(57)【要約】      （修正有）【課題】ＨＥＲ−３に結合する第１の薬剤を、ＨＥＲファミリ−の別のメンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する第２の薬剤と併用して投与することによって、ＨＥＲ−３関連疾患を有する被験者を治療するための物質および方法の提供。【解決手段】第１の薬剤と第２の薬剤を対象に投与するための、対象におけるヒト上皮増殖因子受容体−３（ＨＥＲ−３）と関連した疾患を治療または予防するための医薬組成物であって、第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗体であり、前記第２の薬剤が、ペルツズマブ、トラスツズマブ、及びラパチニブ、及びＴ−ＤＭ１からなる群から選択され、ここで、ＨＥＲ−３と関連した疾患が過剰増殖性疾患である、医薬組成物。【選択図】図１
2020011980.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の薬剤と第２の薬剤を対象に投与するための、対象におけるＨＥＲ−３と関連した疾患を治療または予防するための医薬組成物であって、第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗体であり、かつ、前記第２の薬剤が、ペルツズマブ、トラスツズマブ、及びラパチニブ、及びＴ−ＤＭ１からなる群から選択され、
ここで、ＨＥＲ−３と関連した疾患が過剰増殖性疾患である、医薬組成物。
【請求項２】
第１の薬剤と第２の薬剤を対象に投与するための、対象におけるＨＥＲ−３と関連した疾患を治療または予防するための医薬組成物であって、第１の薬剤が、配列番号２５６の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２８２の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号３１５の配列を有するＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列；並びに、配列番号３４０の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号３４４の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号３８７の配列を有するＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を有するＨＥＲ−３に結合する抗体であり、かつ、前記第２の薬剤が、エルロチニブ、パニツムマブ、及びネラチニブからなる群から選択され、
ここで、ＨＥＲ−３と関連した疾患が過剰増殖性疾患である、医薬組成物。
【請求項３】
前記抗体が、配列番号７０の重鎖アミノ酸配列および配列番号７２の軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記抗体がＨＥＲ−３の細胞外ドメインに向けられたものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記抗体がＨＥＲ−３へ結合することによりＨＥＲ−３介在シグナル伝達を減少させることができる、請求項１〜４のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記抗体がＨＥＲ−３へ結合することによりＨＥＲ−３リン酸化を減少させることができる、請求項１〜５のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記抗体がＨＥＲ−３へ結合することにより細胞増殖を減少させることができる、請求項１〜５のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗体がＨＥＲ−３へ結合することにより細胞移動を減少させることができる、請求項１〜７のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記抗体がＨＥＲ−３へ結合することによりＨＥＲ−３のダウンレギュレ−ションを増加させることができる、請求項１〜８のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記抗体が組換え抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはその抗体フラグメントである、請求項１〜９のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記抗体フラグメントがＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記抗体がＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−またはＩｇＧ４−タイプのものである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記抗体がエフェクタ−グル−プに結合されている、請求項１〜１２のいずれか1項に
記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記エフェクタ−グル−プが放射性同位元素もしくは放射性核種、毒素、または治療薬もしくは化学療法薬グル−プである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記治療薬もしくは化学療法薬グル−プがカリケアマイシン、アウリスタチン−ＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシンおよびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
更に、さらなる治療薬および／または放射線療法と組み合わされるための、請求項１〜１５のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１７】
さらなる治療薬が抗腫瘍薬である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
抗腫瘍薬が抗腫瘍抗体または化学療法薬である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
化学療法薬がカペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、およびカルボプラチンからなる群より選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
第１の薬剤および第２の薬剤が静脈内、皮下、筋肉内または経口投与により投与される形態である、請求項１〜１９のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記過剰増殖性疾患が乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、腎癌、肺癌、膵臓癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌からなる群より選択される、請求項１〜２０のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項２２】
第１の薬剤を１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で６週間毎に少なくとも１回投与するための、請求項１〜２１のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項２３】
第２の薬剤を１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で６週間毎に少なくとも１回投与するための、請求項１〜２２のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項２４】
過剰増殖性疾患を有する対象を選択するための予測マ−カ−が解析された対象に投与するための、請求項１〜２３のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項２５】
投与後に、治療結果がモニタリングされるための、請求項１〜２４のいずれか一項記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト上皮増殖因子受容体−３（ＨＥＲ−３）に結合する第１の薬剤を、ヒト上皮増殖因子受容体（ＨＥＲ）ファミリ−の別のメンバ−に結合するまたはそれを阻害する第２の薬剤と組み合わせて、投与することによって、ＨＥＲ−３に関連した疾患を有する被験者を治療するための物質および方法に関する。第１および第２の薬剤は、それぞれ、ＨＥＲ−３に結合する、または別のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するもしくは阻害する、どのような種類の分子であってもよく、例えば、限定するものではないが、抗原結合タンパク質などの生物学的化合物、小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ、または天然物質が含まれる。
【背景技術】
【０００２】
ＥｒｂＢ３の別名でも知られる、ＨＥＲ−３は、ＨＥＲ−１（別名をＥＧＦ−ＲまたはｅｒｂＢともいう）、ＨＥＲ−２（別名をｅｒｂＢ２ともいう）、およびＨＥＲ−４（別名をｅｒｂＢ４ともいう）をも含む、受容体型タンパク質チロシンキナ−ゼの上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ、別名をＨＥＲともいう）ファミリ−に属する受容体型タンパク質チロシンキナ−ゼの一つである（Ｐｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳ  ８７：４９０５−４９０９；  Ｋｒａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳ  ８６：９１９３−９１９７；  およびＫｒａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳ  ９０：２９００−２９０４）。プロトタイプの上皮増殖因子受容体と同様に、膜貫通受容体ＨＥＲ−３は、細胞外リガンド結合ドメイン（ＥＣＤ）、ＥＣＤ内の二量体化ドメイン、膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）、細胞内タンパク質チロシンキナ−ゼドメイン（ＴＫＤ）、およびＣ末端リン酸化ドメインから構成されている。
【０００３】
ヘレグリン（ＨＲＧ）として知られる、ＨＥＲ−３のリガンドは、ＨＥＲ−３の細胞外ドメインに結合し、他のヒト上皮増殖因子受容体（ＨＥＲ）ファミリ−のメンバ−との二量体化、その後の細胞内ＨＥＲ−３ドメインのリン酸基転移、および下流シグナル伝達カスケ−ドの活性化を促進することによって受容体介在シグナル伝達を活性化する。複数のＨＥＲファミリ−メンバ−との二量体形成は、ＨＥＲ−３のシグナル伝達能力の幅を広げ、シグナルの多様化ならびにシグナルの増幅のための手段となっている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、ＨＥＲ−３に結合する薬剤を、ＨＥＲファミリ−の別のメンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する第２の薬剤と組み合わせて、投与することによって、ＨＥＲ−３関連疾患を有する被験者を治療するための物質および方法に関する。第１および第２の薬剤は、それぞれ、ＨＥＲ−３に結合する、または別のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するおよび／または阻害する、どのような種類の分子であってもよく、例えば、限定するものではないが、抗原結合タンパク質などの生物学的化合物、小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ、または天然物質が含まれる。
【０００５】
一態様において、本発明は、第１の薬剤と第２の薬剤を被験者に投与することを含んでなる、被験者におけるＨＥＲ−３関連疾患を治療または予防する方法であって、第１の薬剤がＨＥＲ−３に結合するものであり、そして第２の薬剤がＨＥＲファミリ−の別のメンバ−に結合するおよび／またはその活性を阻害するものである、ことを特徴とする。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する小分子化合物または抗原結合タンパク質であり得る。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号２３６、２５
１、２５２、および２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１；配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２；および配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１；配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２；および配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列と、を含んでなる。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、および２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２に示されるＣＤＲＨ２；および（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む重鎖アミノ酸配列を含んでなる。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４に示されるＣＤＲＬ２；および（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。
【０００６】
第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、および２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２に示されるＣＤＲＨ２；および（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む重鎖アミノ酸配列と、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４に示されるＣＤＲＬ２；および（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む軽鎖アミノ酸配列と、を含んでなる。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号２３６、２５１、２５２、および２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１、配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２、および配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、または配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１、配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２、および配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。
【０００７】
第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号４２、５４、７０、９２、および９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含んでなる。その抗原結合タンパク質には、配列番号４４、５６、７２、９４、および９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含めることができる。
【０００８】
第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号４２、５４、７０、９２、および９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列と、配列番号４４、５６、７２、９４、および９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列とを含んでなる。
【０００９】
第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号４２の重鎖アミノ酸配列と、配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列とを含んでなる。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号５４の重鎖アミノ酸配列と、配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列とを含んでなる。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号７０の重鎖アミノ酸配列と、配列番号７２の軽鎖
アミノ酸配列とを含んでなる。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含んでなる。第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００１０】
前記抗原結合タンパク質はＨＥＲ−３の細胞外ドメインに対するものであり得る。抗原結合タンパク質のＨＥＲ−３への結合は、ＨＥＲ−３介在シグナル伝達を減少させ、ＨＥＲ−３リン酸化を低減し、細胞増殖を減少させ、細胞移動を抑制し、そして／またはＨＥＲ−３のダウンレギュレ−ションを増加させることができる。
【００１１】
ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質は抗体であり得る。抗体はモノクロ−ナル抗体、ポリクロ−ナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、またはそれらの抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子）とすることができる。抗体はＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−またはＩｇＧ４−タイプのものであってよい。
【００１２】
第１の薬剤は、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり得る。その抗原結合タンパク質をエフェクタ−グル−プに結合させることが可能である。エフェクタ−グル−プは、放射性同位元素もしくは放射性核種、毒素、または治療薬もしくは化学療法薬グル−プ（例えば、カリケアマイシン、アウリスタチンＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシンおよびそれらの誘導体からなる群より選択される治療薬または化学療法薬グル−プ）であり得る。
【００１３】
第２の薬剤は小分子化合物または抗原結合タンパク質であり得る。第２の薬剤は、例えば、トラスツズマブ、ラパチニブ、ネラチニブ、パニツムマブ、エルロチニブ、セツキシマブ、ペルツズマブ、およびＴ−ＤＭ１とすることができる。
【００１４】
別の態様において、本発明は、第１の薬剤と第２の薬剤を被験者に投与することを含んでなる、被験者におけるＨＥＲ−３関連疾患を治療または予防する方法であって、第１の薬剤がＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号４２の重鎖アミノ酸配列と配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列とを含んでなり、そして第２の薬剤がエルロチニブ、ラパチニブ、およびネラチニブからなる群より選択される、ことを特徴とする。さらに、本発明は、第１の薬剤と第２の薬剤を被験者に投与することを含んでなる、被験者におけるＨＥＲ−３関連疾患を治療または予防する方法であって、第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号５４の重鎖アミノ酸配列と配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列とを含んでなるか、またはＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号７０の重鎖アミノ酸配列と配列番号７２の軽鎖アミノ酸配列とを含んでなり、そして第２の薬剤がエルロチニブ、ラパチニブ、およびネラチニブからなる群より選択される、ことを特徴とする。
【００１５】
本発明はまた、第１の薬剤と第２の薬剤を被験者に投与することを含んでなる、被験者におけるＨＥＲ−３関連疾患を治療または予防する方法であって、第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であって、配列番号４２の重鎖アミノ酸配列と配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列とを含んでなり、そして第２の薬剤がトラスツズマブ、Ｔ−ＤＭ１、パニツムマブ、およびセツキシマブからなる群より選択される、ことを特徴とする。
【００１６】
本明細書で提供される方法には、必要に応じて、第３のまたはさらなる治療薬の投与お
よび／または放射線療法を含めることができる。第３のまたはさらなる治療薬は抗腫瘍薬（例えば、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、もしくはカルボプラチンなどの抗腫瘍抗体または化学療法薬）であり得る。
【００１７】
第１の薬剤と第２の薬剤は、静脈内、皮下、筋肉内または経口投与によって投与することができる。前記疾患は過剰増殖性疾患（例えば、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、腎癌、肺癌、膵臓癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌からなる群より選択される疾患）であり得る。
【００１８】
本明細書で提供される方法には、第１の薬剤を約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、６週間に少なくとも１回、投与することを含めることができる。前記方法には、第２の薬剤を約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、６週間に少なくとも１回、投与することを含めることができる。前記方法には、投与に先立って、ＨＥＲ−３関連疾患を有する被験者を選択するための予測マ−カ−の解析を含む方法を用いることをさらに含めることができる。前記方法には、投与後に、治療結果をモニタリングすることをさらに含めることができる。
【００１９】
特に定義しない限り、本明細書中で用いるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載したものと類似のまたは同等の方法および物質は、本発明を実施するために使用することができるが、適切な方法および物質が以下に記載される。本明細書で挙げた刊行物、特許出願、特許および他の文献のそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。コンフリクトの場合には、定義を含めて、本明細書が優先するものとする。さらに、物質、方法、および実施例は単なる例示であって、限定することを意図したものではない。
【００２０】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細が添付の図面および以下の説明に明記される。本発明のその他の特徴、目的および利点は、以下の説明および図面から、ならびに特許請求の範囲から、明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体およびパニツムマブが、単独でまたは併用で、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植腫瘍（Ｃａｌｕ−３）の増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００２２】
【図２】図２は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体およびエルロチニブが、単独でまたは併用で、Ｃａｌｕ−３増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００２３】
【図３】図３は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはｃ２Ｃ４（ＨＥＲ２二量体化阻害剤）もしくはトラスツズマブとの併用で、ＳｋＢｒ−３乳癌細胞の基底足場非依存性増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００２４】
【図４】図４は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはｃ２Ｃ４、トラスツズマブもしくはセツキシマブとの併用で、ＳｋＢｒ−３乳癌細胞のＨＲＧ刺激足場非依存性増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００２５】
【図５】図５は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはｃ２Ｃ４、トラスツズマブもしくはセツキシマブとの併用で、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５卵巣癌細胞の基底足場非依存性増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００２６】
【図６Ａ】図６Ａは、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはトラスツズマブとの併用で、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞の増殖に及ぼす効果をプロットした一連のグラフである。
【００２７】
【図６Ｂ】図６Ｂは、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはラパチニブとの併用で、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞の増殖に及ぼす効果をプロットした一連のグラフである。
【００２８】
【図６Ｃ】図６Ｃは、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはゲムシタビンとの併用で、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞の増殖に及ぼす効果をプロットした一連のグラフである。
【００２９】
【図６Ｄ】図６Ｄは、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはシスプラチンとの併用で、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞の増殖に及ぼす効果をプロットした一連のグラフである。
【００３０】
【図７】図７は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはｃ２Ｃ４、トラスツズマブもしくはラパチニブとの併用で、ＺＲ−７５−３０乳癌細胞のＨＲＧ刺激増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００３１】
【図８】図８は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはｃ２Ｃ４、トラスツズマブもしくはラパチニブとの併用で、ＢＴ４７４乳癌細胞のＨＲＧ刺激増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００３２】
【図９】図９は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはセツキシマブ、ｃ２Ｃ４もしくはトラスツズマブとの併用で、ＨＲＧ刺激ＤＬＤ−１結腸癌細胞の増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００３３】
【図１０】図１０は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはｃ２Ｃ４、トラスツズマブもしくはラパチニブとの併用で、ＨＣＣ−１５６９乳癌細胞のＨＲＧ刺激増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００３４】
【図１１】図１１は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはｃ２Ｃ４、トラスツズマブもしくはラパチニブとの併用で、ＳｋＢｒ−３乳癌細胞のＨＲＧ刺激増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００３５】
【図１２】図１２は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはパニツムマブとの併用で、ＦａＤｕ頭頸部癌細胞の増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００３６】
【図１３】図１３は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはセツキシマブ、ｃ２Ｃ４もしくはトラスツズマブとの併用で、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞におけるＨＥＲ−３（上のパネル）、Ａｋｔ（中間のパネル）、およびＥＲＫ（下のパネル）のリン酸化に及ぼす効果を示すウエスタンブロットの写真である。
【００３７】
【図１４】図１４は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはセツキシマブ、ｃ２Ｃ４、トラスツズマブもしくはラパチニブとの併用で、ＨＲＧ刺激ＳｋＢｒ−３乳癌細胞におけるＨＥＲ−３（上のパネル）、Ａｋｔ（中間のパネル）、およびＥＲＫ（下のパネル）のリン酸化に及ぼす効果を示すウエスタンブロットの写真である。
【００３８】
【図１５】図１５は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはセツキシマブ、ペルツズマブ（ｃ２Ｃ４）もしくはトラスツズマブとの併用で、ＨＲＧ刺激Ｌｓ１７４Ｔ結腸癌細胞におけるＨＥＲ−３（上のパネル）またはＡｋｔ（下のパネル）のリン酸化に及ぼす効果を示すウエスタンブロットの写真である。
【００３９】
【図１６】図１６は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはセツキシマブ、ｃ２Ｃ４もしくはトラスツズマブとの併用で、ＨＲＧ刺激ＨＣＣ  １５６９乳癌細胞におけるＨＥＲ−３（上のパネル）、Ａｋｔ（中間のパネル）、およびＥＲＫ（下のパネル）のリン酸化に及ぼす効果を示すウエスタンブロットの写真である。
【００４０】
【図１７】図１７は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはパニツムマブとの併用で、Ａ５４９肺胞上皮細胞におけるＡｋｔ、ＰＧＦＲ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＨＥＲ−４、およびＥＲＫのリン酸化に及ぼす効果を示すウエスタンブロットの写真である。レ−ン１、ＩｇＧ対照；  レ−ン２、パニツムマブ単独；  レ−ン３、Ｕ１−５９単独；  レ−ン４、パニツムマブと併用したＵ１−５９。チュ−ブリンを同等の負荷のための対照として用いた。
【００４１】
【図１８】図１８は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体が、単独でまたはパニツムマブもしくはラパチニブとの併用で、Ｃａｌｕ３  ＮＳＣＬＣ細胞におけるＨＥＲ−３、Ａｋｔ、ＨＥＲ−２、ＥＲＫ、およびＥＧＦ−Ｒのリン酸化に及ぼす効果を示すウエスタンブロットの写真である。レ−ン１、ＩｇＧ対照；  レ−ン２、パニツムマブ単独；  レ−ン３、Ｕ１−５９単独；  レ−ン４、ラパチニブ単独；  レ−ン５、パニツムマブと併用したＵ１−５９；  レ−ン６、ラパチニブと併用したＵ１−５９。
【００４２】
【図１９】図１９は、ヒト抗ＨＥＲ−３抗体およびラパチニブが、単独でまたは併用で、乳癌異種移植腫瘍（ＨＣＣ−１５６９）の増殖に及ぼす効果をプロットしたグラフである。
【００４３】
【図２０】図２０は、Ａ５４９  ＮＳＣＬＣ細胞のＵ１−５９による治療がＨＥＲ３リン酸化を阻害し、ゲフィチニブによる治療後に再活性化を抑制することを示す。Ａ５４９細胞をゲフィチニブ、Ｕ１−５９または両方で処理し、ＨＥＲ３リン酸化をＥＬＩＳＡ解析により評価した。ゲフィチニブで１時間処理すると、ＨＥＲリン酸化が部分的に阻害されたが、これは２４時間後に逆転して対照レベルに戻った。これに対して、Ｕ１−５９による処理はＨＥＲリン酸化の大きな阻害につながり、これは２４時間後も持続した。両薬剤を併用すると、ゲフィチニブ単独で処理した細胞において２４時間後に見られた阻害の逆転が防止された。実験は３通りのウェルで実施して、少なくとも２回繰り返した。結果は平均±ＳＤとして表される。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
（１）  第１の薬剤と第２の薬剤を被験者に投与することを含んでなる、被験者においてＨＥＲ−３と関連した疾患を治療または予防する方法であって、第１の薬剤がＨＥＲ−３に結合するものであり、そして第２の薬剤がＨＥＲファミリ−の別のメンバ−に結合するおよび／またはその活性を阻害するものである、方法。
（２）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する小分子化合物または抗原結合タンパク質である、（１）記載の方法。
（３）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、
配列番号２３６、２５１、２５２、および２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１；配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２；および配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列；および
配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１；配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２；および配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列；
を含んでなる、（１）記載の方法。
（４）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、および２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２に示されるＣＤＲＨ２；および（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む重鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。（５）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４に示されるＣＤＲＬ２；および（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。
（６）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ（ａ）配列番号２３６、２５１、２５２、および２５６に示されるＣＤＲＨ１；（ｂ）配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２に示されるＣＤＲＨ２；および（ｃ）配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む重鎖アミノ酸配列と、（ｄ）配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０に示されるＣＤＲＬ１；（ｅ）配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４に示されるＣＤＲＬ２；および（ｆ）配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択されるＣＤＲの少なくとも１つを含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。
（７）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号２３６、２５１、２５２、および２５６からなる群より選択されるＣＤＲＨ１、配列番号２５８、２７８、２８０、および２８２からなる群より選択されるＣＤＲＨ２、および配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含む重鎖アミノ酸配列、または配列番号３２０、３３４、３３７、および３４０からなる群より選択されるＣＤＲＬ１、配列番号３４３、３５６、３５１、および３４４からなる群より選択されるＣＤＲＬ２、および配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。
（８）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号４２、５４、７０、９２、および９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。
（９）  前記抗原結合タンパク質が配列番号４４、５６、７２、９４、および９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（８）記載の方法。
（１０）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号４２、５４、７０、９２、および９６からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列と、配列番号４４、５６、７２、９４、および９８からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。
（１１）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号４２の重鎖アミノ酸配列および配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。
（１２）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号５４の重鎖アミノ酸配列および配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）記載の方法。
（１３）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号７０の重鎖アミノ酸配列および配列番号７２の軽鎖アミノ酸配列を含んでなる、（１）
記載の方法。
（１４）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号２８３、２８５、３０９、３１３、および３１５からなる群より選択されるＣＤＲＨ３を含んでなる、（１）記載の方法。
（１５）  第１の薬剤が、ＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号３６０、３８１、３８５、および３８７からなる群より選択されるＣＤＲＬ３を含んでなる、（１）記載の方法。
（１６）  前記抗原結合タンパク質がＨＥＲ−３の細胞外ドメインに対して向けられたものである、（３）〜（１５）のいずれか一項記載の方法。
（１７）  前記抗原結合タンパク質のＨＥＲ−３への結合がＨＥＲ−３介在シグナル伝達を減少させる、（３）〜（１５）のいずれか一項記載の方法。
（１８）  前記抗原結合タンパク質のＨＥＲ−３への結合がＨＥＲ−３リン酸化を減少させる、（３）〜（１５）のいずれか一項記載の方法。
（１９）  前記抗原結合タンパク質のＨＥＲ−３への結合が細胞増殖を減少させる、（３）〜（１５）のいずれか一項記載の方法。
（２０）  前記抗原結合タンパク質のＨＥＲ−３への結合が細胞移動を減少させる、（３）〜（１５）のいずれか一項記載の方法。
（２１）  前記抗原結合タンパク質のＨＥＲ−３への結合がＨＥＲ−３のダウンレギュレ−ションを増加させる、（３）〜（２０）のいずれか一項記載の方法。
（２２）  ＨＥＲ−３に結合する前記抗原結合タンパク質が抗体である、（３）〜（２０）のいずれか一項記載の方法。
（２３）  前記抗体がモノクロ−ナル抗体、ポリクロ−ナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、またはその抗体フラグメントである、（２２）記載の方法。
（２４）  前記抗体フラグメントがＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、または一本鎖抗体分子である、（２３）記載の方法。
（２５）  前記抗体がＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−またはＩｇＧ４−タイプのものである、（２２）記載の方法。
（２６）  第１の薬剤がＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、その抗原結合タンパク質がエフェクタ−グル−プに結合されている、（１）記載の方法。
（２７）  前記エフェクタ−グル−プが放射性同位元素もしくは放射性核種、毒素、または治療薬もしくは化学療法薬グル−プである、（２６）記載の方法。
（２８）  前記治療薬もしくは化学療法薬グル−プがカリケアマイシン、アウリスタチン−ＰＥ、ゲルダナマイシン、メイタンシンおよびそれらの誘導体からなる群より選択される、（２７）記載の方法。
（２９）  第２の薬剤が小分子化合物または抗原結合タンパク質である、（１）〜（１５）のいずれか一項記載の方法。
（３０）  第２の薬剤がトラスツズマブである、（２９）記載の方法。
（３１）  第２の薬剤がラパチニブおよびネラチニブからなる群より選択される、（２９）記載の方法。
（３２）  第２の薬剤がパニツムマブである、（２９）記載の方法。
（３３）  第２の薬剤がエルロチニブである、（２９）記載の方法。
（３４）  第２の薬剤がセツキシマブである、（２９）記載の方法。
（３５）  第２の薬剤がペルツズマブである、（２９）記載の方法。
（３６）  第２の薬剤がア−ビタックスである、（２９）記載の方法。
（３７）  第２の薬剤がＴ−ＤＭ１である、（２９）記載の方法。
（３８）  第１の薬剤と第２の薬剤を被験者に投与することを含んでなる、被験者においてＨＥＲ−３と関連した疾患を治療または予防する方法であって、第１の薬剤がＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号４２の重鎖アミノ酸配列および配
列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、そして第２の薬剤がエルロチニブ、ラパチニブ、ネラチニブおよびペルツズマブからなる群より選択される、方法。
（３９）  第１の薬剤と第２の薬剤を被験者に投与することを含んでなる、被験者においてＨＥＲ−３と関連した疾患を治療または予防する方法であって、第１の薬剤がＨＥＲ−３に結合する抗原結合タンパク質であり、かつ配列番号４２の重鎖アミノ酸配列および配列番号４４の軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、そして第２の薬剤がトラスツズマブ、Ｔ−ＤＭ１、パニツムマブ、ア−ビタックス、およびセツキシマブからなる群より選択される、方法。
（４０）  場合により、さらなる治療薬および／または放射線療法を投与することを含む、（１）記載の方法。
（４１）  さらなる治療薬が抗腫瘍薬である、（４０）記載の方法。
（４２）  抗腫瘍薬が抗腫瘍抗体または化学療法薬である、（４０）記載の方法。
（４３）  化学療法薬がカペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、パクリタキセル、ドセタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、およびカルボプラチンからなる群より選択される、（４２）記載の方法。
（４４）  第１の薬剤と第２の薬剤が静脈内、皮下、筋肉内または経口投与により投与される、（２９）記載の方法。
（４５）  前記疾患が過剰増殖性疾患である、（２９）記載の方法。
（４６）  前記疾患が乳癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸癌、腎癌、肺癌、膵臓癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌からなる群より選択される、（２９）記載の方法。
（４７）  第１の薬剤を約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で６週間に少なくとも１回投与することを含む、（２９）記載の方法。
（４８）  第２の薬剤を約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で６週間に少なくとも１回投与することを含む、（２９）記載の方法。
（４９）  投与に先立って、ＨＥＲ−３と関連した疾患を有する被験者を選択するための予測マ−カ−の解析を含む方法を用いることをさらに含む、（２９）記載の方法。
（５０）  投与後、治療結果をモニタリングすることをさらに含む、（２９）記載の方法。
【００４５】
本明細書中で用いるセクションの見出しは、編成上の目的だけのためであり、記載される発明の内容を限定するものとして解釈されるべきでない。
【００４６】
本明細書で特に定義しない限り、本出願に関連して用いられる科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈から特に要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００４７】
一般的に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質および核酸化学、ならびにハイブリダイゼ−ションに関連して用いられる命名およびそれらの技術は、当技術分野で周知であって、一般に使用されているものである。本出願の方法および技術は一般的に、他に指定のない限り、当技術分野で周知の従来方法に従って、本明細書を通して引用され説明される各種の一般文献および特定文献に記載されるように、実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  第３版，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  （２００１）；  Ａｕｓｕｂｅｌ
ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  （１９９２）；  およびＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．
（１９９０）を参照されたい；各文献の開示内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、当技術分野で一般的に実施されるように、または本明細書に記載されるように、行うことができる。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、医化学および薬化学に関連して用いられる専門用語と、それらの実験手順および技術は、当技術分野で周知であって、一般に使用されているものである。化学合成、化学分析、薬品の調製、製剤化、送達、および患者の治療に関しては、標準的な技術が用いられる。
【００４８】
本発明は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコ−ル、および試薬などに限定されず、それ自体さまざまに変化しうることを理解すべきである。本明細書で使用される専門用語は単に特定の実施形態を説明するためのものであって、開示した内容の範囲（特許請求の範囲によってのみ規定される）を限定するものではない。
【００４９】
実施例または他に指定がある場合を除いて、本明細書で用いられる成分の量または反応条件を表す数字は、あらゆる場合に用語「約」によって修飾されると理解すべきである。パ−センテ−ジと共に用いるときの用語「約」は±１％を意味しうる。
【００５０】
１．  総括
本発明は、ＨＥＲ−３に結合する第１の薬剤と、ＨＥＲファミリ−の他のメンバ−に結合するおよび／またはその活性を阻害する第２の薬剤との組合せを用いて、ＨＥＲ−３に関連した疾患を治療または予防することに関係した物質および方法を提供する。第１の薬剤および第２の薬剤は抗原結合タンパク質などの生物学的化合物または小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤であり得る。例えば、本明細書では、ＨＥＲファミリ−の個別のまたは複数のメンバ−、例えばＨＥＲ−３、ＨＥＲ−２、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ−４、および／またはＨＥＲファミリ−のいずれか他のメンバ−、に結合するおよび／またはそれを阻害する、単離されたポリペプチド（例：抗体などの結合タンパク質）および／または小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤が提供される。さらに、ＨＥＲ−３に結合する第１の薬剤と、１つまたは複数の他のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するおよび／またはその活性を阻害する第２の薬剤とを含む組成物、ならびにＨＥＲ−３関連疾患を治療または予防するための前記組成物の使用方法が提供される。
【００５１】
本明細書に記載される特定の第１および／または第２の薬剤は、抗原結合タンパク質などの生物学的薬剤である。特定の実施形態では、抗原結合タンパク質のポリペプチド構造が、以下を含むがこれらに限定されない抗体に基づくものである：モノクロ−ナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（時には「抗体模倣剤」と呼ばれる）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（時には「抗体コンジュゲ−ト」と呼ばれる）、およびそれらのフラグメント。さまざまな構造が以下でさらに説明される。他の実施形態では、第１および／または第２の薬剤が小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤である。さらに他の実施形態では、第１および／または第２の薬剤がｓｉＲＮＡである。さらに他の実施形態では、第１および／または第２の薬剤が天然物質である。
【００５２】
本明細書に記載の組成物およびそれを使用する方法は、ＨＥＲ−３とＨＥＲファミリ−の少なくとも１つの他のメンバ−を発現する固形腫瘍の増殖の改善された抑制を実証された。特に、ＨＥＲ−３に結合する第１の薬剤とＨＥＲファミリ−の少なくとも１つの他のメンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する第２の薬剤との組合せを投与することは、第１の薬剤または第２の薬剤のいずれかを単独で投与することに比較したとき、多様な腫瘍の増殖を抑制する上で増大した効果を示すことが本明細書において実証された。したがって、本明細書に開示される組成物および方法は、癌などの腫瘍性疾患を治療および
予防する改良方法において有用性が実証された。
【００５３】
２．  ＨＥＲ−３結合薬剤
本明細書に記載するように、ＨＥＲ−３に結合する薬剤は、抗体などの抗原結合タンパク質を含むがこれらに限らない生物学的化合物、または小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤であり得る。本明細書中で用いる「抗原結合タンパク質」または「結合タンパク質」とは、特定の標的抗原、例えばＨＥＲファミリ−のメンバ−（例：ＨＥＲ−３）と特異的に結合するタンパク質を意味する。抗原結合タンパク質は、解離定数（ＫＤ）が＜１０−８Ｍであるとき、その標的抗原と「特異的に結合する」と言われる。抗体は、ＫＤが＜５×１０−９Ｍであるときに「高い親和性」で、そしてＫＤが＜５×１０−１０Ｍであるときに「非常に高い親和性」で、抗原と特異的に結合する。一実施形態では、抗体が＜１０−９ＭのＫＤおよび約１×１０−４／秒のオフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を有する。一実施形態では、オフ速度が約１×１０５／秒である。他の実施形態では、抗体がＨＥＲファミリ−の特定のメンバ−に約１０−８Ｍ〜１０−１０ＭのＫＤで結合し、さらに他の実施形態では、それがＫＤ＜２×１０−１０Ｍで結合する。さらに、本明細書中で用いる小分子化合物は、セリン、トレオニンまたはチロシンキナ−ゼを含めて、１種以上のタンパク質キナ−ゼの酵素活性を阻害するように化学合成された低分子量化合物である。
【００５４】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３結合薬剤が生物学的化合物である場合、その薬剤はＨＥＲ−３に結合できる抗体などの抗原結合タンパク質である。したがって、ＨＥＲ−３関連疾患を治療する組成物および方法において使用するために本明細書で提供されるものは、抗ＨＥＲ−３抗体をはじめとするＨＥＲ結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ−３を標的とする抗体はＨＥＲ−３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対する抗体であり得る。例えば、本明細書に記載される抗ＨＥＲ−３抗体は、ＨＥＲ−３の細胞外部分にある少なくとも１つのエピト−プと相互作用することができる。かかるエピト−プはアミノ末端Ｌ１ドメイン（ａａ  １９−１８４）、Ｓ１（ａａ  １８５−３２７）およびＳ２（ａａ  ５００−６３２）システインリッチドメイン、これら２つのシステインリッチドメインに挟まれたＬ２ドメイン（３２８−４９９）、またはＨＥＲ−３ドメインの組合せに位置することができる。エピト−プはまた、限定するものではないが、Ｌ１の一部とＳ１の一部により構成されるエピト−プのように、ドメインの組合せに位置してもよい。
【００５５】
ＨＥＲ−３結合タンパク質は、ＨＥＲ−３へのその結合がＨＥＲ−３介在シグナル伝達を減少させることによってさらに特徴づけられる。ＨＥＲ−３介在シグナル伝達の減少は、例えば、細胞表面からのＨＥＲ−３分子の少なくとも部分的な消失をもたらすＨＥＲ−３のダウンレギュレ−ションによって、または実質的に不活性な形態（すなわち、非安定化形態に比べて低いシグナル伝達を示す形態）での細胞表面上のＨＥＲ−３の安定化によって、引き起こされる可能性がある。あるいは、ＨＥＲ−３介在シグナル伝達の減少はまた、ＨＥＲ−３へのリガンドまたはＨＥＲファミリ−の別のメンバ−の結合に影響を与える（例えば、減少させるまたは阻害する）ことによって引き起こされる可能性がある。例えば、ＨＥＲ−３介在シグナル伝達の減少は、ＨＥＲ−３と他のＨＥＲファミリ−メンバ−（例えば、ＥＧＦ−Ｒ）とを含む二量体の形成が減少することによっても生じる可能性がある。
【００５６】
ＨＥＲ−３結合薬剤は、抗体様の結合活性を有する（例えば、抗ＨＥＲ−３抗体と類似した活性を有する）足場タンパク質、または抗体、すなわち抗ＨＥＲ−３抗体であり得る。本明細書中で用いる用語「足場タンパク質」（ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）とは、アミノ酸の挿入、置換または欠失が高度に許容される、露出した表面領域を有するポリペプチドまたはタンパク質を意味する。本方法に従って使用できる足場タンパク質の例としては、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）由来のプロ
テインＡ、オオモンシロチョウ（Ｐｉｅｒｉｓ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）由来のビリン結合タンパク質または他のリポカリン類、アンキリン反復タンパク質、およびヒトフィブロネクチンが挙げられる（Ｂｉｎｚ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  （２００５）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １６：４５９−６９に概説される）。足場タンパク質の工学的操作は、安定的に折りたたまれたタンパク質の構造骨組の上または中に親和性機能をグラフト化するまたは組み込むことであると考えられる。親和性機能は本発明によればタンパク質結合親和性を意味する。足場は結合特異性を付与するアミノ酸配列から構造的に分離することができる。一般的に、そのような人工親和性試薬の開発に適すると考えられるタンパク質は、合理的な、または最も一般的には、コンビナトリアルのタンパク質工学的手法によって取得することができ、例えば、当分野で公知の技術である、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでディスプレイされた人工足場ライブラリ−中の結合薬剤についての、ＨＥＲ−３（精製タンパク質または細胞表面にディスプレイされたタンパク質のいずれか）に対するパニング（ｐａｎｎｉｎｇ）によって得ることができる（例えば、Ｓｋｅｒｒａ  （２０００）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇ．  １３：１６７−８７；  およびＢｉｎｚ  ａｎｄ  Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，  前掲を参照されたい）。さらに、抗体様の結合活性をもつ足場タンパク質は、足場ドメインを含むアクセプタ−・ポリペプチドから誘導することができ、この足場ドメインにドナ−・ポリペプチドの結合ドメインをグラフト化して、アクセプタ−・ポリペプチドを含む足場ドメインにドナ−・ポリペプチドの結合特異性を付与することができる。挿入される結合ドメインは、例えば、抗体、特に抗ＨＥＲ−３抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）であり得る。挿入は、例えばポリペプチド合成、コ−ド化アミノ酸の核酸合成を含めた当業者に公知の種々の方法によって、さらには当業者に周知の各種組換え法によって、達成することができる。
【００５７】
用語「抗体」には、モノクロ−ナル抗体、ポリクロ−ナル抗体、組換え抗体、ヒト化抗体（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；  およびＰｒｅｓｔａ  （１９９２）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．
Ｂｉｏｌ．  ２：５９３−５９６）、キメラ抗体（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳ  ８１：６８５１−６８５５）、少なくとも２つの抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、またはそれらの抗体フラグメントが含まれる。用語「抗体フラグメント」は、上記抗体の任意の部分、例えばその抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ  （Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳ  ９０：６４４４−６４４８）、または一本鎖抗体分子（Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ：  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １１３，  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ編，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，  ＮＹ  （１９９４），  ２６９−３１５）、およびＨＥＲ−３に結合する所望の能力を示す限りその他のフラグメントが含まれる。
【００５８】
さらに、本明細書で用いる用語「抗体」には、抗体の改変サブドメインを含む抗体様分子または天然に存在する抗体変異体が含まれる。これらの抗体様分子は、ラクダ科動物などの天然源から得られるか（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｒｅｖ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ７４：２７７−３０２）、またはヒト、ラクダ科動物もしくは他の種からのライブラリ−のｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイを通して得られる（Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２１：４８４−９０）、ＶＨのみまたはＶＬのみのドメインなどの、単一ドメイン抗体であり得る。
【００５９】
「Ｆｖフラグメント」は、完全な抗原認識・結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインが非共有結合で堅く結びついた二量体から成る。それは、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を画定するような形状をしている。集合して、６つのＣＤＲがその抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、完全な結合部位よりも低い親和性であるものの、抗原を認識して、それと結合する能力がある。「Ｆａｂフラグメント」は軽鎖の定常ドメインと重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）をさらに含む。「Ｆａｂフラグメント」は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での数個の残基（抗体ヒンジ領域からの１個以上のシステインを含む）の付加によって「Ｆａｂ’フラグメント」と相違する。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントはもともと「Ｆａｂ’フラグメント」のペアとして作り出されたもので、それらの間にヒンジシステインを有する。パパインまたはペプシン消化などの、この種の抗体フラグメントの作製方法は当業者に公知である。
【００６０】
抗体は、ＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−、ＩｇＧ４−、ＩｇＭ１−およびＩｇＭ２−タイプ（これらに限定されない）などのＩｇＧ−またはＩｇＭ−タイプを含めて、ＩｇＡ−、ＩｇＤ−、ＩｇＥ−、ＩｇＧ−またはＩｇＭ−タイプのものであり得る。例えば、いくつかの場合に、抗体はＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−またはＩｇＧ４−タイプのものである。
【００６１】
いくつかの点で、例えばＨＥＲ−３に対する治療薬候補としての抗体の生成との関連において、抗体は補体を固定して補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）に参加できることが望ましい。それをすることができる抗体のアイソタイプがいくつか存在し、例えば、以下が含まれる：マウスＩｇＭ、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒトＩｇＭ、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＡ。理解されるように、生成された抗体は当初そのようなアイソタイプをもつ必要がなく、むしろ生成された抗体はどのようなアイソタイプをもってもよい。そして抗体は、当技術分野で周知の分子生物学的手法を用いて、適切な発現ベクタ−中の分子クロ−ニングされた定常領域遺伝子またはｃＤＮＡに、分子クロ−ニングされたＶ領域遺伝子またはｃＤＮＡを付加し、その後、当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内でその抗体を発現させることによって、アイソタイプスイッチを行うことができる。アイソタイプスイッチを行った抗体はまた、天然に存在する変異体よりすぐれたＣＤＣをもつように分子的に操作させて（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ
ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６６：２５７１−２５７５）、当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内で組換え発現させた、Ｆｃ領域をもつこともできる。そうした技法には、とりわけ、直接組換え法（例えば、米国特許第４，８１６，３９７号参照）、細胞−細胞融合法（例えば、米国特許第５，９１６，７７１号および第６，２０７，４１８号参照）の使用が含まれる。細胞−細胞融合法では、いずれか所望のアイソタイプの重鎖を保持するミエロ−マまたは他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製され、そして軽鎖を保持する別のミエロ−マまたは他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製される。これらの細胞がその後融合されて、完全な抗体を発現する細胞株が単離される。一例として、ＨＥＲ−３抗原への所望の結合性を保持するヒト抗ＨＥＲ−３  ＩｇＧ４抗体は、同じ可変領域（抗体の特異性と若干の親和性を規定する）をまだ保持させながら、ヒトＩｇＭ、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ３アイソタイプを生成するように、容易にアイソタイプスイッチを行うことができる。そのような分子はその後、補体を固定する能力があり、ＣＤＣに関与できる可能性がある。
【００６２】
さらに、抗体はまた、単球やナチュラルキラ−（ＮＫ）細胞などのエフェクタ−細胞上のＦｃ受容体に結合して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に参加できる可能性がある。それをすることができる抗体アイソタイプがいくつか存在し、例えば、限定するものではないが、以下が含まれる：マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂ、マウスＩｇＧ３、ヒト
ＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ３。理解されるように、生成された抗体は当初そのようなアイソタイプをもつ必要がなく、むしろ生成された抗体はどのようなアイソタイプであってもよい。そして抗体は、当技術分野で周知の分子生物学的手法を用いて、適切な発現ベクタ−中の分子クロ−ニングされた定常領域遺伝子またはｃＤＮＡに、分子クロ−ニングされたＶ領域遺伝子またはｃＤＮＡを付加し、その後当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内で抗体を発現させることによって、アイソタイプスイッチを行うことができる。アイソタイプスイッチを行った抗体はまた、天然に存在する変異体よりすぐれたＡＤＣＣをもつように分子的に改変させて（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：６５９１−６０４）、当技術分野で公知の技法を用いて宿主細胞内で組換え発現させた、Ｆｃ領域をもつことができる。そうした技法には、とりわけ、直接組換え法（例えば、米国特許第４，８１６，３９７号参照）、細胞−細胞融合法（例えば、米国特許第５，９１６，７７１号および第６，２０７，４１８号参照）の使用が含まれる。細胞−細胞融合法では、いずれか所望のアイソタイプの重鎖を保持するミエロ−マまたは他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製され、そして軽鎖を保持する別のミエロ−マまたは他の細胞株（ＣＨＯなど）が作製される。これらの細胞がその後融合されて、完全な抗体を発現する細胞株が単離される。一例として、ＨＥＲ−３抗原への所望の結合性を保持するヒト抗ＨＥＲ−３  ＩｇＧ４抗体は、同じ可変領域（抗体の特異性と若干の親和性を規定する）をまだ保持させながら、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ３アイソタイプを生成するように、容易にアイソタイプスイッチを行うことができる。そのような分子はその後、エフェクタ−細胞上のＦｃγＲに結合して、ＡＤＣＣに参加できる可能性がある。
【００６３】
本明細書中の表１０は、ＨＥＲ−３に対する抗体に含めることができる、いくつかのＣＤＲのアミノ酸配列を提供する。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３を標的とする単離された結合タンパク質は、本明細書に添付して提出された配列表に示される、（ａ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６および２３０に示されるＣＤＲＨ１、（ｂ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６および２３０に示されるＣＤＲＨ２、ならびに（ｃ）配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６および２３０に示されるＣＤＲＨ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖アミノ酸配列、および／または（ｄ）配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８および２３２に示されるＣＤＲＬ１、（ｅ）配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、
６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８および２３２に示されるＣＤＲＬ２、ならびに（ｆ）配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８および２３２に示されるＣＤＲＬ３からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３を標的とする単離された結合タンパク質は、本明細書に添付して提出された配列表に示される、配列番号２、６、１０、１４、１８、２２、２６、３０、３４、３６、４０、４２、４６、５０、５４、６０、６２、６６、７０、７４、７８、８０、８４、８８、９２、９６、１００、１０４、１０８、１１２、１１６、１２０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６、１５０、１５４、１５８、１６２、１６６、１７０、１７４、１７８、１８２、１８６、１９０、１９４、１９８、２０２、２０６、２１０、２１４、２１８、２２２、２２６および２３０からなる群より選択される重鎖アミノ酸配列、および／または配列番号４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、３８、４４、４８、５２、５６、５８、６４、６８、７２、７６、８２、８６、９０、９４、９８、１０２、１０６、１１０、１１４、１１８、１２４、１２８、１３２、１３６、１４０、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０、１６４、１６８、１７２、１７６、１８０、１８４、１８８、１９２、１９６、２００、２０４、２０８、２１２、２１６、２２０、２２４、２２８および２３２からなる群より選択される軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。
【００６５】
いくつかの実施形態において、抗ＨＥＲ−３抗体は、本明細書に添付して提出された配列表に示される、配列番号２および４、６および８、１０および１２、１４および１６、１８および２０、２２および２４、２６および２８、３０および３２、３６および３８、４２および４４、４６および４８、５０および５２、５４および５６、６０および５８、６２および６４、６６および６８、７０および７２、７４および７６、７８および８２、８０および８２、８４および８６、８８および９０、９２および９４、９６および９８、１００および１０２、１０４および１０６、１０８および１１０、１１２および１１４、１１６および１１８、１２２および１２４、１２６および１２８、１３０および１３２、１３４および１３６、１３８および１４０、１４２および１４４、１４６および１４８、１５０および１５２、１５４および１５６、１５８および１６０、１６２および１６４、１６６および１６８、１７０および１７２、１７４および１７６、１７８および１８０、１８２および１８４、１８６および１８８、１９０および１９２、１９４および１９６、１９８および２００、２０２および２０４、２０６および２０８、２１０および２１２、２１４および２１６、２１８および２２０、２２２および２２４、２２６および２２８、２３０および２３２に示される重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列、または配列番号３４、４０、６０、６２および１２０のいずれか１つに示される重鎖アミノ酸配列、または配列番号５８および６４のいずれかに示される軽鎖アミノ酸配列を含むことができる。
【００６６】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３を標的とするタンパク質は、抗体様の結合活性をもつ（例えば、抗ＨＥＲ−３抗体と類似の活性をもつ）足場タンパク質、または抗体、例えば抗ＨＥＲ−３抗体であり得る。抗ＨＥＲ−３抗体は、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ
１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、およびＵ１−６２と指定された抗体、または前記抗体のいずれかの少なくとも１つの重鎖もしくは軽鎖を有する抗体からなる群より選択することができる。Ｕ１−４９（配列番号４２／４４）、Ｕ１−５３（配列番号５４／５６）、およびＵ１−５９（配列番号７０／７２）と指定された抗体、またはこれらの抗体のいずれかの少なくとも１つの重鎖もしくは軽鎖を有する抗体が、特に有用であり得る。
【００６７】
本明細書で提供されるＨＥＲ−３結合タンパク質のアミノ酸配列は、従来の２０種類のアミノ酸に限定されないことを理解すべきである（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  −  Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  （第２版，  Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｇｒｅｎ編，  Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，  Ｍａｓｓ．  （１９９１）を参照されたい；その開示内容は全体が参照により本明細書に組み入れられる）。例えば、アミノ酸には、従来の２０種類のアミノ酸の立体異性体（例：Ｄ−アミノ酸）、非天然アミノ酸、例えばα−，α−ジ置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非従来型アミノ酸が含まれる。非従来型アミノ酸（本明細書で提供される結合タンパク質の適当な構成成分でもあり得る）の例としては以下が挙げられる：４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、ω−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の同様のアミノ酸およびイミノ酸、例えば４−ヒドロキシプロリン。
【００６８】
さらに、配列番号１〜３９０（本明細書に添付して提出された付属書類に記載される）に示されるアミノ酸配列のわずかな変化は、そのアミノ酸配列の変化が配列番号１〜３９０に示される配列の少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、または９９％）を維持するという条件で、本開示によって包含されるものとする。変化はフレ−ムワ−ク領域の内部（すなわち、ＣＤＲの外側）、ＣＤＲの内部、またはフレ−ムワ−ク領域とＣＤＲの内部で起こり得る。いくつかの実施形態では、配列番号１〜３９０に示されるアミノ酸配列の変化、すなわち、少なくとも１個のアミノ酸の欠失、挿入および／または置換は、機能ドメインの境界付近で起こり得る。構造ドメインと機能ドメインは、塩基配列および／またはアミノ酸配列デ−タを、公開または非公開（特定の所有者）の配列デ−タベ−スと比較することによって同定することができる。コンピュ−タ化された比較方法を用いて、構造および／または機能が知られている他の結合タンパク質に存在する配列モチ−フまたは予測タンパク質立体構造ドメインを同定することができる。既知の三次元構造に折りたためるタンパク質配列を同定する方法は当技術分野で公知である（例えば、Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４；  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，  Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編，  Ｗ  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）；  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｔｏｏｚｅ編，  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９１）；  およびＴｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５を参照されたい；各文献の開示内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられる）。したがって、当業者であれば、本明細書に記載のタンパク質に応じて構造および機能ド
メインを特定するために使用できる配列モチ−フおよび立体構造を認識することが可能である。
【００６９】
配列番号１〜３９０に示されるアミノ酸配列の変化には、タンパク質分解もしくは酸化に対する感受性の低下につながる変化、グリコシル化パタ−ンを変更する変化、結合親和性を変更する変化、または結合タンパク質の他の物理化学的もしくは機能的特性を付与もしくは改変する変化を含めることができる。特に、保存的アミノ酸置換が考えられる。保存的置換とは、アミノ酸側鎖が関連しているアミノ酸のファミリ−内で起こる置換である。アミノ酸のファミリ−には次のものが含まれる：酸性ファミリ−＝アスパラギン酸、グルタミン酸；塩基性ファミリ−＝リシン、アルギニン、ヒスチジン；非極性ファミリ−＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および非荷電極性ファミリ−＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。代替ファミリ−には次のものが含まれる：脂肪族ヒドロキシファミリ−＝セリンおよびトレオニン；アミド含有ファミリ−＝アスパラギンおよびグルタミン；脂肪族ファミリ−＝アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；ならびに芳香族ファミリ−＝フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシン。例えば、ロイシンのイソロイシンもしくはバリンによる、アスパラギン酸のグルタミン酸による、トレオニンのセリンによる単独置換、またはあるアミノ酸の構造的に関連したアミノ酸による同様の置換は、特にその置換がフレ−ムワ−ク部位内のアミノ酸を含まない場合、生じる結合タンパク質の結合性または特性に大きな影響を及ぼさない、と予想することは妥当である。しかし、他のすべての可能なアミノ酸置換もまた、本明細書に包含される。アミノ酸変化がＨＥＲ−３のシグナル伝達を減少させる機能性ＨＥＲ−３結合タンパク質をもたらすかどうかは、生じる結合タンパク質の特異的ＨＥＲ−３結合活性をＥＬＩＳＡもしくはＦＡＣＳ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏ機能アッセイで分析することによって容易に確認することができる。
【００７０】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３結合タンパク質はエフェクタ−グル−プに結合させることが可能である。そのような結合タンパク質は治療用途に特に有用であり得る。本明細書中で用いる用語「エフェクタ−グル−プ」は、細胞傷害性グル−プ、例えば放射性同位元素もしくは放射性核種、毒素、治療薬グル−プまたは当技術分野で知られた他のエフェクタ−グル−プをさす。適当なエフェクタ−グル−プの例は、放射性同位元素もしくは放射性核種（例：３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）または非放射性同位元素（例：２Ｄ）、カリケアマイシン、ドラスタチン類似体、例えばアウリスタチン、ならびに化学療法薬、例えばゲルダナマイシンおよびメイタンシン誘導体（ＤＭ１を含む）である。こうして、場合によっては、グル−プを標識グル−プとエフェクタ−グル−プの両方にすることができる。エフェクタ−グル−プをポリペプチドまたは糖ポリペプチド（例えば、抗体）に結合させる各種方法が当技術分野では知られており、本明細書に記載の組成物および方法の製造・実施に使用することができる。いくつかの実施形態では、例えば潜在的な立体障害を減らすために、エフェクタ−グル−プを結合タンパク質にさまざまな長さのスペ−サ−ア−ムによって結合させることが有利であり得る。
【００７１】
本発明はまた、単離されたＨＥＲ−３結合タンパク質を調製する方法に関し、その方法は、該タンパク質を発現する宿主細胞から該タンパク質を調製するステップを含んでなる。使用できる宿主細胞には、限定するものではないが、以下の細胞が含まれる：ハイブリド−マ、真核細胞（例えば、ハムスタ−、ウサギ、ラット、ブタまたはマウス細胞などの哺乳動物細胞）、植物細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞）、原核細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）細胞）、および結合タンパク質の生産に用いられる他の細胞。足場タンパク質や抗体など
の結合タンパク質を宿主細胞から調製して単離する各種方法が当技術分野で知られており、本明細書に記載の方法を実施する際に使用することができる。さらに、結合タンパク質フラグメント（例えば、足場タンパク質フラグメントまたは抗体フラグメント）を調製するための方法、例えばパパインもしくはペプシン消化、現代的なクロ−ニング技術、一本鎖抗体分子（Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，  前掲）およびダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，  前掲）を調製する技法もまた、当業者に公知であり、本明細書に記載の方法を実施する際に使用することができる。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３結合タンパク質は、該タンパク質を分泌するハイブリド−マから調製することができる。例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５を参照されたい。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３結合タンパク質は、宿主細胞内での該結合タンパク質の発現を最適化および／または増幅し、該結合タンパク質を宿主細胞から単離することによって、組換えにより調製することができる。そのために、宿主細胞は、ＨＥＲ−３結合タンパク質をコ−ドするＤＮＡ（例えば、ベクタ−）で形質転換またはトランスフェクションされ、該結合タンパク質の産生に適する条件下で培養される。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい。有用な宿主細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＮＳ／０ミエロ−マ細胞、ヒト胚性腎２９３細胞、大腸菌細胞、およびサッカロミセス・セレビシエ細胞が挙げられる。
【００７４】
抗体であるＨＥＲ−３結合タンパク質は、完全ヒト抗体を作るように遺伝子操作された動物から、またはバクテリオファ−ジ、酵母、リボソ−ムもしくは大腸菌内に作製された抗体ディスプレイライブラリ−から、調製することができる。例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ
ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；  Ｍａｒｋｓ
ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：５８１−５９７；  Ｆｅｌｄｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｓｉｅｇｅｌ  （２００４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：６９−８０；  Ｇｒｏｖｅｓ  ａｎｄ  Ｏｓｂｏｕｒｎ  （２００５）  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  ５：１２５−１３５；  およびＪｏｓｔｏｃｋ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  （２００５）  Ｃｏｍｂ．  Ｃｈｅｍ．  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ  ８：１２７−１３３を参照されたい。
【００７５】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体は、完全ヒト抗体またはヒト化抗体であり得る。ヒト抗体は、マウスまたはラット可変領域および／または定常領域を保有する抗体などの、異種抗体に関連した特定の問題を回避する。異種由来タンパク質の存在は、患者による該抗体に対する免疫応答を引き出し、その後該抗体の急速なクリアランス、抗体の中和による治療的有用性の低下、および／または重症の、命を脅かすことさえある、アレルギ−反応につながることがある。マウスまたはラット由来の抗体の使用を回避するため、げっ歯類、他の哺乳類または動物が完全ヒト抗体を産生するように、げっ歯類または他の哺乳類もしくは動物に機能的なヒト抗体遺伝子座を導入することによって、完全ヒト抗体を作製することができる。
【００７６】
完全ヒト抗体を作製するための１つの方法は、ヒト重鎖遺伝子座とκ軽鎖遺伝子座の２４５ｋｂおよび１９０ｋｂのサイズの生殖系列構造（ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）フラグメントを含むように操作されたＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系統のマウスを利用することである。他のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス系統は、ヒト重鎖遺伝子座とκ軽鎖遺伝子座の９８０ｋｂおよび８００ｋｂのサイズの生殖系列構造フラグメントを含む。さらに他のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス系統は、ヒト重鎖遺伝子座とκ軽鎖遺伝子座の９８０ｋｂおよび８００ｋｂのサイズの生殖系列構造フ
ラグメントに加えて、７４０ｋｂのサイズの生殖系列構造化完全ヒトλ軽鎖遺伝子座を含む。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６；  およびＧｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  （１９９８）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８８：４８３−４９５を参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系統はＡｍｇｅｎ社（Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，  ＣＡ）から入手可能である。
【００７７】
ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスの作出は、２００２年１１月２０日付けの米国特許出願公開第２００３／０２１７３７３号；米国特許第５，９３９，５９８号、第６，０７５，１８１号、第６，１１４，５９８号、第６，１５０，５８４号、第６，１６２，９６３号、第６，６７３，９８６号、第６，８３３，２６８号、および第７，４３５，８７１号；ならびに日本国特許第３０６８１８０Ｂ２号、第３０６８５０６Ｂ２号、および第３０６８５０７Ｂ２号にさらに論述されて説明されている。また、ヨ−ロッパ特許第ＥＰ０４６３１５１号、国際公開公報ＷＯ  ９４／０２６０２、ＷＯ  ９６／３４０９６、ＷＯ  ９８／２４８９３、およびＷＯ  ００／７６３１０も参照されたい。上で引用した特許、出願、および文献のそれぞれの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００７８】
あるいはまた、「ミニ遺伝子座」（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）のアプロ−チを用いることが可能である。ミニ遺伝子座のアプロ−チでは、外因性Ｉｇ遺伝子座がＩｇ遺伝子座からの小片（個々の遺伝子）を含めることによって模倣される。こうして、１個以上のＶＨ遺伝子、１個以上のＤＨ遺伝子、１個以上のＪＨ遺伝子、μ定常領域、および第２の定常領域（例えば、γ定常領域）が、動物に挿入するための構築物へと形成される。このアプロ−チは米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５４５，８０７号、第５，５６９，８２５号、第５，５９１，６６９号、第５，６１２，２０５号、第５，６２５，１２６号、第５，６２５，８２５号、第５，６３３，４２５号、第５，６４３，７６３号、第５，６６１，０１６号、第５，７２１，３６７号、第５，７７０，４２９号、第５，７８９，２１５号、第５，７８９，６５０号、第５，８１４，３１８号、第５，８７４，２９９号、第５，８７７，３９７号、第５，９８１，１７５号、第６，０２３，０１０号、第６，２５５，４５８号に記載されており、これらの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。さらに、ＥＰ特許第０５４６０７３号、ならびに国際公開公報ＷＯ  ９２／０３９１８、ＷＯ  ９２／２２６４５、ＷＯ  ９２／２２６４７、ＷＯ  ９２／２２６７０、ＷＯ  ９３／１２２２７、ＷＯ  ９４／００５６９、ＷＯ  ９４／２５５８５、ＷＯ  ９６／１４４３６、ＷＯ  ９７／１３８５２、およびＷＯ  ９８／２４８８４も参照されたい；これらの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００７９】
ヒト抗体はまた、微小核融合（ｍｉｃｒｏｃｅｌｌ  ｆｕｓｉｏｎ）により、大きな染色体片または全染色体が導入されたマウスから生成することもできる。ＥＰ特許出願第７７３２８８号および第８４３９６１号を参照されたい；これらの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。さらに、Ｋｉｒｉｎ社のＴｃマウスとＭｅｄａｒｅｘ社のミニロ−カス（Ｈｕｍａｂ）マウスの交配の結果であるＫＭ（商標）マウスが作出されている。これらのマウスはＫｉｒｉｎマウスのＨＣトランスクロモソ−ムとＭｅｄａｒｅｘマウスのκ鎖トランスジ−ンを保有する（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ４：９１−１０２）。
【００８０】
ヒト抗体はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法によっても得ることができる。適当な例としては、限定するものではないが、ファ−ジディスプレイ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ社、Ｄｙａｘ社、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ社、Ｘｏｍａ社、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ社、Ａｌｅｘｉｏｎ社（旧Ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｎ社）、およびＡｆｆｉｍｅｄ社によって商品化）、リボソ−ムディスプレイ
（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社によって商品化）、酵母ディスプレイなどが挙げられる。
【００８１】
本明細書に記載されるように、抗体は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を用いて、後述するように調製された。この種のマウスはヒト免疫グロブリン分子および抗体を産生することができ、そしてマウス免疫グロブリン分子および抗体の産生を欠損している。それを達成するために利用できる技術は、本明細書に開示した特許、出願、および文献に記載されている。例えば、マウスおよびそれからの抗体のトランスジェニック生産は、１９９６年１２月３日付けの米国特許出願第０８／７５９，６２０号、ならびに国際公開公報ＷＯ  ９８／２４８９３およびＷＯ  ００／７６３１０に開示されており、これらの開示内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。また、Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６も参照されたい；その開示内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００８２】
本明細書に記載する技術を用いて、さまざまな抗原に対する完全ヒトモノクロ−ナル抗体を生産することが可能である。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）系統のマウスを対象のＨＥＲ−３抗原（例えば、ＨＥＲ−３またはその断片）で免疫して、抗体を発現するマウスからリンパ球（例えば、Ｂ細胞）を回収し、回収した細胞株を骨髄型細胞株と融合させると、不死化ハイブリド−マ細胞株が得られる。これらのハイブリド−マ細胞株をスクリ−ニングおよび選択して、対象の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリド−マ細胞株を同定することができる。ＨＥＲ−３に特異的な抗体を産生する複数のハイブリド−マ細胞株を作製するための方法が本明細書に提供される。さらに、そのような細胞株により産生された抗体を特性解析するための方法、例えば、こうした抗体の重鎖および軽鎖のヌクレオチド及びアミノ酸配列解析、が本明細書に提供される。
【００８３】
一般的に、後述される融合ハイブリド−マにより産生される抗体は、完全ヒトκ軽鎖を有するヒトＩｇＧ１重鎖であるが、本明細書に記載する一部の抗体はＩｇＧ１重鎖のみならずヒトＩｇＧ４重鎖を保有する。抗体はまた、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３を含めて、他のヒトアイソタイプのものであってよい。抗体は一般に高い親和性を有し、固相および細胞ベ−スの技法で測定したとき、典型的には約１０−６〜約１０−１３Ｍまたはそれ以下のＫＤを有する。
【００８４】
本発明はまた、本明細書に記載するようなＨＥＲ−３結合タンパク質をコ−ドする単離された核酸分子を提供する。本明細書中で用いる用語「単離された核酸分子」とは、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源、またはこれらのいくつかの組合せのポリヌクレオチドであって、（１）「単離されたポリヌクレオチド」と一緒に自然界で見いだされるポリヌクレオチドの全部または一部と結合していない、（２）自然界では連結されていないポリヌクレオチドに機能的に連結されている、または（３）より大きな配列の一部として自然界では存在しない、ポリヌクレオチドをさす。さらに、本明細書中で用いる用語「核酸分子」は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾形態（例えば、修飾または置換された糖基を有するヌクレオチドなど）である、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドのポリマ−形態を意味する。この用語はまた、ＤＮＡの一本鎖および二本鎖形態をも含む。
【００８５】
いくつかの実施形態において、核酸分子は制御配列に機能的に連結させることができる。本明細書中で用いる用語「制御配列」とは、それらが連結されるコ−ド配列の発現およびプロセッシングを生じさせるために必要なポリヌクレオチド配列をさす。こうした制御配列の性質は宿主生物に応じて異なってくる。原核生物では、このような制御配列が一般に、プロモ−タ−、リボソ−ム結合部位、および転写終結配列を含む。真核生物では、一般に、そのような制御配列がプロモ−タ−と転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、
最低でも、その存在が発現およびプロセッシングに不可欠なすべての成分を含むものとし、その存在が有利である追加の成分、例えばリ−ダ−配列および融合パ−トナ−配列を含むこともできる。さらに、本明細書中で用いる用語「機能的に連結された」とは、意図した様式でそのように記載された成分を機能させる関係にある、そうした成分の位置をさす。さらに、コ−ド配列に機能的に連結される発現制御配列は、コ−ド配列の発現がその発現制御配列に適合する条件下で達成されるように連結される。
【００８６】
また、本明細書で開示される結合タンパク質をコ−ドする核酸分子を含むベクタ−が本明細書で提供される。核酸分子は制御配列に機能的に連結させることができる。さらに、ベクタ−は複製起点または選択マ−カ−遺伝子を追加的に含んでもよい。使用できるベクタ−の例としては、例えば、プラスミド、コスミド、ファ−ジ、およびウイルスが挙げられる。
【００８７】
本発明はまた、本明細書に記載される核酸分子またはベクタ−で形質転換された宿主細胞をも提供する。形質転換は、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するためのいずれかの公知方法（例えば、ポリヌクレオチドをウイルス（またはウイルスベクタ−）にパッケ−ジングして、そのウイルス（またはベクタ−）を用いて宿主細胞に形質導入することを含む方法）により、または米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１２，０４０号、第４，７４０，４６１号、および第４，９５９，４５５号（これらの開示内容はその全体が参照により本明細書に組み入れられる）に示されるような、当技術分野で公知のトランスフェクション法により実施することができる。異種ポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入するための方法は当技術分野で周知であり、限定するものではないが、デキストラン介在トランスフェクション、リン酸カルシウム沈降、ポリブレン介在トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレ−ション、リポソ−ム内へのポリヌクレオチドのカプセル化、および核へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションが含まれる。使用できる宿主細胞の例には、ハイブリド−マ、真核細胞（例えば、ハムスタ−、ウサギ、ラット、ブタ、マウスなどの哺乳動物細胞、または他の動物細胞）、植物細胞（例えば、トウモロコシおよびタバコの細胞）、真菌細胞（例えば、Ｓ．セレビシエおよびＰ．パストリス細胞）、原核細胞（例えば、大腸菌）、および抗体産生のために当技術分野で用いられる他の細胞が含まれる。発現用の宿主として利用できる哺乳動物細胞株は当技術分野で周知であり、例えば、アメリカン・タイプ・カルチャ−・コレクション（ＡＴＣＣ；  Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ）から入手できる多くの不死化細胞株が含まれる。これらには、限定するものではないが、チャイニ−ズハムスタ−卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビ−ハムスタ−腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞）、および多くの他の細胞株が含まれる。
【００８８】
他の実施形態において、ＨＥＲ−３に結合する薬剤は小分子化合物である。そのような化合物は、例えば小分子の物理的またはバ−チャルライブラリ−を用いて、同定することができる。いくつかの実施形態では、例えば、有用な小分子化合物が、既知のＨＥＲ−３阻害剤と、活性および不活性状態のＨＥＲ−３構造のモデルに基づいた、コンセンサス・バ−チャルスクリ−ニング法を用いて同定され得る。興味のありそうな化合物は構造的新規性と望ましい物理化学的性質についてさらに解析することができる。バ−チャルスクリ−ニングによって同定された候補化合物は、例えばＨＥＲ−３を過剰発現する細胞の増殖を阻害する能力について、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験される。他の実施形態では、有用な小分子化合物が、（例えば、ＨＥＲ−３を過剰発現する細胞において）ＨＥＲ−３に結合するおよび／またはその活性を阻害する能力について大多数の化合物をスクリ−ニングするハイスル−プット法を用いて、小分子化合物のライブラリ−から同定され得る。小分子ＨＥＲ−３阻害剤は、例えば標準的な化学合成法を用いて、合成可能である。
【００８９】
さらに別の実施形態において、ＨＥＲ−３に結合する薬剤は、ＨＥＲ−３の発現を妨げ
るｓｉＲＮＡであってもよい。ｓｉＲＮＡの一例はＥＺＮ−３９２０  （ｅｒｂＢ３  ｍＲＮＡをタ−ゲッティングするアンチセンス）（Ｓａｎｔａｒｉｓ  Ｐｈａｒｍａ社，  Ｈｏｅｒｓｈｏｌｍ，  デンマ−ク）である。
【００９０】
さらに他の実施形態において、ＨＥＲ−３に結合する薬剤は天然物質であり得る。例えば、海洋由来の薬剤であるカハラリド（Ｋａｈａｌａｌｉｄｅ）Ｆは、ＨＥＲ−３タンパク質発現とＡＫＴシグナル伝達をダウンレギュレ−ションすることによってＨＥＲ−３発癌シグナル伝達（Ｊｉｍｅｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄ．  ４：３）を阻害する、ことが示唆されている（Ｊａｎｍａａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｍｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ６８：５０２−５１０）。
【００９１】
さらなる実施形態において、ＨＥＲ−３に結合する薬剤は、抗ＨＥＲ−３抗体ではないものの、抗体様活性を有する（例えば、抗ＨＥＲ−３抗体の活性に類似する活性を有する）、人工的なまたは天然に存在する足場タンパク質であり得る。
【００９２】
３．  他のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合する薬剤
上で説明したように、ＨＥＲ−３関連疾患を治療するための本明細書で提供される組成物および方法は、ＨＥＲ−３に結合する第１の薬剤と、ＨＥＲファミリ−の少なくとも１つの他のメンバ−（ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−４を含むが、これらに限定されない）に結合するおよび／またはそれを阻害する第２の薬剤との併用を含む。第２の薬剤は、限定するものではないが、生物学的薬剤、例えばＨＥＲファミリ−のメンバ−に特異的に結合する抗体などの結合タンパク質、ＨＥＲ−３以外の（またはＨＥＲ−３に加えて）ＨＥＲファミリ−の少なくとも１つのメンバ−に結合するおよび／またはその活性を変更する（例えば、阻害する）小分子化合物、ｓｉＲＮＡ、または天然物質であり得る。本明細書中で用いる用語「他のＨＥＲファミリ−メンバ−」および「別のＨＥＲファミリ−メンバ−」とは、ＨＥＲ−３ではないＨＥＲファミリ−のメンバ−をさす。その例はＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ−２、およびＨＥＲ−４であるが、「ＨＥＲファミリ−メンバ−」には、まだ同定されていないファミリ−メンバ−も含まれる。
【００９３】
第２の薬剤は、他のＨＥＲファミリ−メンバ−の活性を、そのＨＥＲファミリ−メンバ−に対する直接効果または間接効果のいずれかによって、変更する（例えば、増加または減少する）ことができる。しかし、本明細書で提供されるすべての第２の薬剤はＨＥＲファミリ−の機能と活性に影響を与えることに留意されたい。
【００９４】
いくつかの場合には、例えば、第２の薬剤は、別のＨＥＲファミリ−メンバ−（例えば、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ−２、またはＨＥＲ−４）に結合できる抗体、または他のＨＥＲファミリ−メンバ−の活性に影響を与える別の分子に結合できる抗体であり得る。そのような抗体は、例えば、他のＨＥＲファミリ−メンバ−の細胞外ドメインまたはいずれか他の適当なドメイン（例えば、キナ−ゼドメインまたは二量体形成領域）を標的とすることができる。
【００９５】
第２の薬剤は、別のＨＥＲファミリ−メンバ−へのその影響がＨＥＲ介在シグナル伝達を減少させる点でさらに特徴づけられる。ＨＥＲ介在シグナル伝達の減少は、例えば、標的ＨＥＲファミリ−メンバ−のダウンレギュレ−ション（細胞からのＨＥＲ分子の少なくとも部分的な消失をもたらす）によって、または実質的に不活性な形態でのＨＥＲファミリ−メンバ−の安定化によって、引き起こされる可能性がある。あるいはまた、ＨＥＲ介在シグナル伝達の減少は、ＨＥＲファミリ−メンバ−へのリガンドの結合、ＨＥＲ−３へのＨＥＲファミリ−メンバ−の結合、またはＨＥＲ−２へのＧＲＢ２の、もしくはＳＨＣへのＧＲＢ２の結合に影響を与える（例えば、減少または阻害する）ことによって、ある
いは受容体チロシンリン酸化、ＡＫＴリン酸化、ＰＹＫ２チロシンリン酸化、もしくはＥＲＫ２リン酸化、またはＨＥＲファミリ−が介在するシグナル伝達経路に影響を与える他の細胞成分を阻害することによって、引き起こされる可能性がある。例えば、ＨＥＲ介在シグナル伝達の減少は、ＨＥＲ−３と別のＨＥＲファミリ−メンバ−（例えば、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ−２、またはＨＥＲ−４）を含む二量体の形成が減少することによって引き起こされる。その機能の背後にある作用機序にかかわらず、第２の薬剤は、ＨＥＲ−３を標的とする第１の薬剤の効果を増幅させるのに役立つことに留意されたい。
【００９６】
いくつかの実施形態において、別のＨＥＲファミリ−メンバ−、または別のＨＥＲファミリ−メンバ−の活性に影響を与える別のタンパク質に結合する薬剤は、抗体様の結合活性を有する（例えば、抗ＨＥＲ−３抗体に類似した活性を有する）足場タンパク質または抗体（例えば、抗ＥＧＦ−Ｒ、抗ＨＥＲ−２、または抗ＨＥＲ−４抗体）であり得る。この文脈における足場タンパク質および抗体は、ＨＥＲ−３を標的とする薬剤について上で定義して説明したとおりである。そのような足場タンパク質は人工的なものでも、天然に存在するものでもよい。
【００９７】
いくつかの実施形態において、ＨＥＲ−３に結合する第１の薬剤と、別のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する第２の薬剤とは、二重特異性抗体のような１つの化合物に組み合わされることに留意されたい。
【００９８】
また、上述したように、他のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合する、または別のＨＥＲファミリ−メンバ−の活性に影響を与える他のタンパク質に結合するタンパク質のアミノ酸配列は、従来の２０種類のアミノ酸に限定されない。さらに、本明細書に記載するＨＥＲ−３結合タンパク質の場合と同様に、別のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するか、さもなくばその活性に影響を与える薬剤は、エフェクタ−グル−プに結合させることができる。
【００９９】
本発明はまた、例えば、他のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合できる単離されたタンパク質（例えば、抗体）を調製する方法に関する。そうした方法には、ＨＥＲ−３結合タンパク質に関連して上で説明した方法が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ抗ＨＥＲ、抗ＨＥＲ−２、または抗ＨＥＲ−４抗体）が、完全ヒト抗体を作るように遺伝子操作された動物から、またはバクテリオファ−ジ、酵母、リボソ−ムもしくは大腸菌内に作製された抗体ディスプレイライブラリ−から、調製することができる。さらに、別のＨＥＲファミリ−メンバ−を直接または間接的に標的とする抗体は、上述したように、完全ヒト抗体またはヒト化抗体であり得る。
【０１００】
また、他のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合できるか、または他のＨＥＲファミリ−メンバ−の活性に影響を与える他のタンパク質に結合できる、タンパク質を発現する単離された核酸分子（例えば、ベクタ−）が本明細書で提供される。そのような核酸分子内のタンパク質コ−ド配列は、上述したように、１つ以上の制御配列に機能的に連結され得る。さらに、核酸分子は、上述したように、宿主細胞に形質転換またはトランスフェクションすることができる。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、第２の薬剤は小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤であるが、ただし、その薬剤はＨＥＲ−３以外の（またはＨＥＲ−３に加えて）ＨＥＲファミリ−メンバ−の活性に（直接または間接的に）影響を及ぼすことができるものである。そのような阻害剤は、例えば小分子の物理的またはバ−チャルライブラリ−を用いて、同定され得る。いくつかの実施形態では、例えば、有用な小分子化合物が、既知のチロシンキナ−ゼ阻害剤と、活性および不活性状態のＨＥＲファミリ−メンバ−構造のモデルに基づいた、コンセンサス・バ−チャルスクリ−ニング法を用いて同定され得る。潜在的に関心がある
と最初に同定された化合物は構造的新規性と望ましい物理化学的性質についてさらに解析することができる。バ−チャルスクリ−ニングによって同定された候補化合物は、例えばＨＥＲ−３以外のＨＥＲファミリ−メンバ−を過剰発現する細胞の増殖を阻害する能力について、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験され得る。他の実施形態では、有用な小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤は、（例えば、ＨＥＲタンパク質を過剰発現する細胞において）ＨＥＲ−３以外の１種以上のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するおよび／またはその活性を阻害する能力について大多数の化合物をスクリ−ニングするハイスル−プット法を用いて、小分子化合物のライブラリ−から同定することができる。小分子チロシンキナ−ゼ阻害剤は、例えば標準的な化学合成法を用いて、合成可能である。
【０１０２】
ＥＧＦ−Ｒ（ＨＥＲ）の活性に影響を与える薬剤としては、以下が挙げられる：ＡＥＥ−７８８  （Ｎｏｖａｒｔｉｓ社，  Ｂａｓｅｌ，  スイス）、ＢＩＢＷ−２９９２  （Ｎ−［４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３Ｓ）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ社，  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，  ドイツ）、ＢＭＳ−５９９６２６  （Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＢＭＳ−６９０５１４  （Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、カネルチニブ二塩酸塩（Ｎ−［４−［Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミド二塩酸塩）（Ｐｆｉｚｅｒ社，
Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＣＮＸ−２２２  （Ａｖｉｌａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）、ＣＵＤＣ−１０１  （Ｃｕｒｉｓ社，  米国特許第７，５４７，７８１号）、ジメルセプト（Ｄｉｍｅｒｃｅｐｔ）（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｘ社，  Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，  ＣＡ）、ラパチニブ（ジトシル酸塩水和物（Ｎ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル］−６−［５−［［［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］フラン−２−イル］キナゾリン−４−アミン・ビス（４−メチルベンゼンスルホナ−ト）一水和物）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス）、ＭＰ−４１２  （田辺三菱製薬，  大阪，  日本）、ネラチニブ（（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミド）（Ｗｙｅｔｈ社，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＮＪ）、Ｓ−２２２６１１  （塩野義製薬，  大阪，  日本）、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）（４−Ｎ−［３−クロロ−４−（チアゾ−ル−２−イルメトキシ）フェニル］−６−Ｎ−［（４Ｒ）−４−メチル−４，５−ジヒドロオキサゾ−ル−２−イル］キナゾリン−４，６−ジアミン・ビス（４−メチルベンゼンスルホナ−ト）（Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，  Ｂｏｕｌｄｅｒ，  ＣＯ）、ＡＧＴ−２０００  （ＡｒｍｅＧｅｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，  Ｓａｎｔａ  Ｍｏｎｉｃａ，  ＣＡ）、ＡＺＤ−４７６９  （ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス）、ＢＩＢＸ−１３８２  （Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ社，  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，  ドイツ）、ＣＧＰ−５２４１１  （４，５−ビス（フェニルアミノ）−１Ｈ−イソインド−ル−１，３（２Ｈ）−ジオン）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社，  Ｂａｓｅｌ，  スイス）、ＣＬ−３８７７８５  （Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチンアミド）（Ｗｙｅｔｈ社，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＮＪ）、ＣＰ−２９２５９７  （Ｐｆｉｚｅｒ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＤＡＢ−１０５９  （田辺三菱製薬，  大阪，  日本）、エルロチニブ塩酸塩（４−（３−エチニルフェニルアミノ）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−キナゾリン塩酸塩）（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍｅｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，  Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，  ＮＹ，  米国特許第５，７４７，４９８号）、ゲフィチニブ（４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス，  米国特許第５，８２１，２４６号）、Ｈ
ＭＰＬ−８１３  （Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ  Ｃｈｉｎａ  ＭｅｄｉＴｅｃｈ社，  Ｈｏｎｇ
Ｋｏｎｇ）、ＭＤＰ−０１  （Ｍｅｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ社，  Ｐｌａｎ−Ｌｅｓ−Ｏｕａｔｅｓ，  スイス）、ＭＴ−０６２  （Ｍｅｄｉｓｙｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）、ＯＮＣ−１０１  （Ｏｎｃａｌｉｓ社，  Ｓｃｈｌｉｅｒｅｎ，  スイス）、ＰＤ−１５３０３５  （４−（３−ブロモフェニルアミノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス）、ＰＤ−１６９５４０  （Ｐｆｉｚｅｒ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ペリチニブ（ｐｅｌｉｔｉｎｉｂ）（Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＮＪ）、ＰＦ−２９９８０４  （Ｐｆｉｚｅｒ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＰＫＩ−１６６  （４−（Ｒ）−フェネチルアミノ−６−（ヒドロキシル）フェニル−７Ｈ−ピロロ［２．３−ｄ］−ピリミジン）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社，
Ｂａｓｅｌ，  スイス）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）（Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キナゾリン−４−アミン）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス）、ＶＧＡ−１１０２  （大正製薬，  東京，  日本）、ＷＨＩ−Ｐ１５４  （４−（３’−ブロモ−４’−ヒドロキシフェニル）−アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン）、ＺＤ−１８３８  （ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス）、セツキシマブ（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、パニツムマブ（Ａｍｇｅｎ社，  Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，  ＣＡ）。
【０１０３】
ＨＥＲ２の活性に影響を与える薬剤としては、以下が挙げられる：ＡＥＥ−７８８  （Ｎｏｖａｒｔｉｓ社，  Ｂａｓｅｌ，  スイス）、ＡＲＲＹ−３３３７８６  （Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，  Ｂｏｕｌｄｅｒ，  ＣＯ）、ＡＲＲＹ−３８０  （Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，  Ｂｏｕｌｄｅｒ，  ＣＯ）、ＢＩＢＷ−２９９２  （Ｎ−［４−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３Ｓ）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ社，  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，
ドイツ）、ＢＭＳ−５９９６２６  （Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，
Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＢＭＳ−６９０５１４  （Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ
Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、カルネチニブ（ｃａｒｎｅｔｉｎｉｂ）二塩酸塩（Ｎ−［４−［Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミド二塩酸塩）（Ｐｆｉｚｅｒ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＣＮＦ−２０１  （Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ社，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）、ＣＮＸ−２２２  （Ａｖｉｌａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）、ＣＰ−６５４５７７  （ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，  Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，  ＮＹ）、ＣＰ−７２４７１４  （２−メトキシ−Ｎ−［３−［４−［３−メチル−４−（６−メチル−ピリジン−３−イルオキシ）フェニル−アミノ］キナゾリン−６−イル］−Ｅ−アリル］アセトアミド）（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，  Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，  ＮＹ）、ＣＵＤＣ−１０１  （Ｃｕｒｉｓ社，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＭＡ，  米国特許第７，５４７，７８１号）、Ｄ−６９４９１  （Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社，  Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，  ＩＬ）、ジメルセプト（Ｄｉｍｅｒｃｅｐｔ）（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｘ社，  Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，  ＣＡ）、ＥＨＴ−１０２  （ＥｘｏｎＨｉｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，  Ｐａｒｉｓ，  フランス）、ＨＥＲ２アンタゴニスト（Ｃｅｎｔｇｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，  Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）、ＨＥＲ／ｎｅｕワクチン（Ｃｏｒｉｘａ社，  Ｓｅａｔｔｌｅ，  ＷＡ）、ハ−ザイム（Ｈｅｒｚｙｍｅ）（Ｓｉｒｎａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  ＣＡ）、ＨｕＭａｘ−Ｈｅｒ２  （Ｇｅｎｍａｂ社，  Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，  デンマ−ク）、ＩＮＳＭ−１８  （Ｉｎｓｍｅｄ社，  Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，  ＶＡ）、ラパチニブ（ジトシル酸塩水和物（Ｎ−［３−クロロ−４−
［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル］−６−［５−［［［２−（メチル−スルホニル）エチル］アミノ］メチル］フラン−２−イル］キナゾリン−４−アミン・ビス（４−メチルベンゼンスルホナ−ト）一水和物）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス）、ＭＰ−４１２  （田辺三菱製薬，  大阪，  日本）、ｍｕ−４−Ｄ−５  （Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社，  Ｏｃｅａｎｓｉｄｅ，  ＣＡ）、ムブリチニブ（ｍｕｂｒｉｔｉｎｉｂ）（１−［４−［４−［［２−［（Ｅ）−２−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル］オキサゾ−ル−４−イル］メトキシ］フェニル］ブチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾ−ル）（武田薬品，  Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，  ＩＬ）、ネラチニブ（（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミド）（Ｗｙｅｔｈ社，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＮＪ）、ペルツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社，  Ｏｃｅａｎｓｉｄｅ，  ＣＡ）、ＰＸ−１０３．１  （Ｐｈａｒｍｅｘａ社，  Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，  デンマ−ク）、ＰＸ−１０３．２  （Ｐｈａｒｍｅｘａ社，  Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，  デンマ−ク）、ＰＸ−１０４．１  （Ｐｈａｒｍｅｘａ社，  Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，  デンマ−ク）、Ｓ−２２２６１１  （塩野義，  大阪，  日本）、ＴＡＫ−２８５  （武田薬品，  Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，  ＩＬ）、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社，  Ｏｃｅａｎｓｉｄｅ，  ＣＡ）、トラスツズマブ−ＤＭ１  （ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ社，  Ｗａｌｔｈａｍ，  ＭＡ）、バルリチニブ（ｖａｒｌｉｔｉｎｉｂ）（４−Ｎ−［３−クロロ−４−（チアゾ−ル−２−イルメトキシ）フェニル］−６−Ｎ−［（４Ｒ）−４−メチル−４，５−ジヒドロオキサゾ−ル−２−イル］キナゾリン−４，６−ジアミン・ビス（４−メチルベンゼンスルホナ−ト））  （Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ社，  Ｂｏｕｌｄｅｒ，  ＣＯ）、ＶＭ−２０６  （ＶｉｒｏＭｅｄ社，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）。
【０１０４】
ＨＥＲ４の活性に影響を与える薬剤としては、以下が挙げられる：ジメルセプト（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｘ社，  Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，  ＣＡ）、ネラチニブ（（２Ｅ）−Ｎ−［４−［［３−クロロ−４−［（ピリジン−２−イル）メトキシ］フェニル］アミノ］−３−シアノ−７−エトキシキノリン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エンアミド）（Ｗｙｅｔｈ社，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＮＪ）。
【０１０５】
他のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するおよび／またはその活性を変更する薬剤であって、本明細書で提供される組成物および方法で使用できる薬剤の特定の非限定的な例としては、限定するものではないが、以下が挙げられる：パニツムマブ（Ａｍｇｅｎ社，  Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，  ＣＡ）、エルロチニブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社，  Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  ＣＡ；  ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，  Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，  ＮＹ；  Ｒｏｃｈｅ社，  Ｂａｓｅｌ，  スイス）、ラパチニブ（Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス）、ペルツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社，  Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  ＣＡ）、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社，  Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  ＣＡ）、セツキシマブ（ＩｍＣｌｏｎｅ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  およびＢｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ネラチニブ（Ｐｆｉｚｅｒ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、およびＴ−ＤＭ１  （Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社，  Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  ＣＡ；  Ｒｏｃｈｅ社，  Ｂａｓｅｌ，  スイス）、ゲフィチニブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ社，  Ｌｏｎｄｏｎ，  イギリス；  およびＴｅｖａ社，  Ｐｅｔａｈ  Ｔｉｋｖａ，  イスラエル）。これらは以下でさらに詳しく説明される。
【０１０６】
ベクチビックス（ＶＥＣＴＩＢＩＸ：商標）として販売されるパニツムマブは、ＥＧＦ−Ｒに特異的な完全ヒトモノクロ−ナル抗体である。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための組合せは、パニツムマブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１
−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、または、癌などの腫瘍性疾患を治療するための、パニツムマブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２とすることができる。このような組合せを用いて治療できる癌のタイプの例は、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌である。
【０１０７】
エルロチニブ（タルセバ（ＴＡＲＣＥＶＡ：商標）として販売）は、ＮＳＣＬＣ、膵臓癌、およびいくつかの他のタイプの癌を治療するために用いられる薬物である。エルロチニブはＥＧＦ−Ｒチロシンキナ−ゼを特異的に標的とし、その受容体のＡＴＰ結合部位と可逆的に結合する。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための組成物は、エルロチニブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１
−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、または扁平上皮細胞癌を含むがこれらに限定されない、癌などの腫瘍性疾患を治療するための、エルロチニブおよび１種以上の他の薬剤と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９とすることができる。いくつかの好ましい実施形態では、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９が、少なくとも１回の以前の化学療法レジメンが失敗した後の、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、局所進行性ＮＳＣＬＣおよび転移性ＮＳＣＬＣを含めた癌を有する患者の治療において、エルロチニブと組み合わせて用いられる。
【０１０８】
ラパチニブ（タイケルブ（Ｔｙｋｅｒｂ）として販売）は、乳癌などの固形腫瘍を治療するための経口活性小分子である。ラパチニブは、ＥＧＦ−ＲおよびＨＥＲ２／ｎｅｕ（ヒトＥＧＦ−Ｒタイプ２）と関連したチロシンキナ−ゼ活性を阻害する二重チロシンキナ−ゼ阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための組成物は、ラパチニブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、
Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または癌（例えば、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、または扁平上皮細胞癌）などの腫瘍性疾患を治療するための、ラパチニブおよび１種以上の他の薬剤（例えば、カペシタビン）と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９とすることができる。いくつかの好ましい実施形態では、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９が、乳癌および転移性乳癌を含めた癌（その腫瘍はＨＥＲ−２タンパク質を発現または過剰発現する）を有し、かつ以前にアントラサイクリン（例えば、ドキソルビシンまたは関連薬剤）および／またはタキサン（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）およびトラスツズマブを含む化学療法を受けたことがある患者の治療において、ラパチニブと組み合わせて、またはラパチニブおよびカペシタビンと組み合わせて、用いられる。
【０１０９】
トラスツズマブ（ハ−セプチン（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ：登録商標）の別名でも知られる）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体を妨害するヒト化モノクロ−ナル抗体である。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための組成物は、トラスツズマブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４
１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または癌（例えば、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、または扁平上皮細胞癌）などの腫瘍性疾患を治療するための、トラスツズマブおよび１種以上の他の薬剤（例えば、ドセタキセルまたはパクリタキセル）と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９とすることができる。いくつかの好ましい実施形態では、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９が、乳癌および転移性乳癌を含めた癌（その腫瘍はＨＥＲ−２タンパク質を発現または過剰発現する）を有し、かつそれらの（転移性）疾患のための化学療法を受けたことがない患者の治療において、トラスツズマブおよびパクリタキセルと組み合わせて、またはトラスツズマブおよびドセタキセルと組み合わせて、用いられる。
【０１１０】
Ｔ−ＤＭ１は、メイタンシンから誘導される強力な微小管阻害薬（ＤＭ１）に化学的に連結されたトラスツズマブを含む抗体−薬物コンジュゲ−トである。メイタンシンはフリ−の薬物として用いられており、例えば乳癌および肺癌の患者での有効性を示した。Ｔ−ＤＭ１では非還元性チオエ−テルＭＣＣリンカ−が用いられ、トラスツズマブとＤＭ１との間に安定した結合を提供し、暴露を引き延ばし、活性を維持しながらＴ−ＤＭ１の毒性を減らしている。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための方法は、（例えば、同時にまたは別個に）Ｔ−ＤＭ１と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、
Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または癌（例えば、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、および／または転移性乳癌を含む乳癌）などの腫瘍性疾患を治療するための、Ｔ−ＤＭ１および１種以上の他の薬剤（例えば、ドセタキセルまたはパクリタキセル）と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９を投与することを含んでなる。いくつかの好ましい実施形態では、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９が、乳癌および転移性乳癌を含めた癌（その腫瘍はＨＥＲ−２タンパク質を発現または過剰発現する）を有し、かつそれらの（転移性）疾患のための化学療法を受けたことがない患者の治療において、Ｔ−ＤＭ１およびパクリタキセルと組み合わせて、またはＴ−ＤＭ１およびドセタキセルと組み合わせて、用いられる。
【０１１１】
ペルツズマブ（２Ｃ４）（オムニタ−グ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ：商標）として販売または
販売予定）は、ＨＥＲ２と他のＨＥＲ受容体との二量体化を阻害するモノクロ−ナル抗体である。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための組成物は、ペルツズマブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または癌（例えば、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌）などの腫瘍性疾患を治療するための、ペルツズマブおよび１種以上の他の薬剤と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９とすることができる。
【０１１２】
セツキシマブ（ア−ビタックス（ＥＲＢＩＴＵＸ：登録商標）として販売）は、ＥＧＦ−Ｒに結合して、それを阻害するキメラ（マウス／ヒト）モノクロ−ナル抗体である。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための組成物は、セツキシマブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１
−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または癌（例えば、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌）などの腫瘍性疾患を治療するための、セツキシマブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９とすることができる。いくつかの好ましい実施形態では、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９が、５−フルオロウラシルをベ−スとする化学療法が失敗した後の、結腸直腸癌および転移性結腸直腸癌を含めた癌を有する患者の治療において、セツキシマブおよびイリノテカンと組み合わせて、用いられる。
【０１１３】
ゲフィチニブ（イレッサ（ＩＲＥＳＳＡ：登録商標）として販売）は、エルロチニブと同様に作用する薬物である。ゲフィチニブはＥＧＦ−Ｒのチロシンキナ−ゼドメインを選択的に阻害する。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための組成物は、ゲフィチニブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−
５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または癌（例えば、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌）などの腫瘍性疾患を治療するための、ゲフィチニブおよび１種以上の他の薬剤と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９とすることができる。
【０１１４】
ネラチニブは、ＨＥＲ−２受容体チロシンキナ−ゼの阻害剤である。ネラチニブはＨＥＲ−２受容体に不可逆的に結合し、それによって、明らかに該受容体のＡＴＰ結合ポケット中のシステイン残基を標的とすることで、細胞における自己リン酸化を低減する。細胞をネラチニブで処理すると、下流のシグナル伝達事象および細胞周期調節経路が阻害され、細胞周期のＧ１期からＳ期への移行が停止して、最終的に細胞増殖が減少する。さらに、ネラチニブはＥＧＦ−Ｒキナ−ゼを阻害してＥＧＦ−Ｒ依存性細胞増殖を抑制する。い
くつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患を治療するための方法は、（例えば、同時にまたは別個に）ネラチニブと組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくは  Ｕ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９、または癌（例えば、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、および／または転移性乳癌を含む乳癌）などの腫瘍性疾患を治療するための、ネラチニブおよび１種以上の他の薬剤と組み合わせた、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４、Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−１、Ｕ１−２、Ｕ１−３、Ｕ１−４���Ｕ１−５、Ｕ１−６、Ｕ１−７、Ｕ１−８、Ｕ１−９、Ｕ１−１０、Ｕ１−１１、Ｕ１−１２、Ｕ１−１３、Ｕ１−１４、Ｕ１−１５、Ｕ１−１６、Ｕ１−１７、Ｕ１−１８、Ｕ１−１９、Ｕ１−２０、Ｕ１−２１、Ｕ１−２２、Ｕ１−２３、Ｕ１−２４、Ｕ１−２５、Ｕ１−２６、Ｕ１−２７、Ｕ１−２８、Ｕ１−２９、Ｕ１−３０、Ｕ１−３１、Ｕ１−３２、Ｕ１−３３、Ｕ１−３４、Ｕ１−３５、Ｕ１−３６、Ｕ１−３７、Ｕ１−３８、Ｕ１−３９、Ｕ１−４０、Ｕ１−４１、Ｕ１−４２、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４５、Ｕ１−４６、Ｕ１−４７、Ｕ１−４８、Ｕ１−４９、Ｕ１−５０、Ｕ１−５１、Ｕ１−５２、Ｕ１−５３、Ｕ１−５５．１、Ｕ１−５５、Ｕ１−５７．１、Ｕ１−５７、Ｕ１−５８、Ｕ１−５９、Ｕ１−６１．１、Ｕ１−６１、もしくはＵ１−６２、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３もしくはＵ１−５９の投与を含んでなる。
【０１１５】
４．  本明細書で開示した組成物および方法で使用する追加の薬剤
追加の薬剤は、本明細書に開示するような、ＨＥＲ−３に結合する、およびＨＥＲファミリ−の別のメンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する、それぞれ第１および第２の薬剤に添加することができる。これらは、いくつかの実施形態において、化学療法薬であり得る。本明細書で開示した組成物および方法で使用する追加の薬剤はまた、ＨＥＲ
ファミリ−の別のメンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する薬剤の代わりに第２の薬剤として本発明において用いることができる。言い換えれば、ＨＥＲ３に結合する第１の薬剤は、ＨＥＲファミリ−の別のメンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する第２の薬剤の非存在下に／代わりに、後述する追加の薬剤のいずれかと組み合わせて、特定の治療に使用することができる。
【０１１６】
例えば、微小管刺激薬（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｓｔｉｍｕｌａｎｔ）として作用する薬剤としては、以下が挙げられる：ＮＫ−１０５（パクリタキセル）［（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル  （２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナ−ト］（ナノキャリア社，  千葉，  日本）、ミラタキセル（ｍｉｌａｔａｘｅｌ）（１，１０β−ジヒドロキシ−９−オキソ−５β，２０−エポキシ−３ζ−タキサ−１１−エン−２α，４，７β，１３α−テトライル  ４−アセテ−ト  ２−ベンゾア−ト１３−［（２Ｒ，３Ｒ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（フラン−２−イル）−２−ヒドロキシプロパノア−ト］  ７−プロパノア−ト）（Ｔａｘｏｌｏｇ社，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）、ラウリマリド（ｌａｕｌｉｍａｌｉｄｅ）（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，  Ｈａｙｗａｒｄ，  ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社））、サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）Ａ（３−（１−メチルイミダゾ−ル−４−イル）−２（Ｅ）−プロペン酸（１Ｒ，４ａＲ，６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１２ａＲ）−１１−メトキシカルボニル−７，１０−エポキシ−１０−ヒドロキシ−１−イソプロピル−４，７−ジメチル−１，２，４ａ，５，６，７，１０，１２ａ−オクタヒドロベンゾシクロドデセン−６−イルエステル）（Ｐｆｉｚｅｒ社，  Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、シモタキセル（ｓｉｍｏｔａｘｅｌ）（（２ａＲ，４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ，９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）−４，１１−ジヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−７，１１−メタノ−１Ｈ−シクロデカ［３，４］ベンズ［１，２−ｂ］オキセ−ト−６，９，１２，１２ｂ−テトライル１２ｂ−アセタ−ト１２−ベンゾア−ト  ６−シクロペンタンカルボキシラ−ト９−［（２Ｒ，３Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−［［（１−メチルエトキシ）カルボニル］アミノ］−３−（チオフェン−２−イル）プロパノア−ト］）（Ｔａｘｏｌｏｇ社，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）、ＳＹＮ−２００１（ＣＬＬ  Ｐｈａｒｍａ社，  Ｎｉｃｅ，  フランス）、ＴＬ−３１０（Ｔａｘｏｌｏｇ社，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）、ＴＬ１８３６（Ｔａｘｏｌｏｇ社，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）（２’−［（ジメチルアミノ）メチル］−１−ヒドロキシ−５β，２０−エポキシ−９α，１０α−ジヒドロ［１，３］ジオキソロ［４’，５’：９，１０］タキサ−１１−エン−２α，４，１３α−トリイル４−アセタ−ト２−ベンゾア−ト１３−［（２Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−（３−フルオロピリジン−２−イル）−２−ヒドロキシプロパノア−ト）（第一三共製薬，  東京，  日本）、ＴＬ−１８９２（Ｔａｘｏｌｏｇ社，  Ｆａｉｒｆｉｅｌｄ，  ＮＪ）、ＴＰＩ−２８７（（２’Ｒ，３’Ｓ）−２’−ヒドロキシ−Ｎ−カルボキシ−３’−アミノ−５’−メチル−ヘキサノイック，  Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，  １３エステル５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，９α，１０α，１３α−ヘプタヒドロキシ−４，１０−ジアセタ−ト−２−ベンゾア−ト−７，９−アクロレインアセタ−ル−タキサ−１１−エン（Ｔａｐｅｓｔｒｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，  Ｂｏｕｌｄｅｒ，  ＣＯ）、オルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）（２ａＲ−［２ａα，４β，４ａβ，６β，９α（２Ｒ，３Ｓ），１０β，１１β，１２α，１２ａα，１２ｂα］−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−ヒドロキシ−５−メチル−ヘキサン酸  ６，１２ｂ−ジアセトキシ−１２−ベンゾイルオキシ−１０，１１−カルボニルジオキシ−４−ヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９
，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−１Ｈ−７，１１−メタノシクロデカ［３，４］ベンズ［１，２−ｂ］オキセタ−９−イルエステル）  （Ｉｎｄｅｎａ社，
Ｍｉｌａｎ，  イタリア）、パクリタキセル・ポリグルメックス（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｐｏｌｉｇｌｕｍｅｘ）（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ベンゾイルアミノ）−１−［［［（２ａＲ，４Ｓ，４ａＳ，６Ｒ，９Ｓ，１１Ｓ，１２Ｓ，１２ａＲ，１２ｂＳ）−６，１２ｂ−ビス（アセチルオキシ）−１２−（ベンゾイルオキシ）−４，１１−ジヒドロキシ−４ａ，８，１３，１３−テトラメチル−５−オキソ−２ａ，３，４，４ａ，５，６，９，１０，１１，１２，１２ａ，１２ｂ−ドデカヒドロ−７，１１−メタノ−１Ｈ−シクロデカ［３，４］ベンゾ［１，２−ｂ］オキセタ−９−イル］オキシ］カルボニル］−２−フェニルエチルで部分γエステル化されたＬ−ピログルタミルポリ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸）（Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社，  Ｓｅａｔｔｌｅ，  ＷＡ）、タンパク結合パクリタキセル小粒子（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｂｏｕｎｄ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）（パクリタキセル：  （−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル  （２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナ−ト）（Ａｂｒａｘｉｓ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ社，  Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，  ＣＡ）、パクリタキセル（ＮＣＩ）（（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナ−ト）（ＮＣＩ（ＮＩＨ））、パクリタキセル（ＮｅｏＰｈａｒｍ社，  Ｌａｋｅ  Ｂｌｕｆｆ，  ＩＬ）（（−）−（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４，１０−ジアセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル  （２Ｒ，３Ｓ）−３−ベンゾイルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロピオナ−ト）  （ＮｅｏＰｈａｒｍ社，  Ｌａｋｅ  Ｂｌｕｆｆ，  ＩＬ）、パツピロン（ｐａｔｕｐｉｌｏｎｅ）（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２，１６−ペンタメチル−３−［（１Ｅ）−１−（２−メチル−１，３−チアゾ−ル−４−イル）プロパ−１−エン−２−イル］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン）（米国特許公開公報第２００３／０１０４６２５号，  Ｎｏｖａｒｔｉｓ社，  Ｂａｓｅｌ，  スイス）、ＰＥＧ−パクリタキセル（Ｅｎｚｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社，  Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ，  ＮＹ）、ドセタキセル水和物（（−）−（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，７Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−４−アセトキシ−２−ベンゾイルオキシ−５，２０−エポキシ−１，７，１０−トリヒドロキシ−９−オキソタキサ−１１−エン−１３−イル（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロ��シ−３−フェニルプロピオナ−ト三水和物）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社，  Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，  ＮＪ）、エリュテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）  （３−（１−メチルイミダゾ−ル−４−イル）−２（Ｅ）−プロペン酸（１Ｒ，４ａＲ，６Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１２ａＲ）−１１−（２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−アラビノピラノシルオキシメチル）−７，１０−エポキシ−１−イソプロピル−１０−メトキシ−４，７−ジメチル−１，２，４ａ，５，６，７，１０，１２ａ−オクタヒドロベンゾシクロドデセン−６−イルエステル）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＩＤＮ−５３９０（Ｉｎｄｅｎａ社，
Ｍｉｌａｎ，  イタリア）、イクサベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２，１６−ペンタメチル−３−［（１Ｅ）−１−メチル−２−（２−メチルチアゾ−ル−４−イル）エテニル］−１７−オキサ−４−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＫＯＳ−１５８４（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，  Ｈａ
ｙｗａｒｄ，  ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社））、ＫＯＳ−１８０３（１７−イソ−オキサゾ−ル  ２６−トリフルオロ−９，１０−デヒドロ−１２，１３−デスオキシ−エポチロンＢ）（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，  Ｈａｙｗａｒｄ，  ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社））、ＫＯＳ−８６２（Ｋｏｓａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社，  Ｈａｙｗａｒｄ，  ＣＡ（Ｂ−Ｍ  Ｓｑｕｉｂｂ社）；  米国特許第６２０４３８８号および第６３０３３４２号）、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）（１−ヒドロキシ−９−オキソ−５β，２０−エポキシ−７β，１９−シクロタキサ−１１−エン−２α，４，１０β，１３α−テトライル４，１０−ジアセタ−ト２−ベンゾア−ト１３−［（２Ｒ，３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノア−ト］無水物）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社，  Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，  ＮＪ；  国際公開公報ＷＯ  ９５／２６９６１およびＷＯ  ９６／１２５９）、ＡＮＧ−１００５（アンジオペプ（Ａｎｇｉｏｐｅｐ）−２／パクリタキセルコンジュゲ−ト）（ＡｎｇｉｏＣｈｅｍ社，  Ｍｏｎｔｒｅａｌ，  カナダ；  米国特許第７５５７１８２号）、ＢＭＳ−１８４４７６（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，
Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  欧州特許出願公開第６３９５７７号）、ＢＭＳ−１８８７９７（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＢＭＳ−２７５１８３（３’−ｔｅｒｔ−ブチル−３’−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−４−デアセチル−３’−デフェニル−３’−Ｎ−デベンゾイル−４−Ｏ−メトキシカルボニル−パクリタキセル）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，
Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＢＭＳ−３１０７０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、ＢＭＳ−７５３４９３（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ）、カバジタキセル（ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ）（１−ヒドロキシ−７β，１０β−ジメトキシ−９−オキソ−５β，２０−エポキシタキサ−１１−エン−２α，４，１３α−トリイル  ４−アセタ−ト
２−ベンゾア−ト  １３−［（２Ｒ，３Ｓ）−３−［［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ］−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノア−ト］）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社，  Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，  ＮＪ）、ＤＨＡ−パクリタキセル（Ｐｒｏｔａｒｇａ社，  Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ，  ＰＡ，  タクサオプレキシン（ＴＡＸＯＰＲＥＸＩＮ：登録商標））、ジセルモリド（ｄｉｓｅｒｍｏｌｉｄｅ）（［３Ｓ−［３α，４β，５β，６α（２Ｒ＊，３Ｚ，５Ｒ＊，６Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｚ，１１Ｒ＊，１２Ｓ＊，１３Ｓ＊，１４Ｓ＊，１５Ｒ＊，１６Ｅ）］］−６−［１４［（アミノカルボニル）オキシ］−２，６，１２−トリヒドロキシ−５，７，９，１１，１３，１５−ヘキサメチル−３，８，１６，１８−ノナデカテトラエニル］テトラ
ヒドロ−４−ヒドロキシ−３，５−ジメチル−２Ｈ−ピラン−２−オン）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社，  Ｂａｓｅｌ，  スイス；  米国特許第４９３９１６８号および第５６８１８４７号）。これらの微小管刺激薬の一部はそれらの化学構造中にタキサン環をもっている；こうしたタキサン環をもつ化合物は本明細書では「タキサン系」と呼ばれる。
【０１１７】
アントラサイクリン系としては、以下が挙げられる：アクチノマイシン系、例えばアクチノマイシンＤ（ダクチノマイシン：２−アミノ−Ｎ，Ｎ’−ビス［（６Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１３Ｒ，１８ａＳ）−６，１３−ジイソプロピル−２，５，９−トリメチル−１，４，７，１１，１４−ペンタオキソヘキサデカヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，１−ｉ］［１，４，７，１０，１３］オキサテトラアザシクロヘキサデシン−１０−イル］−４，６−ジメチル−３−オキソ−３Ｈ−フェノキサジン−１，９−ジカルボキサミド）、ブレオマイシン（ブレオマイシン塩酸塩：（３−｛［（２’−｛（５Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ）−１５−｛６−アミノ−２−［（１Ｓ）−３−アミノ−１−｛［（２Ｓ）−２，３−ジアミノ−３−オキソプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル］−５−メチルピリミジン−４−イル｝−１３−［｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３−｛［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−４−（カルバモイルオキシ）−３，５−ジヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］オキシ｝−４，５−ジヒド
ロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル］オキシ｝（１Ｈ−イミダゾ−ル−５−イル）メチル］−９−ヒドロキシ−５−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−８，１０−ジメチル−４，７，１２，１５−テトラオキソ−３，６，１１，１４−テトラアザペンタデカ−１−イル｝−２，４’−ビ−１，３−チアゾ−ル−４−イル）カルボニル］アミノ｝プロピル）（ジメチル）スルホニウム）、ダウノルビシン塩酸塩（ダウノルビシン：（８Ｓ−ｃｉｓ）−８−アセチル−１０−（（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）オキシ）−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩）、ドキソルビシン塩酸塩（ドキソルビシン：（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩）（Ａｌｚａ社，  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，  ＣＡ）、イダルビシン塩酸塩（（７Ｓ，９Ｓ）−９−アセチル−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，７，９，１１−テトラヒドロキシ−７−Ｏ−（２，３，６−トリデオキシ−３−アミノ−α−Ｌ−ｌｙｘｏ−ヘキソピラノシル）−５，１２−ナフタセンジオン塩酸塩）（Ｐｆｉｚｅｒ社，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  米国特許第４０４６８７８号および第４４７１０５２号）、およびマイトマイシン（（１ａＳ，８Ｓ，８ａＲ，８ｂＲ）−６−アミノ−４，７−ジオキソ−１，１ａ，２，８，８ａ，８ｂ−ヘキサヒドロ−８ａ−メトキシ−５−メチルアジリノ［２，３：３，４］ピロロ［１，２−α］インド−ル−８−イルメチルカルバメ−ト）（協和発酵キリン，  東京，  日本）。
【０１１８】
シスプラチンとゲムシタビンは化学療法薬である。シスプラチンまたはシス−ジアミンジクロロ白金（ＩＩ）は、さまざまなタイプの癌の治療に用いられる白金ベ−スの薬剤である。シスプラチン白金錯体は生体内で反応し、ＤＮＡに結合してＤＮＡの架橋を引き起こし、最終的にアポト−シスを誘発する。ゲムシタビンは、デオキシシチジンの２’炭素上の水素原子がフッ素原子で置換されたヌクレオシド類似体である。フルオロウラシルや他のピリミジン類似体と同様に、ゲムシタビンはＤＮＡ複製中にシチジンに取って代わり、その「欠陥」ヌクレオシドにはさらなるヌクレオシドが結合できず、結果としてアポト−シスを引き起こすので、腫瘍増殖を停止させる。ゲムシタビンはＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ  （Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，  ＩＮ）からジェムザ−ル（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））として販売されている。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患の治療のための併用は、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、および／または転移性乳癌を含む乳癌である癌を治療するための、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤およびシスプラチンまたはゲムシタビンおよび他の薬剤との併用であり得る。
【０１１９】
カペシタビン（ペンチル［１−（３，４−ジヒドロキシ−５−メチル−テトラヒドロフラン−２−イル）−５−フルオロ−２−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−４−イル］アミノメタノア−ト、ゼロ−ダ（Ｘｅｌｏｄａ）、Ｒｏｃｈｅ社）は、経口投与される化学療法薬である。カペシタビンは腫瘍内で５−フルオロウラシルに酵素的に変換されるプロドラッグであり、ＤＮＡ合成を阻害することで腫瘍組織の増殖を遅らせる。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患の治療のための併用は、癌を治療するためのＵ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤（例えば、ラパチニブ）およびカペシタビンとの併用であり得る。ここで、このような癌は、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、および／または転移性乳癌を含む乳癌である。いくつかの場合に、こうした併用投与は、例えばアントラサイクリンまたはタキサンによる前治療が失敗した後で、行うことができる。いくつかの好ましい実施形態では
、乳癌および転移性乳癌を含めた癌（その腫瘍はＨＥＲ−２タンパク質を発現または過剰発現する）を有しかつアントラサイクリン（例えば、ドキソルビシンまたは関連薬剤）および／またはタキサン（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）およびトラスツズマブを含む以前の化学療法を受けたことがある患者の治療において、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９と、ラパチニブおよびカペシタビンとが併用される。
【０１２０】
ドセタキセル（（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，  Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル，  ５，２０−エポキシ−１，２，４，７，１０，１３−ヘキサヒドロキシタキサ−１１−エン−９−オン４−アセタ−ト２−ベンゾア−トとの１３−エステルの三水和物）およびパクリタキセル（（２α，４α，５β，７β，１０β，１３α）−４，１０−ビス（アセチルオキシ）−１３−｛［（２Ｒ，３Ｓ）−３−（ベンゾイルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノイル］オキシ｝−１，７−ジヒドロキシ−９−オキソ−５，２０−エポキシタキサ−１１−エン−２−イル）は化学療法薬である。ドセタキセルはＳａｎｏｆｉ  Ａｖｅｎｔｉｓ社からタキソテ−ル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）として販売されている。パクリタキセルはＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社からタキソ−ル（Ｔａｘｏｌ）として販売されている。タキソ−ルの製剤では、パクリタキセルがデリバリ−剤としてのクレモホ−ルＥＬとエタノ−ルに溶解される。パクリタキセルをアルブミンに結合させた製剤は、アブラキサン（Ａｂｒａｘａｎｅ）として販売されている。いくつかの実施形態において、ＨＥＲ３関連疾患の治療のための併用は、癌を治療するためのＵ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤（例えば、トラスツズマブ）およびドセタキセルまたはパクリタキセルおよび他の薬剤（例えばトラスツズマブ）との併用であり得る。ここで、このような癌は、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、結腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、非小細胞肺癌を含む肺癌、結腸直腸癌、および／または転移性乳癌を含む乳癌である。いくつかの好ましい実施形態では、乳癌および転移性乳癌を含めた癌（その腫瘍はＨＥＲ−２タンパク質を発現または過剰発現する）を有しかつそれらの（転移性）疾患のための化学療法を受けたことがない患者の治療において、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９は、トラスツズマブおよびパクリタキセルと、Ｔ−ＤＭ１およびパクリタキセルと、トラスツズマブおよびドセタキセルと、あるいはＴ−ＤＭ１およびドセタキセルと併用される。
【０１２１】
ドキソルビシン塩酸塩リポソ−ム注射液は、ドキソルビシン塩酸塩を含むリポソ−ム製剤、ドキシル（Ｄｏｘｉｌ）として販売されている。いくつかの実施形態において、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌などの癌を治療するために、ＨＥＲ−３関連疾患の併用療法は、パクリタキセルまたは白金ベ−スの化学療法薬などの１種以上の他の薬剤を含めてまたは含めないで、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９と本明細書に記載の第２の薬剤およびドキソルビシン塩酸塩リポソ−ム注射液とを併用して投与することを含むことができる。いくつかの好ましい実施形態では、卵巣癌を含めた癌を有し、その疾患が白金ベ−スの化学療法の後で進行したまたは再発した患者の治療において、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９は、ドキソルビシンＨＣｌリポソ−ム注射液（ドキシル）と併用される。
【０１２２】
イリノテカン塩酸塩水和物（イリノテカン：（＋）−（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１−２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩三水和物）（ヤクルト社、ＥＰ公開第１３７１４５号および第５６６９２号）はカンプト（Ｃａｍｐｔｏ）、カンプトサ−ル（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）およびイルカン（Ｉｒｃａｎ）として販売されている。いくつかの態様において、乳癌、消化器癌
、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、および扁平上皮細胞癌などの癌を治療するために、ＨＥＲ３関連疾患の併用療法は、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９と、本明細書に記載の第２の薬剤およびイリノテカン塩酸塩水和物との併用投与、またはＵ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９と、本明細書に記載の第２の薬剤およびイリノテカン塩酸塩水和物および１種以上の他の薬剤、例えば５−ＦＵ  （５’−デオキシ−５−フルオロウリジンまたは５−フルオロ−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン）、ホリナ−トカルシウム（Ｎ−［４−［［（２−アミノ−５−ホルミル−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル）メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸カルシウム塩（１：１））、もしくはレボホリナ−トカルシウム（（−）−カルシウムＮ−［４−［［［（６Ｓ）−２−アミノ−５−ホルミル−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル］メチル］アミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタマ−ト）およびこれらの組合せとの併用投与を含むことができる。
【０１２３】
いくつかの好ましい実施形態において、結腸直腸癌および転移性結腸直腸癌を含めた癌を有する患者の５−フルオロウラシルベ−スの化学療法が失敗した後の治療において、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９は、５−フルオロウラシルベ−スの化学療法と組み合わせて用いることができる。いくつかのさらなる実施形態において、野生型Ｋ−ＲＡＳを含む結腸直腸癌および転移性結腸直腸癌を含めた癌を有する患者の５−フルオロウラシルベ−スの化学療法が失敗した後の治療において、Ｕ１−４９、Ｕ１−５３またはＵ１−５９は、セツキシマブおよびイリノテカンと併用される。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示する組成物および方法で用いる追加の薬剤は、本明細書に開示する第２の薬剤と交換可能であって、抗体ではないが抗体様活性を有する（例えば、抗体の活性に類似した活性を有する）人工的なまたは天然に存在する足場タンパク質であり得る。
【０１２５】
いくつかの他の実施形態において、本明細書に開示する第２の薬剤と交換可能な、前記の追加の薬剤は、他の標的の活性を阻害する、遮断する、もしくは減少させる（該標的に対するアンタゴニストとして作用する）、または活性化する、刺激する、もしくは促進する（該標的に対するアゴニストとして作用する）薬剤であってよく、限定するものではないが、細胞増殖および／または生存経路に影響を与えるもの、例えばＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＲＡＦ／Ｂ−ＲＡＦ阻害剤、ＲＡＳ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、抗ＤＲ４およびＤＲ５作動性抗体などのＤＲ４およびＤＲ５アゴニストを含む細胞死受容体阻害剤（例えば、セデリズマブ、チガツズマブ、ドロジツマブ（ｄｒｏｚｉｔｕｍａｂ）、コナツムマブ）、ＰＰＡＲγアゴニスト（例えば、エファツタゾン、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、ｃ−ＭＥＴ阻害剤、Ｈｓｐ−９０阻害剤およびテロメラ−ゼ阻害剤であり得る。
【０１２６】
いくつかの他の実施形態において、本明細書に開示する第２の薬剤と交換可能な、前記の追加の薬剤は、ＶＥＧＦアンタゴニスト／阻害剤（例えば、ベバシズマブ、バンデタニブ）を含むがこれらに限定されない、抗血管新生薬であり得る。
【０１２７】
いくつかのさらなる実施形態において、第２の薬剤と交換可能な、前記の追加の薬剤は、ワクチンまたは細胞療法などの免疫療法であり得る。
【０１２８】
以下でさらに説明するように、これらおよび他の薬剤は本明細書に提供される組成物に含めることができ、さまざまな異なる形態、組合せおよび投与量で投与することができる。
【０１２９】
５．  組成物
本発明はまた、本明細書に記載のＨＥＲ−３結合薬剤を、別のＨＥＲファミリ−タンパク質に対して誘導されたまたは化学療法化合物である第２の薬剤と組み合わせて、１種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／またはアジュバントと共に、含有する医薬組成物を提供する。本明細書中で用いる用語「医薬組成物」とは、患者に適切に投与したとき、所望の治療効果を引き出すことができる化合物または組成物をさす（Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ，  Ｐａｒｋｅｒ編，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  （１９８５））。本明細書で提供される医薬組成物の効力は一般的に、ＨＥＲ−３への少なくとも１種の結合タンパク質の結合に基づいている。いくつかの実施形態では、この結合がＨＥＲ−３介在シグナル伝達を減少させることができる。
【０１３０】
「薬学的に許容される担体」（本明細書では「賦形剤」または「キャリア」ともいう）は、薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤、安定化剤、または１種以上の治療用化合物（例えば、ＨＥＲ結合タンパク質）を被験者に送達するための他のいずれかの薬理学的に不活性なビヒクルであり、用いる投与量および濃度でそれにさらされる細胞または哺乳動物に対し無毒性のものである。薬学的に許容される担体は、液体または固体とすることができ、所定の医薬組成物の１種以上の治療用化合物や他の任意の成分と一緒にしたとき、所望の容積、稠度、および他の適切な輸送および化学的性質を提供するように、予定した投与様式を考慮に入れて、選択することができる。アミノ酸との有害反応を起こさない、通常の薬学的に許容される担体としては、例えば、限定するものではないが、以下が挙げられる：水、生理食塩水、結合剤（例：ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロ−ス）、充填剤（例：乳糖および他の糖類、ゼラチン、または硫酸カルシウム）、滑沢剤（例：デンプン、ポリエチレングリコ−ル、または酢酸ナトリウム）、崩壊剤（例：デンプンまたはデンプングリコ−ル酸ナトリウム）、および湿潤剤（例：ラウリル硫酸ナトリウム）。薬学的に許容される担体にはさらに、水性ｐＨ緩衝溶液またはリポソ−ム（哺乳動物への薬剤の送達に有用な、さまざまな種類の脂質、リン脂質および／または界面活性剤から構成される小胞）が含まれる。薬学的に許容される担体のさらなる例としては、以下が挙げられる：緩衝剤、例えばリン酸、クエン酸、および他の有機酸；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマ−、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン；単糖類、二糖類、および他の炭水化物（グルコ−ス、マンノ−スまたはソルビト−ルを含む）；キレ−ト剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコ−ル、例えばマンニト−ルまたはソルビト−ル；塩形成対イオン、例えばナトリウム；および／または非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコ−ル（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）。
【０１３１】
リポソ−ムは、親油性材料から形成された膜と、送達される組成物を含有する水性内部とを有する小胞である。リポソ−ムは、その特異性のために、また、それらが薬物送達の観点から提供する作用持続期間のために、特に有用である。リポソ−ム組成物は、例えば、ホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロ−ル、またはジオレオイルホスファチジルエタノ−ルアミンから形成することができる。多数の親油性薬剤が、リポフェクチン（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標））（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）およびエフェクテン（ＥＦＦＥＣＴＥＮＥ（商標））（Ｑｉａｇｅｎ社，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）を含めて、市販されている。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、医薬組成物に含まれる薬剤の少なくとも１つ（例えば、ＨＥＲ−３結合薬剤または別のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合するおよび／またはそれを阻害する薬剤）は、カリケアマイシン、デュオカルマイシン類、アウリスタチン類、メイタンシノイド類、放射性同位元素、または毒性の化学療法薬、例えばゲルダナマイシンおよびメイタンシン、などのエフェクタ−に結合させることができる。この種のコンジュゲ−トは、ＨＥＲ−３を発現している細胞（例えば、癌細胞）を標的とする場合に特に有用でありうる。
【０１３３】
結合タンパク質を放射性同位元素に連結することは、腫瘍の治療に対して利点を提供することができる。化学療法や他の癌治療形態と違って、放射性免疫療法または放射性同位元素−結合タンパク質の組合せの投与は、癌細胞を直接タ−ゲットとして、周囲の正常で健康な組織へのダメ−ジを最小限に抑えることができる。この「特効薬」（ｍａｇｉｃ  ｂｕｌｌｅｔ）により、患者は、今日利用できる他の治療形態よりもはるかに少ない量の放射性同位元素を用いて治療され得る。適当な放射性同位元素としては、例えば、イットリウム９０  （９０Ｙ）、インジウム１１１  （１１１Ｉｎ）、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、放射性銀−１１１、放射性銀−１９９、およびビスマス２１３が挙げられる。放射性同位元素の結合タンパク質への連結は、例えば、従来の二官能性キレ−トを用いて、実施することができる。銀は一価であるため、放射性銀−１１１および放射性銀−１９９の連結の場合には、硫黄ベ−スのリンカ−が用いられる（Ｈａｚｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２４−２５：１−７）。放射性同位元素の銀の連結には、免疫グロブリンをアスコルビン酸で還元する必要があるかもしれない。さらに、チウキセタン（ｔｉｕｘｅｔａｎ）は、イブリツモマブ・チウキセタン（ゼヴァリン（Ｚｅｖａｌｉｎ））を形成するためにイブリツモマブに結合されるＭＸ−ＤＴＰＡリンカ−キレ−ト剤である（Ｗｉｔｚｉｇ  （２００１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４８  （Ｓｕｐｐｌ  １）：９１−９５）。イブリツモマブ・チウキセタンは、インジウム１１１（１１１Ｉｎ）または９０Ｙなどの放射性同位元素と反応して、それぞれ、１１１Ｉｎ−イブリツモマブ・チウキセタンおよび９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタンを形成することができる。
【０１３４】
本明細書に記載の結合タンパク質は、特に癌の治療に用いる場合、毒性を示す化学療法薬とコンジュゲ−ト化することができ、例えば、メイタンシノイド系（Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  １３：４０−４６）、ゲルダナマイシノイド系（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．  ９２：１５４９−１５５１）、およびメイタンシノイド系、例えばメイタンシノイド薬ＤＭ１（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳ  ９３：８６１８−８６２３）とコンジュゲ−ト化される。酸性もしくは還元条件下で、または特定のプロテア−ゼへの暴露時に、薬物を放出するリンカ−を、この技術と共に使用することができる。結合タンパク質は当技術分野で記載されるようにコンジュゲ−トとすることができる。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、結合タンパク質がアウリスタチンＰＥとコンジュゲ−ト化される。アウリスタチンＰＥは、例えば、海洋シェルレス（ｓｈｅｌｌ−ｌｅｓｓ）軟体動物のペプチド成分であるドラスタチン１０の構造修飾体からなる微小管阻害薬である。アウリスタチンＰＥは抗腫瘍活性と抗腫瘍血管活性の両方を有する（Ｏｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊｐｎ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ９１：８３７−４４）。例えば、アウリスタチンＰＥは膵臓癌細胞株において細胞増殖を阻害し、細胞周期の停止とアポト−シスを誘導する（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ３：６４７−５３）。したがって、特定の腫瘍にアウリスタチンＰＥの抗腫瘍活性と抗腫瘍血管活性を特異的に標的化するために、アウリスタチンＰＥを本明細書で提供する結合タンパク質にコンジュゲ−トすることが可能である。
【０１３６】
本明細書で提供される医薬組成物はまた、少なくとも１種のさらなる活性薬剤を含むことができる。さらなる活性薬剤の例としては、ＩＧＦＲ−１およびｃ−ｍｅｔなどの他の受容体タンパク質キナ−ゼの抗体または低分子量阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などの受容体リガンド、ドキソルビシン、シスプラチンまたはカルボプラチンなどの細胞毒性薬、サイトカイン、または抗腫瘍薬が挙げられる。多くの抗腫瘍薬が当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、抗腫瘍薬が、抗体および免疫調節タンパク質を含むがこれらに限定されない治療用タンパク質の群から選択され得る。いくつかの実施形態では、抗腫瘍薬が、以下からなる小分子阻害剤および化学療法薬の群から選択され得る：有糸分裂阻害剤、キナ−ゼ阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、挿入剤として用いる抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラ−ゼ阻害剤、ヒストンデアセチラ−ゼ阻害剤、抗生存薬、生物学的応答修飾因子、抗ホルモン（例えば、抗アンドロゲン）、微小管刺激薬、アントラサイクリン、および抗血管新生薬。抗腫瘍薬が放射線である場合、治療は内部源（例えば、小線源療法）または外部源（例えば、体外照射療法）のいずれかで達成することができる。１種以上のさらなる活性薬剤は、ＨＥＲ３結合薬剤および第２の薬剤と同時にまたは別々に、単一の製剤でまたは各活性薬剤の個別（単独）の製剤で、投与することができる。
【０１３７】
本明細書で提供される医薬組成物は過剰増殖性疾患の診断、予防または治療に特に有用である。過剰増殖性疾患はＨＥＲファミリ−のシグナル伝達の増加と関連づけることができる。特に、その疾患はＨＥＲ−３リン酸化の増加、ＨＥＲ−３と他のＨＥＲファミリ−メンバ−との複合体形成の増加、ＰＩ３キナ−ゼ活性の増加、ｃ−ｊｕｎ末端キナ−ゼ活性および／またはＡＫＴ活性の増加、ＥＲＫ２および／またはＰＹＫ２活性の増加、またはこれらの組合せと関連づけられる。過剰増殖性疾患は、例えば、乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、またはＨＥＲ−３を発現または過剰発現する他の癌、および腫瘍転移の形成からなる群より選択することができる。
【０１３８】
医薬組成物は、１種以上の活性薬剤を、１種以上の生理的に許容される担体、希釈剤および／またはアジュバントと、場合により、改善された輸送、送達、耐性などを与えるために製剤に通常配合される他の物質と、混合することによって製剤化することができる。医薬組成物は、例えば、凍結乾燥製剤、水溶液剤、分散液剤、または錠剤、糖衣錠もしくはカプセル剤などの固形製剤に、製剤化される。多数の適切な製剤は、薬剤師に公知の処方集の中に見いだすことができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  （第１８版，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ  （１９９０））、特にその中のＢｌｏｃｋ，  Ｌａｗｒｅｎｃｅによる第８７章。こうした製剤には、例えば、粉末、ペ−スト、軟膏、ゼリ−、ワックス、オイル、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）含有小胞（リポフェクチンなど）、ＤＮＡコンジュゲ−ト、無水吸収ペ−スト、水中油型および油中水型エマルション、エマルションカ−ボワックス（さまざまな分子量のポリエチレングリコ−ル）、半固体ジェル、およびカ−ボワックスを含む半固体混合物が含まれる。上記の混合物はどれも、本明細書に記載の治療および治療法に適しているが、ただし、製剤中の活性薬剤がその製剤化によって不活性化されず、かつ製剤が投与経路と生理学的に適合しかつそれに耐えられることを条件とする。さらに、薬剤師には周知の製剤、賦形剤および担体に関する追加の情報については、Ｂａｌｄｒｉｃｋ  （２０００）  Ｒｅｇｕｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ３２：２１０−２１８；  Ｗａｎｇ  （２０００）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  ２０３：１−６０；  Ｃｈａｒｍａｎ  （２０００）  Ｊ．
Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ８９：９６７−９７８；  およびＰｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  ＰＤＡ  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ５２：２３８−３１１、ならびにそれらの中の引用文献を参照されたい。
【０１３９】
本発明はまた、薬学的に許容される担体、希釈剤および／またはアジュバントと混合された、本明細書に記載の少なくとも１種の薬剤（例えば、単離されたＨＥＲ−３結合タンパク質）および少なくとも１種の他の活性薬剤（例えば、別のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合する薬剤または化学療法化合物）の、過剰増殖性疾患（例えば、ＨＥＲ−３と関連した疾患）の診断、予防または治療用の医薬組成物の製造における使用に関する。その医薬組成物は本明細書に記載した医薬組成物であり、また、その過剰増殖性疾患は本明細書に記載した過剰増殖性疾患であり得る。
【０１４０】
治療用組成物を製剤化し、その後投与する方法は、当業者に周知である。投薬は一般に、治療すべき疾患状態の重症度と応答性に依存し、治療コ−スは数日から数ヶ月まで、または治癒が得られるか、疾患状態の軽減が達成されるまで続く。当業者は最適用量、投与方法および反復率をル−チンに決定できる。最適用量は個々のポリペプチドの相対的効力によって変化し、一般的にはｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルで有効と判明したＥＣ５０に基づいて推定される。典型的には、投与量は０．１μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、１日１回以上、週２回、週１回、月１回、またはより少ない頻度でさえ、投与可能である。治療の成功に続いて、疾患状態の再発を防ぐために患者に維持療法を受けさせることが望ましいかもしれない。
【０１４１】
医薬組成物は、局所治療または全身治療が望まれているかに応じて、また、治療すべき領域に応じて、いくつかの方法で投与することができる。投与は、例えば、局所的（例えば、経皮的、舌下、眼、鼻腔内）；経肺的（例えば、粉末またはエアロゾルの吸入または吹送による）；経口的；または非経口的（例えば、皮下、髄腔内、脳室内、筋肉内、もしくは腹腔内注射による、または点滴による）であり得る。投与は迅速に（例えば、注射により）、またはある期間にわたって（例えば、遅い注入または徐放性製剤の投与により）行うことができる。中枢神経系の組織を治療する場合は、ＨＥＲ−３結合タンパク質を、一般にポリペプチドの血液脳関門通過を促進することができる１種以上の物質と共に、脳脊髄液に注射または点滴することによって投与することが可能である。
【０１４２】
非経口、髄腔内または脳室内投与用の組成物および製剤には無菌の水溶液が含まれ、それはまた、緩衝剤、希釈剤および他の適当な添加剤（例えば、浸透促進剤、キャリア化合物および他の薬学的に許容される担体）をも含むことができる。
【０１４３】
医薬組成物には、限定するものではないが、溶液、エマルション、水性懸濁液、およびリポソ−ム含有製剤が含まれる。これらの組成物は、例えば、前もって形成された液体、自己乳化性固体および自己乳化性半固体を含むさまざまな成分から生成することができる。エマルションは、多くの場合、緊密に混合されて互いに分散された２つの不混和性の液相からなる二相系である；一般的に、エマルションは油中水（ｗ／ｏ）または水中油（ｏ／ｗ）型のいずれかである。エマルション製剤は、それらの処方の容易さと、可溶化、吸収およびバイオアベイラビリティの効果のため、治療薬の経口送達に広く使用されている。
【０１４４】
ＨＥＲ結合薬剤は、薬学的に許容される塩、エステル、もしくはこのようなエステルの塩、または、ヒトを含めた動物に投与したとき、生物学的に活性な代謝産物またはその残基を（直接または間接的に）提供することができるいずれか他の化合物をさらに包含し得る。したがって、例えば、本発明は、小分子およびポリペプチドの薬学的に許容される塩、プロドラッグおよびこのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、ならびに他の生物学的均等物を提供する。用語「プロドラッグ」は、不活性な形態で調製される治療薬であって、内在性酵素もしくは他の化学物質の作用および／または条件によって体内でまたはその細胞内で活性形態（すなわち、薬物）に変換される治療薬のことである。用語「薬
学的に許容される塩」とは、本明細書で提供されるポリペプチドの生理学的および薬学的に許容される塩（すなわち、毒物学的影響を与えることなく親ポリペプチドの所望の生物学的活性を保持する塩）をさす。薬学的に許容される塩の例には、限定するものではないが、陽イオン（例；ナトリウム、カリウム、カルシウム、またはスペルミンなどのポリアミン類）により形成される塩；無機酸（例：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、または硝酸）により形成される酸付加塩；および有機酸（例：酢酸、クエン酸、シュウ酸、パルミチン酸、またはフマル酸）により形成される塩が含まれる。
【０１４５】
本明細書で提供するいくつかの実施形態は、（ａ）１種以上のＨＥＲ−３結合薬剤；（ｂ）別のＨＥＲファミリ−メンバ−に結合する１種以上の薬剤；および（ｃ）異なる作用機序で機能する１種以上の他の薬剤を含有する医薬組成物を包含する。例えば、（ｃ）の１種以上の薬剤は（ｂ）のそれらと交換可能である；抗炎症薬（非ステロイド系抗炎症薬およびコルチコステロイドを含むが、これらに限定されない）および抗ウイルス薬（リバビリン、ビダラビン、アシクロビルおよびガンシクロビルを含むが、これらに限定されない）を組成物中に含めることができる。他の非ポリペプチド系薬剤（例えば、化学療法薬）もまた本発明の範囲内である。このような組合せの化合物は一緒にまたは連続して用いることができる。
【０１４６】
組成物はさらに、医薬組成物中に通常見られる他の補助成分を含むことができる。こうして、本組成物には、適合性の薬学的活性物質、例えば、鎮痒薬、収斂剤、局所麻酔薬もしくは抗炎症薬など；または本明細書で提供される組成物のさまざまな剤形を物理的に処方する上で有用な追加の物質、例えば、色素、香味剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤および安定剤などを含めることができる。さらに、本組成物は補助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩類、緩衝剤、着色剤、香味剤、および芳香物質と混合することができる。添加する場合は、しかし、そのような物質が本明細書で提供される組成物中のポリペプチド成分の生物学的活性を不当に妨げてはならない。処方物は必要に応じて滅菌することができる。
【０１４７】
単位剤形で便利に提示される医薬製剤は、製薬業界で周知の従来技術に従って調製することができる。そうした技術は、活性成分（すなわち、本明細書で提供される、ＨＥＲファミリ−に結合する薬剤）を１種以上の所望の薬学的担体または賦形剤と会合させる工程を含む。一般的に、製剤は、活性成分を液状担体または微細な固形担体またはその両方と均質かつ密接に会合させ、その後、必要ならば、その製品を成形することによって調製することができる。製剤は必要に応じて滅菌することができるが、ただし、その滅菌方法が製剤中に含まれるポリペプチドの有効性を妨げないことを条件とする。
【０１４８】
本明細書に記載の組成物は、錠剤、カプセル剤、液状シロップ剤、ソフトジェル剤、座剤、および注腸剤など（しかし、これらに限定されない）の多くの可能な剤形に製剤化することができる。本組成物はまた、水性、非水性または混合媒体中の懸濁液剤として製剤化することも可能である。水性懸濁液剤は、その懸濁液の粘度を高める物質、例えば、カルボキシメチルセルロ−スナトリウム、ソルビト−ル、および／またはデキストランを含むことができる。懸濁液剤はまた、安定剤を含んでもよい。
【０１４９】
ＨＥＲ結合タンパク質は、包装材料と組み合わせて、ＨＥＲ−３関連疾患を治療するためのキットとして販売することができる。製品を製造するための成分および方法は周知である。その製品は上記セクションに記載した１種以上のポリペプチドおよび化合物を組み合わせることができる。さらに、製品は、例えば、緩衝剤、または免疫複合体の形成を減らすためのもしくは免疫複合体形成の減少をモニタリングするための他のコントロ−ル試薬を含みうる。ポリペプチドがＨＥＲ−３関連疾患の治療に有効であるかを記述する説明書をそうしたキットに含めてもよい。第１の薬剤、第２の薬剤およびさらなる薬剤のいず
れも、ナノ粒子もしくはリポソ−ム、または他の適切な形態で送達できる可能性がある。
【０１５０】
６．  方法
本発明はまた、ＨＥＲ−３の発現と関連した疾患および症状を治療または予防するための方法を提供する。例えば、その方法は、被験者（例えば、ヒトなどの哺乳類）または被験者由来の生物学的サンプルを、本明細書に記載する第２の薬剤と組み合わせたＨＥＲ−３結合タンパク質と接触させることを含んでなる。サンプルはＨＥＲ−３の発現を示す細胞、例えば腫瘍細胞、血液サンプルまたは他の適当なサンプルであり得る。いくつかの実施形態では、前記接触がｉｎ  ｖｉｖｏで起こり、例えば、ＨＥＲ−３結合薬剤とＨＥＲファミリ−の別のメンバ−に結合する第２の薬剤とを含む組成物がそれを必要とする被験者に投与されるときに起こる。本明細書に記載の方法を用いて治療できるＨＥＲ−３の発現と関連した疾患または症状には、例えば過剰増殖性疾患が含まれ、過剰増殖性疾患としては例えば以下のものがある：乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、黒色腫、転移性乳癌、非小細胞肺癌、類表皮癌、線維肉腫、黒色腫、上咽頭癌、扁平上皮細胞癌、および他のＨＥＲ−３−陽性、−発現性または−過剰発現性の癌。
【０１５１】
本明細書中で用いる用語「治療または予防」とは、治療的処置と予防的または防止的処置の両方を意味し、これらは、標的とする病態または障害の影響を阻止する、遅延させる、または軽減させるために使用することができる。予防または治療が必要な者には、障害をすでにもつ者だけでなく、障害を発症する可能性がある者、または障害を予防すべきである者が含まれる。予防または治療が必要な患者は哺乳類の患者（すなわち、ヒト、家畜および動物園用、スポ−ツ用または愛玩用の動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む、哺乳類として分類される任意の動物）であり得る。いくつかの実施形態において、治療が必要な患者はヒト患者である。
【０１５２】
ＨＥＲ−３の発現と関連した疾患または症状を予防または治療するための方法は、それを必要とする患者に、本明細書に記載する少なくとも１種のＨＥＲ−３結合薬剤および別のＨＥＲファミリ−メンバ−に対する少なくとも１種の他の薬剤、または化学療法化合物（例えば、別のＨＥＲファミリ−に結合するおよび／または阻害する第２の薬剤と交換可能な、上記の「追加の／さらなる」薬剤のうちの少なくとも１種）を投与することを含むことができる。そうした治療は、例えば、異常な細胞増殖、移動または浸潤を抑制することができる。ＨＥＲ−３に対する薬剤と少なくとも１種の他の薬剤は、同時に（例えば、それらが同一の組成物中に含まれる場合、または共通の輸液バッグに入れて混合することにより）、または別々に（例えば、連続的に）投与することができる。本明細書に記載の方法を用いて治療できるＨＥＲ−３の発現と関連した疾患または症状には、例えば、本明細書中で挙げた過剰増殖性疾患が含まれる。予防または治療が必要な患者は哺乳類（例えば、ヒト、家畜、または動物園用、スポ−ツ用もしくは愛玩用の動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、またはウサギ）であり得る。いくつかの場合には、患者がヒト患者である。
【０１５３】
本明細書中で用いる用語「有効量」とは、治療しているＨＥＲ−３関連疾患の１つ以上の症状または臨床的特徴を低下または安定化させる薬剤の量のことである。例えば、本明細書に記載の組成物の有効量の投与は、腫瘍増殖の進行を減速させるか、腫瘍のサイズを縮小させるか、またはＨＥＲ−３もしくはＨＥＲ−３応答性バイオマ−カ−（例えば、Ａｋｔ、ＨＥＲ−２、ＥＲＫ、またはＥＧＦ−Ｒ）の活性化を減少させることができる。その減速または減少は、以前の値と比べたときの低下（例えば、症状または特徴の５％、１０％、２０％、２５％、または２５％超の低下）であり得る。いくつかの実施形態では、「有効量」が安定した疾患をもたらすことがある。
【０１５４】
潜在的な結合タンパク質治療薬の、例えば上述した製剤による、古典的な投与方式に加えて、新たに開発された投与様式も有用であり得る。例えば、外科的切除後の原発性脳腫瘍の治療のための１３１Ｉ標識モノクロ−ナル抗体の局所投与が報告されている。さらに、モノクロ−ナル抗体およびそれらのフラグメントの直接定位脳内注入もまた、臨床的におよび前臨床的に研究されつつある。頸動脈内高浸透圧注入は、薬物をコンジュゲ−トしたモノクロ−ナル抗体を用いて原発性脳悪性腫瘍をタ−ゲティングする実験的戦略である。
【０１５５】
上述したように、投与される薬剤の用量はさまざまな要因により変化しうる。それらには、例えば、薬剤の性質、腫瘍のタイプ、および投与経路が含まれる。本発明の方法がどのような特定の用量にも限定されないことは強調されるべきである。適切な用量を決定するための方法は当技術分野で公知であり、本明細書の実施例に記載されるものを包含する。
【０１５６】
治療される症状のタイプおよび重症度に応じて、約２０ｍｇ／ｋｇまでの各ＨＥＲ結合抗体は、それを必要とする患者に、例えば１回以上の個別の投与によりまたは連続注入により、投与することができる。典型的な１日投与量は、上記の要因に応じて、約１μｇ／日〜約１００ｍｇ／日またはそれ以上であり得る。治療すべき症状に応じて、数日間またはそれ以上にわたる反復投与の場合は、疾患症状の望ましい抑制が生じるまで治療を継続することができる。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法は、被験者由来の生物学的サンプル中の特定のマ−カ−（例えば、ＨＥＲ−３）を分析して、その被験者がＨＥＲ−３発現と関連した疾患をもつかどうかを確認する、ことを含めることができる。そうした方法は、ＨＥＲ−３と関連した疾患をもつ被験者を選択するために使用される。前記方法では、そのような患者のスクリ−ニングが有効ではなさそうな治療を回避できるので、分析ステップを投与ステップに先立って行うことができる。こうして、いくつかの場合には、本明細書で提供される方法は、上記のような過剰増殖性疾患の患者におけるＨＥＲ−３抗原濃度を測定するために、または患者の過剰増殖性疾患のステ−ジを診断するために、細胞内または細胞上のＨＥＲ−３抗原を検出することをさらに含めることができる。検査対象の被験者の過剰増殖性疾患の進行を診断するために、または治療のコ−スに対する被験者の応答を特徴づけるために、被験者から血液サンプルを採取して、サンプル中に存在するＨＥＲ−３抗原の濃度を測定することが可能である。そのようにして得られた濃度を用いることで、その値がどの濃度範囲に入るかを特定することができる。その特定された範囲を、診断を受けた被験者のさまざまな集団において特定された進行のステ−ジまたは治療のステ−ジと相関させ、それによって検査対象の被験者のステ−ジを得ることができる。患者から得られた疾患（例えば、癌）組織の生検もまた、存在するＨＥＲ−３抗原の量を評価するために用いることができる。疾患組織中に存在するＨＥＲ−３抗原の量は、例えば、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、または本明細書に記載のＨＥＲ−３抗体を用いた抗体アレイを用いて、評価可能である。診断上関心のある他のパラメ−タ−は、ＨＥＲ−３タンパク質の二量体化状態および二量体化パ−トナ−、ならびにそれおよびそのパ−トナ−の活性化状態である。これらのパラメ−タ−を測定するためのタンパク質解析方法は当技術分野で周知であり、とりわけ、ウエスタンブロットおよび免疫沈降法、ＦＡＣＳ解析、化学的架橋、生物発光共鳴エネルギ−移動（ＢＲＥＴ）、蛍光共鳴エネルギ−移動（ＦＲＥＴ）など（例えば、Ｐｒｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１８：２５５−２６８）、またはｅＴａｇ技術（ＷＯ  ０５／０３７０７、ＷＯ  ０４／０９１３８４、およびＷＯ  ０４／０１１９００）である。
【０１５８】
いくつかの場合において、本明細書で提供される方法は、処置の治療結果をモニタリングするための１つ以上のステップを含むことができる。例えば、被験者をその疾患の症状
についてモニタリングして、症状の軽減が起こっているかを判定することができる。また、例えば、起こり得る治療の副作用について、被験者をモニタリングすることもできる。モニタリングは投与ステップの後で行うことができ、いくつかの実施形態では、複数回（例えば、２回以上投薬される場合には、投与と投与の間に）行うことができる。こうした方法は、例えば、本明細書に記載の治療方法の有効性と安全性を評価するために使用され得る。
【０１５９】
本発明について以下の実施例でさらに説明することにするが、これらの実施例は特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０１６０】
実施例１  ＨＥＲ−３抗原及び細胞株の調製
組み換えＨＥＲ−３タンパク質を調製した。ＨＥＲ−３の配列（ＧｅｎｅＢａｎｋ  受入れ番号ＮＭ  ００１９８２）に基づくプライマ−：順方向プライマ−：５’−ＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＡＧＣＣＴＡＧＧＧＧＣ−３’（配列番号：２３３）；  逆方向プライマ−：５’−ＧＣＴＣＴＡＧＡＴＴＡＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＴＴＧＴＣＣＴＡＡＡＣＡＧＴＣＴＴＧ−３’  （配列番号：２３４）を用いて、ｐｃＤＮＡ３−ＨＥＲ−３（完全長ヒトＨＥＲ−３を有する発現ベクタ−、Ｗａｌｌａｓｃｈ  ｅｔ
ａｌ．  （１９９５）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １４：４２６７−４２７５）からポリメラ−ゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりＨＥＲ−３の細胞外領域（ＥＣＤ）ｃＤＮＡをクロ−ニングした。
【０１６１】
ＰＣＲ産物をＢａｍＨ１及びＸｂａＩを用いて消化し、ＢａｍＨ１及びＸｂａＩで消化したｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に連結させた。ＣａＰＯ４法を用いて、プラスミドをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトさせた。Ｎｉ−ＮＴＡアフィニティ−クロマトグラフィ−により、採取馴化培地からＨＥＲ−３−ＨＩＳ融合タンパク質を精製した。
【０１６２】
レトロウイルス遺伝子導入により、ＲａｔＩ  ＨＥＲ−３細胞を発生させた。手短に言えば、ＧＰ＋ＥＰ８６細胞（３×１０５）は、６０ｍｍ培養ディスク上に播種され、リン酸カルシウム法を用いて、２μｇ／ｍＬのｐ１ＸＳＮベクタ−又はｐ１ＸＳＮ−ＨＥＲ−３ｃＤＮＡ（Ｃ．Ｗａｌｌａｓｃｈ，  ＰｈＤ  Ｔｈｅｓｉｓ，  Ｍａｘ−Ｐｌａｎｃｋ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，
Ｇｅｒｍａｎｙ）をトランスフェクトされた。２４時間後、培地を新鮮な培地で置換し、ＧＰ＋ＥＰ８６細胞を４−８時間インキュベ−トした。それから、Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ（４ｍｇ／ｍＬ；Ａｌｄｒｉｃｈ）の存在下、４−１２時間、高力価のｐＬＸＳＮ又はｐＬＸＳＮ−ＨＥＲ−３、ｐウイルス（＞１×１０６  Ｇ４１８  ｃ．ｆ．ｕ．／ｍＬ；１０のｍ．ｏ．ｉ．）を放出するＧＰ＋ＥＰ８６細胞の上清とともに、サブコンフルエントのＲａｔ１  ＨＥＲ−３細胞（６ｃｍ皿につき２×１０５細胞）をインキュベ−トした。培地を交換した後、Ｇ４１８を用いるＲａｔＩ細胞の選択を開始した。通常、２１日間の選択の後、安定なクロ−ンを採取した。
【０１６３】
実施例２  ヒト癌細胞株中でのＨＥＲ−３の発現
ヒト癌形成におけるＨＥＲ−３の役割を解明するために、ヒト癌細胞株のパネルにおいて、ＨＥＲ−３の発現を定量化した。癌細胞株は、ＡＴＣＣによって推奨されているとおりに増殖させた。詳細には、ＰＢＳ中の１０ｍＭ  ＥＤＴＡを用いて１０５細胞を採取し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、３％ＦＣＳ、０．４％アジド）で１回洗浄し、９６ウェルの丸底プレ−ト上に播種した。上清を除去するために、１０００ｒｐｍで３分間、細胞を遠心し、次いで、α−ＨＥＲ−３抗体２Ｄ１Ｄ１２（ＷＯ  ０３０１３６０２）（３μｇ／ｍＬ）とともに再懸濁した。細胞懸濁液を氷上で１時間静置し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗
浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中に１：５０で希釈した二次抗体（１００μＬ／ウェル）ロバ抗ヒト−ＰＥ（Ｊａｃｋｓｏｎ）とともに再懸濁した。氷上及び暗所で、細胞懸濁液を３０分間静置し、ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄し、分析した（ＦＡＣＳ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）。ＨＥＲ−３は、種々の乳房、大腸、上皮、黒色腫、鼻咽頭、卵巣、膵臓、及び前立腺の細胞株を含む多くのヒト癌細胞株で発現した。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図面を参照。本特許出願公開は、参照することにより、その全体が、本明細書に組み込まれる。
【０１６４】
実施例３  免疫処置及び力価測定
実施例１に記載されているとおりに調製されたＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質及びＣ３２細胞（ヒト悪性黒色腫；ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１５８５）を抗原として使用した。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス（系統ＸＭＧ１及びＸＭＧ４、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を順次免疫処置することによって、ＨＥＲ−３に対するモノクロ−ナル抗体を産生させた。全ての注射に対し、足蹠を介して、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物に免疫処置を施した。各注射の総容量は、５０μＬ／マウス、２５μＬ／足蹠であった。
【０１６５】
コ−ホ−ト番号１（１０匹のＸＭＧ１マウス）に関して、最初の免疫処置は、マウス当り、ＴＩＴＥＲＭＡＸ  ＧＯＬＤ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ，  Ｏａｋｖｉｌｌｅ，  ＯＮ）が１：１（ｖ／ｖ）で混合されたＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質１０μｇを用いて行った。その後の５回の追加免疫は、発熱物質を含まないＤ−ＰＢＳ中のアラムゲル（ａｌｕｍ  ｇｅｌ）（Ｓｉｇｍａ，Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ）１００μｇと１：１（ｖ／ｖ）で混合されたＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質１０μｇを用いて行った。６回目の追加免疫は、ＴＩＴＥＲＭＡＸ  ＧＯＬＤ（登録商標）と１：１（ｖ／ｖ）で混合されたＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質１０μｇで構成された。７回目の注射は、アラムゲル１００μｇと１：１（ｖ／ｖ）で混合されたＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質１０μｇで構成された。最後の追加免疫は、アジュバントなしで、発熱物物質を含まないＤＰＢＳ中のＨＥＲ−３ＥＣＤタンパク質１０μｇを用いて行った。このプロトコルでは、第０日、４日、７日、１１日、１５日、２０日、２４日及び２９日目にＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウスを免疫し、第３３日目に融合を行った。４回目の追加免疫後の１３日目に及び６回目の追加免疫後１９日目に、後眼窩採血操作により、２回の採血を行った。コ−ホ−ト番号２は存在しなかった。コ−ホ−ト番号３（１０匹のＸＭＧ１マウス）及びコ−ホ−ト番号４（１０匹のＸＭＧ４マウス）については、最初の注射は、マウス当り、ＴＩＴＥＲＭＡＸ  ＧＯＬＤ（登録商標）が１：１（ｖ／ｖ）で混合された発熱物質を含まないＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（ＤＰＢＳ）中の１０７個のＣ３２細胞を用いて行った。次の４つの追加免疫は、マウス当り、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ２５μｇ及び１０μｇのＣｐＧと混合された発熱物質を含まないＤＰＢＳ中の１０７個のＣ３２細胞を用いて行った。６回目の追加免疫は、マウス当り、ＴＩＴＥＲＭＡＸ  ＧＯＬＤ（登録商標）が１：１（ｖ／ｖ）で混合された発熱物質を含まないＤＰＢＳ中の１０７個のＣ３２細胞を用いて行った。７回目、８回目、９回目の追加免疫は、マウス当り、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ２５μｇ及びＣｐＧ１０μｇと混合された発熱物質を含まないＤＰＢＳ中の１０７個のＣ３２細胞を用いて行った。１０回目から１４回目の追加免疫は、マウス当り、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓ２５μｇ及びＣｐＧ１０μｇと混合された発熱物質を含まないＤＰＢＳ中のＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質５μｇを用いて行った。最後の追加免疫は、アジュバントなしで、発熱物物質を含まないＤＰＢＳ中のＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質５μｇを用いて行った。コ−ホ−ト番号３及び４の両方で、第０日、３日、７日、１１日、１４日、１７日、２１日、２４日、２８日、３３日、３５日、３８日、４２日及び４５日目にマウスを免疫し、第４９日目に融合を行った。４回目の追加免疫後１２日目に、６回目の追加免疫後１９日目に、及び１２回目の追加免疫後４０日目に、後眼窩採血操作により、３回の採血を行った。
【０１６６】
力価による、採取のための動物の選択
コ−ホ−ト番号１に関しては、免疫したマウスから得た血清中の抗ＨＥＲ−３抗体力価は、ＨＥＲ−３  ＥＣＤタンパク質に対するＥＬＩＳＡによって測定した。各ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物の特異的力価は、６５０ｎｍでの光学密度から測定され、下記表１に示されている。力価の値は、血清の最大希釈の逆数であり、ＯＤの読み取りは、バックグラウンドの２倍である。従って、数値が高くなるほど、ＨＥＲ−３ＥＣＤに対する液性免疫応答は大きくなる。
【０１６７】
【表１】
2020011980.tif 000003
【０１６８】
コ−ホ−ト番号３及び４に関しては、免疫操作をしたマウスから得た血清中の抗ＨＥＲ−３抗体力価は、Ｒａｔ１／ＨＥＲ−３（抗原陽性細胞株）細胞及びＲａｔ１／ｐＬＳＸＮ（抗原陰性細胞株）細胞を用いたＦＡＣＳによって測定した。デ−タは、表２および３に示されており、血清試料の系列希釈による、細胞抗ＨＥＲ−３細胞染色の幾何平均（ＧｅｏＭｅａｎ）蛍光強度として表されている。
【０１６９】
【表２】
2020011980.tif 000004
【０１７０】
【表３】
2020011980.tif 000005
【０１７１】
実施例４  リンパ球の回収、Ｂ細胞の単離、融合及びハイブリド−マの作製
免疫処置をしたマウスを犠牲にし、各コ−ホ−トからリンパ節を採集し、プ−ルした。ＤＭＥＭ中で磨り潰すことによってリンパ球系細胞を解離させて、組織から細胞を放出させ、細胞をＤＭＥＭ中に懸濁させた。細胞を計数し、０．９ｍＬ  ＤＭＥＭ／１億リンパ球を細胞ペレットに添加して、穏やかに、但し、完全に、細胞を再懸濁した。１億細胞当りＣＤ９０＋磁気ビ−ズ１００μＬを用いて、４℃で１５分間、磁気ビ−ズとともに細胞をインキュベ−トすることによって、細胞を標識した。最大１０８個の陽性細胞（又は最大２×１０９個の全細胞）を含有する磁気標識された細胞懸濁液をＬＳ＋カラムにかけ、ＤＭＥＭでカラムを洗浄した。全ての流出物を、ＣＤ９０陰性画分として集めた（これらの細胞の多くは、Ｂ細胞であると予想された。）。
【０１７２】
上記フラクションから洗浄され、濃縮されたＢ細胞と、ＡＴＣＣ（Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ１５８０）から購入された非分泌性骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（Ｋｅａｒｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２３；１５４８−１５５０）とを、１：１の比で混合することによって、融合を実施した。８００ｇでの遠心によって、細胞混合物を穏やかにペレット状にした。上清を完全に除去した後、２分未満の
間、２〜４ｍＬのプロナ−ゼ溶液（ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ，  Ｃａｔ．Ｎｏ．５３７０２；ＰＢＳ中０．５ｍｇ／ｍＬ）で細胞を処理した。次いで、酵素活性を停止させるために、３〜５ｍＬのＦＢＳを添加し、電気的細胞融合溶液ＥＣＦＳ（０．３Ｍショ糖、Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｓ７９０３、０．１ｍＭ酢酸マグネシウム、Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｍ２５４５、０．１ｍＭ酢酸カルシウム、Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｃ４７０５）を用いて、４０ｍＬの総容積になるように懸濁液を調節した。遠心後、上清を除去し、４０ｍＬ  ＥＣＦＳ中に細胞を再懸濁した。この洗浄工程を繰り返し、２×１０６細胞／ｍＬの濃度になるように、再度、ＥＣＦＳ中に細胞を再懸濁した。
【０１７３】
細胞融合装置、モデルＥＣＭ２００１、Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡを用いて、電気的細胞融合を行った。融合チャンバ−のサイズは２．０ｍＬであり、以下の機器設定を用いた。アラインメント条件：電圧：５０Ｖ、時間：５０秒、膜破壊：電圧：３０００Ｖ、時間：３０μ秒、融合後保持時間：３秒。
【０１７４】
ＥＣＦ後、無菌条件下で、融合チャンバ−から細胞懸濁液を取り出し、同じ容量のハイブリド−マ培養培地（ＤＭＥＭ（ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、１５％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）；Ｌグルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン、ＯＰＩ（オキサロ酢酸、ピルベ−ト、ウシインシュリン）（全てＳｉｇｍａから入手）及びＩＬ−６（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）が補充されている）を含有する無菌チュ−ブ中に移した。３７℃で１５〜３０分間、細胞をインキュベ−トし、次いで、４００ｇで５分間遠心した。ハイブリド−マ選択培地（０．５×ＨＡが補充されたハイブリド−マ培養培地（Ｓｉｇｍａ，  Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ９６６６））の小容量中に、細胞を静かに再懸濁し、計５×１０６個Ｂ細胞／９６ウェルプレ−ト及び２００μＬ／ウェルの最終プレ−ティングを基礎にして、より多くのハイブリド−マ選択培地を用い、容量を適切に調節した。細胞を静かに混合し、９６ウェルプレ−ト中にピペットで添加し、増殖させた。第７日又は１０日目に、培地の半分を除去し、細胞にハイブリド−マ選択培地を再度与えた。
【０１７５】
実施例５  ＥＬＩＳＡによる候補抗体の選択
培養から１４日後に、精製ｈｉｓタグＨＥＲ−３  ＥＣＤを用いるＥＬＩＳＡ及びヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ−ＨＲＰ（Ｃａｌｔａｇ  Ｉｎｃ．，  Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｈ１０５０７、使用した濃度は、１：２０００希釈であった。）を用いるＥＬＩＳＡによる無関係なｈｉｓタグタンパク質に対するカウンタ−スクリ−ニングによって、コ−ホ−ト番号１（コ−ホ−ト番号１のマウスを、任意に融合番号１及び２に分割した。）から得られたハイブリド−マ上清のＨＥＲ−３特異的抗体に対する一次スクリ−ニングを行い、ＥＬＩＳＡプレ−ト上に固定化されたＨＥＲ−３  ＥＣＤへのヒトＩｇＧ結合を検出した。一次スクリ−ニングに基づく陽性ハイブリド−マ細胞増殖ウェルから得た古い培養上清を取り除き、そして新鮮なハイブリド−マ培地を用いて、ＨＥＲ−３陽性ハイブリド−マ細胞を懸濁し、２４ウェルプレ−トに移した。培養から２日後には、これらの上清は、二次的確認スクリ−ニングのために使用した。ＨＥＲ−３特異的完全ヒトＩｇＧｋ抗体に対する二次的確認スクリ−ニングでは、ヒトγ鎖検出のためのヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ−ＨＲＰ（Ｃａｌｔａｇ  Ｉｎｃ．，  Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｈ１０５０７、１：２０００希釈を使用する。）及びヒトκ軽鎖検出のためのヤギ抗ｈＩｇκ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｃａｔ．Ｎｏ．２０６０−０５）という検出用抗体の２つの組を用いたＥＬＩＳＡによって、第一のスクリ−ニングにおいて陽性であったものをスクリ−ニングした。コ−ホ−ト番号１から、９１の完全ヒトＩｇＧ／κＨＥＲ−３特異的モノクロ−ナル抗体が生成した。
【０１７６】
実施例６  ＦＭＡＴ／ＦＡＣＳによる候補抗体の選択
培養から１４日後に、コ−ホ−ト番号３及び番号４から得られたハイブリド−マ（融合番号３及び番号４）上清を、ＦＭＡＴによって、ＨＥＲ−３−特異的モノクロ−ナル抗体
に関してスクリ−ニングした。一次スクリ−ニングにおいて、１：１０最終希釈のハイブリド−マ上清を、ヒトＨＥＲ−３を発現するＲａｔ１−Ｈｅｒ３細胞及び４００ｎｇ／ｍＬのＣｙ５が結合したヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，  Ｃａｔ．Ｎｏ．１０９−１７６−０９８）とともに、室温で６時間インキュベ−トした。細胞への抗体及び検出抗体の結合を、ＦＭＡＴ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。細胞への抗体の非特異的結合は、親Ｒａｔ１細胞への抗体の結合によって測定した。融合物番号３の一次スクリ−ニングから、ＨＥＲ−３−特異的抗体を産生する計４２０のハイブリド−マを選択した。同じＦＭＡＴプロトコ−ルを用いて、これらの増大した培養物からの上清を再度試験し、これらのうちの２６２が、ＨＥＲ−３発現細胞へ特異的に結合することが確認された。融合物番号４の一次スクリ−ニングから、ＨＥＲ−３特異的抗体を産生する計１９３のハイブリド−マを選択した。ＦＡＣＳによって、これらの増大した培養物からの上清物を試験し、これらのうちの１３８が、ＨＥＲ−３発現細胞へ特異的に結合することを確認した。ＦＡＣＳ確認アッセイでは、２％ＦＢＳを含有するＰＢＳ中において、１：２希釈で、１時間、４０℃で、ハイブリド−マ上清とともに、Ｒａｔ１−ＸＨＥＲ３細胞と親Ｒａｔ１細胞（陰性対照として）をインキュベ−トした。ＰＢＳでの洗浄後、２．５μｇ／ｍＬのＣｙ５が結合したヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異抗体（ＪＩＲ＃１０９−１７６−０９８）及び５μｇ／ｍＬ  ＰＥ−結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトκ特異抗体（ＳＢ＃２０６３−０９）によって、細胞への抗体の結合を検出した。ＰＢＳでの洗浄によって、非結合抗体を除去した後、１：４の希釈で、ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ＃５１−２０９０ＫＺ）によって、細胞を固定し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒによって分析した。
【０１７７】
実施例７  クロ−ニングのためのハイブリド−マの選択
精製組換え細胞外ドメイン（たとえば、Ｒ＆Ｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮから入手可能）を用いるＥＬＩＳＡにおける、ＨＥＲ−１（ＥＧＦ−Ｒ）、ＨＥＲ−２及びＨＥＲ−４を上回るＨＥＲ−３に対する特異性、異なるＨＥＲファミリ−メンバ−を発現するヒト腫瘍細胞株のＦＡＣＳベ−スの分析並びにＨＥＲ−３陽性細胞に対するＦＡＣＳ染色での平均蛍光強度のバックグラウンドの５倍を超える増加に基づいて、ハイブリド−マのクロ−ニングのために、コ−ホ−ト番号１及び２から得た抗体を選択した。これらの基準に基づいて、限界希釈細胞プレ−ティングによって、計２３のハイブリド−マ株をクロ−ニングのために選択した。
【０１７８】
ＨＥＲ−１（ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ−２及びＨＥＲ−４を上回るＨＥＲ−３に対する特異性に加え、他の３つの基準に基づいて、ハイブリド−マクロ−ニングのために、コ−ホ−ト番号３及び４から得た抗体を選択した。第一の基準は、ＨＥＲ−３のＬ２ドメイン内に含まれるエピト−プを用いた抗体に対するＥＬＩＳＡスクリ−ニングであった（以下の実施例８を参照。）。
【０１７９】
第二の基準は、ＦＡＣＳを基礎にしたアッセイにおける、ＨＥＲ−３発現細胞へのビオチン化されたヘレグリンαの結合の中和であった。ＳＫＢＲ−３細胞を採取し、培地中で洗浄し、遠心によってペレットにし、培地中に再懸濁した。再懸濁された細胞を、９６ウェルプレ−ト中に分注した。細胞をペレットにするために、プレ−トを遠心した。排出ハイブリド−マ上清中の試験抗体を、２５μＬ／ウェルで添加し、抗体を結合させるために、氷上で１時間静置した。１０ｎＭヘレグリンα（Ｒ＆Ｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）溶液５０μＬを、５ｎＭの最終濃度となるように、各ウェルに添加し、氷上で１．５時間静置した。１５０μＬＰＢＳ中で細胞を洗浄し、遠心によってペレットにし、上清を除去した。１０μｇ／ｍＬのヤギ抗ＨＲＧαポリクロ−ナル抗体５０μＬ中に細胞を再懸濁し、４５分間、氷上で静置した。ＰＢＳ  ２００μＬ中で細胞を洗浄し、遠心によってペレットにし、上清を除去した。５μｇ／ｍＬのウサギＣｙ５標識抗ヤギポリクロ−ナル抗体プラス１０μｇ／ｍＬの７ＡＡＤの溶液５０μＬを添加し、１５分間、氷上に静置した。ＰＢ
Ｓ２００μＬ中で細胞を洗浄し、遠心によってペレットにし、上清を除去した。ＦＡＣＳ緩衝液１００μＬ中に細胞を再懸濁し、ＦＡＣＳ中で読み取った。ヘレグリンαの結合を低下させた試験ＨＥＲ−３抗体は、最も低い蛍光強度を有するものであった。陽性対照として、マウスＨＥＲ−３  ｍＡｂ（１０５．５）又はヒトＩｇＧ１  ＨＥＲ−３  ｍＡＢ、Ｕ１−４９の１０，０００ｎｇ／ｍＬから１６ｎｇ／ｍＬまでの１：５系列希釈を使用した。陰性対照は、ヘレルギンα単独、細胞単独、ヤギ抗ヘレグリンαポリクロ−ナル抗体単独及びＣｙ５標識されたウサギ抗ヤギポリクロ−ナル抗体単独であった。
【０１８０】
第三の基準は、ＨＥＲ−３発現細胞株を用いるＦＡＣＳにおける、親和性に対する相対的順位付け及び／又はより高い相対的平均蛍光強度であった。親和性に対する相対順位付けは、ＨＥＲ−３特異的抗体濃度を標準化し、以下のように、限界抗原ＥＬＩＳＡから得られたデ−タに対してプロットすることによって行った。
【０１８１】
高抗原ＥＬＩＳＡを用いる抗原特異的抗体濃度の標準化
ＥＬＩＳＡ法を用いて、抗原特異的抗体の濃度に対して上清を標準化した。平行して滴定された濃度既知のコ−ホ−ト番号１から得られた２つの抗ＨＥＲ−３ヒトＩｇＧ１抗体を用いて、標準曲線を作成し、コ−ホ−ト番号３及び４から得られた試験ハイブリド−マ上清中の抗原特異的抗体の量を標準と比較した。このようにして、各ハイブリド−マ培養物中のヒトＨＥＲ−３  ＩｇＧ抗体の濃度を推定した。
【０１８２】
４℃で一晩放置しながら、５０μＬ／ウェルで、Ｃｏｓｔａｒ  ３３６８培地結合プレ−ト上に、１×ＰＢＳ／０．０５％アジ化ナトリウム中の８μｇ／ｍＬでニュ−トラアビジンをコ−トすることによって、ニュ−トラアビジンプレ−トを作製した。翌日、１×ＰＢＳ／１％スキムミルクでプレ−トをブロックした。１×ＰＢＳ／１％スキムミルク中の５００ｎｇ／ｍＬの光ビオチン化されたｈｉｓタグＨＥＲ−３  ＥＣＤを、室温で１時間インキュベ−トすることによって、ニュ−トラアビジンプレ−トに結合させた。１×ＰＢＳ／１％スキムミルク／０．０５％アジ化物中に、１：３１の出発希釈から１：７５６８の最終希釈まで、１：２．５系列希釈でハイブリド−マ上清を、５０μＬ／ウェルで添加し、次いで、室温で２０時間インキュベ−トした。未知の各々に対するＯＤの読み取りが確実にアッセイの直線域内に得られるようにするために、系列希釈を使用した。次に、二次検出抗体である、１×ＰＢＸ／１％スキムミルク中の４００ｎｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ  ＨＲＰを、５０μＬ／ウェルで添加した。室温で１時間後、再度、プレ−トを水で５回洗浄し、一成分ＴＭＢ基質５０μＬを各ウェルに添加した。各ウェルに１Ｍ塩酸５０μＬを添加することによって、３０分後に反応を停止させ、４５０ｎｍの波長でプレ−トを読み取った。１０００ｎｇ／ｍＬから０．０６ｎｇ／ｍＬまで１：２で系列希釈された、コ−ホ−ト番号１から得られた２つのＩｇＧ１  ＨＥＲ−３  ｍＡｂから標準曲線を作成し、上記プロトコ−ルを用いてＥＬＩＳＡ中で評価を行った。未知の各々に関しては、各試料中のヒトＨＥＲ−３  ＩｇＧの濃度を推定するために、アッセイの直線域中のＯＤの読み取りを使用した。
【０１８３】
限定された抗原分析は、他の全ての抗原特異的抗体との比較において、Ｂ細胞培養上清中に調製された抗原特異的抗体の親和性を順位付けする方法である。抗原の極めて少量のコ−ティングの存在下では、最高の親和性の抗体のみが、平衡状態で、何れかの検出可能なレベルまで結合できるはずである。（例えば、国際公開公報ＷＯ  ０３／０４８７３０Ａ２を参照。）。この場合、コ−ホ−ト番号１から得られた２つのｍＡｂ（何れも、濃度既知及びＫＤ既知）を、アッセイにおける標準性能評価基準として使用した。
【０１８４】
４℃で一晩放置しながら、５０μＬ／ウェルで、Ｃｏｓｔａｒ  ３３６８培地結合プレ−ト上に、１×ＰＢＳ／０．０５％アジ化ナトリウム中の８μｇ／ｍＬのニュ−トラアビジンをコ−トすることによって、ニュ−トラアビジンプレ−トを作製した。翌日、１×Ｐ
ＢＳ／１％スキムミルクで、プレ−トをブロックした。室温で１時間、１×ＰＢＳ／１％スキムミルク中、１２５、６２．５、３１．２、１５．６及び７．８ｎｇ／ｍＬという５つの濃度で、ビオチン化されたｈｉｓタグＨＥＲ−３ＥＣＤ（５０μＬ／ウェル）を９６ウェルのニュ−トラアビジンプレ−トに結合させた。各プレ−トを水で５回洗浄した。１×ＰＢＳ／１％スキムミルク／０．０５％アジド中に１：３１希釈されたハイブリド−マ上清を、５０μＬ／ウェルで添加した。振とう器上、室温で２０時間、インキュベ−トした後、ｄＨ２Ｏで５回、プレ−トを再度洗浄した。次に、１×ＰＢＳ／１％スキムミルク中の４００ｎｇ／ｍＬの二次検出抗体である、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ  ＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダ−ゼ）を５０μＬ／ウェルで添加した。室温で１時間後、ｄＨ２Ｏで、プレ−トを再度５回洗浄し、一成分ＴＭＢ基質５０μＬを各ウェルに添加した。各ウェルに１Ｍ塩酸５０μＬを添加することによって、３０分後に反応を停止させ、４５０ｎｍの波長でプレ−トを読み取った。直線域内にＯＤ値を与える抗原濃度から得られるＯＤ読み取りを、デ−タ解析のために使用した。
【０１８５】
特異的抗体濃度を比較推定する（詳細については、上記参照）高い抗原デ−タを、限定された抗原ＯＤに対してプロットすると、比較的高い親和性抗体（例えば、結合した抗体が、限定された抗原アッセイでは、より高いＯＤを有したが、上清中には、より少量のＩｇＧ  ＨＥＲ−３抗体を有する。）を示した。これらの組のアッセイで最も性能が優れていた３３個の抗体に対するコ−ホ−ト番号３及び４から得たハイブリド−マは、限定希釈ハイブリド−マプレ−ティングによるクロ−ニングに進んだ。
【０１８６】
また、ＲａｔＩ／ｐＬＸＳＮ及びＲａｔＩ／ＨＥＲ−３細胞のＨＥＲ−３発現のＦＡＣＳ分析は、類似の結果を示した（内在性ラットエピト−プとの交叉反応性なし）。詳細には  、ＰＢＳ中の１０ｍＭ  ＥＤＴＡを用いて１×１０５細胞を採取し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、３％ＦＣＳ、０．４％アジド）で１回洗浄し、９６ウェルの丸底プレ−ト上に播種した。上清を除去するために、１０００ｒｐｍで３分間、細胞を遠心し、次いで、特異的なＨＥＲファミリ−抗体（３μｇ／ｍＬ）とともに再懸濁した。細胞懸濁液を氷上で４５分間静置し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中に１：５０希釈した二次抗体（１００μＬ／ウェル）ロバ抗ヒト−ＰＥ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，  ＰＡ）とともに再懸濁した。氷上及び暗所で、細胞懸濁液を３０分間静置し、ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄し、分析した（ＦＡＣＳ，  Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）。
【０１８７】
実施例８  抗ＨＥＲ−３抗体の構造的分析
以下の議論は、ここに記載されたようにして調製された抗体に関する構造情報を提供する。本発明の抗体の構造を分析するために、特定のハイブリド−マから重鎖及び軽鎖断片をコ−ドする遺伝子が増幅された。配列決定は、以下のようにして行った。
【０１８８】
逆転写ポリメラ−ゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を用いて、９６ウェルプレ−ト中の個々のハイブリド−マクロ−ンから、ＶＨ及びＶＬ転写物を増幅した。Ｆａｓｔ−Ｔｒａｃｋキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、約２×１０５個のハイブリド−マ細胞からポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡを単離した。各ハイブリド−マに対して、４つのＰＣＲ反応（軽鎖カッパ（κ）に対して２つ、及びガンマ重鎖（γ）に対して２つ）を実施した。増幅のために、ＱＩＡＧＥＮ  ＯｎｅＳｔｅｐ室温−ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｃａｔ．Ｎｏ．２１０２１２）を使用した。一組の室温ＰＣＲ反応では、Ｃκ又はＣγ遺伝子のＣＨ１領域のコンセンサスに対応するアンチセンス配列特異的プライマ−を使用し、室温酵素（Ｏｍｎｉｓｃｒｉｐｔ及びＳｅｎｓｉｓｃｒｉｐｔ）の混合物を用いてｃＤＮＡを合成した。５０℃で１時間、逆転写を実施した後、高い特異性及び感度のために、ＨｏｔＳｔａｒＴａｑ  ＤＮＡ  ポリメラ−ゼによるｃＤＮＡのＰＣＲ増幅を行った。各ＰＣＲ反応は、５’センスプライマ−の混合物を使用した。プライマ−配列は、Ｖｂａｓｅウェブサイト
（ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）で入手可能なＶＨ及びＶＫのリ−ダ−配列に基づいた。
【０１８９】
９４℃で１５分間の初期ホットスタ−トでＰＣＲ反応を実行した後、９４℃３０秒間（変性）、６０℃３０秒間（アニ−リング）及び７２℃１分間（伸長）の４０サイクルを行った。
【０１９０】
ＰＣＲ産物を精製し、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ＢｉｇＤｙｅ  タ−ミネ−タ−サイクルシ−ケンシングレディリアクションキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用し、順方向及び逆方向ＰＣＲプライマ−を用いて配列を直接決定した。Ｐｒｉｓｍ色素タ−ミネ−タ−シ−ケンシングキット及びＡＢＩ３７７シ−ケンシングマシンを用いて、両鎖の配列を決定した。
【０１９１】
配列分析：
ＨＥＲ３抗体のヒトＶｈｅａｖｙ及びＶκｃＤＮＡ配列の分析は、Ａｂｇｅｎｉｘ社内ソフトウェア（５ＡＳ）を用いて、ＨＥＲ−３配列とヒト生殖細胞系Ｖｈｅａｖｙ及びＶκ配列とを一列に並べることによって行った。本ソフトウェアによって、Ｖ遺伝子、Ｄ遺伝子及びＪ遺伝子の使用並びに組換え接合部におけるヌクレオチド挿入及び体細胞突然変異が確認された。体細胞突然変異を確認するために、アミノ酸配列もコンピュ−タシミュレ−ションで作製された。市販の配列分析ソフトウェア並びにヒトＶ、Ｄ及びＪ遺伝子の配列に関する入手可能な情報、例えばＶｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）を用いて、同様の結果を得ることができた。
【０１９２】
ｍＡｂ  Ｕ１−５９の分子クロ−ニング
抗体Ｕ１−５９を分泌するハイブリド−マ系列を含む、多数のハイブリド−マ系列を含有する組織培養ウェルから全ＲＮＡを抽出した。３’−Ｃ−γプライマ−とともに、５’−リ−ダ−ＶＨファミリ−特異的プライマ−を用いて、重鎖可変領域を増幅した。ＶＨ４プライマ−を用いて、主要なバンドが増幅され、他のバンドは見られなかった。ＶＨ４−３４γ断片は、ヒトγ１定常領域遺伝子とインフレ−ムにあるｐＣＤＮＡ発現ベクタ−中にクロ−ニングされた。
【０１９３】
３’μ定常領域プライマ−とともに５’ＶＨファミリ−特異的プライマ−を用いて、ＩｇＭ重鎖可変領域を増幅した。ＶＨ２プライマ−を用いて、主要なバンドが増幅され、他のバンドは見られなかった。ＶＨ２−５μ断片は、ヒトμ定常領域遺伝子とインフレ−ムにあるｐＣＤＮＡ発現ベクタ−中にクロ−ニングされた。Ｖκ鎖を増幅し、配列を決定した。４つのκ鎖ＲＴ−ＰＣＲ産物が同定された。産物を配列決定し、コンピュ−タでの翻訳を介した配列分析後に、産物の３つのみがオ−プン・リ−ディング・フレ−ムを有した。（１）ＶＫ１Ａ３−ＪＫ２、（２）ＶＫ１Ａ２０−ＪＫ３及び（３）Ｂ３−ＪＫ１としてのＶκ遺伝子の使用に基づいて同定されたオリゴクロ−ナルＵ１−５９ハイブリド−マウエルから、これらの３つの機能的κ鎖をクロ−ニングした。全てのＶκは、ヒトκ軽鎖定常領域遺伝子とインフレ−ムにあるｐＣＤＮＡ発現ベクタ−中にクロ−ニングされた。
【０１９４】
トランスフェクション：
全部で６つの重鎖／κ軽鎖対に対し、一過性トランスフェクションにおいて、κ鎖の各々とともに、各重鎖をトランスフェクトした。Ａ２０κ鎖とのγ鎖のトランスフェクションは、乏しい抗体発現を与えたのに対して、Ａ２０κ鎖がμ鎖とともに同時トランスフェクションした場合には、抗体は全く分泌せず、検出もされなかった。ＨＥＲ−３結合アッセイには、計３つのＩｇＧ  ｓｕｐｓ及び２つのＩｇＭ  ｓｕｐｓが利用可能であった。
【０１９５】
【表３Ａ】
2020011980.tif 000006
【０１９６】
ＶＨ４−３４及びＢ３κ鎖からなるＩｇＧ１ｍＡｂを用いたＦＡＣＳにおいて、ＨＥＲ−３＋細胞株への結合活性が検出された。他のＶＨ／Ｖκの組み合わせは、ＨＥＲ−３＋細胞株を用いたＦＡＣＳにおいて、バックグラウンドを上回る蛍光シグナルを与えなかった。
【０１９７】
抗ＨＥＲ−３抗体の結合競合
ＨＥＲ−３への結合に関して競合するＨＥＲ−３抗体のクラスタ−を評価するために、「Ｊｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２８８，  ９１−９８」に発表されているように、多重競合抗体ビニングを行った。コ−ホ−ト番号１由来の検査されたＨＥＲ−３抗体は、結合に対する競合に基づいて、５つのビンにクラスタ−化された。
【０１９８】
【表３Ｂ】
2020011980.tif 000007
【０１９９】
抗ＨＥＲ−３抗体のエピト−プの特性評価
本発明のヒト抗ＨＥＲ−３抗体のエピト−プの特性を評価した。まず、還元され、変性され、ＨＥＲ−３−Ｈｉｓタグ化され、精製されたＥＣＤタンパク質のドットブロット分析が、検査された抗ＨＥＲ−３抗体（Ｕ１−５９、Ｕ１−６１、Ｕ１−４１、Ｕ１−４６、Ｕ１−５３、Ｕ１−４３、Ｕ１−４４、Ｕ１−４７、Ｕ１−５２、Ｕ１−４０、Ｕ１−４９）による結合の不存在を示し、全てがジスルフィド結合の還元に対して感受性を有するエピト−プを有することが実証され、また全てが不連続なエピト−プを有することが示唆された。次に、ＨＥＲ−３細胞外ドメインの以下の４つのドメインへの分割に基づいて、様々なヒト−ラットＨＥＲ−３キメラ分子を操作することによって、ＨＥＲ−３分子中の所定のドメインに抗体をマッピングした。
１）Ｌ１（Ｄ１）：マイナ−なリガンド結合ドメイン、
２）Ｓ１（Ｄ２）：第一のシステインリッチドメイン、
３）Ｌ２（Ｄ３）：主要リガンド結合ドメイン、及び
４）Ｓ２（Ｄ４）：第二のシステインリッチドメイン。
【０２００】
ＲＡＴ１−ＨＥＲ−３細胞から、ヒトＨＥＲ−３  ｃＤＮＡの細胞外ドメイン（ＥＣＲ）を増幅した。ラット肝臓ＲＮＡからのＲＴ−ＰＣＲによってラットＨＥＲ−３  ｃＤＮ
Ａを増幅し、配列決定によって確認した。ヒト及びラットＨＥＲ−３のＥＣＤを発現するｃＤＮＡを、Ｖ５−Ｈｉｓ融合タンパク質として、哺乳動物発現ベクタ−中にクロ−ニングした。ヒトＨＥＲ−３  ＥＣＤから得られるドメインを、Ｍｆｅ１、ＢｓｔＸ１及びＤｒａＩＩＩ内部制限部位を使用してラットＨＥＲ−３  ＥＣＤによって提供される骨格中に入れた。この手段によって、様々なキメララット／ヒトＨＥＲ−３  ＥＣＤ  ＨＩＳ融合タンパク質（アミノ酸１〜１６０、１６１〜３５８、３５９〜５７５、１〜３５８、３５９〜６０４）を構築し、ＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞の一過性トランスフェクションにより発現させた。ヒトＨＥＲ−３に対するラットポリクロ−ナル抗体を用いて、構築物の発現を確認した。分泌されたキメラＥＣＤへの結合に対して、ヒトモノクロ−ナル抗体をＥＬＩＳＡにおいて試験した。
【０２０１】
抗体Ｕ１−５９を含むヒト抗体の２つが、ラットＨＥＲ−３と交叉反応した。結合ドメインを割り当てるために、ＨＥＲ−３のＬ１−Ｓ１細胞外ドメインの発現をコ−ドするプラスミドＤＮＡをトランスフェクトしたＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞の上清から精製されたＬ１−Ｓ１−Ｖ５ｈｉｓタグタンパク質からなるＨＥＲ−３の末端切断形態に対して、これらのｍＡｂを試験した。ｍＡｂ  Ｕ１−５９は、ＥＬＩＳＡ中のＬ１−Ｓ１タンパク質に結合したので、そのエピト−プがＬ１−Ｓ１中に存在することが示唆される。ｍＡｂ  ２．５．１は、Ｌ１−Ｓ１タンパク質に結合しなかったので、そのエピト−プがＬ２−Ｓ２中に存在することが示唆される。ｍＡｂ−ＨＥＲ−３  ＥＣＤ複合体のチップ上タンパク質分解消化物を用い、表面エンハンス型レ−ザ−脱離イオン化飛行時間型質量分析装置（ＳＥＬＤＩ  ｔｉｍｅ  ｏｆ  ｆｌｉｇｈｔ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）により、抗体Ｕ１−５９のさらなるマッピングを行った。
【０２０２】
ＳＥＬＤＩを用いたＵ１−５９エピト−プのマッピング
ｍＡｂ−ＨＥＲ−３  ＥＣＤ複合体のチップ上タンパク質分解消化物を用い、表面エンハンス型レ−ザ−脱離イオン化飛行時間型質量分析装置により、抗体Ｕ１−５９のさらなるマッピングを行った。ＰＳ２０プロティンチップアレイに、プロテインＡを共有結合させ、ｍＡｂ  Ｕ１−５９を捕捉するために使用した。次いで、ＨＥＲ−３−Ｈｉｓ精製抗原とともに、ＰＳ２０プロティンチップとモノクロ−ナル抗体の複合体をインキュベ−トした。次に、Ａｓｐ−Ｎの高濃度を用いて、抗体抗原複合体を消化した。チップを洗浄すると、チップ上の抗体に結合されたＨＥＲ−３ペプチドのみが保持された。ＳＥＬＤＩによってエピト−プを決定し、断片の質量によってエピト−プを同定した。同定された６８１４  Ｄ断片は、ＨＥＲ−３−ｈｉｓ  ＥＣＤの部分的消化物から生成される２つの可能な予想されたペプチドに対応する。重複するペプチドの両者は、ドメインＳ１にマッピングされる。ＨＥＲ−３欠失構築物への結合と、ＳＥＬＤＩの結果を合わせることにより、エピト−プは、残基２５１〜３２５にマッピングされた。
【０２０３】
本発明のヒト抗ＨＥＲ−３  ｍＡｂによって認識されるＨＥＲ−３の細胞外部分中における結合ドメインの位置が、表４に要約されている。エピト−プドメインマッピングの結果は、抗体競合結合競合ビンから得られた結果と合致しており、ＨＥＲ−３への結合に関し互いに交叉競合した抗体は、ＨＥＲ−３上の同じドメインにマッピングされる。
【０２０４】
【表４】
2020011980.tif 000008
【０２０５】
実施例９：抗体のカノニカルクラスの決定
抗体構造は、各免疫グロブリン鎖の超可変領域に対する「カノニカルクラス」の観点から記載されている（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６：９０１−１７）。様々な免疫グロブリンのＦａｂ及びＶＬ断片の原子構造は、それらのアミノ酸配列とそれらの抗原結合部位の三次元構造との関係を決定するために分析された。Ｃｈｏｔｈｉａらは、それらのパッキング、水素結合又は異常なφ、ψ若しくはω立体構造を採る能力を通して、超可変領域の主鎖立体構造に主として関与する残基は相対的に少ないことを見出した。これらの残基は、超可変領域内及び保存されたβシ−トフレ−ムワ−ク中の部位に存在することが見出された。未知の構造を有する免疫グロブリンの配列を調べることによって、Ｃｈｏｔｈｉａらは、多くの免疫グロブリンが、公知の構造の１つとサイズが類似する超可変領域を有すること、さらに、観察された立体構造に関与する部位に同一の残基を含有することを示す。
【０２０６】
彼らの発見は、これらの超可変領域が公知の構造中のものに近い立体構造を有することを暗示した。超可変領域の５つに関しては、立体構造のレパ−トリ−は、別個の構造クラスの比較的少数に限定されるようである。これらの一般的に存在する超可変領域の主鎖立体構造は、「カノニカル構造」と名付けられた。Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｎａｔｕｒｅ  （１９８９）  ３４２：８７７−８３）及び他の者（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２６３：８００−１５）によるさらなる研究は、抗体の６つの超可変領域のうち少なくとも５つに対して、主鎖立体構造の小さなレパ−トリ−が存在することを確認した。
【０２０７】
上記した各抗体のＣＤＲを分析して、それらのカノニカルクラスを決定した。既知のとおり、カノニカルクラスは、抗体軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３の他に、抗体重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２に対してのみ割り当てられている。下表は、分析の結果を要約している。カノニカルクラスのデ−タは、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤ
Ｒ２−ＬＣＤＲ３の形態であり、「ＨＣＤＲ」は重鎖ＣＤＲを表し、「ＬＣＤＲ」は軽鎖ＣＤＲを表す。従って、例えば、１−３−２−１−５のカノニカルクラスは、カノニカルクラス１に属するＨＣＤＲ１、カノニカルクラス３に属するＨＣＤＲ２、カノニカルクラス２に属するＬＣＤＲ１、カノニカルクラス１に属するＬＣＤＲ２及びカノニカルクラス５に属するＬＣＤＲ３を有する抗体を表す。
【０２０８】
各カノニカルクラスに対して定義されたアミノ酸と、抗体中のアミノ酸の７０％又はそれ以上の同一性が存在する特定のカノニカルクラスに割り当てがなされた。各抗体に対して定義されたアミノ酸は、例えば、上に引用されたＣｈｏｔｈｉａらによる文献中に見出すことができる。表５及び表６は、ＨＥＲ−３抗体の各々に対するカノニカルクラスデ−タを報告する。７０％未満の同一性が存在した場合には、各ＣＤＲの長さ及びデ−タの全体に基づいて、適切なカノニカルクラスの最良の推定が為されることを示すために、カノニカルクラスの割り当てにアスタリスク（「＊」）が付されている。同じＣＤＲ長さを有する、合致したカノニカルクラスが存在しない場合には、「ｓ１８」（ＣＤＲが１８のサイズであることを意味する。）のように、文字ｓ及び数字で、カノニカルクラスの割り当てに印が付されている。重鎖又は軽鎖の１つに対して入手可能な配列デ−タが存在しない場合には、カノニカルクラスは、「Ｚ」でマ−クされる。
【０２０９】
【表５】
2020011980.tif 000009
【０２１０】
表６は、クラス当りの抗体の数の分析である。左の欄に表記された特定のカノニカルクラスを有する抗体の数が、右の欄に示されている。１つの鎖配列デ−タを欠如し、従って、カノニカル割り当てにおいて「Ｚ」を有する４つのｍＡｂは、このカウント中に含まれていない。
【０２１１】
最も一般的に見られる構造は、３−１−２−１−１である。重鎖及び軽鎖配列の両方を有する４１のｍＡｂのうち２１が、この組み合わせを有していた。
【０２１２】
【表６】
2020011980.tif 000010
【０２１３】
実施例１０  抗体親和性の測定
間接ＦＡＣＳ  Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析によって、本発明の抗ＨＥＲ−３抗体の親和性測定を行った。従って、ＰＢＳ中の１０ｍＭ  ＥＤＴＡを用いて１０５個の目的の細胞又はＳＫ−Ｂｒ３細胞を採取し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、３％ＦＣＳ、０．４％アジド）で１回洗浄し、９６ウェルの丸底プレ−ト上に播種した。１０００ｒｐｍで３分間、細胞を遠心して、上清を除去し、次いで、α−ＨＥＲ−３抗体（３μｇ／ｍＬ）又はＦＡＣＳ緩衝液中の２０μｇ／ｍＬヒトモノクロ−ナル抗体から開始して、１：２の希釈工程で希釈された抗体希釈物（１００μＬ／ウェル）を用いて再懸濁した。細胞懸濁液を氷上で１時間静置し、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に１：５０希釈した二次抗体（１００μＬ／ウェル）ロバ抗ヒトＰＥ（Ｊａｃｋｓｏｎ）を用いて再懸濁した。氷上及び暗所で、細胞懸濁液を３０分間静置し、ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄し、分析した（ＦＡＣＳ，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）。ＦＡＣＳ  Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析に従って、各測定に対して蛍光平均を計算した。各蛍光平均からバックグラウンド染色（＝第一の抗体なし）を差し引いた。ｘ値＝蛍光平均及びｙ値＝蛍光平均／ｍＡｂの濃度（ｎＭ）を用いてＳｃａｔｃｈａｒｄプロットを作成した。ＫＤは、一次方程式の１／ｍの絶対値と解した。以下の表７には、このようにして選択されたある種の抗体に対する親和性測定が記載されている。
【０２１４】
【表７】
2020011980.tif 000011
【０２１５】
実施例１１  抗ＨＥＲ−３抗体は、ＨＥＲ−３受容体のエンドサイト−シスを誘導する。
本発明のＨＥＲ−３は、ＨＥＲファミリ−によって媒介される細胞シグナル伝達の重要なゲ−トキ−パ−としての役割を通じて、過剰増殖性疾患の開始及び進行に影響を与えることができる因子として同定されてきた。従って、ＨＥＲ−３が受容体インタ−ナリゼ−ションよって細胞表面／膜から効果的に除去されれば、細胞シグナル伝達が、従って、悪性腫瘍における細胞の形質転換及び／又は維持が、最終的に減少又は抑制され得る。
【０２１６】
抗ＨＥＲ−３抗体がＨＥＲ−３の加速されたエンドサイト−シスを誘導できるかどうかを調べるために、抗ＨＥＲ−３抗体とともに細胞を０．５及び４時間インキュベ−トした後に、細胞表面上のＨＥＲ−３分子の相対量を比較した。２４ウェル皿中の正常な増殖培地中に３×１０５個の細胞を播種し、一晩増殖させた。表記時間にわたって、３７℃で、通常の増殖培地中の１０μｇ／ｍＬ抗ＨＥＲ−３  ｍＡｂとともに細胞をプレインキュベ−トした。１０ｍＭ  ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離させ、洗浄緩衝液（ＰＢＳ、３％ＦＣＳ、０．０４％アジド）中の１０μｇ／ｍＬ抗ＨＥＲ−３  ｍＡｂとともに、４℃で４５分間インキュベ−トした。洗緩衝液で細胞を２回洗浄し、１：１００希釈されたロバ抗ヒト−ＰＥ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ）とともに、４℃で４５分間インキュベ−トし、洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＥＸＰＯ）によって分析した。コントロ−ルで処理したサンプルに対する抗ＨＥＲ−３抗体で処理したサンプルの平均蛍光強度の減少に基づいて％インタ−ナリゼ−ションを計算した。これらの実験は、細胞の抗ＨＥＲ−３抗体での処理は、受容体のインタ−ナリゼ−ションにつながることを実証した。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図５を参照。
【０２１７】
実施例１２  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体による、ヒト癌細胞ＳＫＢｒ３へのリガンド結合の阻害
細胞をベ−スとしたアッセイにおいて、ＨＥＲ−３へのリガンド結合を阻害する本発明
の抗ＨＥＲ−３抗体の能力を定量するために、放射性リガンド競合実験を行った。従って、変化する抗体濃度で、氷上で３０分間静置した４×１０５個のＳＫ−ＢＲ−３細胞を用いて、ＨＥＲ−３受容体結合アッセイを行った。各ウェルに、１．２５ｎＭ［Ｉ１２５］−α−ＨＲＧ［Ｉ１２５］−β−ＨＲＧを添加し、氷上で２時間、インキュベ−ションを続けた。プレ−トを５回洗浄し、風乾し、シンチレ−ションカウンタ−で数えた。抗体は、内在性ＨＥＲ−３を発現する細胞への、［１２５Ｉ］−α−ＨＲＧ／［１２５Ｉ］−β−ＨＲＧの結合を特異的に低下させることができた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図６ａ−６ｅを参照。
【０２１８】
実施例１３  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体による、リガンド誘導ＨＥＲ−３リン酸化の阻害
本発明の抗体が、リガンドβ−ＨＲＧによって媒介されるＨＥＲ−３の活性化をブロックできるかどうかを調べるために、ＥＬＩＳＡ実験を行った。リガンドによって媒介されるＨＥＲ−３の活性化は、受容体チロシンのリン酸化の増加によって検出した。
【０２１９】
第１日：３７℃で４時間、０．１Ｍ酢酸中の２０μｇ／ｍＬコラ−ゲンＩで１×９６ウェル皿をコ−トした。通常の増殖培地中に、２．５×１０５個の細胞を播種した。
【０２２０】
第２日：無血清培地１００μＬ中で、２４時間、細胞を飢餓状態にした。
【０２２１】
第３日：抗ＨＥＲ−３    ｍＡｂｓ１０μｇ／ｍＬとともに、３７℃で１時間、細胞をプレインキュベ−トした。次いで、β−ＨＲＧ−ＥＧＦドメイン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）３０ｎｇ／ｍＬで、１０分間処理した。培地を除去し、室温で１時間、ＰＢＳ中の４％ホルムアルデヒド溶液で細胞を固定した。ホルムアルデヒド溶液を除去し、洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で細胞を洗浄した。洗浄緩衝液中の１％Ｈ２Ｏ２、０．１％ＮａＮ３で細胞をクエンチし、室温で２０分間静置した。次いで、４℃で５時間、ＮＥＴ−ゼラチンでブロックした。４℃で一晩、一次抗体ホスホ−ＨＥＲ−３（Ｔｙｒ１２８９）（ポリクロ−ナルウサギ；Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃４７９１；１：３００）を添加した。
【０２２２】
第４日：洗浄緩衝液で、プレ−トを３回洗浄した後、ＰＢＳ中に１：３０００希釈された抗ウサギ−ＰＯＤとともに静置した。各ウェルに０．５％ＢＳＡを添加し、室温で１．５時間静置した。洗浄緩衝液で３回、ＰＢＳで１回、プレ−トを洗浄した。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ，  Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を添加し、６５０ｎｍでモニタ−した。２５０ｎＭ  ＨＣｌ  １００μＬの添加によって反応を停止し、Ｖｍａｘプレ−トリ−ダ−（Ｔｈｅｒｍｏ  ＬａｂＳｙｓｔｅｍｓ）を使用して、６５０ｎｍの参照波長を用いて吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
【０２２３】
これらの実験は、受容体チロシンのリン酸化の減少によって示されるように抗ＨＥＲ−３抗体が、リガンドによって媒介されるＨＥＲ−３の活性化を低下させ得ることを実証した。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図７ａを参照。
【０２２４】
ｍＡｂ  Ｕ１−５３が、リガンド誘導ＨＥＲ−３の活性化を抑制する効力を検査するために、２４時間、ＭＣＦ−７細胞を飢餓状態とし、３７℃で１時間、ｍＡｂ  Ｕ１−５３とともにインキュベ−トし、１０分間、１０ｎＭ    ＨＲＧ−βで刺激した。ライセ−トを１Ｂ４（マウス抗ＨＥＲ−３ｍＡｂ）ＥＬＩＳＡプレ−トに移し、抗体４Ｇ１０を用いて、ＨＥＲ−３のリン酸化を分析した。ＨＥＲ−３のリン酸化は、０．１４ｎＭのＩＣ５０で、用量依存的な様式で、ほぼ完全に阻害された。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図７ｂを参照。
【０２２５】
実施例１４  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体による、リガンド誘導ｐ４２／ｐ４４ＭＡＰキナ−ゼ
リン酸化の阻害
本発明の抗体が、リガンドβ−ＨＲＧによって媒介されるｐ４２／ｐ４４ＭＡＰ−キナ−ゼの活性化をブロックできるかどうかを調べるために、次のＥＬＩＳＡ実験を行った。リガンドによって媒介されるＨＥＲ−３の活性化は、タンパク質（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）のリン酸化の増加によって検出した。
【０２２６】
第１日：３７℃で４時間、０．１Ｍ酢酸中の２０μｇ／ｍＬコラ−ゲンＩで１×９６ウェル皿をコ−トした。通常の増殖培地中に、３×１０５個の細胞を播種した。
【０２２７】
第２日：無血清培地１００μＬ中で、２４時間、細胞を飢餓状態にした。
【０２２８】
第３日：抗ＨＥＲ−３  ｍＡＢ  ５μｇ／ｍＬとともに、３７℃で１時間、細胞をプレインキュベ−トし、次いで、β−ＨＲＧ−ＥＧＦドメイン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）２０ｎｇ／ｍＬで、１０分間処理した。溶媒を除去し、室温で１時間、ＰＢＳ中の４％ホルムアルデヒド溶液で細胞を固定した。ホルムアルデヒド溶液を除去し、洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で細胞を洗浄した。細胞緩衝液中の１％Ｈ２Ｏ２、０．１％ＮａＮ３で細胞をクエンチし、室温で２０分間静置し、次いで、４℃で５時間、ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡでブロックした。４℃で一晩、一次抗体ホスホ−ｐ４４／ｐ４２  ＭＡＰキナ−ゼ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（ポリクロ−ナルウサギ；Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃９１０１；１：３０００）を添加した。
【０２２９】
第５日：洗浄緩衝液で、プレ−トを３回洗浄した後、ＰＢＳ中に１：５０００希釈された抗ウサギ−ＨＲＰとともにインキュベ−トした。各ウェルに０．５％ＢＳＡを添加し、室温で１．５時間静置した。洗浄緩衝液で３回、ＰＢＳで１回、プレ−トを洗浄した。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ，  Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を添加し、６５０ｎｍでモニタ−した。２５０ｎＭ  ＨＣｌ  １００μＬの添加によって反応を停止し、Ｖｍａｘプレ−トリ−ダ−（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａｂ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、６５０ｎｍの参照波長を用い、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。これらの実験は、本発明の抗体は、減少したリン酸化によって示されたように、リガンド媒介ｐ４２／ｐ４４  ＭＡＰ−キナ−ゼの活性化を低下させることができたことを示した。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図８を参照。
【０２３０】
実施例１５  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体による、β−ＨＲＧ誘導ホスホ−ＡＫＴリン酸化の阻害
以下のＥＬＩＳＡ実験において、本発明者らは、本発明の抗ＨＥＲ−３抗体が、リガンドβ−ＨＲＧによって媒介されるＡＫＴキナ−ゼの活性化をブロックすることができるかどうかを調べた。リガンドによって媒介されるＡＫＴの活性化は、タンパク質（Ｓｅｒ４７３）のリン酸化の増加によって検出された。
【０２３１】
第１日：３７℃で４時間、０．１Ｍ酢酸中の２０μｇ／ｍＬコラ−ゲンＩで１×９６ウェル皿をコ−トした。通常の増殖培地中に、３×１０５個の細胞を播種した。
【０２３２】
第２日：無血清培地１００μＬ中で、２４時間、細胞を飢餓状態にした。
【０２３３】
第３日：抗ＨＥＲ−３  ｍＡｂｓ  ５μｇ／ｍＬとともに、３７℃で１時間、細胞をプレインキュベ−トし、次いで、β−ＨＲＧ−ＥＧＦドメイン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）２０ｎｇ／ｍＬで１０分間処理した。培地を除去し、室温で１時間、ＰＢＳ中の４％ホルムアルデヒド溶液で細胞を固定した。ホルムアルデヒド溶液を除去し、洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で細胞を洗浄した。洗浄緩衝液中の１％Ｈ２Ｏ２、０．１％ＮａＮ３で細胞をクエンチし、室温で２０分間静置し、次いで、４℃で５時間、ＰＢＳ
／０．５％ＢＳＡでブロックした。４℃で一晩、一次抗体ホスホ−Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３）（ポリクロ−ナルウサギ；Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃９２１７；１：１０００）を添加した。
【０２３４】
第４日：洗浄緩衝液で、プレ−トを３回洗浄した後、ＰＢＳ中に１：５０００希釈した抗ウサギ−ＨＲＰとともにインキュベ−トし、各ウェルに０．５％ＢＳＡを添加し、室温で１．５時間インキュベ−トした。洗浄緩衝液で３回、ＰＢＳで１回、プレ−トを洗浄した。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ，  Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を添加し、６５０ｎｍでモニタ−した。２５０ｎＭ  ＨＣｌ１００μＬの添加によって反応を停止し、Ｖｍａｘプレ−トリ−ダ−（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａｂ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、６５０ｎｍの参照波長を用い、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。本発明の抗ＨＥＲ−３抗体は、リン酸化の減少によって示されたように、β−ＨＲＧ媒介ＡＫＴを低下させることができた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図９を参照。
【０２３５】
実施例１６  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体による、α−ＨＲＧ／β−ＨＲＧ媒介ＭＣＦ７細胞増殖の阻害
本発明の抗体がＨＧＲ−刺激細胞増殖を阻害する能力を決定するために、インビトロ実験を実施した。９６ウェルプレ−ト上のＦＣＳ含有培地中に、一晩、２０００個のＭＣＦ７細胞を播種した。３７℃で１時間、０．５％ＦＣＳを有する培地中で希釈された抗体とともに、細胞を４つ組みでプレインキュベ−トした。抗体溶液にリガンドを直接添加することによって、３０ｎｇ／ｍＬのα−ＨＲＧ又は２０ｎｇ／ｍＬのβ−ＨＲＧ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で細胞を刺激した後、７２時間、増殖させた。ＡＬＡＭＡＲＥＢＬＵＥ（商標）（ＢＩＯＳＯＵＲＣＥ）を添加し、３７℃で、暗所にてインキュベ−トした。３０分毎に、５９０ｎｍでの吸光度を測定した。アラマ−ル・ブル−の添加から９０分後に、デ−タを採取した。これらの研究は、代表的な抗体がヒト癌細胞中でのＨＲＧ誘導細胞増殖を阻害できることを示した。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１０を参照。
【０２３６】
実施例１７  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体による、β−ＨＲＧ誘導ＭＣＦ７細胞移動の阻害
本発明の抗体が細胞移動をブロックするかどうかを調べるために、移動実験を行った。細胞懸濁液に抗体の表記量を添加し、３７℃で４５分間、両者をインキュベ−トすることによって、血清飢餓状態のＭＣＦ７細胞をプレインキュベ−トした。次いで、コラ−ゲンＩによって被覆されたトランスウェル（ｔｒａｎｓｗｅｌｌｓ）（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ，
８μｍ細孔）の最上部チャンバ−中に、細胞懸濁液（５０，０００細胞）５００μＬを置いた。単独の、又はリガンドβ−ＨＲＧ−ＥＧＦドメイン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有する７５０μＬ培地（ＭＥＭ、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、ペニシリン−ストレプトマイシン、０．１％ＢＳＡ、ウシ胎児血清なし）を、チャンバ−の底で使用した。３７℃で８時間、細胞を移動させ、ＤＡＰＩで染色した。染色された核を手作業で計数した。対照抗体と比較した阻害として、％阻害を表した。これらの実験は、代表的な抗ＨＥＲ−３抗体が、ＨＲＧ誘導細胞移動を減少できたことを実証した。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１１を参照。
【０２３７】
実施例１８  コロニ−形成アッセイ（軟寒天アッセイ）
本発明の抗ＨＥＲ−３抗体が足場非依存性細胞増殖を阻害する能力を調べるために、軟寒天アッセイを実施した。このような形質転換された細胞のみが軟寒天中で増殖することができるので、軟寒天コロニ−形成アッセイは、形質転換された細胞に対して試験するための標準的なインビトロアッセイである。
【０２３８】
ＩＭＤＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）中の１０μｇ／ｍＬの表記抗体とともに、３０分間、７５０から２０００個の細胞（細胞株に依存ずる）をプレインキュベ−トし、０．４％Ｄｆｉ
ｃｏ  ｎｏｂｌｅ寒天中に再懸濁した。９６ウェルプレ−ト中に、４つ組みで、２０％ＦＣＳを含有する０．７５％アガロ−ス下層上に細胞懸濁液を播種した。コロニ−を１４日間形成させた後、５０μＬ  ＭＴＴ（ＰＢＳ中、０．５ｍｇ／ｍＬ）で一晩染色した。Ｓｃａｎａｌｙｚｅｒ  ＨＴＳカメラシステム（Ｌｅｍｎａｔｅｃ，  Ｗｕｅｒｓｅｌｅｎ）を用いて、コロニ−を計数した。抗ＨＥＲ−３抗体が、ＭＤＡ−ＭＢ３１６及びＮＣＩ−ＡＤＲ乳癌細胞、ＭＫＮ−２８胃癌細胞、ＨＴ１４４悪性黒色腫細胞、Ｓｋｏｖ３卵巣癌細胞、ＰＰＣ−１前立腺癌細胞、ＢＸ−ＰＣ３膵臓癌細胞、Ａ４３１類表皮癌細胞及び肺癌細胞の足場非依存性細胞増殖を減少させることができた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１２ａ−１２ｉを参照。
【０２３９】
実施例１９  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体は、ヌ−ドマウス中のヒト乳癌の増殖を阻害する
しばしば、ヒト異種移植腫瘍研究において、治療用抗体の抗腫瘍効果が評価される。これらの研究では、ヒト腫瘍は、免疫不全マウス中で、異種移植片として増殖し、治療効果は、腫瘍増殖阻害の程度によって測定される。本発明の抗ＨＥＲ−３抗体が、ヌ−ドマウス中でのヒト乳癌細胞の腫瘍増殖を妨げるかどうかを決定するために、雌のＮＭＲＩヌ−ド／ヌ−ドマウス中に、５×１０６個のＴ４７Ｄ細胞を移植した。腫瘍は、動物の背中上の皮下で増殖した。移植から８日後に、腫瘍が２０ｍｍ３の平均容積に到達した時点で、治療を開始した。最初の治療前に、マウスを無作為化し、治療群にわたって、最初の腫瘍容積（平均、中央値及び標準偏差）の均一性を確保するために、統計学的試験を行った。治療は、５０ｍｇ／ｋｇの負荷投与量から開始し、続いて、腹腔内注射によって、週に一回、２５ｍｇ／ｋｇを注射した。コントロ−ルア−ムには、ドキソルビシン（医薬品グレ−ド）を与えた。全ての動物に、０．５ｍｇ／ｋｇ／週のエストロゲンを腹腔内注射して補充した。処置群の詳細は、下記表８に記載されている。
これらの研究は、抗ＨＥＲ−３抗体の投与が、腫瘍増殖を減少させることを実証した。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１３を参照。
【０２４０】
【表８】
2020011980.tif 000012
【０２４１】
実施例２０  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体は、ＳＣＩＤマウス中でのヒト膵臓腫瘍の増殖を阻害する
他の固形腫瘍タイプでの抗ＨＥＲ−３抗体の治療可能性を試験するために、ヒト膵臓腫瘍細胞株Ｂ×ＰＣ３に由来する確立された腫瘍を有するマウスにおいて、抗ＨＥＲ−３抗体である、Ｕ１−５３及びＵ１−５９を試験した。ビヒクル対照、ＰＢＳ又は確立された治療用抗体、ア−ビタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）の何れかで処理されたマウスのセットをコントロ−ルとして含めた。５×１０６個のＢｘＰＣ３細胞を、Ｍａｔｒｉｇｅｌなしに、ＣＢ１７  ＳＣＩＤマウス中の皮下に接種した。１４０ｍｍ２の平均容積を有する確立された腫瘍を有するマウスに、腹腔内注射を介して、Ｕ１−５３、Ｕ１−５９、ア−ビタックスの５０ｍｇ／ｋｇ又はＰＢＳの等容量を与えた。その後、マウスは、研究期間中、毎週１回、２５ｍｇ／ｋｇの注射を受けた。
【０２４２】
Ｕ１−５３及びＵ１−５９は、細胞分裂を阻害するようにしてヒト膵臓腫瘍増殖を減少させた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１４を参照。注目すべきこ
とに、この実験において、Ｕ１−５３及びＵ１−５９は、腫瘍増殖を遅らせることで、ＥＧＦ−Ｒの標的抗体であるア−ビタックスより有効であった。これらの研究は、基準となる治療剤と比較して、抗ＨＥＲ−３抗体の治療有効性を実証した。
【０２４３】
実施例２１  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体と抗ＥＧＦ−Ｒ抗体との併用は、抗腫瘍活性を増加させる
標的抗体を用いる過剰増殖性疾患の単剤療法は、しばしば、一方で、薬物耐性の発生、他方で、抗原性の変化などの問題によって妨害される。例えば、長期の治療後の抗原性の喪失は、腫瘍細胞を治療抗体に対して非感受性とさせる可能性がある。というのは、標的抗原を発現しないあるいはこれを失った腫瘍細胞は選択的な増殖という利点を有するからである。これらの問題は、腫瘍細胞上の異なる受容体を標的とする治療抗体又は別の抗腫瘍薬と組み合わせて本発明の抗体を使用することによって回避され得る。複数のシグナル伝達経路又は関連する経路においてでも、しかし、複数の介入工程で介入することも、治療的な利点を与え得る。これらの併用治療様式は、各々、異なる作用機序を介して作用する２つの抗癌剤を組み合わせるので、より効果的である可能性がある。
【０２４４】
本発明の抗ＨＥＲ−３抗体であるＵ１−５３及びＵ１−５９の適切な併用薬剤としての実用可能性を実証するために、本発明者らは、Ｕ１−５３又はＵ１−５９の何れかと、抗ＥＧＲ特異的抗体ア−ビタックスとの併用療法投与と、Ｕ１−５３又はＵ１−５９の単剤療法投与とを比較した。５×１０６個のＢｘＰＣ３細胞を、Ｍａｔｒｉｇｅｌとともに、ＣＢ１７  ＳＣＩＤマウスの皮下に接種した。腫瘍容積が２００ｍｍ３に達した後、マウスを各処置群に無作為に振り分けた。単一の薬剤として、又はア−ビタックスと抗ＨＥＲ３抗体のいずれかとの併用として、又は２つの抗ＨＥＲ−３抗体の混合物として、Ｕ１−５３、Ｕ１−５９及びア−ビタックスの腹腔内投与を毎週行った。全ての抗体は、５０ｍｇ／ｋｇ／週の単剤負荷投用量で投薬された後、６週間、２５ｍｇ／ｋｇを毎週注射した。コントロ−ルア−ムは、ゲムシタビン（１２０ｍｇ／ｋｇ）の隔週投与、プ−ルヒトＩｇＧの毎週注射、又はビヒクル（ＰＢＳ）の毎週注射を受けた。レジメンは、以下の表９に詳述されている。
【０２４５】
【表９】
2020011980.tif 000013
【０２４６】
抗体Ｕ１−５３及びＵ１−５９は、単剤として投与された場会、しばしば標準的な抗膵臓癌化学療法として使用されるゲムシタビンと同じ程度まで、ヒト膵臓腫瘍の増殖を遅らせた。Ｕ１−５３又はＵ１−５９とのア−ビタックスの同時投与は、Ｕ１−５３、Ｕ１−５９又はア−ビタックスの何れかの単剤投与を用いて観察されたものより、腫瘍増殖を有意により大きく減少させた。従って、別個の腫瘍抗原を標的とする適切な抗体と本発明の抗ＨＥＲ−３抗体を併用することによって、有益な治療応答を達成することが可能である。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１５を参照。
【０２４７】
要約すると、本発明の抗ＨＥＲ−３抗体は、ヒト腫瘍に対して、インビボで強力な治療効果を有する。本発明の抗ＨＥＲ−３抗体は、抗腫瘍活性を増加させるために、他の抗腫瘍薬治療法と効果的に組み合わせることが可能である。
【０２４８】
実施例２２  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体は、ｎｕ／ｎｕマウス中でのヒト悪性黒色腫瘍の増殖を阻害する
ＨＥＲ−３を含む受容体のｅｒｂＢファミリ−のメンバ−は、極めて様々な上皮癌中で異常に発現されており、多くのこれらの固形腫瘍の増殖及び生存において重要な役割を果たしていることが知られている。これらの腫瘍には、悪性黒色腫、頭部及び頸部扁平上皮細胞癌、非小細胞肺癌及び前立腺癌、神経膠腫、胃癌、乳癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌が含まれる。本発明の抗ＨＥＲ−３抗体の抗癌活性が個別の腫瘍タイプ（例えば、膵臓癌（実施例２１参照））に限定されず、多くのＨＥＲ−３依存性腫瘍に対する治療薬として使用することができることを確かめるために、本発明者らは、さらなる異種移植片研究においてＵ１−５３及びＵ１−５９を試験した。ＣＢ１７  ＳＣＩＤウス中に、５×１０５個のヒト悪性黒色腫細胞ＨＴ１４４を皮下注射した後、Ｕ１−５３及びＵ１−５９の５０ｍｇ／ｋｇ、同容量のＰＢＳ又は２００ｍｇ／ｋｇのダカルバシン（ＤＩＴＣ）を直ちにその後で腹腔内注射した。その後、マウスは、週一回、２５ｍ／ｋｇのＵ１−５３又はＵ１−５９を受けたのに対して、２００ｍｇ／ｋｇのＤＩＴＣを２週毎に１回与えた。
【０２４９】
各処置群から得られた中央値腫瘍容積が、計算された。本発明の抗体の投与は、ビヒクルコントロ−ルで処理された腫瘍と比べると、ヒト悪性黒色腫の増殖を減少させた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１６を参照。これらの結果は、本発明の抗体が、それらの治療可能性に限定されず、ＨＥＲ−３を発現している多様な癌を標的とすることを実証している。
【０２５０】
実施例２３  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体は、マウス中の大腸癌異種移植片の増殖を阻害する
１０×１０６細胞／ｍＬの最終濃度になるように、２：１比率の、Ｍａｔｒｉｇｅｌを用いて、ＨＴ−２９ヒト大腸癌細胞を培地中に懸濁した。４から５週齢のＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスの右側腹部中に、細胞懸濁液０．２ｍＬを皮下注射した。計９５匹のマウスを使用した。
【０２５１】
マウスを、対照群及び処置群へ無作為に割り当てた。処置は、同じ日に開始した。治療期間は、２９日であった。研究が完了した時点で、処置を施してから３時間後に、群当り３つの腫瘍を集めた。腫瘍を迅速に凍結し、−８０℃に保った。
【０２５２】
以下の治療プロトコ−ルを実施した。
対照群：非特異的ヒトＩｇＧ２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−５３、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−７、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−５９、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群５−ＦＵ：５−フルオロウラシル、５０ｍｇ／ｋｇ、９ｄ×５、腹腔内。
【０２５３】
各群から得られた中央値腫瘍容積を計算した。本発明の抗体の投与は、非特異的ヒトＩｇＧ１で処理された腫瘍と比べると、ＨＴ−２９大腸癌腫瘍の増殖を減少させた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１７を参照。
【０２５４】
実施例２４  ヒト抗ＨＲＥ−３抗体は、マウス中の肺癌の増殖を阻害する
５×１０６細胞／ｍＬの最終濃度になるように、１：１の比率のＭａｔｒｉｇｅｌを用いて、Ｃａｌｕ−３ヒト非小細胞肺癌細胞を培地中に懸濁した。９週齢の雌ＣＢ１７ｓｃ
ｉｄマウスの右側腹部中に、０．０５ｍＬの細胞懸濁液を皮下注射した。計６０匹のマウスを使用した。
【０２５５】
マウスを、対照群及び処置群へ無作為に選択した。処置は、同じ日に開始した。治療の期間は、３２日であった。
【０２５６】
以下の治療プロトコ−ルを実施した。
ＰＢＳビヒクル群
ｈＧ対照群：非特異的ヒトＩｇＧ：２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−５３、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−７、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−５９、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
【０２５７】
各対照群及び処置群から得られた中央値腫瘍容積を計算した。本発明の抗体の投与は、ＰＢＳビヒクル対照又は非特異的ヒトＩｇＧで処理された腫瘍と比べると、ヒト非小肺癌異種移植片の増殖を減少させた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１８を参照。
【０２５８】
実施例２５  ヒト抗ＨＥＲ−３抗体は、Ｂａｌｂ／Ｃマウス中でのヒト膵臓腫瘍の増殖を阻害する
５×１０６細胞／ｍＬの最終濃度になるように、２：１の比率のＭａｔｒｉｇｅｌを用いて、ヒト膵臓ＢｘＰＣ３腫瘍細胞を培地中に懸濁した。５−７週齢の雌ＢａｌｂＣ  ｎｕ／ｎｕマウスの右側腹部中に、０．２ｍＬの細胞懸濁液を皮下注射した。計１００匹のマウスを使用した。
【０２５９】
マウスを、対照群及び処置群へ無作為に割り当てた。処置は、同じ日に開始した。治療の期間は、２７日であった。
【０２６０】
以下の治療プロトコ−ルを実施した。
ｈＩｇＧ対照群：非特異的ヒトＩｇＧ、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−５３、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−７、２５ｍｇ／ｋｇ、週２回、腹腔内。
処置群：抗体Ｕ１−５９、２５ｍｇ／ｋｇ、毎週、腹腔内。
Ｇｅｍｚａｒ処置群、ゲムシタビン、８０ｍｇ／ｋｇ、毎週、腹腔内。
【０２６１】
各対照群及び処置群から得られた中央値腫瘍容積を計算した。本発明の抗体の投与は、非特異的ヒトＩｇＧ又はジェムザ−ル（Ｇｅｍｚａｒ）で処理された腫瘍と比べると、ヒト膵臓腫瘍の増殖を減少させた。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図１９を参照。
【０２６２】
ヒト膵臓腫瘍中でのＨＥＲ−３の阻害は、薬力学的実験においても示すことができた。ＢｘＰＣ３腫瘍異種移植片は、上記のとおり増殖させた。ＩｇＧ１対照の抗体５００μｇで３匹のマウスを処理し、５００μｇの抗ＨＥＲ−３抗体Ｕ１−５９で３匹のマウスを処理した。第１日及び第４日目にマウスを処理した後、第５日目に犠牲にして、ＨＥＲ−３リン酸化（ｐＨＥＲ−３）の抗体依存性阻害を測定した。
【０２６３】
プロテア−ゼ阻害剤を加えた標準的なＲＩＰＡ緩衝液中で、腫瘍をホモゲナイズした。４−２０％のＴｒｉｓ−グリシンゲル上で５０μｇの透明なライセ−トを分離し、ニトロセルロ−ス膜上に移し、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）中にブロックした。抗ｐＨＥＲ−３抗体（抗体２１Ｄ３、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を
用いて、イムノブロッティングを行った。抗アクチン抗体（ＡＢａ−２０６６，  Ｓｉｇｍａ）を対照として使用した。
【０２６４】
増強した化学発光（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）によって、発現を検出した。Ｖｅｒｓａｄｏｃ５０００Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＢｉｏＲａｄ，  Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，  ＣＡ）を用いて、画像を捕捉した。ヒト抗ＨＥＲ−３抗体Ｕ１−５９の投与後、ＨＥＲ−３のリン酸化は、もはや検出できなかった。米国特許公開公報第２００８／０１２４３４５号の図２０を参照。従って、本発明の抗体は、ヒト膵臓腫瘍細胞中でのＨＥＲ−３の活性化を著しく低下させることができる。
【０２６５】
実施例２６  異種移植片の研究において、Ｕ１−５９は、第２の薬剤との併用で腫瘍の増殖を抑制する。
Ｃａｌｕ−３  ＮＳＣＬＣ腫瘍異種移植片モデルを使用し、単独又はパニツムマブ若しくはエルロチニブと併用して抗ＨＥＲ−３抗体（Ｕ１−５９）の有効性を評価した。インビボでの有効性を決定するために、〜２００ｍｍ３のＣａｌｕ−３  ＮＳＣＬＣ異種移植片を有するマウスを週に２回抗ＨＥＲファミリ−阻害剤又は対照で処置した。Ａ５４９細胞を用いて他の実験を行った。パニツムマブとの併用研究で、Ｕ１−５９に対する負の対照として、ＩｇＧ１を使用し、またパニツムマブに対する負の対照としてＩｇＧ２を使用した。図１に示すとおり、１００μｇのＵ１−５９又は１００μｇのパニツムマブは、対照と比較して、それぞれ単独で腫瘍の増殖を大きく減少させたが、それぞれ１００μｇの２つの薬剤を併用すると、腫瘍の増殖を完全に阻止した（併用対各薬剤単独に対するｐ＜０．０００１）。エルロチニブを用いた併用研究において、Ｕ１−５９に対する負の対照としてＩｇＧ１を使用し、エルロチニブに対する負の対照としてエルロチニブ溶媒対照を使用した。図２に示すとおり、１００μｇのＵ１−５９と２５μｇのエルロチニブとの併用は、各薬剤単独よりもより大きな阻害効果を有した。Ｕ１−５９とエルロチニブとの併用は、Ｕ１−５９単独よりも有意に効果的であった（ｐ＝０．０３７６）。
【０２６６】
実施例２７  Ｕ１−５９とＨＥＲ阻害剤との併用は、乳癌細胞および卵巣癌細胞の足場非依存性増殖を抑制する
ＳｋＢｒ−３（基底又はＨＲＧ刺激）及びＭＤＡ−ＭＢ−４３５（基底）癌細胞の足場非依存性増殖へのＨＥＲ阻害剤ペルツズマブ、トラスツズマブ又はセツキシマブとの併用によるＵ１−５９の効果を評価するための実験を行った。ＩｇＧが全ての研究での負の対照として使用された。腫瘍細胞コロニ−がＨＲＧの非存在下又は存在下６〜１０日間で形成され、４〜６時間ＭＴＴで染色されて、定量化された。単剤としてのＵ１−５９は、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞のコロニ−増殖を抑制しなかったが、ＳｋＢｒ−３細胞中では５０％までコロニ−増殖を抑制し（ｐ＜０．００１）、また他のＨＥＲ阻害剤と併用すると９５％までコロニ−増殖を抑制した（ｐ＜０．０５）。例えば、５μｇ／ｍＬのペルツズマブ又はトラスツズマブと５μｇ／ｍＬのＵ１−５９との併用は、基底ＳｋＢｒ−３乳癌細胞での足場非依存性増殖をいずれかの薬剤単独よりも有意に大きく減少させた（図３）。ペルツズマブ、トラスツズマブ又はセツキシマブとＵ１−５９との併用は、ＨＲＧ刺激ＳｋＢｒ−３細胞においてＵ１−５９を別個に用いた場合より有意（ｐ＜０．００６）に効果的だった（図４）。同様に、Ｕ１−５９とペルツズマブ、トラスツズマブ又はセツキシマブのいずれかとの併用は、Ｕ１−５９を別個に使用した場合よりも、基底卵巣癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５）のコロニ−形成を有意により効果的に（ｐ＜０．００２）阻害した（図５）。
【０２６７】
実施例２８  Ｕ１−５９とＨＥＲ−２阻害剤又は化学療法剤との併用は、癌細胞増殖を減少させる
ＨＥＲ−２阻害剤又は化学療法剤との併用によるＵ１−５９の癌細胞増殖への効果を評
価するための研究を行った。具体的には、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞中で以下の実験を行った：
・Ｕ１−５９及びトラスツズマブ
対照群＝ＤＭＳＯ＋７５μｇ／ｍＬ  ＩｇＧ１＋ＰＢＳ
１０μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９
７５μｇ／ｍＬ  トラスツズマブ
１０μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９＋７５μｇ／ｍＬトラスツズマブ
・Ｕ１−５９及びラパチニブ
対照群＝ＤＭＳＯ＋１５０μｇ／ｍＬ  ＩｇＧ１
７３．５μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９
０．１μＭ  ラパチニブ
７３．５μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９＋０．１μＭ  ラパチニブ
・Ｕ１−５９及びゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）
対照群＝ＤＭＳＯ＋７５μｇ／ｍＬ  ＩｇＧ１＋ＰＢＳ
１０μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９
１μｇ／ｍＬ  ゲムシタビン
１０μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９＋１μｇ／ｍＬゲムシタビン
・Ｕ１−５９及びシスプラチン
対照群＝ＤＭＳＯ＋７５μｇ／ｍＬ  ＩｇＧ１＋ＰＢＳ
１０μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９
１μｇ／ｍＬ  シスプラチン
１０μｇ／ｍＬ  Ｕ１−５９＋１μｇ／ｍＬ  シスプラチン
【０２６８】
ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞をＨＲＧ刺激に先だって１時間Ｕ１−５９及び／又は他の薬剤とインキュベ−トした。４日後、処置した細胞の増殖をＡＬＯＭＡＲ  ＢＬＵＥ（商標）で測定した。これらのアッセイで、Ｕ１−５９は、単剤として、ＨＲＧ刺激ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩの増殖を４０％（ｐ＜０．０５）まで減少させ、またトラスツズマブ又はラパチニブと併用したときには８０％（ｐ＜０．０５）までその増殖を減少させた（図６Ａ及び６Ｂ）。注目すべきなのは、Ｕ１−５９を標準治療の化学療法薬（ゲムシタビン  （ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）及びシスプラチン；ｐ＜０．０５対いずれかの単剤単独）と併用した場合には、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ細胞において、相加的活性がまた観察されたことである（図６Ｃ及び６Ｄ）。これらの実験のそれぞれにおいて、Ｕ１−５９とＨＥＲ−２阻害剤との併用は、いずれの薬剤単独よりもＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ細胞の増殖低下により有効であった。
【０２６９】
同様な実験をＵ１−５９及びペルツズマブ、トラスツズマブ、又はラパチニブを用いてＨＲＧ刺激ＺＲ−７５−３０乳癌細胞及びＨＲＧ刺激ＢＴ４７４乳癌細胞中で行った（それぞれ図７及び８）。いずれの場合も、Ｕ１−５９及びラパチニブの併用は、細胞増殖を最も阻害する効果を有した。単剤治療単独に比べて、Ｕ１−５９とペルツズマブ又はトラスツズマブ又はラパチニブとの併用は、Ｕ１−５９単独よりも有意に（ｐ＜０．００４）より効果的であった。ＨＲＧ刺激ＤＬＤ−１結腸癌細胞及びＨＲＧ刺激ＨＣＣ−１５６９乳癌細胞中でのＵ１−５９とペルツズマブ、トラスツズマブ及びセツキシマブ（ｃｅｔｉｘｕｍａｂ）の１以上との併用は、図９及び１０に示すように同様な効果を有した。さらに、Ｕ１−５９とトラスツズマブ又はラパチニブとの併用は、ＨＲＧ刺激ＳｋＢｒ−３乳癌細胞においてもＵ１−５９単独に比べより効果的であった（ｐ＜０．００４）（図１１）。
【０２７０】
さらなる実験において、頭頚部癌細胞（ＦａＤｕ）を増殖培地（ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１ＸＰＳＧ）中で培養し、ＩｇＧ対照、Ｕ１−５９、パニツムマブ又はＵ１−５９とパニツマブ（ｐａｎｉｔｕｍａｂ）との併用で処置した。３７℃で５日間インキュベ−トし
た後、ＡＬＯＭＡＲ  ＢＬＵＥ（商標）を用いて、増殖を測定した。単剤として、Ｕ１−５９は、ＦａＤｕ細胞の増殖を１５％から２０％低下させたが、Ｕ１−５９とパニツムマブの併用は、８０％を超える低下を生じた。Ｕ１−５９とパニツムマブの併用は、いずれかの薬剤の単独での使用に比べて有意な（ｐ＝０．００１対最良の単剤活性）改善を来たした（図１２）。
【０２７１】
実施例２９  Ｕ１−５９と他のＨＥＲ阻害剤との併用はシグナル伝達を抑制する
Ｕ１−５９単独又はＵ１−５９とセツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、又はラパチニブとの併用がシグナル伝達に与える効果を刺激されていないＭＤＡ−ＭＢ−１７５ＶＩＩ乳癌細胞、ＨＲＧ刺激ＳｋＢｒ−３乳癌細胞、ＨＲＧ刺激Ｌｓ１７４Ｔ結腸癌細胞及びＨＲＧ刺激ＨＣＣ−１５６９乳癌細胞中で測定した。細胞は、図１３−１６に示す薬剤で処置され、ＨＥＲ−３、Ａｋｔ、及びＥＲＫのリン酸化は、リン酸化部位特異的抗体を用いてウエスタンブロット法により評価した。Ｕ１−５９のペルツズマブ、トラスツズマブ、又はラパチニブのいずれかとの併用は、単剤処置に比べて、試験した全ての細胞型においてＨＥＲ−３、Ａｋｔ、及びＥＲＫのリン酸化をさらに低下させた。Ｕ１−５９とセツキシマブとの併用は、これらのアッセイにおいて相乗作用を余り効率よく与えていないようであった。
【０２７２】
同様な研究をＡ５４９肺胞上皮細胞中で行った（図１７）。Ｕ１−５９単独又はパニツムマブ又はラパチニブと併用してＣａｌｕ３  ＮＳＣＬＣ細胞（図１８）を処置し、ウエスタンブロット法を使用してＡｋｔ、ＥＧＦ−Ｒ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＨＥＲ−４、及びＥＲＫのリン酸化を評価した。Ｕ１−５９とパニツムマブとの併用がＡ５４９細胞中でのＨＥＲ−３リン酸化に最大の明白な効果を有した。一方では、その併用は、Ｃａｌｕ３細胞中でＡｋｔ及びＥＧＦ−Ｒのリン酸化に関してより効果的であった。
【０２７３】
さらなる実験を行って、血清添加培地中１０μｇ／ｍＬのＵ１−５９、他のＨＥＲファミリ−ＡＢｓ、又は対照ｍＡＢで処置したＡ５４９細胞のインビトロでの有効性及び足場非依存性増殖を評価した。外因性リガンドの非存在下１０日間で形成した腫瘍細胞コロニ−を、ＭＴＴで染色し、Ｓｃａｎａｌｙｚｅｒ  ＨＴＳカメラ撮像システムを使用して定量化した。Ｕ１−５９は、Ａ５４９細胞系でコロニ−増殖を５０％（ｐ＜０．００１）阻害し、ＩｇＧ対照又は他のＨＥＲ  ｍＡＢｓと対比して、Ａ５４９ＮＳＣＬＣ異種移植片モデルにおいて腫瘍静止を来たした（ｐ＜０．０５）。
【０２７４】
これらの結果は、Ｕ１−５９は、インビトロで乳癌細胞系での近位及び遠位のＨＥＲ発癌シグナル伝達を阻害すること、そして乳癌細胞は単剤としてのＵ１−５９及びＵ１−５９と抗ＨＥＲ薬剤との併用処置に感受性であることを実証している。
【０２７５】
実施例３０  Ｕ１−５９は、インビボ活性に対するラパチニブの感受性を増加させる
Ｕ１−５９及びラパチニブのインビボでの併用効果を評価するために、マウスにヒト乳癌細胞（ＨＣＣ−１５６９）を移植し、Ｕ１−５９及びラパチニブのそれぞれ単独又は併用して処置した。腫瘍を１００ｍｍ３より大きいかあるいは等しいサイズにまで到達させ、次いでマウスを対照、ラパチニブ、Ｕ１−５９又はラパチニブ及びＵ１−５９の併用で処置した。図１９に示すように、Ｕ１−５９単独では、ＨＣＣ−１５６９腫瘍の増殖を阻害しなかったし、またラパチニブ単独では、対照と比較していくらかはあったが、有意の腫瘍増殖阻害をもたらさなかった（ｐ＝０．１６）。しかしながら、ラパチニブのＵ１−５９との併用は、腫瘍増殖の有意な阻害を来たした（ｐ＜０．０２対対照又はｐ＜０．０５対ラパチニブ）。
【０２７６】
これらの結果は、Ｕ１−５９及びラパチニブの併用は、インビボでのＨＣＣ−１５６９腫瘍増殖の相乗的阻止という結果をもたらすことを示す。この結果は、Ｕ１−５９又はラ
パチニブ単独では応答しない可能性のある腫瘍型でさえも、両者の併用で非常に効果的に処置できることを示すので、この結果は特に興味深く、励みになる。
【０２７７】
実施例３１  診断用薬としての抗ＨＥＲ−３抗体の使用
抗ＨＥＲ−３ｍＡｂは、悪性腫瘍疾患の診断に使用できる。ＨＥＲ−３は、正常な組織と比べて極めて異なった様式で腫瘍細胞上に発現しており、従って、ＨＥＲ−３の発現分析は、固形腫瘍の一次診断、固形腫瘍の病期診断及び悪性度分類、増殖性疾患及び腫瘍形成の予後兆候の判定基準の評価並びにＨＥＲ−３陽性腫瘍を有する患者におけるリスク管理を補助する。
【０２７８】
Ａ．試料中でのＨＥＲ−３抗原の検出
試料中のＨＥＲ−３抗原検出用酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）が開発されている。本アッセイでは、９６ウェルミクロタイタ−プレ−ト又は３８４ウェルマイクロタイタ−プレ−トなどのマイクロタイタ−プレ−トのウェルに、ＨＥＲ−３抗原に対して向けられた第一の完全なヒトモノクロ−ナル抗体を数時間吸着させる。固定化された抗体は、検査試料中に存在し得るＨＥＲ−３抗原の何れかに対する捕捉抗体としての役割を果たす。ウェルを濯ぎ、ミルクタンパク質又はアルブミンなどのブロッキング剤で処理して、分析物の非特異的吸着を防ぐ。
【０２７９】
続いて、ＨＥＲ−３抗原を含有すると疑われる検査試料で、又はＨＥＲ−３抗原の標準量を含有する溶液でウェルを処理する。例えば、このような試料は、病状の診断に役立つと考えられる循環ＨＥＲ−３抗原のレベルを有すると疑われる被験者から得られる血清試料である。検査試料又は標準物質を濯いだ後、ビオチンとの結合で標識されている第二の完全なヒトモノクロ−ナル抗ＨＥＲ−３抗体でウェルを処理する。標識された抗ＨＥＲ−３抗体は、検出抗体としての役割を果たす。過剰な第二の抗体を濯いで除去した後、アビジンが結合した西洋ワサビペルオキシダ−ゼ（ＨＲＰ）及び適した発色基質でウェルを処理する。検査試料中のＨＥＲ−３抗原の濃度は、標準試料から作成された標準曲線との比較によって決定される。
【０２８０】
Ｂ．免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）でのＨＥＲ３抗原の検出
ＩＨＣによる組織切片中のＨＥＲ３抗原を測定するために、まず、パラフィンで包埋された組織を、２回、５分間、キシレン中でパラフィンを除去し、次いで、１００％エタノ−ルで３分間、２回、９５％エタノ−ルで１分間、水和し、蒸留水中で濯いだ。エピト−プのアンマスキング、酵素消化又はサポニンによって、ホルマリン固定及びパラフィン包埋によって遮蔽された抗原エピト−プを露出させる。エピト−プのアンマスキングのために、例えば、２ＮＨＣｌ溶液（ｐＨ１．０）のようなエピト−プ回収溶液中で、２０〜４０分間にわたって、蒸し器、水槽又は電子レンジ中でパラフィン部分を加熱する。酵素消化の場合は、プロテイナ−ゼＫ、トリプシン、プロナ−ゼ、ペプシンなどの異なる酵素溶液中、３７℃で１０〜３０分間、組織切片をインキュベ−トする。
【０２８１】
エピト−プ回収溶液又は過剰な酵素を洗い流した後、ブロッキング緩衝液で組織切片を処理して、非特異的相互作用を阻止する。室温で１時間、又は一晩、希釈緩衝液中、適切な希釈で一次抗体をインキュベ−トする。過剰の一次抗体を洗い流し、室温で１０分間、ペルオキシダ−ゼブロッキング溶液中で切片をインキュベ−トする。別の洗浄工程後、酵素に対する足場としての役割を果たし得る基で標識された二次抗体とともに組織切片をインキュベ−トする。従って、模範例は、ストレプトアビジンが結合した西洋ワサビペルオキシダ−ゼによって認識されるビオチンで標識された二次抗体である。抗体／酵素複合体の検出は、適した発色基質とともにインキュベ−トすることによって達成される。
【０２８２】
Ｃ．患者の血清中のＨＥＲ−３抗原濃度の測定
ヒト血清中のＨＥＲ−３レベルを定量するために、サンドイッチＥＬＩＳＡが開発される。サンドイッチＥＬＩＳＡ中で使用される２つの完全なヒトモノクロ−ナル抗ＨＥＲ−３抗体は、ＨＥＲ−３分子上の異なるドメインを認識し、結合に関して競合しない。例えば、実施例８を参照。以下のようにして、ＥＬＩＳＡを行う。２μｇ／ｍＬの濃度の、コ−ティング緩衝液（０．１ＭＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．６）中の捕捉抗ＨＥＲ−３抗体５０μＬを、ＥＬＩＳＡプレ−ト（Ｆｉｓｈｅｒ）上に被覆した。４℃で一晩インキュベ−トした後、ブロッキング緩衝液２００μＬ（ＰＢＳ中、０．５％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１％チメロサ−ル）で、２５℃で１時間、プレ−トを処理する。ＰＢＳ（洗浄緩衝液、ＷＢ）中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を用いて、プレ−トを洗浄した（３回）。５０％ヒト血清を含有するブロッキング緩衝液中で正常な血清又は患者の血清（Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓ，  Ｂｉｏｒｅｃｌａｉｍａｔｉｏｎ）を希釈する。４℃で一晩、血清試料とともにプレ−トをインキュベ−トし、洗浄緩衝液で洗浄し、次いで、２５℃で１時間、ビオチン化された検出抗ＨＥＲ−３抗体１００μＬ／ウェルとともにインキュベ−トする。洗浄後、ＨＲＰ−ストレプトアビジンとともにプレ−トを１５分間インキュベ−トし、前述のように洗浄し、次いで、発色させるために、Ｈ２Ｏ２中のｏ−フェニレンジアミン（Ｓｉｇｍａ発色溶液）１００μＬ／ウェルで処理する。Ｈ２ＳＯ４（２Ｍ）の５０μＬ／ウェルで反応を停止させ、４９２ｎｍでＥＬＩＳＡプレ−トリ−ダ−を用いて分析する。４パラメ−タ−曲線フィッティングプログラムを用いて、精製されたＨＥＲ−３抗原の希釈と比較することによって、血清試料中のＨＥＲ−３抗原の濃度を計算する。
【０２８３】
患者中の癌の病期診断
項目Ａ、Ｂ及びＣでの記載及び論じた結果に基づき、ＨＥＲ−３抗原の発現レベルに基づいて、被験者での癌の病期診断をすることが可能である。所定のタイプの癌に対し、疾病の進行における様々な段階にあるとして、及び／又は癌の治療処置における様々な点にあるとして診断された被験者から血液試料を採取する。血液試料中に存在するＨＥＲ−３抗原の濃度は、存在する抗原の量を特異的に測定する方法を用いて決定される。このような方法には、項目Ａ及びＢに記載されている方法などのＥＬＩＳＡ法が含まれる。進行又は治療の各段階に対して統計学的に有意な結果を与える試料の集団を用いて、各段階に関して特徴的であると考え得るＨＥＲ−３抗原の濃度範囲が示される。
【０２８４】
検査対象の被験者での癌の進行の段階を決定し、また療法の経過への被験者の応答を特徴付けるために、血液試料を、被験者から採取し、試料中に存在するＨＥＲ−３抗原の濃度を測定する。このようにして得られた濃度を使用して、値が属する濃度範囲を同定する。このようにして同定された範囲は、診断された被験者の様々な集団において同定された進行の段階又は療法の段階と相関し、これにより、検査対象の被験者での病期を提供する。
【０２８５】
ここに記載した抗ＨＥＲ−３抗体は、例えば、ＨＥＲ−３発現のような多数の因子に基づくある種の過剰増殖性疾患又はＨＥＲ−３関連疾患の治療のために使用される。乳癌、消化器癌、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膀胱癌、神経膠腫、悪性黒色腫、及びＨＥＲ−３を発現又は過剰発現する他の癌などの腫瘍型は、ここに記載された併用療法で処置される適応症の例であるが、適応症は、前記のリストに記載されているものに限定されない。さらに、以下の患者群は、ここに記載した療法から利益を得る可能性がある。
・抗ＨＥＲ−２ｍＡｂを用いる治療に適格でない患者
・抗ＨＥＲ−１ｍＡｂ又は小分子抗ＥＧＦ−Ｒ阻害薬に対して耐性を有する患者
・エルロチニブ又はゲフィチニブに対して耐性を示す非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者
【０２８６】
抗ＨＥＲ−３抗体は、１つ若しくはそれ以上のさらなる薬剤と組み合わせて、いわゆる
「併用療法」において使用される。このような併用療法は、前記した薬剤を含むが、これに限定されるものではない。抗ＨＥＲ−３抗体及び他の薬剤との併用療法は、患者の生存を延長し、腫瘍進行までの時間を増加させ、又は患者の生活の質を向上させ得る。プロトコ−ル及び投与の設計は、治療効果並びに標準的治療（例えば、化学療法又は放射線療法など）の通常の用量を低下させる能力に対処する。
【０２８７】
抗ＨＥＲ−３抗体を用いたヒトの治療
腫瘍を有するヒト患者における抗ＨＥＲ−３抗体治療のインビボでの効果を決定するために、抗ＨＥＲ−３抗体の有効量を、ある時間にわたって、このようなヒト患者に注射する。治療の間、周期的にヒト患者はモニタ−され、腫瘍が進行するかどうか、特に、腫瘍が増殖及び転移するかどうかを決定する。
【０２８８】
本発明の抗ＨＥＲ−３抗体で治療された腫瘍患者は、現在の標準治療法で治療した腫瘍患者における腫瘍増殖及び転移のレベルと比べて、より低いレベルの腫瘍増殖及び／又は転移を有する。
【０２８９】
抗ＨＥＲ−３抗体抱合体を用いた治療
抗ＨＥＲ−３抗体抱合体のインビボでの効果を決定するために、抗ＨＥＲ−３抗体抱合体の有効量を、一定の期間にわたって、腫瘍の兆候を示すヒト患者又は動物に注射する。例えば、投与される本発明の抗ＨＥＲ−３抗体抱合体は、ＤＭ１−抗ＨＥＲ−３抗体抱合体、アウリスタチン−抗ＨＥＲ−３抗体抱合体又は放射性同位体−抗ＨＥＲ−３抗体抱合体である。治療の間、周期的に、ヒト患者又は動物はモニタ−され、腫瘍が進行するかどうか、特に、腫瘍が増殖及び転移するかどうかを決定する。
【０２９０】
腫瘍の兆候を示し、例えば、ＤＭ１−抗ＨＥＲ−３抗体抱合体又は放射線同位体−抗ＨＥＲ−３抗体抱合体を用いる治療を受けているヒト患者又は動物は、腫瘍の兆候を示し、代わりの治療を受けている対照患者又は動物と比べて、より低いレベルの腫瘍増殖及び転移を有する。動物で使用され得る対照ＤＭ１−抗体には、本発明の抗ＨＥＲ−３抗体と同じイソタイプの抗体であるが、より具体的には、ＨＥＲ−３腫瘍抗原への結合能を有しない抗体に連結したＤＭ１を含む抱合体が含まれる。動物検査で使用され得る対照放射性同位体−抗体には、本発明の抗ＨＥＲ−３抗体と同じイソタイプの抗体であるが、より具体的には、ＨＥＲ−３腫瘍抗原への結合能を有しない抗体に連結された放射性同位体を含む抱合体が含まれる。注意：対照抱合体は、ヒトには投与されない。
【０２９１】
実施例３３  前臨床薬物動態、薬力学的及び有効性デ−タに基づく抗ＨＥＲ−３ｍＡＢのヒト用量及び治療計画の最初の確認
前臨床薬物動態（ＰＫ）、ＢｘＰＣ３異種移植片マウスの抗腫瘍有効性及び薬力学的（ＰＤ）デ−タを使用して客観的反応に対する最小有効用量レジメンを予想するために前臨床モデリングを使用する研究を行った。
【０２９２】
〜２００ｍｍ３の樹立ＢｘＰＣ３膵臓異種移植片を有するマウスを１週間に２回２５、１００、２００、５００μｇ／マウスのＵ１−５９で処置した。ＢｘＰＣ３異種移植片腫瘍でのｐＨＥＲの阻害をウエスタンブロット法で分析した。ＰＫ／ＰＤ／有効性モデル（Ｓｉｍｅｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：１０９４−１１０１に基づく）を使用してさらなる試験のための用量及び治療計画を、将来を見越して選択した。ＰＫ／ＰＤ／有効性モデルを確認するために、ＢｘＰＣ３膵臓腫瘍を有するマウスを隔週に４００μｇ／マウス並びに隔週、毎週及び週に２回２００μｇ／マウスで処置した。体重（ＢＷ）に基づく種間スケ−リングを使用して、マウス、ラット及びサルで得られた血清濃度に基づくヒトでのＵ１−５９ＰＫパラメ−タ−を予測した。医薬濃度、動物でのｐＨＥＲ−３の阻害、及び種間ＰＫスケ−リングの間の関係を使用して、
ファ−スト・イン・ヒト研究（ｆｉｒｓｔ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｔｕｄｙ）のための最小有効用量を選択した。
【０２９３】
ＢｘＰＣ３異種移植片のＵ１−５９処置は、用量及び治療計画に依存する様式で腫瘍増殖並びにｐＨＥＲ−３レベルを統計学的に有意に抑制する結果となった（ｐ＜０．０５）。隔週に４００μｇ／マウス並びに隔週、毎週及び週に２回２００μｇ／マウスのＵ１−５９を用いた処置は、ＩｇＧ対照で処置したグル−プに対し、それぞれ５０％、３３％、７４％及び７０％の腫瘍増殖の阻害（ｐ＜０．０５）並びにｐＨＥＲ−３の３０％、５８％、２３％及び２０％のｐＨＥＲ−３の阻害（定量的ウエスタンブロット）という結果となった。それぞれの用量グル−プに対する剖検でのＵ１−５９の血清濃度は、それぞれ２．０７（０．９７）、０．４５（０．２１）、３．０８（０．８２）及び３４．９（９．１）μｇ／ｍＬの（平均（ＳＤ））であった。９０％の最大ｐＨＥＲ−３阻害（ＩＣ９０）を達成するのに必要な推定トラフ濃度は、〜３μｇ／ｍＬであると推定された。開発したＰＫ／ＰＤ／有効性モデルは平均腫瘍容積を予測した（Ｒ２＝０．９２５）。ヒトにおけるクリアランス（ＣＬ）及び投与直後における分布容積（Ｖｄ）は、１１ｍＬ／日／ｋｇ及び２８ｍＬ／ｋｇであると推定された。シミュレ−トしたヒトＰＫプロファイルの比較は、線形性ＰＫを示すはずである＞３ｍｇ／ｋｇの隔週投与は、２週間の投薬間隔の間に＞９０％以上のｐＨＥＲ−３阻害を生じる可能性を示唆した。
【０２９４】
ＢｘＰＣ３膵臓異種移植片モデルでの抗腫瘍有効性はＵ１−５９の血清濃度の増加及びｐＨＥＲ−３レベルの減少と関連があり、ＰＫ／ＰＤ／有効性の関係の発展を可能にした。この関係は、ファ−スト・イン・ヒト（ＦＩＨ）研究で調査するためのＵ１−５９に対する投与量及び治療計画の決定に使用された。
【０２９５】
実施例３４  再活性化研究
Ａ５４９細胞をＨａｍ’ｓＦ−１２培地（Ｇｉｂｃｏ）中に蒔いた。全ての培地は、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）及び１ＸＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）で補充されていた。細胞を一昼夜血清飢餓状態にした。培地を新鮮な無血清培地に変え、５０μｇ／ｍｌのＵ１−５９又は５μＭのゲフィチニブ単独、又はＵ１−５９とゲフィチニブを併用して３７℃で１又は２４時間、細胞を処置した。それぞれの処置時点の後、細胞を冷ＰＢＳで洗浄し、２００μＭフェニルメタンスルフォニルフルオライド（ＰＭＳＦ）（Ｆｌｕｋａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ）、２００μＭ  Ｈａｌｔプロテア−ゼインヒビタ−カクテルキット（ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｋｔａｉｌ  ｋｉｔ）（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及び２００μＭオルトバナジン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１％Ｉｇｅｐａｌ、１％デオキシコ−ル酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，０．１％  ＳＤＳ、１％  Ｔｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００）を使用して溶解させた。溶解物は、ＱＩＡシュレッダ−カラム（Ｑｉａｇｅｎ）を通過させ、通過画分は、分光光度計（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，  Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，  ＣＡ）を使用して定量化した。ウェエ当たり５０μｇのタンパク質は、製造業者のプロトコルに従い、ＥＬＩＳＡ  Ｄｕｏｓｅｔ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、ｐＨＥＲについて繰り返し分析した。結果を図２０に示す。
【０２９６】
他の実施態様
本発明は、その詳細な記載と一体となって記載されているが、上記記載は、添付したクレ−ムの範囲によって定義される本発明の範囲を説明するものであり、限定するものではないことは理解されるべきである。他の態様、利点及び変更は以下のクレ−ムの範囲内にある。
【０２９７】
【表１０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【配列表】
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