(57)【要約】【課題】  ポルフィランによる高い免疫賦活作用や保湿作用を保持すると同時に、皮膚に塗布した際のベトつきや異物感を低減した化粧料の原材料となるポルフィランの製造方法を提供する。【解決手段】  原材料である海苔を、１００℃〜１５０℃および０．１ＭＰａ以上１．０ＭＰａ未満の加圧条件下の熱水処理で抽出する分子量１００万以上６００万以下の範囲に分子量分布の最大ピークを有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
原材料である海苔を、
１００℃〜１５０℃および０．１ＭＰａ以上１．０ＭＰａ未満の加圧条件下の熱水処理で抽出する
分子量１００万以上６００万以下の範囲に分子量分布の最大ピークを有するポルフィランの製造方法。
【請求項２】
前記熱水処理は、アンモニア濃度１０−６〜１０−５ＭおよびｐＨ８〜９のアルカリ条件下で行われる請求項１に記載のポルフィランの製造方法。
【請求項３】
請求項１または２記載の製造方法で製造されたポルフィランを、０．０１質量％以上５質量％以下の濃度で、水を主成分とする溶媒に溶解したポルフィラン溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポルフィランの製造方法およびその溶液に関し、具体的には免疫賦活作用、保湿作用などにより皮膚および頭皮を生理的に健全化し、皮膚および毛髪の状態を改善する肌用化粧料に使用されるポルフィランの製造方法及びその溶液に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アマノリ属海藻類から得られる硫酸多糖類の一種であるポルフィランを配合した化粧料により、免疫賦活作用、保湿作用などにより皮膚、頭皮および毛髪を生理的に健全化し、皮膚および毛髪の状態を改善することが知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
また、セラミド産生促進剤としてポルフィランを含む海藻抽出物０．１〜３０質量％と、細胞間脂質及び／又はその類縁物質０．００１〜５質量％とを含有する皮膚外用剤により、ポルフィラン単独使用の場合と比べ、優れた保湿効果及び肌荒れ改善効果を奏すること、及びこれらの効果は比較的少ないポルフィラン添加量で得られることが知られている（例えば、特許文献２参照）。
【０００４】
また、ポルフィランを化粧品パックの主材として用いることにより、水溶性が高く、透明性に優れ、皮膚との密着性が高く、肌の一部に貼付させて伸展した場合に、透明性が優れた皮膚になじむ違和感の少ない極薄膜を皮膚表面に形成するために剥離する必要もなく、また洗い流す必要もない化粧パックも提案されている（例えば、特許文献３参照）
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−３３６１４８号公報
【特許文献２】特開２０１３−１３３３２４号公報
【特許文献３】特開２００８−２５５０６６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、ポルフィランを配合した化粧料にあっては、皮膚に塗布した際にベトついたり、繊維質のような異物感を覚えたりするという課題があった。そこで、水や油剤でベトつきや異物感を覚えない程度に希釈すると、こんどは所期の保湿作用や免疫賦活作用が得られないものとなった。
【０００７】
そこで本発明は、ポルフィランによる高い免疫賦活作用や保湿作用を保持すると同時に、皮膚に塗布した際のベトつきや異物感を低減した化粧料およびその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するにあたり、本発明者らは、比較的低分子量のポルフィランが、皮膚に塗布した際のベトつきや異物感の要因であることを見出した。
【０００９】
すなわち、比較的高分子量のポルフィランを添加することにより、少ない添加量で、所期の保湿作用や免疫賦活作用を得られるので、化粧料として皮膚に塗布した際のベトつきや異物感を低減できるものである。
【００１０】
また、本発明者らは、比較的高分子量のポルフィランを得るためには、原材料である海苔の、熱水処理による抽出時に、１００℃〜１５０℃の加熱および０．１〜１．０ＭＰａの加圧をすることにより、比較的高分子量のポルフィランの分解を最小限に止めることができ、抽出操作の簡略化、短縮化ができることを見出した。
【００１１】
本発明に係るポルフィランの製造方法は、原材料である海苔を、１００℃〜１５０℃および０．１ＭＰａ以上１．０ＭＰａ未満の加圧条件下の熱水処理で抽出する
分子量１００万以上６００万以下の範囲に分子量分布の最大ピークを有することを特徴とする。また、本発明にかかるポルフィラン溶液は、前記製造方法で製造されたポルフィランを、０．０１質量％以上５質量％以下の濃度で、水を主成分とする溶媒に溶解したことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、ポルフィランによる高い免疫賦活作用や保湿作用を保持すると同時に、皮膚に塗布した際のベトつきや異物感を低減した化粧料の原料となるポルフィランの製造方法およびその溶液を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１ａはポルフィランを培地として培養した繊維芽細胞の顕微鏡写真であり、図１ｂは市販の培養皿を培地として培養した繊維芽細胞の顕微鏡写真である。
【図２】図２ａはアガロースを培地として培養したマウス皮膚細胞の顕微鏡写真であり、図２ｂはカラギーナンを培地として培養したマウス皮膚細胞の顕微鏡写真であり、図２ｃはポルフィランを培地として培養したマウス皮膚細胞の顕微鏡写真であり、図２ｄは市販の培養皿を培地として培養したマウス皮膚細胞の顕微鏡写真である。
【図３】図３は、本発明の化粧料に使用されるポルフィランをＧＰＣを用いて測定して得られた分子量分布曲線の一例である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
ポルフィランはアマノリ属に属する海藻である海苔に含まれるガラクトース及びガラクトース誘導体を構成成分とする粘性多糖類で、硫酸基を有するために高分子であっても水溶性である。ポルフィランは海苔を熱水処理することにより抽出される。該抽出液を活性炭、珪藻土で処理し、脱色、脱臭後濃縮して、アルコール類添加による沈殿粉末化、噴霧乾燥、ドラム乾燥機による乾燥、凍結乾燥などにより粉末化して調製される。また、さらに濃縮液をイオン交換樹脂、イオン交換膜を通して脱塩後、新たに苛性ソーダ、苛性カリ、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウムなどアルカリ、またアルギニン、オルニチン、ヒスチヂンなどの塩基性アミノ酸で中和して単一塩とし、改質したポルフィランとして調製することもでき、その詳細は特開２００５−２５５９３２号公報や特開２００８−２５５０６６号公報に記載されている。
【００１５】
熱水処理により抽出された後、アルカリ処理された、従来技術に係るポルフィランの平均分子量は約１５万〜２０万であり、分子量分布の最大ピークも約１５万〜２０万付近となる。一方、本発明に係るポルフィランは、１００万以上６００万以下の範囲に分子量分布の最大ピークが存在するものであり、平均分子量も１００万以上となる。すなわち、分子量分布の最大ピークが１００万を下回ると、保湿効果および細胞賦活性が低下し、ポルフィランの含有量を増量しなければならず、その結果、塗布時のベタつきや繊維質の異物感が生じる。
【００１６】
このような高分子量のポルフィランを調整するためには、原材料である海苔に対する熱水処理による抽出時に、１００℃〜１５０℃、０．１〜１．０ＭＰａの加圧をする。このような条件下とすることにより、高分子量のポルフィランを抽出することが可能であると同時に、抽出された高分子量ポルフィランの分解を最小限に止めることができ、抽出操作の簡略化、短縮化ができる。
【００１７】
好ましくは前記熱水処理は、アンモニア濃度１０−６〜１０−５Ｍ、ｐＨ８〜９のアルカリ条件下で行われる。
【００１８】
ここで、本発明の化粧料に使用されるポルフィランの分子量分布は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）を用いて、例えば以下の条件で測定される。
測定装置  ：東ソー（株）製ＣＣＰＤ
カラム    ：ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ５０００ＰＷ〔東ソー（株）製〕ｌ２本
測定温度  ：３０℃
試料溶液  ：０．１ｍｍリン酸緩衝液溶液
溶液注入量：１００μｌ
検出装置  ：紫外可視分光検出器ＵＶ８０００（検出波長２１０ｎｍ）および屈折率検出器ＲＩ８０００
基準物質  ：ファルマシア製デキストラン
【００１９】
より好ましくは、本発明の化粧料には、分子量１００万以上の成分の割合が５０質量％以上含まれるポルフィランが使用される。分子量１００万以上の成分の割合が５０質量％以上含まれることにより、高い保湿効果および細胞賦活性が担保される。分子量１００万以上の成分の割合は、上記のＧＰＣで得られる分子量分布曲線の面積から算出される。
【００２０】
図３は、本発明の化粧料に使用されるポルフィランを、上記ＧＰＣを用いて測定して得られた分子量分布曲線の一例である。同図において、分子量分布ピークは２００万であり、分子量１００万以上の割合は５１％となっており、分子量１００万〜６００万の割合は３２％となっている。
【００２１】
本発明化粧料は、ポルフィランを必須成分として含有するが、その含有量は固形分として下限０．００１質量％以上であることが望ましい。それ以下の濃度では本発明の効果が十分に発揮されないことがある。また上限については、ポルフィランが粘性を有するものなので、塗布時のベタつきや繊維質の異物感が生じないようにするためには、感触的な評価として０．５質量％以下であることが好ましい。
【００２２】
化粧料の作製において、本発明に係るポルフィランは、予め水を主成分とする溶媒に溶解された溶液（以下、化粧料原液ともいう）の状態で化粧料に添加されて、所期の固形分含有量に調整するのが好ましい。化粧料原液の濃度は、当該化粧料原液の添加された化粧料において、本発明の効果を発揮できるポルフィランの含有量となる濃度ならば特に制限はないが、本発明に係るポルフィランの分子量は比較的大きく、同量の低分子量ポルフィランが溶解した水溶液よりも高粘度となる傾向があるため、化粧料原液の作製や添加における取扱性を考慮した濃度（たとえば０．０１質量％以上５質量％以下）とすることが好ましい。好ましくは、０．１質量％以上０．８質量％以下である。
【００２３】
また、本発明の化粧料には、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種成分、例えば、油剤、粉体、非イオン性界面活性剤以外の界面活性剤、粘剤、樹脂、アミノ酸類、糖類、有機系紫外線吸収剤、天然系の植物抽出成分、溶媒、防腐剤、金属イオン封鎖剤、抗炎症成分、薬効成分等を適宜配合することができる。これらのその他の成分は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。また、化粧料中のその他の成分の含有量は、本発明の効果を損なわない範囲内で、適宜選択することができる。
【００２４】
油剤としては、通常皮膚外用剤に用いられる揮発性及び不揮発性の油剤、溶剤、樹脂等が挙げられ、常温で液体、ペースト、固体のいずれであっても構わない。油剤の例としては、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、イソステアリン酸、ウンデシレン酸等の脂肪酸、グリセリン、ジグリセリン、ソルビトール、エチレングリコール、ジプロピレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ペンタンジオール、イソプロピレングリコール等の多価アルコール、モノステアリン酸グリセリン、トリオクタン酸グリセリル、トリ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリル、フタル酸ジエチル、モノステアリン酸エチレングリコール、オキシステアリン酸オクチル、リンゴ酸ジイソステアリル等のエステル類、流動パラフィン、パラフィン、ワセリン、スクワラン等の炭化水素、ミンク油、カカオ脂、ヤシ油、パーム油、ツバキ油、ゴマ油、マカデミアナッツ油、メドウホーム油、ホホバ油、ヒマシ油、オリーブ油等の油脂及び植物油等が挙げられる。
【００２５】
粉体の例としては、赤色１０４号、赤色１０２号、赤色２２６号、赤色２０１号、赤色２０２号、黄色４号、青色１号、黒色４０１号の色素、黄色４号アルミニウムレーキ、黄色５号アルミニウムレーキ、黄色２０３号バリウムレーキ等のレーキ色素、ナイロンパウダー、シルクパウダー、ウレタンパウダー、テフロン（登録商標）パウダー、シリコーンパウダー、セルロースパウダー、酸化亜鉛、酸化チタン、酸化セリウム等の白色顔料、タルク、マイカ、セリサイト、カオリン、シリカ、アルミナ等の無機粉体、ベントナイト、スメクタイト、窒化ホウ素、微粒子酸化チタン、微粒子酸化亜鉛等が挙げられ、またこれらに従来公知の表面処理、例えば、Ｎ−アシル化リジン処理、アミノ酸処理、親水性高分子処理、油剤処理、シリコーン処理、金属石鹸処理、無機化合物処理、プラズマ処理、メカノケミカル処理等を施したものを使用することも可能である。これらの粉体形状（球状、棒状、針状、板状、不定形状、燐片状、紡錘状等）にも特に制限は無い。粉体の大きさとしては、５ｎｍ〜１００μｍの範囲に入るものが好ましく、さらに好ましくは１０ｎｍ〜２５μｍである。これらの粉体は単独で処理しても、混合物を形成し、それらをまとめて処理しても構わない。また、混合物の色を肌色等に調整したものを処理することも可能である。さらに微粒子酸化チタン、微粒子酸化亜鉛等の紫外線散乱成分を使用することで紫外線防御機能を有する処理粉体とすることも可能である。
【００２６】
非イオン性界面活性剤以外の界面活性剤としては、例えばアニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤を用いることができる。より詳しくは、脂肪酸石鹸、α−アシルスルホン酸塩、Ｎ−アシルアミノ酸、Ｎ−アシルタウリン塩、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキルアリルスルホン酸塩、アルキルナフタレンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルエーテル硫酸塩、アルキルアミド硫酸塩、アルキルリン酸塩、アルキルアミドリン酸塩、アルキロイルアルキルタウリン塩、スルホコハク酸塩、パーフルオロアルキルリン酸エステル等のアニオン性界面活性剤、塩化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化アウテアリルトリメチルエンモニウム、臭化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化セトステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ジステアリルジメチルアンモニウム、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム、臭化ベヘニルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤、カルボキシベタイン型、スルホベタイン型、ヒドロキシスルホベタイン型、アミドスルホベタイン型、ホスホベタイン型、アミノカルボン酸塩型、イミダゾリン誘導体型、アミドアミン型等の両性界面活性剤が挙げられる。
【００２７】
粘剤、樹脂の例としては、ポリアクリル酸ナトリウム、セルロースエーテル、アルギン酸塩、カルボキシビニルポリマー、プルラン、デオキシリボ核酸及びその塩、コンドロイチン硫酸等の酸性ムコ多糖類及びその塩、タマリンド種子多糖、チューベロース多糖、寒天、キサンタンガム、カラギーナン、ハイメトキシルペクチン、ローメトキシルペクチン、グアーガム、アラビアゴム、ローカストビーンガム、結晶セルロース、アラビノガラクタン、カラヤガム、トラガカントガム、アルギン酸、ヒアルロン酸及びその塩、アルブミン、カゼイン、カードラン、ジェランガム、デキストリン、シクロデキストリン、デキストラン、セルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等が挙げられる。
【００２８】
アミノ酸類としては、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−ロイシン、Ｌ−セリン、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、Ｌ−スレオニン、ＤＬ−アラニン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−チロシン、塩酸Ｌ−ヒスチジン、塩酸リジン、グリシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グタミン酸、ＰＣＡナトリウム、トリメチルグリシン、γ−ポリグルタミン酸等が挙げられる。
【００２９】
糖類としては、ガラクトース、マンノース、マルトース、フルクトース、スクロース、キシロース、ソルビトール、キシトール、マンニトール等が挙げられる。
【００３０】
有機系紫外線吸収剤の例としては、パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−硫酸、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、ｐ−メトキシハイドロケイ皮酸  ジエタノールアミン塩、パラアミノ安息香酸（以後、ＰＡＢＡと略す）、オクチルジメチルＰＡＢＡ、サリチル酸オクチル、２−フェニル−ベンズイミダゾール−５−硫酸、サリチル酸トリエタノールアミン、３−（４−メチルベンジリデン）カンフル、２，４−ジヒドロキシベンゾフェニン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４，４’−ジメトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−Ｎ−オクトキシベンゾフェノン、４−イソプロピルジベンゾイルメタン、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、４−（３，４−ジメトキシフェニルメチレン）−２，５−ジオキソ−１−イミダゾリジンプロピオン酸２−エチルヘキシル等が挙げられる。
【００３１】
天然系の植物抽出成分の例としては、アシタバエキス、アボガドエキス、アマチャエキス、アルテアエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アンズエキス、アンズ核エキス、イチョウエキス、ウイキョウエキス、ウコンエキス、ウーロン茶エキス、エイジツエキス、エチナシ葉エキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オオムギエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オランダカラシエキス、オリーブリーフエキス、オレンジエキス、海水乾燥物、（ポルフィランを含む海藻抽出物以外の）海藻エキス、加水分解エラスチン、加水分解コムギ末、加水分解シルク、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、甘草エキス、カルカデエキス、カキョクエキス、キウイエキス、キナエキス、キューカンバーエキス、グアノシン、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、クレマティスエキス、クロレラエキス、クワエキス、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、酵母エキス、ゴボウエキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コンフリーエキス、コラーゲン、コケモモエキス、サイシンエキス、サイコエキス、サイタイ抽出液、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、茶エキス、チョウジエキス、チガヤエキス、チンピエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、蜂蜜、ハマメリスエキス、パリエタリアエキス、ヒキオコシエキス、ビサボロール、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、プロポリス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、リンゴエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス等が挙げられる。
【００３２】
溶媒の例としては、精製水、エタノール、低級アルコール、エーテル類、ＬＰＧ、フルオロアルコール、揮発性直鎖状シリコーン、次世代フロン等が挙げられる。
【００３３】
防腐剤の例としては、安息香酸、安息香酸ナトリウム、ウンデシレン酸、サリチル酸、テヒドロ酢酸又はその塩、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸イソプロピル、パラオキシ安息香酸ベンジル等の有機酸及びその誘導体、イソプロピルメチルフェノール、グルコン酸クロルヘキシジン、チモール、パラクロロフェノール、フェニルエチルアルコール、フェニルフェノール、フェニルフェノールナトリウム、フェノキシエタノール、フェノキシジグリコール、フェノール、ベンジルアルコール等のフェノール類、塩化ステアリルトリメチルエンモニウム、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルベンゼトニウム、塩化ラウリルメチルアンモニウム、臭化アルキルイソキノリウム、臭化ドミフェン等の４級アンモニウム塩、茶エキス、ヒノキチオール、リンゴエキス、ローズマリーエキス等の植物抽出液、また、クロラミンＴ、クロルヘキシジン、ジンクピリチオン等が挙げられる。中でも、１，３−ブチレングリコール、ヘベニルアルコール、ローズ水、ローズマリーエキス、茶エキスが好ましい。
【００３４】
金属イオン封鎖剤としては、エチレンジアミン４酢酸２ナトリウム、エデト酸、エデト酸２ナトリウム、エチドロン酸等が挙げられる。
【００３５】
抗炎症成分としては、カンゾウ葉エキス、ハマメリス水、グリチルリチン酸ジカリウム、アラントイン、酢酸トコフェロール、トコフェロール、アズレン等が挙げられる。中でもカンゾウ葉エキス、ハマメリス水が好ましい。
【００３６】
薬効成分としては、ビタミンＡ油、レチノール、リボフラビン、ピリドキシン塩酸塩、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸リン酸マグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、パントテン酸塩、ビタミンＤ２、コレカルシフェロール等が挙げられる。
【００３７】
本発明の化粧料は、常法に従って、可溶化系、乳化系、粉末分散可溶化系、粉末分散乳化系、粉末分散油系などの任意の剤型に製造できる。なお、本発明の化粧料は、ｐＨ２〜１１、特にｐＨ３〜９に調整することが好ましい。本発明の化粧料は、化粧水、乳液、クリーム、化粧油等のスキンケア製品をはじめ、ファンデーション、パウダー、口紅、頬紅、アイシャドウ、ネイルエナメル等のメークアップ化粧料、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の形態の入浴剤などの製品として、好適に使用可能である。
【００３８】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例】
【００３９】
（ポルフィランの調整）
（１）風乾した九州有明産海苔１ｋｇを、沸騰した１０ｋｇの６×１０−６Mのアンモニアを含む脱イオン水に懸濁し、オートクレーブ処理（１１０℃、３０分）を行った。次にキッチンペーパーを用いた吸引濾過と遠心分離（８０００ｒｐｍ、４０分）によって残渣を完全に除去し、ろ液分をアスピレーターによってアンモニアを除去し、更に減圧（１mmHg／３０℃）で濃縮した。タンパク質除去の場合は陽イオン交換樹脂カラムへ通す操作を行なった。次いで、濾液をエバポレーターで濃縮し、透析チューブで５日間透析した。
【００４０】
（２）工程（１）で得られたポルフィラン溶液をエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥によって白色の精製物（ポルフィラン）を得た。精製物の収率は重量換算で１４．３％だった。この工程で得られたポルフィランを、ＨＰＬＣにより分子量分布を測定したところ、分子量４８８万に最大ピークを有することが確認できた。
また、工程（１）のオートクレーブ処理で使用するアンモニアの濃度を変化させることにより、それぞれ分子量１２０万、２００万、６００万に最大ピークを有する４種類のポルフィランを調整した。
【００４１】
（比較ポルフィランの調整）
（３）風乾した九州有明産海苔１ｋｇを、沸騰した１０ｋｇの０．１Mのアンモニアを含む脱イオン水に懸濁し、オートクレーブ処理（１００℃、３０分）を行った以外は、上記の工程（１）および工程（２）と同じ処理を行い、分子量１０万に最大ピークを有するポルフィランを調整した。
（４）工程（２）で得られたポルフィランを脱イオン水で溶解した１．５％ポルフィラン溶液をダイアイオンＰＫ２１６(０．５Ｌ)カラムに通塔した。次いで、ダイアイオンＰＡ４１２（１Ｌ）カラムに通塔し、流速３．５Ｌ／ｈｒで流し、次いで脱イオン水３Ｌを通塔し、固形分濃度が０になるまで通塔液を採取した。通塔液は、３０％ＮａＯＨ、又は１０％遊離アルギニン液にてｐＨ６．５に中和し、ポルフィランＮａ塩液、ポルフィランアルギニン塩液を得た。本溶液に珪藻土を加え、濾別してポルフィランＮａ塩液、ポルフィランアルギニン塩液とした。
【００４２】
（５）工程（４）で得られたポルフィランＮａ塩溶液を濃縮して３％ポルフィラン水溶液を得た。本溶液を硫酸でｐＨ４．０に調整し、５５℃で０〜７０分放置後、苛性ソーダで再びｐＨ６．５に中和することにより分子量の低下したポルフィラン低分子溶液（分子量分布の最大ピーク約２０万）を得た。同様に、工程（４）で得られたポルフィランアルギニン塩液からも低分子ポルフィラン溶液（分子量分布の最大ピーク約４０万）を得た。
【００４３】
（細胞賦活性の確認）
繊維芽細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）を播種密度８００００個／ｃｍ２で培地に展開し，インキューベータ内（３７℃、０．５％ＣＯ２雰囲気、相対湿度１００％）で７２時間培養した後、蛍光染色（ジメチルアミノフェニル、ローダミン色素）を行い、表面の細胞を顕微鏡にて観測した。繊維芽細胞の培地としては、工程（２）で得られたポルフィラン（分子量ピーク４８８万）の０．０３質量％水溶液を、テトラメチレンジグリシジルエーテル（ＴＧＤＥ）でガラス基板に固定し、中性になるまで水洗浄した試料を利用した。市販の培養皿（図１ｂ）に比べて、工程（２）で得られたポルフィランを培地とした試料は遜色ない繊維芽細胞の密度（図１ａ）となった。
【００４４】
マウス皮膚細胞を培地に展開し，インキューベータ内（３７℃、０．５％ＣＯ２雰囲気、相対湿度１００％）で７２時間培養した後、細胞核を蛍光染色するＤＡＰＩ（４’，６−ｄｉａｍｉｄｉｎｏ−２−ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ）と、細胞のアクチン成分を染色するローダミンで染色し、表面の細胞を顕微鏡にて観測した。マウス皮膚細胞の培地としては、工程（２）で得られたポルフィラン（分子量ピーク４８８万）、カラギーナン、アガロース、それぞれの０．０３質量％水溶液を、テトラメチレンジグリシジルエーテル（ＴＧＤＥ）でガラス基板に固定し、中性になるまで水洗浄した試料を使用した。アガロース培地（図２ａ）では皮膚培養の増殖はほぼ見られなかった。一方、カラギーナン（図２ｂ）、ポルフィラン（図２ｃ）では、皮膚細胞の増殖が観測され、特にポルフィランでは、市販の培養皿（図２ｄ）と同等レベルの単位面積あたりの細胞核（図中の白色点部）の数を確認でき、アクチン部位（図中の灰色部）も高密度で増殖している事がわかった。
【００４５】
（美容液を用いたパネルテスト）
普段から何らかの原因で肌荒れや肌の乾燥感を訴える女性１０名（２５〜５０歳）を対象に、化粧料を実際に使用させ、塗布時のベタつき感、塗布時の異物感、保湿効果（保湿作用）及び肌荒れ改善効果（細胞賦活性）を検討した。被験者には、毎日肌の状態を観察しながら、１日１回、洗顔による角質除去後に、下記処方例で調製した表１〜２に示す美容液（実施例１〜６、比較例７〜１１）を適量塗布させた。塗布は一ヶ月間継続させ、試験開始時及び試験終了時の肌状態を比較し、下記項目について評価させた。
【００４６】
評価項目は、「塗布時のベタつきがない」「塗布後に繊維質が残らない」「乾燥肌がしっとりした」、「キメが細かくなった」、「肌のツヤがよくなった」「保湿度」の５項目である。試験結果は、表中に、１０名中何名が各項目について改善したと回答したかで示す。また、保湿度は、試験開始時および試験終了時に市販の保湿チェッカーを用いて測定して、試験開始時に比べて試験終了時の保湿度が５％以上向上した人数で示す。
【００４７】
【表１】
2020114932.tif 000002
【００４８】
【表２】
2020114932.tif 000003
【００４９】
表１〜表２の結果から、分子量分布の最大ピークが２０万または４０万のポルフィランを用いた比較例８〜１１においては、ポルフィランを含まない比較例７と比べて、保湿作用及び細胞賦活性の効果を発揮するためには、含有量を多くしなければならず、ベタつきや繊維質の異物感が生じてしまい、ベタつきや異物感の低減された含有量では、十分な保湿効果や細胞賦活性の効果が得られなかった。
【００５０】
一方、分子量分布の最大ピークが、分子量１００万以上６００万以下の範囲にあるポルフィランを用いた実施例１〜６においては、少ない含有量でも十分な保湿作用および細胞賦活性を有し、使用感も良好であった。特に、分子量１００万以上の成分の割合が９０質量％であるポルフィランを含有した実施例５および６では、ポルフィランの含有量をさらに低減しても十分な保湿作用および細胞賦活性を有し、使用感はさらに向上することが認められた。
【００５１】
実施例１〜６の美容液の作製において、化粧料原液として使用したポルフィランの３質量％溶液に代えて、実施例１〜６で使用したポルフィランと同一のポルフィランの０．２０質量％溶液を化粧料原液として使用し、その添加量を３質量％とした実施例２１〜２６の美容液で使用性評価を行ったところ、実施例１〜６と同等の結果が得られた。
【００５２】
（各種製剤の製造）
本発明に係る化粧料を各種製造した。以下にその処方例を示すが、本発明はこれらに限定されない。
【００５３】
化粧水の製造例。次の処方により化粧水を製造した。
質量％
１．ポルフィラン３％溶液          １０．０ 
２．１.２−ペンタンジオール         １．０
３．１，３−ブチレングリコール      １．５ 
４．オウゴンエキス                  ５．０
５．ダイズ発酵エキス                ２．０
６．ローヤルゼリーエキス            ５．０
７．精製水                          １００とする残余量
【００５４】
クリームの製造例。次の処方によりクリームを製造した。
質量％
１．ポルフィラン３％溶液          １０．０
２．ローズ水                        ３．０
３．ステアリン酸                    ８．０
４．ハマメリス水                    ２．０
５．アラントイン                    ０．５
６．ソルビット液                    ３．５
７．尿素                            ３．０
８．１，３−ブチレングリコール      １．５
９．ヤシ油脂肪酸                    ２．０
１０．ステアリン酸グリセリル        ２．０
１１．ベヘニルアルコール            ５．０
１２．天然ビタミンＥ             
０．０５
１３．精製水                        １００とする残余量
【００５５】
シャンプーの製造例。次の処方によりシャンプーを製造した。
質量％
１．ポルフィラン３％溶液                  ２．５
２．ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン    ８．０
３．ヤシ油脂肪酸ジエタノミール            ９．５
４．塩化Ｏヒドロキシエチルセルロース      ５．０
５．ホホバ油                              ２．０
６．パラオキシン安息香化エスチル          ２．２
７．香料                                  ０．１
８．精製水                                １００とする残余量
【図１】
2020114932.tif 000004
【図２】
2020114932.tif 000005
【図３】
2020114932.tif 000006