(57)【要約】      （修正有）【課題】治療用高分子に対する免疫寛容を誘発するために免疫抑制剤の薬力学的に有効なウィンドウ内で投与される免疫抑制剤および治療用高分子を提供する方法に関する。【解決手段】治療用高分子に関して、投与薬力学的有効期間を提供する投与用量で、最小２０時間から最大１か月間までの範囲の薬力学的有効期間の間、対象へ免疫抑制剤を投与すること；および免疫抑制剤の投与薬力学的有効期間内において、対象へ治療用高分子を投与すること；を含む方法であって、治療用高分子および免疫抑制剤が、相互に付着されておらず、治療用高分子が、合成ナノ担体に付着されていない、前記方法。該方法は、治療用高分子に特異的な寛容原性免疫応答の発達のための免疫応答をシフトすることを可能にする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の第１のクラスにおいて、治療用高分子に関して、投与薬力学的有効期間を提供する投与用量で、最小２０時間から最大１か月間までの範囲の薬力学的有効期間の間、対象へ免疫抑制剤を投与すること；および
免疫抑制剤の投与薬力学的有効期間内において、対象へ治療用高分子を投与すること；
を含む方法であって、
治療用高分子および免疫抑制剤が、相互に付着されておらず、治療用高分子が、合成ナノ担体に付着されていない、前記方法。
【請求項２】
方法が、以下：
免疫抑制剤の試験用量に基づいて免疫抑制剤の投与用量を決定すること
をさらに含み、
試験用量が、対象の第２のクラスにおいて最小２０時間から最大１か月間までの範囲の薬力学的有効期間の間、治療用高分子に関して試験薬力学的有効期間を有する、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
治療用高分子に対する寛容を誘発する方法における使用のための免疫抑制剤であって、前記方法が、（ａ）２０時間〜１か月間である薬力学的有効期間を引き出すために十分な用量で対象へ免疫抑制剤を投与すること；および（ｂ）前記対象へ、前記薬力学的有効期間内において、治療用高分子を投与すること、を含み、ここで治療用高分子および免疫抑制剤が相互に付着されておらず、および、治療用高分子が合成ナノ担体に付着されていない、前記免疫抑制剤。
【請求項４】
（ａ）２０時間〜１か月間の範囲の薬力学的有効期間を引き出すために十分な用量で対象に免疫抑制剤を投与すること；および（ｂ）前記薬力学的有効期間内において、前記対象へ治療用高分子を投与すること、を含み、ここで治療用高分子および免疫抑制剤が相互に付着されておらず、および、治療用高分子は合成ナノ担体に付着されていない、方法における使用のための、医薬の製造のための免疫抑制剤の使用。
【請求項５】
免疫抑制剤が、合成ナノ担体が付着された免疫抑制剤を含む合成ナノ担体、移植可能浸透圧ポンプ、二重特異性抗体または移植可能高分子デポ材料を含む、請求項１または２に記載の方法、請求項３に記載の免疫抑制剤または請求項４に記載の使用。
【請求項６】
免疫抑制剤が、合成ナノ担体が付着された免疫抑制剤を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項７】
合成ナノ担体が、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤系エマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子、タンパク質粒子、または、ナノ材料の組み合わせを含むナノ粒子、任意にかかるナノ粒子が脂質ポリマーナノ粒子である、を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項８】
免疫抑制剤が、スタチン；ｍＴＯＲインヒビター；ＴＧＦ−βシグナル剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；コルチコステロイド；ミトコンドリア機能のインヒビター；Ｐ３８インヒビター；ＮＦ−κβインヒビター、デキサメタゾン；ＴＣＰＡ−１；ＩＫＫ  ＶＩＩ；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼインヒビター；プロテアソームインヒビター；キナーゼインヒビター；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカインインヒビター；サイトカイン受容体インヒビター；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；カルシニューリンインヒビター；ホスファターゼインヒビター；ＰＩ３ＫＢインヒビター；オートファジーインヒビター；アリール炭化水素受容体インヒビター；プロテアソームインヒビターＩ（ＰＳＩ）；酸化ＡＴＰ；ＩＤＯ、ビタミンＤ３；シクロスポリン；アリール炭化水素受容体インヒビター；レスベラトロール；アザチオプリン；６−メルカプトプリン；６−チオグアニン；ＦＫ５０６；サングリフェリンＡ；サルメテロール；ミコフェノラートモフェチル；アスピリンおよび他のＣＯＸインヒビター；ニフルム酸；エストリオール；またはトリプトリドを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項９】
免疫抑制剤が、ｍＴＯＲインヒビターを含む、請求項８に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１０】
ｍＴＯＲインヒビターが、ラパマイシンを含む、請求項９に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１１】
合成ナノ担体における免疫抑制剤の積載が、合成ナノ担体における材料の総乾燥レシピ重量に基づいて（重量／重量）、０．０００１ｗｔ％と５０ｗｔ％との間の範囲である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１２】
合成ナノ担体における免疫抑制剤の積載が、合成ナノ担体における材料の総乾燥レシピ重量に基づいて（重量／重量）、０．１ｗｔ％と１０ｗｔ％との間の範囲である、請求項１１に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１３】
治療用高分子が、治療用タンパク質または治療用ポリヌクレオチドを含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１４】
治療用タンパク質が、酵素、酵素補因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカイン、成長因子、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を含む、請求項１３に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１５】
投与薬力学的有効期間が、最小２０時間から最大２週間までの範囲である期間を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１６】
投与薬力学的有効期間が、最小２０時間から最大１週間までの範囲である期間を有する、請求項１５に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１７】
投与薬力学的有効期間が、最小２４時間から最大２日間までの範囲である期間を有する、請求項１６に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１８】
試験薬力学的有効期間が、最小２０時間から最大２週間までの範囲である期間を有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項１９】
試験薬力学的有効期間が、最小２０時間から最大１週間までの範囲である期間を有する、請求項１８に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２０】
試験薬力学的有効期間が、最小２４時間から最大２日間までの範囲である期間を有する、請求項１９に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２１】
免疫抑制剤の投与用量が、アロメトリックまたはアイソメトリックスケーリング技術の使用とともに、免疫抑制剤の試験用量に基づいて決定される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２２】
対象の第１のクラスおよび対象の第２のクラスが、対象の同じクラスである、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２３】
対象の第１のクラスおよび対象の第２のクラスが、対象の異なるクラスである、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２４】
合成ナノ担体が、脂質ナノ粒子を含む、請求項７に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２５】
合成ナノ担体が、リポソームを含む、請求項７に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２６】
合成ナノ担体が、金属ナノ粒子を含む、請求項７に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２７】
金属ナノ粒子が、金ナノ粒子を含む、請求項２６に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２８】
合成ナノ担体が、ポリマーナノ粒子を含む、請求項７に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項２９】
ポリマーナノ粒子が、非メトキシ末端のプルロニックポリマーであるポリマーを含む、請求項２８に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３０】
ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、ポリエーテルに付着されたポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む、請求項２８または２９に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３１】
ポリエステルが、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む、請求項３０に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３２】
ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、および、ポリエーテルに付着されたポリエステルを含む、請求項３０または３１に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３３】
ポリエーテルが、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３４】
合成ナノ担体の動的光散乱を使用して得られる粒子サイズ分布の平均が、１００ｎｍよりも大きい径である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３５】
径が、１５０ｎｍよりも大きい、請求項３４に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３６】
径が、２００ｎｍよりも大きい、請求項３５に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３７】
径が、２５０ｎｍよりも大きい、請求項３６に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３８】
径が、３００ｎｍよりも大きい、請求項３７に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【請求項３９】
合成ナノ担体のアスペクト比が、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７または１：１０よりも大きい、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法、免疫抑制剤または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、米国特許法第１１９条の下で、２０１３年５月３日出願の米国仮出願第６１／８１９５１７号、２０１３年９月２４日出願の同第６１／８８１８５１号、２０１３年９月２４日出願の同第６１／８８１９１３号、２０１３年９月２４日出願の同第６１／８８１９２１号、２０１３年１１月２１日出願の同第６１／９０７１７７号、２０１４年３月５日出願の同第６１／９４８３１３号、および２０１４年３月５日出願の同第６１／９４８３８４号の利益を主張するものであり、これらの各々の内容全体を参照によって本明細書に組み込む。
【０００２】
本発明の分野
本発明は、治療用高分子に対して免疫寛容を誘発する免疫抑制剤の薬力学的に有効なウィンドウ内で投与される、免疫抑制剤および治療用高分子を提供する方法に関する。該方法は、治療用高分子に特異的な寛容原性免疫応答の発達のための免疫応答をシフトすることを可能にする。本明細書で提供される方法は、治療用高分子の投与が、望ましくない免疫応答をもたらすか、またはそれをもたらすことが予期される、対象における寛容原性免疫応答を生じさせるために使用できる。
【背景技術】
【０００３】
本発明の背景
タンパク質または酵素補充治療などの治療処置は、しばしば特定の治療に対する望ましくない免疫応答をもたらす。かかる望ましくない免疫応答は、免疫抑制薬の使用を通じて低減され得る。しかしながら、従来の免疫抑制薬は広域作用性である。さらに、免疫抑制を維持するために、免疫抑制薬治療は、一般に生涯の命題である。不幸なことに、広域作用性免疫抑制剤の使用は、腫瘍、感染、腎毒性および代謝障害などの重篤な副作用のリスクと関連する。したがって、新しい寛容原性治療が有益となる。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の概要
一側面において、治療用高分子に関して、対象の第１のクラスにおいて免疫抑制剤を対象に投与薬力学的有効期間を提供する投与用量で投与すること、および、免疫抑制剤の投与薬力学的有効期間の期間内で対象に治療用高分子を投与すること、を含む方法が提供される。一態様において、薬力学的有効期間は、最小２０時間から最大１か月までの範囲の期間を有する。一態様において、治療用高分子および免疫抑制剤は、相互に付着されていない。一態様において、治療用高分子は、合成ナノ担体に付着されていない。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法は、免疫抑制剤の投与用量を免疫抑制剤の試験用量に基づいて決定することをさらに含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、対象の第２のクラスにおいて、試験用量は、試験薬力学的有効期間に関して、最小２０時間から最大１か月までの範囲の期間を有する治療用高分子を有する。
【０００５】
別の側面において、本明細書で提供される免疫抑制剤組成物のいずれか１つは、治療用高分子に対する寛容を誘発する方法における使用を提供する。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法は、（ａ）２０時間〜１か月間の範囲の薬力学的有効期間を引き出すために十分な用量で対象に免疫抑制剤を投与すること、および（ｂ）前記薬力学的有効期間内で治療用高分子を前記対象に投与することを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、治療用高分子および免疫抑制剤は、相互に付着されない。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、治療用高分子は、合成ナノ担体に付着されない。
【０００６】
別の側面において、本明細書で提供される免疫抑制剤組成物のいずれか１つの使用は、本明細書で提供される方法のいずれか１つ、対象における治療用高分子に対する寛容を誘発する方法など、における使用のための医薬の製造のために提供される。一態様において、方法は、（ａ）２０時間〜１か月間の範囲の薬力学的有効期間を引き出すために十分な用量で対象に免疫抑制剤を投与すること；および（ｂ）前記薬力学的有効期間内で前記対象に治療用高分子を投与することを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、治療用高分子および免疫抑制剤は、相互に付着されない。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、治療用高分子は、合成ナノ担体に付着されない。
【０００７】
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体に付着された免疫抑制剤、移植可能浸透圧ポンプ、二重特異性抗体または移植可能高分子デポ材料を含む合成ナノ担体を含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は合成ナノ担体に付着された免疫抑制剤を含む。
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、合成ナノ担体は、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤系エマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子、タンパク質粒子、または、ナノ材料の組み合わせを含むナノ粒子、任意にかかるナノ粒子は脂質ポリマーナノ粒子である、を含む。
【０００８】
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、スタチン；ｍＴＯＲインヒビター；ＴＧＦ-βｃ剤；ＴＧＦ-β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；コルチコステロイド；ミトコンドリア機能のインヒビター；Ｐ３８インヒビター；ＮＦ-κβインヒビター、デキサメタゾン；ＴＣＰＡ-１；ＩＫＫ  ＶＩＩ；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼインヒビター；プロテアソームインヒビター；キナーゼインヒビター；Ｇ-タンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカインインヒビター；サイトカイン受容体インヒビター；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；カルシニューリンインヒビター；ホスファターゼインヒビター；ＰＩ３ＫＢインヒビター；オートファジーインヒビター；アリール炭化水素受容体インヒビター；プロテアソームインヒビターＩ（ＰＳＩ）；酸化ＡＴＰ；ＩＤＯ、ビタミンＤ３；シクロスポリン；アリール炭化水素受容体インヒビター；レスベラトロール；アザチオプリン；６-メルカプトプリン；６−チオグアニン；ＦＫ５０６；サングリフェリンＡ；サルメテロール；ミコフェノラートモフェチル；アスピリンおよび他のＣＯＸインヒビター；ニフルム酸；エストリオール；またはトリプトリドを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤は、ｍＴＯＲインヒビターを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、ｍＴＯＲインヒビターは、ラパマイシンを含む。
【０００９】
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、合成ナノ担体（重量／重量）における材料の総乾燥レシピ重量に基づいて、合成ナノ担体における合成ナノ担体の積載(loading)は、０．０００１ｗｔ％と５０ｗｔ％との間の範囲である。本明細書で提供される方法は、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、合成ナノ担体（重量／重量）における材料の総乾燥レシピ重量に基づいて、合成ナノ担体における免疫抑制剤の積載が、０．１ｗｔ％と１０ｗｔ％との範囲である。
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、治療用高分子は、治療用タンパク質または治療用ポリヌクレオチドを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、治療用タンパク質は、酵素、酵素補因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカイン、成長因子、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を含む。
【００１０】
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、投与薬力学的有効期間は、最小２０時間から最大２週間までの範囲の期間を有する。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、投与薬力学的有効期間は、最小２０時間から最大１週間までの範囲の期間を有する。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、投与薬力学的有効期間は、最小２４時間から最大２日間までの範囲の期間を有する。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、試験薬力学的有効期間は、最小２０時間から最大２週間までの期間を有する。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、試験薬力学的有効期間は、最小２０時間から最大１週間までの範囲の期間を有する。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、試験薬力学的有効期間は、最小２４時間から最大２日間までの範囲の期間を有する。
【００１１】
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤の投与用量は、アロメトリックまたはアイソメトリックスケーリング技術の使用とともに、免疫抑制剤の試験用量に基づいて決定される。
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、対象の第１のクラスおよび対象の第２のクラスは、対象の同じクラスである。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、対象の第１のクラスおよび対象の第２のクラスは対象の異なるクラスである。
【００１２】
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの一態様において、合成ナノ担体は、脂質ナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体は、リポソームを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体は、金属ナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、金属ナノ粒子は、金ナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体は、ポリマーナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、ポリマーナノ粒子は、非メトキシ末端のプルロニックポリマーであるポリマーを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、ポリマーナノ粒子は、ポリエステル、ポリエーテルに付着されたポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、ポリエステルは、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、ポリマーナノ粒子は、ポリエステルおよびポリエーテルに付着されたポリエステルを含む。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、ポリエーテルは、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む。
【００１３】
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体の動的光散乱を使用して得られる粒子サイズ分布の平均は、１００ｎｍよりも大きい径である。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、径は、１５０ｎｍよりも大きい。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、径は、２００ｎｍよりも大きい。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、径は、２５０ｎｍよりも大きい。本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、径は、３００ｎｍよりも大きい。
本明細書で提供される方法、免疫抑制剤または使用のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体のアスペクト比は、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７または１：１０よりも大きい。
【００１４】
別の側面において、本明細書で提供される免疫抑制剤および／または治療用高分子組成物のいずれか１つの製造方法が提供される。一態様において、製造方法は、治療用高分子の用量または剤形を生成すること、および、免疫抑制剤の用量または剤形を生成することを含む。提供される製造方法のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤の用量または剤形を生成するステップは、合成ナノ担体に免疫抑制剤を付着することを含む。提供される製造方法のいずれか１つの別の態様において、方法は、キットにおいて、免疫抑制剤の用量または剤形と、治療用高分子の用量または剤形とを組み合わせることをさらに含む。
【００１５】
別の側面において、製造方法のいずれか１つは、本明細書で提供される方法のいずれか１つを行うための医薬を製造するためのものであり得、かかる製造方法も提供される。一態様において、製造方法は、治療用高分子に対して寛容を誘発するための医薬を製造するためのものである。別の態様において、製造方法は、免疫抑制剤、および治療用高分子が免疫抑制剤の薬力学的有効期間の間投与されるための治療用高分子医薬を製造するためのものである。本明細書で提供される製造方法のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体に付着される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
図の簡単な説明
【図１】図１は、ＩｇＧが、ＯＶＡおよびＫＬＨとともに投与されたカプセル化されたラパマイシンに応答することを示す。
【図２】図２は、プロトコルおよび種々のラパマイシン用量からの結果を示す。
【図３】図３は、ラパマイシンに付着された合成ナノ担体の薬力学的有効期間内の投与の効果を実証する。
【図４】図４は、カプセル化されたタンパク質と同時に投与された、ラパマイシンに付着された合成ナノ担体またはGSK1059615に付着されたナノ担体の効果を実証する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の詳細な説明
本発明を詳細に説明する前に、本発明は、特に例示された材料またはプロセスパラメータに限定されないということは理解されるべきであり、これは、かかるものが当然変化し得るためである。本明細書で使用される用語法は、本発明の特定の態様を説明するためのものに過ぎず、本発明を説明するための代替的用語法の使用を限定することは意図しないこともまた理解されるべきである。
上記または下記のいずれにおいても本明細書で引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、全ての目的において、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
本明細書および添付のクレームで使用する場合、その内容が別途明確に指定していない限り、単数形の「a」、「an」および「the」は複数の言及物を包む。例えば、「ポリマー（a polymer）」への言及は、２つまたは３つ以上のかかる分子の混合物または単一のポリマー種の異なる分子量の混合物を包み、「合成ナノ担体」への言及は２つまたは３つ以上のかかる合成ナノ担体の混合物または複数のかかる合成ナノ担体を包含し、「ＲＮＡ分子」への言及は、２つまたは３つ以上のかかるＲＮＡ分子の混合物または複数のかかるＲＮＡ分子を包み、「免疫抑制剤」への言及は、２つまたは３つ以上のかかる材料または複数のかかる免疫抑制剤分子を包む、等。
【００１９】
本明細書で使用するとき、用語「含む(comprise)」、または「comprises」もしくは「comprising」などの変形形態は、いずれか列挙された完全体(integer)（例えば特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）または完全体の群（例えば複数の特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）の包含を表示すると読むべきであって、いずれか他の完全体または完全体の群の排除を表示すると読むべきではない。ゆえに、本明細書で使用するとき、用語「含む(comprising)」は包括的であり、追加の、列挙されない完全体または方法／プロセスステップを排除しない。
【００２０】
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つのある態様において、「含む(comprising)」は「本質的にからなる(consisting essentially of)」または「からなる(consisting of)」で置換されてもよい。語句「本質的にからなる」は、明記された完全体（単数または複数）またはステップを、クレームされる発明の性質または機能に重大な影響を及ぼさないものと共に要するために、本明細書で使用される。本明細書で使用するとき、用語「からなる(consisting)」は、列挙された完全体（例えば特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）または完全体の群（例えば複数の特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）のみの存在を表示するために使用される。
【００２１】
Ａ．序文
本明細書で提供される方法は、免疫抑制剤の薬力学的に有効なウィンドウ（または薬力学的有効期間）の間の治療用高分子の投与の結果として改善された治療効果を可能にする。免疫抑制剤、いくつかの態様において、合成ナノ担体への付着によって投与される。本明細書で提供される方法および組成物は、対象へ治療用高分子を投与するとき免疫抑制剤治療の利益を最大化することを助ける。
【００２２】
本発明者らは、予想外かつ驚くべきことに、本明細書で開示される本発明を実行することによって前記の課題および限定を克服できることを発見した。特に、本発明者らは、治療用高分子に関して投与薬力学的有効期間を提供し、最小２０時間から最大１か月間までの範囲の期間を有し、免疫抑制剤の投与薬力学的有効期間内で対象へ治療用高分子を投与し、ここで免疫抑制剤および治療用高分子は、相互に連結せず、治療用高分子は合成ナノ担体へ連結しない、投与用量で対象へ免疫抑制剤を投与することを含む方法を提供することが可能であることを予想外に発見した。関連する組成物もまた本明細書で提供される。
本発明は、本発明の実行に有用な種々の組成物を示し、本発明の特定の態様において薬力学的有効期間の基礎となるコンセプトを示すデータもまた提供する、以下の例に示される。
ここで、以下に本発明をより詳細に説明する。
【００２３】
Ｂ．定義
「投与用量」または「免疫抑制剤の投与用量」は、投与に好適な免疫抑制剤の用量を意味する。ある態様において、投与用量は、免疫抑制剤の試験用量に基づく。ある態様において、投与用量は、アロメトリックスケーリング技術の適用とともに、免疫抑制剤の試験用量からの情報に基づいて決定してもよい。例えば、I. Mahmood, “Interspecies Pharmacokinetic Scaling: Principles and Application of Allometric Scaling”, Pine House Publishers 2005を参照。ある態様において、特に対象の第１のクラスおよび対象の第２のクラスが同じ種からである場合、投与用量は、アイソメトリックスケーリング技術の適用とともに、免疫抑制剤の試験用量からの情報に基づいて決定してもよい。ある態様において、投与用量は、試験用量に基づいて、上記の説明のとおりアロメトリックまたはアイソメトリックスケーリングを使用して単純に予測されるよりも、対象の第２のクラスにおける直接的な実験によって決定されてもよい。
【００２４】
「投与すること」または「投与」または「投与する」は、薬理学的に有用なやり方で対象へ材料を提供することを意味する。態様において、「投与すること」または「投与」または「投与する」は、「投与させること」を含む。「投与させること」とは、他の当事者に材料を投与するよう直接的または間接的に、させること、促すこと、奨励すること、援助すること、誘発すること、または、指示することを意味する。
【００２５】
「投与薬力学的有効期間」は、免疫抑制剤の投与用量でのおよび対象の第１のクラスにおける治療用高分子に関して決定される免疫抑制剤の薬力学的有効期間を意味する。ある態様において、列挙される免疫抑制剤は、最小２０時間から最大１か月間まで、好ましくは最小２０時間から最大２週間まで、好ましくは最小２０時間から最大１週間まで、好ましくは最小２０時間から最大５日間まで、好ましくは最小２０時間から最大３日間まで、好ましくは最小２４時間から最大２日間までの範囲の期間を有する、治療用高分子に関して、投与薬力学的有効期間を有してもよい。好ましくは、治療用高分子は、薬力学的有効期間の間投与され、したがって、いくつかの態様において、免疫抑制剤の投与と同時または直後に投与することができるが、ただし治療用高分子の投与は、薬力学的有効期間の終了前に行う。
【００２６】
「有効量」は、対象への投与のための組成物または用量の文脈において、対象における１つまたは２つ以上の望ましい応答、例えば寛容原性免疫応答の発生（例えば、治療用高分子に特異的なＢ細胞の増殖、活性化、誘発、生存、動員の減少、または、治療用高分子に特異的な抗体の産生の減少）を生じさせる組成物の量または用量をいう。いくつかの態様において、有効量は治療的有効量である。それゆえ、いくつかの態様において、有効量は、本明細書で提供される望ましい免疫効果、および／または治療効果の１つまたは２つ以上を生じさせる、本明細書で提供されるいずれかの組成物の量または用量である。この量はin vitroまたはin vivoを目的とし得る。in vitroの目的において、量は、治療用高分子の投与および／またはそれに対する抗原特異的免疫寛容原性を必要とする患者にとって臨床効果を有し得ると臨床医が考えるであろう量であり得る。
【００２７】
有効量は、望ましくない免疫応答のレベルを低減させることに関与し得るが、いくつかの態様において、それは望ましくない免疫応答を完全に防止することに関与する。有効量はまた、望ましくない免疫応答が起こることを遅延させることにも関与し得る。有効である量はまた、望ましい治療エンドポイントまたは望ましい治療結果を生じさせる量でもあり得る。他の態様において、有効量は、治療エンドポイントまたは治療結果などの望ましい応答のレベルを向上させることに関与し得る。有効量は好ましくは、対象において、治療用高分子などの抗原に対する寛容原性免疫応答をもたらす。上述のもののいずれかの達成は、ルーチンな方法によってモニタリングされ得る。
【００２８】
提供される方法のいずれか１つのいくつかの態様において、有効量は、望ましい応答が対象において存続する量である。提供される組成物および方法のいずれかの他の態様において、有効量は、測定可能な望ましい応答をある期間生じさせる量である。
有効量は当然、医療従事者の知識と経験の範囲内で、処置されている具体的な対象；状態、疾患または障害の重篤性；年齢、体調、サイズおよび体重を包含する個々の患者パラメータ；処置の持続期間；（存在する場合）併用治療の特質；投与の具体的な経路および同種の因子に依存するであろう。これらの因子は当業者には周知であり、ルーチンな実験法程度のことで対処し得る。一般に好ましくは、最大用量、すなわち、健全な医療的判断に従う最も高い安全な用量を使用することである。しかしながら、患者はより少ない用量、または耐容用量を、医療的理由、心理学的理由、または事実上あらゆる他の理由で主張し得るということは、当業者には理解されよう。
【００２９】
一般に、本発明の組成物における免疫抑制剤および／または治療用高分子の用量は、免疫抑制剤および／または治療用高分子の量をいう。代替的に、用量は、免疫抑制剤の望ましい量を提供する合成ナノ担体の数に基づいて投与され得る。
「抗原」は、Ｂ細胞抗原またはＴ細胞抗原を意味する。「抗原のタイプ（単数または複数）」は、同じかまたは実質的に同じ抗原的特徴を共有する分子を意味する。いくつかの態様において、抗原は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、リポタンパク質、糖脂質、ポリヌクレオチド、多糖であり得えるか、または、細胞中に含有されるかまたは発現される。抗原が十分に定義または特徴付けされていないときなどのいくつかの態様において、抗原は、細胞または組織調製物、細胞片、細胞エキソソーム、ならし培地等に含有され得る。
【００３０】
「抗原特異的」は、抗原またはその一部分の存在によりもたらされるか、または、抗原を特異的に認識または結合する分子を発生させる、いずれかの免疫応答をいう。いくつかの態様において、抗原が治療用高分子を含むとき、抗原特異的は、治療用高分子特異的を意味し得る。例えば、免疫応答が抗原特異的抗体産生である場合、抗原（例えば治療用高分子）に特異的に結合する抗体が産生される。別の例として、免疫応答が、抗原特異的Ｂ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖および／または活性である場合、増殖および／または活性は、抗原またはその一部分の、単独での、または、ＭＨＣ分子、Ｂ細胞等と複合しての認識によりもたらされる。
「免疫応答を査定すること」は、in vitroまたはin vivoでの免疫応答のレベル、存非、低減、増加等いずれかの測定または決定をいう。かかる測定または決定は、対象から得た１つまたは２つ以上のサンプルで行われ得る。かかる査定は、本明細書で提供されるか、またはそうでなければ、当該分野において知られている方法のいずれかで行われ得る。本明細書で提供される方法のいずれか１つは、免疫応答を査定するステップを含み得る。
【００３１】
「付着する」または「付着されている」または「連結する」または「連結されている」（等）は、１つの実体（例えば部位）をもう１つと化学的に関連させることを意味する。いくつかの態様において、付着は共有結合性であり、それは付着が２つの実体間の共有結合の存在の文脈下で起こることを意味する。非共有結合性の態様において、非共有結合性付着は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせを包含するが、それらに限定されない非共有結合性相互作用により媒介される。ある態様において、カプセル化が付着の形態である。ある態様において、治療用高分子および免疫抑制剤は互いに付着されず、それは治療用高分子と免疫抑制剤とが一方をもう一方と化学的に関連させるように具体的に意図されたプロセスに供されないことを意味する。ある態様において、治療用高分子および／または免疫抑制剤は合成ナノ担体に付着されず、それは治療用高分子（および／または免疫抑制剤）と合成ナノ担体とが一方をもう一方と化学的に関連させるように具体的に意図されたプロセスに供されないことを意味する。
【００３２】
「平均」は、本明細書で使用するとき、特に注記しない限り算術平均値をいう。
「対象のクラス」は、１または２以上の共通の特徴（生物学的分類、食習慣、睡眠の習慣、免疫システムバイオロジー場所における物理的な存在など）を共有する、対象のグループ分けを意味する。クラスは、標準的な生物学的分類にのみに従う必要はない。対象のクラスにおける結果の決定は、対象の別のクラスにおいて達成可能な結果を予測するために有用であり得る（例えば、ヒト疾患の予測または探索における動物モデルの使用）。
【００３３】
「決定すること」または「決定する」は事実関係を確かめることを意味する。決定することは、実験を行うことまたは予測を立てることを包含するがそれらに限定されない、数々の方式で遂行され得る。例として、免疫抑制剤または治療用高分子の用量は、試験用量で開始し、投与のための用量を決定するための公知のスケーリング技術（アロメトリックまたはアイソメトリックスケーリングなど）を使用することにより決定され得る。かかるものを使用して本明細書に提供されるプロトコルを決定もまたし得る。別の態様において、用量は対象において種々の用量を試験することによって、すなわち経験およびガイドデータに基づく直接実験を通して、決定されてもよい。ある態様において、「決定すること」または「決定する」は、「決定させること」を含む。「決定させること」は、実体に事実関係を確かめるように、させること、促すこと、奨励すること、援助すること、誘発することまたは指示すること、または、その実体と協力して行動することを意味し、直接もしくは間接的に、または明示的にもしくは黙示的に、を包含する。
【００３４】
「剤形」は、対象への投与に好適な媒体、担体、ビヒクルまたはデバイス中の薬理学的におよび／または免疫学的に活性な材料を意味する。本明細書で提供される組成物または用量のいずれか１つは、剤形中にあってよい。
「用量」は、所与の時間にわたり対象に投与するための薬理学的および／または免疫学的に活性な材料の具体的な分量(quantity)をいう。
「カプセル化する」は、合成ナノ担体内の物質の少なくとも一部分を封入することを意味する。いくつかの態様において、物質は合成ナノ担体内に完全に封入される。他の態様において、カプセル化される物質の大部分または全てが、合成ナノ担体の外部の局所環境に曝露されない。他の形態において、局所環境に曝露されるのが５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％（重量／重量）を超えない。カプセル化は、吸収（吸収は、物質の大部分または全てを合成ナノ担体の表面上に置き、その物質を合成ナノ担体の外部の局所環境に曝した状態にする）とは区別される。
【００３５】
「発生させること」は、生理学的または免疫学的応答などの作用（例えば寛容原性免疫応答）を、それ自体で直接的または間接的に起こさせることを意味する。
「対象を識別すること」は、対象を本明細書で提供される方法、組成物またはキットから効果が得られ得る対象として臨床医に認識せしめるいずれかの行動または行動のセットである。好ましくは、識別された対象は、本明細書で提供されるとおり、治療用高分子からの治療効果を必要としており、および／または、抗治療用高分子特異的抗体応答が起こっているか、または起こることが予期される（または起こるリスクのある）対象である。行動または行動のセットは、それ自体の直接的なものであっても、または間接的なものであってもよい。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法はさらに、本明細書で提供される方法、組成物またはキットを必要としている対象を識別することを含む。
【００３６】
「免疫抑制剤」は、ＡＰＣに免疫抑制効果（例えば免疫寛容誘発効果）を持たせるか、または、Ｔ細胞またはＢ細胞が抑制されるようにする化合物を意味する。免疫抑制効果は一般に、望ましくない免疫応答を低減、阻害または防止するか、または、制御性免疫応答などの望ましい免疫応答を促進する、サイトカインまたは他の因子のＡＰＣによる産生または発現をいう。ＡＰＣが、このＡＰＣによって提示される抗原を認識する免疫細胞に対して（免疫抑制効果の下）免疫抑制機能を獲得するとき、免疫抑制効果は、提示された抗原に特異的であると言われる。いかなる具体的な理論にも拘泥しないが、免疫抑制効果は、好ましくは抗原の存在下、免疫抑制剤がＡＰＣに送達されることの結果であると思われる。一態様において、免疫抑制剤は、１つまたは２つ以上の免疫エフェクター細胞においてＡＰＣに制御性表現型を促進させるものである。例えば制御性表現型は、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の産生、誘発、刺激または動員の阻害、抗原特異的抗体の産生の阻害、Ｔｒｅｇ細胞（例えばＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の産生、誘発、刺激または動員、等により特徴付けられ得る。これはＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の制御性表現型への転換の結果であり得る。これはまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞、マクロファージおよびｉＮＫＴ細胞などの他の免疫細胞におけるＦｏｘＰ３の誘発の結果でもあり得る。一態様において、免疫抑制剤は、抗原を処理した後のＡＰＣの応答に影響を与えるものである。別の態様において、免疫抑制剤は、抗原の処理に干渉するものではない。さらなる態様において、免疫抑制剤はアポトーシスシグナル分子ではない。別の態様において、免疫抑制剤はリン脂質ではない。
【００３７】
免疫抑制剤としては、スタチン；ラパマイシンまたはラパマイシン類縁体などのｍＴＯＲインヒビター；ＴＧＦ−βシグナル剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；トリコスタチンＡなどのヒストンデアセチラーゼインヒビター；コルチコステロイド；ロテノンなどのミトコンドリア機能のインヒビター；Ｐ３８インヒビター；６Ｂｉｏ、デキサメタゾン、ＴＣＰＡ−１、ＩＫＫ  ＶＩＩなどのＮＦ−κβインヒビター；アデノシン受容体アゴニスト；ミソプロストールなどのプロスタグランジンＥ２アゴニスト（ＰＧＥ２）；ロリプラムなどのホスホジエステラーゼ４インヒビター（ＰＤＥ４）などのホスホジエステラーゼインヒビター；プロテアソームインヒビター；キナーゼインヒビター；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカインインヒビター；サイトカイン受容体インヒビター；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；カルシニューリンインヒビター；ホスファターゼインヒビター；ＴＧＸ−２２１などのＰＩ３ＫＢインヒビター；３−メチルアデニンなどのオートファジーインヒビター；アリールハイドロカーボン受容体インヒビター；プロテアソームインヒビターＩ（ＰＳＩ）；およびＰ２Ｘ受容体ブロッカーなどの酸化ＡＴＰが挙げられるが、これらに限定されない。免疫抑制剤としてはまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、シクロスポリンＡなどのシクロスポリン、アリールハイドロカーボン受容体インヒビター、レスベラトロール、アザチオプリン（Ａｚａ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、ＦＫ５０６、サングリフェリンＡ、サルメテロール、マイコフェノレートモフェチル（ＭＭＦ）、アスピリンおよび他のＣＯＸインヒビター、ニフルミン酸、エストリオール、メトトレキサート、および、トリプトリドも挙げられる。ある態様において、免疫抑制剤は本明細書で提供される薬剤のいずれかを含んでいてもよい。
【００３８】
免疫抑制剤は、ＡＰＣに免疫抑制効果を直接提供する化合物であっても、免疫抑制効果を間接的に（すなわち投与後に何らかの方式で処理された後に）提供する化合物であってもよい。したがって、免疫抑制剤は、本明細書で提供される化合物のいずれかのプロドラッグ形態を包含する。
本明細書で提供される方法、組成物またはキットのいずれか１つのある態様において、本明細書で提供される免疫抑制剤は、合成ナノ担体に付着されている。好ましい態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体の構造を構成する材料に追加された要素である。例えば、合成ナノ担体が１つまたは２つ以上のポリマーで構成されている一態様において、免疫抑制剤は、１つまたは２つ以上のポリマーに追加されて付着された化合物である。別の例として、合成ナノ担体が１つまたは２つ以上の脂質で構成されている一態様において、免疫抑制剤はやはり、１つまたは２つ以上の脂質に追加されて付着された化合物である。合成ナノ担体の材料がまた、免疫抑制効果をももたらす場合などのある態様において、免疫抑制剤は、免疫抑制効果をもたらす合成ナノ担体の材料に追加されて存在する要素である。
【００３９】
本明細書で提供される方法、組成物またはキットのいずれか１つのある態様において、免疫抑制剤はナノ結晶性形態などの形態にあり、それにより免疫抑制剤自体の形態は粒子または粒子様である。ある態様において、こうした形態はウイルスまたは他の外来病原体を模擬している。多くの薬物はナノ化されており、こうした薬物の形態を生じさせるための適切な方法は当業者に知られているであろう。ナノ結晶性ラパマイシンなどの薬物ナノ結晶は当業者に知られている（Katteboinaa, et al. 2009, International Journal of PharmTech Resesarch; Vol. 1, No. 3; pp682-694）。本明細書で使用されるとおり、「薬物ナノ結晶」は、担体またはマトリックス材料を包まない、薬物（例えば免疫抑制剤）の形態をいう。いくつかの態様において、薬物薬物ナノ結晶は、９０％、９５％、９８％または９９％、または、それ以上の薬物を含む。薬物ナノ結晶の生成方法としては、限定されないが、摩砕(milling)、高圧均質化、沈殿、噴霧乾燥、超臨界溶体急速膨張（RESS）、Nanoedge（登録商標）技術（Baxter Healthcare）およびNanocrystal Technology（商標）（Elan Corporation）が挙げられる。いくつかの態様において、薬物ナノ結晶の立体または静電安定性のために、界面活性物質または安定剤を使用してもよい。いくつかの態様において、免疫抑制剤のナノ結晶またはナノ結晶性形態は、免疫抑制剤、特に不溶性のまたは不安定な(labile)免疫抑制剤、の溶解性、安定性および／または生物学的利用能を増大させるために使用され得る。いくつかの態様において、ナノ結晶性形態の免疫抑制剤の投与は、治療用高分子に対する寛容を誘発する。
【００４０】
他の例示的な免疫抑制剤は、小分子薬物、天然生成物、抗体（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ４に対する抗体）、生物製剤系薬物、炭水化物系薬物、ナノ粒子、リポソーム、ＲＮＡｉ、アンチセンス核酸、アプタマー、メトトレキサート、ＮＳＡＩＤ；フィンゴリモド；ナタリズマブ；アレムツズマブ；抗ＣＤ３；タクロリムス（ＦＫ５０６）；ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１０などのサイトカインおよび成長因子；などを含むが、これらに限定されない。本明細書で提供されるいずれか１つの側面または態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体へ付着することができ、または移植可能浸透圧ポンプ、ＡＬＺＥＴ（登録商標）移植可能浸透圧ポンプ、移植可能デポ材料または二重特異性抗体（抗ＣＤ２２＋Ａｇ、抗ＧＩＴＲ＋Ａｇ、または抗ＬＡＧ３＋Ａｇ）など、の形態で送達することができる。さらに免疫抑制剤は、当業者に公知であり、本発明はこの点において限定されない。
【００４１】
免疫抑制剤の合成ナノ担体に付着されるときの「積載量(load)」は、合成ナノ担体（重量／重量）における材料の総乾燥レシピ重量に基づく、合成ナノ担体へ付着された免疫抑制剤の量である。一般に、積載量は、合成ナノ担体の集団にわたる平均として算出される。一態様において、合成ナノ担体にわたって平均して、免疫抑制剤の積載量は、０．０００１重量％〜９９重量％の範囲である。別の態様において、免疫抑制剤の積載量は、０．０１重量％〜５０重量％の範囲である。別の態様において、積載量は、０．１重量％〜２０重量％である。さらなる態様において、免疫抑制剤の積載量は、０．１重量％〜１０重量％の範囲である。なおさらなる態様において、免疫抑制剤の積載量は、１重量％〜１０重量％の範囲である。なおさらなる態様において、積載量は、７重量％〜２０重量％である。なお別の態様において、免疫抑制剤の積載量は、合成ナノ担体の集団にわたって平均して、少なくとも０．１重量％、少なくとも０．２重量％、少なくとも０．３重量％、少なくとも０．４重量％、少なくとも０．５重量％、少なくとも０．６重量％、少なくとも０．７重量％、少なくとも０．８重量％、少なくとも０．９重量％、少なくとも１重量％、少なくとも２重量％、少なくとも３重量％、少なくとも４重量％、少なくとも５重量％、少なくとも６重量％、少なくとも７重量％、少なくとも８重量％、少なくとも９重量％、少なくとも１０重量％、少なくとも１１重量％、少なくとも１２重量％、少なくとも１３重量％、少なくとも１４重量％、少なくとも１５重量％、少なくとも１６重量％、少なくとも１７重量％、少なくとも１８重量％、少なくとも１９重量％、少なくとも２０重量％、少なくとも２５重量％、少なくとも３０重量％、少なくとも４０重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％、少なくとも９６重量％、少なくとも９７重量％、少なくとも９８重量％または少なくとも９９重量％の範囲である。なおさらなる態様において、免疫抑制剤の積載量は、合成ナノ担体の集団にわたって平均して、０．１重量％、０．２重量％、０．３重量％、０．４重量％、０．５重量％、０．６重量％、０．７重量％、０．８重量％、０．９重量％、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％または２０重量％である。上記の態様のいくつかの態様において、免疫抑制剤の積載量は、合成ナノ担体の集団にわたって平均して、２５重量％を超えない。ある態様において、積載量は例に記載され得るとおりであるか、またはそうでなければ、当該分野において知られているように、算出される。
【００４２】
いくつかの態様において、免疫抑制剤の形態が、ナノ結晶性免疫抑制剤などの、それ自体粒子または粒子様であるとき、免疫抑制剤の積載量は粒子等における免疫抑制剤の量（重量／重量）である。かかる態様において、積載量は９７％、９８％、９９％またはそれ以上に届き得る。
【００４３】
「合成ナノ担体の最大寸法」は、合成ナノ担体のいずれかの軸に沿って測定されたナノ担体の最も長い寸法を意味する。「合成ナノ担体の最小寸法」は、合成ナノ担体のいずれかの軸に沿って測定された合成ナノ担体の最も小さい寸法を意味する。例えば、回転楕円状合成ナノ担体において、合成ナノ担体の最大および最小寸法は、実質的に同一であって、その径のサイズとなるであろう。同様に立方体様の合成ナノ担体において、合成ナノ担体の最小寸法は、その高さ、幅または長さのうち最小のものとなり、一方合成ナノ担体の最大寸法は、その高さ、幅または長さのうち最大のものとなろう。一態様において、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍ以上である。
【００４４】
一態様において、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、５μｍ以下である。好ましくは、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１１０ｎｍよりも大きく、より好ましくは１２０ｎｍよりも大きく、より好ましくは１３０ｎｍよりも大きく、より好ましくは１５０ｎｍよりもなお大きい。合成ナノ担体の最大寸法と最小寸法とのアスペクト比は、態様によって変化し得る。例えば、合成ナノ担体の最大寸法の最小寸法に対するアスペクト比は、１：１〜１，０００，０００：１、好ましくは１：１〜１００，０００：１、より好ましくは１：１〜１０，０００：１、より好ましくは１：１〜１０００：１、なおより好ましくは１：１〜１００：１、さらにより好ましくは１：１〜１０：１で変化し得る。好ましくは、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、３μｍ以下、より好ましくは２μｍ以下、より好ましくは１μｍ以下、より好ましくは８００ｎｍ以下、より好ましくは６００ｎｍ以下、なおより好ましくは５００ｎｍ以下である。
【００４５】
好ましい態様において、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍ以上、より好ましくは１２０ｎｍ以上、より好ましくは１３０ｎｍ以上、より好ましくは１４０ｎｍ以上、なおより好ましくは１５０ｎｍ以上である。合成ナノ担体寸法（例えば有効寸法）の測定は、いくつかの態様において、合成ナノ担体を液体（通常は水性）媒体中に懸濁し、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用する（例えばBrookhaven ZetaPALS機器を使用する）ことによって、得てもよい。例えば、合成ナノ担体の懸濁液は、水性緩衝剤から純水中に希釈されておよそ０．０１〜０．１ｍｇ／ｍＬの最終合成ナノ担体懸濁濃度を達成し得る。希釈懸濁液は、ＤＬＳ分析のために好適なキュベットの内部で直接調製されても、またはそれに移してもよい。次いでキュベットをＤＬＳ中に置き、制御された温度に平衡化し、次いで充分な時間スキャンして、媒体の粘度およびサンプルの屈折率に関する適切な入力に基づき、安定で再現可能な分布を獲得し得る。次いで有効径または分布の平均値を報告する。高アスペクト比または非回転楕円状の合成ナノ担体の有効サイズの決定は、より正確な測定を得るために電子顕微鏡などの拡大技術(augmentative techniques)を要する場合がある。合成ナノ担体の「寸法」または「サイズ」または「径」は、例えば動的光散乱を使用して得られる、粒子サイズ分布の平均値を意味する。
【００４６】
「非メトキシ末端のポリマー」は、メトキシ以外の部位で終端する少なくとも１つの末端部を有するポリマーを意味する。いくつかの態様において、ポリマーはメトキシ以外の部位で終端する少なくとも２つの末端部を有する。他の態様において、ポリマーはメトキシで終端する末端部を有さない。「非メトキシ末端のプルロニックポリマー」は、両末端部にメトキシを有する直鎖プルロニックポリマー以外のポリマーを意味する。本明細書で提供されるポリマーナノ粒子は、非メトキシ末端のポリマーまたは非メトキシ末端のプルロニックポリマーを含み得る。
「薬学的に許容し得る賦形剤」または「薬学的に許容し得る担体」は、組成物を処方するために薬理学的に活性な材料と一緒に使用される薬理学的に不活性な材料を意味する。薬学的に許容し得る賦形剤は、糖（例えばグルコース、ラクトース等）、抗菌剤などの保存剤、再構成助剤、着色剤、食塩水（リン酸緩衝化食塩水等）および緩衝剤を包含するが、これらに限定されない、当該分野において知られている種々の材料を含む。
【００４７】
「薬力学的有効期間」は、対象への免疫抑制剤の投与後である第１の用量依存的期間を意味し、その間、抗原の投与後５日間から３か月間までの範囲で開始する第２の期間の間、抗原の投与は、測定可能な対象において抗原特異的寛容をもたらす。態様において、薬力学的有効期間は、１または２以上の対象、対象の第１のクラスなど、において測定された個々の薬力学的有効期間の平均として測定することができ、各測定対象において単独回または複数回測定できる。
「提供すること」は、本発明を実行するために必要とされる物品もしくは物品のセットまたは方法を供給する、個人が行う行動または行動のセットを意味する。行動または行動のセットは、自身で直接的または間接的に取られ得る。
【００４８】
「対象を提供する」とは、臨床医に対象と接触させて本明細書で提供される組成物をその対象に投与させるか、または、本明細書で提供される方法をその対象において行わせる、いずれかの行動または行動のセットである。好ましくは、対象は治療用高分子の投与およびそれへの抗原特異的寛容を必要としている対象である。行動または行動のセットは、自身で直接的または間接的に取られ得る。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法はさらに対象を提供することを含む。
「対象」は、ヒトおよび霊長類などの温血動物；トリ；ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマおよびブタなどのペットまたは家畜；マウス、ラットおよびモルモットなどの実験動物；魚；爬虫類；動物園のおよび野生の動物；等を包含する動物を意味する。
「合成ナノ担体（単数または複数）」は、自然界には見られずサイズにおいて５ミクロン以下の少なくとも１つの寸法を所有する離散性の物体を意味する。アルブミンナノ粒子は一般に、合成ナノ担体として包含されるが、特定の態様において、合成ナノ担体はアルブミンナノ粒子を含まない。ある態様において、合成ナノ担体はキトサンを含まない。他の態様において、合成ナノ担体は脂質系ナノ粒子ではない。さらなる態様において、合成ナノ担体はリン脂質を含まない。
【００４９】
合成ナノ担体は、１つまたは複数の脂質系ナノ粒子（本明細書において脂質ナノ粒子ともいわれ、すなわちその構造を構成する材料の大部分が脂質であるナノ粒子）、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性物質系エマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子（すなわち、主にウイルス構造タンパク質で構成されるが、感染性ではなくまたは感染性が低い粒子）、ペプチドまたはタンパク質系粒子（本明細書においてタンパク質粒子ともいわれ、すなわち、その構造を構成する材料の大部分がペプチドまたはタンパク質である粒子）（アルブミンナノ粒子など）および／または脂質ポリマーナノ粒子などのナノ材料の組み合わせを使用して開発されたナノ粒子であってよいが、これらに限定されない。合成ナノ担体は、回転楕円状、立方体様、ピラミッド状、楕円状、円筒状、ドーナツ状等を包含するが、これらに限定されない種々の異なる形状であり得る。
【００５０】
本発明に従う合成ナノ担体は１つまたは２つ以上の表面を含む。本発明の実行に使用するように適合され得る例示的な合成ナノ担体は、（１）米国特許第5,543,158号（Gref et al.）に開示された生分解性ナノ粒子、（２）公開された米国特許出願第20060002852号（Saltzman et al.）のポリマーナノ粒子、（３）公開された米国特許出願第20090028910号（DeSimone et al.）のリソグラフィーにより構築したナノ粒子、（４）国際出願公開第2009/051837号（von Andrian et al.）の開示、（５）公開された米国特許出願第2008/0145441号（Penades et al.）に開示されたナノ粒子、（６）公開された米国特許出願第20090226525号（de los Rios et al.）に開示されたタンパク質ナノ粒子、（７）公開された米国特許出願第20060222652号（Sebbel et al.）に開示されたウイルス様粒子、（８）公開された米国特許出願第20060251677号（Bachmann et al.）に開示された核酸付着ウイルス様粒子、（９）国際公開第2010047839A1号または同第2009106999A2号に開示されたウイルス様粒子、（１０）P. Paolicelli et al., "Surface-改変 PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles", Nanomedicine. 5(6): 843-853（2010）に開示されたナノ沈殿ナノ粒子、（１１）米国特許公開第2002/0086049号に開示されたアポトーシス細胞、アポトーシス体、または、合成または半合成模倣物、または（１２）Look et al., "Nanogel-based delivery of mycophenolic acid ameliorates 全身 lupus erythematosus in mice", J. Clinical Investigation 123(4): 1741-1749 (2013)に開示されたものを含む。ある態様において、合成ナノ担体は、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７よりも大きな、または１：１０よりも大きなアスペクト比を所有し得る。
【００５１】
約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明に従う合成ナノ担体は、補体を活性化するヒドロキシル基を有する表面を含まないか、または代替的に補体を活性化するヒドロキシル基ではない部位から本質的になる表面を含む。好ましい態様において、約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明に従う合成ナノ担体は、補体を実質的に活性化する表面を含まないか、または代替的に補体を実質的に活性化しない部位から本質的になる表面を含む。より好ましい態様において、約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明に従う合成ナノ担体は、補体を活性化する表面を含まないか、または代替的に補体を活性化しない部位から本質的になる表面を含む。ある態様において、合成ナノ担体は、ウイルス様粒子を排除する。ある態様において、合成ナノ担体は１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７よりも大きな、または１：１０よりも大きなアスペクト比を有し得る。
【００５２】
「試験用量」または「免疫抑制剤の試験用量」は、試験のための免疫抑制剤の用量を意味する。
「試験薬力学的有効期間」は、免疫抑制剤の試験用量の治療用高分子および対象の第２のクラスに関して決定される、免疫抑制剤の薬力学的有効期間を意味する。ある態様において、列挙される免疫抑制剤は、治療用高分子に関して、最小２０時間から最大１か月間まで、好ましくは最小２０時間から最大２週間まで、好ましくは最小２０時間から最大１週間まで、好ましくは最小２０時間から最大５日間まで、好ましくは最小２０時間から最大３日間まで、好ましくは最小２４時間から最大２日間までの範囲の期間を有する、試験薬力学的有効期間を有してもよい。
【００５３】
「治療用高分子」は、対象に投与されて治療効果を有し得るいずれかのタンパク質、炭水化物、脂質、または核酸をいう。いくつかの態様において、対象への治療用高分子の投与は、抗治療用高分子特異的抗体の産生を包含する望ましくない免疫応答をもたらし得る。本明細書で記載する場合、いくつかの態様において、本明細書で記載する場合、治療用高分子の投与は、それへの望ましくない免疫応答を低減させることなどにより、治療用高分子の治療有効性を向上させ得る。いくつかの態様において、治療用高分子は治療用ポリヌクレオチドまたは治療用タンパク質であり得る。
【００５４】
「治療用ポリヌクレオチド」は、対象に投与されて治療効果を有し得るいずれかのポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドに基づく治療を意味する。かかる治療は遺伝子サイレンシングを包含する。かかる治療の例は当該分野において知られており、ネイキッドＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ、修飾メッセンジャーＲＮＡおよびＲＮＡｉの形態を包含する）が挙げられるが、これらに限定されない。他の治療用ポリヌクレオチドの例は本明細書中に別記する。治療用ポリヌクレオチドは、細胞中、細胞上または細胞によって、産生されてもよいし、また細胞フリーの方法、または完全に合成によるin vitro法を使用して得てもよい。対象はそれゆえ、前述のいずれかによる処置を必要としているいずれかの対象を包含する。かかる対象には、前述のいずれかを受けるであろう対象が包含される。
【００５５】
「治療用タンパク質」は、対象に投与されて治療効果を有し得るいずれかのタンパク質またはタンパク質に基づく治療を意味する。かかる治療としては、タンパク質補充治療およびタンパク質補強治療が挙げられる。かかる療法にはまた、外因性または外来性のタンパク質の投与、抗体治療および細胞または細胞に基づく治療も包含される。治療用タンパク質としては、酵素、酵素補助因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカイン、成長因子、モノクローナル抗体、抗体−薬物複合体およびポリクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。他の治療用タンパク質の例は本明細書中で別記する。治療用タンパク質は、細胞中で、細胞上で、または細胞によって、産生されてもよく、かかる細胞から得られるか、または、かかる細胞の形態で投与されてもよい。ある態様において、治療用タンパク質は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、細菌細胞、植物細胞、トランスジェニック動物細胞、トランスジェニック植物細胞、等中で、これらの細胞上で、またはこれらの細胞によって産生される。治療用タンパク質は、かかる細胞中で遺伝子組換えにより産生されてもよい。治療用タンパク質は、ウイルスで形質転換した細胞中、該細胞上、または該細胞により産生されてもよい。対象はそれゆえ、前述のいずれかによる処置を必要とするいずれかの対象を包含する。かかる対象には前述のいずれかを受けるであろう対象が包含される。
【００５６】
Ｃ．本方法の実行において有用な組成物
本明細書で提供されるものは、望ましくない免疫応答の発生の低減および治療用高分子に特異的な寛容原性免疫応答の発生を促進するために有用な方法および関連した組成物である。該方法および組成物は、薬力学的有効期間の間、治療用高分子を投与することによって、免疫抑制剤の治療用高分子に関して、免疫抑制剤を投与する利益を最大化することを助ける。本発明の方法は、治療用高分子に対する寛容原性免疫応答が望ましい対象で実行することができる。かかる対象は、治療用高分子を投与されるであろうものを含む。本発明の実行において、特定の有用性は、治療用高分子に関して、最小２０時間から最大１か月間までの範囲の期間を有する薬力学的有効期間を有する免疫抑制剤である。様々な免疫抑制剤は、本発明の実行において使用してもよい。
【００５７】
特定の態様において、列挙される免疫抑制剤は、移植可能浸透圧ポンプなどのデバイスの形態であってもよい。本発明の実行において使用され得る、１つのかかる移植可能浸透圧ポンプは、ALZET（登録商標）ブランド移植可能浸透圧ポンプである（Durect Corporation, Cupertino CAから入手可能）。ALZET（登録商標）ブランド浸透圧ポンプは、制御された速度で１日から４週間まで、外部接続、頻繁な取り扱いまたは繰り返しの投薬の必要なく、連続的に薬物、ホルモンおよび他の試験剤を送達できる、小型の移植可能浸透圧ポンプである。これらの輸液ポンプは、皮膚下または身体に移植されたとき、全身投与に使用できる。それらは、静脈内、脳内もしくは動脈内の輸液または標的化送達のためのカテーテルに付着させることができ、ここで薬物または試験剤の効果は、特定の組織または臓器に局在する。該ポンプは、該ポンプと動物の体液との間の浸透圧の違いによって動き、したがって、外部電源を必要としない。ALZETポンプは、脊髄、脾臓、肝臓、臓器または組織移植および創傷治癒部位を含む種々多様な部位への送達を標的化するために使用される。例えば、S. M. Stepkowski et al., “Inhibition of host-versus-graft and graft-versus-host responses after small bowel transplantation in rats by rapamycin.” Transplantation (1992) 53(-2-):258-264を参照されたい。ALZET（登録商標）ブランド浸透圧ポンプに関する他の情報はalzet.comで入手可能である。
【００５８】
ある態様において、列挙される免疫抑制剤は、免疫細胞上の関心の高分子および寛容の刺激に関与する免疫細胞上の標的（細胞表面受容体など）に結合するように設計されたその他の可変領域に選択的に結合する抗原（ＢＣＲなど）の受容体を標的化するために設計された１つの可変領域を有する、二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の形態であってもよい。別の態様において、ＢｓＡｂは、関心の高分子に結合する、別の抗体の可変領域を標的とするように設計された１つの可変領域（抗イディオタイプの領域または抗体）および寛容の刺激に関与する免疫細胞上の標的（細胞表面受容体など）に結合するように設計されたその他の可変領域からなる。２つの結合特異性の組み合わせより、ＢｓＡｂ免疫抑制剤の選択性および効能を改善することができ、関心の高分子の免疫寛容を誘発することができる。ある態様において、免疫抑制剤ＢｓＡｂ標的は、Ｂ細胞上のＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２（参考：Ref: M. R. Clatworthy, American Journal of Transplantation 2011; 11: 1359-1367）、およびＧＩＴＲ（グルココルチコイドで誘発された腫瘍ネクローシス因子（ＴＮＦ）受容体ファミリー関連遺伝子）を含むが、これらに限定されない。ＧＩＴＲは、ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーと相同性を有するタイプＩ膜貫通タンパク質である。ＧＩＴＲは、安静時のＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞ならびに上方制御された以下のＴ細胞活性化の際は低レベルで発現される。ＧＩＴＲのライゲーションは、特に最適下限のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激の設定における、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方の増殖ならびに効果または機能を向上させる、共刺激性シグナルを提供する。さらに、ＧＩＴＲは、制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上、高レベルで連続的に発現され、Ｔｒｅｇ抑制を克服するための潜在的な標的として探索されている。ＧＩＴＲリガンドを使用してＧＩＴＲを通じたシグナル伝達は、Ｔｒｅｇの抑制効果を無効化し、自己反応性およびアロ反応性Ｔ細胞応答を向上させ、自己免疫を悪化させる。別のＢｓＡｂ標的は、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３として知られる）を含んでもよい。ＣＤ２２３は、ＣＤ４よりも高い親和性でＭＨＣクラスＩＩに結合し、この相互作用は、Ｔ細胞活性化および恒常的な増殖の負の制御に関与すると考えられている。さらに、ＣＤ２２３は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御Ｔ細胞によって発現され、ＣＤ２２３は、当該技術分野において公知の他のかかる標的に加えて、それらの制御機能に関与し得ることが示唆されている。
【００５９】
特定の態様において、列挙される免疫抑制剤は、移植可能高分子デポ材料の形態であってもよい。ある態様において、移植可能高分子デポ材料は、微多孔質、生体適合性、生分解性、熱可塑性ポリマーの固体マトリックス、速度改変剤(rate modifying agent)および生体活性材料を含む。該マトリックスは、溶液または懸濁液において形成され、注射可能な液体を形成する。該マトリックスは、マトリックスからの生体活性剤の放出の速度および程度を制御する。該プロセスは、それによってデポが部分的に形成され、速度および放出制御の発達の原因である。ポリマー系を凝固させるための、身体におけるin situまたは身体外のいずれかにおける水性媒体を有する液体組成物の相互作用は、構成成分の多様性の機能および種々の構成成分の濃度として、望ましい制御された放出プロファイルを少なくとも部分的にもたらす。例示的な移植可能高分子デポ材料は、“Polymeric compositions useful as controlled release implants”と題する米国特許第5,702,716号（Dunn et al.）および“Gel composition and methods”と題する米国特許第6,130,200号（Brodbeck et al.）に見出すことができる。
【００６０】
列挙される免疫抑制剤は、免疫抑制剤を含む合成ナノ担体の形態において投与することもできる。種々多様な合成ナノ担体を本発明に従い使用し得る。いくつかの態様において、合成ナノ担体は、球状または回転楕円状である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は平坦または平板形状である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は立方体または立方体状である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は卵形または長円である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は円筒、円錐またはピラミッドである。
いくつかの態様において、各合成ナノ担体が同様の性質を有するようにサイズまたは形状の点で比較的均一である合成ナノ担体の集団を使用することが望ましい。例えば、合成ナノ担体の総数に基づいて少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の合成ナノ担体は、合成ナノ担体の平均径または平均寸法の５％、１０％または２０％以内に入る最小寸法または最大寸法を有し得る。
【００６１】
合成ナノ担体は、中実または中空であってよく、１つまたは２つ以上の層を含み得る。いくつかの態様において、各層が、他の層（単数または複数）に対して、独自の組成物および独自の性質を有する。例を挙げると、合成ナノ担体は、コアが１つの層（例えばポリマーコア）でありシェルが第２の層（例えば脂質二分子層または脂質単分子層）であるコア／シェル構造を有していてもよい。合成ナノ担体は複数の異なる層を含んでいてもよい。
【００６２】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は任意で、１つまたは２つ以上の脂質を含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体はリポソームを含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は脂質二分子層を含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は脂質単分子層を含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体はミセルを含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は脂質層（例えば、脂質二分子層、脂質単分子層、等）に囲まれたポリマーマトリックスを含むコアを含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は、脂質層（例えば、脂質二分子層、脂質単分子層、等）に囲まれた非ポリマーコア（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子、タンパク質、核酸、炭水化物、等）を含んでいてもよい。
他の態様において、合成ナノ担体は金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、等を含んでいてもよい。いくつかの態様において、非ポリマー合成ナノ担体は、金属原子（例えば金原子）の凝集体などの非ポリマー構成成分の凝集体である。
【００６３】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は任意で、１つまたは２つ以上の両親媒性の実体を含んでいてもよい。いくつかの態様において、両親媒性の実体は安定性が増大されているか、均一性が改善されているか、または、粘度が増大されている合成ナノ担体の生成を促進し得る。いくつかの態様において、両親媒性の実体は、脂質膜（例えば、脂質二分子層、脂質単分子層、等）の内部表面に関連され得る。当該分野において知られている多くの両親媒性の実体は、本発明に従う合成ナノ担体を作ることにおける使用に好適である。かかる両親媒性の実体としては、ホスホグリセリド；ホスファチジルコリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；ジオレイルオキシプロピルトリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；ジオレオイルホスファチジルコリン；コレステロール；コレステロールエステル；ジアシルグリセロール；ジアシルグリセロールスクシネート；ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサンデカノール；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの脂肪族アルコール；ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル；パルミチン酸またはオレイン酸などの表面活性脂肪酸；脂肪酸；脂肪酸モノグリセリド；脂肪酸ジグリセリド；脂肪酸アミド；ソルビタントリオレエート（Span（登録商標）85）グリココレート；ソルビタンモノラウレート（Span（登録商標）20）；ポリソルベート２０（Tween（登録商標）20）；
【００６４】
ポリソルベート６０（Tween（登録商標）60）；ポリソルベート６５（Tween（登録商標）65）；ポリソルベート８０（Tween（登録商標）80）；ポリソルベート８５（Tween（登録商標）85）；ポリオキシエチレンモノステアレート；サーファクチン；ポロキソマー（poloxomer）；ソルビタントリオレエートなどのソルビタン脂肪酸エステル；レシチン；リゾレシチン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリン；ホスファチジルエタノールアミン（ケファリン）；カルジオリピン；ホスファチジン酸；セレブロシド；ジセチルホスフェート；ジパルミトイルホスファチジルグリセロール；ステアリルアミン；ドデシルアミン；ヘキサデシルアミン；アセチルパルミテート；グリセロールリシノレエート；ヘキサデシルステアレート；イソプロピルミリステート；チロキサポール；ポリ（エチレングリコール）５０００−ホスファチジルエタノールアミン；ポリ（エチレングリコール）４００−モノステアレート；リン脂質；高い界面活性物質活性を有する合成および／または天然洗剤；デオキシコレート；シクロデキストリン；カオトロピック塩；イオンペア剤；および、これらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。両親媒性実体構成成分は、異なる両親媒性実体の混合物であってもよい。これが界面活性物質活性を有する物質の包括的ではない例示的なリストであるということを当業者は認識するであろう。いずれかの両親媒性実体を、本発明に従って使用される合成ナノ担体の生成に使用してよい。
【００６５】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は任意で、１つまたは２つ以上の炭水化物を含んでいてもよい。炭水化物は天然または合成であってもよい。炭水化物は誘導天然炭水化物であってもよい。特定の態様において、炭水化物は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セルビオース、マンノース、キシロース、アラビノース、グルコン酸、ガラクトン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラトサミンおよびノイラミン酸が挙げられるが、これらに限定されない単糖または二糖を含む。特定の態様において、炭水化物は、プルラン、セルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシセルロース（ＨＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、ヒドロキシエチルスターチ、カラギーナン、グリコン、アミロース、キトサン、Ν，Ο−カルボキシメチルキトサン、アルギンおよびアルギン酸、デンプン、キチン、イヌリン、こんにゃく、グルコマンナン、プスツラン、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードランおよびキサンタンが挙げられるが、これらに限定されない多糖である。ある態様において、合成ナノ担体は多糖などの炭水化物を含まない（または具体的に排除される）。特定の態様において、炭水化物は、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトールおよびラクチトールが挙げられるが、これらに限定されない糖アルコールなどの炭水化物誘導体を含んでいてもよい。
【００６６】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は１つまたは２つ以上のポリマーを含み得る。いくつかの態様において、合成ナノ担体は、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである１つまたは２つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）が非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの全てが非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体は非メトキシ末端のポリマーである１つまたは２つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）が非メトキシ末端のポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの全てが非メトキシ末端のポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体はプルロニックポリマーを含まない１つまたは２つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）がプルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの全てがプルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、かかるポリマーは、コーティング層（例えば、リポソーム、脂質単分子層、ミセル、等）で囲まれていてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体の種々の要素はポリマーに付着されていてもよい。
【００６７】
免疫抑制剤は、多くの方法のいずれかによって合成ナノ担体に付着され得る。一般に付着は、免疫抑制剤と合成ナノ担体との間の結合の結果であり得る。この結合は、免疫抑制剤が合成ナノ担体の表面に付着されおよび／または合成ナノ担体内に含有され（カプセル化され）ることをもたらし得る。しかしながら、いくつかの態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体への結合ではなくむしろ合成ナノ担体の構造の結果として、合成ナノ担体によってカプセル化される。好ましい態様において、合成ナノ担体は、本明細書で提供されるポリマーを含み、免疫抑制剤はポリマーに付着される。
付着が免疫抑制剤と合成ナノ担体との間の結合の結果として起こるとき、付着は連結部位を介して起こり得る。連結部位は免疫抑制剤がその部位を通して合成ナノ担体に結合されるいずれかの部位であり得る。かかる部位には、アミド結合またはエステル結合などの共有結合ならびに免疫抑制剤を合成ナノ担体に（共有結合的にまたは非共有結合的に）結合する別個の分子が包含される。かかる分子は、リンカー、または、ポリマーまたはそれらの単位を包含する。例えば、連結部位は、免疫抑制剤が静電的に結合する荷電ポリマーを含み得る。別の例として、連結部位は、それが共有結合的に結合するポリマーまたはその単位を含み得る。
【００６８】
好ましい態様において、合成ナノ担体は本明細書で提供されるポリマーを含む。これらの合成ナノ担体は完全にポリマー性であってもよく、ポリマーと他の材料との混合であってもよい。
いくつかの態様において、合成ナノ担体のポリマー同士が関連してポリマーマトリックスを形成する。これらの態様のうちのいくつかにおいて、免疫抑制剤などの構成成分はポリマーマトリックスの１つまたは２つ以上のポリマーと共有結合的に関連され得る。いくつかの態様において、共有結合的関連はリンカーによって媒介される。いくつかの態様において、構成成分は、ポリマーマトリックスの１つまたは２つ以上のポリマーと非共有結合的に関連され得る。例えば、いくつかの態様において、構成成分は、高分子マトリックス内にカプセル化され、それによって囲まれ、および／または、それの全体にわたって分散され得る。代替的または追加的に、構成成分は、ポリマーマトリックスの１つまたは２つ以上のポリマーと、疎水性の相互作用、電荷相互作用、ファンデルワールス力、等によって関連され得る。ポリマーマトリックスを形成するための多種多様なポリマーおよび方法は従来、知られている。
【００６９】
ポリマーは、天然または非天然（合成）ポリマーであり得る。ポリマーはホモポリマーまたは２つまたは３つ以上のモノマーを含むコポリマーであり得る。並びの点で、コポリマーはランダム、ブロックであっても、ランダムとブロックとの並びの組み合わせを含んでもよい。典型的には、本発明に従うポリマーは、有機ポリマーである。
いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアミドまたはポリエーテル、または、これらの単位を含む。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはポリカプロラクトン、または、これらの単位を含む。いくつかの態様において、ポリマーは生分解性であることが好ましい。それゆえ、これらの態様において、ポリマーがポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位などのポリエーテルを含む場合、ポリマーは、生分解性となるように、ポリエーテルのブロックコポリマーおよび生分解性ポリマーを含むことが好ましい。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位などの、ポリエーテルまたはこれらの単位を、それだけでは含まない。
【００７０】
本発明で使用するのに好適なポリマーの他の例としては、ポリエチレン、ポリカーボネート（例えばポリ（１，３−ジオキサン−２オン））、ポリ酸無水物（例えばポリ（セバシン酸無水物））、ポリプロピルフマラート、ポリアミド（例えばポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリラクチド−ｃｏ−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酸（例えばポリ（β−ヒドロキシアルカノアート）））、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリラート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリ尿素、ポリスチレンおよびポリアミン、ポリリジン、ポリリジン−ＰＥＧ共重合体およびポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）−ＰＥＧ共重合体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
いくつかの態様において、本発明に従うポリマーは、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（１，３−ジオキサン−２オン））；ポリ酸無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））；ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール）；ポリウレタン；ポリメタクリラート；ポリアクリラート；およびポリシアノアクリラートを包含するが、これらに限定されない、米国医薬品局（ＦＤＡ）により21C.F.R.§177.2600の下でヒトにおける使用が認証されたポリマーを包含する。
【００７２】
いくつかの態様において、ポリマーは親水性であり得る。例えば、ポリマーは、アニオン性基（例えばホスファート基、スルファート基、カルボキシラート基）；カチオン性基（例えば四級アミン基）；または極性基（例えばヒドロキシル基、チオール基、アミン基）を含み得る。いくつかの態様において、親水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノ担体は、合成ナノ担体内に親水性環境を発生させる。いくつかの態様において、ポリマーは疎水性であり得る。いくつかの態様において、疎水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノ担体は、合成ナノ担体内に疎水性環境を発生させる。ポリマーの親水性または疎水性の選択は、合成ナノ担体内に組み込まれた（例えば、付着された）材料の特質に影響を有し得る。
いくつかの態様において、ポリマーは１つまたは２つ以上の部位および／または官能基で修飾され得る。種々の部位または官能基を本発明に従い使用し得る。いくつかの態様において、ポリマーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で、炭水化物で、および／または、多糖から誘導された非環式ポリアセタールで、修飾され得る（Papisov, 2001、ACS Symposium Series, 786:301）。特定の態様は、米国特許第5543158号（Gref et al.）または国際公開第2009/051837号（Von Andrian et al.）の一般的教示を使用してなされ得る。
【００７３】
いくつかの態様において、ポリマーは脂質または脂肪酸基で修飾され得る。いくつかの態様において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸またはリグノセリン酸の１つまたは２つ以上であり得る。いくつかの態様において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ−リノール酸、ガンマ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルシン酸の１つまたは２つ以上であり得る。
【００７４】
いくつかの態様において、ポリマーは、本明細書において集合的に「ＰＬＧＡ」と呼ばれる、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）などの、乳酸およびグリコール酸単位を含むコポリマー；および本明細書において「ＰＧＡ」と呼ばれるグリコール酸単位を含むホモポリマー；および本明細書において集合的に「ＰＬＡ」と呼ばれるポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチドおよびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチドなどの乳酸単位を含むホモポリマー、を包含するポリエステルであってもよい。いくつかの態様において、例示的なポリエステルとしては、例えば、ポリヒドロキシ酸；ＰＥＧコポリマーおよびラクチドとグリコリドとのコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＧＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーおよびこれらの誘導体）が挙げられる。いくつかの態様において、ポリエステルは、例えば、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）−ＰＥＧコポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］およびこれらの誘導体を包含する。
【００７５】
いくつかの態様において、ポリマーはＰＬＧＡである。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸との生体適合性かつ生分解性のコポリマーであり、乳酸：グリコール酸の比によってＰＬＧＡの種々の形態が特徴付けられる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸またはＤ，Ｌ−乳酸であり得る。ＰＬＧＡの分解速度は乳酸：グリコール酸比を変えることによって調節され得る。いくつかの態様において、本発明に従い使用されるＰＬＧＡは、およそ８５：１５、およそ７５：２５、およそ６０：４０、およそ５０：５０、およそ４０：６０、およそ２５：７５、または、およそ１５：８５の乳酸：グリコール酸比によって特徴付けられる。
【００７６】
いくつかの態様において、ポリマーは１つまたは２つ以上のアクリルポリマーであってもよい。特定の態様において、アクリルポリマーは、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸のコポリマー、メチルメタクリラートコポリマー、エトキシエチルメタクリラート、シアノエチルメタクリラート、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（無水メタクリル酸）、メチルメタクリラート、ポリメタクリラート、ポリ（メチルメタクリラート）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、グリシジルメタクリラートコポリマー、ポリシアノアクリラートおよび上記のポリマーの１つまたは２つ以上を含む組み合わせを包含する。アクリルポリマーは、四級アンモニウム基の含有量の低いアクリルおよびメタクリル酸エステルの十分にポリマー化されたコポリマーを含み得る。
【００７７】
いくつかの態様において、ポリマーはカチオン性ポリマーであり得る。一般にカチオン性ポリマーは、核酸の負に荷電されたストランドを濃縮および／または保護する能力がある。ポリ（リジン）（Zauner et al., 1998、Adv. Drug Del. Rev., 30:97; Kabanov et al., 1995, Bio複合体 Chem., 6:7）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ；Boussif et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1995, 92:7297）およびポリ（アミドアミン）デンドリマー（Kukowska-Latallo et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 93:4897; Tang et al., 1996, Bio複合体 Chem., 7:703; Haensler et al., 1993, Bio複合体 Chem., 4:372）などのアミン含有ポリマーは、生理学的なｐＨで正に荷電されて核酸とイオン対を形成する。ある態様において、合成ナノ担体はカチオン性ポリマーを含まなくてもよい（または排除してもよい）。
【００７８】
いくつかの態様において、ポリマーはカチオン性の側鎖を持つ生分解性ポリエステル（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Barrera et al., 1993, J, Am. Chem. Soc., 115: 11010; Kwon et al., 1989, Macromolecules, 22:3250; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633; Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）であり得る。これらのポリエステルの例としては、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）（Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115: 11010）、ポリ（セリンエステル）（Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）およびポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）が挙げられる。
【００７９】
これらのおよび他のポリマーの特性およびそれらの調製方法は当該分野において周知である（例えば、米国特許第6,123,727号；5,804,178号；5,770,417号；5,736,372号；5,716,404号；6,095,148号；5,837,752号；5,902,599号；5,696,175号；5,514,378号；5,512,600号；5,399,665号；5,019,379号；5,010,167号；4,806,621号；4,638,045号;および4,946,929号；Wang et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:9480; Lim et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:2460; Langer, 2000, Acc. Chem. Res., 33:94; Langer, 1999, J. Control. Release, 62:7; Uhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181参照）。より一般には、特定の好適なポリマーを合成するための種々の方法が、Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and Ammonium Salts, Ed. by Goethals, Pergamon Press, 1980; Principles of Polymerization by Odian, John Wiley & Sons, Fourth Edition, 2004; Contemporary Polymer Chemistry by Allcock et al., Prentice-Hall, 1981; Deming et al., 1997, Nature, 390:386；および米国特許第6,506,577号、同第6,632,922号、同第6,686,446号および同第6,818,732号に記載されている。
【００８０】
いくつかの態様において、ポリマーは直鎖状または分枝状ポリマーであり得る。いくつかの態様において、ポリマーはデンドリマーであり得る。いくつかの態様において、ポリマーは実質的に、互いに架橋されていてよい。いくつかの態様において、ポリマーは実質的に架橋を含まなくてよい。いくつかの態様において、ポリマーは架橋ステップを経験せずに本発明に従い使用され得る。合成ナノ担体は、ブロックコポリマー、グラフトコポリマー、前述のおよび他のポリマーのいずれかのブレンド、混合物および／または付加物を含み得ることをさらに理解すべきである。本明細書中に列挙されるポリマーは、本発明に従い使用され得る包括的でない例示的なポリマーのリストを表すものであることを当業者は認識するであろう。
いくつかの態様において、合成ナノ担体はポリマー構成成分を含まない。いくつかの態様において、合成ナノ担体は金属粒子、量子ドット、セラミック粒子等を含み得る。いくつかの態様において、非ポリマー合成ナノ担体は、金属原子（例えば金原子）の凝集体などの非ポリマー構成成分の凝集体である。
【００８１】
本発明に従う組成物は、要素を、保存剤、緩衝剤、食塩水またはリン酸緩衝化食塩水などの薬学的に許容し得る賦形剤と組み合わせて含み得る。組成物は、有用な剤形に到達するように従来の医薬製造および配合技術を使用して作られ得る。ある態様において、合成ナノ担体を含むものなどの組成物は、保存剤と一緒に注射用の滅菌食塩水溶液に懸濁される。
ある態様において、担体としての使用のための合成ナノ担体を調製するとき、合成ナノ担体に構成成分を付着する方法が有用であり得る。構成成分が小さな分子である場合、合成ナノ担体の組み立ての前にその構成成分をポリマーに付着することが有利である場合がある。ある態様において、構成成分をポリマーに付着し、次いでこのポリマー複合体を合成ナノ担体の構築に使用するというよりはむしろ、それらの表面基の使用を通して構成成分を合成ナノ担体に付着させるために使用される表面基を有する合成ナノ担体を調製することも有利である場合がある。
【００８２】
特定の態様において、付着は共有結合性リンカーによりなされ得る。ある態様において、本発明に従う構成成分は、ナノ担体の表面のアジド基とアルキン基を含有する構成成分との１，３−双極子環状付加反応により、または、ナノ担体の表面のアルキンとアジド基を含有する構成成分との１，３−双極子環状付加反応により、形成される、１，２，３−トリアゾールリンカーを介して外部表面に共有結合的に付着され得る。かかる環状付加反応は好ましくは、好適なＣｕ（Ｉ）リガンドと、Ｃｕ（ＩＩ）化合物を触媒活性なＣｕ（Ｉ）化合物に還元するための還元剤と共に、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下で行われる。このＣｕ（Ｉ）触媒アジド−アルキン環状付加（ＣｕＡＡＣ）はまた、クリック反応といわれることもある。
加えて、共有結合的付着は、アミドリンカー、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、ヒドラゾンリンカー、ヒドラジドリンカー、イミンまたはオキシムリンカー、尿素またはチオ尿素リンカー、アミジンリンカー、アミンリンカーおよびスルホンアミドリンカーを含む共有結合性リンカーを含み得る。
【００８３】
アミドリンカーは、免疫抑制剤などの一方の構成成分上のアミンとナノ担体などの第２の構成成分のカルボン酸基との間のアミド結合を介して形成される。リンカー中のアミド結合は、好適に保護されたアミノ酸および活性化されたカルボン酸（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性化エステルなど）との従来のアミド結合形成反応のいずれかを使用して作られ得る。
ジスルフィドリンカーは、例としてＲ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２の形態の２つの硫黄原子間のジスルフィド（Ｓ−Ｓ）結合の形成を介して作られ得る。ジスルフィド結合は、チオール／メルカプタン基（−ＳＨ）を含有する構成成分とポリマーまたはナノ担体上の別の活性化チオール基との、または、チオール／メルカプタン基を含有するナノ担体と活性化チオール基を含有する構成成分との、チオール交換によって形成され得る。
トリアゾールリンカー、具体的には、下記の形態
【化１】
2020073488.tif 000003
（式中Ｒ１およびＲ２が、いずれかの化学的実体であり得る）の１，２，３−トリアゾールは、ナノ担体などの第１構成成分に付着されたアジドの、免疫抑制剤などの第２構成成分に付着された末端アルキンとの１，３−双極子環状付加反応により作られる。１，３−双極子環状付加反応は、触媒の有無で、好ましくはＣｕ（Ｉ）触媒を使用して、行われ、これにより２つの構成成分が１，２，３−トリアゾール官能性を通してつながれる。この化学は、Sharpless et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41(14), 2596, (2002) および Meldal, et al, Chem. Rev., 2008, 108(8), 2952-3015により詳細に記載され、「クリック」反応またはＣｕＡＡＣと呼ばれることも多い。
【００８４】
ある態様において、ポリマー鎖の末端にアジドまたはアルキン基を含有するポリマーが調製される。このポリマーは次いで、複数のアルキンまたはアジド基がナノ担体の表面上に位置するような様式で合成ナノ担体を調製するのに使用される。代替的に、合成ナノ担体は、別の経路により調製され、その後にアルキンまたはアジド基で官能化されてもよい。構成成分は、アルキン（ポリマーがアジドを含有する場合）またはアジド（ポリマーがアルキンを含有する場合）基のどちらかの存在により調製される。構成成分は次に、触媒の有無で１，３−双極子環状付加反応を介してナノ担体と反応され、これにより１，４−二置換１，２，３−トリアゾールリンカーを通して構成成分が粒子に共有結合的に付着される。
【００８５】
チオエーテルリンカーは、例としてＲ１−Ｓ−Ｒ２の形態の硫黄−炭素（チオエーテル）結合の形成によって作られる。チオエーテルは、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン（−ＳＨ）基の、第２構成成分上のハロゲン化物またはエポキシドなどのアルキル化基によるアルキル化によって作られる。チオエーテルリンカーはまた、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン基の、マイケル受容体としてマレイミド基またはビニルスルホン基を含有する第２の構成成分上の電子不足アルケン基へのマイケル付加によっても形成され得る。別の方式において、チオエーテルリンカーは、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン基と、第２構成成分上のアルケン基とのラジカルチオール−エン反応により調製され得る。
【００８６】
ヒドラゾンリンカーは、１つの構成成分上のヒドラジド基と、第２構成成分上のアルデヒド／ケトン基との反応によって作られる。
ヒドラジドリンカーは、１つの構成成分上のヒドラジン基と第２構成成分上のカルボン酸基との反応により形成される。かかる反応は一般に、カルボン酸が活性化試薬で活性化される場合のアミド結合の形成と同様の化学を使用して行われる。
イミンまたはオキシムリンカーは、１つの構成成分上のアミンまたはＮ−アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基と、第２構成成分上のアルデヒドまたはケトン基との反応により形成される。
尿素またはチオ尿素リンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のイソシアナートまたはチオイソシアナート基との反応により調製される。
アミジンリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のイミドエステル基との反応により調製される。
【００８７】
アミンリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のハロゲン化物、エポキシドまたはスルホナートエステル基などのアルキル化基とのアルキル化反応により作られる。代替的に、アミンリンカーはまた、１つの構成成分上のアミン基と第２の構成成分上のアルデヒドまたはケトン基との、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの好適な還元試薬を使用した還元アミノ化により作られてもよい。
スルホアミドリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のスルホニルハライド（スルホニルクロリド等）基との反応によって作られてもよい。
スルホンリンカーは、求核基のビニルスルホンへのマイケル付加により作られる。ビニルスルホンまたは求核基のいずれかは、ナノ担体の表面上にあってもよいし、構成成分に付着されていてもよい。
【００８８】
構成成分はまた、非共有結合性複合化法を介してナノ担体に複合化されていてもよい。例えば、負に荷電された免疫抑制剤は、静電吸着を通して正に荷電されたナノ担体に複合化されてもよい。金属リガンドを含有する構成成分はまた、金属−リガンド錯体を介して金属錯体を含有するナノ担体に複合化されてもよい。
ある態様において、構成成分は、合成ナノ担体の組み立ての前に、ポリマー、例えばポリ乳酸−ブロック−ポリエチレングリコールに付着されてもよいし、合成ナノ担体がその表面上に反応性のまたは活性化可能な基を有するように形成されてもよい。後者の場合、構成成分は、合成ナノ担体の表面によって提示される付着化学と適合可能な基を有するように調製されてもよい。他の態様において、ぺプチド構成成分は、好適なリンカーを使用してＶＬＰまたはリポソームに付着されてもよい。リンカーは、２つの分子同士を付着し得る化合物または試薬である。一態様において、リンカーは、Hermanson 2008に記載のホモ二官能性またはヘテロ二官能性試薬であってもよい。例えば、表面上にカルボキシル基を含有するＶＬＰまたはリポソーム合成ナノ担体を、ＥＤＣの存在下でホモ二官能性リンカー、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で処置してＡＤＨリンカーを有する対応する合成ナノ担体を形成し得る。結果としてもたらされるＡＤＨにつながれた合成ナノ担体は次いで、ナノ担体上のＡＤＨリンカーの他の端部を介して酸基を含有するペプチド構成成分と複合化されて対応するＶＬＰまたはリポソームペプチド複合体を生成する。
【００８９】
利用可能な複合化方法の詳細な記載に関しては、Hermanson G T "Bioconjugate Techniques", 2nd Edition Published by Academic Press, Inc., 2008を参照のこと。共有結合性の付着に加えて、構成成分は、予め形成された合成ナノ担体への吸着によって付着されてもよいし、合成ナノ担体形成中のカプセル化によって付着されてもよい。
本明細書で提供されるいずれかの免疫抑制剤は、本発明によって、例えば、ナノ結晶性形態で使用することによって、ALZET（登録商標）浸透圧ポンプへ積載することによって、または、合成ナノ担体（すなわち、合成ナノ担体に付着された免疫抑制剤）に付着することによって使用できる。
【００９０】
本明細書で提供されるいずれかの免疫抑制剤は、提供される方法または組成物において使用され得、いくつかの態様においては、合成ナノ担体に付着されてもよい。免疫抑制剤としては、スタチン；ラパマイシンまたはラパマイシン類縁体などのｍＴＯＲインヒビター；ＴＧＦ−βシグナル剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター；コルチコステロイド；ロテノンなどのミトコンドリア機能のインヒビター；Ｐ３８インヒビター；ＮＦ−κβインヒビター；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼ４インヒビターなどのホスホジエステラーゼインヒビター；プロテアソームインヒビター；キナーゼインヒビター；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカインインヒビター；サイトカイン受容体インヒビター；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；カルシニューリンインヒビター；ホスファターゼインヒビターおよび酸化ＡＴＰが挙げられるがこれらに限定されない。免疫抑制剤としてはまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、シクロスポリンＡ、アリールハイドロカーボン受容体インヒビター、レスベラトロール、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アスピリン、ニフルミン酸、エストリオール、トリポリド、インターロイキン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１０）、シクロスポリンＡ、サイトカインまたはサイトカイン受容体を標的とするｓｉＲＮＡ、等が挙げられる。
【００９１】
スタチンの例としては、アトルバスタチン（LIPITOR（登録商標）、TORVAST（登録商標））、セリバスタチン、フルバスタチン（LESCOL（登録商標）、LESCOL（登録商標）XL）、ロバスタチン（MEVACOR（登録商標）、ALTOCOR（登録商標）、ALTOPREV（登録商標））、メバスタチン（COMPACTIN（登録商標））、ピタバスタチン（LIVALO（登録商標）、PIAVA（登録商標））、ロスバスタチン（PRAVACHOL（登録商標）、SELEKTINE（登録商標）、LIPOSTAT（登録商標））、ロスバスタチン（CRESTOR（登録商標））およびシンバスタチン（ZOCOR（登録商標）、LIPEX（登録商標））が挙げられる。
【００９２】
ｍＴＯＲインヒビターの例としては、ラパマイシンおよびその類縁体（例えば、CCL-779、RAD001、AP23573、Ｃ２０−メタリルラパマイシン（C20-Marap）、Ｃ１６−（Ｓ）−ブチルスルホンアミドラパマイシン（C16-BSrap）、Ｃ１６−（Ｓ）−３−メチルインドールラパマイシン（C16-iRap）（Bayle et al., Chemistry & Biology 2006, 13:99-107））、AZD8055、BEZ235（NVP-BEZ235）、クリソファン酸（クリソファノール）、デフォロリムス（MK-8669）、エベロリムス（RAD0001）、KU-0063794、PI-103、PP242、テムシロリムスおよびWYE-354（Selleck、Houston、TX、USAから入手可能）が挙げられる。
【００９３】
ＴＧＦ−βシグナル剤の例としては、ＴＧＦ−βリガンド（例えば、アクチビンＡ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１１、骨形態形成タンパク質、ノーダル、ＴＧＦ−β）およびそれらの受容体（例えば、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ１Ｃ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ）、Ｒ−ＳＭＡＤＳ／ｃｏ−ＳＭＡＤＳ（例えば、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ８）およびリガンドインヒビター（例えば、フォリスタチン、ノギン、コルジン、DAN、レフティ、LTBP1、THBS1、デコリン）が挙げられる。
【００９４】
ミトコンドリア機能のインヒビターの例としては、アトラクチロシド（ジカリウム塩）、ボングクレキック酸（トリアンモニウム塩）、カルボニルシアニドｍ−クロロフェニルヒドラゾン、カロボキシアトラクチロシド（例えばアトラクチリス属から）、ＣＧＰ−３７１５７、（−）−デグエリン（例えばMundulea sericeaから）、F16、ヘキソキナーゼＩＩＶＤＡＣ結合ドメインペプチド、オリゴマイシン、ロテノン、Ru360、SFK1およびバリノマイシン（例えばStreptomuces fulvissimusから）（EMD4Biosciences, USA）が挙げられる。
Ｐ３８インヒビターの例としては、SB-203580（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、SB-239063（トランス−１−（４ヒドロキシシクロヘキシル）−４−（フルオロフェニル）−５−（２−メトキシ−ピリミジン−４−イル）イミダゾール）、SB-220025（５−（２アミノ−４−ピリミジニル）−４−（４−フルオロフェニル）−１−（４−ピペリジニル）イミダゾール））およびARRY-797が挙げられる。
【００９５】
ＮＦ（例えば、ΝΚ−κβ）インヒビターの例としては、IFRD1、２−（１，８−ナフチリジン−２−イル）−フェノール、５−アミノサリチル酸、BAY11-7082、BAY11-7085、CAPE（カフェイン酸フェネチルエステル）、ジエチルマレエート、ＩＫＫ−２インヒビターＩＶ、IMD0354、ラクタシスチン、MG-132［Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＣＨＯ］、ＮＦκＢ活性化インヒビターＩＩＩ、ＮＦ−κＢ活性化インヒビターＩＩ、JSH-23、パルテノリド、フェニルアルシンオキシド（ＰＡＯ）、PPM-18、ピロリジンジチオカルバミン酸アンモニウム塩、QNZ、RO106-9920、ロカグラミド、ロカグラミドＡＬ、ロカグラミドＣ、ロカグラミドＩ、ロカグラミドＪ、ロカグラオール、(R)-MG-132、サリチル酸ナトリウム、トリプトリド（PG490）およびウェデロラクトンが挙げられる。
【００９６】
アデノシン受容体アゴニストの例としては、CGS-21680およびATL-146eが挙げられる。
プロスタグランジンＥ２アゴニストの例としては、Ｅ−プロスタノイド２およびＥ−プロスタノイド４が挙げられる。
ホスホジエステラーゼインヒビター（非選択的および選択的インヒビター）の例としては、カフェイン、アミノフィリン、ＩＢＭＸ（３−イソブチル−１−メチルキサンチン）、パラキサンチン、ペントキシフィリン、テオブロミン、テオフィリン、メチル化キサンチン、ビンポセチン、ＥＨＮＡ（エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン）、アナグレリド、エノキシモン（PERFAN（商標））、ミルリノン、レボシメンダン（levosimendon）、メセンブリン、イブジラスト、ピクラミラスト、ルテオリン、ドロタベリン、ロフルミラスト（DAXAS（商標）、DALIRESP（商標））、シルデナフィル（REVATION（登録商標）、VIAGRA（登録商標））、タダラフィル（ADCIRCA（登録商標）、CIALIS（登録商標））、バルデナフィル（LEVITRA（登録商標）、STAXYN（登録商標））、ウデナフィル、アバナフィル、イカリイン、４−メチルピペラジンおよびピラゾロピリミジン−７−１が挙げられる。
【００９７】
プロテアソームインヒビターの例としては、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、エピガロカテキン−３−ガラートおよびサリノスポラミドＡが挙げられる。
キナーゼインヒビターの例としては、ベバシズマブ、BIBW2992、セツキシマブ（ERBITUX（登録商標））、イマチニブ（GLEEVEC（登録商標））、トラスツズマブ（HERCEPTIN（登録商標））、ゲフィチニブ（IRESSA（登録商標））、ラニビズマブ（LUCENTIS（登録商標））、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パニツムマブ、バンデタニブ、E7080、パゾパニブおよびムブリチニブが挙げられる。
【００９８】
グルココルチコイドの例としては、ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、コルチゾンアセタート、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、フルドロコルチゾンアセテート、デオキシコルチコステロンアセテート（ＤＯＣＡ）およびアルドステロンが挙げられる。
レチノイドの例としては、レチノール、レチナール、トレチノイン（レチノイン酸、RETIN-A（登録商標））、イソトレチノイン（ACCUTANE（登録商標）、AMNESTEEM（登録商標）、CLARAVIS（登録商標）、SOTRET（登録商標））、アリトレチノイン（PANRETIN（登録商標））、エトレチナート（TEGISON（商標））およびその代謝産物アシトレチン（SORIATANE（登録商標））、タザロテン（TAZORAC（登録商標）、AVAGE（登録商標）、ZORAC（登録商標））、ベキサロテン（TARGRETIN（登録商標））およびアダパレン（DIFFERIN（登録商標））が挙げられる。
【００９９】
サイトカインインヒビターの例としては、IL1ra、ＩＬ１受容体アンタゴニスト、IGFBP、TNF-BF、ウロモジュリン、アルファ−２−マクログロブリン、シクロスポリンＡ、ペンタミジンおよびペントキシフィリン（PENTOPAK（登録商標）、PENTOXIL（登録商標）、TRENTAL（登録商標））が挙げられる。
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニストの例としては、GW9662、ＰＰＡＲγアンタゴニストＩＩＩ、G335およびT0070907（EMD4Biosciences、USA）が挙げられる。
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニストの例としては、ピオグリタゾン、シグリタゾン、クロフィブレート、GW1929、GW7647、L-165,041、LY171883、ＰＰＡＲγアクチベーター、Fmoc-Leu、トログリタゾンおよびWY-14643（EMD4Biosciences、USA）が挙げられる。
【０１００】
ヒストンデアセチラーゼインヒビターの例としては、トリコスタチンＡ、環状テトラペプチド（トラポキシンＢなど）およびデプシペプチドなどのヒドロキサム酸（またはヒドロキサメート）、ベンズアミド、求電子性ケトン、酪酸フェニルおよびバルプロ酸などの脂肪族酸化合物、ボリノスタット（SAHA）、ベリノスタット（PXD101）、LAQ824およびパノビノスタット（LBH589）などのヒドロキサム酸、エンチノスタット（MS-275）、CI994およびモセチノスタット（MGCD0103）などのベンズアミド、ニコチンアミド、ＮＡＤの誘導体、ジヒドロクマリン、ナフトピラノンおよび２−ヒドロキシナフアルデヒド(hydroxynaphaldehyde)が挙げられる。
【０１０１】
カルシニューリンインヒビターの例としては、シクロスポリン、ピメクロリムス、ボクロスポリンおよびタクロリムスが挙げられる。
ホスファターゼインヒビターの例としては、BN82002ヒドロクロリド、CP-91149、カリクリンＡ、カンタリジン酸、カンタリジン、サイパーメスリン、エチル−３，４−デホスタチン、フォストリエシンナトリウム塩、MAZ51、メチル−３，４−デホスタチン、NSC95397、ノルカンタリジン、prorocentrum concavumからのオカダ酸アンモニウム塩、オカダ酸、オカダ酸カリウム塩、オカダ酸ナトリウム塩、フェニルアルシンオキシド、種々のホスファートインヒビター混液、タンパク質ホスファターゼ１Ｃ、タンパク質ホスファターゼ２Ａインヒビタータンパク質、タンパク質ホスファターゼ２Ａ１、タンパク質ホスファターゼ２Ａ２およびオルトバナジン酸ナトリウムが挙げられる。
【０１０２】
いくつかの態様において、治療用高分子は、治療用高分子そのものまたはそれらの断片または誘導体の形態で送達され得る。治療用高分子は、治療用タンパク質および治療用ポリヌクレオチドを包含し得る。治療用タンパク質としては、点滴可能な治療用のタンパク質、酵素、酵素補助因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカインおよびインターフェロン、成長因子、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（例えば補充治療として対象に投与されるもの）およびポンペ病に関連するタンパク質（例えば酸性グルコシダーゼアルファ、ｒｈＧＡＡ（例えばミオザイムおよびルミザイム（Genzyme））が挙げられるが、これらに限定されない。治療用タンパク質はまた、血液凝固カスケードに関与するタンパク質も包含する。治療用タンパク質としては、第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｖ因子、フォン・ヴィレブランド因子、フォン・ヘルデブラント因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター、インスリン、成長ホルモン、エリスロポエチンアルファ、ＶＥＧＦ、トロンボポエチン、リゾチーム、アンチトロンビン等が挙げられるが、これらに限定されない。治療用タンパク質はまた、レプチンおよびアディポネクチンなどのアディポカインも包含する。治療用タンパク質の他の例は以下に記載し、および本明細書中に別記するとおりである。
【０１０３】
リソソーム蓄積障害を有する対象の酵素補充治療に使用される治療用タンパク質の例としては、ゴーシェ病の処置のためのイミグルセラーゼ（例えばCEREZYME（商標））、ファブリー病の処置のためのａ−ガラクトシダーゼＡ（ａ−ｇａｌＡ）（例えば、アガルシダーゼベータ、FABRYZYME（商標））、ポンペ病の処置のための酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）（例えば、酸性グルコシダーゼアルファ、LUMIZYME（商標）、MYOZYME（商標））およびムコ多糖症の処置のためのアリールスルファターゼＢ（例えば、ラロニダーゼ、ALDURAZYME（商標）、イデュルスルファーゼ、ELAPRASE（商標）、アリールスルファターゼＢ、NAGLAZYME（商標））、ペグロチカーゼ（KRYSTEXXA）およびペグシチカーゼが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０４】
酵素の例としては、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、ウリカーゼ、グリコシダーゼ、アスパラギナーゼ、ウリカーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ヘパリナーゼ、ヘパラナーゼ、リジンおよびリガーゼが挙げられる。
治療用タンパク質はまた、いずれかの細菌性の、真菌性の、またはウイルス性の供給源から単離されるか、または誘導された酵素、毒素、または、他のタンパク質またはペプチドを包含してもよい。
【０１０５】
ホルモンの例としては、メラトニン（Ｎ−アセチル−５−メトキシトリプトアミン）、セロトニン、チロキシン（またはテトラヨードチロニン）（甲状腺ホルモン）、トリヨードチロニン（甲状腺ホルモン）、エピネフリン（またはアドレナリン）、ノルエピネフリン（またはノルアドレナリン）、ドーパミン（またはプロラクチン阻害ホルモン）、抗ミュラー管ホルモン（またはミュラー管阻害因子またはホルモン）、アディポネクチン、副腎皮質刺激ホルモン（またはコルチコトロピン）、アンジオテンシノーゲンおよびアンジオテンシン、抗利尿性ホルモン（またはバソプレシン、アルギニンバソプレシン）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（またはアトリオペプチン）、カルシトニン、コレシストキニン、コルチコトロピン放出ホルモン、エリスロポエチン、卵胞刺激ホルモン、ガストリン、グレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）、ＧＩＰ、ゴナドトロピン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒト胎盤性ラクトゲン、成長ホルモン、インヒビン、インスリン、インスリン様成長因子（またはソマトメジン）、レプチン、黄体形成ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、オレキシン、オキシトシン、副甲状腺ホルモン、プロラクチン、レラキシン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、甲状腺刺激ホルモン（またはチロトロピン）、チロトロピン放出ホルモン、コルチゾール、アルドステロン、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステンジオン、ジヒドロテストステロン、エストラジオール、エストロン、エストリオール、プロゲステロン、カルシトリオール（１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）、カルシジオール（２５−ヒドロキシビタミンＤ３）、プロスタグランジン、ロイコトリエン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、プロラクチン放出ホルモン、リポトロピン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、神経ペプチドＹ、ヒスタミン、エンドセリン、膵ポリペプチド、レニンおよびエンケファリンが挙げられる。
【０１０６】
血液または血液凝固因子の例としては、第Ｉ因子（フィブリノゲン）、第ＩＩ因子（プロトロンビン）、組織因子、第Ｖ因子（プロアクセレリン、不安定因子）、第ＶＩＩ因子（安定因子またはプロコンベルチン）、第ＶＩＩＩ因子（抗血友病性グロブリン）、第ＩＸ因子（クリスマス因子または血漿トロンボプラスチン構成成分）、第Ｘ因子（スチュアート・プローワー因子）、第Ｘａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子（ハーゲマン因子）、第ＸＩＩＩ因子（フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン（フレッチャー因子）、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）（フィッツジェラルド因子）、フィブロネクチン、フィブリン、トロンビン、アンチトロンビンＩＩＩ、ヘパリン補助因子ＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関係プロテアーゼインヒビター（ＺＰＩ）、プラスミノーゲン、アルファ２−アンチプラスミン、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ２）、がんプロコアグラントまたはエポエチンアルファ（Epogen、Procrit）が挙げられる。
【０１０７】
サイトカインの例としては、リンホカイン、インターロイキンおよびケモカイン、ＩＦＮ−γなどのタイプ１サイトカイン、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３などのタイプ２サイトカインが挙げられる。
成長因子の例としては、アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンジオポエチン（Ａｎｇ）、自己分泌型細胞運動刺激因子、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、増殖分化因子−９（ＧＤＦ９）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、肝がん由来増殖因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、マイグレーション刺激因子、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、神経成長因子（ＮＧＦ）および他のニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、Ｗｎｔシグナル経路、胎盤増殖因子（Ｐ１ＧＦ）、（ウシ胎児ソマトトロピン）（ＦＢＳ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−７が挙げられる。
【０１０８】
モノクローナル抗体の例としては、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴル(Alacizumab pegol)、ＡＬＤ、アレムツズマブ、アルツモマブペンテテート(Altumomab pentetate)、アナツモマブマフェナトックス(Anatumomab mafenatox)、アンルキンズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ(Aselizumab)、アトリズマブ（トシリズマブ）、アトロリムマブ(Atorolimumab)、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ(Bectumomab)、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ビシロマブ、ビバツズマブメルタンシン(Bivatuzumab mertansine)、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、シタツズマブボガトクス(Citatuzumab bogatox)、シクスツムマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス(Dorlimomab aritox)、ドルリキシズマブ(Dorlixizumab)、エクロメキシマブ(Ecromeximab)、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ(Efungumab)、エロツズマブ、エルシリモマブ(Elsilimomab)、エンリモマブペゴル、エピツモマブシツキセタン(Epitumomab cituxetan)、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ(Ertumaxomab)、エタラシズマブ、エクスビビルマブ(Exbivirumab)、
【０１０９】
ファノレソマブ、ファラリモマブ(Faralimomab)、ファルレツズマブ、フェルビズマブ(Felvizumab)、フェザキヌマブ、フィジツムマブ(Figitumumab)、フォントリズマブ、フォラビルマブ(Foravirumab)、フレソリムマブ(Fresolimumab)、ガリキシマブ、ガンテネルマブ、ガンビリモマブ、ゲムツマブオゾガマイシン、GC1008、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン(Glembatumumab vedotin)、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ(Gomiliximab)、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イゴボマブ(Igovomab)、イムシロマブ、インフリキシマブ、インテツムマブ(Intetumumab)、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ(Lemalesomab)、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ(Libivirumab)、リンツズマブ、ロボツズマブメルタンシン(Lorvotuzumab mertansine)、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マスリモマブ(Maslimomab)、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ(Minretumomab)、ミツモマブ、モロリムマブ(Morolimumab)、モタビズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス(Nacolomab tafenatox)、ナプツモマブエスタフェナトクス(Naptumomab estafenatox)、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ（Nerelimomab）、ニモツズマブ、ノフェツモマブメルペンタン(Nofetumomab merpentan)、オクレリズマブ、オデュリモマブ(Odulimomab)、オファツムマブ、オララツマブ(Olaratumab)、オマリズマブ、オポルツズマブモナトクス(Oportuzumab monatox)、オレゴボマブ、オテリキシズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバクマブ、パスコリズマブ(Pascolizumab)、ペムツモマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、
【０１１０】
ペンツモマブ(Pintumomab)、プリリキシマブ、プリツムマブ(Pritumumab)、ラフィビルマブ(Rafivirumab)、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ(Robatumumab)、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サツモマブペンデチド(Satumomab pendetide)、セビルマブ(Sevirumab)、シブロツズマブ(Sibrotuzumab)、シファリムマブ、シルツキシマブ、シプリズマブ、ソラネズマブ、ソネプシズマブ(Sonepcizumab)、ソンツズマブ(Sontuzumab)、スタムルマブ、スレソマブ、タカツズマブテトラキセタン(Tacatuzumab tetraxetan)、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブペプトクス(Taplitumomab paptox)、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス(Telimomab aritox)、テナツモマブ(Tenatumomab)、テネリキシマブ、テプリズマブ、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、トシリズマブ（アトリズマブ）、トラリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ(Tuvirumab)、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ(Vapaliximab)、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ジラリムマブ(Ziralimumab)およびズリモマブアリタオクス(Zolimomab aritox)が挙げられる。モノクローナル抗体はさらに、抗ＴＮＦ−α抗体を包含する。
【０１１１】
点滴治療または注射可能治療用タンパク質の例としては、例えば、トシリツマブ（Roche/Actemra（登録商標））、アルファ−１アンチトリプシン（Kamada/AAT）、ヘマタイド（登録商標）（AffymaxおよびTakeda、合成ペプチド）、アルブインターフェロンアルファ−２ｂ（Novartis/Zalbin（商標））、ルシン（登録商標）（Pharming Group、Ｃ１インヒビター補充治療）、テサモレリン（Theratechnologies/Egrifta、合成成長ホルモン放出因子）、オクレリズマブ（Genentech、RocheおよびBiogen）、ベリムバブ（GlaxoSmithKline/Benlysta（登録商標））、ペグロチカーゼ（Savient Pharmaceuticals/Krystexxa（商標））、ペグシチカーゼ、タリグルセラーゼアルファ（Protalix/Uplyso）、アガルシダーゼアルファ（Shire/Replagal（登録商標））、ベラグルセラーゼアルファ（Shire）およびキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）が挙げられる。
【０１１２】
追加の治療用タンパク質としては、例えば、Ｆｃ融合タンパク質などの遺伝子操作タンパク質、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ナノボディ、抗原結合タンパク質、抗体フラグメントおよび抗体薬物複合体などのタンパク質複合体が挙げられる。
治療用ポリヌクレオチドとしては、ペガプタニブ（マクゲン、ペグ化された抗ＶＥＧＦアプタマー）などの核酸アプタマー、アンチセンスポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド（例えば、抗ウイルス薬物フォミビルセン(Fomivirsen)またはミポメルセン、コレステロール値を低減させるためにアポリポタンパク質ＢのためのメッセンジャーＲＮＡを標的にするアンチセンス治療剤）などのアンチセンス治療剤；低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（例えば、ＲＮＡｉを極めて高い効力で媒介する２５〜３０塩基対の非対称二重鎖ＲＮＡである、ダイサー基質ｓｉＲＮＡ分子（ＤｓｉＲＮＡ））；または米国特許出願第2013/0115272号（Fougerolles et al.）および公開された米国特許出願第2012/0251618号（Schrum et al.）に開示されたもののような修飾型メッセンジャーＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１３】
本発明の側面に従って有用な追加の治療用高分子は、当業者には明らかであり、本発明はこの点において限定されない。
いくつかの態様において、治療用高分子または免疫抑制剤などの構成成分は、単離されていてもよい。「単離されている」は、その本来の環境から分離されて、その同定または使用を許すのに充分な分量で存在する要素である。これは例えば、その要素が、（ｉ）発現クローニングによって選択的に産生され得るか、または（ｉｉ）クロマトグラフィーまたは電気泳動によって精製され得るということを意味する。単離された要素は、実質的に純粋であってもよいが、純粋である必要はない。単離された要素は医薬調製物中で薬学的に許容し得る賦形剤と混和されてもよいので、要素は、調製物にごくわずかな重量パーセンテージで含まれてもよい。要素はそれでもなお、生体系において関連され得る物質から分離された、すなわち、他の脂質またはタンパク質から単離されたという点で単離されている。本明細書で提供される要素のいずれも、単離されて組成物に包含されても、単離された形態で方法において使用されてもよい。
【０１１４】
Ｄ．組成物を作りおよび使用する方法ならびに関係する方法
列挙される免疫抑制剤が移植可能浸透圧ポンプを含む、ある態様において、免疫抑制剤は、免疫抑制剤の溶液を含有するALZET（登録商標）移植可能浸透圧ポンプを使用して調製することができる。かかる移植可能ポンプは、局所キャピラリーによる化合物の吸収のため、その結果として全身投与をもたらす局所皮下空間への免疫抑制剤の制御された放出のために皮下か、または、肝臓の門脈循環への免疫抑制剤の制御された放出のために腹腔内に移植することができる。移植可能ポンプは、静脈または動脈循環への免疫抑制剤の制御された静脈内送達のためのカテーテルを介して使用することもできる。それらは、静脈内、脳内または動脈内輸液のために、または標的化された送達のためにカテーテルに付着することができ、ここで、薬物または試験剤の効果が特定の組織または臓器に局所化する。例えば、S. M. Stepkowski et al., “Inhibition of host-versus-graft and graft-versus-host responses after small bowel transplantation in rats by rapamycin.” Transplantation (1992) 53(-2-):258-264を参照。広範な文献データベースを含む、ALZET（登録商標）ブランド浸透圧ポンプのセットアップおよび使用に関する他の情報はalzet.comで入手可能である。
【０１１５】
列挙される免疫抑制剤が二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）を含む、ある態様において、二重特異性抗体は、２つの異なるハイブリドーマ細胞株の融合などの遺伝的または生物学的な方法または２つの抗体分子を当該技術分野において知られた方法による好適なリンカーを介して架橋するなどの化学的な方法によって調製することができる。ＢｓＡｂを生成するためのいくつかの方法が開発されている。ＢｓＡｂは、２つのハイブリドーマ細胞株を融合することによって、生物学的に生成することができ、ＢｓＡｂを分泌することができるクワドローマを産生する。ＢｓＡｂは、遺伝的に生じさせることもでき、様々な遺伝的技術が二重特異性分子を作製するために使用されている。ＢｓＡｂを作製するための第３の方法は、様々なホモ二官能性およびヘテロ二官能性化学的リンカー（Roland E. Kontermannによって編集されたBispecific Antibodies, Springer, 2011を参照）を使用する、化学的手段によるものである。ＢｓＡｂの形態に関するさらなる情報は、M. Peipp et al., “Bispecific antibodies targeting cancer cells” Biochemical Society Transaction pp. 507-511 vol. 30 part 4 (2002)を含む文献において見出すことができるが、これに限定されない。ＢｓＡｂは、モノクローナル抗体を使用する方法と同様に皮下または静脈内注射によって患者に投与することができる。
【０１１６】
特定の態様において、列挙される免疫抑制剤は、移植可能高分子デポ材料の形態であってもよい。移植可能高分子デポ材料は、例えば、“Polymeric compositions useful as controlled release implants”と題する米国特許第5,702,716号（Dunn et al.）および“Gel composition and methods”と題する米国特許第6,130,200号（Brodbeck  et al.）において見出される従来の粒子によって配合してもよく、投与してもよい。
ある態様において、免疫抑制剤は合成ナノ担体に付着される。合成ナノ担体は当該分野において知られている種々多様な方法を使用して調製され得る。例えば、合成ナノ担体は、ナノ沈殿、流体チャンネルを使用するフローフォーカシング、噴霧乾燥、シングルおよびダブルエマルション溶媒蒸留、溶媒抽出、相分離、ミリング、マイクロエマルション手順、ミクロ加工、ナノ加工、犠牲層、単純および複合コアセルベーションなどの方法、および、当業者に周知の他の方法によって形成され得る。代替的または追加的に、単分散半伝導体または伝導性、磁性、有機および他のナノ材料のための水性および有機溶媒合成が記載されている（Pellegrino et al., 2005, Small, 1 :48; Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545; Trindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843）。追加の方法が文献に記載されている（例えば、Doubrow, Ed., "Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy," CRC Press, Boca Raton, 1992; Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5: 13; Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275; Mathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755；米国特許第5578325号および6007845号；P. Paolicelli et al., "Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles" Nanomedicine. 5(6): 843-853 (2010)を参照）。
【０１１７】
必要に応じて、C. Astete et al., "Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles" J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 17, No. 3, pp. 247-289 (2006); K. Avgoustakis "Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles: Preparation, Properties and Possible Applications in Drug Delivery" Current Drug Delivery 1: 321-333 (2004); C. Reis et al., "Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles" Nanomedicine 2:8-21 (2006); P. Paolicelli et al., "Surface-改変 PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles" Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)が挙げられるが、これらに限定されない種々の方法を使用して、種々の材料を合成ナノ担体中にカプセル化してもよい。材料を合成ナノ担体中にカプセル化するのに好適な、米国特許第6,632,671号（Unger、2003年10月14日発行）に開示された方法を包含するが、これらに限定されない他の方法を使用してもよい。
【０１１８】
特定の態様において、合成ナノ担体は、ナノ沈殿プロセスまたは噴霧乾燥によって調製される。合成ナノ担体の調製に使用される条件は、望ましいサイズまたは特性（例えば、疎水性、親水性、外部形態学、「粘着性」、形状、等）の粒子を産出するために変え得る。合成ナノ担体の調製方法および使用される条件（例えば、溶媒、温度、濃度、空気流量、等）は、合成ナノ担体に付着すべき材料および／またはポリマーマトリックスの組成に依存し得る。
上記の方法のいずれかによって調製される合成ナノ担体が望ましい範囲を外れるサイズ範囲を有する場合、かかる合成ナノ担体は、例えば、篩いを使用して分粒されてもよい。
合成ナノ担体の要素（すなわち構成成分）は、例えば、１つまたは２つ以上の共有結合によって合成ナノ担体全面的に付着されてもよいし、１つまたは２つ以上のリンカーを使用して付着されてもよい。合成ナノ担体を官能化する追加の方法は、公開された米国特許出願第2006/0002852号（Saltzman et al.）、公開された米国特許出願第2009/0028910号（DeSimone et al）または公開された国際特許出願WO/2008/127532Al（Murthy et al.）から適合されてもよい。
【０１１９】
代替的または追加的に、合成ナノ担体は、直接的に、または非共有結合的相互作用を介して間接的に、構成成分に付着されてよい。非共有結合的な態様において、非共有結合的連結は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせを包含するが、それらに限定されない、非共有結合的相互作用により媒介される。かかる連結は、合成ナノ担体の外部表面または内部表面上に配列されてもよい。ある態様において、カプセル化および／または吸収が連結の形態である。ある態様において、合成ナノ担体は、同じビヒクルまたは送達系中で混和することによって免疫抑制剤または治療用高分子と組み合わされてもよい。
【０１２０】
提供される組成物は、無機または有機緩衝剤（例えば、リン酸、カルボン酸、酢酸またはクエン酸のナトリウムまたはカリウム塩）およびｐＨ調節剤（例えば、塩酸、水酸化ナトリウムまたはカリウム、クエン酸または酢酸の塩、アミノ酸およびそれらの塩）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロール）、界面活性物質（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン９−１０ノニルフェノール、デオキシコール酸ナトリウム）、溶解および／または冷凍／凍結乾燥安定剤(cryo/lyo stabilizer)（例えば、スクロース、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、浸透圧調節剤（例えば、塩または糖）、抗菌剤（例えば、安息香酸、フェノール、ゲンタマイシン）、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロゾン(polydimethylsilozone)、保存剤（例えば、チメロサール、２−フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ）、高分子安定剤および粘度調節剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー４８８、カルボキシメチルセルロース）ならびに共溶媒（例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール）を含んでいてもよい。
【０１２１】
本発明に従う組成物は、薬学的に許容し得る賦形剤を含んでもよい。組成物は、有用な剤形に到達するように従来の医薬製造および配合技術を使用して作られ得るか、または特別な技術（ALZET（登録商標）ポンプまたは二重特異性抗体の場合など）を使用して作られ得る。本発明の実行における使用に好適な技術は、Handbook of Industrial 混合する: Science and Practice, Edited by Edward L. Paul, Victor A. Atiemo-Obeng, and Suzanne M. Kresta, 2004 John Wiley & Sons, Inc.; and Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design, 2nd Ed. Edited by M. E. Auten, 2001, Churchill Livingstoneに見出され得る。ある態様において、組成物は保存剤と一緒に注射用滅菌食塩水溶液中にある。
本発明の組成物はいずれかの好適な様式で作り得、本発明は本明細書に記載される方法を使用して生成され得る組成物になんら限定されないということを理解すべきである。適切な製造方法の選択は、関連している具体的な部位の性質に対する注意を要する場合がある。
【０１２２】
いくつかの態様において、免疫抑制剤、治療用高分子またはかかる材料を含む組成物は、滅菌条件下で製造されるか、または最終的に滅菌される。このことは、結果としてもたらされる材料または組成物が滅菌され、および非感染性であることを確実にし得、こうして非滅菌の組成物と比較したとき安全性を改善する。このことは、とりわけ列挙された材料または組成物を受ける対象が免疫欠如を有する、感染症を患う、および／または、感染されやすいときには、価値のある安全対策を提供する。いくつかの態様において、材料または組成物は凍結乾燥されて、製剤戦略に依存して懸濁液中で、または凍結乾燥粉末として、活性を失うことなく長期間保管されてもよい。
本発明に従う投与は、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、経粘膜、経皮(transdermal)、経皮(transcutaneous)または皮内経路を包含するが、これらに限定されない種々の経路によってよい。好ましい態様において、投与は皮下経路の投与を介する。本明細書で参照される組成物は、従来の方法を使用して、投与、いくつかの態様において、併用投与のために製造され、および調製され得る。
【０１２３】
本発明の組成物は、本明細書で別記した有効量などの有効量で投与することができる。剤形の用量は、変化する量の、本発明に従う免疫抑制剤または治療用高分子を含有し得る。剤形に存在する免疫抑制剤または治療用高分子の量は、治療用高分子、免疫抑制剤の特質、遂行されるべき治療効果および他のかかるパラメータに従い変化し得る。ある態様において、用量範囲研究は、あらゆる剤形に存在すべき免疫抑制剤または治療用高分子の最適な治療量を確立するために行い得る。ある態様において、免疫抑制剤または治療用高分子は、治療用高分子に対する寛容原性免疫応答を生じさせる有効量で剤形に存在し、その後、対象に投与される。対象において従来の用量範囲研究および技術を使用して寛容原性免疫応答を生じさせるのに有効な免疫抑制剤または治療用高分子の量を決定することは可能であり得る。免疫抑制剤または治療用高分子の投与は様々な頻度で生じ得る。
【０１２４】
本開示の別の側面はキットに関する。いくつかの態様において、キットは、薬力学的有効期間を提供する免疫抑制剤用量を含む。いくつかの態様において、キットは、さらに治療用高分子の用量を含む。免疫抑制剤用量および治療用高分子用量は、キットにおいて、別の容器中または同じ容器中に含有され得る。いくつかの態様において、容器はバイアルまたはアンプルである。免疫抑制剤用量および治療用高分子用量は、キット中で、別個の容器内または同じ容器内に含有され得る。いくつかの態様において、容器はバイアルまたはアンプルである。いくつかの態様において、治療用高分子用量および／または免疫抑制剤用量は、容器（単数または複数）とは別の溶液内に含有されて、治療用高分子用量および／または免疫抑制剤用量がその後の時点で容器に加えられるようになされていてもよい。いくつかの態様において、治療用高分子用量および／または免疫抑制剤用量は、それぞれ別の容器中または同じ容器中に凍結乾燥された形態であって、それらがその後の時点で再構成されるようになされていてもよい。いくつかの態様において、キットはさらに、再構成、混合、投与、等のための使用説明書を含む。いくつかの態様において、使用説明書は本明細書に記載された方法の記載を包含する。使用説明書は、例えば印刷されたインサートまたはラベルのような、いずれか好適な形態であってよい。いくつかの態様において、キットはさらに、１つまたは２つ以上のシリンジを含む。
【０１２５】
例
例１：ナノ担体を含有するラパマイシン
材料
ラパマイシンは、TSZ CHEM（185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; 製品カタログ # R1017）から購入した。約２５，０００ＤａのＰＬＧＡは、Lakeshore Biochemicals（756 Tom Martin Drive Birmingham, AL 35211）から購入した。製品コード5050 DLG 2.5A。約５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび４８，０００ＤａのＰＬＡブロックを有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅブロックコポリマーは、Lakeshore Biochemicals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した。製品コード100 DL mPEG 5000 5CE。EMPROVE（登録商標）ポリビニルアルコール4-88、ＵＳＰ（８５〜８９％加水分解、３．４〜４．６ｍＰａ．ｓの粘性)は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027. 品番1.41354）から購入した。
【０１２６】
方法
溶液は以下のとおり調製した：
溶液１：塩化メチレン中、７５ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡ、２５ｍｇ／ｍＬのＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅおよび１２．５ｍｇ／ｍＬのラパマイシン。該溶液は、ＰＬＧＡ、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅおよびラパマイシンを純粋な塩化メチレン中に溶解することによって調製した。
溶液２：１００ｍＭ  ｐＨ８リン酸緩衝剤中の５０ｍｇ／ｍＬのポリビニルアルコール。
溶液３：７０  ｍＭリン酸緩衝剤、ｐＨ８。
【０１２７】
水中油エマルションは、小ガラス圧力管中で溶液１（１ｍＬ）および溶液２（３ｍＬ）を混合し、Branson Digital Sonifier 250を使用して３０％振幅で６０秒間超音波処理することによって作製した。エマルションを、溶液３（３０ｍＬ）を含有する開放５０ｍＬビーカーに加え、室温で２時間撹拌し、ジクロロメタンを蒸発させ、懸濁液中にナノ担体を形成させた。次いでナノ担体懸濁液を遠心分離管へ移し、７５，６００ｒｃｆで４０分間遠心分離し、上清を除去し、リン酸緩衝生理食塩水中でペレットを再懸濁することによって懸濁されたナノ担体の一部分を洗浄した。この洗浄手順を繰り返し、次いでペレットをＰＢＳ１×中で再懸濁し、ポリマー基準１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有する、ナノ担体懸濁液を達成した。懸濁液は、使用まで−２０℃で凍結して保管した。
ナノ担体サイズは、動的光散乱によって決定した。ナノ担体中のラパマイシンの量は、ＨＰＬＣ分析によって決定した。懸濁液１ｍＬ当たりの総乾燥ナノ担体質量は、比重測定法によって決定した。
【表１】
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【０１２８】
例２：ポリマー−ラパマイシン複合体を含有するポリマーナノ担体（予言的）
ステップ１：ＰＬＧＡ-ラパマイシン複合体の調製物：
酸末端基を有するＰＬＧＡポリマー（7525 DLG1A、酸価０．４６ｍｍｏｌ／ｇ、Lakeshore Biomaterials；５ｇ、２．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を３０ｍＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）中に溶解する。Ｎ，Ｎ-ジシクロヘキシルカルボジミド（１．２ｅｑ、２．８ｍｍｏｌ、０．５７ｇ）を加え、次いでラパマイシン（１．０ｅｑ、２．３ｍｍｏｌ、２．１ｇ）および４-ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２．０ｅｑ、４．６ｍｍｏｌ、０．５６ｇ）を加える。混合物をｒｔで２日間撹拌する。次いで混合物をろ過して不溶性ジシクロヘキシル尿素を除去する。ろ液を約１０ｍＬの体積まで濃縮し、１００ｍＬのイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）に加え、ＰＬＧＡ−ラパマイシン複合体を沈殿させる。ＩＰＡ層を除去し、次いで５０ｍＬのＩＰＡおよび５０ｍＬのメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）でポリマーを洗浄する。次いでポリマーを３５℃、２日間で真空下乾燥させ、白色固体（約６．５ｇ）としてＰＬＧＡ-ラパマイシンを得る。
【０１２９】
ステップ２：ＰＬＧＡ−ラパマイシンを含有するナノ担体を、以下の例１に説明される手順に従って調製する：
ナノ担体形成のための溶液を以下のとおり調製する：
溶液１：塩化メチレン中の１００ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡ−ラパマイシン。溶液を純粋な塩化メチレン中にＰＬＧＡ−ラパマイシンを溶解することによって調製する。溶液２：塩化メチレン中の１００ｍｇ／ｍＬのＰＬＡ-ＰＥＧ。純粋な塩化メチレン中にＰＬＡ-ＰＥＧを溶解することによって溶液を調製する。溶液３：１００ｍＭ  ｐＨ８リン酸緩衝剤中の５０ｍｇ／ｍＬのポリビニルアルコール。
【０１３０】
一次油中水エマルションをまず調製する。小圧力管中で溶液１（０．７５ｍＬ）および溶液２（０．２５ｍＬ）を組み合わせ、Branson Digital Sonifier 250を使用して、５０％振幅で４０秒間、超音波処理することによってＷ１／Ｏ１を調製する。次いで、２次エマルション（Ｗ１／Ｏ１／Ｗ２）を、溶液３（３．０ｍＬ）を一次Ｗ１／Ｏ１エマルションと組み合わせ、１０ｓボルテックスし、Branson Digital Sonifier 250を使用して、３０％振幅で６０秒間、超音波処理することによって調製する。Ｗ１／Ｏ１／Ｗ２エマルションを７０ｍＭ  ｐＨ８リン酸緩衝溶液（３０ｍＬ）を含有するビーカーに加え、室温で２時間撹拌し、塩化メチレンを蒸発させ、ナノ担体を形成させる。ナノ担体の一部分を洗浄する。ナノ担体懸濁液を遠心分離管へ移し、７５，６００×ｇおよび４℃で３５分間遠心分離し、上清を除去し、リン酸緩衝生理食塩水中でペレットを再懸濁する。洗浄手順を繰り返し、約１０ｍｇ／ｍＬの最終ナノ担体分散液となるようにリン酸緩衝生理食塩水中でペレットを再懸濁する。
【０１３１】
例３：ラパマイシンを含有する金ナノ担体（ＡｕＮＣ）の調製（予言的）
ステップ１．ＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシンの調製：
乾燥ＤＭＦ中のＰＥＧ酸ジスルフィド（１．０ｅｑ）、ラパマイシン（２．０-２．５ｅｑ）、ＤＣＣ（２．５ｅｑ）およびＤＭＡＰ（３．０ｅｑ）の溶液をｒｔで終夜撹拌する。不溶性ジシクロヘキシル尿素をろ過によって除去し、ろ液をイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）に加え、ＰＥＧ−ジスルフィド−ジ−ラパマイシンエステルを沈殿させ、ＩＰＡで洗浄し、乾燥させる。次いでポリマーをＤＭＦ中トリス（２-カルボキシエチル）ホスフィンヒドロクロリドで処理し、ＰＥＧジスルフィドをチオールＰＥＧラパマイシンエステル（ＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシン）へ還元する。結果としてもたらされるポリマーを、先に説明されたように、ＩＰＡからの沈殿によって回収し、乾燥させ、Ｈ  ＮＭＲおよびＧＰＣで分析する。
【０１３２】
ステップ２．金ＮＣ（ＡｕＮＣ）の形成：
１ｍＭのＨＡｕＣｌ４の５００ｍＬの水溶液をコンデンサー付きの１Ｌ丸底フラスコ中で激しく撹拌しながら１０ｍｉｎ加熱還流する。次いで４０ｍＭのクエン酸三ナトリウムの５０ｍＬの溶液を撹拌溶液に急速に加える。結果としてもたらされる濃ワインレッドの溶液を２５〜３０ｍｉｎ還流状態に保ち加熱を取り除いて溶液を室温まで冷却する。次いで溶液を、０．８μｍメンブランフィルターを通してろ過しＡｕＮＣ溶液を得る。ＡｕＮＣは可視分光法および透過電子顕微鏡法を使用して特徴付けされる。ＡｕＮＣは、約２０ｎｍ径でシトラートによりキャッピングされ５２０ｎｍにピーク吸収を有する。
【０１３３】
ステップ３．ＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシンとのＡｕＮＣ複合体：
ＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシンの溶液（１０ｍＭのｐＨ９．０炭酸緩衝剤中１０μΜ）１５０μｌを２０ｎｍ径のシトラートキャッピングされた金ナノ担体（１．１６ｎＭ）１ｍＬに加え、２５００：１のチオール：金モル比を生成する。混合物をアルゴン下、室温で１時間撹拌し、チオールを金ナノ担体上のシトラートと完全に交換させる。次いで表面にＰＥＧ−ラパマイシンを有するＡｕＮＣを１２，０００ｇで３０分の遠心分離により精製する。上清を傾瀉し、次いでＡｕＮＣ−Ｓ−ＰＥＧ−ラパマイシンを含有するペレットを１×ＰＢＳ緩衝剤でペレット洗浄する。次いで精製された金−ＰＥＧ−ラパマイシンナノ担体をさらなる分析およびバイオアッセイのために好適な緩衝剤に再懸濁する。
【０１３４】
例４：抗体応答の開始におけるカプセル化されたラパマイシンの効果
Ｉ．ＩｇＧの測定
ＩｇＧ抗体のレベルを一般に以下のとおり測定した。Blocker Casein in PBS（Thermo Fisher、カタログ#37528）を希釈剤として使用した。１０ｍＬのTween-20（（Sigma、カタログ#P9416-100mL）を２リットルの１０×ＰＢＳストック（PBS: OmniPur（登録商標）10X PBS Liquid Concentrate、4L、EMD Chemicals、カタログ#6505）および１８リットルの脱イオン水に加えることによって調製した、ＰＢＳ中０．０５％Tween-20を洗浄緩衝剤として使用した。
ストック濃度１０ｍｇ／ｍＬのキーホールリンペットヘモシアニン（KLH）またはストック濃度５ｍｇ／ｍＬのオボアルブミン（ＯＶＡ）タンパク質をコーティング材料として使用した。両材料を５μｇ／ｍｌまで希釈し、使用濃度として使用した。アッセイプレートの各ウェルを１ウェル当たり１００μｌの希釈ＫＬＨまたはＯＶＡでコーティングし、プレートを封止膜（VWR、カタログ#60941-120）で封止し、４℃で終夜インキュベートした。Costar 9017の96ウェル平底プレートをアッセイプレートとして使用した（Costar 9017）。
低結合ポリプロピレン９６ウェルプレートまたはチューブをセットアッププレートとして使用し、アッセイプレートに移す前にその中でサンプルを調製した。セットアッププレートはいずれの抗原も含有せず、それゆえサンプルのセットアップ中は、血清抗体はプレートと結合しなかった。セットアッププレートをサンプル調製に使用し、抗原でコーティングされたプレートを使用してサンプルを調製した場合、サンプルの調製またはピペッティング中に起こるであろう結合を最小限に抑えた。セットアッププレート中でサンプルを調製する前に、ウェルを希釈剤で覆って、いずれの非特異的結合もブロックし、プレートを封止して４℃で終夜インキュベートした。
【０１３５】
アッセイプレートを洗浄緩衝剤で３回洗浄し、最終洗浄後に洗浄緩衝剤をウェルから完全に吸引した。洗浄後、３００μｌの希釈剤をアッセイプレート（単数または複数）の各ウェルに加えて非特異的結合をブロックし、プレートを室温で少なくとも２時間インキュベートした。血清サンプルをセットアッププレートの適切なウェル中１：４０で希釈した。標準を陽性対照として使用した。ＫＬＨについて、マウス抗ＫＬＨＩｇＧ抗体を１μｇ／ｍＬの開始希釈で使用し、次いでプレート全体にわたり３倍希釈した。ＯＶＡについて、マウス抗ＯＶＡＩｇＧ抗体を０．５μｇ／ｍＬの開始希釈で使用し、次いでプレート全体にわたり３倍希釈した。
【０１３６】
全てのサンプルをセットアッププレート中でひとたび調製したら、プレートを封止して、アッセイプレートのブロッキングが完了するまで４℃で保管した。アッセイプレートを洗浄緩衝剤で３回洗浄し、最終洗浄後に洗浄緩衝剤を完全に吸引した。洗浄後、アッセイプレートの列２〜１２に１００μｌの希釈剤を加えた。ピペットを使用してサンプルをセットアッププレートからアッセイプレートへと移した。移す前に、１５０μｌの希釈された血清を上下に３回ピペッティングすることによってサンプルを混合した。混合後、１５０μ１の各サンプルをセットアッププレートから移し、各アッセイプレートに加えた。
【０１３７】
各サンプルの開始希釈をセットアッププレートからアッセイプレートに移したら、以下のように系列希釈をアッセイプレート上にピペッティングした。５０μｌの各血清サンプルを、ピペットを使用して除去し予め加えておいた１００μｌの希釈剤と混合した。このステップをプレート全体にわたり繰り返した。最終列の希釈をピペッティングした後、５０μｌの流体を最終列のウェルから除去して廃棄し、アッセイプレートのウェルごとに１００μｌの最終体積がもたらされた。アッセイプレート中でサンプル希釈を調製したら、プレートを室温で少なくとも２時間インキュベートした。
【０１３８】
インキュベート後、プレートを洗浄緩衝剤で３回洗浄した。検出抗体（ヤギ抗マウス抗ＩｇＧ、ＨＲＰ複合化）を希釈剤で１：１５００希釈し（０．３３μｇ／ｍｌ）、１００μｌの希釈した抗体を各ウェルに加えた。プレートを室温で１時間インキュベートし、次いで洗浄緩衝剤で５回洗浄し、最後の洗浄後に洗浄緩衝剤をウェルから完全に吸引した。洗浄後、検出基質をウェルに加えた。等しい部数(parts)の基質Ａおよび基質Ｂ（BD Biosciences TMB Substrate Reagent Set、カタログ#555214）をアッセイプレートに加える直前に組み合わせ、１００μｌの混合基質溶液を各ウェルに加えて、暗所で１０分間インキュベートした。１０分間の後、５０μｌ停止溶液（２ＮのＨ２ＳＯ４）を各ウェルに加えることによって反応を停止させた。停止溶液を加えた直後のウェルの光学濃度（ＯＤ）をプレートリーダーにて４５０ｎｍで査定し５７０ｎｍで減算した。Molecular DeviceのソフトウェアSoftMax Pro v 6.2.2を使用してデータ分析を行った。希釈をｘ軸（ｌｏｇ目盛）に取りＯＤ値をｙ軸（均等目盛）に取って４パラメータロジスティック曲線に適合するグラフを調製し、各サンプルの最大半量値（ＥＣ５０）を決定した。レイアウトの最上部のプレートテンプレートを調節して各サンプルの希釈を反映させた（１行につき１つ）。
【０１３９】
ＩＩ．粒子状オボアルブミンタンパク質（ｐＯＶＡ）の調製
材料
鶏卵オボアルブミン（ＯＶＡ）をWorthington Biochemical Corporation（730 Vassar Avenue, Lakewood, NJ 08701; 製品コード LS003054）から購入した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）をMediatech（9345 Discovery Boulevard, Manassas, VA 20109；製品コード 21-040-CV）から購入した。水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ、製品コード367176）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、製品コードT62200）をSigma-Aldrich Corp.（3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103）から購入した。
方法
溶液を以下のとおり調製した：
溶液１：ＰＢＳ中の１５ｍｇ／ｍＬのＯＶＡ。溶液は、オボアルブミンをＰＢＳ中に直接的に溶解することによって調製した。溶液２：水中１ＭのＮａＯＨ。溶液は、エンドトキシンフリー水中に直接的にＮａＯＨを溶解することによって調製した。
【０１４０】
オボアルブミン溶液のｐＨを繰り返し上げ下げすることによって、ＯＶＡをコアセルベート化した。溶液１（１０ｍＬ）を、磁気撹拌棒を含有する２０ｍＬガラスバイアル中に加えた。撹拌中、溶液２を溶液のｐＨが１２に達するまでバイアルに滴下して加えた。次いでＴＦＡを溶液のｐＨが２に達するまでバイアルに滴下して加えた。このｐＨの上げ下げをさらに３回繰り返した。次いで溶液２を溶液のｐＨが７に達するまでバイアルに滴下して加えた。
コアセルベート化したＯＶＡ粒子のサイズは、次いで高圧均質化によって低減された。コアセルベート化したＯＶＡ懸濁液は、Ｇ１０Ｚ相互作用チャンバーでMicrofluidics LV1に積載され、次いで２０，０００ｐｓｉで３つのパスを使用して均質化した。結果としてもたらされた１９０〜２４０ｎｍの範囲のサイズを有する粒子状ＯＶＡ（ｐＯＶＡ）を−２０℃で保管した。
【０１４１】
ＩＩＩ．抗体応答の開始におけるカプセル化されたラパマイシンのin vivo試験
Ｃ５７ＢＬ／６動物（ｎ＝５）の群は、未処置かつ未免疫（免疫なし）のままのもの、未処置かつ免疫化（処置なし）されたもの、またはラパマイシン含有ナノ担体で処置し、かつ第０、３および７日に例１から免疫化（ラパ−ＮＣ）されたものである。免疫化は、オボアルブミン（ｐＯＶＡ）の粒子状形態の注射からなる。後肢皮下に注射した。各注射について粒子の用量は、ラパマイシン１００μｇと同程度であり、３回注射後に合計３００μｇとなるようにした。第１４日から開始して、未処置および処置動物（処置なしおよびラパ−ＮＣ）は、隔週で上記のとおり調製された１０μｇのｐＯＶＡを前肢（各３０μｌ）に注射し、５０μｇのキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ、Sigma Aldrich）を尾の付け根（５０μｌ各側面）に注射し、免疫化を受けた（第１４、２８および４２日）。全ての動物は、図１に示す日に採血し、抗ＯＶＡ応答はＥＬＩＳＡによって決定した。
データは、カプセル化されたラパマイシンが、抗原の投与前に７日間注射したとき、本明細書で提供される薬力学的有効期間の範囲内で抗ＯＶＡ応答を有効に阻害したことを実証する。
【０１４２】
例５：カプセル化されたラパマイシンによるＴ細胞活性化の用量依存的阻害
Ｔ細胞活性化に対する、ラパマイシンが介在する阻害の用量依存性を試験するために、ＣＤ４５．１＋動物（Ｂ６．ＳＪＬ）に対し、カプセル化されたラパマイシン（例１に開示されるＮＰ［ラパ］）を静脈内に異なる用量（１０〜５０μｇのラパマイシンおよび１つのＰＢＳ対照）を注射した。これらの動物は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと同じ遺伝的バックグラウンドを共有するが、ＣＤ４５分子（ＣＤ４５．２の代わりにＣＤ４５．１）の異なるイソ型を発現する。６日間後、ＯＴＩＩマウス株の脾臓およびリンパ節から磁気細胞ソーティング（MACS, Miltenyi）によって単離され、ＣＤ４５．２およびＭＨＣ  ＣＬＩＩ（ＯＶＡ３２３〜３３９またはＯＰＩＩ．３２３）の文脈において提示されたニワトリオボアルブミンからのペプチドを認識するトランスジェニックＴＣＲを発現するＴ細胞を、ＣＤ４５．１＋処置動物へ適合移植した。これらの細胞のＣＦＳＥ（Invitrogen）での標識も行い、それらの増殖状態を追跡した。翌日（第７日）全ての動物に後肢皮下に免疫原性用量のＴＬＲ７／８アゴニストＲ４８４８と混合したＯＰＩＩ．３２３を注射した。第１１日、動物を犠牲死させ、注射部位（膝窩）を排出するリンパ節を切除し、細胞をフローサイトメトリーによって分析して移植したＣＤ４５．２＋ＴＣＲｂ＋ＣＤ４＋７ＡＡＤ−Ｔ細胞（Biolegendからの抗体）を同定した。図２に示すとおり、２０μｇもの低いラパマイシンの注射が、ナノ担体の注射から６日後であっても、やはり本明細書で提供される薬力学的有効期間の範囲内で、これらのＴ細胞の活性化および生存において阻害効果を有する。さらなる(mounting)ラパマイシン投薬によって減少した細胞数および増殖がもたらされた。
【０１４３】
例６：移植可能浸透圧ポンプを使用する免疫抑制剤およびin vivoでのその寛容原性免疫応答の評価（予言的）
ステップ１：
ラパマイシンをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）／ポリエチレングリコール４００からなるビヒクルに溶解し、ALZET（登録商標）移植可能浸透圧ポンプ（体積０．２ｍＬ、モデル2001、Durect Corp.、Cupertino、CA)に積載する。次いでポンプは、ALZET（登録商標）ポンプ操作手順に従ってマウスの右横の下腹部の皮下に（ｓ．ｃ．）移植する。ポンプを用いて、ラパマイシンを２．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で２日間連続的にｓ．ｃ．投与する。
【０１４４】
ステップ２：
Ｃ５７ＢＬ／６動物（ｎ＝５）の群は、未処置および未免疫（免疫化なし）のままのもの、未処置および免疫化された（処置なし）もの、またはマウスの横下腹部の皮下に移植されたラパマイシンが積載された上記の浸透圧ポンプで処置され、かつ第０、３および７日に免疫化されたものである。免疫化は、オボアルブミン（ｐＯＶＡ）の粒子状形態の注射からなる。ポンプを用いて、ラパマイシンを２．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で２日間連続的にｓ．ｃ．投与する。各注射についてラパマイシンの用量は、ラパマイシン１００μｇと同程度であり、３回注射後に合計３００μｇとなるようにした。第１４日から開始して、未処置および処置動物（処置なしおよびラパマイシン積載ポンプ）は、前肢に注射される、酸グルコシダーゼアルファまたは組織プラスミノーゲンアクチベーターまたはエリスロポエチンアルファまたはドルリキシズマブ(Dorlixizumab)またはリツキシマブなどの１００μｇの治療用タンパク質で、隔週で免疫化を受ける（第１４、２８および４２日）。全ての動物は、第４０および５４日に採血し、抗タンパク質応答をＥＬＩＳＡによって決定する。移植浸透圧ポンプを介して投与されたラパマイシンは、本明細書で提供される薬力学的有効期間内で注射されるとき、有効に抗タンパク質応答を阻害することが予期され、これらの効果は、タンパク質での初回抗原刺激および２回の追加免疫後でさえも明らかであることが予期される。
【０１４５】
例７：移植可能浸透圧ポンプを使用する免疫抑制剤およびin vivoでのその寛容原性免疫応答の評価（予言的）
ステップ１：
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）（１９ｍｇ／ｍｌ）中のラパマイシン（ラパ）のストック溶液を４℃で保管し、光への曝露から保護する。ラットの重量に基づいた適切なラパ濃度を得るために、ストック溶液を１０％Ｔｗｅｅｎ−８０、２０％ＤＭＡＣおよび７０％ポリエチレングリコール４００（ＰＥＧ４００）の混合物中に希釈する。適切に希釈されたラパを、無菌食塩水中３７℃でインキュベートすることによって４〜６ｈの事前準備をしたALZET（登録商標）ブランド移植可能浸透圧ポンプ（モデル 2002; Durect Corp., Cupertino, CA）に積載する。その後、送達カニューレをラパマイシンの静脈内送達のためにマウスの腰静脈に挿入する。
【０１４６】
ステップ２：
Ｃ５７ＢＬ／６動物（ｎ＝５）の群は、未処置および未免疫のままのもの（免疫化なし）、未処置および免疫化されたもの（処置なし）またはラパマイシン積載された上記の浸透圧ポンプで処置され、かつ第０、３および７日で免疫化されたものである。免疫化は、オボアルブミン（ｐＯＶＡ）の粒子状形態の注射からなる。ポンプを用いて、２．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で２日間、静脈内輸液を介してラパマイシンを投与する。各輸液についてラパマイシンの用量は、ラパマイシン１００μｇと同程度であり、３回注射後に合計３００μｇとなるようにした第１４日から開始して、未処置および処置動物（処置なしおよびラパマイシン積載ポンプ）は、ペガプタニブ、ミポメルセン、米国特許出願第2013/0115272号（Fougerolles et al.）に開示されるものなどの改変メッセンジャーＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）などの５０〜１００μｇの治療用ポリヌクレオチドを用いて、隔週で免疫化を受ける（第１４、２８および４２日）。
全ての動物は、第４０および５４日に採血し、抗タンパク質応答をＥＬＩＳＡによって決定する。移植浸透圧ポンプを介して投与されたラパマイシンは、本明細書で提供される薬力学的有効期間内で注射されるとき、有効に抗ポリヌクレオチド応答を阻害することが予期され、これらの効果は、ポリヌクレオチドでの初回抗原刺激および２回の追加免疫後でさえも明らかであることが予期される。
【０１４７】
例８：第ＶＩＩＩ因子タンパク質への寛容誘発のための阻害性の第ＶＩＩＩ因子抗体に対する、化学的に架橋された抗ＧＩＴＲ抗体および抗イディオタイプの抗体を使用する二重特異性抗体免疫抑制剤（予言的）
ステップ１：二重特異性抗体の調製
エプラツズマブおよび（米国特許第8071094号に従って調製された）阻害性の第ＶＩＩＩ因子抗体に対する抗イディオタイプの抗体などの抗ＧＩＴＲ抗体のＦ（ａｂ’）２フラグメントは、製造業者の使用説明書に従ってImmunoPure F(ab’)2 Preparation Kit（Pierce）を使用して調製される。画分を含有するＦ（ａｂ’）２はプールされ、１０，０００ＭＷＣＯ遠心分離用フィルター（Millipore）を使用して濃縮される。各Ｆ（ａｂ’）２は、２−メルカプトエタノールを２０ｍＭの最終濃度で、３０℃で２０〜４０ｍｉｎ加えることによって、Ｆ（ａｂ）−チオールに還元される。試料は、氷上で冷却し、次いで５０ｍＭ酢酸ナトリウム／０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ５．３中で平衡化し冷却したSephadex G25カラム上に通過させる。画分を含有するタンパク質をプールする。次いで抗ＧＩＴＲ  Ｆａｂ−チオールは、予備冷却された１２ｍＭ架橋、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏ−ＰＤＭ）（ＤＭＦ中に溶解）の１／２体積を加えることによって、氷浴中で３０ｍｉｎマレイミド化する。次いで抗ＧＩＴＲ−マレイミド化−Ｆａｂを５０ｍＭ酢酸ナトリウム／０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ  ｐＨ５．３中で平衡化し冷却したSephadex G25カラム上を通過させる。タンパク質含有画分をプールし、阻害性の第ＶＩＩＩ因子抗体−チオール−Ｆａｂに対する抗イディオタイプの抗体に１：１のモル比ですぐに加える。反応を窒素下に置き、４℃で１５〜２０ｈ優しく撹拌する。ｐＨは、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ８．０を使用してｐＨ８．０に調節され、その後２−メルカプトエタノールを最終濃度２０ｍＭまで加える。反応は、３０℃で２０〜４０ｍｉｎインキュベートし、次いでヨードアセトアミドを２５ｍＭの最終濃度まで加えることによってアルキル化する。次いで混合物をＰＢＳ  ｐＨ７．４中で平衡化されたSuperdex 200カラム上で通過させ、画分を集める。個々の画分は、非還元条件下で１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上に供し、Coomassie Brilliant Blue（Sigma）またはSilver Snap II Kit（Pierce）で染色する。二重特異性抗体（阻害性の第ＶＩＩＩ因子抗体に対する抗ＧＩＴＲ／抗イディオタイプの抗体）を同定し、プールし、かつ免疫抑制剤（用量１０μｇ／日）としての使用のために保管する。
【０１４８】
ステップ２．第ＶＩＩＩ因子のための寛容誘発
Ｃ５７ＢＬ／６動物の群（ｎ＝５）は、未処置および未免疫（免疫化なし）のままのもの、未処置および免疫化されたもの（処置なし）または１０μｇ／日の上記の二重特異性抗体で処置され、かつ第０、３および７日で免疫化されたものである。免疫化は、粒子状オボアルブミン（ｐＯＶＡ）の注射からなる。第１４日から開始し、未処置および処置動物（処置なしおよび二重特異性抗体処置）は、１５０ＩＵ／ｋｇの組み換えヒト抗血友病第ＶＩＩＩ因子（第ＶＩＩＩ因子）を用いて隔週で免疫化を受ける（第１４、２８および４２日）。
全ての動物は、第４０および５４日に採血し、抗タンパク質応答は、ＥＬＩＳＡによって決定する。二重特異性抗体（阻害性の第ＶＩＩＩ因子抗体に対する抗ＧＩＴＲ／抗イディオタイプの抗体）は、本明細書で提供される薬力学的有効期間内で注射されるとき、抗第ＶＩＩＩ因子応答を有効に阻害することが予期され、これらの効果は、第ＶＩＩＩ因子タンパク質での初回抗原刺激および２回の追加免疫後でさえも明らかであることが予期される。
【０１４９】
例９：移植可能高分子デポ材料を使用する免疫抑制剤およびin vivoでのその寛容原性免疫の評価（予言的）
ステップ１：ゲルビヒクル調製
ガラス容器は、Mettler PJ3000 top loader balance上で風袋を測定する。ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）50:50 RESOMER.RTM. RG502（PLGA-502）をガラス容器内で測定する。PLGA-502を含有するガラス容器は、風袋を測定し、対応する溶媒（表２に記載のとおり）を加える。種々のポリマー／溶媒の組み合わせについてパーセンテージとして表される量は、以下の表１に記載される。ポリマー／溶媒混合物をステンレススチールの正方形端のスパチュラにより手動で撹拌すると、白色ポリマー粒子を含有する粘着性の琥珀色のペースト状物質がもたらされる。ポリマー／溶媒混合物を含有する容器は、密封し、温度制御され３９℃で平衡化されたインキュベーターに設置する。ポリマー／溶媒混合物は、透明な琥珀色の均一なゲルに見えるときにインキュベーターから除去する。インキュベーションの時間間隔は、溶媒およびポリマーの種類ならびに溶媒およびポリマー比に依存して、１〜４日間の範囲であってもよい。
【０１５０】
追加のデポゲルビヒクルは、以下のポリマーで調製される：ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）50:50 RESOMER.RTM. L104, PLGA-L104、コードno. 33007、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）50:50 RESOMER.RTM. RG206、PLGA-206, コード no. 8815、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）50:50 RESOMER.RTM. RG502, PLGA-502, コード 0000366、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）50:50 RESOMER.RTM. RG502H, PLGA-502H, コード no. 260187、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド） 50:50 RESOMER.RTM. RG503, PLGA-503, コード no. 0080765、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）50:50 RESOMER.RTM. RG506, PLGA-506, コード no. 95051、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）50:50 RESOMER.RTM. RG755, PLGA-755, コード no. 95037（Boehringer Ingelheim Chemicals, Inc., Petersburg, Va.）および以下の溶媒または混合物：グリセリルトリアセタート（Eastman Chemical Co., Kingsport, Tenn.）、安息香酸ベンジル（「ＢＢ」）、安息香酸エチル（「ＥＢ」）、安息香酸メチル（「ＭＢ」）、トリアセチン（「ＴＡ」）およびトリエチルシトラート（「ＴＣ」）（Aldrich Chemical Co., St Louis, Mo.）。例えば２０％トリアセチンおよび８０％安息香酸ベンジルなどの溶媒の組み合わせを使用するとき、溶媒混合物は、あらかじめ秤量した乾燥ポリマーへ直接的に加える。典型的なポリマー分子量は、１４，４００〜３９，７００（Ｍ．ｓｕｂ．ｗ）［６，４００〜１２，２００（Ｍ．ｓｕｂ．ｎ）］の範囲である。代表的なゲルビヒクルを、以下の表１において説明する。
【０１５１】
【表２】
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【０１５２】
【表３】
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【０１５３】
上記の表２に記載の種々の免疫抑制剤（１０〜２０％ｗ／ｗ）を、特定の透明な琥珀色のデポゲルビヒクルに加え、乾燥粉末を完全に濡れるまで手動で混合する。次いで混合物を、正方形端の金属スパチュラが備え付けられたCaframo mechanical stirrerを使用する従来の混合によって完全に混合する。最終的に均一なゲル免疫抑制剤移植可能高分子デポ材料を、保管または分注のための３、１０または３０ｃｃ使い捨て注射器に移す。
【０１５４】
ステップ２：in vivoでの寛容原性免疫応答の評価
Ｃ５７ＢＬ／６動物（ｎ＝５）の群は、未処置および未免疫（免疫化なし）のままのもの、未処置および免疫化されたもの（処置なし）または１００μｇのラパマイシンを含有する上記の移植可能高分子デポ材料で処置し、第０、３および７日に免疫化する。免疫化は、粒子状オボアルブミン（ｐＯＶＡ）の注射からなる。ポリマーデポ−ラパマイシンを、後肢に移植する。ポリマーデポ−ラパマイシンの用量は、ラパマイシン１００μｇと同程度であり、３回注射後に合計３００μｇとなるようにした。第１４日から開始し、未処置および処置された動物（処置なしおよびラパ−デポ）は、組み換え組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｒｔＰＡ）などの、前肢に注射される、２ｍｇ／ｋｇの治療用タンパク質で、隔週で免疫化を受ける（第１４、２８および４２日）。全ての動物は、示された日に採血し、抗ｒｔＰＡ応答をＥＬＩＳＡによって決定する。ラパマイシンを含有するゲル移植は、本明細書で提供される薬力学的有効期間内で注射されるとき、有効に抗ｒｔＰＡ応答を阻害することが予期され、これらの効果は、ｒｔＰＡでの初回抗原刺激および２回の追加免疫後でさえも明らかであることが予期される。
【０１５５】
例１０：合成ナノ担体に付着されたラパマイシンの薬力学的有効期間内の投与
材料
ラパマイシンをTSZ CHEM（185 Wilson Street、Framingham, MA 01702）から購入した（製品コードR1017）。ラクチド：グリコリド比３：１および固有粘度０．６９ｄＬ／ｇのＰＬＧＡをSurModics Pharmaceuticals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード7525 DLG 7A）。およそ５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５ＤＬ／ｇの全体的な固有粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅブロックコポリマーを、Lakeshore Biochemicals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード100 DL mPEG 5000 5CE）。EMPROVE（登録商標）ポリビニルアルコール４−８８、ＵＳＰ（８５〜８９％加水分解、粘度３．４〜４．６ｍＰａ・ｓ）を、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027）から購入した（製品コード1.41350）。
【０１５６】
方法
以下のとおりに溶液を調製した：
溶液１：塩化メチレン中、７５ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡ、２５ｍｇ／ｍＬのＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅおよび１２．５ｍｇ／ｍＬのラパマイシン。この溶液は、ＰＬＧＡ、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅおよびラパマイシンを純粋な塩化メチレン中に溶解することによって調製した。溶液２：ポリビニルアルコール、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝剤中５０ｍｇ／ｍＬ。
水中油エマルションを使用してナノ担体を調製した。Ｏ／Ｗエマルションは、小圧力管において溶液１（１．０ｍＬ）および溶液２（３．０ｍＬ）を組み合わせ、Branson Digital Sonifier 250を使用して３０％振幅で６０秒間超音波処理することによって調製した。Ｏ／Ｗエマルションを７０ｍＭ  ｐＨ８リン酸緩衝溶液を含有するビーカーに加えた。３つの同一なエマルションが形成され、第１のエマルションとともに同じビーカーに加えた。これらは、次いで室温で２時間撹拌し、塩化メチレンを蒸発させ、ナノ担体を形成させた。ナノ担体の一部分は、ナノ担体懸濁液を遠心分離管へ移し、７５，６００×ｇおよび４℃で３５分間遠心分離し、上清を除去し、リン酸緩衝生理食塩水中にペレットを再懸濁することによって洗浄した。洗浄手順を繰り返し、ペレットをリン酸緩衝生理食塩水中で再懸濁し、約１０ｍｇ／ｍＬの最終ナノ担体分散液とした。洗浄したナノ担体溶液は、次いでPall、品番4656からの１．２μｍＰＥＳメンブランシリンジフィルターを使用してろ過した。
ナノ担体サイズは、動的光散乱によって決定した。ナノ担体中のラパマイシンの量は、ＨＰＬＣ分析によって決定する。懸濁液１ｍＬ当たりの総乾燥ナノ担体質量は、比重測定法によって決定する。
【表４】
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【０１５７】
ラパマイシン積載ナノ担体の免疫抑制ウィンドウ（薬力学的有効期間）の決定
Ｃ５７ＢＬ／６同齢（５〜６週間）雌に、１４、１０、７、４、２および１日（単数または複数）前（それぞれｄ−１４、−１０、−７、−４、−２および−１）からキーホールリンペットヘモシアニンの注射の同じ日（ｄ０、２００μｇ、ＫＬＨ）までの種々の時点（図３に示される）で０．９ｍｇのナノ担体を、尾静脈にｉ．ｖ．注射した。全ての動物が、第０、７および１４日でＫＬＨの注射を毎週受けた（２００μｇ、ＫＬＨ）。これらの動物の血液における抗体力価は、第１９日で決定する。
図３の結果は、免疫化の１４日前でさえ、ラパマイシン含有ナノ担体の注射がＫＬＨに対する抗体応答を改変すること、および、寛容原性ナノ担体が免疫応答の開始が減衰する有意な免疫抑制ウィンドウを提供することを示す。結果は、免疫抑制剤の薬力学的有効期間内で免疫抑制剤および抗原を投与することによって抗原特異的免疫応答を低減する能力を実証する。
【０１５８】
例１１：カプセル化ラパマイシンによるニワトリオボアルブミンに対する抗原特異的寛容原性応答
ＮＰ［ラパ］材料および方法
材料
ラパマイシンは、TSZ CHEM（185 Wilson Street, Framingham, MA 01702）から購入した（製品コード# R1017）。ラクチド：グリコリド比１：１および固有粘度０．２４ｄＬ／ｇのＰＬＧＡを、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード5050 DLG 2.5A)。およそ５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．５０ＤＬ／ｇの全体的な固有粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅブロックコポリマーを、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード100DL mPEG 5000 5CE）。EMPROVE（登録商標）ポリビニルアルコール４−８８、ＵＳＰ（８５〜８９％加水分解、粘度３．４〜４．６ｍＰａ・ｓ）はEMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown、NJ 08027）から購入した（製品コード1.41350）。Cellgro Phosphate-buffered saline 1X（ＰＢＳ１×）は、Corning（9345 Discovery Blvd. Manassas, VA 20109）から購入した（製品コード21-040-CV）。
【０１５９】
方法
以下のとおりに溶液を調製した：
溶液１：１ｍＬ当たり７５ｍｇのＰＬＧＡ、１ｍＬ当たり２５ｍｇのＰＬＡ−ＰＥＧ−Ｏｍｅおよび１ｍＬ当たり１２．５ｍｇのラパマイシンをジクロロメタンに溶解することにより、ポリマーおよびラパマイシン混合物を調製した。溶液２：ポリビニルアルコールは、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝剤中５０ｍｇ／ｍＬに調製した。
【０１６０】
溶液１（１．０ｍＬ）および溶液２（３．０ｍＬ）を小ガラス圧力管中で組み合わせ、Branson Digital Sonifier 250を使用して３０％振幅で６０秒間超音波処理することにより、Ｏ／Ｗエマルションを調製した。このＯ／Ｗエマルションを７０ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝溶液（６０ｍＬ）を含有する開放ビーカーに加えた。３つの追加の同一のＯ／Ｗエマルションを調製し最初のものと同じビーカーに加えた。次いでこれらを室温で２時間撹拌し、ジクロロメタンを蒸発させ、ナノ担体を形成させた。次にナノ担体懸濁液を遠心分離管に移し、７５，６００×ｇおよび４℃で３５分間遠心分離し、上清を除去し、ペレットをＰＢＳ１×中に再懸濁することによって、ナノ担体の一部分を洗浄した。洗浄手順を繰り返し、次いでペレットをＰＢＳ１×中に再懸濁し、ポリマー基準で１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノ担体懸濁液を達成した。同一の製剤を別個のビーカー中で上記のとおり調製し、洗浄ステップ後に最初のものと組み合わせた。次いで混合されたナノ担体溶液をPallの１．２μｍＰＥＳメンブランシリンジフィルター（部品番号4656））を使用してろ過し、−２０℃で保管した。
【０１６１】
ナノ担体のサイズは動的光散乱によって決定した。ナノ担体中のラパマイシンの量はＨＰＬＣ分析によって決定した。懸濁液１ｍＬ当たりの総乾燥ナノ担体質量は比重測定法により決定した。
【表５】
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【０１６２】
ＮＰ［ＯＶＡ］材料および方法
材料
オボアルブミンタンパク質は、Worthington Biochemical Corporation（730 Vassar Avenue、Lakewood、NJ 08701）から購入した（製品コードLS003054）。５４％ラクチドおよび４６％グリコリド含有量ならびに固有粘度０．２４ｄＬ／ｇのＰＬＧＡを、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード5050 DLG 2.5A）。およそ５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび２８，０００ＤａのＭｗ、０．３８ｄＬ／ｇの固有粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧブロックコポリマーをLakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード100 DL mPEG 5000 4CE）。EMPROVE（登録商標）ポリビニルアルコール４−８８、ＵＳＰ、８５〜８９％加水分解、粘度３．４〜４．６ｍＰａ．ｓ、は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027）から購入した（製品コード1.41350.1001）。Cellgro Phosphate-buffered saline 1X（ＰＢＳ１×）は、Corning（9345 Discovery Blvd. Manassas, VA 20109）から購入した（製品コード21-040-CV）。
【０１６３】
方法
以下のとおりに溶液を調製した：
溶液１：５０ｍｇ／ｍＬのオボアルブミンタンパク質は、１０重量％のスクロースを有する１０ｍＭリン酸緩衝剤ｐＨ８中で調製した。溶液２：ＰＬＧＡはジクロロメタン１ｍＬ当たり１００ｍｇのＰＬＧＡをドラフトチャンバー中で溶解することにより調製した。溶液３：ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅは、ジクロロメタン１ｍＬ当たり１００ｍｇのＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅをドラフトチャンバー中で溶解することにより調製した。溶液４：ポリビニルアルコール、１００ｍＭリン酸緩衝剤ｐＨ８中６５ｍｇ／ｍＬ。
【０１６４】
まず溶液１〜３を混合することにより一次（Ｗ１／Ｏ）エマルションを作製した。溶液１（０．２ｍＬ）、溶液２（０．７５ｍＬ）および溶液３（０．２５ｍＬ）を氷水浴中で＞４分予冷した小ガラス圧力管中で組み合わせ、Branson Digital Sonifier 250を使用して、氷浴上で、５０％振幅で４０秒間超音波処理した。次いで溶液４（３ｍＬ）を一次エマルションに加え、ボルテックス混合して乳状分散液を作製し、次いでBranson Digital Sonifier 250を使用して、氷浴上で、３０％振幅で６０秒間超音波処理することによって二次（Ｗ１／Ｏ／Ｗ２）エマルションを形成した。この二次エマルションを、ＰＢＳ１×（３０ｍＬ）を含有する開放５０ｍＬビーカーに加えた。第２の同一のダブルエマルション製剤を上記のとおり調製し、最初のものと同じ５０ｍＬビーカーに加えた。２つの調製剤を室温で２時間撹拌してジクロロメタンを蒸発させ、懸濁液中のナノ担体を形成させた。ナノ担体懸濁液を遠心分離管に移し、７５，６００ｒｃｆで５０分間回転し、上清を除去し、ペレットをＰＢＳ１×に再懸濁すことによって、懸濁ナノ担体の一部分を洗浄した。この洗浄手順を繰り返し、次いでペレットをＰＢＳ１×に再懸濁して、ポリマー基準で１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノ担体懸濁液を達成した。懸濁液は、使用まで、−２０℃で凍結して保管した。
【表６】
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【０１６５】
ＮＰ［GSK1059615］材料および方法
材料
GSK1059615は、MedChem Express（11 Deer Park Drive, Suite 102D Monmouth Junction, NJ 08852）から購入した（製品コードHY- 12036）。ラクチド：グリコリド比１：１および固有粘度０．２４ｄＬ／ｇのＰＬＧＡを、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード5050 DLG 2.5A)。およそ５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．２６ＤＬ／ｇの全体的な固有粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅブロックコポリマーを、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード100 DL mPEG 5000 5K-E）。Cellgro Phosphate-buffered saline 1X pH 7.4（ＰＢＳ１×）は、Corning（9345 Discovery Blvd. Manassas, VA 20109）から購入した（製品コード21-040-CV）。
【０１６６】
方法
以下のとおりに溶液を調製した：
溶液1：ＰＬＧＡ（１２５ｍｇ）およびＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（１２５ｍｇ）を１０ｍＬのアセトンに溶解した。溶液２：GSK1059615を、１ｍＬのＮ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）中１０ｍｇで調製した。
【０１６７】
溶液１（４ｍＬ）および溶液２（０．２５ｍＬ）を小ガラス圧力管中で組み合わせ、この混合物を、２０ｍＬの超純水を含有する２５０ｍＬの丸底フラスコに撹拌下、滴下して加えることにより、ナノ担体を調製した。このフラスコをロータリーエバポレーション装置に取り付け、減圧下アセトンを除去した。ナノ担体懸濁液を遠心分離管に移し、７５，６００ｒｃｆおよび４℃で５０分間遠心分離し、上清を除去し、ペレットをＰＢＳ１×中に再懸濁することによって、ナノ担体の一部分を洗浄した。洗浄手順を繰り返し、ペレットをＰＢＳ１×に再懸濁して、ポリマー基準で１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノ担体懸濁液を達成した。洗浄したナノ担体溶液を、次いでPallの１．２μｍＰＥＳメンブランシリンジフィルター（部品番号4656）を使用してろ過した。同一のナノ担体溶液を上記のとおりに調製し、ろ過ステップ後に最初のものと共に貯蔵した。この均質な懸濁液は、−２０℃で凍結して保管した。
【０１６８】
ナノ担体のサイズは動的光散乱により決定した。ナノ担体中のGSK1059615の量は３５１ｎｍにおけるＵＶ吸収により決定した。懸濁液１ｍＬ当たりの総乾燥ナノ担体質量は比重測定法により決定した。
【表７】
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Ｃ５７ＢＬ／６同齢（５〜６週）雌性マウスに、−２１日および−１４日に、塩水（非処置）、１．２ｍｇのラパマイシン含有ナノ担体（ＮＰ［ラパ］）または８ｍｇのGSK1059615含有ナノ担体（ＮＰ［GSK1059615］）のいずれかと組み合わせた１．１ｍｇの全オボアルブミン添加ナノ担体（ＮＰ［ＯＶＡ］）を、尾静脈においてｉ．ｖ．注射した。
【０１６９】
第０日に、全ての動物に、２μｇのＣｐＧと混和された２５μｇの粒子状ＯＶＡ（ｐＯＶＡ）を後肢においてｓ．ｃ．注射し、続いて第７および１４日に、２５μｇのｐＯＶＡだけを注射した。第２１日に抗体価を測定した。いずれかの処置の非存在下では、動物は、抗ＯＶＡＩｇＧ抗体価によって測定され得るＯＶＡに対する強力な免疫応答を現した。図４に示された第２１日の抗体価は、同じ溶液中でカプセル化ＯＶＡと併用投与された合成寛容原性ナノ担体の２回の用量（ＮＰ［ＯＶＡ］＋ＮＰ［ラパ］またはＮＰ［GSK1059615］）が、ＯＶＡ＋ＣｐＧの１回の注射およびＯＶＡ単独の２回の注射後であっても、ＯＶＡへの抗体形成を低減するのに有効であったことを実証している。これらの結果は、カプセル化免疫抑制剤（ラパマイシンおよびGSK1059615など）が、タンパク質と併用送達されたときに、そのタンパク質への抗体形成を防止し得るということを示している。
【０１７０】
例１２：合成ナノ担体を使用する薬力学的有効期間の投与（予言的）
パイロット試験は、可溶性の第ＶＩＩＩ因子および例１の合成ナノ担体を使用して非ヒト霊長類対象において行う。５０の非ヒト霊長類対象を無作為に５アーム：プラセボ、次いで用量範囲について選択される４つの用量レベルの合成ナノ担体に割り当てる。用量範囲は、１日の好ましい薬力学的有効期間標的で、２０時間から１か月間までの範囲の薬力学的有効期間を確立することである。第０日において、各活性アームにおける対象は、全て皮下に合成ナノ担体の用量が投与され、合成ナノ担体用量の２４時間内で標準輸液用量の第ＶＩＩＩ因子の輸液を得る。２週間後、各動物を標準用量の可溶性第ＶＩＩＩ因子で負荷し、抗第ＶＩＩＩ因子ＩｇＧ抗体のレベルを標準的なＥＬＩＳＡ技術を使用して測定する。有意な抗第ＶＩＩＩ因子抗体の低減を示す４つの活性アーム間からの合成ナノ担体の最低用量を、試験用量として選択する。
試験用量の合成ナノ担体を次いでヒト対象に対する投与のためにアロメトリックにスケールし、ヒト臨床試験に使用し、可溶性の第ＶＩＩＩ因子の標準用量を使用した合成ナノ担体の投与用量レベルの範囲を決定する。次いで合成ナノ担体および第ＶＩＩＩ因子の投与用量を定期的な臨床プラクティスに利用可能なものとする。
【０１７１】
例１３：合成浸透圧ポンプを使用する薬力学的有効期間の投与（予言的）
パイロット試験を可溶性の第ＶＩＩＩ因子および浸透圧ポンプ（一般に例６に従って調製されるが、GSK1059615を例６のラパマイシンと置き換える）を使用して非ヒト霊長類対象において行う。５０の非ヒト霊長類対象を無作為に５つのアームに割当る：プラセボ、次いで浸透圧ポンプによって送達され、用量範囲について選択されるGSK1059615の４つの用量レベル。用量範囲は、１日の好ましい薬力学的有効期間標的で２０時間から１か月間までの範囲の薬力学的有効期間を確立することである。第０日において、各活性アームにおける対象全てに皮下に該用量の合成ナノ担体を投与し、合成ナノ担体用量の２４時間内に標準輸液用量の第ＶＩＩＩ因子の輸液を得る。２週間後、各動物を標準用量の可溶性の第ＶＩＩＩ因子で負荷し、該レベルの抗第ＶＩＩＩ因子  ＩｇＧ抗体を標準的なＥＬＩＳＡ技術を使用して測定する。抗第ＶＩＩＩ因子抗体の有意な低減を示す４つの活性アーム間から浸透圧ポンプによって送達される最低用量のGSK1059615を試験用量として選択する。
浸透圧ポンプによって送達される試験用量のGSK1059615を、次いでヒト対象に投与するためにアロメトリックにスケールし、ヒト臨床試験において使用して、浸透圧ポンプによって送達されるGSK1059615の投与用量レベルの範囲を標準用量の可溶性の第ＶＩＩＩ因子を使用して決定する。浸透圧ポンプおよび第ＶＩＩＩ因子によって送達されるGSK1059615の投与用量を、次いで臨床プラクティスに利用可能なものとする。
【０１７２】
例１４：治療用ポリヌクレオチドを使用する薬力学的有効期間の投与（予言的）
パイロット試験を、アスパラギナーゼをコードするｍｍＲＮＡ（一般に米国特許出願第2013/0115272号（Fougerolles et al.）（“ｍｍＲＮＡ”）に従って調製する）および例１の合成ナノ担体を使用して非ヒト霊長類対象において行う。５０の非ヒト霊長類対象を無作為に５つのアームに割り当てる：プラセボ、次いで用量範囲について選択される４つの用量の合成ナノ担体。用量範囲は、１日の好ましい薬力学的有効期間標的で２０時間から１か月間までの範囲の薬力学的有効期間を確立することである。第０日において、各活性アームの対象全てに該用量の合成ナノ担体を皮下に投与し、合成ナノ担体用量の２４時間内に標準輸液用量の第ＶＩＩＩ因子の輸液を得る。２週間後、各動物を標準用量のｍｍＲＮＡで負荷し、該レベルの抗ｍｍＲＮＡ抗体を標準的なＥＬＩＳＡ技術を使用して測定する。抗ｍｍＲＮＡ抗体の有意な低減を示す４つの活性アーム間からの合成ナノ担体の最低用量を試験用量として選択する。
次いで合成ナノ担体の試験用量を、ヒト対象への投与のためにアロメトリックにスケールし、ヒト臨床試験に使用して合成ナノ担体の投与用量の範囲を標準用量レベルのｍｍＲＮＡを使用して決定する。次いで合成ナノ担体およびｍｍＲＮＡの投与用量を標準的な臨床プラクティスに利用可能なものとする。
【０１７３】
例１５：ナノ結晶性免疫抑制剤を使用する薬力学的有効期間の投与（予言的）
パイロット試験を、非ヒト霊長類対象において例１の可溶性の第ＶＩＩＩ因子および合成ナノ担体を使用して行う。５０の非ヒト霊長類対象を無作為に５つのアームに割り当てる：プラセボ、次いで用量範囲のために選択されるナノ結晶性ラパマイシンの４つの用量レベル。用量範囲は、１日の好ましい薬力学的有効期間標的で２０時間から１か月間までの範囲の薬力学的有効期間を確立することである。第０日において、各活性アームの対象全てに該用量のナノ結晶性ラパマイシンを皮下に投与し、ナノ結晶性ラパマイシン用量の２４時間内に標準輸液用量の第ＶＩＩＩ因子の輸液を得る。２週間後、各動物を標準用量の可溶性の第ＶＩＩＩ因子で負荷し、該レベルの抗第ＶＩＩＩ因子  ＩｇＧ抗体を標準的なＥＬＩＳＡ技術を使用して測定する。抗第ＶＩＩＩ因子抗体の有意な低減を示す４つの活性アーム間からのナノ結晶性ラパマイシンの最低用量を試験用量として選択する。
次いでナノ結晶性ラパマイシンの試験用量をヒト対象への投与についてアロメトリックにスケールし、ヒト臨床試験において使用してナノ結晶性ラパマイシンの投与用量レベルの範囲を標準用量の可溶性の第ＶＩＩＩ因子を使用して決定する。次いでナノ結晶性ラパマイシンおよび第ＶＩＩＩ因子の投与用量を標準的な臨床プラクティスに利用可能なものとする。
【０１７４】
例１６：ナノ結晶性免疫抑制剤を使用する薬力学的有効期間の投与（予言的）
パイロット試験を、アスパラギナーゼをコードするｍｍＲＮＡ（米国特許出願第2013/0115272号（Fougerolles et al.）（“ｍｍＲＮＡ”）に従って一般に調製する）およびナノ結晶性ラパマイシンを使用して非ヒト霊長類対象において行う。５０の非ヒト霊長類対象を無作為に５つのアームに割り当てる：プラセボ、次いで用量範囲について選択される４つの用量の合成ナノ担体。用量範囲は、１日の好ましい薬力学的有効期間標的で２０時間から１か月間までの範囲の薬力学的有効期間を確立することである。第０日において、各活性アームの対象すべてに該用量のナノ結晶性ラパマイシンを皮下に投与し、ナノ結晶性ラパマイシン用量の２４時間内に標準輸液用量の第ＶＩＩＩ因子の輸液を得る。２週間後、各動物を標準用量のｍｍＲＮＡで負荷し、該レベルの抗ｍｍＲＮＡ抗体を標準的なＥＬＩＳＡ技術を使用して測定する。抗ｍｍＲＮＡ抗体の有意な低減を示す４つの活性アーム間からのナノ結晶性ラパマイシンの最低用量を試験用量として選択する。
次いでナノ結晶性ラパマイシンの試験用量をヒト対象への投与についてアロメトリックにスケールし、ヒト臨床試験において使用してナノ結晶性ラパマイシンの投与用量の範囲をｍｍＲＮＡの標準用量レベルを使用して決定する。次いでナノ結晶性ラパマイシンおよびｍｍＲＮＡの投与用量を標準的な臨床プラクティスに利用可能なものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年1月6日(2020.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【手続補正書】
【提出日】令和2年2月21日(2020.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の第１のクラスにおいて、治療用高分子に関して、投与薬力学的有効期間を提供する投与用量で、最小２０時間から最大１か月間までの範囲の薬力学的有効期間の間、対象へ免疫抑制剤を投与すること；および
免疫抑制剤の投与薬力学的有効期間内において、対象へ治療用高分子を投与すること；
を含む方法における使用のための、免疫抑制剤を含む組成物であって、
治療用高分子および免疫抑制剤が、相互に付着されておらず、治療用高分子が、合成ナノ担体に付着されていない、前記組成物。
【請求項２】
方法が、以下：
免疫抑制剤の試験用量に基づいて免疫抑制剤の投与用量を決定すること
をさらに含み、
試験用量が、対象の第２のクラスにおいて最小２０時間から最大１か月間までの範囲の薬力学的有効期間の間、治療用高分子に関して試験薬力学的有効期間を有する、
請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
治療用高分子に対する寛容を誘発する方法における使用のための免疫抑制剤を含む組成物であって、前記方法が、（ａ）２０時間〜１か月間である薬力学的有効期間を引き出すために十分な用量で対象へ免疫抑制剤を投与すること；および（ｂ）前記対象へ、前記薬力学的有効期間内において、治療用高分子を投与すること、を含み、ここで治療用高分子および免疫抑制剤が相互に付着されておらず、および、治療用高分子が合成ナノ担体に付着されていない、前記組成物。
【請求項４】
（ａ）免疫抑制剤が、合成ナノ担体が付着された免疫抑制剤を含む合成ナノ担体、移植可能浸透圧ポンプ、二重特異性抗体または移植可能高分子デポ材料を含む；（ｂ）免疫抑制剤が、合成ナノ担体が付着された免疫抑制剤を含む；（ｃ）合成ナノ担体が、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤系エマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子、タンパク質粒子、または、ナノ材料の組み合わせを含むナノ粒子、任意にかかるナノ粒子が脂質ポリマーナノ粒子である、を含む；（ｄ）免疫抑制剤が、スタチン；ｍＴＯＲインヒビター；ＴＧＦ−βシグナル剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；コルチコステロイド；ミトコンドリア機能のインヒビター；Ｐ３８インヒビター；ＮＦ−κβインヒビター、デキサメタゾン；ＴＣＰＡ−１；ＩＫＫ  ＶＩＩ；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼインヒビター；プロテアソームインヒビター；キナーゼインヒビター；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカインインヒビター；サイトカイン受容体インヒビター；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；カルシニューリンインヒビター；ホスファターゼインヒビター；ＰＩ３ＫＢインヒビター；オートファジーインヒビター；アリール炭化水素受容体インヒビター；プロテアソームインヒビターＩ（ＰＳＩ）；酸化ＡＴＰ；ＩＤＯ、ビタミンＤ３；シクロスポリン；アリール炭化水素受容体インヒビター；レスベラトロール；アザチオプリン；６−メルカプトプリン；６−チオグアニン；ＦＫ５０６；サングリフェリンＡ；サルメテロール；ミコフェノラートモフェチル；アスピリンおよび他のＣＯＸインヒビター；ニフルム酸；エストリオール；またはトリプトリドを含む；（ｅ）合成ナノ担体における免疫抑制剤の積載が、合成ナノ担体における材料の総乾燥レシピ重量に基づいて（重量／重量）、０．０００１ｗｔ％と５０ｗｔ％との間の範囲であり、任意に、合成ナノ担体における免疫抑制剤の積載は、合成ナノ担体における材料の総乾燥レシピ重量に基づいて（重量／重量）、０．１ｗｔ％と１０ｗｔ％との間の範囲である；（ｆ）治療用高分子が、治療用タンパク質または治療用ポリヌクレオチドを含み、任意に、治療用タンパク質が、酵素、酵素補因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカイン、成長因子、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を含む；または（ｇ）投与薬力学的有効期間が、（ｉ）最小２０時間から最大２週間まで；（ｉｉ）最小２０時間から最大１週間まで；（ｉｉｉ）最小２４時間から最大２日間までの範囲である期間を有する；または（ｈ）試験薬力学的有効期間が、（ｉ）最小２０時間から最大２週間まで；（ｉｉ）最小２０時間から最大１週間まで；（ｉｉｉ）最小２４時間から最大２日間までの範囲である期間を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
免疫抑制剤が、ｍＴＯＲインヒビターを含み、ｍＴＯＲインヒビターは、ラパマイシンまたはラパマイシン類縁体を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
免疫抑制剤の投与用量が、アロメトリックまたはアイソメトリックスケーリング技術の使用とともに、免疫抑制剤の試験用量に基づいて決定される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
対象の第１のクラスおよび対象の第２のクラスが、対象の同じクラスである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
対象の第１のクラスおよび対象の第２のクラスが、対象の異なるクラスである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
合成ナノ担体が、脂質ナノ粒子、リポソーム、ポリマーナノ粒子または金属ナノ粒子を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
金属ナノ粒子が、金ナノ粒子を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ポリマーナノ粒子が、非メトキシ末端のプルロニックポリマーであるポリマーを含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、ポリエーテルに付着されたポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ポリエステルが、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、および、ポリエーテルに付着されたポリエステルを含む、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ポリエーテルが、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
（ａ）合成ナノ担体の動的光散乱を使用して得られる粒子サイズ分布の平均が、（ｉ）１００ｎｍ；（ｉｉ）１５０ｎｍ；（ｉｉｉ）２００ｎｍ；（ｉｖ）２５０ｎｍ；または（ｖ）３００ｎｍよりも大きい径であり、および／または、（ｂ）合成ナノ担体のアスペクト比が、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７または１：１０よりも大きい、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【外国語明細書】
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