(57)【要約】【課題】免疫療法のための調節粒子の提供。【解決手段】ナノ粒子組成物が開示される。ナノ粒子組成物は、典型的に、少なくとも１つ、好ましくは２つまたはそれを超える活性薬剤を含み、これらのうちの１つは、送達ビヒクルの中に負荷された、その表面に結合された、および／またはその内に密封された免疫調節化合物である。送達ビヒクルは、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子などの生分解性ポリマーナノ粒子とすることができる。典型的に、活性薬剤の少なくとも１つは、免疫刺激性の応答を増加させるまたは免疫抑制性の応答を減少させる免疫調節薬である。いくつかの実施形態では、粒子が、免疫刺激性の応答を増加させる免疫調節薬および免疫抑制性の応答を減少させる免疫調節薬の両方を含む。粒子は標的細胞への送達を改善するターゲティング成分により装飾することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
それぞれ送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される免疫調節薬および第２の活性薬剤を含むナノ粒子組成物であって、
前記送達ビヒクルが、ポリマーコア、吸収剤、および脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子であるナノ粒子組成物。
【請求項２】
前記免疫調節薬が、Ｔ細胞応答を増強する、Ｔ細胞活性を増加させる、Ｔ細胞増殖を増加させる、Ｔ細胞阻害性シグナルを低下させる、サイトカインの産生を増強する、Ｔ細胞分化もしくはエフェクター機能を刺激する、Ｔ細胞の生存を促進する、またはその任意の組み合わせである薬剤である、請求項１に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３】
前記免疫調節薬が、サイトカインまたはケモカインである、請求項２に記載のナノ粒子組成物。
【請求項４】
前記サイトカインが、ＩＬ−２またはＩＦＮγである、請求項３に記載のナノ粒子組成物。
【請求項５】
前記免疫調節薬が、Ｔｒｅｇを排除する、Ｔｒｅｇの分化、輸送、エフェクター機能、もしくはその組み合わせをブロックする、エフェクター細胞抑制閾値を上げる、またはその任意の組み合わせである薬剤である、請求項１に記載のナノ粒子組成物。
【請求項６】
前記薬剤が、ＴＧＦ−β阻害剤である、請求項５に記載のナノ粒子組成物。
【請求項７】
前記ＴＧＦ−β阻害剤が、ＳＢ５０５１２４またはロサルタンである、請求項６に記載のナノ粒子組成物。
【請求項８】
前記第２の活性薬剤もまた、免疫調節薬である、請求項１に記載のナノ粒子組成物。
【請求項９】
ターゲティング成分を含む請求項１に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１０】
前記ターゲティング成分が、ＲＧＤペプチド、ＣＤ４０アゴニスト、ｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体から成る群から選択される、請求項９に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１１】
それぞれ送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封されるＩＬ−２もしくはＩＦＮγおよびロサルタンを含むナノ粒子組成物であって、
前記送達ビヒクルが、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子であるナノ粒子組成物。
【請求項１２】
それぞれ送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封されるＩＬ−２またはＩＦＮγおよびターゲティング成分を含むナノ粒子組成物であって、
前記送達ビヒクルが、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子であるナノ粒子組成物。
【請求項１３】
前記ターゲティング成分が、ＲＧＤペプチド、ＣＤ４０アゴニスト、ｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体から成る群から選択される、請求項１２に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１４】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により装飾された、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子を含む人工樹状細胞。
【請求項１５】
１つまたはそれを超えるさらなる活性薬剤をさらに含む、請求項１４に記載の人工樹状細胞。
【請求項１６】
前記活性薬剤のうちの１つが、ＩＬ−２またはＩＦＮγである、請求項１５に記載の人工樹状細胞。
【請求項１７】
前記活性薬剤のうちの１つが、ロサルタンまたはＳＢ５０５１２４である、請求項１５に記載の人工樹状細胞。
【請求項１８】
ＩＬ−２およびロサルタンをさらに含む、請求項１４に記載の人工樹状細胞。
【請求項１９】
免疫応答を刺激または増強するための方法であって、免疫応答を上昇させるためにそれを必要とする対象に請求項１〜１８のいずれかの有効量の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２０】
癌を治療するための方法であって、癌の１つまたはそれを超える症状を低下させるために請求項１〜１８のいずれかの有効量の組成物を癌を有する対象に投与するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１３年１１月１日に出願された米国出願第６１／８９９，０８０号および２０１４年８月２１日に出願された米国出願第６２／０４０，２４２号の優先権の利益を主張し、これらの出願は、本明細書において参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、一般に、ナノ粒子組成物および免疫療法のためのその使用の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
治療上の処置の効能は、使用される薬剤の作用メカニズムに依存性であるが、他の因子もまた、最適な応答を誘起するのに重要となり得る。例えば、疾患の発病に関する投薬量および投与のタイミングならびに薬物動態学的および薬力学的特質に関する多くの複雑な問題は、考慮すべき重要なこととなり得る。
【０００４】
この数年にわたって、様々な研究が、薬物送達のための最適な戦略を確立するために、多くの治療剤により実行されてきた。様々なタイプの疾患のための薬物レジメンが、併用療法に進展した。例えば、いくつかの場合では、組み合わせは、（１）同じまたは異なる疾患標的を有する薬物を組み合わせること、（２）２つの薬物の組み合わせた活性が、それぞれ単独の活性の合計よりも大きいものを組み合わせること、および（３）２つの薬物のうち、一方の薬物は疾患状態に対して直接作用するが、他方は対象の症状を間接的に改善するものの組み合わせによって、効能を改善するために使用される。しかし、疾患の処置における役割の異なるかかる異種薬物は、しばしば、化学的性質が劇的に異なり、併用療法における薬物送達問題は非常に困難であり得る。
【０００５】
したがって、本発明は、改善された薬物送達および疾患処置のための組成物および方法を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明の別の目的は、標的細胞への活性薬剤の送達および効能を改善するための組成物および方法を提供することである。
【０００７】
本発明のさらなる目的は、少なくとも２つの活性薬剤を含む併用療法の送達および効能を改善するための組成物および方法を提供することである。
【０００８】
本発明のさらなる目的は、それを必要とする対象において免疫刺激性の応答を誘発または増強するための特異的な併用療法を提供することである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ナノ粒子組成物が、開示される。ナノ粒子組成物は、送達ビヒクルの中に負荷された、その表面に結合された、および／またはその内に密封された１つ、好ましくは２つまたはそれを超える活性薬剤を典型的に含む。送達ビヒクルは、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲル、またはＰＬＧＡナノ粒子などの生分解性ポリマーナノ粒子とすることができる。活性薬剤は、治療剤もしくは診断剤、ターゲティング成分、抗原、またはアジュバントとすることができる。２つまたはそれを超える活性薬剤のそれぞれの相対濃度および送達ビヒクル上または内のそれらの配置は、標的細胞が受けるであろう好ましい投薬量および提示に適応させるために、組成物の製造の間に操作することができる。同じ送達ビヒクルの中へのまたは上への２つまたはそれを超える活性薬剤の負荷は、２つまたはそれを超える活性薬剤が標的細胞に同時にまたは他の場合には所定の順序で提示されることを可能にする。
【００１０】
最も好ましい実施形態では、ナノ粒子組成物が、少なくとも１つの免疫調節物質を含む。免疫調節物質は、免疫刺激性の応答を増加させるまたは増強する薬剤、例えば、Ｔ細胞応答を増強する、Ｔ細胞活性を増加させる、Ｔ細胞増殖を増加させる、Ｔ細胞阻害性シグナルを低下させる、サイトカインの産生を増強する、Ｔ細胞分化もしくはエフェクター機能を刺激する、Ｔ細胞の生存を促進する薬剤、またはその任意の組み合わせとすることができる。免疫刺激性の応答を増加させるまたは増強する例示的な薬剤には、サイトカインならびにインターロイキン−２（ＩＬ−２）およびインターフェロンγ（ＩＦＮγ）などのケモカインが含まれるが、これらに限定されない。
【００１１】
免疫調節物質は、免疫抑制性の応答を減少させるまたは阻害する薬剤、例えば、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を排除する；Ｔｒｅｇの分化、輸送、エフェクター機能、もしくはその組み合わせをブロックする；エフェクター細胞抑制閾値を上げる薬剤、またはその任意の組み合わせとすることができる。免疫抑制性の応答を減少させるまたは阻害する例示的な薬剤には、ＳＢ５０５１２４またはロサルタンなどのＴＧＦ−β阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００１２】
組成物は、ターゲティング成分を含むことができる。好ましいターゲティング成分は、ＲＧＤペプチド、ＣＤ４０アゴニスト、ｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体、およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を含む。
【００１３】
活性薬剤の特定の組み合わせもまた、開示される。例えば、いくつかの実施形態では、送達ビヒクルが、ロサルタンと組み合わせて、ＩＬ−２またはＩＦＮγを負荷されるか、またはそれにより装飾される。他の実施形態では、送達ビヒクルは、ＩＬ−２またはＩＦＮγを負荷し、ＲＧＤペプチドまたは抗ＣＤ４０抗体もしくはその抗原結合断片などのターゲティング成分により装飾される。
【００１４】
樹状細胞を模倣する人工樹状細胞および組成物もまた、開示される。特定の実施形態では、人工樹状細胞が、ポリマーコアおよび脂質シェルを有するナノリポゲルまたは生分解性ポリマーナノ粒子から構成される。ナノリポゲルまたはポリマーナノ粒子、例えば、ＰＬＧＡナノ粒子は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により装飾される。人工樹状細胞は、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ロサルタン、ＳＢ５０５１２４、または任意のその組み合わせなどの１つまたはそれを超えるさらなる活性薬剤を負荷することができる。
【００１５】
対象の免疫応答を刺激しまたは増強し、癌について対象を処置するための方法もまた、開示される。典型的に、方法は、免疫応答を増加させる、癌細胞を破壊する、癌成長および／もしくは転移に干渉する、ならびに／または癌の１つもしくはそれを超える有害な事象および／もしくは続発症を低下させるために、有効量のナノ粒子組成物を対象に投与するステップを含む。この作用様式は、治療的または予防的なものとすることができる。そのため、投与された粒子を使用する免疫応答の増強、刺激、または干渉は、既知の抗原によるワクチン開発または自己免疫障害の抑制の両方に有用である。
【００１６】
さらなる活性薬剤を対象に投与することと組み合わせて、送達ビヒクルの中に、その上に負荷された、または他の場合にはそれと会合された１つまたはそれを超える活性薬剤を有するナノリポゲルまたはポリマー粒子などの送達ビヒクルを含むナノ粒子組成物を対象に投与するステップを含む、それを必要とする対象を処置するための方法もまた、提供される。ナノ粒子組成物およびさらなる活性薬剤は、単一の医薬組成物においてまたは異なる医薬組成物において別々に投与することができる。特に好ましい実施形態では、ナノ粒子組成物が、炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−２）および／またはＴＧＦβ阻害剤（例えば、ロサルタン）を含むナノリポゲルまたは他のポリマー粒子を含み、さらなる活性薬剤が、免疫修飾因子または化学療法剤である。特に好ましい実施形態では、１つまたはそれを超える活性薬剤が、免疫応答刺激剤または促進剤（ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスティック抗ＰＤ１抗体、抗−Ｂ７−Ｈ１抗体など）またはＣＴＬＡ４アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスティック抗ＣＴＬＡ４抗体）、さらに好ましくはその組み合わせなど）である。別の好ましい実施形態では、さらなる活性薬剤が、化学療法剤、例えば、ドキソルビシンである。
【００１７】
方法は、免疫応答の増強（例えば、Ｔ細胞増殖または活性化などのＴ細胞応答の増加または誘発）が、所望される対象を処置するために使用することができる。例示的な対象には、癌または伝染病を有する対象が含まれる。免疫応答（例えば、Ｔ細胞応答の増加または誘発）は、癌または疾患の抗原に対するものとすることができる。免疫応答は、癌または感染症を処置するのに有効になり得る。いくつかの実施形態では、免疫応答が、癌性および／または疾患感染細胞に対するものであり、癌および／または疾患の１つまたはそれを超える症状（例えば、腫瘍量、腫瘍進行、疾患進行など）を低下させることができる。処置レジメンもまた、提供される。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
それぞれ送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される免疫調節薬および第２の活性薬剤を含むナノ粒子組成物であって、
前記送達ビヒクルが、ポリマーコア、吸収剤、および脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子であるナノ粒子組成物。
（項目２）
前記免疫調節薬が、Ｔ細胞応答を増強する、Ｔ細胞活性を増加させる、Ｔ細胞増殖を増加させる、Ｔ細胞阻害性シグナルを低下させる、サイトカインの産生を増強する、Ｔ細胞分化もしくはエフェクター機能を刺激する、Ｔ細胞の生存を促進する、またはその任意の組み合わせである薬剤である、項目１に記載のナノ粒子組成物。
（項目３）
前記免疫調節薬が、サイトカインまたはケモカインである、項目２に記載のナノ粒子組成物。
（項目４）
前記サイトカインが、ＩＬ−２またはＩＦＮγである、項目３に記載のナノ粒子組成物。（項目５）
前記免疫調節薬が、Ｔｒｅｇを排除する、Ｔｒｅｇの分化、輸送、エフェクター機能、もしくはその組み合わせをブロックする、エフェクター細胞抑制閾値を上げる、またはその任意の組み合わせである薬剤である、項目１に記載のナノ粒子組成物。
（項目６）
前記薬剤が、ＴＧＦ−β阻害剤である、項目５に記載のナノ粒子組成物。
（項目７）
前記ＴＧＦ−β阻害剤が、ＳＢ５０５１２４またはロサルタンである、項目６に記載のナノ粒子組成物。
（項目８）
前記第２の活性薬剤もまた、免疫調節薬である、項目１に記載のナノ粒子組成物。
（項目９）
ターゲティング成分を含む項目１に記載のナノ粒子組成物。
（項目１０）
前記ターゲティング成分が、ＲＧＤペプチド、ＣＤ４０アゴニスト、ｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体から成る群から選択される、項目９に記載のナノ粒子組成物。
（項目１１）
それぞれ送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封されるＩＬ−２もしくはＩＦＮγおよびロサルタンを含むナノ粒子組成物であって、
前記送達ビヒクルが、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子であるナノ粒子組成物。
（項目１２）
それぞれ送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封されるＩＬ−２またはＩＦＮγおよびターゲティング成分を含むナノ粒子組成物であって、
前記送達ビヒクルが、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子であるナノ粒子組成物。
（項目１３）
前記ターゲティング成分が、ＲＧＤペプチド、ＣＤ４０アゴニスト、ｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体から成る群から選択される、項目１２に記載のナノ粒子組成物。
（項目１４）
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により装飾された、ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲルであるか、または生分解性ポリマーナノ粒子を含む人工樹状細胞。
（項目１５）
１つまたはそれを超えるさらなる活性薬剤をさらに含む、項目１４に記載の人工樹状細胞。
（項目１６）
前記活性薬剤のうちの１つが、ＩＬ−２またはＩＦＮγである、項目１５に記載の人工樹状細胞。
（項目１７）
前記活性薬剤のうちの１つが、ロサルタンまたはＳＢ５０５１２４である、項目１５に記載の人工樹状細胞。
（項目１８）
ＩＬ−２およびロサルタンをさらに含む、項目１４に記載の人工樹状細胞。
（項目１９）
免疫応答を刺激または増強するための方法であって、免疫応答を上昇させるためにそれを必要とする対象に項目１〜１８のいずれかの有効量の組成物を投与するステップを含む、方法。
（項目２０）
癌を治療するための方法であって、癌の１つまたはそれを超える症状を低下させるために項目１〜１８のいずれかの有効量の組成物を癌を有する対象に投与するステップを含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１−１】図１Ａは、クマリン−６−負荷ＰＬＧＡナノ粒子による注射の３時間後のマウスの脾臓、肝臓、肺、心臓、および腎臓におけるクマリン−６／組織（ｎｇ／ｇ）の分布を示す棒グラフである。図１Ｂは、クマリン−６−負荷ＰＬＧＡナノ粒子による注射の６時間後のマウスの脾臓、肝臓、肺、心臓、および腎臓におけるクマリン−６／組織（ｎｇ／ｇ）の分布を示す棒グラフである。図１Ｃは、脾臓における細胞サブセット（ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０−、ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０＋、ＣＤ１１ｃ−Ｆ４／８０−、Ｂ２２０ポジティブ、ＣＤ４ポジティブ、およびＣＤ８ポジティブ）内のクマリン−６  ＰＬＧＡナノ粒子ポジティブ細胞％を示す棒グラフである（Ｃ６  ＰＬＧＡナノ粒子処置（クローズドバー）、非蛍光ＰＬＧＡナノ粒子処置（オープンバー））。図１Ｄは、リンパ節中の細胞サブセット（ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０−、ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０＋、ＣＤ１１ｃ−Ｆ４／８０−、Ｂ２２０ポジティブ、ＣＤ４ポジティブ、およびＣＤ８ポジティブ）内のクマリン−６  ＰＬＧＡナノ粒子ポジティブ細胞％を示す棒グラフである（Ｃ６  ＰＬＧＡナノ粒子処置（クローズドバー）、非蛍光ＰＬＧＡナノ粒子処置（オープンバー））。＊は、ＡＮＡＯＶＡ（器官）および両側ｔ−検定によるｐ＜０．０５を示す。
【図１−２】図１Ａは、クマリン−６−負荷ＰＬＧＡナノ粒子による注射の３時間後のマウスの脾臓、肝臓、肺、心臓、および腎臓におけるクマリン−６／組織（ｎｇ／ｇ）の分布を示す棒グラフである。図１Ｂは、クマリン−６−負荷ＰＬＧＡナノ粒子による注射の６時間後のマウスの脾臓、肝臓、肺、心臓、および腎臓におけるクマリン−６／組織（ｎｇ／ｇ）の分布を示す棒グラフである。図１Ｃは、脾臓における細胞サブセット（ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０−、ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０＋、ＣＤ１１ｃ−Ｆ４／８０−、Ｂ２２０ポジティブ、ＣＤ４ポジティブ、およびＣＤ８ポジティブ）内のクマリン−６  ＰＬＧＡナノ粒子ポジティブ細胞％を示す棒グラフである（Ｃ６  ＰＬＧＡナノ粒子処置（クローズドバー）、非蛍光ＰＬＧＡナノ粒子処置（オープンバー））。図１Ｄは、リンパ節中の細胞サブセット（ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０−、ＣＤ１１ｃ＋Ｆ４／８０＋、ＣＤ１１ｃ−Ｆ４／８０−、Ｂ２２０ポジティブ、ＣＤ４ポジティブ、およびＣＤ８ポジティブ）内のクマリン−６  ＰＬＧＡナノ粒子ポジティブ細胞％を示す棒グラフである（Ｃ６  ＰＬＧＡナノ粒子処置（クローズドバー）、非蛍光ＰＬＧＡナノ粒子処置（オープンバー））。＊は、ＡＮＡＯＶＡ（器官）および両側ｔ−検定によるｐ＜０．０５を示す。
【００１９】
【図２】図２は、皮下Ａ３７５Ｃ１５Ｎ（ｐ５３＋ＨＬＡ−Ａ２／ヒトメラノーマ）異種移植片腫瘍確立およびＰＢＳ、ＴＣＲ粒子（ＩＬ−２カプセル化）ナノリポゲル、またはＴＣＲ／ＩＬ−２（可溶性ｐ５３特異的ｓｃＴＣＲ／ＩＬ−２融合タンパク質（Ａｌｔｏｒ  ８０１、Ａｌｔｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍｉｒａｍａｒ、ＦＬ））ナノ粒子による続く処置後の、ある期間にわたる（日数）、ヌードマウスにおける相対腫瘍容積（ｍｍ３）を示す折れ線グラフである。
【００２０】
【図３】図３は、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞の接種のおよそ７日後から始めた、抗ＣＤ４０により表面修飾した（−▲−）もしくは抗ＣＤ４０により表面修飾し、ＩＬ−２を負荷した（−▼−）５μｇのＰＬＧＡナノ粒子またはコントロールとしてのブランク粒子（何もない表面および空）（−■−）または緩衝食塩水（１×ＰＢＳ）（−●−）による処置後の、ある期間にわたる（日数）、マウスにおける腫瘍容積（ｍｍ３）を示す折れ線グラフである。
【００２１】
【図４】図４は、ＰＬＧＡナノ粒子がどのように製造されるかならびにＩＬ−１５（樹状細胞上に発現される）およびＮＫ細胞上に発現される中程度の親和性のＩＬ−２／１５受容体の間の天然に存在する相互作用に基づいてそれがどのようにＮＫ細胞などの標的細胞と相互作用すると考えられるかを含めて、アビジン−ビオチン連結ＩＬ−１５ＲαＦＣ融合タンパク質を表示するＰＬＧＡナノ粒子を示す図である。
【００２２】
【図５−１】図５Ａは、未処置コントロールにおけるおよびＰＬＧＡナノ粒子のみ、ＩＬ−１５のみ、ＩＬ−１５負荷ナノ粒子、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体のみ、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ナノ粒子による処置後のＮＫ増殖（細胞数）を示す棒グラフである。図５Ｂは、濃度の関数として、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体のみおよびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ナノ粒子による処置後のＮＫ増殖（細胞数）を示す折れ線グラフである。図５Ｃは、濃度の関数として、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体のみおよびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ナノ粒子による処置後のＩＦＮ−γ（ｎｇ／ｍｌ）を示す折れ線グラフである。
【図５−２】図５Ａは、未処置コントロールにおけるおよびＰＬＧＡナノ粒子のみ、ＩＬ−１５のみ、ＩＬ−１５負荷ナノ粒子、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体のみ、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ナノ粒子による処置後のＮＫ増殖（細胞数）を示す棒グラフである。図５Ｂは、濃度の関数として、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体のみおよびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ナノ粒子による処置後のＮＫ増殖（細胞数）を示す折れ線グラフである。図５Ｃは、濃度の関数として、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体のみおよびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ナノ粒子による処置後のＩＦＮ−γ（ｎｇ／ｍｌ）を示す折れ線グラフである。
【００２３】
【図６】図６は、ＰＢＳ（−○−）、ナノ粒子のみ（−●−）、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体のみ（−−□−−）、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ＰＬＧＡナノ粒子（−□−）、およびＯｖａをカプセル化しているＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体装飾ナノ粒子（−■−）により処置したＢ１６．Ｏｖａマウス（マウスにメラノーマ株由来を注射、これらの細胞はオバルブミン表面抗原（ＯＶＡ）を有する）のある期間にわたる生存パーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。
【００２４】
【図７】図７は、ＲＧＤペプチドにより装飾し、ＳＢ５０５１２４をカプセル化するＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子の形成および腫瘍細胞に対するその提唱される作用メカニズムを示す図である。
【００２５】
【図８】図８は、下記の実施例６において使用されるマウス腫瘍モデルを例証する図である。Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍細胞（５００，０００細胞）を、０日目にＣ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈に注射し、後に、溶液中のＳＢ５０５１２４およびＲＧＤまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子上に負荷した一方もしくは両方の薬剤をＩＶ注射した。マウスを屠殺し、肺を収集し、腫瘍結節を数えた。
【００２６】
【図９】図９Ａは、図８のアッセイに従って処置したマウスについての、ある期間にわたる腫瘍容積×１０３（ｍｍ３）を示す棒グラフである。コントロール（−○−）、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ（−□−）、ＳＢ５０５１２４負荷ＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ  −Δ−）、ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＮＰ−ＲＧＤ（−▽−））、またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ（−◆−））。図９Ｂは、図８のアッセイに従って処置したマウスのある期間にわたる生存パーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。コントロール（−○−）、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ（−□−）、ＳＢ５０５１２４負荷ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ  −Δ−）、ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＮＰ−ＲＧＤ（−▽−））、またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（−◆−）。図９Ｃは、ナノ粒子（−○−）およびＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ（−■−））の半減期を示す折れ線グラフである。
【００２７】
【図１０−１】図１０Ａは、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ）、ＳＢ５０５１２４負荷ＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ）、ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＮＰ−ＲＧＤ）、またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ）による処置後のマウス腫瘍モデルにおける腫瘍の数を示すドットプロットである。図１０Ｂは、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ  （−○−））またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ  （−■−））により処置したマウスのある期間にわたる生存パーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。図１０Ｃは、ＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ）、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ）、ＳＢ５０５１２４負荷ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ）、またはＴＧＦ−βによる処置後の浸潤細胞の数を示すドットプロットである。エフェクター細胞（ＮＫ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞）および調節性Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋ＣＤ２５＋）細胞をここでアッセイした。図１０Ｄは、ＴＧＦ−β、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ、またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子により処置した細胞の遊走（コントロールのうちの％）を示す棒グラフである。内皮間葉転換（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｔｏ  ｍｅｓｅｎｃｙｈｍａｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ）（ＥＭＴ）で知られている癌細胞（Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞株）を、ＴＧＦ−ｂの存在下でおよびＴＧＦ−ｂ阻害剤を負荷したＰＬＧＡ−ＰＥＧ  ＮＰを追加してここでアッセイし、インテグリンを過剰発現する癌細胞に向けた。
【図１０−２】図１０Ａは、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ）、ＳＢ５０５１２４負荷ＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ）、ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＮＰ−ＲＧＤ）、またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ）による処置後のマウス腫瘍モデルにおける腫瘍の数を示すドットプロットである。図１０Ｂは、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ  （−○−））またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ  （−■−））により処置したマウスのある期間にわたる生存パーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。図１０Ｃは、ＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ−ＲＧＤ）、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ（Ｓｏｌ  ＳＢ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ）、ＳＢ５０５１２４負荷ナノ粒子（ＳＢ／ＮＰ）、またはＴＧＦ−βによる処置後の浸潤細胞の数を示すドットプロットである。エフェクター細胞（ＮＫ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞）および調節性Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋ＣＤ２５＋）細胞をここでアッセイした。図１０Ｄは、ＴＧＦ−β、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤ、またはＳＢ５０５１２４負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子により処置した細胞の遊走（コントロールのうちの％）を示す棒グラフである。内皮間葉転換（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｔｏ  ｍｅｓｅｎｃｙｈｍａｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ）（ＥＭＴ）で知られている癌細胞（Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞株）を、ＴＧＦ−ｂの存在下でおよびＴＧＦ−ｂ阻害剤を負荷したＰＬＧＡ−ＰＥＧ  ＮＰを追加してここでアッセイし、インテグリンを過剰発現する癌細胞に向けた。
【００２８】
【図１１】図１１Ａは、下記の実施例において使用されるマウス腫瘍モデルを例証する図である。Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍細胞を、−１０日目にＣ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈に注射した。０日目に、マウスに、溶液中のロサルタンおよびＲＧＤをまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子上に負荷した一方もしくは両方の薬剤をＩＶ注射した。その後、マウスを屠殺し、腫瘍結節を数えた。図１１Ｂは、図１１Ａのアッセイに従って、可溶性ロサルタンおよびＲＧＤ（Ｓｏｌ  Ｌｏｓ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ（−○−）、ロサルタン負荷ナノ粒子（Ｌｏｓ／ＮＰ  −Δ−）、またはロサルタン負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（Ｌｏｓ／ＮＰ−ＲＧＤ（−▲−））により処置した動物におけるある期間にわたる腫瘍容積×１０３（ｍｍ３）を示す折れ線グラフである。図１１Ｃは、図１１Ａのアッセイに従って、可溶性ロサルタンおよびＲＧＤ（Ｓｏｌ  Ｌｏｓ＋Ｓｏｌ  ＲＧＤ（−○−）、ロサルタン負荷ナノ粒子（Ｌｏｓ／ＮＰ  −Δ−）、またはロサルタン負荷ＲＧＤ装飾ナノ粒子（Ｌｏｓ／ＮＰ−ＲＧＤ（−▲−））により処置したマウスのある期間にわたる生存パーセントを示すＫａｐｌａｎ  Ｍｅｉｅｒ生存曲線である。
【００２９】
【図１２】図１２は、４日間の、様々な濃度（１２５μｇ／ｍｌ、６２．５μｇ／ｍｌ、３１μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ）での、空（オープンバー）またはＭＨＣ−ＩＩ  Ｏｖａ提示複合体を表示するＩＬ−１２カプセル化ＰＬＧＡナノ粒子（クローズドバー）による単離ＣＤ４＋ＯＴ−ＩＩ（Ｏｖａ特異的）細胞の処置後のＩＦＮγ（ｎｇ／ｍｌ）レベルを示す棒グラフである。
【００３０】
【図１３−１】図１３Ａは、可溶性ＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ−１抗原またはＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ抗原によりパルスした（ｐｕｌｓｅ）樹状細胞と比較した、ヒトＰＢＬＣから単離し、ＨＬＡ−Ａ２との関連でメラノーマ抗原ＭＡＲＴ−１を含有するＰＬＧＡナノ粒子により処置したＣＤ８＋Ｔ細胞の増加倍数を示す棒グラフである。それぞれの処置グループの結果を、０、７、１４、２１、および２８日目（左から右に）に示す。図１３Ｂは、可溶性ＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ−１抗原またはＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ抗原によりパルスした樹状細胞と比較した、ＨＬＡ−Ａ２との関連でメラノーマ抗原ＭＡＲＴ−１を含有するナノ粒子による処置後の四量体ポジティブＣＤ８＋Ｔ細胞％を示す棒グラフである。それぞれの処置グループの結果を、０、７、１４、２１、および２８日目（左から右に）に示す。
【図１３−２】図１３Ａは、可溶性ＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ−１抗原またはＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ抗原によりパルスした（ｐｕｌｓｅ）樹状細胞と比較した、ヒトＰＢＬＣから単離し、ＨＬＡ−Ａ２との関連でメラノーマ抗原ＭＡＲＴ−１を含有するＰＬＧＡナノ粒子により処置したＣＤ８＋Ｔ細胞の増加倍数を示す棒グラフである。それぞれの処置グループの結果を、０、７、１４、２１、および２８日目（左から右に）に示す。図１３Ｂは、可溶性ＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ−１抗原またはＩＬ−２（０．１ｎｇ／ｍｌもしくは１０ｎｇ／ｍｌ）プラスＭＡＲＴ抗原によりパルスした樹状細胞と比較した、ＨＬＡ−Ａ２との関連でメラノーマ抗原ＭＡＲＴ−１を含有するナノ粒子による処置後の四量体ポジティブＣＤ８＋Ｔ細胞％を示す棒グラフである。それぞれの処置グループの結果を、０、７、１４、２１、および２８日目（左から右に）に示す。
【００３１】
【図１４】図１４は、マウス転移モデルにおけるＢ１６Ｆ１０マウスメラノーマに対して試験した様々な処置の組み合わせおよびレジメンの効果を示す散布図を示す図である。「ＩＭＭ１」は、ロサルタンおよびＩＬ−２を負荷したナノリポゲルを指し、「ＰＤ１」は、アンタゴニスティック抗ＰＤ−１抗体を指し、「Ｙｅｒｖｏｙ」は、アンタゴニスティック抗ＣＴＬＡ４抗体を指し、「Ｌｏｓ−ＮＬＧ」は、ロサルタンを負荷したナノリポゲルを指し、「ＩＬ−２」は、遊離または可溶性ＩＬ−２を指す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
「ナノリポゲル」（ｎａｎｏｌｉｐｏｇｅｌ）は、本明細書中で使用される場合、単層または二層であり得るリポソームシェル内に、ホスト分子を含むことができるポリマーマトリクスコアを有し、任意選択的にコアとシェルが架橋しているコア−シェルナノ粒子をいう。
【００３３】
「ホスト分子」は、本明細書中で使用される場合、活性薬剤と可逆的に会合して複合体を形成する分子または材料をいう。特定の実施形態では、ホストは、活性薬剤と包接複合体を形成する分子である。包接複合体は、活性薬剤（すなわち、ゲスト）または活性薬剤の一部が別の分子、分子群、または材料（すなわち、ホスト）の空隙内に挿入された場合に形成される。ホストは、小分子、オリゴマー、ポリマー、またはその組み合わせであり得る。例示的なホストには、ポリサッカリド（アミロース、シクロデキストリン、および複数のアルドース環を含む他の環状またはらせん状の化合物（例えば、モノサッカリド（グルコース、フルクトース、およびガラクトースなど）の１，４結合および１，６結合を介して形成された化合物）など）およびジサッカリド（スクロース、マルトース、およびラクトースなど）が含まれる。他の例示的なホスト化合物には、クリプタンド、クリプトファン、キャビタンド、クラウンエーテル、デンドリマー、イオン交換樹脂、カリックスアレーン、バリノマイシン、ナイジェリシン、カテナン、ポリカテナン、カルセランド、ククルビツリル、およびスフェランドが含まれる。
【００３４】
「小分子」は、本明細書中で使用される場合、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、より好ましくは約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、最も好ましくは約１２００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する分子をいう。
【００３５】
「ヒドロゲル」は、本明細書中で使用される場合、共有結合架橋または非共有結合架橋によって共に保持された高分子の三次元網目構造から形成された水膨潤性ポリマーマトリクスをいう。これは相当量（重量）の水を吸収してゲルを形成することができる。
【００３６】
「ナノ粒子」は、本明細書中で使用される場合、一般に、直径が約１０ｎｍから約１ミクロンまで（未満）、好ましくは１００ｎｍ〜約１ミクロンの粒子をいう。粒子は任意の形状を有し得る。球状のナノ粒子を、一般に、「ナノスフェア」という。
【００３７】
「分子量」は、本明細書中で使用される場合、一般に、特別の規定がない限り、バルクのポリマーの相対平均鎖長をいう。実際には、分子量を、種々の方法（ゲル浸透クロマトグラフィ（ＧＰＣ）または細管式粘度測定（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｖｉｓｃｏｍｅｔｒｙ）が含まれる）を使用して推定または特徴づけることができる。ＧＰＣ分子量を、数平均分子量（Ｍｎ）と対照的な重量平均分子量（Ｍｗ）として報告する。細管式粘度測定により、特定の一連の濃度、温度、および溶媒条件を使用して希釈ポリマー溶液から決定した固有粘度として分子量が推定される。
【００３８】
「平均粒径」は、本明細書中で使用される場合、一般に、粒子集団中の粒子の統計的平均粒径（直径）をいう。本質的に球状の粒子の直径は、物理的直径または流体力学直径をいうことができる。非球状粒子の直径は、優先的に、流体力学直径をいうことができる。本明細書中で使用される場合、非球状粒子の直径は、粒子表面上の２点間の最長の直線距離をいうことができる。平均粒径を、当該分野で公知の方法（動的光散乱など）を使用して測定することができる。
【００３９】
「単分散」および「均一サイズ分布」は、本明細書中で互換的に使用され、全粒子が同一またはほぼ同一のサイズであるナノ粒子または微粒子の集団を説明する。本明細書中で使用される場合、単分散分布は、分布の９０％がメジアン粒径の１５％以内、より好ましくはメジアン粒径の１０％以内、最も好ましくはメジアン粒径の５％以内にある粒子分布をいう。
【００４０】
「ＰＤ−１アンタゴニスト」は、本明細書中で使用される場合、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、ＤＣ、およびマクロファージの表面上に見つけられるＰＤ−１によって媒介される阻害性シグナル伝達を減弱する任意の分子を意味する。そのようなアンタゴニストは、Ｔ細胞上のＰＤ−１分子によって生成されるいかなる阻害性シグナルも破壊する分子を含む。したがって、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１受容体シグナル伝達経路を通しての阻害性シグナル伝達を阻害する、低下させる、停止する、他の場合には低下させる分子とすることができる。そのような減少が生じてもよく、ここで、（ｉ）ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤ−１受容体に結合し、シグナル伝達を引き起こすことなく、阻害性シグナル伝達を低下させるか、もしくはブロックするか；（ｉｉ）ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤ−１受容体のリガンド（例えば、アゴニスト）に結合し、受容体へのリガンドの結合を妨げるか（例えば、前記アゴニストはＢ７−Ｈ１である）；（ｉｉｉ）ＰＤ−１アンタゴニストが、阻害されなかった場合、ＰＤ−１阻害性シグナル伝達を刺激するか、もしくは他の場合には促進する結果をもたらす調節鎖の一部である分子に結合するか、もしくは他の場合にはその活性を阻害するか；または（ｉｖ）ＰＤ−１アンタゴニストが、とりわけ、ＰＤ−１をコードする１つもしくはそれを超える遺伝子または１つもしくはそれを超えるその自然のリガンドの発現を低下させるか、もしくは停止することによって、ＰＤ−１受容体の発現もしくはそのリガンドの発現を阻害する。したがって、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１阻害性シグナル伝達の減少に影響を与える分子とすることができ、それによって、１つまたはそれを超える抗原に対するＴ細胞応答を増加させる。
【００４１】
「ＣＴＬＡ４アンタゴニスト」は、本明細書中で使用される場合、Ｔ細胞反応のＣＴＬＡ４媒介性の阻害を低下させる化合物を意味する。例えば、Ｔ細胞において、ＣＴＬＡ４は、Ｂ７リガンド（Ｂ７−１およびＢ７−２など）の結合に際して阻害性の刺激を伝える。ＣＴＬＡ４アンタゴニストは、活性化Ｔ細胞上のＣＴＬＡ４への前記リガンドの結合を破壊するものである。
【００４２】
ＩＩ．ナノ粒子組成物
それぞれが送達ビヒクルの中に負荷された、その表面に結合された、および／またはその内に密封された１つまたはそれを超える活性薬剤を含むナノ粒子組成物が、開示される。ナノ粒子組成物は、溶液中で標的細胞に活性薬剤（複数可）を送達することにまさって多くの利点を与える。例えば、ナノ粒子組成物は、ナノ粒子上のまたは中の１つまたはそれを超える局所的な濃度の活性薬剤を提示し、ナノ粒子が標的細胞に遭遇した場合に、結合活性の増加に至る。ナノ粒子組成物はまた、数日間継続することができる調整可能な放出反応速度を有する、活性薬剤の貯蔵物として果たすこともでき、薬剤（複数可）の有効全身半減期および効能を延ばす。
【００４３】
典型的に、２つまたはそれを超える活性薬剤が、送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される。２つまたはそれを超える活性薬剤のそれぞれの相対濃度および送達ビヒクル上または内のそれらの配置は、標的細胞が受けるであろう好ましい投薬量および提示に適応させるために、組成物の製造の間に操作することができる。同じ送達ビヒクルの中へのまたは上への２つまたはそれを超える活性薬剤の負荷は、２つまたはそれを超える活性薬剤が標的細胞に同時にまたは他の場合には標的細胞に所定の順序で提示されることを可能にする。
【００４４】
Ａ．送達ビヒクル
ナノ粒子送達ビヒクルは、例えば、ナノリポゲル、ポリマー粒子、シリカ粒子、リポソーム、または多層小胞とすることができる。最も好ましい実施形態では、粒子送達ビヒクルが、ナノスケール組成物であり、これは、例えば、１０ｎｍ〜約１ミクロンであるが、約１ミクロンを含まない。しかし、いくつかの実施形態では、またいくつかの使用については、粒子は、より小さいものまたはより大きいものとすることができる（例えば、微粒子など）ことが十分に理解される。本明細書において開示される組成物は、全体を通して、ナノ粒子組成物のことを指すが、いくつかの実施形態では、またいくつかの使用については、粒子組成物が、ナノ粒子よりも多少大きくなり得ることが十分に理解される。例えば、粒子組成物は、約１ミクロン〜約１０００ミクロンとすることができる。そのような組成物は、微小粒子組成物と呼ぶことができる。
【００４５】
癌を処置するための好ましい実施形態では、粒子が、腫瘍微小環境に到達するのに適したサイズであることが望ましい。特定の実施形態において、粒子が、増強された浸透性および滞留（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）（ＥＰＲ）の効果によって、腫瘍微小環境および／または腫瘍細胞に到達するのに適したサイズをしている。ＥＰＲは、あるサイズの分子（例えば、本明細書において議論される粒子組成物）が、それらが正常組織において蓄積するよりもずっと多く、腫瘍組織において蓄積する傾向がある特性を指す。したがって、癌の処置のための組成物では、送達ビヒクルは、好ましくは、約２５ｎｍおよび約５００ｎｍを含めて約２５ｎｍ〜約５００ｎｍの範囲にある、より好ましくは、約５０ｎｍおよび約３００ｎｍを含めて約５０ｎｍ〜約３００ｎｍの範囲にある。
【００４６】
１．ナノリポゲル
ナノリポゲルは、活性薬剤の持続送達のためのリポソームおよびポリマーベースの粒子の両方の利点を組み合わせたコア−シェルナノ粒子である。いくつかの実施形態では、ナノリポゲルが、送達ビヒクルとしてポリマーナノ粒子よりも好まれてもよい。一般に、ナノリポゲルは、生物製剤（例えば、タンパク質、ペプチド、抗体など）と組み合わせて小分子疎水性薬物を共負荷する、疎水性および親水性薬物、単一または組み合わせのサイトカイン、抗体、成長または抑制性タンパク質／ペプチド因子、または細胞全体、その分泌産物、もしくは細胞溶解物などの生物製剤の組み合わせを共負荷するために、ならびに／または粒子の内部移行および活性薬剤（複数可）の細胞内送達が所望される適用のために、選択されてもよい。これらの実施形態および適用のいくつかでは、ナノリポゲルが、従来のナノ粒子組成物と比較して、高分子および分子の組み合わせについて、負荷効率の増加、徐放性の増加、および治療的な効能の改善を示すことができる。
【００４７】
以下でより詳細に考察するように、典型的には、ナノリポゲルの外側シェルは、カーゴを保護し、かつ、生体適合性ならびにターゲティング分子での機能付与のための表面を提供する。外側シェルは、所望するまで（例えば、環境条件または刺激に応答して単分散性の再生可能な粒子集団を作製し、所望の細胞型への内在化を媒介するまで）成分が曝露されないように成分をカプセル化する。デンドリマーまたは他のポリマーであり得る内部コアは、その外側シェルとは個別且つ付加的な機能性を有する。例えば、内側シェルは、薬物、ワクチン、または造影薬を二次的に堆積させ、異なる生理化学的特性を有する成分の粒子への負荷を増大させ、粒子から内容物を調整可能に放出させ、エンドソーム破壊によってＤＮＡ／ＲＮＡ、薬物、および／またはタンパク質のサイトゾルでの利用可能性を増大させ、これらすべてによって薬物効果、抗原提示、およびトランスフェクション／サイレンシングが増強される。
【００４８】
ナノリポゲルは、１種またはそれより多くのホスト分子を含むポリマーマトリクスコアを有する。ポリマーマトリクスは、好ましくは、１種またはそれより多くのポリ（アルキレンオキシド）セグメント（ポリエチレングリコールなど）および１種またはそれより多くの脂肪族ポリエステルセグメント（ポリ乳酸など）を含むヒドロゲル（架橋ブロックコポリマーなど）である。１種またはそれより多くのホスト分子（シクロデキストリン、デンドリマー、またはイオン交換樹脂など）は、ポリマーマトリクス内に分散しているか、ポリマーマトリクスに共有結合している。ヒドロゲルコアを、リポソームシェルで包囲する。
【００４９】
ナノリポゲルを、その後に制御様式で放出することができる種々の活性薬剤を組み込むように構築することができる。活性薬剤を、ヒドロゲルマトリクス内に分散させるか、１種またはそれより多くのホスト分子と会合させるか、リポソームシェル内に分散させるか、リポソームシェルに共有結合させるか、その組み合わせを行うことができる。活性薬剤を、ナノリポゲル内のこれらの各局所に選択的に組み込むことができる。さらに、これらの各局所からの活性薬剤の放出速度を、独立して調整することができる。これらの各局所が異なる特性（サイズおよび疎水性／親水性が含まれる）を保有するので、これらの各局所に独立して組み込まれた化学的実体はサイズおよび組成が劇的に異なり得る。例えば、ナノリポゲルに、ポリマーマトリクス内に分散させた１種またはそれより多くのタンパク質およびホスト分子と会合した小分子疎水性薬物を負荷することができる。
【００５０】
例えば、一定の実施形態では、ナノリポゲルコアは２つ以上の活性薬剤を含む。好ましい実施形態では、ナノリポゲルコアは、好ましくは１種またはそれより多くの適切なホスト分子と会合した小分子疎水性活性薬剤およびポリマーマトリクス内に分散された親水性活性薬剤の両方を含む。特定の実施形態では、親水性活性薬剤は、タンパク質（治療サイトカインなど）である。ホスト分子と会合した疎水性活性薬剤およびポリマーマトリクス内に分散された親水性分子の組み込みにより、２つ以上の活性薬剤（多様な生理化学的特徴（溶解度、疎水性／親水性、分子量、およびその組み合わせなど）を有する２つ以上の活性薬剤が含まれる）を制御放出させることができる。
【００５１】
好ましい実施形態では、ホスト分子が、化学療法薬などの低分子量化合物を送達するために使用され、ホスト分子が、低分子量化合物およびサイトカインなどのより大きな親水性化合物の放出を遅らせ、その結果、両方の分子の放出がほぼ同じ期間生じる。
【００５２】
このような方法で、ナノリポゲルは、化学的組成および分子量が非常に異なる薬剤を同時徐放することができる。非限定的な例では、ナノリポゲルに、ポリマーマトリクス内に分散させたホスト分子に会合した疎水性の小分子抗原および免疫アジュバント（免疫賦活性タンパク質など）の両方を負荷することができる。これらのナノリポゲルは、免疫応答を至適化するためにアジュバントと共に抗原を徐放することができる。
【００５３】
特定の例では、免疫賦活性タンパク質であるインターロイキン−２（ＩＬ−２）および低分子量有機分子である２−（５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−ｔｅｒｔ−ブチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−６−メチルピリジン塩酸塩（トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）のインヒビター）のナノリポゲルによって同時持続送達が達成される。この構築物は、マウス系において、単独の薬剤または２種の薬剤の組み合わせの溶液での投与によって達成可能な抗腫瘍応答よりもはるかに優れた抗腫瘍応答が得られる。さらに、ナノリポゲルは、好ましくは、ナノリポゲル内にカプセル化させた１種またはそれより多くの活性薬剤の生体内分布を調整することができる。
【００５４】
ナノリポゲルは、典型的には、球状であり、平均粒径は約５０ｎｍと約１０００ｎｍとの間、より好ましくは約７５ｎｍと約３００ｎｍとの間、最も好ましくは約９０ｎｍと約２００ｎｍとの間である。一定の実施形態では、ナノリポゲルの平均粒径は、約１００ｎｍと約１４０ｎｍとの間である。粒子は、非球状であり得る。
【００５５】
ナノリポゲルのリポソームシェル中に存在する脂質の性質に依存して、陽性、陰性、または中性付近の表面電荷を有するナノリポゲルを調製することができる。一定の実施形態では、ナノリポゲルは中性付近の表面電荷を保有する。一定の実施形態では、ナノリポゲルのζ電位は、約１０ｍＶと約−１０ｍＶとの間、より好ましくは約５ｍＶと約−５ｍＶとの間、より好ましくは約３ｍＶと約−３ｍＶとの間、最も好ましくは約２ｍＶと約−２ｍＶとの間である。
【００５６】
タンパク質などの疎水性活性薬剤をナノリポゲル表面に共有結合的に接続することができるのに対して、親水性活性薬剤をナノリポゲル表面に共有結合的に接続することができるかリポソームシェル内に分散させることができる。一定の実施形態では、リポソームシェルは１種またはそれより多くのＰＥＧ化脂質を含む。これらの場合、１種またはそれより多くの活性薬剤を、リポソームシェル表面上に存在する１種またはそれより多くのＰＥＧ鎖の末端に結合体化することができる。
【００５７】
別の実施形態では、脂質が、アビジン成分を含むように修飾され、ビオチン化されたターゲティング成分、検出可能な標識、または他の活性薬剤が、アビジン成分にカップリングされるのを、そのように所望される場合に可能にする。
【００５８】
特定の実施形態では、１種またはそれより多くの活性薬剤を、所望の生理学的局所で活性薬剤の放出を誘発するために外部の化学的刺激または物理的刺激（周囲ｐＨの変化など）に反応して切断する連結基を介してナノリポゲル表面に共有結合的に接続する。
【００５９】
ａ．コア
ナノリポゲルコアは、ポリマーマトリクスから形成される。このマトリクスは、下記でより詳細に議論するとおりの１種またはそれより多くのホスト分子を含むことができる。ナノリポゲルコアは、１種またはそれより多くの活性薬剤をさらに含むことができる。活性薬剤を、ホスト分子と複合体化するか、ポリマーマトリクスを用いて分散させるか、それらの組み合わせを行うことができる。
【００６０】
ナノリポゲルのポリマーマトリクスを、１種またはそれより多くのポリマーまたはコポリマーから形成することができる。ポリマーマトリクスの組成および形態を変動させることにより、種々の制御放出特徴を達成することができ、それにより、中程度の一定用量の１種またはそれより多くの活性薬剤を長期間にわたって送達可能である。
【００６１】
ポリマーマトリクスを非生分解性ポリマーまたは生分解性ポリマーから形成することができるが、しかし、好ましくは、ポリマーマトリクスは生分解性である。ポリマーマトリクスを、１日〜１年間、より好ましくは７日〜２６週間、より好ましくは７日〜２０週間、最も好ましくは７日〜１６週間の範囲の期間にわたって分解されるように選択することができる。
【００６２】
一般に、天然ポリマーを使用することができるが、合成ポリマーが好ましい。代表的なポリマーには、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えば、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリヒドロキシアルカノアート（ポリ３−ヒドロキシブチラートまたはポリ４−ヒドロキシブチラートなど）；ポリカプロラクトン；ポリ（オルトエステル）；ポリ酸無水物；ポリ（ホスファゼン）；ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）；ポリ（グリコリド−ｃｏ−カプロラクトン）；ポリカーボネート（チロシンポリカーボネートなど）；ポリアミド（合成および天然のポリアミドが含まれる）、ポリペプチド、およびポリ（アミノ酸）；ポリエステルアミド；他の生体適合性ポリエステル；ポリ（ジオキサノン）；ポリ（アルキレンアルキラート）；親水性ポリエーテル；ポリウレタン；ポリエーテルエステル；ポリアセタール；ポリシアノアクリラート；ポリシロキサン；ポリ（オキシエチレン）／ポリ（オキシプロピレン）コポリマー；ポリケタール；ポリホスファート；ポリヒドロキシバレラート；ポリアルキレンオキサラート；ポリアルキレンスクシナート；ポリ（マレイン酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン；ポリ（アルキレンオキシド）（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）；誘導体化セルロース（アルキルセルロース（例えば、メチルセルロース）、ヒドロキシアルキルセルロース（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロースなど）、アクリル酸、メタクリル酸のポリマーまたはそのコポリマーもしくは誘導体（エステル、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（エチルメタクリラート）、ポリ（ブチルメタクリラート）、ポリ（イソブチルメタクリラート）、ポリ（ヘキシルメタクリラート）、ポリ（イソデシルメタクリラート）、ポリ（ラウリルメタクリラート）、ポリ（フェニルメタクリラート）、ポリ（メチルアクリラート）、ポリ（イソプロピルアクリラート）、ポリ（イソブチルアクリラート）、およびポリ（オクタデシルアクリラート）（本明細書中で集合的に「ポリアクリル酸）と呼ばれる）が含まれる）、ならびにその誘導体、コポリマー、およびブレンドが含まれる。
【００６３】
本明細書中で使用される場合、「誘導体」には、化学基の置換、付加、および当業者によって日常的に作製される上記のポリマー骨格への他の修飾を有するポリマーが含まれる。天然ポリマー（タンパク質（アルブミン、コラーゲン、ゼラチン、プロラミン（ゼインなど）など）およびポリサッカリド（アルギナートおよびペクチンなど）が含まれる）を、ポリマーマトリクスに組み込むこともできる。種々のポリマーを使用してポリマーマトリクスを形成することができるが、一般に、得られたポリマーマトリクスはヒドロゲルであろう。一定の例では、ポリマーマトリクスが天然ポリマーを含む場合、天然ポリマーは、加水分解によって分解されるバイオポリマー（ポリヒドロキシアルカノアートなど）である。
【００６４】
好ましい実施形態では、ポリマーマトリクスは、１種またはそれより多くの架橋性ポリマーを含む。好ましくは、架橋性ポリマーは、ナノリポゲル形成後にポリマーマトリクスを架橋可能な１種またはそれより多くの光重合性基を含む。適切な光重合性基の例には、ビニル基、アクリラート基、メタクリラート基、およびアクリルアミド基が含まれる。存在する場合、光重合性基を、架橋性ポリマーの骨格内、架橋性ポリマーの側鎖のうちの１つ以上内、架橋性ポリマーの末端の１つ以上で、またはその組み合わせに組み込むことができる。
【００６５】
ポリマーマトリクスを、特定の適用に最適な特性（薬物放出速度が含まれる）を有するナノリポゲルを形成するための種々の分子量を有するポリマーから形成することができる。一般に、ポリマーマトリクスを構成するポリマーの平均分子量は約５００Ｄａと５０ｋＤａとの間の範囲にわたる。ポリマーマトリクスを非架橋性ポリマーから形成する場合、ポリマーの平均分子量は、典型的には、約１ｋＤａと約５０ｋＤａとの間、より好ましくは約１ｋＤａと約７０ｋＤａとの間、最も好ましくは約５ｋＤａと約５０ｋＤａとの間の範囲である。ポリマーマトリクスを架橋性ポリマーから形成する場合、ポリマーは、典型的には、約５００Ｄａと約２５ｋＤａとの間、より好ましくは約１ｋＤａと約１０ｋＤａとの間、最も好ましくは約３ｋＤａと約６ｋＤａとの間の範囲のより低い平均分子量を有する。特定の実施形態では、ポリマーマトリクスを、平均分子量が約５ｋＤａの架橋性ポリマーから形成する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、ポリマーマトリクスを、ポリ（アルキレンオキシド）ポリマーまたは１種またはそれより多くのポリ（アルキレンオキシド）セグメントを含むブロックコポリマーから形成する。ポリ（アルキレンオキシド）ポリマーまたはポリ（アルキレンオキシド）ポリマーセグメントは、８と５００との間の反復単位、より好ましくは４０と３００との間の反復単位、最も好ましくは５０と１５０との間の反復単位を含むことができる。適切なポリ（アルキレンオキシド）には、ポリエチレングリコール（ポリエチレンオキシドまたはＰＥＧとも呼ばれる）、ポリプロピレン１，２−グリコール、ポリ（プロピレンオキシド）、ポリプロピレン１，３−グリコール、およびそのコポリマーが含まれる。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ポリマーマトリクスを、脂肪族ポリエステルまたは１種またはそれより多くの脂肪族ポリエステルセグメントを含むブロックコポリマーから形成する。好ましくは、ポリエステルまたはポリエステルセグメントは、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）ＰＧＡ、またはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）である。
【００６８】
好ましい実施形態では、ポリマーマトリクスを、１種またはそれより多くのポリ（アルキレンオキシド）セグメント、１種またはそれより多くの脂肪族ポリエステルセグメント、および任意選択的な１種またはそれより多くの光重合性基を含むブロックコポリマーから形成する。これらの場合、１種またはそれより多くのポリ（アルキレンオキシド）セグメントは、得られたポリマーマトリクスが適切なヒドロゲルを形成するようにポリマーに必要な親水性を付与する一方で、ポリエステルセグメントは調整可能な疎水性／親水性および／または所望のｉｎ  ｖｉｖｏ分解特徴を有するポリマーマトリクスを提供する。
【００６９】
ポリエステルセグメントの分解速度、しばしば対応する薬物放出速度を、数日（純粋なＰＧＡの場合）から数ヶ月（純粋なＰＬＡの場合）まで変化させることができ、ポリエステルセグメント中のＰＬＡのＰＧＡに対する比を変化させることによって容易に操作することができる。さらに、ポリ（アルキレンオキシド）（ＰＥＧなど）および脂肪族ポリエステル（ＰＧＡ、ＰＬＡ、およびＰＬＧＡなど）はヒトでの使用の安全性が確立されており、これらの材料はヒトへの臨床適用（薬物送達系が含まれる）において３０年を超えて使用されている。
【００７０】
一定の実施形態では、ポリマーマトリクスを、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメント、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメントのいずれかの末端に結合した隣接脂肪族ポリエステルセグメント、および１種またはそれより多くの光重合性基を含むトリブロックコポリマーから形成する。好ましくは、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメントはＰＥＧであり、脂肪族ポリエステルセグメントは、ＰＧＡ、ＰＬＡ、またはＰＬＧＡである。
【００７１】
一般に、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメントの平均分子量は、隣接ポリエステルセグメントの平均分子量より高い。一定の実施形態では、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメントの平均分子量は、１つの隣接ポリエステルセグメントの平均分子量の少なくとも３倍、より好ましくは１つの隣接ポリエステルセグメントの平均分子量の少なくとも５倍、最も好ましくは１つの隣接ポリエステルセグメントの平均分子量の少なくとも１０倍である。
【００７２】
いくつかの場合、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメントの平均分子量は、約５００Ｄａと約１０，０００Ｄａとの間、より好ましくは約１，０００Ｄａと約７，０００Ｄａとの間、最も好ましくは約２，５００Ｄａと約５，０００Ｄａとの間の範囲である。特定の実施形態では、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメントの平均分子量は約４，０００Ｄａである。典型的には、各隣接ポリエステルセグメントの平均分子量は、約１００Ｄａと約３，５００Ｄａとの間、より好ましくは約１００Ｄａと約１，０００Ｄａとの間、最も好ましくは約１００Ｄａと約５００Ｄａとの間の範囲である。
【００７３】
１つの好ましい実施形態では、ポリマーマトリクスを、以下：
【化１】
2020073617.tif 000002
に示すトリブロックコポリマーから形成し、式中、ｍおよびｎは、それぞれ独立して、１と５００との間、より好ましくは１０と１５０との間の整数である。
【００７４】
好ましい天然ポリマーの例には、タンパク質（アルブミン、コラーゲン、ゼラチン、およびプロラミン（例えば、ゼイン）など）およびポリサッカリド（アルギナート、セルロース誘導体、およびポリヒドロキシアルカノアート（例えば、ポリヒドロキシブチラート）など）が含まれる。微粒子のｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共重合したポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）などのポリマーの使用によって生成中に調整することができる。ＰＥＧを外面上に曝露する場合、ＰＥＧは、ＰＥＧの親水性によってこれらの材料が循環する時間を増大させることができる。
【００７５】
好ましい非生分解性ポリマーの例には、エチレンビニルアセタート、ポリ（メト）アクリル酸、ポリアミド、コポリマー、およびその混合物が含まれる。
【００７６】
マトリクスを、伝統的なイオン性ゲル化技術によって生成されたゲル型ポリマー（アルギナートなど）から作製することもできる。ポリマーを最初に水溶液に溶解し、硫酸バリウムまたはいくつかの生物活性剤と混合し、次いで、いくつかの場合に液滴を分離するために窒素ガス流を使用する微小滴形成デバイスによって押し出す。ゆっくり撹拌させた（およそ１００〜１７０ＲＰＭ）イオン性硬化浴を、形成された微小滴を捕捉するために押し出しデバイス下に配置する。微粒子を、十分な時間でゲル化させるために浴中で２０〜３０分間インキュベートする。微粒子のサイズを、種々のサイズの押出機の使用または窒素ガスの流量またはポリマー溶液の流量のいずれかの変化によって制御する。キトサン微粒子を、ポリマーの酸性溶液への溶解およびトリホスファートとの架橋によって調製することができる。カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）微粒子を、酸溶液へのポリマーの溶解および鉛イオンでの微粒子の沈殿によって調製することができる。負に荷電したポリマー（例えば、アルギナート、ＣＭＣ）の場合、異なる分子量の正に荷電したリガンド（例えば、ポリリジン、ポリエチレンイミン）を、イオン結合させることができる。
【００７７】
おそらく、脂肪族ポリエステル、特に、疎水性ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、より親水性のポリ（グリコール酸）ＰＧＡおよびそのコポリマーであるポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）が最も広く使用されている。これらのポリマーの分解速度、しばしば対応する薬物放出速度を、数日（ＰＧＡ）から数ヶ月（ＰＬＡ）まで変化させることができ、ＰＬＡのＰＧＡに対する比を変化させることによって容易に操作される。第２に、ＰＬＧＡならびにそのホモポリマーＰＧＡおよびＰＬＡの生理学的適合性は、ヒトでの使用の安全性が確立されており、これらの材料は種々のヒトへの臨床適用（薬物送達系が含まれる）において３０年を超える歴史がある。ＰＬＧＡナノ粒子を、受動的または能動的なターゲティングのいずれかによって薬物の薬物動態学および標的組織への生体内分布を改善する種々の方法で処方することができる。微粒子を、カプセル化または結合された分子が数日から数週間にわたって放出されるようにデザインする。放出持続時間に影響を及ぼす要因には、周辺媒質のｐＨ（ＰＬＧＡの酸触媒加水分解に起因するｐＨ５およびそれ未満で放出速度がより早い）およびポリマー組成が含まれる。脂肪族ポリエステルは疎水性が異なり、それによって分解速度に影響を及ぼす。特に、疎水性ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、より親水性の高いポリ（グリコール酸）ＰＧＡ、およびそのコポリマーであるポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）は、種々の放出速度を有する。これらのポリマーの分解速度、しばしば対応する薬物放出速度を、数日（ＰＧＡ）から数ヶ月（ＰＬＡ）まで変化させることができ、この速度はＰＬＡのＰＧＡに対する比を変化させることによって容易に操作される。
【００７８】
ｂ．シェル成分
ナノリポゲルは、１種またはそれより多くの同心円状の脂質単層または脂質二重層から構成されるリポソームシェルを含む。シェルは、１種またはそれより多くの活性薬剤、ターゲティング分子、またはその組み合わせをさらに含むことができる。
【００７９】
ナノリポゲルは、１種またはそれより多くの同心円状の脂質単層または脂質二重層から構成されるリポソームシェルを含む。リポソームシェルの組成を、ｉｎ  ｖｉｖｏでの１種またはそれより多くの活性薬剤の放出速度に影響を及ぼすように変化させることができる。脂質を、必要に応じて共有結合的に架橋させてｉｎ  ｖｉｖｏ薬物放出を変更することもできる。
【００８０】
脂質シェルを、単一の脂質二重層（すなわち、シェルは単層であり得る）またはいくつかの同心円状の脂質二重層（すなわち、シェルは多層であり得る）から形成することができる。脂質シェルを単一の脂質から形成することができるが、好ましい実施形態では、脂質シェルを、１つを超える脂質の組み合わせから形成する。脂質は、生理学的ｐＨで中性、アニオン性、またはカチオン性であり得る。
【００８１】
適切な中性およびアニオン性の脂質には、ステロールおよび脂質（コレステロール、リン脂質、リゾ脂質、リゾリン脂質、およびスフィンゴ脂質など）が含まれる。中性およびアニオン性の脂質には、ホスファチジルコリン（ＰＣ）（卵ＰＣ、ダイズＰＣなど）（１，２−ジアシル−グリセロ−３−ホスホコリンが含まれる）；ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）；糖脂質；スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリンなど）；スフィンゴ糖脂質（１−セラミジルグルコシドとしても公知）（セラミドガラクトピラノシド、ガングリオシド、およびセレブロシドなど）；脂肪酸、カルボン酸基を含むステロール（コレステロールなど）、またはその誘導体；および１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンまたは１，２−ジオレオリルグリセリルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジヘキサデシルホスホエタノールアミン（ＤＨＰＥ）、１，２−ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、および１，２−ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）が含まれる）が含まれるが、これらに限定されない。これらの脂質の天然の誘導体（例えば、組織由来のＬ−α−ホスファチジル：卵黄、心臓、脳、肝臓、ダイズ）および／または合成の誘導体（例えば、飽和および不飽和の１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１−アシル−２−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、１，２−ジヘプタノイル−ＳＮ−グリセロ−３−ホスホコリン）も適切である。
【００８２】
適切なカチオン性脂質には、例えば、メチル硫酸塩として、ＴＡＰ脂質とも呼ばれるＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム塩が含まれる。適切なＴＡＰ脂質には、ＤＯＴＡＰ（ジオレオイル−）、ＤＭＴＡＰ（ジミリストイル−）、ＤＰＴＡＰ（ジパルミトイル−）、およびＤＳＴＡＰ（ジステアロイル−）が含まれるが、これらに限定されない。他の適切なカチオン性脂質には、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、１，２−ジアシルオキシ−３−トリメチルアンモニウムプロパン、Ｎ−［１−（２，３−ジオロイルオキシ）プロピル］−Ν，Ν−ジメチルアミン（ＤＯＤＡＰ）、１，２−ジアシルオキシ−３−ジメチルアンモニウムプロパン、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジアルキルオキシ−３−ジメチルアンモニウムプロパン、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、３−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノ−エタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）；２，３−ジオレオイルオキシ−Ｎ−（２−（スペルミンカルボキサミド）−エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロ−アセタート（ＤＯＳＰＡ）、β−アラニルコレステロール、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）、ジＣ１４−アミジン、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ’−テトラデシル−３−テトラデシルアミノ−プロピオンアミジン、Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセチル）ジドデシル−Ｄ−グルタマートクロリド（ＴＭＡＧ）、ジテトラデカノイル−Ｎ−（トリメチルアンモニオ−アセチル）ジエタノールアミンクロリド、１，３−ジオレオイルオキシ−２−（６−カルボキシ−スペルミル）−プロピルアミド（ＤＯＳＰＥＲ）、およびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−、Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシルエチル）−２，３−ジオレオイルオキシ−１，４−ブタンジアンモニウムヨージド、１−［２−（アシルオキシ）エチル］２−アルキル（アルケニル）−３−（２−ヒドロキシエチル）−イミダゾリニウムクロリド誘導体（１−［２−（９（Ｚ）−オクタデセノイルオキシ）エチル］−２−（８（Ｚ）−ヘプタデセニル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）および１−［２−（ヘキサデカノイルオキシ）エチル］−２−ペンタデシル−３−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＰＴＩＭ）など）、および第四級アミン上にヒドロキシアルキル部分を含む２，３−ジアルキルオキシプロピル第四級アンモニウム誘導体（例えば、１，２−ジオレオイル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩ）、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジメチル（ｄｉｍｅｔｙｌ）−ヒドロキシプロピルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ−ＨＰ）、１，２−ジオレイル−オキシ−プロピル−３−ジメチル−ヒドロキシブチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ−ＨＢ）、１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−ジ���チル−ヒドロキシペンチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ−Ｈｐｅ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシルエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、１，２−ジパルミチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＰＲＩＥ）、および１，２−ジステリルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＳＲＩＥ））が含まれる。
【００８３】
他の適切な脂質には、上記の中性、アニオン性、およびカチオン性の脂質のＰＥＧ化誘導体が含まれる。１種またはそれより多くのＰＥＧ化脂質誘導体の脂質シェルへの組み込みにより、その表面上にポリエチレングリコール鎖を示すナノリポゲルを得ることができる。得られたナノリポゲルは、その表面上にＰＥＧ鎖を欠くナノリポゲルと比較してｉｎ
ｖｉｖｏでの安定性および循環時間が増大し得る。適切なＰＥＧ化脂質の例には、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ｅｔｈａｎｌａｍｉｎｅ）−ポリエチレングリコール（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）（ＤＳＰＥ  ＰＥＧ（分子量２０００）およびＤＳＰＥ
ＰＥＧ（分子量５０００）が含まれる）、ジパルミトイル−グリセロ−スクシナートポリエチレングリコール（ＤＰＧＳ−ＰＥＧ）、ステアリル−ポリエチレングリコール、およびコレステリル−ポリエチレングリコールが含まれる。
【００８４】
好ましい実施形態では、脂質シェルを、１つを超える脂質の組み合わせから形成する。一定の実施形態では、脂質シェルを、少なくとも３つの脂質の混合物から形成する。特定の実施形態では、脂質シェルを、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）、およびコレステロールの混合物から形成する。
【００８５】
いくつかの実施形態では、脂質シェルを、１種またはそれより多くのＰＥＧ化リン脂質および１種またはそれより多くのさらなる脂質またはステロールの混合物から形成する。一定の例では、１種またはそれより多くのＰＥＧ化脂質の１種またはそれより多くのさらなる脂質またはステロールに対するモル比は、約１：１〜約１：６、より好ましくは約１：２〜約１：６、最も好ましくは約１：３〜約１：５の範囲である。特定の実施形態では、１種またはそれより多くのＰＥＧ化脂質の１種またはそれより多くのさらなる脂質またはステロールに対するモル比は約１：４である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、脂質シェルを、１種またはそれより多くのリン脂質および１種またはそれより多くのさらなる脂質またはステロールの混合物から形成する。一定の例では、１種またはそれより多くのリン脂質の１種またはそれより多くのさらなる脂質またはステロールに対するモル比は、約１：１〜約６：１、より好ましくは約２：１〜約６：１、最も好ましくは約３：１〜約５：１の範囲である。特定の実施形態では、１種またはそれより多くのリン脂質の１種またはそれより多くのさらなる脂質またはステロールに対するモル比は約４：１である。
【００８７】
好ましい実施形態では、脂質シェルを、リン脂質（ホスファチジルコリン（ＰＣ）など）、ＰＥＧ化リン脂質（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）など）、およびコレステロールの混合物から形成する。特定の実施形態では、脂質シェルを、３：１：１のモル比のホスファチジルコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）、およびコレステロールの混合物から形成する。
【００８８】
２．ポリマー粒子
ナノ粒子送達ビヒクルはまた、ポリマー粒子、例えば、マイクロまたはナノ粒子とすることもできる。
【００８９】
粒子は、生分解性または非生分解性である。
【００９０】
ポリマー粒子を製造するために使用することができる例示的なポリマーは、ナノリポゲルのポリマーマトリクス構成成分に関して上記に議論される。
【００９１】
好ましい生分解性ポリマーの例には、乳酸およびグリコール酸などのヒドロキシ酸のポリマー、ＰＥＧとのコポリマー、ポリ酸無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、その混合物およびコポリマーが含まれる。好ましい実施形態では、粒子が、１つまたはそれを超えるポリエステルから構成される。
【００９２】
例えば、粒子は、１つまたはそれを超える下記のポリエステルを含有することができる：本明細書において「ＰＧＡ」と呼ばれるグリコール酸単位ならびに本明細書において総称して「ＰＬＡ」と呼ばれるポリＬ−乳酸、ポリＤ−乳酸、ポリＤ，Ｌ−乳酸、ポリＬ−ラクチド、ポリＤ−ラクチド、およびポリＤ，Ｌ−ラクチドなどの乳酸単位ならびに本明細書において総称して「ＰＣＬ」と呼ばれるポリ（ε−カプロラクトン）などのカプロラクトン単位を含むホモポリマー；ならびに本明細書において総称して「ＰＬＧＡ」と呼ばれる乳酸：グリコール酸の比によって特徴づけられる様々な形態のポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）などの、乳酸およびグリコール酸単位を含むコポリマー；ならびにポリアクリラートならびにその誘導体。例示的なポリマーにはまた、本明細書において総称して「ＰＥＧ化ポリマー」と呼ばれる様々な形態のＰＬＧＡ−ＰＥＧまたはＰＬＡ−ＰＥＧコポリマーのなどの、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および前述のポリエステルのコポリマーが含まれる。一定の実施形態では、ＰＥＧ領域が、切断可能なリンカーによって「ＰＥＧ化ポリマー」をもたらすために、ポリマーと共有結合する。アルギナートポリマーもまた、使用されてもよい。
【００９３】
いくつかの実施形態では、粒子が、ＰＬＧＡから構成される。ＰＬＧＡは、安全な、ＦＤＡにより承認されたポリマーである。ＰＬＧＡ粒子は、活性薬剤を保護することができ（つまり、カプセルの材料）、長期の放出を促進し、ターゲティング成分の追加に適用可能であるので、有利である。例えば、粒子のポリマーは、構造：
【化２】
2020073617.tif 000003
を有することができる（ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）ＰＬＧＡ＋Ｈ２Ｏ＝調節可能な分解（日〜週）。
【００９４】
粒子は、ポリマーおよびターゲティング成分、検出可能な標識、または他の活性薬剤の間に、末端の間の連結を含有する、１つまたはそれを超えるポリマーコンジュゲートを含有することができる。例えば、修飾ポリマーは、ＰＬＧＡ−ＰＥＧ−ホスホナートとすることができる。別の実施例では、粒子が、アビジン成分を含むように修飾され、ビオチン化されたターゲティング成分、検出可能な標識、または他の活性薬剤をそれにカップリングすることができる。
【００９５】
好ましい天然ポリマーの例には、タンパク質（アルブミン、コラーゲン、ゼラチン、およびプロラミン（例えば、ゼイン）など）およびポリサッカリド（アルギナート、セルロース誘導体、およびポリヒドロキシアルカノアート（例えば、ポリヒドロキシブチラート）など）が含まれる。粒子のｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と共重合したポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）などのポリマーの使用によって生成中に調整することができる。ＰＥＧを外面上に曝露する場合、ＰＥＧは、ＰＥＧの親水性によってこれらの材料が循環する時間を増大させることができる。
【００９６】
好ましい非生分解性ポリマーの例には、エチレンビニルアセタート、ポリ（メト）アクリル酸、ポリアミド、コポリマー、およびその混合物が含まれる。
【００９７】
３．他の送達ビヒクル
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルが、リポソームである。リポソームは、典型的に、ラメラ相脂質二重層から構成される球状の小胞である。リポソームは、例えば、多層小胞（ＭＬＶ）、小さな単層リポソーム小胞（ＳＵＶ）、大きな単層小胞（ＬＵＶ）、または渦巻形の小胞とすることができる。開示されるナノ粒子組成物の調製に有用であるリポソーム、ミセル、および他の脂質ベースの送達ビヒクルは、当該分野で公知である。例えば、Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎら、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、５８（１４）：１５３２−５５（２００６）を参照のこと。
【００９８】
送達ビヒクルはまた、シリカ粒子とすることもできる。開示されるナノ粒子組成物の調製に有用に適したシリカ粒子もまた、当該分野で公知である。例えば、Ｂａｒｂｅら、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ、１６（２１）：１９５９−１９６６（２００４）およびＡｒｇｙｏら、Ｃｈｅｍ．Ｍａｔｅｒ．，２６（１）：４３５−４５１（２０１４）を参照のこと。
【００９９】
Ｂ．活性薬剤
本明細書において開示されるナノ粒子組成物には、典型的に、ナノリポゲルまたはマイクロもしくはナノ粒子または他の送達ビヒクルが含まれ、１つまたはそれを超える活性薬剤が、送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される。いくつかの実施形態では、２つ、３つ、４つ、またはそれを超える活性薬剤が、送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される。２つまたはそれを超える薬剤は、同じ粒子または異なる粒子の中に負荷することができる、その表面に結合することができる、および／またはその内に密封することができる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、処方物は、粒子と会合した同じまたは異なる活性薬剤（複数可）を有する２つまたはそれを超える異なるタイプの粒子を含む。
【０１０１】
処方物は、開示される送達ビヒクルの中に負荷されない、その表面に結合されない、および／またはその内に密封されない１つまたはそれを超える活性薬剤を含むことができる。例えば、そのような活性薬剤は、遊離または可溶性活性薬剤（複数可）または異なるキャリアもしくは剤形をした活性薬剤（複数可）とすることができるが、それにもかかわらず、ナノ粒子組成物と同じ医薬組成物の一部である。
【０１０２】
下記により詳細に記載されるように、いくつかの実施形態では、開示される方法が、１つまたはそれを超える別々の処方物として対象に投与される１つ、２つ、３つ、またはそれを超えるさらなる活性薬剤と組み合わせて、送達ビヒクルの中に負荷された、その表面に結合された、および／またはその内に密封された１つ、２つ、３つ、またはそれを超える活性薬剤を含むナノ粒子組成物をそれを必要とする対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、さらなる活性薬剤が、対象に同時投与されるが、開示される送達ビヒクルの中に負荷されず、その表面に結合されず、および／またはその内に密封されず、例えば、遊離もしくは可溶性とすることができるまたは異なるキャリアもしくは剤形とすることができる。開示される活性薬剤のいずれも、送達ビヒクルの中に負荷され、その表面に結合され、および／またはその内に密封され、ナノ粒子組成物の一部としてそれを必要とする対象に投与することができる。開示される活性薬剤のいずれも、ナノ粒子組成物と組み合わせて対象に投与される遊離もしくは可溶性または別の投薬単位もしくは剤形の一部として対象に投与することができる。
【０１０３】
例示的な活性薬剤には、例えば、腫瘍抗原、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ、サイトカイン、化学療法剤、放射性核種、小分子シグナル伝達阻害剤、光熱アンテナ（ｐｈｏｔｏｔｈｅｒｍａｌ  ａｎｔｅｎｎａ）、免疫学的危険シグナル伝達分子、他の免疫療法薬（ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）、酵素、抗生物質、抗ウイルス薬、抗寄生動物薬（ａｎｔｉ−ｐａｒａｓｉｔｅ）（蠕虫、原生動物）、成長因子、成長阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、抗体およびその生理活性断片（ヒト化、単鎖、およびキメラ抗体を含む）、抗原およびワクチン処方物（アジュバントを含む）、ペプチド薬剤、抗炎症剤、免疫調節物質（自然免疫系を活性化するための、Ｔｏｌｌ様受容体に結合するリガンド（ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含むが、これらに限定されない）、適応免疫系を動員し、かつ最適化する分子、細胞傷害性Ｔリンパ球、ナチュラルキラー細胞、およびヘルパーＴ細胞の作用を活性化するまたはアップレギュレートする分子、ならびにサプレッサーまたは調節性Ｔ細胞を非活性化するまたはダウンレギュレートする分子を含む）、細胞の中への送達ビヒクルの取込みを促進する薬剤（樹状細胞および他の抗原提示細胞を含む）、ビタミンなどの栄養補助食品、ならびにオリゴヌクレオチド薬剤（ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス、アプタマー、低分子干渉ＲＮＡ、リボザイム、リボヌクレアーゼＰについての外部ガイド配列、およびトリプレックス形成剤（ｔｒｉｐｌｅｘ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）を含む）が含まれる。
【０１０４】
好ましい実施形態では、１つまたはそれを超える活性薬剤が、免疫応答刺激剤または免疫抑制をブロックする薬剤などの免疫調節物質である。特に好ましい実施形態では、活性薬剤が、腫瘍チェックポイント遮断または共刺激分子を標的にする。本明細書において開示されるナノ粒子組成物および使用の方法は、同じ薬剤を単独で投与するのと比較して、効能を増加させることができるおよび／または毒性を低下させることができると考えられる。例えば、下記により詳細に議論されるように、組成物および方法のうちのいくつかは、従来の癌の処置（例えば免疫シグナル伝達特性に関連する免疫療法または化学療法）と組み合わせて、ナノ粒子アジュバント（典型的に、小分子薬剤および／または生物学的因子をカプセル化する生分解性ナノ粒子組成物）を同時投与するステップを含む。そのような併用療法およびレジメンは、効能を増加させ、毒性を低下させ、投与時の全体的な用量を低下させることができる。特定の実施形態は、下記により詳細に議論される。
【０１０５】
１．免疫応答刺激剤
１つまたはそれを超える活性薬剤は、免疫応答刺激剤とすることができる。免疫系は、細胞性（駆動されたＴ細胞）および体液性（駆動されたＢ細胞）エレメントから構成される。癌について、強力な細胞媒介性免疫応答のトリガリングは、体液性免疫の活性化よりも有効であることが一般に認められている。細胞ベースの免疫は、抗原提示細胞（ＡＰＣ；樹状細胞がその重要な構成成分である）、細胞障害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、およびＴ−ヘルパー細胞を含む、多くの異なる免疫細胞タイプの相互作用および協力に依存する。したがって、活性薬剤は、細胞（駆動されたＴ細胞）免疫応答、体液性（駆動されたＢ細胞）免疫応答、またはその組み合わせを増加させる薬剤とすることができる。例えば、いくつかの実施形態では、薬剤が、Ｔ細胞応答を増強する、Ｔ細胞活性を増加させる、Ｔ細胞増殖を増加させる、Ｔ細胞阻害性シグナルを低下させる、サイトカインの産生を増強する、Ｔ細胞分化もしくはエフェクター機能を刺激する、Ｔ細胞の生存を促進する、またはその任意の組み合わせである。
【０１０６】
例示的な免疫調節薬には、サイトカイン、キサンチン、インターロイキン、インターフェロン、オリゴデオキシヌクレオチド、グルカン、成長因子（例えば、ＴＮＦ、ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＧ−ＣＳＦ）、ホルモン（エストロゲン（ジエチルスチルベストロール、エストラジオール）、アンドロゲン（テストステロン、ハロテスチン（登録商標）（フルオキシメステロン））、プロゲスチン（メガス（登録商標）（酢酸メゲストロール）、プロベラ（登録商標）（酢酸メドロキシプロゲステロン））、およびコルチコステロイド（プレドニゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン）など）が含まれる。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、薬剤が、炎症分子（サイトカイン、メタロプロテアーゼ、または他の分子（ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−ベータ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１、およびＭＭＰが含まれるが、これらに限定されない）である。
【０１０８】
ａ．サイトカイン
好ましい実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤が、炎症促進性サイトカインである。サイトカインは、典型的に、ナノ〜ピコモル濃度でホルモン調節因子またはシグナル伝達分子として作用し、細胞シグナル伝達を助ける。サイトカインは、タンパク質、ペプチド、または糖タンパク質とすることができる。例示的なサイトカインには、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子、白血球阻害因子（ＬＩＦ）、ケモカイン、ＳＤＦ−１α、およびサイトカインのＣＸＣファミリーが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０９】
ｂ．ケモカイン
別の実施形態では、少なくとも１つの活性薬剤が、炎症促進性ケモカインである。ケモカインは、小さなサイトカインのファミリーである。それらの名称は、近くの応答性の細胞において、定方向の走化性を誘発するそれらの能力に由来する。したがって、それらは、走化性サイトカインである。タンパク質は、小さなサイズ（それらはすべてサイズがおよそ８〜１０キロダルトンである）およびそれらの３次元の形状を形成するのに重要である、保存された場所における４つのシステイン残基の存在などの共有される構造的な特質に従ってケモカインとして分類される。ケモカインは、４つの主なサブファミリーに分類された：ＣＸＣ、ＣＣ、ＣＸ３Ｃ、およびＸＣ。ケモカインは、Ｇプロテイン連結膜貫通受容体（つまりケモカイン受容体）に結合することによって細胞シグナル伝達を誘発する。
【０１１０】
２．免疫抑制をブロックする薬剤
少なくとも１つの活性薬剤は、免疫抑制をブロックする、阻害する、もしくは低下させる薬剤または免疫抑制の一因となる因子の生物活性をブロックする、阻害する、もしくは低下させる薬剤とすることができる。腫瘍関連免疫抑制が、腫瘍進行の一因に大いになるだけでなく、癌免疫療法の活性を制限する重大な因子のうちの１つでもあることがますます明らかになった。抗原特異的Ｔ細胞寛容は、腫瘍エスケープの主なメカニズムのうちの１つであり、腫瘍非応答性の抗原特異的な性質は、癌を有するホストが、他の免疫刺激薬に対してなお応答しながらも、腫瘍特異的な免疫応答を維持することができないことを示す（Ｗｉｌｌｉｍｓｋｙら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，２２０：１０２−１２（２００７）、Ｗａｎｇら  Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．，１６：７３−９（２００６）、Ｆｒｅｙら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，２２２：１９２−２０５（２００８）、Ｎａｇａｒａｊら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１６（６）：１８１２−２３（２０１０））。
【０１１１】
ａ．Ｔｒｅｇを排除する薬剤
調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のコンパートメントにおける不足により、重度の自己免疫性疾患に至るので、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、自己寛容を維持するのに不可欠である。しかし、この重要な機能は、腫瘍免疫監視および抗腫瘍免疫に対するそれらの有害作用と対照をなす。腫瘍および癌患者の血行路内でのＴｒｅｇの増加は、癌の病因および疾患進行に関係し、増殖から特異的な輸送ネットワークに及ぶメカニズムは、それらの蓄積の原因となることが同定された。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの実験は、シクロオキシゲナーゼ−２、ＣＤ７０、Ｇａｌ１、ＴＧＦ−β、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ、および他のまだ同定されていない因子を含む、Ｔｒｅｇ生成の一因となるいくつかの可溶性または接触依存性腫瘍因子を示す。局所的なＴｒｅｇ増殖の増強またはアポトーシスの低下は、腫瘍Ｔｒｅｇ数の増加の一因となり得る。したがって、いくつかの実施形態では、少なくとも１つの薬剤が、特に腫瘍中でまたは腫瘍の近くで、シクロオキシゲナーゼ−２、ＣＤ７０、Ｇａｌ１、ＴＧＦ−β、もしくはインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼを低下させる、局所的なＴｒｅｇ増殖を低下させる、および／またはＴｒｅｇアポトーシスを増加させる。
【０１１２】
Ｔｒｅｇが及ぼすアンタゴニスティックな影響を改善するための様々な免疫療法アプローチは、Ｍｏｕｇｉａｋａｋｏｓ  Ａｄｖ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１０７：５７−１１７（２０１０）、Ｄｅ  Ｒｅｚｅｎｄｅら、Ａｒｃｈ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｅｘｐ．，５８（３）：１７９−９０（２０１０）、およびＣｕｒｉｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０（２）：２４１−２４６（２００８）において概説される。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、薬剤は、Ｔｒｅｇを排除するか；Ｔｒｅｇの分化、輸送、エフェクター機能、もしくはその組み合わせをブロックするか；エフェクター細胞抑制閾値を上げるか、またはその任意の組み合わせである。Ｔｒｅｇを排除するまたはそれらの機能をブロックする例示的な薬剤には、抗ＣＤ２５抗体、シクロホスファミド、デニロイキンジフチトクス（Ｏｎｔａｋ、ＩＬ−２およびジフテリア毒素を融合するタンパク質）、ＬＭＢ−２（ＣＤ２５特異的シュードモナス免疫毒素）、ＣｐＧ処置、ならびに抗ＣＴＬＡ４抗体が含まれる（Ｃｕｒｉｅｌ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０（２）：２４１−２４６（２００８））。
【０１１４】
ターゲティング腫瘍抗原特異的Ｔｒｅｇもまた、腫瘍が免疫系を逃れる能力を低下させるのに有効であるかもしれない。腫瘍抗原特異的Ｔｒｅｇは、天然に存在し、ワクチン接種によって誘発される。葉酸受容体４発現腫瘍Ｔｒｅｇは、抗原特異的な細胞について豊富となり得、癌を有するマウスにおいて、それらが除去されると、免疫媒介性の腫瘍拒絶が改善された。したがって、いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物は、葉酸受容体４発現腫瘍Ｔｒｅｇを標的にする。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの薬剤が、ＴＧＦ−β修飾因子である。潜在型ＴＧＦ−βが腫瘍細胞から放出された後、ＴＧＦ−βは、腫瘍細胞の表面上のインテグリンと結合して、潜在型ＴＧＦ−βの活性化に至る。その結果、腫瘍微小環境におけるＴＧＦ−β濃度の増加により、調節性Ｔ細胞を動員することによって免疫抑制が支持される（Ｍａｓｓａｙｏら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ．，（４）：２７−３２（２０１３）。
【０１１６】
ｉ．ＳＢ５０５１２４
ＴＧＦ−β分子の上昇は、ＳＢ５０５１２４（２−（５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−ｔｅｒｔ−ブチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−６−メチルピリジンヒドロクロリド）などのＴＧＦ−β阻害剤によって阻害することができる。ＳＢ５０５１２４（ＳＢ−５０５１２４としても知られ、すなわち、ＳＢと略される）は、ＴＧＦ−βＩ型受容体ＡＬＫ４、ＡＬＫ５、およびＡＬＫ７の選択的阻害剤である（ＤａＣｏｓｔａら、Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６５：７４４−５２（２００４））。特定の実施形態では、ＳＢ５０５１２４が、シクロデキストリンなどのホスト分子と複合体を形成する。
【０１１７】
ｉｉ．ロサルタン
別のＴＧＦ−β修飾因子は、ロサルタン（ＣＯＺＡＡＲ（登録商標）としても知られている）である。アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニストとして最もよく知られているロサルタンもまた、ＴＧＦ−βをダウンレギュレートする（Ｇｕｏら、Ｚｈｏｎｇｈｕａ
Ｎｅｉ  Ｋｅ  Ｚａ  Ｚｈｉ，４２：４０３−８（２００３））。ロサルタン（２−ブチル−４−クロロ−１−｛［２’−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）ビフェニル−４−イル］メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メタノール）は、構造：
【化３】
2020073617.tif 000004
を有する。
【０１１８】
ロサルタンは、経口投与後によく吸収され、重要な初回通過代謝を受け、ＥＸＰ３１７４と示される５−カルボン酸代謝物質を生成する。この代謝物質は、ＡＴ１受容体で長時間作用性（６〜８時間）の非競合的アンタゴニストとなり、ロサルタンの薬理学的効果に寄与する。ロサルタンは、任意選択で他の抗高血圧剤と組み合わせて、高血圧症、任意選択で低血糖剤と組み合わせて、糖尿病性ニューロパシー、発作の危険性を減少させるためのヒドロクロロチアジド（ＨＣＴＺ）と組み合わせて、慢性心不全を含む多くの徴候の処置として同定された。カリウム塩は、１２．５、２５、５０、および１００ｍｇの強度を有する錠剤ならびにまた懸濁液については２．５ｍｇ／ｍｌの粉剤としても処方されている。ＨＣＴＺ（Ｈｙｚａａｒ）とのロサルタンの併用製品もまた、５０ｍｇ／１２．５ｍｇ、１００ｍｇ／１２．５ｍｇ、および１００ｍｇ／２５ｍｇの強度を有する錠剤として入手可能である。ロサルタンならびにその医薬品の塩およびイミダゾール誘導体を含む組成物および処方物ならびにその使用の方法は、米国特許第５，１３８，０６９号明細書、米国特許第５，１５３，１９７号明細書、米国特許第５，１２８，３５５号明細書、米国特許第５，１５５，１１８号明細書、米国特許第５，２１０，０７９号明細書、および米国特許第５，３５４，８６７号明細書において議論される。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ロサルタンまたはその医薬品の塩、イミダゾール誘導体、もしくは代謝物質が、送達ビヒクル、例えばポリマーナノ粒子またはナノリポゲルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される。好ましくは、第２の活性薬剤もまた、送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される。第２の活性薬剤は、第２の免疫調節物質、例えばＩＬ−２とすることができる。特定の実施形態では、ＰＬＧＡナノ粒子またはナノリポゲルに、ロサルタンおよびＩＬ−２が負荷される。いくつかの実施形態では、送達ビヒクルが、ＲＧＤペプチドなどのターゲティング成分を含む。
【０１２０】
ナノ粒子上にこれらの薬剤を負荷する方法は、それぞれ実施例３および７において下記に記載されるものなどのような方法を含むことができる。粒子は、ＰＬＧＡナノ粒子、ナノリポゲル、または他の生分解性ポリマーとすることができる。
【０１２１】
活性薬剤の様々な粒子および／または投薬量の抗腫瘍性の効能を試験する例示的なアッセイでは、動物の後肢にＢ１６Ｆ１０メラノーマ細胞を接種する。腫瘍成長をモニタリングし、およそ７日後に始めて、腫瘍面積が０．５ｍｍ２に到達したら、（ａ）ＩＬ−２およびロサルタンを負荷した５ｕｇのナノ粒子、またはコントロールとして、（ｂ）ブランクの粒子の腫瘍周囲の注射のコースを動物に受けさせる（下記の実施例において記載されるアッセイと同様）。
【０１２２】
ｂ．骨髄由来サプレッサー細胞を排除する薬剤
骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、癌における抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞寛容の誘発の原因である抗原提示細胞の主な集団に相当し得る。したがって、いくつかの実施形態では、組成物が、ＭＤＳＣの数または活性を低下させる薬剤を含む。ＭＤＳＣを排除するために使用することができる例示的な薬剤には、分化誘導剤（オールトランスレチノイン酸）、化学療法薬物、アミノビスフォスフォネート（ａｍｉｎｏｂｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ）、サイクロオキシゲナーゼー２阻害剤、ならびにホスホジエステラーゼ−５阻害剤（シルデナフィル（ｓｉｌｄａｎｅｆｉｌ））および合成トリテルペノイド（例えば、２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアナ−１，９（１１）−ジエン−２８−酸のメチルエステル（ＣＤＤＯ−Ｍｅおよびバルドキソロンメチルとも呼ばれる）によるＭＤＳＣ機能の阻害が含まれるが、これらに限定されない（（Ｎａｇａｒａｊら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１６（６）：１８１２−２３（２０１０））。
【０１２３】
ｃ．ＰＤ−１アンタゴニスト
いくつかの実施形態では、活性薬剤が、ＰＤ−１アンタゴニストである。Ｔ細胞の活性化は、通常、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）を介して提示された抗原性ペプチドとのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の接触後の抗原特異的なシグナルに依存するが、この反応の程度は、様々な共刺激分子からエミネートされる（ｅｍｉｎａｔｅ）正および負の抗原非依存性シグナルによってコントロールされる。後者は、一般に、ＣＤ２８／Ｂ７ファミリーのメンバーである。反対に、プログラム死−１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞上で誘発された場合に、負の免疫応答を伝える受容体のＣＤ２８ファミリーのメンバーである。ＰＤ−１およびそのリガンドのうちの１つ（Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣ）の間の接触は、Ｔ細胞の増加ならびに／またはＴ細胞応答の強度および／もしくは期間を減少させる阻害性応答を誘発する。適したＰＤ−１アンタゴニストは、米国特許第８，１１４，８４５号明細書、米国特許第８，６０９，０８９号明細書、および米国特許第８，７０９，４１６号明細書において記載され、ＰＤ−１のリガンドに結合し、それをブロックして、ＰＤ−１受容体へのリガンドの結合に干渉するもしくはそれを阻害するまたはＰＤ−１受容体に直接結合し、ブロックして、ＰＤ−１受容体を通しての阻害性シグナル伝達を誘発しない化合物または薬剤を含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストが、ＰＤ−１受容体に直接結合して、阻害性シグナル伝達を引き起こさず、また、ＰＤ−１受容体のリガンドに結合して、ＰＤ−１受容体を通してのシグナル伝達を低下させるか、またはリガンドがそれを引き起こすのを阻害する。ＰＤ−１受容体に結合し、阻害性シグナルの伝達を引き起こすリガンドの数および／または量を低下させることによって、より少数の細胞しか、ＰＤ−１シグナル伝達によって伝えられる負のシグナルによって減弱されず、より頑健な（ｒｏｂｕｓｔ）免疫応答を実現することができる。
【０１２５】
ＰＤ−１シグナル伝達は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によって提示されたペプチド抗原の近傍で、ＰＤ−１リガンド（Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣなど）に結合することによって駆動されると考えられる（例えば、Ｆｒｅｅｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，１０５：１０２７５−１０２７６（２００８）を参照のこと）。したがって、ＰＤ−１およびＴ細胞膜上のＴＣＲの同時の連結を妨げるタンパク質、抗体または小分子もまた、有用なＰＤ−１アンタゴニストである。
【０１２６】
好ましい実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストが、ＰＤ−１のリガンドまたはＰＤ−１自体に結合することによってＰＤ−１受容体シグナル伝達を低下させるまたはそれに干渉する小分子アンタゴニストまたは抗体であり、とりわけ、ＴＣＲとのＰＤ−１の同時の連結が、そのような結合に続かず、それによって、ＰＤ−１受容体を通しての阻害性シグナル伝達を引き起こさない。
【０１２７】
本発明の方法によって企図される他のＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１またはＰＤ−１のリガンドに結合する抗体および他の抗体を含む。
【０１２８】
適した抗ＰＤ−１抗体は、下記の刊行物において記載されるものを含むが、これらに限定されない：
ＰＣＴ／ＩＬ０３／００４２５  （Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００３／０９９１９６）
ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３０９６０６  （Ｋｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００６／１２１１６８）
ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００８９２５  （Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００９／０１４７０８）
ＰＣＴ／ＪＰ０３／０８４２０  （Ｈｏｎｊｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００４／００４７７１）
ＰＣＴ／ＪＰ０４／００５４９  （Ｈｏｎｊｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００４／０７２２８６）
ＰＣＴ／ＩＢ２００３／００６３０４  （Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００４／０５６８７５）
ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８８８５１  （Ａｈｍｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００８／０８３１７４）
ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２６０４６  （Ｋｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００７／００５８７４）
ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８４９２３    （Ｔｅｒｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ／２００９／０７３５３３）
Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  １４：３０４４３０５１  （２００８）．
【０１２９】
抗ＰＤ−１抗体の特定の例は、好ましくは３ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるＭＤＸ−１１０６（Ｋｏｓａｋ、米国特許出願公開第２００７０１６６２８１号明細書（２００７年７月１９日公開）第４２段落を参照のこと）、ヒト抗ＰＤ−１抗体である。
【０１３０】
例示的な抗Ｂ７−Ｈ１抗体には、下記の刊行物において記載されるものが含まれるが、これらに限定されない：
ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２２４２３（国際公開第２００６／１３３３９６号パンフレット、２００６年１２月１４日公開）
ＰＣＴ／ＵＳ０７／０８８８５１（国際公開第２００８／０８３１７４号パンフレット、２００８年７月１０日公開）
米国特許出願公開第２００６／０１１０３８３号明細書（２００６年５月２５日公開）
【０１３１】
抗Ｂ７−Ｈ１抗体の特定の例は、ＭＤＸ−１１０５（２００７年１月１１日に公開された国際公開第２００７／００５８７４号パンフレット）、ヒト抗−Ｂ７−Ｈ１抗体である。
【０１３２】
抗Ｂ７−ＤＣ抗体については、米国特許第７，４１１，０５１号明細書、米国特許第７，０５２，６９４号明細書、米国特許第７，３９０，８８８号明細書、および米国特許出願公開第２００６／００９９２０３号明細書を参照のこと。
【０１３３】
抗体は、Ｂ７−Ｈ１などのＰＤ−１のリガンドに結合する抗体に架橋された、ＰＤ−１受容体に結合する抗体を含む二重特異性抗体とすることができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合部分が、ＰＤ−１受容体を通してのシグナル伝達を低下させるか、または阻害する。
【０１３４】
他の例示的なＰＤ−１受容体アンタゴニストには、Ｂ７−ＤＣポリペプチド、これらは、その相同体および変異体を含み、ならびに前述のもののいずれかの活性断片およびこれらのいずれかを組み込む融合タンパク質が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、融合タンパク質が、ヒトＩｇＧなどの抗体のＦｃ部分にカップリングされたＢ７−ＤＣの可溶性部分を含み、ヒトＢ７−ＤＣの膜貫通部分のすべてまたは一部を組み込まない。
【０１３５】
ＰＤ−１アンタゴニストはまた、好ましくはマウスまたは霊長動物、好ましくはヒト由来の哺乳動物Ｂ７−Ｈ１の断片とすることもでき、断片が、ＰＤ−１に結合し、ブロックするが、ＰＤ−１を通しての阻害性シグナル伝達をもたらさない。断片はまた、融合タンパク質、例えばＩｇ融合タンパク質の一部とすることもできる。
【０１３６】
他の有用なポリペプチドＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１受容体のリガンドに結合するものを含む。これらは、ＰＤ−１受容体タンパク質またはその可溶性断片を含み、これは、Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣなどのＰＤ−１リガンドに結合し、内因性ＰＤ−１受容体への結合を妨げることができ、それによって阻害性シグナル伝達を妨げる。Ｂ７−Ｈ１はまた、タンパク質Ｂ７．１に結合することも示された（Ｂｕｔｔｅら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌ．２７、ｐｐ．１１１−１２２（２００７））。そのような断片はまた、天然のリガンドへの結合を増加させるＡ９９Ｌ突然変異などの突然変異を含むＰＤ−１タンパク質の可溶性ＥＣＤ部分も含む（Ｍｏｌｎａｒら、ＰＮＡＳ，１０５：１０４８３−１０４８８（２００８））。Ｂ７−Ｈ１リガンドに結合し、内因性ＰＤ−１受容体への結合を妨げることができ、それによって阻害性シグナル伝達を妨げるＢ７−１またはその可溶性断片もまた、有用である。
【０１３７】
ＰＤ−１およびＢ７−Ｈ１アンチセンス核酸、ＤＮＡおよびＲＮＡの両方、ならびにｓｉＲＮＡ分子もまた、ＰＤ−１アンタゴニストとすることができる。そのようなアンチセンス分子は、Ｔ細胞上のＰＤ−１の発現ならびにＢ７−Ｈ１、ＰＤ−Ｌ１、および／またはＰＤ−Ｌ２などのＴ細胞リガンドの産生を妨げる。例えば、ポリエチレンイミンなどのキャリアと複合体を形成したｓｉＲＮＡ（例えば、長さが約２１個のヌクレオチドの、ＰＤ−１をコードするまたはＰＤ−１リガンドをコードする遺伝子に対して特異的であり、このオリゴヌクレオチドは容易に市販で購入することができる）（Ｃｕｂｉｌｌｏｓ−Ｒｕｉｚら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９（８）：２２３１−２２４４（２００９）を参照のこと。ＰＤ−１およびＰＤ−１のリガンドを発現する細胞によって容易に取込まれ、これらの受容体およびリガンドの発現を低下させて、Ｔ細胞における阻害性シグナル伝達の減少を実現し、それによってＴ細胞を活性化する。
【０１３８】
ｄ．ＣＴＬＡ４アンタゴニスト
免疫応答においてＴ細胞の効果を媒介するのに有用な他の分子もまた、活性薬剤として企図される。例えば、いくつかの実施形態では、分子が、ＰＤ−１ではない免疫応答媒介分子に結合する薬剤である。好ましい実施形態では、分子が、ＣＴＬＡ４のアンタゴニスト、例えばアンタゴニスティック抗ＣＴＬＡ４抗体である。本発明の方法における使用が企図される抗ＣＴＬＡ４抗体の一例は、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４３６９０（Ｆｉｓｃｈｋｏｆｆら、国際公開第２００７／０５６５３９号パンフレット）において記載される抗体を含む。
【０１３９】
抗ＰＤ−１、抗Ｂ７−Ｈ１、および抗ＣＴＬＡ４抗体についての投薬量は、当該分野で公知であり、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができ、１〜５０ｍｇ／ｋｇのより狭い範囲が好ましく、１０〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲がより好ましい。ヒト対象についての適切な用量は、５〜１５ｍｇ／ｋｇであり、１０ｍｇ／ｋｇの抗体（例えばＭＤＸ−１１０６のようなヒト抗ＰＤ−１抗体）が最も好ましい。
【０１４０】
本発明の方法において有用な抗ＣＴＬＡ４抗体の特定の例は、ＭＤＸ−０１０またはＭＤＸ−１０１としても知られているイピリムマブ、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で好ましくは投与されるヒト抗ＣＴＬＡ４抗体、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で好ましくは投与されるトレメリムマブ、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体である。２００９年１２月にオンラインで公開されたＳａｍｍａｒｔｉｎｏら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，３（２）：１３５−１３７（２０１０）もまた参照のこと。
【０１４１】
他の実施形態では、アンタゴニストが、小分子である。一連の小さな有機化合物は、Ｂ７−１リガンドに結合して、ＣＴＬＡ４への結合を妨げることが示された（Ｅｒｂｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：７３６３−７３６８（２００２）を参照のこと。そのような小さな有機化合物は、単独でまたは抗ＣＴＬＡ４抗体と共に投与して、Ｔ細胞の阻害性シグナル伝達を低下させることができた。
【０１４２】
３．アジュバントおよび抗原
いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物が、免疫系を刺激するためにワクチン処方物の一部またはアジュバントとして使用される。いくつかの実施形態では、抗原および／またはアジュバントが、送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される。いくつかの実施形態では、抗原および／またはアジュバントが、送達ビヒクルの中に負荷された、その表面に結合された、および／またはその内に密封された活性薬剤と組み合わせて投与される。抗原および／またはアジュバントは、粒子から遊離することができる。例えば、抗原および／またはアジュバントは、可溶性とすることができる。
【０１４３】
これらの抗原はまた、投与後に吸収されてもよい。例えば、ＮＬＧは、その場で腫瘍抗原を吸収することができるので、ＮＬＧは、免疫刺激薬および／または化学療法薬と共に投与されてもよく、その後、腫瘍細胞が死滅する時に腫瘍抗原を吸収する。ペプチド、タンパク質、およびＤＮＡベースのワクチンを使用して、種々の疾患または状態に対する免疫を誘導することができる。細胞媒介性免疫は、ウイルス感染細胞を検出および破壊するために必要である。最も伝統的なワクチン（例えば、タンパク質ベースのワクチン）は、体液性免疫のみを誘導することができる。ＤＮＡベースのワクチンが体液性免疫および細胞媒介性免疫の両方を誘導することができるので、ＤＮＡベースのワクチンは、ウイルスまたは寄生虫に対してワクチン接種するための固有の手段である。さらに、ＤＮＡベースのワクチンは、潜在的に、伝統的なワクチンより安全である。ＤＮＡワクチンは、相対的により安定であり、製造および保存の際の費用効果がより高い。ＤＮＡワクチンは、２つの主な成分（ＤＮＡキャリア（または送達ビヒクル）および抗原をコードするＤＮＡ）からなる。ＤＮＡキャリアはＤＮＡを分解から保護し、特定の組織または細胞へのＤＮＡ侵入および有効レベルでの発現を容易にすることができる。
【０１４４】
ａ．アジュバント
粒子と会合することができる免疫学的アジュバントの例には、ＴＬＲリガンド、Ｃ型レクチン受容体リガンド、ＮＯＤ様受容体リガンド、ＲＬＲリガンド、およびＲＡＧＥリガンドが含まれるが、これらに限定されない。ＴＬＲリガンドには、リポ多糖（ＬＰＳ）およびその誘導体、ならびにリピドＡおよびその誘導体（モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、グリコピラノシルリピドＡ、ＰＥＴ−リピドＡ、および３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡが含まれるが、これらに限定されない）が含まれ得る。特定の実施形態では、免疫学的アジュバントはＭＰＬである。別の実施形態では、免疫学的アジュバントはＬＰＳである。ＴＬＲリガンドには、ＴＬＲ３リガンド（例えば、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＴＬＲ７リガンド（例えば、イミキモドおよびレシキモド）、およびＴＬＲ９リガンドも含まれ得るが、これらに限定されない。
【０１４５】
ｂ．抗原
抗原は、ペプチド、タンパク質、ポリサッカリド、サッカリド、脂質、核酸、またはその組み合わせとすることができる。抗原は、ウイルス、細菌、寄生動物、植物、原生動物、菌類、組織、または癌もしくは白血病細胞などの形質転換細胞に由来し得、細胞全体またはその免疫原性構成成分、例えば、その細胞壁構成成分または分子構成成分とすることができる。
【０１４６】
適した抗原は、当該分野で公知であり、商業上の政府のおよび科学的な供給源から入手可能である。一実施形態では、抗原が、不活性化または弱毒化有機体全体である。これらの有機体は、ウイルス、寄生動物、および細菌などの感染性有機体であってもよい。これらの有機体はまた、腫瘍細胞であってもよい。抗原は、腫瘍またはウイルスもしくは細菌供給源に由来する精製されたまたは部分的に精製されたポリペプチドであってもよい。抗原は、異種発現系においてポリペプチド抗原をコードするＤＮＡを発現することによって産生される組み換えポリペプチドとすることができる。抗原は、抗原性タンパク質のすべてまたは一部をコードするＤＮＡとすることができる。ＤＮＡは、プラスミドＤＮＡなどのベクターＤＮＡの形態をしていてもよい。
【０１４７】
抗原は、単一の抗原としてまたは組み合わせて提供されてもよい。抗原はまた、ポリペプチドまたは核酸の複合体混合物として提供されてもよい。
【０１４８】
ｉ．ウイルス抗原
ウイルス抗原は、下記のウイルスファミリーのいずれか由来のウイルスを含むが、これらに限定されない任意のウイルスから単離することができる：Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ａｒｔｅｒｉｖｉｒｕｓ、Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂａｄｎａｖｉｒｕｓ、Ｂａｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｒｏｍｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｃａｐｉｌｌｏｖｉｒｕｓ、Ｃａｒｌａｖｉｒｕｓ、Ｃａｕｌｉｍｏｖｉｒｕｓ、Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｌｏｓｔｅｒｏｖｉｒｕｓ、Ｃｏｍｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスなどのＣｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、Ｃｏｒｔｉｃｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｙｓｔｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｄｅｌｔａｖｉｒｕｓ、Ｄｉａｎｔｈｏｖｉｒｕｓ、Ｅｎａｍｏｖｉｒｕｓ、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、マールブルグ病ウイルスおよびエボラウイルス（例えば、ザイール、レストン、コートジボアール、またはスーダン株））、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス、デング熱ウイルス１、デング熱ウイルス２、デング熱ウイルス３、およびデング熱ウイルス４）、Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ヒトヘルペスウイルス１、３、４、５、および６ならびにサイトメガロウイルス）、Ｈｙｐｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｌｅｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｌｉｐｏｔｈｒｉｘｖｉｒｉｄａｅ、Ｍｉｃｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、インフルエンザウイルスＡおよびＢおよびＣ）、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、麻疹、ムンプス、およびヒト呼吸器合胞体ウイルス）、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ポリオウイルス、ライノウイルス、ヘパトウイルス、およびアフトウイルス）、Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ワクシニアおよび天然痘ウイルス）、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ロタウイルス）、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）１およびＨＩＶ２などのレンチウイルス）、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ（例えば、狂犬病ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルスなど）、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ（例えば、風疹ウイルス、デング熱ウイルスなど）、ならびにＴｏｔｉｖｉｒｉｄａｅ。適したウイルス抗原はまた、デング熱タンパク質Ｍ、デング熱タンパク質Ｅ、デング熱Ｄ１ＮＳ１、デング熱Ｄ１ＮＳ２、およびデング熱Ｄ１ＮＳ３のすべてまたは一部を含む。
【０１４９】
ウイルス抗原は、パピローマウイルス、ヘルペスウイルス、すなわち単純ヘルペス１および２；肝炎ウイルス、例えば、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、デルタ型肝炎Ｄウイルス（ＨＤＶ）、Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）、およびＧ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）、ダニ媒介性脳炎ウイルス；パラインフルエンザ、バリセラゾスター、サイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇｌａｖｉｒｕｓ）、エプスタイン−バー、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、馬脳炎、日本脳炎、黄熱病、リフトバレー熱、およびリンパ球性脈絡髄膜炎などの特定の株に由来してもよい。
【０１５０】
ｉｉ．細菌抗原
細菌抗原は、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ、Ａｎａｂａｅｎａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｈｌｏｒｏｂｉｕｍ、Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｂ型  （ＨＩＢ）、Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ  Ａ、ＢおよびＣ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｙｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ、Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｎ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｐｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ、Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ、およびＴｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｖｉｂｒｉｏ、ならびにＹｅｒｓｉｎｉａを含むが、これらに限定されない任意の細菌に起源を持つことができる。
【０１５１】
ｉｉｉ．寄生動物抗原
寄生動物抗原は、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ
ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉに由来する抗原などであるが、これらに限定されない寄生動物から得ることができる。これらは、スポロゾイト周囲蛋白、スポロゾイト表面タンパク質、肝臓ステージ抗原、頂端膜関連タンパク質（ａｐｉｃａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、またはメロゾイト表面タンパク質のすべてまたは一部などの、胞子虫抗原、マラリア原虫抗原を含む。
【０１５２】
ｉｖ．アレルゲンおよび環境抗原
抗原は、アレルゲンまたは環境抗原（天然に存在するアレルゲンに由来する抗原（花粉アレルゲン（木、ハーブ、雑草、および牧草花粉アレルゲン）、昆虫アレルゲン（吸入抗原、唾液、および毒液アレルゲン）、動物の毛およびフケアレルゲン、ならびに食物アレルゲンなど）など、これらに限定されない）とすることができる。木、草、およびハーブ由来の重要な花粉アレルゲンは、すなわちカバノキ（Ｂｅｔｕｌａ）、ハンノキ（Ａｌｎｕｓ）、ハシバミ（Ｃｏｒｙｌｕｓ）、シデ（Ｃａｒｐｉｎｕｓ）、およびオリーブ（Ｏｌｅａ）、スギ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａａｎｄ  Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ）、スズカケノキ（Ｐｌａｔａｎｕｓ）を含むＦａｇａｌｅｓ、Ｏｌｅａｌｅｓ、Ｐｉｎａｌｅｓ、およびｐｌａｔａｎａｃｅａｅの分類学上の目、すなわちＬｏｌｉｕｍ、Ｐｈｌｅｕｍ、Ｐｏａ、Ｃｙｎｏｄｏｎ、Ｄａｃｔｙｌｉｓ、Ｈｏｌｃｕｓ、Ｐｈａｌａｒｉｓ、Ｓｅｃａｌｅ、およびＳｏｒｇｈｕｍ属の草を含むＰｏａｌｅｓ目、すなわちＡｍｂｒｏｓｉａ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ、およびＰａｒｉｅｔａｒｉａ属のハーブを含むＡｓｔｅｒａｌｅｓおよびＵｒｔｉｃａｌｅｓ目に起源を有する。使用されてもよい他のアレルゲン抗原は、ＤｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓおよびＥｕｒｏｇｌｙｐｈｕｓ属のイエダニ、貯蔵庫ダニ、例えば、Ｌｅｐｉｄｏｇｌｙｐｈｙｓ、Ｇｌｙｃｙｐｈａｇｕｓ、およびＴｙｒｏｐｈａｇｕｓ由来のアレルゲン、ゴキブリ、カ、およびノミ、例えば、Ｂｌａｔｅｌｌａ、Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ、Ｃｈｉｒｏｎｏｍｕｓ、およびＣｔｅｎｏｃｅｐｐｈａｌｉｄｅｓ由来のもの、ネコ、イヌ、およびウマなどの哺乳動物、鳥由来のもの、ハチ（Ａｐｉｄａｅ上科）、スズメバチ（Ｖｅｓｐｉｄｅａ上科）、およびアリ（Ｆｏｒｍｉｃｏｉｄａｅ上科）を含むＨｙｍｅｎｏｐｔｅｒａの分類学上の目由来のものなどの、刺すまたは噛む昆虫に起源を有するものなどを含む毒液アレルゲンを含む。使用されてもよいさらに他のアレルゲン抗原は、ＡｌｔｅｒｎａｒｉａおよびＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ属由来のなどの真菌由来の吸入アレルゲンを含む。
【０１５３】
ｖ．腫瘍抗原
抗原は、アルファ−アクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、ベータ−カテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ１１、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−１、２、および３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ（Ｔｒｉｏｓｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｉｓｏｍｅｒａｓ）、Ｂａｇｅ−１、Ｇａｇｅ  ３、４、５、６、７、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、Ｌａｇｅ−１、Ｍａｇｅ−Ａ１、２、３、４、６、１０、１２、Ｍａｇｅ−Ｃ２、ＮＡ−８８、ＮＹ−Ｅｓｏ−１／Ｌａｇｅ−２、ＳＰ１７、ＳＳＸ−２、およびＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ−Ｉ）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ  １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ｐ１５（５８）、ＣＥＡ、ＲＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ（ＬＡＧＥ）、ＳＣＰ−１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、Ｈ−Ｒａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタインバーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、β−カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α−フェトプロテイン、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３（ＣＡ  ２７．２９／ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質／シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ならびにＴＰＳなどの腫瘍関連または腫瘍特異的抗原を含むが、これらに限定されない腫瘍抗原とすることができる。
【０１５４】
４．他の活性薬剤
送達ビヒクルの中に負荷することができる、その表面に結合することができる、および／もしくはその内に密封することができるまたはナノ粒子組成物と組み合わせて投与することができる他の活性薬剤には、治療薬、栄養補助薬（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ａｇｅｎｔ）、診断薬、および予防薬が含まれる。活性薬剤は、小分子の活性薬剤または生体高分子（タンパク質、ポリペプチド、または核酸など）であり得る。適切な小分子活性薬剤には、有機化合物および有機金属化合物が含まれる。小分子活性薬剤は、親水性、疎水性、または両親媒性の化合物であり得る。
【０１５５】
例示的な診断薬には、常磁性分子、蛍光化合物、磁性分子、および放射性核種、Ｘ線造影剤、および造影剤が含まれる。
【０１５６】
一定の実施形態では、送達ビヒクルは１種またはそれより多くの抗癌剤を含む。代表的な抗癌剤には、アルキル化剤（シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、ダカルバジン、ロムスチン、カルムスチン、プロカルバジン、クロラムブシル、およびイフォスファミドなど）、代謝拮抗物質（フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ゲムシタビン、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、フルダラビン、およびフロクスウリジンなど）、抗有糸分裂薬（タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）など）およびビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、およびビンデシンなど）が含まれる）、アントラサイクリン（ドキソルビシン、ダウノルビシン、バルルビシン、イダルビシン、エピルビシン、およびアクチノマイシン（アクチノマイシンＤなど）が含まれる）、細胞傷害性抗生物質（マイトマイシン、プリカマイシン、およびブレオマイシンが含まれる）、トポイソメラーゼインヒビター（カンプトセシン（カンプトセシン、イリノテカン、およびトポテカンなど）およびエピポドフィロトキシンの誘導体（アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスファート、およびテニポシドなど）が含まれる）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）に対する抗体（ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）など）、他の抗ＶＥＧＦ化合物；サリドマイド（サロミド（登録商標））およびその誘導体（レナリドマイド（レブリミド（登録商標））など）；エンドスタチン；アンギオスタチン；受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）インヒビター（スニチニブ（スーテント（登録商標））など）；チロシンキナーゼインヒビター（ソラフェニブ（ネクサバール（登録商標））、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、パゾパニブ、アキシチニブ、およびラパチニブなど）；トランスフォーミング成長因子−αインヒビターまたはトランスフォーミング成長因子−βインヒビター、および上皮成長因子受容体に対する抗体（パニツムマブ（ベクチビックス（登録商標））およびセツキシマブ（エルビタックス（登録商標）など））が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５７】
好ましい実施形態、特に、癌を処置するための実施形態では、１つまたはそれを超える活性薬剤が、免疫シグナル伝達特性を有する化学療法剤とすることができる。
【０１５８】
５．ターゲティング成分
１つまたはそれを超えるターゲティング成分（本明細書においてターゲティング分子とも呼ばれる）は、送達ビヒクルの中に負荷することができる、その表面に結合することができる、および／またはその内に密封することができる。好ましくは、ターゲティング成分は、送達ビヒクルの外部表面上に表示される。
【０１５９】
例示的な標的分子には、器官、組織、細胞、または細胞外基質、または特定の型の腫瘍もしくは感染細胞に会合する１種またはそれより多くの標的に結合するタンパク質、ペプチド、核酸、脂質、サッカリド、またはポリサッカリドが含まれる。標的ビヒクルがターゲティングする特異性の程度を、適切な親和性および特異性を有するターゲティング分子の選択によって調整することができる。例えば、抗体は非常に特異的である。これらの抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、フラグメント、組み換え抗体、または単鎖抗体であり得、これらの多くは市販されているか、標準的な技術を使用して容易に得られる。抗原提示細胞が結合するＴ細胞特異的分子および抗原ならびに腫瘍ターゲティング分子を、ナノリポゲル表面および／またはホスト分子に結合することができる。ターゲティング分子を、粒子の表面上に存在する１種またはそれより多くのＰＥＧ鎖の末端に結合体化することができる。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、ターゲティング成分が、悪性細胞（例えば腫瘍抗原）上に専ら存在するか、または上昇した量で存在する腫瘍マーカーを特異的に認識する抗体またはその抗原結合断片である。目的の細胞および組織にナノ粒子を誘導するために使用することができる適切なターゲティング分子ならびに標的分子のナノ粒子への結合体化方法は当該分野で公知である。例えば、Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，ら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，２：８３−９０（２００２）を参照のこと。抗体などの抗原結合分子により標的にすることができる例示的な腫瘍抗原は、ワクチン抗原に関して上記に議論される。
【０１６１】
ターゲティング分子はまた、ニューロピリンならびに内皮ターゲティング分子、インテグリン、セレクチン、および接着分子を含むことができる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、ターゲティング成分が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に、特に樹状細胞として知られているＡＰＣのサブクラスに粒子を向ける。樹状細胞は、エンドサイトーシスを媒介することができる多くの細胞表面受容体を発現する。全身に分布する抗原提示細胞上の内部移行表面分子に外因性抗原を向けることにより、粒子の取込みを促進し、療法における重大な律速段階を改善する。
【０１６３】
樹状細胞ターゲティング分子は、樹状細胞の表面上に表示されるエピトープを認識し、結合するモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体またはその断片を含む。樹状細胞ターゲティング分子はまた、樹状細胞上の細胞表面受容体に結合するリガンドも含む。あるそのような受容体、レクチンＤＥＣ−２０５は、体液性（抗体ベース）および細胞性（ＣＤ８  Ｔ細胞）応答を２〜４桁押し上げるためにｉｎ  ｖｉｔｒｏでおよびマウスにおいて使用されてきた（Ｈａｗｉｇｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９４（６）：７６９−７９（２００１）；Ｂｏｎｉｆａｚら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９６（１２）：１６２７−３８（２００２）；Ｂｏｎｉｆａｚら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９（６）：８１５−２４（２００４））。これらの実験では、抗原が、抗ＤＥＣ２０５重鎖に融合され、組み換え抗体分子が、免疫に使用された。
【０１６４】
マンノース特異的レクチン（マンノース受容体）およびＩｇＧ  Ｆｃ受容体を含む様々な他のエンドサイトーシス受容体もまた、この方法で標的にされ、抗原提示効率が同様に増強した。標的にされてもよい他の適した受容体は、ＤＣ−ＳＩＧＮ、３３Ｄ１、ＳＩＧＬＥＣ−Ｈ、ＤＣＩＲ、ＣＤ１１ｃ、熱ショックタンパク質受容体、およびスカベンジャー受容体を含むが、これらに限定されない。
【０１６５】
標的にされてもよい他の受容体は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を含む。ＴＬＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、結合する。ＰＡＭＰは、樹状細胞の表面上のＴＬＲを標的にし、内部に信号を送り、それによって、ＤＣ抗原取込み、成熟、およびＴ細胞刺激性の能力を可能性として増加させる。粒子表面にコンジュゲートされたまたは同時カプセル化されたＰＡＭＰは、非メチル化ＣｐＧ  ＤＮＡ（細菌）、二本鎖ＲＮＡ（ウイルス）、リポポリサッカリド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｈａｒｒｉｄｅ）（細菌）、ペプチドグリカン（細菌）、リポアラビノマンナン（ｌｉｐｏａｒａｂｉｎｏｍａｎｎｉｎ）（細菌）、ザイモサン（酵母）、ＭＡＬＰ−２（細菌）などのマイコプラズマリポタンパク質、フラジェリン（細菌）、ポリ（イノシン−シチジル）酸（細菌）、リポタイコ酸（細菌）、またはイミダゾキノリン（合成）を含む。
【０１６６】
ターゲティング分子は、当該分野で公知である様々な方法を使用して送達ビヒクルに共有結合することができる。好ましい実施形態では、ターゲティング成分が、ＰＥＧ化またはビオチン−アビジンブリッジによって送達ビヒクルに結合される。
【０１６７】
ａ．ＣＤ４０アゴニスト
特定の実施形態では、ターゲティング成分が、ＣＤ４０を標的にする。成分は、ＣＤ４０アゴニストとすることができる。細胞表面分子ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーであり、免疫、造血、血管、上皮、および広範囲の腫瘍細胞を含む他の細胞によって広く発現される。Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ，１３（４）：１０８３−１０８８（２００７）。癌療法のための可能性として考えられる標的として、ＣＤ４０は、免疫活性化の間接的な効果および腫瘍に対する直接的な細胞傷害効果の両方を通して腫瘍後退を媒介してもよく、「１つで２つの」ＣＤ４０アゴニストの作用メカニズムをもたらす。ＣＤ４０アゴニストは、当該分野で公知であり、Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１３（４）：１０８３−１０８８（２００７）において概説される。例示的なアゴニストには、組み換えＣＤ４０Ｌ（組み換えヒト三量体）、ＣＤ−８７０、８９３（完全ヒトＩｇＧ２  ｍＡｂ）、ＳＧＮ−４０（ヒト化ＩｇＧ１）、およびＨＣＤ  １２２（完全ヒトＩｇＧ１  ｍＡｂ）が含まれるが、これらに限定されない。可溶性アゴニストＣＤ４０抗体は、Ｔ細胞媒介性免疫のマウスモデルにおいてＣＤ４＋リンパ球によって提供されるＴ細胞の支援の代わりをすることが示された（Ｋｈａｌｉｌら、Ｕｐｄａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，２：６１−６５（２００７））。好ましい実施形態では、ターゲティング成分が、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、ＣＤ４０リガンド、またはその抗原結合断片である。
【０１６８】
ｂ．インテグリンリガンド
別の実施形態では、ターゲティング成分が、インテグリンに対するリガンドである。研究により、インテグリンが、腫瘍細胞の表面上に過剰発現され、したがって、腫瘍細胞および正常細胞を識別するマーカーとして果たすことができることが示される。あるインテグリンはまた、細胞外経路を通してＴＧＦ−βも活性化する。潜在型ＴＧＦ−βが腫瘍細胞から放出された後、それは、腫瘍細胞の表面上のインテグリンと結合して、潜在型ＴＧＦ−βの活性化に至る。腫瘍微小環境におけるＴＧＦ−β濃度の増加により、免疫抑制が支持され、調節性Ｔ細胞を腫瘍環境に動員する。
【０１６９】
ＲＧＤペプチドは、二重の機能を果たすことができる：それは単に典型的なインテグリンを標的にするリガンドだけではなく（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ  Ｅ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，１２：６９７−７１５（１９９６））、免疫危険シグナルとしても果たし、ＡＰＣを活性化する（Ａｌｔｉｎｃｉｃｅｋら、Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，３９０，１３０３−１１（２００９））。したがって、好ましい実施形態では、ＲＧＤペプチドが、送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封される。
【０１７０】
ｃ．ｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体
特定の実施形態では、ターゲティング成分が、ヒトＭＨＣに関連するｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。アルファ、ベータ鎖またはガンマ／デルタ鎖から構成されるＴ細胞受容体（α／βＴＣＲまたはγ／δＴＣＲ）を含む、細菌、真核生物、または酵母細胞に由来するＴ細胞受容体組み換えタンパク質。例えば、アカゲザルＴＣＲα（ＴＣＲＡＲ２  ５’ＣＣＣ０ＧＧＣＣＡＣＴＴＴＣＡＧＧＡＧＧＡＧＧ−３’）（配列番号１）およびβ（ＴＣＲＢＲ  ５’−ＧＴＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＣ−ＣＡＴＣＣＴＣ−３’）（配列番号２）に由来する完全長外部ドメイン保存配列。
【０１７１】
ｄ．ＩＬ−１５／ＩＬ１５Ｒα
別の実施形態では、ターゲティング成分は、ＩＬ−１５／ＩＬ１５Ｒα複合体である。インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、ＩＬ−２とある受容体サブユニットを共有し、したがって、いくつかのオーバーラップする作用メカニズムを有するサイトカインである。ＩＬ−１５は、樹状細胞によって発現され、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖およびプライミング（ｐｒｉｍｉｎｇ）の重要なシグナルを提供する。したがって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞にナノ粒子組成物を向けるために使用することができる。
ヒトＩＬ−１５：
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳ  ＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬ  ＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧ  ＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳ  ＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩ  ＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤ  ＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨ  ＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣ  ＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴ  ＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮ  ＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥ  ＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥ  ＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮ  ＴＳ（配列番号３）
ヒトＩＬ−１５受容体：
ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＰＡＬＶＨＱＲＰＡＰＰＳＴＶＴＴＡＧＶＴＰＱＰＥＳＬＳＰＳＧＫＥＰＡＡＳＳＰＳＳＮＮＴＡＡＴＴＡＡＩＶＰＧＳＱＬＭＰＳＫＳＰＳＴＧＴＴＥＩＳＳＨＥＳＳＨＧＴＰＳＱＴＴＡＫＮＷＥＬＴＡＳＡＳＨＱＰＰＧＶＹＰＱＧＨＳＤＴＴＶＡＩＳＴＳＴＶＬＬＣＧＬＳＡＶＳＬＬＡＣＹＬＫＳＲＱＴＰＰＬＡＳＶＥＭＥＡＭＥＡＬＰＶＴＷＧＴＳＳＲＤＥＤＬＥＮＣＳＨＨＬ（配列番号４）
【０１７２】
Ｃ．ホスト分子
ホスト分子は、活性薬剤と可逆的に会合して複合体を形成する分子または材料である。可逆的に活性薬剤と複合体を形成する能力のために、ホスト分子は複合体化した活性薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの放出を調節するように機能することができる。
【０１７３】
いくつかの場合、ホスト分子は、活性薬剤と包接複合体を形成する分子である。包接複合体は、活性薬剤（すなわち、ゲスト）または活性薬剤の一部が別の分子、分子群、または材料（すなわち、ホスト）の空隙内に挿入された場合に形成される。典型的には、ゲスト分子は、宿主の枠組みや構造に影響を及ぼすことなくホスト分子と会合する。例えば、包接複合体の場合、ホスト分子中の利用可能な空隙のサイズおよび形状は、複合体形成の結果として実質的に不変である。
【０１７４】
ホスト分子は、小分子、オリゴマー、ポリマー、またはその組み合わせであり得る。例示的なホストには、ポリサッカリド（アミロース、シクロデキストリン、および複数のアルドース環を含む他の環状またはらせん状の化合物（例えば、モノサッカリド（グルコース、フルクトース、およびガラクトースなど）の１，４結合および１，６結合を介して形成された化合物）など）およびジサッカリド（スクロース、マルトース、およびラクトースなど）が含まれる。他の例示的なホスト化合物には、クリプタンド、クリプトファン、キャビタンド、クラウンエーテル、デンドリマー、イオン交換樹脂、カリックスアレーン、バリノマイシン、ナイジェリシン、カテナン、ポリカテナン、カルセランド、ククルビツリル、およびスフェランドが含まれる。
【０１７５】
さらなる他の実施形態では、有機ホスト化合物または有機ホスト材料には、カーボンナノチューブ、フラーレン、および／またはグラフィーム（ｇｒａｐｈｅｍｅ）ベースのホスト材料が含まれる。カーボンナノチューブ（ＣＮＴ）は、円柱ナノ構造を有する炭素の同素体である。ナノチューブは球状バッキーボールも含まれるフラーレン構造ファミリーのメンバーであり、ナノチューブの末端をバッキーボール構造の半球でキャッピングすることができる。その名称は、グラフェンと呼ばれる１原子の厚さの炭素シートによって形成された壁を有するその長い中空構造に由来する。これらのシートは特異的且つ個別の（「カイラル」）角で丸められ、ローリング角と半径との組み合わせがナノチューブの特性を決定する。ナノチューブを、単一壁ナノチューブ（ＳＷＮＴ）および多重壁ナノチューブ（ＭＷＮＴ）に分類することができる。ナノチューブおよび／またはフラーレンは、例えば、チューブまたはフラーレン内に送達すべき材料（すなわち、ゲスト）のカプセル化または捕捉によってホストとしての機能を果たすことができる。あるいは、チューブおよび／またはフラーレンの外部および／または内部を、送達すべきゲストと複合体化することができる官能基で官能化することができる。複合体化には、イオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、およびπ−π相互作用（πスタッキングなど）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７６】
グラフェンは炭素同素体でもある。グラフェンの構造は、ハニカム状の結晶格子中に高密度に充填されたｓｐ２結合炭素原子の１原子の厚さの平面シートである。グラフェンは、いくつかの炭素同素体（グラファイト、チャコール、カーボンナノチューブ、およびフラーレンが含まれる）の基本構造要素である。送達すべきゲストは、ナノチューブおよびフラーレンについて上記のように、グラフェンまたは官能化グラフェンと会合および／または複合体化することができる。
【０１７７】
ホスト材料は無機材料でもあり得、無機リン酸塩およびシリカが含まれるが、これらに限定されない。
【０１７８】
適切なホスト分子は、一般に、送達すべき活性薬剤の正体および所望の薬物放出プロフィールを考慮してナノリポゲルまたはナノ粒子に組み込むために選択される。送達される活性薬剤との複合体を形成するために、ホスト分子を、一般に、立体的性質（サイズ）および電子的性質（電荷および極性）の両方の観点から活性薬剤に有利なように選択する。例えば、送達すべき活性薬剤と包接複合体を形成するホスト分子の場合、ホスト分子は、典型的には、活性薬剤を組み込むための適切なサイズの間隙を保有するであろう。さらに、ホスト分子は、典型的には、活性薬剤との複合体形成を促進するのに適切な疎水性／親水性の間隙を保有する。ゲスト−ホスト相互作用の強度は、ナノリポゲルまたはナノ粒子からの活性薬剤の薬物放出プロフィールに影響を及ぼし、ゲスト−ホスト相互作用が強いほど一般に薬物放出が長期になるであろう。
【０１７９】
一般に、ホスト分子を、ナノリポゲルコアまたはナノ粒子コアを形成するポリマーマトリクス内に分散させる。いくつかの場合、１種またはそれより多くのホスト分子を、ポリマーマトリクスに共有結合させる。例えば、ホスト分子を、ポリマーマトリクスと反応する１種またはそれより多くのペンダント反応性官能基で官能化することができる。特定の実施形態では、ホスト分子は、ポリマーマトリクスと反応してポリマーマトリクスと架橋する１種またはそれより多くのペンダント反応性官能基を含む。適切な反応性官能基の例には、メタクリラート、アクリラート、ビニル基、エポキシド、チイラン、アジド、およびアルキンが含まれる。
【０１８０】
一定の実施形態では、ホスト分子はシクロデキストリンである。シクロデキストリンは、６個（α−シクロデキストリン）、７個（β−シクロデキストリン）、８個（γ−シクロデキストリン）、またはそれを超えるα−（１，４）連結グルコース残基を含む環状オリゴサッカリドである。シクロデキストリンのヒドロキシル基が環の外側に配向している一方で、グルコシドの酸素および非交換性水素原子の２つの環は間隙の内側に向かっている。結果として、シクロデキストリンは、親水性の外部と組み合わせた疎水性の内部間隙を保有する。疎水性活性薬剤との組み合わせの際に、活性薬剤（すなわち、ゲスト）は、シクロデキストリン（すなわち、ホスト）の疎水性の内部に挿入される。
【０１８１】
シクロデキストリンを、大環状分子の一級または二級ヒドロキシル基またはその両方のいくつかまたはすべてが１種またはそれより多くのペンダント基で官能化されるように化学修飾することができる。ペンダント基は、ポリマーマトリクス（メタクリラート、アクリラート、ビニル基、エポキシド、チイラン、アジド、アルキン、およびその組み合わせなど）と反応することができる反応性官能基であり得る。ペンダント基はまた、シクロデキストリンの溶解度を改変する働きをすることができる。例示的なこの型の基には、１種またはそれより多くの（例えば、１、２、３、または４つの）ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルボニル基、アシル基、オキシ基、およびオキソ基で任意選択的に置換されたスルフィニル、スルホニル、ホスファート、アシル、およびＣｌ〜Ｃ１２アルキル基が含まれる。これらのアルコール残基の修飾方法は当該分野で公知であり、多数のシクロデキストリン誘導体が市販されている。
【０１８２】
適切なシクロデキストリンの例には、α−シクロデキストリン；β−シクロデキストリン；γ−シクロデキストリン；メチルα−シクロデキストリン；メチルβ−シクロデキストリン；メチルγ−シクロデキストリン；エチルβ−シクロデキストリン；ブチルα−シクロデキストリン；ブチルβ−シクロデキストリン；ブチルγ−シクロデキストリン；ペンチルγ−シクロデキストリン；ヒドロキシエチルβ−シクロデキストリン；ヒドロキシエチルγ−シクロデキストリン；２−ヒドロキシプロピルα−シクロデキストリン；２−ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン；２−ヒドロキシプロピルγ−シクロデキストリン；２−ヒドロキシブチルβ−シクロデキストリン；アセチルα−シクロデキストリン；アセチルβ−シクロデキストリン；アセチルγ−シクロデキストリン；プロピオニルβ−シクロデキストリン；ブチリルβ−シクロデキストリン；スクシニルα−シクロデキストリン；スクシニルβ−シクロデキストリン；スクシニルγ−シクロデキストリン；ベンゾイルβ−シクロデキストリン；パルミチルβ−シクロデキストリン；トルエンスルホニルβ−シクロデキストリン；アセチルメチルβ−シクロデキストリン；アセチルブチルβ−シクロデキストリン；グルコシルα−シクロデキストリン；グルコシルβ−シクロデキストリン；グルコシルγ−シクロデキストリン；マルトシルα−シクロデキストリン；マルトシルβ−シクロデキストリン；マルトシルγ−シクロデキストリン；α−シクロデキストリンカルボキシメチルエーテル；β−シクロデキストリンカルボキシメチルエーテル；γ−シクロデキストリンカルボキシメチルエーテル；カルボキシメチルエチルβ−シクロデキストリン；リン酸エステルα−シクロデキストリン；リン酸エステルβ−シクロデキストリン；リン酸エステルγ−シクロデキストリン；３−トリメチルアンモニウム−２−ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン；スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン；カルボキシメチルα−シクロデキストリン；カルボキシメチルβ−シクロデキストリン；カルボキシメチルγ−シクロデキストリン、およびその組み合わせが含まれる。
【０１８３】
好ましいシクロデキストリンには、１種またはそれより多くのペンダントアクリラート基またはペンダントメタクリラート基で官能化されたα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、およびγ−シクロデキストリンが含まれる。特定の実施形態では、ホスト分子は、複数のメタクリラート基で官能化されたβ−シクロデキストリンである。例示的なこの型のホスト分子を以下：
【化４】
2020073617.tif 000005
に例示し、ここで、ＲはＣ１〜Ｃ６アルキル基を示す。
【０１８４】
さらなる例として、ホスト分子はまた、イオン相互作用を介して活性薬剤と一過性に会合する材料であり得る。例えば、制御薬物放出で用いる当該分野で公知の従来のイオン交換樹脂は、ホスト分子としての機能を果たし得る。例えば、Ｃｈｅｎ，ら、“Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｏｎ−ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ  ａｓ  ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｓｔｕｄｉｅｓ．”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４４（３）：２１１−２１５（１９９２）およびＦａｒａｇ，ら、“Ｒａｔｅ  ｏｆ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｆｒｏｍ  ｉｏｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｒｅｓｉｎｓ”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．７７（１０）：８７２−８７５（１９８８）を参照のこと。
【０１８５】
例示を目的として、送達される活性薬剤がカチオン種である場合、適切なイオン交換樹脂は、生理学的に許容され得る足場上にスルホン酸基（または修飾スルホン酸基）または任意選択的に修飾されたカルボン酸基を含むことができる。同様に、活性薬剤がアニオン種である場合、適切なイオン交換樹脂は、アミンベースの基（例えば、強力な相互作用のためのトリメチルアミンまたは弱い相互作用のためのジメチルエタノールアミン）を含むことができる。カチオン性ポリマー（ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）など）は、複合体オリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡなど）のホスト分子として機能することができる。
【０１８６】
他の場合では、ホスト分子はデンドリマー（ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーなど）である。カチオン性およびアニオン性のデンドリマーは、上記のように活性薬剤とのイオン性会合によってホスト材料として機能することができる。さらに、中サイズのデンドリマー（第３世代および第４世代のＰＡＭＡＭデンドリマーなど）は、例えば、核酸の複合体化によって活性薬剤に適応することができる内部ボイドスペースを保有し得る。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、ホスト分子は、シクロデキストリンと結合体化したデンドリマーである。いくつかの実施形態では、シクロデキストリンは、デンドリマーの第一級アミンを遮蔽する。適切なデンドリマーおよびシクロデキストリンは上記で考察している。未修飾デンドリマー（すなわち、第４世代ＰＡＭＡＭデンドリマー（Ｇ４））は、経験的に、エンドソーム破壊において、シクロデキストリン（ｃｙｃｌｏｄｅｘｒｉｎ）（ＣＤ）と結合体化したデンドリマーより優れている（以下の実施例を参照のこと）。理論に拘束されないが、ＰＡＭＡＭデンドリマー上の末端アミン基がプロトンスポンジ効果によってエンドソームを緩衝化し、エンドソームを破壊すると考えられる。したがって、ＣＤが増えることによってエンドソーム破壊が減少する。以下の実施例で考察するように、デンドリマーとシクロデキストリンとの異なる組み合わせを使用して、細胞内でのトランスフェクション効率およびエンドソーム破壊レベルを調整することができる。
【０１８８】
好ましくは、１種またはそれより多くのホスト分子は、ポリマーマトリクスの約０．１％〜約４０％ｗ／ｗ、より好ましくは全処方物の約０．１％〜約２５％ｗ／ｗの量で存在する。
【０１８９】
ＩＩＩ．製造方法、負荷方法、および薬学的組成物
Ａ．製造方法および負荷方法
１．ナノリポゲル
ナノリポゲルは、核酸、タンパク質、および／または小分子の持続送達についてリポソームおよびポリマーベースの粒子の両方の利点を組み合わせたナノ粒子である。ナノリポゲルは、球状、円板、ロッド、または異なるアスペクト比の他の幾何学的形状であり得る。ナノスフェアは、より大きい可能性がある（すなわち、微粒子）。ナノリポゲルは、典型的には、遠隔負荷によって薬剤をカプセル化可能であり、且つ異なる放出速度を容易にするために特性を調整可能な合成ポリマーまたは天然ポリマーから形成される。放出速度を、ポリマー−脂質比を０．０５〜５．０、より好ましくは０．５〜１．５に変化させることによって調整する。
【０１９０】
ナノリポゲルを、形成前、形成中、または形成後のいずれかに薬剤を負荷し、その後に薬剤のための制御放出ビヒクルとして機能するようにデザインする。ナノリポゲルに、その後に複数の薬剤が制御放出されるように１つを超える薬剤を負荷することができる。
【０１９１】
ナノリポゲルに、形成中に１種またはそれより多くの第１の薬剤を負荷し、形成後に第２の薬剤の存在下でのナノリポゲルの再水和過程によって１種またはそれより多くの第２の薬剤を負荷する。例えば、ナノリポゲルに、アジュバントとしての機能を果たす分子を負荷し、その後、形成後に標的抗原と共にアジュバントを制御放出させるための１種またはそれより多くの標的抗原を組み込む。
【０１９２】
２．ポリマーナノ粒子
ａ．乳濁液による方法
いくつかの実施形態では、ポリマーナノ粒子は、乳濁液溶媒蒸発方法を使用して調製される。例えば、ポリマー物質を水不混和性有機溶媒に溶解し、薬物溶液または薬物溶液の組み合わせと混合する。水不混和性有機溶媒は、１つまたはそれを超える以下のものとすることができる：クロロホルム、ジクロロメタン、およびアシルアセタート。薬物は、１つまたはそれを超える以下のものに溶解することができる：アセトン、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール、アセトニトリル、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、これらに限定されない。次に、得られた混合溶液に水溶液を添加し、乳化によって乳濁溶液が得る。乳化技術は、プローブ超音波処理またはホモジナイザーによる均質化となり得るが、これらに限定されない。ペプチドまたはフルオロフォアまたは薬物は、粒子のポリマーマトリクスの表面と会合してもよい、その内にカプセル化されてもよい、それによって囲まれてもよい、および／またはその全体にわたって分配されてもよい。
【０１９３】
ｂ．ナノ沈殿法
別の実施形態では、ポリマーナノ粒子は、ナノ沈殿法またはマイクロ流体デバイスを使用して調製される。ポリマー物質を、水混和性有機溶媒中で薬物または薬物の組み合わせと混合する。
【０１９４】
その後、得られた混合溶液を水溶液に添加し、ナノ粒子溶液を得る。
【０１９５】
ｃ．例示的な調製方法
粒子は、様々な方法を使用して様々なポリマーから作ることができ、当該分野で公知である方法に従って、粒子のポリマー組成、粒子に負荷されているまたは会合している薬剤（複数可）を含む基準に基づいて選択することができる。例示的な方法は、以下に提供する。
【０１９６】
ａ．溶媒蒸発．この方法では、ポリマーを、塩化メチレンなどの揮発性有機溶媒に溶解する。薬物（可溶性であるか、または細かい粒子として分散した）を溶液に添加し、混合物をポリ（ビニルアルコール）などの表面活性剤を含有する水溶液に懸濁する。得られた乳濁液を、ほとんどの有機溶媒が蒸発するまで撹拌し、固体粒子を残す。得られた粒子を、水で洗浄し、凍結乾燥器で一晩、乾燥する。様々なサイズ（０．５〜１０００ミクロン）および形態を有する粒子を、この方法によって得ることができる。この方法は、ポリエステルおよびポリスチレンのような比較的安定なポリマーに有用である。
【０１９７】
しかし、ポリ酸無水物などの不安定なポリマーは、水の存在により生成プロセスの間に分解し得る。これらのポリマーについては、完全に無水の有機溶媒中で実行される以下の２つの方法が、より有用である。
【０１９８】
ｂ．ホットメルトマイクロカプセル化．この方法では、ポリマーを、最初に融解し、その後、固体粒子と混合する。混合物を、非混和性溶媒（シリコーン油のような）に懸濁し、連続して撹拌しながら、ポリマーの融点より高い５℃まで加熱する。一旦乳濁液が安定化したら、ポリマー粒子が凝固するまでそれを冷却する。結果として生じる粒子を、石油エーテルによりデカンテーションによって洗浄し、易流動性の粉剤を得る。０．５〜１０００ミクロンのサイズを有する粒子が、この方法により得られる。この技術により調製された球体の外表面は、通常、滑らかで高密度である。この手順は、ポリエステルおよびポリ酸無水物から作製される粒子を調製するために使用される。しかし、この方法は、１，０００〜５０，０００の分子量を有するポリマーに限られる。
【０１９９】
ｃ．溶媒除去．この技術は、ポリ酸無水物について主としてデザインされる。この方法では、薬物を、塩化メチレンのような揮発性有機溶媒中の選択されたポリマーの溶液に分散または溶解する。この混合物を、有機油（シリコーン油など）中に撹拌することによって懸濁し、乳濁液を形成する。溶媒蒸発と異なり、この方法は、高い融点および様々な分子量を有するポリマーから粒子を作製するために使用することができる。１〜３００ミクロンの範囲にわたる粒子を、この手順によって得ることができる。この技術により製造された球体の外部の形態は、使用されるポリマーのタイプに非常に依存性である。
【０２００】
ｄ．噴霧乾燥  この方法では、ポリマーを、有機溶媒に溶解する。既知量の活性薬物を、ポリマー溶液に懸濁するか（不溶性の薬物）、または同時に溶解する（可溶性の薬物）。その後、溶液または分散液を噴霧乾燥させる。ミニ噴霧乾燥器（Ｂｕｃｈｉ）についての典型的なプロセスパラメーターは、以下のとおりである：ポリマー濃度＝０．０４ｇ／ｍＬ、入口温度＝−２４℃、出口温度＝１３〜１５℃、アスピレーター設定＝１５、ポンプ設定＝１０ｍＬ／分、噴霧流量＝６００Ｎｌ／時間、およびノズル直径＝０．５ｍｍ。１〜１０ミクロンの範囲にわたる微粒子が、使用されるポリマーのタイプに依存する形態で得られる。
【０２０１】
ｅ．ヒドロゲル粒子．アルギナートなどのゲル型ポリマーから作製される粒子は、従来のイオンゲル化技術により製造される。ポリマーを、水溶液に最初に溶解し、硫酸バリウムまたはいくつかの生理活性薬剤と混合し、その後、いくつかの場合において液滴を切り取るために窒素ガスのフローを用いる微小滴形成デバイスを通して押し出す。ゆっくりと撹拌される（およそ１００〜１７０ＲＰＭ）イオン硬化浴を、押し出しデバイスの下に置き、形成されている微小滴を捕らえる。粒子を、２０〜３０分間、浴槽中でそのままインキュベートし、ゲル化が起こるのに十分な時間を与える。粒径は、様々なサイズの押し出し成形機を使用することによってまたは窒素ガスもしくはポリマー溶液の流速を変動することによってコントロールされる。キトサン粒子は、酸性溶液にポリマーを溶解し、それをトリポリホスファートと架橋することによって調製することができる。カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）粒子は、酸性溶液にポリマーを溶解し、鉛イオンにより粒子を沈殿させることによって調製することができる。負に荷電しているポリマー（例えば、アルギナート、ＣＭＣ）の場合には、様々な分子量の正に荷電しているリガンド（例えば、ポリリジン、ポリエチレンイミン）をイオン結合することができる。
【０２０２】
Ｂ．薬学的組成物
医薬組成物は、非経口（筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）、もしくは皮下注射）で、点滴注入で、またはデポー剤での投与のため、投与の各経路に適切な剤形で処方することができる。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、組成物を、標的化細胞への組成物の送達に有効な量で、例えば、静脈内投与または腹腔内投与によって全身投与する。他の経路は、点滴注入または粘膜を含む。
【０２０４】
一定の実施形態では、組成物を、例えば、処置すべき部位への直接注射によって局所投与する。いくつかの実施形態では、組成物を、１種またはそれより多くの腫瘍または罹患した組織に注射するか、または別様に直接投与する。典型的には、局所注射により、組成物の局所濃度が全身投与によって達成することができる濃度より高くなる。いくつかの実施形態では、組成物を、カテーテルまたはシリンジの使用によって適切な細胞に局所的に送達させる。かかる組成物を細胞へ局所的に送達する他の手段には、注入ポンプの使用または埋没物隣接領域への組成物の徐放に影響を及ぼし得る組成物のポリマー埋没物への組み込みが含まれる。
【０２０５】
細胞に対して直接的に（組成物の細胞との接触などによる）または間接的に（任意の生物学的過程の作用などによる）組成物を提供することができる。例えば、組成物を、生理学的に許容され得るキャリアまたはビヒクル中に処方し、細胞周囲の組織または流体に注入することができる。組成物は、単純拡散、エンドサイトーシス、または任意の能動輸送機構もしくは受動輸送機構によって細胞膜を横切ることができる。
【０２０６】
選択される投薬量は、所望の治療効果、投与経路、および所望の処置持続時間に依存する。一般に、ナノ粒子組成物は、投与当たり約０００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲で投与することができる（例えば、より詳細に下記に議論されるように毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）。投与経路は、同様に、投薬量を決定する際に考慮することができる。例えば、特定の実施形態では、ナノ粒子組成物が、静脈内または自己の解釈に基づく（ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎａｌ）経路によって０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲で（例えば、より詳細に下記に議論されるように毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）または皮下経路（例えば、腫瘍もしくは腫瘍微小環境の中へもしくはその付近への局所的な注射）について０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの範囲で（例えば、より詳細に下記に議論されるように毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）投与される。より例示的な投薬量は、下記に議論される。
【０２０７】
１．非経口投与用処方物
好ましい実施形態では、組成物を、非経口注射によって水溶液で投与する。処方物は、懸濁液または乳濁液の形態であり得る。一般に、有効量の１種またはそれより多くの活性薬剤を含む薬学的組成物を提供し、この薬学的組成物は、任意選択的に、薬学的に許容され得る希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、および／またはキャリアを含む。かかる組成物は、希釈剤（例えば、滅菌水、種々の緩衝液の成分（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、およびイオン強度の緩衝化食塩水など）；ならびに、任意選択的に、添加物（界面活性剤および溶解補助剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、ポリソルベート２０または８０とも呼ばれる）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、および防腐剤（例えば、チメロサール（Ｔｈｉｍｅｒｓａｌ）、ベンジルアルコール）など）を含むことができる。非水性溶媒または非水性ビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（オリーブ油およびトウモロコシ油など）、ゼラチン、および注射用有機エステル（オレイン酸エチルなど）である。処方物を凍結乾燥させ、使用直前に再懸濁することができる。処方物を、例えば、細菌保持フィルタを介した濾過、組成物への滅菌剤の組み込み、組成物の照射、または組成物の加熱によって滅菌することができる。
【０２０８】
２．局所投与、粘膜投与および経口投与のための処方物
組成物を、局所適用または点滴注入（instillation）することができる。局所投与には、肺、鼻、口（舌下、口内）、膣、または直腸の粘膜への適用が含まれ得る。これらの投与方法は、粘膜輸送構成要素でシェルを処方することによって有効となり得る。組成物を吸入中に肺に送達させ、空気動力学的直径が約５ミクロン未満のエアロゾルまたは噴霧乾燥粒子のいずれかとして送達した場合に肺上皮内層を横切って血流に到達することができる。
【０２０９】
治療用製品の肺送達のためにデザインした広範な機械デバイスを使用することができ、機械デバイスには、噴霧器、定量吸入器、および粉末吸入器（すべて当業者によく知られている）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１０】
粘膜投与用の処方物は、典型的には、噴霧乾燥した薬物粒子であり、この粒子を錠剤、ゲル、カプセル、懸濁液、または乳濁液に組み込むことができる。標準的な薬学的賦形剤は、任意の調合者から利用可能である。
【０２１１】
経口処方物は、チューインガム、ゲルストリップ、錠剤、カプセル、またはロゼンジの形態であり得る。経口処方物は、腸での防御を付与するかＧＩ管（腸上皮および粘膜が含まれる）を介した送達を増強することができる賦形剤または粒子に対する他の改変を含むことができる（Ｓａｍｓｔｅｉｎ，ら、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．．２９（６）：７０３−８（２００８）を参照のこと）。
【０２１２】
経皮処方物も調製することができる。これらは、典型的には、軟膏、ローション、スプレー、またはパッチであろう。これらの全てを標準的なテクノロジーを使用して調製することができる。経皮処方物は、透過増強剤を含むことができる。化学的増強剤および物理的方法（エレクトロポレーションおよびマイクロニードルが含まれる）は、この方法と併せて役立ち得る。
【０２１３】
ＩＶ．処置方法
Ａ．免疫応答を刺激または増強するための方法
ナノ粒子組成物を、対象における免疫応答を誘発する、増強する、または増加させるために有効量でそれを必要とする対象に投与することができる。典型的に、免疫応答は、免疫刺激応答である。例えば、組成物を、細胞（駆動されたＴ細胞）免疫応答、体液性（駆動されたＢ細胞）免疫応答、Ｔ細胞活性、および／もしくはＴ細胞増殖を増加させるために、Ｔ細胞阻害性シグナルを低下させるために、サイトカインの産生を増強するために、Ｔ細胞分化もしくはエフェクター機能を刺激するために、Ｔ細胞の生存を促進するために、またはその任意の組み合わせのために、有効量で投与することができる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、組成物により、免疫抑制性の応答を低下させるか、または阻害することができる。例えば、組成物を、Ｔｒｅｇを排除する、Ｔｒｅｇ分化、輸送、および／もしくはエフェクター機能をブロックするために、エフェクター細胞抑制閾値を上げるために、またはその任意の組み合わせのために、有効量で投与することができる。
【０２１５】
送達ビヒクルは、同じ標的細胞への２つまたはそれを超える活性薬剤の同時または順序づけられた送達に特に有用である。例えば、同じ送達ビヒクルの中へのまたはその上への２つまたはそれを超える活性薬剤の共負荷は、両方の薬剤が同じ標的細胞に送達される可能性を増加し得る。使用者は、どの活性薬剤を送達ビヒクルの表面上に提示するかおよびどれをその中にカプセル化するかをコントロールすることができる。したがって、使用者は、それぞれの活性薬剤をどのように、またいつ標的細胞に提示するかを決定することができる（すなわち、細胞の外部の受容体に、エンドサイトーシス後に細胞内で、など）。
【０２１６】
同時送達はまた、２つの異なる経路への同時のターゲティングも可能にする。例えば、ナノ粒子組成物は、免疫刺激応答を誘発するか、または増加させることができ、同時に、免疫抑制性の応答を減少させるか、または低下させることができる。典型的に、そのような組成物は、少なくとも２つの活性薬剤を含み、第１の活性薬剤は、免疫刺激応答を増加させ、第２の活性薬剤は、免疫抑制性の応答を減少させる。例示的な組成物は、ＩＬ−２などの炎症性サイトカインおよびＳＢ５０５１２４またはロサルタンなどのＴＧＦ−β阻害剤を含む。さらなる実施形態では、粒子は、ターゲティング成分、例えば、ＲＧＤペプチドなどの腫瘍ターゲティング成分を含む。
【０２１７】
別の実施形態では、それぞれの活性薬剤は、例えば、両方の薬剤が、同じ細胞に対して作用するまたは同じ微小環境中に局在化する必要がない場合、一緒にまたは別々に対象に送達される別々の粒子に負荷される。
【０２１８】
本明細書において開示されるナノ粒子組成物はまた、癌患者において排除され得るおよび／または無効となり得る機能的ＡＰＣおよびＴ−ヘルパー細胞を模倣するようにデザインすることができる。ヒトにおける免疫は、２つの進化論的な応答−自然および適応から構成される。通常免疫系に提示されないトリガリング分子、外来性の分子または「自己」をベースにする分子のＡＰＣへの提示は、両方の応答にとって重要である。総称して「危険シグナル」と呼ばれているこれらの分子は、疾患またはおそらく疾患をもたらすであろう状況の存在について特にＡＰＣを介して免疫系に警報する。ナノ粒子は、危険シグナル伝達を促進し、さらに、活性化ＡＰＣを模倣して、人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）として果たすために効果的に用いることができる。いくつかの特定の実施形態では、粒子が、樹状細胞を模倣するか、または人工樹状細胞として機能するようにデザインされる。特定の実施形態では、粒子は、それらの表面上にＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を提示する。
【０２１９】
ナノ粒子組成物の活性または有効性は、コントロールと比較することができる。適したコントロールは、当該分野で公知である。例えば、コントロールは、処置前の対象とすることができる。組成物の活性または有効性は、処置後の対象の状態または症状における変化とすることができる。
【０２２０】
コントロールはまた、可溶性形態のまたは異なる送達ビヒクルにおける同じ活性薬剤により並行して処置された同じ状態または症状を有する対象とすることもできる。いくつかの実施形態では、可溶性形態のまたは異なる送達ビヒクルにおける同じ活性薬剤の投与と比較して、より少ない量の活性薬剤を使用するか、活性薬剤をそれほど頻繁に投与しないか、またはその組み合わせである。例えば、いくつかの実施形態では、可溶性形態で投与される活性薬剤と比較して、１０、２５、５０、７５、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００分の１の活性薬剤をナノ粒子組成物に使用する。
【０２２１】
典型的に、開示されるナノ粒子組成物は、改善された活性、有効性、または効能を示す。例えば、ビヒクルにより送達される活性薬剤（複数可）の治療的な効力は、送達ビヒクルがない状態での薬剤（複数可）を越えることができる。開示される送達ビヒクルの改善された治療的な効力は、標的細胞に対する薬剤（複数可）の結合活性の増加、２つもしくはそれを超える治療剤の同時の高い局所濃度、同時の抑制性エレメントの減退および免疫系の刺激性エレメントの増強、免疫系の刺激性エレメントの選択的なターゲティング、疾患細胞の直接的なターゲティング、またはその任意の組み合わせによるものとすることができる。
【０２２２】
Ｂ．処置される疾患
ナノ粒子組成物を、疾患もしくは障害またはその１つもしくはそれを超える症状を予防する、遅延させる、処置する、またはその重症度を低下させるために、有効量でそれを必要とする対象に予防的にまたは治療的に投与することができる。開示される組成物は、全身性の半減期および体内分布が重要であり、可溶性形態でまたは他の場合には送達ビヒクルがない状態で投与された場合にそれほど有効でないまたは効果がないかもしれない薬剤による多くの疾患の処置およびコントロールの可能性を提供する。
【０２２３】
疾患または障害は、例えば、癌または感染症とすることができる。
【０２２４】
１．癌
開示される組成物は、良性または悪性癌およびその腫瘍を処置するために使用することができる。処置は、癌細胞を直接標的にし、死滅させることができるか、癌細胞に対する免疫応答を増加させることによって癌細胞を間接的に標的にすることができるか、またはその組み合わせである。
【０２２５】
成熟した動物では、バランスは、通常、ほとんどの器官および組織において、細胞再生および細胞死の間で維持される。体内の様々なタイプの成熟細胞は、所与の寿命を有し、これらの細胞が死滅すると、新たな細胞が、様々なタイプの幹細胞の増殖および分化によって生成される。正常な状況下では、新たな細胞の産生は、調節されるので、任意の特定のタイプの細胞の数は一定のままである。しかし、時々、正常な成長−コントロールメカニズムにもはや応答性ではない細胞が発生する。これらの細胞は、かなりのサイズまで増えることができる細胞のクローンをもたらし、腫瘍または新生物を産生する。無限の成長ができず、健康な周囲の組織に広範囲に侵入しない腫瘍は、良性である。成長し続け、進行的に侵襲性になる腫瘍は、悪性である。癌という用語は、特に悪性腫瘍を指す。コントロールされない成長に加えて、悪性腫瘍は、転移を示す。このプロセスにおいて、癌性細胞の小さな塊は腫瘍から移動し、血液またはリンパ管に侵入し、他の組織に運ばれ、ここでそれらは増殖し続ける。このように、ある部位の原発性腫瘍は、別の部位で二次性腫瘍をもたらし得る。
【０２２６】
開示される組成物は、対象における腫瘍の成長を遅延させるか、もしくは阻害するか、腫瘍の成長もしくはサイズを低下させるか、またはそれをすべて排除するか、腫瘍の転移を阻害するか、もしくは低下させるか、および／または腫瘍発生もしくは成長に関連する症状を阻害するか、もしくは低下させることができる。例えば、いくつかの実施形態では、組成物により、ある期間にわたって、対象における腫瘍量を低下させるか、または腫瘍成長を遅らせるか、もしくは予防する。
【０２２７】
処置されてもよい悪性腫瘍は、腫瘍が由来する組織の胚性の起源に従って本明細書において分類される。癌は、皮膚または内臓および腺の上皮内層などの内胚葉または外胚葉組織から発生する腫瘍である。肉腫は、それほど頻繁に発生しないが、骨、脂肪、および軟骨などの中胚葉結合組織に由来する。白血病およびリンパ腫は、骨髄の造血細胞の悪性腫瘍である。白血病は、単一の細胞として増殖するのに対して、リンパ腫は、腫瘍の塊として成長する傾向がある。悪性腫瘍は、身体の多数の器官または組織に現れ、癌を確立し得る。
【０２２８】
提供される組成物および方法により処置することができる癌のタイプは、多発性骨髄腫などの血管の癌ならびに骨、膀胱、脳、乳房、頸部、結腸、直腸、食道、腎臓、肝臓、肺、鼻咽腔、膵臓、前立腺、皮膚、胃、および子宮の腺癌および肉腫を含む固形癌を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、開示される組成物が、多発癌のタイプを並行して処置するために使用される。組成物はまた、複数の場所の転移または腫瘍を処置するために使用することもできる。
【０２２９】
投与は、既存の腫瘍または伝染病の処置に限定されないが、個人においてそのような疾患を発症する危険性を予防するまたは低下させるために、つまり予防的な使用のために使用することができる。予防的なワクチン接種についての有力候補は、癌を起こす高い危険性を有する、すなわち、あるタイプの癌の個人的なまたは家族性の病歴を有する個人を含む。
【０２３０】
２．感染症
組成物は、感染症、例えば、ウイルス感染症、細菌性感染症、真菌感染症、または原生動物感染症に罹患している対象における免疫応答を刺激するために使用することができる。したがって、一実施形態は、感染症に対する免疫応答を増加させるために、有効量のナノ粒子組成物を投与することによって感染症を処置するための方法を提供する。
【０２３１】
処置することができる代表的な感染症は、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ、Ａｎａｂａｅｎａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｈｌｏｒｏｂｉｕｍ、Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｂ型  （ＨＩＢ）、Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ  Ａ、ＢおよびＣ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｙｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ、Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｎ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｐｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ、Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ、およびＴｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉを含むが、これらに限定されない微生物によって引き起こされる感染症を含むが、これらに限定されない。
【０２３２】
Ｃ．例示的な疾患処置戦略
活性薬剤の特定の組み合わせもまた、本明細書において開示され、下記の実施例において例証される。
【０２３３】
１．炎症性サイトカインおよびＴＧＦ−β阻害剤
１つの例示的な疾患処置戦略には、炎症性サイトカインおよびＴＧＦ−β阻害剤を含むナノ粒子組成物のそれを必要とする対象への投与が含まれる。２つの薬剤は、同じ粒子の中にもしくはその上にまたは別々の粒子の中にもしくはその上に負荷され、同時投与することができる。好ましい実施形態では、炎症性サイトカインおよびＴＧＦ−β阻害剤が、同じ送達ビヒクル、例えば、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡなどのポリマーナノ粒子の中にまたはその上に負荷される。炎症性サイトカインは、ＩＬ−２またはＩＦＮγとすることができ、ＴＧＦ−β阻害剤は、ＳＢ５０５１２４またはロサルタンとすることができる。特定の実施形態では、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子に、組み換えＩＬ−２およびロサルタンを共負荷する。さらなる実施形態では、送達ビヒクルは、ＲＧＤなどのターゲティング成分により装飾される。
【０２３４】
炎症促進性サイトカインおよび／またはＴＧＦ−β阻害剤を含有するナノ粒子組成物を作製するための方法は、下記の実施例においてより詳細に議論される。例えば、０．５ｍｇ〜５ｍｇの投薬量が、マウスにおいて試験された。これらの活性薬剤についての好ましい投薬量範囲は、静脈内または腹腔内注射または注入経路による０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、より詳細に下記に議論されるように毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）または皮下経路による０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ（例えば、より詳細に下記に議論されるように毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）の粒子またはナノリポゲルである。ＩＬ−２およびロサルタンが負荷された５ｍｇのナノリポゲルが、典型的に、約５０ｎｇのＩＬ−２および約２００μｇのロサルタンを含有することが特定された。
【０２３５】
２．炎症性サイトカインおよびターゲティング成分
別の例示的な疾患処置戦略には、ターゲティング成分および炎症性サイトカインを含むナノ粒子組成物のそれを必要とする対象への投与が含まれる。上記に議論されるように、ターゲティング分子は、例えば、ＲＧＤとすることができる。他の実施形態では、ターゲティング成分が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）または抗ＣＤ４０アゴニストである。好ましい炎症促進性サイトカインは、ＩＬ−２またはＩＦＮγである。
【０２３６】
特定の実施形態では、ターゲティング成分は、ヒトＭＨＣに関連するｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
【０２３７】
別の実施形態では、ターゲティング成分は、ＣＤ４０アゴニスト、例えば、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合断片である。適したＣＤ４０アゴニストは、当該分野で公知であり、上記に記載される。
【０２３８】
したがって、ＩＬ−２を負荷し、ヒトＭＨＣに関連するｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）により装飾されたナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子などのナノ粒子などの送達ビヒクルが、開示される。ＩＬ−２を負荷し、ＣＤ４０アゴニストにより装飾されたナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子などのナノ粒子などの送達ビヒクルもまた、開示される。ＩＦＮγを負荷し、ヒトＭＨＣに関連するｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＣＤ４０アゴニストにより装飾されたナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子などのナノ粒子もまた、開示される。
【０２３９】
これらの活性薬剤についての好ましい投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である（例えば、毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）。
【０２４０】
３．ＩＬ−１５／ＩＬ−１５α
いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物が、樹状細胞などのＡＰＣを模倣するようにデザインされる。インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、ＩＬ−２とある受容体サブユニットを共有し、したがって、いくつかのオーバーラップする作用メカニズムを有するサイトカインである。ＩＬ−１５は、樹状細胞によって発現され、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖およびプライミングの重要なシグナルを提供する。ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαと呼ばれるＩＬ−２によって共有されない受容体サブユニットに密接に結合する。ＩＬ−１５Ｒαは、他のサブユニットと独立してＩＬ−１５に結合することができる。この特性は、ＩＬ−１５がある細胞によって生成され、別の細胞によって細胞内に取り込まれ（ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｅｄ）、その後、第３の細胞に提示されるのを可能にすると考えられる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの可溶性複合体は、調製され、送達ビヒクル上に表示することができ、それらは、人工樹状細胞のように作用する。
【０２４１】
送達ビヒクルの表面上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の多価の提示は、ＮＫ細胞への粒子の接着を促進すると考えられる。実際、ナノ粒子上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、ＩＬ−１５単独または可溶性ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体よりも有効にＮＫ細胞を増やした（下記の実施例を参照のこと）。ナノ粒子上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により刺激された場合、これらのＮＫ細胞はまた、著しいレベルの細胞分裂を促進しないナノ粒子濃度でさえインターフェロン−γ分泌のレベルの上昇も示す。ナノ粒子上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増大も促進する。
【０２４２】
したがって、いくつかの実施形態では、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子などのナノ粒子が、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により装飾される。ナノリポゲルまたはナノ粒子は、１つまたはそれを超えるさらなる活性薬剤がさらに負荷されてもよい。１つまたはそれを超えるさらなる薬剤は、抗癌剤または免疫調節物質、例えばＩＬ−２またはロサルタンなどのＴＧＦ−β阻害剤とすることができる。いくつかの実施形態では、ナノリポゲルまたはナノ粒子は、１つまたはそれを超える抗原またはアジュバント、例えば腫瘍抗原がさらに負荷される。
【０２４３】
これらの活性薬剤の好ましい投薬量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇもしくは約１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ；または約１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ；または１〜５ｍｇ／ｋｇ〜１０〜５０ｍｇ／ｋｇの範囲である（例えば、毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）。
【０２４４】
Ｄ．アジュバント戦略および併用療法
いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物が、アジュバントとして使用され、開示されるナノ粒子組成物上にまたはその中に負荷されていないさらなる活性薬剤と組み合わせて同時投与される。アジュバントおよび併用療法は、粒子と同じ混和物においてまたは別々の混和物において一緒にさらなる活性薬剤を投与することを含むことができる。
【０２４５】
好ましい実施形態では、１つまたはそれを超える活性薬剤（ＴＧＦ−β阻害剤および／または炎症性サイトカインなど）が、ナノ粒子組成物を形成するためにナノリポゲルまたは別の送達ビヒクルの中にまたはその上に負荷され、遊離もしくは可溶性形態であるまたはさらに別々の投薬単位の一部である１つまたはそれを超えるさらなる活性薬剤と組み合わせて対象に投与される。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、医薬組成物が、２つ、３つ、またはそれを超える活性薬剤を含み、これらのうちのいくつかが、粒子の中にまたはその上に負荷され、それらのうちのいくつかが負荷されない。
【０２４７】
異なる活性薬剤は、同じまたは異なる作用メカニズムを有することができる。いくつかの実施形態では、組み合わせにより、疾患または障害の処置に対して相加効果がもたらされる。いくつかの実施形態では、組み合わせにより、疾患または障害の処置に対して相加効果を越えるものがもたらされる。例えば、特定の実施形態では、ナノ粒子組成物により、免疫刺激または免疫増強療法または化学療法剤を増加させるか、または改善する。
【０２４８】
ナノ粒子組成物および１つまたはそれを超えるさらなる遊離または可溶性活性薬剤は、処置レジメンの一部として対象に投与することができる。処置レジメンは、典型的に、疾患の処置または抗原もしくは免疫原に対する免疫系に関与する１つもしくはそれを超える細胞もしくは細胞型の数または活性の増加もしくは減少などの、抗原もしくは免疫原に対する免疫系の応答の増加もしくは減少などの所望の生理学的変化もしくはその疾患の症状における変化を実現するための方法を指し、前記処置または方法が、疾患を有効に処置するか、または前記生理学的変化もしくは疾患の症状における変化をもたらすために、十分な量の２つまたはそれを超える化学薬品または前記レジメンの構成成分を哺乳動物などの動物、とりわけヒトに投与するステップを含み、化学薬品または構成成分が、同じ組成物の一部などのように一緒に投与されるか、または同時にもしくは異なる時間に別々にかつ独立して投与される（すなわち、それぞれの薬剤または構成成分の投与が、１つまたはそれを超える薬剤または構成成分から限られた期間、分けられる）。好ましくは、単独でまたは分離して投与された場合、１つまたはそれを超える薬剤または構成成分の投与は、薬剤または構成成分のいずれかよりも優れた結果を実現する。好ましくは、１つまたはそれを超える活性薬剤が、ナノ粒子組成物中にある。
【０２４９】
ナノ粒子組成物および／またはさらなる活性薬剤（複数可）は、３日以内または５日以内または７日以内または１０日以内または１５日以内または２０日以内または２５日以内などの限られた期間、毎日、一緒にまたは別々に投与され、すべて、本発明によって特に企図される。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物および／またはさらなる活性薬剤（複数可）が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、投与の頻度が、毎週１回または２週ごとに１回または４週ごとに１回または毎週２回である。いくつかの実施形態では、単一の投与が、有効である。いくつかの実施形態では、２回またはそれを超える投与が、必要である。
【０２５０】
ナノ粒子組成物のそのような投与のすべてが、さらなる活性薬剤（複数可）の投与の前または後に行われてもよい。あるいは、１回またはそれを超える用量の活性薬剤（複数可）の投与は、処置の一様なまたは多様なコースを形成するためにナノ粒子組成物の投与と時間的にずらされてもよく、それによって、１回またはそれを超える用量の活性薬剤（複数可）が、投与され、その後、１回またはそれを超える用量のナノ粒子組成物が続き、その後、１回またはそれを超える用量のさらなる活性薬剤が続くか、または逆もまた同じであり、薬剤を投与する研究者または臨床医によって選択または所望されるスケジュールがどのようなものであっても、すべてそれに従う。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物が、さらなる活性薬剤（複数可）の投与の少なくとも１、２、３、５、１０、１５、２０、２４、または３０時間前または後に投与される。他の実施形態では、さらなる活性薬剤（複数可）が、ナノ粒子組成物の投与の少なくとも１、２、３、５、１０、１５、２０、２４、または３０時間前または後に投与される。
【０２５２】
例示的な戦略では、それを必要とする対象は、１つまたはそれを超えるさらなる免疫応答刺激剤または増強剤と組み合わせて、炎症性サイトカインおよび／またはＴＧＦ−β阻害剤を含むナノ粒子組成物が投与される。炎症性サイトカインおよび／またはＴＧＦ−β阻害剤は、同じ粒子の中にもしくはその上にまたは別々の粒子の中にもしくはその上に負荷され、同時投与することができる。いくつかの実施形態では、ナノリポゲルのみまたは炎症性サイトカインを含むもしくはＴＧＦ−β阻害剤を含む粒子が、他方がない状態で対象に投与される。好ましい実施形態では、炎症性サイトカインおよびＴＧＦ−β阻害剤が、同じ送達ビヒクル、例えば、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡなどのポリマーナノ粒子の中にまたはその上に負荷される。炎症性サイトカインは、ＩＬ−２またはＩＦＮγとすることができ、ＴＧＦ−β阻害剤は、ＳＢ５０５１２４またはロサルタンとすることができる。特定の実施形態では、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子に、組み換えＩＬ−２およびロサルタンを共負荷する。
【０２５３】
１つまたはそれを超えるさらなる免疫応答刺激剤または増強剤は、対象における免疫抑制性の応答を減少させる薬剤とすることができる。例示的な薬剤は、上記により詳細に議論され、例えば、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＣＴＬＡ４アンタゴニストを含む。好ましい実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストが、アンタゴニスティック抗ＰＤ１抗体であり、ＣＴＬＡ４アンタゴニストが、アンタゴニスティック抗ＣＴＬＡ４抗体である。
【０２５４】
好ましい実施形態では、１つまたはそれを超えるさらなる免疫応答刺激剤または増強剤が、ナノリポゲルまたは他の粒子送達ビヒクルの中にまたはその上に負荷されない。１つまたはそれを超えるさらなる免疫応答刺激剤または増強剤は、遊離もしくは可溶性形態でまたは別の従来の剤形で対象に投与することができる。
【０２５５】
例示的な好ましい実施形態では、ロサルタンおよび／またはＩＬ−２が、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子などのナノ粒子の中にまたはその上に負荷され、抗ＰＤ−１、抗ＣＴＬＡ４、またはその組み合わせと組み合わせて対象に投与される。
【０２５６】
理論によって拘束されないが、アンタゴニスティック抗ＰＤ−１および／またはアンタゴニスティック抗ＣＴＬＡ４などの１つまたはそれを超える免疫応答刺激剤が、ＩＬ−２などの炎症性サイトカインおよび／またはロサルタンなどのＴＧＦ−β阻害剤が負荷されたまたはそれと会合したナノリポゲルまたは粒子と組み合わせて同時投与される場合、（１）免疫応答刺激剤（複数可）は、より低用量で投与することができる；（２）免疫応答刺激剤（複数可）は、対象に対する副作用または毒性の低下を示すであろう；（３）免疫応答刺激剤は、効力の増強を示すであろう、および／または（４）負荷されたナノリポゲルまたは粒子と組み合わせて免疫応答刺激剤によって実現された結果は、負荷されたナノリポゲルもしくは粒子がない免疫応答刺激剤（複数可）の投与または免疫応答刺激剤（複数可）がない状態で負荷されたナノリポゲルまたは粒子を投与することと比較した場合に、対象に対して相加効果よりも優れた効果を有するであろうと考えられる。
【０２５７】
他の例示的な戦略では、それを必要とする対象は、１つまたはそれを超える化学療法剤と組み合わせて、炎症性サイトカインおよび／またはＴＧＦ−β阻害剤を含むナノ粒子組成物が投与される。炎症性サイトカインおよび／またはＴＧＦ−β阻害剤は、同じ粒子の中にもしくはその上にまたは別々の粒子の中にもしくはその上に負荷され、同時投与することができる。いくつかの実施形態、ナノリポゲルのみまたは炎症性サイトカインを含むもしくはＴＧＦ−β阻害剤を含む粒子が、他方がない状態で対象に投与される。好ましい実施形態では、炎症性サイトカインおよびＴＧＦ−β阻害剤が、同じ送達ビヒクル、例えば、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡなどのポリマーナノ粒子の中にまたはその上に負荷される。炎症性サイトカインは、ＩＬ−２またはＩＦＮγとすることができ、ＴＧＦ−β阻害剤は、ＳＢ５０５１２４またはロサルタンとすることができる。特定の実施形態では、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子に、組み換えＩＬ−２およびロサルタンを共負荷する。
【０２５８】
好ましい実施形態では、１つまたはそれを超える化学療法剤が、ナノリポゲルまたは他の粒子送達ビヒクルの中にまたはその上に負荷されない。１つまたはそれを超える化学療法剤は、遊離もしくは可溶性形態でまたは別の従来の剤形で対象に投与することができる。例示的な化学療法剤は、上記に議論される。特定の実施形態では、化学療法剤が、ドキソルビシンである。
【０２５９】
例示的な好ましい実施形態では、ロサルタンおよび／またはＩＬ−２が、ナノリポゲルまたはＰＬＧＡナノ粒子などのナノ粒子の中にまたはその上に負荷され、ドキソルビシンと組み合わせて投与される。
【０２６０】
免疫応答刺激剤に関して上記に議論されるように、ドキソルビシンなどの１つまたはそれを超える化学療法剤が、ＩＬ−２などの炎症性サイトカインおよび／またはロサルタンなどのＴＧＦ−β阻害剤が負荷されたまたはそれと会合したナノリポゲルまたは粒子と組み合わせて同時投与される場合、（１）化学療法剤（複数可）は、より低用量で投与することができる；（２）化学療法剤（複数可）は、対象に対する副作用または毒性の低下を示すであろう；（３）化学療法剤は、効力の増強を示すであろう、および／または（４）負荷されたナノリポゲルまたは粒子と組み合わせて化学療法剤によって実現された結果は、負荷されたナノリポゲルもしくは粒子がない化学療法剤（複数可）の投与または化学療法剤（複数可）がない状態で負荷されたナノリポゲルまたは粒子を投与することと比較した場合に、対象に対して相加効果よりも優れた効果を有するであろうと同様に考えられる。
【０２６１】
併用療法および処置レジメンは、免疫応答を誘発する、増加させる、または増強するためにそれを必要とする対象において使用することができる（例えば、Ｔ細胞増殖または活性化などのＴ細胞応答の増加または誘発）。例示的な対象には、上記により詳細に記載されるように癌または伝染病を有する対象が含まれる。免疫応答（例えばＴ細胞応答の増加または誘発）は、癌または疾患抗原に対するものとすることができる。免疫応答は、癌または感染症を処置するのに有効になり得る。いくつかの実施形態では、免疫応答が、癌性または疾患感染細胞に対するものであり、癌または疾患の１つまたはそれを超える症状（例えば腫瘍量、腫瘍進行、疾患進行など）を低下させることができる。
【０２６２】
炎症性サイトカインおよび／またはＴＧＦ−β阻害剤を含むナノ粒子組成物についての好ましい投薬量は、上記に議論される。本明細書で記載されるアジュバント組成物および方法などの他の特定の実施形態では、ナノ粒子組成物が、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ；または約１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ；または０．１〜１ｍｇ／ｋｇ〜１０〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲で投与される（例えば、より詳細に上記に議論されるように毎日；または毎週２、３、４、５回、もしくはそれを超える回数；または月に２、３、４、５、もしくはそれを超える回数など）。
【実施例】
【０２６３】
実施例１：脾臓へのナノ粒子の輸送および樹状細胞への提示
材料および方法
ナノ粒子を、以前に記載されたプロトコールに従って作製し、特徴づけた（Ｌｏｏｋら、Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１２３（４）：１７４１−９（２０１３）、Ｓｈｉｒａｌｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，１１（１２）：２５８２−９２（２０１１））。ＰＬＧＡ粒子、蛍光プローブ（クマリン６）を、酢酸エチルでＰＬＧＡと共に溶解し、超音波処理器のプローブを使用してポリ（ビニルアルコール）およびアビジン−パルミチン酸により乳化した。ＰＬＧＡ粒子を、続いて硬化し、洗浄し、その後、凍結乾燥した。ビオチン化ポリ（エチレングリコール）を、実験に使用する前に、粒子１ｍｇ当たり１．３３μｇの比でＰＬＧＡ粒子に添加した。
体内分布研究：粒子（動物当たり２ｍｇ）を調製し、その後、マウスに腹腔内注射した。器官を回収し、計量し、ＩＶＩＳ画像システムを使用して画像化して、定量的蛍光測定値を得た。組織学的分析のために、脾臓をＯＣＴ包埋培地中でスナップ凍結し（ｓｎａｐ−ｆｒｏｚｅｎ）、その後、荷電スライド上でクリオトームで薄片を作った。切片を、１０分間、氷冷アセトン中で固定し、続いて、抗体により染色した。組織切片は、Ｎｉｋｏｎ  ＴＥ−２０００顕微鏡で画像化した。
【０２６４】
結果
ＡＰＣへの抗原のナノ粒子による輸送は、それらの抗原に対する細胞ベースの免疫応答を動員する際に第１の重要なステップとなる。実験は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのナノ粒子の蓄積を追跡するようにデザインした。ＰＬＧＡから作製したナノ粒子に、蛍光剤、クマリン−６を負荷し、マウスに注射した。結果を、図１Ａ〜１Ｄに示す。図１Ａは、蛍光剤クマリン−６を負荷したナノ粒子によるマウスの静脈内注射の３時間後を示し、これらのナノ粒子は、多くの組織の中に広く広まったが、６時間で（図１Ｂ）、蛍光ナノ粒子は、脾臓に極度に集中した。免疫細胞の多くの集団は、ある組織、特に脾臓に集中した。図１Ｃ〜１Ｄは、クマリン−６ナノ粒子が、脾臓（１Ｃ）およびまた免疫刺激に関与する別の重要な部位であるリンパ節（１Ｄ）において抗原提示細胞集団、特に樹状細胞およびマクロファージと顕著に会合したことを示す。
【０２６５】
実施例２：ナノ粒子はＩＬ−２の抗腫瘍効果を促進する
材料および方法
ナノゲルは、１：２：０．１のモル比のコレステロール：ホスファチジルコリン：１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）−２０００］の脂質混合物から押し出したリポソームにより作製した。リポソームを凍結乾燥し、その後、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｅｄ）乳酸−ポリ（エチレングリコール）−乳酸、非メチル化β−シクロデキストリンと複合体を形成した蛍光プローブ（ローダミンＢ）、およびイルガキュア２９５９の混合物により再水和した。粒子をＵＶ光下で硬化し、すすぎ、遠心分離し、１００ｕｇ／ｍｌのヒトＩＬ−２（プロロイキン）をわずかに負荷した。ナノゲルに、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド／１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミドヒドロクロリド（ｓＮＨＳ／ＥＤＣ）を使用して、アビジンにより官能性をもたせた。ビオチン化Ｔ細胞受容体を、１ｍｇのナノ粒子当たり１０ｕｇのＴＣＲの濃度で添加した（Ｌｏｏｋら、Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１２３（４）：１７４１−９（２０１３）、Ｊｏｓｈｉら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１６１（１）：２５−３７（２０１２）、Ｄａｎｈｉｅｒら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１６１（２）：５０５−２２（２０１２）、Ｅｌａｍａｎｃｈｉｌｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ，２２（１９）：２４０６−１２（２００４）、Ｓｈｉｒａｌｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，１１（１２）：２５８２−９２（２０１１））。
【０２６６】
結果
免疫不全（ヌード）マウスに、ｐ５３抗原を発現する、１０５細胞のヒトＡ３７Ｃ５１５Ｎメラノーマ細胞を皮下に異種移植した。図２において示される時間に（矢印）、マウスに、ヒトＭＨＣに関連するこのｐ５３抗原を認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）にカップリングされ、サイトカインＩＬ−２を負荷したナノ粒子または可溶性ｐ５３特異的ｓｃＴＣＲ／ＩＬ−２融合タンパク質（Ａｌｔｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍｉｒａｍａｒ、ＦＬ）を静脈内注射した。図２は、ＰＢＳ処置コントロールマウスにおける腫瘍と比較して、キメラタンパク質により処置したマウスにおける平均腫瘍容積がおよそ４０％まで低下したことを示す。しかし、研究期間の終わりに、ナノ粒子により処置したマウスにおける平均腫瘍容積は、ナノ粒子中に負荷したＩＬ−２の量がＴＣＲ／ＩＬ−２キメラタンパク質中の相対的なＩＬ−２濃度と比較しておよそ１０００分の１であったのに、およそ７０％まで低下した。可溶性融合タンパク質に比べた、ナノ粒子上のＩＬ−２および／またはＴＣＲについての結合活性の増加は、ナノ粒子調製物の優れた抗腫瘍効力を説明することができた。
【０２６７】
実施例３：ナノ粒子上の抗ＣＤ４０と組み合わせたＩＬ−２またはＩＦＮガンマは抗癌活性を示す
材料および方法
ＰＬＧＡナノ粒子は、実施例１に記載されるように調製した。ＩＦＮガンマ（１００ｕｇ／ｍｌ）に１００ｍｇのＰＬＧＡを負荷した。実施例１に記載されるように、アビジンにより表面修飾した１ｍｇ／ｍｌのポリマーｎｐに対して、抗ＣＤ４０ビオチン（１０ｕｇ／ｍｌ）を添加した。
【０２６８】
結果
ＩＬ−２は、活性化Ｔ細胞によって生成され、分泌されるが、抗腫瘍性の効果を誘起するように他の免疫促進剤とナノ粒子上で組み合わせることができる。そのような１つの薬剤は、ＣＤ４０に対するアゴニスト抗体である（Ｈｏｎｅｙｃｈｕｒｃｈ，Ｊ．，Ｇｌｅｎｎｉｅ，ＭＪ、Ｊｏｈｎｓｏｎ，ＰＷ、Ｉｌｌｉｄｇｅ，ＴＭ．：Ａｎｔｉ−ＣＤ４０
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａ  ＣＤ８  Ｔ−ｃｅｌｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２００３；１０２：１４４９−１４５７）。ＣＤ４０は、ＡＰＣ上に見られる共刺激タンパク質であり、それらの活性化に必要とされる。そのような活性化は、ＣＤ４０が、活性化Ｔ細胞上に主として発現され、分子のＴＮＦスーパーファミリーのメンバーであるタンパク質であるＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）に結合した場合に起こる。アゴニスト抗ＣＤ４０は、ＡＰＣを活性化する際にＣＤ４０Ｌの機能を補助し、したがって、アゴニスト抗ＣＤ４０およびＩＬ−２の組み合わせを有するナノ粒子は、Ｔヘルパー細胞のある機能的な側面を提供することができる。
【０２６９】
ＴＮＦスーパーファミリーのいくつかのメンバーのホモ三量体化が、活性化の間に起こり、結合価の役割およびシグナル伝達の間の高結合活性による相互作用を示唆する。実際に、形質膜上に予想されるであろう高次オリゴマーが、有効な応答を実現するために必要とされ得る（Ｇｒｅｌｌら、Ｃｅｌｌ，８３：７９３−８０２（１９９５）、Ｔａｎａｋａら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，４：３１−３６（１９９８）、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８７：１２０５−１２１（１９９８））。
【０２７０】
したがって、実験は、抗ＣＤ４０を表示するナノ粒子が、標的に対してより高い結合活性で相互作用するかどうかおよび可溶性単量体またはＣＤ４０抗体複合体により実現することができない強力なシグナル伝達についての生理学的な要求を再現することができるかを決定するようにデザインした。
【０２７１】
動物の後肢にＢ１６Ｆ１０メラノーマ細胞を接種した。腫瘍成長をモニタリングし、およそ７日後に、腫瘍面積が０．５ｍｍ２に到達したら、（ａ）抗ＣＤ４０により表面修飾した；（ｂ）抗ＣＤ４０により表面修飾し、ＩＬ−２を負荷した５ｕｇのＰＬＧＡナノ粒子；またはコントロールとして、（ｃ）ブランクナノ粒子（何もない表面および空）または（ｄ）緩衝食塩水（１×ＰＢＳ）により、動物の腫瘍周囲を処置した。非負荷ＰＬＧＡナノ粒子は、ＰＢＳの処置と比較して、腫瘍成長に対して効果がなかった（図３）。ナノ粒子上にＩＬ−２のみでは、ほとんどまたは全く抗腫瘍性の特性を有しない。ナノ粒子上のアゴニスト抗ＣＤ４０は、実験の期間、重要な抗癌効果を示し、この抗体が表面に提示されるだけで、治療上の実用性を有し得ることを示す（図３）。最も強力な応答は、アゴニスト抗ＣＤ４０およびＩＬ−２を含有するナノ粒子で見られた（図３）。
【０２７２】
実施例４：ナノ粒子上のＩＬ−１５はＮＫ細胞を活性化する
材料および方法
８０ｋＤａの平均分子量を有するラクチド−グリコリド共重合体（ＰＬＧＡ）５０／５０は、Ｄｕｒｅｃｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ、ＣＡ）から得、ナノ粒子生成に使用した。ナノ粒子を、親水性のカプセルの材料についての水中油型乳濁液の技術または水中油中水型ダブル乳濁液の技術を使用して形成した。乳濁液を、６００Ｗ
Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（Ｓｏｎｉｃｓ  ＆  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ
Ｉｎｃ、Ｎｅｗｔｏｗｎ、ＣＴ）プローブ超音波処理器でそれぞれ１０秒間３回超音波処理し、ポリ（ビニルアルコール）の０．２％溶液中で１．５〜３時間硬化した。ナノ粒子を、上記されるようにアビジン−パルミチン酸コンジュゲートにより表面修飾した。粒子を、ｄＨ２Ｏで洗浄し、凍結乾燥し、−２０℃で保存した。
【０２７３】
ヒトＩＬ−１５：ＩＬ−１５Ｒαヘテロ二量体は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａｔ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）の寛大な贈り物であった。ＩＬ−１５ヘテロ二量体を、ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）と１：１０のモル比で反応させ、その後、ＰＢＳ中で４８時間透析し、過剰な未反応ビオチンを除去した。ビオチン化ＩＬ−１５ヘテロ二量体を、示す濃度でナノ粒子に添加し、室温で１５分間、回転板型振とう機上でインキュベートした。
【０２７４】
結果
インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、ＩＬ−２とある受容体サブユニットを共有し、したがって、いくつかのオーバーラップする作用メカニズムを有するサイトカインである。ＩＬ−１５は、樹状細胞によって発現され、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖およびプライミングの重要なシグナルを提供する。ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαと呼ばれるＩＬ−２によって共有されない受容体サブユニットに密接に結合する。ＩＬ−１５Ｒαは、他のサブユニットと独立してＩＬ−１５に結合することができる。この特性は、ＩＬ−１５がある細胞によって生成され、第２の細胞によって細胞内に取り込まれ、その後、第３の細胞に提示されるのを可能にすることを示唆する。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの可溶性複合体を調製することができるので、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の潜在的な抗癌活性を評価することが可能である。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαのそのような複合体はまた、ナノ粒子上に負荷することもでき、人工樹状細胞としていくつかの点で作用することができる（図４）。
【０２７５】
実験は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により装飾したナノ粒子の免疫応答を調整する能力を試験するためにデザインした。結果は、ナノ粒子の表面上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の多価の提示が、ＮＫ細胞へのナノ粒子の接着を促進することを示す。ナノ粒子上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、ＩＬ−１５単独または可溶性ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体よりも効率的にＮＫ細胞を増やした（図５Ａ）。ナノ粒子上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により刺激された場合、これらのＮＫ細胞はまた、著しいレベルの細胞分裂を促進しないナノ粒子濃度でさえインターフェロン−γのレベルの上昇を示した（それぞれ図５Ｃおよび５Ｂ）。結果はまた、ナノ粒子上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体が、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増大を促進したことも示す。
【０２７６】
実施例５：ナノ粒子上のＩＬ−１５は抗腫瘍性の活性を示す
材料および方法
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ粒子は、実施例４に記載されるように使用した。Ｂ１６−ＯＶＡ細胞（ＡＴＣＣ）をＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で培養し、注射直前に１×ＰＢＳ（氷上で保持）で２×１０６細胞／ｍＬに懸濁した。皮下腫瘍研究のために、雌６〜８週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＡＥｒｒａｎｅ（イソフルラン；Ｂａｘｔｅｒ）で鎮静し、右後側腹部の剪毛後に５０μＬの細胞懸濁液を皮下注射した。腫瘍をモニタリングし、平均腫瘍面積が５．５ｍｍ２に到達した時に処置を開始した（Ｂ１６注射から８〜１０日後；群間で腫瘍サイズを正規化するために、マウスを再配置した）。ナノリポゲル投与のために、マウスをイソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）で鎮静させた。これは、腫瘍内に行われた。各用量は、２ｍｇ  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ  ＮＰからなっていた。観察者は、腫瘍面積および生存研究について盲検化された。任意の１つの腫瘍寸法が１５ｍｍを超える場合、疾患の任意の徴候を示した時、またはＦＡＣＳ分析研究のための処置から１週間後に二酸化炭素を使用してマウスを安楽死させた。異なる時点で群あたり５匹のマウスを安楽死させ、腫瘍を抽出し、秤量した。
【０２７７】
結果
強いＮＫ細胞応答を促進するナノ粒子上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の能力を考慮して、実験は、癌モデルにおけるこれらの複合体の有効性を決定するためにデザインした。この実施例において、転移性Ｂ１６疾患モデルは、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体がこれらの腫瘍に対する免疫応答における役割を果たすことが知られているので、選択した。細胞がオバルブミン表面抗原（ＯＶＡ）を持つメラノーマ株由来Ｂ１６．ＯＶＡを使用した。これは、ナノ粒子を介しての腫瘍ターゲティングの効果を評価するためのさらなる可能性を提供する。
【０２７８】
ナノ粒子を、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により装飾し、エンドトキシンなしのオバルブミンタンパク質をさらに負荷した。１０５  Ｂ１６．ＯＶＡメラノーマ細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに注射し、その後１、２、および７日目に、５匹のマウスのグループに、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、非負荷ＰＬＧＡナノ粒子、１μｇ  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの複合体全体、またはカプセル化したオバルブミンを有するもしくは有していないナノ粒子上に負荷された同量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体を注射した。図６に結果を示す。ＰＢＳまたは非負荷ナノ粒子により処置したマウスはすべて、５０日未満で死んだ。溶液中またはナノ粒子上に負荷したＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により処置したマウスは、より長い期間生存した。最も効果的な処置は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体プラスオバルブミンを負荷したナノ粒子であり、腫瘍へのナノ粒子のターゲティングが、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の抗腫瘍性効果を改善することができたことを実証した（図６）。
【０２７９】
実施例６：ＲＧＤペプチドを有するターゲティングＴＧＦ−β阻害剤ＳＢ５０５１２４が抗腫瘍活性を示す
材料および方法
ＲＧＤ／ＳＢナノ粒子の合成および特徴づけ
酸末端ＰＬＧＡおよびアミン末端ＰＥＧのコンジュゲーションは、以下のとおりとした。酸末端ＰＬＧＡ（５００ｍｇ）ならびに１０倍の過剰量のＮＨＳおよびＤＣＣを、１０ｍＬ無水ＤＣＭに溶解した。４時間室温で撹拌した後、反応溶液をＰＴＦＥフィルタで濾過し、沈殿物を除去した。冷エチルエーテル中での沈殿により、ＮＨＳ活性化ＰＬＧＡを得た。真空下で乾燥させた後、ＮＨＳ活性化ＰＬＧＡを、等モル比のＮＨ２−ＰＥＧ−ＣＯＯＨを有する無水ＤＣＭに溶解し、溶液を室温で撹拌した。コンジュゲートを冷エチルエーテル中に沈殿させ、真空下で乾燥させ、収率は９０％を超えた。ＲＧＤペプチドは、ＮＨＳおよびＥＤＣを使用してＰＬＧＡ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨのカルボキシル基とコンジュゲートした。このブロックコポリマーを使用して、ＴＧＦ−β阻害薬を、透析方法を使用してナノ粒子の中にカプセル化した。詳細には、薬物およびポリマーをＤＭＳＯに溶解し、溶液を、透析膜（ＭＷＣＯ  １００，０００）に移した。透析は、ＤＩ水に対して２４時間実行した。その後、水性粒子溶液を遠心分離し、超音波処理し、粒子を濃縮した。
【０２８０】
ナノ粒子のサイズまたはＩＤは、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ）を使用し、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって決定した。サンプル濃度は、０．５ｍｇ／ｍＬで維持した。ＳＢカプセル化の量は、９９０ｍＬのＤＭＳＯに１０ｍＬのＳＢナノ粒子を溶解することによって、これによりＤＭＳＯ溶液にＳＢを放出させ、その吸光度測定値から得た。その後、吸光度を３００ｎｍで測定した。その滴定濃度に従ってあらかじめ測定したＳＢ吸光度の検量線を使用して、カプセル化されたＳＢ濃度を計算した。ＳＢ放出プロファイルは、異なるプロトコールに従って決定した。１ミリリットルのＰＢＳ−ＳＢナノ粒子を、適度に振盪させながらエッペンドルフチューブ中で調製した。それぞれの時点で、チューブを遠心分離して、ナノ粒子をペレットにし、上清を集めた。上清をＤＭＳＯで１００倍に希釈し、その吸光度を３００ｎｍで測定した。
【０２８１】
結果
研究により、インテグリンが、腫瘍細胞の表面上に過剰発現され、腫瘍細胞および正常細胞を識別するマーカーとして果たすことができることが示された。インテグリンは、さらに、細胞外経路を通してＴＧＦ−βを活性化する。潜在型ＴＧＦ−βが腫瘍細胞から放出された後、それは、腫瘍細胞の表面上のインテグリンと結合して、潜在型ＴＧＦ−βの活性化に至る。その結果、腫瘍微小環境におけるＴＧＦ−β濃度の増加により、調節性Ｔ細胞を動員することによって免疫抑制が支持される（Ｍａｓｓａｙｏら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ．，（４）：２７−３２（２０１３）。ＴＧＦ−β分子の上昇は、ＳＢ５０５１２４（２−（５−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−２−ｔｅｒｔ−ブチル−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−６−メチルピリジンヒドロクロリド）などのＴＧＦ−β阻害剤によって阻害することができる。ＳＢ−５０５１２４は、ＳＢ５０５１２４（ＳＢとも略される）としても知られている形質転換成長因子−ベータＩ型受容体ＡＬＫ４、ＡＬＫ５、およびＡＬＫ７の選択的阻害剤である（ＤａＣｏｓｔａら、Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６５：７４４−５２（２００４））。
【０２８２】
この実施例では、ＳＢ５０５１２４は、上記に記載されるようにＰＬＧＡ−ＰＥＧナノ粒子の中に直接負荷した。
【０２８３】
ＲＧＤペプチドは、二重の機能を果たすことができる：それは単に典型的なインテグリンを標的にするリガンドだけではなく（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，１２：６９７−７１５（１９９６））、免疫危険シグナルとして働き、ＡＰＣを活性化する（Ａｌｔｉｎｃｉｃｅｋら、Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，（３９０）１３０３−１１（２００９））。
【０２８４】
この実施例では、ＰＬＧＡナノ粒子に、ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤペプチドを負荷した。これらのナノ粒子は、強い抗腫瘍効果を促進し、複数の方法においてＴＧＦ−βならびにその活性化および機能の調節を顕著に伴い（図７）、両方の薬剤はまた、免疫系のエレメントも調整し、その結果、局所的な環境が、抑制性から刺激性に変わった。ＲＧＤペプチドは、免疫危険シグナルとしてのその役割によって、ＡＰＣを活性化することができ、インテグリンとのその相互作用を介して、ＲＧＤペプチドは、潜在型ＴＧＦ−βおよびインテグリンの間の結合をブロックすることができる。ＳＢ５０５１２４は、ＴＧＦ−β活性化を阻害することができる。したがって、潜在型ＴＧＦ−βは、最小限しか活性化されず、Ｔｒｅｇ媒介性の腫瘍免疫回避が妨げられる。
【０２８５】
図８および９Ａ〜９Ｃは、Ｂ１６ｆ１０メラノーマ細胞に対するＳＢ５０５１２４および／またはＲＧＤの効果を決定する研究を要約する。処置は、腫瘍細胞をマウスに接種した１０日後に開始した（図８）。ＲＧＤ（１００ｎＭ）および／またはＳＢ５０５１２４（１００ｎＭ）を溶液でまたはナノ粒子に負荷して投与した。排除の遅延に対する効果（グループ当たり７匹のマウス）。実験の１つのセットにおいて、動物に、毎週４回、腫瘍周囲の注射を与え、容量および生存率の両方を５週間追跡した。
【０２８６】
図９Ａおよび９Ｂに示されるように、可溶性ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤは、たとえあったとしてもあまり大きくない抗腫瘍性の効果しかなかった。ＳＢ５０５１２４をナノ粒子に負荷し、マウスに投与した場合も同様であった。ＲＧＤを有するナノ粒子は、抗腫瘍効果を有するように思われたが、ナノ粒子上でのＳＢ５０５１２４およびＲＧＤの組み合わせは、はるかに優れており、統計的に有意な抗腫瘍効果を有した。ＲＧＤを有するまたは有していないクマリンカプセル化ナノ粒子を４匹のマウスのグループに腫瘍周囲に注射し、９６時間にわたってスキャンした場合に例証されるように、ナノ粒子の投与を介しての効能の増加の少なくとも一部は、排除の減少によるものであったかもしれない。蛍光強度により、遊離ＲＧＤよりも少なくとも４倍優れたナノ粒子結合ＲＧＤの半減期が示された（図９Ｃ）。
【０２８７】
実施例７：ＲＧＤペプチドを有するターゲティングＴＧＦ−β阻害剤ＳＢ５０５１２４が抗腫瘍活性を示す
材料および方法
材料は、上記に記載されるとおりとする。ｉｎ  ｖｉｖｏでの研究のために、マウスは、陽圧拘束ラック中に置いたオートクレーブマイクロアイソレーターケージに収容し、Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ
ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅの承認プロトコールに従って維持した。マウスは、それぞれ５〜７匹の動物の実験およびコントロールグループに無作為に割り当てた。Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞を上記に記載されるように培養した。メラノーマ異種移植を、マウスの右側の後部脇腹に５×１０６  Ｂ１６Ｆ１０−ＯｖａまたはＢ１６Ｆ１０細胞を皮下移植することによって開始した。１０日後、それぞれのマウスを異なる薬物処方物により処置した。処方物はすべて、腫瘍の中に直接注射した。複数回用量の研究のために、処方物はすべて、１週間に１回注射した。腫瘍阻害活性は、以下の方程式を使用して計算した腫瘍容積によって決定した：Ｖ＝（ｗ）２×（ｌ）／２、ここで（ｗ）および（ｌ）は、キャリパーによって測定される腫瘍の幅および長さとした。
【０２８８】
腫瘍体内分布研究のために、マウスを、腫瘍内注射によってクマリン６−カプセル化ＲＧＤナノ粒子により処置した。ＲＧＤなしのクマリン６−カプセル化ナノ粒子は、コントロールとして使用した。ｉｎ  ｖｉｖｏでの分子イメージング機器（Ｃａｒｅｓｔｒｅａｍ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ）を使用して、マウスをスキャンし、注射後の様々な時点での腫瘍におけるクマリン６の蛍光強度を測定した。それぞれのマウスのクマリン６強度は、それぞれの時点でそれぞれの腫瘍面積を包含する関心領域（ＲＯＩ）において分析した。
結果
【０２８９】
Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍細胞（５００，０００細胞）を、０日目にＣ５７ＢＬ／６マウスの尾静脈中に注射した。５日目に、マウスに、溶液中のＳＢ５０５１２４およびＲＧＤまたはナノ粒子に負荷した一方もしくは両方の薬剤をＩＶ注射した。１０日後に、マウスを屠殺し、肺を収集し、腫瘍結節を数えた。図１０Ａは、ナノ粒子結合ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤの投与が、溶液中の２つの薬剤の投与に対して、結節の数の著しい減少に至り、一方の薬剤のみを含有するナノ粒子が、中程度の応答を誘起したことを示す。
【０２９０】
より長い期間にわたる転移性腫瘍に対するこれらの薬剤の効果を決定するために、５００，０００のＢ１６ｆ１０メラノーマ細胞を、０日目に尾静脈を介してｉ．ｖ．注射した。もう一度、癌を有するマウスに、この場合は、５、１２、１９、および２６日目に、溶液中のまたはナノ粒子に負荷したＳＢ５０５１２４およびＲＧＤを注射した。図１０Ｂは、ナノ粒子結合ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤによる処置が、溶液中の薬剤を受けているマウスと比較した場合、長期生存時間に劇的に至ったことを例証する。
【０２９１】
ナノ粒子結合ＳＢ５０５１２４およびＲＧＤが転移性腫瘍モデルにおいて強力な阻害効果を誘起し得る多くのメカニズムがある。説得力のある１つのメカニズムは、転移のプロセスを伴う。蓄積しつつある証拠により、癌細胞の亜分画、癌幹細胞（ＣＳＣ）が、腫瘍形成および再生を一手にすることができることが示されている（Ｃｌａｒｋｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６６：９３３９−９３４４（２００６）；Ｄａｌｅｒｂａら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，５８：２６７−２８４（２００７））。固形腫瘍中のＣＳＣは、腫瘍維持を駆動する癌細胞の機能的に均一な集団であると一般に考えられている。上皮腫瘍では、これらのＣＳＣは、腫瘍の上皮の特質を維持するが、遊走する能力を欠き、したがって、転移を確立することができない。小さなサブセットのみが、遊走し、転移形成を開始する潜在能力を有する。この特性は、上皮間葉転換（ＥＭＴ）を誘発することによって癌転移における重要な役割を果たすことができるＴＧＦ−βの発現に関連する。したがって、ほとんどの癌細胞によって分泌されるＴＧＦ−βは、転移性の潜在能力を有する癌細胞の形成を誘発するパラクリン方式で機能し得る。
【０２９２】
実験は、腫瘍微小環境におけるＴＧＦ−βの阻害が間葉細胞の発生を予防することができ、したがって転移性腫瘍量を減少させるかどうかを決定するためにデザインした。
【０２９３】
ＴＧＦ−β阻害による細胞遊走の低下の可能性を試験するために、スクラッチアッセイ（図１０Ｃ）およびスフェロイド形成アッセイ（図１０Ｄ）を使用した。前者の場合において、細胞をウェル中で平板培養し、ある領域をｔ＝０にピペットチップでこすった。２４時間後、発明者らは、（１）ＴＧＦ−β、（２）ＳＢ５０５１２４の混合物、または（３）表面上にＲＧＤを有し、ＳＢ５０５１２４を負荷したＰＬＧＡナノ粒子の存在下で、こすった領域における細胞遊走を比較した。癌細胞遊走における低下を創傷面積比としてプロットした（２４時間後の無細胞面積／０時間の無細胞面積）（図１０Ｃ）。同様の効果が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのスフェロイド形成アッセイにおいて観察され、発明者らは、ＲＧＤおよびＳＢ５０５１２４による相乗的ターゲティングが、スフェロイド形成の低下の増強を促進したことを観察した（図１０Ｄ）。これらの研究は、ＲＧＤおよびＳＢ５０５１２４の同時局在パラクリン送達が、癌細胞遊走を強く阻害したことを実証し、ＲＧＤによるナノ粒子ベースのターゲティングが、腫瘍微小環境における滞留を促進することによってＴＧＦ−β阻害剤の抗転移性効果をさらに増大させるという概念を支持する。
【０２９４】
実施例８：ＲＧＤペプチドと組み合わせたＴＧＦ−β阻害剤ロサルタンの抗腫瘍効果
材料および方法
材料は、実施例６において上記に記載されるとおりとした。ここで、ロサルタンは、同じ濃度でＳＢ５０５１２４の代わりに使用した。
【０２９５】
結果
ＲＧＤペプチドの効果もまた、ロサルタンと組み合わせて試験した。アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニストとして最もよく知られているロサルタンもまた、ＴＧＦ−βをダウンレギュレートする（Ｇｕｏら、Ｚｈｏｎｇｈｕａ  Ｎｅｉ  Ｋｅ  Ｚａ  Ｚｈｉ，４２：４０３−８（２００３））。図１１Ａ〜１１Ｃは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０メラノーマ細胞、その後（１）空のナノ粒子、（２）可溶性ＲＧＤおよび可溶性ロサルタン、（３）ロサルタンを負荷したナノ粒子、または（４）ＲＧＤおよびロサルタンを負荷したナノ粒子を注射した場合、ＲＧＤおよびロサルタンを負荷したナノ粒子が、腫瘍成長を低下させ、癌を有するマウスの生存を延ばすのに、他の処置のいずれよりもはるかに有効であったことを実証する。
【０２９６】
実施例９：ＩＬ−１２をカプセル化しているナノ粒子は抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を刺激する
材料および方法
アビジンにより装飾し、ＩＬ−１２をカプセル化するＰＬＧＡナノ粒子を作製する方法は、実施例３と同一とする。ＩＬ−１２は、１００ｍｇのＰＬＧＡ当たり１００ｕｇ／ｍｌの濃度で使用した。発明者らは、オバルブミンペプチドに対して特異的なビオチン化ペプチド／ＭＨＣ  ＩＩを使用する。
【０２９７】
結果
より長続きする細胞障害性Ｔ細胞応答の発生を促進する１つの方法は、ＣＤ４＋Ｔ細胞支援によるものである。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、弱った細胞障害性Ｔ細胞を救出し、それらの機能を完全に回復させることが以前に示された（Ａｕｂｅｒｔら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，１０８：２１１８２−２１１８７（２０１１））。ＣＤ４＋Ｔ細胞支援は、樹状細胞および細胞障害性Ｔ細胞の両方に対してＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用の形態で提供することができ、したがって、間接的および直接的な方式でＣＤ８＋抗腫瘍応答をプライミングする（Ｎｅｓｂｅｔｈら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１８４：５６５４−５６６２（２０１０）、Ｓｈａｆｅｒ−Ｗｅａｖｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６９：６２５６−６２６（２００９））。これに加えて、ＣＤ４＋Ｔ細胞はまた、癌細胞成長の停止を促進するためにナチュラルキラー細胞およびマクロファージを活性化することもできる（Ｃｏｒｔｈａｙ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２２，３７１−３８３（２００５））．Ｐｅｒｅｚ−Ｄｉｅｚ，Ａ．，Ｂｌｏｏｄ，１０９：５３４６−５３５４（２００７）．Ｂｒａｕｍｕｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，４９４：３６１−３６５（２０１２））。さらに、ＣＤ４＋Ｔ細胞はまた、ＭＨＣ−Ｉがダウンレギュレートした腫瘍細胞に対して死滅を指示することもでき、したがって、ある固形腫瘍上でアップレギュレートされ得るＭＨＣ−ＩＩ分子との相互作用を介しての細胞障害性Ｔ細胞破壊を回避する。腫瘍特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の移入が転移性メラノーマモデルにおいて臨床的に長続きする応答を生成したこともまた示された（Ｈｕｎｄｅｒら、Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３５８，２６９８−２７０３（２００８）、Ｋａｈｎ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４６：３２３５−３２４１（１９９１））。より重要なことには、移入されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、非同種腫瘍抗原に対するＴ細胞応答を促進した。
【０２９８】
ＣＤ４＋Ｔ細胞の分化における駆動因子のうちの１つは、サイトカイン環境であり、ＩＬ−１２は、Ｔｈ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞の分化を促進する際に役割を果たす。実験は、ＩＬ−１２をカプセル化し、ＭＨＣ−ＩＩペプチド複合体を提示する粒子またはポリクローナルＣＤ４  Ｔ細胞を標的にするリガンドが、ナイーブ集団からＴｈ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞の分化を促進するかどうかを試験するためにデザインした。ＩＬ−１２は、ＰＬＧＡおよびナノリポゲルナノ粒子の中に効率的にカプセル化することができる。ＩＬ−１２カプセル化ナノ粒子により処置したＣＤ４＋Ｔ細胞は、空のナノ粒子と共にインキュベートされた細胞よりも有意により多くのＩＦＮガンマを分泌した（図１２）。これらの細胞によって分泌されたＩＬ−４のレベルは、アッセイの検出限界未満であり、これらがＴｈ１  ＣＤ４＋Ｔ細胞であることを示した。そのうえ、ＩＬ−１２をカプセル化しているナノ粒子は、出発ナイーブ集団および空のナノ粒子により処置した細胞と比較して、ＣＤ４４、ＣＤ２５、およびＣＤ２７発現のアップレギュレーションを促進した。
【０２９９】
発明者らのＩＬ−１２カプセル化ナノ粒子の表面上のＭＨＣ−ＩＩ  Ｏｖａ提示複合体のレベルを、滴定し、続くＣＤ４  Ｔ細胞応答を、空のナノ粒子に曝露した細胞と比較した。細胞トレースヨードバイオレットを使用し、ＩＬ−１２をカプセル化するナノ粒子と共にインキュベートした、より高いパーセンテージのＣＤ４＋ＯＴ−ＩＩ細胞が増殖したことを特定した。そのうえ、これらの細胞は、より高いレベルのＣＤ２５およびＣＤ４４のそれらの発現ならびに有意により高いレベルのインターフェロンガンマの分泌によって示されるようにＣＤ４＋Ｔ細胞よりも高度に活性化された（図１３Ａ）。結論として、ＣＤ４標的ナノ粒子におけるＩＬ−１２のカプセル化は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の応答性および活性化を押し上げる。
【０３００】
実施例１０：ナノリポゲルの抗腫瘍効果の免疫学的メカニズム
抗腫瘍効果を示すことができる腫瘍抗原特異的Ｔ細胞集団を増やすためにナノ粒子を使用する性能について試験するために、ＨＬＡ−Ａ２との関連でメラノーマ抗原ＭＡＲＴ−１を含有するナノ粒子を、生成し、ヒトｐＢＬから単離したＣＤ８＋Ｔ細胞に提示した（図１３Ａ〜１３Ｂ）。図１３Ａにおいて示されるように、これらのナノ粒子は、培養中２８日間Ｔ細胞集団を増やすのに非常に有効であり、培養の２１日後に最大およそ１５０倍に増加した。その増大は、可溶性ＩＬ−２およびＭＡＲＴ−１抗原またはＩＬ−２およびＭＡＲＴ抗原によりパルスした樹状細胞にＴ細胞培養物を曝露することによって得られたものよりも、はるかに目立った（図１３Ａ）。培養の１４日目以降、ＭＡＲＴ負荷ナノ粒子により処置した培養物中の大多数のＴ細胞が、ＭＡＲＴへの曝露と同時に四量体を形成し（図１３Ｂ）、Ｔ細胞のうちの増えた集団が、実に大部分が抗原特異的であったことを示す。
【０３０１】
実施例１１：ロサルタン／ＩＬ−２ナノリポゲルは抗ＰＤ１および抗ＣＴＬＡ４療法の効力を増強するアジュバントである
材料および方法
ｉｎ  ｖｉｖｏでの研究のために、マウスは、陽圧拘束ラック中に置いたオートクレーブマイクロアイソレーターケージに収容し、承認プロトコールに従って維持した。マウスは、それぞれ６〜８匹の動物の実験およびコントロールグループに無作為に割り当てた。Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞を、以下のように培養し、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞を、１０％ＦＢＳを有するＤＭＥＭ条件培地中で培養した。コンフルエンスに達した後、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡを使用して分離し、２×１０５細胞を静脈内に注射した（Ｂ１６Ｆ１０（２００，０００細胞／５０ｕＬ）の尾静脈ｉ．ｖ．注射）（Ｇｏｒｅｌｉｋら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．，７（１０）：１１１８−２２（２００１））。
【０３０２】
処置は、７〜１０日後に開始した。５ｍｇナノリポゲルからなる各用量を尾静脈注射を介して静脈内に投与した。抗ＣＴＬＡ４および抗ＰＤ１を表において示される用量スケジュールでＩＰ投与した。
・ｉｎ  ｖｉｖｏ種−転移モデル
−Ｃ５７ＢＬ／６マウス（グループ１〜１０）
・処置
−ｉ．ｖ．（グループ１０）
・スケジュール
−用量×（繰り返しの数）
・この実施例ならびに表１、図１４、およびそれに関連する説明における「ＩＭＭ１」は、ＩＬ−２およびロサルタンの両方を負荷したナノリポゲル（「ＮＬＧ」）を指す。ナノリポゲルは、上記の実施例において記載されるナノリポゲルと同じポリマーおよび脂質組成を有する。この実施例ならびに表１、図１４、およびそれに関連する説明における「ＰＤ１」は、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体を指す。
・この実施例ならびに表１、図１４、およびそれに関連する説明における「Ｙｅｒｖｏｙ」は、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ４抗体を指す。
【０３０３】
【表１−１】
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【表１−２】
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−＊肺転移数、肝臓計量のために３匹のマウスを屠殺し、ＴＣＲシークエンシングおよびＣＢＣのために血液を取り、肺組織を固定し、腫瘍およびＴ細胞を染色する。
−＊＊肺転移数、肝臓計量のために２匹のマウスを屠殺し、ＴＣＲシークエンシングおよびＣＢＣのために血液を取り、肺組織を固定し、腫瘍およびＴ細胞を染色する。
−ｍＡｂは７および１０日目にＩＰで与える。
−グループ１〜４は、血液、腫瘍、および組織分析のために１４日目に屠殺したサブセットに加えて、生存コンポーネントを有する。
−グループ５〜１２はすべて、血液、腫瘍、および組織分析のために１４日目に屠殺する。
【０３０４】
結果
図１４に例証される実験からのデータは、重要な２つのポイントを実証する。（１）頻度および用量は、ナノリポゲルのみにおけるＩＭＭ１（ロサルタン−ＩＬ２）の治療的な機能にとって重要となり得る。例えば、最高用量で３回投与されたＩＭＭ−１は、同じ頻度で投与した１０分の１用量よりも良好に転移性機能傷害の数を低下させる。（２）抗ＰＤ１および抗ＣＴＬＡ４が、ＩＭＭ１により相加的に機能するものを越えて機能するおよび／またはＩＭＭ−１がそれらの抗体の治療的な応答を補強する（ａｄｊｕｖｅｎａｔｅ）もしくは増強することもまたを示す。例えば、１０分の１の用量で２回投与されたＩＭＭ１および抗ＰＤ１のみは、両方の薬剤の投与と比較して、より高い肺転移数を有する（治療的な相加効果を越える効果）。同じことが、抗ＣＴＬＡ４（Ｙｅｒｖｏｙ）に当てはまる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
2020073617.tif 000022
【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年3月23日(2020.3.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーコアおよび脂質シェルを含むナノリポゲル、ポリマーナノ粒子ならびにリポソームからなる群から選択される送達ビヒクルを含むナノ粒子組成物であって、前記送達ビヒクルは、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体により装飾されており、前記組成物は、前記送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封されるＩＬ−２およびロサルタンの組み合わせを含まない、ナノ粒子組成物。
【請求項２】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体が、前記送達ビヒクルの表面に結合されており、前記結合は、必要に応じて、ＰＥＧ化によるか、またはアビジン−ビオチン連結によるものである、請求項１に記載のナノ粒子組成物。
【請求項３】
前記送達ビヒクルが、少なくとも１つの免疫調節物質で負荷されている、請求項１または請求項２に記載のナノ粒子組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１つの免疫調節物質が、サイトカイン、ケモカインおよび／またはＴＧＦ−β阻害剤を含む、請求項３に記載のナノ粒子組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１つの免疫調節物質が、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ロサルタン、ＳＢ５０５１２４、またはＩＬ−２およびロサルタンの組み合わせを除くそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３または請求項４に記載のナノ粒子組成物。
【請求項６】
それぞれが前記送達ビヒクルの中に負荷される、その表面に結合される、および／またはその内に密封されるサイトカインおよびＴＧＦ−β阻害剤を含む、請求項１〜４のいずれかに記載のナノ粒子組成物であって、前記サイトカインは、インターフェロン、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子、白血球阻害因子（ＬＩＦ）、ケモカイン、ＳＤＦ−１α、およびサイトカインのＣＸＣファミリーのメンバーからなる群から選択される、ナノ粒子組成物。
【請求項７】
前記サイトカインがＩＦＮ−γである、請求項６に記載のナノ粒子組成物。
【請求項８】
前記ＴＧＦ−β阻害剤が、ロサルタンまたはその医薬品の塩、イミダゾール誘導体もしくは代謝物質である、請求項６または請求項７に記載のナノ粒子組成物。
【請求項９】
前記サイトカインがＩＦＮ−γであり、前記ＴＧＦ−β阻害剤がロサルタンである、請求項６〜８のいずれかに記載のナノ粒子組成物。
【請求項１０】
前記送達ビヒクルが、非架橋性ポリマーから形成されたポリマーコアを含むナノリポゲルである、請求項１〜９のいずれか１項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１１】
前記送達ビヒクルが、１種またはそれより多くの架橋性ポリマーから形成されたポリマーコアを含むナノリポゲルである、請求項１〜９のいずれかに記載のナノ粒子組成物。
【請求項１２】
前記ポリマーコア中のポリマーが、１種またはそれより多くの光重合性基によって架橋されている、請求項１１に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１３】
前記送達ビヒクルが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレン１，２−グリコール、ポリ（プロピレンオキシド）および／またはポリプロピレン１，３−グリコールセグメントから選択される１種またはそれより多くのポリ（アルキレンオキシド）セグメント；ならびに／あるいは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）および／またはポリラクチド−ｃｏ−グリコリド（ＰＬＧＡ）セグメントから選択される１種またはそれより多くの脂肪族ポリエステルセグメントを含むブロックコポリマーから形成されるポリマーコアを含むナノリポゲルである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１４】
前記ブロックコポリマーが、中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメント、および前記中心ポリ（アルキレンオキシド）セグメントのいずれかの末端に結合した隣接脂肪族ポリエステルセグメントを含むトリブロックコポリマーである、請求項１３に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１５】
前記ポリマーコアが、１種またはそれより多くの光重合性基をさらに含む、請求項１３または請求項１４に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１６】
前記送達ビヒクルが、ポリマーマトリクスコアであって、前記ポリマーマトリクス内に分散しているか、または前記ポリマーマトリクスに共有結合している１種またはそれより多くのホスト分子を含むポリマーマトリクスコアと、脂質シェルとを含むナノリポゲルである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１７】
前記ホスト分子が、ポリサッカリド、シクロデキストリン、クリプタンド、クリプトファン、キャビタンド、クラウンエーテル、デンドリマー、カテナン、ポリカテナン、カルセランド、スフェランド、カーボンナノチューブ、フラーレン、無機リン酸塩およびシリカからなる群から選択される、請求項１６に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１８】
それぞれが前記ポリマーマトリクスコア内に分散しているか、前記脂質シェル内に分散しているか、および／または前記脂質シェルに結合している、サイトカインおよびＴＧＦβ阻害剤をさらに含む、請求項１６または請求項１７に記載のナノ粒子組成物。
【請求項１９】
前記ＴＧＦβ阻害剤がホスト分子と会合しており、前記サイトカインが前記ポリマーマトリックスコア内に分散している、請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
【請求項２０】
前記１種またはそれより多くのホスト分子がシクロデキストリンを含み、前記シクロデキストリンは、官能化されていないか、あるいは前記ポリマーマトリクスコアと反応する１種またはそれより多くの反応性官能基で、および／または前記シクロデキストリンの溶解度を改変する１種またはそれより多くの反応性官能基で官能化されている、請求項１６〜１９のいずれかに記載のナノ粒子組成物。
【請求項２１】
前記送達ビヒクルが、リン脂質、ＰＥＧ化リン脂質およびコレステロールの混合物から構成される脂質シェルを含むナノリポゲルである、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のナノ粒子組成物。
【請求項２２】
前記送達ビヒクルが、ヒドロキシ酸のポリマーおよびポリエチレングリコールとのヒドロキシ酸のコポリマー、ポリ酸無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ならびにそれらのブレンドおよびコポリマーから選択される１種またはそれより多くのポリマーから形成されるポリマーナノ粒子である、請求項１〜９のいずれかに記載のナノ粒子組成物。
【請求項２３】
免疫調節物質または化学療法剤である少なくとも１種のさらなる活性薬剤をさらに含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のナノ粒子組成物であって、前記少なくとも１種のさらなる活性薬剤は、前記送達ビヒクルに負荷されておらず、前記送達ビヒクルの表面に結合されておらず、前記送達ビヒクルの内に密封されていない、ナノ粒子組成物。
【請求項２４】
前記免疫調節物質が、免疫応答刺激剤；免疫抑制をブロックする薬剤；または腫瘍チェックポイント遮断または共刺激分子を標的にする薬剤である、請求項２３に記載のナノ粒子組成物。
【請求項２５】
前記免疫応答刺激剤が、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、またはそれらの組合せであるか、あるいは前記化学療法剤がドキソルビシンである、請求項２４に記載のナノ粒子組成物。
【請求項２６】
免疫応答刺激剤の免疫刺激効果もしくは免疫増強効果または化学療法剤の効果を増加させるか、または改善する方法における使用のための、請求項１〜２５のいずれか１項に記載のナノ粒子組成物であって、前記方法は、それを必要とする対象に、有効量の前記ナノ粒子組成物を、免疫応答刺激剤または化学療法剤と組み合わせて投与し、前記免疫応答刺激剤の免疫刺激効果もしくは免疫増強効果、または前記化学療法剤の効果を増加させるステップを含み、前記ナノ粒子組成物は、前記免疫応答刺激剤または化学療法剤と一緒にまたは別々に前記対象に投与されることを特徴とする、ナノ粒子組成物。
【請求項２７】
前記組成物と前記免疫応答刺激剤または前記化学療法剤とが、一緒に前記対象に投与されるか、または同時にもしくは異なる時間に別々にかつ独立して前記対象に投与されることを特徴とする、請求項２６に記載のナノ粒子組成物。
【請求項２８】
前記免疫応答刺激剤が、腫瘍チェックポイント遮断または共刺激分子を標的にする薬剤である、請求項２６または請求項２７に記載のナノ粒子組成物。
【請求項２９】
前記免疫応答刺激剤が、ＰＤ−１アンタゴニストもしくはＣＤＬＡ４アンタゴニストまたはそれらの組み合わせである、請求項２６〜２８のいずれかに記載のナノ粒子組成物。
【請求項３０】
前記化学療法剤がドキソルビシンである、請求項２６〜２８のいずれかに記載のナノ粒子組成物。
【請求項３１】
感染症または癌を処置する方法における使用のための、請求項１〜２５のいずれかに記載のナノ粒子組成物であって、前記癌は、多発性骨髄腫、ならびに骨、膀胱、脳、乳房、頸部、結腸、直腸、食道、腎臓、肝臓、肺、鼻咽腔、膵臓、前立腺、皮膚、胃、および子宮の腺癌および肉腫からなる群から選択される癌を含み、前記方法は、前記感染症または前記癌を有する対象に、有効量の請求項１〜２５のいずれかに記載の組成物を投与し、前記感染症または前記癌の１つまたはそれを超える症状を低減するステップを含むことを特徴とする、ナノ粒子組成物。
【請求項３２】
前記２６〜３１のいずれか１項に記載の方法における使用のための医薬の製造における、請求項１〜２５のいずれかに記載のナノ粒子組成物の使用。
【外国語明細書】
2020073617000001.pdf