(57)【要約】      （修正有）【課題】１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基の精製方法の提供。【解決手段】（ａ）未精製化合物を、酸と共に、Ｃ１−５アルコールおよび水の混合溶媒中に溶解させること、並びに（ｂ）（ａ）から得られる溶液のｐＨを、化合物がアルコール−水混合溶媒から沈殿するまで増加させること、を含む、方法。【選択図】図１
2020117532.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を精製するための方法であって、
ａ）或る量の未精製１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンを、酸と共に、Ｃ１−５アルコールおよび水の混合溶媒中に溶解させること、並びに
ｂ）（ａ）から得られる溶液のｐＨを、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基がアルコール−水混合溶媒から沈殿するまで増加させること、
を含む、前記方法。
【請求項２】
アルコール−水混合溶媒中のアルコールがエタノールである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アルコール−水混合溶媒が、段階（ｂ）の実行に先立ち、６０〜８０体積％のアルコール、好ましくは７０〜８０体積％のアルコールを含有するように、必要であれば調製される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
アルコール−水混合溶媒が、段階（ｂ）の実行に先立ち、７３〜７７体積％のアルコール、好ましくはおよそ７５体積％のアルコールを含有するように、必要であれば調製される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
段階（ｂ）において、（ａ）から得られた溶液のｐＨが７．５〜９．５に増加される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
段階（ｂ）において、ｐＨが７．８〜８．８、好ましくはおよそ８．５に増加される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
段階（ｂ）において、（ａ）から得られた溶液のｐＨが塩基の溶液を用いて増加される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
段階（ｂ）でのｐＨの増加に使用される塩基の溶液が、未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンがこの段階において存在しているアルコール−水混合溶媒と、実質的に同一の溶媒組成を有するアルコール−水混合溶媒を使用する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
段階（ｂ）において、（ａ）から得られた溶液のｐＨが水酸化カリウムを含む塩基を用いて増加される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
段階（ａ）において、Ｃ１〜５アルコールおよび水の混合溶媒中の未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−
ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンおよび酸の溶解が高温で実行される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
段階（ｂ）において、ｐＨが増加されている間、（ａ）から得られた溶液の温度が７０℃以上に維持される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
段階（ｂ）において、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基の沈殿が開始するまで、（ａ）から得られた溶液の温度が７３℃以上に維持される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
以下のさらなる段階を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法：
ｃ）段階（ｂ）で得られた沈殿した１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を、酸と共に、Ｃ１〜５アルコールおよび水の混合溶媒中に再溶解させる段階、並びに
ｄ）（ｃ）から得られた溶液のｐＨを、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基がアルコール−水混合溶媒から沈殿するまで増加させる段階。
【請求項１４】
段階（ｄ）における１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基の沈殿の間、ｐＨが必要に応じてさらに増加されことで、段階（ｄ）において１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基の沈殿が開始するレベル以上にｐＨが維持される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
段階（ａ）で使用される酸がフマル酸、クエン酸および塩酸から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基が、未精製の或る量の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンから精製される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンが、フェニルＮ’−シアノ−Ｎ−（７−（ピロリジン−１−イル
）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）カルバムイミデートと３−ヒドラジノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジンとの間の反応の生成物である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンの開始溶液が、段階（ａ）におけるアルコール−水混合溶媒と接触させられる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンの開始溶液が、フェニルＮ’−シアノ−Ｎ−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）カルバムイミデートと３−ヒドラジノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジンとの間の反応から得られる生成物溶液を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
開始溶液が段階（ａ）で使用されるアルコール−水混合溶媒以外の溶媒を使用する、請求項１８または請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
開始溶液の溶媒が段階（ａ）で使用されるアルコール−水混合溶媒と不混和性である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
開始溶液の溶媒が段階（ｂ）に先立ち除去される、請求項２０または請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法によって入手される、または入手可能な、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基、または１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、方法、具体的には、純度が高く且つ溶媒残留物が少なくなるように所定の医薬品有効成分の遊離塩基を得るための方法、に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ａｘｌ（ＵＦＯ、ＡＲＫ、およびＴｙｒｏ７としても知られている；ヌクレオチド受入番号ＮＭ＿０２１９１３およびＮＭ＿００１６９９；タンパク質受入番号ＮＰ＿０６８７１３およびＮＰ＿００１６９０）は、Ｎ末端細胞外リガンド結合ドメインおよび触媒ドメインを含有するＣ末端細胞質領域を含むレセプター型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。Ａｘｌおよびその２つの近縁種であるＭｅｒＴＫ／ＮｙｋおよびＳｋｙ（Ｔｙｒｏ３／Ｒｓｅ／Ｄｔｋ）は、まとめてＲＴＫのＴＡＭファミリーとして知られており、これらは全て、同一のリガンド、Ｇａｓ６（growth arrest specific-6）、凝固カスケード制御因子プロテインＳに対して有意な相同性を有する約７６ｋＤａの分泌タンパク質、によって、様々な程度に結合して刺激される。リガンドへの結合に加えて、Ａｘｌ細胞外ドメインは、細胞凝集を仲介する同種相互作用を起こすことが示されており、これは、Ａｘｌの１つの重要な機能が細胞間接着の仲介であり得ることを示唆している。
【０００３】
ＷＯ２００８／０８３３６７では、一群の化合物がＡｘｌの阻害剤として開示されている。そのような阻害は抗悪性腫瘍効果をもたらすことが示されている。この点において、１つの特定の化合物、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン（以下で化合物Ａと称する場合がある）は、特に有望であることが示されている。ＷＯ２００８／０８３３６７に記載される化合物Ａの小規模合成は、イソプロピルアルコール中で実行され、後に溶媒の蒸発およびＨＰＬＣによる精製を伴う。しかし、このような手順は効果であり、規模拡大には適していない。化合物Ａの遊離塩基を単離するための他のアプローチが試みられているが、これらは典型的に、余りに多い段階を含み、所望され得るよりも多い溶媒残留物を伴って生成物を与える可能性がある。例えば、トルエンを含む最終溶媒中の化合物Ａの合成の後、１つの単離アプローチは、蒸留によるトルエンのメタノールへの交換、続いて、ジクロロメタンの添加、ＭｇＳＯ４を用いた乾燥、蒸留によるＤＣＭの除去、メタノールの添加、熱溶媒へのフマル酸の添加、並びにフマル酸塩の沈殿および単離を含んだ。この塩を次に、炭酸カリウム水溶液、エタノールおよびＤＣＭの混合物で処理し、有機相を乾燥させ、濾過および蒸発させて、不純な化合物Ａ遊離塩基を得た。これをエタノール／ＤＣＭ中に再び溶かし、沸騰エタノールに加え、蒸留によりＤＣＭを除去して、化合物Ａ遊離塩基を沈殿させた。しかし、この複雑な方法の後でさえも、生成物中のエタノールおよびＤＣＭの残留レベルは所望のレベルよりも高く、予測不可能であり、方法の規模によってかなりの影響を受ける。
【発明の概要】
【０００４】
従って、本発明の目的は、規模拡大が可能であり、許容可能な程度に少ない溶媒残留物を伴う生成物を与える、化合物Ａの遊離塩基の精製のための方法を提供することである。
【０００５】
本発明の第一の態様により、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を精製するための方法が提供され、前記方法は、
ａ）或る量の未精製１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンを、酸と共に、Ｃ１−５アルコールおよび水の混合溶媒中に溶解させること、並びに
ｂ）（ａ）から得られる溶液のｐＨを、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基がアルコール−水混合溶媒から沈殿するまで増加させること、
を含む。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
本発明の方法は、未精製試料から化合物Ａ遊離塩基の比較的純粋な形態を回収するための容易な手段を提供する。用語「未精製」とは、本明細書で使用される場合、使用目的のために望まれるよりも（遊離塩基に関して）純度が低い、化合物Ａの形態を単に指す。未精製試料は、例えば、化合物Ａが合成された反応混合物から得られ得る。化合物Ａ遊離塩基は、有害且つ／または水不混和性の有機溶剤を使用する必要無しに、得ることができる。さらに、化合物Ａ−酸性塩を単離した後に塩を壊して遊離塩基に戻す追加段階を介して進む必要も無い。段階（ｂ）中のｐＨ増加は、低溶解性の化合物Ａの遊離塩基の生成をもたらし、これが沈降して、より可溶性の化合物Ａ−酸性塩が溶液中に残る。前記方法は、高収率で適切な純粋生成物をもたらし、且つ、溶媒残留物が少なく、例えば、エタノールが混合溶媒中のＣ１−５アルコールとして使用された場合、１０，０００ｐｐｍエタノールを有意に下回る。さらに、本発明の方法は、化合物Ａ遊離塩基の薬剤的に最も有用な多形形態に関して高い多形純度を有する、生成物をもたらす。
【０００７】
用語「未精製化合物Ａ」は、化合物Ａの塩形態を含むことが意図される。従って、本発明の方法は、化合物Ａの塩の試料から化合物Ａ遊離塩基を精製するために使用され得る。そのような実施形態において、段階（ａ）で溶解される酸は、追加の酸の添加を必要とする場合がないように、単純に、未精製化合物Ａとして使用される化合物Ａ塩の共役酸であってよいことは理解されよう。
【０００８】
本発明の方法において、アルコール−水混合溶媒（すなわち、Ｃ１−５アルコールおよび水の混合溶媒）中のアルコールは、他の直鎖または分岐鎖Ｃ１−５アルコールも使用可能ではあるが、メタノールまたはエタノールであることが好ましい。好ましいアルコールはエタノールであり、それに基づく混合溶媒は、未精製の投入材料からの化合物Ａの良好な抽出を与える。
【０００９】
好ましい実施形態では、アルコール−水混合溶媒は、段階（ｂ）の実行に先立ち、６０〜８０体積％、好ましくは７０〜８０体積％のアルコールを含有するように、（必要であれば）調製される。このレベルの溶媒組成は、段階（ｂ）の沈殿において有効に働くことが分かっている。７０〜８０％の範囲外のアルコール含量も、本発明の方法が成功裏に使用されることを可能にし得るが（例えば、６０体積％のエタノールは有益な結果をもたらすことが分かっている）；７０〜８０％の範囲内のアルコール含量が、さらに良い結果を予想外にも与えることが分かっている。段階（ａ）で使用されるアルコール−水混合溶媒組成が必要とされるアルコール体積含有率を既に有している場合、この調製段階は必要でない場合がある。しかし、段階（ａ）においてより少ないアルコール含量の混合溶媒を使用することが必要または望ましい場合、段階（ｂ）が実行される前にさらなるアルコールを加えることにより、アルコール含量を必要なレベルにまで上げることができる。化合物Ａが中で合成された反応混合物の形態で未精製の化合物Ａが存在している場合、これはし
ばしば、非極性溶媒（例えば、トルエンまたはジクロロメタン）中の溶液の形態をとり得る。そのような場合、非極性溶媒とアルコール−水混合溶媒との間のきれいな相分離、並びにそれによる、非極性溶媒および不純物の効率的な除去、並びに化合物Ａの最小限の損失を確実とするために、より少ないアルコール含量の混合溶媒が段階（ａ）で使用され得る。
【００１０】
アルコール−水混合溶媒は、段階（ｂ）の実行に先立ち、例えば、７３〜７７体積％のアルコール、好ましくはおよそ７５体積％のアルコールを含有するように、（必要であれば）調製され得る。特にエタノールの場合、そのような溶媒組成は段階（ｂ）において驚くほど効率的な沈殿を与えることが分かっている。
【００１１】
段階（ｂ）において、（ａ）から得られた溶液のｐＨは、例えば、７．５〜９．５に増加され得る。特に、ｐＨは、７．８〜８．８、好ましくはおよそ８．５に増加され得る。記載される範囲内へのｐＨの増加は、不純物の最小限の共沈を伴って、化合物Ａ遊離塩基の効率的な沈殿をもたらすことが分かっている。
【００１２】
（ａ）から得られた溶液のｐＨは、段階（ｂ）で塩基の溶液を用いて増加されることが好都合であり得る。適切な有機塩基も使用され得るが、塩基は無機塩基であることが好ましい。好ましい塩基としては、ＮａＯＨおよびＫＯＨが挙げられ、特にＫＯＨが好ましい。ＫＯＨを含む塩基の使用は、化合物Ａ遊離塩基中の不溶性の不純物の出現を減少させることに繋がる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、段階（ｂ）中、具体的には沈殿が開始した後に、ｐＨを２回以上増加させることが必要であり得る。これは、化合物Ａ遊離塩基の沈殿がｐＨの低下をもたらす可能性があるためである。未精製の化合物Ａが段階（ａ）において、化合物Ａが中で合成された反応混合物の形態で存在している場合、反応混合物の他の成分が溶液をある程度緩衝し得るため、これはさほど問題にならない場合がある。
【００１４】
好ましい実施形態では、段階（ｂ）におけるｐＨの増加に使用される塩基の溶液は、未精製の化合物Ａがこの段階のために存在しているアルコール−水混合溶媒と実質的に同一の溶媒組成を有するアルコール−水混合溶媒を用いる。これにより、塩基添加の結果としてアルコール−水混合溶媒の組成が変化しないことが確実となる。沈殿はアルコール含量に敏感である可能性があるため、この予防策の配備は有用であり得る。
【００１５】
段階（ａ）において、Ｃ１〜５アルコールおよび水の混合溶媒中の未精製化合物Ａおよび酸の溶解は、高温（例えば６０℃超、好ましくは６５℃超、より好ましくは７０℃超）で実行され得る。増強されたおよび／またはより迅速な溶解は、このようにして獲得され得る。溶解を高温で実行するかどうかにかかわらず、（ａ）から得られた溶液の温度は、ｐＨが増加している間（すなわち段階（ｂ）中）、７０℃以上に維持されることが好ましい。これは、化合物Ａと酸との間で形成された塩が溶解されたままであることを確実にするためであり、結果として、前記塩による段階（ｂ）で形成される遊離塩基沈殿物の汚染が防止される。好ましい実施形態では、（ａ）から得られた溶液の温度は、化合物Ａ遊離塩基の沈殿が開始するまで、段階（ｂ）において７３℃以上に維持される。場合によっては、溶液が沈殿の間、少なくともその初期段階の間に、約７５℃に維持される場合、より良い結果が得られることがある。沈殿が進行中となった後、溶液の冷却を試みてもよいが、理想的には沈殿の進行を監視するべきである。有用な結果は、例えば混合物が最初の４〜５時間に亘り（平均して）１時間当たり約８〜９℃／時ずつ冷却するように、例えば混合物を７５℃から周囲温度まで自然冷却させることによって、得られた。
【００１６】
本発明の方法は以下のさらなる段階を含んでもよい：
ｃ）段階（ｂ）で得られた沈殿した１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を、酸と共に、Ｃ１〜５アルコールおよび水の混合溶媒中に再溶解させる段階、並びに
ｄ）（ｃ）から得られた溶液のｐＨを、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基がアルコール−水混合溶媒から沈殿するまで増加させる段階。
【００１７】
段階（ｃ）および（ｄ）は、段階（ｂ）で得られた化合物Ａ遊離塩基の再沈殿を提供する。これにより、化合物Ａ遊離塩基の純度におけるさらなる増加がもたらされる。段階（ａ）および段階（ｂ）単独の方法の後、約９８％ｗ／ｗの純度が得られた。段階（ｃ）および（ｄ）による再沈殿の後、純度は９９％ｗ／ｗ超に増加した。さらに、段階（ｃ）および（ｄ）によって、化合物Ａ遊離塩基の所望の多形形態に関してさらにより高い多形純度を有する生成物がもたらされる。
【００１８】
再沈殿の手順を実行する際、段階（ｄ）での化合物Ａ遊離塩基の沈殿中に、必要に応じてｐＨをさらに増加させて、段階（ｄ）で化合物Ａ遊離塩基の沈殿が開始するレベル以上にｐＨを維持することが有用な場合がある。段階（ｂ）に関する上記のように、化合物Ａ遊離塩基の沈殿がｐＨの低下をもたらす可能性があるため、これが必要となる場合がある。これは、例えば、さらなる塩基の添加についてモニターされ、さらなる塩基の添加によって減弱され得る。段階（ａ）に関しての上記の高温条件は、段階（ｃ）においても採用され得る。同様に、段階（ｂ）に関しての上記の温度条件および冷却条件も、段階（ｄ）の実行において有益に採用され得る。
【００１９】
段階（ａ）および／または段階（ｃ）で使用される酸は、フマル酸、クエン酸および塩酸から選択され得る。当業者であれば分かることであるが、他の酸を使用してもよい。
【００２０】
ある実施形態では、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基（すなわち、化合物Ａ遊離塩基のＳ−鏡像異性体）が、未精製の或る量の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン（すなわち、化合物Ａの未精製Ｓ−鏡像異性体）から精製される。
【００２１】
有用なことに、未精製の化合物Ａは、フェニルＮ’−シアノ−Ｎ−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）カルバムイミデートと３−ヒドラジノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジンとの間の反応の生成物であり得る。このような反応は、先行技術（例えばＷＯ２００８／０８３３６７）に記載されている。この反応はあらゆる適切な溶媒中で実行され得る。未精製の化合物Ａは、固体形態または溶液形態（「開始溶液」と称される）で、段階（ａ）において存在し得る。上記のように、段階（ａ）はその後に化合物Ａの液相抽出を含み、非極性溶媒中に不純物が保持され得ることから、非極性溶媒を使用することが好都合であり得る。
【００２２】
従って、実施形態において、未精製の化合物Ａの開始溶液は、段階（ａ）においてアルコール−水混合溶媒と接触させられる。未精製の化合物Ａの開始溶液は、フェニルＮ’−シアノ−Ｎ−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）カルバムイミデートと３−ヒドラジノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジンとの間の反応から得られる生成物溶液を含み得る。上記で説明したように、開始溶液は段階（ａ）で使用されるアルコール−水混合溶媒以外の溶媒を採用することが好都合であり得る。ある実施形態では、開始溶液の溶媒は、段階（ａ）で使用されるアルコール−水混合溶媒と実質的に不混和性であり得る。通常、開始溶液の溶媒は段階（ｂ）の前に除去されることが好都合である。
【００２３】
第二の態様により、本発明は、本発明の第一の態様の方法によって入手される、または入手可能な、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基、または１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を提供する。
【００２４】
次に、本発明を、ただの例示として添付の図面を参照してより詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、段階（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を用いる本発明の方法によって得られた化合物Ａ遊離塩基の試料からの、ＸＲＰＤの結果を示している。
【図２】図２は、所望の多形形態を有する化合物Ａ遊離塩基の参照試料のＸＲＰＤを示している。
【実施例】
【００２６】
化合物Ａの合成
化合物Ａの合成における最終段階への経路をスキーム１に示す。Ｂ＊をトルエンに溶解させ、３０℃でＤＰＣＣと反応させた。変換が完了した際、化合物Ｆを添加し、温度を６５℃に上昇させた。
【００２７】
【化１】
2020117532.tif 000003
スキーム１
【００２８】
３つの実験（０．１ｇのＢ＊）を３つの異なる溶媒（トルエン、イソプロパノールおよびアセトニトリル）中で組み立てた。最良の結果は、少なくともＤの溶解性の点で、トルエンにおいてであった。全ての反応物を一晩放置したところ、ほとんどの場合、反応混合物は褐色溶液となり、小さな沈殿固体が縁のあたりに存在した。Ｂ＊のＤへの変換は概して９９％超であり、化合物Ａの収率は概して約７０％以上であった（ＨＰＬＣ）。
【００２９】
ワークアップ
化合物Ａのフマル酸塩物質を、５０％メタノール／水中、７５％メタノール／水中、５０％エタノール／水中および７５％エタノール／水中の溶解性について試験した。フマル酸塩は全ての場合において溶解した（加熱）。ＮａＯＨを添加することで再沈殿させる試みは、７５％エタノール／水から、成功した。
【００３０】
好ましい溶媒混合物はエタノール／水であった。化合物Ａがエタノール／水相に移っているであろう反応混合物の抽出を行った。エタノール、水およびフマル酸（理論収量との比較で１当量）の５０℃の反応混合物への添加によりエタノール／水／トルエンの１：１：１混合物を得たところ、トルエン相における生成物の相分離および最小損失がもたらされた。
【００３１】
化合物Ａ遊離塩基の沈殿
沈殿させる前に、粒子除去のために反応混合物を（熱）濾過した。およそ７５％のエタノール／水混合物を得るために、相当量のエタノールを用いて生成物を「洗浄（wash in）」した。最初に、７５℃で、１Ｍ  ＮａＯＨ（水溶液）を添加し、ｐＨを９．１に調整することにより、沈殿を行った。懸濁液を一晩放冷させた。化合物Ａが、６２％の収率、９７．３％の純度で単離された。同様の実験でｐＨを１０．５に調整した場合、ほぼ同じ収率が得られたが（６３％）、純度は９３．９％に下がった。さらに、フマル酸の持ち越し汚染がいくらか検出された。
【００３２】
ＮａＯＨの代わりにＫＯＨを添加した場合、ｐＨがより高い溶液となった。従って、１
Ｍ  ＫＯＨ（水溶液）を用い、７５℃でｐＨ９に調整することにより、沈殿を行った。一晩冷却した後、化合物Ａ遊離塩基が５６％の収率、９５．３％の純度で単離された。
【００３３】
後者の実験におけるｐＨは塩基水溶液（aqueous base）で調整されたため、実際のエタノール／水比は６３〜６７％であると算出された。従って、１０ｇのＢ＊から開始して反復を行い、ワークアップの後、溶液を２つの部分に分割した。両方の場合で、ｐＨを７５％エタノール／水中で１Ｍ  ＫＯＨで調整することにより、エタノール／水の比を一定に保った。第一の実験はｐＨ８．５に調整し、第二の実験はｐＨ９．０に調整した。一晩沈殿させた後、ｐＨはそれぞれ９．３および１０．１と測定された。ｐＨ増加の理由は温度の低下である。第一の実験は５０％の収率、９８．７％の純度という結果であった。第二の実験は４３％の収率、９８．５％の純度という結果であった。エタノール／水の比を７５％エタノールに維持することが明確に有益であり、ｐＨ８．５での沈殿が最良の結果を与えると結論された。
【００３４】
後者の実験の規模拡大を２０ｇのＢ＊まで実行した。これは満足に進行し、収率は２１．２ｇ（５４％）であり、純度は９７．６％であった。さらに、１２０ｇのＢ＊までの規模拡大を実行した。これも満足に進行し、１７４．９ｇの湿潤固体が単離された。小試料の乾燥に基づいて、収率は５１％、純度は９８．７％と測定された。
【００３５】
化合物Ａ遊離塩基の再沈殿
９７．６％の純度を有する上記の実験からの材料を用いて、再沈殿を試験した。この材料を２×１０ｇに分割し、ｐＨ９．０またはｐＨ８．５で沈殿させた。溶媒混合物は７５％エタノール／水に、フマル酸の含量は０．７５当量に、温度は７５℃に、塩基は７５％エタノール／水中の１Ｍ  ＫＯＨに、時間は一晩に、設定した。
【００３６】
ｐＨ９．０の実験は７．５ｇの遊離塩基（７５％の回収率）を生成し、純度は９９．３％、アッセイ（assay）は９８．８％、残留エタノールは１４，６００ｐｐｍ、含水量は０．２０％であった。このようにして得られた化合物Ａ遊離塩基の試料に対してＸＲＰＤを行った。結果を図１に示す。参照試料ＸＲＰＤとの良好な比較（図２）が観察できる。ｐＨを８．５に調整した後に放冷した実験において、望まれるよりも多い化合物Ａが冷却後の濾液中に存在したように、化合物が沈殿した際にｐＨが低下したことから、このｐＨが最適よりも潜在的に低いことが分かった。
【００３７】
従って、後の実行において、ｐＨを７５％エタノール／水中の１Ｍ  ＫＯＨを用いて調整したところ、ｐＨ８．０において自然沈殿が観察された。塩基を添加せずにｐＨを安定化させた後（ｐＨ７．５で安定）、塩基を添加して８．５に調整した。塩基の添加により、ｐＨは再度８．５で安定化した。安定なｐＨが２０分間観察されたら、その懸濁液を一晩放冷した。８５分後、温度は４６℃であり、一晩の冷却の後、ｐＨは９．４（２２．０℃）と測定された。２．６３ｇが単離され（８８％の回収率）、純度は９９．４％であり、残留エタノールは８，８００ｐｐｍであった。
【００３８】
この再沈殿は非常に上手くいき、良く制御されていた。
【００３９】
考察および結論
エタノール、水およびフマル酸（理論収量との比較で１当量）を、化合物Ａの合成から得られた反応混合物に添加して、１：１：１の溶媒比（トルエン：エタノール：水）を得ることにより、生成物の最小損失およびいくらかの不純物の除去を伴い、トルエンが除去された、分離溶液（５０℃において）がもたらされることが分かった。トルエンでの余分な洗浄は、生成物の最小損失を伴ってさらなる不純物を除去し、過剰なトルエンは共沸蒸留によって除去することができた。
【００４０】
エタノールをエタノール／水相に添加して、近似の７５％エタノール／水混合物を得た。沈殿は、７５％エタノール／水中の１Ｍ  ＫＯＨを用いた８．５へのｐＨ調整により、７５℃で行った。最後の沈殿法を用いて、９７．６％〜９８．９％の純度が得られ、５０％〜５４％収率が得られた。
【００４１】
以下の要素が沈殿にとって重要であることが分かった：
塩基：ＮａＯＨを用いてｐＨを調整した場合、いくらかの不溶性物質が形成された。ＫＯＨに交換した場合、これは問題とならなかった。
ｐＨ：ｐＨが高いほど、化合物はより不純となる。ｐＨ８．５が最良の結果を与えることが示された。ｐＨは、おそらくは反応混合物からの緩衝によって、化合物が沈殿する際に有意に低下しない。
アルコール／水比：ＫＯＨ水溶液の代わりに７５％エタノール／水中の１Ｍ  ＫＯＨを用いてｐＨを調整することによって、エタノール／水比を７５％に保った場合、純度における大きな向上が認められた。
温度：温度の影響が存在する。例えば、化合物Ａのフマル酸塩は７０℃超で溶解し、７３℃未満で沈殿することは効果的でないと思われる。沈殿物を７５℃で成熟させ、ゆっくりと冷却することは、有益であり得る。当業者には理解されることであるが、さらに良好な結果は、当然、より制御された様式で冷却する場合に得られ得る。
【００４２】
再沈殿を検討するために、１ｇ規模に対するスクリーニング実験を行った。より大規模の実験も行ったところ、８５〜８８％の回収率および９９．４％〜９９．７％の純度、並びに７，４００〜８，８００ｐｐｍの残留エタノールレベルが得られた。
【００４３】
以下のパラメータが再沈殿にとって重要であることが分かった：
塩基：全ての再沈殿実験において、ＫＯＨが効果的であることが分かった。
ｐＨ：沈殿が開始する際、ｐＨが低下する場合がある。従って、ｐＨを制御および調整することは有益である。上記の実験において、沈殿が開始した後、ｐＨが安定化するまで待つことが有用であった。３つの大きな実験のうち２つにおいて、自然沈殿がｐＨ８．０で認められたことから、ｐＨ７．８で播種（seed）してあることが有益であり得る。ｐＨ８．５への最終調整およびこのｐＨでの安定化は、満足な純度および回収率を得るのに十分であった。ｐＨは冷却時に上昇するため、最終ｐＨが９．２から９．８まで変動したとしても、単独ロットの品質は同様であった。熱センサを含有する、ＷＴＷ、ｐＨ３１１０ｐＨメータを用いて、ｐＨ測定を行った。ｐＨメータは２０℃で較正した。
時間：結晶を高温で成長させた後、制御された様式でゆっくりと冷却させることは有益であった。
アルコール／水の比：７５％エタノール／水を上記の実験で使用したが、より多くの水を加えた場合にも良好な残留エタノールレベルが見られた。より多くの水は否定的な意味で純度に影響し得るが、出発物質が高い純度を既に有している場合、これはそれほど重要ではない。
温度：７３℃超における化合物の沈殿は、特に沈殿物がこの温度で成熟させられる場合、良好な結果を与える。
【００４４】
全体として、本発明の方法は簡便であり、好ましくない溶媒の使用を回避し、いくつかの溶媒交換を回避する。化合物Ａのフマル酸（または他の酸）塩の単離は必要ではなく；その代わりに、化合物Ａ遊離塩基を直接単離し、乾燥無しに再沈殿させることができる。最終反応および最も大きな再沈殿実験の全収率は、まずまずの４３％であった。残留エタノールは１０，０００ｐｐｍを有意に下回った。
【００４５】
分析法
ＨＰＬＣ分析を下記の通りに行った：Ａ１−Ｂ＊のＤへの変換を測定するためのＨＰＬＣ法；Ａ２−ＤおよびＦの化合物Ａへの変換、並びに化合物Ａの純度を測定するためのＨＰＬＣ法。
【００４６】
Ａ１：Ｂ＊のＤへの変換に対するＨＰＬＣ、ＩＰＣ法
ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ＮＸ、Ｃ１８、３μｍ、１５０×４．６ｍｍ
流速：１．０ｍＬ／分
注入量：３μＬ
検出波長：２４０ｎｍ
カラム温度：３０℃
オートサンプラー温度：２０℃
移動相Ａ：ＭＱ−水中０．１％ＤＥＡ
移動相Ｂ：アセトニトリル
試料溶媒：メタノール／ＭＱ−水（１：１）中０．１％ＴＦＡ
試料調製：１０μＬの反応混合物を蒸発させ、１ｍＬのＳＳ中に再溶解させた
【００４７】
勾配プロファイルｂ
【００４８】
【表１】
2020117532.tif 000004
【００４９】
おおよその保持時間
フェノール：２分
Ｄ：１１．０分
Ｂ＊：１５．９分
【００５０】
ＨＰＬＣ法Ａ２：
ＨＰＬＣカラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８、４．６×１００ｍｍ流速：１．０ｍＬ／分
注入量：１０μＬ
検出波長：２５５ｎｍ
カラム温度：５５℃
オートサンプラー温度：２０℃
移動相Ａ：ＭＱ−水中０．１％ＴＦＡ
移動相Ｂ：メタノール／アセトニトリル（１：１）中０．１％ＴＦＡ
試料溶媒：メタノール／ＭＱ−水（１：１）中０．１％ＴＦＡ
名目上の濃度：１８０μｇ／ｍＬ
試料調製（ＩＰＣ）：８μＬの反応混合物を蒸発させ、１ｍＬのＳＳ中に再溶解させた。
【００５１】
勾配プロファイル
【００５２】
【表２】
2020117532.tif 000005
【００５３】
おおよその保持時間
フェノール：４．４分
Ｆ：５．１分
Ｄ：６．９分
化合物Ａの保持時間は１０．４分であった。
【００５４】
残留エタノールを、下記のＡ３に従って、ガスクロマトグラフィー分析により測定した。
【００５５】
Ａ３：ＧＣによる残留エタノール分析
カラム：アジレント社製ＤＢ−１、品番１２３−１０６４（６０ｍ×３２０μｍ  ＩＤ×３．０μｍ）
キャリアガス：ヘリウム
様式：定圧１．２ｂａｒ
乾燥器：初期温度：４０℃
初期等温時間：９．０分
速度１：２６．３℃／分
温度１：１４５℃
等温時間：７．０分
速度２：６７．５℃／分
最終温度：２８０℃／分
最終等温時間：１１．０分
入口：様式：スプリット
ライナー：スプリット／スプリットレス
スプリット比：５．０
温度：２５０℃
ガス節約器：オフ
検出器（ＦＩＤ）温度：２８０℃
Ｈ２流速：４０．０ｍＬ／分
空気流量：４５０．０ｍＬ／分
様式：一定のメイクアップ
メイクアップ：３０．０ｍＬ／分
注入器：体積：１．０μＬ
【００５６】
試料希釈剤：ＤＭＳＯ
試料調製：約５ｍＬのＤＭＳＯ中に約１００ｍｇの正確に秤量した化合物Ａを超音波処理により溶解させる。放冷し、ＤＭＳＯで体積（５．０ｍＬ）まで満たす。
ニードル洗浄溶媒：ＤＭＳＯ
【００５７】
メタノール／ジクロロメタン（３：１）を溶媒として使用するカール・フィッシャー滴定を用いて水分析を行った。抽出時間は１８０秒であった。
【００５８】
ＸＲＰＤ解析：Ｃｕ  Ｋα  Ｘ線照射を使用するＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘｐｅｒｔ
Ｐｒｏ回折計およびＰｉｘｃｅｌ検出系を用いて行った。試料を低密度ポリエチレンフィルムの間に保持し、透過モードにおいて周囲温度で分析した。装置パラメータ：範囲３〜４０°２θ、刻み幅０．０１３°、計数時間９９秒、約２２分間の実行時間）。ＸＲＰＤパターンを、ＨｉｇｈＳｃｏｒｅ  Ｐｌｕｓ  ２．２ｃソフトウェアを用いて識別、マニピュレートおよび指標付けした。
【図１】
2020117532.tif 000006
【図２】
2020117532.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】令和2年5月8日(2020.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を精製するための方法であって、
ａ）或る量の未精製１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンを、酸と共に、Ｃ１−５アルコールおよび水の混合溶媒中に溶解させること、並びに
ｂ）（ａ）から得られた溶液のｐＨを、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基がアルコール−水混合溶媒から沈殿するまで増加させること、
を含み、
前記段階（ｂ）において、（ａ）から得られた溶液のｐＨが７．５〜９．５に増加される、
前記方法。
【請求項２】
アルコール−水混合溶媒中のアルコールがエタノールである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アルコール−水混合溶媒が、段階（ｂ）の実行に先立ち、６０〜８０体積％のアルコールを含有するように、必要であれば調製される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
アルコール−水混合溶媒が、段階（ｂ）の実行に先立ち、７０〜８０体積％のアルコールを含有するように、必要であれば調製される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項５】
アルコール−水混合溶媒が、段階（ｂ）の実行に先立ち、７３〜７７体積％のアルコールを含有するように、必要であれば調製される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
アルコール−水混合溶媒が、段階（ｂ）の実行に先立ち、７５体積％のアルコールを含
有するように、必要であれば調製される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
段階（ｂ）において、ｐＨが７．８〜８．８に増加される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
段階（ｂ）において、ｐＨが８．５に増加される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
段階（ｂ）において、（ａ）から得られた溶液のｐＨが塩基の溶液を用いて増加される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
段階（ｂ）でのｐＨの増加に使用される塩基の溶液が、未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンがこの段階において存在しているアルコール−水混合溶媒と、同一の溶媒組成を有するアルコール−水混合溶媒を使用する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
段階（ｂ）において、（ａ）から得られた溶液のｐＨが水酸化カリウムを含む塩基を用いて増加される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
段階（ａ）において、Ｃ１〜５アルコールおよび水の混合溶媒中の未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンおよび酸の溶解が６０℃超で実行される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
段階（ｂ）において、ｐＨが増加されている間、（ａ）から得られた溶液の温度が７０℃以上に維持される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
段階（ｂ）において、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基の沈殿が開始するまで、（ａ）から得られた溶液の温度が７３℃以上に維持される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
以下のさらなる段階を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法：
ｃ）段階（ｂ）で得られた沈殿した１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を、酸と共に、Ｃ１〜５アルコールおよび水の混合溶媒中に再溶解させる段階、並びに
ｄ）（ｃ）から得られた溶液のｐＨを、１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基がアルコール−水混合溶媒から沈殿するまで増加させる段階。
【請求項１６】
段階（ｂ）で得られた沈殿した１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル
）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基を、酸と共に、Ｃ１〜５アルコールおよび水の混合溶媒中に再溶解させる段階が、６０℃超で実行される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
段階（ｄ）において、ｐＨが増加されている間、（ｃ）から得られた溶液の温度が７０℃以上に維持される、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
段階（ｄ）における１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基の沈殿の間、ｐＨが必要に応じてさらに増加されることで、段階（ｄ）において１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基の沈殿が開始するレベル以上にｐＨが維持される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
段階（ａ）および／または段階（ｃ）で使用される酸がフマル酸、クエン酸および塩酸から選択される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミン遊離塩基が、未精製の或る量の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（Ｓ）−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンから精製される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンが、フェニルＮ’−シアノ−Ｎ−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）カルバムイミデートと３−ヒドラジノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジンとの間の反応の生成物である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンの開始溶液が、段階（ａ）におけるアルコール−水混合溶媒と接触させられる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
未精製の１−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ３−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３，５−ジアミンの開始溶液が、フェニルＮ’−シアノ−Ｎ−（７−（ピロリジン−１−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アヌレン−２−イル
）カルバムイミデートと３−ヒドラジノ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２−ｃ］ピリダジンとの間の反応から得られる生成物溶液を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
開始溶液が段階（ａ）で使用されるアルコール−水混合溶媒以外の溶媒を使用する、請求項２２または請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
開始溶液の溶媒が段階（ａ）で使用されるアルコール−水混合溶媒と不混和性である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
開始溶液の溶媒が段階（ｂ）に先立ち除去される、請求項２４または請求項２５に記載の方法。