(57)【要約】【課題】網膜血管障害を処置するための方法、より詳細には、Ｓ１ＰＲ２の阻害によって家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）および未熟児網膜症（ＲＯＰ）を処置するための方法を提供すること。【解決手段】治療有効量のスフィンゴシン−１−ホスフェート受容体タイプ２（Ｓ１ＰＲ２）阻害剤を投与することによって家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）および未熟児網膜症（ＲＯＰ）を処置するための方法および組成物が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１４年６月２日に出願された「ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ  ＯＦ  ＦＡＭＩＬＩＡＬ  ＥＸＵＤＡＴＩＶＥ  ＶＩＴＲＥＯＲＥＴＩＮＯＰＡＴＨＹ  ＴＨＲＯＵＧＨ  Ｓ１ＰＲ２  ＩＮＨＩＢＩＴＩＯＮ」との表題の仮出願第６２／００６，７７９号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
技術の分野
本技術は、概して、網膜血管障害を処置するための方法、より詳細には、Ｓ１ＰＲ２の阻害によって家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）および未熟児網膜症（ＲＯＰ）を処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
網膜は、視覚的刺激の感知に関わる眼の裏側を裏打ちしている神経組織の薄い層である。発生において、網膜血管系は、内皮発芽（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｓｐｒｏｕｔ）から始まり、その内皮発芽は、視神経円板から網膜末梢へと放射状に外向きに突き出す主要な動脈および静脈を定め、中央のニューロン層のいずれかの側に位置する一対の毛細血管床が、さらに網膜に貫入する。網膜血管系のパターン形成は、成長中の血管系の前端部における特殊な内皮細胞である先導端細胞（ｔｉｐ  ｃｅｌｌ）が感知する血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）の勾配を誘導する組織低酸素によって初めて駆動されるガイダンスキューによって制御される。先導端細胞は、それらの先導端細胞の後に続く内皮柄細胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｓｔａｌｋ  ｃｅｌｌ）とともに、既存のアストロサイトネットワークに沿って遊走する。主要な血管系は、いったん所定の位置に置かれると、成熟して動脈および静脈を規定し、新生ネットワークが削られ、血液網膜関門が形成される。血管平滑筋細胞および周皮細胞（毛細血管の内皮細胞を包み込む収縮性の細胞である壁細胞としても知られる）のリクルートメントは、新しく形成された血管の安定化を助ける。眼の血管の発生を制御する分子機構は、十分に理解されていない。
【０００４】
ヒトにおいて、網膜血管の発生は、通常、満期産頃に完了するが、家族性滲出性硝子体網膜症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐｔｈｙ）（ＦＥＶＲ）などの網膜の発生障害では遅れるかまたは停止する。ＦＥＶＲは、末梢網膜の血管新生不全に起因する網膜の低血管新生（ｈｙｐｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）に続く続発性の異常な新生血管形成を特徴とする。重症型のＦＥＶＲは、両側性の先天網膜ひだまたは網膜剥離を呈する（図１）。現在、ＦＥＶＲの管理は、レーザーおよび手術によって行われている。介入によって、視力を維持する可能性は改善されるが、現在の最善の努力にもかかわらず、７５％超の眼が法的に盲のままである。１つの研究が、ＦＥＶＲ患者のために、ベバシズマブ（本来は癌を処置するために開発された、ＶＥＧＦ機能を阻害するモノクローナル抗体であるＡｖａｓｔｉｎ）での眼への注射をした後の網膜出血および新生血管形成の改善を記載したが、しかしながら、ＦＥＶＲの回復における抗ＶＥＧＦ剤の役割は不明なままであり、広く採用されていない。現在も介入のオプションが存在するにもかかわらず、ＦＥＶＲ患者の大部分が失明している。この状態に対する概念（ｉｄｅａ）処置は、合併症が全体で進行するのを妨げ得る治療による早期の介入とともに早期の検出を必要とし得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
概要
本開示のさらなる特徴および利点は、以下の説明に示され、その説明から部分的に明らかになるか、または本明細書中に開示される原理の実施によって知ることができる。本開示の特徴および利点は、添付の特許請求の範囲において特に指摘されている手段および組み合わせを用いて実現し、得ることができる。本開示のこれらの特徴および他の特徴は、以下の説明および添付の特許請求の範囲からさらに十分に明らかになるか、本明細書中に示される原理の実施によって知ることができる。
【０００６】
変異したときＦＥＶＲを引き起こす遺伝子の発見によって、網膜血管の発生を制御する分子経路の理解が進んだ。現在までに、ＦＥＶＲを引き起こす遺伝子が５つ同定された：ＦＺＤ４、ＬＲＰ５、ＴＳＰＡＮ１２、ＮＤＰおよびＺＮＦ４０８。この５つの既知のＦＥＶＲ原因遺伝子のうち４つが、ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体シグナル伝達複合体を形成する（図２）。ＦＺＤ４は、通常、Ｗｎｔファミリーのリガンドによって活性化される７回膜貫通受容体のｆｒｉｚｚｌｅｄファミリーの一部である。ＦＺＤ４は、ＮＤＰ遺伝子の産物である非Ｗｎｔリガンドｎｏｒｒｉｎによって特異的に活性化されるという点において、ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体ファミリーの中でも独特である。Ｎｏｒｒｉｎは、ミュラーグリア細胞から分泌され、血管内皮細胞上に位置するＦＺＤ４受容体に結合する。ＬＲＰ５は、ＦＺＤ４に対する共受容体であり、ＦＺＤ４が機能するのに必要である。ＴＳＰＡＮ１２は、内皮細胞において特異的に発現され、ＦＺＤ４に直接結合し、ｎｏｒｒｉｎとＦＺＤ４とＬＲＰ５との間の相互作用を増強する。ほとんどのｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体と同様に、ＦＺＤ４シグナルは、□−カテニンシグナル伝達経路を介して伝達される。サイトゾルの□−カテニンが、数多くの遺伝子の転写に影響する核にトランスロケーションすることは、ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体シグナル伝達の背景にある主要な駆動因子である（図２）。
【０００７】
Ｆｚｄ４、Ｔｓｐａｎ１２、Ｌｒｐ５およびＮｄｐに対するマウスノックアウトモデルは、ＦＥＶＲ患者において観察される眼の表現型の正確な模倣として役立つ。これらのモデルは、ＦＥＶＲ表現型の詳細な解析を可能にした。これらのマウス研究からの重要な知見は、ＦＥＶＲのマウスモデルでは網膜血管系が損なわれているにもかかわらず、その網膜自体は形態学的に正常に見えることから、網膜の虚血に起因する視力喪失を逆転させ得る介入の治療機会（ｗｉｎｄｏｗ  ｏｆ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｙ）が提供されるということであった。
【０００８】
未熟児網膜症（ＲＯＰ）は、ＦＥＶＲと表現型がかなり重複する、早産で生まれた乳児の網膜血管系に影響する障害である。ＲＯＰを有する乳児は、網膜の無血管帯を有し、続発性の異常な新生血管形成およびその後の網膜剥離を発症するリスクがある。重度のＲＯＰの処置としては、レーザーおよびベバシズマブが挙げられる。最近の研究は、現行の処置が、患者の約１／３において、２０／４０またはそれより良好な視力をもたらすことを示唆しているが、約１／４が、法的に盲である。処置にもかかわらず、重度のＲＯＰを発症している早産児の約２／３が運転視力基準を満たさず、約５０％が、重度の視力障害を有したままであり得る。その視力喪失のいくらかの原因は、早産の神経性合併症にあり得るが、ほとんどの視力喪失は、網膜の状態と相関する。
【０００９】
ＲＯＰの厳密な病因は、現在不明である。しかしながら、ＦＥＶＲ原因遺伝子における多型が、重度のＲＯＰを有する患者において同定されたので、ＲＯＰとＦＥＶＲとの間の潜在的な分子的関連を記載する証拠がある。さらに、げっ歯類ＲＯＰモデルでは、Ｆｚｄ４およびＬｒｐ５の発現はダウンレギュレートされ、これは、ＲＯＰ表現型に寄与するＦＺＤ４シグナル伝達の減少と一致する。この関連をさらに確かめ、そして最初の機能的データを付け加えるために、ヒトＲＯＰを模倣するために用いられる眼虚血性網膜症（ＯＩＲ）の十分に確立されたマウスモデルにおいて、血管閉塞およびその後の新生血管形成の程度を、野生型マウスおよびＦｚｄ４＋／−（ヘテロ接合性）マウスにおいて決定した。Ｆｚｄ４＋／−マウスは、野生型マウスと比べて、室内空気への再曝露後の血管新生の回復が不完全であると観察された（図３）。ＦＥＶＲ原因遺伝子とＲＯＰの重症度との間の関連に加えて、ＦＥＶＲとＲＯＰの臨床的提示が似ていることは、ＦＥＶＲに対する治療が、ＲＯＰの処置に有効であり得ることを予測する。ＦＥＶＲの処置は、糖尿病性網膜症などの他の網膜血管障害にも転用され得る。
【００１０】
スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）は、スフィンゴミエリナーゼ、セラミダーゼおよびスフィンゴシンキナーゼの作用によるスフィンゴミエリンの代謝から生成される血液由来の脂質セカンドメッセンジャーである（図４）。Ｓ１Ｐ生成の主要な部位は、内皮細胞および赤血球である。Ｓ１Ｐは、Ｓ１ＰＲ１〜５（以前はＥｄｇ１〜５）と命名されたＧタンパク質共役受容体の内皮分化ファミリーを活性化する。Ｓ１ＰＲは、種々の細胞型において発現され、数多くの生物学的プロセスを制御する。Ｓ１ＰＲ１、−２および−３は、血管内皮細胞上に発現され、血管の発生および安定性を制御するので、それらの機能は、特に興味深い。
【００１１】
Ｓ１ＰＲ１は、血管の安定化に不可欠であり、血管遊走を増加させる。Ｓ１ＰＲ１は、Ｇｉに結合し、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ経路を活性化し、それを介して、Ｒａｃは、アクチンのアセンブリおよび細胞遊走に影響する。重複する同様の機能が、Ｇｑに結合するＳ１ＰＲ３に対して報告されている。対照的に、Ｓ１ＰＲ２は、Ｓ１ＰＲ１および−３シグナル伝達と拮抗する。Ｓ１ＰＲ２は、主にＧ１２／１３を活性化し、Ｒｈｏ−Ｒｈｏキナーゼ経路を活性化し、Ｒａｃの機能を阻害する（図５）。これらの拮抗するＳ１ＰＲ経路間のバランスは、Ｓ１Ｐに対する内皮細胞の応答を決定する。この点で、網膜血管系の発生におけるＳ１ｐの重要性を考えると、Ｓ１ＰＲ２シグナル伝達の阻害は、ＦＥＶＲおよびＲＯＰなどの網膜血管障害に対して治療効果をもたらし得る。
【００１２】
概して、Ｓ１ＰＲ２阻害剤をスクリーニングすることにより、ＦＥＶＲおよびＲＯＰなどの網膜血管系障害を処置するための新規アプローチが特定される。本発明は、治療有効量のＳ１ＰＲ２阻害剤を投与することによって、ＦＥＶＲおよびＳＯＰに罹患している個体を安全かつ有効に処置する組成物および方法を提供する。
【００１３】
さらなる態様において、本発明は、糖尿病性網膜症および黄斑変性症を含む、汎発性の網膜血管障害に罹患している個体を安全かつ有効に処置する組成物および方法を提供する。
【００１４】
さらなる態様において、本発明は、小分子または生物製剤を含み得るＳ１ＰＲ２阻害剤を含む薬学的組成物、およびＦＥＶＲまたはＲＯＰに罹患している被験体を処置するためにその組成物を被験体に投与するための指示書を備えるキットを提供する。
【００１５】
本明細書中で使用されるとき、「核酸」または「核酸分子」は、２つまたはそれを超えるヌクレオチドの鎖、例えば、ＲＮＡ（リボ核酸）およびＤＮＡ（デオキシリボ核酸）を意味する。
【００１６】
本明細書中で使用されるとき、用語「阻害」とは、タンパク質の生物学的活性の低下、好ましくは、ヒトタンパク質Ｓ１ＰＲ２の活性の低下のことを指す。
【００１７】
本明細書中で使用されるとき、用語「遺伝子」は、特定のタンパク質をコードする核酸分子、またはある特定の場合では、機能的ＲＮＡ分子もしくは構造的ＲＮＡ分子のことを意味する。
【００１８】
本明細書中で使用されるとき、「タンパク質」および「ポリペプチド」は、長さまたは翻訳後修飾、例えば、グリコシル化またはリン酸化を問わず、任意のペプチドに連結したアミノ酸鎖を意味する同意語として使用される。
【００１９】
核酸分子またはポリペプチドについて言及するとき、用語「野生型」とは、天然に存在する（例えば、天然の、ＷＴ）核酸またはポリペプチドのことを指す。
【００２０】
本明細書中で使用されるとき、用語「処置」および「治療」は、ある障害もしくは疾患、障害もしくは疾患の症状または障害もしくは疾患の素因を治療するか、治癒するか、緩和するか、軽減するか、変化させるか、治すか、回復させるか、改善するかまたは影響する目的で、患者もしくは被験体への治療薬の適用もしくは投与、またはその障害もしくは疾患、その障害もしくは疾患の症状またはその障害もしくは疾患の素因を有する患者もしくは被験体から単離された組織もしくは細胞株への治療薬の適用もしくは投与として定義される。
【００２１】
用語「治療有効量」は、本明細書中で使用されるとき、所望の治療効果または治療反応を誘発するＳ１ＰＲ２阻害剤の量を意味する。
【００２２】
用語「患者」、「被験体」および「個体」は、本明細書中で交換可能に使用され、処置されるため、診断されるため、および／または生物学的サンプルを得るための哺乳動物（例えば、ヒト、げっ歯類、非ヒト霊長類、イヌ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ネコなど）の被験体を意味する。
【００２３】
用語「キット」は、本明細書中で使用されるとき、ＦＥＶＲおよびＲＯＰを処置するために治療有効量のＳ１ＰＲ２阻害剤を投与するための構成要素を含む包装された製品のことを指す。キットは、好ましくは、そのキットの構成要素を保持する箱または容器を備える。その箱または容器には、ラベルまたは食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されたプロトコルが貼られている。その箱または容器は、好ましくは、プラスチック、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレンまたはプロピレンの入れ物の中に含まれる本発明の構成要素を保持する。その入れ物は、ふた付きのチューブまたはボトルであり得る。キットは、Ｓ１ＰＲ２阻害剤を投与するための指示書も備え得る。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
治療有効量のＳ１ＰＲ２阻害剤、
前記Ｓ１ＰＲ２阻害剤の分解を減少させるのに十分な量の少なくとも１つの緩衝剤
を含む薬学的組成物を投与することによって、患者における網膜血管障害を処置する方法。
（項目２）
前記網膜血管障害が、ＦＥＶＲである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記網膜血管障害が、ＲＯＰである、項目１に記載の方法。
【００２４】
上で述べられた本開示の利点および特徴ならびに他の利点および特徴を得ることができる様式を説明するために、上で簡潔に記載された原理のより詳細な説明が、添付の図面に示されているその具体的な実施形態を参照することによって表現され得る。これらの図面は、本開示の単なる例示的な実施形態を描写しているので、その範囲を限定しているとみなされるべきでないことが理解され、本明細書中の原理は、添付の図面を用いることによって、さらに具体的かつ詳細に記載され、説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、ヒトの眼の血管新生を例証している。（Ａ）正常に、網膜血管系が視神経円板から網膜末梢に外向きに突き出している。家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）は、網膜の低血管新生をもたらす遺伝性の障害であり（Ｂ）、その後の異常な新生血管形成は、網膜剥離をもたらし得る（Ｃ）。
【００２６】
【図２】図２は、古典的なＷｎｔ経路をＮｏｒｒｉｎ経路と比較して図示している。Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４受容体を介したＮｏｒｒｉｎシグナル伝達は、網膜における血管の発生を特異的に制御する。Ｎｏｒｒｉｎ、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４、ＬＲＰ５およびＴＳＰＡＮ１２をコードする遺伝子における変異は、家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）を引き起こす（Ｃｅｌｌ  １３９，２２７−２９からの図）。
【００２７】
【図３】図３は、改変された眼虚血性網膜症モデルの後の、Ｆｚｄ４＋／＋マウスおよびＦｚｄ４＋／−マウスのホールマウントされたマウス網膜における血管系を示している。酸素チャンバーから取り出されたＰ１２において、血管閉塞の面積は、野生型マウスとＦｚｄ４＋／−マウスとで似ていた（図示せず）。室内空気に戻した５日後のＰ１７において、ホールマウントされた網膜をイソレクチンで染色したところ（Ａ）、Ｆｚｄ４＋／−マウスではアテローム発生（白色の領域が、なおも血管閉塞している領域を描写している）が遅れることが実証された。（Ｂ）Ｐ１７の野生型マウスおよびＦｚｄ４＋／−マウスに残っている血管閉塞の面積の定量。８つの実験の平均値（ｐ＜０．０１）。
【００２８】
【図４】図４は、血液由来のセカンドメッセンジャーであるスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）が、スフィンゴミエリナーゼ経路を介して内皮細胞において産生されることを示している。Ｓ１Ｐは、次に一連の５つのＳ１Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）に結合し得る。Ｓ１ＰＲ１、２および３は、内皮細胞上に見られ、血管新生を制御する。
【００２９】
【図５】図５は、スフィンゴシン−１−Ｐ受容体（Ｓ１ＰＲ）を図示している。Ｓ１ＰＲ１、２および３は、血管内皮細胞上に見られる。Ｓ１ＰＲ１およびＳ１ＰＲ３は、血管遊走を駆動し、一方Ｓ１ＰＲ２は、それらの作用を打ち消す。この点で、Ｓ１ＰＲ２の阻害（血管遊走の阻害剤の阻害）は、網膜血管の発生の障害である家族性滲出性硝子体網膜症（ＦＥＶＲ）に対して、正常な網膜の血管新生の回復をもたらし得る（Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  １０，４８９−５０３からの図）。
【００３０】
【図６】図６は、ＦＥＶＲのＴｓｐａｎ１２−／−マウスモデルにおいてＳ１ｐｒ２遺伝子を不活性化した際の正常な血管系パターン形成の回復を示している。Ｐ１７における網膜をフラットマウントし、イソレクチンＢ４  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４で染色した後、血管系を共焦点顕微鏡によって可視化した。同様の結果が、Ｆｚｄ４−／−Ｓ１ｐｒ２−／−マウスに対しても観察された。
【００３１】
【図７】図７は、スフィンゴシン−１−ホスフェート受容体２（Ｓ１ＰＲ２）結合ポケットを示している。このヒトＳ１ＰＲ２リガンド結合ポケットは、ＪＴＥ−１０３に結合した状態で示されている。ＪＴＥ−１０３は、他のＳ１ＰＲと比べてＳ１ＰＲ２に対して１０倍高い特異性を有するツール化合物（ｕＭ親和性）である。このＳ１ＰＲ２結合ポケットの分子モデリングを用いて、潜在的な強力なＳ１ＰＲ２阻害剤を同定した。
【００３２】
【図８】図８は、スフィンゴシン−１−ホスフェートおよびその特定された標的領域を図示している。これらの同定された化合物は、その公知の受容体よりも強く結合ポケットと相互作用し、ゆえに、Ｓ１Ｐの結合を妨げる。同定された化合物は、購入可能である。以下の２１個（それらのＰｕｂＣｈｅｍ識別によって識別される（天然物、薬物および公知の化学的実体の組み合わせ）を、インビトロおよびインビボ試験のために実行可能な標的として選択した。ＰｕｂＣｈｅｍ識別子は、３３８２７７８；４４３１７１４２（５２０および６４４２６０としても）；５４７３６８６５；３８６６３４２；４６８９１７７０（３２４７０４１としても）；５１６２４４０６；９５７８２９１；９８６４１５６；３６５０１５；２８０９４４８０；４０５９２６７６；１０８８３３９６；３４２３０２；５６９２３８４５；５４７３４９１２；１８３９０５９０；５６９２３９２８；５１５０８５４８；２８９６０３５４；５１６２４６８３；２７９９３である。
【００３３】
【図９】図９は、成体ゼブラフィッシュにおけるｆｚｄ４遺伝子の不活性化が、ヒトおよびマウスにおいて観察される異常な新生血管形成をもたらすことを示している。ｆｚｄ４遺伝子を標的化するために、１対のＴＡＬＥＮヌクレアーゼを作製した。かなりの割合の変異を有する創始個体（ｆｏｕｎｄｅｒ）を、ｆｌｉ１：ＥＧＦＰトランスジェニック魚（血管系に対するＧＦＰマーカー）と交配し、得られたＦ１魚を成体期まで育てた。ｆｚｄ４遺伝子のオープンリーディングフレームにおける１０個のヌクレオチドの挿入が確認された。ｆｚｄ４ヘテロ接合性魚の対を交配して、ホモ接合性変異体を含む子孫を得た。ホモ接合性変異体魚は、いかなる明らかな胚の表現型も有さず、成体期まで育った。網膜血管系がｆｚｄ４変異によって影響されているかをチェックするために、野生型および変異体の魚から網膜を解剖し、フラットマウントし、共焦点顕微鏡によって可視化した。ホモ接合性ｆｚｄ４−／−変異体は、可視化された領域において、広範囲の無血管および異常な血管パターンを有する。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
詳細な説明
本開示の様々な実施形態が、下記で詳細に論じられる。具体的な実行が論じられるが、これは、例証の目的のためだけに行われることが理解されるべきである。本開示内で引用されるすべての参考文献が、本明細書中に援用される。関連する分野の当業者は、本開示の精神および範囲から離れることなく、他の構成要素および構成を使用してもよいことを認識するだろう。
【００３５】
治療有効量のＳ１ＰＲ２阻害剤を投与することによって網膜血管障害を処置するための組成物および方法が説明される。好ましい実施形態において、処置レジメンは、ＦＥＶＲおよびＲＯＰの処置に適応される。
【００３６】
１つの実施形態において、治療有効量のＳ１ＰＲ２阻害剤は、以下のＰｕｂＣｈｅｍ識別子の群から選択される式を有する：３３８２７７８；４４３１７１４２（５２０および６４４２６０としても）；５４７３６８６５；３８６６３４２；４６８９１７７０（３２４７０４１としても）；５１６２４４０６；９５７８２９１；９８６４１５６；３６５０１５；２８０９４４８０；４０５９２６７６；１０８８３３９６；３４２３０２；５６９２３８４５；５４７３４９１２；１８３９０５９０；５６９２３９２８；５１５０８５４８；２８９６０３５４；５１６２４６８３；２７９９３。
【００３７】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、以下の化学構造：
【化１】
2020114870.tif 000002
を有する小分子１−（２，６−ジクロロ−４−ピリジル）−３−［（４−イソプロピル−１，３−ジメチル−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−６−イル）アミノ］尿素である。
【００３８】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、一般式：
【化２】
2020114870.tif 000003
を特徴とする化合物（式中：
−Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルであり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ペルハロアルキル（ｐｅｒｈａｌｏａｌｋｙｉ）、Ｃ１−Ｃ４ペルハロアルコキシ、アミノ、モノ−もしくはジＣ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ７シクロアルコキシであり、Ｒ３およびＲ４は、必要に応じて、ｈ、ｉまたはｊに位置するが、同時に同じ位置には位置せず、−Ｒ５は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６ペルハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ペルハロアルコキシ、アミノ、モノ−もしくはジＣ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ７シクロアルコキシであり、
−ｎは、０、１、２、３または４である）；
２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール；５−［［３−クロロ−４−（２，３ジヒドロキシプロポキシ）フェニル］メチル］−３−（ｏ−トリル）−２−（プロピルアミノ）チアゾリジン−４−オン；２−アミノ−２−［２−［４−（３−ベンジルオキシフェニル）スルファニル−２−クロロ−フェニル］エチル］プロパン−１，３−ジオール；１−［５−［（３Ｒ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−３−メチル−ブチル］−１−メチル−ピロール−２−イル］−４−（ｐ−トリル）ブタン−１−オン；３−アミノ−４−（３−オクチルアニリノ）−４−オキソ−ブチル］ホスホン酸；５−［４−フェニル−５−（トリフルオロメチル）−２−チエニル］−３−［３−（トリフルオロメチル）＾オキサジアゾール；
または一般式ＩＩ
【化３】
2020114870.tif 000004
を特徴とする化合物（式中：
−Ｘは、ＮＲａＲｂ、ＳＲｂ、Ｆ、ＣＩ、ＢｒまたはＩであり、
−Ｒ１は、ＨまたはＲｂであり、
−Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、ＣＩ、Ｂｒ、ＩまたはＲｂであり、
−Ｒａは、ＨまたはＲｂであり、Ｒｂは、１〜１２個の炭素原子を有する分枝状もしくは直鎖状のアルキル（ここで、１つまたはそれを超える、好ましくは、１〜７個の水素原子は、Ｆ、ＣＩ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲａ、ＣＯＯＲ３、ＣＮ、Ｎ（Ｒａ）２によって置き換えられてもよく、１つまたはそれを超える、好ましくは、１〜７個の非隣接ＣＨ２基は、Ｏ、ＮＲａ、ＳもしくはＳ０２および／または−ＣＨ＝ＣＨ−基によって置き換えられてもよい）または３〜７個の環炭素原子を有するシクロアルキルもしくはシクロアルキルアルキレンであり、
−Ｗは、Ｃ＝０、Ｃ＝Ｓ、Ｓ０２またはＳＯであり、
−Ｑは、ＮＲ３、−Ｏ−または−Ｓ−であり、
Ｒは、水素、Ｒｂ、ＡｒまたはＨｅｔであり、Ａｒは、非置換であり得るか、Ｆ、ＣＩ、Ｂｒ、Ｉ、Ｒｂ、ＯＲ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、Ｎ（Ｒ３）２、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｎ（Ｒ３）２、Ｎ０２、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＯＮ（Ｒ３）、ＮＲ３ＣＯＡ、ＮＲ３ＣＯＮ（Ｒ３）２、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｈｅｔ、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ａｒ、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−シクロアルキル、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−［（Ｒ３）２］ｎ−ＣＯＯＲ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＮＲ３−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｃ０２Ｒ３；−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＮＲ３−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、−Ｓ０２−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｃ０２Ｒ３、−Ｓ０２−Ｎ（Ｒ３）２］ｎ−［Ｃ０２Ｒ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］Ｎ−Ｓ０２−［Ｃ（Ｒ３）］ｎ−Ｃ０２Ｒ３、−Ｓ０２［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、−Ｓ０２Ｎ（Ｒ３）２−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］Ｎ−Ｓ０２−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、ＮＲ３ＣＯＮ（Ｒ３）２、ＮＲ３Ｓ０２Ｒｂ、ＣＯＲ３、Ｓ０２Ｎ（Ｒ３）２、Ｓ０２Ｎ（Ｒ３）Ｒｂ、ＳＯＲｂ、ＳＯＮＲ３Ｒｂ、Ｓ０２Ｒｂおよび／または−０［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＣＯＯＲ３によって一置換、二置換または三置換され得る、６〜１４個の炭素原子を有する単環式または二環式の飽和、不飽和または芳香族の炭素環であり、Ｈｅｔは、非置換であり得るか、Ｆ、ＣＩ、Ｂｒ、Ｉ、Ｒｂ、ＯＲ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、Ｎ（Ｒ３）２、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｎ（Ｒ３）２、Ｎ０２、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＯＮ（Ｒ３）、ＮＲ３ＣＯＡ、ＮＲ３ＣＯＮ（Ｒ３）２、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｈｅｔ、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ａｒ、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−シクロアルキル、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＣＯＮ（Ｒ３）２、−［（Ｒ３）２］ｎ−ＣＯＯＲ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＮＲ３−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｃ０２Ｒ３；−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＮＲ３−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、−Ｓ０２−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−Ｃ０２Ｒ３、−Ｓ０２−Ｎ（Ｒ３）２］ｎ−［Ｃ０２Ｒ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］Ｎ−Ｓ０２−［Ｃ（Ｒ３）］ｎ−Ｃ０２Ｒ３、−Ｓ０２［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、−Ｓ０２Ｎ（Ｒ３）２−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、−［Ｃ（Ｒ３）２］Ｎ−Ｓ０２−［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＯＲ３、ＮＲ３ＣＯＮ（Ｒ３）２、ＮＲ３Ｓ０２Ｒｂ、ＣＯＲ３、Ｓ０２Ｎ（Ｒ３）２、Ｓ０２Ｎ（Ｒ３）Ｒｂ、ＳＯＲｂ、ＳＯＮＲ３Ｒｂ、Ｓ０２Ｒｂおよび／または−０［Ｃ（Ｒ３）２］ｎ−ＣＯＯＲ３によって一置換、二置換または三置換され得る、１〜４個のＮ、Ｏおよび／またはＳを有する単環式または二環式の飽和、不飽和または芳香族の複素環式環であり、
−Ｒ１は、ＨまたはＲｂであり、
−Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、ＣＩ、Ｂｒ、ＩまたはＲｂであり、
−Ｒ３は、ＨまたはＲｂであり、
−ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７または８である）；
２−［１−［２−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−アニリノ）−２−オキソ−エチル］−２，４−ジオキソ−キナゾリン−３−イル］酢酸；−Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−フェニル）−２−［２，４−ジオキソ−３−［２−オキソ−２−［２−（３−ピリジル（ｐｒｉｄｙｌ））エチルアミノ］エチル］キナゾリン−１−イル］；２−［４−［１−［２−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−アニリノ）−２−オキソ−エチル］−２，４−ジオキソ−キナゾリン−３−イル］フェニル］−Ｎ−フェネチル−アセトアミド；４−［６−クロロ−１−［２−（３−クロロ−４−エトキシ−フェニル）−２−オキソ−エチル］−２，４−ジオキソ−キナゾリン−３−イル］−Ｎ−シクロペンチル−ブタンアミド；Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−フェニル）−２−［２，４−ジオキソ−３−［２−（フェネチルアミノ）エチル］キナゾリン−１−イル］アセトアミド；−ｔｅｒｔ−ブチル２−［１−［２−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−アニリノ）−２−オキソ−エチル］−２，４−ジオキソ−キナゾリン−３−イル］アセテート；−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−［１−［２−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−アニリノ）−２−オキソ−エチル］−２，４−ジオキソ−キナゾリン−３−イル］エチル］カルバメート；−２−［１−［２−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−アニリノ）−２−オキソ−エチル］−２，４−ジオキソ−ピリド［３，２−ｄ］ピリミジン−３−イル］酢酸；−２−［１−［２−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−アニリノ）−２−オキソ−エチル］−２−オキソ−４Ｈ−キナゾリン−３−イル酢酸；Ｎ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシ−フェニル）−２−［３−（３−メトキシベンゾイル）−７−メチル−４−４ａ，８ａ−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−１−イル］アセトアミド；２−［１−［２−［（２，６−ジクロロ−４−ピリジル）アミノ］−２−オキソ−エチル］−５−メチル−２，４−ジオキソ−キナゾリン−３−ｌ］酢酸；４−メチル−８−（２，４，６−トリメチルアニリノ）−２Ｈ−フタラジン−１−オン；４−メチル−８−（２，４，６−トリメチルアニリノ）−２Ｈ−イソキノリン−１−オン；８−（２，６−ジメチルアニリノ）−２Ｈ−イソキノリン−１−オン；８−（４−フルオロ−２，６−ジメチル−アニリノ）−４−メチル−２Ｈ−フタラジン−１−オン；−４−エチル−８−（２，４，６−トリメチルアニリノ）−２Ｈ−フタラジン−１−オン；４−イソプロピル−８−（２，４，６−トリメチルアニリノ）−２Ｈ−フタラジン−１−オン；−４−（２−ヒドロキシエチル）−８−（２，４，６−トリメチルアニリノ）−２Ｈ−フタラジン−１−オン；−８−（２，６−ジエチル−４−フルオロ（ｆｌｕｒｏ）−アニリノ）−４−メチル−２Ｈ−フタラジン−１−オン；８−（４−クロロ−２，６−ジメチル−アニリノ）−４−メチル−２Ｈ−フタラジン−１−オン；−４−エチル−８−（４−フルオロ−２，６−ジメチル−アニリノ）−２Ｈ−フタラジン−１−オン；−５−（２−プロピルピラゾール−３イル）２−２（２，４，６−トリメチルアニリノ）ベンズアミド；−５−メトキシ−２−（２，４，６−トリメチルアニリノ）ベンズアミド；５−クロロ−２−（２，４，６−トリメチルアニリノ）ベンズアミドである。
【００３９】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、一般式：
Ａｒ２−Ｘ
【化４】
2020114870.tif 000005
Ｙ
【化５】
2020114870.tif 000006
Ｚ−Ｗ−Ａｒ１
を有する化合物であり、式中：
Ａｒ１は、必要に応じて置換される複素環または芳香族複素環であり；
Ａｒ２は、必要に応じて置換される複素環または芳香族複素環であり；
Ｗは、ＮＲａ−、Ｏまたは−ＣＨ２−であり、ここで、Ｒａは、水素またはＣ１−Ｃ３アルキルであり；
Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、Ｏ、−ＣＨ２−、＝Ｎ−または＝ＣＨ−であり；
Ｙは、−ＮＲａ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ＝、−ＣＨ＝、＝Ｎ−または＝ＣＨ−であり；Ｘは、−ＮＲａ−、−Ｎ＝、−ＣＨ＝または−ＣＨ２−である。
【００４０】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、一般式：
【化６】
2020114870.tif 000007
を有する化合物であり、式中、
Ａｒ１は、芳香族複素環であり；
Ｗ、Ｚ、ＹおよびＸは、先に定義されたとおりであり；
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ペルハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ペルハロアルコキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルオキシであり；
Ｒ３およびＲ４は、ｈ、ｉまたはｊに位置し得るが、同時に同じ位置には位置せず；
Ｘ２は、Ｎまたは−ＣＲｂ−であり、ここで、Ｒｂは、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ペルハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ペルハロアルコキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルオキシである。
【００４１】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、一般式：
【化７】
2020114870.tif 000008
を有する化合物であり、式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ペルハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ペルハロアルコキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルオキシであり；
Ｒ５の各存在は、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ６ペルハロアルキル、Ｃ１−Ｃ４ペルハロアルコキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルオキシであり；
ｎは、０、１、２、３または４である。
【００４２】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、一般式：
【化８】
2020114870.tif 000009
を有する化合物であり、式中：
Ａは、直接的な結合または（ＣＲ）であり、Ｂ、ＣおよびＤは、独立して、（ＣＲ）およびＮからなる群より選択され、ここで、Ｒは、Ｈまたはアルキルであるが、但し、Ｂ、ＣおよびＤのすべてがＮであるとは限らず、Ａが直接的な結合であるとき、Ｄは、（ＣＲ）であり；
Ｒ３は、アルキルからなる群より選択され；
Ｘは、Ｏ、ＮＲ４およびＣＲ４Ｒ５からなる群より選択され、ここで、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈおよびアルキルからなる群より選択され；
Ｙは、ＯまたはＳからなる群より選択され；
Ｚは、置換アリール環である。
【００４３】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、一般式：
【化９】
2020114870.tif 000010
を有する化合物であり、式中：
Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈおよびアルキル、メトキシ、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトリルおよびトリフルオロメチルからなる群より選択され；
Ｒ３は、独立して、アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトリルおよびトリフルオロメチルからなる群より選択され；
Ｄは、ＣＲまたはＮであり；
Ｒは、Ｈまたはアルキルであり；
Ｘは、Ｏ、ＮＲ４、ＣＲ４Ｒ５であり、ここで、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈおよびアルキル、例えば、低級アルキルからなる群より選択され、１〜１０個の炭素を有し得、３〜１０個の炭素を有する環状または分枝鎖のアルキル、メトキシ、ヒドロキシル、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ、ニトリルおよびトリフルオロメチルであり得；
Ｙは、ＯまたはＳであり、
Ｚは、以下の構造：
【化１０】
2020114870.tif 000011
を有する置換アリール環であり、ここで、Ｒ６およびＲ７は、独立して、アルキルからなる群より選択され、１〜１０個の炭素を含み得、３〜１０個の炭素を有する環状または分枝鎖のアルキル、メトキシ、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトリルおよびトリフルオロメチルであり得；
Ｅは、ＮまたはＣＲであるか；
または、式中：
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、独立して、Ｈ、ハロゲン、メチルまたはイソプロピルであり；Ｘは、ＮＲ４であり；
Ｒ４は、Ｈであり；
Ｙは、Ｏであり；
Ｒ６およびＲ７は、独立して、Ｈまたはクロロであり；
Ｅは、ＮまたはＣＲであり；
Ｒは、Ｈである。
【００４４】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−２−（４−メチル−１，８−ナフチリジン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−２−（４−イソプロピル−１，８−ナフチリジン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−２−（４−イソプロピル−５，８−ジメチルキノリン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−２−（４−イソプロピルキノリン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）−２−（４，８−ジメチルキノリン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−２−（４，８−ジメチルキノリン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）−２−（４−メチルキノリン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミド；およびＮ−（３，５−ジクロロフェニル）−２−（４，５，８−トリメチルキノリン−２−イル）ヒドラジンカルボキサミドからなる群より選択される小分子である。
【００４５】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、一般式：
【化１１】
2020114870.tif 000012
を有する化合物であり、式中：
Ｒ１Ｒ２は、独立して、Ｈおよびアルキル、メトキシ、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトリルおよびトリフルオロメチルからなる群より選択され；
Ｒ３は、独立して、アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトリルおよびトリフルオロメチルからなる群より選択され；
Ｘは、Ｏ、ＮＲ４、ＣＲ４Ｒ５であり、ここで、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈおよびアルキル、例えば、低級アルキルからなる群より選択され、１〜１０個の炭素を有し得、３〜１０個の炭素を有する環状または分枝鎖のアルキル、メトキシ、ヒドロキシル、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ、ニトリルおよびトリフルオロメチルであり得；
Ｙは、ＯまたはＳであり；
Ｒは、Ｈ、メトキシまたはアルキルであり；
Ｚは、以下の構造：
【化１２】
2020114870.tif 000013
を有する置換アリール環であり、ここで、Ｒ６およびＲ７は、独立して、アルキルからなる群より選択され、１〜１０個の炭素を含み得、３〜１０個の炭素を有する環状または分枝鎖のアルキル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ヒドロキシル、ハロゲン、ニトリルおよびトリフルオロメチルであり得；Ｅは、ＮまたはＣＲであるか；
または、式中：
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、独立して、メチルまたはイソプロピルであり；
Ｘは、ＮＲ４またはＣＲ４Ｒ５であり；
Ｒ４は、Ｈであり；
Ｒ５は、Ｈであり；
Ｙは、Ｏであり；
Ｒ６およびＲ７は、独立して、アルキルからなる群より選択され、１〜５個の炭素、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、クロロおよびトリフルオロメチルを含み得；
Ｅは、ＮまたはＣＲであり；
Ｒは、Ｈまたはメトキシである。
【００４６】
別の実施形態において、Ｓ１ＰＲ２阻害剤は、Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；１−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）−３−（（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；Ｎ−（２−ブチル−６−クロロピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（２−クロロ−６−エトキシピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；１−（３，５−ジクロロフェニル）−３−（（１，３，７−トリメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；Ｎ−（２，６−ジクロロピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（３−クロロ−５−メトキシピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；１−（２，６−ジクロロフェニル）−３−（（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；１−（２−クロロ−６−メトキシピリジン−４−イル）−３−（（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；Ｎ−（２−クロロ−６−プロピルピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；１−（２−クロロ−６−プロピルピリジン−４−イル）−３−（（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；１−（２−クロロ−６エトキシピリジン−４−イル）−３−（（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；１−（２−クロロ−６−プロポキシピリジン−４−イル）−３−（（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；Ｎ−（２−クロロ−６−プロポキシピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；Ｎ−（２−ブトキシ−６−クロロピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；１−（２−ブトキシ−６−クロロピリジン−４−イル）−３−（（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）メチル）尿素；Ｎ−（２−エトキシピリジン−４−イル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミド；およびＮ−（５−クロロ−２，４−ジメトキシフェニル）−２−（７−イソプロピル−１，３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−５−イル）ヒドラジンカルボキサミドからなる群より選択される小分子である。
【００４７】
投与
本明細書中に記載されるような組成物を被験体に投与する任意の好適な方法が使用され得る。これらの方法において、それらの組成物は、任意の好適な経路によって、例えば、静脈内注射によって全身に、眼内注射によって直接、経口的などによって、被験体に投与され得る。それらの組成物は、例えば、内側もしくは外側の標的部位への外科的送達によって、または血管によって接近可能な部位へのカテーテルによって、標的部位に直接投与され得る。例えば、ＦＥＶＲを処置する方法では、本明細書中に記載されるような組成物は、眼内注射によって、経口的に、または静脈内に、送達され得る。それらの組成物は、単回ボーラスで、複数回の注射で、または持続注入（例えば、静脈内または髄腔内（ｉｎｔｅｒａｔｈｅｃａｌｌｙ）、腹膜透析、ポンプ注入による）によって、投与され得る。非経口的投与の場合、それらの組成物は、好ましくは、滅菌された発熱物質非含有形態で製剤化される。上で示されたように、本明細書中に記載される組成物は、滅菌された注射に適した形態であり得る。そのような組成物を調製するために、好適な活性な治療薬は、非経口的に許容され得る液体ビヒクルに溶解されるかまたは懸濁される。使用してもよい許容され得るビヒクルおよび溶媒には、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウムまたは好適な緩衝液を加えることによって好適なｐＨに調整された水、１，３−ブタンジオール、リンガー溶液ならびに等張性塩化ナトリウム溶液およびデキストロース溶液がある。水性製剤は、１つまたはそれを超える保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピル）も含み得る。それらの化合物のうちの１つが、ほんのわずかしか水に溶けないか少ししか水に溶けない場合、溶解促進剤もしくは可溶化剤が加えられ得るか、または溶媒に１０〜６０％ｗ／ｗのプロピレングリコールなどが含められ得る。本明細書中に記載される組成物は、従来の薬学的実施に従う任意の好適な製剤で、哺乳動物（例えば、げっ歯類、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ）に投与され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ  ｅｄ．），ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２０００）、ならびにこの分野およびＵＳＰ／ＮＦの標準的なテキストであるＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８−１９９９））。例示的な薬学的に許容され得るキャリアおよび希釈剤ならびに薬学的製剤の説明は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：前出に見られ得る。組成物を安定化させるためおよび／または保存するために、他の物質が組成物に加えられてもよい。
【００４８】
本明細書中に記載される治療方法は、通常、治療有効量の本明細書中に記載される組成物を、それを必要とする被験体（例えば、動物、ヒト）（哺乳動物、特にヒトを含む）に投与することを含む。そのような処置は、ある疾患、障害もしくはその症状に罹患しているか、ある疾患、障害もしくはその症状を有しているか、ある疾患、障害もしくはその症状に感受性であるか、またはある疾患、障害もしくはその症状のリスクがある被験体、特にヒトに適切に施される。「リスクがある」被験体の決定は、診断試験または被験体もしくは医療提供者の所見による任意の客観的もしくは主観的な決定によって行われ得る。本明細書中の方法および組成物は、貧血に関係する他の任意の障害または疾患の処置において使用され得る。
【００４９】
有効用量
本明細書中に記載される組成物は、好ましくは、有効量、すなわち、処置された哺乳動物において望ましい結果をもたらすことができる量で哺乳動物（例えば、ヒト）に投与される（例えば、Ｓ１ＰＲ２阻害剤の投与によるＦＥＶＲまたはＲＯＰの処置）。そのような治療有効量は、標準的な方法に従って決定され得る。
【００５０】
本発明の方法において使用される組成物の毒性および治療効果は、標準的な薬学的手順によって決定され得る。医学および獣医学の分野において周知であるように、任意の一被験体に対する投与量は、多くの因子に依存し、それらの因子としては、被験体のサイズ、体表面積、齢、投与される特定の組成物、投与時間および投与経路、全般的な健康状態、ならびに同時に投与される他の薬物が挙げられる。本明細書中に記載されるような組成物の送達用量は、前臨床有効性および前臨床安全性に基づいて決定され得る。
【実施例】
【００５１】
以下の具体的な実施例によって、本発明がさらに例証される。これらの実施例は、単に例証のために提供されるのであって、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。
【００５２】
Ｓ１Ｐが、網膜血管系の発生において決定的な役割を果たすので、Ｓ１ＰＲ２シグナル伝達を阻害すると、ＦＥＶＲおよびＲＯＰにおいて観察される血管発生の欠陥が回復する。例えば、Ｓ１Ｐに結合して不活性化する、Ｓ１Ｐに対するモノクローナル抗体を、レーザー誘発性脈絡膜新生血管形成に供されたマウスに眼内注射によって投与することにより、正常な網膜の血管再生が有意に増強される。さらに、Ｓ１Ｐ２は、低酸素ストレスにおける内皮細胞において強く誘導されることから、Ｓ１Ｐが、Ｓ１ＰＲ２を介してシグナル伝達することにより、ＲＯＰにおいて観察される異常な血管系がもたらされると示唆される。さらに、ＲＯＰモデルに供された新生仔Ｓ１ｐｒ２−／−マウスは、病的な新生血管形成、内皮の間隙および炎症細胞浸潤の減少を示す。最後に、マウスにおけるＳ１ＰＲ１の出生後の不活性化は、異常な網膜血管系をもたらし、これは、Ｓ１ＰＲ１とＳ１ＰＲ２が網膜血管の発生の制御に対抗して作用することと一致する。Ｓ１ｐｒ２−／−Ｔｓｐａｎ１２−／−ダブルノックアウトマウスを作製したところ、野生型マウスに似た、網膜血管系のパターン形成の著しい回復が観察された（図６）。Ｆｚｄ４−／−Ｓ１ｐｒ２−／−マウスも作製したところ、これらのマウスも、網膜血管系のパターン形成の回復を示す。したがって、Ｓ１ＰＲ２の阻害は、ＦＥＶＲおよびＲＯＰなどの疾患に対する重要な治療的アプローチである。
【００５３】
Ｓ１ＰＲ２アンタゴニストのコンピュータ支援ドラッグデザイン
一般に、Ｇタンパク質共役受容体は、極めて創薬しやすい（ｄｒｕｇｇａｂｌｅ）と考えられており、Ｓ１ＰＲ１−３および−５を同時に標的化する広範な特異性Ｓ１ＰＲアゴニスト（Ｆｉｎｇｏｌｉｍｏｄ、商品名Ｇｉｌｅｎｙａ）が、多発性硬化症の処置用に販売中である。これまで、コンピュータ支援ドラッグデザインを用いて、脂質酵素の小分子阻害剤のデザインおよび合成に成功してきており、それらの小分子阻害剤は、現在、その後の第１／２ａ相臨床試験に向けた後期の前臨床評価にある。Ｓ１ＰＲ２アンタゴニストのデザインおよび試験に対しても同様の開発の道筋を用いることができる。
【００５４】
コンピュータによる手段によってＳ１ＰＲ２の阻害剤を同定するために、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）プログラムを用いて、Ｓ１ＰＲ１の構造のモデリングが行われた。このプロセス全体を通して、ＣＨＡＲＭＭ２７力場を実行し、気相環境を指定した。Ｓ１ＰＲ２のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔアーカイブから得た。Ｓ１ＰＲ２およびＳ１ＰＲ１のアミノ酸配列をアラインメントし、そのアラインメントから相同性モデルを作製した。作製されたモデルを、３１０Ｋの温度、７．０のｐＨおよび０．１ｍｏｌ／Ｌの塩濃度に対して、プロトン化した。ＭＯＥにおけるサイトファインダーツール（ｓｉｔｅ  ｆｉｎｄｅｒ  ｔｏｏｌ）を用いて、受容体の結合ポケットを特定した。そのタンパク質の細胞外の面に位置する３４アミノ酸から構成されるポケットが特定され、これは、その対応物Ｓ１ＰＲのポケットと相関する（図７）。
【００５５】
Ｓ１ＰＲ２受容体の主要なリガンドＳ１Ｐは、３つの異なる化学的領域を有する。これらの領域（図８）を用いて、領域１、２または３のいずれかを含む類似の分子についてＰｕｂＣｈｅｍデータベースを検索した。加えて、硫酸基は、ホスフェートのバイオアイソスターであるので、硫酸基もその検索に含めた。以下の判定基準に基づいて、化合物を同定した：それらの化合物は、３９０未満の分子量、領域２および３に対しては−１〜７のＸＬｏｇＰ値、または領域１に対しては５未満のＸＬｏｇＰ値および３５〜１２０の極性の総表面積を有しなければならない。各領域から特定された化合物を、データベースとしてＭＯＥにインポートした。領域１に対して合計６２，１２５個の結果；領域２に対して２，９７１個の結果、および；領域３に対して１３，４４２個の結果が得られた。まず、これらの分子を、その構造に含められている可能性がある任意の塩イオンを除去するために洗浄し、気相環境におけるＣＨＡＲＭＭ２７力場を用いてエネルギー最適化した。次いで、それらの化合物を、Ｓ１ＰＲ２上の特定された結合ポケットを通じて仮想スクリーニングにかけた。
【００５６】
仮想スクリーニングの結果から、各領域に対する最善の１００個の化合物を選択し、より厳格なドッキング法に供した：Ｓ１ＰＲ２およびＳ１ＰＲ１に対する当てはめを誘導した。このドッキングは、そのポケットを裏打ちしているアミノ酸側鎖ならびにドッキングされるリガンドが動くことを許容する。得られたデータベースを、Ｓ１Ｐのスコアよりも良好なＳスコアを有する化合物について調べたところ、そのデータベースは、Ｓ１ＰＲ１と比べてＳ１ＰＲ２に特異的と予測した。次いで、特定された化合物を、購入可能性についてスクリーニングし、２１個（図８）が、商業的に入手可能であると見出され、試験のための実行可能な標的として選択した。それらのＰｕｂＣｈｅｍ識別は、以下：３３８２７７８；４４３１７１４２（５２０および６４４２６０としても）；５４７３６８６５；３８６６３４２；４６８９１７７０（３２４７０４１としても）；５１６２４４０６；９５７８２９１；９８６４１５６；３６５０１５；２８０９４４８０；４０５９２６７６；１０８８３３９６；３４２３０２；５６９２３８４５；５４７３４９１２；１８３９０５９０；５６９２３９２８；５１５０８５４８；２８９６０３５４；５１６２４６８３；２７９９３であった。それらの有効性は、Ｓ１ＰＲ２に対していくらか特異性を有する低親和性Ｓ１ＰＲ阻害剤であるツール化合物ＪＴＥ−１０３と容易に比較され得る。
【００５７】
ＦＥＶＲのゼブラフィッシュモデルおよびマウスモデルにおけるＳ１ＰＲ２アンタゴニストの確認
ノックアウトアプローチによって、ヒトの疾患を再現するゼブラフィッシュモデルの作製が可能になり、より時間がかかり高額な哺乳動物の研究の前に、薬物スクリーニングのための迅速な中間のインビボ工程が可能になる。Ｓ１ＰＲ２薬物標的およびＦＺＤ４経路は、ゼブラフィッシュとヒトとの間で高度に保存されている。ＴＡＬＥＮシステムを用いて、生殖系列ｆｚｄ４−／−のゼブラフィッシュを作製した（図９）（その阻害がこのモデルにおいても正常な血管系を回復させることを確かめるために、モルホリノをｓ１ｐｒ２に対して用いた）。
【００５８】
同定されたＳ１ＰＲ２阻害剤ならびに公知のツール化合物ＪＴＥ−１０３をアッセイするために、３つのｆｚｄ４−／−ゼブラフィッシュ胚を９６ウェルプレートに整列させる。次いで、受精の２４時間後（ｈｐｆ）に、化合物を１〜３０μＭの最終濃度でその胚プレートに移す。次いで、胚を化合物とともに２８．５℃で１２時間インキュベートし、肉眼で見える全体的な発生作用についてスクリーニングする。次いで、様々な時間枠（２〜１２日間）において、胚にＴｒｉｃａｉｎｅ（ＭＳ−２２２）を過剰投与し、４％パラホルムアルデヒド中で固定し、網膜血管系を決定し得る。続いて、ゼブラフィッシュに対して最も良好に正常な血管系を回復する化合物をＴｓｐａｎ１２−／−マウスおよびＦｚｄ４−／−マウスにおいて試験することにより、最も有効な治療的化合物を単離する。
【００５９】
マウスにおける研究の場合、化合物は、Ｐ７、Ｐ１０、Ｐ１７およびＰ２８において眼内注射によってマウスの眼に送達される（１〜３０μＭ）（各化合物の５つの用量に対して、化合物１つあたり８〜１２匹のマウス）。この時間枠は、どの段階においてＦＥＶＲがＳ１ＰＲ２アンタゴニストによって有効に処置され得るかを決定する。次いで、ｓ１ｐｒ２−／−ｔｓｐａｎ１２−／−マウスおよびｓ１ｐｒ２−／−ｆｚｄ４−／−マウスの研究に対して上に記載されたように、網膜の表現型および眼の機能を決定する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【外国語明細書】
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