(57)【要約】【課題】幹細胞を動員するための方法および組成物の提供。【解決手段】本発明は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法および組成物、ならびに移植した造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために前処置する関連方法、ならびに造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法に関する。一局面において、本発明は、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体においてエクソストシン１（ｅｘｏｓｔｏｓｉｎ  １）（ＥＸＴ１）のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する工程を包含する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年２月２８日に出願された米国仮出願第６１／７７０，５３３号、２０１３年５月２９日に出願された米国仮出願第６１／８２８，５６８号、および２０１３年１１月１５日に出願された米国仮出願第６１／９０４，７６８号の利益を請求する。上記出願のすべての教示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
政府支援
米国国立衛生研究所により授与されたＨＬ０４４８５１、ＨＬ９７７９４およびＨＬ０９７７４のもと政府支援によって本発明がなされた。政府は、本発明における特定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
造血幹細胞（ＨＳＣ）移植は、全世界で年間約６０，０００名の患者を処置および治癒するために使用される、一般的な医学的救命手順である。その一般的な使用にも拘わらず、ＨＳＣ移植から利益を受け得る患者のごく一部がこの手順を受けるに過ぎないので、移植効率および患者アクセスを改善するために重大な要求が未だ満たされていないままである。動員されたＨＳＣは、ＨＳＣ移植のために広く使用されており、骨髄由来ＨＳＣと比較して、改善された転帰を有する。有効な動員レジメンは存在する（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）一方で、Ｇ−ＣＳＦ不応性集団において機能する、Ｇ−ＣＳＦを使わないレジメンもしくは医薬を同定する必要は未だ残っている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
動員抵抗性集団（例えば、糖尿病誘発性の動員障害）において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法、ならびに移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために被験体を（例えば、化学療法および放射線療法のような細胞傷害性前処置の非存在下で）前処置する非細胞傷害性の方法が必要である。本発明は、これらの必要性に対処し、加えて他の望ましい特徴を有するさらなる解決法に関する。
【０００５】
よって、一局面において、本発明は、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体においてエクソストシン１（ｅｘｏｓｔｏｓｉｎ  １）（ＥＸＴ１）のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する工程を包含する。
【０００６】
一局面において、本発明は、糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法を提供し、上記方法は、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する。
【０００７】
一局面において、本発明は、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために被験体を前処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を上記被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０００８】
一局面において、本発明は、処置が必要な被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を上記被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために該被験体を前処置する工程；ならびに（ｂ）造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体に移植する工程であって、ここで上記移植される造血幹細胞は、上記被験体の骨髄に生着し、それによって、上記被験体における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置する工程を包含する。
【０００９】
一局面において、本発明は、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法を提供し、上記方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する工程を包含する。
【００１０】
一局面において、本発明は、糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法を提供し、上記方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する。
【００１１】
一局面において、本発明は、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために被験体を前処置するための方法を提供し、上記方法は、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を該被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【００１２】
一局面において、本発明は、処置が必要な被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を上記被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程；ならびに（ｂ）上記被験体に造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を移植する工程であって、ここで上記移植される造血幹細胞は、上記被験体の骨髄に生着し、それによって、上記被験体における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置する工程を包含する。
【００１３】
本発明は、任意の細胞、組織、器官もしくは個体においてＥＸＴ１もしくはその生成物（ヘパラン硫酸）のレベルもしくは活性を阻害することを企図する。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、間葉細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、骨髄間葉細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、Ｍｘ１＋骨格幹細胞および／もしくは前駆細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する。
【００１４】
いくつかの実施形態において、上記薬剤は、有機低分子もしくは無機低分子；サッカリン；オリゴサッカリド；ポリサッカリド；ペプチド、タンパク質、ペプチドアナログおよび誘導体からなる群より選択される生物学的高分子；ペプチド摸倣物；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群より選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群より選択される生物学的物質から作製される抽出物；天然に存在するかもしくは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組み合わせ、からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上記被験体において動員される上記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記被験体において動員された上記幹細胞および／もしくは前駆細胞を採取する工程を包含する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記採取された幹細胞および／もしくは前駆細胞を、移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記被験体において動員された上記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、上記被験体への自家移植のために採取される。いくつかの実施形態において、上記被験体において動員された上記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、レシピエント被験体への同種異系移植のために採取される。いくつかの実施形態において、上記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞のその後の生着のために、上記被験体を前処置するために上記被験体において動員される。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞のその後の生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、化学療法なしで生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、放射線療法なしで生着のために前処置される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、上記方法は、従来の動員レジメンに対する応答において不十分な動員を示す被験体を選択する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に対する応答において不十分な動員を示す。
【００２１】
いくつかの実施形態において、上記方法は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを上記被験体に投与する工程を包含する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、上記方法は、Ｇ−ＣＳＦまたはこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態とヘパリンとの組み合わせを上記被験体に投与する工程を包含する。
【００２３】
いくつかの実施形態において、上記方法は、血液悪性腫瘍と診断されたか、血液悪性腫瘍を有する疑いがあるか、または血液悪性腫瘍を発生させるリスクがある被験体を選択する工程を包含する。いくつかの実施形態において、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患は、血液悪性腫瘍を含む。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態において、上記方法は、非悪性疾患と診断されたか、非悪性疾患を有する疑いがあるか、または非悪性疾患を発生させるリスクがある被験体を選択する工程を包含する。いくつかの実施形態において、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患は、非悪性疾患を含む。いくつかの実施形態において、上記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、糖尿病と診断されたか、糖尿病を有する疑いがあるか、または糖尿病を発生させるリスクがある被験体を選択する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す。いくつかの実施形態において、上記方法は、糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体を選択する工程を包含する。
【００２６】
一局面において、本発明は、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法を提供し、上記方法は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、上記被験体の末梢血へと造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【００２７】
いくつかの実施形態において、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法は、上記被験体において動員された末梢血幹細胞を採取する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法は、アフェレーシスを介して上記末梢血幹細胞を採取する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞動員およびアフェレーシスは、同日に行われる。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで、レシピエントの体重１ｋｇあたり約２×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分な末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記方法は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与することによって、移植される幹細胞の生着のために、幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法は、移植が必要な被験体へと上記採取した末梢血幹細胞を移植する工程を包含する。
【００２８】
一局面において、本発明は、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員した循環末梢血幹細胞を、被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程を包含する。
【００２９】
一局面において、本発明は、移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって、移植される末梢血幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【００３０】
一局面において、本発明は、末梢血幹細胞移植が必要な被験体を処置するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞のその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチを前処置するために有効な量で上記被験体に投与する工程；ならびに（ｂ）上記被験体へと末梢血幹細胞を移植する工程を包含する。
【００３１】
いくつかの実施形態において、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される。いくつかの実施形態において、上記組成物は、皮下投与のために製剤化される。
【００３２】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、（ｉ）Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体および（ｉｉ）Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。
【００３３】
いくつかの実施形態において、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。
【００３４】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、化学療法なしで生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、放射線療法なしで生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、間質細胞を弱らせることなく生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、上記被験体にＧ−ＣＳＦを投与することなく生着のために前処置される。
【００３５】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを上記被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、少なくとも１種の化学療法剤を上記被験体に投与する工程を包含する。
【００３６】
いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む。
【００３７】
本明細書で記載される方法が、自家幹細胞移植もしくは同種異系幹細胞移植と関連して使用され得ることは認識されるべきである。自家幹細胞移植の状況において、「ドナー」および「被験体」とは、同じ個体をいう。同種異系幹細胞移植の状況において、「ドナー」および「被験体」とは、異なる個体をいう。しかし、当業者に明らかであるはずのいくつかの状況において、「被験体」は、本明細書で記載される造血幹細胞動員薬剤もしくは造血幹細胞動員薬剤の組み合わせを、このような造血幹細胞が必要な被験体へのその後の採取および移植のために受ける個体をいうために「ドナー」と交換可能に使用される。
【００３８】
いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞は、自家移植のために上記被験体において動員される。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞は、同種異系移植のために前記被験体において動員される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。
【００３９】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される。
【００４０】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、非悪性疾患を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される。
【００４１】
一局面において、本発明は、処置が必要な被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびにＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を上記ドナーから末梢血幹細胞移植が必要な被験体へと移植する工程を包含する。
【００４２】
いくつかの実施形態において、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。いくつかの実施形態において、上記方法は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを上記被験体に投与する工程を包含する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記被験体への移植前に、上記ドナーから上記ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を採取する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含む。いくつかの実施形態において、上記ドナーへの前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、アフェレーシス手順と同日に行われる。いくつかの実施形態において、上記アフェレーシス手順は、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与の１時間以内に行われる。
【００４４】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記末梢血幹細胞の移植前に、移植される末梢血幹細胞の生着のために上記末梢血幹細胞移植が必要な前記被験体を前処置する工程を包含する。いくつかの実施形態において、前処置する工程は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、上記末梢血幹細胞の移植の前に、化学療法の処置も放射線療法の処置も投与されない。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび上記被験体は、同じ個体である。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび上記被験体は、異なる個体である。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび／もしくは上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび／もしくは上記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび／もしくは上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。
【００４６】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記血液悪性腫瘍の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。
【００４７】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、非悪性疾患を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記非悪性疾患の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。
【００４８】
一局面において、本発明は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびにＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用して、造血幹細胞再動員から利益を得る被験体を選択するための方法を提供し、上記方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤またはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程であって、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤またはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用する造血幹細胞再動員から利益を得る被験体である、工程を包含する。
【００４９】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記被験体において造血幹細胞を再動員するために、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせを上記被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。
【００５０】
一局面において、本発明は、移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法を提供し、上記方法は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。
【００５１】
一局面において、本発明は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、ならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインをさらに含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、少なくとも１種の化学療法剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される血液悪性腫瘍の少なくとも１種の従来処置を含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される非血液悪性腫瘍の少なくとも１種の従来処置を含む。いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみおよびプレリキサフォルのうちの１種以上の投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、上記幹細胞ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、上記幹細胞ニッチから末梢血へと早ければ１５分程度で造血幹細胞を動員する。いくつかの実施形態において、上記２種以上の動員薬剤の組み合わせは、皮下投与のために製剤化される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。
【００５２】
一局面において、本発明は、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；および（ｂ）上記試験薬剤が、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、ならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力を評価する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。
【００５３】
一局面において、本発明は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせ；ならびに（ｂ）（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において幹細胞増殖を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために、上記被験体への上記２種以上の動員薬剤の組み合わせを投与するための説明書を含むキットを提供する。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。いくつかの実施形態において、上記キットは、上記動員された末梢血幹細胞を上記被験体へと移植するための１種以上の医療デバイスを含む。
【００５４】
一局面において、本開示は、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法を提供し、上記方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血へと動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【００５５】
いくつかの実施形態において、幹細胞および／もしくは前駆細胞（例えば、造血の）を動員するための方法は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを上記被験体に投与する工程をさらに包含する。
【００５６】
いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を採取する工程をさらに包含する。
【００５８】
いくつかの実施形態において、上記動員された幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含み、例えば、アフェレーシスは、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記ＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせが上記被験体に投与されるその同日に行われる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される上記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために十分に、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される上記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために十分に、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される上記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために十分に、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。
【００６０】
いくつかの実施形態において、上記方法は、移植される幹細胞の生着のために、幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを含む組成物を、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記被験体に少なくとも１種の化学療法剤を投与する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、化学療法なしで生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、放射線療法なしで生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、間質細胞を弱らせることなく生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、上記被験体にＧ−ＣＳＦを投与することなく生着のために前処置される。
【００６１】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記採取した末梢血幹細胞を、移植が必要な被験体へと移植する工程をさらに包含する。
【００６２】
いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞は、自家移植のために上記被験体において動員される。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞は、同種異系移植のために上記被験体において動員される。
【００６３】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、１種以上の薬剤、例えば、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、非悪性疾患を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される。
【００６６】
別の局面において、本開示は、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員した循環末梢血幹細胞を、被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程を包含する。
【００６７】
いくつかの実施形態において、上記循環末梢血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む。
【００６８】
いくつかの実施形態において、上記循環末梢血幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含み、上記造血幹細胞動員およびアフェレーシスは、同日に行われる。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで、レシピエントの体重の約２×１０６／ｋｇ〜１０×１０６／ｋｇの間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。
【００６９】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で、上記前処置される予定の被験体に投与することによって、移植される末梢血幹細胞の生着のために末梢血幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、化学療法も放射線療法もなしで生着のために前処置される。
【００７０】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法は、採取された末梢血幹細胞を、このような移植が必要な被験体に移植する工程をさらに包含する。
【００７１】
いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞は、自家移植のために上記必要な被験体において動員される。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞は、同種異系移植のために上記被験体において動員される。
【００７２】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、１種以上の薬剤、例えば、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。
【００７３】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される。
【００７４】
いくつかの形態において、上記被験体は、非悪性疾患を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される。
【００７５】
いくつかの局面において、本開示は、移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される末梢血幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【００７６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを上記被験体に投与する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインは、上記被験体に投与されない。
【００７７】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、化学療法も放射線療法もなしで生着のために前処置される。
【００７８】
いくつかの実施形態において、上記方法は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞をそのような移植が必要な被験体へと移植する工程をさらに包含する。
【００７９】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される。
【００８０】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、非悪性疾患を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される。
【００８１】
いくつかの局面において、本開示は、処置が必要な被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法を提供し、上記方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて、循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記ドナーから末梢血幹細胞移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【００８２】
いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記方法は、以下をさらに包含する。
【００８３】
上記被験体への移植の前に、上記ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を上記ドナーから採取する工程。
【００８４】
いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含む。いくつかの実施形態において、上記ドナーへの上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、上記アフェレーシス手順と同日に行われる。
【００８５】
いくつかの実施形態において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与の１時間以内に行われる。
【００８６】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記末梢血幹細胞の移植前に、移植される末梢血幹細胞の生着のために上記末梢血幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程をさらに包含する。
【００８７】
いくつかの実施形態において、前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、上記末梢血幹細胞の移植前に、化学療法の処置も放射線療法の処置も投与されていない。
【００８９】
いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび上記被験体は、同じ個体である。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび上記被験体は、異なる個体である。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび／もしくは上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび／もしくは上記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記ドナーおよび／もしくは上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。
【００９０】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される。
【００９１】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記血液悪性腫瘍の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程をさらに包含する。
【００９２】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、非悪性疾患を示す患者である。いくつかの実施形態において、上記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される。
【００９３】
いくつかの実施形態において、上記方法は、上記非悪性疾患の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程をさらに包含する。いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用して、造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体を選択するための方法を提供し、上記方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程であって、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用する造血幹細胞再動員から利益を得る被験体である工程を包含する。
【００９４】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体およびＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。
【００９５】
いくつかの局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【００９６】
いくつかの局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アゴニストを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【００９７】
いくつかの局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体を、移植される末梢血幹細胞の上記被験体の骨髄ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の骨髄ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される末梢血幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【００９８】
いくつかの局面において、移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【００９９】
いくつかの局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１００】
いくつかの局面において、移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１０１】
いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを含む組成物を提供する。
【０１０２】
本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせは、有機低分子もしくは無機低分子；サッカリン；オリゴサッカリド；ポリサッカリド；ペプチド、タンパク質、ペプチドアナログおよび誘導体からなる群より選択される生物学的高分子；ペプチド摸倣物；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群より選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群より選択される生物学的物質から作製される抽出物；天然に存在するかもしくは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組み合わせ、からなる群より選択される。
【０１０３】
本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせは、皮下投与のために製剤化される。
【０１０４】
本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、有機低分子もしくは無機低分子；サッカリン；オリゴサッカリド；ポリサッカリド；ペプチド、タンパク質、ペプチドアナログおよび誘導体からなる群より選択される生物学的高分子；ペプチド摸倣物；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群より選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群より選択される生物学的物質から作製される抽出物；天然に存在するかもしくは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組み合わせ、からなる群より選択される。
【０１０５】
本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体である。本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体である。本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される。本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体およびＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体であり、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体であり、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体である。
【０１０６】
本開示のこの局面およびいくつかの局面のいくつかの実施形態において、本明細書で記載される組成物および方法は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインをさらに含むか、またはサイトカインを被験体に投与する工程をさらに包含する。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみおよびプレリキサフォルのうちの１種以上の投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、上記幹細胞ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、上記幹細胞ニッチから末梢血へと早ければ１５分程度で造血幹細胞を動員する。
【０１０８】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを提供する工程；（ｂ）試験薬剤を提供する工程；ならびに（ｃ）上記試験薬剤が上記ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを作動する能力をアッセイする工程であって、ここで上記ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを作動する試験薬剤は、候補の造血幹細胞動員薬剤である工程、を包含する。
【０１０９】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントを提供する工程；（ｂ）ＣＸＣＲ４結合パートナーを提供する工程；（ｃ）試験薬剤を提供する工程；ならびに（ｄ）上記試験薬剤が上記ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントへの上記ＣＸＣＲ４結合パートナーの結合を阻害する能力をアッセイする工程であって、ここで上記ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントへの上記ＣＸＣＲ４結合パートナーの結合を阻害する試験薬剤は、候補の造血幹細胞動員薬剤である工程、を包含する。
【０１１０】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；ならびに（ｂ）上記試験薬剤が、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力を評価する工程を包含する。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体およびＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。
【０１１２】
いくつかの局面において、本開示は、以下を含むキットを提供する：（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、（ｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および（ｉｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせ；ならびに（ｂ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、（ｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および（ｉｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせは、有機低分子もしくは無機低分子；サッカリン；オリゴサッカリド；ポリサッカリド；ペプチド、タンパク質、ペプチドアナログおよび誘導体からなる群より選択される生物学的高分子；ペプチド摸倣物；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群より選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群より選択される生物学的物質から作製される抽出物；天然に存在するかもしくは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組み合わせ、からなる群より選択される。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体およびＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記キットは、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、上記被験体に移植するための１種以上の医療デバイスをさらに含む。
本発明は、例えば以下を提供する。
（項目１）
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法であって、該方法は、該被験体においてエクソストシン１（ＥＸＴ１）のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を該被験体に投与し、それによって、該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する工程を包含する、方法。
（項目２）
糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法であって、該方法は、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を該被験体に投与し、それによって、該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する、方法。
（項目３）
細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を該被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目４）
処置が必要な被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法であって、該方法は、
（ａ）該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を該被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために該被験体を前処置する工程；ならびに
（ｂ）造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を該被験体に移植する工程であって、ここで該移植された造血幹細胞は、該被験体の骨髄に生着し、それによって、該被験体における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置する工程、
を包含する、方法。
（項目５）
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法であって、該方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を該被験体に投与し、それによって、該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する工程を包含する、方法。
（項目６）
糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法であって、該方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を該被験体に投与し、それによって、該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する、方法。
（項目７）
細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を該被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で移植される末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目８）
処置が必要な被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法であって、該方法は、
（ａ）該被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を該被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために該被験体を前処置する工程；ならびに
（ｂ）該被験体に造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を移植する工程であって、ここで該移植された造血幹細胞は、該被験体の骨髄に生着し、それによって、該被験体における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置する工程、
を包含する、方法。
（項目９）
前記薬剤は、間葉細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記薬剤は、骨髄間葉細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記薬剤は、Ｍｘ１＋骨格幹細胞および／もしくは前駆細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記薬剤は、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目５〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記薬剤は、有機低分子もしくは無機低分子；サッカリン；オリゴサッカリド；ポリサッカリド；ペプチド、タンパク質、ペプチドアナログおよび誘導体からなる群より選択される生物学的高分子；ペプチド摸倣物；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群より選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群より選択される生物学的物質から作製される抽出物；天然に存在するかもしくは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組み合わせ、からなる群より選択される、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記被験体において動員される前記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞を含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記被験体において動員された前記幹細胞および／もしくは前駆細胞を採取する工程をさらに包含する、項目１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記採取された幹細胞および／もしくは前駆細胞を、移植が必要な被験体に移植する工程をさらに包含する、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記被験体において動員された前記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、該被験体への自家移植のために採取される、項目１５または１６に記載の方法。
（項目１８）
前記被験体において動員された前記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、レシピエント被験体への同種異系移植のために採取される、項目１５または１６に記載の方法。
（項目１９）
前記幹細胞および／もしくは前駆細胞は、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞のその後の生着のために、前記被験体において動員して前記被験体を前処置する、項目１、２、５、６および９〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記被験体は、細胞傷害性前処置の非存在下で移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞のその後の生着のために前処置される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記被験体は、化学療法なしで生着のために前処置される、項目３、７および２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記被験体は、放射線療法なしで生着のために前処置される、項目３、７および２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
従来の動員レジメンに対する応答において不十分な動員を示す被験体を選択する工程をさらに包含する、項目１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記被験体は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に対する応答において不十分な動員を示す、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
Ｇ−ＣＳＦまたはそのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態とヘパリンとの組み合わせを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
血液悪性腫瘍と診断されたか、血液悪性腫瘍を有する疑いがあるか、または血液悪性腫瘍を発生させるリスクがある被験体を選択する工程をさらに包含する、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
非悪性疾患と診断されたか、非悪性疾患を有する疑いがあるか、または非悪性疾患を発生させるリスクがある被験体を選択する工程をさらに包含する、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
糖尿病と診断されたか、糖尿病を有する疑いがあるか、または糖尿病を発生させるリスクがある被験体を選択する工程をさらに包含する、項目１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記被験体は、幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す、項目１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体を選択する工程をさらに包含する、項目３または７に記載の方法。
（項目３４）
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法であって、該方法は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、該被験体の末梢血へと造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効な量で、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目３５）
前記被験体において動員された末梢血幹細胞を採取する工程をさらに包含する、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記末梢血幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含み得、前記造血幹細胞動員およびアフェレーシスは、同日に行われる、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
単一セッションのアフェレーシスにより、レシピエントの体重１ｋｇあたり約２×１０６〜１０×１０６の細胞用量のために十分な末梢血幹細胞が集められる、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該前処置された被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与することによって、移植される幹細胞の生着のために、幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程をさらに包含する、項目３４〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
移植が必要な被験体へと前記採取した末梢血幹細胞を移植する工程をさらに包含する、項目３４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法であって、該方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で、該ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）該動員した循環末梢血幹細胞を、被験体における移植のために該ドナーから採取する工程、を包含する方法。
（項目４１）
移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストまたはＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって、移植される末梢血幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目４２）
末梢血幹細胞移植が必要な被験体を処置するための方法であって、該方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストまたはＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞のその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチを前処置するために有効な量で該被験体に投与する工程；ならびに（ｂ）該被験体へと末梢血幹細胞を移植する工程、を包含する方法。
（項目４３）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される、項目３４〜４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目３４〜４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、（ｉ）Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体および（ｉｉ）Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される、項目３４〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目３４〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一アフェレーシスセッションで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、前記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する、項目３４〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一アフェレーシスセッションで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、前記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する、項目３４〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一アフェレーシスセッションで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、前記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する、項目３４〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
前記被験体は、化学療法なしで生着のために前処置される、項目３４〜４９のいずれか１項に記載の方法。
（項目５１）
前記被験体は、放射線なしで生着のために前処置される、項目３４〜５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目５２）
前記被験体は、間質細胞を弱らせることなく生着のために前処置される、項目３４〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５３）
前記被験体は、前記被験体にＧ−ＣＳＦを投与することなく生着のために前処置される、項目３４〜５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目５４）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目３４〜５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目５５）
少なくとも１種の化学療法剤を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目３４〜５４のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
前記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む、項目３４〜５５のいずれか１項に記載の方法。
（項目５７）
前記造血幹細胞は、自家移植のために前記被験体において動員される、項目３４〜５６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
前記造血幹細胞は、同種異系移植のために前記被験体において動員される、項目３４〜５７のいずれか１項に記載の方法。
（項目５９）
前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目３４〜５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
前記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目３４〜５９のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目３４〜６０のいずれか１項に記載の方法。
（項目６２）
前記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である、項目３４〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
前記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記被験体は、非悪性疾患を示す患者である、項目３４〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６５）
前記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
処置が必要な被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法であって、該方法は、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびにＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で、該ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）該ドナーから動員された循環末梢血幹細胞を末梢血幹細胞移植が必要な被験体へと移植する工程を包含する、方法。
（項目６７）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目６６または６７に記載の方法。
（項目６９）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される、項目６６〜６８のいずれか１項に記載の方法。
（項目７０）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目６６〜６９のいずれか１項に記載の方法。
（項目７１）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目６６〜７０のいずれか１項に記載の方法。
（項目７２）
前記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む、項目６６〜７１のいずれか１項に記載の方法。
（項目７３）
前記被験体への移植前に、前記ドナーから前記ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を採取する工程をさらに包含する、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
前記動員された造血幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含む、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記ドナーへの前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、アフェレーシス手順と同日に行われる、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記アフェレーシス手順は、前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与の１時間以内に行われる、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記末梢血幹細胞の移植前に、移植される末梢血幹細胞の生着のために該末梢血幹細胞移植が必要な前記被験体を前処置する工程をさらに包含する、項目６６〜７６のいずれか１項に記載の方法。
（項目７８）
前処置する工程は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも1種のＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少な
くとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の前記前処置された被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該前処置された被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与する工程を包含する、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
前記被験体は、前記末梢血幹細胞の移植の前に、化学療法の処置も放射線療法の処置も投与されない、項目６６〜７８のいずれか１項に記載の方法。
（項目８０）
前記ドナーおよび前記被験体は、同じ個体である、項目６６〜７９のいずれか１項に記載の方法。
（項目８１）
前記ドナーおよび前記被験体は、異なる個体である、項目６６〜８０のいずれか１項に記載の方法。
（項目８２）
前記ドナーおよび／もしくは前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目６６〜８１のいずれか１項に記載の方法。
（項目８３）
前記ドナーおよび／もしくは前記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目６６〜８２のいずれか１項に記載の方法。
（項目８４）
前記ドナーおよび／もしくは前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目６６〜８３のいずれか１項に記載の方法。
（項目８５）
前記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である、項目６６〜８４のいずれか１項に記載の方法。
（項目８６）
前記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
前記血液悪性腫瘍の従来処置の治療上有効な量を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目８５または８６に記載の方法。
（項目８８）
前記被験体は、非悪性疾患を示す患者である、項目６６〜８７のいずれか１項に記載の方法。
（項目８９）
前記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
前記非悪性疾患の従来処置の治療上有効な量を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目８９に記載の方法。
（項目９１）
（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびにＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用して、造血幹細胞再動員から利益を得る被験体を選択するための方法であって、該方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤またはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程であって、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤またはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用する造血幹細胞再動員から利益を得る被験体である、工程を包含する、方法。
（項目９２）
前記被験体において造血幹細胞を再動員するために、前記２種以上の動員薬剤の組み合わせを該被験体に投与する工程をさらに包含する、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目９１または９２に記載の方法。
（項目９４）
移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員の組み合わせを、移植される幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目９５）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目９４に記載の方法。
（項目９６）
（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、ならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤を含む組成物。
（項目９７）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインをさらに含む、項目９６に記載の組成物。
（項目９８）
少なくとも１種の化学療法剤をさらに含む、項目９６または９７に記載の組成物。
（項目９９）
急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される血液悪性腫瘍の少なくとも１種の従来処置をさらに含む、項目９６〜９８のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１００）
骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される非血液悪性腫瘍の少なくとも１種の従来処置をさらに含む、項目９６〜９８のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０１）
前記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である、項目９６〜１００のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０２）
前記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみおよびプレリキサフォルのうちの１種以上の投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である、項目９６〜１０１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０３）
前記組成物は、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するために有用である、項目９６〜１０２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０４）
前記組成物は、前記幹細胞ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である、項目９６〜１０３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０５）
前記組成物は、前記幹細胞ニッチから末梢血へと早ければ１５分程度で造血幹細胞を動員する、項目１０４に記載の組成物。
（項目１０６）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせは、皮下投与のために製剤化される、項目９６〜１０５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０７）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目９６〜１０６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０８）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される、項目９６〜１０７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１０９）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目９６〜１０８のいずれか１項に記載の組成物。
（項目１１０）
造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法であって、該方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；および（ｂ）該試験薬剤が、（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、ならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力を評価する工程を包含する、方法。
（項目１１１）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１４１に記載の方法。
（項目１１２）
以下を含むキット：
（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターならびに（ｉｉ）ＣＸＣＲ２アゴニストおよびＣＸＣＲ４アンタゴニストのうちの少なくとも一方を含む２種以上の動員薬剤の組み合わせ；ならびに（ｂ）（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）該被験体において幹細胞移殖を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために、該被験体への該２種以上の動員薬剤の組み合わせを投与するための説明書。
（項目１１３）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１１２に記載のキット。
（項目１１４）
前記動員された末梢血幹細胞を前記被験体へと移植するための１種以上の医療デバイスをさらに含む、項目１１２または１１３に記載のキット。
（項目１１５）
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法であって、該方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を該被験体の末梢血へと動員するために有効な量で該被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目１１６）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、有機低分子もしくは無機低分子；サッカリン；オリゴサッカリド；ポリサッカリド；ペプチド、タンパク質、ペプチドアナログおよび誘導体からなる群より選択される生物学的高分子；ペプチド摸倣物；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群より選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群より選択される生物学的物質から作製される抽出物；天然に存在するかもしくは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、項目１１５に記載の方法。
（項目１１７）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される、項目１１５または１１６に記載の方法。
（項目１１８）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１１５〜１１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１９）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体である、項目１１５〜１１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２０）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１１５〜１１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２１）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目１１５〜１２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２２）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目１１５〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２３）
前記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む、項目１１５〜１２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２４）
前記ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を採取する工程をさらに包含する、項目１２３に記載の方法。
（項目１２５）
前記動員された幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含み、該アフェレーシス手順は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび前記ＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせが前記被験体に投与されるその同日に行われる、項目１２４に記載の方法。
（項目１２６）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一アフェレーシスセッションで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、前記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する、項目１１５〜１２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２７）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一アフェレーシスセッションで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、前記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する、項目１１５〜１２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２８）
前記２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、単一アフェレーシスセッションで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、前記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する、項目１１５〜１２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２９）
移植される幹細胞の生着のために幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程をさらに包含する、項目１１５〜１２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３０）
前記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の該前処置された被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該前処置された被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与する工程を包含する、項目１２９に記載の方法。
（項目１３１）
前記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを含む組成物を、移植される幹細胞の該前処置された被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該前処置された被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与する工程を包含する、項目１３０に記載の方法。
（項目１３２）
前記被験体に少なくとも１種の化学療法剤を投与する工程をさらに包含する、項目１２９〜１３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３３）
前記被験体は、化学療法なしで生着のために前処置される、項目１２９〜１３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３４）
前記被験体は、放射線なしで生着のために前処置される、項目１２９〜１３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３５）
前記被験体は、間質細胞を弱らせることなく生着のために前処置される、項目１２９〜１３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３６）
前記被験体は、該被験体にＧ−ＣＳＦを投与することなく生着のために前処置される、項目１２９〜１３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３７）
前記採取した末梢血幹細胞を、移植が必要な被験体へと移植する工程をさらに包含する、項目１２４〜１３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３８）
前記造血幹細胞は、自家移植のために前記被験体において動員される、項目１１５〜１３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３９）
前記造血幹細胞は、同種異系移植のために前記被験体において動員される、項目１１５〜１３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４０）
前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１１５〜１３９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４１）
前記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１１５〜１４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４２）
前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１１５〜１４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４３）
前記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である、項目１１５〜１４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４４）
前記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される、項目１４３に記載の方法。
（項目１４５）
前記被験体は、非悪性疾患を示す患者である、項目１１５〜１４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４６）
前記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される、項目１４５に記載の方法。
（項目１４７）
末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法であって、該方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で該ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）該動員した循環末梢血幹細胞を、被験体における移植のために該ドナーから採取する工程、を包含する方法。
（項目１４８）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される、項目１４７に記載の方法。
（項目１４９）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１４７または１４８に記載の方法。
（項目１５０）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体である、項目１４７〜１４９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５１）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１４７〜１５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５２）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低減する薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低減する薬剤からなる群より選択される、項目１４７〜１５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５３）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目１４７〜１５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５４）
前記循環末梢血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む、項目１４７〜１５３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５５）
前記末梢血幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含み、前記造血幹細胞動員およびアフェレーシスは、同日に行われる、項目１４７〜１５４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５６）
単一セッションのアフェレーシスにより、レシピエントの体重１ｋｇあたり約２×１０６〜１０×１０６の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる、項目１５５に記載の方法。
（項目１５７）
少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で、前処置される予定の被験体に投与することによって、移植される末梢血幹細胞の生着のために末梢血幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程をさらに包含する、項目１４７〜１５６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５８）
前記被験体は、化学療法も放射線療法もなしで生着のために前処置される、項目１５７に記載の方法。
（項目１５９）
前記採取された末梢血幹細胞を、移植が必要な被験体に移植する工程をさらに包含する、項目１４７〜１５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６０）
前記造血幹細胞は、自家移植のために前記被験体において動員される、項目１４７〜１５９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６１）
前記造血幹細胞は、同種異系移植のために前記被験体において動員される、項目１４７〜１６０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６２）
前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１４７〜１６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６３）
前記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１４７〜１６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６４）
前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１４７〜１６３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６５）
前記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である、項目１４７〜１６４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６６）
前記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される、項目１６５に記載の方法。
（項目１６７）
前記被験体は、非悪性疾患を示す患者である、項目１４７〜１６６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６８）
前記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される、項目１６７に記載の方法。
（項目１６９）
移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって移植される末梢血幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目１７０）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される、項目１６９に記載の方法。
（項目１７１）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１６９〜１７０に記載の方法。
（項目１７２）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体である、項目１６９〜１７１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７３）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１６９〜１７２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７４）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目１６９〜１７３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７５）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目１６９〜１７４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７６）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインは、前記被験体に投与されない、項目１６９〜１７４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７７）
前記被験体は、化学療法も放射線療法もなしで生着のために前処置される、項目１６９〜１７６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７８）
移植が必要な被験体へとＣＤ３４＋末梢血幹細胞を移植する工程をさらに包含する、項目１６９〜１７７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７９）
前記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である、項目１６９〜１７８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８０）
前記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される、項目１７９に記載の方法。
（項目１８１）
前記被験体は、非悪性疾患を示す患者である、項目１６９〜１８０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８２）
前記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される、項目１８１に記載の方法。
（項目１８３）
処置が必要な被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法であって、該方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて、循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で該ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）末梢血幹細胞移植が必要な被験体に、該ドナーから該動員された循環末梢血幹細胞を移植する工程、を包含する方法。
（項目１８４）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせは、組成物として製剤化される、項目１８３に記載の方法。
（項目１８５）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１８３または１８４に記載の方法。
（項目１８６）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体である、項目１８３〜１８５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８７）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１８３〜１８６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８８）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目１８３〜１８７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８９）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目１８３〜１８８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９０）
前記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を含む、項目１８３〜１８９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９１）
前記被験体への移植の前に、前記ドナーから前記ＣＤ３４＋末梢血幹細胞を採取する工程をさらに包含する、項目１８３〜１９０に記載の方法。
（項目１９２）
前記動員された造血幹細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含む、項目１９１に記載の方法。
（項目１９３）
前記ドナーへの前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与は、前記アフェレーシス手順と同日に行われる、項目１９２に記載の方法。
（項目１９４）
前記アフェレーシス手順は、前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせの投与の１時間以内に行われる、項目１９３に記載の方法。
（項目１９５）
前記末梢血幹細胞の移植前に、移植される末梢血幹細胞の生着のために該末梢血幹細胞の移植が必要な被験体を前処置する工程をさらに包含する、項目１８３〜１９４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９６）
前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される末梢血幹細胞の前記前処置された被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該前処置された被験体の幹細胞ニッチにおいて造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与する工程を包含する、項目１９５に記載の方法。
（項目１９７）
前記被験体は、前記末梢血幹細胞の移植前に、化学療法の処置も放射線療法の処置も投与されていない、項目１８３〜１９６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９８）
前記ドナーおよび前記被験体は、同じ個体である、項目１８３〜１９７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９９）
前記ドナーおよび前記被験体は、異なる個体である、項目１８３〜１９７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２００）
前記ドナーおよび／もしくは前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１８３〜１９９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０１）
前記ドナーおよび／もしくは前記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１８３〜２００のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０２）
前記ドナーおよび／もしくは前記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される、項目１８３〜２０１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０３）
前記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である、項目１８３〜２０２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０４）
前記血液悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病からなる群より選択される、項目２０３に記載の方法。
（項目２０５）
前記血液悪性腫瘍の従来処置の治療上有効な量を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目２０３または２０４に記載の方法。
（項目２０６）
前記被験体は、非悪性疾患を示す患者である、項目１８３〜２０５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０７）
前記非悪性疾患は、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群からなる群より選択される、項目２０６に記載の方法。
（項目２０８）
前記非悪性疾患の従来処置の治療上有効な量を前記被験体に投与する工程をさらに包含する、項目２０６または２０７に記載の方法。
（項目２０９）
少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用して、造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体を選択するための方法であって、該方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程であって、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを使用する造血幹細胞再動員から利益を得る被験体である工程を包含する、方法。
（項目２１０）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体およびＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される、項目２０９に記載の方法。
（項目２１１）
移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを、移植される幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目２１２）
移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アゴニストを、移植される幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目２１３）
移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体を、移植される末梢血幹細胞の該被験体の骨髄ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の骨髄ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって移植される末梢血幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目２１４）
移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目２１５）
移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目２１６）
移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法であって、該方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の該被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、該被験体の幹細胞ニッチから造血幹細胞を枯渇させるために有効な量で該被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために該被験体を前処置する工程を包含する、方法。
（項目２１７）
少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを含む、組成物。
（項目２１８）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせは、皮下投与のために製剤化される、項目２１７に記載の組成物。
（項目２１９）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目２１７または２１８に記載の組成物。
（項目２２０）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体である、項目２１７〜２１９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２１）
前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目２１７〜２２０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２２）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体、硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤、およびＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を低下させる薬剤からなる群より選択される、項目２１７〜２２１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２３）
組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインをさらに含む、項目２１７〜２２２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２４）
前記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である、項目２１７〜２２３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２５）
前記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみおよびプレリキサフォルのうちの１種以上の投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である、項目２１７〜２２４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２６）
前記組成物は、移植した幹細胞の生着のために被験体を前処置するために有用である、項目２１７〜２２５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２７）
前記組成物は、前記幹細胞ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である、項目２１７〜２２６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２８）
前記組成物は、前記幹細胞ニッチから末梢血へと早ければ１５分程度で造血幹細胞を動員する、項目２２７に記載の組成物。
（項目２２９）
造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法であって、該方法は、（ａ）ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを提供する工程；（ｂ）試験薬剤を提供する工程；ならびに（ｃ）該試験薬剤が該ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを作動する能力をアッセイする工程であって、ここで該ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを作動する試験薬剤は、候補の造血幹細胞動員薬剤である工程、を包含する方法。
（項目２３０）
造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法であって、該方法は、（ａ）ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントを提供する工程；（ｂ）ＣＸＣＲ４結合パートナーを提供する工程；（ｃ）試験薬剤を提供する工程；および（ｄ）該試験薬剤が該ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントへの該ＣＸＣＲ４結合パートナーの結合を阻害する能力をアッセイする工程であって、ここで該ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントへの該ＣＸＣＲ４結合パートナーの結合を阻害する試験薬剤は、候補の造血幹細胞動員薬剤である工程、を包含する方法。
（項目２３１）
造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法であって、該方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；ならびに（ｂ）該試験薬剤が、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力を評価する工程を包含する、方法。
（項目２３２）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目２３１に記載の方法。
（項目２３３）
以下を含むキット：
（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、（ｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および（ｉｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせ；ならびに（ｂ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、（ｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および（ｉｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）該被験体において幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために該被験体に投与するための説明書。
（項目２３４）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ヘパリン硫酸またはそのアナログもしくは誘導体および硫酸プロタミンまたはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目２３３に記載のキット。
（項目２３５）
前記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、前記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および前記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、前記被験体に移植するための１種以上の医療デバイスをさらに含む、項目２３３〜２３４に記載のキット。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
特許および特許出願のファイルは、カラーで仕上げられた少なくとも１つの図面を含む。カラー図面つきでのこの特許もしくは特許出願の公報のコピーは、要請し、必要な料金を支払えば、当該官庁によって提供される。
【０１１６】
【図１】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃおよび図１Ｄは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンが骨髄におけるＨＳＰＣ保持に必須であり、グリコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＥＸＴ１の欠失がＨＳＰＣ局在化においてゆるやかな変化を生じることを図示する。図１Ａ（上）は、図１Ｂ、図１Ｃおよび図１Ｄに示される結果を生じた実験デザインの模式図を示す。図１Ｂは、コロニー形成能力によって測定される造血前駆細胞が血中で有意に増大されることを示す。図１Ｃおよび図１Ｄは、免疫型として規定された前駆細胞（図１Ｃ、中央）および幹細胞（図１Ｄ、右）がＥＸＴ１の欠失の６ヶ月後に骨髄中で有意に減少されることを示す。これら結果は、１実験群につき６〜１０匹の動物での３回の独立した実験を表す。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【０１１７】
【図２】図２Ａ、図２Ｂおよび図２Ｃは、ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）が造血幹細胞局在化に対するＶＣＡＭ−１の活性を変化させることを図示する。図２Ａは、図２Ｂおよび図２Ｃに示される結果を生じた実験デザインの模式図を示す。図２Ｂおよび図１Ｃは、ＶＣＡＭ−１誘発性の動員が、コロニー形成単位アッセイ（図２Ｂ、左下パネル）および競合再集合アッセイ（図２Ｃ、右下パネル）によって示されるように、Ｅｘｔ１／ヘパラン硫酸プロテオグリカンに依存することを示す。これら結果は、１実験群につき５匹の動物での２回の独立した実験を表す。＊＊ｐ＜０．０５；＊＊＊ｐ＜０．０１；ｎｓ＝有意でない。
【０１１８】
【図３】図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃは、ヘパリン硫酸が内因性ＨＳＰＧと競合し、機能的に強力なＨＳＣの動員を可能にすることを図示する。図３Ａ（上）は、図３Ｂおよび図３Ｃに示される結果を生じた実験デザインの模式図を示す。図３Ｂは、一連の競合移植物によって測定される場合、ヘパリンがＧ−ＣＳＦ誘発性の動員を有意に増強することを示す（左下パネル）。図３Ｃは、Ｇ−ＣＳＦとヘパリンとの組み合わせによって達成された、増強された動員が、無傷の内因性ＨＳＰＧに依存することを示す（右下パネル）。これら結果は、１実験群につき６〜１０匹の動物での３回の独立した実験を表す。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【０１１９】
【図４】図４は、ヘパラン硫酸インヒビターとＡＭＤ３１００とを組み合わせることによる、顕著に効率的な幹細胞動員を図示する。単一用量のＡＭＤ３１００のみ（５ｍｇ／ｋｇ）、またはＡＭＤ３１００＋ヘパリン（１００Ｕ／マウス）もしくは硫酸プロタミン（４０ｍｇ／ｋｇ）で処置した動物の血液を、致命的に照射したコンジェニック宿主の移植において使用した。生着したドナー細胞の相対頻度を示す。１のところにある線＝ＡＭＤ３１００のみ。結果は、６〜１０匹／群に由来する。
【０１２０】
【図５】図５Ａ、図５Ｂ、図５Ｃ，図５Ｄ、図５Ｅ、図５Ｆ、図５Ｇ、図５Ｈ、図５Ｉ、図５Ｊ、図５Ｋおよび図５Ｌは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンがＨＰＳＣ局在化を制御することを示す。図５Ａは、実験デザインを示す模式的概略図である。図５Ｂ〜５Ｊは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後に集めたデータに関する。図５Ｂおよび図５Ｃは、コミットされた骨髄系前駆細胞（共通骨髄系前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球−マクロファージ前駆細胞（ＧＭＰ）および、巨核球−赤血球前駆細胞（ＭＥＰ））およびコミットされたリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）への寄与（図１Ｂ）、ならびにＫＬＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋ＨＳＣへの寄与（図５Ｃ）を示す骨髄分析の結果を図示する棒グラフである。図５Ｄは、骨髄ＫＬＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋細胞集団におけるアポトーシスを図示する棒グラフである。図５Ｅは、細胞周期のＧ０、Ｇ１およびＳ−Ｇ２−Ｍ期にある細胞のパーセンテージを示す、骨髄ＫＬＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋ＨＳＣの細胞周期分析の結果を示す棒グラフである。図５Ｆは、末梢白血球（ＷＢＣ）数を示す棒グラフである。図５Ｇは、キメラマウスにおけるメチルセルロース中のコロニー形成単位アッセイ（ＣＦＵ）によって測定される循環前駆細胞の数を示す末梢血分析を示す棒グラフである。図５Ｈ〜５Ｋは、総重量（ｍｇ）を示す脾臓分析の結果（図５Ｈ）、ＫＬＳ  ４８−ＣＤ１５０＋ＨＳＣへの寄与（図５Ｉ）、ＣＭＰ、ＧＭＰおよびＭＥＰ細胞への寄与（図５Ｊ）、ならびにＷＴ  ＣＤ４５．２脾細胞の等しい数と競合したコントロールもしくは変異キメラマウス（ＣＤ４５．１）に由来する脾細胞を注入したレシピエントＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２）マウスの、移植後１６週間での相対的ＰＢ再構成（図５Ｋ）を示す棒グラフである。図５Ｌは、コントロールマウス（ｎ＝８）および変異マウス（ｎ＝４〜５）の大腿骨の皮質骨（上のパネル）および海綿骨（下のパネル）の代表的三次元マイクロＣＴ画像を示す。データは、少なくとも３回の独立した実験（ｎ＝５〜８匹のマウス／遺伝子型／実験）の代表。データは、平均±ＳＥＭとして表される。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【０１２１】
【図６−１】図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｅ、図６Ｆ、図６Ｇ、図６Ｈ、図６Ｉ、図６Ｊ、図６Ｋ、図６Ｌ、図６Ｍ、図６Ｎ、図６Ｏ、図６Ｐ、図６Ｑ、図６Ｒ、図６Ｓ、図６Ｔ、図６Ｕ、図６Ｖおよび図６Ｗは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンが造血幹細胞／前駆細胞局在化を制御することを示す。図６Ａ〜図６Ｃは、ＢＭ  Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＥｘｔ１欠失の評価を示す。図６Ａは、コントロールマウスおよび変異マウスが、どのようにしてＲＯＳＡ２６−ｌｏｘＰ−ｓｔｏｐ−ｌｏｘＰ−ＥＹＦＰ（Ｒｏｓａ−ＹＦＰ）系統に交配されて、ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋細胞の予測単離（ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ）を容易にしたかを示す模式図である。図６Ｂは、コントロールマウスおよび変異マウス（ｎ＝３／遺伝子型）に由来するエキソビボで増殖させたＢＭ  ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋（ＹＦＰ＋）細胞におけるＥｘｔ１のウェスタンブロットを示し、Ｇａｐｄｈは、添加コントロールとして示される。図６Ｃは、Ｇａｐｄｈに対してＥｘｔ１バンドの光学密度を測定することによって行われる定量を示す棒グラフである。図６Ｄ〜６Ｆは、コントロールマウスおよび変異マウスに由来するエキソビボで増殖させた（図６Ｄ）、および新たに単離した（図６Ｅ）、ＢＭ  ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋ＢＭ細胞におけるＨＳレベルの定量を示す棒グラフである。図６Ｆは、コントロールマウスおよび変異マウスにおけるＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋ＣＤ１０５＋ＣＤ１４０＋Ｓｃａ１＋間葉性幹細胞への寄与を示す骨髄分析を示す棒グラフである。図６Ｇ〜６Ｋは、ドナー細胞集団（ＣＤ４５．１）の出現率（図６Ｇ）、白血球（ＷＢＣ）数（図６Ｈ）、赤血球（ＲＢＣ）数（図６Ｉ）、血小板（ＰＬＴ）数（図６Ｊ）、ならびにＢ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与（図６Ｋ）を示す、移植の６〜８週間後にｐＩｐＣ誘発する前の、キメラＥｘｔ１コントロールマウスおよび変異マウスの末梢血造血パラメーターの分析を図示する。図６Ｌ〜６Ｓは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のキメラＥｘｔ１コントロールマウスおよび変異マウスの分析を示す。図６Ｌは、総体重（ＴＢＷ）（ｇ）を示す棒グラフである。図６Ｍおよび６Ｎは、レシピエントマウスにおける全ＢＭ細胞性（図６Ｍ）、ならびにＢ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与（図６Ｎ）を示す骨髄分析を図示する棒グラフである。図６Ｏ〜６Ｑは、レシピエントマウスにおけるＢ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与（図６Ｏ）、血小板数（ＰＬＴ）（図６Ｐ）および赤血球数（ＲＢＣ）（図６Ｑ）を示す末梢血分析を示す棒グラフである。図６Ｒおよび６Ｓは、コントロールおよび変異キメラマウスにおいて、細胞周期分析を示す、脾臓に存在するＫＬＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋ＨＳＣ分析（図６Ｒ）；細胞周期のＧ０、Ｇ１およびＳ−Ｇ２−Ｍ期の細胞、およびアポトーシス（図６Ｓ）を示すグラフである。図６Ｔは、Ｂ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与を示す、ＷＴ  ＣＤ４５．２脾細胞の等しい数と競合したコントロールマウスもしくは変異キメラマウス（ＣＤ４５．１）に由来する脾細胞を注入したレシピエントＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２）マウスの、移植の１６週間後のＰＢ再構成を示す棒グラフである。図６Ｕは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のキメラコントロールマウスおよび変異マウスにおけるＣＤ６２Ｌｏｗ循環好中球の分布を示す棒グラフである。図６Ｖは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のコントロールマウスおよび変異キメラマウスのＢＭにおけるＣｘｃｌ１２タンパク質レベルを示す棒グラフである。図６Ｗは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のキメラＥｘｔ１コントロールマウスおよび変異マウスの大腿の代表的ヘマトキシリンおよびエオシン染色を示す。倍率：上のパネルは４×、下のパネルは４０×。データは、別段示されなければ、少なくとも２回の独立した実験（ｎ＝５〜８匹のマウス／遺伝子型／実験）の代表。データは、平均±ＳＤもしくはメジアン±ＩＱＲ（四分位数間領域）として表される。ｎｓ：有意でない；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【図６−２】図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、図６Ｄ、図６Ｅ、図６Ｆ、図６Ｇ、図６Ｈ、図６Ｉ、図６Ｊ、図６Ｋ、図６Ｌ、図６Ｍ、図６Ｎ、図６Ｏ、図６Ｐ、図６Ｑ、図６Ｒ、図６Ｓ、図６Ｔ、図６Ｕ、図６Ｖおよび図６Ｗは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンが造血幹細胞／前駆細胞局在化を制御することを示す。図６Ａ〜図６Ｃは、ＢＭ  Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＥｘｔ１欠失の評価を示す。図６Ａは、コントロールマウスおよび変異マウスが、どのようにしてＲＯＳＡ２６−ｌｏｘＰ−ｓｔｏｐ−ｌｏｘＰ−ＥＹＦＰ（Ｒｏｓａ−ＹＦＰ）系統に交配されて、ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋細胞の予測単離（ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ）を容易にしたかを示す模式図である。図６Ｂは、コントロールマウスおよび変異マウス（ｎ＝３／遺伝子型）に由来するエキソビボで増殖させたＢＭ  ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋（ＹＦＰ＋）細胞におけるＥｘｔ１のウェスタンブロットを示し、Ｇａｐｄｈは、添加コントロールとして示される。図６Ｃは、Ｇａｐｄｈに対してＥｘｔ１バンドの光学密度を測定することによって行われる定量を示す棒グラフである。図６Ｄ〜６Ｆは、コントロールマウスおよび変異マウスに由来するエキソビボで増殖させた（図６Ｄ）、および新たに単離した（図６Ｅ）、ＢＭ  ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋ＢＭ細胞におけるＨＳレベルの定量を示す棒グラフである。図６Ｆは、コントロールマウスおよび変異マウスにおけるＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋ＣＤ１０５＋ＣＤ１４０＋Ｓｃａ１＋間葉性幹細胞への寄与を示す骨髄分析を示す棒グラフである。図６Ｇ〜６Ｋは、ドナー細胞集団（ＣＤ４５．１）の出現率（図６Ｇ）、白血球（ＷＢＣ）数（図６Ｈ）、赤血球（ＲＢＣ）数（図６Ｉ）、血小板（ＰＬＴ）数（図６Ｊ）、ならびにＢ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与（図６Ｋ）を示す、移植の６〜８週間後にｐＩｐＣ誘発する前の、キメラＥｘｔ１コントロールマウスおよび変異マウスの末梢血造血パラメーターの分析を図示する。図６Ｌ〜６Ｓは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のキメラＥｘｔ１コントロールマウスおよび変異マウスの分析を示す。図６Ｌは、総体重（ＴＢＷ）（ｇ）を示す棒グラフである。図６Ｍおよび６Ｎは、レシピエントマウスにおける全ＢＭ細胞性（図６Ｍ）、ならびにＢ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与（図６Ｎ）を示す骨髄分析を図示する棒グラフである。図６Ｏ〜６Ｑは、レシピエントマウスにおけるＢ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与（図６Ｏ）、血小板数（ＰＬＴ）（図６Ｐ）および赤血球数（ＲＢＣ）（図６Ｑ）を示す末梢血分析を示す棒グラフである。図６Ｒおよび６Ｓは、コントロールおよび変異キメラマウスにおいて、細胞周期分析を示す、脾臓に存在するＫＬＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋ＨＳＣ分析（図６Ｒ）；細胞周期のＧ０、Ｇ１およびＳ−Ｇ２−Ｍ期の細胞、およびアポトーシス（図６Ｓ）を示すグラフである。図６Ｔは、Ｂ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与を示す、ＷＴ  ＣＤ４５．２脾細胞の等しい数と競合したコントロールマウスもしくは変異キメラマウス（ＣＤ４５．１）に由来する脾細胞を注入したレシピエントＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２）マウスの、移植の１６週間後のＰＢ再構成を示す棒グラフである。図６Ｕは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のキメラコントロールマウスおよび変異マウスにおけるＣＤ６２Ｌｏｗ循環好中球の分布を示す棒グラフである。図６Ｖは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のコントロールマウスおよび変異キメラマウスのＢＭにおけるＣｘｃｌ１２タンパク質レベルを示す棒グラフである。図６Ｗは、ｐＩｐＣ誘発の２４週間後のキメラＥｘｔ１コントロールマウスおよび変異マウスの大腿の代表的ヘマトキシリンおよびエオシン染色を示す。倍率：上のパネルは４×、下のパネルは４０×。データは、別段示されなければ、少なくとも２回の独立した実験（ｎ＝５〜８匹のマウス／遺伝子型／実験）の代表。データは、平均±ＳＤもしくはメジアン±ＩＱＲ（四分位数間領域）として表される。ｎｓ：有意でない；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【０１２２】
【図７】図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ、図７Ｅ、図７Ｆおよび図７Ｇは、ヘパラン硫酸がＶｃａｍ−１依存性ＨＳＰＣ接着を調節することを示す。図７Ａおよび図７Ｂは、ＢＭ腔におけるＨＳＣの相対的位置づけを示す。図７Ａは、コントロールマウスおよび変異マウスがＣｏｌ２．３プロモーター標識骨芽細胞の下でＧＦＰを発現する系統へと交配されたことを示す。図７Ｂは、Ｃｏｌ２．３ＧＦＰ細胞（左パネル）および骨内膜表面（右パネル）に由来する、移植の２４時間後のＬＫＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋ＨＳＣの距離（μｍ単位）を示す。図７Ｃおよび図７Ｄは、Ｍｘ１＋細胞におけるニッチ関連分子の発現を示す。図７Ｃは、Ｖｃａｍ１、Ｃｘｃｌ１２、Ａｎｇｐｔ１およびＳｃｆ１についてのリアルタイムＰＣＲ結果を示す。図７Ｄは、コントロールマウスおよび変異マウスに由来するＢＭ  ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋細胞におけるＶｃａｍ１タンパク質レベルの代表的ヒストグラムである。図７Ｅ、図７Ｆおよび図７Ｇは、Ｍｘ１＋細胞におけるＶｃａｍ１の機能的評価を示す。図７Ｅは、実験デザインの模式的概略図である。図７Ｆは、Ｇ−ＣＳＦおよびＶｃａｍ１中和抗体を注射したコントロールマウスおよび変異マウスの末梢血におけるＣＦＵ−Ｃアッセイによって測定された循環前駆細胞の数を示す。図７Ｇは、Ｇ−ＣＳＦおよびＶｃａｍ１中和抗体もしくはアイソタイプコントロールで動員したコントロールマウスもしくは変異マウスに由来する末梢血１５０μＬを注入したレシピエントマウスにおける、移植の１６週間後の全末梢血再構成を示す。ＣＤ４５．１  ＢＭ細胞を、コントロールマウスおよび変異マウスにおいて等しい数で放射線防御のために移植した。データは、少なくとも２回の独立した実験（ｎ＝５〜８匹のマウス／遺伝子型／実験）の代表。動員実験において、ＰＢを、実験群あたり少なくとも５匹のマウスから集めた。データは、平均±ＳＤとして表される。ｎｓ：有意でない；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【０１２３】
【図８】図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃおよび図８Ｄは、ヘパラン硫酸がＶｃａｍ１依存性ＨＳＣ接着を調節することを示す。図８Ａは、ＤｉＤ標識ＨＳＣ（赤）；青、第２の調和生成シグナル（ｓｅｃｏｎｄ−ｈａｒｍｏｎｉｃ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｓｉｇｎａｌ）（骨）；緑、Ｃｏｌ２．３ＧＦＰ（骨芽細胞）の等しい数を注射したコントロールマウスおよび変異マウスの骨髄腔の代表的写真である。スケールバー、１００μｍ。図８Ｂは、コントロールマウスおよび変異Ｅｘｔ１マウスに由来するＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＣｘｅｌ１２タンパク質レベル定量を示す。図８Ｃは、コントロールマウスおよび変異Ｅｘｔ１マウスに由来するＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＶｃａｍ１タンパク質レベル定量を示す。図８Ｄは、Ｖｃａｍ１中和抗体もしくはアイソタイプコントロールを受容するＥｘｔ１コントロールマウスもしくは変異マウスからコロニー形成単位アッセイ（ＣＦＵ）によって測定した末梢血循環前駆細胞の定量を示す。データは、別段示されなければ、少なくとも２回の独立した実験（ｎ＝５〜８匹のマウス／遺伝子型／実験）の代表。データは、平均±ＳＤとして表される。ｎｓ：有意でない；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【０１２４】
【図９】図９Ａ、図９Ｂ、図９Ｃ、図９Ｄ、図９Ｅ、図９Ｆ、図９Ｇ、図９Ｈ、図９Ｉ、図９Ｊ、図９Ｋ、図９Ｌおよび図９Ｍは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの薬理学的阻害がＨＳＰＣ動員を誘発することを示す。図９Ａは、実験デザインの模式的概略図である。図９Ｂは、Ｇ−ＣＳＦもしくはＧ−ＣＳＦ＋ヘパリンを受容するＣ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２）マウスにおける末梢ＷＢＣ数を示すグラフである。図９Ｃは、致命的に照射したＣＤ４５．１コンジェニックレシピエントに移植した、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２）由来のＧ−ＣＳＦもしくはＧ−ＣＳＦ＋ヘパリンで動員したＰＢの全ドナー（ＣＤ４５．２）再構成を示す。ＣＤ４５．１  ＢＭ細胞を、両方の群において等しい数で放射線防御のために移植した。Ｘ軸の中断は、致命的に照射したレシピエントへの連続ＢＭ移植を表す。図９Ｄ〜９Ｆは、Ｇ−ＣＳＦ（ｎ＝１）もしくはＧ−ＣＳＦ＋ヘパリン（ｎ＝２）誘発性の動員に際して、細胞接着遺伝子（図９Ｄ）、細胞増殖遺伝子（図９Ｅ）および増殖調節遺伝子（図９Ｆ）における変化を示す、ＰＢからＦＡＣＳソートしたＨＳＰＣ（Ｌｉｎ−、ｃＫｉｔ＋、Ｓｃａ１＋）において差次的に発現された遺伝子のクラスター形成を図示する。青および黄は、それぞれ高発現および低発現を示す。図９Ｇ〜９Ｈは、致命的に照射したレシピエントへのＧ−ＣＳＦもしくはＧ−ＣＳＦ＋ヘパリン動員したＰＢの非競合的移植を示し、好中球（図９Ｇ）および血小板回復（図９Ｈ）を示す。図９Ｉは、致命的に照射したＣＤ４５．１コンジェニックレシピエントに移植した、Ｅｘｔ１変異マウス由来のＧ−ＣＳＦもしくはＧ−ＣＳＦ＋ヘパリン動員したＰＢの全ドナー（ＣＤ４５．２）再構成を示す。ＣＤ４５．１  ＢＭ細胞を、両方の群において等しい数で放射線防御のために移植した。図９Ｊは、Ｇ−ＣＳＦとヘパリンもしくはＧ−ＣＳＦとヒルジンを受容するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ＣＤ４５．２）由来のＰＢを注入したレシピエントＣＤ４５．１マウスの、移植１６週間後での相対的ＰＢ再構成を示す。レシピエントマウスを致命的に照射し、放射線防御のためにＣＤ４５．１細胞を与えた。図９Ｋ〜９Ｌは、非糖尿病および糖尿病のコントロールおよび変異マウス由来のＧ−ＣＳＦで動員したＰＢ（合計４群）（図９Ｋ）を、または非糖尿病および糖尿病のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス由来のＧ−ＣＳＦ＋ヘパリンで動員したＰＢ（図９Ｌ）を注入したレシピエントマウスの、移植１６週間後の相対的ＰＢ再構成を示す。移植のために、致命的に照射したＣＤ４５．１動物を、レシピエントとして使用した。ＣＤ４５．１  ＢＭを、放射線防御のために等しい数で使用した。図９Ｍは、Ｖｃａｍ１阻害がヘパリン誘発性動員を排除することを示す。末梢血循環前駆細胞を、ビヒクル、ＡＭＤ３１００もしくはＶｃａｍ１中和抗体のみ、またはヘパリンと組み合わせて受容する動物のコロニー形成単位アッセイ（ＣＦＵ）によって測定した。データは、少なくとも２回の独立した実験（ｎ＝５〜８匹のマウス／遺伝子型／実験）の代表。動員実験において、ＰＢを、１実験群あたり少なくとも５匹のマウスから集めた。データは、平均±ＳＤもしくは平均±ＩＱＲ（四分位数間領域）として表される。ｎｓ��有意でない；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０．１；＊＊＊ｐ＜０．００１。
【０１２５】
【図１０】図１０Ａ、図１０Ｂ、図１０Ｃ、図１０Ｄおよび図１０Ｅは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの薬理学的阻害がＨＳＰＣ動員を誘発することをさらに示す。図１０Ａは、ビヒクル（ＰＢＳ）もしくはヘパリンを受容するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける末梢ＷＢＣ数を示す。図１０Ｂは、ビヒクル（ＰＢＳ）もしくはヘパリンを受容するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいてコロニー形成単位アッセイ（ＣＦＵ）によって測定した末梢血循環前駆細胞を示す。図１０Ｃは、ビヒクル、ＡＭＤ３１００もしくはＶｃａｍ１中和抗体のみ、またはヘパリンと組み合わせて受容するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに由来するＰＢ循環前駆細胞コロニーを示すＣＦＵアッセイの代表的画像である。図１０Ｄは、ビヒクル（ＰＢＳ）もしくはヘパリンを受容するＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに由来するＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＶｃａｍ１タンパク質レベル定量を示す。図１０Ｅは、Ｇ−ＣＳＦのみもしくはＡＭＤ３１００と組み合わせて受容するＥｘｔ１コントロールマウスもしくは変異マウス（ＣＤ４５．２）のＰＢを注入したレシピエントＣＤ４５．１マウスの、移植１６週間後での相対的ＰＢ再構成を示す。レシピエントマウスを致命的に照射し、放射線防御のためにＣＤ４５．１細胞を与えた。
【０１２６】
【図１１】図１１Ａ、図１１Ｂおよび図１１Ｃは、Ｍｘ１＋間葉細胞が、移植したＨＳＰＣの生着を制御することを示す。図１１Ａは、１０６および８×１０６  ＣＤ４５．１コンジェニックＢＭ細胞を注入した非前処置コントロールマウス、ならびに１０６、４×１０６および８×１０６  ＣＤ４５．１コンジェニックＢＭ細胞を注入した変異レシピエントマウスの全ＰＢ再構成を示すグラフである。図１１Ｂは、Ｅｘｔ１変異レシピエントマウスへの８×１０６  ＣＤ４５．１コンジェニックＢＭ細胞の非前処置移植の１６週間後のＰＢ分析を示す棒グラフであり、Ｂ細胞（Ｂ２２０）、骨髄系細胞（Ｍａｃ１およびＧｒ１）およびＴ細胞（ＣＤ３）への寄与を示す。図１１Ｃは、ニッチにおいて発現されるＥＸＴ１／ＨＳＰＧの機能的役割に関する提唱されたモデルの模式図である。ｎ＝５匹のマウス／遺伝子型。データは、平均±ＳＥＭとして表される。＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【０１２７】
（発明の詳細な説明）
本開示は、幹細胞移植と関連して使用するための幹細胞および／もしくは前駆細胞（例えば、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞）の動員に関する。簡潔には、上記幹細胞移植プロセスは、被験体（例えば、ドナー）への動員薬剤の注射、骨髄空間から被験体の血液への被験体の幹細胞の動員、その動員した幹細胞を血液から（例えば、アフェレーシスを介して）集めること、その集めた幹細胞を（例えば、注入バッグ中に）保存するための準備、その集めて保存した動員幹細胞の低温保存、移植される予定の保存した動員幹細胞の生着のために被験体を前処置すること、上記幹細胞の前処置した被験体への移植、ならびに上記被験体における絶対的好中球数および血小板数を増大させることによって証明される生着および回復のうちのいずれかもしくは全てを含み得る。（Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｒｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  Ｎｕｒｓｅｓ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ａｌｌｉｅｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃａｒｅ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ−Ｎｕｒｓｅｓ  Ｇｒｏｕｐ（その内容は、本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。
【０１２８】
本開示は、幹細胞移植に関与する手順のうちのいずれかと関連する方法、組成物、薬剤およびキット（例えば、幹細胞を動員するための方法、移植のために動員された幹細胞を採取するための方法、その後の移植のために、採取された動員幹細胞を保存するための方法、移植される幹細胞の増強された生着のために、被験体を前処置するための方法、幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法、幹細胞動員のために被験体を選択するための方法、ならびに上記方法における使用のための組成物、薬剤およびキット）の使用を企図する。
【０１２９】
ＨＳＰＣの動員
【０１３０】
本発明のある種の局面は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法に関する。本明細書で使用される場合、「動員する」および「造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する」とは、第１の位置（例えば、幹細胞ニッチ、例えば、骨髄）から第２の位置（例えば、組織（例えば、末梢血）もしくは器官（例えば、脾臓））への造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移動を誘発する行為をいうために交換可能に使用される。本明細書で記載される研究は、ヘパリン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）が骨髄幹細胞ニッチにおける造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の保持を維持するのに関与することを示す。特に、本発明者らは、驚くべきことにかつ予測外なことに、エクソストシン−１（ＧｅｎｅＩＤ：２１３１、ＥＸＴ−１（ＥＸＴ、ＬＧＳ、ＴＴＶ、ＬＧＣＲ、およびＴＲＲＰＳ２としても公知）、ヘパラン硫酸の生成に必須のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子）の欠失が、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を骨髄から出て行かせることを示した。驚くべきことに、かつ予測外なことに、本発明者らは、ヘパラン硫酸（例えば、内因性）の阻害（例えば、薬理学的な）が、動員抵抗性が他の方法では不十分な動員を生じる状況においてすら、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強することをさらに示した。
【０１３１】
本明細書で開示されるある種の局面は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの組み合わせが、Ｇ−ＣＳＦのみ、もしくはプレリキサフォルと組み合わせて使用する造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員と比較して、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するにあたって有意により有効であるということを実証する、本明細書で記載される顕著な研究に依拠する。よって、いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト（例えば、Ｇｒｏ−ｂｅｔａ）および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、プレリキサフォル）を使用して造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員することに関する方法ならびに組成物を提供する。
【０１３２】
本明細書で開示されるある種の局面は、Ｇ−ＣＳＦおよび少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターの組み合わせが、Ｇ−ＣＳＦのみを使用する造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員と比較して、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するにあたって有意により有効であるということを実証する、本明細書で記載される顕著な研究に依拠する。よって、いくつかの局面において、本開示は、Ｇ−ＣＳＦおよび少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター（例えば、ヘパリン硫酸）の組み合わせを使用して造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員することに関する方法ならびに組成物を提供する。
【０１３３】
本明細書で開示されるある種の局面は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストおよび少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターの組み合わせが、プレリキサフォルのみを使用する造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員と比較して、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するにあたって有意により有効であるということを実証する、本明細書で記載される顕著な研究に依拠する。よって、いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター（例えば、ヘパリン硫酸）および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、プレリキサフォル）の組み合わせを使用して造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員することに関する方法ならびに組成物を提供する。
【０１３４】
よって、本発明は、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための種々の方法を提供する。
【０１３５】
一局面において、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法は、上記被験体においてエクソストシン１（ＥＸＴ−１）のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する工程を包含する。一局面において、被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員する工程を包含する。
【０１３６】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法のある種の局面は、一般に、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、およびＧ−ＣＳＦのうちの２種以上の組み合わせを使用することを包含する。
【０１３７】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための例示的方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、およびＧ−ＣＳＦからなる群より選択されるいずれか２種以上の動員薬剤の組み合わせを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を末梢血へと動員するために十分な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１３８】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための別の例示的方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血に動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１３９】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するためのさらに別の例示的方法は、Ｇ−ＣＳＦもしくは少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストのいずれかと組み合わせて少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血に動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１４０】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するためのなおさらに別の例示的方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストと組み合わせて少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血に動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１４１】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するためのさらなる例示的方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストと組み合わせて少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血に動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１４２】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するためのなおさらなる例示的方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストと組み合わせて少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血に動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１４３】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するためのなおさらなる例示的方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの組み合わせを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血に動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１４４】
被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するためのなお別の例示的方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよびＧ−ＣＳＦの組み合わせを、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体の末梢血に動員するために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１４５】
本発明のある種の局面は、幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す個体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強することに関する。驚くべきことに、かつ予測外なことに、本明細書で記載される研究は、本明細書で記載される薬剤が糖尿病誘発性の動員障害を克服するにあたって有効であることを示す。よって、理論によって束縛されることは望まないが、本明細書で記載される薬剤は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す個体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するために使用され得ると考えられる。当業者に認識されるように、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す個体における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の増強された動員は、例えば、中でも、細胞をその後の採取および移植のために上記被験体において細胞を動員するために、または上記被験体をその後の生着のために前処置するために、またはこれらの組み合わせなどのために、種々の有用な適用を有する。
【０１４６】
一局面において、本発明は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法を提供し、上記方法は、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する。一局面において、本発明は、糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法を提供し、上記方法は、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する。
【０１４７】
一局面において、本発明は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法を提供し、上記方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する。一局面において、本発明は、糖尿病誘発性の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法を提供し、上記方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の有効量を上記被験体に投与し、それによって、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強する工程を包含する。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するための方法は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体を選択する工程を包含する。造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す被験体を選択する工程は、当業者に利用可能な任意の技術に従って行われ得る。例えば、上記被験体は、従来の動員薬剤（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）に対して不十分な動員を示すことについて選択され得る。いくつかの実施形態において、上記被験体は、動員障害を誘発することが報告されている疾患、状態もしくは障害（例えば、糖尿病）に罹患している被験体である。動員障害を示す被験体を選択するための他の適切な技術は、当業者に明らかである。
【０１４９】
本明細書で使用される場合、「造血幹細胞」とは、造血系統へ分化し得、骨髄系統（例えば、単球およびマクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、赤血球、巨核球／血小板、樹状細胞）、およびリンパ系統（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）を含め、全ての血球タイプ（例えば、白血球および赤血球）を生じ得る幹細胞をいう。「幹細胞」とは、これらが複数の細胞タイプを形成する能力（多能性）およびこれらが自己再生する能力によって定義される。造血幹細胞は、例えば、細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３４−、ＣＤ１３３＋、ＣＤ４８−、ＣＤ１５０＋、ＣＤ２４４−、ｃＫｉｔ＋、Ｓｃａ１＋）によって、ならびに系統マーカーの欠如（例えば、Ｂ２２０、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｍａｃ１、Ｇｒ１、およびＴｅｒ１１９などについて陰性）によって同定され得る。造血幹細胞を同定および分析するための方法は、Ｃｈａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（例えば、「Ｍｏｕｓｅ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ａ．２００９；７５（１）：１４−２４（その全体において本明細書に参考として援用される）を参照のこと）によって総説されている。本明細書で記載される方法は、移植に有用な任意の幹細胞（末梢血幹細胞、骨髄幹細胞、臍帯由来幹細胞、遺伝的に改変された幹細胞などが挙げられるが、これらに限定されない）を企図する。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、用語「造血前駆細胞」とは、造血細胞系統（一般には、自己再生しない）になるようにコミットされ、短期造血幹細胞（ＳＴ−ＨＳＣ）、多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、骨髄系共通前駆細胞（ＣＭＰ）、顆粒球−単球前駆細胞（ＧＭＰ）、巨核球−赤血球前駆細胞（ＭＥＰ）、およびコミットされたリンパ系前駆細胞（ＣＬＰ）が挙げられるが、これらに限定されない造血系のいくつかの細胞タイプ（例えば、顆粒球、単球、赤血球、巨核球、Ｂ細胞およびＴ細胞）へと分化し得る多能性細胞を包含する。造血前駆細胞の存在は、完全メチルセルロースアッセイ（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ａｓｓａｙ）において、コロニー形成単位細胞（ＣＦＵ−Ｃ）として機能的に、または当業者に公知のアッセイを使用して細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ４５−、ＣＤ３４＋、Ｔｅｒ１１９−、ＣＤ１６／３２、ＣＤ１２７、ｃＫｉｔ、Ｓｃａ１）の検出を通じて表現型として決定され得る。
【０１５１】
一般に、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンが、それらの細胞ニッチにおける造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の接着の維持を担う任意の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員し得る。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞は、ＫＬＳ−ＣＤ１５０＋ＣＤ４８−細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞は、ＣＤ３４−ＣＤ１３３＋細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、骨髄系共通前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、顆粒球／単球前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、巨核球／赤血球前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、コミットされたリンパ系前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、骨髄系共通前駆細胞、顆粒球／単球前駆細胞、巨核球／赤血球前駆細胞の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、上記造血前駆細胞は、ＣＤ１５０−ＣＤ４８−ＣＤ２４４＋細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記造血前駆細胞は、ＣＤ１５０−ＣＤ４８＋ＣＤ２４４＋細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記造血前駆細胞は、Ｌｉｎ−ＳＣＡ−１−ｃ−Ｋｉｔ＋ＣＤ３４＋ＣＤ１６／３２ｍｉｄ細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記造血前駆細胞は、ｌｉｎ−ＳＣＡ−１−ｃ−ｋｉｔ＋ＣＤ３４−ＣＤ１６／３２ｌｏｗ細胞を含む
【０１５２】
本発明は、当業者にとって望ましい任意の目的のために造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員することを企図する。当業者は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員が、例えば、末梢血中の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の数を増大させることによって、移植のために（例えば、アフェレーシスを介して）採取され得る造血幹細胞および／もしくは前駆細胞のアクセスがよりしやすい供給源を提供する。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記被験体において動員された幹細胞および／もしくは前駆細胞を採取する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記採取された幹細胞および／もしくは前駆細胞をこのような移植が必要な被験体へと移植する工程を包含する。いくつかの実施形態において、被験体において動員された上記造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、上記被験体への自家移植のために採取される。いくつかの実施形態において、上記被験体において動員された造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、レシピエント被験体への同種異系移植のために採取される。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、従来の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員レジメン（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）を利用する不十分な動員に対する応答において、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有用である。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、組換え顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態からなる群より選択されるサイトカインを上記被験体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、Ｇ−ＣＳＦまたはそのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態とヘパリンとの組み合わせを、上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞および／もしくは前駆細胞は、例えば、幹細胞ニッチ（例えば、骨髄）（その中に、上記移植される細胞が生着し得る）において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の数を減少させることによって、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置するために、被験体において動員される。
【０１５５】
本明細書で開示される本発明の方法（例えば、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法）の局面は、その動員された幹細胞（例えば、ＣＤ３４＋および／もしくはＣＤ１３３＋末梢血幹細胞）を採取する工程を包含する。よって、いくつかの局面において、本開示は、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法を提供する。末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための例示的方法は、以下の工程を包含する：（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、および少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための方法は、以下の工程を包含する：（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、およびＧ−ＣＳＦからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体において移植するために採取するための方法は、以下の工程を包含する：（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、およびＧ−ＣＳＦからなる群より選択される２種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体において移植するために採取するための方法は、以下の工程を包含する：（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、およびＧ−ＣＳＦからなる群より選択される３種以上の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１５９】
末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するための別の例示的方法は、以下を包含する：（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１６０】
末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するためのさらに別の例示的方法は、以下を包含する：（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１６１】
末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するためのさらに別の例示的方法は、以下を包含する：（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１６２】
末梢血幹細胞を、このような細胞が必要な被験体における移植のために採取するためのさらになお別の例示的方法は、以下を包含する：（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを、末梢血幹細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞を、上記被験体における移植のために上記ドナーから採取する工程。
【０１６３】
採取、前処置および移植に関する上記の説明が、ここで記載される採取方法に等しく適用可能であることは認識されるべきである。
【０１６４】
本開示は、動員された幹細胞を採取するおよび／もしくは集めるための任意の適切な方法の使用を企図する。いくつかの実施形態において、上記動員された造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を採取する工程は、アフェレーシスを含む。本明細書で記載される研究は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト（例えば、Ｇｒｏ−ｂｅｔａもしくはＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４）および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト（例えば、プレリキサフォルもしくはＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標））の組み合わせが、幹細胞を迅速にかつ効率的に動員し、そしてＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォル（単独もしくは組み合わせにおいて）と比較して、増大した効率を示すことを示す。結果として、いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、上記アフェレーシス手順が、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストが上記被験体に投与されるその同日に行われることを可能にする。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、上記アフェレーシス手順が、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦが上記被験体に投与されるその同日に行われることを可能にする。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、上記アフェレーシス手順が、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターが上記被験体に投与されるその同日に行われることを可能にする。他の研究において、動員された幹細胞を被験体（例えば、ドナー）からアフェレーシスを介して採取する工程は、ヘルスケア施設に１回訪れる間に、上記動員薬剤が上記被験体に投与されるその同日に行われ得る。
【０１６５】
いくつかの場合、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与後に早ければ１５分程度で開始し得る。いくつかの実施形態において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与後に早ければ２０分、２２分、２５分、３０分、３５分、４０分、４７分、５２分、５８分もしくは１時間程度で開始し得る。
【０１６６】
いくつかの場合において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸アンタゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与後に早ければ１５分程度で開始し得る。いくつかの実施形態において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与後に早ければ２０分、２２分、２５分、３０分、３５分、４０分、４７分、５２分、５８分もしくは１時間程度で開始し得る。
【０１６７】
いくつかの場合において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸アンタゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの投与後に早ければ１５分程度で開始し得る。いくつかの実施形態において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの投与後に早ければ２０分、２２分、２５分、３０分、３５分、４０分、４７分、５２分、５８分もしくは１時間程度で開始し得る。
【０１６８】
いくつかの場合において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸アンタゴニストおよびＧ−ＣＳＦの投与後に早ければ１５分程度で開始し得る。いくつかの実施形態において、上記アフェレーシス手順は、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦの投与後に早ければ２０分、２２分、２５分、３０分、３５分、４０分、４７分、５２分、５８分もしくは１時間程度で開始し得る。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約２×１０６〜８×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約２×１０６〜８×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約２×１０６〜８×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約１×１０６／ｋｇ体重〜１０×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０６〜１０×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約２×１０６／ｋｇ体重〜８×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約２×１０６〜８×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦの投与は、単一セッションのアフェレーシスで約３×１０６／ｋｇ体重〜６×１０６／ｋｇ体重の間の細胞用量を採取するために、上記被験体において循環末梢血幹細胞のある量を動員する。いくつかの実施形態において、単一セッションのアフェレーシスで上記レシピエントの体重１ｋｇあたり約１×１０〜１０６×１０６の間の細胞用量のために十分なＣＤ３４＋末梢血幹細胞が集められる。
【０１７３】
生着のための前処置
【０１７４】
本発明のある種の局面は、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞（例えば、末梢血幹細胞、骨髄幹細胞、臍帯由来幹細胞、遺伝子改変幹細胞など）の生着のために被験体を前処置するための方法に関する。
【０１７５】
一般には、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、本明細書で記載される１種以上の幹細胞動員薬剤を利用する。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で記載される造血幹細胞動員薬剤を利用して、移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法に関する。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で記載される造血幹細胞動員薬剤を利用して、移植される骨髄幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法に関する。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で記載される造血幹細胞動員薬剤を利用して、移植される臍帯由来幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法に関する。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で記載される造血幹細胞動員薬剤を利用して、移植される遺伝子改変幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法に関する。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書で記載される造血幹細胞動員薬剤を利用して、末梢血幹細胞、骨髄幹細胞、末梢血幹細胞、および遺伝子改変幹細胞からなる群より選択される幹細胞の混合物を含む移植される幹細胞集団の生着のために被験体を前処置するための方法に関する。
【０１７６】
いくつかの局面において、本開示は、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法を提供し、上記方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員薬剤を、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから細胞（例えば、幹細胞および／もしくは前駆細胞）を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１７７】
一局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１７８】
別の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１７９】
一局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８０】
さらに別の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８１】
さらに別の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８２】
なおさらなる別の局面において、本開示は、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法を提供し、上記方法は、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８３】
他の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体を、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８４】
ある種の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８５】
ある種の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８６】
ある種の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８７】
ある種の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８８】
ある種の局面において、移植される幹細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、およびＧ−ＣＳＦからなる群より選択される２種以上の幹細胞動員薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の上記被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記被験体の幹細胞ニッチから幹細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与し、それによって移植される幹細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、上記除去される幹細胞および／もしくは前駆細胞は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記幹細胞ニッチは、骨髄を含む。いくつかの実施形態において、上記移植される幹細胞は、末梢血幹細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記移植される幹細胞は、採取された動員末梢血幹細胞（例えば、ＣＤ３４＋および／もしくはＣＤ１３３＋）を含む。いくつかの実施形態において、上記移植される幹細胞は、末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記移植される幹細胞は、採取された動員末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞（例えば、ＣＤ３４＋および／もしくはＣＤ１３３＋）を含む。いくつかの実施形態において、上記移植される幹細胞は、臍帯由来幹細胞および／もしくは前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記移植される幹細胞は、骨髄幹細胞および／もしくは前駆細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記移植される幹細胞は、遺伝子改変幹細胞および／もしくは前駆細胞を含む。
【０１９０】
本明細書で開示される方法（例えば、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法）の局面は、移植される末梢血幹細胞の生着のために、末梢血幹細胞移植が必要な被験体を前処置する工程を包含する。本明細書で使用される場合、幹細胞（増殖させた造血幹細胞が挙げられる）の「生着する」および「生着」は、上記幹細胞がインビボで存続する動物へと、例えば、注射によって上記幹細胞の場所を定めることを意味する。これは、造血幹細胞が、例えば、進行中の血球形成に寄与する能力によって容易に測定され得る。本明細書で使用される場合、「生着のために被験体を前処置する」、「幹細胞ニッチを空にする」および「ニッチの空き」を作るとは、健康な移植される幹細胞（例えば、末梢血幹細胞、骨髄幹細胞、臍帯由来幹細胞、遺伝子改変幹細胞、最小限に操作された幹細胞など）の上記被験体の幹細胞ニッチ（例えば、骨髄）におけるその後の生着のために、上記幹細胞ニッチにおいて細胞（例えば、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞）の上記量を枯渇させるプロセスをいうために、交換可能に使用される。「ニッチを空にする薬剤」とは、「ニッチの空き」を作る薬剤をいう。本明細書で記載される動員薬剤（例えば、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員薬剤）が移植される幹細胞のその後の生着のために、被験体を前処置するために使用される状況において、上記動員薬剤は、ニッチを空にする薬剤ともいわれることは、認識されるはずである。本開示は、本明細書で記載される薬剤（例えば、動員薬剤および／もしくはニッチを空にする薬剤）が、幹細胞ニッチ（例えば、骨髄）から造血幹細胞、ＣＭＰ、ＧＭＰ、ＭＥＰ、および／もしくはＣＬＰの量を減らすために使用され得ることを企図する。本開示は、特定の被験体の処置の過程で認識される任意の前処置方法、ならびに望ましい移植用供給源である任意の幹細胞供給源を企図する。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターからなる群より選択される少なくとも２種のニッチを空にする薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、およびＧ−ＣＳＦからなる群より選択される少なくとも２種のニッチを空にする薬剤の組み合わせを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物を、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物を、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを含む組成物を、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０２００】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを含む組成物を、移植される幹細胞の上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおけるその後の生着のために、上記前処置される被験体の幹細胞ニッチにおいて幹細胞および／もしくは前駆細胞を枯渇させるために有効な量で上記被験体に投与する工程を包含する。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、上記除去される幹細胞および／もしくは前駆細胞は、造血幹細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記幹細胞ニッチは、骨髄を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、上記被験体を前処置する工程は、化学療法もしくは放射線療法を上記被験体に投与して、上記被験体の骨髄ニッチに残っているいかなる癌細胞をも死滅させ、健康な末梢血幹細胞が上記被験体の骨髄ニッチへと移植され生着する余地があるようにする工程を包含する。このような前処置する工程は、いくらかの患者、特に、上記化学療法もしくは放射線療法によって引き起こされる毒性の全身効果（これは非悪性血液疾患の処置を受けている患者が耐えられないもしくは耐えるのに気が進まない）が原因で、「毒性前処置」と本明細書でいわれる。
【０２０３】
生着のために患者を前処置するための従来法は、代表的には、全身照射および高用量化学療法を包含し、これらは処置プランの一部として放射線療法もしくは高用量化学療法を要する悪性腫瘍に罹患していない患者（例えば、ＨＩＶおよび他の免疫不全）にとって毒性があり、望ましくない。
【０２０４】
化学療法もしくは放射線療法と組み合わせて被験体にＧ−ＣＳＦを投与することによって代表的には行われる毒性前処置とは対照的に、動員薬剤として少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用する本明細書で記載される方法は、化学療法も放射線療法もなしで生着のために被験体を前処置し得るので、非毒性前処置を可能にする。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、化学療法も放射線療法もなしで生着のために被験体を前処置し得る動員薬剤として少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用し、それによって、非毒性前処置を可能にする。いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、化学療法も放射線療法もなしで生着のために被験体を前処置し得る動員薬剤として少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを使用し、それによって、非毒性前処置を可能にする。
【０２０５】
従来の細胞傷害性前処置法とは対照的に、本発明は、非細胞傷害性前処置法を提供する。特に、本発明は、驚くべきことにかつ予測外なことに、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞が、細胞傷害性前処置の非存在下で、インビボでＥＸＴ−１欠損動物に生着することを示した。理論によって拘束されることは望まないが、例えば、ＥＸＴ−１阻害もしくはＶＣＡＭ−１阻害を介する、被験体でのヘパラン硫酸プロテオグリカンの阻害は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために、上記被験体を前処置するための有効な代替の非細胞傷害性方法を提供する。
【０２０６】
一局面において、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効な、レベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。一局面において、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために被験体を前処置するための方法は、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効な、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程を包含する。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、化学療法なしで生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、放射線療法なしで生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、間質細胞を弱らせることなく生着のために前処置される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、上記被験体にＧ−ＣＳＦを投与することなく生着のために前処置される。
【０２０８】
本明細書で記載される前処置法のうちのいずれかが、幹細胞（例えば、末梢血幹細胞、例えば、ＣＤ３４＋末梢血幹細胞もしくはＣＤ１３３＋末梢血幹細胞、骨髄幹細胞、臍帯由来幹細胞、遺伝子改変幹細胞）を、上記移植される細胞の生着のために上記被験体に移植する工程を包含し得ることは、認識されるべきである。
【０２０９】
動員されたＨＳＰＣの移植
【０２１０】
本発明の局面（例えば、幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法）は、移植が必要な被験体に幹細胞を移植する工程を包含する。本明細書で開示される方法は、何らかの種の幹細胞をこのような移植（例えば、末梢血幹細胞、骨髄幹細胞、臍帯由来幹細胞、遺伝子改変幹細胞など）が必要な被験体に移植することを企図する。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示される方法（例えば、造血幹細胞を動員するための方法）は、採取された末梢血幹細胞を、移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【０２１２】
処置法
【０２１３】
本発明のある種の局面は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法に関する。造血幹細胞および／もしくは前駆細胞（ＨＰＳＣ）移植は、相変わらず、多くの血液障害に関する常套手段としての根治療法である。しかし、成功裡のＨＰＳＣ移植は、十分なＨＳＰＣをそれらの採取および患者への移植のために循環の中に動員する能力、ならびにその移植されるＨＰＳＣのその後の生着のために骨髄ニッチを効率的に空にするのを起こせる能力に依存する。しかし、動員を誘発し、その後の生着のために骨髄ニッチを空にするための従来法には、いくつかの欠点がある。例えば、現在の動員方法（例えば、Ｇ−ＣＳＦ誘発）は、動員抵抗性になりやすく、このことは、いくらかの個体にとって救命的な治療を危うくし得る。同様に、生着のために患者を前処置するための現在の方法は、代表的には、全身照射および高用量化学療法を含み、これらは、処置プランの一部として放射線療法もしくは高用量化学療法を要する悪性腫瘍には罹患していない患者（例えば、ＨＩＶ患者および他の免疫不全）にとって毒性でありかつ望ましくない。よって、本明細書で記載される方法は、例えば、動員抵抗性が別の方法では不十分な動員（例えば、動員障害）を生じる状況下ですら、強い造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を提供することによって、ならびに細胞傷害性前処置の非存在下で、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の増強された生着のために被験体を前処置する非細胞傷害性前処置法を提供することによって、ＨＰＳＣ移植の安全性および効力を増強する。
【０２１４】
一局面において、処置が必要な被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法は、（ａ）上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効な、レベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を上記被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程；ならびに（ｂ）造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体に移植する工程であって、ここで上記移植された造血幹細胞は、上記被験体の骨髄に生着し、それによって、上記被験体における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置する工程を包含する。一局面において、処置が必要な被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための方法は、（ａ）上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効なヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤のある量を上記被験体に投与し、それによって、細胞傷害性前処置の非存在下で、移植される造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の生着のために上記被験体を前処置する工程；ならびに（ｂ）造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記被験体に移植する工程であって、ここで上記移植された造血幹細胞は、上記被験体の骨髄に生着し、それによって、上記被験体における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置する工程を包含する。
【０２１５】
処置が必要な被験体において幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための例示的方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員薬剤の組み合わせを、幹細胞および／もしくは前駆細胞ドナーにおいて循環幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記ドナーから幹細胞移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、処置が必要な被験体において幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、幹細胞ドナーにおいて循環幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環幹細胞を上記ドナーから幹細胞移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、処置が必要な被験体において幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、幹細胞ドナーにおいて循環幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環幹細胞を上記ドナーから幹細胞移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、処置が必要な被験体において幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを、幹細胞ドナーにおいて循環幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環幹細胞を上記ドナーから幹細胞移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、処置が必要な被験体において幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを、幹細胞ドナーにおいて循環幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環幹細胞を上記ドナーから幹細胞移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【０２２０】
処置が必要な被験体において末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患を処置するための別の例示的方法は、（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員薬剤の組み合わせを、末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞ドナーにおいて循環末梢血幹細胞を動員するために有効な量で上記ドナーに投与する工程；ならびに（ｂ）上記動員された循環末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞を上記ドナーから末梢血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植が必要な被験体に移植する工程を包含する。
【０２２１】
採取、前処置、および移植に関する上記の説明が、ここで記載される処置方法の局面に等しく適用可能であることは、理解されるべきである。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、血液悪性腫瘍の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、非悪性疾患の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、血液悪性腫瘍の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、非悪性疾患の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法は、心臓修復もしくは心筋症（ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｐａｔｈｙ）の従来処置の治療上有効な量を上記被験体に投与する工程を包含する。動員されたＣＤ３４＋および／もしくはＣＤ１３３＋細胞が心臓修復のために使用され得る例示的適応症としては、わずか２〜３例を挙げれば、アンギナ（例えば、難治性狭心症）の処置、心筋虚血（例えば、慢性心筋虚血）における心機能の改善が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２７】
本明細書で使用される場合、「ｔｒｅａｔ（処置する）」、「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（処置）」、「ｔｒｅａｔｉｎｇ（処置すること）」、もしくは「ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ（改善）」とは、疾患、障害もしくは医学的状態を参照して使用される場合、その目的が症状もしくは状態の進行もしくは重症度を改善する（ｒｅｖｅｒｓｅ）か、緩和するか、改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）か、阻害するか、遅らせるかもしくは止めることである、状態の治療的処置をいう。用語「処置すること」とは、状態の少なくとも１つの有害効果もしくは症状を低下させることもしくは緩和することを含む。処置は、一般に、１以上の症状もしくは臨床マーカーが低下される場合に「有効」である。あるいは、処置は、状態の進行が低下するかもしくは停止する場合に「有効」である、すなわち、「処置」は、症状もしくはマーカーの改善を含むだけでなく、処置の非存在下で、予測される症状の進行もしくは悪化の停止もしくは少なくとも遅延もまた含む。有益なもしくは望ましい臨床結果としては、１以上の症状の緩和、欠損の程度の減少、例えば、本明細書で記載される状態、疾患もしくは障害の状態の安定した（すなわち、悪化していない）状態、または本明細書で記載される状態、疾患もしくは障害の始まりの遅延もしくは緩慢化、および処置の非存在下で、予測されるものと比較した場合の寿命の長期化が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２８】
動員薬剤（例えば、Ｇ−ＣＳＦ）および細胞傷害性前処置法（例えば、化学療法もしくは放射線療法）の別個の投与を代表的には要する従来法とは対照的に、本明細書で記載される方法、組成物および薬剤のある種の実施形態は、単一薬剤の投与を介する造血幹細胞および／もしくは前駆細胞のその後の生着のために、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞ならびに非細胞傷害性前処置の二重の動員を可能にすることは、認識されるべきである。例えば、本明細書で記載される薬剤が、自家造血幹細胞および／もしくは前駆細胞移植のために被験体に投与される場合、上記薬剤は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を効率的に動員すると同時に、いったんそれらが（例えば、アフェレーシスを介して）採取されたら、それら細胞の生着のために上記被験体を前処置する。
【０２２９】
本明細書で使用される場合、用語「投与すること」は、例えば当業者に周知の技術に従って薬学的に受容可能な組成物へと製剤化される本明細書で記載される薬剤（例えば、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤またはヘパラン硫酸のレベルもしくは活性を阻害する薬剤）の、作用部位への送達を生じる方法もしくは経路による被験体への配置をいう。ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤、またはこのような薬剤を含む薬学的組成物は、上記被験体において有効な処置を生じる任意の適切な経路によって投与され得る。
【０２３０】
本発明は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植が望ましい疾患、障害もしくは状態と関連する任意の疾患、障害、状態もしくは合併症を処置することを企図する。いくつかの実施形態において、本開示は、このような処置が必要な被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置するための方法を提供する。このような疾患の例としては、例えば、血液悪性腫瘍および非悪性血液疾患が挙げられる。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、上記疾患は、血液悪性腫瘍である。本明細書で記載される方法で処置され得る例示的な血液悪性腫瘍としては、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、上記疾患は、非悪性障害である。本明細書で記載される方法で処置され得る例示的な非悪性疾患の例としては、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群が挙げられるが、これらに限定されない。本開示はまた、心筋修復のために本明細書で記載される方法に従って動員される細胞の使用を企図する。例えば、ある種の動員されたＣＤ３４＋および／もしくはＣＤ１３３＋細胞は、新血管新生に寄与し得、そして損傷した心組織の虚血組織の血管形成もしくは再灌流を促進し得る。このような処置が必要な被験体を同定するための方法は、本明細書で記載される。このような被験体を同定するための他の適切な方法は、当業者に明らかである。
【０２３２】
被験体
【０２３３】
本明細書で使用される場合、「被験体」とは、ヒトもしくは動物を意味する。通常、上記動物は、脊椎動物（例えば、霊長類、齧歯類、飼い慣らされた動物もしくは狩猟用動物）である。霊長類としては、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、およびマカーク（ｍａｃａｑｕｅ）（例えば、アカゲザル）が挙げられる。齧歯類としては、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギおよびハムスターが挙げられる。飼い慣らされた動物および狩猟用動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、野牛、スイギュウ、ネコ種（例えば、イエネコ）、イヌ種（例えば、イヌ、キツネ、オオカミ）、トリ種（例えば、ニワトリ、エミュー、ダチョウ）および魚類（例えば、マス、ナマズおよびサケ）が挙げられる。患者もしくは被験体としては、前述のうちのいずれかの部分セット（例えば、ヒト、霊長類もしくは齧歯類のような１以上の群もしくは種を排除して、上記のうちの全て）が挙げられる。ある種の実施形態において、上記被験体は、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒトである。用語「患者」、「個体」および「被験体」は、本明細書で交換可能に使用される。好ましくは、上記被験体は、哺乳動物である。上記哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、もしくはウシであり得るが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、有利なことには、例えば、動物モデル、例えば、血液悪性腫瘍の動物モデルを示す被験体として使用され得る。さらに、本明細書で記載される方法は、飼い慣らされた動物および／もしくはペットを処置するために使用され得る。被験体は、雄性もしくは雌性であり得る。
【０２３４】
被験体は、（例えば、本明細書で記載される血液悪性腫瘍もしくは非悪性疾患の）処置が必要な、本明細書で記載される状態、疾患もしくは障害、またはこのような状態に関連する１以上の合併症を有するまたはこれらに罹患していると以前に診断されたか同定され、そして必要に応じて、しかしある状態、もしくはこの状態に関する１以上の合併症の処置をこれまで受ける必要はなかった被験体であり得る。あるいは、被験体は、ある状態に関する１以上の合併症の処置が必要なこのような状態を有すると以前に診断されなかった被験体であり得る。むしろ、被験体は、ある状態の１以上のリスク因子もしくはこのような状態に関する１以上の合併症を示す被験体を含み得る。特定の状態の処置が「必要な被験体」は、その状態を有するか、その状態を有すると診断されたか、または所定の参照集団に対してその状態を発生させるリスクが増大した被験体であり得る。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、血液悪性腫瘍、例えば、本明細書で記載される血液悪性腫瘍と診断されたか、それらを有する疑いがあるか、またはそれらを発生させるリスクがある被験体を選択する工程を包含する。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、非悪性疾患、例えば、本明細書で記載される非悪性疾患と診断されたか、それらを有する疑いがあるか、またはそれらを発生させるリスクがある被験体を選択する工程を包含する。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、糖尿病と診断されたか、それらを有する疑いがあるか、またはそれらを発生させるリスクがある被験体を選択する工程を包含する。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、動員レジメンに対する応答において不十分な動員を示す被験体を選択する工程を包含する。例えば、第１の動員レジメンを投与される被験体は、上記被験体において造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員を増強するために、本明細書で記載される薬剤の投与のために選択され得る。本発明は、任意の動員薬剤もしくはレジメンに対する応答において不十分な動員を示す被験体において動員を増強することを企図する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）に対する応答において不十分な動員を示す。いくつかの実施形態において、上記被験体は、幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員障害を示す。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、造血幹細胞動員薬剤の以前の投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて被験体を選択する工程をさらに包含する。本明細書で記載される研究は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストとの組み合わせでの少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの投与が、Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォルのみ、もしくはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与より有意に有効であることを示す。よって、いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて被験体を選択する工程をさらに包含する。本明細書で記載される研究は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストとの組み合わせでの少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターの投与が、プレリキサフォルのみの投与より有意に有効であり、Ｇ−ＣＳＦとの組み合わせでの少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターの投与がＧ−ＣＳＦのみの投与より有意に有効であることをさらに示す。よって、いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、Ｇ−ＣＳＦのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて被験体を選択する工程をさらに包含する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、プレリキサフォルのみの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。いくつかの実施形態において、上記被験体は、Ｇ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示すことについて選択される。
【０２４０】
このような実施形態において、被験体は、本明細書で記載される教示に従って、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用する再動員のために選択され得る。例示的実施形態において、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用する造血幹細胞再動員から利益を得る被験体を選択するための方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程を包含し、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用する造血幹細胞再動員から利益を得る被験体である。
【０２４１】
このような実施形態において、被験体は、本明細書で記載される教示に従って、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用する再動員のために選択され得る。例示的実施形態において、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用する造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体を選択するための方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程を包含し、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを使用する造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体である。
【０２４２】
このような実施形態において、被験体は、本明細書で記載される教示に従って、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを使用する再動員のために選択され得る。例示的実施形態において、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを使用する造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体を選択するための方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程を包含し、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを使用する造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体である。
【０２４３】
このような実施形態において、被験体は、本明細書で記載される教示に従って、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを使用する再動員のために選択され得る。例示的実施形態において、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを使用する造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体を選択するための方法は、Ｇ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体を同定する工程を包含し、ここでＧ−ＣＳＦおよびプレリキサフォルからなる群より選択される動員薬剤もしくはレジメンの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを使用する造血幹細胞再動員から利益を受ける被験体である。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、血液悪性腫瘍を示す患者である。例示的な血液悪性腫瘍としては、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫、結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、および若年性骨髄単球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、血液悪性腫瘍と診断された被験体を選択する工程をさらに包含する。血液悪性腫瘍と関連する障害に罹患している被験体は、示した症状に基づいて選択され得る。例えば、血液悪性腫瘍に罹患している被験体は、疲労、不定愁訴、息切れ、虚弱、過剰もしくは容易にあざができやすいこと、歯茎の出血もしくは頻繁な鼻血、再発性の感染もしくは発熱、寝汗、体重減少、食欲不振、リンパ節腫脹、腹部臓器の肥大に起因するしこりもしくは膨張、腹痛、骨痛、背痛、錯乱、譫妄、頭痛、視覚障害、体液貯留、排尿の減少という症状を示し得る。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、血液悪性腫瘍を発生させるリスクがある被験体を選択する工程をさらに包含する。血液悪性腫瘍を発生させるリスクがある被験体は、家族歴（例えば、１９９８〜２００１年の間にリンパ腫を有すると診断された患者の研究は、何らかの血液悪性腫瘍の、および特に何らかのリンパ腫の陽性家族歴を有する個体については、非ホジキンリンパ腫のリスクが増大していることを示した；Ｍｅｎｓａｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ａｎｄ
ｆａｍｉｌｙ  ｈｉｓｔｏｒｙ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．  Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．  ２００７  １６５（２）：１２６−３３を参照のこと）に基づいて、もしくは示された症状に基づいて、選択され得る。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、血液悪性腫瘍を有する疑いがある被験体を選択する工程をさらに包含する。血液悪性腫瘍を有する疑いがある被験体は、家族歴、診断検査（例えば、白血病もしくはリンパ腫と関連する転座について）に基づいて、または示した症状もしくはこれらの組み合わせに基づいて、選択され得る。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、上記被験体は、非悪性血液疾患を示す患者である。例示的な非悪性血液疾患としては、骨髄線維症、骨髄異形成症候群、アミロイドーシス、重症再生不良性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、免疫性血球減少症、全身性強皮症、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、クローン病、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ファンコーニ貧血、鎌状赤血球症、ベータサラセミアメジャー、ハーラー症候群（ＭＰＳ−ＩＨ）、副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、家族性血球貪食性リンパ組織球症および他の組織球障害、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ならびにウィスコット・オルドリッチ症候群
が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、非悪性血液疾患と診断された被験体を選択する工程をさらに包含する。非悪性血液疾患と関連する障害に罹患している被験体は、示した症状に基づいて選択され得る。例えば、鎌状赤血球症（例えば、鎌状赤血球貧血症）に罹患している被験体は、定期的な疼痛エピソード、手および足の腫脹、頻繁な感染症、および成長遅延という症状を示し得る。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、非悪性血液疾患を発生させるリスクがある被験体を選択する工程をさらに包含する。非悪性血液疾患を発生させるリスクがある被験体は、家族歴（例えば、鎌状赤血球形質を有する親をもつ小児は、鎌状赤血球症を発生させるかもしくはこれを有するリスクがあり得る）、起源（例えば、アフリカ、インドおよび地中海人種の子孫は、鎌状赤血球症を発生させるリスクがより高いと考えられる）、診断検査（例えば、βグロビン遺伝子における点変異は、鎌状赤血球症および／もしくはサラセミアのスクリーニングのために使用され得る）に基づいて、または示した症状に基づいて、選択され得る。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、非悪性血液疾患を有する疑いのある被験体を選択する工程をさらに包含する。非悪性血液疾患を有する疑いのある被験体は、家族歴、診断検査に基づいて、または示した症状もしくはこれらの組み合わせに基づいて、選択され得る。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される方法は、心臓修復の必要がある被験体を選択する工程をさらに包含する。心臓修復の必要がある被験体は、例えば、急性虚血性傷害および／もしくは慢性心筋症に起因する、損傷した心組織の履歴に基づいて選択され得る。
【０２５３】
組成物
【０２５４】
本開示は、本明細書で記載される薬剤（例えば、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の動員薬剤）を含む組成物を企図する。いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを含む組成物を提供する。いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物を提供する。いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターを含む組成物を提供する。
【０２５５】
いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物を提供する。上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物は、造血幹細胞の動員および移植を包含する任意の適用のために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、他の動員処置に対して不十分に応答するか、または他の動員処置に対する応答において動員しない被験体において、造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみ、およびプレリキサフォルのうちの１種以上の投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される末梢血幹細胞の生着のために、被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、幹細胞ニッチから末梢血への幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で幹細胞ニッチから末梢血へ幹細胞を動員する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、骨髄ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で骨髄ニッチから末梢血へ造血幹細胞を動員する。
【０２５６】
いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物を提供する。上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物は、造血幹細胞の動員および移植を含む任意の適用のために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、他の動員処置に対して不十分に応答するか、または他の動員処置に対する応答において動員しない被験体において、造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみ、もしくはプレリキサフォルのみ、もしくはＧ−ＣＳＦとの組み合わせでの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される末梢血幹細胞の生着のために、被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、幹細胞ニッチから末梢血への幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で幹細胞ニッチから末梢血へ幹細胞を動員する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、骨髄ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で骨髄ニッチから末梢血へ造血幹細胞を動員する。
【０２５７】
いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを含む組成物を提供する。上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストを含む組成物は、造血幹細胞の動員および移植を含む任意の適用のために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、他の動員処置に対して不十分に応答するか、または他の動員処置に対する応答において動員しない被験体において、造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみ、もしくはプレリキサフォルのみ、もしくはＧ−ＣＳＦとの組み合わせでの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される末梢血幹細胞の生着のために、被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、幹細胞ニッチから末梢血への幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で幹細胞ニッチから末梢血へ幹細胞を動員する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、骨髄ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で骨髄ニッチから末梢血へ造血幹細胞を動員する。
【０２５８】
いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを含む組成物を提供する。上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよびＧ−ＣＳＦを含む組成物は、造血幹細胞の動員および移植を含む任意の適用のために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、他の動員処置に対して不十分に応答するか、または他の動員処置に対する応答において動員しない被験体において、造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみ、もしくはプレリキサフォルのみ、もしくはＧ−ＣＳＦとの組み合わせでの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される末梢血幹細胞の生着のために、被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、幹細胞ニッチから末梢血への幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で幹細胞ニッチから末梢血へ幹細胞を動員する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、骨髄ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で骨髄ニッチから末梢血へ造血幹細胞を動員する。
【０２５９】
いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物を提供する。上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを含む組成物は、造血幹細胞の動員および移植を含む任意の適用のために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、他の動員処置に対して不十分に応答するか、または他の動員処置に対する応答において動員しない被験体において、造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみ、もしくはプレリキサフォルのみ、もしくはＧ−ＣＳＦとの組み合わせでの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される末梢血幹細胞の生着のために、被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、幹細胞ニッチから末梢血への幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で幹細胞ニッチから末梢血へ幹細胞を動員する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、骨髄ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で骨髄ニッチから末梢血へ造血幹細胞を動員する。
【０２６０】
いくつかの局面において、本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＧ−ＣＳＦを含む組成物を提供する。上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＧ−ＣＳＦを含む組成物は、造血幹細胞の動員および移植を含む任意の適用のために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、造血幹細胞を末梢血へと動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、他の動員処置に対して不十分に応答するか、または他の動員処置に対する応答において動員しない被験体において、造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、Ｇ−ＣＳＦのみ、もしくはプレリキサフォルのみ、もしくはＧ−ＣＳＦとの組み合わせでの投与に対する応答において不十分な動員を示す被験体において造血幹細胞を再動員するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、移植される末梢血幹細胞の生着のために、被験体を前処置するために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、幹細胞ニッチから末梢血への幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で幹細胞ニッチから末梢血へ幹細胞を動員する。いくつかの実施形態において、上記組成物は、骨髄ニッチから末梢血への造血幹細胞の迅速な動員のために有用である。いくつかの実施形態において、上記組成物は、早ければ１５分程度で骨髄ニッチから末梢血へ造血幹細胞を動員する。
【０２６１】
いくつかの局面において、組成物は、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤および本明細書で記載される少なくとも１種のニッチを空にする薬剤を含む。いくつかの局面において、組成物は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤（例えば、ヘパラン硫酸インヒビター）および本明細書で記載される少なくとも１種のニッチを空にする薬剤を含む。いくつかの局面において、組成物は、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤およびヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤を含む。いくつかの局面において、組成物は、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤および本明細書で記載されるサイトカインを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤および本明細書で記載されるサイトカインを含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤、ならびにＣＸＣＲ２アゴニスト、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＧ−ＣＳＦのうちの少なくとも１種を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤、ならびにＣＸＣＲ２アゴニスト、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＧ−ＣＳＦのうちの少なくとも２種を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤、ＣＸＣＲ２アゴニスト、ＣＸＣＲ４アンタゴニストおよびＧ−ＣＳＦを含む。
【０２６２】
同定法
【０２６３】
本開示は、幹細胞動員薬剤（例えば、造血幹細胞動員薬剤）および前処置薬剤を同定するための種々の方法を企図する。
【０２６４】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを提供する工程；（ｂ）試験薬剤を提供する工程；および（ｃ）上記試験薬剤が上記ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを作動する能力をアッセイする工程であって、ここで上記ＣＸＣＲ２タンパク質もしくはその機能的フラグメントを作動する試験薬剤は、候補の造血幹細胞動員薬剤である、工程を包含する。
【０２６５】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはそのフラグメントを提供する工程；（ｂ）ＣＸＣＲ４結合パートナーを提供する工程；（ｃ）試験薬剤を提供する工程；および（ｄ）上記試験薬剤が、上記ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントへの上記ＣＸＣＲ４結合パートナーの結合を阻害する能力をアッセイする工程であって、ここで上記ＣＸＣＲ４タンパク質もしくはその機能的フラグメントへの上記ＣＸＣＲ４結合パートナーの結合を阻害する試験薬剤は、候補の造血幹細胞動員薬剤である、工程を包含する。
【０２６６】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）ヘパラン硫酸プロテオグリカンを提供する工程；（ｂ）ヘパラン硫酸プロテオグリカン結合パートナーを提供する工程；（ｃ）試験薬剤を提供する工程；および（ｄ）上記試験薬剤が、上記ヘパラン硫酸プロテオグリカン結合パートナーへの上記ヘパラン硫酸プロテオグリカンの結合を阻害する能力をアッセイする工程であって、ここで上記ヘパラン硫酸プロテオグリカン結合パートナーへの上記ヘパラン硫酸プロテオグリカンの結合を阻害する試験薬剤は、候補の造血幹細胞動員薬剤である、工程を包含する。
【０２６７】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；および（ｂ）上記試験薬剤が、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力をアッセイする工程を包含する。
【０２６８】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；および（ｂ）上記試験薬剤が、少なくとも１種のヘパラン硫酸アンタゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力をアッセイする工程を包含する。
【０２６９】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；および（ｂ）上記試験薬剤が、少なくとも１種のヘパラン硫酸アンタゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力をアッセイする工程を包含する。
【０２７０】
いくつかの局面において、造血幹細胞動員薬剤を同定するための方法は、（ａ）試験薬剤を提供する工程；および（ｂ）上記試験薬剤が、少なくとも１種のヘパラン硫酸アンタゴニストおよびＧ−ＣＳＦの造血幹細胞動員効果に匹敵する能力をアッセイする工程を包含する。
【０２７１】
本明細書で記載される方法に従って同定される候補の造血幹細胞動員薬剤は、移植される動員幹細胞の増強された生着のために、被験体を前処置するそれらの能力についてさらに評価され得る。
【０２７２】
キット
【０２７３】
本明細書で記載される薬剤は、キット中で提供され得る。上記キットは、（ａ）上記薬剤（例えば、上記薬剤を含む組成物）、および（ｂ）情報資料を含む。上記情報資料は、記述資料、指示資料、マーケティング資料、または本明細書で記載される方法および／もしくは本明細書で記載される方法のための上記薬剤の使用に関する他の資料であり得る。例えば、上記情報資料は、被験体において造血幹細胞を動員するために上記被験体に上記薬剤を投与する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、もしくはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために、被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、ための方法を記載する。
【０２７４】
一実施形態において、上記情報資料は、適切な様式で、例えば、適切な用量、投与形態、もしくは投与様式（例えば、本明細書で記載される用量、投与形態、もしくは投与様式）で、上記薬剤を投与するための説明書を含み得る。別の実施形態において、上記情報資料は、適切な被験体、例えば、ヒト（例えば、成人を）選択するための説明書を含み得る。上記キットの情報資料は、その形態において限定されない。多くの場合、上記情報資料（例えば、説明書）は、印刷物（例えば、印刷されたテキスト、図面、および／もしくは写真、例えば、ラベルもしくは印刷されたシート）で提供される。しかし、上記情報資料はまた、他の形式（例えば、点字、コンピューター読み取り可能な物体、ビデオ記録、もしくは音声記録）で提供され得る。別の実施形態において、上記キットの情報資料は、リンクもしくは連絡情報（例えば、物理的アドレス、ｅメールアドレス、ハイパーリンク、ウェブサイトもしくは電話番号）であり、ここで上記キットのユーザーは、本明細書で記載される方法での調節因子および／もしくはその使用についての実質的情報を入手し得る。当然のことながら、上記情報資料はまた、任意の形式の組み合わせで提供され得る。
【０２７５】
上記キットの薬剤もしくは組成物に加えて、他の成分、例えば、溶媒もしくは緩衝液、安定化剤もしくは保存剤、および／または本明細書で記載される状態もしくは障害（例えば、動員された末梢血幹細胞の移植を要する疾患）を処置するための第２の薬剤が含まれ得る。あるいは、上記他の成分は、上記キット中に含まれ得るが、上記薬剤以外の異なる組成物もしくは容器中に含まれ得る。このような実施形態において、上記キットは、上記薬剤と上記他の成分とを混合するための、または上記調節因子と上記他の成分とを一緒に使用するための説明書を含み得る。
【０２７６】
上記薬剤は、任意の形態、例えば、液体、乾燥形態もしくは凍結乾燥形態で提供され得る。上記薬剤が、実質的に純粋および／もしくは無菌であることは、好ましい。上記薬剤が液体溶液で提供される場合、上記液体溶液は、好ましくは、水性溶液であり、滅菌の水性溶液が好ましい。上記薬剤が乾燥形態で提供される場合、再構成は、一般に、適切な溶媒を添加することによって行われる。上記溶媒（例えば、滅菌水もしくは緩衝液）は、必要に応じて、上記キット中に提供され得る。
【０２７７】
上記キットは、上記薬剤を含む組成物のための１以上の容器を含み得る。いくつかの実施形態において、上記キットは、上記薬剤（例えば、組成物中の）および情報資料のために、別個の容器、仕切り（ｄｉｖｉｄｅｒ）もしくは区画を含む。例えば、上記薬剤（例えば、組成物中の）は、ボトル、バイアル、もしくはシリンジの中に含まれ得、上記情報資料は、プラスチックスリーブもしくはパケットの中に含まれ得る。他の実施形態において、上記キットの別個の要素は、単一の分割できない容器内に含まれる。例えば、上記薬剤（例えば、組成物中の）は、ラベルの形態にある情報資料が貼付されたボトル、バイアルもしくはシリンジの中に含まれる。いくつかの実施形態において、上記キットは、複数の（多数の）個々の容器を含み、各々は、上記薬剤（例えば、組成物中の）の１以上の単位投与形態（例えば、本明細書で記載される投与形態）を含む。例えば、上記キットは、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、もしくはブリスターパックを含み、各々は、上記薬剤の単一の単位用量を含む。上記キットの容器は、気密および／もしくは水密であり得る。
【０２７８】
上記薬剤（例えば、組成物中の）は、被験体、例えば、成人被験体、例えば、動員された末梢血幹細胞の移植を要する疾患（例えば、血液悪性腫瘍）に罹患している被験体に投与され得る。上記方法は、例えば全血球計算を得るために、被験体を評価する工程、それによって、血液悪性腫瘍を有するとして被験体を同定する工程を包含し得る。全血球計算を得るための方法は、当業者に公知である。
【０２７９】
いくつかの局面において、キットは、（ａ）（ｉ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、（ｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト、および（ｉｉｉ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストからなる群より選択される２種以上の幹細胞動員薬剤の組み合わせ；ならびに（ｃ）上記（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）から選択される２種以上の幹細胞動員薬剤の組み合わせを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書を含む。
【０２８０】
いくつかの局面において、キットは、（ａ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニスト；（ｂ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト；ならびに（ｃ）上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書を含む。
【０２８１】
いくつかの局面において、キットは、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター；（ｂ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト；ならびに（ｃ）上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書を含む。
【０２８２】
いくつかの局面において、キットは、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター；（ｂ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アンタゴニスト；ならびに（ｃ）上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アンタゴニストを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書を含む。
【０２８３】
いくつかの局面において、キットは、（ａ）少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター；（ｂ）Ｇ−ＣＳＦ；ならびに（ｃ）上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記Ｇ−ＣＳＦを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書を含む。
【０２８４】
いくつかの局面において、キットは、（ａ）ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤；（ｂ）少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニスト；ならびに（ｃ）上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書を含む。
【０２８５】
いくつかの局面において、キットは、（ａ）ＥＸＴ１のレベルもしくは活性を阻害する少なくとも１種の薬剤；（ｂ）少なくとも１種のＣＸＣＲ２アンタゴニスト；ならびに（ｃ）上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アンタゴニストを、（ｉ）被験体において造血幹細胞を動員する；（ｉｉ）Ｇ−ＣＳＦのみ、プレリキサフォル、またはＧ−ＣＳＦとプレリキサフォルとの組み合わせの投与に対する応答において不十分な動員を示した被験体において造血幹細胞を再動員する；（ｉｉｉ）移植される末梢血幹細胞の生着のために被験体を前処置する；および（ｉｖ）上記被験体において末梢血幹細胞移植を要する疾患を処置する、のうちの１以上のために上記被験体に投与するための説明書を含む。
【０２８６】
薬剤
【０２８７】
本発明は、本明細書で記載される方法および組成物と関連して種々の薬剤の使用を企図する。特に、本明細書で記載される研究は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤が、例えば、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害することによって、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するための方法および組成物において使用され得、動員抵抗性が別の方法では不十分な動員を生じる状況において、ならびに細胞傷害性前処置を要することなく生着のために被験体を前処置するための非細胞傷害性方法において、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員するにあたって特に有効であることを示す。当業者によって認識されるように、前述の薬剤は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の移植を要する疾患の処置のための種々の方法において使用され得る。
【０２８８】
本明細書で企図される方法および組成物は、本明細書で記載される薬剤の「有効量」を投与することを企図する。本明細書で使用される場合、「〜のために有効な量」、「有効量」、もしくは「治療上有効な量」は、造血幹細胞および／もしくは前駆細胞を動員して、上記被験体の細胞ニッチから出ていく、例えば、上記被験体の骨髄から上記被験体の末梢血へと出て行くために有効である上記薬剤のある量を意味するために、交換可能に使用される。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。一般に、有効量は、上記被験体の履歴、年齢、状態、性別、ならびに上記被験体における医学的状態の重症度およびタイプ、ならびに血液悪性腫瘍もしくは非悪性障害における病的プロセスを阻害する他の薬剤の投与に伴って変動し得る。
【０２８９】
いくらかの状況において、本明細書で記載される薬剤の投与は、上記被験体の細胞ニッチ（例えば、骨髄）における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を減少させる。本明細書で使用される場合、用語「減少」、「低下した」、「低下」、「減少させる」もしくは「阻害する」は、概して、統計的に有意な量程度の減少を意味するために、全て本明細書で使用される。しかし、疑義を回避するために、「低下した」、「低下」または「減少する」もしくは「阻害する」は、参照レベルと比較して少なくとも１０％程度、例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％程度の減少（ここで上記減少は、１００％未満である）を意味する。一実施形態において、上記減少は、１００％の減少（例えば、参照サンプルと比較して、ないレベル）、または参照レベルと比較して１０〜１００％の間の任意の減少を含む。いくつかの実施形態において、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の投与は、上記被験体の骨髄における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を、参照レベルと比較して少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％と同じくらいの程度減少させる。いくつかの実施形態において、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の投与は、上記被験体の骨髄における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を、参照レベルと比較して少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％と同じくらいの程度減少させる。
【０２９０】
いくらかの状況において、本明細書で記載される薬剤の投与は、上記被験体の末梢血中の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を増大させる。本明細書で使用される場合、用語「増大した」、「増大する」もしくは「増強する」もしくは「活性化する」は、概して、統計的に有意な量程度の増大を意味するために、全て本明細書で使用される；疑義を回避するために、「増大した」、「増大する」もしくは「増強する」もしくは「活性化する」は、参照レベルと比較して少なくとも１０％の増大、例えば、参照レベルと比較して少なくとも約２０％、もしくは少なくとも約３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも約５０％、もしくは少なくとも約６０％、もしくは少なくとも約７０％、もしくは少なくとも約８０％、もしくは少なくとも約９０％または最大で１００％までもしくは１００％（を含む）の増大または１０〜１００％の間の任意の増大、あるいは参照レベルと比較して少なくとも約２倍、もしくは少なくとも約３倍、もしくは少なくとも約４倍、もしくは少なくとも約５倍もしくはもしくは少なくとも約１０倍の増大、または２倍〜１０倍の間の任意の増大またはより多くの増大を意味する。いくつかの実施形態において、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の投与は、上記被験体の末梢血中の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を、参照レベルと比較して少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％と同じくらいの程度増大させる。いくつかの実施形態において、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を阻害する薬剤の投与は、上記被験体の末梢血中の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を、参照レベルと比較して少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または少なくとも約１０倍、またはより多くの程度増大させる。いくつかの実施形態において、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の投与は、上記被験体の末梢血中の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を、参照レベルと比較して少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％と同じくらいの程度増大させる。いくつかの実施形態において、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤の投与は、上記被験体の末梢血中の造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の量を、参照レベルと比較して少なくとも約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または少なくとも約１０倍またはより多くの程度増大させる。
【０２９１】
用語「統計的に有意」もしくは「有意に」とは、統計的有意性をいい、一般に、マーカーの規定濃度より２標準偏差（２ＤＳ）下回るかもしくは２標準偏差以下を意味する。上記用語は、差異がある統計的証拠に言及する。それは、帰無仮説が実際に真である場合に、その帰無仮説を棄却すると決定する可能性として定義される。この決定はしばしば、ｐ値を使用して行われる。
【０２９２】
本発明は、細胞ニッチ（例えば、骨髄幹細胞ニッチ）における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の保持に関与する任意のヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害することを企図する。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、間葉細胞に置いて発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、骨髄間葉細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、Mx1＋骨格幹細胞および／もしくは前駆細胞において発現されるヘパラン硫酸プロテ
オグリカンのレベルもしくは活性を阻害する。
【０２９３】
本発明はまた、細胞ニッチ（例えば、骨髄）における造血幹細胞および／もしくは前駆細胞の保持を妨害する何らかの方法で、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害することを企図する。ヘパラン硫酸プロテオグリカンのレベルもしくは活性を阻害する薬剤がヘパラン硫酸インヒビターともいわれ得ることは、理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「ヘパラン硫酸インヒビター」とは、内因性ヘパラン硫酸のレベルおよび／もしくは活性（例えば、骨髄に幹細胞および／もしくは前駆細胞を保持することにおけるＶＣＡＭ−１とのヘパラン硫酸プロテオグリカンの相互作用）と競合し得る任意の薬剤をいう。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、上記ヘパラン硫酸インヒビターは、ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を減少させる薬剤を含む。ＥＸＴ−１のレベルもしくは活性を減少させる例示的薬剤としては、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、低分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、および抗ＥＸＴ−１抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ＥＸＴ−１に対して指向されるｓｈＲＮＡは、Ｒｅｉｊｍｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｌｏｏｄ．２０１０；１１５（３）：６０１−６０４）によって記載される。抗ＥＸＴ−１抗体は、市販されている（例えば、Ａｂｃａｍから）。
【０２９５】
ヘパラン硫酸の例示的な低分子インヒビターは、Ｇａｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００８；２８３（４３）：２８８８１−２８８８７）によって記載される。いくつかの実施形態において、上記ヘパラン硫酸インヒビターは、グリコシルトランスフェラーゼインヒビターを含む。いくつかの実施形態において、上記ヘパラン硫酸インヒビターは、内因性ヘパラン硫酸の競合的インヒビターである。このようなインヒビターの例としては、ヘパリン硫酸、硫酸プロタミン、スルフェン、およびこれらのアナログもしくは誘導体が挙げられる。ヘパリンに対する類似性を示す分子の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ヘパリンテトラサッカリド、ペントサンポリスルフェート、ホスホマンノペンタノーススルフェート、および選択的化学的Ｏ脱硫酸化ヘパリン。少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターとして使用され得るヘパリン誘導体は、米国特許第４，８１６，４４６号（本明細書に参考として援用される）に記載される。少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターとして使用され得るポリ硫酸化ヘパリンは、欧州特許番号ＥＰ０３２２６５９Ａ１（本明細書に参考として援用される）に記載される。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビターは、ＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を減少させる薬剤である。ＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を減少させる例示的薬剤としては、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、低分子、アンチセンスオリゴヌクレオチド、および抗ＶＣＡＭ−１抗体が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を減少させる薬剤は、Ｓｙｍｂｉｏｐｏｌｙｏｌである。いくつかの実施形態において、ＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を減少させる薬剤は、プロテアソームインヒビターである。いくつかの実施形態において、ＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を減少させる薬剤は、プロブコール、ならびに欧州特許番号ＥＰ１４６６３９号（その全体において本明細書に参考として援用される）に記載されるとおりのプロブコールのコハク酸エステルである。いくつかの実施形態において、ＶＣＡＭ−１のレベルもしくは活性を減少させる薬剤は、一酸化窒素である。ＶＣＡＭ−１の例示的低分子インヒビターとしては、ＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ／２００１／０７０７５７Ａ２（その内容は、本明細書に参考として援用される）に記載されるチオケタールおよびチオエーテルが挙げられる。ＶＣＡＭ−１の発現を阻害するためのさらなる化合物および方法は、米国特許第６，１４７，２５０号（その内容は、本明細書に参考として援用される）に記載される。ＶＣＡＭ−１発現を阻害するためのさらなる化合物および方法は、米国特許第６，８２８，４４７号、同第６，５４８，６９９号、同第６，６１７，３５２号、同第６，６６０，９１４号および同第７，１８９，８７０号に見出され得る。ヒトＶＣＡＭ−１  ＲＮＡに対して指向される例示的アンチセンスオリゴは、米国特許第５，５９６，０９０号（その全体において本明細書に参考として援用される）に見出され得る。
【０２９７】
本開示は、少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストの、単独でもしくは組み合わせでの、本明細書で記載される方法、組成物およびキットにおける幹細胞および／前駆細胞の動員薬剤としての使用を企図する。本開示は、ヘパラン硫酸を阻害するか、ＣＸＣＲ２を作動するか、もしくはＣＸＣＲ４を拮抗し、そして幹細胞を動員する能力のある任意の薬剤の使用を企図する。本明細書で記載される方法、組成物、およびキットにおいて、上記少なくとも１種のヘパラン硫酸インヒビター、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストおよび上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストとして使用され得る薬剤の例示的なタイプとしては、有機低分子もしくは無機低分子；サッカリン；オリゴサッカリド；ポリサッカリド；ペプチド、タンパク質、ペプチドアナログおよび誘導体からなる群より選択される生物学的高分子；ペプチド摸倣物；ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、およびアプタマーからなる群より選択される核酸；細菌、植物、真菌、動物細胞、および動物組織からなる群より選択される生物学的物質から作製される抽出物；天然に存在するかもしくは合成の組成物；ならびにこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、ケモカインＧｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体である。Ｇｒｏ−ｂｅｔａの例示的形態は、ヒトＧｒｏ−ｂｅｔａポリペプチド（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＡＡＰ１３１０４）である。例示的なＧｒｏ−ｂｅｔａアナログもしくは誘導体は、デスアミノＧｒｏ−ｂｅｔａタンパク質（ＭＩＰ−２ａｌｐｈａとしても公知）であり、これは、ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ／１９９４／０２９３４１（その全体において本明細書に参考として援用される）に記載されるように、そのＮ末端においてアミノ酸２位〜８位の間が短縮された成熟Ｇｒｏ−Ｓタンパク質のアミノ酸配列を含む。別のＧｒｏ−ｂｅｔａアナログもしくは誘導体は、米国特許第６，４１３，５１０号（その全体において本明細書に参考として援用される）に記載されるダイマー改変Ｇｒｏ−ｂｅｔａタンパク質である。さらに別の例示的なＧｒｏ−ｂｅｔａアナログもしくは誘導体は、Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（２００９），４３，１８１−１９５（本明細書に参考として援用される））によって記載されるように、ＳＢ−２５１３５３（幹細胞および他の白血球の移動の指向に関与するＧｒｏ−ｂｅｔａアナログ）である。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体である。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。
【０３００】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体である。いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体およびＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。プレリキサフォルの例示的アナログとしては、Ｄｅ  Ｃｌｅｒｃｑ，Ｅ．（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  １２８（３）：５０９−１８（その全体において本明細書に参考として援用される））によって記載されるように、ＡＭＤ１１０７０、ＡＭＤ３４６５、ＫＲＨ−３９５５、Ｔ−１４０、および４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体であり、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体である。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体であり、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体である。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ２アゴニストは、Ｇｒｏ−ｂｅｔａまたはそのアナログもしくは誘導体およびＧｒｏ−ｂｅｔａΔ４またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択され、上記少なくとも１種のＣＸＣＲ４アンタゴニストは、プレリキサフォルまたはそのアナログもしくは誘導体およびＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）またはそのアナログもしくは誘導体からなる群より選択される。
【０３０４】
任意の適切な投与経路は、本明細書で記載される薬剤を被験体に投与するために使用され得る。薬物送達ストラテジーに関する包括的な総説については、Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（１９９９），１：３３６−３４４３；  Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｎｅｕｒｏ  Ｖｉｏｌ．（１９９７），３：３８７−４００；  およびＪａｎ，  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ：  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ，  Ｄｅｃｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，１９９８（その全ての内容は、本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【０３０５】
上記薬剤は、上記薬剤の治療上有効な量を含む薬学的に受容可能な組成物中に製剤化され得、１種以上の薬学的に受容可能なキャリア（添加剤）および／もしくは希釈剤と一緒に製剤化され得る。
【０３０６】
上記製剤は、便利なことには、単位投与形態で提示され得、薬学分野で周知の方法のうちのいずれかによって調製され得る。技術、賦形剤および製剤は、一般に、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１９８５，１７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｎｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．１９９７  ５１：１６６−１７１において見出される。
【０３０７】
本明細書で記載される薬剤は、他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて被験体に投与され得る。例示的な薬学的に活性な薬剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  １３ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｅｄｓ．  Ｔ．Ｒ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｎ．Ｙ．，  ＮＹ；  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，  ５０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９７，Ｏｒａｄｅｌｌ  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏ．；  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ，１９９０；  Ｕｎｉｔｅｄ
Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，ＵＳＰ  ＸＩＩ  ＮＦ  ＸＶＩＩ，１９９０（これら全ての完全な内容は、本明細書に参考として援用される）において見出されるもの。いくつかの実施形態において、上記薬学的に活性な薬剤は、血液悪性腫瘍の従来の処置である。いくつかの実施形態において、上記薬学的に活性な薬剤は、非悪性疾患の従来処置である。当業者は、彼らの専門技術、知識および経験に基づいて、上述の参考文献を使用して、任意の特定の血液悪性腫瘍もしくは非悪性疾患を処置するための適切な従来の薬学的に活性な薬剤を選択し得る。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、上記薬学的に活性な薬剤は、造血幹細胞動員薬剤である。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞動員薬剤は、サイトカインである。本明細書で記載される薬剤（例えば、ヘパラン硫酸インヒビター）と関連して使用するための例示的サイトカインとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、およびこれらのグリコシル化形態もしくはｐｅｇ化形態。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞動員薬剤は、化学療法剤（例えば、ＣＹ、パクリタキセル、エトポシド）である。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞動員薬剤は、ＥＰＯである。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞動員薬剤は、幹細胞因子である。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞動員薬剤は、ＴＰＯである。いくつかの実施形態において、上記造血幹細胞動員薬剤は、副甲状腺ホルモンである。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、上記薬学的に活性な薬剤は、化学療法剤である。例示的な化学療法剤としては、ビンブラスチン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、６−チオグアニン、シタラビン、シクロホスファミドおよびシスプラチンが挙げられるが、これらに限定されない。他の適切な化学療法剤は、当業者に明らかである。
【０３１１】
いくつかの定義
【０３１２】
本明細書で別段定義されなければ、本願と関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、別段状況が要求しなければ、単数形は、複数形を含み、複数形は単数形を含むものとする。
【０３１３】
本明細書で記載される場合、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む、包含する）」もしくは「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む、包含する）」は、本発明に必須である、組成物、方法、およびそれぞれのその構成要素を参照して使用されるが、必須か否かに拘わらず、特定されていない要素の包含に対しては開かれている。
【０３１４】
本明細書で使用される場合、用語「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的になる）」とは、所定の実施形態に必要とされるそれら要素に言及する。この用語は、本発明のその実施形態の基本的かつ新規もしくは機能的な特徴に本質的に影響を及ぼさないさらなる要素の存在を許容する。
【０３１５】
用語「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ（からなる）」とは、上記実施形態のその説明に記載されていないいかなる要素をも排除する、本明細書で記載されるとおりの組成物、方法、およびそれらそれぞれの構成要素に言及する。
【０３１６】
実施例におけるもの以外に、もしくは別段示される場合、本明細書で使用される成分もしくは反応条件の量を表す全ての数字は、全ての場合、用語「約」によって修飾されていると理解されるべきである。用語「約」は、パーセンテージに関して使用される場合、±１％を意味し得る。
【０３１７】
単数形の用語「ａ（１つの、ある）」、「ａｎ（１つの、ある）」、および「ｔｈｅ（上記、その、この）」は、状況が別段明示しなければ、複数形を含む。同様に、文言「ｏｒ（もしくは、または、あるいは）」は、状況が別段明示しなければ、「および、ならびに、そして（ａｎｄ）」を含むことが意図される。本明細書で記載されるものに類似もしくは等価な方法および材料が、本開示の実施もしくは試験において使用され得るものの、適切な方法および材料が本明細書で記載される。用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む、包含する）」は、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む、包含する）」を意味する。略語「ｅ．ｇ．（例えば）」は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ  ｇｒａｔｉａ（例えば）に由来し、非限定的な例を示すために本明細書で使用される。従って、略語「ｅ．ｇ．（例えば）」は、用語「ｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ（例えば）」と同義である。
【実施例】
【０３１８】
（実施例）
【０３１９】
実施例１：ＨＩＶ／ＡＩＤＳのＨＳＣ移植治療を達成するための障壁を低くするための前処置の毒性の低下
【０３２０】
造血幹細胞（ＨＳＣ）移植は、ＨＩＶの見かけ上の治癒に関する１つの公知の基本である。強力な化学療法後の同種異系ＣＣＲ５−／−造血性移植物が検出不能なＨＩＶという耐えている状態を提供した「ベルリン患者」は、幹細胞ベースのアプローチに関する強力な原理を提供する１。近年、同種異系移植で処置した２名のさらなる患者は、移植の８ヶ月後および１７ヶ月後に検出不能なＨＩＶウイルス負荷を有すると報告された（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＴＨＡＡ０１０１  ＸＩＸ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＩＤＳ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ；  Ｊｕｌｙ  ２２−２７、２０１２）。さらに、ＨＩＶ耐性を増強するように遺伝子改変されたＨＳＣは、臨床試験２（および報告されていないＳｙｓｔｅｍｉｘ後援の多施設治験、調査者としてＤＴＳ）で試験された。ＴＡＬＥＮおよびジンクフィンガーヌクレアーゼのような新生遺伝子改変ストラテジーを強化する複合的な努力は、ＨＩＶ保有者を標的とし得るＨＩＶ耐性免疫系を作り出す手段として、より多くの幹細胞移植の機会を提供するＨＩＶ耐性自家ＨＳＣを作り出すことに焦点を当てている３。これらアプローチは、成功裡であれば、終生の抗レトロウイルス治療なしでＨＩＶを永続的にコントロールもしくは根絶し得る手段を提供し得る。このような結果は、転帰が、毒性、複雑性およびコストを低減するために移植においてかなりの進展を要するということを達成することを除けば、莫大な明らかな利益を有する。
【０３２１】
移植前の前処置は、代表的には、レシピエントの骨髄内の造血幹細胞を枯渇させるために、高用量の化学療法の投与によっておよび／もしくは放射線療法と組み合わせて、達成される。これら前処置の伝統的な方法はしばしば、生命をおびやかす悪性腫瘍を有していない患者でのＨＳＣ移植物の使用を排除し、ＨＳＣ移植物から利益を得ることができる患者の数を顕著に減少させる。非骨髄破壊的な低減した前処置レジメンの開発は、根治的なＨＳＣ移植をより広い範囲の疾患（最も顕著には、ＨＩＶ）へと大いに拡げる。非骨髄破壊的前処置を使用してＨＳＣ生着を達成するための以前の試みは、明らかな全身毒性なしでのＨＳＣの選択的な標的化および除去が、免疫系のほぼ完全な置換を可能にすることを示した。しかし、これらアプローチは、マウス特異的抗体試薬を使用する４かまたは低線量の放射線療法と組み合わせる５かのいずれかであった。ＡＭＤ３１００（ＨＳＣを骨髄から出ていかせることができるＣＸＣＲ４アンタゴニスト）の使用、もしくは前処置なしでの幹細胞の反復注入は、中程度レベルのキメラ現象を達成したが、不十分な生着レベルが一部原因で、臨床実施には拡がらなかった６。他のストラテジーが必要である。今日までの移植の成功を考えれば、遺伝子改変技術においてなされた進歩、および終生の抗レトロウイルス化学療法という気が遠くなるほどの難題、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの幹細胞療法への障壁の低下は、非常に筋が通っていると思われる。本発明者らがここで考察するアプローチは、潜在的には、臨床試験へとさらに拡げるために、遺伝子改変された自家細胞もしくは同種異型細胞のいずれかのより迅速な移動を生じ得る。
【０３２２】
ＨＩＶのための幹細胞療法の課題は、新しくもなく、実際に、本発明者ら他は、過去に一連の前臨床研究および臨床研究を行った７−１０。これらは、ＨＳＣがＨＩＶに感染したか否か（本発明者らが感染していないことを見出した；７）およびＨＩＶ複製を制限する遺伝子構築物を有するレトロウイルス感染した細胞が、ＨＩＶ感染個体に成功裡に移植され得るか否かに焦点を当てた。さらに、本発明者らは、ＡＩＤＳ関連リンパ腫を有する患者におけるＨＳＣ移植の使用に関する多施設治験を行ったところ、それが成し遂げられ得、根底にある悪性腫瘍に永続的に影響を与え得ることを示した。遺伝子改変したかもしくはＣＣＣＲ５−／−ＨＳＰＣの高効率生着を達成する新規な手段の発見は、潜在的に根治的なアプローチの適用への現在制限となっている障壁周辺を革新する。
【０３２３】
本発明者らが移植における改善を達成しようと計画している具体的手段は、骨髄ニッチを空にするという新規な、低コストの低毒性手段を試験するために、骨髄中でのＨＳＰＣ保持でのグリコシルトランスフェラーゼＥＸＴ１の役割の本発明者らの新たな発見を利用する、多くの新規な発見および構築物を包含する。ニッチを空にすることを可能にするためのこれら試みは、新たな薬剤もしくは新たな生物学に全て基づき、各々が臨床適用の潜在能力を有する新規なアプローチを表す。特に、上記試みは、明確な知見の迅速な解釈を可能にする新規用途について既にＦＤＡに認可されている多くの化合物を使用する。
【０３２４】
ＨＩＶ／ＡＩＤＳの根治的処置モダリティーとしてのＨＳＣ移植を使用することへの１つの重大な障壁、毒性前処置を越える手段として、本発明者らは、ＨＳＣニッチに対して最小限の毒性および損傷でＨＳＣ生着を達成するために低減した前処置アプローチを試験し続ける。本発明者らの方法論は、注入される細胞が内因性幹細胞と成功裡に競合して生着を達成する機会を提供する。特に、本発明者らは、上記ニッチを損傷しないが非常に効率的な動員を引き起こす、骨髄中でのＨＳＣ保持に関わる種々の分子を標的とすることが公知の、機械的に異なる動員薬剤を組み合わせる。次いで、このアプローチは、注入される細胞が内因性細胞と競合することを可能にする。本発明者らは、現在実際に、非常に毒性の、標的化されていない前処置レジメンを必要とせずに、注入される細胞に競合的利益を提供することを目的とする。本明細書で記載される研究は、ＨＳＣ移植レシピエントにとって新規な前処置ストラテジーの概念実証を確立する。改善された前処置レジメンは、急性の免疫抑制およびオフターゲット組織損傷を制限し、非悪性血液疾患および免疫疾患、ＨＩＶ／ＡＩＤＳを有する患者にとってＨＳＣ移植を制限する課題のうちの少なくとも１つを潜在的に解決する。
【０３２５】
実施例２：ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４の操作を通じてニッチ毒性なくニッチを空にすることを増強する
【０３２６】
前臨床データは、ＣＸＣＲ２アゴニストが、作用動態および移動させられる細胞の品質の両方に関して、現在のケア標準より優れている可能性がある。このプロジェクトの目的は、既存のＧＳＫ  ＣＸＣＲ２アゴニスト、Ｇｒｏ−ｂｅｔａをＣＸＣＲ４インヒビターであるＭｏｚｏｂｉｌ（登録商標）と組み合わせて試験し、動員、生着および非毒性前処置レジメンとして現在のケア標準と転帰を比較することである。動物を、Ｇ−ＣＳＦ、プレリキサフォル（例えば、Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標））、Ｇｒｏ−ｂｅｔａもしくは他の動員薬剤の種々の組み合わせで処置し、ＨＳＣ動員を誘発するそれらの能力について試験する。動員される細胞を、それらのインビトロおよびインビボでの機能的能力、ならびに照射したマウスにおける生存および造血回復を増強する能力について分析する。細胞を機能的アッセイ、免疫組織化学およびトランスクリプトミクスによって特徴付けして、動員される幹細胞集団におけるバリエーションを規定する一助とする。
【０３２７】
潜在的な影響は、ＨＳＣ移植物に適格な患者数を有意に増大させ得、健康なおよび自家移植のドナーの両方に対してＧ−ＣＳＦと関連した罹病率を低減し得、認識されるドナー時間の減少に鑑みてクオリティー・オブ・ライフを高め、そして非悪性疾患を有する患者または低減したもしくは非毒性前処置によって遺伝子治療を要する患者にとっての救命医療としてＨＳＣ移植の増大した使用を潜在的に可能にし得る医療の同定である。この迅速な動員ストラテジーはまた、非造血性適応症における使用の可能性を有する。なぜなら動員されたＣＤ３４＋細胞は、虚血性心疾患の治療として、フェーズＩＩＩにおいて活発に調査されている最中だからである。
【０３２８】
造血幹細胞（ＨＳＣ）移植は、多くの悪性血液疾患に関して現在唯一の根治的処置モダリティーである。しかし、移植関連の罹病率および死亡率は未だ高く、ＨＳＣ移植から利益を受け得る患者のうちのごく僅かが実際にＨＳＣ移植を受けるに過ぎない。これら本質的なリスクを低減させれば、各年で移植される患者数が大いに増大する可能性がある。
【０３２９】
移植のためのＨＳＣ源としては、骨髄、臍帯血、もしくは動員される末梢血が挙げられる。定常状態条件下では、ＨＳＣおよびＨＰＣは、骨髄ニッチの中にいるが、これら集団によって生成される成熟細胞は、骨髄を出て末梢へと入る。増大したＨＰＣが化学療法後に患者において見出されたという観察に基づくと、ＨＳＣおよびＨＰＣが自然に出て行くことを高められ得るということが知られるようになった。造血性増殖因子である顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）は、移植用のＨＳＣおよびＨＰＣを動員するために臨床的に広く使用されている。Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血幹細胞（ＰＢＳＣ）は、より迅速な生着、より短期間の入院（１−４）、およびいくらかの環境では、骨髄と比較して優れた全生存（５）と関連する。動員される成人ＨＳＣおよびＨＰＣは、自家移植および同種異系移植のためにいまや広く使用されている。
【０３３０】
成功裡ではあるものの、改善されたＨＳＰＣ動員薬剤の重大な医療的ニーズが未だにある。なぜならＧ−ＣＳＦレジメンは、反復皮下注射を要し、これが骨痛（しばしば重症でかつ衰弱する合併症）、悪心、頭痛、および疲労（６−９）に由来する罹病率としばしば関連するからである。これらは、正常なボランティアにおいて高い％の自主撤退を伴って生活様式破壊的であり得、そして癌化学療法の過酷さに耐えている患者にとっては特に悲惨である。さらに、正常なドナーの小さな集団では、Ｇ−ＣＳＦは、重篤な毒性とも関連した。その成功にも拘わらず、Ｇ−ＣＳＦに対する応答における不十分な動員は、正常な健康ドナーのうちの１５％に起こる。十分数のＣＤ３４＋を達成しない患者は、１回より多くのアフェレーシス手順がしばしば必要である（１８−２０）。患者のうちの最大で６０％までが、高用量化学療法の連携サイクルを要する自家移植のために最適なＣＤ３４＋細胞数を動員しない（２５−２７）。これは、長期のアフェレーシスをしばしば要し（２９）、移植レシピエントの最大グループを構成するリンパ腫および多発性骨髄腫を有する患者（２８）にとって特に問題である。これら問題は、ＨＳＰＣを動員するための代替法が大きな影響を有し得る状況をもたらす。
【０３３１】
低分子ＣＸＣＲ４アンタゴニストであるプレリキサフォル（ＡＭＤ３１００）は、Ｇ−ＣＳＦのみでの不十分な動員という問題に対処することが示されており（３２−３５）、Ｇ−ＣＳＦに失敗した非ホジキンリンパ腫もしくは多発性骨髄腫を有する患者におけるＰＢＳＣの動員のために、Ｇ−ＣＳＦと組み合わせて使用されることが今やＦＤＡによって承認されている。しかし、患者のかなりの割合がプレリキサフォル投与後ですら十分数をなお動員できておらず、患者のうちの約３３％は、下痢もしくは注射部位反応を報告する。プレリキサフォル＋Ｇ−ＣＳＦは、これら患者においてＨＳＣを動員する能力に明らかに影響を与えたものの、代替薬剤にもまだかなりの臨床状の好機が残っている。以下の問題を克服する薬剤は、特に魅力的である：  １）かなりの骨痛および他の望ましくない効果をもたらすＧ−ＣＳＦの複数回の毎日の注射の要求；２）現在ある動員薬剤での患者およびボランティアの部分集団における変動しやすく、最適状態には及ばない動員；ならびに３）必要とされるアフェレーシス手順の総数および最適な動員時間を推定することができないこと。
【０３３２】
動員薬剤の効力を試験することは、臨床効力の明確なエンドポイントによって促進され得る。適切な動員の臨床目標が確立された。＞３×１０６／ｋｇのＣＤ３４＋細胞用量は、同種異系移植片レシピエントの中で低減した罹病率および死亡率（２１）と関連する。最大１０×１０６／ｋｇまでのより高いＣＤ３４＋細胞用量は、特に、再発のリスクが高い疾患を有する患者（２３，２４）にとっては、より迅速な生着、より低い罹病率およびより良好な生存率（２２）を生じると報告される。従って、動員レジメンの成功を測定するパラメーターは、適切である。この提唱の主要な焦点は、造血幹細胞採取の既存の治療に対する薬理学的代替手段の開発であるものの、本発明者らが探索していると提唱する臨床上の影響については好機がさらにある。内因性幹細胞をそのニッチから動員する薬剤は、ニッチを空にし、移植される細胞の生着を可能にし得る。Ｇ−ＣＳＦは、幹細胞ニッチに対するその公知の有害効果が原因でこの機能において制限されているが、代替のアプローチは、同様には妨げられていない可能性がある。この機能が最適化されるのであれば、細胞傷害性化学療法も放射線療法もなしで幹細胞生着のために上記レシピエントを前処置する可能性は、考えられ得る。このような転帰は、非悪性疾患（例えば、鎌状赤血球貧血症、先天性免疫不全症、蓄積症（ｓｔｏｒａｇｅ  ｄｅｆｅｃｔ）およびＨＩＶ）を処置することにおける利益を仮定すれば、臨床コミュニティーにとってはますます重要である。新たな動員薬剤が細胞傷害性なしで生着を達成し得るか否かを規定することは、動員研究の延長であり、重要な潜在的影響の延長である。
【０３３３】
実施例３：ＣＸＣＲ２の操作によるニッチ毒性なしでニッチを空にすることを増強し、ＨＳＣと骨髄ニッチとの間のヘパラン硫酸プロテオグリカン相互作用が最近規定された
【０３３４】
ＨＳＰＣのニッチ保持は、ＳＤＦ−１とＨＳＰＣ上のそのコグネイトレセプターＣＸＣＲ４との相互作用によって部分的に維持される。臨床的には、上記ＣＸＣＲ４アンタゴニスト、ＡＭＤ３１００は、アフェレーシスによる採取およびその後の移植のために骨髄から末梢にＨＳＰＣが出て行くのを増強するために、Ｇ−ＣＳＦと組み合わせて使用することがＦＤＡによって承認されている。この組み合わせは、明らかに骨髄ニッチを空にするが、Ｇ−ＣＳＦは、間質ニッチ細胞を有意に弱らせる１８。これは、目的が単に幹細胞採取である場合にほとんど重大ではないが、低毒性前処置の状況において、上記ニッチを空にして、競合している細胞を生着させ得ることを考える場合には問題である。これは、Ｇ−ＣＳＦがこの状況において不成功であった理由であり得る；それは、注入される細胞および内因性細胞に関するニッチの支持能力を低減させる。従って、ＨＳＰＣをニッチから去らせると同時に、ニッチ完全性を維持するストラテジーは、低減した前処置ストラテジーにとって好ましい。本明細書で記載される研究は、適切な動員が起こって、上記ニッチを破壊することなく、移植される細胞の生着を可能にし得るか否かを決定するために２つのこのようなアプローチの組み合わせを使用することを企図する。
【０３３５】
上記ＣＸＣＲ２アゴニスト、ＧＲＯ−βは、ＨＳＰＣを迅速に動員し得る薬剤であり、Ｇ−ＣＳＦと比較した場合に優れた生着能力で長期間再集合するＨＳＣの動員を生じる１９。この薬剤は、ＭＭＰ−９を活性化するという点でＧ−ＣＳＦもしくはＡＭＤ３１００とは全く異なる推定作用機構を有する。それは非常に急激に起こり、マウスにおいて最大で注入後１５分程度でＨＳＰＣを動員する。Ｇ−ＣＳＦとは異なり、上記動員は、免疫組織化学によって骨髄形態の変化と関連しない（データは示さず）。それは、ニッチを空にする薬剤として働く優れた候補である。本発明者らはまた、骨髄中でのＨＳＣ保持においてヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）の新規な関与（これは、Ｇ−ＣＳＦによって動員されるものとは機能的に異なる細胞の幹細胞動員を誘発するために薬理学的に操作され得る）を近年同定した。このプロセスは、ヘパリンおよびＡＮＤ３１００の使用を要するものであり、承認された薬剤（これは、臨床試験へと迅速に移行し得る）を使用する強い動員を達成する。
【０３３６】
細胞外マトリクスタンパク質が骨髄ニッチの重要な要素として働くと仮定すると、オステオポンチンがそのような役割を果たすことが示された２０，２１。さらに、ＨＳＰＧは、発生において局所組織中で複数の他のサイトカインおよびモルフォゲンの勾配を生じることが公知である２２，２３ので、本発明者らは、それらが役割を果たすか否かを試験した。これを評価するために、本発明者らは、ＥＸＴ１（ヘパラン硫酸プロテオグリカンの生成に必須なグリコシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子２４）の条件付き欠失の効果を試験した。本発明者らは、条件付き対立遺伝子保有マウスと、ＣｒｅリコンビナーゼがＭｘ１プロモーターの制御下で発現されるマウスとを交配することによって、上記を試験した。Ｍｘ１は、造血性細胞においてポリ（Ｉ）／ポリ（Ｃ）によって誘発可能であり、本発明者らは、近年、骨系統間葉幹／前駆細胞において示した２５。造血性細胞に対するＥＸＴ１の直接効果を排除するために、以下の研究を、移植によってキメラになった動物で行った：それらの造血系は、野性型であると同時に、微小環境は、ＥＸＴ１  ｆｌ／ｆｌ（ＫＯ）もしくは＋／＋（コントロール）である。
【０３３７】
キメラ動物を、Ｃｒｅの条件付き活性化によって、造血に対する微小環境中でのＥＸＴ１欠失の効果を評価し、続いて１〜６ヶ月間にわたって血液、骨髄および脾臓について評価した（図１）。血中のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の数字は、有意に増大し（ｐ＜０．０１）（左パネル）、付随して、骨髄中の骨髄系前駆細胞（中央パネル）およびＨＳＣ（右パネル）では逆に減少した（ｐ＜０．０５）。
【０３３８】
この効果についての潜在的基礎を調べたところ、本発明者らは、ＩＨＣによって骨髄の骨系細胞におけるＶＣＡＭ−１発現の減少を観察した（データは示さず）ので、動員研究によってＶＣＡＭ−１の機能的役割を試験した（図２）。本発明者らは、ＶＣＡＭ−１中和抗体（もしくはアイソタイプコントロール）を、Ｇ−ＣＳＦと組み合わせて使用して細胞を動員し（模式図は上パネル）、Ｇ−ＣＳＦ＋抗ＶＣＡＭ−１による動員が、ＥＸＴ１欠失の状況においてコロニー形成単位アッセイ（ｐ＜０．００１）および競合的移植アッセイ（ｐ＜０．０１）によって測定される場合を除いて、相加的である（ｐ＜０．０１）であることを見出した。これらデータは、ＶＣＡＭ１がＥＸＴ１欠失によって骨髄におけるＨＳＰＣ保持の変化に関与する分子のうちの１つであることを示唆するのみならず、Ｇ−ＣＳＦ動員に対してＥＸＴ１欠失の特徴的な機構および骨髄中の幹細胞のＶＣＡＭ−１保持を確立することでのＥＸＴ−１制御ＨＳＰＧの重要性をも裏付ける。
【０３３９】
内因性ＨＳＰＧが公知の薬理学的ＨＳＰＧと競合し得ると仮定して、本発明者らは、ヘパリン硫酸が幹細胞局在化に対するＥＸＴ１欠失の効果を摸倣し得るか否かを調べた。最初に、これを、標準的Ｇ−ＳＣＦ動員レジメンの後に単一用量のヘパリン硫酸（１００Ｕ／マウス）を使用して、末梢血を採取し、これを使用して、致命的に照射したコンジェニックレシピエントを再構成して行った（図３）。次いで、最初のレシピエントを、４ヶ月後に採取し、二次的に致命的に照射したレシピエントに移植するために使用した。
【０３４０】
結果は、ヘパリン硫酸が幹細胞の相加的動員を誘発することを示す（左下パネル）。上記細胞は、二次的生着を提供するにあたって明確により能力があるようである（左下パネル、折れ線グラフの中断後）（ｐ＜０．００１）。これらデータは、安価で臨床的に利用可能なヘパリン硫酸が、Ｇ−ＣＳＦのみと比較して、機能的に異なる、おそらく機能的に優れた幹細胞集団を動員し得ることを示唆する。
【０３４１】
ヘパリン硫酸が内因性ＨＳＰＧとの競合因子として機能するのを誘発するか否かを試験するために、本発明者らは、これがＥＸＴ１  ＫＯにおいてＧ−ＣＳＦ動員を増大する能力を調べたところ、その効果を喪失していることが観察された（右下パネル）。従って、ヘパリン硫酸は、内因性プロテオグリカンが減少される場合に不活性であり；ヘパリン硫酸は、その活性に関してこれら分子の存在に依存し、このことは、ヘパリン硫酸が、内因性ＨＳＰＧに局所的に結合されるＶＣＡＭ−１のような分子への結合をおそらく通じて、ＨＳＰＧを阻害するのを誘発することを示唆することを示唆する。
【０３４２】
ＨＳＰＧは、特に強力な二次的再構成能力で幹細胞の局在化を制御するようであったので、およびＨＳＰＧインヒビターが、医院で容易に利用可能であるので、本発明者らは、ニッチ傷害が回避されるべき状況においてこのアプローチが有用であり得るか否かを試験した。本発明者らは、ヘパリン硫酸もしくは別の臨床的に使用されるＨＳＰＧアンタゴニストである硫酸プロタミンを単独で、幹細胞動員薬剤として試験した。いずれも単独では十分に有効ではなかった（データは示さず）。従って、本発明者らは、それらを、Ｇ−ＣＳＦと関連する骨内膜細胞への傷害なしに幹細胞を動員し得るＡＭＤ３１００とともに試験した。データは、いずれの薬剤もＡＭＤ３１００のみと比較して、動員の効力の増強を提供することを示し（図４中の１のところの線で示される）、ＡＭＤ３１００＋ヘパリン硫酸は、特別有効性を提供する（２〜６倍の増強）（ｐ＜０．０５）。
【０３４３】
ＧＲＯ−β、ＨＳインヒビターおよびＡＭＤ３１００がニッチからＨＳＰＣを迅速に動員し得、ＨＳＣ局在化を左右する異なる分子実体を標的とすると仮定すると、これら薬剤は、内因性ＨＳＰＣを最大限に動員するために使用され得る。
【０３４４】
実施例１〜３の参考文献
【表Ａ】
2020073589.tif 000002
【０３４５】
実施例４：間葉細胞ヘパラン硫酸生成の阻害は、幹細胞動員を改善し、細胞傷害性前処置なしで生着を可能にする
【０３４６】
導入
【０３４７】
グリコシルトランスフェラーゼ遺伝子Ｅｘｔ１は、ヘパラン硫酸（ＨＳ）生成に必須であり、成体マウスの間葉細胞（骨格幹細胞／前駆細胞）の集団において阻害される場合、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）局在化において顕著な変化を生じる。ＨＳＰＣは、Ｅｘｔ１欠失の後に、骨髄から脾臓へと出ていった。これは、間葉細胞における変化したシグナル伝達およびそれらによるＶｃａｍ１生成の低下と関連した。さらに、ＨＳの薬理学的阻害が、Ｇ−ＣＳＦ抵抗性の状況におけるものを含め、Ｇ−ＣＳＦのみよりも、定性的にはより強力な、および定量的にはより多くのＨＳＰＣを骨髄から動員した。Ｅｘｔ１欠失後の内因性ＨＳＰＣの低下した存在は、宿主のいかなる毒性の前処置もなしで、移植されるＨＳＰＣの生着と関連した。従って、ＨＳ生成の阻害は、非悪性状態のためのＨＳＰＣ移植において放射線療法もしくは化学療法の毒性を回避するための手段を提供し得る。
【０３４８】
発生において細胞のパターンを確立することは、多細胞生物によって必要とされるより高次の組織化の根本である。モルフォゲン勾配は、パターン確立およびその後の組織機能において中心的な役割を果たし（Ａｋｉｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；  Ｖｉｅｄ
ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）との相互作用を通じて維持される（Ｉｎａｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。造血系において、ＨＳＰＧは、重要な造血性サイトカインとインビトロで相互作用し、このことは、骨髄（ＢＭ）区画化におけるそれらの潜在的役割を示唆する（Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７；Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）。
【０３４９】
本発明者らの研究室は近年、Ｍｙｘｏｖｉｒｕｓ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  １（Ｍｘ１）遺伝子のインターフェロン誘発性発現によって特徴付けられる骨髄（ＢＭ）骨格幹細胞／前駆細胞の集団を記載した（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。これら細胞は、骨のホメオスタシスに関与し、ＨＳＰＣニッチの構成要素であると示されたネスチン１＋間葉集団と部分的に重なる（Ｍｅｎｄｅｚ−Ｆｅｒｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。本発明者らは、局所的に分泌されるマトリクスタンパク質との相互作用によって維持されるサイトカインおよびモルフォゲンが、造血幹細胞／前駆細胞（ＨＳＰＣ）ニッチを維持するにあたって必須であると仮定した。これを試験するために、本発明者らは、Ｍｘ１＋間葉細胞においてＥｘｔ１遺伝子（ヘパラン硫酸（ＨＳ）の合成に必須のグリコシルトランスフェラーゼ）を条件付きで欠失させた（Ｉｎａｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；  ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。
【０３５０】
本発明者らのデータは、Ｍｘ１＋間葉細胞およびそれらの子孫において発現されるＥｘｔ１／ＨＳＰＧが、部分的に血管細胞接着分子−１（Ｖｃａｍ−１）を調節することによって、ＢＭ中のＨＳＰＣ局在化および保持を制御することを示す。内因性ＨＳの競合的な薬理学的阻害は、糖尿病モデルにおいて動員抵抗性の状況におけるものを含め、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の動員効力を増強した。さらに、上記動員されたＨＳＰＣは、照射した宿主での一次および二次移植における再構成の動態を改善した。最終的に、移植されるＨＳＰＣの生着は、マウスがＥｘｔ１欠損にされた直後に細胞傷害性前処置なしで効率的に起こった。
【０３５１】
これら知見は、骨髄造血幹細胞ニッチにおけるＨＳの重要な役割を示し、ＨＳもしくは酵素Ｅｘｔ１の標的化が臨床的移植に重要である動員もしくは生着のいずれかにおいて転帰を達成するための新規な方法を提供し得ることを示唆する。
【０３５２】
結果
【０３５３】
ヘパラン硫酸はＨＳＰＣ局在化を制御する
【０３５４】
Ｍｘ１は、ポリ（Ｉ）：ポリ（Ｃ）（ｐＩｐＣ）によるインターフェロン誘発の後に、造血系においておよび骨系統間葉細胞において発現される（Ｋｕｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；  Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。Ｍｘ１プロモーターによって駆動されるｃｒｅリコンビナーゼによるｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子の二対立遺伝子欠失は、造血系において非常に効率的である（Ｇｕｒｕｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）が、間葉区画においてあまり特徴付けられていない。ｐＩｐＣ投与の際の間葉区画におけるＥｘｔ１欠失の効率を評価するために、コントロールおよび変異Ｅｘｔ１マウスを、ＲＯＳＡ２６−ｌｏｘＰ−ｓｔｏｐ−ｌｏｘＰ−ＥＹＦＰ（Ｒｏｓａ−ＹＦＰ）レポーターマウスと交配して、Ｅｘｔ１  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ；Ｍｘ１  ｃｒｅ＋；Ｒｏｓａ−ＹＦＰ＋（変異ＹＦＰ）動物およびＥｘｔ１＋／＋；Ｍｘ１  ｃｒｅ＋；Ｒｏｓａ−ＹＦＰ＋（コントロールＹＦＰ）動物を作った（図６Ａ）。変異およびコントロールＹＦＰ＋、ＣＤ４５−、Ｔｅｒ１１９−骨格前駆細胞を、ｐＩｐＣ誘発の２１日後にフローソートし、Ｅｘｔ１の効率的欠失を、ウェスタンブロットによって、エキソビボで増殖させた細胞で検証した（図６Ｂおよび図６Ｃ）。さらに、Ｅｘｔ１欠失の際のＨＳ生成の顕著な排除は、インビボで増殖したＭｘ１＋間葉細胞および新たに単離されたＭｘ１＋間葉細胞で検出された（図６Ｄおよび図６Ｅ）。重要なことには、Ｅｘｔ１の欠失は、ＢＭ中の免疫表現型で規定された間葉幹細胞の量に影響を及ぼさなかった（図６Ｆ）。
【０３５５】
Ｅｘｔ１欠失をＭｘ１＋骨格前駆細胞に制限するために、本発明者らは、ＣＤ４５．１発現コンジェニック動物（Ｂ６．ＳＪＬ）から致命的に照射した変異（Ｅｘｔ１  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ；Ｍｘ１  ｃｒｅ＋）マウスもしくはコントロール（Ｅｘｔ１  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ；Ｍｘ１  ｃｒｅ−）マウス（ともにＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスバックグラウンドにある）へと全ＢＭ細胞を移植して（図５Ａ）、コントロールおよび変異キメラを作った。移植の６〜８週間後に、その造血系は、ＣＤ４５．１細胞（図６Ｇ）によって完全に置換され、キメラ動物は、末梢血（ＰＢ）中の白血球（ＷＢＣ）数、赤血球（ＲＢＣ）数、血小板数およびＷＢＣ系統分布のような同等のパラメーターを示した（図６Ｈ、図６Ｉ、図６Ｊおよび図６Ｋ）。次いで、Ｅｘｔ１をｐＩｐＣ誘発によって非造血性細胞において欠失させ、造血を２４週間モニターした。ｐＩｐＣの２４週間後に、コントロールおよび変異キメラマウスの両方が、匹敵する総体重（ＴＢＷ）およびＢＭ細胞性を示した（図６Ｌおよび図６Ｍ）。骨髄免疫表現型分析から、変異キメラにおけるＭａｃ１＋Ｇｒ１＋およびＣＤ３＋細胞の割合の有意な低下およびＢ２２０＋集団における減少の傾向が明らかになった（図６Ｎ）。同様に、本発明者らは、成熟骨髄系前駆細胞（骨髄系共通前駆細胞もしくはＣＭＰ、巨核球赤血球前駆細胞もしくはＭＥＰ、および顆粒球マクロファージ前駆細胞もしくはＧＭＰ）の割合の有意な低下（図５Ｂ）、減少したリンパ系共通前駆細胞（ＣＬＰ）の傾向、ならびに変異キメラマウスのＢＭ中でのＬＫＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋造血幹細胞（ＨＳＣ）の割合の１／２減少（図５Ｃ）を見出した。しかし、これら変化は、ＨＳＣ死滅の増大にも、増殖欠損にも原因があるとすることはできなかった（図５Ｄおよび図５Ｅ）。変異キメラマウスでのＨＳＣのアポトーシスおよび細胞周期の変化がないと仮定して、本発明者らは、ＰＢおよび脾臓を試験することによって、ＨＳＰＣの誤った局在化を評価した。２４週間の時間経過の後、変異キメラは、顕著な白血球増加（図５Ｆ）（と、ＰＢ中のリンパ系細胞および骨髄系細胞の数の有意な増大（図６Ｏ））、ならびに中程度の血小板減少と正常な赤血球（ＲＢＣ）数（図６Ｐおよび図６Ｑ）を発現した。さらに、ＰＢコロニー形成アッセイ（ＣＦＵ−Ｃ）は、変異キメラマウスにおいて循環前駆細胞の有意な増大を示した（図５Ｇ）。
【０３５６】
変異キメラは、ｐＩｐＣ注射の２４週間後に、有意により大きな脾臓を有した（図５Ｈ）。脾臓の免疫表現型特徴付けから、ＨＳＣ（図５Ｉ）、ＣＭＰおよびＧＭＰの割合の実質的増大が明らかになったが、これらマウスにおいてＭＥＰの増大は明らかにならなかった（図５Ｊ）。脾臓におけるこのＨＳＣ蓄積は、それらの増殖の増大もしくは細胞死への抵抗に原因があるとすることはできない（図６Ｒおよび６Ｓ）。さらに、変異キメラマウス由来の脾細胞と、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス由来の等しい数の脾細胞との競合的移植から、コントロールキメラ由来の脾細胞と比較して、有意に長期の競合的利点が明らかになった（図５Ｋ）。この移植実験におけるコントロールおよび変異キメラに由来するＨＳＣによる血球系統への寄与は、等しかった（図６Ｔ）。
【０３５７】
ＨＳＰＣの誤った局在化は、好中球ターンオーバーおよび好中球誘発性のＢＭ微小環境変化と関連した（Ｃａｓａｎｏｖａ−Ａｃｅｂｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。循環「老化」好中球（図６Ｕ）およびＢＭ  Ｃｘｃｌ１２レベル（図６Ｖ）の分布は、コントロールおよび変異キメラＥｘｔ１マウスにおいて等しかった。このことは、本発明者らのモデルにおいて認められた好中球増加がＨＳＰＣの誤った局在化を説明しないことを示唆する。骨系細胞が、多くのマウスモデルにおいて造血に影響を及ぼす（Ｍｅｒｃｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）ことを示したと仮定して、本発明者らは、Ｅｘｔ１変異マウスにおいて観察されたＨＳＰＣの誤った局在化が、損なわれた骨系細胞機能の結果であるか否かを評価した。骨の組織形態的計測的、マイクロＣＴおよび組織学的な分析から、有意差は示されなかった。このことは、Ｍｘ１＋骨格前駆細胞におけるＥｘｔ１欠失が骨格系のホメオスタシスには必須でないことを示唆する（図５Ｌ、図６Ｗ、表１および表２）。まとめると、これら結果は、Ｍｘ１＋骨格前駆細胞の集団によるＨＳの生成が、ＢＭ腔におけるＨＳＰＣ保持を調節することを示す。
【０３５８】
【表１】
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【０３５９】
【表２−１】
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【表２−２】
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【０３６０】
ヘパラン硫酸は、Ｖｃａｍ−１依存性ＨＳＰＣ接着を調節する
【０３６１】
ＢＭにおけるＨＳＰＣの微小解剖学的位置づけは、それらの異型相互作用に影響を与えて、刺激に対する活性および応答を変化させる。本発明者らは、ＢＭにおけるＨＳＰＣ位置づけがＭｘ１＋骨格前駆細胞におけるＥｘｔ１欠失に際して影響を受けるか否かを評価した。コントロールおよび変異マウスを、骨芽細胞を特異的に標識して、Ｃｏｌ２．３プロモーターの制御下でＧＦＰを発現するレポーター系統（Ｃｏｌ２．３−ＧＦＰ）に交配した（図７Ａ）。Ｅｘｔ１コントロールおよび変異Ｃｏｌ２．３−ＧＦＰ＋マウスを致命的に照射し、１０４  ＷＴ  ＬＫＳ  ＣＤ４８−ＣＤ１５０＋ＤｉＤ（１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’−テトラメチルインドジカルボシアニンペルクロレート）標識ＨＳＣを移植した。標識したＨＳＣを、生体内高分解能二光子共焦点顕微鏡によって注射の２４時間後の頭蓋冠ＢＭにおいて可視化し、骨芽細胞までのそれらの相対的距離（Ｃｏｌ２．３−ＧＦＰ＋）および骨内膜面を定量した。変異動物におけるＤｉＤ＋細胞の解剖学的位置づけは、ＧＦＰ＋骨系細胞からの距離がより大きい細胞で顕著に変化した（図７Ｂおよび図８Ａ）。ＨＳが、ＨＳＰＣ局在化を調節することが公知の分子の調節に影響を及ぼすか否かを調査するために、コントロールおよび変異ＹＦＰ＋（図６Ａ）、ＣＤ４５−、Ｔｅｒ１１９−骨格前駆細胞を、ｐＩｐＣ誘発の２１日後にフローソートした。ｍＲＮＡレベルの評価から、Ｃｘｃｌ１２、Ｖｃａｍ１、Ｓｃｆおよびアンジオポエチン−１（Ｍｅｒｃｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）の発現が、骨芽細胞からさらに離れて観察されたＨＳＣ局在化と一致して、変異マウスにおいて有意にダウンレギュレートされることが明らかになった（図７Ｃ）。
【０３６２】
骨系細胞におけるＣｘｃｌ１２およびＳｃｆの条件付き欠失は、ＨＳＰＣ生物学に影響を及ぼさず（Ｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，２０１３；  Ｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；  Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、アンジオポエチン−１は、Ｅｘｔ１欠失の際にＨＳＣで変化しなかった状態であるＨＳＣ静止を制御する（Ａｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）（図５Ｅ）。さらに、ＢＭ中のＣｘｃｌ１２レベル、およびＭｘ１＋間葉性細胞によって生成されるＣｘｃｌ１２タンパク質は、コントロールおよび変異マウスにおいて匹敵した（図６Ｖおよび図８Ｂ）。よって、本発明者らは次に、Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＥｘｔ１欠失の際に認められたＨＳＰＣ欠損が、Ｖｃａｍ１発現における変化の結果であるか否かを評価した。Ｖｃａｍ１は、α４β１インテグリンＶｌａ４のリガンドである。Ｖｌａ４−Ｖｃａｍ１軸は、ＨＳＰＣのニッチへのＨＳＰＣ接着において役割を果たし、この相互作用の薬理学的阻害は、ＨＳＰＣ動員を生じる（Ｃｒａｄｄｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；  Ｐａｒａｙａｎｎｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。Ｖｃａｍ１タンパク質レベルは、変異マウス中のＭｘ１＋間葉細胞において有意に低下した（図７Ｄおよび図８Ｃ）。Ｖｃａｍ１発現における観察された低下が、Ｅｘｔ１変異キメラマウスにおいて認められるＨＳＰＣの誤った局在化に機能的に寄与するか否かを決定するために、本発明者らは、Ｖｃａｍ１中和抗体の添加が、コントロールおよび変異動物においてＧ−ＣＳＦ誘発性のＨＳＰＣ動員にどのようにして影響を及ぼすかを評価した（図７Ｅ）。Ｇ−ＣＳＦと一緒にＶｃａｍ１中和抗体を受けたコントロール動物から動員されたＰＢは、Ｇ−ＣＳＦのみを受容する動物と比較して、循環ＣＦＵ−Ｃにおいて有意な増大（図７Ｆ左パネル）（Ｃｒａｄｄｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）および移植後に致命的に照射したコンジェニックレシピエントにおいて増大したドナーキメラ現象（図７Ｇ左パネル）を示した。しかし、Ｇ−ＣＳＦとＶｃａｍ１中和抗体との組み合わせで動員された変異Ｅｘｔ１マウス由来のＰＢは、Ｇ−ＣＳＦのみと、ＣＦＵ−Ｃの等しい数（図７Ｆ右パネル）および致命的に照射したコンジェニックレシピエントにおいて造血を再構成する等しい能力（図７Ｇ右パネル）を示した。匹敵する結果を、Ｇ−ＣＳＦ投与なしでＶｃａｍ１中和抗体に対する応答において得た（図８Ｄ）。まとめると、Ｍｘ１＋骨格前駆細胞におけるＥｘｔ１の欠失およびそのＨＳＰＧ生成物は、Ｖｃａｍ１および他の接着メディエーターの生成を低減させ、領域を幹細胞保持の部位としてあまり機能しないようにする。
【０３６３】
インビボでのヘパラン硫酸プロテオグリカンの薬理学的競合的阻害は、ＨＰＳＣ動員を誘発する
【０３６４】
ＨＳ摸倣物は、おそらく内因性ＨＳＰＧの競合的阻害を通じて、マウスにおいて迅速なＨＳＰＣ動員を誘発することが示された（Ｄｉ  Ｇｉａｃｏｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；  Ｆｒｅｎｅｔｔｅ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓ，２０００；  Ｓｗｅｅｎｅｙ  ｅｔａｌ．，２００２）。非常に硫酸化されたグリコサミノグリカンであるヘパリンは、それだけで動員を誘発する能力を欠いていることが示された（Ｆｒｅｎｅｔｔｅ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓ，２０００）。驚くべきことに、本発明者らは、ヘパリン投与（ＰＢ採取の１時間前に１００U／マウス）が、ＷＢＣ数の有意な変化なしで、ＣＦＵアッセイによって測定さ
れる場合、循環ＨＳＰＣの数において中程度であるが有意な増大を誘発することを観察した（図１０Ａおよび図１０Ｂ）。ＨＳ生成の遺伝的欠失がＨＳＰＣ局在化を変化させ、ヘパリンがＨＳＰＧシグナル伝達を競合的に阻害する安価なＦＤＡ承認薬であるという本発明者らの所見を考慮して、本発明者らは、ヘパリンが現在のＧ−ＣＳＦ動員レジメンと協同し得るか否かを調査した（図９Ａ）。
【０３６５】
Ｇ−ＣＳＦと組み合わせてヘパリン（ＰＢ採取の１時間前に１００Ｕ／マウス）で処置したマウスは、Ｇ−ＣＳＦのみで処置したマウスと比較して、ＰＢ中のＷＢＣ数において中程度の（ｐ＜０．０５）増大を示した（図９Ｂ）。しかし、ヘパリンとＧ−ＣＳＦとの組み合わせは、致命的に照射したコンジェニックマウスへのＰＢ競合的移植によって測定される場合、長期の再構成細胞の動員を有意に増大した（図９Ｃ、折れ線グラフの中断前）。さらに、これら細胞は、二次レシピエントに生着するそれらの能力によって示されるように、効率的に自己再生した（図９Ｃ、折れ線グラフの中断後）。重要なことには、ヘパリンおよびＧ−ＣＳＦの投与は、Ｇ−ＣＳＦのみと比較して、明瞭な転写シグナチャーとともにＨＳＣの集団を動員する（図９Ｄ、図９Ｅ、図９Ｆおよび表３）。このことは、ＨＳ競合阻害が、ＨＳＰＣの異なる集団を動員するか、または上記動員プロセスが、遺伝子発現特徴を迅速に変化させるために十分異なっているかのいずれかを示唆する。好中球および血小板数の回復は、臨床状況におけるＢＭ移植後の成功裡の生着を規定し、回復までの時間は、生存を推定する（Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。重要なことには、Ｇ−ＣＳＦおよびヘパリンの共投与によって動員されたＰＢの非競合的移植は、Ｇ−ＣＳＦのみと比較して、好中球（図９Ｇ）および血小板（図９Ｈ）の４〜６日間早い回復を生じた。ヘパリンとＧ−ＣＳＦとの組み合わせは、Ｅｘｔ１変異マウスにおいてＧ−ＣＳＦのみを超えてＨＳＰＣ動員を増大させなかった。このことは、ヘパリンが、内因性ＨＳＰＧを調節することによって、野生型マウスにおいてＧ−ＣＳＦ誘発性動員を増強することを示唆する（図９Ｉ）。また、ヒルジン（非ヘパリンベースの抗凝固剤）は、Ｇ−ＣＳＦ誘発性のＨＳＰＣ動員に影響を及ぼさなかった（図９Ｊ）。このことは、観察された効果がヘパリン抗凝固特性の結果ではなかったことを示唆する。
【０３６６】
【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【０３６７】
造血幹細胞移植は、多くの血液障害にとって相変わらず常套手段的根治療法のままである。しかし、Ｇ−ＣＳＦ動員抵抗性は、いくらかの個体にとって救命治療を危うくし得る。従って、本発明者らは、ＨＳＰＧの遺伝的もしくは薬理学的競合阻害が、Ｉ型糖尿病誘発性の動員障害のマウスモデル（Ｆｅｒｒａｒｏ  ｅｔｌ  ａｌ．，２０１１）において、Ｇ−ＣＳＦ誘発性の、ＢＭからＨＳＰＣが出て行くことを促進し得るか否かを評価した。Ｇ−ＣＳＦは、Ｉ型糖尿病マウスにおいてＨＳＰＣを効率的に動員しなかった。しかし、Ｇ−ＣＳＦへの損なわれた応答は、Ｍｘ１＋間葉細胞においてＥｘｔ１発現を欠如するＩ型糖尿病マウスにおいて十分に矯正された（図９Ｋ）。さらに、ヘパリンとＧ−ＣＳＦとの組み合わせは、致命的に照射されたマウスへのＰＢ競合的移植によって測定される場合、糖尿病動物における長期の再構成細胞の正常な動員を生じた（図９Ｌ）。これらデータは、内因性ＨＳＰＧの機能的競合阻害が、薬理学的に誘発された糖尿病を有する動物において注意される動員異常をレスキューすることを示す。
【０３６８】
次に、本発明者らは、ヘパリン誘発性の動員が、Ｇ−ＣＳＦ刺激の非存在下でのＶｃａｍ１阻害の際に排除されるか否かを評価した。なぜなら、Ｖｃａｍ１は、少なくとも部分的には、Ｅｘｔ１変異マウスにおいて認められる欠損の原因であるからである。ヘパリンの投与は、ＣＦＵアッセイによって測定される場合、ビヒクルと比較してＨＰＳＣ動員を増強した（図９Ｍおよび図１０Ｃ）。逆に、ヘパリンおよびＶｃａｍ１中和抗体の共投与は、Ｖｃａｍ１中和のみを超えてＨＳＰＣ動員を改善しなかった。このことは、ヘパリンがＶｃａｍ１依存性接着を調節することによって動員を誘発することを示唆する（図９Ｍおよび図１０Ｃ）。しかし、ＰＢ採取の１時間前のヘパリンの投与は、Ｍｘ１間葉細胞におけるＶｃａｍ１レベルを調節しない（図１０Ｄ）。このことは、以前に示されたように（Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）、Ｖｃａｍ１−Ｖｌａ４相互作用に影響を及ぼすアロステリック相互作用のようなＶｃａｍ１依存性接着に対するヘパリンの効果において代替の機構が関係していることを示唆する。重要なことには、本発明者らの結果はまた、ヘパリンの共投与がＡＭＤ３１００誘発性の動員を増強することを示す（図９Ｍ、図１０Ｃの中央の陰影付きのパネル）。さらに、ＡＭＤ３１００、Ｃｘｃｒ４アンタゴニスト（Ｂｒｏｘｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）はまた、Ｅｘｔ１欠損マウスにおいてＧ−ＣＳＦ誘発性の動員を増強する（図１０Ｅ）。このことは、ＨＳＰＣ保持におけるＨＳの役割が、Ｃｘｃｌ１２−Ｃｘｃｒ４軸とは無関係であることを示唆する。
【０３６９】
Ｍｘ１＋間葉細胞は、移植される造血幹細胞および前駆細胞の生着を制御する
【０３７０】
ＢＭにおけるＨＳＰＣ生着は、全身照射および高用量化学療法によってしばしば達成される、ＢＭニッチを効率的に空白にすることに依拠する（Ａｒｍｉｔａｇｅ，１９９４）。これら前処置法は、処置プランの一部として放射線療法もしくは高用量化学療法を要する悪性腫瘍には罹患していない患者にとって毒性であり望ましくない。
【０３７１】
本発明者らは、Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＥｘｔ１の排除が、細胞傷害性前処置なしで生着を可能にし得るか否かを評価した。ｐＩｐＣ誘発の３週間後、コントロールマウスおよび変異マウスに、コンジェニックＣＤ４５．１  ＢＭ細胞を移植し、１６週間追跡した。顕著なことには、コントロール動物は、移植された細胞用量とは無関係に生着しなかった一方で、変異マウスは、移植の過程全体を通じて用量依存性様式で生着の有意な増大を示した（図１１Ａ）。細胞の生着は、長期の多系統再構成を示した（図１１Ｂ）。よって、ＨＳＰＧのＭｘ１＋間葉細胞生成は、ＢＭにおけるＨＳＰＣ生着のプロセスを調節する。このことは、ＨＳを標的とすることが、細胞傷害性の事前処置なしで生着を可能にする手段を提供し得ることを示唆する。
【０３７２】
考察
【０３７３】
分泌型および膜結合型ＨＳＰＧは、異種細胞相互作用に必要な微小環境を作り出して組織を作り維持する、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａから哺乳動物までの生物における多くの生物学的プロセスに関与している（Ｋｒａｕｓｈａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；  Ｖｉｅｌ
ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。造血において、いくつかの先行する報告は、ＨＳＰＧの重要性を示した。例えば、ＨＳ摸倣物は、造血幹細胞／前駆細胞（ＨＳＰＣ）動員を誘発することを示した（Ｄｉ  Ｇｉａｃｏｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；  Ｆｒｅｎｅｔｔｅ
ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓ，２０００；  Ｓｗｅｅｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。その一方で、ＨＳ切断酵素ヘパラナーゼの過剰発現は、ＢＭにおけるＨＳＰＣ蓄積を生じた（Ｓｐｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。さらに、グリピカン−３（細胞表面ＨＳＰＧ）は、細胞外ジペプチジルペプチダーゼＣＤ２６を阻害する（Ｋｈｕｒａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）し、ＣＤ２６は、ＨＳＰＣのホーミングおよびＢＭから出て行くことに影響を及ぼす（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。ここで、本発明者らは、ＨＳの骨格幹細胞／前駆細胞生成が、ＨＳＰＣ骨髄保持を制御し、動員抵抗性の状況においてすらより強力なＨＳＰＣを動員するために阻害され得、そしてＨＳＰＣ生着のために非毒性前処置を可能にするように標的化され得るという証拠を示す。これらデータを通じて、本発明者らは、Ｍｘ１発現間葉細胞および／もしくはそれらの子孫が、造血幹細胞のニッチに関与するＢＭ細胞の集団を含むことを示す（図１１Ｃ）。
【０３７４】
骨格幹細胞／前駆細胞によって生成される内因性ＨＳＰＧの操作は、臨床的に重要な課題に十分に関連するように局在化を変化させ得る。第１に、Ｇ−ＣＳＦとヘパリンの共投与は、より迅速な造血性の再構成および増大した二次移植能を有する定量的に明瞭なＨＳＰＣを動員した。これらデータは、これら薬剤の併用が、移植のための非常に強力なＨＳＰＣの回収に有利であり得ることを示唆する。第２に、ヘパリンもしくはＥｘｔ１欠失は、糖尿病表現型によって誘発されるＧ−ＣＳＦ抵抗性の状況ですら、Ｇ−ＣＳＦ誘発性のＨＳＰＣ動員を増強した。挿話的であるが、糖尿病表現型の病態生理的基礎は、ニューロパチーを含む。Ｅｘｔ１の欠失は動員欠損の発生を妨げるので、ＨＳが糖尿病のニューロパチー合併症に関与するか否かを考慮することは、興味をそそる。最後に、Ｅｘｔ１欠失は、注入されるＨＳＰＣが生着し得、いくらかの非悪性臨床状態にとって意味があるキメラ現象のレベルを達成し得る状況を提供した。キメラ現象のレベルは、ＡＭＤ３１００が５倍多くの骨髄細胞を使用する他者によって前処置レジメンとして使用した場合（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）に認められるものの２倍より高かったことに注意すべきである。なぜなら動物におけるＥｘｔ１欠失の誘発は、細胞を注入する前の３週間の間隔にわたって動物の見かけ上の健康を損なわなかったので、Ｅｘｔ１機能の阻害は、細胞傷害性前処置なしでＨＳＰＣ生着を達成するストラテジーであり得る。この論点は、非悪性疾患のためにＨＳＰＣを遺伝的に改変するという成功の改善とともに、ますます重要である（Ａｉｕｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；  Ｂｉｆｆｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０３７５】
実施例４の実験手順
【０３７６】
マウス
【０３７７】
Ｅｘｔ１  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウスは、以前に記載された（Ｉｎａｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｂ６．ＳＪＬ−Ｐｔｐｒｃａ  Ｐｅｐ３ｂ／ＢｏｙＪ（Ｂ６．ＳＪＬ）、Ｍｘ１−Ｃｒｅ（Ｂ６．Ｃｇ−Ｔｇ（Ｍｘ１−ｃｒｅ）ｌＣｇｎ／Ｊ）、Ｒｏｓａ２６−ｌｏｘＰ−ｓｔｏｐ−ｌｏｘＰ−ＥＹＦＰ（Ｒｏｓａ−ＹＦＰ，Ｂ６．１２９Ｘ１−Ｇｔ（Ｒｏｓａ）２６Ｓｏｒｔｍ１（ＥＹＦＰ）Ｃｏｓ／Ｊ）およびＣｏｌ２．３−ＧＦＰ（Ｂ６．Ｃｇ−Ｔｇ（Ｃｏｌ１ａ１＊２．３−ＧＦＰ）ｌＲｏｗｅ／Ｊ）マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。６〜１２週齢の雄性マウスを使用した。ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐＩｐＣ）を、Ａｍｅｒｓｈａｍ（ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）から得、４日間にわたって１日おきにＰＢＳ中で２５ｍｇ／ｋｇ  総体重（ＴＢＷ）の用量で腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって投与した。Ｈａｒｖａｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）およびＳｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌが全ての動物研究を承認した。
【０３７８】
フローサイトメトリー分析
【０３７９】
造血区画および間葉区画の免疫表現型特徴付けを、以前に記載されるように行った（Ｇｕｒｕｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。詳細については、補遺情報を参照のこと。Ｖｃａｍ１およびＣｘｃｌ１２タンパク質レベルを、それぞれ抗Ｖｃａｍ１−ＡＰＣ抗体および抗Ｃｘｃｌ１２−ＡＰＣ抗体、ならびにその対応するアイソタイプコントロール（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で評価した。全てのデータ収集を、ＬＳＲＩＩもしくはＦＡＣＳ  Ａｒｉａ  ＩＩ（Ｂｅｃｋｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で行い、データ分析をＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）で行った。
【０３８０】
移植アッセイ
【０３８１】
非競合的ＢＭ移植に関して、図１ａに記載されるキメラを作製するために、Ｂ６．ＳＪＬ（ＣＤ４５．１）マウス由来の１×１０６  全ＢＭ細胞を、ｐＩｐＣ投与の６〜８週間前に、致命的に照射した（移植前に４〜２４時間セシウム源から９．５Ｇｙ）Ｅｘｔ１−ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ−Ｍｘ１ｃｒｅ（ＣＤ４５．２）レシピエントに移植した。好中球および血小板回復アッセイを、以前に記載されるように行った（Ｈｏｇｇａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ＣＤ４５．２）マウス由来の３×１０６の動員されたＰＢ単核細胞（ＭＮＣ）を、致命的に照射したＢ６．ＳＪＬ（ＣＤ４５．１）マウスに移植し、少なくとも３６日間追跡した。細胞傷害性前処置なしでの移植のために、Ｂ６．ＳＪＬマウス由来の１×１０６、４×１０６もしくは８×１０６の全ＢＭ細胞を、ｐＩｐＣ投与の３週間後にＥｘｔ１−ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ−Ｍｘ１ｃｒｅレシピエントに移植した。動員された末梢血（ＰＢ）の競合的移植のために、１５０μｌのＰＢ（ＣＤ４５．２）を、２×１０５コンジェニックＢＭ支持細胞と混合し、致命的に照射したＣＤ４５．１レシピエントに注射した。細胞を、側方尾静脈注射（ｌａｔｅｒａｌ  ｔａｉｌ  ｖｅｉｎ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）によって注入した。ＦＡＣＳ分析によって、４週間間隔で生着をモニターした。
【０３８２】
生体内顕微鏡検査
【０３８３】
頭蓋冠ＢＭ腔中のＨＳＰＣのインビボ画像化およびデータ分析を、以前に記載されるように行った（Ｌｏ  Ｃｅｌｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。簡潔には、ＦＡＣＳソートしたＨＳＣを、ＤｉＤ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１：２００希釈を使用して、３７℃において１５分間ＰＢＳ中で染色し、致命的に照射したＥｘｔ１コントロールおよび変異Ｃｏｌ２．３−ＧＦＰ＋レシピエントに注射した。マウスを２４時間後に画像化した。ＨＳＣ、ＧＦＰ＋骨芽細胞と骨との間の距離を、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを使用して測定した。
【０３８４】
ＨＳＣ動員および採血
【０３８５】
組換えヒトＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ，Ｆｉｌｇｒａｓｔｒｉｍ）を、８回連続注射のために１２時間ごとに、１２５μｇ／ｋｇ  ＴＢＷで投与した。ヘパリンナトリウム（ＡＰＰ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を、単一用量１００Ｕでｉ．ｐ．注射した。単一用量において４０ｍｇ／ｋｇ  ＴＢＷでヒルジンを使用した。Ｖｃａｍ１中和抗体およびその対応するアイソタイプコントロール（ラットＩｇＧ２ａ，ｋ）を、３用量にわたって毎日２ｍｇ／ｋｇ  ＴＢＷで静脈注射し、ＰＢサンプルを最後の注射の翌日に眼窩後部採血によって得た。ＡＭＤ３１００を、単一用量５ｍｇ／ｋｇ  ＴＢＷで皮下投与した。ＰＢサンプルを、Ｇ−ＣＳＦの最後の注射の３時間後およびヘパリン、ＡＭＤ３１００、もしくはヒルジン注射の１時間後に、眼窩後部採血によって得た。
【０３８６】
糖尿病マウスモデル
【０３８７】
４〜６週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄性マウスもしくはＥｘｔ１−ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ−Ｍｘ１ｃｒｅ雄性マウスにおいて以前に記載されるように糖尿病を誘発した（Ｆｅｒｒａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。３００ｍｇ／ｄｌより高いグルコース値を有する動物のみを実験に使用した。
【０３８８】
統計分析
【０３８９】
不対の両側スチューデントｔ検定もしくは一元配置ＡＮＯＶＡ、続いて適切な事後検定を使用した。正規（ガウス）分布に従うサンプルに関して、データを、平均±ＳＤとしてプロットした。あるいは、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定を使用し、データを平均±ＩＱＲ（四分位数範囲）としてプロットした。統計的有意性を、以下のように示す：ｎｓ：有意でない；＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【０３９０】
フローサイトメトリー分析
【０３９１】
造血幹細胞および前駆細胞を、系統マーカー、ならびに蛍光色素に結合体化した以下のマーカーによって同定した：ｃ−Ｋｉｔ−ＡＰＣ、ＣＤ３４−ＦＩＴＣ、ＣＤ１６／３２−ＰＥ−Ｃｙ７、ＣＤ１２７−ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＣＤ４８−ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ、ＣＤ１５０−ＰＥおよびＳｃａ−１−ＰＥ−Ｃｙ７。系統染色を、Ｍａｃ−１ａ（ＣＤ１１ｂ）、Ｇｒ−１（Ｌｙ−６Ｇ／Ｃ）、Ｔｅｒ１１９（Ｌｙ−７６）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８ａ（Ｌｙ−２）およびＢ２２０に対するビオチン化抗マウス抗体のカクテルで行い、続いて、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｏｒａｎｇｅに結合体化したストレプトアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で検出を行った。コンジェニック系統識別のために、抗ＣＤ４５．１−ＰＥ−Ｃｙ７抗体および抗ＣＤ４５．２−ＦＩＴＣ抗体を使用した。成熟リンパ系細胞および骨髄系細胞を、以下によって同定した：Ｂ２２０−ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ（Ｂ細胞）、Ｍａｃ−１ａ−ＰＥおよびＧｒ１−ＡＰＣもしくはＦＩＴＣ（骨髄系細胞）およびＣＤ３−ＰＥ−Ｃｙ５もしくはＡｌｅｘａ７００（Ｔ細胞）。
【０３９２】
循環好中球の評価を、以前に記載されるように行った（Ｃａｓａｎｏｖａ−Ａｃｅｂｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。好中球を、それらのＭａｃ１（ＰＥ−Ｃｙ７）、Ｇｒ１（ＦＩＴＣ）、ＣＤ６２（ＡＰＣ）およびＣｘｃｒ４（ＰＥ）の発現によって、ならびにＢ２２０（ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ）、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１５、ＣＤ１１７、ＣＤ４９ｂおよびＦ４／８０（全てビオチン化、続いてＰａｃｉｆｉｃＯｒａｎｇｅに結合体化されたストレプトアビジンで検出）の発現の欠如によって同定した。細胞周期分析については、骨髄細胞を、最初にＨＳＣ細胞表面マーカー（Ｌｉｎｅａｇｅ−ＡＰＣ−Ｃｙ７、ｃ−Ｋｉｔ−ＡＰＣ、Ｓｃａ−１−ＰＥ−Ｃｙ７、ＣＤ４８−ＰＥおよびＣＤ１５０−ＰＥ−Ｃｙ５）に関して染色し、固定し、ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ  Ｋｉｔ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して透過性にし、Ｋｉ−６７−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で４５分間、４℃において染色し、続いて、ＤＡＰＩ（２ｐｇ／ｍＬ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でＤＮＡ染色した。アポトーシスに関しては、７−ＡＡＤおよびＡｎｎｅｘｉｎＶ−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）染色を、製造業者の説明書に従って使用した。
【０３９３】
間葉幹細胞を、ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−（ともにＰＥ−Ｃｙ７）ＢＭ細胞の中で、ＣＤ１０５（ＰＥ）、ＣＤ１４０（ＡＰＣ）、Ｓｃａ１（ＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ）およびＭｘ１（Ｒｏｓａ２６−ｌｏｘＰ−ｓｔｏｐ−ｌｏｘＰ−ＥＹＦＰ）の発現によって同定した（Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；  Ｍｏｒｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；  Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０３９４】
Ｍｘ１＋間葉細胞におけるＥｘｔ１欠失に際したヘパラン硫酸生成の評価を、抗ＨＳ抗体１０Ｅ４（Ｓｅｉｋａｇａｋｕ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、続いて、ＰＥ結合体化抗マウスＩｇＭとインキュベーションして製造業者の説明書に従って行った。
【０３９５】
全ての抗体を、別段示されなければ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄもしくはｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。
【０３９６】
全血球計算（ＣＢＣ）
【０３９７】
血球計算を、自動Ｖｅｔｓｃａｎ  ＨＭ２（Ａｂａｘｉｓ）で行った。
【０３９８】
コロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイ
【０３９９】
ＣＦＵアッセイを、以前に記載されるように行った（Ｆｅｒｒａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。等体積のＰＢ（実験に依存して５０〜２００ｊｕｌ）を、アンモニウム−塩化物−カリウム緩衝液での赤血球溶解に供し、４ｍｌのメソカルトＭ３４３４（Ｓｔｅｍ
Ｃｅｌｌ  Ｔｅｓｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に再懸濁し、３５ｍｍ培養ディッシュにプレートし（１ｍＬ／ディッシュ）、８日間にわわって３７℃で培養し、その後、コロニー形成についてスコア付けした。
【０４００】
マイクロＣＴ
【０４０１】
海綿骨および皮質骨の微小構造を、高分解能マイクロＣＴ（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ７ｊｍ，ｍｉｃｒｏＣＴ３５，ＳｃａｎｃｏＭｅｄｉｃａｌ  ＡＧ，Ｂａｓｓｅｒｓｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）によって大腿骨で分析した。骨を、エネルギーレベル５５ｋＶｐおよび強度１４５ｊＡでスキャンした。上記マイクロＣＴ３５を、Ｓｃａｎｃｏによって提供される模型を使用して、１週間に１回補正する。海綿骨密度（ｃａｎｃｅｌｌｏｕｓ  ｂｏｎｅ  ｖｏｌｕｍｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）および微小構造を、遠位大腿骨成長板から０．１５ｍｍ近位で出発して、近位３．２ｍｍまで拡げて二次海綿において評価した。約４６０の連続スライスを、成長板の遠位端において７ｊｍ間隔で近位方向に拡げて作製し、３００の連続スライスを分析用に選択した。最大グレースケール値の２９％での固定閾値を使用して、全てのサンプルで軟組織から骨を分離した。皮質領域についてのスキャンを、７ｊｍの等方ボクセルサイズで各大腿骨の中間点において測定した。中央骨幹分析に関しては、皮質殻（ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｓｈｅｌｌ）を、最大グレースケールの３５％でユーザー定義閾値によって輪郭を示し、全８６スライスを通じて反復した。全スキャンを、製造業者のソフトウェア（Ｓｃａｎｃｏ，バージョン４．０５）を使用して分析した。マウクロＣＴデータの取得および分析を、近年発表されたガイドライン（Ｂｏｕｘｓｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）に従って行った。
【０４０２】
骨組織形態測定
【０４０３】
コントロールおよび変異マウスに致命的に照射し、６週齢で１０６  ＢＭ細胞を移植した。Ｅｘｔ１欠失を、ｐＩｐＣ注射によって移植後３週間で誘発した。静的および動的組織形態計測測定値を、１２週齢で（ＢＭ移植の６週間後）変異マウスとコントロールマウスとの間で分析した。サンプル採取前に、マウスに７日間および２日間、それぞれ、２０ｍｇ／ｋｇ  カルセインおよびデメクロサイクリンをｉ．ｐ．注射した。脛骨を以前に記載されるように（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）分析し、パラメーターの記載については標準命名法を使用した（Ｄｅｍｐｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０４０４】
骨組織学
【０４０５】
組織学的準備および分析を、以前に記載されるように行った（Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。
【０４０６】
ＲＮＡ単離、定量的リアルタイムＰＣＲおよびマイクロアレイ遺伝子発現プロファイリングのために、Ｅｘｔ１−ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ−Ｍｘ１ｃｒｅ＋−Ｒｏｓａ−ＹＦＰ＋およびＥｘｔ１−ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ−Ｍｘ１ｃｒｅ＋−Ｒｏｓａ−ＹＦＰ＋マウスに由来するＹＦＰ＋ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−ＰＩ−（ヨウ化プロピジウム）細胞を、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の中へと直接ＦＡＣＳソートし、ｍＲＮＡを、製造業者の説明書に従って抽出した。ｃＤＮＡ合成を、ＲＥＴＲＯｓｃｒｉｐｔ逆転写キット（Ａｍｂｉｏｎ）で行った。リアルタイムＰＣＲを、ＳＹＢＲグリーン（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）技術を使用して製造業者の説明書に従って行った。本研究でのＳＹＢＲグリーンリアルタイムＰＣＲに使用したプライマーは、以前に公開されている（Ｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，２０１３；  Ｍｅｎｄｅｚ−Ｆｅｒｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；  Ｐｏｍｙｊｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；  Ｚｅｒｆａｏｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）（全て５’→３’）。
【０４０７】
【化１】
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【０４０８】
【化２】
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【０４０９】
【化３】
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【０４１０】
【化４】
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【０４１１】
【化５】
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【０４１２】
【化６】
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【０４１３】
マイクロアレイ分析のために、Ｇ−ＣＳＦのみでもしくはヘパリンと組み合わせて動員したマウスに由来するＰＢを、本文主要部に記載されるように集めた。単核細胞を、勾配遠心分離によって単離し、ＨＳＰＣマーカー（Ｌｉｎｅｇａｅ−、ｃ−ｋｉｔ＋、Ｓｃａ−１＋）に関して染色し、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へと直接ソートした。ＲＮＡを製造業者の説明書に従って抽出した。増幅されたｃＤＮＡを、ＮｕＧＥＮ  Ｏｖａｔｉｏｎ  Ｖ２増幅システムを使用して製造業者の説明書に従って総ＲＮＡから調製した。増幅されたｃＤＮＡを、Ｚｙｍｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＤＮＡ  Ｃｌｅａｎ＆Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒシステムを使用して精製した。精製したｃＤＮＡを、製造業者の説明書に従って、Ｍｏｕｓｅ４３０Ａマイクロアレイにハイブリダイズさせた。Ｎｅｘｕｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖ２．０（Ｂｉｏｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用してデータを分析した。低分散、低強度および偽発見率（ＦＤＲ）補正を、データ分析のために適用した。
【０４１４】
ウェスタンブロッティング
【０４１５】
Ｅｘｔ１−ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ−Ｍｘ１ｃｒｅ＋−Ｒｏｓａ−ＹＦＰ＋およびＥｘｔ１−ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ−Ｍｘ１ｃｒｅ＋−Ｒｏｓａ−ＹＦＰ＋マウスに由来するＹＦＰ＋ＣＤ４５−Ｔｅｒ１１９−ＰＩ−（ヨウ化プロピジニウム）細胞を、ＦＡＣＳソートし、リボヌクレオシドおよびデオキシリボヌクレオシドなしの、２０％  ＦＢＳ、２．２ｇ／Ｌ  炭酸水素ナトリウムおよび２．５ｍＬの２−メルカプトエタノール（１００×、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＥＳ−００７−Ｅ）を補充したα−ＭＥＭ培地中で１０日間にわたってエキソビボで増殖させた。細胞を、プロテアーゼインヒビターおよびホスファターゼインヒビター（１０ｍＭ  ＮａＦ、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４および１×プロテアーゼカクテル（Ｒｏｃｈｅ））を補充したＲＩＰＡ緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）中で溶解した。タンパク質抽出物（２０ｊｕｇ）を、１２．５％  ポリアクリルアミドゲルでＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ニトロセルロース膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）上にイムノブロットし、標準プロトコルを使用してケミルミネッセンスによって可視化した。以下の抗体を使用した：抗Ｅｘｔ１（Ｓｉｇｍａ，ｗｈ０００２１３１ｍｌ）および抗ウサギＧａｐｄｈ（ａｂｃａｍ，ａｂ９４８５）。フィルムをスキャンし、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ）を使用してデンシトメトリー測定を行った。Ｅｘｔ１バンドの光学密度を、Ｇａｐｄｈの光学密度に対して正規化した。Ｅｘｔ１タンパク質のレベルを、Ｇａｐｄｈのレベルに対してその光学密度の比として表した。
【表Ｂ−１】
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【表Ｂ−２】
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【表Ｂ−３】
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【表Ｂ−４】
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【表Ｂ−５】
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【表Ｂ−６】
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【表Ｂ−７】
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【０４１６】
同定される全ての特許および他の刊行物は、例えば、本開示と関連して使用され得るこのような刊行物中に記載される方法論を記載および開示する目的で、本明細書に明示的に参考として援用される。これら刊行物は、本願の出願日より前のそれらの開示に関してのみ提供される。本発明者らは、この点に関しては何も、先行発明によってもしくは何らかの他の理由でこのような開示に先行する権利がないという自白として解釈されるべきではない。日付に関する全ての主張もしくはこれら文書の内容に関する表示は、出願人に利用可能な情報に基づき、これら文書の日付もしくは内容の正確さに関して何ら自白を構成するものではない。
【０４１７】
本発明の多くの改変および代替の実施形態は、前述の説明に鑑みて当業者に明らかである。よって、この説明は、本発明を実施するための最良の実施態様を当業者に教示する目的である。構造の詳細は、本発明の趣旨から逸脱することなく実質的に変化し得、添付の特許請求の範囲内にある全ての改変の専用は、留保される。本明細書内で、明確かつ正確な仕様が記載され得る方法で実施形態が記載されてきたが、本発明から離れることなく実施形態が種々に組み合わされ得るかもしくは分けられ得ることは、意図されかつ認識される。本発明が添付の特許請求の範囲および適用法令によって求められる範囲までに制限されるのみであることが意図される。
【０４１８】
以下の特許請求の範囲は、本明細書で記載される発明の全ての包括的なおよび具体的な特徴、ならびに文言としてそれらの間に入るといわれ得る本発明の範囲の全ての主張を網羅するものとすることもまた、理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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