(57)【要約】【課題】がんまたは感染を処置するための組合せ調製物の提供。【解決手段】（ａ）ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体；および（ｂ）プログラム細胞死タンパク質−１（ＰＤ−１）経路阻害剤を含む、組合せ調製物および医薬組成物が記載される。ＰＤ−１経路阻害剤、例えば抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体、およびＡＰＣ活性化因子として作用するＬＡＧ−３の可溶性誘導体は、Ｔ細胞（特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を一緒に相乗的に活性化する。組合せ調製物および組成物の医薬としての、特にがんまたは感染の処置のための使用、およびがんまたは感染の処置のための方法が記載される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組合せ調製物および医薬組成物、ならびに医薬としての、特にがんまたは感染症の治療のためのそれらの使用、ならびにがんまたは感染症の治療のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
胸腺から出ると、ナイーブＴ細胞はリンパ節を通して血液中を循環し、特異的抗原提示細胞（ＡＰＣ）、典型的には樹状細胞によって提示される外来の（「非自己」）抗原を探索する。Ｔ細胞は、病原体関連抗原だけでなく異常に発現された自己タンパク質−変異または形質転換した腫瘍形成性細胞を示す−も「非自己」と認識することができる。Ｔ細胞が適当な共刺激分子の脈絡でそれらの特異抗原に遭遇する場合、細胞は活性化され、活性化およびホーミング分子を上方制御する。エフェクターＴ細胞と命名されるこれらのＴ細胞は、感染細胞またはがん性細胞を捜しに炎症を起こした組織に入ることができる。数ある機能の中でも、エフェクターＴ細胞は炎症性サイトカインおよび／または細胞溶解性顆粒を生成することができ、感染細胞または腫瘍細胞のアポトーシスまたは壊死に導くことができる。
【０００３】
免疫応答の期間全体で、局所および全身性の下方制御力は、健康な細胞および組織への損傷を最小にする。これらは、免疫抑制サイトカイン、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および他の細胞からの負のシグナル伝達を含むことができる。腫瘍抗原特異的Ｔ細胞は障害のあるエフェクター機能、ならびに炎症誘発性サイトカインの生成の減少および抗原性再刺激への低応答性によって特徴付けられる疲弊した表現型を示す。これは、細胞外部の機構、例えば制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、および細胞固有の機構、例えば疲弊した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）で上方制御される阻害分子によって媒介される。
【０００４】
免疫チェックポイント経路は、発生期のＴ細胞応答を抑制し、正常組織に対する免疫攻撃の可能性を低減する目的で、Ｔ細胞活性化を強く下方制御する。しかし、腫瘍形成の間、がん細胞は、適応免疫系による検出に抵抗するかそれによる排除を回避するために、これらの共阻害経路を活用することができる。プログラム細胞死タンパク質−１（ＰＤ−１）は、活性化の結果Ｔ細胞によって発現される欠くことのできないチェックポイント分子である。ＰＤ−１チェックポイント経路は、継続する免疫応答を弱めおよび／または自己組織への損傷を防止するために、主に末梢組織で作用すると考えられる。ＰＤ−１は、Ｔ細胞に加えて、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞および活性化単球によって発現される。ＰＤ−１リガンド−中でもＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を含む−は、マクロファージおよび単球によって発現され、これらは炎症環境内の多数の細胞型で誘導することができる。
【０００５】
免疫攻撃を回避する１つの方法として、ＰＤ−１のリガンド、主にＰＤ−Ｌ１を発現する非免疫細胞の能力が腫瘍によって活用される。腫瘍細胞も、検出を回避するために抗原発現を下方制御することができる。さらに、免疫抑制メディエーターの生成および腫瘍微小環境中のＴｒｅｇおよび免疫サプレッサー細胞の保持は、抗腫瘍免疫応答を弱めることができる。
【０００６】
図１（Harvey、Clinical  Pharmacology  &  Therapeutics、２０１４年、９６巻（２号）２１４〜２２３頁からとる）は、腫瘍免疫回避におけるＰＤ−１経路の役割およびＰＤ−１経路遮断の作用機構を表す：（ａ）Ｔ細胞活性化におけるＰＤ−１。Ｔ細胞は、以下によって活性化される（ｉ）ＡＰＣ上のＭＨＣとペプチドのＴＣＲへの結合、次に（ｉｉ）ＡＰＣ  ＣＤ８０／８６のＴ細胞ＣＤ２８への結合。がん患者では、腫瘍細胞はＡＰＣの役割をすることもできる。Ｔ細胞活性化の結果、ＰＤ−１発現が誘導される；（ｂ）Ｔ細胞疲弊におけるＰＤ−１。慢性感染または持続的刺激の状況では、健康な組織への損傷を最小にするためにＰＤ−Ｌ１はＴ細胞ＰＤ−１を通してＴ細胞を「遮断する（turn  off）」ようにシグナル伝達する（活性化シグナル伝達をブロックする）。腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１を上方制御して該細胞を破壊し得るＴ細胞を「遮断する」ことができる。（ｃ）ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達経路のブロックにより、Ｔ細胞がそれらのエフェクター機能を維持することが可能になる。がん患者では、活性化腫瘍特異性Ｔ細胞は腫瘍細胞を死滅させること、および抗腫瘍応答に参加するように他の免疫細胞を活性化／動員するサイトカインを分泌することができる。
【０００７】
ＰＤ−１のクローニングは、Ishidaら（The  EMBO  Journal（１９９２年）、１１巻（１１号）、３８８７〜３８９５頁）によって記載される。ヒトＰＤ−１  ｃＤＮＡの配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５０１８の下で記録されている。ヒトＰＤ−Ｌ１  ｃＤＮＡの配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ２３３５１６で与えられ、ヒトＰＤ−Ｌ２  ｃＤＮＡの配列はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０２５２３９で与えられる。
【０００８】
２０１４年９月に、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、他の薬物にもはや応答していない進行したか切除不能なメラノーマの患者の処置のために、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（ペンブロリズマブ）に対して迅速承認を与えた。Ｋｅｙｔｒｕｄａ（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．）は、ＰＤ−１に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。それは、安定性を増加させるための改変を加えた、ヒトＩｇＧ４免疫グロブリンに移植した（grafted）非常に高い親和性のマウス抗ヒトＰＤ−１抗体の可変領域配列を含む。Ｋｅｙｔｒｕｄａは、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合をブロックする。
【０００９】
２０１４年１２月に、米国ＦＤＡは、他の薬物にもはや応答しない、切除不能であるか転移性のメラノーマの患者のための新しい治療薬Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマブ）に対して、迅速承認を同様に与えた。Ｏｐｄｉｖｏ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合をブロックするＰＤ−１に対する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ４抗体である。
【００１０】
ニボルマブは、ＰＤ−１経路阻害剤の中で肺がんにおいて最も広範な臨床評価を受けた。扁平上皮および非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）で単剤療法ならびに従来の化学療法と組み合わせたときの両者で活性の証拠が、ＮＳＣＬＣ患者で実証されている。ＮＳＣＬＣ患者において、ペンブロリズマブが継続中の臨床治験で評価されている（ＮＣＴ０１２９５８２７）。
ＰＤ−１経路を標的にするいくつかの他の有望な薬剤（ＰＤ−１経路阻害剤）が、臨床開発中である（下の表１．１を参照）：
【表１．１】
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【００１１】
ADCC、抗体依存細胞媒介細胞傷害性;IgG、免疫グロブリンG;PD-1、プログラム死-1;PD-L1、PDリガンド1。
【００１２】
臨床開発中のさらなるＰＤ−１経路阻害剤は、Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡとＰｆｉｚｅｒが共同開発中のアベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られる）、完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。
【００１３】
進行したメラノーマの処置のためのＫｅｙｔｒｕｄａおよびＯｐｄｉｖｏの近年のＦＤＡ承認ならびにＰＤ−１経路を標的にした薬剤からの臨床治験でのＮＳＣＬＣに対する有望な結果にもかかわらず、より有効ながん処置を提供すること、より広い数のがん患者に有効である処置を提供すること、他のがんに有効な処置を提供すること、および副作用の低減した有効ながん処置を提供することが依然として必要である。
【００１４】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）は、４個の細胞外免疫グロブリンスーパーファミリードメインを有するＣＤ４ホモログＩ型膜タンパク質である。ＣＤ４と同様に、ＬＡＧ−３はＴ細胞の表面でオリゴマー形成し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するがＣＤ４よりも顕著に高い親和性を有する。ＬＡＧ−３は、細胞表面でＣＤ３−Ｔ細胞受容体複合体と会合する活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔリンパ球上に発現され、シグナル伝達を負に調節する。結果としてそれは、Ｔ細胞増殖、機能および恒常性を負に調節する。ＬＡＧ−３は、エフェクターまたは記憶Ｔ細胞と比較して疲弊したＴ細胞で上方制御される。ＬＡＧ−３は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）でも上方制御され、抗ＬＡＧ−３抗体を使用したＬＡＧ−３の遮断は抗腫瘍Ｔ細胞応答を増強することができる。
【００１５】
Blackburnら（Nat  Immunol.２００９年；１０巻（１号）：２９〜３７頁）は、複数の阻害性受容体による慢性ウイルス感染中のＣＤ８＋Ｔ細胞疲弊の共制御を記載する。慢性リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）のマウスモデルを使用して、著者らは、疲弊した抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が、記憶またはナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞と比較して最高７つの阻害性受容体（ＰＤ−１、ＬＡＧ３、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＴＬＡ−４、ＰＩＲ−ＢおよびＧＰ４９）の発現を増加させていたことを実証する。複数の別個の阻害性受容体の共発現は、より大きなＴ細胞疲弊およびより重度の感染と関連していた。Ｔ細胞阻害性受容体ＰＤ−１およびＬＡＧ−３の遮断（抗ＰＤ−Ｌ１抗体および抗ＬＡＧ−３抗体を使用した）は、Ｔ細胞応答を改善して、ｉｎ  ｖｉｖｏウイルス負荷を減らした。
【００１６】
Wooら（Cancer  Research２０１１年；７２巻（４号）：９１７〜９２７頁）は、移植可能な腫瘍で腫瘍浸潤性ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＰＤ−１およびＬＡＧ−３の共発現を記載する。二重の抗ＬＡＧ−３／抗ＰＤ−１抗体による処置は、単一の抗体処置に大いに抵抗性であった確立された腫瘍のほとんどのマウスを治癒させた。
【００１７】
慢性感染およびがんにおけるＴ細胞機能へのＬＡＧ−３の免疫調節的な役割に基づいて、ＬＡＧ−３特異的モノクローナル抗体の予測された作用機構は、腫瘍特異的エフェクターＴ細胞の負の調節を阻害することである。
【００１８】
ＬＡＧ−３は、ＬＡＧ−３の可溶性形態（ｓＬＡＧ−３）に変換される代わりのスプライス変異体もコードする。可溶性分子として、ＬＡＧ−３はＭＨＣクラスＩＩシグナル伝達を通して抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化し、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗原特異的Ｔ細胞応答の増加をもたらす（Triebel、Trends  Immunol.、２００３年、２４巻：６１９〜６２２頁）。
【００１９】
主要な抗腫瘍免疫応答は、１型細胞傷害性（Ｔｃ１）ＣＤ８  Ｔ細胞、ＮＫ細胞および単球／マクロファージの活性化を通して媒介される。短期ｅｘ  ｖｉｖｏアッセイでは、ＬＡＧ−３タンパク質の可溶性形態（ＩＭＰ３２１）は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）で適当な細胞傷害型の応答を誘導する（Brignoneら、Journal  of  Immunology、２００７年、１７９巻：４２０２〜４２１１頁）。ＩＭＰ３２１は、全ての骨髄性樹状細胞を含むＰＢＭＣ中の少数のＭＨＣクラスＩＩ＋細胞およびごく一部の単球と結合する。ＰＢＭＣへのＩＭＰ３２１の添加の４時間後に、これらの骨髄性細胞はＴＮＦ−αおよびＣＣＬ４を生成する。１８時間後に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の１％および３．７％のＮＫ細胞は、ＩＦＮ−αおよび／またはＴＮＦ−αなどのＴｃ１サイトカインを生成する。ＩＭＰ３２１は純粋な選別されたＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化できないので、ＩＭＰ３２１による初期のＡＰＣ活性化がこのＴｃ１型の活性化のために必要である。抗原を経験した完全に分化したグランザイム＋ＣＤ８Ｔ細胞（エフェクターおよびエフェクター記憶Ｔ細胞であるがナイーブでも中心記憶Ｔ細胞でもない）だけが、ＩＭＰ３２１によって完全なＴｃ１活性化までに誘導される。
【００２０】
ＰＤ−１経路阻害剤（抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体）およびＡＰＣ活性化因子として作用するＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＩＭＰ３２１）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞（特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞）を一緒に相乗的に活性化することが今や見出された。
Ｔ細胞のこの相乗的活性化は驚くべきことである。Wooら（上記）によって記載された二重の抗ＬＡＧ−３／抗ＰＤ−１抗体処置では、抗ＬＡＧ−３抗体はＬＡＧ−３による腫瘍特異的エフェクターＴ細胞の負の調節を阻害していると考えられているが、ＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＩＭＰ３２１）は、異なる機構を通してＡＰＣ活性化因子として作用していると考えられている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Harvey、Clinical  Pharmacology  &  Therapeutics、２０１４年、９６巻（２号）２１４〜２２３頁
【非特許文献２】The  EMBO  Journal（１９９２年）、１１巻（１１号）、３８８７〜３８９５頁
【非特許文献３】Nat  Immunol.２００９年；１０巻（１号）：２９〜３７頁
【非特許文献４】Cancer  Research２０１１年；７２巻（４号）：９１７〜９２７頁
【非特許文献５】Triebel、Trends  Immunol.、２００３年、２４巻：６１９〜６２２頁
【非特許文献６】Brignoneら、Journal  of  Immunology、２００７年、１７９巻：４２０２〜４２１１頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明により（ａ）ＬＡＧ−３タンパク質またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合できるその誘導体；および（ｂ）ＰＤ−１経路阻害剤を含む、組合せ調製物が提供される。
【００２３】
本明細書において使用される用語「組合せ調製物」は、上に規定される組合せ構成成分（ａ）および（ｂ）が独立にまたは組合せ構成成分（ａ）および（ｂ）の区別される量のさまざまな固定された組合せの使用によって投与され得るという意味で「キットオブパーツ」を指す。構成成分は、同時にまたは順々に投与されてよい。構成成分が順々に投与される場合、好ましくは投与間の時間間隔は、構成成分の併用の治療効果が組合せ構成成分（ａ）および（ｂ）のいずれか１つだけの使用によって得られる効果よりも大きいように選択される。
【００２４】
組合せ調製物の構成成分は、１つの組合せ単位剤形中に、または構成成分（ａ）の第１の単位剤形および構成成分（ｂ）の別の第２の単位剤形として存在してよい。組合せ調製物中で投与される組合せ構成成分（ａ）と組合せ構成成分（ｂ）との総量の比は、例えば、患者の特定の疾患、年齢、性別または体重に起因するものであり得る、治療される患者亜集団の要求または患者個人の要求に対処するために変えることができる。
【００２５】
好ましくは、少なくとも１つの有益な効果、例えば、ＰＤ−１経路阻害剤の効果の増強、またはＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体の効果の増強、または組合せ成分（ａ）および（ｂ）の効果の相互増強、例えば、組合せ成分（ａ）および（ｂ）の１つまたは両方の有効投与量と比較して、相加効果を上回る効果、追加的な有利な効果、より少ない副作用、より少ない毒性、または併用治療効果、ならびに、非常に好ましくは組合せ成分（ａ）および（ｂ）の相乗作用がある。
【００２６】
本発明の組合せ調製物は、哺乳動物、好ましくはヒトへの投与のための医薬用組合せ調製物として提供され得る。ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、任意選択で薬学的に許容される担体、賦形剤もしくは希釈剤と一緒に提供されてよく、および／またはＰＤ−１経路阻害剤は任意選択で薬学的に許容される担体、賦形剤もしくは希釈剤と一緒に提供されてよい。
【００２７】
ＬＡＧ−３またはその誘導体は、ＬＡＧ−３誘導体ＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１の０．２５〜３０ｍｇ、１〜３０ｍｇまたは６〜３０ｍｇのモル当量である用量で存在してよい。ＩＭＰ３２１の皮下（ｓ．ｃ．）注射１回あたり６〜３０ｍｇの用量は、安全であることが示されており、転移性腎細胞がん患者において得られた薬物動態データの結果に基づいて許容可能な全身性曝露を提供する。ｓ．ｃ．注射後少なくとも２４時間１ｎｇ／ｍｌを上回るＩＭＰ３２１の血液濃度が、６ｍｇを超えるＩＭＰ３２１用量を注射された患者において得られる。
【００２８】
本発明の組合せ調製物は、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の複数の用量を含む場合がある。
【００２９】
ＰＤ−１経路阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する薬剤であってよい。特に、薬剤は、ヒトＰＤ−Ｌ１および／またはヒトＰＤ−Ｌ２へのヒトＰＤ−１の結合を阻害することができる。薬剤は、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％阻害することができる。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析またはフローサイトメトリー分析によってＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を決定するのに適するアッセイは、Ghiottoら（Int.  Immunol.２０１０年８月；２２巻（８号）：６５１〜６６０頁）に記載される。薬剤は、例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２への結合によって、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害することができる。薬剤は、抗体、好適にはモノクローナル抗体、例えばヒトまたはヒト化モノクローナル抗体であってよい。薬剤は、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する能力を保持する抗体の断片または誘導体であってもよい。
【００３０】
本発明による使用に適している抗ＰＤ−１抗体の例には、以下のものが含まれる：ペンブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）、ヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体；ニボルマブ、完全ヒトモノクローナルＩｇＧ４抗体；ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体。ＰＤ−１に結合するが抗体でないＰＤ−１経路阻害剤の例は、ＡＭＰ−２２４である。ＡＭＰ−２２４は、ＰＤ−Ｌ２の細胞外ドメインおよびヒトＩｇＧのＦｃ領域の組換え融合タンパク質である。ＡＭＰ−２２４は、ＰＤ−１高発現Ｔ細胞の除去を引き起こす。本発明による使用に適している抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例には、以下のものが含まれる：ＢＭＳ−９３６５５９、完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体；ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、完全ヒトモノクローナル抗体；ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＡＤＣＣを防止するための操作されたＩｇＧ  Ｆｃドメインを含有するヒトモノクローナル抗体；アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られる）、完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１モノクローナル抗体。
【００３１】
ＰＤ−１経路阻害剤の用量は、使用される特定のＰＤ−１経路阻害剤に依存する。一般に、ヒト被験体のためのＰＤ−１経路阻害剤の典型的に処方される用量は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．１〜１ｍｇ／ｋｇまたは１〜１０ｍｇ／ｋｇであってもよい。用語「典型的に処方される用量」は、本明細書において、単剤療法として被験体（好適にはヒト被験体）への投与に安全および処置的に有効であるか、または、単剤療法として被験体（好適にはヒト被験体）への投与のために所管の規制機関によって承認される用量と同じか投与量範囲内の用量を含むものとして使用される。単剤療法として使用されるときの公知のＰＤ−１経路阻害剤のヒトに対する典型的に処方される用量の例には、以下のものが含まれる：
【００３２】
ペンブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）：２週間または３週間毎に２〜１０ｍｇ／ｋｇ。例えば、米国ＦＤＡは、３週間毎に３０分間の静脈内注入として２ｍｇ／ｋｇのＫｅｙｔｒｕｄａ（ペンブロリズマブ）の投与を承認している；
ニボルマブ：２週間毎の０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ。例えば、米国ＦＤＡは、２週間毎に６０分間の静脈内注入として３ｍｇ／ｋｇのＯｐｄｉｖｏ（ニボルマブ）の投与を承認している；
ＢＭＳ−９３６５５９：２週間毎の０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ。
【００３３】
ＰＤ−１経路阻害剤は、任意の適する経路によって、例えば非経口的に（皮下、静脈内または筋肉内注射を含む）投与することができる。現在承認されているか開発中のＰＤ−１経路阻害剤は、静脈内注入として投与される。
【００３４】
本発明の組合せ調製物は、ＰＤ−１経路阻害剤の複数の用量を含んでよい。
【００３５】
ＬＡＧ−３タンパク質は、単離された天然または組換えＬＡＧ−３タンパク質であってよい。ＬＡＧ−３タンパク質は、霊長類またはマウスＬＡＧ−３タンパク質などの任意の好適な種由来のＬＡＧ−３タンパク質のアミノ配列を含んでもよいが、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のアミノ配列である。ヒトおよびマウスＬＡＧ−３タンパク質のアミノ酸配列は、Huardら（Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１１巻:５７４４〜５７４９頁、１９９７年）の図１に提供されている。ヒトＬＡＧ−３タンパク質の配列は、下の図１５に反復されている（配列番号１）。ヒトＬＡＧ−３の４個の細胞外Ｉｇスーパーファミリードメイン（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４）のアミノ酸配列も、Huardらの図１のアミノ酸残基：１〜１４９（Ｄ１）；１５０〜２３９（Ｄ２）；２４０〜３３０（Ｄ３）；および３３１〜４１２（Ｄ４）に同定されている。
【００３６】
ＬＡＧ−３タンパク質の誘導体は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合できるＬＡＧ−３タンパク質の可溶性断片、バリアントまたは変異体を含む。ＬＡＧ−３タンパク質のいくつかの誘導体は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合できることが知られている。そのような誘導体の多数の例はHuardら（Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１１巻:５７４４〜５７４９頁、１９９７年）に記載されている。この文書は、ＬＡＧ−３タンパク質上のＭＨＣクラスＩＩ結合部位の特徴付けを記載している。ＬＡＧ−３の変異体を作るための方法ならびにクラスＩＩ陽性Ｄａｕｄｉ細胞に結合するＬＡＧ−３変異体の能力を決定するための定量的細胞接着アッセイが記載されている。ＬＡＧ−３の一部の異なる変異体のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合が決定された。いくつかの変異は、クラスＩＩ結合を低減することができる一方で、他の変異はクラスＩＩ分子に対するＬＡＧ−３の親和性を増加させた。ＭＨＣクラスＩＩタンパク質に結合するために不可欠な残基の多くは、ＬＡＧ−３  Ｄ１ドメイン中の大きな３０アミノ酸エクストラループ（ｅｘｔｒａ−ｌｏｏｐ）構造の塩基にクラスター化されている。ヒトＬＡＧ−３タンパク質のＤ１ドメインのエクストラループ構造のアミノ酸配列は、図１５中の下線付き配列であるＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹ（配列番号２）である。
【００３７】
ＬＡＧ−３タンパク質誘導体は、ヒトＬＡＧ−３  Ｄ１ドメインの３０アミノ酸エクストラループ配列、または１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を含むそのような配列のバリアントを含んでよい。バリアントは、ヒトＬＡＧ−３  Ｄ１ドメインの３０アミノ酸エクストラループ配列と少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含んでよい。
【００３８】
ＬＡＧ−３タンパク質の誘導体は、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のドメインＤ１および任意選択でドメインＤ２のアミノ酸配列を含んでよい。
【００３９】
ＬＡＧ−３タンパク質の誘導体は、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のドメインＤ１と、またはドメインＤ１およびＤ２と少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含んでよい。
【００４０】
ＬＡＧ−３タンパク質の誘導体は、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のドメインＤ１、Ｄ２、Ｄ３および任意選択でＤ４のアミノ酸配列を含んでよい。
【００４１】
ＬＡＧ−３タンパク質の誘導体は、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３のドメインＤ１、Ｄ２およびＤ３と、またはドメインＤ１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４と少なくとも７０％、８０％、９０％または９５％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含んでよい。
【００４２】
アミノ酸配列間の配列同一性は、配列のアライメントを比較することによって決定され得る。比較される配列中の相当する位置が同じアミノ酸によって占められている場合、それにより分子はその位置で同一である。同一性の百分率としてのアライメントをスコアリングは、比較される配列によって共有される位置での同一のアミノ酸の数の関数である。配列を比較するときに、最適なアライメントは、配列中の可能性がある挿入および欠失を考慮に入れるために１つまたは複数の配列に導入されるギャップを必要とする場合がある。配列比較方法は、比較される配列中の同じ数の同一分子についてギャップペナルティーを用いる場合があり、可能な限り少ないギャップを含む配列アライメントは、２つの比較される配列間のより高い関連性を反映しており、多数のギャップを含むものよりも高いスコアを達成する。最大同一性パーセントの算出は、ギャップペナルティーを考慮に入れる最適なアライメントの作成を含む。
【００４３】
配列比較を実行するために好適なコンピュータープログラムは、商業的におよび公共部門において広く入手可能である。例はＭａｔＧａｔ（Campanellaら、２００３年、BMC  Bioinformatics  ４巻:２９頁;プログラムはhttp://bitincka.com/ledion/matgatから入手可能）、Ｇａｐ（NeedlemanおよびWunsch、１９７０年、J.  Mol.  Biol.  ４８巻:４４３〜４５３頁）、ＦＡＳＴＡ（Altschulら、１９９０年、J.  Mol.  Biol.  ２１５巻:４０３〜４１０頁;プログラムはhttp://www.ebi.ac.uk/fastaから入手可能）、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ  ２．０およびＸ  ２．０（Larkinら、２００７年、Bioinformatics  ２３巻:２９４７〜２９４８頁;プログラムはhttp://www.ebi.ac.uk/tools/clustalw2から入手可能）およびＥＭＢＯＳＳ  Ｐａｉｒｗｉｓｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ（NeedlemanおよびWunsch、１９７０年、上記;  Kruskal、１９８３年、Time  warps,  string  edits  and  macromolecules:  the  theory  and  practice  of  sequence  comparison、SankoffおよびKruskal（編）、１〜４４頁、Addison  Wesley;プログラムはhttp://www.ebi.ac.uk/tools/emboss/alignから入手可能）を含む。すべてのプログラムは初期パラメーターを使用して実行できる。
【００４４】
例えば配列比較は、それらの長さ全体を考慮して百分率同一性スコアを提供する場合に、２つの配列の最適なアライメント（ギャップを含む）を決定するＥＭＢＯＳＳ  Ｐａｉｒｗｉｓｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓの「ニードル」法を使用して行われてよい。アミノ酸配列比較についての初期パラメーター（「タンパク質分子」選択肢）は、ギャップ伸長ペナルティー：０．５、ギャップオープンペナルティー：１０．０、マトリクス：Ｂｌｏｓｕｍ  ６２であってよい。
【００４５】
配列比較は、参照配列の全長にわたって実施されてよい。
【００４６】
ＬＡＧ−３タンパク質誘導体は、免疫グロブリンＦｃアミノ酸配列、好ましくはヒトＩｇＧ１  Ｆｃアミノ酸配列に、任意選択でリンカーアミノ酸配列によって融合されてよい。
【００４７】
ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するＬＡＧ−３タンパク質の誘導体の能力は、Huardら（上記）に記載の定量的細胞接着アッセイを使用して決定され得る。ＬＡＧ−３タンパク質の誘導体のＭＨＣクラスＩＩ分子への親和性は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質のクラスＩＩ分子への親和性の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％であってよい。好ましくはＬＡＧ−３タンパク質の誘導体のＭＨＣクラスＩＩ分子への親和性は、ヒトＬＡＧ−３タンパク質のクラスＩＩ分子への親和性の少なくとも５０％である。
ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合できるＬＡＧ−３タンパク質の好適な誘導体の例は：
ヒトＬＡＧ−３配列のアミノ酸残基２３から４４８；
ＬＡＧ−３のドメインＤ１およびＤ２のアミノ酸配列；
次の位置：ＡＲＧがＧＬＵで置換されている７３位；ＡＲＧがＡＬＡまたはＧＬＵで置換されている７５位；ＡＲＧがＧＬＵで置換されている７６位；ＡＳＰがＡＬＡで置換されている３０位；ＨＩＳがＡＬＡで置換されている５６位；ＴＹＲがＰＨＥで置換されている７７位；ＡＲＧがＡＬＡで置換されている８８位；ＡＲＧがＡＬＡで置換されている１０３位；ＡＳＰがＧＬＵで置換されている１０９位；ＡＲＧがＡＬＡで置換されている１１５位、の１つまたは複数にアミノ酸置換を有するＬＡＧ−３のドメインＤ１およびＤ２のアミノ酸配列；
アミノ酸残基５４から６６の欠失を有するＬＡＧ−３のドメインＤ１のアミノ酸配列；
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃに融合されたｈＬＡＧ−３の細胞外ドメインをコードするプラスミドでトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣細胞で産生された組換え可溶性ヒトＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質（ＩＭＰ３２１）−２００ｋＤａ二量体
を含む誘導体を含む。ＩＭＰ３２１の配列は、米国特許出願公開第２０１１／０００８３３１号の配列番号１７で与えられる。
【００４８】
本発明により（ａ）ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合できるその誘導体；（ｂ）ＰＤ−１経路阻害剤；および（ｃ）薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物も提供される。
【００４９】
本発明により医薬としての使用のための本発明の組合せ調製物または医薬組成物がさらに提供される。
【００５０】
本発明は、がんを予防する、治療するまたは回復させるための本発明の組合せ調製物または医薬組成物も提供する。
【００５１】
本発明により、がんを予防する、治療するまたは回復させるための医薬の製造における本発明の組合せ調製物または医薬組成物の使用がさらに提供される。
【００５２】
本発明によりがんを予防する、治療するまたは回復させる方法であって、ＬＡＧ−３タンパク質またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合できるその誘導体および抗ＰＤ−１経路阻害剤をそのような予防、治療または回復を必要とする対象に投与することを含む、方法も提供される。
【００５３】
本発明の組合せ調製物および組成物を、感染、特に慢性または持続的感染の予防、処置または回復のために使用することもできることを本発明者らは十分に理解した。
【００５４】
急性感染の間、活性化された病原体特異的細胞傷害性ＣＤ８  Ｔリンパ球（ＣＴＬ）は増殖し、それらが感染を効果的に取り除くことを可能にするエフェクター機能、例えばサイトカイン生成および細胞傷害能力を獲得する。取り除いた後、小プールの病原体特異的記憶Ｔ細胞が残り、該細胞は同じ病原体への再曝露の後に非常に急速に再活性化してそれらの殺滅機能を獲得する能力を有している。しかし、慢性感染の間は、病原体特異的ＣＴＬに機能的欠陥があり、感染を排除することができないことが見出されているので、これは起こらない。これらの疲弊したＣＴＬは、それらの損なわれた増殖能力、サイトカイン生成および細胞傷害能力の喪失によって定義される（図１（ｂ）、およびHofmeyerら、Journal  of  Biomedicine  and  Biotechnology、２０１１巻、論文ＩＤ４５１６９４のレビューを参照）。
【００５５】
この現象は、元々マウスの慢性ウイルス感染、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の十分に確立したマウスモデルを使用して定義された（Zajacら、The  Journal  of  Experimental  Medicine、１８８巻、１２号、２２０５〜２２１３頁、１９９８年；Gallimoreら、The  Journal  of  Experimental  Medicine、１８７巻、９号、１３８３〜１３９３頁、１９９８年）。ＬＣＭＶのアームストロング株は急性感染を引き起こし、それは免疫系によって取り除かれてロバストなＣＴＬ記憶を生成する。他方、ＬＣＭＶのクローン１３株はマウスにおいて慢性感染を確立し、ＣＴＬを疲弊させて感染の除去を不可能にする。さらに、正常なＴ細胞と比較して、疲弊したＣＴＬは代謝欠損、ならびに化学向性、接着および移動に関与する遺伝子の発現変化を有する（Wherryら、Immunity、２７巻、４号、６７０〜６８４頁、２００７年）。
【００５６】
疲弊をもたらす機構を明らかにするために実行した研究では、慢性ＬＭＣＶ感染からの疲弊したＣＴＬの遺伝子プロファイルを急性ＬＣＭＶ感染に応答する機能的ＣＴＬの遺伝子プロファイルと比較した（Barberら、Nature、４３９巻、７０７７号、６８２〜６８７頁、２００６年）。疲弊したＣＴＬはＰＤ−１の有意な過剰発現を有することが見出されたが、機能的ＬＣＭＶ特異的ＣＴＬはＰＤ−１の評価可能な発現を有しなかった。ＰＤ−１の発現は、疲弊したＴ細胞で見られる規定の機能的障害と、および次にはより高いウイルス負荷と相関することが見出された。慢性感染マウスでの抗ＰＤ−Ｌ１抗体によるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路のブロックは、ウイルス負荷の低下を引き起こしたＣＴＬ応答の増強をもたらした。慢性感染の間の特異的エピトープの提示の喪失が機能的修復およびエピトープ特異的ＣＴＬの上でのＰＤ−１発現の低下をもたらすので、疲弊したＣＴＬによるＰＤ−１発現は持続する抗原特異的刺激に依存する（Blattmanら、Journal  of  Virology、８３巻、９号、４３８６〜４３９４頁、２００９年）。慢性ウイルス感染の間の持続的抗原刺激は、ＣＴＬ機能の喪失およびＰＤ−１発現における相関した増加に対して進行性作用（progressive  effect）を有し、これは、より疲弊したＣＴＬ（ＰＤ−１ｈｉ）が他（ＰＤ−１ｉｎｔ）よりもＰＤ−１ブロッキングによる機能的救済への感受性が低いことを意味する（Blackburnら、Proceedings  of  the  National  Academy  of  Sciences  of  the  United  States  of  America、１０５巻、３９号、１５０１６〜１５０２１頁、２００８年）。
【００５７】
本発明により、感染の予防、処置または回復において使用するための本発明の組合せ調製物または医薬組成物がさらに提供される。
【００５８】
本発明により、感染の予防、処置または回復のための医薬の製造における、本発明の組合せ調製物または医薬組成物の使用も提供される。
【００５９】
本発明により、感染を予防する、処置するまたは回復させる方法であって、そのような予防、処置または回復を必要とする被験体に、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体、およびＰＤ−１経路阻害剤を投与することを含む方法も提供される。
【００６０】
特定の実施形態では、感染は慢性的または持続的な感染である。本明細書において、用語「慢性的または持続的な感染」は、感染した被験体で古典的ＣＴＬ応答を誘導した病原体による感染を指すために使用されるが、感染は取り除かれておらず、損なわれた増殖能力、サイトカイン生成および細胞傷害能力の喪失を伴う、疲弊したＰＤ−１を発現する病原体特異的ＣＴＬの存在をもたらす。
【００６１】
本発明により処置することができる感染症の例には、ウイルス、細菌、真菌または原生動物の感染症、特に慢性的または持続的なウイルス、細菌、真菌または原生動物の感染症が含まれる。
【００６２】
ウイルス感染は、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、Ｂウイルス（マカシンヘルペスウイルスＩ）、ＢＫウイルス、ブンヤウイルス、チクングニヤウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、サイトメガロウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エンテロウイルス、エプスタインバーウイルス、ハンタウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス１、単純疱疹ウイルス２、ヒトフォーミーウイルス、ヒトヘルペスウイルス３、ヒトヘルペスウイルス５、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒト免疫不全ウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ヒトβ−リンパ球向性ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩＩ、インフルエンザウイルス、ＪＣウイルス、ＪＥＶ、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ラッサウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ニパウイルス、ノロウイルス、ノーウォークウイルス、オルトレオウイルス、パラインフルエンザウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、レオウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、天然痘ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、大痘瘡ウイルス、小痘瘡ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（vericella-zoster  virus）、ウエストナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルスまたは黄熱ウイルスが引き起こすことができる。
【００６３】
特定の実施形態では、ウイルス感染は肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス）、レンチウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス）またはヘルペスウイルス（例えば、単純疱疹ウイルス１、単純疱疹ウイルス２）によって引き起こされる。
【００６４】
細菌感染は、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａまたはＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓが引き起こすことができる。
【００６５】
真菌感染は、例えば、Ｃａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、ＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓまたはＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓが引き起こすことができる。
【００６６】
原生動物感染は、例えば、Ａｍｏｅｂｏｚｏａ、Ｅｘｃａｖａｔａ、Ｃｈｒｏｍａｌｖｅｏｌａｔａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ、Ｃｏｃｃｉｄｉａ、Ｂｅｓｎｏｉｔｉａ、ＤｉｃｒｏｃｏｅｌｉｕｍまたはＬｅｉｓｈｍａｎｉａが引き起こすことができる。
【００６７】
本発明により、Ｔ細胞の活性化によって、特にＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化によって予防する、処置するまたは回復させることができる疾患、障害または状態の予防、処置または回復において使用するための、本発明の組合せ調製物または医薬組成物がさらに提供される。
【００６８】
本発明により、Ｔ細胞の活性化によって、特にＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化によって予防する、処置するまたは回復させることができる疾患、障害または状態の予防、処置または回復のための医薬の製造における、本発明の組合せ調製物または医薬組成物の使用も提供される。
【００６９】
本発明により、Ｔ細胞の活性化によって、特にＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化によって予防する、処置するまたは回復させることができる疾患、障害または状態を予防する、処置するまたは回復させる方法であって、そのような予防、処置または回復を必要とする被験体に、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体、およびＰＤ−１経路阻害剤を投与することを含む方法も提供される。
【００７０】
一部の実施形態では、Ｔ細胞の活性化によって予防する、処置するまたは回復させることができる疾患、障害または状態は、がんを除外することができる。
【００７１】
本発明により、Ｔ細胞媒介免疫応答、特にＣＤ８陽性Ｔ細胞媒介免疫応答の増強で使用するための、本発明の組合せ調製物または医薬組成物も提供される。
【００７２】
本発明は、Ｔ細胞媒介免疫応答、特にＣＤ８陽性Ｔ細胞媒介免疫応答の増強のための医薬の製造における、本発明の組合せ調製物または医薬組成物の使用も提供する。
【００７３】
本発明により、Ｔ細胞媒介免疫応答、特にＣＤ８陽性Ｔ細胞媒介免疫応答を増強する方法であって、そのような増強されたＴ細胞媒介免疫応答を必要とする被験体に、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体、およびＰＤ−１経路阻害剤を投与することを含む方法がさらに提供される。
【００７４】
一部の実施形態では、Ｔ細胞媒介免疫応答またはＣＤ８陽性Ｔ細胞媒介免疫応答の増強は、がんの予防、処置または回復を排除することができる。
【００７５】
ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体、およびＰＤ−１経路阻害剤は、被験体に逐次投与することができ、すなわち、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、ＰＤ−１経路阻害剤の前、それと共にまたはその後に投与することができる。
【００７６】
ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤は、対象に互いに９６時間、７２時間、４８時間、２４時間または１２時間以内に投与されてよい。
【００７７】
代替的に、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤は、例えばＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤を含む組成物として、またはＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤の別々の用量の同時投与によって対象に共投与されてよい。
【００７８】
一部の実施形態によれば、ＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体の複数の用量および／またはＰＤ−１経路阻害剤の複数の用量が、対象に投与される。
【００７９】
一部の実施形態によれば、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の用量は、ＰＤ−１経路阻害剤の２またはそれを超える用量の各投与の前に、それと共にまたはその後に投与される。
【００８０】
例えば、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の用量は、ＰＤ−１経路阻害剤の２またはそれを超える用量の各投与の９６時間、７２時間、４８時間、２４時間または１２時間以内に投与されてよい。
【００８１】
本発明による併用療法において使用される構成成分の適切な投与量の選択は、例えば、患者の健康全般および併用療法への応答を含む患者の所見によって、当業者によって決定および最適化され得る。最適化は、例えば、患者が望ましい治療効果を示さないことが決定された場合に、または反対に数が多すぎるもしくは困難な重症度である望ましくないもしくは有害な副作用を患者が経験している場合に必要である場合がある。
【００８２】
本発明による併用療法において使用される構成成分の用量は、組合せにおける構成成分の治療有効量を提供するために選択されるべきである。
【００８３】
併用療法の「有効量」は、がんに関連する少なくとも１つの病理学的パラメーターの低減をもたらす量であり得る。例えば、一部の実施形態では、併用療法の有効量は、併用療法を伴わずにがんに関連するパラメーターにおいて期待される低減と比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の病理学的パラメーターにおける低減を達成するために有効な量である。例えば、病理学的パラメーターは腫瘍成長または腫瘍成長速度であってよい。
【００８４】
あるいは、併用療法の「有効量」は、がん処置に関連した臨床上の利益の増加をもたらす量であってよい。例えば、一部の実施形態では、併用療法の「有効量」は、併用療法なしで予想される臨床上の利益と比較して、臨床上の利益において少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増加を達成するのに有効な量である。例えば、臨床上の利益は、腫瘍奏効率、無進行生存、全体的生存または以降の処置への増感であってよい。
【００８５】
あるいは、併用療法の「有効量」は、がん処置に関連した少なくとも１つの有益なパラメーターの変化をもたらす量であってよい。例えば、一部の実施形態では、併用療法の「有効量」は、併用療法なしでのがん処置に関係したパラメーターの予想される変化と比較して、パラメーターにおいて少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の変化を達成するのに有効な量である。例えば、パラメーターは、循環する腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加、または腫瘍抗原特異的な制御性Ｔ細胞の数の低減、または活性化Ｔ細胞、特に活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加、疲弊した抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の低減、または循環する機能的（すなわち、疲弊していない）抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加であってよい。
【００８６】
感染の処置に関係した実施形態では、併用療法の「有効量」は、感染に関連した少なくとも１つの病理学的パラメーターの低減をもたらす量であってよい。例えば、一部の実施形態では、併用療法の有効量は、併用療法なしでの感染に関連したパラメーターの予想される低減と比較して、病理学的パラメーターにおいて少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の低減を達成するのに有効な量である。例えば、病理学的パラメーターは、ウイルス負荷（例えば、血液１ｍｌあたりのウイルス粒子の数またはウイルスＤＮＡの量）、細菌負荷（例えば、血液１ｍｌあたりの細菌ＤＮＡの量または異なる寒天プレートの上での１〜２１日の成長期間の後の細菌コロニーの数）であってよい。
【００８７】
ウイルスおよび細菌負荷を測定する好適な方法は、当業者に周知である。例えば、ＥＬＩＳＡによってウイルス負荷を測定する方法は、Goldschmidtら（Clinical  and  Diagnostic  Laboratory  Immunology、１９９８年７月、５１３〜５１８頁）で比較されている。ウイルス核酸の検出のための異なる市販のアッセイを使用してウイルス負荷を測定する方法は、Holguinら（Eur  J  Clin  Microbiol  Infect  Dis.１９９９年４月；１８巻（４号）：２５６〜９頁）およびSwensonら（J.  Clin.  Microbiol.２０１４年２月；５２巻（２号）：５１７〜５２３頁）で比較されている。リアルタイムＰＣＲによる細菌負荷の測定を記載する論文の例は、Nadkarniら（Microbiology（２００２年）、１４８巻、２５７〜２６６頁）である。この論文は、今はBergey's  Manual  of  Systematic  Bacteriology、第２版、に取って代わられたBergey's  Manual  of  Determinative  Bacteriologyを引用する。分子細菌負荷アッセイが、Honeyborneら（J.  Clin.  Microbiol.２０１１年４９巻：３９０５〜３９１１頁およびJ.  Clin.  Microbiol.２０１４年８月；５２巻（８号）：３０６４〜７頁）によって記載されている。ウイルス負荷および細菌負荷を測定するＦＤＡ承認のスクリーニングアッセイのリストは、以下のＦＤＡウェブサイトで見出すことができる：
【００８８】
www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/BloodBloodProducts/ApprovedProducts/LicensedProductsBLAs/BloodDonorScreening/InfectiousDisease/ucm080466.htm.
【００８９】
あるいは、併用療法の「有効量」は、感染の処置に関連した臨床上の利益の増加をもたらす量であってよい。例えば、一部の実施形態では、併用療法の「有効量」は、併用療法なしで予想される臨床上の利益と比較して、臨床上の利益において少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増加を達成するのに有効な量である。
【００９０】
あるいは、併用療法の「有効量」は、感染の処置に関連した少なくとも１つの有益なパラメーターの変化をもたらす量であってよい。例えば、一部の実施形態では、併用療法の「有効量」は、併用療法なしでの処置に関係したパラメーターの予想される変化と比較して、パラメーターの少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の変化を達成するのに有効な量である。例えば、パラメーターは、活性化Ｔ細胞、特に活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加、循環する機能的（すなわち、疲弊していない）抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加、または疲弊した抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の低減または抗原特異的な制御性Ｔ細胞の数の低減であってよい。
【００９１】
本発明により併用治療は、単剤療法としてのＰＤ−１経路阻害剤またはＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体の効果と比較してＰＤ−１経路阻害剤またはＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体の治療効果を増加させるために、あるいは個々の構成成分の望まれないまたは有害な副作用の危険性を予防するまたはさらに低減すると同時に、得られる組合せ中での個々の構成成分の用量を減少させるために用いられ得る。
【００９２】
一実施形態では、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤は、単剤療法としての各化合物についての典型的な規定用量範囲内である用量にそれぞれ規定される。化合物は、別々の投与量としてまたは組合せ投与量として規定されてよい。そのような組合せは、単剤療法としてのいずれかの化合物の効果と比較して有効性の増加を提供する。
【００９３】
別の実施形態では、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤は、単剤療法としての各構成成分についての典型的な規定用量より低い用量だが、組合せで治療有効性を有する用量でそれぞれ規定される。構成成分は、別々の投与量としてまたは組合せ投与量として規定されてよい。組合せにおける構成成分の投与量は、単剤療法としてのＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体またはＰＤ−１経路阻害剤と同様のレベルの治療有効性を提供するが、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤のより低い用量が、単剤療法としての各化合物の規定投与量と比較して有害な副作用の危険性を低減する有利点を伴うように選択され得る。
【００９４】
別の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤の規定投与量は、単剤療法のための典型的な規定用量範囲内であり、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、単剤療法のための典型的な規定用量より低い投与量に規定される。
【００９５】
さらなる実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤の規定投与量は、単剤療法のための典型的な規定用量より低く、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、単剤療法のための典型的な規定用量範囲内である投与量に規定される。
【００９６】
単剤療法のための典型的な規定用量より低い好ましい投与量は、典型的な規定用量の５０％までまたは２５％までである用量である。例えば、単剤療法のために典型的に処方される用量未満の投与量は、ＰＤ−１経路阻害剤および／またはＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体の典型的に処方される用量の、１〜５０％、１〜２５％、１〜１０％、２〜５０％、２〜２５％、２〜１０％である用量であってよい。
【００９７】
ヒト被験体での単剤療法のためのＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の典型的に処方される用量は、ＬＡＧ−３誘導体ＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１の０．２５〜３０ｍｇ、１〜３０ｍｇまたは６〜３０ｍｇのモル当量である用量であってよい。
【００９８】
ヒト被験体での単剤療法のためのＰＤ−１経路阻害剤の典型的に処方される用量は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１ｍｇ／ｋｇまたは１〜１０ｍｇ／ｋｇであってもよい。例えば、ヒト被験体での単剤療法のためのペンブロリズマブの典型的に処方される用量は、２〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば２ｍｇ／ｋｇであってよく、ヒト被験体での単剤療法のためのニボルマブの典型的に処方される用量は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば３ｍｇ／ｋｇであってよく、ヒト被験体での単剤療法のためのＢＭＳ−９３６５５９の典型的に処方される用量は、０．３〜１０ｍｇ／ｋｇであってよい。
【００９９】
本発明の組合せ調製物または組成物の特定の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤の処方される投与量は、単剤療法のために典型的に処方される用量未満、例えばＰＤ−１経路阻害剤の典型に処方される用量の１〜５０％、１〜２５％、１〜２０％、１〜１０％、２〜５０％、２〜２５％、２〜２０％、２〜１０％、０．１〜５０％、０．１〜２５％、０．１〜２０％、０．１〜１０％、２０％未満、１０％未満、０．１〜２０％未満、０．１〜１０％未満、０．０１〜２０％未満または０．０１〜１０％未満である。
本発明によるＰＤ−１経路阻害剤およびＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の適する用量の例は、下の表１．２に示す：
【表１．２−１】
2020073594.tif 000003
【表１．２−２】
2020073594.tif 000004
【表１．２−３】
2020073594.tif 000005
【表１．２−４】
2020073594.tif 000006
【表１．２−５】
2020073594.tif 000007
【０１００】
ＬＡＧ−３誘導体は上記の、または図７に示すＬＡＧ−３誘導体のいずれであってもよい。特定の実施形態では、ＬＡＧ−３誘導体は、ＩＭＰ３２１である。
【０１０１】
別々の投与量で投与される場合、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤は、実質的に同時に（例えば、互いに約６０分間、約５０分間、約４０分間、約３０分間、約２０分間、約１０分間、約５分間または約１分間以内）、あるいは約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約１０時間、約１２時間、約２４時間、約３６時間、約７２時間もしくは約９６時間またはそれを超えるだけ時間を離して投与されてよい。
【０１０２】
当業者は、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体およびＰＤ−１経路阻害剤の特定の組合せに応じて逐次投与のために好適な時間経過を決定および最適化できる。時間経過の選択は好ましくは、少なくとも１つの有益な効果、例えば、ＬＡＧ−３タンパク質もしくはその誘導体またはＰＤ−１経路阻害剤の効果の増強、または組合せ構成成分の効果の相互増強、例えば、相加効果を上回る効果、追加的な有利な効果、より少ない副作用、より少ない毒性、もしくは組合せ構成成分の１つもしくは両方の非有効投与量と比較した併用治療効果、および非常に好ましくは組合せ構成成分の相乗作用が認められるように行われる。
【０１０３】
最適な時間経過が、投与後に化合物のピーク血漿濃度に達するまでにかかる時間、各化合物の排出半減期などの要因に依存することが理解される。好ましくは時間の差異は、投与される第１の構成成分の半減期未満である。
【０１０４】
当業者は、また、投与のための適切な時期を決定できる。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は朝に投与されてよく、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、少なくとも１度その日の内に投与されてよい。他の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤およびＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、実質的に同じ時に投与されてよい。
【０１０５】
一部の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、例えば、医師によって対象に投与されてよく、対象は、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の用量を、後に（例えばその日の内にまたは翌日に）投与するための、例えば予め充填されたシリンジ中で提供されてよい。
【０１０６】
ＰＤ−１経路阻害剤およびＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、毎日、毎週、２週ごと、３週ごと、毎月、２カ月ごと、３カ月ごと、４カ月ごと、５カ月ごと、６カ月ごと、７カ月ごと、８カ月ごと、９カ月ごと、１０カ月ごと、１１カ月ごと、１年ごと、２年ごと、３年ごと、４年ごと、５年ごとまたはそれ超の年数ごとに投与することができる。
【０１０７】
対象は、ＰＤ−１経路阻害剤およびＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の用量を週、月または年の期間にわたって受ける場合がある。例えば、１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１年、２年、３年、４年、５年またはそれを超える。
【０１０８】
被験体は、哺乳動物の被験体、好適にはヒト被験体であってよい。
【０１０９】
本発明により処置することができるがんには、がんの腫瘍細胞がＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２を発現するがん（すなわち、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２陽性のがん）が含まれる。
【０１１０】
ＰＤ−Ｌ１発現は、肺癌、卵巣癌、腎臓癌および結腸癌ならびに悪性メラノーマで検出されたが、肺、子宮、腎臓、結腸または皮膚を含む正常組織では検出されなかった（Bensonら、Blood１１６巻、２２８６〜２２９４頁（２０１０年）；Blankら、Int.  J.  Cancer１１９巻、３１７〜３２７頁（２００６年）；Dongら、Nat.  Med.８巻、７９３〜８００頁（２００２年））。腫瘍細胞によるＰＤ−Ｌ１発現は、乳がん、胃がん、食道がん、肝細胞癌、悪性メラノーマ、卵巣がん、すい臓がん、腎細胞癌および尿路上皮がんのより悪い予後に関連する（Zou  &  Chen、Nat.  Rev.  Immunol.８巻、４６７〜４７７頁（２００８年））。
【０１１１】
ヒト腫瘍がＰＤ−Ｌ２を発現することができるという証拠が同様にある（Rozaliら、Clin.  Dev.  Immunol.２０１２巻、６５６３４０（２０１２年）；Karimら、Clin.  Cancer  Res.１５巻、６３４１〜６３４７頁（２００９年））。非小細胞肺がん−（ＮＳＣＬＣ−）関連の線維芽細胞は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を構成的に発現する。ＰＤ−Ｌ２陽性（ＰＤ−Ｌ２陰性に対して）の食道がん、卵巣がんまたは肝細胞がんの患者での生存低下も記載された。
【０１１２】
本発明により処置することができるがんには、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、特にＣＤ８＋ＴＩＬがＰＤ−１を発現するがん、またはＴＩＬが循環リンパ球より高いレベルのＰＤ−１を発現するがんが含まれる。
【０１１３】
ＮＳＣＬＣおよびメラノーマの両患者で、循環リンパ球より高いレベルのＰＤ−１がＴＩＬで観察された（Blankら、Int.  J.  Cancer１１９巻、３１７〜３２７頁（２００６年）；Zhangら、Cell.  Mol.  Immunol.７巻、３８９〜３９５頁（２０１０年））。ワクチン接種をしたメラノーマ患者の末梢血では、メラノーマ抗原特異的細胞傷害性リンパ球およびＴｒｅｇの両方がＰＤ−１を発現した（Wangら、Int.  Immunol.２１巻、１０６５〜１０７７頁（２００９年））。食道がんにおいて腫瘍ＰＤ−Ｌ２発現とＣＤ８＋ＴＩＬの存在の間に、負の相関もあった（Rozaliら、Clin.  Dev.  Immunol.２０１２巻、６５６３４０（２０１２年））。
【０１１４】
ＮＳＣＬＣから分離されたＣＤ８＋ＴＩＬは、循環するＣＤ８＋Ｔ細胞または健康なボランティアからのＣＤ８＋Ｔ細胞と比較して、ＰＤ−１の発現の増加および損なわれた機能的応答（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖および炎症性サイトカイン生成）を有した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体の添加は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖しインターフェロン−γを生成するＣＤ８＋ＴＩＬの能力を有意に改善した（Zhangら、Cell.  Mol.  Immunol.７巻、３８９〜３９５頁（２０１０年））。卵巣がん患者からの腫瘍由来樹状細胞およびＴＩＬの培養物を使用した類似の研究では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の添加は、腫瘍抗原に応答したＴＩＬによるインターフェロン−γ生成を有意に増加させた。卵巣腫瘍を有する免疫不全マウスにこれらのＴＩＬを移入したとき、対照群のマウスの腫瘍成長と比較して低減された腫瘍成長が見られた（Curielら、Nat.  Med.９巻、５６２〜５６７頁（２００３年））。
【０１１５】
特に、本発明により処置することができるがんには、皮膚がん、肺がん（特に扁平上皮または非扁平上皮ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、腎臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、乳がん、胃がん、食道がん、膵臓がん、膀胱がん、尿路上皮がんおよび肝臓がんが含まれる。
【０１１６】
本発明により処置することができるがんの他の例には、メラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、前立腺がん（例えばホルモン難治性の前立腺腺癌）、頭頸部がん（例えば、頭頸部の扁平上皮癌）、子宮頸がん、甲状腺がん、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫）、副腎がん、エイズ関連がん、胞巣状軟部肉腫、星状細胞腫瘍、骨がん、脳脊髄がん、転移性脳腫瘍、頸動脈球腫瘍、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管がん、妊娠性絨毛疾患、胚細胞腫瘍、血液学的悪性腫瘍、肝細胞癌、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓がん、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、髄芽細胞腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、脊髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、乳頭状甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、小児がん、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、後部ブドウ膜メラノーマ、稀な血液学的障害、腎臓転移がん、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫（rhabdomysarcoma）、肉腫、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、胃がん、滑膜肉腫、精巣がん、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺の転移がんまたは子宮がんが含まれる。
【０１１７】
一般に、本発明の組合せの構成成分または本発明の組成物は、公知の手段によって、任意の好適な製剤中で、任意の好適な経路によって投与されてよい。一部の実施形態では、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は、非経口的に（例えば、皮下、静脈内または筋肉内注射によって）投与される。一部の実施形態では、ＰＤ−１経路阻害剤は、静脈内に投与される。特定の実施形態では、ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体は皮下に投与され、ＰＤ−１経路阻害剤は静脈内に投与される。
【０１１８】
好適な医薬組成物および剤形は、医薬用製剤の分野の当業者に公知のならびに関連テキストおよび文献、例えばRemington:  The  Science  and  Practice  of  Pharmacy  (Easton,  Pa.:  Mack  Publishing  Co.、１９９５年)に記載されている従来の方法を使用して調製されてよい。
【０１１９】
投与の容易さおよび投与量の均一性のために本発明の組合せまたは組成物を単位剤形に製剤化することは特に有利である。本明細書において使用される用語「単位剤形」は、治療される個体のための単位の投与量として適する物理的に別個の単位を指す。すなわち、組成物は、必要とされる医薬用担体と関連して所望の治療効果を産生するように算出された活性剤の予め決定された「単位投与量」の分量をそれぞれ含有する別個の投与量単位に製剤化される。本発明の単位剤形の規格は、送達される活性剤の固有の特徴に依存する。投与量は、常用量および成分の投与の様式を参照してさらに決定されてよい。一部の場合では、組合わせにおける２つまたはそれを超える個々の投与単位が活性剤の治療有効量を提供する、例えば一緒に摂取される２個の錠剤またはカプセル剤が、各錠剤またはカプセル剤中の単位投与量が治療有効量のおよそ５０％であるように、治療有効投与量を提供できることは留意されるべきである。
【０１２０】
非経口投与のための本発明による調製物は、滅菌水溶液および非水溶液、懸濁液ならびにエマルションを含む。注射用水溶液は、活性剤を水溶性形態で含有する。非水性溶媒またはビヒクルの例は、オリーブ油およびコーン油などの脂肪油、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、プロピレングリコールなどの低分子量アルコール、ポリエチレングリコールなどの合成親水性ポリマー、リポソームなどを含む。非経口製剤は、可溶化剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤および安定化剤などのアジュバントも含有する場合があり、水性懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、およびデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有する場合がある。注射用製剤は、滅菌剤の組み込み、細菌保持フィルターを通じた濾過、照射または加熱によって滅菌状態にされてよい。それらは、滅菌注射用媒体を使用して製造されてもよい。活性剤は、注射を介する投与の直前に好適なビヒクルで再水和され得る乾燥形態、例えば凍結乾燥形態であってもよい。
【０１２１】
既に記載の製剤に加えて、活性剤は、活性剤の制御放出、好ましくは長期間にわたる徐放のためのデポー調製物として製剤化されてよい。これらの徐放剤形は、インプラント術（例えば、皮下もしくは筋肉内にまたは筋肉内注射によって）によって一般に投与される。
【０１２２】
本発明の組合せ調製物は、組合せでの構成成分の投与のための説明書と共に包装されてよい。説明書は、好適な記録媒体または基板上に記録されてよい。例えば、説明書は、紙またはプラスチックなどの基板上に印刷されてよい。説明書は、添付文書として、容器またはその構成成分のラベル（すなわち、包装または小分け包装に付随する）に存在してよい。他の実施形態では、説明書は、好適なコンピュータ可読保存媒体上に存在する電子的保存データファイル、例えばＣＤ−ＲＯＭ、ディスケットとして存在する。組合せ調製物の構成成分の一部またはすべては、滅菌性を維持するために好適な包装中に包装されてよい。
本発明の実施形態を、単なる一例として、添付の図面を参照して以下に記載する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
（ａ）ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体；および（ｂ）プログラム細胞死タンパク質−１（ＰＤ−１）経路阻害剤を含む、組合せ調製物。
（項目２）
（ａ）ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体；（ｂ）ＰＤ−１経路阻害剤；および（ｃ）薬学的に許容されるキャリア、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物。
（項目３）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体および前記ＰＤ−１経路阻害剤の共投与または逐次投与のための、項目１に記載の組合せ調製物または項目２に記載の医薬組成物。
（項目４）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体が前記ＰＤ−１経路阻害剤から分離されている、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目５）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体がＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１の０．２５〜３０ｍｇのモル当量である用量で存在する、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目６）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の複数の用量を含む、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目７）
前記ＰＤ−１経路阻害剤の複数の用量を含む、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目８）
前記ＰＤ−１経路阻害剤がＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目９）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が抗ＰＤ−１抗体、またはＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する能力を保持するその誘導体もしくは断片を含む、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１０）
前記ＰＤ−１経路阻害剤がペンブロリズマブまたはニボルマブまたはピジリズマブである、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１１）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が抗ＰＤ−Ｌ１抗体、またはＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する能力を保持するその誘導体もしくは断片を含む、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１２）
前記ＰＤ−１経路阻害剤がＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０ＡまたはＭＳＢ００１０７１８Ｃである、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１３）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が、単剤療法としての該ＰＤ−１経路阻害剤の典型的に処方される用量の最高５０％、１〜５０％、１〜２５％または１〜１０％である用量で存在する、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１４）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が、単剤療法としての該ＰＤ−１経路阻害剤の典型的に処方される用量の０．１〜５０％、０．１〜２５％、０．１〜２０％、０．１〜１０％、２０％未満、１０％未満、０．１〜２０％未満、０．１〜１０％未満、０．０１〜２０％未満または０．０１〜１０％未満である用量で存在する、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１５）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体、および前記ＰＤ−１経路阻害剤が、表１．２に示す投薬量の組合せのいずれかで存在する、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１６）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のドメインＤ１、および任意選択でドメインＤ２と、少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１７）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のドメインＤ１、Ｄ２、Ｄ３、および任意選択でＤ４と、少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１８）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が免疫グロブリンＦｃ配列に融合している、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目１９）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が、組換え可溶性ヒトＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１である、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目２０）
医薬としての使用のための、先行する項目のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目２１）
がんの予防、処置または回復において使用するための、項目１から１９のいずれかに記載の、組合せ調製物または医薬組成物。
（項目２２）
がんの予防、処置または回復のための医薬の製造における、項目１から１９のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物の使用。
（項目２３）
前記がんがＰＤ−Ｌ１陽性またはＰＤ−Ｌ２陽性のがんである、項目２１に記載の組合せ調製物もしくは医薬組成物、または項目２２に記載の組合せ調製物もしくは医薬組成物の使用。
（項目２４）
前記がんが、皮膚がん、肺がん（特に扁平上皮または非扁平上皮の非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、腎臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、乳がん、胃がん、食道がん、膵臓がん、膀胱がん、尿路上皮がんまたは肝臓がん、またはメラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、前立腺がん（例えばホルモン難治性の前立腺腺癌）、頭頸部がん（例えば、頭頸部の扁平上皮癌）、子宮頸がん、甲状腺がん、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫）、副腎がん、エイズ関連がん、胞巣状軟部肉腫、星状細胞腫瘍、骨がん、脳脊髄がん、転移性脳腫瘍、頸動脈球腫瘍、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管がん、妊娠性絨毛疾患、胚細胞腫瘍、血液学的悪性腫瘍、肝細胞癌、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓がん、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、髄芽細胞腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、脊髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、乳頭状甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、小児がん、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、後部ブドウ膜メラノーマ、稀な血液学的障害、腎臓転移がん、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、胃がん、滑膜肉腫、精巣がん、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺の転移がんまたは子宮がんである、項目２１に記載の組合せ調製物もしくは医薬組成物、または項目２２に記載の組合せ調製物もしくは医薬組成物の使用。
（項目２５）
感染の予防、処置または回復に使用するための、項目１から１９のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物。
（項目２６）
感染の予防、処置または回復のための医薬の製造における、項目１から１９のいずれかに記載の組合せ調製物または医薬組成物の使用。
（項目２７）
前記感染が慢性または持続的な感染である、項目２５に記載の組合せ調製物または項目２６に記載の使用。
（項目２８）
前記感染がウイルス、細菌、真菌または原生動物の感染である、項目２５もしくは２７に記載の組合せ調製物または項目２６もしくは２７に記載の使用。
（項目２９）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、Ｂウイルス（マカシンヘルペスウイルスＩ）、ＢＫウイルス、ブンヤウイルス、チクングニヤウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、サイトメガロウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エンテロウイルス、エプスタインバーウイルス、ハンタウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス１、単純疱疹ウイルス２、ヒトフォーミーウイルス、ヒトヘルペスウイルス３、ヒトヘルペスウイルス５、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒト免疫不全ウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ヒトβ−リンパ球向性ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩＩ、インフルエンザウイルス、ＪＣウイルス、ＪＥＶ、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ラッサウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ニパウイルス、ノロウイルス、ノーウォークウイルス、オルトレオウイルス、パラインフルエンザウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、レオウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、天然痘ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、大痘瘡ウイルス、小痘瘡ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ウエストナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルスまたは黄熱ウイルスによって引き起こされる、項目２８に記載の組合せ調製物または使用。
（項目３０）
前記細菌感染が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａまたはＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓによって引き起こされる、項目２８に記載の組合せ調製物または使用。
（項目３１）
前記真菌感染がＣａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、ＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓまたはＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓによって引き起こされる、項目２８に記載の組合せ調製物または使用。
（項目３２）
前記原生動物感染が、Ａｍｏｅｂｏｚｏａ、Ｅｘｃａｖａｔａ、Ｃｈｒｏｍａｌｖｅｏｌａｔａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ、Ｃｏｃｃｉｄｉａ、Ｂｅｓｎｏｉｔｉａ、ＤｉｃｒｏｃｏｅｌｉｕｍまたはＬｅｉｓｈｍａｎｉａによって引き起こされる、項目２８に記載の組合せ調製物または使用。
（項目３３）
がんを予防する、処置するまたは回復させる方法であって、そのような予防、処置または回復を必要とする被験体に、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体、およびＰＤ−１経路阻害剤を投与することを含む方法。
（項目３４）
感染を予防する、処置するまたは回復させる方法であって、そのような予防、処置または回復を必要とする被験体に、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体、およびＰＤ−１経路阻害剤を投与することを含む方法。
（項目３５）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体、および前記ＰＤ−１経路阻害剤が前記被験体に逐次投与される、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体が前記ＰＤ−１経路阻害剤の後に投与される、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３７）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体、および前記ＰＤ−１経路阻害剤が互いに９６時間以内に前記被験体に投与される、項目３５または３６に記載の方法。
（項目３８）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体、および前記ＰＤ−１経路阻害剤が前記被験体に共投与される、項目３３または３４に記載の方法。
（項目３９）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体がＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１の０．２５〜３０ｍｇのモル当量である用量で前記被験体に投与される、項目３３から３８のいずれかに記載の方法。
（項目４０）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の複数の用量が前記被験体に投与される、項目３３から３９のいずれかに記載の方法。
（項目４１）
前記ＰＤ−１経路阻害剤の複数の用量が前記被験体に投与される、項目３３から４０のいずれかに記載の方法。
（項目４２）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体の用量が、前記ＰＤ−１経路阻害剤の２またはそれを超える用量の各投与の前、それと共にまたはその後に投与される、項目４０または４１に記載の方法。
（項目４３）
前記ＰＤ−１経路阻害剤がＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、項目３３から４２のいずれかに記載の方法。
（項目４４）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が抗ＰＤ−１抗体、またはＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する能力を保持するその誘導体もしくは断片を含む、項目３３から４３のいずれかに記載の方法。
（項目４５）
前記ＰＤ−１経路阻害剤がペンブロリズマブまたはニボルマブまたはピジリズマブである、項目３３から４４のいずれかに記載の方法。
（項目４６）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が抗ＰＤ−Ｌ１抗体、またはＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する能力を保持するその誘導体もしくは断片を含む、項目３３から４３のいずれかに記載の方法。
（項目４７）
前記ＰＤ−１経路阻害剤がＢＭＳ−９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０ＡまたはＭＳＢ００１０７１８Ｃである、項目３３から４３または４６のいずれかに記載の方法。
（項目４８）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が、単剤療法としての該ＰＤ−１経路阻害剤の典型的に処方される用量の最高５０％、１〜５０％、１〜２５％または１〜１０％である用量で前記被験体に投与される、項目３３から４７のいずれかに記載の方法。
（項目４９）
前記ＰＤ−１経路阻害剤が、単剤療法としての該ＰＤ−１経路阻害剤の典型的に処方される用量の０．１〜５０％、０．１〜２５％、０．１〜２０％、０．１〜１０％、２０％未満、１０％未満、０．１〜２０％未満、０．１〜１０％未満、０．０１〜２０％未満または０．０１〜１０％未満である用量で前記被験体に投与される、項目３３から４８のいずれかに記載の方法。
（項目５０）
前記ＬＡＧ−３タンパク質またはその誘導体、および前記ＰＤ−１経路阻害剤が、表１．２に示す投薬量の組合せのいずれかで投与される、項目３３から４８のいずれかに記載の方法。
（項目５１）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のドメインＤ１、および任意選択でドメインＤ２と、少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目３３から５０のいずれかに記載の方法。
（項目５２）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が、ＬＡＧ−３タンパク質、好ましくはヒトＬＡＧ−３タンパク質のドメインＤ１、Ｄ２、Ｄ３、および任意選択でＤ４と、少なくとも７０％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目３３から５１のいずれかに記載の方法。
（項目５３）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が免疫グロブリンＦｃ配列に融合している、項目３３から５２のいずれかに記載の方法。
（項目５４）
ＬＡＧ−３タンパク質の前記誘導体が、組換え可溶性ヒトＬＡＧ−３Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１である、項目３３から５３のいずれかに記載の方法。
（項目５５）
前記がんがＰＤ−Ｌ１陽性またはＰＤ−Ｌ２陽性のがんである、項目３３または３５から５４のいずれかに記載の方法。
（項目５６）
前記がんが、皮膚がん、肺がん（特に扁平上皮または非扁平上皮の非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、腎臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、乳がん、胃がん、食道がん、膵臓がん、膀胱がん、尿路上皮がんまたは肝臓がん、またはメラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、前立腺がん（例えばホルモン難治性の前立腺腺癌）、頭頸部がん（例えば、頭頸部の扁平上皮癌）、子宮頸がん、甲状腺がん、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫）、副腎がん、エイズ関連がん、胞巣状軟部肉腫、星状細胞腫瘍、骨がん、脳脊髄がん、転移性脳腫瘍、頸動脈球腫瘍、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管がん、妊娠性絨毛疾患、胚細胞腫瘍、血液学的悪性腫瘍、肝細胞癌、島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓がん、脂肪腫／良性脂肪腫様腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫様腫瘍、髄芽細胞腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、多発性内分泌腫瘍、多発性骨髄腫、脊髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、乳頭状甲状腺癌、副甲状腺腫瘍、小児がん、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺がん、後部ブドウ膜メラノーマ、稀な血液学的障害、腎臓転移がん、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、胃がん、滑膜肉腫、精巣がん、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺の転移がんまたは子宮がんである、項目３３または３５から５５のいずれかに記載の方法。
（項目５７）
前記感染が慢性または持続的な感染である、項目３４から５４のいずれかに記載の方法。
（項目５８）
前記感染がウイルス、細菌、真菌または原生動物の感染である、項目３４から５４、または５７のいずれかに記載の方法。
（項目５９）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、Ｂウイルス（マカシンヘルペスウイルスＩ）、ＢＫウイルス、ブンヤウイルス、チクングニヤウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、サイトメガロウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エボラウイルス、エンテロウイルス、エプスタインバーウイルス、ハンタウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス１、単純疱疹ウイルス２、ヒトフォーミーウイルス、ヒトヘルペスウイルス３、ヒトヘルペスウイルス５、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス７、ヒト免疫不全ウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ヒトβ−リンパ球向性ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩＩ、インフルエンザウイルス、ＪＣウイルス、ＪＥＶ、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ラッサウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ニパウイルス、ノロウイルス、ノーウォークウイルス、オルトレオウイルス、パラインフルエンザウイルス、パルボウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、レオウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、天然痘ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、大痘瘡ウイルス、小痘瘡ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ウエストナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルスまたは黄熱ウイルスによって引き起こされる、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記細菌感染がＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａまたはＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓによって引き起こされる、項目５８に記載の方法。
（項目６１）
前記真菌感染がＣａｎｄｉｄａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、ＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓまたはＳｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓによって引き起こされる、項目５８に記載の方法。
（項目６２）
前記原生動物感染が、Ａｍｏｅｂｏｚｏａ、Ｅｘｃａｖａｔａ、Ｃｈｒｏｍａｌｖｅｏｌａｔａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ、Ｃｏｃｃｉｄｉａ、Ｂｅｓｎｏｉｔｉａ、ＤｉｃｒｏｃｏｅｌｉｕｍまたはＬｅｉｓｈｍａｎｉａによって引き起こされる、項目５８に記載の方法。
（項目６３）
前記被験体がヒト被験体である、項目３３から６２のいずれかに記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０１２３】
【図１】図１は、腫瘍免疫回避におけるＰＤ−１経路の役割およびＰＤ−１経路遮断の作用機構を示す図である（ＡＰＣ、抗原提示細胞；ＩＦＮ−γ、インターフェロン−γ；ＭＨＣ、主要組織適合性複合体；ＰＤ−１、プログラム死−１；ＰＤ−Ｌ１、ＰＤリガンド１；ＴＣＲ、Ｔ細胞受容体）。
【図２】図２は、抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響を示すグラフである。
【図３】図３は、抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響を示すグラフである。
【図４】図４は、抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響を示すグラフである。
【図５】図５は、抗原刺激によって誘導されるＴＮＦα、ＩＬ−６、ＲＡＮＴＥＳの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響を示すグラフである。
【図６−１】図６は、抗原刺激によって誘導される活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響を示すグラフである。図６の各グラフの最終欄の条件が図に示すように「３０ｎｇ／ｍｌ抗ＰＤ１＋１０００ｎｇ／ｍｌ  ＬＡＧ−３Ｉｇ」ではなく「１０００ｎｇ／ｍｌ抗ＰＤ１＋３０ｎｇ／ｍｌ  ＬＡＧ−３Ｉｇ」であることに留意されたい。
【図６−２】図６は、抗原刺激によって誘導される活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響を示すグラフである。図６の各グラフの最終欄の条件が図に示すように「３０ｎｇ／ｍｌ抗ＰＤ１＋１０００ｎｇ／ｍｌ  ＬＡＧ−３Ｉｇ」ではなく「１０００ｎｇ／ｍｌ抗ＰＤ１＋３０ｎｇ／ｍｌ  ＬＡＧ−３Ｉｇ」であることに留意されたい。
【図７】図７は、免疫グロブリンＦｃ（ＩｇＦｃ）配列に融合されたＬＡＧ−３タンパク質の誘導体を示す説明図である。
【図８】図８は、ＬＡＧ−３誘導体のＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合を示す。
【図９】図９は、ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を遮断する抗体によるＬＡＧ−３誘導体のＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合の阻害を示す。
【図１０】図１０は、ＣＣＬ４分泌によって決定されたＬＡＧ−３誘導体によるＴＨＰ−１細胞の活性化を示す。
【図１１】図１１は、ＴＮＦ−α分泌によって決定されたＬＡＧ−３誘導体によるＴＨＰ−１細胞の活性化を示す。
【図１２】図１２は、ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を遮断する抗体によるＬＡＧ誘導体誘導単球活性化の阻害を示す。
【図１３】図１３は、ＬＡＧ−３誘導体による抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化を示す。
【図１４】図１４は、ＬＡＧ−３誘導体によるＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化を示す。
【図１５】図１５は、成熟ヒトＬＡＧ−３タンパク質のアミノ酸配列を示す。４個の細胞外Ｉｇスーパーファミリードメインは、アミノ酸残基：１〜１４９（Ｄ１）；１５０〜２３９（Ｄ２）；２４０〜３３０（Ｄ３）；および３３１〜４１２（Ｄ４）にある。ヒトＬＡＧ−３タンパク質のＤ１ドメインのエクストラループ構造のアミノ酸配列を太字下線付きで示す。
【図１６−１】図１６は、抗原刺激によって誘導される活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の影響を示すグラフである。
【図１６−２】図１６は、抗原刺激によって誘導される活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の影響を示すグラフである。
【図１７】図１７は、抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび異なる抗ＰＤ１抗体（Ａｂ１およびＡｂ２）の影響を示すグラフである。
【図１８】図１８は、抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび異なる抗ＰＤ−Ｌ１抗体（Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５およびＡｂ６）の影響を示すグラフである。
【図１９】図１９は、抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌に及ぼす異なるＬＡＧ−３誘導体（ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ３２１  Ｒ７５Ａ、ＬＡＧ３  Ｄ１Ｄ４−リンカー２−Ｉｇ）および抗ＰＤ−１抗体の影響を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０１２４】
下の実施例、表および図では、用語「抗ＰＤ１抗体」は「抗ＰＤ−１抗体」と同義的に使用され、用語「抗ＰＤＬ１抗体」は「抗ＰＤ−Ｌ１抗体」と同義的に使用される。
【実施例】
【０１２５】
（実施例１）
抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響
この実施例は、ＩＦＮ−γ分泌アッセイを使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞活性化に及ぼすＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＬＡＧ−３Ｉｇ、ＩＭＰ３２１としても知られる）および抗ＰＤ１抗体の影響を実証する。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）には、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）、単球および樹状細胞が含まれる。ＩＦＮ−γは、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋記憶およびエフェクターＴ細胞によって、ならびに活性化後のＮＫ細胞によって主に分泌される。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの特異抗原による再刺激の後、ＩＦＮ−γの分泌が誘導される。
【０１２６】
３人の健康なドナーからのＰＢＭＣ（細胞数０．２×１０６／ウェル、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）＋１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）に１×１０６Ｍ／ｍｌで）を、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび示された濃度の抗ＰＤ１  ｍＡｂ（クローンＥＨ１２．１、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ＃５６２１３８）の存在下または非存在下で、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ｐｐ６５の配列を含むペプチドのプール（ＰｅｐＴｉｖａｔｏｒ（登録商標）ＣＭＶ  ｐｐ６５、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ＃１３０−０９３−４３５）と共に３つ組でインキュベートした。ペプチドのプールは、ヒトＣＭＶ株ＡＤ１６９（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ０６７２５）のｐｐ６５タンパク質の完全配列を含む、１１個のアミノ酸重複部分を有する１５量体配列から主になった。
【０１２７】
Ｔ細胞応答は、ＢＤサイトメトリービーズアレイを使用して刺激の２日後に細胞上清中のＩＦＮ−γの濃度を測定することによって評価した。
【０１２８】
各ドナーについてのプールした３つ組（pooled  triplicates）に存在するＩＦＮ−γの濃度を、下の表２に記録する。図２は、各ドナーの抗ＰＤ１  ｍＡｂの濃度に対してプロットされたＩＦＮ−γの濃度を示す。
【表２】
2020073594.tif 000008
【０１２９】
結果は、単独の抗ＰＤ１抗体と比較して、ＰＢＭＣを３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよびより低い濃度の抗ＰＤ１抗体の存在下でインキュベートしたとき、ＩＦＮ−γの分泌が劇的に増加したことを示す。例えば、下の表３に示すように、各ドナーについて、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体の存在下でのバックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ１およびＬＡＧ−３Ｉｇの非存在下でのＩＦＮ−γの濃度）を超えるＩＦＮ−γの濃度の増加は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇ単独および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体単独の存在下での対応する増加の合計より大きかった。したがって、各ドナーについてのＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の組合せの効果は相乗的であった。
【表３】
2020073594.tif 000009
【０１３０】
結果は、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび比較的低い濃度の抗ＰＤ１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＩＦＮ−γの分泌が、はるかに高い濃度（３００ｎｇ／ｍｌ〜１０００ｎｇ／ｍｌ、１０倍から３０倍超高い）の抗ＰＤ１抗体単独によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌と同等であったことも示す。ドナーＮｏ．１および３の場合、単独の１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体と比較して、ＰＢＭＣを３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１および３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇとインキュベートしたときに類似の濃度のＩＦＮ−γが分泌された。ドナーＮｏ．２の場合、３００ｎｇ／ｍｌおよび１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体単独と比較して、ＰＢＭＣを３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１および３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇとインキュベートしたときに類似の濃度のＩＦＮ−γが分泌された。
【０１３１】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞応答（ＩＦＮ−γ分泌によって測定される）は、可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加する（ドナーＮｏ．１、２および３でそれぞれ概ね約７．５倍、１．５倍および２倍）と結論づけられた。さらに、抗ＰＤ１抗体を可溶性ＬＡＧ−３誘導体と組み合わせるならば、概ね１０分の１〜３０分の１の抗ＰＤ１抗体を使用して同等のｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞応答が得られると結論づけられた。
（実施例２）
抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響
【０１３２】
この実施例は、ＩＦＮ−γ分泌アッセイを使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞活性化に及ぼすＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＬＡＧ−３Ｉｇ）および抗ＰＤ１抗体の影響を実証する。
【０１３３】
１０人の健康なドナーからのＰＢＭＣ（細胞数０．２×１０６／ウェル、完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳに１×１０６Ｍ／ｍｌで）を、ＣＭＶ  ｐｐ６５の配列を含むペプチドのプール（ＰｅｐＴｉｖａｔｏｒ（登録商標）ＣＭＶ  ｐｐ６５、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ＃１３０−０９３−４３５）と共に、いかなる添加物もなし（培地）で、３０ｎｇ／ｍｌまたは１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１  ｍＡｂ（クローンＥＨ１２．１、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ＃５６２１３８）と一緒に、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇと一緒に、または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１  ｍＡｂと一緒に３つ組でインキュベートした。
【０１３４】
Ｔ細胞応答は、ＢＤサイトメトリービーズアレイを使用して刺激の２日後に細胞上清中のＩＦＮ−γの濃度を測定することによって評価した。
【０１３５】
各ドナーについての各刺激条件でのプールした３つ組中のＩＦＮ−γの濃度を、下の表４に記録する。１０人のドナーについて得られた結果の平均を、表５に示す。各ドナーの結果は、図３および４にもプロットする。統計的差（＊ｐ＜０．０５）は、図３に黒色で示す。
【表４】
2020073594.tif 000010
【０１３６】
【表５】
2020073594.tif 000011
【０１３７】
結果は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇまたは３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体単独と比較して、ＰＢＭＣを３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体の存在下でインキュベートしたとき、各ドナーでＩＦＮ−γの分泌がはるかに高かったことを示す。表５は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体の存在下での平均バックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ１およびＬＡＧ−３Ｉｇの非存在下でのＩＦＮ−γの平均濃度）を超えるＩＦＮ−γの平均濃度の増加は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇ単独および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体単独の存在下での対応する増加の合計より大きかったことを示す（すなわち、７６５＞２３９＋１７２）。したがって、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の組合せの効果は相乗的であった。
【０１３８】
結果は、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび比較的低い濃度の抗ＰＤ１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＩＦＮ−γの分泌が、はるかに高い濃度（１０００ｎｇ／ｍｌ、３０倍超高い）の抗ＰＤ１抗体単独によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌と同等であったことも示す。
【０１３９】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答（ＩＦＮ−γ分泌によって測定される）は、可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加する（平均して概ね２倍）と結論づけられた。さらに、抗ＰＤ１抗体を可溶性ＬＡＧ−３誘導体と組み合わせるならば、３０分の１より少ない抗ＰＤ１抗体を使用して同等のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｔ細胞応答が得られると結論づけられた。
（実施例３）
抗原刺激によって誘導されるＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＲＡＮＴＥＳの分泌に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響
【０１４０】
この実施例は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）の分泌を測定することによりｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞活性化に及ぼすＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＬＡＧ−３Ｉｇ）および抗ＰＤ１抗体の影響を実証する。
【０１４１】
１０人の健康なドナーからのＰＢＭＣ（細胞数０．２×１０６／ウェル、完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳに１×１０６Ｍ／ｍｌで）を、ＣＭＶ  ｐｐ６５の配列を含むペプチドのプール（ＰｅｐＴｉｖａｔｏｒ（登録商標）ＣＭＶ  ｐｐ６５、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ＃１３０−０９３−４３５）と共に、いかなる添加物もなし（培地）で、３０ｎｇ／ｍｌまたは１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１  ｍＡｂ（クローンＥＨ１２．１、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ＃５６２１３８）と一緒に、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇと一緒に、または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１  ｍＡｂと一緒に３つ組でインキュベートした。
【０１４２】
Ｔ細胞応答は、ＢＤサイトメトリービーズアレイを使用して刺激の２日後に細胞上清中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＬ５）の濃度を測定することによって評価した。
【０１４３】
各ドナーについての各刺激条件でのプールした３つ組中のサイトカイン／ケモカインの濃度を、下の表６〜８に記録する。１０人のドナーで得られた結果の平均を表９に示し、平均バックグラウンドを超える平均の増加は表１０に示す。各ドナーの結果も図５にプロットし、統計的差（＊ｐ＜０．０５）は黒色で示す。
【表６】
2020073594.tif 000012
【０１４４】
【表７】
2020073594.tif 000013
【０１４５】
【表８】
2020073594.tif 000014
【０１４６】
【表９】
2020073594.tif 000015
【０１４７】
【表１０】
2020073594.tif 000016
【０１４８】
結果は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇまたは３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体単独と比較して、ＰＢＭＣを３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体の存在下でインキュベートしたとき、各ドナーでＩＬ−６の分泌がはるかに高かったことを示す。表１０は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体の存在下での平均バックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ１およびＬＡＧ−３Ｉｇの非存在下でのＩＬ−６の平均濃度）を超えるＩＬ−６の平均濃度の増加は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇ単独および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１抗体単独の存在下での対応する増加の合計より大きかったことを示す（すなわち、８５９４＞７３２＋２９６４）。したがって、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の組合せの効果は相乗的であった。
【０１４９】
結果は、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび比較的低い濃度の抗ＰＤ１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＩＬ−６の分泌が、はるかに高い濃度（１０００ｎｇ／ｍｌ、３０倍超高い）の抗ＰＤ１抗体単独によって誘導されるＩＬ−６の分泌と同等であったことも示す。
【０１５０】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答（ＩＬ−６分泌によって測定される）は、可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加する（平均して２．３倍超）と結論づけられた。
（実施例４）
抗原刺激によって誘導される活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ１抗体の影響
【０１５１】
この実施例は、Ｔ細胞活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＬＡＧ−３Ｉｇ）および抗ＰＤ１抗体の影響を実証する。
【０１５２】
７人の健康なドナーからのＰＢＭＣ（細胞数０．２×１０６／ウェル、完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳに１×１０６Ｍ／ｍｌで）を、ＣＭＶ  ｐｐ６５の配列を含むペプチドのプール（ＰｅｐＴｉｖａｔｏｒ（登録商標）ＣＭＶ  ｐｐ６５、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ＃１３０−０９３−４３５）と共に、いかなる添加物もなし（培地）で、３０ｎｇ／ｍｌまたは１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１  ｍＡｂ（クローンＥＨ１２．１、ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ＃５６２１３８）と一緒に、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇと一緒に、または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０もしくは１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ１  ｍＡｂと一緒に３つ組でインキュベートした。
【０１５３】
刺激の２日後にフローサイトメトリーによって３つの活性化マーカー（ＬＡＧ−３、ＣＤ６９およびＣＤ２５）の発現について細胞の表現型を分析することによって、Ｔ細胞応答を評価した。
【０１５４】
各刺激条件でのプールした３つ組における、ＬＡＧ−３、ＣＤ６９またはＣＤ２５、３つの活性化マーカーの少なくとも１つ（ＬＡＧ−３、ＣＤ６９またはＣＤ２５）、または活性化マーカーの全３つ（ＬＡＧ−３、ＣＤ６９およびＣＤ２５）を発現するＣＤ８細胞の百分率は、下の表１１〜１５に記録する。７人のドナーで得られた結果の平均を表１６に示し、平均バックグラウンドを超える平均の増加は表１７に示す。各ドナーの結果も図６にプロットし、統計的差（＊ｐ＜０．０５）は黒色で示す。
【表１１】
2020073594.tif 000017
【０１５５】
【表１２】
2020073594.tif 000018
【０１５６】
【表１３】
2020073594.tif 000019
【０１５７】
【表１４】
2020073594.tif 000020
【０１５８】
【表１５】
2020073594.tif 000021
【０１５９】
【表１６】
2020073594.tif 000022
【０１６０】
【表１７】
2020073594.tif 000023
【０１６１】
結果は、３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体および３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇまたは１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体および３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇによる刺激が、活性化マーカーのいずれかまたは全３つを発現するＣＤ８細胞の平均百分率の相乗的増加をもたらしたことを示す。
【０１６２】
結果は、３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体および３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇによる刺激が、活性化マーカーのいずれかまたは全３つを発現するＣＤ８細胞の、１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体による刺激よりも有意に高い平均百分率をもたらしたことも示す。
【０１６３】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＣＤ８＋Ｔ細胞応答（Ｔ細胞活性化マーカーの発現によって測定される）は、可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加すると結論づけられた。さらに、抗ＰＤ１抗体を可溶性ＬＡＧ−３誘導体と組み合わせるならば、３０分の１より少ない抗ＰＤ１抗体を使用して劇的に改善されたｉｎ  ｖｉｔｒｏのＣＤ８＋Ｔ細胞応答が得られると結論づけられた。
【０１６４】
ＰＤ−１経路阻害剤（ＫｅｙｔｒｕｄａおよびＯｐｄｉｖｏなど）はＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化することが知られており、この活性化は抗がん作用と関連するので、上の実施例で示される結果は、ＰＤ−１経路阻害剤と、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体の共投与によって改善された抗がん作用を得ることができるという証拠を提供する。あるいは、単剤療法としてのＰＤ−１経路阻害剤の投与と比較してＰＤ−１経路阻害剤のより低い用量（例えば、１０分の１〜３０分の１の用量）での、ＰＤ−１経路阻害剤とＬＡＧ−３タンパク質（または、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体）の共投与によって、類似の抗がん作用を達成することができる。そのような共投与は、ＰＤ−１経路阻害剤によって引き起こされる副作用を低減することが予想される。
【０１６５】
同様に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、慢性または持続的感染を含む感染に対して有効であることも知られているので、上の実施例で示される結果は、感染をより効果的に予防する、処置するまたは回復させるために、ＰＤ−１経路阻害剤と、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体の共投与を使用することができる証拠も提供する。あるいは、単剤療法としてのＰＤ−１経路阻害剤の投与と比較してＰＤ−１経路阻害剤のより低い用量（例えば、３０分の１〜１００分の１の用量）での、ＰＤ−１経路阻害剤とＬＡＧ−３タンパク質（または、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体）の共投与によって、感染に対する類似の効果を達成することができる。そのような共投与は、ＰＤ−１経路阻害剤によって引き起こされる副作用を低減することが予想される。
（実施例５）
ＬＡＧ−３誘導体のＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合
ＬＡＧ−３のいくつかの誘導体をＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞に結合するそれらの能力について検査した：
ｉ）第１のリンカーによって免疫グロブリンＦｃ（Ｉｇ  Ｆｃ）配列に連結されたＬＡＧ−３のドメインＤ１〜Ｄ４（ＬＡＧ−３  Ｄ１Ｄ４−リンカー１−Ｉｇ、ｓＬＡＧ−３  Ｄ１Ｄ４−Ｉｇ、ＬＡＧ−３ＩｇまたはＩＭＰ３２１）；
ｉｉ）第２のリンカーによってＩｇ  Ｆｃ配列に連結されたＬＡＧ−３のドメインＤ１〜Ｄ４（ＬＡＧ−３  Ｄ１Ｄ４−リンカー２−ＩｇまたはｓＬＡＧ−３  Ｄ１Ｄ４−リンカーＢ−Ｉｇ）；
ｉｉｉ）第２のリンカーによってＩｇ  Ｆｃ配列に連結されたＬＡＧ−３のドメインＤ１およびＤ２（ＬＡＧ−３  Ｄ１Ｄ２−リンカー２−ＩｇまたはｓＬＡＧ−３  Ｄ１Ｄ２−リンカーＢ−Ｉｇ）；ならびに
【０１６６】
ｉｖ）第１のリンカーによってＩｇ  Ｆｃ配列に連結されたＬＡＧ−３のドメインＤ１〜Ｄ４だが、３倍またはそれを超えるまでＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を増強する変異をＬＡＧ−３のＤ１ドメインのＭＨＣクラスＩＩ結合部位中のＲ７５位（Ｒ７５Ａ）に有する（Huardら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１９９７年、９４巻:５７４４頁）（ＩＭＰ３２１  Ｒ７５Ａ）。
【０１６７】
誘導体を図７に例示する。
【０１６８】
ＭＨＣクラスＩＩ＋Ｒａｊｉ細胞を種々の濃度のＬＡＧ−３誘導体と、または陰性対照としてのヒトＩｇＧ１抗体（ｈＩｇＧ１）と４５分間、４℃でインキュベートした。細胞表面に結合したＬＡＧ−３分子がＦＩＴＣ−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇ（Ｃｏｕｌｔｅｒ）で明らかになった。細胞をフローサイトメトリーによって分析した。蛍光強度単位として表される結果を、図８に示す。結果は、すべてのＬＡＧ−３誘導体がＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞に結合したことを示している。
（実施例６）
ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を遮断する抗体によるＬＡＧ−３誘導体ＩＭＰ３２１のＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞への結合の阻害
【０１６９】
１７Ｂ４および１１Ｅ３は、ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を遮断することが知られている抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体である。ＩＭＰ３２１−コンジュゲート（ＬＡＧ−３Ｉｇ−Ａｌｅｘａ４８８）のＭＨＣクラスＩＩ陽性Ｂ細胞（Ｒａｊｉ細胞）への結合を、１７Ｂ４もしくは１１Ｅ３遮断抗体またはアイソタイプ適合（ｉｓｏｔｙｐｅ  ｍａｔｃｈｅｄ）陰性対照モノクローナル抗体（ｍＩｇＧ１）とのコンジュゲートの予備インキュベーション（４μｇ／ｍｌ、４℃）に続いて決定した。細胞結合蛍光の分析を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用して実行した。結果を図９に示す。
【０１７０】
結果は、ＩＭＰ３２１のＲａｊｉ細胞への結合が、ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を遮断するＬＡＧ−３−特異的モノクローナル抗体によって阻害されたことを示している。
（実施例７）
ＬＡＧ−３誘導体による単球の活性化
【０１７１】
ＴＨＰ−１細胞を図５に例示するＬＡＧ−３誘導体と、または陰性対照としてのヒトＩｇＧ１と４時間、４℃でインキュベートした。ケモカインＣＣＬ４、およびサイトカイン腫瘍壊死因子−α、ＴＮＦ−αのＴＨＰ−１細胞による分泌の量を決定し、単球活性化の測定値として使用した。ＣＣＬ４およびＴＮＦ−α分泌をＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄｓ  Ａｒｒａｙを使用して細胞上清中で定量した。ＣＣＬ４決定の結果を図１０に示し、ＴＮＦ−α決定の結果を図１１に示す。
【０１７２】
結果は、ＬＡＧ−３誘導体がすべてＴＨＰ−１単球細胞を活性化できたことを示している。
（実施例８）
ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を遮断する抗体によるＩＭＰ３２１誘導単球活性化の阻害
【０１７３】
ＴＨＰ−１細胞との混合物の３７℃で４時間のインキュベーションの前にＩＭＰ３２１（２０ｎｇ／ｍｌ）を１７Ｂ４または１１Ｅ３抗体と予備インキュベート（３７℃で５分間）した。ＴＨＰ−１細胞によるＣＣＬ４分泌の量を単球活性化のレベルを決定するために使用した。２つの実験の結果を図１２に示す。
【０１７４】
結果は、ＩＭＰ３２１誘導単球活性化が遮断抗ＬＡＧ−３  ｍＡｂｓ  １７Ｂ４および１１Ｅ３によって阻害されることを実証している。これは、単球を活性化するＩＭＰ３２１の能力がＩＭＰ３２１のＭＨＣクラスＩＩ分子への結合に依存することを示している。
（実施例９）
ＬＡＧ−３誘導体による初代抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化
【０１７５】
ヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を図７に例示するＬＡＧ−３誘導体と、または陰性対照としてのヒトＩｇＧ１と、分泌阻害物質であるブレフェルジンの存在下で３７℃で４時間インキュベートした。ＰＢＭＣに存在するＡＰＣのサイトカイン応答をＣＣＬ４（Ｔｈ１およびＣＤ８陽性応答を支持することが知られているケモカイン）ならびにＴＮＦ−α（腫瘍形成を直接阻害する多機能性サイトカイン）の細胞内染色によって決定した。結果をサイトメトリーによって分析した。結果をＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞においてＣＣＬ４および／またはＴＮＦ−αを発現している細胞の百分率によって表し、図１３に示す。
【０１７６】
結果は、初代ＡＰＣにおいて検査したすべてのＬＡＧ−３誘導体がＣＣＬ４およびＴＮＦ−αの産生を誘導したことを示している。
（実施例１０）
ＬＡＧ−３誘導体によるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化
【０１７７】
ヒトＰＢＭＣを図７に例示するＬＡＧ−３誘導体と、または陰性対照としてのヒトＩｇＧ１と１８時間インキュベートした。ブレフェルジンは、インキュベーションの最後の１６時間に存在した。ＬＡＧ−３誘導体への１８時間曝露後のＣＤ８＋Ｔ細胞のサイトカイン応答をＣＣＬ４、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの細胞内染色によって追跡し、サイトメトリーによって分析した。結果をＣＤ３＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞においてＣＣＬ４、ＩＦＮ−γおよび／またはＴＮＦ−αを発現している細胞の百分率として表し、図１４に示す。
【０１７８】
結果は、検査したすべてのＬＡＧ−３誘導体が１型細胞傷害性ＣＤ８陽性Ｔ細胞（Ｔｃ１細胞）の活性化を誘導したことを示している。ＡＰＣによって発現されるＭＨＣクラスＩＩ分子への結合を通じて、ＬＡＧ−３誘導体はＴｃ１細胞の活性化を誘導したことが結論付けられる。Ｔｃ１細胞の活性化は主な抗腫瘍免疫応答を形成する。
（実施例１１）
抗原刺激によって誘導される活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび抗ＰＤ−Ｌ１の影響
【０１７９】
この実施例は、Ｔ細胞活性化マーカーの発現に及ぼすＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＬＡＧ−３Ｉｇ）および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の影響を実証する。
【０１８０】
１２人の健康なドナーからのＰＢＭＣ（細胞数０．２×１０６／ウェル、完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳに１Ｍ／ｍｌで）を、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールと、いかなる添加物もなし（培地）で、３０ｎｇ／ｍｌまたは３０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−Ｌ１ヒト化抗体（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ＃７１２１３）と一緒に、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇと一緒に、または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−Ｌ１抗体と一緒に３つ組でインキュベートした。
【０１８１】
刺激の３日後にフローサイトメトリーによって３つの活性化マーカー（ＬＡＧ−３、ＣＤ６９およびＣＤ２５）の発現について細胞の表現型を分析することによって、Ｔ細胞応答を評価した。
【０１８２】
各刺激条件でのプールした３つ組における、ＬＡＧ−３、ＣＤ６９またはＣＤ２５、３つの活性化マーカーの少なくとも１つ（ＬＡＧ−３、ＣＤ６９またはＣＤ２５）、または活性化マーカーの全３つ（ＬＡＧ−３、ＣＤ６９およびＣＤ２５）を発現するＣＤ８細胞の百分率は、下の表１８〜２２に記録する。１２人のドナーで得られた結果の平均を表２３に示し、平均バックグラウンドを超える平均の増加は表２４に示す。各ドナーの結果も図１６にプロットし、統計的差（＊ｐ＜０．０５）は黒色で示す。
【表１８】
2020073594.tif 000024
【０１８３】
【表１９】
2020073594.tif 000025
【０１８４】
【表２０】
2020073594.tif 000026
【０１８５】
【表２１】
2020073594.tif 000027
【０１８６】
【表２２】
2020073594.tif 000028
【表２３】
2020073594.tif 000029
【０１８７】
【表２４】
2020073594.tif 000030
【０１８８】
結果は、３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−Ｌ１抗体および３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇによる刺激が、活性化マーカーのいずれかまたは全３つを発現するＣＤ８細胞の平均百分率の相乗的増加をもたらしたことを示す。
【０１８９】
結果は、３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−Ｌ１抗体および３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇによる刺激が、活性化マーカーのいずれかまたは全３つを発現するＣＤ８細胞の、３０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独による刺激よりも有意に高い平均百分率をもたらしたことも示す。
【０１９０】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＣＤ８＋Ｔ細胞応答（Ｔ細胞活性化マーカーの発現によって測定される）は、可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加すると結論づけられた。さらに、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を可溶性ＬＡＧ−３誘導体と組み合わせるならば、１００分の１の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用して劇的に改善されたｉｎ  ｖｉｔｒｏのＣＤ８＋Ｔ細胞応答が得られると結論づけられた。
【０１９１】
ＰＤ−１経路阻害剤（ＫｅｙｔｒｕｄａおよびＯｐｄｉｖｏなど）はＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化することが知られており、この活性化は抗がん作用と関連するので、上の実施例で示される結果は、ＰＤ−１経路阻害剤と、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体の共投与によって改善された抗がん作用を得ることができるという証拠を提供する。あるいは、単剤療法としてのＰＤ−１経路阻害剤の投与と比較してＰＤ−１経路阻害剤のより低い用量（例えば、３０分の１〜１００分の１の用量）での、ＰＤ−１経路阻害剤とＬＡＧ−３タンパク質（または、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体）の共投与によって、類似の抗がん作用を達成することができる。そのような共投与は、ＰＤ−１経路阻害剤によって引き起こされる副作用を低減することが予想される。
【０１９２】
同様に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、慢性または持続的感染を含む感染に対して有効であることも知られているので、上の実施例で示される結果は、感染をより効果的に予防する、処置するまたは回復させるために、ＰＤ−１経路阻害剤と、ＬＡＧ−３タンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体の共投与を使用することができる証拠も提供する。あるいは、単剤療法としてのＰＤ−１経路阻害剤の投与と比較してＰＤ−１経路阻害剤のより低い用量（例えば、３０分の１〜１００分の１の用量）での、ＰＤ−１経路阻害剤とＬＡＧ−３タンパク質（または、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することができるその誘導体）の共投与によって、感染に対する類似の効果を達成することができる。そのような共投与は、ＰＤ−１経路阻害剤によって引き起こされる副作用を低減することが予想される。
（実施例１２）
抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α生成に及ぼすＬＡＧ−３Ｉｇおよび様々な抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の影響
【０１９３】
この実施例は、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α分泌アッセイを使用したｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞活性化に及ぼすＬＡＧ−３の可溶性誘導体（ＬＡＧ−３Ｉｇ）および様々な異なる抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の影響を実証する。
【０１９４】
健康なドナーからのＰＢＭＣ（細胞数０．２×１０６／ウェル、完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳに１Ｍ／ｍｌで）を、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールと、いかなる添加物もなし（培地）で、３０ｎｇ／ｍｌもしくは１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体（Ａｂ１またはＡｂ２）または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５またはＡｂ６）と一緒に、１０もしくは３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇと一緒に、または１０もしくは３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体と一緒に３つ組でインキュベートした。
【０１９５】
Ｔ細胞応答は、ＢＤサイトメトリービーズアレイを使用して刺激の３日後に細胞培養上清中のＩＦＮ−γおよびＴＮＦの濃度を測定することによって評価した。
抗ＰＤ−１：Ａｂ１（ＢＤ  ＰｈａｒｍｉｎｇｅｎからのクローンＭＩＨ４、カタログ＃５５７８２３）およびＡｂ２（ＢＰＳ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅからのヒト化抗ＰＤ−１、カタログ＃７１１２０）；
抗ＰＤ−Ｌ１：Ａｂ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅからのクローンＭＩＨ１、カタログ＃１６−５９８３−８２）、Ａｂ４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅからのクローンＭＩＨ５、カタログ＃１６−５９８２−８１）、Ａｂ５（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅからのクローン１−１１１Ａ、カタログ＃１４−９９７１−８１）およびＡｂ６（ＢＰＳ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅからのヒト化抗ＰＤ−Ｌ１、カタログ＃７１２１３）。
【０１９６】
抗ＰＤ−１抗体についての各刺激条件でのプールした３つ組中のＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの濃度を、表２５に記録する。結果を、図１７にプロットする。
【表２５】
2020073594.tif 000031
【０１９７】
結果は、各抗ＰＤ−１抗体で、単独の抗ＰＤ−１抗体と比較して、ＰＢＭＣをＬＡＧ−３Ｉｇおよびより低い濃度の抗ＰＤ−１抗体の存在下でインキュベートしたとき、ＩＦＮ−γの分泌が増加したことを示す。例えば、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌのＡｂ１抗ＰＤ−１抗体、または１０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌのＡｂ２抗ＰＤ−１抗体の存在下でのバックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ−１およびＬＡＧ−３Ｉｇの非存在下でのＩＦＮ−γの濃度）を超えるＩＦＮ−γの濃度の増加は、単独のＬＡＧ−３Ｉｇおよび単独の３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体の存在下での対応する増加の合計より大きかった（すなわち、Ａｂ１では２３５．１＞−５３．３＋１４４．６；Ａｂ２では２７３．８＞１７６．１＋１８．２）。したがって、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび各異なる抗ＰＤ−１抗体の組合せの効果は相乗的であった。
【０１９８】
結果は、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび比較的低い濃度の抗ＰＤ−１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＩＦＮ−γの分泌が、はるかに高い濃度（１０００ｎｇ／ｍｌ、３０倍超高い）の抗ＰＤ−１抗体単独によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌よりずっと高かったことも示す（すなわち、Ａｂ１では２３５．１＞１０７．７；Ａｂ２では２７３．８＞２７．３）。
【０１９９】
ＴＮＦ−α分泌に関して、単独の抗ＰＤ−１抗体（比較的低いか高い濃度）のいずれも、ＴＮＦ−α分泌に有意な影響を及ぼさなかった。しかし、各抗ＰＤ−１抗体で、単独の抗ＰＤ−１抗体と比較して、ＰＢＭＣをＬＡＧ−３Ｉｇおよびより低い濃度の抗ＰＤ−１抗体の存在下でインキュベートしたとき、ＴＮＦ−αの分泌は増加した。例えば、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌのＡｂ１抗ＰＤ−１抗体、または１０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌのＡｂ２抗体の存在下でのバックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ−１およびＬＡＧ−３Ｉｇの非存在下でのＴＮＦ−αの濃度）を超えるＴＮＦ−αの濃度の増加は、単独のＬＡＧ−３Ｉｇおよび単独の３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体の存在下での対応する増加の合計より大きかった（すなわち、Ａｂ１では１１８．７＞０．９＋８２．２；Ａｂ２では１２．７７８＞２．５６３＋９．８５８）。したがって、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび各異なる抗ＰＤ−１抗体の組合せの効果は相乗的であった。
【０２００】
結果は、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび比較的低い濃度の抗ＰＤ−１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＴＮＦ−αの分泌が、はるかに高い濃度（１０００ｎｇ／ｍｌ、３０倍超高い）の抗ＰＤ−１抗体単独によって誘導されるＴＮＦ−αの分泌より劇的に高かったことも示す（すなわち、Ａｂ１では１１８．７＞１．６；Ａｂ２では１２．７７８＞２．４９４）。
【０２０１】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ−１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答（ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの分泌によって測定される）は、可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加すると結論づけられた。さらに、抗ＰＤ−１抗体を可溶性ＬＡＧ−３誘導体と組み合わせるならば、３０分の１より少ない抗ＰＤ−１抗体を使用して有意により大きなｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答が得られると結論づけられた。これらの効果は、異なる抗ＰＤ−１抗体で見られた。
【０２０２】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体についての各刺激条件でのプールした３つ組中のＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの濃度を、表２６に記録する。結果を、図１８にプロットする。
【表２６】
2020073594.tif 000032
【０２０３】
結果は、各抗ＰＤ−Ｌ１抗体で、単独の抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、ＰＢＭＣをＬＡＧ−３Ｉｇおよびより低い濃度の抗ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下でインキュベートしたとき、ＩＦＮ−γの分泌が増加したことを示す。例えば、１０または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下でのバックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３Ｉｇの非存在下でのＩＦＮ−γの濃度）を超えるＩＦＮ−γの濃度の増加は、１０または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇ単独および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独の存在下での対応する増加の合計より大きかった（すなわち、Ａｂ３では２２６．５＞２８．５＋７９．１；Ａｂ４では１２６．０３＞２．３１＋８．００；Ａｂ５では１８０．３４＞１９．８４＋３０．１１；Ａｂ６では９５．１４＞−１６．５１＋１９．８４）。したがって、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび各異なる抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組合せの効果は相乗的であった。
【０２０４】
結果は、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび比較的低い濃度の抗ＰＤ−Ｌ１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＩＦＮ−γの分泌が、はるかに高い濃度（１０００ｎｇ／ｍｌ、３０倍超高い）の抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌より劇的に高かったことも示す（すなわち、Ａｂ３では２２６．５＞５５．５；Ａｂ４では１２６．０３＞−１０．６６；Ａｂ５では１８０．３４＞１０．８９；Ａｂ６では９５．１４＞−４９．６１）。
【０２０５】
ＴＮＦ−αの分泌に関して、抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ａｂ３、Ａｂ４およびＡｂ５で、単独の抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較して、ＰＢＭＣをＬＡＧ−３Ｉｇおよびより低い濃度の抗ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下でインキュベートしたとき、ＴＮＦ−αの分泌は増加した。例えば、１０または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３Ｉｇおよび３０ｎｇ／ｍｌのＡｂ３、Ａｂ４またはＡｂ５抗ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下でのバックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３Ｉｇの非存在下でのＴＮＦ−αの濃度）を超えるＴＮＦ−αの濃度の増加は、ＬＡＧ−３Ｉｇ単独および３０ｎｇ／ｍｌのＡｂ３、Ａｂ４またはＡｂ５抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独の存在下での対応する増加の合計より大きかった（すなわち、Ａｂ３では９．０＞−１．８＋２．４；Ａｂ４では８０．３４＞２．０８＋５８．７１；Ａｂ５では１３７．８４＞５．５３＋８４．２１）。したがって、ＬＡＧ−３Ｉｇおよびこれらの異なる抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組合せの効果は相乗的であった。
【０２０６】
ＬＡＧ−３Ｉｇと組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体Ａｂ６でＴＮＦ−α分泌に対する相乗作用は観察されなかったが、これは、この抗体単独の存在下での高レベルのＴＮＦ−α分泌に起因し得る。それにもかかわらず、Ａｂ６およびＬＡＧ−３Ｉｇの組合せの存在下でのＴＮＦ−α分泌のレベルは、Ａｂ６抗体単独（３０ｎｇ／ｍｌおよび１０００ｎｇ／ｍｌ）の存在下でより高かった。
【０２０７】
結果は、ＬＡＧ−３Ｉｇおよび比較的低い濃度の抗ＰＤ−Ｌ１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＴＮＦ−αの分泌が、はるかに高い濃度（１０００ｎｇ／ｍｌ、３０倍超高い）の抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独によって誘導されるＴＮＦの分泌より劇的に高かったことも示す（すなわち、Ａｂ３では９．０＞０．６；Ａｂ４では８０．３４＞２．５０；Ａｂ５では１３７．８４＞４．００；Ａｂ６では１００．９９＞４７．８１）。
【０２０８】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ−Ｌ１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答（ＩＦＮ−γおよびＴＮＦの分泌によって測定される）は、可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加すると結論づけられた。さらに、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を可溶性ＬＡＧ−３誘導体と組み合わせるならば、３０分の１より少ない抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用して有意により大きなｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答が得られると結論づけられた。これらの効果は、異なる抗ＰＤ−Ｌ１抗体で見られた。
（実施例１３）
抗原刺激によって誘導されるＩＦＮ−γ生成に及ぼすＬＡＧ−３誘導体および抗ＰＤ−１抗体の影響
【０２０９】
この実施例は、ＩＦＮ−γ分泌アッセイを使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞活性化に及ぼすＬＡＧ−３の様々な異なる可溶性誘導体（実施例５に記載され、図７に例示される誘導体（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｖ））および抗ＰＤ−１抗体の影響を実証する。
【０２１０】
健康なドナーからのＰＢＭＣ（細胞数０．２×１０６／ウェル、完全ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳに１Ｍ／ｍｌで）を、ＣＭＶ  ｐｐ３５の配列を含むペプチドのプールと、いかなる添加物もなし（培地）で、３０ｎｇ／ｍｌまたは１０００ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体（ＥＨ１２クローン）と一緒に、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３誘導体（ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ３２１  Ｒ７５ＡまたはＬＡＧ３  Ｄ１Ｄ４−リンカー２−Ｉｇ）と一緒に、または３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３誘導体および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１と一緒に３つ組でインキュベートした。
【０２１１】
Ｔ細胞応答は、ＢＤサイトメトリービーズアレイを使用して刺激の３日後に細胞培養上清中のＩＦＮ−γの濃度を測定することによって評価した。
【０２１２】
各刺激条件のプールした３つ組におけるＩＦＮ−γの濃度を、表２７に記録する。結果を、図１９にプロットする。
【表２７】
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【０２１３】
結果は、各ＬＡＧ−３誘導体について、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３誘導体または３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体単独と比較して、ＰＢＭＣを３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３誘導体および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体の存在下でインキュベートしたとき、ＩＦＮ−γの分泌が増加したことを示す。例えば、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３誘導体および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体の存在下でのバックグラウンドレベル（すなわち、抗ＰＤ−１およびＬＡＧ−３誘導体の非存在下でのＩＦＮ−γの濃度）を超えるＩＦＮ−γの濃度の増加は、３０ｎｇ／ｍｌのＬＡＧ−３誘導体単独および３０ｎｇ／ｍｌの抗ＰＤ−１抗体単独の存在下での対応する増加の合計より大きかった（すなわち、ＩＭＰ３２１では５７２．３＞２４９．７＋２２．３；ＩＭＰ３２１  Ｒ７５Ａでは５１１．２＞３１７．３＋２２．３；ＬＡＧ３  Ｄ１Ｄ４−リンカー２−Ｉｇでは５２０．７＞２５８．０＋２２．３）。したがって、抗ＰＤ−１抗体および各異なるＬＡＧ−３誘導体の組合せの効果は、相乗的であった。
【０２１４】
結果は、各ＬＡＧ−３誘導体および比較的低い濃度の抗ＰＤ−１抗体（３０ｎｇ／ｍｌ）の組合せによって誘導されるＩＦＮ−γの分泌が、はるかに高い濃度（１０００ｎｇ／ｍｌ、３０倍超高い）の抗ＰＤ−１抗体単独によって誘導されるＩＦＮ−γの分泌より劇的に高かったことも示す（すなわち、ＩＭＰ３２１では５７２．３＞８５．９；ＩＭＰ３２１  Ｒ７５Ａでは５１１．２＞８５．９；ＬＡＧ３  Ｄ１Ｄ４−リンカー２−Ｉｇでは５２０．７＞８５．９）。
【０２１５】
これらの結果から、比較的低い用量の抗ＰＤ−１抗体によって誘導されるｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答（ＩＦＮ−γの分泌によって測定される）は、その各々はＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞に結合する能力を保持する様々な異なる可溶性ＬＡＧ−３誘導体によって相乗的に増加すると結論づけられた。さらに、抗ＰＤ−１抗体を可溶性ＬＡＧ−３誘導体のいずれかと組み合わせるならば、３０分の１より少ない抗ＰＤ−１抗体を使用して有意により大きなｉｎ  ｖｉｔｒｏのＴ細胞応答が得られると結論づけられた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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