(57)【要約】【課題】生体の抗酸化防御、解毒能力を高める効果を発揮する組成物を提供する。【解決手段】Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化作用を持つ物質の探索について鋭意検討を重ねた結果、ナンキョウの抽出物が、これらの活性化作用を持つことを見出し、組成物を完成させた。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナンキョウの抽出物を含む、Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２活性化剤。
【請求項２】
請求項１記載の剤を含有する、皮膚外用剤。
【請求項３】
請求項１記載の剤を含有する、経口組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化作用を持ち、主にヒトなどの生体の抗酸化防御、解毒能力などを高める効果を発揮する医薬品、食品、化粧品等、及び／又はこれらに配合する素材に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｎｒｆ（ＮＦ−Ｅ２  ｒｅｌａｔｅｄ  ｆａｃｔｏｒ）ファミリータンパク質は、細胞内のプロテアソームの活性化や抗ストレス物質の発現など広範な生理機能を制御している。
【０００３】
Ｎｒｆファミリータンパク質のＮｒｆ２は、細胞内で恒常的に発現されるが、定常状態ではユビキチンリガーゼのアダプター分子であるＫｅｌｃｈ−ｌｉｋｅ  ＥＣＨ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １（Ｋｅａｐ１）と複合体を形成し、ユビキチン化を受け、プロテアソームで分解される。Ｋｅａｐ１はシステイン残基に富むタンパク質であり、親電子性物質や活性酸素種といったストレスが細胞に加わると、それらのシステイン残基が酸化または修飾されることで、タンパク質の構造変化が誘導される。その結果として、Ｎｒｆ２との結合が解離し、Ｎｒｆ２の分解が抑制される。分解を免れたＮｒｆ２の細胞内濃度が向上するとＮｒｆ２は核内に移行し、プロモーターである遺伝子上の抗酸化剤応答配列（ａｎｔｉ−ｏｘｉｄａｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ（ＡＲＥ））と結合し、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）、ヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１）、キノンオキシドレダクターゼ、グルタチオン合成酵素、ペルオキシレドキシンといった異物代謝酵素や解毒酵素の発現を誘導する（非特許文献１）。更に、Ｎｒｆ２の活性化により、例えば以下が報告されている。
・長寿ホルモンとして知られるＦＧＦ２１の発現促進（非特許文献２）
・ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナルの制御によるメラニン生成の抑制（非特許文献３）
・抗老化遺伝子ＳＩＲＴ１の活性化（非特許文献４）
・細胞の恒常性に関与するオートファジーの活性化（非特許文献５）
・炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１β）の発現抑制（非特許文献６）
・抗肥満作用及び／又は抗糖尿病作用（非特許文献７）
・癌発生抑制作用（非特許文献８）
・所定の抗酸化遺伝子の発現の誘導（特許文献１）
【０００４】
Ｎｒｆ１は、Ｎｒｆ２同様に細胞内で恒常的に発現されているが、定常状態ではそのＮ末端側のドメインを介して小胞体にアンカーされ、ユビキチンリガーゼによってユビキチン化を受け、プロテアソームで分解される。細胞が特定のストレスに晒されると、Ｎｒｆ１は核に移行し、やはりＡＲＥに結合することで、プロテアソーム遺伝子群の活性化を誘導する（非特許文献９）。プロテアソームは、細胞内において役割を終えたタンパク質や不良なタンパク質を分解する役割がある。
【０００５】
Ｎｒｆ３は、その生理機能の詳細は未だ明らかではないが、Ｎｒｆ３の細胞内濃度の上昇がプロテアソームの活性向上につながるとの報告があり、その機能の一つは、Ｎｒｆ１同様にプロテアソームの活性の制御であると考えられている。
【０００６】
これらの知見から、Ｎｒｆ１、Ｎｒｆ２などの活性化は、酸化ストレス、炎症、老化、癌化などから細胞を保護することにつながると期待される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ａｇｉｎｇ  Ｃｅｌｌ．  ２０１７  Ｏｃｔ；１６（５）：９３４−９４２．
【非特許文献２】Ｇｅｎｅｓ  Ｃｅｌｌｓ．  ２０１４  Ｄｅｃ；１９（１２）：８６４−７８．
【非特許文献３】ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．  ２０１４  Ａｐｒ  ２４；９（４）：ｅ９６０３５．
【非特許文献４】Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓ．  ２０１６  Ｆｅｂ  １１；７：ｅ２０９３．
【非特許文献５】Ａｕｔｏｐｈａｇｙ．  ２０１６  Ｏｃｔ  ２；１２（１０）：１９０２−１９１６．
【非特許文献６】Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２０１７  Ｏｃｔ  １３；２９２（４１）：１６８１７−１６８２４．
【非特許文献７】Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１３  Ａｕｇ；３３（１５）：２９９６−３０１０．
【非特許文献８】Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ２００４  Ｊｕｌ；３（７）：８８５−９３．
【非特許文献９】Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．  ２０１０  Ａｐｒ  ９；３８（１）：１７−２８．
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１３−２０９３５１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明が解決しようとする課題は、Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化作用を持ち、主にヒトなどの生体の抗酸化防御、解毒能力を高める効果を発揮する医薬品、食品、化粧品等、及び／又はこれらに配合する新たな素材を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
そこで、本発明の発明者は、Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化作用を持つ物質の探索について鋭意検討を重ねた結果、ナンキョウの抽出物が、これらの活性化作用を持つことを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
本発明は、以下の項を含む。
〔項１〕ナンキョウの抽出物を含む、Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２活性化剤。
〔項２〕〔項１〕記載の剤を含有する、皮膚外用剤。
〔項３〕〔項１〕記載の剤を含有する、経口組成物。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化を介して、主にヒトなどの生体の抗酸化防御、解毒能力などを高め、皮膚障害等の予防、治療又は改善が可能となる。また、Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化を介して、細胞内のプロテアソーム活性が向上するため、標的タンパク質分解誘導剤（疾患の発症や増悪に関わる標的タンパク質をユビキチン化するなどして、ユビキチン―プロテアソーム系を介して人為的に標的タンパク質の分解を誘導する薬剤）の増強剤として用いることも考えられる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明を実施するための形態について説明する。
（Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化剤）
Ｎｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化剤は、細胞内のＮｒｆ１及びＮｒｆ２の活性化を誘導するための剤である。この剤は、液体だけでなく、例えば固形等々も挙げられ、例えば皮膚外用剤だけでなく、経口組成物（例えば、固体でも液体でも作製可能）とも考えられる。
【００１４】
（ナンキョウ）
「ナンキョウ」は、ショウガ科、ハナミョウガ属の植物（ナンキョウ（学名  Ａｌｐｉｎｉａ  ｇａｌａｎｇａ））である。「ナンキョウ」の抽出物を製造する際には、材料として、例えば、根、根茎、葉、茎、花、果実、果皮、種子、全草、又はこれらの混合物を用いる。
【００１５】
（ナンキョウの抽出物の製造例）
ナンキョウの抽出物は、例えば、材料を生のまま又は乾燥したものを粉砕後搾取して作製、材料を生のまま又は乾燥したものを粉砕後溶媒で抽出して作製、する。例えば、以下例１、例２により、ナンキョウの抽出物を製造する。
【００１６】
（ナンキョウの抽出物の製造例１）
ナンキョウの根乾燥物を粉砕し、粉砕物を作製する。この粉砕物１００ｇを８０％エタノール溶液１ｋｇに浸漬する。約１０℃〜約３０℃の環境で、５〜１０日間、この浸漬を行う。この浸漬を経て得られる溶液を、所定のろ過材（Ｇｌａｓｓ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｉｌｅｔｒ  （ＡＤＶＡＮＴＥＣ製  Ｇｆ−７５）とＭｉｘｅｄ  Ｃｅｌｌｕｒｏｓｅ  ｅｓｔｅｒ  （ＡＤＶＡＮＴＥＣ製  Ａ０４５Ａ０４７Ａ）など）を用いて、ろ過する。ろ過後の溶液を約−３０℃〜約１０℃の環境で、５〜１０日間、静置する。再度、所定のろ過材を用いて、ろ過し、得られた溶液を、ナンキョウの抽出物として用いる。この製造例１で得られる抽出物に含まれる乾燥固形分重量は、約０．８ｋｇ（乾燥固形分１．０％）である。
【００１７】
（ナンキョウの抽出物の製造例２）
ナンキョウの根乾燥物を粉砕し、粉砕物を作製する。この粉砕物１００ｇを８０％エタノール溶液１ｋｇに浸漬する。約１０℃〜約３０℃の環境で、５〜１０日間、この浸漬を行う。この浸漬を経て得られる溶液を、所定のろ過材を用いて、ろ過する。ろ過後の溶液に対し、エバポレーションにより所定量のエタノールを除去する。この除去後の溶液に、終濃度７０％となるように１，３−ブチレングリコールを添加する。この添加後の溶液を約−３０℃〜約１０℃の環境で、５〜１０日間、静置する。再度、所定のろ過材を用いて、ろ過し、得られた溶液を、ナンキョウの抽出物として用いる。この製造例２で得られる抽出物に含まれる乾燥固形分重量は、約０．８ｋｇ（乾燥固形分１．０％）である。
【００１８】
（ナンキョウの抽出物の製造の際に用いる抽出溶媒）
抽出溶媒としては、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール或いは含水低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、１，５−ペンタンジオール、１，２−ペンタンジオール、１，３−ペンタンジオール、１，４−ペンタンジオール、１，３，５−ペンタントリオール、グリセリン、ポリエチレングリコール（分子量１００〜１０万）等の多価アルコール或いは含水多価アルコール、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、エチルメチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、キシレン、ベンゼン、クロロホルム、四塩化炭素、フェノール、トルエン等の各種有機溶媒や、適宜規定度を調製した酸（塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸等）やアルカリ（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等）の中から選ばれる１種もしくは２種以上の混液が挙げられる。
【００１９】
（その他）
本発明で用いるナンキョウの抽出物は、溶媒抽出後、更に適宜精製操作を施すことも可能である。精製操作は、例えば、酸（塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、有機酸等）又はアルカリ（水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等）添加による分解、微生物による発酵又は代謝変換、イオン交換樹脂や活性炭、ケイ藻土等による成分吸着、種々の分離モード（イオン交換、親水性吸着、疎水性吸着、サイズ排除、配位子交換、アフィニティー等）を有するクロマトグラフィーを用いた分画、濾紙やメンブランフィルター、限外濾過膜等を用いた濾過、加圧又は減圧、加温又は冷却、乾燥、ｐＨ調整、脱臭、脱色、長時間の静置保管等であり、これらを任意に選択し組合わせた処理を行うことも可能である。
【００２０】
（経口組成物の形態）
本発明による経口組成物は、例えば、飲料、食品、医薬品、医薬部外品が挙げられる。
【００２１】
（皮膚外用剤の形態）
本発明による皮膚外用剤は、アンプル、カプセル、粉末、顆粒、液体、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤等利用上の適当な形態の１）医薬品類、２）医薬部外品類、３）局所用又は全身用の皮膚外用剤類（例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パック等の基礎化粧料、固形石鹸、液体ソープ、ハンドウォッシュ等の洗顔料や皮膚洗浄料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、除毛剤、脱毛剤、髭剃り処理料、アフターシェーブローション、プレショーブローション、シェービングクリーム、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ等のメークアップ化粧料、香水類、美爪剤、美爪エナメル、美爪エナメル除去剤、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、貼付剤、エアゾール剤等）、４）頭皮・頭髪に適用する薬用又は／及び化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、ヘアートリートメント剤、プレヘアートリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤、育毛・養毛料、パップ剤、プラスター剤、テープ剤、シート剤、エアゾール剤等）、５）浴湯に投じて使用する浴用剤、６）その他、腋臭防止剤や消臭剤、制汗剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等が挙げられる。
【００２２】
（皮膚外用剤の構成成分）
また、このような剤には、必要に応じて、本発明の効果を損ねない範囲で以下に例示する成分や添加剤を任意に選択・併用して製造することができ、これらの処方系中への配合量は、特に規定するものではないが、通常、０．０００１〜５０％程度が好ましいと考えられる。
【００２３】
（１）各種油脂類
アボカド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）等。
【００２４】
（２）ロウ類
ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等。
【００２５】
（３）鉱物油
流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等。
【００２６】
（４）脂肪酸類
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、２−エチルブタン酸、イソペンタン酸、２−メチルペンタン酸、２−エチルヘキサン酸、イソペンタン酸等の合成脂肪酸。
【００２７】
（５）アルコール類
エタノール、イソプロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等の天然アルコール、２−ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、２−オクチルドデカノール等の合成アルコール。
【００２８】
（６）多価アルコール類
酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチトール、マルチトール等。
【００２９】
（７）エステル類
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。
【００３０】
（８）金属セッケン類
ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛等。
【００３１】
（９）ガム質、糖類又は水溶性高分子化合物
アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン（Ｃ２〜Ｃ４）オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル（Ｃ２〜Ｃ４）キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。
【００３２】
（１０）界面活性剤
アニオン界面活性剤（アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤：カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型、ベタイン型）、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤）等。
【００３３】
（１１）各種ビタミン類
ビタミンＡ群：レチノール、レチナール（ビタミンＡ１）、デヒドロレチナール（ビタミンＡ２）、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミンＢ１）、リボフラビン（ビタミンＢ２）、ピリドキシン（ビタミンＢ６）、シアノコバラミン（ビタミンＢ１２）、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンＣ群：ビタミンＣ酸又はその誘導体、ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ２）、コレカルシフェロール（ビタミンＤ３）、ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群：ビタミンＥ又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ１）、メナキノン（ビタミンＫ２）、メナジオン（ビタミンＫ３）、メナジオール（ビタミンＫ４）、その他、必須脂肪酸（ビタミンＦ）、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、オロット酸、ビタミンＰ類（ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン）、ビタミンＵ等。
【００３４】
（１２）各種アミノ酸類
バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。
【００３５】
（１３）添加物
添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工（例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、ｐＨ調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組み合わせた処理）を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。
【００３６】
尚、抽出に用いる溶媒については、供する製品の使用目的、種類、或いは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すれば良いが、通常では、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール或いは含水低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール或いは含水多価アルコール、アセトン、酢酸エチル等の各種有機溶媒の中から選ばれる１種若しくは２種以上の混液を用いるのが望ましい。但し、用途により有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用したり、若しくは抽出後に除去しやすいエタノールを採用し、単独又は水との任意の混液で用いたりすれば良く、又、搾取抽出したものでも良い。
【００３７】
尚、植物又は動物系原料由来の添加物を、全身用又は局所用の外用剤、化粧品類に供する場合、皮膚や頭髪の保護をはじめ、保湿、感触・風合いの改善、柔軟性の付与、刺激の緩和、芳香によるストレスの緩和、細胞賦活（細胞老化防止）、炎症の抑制、肌質・髪質の改善、肌荒れ防止及びその改善、発毛、育毛、脱毛防止、光沢の付与、清浄効果、疲労の緩和、血流促進、温浴効果等の美容的効果のほか、香付け、消臭、増粘、防腐、緩衝等の効果も期待できる。
【００３８】
さらにこの他にも、これまでに知られている各原料素材の様々な美容的、薬剤的効果を期待し、これらを組み合わせることによって、本発明の目的とする効果の増進を図り、多機能的な効果を期待した製品とすることも可能である。
【実施例】
【００３９】
以下、本発明の実施例について、説明する。
【００４０】
（実験１（ＡＲＥ遺伝子の下流にコードされた配列の転写活性の確認））
細胞に対してナンキョウの抽出液を添加することにより、細胞内のＮｒｆを活性化し、抗酸化剤応答配列（ａｎｔｉ−ｏｘｉｄａｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ（ＡＲＥ））の下流に設定（コード）された遺伝子配列の転写活性が向上するかどうかを確認した。この確認（実験）で用いるナンキョウ抽出液は、上述の製造例１で製造したナンキョウ抽出液を用いた。
【００４１】
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ＴＡＫＡＲＡ製  ６３２１８０）に対して、リポフェクタミン３０００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｉｅｒ製  Ｌ３００００１５）を用いて、メーカーの推奨する方法に従って、ＡＲＥレポータープラスミド（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製  ６０５１４）を導入した。プラスミド導入後の細胞を９６穴プレートに対して、１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地を用いて、５×１０４（個）／穴で撒き、５％ＣＯ２培養機にて３７℃で１６時間培養した。その後、ナンキョウの抽出液等を所定の濃度となるように添加し、５％ＣＯ２培養機にて３７℃で２０時間培養した。なお、この添加は、以下の群を作製するように行った。
・ナンキョウの抽出液を終濃度０．５％含有する群（試験例１）
・ナンキョウの抽出液を終濃度０．２５％含有する群（試験例２）
・比較対象として、ナンキョウと同じショウガ科に属するリョウキョウ（Ｒｈｉｚｏｍａ  Ａｌｐｉｎｉａｅ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ）の抽出液を終濃度０．５％含有する群（試験例３）
・比較対象として、リョウキョウの抽出液を終濃度０．２５％含有する群（試験例４）
・比較対象として、ナンキョウと同じショウガ科に属するショウキョウ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）の抽出液を終濃度０．５％含有する群（試験例５）
・比較対象として、ショウキョウの抽出液を終濃度０．２５％含有する群（試験例６）
・比較対象として、抽出溶媒である８０％エタノールを終濃度０．５％含有する群（試験例７）
・比較対象として、抽出溶媒である８０％エタノールを終濃度０．２５％含有する群（試験例８）
【００４２】
この２０時間の培養後、細胞内のレポータープラスミドのＡＲＥ配列の下流にコードされたホタルルシフェラーゼの発現量及び同プラスミドにコードされ、恒常的に発現されるウミシイタケルシフェラーゼの発現量をデュアルルシフェラーゼアッセイシステム（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製  ６０６８３）を用いて検出した。ホタルルシフェラーゼ基質を含むサンプルバッファーにより細胞を溶解し、化学発光値をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ｉ３ｘ（モレキュラーデバイス社）で定量した。続いて、ウミシイタケルシフェラーゼ基質を含むサンプルバッファーを添加し、化学発光値をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ｉ３ｘで定量した。ホタルルシフェラーゼの発光値をウミシイタケルシフェラーゼの発光値で補正後、試験例７の化学発光値を１００（％）として、試験例１、３、５の化学発光強度（％）を算出した。試験例８の化学発光値を１００（％）として、試験例２、４、６の化学発光強度（％）を算出した。その結果を表１に示す。リョウキョウの抽出液及びショウキョウの抽出液の試験例（試験例３〜６）と比べ、ナンキョウの抽出液の試験例（試験例１と試験例２）は、ＡＲＥ配列の下流にコードされた遺伝子配列の転写をより強く誘導した。
【表１】
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【００４３】
なお、試験例３〜試験例６で用いた抽出液については、以下のように作製した。
【００４４】
（リョウキョウの抽出液の作製方法）
リョウキョウの根茎乾燥物を粉砕し、粉砕物を作製した。この粉砕物１００ｇを８０％エタノール溶液１ｋｇに浸漬する。約１０℃〜約３０℃の環境で、５〜１０日間、この浸漬を行う。この浸漬を経て得られる溶液を、所定のろ過材（Ｇｌａｓｓ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｉｌｅｔｒ  （ＡＤＶＡＮＴＥＣ製  Ｇｆ−７５）  と  Ｍｉｘｅｄ  Ｃｅｌｌｕｒｏｓｅ  ｅｓｔｅｒ  （ＡＤＶＡＮＴＥＣ製  Ａ０４５Ａ０４７Ａ）など）を用いて、ろ過する。ろ過後の溶液を約−３０℃〜約１０℃の環境で、５〜１０日間、静置する。再度、所定のろ過材を用いて、ろ過し、得られた溶液を、リョウキョウの抽出物として用いる。
【００４５】
（ショウキョウの抽出液の作製）
ショウキョウの根茎乾燥物を粉砕し、粉砕物を作製した。この粉砕物１００ｇを８０％エタノール溶液１ｋｇに浸漬する。約１０℃〜約３０℃の環境で、５〜１０日間、この浸漬を行う。この浸漬を経て得られる溶液を、所定のろ過材（Ｇｌａｓｓ  Ｆｉｂｅｒ  Ｆｉｌｅｔｒ  （ＡＤＶＡＮＴＥＣ製  Ｇｆ−７５）と  Ｍｉｘｅｄ  Ｃｅｌｌｕｒｏｓｅ  ｅｓｔｅｒ  （ＡＤＶＡＮＴＥＣ製  Ａ０４５Ａ０４７Ａ）など）を用いて、ろ過する。ろ過後の溶液を約−３０℃〜約１０℃の環境で、５〜１０日間、静置する。再度、所定のろ過材を用いて、ろ過し、得られた溶液を、ショウキョウの抽出物として用いる。
【００４６】
（実験２（細胞内のＮｒｆの濃度変化の確認））
細胞に対してナンキョウの抽出液を添加することにより、細胞内のＮｒｆ１、Ｎｒｆ２及び／又はＮｒｆ３のタンパク質濃度が変化するかどうかを、メーカーの推奨するプロトコルに従ったサンドイッチＥＬＩＳＡ法により確認した。Ｎｒｆ１の定量には、Ｈｕｍａｎ  Ｎｒｆ１  ＥＬＩＳＡキット（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ製  ＭＢＳ９５０２２２５）を用いた。Ｎｒｆ２の定量には、Ｈｕｍａｎ  Ｎｒｆ２  ＥＬＩＳＡキット（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ製  ＭＢＳ２７０７０２１）を用いた。Ｎｒｆ３の定量には、Ｈｕｍａｎ  Ｎｒｆ３  ＥＬＩＳＡキット（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ製  ＭＢＳ９３３９７７３）を用いた。
２０ｍＬの１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地を用いて、５％ＣＯ２培養機にて３７℃で培養した１×１０７個のＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対して、ナンキョウの抽出液等を所定の濃度となるように添加し、５％ＣＯ２培養機にて３７℃で８時間培養した。なお、この添加は、以下の群を作製するように行った。
・ナンキョウの抽出液を終濃度０．５％含有する群（試験例９）
・比較対象として、抽出溶媒である７０％１，３−ブチレングリコールを終濃度０．５％含有する群（試験例１０）
【００４７】
培養した細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄後、Ｈｕｍａｎ  Ｎｒｆ１  ＥＬＩＳＡキット（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ製  ＭＢＳ９５０２２２５）のＣｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（１００μＬ）を用いて、細胞ペレットを溶解した。遠心後に上澄みを回収し（上澄み１、という）、さらに同キットのＮｕｃｌｅａｒ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（１００μＬ）を用いて、細胞ペレットを再溶解した。遠心後、上澄み（上澄み２、という）を回収した。二種（上澄み１、上澄み２）の上澄みを合わせることで、細胞内タンパク質のＬｙｓａｔｅ液とし、このＬｙｓａｔｅ液を用いて、メーカーの推奨するプロトコルに従って、ＥＬＩＳＡを行い、Ｌｙｓａｔｅ液に含まれるＮｒｆ１、Ｎｒｆ２、又はＮｒｆ３のタンパク質量を吸光度４５０ｎｍの値として、独立に定量した。この結果を以下に示す。
【００４８】
Ｎｒｆ１の定量における吸光度値は、試験例１０は０．０５９５に対し、試験例９は０．０７６５であった。
【００４９】
Ｎｒｆ２の定量における吸光度値は、試験例１０は０．０８５５に対し、試験例９は０．１０８５であった。
【００５０】
Ｎｒｆ３の定量における吸光度値は、試験例１０は０．０４２５に対し、試験例９は０．０４１であった。
【００５１】
試験例９（ナンキョウの抽出液を添加した群）で用いたＬｙｓａｔｅ液には、より高濃度にＮｒｆ１及びＮｒｆ２が含まれていることが示された。
【００５２】
（実験３（細胞内のプロテアソーム及びＳＯＤの発現確認））
細胞に対してナンキョウの抽出液を添加することにより、細胞内のプロテアソーム及びＳＯＤの発現量が変化するかどうかを確認した。プロテアソームの発現確認では、プロテアソームの活性を蛍光強度で定量する２０Ｓ  Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  Ａｓｓａｙキット（Ｃａｙｍａｎ  ｃｈｅｍｉｃａｌ製  １０００８０４１）を用いた。ＳＯＤの発現確認では、活性酸素の量を吸光度で定量するＳＯＤ  ａｓｓａｙキット（ＤＯＪＩＮＤＯ製  Ｓ３１１）を用いた。
【００５３】
２０ｍＬの１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地を用いて、５％ＣＯ２培養機にて３７℃で培養した１×１０７個のＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対して、ナンキョウの抽出液等を所定の濃度となるように添加し、５％ＣＯ２培養機にて３７℃で８時間培養した。なお、この添加は、以下の群を作製するように行った。
・ナンキョウの抽出液を終濃度０．５％含有する群（試験例１１）
・比較対象として、抽出溶媒である７０％１，３−ブチレングリコールを終濃度０．５％含有する群（試験例１２）
【００５４】
培養した細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄後、Ｈｕｍａｎ  Ｎｒｆ１  ＥＬＩＳＡキット（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ製  ＭＢＳ９５０２２２５）のＣｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（１００μＬ）を用いて、細胞ペレットを溶解した。遠心後に上澄みを回収し（上澄み１、という）、さらに同キットのＮｕｃｌｅａｒ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（１００μＬ）を用いて、細胞ペレットを再溶解した。遠心後、上澄み（上澄み２、という）を回収した。二種（上澄み１、上澄み２）の上澄みを合わせることで、細胞内タンパク質のＬｙｓａｔｅ液とし、このＬｙｓａｔｅ液を用いて、メーカーの推奨するプロトコルに従って、Ｌｙｓａｔｅ液に含まれるプロテアソーム又はＳＯＤのタンパク質量を独立に定量した。この結果を以下に示す。
【００５５】
プロテアソームの活性を蛍光強度で定量したところ、試験例１２は１８２１９０に対し、試験例１１は２３２１３４８であった。試験例１２に比べ、試験例１１（ナンキョウの抽出液を添加した群）のＬｙｓａｔｅ液には、より高濃度にプロテアソームが含まれていることが示された。
【００５６】
活性酸素の量を所定の吸光度（４５０ｎｍ）で定量したところ、試験例１２は０．１８７５に対し、試験例１１は０．１２２であった。試験例１２に比べ、試験例１１（ナンキョウの抽出液を添加した群）では、活性酸素の産生がより強く阻害されたことから、試験例１１（ナンキョウの抽出液を添加した群）で用いたＬｙｓａｔｅ液には、より高濃度にＳＯＤが含まれていることが示された。
【００５７】
以上、本発明の実施の形態（実施例も含め）について、図面を参照して説明してきたが、本発明の具体的構成は、これに限られるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において、設計変更等があっても、本発明に含まれるものである。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明は、例えば、主にヒトなどの生体の抗酸化防御、解毒能力を高める効果を発揮する組成物（剤など）として利用される。