(57)【要約】      （修正有）【課題】レビー小体病に罹患し、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体における便秘を治療する方法の提供。【解決手段】α−シヌクレインに対する抗体又はα−シヌクレインに対する抗体を誘導するα−シヌクレインの断片を含む、レビー小体病を患っている被験体における便秘を治療するための医薬組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レビー小体病と診断され、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体におけるα−シヌクレインに対する免疫療法の有効性を査定する方法であって、
（ａ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前に被験体の便秘症状を評価することと；
（ｂ）第１のレジームにおいて免疫療法剤を被験体へ投与することと；
（ｃ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与後に被験体の便秘症状を評価することと；
（ｄ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前後の被験体の便秘症状を比較することと；
（ｅ）第２のレジームをその症状が改善した被験体へ、及び第３のレジームをその症状が悪化した被験体へ投与し、第２のレジーム及び第３のレジームが異なることと、
を含む、該方法。
【請求項２】
前記第２のレジームが第１のレジームと同じである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第２のレジームが、低減した投薬量または頻度で前記第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与する、請求項１または２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記第３のレジームが、増加した投薬量または頻度で前記第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第３のレジームが、第１のレジームとは異なる免疫療法剤または非免疫療法剤を投与する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記レビー小体病がパーキンソン病である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記レビー小体病がレビー小体型認知症である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記免疫療法剤がα−シヌクレインへ特異的に結合する抗体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記免疫療法剤がα−シヌクレインへ特異的に結合する抗体を誘導する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、α−シヌクレインの残基１〜１０、９１〜９９、１１８〜１２６または１３０〜１４０内のエピトープへ結合する、請求項８または９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が、α−シヌクレインの残基１１８〜１２６内のエピトープへ結合する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫療法剤が、９Ｅ４、５Ｃ１、１Ｈ７、６Ｈ７または８Ａ５の６つのＫａｂａｔのＣＤＲを含む抗体である、請求項１〜９または１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体が、配列番号：３７の重鎖可変領域及び配列番号：３２の軽鎖可変領域を含むヒト化９Ｅ４である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験体の便秘症状が、質問票への被験体の答えから評価される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記質問票がＰＡＣ−ＳＹＭ質問票である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１のレジームにおける免疫療法剤の第１及び第２の投与後のそれぞれ少なくとも第１及び第２の機会に、前記被験体の便秘症状が評価される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記用量または頻度が、第１のレジームと比較して前記第２のレジームにおいて少なくとも半分まで低減される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記用量または頻度が、第２のレジームと比較して前記第３のレジームにおいて少なくとも２倍まで増加される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１のレジームに応答する便秘以外のレビー小体病の１つまたは複数の徴候または症状における変化について、前記被験体をモニターすることを更に含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記徴候または症状には、運動機能、認知機能、及び脳または体液中のα−シヌクレインのレベルが含まれる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記免疫療法剤がヒト化９Ｅ４抗体であり、前記用量が０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜３０ｍｇ／ｋｇであり、２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度で投与される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
レビー小体病に罹患し、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体における便秘を治療する方法であって、
便秘症状を低減させるのに効果的なレジームでα−シヌクレインに対する免疫療法を被験体へ施すことを含む、該方法。
【請求項２３】
前記便秘症状をモニターすることを更に含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記免疫療法剤がヒト化９Ｅ４抗体であり、前記用量が０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜３０ｍｇ／ｋｇであり、２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度で投与される、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
免疫療法レジームを評価する方法であって、
α−シヌクレインに対する免疫療法レジームを、α−シヌクレイン導入遺伝子を発現しレビー小体病の徴候及び症状を示すように配置された遺伝子導入動物モデルへ投与することと；
免疫療法レジームの投与の前後に１つまたは複数の便秘症状を決定し、症状の改善が、免疫療法レジームがレビー小体病を治療するのに有用であるという指標を提供することと、
を含む、該方法。
【請求項２６】
前記免疫療法剤がヒト化９Ｅ４抗体であり、前記用量が０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜３０ｍｇ／ｋｇであり、２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度で投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
レビー小体病と診断され、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体におけるα−シヌクレインに対する免疫療法の有効性を査定する方法であって、
（ａ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前に被験体の便秘症状を評価することと；
（ｂ）第１のレジームにおいて免疫療法剤を被験体へ投与することと；
（ｃ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与後に被験体の便秘症状を評価することと；
（ｄ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前後の被験体の便秘症状を比較し；そこで被験体の症状は改善することと；
（ｅ）第１のレジームと同じであるか、または低減された用量または頻度で第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与することである、第２のレジームを投与することと、
を含む、該方法。
【請求項２８】
前記免疫療法剤がヒト化９Ｅ４抗体であり、前記用量が０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜３０ｍｇ／ｋｇであり、２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度で投与される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
レビー小体病と診断され、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体におけるα−シヌクレインに対する免疫療法の有効性を査定する方法であって、
（ａ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前に被験体の便秘症状を評価することと；
（ｂ）第１のレジームにおいて免疫療法剤を被験体へ投与することと；
（ｃ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与後に被験体の便秘症状を評価することと；
（ｄ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前後の被験体の便秘症状を比較し；そこで被験体の症状は同じままかまたは悪化することと；
（ｅ）増加した用量もしくは頻度で第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与することであるか、または異なる免疫療法剤を投与することであるか、またはレビー小体病の治療のために効果的な非免疫療法剤を投与することである、第２のレジームを投与することと、
を含む、該方法。
【請求項３０】
前記免疫療法剤がヒト化９Ｅ４抗体であり、前記用量が０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜３０ｍｇ／ｋｇであり、２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度で投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
レビー小体病に罹患する被験体を治療する方法であって、
ヒト化９Ｅ４抗体を用量０．３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇで２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度で被験体へ投与することを含む、該方法。
【請求項３２】
前記用量が０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記用量が１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記用量が３．０〜１０ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記用量が１０〜３０ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記用量が０．３ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記用量が１．０ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
前記用量が３ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
前記用量が１０ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
前記用量が３０ｍｇ／ｋｇである、請求項３１に記載の方法。
【請求項４１】
前記ヒト化９Ｅ４抗体が、配列番号：３２の軽鎖可変領域及び配列番号：３７の重鎖可変領域を有する、請求項３１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
［配列リスト］
配列番号：１〜１２９を含む配列リストが添付され、その全体は参照により本明細書に援用される。４５２１４３ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔと命名されたリストは２０１４年１１月１８日にＡＳＣＩＩフォーマットで生成され、１１６キロバイトのサイズである。
【０００２】
［背景技術］
レビー小体病（ＬＢＤ）は、ドーパミン作動系の悪化、運動変化、認知機能不全、ならびにレビー小体（ＬＢ）及び／またはレビー神経突起の形成によって特徴づけられる（ＭｃＫｅｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（１９９６）４７：１１１３−２４）。レビー小体病には、パーキンソン病（特発性パーキンソン病が含まれる）及びレビー小体型認知症（ＬＢＤ）が含まれる。レビー小体病は、老齢集団の運動障害及び認知機能衰退についての一般的な原因である（Ｇａｌａｓｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．（１９９４）５１：８８８−９５）。便秘はレビー小体病に罹患する被験体の別の一般的な症状である（Ｏｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２０１２；７８；１６５０−１６５４；Ａｓｈｒａｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｖｅｍｅｎｔ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  １２，９４６−９５１（１９９７））。
【０００３】
α−シヌクレインは通常シナプスと会合し、神経可塑性、学習及び記憶において役割を果たすと考えられる。α−シヌクレインはレビー小体病の病因において中心的な役割を持つことも暗示される。タンパク質は凝集して、理学的状態で不溶性線維を形成することができる。例えば、α−シヌクレインはＬＢ中に蓄積する（Ｓｐｉｌｌａｎｔｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９９７）３８８：８３９−４０；Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．（１９９８）１５２：３６７−７２；Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．（１９９７）２３９：４５−８）。α−シヌクレイン遺伝子中の突然変異は、パーキンソン症候群の稀な家族型と共分離する（Ｋｒｕｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎ．（１９９８）１８：１０６−８；Ｐｏｌｙｍｅｒｏｐｏｕｌｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）２７６：２０４５−７）。遺伝子導入マウス（Ｍａｓｌｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０００）２８７：１２６５−９）及びショウジョウバエ（Ｆｅａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（２０００）４０４：３９４−８）におけるα−シヌクレインの過剰発現は、レビー小体病の複数の病理学的な態様を模倣する。シヌクレインの可溶性オリゴマーは神経毒性であり得る（Ｃｏｎｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（２０００）９７：５７１−５７６）。ヒト、マウス及びハエのような多様な種及び動物モデルにおける類似の形態的及び神経学的な変更をともなうα−シヌクレインの蓄積は、この分子がレビー小体病の発症に寄与することを示唆する。
【０００４】
α−シヌクレインに対して向けられた免疫療法は、レビー小体病のマウスモデルにおいてα−シヌクレイン沈着及び行動の症状を低減させることが報告された（Ｍａｓｌｉａｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６（４）：ｅ１９３３８．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００１９３３８）。しかしながら、α−シヌクレイン沈着に対する免疫療法の効果はヒト被験体においてモニターすることは容易ではない。認知機能及び運動系に対する免疫療法の効果の発生は遅く、治療効果に非依存的に有意な日々のばらつきも起こり得る。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、レビー小体病と診断され、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体におけるα−シヌクレインに対する免疫療法の有効性を査定する方法であって、（ａ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前に被験体の便秘症状を評価することと；（ｂ）第１のレジームにおいて免疫療法剤を被験体へ投与することと；（ｃ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与後に被験体の便秘症状を評価することと；（ｄ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前後の被験体の便秘症状を比較することと；（ｅ）第２のレジームをその症状が改善した被験体へ、及び第３のレジームをその症状が悪化した被験体へ施し、第２のレジーム及び第３のレジームが異なることと、を含む該方法を提供する。随意に、第２のレジームは第１のレジームと同じである。随意に、第２のレジームは、低減させた投薬量または頻度で第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与する。随意に、第３のレジームは、増加した投薬量または頻度で第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与する。随意に、第３のレジームは、第１のレジームとは異なる免疫療法剤または非免疫療法剤を投与する。随意に、レビー小体病は、レビー小体をともなうパーキンソン病または認知症である。
【０００６】
上述の方法のうちの任意のものにおいて、免疫療法剤はα−シヌクレインへ特異的に結合する抗体であり得る。随意に、免疫療法剤はα−シヌクレインへ特異的に結合する抗体を誘導する。随意に、抗体は、α−シヌクレインの残基１〜１０、９１〜９９、１１８〜１２６または１３０〜１４０内でエピトープへ結合する。随意に、抗体はα−シヌクレインの残基１１８〜１２６内でエピトープへ結合する。随意に、抗体は、９Ｅ４、５Ｃ１、１Ｈ７、６Ｈ７または８Ａ５の６つのＫａｂａｔのＣＤＲを含む。随意に、抗体は、配列番号：３７の重鎖可変領域及び配列番号：３２の軽鎖可変領域を含むヒト化９Ｅ４である。
【０００７】
上述の方法のうちの任意のものにおいて、被験体の１つまたは複数の便秘症状は、質問票への被験体の答えから評価することができる。随意に、質問票はＰＡＣ−ＳＹＭ質問票である。随意に、被験体の便秘症状は、第１のレジームにおける免疫療法剤の第１及び第２の投与後のそれぞれ少なくとも第１及び第２の機会に評価される。随意に、用量または頻度は、第１のレジームと比較して、第２のレジームにおいて少なくとも半分まで低減される。随意に、用量または頻度は、第２のレジームと比較して第３のレジームにおいて少なくとも２倍まで増加させる。
【０００８】
上述の方法のうちの任意のものは、第１のレジームに応答する便秘以外のレビー小体病の１つまたは複数の徴候または症状における変化について、被験体をモニターすることを更に含むことができる。随意に、徴候または症状には、運動機能、認知機能、及び脳または体液中のα−シヌクレインのレベルが含まれる。
【０００９】
本発明は、レビー小体病に罹患し、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体における便秘を治療する方法を更に提供する。方法は、便秘症状を低減させるのに効果的なレジームでα−シヌクレインに対する免疫療法を被験体へ施すことを含む。随意に、方法は便秘症状をモニターすることを含む。
【００１０】
本発明は、免疫療法レジームを評価する方法を更に提供する。かかる方法は、α−シヌクレインに対する免疫療法レジームを、α−シヌクレイン導入遺伝子を発現しレビー小体病の徴候及び症状を示すように配置された遺伝子導入動物モデルへ投与することと；免疫療法レジームの投与の前後に１つまたは複数の便秘症状を決定し、症状の改善が、免疫療法レジームがレビー小体病を治療するのに有用であるという指標を提供することと、を含む。
【００１１】
本発明は、レビー小体病と診断され、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体におけるα−シヌクレインに対する免疫療法の有効性を査定する方法であって、（ａ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前に被験体の便秘症状を評価することと；（ｂ）第１のレジームにおいて免疫療法剤を被験体へ投与することと；（ｃ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与後に被験体の便秘症状を評価することと；（ｄ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前後の被験体の便秘症状を比較し；そこで被験体の症状は改善することと；（ｅ）第１のレジームと同じであるか、または低減された用量または頻度で第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与することである、第２のレジームを投与するすことと、を含む該方法を更に提供する。
【００１２】
本発明は、レビー小体病と診断され、１つまたは複数の便秘症状を有する被験体におけるα−シヌクレインに対する免疫療法の有効性を査定する方法であって、（ａ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前に被験体の便秘症状を評価することと；（ｂ）第１のレジームにおいて免疫療法剤を被験体へ投与することと；（ｃ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与後に被験体の便秘症状を評価することと；（ｄ）第１のレジームにおける免疫療法剤の投与の前後の被験体の便秘症状を比較し；そこで被験体の症状は同じままかまたは悪化することと；（ｅ）増加した用量もしくは頻度で第１のレジームと同じ免疫療法剤を投与することであるか、または異なる免疫療法剤を投与することであるか、またはレビー小体病の治療のために効果的な非免疫療法剤を投与することである、第２のレジームを投与することと、を含む該方法を更に提供する。
【００１３】
上述の方法のうちの任意のものにおいて、免疫療法剤はヒト化９Ｅ４抗体であり、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜３０ｍｇ／ｋｇであり、２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度により投与することができる。
【００１４】
本発明は、レビー小体病に罹患する被験体を治療するかまたは予防を達成する方法であって、ヒト化９Ｅ４抗体を用量０．３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇで２８〜３１日ごとに１回（随意に毎月）の頻度で被験体へ投与することを含む該方法を更に提供する。随意に、用量は０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は３．０〜１０ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は１０〜３０ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は０．３ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は１．０ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は３ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は１０ｍｇ／ｋｇである。随意に、用量は３０ｍｇ／ｋｇである。これらの方法のうちの任意のものにおいてヒト化９Ｅ４抗体は、配列番号：３２の軽鎖可変領域及び配列番号：３７の重鎖可変領域を有することができる。
定義
【００１５】
「抗体」という用語にはインタクトな抗体及びその結合断片が含まれる。典型的には、断片は、それらが由来するインタクトな抗体と標的への特異的結合について競合する。断片には、分離した重鎖、分離した軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、Ｆｖ、単一鎖抗体及び単一ドメイン抗体が含まれる。「抗体」という用語には、二重特異性抗体も含まれる。二重特異性抗体または二重機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖ペア及び２つの異なる結合部位を有する人工的ハイブリッド抗体である（例えばＳｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７−５３（１９９２）を参照）。
【００１６】
基本的な抗体構造単位はサブユニットの四量体である。各々の四量体は、２つの同一のペアのポリペプチド鎖を含み、各々のペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各々の鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識に関与する約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。最初に発現された場合に、この可変領域は、典型的には切断可能なシグナルペプチドへ連結される。シグナルペプチドなしの可変領域は場合によっては成熟可変領域と称される。したがって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドなしの軽鎖可変領域を意味する。各々の鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能に関与する定常領域を定義する。定常領域には、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域及びＣＨ３領域のうちの任意のものまたはすべてが含まれ得る。
【００１７】
軽鎖はκまたはλのいずれかとして分類される。重鎖はγ、μ、α、δまたはεとして分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥとして抗体のイソタイプを定義する。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域（重鎖については約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む）によってつながれる（一般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、１９８９年）、７章を参照）（その全体はすべての目的のために参照により援用される）。
【００１８】
各々の軽鎖／重鎖ペアの成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。したがって、インタクトな抗体は２つの結合部位を有する。二重機能性抗体または二重特異性抗体以外は、２つの結合部位は同じである。鎖はすべて、３つの超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる）によってつながれた、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的構造を示す。各々のペアの２つの鎖からのＣＤＲはフレームワーク領域によって整列され、特異的エピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖及び重鎖の両方は、領域ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各々の領域へのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９８７年及び１９９１年）またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖または異なる軽鎖の間の対応する残基に同じ番号を割り当てる、広く使用されるナンバリング慣例（Ｋａｂａｔのナンバリング）も提供する。
【００１９】
パーセンテージ配列同一性はＫａｂａｔのナンバリング慣例によって最大に整列させた抗体配列で決定される。整列後に、被験体抗体領域（例えば重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）が、参照抗体の同じ領域と比較されるならば、被験体抗体と参照抗体領域との間のパーセンテージ配列同一性は、２つの領域の整列させた位置の総数（カウントされないギャップありで）で割って１００を掛けてパーセンテージへ転換した、被験体抗体及び参照抗体領域の両方において同じアミノ酸によって占められた位置の数である。
【００２０】
保存的または非保存的であるとしてアミノ酸置換を分類する目的のために、アミノ酸は以下の通りグループ化される。グループＩ（疎水性側鎖）：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。保存的置換は同じクラス中のアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のメンバーと交換することである。
【００２１】
本発明の抗体は、典型的には少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９または１０１０Ｍ−１の親和定数で、それらの示された標的へ結合する。かかる結合は、それが検出可能に高い大きさであり、少なくとも１つの無関係な標的に対して生じる非特異的結合とは区別可能であるという点で特異的結合である。特異的結合は、特定の官能基との間の結合、または特定の空間的な適合（例えば錠前及び鍵タイプ）の形成の結果であり得るが、非特異的結合は通常ファンデルワールス力の結果である。しかしながら、特異的結合は、モノクローナル抗体がただ一つの１つの標的を結合することを必ずしも暗示しない。
【００２２】
「症状」という用語は、被験体によって認められるような疾患の主観的証拠（足取りの変化等）を指す。「徴候」は、医師によって観察されるような疾患の客観的証拠を指す。
【００２３】
被験体が少なくとも１つの公知のリスクファクター（例えば、遺伝学的、生化学的、家族歴、状況性曝露）を有するならば、個体は疾患のリスクが増加し、そのリスクファクターを持つ個体の疾患を発症するリスクを、リスクファクターなしの個体よりも統計的に有意に高くする。統計的有意性はｐ≦０．０５を意味する。
【００２４】
特別に文脈から明白でない限り、「約」という用語は、表示値の平均の標準偏差または表示値の±５％（どちらかより大きいほう）内の値を包含する。
【００２５】
「９Ｅ４抗体」という用語は、ＣＤＲの各々が実質的に９Ｅ４のものである任意の抗体を指し、したがって、マウス９Ｅ４、キメラ９Ｅ４、ベニヤ化（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）９Ｅ４、及びヒト化９Ｅ４が含まれる。他の抗体（５Ｃ１、１Ｈ７、６Ｈ７及び８Ａ５等）への参照は、対応する意味を有する。
【００２６】
特別に文脈から明白でない限り、範囲への参照は、範囲内の任意の整数も含む。
【００２７】
治療レジームは、任意またはすべての用量、投与の頻度、投与の経路及び投与の継続期間の合計が含まれる、免疫療法剤の投与を特徴づけるパラメーターの組み合わせを指す。
［配列の簡潔な記述］
配列番号：１は、ｍ９Ｅ４ＶＬ可変領域である。
配列番号：２は、６３１０２８８９Ｈｕ９Ｅ４ＶＬＦｒ可変領域である。
配列番号：３は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ１可変領域である。
配列番号：４は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ２（復帰突然変異なし）可変領域である。
配列番号：５は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ３可変領域である。
配列番号：６は、ｍ９Ｅ４ＶＨ可変領域である。
配列番号：７は、１７９１００９Ｈｕ９Ｅ４ＶＨＦｒ可変領域である。
配列番号：８は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ１可変領域である。
配列番号：９は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ２可変領域である。
配列番号：１０は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ３可変領域である。
配列番号：１１は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ４（復帰突然変異なし）可変領域である。
配列番号：１２は、天然ヒト野生型α−シヌクレインのアミノ酸配列である。
配列番号：１３は、ヒト化９Ｅ４軽鎖定常領域（Ｒあり）（ｖ１、ｖ２、ｖ３については共通）である。
配列番号：１４は、ヒト化９Ｅ４軽鎖定常領域（Ｒあり）ヌクレオチド配列（ｖ１、ｖ２、ｖ３については共通）である。
配列番号：１５は、例示的なヒトＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列である。
配列番号：１６は、例示的なヒトＩｇＧ１定常領域をコードする核酸配列である。
配列番号：１７は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ１ヌクレオチド配列可変領域である。
配列番号：１８は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ２ヌクレオチド配列（復帰突然変異なし）可変領域である。
配列番号：１９は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ３ヌクレオチド配列可変領域である。
配列番号：２０は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ１ヌクレオチド配列可変領域である。
配列番号：２１は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ２ヌクレオチド配列可変領域である。
配列番号：２２は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ３ヌクレオチド配列可変領域である。
配列番号：２３は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ４ヌクレオチド配列（復帰突然変異なし）可変領域である。
配列番号：２４は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬシグナルペプチド（ｖ１、ｖ２、ｖ３については共通）である。
配列番号：２５は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬシグナルペプチドヌクレオチド配列（ｖ１、ｖ２、ｖ３については共通）である。
配列番号：２６は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨシグナルペプチド（ｖ１、ｖ２、ｖ３については共通）である。
配列番号：２７は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨシグナルペプチドクレオチド配列（ｖ１、ｖ２、ｖ３、ｖ４については共通）である。
配列番号：２８は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬの代替である。
配列番号：２９は、Ｈｕ９Ｅ４ＶＨの代替である。
配列番号：３０は、例示的なヒトκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列である。
配列番号：３１は、ヒト化９Ｅ４軽鎖定常領域（Ｒなし）ヌクレオチド配列（ｖ１、ｖ２、ｖ３については共通）である。
配列番号：３２は、ヒト化９Ｅ４軽鎖バージョン３（可変領域＋アルギニンありの定常領域）である。
配列番号：３３は、ヒト化９Ｅ４軽鎖バージョン３（可変領域＋アルギニンなしの定常領域）である。
配列番号：３４は、ヒト化９Ｅ４重鎖バージョン３（可変領域＋定常領域）である。
配列番号：３５は、ヒト化９Ｅ４重鎖定常領域（Ｇ１ｍ３アロタイプ；ＢＩＰバージョン）である。
配列番号：３６は、ヒト化９Ｅ４重鎖バージョン３（可変領域＋定常領域）である。
配列番号：３７は、ヒト化９Ｅ４重鎖バージョン３（可変領域＋代替の定常領域Ｇ１ｍ３アロタイプ）である。
配列番号：３８は、ｍ５Ｃ１抗体の成熟重鎖可変領域ヌクレオチド配列である。
配列番号：３９は、ｍ５Ｃ１抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列である。
配列番号：４０は、ｍ５Ｃ１抗体の重鎖シグナルペプチドヌクレオチド配列である。
配列番号：４１は、ｍ５Ｃ１抗体の重鎖シグナルペプチドアミノ酸配列である。
配列番号：４２は、ｍ５Ｃ１抗体の成熟軽鎖可変領域ヌクレオチド配列である。
配列番号：４３は、ｍ５Ｃ１抗体の軽鎖可変領域アミノ酸配列である。
配列番号：４４は、ｍ５Ｃ１抗体の軽鎖シグナルペプチドヌクレオチド配列である。
配列番号：４５は、ｍ５Ｃ１抗体の軽鎖シグナルペプチドアミノ酸配列である。
配列番号：４６は、５Ｃ１免疫原である。
配列番号：４７は、ｍ５Ｃ１重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号：４８は、ｍ５Ｃ１重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号：４９は、ｍ５Ｃ１重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号：５０は、ｍ５Ｃ１軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号：５１は、ｍ５Ｃ１軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号：５２は、ｍ５Ｃ１軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号：５３は、シグナルペプチドをコードする配列ありのマウス５Ｃ１重鎖可変領域ヌクレオチド配列である。
配列番号：５４は、シグナルペプチドありのマウス５Ｃ１重鎖可変領域配列である。
配列番号：５５は、シグナルペプチドをコードする配列ありのマウス５Ｃ１軽鎖可変領域ヌクレオチド配列である。
配列番号：５６は、シグナルペプチドありのマウス５Ｃ１軽鎖可変領域配列である。
配列番号：５７は、ヒトＶＨアクセプターＦＲ（Ａｃｃ＃ＡＡＹ４２８７６．１）である。
配列番号：５８は、ヒト化５Ｃ１Ｈ１である。
配列番号：５９は、ヒト化５Ｃ１Ｈ２である。
配列番号：６０は、ヒト化５Ｃ１Ｈ３である。
配列番号：６１は、ヒト化５Ｃ１Ｈ４である。
配列番号：６２は、ヒト化５Ｃ１Ｈ５である。
配列番号：６３は、ヒト化５Ｃ１  Ｈ１をコードする核酸配列である。
配列番号：６４は、ヒト化５Ｃ１  Ｈ２をコードする核酸配列である。
配列番号：６５は、ヒト化５Ｃ１Ｈ３をコードする核酸配列である。
配列番号：６６は、ヒト化５Ｃ１  Ｈ４をコードする核酸配列である。
配列番号：６７は、ヒト化５Ｃ１Ｈ５をコードする核酸配列である。
配列番号：６８は、ヒトＶＬアクセプターＦＲ（Ａｃｃ＃ＣＡＢ５１２９３．１）である。
配列番号：６９は、ヒト化５Ｃ１Ｌ１である。
配列番号：７０は、ヒト化５Ｃ１Ｌ２である。
配列番号：７１は、ヒト化５Ｃ１Ｌ３である。
配列番号：７２は、ヒト化５Ｃ１Ｌ４である。
配列番号：７３は、ヒト化５Ｃ１  Ｌ１をコードする核酸配列である。
配列番号：７４は、ヒト化５Ｃ１  Ｌ２をコードする核酸配列である。
配列番号：７５は、ヒト化５Ｃ１Ｌ３をコードする核酸配列である。
配列番号：７６は、ヒト化５Ｃ１  Ｌ４をコードする核酸配列である。
配列番号：７７は、例示的なヒトκ軽鎖定常領域をコードする核酸配列である。
配列番号：７８は、Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．によって報告されるようなα−シヌクレインの非アミロイド構成要素（ＮＡＣ）ドメインである。
配列番号：７９は、Ｕeｄａ  ｅｔ  ａｌ．によって報告されるようなα−シヌクレインの非アミロイド構成要素（ＮＡＣ）ドメインである。
配列番号：８０は、ｍ１Ｈ７抗体の重鎖可変ヌクレオチド配列である。
配列番号：８１は、ｍ１Ｈ７抗体の重鎖可変アミノ酸配列である。
配列番号：８２は、ｍ１Ｈ７抗体の軽鎖可変ヌクレオチド配列である。
配列番号：８３は、ｍ１Ｈ７抗体の軽鎖可変アミノ酸配列である。
配列番号：８４は、成熟ｍ１Ｈ７抗体の重鎖可変ヌクレオチド配列である。
配列番号：８５は、成熟ｍ１Ｈ７抗体の重鎖可変アミノ酸配列である。
配列番号：８６は、成熟ｍ１Ｈ７抗体の軽鎖可変ヌクレオチド配列である。
配列番号：８７は、成熟ｍ１Ｈ７抗体の軽鎖可変アミノ酸配列である。
配列番号：８８は、ｍ１Ｈ７抗体の重鎖ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔの定義）である。
配列番号：８９は、ｍ１Ｈ７抗体の重鎖ＣＤＲ２（Ｋａｂａｔの定義）である。
配列番号：９０は、ｍ１Ｈ７抗体の重鎖ＣＤＲ３（Ｋａｂａｔの定義）である。
配列番号：９１は、ｍ１Ｈ７抗体の軽鎖ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔの定義）である。
配列番号：９２は、ｍ１Ｈ７抗体の軽鎖ＣＤＲ２（Ｋａｂａｔの定義）である。
配列番号：９３は、ｍ１Ｈ７抗体の軽鎖ＣＤＲ３（Ｋａｂａｔの定義）である。
配列番号：９４は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ１ヌクレオチド配列である。
配列番号：９５は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ１アミノ酸配列である。
配列番号：９６は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ２ヌクレオチド配列である。
配列番号：９７は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ２アミノ酸配列である。
配列番号：９８は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ３ヌクレオチド配列である。
配列番号：９９は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ３アミノ酸配列である。
配列番号：１００は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ４ヌクレオチド配列である。
配列番号：１０１は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ４アミノ酸配列である。
配列番号：１０２は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ５ヌクレオチド配列である。
配列番号：１０３は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ５アミノ酸配列である。
配列番号：１０４は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨシグナルペプチドヌクレオチド配列である。
配列番号：１０５は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨシグナルペプチドアミノ酸配列である。
配列番号：１０６は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨシグナルペプチドヌクレオチド配列である。
配列番号：１０７は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨシグナルペプチドアミノ酸配列である。
配列番号：１０８は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ１ヌクレオチド配列である。
配列番号：１０９は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ１アミノ酸配列である。
配列番号：１１０は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ２ヌクレオチド配列である。
配列番号：１１１は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ２アミノ酸配列である。
配列番号：１１２は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ３ヌクレオチド配列である。
配列番号：１１３は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ３アミノ酸配列である。
配列番号：１１４は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ４ヌクレオチド配列である。
配列番号：１１５は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ４アミノ酸配列である。
配列番号：１１６は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬシグナルペプチドヌクレオチド配列である。
配列番号：１１７は、重鎖フレームワークのために使用されるＢＡＣ０２０３７（ＧＩ−２１６７００５５）ヒトアクセプターのアミノ酸配列である。
配列番号：１１８は、軽鎖フレームワークのために使用されるＡＡＹ３３３５８（ＧＩ−６３１０２９０５）ヒトアクセプターのアミノ酸配列である。
配列番号：１１９は、復帰突然変異またはＣＤＲ突然変異のないＨｕ１Ｈ７ＶＨである。
配列番号：１２０は、復帰突然変異またはＣＤＲ突然変異のないＨｕ１Ｈ７ＶＬである。
配列番号：１２１は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨの代替である。
配列番号：１２２は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＬの代替である。
配列番号：１２３は、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨ  ＣＤＲ３代替である。
配列番号：１２４は、ヒト化１Ｈ７軽鎖バージョン３（可変領域＋アルギニンあり定常領域）である。
配列番号：１２５は、ヒト化１Ｈ７軽鎖バージョン３（可変領域＋アルギニンなし定常領域）である。
配列番号：１２６は、ヒト化１Ｈ７重鎖バージョン３（可変領域＋定常領域）である。
配列番号：１２７は、ヒト化１Ｈ７重鎖バージョン３（可変領域＋定常領域Ｇ１ｍ３アロタイプ）である。
配列番号：１２８は、ヒト化１Ｈ７重鎖定常領域（ＩｇＧ２）である。
配列番号：１２９は、ヒト化１Ｈ７重鎖定常領域（Ｇ１ｍ１アロタイプ）である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
Ｉ．一般
本発明は、治療の前ならびに治療の間及び／または後の１つまたは複数の時に、被験体の便秘症状を比較することによって、α−シヌクレインに対して向けられた免疫療法をモニターする方法を提供する。治療の間または後の便秘症状の改善は、免疫療法レジームが陽性（すなわち、所望される）アウトカムを達成しているという指標を提供する。したがって、レジームを継続するか、またはいくつかの事例において、同じ免疫療法剤の投与の用量または頻度を低減するように調整することができる。反対に、便秘症状が改善しないかまたは悪化することは、治療レジームが陽性のアウトカムを達成していないという指標を提供する。したがって、免疫療法剤の投与の投薬量または頻度は増加させることができる。あるいは、異なる薬剤（別の免疫療法剤または他のもののいずれか）による治療レジームを試みることができる。
【００２９】
ＩＩ．標的分子
天然のヒト野生型α−シヌクレインは１４０アミノ酸のペプチドであり、以下のアミノ酸配列を有する。
2020011978.tif 000002
（Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９３）９０：１１２８２−６）；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：Ｐ３７８４０。タンパク質は、３つの認識されるドメイン、アミノ酸１〜６１をカバーするＮ末端のＫＴＫＥ反復ドメイン；およそアミノ酸６０〜９５に及ぶＮＡＣ（非アミロイド構成要素）ドメイン；及びおよそアミノ酸９８〜１４０に及ぶＣ末端の酸性ドメインを有する。
【００３０】
特別に文脈から明白でない限り、α−シヌクレインまたはその断片への参照には、上で示される天然のヒト野生型アミノ酸配列、及びそのヒト対立遺伝子バリアント、特にレビー小体病と関連したものが含まれる（例えばバリアントＥ４６Ｋ、Ａ３０Ｐ及びＡ５３Ｔでは、第１の文字は配列番号：１２中のアミノ酸を示し、数字は配列番号：１２中のコドン位置を示し、第２の文字は対立遺伝子バリアント中のアミノ酸を示す）。かかるバリアントは、以下で記述される本発明の態様のいずれかにおいて、個別にまたは任意の組み合わせで、随意に存在することができる。
【００３１】
ＩＩＩ．レビー小体病
レビー小体疾患（ＬＢＤ）は、ドーパミン作動系の悪化、運動変化、認知機能障害、及びレビー小体（ＬＢ）の形成によって特徴づけられる（ＭｃＫｅｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（１９９６）４７：１１１３−２４）。レビー小体は神経細胞中で見出される球状のタンパク質沈着である。脳におけるそれらの存在は、化学メッセンジャー（アセチルコリン及びドーパミンが含まれる）の作用を中断して脳の正常機能を妨害する。レビー小体病には、パーキンソン病（特発性パーキンソン病が含まれる）、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）（びまん性レビー小体病（ＤＬＢＤ）としても公知である）、アルツハイマー病のレビー小体バリアント（ＬＢＶ）、アルツハイマー病及びパーキンソン病の組み合わせ、ならびに多系統萎縮症（ＭＳＡ；例えばオリーブ橋小脳萎縮症、線条体黒質変性症及びシャイ−ドレーガー症候群）が含まれる。ＬＢＤは、アルツハイマー病及びパーキンソン病の両方の症状を共有する。ＬＢＤは主にレビー小体の所在位置でパーキンソン病とは異なる。ＬＢＤにおいて、レビー小体は主に皮質中で形成される。パーキンソン病において、それらは主に黒質中で形成される。他のレビー小体病には、純粋自律神経不全症、レビー小体嚥下障害、偶発的ＬＢＤ及び遺伝性ＬＢＤ（例えばα−シヌクレイン遺伝子、ＰＡＲＫ３及びＰＡＲＫ４の突然変異）が含まれる。
【００３２】
ＩＶ．免疫療法剤
受動的免疫療法は、α−シヌクレインに対する抗体による治療を含む。能動的免疫療法は、かかる抗体を誘導する薬剤による治療を含む。
【００３３】
１．抗体
Ａ．結合特異性及び機能的特性
免疫療法剤には、ヒトα−シヌクレインのＮ末端、ＮＡＣまたはＣ末端のドメインに特異的に結合する抗体が含まれる。いくつかの抗体は、ヒトα−シヌクレインの残基１〜１０、９１〜９９、１１８〜１２６または１３０〜１４０内のエピトープへ結合する。抗体はモノクローナルまたはポリクローナルであり得る。ポリクローナル血清は、それがエピトープまたは範囲の外部に結合する抗体を欠損するという点でα−シヌクレイン内のアミノ酸のエピトープまたは範囲に特異的であり得る。抗体は、他の可能性の中でも特に、非ヒト、キメラ、ベニヤ化、ヒト化、またはヒトであり得る。
【００３４】
いくつかの抗体は二重特異性であり、１つのアームはα−シヌクレインに対する抗体であり、他のアームは脳血液関門で発現される受容体（インスリン受容体、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）受容体、レプチン受容体もしくはリポタンパク質受容体または好ましくはトランスフェリン受容体等）へ結合する抗体である（Ｆｒｉｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ８８：４７７１−４７７５，１９９１；Ｆｒｉｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：３７３−３７７，１９９３）。かかる二重特異性抗体は受容体媒介性トランスサイトーシスによって脳血液関門を横切って移行することができる。二重特異性抗体の脳への取り込みは、脳血液関門受容体への親和性を低減させるように二重特異性抗体を操作することによって、更に促進することができる。受容体への親和性の低減は、脳におけるより広域の分布をもたらした（例えばＡｔｗａｌ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４３，２０１１；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．３，８４ｒａ４４，２０１１を参照）。
【００３５】
例示的な二重特異性抗体は、（１）二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ−Ｉｇ）（各々の軽鎖及び重鎖が短いペプチド連結を介してタンデムで２つの可変ドメインを含有する）（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２０１０）中のＷｕ  ｅｔ  ａｌ．、Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｄｕａｌ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（ＤＶＤ−Ｉｇ（商標））Ｍｏｌｅｃｕｌｅ）；（２）タンダブ（Ｔａｎｄａｂ）（標的抗原の各々について２つの結合部位を有する四価の二重特異性抗体をもたらす、２つの単一鎖ダイアボディの融合物）；（３）フレキシボディ（ｆｌｅｘｉｂｏｄｙ）（多価分子をもたらす、ダイアボディとｓｃＦｖの組み合わせ）；（４）タンパク質キナーゼＡ中の「二量体化及びドッキングドメイン」に基づく、いわゆる「ドック・アンド・ロック（ｄｏｃｋ  ａｎｄ  ｌｏｃｋ）」分子（Ｆａｂに適用された場合に、異なるＦａｂ断片へ連結された２つの同一のＦａｂ断片からなる、三価の二重特異性結合タンパク質をもたらし得る）；（５）いわゆるスコーピオン分子（例えばヒトＦｃ領域の両方の末端に融合させた２つのｓｃＦｖを含む）でもあり得る。二重特異性抗体の調製に有用なプラットフォームの例には、ＢｉＴＥ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、ＤＡＲＴ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｆｃａｂ及びＭａｂ２（Ｆ−ｓｔａｒ）、Ｆｃ操作ＩｇＧ１（Ｘｅｎｃｏｒ）またはＤｕｏＢｏｄｙ（Ｆａｂアーム交換に基づく、Ｇｅｎｍａｂ）が含まれる。
【００３６】
α−シヌクレインの残基１〜１０のエピトープへ結合する例示的な１つの抗体は、モノクローナル抗体６Ｈ７である。抗体６Ｈ７を産生するＪＨ１７．６Ｈ７．１．５４．２８と表記される細胞株は、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−６９１０を有し、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １５４９、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１０８）へブダペスト条約の条項下で２００５年８月４日に寄託されている。
【００３７】
α−シヌクレインの残基１３０〜１４０内のエピトープへ結合する別の例示的な抗体は、モノクローナル抗体８Ａ５である。抗体８Ａ５を産生するＪＨ４．８Ａ５．２５．７．３６と表記される細胞株は、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−６９０９を有し、２００５年８月４日に寄託されている。
【００３８】
別の例示的な抗体は、ヒトα−シヌクレインの残基１１８〜１２６内のエピトープへ結合するモノクローナル抗体９Ｅ４である。抗体９Ｅ４を産生するＪＨ１７．９Ｅ４．３．３７．１．１４．２と表記される細胞株は、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−８２２１を有し、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １５４９、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１０８）へブダペスト条約の条項下で２００７年２月２６日に寄託されている。マウスの軽鎖可変配列及び重鎖可変配列は、それぞれ配列番号：１及び配列番号：６である。
【００３９】
別の例示的な抗体はモノクローナル抗体５Ｃ１である。マウスの軽鎖可変配列及び重鎖可変配列は、それぞれ配列番号：４３及び配列番号：３９である。
【００４０】
別の例示的な抗体はモノクローナル抗体１Ｈ７である。抗体１Ｈ７を産生するＪＨ１７．１Ｈ７．４．２４．３４と表記される細胞株は、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−８２２０を有し、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １５４９、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１０８）へブダペスト条約の条項下で２００７年２月２６日に寄託されている。マウスの軽鎖可変配列及び重鎖可変配列は、それぞれ配列番号：８７及び配列番号：８５である。
【００４１】
かかる抗体は、ＷＯ０６／０２０５８１ならびに米国出願第６１／５９１，８３５号、第６１／７１１，２０７号、第１３／７５０，９８３号、第６１／７１１，２０４号、第６１／７１９，２８１号、第６１／８４０，４３２号、第６１／８７２，３６６号、第１４／０４９，１６９号、第６１／５５３，１３１号、第６１／７１１，２０４号、第６１／８４３，０１１号及び第１３／６６２，２６１号中に記述され、そのすべてはすべての目的のために参照により本明細書に援用される。
【００４２】
Ｂ．ヒト化抗体
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列の中へグラフトされた、遺伝子操作抗体である（例えばＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、ＵＳ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９；Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ、ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ、ＵＳ５，８５９，２０５、６，８８１，５５７、Ｆｏｏｔｅ、ＵＳ６，８８１，５５７を参照）。アクセプター抗体配列は、例えば成熟ヒト抗体の可変領域配列、かかる配列の複合物、ヒト抗体配列のコンセンサス配列（例えばＫａｂａｔ、１９９１年、前出の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域のコンセンサス配列）または生殖系列可変領域配列であり得る。したがって、本発明のヒト化抗体には、９Ｅ４、５Ｃ１、１Ｈ７、６Ｈ７または８Ａ５等の完全に、または実質的にマウス抗体（ドナー抗体）からのＫａｂａｔによって定義されるような３つの軽鎖ＣＤＲ及び３つの重鎖ＣＤＲならびに完全にまたは実質的にヒト抗体配列からの成熟可変領域フレームワーク配列及び定常領域（存在するならば）を有する抗体が含まれる。同様に、ヒト化重鎖には、ドナー抗体の重鎖からのＫａｂａｔによって定義されるような３つの重鎖ＣＤＲならびに完全に、または実質的にヒト抗体の重鎖配列からの成熟重鎖可変配列及び重鎖定常領域配列（存在するならば）を有する重鎖が含まれる。同様にヒト化軽鎖には、ドナー抗体の軽鎖からのＫａｂａｔによって定義されるような３つの軽鎖ＣＤＲならびに完全に、または実質的にヒト抗体の軽鎖配列からの成熟軽鎖可変配列及び軽鎖定常領域配列（存在するならば）を有する軽鎖が含まれる。Ｋａｂａｔによって定義された対応する残基のうちの少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％が同一の場合、抗体鎖の成熟可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域配列は、それぞれ実質的にヒト成熟可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域配列からである。少なくとも６５％の同一性が要求されるＣＤＲＨ２の事例において以外は、少なくとも８５％のそれに対する同一性を示すならば、ＣＤＲは実質的に対応するドナーＣＤＲからである。
【００４３】
ヒト成熟可変領域フレームワーク残基からの特定のアミノ酸は、ＣＤＲ立体配座及び／または抗原への結合に対するそれらの影響の可能性に基づいて、置換のために選択することができる。かかる影響の可能性の調査は、モデル化、特定の位置でのアミノ酸の特徴の検討、または特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の効果の経験的観察による。
【００４４】
例えば、マウス成熟可変領域フレームワーク残基と選択されたヒト成熟可変領域フレームワーク残基との間でアミノ酸が異なるときに、ヒトフレームワークアミノ酸は、マウス抗体からの等価なフレームワークアミノ酸によって置換することができ、それは、アミノ酸が、
（１）非共有結合で抗原を直接結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、
（３）そうでなければＣＤＲ領域と相互作用する（例えばＣＤＲ領域の約６Å内である）、
（４）重鎖と軽鎖との間の相互作用を媒介する
ことが合理的に予想される場合である。
【００４５】
マウス９Ｅ４抗体の例示的なヒト化形状は、３つの例示的なヒト化軽鎖成熟可変領域（Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ１〜ｖ３；配列番号：３〜５）及び４つの例示的なヒト化重鎖成熟可変領域（Ｈｕ９Ｅ４ＶＨｖ１〜ｖ４；配列番号：８〜１１）を含む。
【００４６】
例示的な軽鎖及び重鎖の成熟可変領域を任意の組み合わせでペアにすることができる。好ましい組み合わせは、Ｈｕ９Ｅ４ＶＬｖ３（配列番号：５）及びＨｕ９Ｅ４ＶＨｖ３（配列番号：１０）である。例示的な重鎖定常領域は配列番号：３５である。この定常領域は、重鎖可変領域の任意のものへ連結することができる。例示的な軽鎖定常領域は配列番号：３０である。この定常領域は、軽鎖可変領域の任意のものへ連結することができる。好ましい全長重鎖は配列番号：３７のアミノ酸配列を有する。好ましい全長軽鎖は配列番号：３２のアミノ酸配列を有する。好ましい組み合わせは、配列番号：３７及び配列番号：３２を含む抗体である。直前に記述した様々な重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、配列番号：１７〜２３中で提供される。
【００４７】
マウス１Ｈ７抗体の例示的なヒト化形状は、４つの例示的なヒト化軽鎖成熟可変領域（Ｈｕ１Ｈ７ＶＬｖ１〜ｖ４；配列番号：１０８〜１１３）及び５つの例示的なヒト化重鎖成熟可変領域（Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ１〜ｖ５；配列番号：９４〜１０３）を含む。例示的な軽鎖及び重鎖の成熟可変領域を任意の組み合わせでペアにすることができる。好ましい組み合わせは、Ｈｕ１Ｈ７ＶＨｖ３（配列番号：９９）及びＨｕ１Ｈ７ＶＬｖ３（配列番号：１１３）である。例示的な重鎖定常領域は配列番号：３５である。この定常領域は、重鎖可変領域の任意のものへ連結することができる。例示的な軽鎖定常領域は配列番号：３０である。この定常領域は、軽鎖可変領域の任意のものへ連結することができる。好ましい全長重鎖は配列番号：１２７のアミノ酸配列（Ｇ１ｍ３で）を有する。好ましい全長軽鎖は配列番号：１２５（アルギニンなし）のアミノ酸配列を有する。好ましい組み合わせは、配列番号：１２７及び配列番号：１２５を含む抗体である。直前に記述した様々な重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、配列番号中で提供される。かかるヒト化抗体は、ＷＯ０６／０２０５８１ならびにＵＳ１３／７５０，９８３、１４／０４９，１６９、１３／６６２，２６１及び６１／８４３，０１１中で記述される。
【００４８】
本明細書に記述されるこれらまたは他の抗体において、１つまたは複数の末端残基は、特に重鎖定常領域の末端リジンについては、翻訳後プロセッシングの過程で切断することができる。
【００４９】
Ｃ．キメラ抗体及びベニヤ化抗体
本発明は、非ヒト抗体（特に９Ｅ４、５Ｃ１、１Ｈ７、６Ｈ７、８Ａ５）のキメラ形状及びベニヤ化形状を更に提供する。
【００５０】
キメラ抗体は、非ヒト抗体（例えばマウス）の軽鎖及び重鎖の成熟可変領域を、異なる種の抗体からの軽鎖及び重鎖の定常領域と組み合わせた抗体である。典型的には、軽鎖及び重鎖の定常領域はヒト起源であるが、必要に応じて、定常領域は異なる非ヒト種（ラット等）を起源とすることができる（例えば適切な動物モデルにおける非ヒト抗体の試験を促進するために）。かかる抗体は、可変領域を供給する非ヒト（例えば、マウス）抗体の結合特異性を実質的または完全に保持し、約３分の２はヒト（または異なる非ヒト種）配列である。
【００５１】
ベニヤ化抗体は、ＣＤＲのうちのいくつか及び通常すべて、ならびに非ヒト抗体の非ヒト可変領域フレームワーク残基のうちのいくつかを保持するが、Ｂ細胞またはＴ細胞のエピトープに寄与し得る他の可変領域フレームワーク残基（例えば曝露される残基）（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９，１９９１）を、ヒト抗体配列の対応する位置からの残基により置き換えた、ヒト化抗体のタイプである。結果は、ＣＤＲが完全または実質的に非ヒト抗体からであり、非ヒト抗体の可変領域フレームワークが置換によってよりヒト様に作製された抗体である。９Ｅ４のベニヤ化形状は本発明中に含まれる。
【００５２】
Ｄ．定常領域の選択
キメラ抗体、ベニヤ化抗体またはヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部へ連結することができる。定常領域の選択は、部分的に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、抗体依存性細胞ファゴサイトーシス及び／または補体依存性細胞傷害が所望されるかどうかに依存する。例えば、ヒトイソタイプのＩｇＧ１及びＩｇＧ３は補体依存性細胞傷害を有し、ヒトイソタイプのＩｇＧ２及びＩｇＧ４は有していない。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも高い細胞媒介性エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域はλまたはκであり得る。例示的なヒト軽鎖κ定常領域は配列番号：１３のアミノ酸配列を有する。いくつかのかかる軽鎖κ定常領域は核酸配列によってコードすることができる。配列番号：１３のＮ末端アルギニンは省くことができ、その場合には、軽鎖κ定常領域は配列番号：３０のアミノ酸配列を有する。いくつかのかかる軽鎖κ定常領域は核酸配列によってコードすることができる。例示的なヒトＩｇＧ１重鎖定常領域は、配列番号：１５のアミノ酸配列（Ｃ末端のリジンありまたはなしで）または配列番号：３７の重鎖定常領域構成要素を有する。いくつかのかかる重鎖定常領域は核酸配列によってコードすることができる。抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含有する四量体として、分離した重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２及びＦｖとして、または重鎖及び軽鎖の成熟可変ドメインがスペーサーを介して連結される一本鎖抗体として発現させることができる。
【００５３】
ヒト定常領域は、異なる個体の間でアロタイプ変異及びイソアロタイプ変異を示し、すなわち、定常領域は１つまたは複数の多型位置で異なる個体において異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つまたは複数の他のイソタイプの非多型領域へ結合するという点で、アロタイプとは異なる。したがって、例えば、別の重鎖定常領域は、ＩｇＧ１  Ｇ１ｍ３アロタイプであり、配列番号：３７の定常領域をコードするアミノ酸配列を有する。さらに別の重鎖定常領域は、Ｃ末端のリジンを欠損する以外は配列番号：３７の定常領域をコードするアミノ酸配列を有する。
【００５４】
軽鎖及び／または重鎖のアミノ末端またはカルボキシ末端の１つまたは複数のアミノ酸（重鎖のＣ末端のリジン等）は、分子の一部またはすべてにおいて欠損または誘導体化され得る。エフェクター機能（補体媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣ等）を低減もしくは増加させるか（例えばＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、ＵＳ５，６２４，８２１；Ｔｓｏ  ｅｔ  ａｌ．、ＵＳ５，８３４，５９７；及びＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：４００５，２００６を参照）、またはヒトにおける半減期を延長する（例えばＨｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照）ように、定常領域中で置換を行なうことができる。例示的な置換には、抗体の半減期を増加させるために位置２５０でのＧｌｎ及び／または位置４２８でのＬｅｕ（ＥＵナンバリングを定常領域のためにこのパラグラフにおいて使用する）が含まれる。位置２３４、２３５、２３６及び／または２３７のうちの任意のものまたはすべてでの置換は、Ｆｃγ受容体（特にＦｃγＲＩ受容体）への親和性を低減させる（例えばＵＳ６，６２４，８２１を参照）。いくつかの抗体は、エフェクター機能を低減させるためにヒトＩｇＧ１の位置２３４、２３５及び２３７でのアラニン置換を有する。随意に、ヒトＩｇＧ２における位置２３４、２３６及び／または２３７はアラニンにより、ならびに位置２３５はグルタミンにより置換される（例えばＵＳ５，６２４，８２１を参照）。
【００５５】
Ｅ．組換え抗体の発現
抗体は組換え発現によって産生することができる。抗体をコードする核酸は、所望される細胞タイプ（例えばＣＨＯまたはＳｐ２／０）中での発現のためにコドンを至適化することができる。組換え核酸コンストラクトは、典型的には抗体鎖のコード配列へ作動可能に連結された発現制御配列（天然に会合するプロモーター領域または異種プロモーター領域が含まれる）を含む。発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションできるベクター中の真核生物プロモーター系であり得る。一旦、ベクターが適切な宿主の中へ取り込まれたならば、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現ならびに交差反応抗体の収集及び精製のために好適な条件下で維持される。抗体鎖をコードするベクター（複数可）は、抗体鎖をコードする核酸のコピー数の増幅を可能にするように選択可能な遺伝子（ジヒドロ葉酸還元酵素等）も含有することができる。
【００５６】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、抗体（特に抗体断片）を発現するために特に有用な原核生物宿主である。微生物（酵母等）も発現のために有用である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属は、発現制御配列、複製起点、終止配列及び同種のものを所望に応じて有する適切なベクターと共に、好ましい酵母宿主である。典型的なプロモーターには３−ホスホグリセレートキナーゼ及び他の解糖系酵素が含まれる。誘導可能酵母プロモーターには、とりわけ、アルコール脱水素酵素、イソシトクロムＣ、ならびにマルトース及びガラクトース利用に関与する酵素からのプロモーターが含まれる。
【００５７】
哺乳類細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントの発現のために使用することができる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ  Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ  （ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  ＮＹ，  １９８７）参照。インタクトな異種タンパク質を分泌できる多数の適切な宿主細胞株が、当技術分野において開発されており、ＣＨＯ細胞株、様々なＣＯＳ細胞株、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、ならびにＳｐ２／０及びＮＳ０を含む非抗体産生ミエローマが含まれる。ヒト以外の細胞を使用することは有利であり得る。これらの細胞のための発現ベクターには、発現制御配列（複製起点、プロモーター、エンハンサー等）（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））及び必要なプロセッシング情報部位（リボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位及び転写ターミネーター配列等）が含まれ得る。適切な発現制御配列は、内在性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス及び同種のものに由来するプロモーターである。Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。
【００５８】
細胞培養の中へ抗体重鎖及び軽鎖をコードするベクター（複数可）を導入して、無血清培地中での増殖生産性及び産物品質について細胞プールをスクリーニングすることができる。次いで、上位の産生細胞のプールにＦＡＣＳに基づく単一細胞クローニングを行って、モノクローナル株を生成することができる。１日あたり１細胞あたり５０ｐｇまたは１００ｐｇより上の特異的生産性（それは７．５ｇ／Ｌ培養を超える産物力価に対応する）は有利であり得る。単細胞クローンによって産生された抗体は、濁度、濾過特性、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＵＶスキャン、ＨＰ−ＳＥＣ、炭水化物−オリゴ糖マッピング、質量分析及び結合アッセイ（ＥＬＩＳＡまたはＢｉａｃｏｒｅ）についても試験することができる。次いで、選択されたクローンは複数のバイアル中で保存することができ、後続する使用のために凍結して貯蔵できる。
【００５９】
一旦発現されたならば、抗体は、プロテインＡ捕捉、カラムクロマトグラフィー（例えば疎水性相互作用またはイオン交換）、ウイルス不活性化のための低ｐＨ及び同種のもの（一般的には、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照）が含まれる当該技術分野の標準的な手順に従って精製することができる。
【００６０】
抗体の商業的な産生のための方法論には、コドン至適化、プロモーターの選択、転写エレメント及びターミネーター、無血清単一細胞クローニング、細胞保存、コピー数の増幅のための選択マーカーの使用、ＣＨＯターミネーター、無血清単一細胞クローニング、タンパク質力価の改善が含まれる（例えばＵＳ５，７８６，４６４、ＵＳ６，１１４，１４８、ＵＳ６，０６３，５９８、ＵＳ７，５６９，３３９、ＷＯ２００４／０５０８８４、ＷＯ２００８／０１２１４２、ＷＯ２００８／０１２１４２、ＷＯ２００５／０１９４４２、ＷＯ２００８／１０７３８８及びＷＯ２００９／０２７４７１及びＵＳ５，８８８，８０９を参照）。
【００６１】
２．能動的免疫療法
能動的免疫療法のための免疫療法剤は、α−シヌクレインに対する抗体を誘導する。好ましい薬剤はα−ＳＮペプチドそのもの及びその断片である。活性薬剤をアジュバントまたは担体（例えば任意の長さのペプチド）と組み合わせて使用して、抗体の誘発を支援することができる。ＵＳ２００６０２５９９８６Ａ１及びＷＯの０５／０１３８８９は、レビー小体病の治療の方法において免疫療法剤として有用なα−シヌクレイン断片を開示する。随意に、これらの断片はアジュバントと組み合わせて使用することができる。随意に、免疫療法剤はヒトα−シヌクレインの５〜２０のアミノ酸を有し、残基１〜１０、９１〜９９、１１８〜１２６または１３０〜１４０内のエピトープへ結合する抗体を誘導する。いくつかのかかる免疫療法剤は、５〜５、５〜８、５〜９または５〜１０のアミノ酸を有する。
【００６２】
適切な担体には、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシニアン、免疫グロブリン分子、チログロブリン、オバルブミン、破傷風トキソイドもしくは他の病原菌（ジフテリア、大腸菌、コレラまたはピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）等）からのトキソイドまたは弱毒化された毒素誘導体が含まれる。Ｔ細胞エピトープも適切な担体分子である。いくつかのコンジュゲートは、免疫刺激ポリマー分子（例えばトリパルミトイル−５−グリセリンシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、マンナン（マンノースポリマー）またはグルカン（β１→２ポリマー））、サイトカイン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１α及びβペプチド、ＩＬ−２、γ−ＩＮＦ、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ）及びケモカイン（例えばＭＩＰ１α及びβならびにＲＡＮＴＥＳ）へ、本発明の薬剤を連結することによって形成することができる。免疫原性剤は、Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ、ＷＯ９７／１７６１３及びＷＯ９７／１７６１４中で記述されるように、組織を横切る輸送を促進するペプチドへ連結することができる。免疫原を、スペーサーアミノ酸（例えばｇｌｙ−ｇｌｙ）ありまたはなしで、担体へ連結することができる。
【００６３】
いくつかのコンジュゲートは少なくとも１つのＴ細胞エピトープへ本発明の薬剤を連結することによって形成できる。いくつかのＴ細胞エピトープは無差別的であるが、他のＴ細胞エピトープは普遍的である。無差別的なＴ細胞エピトープは、様々なＨＬＡタイプを提示する様々な被験体においてＴ細胞免疫の誘導を促進することができる。無差別的なＴ細胞エピトープとは対照的に、普遍的なＴ細胞エピトープは、異なるＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子によってコードされた様々なＨＬＡ分子を提示する被験体のうちの大きなパーセンテージ（例えば少なくとも７５％）でＴ細胞免疫の誘導を促進することができる。
【００６４】
多数の天然に存在するＴ細胞エピトープが存在し、それらは、破傷風トキソイド（例えばＰ２及びＰ３０エピトープ）、Ｂ型肝炎表面抗原、百日咳トキソイド、はしかウイルスＦタンパク質、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍｉｔｉｓ主要外膜タンパク質、ジフテリアトキソイド、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト周囲Ｔ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ  ＣＳ抗原、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉトリオースリン酸イソメラーゼ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＴｒａＴ及びインフルエンザウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）等である。本発明の免疫原性のペプチドは、Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３６：７７８−７８０（１９８８）；Ｃｈｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７８：２７−４７（１９９３）；Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ７４：１９７−２０３（１９９３）；Ｆａｌｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，３９：２３０−２４２（１９９４）；ＷＯ９８／２３６３５；及びＳｏｕｔｈｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６０：３３６３−３３７３（１９９８）（その各々はすべての目的のために参照により本明細書に援用される）中で記述されるＴ細胞エピトープへもコンジュゲートすることができる。
【００６５】
あるいは、コンジュゲートは、ＭＨＣクラスＩＩ分子の大部分を結合できる少なくとも１つの人工的Ｔ細胞エピトープ（汎ＤＲエピトープ（「ＰＡＤＲＥ」）等）へ本発明の薬剤を連結することによって形成できる。ＰＡＤＲＥは、米国特許第５，７３６，１４２号、ＷＯ９５／０７７０７及びＡｌｅｘａｎｄｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１：７５１−７６１（１９９４）（その各々はすべての目的のために参照により本明細書に援用される）中で記述される。好ましいＰＡＤＲＥペプチドはＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号：１２）（太字の共通残基）であり、配列中、Ｘは好ましくはシクロヘキシルアラニン、チロシンまたはフェニルアラニン、最も好ましくはシクロヘキシルアラニンである。
【００６６】
免疫原性の薬剤は化学的架橋によって担体へ連結することができる。担体への免疫原の連結のための技法は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジル−チオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及びスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）を使用するジスルフィド結合の形成を含む（ペプチドがスルフヒドリル基を欠損するならば、これはシステイン残基の添加によって提供することができる）。これらの試薬は、自身と１つのタンパク質上に存在するペプチドシステインとの間でジスルフィド結合及びリジン上のε−アミノまたは他のアミノ酸中の他の遊離アミノ基を介するアミド結合を生成する。多様なかかるジスルフィド／アミド形成剤はＩｍｍｕｎ．Ｒｅｖ．６２，１８５（１９８２）によって記述される。他の二官能性カップリング剤は、ジスルフィド結合ではなくチオエーテルを形成する。これらのチオエーテル形成剤の多くは商業的に入手可能であり、６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸及び２−ヨード酢酸、４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸の反応性エステルが含まれる。カルボキシル基は、それらをスクシンイミドまたは１−ヒドロキシル−２−ニトロ−４−スルホン酸、ナトリウム塩と組み合わせることによって活性化することができる。
【００６７】
免疫原性は、Ｔｈエピトープと本発明のペプチド免疫原との間のスペーサー残基（例えばＧｌｙ−Ｇｌｙ）の添加を介して改善することができる。Ｂ細胞エピトープ（すなわちペプチド免疫原）からＴｈエピトープを物理的に分離することに加えて、グリシン残基は、ペプチド免疫原とＴｈエピトープの連結によって生成される任意の人工的二次構造を妨害し、それによって、Ｔ細胞及び／またはＢ細胞の応答の間の干渉を消失させることができる。ヘルパーエピトープと抗体の誘発ドメインとの間での立体配座的分離は、したがって提示された免疫原と適切なＴｈ細胞及びＢ細胞との間のより効率的な相互作用を可能にする。
【００６８】
本発明の薬剤へ様々なＨＬＡタイプを提示する被験体の大きなパーセンテージにおいてＴ細胞免疫の誘導を促進するために、異なるＴｈ細胞エピトープとコンジュゲートの混合物を調製することができる。混合物は、異なるＴｈ細胞エピトープとの少なくとも２つのコンジュゲートの混合物、異なるＴｈ細胞エピトープとの少なくとも３つのコンジュゲートの混合物または異なるＴｈ細胞エピトープとの少なくとも４つのコンジュゲートの混合物を含有し得る。混合物はアジュバントと共に投与することができる。
【００６９】
免疫原性のペプチドは、担体（すなわち異種ペプチド）との融合タンパク質としても発現させることができる。免疫原性のペプチドは、そのアミノ末端、そのカルボキシル末端または両方で担体へ連結することができる。随意に、免疫原性のペプチドの複数の反復は融合タンパク質中で存在することができる。随意に、免疫原性のペプチドは、例えばペプチドのＮ末端及びＣ末端の両方で、複数のコピーの異種ペプチドへ連結することができる。いくつかの担体ペプチドは、担体ペプチドに対するヘルパーＴ細胞応答を誘導する役目を供する。誘導されたヘルパーＴ細胞は、今度は担体ペプチドへ連結された免疫原性のペプチドに対するＢ細胞応答を誘導する。
【００７０】
本発明のいくつかの薬剤は、α−ＳＮのＮ末端断片が担体ペプチドへそのＣ末端で連結される融合タンパク質を含む。かかる薬剤において、α−ＳＮの断片のＮ末端残基は、融合タンパク質のＮ末端残基を構成する。したがって、かかる融合タンパク質は、α−ＳＮのＮ末端残基が遊離形状であることを要求するエピトープへ結合する抗体の誘導において効果的である。本発明のいくつかの薬剤は、１つまたは複数のコピーの担体ペプチドへＣ末端で連結されるＮＡＣの複数の反復を含む。いくつかの融合タンパク質は、α−ＳＮの異なるセグメントをタンデムで含む。
【００７１】
多様なアジュバントをペプチド（α−ＳＮ等）と組み合わせて使用して、免疫応答を誘発することができる。好ましいアジュバントは、応答の定性的な形に影響を与える免疫原の立体配座的変化を引き起こさずに、免疫原への内因的な応答を増大させる。好ましいアジュバントには、水酸化アルミニウム及びリン酸アルミニウム、３デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ（商標））が含まれる（ＧＢ２２２０２１１を参照（ＲＩＢＩ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔ．、Ｃｏｒｉｘａの現在の一部））。Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）ＱＳ−２１は、南アメリカで見出されたＱｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａ木の樹皮から単離されたトリテルペングリコシドまたはサポニンである（Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ＆Ｎｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、１９９５年）中のＫｅｎｓｉｌ  ｅｔ  ａｌ．；米国特許第５，０５７，５４０号を参照）、（Ａｑｕｉｌａ  ＢｉｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、Ｍａｓｓ．）。他のアジュバントは、随意に、免疫刺激剤（モノホスホリルリピドＡ等）（Ｓｔｏｕｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６−９１（１９９７）を参照）、プルロニックポリマー及び殺菌したマイコバクテリウムと組み合わせた水中油滴型エマルション（スクワレンまたは落花生油等）である。別のアジュバントはＣｐＧ（ＷＯ９８／４０１００）である。あるいは、α−ＳＮはアジュバントへカップリングすることができる。しかしながら、かかるカップリングは、それに対する免疫応答の性質に影響を与えるように、α−ＳＮの立体配座を実質的に変化させるべきでない。アジュバントは、活性薬剤を備えた治療法用の組成物の構成要素として投与することができるか、または療法剤の投与の前、同時、もしくは後に、分離して投与することができる。
【００７２】
アジュバントの好ましいクラスは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム等のアルミニウム塩（アラム）である。かかるアジュバントは、他の特異的免疫刺激剤（ＭＰＬまたは３−ＤＭＰ、ＱＳ−２１等）、ポリマーアミノ酸または単量体アミノ酸（ポリグルタミン酸またはポリリジン等）ありまたはなしで使用することができる。別のクラスのアジュバントは水中油滴型エマルション製剤である。かかるアジュバントは、他の特異的免疫刺激剤ありまたはなしで使用することができ、それらは、ムラミルペプチド（例えばＮ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホルイルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａ１−Ｄ−イソグル−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトキシプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）、Ｔｈｅｒａｍｉｄｅ（商標））、または他の細菌細胞壁構成要素等である。水中油滴型エマルションには、（ａ）微流動化装置（モデル１１０Ｙ微流動化装置（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、Ｍａｓｓ．）等）を使用して、サブミクロン粒子へと製剤化され、５％のスクワレン、０．５％のＴｗｅｅｎ  ８０、及び０．５％のＳｐａｎ  ８５（随意に様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含有する）を含有する、ＭＦ５９（ＷＯ９０／１４８３７）（ｂ）サブミクロンエマルションへの微流動化、またはボルテックスによるより大きな粒子サイズエマルションの生成のいずれかで、１０％のスクワレン、０．４％のツイーン８０、５％のプルロニックブロックポリマーＬ１２１及びｔｈｒ−ＭＤＰを含有する、ＳＡＦ（ｃ）２％のスクワレン、０．２％のＴｗｅｅｎ  ８０、ならびにモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）及び細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群からの１つまたは複数の細菌細胞壁構成要素、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））を含有する、Ｒｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔ．）が含まれる。
【００７３】
別のクラスの好ましいアジュバントは、サポニンアジュバント（Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）（ＱＳ−２１、Ａｑｕｉｌａ、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、Ｍａｓｓ．）等）またはそれから生成される粒子（ＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）及びＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ等）である。他のアジュバントには、ＲＣ−５２９、ＧＭ−ＣＳＦならびにフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）及びフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）が含まれる。他のアジュバントにはサイトカインが含まれ、それらは、インターロイキン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ１３及びＩＬ−１５）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）等である。別のクラスのアジュバントは、Ｎ−グリコシルアミド、Ｎ−グリコシルウレア及びＮ−グリコシルカルバメートが含まれる糖脂質類似体であり、その各々は、免疫修飾物質またはアジュバントとして、糖残基でアミノ酸によって置換される（米国特許第４，８５５，２８３号を参照）。熱ショックタンパク質（例えばＨＳＰ７０及びＨＳＰ９０）もアジュバントとして使用することができる。
【００７４】
アジュバントは、単一組成物として免疫原により投与することができるか、または免疫原の投与の前、同時、もしくは後に投与することができる。
【００７５】
Ｖ．レビー小体病のための診断基準
本方法は、一般に、適格な健康関連業務従業者によってレビー小体病と診断され、疾患に関連するかまたは少なくとも関連する疑いのある便秘を有する被験体に対して遂行される。かかる個体には、レビー小体病の治療または予防のための事前の処方を受理した任意のものが含まれる。レビー小体病の診断は、好ましくはレビー小体病の疑いまたはレビー小体病がほぼ確実であることについて、当技術分野で認められている基準（ＤＳＭ−ＶまたはＤＳＭ  ＩＶ−ＴＲ、Ｌｅｗｙ  Ｂｏｄｙ  ｄｅｍｅｎｔｉａ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｏｃｉｅｔｙ及び同種のものの基準等）に基づく。しかしながら、診断は、被験体の便秘がレビー小体病の結果である可能性が最も高いと治療医師に結論を下させる、レビー小体病の任意の徴候または症状の存在にも基づき得る。パーキンソン病の疑いまたはパーキンソン病がほぼ確実であることを診断する例示的な基準は以下に示される。
グループＡ：休止時振戦、動作緩慢、固縮及び非対称性の開始
グループＢの特色：代替の診断の示唆
症状開始後の最初の３年で姿勢不安定性が顕著
最初の３年で事象が停止する
最初の３年で医薬物に無関係な幻覚
運動症状に先行または最初の年での認知症
核上性注視麻痺（上方注視の制限以外の）または垂直性サッケードの遅延
医薬物に無関係な重度の症状の自律神経異常症
【００７６】
パーキンソン症候群を生ずることが公知であり、被験体の症状に妥当に結び付けられる病態の報告（適切に位置決めした局所性脳病変または過去６か月間以内の神経弛緩薬の使用等）。
【００７７】
パーキンソン病の「疑い」の診断についての基準：
グループＡ中の４つの特色のうちの少なくとも２つが存在し；少なくともこれらのうちの１つは震動または動作緩慢であり、グループＢ中の特色のどれも存在しないか、または症状は３年未満の間存在するかのいずれかであり、グループＢ中の特色のどれも現在まで存在せず；レボドーパもしくはドーパミンアゴニストへの実質的かつ持続的な応答が報告されているか、または被験体はレボドーパもしくはドーパミンアゴニストを適切に試していなかったかのいずれかである。
【００７８】
パーキンソン病が「ほぼ確実であること」の診断についての基準：
グループＡ中の少なくとも３つまたは４つの特色が存在し、グループＢ中の特色のどれも存在せず、レボドーパまたはドーパミンアゴニストへの実質的かつ持続的な応答が報告されている。
【００７９】
レビー小体認知症の診断についての例示的な基準は以下のとおりである。
認知症の存在
少なくとも以下の３つのコア特色のうちの２つ。
注意力及び集中力の変動、
定期的に繰り返すはっきりした幻視、
自発的なパーキンソン病性の運動徴候。
示唆的な臨床特色には以下のものが含まれる。
急速眼球運動（ＲＥＭ）睡眠行動障害
重度の神経弛緩薬感受性
ＳＰＥＣＴまたはＰＥＴ画像化によって実証される基底核における低ドーパミン輸送体取り込み。
【００８０】
２つのコア特色が存在しない場合、認知症に加えて少なくとも１つの示唆的な特色が１つのコア特色と共に存在するならば、ＤＬＢがほぼ確実であるという診断を行うこともできる。
【００８１】
ＤＬＢの疑いは、認知症に加えて１つのコア特色または示唆的な特色の存在により診断することができる。
【００８２】
レビー小体病の早期の前兆には、例えばＥＥＧの遅延、神経精神病学的所見（うつ病、認知症、幻覚、不安、無感覚、無快感）、自律神経性変化（起立性低血圧、膀胱障害、便秘、便失禁、唾液分泌過多、嚥下障害、性機能障害、脳血流の変化）、感覚的変化、（嗅覚、疼痛、色識別、知覚異常）、睡眠障害（レム睡眠行動障害（ＲＢＤ）、下肢静止不能症候群／周期的な四肢の動き、過眠症、不眠症）、ならびに様々な他の徴候及び症状（疲労、複視、霧視、脂漏、体重減少／増加）が含まれる。パーキンソン病に対するリスクの遺伝的マーカーには、α−シヌクレインまたはパーキン、ＵＣＨＬＩ及びＣＹＰ２Ｄ６遺伝子中の突然変異；特にα−シヌクレイン遺伝子の位置３０及び５３での突然変異が含まれる。これらの遺伝学マーカーまたは早期の前兆のどれもそれ自体はレビー小体病の診断ではないが、それらは、個別でまたは組み合わせてレビー小体病の診断に寄与し得る。
【００８３】
ＶＩ．便秘症状の決定
単純な近似として、１週間あたり３回未満の排便が便秘、及び３回以上が正常であると判断することができるが、ヒトの便秘症状のより正確な評価は、被験体の質問票への応答によって決定することができ、その多くは出版済み文献及び医学的用途で利用可能である。かかる質問票の１つの例はＰＡＴＩＥＮＴ  ＡＳＳＥＳＳＭＥＮＴ  ＯＦ  ＣＯＮＳＴＩＰＡＴＩＯＮ  ＳＹＭＰＴＯＭＳ（ＰＡＣ−ＳＹＭ）である。ＰＡＣ−ＳＹＭは、慢性的な便秘の症状頻度及び重症度を査定する（Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １９９９；３４：８７０−７）。この１２項目の自己報告尺度は３つの症状サブスケール（すなわち腹部、直腸及び便）へと分割される。項目を４点のＬｉｋｅｒｔスケールでスコアリングし、４は最悪の症状の重症度を示す。ＰＡＣ−ＳＹＭについてのスコアの合計は０〜４８の範囲であり得る。
【００８４】
Ｃｏｎｓｔｉｐａｔｉｏｎ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＣＳＳ）（Ｄｉｓ  Ｃｏｌｏｎ  Ｒｅｃｔｕｍ  １９９６；３９：６８１−５）は、便秘の罹患率及び重症度を査定するようにデザインされた８項目の自己報告尺度である。スコアリングシステムは、８つの変数（排便の頻度；困難なまたは有痛性の排泄；排泄の完全性；腹痛；１回の試みあたりの時間；緩下剤を含む支援のタイプ；用指排便または浣腸；２４時間の期間における排泄で不成功な試みの数及び便秘の継続期間）に基づく。ＣＳＳは、０（時間のうちで少しもない）〜４（時間のすべて）の範囲の５点のＬｉｋｅｒｔのスケールを使用してスコアリングされる７つの項目及び０〜２のスケールで評価される１つの項目からなる。スコアの合計は０（正常）から３０（重度の便秘）の範囲であり得る。１５のカットオフスコアは便秘を示唆する。
【００８５】
Ｋｎｏｗｌｅｓ  Ｅｃｃｅｒｓｌｅｙ  Ｓｃｏｔｔ  Ｓｙｍｐｔｏｍ（ＫＥＳＳ）（Ｄｉｓ  Ｃｏｌｏｎ  Ｒｅｃｔｕｍ  ２０００；４３：１４１９−２６）は、便秘の診断を支援し、病理生理学的サブグループの中での識別のために開発された、１１項目の尺度である。ＫＥＳＳは、重み付きでない線形整数スケールでスコアリングされる４〜５点のＬｉｋｅｒｔのスケールを使用する。スコアの合計は、０（症状はない）〜３９（高い症状の重症度）の範囲であり得る。≧１１のカットオフスコアは便秘を示す。
【００８６】
Ｇａｒｒｉｇｕｅｓ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＧＱ）（Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  ２００４；１５９：５２０−６）は、慢性的な便秘の存在を定義するために開発された、２１項目の自己報告尺度である。２１項目のうちの１３のみが用便習慣に関連する。２つの異なる４点のＬｉｋｅｒｔスケールを使用して、項目をスコアリングする。第１のものは、「なし」、「時々」（時間のうちの＜２５％）、「頻繁に」（時間のうちの≧２５％）及び「常に」からなっていた。第２のものは、「なし」、「週に１回未満」、「週に１回以上」及び「毎日」からなっていた。
【００８７】
動物モデルにおける便秘は、他の測定の中でも動物モデルにおける排便の頻度及び継続期間ならびに／または便稠度をモニターすることによって査定することができる。
【００８８】
被験体の便秘症状（複数可）を免疫療法の開始前に少なくとも１回査定して、ベースライン読み取りを決定することができる。被験体の便秘症状（複数可）は免疫療法剤の投与後に少なくとも１回査定することもできる。かかるレジームの間及び後に、症状（複数可）を複数回査定することができる。例えば、かかるレジームにおける免疫療法剤の各々の投与後に、症状（複数可）を固定した間隔で査定することができる。
【００８９】
質問票の考察から明らかなように、質問票への被験体答えは１つまたは複数の数値へとまとめることができ、被験体の病態の全体的な評価が提供され、異なる時間で投与された質問票の間で単純に比較して、便秘症状が改善されるか、同じにとどまるか、または悪化しているかどうかを示すことが可能になる。
【００９０】
ＶＩＩ．動物モデル
本方法は、レビー小体病の動物モデル（特に齧歯目の動物、昆虫、ヒト以外の霊長動物）における、免疫療法剤及びレジームの評価のためにも有用である。動物モデルの好ましい形状は、レビー小体病の１つまたは複数の徴候または症状を発症するように配置したα−シヌクレイン導入遺伝子（Ｍａｓｌｉａｈ，２０００，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１２６５−６９を参照）を発現する遺伝子導入マウスである。ＡＰＰ導入遺伝子も含む類似のマウスも使用することができる。Ｅ４６Ｋ及びＲｅｐ１の突然変異を備えたゲノムのα−シヌクレイン導入遺伝子を取り込む別のモデルは、ＵＳ８，５０２，０１６中で記述される。ヒトα−シヌクレインを発現するトランスジェニックショウジョウバエは、Ｆｅａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２０００  Ｍａｒ  ２３；４０４（６７７６）：３９４−８によって報告される。レビー小体病の他の遺伝子導入動物モデルは、Ｅｓｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ  Ｄｉｓ．２０１３  Ｓｅｐ  ２４（電子印刷）によって概説される。
【００９１】
動物モデルは免疫療法剤及びレジームのスクリーニングのために使用することができる。免疫療法剤はレジームにおいて動物モデルへ投与され、便秘の１つまたは複数の症状は投与前後に査定することができる。レビー小体病の他の徴候及び症状は査定されるかまたは査定されなくてもよい。免疫療法剤の投与へ応答性である１つまたは複数の便秘症状における改善は、免疫療法剤及びそれが投与されるレジームがレビー小体病の治療のために有用であるという指標を提供する。改善は、試験されている免疫療法剤を受けない類似の動物モデルと比較して査定することもできる。好ましくは、免疫療法剤を受ける動物モデルの集団と受けない動物モデルの集団との間で比較を遂行して、免疫療法剤及びそれが投与されるレジームが、便秘の症状において統計的に有意な低減を達成するかどうかを決定する。
【００９２】
ＶＩＩＩ．便秘症状に基づいた免疫療法のモニター及び調整
方法は、便秘症状が含まれるレビー小体病と診断された被験体で実践される。被験体は免疫療法の開始前に便秘症状のためのベースラインを確立するために評価することができる。好ましくは、被験体は、ベースライン及び治療に非依存的なランダムなばらつきの尺度の両方を確立するために複数の機会で評価される。次いで免疫療法剤は第１のレジームで投与される。
【００９３】
レジームには、典型的には例えば１か月間〜５年間、好ましくは１〜２４または６〜１８か月間の範囲の合計期間にわたる免疫療法剤の複数の投与が含まれる。１つまたは複数の便秘症状は、レジームの間または後に少なくとも１回評価される。好ましくは、ランダムなばらつきの尺度を確立すること及び免疫療法に応答する傾向性を示すことの両方のために、症状を複数の機会で評価する。次いで便秘症状の様々な評価を比較する。２つの評価のみが行われるならば、直接的な比較を２つの評価の間で行って、便秘症状が、２つの評価の間で改善したか、悪化したか、または同じままであるかどうかを決定することができる。２つ以上の測定が行われるならば、測定は、免疫療法の前に開始し免疫療法を通して進むような時間経過として分析することができる。分析は、同様に、便秘症状（複数可）が免疫療法に応答して改善したか、悪化したか、または同じままであるかどうかを示す。比較は適切にプログラムされたコンピューターにおいて遂行することができ、それは以下で更に論じられるようなアウトプットを提供するようにもプログラムされ得る。追加で、またはあるいは、治療の開始後の１週間あたり３回以上の排便の頻度は、治療への陽性の応答の単純な指標として判断することができる。
【００９４】
１つまたは複数の便秘症状の比較のアウトカムに依存して、異なる被験体は異なる後続の治療レジームを受けることができる。１つまたは複数の症状が改善した被験体において、第１のレジームは成功したと結論付けることができる。その後のかかる被験体は第２のレジームを受け、それは第１のレジームと同じであり得るか（それが成功したので）または、第１のレジームにおけるものと同じ免疫療法剤であるが低減させた投薬量もしくは頻度での継続的な投与を含み得る（例えば誘導レジームから維持レジームへの移行）。例えば、第２のレジームにおいて、用量または頻度は、少なくとも１．５、少なくとも２または１．５〜５分の１まで低減させることができる。投薬量を下げて調整する目的のために、投薬量は、０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、１〜３ｍｇ／ｋｇ、３〜１０ｍｇ／ｋｇ及び１０〜３０ｍｇ／ｋｇ等の４つの帯域（他の可能性の中でも特に）において分類することができ、より高い帯域からより低い帯域内で用量を変化させて下方へ調整される。より低い帯域は、初回用量よりも低い帯域の任意のものであり得る。例えば、用量は、より高い帯域から次のより低い帯域（３〜１０ｍｇ／ｋｇから１〜３ｍｇ／ｋｇへ等）へ調整され得る。投薬量は、０．３、１、３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇの例示的な投薬量の中で調整することもできる。例えば、３０ｍｇ／ｋｇの初回投薬量は、言及された他の投薬量のうちの任意のものへ下げて調整することができる。いくつかのかかる方法において、言及されたもののうちのより高い端部での投薬量（例えば３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇ）は誘導のために使用され、より低い端部での投薬量（例えば０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇ）は維持のために使用される。１つまたは複数の症状が悪化したか、または同じままであった被験体において、第１のレジームが失敗であったかまたは少なくとも最適未満で成功したことを、結論付けることができる。その後にかかる被験体は、第３のレジーム（第１のレジームとは異なる）及び第２のレジームを受けることができる。第３のレジームは、第１のレジームにおけるものと同じ免疫療法剤であるが増加させた用量及び頻度での投与を含み得る。例えば、用量または頻度は、少なくとも１．５、少なくとも２または１．５〜５倍で増加させることができる。例として、用量は、上記のもののより低い帯域からより高い帯域内、またはより低い例示的な投薬量からより高い例示的な投薬量であるように調整され得る。第３のレジームには、第１のレジームとは異なる薬剤（異なる免疫療法剤（例えばα−シヌクレインへの異なる抗体）またはレビー小体病の治療のために示される非免疫療法剤のいずれか）の投与も含まれ得る。
【００９５】
症状における改善または悪化への参照は、被験体の病態におけるランダムなばらつきではなく、医師の判定において治療に起因する可能性が高く、好ましくはかかる揺らぎの少なくとも１標準偏差及び好ましくは２標準偏差を超える改善によって実証される改善を意味する。
【００９６】
便秘症状の評価は、レビー小体病の他の徴候及び症状の査定と併用して行うことができる。レビー小体病の徴候には、脳中の軸索性または神経炎性のα−シヌクレイン凝集またはレビー小体の蓄積、脳脊髄液または体液中のα−シヌクレインの蓄積、神経炎性ジストロフィー、及びシナプス密度の低減が含まれる。シナプス密度または樹状密度の変化のインデックスは、シナプス形成（シナプトフィジン）及び／または樹状突起（ＭＡＰ２）のマーカーによって測定することができる。レビー小体病の症状には、診断下で上でリストされた任意のものが含まれる。評価のために好ましい症状には、運動機能及び認知機能が含まれる。いくつかの被験体において、便秘症状における改善は、被験体における他のかかる症状（例えば神経炎性及び／もしくは軸索性のα−シヌクレイン凝集の低減、認知機能の改善、ならびに／または認知力低下の回復、治療もしくは防止）のうちの１つもしくは複数またはすべてにおける改善の前に生じる。
【００９７】
方法は、認可された免疫療法剤のためのものまたは免疫療法剤の臨床試験もしくは前臨床試験の一部としてのものであり得る。方法は、単一個体または個体の集団に対して実践することができる。集団に対してであるならば、集団は、好ましくは、便秘症状が治療に応答して減少する少なくとも１つの個体、及び症状が治療後に同じままかまたはより悪くなる少なくとも１つの個体を含むほど十分に大きい。集団は、好ましくは、少なくとも２、５、１０、５０、１００または１０００名の被験体を含む。
【００９８】
ＩＸ．便秘の治療
本発明は、レビー小体病と診断され、レビー小体病に起因するという疑いのある便秘の症状を有する被験体において、便秘を治療する方法を更に提供する。かかる方法は、被験体における便秘の１つまたは複数の症状を改善するような、α−シヌクレインに対する免疫療法剤の効果的なレジームを被験体へ投与することを含む。好ましくは、便秘の１つまたは複数の症状を治療の前及び間にモニターして、治療が便秘の症状を低減させるのに効果的かどうかの評価を可能にする。
【００９９】
Ｘ．治療レジーム
治療用途において、抗体または抗体を誘導する薬剤は、疾患の少なくとも１つの徴候または症状の更なる悪化を寛解するかまたは少なくとも阻害するのに効果的であることが公知であるかまたはそのように考えられるレジーム（用量、頻度及び投与経路）で、レビー小体病と診断される被験体へ投与される。予防用途において、抗体または抗体を誘導する薬剤は、疾患の少なくとも１つの徴候または症状の開始を阻害または遅延させるのに効果的であることが公知であるかまたはそのように考えられるレジームで、レビー小体病のリスクが増加したがその疾患と診断される十分な症状をまだ有していない被験体へ投与される。
【０１００】
より好ましいアウトカムが、対照動物モデルまたは臨床試験（例えばフェーズＩＩ、フェーズＩＩ／ＩＩＩまたはフェーズＩＩＩ試験）において、ｐ＜０．０５もしくは０．０１または場合によっては０．００１レベルで、治療被験体ｖｓ対照被験体で実証されるならば、レジームは治療法的または予防的に効果的であると考慮される。しかしながら、遺伝学、被験体特徴及び環境におけるばらつき、ならびに個別の被験体の間の疾患サブタイプに起因して、１つの被験体において効果的なレジームは、別の被験体において効果的でないかまたは異なる程度で効果的であり得る。
【０１０１】
効果的な用量は様々な要素に依存して変動し、それらには、投与の手段、標的部位、レビー小体病のタイプが含まれる被験体の生理的状態、被験体がＡｐｏＥ保因者であるか、被験体がヒトまたは動物であるか、他の医薬物が投与されるか、及び治療が予防的または治療法的なものであるかが含まれる。
【０１０２】
抗体についての例示的な投薬量範囲は、約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ被験体体重である。抗体についての追加の例示的な投薬量範囲は、約０．１〜６０ｍｇ／ｋｇ被験体体重である。抗体は、かかる用量で、毎日、隔日、毎週、隔週、毎月、３ヶ月ごと、毎年、または経験的分析によって決定された任意の他のスケジュールに従って、投与することができる。例示的な治療は、例えば少なくとも６か月間及び場合によっては少なくとも１２または１８か月間の延長された期間にわたって複数の投薬量での投与を要する。追加の例示的な治療レジームは、２週間ごと１回または月に１回または３〜６か月間ごとに１回の投与を要する。
【０１０３】
本方法のうちの任意のものにおけるα−シヌクレインへの抗体についての例示的な投薬量範囲には、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇ、または以下の範囲、０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇ、３．０〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜３０ｍｇ／ｋｇのいずれか内もしくはかかる範囲の任意の組み合わせ（例えば０．３〜３ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇ）内の用量が含まれる。かかる投薬量は、およそ毎月の間隔（例えば２８、２９、３０または３１日ごとに）で、または暦月により投与することができる。暦月または２８日の間隔が好ましい。２８〜３１日ごとに１回の間隔は、２８日ごとに１回、２９日ごとに１回、３０日ごとに１回、３１日ごとに１回、１つの暦月あたり１回、またはこれらの間隔の任意の順列で、用量を投与できることを意味する（例えば用量の間の第１の間隔は２８日、第２の間隔は２９日、第３の間隔は３１日、第４の間隔は３８日）。実験誤差内の同じ曲線下面積を送達する他のレジームも使用することができる。このレジームによって使用可能なα−シヌクレイン抗体の１つの例は、ヒト化９Ｅ４、または特に軽鎖可変領域が配列番号：５及び重鎖可変領域が配列番号：１０と指定されるＨ３Ｖ３バージョン、またはより具体的には全長軽鎖が配列番号：３２及び全長重鎖が配列番号：３７と指定されるＨ３Ｖ３バージョンである。
【０１０４】
抗体は末梢経路経由で投与することができる（すなわち投与された抗体が脳血液関門を横切って脳中の意図された部位に到達するもの）。投与経路には、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、髄腔内、腹腔内、鼻腔内、または筋肉内が含まれる。抗体の投与のためのいくつかの経路は静脈内及び皮下である。このタイプの注射は、最も典型的には腕または脚の筋肉において遂行される。いくつかの方法において、薬剤は沈着が蓄積する特定の組織の中へ直接注射される（例えば頭蓋内注射）。
【０１０５】
本レジームは、治療されている疾患の治療または予防において効果的な他の薬剤と組み合わせて投与することができる。他の薬剤は、本明細書において記述される別の免疫療法剤またはパーキンソン病の治療のための他の薬剤であり得、それらには、レボドーパ、ベンザセリデ（ｂｅｎｚａｓｅｒｉｄｅ）、カルビドパ、ドーパミンアゴニスト、非麦角系ドーパミンアゴニスト、カテコール−Ｏ−メチル（「ＣＯＭＴ」）阻害剤（例えばエンタコポン（ｅｎｔａｃｏｐｏｎｅ）またはトルコポン（ｔｏｌｃｏｐｏｎｅ）等）、モノアミンオキシダーゼ（「ＭＡＯ」）阻害剤（例えばラサガリン（ｒａｓａｇａｌｉｎｅ）及びアマンタジン等）、またはレジームと組み合わせて使用することができる抗コリン作動剤が含まれる。
【０１０６】
すべての出版物（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号及び同種のものが含まれる）、特許及び引用された特許出願は、あたかも各々の個別の出版物、特許及び特許出願が、その全体ですべての目的のために参照により援用されることが具体的に個別に示されたかのように、それらの全体ですべての目的のために参照により本明細書に同じ程度まで援用される。Ｇｅｎｂａｎｋ及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔのアクセッション番号と関連した配列及び同種のものもしくはウェブサイトまたは団体の疾患基準における任意の不一致の事象において、本出願はその有効出願日に施行されたものを参照する。
【配列表】
2020011978000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年9月26日(2019.9.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−シヌクレインに対する抗体又はα−シヌクレインに対する抗体を誘導するα−シヌクレインの断片を含む、レビー小体病を患っている被験体における便秘を治療するための医薬組成物。
【外国語明細書】
2020011978000001.pdf