
測定することを含んでもよい。
【００１０】
本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の血中尿素窒素の低下；被検体の血液中
のクレアチニンの低下；被検体のクレアチニンクリアランスの改善；被検体のタンパク尿
の減少；被検体のアルブミン：クレアチニン比の低下；および／または被検体の糸球体濾
過量の改善から選択される被検体の腎機能の１つまたは複数のマーカーの改善を行うこと
ができる。本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の尿中のＮＡＧの低下；被検体
の尿中のＮＧＡＬの低下；被検体の尿中のＫＩＭ−１の低下；被検体の尿中のＩＬ−１８
の低下；被検体の尿中のＭＣＰ１の低下；被検体の尿中のＣＴＧＦの低下；被検体の尿中
のコラーゲンＩＶフラグメントの低下；被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩフラグメントの
低下；および被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベル（有足細胞タンパク質はネフリン
およびポドシンから選択される）の低下から選択される被検体の腎機能の１つまたは複数
のマーカーの改善を行うことができる。本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の
血液中のシスタチンＣタンパク質の低下、被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴ
Ｐ）の低下、および被検体の血液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の低下から選択さ
れる腎機能の１つまたは複数のマーカーの改善を行うことができる。
【００１１】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、タンパク尿はアルブミン尿である。アル
ブミン尿は正常高値アルブミン尿でも、微量アルブミン尿でも、あるいは顕性アルブミン
尿でもよい。
【００１２】
ある種の実施形態では、アルポート症候群はＸ連鎖型アルポート症候群である。ある種
の実施形態では、アルポート症候群は常染色体性型のアルポート症候群である。
【００１３】
本明細書に提供される実施形態の何れかは、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）
阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、降圧薬、ビタミンＤアナログ、
経口リン吸着薬、透析および腎臓移植から選択される少なくとも１つの追加治療を行うこ
とを含んでもよい。これらの実施形態の何れかでは、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（Ａ
ＣＥ）阻害剤は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリ
ル、ホシノプリルおよびラミプリルから選択される。これらの実施形態の何れかでは、ア
ンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）は、カンデサルタン、イルベサルタン、オル
メサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタンから選択
される。これらの実施形態の何れかでは、ＡＣＥ阻害剤は、シラザプリル、ペリンドプリ
ルおよびトランドラプリルから選択される。
【００１４】
ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、０．５〜１ｍｇ／ｍ２／日、１〜６ｍｇ／ｍ
２／日、１〜２ｍｇ／ｍ２／日、２〜４ｍｇ／ｍ２／日、または４〜８ｍｇ／ｍ２／日の
範囲にわたる用量で投与される。
【００１５】
ある種の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５〜１５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用
量で投与される。これらの実施形態の何れかでは、ＡＲＢは、６．２５ｍｇ／ｍ２／日、
１０ｍｇ／ｍ２／日、１２．５ｍｇ／ｍ２／日、１８．７５ｍｇ／ｍ２／日、３７．５ｍ
ｇ／ｍ２／日、５０ｍｇ／ｍ２／日、または１５０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
【００１６】
ある種の実施形態では、少なくとも１つの追加治療はアルドステロンアンタゴンシスト
である。ある種の実施形態では、アルドステロンアンタゴニストはスピロノラクトンであ
る。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは１日１０〜３５ｍｇの範囲にわたる用量
で投与される。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは１日２５ｍｇの用量で投与さ
れる。
【００１７】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列
は、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列（配列番号１）と少なくとも９０％相補的、少なくとも
９５％相補的または１００％相補的である。
【００１８】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜３０個
、１２〜２５個または１５〜２５個連結したヌクレオシドからなる。本明細書に提供され
る実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、１２個、１３個、１４個、１５個
、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個連結したヌクレオシド
からなる。本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、１
５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個連結したヌクレオ
シドからなる。
【００１９】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも１
個の修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド、２’−Ｏ
−メトキシエチルヌクレオシド、およびＬＮＡヌクレオシドから選択してもよい。修飾オ
リゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含んでもよい。修飾オ
リゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合であってもよい
。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間
結合である。
【００２０】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−Ａ
ＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有しても
よく、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；
後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付
き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し、ヌクレオシド間結合
は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【００２１】
本明細書で提供されるのは、８〜３０個、１２〜２５個または１５〜２５個連結したヌ
クレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩
基配列がｍｉＲ−２１と相補的である修飾オリゴヌクレオチドの、アルポート症候群の処
置のための使用である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの腎機能を改善させる。図１Ａは９週目の血中尿素窒素（ＢＵＮ）を示す。図１Ｂは３週目、５週目、７週目および９週目の尿中アルブミン／クレアチニン比を示す。＊は統計学的有意性を示す。
【図２】抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの糸球体硬化症を予防する。糸球体硬化症は、０（硬化症なし）〜４（完全な硬化症）の範囲にわたる半定量的硬化スコアを用いて評価した（ｎ＝１０）。
【図３】抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの線維症を減少させる。図３Ａは、腎臓におけるピクロシリウス（シリウス）レッド染色線維症の定量を示す（ｎ＝６）。図３Ｂは、ＧＡＰＤＨに対して標準化したＣｏｌ１ａ１転写物の定量ＰＣＲを示す（ｎ＝６）。＊は統計学的有意性を示す。
【図４】抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓傷害の順位を低下させる。図４Ａは９週齢のマウスの腎切片の腎臓傷害順位スコアを示す。図４Ｂは糸球体半月体の比率を示す（ｎ＝５）。図４Ｃは尿細管傷害の定量を示す（ｎ＝５）。＊は統計学的有意性を示す。
【図５】図５Ａでは、抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスのマクロファージ浸潤を減少させる。９週齢のマウスの腎切片のＦ４／８０染色の定量を示す（ｎ＝５）。図５Ｂでは、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの筋線維芽細胞を減少させる。９週齢のマウスの腎切片のαＳＭＡ染色の定量を示す（ｎ＝５）。＊は統計学的有意性を示す。
【図６】抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの反応性酸素種を減少させる。図６Ａは抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの尿中の過酸化水素の定量を示す（ｎ＝８；＊は統計学的有意性を示す）。図６Ｂは、抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウス、および野生型マウスの腎臓組織のＤＥＳの定量を示す（各群ｎ＝３；＊統計学的有意性を示す）。
【図７】抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの有足細胞数を改善する。抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの糸球体におけるＷＴ１陽性細胞数の定量を示す（ｎ＝３；ｐ＝０．００５）。
【図８】抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を延長する。図８Ａは、抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの体重を示す（ｐ＜０．０１）。図８Ｂは、抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を示す（ｐ＜０．００１）。
【図９】抗ｍｉＲ−２１は用量反応性に、腎機能を改善し、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を延長する（各処置群ｎ＝１０〜１３）。図９Ａは、週１回（ＱＷ）もしくは週２回（ＢＩＷ）の反復投与にて抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの７週目の血中尿素窒素を示す。図９Ｂは、週１回（ＱＷ）もしくは週２回（ＢＩＷ）の反復投与にて抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
他に記載がない限り、本明細書で使用する技術用語及び科学用語は全て、本発明が属す
る技術分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を持つ。具体的な定義がなされて
いない場合、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬化学に関連
して使用される用語と、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬
化学の手順及び技法とは、当該技術分野において公知であり、一般に用いられるものであ
る。本明細書の用語に複数の定義が存在する場合、本セクションの定義が優先する。化学
合成、化学分析、医薬品の調製、製剤及び送達、並びに被検体の処置には、標準的な技法
を使用することができる。ある種のそうした技法及び手順は、例えば「Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ
」Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓａｎｇｖｉ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，１９９４；及び「Ｒｅｍ
ｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，」Ｍａｃｋ  Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９
９０で確認することができ、更に、これらをいかなる目的においても本明細書に援用する
。許容される場合、特許、特許出願、公開された出願及び公報、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウ
ェブサイト、及び本明細書の開示内容全体を通して参照した他の公開資料は、他に記載が
ない限り、その全体を援用する。ＵＲＬまたは他のそうした識別子またはアドレスに言及
する場合、そうした識別子は変更されることがあり、インターネット上の特定の情報も変
更される場合があるが、インターネットの検索により、対応する情報を確認することがで
きることが理解されよう。それを参照することにより、そうした情報の利用可能性及び一
般への提供が明らかにされる。
【００２４】
本組成物及び方法を開示し、説明するのに先立ち、本明細書に使用される用語は、特定
の実施形態を説明するためのものにすぎず、限定的であることを意図するものではないこ
とを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用する場合、単数形表現「１
つの（ａ、ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合
を除き、複数の意味を含むことに留意しなければならない。
【００２５】
定義
「アルポート症候群」は、異常なレベルの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が産生され、間質線
維症、糸球体硬化をきたし、最終的には腎機能の喪失に至る遺伝性の腎疾患を意味する。
本疾患はさらに難聴および眼球異常を特徴とする場合が多い。
【００２６】
「血尿」は尿中に赤血球が存在することを意味する。
【００２７】
「アルブミン尿」は、尿中に過剰なアルブミンが存在することを意味し、以下に限定さ
れるものではないが、正常アルブミン尿、正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿及び
顕性アルブミン尿を含む。通常、糸球体濾過障壁は有足細胞、糸球体基底膜及び内皮細胞
からなり、血清タンパク質が尿に漏出するのを防止する。アルブミン尿は、糸球体濾過障
壁の損傷を反映すると考えられる。アルブミン尿は、２４時間尿サンプル、夜間尿サンプ
ルまたはスポット尿サンプルから算出することができる。
【００２８】
「正常高値アルブミン尿」は、（ｉ）２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が１
５〜＜３０ｍｇ及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が１．２５〜＜
２．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１０〜＜２０ｍｇ／ｇ）または女性の場合１．７５〜＜３
．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１５〜＜３０ｍｇ／ｇ）であることを特徴とする高アルブミ
ン尿を意味する。
【００２９】
「微量アルブミン尿」は、（ｉ）２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が３０〜
３００ｍｇ及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が２．５〜＜２５ｍ
ｇ／ｍｍｏｌ（または２０〜＜２００ｍｇ／ｇ）または女性の場合３．５〜＜３５ｍｇ／
ｍｍｏｌ（または３０〜＜３００ｍｇ／ｇ）を特徴とする高アルブミン尿を意味する。
【００３０】
「顕性アルブミン尿」は、２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が３００ｍｇ超
及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が＞２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（また
は＞２００ｍｇ／ｇ）または女性の場合＞３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または＞３００ｍｇ／ｇ
）を特徴とする高アルブミン尿を意味する。
【００３１】
「アルブミン／クレアチニン比」は、尿中クレアチニン（ｇ／ｄＬ）当たりの尿中アル
ブミン（ｍｇ／ｄＬ）の比を意味し、ｍｇ／ｇで表される。ある実施形態ではアルブミン
／クレアチニン比はスポット尿サンプルから算出することができ、２４時間にわたるアル
ブミン排泄量の推定値として使用され得る。
【００３２】
「推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）または「糸球体濾過量（ＧＦＲ）」は、腎臓がどの程
度クレアチニンを濾過するかの測定値を意味し、血液が１分当たりどの程度糸球体を通過
するかの推定値として使用される。通常の結果は、９０〜１２０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３
ｍ２の範囲になり得る。３ヶ月以上６０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２未満のレベルである
と、慢性腎疾患の指標となり得る。１５ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２未満のレベルは、腎
不全の指標となり得る。
【００３３】
「タンパク尿」は、過剰の血清タンパク質が尿内に存在することを意味する。タンパク
尿は、２４時間当たりのタンパク質の尿への排泄量が＞２５０ｍｇ及び／または尿中タン
パク質とクレアチニンとの比が≧０．２０ｍｇ／ｍｇであることを特徴してもよい。タン
パク尿に関連して増加する血清タンパク質として、以下に限定されるものではないが、ア
ルブミンが挙げられる。
【００３４】
「血中尿素窒素」または「ＢＵＮ」は、尿素形態の血液中の窒素量の尺度を意味する。
肝臓はタンパク質の消化の老廃物として尿素回路において尿素を生成し、尿素は、腎臓に
より血液から除去される。正常ヒト成人血液は、１００ｍｌ（７〜２１ｍｇ／ｄＬ）の血
液当たり７〜２１ｍｇの間の尿素窒素を含む。血中尿素窒素の測定は、腎臓の健康の指標
として使用される。腎臓が血液から尿素を正常に除去できない場合、被検体のＢＵＮが上
昇する。
【００３５】
「末期腎臓病（ＥＳＲＤ）」は、腎機能の完全またはほぼ完全な喪失を意味する。
【００３６】
「腎機能の障害」は、正常な腎機能と比較して腎機能が低下していることを意味する。
【００３７】
「線維症」は、器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発生を意味
する。ある種の実施形態では、線維症は修復または反応のプロセスとして起こる。ある種
の実施形態では、線維症は損傷または傷害に反応して起こる。「線維症」という用語、器
官または組織において過剰な線維性結合組織が修復または反応のプロセスとして形成また
は発生するものであり、器官または組織の通常成分としての線維組織の形成と異なるもの
であると理解されたい。
【００３８】
「更なる進行を遅延させる」は、ある医学的状態が進行状態に進む速度を低下させるこ
とを意味する。
【００３９】
「更なる進行を阻止する」は、ある医学的状態の進行状態への進行を止めることを意味
する。
【００４０】
「透析までの時間を遅延させる」は、透析処置の必要性を遅延させるように十分な腎機
能を維持することを意味する。
【００４１】
「腎移植までの時間を遅延させる」は、腎臓移植の必要性を遅延させるように十分な腎
機能を維持することを意味する。
【００４２】
「平均余命を改善する」は、被検体の疾患の１つまたは複数の症状を処理することによ
り被検体を延命させることを意味する。
【００４３】
「抗ｍｉＲ」は、マイクロＲＮＡと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
を意味する。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲは修飾オリゴヌクレオチドである。
【００４４】
「抗ｍｉＲ−Ｘ」は、「ｍｉＲ−Ｘ」が特定のマイクロＲＮＡを示す場合、ｍｉＲ−Ｘ
と相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある種の実施形態では
、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと完全に（例：１００％）相補的である。ある種の実施形
態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくと
も９０％または少なくとも９５％相補的である。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは
修飾オリゴヌクレオチドである。
【００４５】
「ｍｉＲ−２１」は、核酸塩基配列ＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡ（
配列番号１）を有する成熟型ｍｉＲＮＡを意味する。
【００４６】
「ｍｉＲ−２１ステムループ配列」は、核酸塩基配列ＵＧＵＣＧＧＧＵＡＧＣＵＵＡＵ
ＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡＣＵＧＵＵＧＡＡＵＣＵＣＡＵＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＧＵ
ＣＧＡＵＧＧＧＣＵＧＵＣＵＧＡＣＡ（配列番号２）を有するステムループ配列を意味す
る。
【００４７】
「標的核酸」は、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計される核酸を意味
する。
【００４８】
「標的化」は、標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列の設計及び選択のプロセス
を意味する。
【００４９】
「〜を標的とする」は、標的核酸へのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配
列を有することを意味する。
【００５０】
「調節」は、機能、量または活性の変質を意味する。ある種の実施形態では、調節は機
能、量または活性の増加を意味する。ある種の実施形態では、調節は機能、量または活性
の低下を意味する。
【００５１】
「発現」は、遺伝子のコードされた情報が、細胞内に存在して働く構造体に変換される
任意の機能及び段階を意味する。
【００５２】
「核酸塩基配列」は、典型的には任意の糖、結合及び／または核酸塩基の修飾と関係な
く５’から３’方向に記載された、オリゴマー化合物または核酸において連続する核酸塩
基の順序を意味する。
【００５３】
「連続する核酸塩基」は、核酸において互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
【００５４】
「核酸塩基相補性」は、２つの核酸塩基が水素結合を介して非共有結合により対を形成
できることを意味する。
【００５５】
「相補的」は、１つの核酸がもう１つの核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイ
ズできることを意味する。ある種の実施形態では、相補的とは、オリゴヌクレオチドが標
的核酸にハイブリダイズできることをいう。
【００５６】
「完全に相補的」は、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、対応する各々の位置で標的
核酸の核酸塩基と対を形成できることを意味する。ある種の実施形態では、オリゴヌクレ
オチドは、マイクロＲＮＡと完全に相補的である、即ちオリゴヌクレオチドの各核酸塩基
が、対応する各々の位置でマイクロＲＮＡの核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態
では、各核酸塩基がマイクロＲＮＡステムループ配列の領域内の核酸塩基と相補性を有す
るオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列と完全に相補的である。
【００５７】
「相補性パーセント」は、同じ長さの標的核酸の部分と相補的なオリゴヌクレオチドの
核酸塩基の割合を意味する。相補性パーセントは、オリゴヌクレオチドのうち、対応する
位置で標的核酸の核酸塩基と相補的な核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチドの核酸塩基の
総数で割ることにより計算される。
【００５８】
「同一性パーセント」は、第１の核酸のうち、対応する位置で第２の核酸の核酸塩基と
同一である核酸塩基の数を、第１の核酸の核酸塩基の総数で割った商を意味する。ある種
の実施形態では、第１の核酸はマイクロＲＮＡであり、第２の核酸はマイクロＲＮＡであ
る。ある種の実施形態では、第１の核酸はオリゴヌクレオチドであり、第２の核酸はオリ
ゴヌクレオチドである。
【００５９】
「ハイブリダイズする」は、核酸塩基の相補性により相補的核酸のアニーリングが起こ
ることを意味する。
【００６０】
「ミスマッチ」は、第１の核酸の核酸塩基が、対応する位置で第２の核酸の核酸塩基と
Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ対を形成できないことを意味する。
【００６１】
核酸塩基配列の文脈において「同一の」は、糖、結合及び／または核酸塩基の修飾に関
係なく、かつ、存在する任意のピリミジンのメチル状態にも関係なく、同じ核酸塩基配列
を有することを意味する。
【００６２】
「マイクロＲＮＡ」は、酵素ダイサーによるプレ−マイクロＲＮＡの切断産物であり、
長さ１８〜２５核酸塩基の内在性非コードＲＮＡを意味する。成熟型マイクロＲＮＡの例
は、ｍｉＲＢａｓｅと呼ばれるマイクロＲＮＡデータベースで確認される（ｈｔｔｐ：／
／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。ある種の実施形態では、マイクロ
ＲＮＡは、「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略記される。
【００６３】
「プレ−マイクロＲＮＡ」または「ｐｒｅ−ｍｉＲ」は、Ｄｒｏｓｈａと呼ばれる二本
鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼによるｐｒｉ−ｍｉＲの切断産物であり、ヘアピン構造
を有する非コードＲＮＡを意味する。
【００６４】
「ステムループ配列」は、ヘアピン構造を有し、かつ成熟型マイクロＲＮＡ配列を含む
ＲＮＡを意味する。プレ−マイクロＲＮＡ配列及びステムループ配列は重複してもよい。
ステムループ配列の例は、ｍｉＲＢａｓｅと呼ばれるマイクロＲＮＡデータベースで確認
される（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。
【００６５】
「プリ−マイクロＲＮＡ」または「ｐｒｉ−ｍｉＲ」は、二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌク
レアーゼＤｒｏｓｈａの基質であり、ヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。
【００６６】
「マイクロＲＮＡ前駆体」は、ゲノムＤＮＡに由来し、かつ、１つまたは複数のマイク
ロＲＮＡ配列を含む非コードｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  ＲＮＡを含む転写物を意味する。例
えば、ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ前駆体はプレ−マイクロＲＮＡである。あ
る種の実施形態では、マイクロＲＮＡ前駆体はプリ−マイクロＲＮＡである。
【００６７】
「マイクロＲＮＡ制御転写物」は、マイクロＲＮＡにより制御される転写物を意味する
。
【００６８】
「シード配列」は、成熟型マイクロＲＮＡ配列の５’末端の核酸塩基１〜９のうち連続
した６〜８核酸塩基を含む核酸塩基配列を意味する。
【００６９】
「シードマッチ配列」は、シード配列と相補的であり、シード配列と同じ長さの核酸塩
基配列を意味する。
【００７０】
「オリゴマー化合物」は、複数の連結したモノマーサブユニットを含む化合物を意味す
る。オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドを含んでいた。
【００７１】
「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結したヌクレオシドを含む化合物を意味し、その
各々は、互いに独立に修飾されていても、または非修飾であってもよい。
【００７２】
「天然のヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の３’から５’のホスホジエステル
結合を意味する。
【００７３】
「天然糖」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖を意味す
る。
【００７４】
「ヌクレオシド間結合」は、隣接するヌクレオシド間の共有結合を意味する。
【００７５】
「連結したヌクレオシド」は、共有結合により連結されたヌクレオシドを意味する。
【００７６】
「核酸塩基」は、別の核酸塩基と非共有結合的に対を形成することができる複素環部分
を意味する。
【００７７】
「ヌクレオシド」は、核酸塩基が糖部分に結合したものを意味する。
【００７８】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部に共有結合したリン酸基を有するヌクレオシ
ドを意味する。
【００７９】
いくつかの連結したヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」は
、所定の数の連結したヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味
する。従って、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含んでもよい。他に記載
がない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド以外に任意の追加のヌク
レオシドを含まない。
【００８０】
「修飾オリゴヌクレオチド」は、天然の末端、糖、核酸塩基及び／またはヌクレオシド
間結合に関して１つまたは複数の修飾を有するオリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリ
ゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含んでもよい。
【００８１】
「一本鎖修飾オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズしていない修飾オリゴ
ヌクレオチドを意味する。
【００８２】
「修飾ヌクレオシド」は、天然のヌクレオシドと異なるヌクレオシドを意味する。修飾
ヌクレオシドは、修飾糖及び非修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、修飾
糖及び修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、天然糖及び修飾核酸塩基を有
してもよい。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドである。あ
る種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは非二環式ヌクレオシドである。
【００８３】
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然のヌクレオシド間結合と何らか異なることを意味
する。
【００８４】
「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋原子の１つが硫黄原子である、
ヌクレオシド間の結合を意味する。
【００８５】
「修飾糖部分」は、天然糖の置換及び／または何らかの変化を意味する。
【００８６】
「非修飾核酸塩基」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然の複素環塩基：プリン塩基アデニン
（Ａ）及びグアニン（Ｇ）と、ピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチ
ルシトシンを含む）及びウラシル（Ｕ）とを意味する。
【００８７】
「５−メチルシトシン」は、５位に結合したメチル基を含むシトシンを意味する。
【００８８】
「非メチル化シトシン」は、５位に結合したメチル基を有さないシトシンを意味する。
【００８９】
「修飾核酸塩基」は、非修飾核酸塩基でない任意の核酸塩基を意味する。
【００９０】
「糖部分」は、天然に存在するフラノシルまたは修飾された糖部分を意味する。
【００９１】
「修飾された糖部分」は、置換された糖部分または代用糖を意味する。
【００９２】
「２’−Ｏ−メチル糖」または「２’−ＯＭｅ糖」は、２’位にＯ−メチル修飾を有す
る糖を意味する。
【００９３】
「２’−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２’−ＭＯＥ糖」は、２’位にＯ−メトキシ
エチル修飾を有する糖を意味する。
【００９４】
「２’−フルオロ」または「２’−Ｆ」は、２’位にフルオロ修飾を有する糖を意味す
る。
【００９５】
「二環式糖部分」は、４〜７員環の２個の原子を連結して第２の環を形成して、二環式
構造を生じさせる架橋を含む、４〜７員環（以下に限定されるものではないが、フラノシ
ル）を含む修飾糖部分を意味する。ある種の実施形態では、４〜７員環は糖環である。あ
る種の実施形態では４〜７員環はフラノシルである。そうしたある種の実施形態では、架
橋はフラノシルの２’−炭素及び４’−炭素を連結する。非限定的な例示的二環式糖部分
として、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ及びＲ−ｃＥｔが挙げられる。
【００９６】
「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」は、フラノース環の２’の原子と４’の原子との間
に（ＣＨ２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【００９７】
「ＥＮＡ糖部分」は、フラノース環の２’の原子と４’の原子との間に（ＣＨ２）２−
Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【００９８】
「規制されたエチル（ｃＥｔ）糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子と
の間にＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。ある種の実施形態では、Ｃ
Ｈ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｓ方向に規制される。ある種の実施形態では、（ＣＨ２）２−
ＯはＲ方向に規制される。
【００９９】
「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＳ−規制Ｃ
Ｈ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１００】
「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＲ−規制Ｃ
Ｈ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１０１】
「２’−Ｏ−メチル」ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾を含む２’−修飾ヌク
レオシドを意味する。
【０１０２】
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾を有
する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修
飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
【０１０３】
「２’−フルオロヌクレオシド」は、２’−フルオロ糖修飾を有する２’−修飾ヌクレ
オシドを意味する。２’−フルオロヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非
修飾核酸塩基を含んでもよい。
【０１０４】
「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する
。二環式ヌクレオシドは、修飾核酸塩基を有しても、または非修飾核酸塩基を有してもよ
い。
【０１０５】
「ｃＥｔヌクレオシド」は、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌク
レオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
【０１０６】
「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１０７】
「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１０８】
「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」は天然のＤＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１０９】
「β−Ｄ−リボヌクレオシド」は天然のＲＮＡヌクレオシドを意味する。
【０１１０】
「ＬＮＡヌクレオシド」は、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１１１】
「ＥＮＡヌクレオシド」は、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０１１２】
「被検体」は、処置または治療のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【０１１３】
「それを必要とする被検体」は、治療または処置を必要とすると判定される被検体を意
味する。
【０１１４】
「〜を有する疑いがある被検体」は、疾患の１つまたは複数の臨床徴候を示す被検体を
意味する。
【０１１５】
「投与すること」は、被検体に医薬品または組成物を与えることを意味し、以下に限定
されるものではないが、医療専門家による投与及び自己投与を含む。
【０１１６】
「非経口投与」は、注射または注入による投与を意味する。非経口投与は、以下に限定
されるものではないが、皮下投与、静脈内投与および筋肉内投与を含む。
【０１１７】
「皮下投与」は、皮膚直下の投与を意味する。
【０１１８】
「静脈内投与」は、静脈への投与を意味する。
【０１１９】
「併用投与される」は、２つの薬理効果が患者に同時に現れる任意の方法で２種以上の
薬が併用投与されることをいう。併用投与は、２種の薬を単一の医薬組成物で投与したり
、同じ剤形で投与したり、または同じ投与経路で投与したりする必要はない。２種の薬の
作用自体は、同時に現れる必要はない。効果は一定期間重複するだけでよく、同じ長さを
持つ必要はない。
【０１２０】
「持続期間」は、活性またはイベントが継続する期間を意味する。ある種の実施形態で
は、処置の持続期間は、医薬品または医薬組成物の用量が投与される期間である。
【０１２１】
「治療」は、疾患の処置方法を意味する。ある種の実施形態では、治療は、以下に限定
されるものではないが、化学療法、放射線治療、または医薬品の投与を含む。
【０１２２】
「処置」は、疾患の治癒または軽減のために使用される１つまたは複数の特定の手順を
適用することを意味する。ある種の実施形態では、特定の手順は、１つまたは複数の医薬
品の投与である。
【０１２３】
「回復」は、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度を低下させることを意味
する。ある種の実施形態では、軽減は、状態または疾患の１つまたは複数の指標の進行を
遅延させるまたは遅らせることを含む。指標の重症度は、当業者に公知の主観的基準また
は客観的基準により判定することができる。
【０１２４】
「〜を発症するリスクがある」は、被検体がある状態または疾患を発症しやすい状態に
あることを意味する。ある種の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクがある被
検体は、その状態または疾患の１つまたは複数の症状を示すものの、その状態または疾患
と診断されるのに十分な数の症状を示さない。ある種の実施形態では、状態または疾患を
発症するリスクがある被検体は、状態または疾患の１つまたは複数の症状を示すものの、
状態または疾患と診断するのに必要とされるより少ない程度で示す。
【０１２５】
「〜の発症を予防する」は、疾患または状態を発症するリスクがある被検体の状態また
は疾患の発生を予防することを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を発症
するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様の処
置を受ける。
【０１２６】
「〜の発症の遅延させる」は、疾患または状態を発症するリスクがある被検体の状態ま
たは疾患の発生を遅延させることを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を
発症するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様
の処置を受ける。
【０１２７】
「治療薬」は、疾患の治癒、軽減または予防に使用される医薬品を意味する。
【０１２８】
「用量」は、１回の投与で与えられる医薬品の所定量を意味する。ある種の実施形態で
は、用量を２以上のボーラス、錠剤または注射で投与してもよい。例えば、皮下投与が所
望であるある種の実施形態では、所望の用量は、１回の注射で容易に与えられない量を必
要とする。そうした実施形態では、所望の用量を達成するため２回以上の注射を使用して
もよい。ある種の実施形態では、用量は、２回以上の注射で投与して個体の注射部位反応
を最小限に抑えてもよい。ある種の実施形態では、用量を緩速注入として投与する。
【０１２９】
「投薬単位」は、医薬品が与えられる形態を意味する。ある種の実施形態では、投薬単
位は、凍結乾燥オリゴヌクレオチドを含むバイアルである。ある種の実施形態では、投薬
単位は、再溶解したオリゴヌクレオチドを含むバイアルである。
【０１３０】
「治療有効量」は、動物に治療上の利益を与える医薬品の量をいう。
【０１３１】
「医薬組成物」は、医薬品など個体への投与に好適な物質の混合物を意味する。例えば
、医薬組成物は無菌水溶液を含んでもよい。
【０１３２】
「医薬品」は、被検体に投与すると治療効果を与える物質を意味する。
【０１３３】
「医薬活性成分」は、所望の作用を与える医薬組成物中の物質を意味する。
【０１３４】
「臓器機能の改善」は、正常範囲に向けた臓器機能の変化を意味する。ある種の実施形
態では、臓器機能は、被検体の血液または尿中に見られる分子の測定により評価される。
たとえば、ある種の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の低下、タンパク尿の
減少、アルブミン尿の減少等により評価される。
【０１３５】
「許容可能な安全性プロファイル」は、臨床的に許容できる範囲内にある副作用のパタ
ーンを意味する。
【０１３６】
「副作用」は、処置に起因する所望の作用以外の生理反応を意味する。ある種の実施形
態では、副作用は、以下に限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、
腎臓機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常及びミオパチーを含む。こうした副作用
は直接的に検出しても、または間接的に検出してもよい。例えば、血清中のアミノトラン
スフェラーゼレベルの上昇から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。例え
ば、ビリルビンの増加から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。
【０１３７】
「被検体のコンプライアンス」は、推奨または処方された治療剤の被検体による服薬遵
守を意味する。
【０１３８】
「遵守する」は、推奨された治療剤の被検体による服薬遵守を意味する。
【０１３９】
「推奨された治療剤」は、疾患の処置、軽減または予防のため医療専門家により推奨さ
れた処置剤を意味する。
【０１４０】
「血液」という用語は、本明細書で使用する場合、全血および血液分画、たとえば血清
および血漿を包含する。
【０１４１】
概要
アルポート症候群は、異常なレベルの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が産生され、間質線維症
、糸球体硬化をきたし、典型的には末期腎臓病に至る遺伝性の腎疾患である。アルポート
症候群の管理において、処置の主要な目的は、腎機能を維持し、末期腎臓病の発症（ＥＳ
ＲＤ）を予防し、次いでアルポート症候群の被検体の平均余命を改善することである。
【０１４２】
アルポート症候群は、ＧＢＭ組成の障害による進行性線維症を特徴とし、したがってＧ
ＢＭの構造および機能における改善が望ましい。ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌ
クレオチドは、アルポート症候群の実験モデルにおいて腎機能を改善することが本明細書
で立証される。加えて、抗ｍｉＲ−２１処置後に糸球体硬化および線維症も減少する。さ
らに抗ｍｉＲ−２１がアルポート症候群の実験モデルの生存率を改善させることも本明細
書で立証される。したがって、ｍｉＲ−２１を標的とするこうした修飾オリゴヌクレオチ
ドは、アルポート症候群の処置に有用である。
【０１４３】
本発明の特定の使用
本明細書で提供されるのは、アルポート症候群の処置のための方法であって、アルポー
ト症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体にｍｉＲ−２１と相補的な修飾オ
リゴヌクレオチドを投与することを含む方法である。
【０１４４】
ある種の実施形態では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与前にアルポート症候
群を有すると診断されたことがある。アルポート症候群の診断は、以下に限定されるもの
ではないが、被検体の家族歴、臨床的特徴（以下に限定されるものではないが、タンパク
尿、アルブミン尿、血尿、ＧＦＲの異常、難聴及び／または眼球の変化）及び組織生検の
結果などのパラメーターの評価により達成することができる。腎生検は、ＩＶ型コラーゲ
ンα−３鎖、α−４鎖及びα−５鎖の有無について検査してもよい。加えて、糸球体の構
造的変化は、腎生検材料の電子顕微鏡観察により検出してもよい。皮膚生検においてＩＶ
型コラーゲンα−５鎖の存在を検査してもよく、α−５鎖は通常皮膚に存在するが、Ｘ連
鎖型アルポート症候群の男性被検体にほぼ常に存在しない。アルポート症候群の診断は、
Ｃｏｌ４ａ３遺伝子、Ｃｏｌ４ａ４遺伝子またはＣｏｌ４ａ５遺伝子の１つまたは複数の
突然変異についてスクリーニングすることを更に含んでもよい。
【０１４５】
ある種の実施形態では、アルポート症候群を有する被検体の腎臓においてｍｉＲ−２１
のレベルが増加している。ある種の実施形態では、投与前に、被検体は、腎臓におけるｍ
ｉＲ−２１のレベルが増加していると判定される。ｍｉＲ−２１レベルは、腎生検材料か
ら測定することができる。ある種の実施形態では、投与前に、被検体は被検体の尿中また
は血液中のｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定される。
【０１４６】
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与の結果
、１つまたは複数の臨床上有利な成績が得られる。ある種の実施形態では、本投与は腎機
能を改善する。ある種の実施形態では、本投与は末期腎臓病の発症を遅延させる。ある種
の実施形態では、本投与は透析までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与
は腎移植までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は被検体の平均余命を
改善する。
【０１４７】
ある種の実施形態では、本投与は腎線維症を抑制する。ある種の実施形態では、本投与
は腎線維症の更なる進行を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は腎線維症の更な
る進行を阻止する。ある種の実施形態では、本投与は血尿を減少させる。ある種の実施形
態では、本投与は血尿の発症を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与はタンパク尿
を減少させる。ある種の実施形態では、本投与はタンパク尿の発症を遅延させる。
【０１４８】
アルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体は、ＩＶ型コラーゲン
のα３鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ３）の突然変異を有しても、ＩＶ型コラーゲン
のα４鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ４）の突然変異を有しても、あるいはＩＶ型コ
ラーゲンのα５鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ５）の突然変異を有してもよい。ある
種の実施形態では、被検体は男性（雄）である。ある種の実施形態では、被検体は女性（
雌）である。
【０１４９】
ある種の実施形態では、被検体は腎機能の障害を有する。ある種の実施形態では、被検
体は腎機能の改善を必要とする。ある種の実施形態では、被検体は腎機能の障害を有する
と確認される。ある種の実施形態では、被検体は血尿を有すると確認される。ある種の実
施形態では、被検体はタンパク尿を有すると確認される。
【０１５０】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、被検体は腎機能を評価する何らかの試験
を受けてもよい。そうした試験には、以下に限定されるものではないが、被検体の血中尿
素窒素の測定；被検体の血液中のクレアチニンの測定；被検体の血液中のクレアチニンク
リアランスの測定；被検体のタンパク尿の測定；被検体のアルブミン：クレアチニン比の
測定；被検体の糸球体濾過量の測定；および被検体の尿量の測定がある。
【０１５１】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、尿中または血液中に存在するタンパク質
を使用して腎機能を測定してもよい。こうした腎機能の試験には、被検体の尿中のＮ−ア
セチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）タンパク質の測定；被検体の尿中の好中
球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質の測定；被検体の尿中の腎臓傷害
分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質の測定；被検体の尿中のインターロイキン−１８（Ｉ
Ｌ−１８）タンパク質の測定；被検体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルの測
定；被検体の尿中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）レベルの測定；被検体の尿中の
コラーゲンＩＶ（Ｃｏｌ  ＩＶ）フラグメントの測定；被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩ
（Ｃｏｌ  ＩＩＩ）フラグメントレベルの測定；被検体の血液中のシスタチンＣタンパク
質の測定；被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）の測定；および被検体の血
液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の測定があるが、これに限定されるものではない
。本明細書に提供される実施形態の何れかでは、尿中の有足細胞傷害のマーカーを測定し
てもよい。こうしたタンパク質として、ネフリンおよびポドシンが挙げられる。こうした
タンパク質は、たとえば、市販されているキットを用いて酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）
またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により定量することができる。
【０１５２】
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌ
クレオチドは、被検体の腎機能の１つまたは複数のマーカーを改善する。腎機能のマーカ
ーの改善としては、以下に限定されるものではないが、被検体の血中尿素窒素の低下；被
検体の血液中のクレアチニンの低下；被検体のクレアチニンクリアランスの改善；被検体
のタンパク尿の減少；被検体のアルブミン：クレアチニン比の低下；被検体の糸球体濾過
量の改善；および／または被検体の尿量の増加が挙げられる。
【０１５３】
特定の追加治療
アルポート症候群または本明細書に列挙された状態の何れかの処置は、２つ以上の治療
を含んでもよい。したがって、ある種の実施形態では、本明細書で記載されるのは、アル
ポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体を処置するための方法であっ
て、ｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドの投与に加え
て、少なくとも１つ治療を投与することを含む方法である。
【０１５４】
ある種の実施形態では、少なくとも１つ追加治療は医薬品を含む。
【０１５５】
ある種の実施形態では、医薬品はアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を含む
。ある種の実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬はカンデサルタン、イルベ
サルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンまたはエプロサ
ルタンである。
【０１５６】
ある種の実施形態では、医薬品はアンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤を含
む。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤はカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル
、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルまたはラミプリルである。
【０１５７】
ある種の実施形態では、医薬品は降圧薬である。降圧薬は被検体の血圧の制御に使用さ
れる。
【０１５８】
ある種の実施形態では、医薬品はビタミンＤアナログである。ビタミンＤアナログは、
被検体の副甲状腺ホルモンの産生を制限するのに使用することができる。
【０１５９】
ある種の実施形態では、医薬品は、食事性リン吸収を抑制する経口リン吸着薬である。
【０１６０】
ある種の実施形態では、医薬品は免疫抑制薬を含む。ある種の実施形態では、免疫抑制
薬はコルチコステロイド、シクロホスファミドまたはミコフェノール酸モフェチルである
。
【０１６１】
ある種の実施形態では、医薬品はシクロスポリン、ＨＭＧ−コエンザイムＡ阻害剤、バ
ソペプチダーゼ阻害剤またはＴＧＦ−βアンタゴニストである。
【０１６２】
ある種の実施形態では、追加治療は遺伝子治療である。ある種の実施形態では、遺伝子
治療は正常なＣｏｌ４ａ３遺伝子を与える。ある種の実施形態では、遺伝子治療は正常な
Ｃｏｌ４ａ４遺伝子を与える。ある種の実施形態では、遺伝子治療は正常なＣｏｌ４ａ５
遺伝子を与える。
【０１６３】
ある種の実施形態では、追加治療は透析である。ある種の実施形態では、追加治療は腎
移植である。
【０１６４】
ある種の実施形態では、医薬品は抗炎症薬を含む。ある種の実施形態では、抗炎症薬は
ステロイド系抗炎症薬である。ある種の実施形態では、ステロイド抗炎症薬はコルチコス
テロイドである。ある種の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。あ
る種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症剤である。ある種の実施形態では
、非ステロイド系抗炎症薬はイブプロフェン、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤またはＣＯＸ−２阻害剤
である。
【０１６５】
ある種の実施形態では、医薬品は線維化シグナルに対する１つまたは複数の反応をブロ
ックする医薬品である。
【０１６６】
ある種の実施形態では、医薬品は抗糖尿病薬を含む。抗糖尿病薬には、ビグアナイド、
グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニル尿素およびチアゾリデンジオンがあるが
、これに限定されるものではない。
【０１６７】
ある種のマイクロＲＮＡの核酸塩基配列
本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１（配列番号１）またはその
前駆体（配列番号２）と相補的な核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態では、修飾オ
リゴヌクレオチドの各核酸塩基はそれぞれ対応する位置で、ｍｉＲ−２１またはその前駆
体の核酸塩基配列の核酸塩基と塩基対の形成を行うことができる。ある種の実施形態では
、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１配列または前駆体配列の核酸
塩基配列に対して１つまたは複数のミスマッチ塩基対を有していてもよく、依然としてそ
の標的配列にハイブリダイズすることができる。
【０１６８】
ｍｉＲ−２１配列はｍｉＲ−２１前駆体配列内に含まれており、ｍｉＲ−２１と相補的
な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１前駆体の領域とも相補
的である。
【０１６９】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の長さと等しいいく
つかの連結したヌクレオシドからなる。
【０１７０】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉ
Ｒ−２１の長さより短い。いくつかの連結したヌクレオシドを有する、ｍｉＲ−２１の長
さより短い修飾オリゴヌクレオチドであって、その各核酸塩基が対応する位置でｍｉＲ−
２１の各核酸塩基と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１配列の領域と完全
に相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドと見なされる。例えば、１９個
連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、各核酸塩基が長さ２２
核酸塩基のｍｉＲ−２１の対応する位置と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−
２１の１９個の核酸塩基領域と完全に相補的である。こうした修飾オリゴヌクレオチドは
、ｍｉＲ−２１の１９個の核酸塩基部分に対して１００％の相補性を有し、ｍｉＲ−２１
に対して１００％相補性を有すると考えられる。
【０１７１】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはシード配列と相補的な核酸塩基配列
を含む、即ち修飾オリゴヌクレオチドはシード−マッチ配列を含む。ある種の実施形態で
は、シード配列は６量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、シード配列
はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜６である。そうしたある種の実施形態では、シード配列は
ｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜７である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はｍ
ｉＲ−２１の核酸塩基３〜８である。ある種の実施形態では、シード配列は７量体シード
配列である。そうしたある種の実施形態では、７量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩
基１〜７である。そうしたある種の実施形態では、７量体シード配列はｍｉＲ−２１の核
酸塩基２〜８である。ある種の実施形態では、シード配列は８量体シード配列である。そ
うしたある種の実施形態では、８量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜８である
。ある種の実施形態では、８量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜９である。
【０１７２】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の
核酸塩基配列に対して１つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態
では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対し
て２つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、修飾
オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対して２つ以下
のミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ
核酸塩基は隣接している。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は隣接し
ていない。
【０１７３】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉ
Ｒ−２１の長さを超える。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドの核酸塩
基は、ｍｉＲ−２１のステムループ配列の核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態で
は、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより１
個多い。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの５
’末端にある。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチ
ドの３’末端にある。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレ
オシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより２個多い。そうしたある種の実施形態では、２個
の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの５’末端にある。そうしたある種の実施形
態では、２個の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの３’末端にある。そうしたあ
る種の実施形態では、１個の追加のヌクレオシドが５’末端に位置し、１個の追加のヌク
レオシドがオリゴヌクレオチドの３’末端に位置する。ある種の実施形態では、オリゴヌ
クレオチドの領域はｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と完全に相補的である場合があるが、修
飾オリゴヌクレオチド全体がｍｉＲ−２１と完全に相補的であるとは限らない。例えば、
２４個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、ヌクレオシド１
〜２２の各核酸塩基が、長さ２２核酸塩基のｍｉＲ−２１の対応する位置と相補的な修飾
オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と完全に相補的である２２個のヌク
レオシド部分を有し、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して全体として約９２％相補性を
有する。
【０１７４】
特定の修飾オリゴヌクレオチド
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴ
ＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）を有し、ここで後に下付き文字が
ないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」が
あるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌク
レオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエ
ートヌクレオシド間結合である。
【０１７５】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＳＧ
ＴＣＳＵＳＧＡＵＳＡＳＡＧＣＳＵｓＡＥ−３’（配列番号３）を有し、ここで後に下付
き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字
「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」が
あるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホスホ
ロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１７６】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−ＭｅＣＥＡＳＡＳＴＥＣ
ＳＵＳＡＥＡＥＵＳＡＳＡＥＧＥＣＳＴＥＡＳ−３’（配列番号４）を有し、ここで後に
下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き
文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ
」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；上付き文字「Ｍｅ」はヌクレオ
シドの塩基の５−メチル基を示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌク
レオシド間結合である。
【０１７７】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡ
ＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＵＳＡＳ−３’（配列番号３）を有し、ここで後に
下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き
文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ
」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホ
スホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１７８】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の５−メチルシトシ
ンを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドのシトシンは各々５−メチル
シトシンを含む。
【０１７９】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは８〜３０個連結したヌクレオシドか
らなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜２５個連結したヌク
レオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜３０個連結
したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜２
５個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは
１５〜１９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレ
オチドは１５〜１６個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリ
ゴヌクレオチドは１９〜２４個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、
修飾オリゴヌクレオチドは２１〜２４個連結したヌクレオシドからなる。
【０１８０】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは８個連結したヌクレオシドからなる
。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは９個連結したヌクレオシドからなる
。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１０個連結したヌクレオシドからな
る。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１１個連結したヌクレオシドから
なる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１２個連結したヌクレオシドか
らなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１３個連結したヌクレオシド
からなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１４個連結したヌクレオシ
ドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５個連結したヌクレオ
シドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１６個連結したヌクレ
オシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１７個連結したヌク
レオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１８個連結したヌ
クレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１９個連結した
ヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２０個連結し
たヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２１個連結
したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２２個連
結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２３個
連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２４
個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２
５個連結したヌクレオシドからなる。
【０１８１】
ある種の修飾
ある種の実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、核酸塩基、糖及
び／またはヌクレオシド間結合に対して１つまたは複数の修飾を含んでもよく、従って修
飾オリゴヌクレオチドである。修飾された核酸塩基、糖及び／またはヌクレオシド間結合
は、望ましい特性、例えば、細胞取り込みの増大、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標
的に対する親和性の強化、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増強を理由に非修飾形
態と比較して選択すればよい。
【０１８２】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾ヌクレオシド
を含む。そうしたある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは安定化ヌクレオシドである
。安定化ヌクレオシドの例として糖修飾ヌクレオシドがある。
【０１８３】
ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは糖修飾ヌクレオシドである。そうしたある
種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然若しくは修飾複素環塩基部分及び／また
は天然若しくは修飾ヌクレオシド間結合を更に含んでもよく、糖修飾とは無関係な修飾を
更に含んでもよい。ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然リボースまたは
２’−デオキシ−リボースの２’炭素で糖環が修飾されている２’−修飾ヌクレオシドで
ある。
【０１８４】
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは二環式糖部分を有する。そうしたあ
る種の実施形態では、二環式糖部分はα配置のＤ糖である。そうしたある種の実施形態で
は、二環式糖部分はβ配置のＤ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分
はα配置のＬ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はβ配置のＬ糖で
ある。
【０１８５】
こうした二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡという
。ある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドとして、下記に図示するように、（Ａ）α
−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキ
シ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ
−２’）ＢＮＡ；（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（
Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｆ）メチル（メチレ
ンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（規制されたエチルまたはｃＥｔ
とも呼ばれる）；（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ；（Ｈ）メチ
レン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｉ）メチル炭素環式（４’−
ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ；（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４’−ＣＨ２−ＯＭｅ−２
’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡがある
が、これに限定されるものではない。
【化１】
2020073479.tif 000002
式中、Ｂｘは核酸塩基部分であり、Ｒは独立にＨ、保護基またはＣ１〜Ｃ１２アルキルで
ある。
【０１８６】
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣ
Ｈ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ
３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）
−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０１８７】
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ３、及びＯＣＨ２Ｃ
Ｈ２ＯＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０１８８】
ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ修飾ヌクレオシドである。あ
る種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドである
。４’−チオ修飾ヌクレオシドは、４’−Ｏが４’−Ｓで置換されたβ−Ｄ−リボヌクレ
オシドを有する。４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドは、２’−ＯＨが２’−置換基で
置換された４’−チオ修飾ヌクレオシドである。好適な２’−置換基は、２’−ＯＣＨ３
、２’−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、及び２’−Ｆを含む。
【０１８９】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数のヌクレオシド間修
飾を含む。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間
結合は修飾ヌクレオシド間結合である。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合
はリン原子を含む。
【０１９０】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエ
ートヌクレオシド間結合を含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌ
クレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１９１】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾核酸塩基を含
む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノ
シン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンから選択される。ある種の実施形態では、修
飾核酸塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、並びにＮ−２、Ｎ−６及びＯ
−６置換プリン、例えば２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プ
ロピニルシトシンから選択される。
【０１９２】
ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は多環式複素環を含む。ある種の実施形態では、
修飾核酸塩基は三環式複素環を含む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基はフェノキサ
ジン誘導体を含む。ある種の実施形態では、フェノキサジンは更に修飾されて、当該技術
分野においてＧクランプ（Ｇ−ｃｌａｍｐ）として知られる核酸塩基を形成していてもよ
い。
【０１９３】
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の部分にコンジュ
ゲートされ、１つまたは複数の部分は、その結果得られるアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの活性、細胞分布または細胞取り込みを促進するものである。そうしたある種の実施形
態では、その部分はコレステロール部分である。ある種の実施形態では、その部分は脂質
部分である。コンジュゲーションのための別の部分には、糖質、リン脂質、ビオチン、フ
ェナジン、フォレート、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイ
ン、ローダミン、クマリンおよび色素がある。ある種の実施形態では、糖質部分はＮ−ア
セチル−Ｄ−ガラクトサミン（ＧａｌＮａｃ）である。ある種の実施形態では、コンジュ
ゲート基はオリゴヌクレオチドに直接結合される。ある種の実施形態では、コンジュゲー
ト基はアミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和基（たとえば、二重結合ま
たは三重結合）、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシニミジル
４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、６
−アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、置換または
非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、および置換または非置換のＣ２〜Ｃ１０アルキニルから
選択される結合部分により修飾オリゴヌクレオチドに結合される。そうしたある種の実施
形態では、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェ
ニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル
およびアルキニルから選択される。
【０１９４】
そうしたある種の実施形態では、本化合物は、たとえば、ヌクレアーゼ安定性などの特
性を強化するため、修飾オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合した１つまた
は複数の安定化基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。安定化基にはキャップ構造が
含まれる。これらの末端修飾は、エキソヌクレアーゼによる分解から修飾オリゴヌクレオ
チドを保護し、細胞内の送達および／または局在化に役立ち得る。キャップは５’−末端
（５’−キャップ）に存在しても、３’−末端（３’−キャップ）に存在してもよいし、
あるいは両末端に存在してもよい。キャップ構造は、たとえば、逆位のデオキシ脱塩基キ
ャップを含む。
【０１９５】
特定の医薬組成物
本明細書で提供されるのは、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物である。ある種の実
施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１５〜２５個連結したヌクレオシドか
らなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、かつｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有す
る化合物を含む。ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、８〜３０
個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、かつｍｉＲ−２１と相
補的な核酸塩基配列を有する化合物を含む。ある種の実施形態では、本明細書で提供され
る医薬組成物は、１２〜２５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを
含み、かつｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する化合物を含む。
【０１９６】
好適な投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、経腸、局所、坐剤、吸入による、髄腔
内、心臓内、脳室内、腹腔内、経鼻、眼内、腫瘍内および非経口（たとえば、静脈内、筋
肉内、骨髄内および皮下）があるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態
では、全身曝露ではなく局所曝露を達成するため薬剤の髄腔内投与を行う。たとえば、医
薬組成物は効果の望まれる領域に（たとえば、腎臓に）直接注射してもよい。
【０１９７】
ある種の実施形態では、医薬組成物は、投薬単位の形態（例えば、錠剤、カプセル剤、
ボーラス等）で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ〜８００
ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ
〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、
１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍ
ｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７０
０ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、
３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ及び４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択
される範囲内の用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、こうした
医薬組成物は、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍ
ｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍ
ｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３
０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、
１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍ
ｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３
０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、
２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍ
ｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３
０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、
３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍ
ｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３
０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、
４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍ
ｇ、５００ｍｇ、５０５ｍｇ、５１０ｍｇ、５１５ｍｇ、５２０ｍｇ、５２５ｍｇ、５３
０ｍｇ、５３５ｍｇ、５４０ｍｇ、５４５ｍｇ、５５０ｍｇ、５５５ｍｇ、５６０ｍｇ、
５６５ｍｇ、５７０ｍｇ、５７５ｍｇ、５８０ｍｇ、５８５ｍｇ、５９０ｍｇ、５９５ｍ
ｇ、６００ｍｇ、６０５ｍｇ、６１０ｍｇ、６１５ｍｇ、６２０ｍｇ、６２５ｍｇ、６３
０ｍｇ、６３５ｍｇ、６４０ｍｇ、６４５ｍｇ、６５０ｍｇ、６５５ｍｇ、６６０ｍｇ、
６６５ｍｇ、６７０ｍｇ、６７５ｍｇ、６８０ｍｇ、６８５ｍｇ、６９０ｍｇ、６９５ｍ
ｇ、７００ｍｇ、７０５ｍｇ、７１０ｍｇ、７１５ｍｇ、７２０ｍｇ、７２５ｍｇ、７３
０ｍｇ、７３５ｍｇ、７４０ｍｇ、７４５ｍｇ、７５０ｍｇ、７５５ｍｇ、７６０ｍｇ、
７６５ｍｇ、７７０ｍｇ、７７５ｍｇ、７８０ｍｇ、７８５ｍｇ、７９０ｍｇ、７９５ｍ
ｇ及び８００ｍｇから選択される用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。そうしたある種
の実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍ
ｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６０
０ｍｇ、７００ｍｇ及び８００ｍｇから選択される用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む
。
【０１９８】
ある種の実施形態では、医薬品は、好適な希釈液、例えば、無菌注射用水または無菌注
射用生理食塩水で再溶解される無菌凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドである。再溶解され
る製品は、食塩水に希釈してから皮下注射または点滴静注として投与される。凍結乾燥製
剤は、注射用水または注射用食塩水で調製され、調製中に酸または塩基でｐＨ７．０〜９
．０に調整し、その後凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドからなる。凍結乾燥修飾オ
リゴヌクレオチドは、２５〜８００ｍｇのオリゴヌクレオチドであってもよい。これは、
２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２
００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ
、３７５ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０
ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７
２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ及び８００ｍｇの凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドを
包含することが理解されよう。更に、いくつかの実施形態では、凍結乾燥修飾オリゴヌク
レオチドは、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２
５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００
ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３０
０ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜
８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍ
ｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ及び４
００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の量のオリゴヌクレオチドである。凍結乾燥
製剤は、２ｍＬのＴｙｐｅ  Ｉ透明ガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理）に入れ、ブ
ロモブチルゴム栓で栓をしてアルミニウム製ＦＬＩＰ−ＯＦＦ（登録商標）オーバーシー
ルで密封してもよい。
【０１９９】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、医薬組成物に通常見られ
る他の補助成分を当該技術分野で確立された使用レベルで更に含んでもよい。このため、
例えば、組成物は、適合性がある追加の医薬活性物質、例えば、鎮痒薬、収斂薬、局所麻
酔薬または抗炎症薬を含んでもよいし、また、様々な剤形の本発明の組成物を物理的に配
合するのに有用な追加物質、例えば色素、着香剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、粘度付
与剤及び安定剤を含んでもよい。しかしながら、こうした物質は、加える際に、本発明の
組成物の成分の生物活性を必要以上に阻害するものであってはならない。こうした製剤は
滅菌し、必要に応じて、助剤、例えば、製剤のオリゴヌクレオチド（単数または複数）と
有害な相互作用を起こさない滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を調節す
るための塩、緩衝液、着色料、矯味矯臭剤及び／または芳香物質及び同種のものを含んで
もよい。
【０２００】
核酸治療剤には脂質部分が種々の方法で使用されてきた。１つの方法では、カチオン性
脂質と中性脂質との混合物で作られた、予め形成されたリポソームまたはリポプレックス
に核酸を導入する。別の方法では、中性脂質の存在なしにＤＮＡとモノ−またはポリ−カ
チオン性脂質との複合体を形成する。ある種の実施形態では、脂質部分は、特定の細胞ま
たは組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質部分
は、脂肪組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質
部分は、筋肉組織への医薬品の分布が増加するように選択する。
【０２０１】
ある種の実施形態では、イントラリピッドを使用してオリゴヌクレオチドを含む医薬組
成物を調製する。イントラリピッドは、静脈内投与用に調製された脂肪乳剤である。イン
トラリピッドは、１０％大豆油、１．２％卵黄リン脂質、２．２５％グリセリン及び注射
用水からなる。更に、ｐＨを調整するため水酸化ナトリウムが加えられているため、最終
製品のｐＨ範囲は６〜８．９になっている。
【０２０２】
ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、ポリアミン化合物または
脂質部分と核酸との複合体を含む。ある種の実施形態では、こうした調製物は、各々独立
に式（Ｚ）により定義される構造を有する１つまたは複数の化合物またはその薬学的に許
容される塩を含み、
【化２】
2020073479.tif 000003
式中、ＸａおよびＸｂは各々独立にそれぞれＣ１〜６アルキレンであり；ｎは０、１、２
、３、４または５であり；Ｒは各々独立にＨであり、調製物中の式（Ｚ）の化合物の分子
の少なくとも８０％のＲ部分の少なくともｎ＋２はＨではなく；ｍは１、２、３または４
であり；ＹはＯ、ＮＲ２またはＳであり；Ｒ１はアルキル、アルケニル、またはアルキニ
ルであり；その各々は任意選択的に１つまたは複数の置換基で置換されており；Ｒ２はＨ
、アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；その各々は任意選択的に置換され、そ
の各々は任意選択的に１つまたは複数の置換基で置換されており；ただし、ｎ＝０である
場合、Ｒ部分の少なくともｎ＋３はＨではない。こうした調製物は、脂質調製物の開示に
ついてその全体を本明細書に援用する国際公開第２００８／０４２９７３号明細書に記載
されている。いくつかの別の調製物については、脂質調製物の開示についてその全体を本
明細書に援用するＡｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ  ２６，５６１−５６９（０１  Ｍａｙ  ２００８）に記載されている。
【０２０３】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、１つまたは複数の修飾オ
リゴヌクレオチド、及び１種または複数種の賦形剤を含む。そうしたある種の実施形態で
は、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトー
ス、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロ
キシメチルセルロース及びポリビニルピロリドンから選択される。
【０２０４】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、以下に限定されるもので
はないが、混合工程、溶解工程、造粒工程、糖衣錠製造工程、水簸工程、乳化工程、カプ
セル充填工程、封入工程または錠剤化工程を含む既知の技術を用いて調製される。
【０２０５】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は液体（例えば、懸濁剤、エ
リキシル剤及び／または溶液剤）である。こうした実施形態の一部では、液体医薬組成物
は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定されるものではないが、水、グリコー
ル、油、アルコール、着香剤、防腐剤及び着色剤を用いて調製される。
【０２０６】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は固体（例えば、散剤、錠剤
及び／またはカプセル剤）である。こうした実施形態の一部では、１つまたは複数のオリ
ゴヌクレオチドを含む固体医薬組成物は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定
されるものではないが、デンプン、糖、希釈液、造粒剤、滑沢剤、バインダー及び崩壊剤
を用いて調製される。
【０２０７】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物はデポ調製物として製剤化さ
れる。ある種のこうしたデポ調製物は典型的には非デポ調製物より長く作用する。ある種
の実施形態では、こうした調製物は、埋入（例えば皮下または筋肉内）または筋肉内注射
により投与される。ある種の実施形態では、デポ調製物は、好適なポリマー材料若しくは
疎水性材料（例えば許容可能な油に溶かしたエマルジョン）またはイオン交換樹脂を用い
て、或いは、やや溶けにくい誘導体、例えば、やや溶けにくい塩として調製される。
【０２０８】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、送達系を含む。送達系の
例には、リポソーム及びエマルジョンがあるが、これに限定されるものではない。ある種
の送達系は、疎水性化合物を含む医薬組成物などある種の医薬組成物の調製に有用である
。ある種の実施形態では、ある種の有機溶媒、例えばジメチルスルホキシドが使用される
。
【０２０９】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、本発明の１つまたは複数
の医薬品を特異的な組織または細胞型に送達するように設計された１つまたは複数の組織
特異的送達分子を含む。例えば、ある種の実施形態では、医薬組成物は、組織特異的抗体
でコーティングされたリポソームを含む。
【０２１０】
ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、徐放システムを含む。そ
うした徐放システムの非限定的な例として、固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが
ある。ある種の実施形態では、徐放システムは、その化学的性質に応じて数時間、数日、
数週または数ヶ月の期間にわたり医薬品を放出することができる。
【０２１１】
ある種の実施形態では、医薬組成物は、注射による投与（例えば、静脈内、皮下、筋肉
内等）用に調製される。こうした実施形態の一部では、医薬組成物は、キャリアを含み、
水溶液、例えば水または生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス液、リンゲル液また
は生理食塩水緩衝液中で製剤化される。ある種の実施形態では、他の成分（例えば、溶解
を助けるまたは防腐剤として働く成分）も含まれる。ある種の実施形態では、適切な液体
キャリア、懸濁化剤及び同種のものを用いて注射用懸濁液を調製する。ある種の注射用医
薬組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器で提供される。ある種の注
射用医薬組成物は、油性若しくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンであ
り、製剤添加剤、例えば懸濁剤、安定化剤及び／または分散剤を含んでもよい。注射用医
薬組成物に使用するのに好適なある種の溶媒には、親油性溶媒及び脂肪油、例えばゴマ油
、合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリド、並びにリポソー
ムがあるが、これに限定されるものではない。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を高める
物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストラン
を含んでもよい。任意に、こうした懸濁液は、好適な安定剤、または医薬品の溶解性を高
めて高濃縮溶液の調製を可能にする作用物質を更に含んでもよい。
【０２１２】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、治療有効量で修飾オリゴ
ヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、治療有効量は、疾患の症状を予防、緩和ま
たは軽減させる、或いは、処置された被検体の生存を延長させるのに十分な量である。治
療有効量の判定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２１３】
ある種の実施形態では、本明細書に提供される１つまたは複数の修飾オリゴヌクレオチ
ドはプロドラッグとして製剤化される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、インビ
ボ投与すると、生物学的に、薬学的にまたは治療的により活性な形態のオリゴヌクレオチ
ドに化学的に変換される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、その活性形態より投
与しやすいため、有用である。例えば、場合によっては、プロドラッグは、その活性形態
より（例えば、経口投与により）体内吸収される可能性がある。場合によっては、プロド
ラッグは、その活性形態と比較して溶解性を改善できたかもしれない。ある種の実施形態
では、プロドラッグは、その活性形態より水溶性に乏しい。場合によっては、こうしたプ
ロドラッグは、細胞膜（通り抜けるには水溶性が妨げになる）を通過する優れた送達性を
有する。ある種の実施形態では、プロドラッグはエステルである。そうしたある種の実施
形態では、エステルは、投与すると代謝によりカルボン酸に加水分解される。場合によっ
ては、カルボン酸を含む化合物はその活性形態である。ある種の実施形態では、プロドラ
ッグは、酸性基に結合した短いペプチド（ポリアミノ酸）を含む。こうした実施形態の一
部では、ペプチドは、投与されると切断されてその活性形態となる。
【０２１４】
ある種の実施形態では、プロドラッグは、インビボ投与すると医薬活性化合物が再生す
るように医薬活性化合物を修飾することにより製造する。プロドラッグは、薬剤の代謝安
定性または輸送性を変化させる、副作用または毒性をマスクする、薬剤の風味を改善する
、或いは、薬剤の他の特徴または特性を変化させるように設計してもよい。当業者は、医
薬活性化合物が分かれば、インビボでの薬力学的プロセス及び薬物代謝の知識に基づき、
その化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５
）  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒ
ｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐａ
ｇｅｓ  ３８８−３９２を参照されたい）。
【０２１５】
特定の追加治療
ｍｉＲ−２１に関連する疾患の処置は、２つ以上の治療を含んでもよい。したがって、
ある種の実施形態では、本明細書で記載されるのは、ｍｉＲ−２１に関連する疾患を有す
るまたはそれを有する疑いがある被検体を処置するための方法であって、マイクロＲＮＡ
と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドに加えて少なくとも１つの治療
を行うことを含む方法である。
【０２１６】
ある種の実施形態では、少なくとも１つの追加治療は医薬品を含む。
【０２１７】
ある種の実施形態では、医薬品は抗炎症薬を含む。ある種の実施形態では、抗炎症薬は
ステロイド系抗炎症薬である。ある種の実施形態では、ステロイド抗炎症薬はコルチコス
テロイドである。ある種の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。あ
る種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症剤である。ある種の実施形態では
、非ステロイド系抗炎症薬はイブプロフェン、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤またはＣＯＸ−２阻害剤
である。
【０２１８】
ある種の実施形態では、医薬品は抗糖尿病薬を含む。抗糖尿病薬には、ビグアナイド、
グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニル尿素およびチアゾリデンジオンがあるが
、これに限定されるものではない。
【０２１９】
ある種の実施形態では、医薬品には利尿薬（たとえばスプリオノラクトン、エプレレノ
ン、フロセミド）、変力作用薬（たとえばドブタミン、ミルリノン）、ジゴキシン、血管
拡張薬、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（たとえばカプトプリル、エナ
ラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルおよびラミプリル）
、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）（たとえばカンデサルタン、イルベサル
タン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、エプロサルタン）
、カルシウムチャネル遮断薬、二硝酸イソソルビド、ヒドララジン、ニトレート（たとえ
ば一硝酸イソソルビド、二硝酸イソソルビド）、ヒドララジン、β遮断薬（たとえばカル
ベジロール、メトプロロール）およびナトリウム利尿ペプチド（たとえばネシリチド）が
あるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤はシラザ
プリル、ペリンドプリルおよびトランドラプリルから選択される。
【０２２０】
ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、０．０２５〜０．１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で
投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、０．１２５〜１．０ｍｇ／ｋｇ体
重の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、１〜６ｍｇ／ｍ２／日
の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、１〜２ｍｇ
／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、
２〜４ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ
阻害剤は、０．５〜１ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。
【０２２１】
ある実施形態では、ラミプリルは、１〜６ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与さ
れる。ある種の実施形態では、ラミプリルは、１〜２ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量
で投与される。ある実施形態では、エナラプリルは、２〜４ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわた
る用量で投与される。ある実施形態では、リシノプリルは、４〜８ｍｇ／ｍ２／日の範囲
にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ベナゼプリルは、４〜８ｍｇ／ｍ２／日
の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ホシノプリルは、４〜８ｍｇ／ｍ
２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、キナプリルは、４〜８ｍｇ
／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、シラザプリルは、１〜
２ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ペリンプリルは
、１〜２ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、トランド
ラプリルは、０．５〜１ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。
【０２２２】
ある種の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５〜１５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用
量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投
与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、１０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
ある種の実施形態では、ＡＲＢは、１２．５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。ある種
の実施形態では、ＡＲＢは、１８．７５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。ある種の実
施形態では、ＡＲＢは、３７．５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。ある種の実施形態
では、ＡＲＢは、５０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲ
Ｂは、１５０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
【０２２３】
ある種の実施形態では、ロサルタンは、１２．５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
ある種の実施形態では、ロサルタンは、１２．５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。あ
る種の実施形態では、カンデサルタンは、６．２５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
ある種の実施形態では、イルベスタルタンは、３７．５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与され
る。ある種の実施形態では、テルミサルタンは、１０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される
。ある種の実施形態では、バルサルタンは、１８．７５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与され
る。ある種の実施形態では、エスプレサルタンは、１５０ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与さ
れる。
【０２２４】
ある種の実施形態では、医薬品はアルドステロンアンタゴンシストである。ある種の実
施形態では、アルドステロンアンタゴニストはスピロノラクトンである。ある種の実施形
態では、スピロノラクトンは１日１０〜３５ｍｇの範囲にわたる用量で投与される。ある
種の実施形態では、スピロノラクトンは１日２５ｍｇの用量で投与される。
【０２２５】
ある種の実施形態では、医薬品はヘパリノイドを含む。ある種の実施形態では、ヘパリ
ノイドはペントサンポリ硫酸である。
【０２２６】
ある種の実施形態では、医薬品は、線維化シグナルに対する１つまたは複数の反応をブ
ロックする医薬品である。
【０２２７】
ある種の実施形態では、医薬品は抗結合組織増殖因子治療剤である。ある種の実施形態
では、抗ＣＴＧＦ治療剤はＣＴＧＦに対するモノクローナル抗体である。
【０２２８】
ある種の実施形態では、追加治療は、身体の免疫系を強化する医薬品であってもよく、
低用量シクロフォスファミド、チモスチムリン、ビタミンおよび栄養補助剤（たとえば、
酸化防止剤、たとえばビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、βカロテン、亜鉛、セレン
、グルタチオン、コエンザイムＱ−１０およびエキネシア）、ならびにワクチン、たとえ
ば、多量体抗原の提示とアジュバントとを組み合わせたワクチン製剤を構成する免疫刺激
複合体（ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。
【０２２９】
ある種の実施形態では、追加治療は、本発明の１種または複数種の医薬組成物の副作用
を処置または軽減するように選択される。こうした副作用として、以下に限定されるもの
ではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系
異常およびミオパチーが挙げられる。たとえば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベ
ルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示す場合がある。たとえば、ビリルビンの増加も
、肝毒性または肝機能異常を示す場合がある。
【０２３０】
追加医薬品の別の例には、免疫グロブリン、以下に限定されるものではないが、静脈内
免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）；鎮痛薬（たとえば、アセトアミノフェン）；サリチレート
；抗生物質；抗ウイルス薬；抗真菌薬；アドレナリン作用修飾薬；ホルモン（たとえば、
アナボリックステロイド、アンドロゲン、エストロゲン、カルシトニン、プロゲスチン、
ソマトスタンおよび甲状腺ホルモン）；免疫調節剤；筋弛緩薬；抗ヒスタミン剤；骨粗鬆
症薬（たとえば、ビホスホネート、カルシトニンおよびエストロゲン）；プロスタグラン
ジン、抗腫瘍薬；精神治療薬；鎮静剤；毒オークまたは毒ウルシの生成物；抗体；および
ワクチンがあるが、これに限定されるものではない。
【０２３１】
ある種のキット
本発明はまたキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、核酸塩基配列が
ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む、本発明の１種ま
たは複数種の化合物を含む。ｍｉＲ−２１と相補的な化合物は、本明細書に記載のヌクレ
オシドパターンのいずれを有してもよい。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補
的な化合物はバイアル内に存在してもよい。例えば、調剤容器には、１０個などの複数の
バイアルが存在してもよい。いくつかの実施形態では、バイアルは、シリンジが利用しや
すいように製造する。キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物の使用説明書を更に含ん
でもよい。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、キットを使用してｍｉＲ−２１と相補的な化合物を被検体に
投与することができる。こうした例では、キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物に加
えて、以下の１つまたは複数を更に含んでもよい：シリンジ、アルコール綿棒、コットン
ボール及び／またはガーゼ。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物は
、バイアル中でなくプレフィルドシリンジ（例えば２７ゲージ、１／２インチ針の針ガー
ド付き単回投与シリンジ）中に存在してもよい。１０本など複数のプレフィルドシリンジ
が、例えば、調剤容器中に存在してもよい。キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物の
投与説明書を更に含んでもよい。
【０２３３】
ある種の実験モデル
ある種の実施形態では、本発明は、実験モデルを用いて本発明の修飾オリゴヌクレオチ
ドを使用及び／または試験する方法を提供する。当業者であれば、そうした実験モデルの
プロトコルを選択及び変更して本発明の医薬品を評価することができる。
【０２３４】
一般に、修飾オリゴヌクレオチドは最初に培養細胞で試験する。好適な細胞型には、イ
ンビボでの修飾オリゴヌクレオチドの送達が望ましい細胞型に関連する細胞型がある。例
えば、本明細書に記載の方法の研究に好適な細胞型には、初代細胞または培養細胞がある
。
【０２３５】
ある種の実施形態では、培養細胞を用いて、修飾オリゴヌクレオチドがｍｉＲ−２１の
活性を阻害する程度を評価する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ活性の阻害は、
マイクロＲＮＡのレベルを測定することにより評価することができる。或いは、予想され
るまたは検証されたマイクロＲＮＡ制御転写物のレベルを測定してもよい。マイクロＲＮ
Ａ活性が阻害されると、ｍｉＲ−２１制御転写物、及び／またはｍｉＲ−２１制御転写物
によりコードされたタンパク質が増加する場合がある。更に、ある種の実施形態では、あ
る種の表現型の結果を測定してもよい。
【０２３６】
ヒト疾患モデルを対象としたｍｉＲ−２１の研究用にいくつかの動物モデルが、当業者
に入手可能である。たとえば、アルポート症候群の実験モデル、たとえばＣｏｌ４ａ３ノ
ックアウトマウス（Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス）を用いてｍｉＲ−２１の阻害剤を研究す
ることができる。マウスモデルの疾患の重症度は、Ｃｏｌ４ａ３突然変異を有するマウス
の遺伝的背景に依存する。たとえば、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ背景と比較して１２９Ｘ１／Ｓｖ
Ｊ背景では、疾患の発症および進行が一般に速い。したがって、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウ
スの遺伝的背景は、疾患の発症および進行が異なるように選択することができる。別のモ
デルとして、Ｘ連鎖、常染色体劣性または常染色体優性のアルポート症候群のイヌモデル
が挙げられる。たとえば、Ｋａｓｈｔａｎ，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌ
ａｎｔ，２００２，１７：１３５９−１３６１を参照されたい。
【０２３７】
ある種の定量化アッセイ
修飾オリゴヌクレオチドの投与後のｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害の作用は、当該技
術分野において公知の種々の方法により評価することができる。ある種の実施形態では、
これらの方法を用いて、細胞または組織のマイクロＲＮＡレベルをインビトロまたはイン
ビボで定量する。ある種の実施形態では、マイクロアレイ解析によりマイクロＲＮＡレベ
ルの変化を測定する。ある種の実施形態では、市販されているいくつかのＰＣＲアッセイ
の１つ、例えばＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡ  Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅ
ｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によりマイクロＲＮＡレベルの変化を測定する。ある種の実
施形態では、ｍｉＲ−２１の標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルを測定するこ
とにより、ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害を評価する。ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻
害を行うと、一般にマイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルが
上昇する。
【０２３８】
標的結合アッセイ
抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣物によるマイクロＲＮＡ活性の調節は、標的結合を
測定することにより評価することができる。ある種の実施形態では、標的結合は、ｍＲＮ
Ａのマイクロアレイプロファイリングにより測定する。抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模
倣物により調節される（増加或いは減少する）ｍＲＮＡの配列についてマイクロＲＮＡシ
ード配列を検索し、マイクロＲＮＡの標的であるｍＲＮＡの調節を、マイクロＲＮＡの標
的でないｍＲＮＡの調節と比較する。この方法では、抗ｍｉＲとｍｉＲ−２１と、または
ｍｉＲ−２１模倣物とその標的との相互作用を評価することができる。抗ｍｉＲの場合に
は、発現レベルが上昇するｍＲＮＡについて、抗ｍｉＲと相補的なマイクロＲＮＡのシー
ドマッチを含むｍＲＮＡ配列をスクリーニングする。
【実施例】
【０２３９】
本発明のいくつかの実施形態をより詳細に説明するため、以下に実施例を示す。但し、
実施例は、本発明の広範な範囲を限定するものとして解釈してはならない。当業者であれ
ば、本発見の根底にある原理を採用し、本発明の精神を逸脱しない範囲で様々な化合物を
容易に設計するであろう。
【０２４０】
実施例１：アルポート症候群のモデルにおける抗ｍｉＲ−２１
１２９ｓｖの遺伝的背景のＣｏｌ４ａ３−／−マウスは、ヒトアルポート症候群に類似
した重度腎疾患を自然に発症する。したがって、アルポート症候群の実験モデルとしてＣ
ｏｌ４ａ３−／−マウスを使用する。
【０２４１】
アルポート症候群のＣｏｌ４ａ３−／−モデルを用いて、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾
オリゴヌクレオチド（抗ｍｉＲ−２１化合物）を試験した。野生型マウスを対照マウスと
した使用した。
【０２４２】
抗ｍｉＲ−２１化合物の構造は、５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧ
ＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ
−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２
’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔ
ヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合
である。
【０２４３】
３週齢でマウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを特定した。３週齢から
９週齢で性別が一致したマウスの同腹仔を抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳで処置した。抗ｍ
ｉＲ−２１は、２５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回皮下投与した。処置群は：（１）野生型マ
ウス、ＰＢＳ投与、ｎ＝８；（２）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、ＰＢＳ投与、ｎ＝１２；
（３）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、抗ｍｉＲ−２１投与、ｎ＝１２であった。Ｃｏｌ４ａ
３−／−マウスの野生型同腹仔を野生型対照マウスとして使用した。夜間尿サンプル（約
１６時間）を週１回採取した。血漿および腎臓は、９週目の終了時に採取した。体液サン
プルおよび組織サンプルを解析して腎機能、腎臓損傷ならびに糸球体硬化および間質線維
症の変化を判定した。
【０２４４】
血液または尿の評価項目は、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アルブミン尿、アルブミン／ク
レアチニン比、糸球体濾過量の測定とした。組織学的解析には、糸球体硬化、間質線維症
、尿細管の傷害、マクロファージ浸潤および筋線維芽細胞の存在の評価を含めた。
【０２４５】
血中尿素窒素（ＢＵＮ）は９週目に測定した。統計学的有意性は、マン・ホイットニー
検定により計算した。図１Ａに示すように試験終了時点で、抗ｍｉＲ−２１で処置した動
物では、ＰＢＳ処置対照動物と比較してＢＵＮの統計学的に有意な低下が観察された。Ｂ
ＵＮの低下は、全体（図１Ａ）だけでなく、雄マウスのみ（対照雄マウスの約２５ｍｇ／
ｄＬと比較して約９０ｍｇ／ｄＬ）および雌マウスのみ（対照雌マウスの約２５ｍｇ／ｄ
Ｌと比較して約７０ｍｇ／ｄＬ）図示せず）でも観察された。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウス
のＢＵＮは、約１２．５ｍｇ／ｋＬ（正常範囲内；図示せず）であった。ＢＵＮは、腎機
能の血液マーカーである。ＢＵＮが高くなると腎機能が低下する関係にある。ＢＵＮの低
下は、腎臓の傷害および損傷の減少と機能の改善との指標である。
【０２４６】
アルブミン尿は、週１回の頻度で１６時間にわたり採取した尿サンプル中のアルブミン
をＥＬＩＳＡにより測定し、尿中クレアチニン排泄量に対して標準化して評価した。解析
はすべて試験終了時に同時に行った。図１Ｂに示すように、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスは
重度のアルブミン尿が出現する。一方、抗ｍｉＲ−２１で処置したマウスは、尿中アルブ
ミン／クレアチニン比の低下により認められるように、出現したアルブミン尿がはるかに
少なかった。アルブミン尿の減少は７週目には観察され、９週目まで続いた。Ｃｏｌ４ａ
３−／−マウスの野生型同腹仔は、予想通りアルブミン尿を示さなかった。アルブミン尿
は、糸球体および尿細管の損傷の高感度の指標である。アルブミン／クレアチニン比の低
下は、糸球体および／または尿細管疾患の減少を示す。
【０２４７】
アルポートシドロムはさらに、糸球体硬化症、および不適切な糸球体漏出が起こると生
じる著しい腎間質線維症の進行性の発症を特徴とする。したがって、糸球体硬化症は、盲
検による糸球体の硬化病変スコア（毛細血管ループの消失＋線維症または硝子化）により
評価した。盲検下の観察者が、各マウス由来の３０の糸球体を連続的にスコア化した。ス
コアは０〜４とし、０＝正常；１＝硬化症に冒された糸球体が＜２５％；２＝２５〜５０
％の糸球体が硬化症に冒されている；３＝５０〜７５％の糸球体が硬化症に冒されている
；４＝７５〜１００％の糸球体が硬化症に冒されている。疾患のない糸球体の比率は抗ｍ
ｉＲ−２１で処置したマウスの方でかなり高く、中等度または重度に冒された糸球体（ス
コア２〜４）の糸球体比率は、ＰＢＳで処置したマウスの方で著しく高かった（図２）。
Ｃｏｌ４３ａ−／−マウスの野生型同腹仔（ＷＴ）の糸球体もスコア化した。間質線維症
は、ＰＢＳ処置および抗ｍｉＲ−２１  Ｃｏｌ４ａ３−／−動物由来の、ピクロシリウス
レッドで染色した矢状切片全体を対象に形態計測学的に測定した。図３Ａに示すように、
抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの間質線維症の統計学的に有意な減少が観
察された。さらに、主要な病的基質タンパク質コラーゲンＩα（１）（Ｃｏｌ１ａ１）の
転写物の定量ＰＣＲから、抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス由来の腎臓組織
では、この病的コラーゲンの産生が非常に少ないことも示された（図３Ｂ）。
【０２４８】
腎組織傷害は、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）反応により染色した、パラホルムアルデヒ
ド（４％）固定パラフィン包埋組織切片を用いて評価した。最初に腎臓切片について、尿
細管および糸球体の傷害および炎症に基づき傷害全体の順位付けを行った。損傷は、尿細
管の拡張、刷子縁の消失、細胞浸潤、糸球体の炎症、間質の浮腫および細胞壊死などの種
々の因子に基づき評価した。腎臓切片については、盲検的に傷害全体の順位付けを行い、
腎臓傷害順位スコアを付与した。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス由来の腎臓切片は、著しく低
い腎臓傷害順位スコアを示したことから、腎臓傷害が少ないことが示唆される（図４Ａ）
。これをより詳細に解析するため、糸球体について、盲検下の観察者により糸球体半月体
を有する比率を評価した。半月体はボーマン嚢内の細胞の増殖であり、ボーマン腔内細胞
が≧２層であることで半月体と定義される。半月体は、糸球体傷害の十分に確立されたマ
ーカーである。抗ｍｉＲ−２１を投与したＣｏｌ４ａ３−／−マウスでは、半月体を有す
る糸球体の比率は約４４％であったのに対し、ＰＢＳ対照処置を受けたマウスでは、半月
体を有する糸球体の比率は約１９％であった（図４Ｂ）。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋同腹仔では
、半月体を有する糸球体の比率は５％未満であった（図示せず）。腎臓のネフロンの尿細
管も損傷される部位である。尿細管損傷は、各腎臓の矢状切片全体をカバーする時系列画
像の格子を重ねることにより評価した。尿細管の損傷は、格子の升目ごとに盲検的に評価
した。尿細管の損傷は、尿細管の拡張／扁平化、刷子縁の消失、細胞浸潤および細胞壊死
の存在に基づき評価した。これらの特徴が存在した場合、格子の升目のスコアが正になる
。尿細管の損傷を有する升目の％である総合スコアを各画像に適用する。その腎臓由来の
全画像について総合スコアを平均する。次いで腎臓ごとの平均スコアを統計解析に供する
。図示されるように、尿細管の傷害スコアは、ＰＢＳを投与したＣｏｌ４ａ３−／−（図
４Ｃ）と比較して抗ｍｉＲ−２１で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの方が有意に低か
った。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋同腹仔の尿細管の傷害スコアは、１０％未満であった（図示せ
ず）。
【０２４９】
腎臓サンプルの別の組織学的解析を行い、マクロファージ浸潤、内皮細胞の安定性およ
び筋線維芽細胞の付着を評価した。Ｆ４／８０染色で判断したところ、ＰＢＳ処置Ｃｏｌ
４ａ３−／−対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスでは、
マクロファージ浸潤が減少していた（図５Ａ）。ＣＤ３１の免疫細胞化学的染色から、Ｐ
ＢＳ処置Ｃｏｌ４ａ３−／−対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／
−マウスでは、内皮細胞の安定性の改善が立証された（図示せず）。α−ＳＭＡの検出に
より、ＰＢＳ処置Ｃｏｌ４ａ３−／−対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４
ａ３−／−マウスの筋線維芽細胞の付着の減少が明らかになった（図５Ｂ）。Ｃｏｌ４ａ
３＋／＋マウスでは、α−ＳＭＡ染色は約５％であった（図示せず）。
【０２５０】
反応性酸素種（ＲＯＳ）は正常な細胞代謝の副産物である。細胞ストレスにおいて、過
剰なＲＯＳは、細胞膜およびオルガネラ膜の脂質過酸化を引き起こし、その結果構造の完
全性と細胞輸送能およびエネルギー産生能とを破壊し得る。腎臓では、細胞ストレスにお
いて産生されたＲＯＳは腎傷害を引き起こすことがある。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスにお
いてｍｉＲ−２１の阻害後にＲＯＳの産生が減少したかどうかを評価するため、抗ｍｉＲ
−２１処置マウスおよびＰＢＳ処置マウスを用いて尿中の過酸化水素レベルを測定した。
尿中の過酸化水素レベルは、抗ｍｉＲ−２１を投与したマウスで有意に低下した（図６Ａ
）。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウスでは、尿中の過酸化水素レベルは５μＭ未満であった（図
示せず）。さらに、ＲＯＳの指標であるジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）による腎臓組織の
免疫細胞化学的染色から、ＰＢＳ処置対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４
ａ３−／−マウスの腎臓組織においてＲＯＳの減少が立証された（図６Ｂ）。Ｃｏｌ４ａ
３＋／＋マウスでは、ＤＨＥ染色が観察されたのは１０％未満であった（図示せず）。こ
れらのデータから、抗ｍｉＲ−２１で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの尿および腎臓
組織の両方におけるＲＯＳの減少が立証される。したがって、抗ｍｉＲ−２１が腎臓傷害
を減少させ得る１つのメカニズムとして、反応性酸素種の産生を減少させることが挙げら
れる。
【０２５１】
抗ｍｉＲ−２１で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓タンパク質の免疫ブロット
から、腎臓内のＭＰＶ１７Ｌタンパク質の量がＣｏｌ４ａ３−／−マウスと比較して増加
することが明らかになった。ＭＰＶ１７Ｌは、反応性酸素種の代謝に関係し、酸化ストレ
スを防止するミトコンドリア内膜タンパク質である。したがって、抗ｍｉＲ−２１処置後
のＲＯＳ産生の減少は、ＭＰＶ１７Ｌレベルの増加により、少なくともある程度起こり得
る。抗ｍｉＲ−２１の作用機序をさらに探るため、ＰＢＳで処置または抗ｍｉＲ−２１処
置のＣｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓の免疫ブロットにより、ＰＰＡＲ−αタンパク質を
測定した。抗ｍｉＲ−２１処置はＰＰＡＲ−αタンパク質を増加させたことから、代謝経
路の刺激が示唆された。
【０２５２】
有足細胞は、糸球体濾過障壁に不可欠な要素である非常に特殊な上皮細胞である。有足
細胞が減少するとタンパク尿が出て、一部の病状では糸球体硬化に至ることがある。Ｃｏ
ｌ４ａ３−／−マウスを用いて有足細胞数がｍｉＲ−２１の阻害の影響を受けるかどうか
を評価するため、抗ｍｉＲ−２１処置マウスおよびＰＢＳ処置マウスの有足細胞数を測定
した。有足細胞数は、ＰＢＳ処置マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１を投与したＣｏｌ４ａ
３−／−マウスで有意に増加し、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの野生型同腹仔で観察された
有足細胞数と同程度であった（図７）。したがって、アルポート症候群のモデルにおいて
抗ｍｉＲ−２１が腎臓傷害を減少させ得る１つのメカニズムは、有足細胞の減少を防止ま
たは抑制することによる。
【０２５３】
以下の抗ｍｉＲ−２１化合物：
抗ｍｉＲ−２１化合物＃１（上記）：５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡ
ＧＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）
抗ｍｉＲ−２１化合物＃２：５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＳＧＴＣＳＵＳＧＡＵＳＡＳＡＧ
ＣＳＵｓＡＥ−３’（配列番号３）；
抗ｍｉＲ−２１化合物＃３：５’−ＭｅＣＥＡＳＡＳＴＥＣＳＵＳＡＥＡＥＵＳＡＳＡＥ
ＧＥＣＳＴＥＡＳ−３’（配列番号４）；および
抗ｍｉＲ−２１化合物＃４：５’−ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡ
ＡＧＣＳＵＳＡＳ−３’（配列番号３）；
を用いて同様の研究を行った。（ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デ
オキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯ
Ｅヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオ
シドを示し；および上付き文字「Ｍｅ」はヌクレオシドの塩基の５−メチル基を示す）。
ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２５４】
各化合物は、３週齢のＣｏｌ４ａ３−／−マウスに２５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回９週
間投与した。対照群は、ＰＢＳで処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウス、およびＣｏｌ４ａ
３−／−マウスの野生型同腹仔とした。各処置群は、１０〜１２匹のマウスを含んでいた
。化合物＃１、２および４では、各評価項目は上記のように評価し、ＢＵＮ、尿中アルブ
ミン／クレアチニン比、腎臓傷害（ＰＡＳ染色）、糸球体硬化症および半月体を有する糸
球体の比率とした。化合物＃３の評価項目は、ＢＵＮ、尿中アルブミン／クレアチニン比
およびコラーゲン遺伝子発現（線維症の指標として）とし、上記のように評価した。
【０２５５】
上述の結果と一致して、抗ｍｉＲ−２１化合物＃１では評価対象の全評価項目が改善し
た。両方の抗ｍｉＲ−２１化合物＃２の有効性も化合物＃１のそれと同様であり、ＢＵＮ
、尿中アルブミン／クレアチニン比、腎臓傷害、糸球体硬化症の程度および半月体を有す
る糸球体の割合において改善が観察された。化合物＃３の有効性も化合物＃１のそれと同
様であり、ＢＵＮ、尿中アルブミン／クレアチニン比およびＣｏｌ１ａ１発現において改
善が観察された。抗ｍｉＲ−２１化合物＃４は、化合物試験した他の化合物より有効性が
低いものの、それでもＢＵＮ、腎臓傷害、糸球体硬化症の程度および半月体を有する糸球
体の割合が改善した。
【０２５６】
総合的に見ると、これらのデータから、アルポートシドロムのモデルでは、抗ｍｉＲ−
２１処置が腎機能の低下およびアルブミン尿の発症を減弱させたことが証明される。糸球
体硬化症および間質線維症は著明に減弱し、近位尿細管は維持された。抗ｍｉＲ−２１は
Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの腎機能が徐々に低下するのを防止し、糸球体疾患および尿細
管間質疾患の両方を減弱させるので、抗ｍｉＲ−２１はヒトアルポート症候群の治療薬で
ある。
【０２５７】
実施例２：アルポート症候群のモデルにおけるｍｉＲ−２１の増加
アルポート症候群の実験モデルにおけるｍｉＲ−２１の調節不全を評価するため、マウ
スから採取した腎臓組織のｍｉＲ−２１レベルを測定した。腎全体からＲＮＡを単離し、
定量ＰＣＲによりｍｉＲ−２１を測定した。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスでは、ｍｉＲ−２
１レベルが野生型マウスのｍｉＲ−２１レベルと比較して約３倍高かった。
【０２５８】
したがって、アルポート症候群の処置を受ける被検体は、処置を行う前の腎生検材料、
尿または血液におけるｍｉＲ−２１が高いと確認され得る。
【０２５９】
実施例３：アルポート症候群のモデルの生存試験
野生型マウスは一般に、２〜３年（７３０〜１０９５日）生存する。１２９Ｘ１／Ｓｖ
Ｊ背景のＣｏｌ４ａ３−／−マウスの場合、末期腎不全が早ければ生後２ヶ月で起こるこ
とがある。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ背景のＣｏｌ４ａ３−／−の場合、末期腎不全が早ければ生
後６ヶ月で起こることがある。背景に関係なく、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命は野生
型マウスのそれより著しく短い。このため、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスは、どのような遺
伝的背景でも、アルポート症候群における末期腎不全のモデルとすることができ、平均余
命に対する候補治療薬の作用を評価するのに使用することができる。
【０２６０】
マウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを特定する。抗ｍｉＲ−２１は、
１０〜２５ｍｇ／ｋｇの範囲にわたる用量で週１回または週２回、最大１年間皮下投与す
る。ＰＢＳは、対照処置として投与することができる。本試験を通じて週１回または月１
回のスケジュールで夜間尿サンプル（約１６時間）を採取する。各マウスの死亡時の年齢
を記録する。死亡時または試験終了時に血漿および腎臓を採取する。体液サンプルおよび
組織サンプルを解析して腎機能、糸球体硬化および線維症の変化を判定する。
【０２６１】
体液サンプルおよび組織サンプルを解析して腎機能、腎臓損傷ならびに糸球体硬化およ
び間質線維症の変化を判定する。血液または尿の評価項目には、血中尿素窒素（ＢＵＮ）
、アルブミン尿、アルブミン／クレアチニン比、糸球体濾過量の測定を含める。組織学的
解析には、糸球体硬化、間質線維症、尿細管の傷害、マクロファージ浸潤および筋線維芽
細胞の存在の評価を含める。
【０２６２】
ＰＢＳ処置対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置マウスにおける末期腎不全の発症
の遅延および平均余命の延長が観察されることから、抗ｍｉＲ−２１がアルポート症候群
の被検体の平均余命を延長させることができる治療薬であることが示唆される。
【０２６３】
抗ｍｉＲ−２１は、アルポート症候群のモデルの生存期間を延長させる−単回投与試験
アルポート症候群の実験モデルの生存期間に対する抗ｍｉＲ−２１の作用を評価するた
め、抗ｍｉＲ−２１化合物をＣｏｌ４ａ３−／−マウスに投与した。
【０２６４】
抗ｍｉＲ−２１化合物の構造は、５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧ
ＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ
−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２
’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔ
ヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合
である。
【０２６５】
１２９Ｘ１／ＳｖＪ背景のＣｏｌ４ａ３＋／１マウス（ヘテロ接合体）を掛け合わせて
Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスを作成した。生後３週で、マウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４
ａ３−／−マウスを特定した。処置群は、（１）Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウス（野生型同腹
仔）、ＰＢＳ投与、週２回、ｎ＝１２；（２）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、ＰＢＳ投与、
週２回、ｎ＝１２；（３）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１
皮下投与、週２回、ｎ＝１２であった。処置剤は３週目から１６週目まで週２回投与した
。動物の体重を週１回測定し、寿命を記録した。
【０２６６】
予想通り、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスは生後約９週から体重減少が見られ、生後９〜１
１週で死亡した。図８Ａに示すように、抗ｍｉＲ−２１は最大体重を増加させ、体重減少
を有意に遅延させた（ｐ＜０．０１）。図８Ｂに示すように、抗ｍｉＲ−２１は寿命を有
意に延長させた（ｐ＜０．００１）。したがって、抗ｍｉＲ−２１による処置は、体重減
少を遅延させただけでなく、重要な点としてＣｏｌ４ａ３−／−マウスの生存期間も改善
させた。
【０２６７】
抗ｍｉＲ−２１はアルポート症候群のモデルの生存期間を延長させた−用量反応試験
アルポート症候群の実験モデルの生存期間に対する抗ｍｉＲ−２１の用量反応性を評価
するため、いくつかの用量の抗ｍｉＲ−２１化合物をＣｏｌ４ａ３−／−マウスに投与し
た。
【０２６８】
抗ｍｉＲ−２１化合物の構造は、５’−ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＧＴＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧ
ＣＳＴＡＥ−３’（配列番号３）であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ
−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２
’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔ
ヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合
である。
【０２６９】
生後３週で、マウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを特定した。処置群
は、
（１）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、ＰＢＳ投与、週１回、ｎ＝１３；
（２）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、１２．５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週１回
、ｎ＝１２；
（３）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週１回、ｎ
＝１３；
（４）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、５０ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週１回、ｎ
＝１２；
（５）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週２回、ｎ
＝１２；
であった。
【０２７０】
処理剤は、２４日目から投与した。動物の体重を週１回測定し、寿命を記録した。７週
目で、血液を採取してＢＵＮを測定した。
【０２７１】
図９Ａに示すように、ＰＢＳ処置対照動物と比較して抗ｍｉＲ−２１で処置した動物で
は、ＢＵＮの低下が観察された。ＢＵＮの低下は観察されたが、強い用量反応性がなかっ
た。おそらく本実験に使用したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの疾患がより重度であったため
と考えられる（マウスは、前述の例に記載したＣｏｌ４ａ３−／−マウスと異なる業者か
ら入手した）。観察されたＢＵＮの低下は、腎臓の傷害および損傷の減少と機能の改善の
指標である。
【０２７２】
図９Ｂに示すように、抗ｍｉＲ−２１による処置はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を
用量反応性に延長させた。寿命の延長は、週２回処置および週１回処置の両方で観察され
た。生存期間の中央値は以下の通りであった：ＰＢＳ、６２日；１２．５ｍｇ／ｋｇの抗
ｍｉＲ−２１  週１回（ＱＷ）、７２．５日；２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１  週１回
（ＱＷ）、７７日；５０ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１  週１回（ＱＷ）、８９日；２５ｍ
ｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１  週２回（ＢＩＷ）、８２．５日。
【０２７３】
ＰＢＳ処置対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置マウスにおける腎機能障害発症の
遅延および平均余命の延長が観察されたことから、抗ｍｉＲ−２１がアルポート症候群の
被検体の平均余命を延長し得る治療薬であることが示唆された。
【０２７４】
実施例４：Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓における抗ｍｉＲの分布
抗ｍｉＲ化合物を含むオリゴヌクレオチドは、腎臓内のいくつかの細胞型に分布するこ
とが知られている。Ｃｈａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．，２０１
２，１２１ｒａ１８により報告されているように、正常なマウスあるいは腎臓傷害を生じ
させたマウス（一側尿管閉塞、間質線維症モデル）にＣｙ３標識抗ｍｉＲの投与後、腎臓
内の最大蛍光強度は近位尿細管上皮であった。内皮、周皮細胞、筋線維芽細胞およびマク
ロファージにもすべて、検出可能な量のＣｙ３標識抗ｍｉＲが含まれていた。しかしなが
ら、糸球体、特に有足細胞は、相当量の抗ｍｉＲを取り込んでいないようであり、化学修
飾オリゴヌクレオチドの既知の分布と一致した（Ｍａｓａｒｊｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏ
ｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００４，１４，２９９−３１０）。
【０２７５】
アルポート症候群のマウスモデルにおける抗ｍｉＲの分布を調べるため、Ｃｙ３標識抗
ｍｉＲ化合物を、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの２つの異なる群、生後６週の群（ｎ＝３）
および生後８週の群（ｎ＝４）と、生後８週の野生型マウスの１群（ｎ＝３）に投与した
。抗ｍｉＲ化合物の投与から２日後、動物を屠殺し、腎臓を採取し、組織学的解析用に処
理した。
【０２７６】
いくつかの異なる細胞マーカーに特異的な抗体で腎臓組織の切片を共標識して、特定の
細胞型における抗ｍｉＲの取り込みを確認した。染色は、α−ＳＭＡ（筋線維芽細胞マー
カー）、ＰＤＧＦＲ−β（周皮細胞／筋線維芽細胞マーカー）、ＣＤ３１（内皮細胞マー
カー）、Ｆ４／８０（マクロファージマーカー）およびＧＰ３８（有足細胞マーカー）に
対して行った。予想通り、抗ｍｉＲ化合物は、近位尿細管上皮、周皮細胞、筋線維芽細胞
およびマクロファージに取り込まれた。正常なマウスおよび間質線維症のマウスにおける
以前の観察結果とは異なり、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスでは、抗ｍｉＲは有足細胞を含め
糸球体に取り込まれた。
【０２７７】
本明細書に記載するように、アルポート症候群の実験モデルにおいて抗ｍｉＲ−２１投
与後に観察された有効性は、尿細管周囲の間質線維症だけでなく、糸球体の線維症（糸球
体硬化症という）の改善を伴う。これらデータから、こうした改善は、尿細管の構造およ
び機能の改善からのフィードバックに加えてあるいはその代わりに、糸球体における抗ｍ
ｉＲ−２１の作用に直接関係している可能性があることが示唆される。
【図１】
2020073479.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2020073479.tif 000011
【図９】
2020073479.tif 000012
【配列表】
2020073479000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月13日(2019.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。