(57)【要約】【課題】実質的にアスタキサンチン以外の油性成分を殆ど含有しない、アスタキサンチン含有粉末及びその製造方法を提供することを課題とする。【解決手段】アスタキサンチンを含有する液状油と多孔性微粒子を混合し、超臨界抽出法で抽出操作を行い、抽出残渣を回収、アスタキサンチンと多孔性微粒子からなるアスタキサンチン含有粉末を得る。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスタキサンチンと多孔性微粒子からなるアスタキサンチン含有粉末。
【請求項２】
多孔性微粒子に形成された孔中にアスタキサンチンが担持されている粒子からなるアスタキサンチン含有粉末。
【請求項３】
多孔性微粒子が二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、多孔質でんぷんから選択される１以上の物質である請求項１又は２に記載のアスタキサンチン含有粉末。
【請求項４】
粉末あたり８〜３０質量％のアスタキサンチンを含有する請求項１〜３のいずれかに記載のアスタキサンチン含有粉末。
【請求項５】
アスタキサンチンを含有する液状油と多孔性微粒子を混合し、１５ＭＰａ以上の圧力条件で、超臨界抽出操作を行い、抽出残渣を回収することを特徴とするアスタキサンチン含有粉末を製造する方法。
【請求項６】
多孔性微粒子が二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、多孔質でんぷんから選択される１以上の物質からなる粉末である請求項５に記載のアスタキサンチン含有粉末の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アスタキサンチン含有粉末に関する。
【背景技術】
【０００２】
アスタキサンチンは、一部の藻類やオキアミ、エビ、鯛、鮭などに含まれ、自然界に広く分布する色素物質である。β−カロテンやリコピンなどと同じくカロテノイドの一種で、キサントフィル類に分類される。ＩＵＰＡＣ名は３，３’−ジヒドロキシ−β，β−カロテン−４，４’−ジオンである。甲殻類では殻に存在し、それらを餌とするマダイでは体表に、サケ科魚類では筋肉の赤色部分などに見られる。アスタキサンチンは高い抗酸化作用を持ち、紫外線や脂質過酸化反応から生体を防御する因子として働いていると考えられる。このためアスタキサンチンを配合したサプリメントや健康食品、スキンケア用品（基礎化粧品）なども発売されている。 
【０００３】
アスタキサンチンには、３つの光学異性体と４つの幾何異性体が存在する。生体内では遊離型、モノエステル型、ジエステル型の３形態が可能であるが、多くは脂肪酸エステル型として存在している。通常は、これらの異性体を区別せずにアスタキサンチンと呼んでいる。
【０００４】
アスタキサンチンは、天然物由来のものまたは化学合成により得られるものが存在する。天然物由来のものとしては、例えば、エビ、オキアミ、カニなどの甲殻類の甲殻、卵および臓器、種々の魚介類の皮および卵、緑藻ヘマトコッカスなどの藻類、赤色酵母ファフィアなどの酵母類、海洋性細菌、福寿草および金鳳花などの種子植物から得られるものなどがある。天然物由来のアスタキサンチンおよびアスタキサンチンの化学合成品は市販され、または公知の方法で製造されるので、入手は容易である。
【０００５】
天然物由来のアスタキサンチンは、例えば、赤色酵母ファフィア・ロドザイマの培養（特許文献１）、緑藻ヘマトコッカス・ブルビアリスの培養（特許文献２）で得られる。培養や抽出のしやすさ、アスタキサンチンを最も高濃度で含有すること、生産性の高さから、天然物としては緑藻ヘマトコッカスが最も良く利用されている。
【０００６】
アスタキサンチンの抽出・精製方法については種々の方法が知られている。例えば、アスタキサンチンおよびそのエステルは油溶性物質であることから、アセトン、アルコール、酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルムなどの油溶性有機溶媒で上記天然物からアスタキサンチンを抽出することができる。また、二酸化炭素や水などを用い、超臨界抽出を行うこともできる。抽出の後、常法に従って溶媒を除去し、モノエステル型のアスタキサンチンとジエステル型のアスタキサンチンの混合濃縮物を得ることができる。さらに、分離カラムやリパーゼ分解によってこの濃縮物を精製することができることが知られている。
【０００７】
アスタキサンチンの化学合成法も開発されている。
特許文献３にはエーテル系溶媒中でカンタキサンチンと金属ビストリメチルシリルアミドとから調製されるカンタキサンチンジ金属エノレートに、低温下でオキサジリジン化合物の非プロトン性極性溶媒の溶液を加えるか、又は低温下で該非プロトン性極性溶媒を加えた後、低温下で該オキサジリジン化合物を加え、次いで酸性物質を加え、得られる反応液から低温下で未反応のカンタキサンチンを分離するアスタキサンチンの製造方法が記載されている。
またアスタキサンチンは、ベータカロテンなどの他のカロテノイドと同様に油溶性が高く、アスタキサンチン単独で結晶化や粉末状とすることは困難である。このため、アスタキサンチンは、アスタキサンチン溶解性の有機溶媒や油脂に溶解させて利用している。食品や医薬品に利用する場合は、通常はヘマトコッカス由来のトリグリセリドを含む抽出物をさらに食用油に溶解分散させたアスタキサンチン含有液状油として利用している。この市販されているアスタキサンチン含有液状油中には、アスタキサンチンが１〜２０質量％含有されている（非特許文献１）。
【０００８】
液状油の形態であるアスタキサンチンを粉末化しようとする試みもなされている。これは、一般的に行なわれる乳化技術と噴霧乾燥などの乾燥技術の組み合わせによるものである。
特許文献４には、アスタキサンチン含有ヘマトコッカス藻体の破砕物、界面活性剤、抗酸化剤、賦形剤及び水からなる懸濁液を乾燥してアスタキサンチン含有粉末を得る方法が記載されている。
特許文献５には、アスタキサンチンを含む液状油と乳化剤とデキストリンや乳糖などの賦形剤を含有する水相からなるエマルジョン溶液を噴霧乾燥する技術が開示されている。
特許文献６には、アスタキサンチンを含有するヘマトコッカス藻色素含有液状油とトコフェロールの混合物と、ショ糖ラウリン酸エステル、ラウリン酸ポリグリセリル−１０、レシチン、イヌリン、水からなる溶液を混合して乳化液を調製しこれを噴霧乾燥してアスタキサンチン含有粉末を調製する技術が開示されている。
これらの粉末には、食用油成分や乳化剤や賦形剤が含有されており、さらにアスタキサンチンを溶解させている液状油の成分が含有されている。このためアスタキサンチン含有粉末として必ずしも取り扱いやすいものではなかった。特にアスタキサンチンを高濃度配合した錠剤を製造する場合は、打錠適性に問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平０３−２０６８８０号公報
【特許文献２】特開平０７−０３９３８９号公報
【特許文献３】特開平０７−１１８２２７号公報
【特許文献４】国際公開第０２／０７７１０５号
【特許文献５】特開２０１１−２４１１７６号公報
【特許文献６】特開２００９−０６２３３１号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】オリザ油化株式会社発行カタログｖｅｒ．２．２ＳＪ「アスタキサンチン」https://www.oryza.co.jp/pdf/japanese/astaxanthin_j%202.2SJ.pdf
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
アスタキサンチンは、医薬品や食品原料として食用液状油に溶解分散した状態で提供されている。このアスタキサンチン含有液状油から、アスタキサンチンのみを分離することは、複雑な分離操作が必要である。またアスタキサンチンを粉末化するためには、上記の通りアスタキサンチン含有液状油に賦形剤や乳化剤と水を添加し、乳化組成物を調製し、これを噴霧乾燥などの乾燥手段で乾燥させて粉末化していた。このため、アスタキサンチン含有粉末には高濃度の油性成分が含有されている。
本発明者は、アスタキサンチンを高含有する粉末組成物を調製するために研究を行ってきた。試行錯誤を繰り返しながら検討し、実質的にアスタキサンチン以外の油性物を殆ど含まないアスタキサンチン粉末を得る技術を見出した。
すなわち本発明は、実質的にアスタキサンチン以外の油性成分を殆ど含有しない、アスタキサンチン含有粉末及びその製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の主な構成は以下の通りである。
（１）アスタキサンチンと多孔性微粒子からなるアスタキサンチン含有粉末。
（２）多孔性微粒子に形成された孔中にアスタキサンチンが担持されている粒子からなるアスタキサンチン含有粉末。
（３）多孔性微粒子が二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、多孔質でんぷんから選択される１以上の物質である（１）又は（２）に記載のアスタキサンチン含有粉末。
（４）粉末あたり８〜３０質量％のアスタキサンチンを含有する（１）〜（３）のいずれかに記載のアスタキサンチン含有粉末。
（５）アスタキサンチンを含有する液状油と多孔性微粒子を混合し、１５ＭＰａ以上の圧力条件で超臨界抽出操作を行い、抽出残渣を回収することを特徴とするアスタキサンチン含有粉末を製造する方法。
（６）多孔性微粒子が二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、多孔質でんぷんから選択される１以上の物質からなる粉末である（５）に記載のアスタキサンチン含有粉末の製造方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、実質的にアスタキサンチン以外の油性成分を殆ど含まないアスタキサンチン含有粉末が提供される。また実質的にアスタキサンチン以外の油性成分を殆ど含有しないアスタキサンチン粉末の製造方法が提供される。本発明の粉末は、油性成分を殆ど含有していないため、水分散性に優れ、経口摂取したときの吸収性に優れている。また打錠適性に優れた粉末となる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の粉末調製に用いる多孔性微粒子の構造を例示する。左図は多孔性微粒子の構造の断面模式図である。右図はケイ酸カルシウムの走査型電子顕微鏡画像である。
【図２】本発明のアスタキサンチン含有粉末を調製するための操作工程を示す模式図である。
【図３】実施例１〜３に使用した多孔性微粒子の画像（上段）、実施例１〜３のアスタキサンチン含有粉末の粒子（下段）の走査型電子顕微鏡観察画像である。
【図４】多孔質でんぷん/アスタキサンチン粉末、ケイ酸カルシウム/アスタキサンチン粉末、二酸化ケイ素/アスタキサンチン粉末、精製アスタキサンチン（コントロール）の日本薬局方に基づく溶出試験の結果を示すグラフである。
【図５】本発明のアスタキサンチン含有粉末を投与したラットとアスタキサンチン含有液状油（アスタリール５０ＦＣ）を投与したラットの、血中アスタキサンチン濃度のＣｍａｘを比較するグラフである。
【図６】本発明のアスタキサンチン含有粉末を投与したラットとアスタキサンチン含有液状油（アスタリール５０ＦＣ）を投与したラットの血中アスタキサンチン濃度変化に基づくＡＵＣ値を比較するグラフである。
【図７】本発明のアスタキサンチン含有粉末、アスタキサンチン含有液状油（アスタリール５０ＦＣ）、市販アスタキサンチン含有製剤、自己乳化型アスタキサンチン製剤を投与したラットの血中アスタキサンチン濃度推移のグラフである。
【図８】本発明のアスタキサンチン含有粉末と市販品アスタキサンチン粉末原料を錠剤に製し、打錠特性を比較するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、アスタキサンチンと多孔性微粒子からなるアスタキサンチン含有粉末及びその製法に関する。
アスタキサンチンは、液状油に溶解分散した状態で一般に提供されているが、このアスタキサンチン含有液状油から、アスタキサンチンのみを分離することは、困難である。
【００１６】
本発明の粉末には、実質的にアスタキサンチン以外の食用油などの油性成分は殆ど含有されない。また本発明の粉末は、アスタキサンチンと多孔性微粒子からなる粉末であり、本願で開示される製造方法によってはじめて得ることができたものである。
【００１７】
本願明細書において、アスタキサンチンとは、アスタキサンチンの遊離体、アスタキサンチン脂肪酸モノエステル、アスタキサンチン脂肪酸ジエステルの群から選ばれる少なくとも１種からなるものである。脂肪酸エステルとは、炭素数が２個以上の飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸の群から選ばれる少なくとも１種以上からなるものである。
【００１８】
アスタキサンチンは、合成品及び／又は天然品のいずれであっても良いが、生体の安全性を考慮すると天然由来品、例えばヘマトコッカス藻体、ファフィア酵母又はオキアミ等から抽出されるアスタキサンチンが好ましく、工業的に大量且つ安定に入手できるヘマトコッカス藻体からの抽出アスタキサンチンが特に好適である。このようなアスタキサンチンとしてはアスタリールオイル５０Ｆ（アスタキサンチン５質量％含有：富士化学工業株式会社製）、アスタキサンチン２０（アスタキサンチン２０質量％含有：オリザ油化株式会社製）などが例示できる。アスタキサンチンの濃度は高いものが好ましい。
【００１９】
アスタキサンチンとして、ヘマトコッカス由来のアスタキサンチンオイルを使用するときは、オイル中のアスタキサンチンの含量とその他の夾雑物（主な成分は、モノ、ジ、トリグリセリド）の成分の重量に基づいて多孔性微粒子の使用量を設定することができる。具体的には、アスタキサンチン１質量部に対し、多孔性微粒子０．１〜２０質量部であり、好ましくは１〜１０質量部、より好ましくは１〜６質量部である。
【００２０】
本発明において、多孔性微粒子とは、粉末の粒子径が２〜５μｍの平均粒子径を有する微粉末であって、平均細孔径２〜３０ｎｍの空隙を有し、水不溶性の有機又は無機粉末であって、水濡れ性を有するものが好ましい。このような多孔性微粒子としては、ゼオライト、カオリナイト、モンモリロナイトなどの粘度鉱物、ケイ酸カルシウム、二酸化ケイ素などのケイ酸化合物、多孔質セルロース、多孔質デンプンなどが例示できる。これらの中でも本発明に適した多孔性微粒子として、ケイ酸カルシウム、二酸化ケイ素、多孔質デンプンが例示される。なお、これらの多孔性微粒子は市販品を使用することができる。ケイ酸カルシウムとしては、「フローライト」（富田製薬株式会社）、二酸化ケイ素としては微粒二酸化ケイ素（「サイロページ７２０」：富士シリシア化学株式会社）、多孔質デンプンとしては「エフメルトF1」（富士化学工業株式会社）などが使用可能である。
【００２１】
本発明のアスタキサンチンと多孔性微粒子からなるアスタキサンチン含有粉末を得るためには、アスタキサンチンを含有する液状油と多孔性微粒子を所望する比率で混合し、これを、超臨界抽出装置を用いて、二酸化炭素を超臨界抽出溶媒として、２０〜５０℃、好ましくは３０〜４０℃の温度条件で、二酸化炭素の流速を１０〜１００ｇ／分の流速条件を設定して３０分〜１．５時間超臨界抽出操作を行う。超臨界抽出圧力は１５ＭＰａ以上５０ＭＰａ以下が好ましい。超臨界抽出によってアスタキサンチンを含有する液状油からアスタキサンチン以外の液状油や油性物質が抽出される。また多孔性微粒子は超臨界抽出法では、変化がなく、さらに抽出の過程で、抽出溶媒とともに油性成分とアスタキサンチンが、この多孔性微粒子の粒子中に形成されている空隙（多孔）部に浸入して、油性成分は超臨界溶媒と共に抽出されるがアスタキサンチンは、そのまま担持される。この空隙は図１に示すような空隙構造を有する。この空隙は粒子全体に分布し、粒子を貫通していても良い。そして、超臨界抽出装置における本発明の粉末が調製される過程を示す模式図を図２に示す。すなわち、粒子の空隙に浸透したアスタキサンチン含有液状油は、超臨界抽出操作によって油脂や油成分が選択的に抽出され、アスタキサンチンが粒子に担持される。
【００２２】
超臨界抽出が終了すると、多孔性微粒子に担持されたアスタキサンチンが、多孔性微粒子とともに超臨界抽出装置の抽出槽に残留する。この残渣には、微粉末粒子に存在する多孔（ポーラス）内及び粒子表面にアスタキサンチンのみが担持されて残留する。得られた残渣は、そのままアスタキサンチンを含む粉末となる。この粉末は、アスタキサンチンを粉末あたり８〜３０質量％のアスタキサンチンを含有する。また、この粉末は、実質的に油成分を含有しないため、流動性の良い粉体である。このため従来のアスタキサンチン含有粉末では困難な打錠成形による錠剤原料として使用できる。この粉末を打錠成形することで、アスタキサンチン高濃度含有錠剤として医薬品や健康食品とすることができる。
またこのアスタキサンチンを含む粉末は、水への分散性を有している。
【実施例】
【００２３】
以下に実施例、比較例及びそれを用いた試験例を示し、本発明を具体的に説明する。
１．超臨界抽出装置による粉末の調製例（１）
（１）製造方法
アスタキサンチン含有液状油「アスタリールオイル５０ＦＣ（アスタキサンチン５質量％含有；富士化学工業株式会社）」と多孔性微粒子を用いて、アスタキサンチン含有粉末を調製した。多孔性微粒子として微粒二酸化ケイ素（サイロページ７２０：富士シリシア化学株式会社）、ケイ酸カルシウム（フローライト：富田製薬株式会社）、多孔質デンプン（エフメルトF1：富士化学工業株式会社）添加粉末を表１に記載の比率で混合し均一化した。
次いで、超臨界抽出装置（三菱化工機株式会社）の耐圧容器（抽出槽、０．５Ｌ容器）に移し、抽出溶媒として二酸化炭素を用いて、昇温・昇圧操作を行い、２５ＭＰａ、４０℃の条件で１時間二酸化炭素を抽出溶媒として用い、ＣＯ２流速：６５ｇ／分で、超臨抽出操作を行った。
【００２４】
比較例として、比較例１：無添加、比較例２としてγシクロデキストリン粉末（Wacker  chemical  corporation）、比較例３としてホタテ末（エヌシーコーポレーション株式会社）を用いて表１に示す比率で同様に添加して超臨界抽出を行った。
【００２５】
（２）粉末の特性評価
１）残渣の状態
抽出槽に残った残渣の状態を目視で評価した。
【００２６】
２）残渣中のアスタキサンチン濃度
試料約１０ｍｇを精密に量り、ヘキサンを約３０ｍＬ加えて懸濁し、約３０〜４０℃で１０分間超音波処理を行い、ヘキサンで５０ｍＬにメスアップする。
波長４７０ｎｍの吸光度が約０．１〜２の範囲に収まるようにヘキサンでさらに希釈する。吸光度測定前に細孔径０．４５ｕｍのシリンジフィルターでろ過することが好ましい。試料溶液につきヘキサンを対照とし、吸光度測定法により試験を行い、波長４７０ｎｍの吸光度Ａを測定する。
アスタキサンチン含量（％）＝（Ａ×希釈倍率）／（２１００×Ｓ）
Ａ；試料溶液の４７０ｎｍでの吸光度、Ｓ；試料採取料（ｍｇ）、２１００；ヘキサン中での係数
【００２７】
３）水分散性
各試料を約１００ｍｇ、水１００ｍＬに投入し、薬さじで３０秒間混合した後、水溶液の状態を目視観察して評価した。
粉末又はペーストが均一に分散：〇、分散しない：×と評価した。
【００２８】
（３）評価結果
評価結果を表１に示した。
【００２９】
【表１】
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【００３０】
実施例１〜３は、いずれも取り扱いのしやすい、好ましい赤色粉末となった。またアスタキサンチン含有液状油に含有されている油成分は超臨界抽出により回収槽に移行していた。
得られた粉末中のアスタキサンチン濃度は、従来のアスタキサンチン含有粉末では困難であった８質量％以上の濃度となった。さらに、実施例１〜３の粉末はいずれも好ましい水分散性を有していた。
また、多孔性微粒子を用いるとアスタキサンチンを含む粉末を得ることができるが、シクロデキストリンやホタテ末のような非多孔性の粉末の場合アスタキサンチンは、抽出槽に残留するが、ペースト状を呈することから、粉末化のためには、添加する粉末の粒子が、多孔性であることが必要であるものと考えられた。さらに実施例１、２、３の粉末の粒子を走査型電子顕微鏡で観察したところ、アスタキサンチンは各粒子の粒子表面及び粒子の内部に担持されていることが、実施例１〜３に使用した多孔性微粒子の画像と比較観察することで確認できた（図３）。
【００３１】
２．超臨界抽出装置による粉末の調製例（２）
超臨界抽出の最適条件を検討した。
（１）製造方法
１と同様にアスタキサンチン含有液状油「アスタリールオイル５０FC（アスタキサンチン５質量％含有；富士化学工業株式会社）」とケイ酸カルシウム（フローライト：富田製薬株式会社）を表２に記載の比率で混合し、さらに表２の超臨界条件で、１時間二酸化炭素を抽出溶媒として用い、ＣＯ２流速：６５ｇ／分で、超臨界抽出操作を行った。
【００３２】
（２）粉末の特性評価
１）残渣の状態
抽出槽に残った残渣の状態を目視で評価した。
【００３３】
２）残渣中のアスタキサンチン濃度
１と同様にアスタキサンチン濃度を分析した。
【００３４】
３）水分散性
各試料を約１００ｍｇ、水１００ｍＬに投入し、薬さじで３０秒間混合した後、水溶液の状態を目視観察して評価した。
粉末又はペーストが均一に分散：〇、分散しない：×、と評価した。
【００３５】
（３）評価結果
評価結果を表２に示した。
【００３６】
【表２】
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【００３７】
表２に示すとおり、本発明の目的に合致した粉末を得るためには超臨界抽出条件として、１５ＭＰａ以上の高圧条件が必要なことが判明した。
【００３８】
３．添加する多孔性微粒子の相違による溶出性
実施例１、実施例２、実施例３と同様に調製した多孔性微粒子が相違する３種類のアスタキサンチン含有粉末について溶出試験を実施した。
（１）試験方法
日本薬局方に定める溶出試験法に準じて実施した。
試験条件
試験試料：
・多孔質デンプン／アスタキサンチン粉末：アスタキサンチン１０質量％含有（エフメルト）
・ケイ酸カルシウム／アスタキサンチン粉末：アスタキサンチン１５質量％含有（フローライト）
・二酸化ケイ素／アスタキサンチン粉末：アスタキサンチン１６質量％含有（サイロページ）
・精製アスタキサンチン（コントロール）
上記試料をアスタキサンチン３０ｍｇになるように試験に用いた。
試験液：溶出試験液第２液（ｐＨ６．８）＋０．１％ポリソルベート８０
パドル回転数：１００ｒｐｍ
検出器：ＵＶ（Ａ４６０ｎｍ）  オートサンプラーで分取し、溶出試験器付属のＵＶ計で測定した。
フィルター：細孔７０μｍを使用
【００３９】
（２）試験結果
図４に溶出試験結果を示す。
二酸化ケイ素／アスタキサンチン粉末（サイロページ）が特に高い溶出性を示した。
多孔性微粒子として二酸化ケイ素を用いて調製すると、アスタキサンチンの溶出性の良い粉末が調製できた。
【００４０】
４．動物試験（１）
経口投与によるアスタキサンチンの吸収性を試験した。
（１）試験方法
１）試験試料
・二酸化ケイ素／アスタキサンチン粉末：アスタキサンチン１６質量％含有（ＡＸＳＣ）
・アスタリールオイル５０ＦＣ（アスタキサンチン５質量％含有；富士化学工業株式会社）（コントロール）
２）使用動物    
種：ラット    系統：ＳＤ    性別：雄性    
実験処置時における週齢：８週齢
３）投与回数：経口単回投与
４）投与容量および投与経路    
アスタキサンチンとして５０ｍｇ／ｋｇとなるように強制経口投与する。
５）飼育条件
・動物搬入後、７日間馴化飼育を行う。
・７日目に体重を測定し、体重層別法により１群６匹に群分けし、夕刻から絶食する。
・絶食は被検物質の投与前日から１６時間以上行い、８時間後の採血後に給餌開始する。
・翌朝、薬物溶液を、ゾンデを用いて経口胃内投与する。
・イソフルラン吸入麻酔により非覚醒状態にし、ヘパリン処理注射筒を用いて、約２００μＬを採血する。採血ポイントは、投与前、投与後０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間の８ポイントとした。
・投与後は自由飲水とする。
【００４１】
６）血漿分析法
・前処理
血漿１００μＬを採取し、除タンパク処理を行なう。除タンパク処理は、酸化防止剤ＢＨＴを０．５ｍｇ／ｍＬ含有メタノール３００μＬを添加し、２０分間撹拌し、５分間氷冷後１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清２００μＬを採取する。
【００４２】
・分析
ＬＣ／ＭＳ（液体クロマト／マススペクトル）分析法により血漿アスタキサンチン量を測定する。
ＬＣ条件
カラム：Ｃａｐｃｅｌｌｐａｋ  ＣＯＲＥ  Ｃ１８  ２．１×７５ｍｍ  ２．７μｍ
カラム温度：３５℃
移動相  Ａ液：水
Ｂ液：アセトニトリル：メタノール＝１：１
グラジエント  Ｂ液
０分（９０％）→２−３分（１００％）→３．１−４．７分（９０％）
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
【００４３】
【表３】
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【００４４】
（２）結果
血漿中のアスタキサンチン濃度の変化から、Ｃｍａｘ及びＡＵＣを計算した。
Ｃｍａｘの結果を図５、ＡＵＣの結果を図６に示す。なお結果はスミルノフ・グラブス検定により外れ値を除外し、有意差検定を実施した。
【００４５】
ラットを用いた吸収試験の結果Ｃｍａｘ及びＡＵＣは、本発明のアスタキサンチン粉末がアスタキサンチンの生体吸収性を顕著に改善することがわかった。
【００４６】
５．動物試験（２）
本発明のアスタキサンチン含有粉末とアスタキサンチンの経口投与吸収性を改善した自己乳化型組成物（ＳＥＤＤＳ）、株式会社ファンケルで販売している製剤組成物（現行品）、アスタキサンチン原料であるアスタリール５０ＦＣ（コントロール）の３種の組成物を用いて、動物試験（１）と同様の条件によりアスタキサンチンの吸収性を試験した。
（１）試験方法
１）試験試料
・二酸化ケイ素アスタキサンチン粉末：アスタキサンチン１６質量％含有（本発明）
・吸収性改善自己乳化型組成物（ＳＥＤＤＳ）
・現行製剤用組成物（現行品）
・アスタリールオイル５０ＦＣ（アスタキサンチン５質量％含有；富士化学工業株式会社）（コントロール）
２）使用動物    
種：ラット    系統：ＳＤ    性別：雄性    
実験処置時における週齢：８週齢
３）投与回数  ：経口単回投与
４）投与容量および投与経路    
アスタキサンチンとして５０ｍｇ／ｋｇとなるように強制経口投与する。
５）飼育条件
・動物搬入後、７日間馴化飼育を行う。
・７日目に体重を測定し、体重層別法により１群６匹に群分けし、夕刻から絶食する。
・絶食は被検物質の投与前日から１６時間以上行い、８時間後の採血後に給餌開始する。
・翌朝、薬物溶液を、ゾンデを用いて経口胃内投与する。
・イソフルラン吸入麻酔により非覚醒状態にし、ヘパリン処理注射筒を用いて、約２００μＬを採血する。採血ポイントは、投与前、投与後０．５時間、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間の８ポイントとした。
・投与後は自由飲水とする。
【００４７】
６）血漿分析法
・前処理
血漿１００μＬを採取し、除タンパク処理を行なう。除タンパク処理は、酸化防止剤ＢＨＴを０．５ｍｇ／ｍＬ含有メタノール３００μＬを添加し、２０分間撹拌し、５分間氷冷後１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清２００μＬを採取する。
【００４８】
・分析
ＬＣ／ＭＳ（液体クロマト／マススペクトル）分析法により血漿アスタキサンチン量を測定する。
ＬＣ条件
カラム：Ｃａｐｃｅｌｌｐａｋ  ＣＯＲＥ  Ｃ１８  ２．１×７５ｍｍ  ２．７μｍ
カラム温度：３５℃
移動相  Ａ液：水
Ｂ液：アセトニトリル：メタノール＝１：１
グラジエント  Ｂ液
０分（９０％）→２−３分（１００％）→３．１−４．７分（９０％）  流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
【００４９】
【表４】
2020011927.tif 000006
【００５０】
（２）結果
本発明の組成物及び各試験試料の血漿中のアスタキサンチン濃度の変化を図７に示す。
【００５１】
ラットを用いた吸収試験の結果、図７に示すように本発明の組成物は、投与後４８時間にＣｍａｘが出現した。一方、コントロール、ＳＥＤＤＳ、現行品は、いずれもＣｍａｘが１〜３時間の間にあることが確認された。
各試験試料のアスタキサンチン血中濃度の経時推移の比較から、本発明の組成物による吸収性改善は、一般的な乳化技術による急速な吸収とは異なり、緩やかに生体内に吸収されていることが明らかとなった（図７参照）。
【００５２】
６．粉体特性（粉体の物性）
実施例１〜６の本発明の組成物はさらさらした粉末であり、付着性等もなく取り扱いが容易であった。
【００５３】
７．打錠適性
実施例１、実施例２、実施例３およびアスタキサンチン２質量％含有粉末原料市販品（アスタリールパウダー２０Ｆ；富士化学工業株式会社）を用いて錠剤を作製し、その打錠特性を比較した。
なお打錠特性の評価比較は次に示す文献記載の方法に基づいて評価した。
文献：Ｏｓａｍｕｒａ  Ｔ，  Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｙ，  Ｏｎｏｄｅｒａ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．．  Ｉｎｔ  Ｐｈａｒｍ  ２０１６；５１０：１９５−２０２
【００５４】
（１）試験錠剤の調製
錠剤１５０ｍｇ中にアスタキサンチンを６ｍｇ含有するように下記表５に示す処方の打錠用の粉末を調製した。
【００５５】
【表５】
2020011927.tif 000007
【００５６】
測定器ＧＴＰ−２（Ｇａｍｌｅｎ  Ｔａｂｌｅｔｉｎｇ  Ｌｔｄ．社製）で、打錠圧２００ＭＰａで成形し、錠剤強度（Ｔｅｎｓｉｌｅｆｒａｃｔｕｒｅ  ｓｔｒｅｓｓ、以下ＴＳ）、排出摩擦（Ｅｊｅｃｔｉｏｎ  Ｓｔｒｅｓｓ）、杵との摩擦（Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ  Ｓｔｒｅｓｓ）を測定した。
錠剤重量：１５０ｍｇ
杵サイズ：φ６ｍｍ平杵
打錠圧：２００ＭＰａ
杵スピード：３０ｍｍ／ｍｉｎ
【００５７】
（２）打錠適性の評価
錠剤強度、排出摩擦圧、杵との摩擦圧の測定結果を上記の文献の記載にしたがってプロットして打錠適性を評価した。
プロットされる４領域は次のような意味づけがなされている。
領域I   ：生産性良く、錠剤強度も高い
領域II  ：生産性良く、錠剤強度は低い
領域III ：生産性悪く、錠剤強度は高い
領域IV  ：生産性悪く、錠剤強度も低い
【００５８】
排出摩擦が高いことはキャッピングのリスクが高いことを意味し、杵との摩擦が高い場合は、スティッキングのリスクが高い。一般的には、２００ＭＰａで成形した際に、ＴＳ  ２ＭＰａ以上、排出摩擦が２ＭＰａ以下になれば最も好ましいとされる（バブルが小さく、図８のIの領域にプロットされるのが最も好ましい）。
図８では、錠剤強度（ＴＳ）を横軸、排出摩擦（Ｅｊｅｃｔｉｏｎ  Ｓｔｒｅｓｓ）を縦軸にプロットし、バブル（図中の円）の大きさで杵との摩擦を表している。
市販されているアスタキサンチン粉末（既存粉末製品）は錠剤強度が低く、スティッキングのリスクである杵との摩擦（Ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ  Ｓｔｒｅｓｓ）が高かった。打錠性は実施例３が最も良好との評価となった。
すなわち本発明によるアスタキサンチン粉末は、従来品とは明らかに異なる好ましい打錠適性を有していることが明らかとなった。                                              
【図１】
2020011927.tif 000008
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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