(57)【要約】      （修正有）【課題】がんおよび感染性疾患などの疾患の処置における抗ＣＤ２７抗体の提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、特定のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、特定のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、特定のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、特定のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および特定のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む、抗ヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片。【選択図】図７Ａ
2020114241.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、および
ｆ．配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
ａ．Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列を
含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤ
Ｒ２、および
ｆ．Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可
変領域ＣＤＲ３
を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３】
ヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ａ．Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまたは３
つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｂ．Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列、
または前記配列と１つ、２つまたは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む重鎖
可変領域ＣＤＲ２、
ｃ．Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまたは３
つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、
ｄ．Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまたは３
つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
ｅ．Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号５のアミノ酸配列、または前記配列と１つ
、２つまたは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、お
よび
ｆ．Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列、または前記
配列と１つ、２つまたは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域Ｃ
ＤＲ３
を含む、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
軽鎖免疫グロブリン可変領域、重鎖免疫グロブリン可変領域、または軽鎖免疫グロブリ
ン可変領域と重鎖免疫グロブリン可変領域の両方を含み、
ａ．配列番号７のアミノ酸配列、もしくは配列番号７と１つ、２つもしくは３つの保存
的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖、および／または、配列番号８のアミノ酸
配列、もしくは配列番号８と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配
列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｂ．配列番号９のアミノ酸配列、もしくは配列番号９と１つ、２つもしくは３つの保存
的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖、および／または、配列番号１４のアミノ
酸配列、もしくは配列番号１４と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ
酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｃ．配列番号３２のアミノ酸配列、もしくは配列番号３２と１つ、２つもしくは３つの
保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖、および／または、配列番号３３のア
ミノ酸配列、もしくは配列番号３３と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるア
ミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｄ．配列番号３４のアミノ酸配列、もしくは配列番号３４と１つ、２つもしくは３つの
保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖、および／または、配列番号３５のア
ミノ酸配列、もしくは配列番号３５と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるア
ミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｅ．配列番号３９のアミノ酸配列、もしくは配列番号３９と１つ、２つもしくは３つの
保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖、および／または、配列番号４０のア
ミノ酸配列、もしくは配列番号４０と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるア
ミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｆ．配列番号１０〜１３、もしくは配列番号１０〜１３の１つと１つ、２つもしくは３
つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列からなる群から選択される可変重鎖、および／ま
たは、配列番号１５〜１８のいずれか１つ、もしくは配列番号１５〜１８の１つと１つ、
２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列からなる群から選択される可変軽
鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｇ．配列番号１０のアミノ酸配列、もしくは配列番号１０と１つ、２つもしくは３つの
保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖、および／または、配列番号１５のア
ミノ酸配列、もしくは配列番号１５と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるア
ミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｈ．配列番号１０〜１３のいずれか１つとの少なくとも９０％の同一性を含む可変重鎖
、および／または、配列番号１５〜１８のいずれか１つとの少なくとも９０％の同一性を
含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片、
ｉ．配列番号１０〜１３のいずれか１つとの少なくとも９０％の同一性を含む可変重鎖
、および／または、配列番号１５〜１８のいずれか１つとの少なくとも９０％の同一性を
含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片であって、任意の配列変異が前記抗体ま
たは抗原結合断片のフレームワーク領域において生じる、抗体またはその抗原結合断片、
ｊ．配列番号１０〜１３のいずれか１つに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ
、７つ、８つ、９つもしくは１０個のアミノ酸置換を含む可変重鎖、および／または、配
列番号１５〜１８のいずれか１つに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、
８つ、９つもしくは１０個のアミノ酸置換を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合
断片、および
ｋ．配列番号１０〜１３のいずれか１つに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ
、７つ、８つ、９つもしくは１０個のアミノ酸置換を含む可変重鎖、および／または、配
列番号１５〜１８のいずれか１つに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、
８つ、９つもしくは１０個のアミノ酸置換を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合
断片であって、ここで、前記アミノ酸置換が前記抗体または抗原結合断片のフレームワー
ク領域において生じる、抗体またはその抗原結合断片
からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
ａ．配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号１４のアミノ酸配列を含
む可変軽鎖、
ｂ．配列番号３２のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号３３のアミノ酸配列を
含む可変軽鎖、および
ｃ．配列番号３４のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号３５のアミノ酸配列を
含む可変軽鎖
からなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン可変領域および重鎖免疫グロブリン可変
領域を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
ａ．配列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号８のアミノ酸配列を含む
可変軽鎖、
ｂ．配列番号３９のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号４０のアミノ酸配列を
含む可変軽鎖、
ｃ．配列番号１０〜１３からなる群から選択される可変重鎖および配列番号１５〜１８
からなる群から選択される可変軽鎖、および
ｄ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号１５のアミノ酸配列を
含む可変軽鎖
からなる群から選択される可変軽鎖領域および可変重鎖領域を含む、請求項４に記載の
抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１または２に記載の抗体または抗原結
合断片。
【請求項８】
以下の特徴：
ａ）細胞ＥＬＩＳＡアッセイにおいて１００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合
する、
ｂ）細胞ＥＬＩＳＡアッセイにおいて１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７（Ａ５
９Ｔ）に結合する、および
ｃ）細胞ＥＬＩＳＡアッセイにおいて１００ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７
に結合する
の少なくとも１つを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合
断片。
【請求項９】
以下の特徴：
ａ）表面プラズモン共鳴によって決定される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２
７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する、
ｂ）細胞ＥＬＩＳＡアッセイにおいて２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合
する、
ｃ）細胞ＥＬＩＳＡアッセイにおいて２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７（Ａ５
９Ｔ）に結合する、
ｄ）細胞ＥＬＩＳＡアッセイにおいて１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７
に結合する、
ｅ）カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する、
ｆ）ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する、および
ｇ）Ｔ細胞活性化を増加させる
の少なくとも１つを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合
断片。
【請求項１０】
以下の特徴：
ａ）前記抗体またはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２
７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する、
ｂ）前記抗体またはその断片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ
２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する、
ｃ）前記抗体またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲザル
ＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する、
ｄ）ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未
満のＥＣ５０を有する、
ｅ）可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる、および
ｆ）ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる
の少なくとも１つを有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原
結合断片。
【請求項１１】
配列番号１０の可変重鎖と配列番号１５の可変軽鎖とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する
抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
配列番号１０〜１２のいずれか１つの可変重鎖と、配列番号１５〜１７のいずれか１つ
の可変軽鎖とを含むか、または配列番号１３の可変重鎖と、配列番号１８の可変軽鎖とを
含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１３】
配列番号１０の可変重鎖と配列番号１５の可変軽鎖とを含む抗体と同じヒトＣＤ２７の
エピトープと結合するか、または配列番号７の可変重鎖と配列番号８の可変軽鎖とを含む
抗体と同じヒトＣＤ２７のエピトープと結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
抗体またはその抗原結合断片であって、ヒトＣＤ２７に結合するとき、配列番号１９の
Ｌｅｕ１８、Ａｓｐ３４、Ｇｌｎ３５、およびＬｙｓ３８からなる群から選択される少な
くとも１つの残基に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
ヒトＣＤ２７に結合するとき、配列番号１９のＧｌｎ３５およびＬｙｓ３８からなる群
から選択される少なくとも１つの残基に結合する、請求項１４に記載の抗体またはその抗
原結合断片。
【請求項１６】
配列番号１９のＰｒｏ８、Ｇｌｕ９、Ｈｉｓ１１、Ｌｙｓ１７、Ｈｉｓ３６およびＡｒ
ｇ３７からなる群から選択される１つ以上の残基にさらに結合する、請求項１４または１
５に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１７】
配列番号１９のＧｌｕ９、Ｌｙｓ１７、Ｈｉｓ３６およびＡｒｇ３７からなる群から選
択される１つ以上の残基にさらに結合する、請求項１４または１５に記載の抗体または抗
原結合断片。
【請求項１８】
配列番号１９の残基Ｐｒｏ８、Ｇｌｕ９、Ｈｉｓ１１、Ｌｙｓ１７、Ｌｅｕ１８、Ａｓ
ｐ３４、Ｇｌｎ３５、Ｈｉｓ３６、Ａｒｇ３７およびＬｙｓ３８に結合する、請求項１４
に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
配列番号１９の残基Ｇｌｕ９、Ｌｙｓ１７、Ｌｅｕ１８、Ａｓｐ３４、Ｇｌｎ３５、Ｈ
ｉｓ３６、Ａｒｇ３７およびＬｙｓ３８に結合する、請求項１４に記載の抗体またはその
抗原結合断片。
【請求項２０】
可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させるか、またはヒト腫瘍培養物中で抗Ｃ
Ｄ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる、請求項１１〜１９のいずれか一項に記載の抗体また
はその抗原結合断片。
【請求項２１】
２つの重鎖および２つの軽鎖を含むヒト化抗体であり、そしてＩｇＧである、請求項１
〜２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２２】
ＩｇＧ１アイソタイプの抗体である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体また
は抗原結合断片。
【請求項２３】
ＩｇＧ４アイソタイプの抗体である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体また
は抗原結合断片。
【請求項２４】
前記抗体が配列番号３０の重鎖定常ドメインを含む、請求項１〜２１のいずれか一項に
記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２５】
前記抗体が配列番号２８の重鎖定常ドメインを含む、請求項１〜２０のいずれか一項に
記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２６】
２つの軽鎖および２つの重鎖からなるヒトＣＤ２７に結合する抗体であって、ここで、
各軽鎖が配列番号３６からなり、そして各重鎖が配列番号３７からなる、ヒトＣＤ２７に
結合する抗体。
【請求項２７】
抗体または抗原結合断片が、哺乳類細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを
含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２８】
抗体または抗原結合断片が、ＣＨＯ細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを
含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２９】
配列番号１〜１８、３２〜４０、および４４〜４５のいずれか１つのアミノ酸配列を含
む単離ポリペプチド。
【請求項３０】
請求項１〜２６に記載の抗体もしくは抗原結合断片のいずれか１つ、または請求項２９
に記載のポリペプチドのいずれか１つをコードする単離核酸。
【請求項３１】
配列番号４６もしくは配列番号４７またはその両方を含む単離核酸。
【請求項３２】
請求項３０または３１に記載の単離核酸を含む発現ベクター。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか一項に記載の、抗体、結合断片、ポリペプチド、ポリヌクレ
オチドまたは発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３４】
細菌細胞、ヒト細胞、哺乳類細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、植物細胞、ＨＥＫ２
９３細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項３３に記載の宿主細胞
。
【請求項３５】
請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片、および薬学的に許容
される担体または希釈剤を含む組成物。
【請求項３６】
ａ．抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合断片、
ｂ．抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合断片、
ｃ．抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片、
ｄ．抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片、
ｅ．抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合断片、
ｆ．抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、
ｇ．抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片、
ｈ．抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合断片、
ｉ．抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片、
ｊ．抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片、
ｋ．抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、
ｌ．抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合断片、
ｍ．抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合断片、
ｎ．抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片、
ｏ．抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合断片、
ｐ．抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合断片、
ｑ．抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合断片、
ｒ．抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合断片、
ｓ．抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合断片、
ｔ．抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合断片、
ｕ．抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合断片、
ｖ．抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合断片、
ｗ．抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合断片、
ｘ．抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合断片、
ｙ．抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合断片、および
ｚ．抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合断片、
からなる群から選択される薬剤をさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片が、ペムブロリズマブまたはその抗原結合断
片およびニボルマブまたはその抗原結合断片からなる群から選択される、請求項３６に記
載の組成物。
【請求項３８】
抗体または抗原結合断片を産生する方法であって、
ａ．請求項１〜２８に記載の抗体または抗原結合断片のいずれか１つの重鎖および／ま
たは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、前記ポリヌクレオチドの発現
に都合よい条件下で培養し、そして
ｂ．場合により前記宿主細胞および／または培養培地から前記抗体または抗原結合断片
を回収する、
ことを含む、方法。
【請求項３９】
ａ．がんの処置、または
ｂ．感染症もしくは感染性疾患の処置
における使用のための、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断
片。
【請求項４０】
免疫細胞活性化を増加させる、がんを処置する、または、感染症もしくは感染性疾患を
処置するための医薬の製造のための、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体または
抗原結合断片の使用。
【請求項４１】
ヒト対象におけるがんを処置する方法であって、場合によりさらなる治療薬または治療
手順と共同して、前記対象に請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結
合断片、または請求項３２に記載の発現ベクター、または請求項３３および３４のいずれ
か一項に記載の宿主細胞、または請求項３５に記載の組成物の有効量を投与することを含
む、方法。
【請求項４２】
ヒト対象における感染症または感染性疾患を処置する方法であって、場合によりさらな
る治療薬または治療手順と共同して、前記対象に請求項１〜２８のいずれか一項に記載の
抗体もしくは抗原結合断片、または請求項３２に記載の発現ベクター、または請求項３３
および３４のいずれか一項に記載の宿主細胞、または請求項３５に記載の組成物の有効量
を投与することを含む、方法。
【請求項４３】
前記さらなる治療薬が
ａ．抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合断片、
ｂ．抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合断片、
ｃ．抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片、
ｄ．抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片、
ｅ．抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合断片、
ｆ．抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、
ｇ．抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片、
ｈ．抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合断片、
ｉ．抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片、
ｊ．抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片、
ｋ．抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、
ｌ．抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合断片、
ｍ．抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合断片、
ｎ．抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片、
ｏ．抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合断片、
ｐ．抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合断片、
ｑ．抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合断片、
ｒ．抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合断片、
ｓ．抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合断片、
ｔ．抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合断片、
ｕ．抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合断片、
ｖ．抗ＮＫ２ＧＡ抗体またはその抗原結合断片、
ｗ．抗ＮＫ２ＧＣ抗体またはその抗原結合断片、
ｘ．抗ＮＫ２ＧＥ抗体またはその抗原結合断片、
ｙ．抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合断片、
ｚ．抗ＩＬ１０抗体またはその抗原結合断片、
ａａ．ＳＴＩＮＧアゴニスト、
ｂｂ．ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、および
ｃｃ．ＰＡＲＰ阻害剤
からなる群から選択される、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
投与が、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片と共同している、請求項４１または４２
に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、または
それらの抗原結合断片である、請求項４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫応答の刺激、特に、抗原特異的Ｔリンパ球の刺激によって回復される症
状の処置に関する。本発明の様々な態様は、ＣＤ２７＋免疫細胞の刺激によって、または
（1以上の）免疫チェックポイントタンパク質の阻害によって回復されることが知られて
いるまたは予想される任意の状態の処置に適している。本発明によって適切に処置される
症状は、感染性疾患およびがんなどの、免疫刺激によって回復されるものである。より具
体的には、本発明は、抗ＣＤ２７抗体、ならびにがんおよび感染性疾患のような疾患の処
置におけるこれらの抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーであるＣＤ２７は、ヒトＴ細胞上の膜分子であると同
定された（ｖａｎ  Ｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：
１５８９−９６）。現在の証拠によると、ＣＤ２７は、単一のリガンドＣＤ７０を有し、
これもまたＴＮＦファミリーメンバーである（Ｇｏｏｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３
，Ｃｅｌｌ  ７３：４４７−５６）。
【０００３】
ＣＤ２７は、造血細胞、特に、リンパ球系列のもの、すなわちＴ細胞、Ｂ細胞およびＮ
Ｋ細胞によって排他的に発現される。ＣＤ２７は、元々、ＴＣＲ刺激に対する増殖応答を
増加させるヒトＴ細胞共刺激分子と定義された（ｖａｎ  Ｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９
８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：１５８９−９６）。ＣＤ２７のリガンドであるＣＤ
７０の存在は、ＣＤ２７媒介共刺激のタイミングおよび持続性を決定づける。
【０００４】
未熟樹状細胞におけるＣＤ７０のトランスジェニック発現は、ウイルスまたは腫瘍に対
する免疫寛容をＣＤ８＋Ｔ細胞応答性に変換するのに十分であった。同様に、アゴニスト
性の可溶性ＣＤ７０は、そのようなペプチド免疫化時にＣＤ８＋Ｔ細胞応答を促進し（Ｒ
ｏｗｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２：６０３９−６０４
６）、ＣＤ７０トランスジェニックマウスにおいて、ＴＣＲ刺激に応答したＣＤ４＋およ
びＣＤ８＋エフェクター細胞形成は、大きく促進された（Ａｒｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．２０
０１，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５：８０１−１２、Ｔｅｓｓｅｌａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２
００３，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：４９−５４、Ｋｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００
８，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２９：３３４−３４６）。マウスリンパ腫モデルでは、ＣＤ７０
トランスジェネシスまたは抗マウスＣＤ２７抗体の注入時に腫瘍拒絶が改善された（Ａｒ
ｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９９：１５９５−１６０５、
Ｆｒｅｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｂｌｏｏｄ  １０９：４８１０−１５、Ｓａｋ
ａｎｉｓｈｉ  ａｎｄ  Ｙａｇｉｔａ，２０１０，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ
ｅｓ．Ｃｏｍｍ．３９３：８２９−８３５、国際公開第２００８／０５１４２４号、国際
公開第２０１２／００４３６７号）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００８／０５１４２４号
【特許文献２】国際公開第２０１２／００４３６７号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ｖａｎ  Ｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：１５８９−９６
【非特許文献２】Ｇｏｏｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ  ７３：４４７−５６
【非特許文献３】Ｒｏｗｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２：６０３９−６０４６
【非特許文献４】Ａｒｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．２００１，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５：８０１−１２
【非特許文献５】Ｔｅｓｓｅｌａａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：４９−５４
【非特許文献６】Ｋｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００８，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２９：３３４−３４６
【非特許文献７】Ａｒｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９９：１５９５−１６０５
【非特許文献８】Ｆｒｅｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｂｌｏｏｄ  １０９：４８１０−１５
【非特許文献９】Ｓａｋａｎｉｓｈｉ  ａｎｄ  Ｙａｇｉｔａ，２０１０，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３９３：８２９−８３５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
国際公開第２０１２／００４３６７号では、免疫応答のＣＤ２７媒介共刺激を活性化す
るために架橋を必要としない最初の抗ヒトアゴニスト抗体（ｈＣＤ２７．１５と命名され
た）が記載された。さらに、架橋時にＣＤ２７を活性化する１Ｆ５と命名された抗ヒトＣ
Ｄ２７抗体が開示された（国際公開第２０１１／１３０４３４号およびＶｉｔａｌｅ  ｅ
ｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２０１２，１８（１４）：３８１２−３
８２１）。しかしながら、Ａ５９Ｔ  ＳＮＰを有するヒトＣＤ２７およびカニクイザルか
らのＣＤ２７を結合する能力を含めた、改善された特徴を有する抗ヒトＣＤ２７抗体を開
発することが当分野において依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、以下に特定される構造的および機能的特色を含む抗ＣＤ２７抗体およびその
抗原結合断片を提供する。
【０００９】
別の実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域Ｃ
ＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ
）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、重鎖可変領域および
軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。一
実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミ
ノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつ
Ｘ４＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ
１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。一実施形
態では、抗体またはその抗原結合断片は、場合により、以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッ
セイに従って１００ｐＭ未満、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合す
る；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０
でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満
、または１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモン共
鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）
によって決定される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ
５９Ｔ）に結合する；カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ
７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩ
ＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合、５
ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体
またはその断片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発
現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、
１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導す
る；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未満
のＥＣ５０を有する；可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養
物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる、の少なくとも１つを有してもよい。一実
施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒトＣＤ２７Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は
、ＣＤ２７プラスミドを一過性にトランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポ
ーター構築物を含有するＨＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ
８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、
ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約１．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３
誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体および１０ｎｇ／ｍｌの抗
ＣＤ３抗体で、少なくとも１．５倍である。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に
結合する抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸
配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号５
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ
３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、ヒトＣＤ
２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供する。一実施形態では、抗体またはその抗
原結合断片は、場合により以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満
、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイ
に従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに
結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥ
Ｃ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）
または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１
０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニク
イザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合
を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生
産を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣ
Ｄ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型であ
る場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活
性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカ
ゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋
Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型
においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ
産生を増加させる、の少なくとも１つを有する。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒトＣ
Ｄ２７Ａ５９Ｔ、またはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一過性に
トランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨＥＫ２
９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５＋
ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約１
．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２０
μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で、少なくとも１．５
倍である。
【００１１】
本発明の別の実施形態では、抗体または抗原結合断片は重鎖可変領域および軽鎖可変領
域を含み、Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまた
は３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、Ｘ１＝Ｎ、
Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列、または前記配列と
１つ、２つまたは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２
と、Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまたは３つ
の保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、Ｘ１＝Ｍである配
列番号４のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまたは３つの保存的置換だけ異な
るアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号
５のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまたは３つの保存的置換だけ異なるアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列
番号６のアミノ酸配列、または前記配列と１つ、２つまたは３つの保存的置換だけ異なる
アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。一実施形態では、抗体またはその抗
原結合断片は、場合により以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満
、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイ
に従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに
結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥ
Ｃ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）
または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１
０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニク
イザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合
を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞産
生を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣ
Ｄ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型であ
る場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活
性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカ
ゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋
Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型
においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ
産生を増加させる、の少なくとも１つを有してもよい。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、
ヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ、またはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一
過性にトランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨ
ＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ
２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平
均約１．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は
、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で、少なくとも
１．５倍である。
【００１２】
本発明の別の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ヒトＣＤ２７に結合する抗体
またはその抗原結合断片であって、軽鎖免疫グロブリン可変領域、重鎖免疫グロブリン可
変領域、または軽鎖免疫グロブリン可変領域と重鎖免疫グロブリン可変領域の両方を含み
、配列番号７のアミノ酸配列、もしくは配列番号７と１つ、２つもしくは３つの保存的置
換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号８のアミノ酸配列、も
しくは配列番号８と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む
可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号９のアミノ酸配列、もしくは配列
番号９と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖お
よび／または配列番号１４のアミノ酸配列、もしくは配列番号１４と１つ、２つもしくは
３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合
断片；配列番号３２のアミノ酸配列、もしくは配列番号３２と１つ、２つもしくは３つの
保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号３３のアミノ
酸配列、もしくは配列番号３３と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ
酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号３４のアミノ酸配列
、もしくは配列番号３４と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列
を含む可変重鎖および／または配列番号３５のアミノ酸配列、もしくは配列番号３５と１
つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体ま
たはその抗原結合断片；配列番号３９のアミノ酸配列、もしくは配列番号３９と１つ、２
つもしくは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列
番号４０のアミノ酸配列、もしくは配列番号４０と１つ、２つもしくは３つの保存的置換
だけ異なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号１
０〜１３、もしくは配列番号１０〜１３の１つと１つ、２つもしくは３つの保存的置換だ
け異なるアミノ酸配列からなる群から選択される可変重鎖および／または配列番号１５〜
１８のいずれか１つ、もしくは配列番号１５〜１８の１つと１つ、２つもしくは３つの保
存的置換だけ異なるアミノ酸配列からなる群から選択される可変軽鎖を含む抗体またはそ
の抗原結合断片；配列番号１０のアミノ酸配列、もしくは配列番号１０と１つ、２つもし
くは３つの保存的置換だけ異なるアミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号１
５のアミノ酸配列、もしくは配列番号１５と１つ、２つもしくは３つの保存的置換だけ異
なるアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片からなる群から選択
されるヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。一実施形態では、抗
体またはその抗原結合断片は、場合により以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って
１００ｐＭ未満、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬ
ＩＳＡアッセイに従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２
７  Ａ５９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または１５
０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢ
ＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定
される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結
合する；カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒト
ＣＤ２７の結合を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原
特異的Ｔ細胞生産を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥ
Ｃ５０でヒトＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断
片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけ
るＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満の
ＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋
またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を
有する；可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ
３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる、の少なくとも１つを有してもよい。一実施形態では、
ヒトＣＤ２７、ヒトＣＤ２７Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プ
ラスミドを一過性にトランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物
を含有するＨＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活
性化は、ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細
胞活性化の平均約１．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ
産生の増加は、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体、および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体
で少なくとも１．５倍である。
【００１３】
別の実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に
結合する抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖
可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と
、（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番
号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域Ｃ
ＤＲ３とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供する。別の実施
形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に結合する抗
体または抗原結合断片であって、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列を含む
重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである
配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍである配
列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配列番
号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔであ
る配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝
Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む
、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供する。一実施形態では、抗体ま
たはその抗原結合断片は、ヒト化されている。一実施形態では、抗体またはその抗原結合
断片は、配列番号９、１０、１１、１２、１３、３２、３４、および３９からなる群から
選択される重鎖可変領域と、配列番号１４、１５、１６、１７、１８、３３、３５、およ
び４０からなる群から選択される軽鎖可変領域とを含む。一実施形態では、抗体またはそ
の抗原結合断片は、配列番号１０、１１、１２、または１３のいずれか１つとの少なくと
も９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を含む重鎖可変領域
と、配列番号１５、１６、１７、または１８のいずれか１つとの少なくとも９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含む。一実
施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０、１１、１２、または１３の
いずれか１つに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または
１０個のアミノ酸置換を含む重鎖可変領域と、配列番号１５、１６、１７、または１８の
いずれか１つに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または
１０個のアミノ酸置換を含む軽鎖可変領域とを含む。一実施形態では、抗体またはその抗
原結合断片は、場合により以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満
、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイ
に従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに
結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥ
Ｃ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）
または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１
０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニク
イザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合
を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生
産を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣ
Ｄ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型であ
る場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活
性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカ
ゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋
Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型
においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ
産生を増加させる、の少なくとも１つを有してもよい。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、
ヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ、またはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一
過性にトランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨ
ＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ
２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平
均約１．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は
、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体、および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で少なくとも
１．５倍である。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片であっ
て、配列番号１０、１１、１２、または１３のいずれか１つとの少なくとも９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性と、配列番号１５、１６、１７、ま
たは１８のいずれか１つとの少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、また
は９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原
結合断片を提供する。一実施形態では、提案された配列変異は、抗体のフレームワーク領
域においてのみ生じる。
【００１５】
別の実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に
結合する抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖
可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と
、（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番
号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域Ｃ
ＤＲ３とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片であって、配列番号９
〜１３からなる群から選択される重鎖可変領域との少なくとも９０％、９５％、９６％、
９７％、９８％、または９９％の同一性を含む重鎖可変領域と、配列番号１４〜１８から
なる群から選択される軽鎖可変領域との少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９
８％、または９９％の同一性を含む軽鎖可変領域とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体
または抗原結合断片を提供する。この前述の実施形態では、配列変異は、フレームワーク
領域において生じ、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１の
アミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、
かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ
）Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ
１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ
、かつＸ２＝Ｔである配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ
）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領
域ＣＤＲ３とを含む。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、場合により以下
の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または２００ｐＭ未満のＥＣ
５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１５０ｐＭ未満、また
は２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッ
セイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７に
結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉ
ｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ
２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２
７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する；Ｔ細胞活性化を増
加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産を刺激する；抗体またはその
断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−
κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５
０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはそ
の断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７発現細胞におけ
るＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への
結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化
を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる、の少なくと
も１つを有してもよい。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ、または
アカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一過性にトランスフェクトしたＮ
Ｆ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞
である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ
８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約１．５〜２倍の増加がある
。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７
抗体および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で、少なくとも１．５倍である。
【００１６】
本発明のさらなる実施形態では、ヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片
であって、軽鎖免疫グロブリン可変領域と重鎖免疫グロブリン可変領域の両方を含み、配
列番号７のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖
を含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号９のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配
列番号１４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号
３２のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号３３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を
含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号３４のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配
列番号３５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号
３９のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号４０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を
含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号１０〜１３からなる群から選択される可変重
鎖および配列番号１５〜１８からなる群から選択される可変軽鎖を含む抗体またはその抗
原結合断片；配列番号１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖および配列番号１５のアミノ酸
配列を含む可変軽鎖を含む抗体またはその抗原結合断片；配列番号１０〜１２のいずれか
１つの可変重鎖および配列番号１５〜１７のいずれか１つの可変軽鎖を含む抗体または抗
原結合断片；ならびに配列番号１３の可変重鎖および配列番号１８の可変軽鎖を含む抗体
または抗原結合断片；からなる群から選択される、ヒトＣＤ２７に結合する抗体またはそ
の抗原結合断片が提供される。
【００１７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、場合により以下の特徴：細胞ＥＬＩ
ＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７
に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満の
ＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００
ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラ
ズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣ
ＴＥＴ）によって決定される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ
２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；
ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２
およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である
場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導す
る；抗体またはその断片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ
５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型であ
る場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化
を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５
ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト
腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる、の少なくとも１つを有してもよ
い。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒトＣＤ２７Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７発
現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一過性にトランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラ
ーゼレポーター構築物を含有するＨＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態で
は、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測
定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約１．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、
抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体、および１０ｎｇ
／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で少なくとも１．５倍である。
【００１８】
別の実施形態では、本発明は、抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号７のア
ミノ酸配列を含む可変重鎖および／または配列番号８のアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含
み、ヒトＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、
本発明は、ヒトＣＤ２７に結合する単離抗体または抗原結合断片であって、配列番号７の
アミノ酸配列または最大２５個のアミノ酸置換を含むその変異体を含む重鎖、および／ま
たは最大２５個のアミノ酸置換を含む配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ヒト
ＣＤ２７に結合する単離抗体または抗原結合断片に関する。一実施形態では、抗体または
その抗原結合断片は、場合により以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐ
Ｍ未満、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡア
ッセイに従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５
９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未
満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯ
ＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約
５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；
カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７
の結合を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ
細胞生産を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０で
ヒトＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶
型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−
κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０
でアカゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣ
Ｄ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；
可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導Ｉ
ＦＮγ産生を増加させる、の少なくとも１つを有してもよい。一実施形態では、ヒトＣＤ
２７、ヒトＣＤ２７Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミド
を一過性にトランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有す
るＨＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、
ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化
の平均約１．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増
加は、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で、少なく
とも１．５倍である。
【００１９】
上記実施形態のいずれにおいても、抗体またはその抗原結合断片は、単離され得る。
【００２０】
上記実施形態のいずれにおいても、抗体またはその抗原結合断片は、組換え抗体である
。
【００２１】
上記実施形態のいずれにおいても、抗体は、全長抗体とすることができる。
【００２２】
上記実施形態のいずれにおいても、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化抗体とする
ことができる。
【００２３】
上記実施形態のいずれにおいても、抗体またはその抗原結合断片は、２つの重鎖および
２つの軽鎖を含むヒト化抗体とすることができ、インタクトなＩｇＧ抗体であってもよい
。一実施形態では、重鎖は、ＩｇＧアイソタイプのものである。一実施形態では、重鎖は
、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。別の実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ２アイソタイ
プのものである。別の実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ４アイソタイプのものである。別の
実施形態では、重鎖は、ＩｇＭアイソタイプのものである。一実施形態では、抗体は、配
列番号３０または配列番号２８の重鎖定常ドメインを含む。
【００２４】
本発明の別の態様では、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変
領域を含み、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ
１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ
酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸
配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号５のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓで
ある配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含み、重鎖定常ドメイン
は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである。一実施形態では、抗体またはその抗原
結合断片は、場合により以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、
または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに
従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結
合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥＣ
５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）ま
たは類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１０
ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニクイ
ザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を
遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産
を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ
２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である
場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性
化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲ
ザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ
細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型に
おいてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産
生を増加させる、の少なくとも１つを有してもよい。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒ
トＣＤ２７Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一過性
にトランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨＥＫ
２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５
＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約
１．５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２
０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体、および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で少なくとも１．
５倍である。
【００２５】
上記実施形態のいずれにおいても、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）上
記の可変重鎖のいずれか、および（ｂ）リーダーペプチド（例えば配列番号２６のリーダ
ーペプチド）からなる重鎖領域を含み得る。上記実施形態のいずれにおいても、本発明の
抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）上記の軽鎖のいずれか、および（ｂ）リーダーペ
プチド（例えば配列番号２７のリーダーペプチド）からなる軽鎖領域を含み得る。
【００２６】
本発明の上記実施形態のいずれにおいても、抗体またはその抗原結合断片は、上記の重
鎖可変領域のいずれかと、任意のヒト重鎖定常ドメインとを含む抗体とすることができる
。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧアイソタイプのものであり、
ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ヒト重鎖定常ドメインを含む。一実施
形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ヒト重鎖ＩｇＧ１定常ドメイン（配
列番号３０）またはその変異体であって、配列番号３０に対して最大２０個のアミノ酸置
換を含む変異体を含む。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト重鎖Ｉ
ｇＧ４定常ドメインであって、位置２２８のアミノ酸（ＥＵナンバリングスキームを使用
）がＳｅｒからＰｒｏに置換されている（配列番号２８）ヒト重鎖ＩｇＧ４定常ドメイン
を含む。別の実施形態では、重鎖は、ＩｇＭアイソタイプのものである。
【００２７】
上記実施形態のいずれにおいても、抗体またはその抗原結合断片は、上記の軽鎖可変領
域のいずれかと、ヒト軽鎖定常ドメインとを含み得る。一実施形態では、抗体またはその
抗原結合断片は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むヒトカッパ軽鎖定常ドメインを含む
。
【００２８】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を有する完
全四量体構造であって、各軽鎖が配列番号１４〜１８、３３、３５、および４０のいずれ
か１つを含む可変領域と、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖定常領域とを含み、各重
鎖が配列番号９〜１３、３２、３４、および３９のいずれか１つを含む可変領域と、ヒト
ＩｇＧ１定常領域（配列番号３０）とを含む、完全四量体構造を含む。
【００２９】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を有する完
全四量体構造であって、各軽鎖が配列番号１４〜１８、３３、３５、および４０のいずれ
か１つを含む可変領域と、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインとを含み、
各重鎖が配列番号９〜１３、３２、３４、および３９のいずれか１つを含む可変領域と、
ヒトＩｇＭ定常領域とを含む、完全四量体構造を含む。
【００３０】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖を有する完
全四量体構造であって、各軽鎖が配列番号１４〜１８、３３、３５、および４０のいずれ
か１つを含む可変領域と、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインとを含み、
各重鎖が配列番号９〜１３、３２、３４、および３９のいずれか１つを含む可変領域と、
ヒトＩｇＧ２定常領域とを含む、完全四量体構造を含む。
【００３１】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号３６からなり、各重鎖が配列番号３７からなる、２つの軽鎖および２つ
の重鎖を含む。
【００３２】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号３６からなり、各重鎖が配列番号３７からなる、２つの軽鎖および２つ
の重鎖からなる。
【００３３】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号３６からなり、各重鎖が配列番号３８からなる、２つの軽鎖および２つ
の重鎖を含む。
【００３４】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号３６からなり、各重鎖が配列番号３８からなる、２つの軽鎖および２つ
の重鎖からなる。
【００３５】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号１４〜１８、３３、３５、および４０のいずれか１つを含む可変領域お
よびヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインからなり、各重鎖が配列番号９〜
１３、３２、３４、および３９のいずれか１つからなる可変領域およびヒトＩｇＭ定常領
域からなる、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む。
【００３６】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号１４〜１８、３３、３５、および４０のいずれか１つを含む可変領域お
よびヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインからなり、各重鎖が配列番号９〜
１３、３２、３４、および３９のいずれか１つからなる可変領域およびヒトＩｇＭ定常領
域からなる、２つの軽鎖および２つの重鎖からなる。
【００３７】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号１４〜１８、３３、３５、および４０のいずれか１つからなる可変領域
およびヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインからなり、各重鎖が配列番号９
〜１３、３２、３４、および３９のいずれか１つを含む可変領域およびヒトＩｇＧ１定常
領域からなる、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む。
【００３８】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、２つの軽鎖および２つの重鎖であって、
各軽鎖が配列番号１４〜１８、３３、３５、および４０のいずれか１つからなる可変領域
およびヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインからなり、各重鎖が配列番号９
〜１３、３２、３４、および３９のいずれか１つを含む可変領域およびヒトＩｇＧ１定常
領域からなる、２つの軽鎖および２つの重鎖からなる。
【００３９】
本発明の別の態様では、上記の抗体または抗原結合断片のいずれかは、哺乳類細胞また
はＣＨＯ細胞による発現に特徴的なグリコシル化パターンを含む。
【００４０】
ある実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの治療
薬にコンジュゲートしている。一実施形態では、治療薬は、第二抗体もしくはその断片、
免疫調節剤、ホルモン、細胞傷害性薬物、酵素、放射性核種、少なくとも１つの免疫調節
剤にコンジュゲートした第二抗体、酵素、放射性標識、ホルモン、アンチセンスオリゴヌ
クレオチド、または細胞傷害性薬物、またはその組合せである。
【００４１】
本発明は、配列番号１〜１８、３２〜４０、および４４〜４５のいずれか１つのアミノ
酸配列または前記配列のいずれかの断片を含む単離ポリペプチドも提供する。
【００４２】
本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片のいずれか１つをコードする単
離核酸も提供する。一実施形態では、本発明は、配列番号１〜１８、３２〜４０、および
４４〜４５のポリペプチドであって、リーダー配列を含んでもよいポリペプチドのいずれ
か１つをコードする単離核酸を提供する。別の実施形態では、本発明は、配列番号４６も
しくは配列番号４７、またはその両方を含む単離核酸を提供する。本発明は、配列番号１
〜１８、３２〜４０、および４４〜４５のポリペプチドのいずれか１つをコードする核酸
（前記ポリペプチドは、リーダー配列を含んでいてもよい）または配列番号４６もしくは
配列番号４７、もしくはその両方を含む核酸を含む発現ベクターも提供する。これらの単
離核酸およびそれらを含む発現ベクターは、組換え宿主細胞において本発明の抗体または
その抗原結合断片を発現させるために使用され得る。したがって、本発明は、配列番号１
〜１８、３２〜４０、および４４〜４５のポリペプチドのいずれか１つをコードする核酸
（前記ポリペプチドは、リーダー配列を含んでいてもよい）または配列番号４６もしくは
配列番号４７、もしくはその両方を含む核酸を含む宿主細胞も提供する。一実施形態では
、宿主細胞は、細菌細胞、ヒト細胞、哺乳類細胞、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、植物細
胞、ＨＥＫ２９３細胞またはチャイニーズハムスター卵巣細胞である。一実施形態では、
宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞である。一実施形態では、宿主細胞は、酵
母細胞、例えば、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞またはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ
ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞である。
【００４３】
本発明は、本発明の抗体または抗原結合断片と、薬学的に許容される担体または希釈剤
とを含む医薬組成物も提供する。一実施形態では、組成物は、さらなる治療薬を含む。一
実施形態では、さらなる治療薬は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合断片、抗ＴＩＧＩ
Ｔ抗体またはその抗原結合断片、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片、抗ＢＴＬＡ
抗体またはその抗原結合断片、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合断片、抗ＣＴＬＡ４抗
体またはその抗原結合断片、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片、抗ＣＤ７０抗体ま
たはその抗原結合断片、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片、抗ＣＤ２８抗体または
その抗原結合断片、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗
原結合断片、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結
合断片、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合断片、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合
断片、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ３抗体またはその抗原結合断片
、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原結合断片、抗
４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ａ抗体またはその抗
原結合断片、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体またはその抗
原結合断片、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬ−１０抗体またはその抗原
結合断片、ＩＬ−１０またはペグ化ＩＬ−１０、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＲ２アン
タゴニスト、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群から選択される。
【００４４】
本発明の医薬組成物の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は
、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖
可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と
、（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番
号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域Ｃ
ＤＲ３とを含む。
【００４５】
本発明は、１つ、２つまたはそれ以上の治療薬と組み合わせて、本発明の抗ＣＤ２７抗
体または抗原結合断片を含む組合せも含み、第２の治療薬は、抗ＬＡＧ３抗体またはその
抗原結合断片、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合断片、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその
抗原結合断片、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原
結合断片、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結
合断片、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合断片、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断
片、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、抗
ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＧＩ
ＴＲ抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合断片、抗ＳＩＲＰ
α抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ３抗
体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ５抗体ま
たはその抗原結合断片、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ａ抗体ま
たはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体ま
たはその抗原結合断片、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬ−１０抗体また
はその抗原結合断片、ＩＬ−１０またはペグ化ＩＬ−１０、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸ
ＣＲ２アンタゴニスト、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群から選択される。
【００４６】
本発明の組合せの一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、重
鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変
領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（
ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む
軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ
３とを含む。
【００４７】
本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片のいずれか１つを含む容器また
は注入デバイスも提供する。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断
片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む
重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ
２と、（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配
列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配
列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領
域ＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を
含むヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配
列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、
Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と
、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、
（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ
）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２
と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む
軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供
する。
【００４８】
本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片を産生する方法であって、本発
明の抗体（またはその抗原結合断片）の重鎖および／または軽鎖をコードするポリヌクレ
オチドを含む宿主細胞をポリヌクレオチドの発現に都合よい条件下で培養すること、場合
により宿主細胞および／または培養培地から抗体または抗原結合断片を回収すること、を
含む方法も提供する。一実施形態では、重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび軽鎖を
コードするポリヌクレオチドは、単一のベクター中にある。別の実施形態では、重鎖をコ
ードするポリヌクレオチドおよび軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、異なるベクター
中にある。一実施形態では、重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび軽鎖をコードする
ポリヌクレオチドは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号
３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤ
Ｒ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、抗体
または抗原結合断片をコードする。別の実施形態では、本発明は、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである
配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ
、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２
と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と
、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（
ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ
２と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含
む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片から
の重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび軽鎖をコードするポリヌクレオチドを提供す
る。
【００４９】
本発明は、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、場合によりさ
らなる治療薬または治療手順と共同して、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片の
有効量を対象に投与することを含む方法も提供する。一実施形態では、処置される対象は
、ヒト対象である。一実施形態では、さらなる治療薬は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原
結合断片、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合断片、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原
結合断片、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合
断片、抗ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断
片、抗ＣＤ７０抗体またはその抗原結合断片、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片、
抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤ
Ｌ１抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＧＩＴＲ
抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合断片、抗ＳＩＲＰα抗
体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ３抗体ま
たはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ５抗体または
その抗原結合断片、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ａ抗体または
その抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体または
その抗原結合断片、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬ−１０抗体またはそ
の抗原結合断片、抗ＩＬ−１０抗体またはその抗原結合断片、ＩＬ−１０またはペグ化Ｉ
Ｌ−１０、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、およびＰＡＲＰ阻害剤か
らなる群から選択される。
【００５０】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域および
軽鎖可変領域を含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号
３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤ
Ｒ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。別の
実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に結合す
る抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列を
含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔで
ある配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍであ
る配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配
列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔ
である配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ
２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを
含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供する。
【００５１】
一実施形態では、本発明は、（ｉ）本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片と、（
ｉｉ）配列番号５３の重鎖配列および配列番号４８の軽鎖配列を含む抗ＰＤ１抗体とを含
む組成物を提供する。別の実施形態では、本発明は、（ａ）本発明の抗ＣＤ２７抗体また
は抗原結合断片と、（ｂ）配列番号５２の重鎖可変配列および配列番号７８の軽鎖可変配
列を含む抗ＰＤ１抗体とを含む組成物を提供する。一実施形態では、抗ＰＤ１抗体は、抗
ＣＤ２７抗体の投与前に投与される。一実施形態では、抗ＰＤ１抗体は、抗ＣＤ２７抗体
の投与の４〜１０日前に投与される。一実施形態では、抗ＰＤ１抗体での前処理は、免疫
細胞を調節し得、これは、抗ＣＤ２７抗体の増強されたＦｃ媒介機能をもたらす。一実施
形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変
領域を含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）
配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号３のアミ
ノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖
可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、
（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。
【００５２】
本発明は、対象における感染症または感染性疾患を処置する方法であって、場合により
さらなる治療薬または治療手順と共同して、本発明の抗体または抗原結合断片の有効量を
対象に投与することを含む方法も提供する。一実施形態では、処置される対象は、ヒト対
象である。一実施形態では、さらなる治療薬は、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合断片
、抗ＴＩＧＩＴ抗体またはその抗原結合断片、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片
、抗ＢＴＬＡ抗体またはその抗原結合断片、抗ＴＩＭ３抗体またはその抗原結合断片、抗
ＣＴＬＡ４抗体またはその抗原結合断片、抗ＨＶＥＭ抗体またはその抗原結合断片、抗Ｃ
Ｄ７０抗体またはその抗原結合断片、抗ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片、抗ＣＤ２
８抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片、抗ＰＤＬ１抗体
またはその抗原結合断片、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＧＩＴＲ抗体また
はその抗原結合断片、抗ＩＣＯＳ抗体またはその抗原結合断片、抗ＳＩＲＰα抗体または
その抗原結合断片、抗ＩＬＴ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ３抗体またはその
抗原結合断片、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬＴ５抗体またはその抗原
結合断片、抗４−１ＢＢ抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ａ抗体またはその抗原
結合断片、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体またはその抗原結合断片、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体またはその抗原
結合断片、抗ＴＳＬＰ抗体またはその抗原結合断片、抗ＩＬ−１０抗体またはその抗原結
合断片、ＩＬ−１０またはペグ化ＩＬ−１０、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＲ２アンタ
ゴニスト、およびＰＡＲＰ阻害剤からなる群から選択される。
【００５３】
一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域および
軽鎖可変領域を含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号
３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤ
Ｒ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。別の
実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に結合す
る抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列を
含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔで
ある配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍであ
る配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配
列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔ
である配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ
２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを
含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供する。
【００５４】
本発明は、本発明の抗体または抗原結合断片を含むワクチンも提供する。一実施形態で
は、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を
含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番
号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配
列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領
域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ
）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、
本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗
原結合断片であって、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領
域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号３の
アミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号
５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ
３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、ヒトＣＤ
２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供する。一実施形態では、ワクチンは、抗原
をさらに含む。
【００５５】
本発明は、試料中のＣＤ２７ペプチドまたはその断片の存在を検出するための方法であ
って、試料を本発明の抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、抗体または断片
とペプチドの複合体の存在を検出することとを含み、複合体の検出がＣＤ２７ペプチドの
存在を示す、方法も提供する。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合
断片は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列
番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸
配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変
領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖ
ｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では
、本発明は、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ
１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４＝Ｔである配列番号２のアミノ
酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号３のアミノ酸
配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍである配列番号４のアミノ酸配列
を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ２＝Ｔである配列番号５のアミ
ノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）Ｘ１＝Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓで
ある配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含む、ヒトＣＤ２７に結
合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００５６】
本発明は、免疫細胞の活性を増加させる方法であって、免疫細胞を本発明の抗体または
抗原結合断片のいずれか１つと接触させることを含む方法も提供する。一実施形態では、
本発明は、免疫細胞の活性を増加させる方法であって、それを必要とする対象に本発明の
抗体または抗原結合断片の有効量を投与することを含む方法を提供する。一実施形態では
、方法は、がんの処置、感染症または感染性疾患の処置に、またはワクチンアジュバント
として使用される。一実施形態では、免疫細胞の活性の増加は、免疫細胞の増殖を測定す
ることによって検出され得る。例えば、Ｔ細胞の活性の増加は、Ｔ細胞の増殖を測定する
ことによって検出され得る。一実施形態では、免疫細胞の活性の増加は、対象に由来する
試料中のＴ細胞活性化をエクスビボで測定することによって検出され得る。一実施形態で
は、Ｔ細胞活性の増加は、（ｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＩＬ−１
β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３から
なる群から選択されるサイトカインの産生を誘導するためのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグ
ナリングの混合リンパ球反応または直接的抗ＣＤ３  ｍＡｂ刺激を測定すること、（ｉｉ
）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６
、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３からなる群から選択される１つ以上のサイトカイ
ンのＳＥＢ誘導生産を測定すること、または（ｉｉｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７
、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５、およびＩＬ
−１３からなる群から選択されるサイトカインのＴＴ誘導生産を測定することによって決
定される。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領
域および軽鎖可変領域を含み、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤ
Ｒ１と、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）
配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）配列番号４のアミノ
酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変
領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とを含
む。
【００５７】
別の実施形態では、本発明は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むヒトＣＤ２７に
結合する抗体または抗原結合断片であって、（ｉ）Ｘ１＝Ｍである配列番号１のアミノ酸
配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｉｉ）Ｘ１＝Ｎ、Ｘ２＝Ｔ、Ｘ３＝Ｎ、かつＸ４
＝Ｔである配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）Ｘ１＝
Ｍである配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、（ｉｖ）Ｘ１＝Ｍで
ある配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１と、（ｖ）Ｘ１＝Ｄ、かつＸ
２＝Ｔである配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２と、（ｖｉ）Ｘ１＝
Ｗ、Ｘ２＝Ｎ、かつＸ３＝Ｓである配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ
３とを含む、ヒトＣＤ２７に結合する抗体または抗原結合断片を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】抗体ｈＣＤ２７．１５は、ＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結合しないことを示す図である。ＣＤ２７およびＣＤ２７  Ａ５９Ｔを一過性トランスフェクションによってＣＨＯ−Ｋ１上で発現させた。ＣＤ２７およびＣＤ２７  Ａ５９ＴへのｈＣＤ２７．１５（ヒト化６Ｂ）およびＦｃ−ｍＣＤ７０の結合をフローサイトメトリーによって測定した。Ｆｃ−ｍＣＤ７０は、ＣＤ２７とＣＤ２７  Ａ５９Ｔの両方に結合するが、ｈＣＤ２７．１５は、ＣＤ２７にのみ結合する。
【図２】抗体ｈＣＤ２７．１５がマカカ・ムラッタ（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）ＣＤ２７に結合しないことを示す図である。ＨｓＣＤ２７およびＭｍＣＤ２７を一過性トランスフェクションによってＣＨＯ−Ｋ１上に発現させた。ＨｓＣＤ２７およびＭｍＣＤ２７へのｈＣＤ２７．１５（キメラｃ−４）の結合をフローサイトメトリーによって測定した。
【図３Ａ】生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列：１３１ＡＶＨ６（配列番号１０）、１３１ＡＶＨ７（配列番号１１）、１３１Ａ親ＶＨ（配列番号７）、１３１ＡＶＨ８（配列番号１２）、１３１ＡＶＨ９（配列番号１３）、ＶＨ１−１０２（配列番号６４）、ＶＨ１−１４６（配列番号６５）、１３１ＡＶＬ６（配列番号１５）、１３１ＡＶＬ７（配列番号１６）、１３１Ａ親ＶＬ（配列番号８）、１３１ＡＶＬ８（配列番号１７）、１３１ＡＶＬ９（配列番号１８）、ＶＫ１〜Ｏ２（配列番号６６）、ＶＫ３−Ｌ６（配列番号６７）に対する本発明の様々な抗ＣＤ２７抗体の重鎖および軽鎖可変領域のアラインメントを示す図である。
【図３Ｂ】生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列：１３１ＡＶＨ６（配列番号１０）、１３１ＡＶＨ７（配列番号１１）、１３１Ａ親ＶＨ（配列番号７）、１３１ＡＶＨ８（配列番号１２）、１３１ＡＶＨ９（配列番号１３）、ＶＨ１−１０２（配列番号６４）、ＶＨ１−１４６（配列番号６５）、１３１ＡＶＬ６（配列番号１５）、１３１ＡＶＬ７（配列番号１６）、１３１Ａ親ＶＬ（配列番号８）、１３１ＡＶＬ８（配列番号１７）、１３１ＡＶＬ９（配列番号１８）、ＶＫ１〜Ｏ２（配列番号６６）、ＶＫ３−Ｌ６（配列番号６７）に対する本発明の様々な抗ＣＤ２７抗体の重鎖および軽鎖可変領域のアラインメントを示す図である。
【図４】腫瘍体積および処置後の日数により測定した、ＭＣ３８腫瘍を有するｈｕＣＤ２７ノックインマウスにおける１Ｆ５−ｈｕＩｇＧ１と比較した１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈｕＩｇＧ１の抗腫瘍活性を示す図である。
【図５】ＭＢ４９腫瘍を有するｈｕＣＤ２７ノックインマウスにおける、抗ＰＤ−１と組み合わせた１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈｕＩｇＧ１の抗腫瘍活性を示す図である。
【図６Ａ】ｈＣＤ２７．１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈｕＩｇＧ１がＣＤ２７発現２９３ＦＴ細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導することを示す図である。ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（２９３ＦＴ−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ細胞）を含有するヒト胚腎臓細胞を、ヒトＷＴ、Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７をコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトした。細胞を抗ヒトＣＤ２７抗体の存在下または非存在下で１６〜２０時間刺激し、次いでルシフェラーゼ活性によって読み取られるようにＮＦ−κＢ活性化についてアッセイした。ｍＡｂ  ｈＣＤ２７．１３１ＡＶＨ６ＶＨＬ６  ｈｕＩｇＧ１、１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１、またはｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ４での（Ａ）ｈＣＤ２７  ＷＴ、（Ｂ）ｈＣＤ２７  Ａ５９Ｔ、または（Ｃ）アカゲザル発現ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞の刺激後のルシフェラーゼ活性に関する未刺激細胞に対する倍率変化値が示されている。データは、１回の実験からの三重測定値を表す（＋ＳＤ）。データは、３〜６回の独立した実験の代表である。
【図６Ｂ】ｈＣＤ２７．１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈｕＩｇＧ１がＣＤ２７発現２９３ＦＴ細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導することを示す図である。ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（２９３ＦＴ−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ細胞）を含有するヒト胚腎臓細胞を、ヒトＷＴ、Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７をコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトした。細胞を抗ヒトＣＤ２７抗体の存在下または非存在下で１６〜２０時間刺激し、次いでルシフェラーゼ活性によって読み取られるようにＮＦ−κＢ活性化についてアッセイした。ｍＡｂ  ｈＣＤ２７．１３１ＡＶＨ６ＶＨＬ６  ｈｕＩｇＧ１、１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１、またはｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ４での（Ａ）ｈＣＤ２７  ＷＴ、（Ｂ）ｈＣＤ２７  Ａ５９Ｔ、または（Ｃ）アカゲザル発現ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞の刺激後のルシフェラーゼ活性に関する未刺激細胞に対する倍率変化値が示されている。データは、１回の実験からの三重測定値を表す（＋ＳＤ）。データは、３〜６回の独立した実験の代表である。
【図６Ｃ】ｈＣＤ２７．１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈｕＩｇＧ１がＣＤ２７発現２９３ＦＴ細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導することを示す図である。ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（２９３ＦＴ−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ細胞）を含有するヒト胚腎臓細胞を、ヒトＷＴ、Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７をコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトした。細胞を抗ヒトＣＤ２７抗体の存在下または非存在下で１６〜２０時間刺激し、次いでルシフェラーゼ活性によって読み取られるようにＮＦ−κＢ活性化についてアッセイした。ｍＡｂ  ｈＣＤ２７．１３１ＡＶＨ６ＶＨＬ６  ｈｕＩｇＧ１、１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１、またはｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ４での（Ａ）ｈＣＤ２７  ＷＴ、（Ｂ）ｈＣＤ２７  Ａ５９Ｔ、または（Ｃ）アカゲザル発現ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞の刺激後のルシフェラーゼ活性に関する未刺激細胞に対する倍率変化値が示されている。データは、１回の実験からの三重測定値を表す（＋ＳＤ）。データは、３〜６回の独立した実験の代表である。
【図７Ａ】ｈＣＤ２７．１３１Ａ  ＩｇＧ１およびＩｇＧ４ヒト化変異体がＣＤ２７発現２９３ＦＴ細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導することを示す図である。ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（２９３ＦＴ−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ細胞）を含有するヒト胚腎臓細胞を、ヒトＷＴ  ＣＤ２７をコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトした。細胞を抗ヒトＣＤ２７抗体の存在下または非存在下で１６〜２０時間刺激し、次いでルシフェラーゼ活性によって読み取られるようにＮＦ−κＢ活性化についてアッセイした。（Ａ）ヒトＩｇＧ１または（Ｂ）ＩｇＧ４フレームワーク上のヒト化ｈＣＤ２７．１３１Ａ抗体での刺激後のルシフェラーゼ活性に関する未刺激細胞に対する倍率変化値が示されている。
【図７Ｂ】ｈＣＤ２７．１３１Ａ  ＩｇＧ１およびＩｇＧ４ヒト化変異体がＣＤ２７発現２９３ＦＴ細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導することを示す図である。ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（２９３ＦＴ−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ細胞）を含有するヒト胚腎臓細胞を、ヒトＷＴ  ＣＤ２７をコードするプラスミドで一過性にトランスフェクトした。細胞を抗ヒトＣＤ２７抗体の存在下または非存在下で１６〜２０時間刺激し、次いでルシフェラーゼ活性によって読み取られるようにＮＦ−κＢ活性化についてアッセイした。（Ａ）ヒトＩｇＧ１または（Ｂ）ＩｇＧ４フレームワーク上のヒト化ｈＣＤ２７．１３１Ａ抗体での刺激後のルシフェラーゼ活性に関する未刺激細胞に対する倍率変化値が示されている。
【図８】初代ヒト腫瘍ＴＩＬ培養物における１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ＩｇＧ１の生物活性を示す図である。外科的切除から得られたヒト腫瘍組織（Ｎ＝２０、１６個のＮＳＣＬＣ、３つのＲＣＣ、および１つのＨ＆Ｎ）を、コラゲナーゼＩ型およびＤＮａｓｅ  Ｉを使用して単一細胞懸濁液に消化した。腫瘍の様々な細胞型の混合物を含有する濃縮生細胞を１０ｎｇ／ｍｌ抗ＣＤ３の存在下で０．１、１、１０、または２０μｇ／ｍＬの１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１で処置した。処置は、アイソタイプ対照（ＩｇＧ１およびＩｇＧ４、２０μｇ／ｍｌ）および１０μｇ／ｍＬ抗ＰＤ−１（ペムブロリズマブ）も含んだ。上清を６日目にインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）測定のために回収した。平均ＩＦＮγレベルおよび平均の標準誤差が示されている。処置群とアイソタイプ対照群間の比較に関するＰ値を対応のあるパラメトリック両側Ｔ検定によって決定した。ＩＦＮγ＝インターフェロンガンマ、ＩｇＧ１＝免疫グロブリンＧ、サブクラス１、ＩｇＧ４＝免疫グロブリンＧ、サブクラス４、ＳＥＭ＝平均の標準誤差。
【図９】初代ヒト腫瘍ＴＩＬ培養物におけるｈＣＤ２７．１５−４ＢＩｇＧ４およびＩＦ５−ＩｇＧ１との１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ＩｇＧ１の生物活性の比較を示す図である。２０のうちの１３の腫瘍（１２のＮＳＣＬＣおよび１つのＨ＆Ｎがん）からの消化されたヒト腫瘍細胞も同時にｈＣＤ２７．１５−４ＢＩｇＧ４およびＩＦ５−ＩｇＧ１で試験した。腫瘍の様々な細胞型の混合物を含有する濃縮生細胞を、アイソタイプ対照（ＩｇＧ１およびＩｇＧ４、２０μｇ／ｍｌ）および１０μｇ／ｍｌ抗ＰＤ１（ペムブロリズマブ）対照を含む０．１、１、１０、または２０μｇ／ｍＬの１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１、ｈＣＤ２７．１５−４ＢＩｇＧ４、およびＩＦ５−ＩｇＧ１で処置した。１０ｎｇ／ｍｌ可溶性抗ＣＤ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローンＯＫＴ３）を刺激として使用した。上清を６日目にインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）測定のために回収した。平均ＩＦＮγレベルおよび平均の標準誤差が示されている。処置群とアイソタイプ対照群間の比較に関するＰ値を対応のあるパラメトリック両側Ｔ検定によって決定した。ＩＦＮγ＝インターフェロンガンマ、ＩｇＧ１＝免疫グロブリンＧ、サブクラス１、ＩｇＧ４＝免疫グロブリンＧ、サブクラス４、ＳＥＭ＝平均の標準誤差。
【図１０】ＣＨＯ−Ｋ１細胞上で発現されたｈＣＤ２７アラニンミュータントへの、フローサイトメトリーによるマウスｈＣＤ２７．１３１Ａ（マウスＩｇＧ１）、ヒト化ｈＣＤ２７．１５（ヒトＩｇＧ４、クローン６Ｂ）、１Ａ４（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＩＭ２０３４、クローン１Ａ４ＣＤ２７、マウスＩｇＧ１）、９Ｆ４（Ｓａｎｑｕｉｎ  ＰｅｌｉＣｌｕｓｔｅｒ  ＣＤ２７、製品番号Ｍ１４５５、クローンＣＬＢ−ＣＤ２７／１、９Ｆ４、マウスＩｇＧ２ａ）および１Ｆ５ＩｇＧ１の結合を示す図である。試験されたｈＣＤ２７変異体が列挙されている。アミノ酸は、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ２６８４２−１配列に対応する。アミノ酸１〜２０は、シグナルペプチドを構成する。結合は、１００％に設定されたｈＣＤ２７への抗体結合に対するＦＩＴＣシグナルの幾何平均として表される。
【図１１】１３１ＡＶＨ６ＶＬ６Ｆａｂ−ＣＤ２７およびＭ２１７７Ｆａｂ−ＣＤ２７複合体の構造の比較を示す図である（Ｏｂｍｏｌｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７  Ｍａｒ；８３：９２−９９，２０１７）。座標を抗原構造の重ね合わせ後のリボンとして示し、それぞれ、ＣＤ２７は、黒い太線であり、Ｆａｂは、細線、黒であり、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６ＦａｂおよびＭ２１７７Ｆａｂは、淡灰色である。Ｍ２１７７−ＣＤ２７複合体に関する座標は、それぞれ、Ｆａｂ軽鎖、重鎖および抗原に関して鎖Ａ、ＢおよびＸを使用してＰＤＢ  ５ＴＬＫから得られる。
【図１２Ａ】１３１ＡＶＨ６ＶＬ６Ｆａｂ−ＣＤ２７（Ａ）およびＭ２１７７Ｆａｂ−ＣＤ２７複合体（Ｂ）の構造の比較、クローズアップ図を示す図である：入力モデルおよび画像の向きは、図１１と同じであるが、視野は、比較をよりよく示すために、Ｆａｂ−抗原界面上で拡大されている。図１１と同じリボン表示、色および厚さの慣例が使用されている（Ｍ２１７７−ＣＤ２７共構造は、淡灰色に着色されていることを除く）が、極性相互作用に関与する残基の側鎖は棒として示されている。３．３０Åの距離カットオフを有する水素結合および塩橋は、塩橋に関してより短いダッシュを使用して、破線として示されている。
【図１２Ｂ】１３１ＡＶＨ６ＶＬ６Ｆａｂ−ＣＤ２７（Ａ）およびＭ２１７７Ｆａｂ−ＣＤ２７複合体（Ｂ）の構造の比較、クローズアップ図を示す図である：入力モデルおよび画像の向きは、図１１と同じであるが、視野は、比較をよりよく示すために、Ｆａｂ−抗原界面上で拡大されている。図１１と同じリボン表示、色および厚さの慣例が使用されている（Ｍ２１７７−ＣＤ２７共構造は、淡灰色に着色されていることを除く）が、極性相互作用に関与する残基の側鎖は棒として示されている。３．３０Åの距離カットオフを有する水素結合および塩橋は、塩橋に関してより短いダッシュを使用して、破線として示されている。
【図１３Ａ】マウス抗ｈＣＤ２７クローンｈＣＤ２７．１３１Ａは、細胞に基づくＥＬＩＳＡにおけるｈＣＤ２７への結合に関して１Ｆ５ＩｇＧ１と交差競合しないことを示す図である。マウスｈＣＤ２７．１３１ＡおよびマウスｈＣＤ２７．１５を、１Ｆ５ＩｇＧ１でのｈＣＤ２７への競合的結合に関して試験した。（Ａ）左パネル：実験設定。右パネル：１Ｆ５ＩｇＧ１、続いて１μｇ／ｍｌマウスｈＣＤ２７．１３１Ａ、マウスｈＣＤ２７．１５、またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照の段階希釈の交差競合データ。（Ｂ）左パネル：実験設定。右パネル：マウスｈＣＤ２７．１３１Ａ、マウスｈＣＤ２７．１５、またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照、続いて１μｇ／ｍｌの１Ｆ５ＩｇＧ１の段階希釈の交差競合データ。エラーバーを有するデータ点は、範囲を有する二重測定の平均を表す。
【図１３Ｂ】マウス抗ｈＣＤ２７クローンｈＣＤ２７．１３１Ａは、細胞に基づくＥＬＩＳＡにおけるｈＣＤ２７への結合に関して１Ｆ５ＩｇＧ１と交差競合しないことを示す図である。マウスｈＣＤ２７．１３１ＡおよびマウスｈＣＤ２７．１５を、１Ｆ５ＩｇＧ１でのｈＣＤ２７への競合的結合に関して試験した。（Ａ）左パネル：実験設定。右パネル：１Ｆ５ＩｇＧ１、続いて１μｇ／ｍｌマウスｈＣＤ２７．１３１Ａ、マウスｈＣＤ２７．１５、またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照の段階希釈の交差競合データ。（Ｂ）左パネル：実験設定。右パネル：マウスｈＣＤ２７．１３１Ａ、マウスｈＣＤ２７．１５、またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照、続いて１μｇ／ｍｌの１Ｆ５ＩｇＧ１の段階希釈の交差競合データ。エラーバーを有するデータ点は、範囲を有する二重測定の平均を表す。
【図１４】初代ＣＤ８  Ｔ細胞共刺激アッセイにおける１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１および１Ｆ５−ｈＩｇＧ１の生物活性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
略語
本発明の詳細な説明および例を通して、以下の略語が使用されることになる。
【００６０】
ＡＤＣＣ    抗体依存性細胞傷害
ＣＤＣ      補体依存性細胞傷害
ＣＤＲ      Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用して定義された免疫グロブリン可
変領域における相補性決定領域
ＣＨＯ      チャイニーズハムスター卵巣
ＥＬＩＳＡ  酵素結合免疫吸着検定法
ＦＲ        抗体フレームワーク領域：ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域
ＨＲＰ      西洋ワサビペルオキシダーゼ
ＩＦＮ      インターフェロン
ＩＣ５０    ５０％阻害をもたらす濃度
ＩｇＧ      免疫グロブリンＧ
Ｋａｂａｔ  Ｅｌｖｉｎ  Ａ．Ｋａｂａｔ（（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅ
ｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕ
ｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）によって開発された免疫グロ
ブリンアラインメントおよびナンバリングシステムｍＡｂまたはＭａｂまたはＭＡｂモノ
クローナル抗体
ＳＥＢ      ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）エンテロトキシンＢ
ＴＣＲ      Ｔ細胞受容体
ＴＴ        破傷風トキソイド
Ｖ領域      異なる抗体間で配列が可変であるＩｇ鎖のセグメント。それは、軽鎖にお
けるＫａｂａｔ残基１０７および重鎖における１１３に及ぶ。
ＶＨ        免疫グロブリン重鎖可変領域
ＶＫ        免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域
【００６１】
定義
本発明をより容易に理解することができるように、ある特定の技術および科学用語を以
下に具体的に定義する。本明細書の他の箇所で具体的に定義されていない限り、本明細書
で使用される他の全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に
よって一般に理解される意味を有する。
【００６２】
本明細書で使用する場合、添付の特許請求の範囲を含めて、「ａ」、「ａｎ」および「
ｔｈｅ」などの単語の単数形は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、それら
の対応する複数形の参照を含む。
【００６３】
動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、器官または体液に適用される「投与」および「処
置」は、動物、ヒト、対象、細胞、組織、器官または体液への外因性の医薬品、治療薬、
診断薬または組成物の接触を表す。細胞の処置は、細胞への試薬の接触、並びに体液への
試薬の接触を包含し、ここで、体液は、細胞と接触している。「投与」および「処置」は
、試薬、診断薬、結合化合物によるまたは他の細胞による、例えば、細胞のインビトロお
よびエクスビボの処置も意味する。
【００６４】
「処置する」または「処置すること」は、本発明の抗体または抗原結合断片のいずれか
を含有する組成物などの治療薬を、内部的または外部的に、その薬剤が治療活性を有する
１つ以上の疾患症状を有するか、または疾患を有することが疑われる対象または患者に投
与することを意味する。典型的に、薬剤は、任意の臨床的に測定可能な程度にそのような
（１つ以上の）症状の退縮を誘導しようと進行を阻害しようと、処置された対象または集
団における１つ以上の疾患症状を緩和するのに有効な量で投与される。任意の特定の疾患
症状を緩和するのに有効である治療薬の量は、患者の病状、年齢、および体重、ならびに
対象における所望の応答を誘発する薬物の能力などの因子によって異なり得る。疾患症状
が緩和されたかどうかは、その症状の重症度または進行状況を評価するために医師または
他の熟練したヘルスケア提供者によって典型的に使用される任意の臨床的測定によって評
価され得る。
【００６５】
ＣＤ２７
本発明の一実施形態では、ヒトＣＤ２７のアミノ酸配列は、配列番号１９または配列番
号２０（配列番号１９と同一であるがＳＮＰ−Ａ５９Ｔを含む）のアミノ酸配列を含む。
ｒｓ２５６８０対立遺伝子（一般にＡ５９Ｔと称される）の頻度は、１９．７８％のＥｘ
ＡＣデータベースに基づく全体の平均を有する。
【００６６】
本発明の一実施形態では、カニクイザルのアミノ酸配列、例えばマカカ・ファシキュラ
リス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＣＤ２７またはマカカ・ムラッタＣＤ
２７（ｍｍＣＤ２７）は、配列番号２１に開示されているアミノ酸配列を含む。
【００６７】
抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片
本発明は、ヒトＣＤ２７を結合する抗体またはその抗原結合断片およびそのような抗体
または断片の使用を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２７抗体は、単離されて
いる。
【００６８】
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、約５〜１０
ｎＭのＫＤでヒトＣＤ２７（配列番号１９または配列番号２０）に結合する。一実施形態
では、ヒトＣＤ２７に結合する本発明の抗体は、ｍｍＣＤ２７と交差反応性でもある。本
明細書で使用する場合、「交差反応性」は、抗体が他の種からの相同タンパク質と反応す
る能力を表す。抗体がヒトＣＤ２７またはｍｍＣＤ２７に結合するかどうかは、当技術分
野で既知の任意のアッセイを使用して決定され得る。結合親和性を決定するための当技術
分野で既知のアッセイの例は、表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似
の技法術（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）を含む。
【００６９】
本発明は、抗ＣＤ２７抗体およびその使用方法を含む。本明細書で使用する場合、「抗
体」という用語は、所望の生物学的活性を示す抗体の任意の形を表す。したがって、それ
は、最も広い意味で使用され、特にモノクローナル抗体（２つの軽鎖および２つの重鎖を
含む全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二
重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、およびキメラ抗体を包含するが、これらに
限定されない。
【００７０】
本発明は、抗ＣＤ２７抗原結合断片およびその使用方法を含む。本明細書で使用する場
合、他に示さない限り、「抗体断片」または「抗原結合断片」は、抗体の抗原結合断片、
すなわち、全長抗体によって結合される抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体断片
、例えば、１つ以上のＣＤＲ領域を保持する断片を表す。抗原結合断片の例は、Ｆａｂ、
Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、ダイアボディ、線形抗体、一本鎖抗体分子
、例えば、ｓｃ−Ｆｖ、抗体断片から形成された多重特異性抗体を含むが、これらに限定
されない。
【００７１】
本発明は、抗ＣＤ２７  Ｆａｂ断片およびその使用方法を含む。「Ｆａｂ断片」は、１
つの軽鎖ならびに１つの重鎖のＣＨ１および可変領域からなる。Ｆａｂ分子の重鎖は、別
の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆａｂ断片」は、抗体のパ
パイン切断の産物となり得る。
【００７２】
本発明は、Ｆｃ領域を含む抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片、ならびにその使用
方法を含む。「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ３およびＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖断片
を含有する。２つの重鎖断片は、２つ以上のジスルフィド結合によっておよびＣＨ３ドメ
インの疎水性相互作用によって、一緒に保持されている。
【００７３】
本発明は、抗ＣＤ２７  Ｆａｂ’断片およびその使用方法を含む。「Ｆａｂ’断片」は
、２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成されて、Ｆ（ａｂ’
）２分子が形成され得るように、１つの軽鎖ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメイン
、さらにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメイン間の領域を含有する１つの重鎖の部分または断
片を含有する。
【００７４】
本発明は、抗ＣＤ２７  Ｆ（ａｂ’）２断片およびその使用方法を含む。「Ｆ（ａｂ’
）２断片」は、鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖の間に形成されるように、２つの軽鎖
およびＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分を含有する２つの重鎖を含有
する。したがって、Ｆ（ａｂ’）２断片は、２つの重鎖間のジスルフィド結合によって一
緒に保持されている２つのＦａｂ’断片からなる。「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、抗体のペ
プシン切断の産物となり得る。
【００７５】
本発明は、抗ＣＤ２７  Ｆｖ断片およびその使用方法を含む。「Ｆｖ領域」は、重鎖と
軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
【００７６】
本発明は、抗ＣＤ２７  ｓｃＦｖ断片およびその使用方法を含む。「単鎖Ｆｖ」または
「ｓｃＦｖ」抗体という用語は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体断片を表し、
これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖中に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、
ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬド
メイン間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説に関しては、Ｐｌｕｃｋ
ｔｈｕｎ（１９９４）ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ  ＯＦ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ
ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  
ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を
参照されたい。国際特許出願公開８８／０１６４９号および米国特許第４，９４６，７７
８号および第５，２６０，２０３号もまた参照されたい。
【００７７】
本発明は、抗ＣＤ２７二価抗体およびその使用方法を含む。「二価抗体」は、２つの抗
原結合部位を含む。いくつかの場合では、２つの結合部位は、同じ抗原特異性を有する。
しかしながら、二価抗体は、二重特異性となり得る（以下を参照されたい）。
【００７８】
本発明は、抗ＣＤ２７ダイアボディおよびその使用方法を含む。本明細書で使用する場
合、「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を表し
、この断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）中の軽鎖可変ドメイ
ン（ＶＬ）に結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間
の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖
の相補的ドメインと対形成することを強いられ、２つの抗原結合部位を作り出す。ダイア
ボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７、国際公開第９３／１１１６１号、および
Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８により完全に記載されている。操作された抗体変異体
の総説に関しては、一般に、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａ
ｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６−１１３６を参照されたい。
【００７９】
典型的に、何らかの方法で修飾された本発明の抗体または抗原結合断片は、その活性が
モルベースで表される場合、その結合活性の少なくとも１０％（親抗体と比較した場合）
を保持する。好ましくは、本発明の抗体または抗原結合断片は、親抗体としてＣＤ２７結
合親和性の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％
以上を保持する。本発明の抗体または抗原結合断片が、その生物学的活性を実質的に変え
ない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」または「機能保存変異
体」と称される）を含み得ることも意図されている。
【００８０】
本発明は、単離抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片、ならびにその使用方法を含む
。「単離」抗体またはその抗原結合断片は、それらが産生される細胞または細胞培養物か
らの他の生体分子を少なくとも部分的に含まない。そのような生物学的分子は、核酸、タ
ンパク質、脂質、炭水化物、または細胞デブリおよび増殖培地などの他の物質を含む。単
離抗体または抗原結合断片は、さらに、宿主細胞からの生体分子またはその増殖培地など
の発現系構成成分を少なくとも部分的に含まなくてもよい。一般に、「単離」という用語
は、そのような生体分子の完全な非存在、または水、緩衝液、塩の非存在、または、抗体
もしくは断片を含む医薬製剤の構成成分を表すことが意図されていない。
【００８１】
本発明は、抗ＣＤ２７キメラ抗体（例えばヒト定常ドメイン／マウス可変ドメイン）お
よびその使用方法を含む。本明細書で使用する場合、「キメラ抗体」は、第１の抗体から
の可変ドメインおよび第２の抗体からの定常ドメインを有する抗体であり、ここで、第一
および第二の抗体は、異なる種からのものである。（米国特許第４，８１６，５６７号、
およびＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５）。典型的に、可変ドメインはげっ歯類など
の実験動物からの抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配列は、ヒト抗体から得
られるので、生じるキメラ抗体は、親（例えばマウス）抗体よりもヒト対象において有害
な免疫応答を誘発する可能性が低いことになる。
【００８２】
本発明は、抗ＣＤ２７ヒト化抗体およびその抗原結合断片（例えばヒト化されたラット
またはマウス抗体）、ならびにその使用方法を含む。本発明は、１３１Ａ抗体の任意のヒ
ト化バージョンを含む。本明細書で使用する場合、「１３１Ａ抗体」および「ｈＣＤ２７
．１３１Ａ」は互換的に使用され、配列番号７のＶＨ領域および配列番号８のＶＬ領域を
含む抗体を表す。本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒト抗体と非
ヒト（例えばマウスまたはラット）抗体の両方からの配列を含有する抗体の形を表す。一
般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的に２つの可変ドメインの全てを実質的に含
むことになり、ここで、高頻度可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブ
リンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全部または実質的に全部がヒト免疫
グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、場合によりヒト免疫グロブリン定常領域（
Ｆｃ）の少なくとも部分を含み得る。ヒト化抗体についてのさらなる詳細に関して、例え
ば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）、
Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８
）、Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（
１９９２）、およびＣｌａｒｋ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３９７−４０２（
２０００）を参照されたい。
【００８３】
一般に、基本的な抗体構造単位は、四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つ
の同一の対を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約
５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主に司る約１００〜
１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機
能を主に司る定常領域を定義し得る。典型的に、ヒト軽鎖は、カッパおよびラムダ軽鎖と
して分類される。さらに、ヒト重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシ
ロンとして典型的に分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、
ＩｇＡおよびＩｇＥとして定義する。軽鎖および重鎖内で、可変領域および定常領域は、
約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖はまた、約１０以上のアミノ
酸の「Ｄ」領域を含む。一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃ
ｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（
１９８９）を参照されたい。
【００８４】
各軽／重鎖対の可変領域は、抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、インタク
トな抗体は、２つの結合部位を有する。二機能性または二重特異性抗体を除いて、２つの
結合部位は一般に同じである。
【００８５】
典型的に、重鎖と軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域
（ＦＲ）内に位置する相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの高頻度可変領域を含
む。ＣＤＲは、通常、フレームワーク領域によって整列され、特異的エピトープへの結合
を可能にする。一般に、Ｎ末端からＣ末端へ、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両
方は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各
ドメインへのアミノ酸の割り当ては、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ
．、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ
，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）、Ｋ
ａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５、Ｋａｂａｔ，ｅｔ
ａｌ．，（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６、Ｃｈｏ
ｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７
またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８
８３の定義に従う。
【００８６】
本明細書で使用する場合、「フレームワーク」または「ＦＲ」残基という用語は、本明
細書中でＣＤＲ残基として定義される高頻度可変領域残基以外の可変ドメイン残基を表す
。
【００８７】
本明細書で使用する場合、「高頻度可変領域」という用語は、抗原結合を司る抗体また
はその抗原結合断片のアミノ酸残基を表す。高頻度可変領域は、ＣＤＲ（すなわち、軽鎖
可変ドメインにおけるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、ならびに重鎖可変ド
メインにおけるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む。
Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  
ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  
Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅ
ａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（ｄｅｆｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＤＲ  ｒｅｇｉｏ
ｎｓ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｙ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）を参照されたい。Ｃｈ
ｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９
１７（ｄｅｆｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＤＲ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉｂｏ
ｄｙ  ｂｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）も参照されたい。
【００８８】
「単離核酸分子」または「単離ポリヌクレオチド」は、ゲノムの、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ
、または、合成起源の、またはそのいくつかの組合せであるＤＮＡまたはＲＮＡを意味し
、それは、天然に見出されるポリヌクレオチドの全てまたは部分とは関連していないか、
またはそれが天然には連結されていないポリヌクレオチドに連結されている。本開示の目
的のために、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は、インタクトな染色体を包含
しないことが理解されるべきである。特定の核酸配列を「含む」単離核酸分子は、特定の
配列に加えて、最大１０、さらには最大２０以上の他のタンパク質またはその部分もしく
は断片に関するコード配列を含み得るか、または列挙された核酸配列のコード領域の発現
を制御する機能的に連結された調節配列および／またはベクター配列を含み得る。
【００８９】
「制御配列」というフレーズは、特定の宿主生物における機能的に連結されたコード配
列の発現に必要なＤＮＡ配列を表す。原核生物に適している制御配列は、例えば、プロモ
ーターを含み、場合によりオペレーター配列、およびリボソーム結合部位を含んでよい。
真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを使用すること
が知られている。
【００９０】
核酸またはポリヌクレオチドは、それが別の核酸配列との機能的関係に置かれた場合に
「機能的に連結され」ている。例えば、プレ配列または分泌リーダーに関するＤＮＡは、
それがポリペプチドの分泌に関与するタンパク質前駆体として発現される場合、ポリペプ
チドに関するＤＮＡに機能的に連結されており、プロモーターまたはエンハンサーは、そ
れが配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に機能的に連結されており、または、リ
ボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に機
能的に連結されている。常にではないが一般的に、「機能的に連結された」は、連結され
ているＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合、近接しておりかつ読み段階にあ
ることを意味する。しかしながら、エンハンサーは近接していなくてもよい。連結は、好
都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場
合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される
。
【００９１】
本明細書で使用する場合、「細胞」、「細胞株」および「細胞培養物」という表現は互
換的に使用され、全てのそのような呼称は子孫を含む。したがって、「形質転換体」およ
び「形質転換細胞」という用語は、初代対象細胞およびそれに由来する培養物を導入の数
に関係なく含む。意図的または偶然の突然変異により全ての子孫が正確に同一のＤＮＡ量
を有することになるわけではないこともまた理解される。元々形質転換された細胞におい
てスクリーニングされたものと同じ機能または生物学的活性を有するミュータント子孫が
含まれる。明確な指定が意図されている場合、それは、文脈から明らかとなる。
【００９２】
本明細書で使用する場合、「生殖系列配列」は、再配列されていない免疫グロブリンＤ
ＮＡ配列の配列を表す。再配列されていない免疫グロブリン配列の任意の適した供給源が
使用され得る。ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  
ｏｆ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ  ａｎｄ  Ｓｋｉ
ｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈに関するウェブサイト上のＪＯＩＮＳＯＬ
ＶＥＲ生殖系列データベースから得られ得る。マウス生殖系列配列は、例えば、Ｇｉｕｄ
ｉｃｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３３：
Ｄ２５６−Ｄ２６１に記載されているように得られ得る。
【００９３】
例示的な抗ＣＤ２７抗体の物理的および機能的特性
本発明は、特定の構造的および機能的特色を有する抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合
断片、ならびに疾患（例えばがんまたは感染性疾患）の処置または予防における抗体また
はその抗原結合断片の使用の方法を提供する。
【００９４】
「本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片」は、本明細書で考察される任意の
抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、表１２に開示されたｈＣＤ２７．１３１Ａまた
はそのヒト化バージョン）またはその変異体（例えば配列変異体または機能的変異体）、
表１２に記載されたＣＤＲの任意の１つ以上を含む任意の抗体または抗原結合断片を含む
。
【００９５】
上記のように、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片のいずれかと同じエピ
トープに結合する抗体および断片も本発明の一部を形成する。一実施形態では、本発明は
、配列番号１０の可変重鎖と配列番号１５の可変軽鎖とを含む抗体と同じヒトＣＤ２７の
エピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。別の実施形態では、本発
明は、配列番号７の可変重鎖と配列番号８の可変軽鎖とを含む抗体と同じヒトＣＤ２７の
エピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００９６】
標的抗原上の抗体エピトープをマッピングするために利用可能ないくつかの方法があり
、これには、Ｈ／Ｄ−Ｅｘ質量分析、Ｘ線結晶解析、ペプスキャン分析、アラニンスキャ
ニング、ヒドロキシルラジカルフットプリント、および部位特異的突然変異誘発が含まれ
る。例えば、タンパク質分解および質量分析と組み合わされたＨＤＸ（水素重水素交換）
を使用して、特異的抗原Ｙ上の抗体のエピトープを決定することができる。ＨＤＸ−ＭＳ
は、様々な時間間隔でそのままでおよびその抗体の存在下Ｄ２Ｏ中でインキュベートされ
た場合の抗原による重水素取り込みの程度の正確な測定および比較に依存する。
【００９７】
重水素は、露出領域においてタンパク質のアミド骨格上で水素と交換されるが、抗体に
結合した抗原の領域は保護されることになり、タンパク質分解断片のＬＣ−ＭＳ／ＭＳに
よる分析後にほとんどまたは全く交換を示さないことになる。一実施形態では、エピトー
プは、ＣＤ２７またはその断片と抗ＣＤ２７抗体またはその断片間の複合体のＸ線結晶構
造を解明して抗ＣＤ２７抗体残基の４Å以内の１つ以上のＣＤ２７残基を同定することに
よって決定される。別の実施形態では、エピトープは、例えば、抗ＣＤ２７抗体残基とフ
ァンデルワールス、極性相互作用、塩橋または水素結合接触を有するＣＤ２７残基を含む
。別の実施形態では、エピトープは、ＣＤ２７残基の突然変異誘発（例えばアラニンスキ
ャニング）および突然変異誘発の結果としての抗ＣＤ２７抗体への結合の喪失を分析する
ことによって決定される。
【００９８】
本発明は、ヒトＣＤ２７に結合するとき、配列番号１９のＬｅｕ１８、Ａｓｐ３４、Ｇ
ｌｎ３５およびＬｙｓ３８からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する抗
体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は
、配列番号１９のＬｅｕ１８、Ａｓｐ３４、Ｇｌｎ３５、およびＬｙｓ３８からなる群か
ら選択される少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つの残基に結合する。本発明は、ヒト
ＣＤ２７に結合するとき、配列番号１９のＧｌｎ３５、およびＬｙｓ３８からなる群から
選択される少なくとも１つの残基に結合する、抗体またはその抗原結合断片も提供する。
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９の少なくともＧｌｎ３５
およびＬｙｓ３８に結合する。
【００９９】
前述の実施形態の別の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号１９のＰｒ
ｏ８、Ｇｌｕ９、Ｈｉｓ１１、Ｌｙｓ１７、Ｈｉｓ３６、およびＡｒｇ３７からなる群か
ら選択される１つ以上の残基（１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの残基）にさら
に結合する。さらなる実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号１９のＧｌｕ
９、Ｌｙｓ１７、Ｈｉｓ３６、およびＡｒｇ３７からなる群から選択される１つ以上の残
基（１つ、２つ、３つ、または４つの残基）にさらに結合する。本発明の別の態様では、
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９の残基Ｐｒｏ８、Ｇｌｕ９、Ｈｉｓ１１、
Ｌｙｓ１７、Ｌｅｕ１８、Ａｓｐ３４、Ｇｌｎ３５、Ｈｉｓ３６、Ａｒｇ３７、およびＬ
ｙｓ３８に結合する。さらなる実施形態では、抗体または抗原結合は、配列番号１９の残
基Ｇｌｕ９、Ｌｙｓ１７、Ｌｅｕ１８、Ａｓｐ３４、Ｇｌｎ３５、Ｈｉｓ３６、Ａｒｇ３
７、およびＬｙｓ３８に結合する。
【０１００】
前述の実施形態の一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、場合により、以下
の特徴：細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または２００ｐＭ未満のＥＣ
５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１５０ｐＭ未満、また
は２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッ
セイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７に
結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉ
ｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ
２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２
７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する；Ｔ細胞活性化を増
加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産を刺激する；抗体またはその
断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−
κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５
０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはそ
の断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７発現細胞におけ
るＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への
結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化
を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる、の少なくと
も１つを有してもよい。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔまたはア
カゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一過性にトランスフェクトしたＮＦ
−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞で
ある。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８
＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約１．５〜２倍の増加がある。
別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗
体、および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で少なくとも１．５倍である。
【０１０１】
本発明の抗ＣＤ２７抗体の免疫グロブリン鎖およびそれらのＣＤＲの例には、表１２（
配列番号７〜１８および３２〜４０）に開示されているものが含まれるがこれらに限定さ
れない。本発明は、配列番号７〜１８および３２〜４０、ならびに４４〜４５のアミノ酸
配列を含むかまたはそれらからなる任意のポリペプチド、およびそのようなポリペプチド
をコードする組換えヌクレオチドを含む。
【０１０２】
本発明の範囲は、本明細書で記載された免疫グロブリン鎖の変異体、例えば、配列番号
７〜１８、３２〜４０、および４４〜４５のいずれかを含む、単離抗ＣＤ２７抗体および
その抗原結合断片（例えばヒト化抗体）であって、変異体が以下の特徴：細胞ＥＬＩＳＡ
アッセイに従って１００ｐＭ未満、または２００ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結
合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１５０ｐＭ未満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ
５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ
未満、または１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７に結合する；表面プラズモ
ン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥ
Ｔ）によって決定される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７
（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニクイザルまたはアカゲザルＣＤ２７と交差反応する；ヒト
ＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する；Ｔ細胞活性化を増加させる；ＩＬ−２およ
びＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産を刺激する；抗体またはその断片が可溶型である場合
、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；
抗体またはその断片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９
Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場
合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘
導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ２７への結合に関して０．５ｎＭ
未満のＥＣ５０を有する；可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍
培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる、の１つ以上を示す、単離抗ＣＤ２７
抗体およびその抗原結合断片を含む。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒトＣＤ２７Ａ５
９Ｔ、またはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一過性にトランスフ
ェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨＥＫ２９３ＦＴヒ
ト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋
である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約１．５〜２倍
の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２０μｇ／ｍｌ
の抗ＣＤ２７抗体、および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で少なくとも１．５倍である。
一実施形態では、変異体は、配列番号７〜１８、３２〜４０、および４４〜４５のいずれ
か１つに対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個のアミ
ノ酸置換を含む。
【０１０３】
他の実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ２７（例えばヒト化抗体）を結合し、配列番号
７〜１８および３２〜４０の少なくとも１つとの少なくとも８０％、８５％、９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＬドメインおよび
ＶＨドメインを有する抗体またはその抗原結合断片であって、変異体が望ましい結合およ
び特性、例えば、細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または２００ｐＭ未
満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７に結合する；細胞ＥＬＩＳＡアッセイに従って１５０ｐＭ未
満、または２５０ｐＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔに結合する；細胞ＥＬＩ
ＳＡアッセイに従って１００ｐＭ未満、または１５０ｐＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣ
Ｄ２７に結合する；表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例
えばＫｉｎＥｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１０ｎＭの二価ＫＤ値で
ヒトＣＤ２７およびヒトＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）に結合する；カニクイザルまたはアカゲザ
ルＣＤ２７と交差反応する；ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する；Ｔ細胞活
性化を増加させる；ＩＬ−２およびＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産を刺激する；抗体ま
たはその断片が可溶型である場合、５ｎＭ未満のＥＣ５０でヒトＣＤ２７発現細胞におけ
るＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体またはその断片が可溶型である場合、１０ｎＭ未満
のＥＣ５０でヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ発現細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；抗体
またはその断片が可溶型である場合、１ｎＭ未満のＥＣ５０でアカゲザルＣＤ２７発現細
胞におけるＮＦ−κＢ活性化を誘導する；ＣＤ８＋またはＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＣＤ
２７への結合に関して０．５ｎＭ未満のＥＣ５０を有する；可溶型においてＣＤ８＋Ｔ細
胞活性化を増加させる；ヒト腫瘍培養物中で抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生を増加させる；を
示す、抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、ヒトＣＤ２７、ヒトＣ
Ｄ２７Ａ５９ＴまたはアカゲザルＣＤ２７発現細胞は、ＣＤ２７プラスミドを一過性にト
ランスフェクトしたＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物を含有するＨＥＫ２９
３ＦＴヒト胚腎臓細胞である。一実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化は、ＣＤ２５＋Ｃ
Ｄ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定され、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の平均約１．
５〜２倍の増加がある。別の実施形態では、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の増加は、２０μ
ｇ／ｍｌの抗ＣＤ２７抗体、および１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体で少なくとも１．５倍
である。
【０１０４】
他の実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ２７に結合し、配列番号８、１４〜１８、３３
、３５、および４０のＶＬドメインのいずれか１つおよび配列番号７、９〜１３、３２、
３４、および３９のＶＨドメインのいずれか１つとの少なくとも９５％の配列同一性を有
するＶＬドメインおよびＶＨドメインを有する抗体またはその抗原結合断片（例えばヒト
化抗体）を提供する。他の実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ２７に結合し、配列番号８
、１４〜１８、３３、３５、および４０のＶＬドメインのいずれか１つおよび配列番号７
、９〜１３、３２、３４、および３９のＶＨドメインのいずれか１つを有するＶＬドメイ
ンおよびＶＨドメインを有する抗体またはその抗原結合断片（例えばヒト化抗体）を提供
する。他の実施形態では、本発明は、ヒトＣＤ２７に結合し、配列番号８、１４〜１８、
３３、３５、および４０のＶＬドメインのいずれか１つおよび配列番号７、９〜１３、３
２、３４、および３９のＶＨドメインのいずれか１つとの少なくとも９９％の配列同一性
を有するＶＬドメインおよびＶＨドメインを有する抗体またはその抗原結合断片（例えば
ヒト化抗体）を提供する。
【０１０５】
「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、変化がそのタンパク質の生物
学的活性を変えることなく頻繁になされ得るような、類似した特徴（例えば、電荷、側鎖
サイズ、疎水性／親水性、骨格構造および剛性など）を有する他のアミノ酸とのタンパク
質中のアミノ酸の置換を表す。当業者は、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単
一のアミノ酸置換が生物学的活性を実質的に変化させないことを認識している（例えば、
Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  
ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ
．２２４（４ｔｈ  Ｅｄ．）を参照されたい）。さらに、構造的または機能的に類似した
アミノ酸の置換は、生物学的活性を乱す可能性が低い。例示的な保存的置換が表１に記載
されている。
【表１】
2020114241.tif 000003
【０１０６】
本発明の抗体の機能保存的変異体も本発明によって意図されている。本明細書で使用す
る場合、「機能保存的変異体」は、抗原親和性および／または特異性などの所望の特性を
変えることなく１つ以上のアミノ酸残基が変えられている抗体または断片を表す。そのよ
うな変異体は、表１の保存的アミノ酸置換などの類似の特性を有するものとのアミノ酸の
置換を含むが、これに限定されない。本発明の抗ＣＤ２７抗体のＶＬドメインを含む単離
ポリペプチド（例えば、配列番号８、１４〜１８、３３、３５および４０）、および、最
大０、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個以上のアミノ酸
置換を有する本発明の抗ＣＤ２７抗体のＶＨドメインを含む単離ポリペプチド（例えば、
配列番号７、９〜１３、３２、３４、および３９）も提供される。
【０１０７】
別の実施形態では、ＣＤ２７に結合し、本明細書に記載のＶＬドメインまたはＶＨドメ
インの１つ以上と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％
、８０％または７５％の配列同一性を有するＶＬドメインおよびＶＨドメインを有し、Ｃ
Ｄ２７への特異的結合を示す抗体またはその抗原結合断片が提供される。別の実施形態で
は、本発明の結合抗体またはその抗原結合断片は、最大１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、
６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、
１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個以上のアミ
ノ酸置換を有するＶＬおよびＶＨドメイン（シグナル配列を有するまたは有さない）を含
み、ＣＤ２７への特異的結合を示す。
【０１０８】
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド
本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片のポリペプチドまたは免疫
グロブリン鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。例えば、本発明は
、配列番号１〜１８、３２〜４０、および４４〜４５のいずれか１つに記載のアミノ酸を
コードするポリヌクレオチドを含む。別の実施形態では、本発明は、配列番号４６もしく
は配列番号４７、またはその両方を含む単離核酸を提供する。
【０１０９】
一実施形態では、本明細書に記載の単離抗体または抗原結合断片のポリペプチド鎖をコ
ードする単離ポリヌクレオチド、例えばＤＮＡが提供される。一実施形態では、単離ポリ
ヌクレオチドは、本発明による少なくとも１つの成熟免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ド
メインおよび／または本発明による少なくとも１つの成熟免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ
）ドメインを含む抗体またはその抗原結合断片をコードする。いくつかの実施形態では、
単離ポリヌクレオチドは、単一のポリヌクレオチド分子上の軽鎖と重鎖の両方をコードし
、他の実施形態では、軽鎖および重鎖は、別個のポリヌクレオチド分子上にコードされる
。別の実施形態では、ポリヌクレオチドは、シグナル配列をさらにコードする。
【０１１０】
一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号２
）およびＣＤＲ−Ｈ３（配列番号３）を含むＶＨドメインをコードする単離ポリヌクレオ
チドまたはその抗原結合断片を含む。
【０１１１】
一実施形態では、本発明は、ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号５
）およびＣＤＲ−Ｌ３（配列番号６）を含むＶＬドメインをコードする単離ポリヌクレオ
チドまたはその抗原結合断片を含む。
【０１１２】
一実施形態では、本発明は、配列番号７のＶＨドメインをコードする単離ポリヌクレオ
チドを含む。
【０１１３】
一実施形態では、本発明は、配列番号８のＶＬドメインをコードする単離ポリヌクレオ
チドを含む。
【０１１４】
一実施形態では、本発明は、配列番号１０〜１３のいずれか１つのＶＨドメインをコー
ドする単離ポリヌクレオチドを含む。
【０１１５】
一実施形態では、本発明は、配列番号１０のＶＨドメインをコードする単離ポリヌクレ
オチドを含む。
【０１１６】
一実施形態では、本発明は、配列番号１５〜１８のいずれか１つのＶＬドメインをコー
ドする単離ポリヌクレオチドを含む。
【０１１７】
一実施形態では、本発明は、配列番号１５のＶＬドメインをコードする単離ポリヌクレ
オチドを含む。
【０１１８】
本発明は、本発明の単離ポリヌクレオチドであって、宿主細胞がベクターでトランスフ
ェクトされた場合に宿主細胞によって認識される制御配列に機能的に連結しているポリヌ
クレオチドを含むベクター、例えば、プラスミドなどの発現ベクターも提供する。更に、
本発明のベクターを含む宿主細胞、および、本明細書で開示された抗体またはその抗原結
合断片またはポリペプチドを産生するための方法であって、培養培地中で抗体またはその
抗原結合断片の免疫グロブリン鎖をコードする発現ベクターまたは核酸を有する宿主細胞
を培養することと、宿主細胞または培養培地から抗原またはその抗原結合断片を単離する
ことを含む方法、も提供される。
【０１１９】
比較が、アルゴリズムのパラメータがそれぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの
配列間の最も大きいマッチを与えるように選択されるＢＬＡＳＴアルゴリズムによって行
われる場合（例えば、期待閾値１０、ワードサイズ３、クエリ範囲における最大マッチ０
、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス、ギャップコスト存在１１、拡張１、条件付き組成スコ
アマトリックス調整）、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列と少なくとも約７５％
同一、８０％同一、より好ましくは少なくとも約９０％同一、最も好ましくは少なくとも
約９５％同一（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％）のアミノ
酸配列を含むポリペプチド、例えば免疫グロブリンポリペプチドも本発明に含まれる。
【０１２０】
配列同一性は、２つの配列が最適に整列されている場合に、２つのポリペプチドのアミ
ノ酸が同等の位置で同じである程度を表す。
【０１２１】
以下の参考文献は、配列分析にしばしば使用されるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関する。
ＢＬＡＳＴ  ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ：Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）ＦＥ
ＢＳ  Ｊ．２７２（２０）：５１０１−５１０９、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ  
ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０、Ｇｉｓｈ，Ｗ．
，ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．３：２６６−２７２、Ｍａｄ
ｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：１
３１−１４１、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２、Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．
，（１９９７）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．７：６４９−６５６、Ｗｏｏｔｔｏｎ，Ｊ．Ｃ．
，ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１７：１４９−１６３、Ｈａｎ
ｃｏｃｋ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ
．１０：６７−７０、ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＣＯＲＩＮＧ  ＳＹＳＴＥＭＳ：Ｄａｙｈ
ｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ
ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．”ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐ
ｌ．３．Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（ｅｄ．），ｐｐ．３４５−３５２，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏ
ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ、Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．
Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎ
ｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．”ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，（１９７８）ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．３．
“Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ（ｅｄ．），ｐｐ．３５３−３５８，Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ
．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，
（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９：５５５−５６５；Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．
，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３：６６−７０、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｓ
．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９
：１０９１５−１０９１９、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６：２９０−３００、ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＴＡＴＩＳＴＩ
ＣＳ：Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−２２６８、Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，（
１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７
、Ｄｅｍｂｏ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｎｎ．Ｐｒｏｂ．２２：２０２２−
２０３９、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．“Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔａ
ｔｉｓｔｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｉｓｔｉｎ
ｃｔ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ．”  ｉｎ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ
Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ（Ｓ．Ｓｕｈａｉ，ｅｄ．），（１９９７）ｐｐ．１−１４，Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ  
Ｙｏｒｋ。
【０１２２】
結合親和性
限定ではなく例として、本明細書で開示された抗体および抗原結合断片は、ヒトＣＤ２
７−Ｆｃ融合タンパク質またはヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ−Ｆｃ融合タンパク質を用いて測定
される表面プラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉｎＥ
ｘａまたはＯＣＴＥＴ）によって決定される１０×１０−９Ｍ以下の二価ＫＤ値でヒトＣ
Ｄ２７またはＣＤ２７Ａ５９Ｔ（配列番号１９または配列番号２０）を結合し得る。一実
施形態では、本明細書で開示された抗体および抗原結合断片は、ヒトＣＤ２７−Ｆｃ融合
タンパク質またはヒトＣＤ２７Ａ５９Ｔ−Ｆｃ融合タンパク質を用いて測定される表面プ
ラズモン共鳴（例えばＢＩＡＣＯＲＥ）または類似の技法（例えばＫｉｎＥｘａまたはＯ
ＣＴＥＴ）によって決定される約５〜１０×１０−９Ｍの二価ＫＤ値でヒトＣＤ２７また
はＣＤ２７Ａ５９Ｔを結合し得る。
【０１２３】
免疫細胞活性化
いくつかの実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、免疫細胞の活性を増加
させる。免疫細胞の活性の増加は、当技術分野において任意の既知の方法を使用して検出
され得る。一実施形態では、免疫細胞の活性の増加は、免疫細胞の増殖を測定することに
よって検出され得る。例えば、Ｔ細胞の活性の増加は、Ｔ細胞の増殖または免疫受容体も
しくは転写調節因子にシグナルを伝達する下流キナーゼのチロシンリン酸化などのシグナ
ル伝達事象を測定することによって検出され得る。他の実施形態では、免疫細胞の活性の
増加は、特定の標的細胞に対するＣＴＬもしくはＮＫ細胞の細胞傷害性機能、または、抗
腫瘍免疫の刺激に関連しているＩＦＮγサイトカイン応答を測定することによって検出さ
れ得る。さらに他の実施形態では、免疫細胞の活性の増加は、対象に由来する試料中のＴ
細胞活性化をエクスビボで測定することによって検出され得る。一実施形態では、Ｔ細胞
活性の増加は、（ｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＧＭ−
ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３からなる群か
ら選択される１つ以上の炎症促進性サイトカインのＳＥＢ（スタフィロコッカスエンテロ
トキシンＢ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ  Ｂ））誘導作製
を測定すること、または（ｉｉ）ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１７、ＩＦＮγ、ＩＬ−１
β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびＩＬ−１３から
なる群から選択されるサイトカインの産生を誘導するためのＴＣＲシグナリングの混合リ
ンパ球反応または直接的抗ＣＤ３  ｍＡｂ刺激を測定することによって決定される。ある
実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片は、ＩＬ−２および／ま
たはＩＦＮγの抗原特異的Ｔ細胞生産を少なくとも１．５倍刺激することになる。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片が免疫細胞の活性を増加さ
せる能力は、フローサイトメトリーによるＣＤ２５およびＣＤ６９の上方制御によって検
出され得る。
【０１２５】
抗ｈＣＤ２７抗体がｈＣＤ７０への結合を遮断する能力
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片は、ヒトＣＤ７
０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断することができる。ヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結
合を遮断する能力は、当技術分野で既知の任意の方法を使用して決定され得る。一実施形
態では、抗体がヒトＣＤ７０へのヒトＣＤ２７の結合を遮断する能力は、ＥＬＩＳＡアッ
セイを使用して決定される。
【０１２６】
抗体およびその抗原結合断片を産生する方法
したがって、本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片を産生するた
めの方法であって、抗体または断片を発現するハイブリドーマ細胞をそのような発現に有
利な条件下で培養することと、場合によりハイブリドーマおよび／または増殖培地（例え
ば細胞培養培地）から抗体または断片を単離すること、を含む方法を含む。
【０１２７】
本明細書で開示された抗ＣＤ２７抗体は、組換えで（例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）／
Ｔ７発現系、哺乳類細胞発現系または下等真核生物発現系において）も産生され得る。こ
の実施形態では、本発明の抗体免疫グロブリン分子をコードする核酸（例えばＶＨまたは
ＶＬ）は、ｐＥＴに基づくプラスミドに挿入され、大腸菌／Ｔ７系において発現され得る
。例えば、本発明は、宿主細胞（例えば、ＢＬ２１またはＢＬ２１ＤＥ３などの大腸菌な
どの細菌宿主細胞）において抗体またはその抗原結合断片またはその免疫グロブリン鎖を
発現させるための方法であって、Ｔ７プロモーターに機能的に連結されている免疫グロブ
リン鎖をコードするポリヌクレオチドも含む細胞中でＴ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現さ
せることを含む方法を含む。例えば、本発明の一実施形態では、大腸菌などの細菌宿主細
胞は、ｌａｃプロモーターに機能的に連結されたＴ７  ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子をコー
ドするポリヌクレオチドを含み、ポリメラーゼおよび鎖の発現は、ＩＰＴＧ（イソプロピ
ル−ベータ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）での宿主細胞のインキュベーションによって
誘導される。
【０１２８】
当技術分野で既知である組換え抗体を産生するためのいくつかの方法がある。抗体の組
換え産生のための方法の一例は、米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている。
【０１２９】
形質転換は、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための任意の既知の方法によって
行うことができる。哺乳類細胞への異種ポリヌクレオチドの導入のための方法は、当技術
分野でよく知られており、デキストラン媒介トランスフェクション、リン酸カルシウム沈
殿、ポリブレン媒介トランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーショ
ン、リポソームにおける（１つ以上の）ポリヌクレオチドのカプセル化、核へのＤＮＡの
微粒子銃注入および直接的マイクロインジェクションを含む。さらに、核酸分子は、ウイ
ルスベクターによって哺乳類細胞中に導入され得る。細胞を形質転換する方法は、当技術
分野においてよく知られている。例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，９１
２，０４０号、第４，７４０，４６１号および第４，９５９，４５５号を参照されたい。
【０１３０】
したがって、本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体もしくはその抗原結合断片、またはそ
の免疫グロブリン鎖を作るための組換え方法であって、抗体または断片の１つ以上の免疫
グロブリン鎖（例えば重鎖および／または軽鎖免疫グロブリン鎖）をコードするポリヌク
レオチドを導入することと、宿主細胞（例えば、ＣＨＯまたはピキア（Ｐｉｃｈｉａ）ま
たはピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ））をそのような発現に有利
な条件下で培養すること、場合により宿主細胞および／または宿主細胞が増殖している培
地から抗体または断片または鎖を単離することを含む方法を含む。
【０１３１】
抗ＣＤ２７抗体は、米国特許第６，３３１，４１５号に記載された方法のいずれかによ
っても合成され得る。
【０１３２】
本明細書で開示された抗体または断片または免疫グロブリン鎖の発現のための宿主とし
ての哺乳類細胞を含めた真核生物および原核生物宿主細胞は、当技術分野においてよく知
られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ａ
ＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含む。これらは、とりわけ、チャイニーズ
ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター
腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えばＨｅｐ  Ｇ２
）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、およびいくつかの他の細胞株を含
む。哺乳類宿主細胞は、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、
およびハムスター細胞を含む。特に好ましい細胞株は、どの細胞株が高発現レベルを有す
るかを決定することを通して選択される。使用され得る他の細胞株は、Ｓｆ９細胞、両生
類細胞、細菌細胞、植物細胞、および真菌細胞などの昆虫細胞株である。真菌細胞は、例
えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・フィンランデ
ィカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピキア・トレハロフィア（Ｐｉｃｈｉａ
ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピキア・コクラマエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ
）、ピキア・メンブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）、ピキア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｉｎｕｔａ）（オガタエア・ミヌタ（Ｏｇａｔ
ａｅａ  ｍｉｎｕｔａ）、ピキア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｌｉｎｄｎｅｒｉ））、
ピキア・オプンチアエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピキア・セルモトレランス
（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピキア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉ
ａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピキア・グエルクーム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ
）、ピキア・ピジペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピキア・スティプティス（Ｐ
ｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌ
ｉｃａ）、ピキア種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス種（Ｓａｃｃｈａｒ
ｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルフィア（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙ
ｍｏｒｐｈａ）、クリベロマイセス種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クリベ
ロマイセス・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・ア
ルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉ
ｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリザエ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙ
ｚａｅ）、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソ
スポリウム・ルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）
、フサリウム種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フサリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒ
ｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フサリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅ
ｎａｔｕｍ）、ヒスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅｎ
ｓ）、およびネウロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ピキア
種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、任意のサッカロマイセス種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポィモルフィア（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ
）、任意のクリベロマイセス種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、カンジダ・ア
ルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、任意のアスペルギルス種（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅ
ｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋ
ｎｏｗｅｎｓｅ）、任意のフサリウム種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ヤロウイア・リ
ポライティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、およびネウロスポラ・クラ
ッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）を含めた酵母および糸状菌細胞を含む。重
鎖またはその抗原結合部分またはその断片、軽鎖および／またはその抗原結合断片をコー
ドする組換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞に導入される場合、抗体が、宿主細胞におけ
る抗体または断片または鎖の発現、または宿主細胞が増殖される培養培地への分泌を可能
にするのに十分な期間宿主細胞を培養することによって産生される。
【０１３３】
抗体およびその抗原結合断片および免疫グロブリン鎖は、標準的なタンパク質精製方法
を使用して培養培地から回収され得る。さらに、生産細胞株からの本発明の抗体およびそ
の抗原結合断片および免疫グロブリン鎖（またはそこからの他の部分）の発現は、いくつ
かの既知の技法を使用して増強され得る。例えば、グルタミン合成酵素遺伝子発現系（Ｇ
Ｓ系）は、特定の条件下での発現を増強するための一般的なアプローチである。ＧＳ系は
、欧州特許第０２１６８４６号、第０２５６０５５号、第０３２３９９７号、および欧州
特許出願第８９３０３９６４．４号に関連して全体的または部分的に考察されている。し
たがって、本発明の一実施形態では、哺乳類宿主細胞（例えばＣＨＯ）は、グルタミン合
成酵素遺伝子を欠き、培地中のグルタミンの非存在下で増殖されるが、ここで、しかしな
がら、免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドが宿主細胞におけるその遺伝子の
欠如を補完するグルタミン合成酵素遺伝子を含む。
【０１３４】
一般に、特定の細胞株またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質
は、その細胞株またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的
なグリコシル化パターンを有することになる。したがって、抗体の特定のグリコシル化パ
ターンは、抗体を産生するために使用される特定の細胞株またはトランスジェニック動物
に依存することになる。しかしながら、本明細書で提供される核酸分子によってコードさ
れるかまたは本明細書で提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体は、抗体が有し得るグ
リコシル化パターンとは無関係に本発明を構成する。同様に、特定の実施形態では、非フ
コシル化Ｎ−グリカンのみを含むグリコシル化パターンを有する抗体は有利であり得るが
、なぜなら、これらの抗体は、インビトロおよびインビボの両方でそれらのフコシル化相
当物よりも強力な有効性を典型的に示すことが示されているからである（例えば、Ｓｈｉ
ｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３（２
００３）、米国特許第６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照された
い）からである。非フコシル化Ｎ−グリカンを有するこれらの抗体は、それらの炭水化物
構造がヒト血清ＩｇＧに存在する集団の通常の構成要素であるため、免疫原性である可能
性は低い。
【０１３５】
本発明は、ＣＤ２７および例えばＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＬＡＧ−３のような別の
抗原に対する結合特異性を有する二重特異性および二機能性抗体ならびに抗原結合断片、
ならびに、その使用方法を含む。本発明の一実施形態では、抗ＣＤ２７鎖は、表１２に記
載のＶＨ／ＶＬ配列のいずれか１つを含み、抗ＰＤ１鎖は、配列番号４８および５３また
は配列番号７８および５２のアミノ酸配列（または前記配列のいずれかの抗原結合断片）
を含む。二重特異性または二機能性抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異な
る結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの
融合またはＦａｂ’断片の連結を含む様々な方法によって産生され得る。例えば、Ｓｏｎ
ｇｓｉｖｉｌａｉ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７
９：３１５−３２１、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照されたい。さらに、二重特異性抗体は、「ダイア
ボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０：６
４４４−６４４８）として、または「Ｊａｎｕｓｉｎｓ」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，ｅｔ
ａｌ．，（１９９１）ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９およびＴｒａｕｎｅｃ
ｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１
−５２）として形成され得る。
【０１３６】
本発明は、本明細書で開示された抗ＣＤ２７抗体の抗ＣＤ２７抗原結合断片をさらに含
む。抗体断片は、Ｆ（ａｂ）２断片を含み、これは、例えばペプシンによるＩｇＧの酵素
的切断によって産生され得る。Ｆａｂ断片は、例えば、ジチオトレイトールまたはメルカ
プトエチルアミンでのＦ（ａｂ）２の還元によって産生され得る。
【０１３７】
免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して異なるクラ
スに割り当てられ得る。いくつかの実施形態では、異なる定常ドメインが本明細書で提供
されたＣＤＲに由来するヒト化ＶＬおよびＶＨ領域に付加され得る。免疫グロブリンには
、少なくとも５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあ
り、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、
ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４；ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けられ得る。本発明は、
抗体のこれらのクラスまたはサブクラスのいずれかの抗体および抗原結合断片を含む。
【０１３８】
一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、γ１、γ２、γ３、もしくはγ４ヒト重
鎖定常領域またはその変異体などの重鎖定常領域、例えば、ヒト定常領域を含む。別の実
施形態では、抗体または抗原結合断片は、ラムダもしくはカッパヒト軽鎖領域またはその
変異体などの軽鎖定常領域、例えば、ヒト軽鎖定常領域を含む。限定ではなく例として、
ヒト重鎖定常領域は、γ４であり得、ヒト軽鎖定常領域は、カッパであり得る。代替的実
施形態では、抗体のＦｃ領域は、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ突然変異を有するγ４である（Ｓｃ
ｈｕｕｒｍａｎ，Ｊ  ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１−８，２００１
）。
【０１３９】
一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＩｇＧ１サブタイプの重鎖定常領域を含
む。一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＩｇＧ２サブタイプの重鎖定常領域を
含む。一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＩｇＧ４サブタイプの重鎖定常領域
を含む。
【０１４０】
抗体工学
更に、例えば、抗体または断片の特性を改善するための、親ｈＣＤ２７．１３１Ａモノ
クローナル抗体の可変ドメイン内のフレームワーク残基への修飾を含むための抗ＣＤ２７
抗体およびその抗原結合断片が操作された抗体である実施形態が含まれる。典型的に、そ
のようなフレームワーク修飾は、抗体または断片の免疫原性を低下させるために行われる
。これは、通常、親（例えば、げっ歯類）抗体または断片における可変ドメイン中の非Ｃ
ＤＲ残基（すなわちフレームワーク残基）をその抗体が使用されることになっている種の
免疫レパートリーからの類似残基、例えば、ヒト治療学の場合、ヒト残基と置換すること
によって達成される。そのような抗体または断片は、「ヒト化」抗体または断片と称され
る。場合によっては、操作された（例えばヒト化）抗体の親和性を増加させる、または特
異性を変えることが望ましい。１つのアプローチは、１つ以上のフレームワーク残基を対
応する生殖系列配列に「復帰突然変異」させることである。より具体的には、体細胞突然
変異を受けた抗体または断片は、抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク
残基を含有し得る。そのような残基は、抗体または断片フレームワーク配列を、抗体また
は断片が由来する生殖系列配列と比較することによって同定され得る。別のアプローチは
、操作された（例えばヒト化）抗体の１つ以上の位置で元々の親（例えばげっ歯類）残基
に復帰すること、例えば、フレームワーク残基を置換する過程で失われた可能性がある結
合親和性を回復させることである。（例えば、米国特許第５，６９３，７６２号、米国特
許第５，５８５，０８９号、および米国特許第５，５３０，１０１号を参照されたい）。
【０１４１】
ある実施形態では、抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片は、それらの特性を改善す
るためにフレームワークおよび／またはＣＤＲに修飾を含むように操作（例えばヒト化）
されている。そのような操作された変化は、分子モデリングに基づき得る。親（非ヒト）
抗体配列に関する可変領域に関する分子モデルは、抗体の構造的特徴を理解するために構
築され得、抗原と相互作用し得る抗体上の潜在的領域を同定するために使用され得る。従
来のＣＤＲは、免疫グロブリン配列のアラインメントおよび可変領域を同定することに基
づく。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａ
ｌ．、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄ
ａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２、Ｋａｂａｔ（
１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，
（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６。Ｃｈｏｔｈｉａお
よび共同研究者は、抗体の結晶構造におけるループの立体構造を注意深く調べ、高頻度可
変ループを提案した。Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔ
ｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３。「ＣＤＲ」および「高頻度可変ループ」として分類さ
れる領域間の変動がある。後の研究（Ｒａｇｈｕｎａｔｈａｎ  ｅｔ  ａｌ，（２０１２
）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇ．２５，３，１０３−１１３）は、いくつかの抗体−抗原結晶
複合体を分析し、抗体中の抗原結合領域が必ずしも厳密に「ＣＤＲ」残基または「高頻度
可変」ループと一致しないことを観察した。非ヒト抗体の可変領域に関する分子モデルは
、抗原に潜在的に結合し得る領域の選択を導くために使用され得る。実際には、モデルに
基づく潜在的抗原結合領域は、従来の「ＣＤＲ」または「高頻度可変」ループとは異なる
。ＭＯＥ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ）などの市販の科学ソフ
トウェアが分子モデリングのために使用され得る。ヒトフレームワークは、フレームワー
クおよびＣＤＲの両方における非ヒト配列とのベストマッチに基づいて選択され得る。Ｖ
ＨにおけるＦＲ４（フレームワーク４）に関して、ヒト生殖細胞系に関するＶＪ領域が対
応する非ヒト領域と比較される。ＶＬ中のＦＲ４（フレームワーク４）の場合、ヒト生殖
系列配列のＪ−カッパおよびＪ−ラムダ領域が対応する非ヒト領域と比較される。適した
ヒトフレームワークが同定されると、ＣＤＲは、選択されたヒトフレームワークに移植さ
れる。場合によっては、ＶＬ−ＶＨ界面における特定の残基は、非ヒト（親）配列におけ
るように保持され得る。分子モデルは、ＣＤＲ立体構造を潜在的に変化させ、したがって
抗原に結合することができる残基を同定するためにも使用され得る。場合によっては、こ
れらの残基は、非ヒト（親）配列におけるように保持される。分子モデルは、グリコシル
化、アミド分解、および酸化などの望ましくない効果をもたらし得る溶媒露出アミノ酸を
同定するためにも使用され得る。
【０１４２】
これらの潜在的な問題を排除／最小化するために、設計段階の早い段階で発展性フィル
タが導入され得る。
【０１４３】
別のタイプのフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内、またはさらに１つ以上の
ＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を突然変異させてＴ細胞エピトープを除去し、それによっ
て抗体の潜在的免疫原性を低下させることを伴う。このアプローチは、「脱免疫化」とも
称され、米国特許第７，１２５，６８９号にさらに詳細に記載されている。
【０１４４】
特定の実施形態では、アミド分解または異性化を回避するために、最終抗体のより大き
な化学的安定性を提供するために露出された側鎖を含有する特定のアミノ酸を別のアミノ
酸残基に変えることが望ましい。アスパラギンのアミド分解は、ＮＧ、ＤＧ、ＮＧ、ＮＳ
、ＮＡ、ＮＴ、ＱＧまたはＱＳ配列上で生じ得、ポリペプチド鎖にねじれを導入し、その
安定性を減少させるイソアスパラギン酸残基の生成をもたらし得る（イソアスパラギン酸
効果）。異性化は、ＤＧ、ＤＳ、ＤＡまたはＤＴ配列で生じ得る。ある実施形態では、本
開示の抗体は、アミド分解もアスパラギン異性部位も含有しない。
【０１４５】
例えば、アスパラギン（Ａｓｎ）残基は、特にＣＤＲ内の任意のＡｓｎ−Ｇｌｙ配列で
のイソアスパラギン酸の形成の可能性を減らすために、ＧｌｎまたはＡｌａに変えられ得
る。類似した問題がＡｓｐ−Ｇｌｙ配列でも起こり得る。Ｒｅｉｓｓｎｅｒ  ａｎｄ  Ａ
ｓｗａｄ（２００３）Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６０：１２８１。イソアス
パラギン酸形成は、その標的抗原への抗体の結合を衰弱させるかまたは完全に無効にし得
る。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６
：７３１  ａｔ  ７３４を参照されたい。一実施形態では、アスパラギンは、グルタミン
（Ｇｌｎ）に変えられる。アスパラギン（Ａｓｎ）またはグルタミン（Ｇｌｎ）残基に隣
接するアミノ酸を改変して、小さいアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンに隣接して
存在する場合により高い割合で生じるアミド分解の可能性を減らすことも望ましいことが
ある。Ｂｉｓｃｈｏｆｆ＆Ｋｏｌｂｅ（１９９４）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．６６２：２
６１を参照されたい。さらに、ＣＤＲ中の任意のメチオニン残基（典型的には溶媒露出Ｍ
ｅｔ）は、抗原結合親和性を低下させ、最終的な抗体調製物における分子不均一性に寄与
もし得るメチオニン硫黄が酸化する可能性を減らすために、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、も
しくはＰｈｅ、または他のアミノ酸に変えられ得る。同文献。さらに、潜在的に切断され
やすいＡｓｎ−Ｐｒｏペプチド結合を防止または最小化するために、ＣＤＲ中に見出され
る任意のＡｓｎ−Ｐｒｏ組合せをＧｌｎ−Ｐｒｏ、Ａｌａ−Ｐｒｏ、またはＡｓｎ−Ａｌ
ａに改変することが望ましいことがある。そのような置換を有する抗体は、その後、その
置換が抗体のＣＤ２７に対する親和性もしくは特異性、または他の所望の生物学的活性を
許容できないレベルまで低下させないことを確実にするためにスクリーニングされる。
【表２】
2020114241.tif 000004
【０１４６】
Ｆｃ領域の抗体工学
本明細書で開示された抗体（例えばヒト化抗体）およびその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、Ｆｃ領域内の修飾を含むように、典型的に、
血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合、および／またはエフェクター機能（例えば抗原
依存性細胞傷害性）などの抗体の１つ以上の特性を改変するように操作もされ得る。さら
に、本明細書で開示された抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびその
ヒト化バージョン）は、化学的に修飾され得る（例えば、１つ以上の化学部分が抗体に付
着され得る）、またはそのグリコシル化を改変するように、ここでもまた抗体または断片
の１つ以上の特性を改変するように修飾され得る。これらの実施形態のそれぞれは、以下
でさらに詳細に説明される。Ｆｃ領域における残基のナンバリングは、ＫａｂａｔのＥＵ
インデックスのものである。
【０１４７】
本明細書で開示された抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒ
ト化バージョン）は、改変されたエフェクター機能を提供するための修飾（または遮断）
Ｆｃ領域を有する抗体および断片も含む。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、国
際公開第２００３／０８６３１０号、国際公開第２００５／１２０５７１号、国際公開第
２００６／００５７７０２号を参照されたい。そのような修飾は、診断および治療におけ
る可能性のある有益な効果と共に、免疫系の種々の反応を増強または抑制するために使用
され得る。Ｆｃ領域の改変は、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化ま
たは脱グリコシル化、および複数のＦｃ領域を付加することを含む。Ｆｃに対する変化は
、治療抗体における抗体の半減期も変化させ、より少ない頻度の投薬を可能にし、したが
って、利便性の増加および材料の使用の減少を可能にし得る。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）
Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１  ａｔ  ７３４−３５
を参照されたい。
【０１４８】
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそ
のヒト化バージョン）は、重鎖定常領域のヒンジ領域における位置２２８に対応する位置
でのセリンからプロリンへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ、ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４
アイソタイプ抗体または断片である。この突然変異は、ヒンジ領域における重鎖間ジスル
フィド架橋の不均一性を無効にすることが報告されている（上記Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ
．、位置２４１は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに基づく）。
【０１４９】
本発明の一実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域におけるシステイン残基
の数が増加するまたは減少するように修飾される。このアプローチは、米国特許第５，６
７７，４２５号にさらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数は
、例えば、軽鎖および重鎖の構築を促進するためまたは抗体の安定性を増加させるもしく
は減少させるために変えられる。
【０１５０】
別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびその
ヒト化バージョン）のＦｃヒンジ領域は、抗体または断片の生物学的半減期を減少させる
ために突然変異させられる。より具体的には、抗体または断片が天然のＦｃヒンジドメイ
ンＳｐＡ結合に対して損なわれたブドウ球菌プロテインＡ（ＳｐＡ）結合を有するように
、１つ以上のアミノ酸突然変異がＦｃヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域に導
入される。このアプローチは、米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載され
ている。
【０１５１】
別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびその
ヒト化バージョン）は、その生物学的半減期を増加させるように修飾されている。様々な
アプローチが可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されているよ
うに、以下の突然変異、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆの１つ以上が導入され得る
。或いは、生物学的半減期を増加させるために、抗体は、米国特許第５，８６９，０４６
号および第６，１２１，０２２号に記載されているように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ド
メインの２つのループから採取されたサルベージ受容体結合エピトープを含有するように
ＣＨ１またはＣＬ領域内で改変され得る。
【０１５２】
さらに他の実施形態では、抗体または抗原結合断片の（１つ以上の）エフェクター機能
を改変するために、Ｆｃ領域が少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置
換することによって改変される。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７
、２９７、３１８、３２０、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体が
エフェクターリガンドに対して改変された親和性を有し親抗体の抗原結合能を保持するよ
うに、異なるアミノ酸残基で置換され得る。それへの親和性が改変されたエフェクターリ
ガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１構成成分となり得る。このアプローチは
、米国特許第５，６２４，８２１号および第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載さ
れている。
【０１５３】
別の例では、アミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つ以上のア
ミノ酸は、抗体が改変されたＣ１ｑ結合および／または減少されたもしくは無効にされた
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、異なるアミノ酸残基で置換され得る。こ
のアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載されている。
【０１５４】
別の例では、アミノ酸位置２３１および２３９内の１つ以上のアミノ酸残基が改変され
て、それによって抗体が補体を固定する能力が改変される。このアプローチは、ＰＣＴ公
開国際公開第９４／２９３５１号にさらに記載されている。
【０１５５】
さらに別の例では、Ｆｃ領域は、以下の位置、２３８、２３９、２４３、２４８、２４
９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６４、２６５、２６７、２６８、２６
９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９
０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０
７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３
０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７
６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３
４、４３５、４３７、４３８、または４３９で１つ以上のアミノ酸を修飾することによっ
て、本発明の抗体または抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン
）が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を減少させるようにおよび／または
Ｆｃγ受容体に対する抗体または断片の親和性を減少させるように修飾される。このアプ
ローチは、ＰＣＴ国際公開第００／４２０７２号にさらに記載されている。さらに、Ｆｃ
γＲ１、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部
位がマッピングされており、結合が改善された変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ
ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参
照されたい）。
【０１５６】
本発明の一実施形態では、Ｆｃ領域は、残基２４３および残基２６４を修飾することに
よって、本発明の抗体（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）がエフェクタ
ー機能を媒介するおよび／または抗炎症特性を増加させる能力を減少させるように修飾さ
れている。一実施形態では、抗体または断片のＦｃ領域は、位置２４３および２６４の残
基をアラニンに変えることによって修飾されている。一実施形態では、Ｆｃ領域は、残基
２４３、２６４、２６７および３２８を修飾することによって、抗体または断片がエフェ
クター機能を媒介するおよび／または抗炎症特性を増加させる能力を減少させるように修
飾されている。
【０１５７】
改変されたエフェクター機能
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２７抗体のＦｃ領域は、エフェクター機能を媒介する
抗体または抗原結合断片の能力を増加または減少させるように、かつ／またはＦｃガンマ
受容体（ＦｃγＲ）へのそれらの結合を増加させる／減少させるように修飾されている。
【０１５８】
本明細書で使用する場合、「エフェクター機能」という用語は、抗体依存性細胞媒介細
胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）媒介応答、Ｆｃ媒介食作用
または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびＦｃＲｎ受容体を介した抗体再利用の
１つ以上を表すことを意味する。
【０１５９】
抗原結合タンパク質の定常領域と、ＦｃガンマＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃガンマＲＩＩ（
ＣＤ３２）、およびＦｃガンマＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を含めた様々なＦｃ受容体（ＦｃＲ
）間の相互作用は、抗原結合タンパク質のＡＤＣＣおよびＣＤＣのようなエフェクター機
能を媒介すると考えられている。Ｆｃ受容体は、抗腫瘍免疫に重要であり得る抗体架橋に
も重要である。
【０１６０】
エフェクター機能は、例えば、ＡＤＣＣエフェクター機能を測定するために、ナチュラ
ルキラー細胞へのＦｃガンマＲＩＩＩの結合を介して、または単球／マクロファージへの
ＦｃガンマＲＩを介して、を含めたいくつかの方法で測定され得る。例えば、本発明の抗
原結合タンパク質は、ナチュラルキラー細胞アッセイにおいてＡＤＣＣエフェクター機能
に関して評価され得る。このようなアッセイの例は、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ，２０
０１  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６，ｐ６５９１−６６０４、Ｃｈａｐｐ
ｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９３  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ２６８，ｐ２５１２４
−２５１３１、Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ，２００６  ＰＮＡＳ，１０３；４００５−４０
１０に見出され得る。
【０１６１】
残基Ａｓｎ２９７上の特定の突然変異または改変されたグリコシル化を含有するヒトＩ
ｇＧ１定常領域は、Ｆｃ受容体への結合を低下させることが示された。他の場合では、突
然変異は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを増強することも示された（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．
ＰＮＡＳ  ２００６，１０３；４００５−４０１０、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  
Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００１，２７６；６５９１−６６０４、Ｎｅｃｈａｎｓｋｙ  ｅ
ｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，４４；１８１５−１８１７）。
【０１６２】
本発明の一実施形態では、そのような突然変異は、２３９、３３２、および３３０（Ｉ
ｇＧ１）から選択される位置の1以上に、または他のＩｇＧアイソタイプにおける同等の
位置にある。適した突然変異の例は、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌであ
る。一実施形態では、本明細書に記載された本発明の抗原結合タンパク質は、位置２３９
および３３２、例えば、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅで突然変異されているか、またはさ
らなる実施形態では、それは、位置２３９および３３２および３３０、例えば、Ｓ２３９
ＤおよびＩ３３２ＥおよびＡ３３０Ｌ（ＥＵインデックスナンバリング）から選択される
３つ以上の位置で突然変異されている。
【０１６３】
本発明の代替的実施形態では、抗原結合タンパク質が増強されたエフェクター機能を有
するように改変されたグリコシル化プロファイルを有する重鎖定常領域を含む抗体が提供
される。例えば、ここでは、抗体が増強されたＡＤＣＣまたは増強されたＣＤＣを有する
か、または、それは、増強されたＡＤＣＣとＣＤＣエフェクター機能の両方を有する。改
変されたグリコシル化プロファイルを有する抗原結合タンパク質を産生するための適した
方法論の例は、国際公開第２００３０１１８７８号、国際公開第２００６０１４６７９号
、および欧州特許第１２２９１２５号に記載されている。
【０１６４】
さらなる態様では、本発明は、「非フコシル化」または「アフコシル化」抗体を提供す
る。非フコシル化抗体は、フコース残基を有さないＦｃの複合型Ｎ−グリカンのトリ−マ
ンノシルコア構造を有する。Ｆｃ  Ｎ−グリカンからのコアフコース残基を欠くこれらの
糖操作された抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩａ結合能力の増強のためにフコシル化等価物よ
りも強いＡＤＣＣを示し得る。
【０１６５】
本発明は、本発明による抗体の産生のための方法であって、ａ）本明細書で記載された
単離核酸を含む発現ベクターを含む組換え宿主細胞を培養するステップであって、組換え
宿主細胞がアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼを含まない、ステップと、ｂ
）抗原結合タンパク質を回収するステップとを含む方法も提供する。組換え宿主細胞は、
通常、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を含有しない
か（例えば、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）種などの酵母宿主細胞）、またはアルファ−１，６
−フコシルトランスフェラーゼを不活性化するように遺伝子改変されていてもよい。アル
ファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子を不活性化する
ように遺伝子改変されている組換え宿主細胞が利用可能である。例えば、ＦＵＴ８遺伝子
の機能的コピーを欠くＣＨＯＫ１ＳＶ細胞が、機能的ＦＵＴ８遺伝子を有する細胞におい
て産生される同一のモノクローナル抗体に対して増強された抗体依存性細胞媒介細胞傷害
（ＡＤＣＣ）活性を有するモノクローナル抗体を産生する、ＢｉｏＷａ，Ｉｎｃ（Ｐｒｉ
ｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）から入手可能なＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（商標）技術システム
を参照されたい。ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（商標）技術システムの態様は、米国特許第７
２１４７７５号、米国特許第６９４６２９２号、国際公開第００６１７３９号、および国
際公開第０２３１２４０号に記載されている。当業者は、他の適切なシステムも認識する
ことになる。
【０１６６】
そのような修飾が単独で使用され得るだけでなく、エフェクター機能をさらに増強また
は減少させるために互いに組み合わせて使用され得ることは当業者に明らかとなる。
【０１６７】
修飾グリコシル化を有する抗体の産生
さらに別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよ
びそのヒト化バージョン）は、特定のグリコシル化パターンを含む。例えば、アフコシル
化またはアグリコシル化抗体または断片が産生され得る（すなわち、抗体は、それぞれフ
コースまたはグリコシル化を欠く）。抗体または断片のグリコシル化パターンは、例えば
、ＣＤ２７抗原に対する抗体または断片の親和性またはアビディティーを増加させるため
に改変され得る。そのような修飾は、例えば、抗体または断片配列内のグリコシル化部位
の１つ以上を改変することによって達成され得る。例えば、可変領域フレームワークグリ
コシル化部位の１つ以上の除去をもたらし、それによりその部位でのグリコシル化を排除
する１つ以上のアミノ酸置換が行われ得る。そのようなアグリコシル化は、抗原に対する
抗体または断片の親和性またはアビディティーを増加させ得る。例えば、米国特許第５，
７１４，３５０号および第６，３５０，８６１号を参照されたい。
【０１６８】
本明細書で開示された抗体および抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化
バージョン）は、下等真核生物宿主細胞で産生されるものをさらに含み得、特に、酵母お
よび糸状菌などの真菌宿主細胞は、哺乳類様またはヒト様グリコシル化パターンを有する
糖タンパク質を産生するように遺伝子操作されている。（例えば、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ
，（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００：５０２２−５０２７、
Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０１：１２４４−１
２４６、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１３：１４
４１−１４４３、Ｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｓｔ  ２８（３）：２３７−５２（２
０１１）、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ  Ｏｃｔ；１８（５）：３８７−９２（２００７）を参照されたい）。現在使用されて
いる哺乳類細胞株に対するこれらの遺伝子改変宿主細胞の特定の利点は、特定のＮ−グリ
カン構造が優勢である糖タンパク質の組成物が産生され得るように細胞において産生され
る糖タンパク質のグリコシル化プロファイルを制御する能力である（例えば、米国特許第
７，０２９，８７２号および米国特許第７，４４９，３０８号を参照されたい）。これら
の遺伝子改変宿主細胞は、主に特定のＮ−グリカン構造を有する抗体を産生するために使
用されてきた（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ．２４：２１０−２１５を参照されたい）。
【０１６９】
特定の実施形態では、本明細書で開示された抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、下等真核生物宿主細胞において産生され、フ
コシル化および非フコシル化ハイブリッドおよびＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３Ｇｌｃ
ＮＡｃ２、Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡ
（１−４）Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（１−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２などのＮ−
グリカンを含むがこれに限定されない、二分されたかつ多分岐の種を含めた、複合Ｎ−グ
リカン（二分枝および多アンテナ種を含む）を含むものをさらに含む。
【０１７０】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片（例えば、抗
体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇ
ａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、およびＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５
ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択される少なくとも１つのハイブリッドＮ−グリカンを
有する抗体または断片を含み得る。特定の態様では、ハイブリッドＮ−グリカンは、組成
物中の主なＮ−グリカン種である。
【０１７１】
特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａ
ｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮ
Ａｃ２、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３Ｇｌｃ
ＮＡｃ２、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮ
Ａｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３Ｇｌ
ｃＮＡｃ２からなる群から選択される少なくとも１つの複合Ｎ−グリカンを有する抗体お
よび断片を含む。特定の態様では、複合Ｎ−グリカンは、組成物中の主なＮ−グリカン種
である。さらなる態様では、複合Ｎ−グリカンは、組成物中の複合Ｎ−グリカンの約３０
％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９
％、または１００％を含む特定のＮ−グリカン種である。一実施形態では、本明細書で提
供される抗体およびその抗原結合断片は、複合Ｎ−グリカンを含み、ここで、複合Ｎ−グ
リカンの少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％
、９９％、または１００％が構造ＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡ
ｃ２を含み、そのような構造はアフコシル化されている。そのような構造は、例えば、操
作されたピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞において産生
され得る。
【０１７２】
特定の実施形態では、Ｎ−グリカンはフコシル化されている。一般に、フコースは、Ｎ
−グリカンの還元末端でＧｌｃＮＡｃとα１，３−連結、Ｎ−グリカンの還元末端でＧｌ
ｃＮＡｃとα１，６−連結、Ｎ−グリカンの非還元末端でＧａｌとα１，２−連結、Ｎ−
グリカンの非還元末端でＧｌｃＮａｃとα１，３−連結、またはＮ−グリカンの非還元末
端でＧｌｃＮＡｃとα１，４−連結している。
【０１７３】
したがって、上記糖タンパク質組成物の特定の態様では、グリコフォームは、α１，３
−連結またはα１，６−連結フコースにあり、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｇｌ
ｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｇｌ
ｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（
Ｆｕｃ）、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｇａｌ２ＧｌｃＮ
Ａｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３Ｇ
ｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡ
ｃ２（Ｆｕｃ）からなる群から選択されるグリコフォームを産生するか、α１，３−結合
またはα１，４−結合フコースにあり、ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２
、ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍ
ａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２
、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２
ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２Ｇ
ｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１−２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択されるグリコ
フォームを産生するか、またはα１，２−結合フコースにあり、Ｇａｌ（Ｆｕｃ）Ｇｌｃ
ＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３Ｇ
ｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ
２、およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１−２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２
からなる群から選択されるグリコフォームを産生する。
【０１７４】
さらなる態様では、抗体（例えばヒト化抗体）またはその抗原結合断片は、Ｍａｎ８Ｇ
ｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡ
ｃ２、Ｍａｎ４ＧｌｃＮＡｃ２、またはＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２Ｎ−グリカン構造からな
るＮ−グリカンを含む高マンノースＮ−グリカンを含み、これに限定されない。
【０１７５】
上のさらなる態様では、複合Ｎ−グリカンは、フコシル化および非フコシル化二分枝お
よび多アンテナ種をさらに含む。
【０１７６】
本明細書で使用する場合、「Ｎ−グリカン」および「グリコフォーム」という用語は互
換的に使用され、Ｎ結合型オリゴ糖、例えば、アスパラギン−Ｎ−アセチルグルコサミン
結合によってポリペプチドのアスパラギン残基に付着しているものを表す。Ｎ結合型糖タ
ンパク質は、タンパク質中のアスパラギン残基のアミド窒素に連結したＮ−アセチルグル
コサミン残基を含有する。糖タンパク質上に見出される主な糖は、グルコース、ガラクト
ース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセ
チルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、およびシアル酸（例えば、Ｎ−アセチルノイラミン
酸（ＮＡＮＡ））である。糖基のプロセシングは、ＥＲの内腔において同時翻訳的に生じ
、Ｎ結合型糖タンパク質に関してゴルジ体において翻訳後に続く。
【０１７７】
Ｎ−グリカンは、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２の共通の五糖コアを有する（「Ｍａｎ」は、
マンノースを表し、「Ｇｌｃ」は、グルコースを表し、「ＮＡｃ」は、Ｎ−アセチルを表
し、ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ−アセチルグルコサミンを表す）。通常、Ｎ−グリカン構造は、
左に非還元末端、右に還元末端で提示される。Ｎ−グリカンの還元末端は、タンパク質上
のグリコシル化部位を含むＡｓｎ残基に付着している末端である。Ｎ−グリカンは、「ト
リマンノースコア」、「五糖コア」、または「パウチマンノースコア」とも称されるＭａ
ｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（「Ｍａｎ３」）コア構造に付加される末梢糖（例えば、ＧｌｃＮＡ
ｃ、ガラクトース、フコースおよびシアル酸）を含む分枝（アンテナ）の数に関して異な
る。Ｎ−グリカンは、それらの分岐成分（例えば、高マンノース、複合体またはハイブリ
ッド）に従って分類される。「高マンノース」型Ｎ−グリカンは、５つ以上のマンノース
残基を有する。「複合」型Ｎ−グリカンは、典型的に、「トリマンノース」コアの１，３
マンノースアームに付着した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃおよび１，６マンノースアー
ムに付着した少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃを有する。複合Ｎ−グリカンは、シアル酸ま
たは誘導体で修飾されていてもよいガラクトース（「Ｇａｌ」）またはＮ−アセチルガラ
クトサミン（「ＧａｌＮＡｃ」）残基も有し得る（例えば、「ＮＡＮＡ」または「Ｎｅｕ
Ａｃ」、ここで「Ｎｅｕ」は、ノイラミン酸を表し、「Ａｃ」は、アセチルを表す）。複
合Ｎ−グリカンは、「二分枝」ＧｌｃＮＡｃおよびコアフコース（「Ｆｕｃ」）を含む鎖
内置換も有し得る。複合Ｎ−グリカンは、しばしば「複数のアンテナグリカン」と称され
る「トリマンノースコア」上に複数のアンテナも有し得る。「ハイブリッド」Ｎ−グリカ
ンは、トリマンノースコアの１，３マンノースアームの末端上に少なくとも１つのＧｌｃ
ＮＡｃ、およびトリマンノースコアの１，６マンノースアーム上に０以上のマンノースを
有する。様々なＮ−グリカンは、「グリコフォーム」とも称される。
【０１７８】
複合Ｎ−グリカン関して、「Ｇ−２」、「Ｇ−１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「Ｇ２」、
「Ａ１」、および「Ａ２」という用語は、以下を意味する。「Ｇ−２」は、Ｍａｎ３Ｇｌ
ｃＮＡｃ２として特徴付けられ得るＮ−グリカン構造を表し、「Ｇ−１」という用語は、
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けられ得るＮ−グリカン構造を表し、
「Ｇ０」という用語は、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けられ得る
Ｎ−グリカン構造を表し、「Ｇ１」という用語は、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３Ｇｌｃ
ＮＡｃ２として特徴付けられ得るＮ−グリカン構造を表し、「Ｇ２」という用語は、Ｇａ
ｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けられ得るＮ−グリカン構造を
表し、「Ａ１」という用語は、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２
として特徴付けられ得るＮ−グリカン構造を表し、そして「Ａ２」という用語は、ＮＡＮ
Ａ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付けられ得るＮ−グリカ
ン構造を表す。特に明記しない限り、「Ｇ−２」、「Ｇ−１」、「Ｇ０」、「Ｇ１」、「
Ｇ２」、「Ａ１」および「Ａ２」という用語は、Ｎ−グリカンの還元末端でＧｌｃＮＡｃ
残基に付着したフコースを欠くＮ−グリカン種を表す。この用語が「Ｆ」を含む場合、「
Ｆ」は、Ｎ−グリカン種がＮ−グリカンの還元末端のＧｌｃＮＡｃ残基上にフコース残基
を含有することを示す。例えば、Ｇ０Ｆ、Ｇ１Ｆ、Ｇ２Ｆ、Ａ１ＦおよびＡ２Ｆは、全て
、Ｎ−グリカンがＮ−グリカンの還元末端でＧｌｃＮＡｃ残基に付着したフコース残基を
さらに含むことを示す。酵母や糸状菌などの下等真核生物は、フコースを生産するＮ−グ
リカンを通常生産しない。
【０１７９】
多アンテナＮ−グリカンに関して、「多アンテナＮ−グリカン」という用語は、Ｎ−グ
リカンの１，６アームもしくは１，３アームの非還元末端を含むマンノース残基上のＧｌ
ｃＮＡｃ残基を含むかまたはＮ−グリカンの１，６アームおよび１，３アームの非還元末
端を含むマンノース残基のそれぞれ上のＧｌｃＮＡｃ残基をさらに含むＮ−グリカンを表
す。したがって、多アンテナＮ−グリカンは、式ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３Ｇｌｃ
ＮＡｃ２、Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、またはＮ
ＡＮＡ（１−４）Ｇａｌ（１−４）ＧｌｃＮＡｃ（２−４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２によ
って特徴付けられ得る。「１〜４」という用語は、１つ、２つ、３つ、または４つの残基
を表す。
【０１８０】
二分枝Ｎ−グリカンに関して、「二分枝Ｎ−グリカン」という用語は、ＧｌｃＮＡｃ残
基がＮ−グリカンの還元末端でマンノース残基に連結しているＮ−グリカンを表す。二分
枝Ｎ−グリカンは、式ＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２によって特徴付けられ得、
ここで、各マンノース残基がその非還元末端でＧｌｃＮＡｃ残基に連結されている。対照
的に、多アンテナＮ−グリカンがＧｌｃＮＡｃ３Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２として特徴付け
られる場合、式は、２つのＧｌｃＮＡｃ残基が、Ｎ−グリカンの２つのアームの１つの非
還元末端でマンノース残基に連結されており、１つのＧｌｃＮＡｃ残基がＮ−グリカンの
他のアームの非還元末端でマンノース残基に連結されていることを示している。
【０１８１】
抗体物理的特性
本明細書で開示された抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒ
ト化バージョン）は、軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域のいずれかに１つ以上のグ
リコシル化部位をさらに含有し得る。そのようなグリコシル化部位は、改変された抗原結
合により、抗体または断片の増加した免疫原性または抗体のｐＫの改変をもたらし得る（
Ｍａｒｓｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９７２）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ４１
：６７３−７０２、Ｇａｌａ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（２００４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ  １７２：５４８９−９４、Ｗａｌｌｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ（１９８８）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍ
ｅｄ  １６８：１０９９−１０９、Ｓｐｉｒｏ（２００２）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  
１２：４３Ｒ−５６Ｒ、Ｐａｒｅｋｈ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１６：
４５２−７、Ｍｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：
６９７−７０６）。グリコシル化は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフで生じるこ
とが知られている。
【０１８２】
各抗体または抗原結合断片（例えば１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、ユニー
クな等電点（ｐＩ）を有することになり、これは、一般に６〜９．５の間のｐＨ範囲に入
る。ＩｇＧ１抗体に関するｐＩは、典型的に７〜９．５のｐＨ範囲内に入り、ＩｇＧ４抗
体に関するｐＩは、典型的に６〜８のｐＨ範囲内に入る。
【０１８３】
各抗体または抗原結合断片（例えば１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、特徴的
な融解温度を有することになり、より高い融解温度は、インビボでのより大きい全体的安
定性を示す（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ  Ｒ  ａｎｄ  Ｍａｎｎｉｎｇ  ＭＣ（２００
２）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３：３６１−７１）。一般に、ＴＭ
１（初期のアンフォールディングの温度）は、６０℃を超え得、６５℃を超え得、または
７０℃を超え得る。抗体または断片の融点は、示差走査熱量測定（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ
（２００３）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ２０：１９５２−６０、Ｇｈｉｒｌａｎｄｏ  ｅｔ  
ａｌ（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ６８：４７−５２）または円二色性（Ｍｕ
ｒｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｓｃｉ  ４０：３４３
−９）を使用して測定され得る。
【０１８４】
さらなる実施形態では、急速に分解しない抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１
３１Ａおよびそのヒト化バージョン）が選択される。抗体または断片の分解は、キャピラ
リー電気泳動（ＣＥ）およびＭＡＬＤＩ−ＭＳ（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＡＪ  ａｎｄ  Ｈ
ｕｇｈｅｓ  ＤＥ（１９９５）Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ６７：３６２６−３２）を使用して
測定され得る。
【０１８５】
さらなる実施形態では、望ましくない免疫応答および／または改変されたもしくは好ま
しくない薬物動態特性の引き金につながり得る最小の凝集効果を有する抗体（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）およびその抗原結合断片が選択される。一般に、
抗体および断片は、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、または５％以下
の凝集で許容される。
【０１８６】
凝集は、サイズ排除カラム（ＳＥＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、お
よび光散乱を含めたいくつかの技法によって測定され得る。
【０１８７】
抗体コンジュゲート
本明細書で開示された抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａお
よびそのヒト化バージョン）はまた、化学部分にコンジュゲートされ得る。化学部分は、
とりわけ、高分子、放射性ヌクレオチドまたは細胞傷害性因子であり得る。特定の実施形
態では、化学部分は、対象の身体において抗体または断片の半減期を増加させる高分子で
ある。適した高分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、２ｋＤａ、５ｋＤ
ａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を有す
るＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）を含
むがこれらに限定されない親水性高分子を含むが、これらに限定されない。Ｌｅｅ，ｅｔ
ａｌ．，（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３−９８１）は、ＰＥ
Ｇコンジュゲート単鎖抗体を開示している。Ｗｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，（２００１）（Ｂｉ
ｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５−５５３）は、放射性金属キレート剤（ジエチレン
トリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ））に付着されているＰＥＧと抗体をコンジュゲートさ
せることを開示している。
【０１８８】
本明細書で開示された抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒ
ト化バージョン）はまた、９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、
３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２
６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７ＣＵ、２１７Ｃｉ、２１１Ａ
ｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈ、および４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５
Ｍｎ、５２Ｔｒ、および５６Ｆｅなどの標識とコンジュゲートされ得る。
【０１８９】
本明細書で開示された抗体および抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化
バージョン）はまた、例えば、その生物学的（例えば血清）半減期を増加させるためにＰ
ＥＧ化され得る。抗体または断片をＰＥＧ化するために、抗体または断片を、典型的に、
１つ以上のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着するようになる条件下でＰＥＧの反応性
エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の反応性形と
反応させる。特定の実施形態では、ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性
水溶性高分子）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。本明細書で使
用する場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキ
シ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−
マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形のいず
れかを包含することが意図されている。ある実施形態では、ＰＥＧ化される抗体または断
片は、アグリコシル化抗体または断片である。タンパク質をＰＥＧ化する方法は、当技術
分野において既知であり、本発明の抗体に適用され得る。例えば、欧州特許第０１５４３
１６号および欧州特許第０４０１３８４号を参照されたい。
【０１９０】
本明細書で開示された抗体および抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化
バージョン）はまた、希土類キレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンお
よびその誘導体、イソチオシアネート、フィコエリスリン、フィコシアニン、アロフィコ
シアニン、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレスカミン、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリ
フェロン、ルシフェリン、ルミナール標識、イソルミナール標識、芳香族アクリジニウム
エステル標識、イミダゾール標識、アクリジミウム塩標識、シュウ酸エステル標識、エク
オリン標識、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識、な
らびに安定なフリーラジカルなどのフルオロフォアを含めた蛍光標識または化学発光標識
とコンジュゲートされ得る。
【０１９１】
本発明の抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョ
ン）はまた、ジフテリア毒素、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、ア
ルファ−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質お
よび化合物（例えば脂肪酸）、ジアンシンタンパク質、フィトイアッカ・アメリカーナ（
Ｐｈｙｔｏｉａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、および
ＰＡＰ−Ｓ、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、
クロチン、サポナリア・オフィシナリス（ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ
）阻害剤、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、ならびにエノマイシンなど
の細胞傷害性因子にコンジュゲートされ得る。
【０１９２】
Ｈｕｎｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ  １４４：９４５、Ｄａｖｉ
ｄ，ｅｔ  ａｌ．，（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４、Ｐａｉｎ
，ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９、およびＮ
ｙｇｒｅｎ，Ｊ．，（１９８２）Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０
：４０７によって記載された方法を含めた、本発明の抗体およびその抗原結合断片（例え
ば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）を様々な部分にコンジュゲートするための
当技術分野において既知の任意の方法が使用され得る。抗体および断片をコンジュゲート
するための方法は、慣習的であり、当技術分野において非常によく知られている。
【０１９３】
抗ＣＤ２７抗体の治療的使用
本明細書で開示された単離抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそ
のヒト化バージョン）での処置を必要とするヒト対象を含めた対象を処置するための方法
がさらに提供される。本発明の一実施形態では、そのような対象は、感染症または感染性
疾患に罹患している。本発明は、がんの処置、または感染症もしくは感染性疾患の処置に
おける使用のための本発明の抗体または抗原結合断片も提供する。本発明は、免疫細胞活
性化を増加させる、がんを処置する、または感染症もしくは感染性疾患を処置するための
医薬の製造のための本発明の抗体または抗原結合断片の使用も提供する。
【０１９４】
本発明の別の実施形態では、そのような対象はがんに罹患している。一実施形態では、
がんは、例えば、骨肉腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、腎臓がん、白血病、腎移行細胞が
ん、膀胱がん、ウィルムスがん、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、骨がん、肺
がん（例えば非小細胞肺がん）、胃がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、滑膜肉腫、頭頸部
がん、扁平上皮癌、多発性骨髄腫、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、肝芽腫、肝細胞癌、黒色
腫、腎臓のラブドイド腫瘍、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、脳腫瘍、神経膠芽腫、髄膜腫、
下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍、髄芽腫、星状細胞腫、未分化星状細
胞腫、乏突起膠腫、上衣腫、脈絡叢乳頭腫、真性赤血球増加症、血小板血症、特発性骨髄
線維症、軟部組織肉腫、甲状腺がん、子宮内膜がん、カルチノイドがんまたは肝臓がん、
乳がんまたは胃がんである。本発明の一実施形態では、がんは、例えば、上記の種類の転
移性がんである。
【０１９５】
本発明の抗体または抗原結合断片、組成物、および方法によって処置され得るがんは、
心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫
、脂肪腫および奇形腫、肺：気管支癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞型、
腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫、消
化管：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌腫、リンパ腫、平滑筋
肉腫）、膵臓（管腺がん、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノ
イド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カルポジ肉腫、平滑
筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管腺腫、絨毛腺腫、過誤腫
、平滑筋腫）結腸直腸、尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ
腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫
）、精巣（セミノーマ、奇形腫、胚性癌腫、奇形癌腫、絨毛癌腫、肉腫、間質細胞癌腫、
線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）、肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、
血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫、骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織
球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細
胞腫瘍脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫
、類骨骨腫および巨細胞腫、神経系：頭蓋骨（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨
炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣
腫、胚芽腫［松果体腫］、多形性膠芽腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、網膜芽細胞腫、先天性
腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）、婦人科：子宮（子宮内膜がん）、
子宮頸部（子宮頸がん、前腫瘍子宮頸部異形成）、卵巣癌（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘
液性嚢胞腺癌、未分類癌］、顆粒膜細胞腫、セルトリ−ライディッヒ細胞腫、未分化胚細
胞腫、悪性奇形腫）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（
明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌）、乳房、血液学
：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血
病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリン
パ腫［悪性リンパ腫］、皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カルポジ肉腫、異
形成母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬、ならびに副腎：神経芽細胞腫
を含むが、これらに限定されない。したがって、本明細書で提供される「がん性細胞」と
いう用語は、上記で同定された症状のいずれか１つによって苦しめられている細胞を含む
。
【０１９６】
一実施形態では、本明細書で開示された抗体またはその抗原結合断片、本発明の組成物
および方法によって処置され得るがんは、肺がん、膵臓がん、結腸がん、結腸直腸がん、
骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、甲状腺癌
、骨髄異形成症候群、膀胱癌、表皮癌、黒色腫、乳がん、前立腺癌、頭頸部癌、卵巣がん
、脳腫瘍、間葉系がん、肉腫、テトラカルシノーマ、神経芽細胞腫、腎癌、肝癌、非ホジ
キンリンパ腫、多発性骨髄腫、および未分化甲状腺癌を含むが、これらに限定されない。
【０１９７】
一実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば
抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）を使用して対象を処置する方法であって、対
象がウイルス感染症に罹患している、方法を提供する。一実施形態では、ウイルス感染症
は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、肝炎ウイルス（Ａ、Ｂ、またはＣ）、ヘルペスウ
イルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＡＶ−６、ＨＳＶ−ＩＩ、およびＣＭＶ、エプ
スタインバーウイルス）、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、
エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、ＲＳウイル
ス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、
ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デング熱ウイルス、パピローマウイルス、軟属
腫ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、またはアルボウイルス性
脳炎ウイルスからなる群から選択されるウイルスによる感染症である。
【０１９８】
一実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片を使用し
て対象を処置する方法であって、対象が細菌感染症に罹患している、方法を提供する。一
実施形態では、細菌感染症は、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、リケッチア細菌（ｒ
ｉｃｋｅｔｔｓｉａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａ）、マイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ
ｉａ）、ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｉ）、肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ）、髄膜炎菌（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃ
ｉ）、および淋菌（ｇｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシエラ属（ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、
プロテウス属（ｐｒｏｔｅｕｓ）、セラチア属（ｓｅｒｒａｔｉａ）、シュードモナス属
（ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリ
ウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、サル
モネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、バチルス属（ｂａｃｉｌｌｉ）、ビブリオ・コレラ
エ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄ
ｉｕｍ  ｔｅｔａｎ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏ
ｔｕｌｉｎｕｍ）、バチルス・アンシリシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒｉｃｉｓ）
、エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、マイコプラズマ・レプラ
エ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・レプロマトー
シス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、およびボリエラ（Ｂ
ｏｒｒｉｅｌｌａ）からなる群から選択される細菌による感染症である。
【０１９９】
一実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片を使用し
て対象を処置する方法であって、対象が真菌感染症に罹患している、方法を提供する。一
実施形態では、真菌感染症は、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）（アルビカンス（ａｌｂｉｃ
ａｎｓ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロピカリス
（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（
フミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ケカビ目属（Ｇｅｎ
ｕｓ  Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）（ケカビ（ｍｕｃｏｒ）、アブサイジア（ａｂｓｉｄｉａ）
、クモノスカビ（ｒｈｉｚｏｐｕｓ））、スポロトリックス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔ
ｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃ
ｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒ
ａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、コクシジオイデス・イミチ
ス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、およびヒストプラズマ・カプスラー
ツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）からなる群から選択される真菌
による感染症である。
【０２００】
一実施形態では、本発明は、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片を使用し
て対象を処置する方法であって、対象が寄生虫感染症に罹患している、方法を提供する。
一実施形態では、寄生虫感染症は、エントアメーバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂ
ａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、大腸バランチジウム（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌ
ｉ）、ネグレリア・フォーレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカントアメ
ーバ（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ）、ジアルジア・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂ
ｉａ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、ニューモシスチス
・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモディウム・ビバック
ス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロッティ（Ｂａｂｅｓｉａ  
ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ
）、トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、リーシュマニ
ア・ドノヴァニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トキソプラズマ・ゴンデ
ィ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）およびニポストロンジルス・ブラシリエンシ
ス（Ｎｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）からなる群から選択
される寄生虫による感染症である。
【０２０１】
「対象」は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、サル（例えば、カニク
イザル、例えば、マカカ・ファシキュラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ
））、またはウサギなどの哺乳類であり得る。本発明の好ましい実施形態では、対象はヒ
ト対象である。
【０２０２】
「と共同して」という用語は、抗がん剤と共に投与される本発明の方法において投与さ
れる構成成分（例えば、抗ＣＤ２７抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合断片
（例えば抗体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン））が、同時送達のため、に単一組成
物に製剤化され得るまたは２つ以上の組成物（例えばキット）に別々に製剤化され得るこ
とを示す。各構成成分は、他の成分が投与されるときとは異なる時間に対象に投与され得
、例えば、各投与は、所与の期間にわたってそれぞれの間隔で非同時的に（例えば、別々
にまたは順次）与えられ得る。さらに、別個の構成成分は、同じまたは異なる経路によっ
て対象に投与され得る。
【０２０３】
特定の実施形態では、本明細書で開示された抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、そのような処置または予防を必要とする対象
において、例えば、本明細書で考察されるように、がんなどの任意の疾患を処置または予
防するために、単独で、または他のさらなる治療薬および／または治療手順と共同して使
用され得る。さらなる治療薬と共同してそのような抗体および断片を含む組成物、例えば
、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も本発明の一部である。
【０２０４】
したがって、本発明は、ヒト対象におけるがんを処置する方法であって、場合によりさ
らなる治療薬または治療手順と共同して、本明細書で開示された抗体または抗原結合断片
の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。本発明は、ヒト対象における感染
症または感染性疾患を処置する方法であって、場合によりさらなる治療薬または治療手順
と共同して、本発明で開示された抗体または抗原結合断片の有効量を対象に投与すること
を含む方法も提供する。本発明は、免疫細胞の活性を増加させる方法であって、それを必
要とする対象に本明細書で開示された抗体または抗原結合断片の有効量を投与することを
含む方法も提供する。一実施形態では、方法は、がんの処置、感染症または感染性疾患の
処置に、またはワクチンアジュバントとして使用される。別の実施形態では、本発明は、
がんの処置、免疫細胞の活性の増加、またはさらなる治療薬と組み合わせた感染症もしく
は感染性疾患の処置、における使用のための本発明の抗体または抗原結合断片を提供する
。さらなる実施形態では、本発明は、免疫細胞活性化を増加させる、がんを処置する、ま
たはさらなる治療薬と組み合わせて感染症もしくは感染性疾患を処置するための医薬の製
造のための本発明の抗体または抗原結合断片の使用を提供する。別の実施形態では、本発
明は、がんの処置、免疫細胞の活性の増加、または感染症もしくは感染性疾患の処置、の
ための本発明の抗体または抗原結合断片とさらなる治療薬の組合せを提供する。
【０２０５】
他の実施形態では、本発明は、ヒト対象におけるがんを処置するまたは感染症もしくは
感染性疾患を処置する方法であって、場合によりさらなる治療薬または治療手順と共同し
て、本発明の抗体もしくは抗原結合断片または本発明による発現ベクターもしくは宿主細
胞の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。
【０２０６】
特定の実施形態では、本明細書で開示された抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、単独で、または腫瘍ワクチンと共同して使用
され得る。腫瘍ワクチンの例は、Ｇａｒｄａｓｉｌ（登録商標）、Ｇａｒｄａｓｉｌ（登
録商標）およびＣｅｒｖａｒｉｘ（登録商標）などの、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ
）感染症が引き起こすがんのためのワクチン、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（登録商標）およびＲ
ｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ（登録商標）などのＢ型肝炎ウイルスが引き起こす肝臓がんを
予防するワクチン、Ｉｍｌｙｇｉｃ（登録商標）などの免疫応答をトリガーする腫瘍退縮
ウイルス療法、Ｓｙｎｃｈｏｔｒｏｐｅ  ＭＡ２ＭプラスミドＤＮＡワクチンおよびＺＹ
Ｃ１０１などのＤＮＡワクチン、マンマグロビン−ａ  ＤＮＡワクチン（Ｃｌｉｎｉｃａ
ｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１４２０（２３）：５９６４−７５を参照されたい）、
ＰＳＡ−ＴＲＩＣＯＭ（ｐｒｏｓｔｖａｃ）、ＰＡＮＶＡＣ−ＶＦ、リステリア・モノサ
イトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）に基づくＰＳＡワクチン
（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ、２０１４、２
（５）１３７−１４８を参照されたい）、Ｌｉｓｔｅｒｉａ−ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ  Ａ
ｄｅｎｏ−ＣＥＡなどのベクターに基づくワクチン、ＧＶＡＸ、ＢＬＰ−２５（抗アンカ
ラムチン１）、Ｂｅｌａｇｅｎｐｕｍａｔｕｃｅｌ−Ｌ、ＴＧ４０１０、ＣＩＭＡｖａｘ
上皮成長因子ワクチン、ＮＹ−ＥＳＯ、ＧＭ．ＣＤ４０Ｌ−ＣＣＬ２１などの同種ワクチ
ン、アデノＣＤ４０Ｌ、ＢＣＧ、ＩＮＧＮ−２２５などの自己ワクチン、Ｐｒｏｖｅｎｇ
ｅ（登録商標）（Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ）、ｒＦ−ＣＥＡ−ＭＵＣ１−ＴＲＩＣＯＭ
（ｐａｎｖａｃ−ＤＣ）などの樹状細胞ワクチン、ＭＵＣ−１（ｓｔｉｍｕｖａｘ）、Ｎ
Ｙ−ＥＳＯ−１、ＧＰ−１００、ＭＡＧＥ−Ａ３（黒色腫抗原コード遺伝子Ａ３）、ＩＮ
ＧＮ−２２５（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １５３（２０１
５）１−９を参照されたい）などの抗原ワクチンを含むが、これらに限定されない。
【０２０７】
特定の実施形態では、本明細書で開示された抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、単独でまたは化学療法剤と共同して、使用さ
れ得る。
【０２０８】
特定の実施形態では、本明細書で開示された抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、単独でまたは放射線療法と共同して、使用さ
れ得る。
【０２０９】
特定の実施形態では、本明細書で開示された抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、単独でまたは標的療法と共同して、使用され
得る。標的療法の例は、ホルモン療法、シグナル伝達阻害剤（例えば、セツキシマブ（Ｅ
ｒｂｉｔｕｘ）およびエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）などのＥＧＦＲ阻害剤）、ＨＥＲ
２阻害剤（例えば、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）およびペルツズマブ（Ｐｅｒ
ｊｅｔａ））、ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤（イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）およびダサチニブ
（Ｓｐｒｙｃｅｌ）など）、ＡＬＫ阻害剤（クリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ）およびセリ
チニブ（Ｚｙｋａｄｉａ）など）、ＢＲＡＦ阻害剤（ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ
）およびダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ）など）、遺伝子発現調節剤、アポトーシス
誘導剤（例えば、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）およびカルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏ
ｌｉｓ））、血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）およびラムシル
マブ（Ｃｙｒａｍｚａ）、毒素に付着したモノクローナル抗体（例えば、ブレンツキシマ
ブベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）およびアドトラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌ
ａ））を含む。
【０２１０】
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体１
３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、免疫調節受容体阻害剤、例えば、受容体に特異
的に結合する抗体またはその抗原結合断片などの抗がん治療薬または免疫調節薬と組み合
わせて使用され得る。
【０２１１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＴＩＧ
ＩＴ抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＣＳ１抗体（例えばエロツズマブ）、抗ＫＩＲ２ＤＬ１
／２／３抗体（例えばリリルマブ）、抗ＣＤ１３７抗体（例えばウレルマブ）、抗ＧＩＴ
Ｒ抗体（例えばＴＲＸ５１８）、抗ＰＤ１抗体（例えばペムブロリズマブ、ニボルマブ、
ピジリズマブ（ＣＴ−０１１））、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、ＢＭＳ−９３６５５９、
デュルバルマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、またはＭＰＤＬ３２８０Ａ）、抗ＰＤ−Ｌ２
抗体、抗ＩＬＴ１抗体、抗ＩＬＴ２抗体、抗ＩＬＴ３抗体、抗ＩＬＴ４抗体、抗ＩＬＴ５
抗体、抗ＩＬＴ６抗体、抗ＩＬＴ７抗体、抗ＩＬＴ８抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０
抗体、抗ＩＣＯＳ、抗ＳＩＲＰα、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体、
抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体、抗ＫＩＲ３
ＤＬ１抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＮＫ
Ｇ２Ｃ抗体、抗ＮＫＧ２Ｅ抗体、抗４−１ＢＢ抗体（例えばＰＦ−０５０８２５６６）、
抗ＴＳＬＰ抗体、抗ＩＬ−１０抗体、ＩＬ−１０もしくはＰＥＧ化ＩＬ−１０、またはそ
のような標的の任意の小有機分子阻害剤の１つ以上と共同して使用される。
【０２１２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＰＤ１抗体（例えば、ペムブロリズマブ
、ニボルマブ、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１））と共同して使用される。
【０２１３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＰＤＬ１抗体、例えば、ＢＭＳ−９３６
５５９、デュルバルマブ、ＭＳＢ００１０７１８ＣまたはＭＰＤＬ３２８０Ａと共同して
使用される。
【０２１４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＣＴＬＡ４抗体と共同して使用される。
【０２１５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＣＳ１抗体と共同して使用される。
【０２１６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ２ＤＬ１／２／３抗体と共同して
使用される。
【０２１７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＣＤ１３７抗体（例えばウレルマブ）と
共同して使用される。
【０２１８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＧＩＴＲ抗体（例えばＴＲＸ５１８）と
共同して使用される。
【０２１９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＰＤ−Ｌ２抗体と共同して使用される。
【０２２０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ１抗体と共同して使用される。
【０２２１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ２抗体と共同して使用される。
【０２２２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ３抗体と共同して使用される。
【０２２３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ４抗体と共同して使用される。
【０２２４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ５抗体と共同して使用される。
【０２２５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ６抗体と共同して使用される。
【０２２６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ７抗体と共同して使用される。
【０２２７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＴＬ８抗体と共同して使用される。
【０２２８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＣＤ４０抗体と共同して使用される。
【０２２９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＯＸ４０抗体と共同して使用される。
【０２３０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ２ＤＬ１抗体と共同して使用され
る。
【０２３１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ２ＤＬ２／３抗体と共同して使用
される。
【０２３２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体と共同して使用され
る。
【０２３３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ抗体と共同して使用さ
れる。
【０２３４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ抗体と共同して使用さ
れる。
【０２３５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ３ＤＬ１抗体と共同して使用され
る。
【０２３６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と共同して使用され
る。
【０２３７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＫＩＲ３ＤＬ３抗体と共同して使用され
る。
【０２３８】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体と共同して使用される。
【０２３９】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＮＫＧ２Ｃ抗体と共同して使用される。
【０２４０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＣＯＳ抗体と共同して使用される。
【０２４１】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＳＩＲＰα抗体と共同して使用される。
【０２４２】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗４−１ＢＢ抗体と共同して使用される。
【０２４３】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＩＬ−１０抗体と共同して使用される。
【０２４４】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗ＴＳＬＰ抗体と共同して使用される。
【０２４５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、ＩＬ−１０またはペグ化ＩＬ−１０と共同
して使用される。
【０２４６】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、ＭＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳類標的）阻
害剤、細胞傷害性薬物、白金剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、微小管安定化剤、タ
キサン、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ５２阻害剤、ＣＤ３０阻害剤、ＲＡＮＫ（核因子カッパＢ
の受容体活性化剤）阻害剤、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、ＲＡＮ
ＫＬ（核因子カッパ−Ｂリガンドの受容体活性化剤）阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＭＡＰキナ
ーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＨＥＲ１
阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＨＥＲ４阻害剤、Ｂｃｌ２阻害剤、ＣＤ２２
阻害剤、ＣＤ７９ｂ阻害剤、ＥｒｂＢ２阻害剤、またはファルネシルタンパク質トランス
フェラーゼ阻害剤などの阻害剤（例えば小有機分子または抗体もしくはその抗原結合断片
）の１つ以上と共同して使用される。
【０２４７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、１３−シス−レチノイン酸、３−［５−（
メチルスルホニルピペラジンメチル）−インドリル］−キノロン、４−ヒドロキシタモキ
シフェン、５−デオオキシウリジン、５’−デオキシ−５−フルオロウリジン、５−フル
オロウラシル、６−メカプトプリン、７−ヒドロキシスタウロスポリン、Ａ−４４３６５
４、アビラテロンアセテート、アブラキサン、ＡＢＴ−５７８、アコルビフェン、ＡＤＳ
−１００３８０、ＡＬＴ−１１０、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド
、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンジオスタチン、
ＡＰ−２３５７３、ＡＲＱ−１９７、アルゾキシフェン、ＡＳ−２５２４２４、ＡＳ−６
０５２４０、アスパラギナーゼ、ＡＴ−９２６３、アトラセンタン、アキシチニブ、ＡＺ
Ｄ１１５２、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒ
ｉｎ）（ＢＣＧ）ワクチン、バタブリン、ＢＣ−２１０、ベソデュトクス、ベバシズマブ
、ビカルタミド、Ｂｉｏ１１１、ＢＩＯ１４０、ブレオマイシン、ＢＭＳ−２１４６６２
、ＢＭＳ−２４７５５０、ＢＭＳ−２７５２９１、ＢＭＳ−３１０７０５、ボルテジミブ
、ブセレリン、ブスルファン、カルシトリオール、カンプトテシン、カネルチニブ、カペ
シタビン、カルボプラチン、カルムスチン、ＣＣ８４９０、セジラニブ、ＣＧ−１５２１
、ＣＧ−７８１、クラミドシン、クロラムブシル、クロロトキシン、シレンギチド、シミ
チジン、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、ＣＯＬ−３、ＣＰ−７２４７１
４、シクロホスファミド、シプロテロン、シプロテロンアセテート、シタラビン、シトシ
ンアラビノシド、ダカルバジン、ダシノスタット、ダクチノマイシン、ダロツズマブ、ダ
ヌサチブ、ダサタニブ、ダウノルビシン、デカタニブ、デグエリン、デニレウキン、デオ
キシコホルマイシン、デプシペプチド、ジアリールプロピオニトリル、ジエチルスチルベ
ストロール、ジフチトックス、ドセタキセル、ドビチニブ、ドキソルビシン、ドロロキシ
フェン、エドテカリン、イットリウム９０標識エドトレオチド、エドトレオチド、ＥＫＢ
−５６９、ＥＭＤ１２１９７４、エンドスタチン、エンザルタミド、エンザスタウリン、
エピルビシン、エピチロンＢ、ＥＲＡ−９２３、エルビタックス、エルロチニブ、エスト
ラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、フィクラ
ツズマブ、フィナステリド、フラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フル
ドロコルチゾン、フルオキシメステロン、フルタミド、ＦＯＬＦＯＸレジメン、フルベス
トラント、ガレテロン、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ギマテカン、ゴセレリン、酢酸ゴ
セレリン、ゴシポール、ＧＳＫ４６１３６４、ＧＳＫ６９０６９３、ＨＭＲ−３３３９、
カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、ヒドロキシ尿素、ＩＣ８７１１４、イダルビシン
、イドキシフェン、イホスファミド、ＩＭ８６２、イマチニブ、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＩＮ
ＣＢ２４３６０、ＩＮＯ１００１、インターフェロン、インターロイキン−１２、イピリ
ムマブ、イリノテカン、ＪＮＪ−１６２４１１９９、ケトコナゾール、ＫＲＸ−０４０２
、ラパチニブ、ラソフォキシフェン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、酢酸
ロイプロリド、レバミゾール、パクリタキセル封入リポソーム、ロムスチン、ロナファル
ニブ、ルカントン、ＬＹ２９２２２３、ＬＹ２９２６９６、ＬＹ２９３６４６、ＬＹ２９
３６８４、ＬＹ２９４００２、ＬＹ３１７６１５、マリマスタット、メクロレタミン、酢
酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、
メスナ、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサント
ロン、トザセルチブ、ＭＬＮ８０５４、ネオバスタット、ネラチニブ、ノイラジアブ（ｎ
ｅｕｒａｄｉａｂ）、ニロチニブ、ニルチミド、ノラトレキシド、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５
、オブリマーセン、オクトレオチド、オファツムマブ、オラパリブ、オレゴボマブ、オル
トロネル、オキサリプラチン、パクリタキセル、パルボシクリブ、パミドロネート、パニ
ツムマブ、パゾパニブ、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ１８４３５２、ＰＥＧ−インターフェ
ロン、ペメトレキセド、ペントスタチン、ペリフォシン、フェニルアラニンマスタード、
ＰＩ−１０３、ピクチリシブ、ＰＩＫ−７５、ピペンドキシフェン、ＰＫＩ−１６６、プ
リカマイシン、ポルフィマー、プレドニゾン、プロカルバジン、プロゲスチン、ＰＸ−８
６６、Ｒ−７６３、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラゾキシン、リダホロリムス、
リツキシマブ、ロミデプシン、ＲＴＡ７４４、ルビテカン、スクリプタイド、Ｓｄｘ１０
２、セリシクリブ、セルメチニブ、セマクサニブ、ＳＦ１１２６、シロリムス、ＳＮ３６
０９３、ソラフェニブ、スピロノラクトン、スクアラミン、ＳＲ１３６６８、ストレプト
ゾシン、ＳＵ６６６８、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、スニチニブ、合成エストロ
ゲン、タラムパネル、タリモジーン・ラハーパレプベック、タモキシフェン、テモゾロミ
ド、テムシロリムス、テニポシド、テスミリフェン、テストステロン、テトランドリン、
ＴＧＸ−２２１、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、チシリムマブ、チピファルニ
ブ、チボザニブ、ＴＫＩ−２５８、ＴＬＫ２８６、トポテカン、トレミフェンクエン酸塩
、トラベクテジン、トラスツズマブ、トレチノイン、トリコスタチンＡ、トリシリビンリ
ン酸一水和物、トリプトレリンパモエート、ＴＳＥ−４２４、ウラシルマスタード、バル
プロ酸、バルルビシン、バンデタニブ、バタラニブ、ＶＥＧＦトラップ、ビンブラスチン
、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビタキシン、ビテスパン、ボリノスタッ
ト、ＶＸ−７４５、ワートマニン、Ｘｒ３１１、ザノリムマブ、ＺＫ１８６６１９、ＺＫ
−３０４７０９、ＺＭ３３６３７２、ＺＳＴＫ４７４の任意の１つ以上と共同して使用さ
れる。
【０２４８】
本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて使用される、適した抗
がん剤の非限定的な例には、細胞増殖抑制剤、細胞傷害性薬物、がんおよび腫瘍性疾患に
対する標的治療薬（小分子、生物製剤、ｓｉＲＮＡ、およびマイクロＲＮＡ）、
１）代謝拮抗剤（メトキトレキサート、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、フルダ
ラビン、カペシタビンなど）、
２）テモゾロミド、シクロホスファミドなどのアルキル化剤、
３）シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシンなどのＤＮＡ相互作用剤および
ＤＮＡ損傷剤、
４）放射線療法などの電離放射線照射、
５）エトポシド、ドキソルビシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、
６）イリノテカン、トポテカンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤、
７）パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、エポチロンなどのチューブリン相
互作用剤、
８）キネシン紡錘体タンパク質阻害剤、
９）紡錘体チェックポイント阻害剤、
１０）オラパリブ、ニラパリブ、およびベリパリブなどのポリ（ＡＤＰ−リボース）ポ
リメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、
１１）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤、
１２）カテプシンＤおよびカテプシンＫ阻害剤などのプロテアーゼ阻害剤、
１３）ボルテゾミブなどのプロテオソームまたはユビキチン化阻害剤、
１４）その野生型ｐ５３活性を回復させるためのミュータントｐ５３の活性化剤、
１５）アデノウイルス−ｐ５３、
１６）ＡＢＴ−２６３などのＢｃｌ−２阻害剤、
１７）ゲルダナマイシンおよび１７−ＡＡＧなどの熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）調
節因子、
１８）ボリノスタット（ＳＡＨＡ）などのヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤
、
１９）性ホルモン調節剤、
ａ．タモキシフェン、フルベストラントなどの抗エストロゲン剤、
ｂ．ラロキシフェンなどの選択的エストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）、
ｃ．ビカルタミド、フルタミドなどの抗アンドロゲン剤、
ｄ．ロイプロリドなどのＬＨＲＨアゴニスト、
ｅ．フィナステリドなどの５α−レダクターゼ阻害剤、
ｆ．シトクロムＰ４５０  Ｃ１７リアーゼ（ＣＹＰ４５０ｃ１７、１７αＣとも称さ
れる）、
ｇ．レトロゾール、アナストロゾール、エキセメスタンなどのアロマターゼ阻害剤、
２０）ゲフチニブ、エルロチニブ、ラプチニブなどのＥＧＦＲキナーゼ阻害剤
２１）ラパチニブなどの二重ｅｒｂＢ１およびｅｒｂＢ２阻害剤、
２２）多標的キナーゼ（セリン／スレオニンおよび／またはチロシンキナーゼ）阻害剤
、
ａ．ＡＢＬキナーゼ阻害剤、イマチニブおよびニロチニブ、ダサチニブ
ｂ．スニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、ＰＬＸ−４０３２、ア
キシチニブ、ＰＴＫ７８７、ＧＳＫ−１１２０２１２などのＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ
−２、ＰＤＧＦＲ、ＫＤＲ、ＦＬＴ、ｃ−Ｋｉｔ、Ｔｉｅ２、Ｒａｆ、ＭＥＫおよびＥＲ
Ｋ阻害剤、
ｃ．ポロ様キナーゼ阻害剤、
ｄ．オーロラキナーゼ阻害剤、
ｅ．ＪＡＫ阻害剤、
ｆ．ｃ−ＭＥＴキナーゼ阻害剤、
ｇ．ＧＤＣ−０９４１、ＢＥＺ−２３５、ＢＫＭ−１２０、およびＡＺＤ−８０５５
などのＰＩ３ＫおよびｍＴＯＲ阻害剤、
ｈ．テムシロリムス、エベロリムス、およびデフォロリムスなどのラパマイシンおよ
びその類似体、
ｉ．ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激剤）アゴニスト、
ｊ．ＣＸＣＲ（ＣＸＣケモカイン受容体）阻害剤、ＣＸＣＲ２アンタゴニスト、
２３）および他の抗がん（抗悪性腫瘍薬としても知られる）剤には、ａｒａ−Ｃ、アド
リアマイシン、シトキサン、カルボプラチン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホ
スフスミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、ト
リエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾ
シン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオ
グアニン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチ
ン、ビンデシン、ビノレルビン、ナベルビン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウ
ノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、テニポシド、シタラビン、ペメトレキセド
、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌアス
パラギナーゼ、テニポシド、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、
テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン
、テストラクトン、メゲストロールアセテート、メチルプレドニゾロン、メチルテストス
テロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲス
テロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、フルタミド、酢酸メドロキシプロゲス
テロン、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、アムサクリン、
プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、ドロロキサフィン、ヘキ
サメチルメラミン、ベキサール、ゼバリン、トリセノックス、プロフィマー、チオテパ、
アルトレタミン、ドキシル、オンタク、デポサイト、アラネスプ、ニューポジェン、ネウ
ラスタ、ケピバンスを含み、これらに限定されず、
２４）ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）（４−［２−［４−［（１１Ｒ）−３，１０−ジブロモ
−８−クロロ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［５，６］シクロヘプタ［１，２−ｂ
］ピリジン−１１−イル−］−１−ピペリジニル］−２−オキソエチル］−ピペリジンカ
ルボキサミド、チピファルニブなどのファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤
、
２５）イントロンＡ、ペグ−イントロンなどのインターフェロン、
２６）セツキシマブ、パニツムマブなどの抗ｅｒｂＢ１抗体、
２７）トラスツズマブなどの抗ｅｒｂＢ２抗体、
２８）アレムツズマブなどの抗ＣＤ５２抗体、
２９）リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体、
３０）ゲムツズマブオゾガマイシンなどの抗ＣＤ３３抗体、
３１）アバスチンなどの抗ＶＥＧＦ抗体、
３２）レクサツムマブ、マパツズマブ、ＡＭＧ−６５５などのＴＲＩＡＬリガンド、
３３）イピリムマブなどの抗ＣＴＬＡ−４抗体、
３４）ＣＴＡ１、ＣＥＡ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４４、ＣＤ４
４Ｖ６、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、ＭＨＣＩＩ、ＨＧＦ、ＩＬ−６、Ｍ
ＵＣ１、ＰＳＭＡ、ＴＡＬ６、ＴＡＧ−７２、ＴＲＡＩＬＲ、ＶＥＧＦＲ、ＩＧＦ−２、
ＦＧＦに対する抗体、
３５）ダロツズマブ（ＭＫ−０６４６）およびロバツムマブ（ＳＣＨ７１７４５４）な
どの抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体、
を含む。
【０２４９】
「エストロゲン受容体調節因子」は、機構にかかわらず、受容体へのエストロゲンの結
合を妨害または阻害する化合物を表す。エストロゲン受容体調節因子の例は、タモキシフ
ェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミ
フェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４
−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベ
ンゾピラン−３−イル）−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４’−ジヒ
ドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾン、およびＳＨ６４６を
含むが、これらに限定されない。
【０２５０】
「アンドロゲン受容体調節因子」は、機構にかかわらず、受容体へのアンドロゲンの結
合を妨害または阻害する化合物を表す。アンドロゲン受容体調節因子の例は、フィナステ
リドおよび他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リ
アロゾール、および酢酸アビラテロンを含む。
【０２５１】
「レチノイド受容体調節因子」は、機構にかかわらず、受容体へのレチノイドの結合を
妨害または阻害する化合物を表す。そのようなレチノイド受容体調節因子の例は、ベキサ
ロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフ
ルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフ
ェニル）レチナミド、およびＮ−４−カルボキシフェニルレチナミドを含む。
【０２５２】
「細胞傷害性／細胞増殖抑制剤」は、アルキル化剤、腫瘍壊死因子、介入物、低酸素活
性化可能化合物、微小管阻害剤／微小管安定化剤、有糸分裂キネシンの阻害剤、ヒストン
デアセチラーゼ阻害剤、有糸分裂進行に関与するキナーゼの阻害剤、成長因子およびサイ
トカインシグナル伝達経路に関与するキナーゼの阻害剤、代謝拮抗剤、生物学的応答修飾
因子、ホルモン剤／抗ホルモン治療薬、造血増殖因子、モノクローナル抗体標的治療薬、
トポイソメラーゼ阻害剤、プロテオソーム阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤、およびオ
ーロラキナーゼ阻害剤を含む、主に細胞の機能を直接妨害するか、または細胞縮瞳を阻害
または妨害することによって細胞死を引き起こすか、または、細胞増殖を阻害する化合物
を表す。
【０２５３】
細胞傷害性／細胞増殖抑制剤の例は、白金配位化合物、セルテネフ、カケクチン、イホ
スファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニム
スチン、ジブロモズルシトール、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサ
リプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸インプロスル
ファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチ
ン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシフォス
ファミド、シス−アミノジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金、ベンジルグアニン、グ
ルフォスファミド、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トランス）−ビス−ミュー−
（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ミュー−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン
（クロロ）白金（ＩＩ）］四塩化物、ジアリジニルスペルミン、三酸化ヒ素、１−（１１
−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾル
ビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサントレン、ミトキサントロン、ピラルビシ
ン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、抗新生物薬、３’−デアミノ−３’−モ
ルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルノマイシン、アナマイシン、ガラルビ
シン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジ
ニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（国際公開第００／５００３２号を参照さ
れたい）を含むが、これらに限定されない。
【０２５４】
低酸素活性化可能化合物の例は、チラパザミンである。
【０２５５】
プロテオソーム阻害剤の例は、ラクタシスチンおよびＭＬＮ−３４１（Ｖｅｌｃａｄｅ
）を含むが、これらに限定されない。
【０２５６】
微小管阻害剤／微小管安定化剤の例は、一般にタキサンを含む。特定の化合物は、パク
リタキセル（タキソール（登録商標））、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４
’−デオキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール（タキソテール（登
録商標））、リゾキシン、ドラスタチン、イセチオン酸ミボブリン、アウリスタチン、セ
マドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン
、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）
ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−
Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド
、（配列番号６８）、ＴＤＸ２５８、エポチロン（例えば、米国特許第６，２８４，７８
１号および第６，２８８，２３７号を参照されたい）およびＢＭＳ１８８７９７を含む。
【０２５７】
トポイソメラーゼ阻害剤のいくつかの例は、トポテカン、ヒカプタミン、イリノテカン
、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ−ベンジリデン−チ
ャートレイシン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−
ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオ
ロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ、１２Ｈ−ベンゾ［デ］ピラ
ノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０、１３（９Ｈ，１
５Ｈ）ジオン、ルルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０
Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９
４２、エトポシドホスフェート、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ−２
’−デオキシ−エトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−
ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボ
キサミド、アスラクリン、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（
ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，
５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３’，４
’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソール−６−オン、２，３−（メチ
レンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナント
リジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソギノリン−
５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−
（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１−デ］アクリジン
−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オ
キソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルア
ミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチ
ル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、お
よびジメスナである。
【０２５８】
有糸分裂キネシン阻害剤、特にヒト有糸分裂キネシンＫＳＰ阻害剤の例は、刊行物国際
公開第０３／０３９４６０号、国際公開第０３／０５００６４号、国際公開第０３／０５
０１２２号、国際公開第０３／０４９５２７号、国際公開第０３／０４９６７９号、国際
公開第０３／０４９６７８号、国際公開第０４／０３９７７４号、国際公開第０３／０７
９９７３号、国際公開第０３／０９９２１１号、国際公開第０３／１０５８５５号、国際
公開第０３／１０６４１７号、国際公開第０４／０３７１７１号、国際公開第０４／０５
８１４８号、国際公開第０４／０５８７００号、国際公開第０４／１２６６９９号、国際
公開第０５／０１８６３８号、国際公開第０５／０１９２０６号、国際公開第０５／０１
９２０５号、国際公開第０５／０１８５４７号、国際公開第０５／０１７１９０号、米国
特許出願公開第２００５／０１７６７７６号に記載されている。一実施形態では、有糸分
裂キネシンの阻害剤は、ＫＳＰの阻害剤、ＭＫＬＰ１の阻害剤、ＣＥＮＰ−Ｅの阻害剤、
ＭＣＡＫの阻害剤、およびＲａｂ６−ＫＩＦＬの阻害剤を含むが、これらに限定されない
。
【０２５９】
「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」の例は、ＳＡＨＡ、ＴＳＡ、オキサムフラチン、Ｐ
ＸＤ１０１、ＭＧ９８およびスクリプタイドを含むが、これらに限定されない。他のヒス
トンデアセチラーゼ阻害剤へのさらなる言及は、以下の原稿、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．ｅ
ｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（２４）：５０９７−５１１６（２００３）に見
出され得る。
【０２６０】
「有糸分裂進行に関与するキナーゼの阻害剤」は、オーロラキナーゼの阻害剤、ポロ様
キナーゼの阻害剤（ＰＬＫ、特にＰＬＫ−１の阻害剤）、ｂｕｂ−１の阻害剤およびｂｕ
ｂ−Ｒ１の阻害剤を含むが、これらに限定されない。「オーロラキナーゼ阻害剤」の例は
、ＶＸ−６８０である。
【０２６１】
「抗増殖剤」は、Ｇ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、およ
びＩＮＸ３００１などのアンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、ならびに
エノシタビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメ
トレキセート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスファー
ト（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ  ｏｃｆｏｓｆａｔｅ）、ホステアビンナトリウム水和物、ラ
ルチトレキセド、パルチトレキシド、エミテフル、チアゾフリン、デシタビン、ノルラト
レキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン
、２’−フルオロメチレン−２’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−
ベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−
デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ）、４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリチルアミノ
］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテ
ナサイジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テト
ラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エ
チル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシ
ル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−
６−メトキシ−１４−オキサ−１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−
テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレ
キソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−
パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、３−アミノピリジン−２−カ
ルボキシアルデヒドチオセミカルバゾンおよびトラスツズマブなどの代謝拮抗剤を含む。
【０２６２】
モノクローナル抗体標的治療薬の例は、がん細胞特異的または標的細胞特異的モノクロ
ーナル抗体に付着した細胞傷害性薬物または放射性同位体を有する治療薬を含む。例には
、ベキサールを含む。
【０２６３】
「プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤」は、ファルネシル−タンパク質ト
ランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓｅ）、ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼ
Ｉ型（ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉ）、およびゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼ
ＩＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−ＩＩ、Ｒａｂ  ＧＧＰＴａｓｅとも称される）を含めた、プレ
ニル−タンパク質トランスフェラーゼ酵素の任意の１つまたは任意の組合せを阻害する化
合物を表す。
【０２６４】
プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の例は、以下の刊行物および特許：国
際公開第９６／３０３４３号、国際公開第９７／１８８１３号、国際公開第９７／２１７
０１号、国際公開第９７／２３４７８号、国際公開第９７／３８６６５号、国際公開第９
８／２８９８０号、国際公開第９８／２９１１９号、国際公開第９５／３２９８７号、米
国特許第５，４２０，２４５号、米国特許第５，５２３，４３０号、米国特許第５，５３
２，３５９号、米国特許第５，５１０，５１０号、米国特許第５，５８９，４８５号、米
国特許第５，６０２，０９８号、欧州特許公開第０６１８２２１号、欧州特許公開第０６
７５１１２号、欧州特許公開第０６０４１８１号、欧州特許公開第０６９６５９３号、国
際公開第９４／１９３５７号、国際公開第９５／０８５４２号、国際公開第９５／１１９
１７号、国際公開第９５／１２６１２号、国際公開第９５／１２５７２号、国際公開第９
５／１０５１４号、米国特許第５，６６１，１５２号、国際公開第９５／１０５１５号、
国際公開第９５／１０５１６号、国際公開第９５／２４６１２号、国際公開第９５／３４
５３５号、国際公開第９５／２５０８６号、国際公開第９６／０５５２９号、国際公開第
９６／０６１３８号、国際公開第９６／０６１９３号、国際公開第９６／１６４４３号、
国際公開第９６／２１７０１号、国際公開第９６／２１４５６号、国際公開第９６／２２
２７８号、国際公開第９６／２４６１１号、国際公開第９６／２４６１２号、国際公開第
９６／０５１６８号、国際公開第９６／０５１６９号、国際公開第９６／００７３６号、
米国特許第５，５７１，７９２号、国際公開第９６／１７８６１号、国際公開第９６／３
３１５９号、国際公開第９６／３４８５０号、国際公開第９６／３４８５１号、国際公開
第９６／３００１７号、国際公開第９６／３００１８号、国際公開第９６／３０３６２号
、国際公開第９６／３０３６３号、国際公開第９６／３１１１１号、国際公開第９６／３
１４７７号、国際公開第９６／３１４７８号、国際公開第９６／３１５０１号、国際公開
第９７／００２５２号、国際公開第９７／０３０４７号、国際公開第９７／０３０５０号
、国際公開第９７／０４７８５号、国際公開第９７／０２９２０号、国際公開第９７／１
７０７０号、国際公開第９７／２３４７８号、国際公開第９７／２６２４６号、国際公開
第９７／３００５３号、国際公開第９７／４４３５０号、国際公開第９８／０２４３６号
、および米国特許第５，５３２，３５９号に見出され得る。血管新生に対するプレニル−
タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤の役割の例に関しては、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．  
ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９，ｐｐ．１３９４−１４０１（１９９９）
を参照されたい。
【０２６５】
「血管新生阻害剤」は、機構にかかわらず、新しい血管の形成を阻害する化合物を表す
。血管新生阻害剤の例は、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦ
ｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）の阻害剤などのチロシンキナーゼ阻害剤、表皮由来、
線維芽細胞由来、または血小板由来の増殖因子の阻害剤、ＭＭＰ（マトリックスメタロプ
ロテアーゼ）阻害剤、インテグリン遮断薬、インターフェロン−α、インターロイキン−
１２、ペントサンポリサルフェート、アスピリンおよびイブプロフェンのような非ステロ
イド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）を含むシクロオキシゲナーゼ阻害剤ならびにセレコキシブ
およびロフェコキシブのような選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤（ＰＮＡＳ，Ｖｏ
ｌ．８９，ｐ．７３８４（１９９２）、ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９，ｐ．４７５（１９８２
）、Ａｒｃｈ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７３（１９９０）、Ａｎ
ａｔ．Ｒｅｃ．，Ｖｏｌ．２３８，ｐ．６８（１９９４）、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，
Ｖｏｌ．３７２，ｐ．８３（１９９５）、Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．Ｖｏｌ．３１３，ｐ
．７６（１９９５）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１６，ｐ．１０７
（１９９６）、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．７５，ｐ．１０５（１９９
７）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．５７，ｐ．１６２５（１９９７）、Ｃｅｌｌ，
Ｖｏｌ．９３，ｐ．７０５（１９９８）、Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２
，ｐ．７１５（１９９８）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７４，ｐ．９１１６
（１９９９））、ステロイド系抗炎症薬（コルチコステロイド、ミネラルコルチコイド、
デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレッド、ベタメタゾンなど）
、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ−４、スクアラミン、６−Ｏ−
クロロアセチル−カルボニル）−フマギロール、サリドマイド、アンジオスタチン、トロ
ポニン−１、アンジオテンシンＩＩアンタゴニスト（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．
，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５：１４１−１４５（１９８５）を参照されたい
）、ならびにＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏ
ｌ．１７，ｐｐ．９６３−９６８（Ｏｃｔｏｂｅｒ  １９９９）、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．
，Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１−８４４（１９９３）、国際公開第００／４４７７７号
、および国際公開第００／６１１８６号を参照されたい）を含むが、これらに限定されな
い。
【０２６６】
血管新生阻害剤の他の例は、エンドスタチン、ウクライン、ランピルナーゼ、ＩＭ８６
２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル
］−１−オキサスピロ［２，５］オクタ−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、ア
セチルジナナリン、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイ
ル）フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ
１０１、スクアラミン、コンブレタスタチン、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化
マンノペンタオースホスフェート、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−
４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ
］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホネート）、および３−［（２，４−ジメチルピ
ロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）を含むが、これらに
限定されない。
【０２６７】
血管新生を調節または阻害し、本発明の化合物と組み合わせて使用され得る他の治療薬
は、凝固および線溶系を調節または阻害する薬剤を含む（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍ
ｅｄ．３８：６７９−６９２（２０００）の総説を参照されたい）。凝固および線溶経路
を調節または阻害するそのような薬剤の例は、ヘパリン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ
．８０：１０−２３（１９９８）を参照されたい）、低分子量ヘパリン、およびカルボキ
シペプチダーゼＵ阻害剤（活性トロンビン活性化可能線維素溶解阻害剤［ＴＡＦＩａ］の
阻害剤としても知られている）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．１０１：３２９−３５
４（２００１）を参照されたい）を含むが、これらに限定されない。ＴＡＦＩａ阻害剤は
、米国特許出願第６０／３１０，９２７号（２００１年８月８日に出願された）および第
６０／３４９，９２５号（２００２年１月１８日に出願された）に記載されている。
【０２６８】
「受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を妨害する薬剤」は、ＲＴＫを阻害し、したが
って、発がんおよび腫瘍進行に関与する機構を阻害する化合物を表す。そのような薬剤は
、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３、およびｃ−Ｍｅｔの阻害剤を含む。さらな
る薬剤は、Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ  ａｎｄ  Ｈｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３
５５−３６５，２００１に記載されているＲＴＫの阻害剤を含む。
【０２６９】
「細胞増殖および生存シグナリング経路の阻害剤」は、細胞表面受容体の下流のシグナル
伝達カスケードを阻害する化合物を表す。そのような薬剤は、セリン／スレオニンキナー
ゼの阻害剤（国際公開第０２／０８３０６４号、国際公開第０２／０８３１３９号、国際
公開第０２／０８３１４０号、米国特許出願公開第２００４−０１１６４３２号、国際公
開第０２／０８３１３８号、米国特許出願公開第２００４−０１０２３６０号、国際公開
第０３／０８６４０４号、国際公開第０３／０８６２７９号、国際公開第０３／０８６３
９４号、国際公開第０３／０８４４７３号、国際公開第０３／０８６４０３号、国際公開
第２００４／０４１１６２号、国際公開第２００４／０９６１３１号、国際公開第２００
４／０９６１２９号、国際公開第２００４／０９６１３５号、国際公開第２００４／０９
６１３０号、国際公開第２００５／１００３５６号、国際公開第２００５／１００３４４
号、米国特許出願公開第２００５／０２９９４１号、米国特許出願公開第２００５／４４
２９４号、米国特許出願公開第２００５／４３３６１号、第６０／７３４１８８号、第６
０／６５２７３７号、第６０／６７０４６９号に記載されているものなどのＡｋｔの阻害
剤を含むが、これらに限定されない）、Ｒａｆキナーゼの阻害剤（例えばＰＬＸ−４０３
２）、ＭＥＫの阻害剤（例えば、Ａｒｒｙ−１６２、ＲＯ−４９８７６５５、およびＧＳ
Ｋ−１１２０２１２）、ｍＴＯＲの阻害剤（例えば、ＡＺＤ−８０５５、ＢＥＺ−２３５
、およびエベロリムス）、およびＰＩ３Ｋの阻害剤（例えばＧＤＣ−０９４１、ＢＫＭ−
１２０）を含む。
【０２７０】
上で使用されたように、「インテグリン遮断薬」は、αｖβ３インテグリンへの生理学
的リガンドの結合を選択的にアンタゴナイズする、阻害する、または対抗する化合物、α
ｖβ５インテグリンへの生理学的リガンドの結合を選択的にアンタゴナイズする、阻害す
る、または対抗する化合物、αｖβ３インテグリンとαｖβ５インテグリンの両方への生
理学的リガンドの結合をアンタゴナイズする、阻害する、または対抗する化合物、および
毛細血管内皮細胞上で発現される（１つ以上の）特定のインテグリンの活性をアンタゴナ
イズする、阻害する、または対抗する化合物を表す。この用語は、αｖβ６、αｖβ８、
α１β１、α２β１、α５β１、α６β１、およびα６β４インテグリンのアンタゴニス
トも表す。この用語は、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１
、α５β１、α６β１およびα６β４インテグリンの任意の組合せのアンタゴニストも表
す。
【０２７１】
チロシンキナーゼ阻害剤のいくつかの特定の例は、Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル
）−５−メチルイソオキサゾール−４−カルボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロ
ール−５−イル）メチリデニル）インドリン−２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７
−デメトキシゲルダナマイシン、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７
−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン、Ｎ−（３−エチ
ニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩ
ＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチ
ル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２
，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシ
ン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン、ＳＴＩ５７１、ＣＥＰ２５６３、４−（３−
クロロフェニルアミノ）−５，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメ
タンスルホネート、４−（３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメ
トキシキナゾリン、４−（４’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナ
ゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴＩ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジル
メチル）−１−フタルアジナミン、およびＥＭＤ１２１９７４を含む。
【０２７２】
ＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガンマ）アゴニストおよびＰＰＡＲ−δ（すなわ
ち、ＰＰＡＲ−デルタ）アゴニストとここで特許請求された抗体または抗原結合断片の組
合せは、ある種の悪性腫瘍の処置に有用であり得る。ＰＰＡＲ−γおよびＰＰＡＲ−δは
、核ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γおよびδである。内皮細胞におけるＰＰＡ
Ｒ−γの発現およびその血管新生への関与は、文献に報告されている（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏ
ｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８；３１：９０９−９１３、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．１９９９；２７４：９１１６−９１２１、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  
Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２０００；４１：２３０９−２３１７を参照されたい）。ごく最近では
、ＰＰＡＲ−γアゴニストは、インビトロでＶＥＧＦに対する血管新生応答を阻害するこ
とが示され、トログリタゾンとマレイン酸ロシグリタゾンの両方は、マウスにおける網膜
新生血管新生の発達を阻害する。（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．２００１；１１９：
７０９−７１７）。ＰＰＡＲ−γアゴニストおよびＰＰＡＲ−γ／αアゴニストの例は、
Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標）、Ｒｕｃａｐａｒｉｂ（登録商標）、Ｔａｌａｚｏｐａｒ
ｉｂ（登録商標）、ｎｉｒａｐａｒｉｂ、Ｖｅｌｉｐａｒｉｂ（登録商標）、チアゾリジ
ンジオン（ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、トログリタゾン、ロシグリタゾン、ピオグリ
タゾンなど）、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ＧＷ２５７
０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ
２３３１、ＧＷ４０９５４４、ＮＮ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１
５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−
［（５，７−ジプロピル−３−トリフルオロメチル−１，２−ベンズイソオキサゾール−
６−イル）オキシ］−２−メチルプロピオン酸、および２（Ｒ）−７−（３−（２−クロ
ロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルクロマン−
２−カルボン酸を含むが、これらに限定されない。
【０２７３】
本発明の抗体または抗原結合断片はまた、アロマターゼ阻害剤と組み合わせて乳がんを
処置または予防するのに有用であり得る。アロマターゼ阻害剤の例は、アナストロゾール
、レトロゾール、およびエキセメスタンを含むが、これらに限定されない。
【０２７４】
本発明の抗体または抗原結合断片はまた、以下の化学療法剤：アバレリクス（Ｐｌｅｎ
ａｘｉｓ  ｄｅｐｏｔ（登録商標））、アルデスロイキン（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標）
）、アルデスロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐ
ａｔｈ（登録商標））、アリトレチノイン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））、アロプリ
ノール（Ｚｙｌｏｐｒｉｍ（登録商標））、アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標
））、アミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅ
ｘ（登録商標））、三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））、アスパラギナーゼ（
Ｅｌｓｐａｒ（登録商標））、アザシチジン（Ｖｉｄａｚａ（登録商標））、ベンダムス
チン塩酸塩（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））、ベバクジマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標
））、ベキサロテンカプセル（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））、ベキサロテンゲル（
Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））、ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）
）、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ブレフェルジンＡ、ブスルファン静
注（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、ブスルファン経口（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）
）、カルステロン（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（
登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（
ＢＣＮＵ（登録商標）、ＢｉＣＮＵ（登録商標））、カルムスチン（Ｇｌｉａｄｅｌ（登
録商標））、ポリフェプロサン２０インプラントを有するカルムスチン（Ｇｌｉａｄｅｌ
Ｗａｆｅｒ（登録商標））、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））、セツキシ
マブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標）
）、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉ
ｎ（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））、クロファラビン（Ｃｌｏｌａｒ（登録商標
））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））
、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））、シクロホ
スファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ  Ｔａｂｌｅｔ（登録商標））、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａ
ｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカル
バジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン、アクチノマイシンＤ（
Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））、ダルテパリンナトリウム注射剤（Ｆｒａｇｍｉｎ（登
録商標））、ダルベポエチンアルファ（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））、ダサチニブ（Ｓ
ｐｒｙｃｅｌ（登録商標））、ダウノルビシンリポソーム（ＤａｎｕｏＸｏｍｅ（登録商
標））、ダウノルビシン、ダウノマイシン（ダウノルビシン（登録商標））、ダウノルビ
シン、ダウノマイシン（セルビジン（登録商標））、デガレリクス（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（
登録商標））、デニロイキンジフチトックス（Ｏｎｔａｋ（登録商標））、デクスラゾキ
サン（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標））、塩酸デクスラゾキサン（Ｔｏｔｅｃｔ（登録商
標））、ジデムニンＢ、１７−ＤＭＡＧ、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）
）、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ（登録商標））、ドキソルビシン（
Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、ドキソルビシン（Ａｄ
ｒｉａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））、ドキソルビシンリポソ
ーム（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））、ドロモスタノロンプロピオネート（Ｄｒｏｍｏｓｔａ
ｎｏｌｏｎｅ（登録商標））、ドロモスタノロンプロピオネート（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ  
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））、エクリズマブ注射剤（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標）
）、エリオットＢ溶液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  Ｂ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標））、エ
ルトロンボパグ（Ｐｒｏｍａｃｔａ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登
録商標））、エポエチンアルファ（エポゲン（登録商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅ
ｖａ（登録商標））、エストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））、エチニルエストラ
ジオール、エトポシドホスフェート（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標））、エトポシド、
ＶＰ−１６（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、エベロリムス錠（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録
商標））、エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））、フェルモキシトール（Ｆ
ｅｒａｈｅｍｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））、フィルグラスチム（Ｎｅｕｐｏｇ
ｅｎ（登録商標））、フロクスウリジン（動脈内）（ＦＵＤＲ（登録商標））、フルダラ
ビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、フルオロウラシル、５−ＦＵ（Ａｄｒｕｃｉｌ（
登録商標））、フルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標））、ゲフィチニブ（Ｉ
ｒｅｓｓａ（登録商標））、ゲルダナマイシン、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標
））、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））、
酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ  Ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））、酢酸ゴセレリン（
Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））、酢酸ヒストレリン（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ  Ｉｍｐｌａｎ
ｔ（登録商標））、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イブリツモマブチウ
キセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、イダルビシン（イダムマイシン（登録商標）
）、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（
登録商標））、インターフェロンアルファ２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ  Ａ（登録商標））、イ
ンターフェロンアルファ−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標））、イオベングアンＩ  
１２３注射剤（ＡｄｒｅＶｉｅｗ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（
登録商標））、イクサベピロン（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））、ラパチニブ錠（Ｔｙｋ
ｅｒｂ（登録商標））、レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））、レトロゾー
ル（Ｆｅｍａｒａ（登録商標））、ロイコボリン（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標）
、Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標））、酢酸ロイプロリド（Ｅｌｉｇａｒｄ（登録商標
））、レバミゾール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ（登録商標））、ロムスチン、ＣＣＮＵ（Ｃｅ
ｅＢＵ（登録商標））、メクロレタミン、ナイトロジェンマスタード（Ｍｕｓｔａｒｇｅ
ｎ（登録商標））、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））、メルファラン、
Ｌ−ＰＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、メルカプトプリン、６−ＭＰ（Ｐｕｒｉｎ
ｅｔｈｏｌ（登録商標））、メスナ（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））、メスナ（Ｍｅｓｎｅ
ｘ  ｔａｂｓ（登録商標））、メトトレキサート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標
））、メトキサレン（Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））、８−メトキシソラレン、マイトマイ
シンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））、ミトタン（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ（登録商標）
）、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、ミトラマイシン、フェン
プロピオン酸ナンドロロン（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ−５０（登録商標））、ネララビン（Ａ
ｒｒａｎｏｎ（登録商標））、ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））、ノフェツモ
マブ（Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標））、オフツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、
Ｏｐｒｅｌｖｅｋｉｎ（Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標））、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａ
ｔｉｎ（登録商標））、パクリタキセル（Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））、パクリタキセル
（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、パクリタキセルタンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（
登録商標））、パリフェルミン（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標））、パミドロネート（
Ａｒｅｄｉａ（登録商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））、パゾパ
ニブ錠（Ｖｏｔｒｉｅｎｔｔｍ（登録商標））、ペガデマーゼ（Ａｄａｇｅｎ（Ｐｅｇａ
ｄｅｍａｓｅ  Ｂｏｖｉｎｅ）（登録商標））、ペガスパルガーゼ（Ｏｎｃａｓｐａｒ（
登録商標））、ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））、ペメトレキセ
ド二ナトリウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商
標））、ピポブロマン（Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、プレリキサホル（Ｍｏｚｏｂｉ
ｌ（登録商標））、プリカマイシン、ミトラマイシン（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ（登録商標）
）、ポルフィマーナトリウム（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ（登録商標））、プララトレキサート
注射剤（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））、プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標
））、キナクリン（Ａｔａｂｒｉｎｅ（登録商標））、ラパマイシン、ラスブリカーゼ（
Ｅｌｉｔｅｋ（登録商標））、ラロキシフェン塩酸塩（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））、リ
ツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標
））、ロミプロスチム（Ｎｐｌａｔｅ（登録商標））、サルグラモスティム（Ｌｅｕｋｉ
ｎｅ（登録商標））、サルグラモスティム（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））、ソラフェニ
ブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））
、マレイン酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、タルク（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ（
登録商標））、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テモゾロミド（Ｔｅ
ｍｏｄａｒ（登録商標））、テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））、テニポシ
ド、ＶＭ−２６（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、テストラクトン（Ｔｅｓｌａｃ（登録商標
））、チオグアニン、６−ＴＧ（チオグアニン（登録商標））、チオプリン、チオテパ（
Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））、トレ
ミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）
）、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、トランスレ
チノイン酸、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、トレチノイン、ＡＴ
ＲＡ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））、トリエチレンメラミン、ウラシルマスタード（
Ｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｃａｐｓｕｌｅｓ（登録商標））、バルルビシン（Ｖａ
ｌｓｔａｒ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリス
チン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）
）、ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））、ワートマニン、およびゾレドロネ
ート（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））と組み合わせてがんを処置するのに有用であり得る。
【０２７５】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、カソピタント（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌ
ｉｎｅ）、Ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ（ＭＧＩ−Ｈｅｌｓｉｎｎ）、他のＮＫ−１受容体アン
タゴニスト、パロノセトロン（ＭＧＩ  Ｐｈａｒｍａ社によりアロキシとして販売されて
いる）、アプレピタント（ニュージャージー州ローウェイのＭｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．
社によりイメンドとして販売されている）、ジフェンヒドラミン（ニューヨーク州ニュー
ヨークのＰｆｉｚｅｒ社によりＢｅｎａｄｒｙｌ（登録商標）として販売されている）、
ヒドロキシジン（ニューヨーク州ニューヨークのＰｆｉｚｅｒ社よりＡｔａｒａｘ（登録
商標）として販売されている）、メトクロプラミド（バージニア州リッチモンドのＡＨ  
Ｒｏｂｉｎｓ  Ｃｏ社によりＲｅｇｌａｎ（登録商標）として販売されている）、ロラゼ
パム（ニュージャージー州マディソンのＷｙｅｔｈ社によりＡｔｉｖａｎ（登録商標）と
して販売されている）、アルプラゾラム（ニューヨーク州ニューヨークのＰｆｉｚｅｒ社
によりＸａｎａｘ（登録商標）として販売されている）、ハロペリドール（ニュージャー
ジー州ラリタンのＯｒｔｈｏ−ＭｃＮｅｉｌ社によりＨａｌｄｏｌ（登録商標）として販
売されている）、ドロペリドール（Ｉｎａｐｓｉｎｅ（登録商標））、ドロナビノール（
ジョージア州マリエッタのＳｏｌｖａｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ社に
よりＭａｒｉｎｏｌ（登録商標）として販売されている）、デキサメタゾン（ニュージャ
ージー州ローウェイのＭｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．社によりＤｅｃａｄｒｏｎ（登録商標
）として販売されている）、メチルプレドニゾロン（ニューヨーク州ニューヨークのＰｆ
ｉｚｅｒ社によりＭｅｄｒｏｌ（登録商標）として販売されている）、プロクロルペラジ
ン（ノースカロライナ州リサーチトライアングルパークのＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎ
ｅ社によりＣｏｍｐａｚｉｎｅ（登録商標）として販売されている）、グラニセトロン（
ニュージャージー州ナトリーのＨｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｉｎｃ．社により
Ｋｙｔｒｉｌ（登録商標）として販売されている）、オンダンセトロン（ノースカロライ
ナ州リサーチトライアングルパークのＧｌａｘｏｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ社によりＺｏｆｒ
ａｎ（登録商標）として販売されている）、ドラセトロン（ニューヨーク州ニューヨーク
のＳａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社よりＡｎｚｅｍｅｔ（登録商標）として販売されてい
る）、トロピセトロン（ニュージャージー州イーストハノーバーのＮｏｖａｒｔｉｓ社に
よりＮａｖｏｂａｎ（登録商標）として販売されている）を含むが、これらに限定されな
い１つ以上の制吐剤と共同して使用される。
【０２７６】
がん処置の他の副作用は、赤血球および白血球欠乏症を含む。したがって、本発明の一
実施形態では、抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａまたはその
ヒト化バージョン）は、例えば、フィルグラスチム、ＰＥＧフィルグラスチム、エリスロ
ポエチン、エポエチンアルファ、またはダルベポエチンアルファなどのそのような欠乏症
を処置または予防する薬剤と共同する。
【０２７７】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗
体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）は、抗がん放射線療法と共同して投与される。
例えば、本発明の一実施形態では、放射線療法は、体外照射療法（ＥＢＴ）、つまり、高
エネルギーＸ線のビームを腫瘍の位置に送達するための方法である。ビームは、患者の外
部で（例えば、線形加速器によって）生成され、腫瘍部位を標的とする。これらのＸ線は
、がん細胞を破壊することができ、慎重な処置計画により、周囲の正常組織が残されるこ
とが可能になる。放射線源は、患者の身体内に置かれない。本発明の一実施形態では、放
射線療法は、陽子線療法、つまり、患部組織にＸ線の代わりに陽子を照射する一種の原体
療法である。本発明の一実施形態では、放射線療法は、原体体外照射放射線療法、つまり
、個人の身体構造に放射線療法を合わせるための先進技術を使用する手順である。本発明
の一実施形態では、放射線療法は、小線源照射療法、つまり、身体内の放射性物質の一時
的な配置であり、通常、ある領域に放射線の余分な線量（またはブースト）を与えるため
に用いられる。
【０２７８】
本発明の一実施形態では、外科手術が抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば
抗体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）と共同して行われ、これは、外科的腫瘍摘出
である。
【０２７９】
さらなる実施形態では、患者は、抗ＣＤ２７特異的抗体またはその抗原結合断片を用い
てエクスビボで増殖させた自己Ｔ細胞を注入される。別の実施形態では、患者は、抗ＣＤ
２７特異的抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて自己Ｔ細胞を投与される。さらに
別の実施形態では、患者は、がんワクチンをワクチン接種され、抗ＣＤ２７特異的抗体ま
たはその抗原結合断片を用いてエクスビボで増殖させた自己Ｔ細胞を注入される。自己Ｔ
細胞は、自己浸潤リンパ球、腫瘍抗原に対する高親和性Ｔ細胞受容体で形質導入されたＴ
細胞、またはＴ細胞シグナリング分子のエンドドメインを有するハイブリッド免疫グロブ
リン軽鎖からなるキメラ抗原受容体で形質導入されたＴ細胞となり得る。Ｋａｌｏｓ  Ｍ
．  ａｎｄ  Ｊｕｎｅ  Ｃ．Ｈ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３９，２０１３，ｐ４９−６０、
Ｗｕ  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．２０１２；１８（２）：１６０−１７５、
およびＪｕｎｅ，Ｃ．Ｈ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１７：１４６６−１４７６
（２００７）を参照されたい。
【０２８０】
実験的および診断的使用
本明細書で開示された抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａお
よびそのヒト化バージョン）は、親和性精製薬剤として使用され得る。このプロセスでは
、抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片は、当技術分野でよく知られている方法を使用
して、セファデックス、ガラスまたはアガロース樹脂またはろ紙などの固相に固定化され
る。固定化された抗体または断片は、精製されるＣＤ２７タンパク質（またはその断片）
を含有する試料と接触させられ、その後、支持体が、固定化抗体または断片に結合してい
るＣＤ２７タンパク質を除く試料中の実質的に全ての物質を除去する、適した溶媒で洗浄
される。最後に、支持体が、結合したＣＤ２７（例えばプロテインＡ）を溶出する溶媒で
洗浄される。そのような固定化抗体および断片は、本発明の一部を形成する。
【０２８１】
例えば、ウエスタンブロットおよび本明細書で考察される他のイムノアッセイを実施す
るのに有用である二次抗体を生成するための抗原がさらに提供される。
【０２８２】
抗ＣＤ２７抗体（例えばヒト化抗体）およびその抗原結合断片は、例えば、特定の細胞
、組織、または血清、例えば、黒色腫細胞などの腫瘍細胞におけるその発現を検出するＣ
Ｄ２７タンパク質に関する診断アッセイにおいても有用であり得る。そのような診断方法
は、様々な疾患診断において有用であり得る。
【０２８３】
本発明は、本明細書で開示された抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体
１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）の使用を組み込んだＥＬＩＳＡアッセイ（酵素結
合免疫吸着検定法）を含む。
【０２８４】
例えば、そのような方法は、以下のステップを含む。
【０２８５】
（ａ）抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片で基板（例えばマイクロタイタープレー
トウェル、例えばプラスチックプレートの表面）をコーティングする、
（ｂ）ＣＤ２７の存在に関して試験される試料を基板に適用する、
（ｃ）試料中の結合していない物質が除去されるようにプレートを洗浄する、
（ｄ）ＣＤ２７抗原にも特異的な検出可能に標識された抗体（例えば酵素結合抗体）を
適用する、
（ｅ）結合していない標識抗体が除去されるように基板を洗浄する、
（ｆ）標識抗体が酵素結合している場合、酵素によって蛍光シグナルに変換される化学
物質を適用する、
（ｇ）標識抗体の存在を検出する。
【０２８６】
基板と結合した標識の検出は、ＣＤ２７タンパク質の存在を示す。
【０２８７】
さらなる実施形態では、標識抗体またはその抗原結合断片は、ＡＢＴＳ（例えば、２，
２’−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸））または３，３’
，５，５’−テトラメチルベンジジンと反応して、検出可能である色の変化を生じるペル
オキシダーゼで標識される。或いは、標識抗体または断片は、シンチラントの存在下でシ
ンチレーションカウンターによって検出され得る検出可能な放射性同位体（例えば、３Ｈ
）で標識される。
【０２８８】
本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａまたはそのヒト
化バージョン）は、ウエスタンブロットまたは免疫タンパク質ブロット手順において使用
され得る。そのような手順は、本発明の一部を形成し、例えば、以下を含む；
（１）場合により当技術分野で既知の方法（例えばセミドライブロッティングまたはタン
クブロッティング）を使用して、ＣＤ２７の存在について試験される試料から（例えば、
試料中のタンパク質のＰＡＧＥまたはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動分離から）、タンパク質
を膜または他の固体基質上に移し；結合したＣＤ２７またはその断片の存在について試験
される膜または他の固体基質を、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片と接触
させる。
【０２８９】
そのような膜は、未変性ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルまたはＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルにおいて
ＣＤ２７の存在に関して試験されるタンパク質が（例えば、ゲルにおける電気泳動分離後
に）移されたニトロセルロースまたはビニル（例えば、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ
））に基づく膜の形をとり得る。膜を抗ＣＤ２７抗体または断片と接触させる前に、膜は
、膜上の非特異的タンパク質結合部位を結合するように、例えば、脱脂粉乳などで遮断さ
れてもよい。
【０２９０】
（２）膜を１回または複数回洗浄して、結合していない抗ＣＤ２７抗体または断片およ
び他の結合していない物質を除去する；そして
（３）結合した抗ＣＤ２７抗体または断片を検出する。
【０２９１】
結合した抗体または断片の検出は、ＣＤ２７タンパク質が膜または基板上および試料中
に存在することを示している。結合した抗体または断片の検出は、抗体または断片を、検
出可能に標識されている二次抗体（抗免疫グロブリン抗体）と結合させ、次いで二次抗体
の存在を検出することにより得る。
【０２９２】
本明細書で開示された抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａお
よびそのヒト化バージョン）はまた、免疫組織化学的検査に使用され得る。そのような方
法は、本発明の一部を形成し、例えば、以下を含む；
（１）ＣＤ２７タンパク質の存在に関して試験される細胞（例えば黒色腫細胞などの腫
瘍細胞）を本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片と接触させる；そして
（２）細胞上または細胞中の抗体または断片を検出する。
【０２９３】
抗体または断片自体が検出可能に標識されている場合、それは、直接検出され得る。或
いは、抗体または断片は、検出される検出可能に標識された二次抗体によって結合され得
る。
【０２９４】
本明細書で開示されたある抗ＣＤ２７抗体およびその抗原結合断片（例えば抗体１３１
Ａおよびそのヒト化バージョン）はまた、インビボ腫瘍イメージングに使用され得る。そ
のような方法は、（例えば、例えば腫瘍細胞表面上にＣＤ２７を発現する）ＣＤ２７発現
と関連している腫瘍の存在に関して試験される患者の身体への放射標識抗ＣＤ２７抗体ま
たはその抗原結合断片の注入、それに続く、例えば腫瘍に結合している高濃度の抗体また
は断片を含む遺伝子座での標識抗体または断片の存在を検出するための患者の身体の核イ
メージングを含み得る。遺伝子座の検出は、ＣＤ２７＋腫瘍および腫瘍細胞の存在を示す
。
【０２９５】
イメージング技法は、ＳＰＥＣＴイメージング（単一光子放出コンピュータ断層撮影）
またはＰＥＴイメージング（陽電子放出断層撮影）を含む。標識は、例えば、例えばＳＰ
ＥＣＴイメージングまたは１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏまたは１８Ｆと組み合わせて、例えば
、ＰＥＴイメージングまたはインジウム−１１１と組み合わせてヨウ素１２３（１２３Ｉ
）およびテクネチウム９９ｍ（９９ｍＴｃ）を含む（例えば、Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ
．，（２００５）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．６７：３
８５−４４０を参照されたい）。
【０２９６】
医薬組成物および投与
本発明の抗ＣＤ２７抗体および抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バ
ージョン）の医薬組成物または無菌組成物を調製するために、抗体またはその抗原結合断
片を薬学的に許容される担体または賦形剤と混合する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照されたい。
【０２９７】
治療薬および診断薬の製剤は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁液
の形の許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって調製され得る（例
えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａ
ｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０
００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎ
ｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ、Ａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉ
ｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ
．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ
：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａ
ｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ
ｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｗｅｉｎ
ｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ
ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，
ＮＹを参照されたい）。
【０２９８】
単独でまたは別の治療薬と組み合わせて投与される本発明の抗体の毒性および治療有効
性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致命的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％
に治療上有効な用量）を決定するための細胞培養または実験動物における標準的な医薬手
順によって決定され得る。毒性効果と治療効果の用量比は治療指数（ＬＤ５０／ＥＤ５０
）である。これらの細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトにおけ
る使用のための様々な投与量を製剤化することにおいて使用され得る。そのような化合物
の投与量は、好ましくは、ほとんどまたは全く毒性を有さないＥＤ５０を含む循環濃度の
範囲内にある。投与量は、用いられる剤形および投与の経路に依存してこの範囲内で変動
し得る。
【０２９９】
さらなる実施形態では、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２
００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅ
ｍｂｅｒ  １，２００２））に従って、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片
（例えば抗体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）と共同して対象に投与されるさらな
る治療薬がある。
【０３００】
投与の様式は、異なり得る。投与の経路は、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口、筋肉内
、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接的脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、ガ
ス注入、局所、皮膚、経皮、または動脈内を含む。
【０３０１】
特定の実施形態では、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体１
３１Ａおよびそのヒト化バージョン）は、注入によるなどの侵襲的経路によって投与され
得る。本発明のさらなる実施形態では、抗ＣＤ２７抗体もしくはその抗原結合断片、また
はその医薬組成物は、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内に、または吸入、エアロゾ
ル送達によって投与される。非侵襲的経路（例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤で経口
で）による投与も本発明の範囲内である。
【０３０２】
本発明は、本発明の抗体もしくは抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化
バージョン）のいずれかまたはその医薬組成物を含む容器（例えば、例えば、キャップも
しくはクロマトグラフィーカラム、中空穴針、またはシリンジシリンダーを有するプラス
チックまたはガラスバイアル）を提供する。本発明は、本発明の任意の抗体もしくは抗原
結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）またはその医薬組成物を含
む注入デバイスも提供する。注入デバイスは、非経口経路、例えば、筋肉内、皮下または
静脈内経路を通して患者の身体内に物質を導入するデバイスである。例えば、注射デバイ
スは、例えば、注入される流体（例えば抗体もしくは断片またはその医薬組成物）を保持
するためのシリンダーまたはバレル、流体の注入のために皮膚および／または血管を縫合
するための針、および流体をシリンダーから針穴を通して押し出すためのプランジャを含
む（例えば、自動注入器などの医薬組成物で予め充填された）シリンジとなり得る。本発
明の一実施形態では、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、またはその医薬組成物を
含む注入デバイスは、静脈内（ＩＶ）注射デバイスである。そのようなデバイスは、カニ
ューレまたはトロカール／針を通して患者の身体内に導入される流体（例えば、食塩水、
またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２を含み、グルコースを含んでもよ
い乳酸リンゲル液）を保持するためのバッグまたはリザーバに付着され得るチューブに付
着され得るカニューレまたはトロカール／針における抗体もしくはその断片または医薬組
成物を含む。本発明の一実施形態では、トロカールおよびカニューレが対象の静脈に挿入
され、トロカールが挿入されたカニューレから除去されると、抗体もしくは断片またはそ
の医薬組成物がデバイスに導入され得る。ＩＶデバイスは、例えば、（例えば、手または
腕における）末梢静脈、上大静脈もしくは下大静脈、または心臓の右心房内（例えば中心
ＩＶ）、または鎖骨下静脈、内頸静脈、または大腿静脈に挿入され、例えば、心臓に向か
ってそれが上大静脈または右心房（例えば中心静脈線）に達するまで前進され得る。本発
明の一実施形態では、注入デバイスは、自動注入器、ジェット式注入器、または外部輸注
ポンプである。ジェット式注入器は、表皮を貫通して、抗体もしくは断片またはその医薬
組成物を患者の身体に導入する高圧の狭い液体のジェットを使用する。外部輸注ポンプは
、抗体もしくは断片またはその医薬組成物を患者の身体内に制御された量で送達する医療
デバイスである。外部輸注ポンプは、電気的または機械的に動力を供給され得る。異なる
ポンプは、異なる方法で動作し、例えば、シリンジポンプは、シリンジのリザーバに流体
を保持し、可動ピストンが流体送達を制御し、エラストマーポンプは、伸縮性バルーンリ
ザーバ内に流体を保持し、バルーンの弾性壁からの圧力が流体供給を駆動する。ぜん動ポ
ンプでは、ローラーのセットがある長さの柔軟なチューブを締め付け、流体を前方に押す
。マルチチャンネルポンプでは、流体は、複数のリザーバから複数の速度で送達され得る
。
【０３０３】
本明細書で開示された医薬組成物はまた、米国特許第６，６２０，１３５号、第６，０
９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３
３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、
または第４，５９６，５５６号に開示されているデバイスなどの無針皮下注入デバイスを
用いて投与され得る。医薬組成物を含むそのような無針デバイスも本発明の一部である。
本明細書で開示された医薬組成物は、輸注によっても投与され得る。医薬組成物を投与す
るための周知のインプラントおよびモジュールの例は、制御された速度で薬を分配するた
めの埋め込み型微量輸注ポンプを開示している米国特許第４，４８７，６０３号、正確な
輸注速度で薬を送達するための薬輸注ポンプを開示している米国特許第４，４４７，２３
３号、連続的な薬物送達のための可変流埋め込み型輸注装置を開示している米国特許第４
，４４７，２２４号、マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達系を開示している米
国特許第４，４３９，１９６号に開示されたものを含む。多くの他のそのようなインプラ
ント、送達系、およびモジュールは当業者にはよく知られており、本発明の医薬組成物を
含むものは本発明の範囲内にある。
【０３０４】
或いは、本発明の抗ＣＤ２７抗体または抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよびその
ヒト化バージョン）を、例えば、抗体または断片の直接的な腫瘍、例えば、ＣＤ２７＋腫
瘍への注入を通して全身的ではなく局所的に投与してもよい。さらに、標的化薬物送達系
において、例えば免疫病理学によって特徴付けられる、例えば腫瘍、例えばＣＤ２７＋腫
瘍を標的とする組織特異的抗体でコーティングされたリポソームにおいて、抗体または断
片を投与してもよい。リポソームは、罹患組織を標的とし、それによって選択的に取り込
まれることになる。そのような方法およびリポソームは、本発明の一部である。
【０３０５】
投与計画は、治療抗体または抗原結合断片の血清または組織の代謝回転速度、症状のレ
ベル、治療抗体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の到達性を含
めたいくつかの因子に依存する。好ましくは、投与計画は、同時に望ましくない副作用を
最小化しながら、標的疾患症状の改善をもたらすのに十分な治療抗体または断片を送達す
る。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の治療抗体および処置されている症状
の重症度に部分的に依存する。治療抗体または断片の適切な用量を選択することにおける
手引きが利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄ
ｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄ
ｓｈｉｒｅ，ＵＫ、Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  
Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ、Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａ
ｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒ
ｋ，ＮＹ、Ｂａｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４
８：６０１−６０８、Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ
．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３、Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎｅ
ｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２、Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅ
ｔ  ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９、Ｇｈ
ｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２
、Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１
５９４−１６０２を参照されたい）。
【０３０６】
適切な用量の決定は、例えば、処置に影響を与えることが当技術分野において既知であ
るかまたは疑われるパラメータまたは因子を使用して、臨床医によって行われる。一般に
、用量は、最適用量より幾分少ない量で始まり、その後、任意の負の副作用に対して所望
のまたは最適な効果が達成されるまで少しずつ増加させる。重要な診断手段は、例えば、
炎症の症状または産生される炎症性サイトカインのレベルのものを含む。一般に、使用さ
れることになる生物製剤は、処置の標的とされる動物と同じ種に由来し、それによって試
薬に対する任意の免疫応答を最小化することが望ましい。例えば、ヒト対象の場合、ヒト
化抗体および完全ヒト抗体が望ましいことがある。
【０３０７】
本明細書で開示された抗体またはその抗原結合断片（例えば、抗体１３１Ａおよびその
ヒト化バージョン）は、連続輸注によって、例えば、毎日、週１〜７回、毎週、隔週、毎
月、隔月、四半期毎、半年毎、毎年などに投与される用量によって提供され得る。用量は
、例えば、静脈内に、皮下に、局所的に、経口的に、経鼻的に、直腸的に、筋肉内に、脳
内に、脊髄内に、または吸入によって提供され得る。毎週の総用量は、一般に、少なくと
も０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般的には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／
ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０
ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、
５０ｍｇ／ｋｇ以上である（例えば、Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎ
ｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４、Ｈｅｒｏｌｄ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）
Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８、Ｌｉｕ，ｅｔ  ａｌ．（
１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６
、Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，ｅｔ  ａｌ．（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１５１−１４４を参照されたい）。用量はまた、０．１、０
．３、１、３、１０、３０、１００、３００μｇ／ｍｌ以上などの、対象の血清中の抗Ｃ
Ｄ２７抗体の所定の標的濃度を達成するために提供され得る。他の実施形態では、本発明
の抗ＣＤ２７抗体は、１０、２０、５０、８０、１００、２００、５００、１０００、ま
たは２５００ｍｇ／対象で、毎週、隔週、「４週間毎に」、毎月、隔月、または四半期毎
に、例えば、皮下にまたは静脈内に投与される。
【０３０８】
本明細書で使用する場合、「有効量」という用語は、細胞、組織、または対象に単独で
または追加の治療薬と組み合わせて投与される場合に、疾患、例えば、がんの1以上の症
状またはがんの進行における測定可能な改善を引き起こすのに有効である本発明の抗ＣＤ
２７またはその抗原結合断片（例えば、抗体１３１Ａおよびそのヒト化バージョン）の量
を表す。有効用量は、さらに、症状の少なくとも部分的な回復、例えば、腫瘍の縮小また
は消失、腫瘍成長の欠如、生存期間の増加をもたらすのに十分な抗体または断片の量を表
す。単独で投与される個々の活性成分に適用される場合、有効用量は、その成分単独を表
す。組合せに適用される場合、有効用量は、組み合わせて投与されるか、連続的に投与さ
れるか、または同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす活性成分の組み合
わせられた量を表す。治療薬の有効量は、少なくとも１０％、通常少なくとも２０％、好
ましくは少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なく
とも５０％の診断尺度またはパラメータの改善をもたらすことになる。主観的尺度が疾患
重症度を評価するために使用される場合、有効量は、主観的尺度の改善ももたらし得る。
【０３０９】
キット
本明細書で考察される薬学的に許容される担体および／または治療薬を含む（これらに
限定されない）１つ以上の追加の構成要素と共同して本明細書で考察される抗ＣＤ２７抗
体または抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａまたはそのヒト化バージョン）を含む（これ
らに限定されない）１つ以上の構成要素を含むキットがさらに提供される。抗体もしくは
断片および／または治療薬は、純粋な組成物としてまたは薬学的に許容される担体と組み
合わせて、医薬組成物中に製剤化され得る。
【０３１０】
一実施形態では、キットは、１つの容器（例えば滅菌ガラスまたはプラスチックバイア
ル中）中に、本発明の抗ＣＤ２７抗体もしくはその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａま
たはそのヒト化バージョン）またはその医薬組成物を含み、および／または別の容器（例
えば滅菌ガラスまたはプラスチックバイアル中）中に治療薬およびその医薬組成物を含む
。
【０３１１】
別の実施形態では、キットは、場合により医薬組成物中単一の共通の容器中で、薬学的
に許容される担体と共に本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えばヒト化
１３１Ａ）を、場合により一緒に製剤化された１つ以上の治療薬と組み合わせて含む本発
明の組合せを含む。
【０３１２】
キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、キットは、そのような投
与を行うためのデバイスを含み得る。例えば、キットは、１以上の皮下注射針または上記
のような他の注入デバイスを含み得る。
【０３１３】
キットは、キット中の医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含み得る。
一般に、そのような情報は、患者および医師が同封の医薬組成物および剤形を効果的かつ
安全に使用するのを助ける。例えば、本発明の組合せに関する以下の情報、薬物動態学、
薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌、警告、注意、有害反応
、過剰投与、適正な投与量および投与、どのように供給されたか、適切な保管条件、参考
文献、製造業者／販売者情報ならびに特許情報が添付文書で提供され得る。
【０３１４】
検出キットおよび治療キット
便宜上、本発明の抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結合断片（例えば抗体１３１Ａおよび
そのヒト化バージョン）は、キット中で、診断または検出アッセイを行うための指示書と
ともに、すなわち、所定の量の試薬のパッケージされた組合せで提供され得る。抗体また
は断片が酵素で標識されている場合、キットは、酵素が必要とする基質および補因子（例
えば、検出可能な発色団またはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含むことになる
。さらに、安定剤、緩衝液（例えば、遮断緩衝液または溶解緩衝液）などの他の添加剤が
含まれ得る。種々の試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中
の濃度を提供するために広く変えることができる。特に、試薬は、溶解時に適切な濃度を
有する試薬溶液を提供することになる賦形剤を含む、通常凍結乾燥された乾燥粉末として
提供され得る。
【０３１５】
例えば、ＥＬＩＳＡ（サンドイッチ型または競合フォーマット）などのイムノアッセイ
を含めた様々な検出アッセイにおける使用のための１つ以上のそのような試薬を含む診断
または検出試薬およびキットも提供される。キットの構成成分は、固体支持体に予め付着
されていてもよく、またはキットが使用されるときに固体支持体の表面に適用されてもよ
い。本発明のいくつかの実施形態では、シグナル発生手段は、本発明の抗体または断片と
予め共同していてもよく、または使用前に、１つ以上の成分、例えば、緩衝液、抗体−酵
素コンジュゲート、酵素基質などと組み合わせることを必要とし得る。キットは、追加の
試薬、例えば、固相表面への非特異的結合を減少させるための遮断試薬、洗浄試薬、酵素
基質なども含み得る。固相表面は、チューブ、ビーズ、マイクロタイタープレート、マイ
クロスフェア、またはタンパク質、ペプチドもしくはポリペプチドを固定化するのに適し
た他の材料の形であってもよい。特定の態様では、化学発光もしくは発色生成物の形成ま
たは化学発光もしくは発色基質の還元を触媒する酵素は、シグナル発生手段の構成成分で
ある。そのような酵素は、当技術分野においてよく知られている。キットは、本明細書で
記載された捕捉剤および検出試薬のいずれかを含み得る。場合により、キットは、本発明
の方法を行うための説明書も含み得る。
【０３１６】
バイアルまたはボトルなどの容器中にパッケージされた抗ＣＤ２７抗体（例えばヒト化
抗体）またはその抗原結合断片を含み、容器に付着またはパッケージされたラベルをさら
に含むキットも提供され、標識は、容器の内容物を説明し、本明細書に記載されている１
つ以上の病状を処置するための容器の内容物の使用に関する指示書および／または教示書
を提供する。
【０３１７】
一態様では、キットは、がんを処置するためのものであり、抗ＣＤ２７抗体（例えばヒ
ト化抗体）またはその抗原結合断片およびさらなる治療薬またはワクチンを含む。キット
は、場合により非経口、例えば、静脈内投与のためのシリンジをさらに含み得る。別の態
様では、キットは、抗ＣＤ２７抗体（例えばヒト化抗体）またはその抗原結合断片、およ
び、ワクチンもしくはさらなる治療薬との抗体または断片の使用を説明する、容器に付着
されたまたはパッケージされたラベルを含む。さらに別の態様では、キットは、ワクチン
またはさらなる治療薬、および、抗ＣＤ２７抗体または断片とのワクチンまたはさらなる
治療薬の使用を説明する容器に付着されたまたはパッケージされたラベルを含む。ある実
施形態では、抗ＣＤ２７抗体およびワクチンまたはさらなる治療薬は、別個のバイアル中
にあるか、または同一医薬組成物中で一緒に組み合わせられている。上記の腫瘍ワクチン
に加えて、感染性疾患のためのワクチン、例えば、ＣＯＭＶＡＸ（登録商標）、Ｍ−Ｍ−
Ｒ（登録商標）ＩＩ、Ｐｅｄｖａｘ  ＨＩＢ（登録商標）、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ（登録商
標）２３、ＰｒｏＱｕａｄ（登録商標）、ＲｏｔａＴｅｑ（登録商標）、ＶＡＲＩＶＡＸ
（登録商標）、およびＺＯＳＴＡＶＡＸ（登録商標）が抗ＣＤ２７抗体またはその抗原結
合断片と組み合わせて使用され得る。
【０３１８】
併用療法の項で考察されたように、２つの治療薬の同時投与は、それらの薬剤がそれら
の治療効果を発揮している期間に重複がある限り、薬剤が同時にまたは同じ経路によって
投与されることを要求しない。異なる日または週での投与のように、同時または連続投与
が意図される。
【０３１９】
本明細書で開示された治療キットおよび検出キットは、本明細書で開示された抗体、ペ
プチド、抗原結合断片またはポリヌクレオチドの少なくとも１つ、および検出試薬または
治療薬として組成物を使用するための説明書を含むように調製され得る。そのようなキッ
トにおける使用のための容器は、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル
、シリンジまたは他の適した容器を典型的に含み、（１つ以上の）検出および／または治
療組成物の１つ以上がその中に配置され得、好ましくは適切に小分けされる。第２の治療
薬も提供される場合、キットは、この第２の検出および／または治療組成物がその中に配
置され得る第２の別個の容器も含有し得る。
【０３２０】
或いは、複数の化合物が単一の医薬組成物に調製され得、バイアル、フラスコ、シリン
ジ、ボトル、または他の適した単一容器などの単一容器手段にパッケージされ得る。本明
細書で開示されたキットは、例えば、所望の（１つ以上の）バイアルが保持される射出ま
たは吹込成形プラスチック容器などの（１つ以上の）バイアルを商業的販売のために密接
に封じ込めて含有するための手段も典型的に含むことになる。放射標識、発色、蛍光発生
、または他のタイプの検出可能な標識または検出手段がキット内に含まれる場合、標識剤
は、検出または治療組成物自体と同じ容器で提供され得る、または代わりに、この第２の
組成物が配置され、適切に小分けされ得る第２の別個の容器手段に配置され得る。或いは
、検出試薬および標識は、単一の容器手段で調製され得、大多数の場合、キットは、商業
的販売ならびに／または好都合なパッケージングおよび送達のために（１つ以上の）バイ
アルを密接に封じ込めて含有するための手段も典型的に含むことになる。
【０３２１】
本明細書で記載された検出またはモニタリング方法を行うためのデバイスまたは装置も
提供される。そのような装置は、試料が入れられ得るチャンバーまたはチューブ、デバイ
スを通る試料の流れを方向付けるためのバルブまたはポンプを含んでもよい流体取扱シス
テム、場合により血液から血漿または血清を分離するためのフィルタ、捕捉剤または検出
試薬を添加するための混合チャンバー、および、場合により捕捉剤免疫複合体に結合した
検出可能な標識の量を検出するための検出装置を含み得る。試料の流れは、受動的（例え
ば、試料がいったん適用されるとデバイスのさらなる操作を必要としない毛管力、静水圧
、または他の力による）または能動的（例えば、機械的ポンプ、電気浸透ポンプ、遠心力
または増加した空気圧を介して発生した力の適用による）であってもまたは能動的な力と
受動的な力の組合せによってもよい。
【０３２２】
さらなる実施形態では、プロセッサ、コンピュータ可読メモリ、および、コンピュータ
可読メモリに格納されプロセッサ上で実行されて本明細書で記載された方法のいずれかを
実行するように適合されたルーチンも提供される。適したコンピューティングシステム、
環境、および／または構成の例は、パーソナルコンピュータ、サーバコンピュータ、ハン
ドヘルドまたはラップトップデバイス、マルチプロセッサシステム、マイクロプロセッサ
に基づくシステム、セットトップボックス、プログラム可能な家庭用電化製品、ネットワ
ークＰＣ、ミニコンピュータ、メインフレームコンピュータ、上記のシステムまたはデバ
イスのいずれか、または当技術分野で知られている他の任意のシステムを含む分散コンピ
ューティング環境を含む。
【０３２３】
一般的な方法
分子生物学における標準的な方法がＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｍａ
ｎｉａｔｉｓ（１９８２＆１９８９  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１  ３ｒｄ  Ｅｄ
ｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎ
ｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，
Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅ
ｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓ
ｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎ
ｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，Ｖｏｌ．
２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に記載されている
。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており
、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺
乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発
現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
【０３２４】
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含めたタンパク質
精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｕｒ
ｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，
Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０３２５】
化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の産生、タンパク質のグリコシル化
が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ
Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ
ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，
ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃ
ｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５−８９、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，
Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４−３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナ
ル抗体の産生、精製、および断片化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．（
２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．
１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｈａｒｌ
ｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓ
ｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎ
ｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、上記Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ）。リガンド／受容体相
互作用を特徴付けるための標準的な技法が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅ
ｔ  ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい
）。
【０３２６】
モノクローナル、ポリクローナル、およびヒト化抗体が調製され得る（例えば、Ｓｈｅ
ｐｅｒｄ  ａｎｄ  Ｄｅａｎ（ｅｄｓ．）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ、Ｋｏｎ
ｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ（ｅｄｓ．）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎ
ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｈａｒｌｏ
ｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  
Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３、Ｃａｒｐ
ｅｎｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅ，
ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９、Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａ
ｌ．（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８、Ｂａｃａ
ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４
；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３、
Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７
−４９９；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，３２９，５１１を参照されたい）。
【０３２７】
ヒト化の代替法は、ファージ上に提示されたヒト抗体ライブラリーまたはトランスジェ
ニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎ  ｅ
ｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４、
Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：８３７−８３９、Ｍｅ
ｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−
１５６、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．  
Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７７、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｈａｇ
ｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎ
ｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａ
ｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐ
ｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、ｄｅ  
Ｂｒｕｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３
９７−３９９）。
【０３２８】
一本鎖抗体およびダイアボディが記載されている（例えば、Ｍａｌｅｃｋｉ  ｅｔ  ａ
ｌ．（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９９：２１３−２１
８、Ｃｏｎｒａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３
４６−７３５０、Ｄｅｓｍｙｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．２７６：２６２８５−２６２９０、Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｋｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１７７−１８９、および米国特許第４，９
４６，７７８号を参照されたい）。二機能性抗体が提供される（例えば、Ｍａｃｋ，ｅｔ
ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：７０２１
−７０２５、Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：
７−１５、Ｖｏｌｋｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒ
ｉｎｇ  １４：８１５−８２３、Ｓｅｇａｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：１−６、Ｂｒｅｎｎａｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３、Ｒａｓｏ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７２：２７６２３、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２
９：１２０２−１２０７、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＥＭＢＯ  
Ｊ．１０：３６５５−３６５９、および米国特許第５，９３２，４４８号、第５，５３２
，２１０号、および第６，１２９，９１４号を参照されたい）。
【０３２９】
二重特異性抗体も提供される（例えば、Ａｚｚｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３４９３、Ｋｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１６２：６９０１、Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．７４：９１１５、Ｐａｎｄｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２７５：３８６３３、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ  
Ｃｈｅｍ．２７６：１２９９９、Ｐｒｏｐｓｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１６５：２２１４、Ｌｏｎｇ（１９９９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
７：８７５を参照されたい）。
【０３３０】
抗原の精製は、抗体の生成に必要ではない。動物が関心のある抗原を有する細胞で免疫
され得る。次いで脾細胞が免疫された動物から単離され得、その脾細胞を骨髄腫細胞株と
融合させてハイブリドーマを産生することができる（例えば、Ｍｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａ
ｌ．（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．
（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２、上記Ｐｒｅｓｔｏｎ  ｅｔ  ａ
ｌ．、Ｋａｉｔｈａｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：
５１５７−５１６４を参照されたい）。
【０３３１】
抗体は、例えば、小さい薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）にコンジュゲートされ得る。抗体は、治療、診断、キットまたは他の目的に有用であ
り、例えば、色素、放射性同位体、酵素、または金属、例えば、コロイド金に結合した抗
体を含む（例えば、Ｌｅ  Ｄｏｕｓｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４６：１６９−１７５、Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８、Ｈｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ｂｉｓｈｏｐ（１９９
９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１、Ｅｖｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．（
２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９を参照されたい）。
【０３３２】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含めたフローサイトメトリーのための方法が利用可
能である（例えば、Ｏｗｅｎｓ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒ
ｙ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａ
ｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ、Ｇｉｖ
ａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ  ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓ
ｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ、Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｆｌｏｗ
Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ
Ｊを参照されたい）。例えば、診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプ
ローブ、ポリペプチド、ならびに抗体を含む、核酸を修飾するのに適した蛍光試薬が入手
可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒ
ｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０３３３】
免疫系の組織学の標準的な方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅ
ｌｉｎｋ（ｅｄ．）（１９８６）Ｈｕｍａｎ  Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏ
ｇｙ  ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒ
ｋ，ＮＹ、Ｈｉａｔｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｃｏｌｏｒ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｈｉ
ｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，
Ｐｈｉｌａ，ＰＡ、Ｌｏｕｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂａｓｉｃ  Ｈｉｓｔｏｌｏ
ｇｙ：Ｔｅｘｔ  ａｎｄ  Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ
Ｙを参照されたい）。
【０３３４】
例えば、抗原断片、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能ドメイン、グリ
コシル化部位、および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよ
びデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登
録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、ＧＣＧ  
Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ）、ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙ
ｓｔａｌ  Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）、Ｍｅｎｎｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｂｉｏｉｎ
ｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２、Ｍｅｎｎｅ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｂ
ｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７
４２、Ｗｒｅｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒ
ａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１、ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕ
ｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１、ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照されたい）。
【０３３５】
［実施例］
実施例１：抗ＣＤ２７抗体の免疫化および選択
ＣＤ２７  ｃＤＮＡでのマウスの免疫化
抗ｈＣＤ２７抗体を産出するために、ｈＣＤ２７の全長オープンリーディングフレーム
をコードするｃＤＮＡを、ｐＣＩ−ｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、
ＷＩ）にサブクローニングした。得られたベクターの発現を、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（Ａｍｅ
ｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖ
Ａ）におけるｐＣＩ−ｎｅｏ−ｈＣＤ２７の一過性トランスフェクションおよび１０μｇ
／ｍｌマウス抗ｈＣＤ２７  ＩｇＧ１（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＃５５５４３９）
、それに続くヤギ抗マウスＩｇＧ１−ＦＩＴＣ（１：１００）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）を使用したフローサイトメトリ
ーによって確認した。
【０３３６】
製造者の指示に従って、Ｈｅｌｉｏｓ  Ｇｅｎｅ  ｇｕｎ（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕ
ｌｅｓ、ＣＡ）およびＤＮＡコーティングした金の弾丸（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、マ
ウスを遺伝子銃免疫化によって免疫した。簡単に述べると、１μｍの金粒子をｐＣＩ−ｎ
ｅｏ−ｈＣＤ２７  ｃＤＮＡならびにマウスＦｌｔ３ＬおよびマウスＧＭ−ＣＳＦ用の市
販の発現ベクターで２：１：１の比でコーティングした（どちらもＡｌｄｅｖｒｏｎ、Ｆ
ａｒｇｏ、ＮＤ製）。合計１μｇのプラスミドＤＮＡを使用して、５００μｇの金粒子を
コーティングした。
【０３３７】
具体的には、７〜８週齢のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの耳に遺伝子銃で免疫し、両耳に３
サイクルのショットを与えた。２回のＤＮＡ免疫化の後、マウス血清中の細胞ＥＬＩＳＡ
により、およそ１：４，０００の抗ｈＣＤ２７力価が検出された。細胞ＥＬＩＳＡでは、
全てのインキュベーションステップの後にＰＢＳＴ（０．０１％  Ｔｗｅｅｎ２０を有す
るＰＢＳ）での洗浄ステップを行った。親ＣＨＯ−Ｋ１またはＣＨＯ−Ｋ１．ｈＣＤ２７
細胞を組織培養プレートに播種し（４０，０００細胞／ウェル）、３７℃で終夜インキュ
ベートした。翌日、培養培地を除去し、細胞をマウス血清（の希釈物）と共に３７℃で１
時間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳＴで洗浄し、１：１，０００のヤギ抗マウ
スＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃１０３０−０５
）と共に３７℃で１時間インキュベートした。
【０３３８】
その後、細胞をＰＢＳＴで６回洗浄し、抗ｈＣＤ２７免疫反応性を１００μｌ  Ｏｐｔ
ｉＥＩＡ  ＴＭＢ基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅ、
ＮＪ）で可視化した。反応を１００μｌ  ０．５Ｍ  Ｈ２ＳＯ４で停止させ、吸光度を４
６０および６２０ｎｍで読んだ。ｈＣＤ２７に対して反応性を示したマウスを、最終４回
目の免疫をし、４日後に屠殺した。
【０３３９】
赤血球枯渇脾臓細胞集団を以前記載されたように調製した（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ
ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１５２：６９−７７、Ｓｔ
ｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．１９：１
２５−１３４）、−１４０℃で凍結させた。
【０３４０】
抗ｈＣＤ２７抗体産生Ｂ細胞の選択
抗ｈＣＤ２７抗体を産生するＢ細胞クローンを選択するために、１．５×１０７の赤血
球枯渇脾細胞を単球に関して枯渇させた。ｈＣＤ２７特異的Ｂ細胞をＴ２５フラスコ中で
密集するまで増殖した４℃または３７℃で照射（３，０００ＲＡＤ）ＣＨＯ−Ｋ１．ｈＣ
Ｄ２７トランスフェクタントに結合することによって選択した。非特異的Ｂ細胞を除去す
るために徹底的に洗浄した後、結合したＢ細胞を製造者の指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、
ｃａｔ．ｎｏ．２５２００−０５６）に従ってトリプシン処理によって回収した。次に、
Ｂ細胞をＳｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅ
ｐ．１９：１２５−１３４によって記載されたように培養した。簡単に述べると、選択さ
れたＢ細胞を９６ウェル平底組織培養プレートにおいて２００μｌ  ＤＭＥＭ  Ｆ１２／
Ｐ／Ｓ／１０％ＢＣＳの最終体積で７．５％（ｖ／ｖ）Ｔ細胞上清および５０，０００照
射（２，５００ＲＡＤ）ＥＬ−４  Ｂ５栄養細胞と混合した。
【０３４１】
８日目に、上清を上記のようにｈＣＤ２７に対する反応性に関して細胞ＥＬＩＳＡによ
ってスクリーニングした。さらに、ｈＣＤ２７反応性上清をＣＨＯ−Ｋ１細胞上に発現さ
れたマカカ・ムラッタＣＤ２７（ｍｍＣＤ２７）への結合に関して試験した。［Ｍａｃａ
ｃａ  Ｍｕｌａｔｔａ  ＣＤ２７  Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｇｉ１
０９０９５２１４］。細胞ＥＬＩＳＡでは、全てのインキュベーションステップに続いて
ＰＢＳＴ（０．０１％  Ｔｗｅｅｎ２０を有するＰＢＳ）での洗浄ステップを行った。親
ＣＨＯ−Ｋ１、ＣＨＯ−Ｋ１．ｈＣＤ２７、またはＣＨＯ−Ｋ１．ｍｍＣＤ２７細胞を組
織培養プレートに播種し（４０，０００細胞／ウェル）、３７℃で終夜インキュベートし
た。翌日、培養培地を除去し、細胞をＢ細胞上清（の希釈物）と共に３７℃で１時間イン
キュベートした。次に、細胞をＰＢＳＴで洗浄し、１：１，０００のヤギ抗マウスＩｇＧ
−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃１０３０−０５）と共に
３７℃で１時間インキュベートした。その後、細胞をＰＢＳＴで６回洗浄し、抗ｈＣＤ２
７免疫反応性を１００μｌ  ＴＭＢ  Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｈｒｏｍａｇｅｎ（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ、ｃａｔ．ｎｏ．ＳＢ０２）で可視化した。反応を１００μｌ  ０．５
Ｍ  Ｈ２ＳＯ４で停止させ、吸光度を４６０および６２０ｎｍで読んだ。
【０３４２】
続いて、ｈＣＤ２７およびｍｍＣＤ２７への結合を示した上清からの６４のＢ細胞クロ
ーンを、以下の公開された手順（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１５２：６９−７７、Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓ  ｅｔ
ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．１９：１２５−３４）に従って、ミニ
電気融合によって不死化した。具体的には、Ｂ細胞を１０６のＳｐ２／０−Ａｇ１４骨髄
腫細胞と混合し、血清をＤＭＥＭ  Ｆ１２培地で洗浄することによって除去した。細胞を
プロナーゼ溶液（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、ｃａｔ．ｎｏ．４３０８０７０．５３６）で３
分間処理し、Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ  Ｉｓｏｍｏｌａｒ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｅｐｐｅ
ｎｄｏｒｆ、ｃａｔ．ｎｏ．５３７０２）で洗浄した。５０μＬ融合チャンバー中で、３
０秒、２ＭＨｚ、４００Ｖ／ｃｍの交流電界、それに続く１０μｓ、３ｋＶ／ｃｍの方形
高電界パルス、および再び３０秒、２ＭＨｚ、４００Ｖ／ｃｍの交流電場によって、電気
融合を行った。
【０３４３】
チャンバーの内容物をハイブリドーマ選択培地に移し、限界希釈条件下で９６ウェルプ
レートに蒔いた。融合後８または９日目に、ハイブリドーマ上清を上記のようにｈＣＤ２
７反応性に関してスクリーニングした。ハイブリドーマ上清を上記のように、ＣＨＯ−Ｋ
１．ｍｍＣＤ２７またはｈＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）を発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞への結合に
ついてＣｅｌｌ−ＥＬＩＳＡ実験で試験した。さらに、ハイブリドーマ上清と抗体ｈＣＤ
２７．１５との交差競合を、均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイを使用して調べた。
抗体ｈＣＤ２７．１５は、国際公開第２０１２／００４３６７号に記載されており、寄託
受託番号ＰＴＡ−１１００８を有し、かつ配列番号３のＶＨ領域および配列番号４のＶＬ
領域を有するＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体である。（国
際公開第２０１２／００４３６７号の配列番号を参照）。このアッセイでは、０．６ｎＭ
ビオチン化ｈＣＤ２７．１５を１．２ｎＭ  ｒｈＣＤ２７−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ
ｓ、３８２−ＣＤ−１００）、１．３３ｎＭストレプトアビジン−Ｋ（アクセプター）、
および１．２５ｎＭ抗ヒトＦｃ−Ｄ２（ドナー）と共にインキュベートした。上清の段階
希釈物を添加した。ｈＣＤ２７．１５との交差競合は、ドナーからアクセプターへのエネ
ルギー移動を低下させ、デルタＦとして表される（（比６６５／６１５試料−比６６５／
６１５バックグラウンド）／比６６５／６１５バックグラウンド、ここでバックグラウン
ドは、ｒｈＣＤ２７−Ｆｃを添加しないことによって決定される）。蛍光を６１５および
６６５ｎＭでＶｉｃｔｏｒ２分光光度計（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定した。
【０３４４】
最後に、ハイブリドーマ上清をＣＤ２７シグナリングをトリガーするそれらの能力に関
して試験した。ｈＣＤ２７−ｐｃＤＮＡおよびＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構
築物で同時トランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞をハイブリドーマ上清の段階希釈物
に２４時間暴露した。ルシフェラーゼ活性をＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ  Ｈｉｇ
ｈ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｇｅｎｅ
Ａｓｓａｙシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、６０１６７５７）およびＶｉｃｔｏｒ
分光光度計（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して測定した。
【０３４５】
次に、４６のハイブリドーマを単回の限界希釈によりサブクローニングに関して選択し
た。限界希釈上清をＣＨＯ−Ｋ１．ｈＣＤ２７への結合に関してスクリーニングした後、
クローンを凍結および保存に関して選択した。上記のように、ＣＨＯ−Ｋ１．ｈＣＤ２７
への結合、ｈＣＤ２７．１５との交差競合、およびＮＦ−κＢの刺激に関する限界希釈上
清のさらなる分析は、無血清抗体産生に関する１６のハイブリドーマの選択を可能にした
。
【０３４６】
実施例２：抗ｈＣＤ２７抗体の精製および特徴付け
安定なハイブリドーマを無血清培地中で７日間培養し、上清を収集した。抗体を、製造
者の指示に従って、Ｍａｂ  Ｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ  Ｐｒｏｔ  Ａ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａ
ｌｔｈｃａｒｅ  １７−５４３８）との混合およびポリプレップクロマトグラフィーカラ
ム（ＢｉｏＲａｄ７３１−１５５０）からの溶出によって精製した。次に、抗体を、Ｚｅ
ｂａ  Ｓｐｉｎ  Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ  Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ  ８９８８９）を使用して脱塩し、ｐＨ７．４のＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中で再緩衝
し、分光光度法を使用して定量した。
【０３４７】
次いで、精製された抗体を一連の実験において特徴付けた。上記のように、それらがＣ
ＨＯ−Ｋ１．ｈＣＤ２７およびＣＨＯ−Ｋ１．ｍｍＣＤ２７に結合する能力を、Ｃｅｌｌ
−ＥＬＩＳＡによって決定した。それらがＨＴＲＦアッセイによってｈＣＤ２７．１５と
の交差競合を示したかどうか、および、それらがＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターア
ッセイにおいてＣＤ２７シグナリングを誘導することができたかどうかも調査した。さら
に、抗体がナイーブヒトＣＤ８＋Ｔ細胞に対する刺激効果を有したどうかを以下のように
試験した。手付かずのナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞をＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒトＣＤ８＋Ｔ細
胞濃縮カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  １５０６３）およびＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離を使
用してバフィーコートから単離し、続いて、本質的に製造者の指示に従って、ＢＤ  ＩＭ
ａｇ（商標）ヒトナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞濃縮キット（ＢＤ  ｃａｔ  ｎｕｍｂｅｒ５５
８５６９）を使用して、ＭＡＣＳに基づくネガティブ選択を行った。単離ＣＤ８＋Ｔ細胞
を抗ＣＤ８抗体および抗ＣＤ４５ＲＡ抗体を使用してフローサイトメトリーによって純度
およびナイーブ性に関して確認した。次に、それらを１．５×１０５細胞／ウェルの濃度
で９６ウェルプレートに播種した。細胞を、精製された抗体の段階希釈物の存在下０．１
２５μｇ／ｍｌの最終濃度での可溶性抗ＣＤ３  ｍＡｂ（ＯＫＴ−３）および１．０μｇ
／ｍｌの最終濃度での抗ＣＤ２８ｍＡｂ（Ｓａｎｑｕｉｎ、ｃｌｏｎｅ１５Ｅ８）で刺激
した。４日後、細胞の生存率をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を使用して決定し、活性化細
胞の数をフローサイトメトリーによって決定した。
【０３４８】
上記の実験で得られた結果に基づいて、ｈＣＤ２７．１３１Ａ抗体をさらなる分析のた
めに選択した。抗体ｈＣＤ２７．１３１Ａ（または「マウス親１３１Ａ」）は、配列番号
７のＶＨ領域および配列番号８のＶＬ領域を有するマウスＩｇＧ１抗体である。
【０３４９】
実施例３：ｈＣＤ２７（Ａ５９Ｔ）およびｍｍＣＤ２７に対する抗体ｈＣＤ２７．１５
の親和性
以前に、アゴニストｈＣＤ２７．１５抗体を国際公開第２０１２／００４３６７号に記
載されているように単離した。ｈＣＤ２７．１５をヒト化して、ｈＣＤ２７．１５−６Ｂ
（同一のＣＤＲ領域を有する国際公開第２０１２／００４３６７号からのｈＣＤ２７．１
５のヒト化バージョン、配列番号２４および２５）およびキメラｈＣＤ２７．１５−ｃ４
（マウスｈＣＤ２７．１５可変領域およびヒトＩｇＧ４定常領域、配列番号２２および２
３）を産生した。それぞれ図１および２に示されるように、ｈＣＤ２７．１５抗体のこれ
らのバージョンは、ｈＣＤ２７において頻繁に生じるＳＮＰ（Ａ５９Ｔ）に結合せず、か
つカニクイザルＣＤ２７（本明細書でＭｍＣＤ２７またはマカカ・ムラッタＣＤ２７とも
称される）に結合しない。対照的に、抗体ｈＣＤ２７．１３１Ａは、ｈＣＤ２７（Ａ５９
Ｔ）において頻繁に発生するＳＮＰおよびカニクイザルＣＤ２７の両方に結合するように
特異的に選択された。
【０３５０】
実施例４：ｈＣＤ２７．１３１Ａ抗体のヒト化
本明細書に記載の方法を使用してマウスｈＣＤ２７．１３１Ａ抗体をヒト化した。マウ
スｈＣＤ２７．１３１Ａ抗体から、以下のヒト化可変重鎖、１３１ＡＶＨ６、１３１ＡＶ
Ｈ７、１３１ＡＶＨ８、１３１ＡＶＨ９（配列番号１０〜１３）を構築し、以下のヒト化
可変軽鎖、１３１ＡＶＬ６、１３１ＡＶＬ７、１３１ＡＶＬ８、１３１ＡＶＬ９（配列番
号１５〜１８）を構築した。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４定常領域のいずれか
を有する抗体１３１ＡＶＨ６ＶＬ６、１３１ＡＶＨ６ＶＬ７、１３１ＡＶＨ６ＶＬ８、１
３１ＡＶＨ７ＶＬ６、１３１ＡＶＨ７ＶＬ７、１３１ＡＶＨ７ＶＬ８、１３１ＡＶＨ８Ｖ
Ｌ６、１３１ＡＶＨ８ＶＬ７、１３１ＡＶＨ８ＶＬ８、および１３１ＡＶＨ９ＶＬ９を調
製した。
【０３５１】
実施例５：細胞表面ＣＤ２７への結合
１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１および１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ２抗体を、
ＣＨＯ−ＥＸＰ１細胞またはＨＥＫ２９３ＥＸＰ１細胞において発現させた。１Ｆ５  ｈ
ＩｇＧ１（または「１Ｆ５」、または「１Ｆ５ＩｇＧ１」は、米国特許第２０１１／０２
７４６８５号における１Ｆ５の可変領域を有する）をＨＥＫ２９３ＥＸＰ１細胞において
発現させた。精製された抗体を、細胞に基づくＥＬＩＳＡフォーマットを使用して、ヒト
ＣＤ２７発現ＣＨＯＫ１細胞、ヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔ発現ＣＨＯＫ１細胞への結合、お
よびアカゲザルＣＤ２７発現ＣＨＯＫ１細胞への交差反応性に関してアッセイした。ヒト
ＣＤ２７発現ＣＨＯＫ１細胞、ヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔ発現ＣＨＯＫ１細胞、およびアカ
ゲザルＣＤ２７発現ＣＨＯＫ１細胞を、５０μｌのＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０％ＢＣＳおよ
びゲンタマイシン（ＣＨＯ−Ｋ１培地）において９６ウェル組織培養プレートに蒔いた。
細胞を、アッセイの２日前に２×１０４細胞／ウェルでまたはアッセイの１日前に４×１
０４細胞／ウェルでのいずれかで蒔いた。培地をアッセイの前にウェルから除去し、続い
て１０μｇ／ｍＬの出発濃度および８ステップ１：４段階希釈での１００μＬの新鮮な培
養培地におけるｍＡｂのインキュベーションを行った。抗体を室温で３０〜６０分間イン
キュベートし、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５ｘ  Ｓｅｌｅｃｔ  ＣＷプレートウォッシャー
上で細胞ＥＬＩＳＡ洗浄プロトコールを使用してＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０で
３回洗浄した。５０マイクロリットルの検出抗体（ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇ
Ｇ（Ｊａｃｋｓｏｎ、ｃａｔ＃１０９−０３６−０９８））をＣＨＯ−Ｋ１培地中１：５
０００希釈で添加し、室温で３０〜６０分間インキュベートした。アッセイプレートを上
記のように洗浄し、ＴＭＢで発色させ、ＴＭＢ停止溶液（ＫＰＬ  ｃａｔ＃５０−８５−
０６）または０．１Ｎリン酸で停止させた。プレートを４５０ｎｍ／６５０ｎｍでＭｏｌ
ｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＶｅｒｓａＭａｘプレートリーダー上で読んだ。滴定曲
線を使用して、最大半量有効濃度（ＥＣ５０）を決定した。
【０３５２】
ヒト健常志願者からの血液を、Ｋ２−ＥＤＴＡを含有するチューブ（ＢＤバキュテナー
、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号３６７８６３）中にＰａｌｏ  Ａｌｔｏ
献血者プログラムの一部として回収した。アカゲザルからの血液をＢｉｏｒｅｃｌａｍａ
ｔｉｏｎでＫ２−ＥＤＴＡを含有するチューブ（ＢＤバキュテナー、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ、カタログ番号３６７８６３）に回収し、穏やかに反転させ、４℃で保存し、
４℃で終夜Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌ
ｔｏ、ＣＡに輸送した。受領時に、血液に溶解または凝固の明らかな徴候がないことを視
覚的に確認した。１００マイクロリットルの血液を、暗所において４℃で３０分間、表現
型抗体および試験抗体または対照抗体の示された濃度とのカクテルと共に９６ウェルブロ
ック（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３９６０）中でインキュベートした。次いで、赤血球
（ＲＢＣ）を５分間の１．７ｍＬのＡｍｍｏｎｉｕｍ−Ｃｈｌｏｒｉｄｅ−Ｐｏｔａｓｓ
ｉｕｍ赤血球溶解溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ａ１０４９
２−０１）でのインキュベーションによって溶解させた。溶解ステップを２ｍｌのＡＣＫ
溶解溶液、次いで、再び３００ｍｌのＡＣＫ溶解溶液でもう一度繰り返した。次いで、細
胞を１．７ｍｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＨ３０
０２８．０２）を添加した後に洗浄した。次いで、細胞を０．１μＬのＦｉｘａｂｌｅ  
Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｙｅ  ｅＦｌｕｏｒ５０６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ
番号６５−０８６６−１８）を含有する１００μＬのＰＢＳに再懸濁し、暗所で４℃にて
３０分間インキュベートした。標識細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｈｙｃｌｏ
ｎｅ、カタログ番号ＳＨ３００２８．０２）中に２％ウシ胎仔血清（ＳＡＦＣ、カタログ
番号１２１０３Ｃ）および２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カ
タログ番号１５５７５−０３８）を含有する２ｍＬの染色緩衝液（ＳＢ）に再懸濁するこ
とによって洗浄し、続いて１３００ｒｐｍで５分間遠心分離した。記載されているように
ＳＢを用いて洗浄ステップを繰り返し、次いで、ＰＢＳ中の１％パラホルムアルデヒド（
Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１５７１０
）での暗所で４℃、１５分間のインキュベーションによって固定した。ＳＢにおける最後
の洗浄後、試料をハイスループットサンプラーを使用してＬＳＲ−Ｆｏｒｔｅｓｓａフロ
ーサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）において取得し、ＦｌｏｗＪｏソフ
トウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ  Ｉｎｃ）によってデータを分析した。
【表３】
2020114241.tif 000005
【０３５３】
トランスフェクトＣＨＯ細胞（ｃＥＬＩＳＡ）または初代Ｔ細胞（フローサイトメトリ
ー）上の細胞表面ヒトＣＤ２７への結合に関するＥＣ５０は、１Ｆ５−ｈＩｇＧ１と比較
して１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１に関して約４倍低かった（表３）。
【０３５４】
ヒト化１３１Ａ−ｈＩｇＧ１および１３１Ａ−ｈＩｇＧ４変異抗体を、ＣＨＯ−ＥＸＰ
１細胞またはＨＥＫ２９３ＥＸＰ１細胞において発現させた。精製された抗体を細胞に基
づくＥＬＩＳＡフォーマットを使用してヒトＣＤ２７発現ＣＨＯＫ１細胞への結合に関し
てアッセイした。ヒトＣＤ２７発現ＣＨＯＫ１細胞を、５０μｌのＤＭＥＭ／Ｆ１２、１
０％ＢＣＳ（仔ウシ血清）（ＣＨＯ−Ｋ１培地）において９６ウェル組織培養プレートに
蒔いた。細胞をアッセイの２日前に２×１０４細胞／ウェルでまたはアッセイの１日前に
４×１０４細胞／ウェルでのいずれかで蒔いた。培地をアッセイの前にウェルから除去し
、続いて１０μｇ／ｍＬの開始濃度および８ステップ１：５段階希釈（ｈＩｇＧ４抗体）
または５０μｇ／ｍＬの開始濃度でおよび８ステップ１：５段階希釈（ｈＩｇＧ１抗体）
での１００μＬの新鮮な培養培地におけるｍＡｂのインキュベーションを行った。抗体を
室温で３０〜６０分間インキュベートし、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５ｘ  Ｓｅｌｅｃｔ  
ＣＷプレートウォッシャー上で細胞ＥＬＩＳＡ洗浄プロトコールを使用してＰＢＳ／０．
０５％  Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。５０マイクロリットルの検出抗体（ＨＲＰコン
ジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｃａｔ＃２０１４−
０５））をＣＨＯ−Ｋ１培地中１：２０００希釈で添加し、室温で３０〜６０分間インキ
ュベートした。アッセイプレートを上記のように洗浄し、ＴＭＢで発色させ、ＴＭＢ停止
溶液（ＫＰＬ  ｃａｔ＃５０−８５−０６）または０．１Ｎリン酸で停止させた。プレー
トを４５０ｎｍ／６５０ｎｍでＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭ
ａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４プレートリーダー上で読んだ。滴定曲線を使用して、最大半量有
効濃度（ＥＣ５０）を決定した。
【表４】
2020114241.tif 000006
【０３５５】
全てのヒト化１３１Ａ−ｈＩｇＧ１および１３１Ａ−ｈＩｇＧ４変異体抗体が、トラン
スフェクトＣＨＯ細胞上の細胞表面ヒトＣＤ２７への結合に関するＥＣ５０（ｃＥＬＩＳ
Ａ）が１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１に関するＥＣ５０の２倍以内を有した一方（表
４）、１Ｆ５−ｈＩｇＧ１に関するＥＣ５０は、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１と比
較して約４倍高かった（表３）。
【０３５６】
ヒト健常志願者からの血液をスタンフォード血液センターからのバフィーコートとして
得、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ−Ｐｌａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅ
ａｌｔｈｃａｒｅ、＃１７−１４４０−０３）を使用して密度遠心分離によって単離した
。次いで、ＰＢＭＣ画分中の残りの赤血球（ＲＢＣ）を２ｍＬのＡｍｍｏｎｉｕｍ−Ｃｈ
ｌｏｒｉｄｅ−Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ（ＡＣＫ）赤血球溶解溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ、＃Ａ１０４９２−０１）での室温で５分間のインキュベーションによって
溶解し、次いで、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の２％ウシ胎仔血清（ＳＡＦＣ、＃１２
１０３Ｃ）および２ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃１５５７
５−０３８）を含有する１０ｍＬの染色緩衝液（ＳＢ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ、＃ＳＨ３００
２８．０２）中で洗浄し、続いて３００ｇで５分間遠心分離した。次いで、細胞をＶｉｃ
ｅｌｌ自動細胞計数器（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ＃３８３５５６）を使用して計
数し、ウェルあたり２×１０５細胞をＵ底９６ウェルプレートに分配した。次いで、細胞
を０．１μＬのＦｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｙｅ  ｅＦｌｕｏｒ５０６（ｅ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、＃６５−０８６６−１８）を含有する１００μＬのＰＢＳに再懸
濁し、暗所で４℃にて３０分間インキュベートした。標識細胞を１５０μｌの染色緩衝液
（ＳＢ）に再懸濁することによって洗浄し、続いて３００ｇで５分間遠心分離した。次い
で、細胞を様々な濃度での一次抗ＣＤ２７抗体を含有する１００μｌのＳＢに再懸濁し、
暗所で４℃で３０分間インキュベートし、続いて前述のように洗浄および遠心分離ステッ
プを行った。次に、細胞を、ヒト化抗ＣＤ２７クローンを検出するために二次マウス抗ヒ
トＩｇＧ１抗体ＰＥコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  ｂｉｏｔｅｃｈ＃ＨＰ６００１
）、または親マウス抗ＣＤ２７抗体を検出するためにロバ抗マウスＡｌｅｘａ５５５（Ｔ
ｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ＃Ａ−３１５７０）で染色した。細胞を暗所で４℃で３０分間イ
ンキュベートし、続いて洗浄および遠心分離ステップを行った。次に、細胞を表面マーカ
ーに関する表現型抗体のカクテル（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１ｂ）で染色し、暗
所で４℃で３０分間インキュベートし、続いて洗浄および遠心分離ステップを行った。最
後に、細胞を１００μｌのＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ＃５５
４６５５）での暗所で４℃で１０分間のインキュベーションによって固定し、続いて洗浄
および遠心分離ステップを行った。試料をハイスループットサンプラーを使用してＬＳＲ
−Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）において取
得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ  Ｉｎｃ）によってデータを分析
した。
【表５】
2020114241.tif 000007
【０３５７】
全てのヒト化１３１Ａ−ｈＩｇＧ１変異体抗体が、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１
に関するＥＣ５０に匹敵する（１０％以内）またはそれより低い初代Ｔ細胞（フローサイ
トメトリー）への結合に関するＥＣ５０を有した一方（表５）、１Ｆ５−ｈＩｇＧ１に関
するＥＣ５０は、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１と比較して約５倍高かった（表３）
。
【０３５８】
実施例６：ヒトＣＤ２７組換えタンパク質への抗ＣＤ２７抗体の結合に関する親和性決
定
抗ヒトＣＤ２７抗体１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１および１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−
ｈＩｇＧ２の動態学的結合活性を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００システム（Ｂｉａｃｏｒｅ
、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して表面プラズモ
ン共鳴によって測定した。約４００ＲＵのヒトＣＤ２７−Ｆｃ融合タンパク質、約２００
０ＲＵのヒトＣＤ２７  Ａ５９Ｔ−Ｆｃ融合タンパク質または約３００ＲＵのアカゲザル
（ｒｈｅｓｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）ＣＤ２７−Ｆｃ融合タンパク質を、アミンカップリン
グ化学を介してＳｅｒｉｅｓ  Ｓ  ＣＭ５センサーチップ、カタログ番号ＢＲ−１００５
−３０上に固定化した。ＨＢＳ−ＥＰ＋緩衝液（ＢＲ−１００６−６９）を５０μＬ／ｍ
ｉｎの流速でランニング緩衝液として使用した。４．１ｎＭ〜４００ｎＭの範囲の様々な
濃度の１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１および１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ２を抗
原表面上に注入した。抗体注射は１８０秒間続き、注射後、解離を９００秒間モニターし
た。各注入サイクル後、抗原表面を３Ｍ  ＭｇＣｌ２の３０秒間の注入で再生した。
【０３５９】
ブランク表面からの応答および緩衝液注入からの応答を差し引くことによってセンソグ
ラムを「二重参照」し、会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）の速度定数、ならびに平衡解離
定数ＫＤを分析するために使用した。生じたデータセットに、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００
評価ソフトウェア（バージョン２．０）を使用して１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ  Ｂｉｎｄ
ｉｎｇ  Ｍｏｄｅｌを適合させた。表６は、ヒトＣＤ２７−Ｆｃ融合タンパク質、ヒトＣ
Ｄ２７  Ａ５９Ｔ−Ｆｃ融合タンパク質およびアカゲザルＣＤ２７−Ｆｃ融合タンパク質
に対する抗ヒトＣＤ２７抗体の親和性を要約する。
【表６】
2020114241.tif 000008
【０３６０】
Ｂｉａｃｏｒｅ  ４０００システム（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、
Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を行って、
Ｈｉｓ９Ｇタグ付きヒトおよびカニクイザルＣＤ２７組換えタンパク質（配列番号６９と
して開示された「Ｈｉｓ９Ｇ」）（ＨＥＫ２９３細胞の院内の一過性プラスミドトランス
フェクション）に対するヒト化抗ＣＤ２７．１３１Ａ  ｈＩｇＧ１およびｈＩｇＧ４変異
体の動態学的結合活性を決定した。Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ／Ｂ
ｉａｃｏｒｅ、Ｃａｔ＃ＢＲ−１００５−３０）の表面を製造者のプロトコールに従って
マウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｐｔｕｒｅキッ
ト、ＧＥ／Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｃａｔ＃ＢＲ−１００８−３９）のアミンカップリングによ
って調製し、約９０００ＲＵの固定化抗体を産生した。アッセイをろ過および脱気したＨ
ＢＳ−ＥＰ＋ランニング緩衝液、ｐＨ７．４（ＧＥ／Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｃａｔ＃１００６
−６９）中、２５℃で行った。抗ＣＤ２７．１３１Ａキメラおよび変異体を１０μＬ／分
の流速で１２０秒間、６．６ｎＭ（１μｇ／ｍｌ）で捕捉した。抗ヒトＦｃ抗体で修飾さ
れているがＣＤ２７抗体を欠いているフローセルスポットを参照として使用した。Ｈｉｓ
９Ｇタグ付きヒトまたはカニクイザルＣＤ２７タンパク質（配列番号６９として開示され
る「Ｈｉｓ９Ｇ」）の５点２倍希釈系列（３．１３ｎＭ〜５０ｎＭ）を、３０μＬ／分で
１８０秒間抗体表面上に注入し（会合段階）、続いて６００秒間の緩衝液フロー（解離段
階）を行った。チップ表面を各注入サイクルの後、３Ｍ  ＭｇＣｌ２の３０秒間の注入で
再生した。
【０３６１】
ブランク表面からの応答および緩衝液注入からの応答を差し引くことによってデータを
二重参照し、会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）の速度定数、ならびに平衡解離定数ＫＤを
分析するために使用した。生じたデータセットに、Ｂｉａｃｏｒｅ  ４０００  ＢＩＡｅ
ｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン１．０（ＧＥ／Ｂｉａｃｏｒｅ）を使用して
Ｌａｎｇｍｕｉｒ１：１結合モデルを適合させた。表７は、ヒトおよびカニクイザルＣＤ
２７／Ｈｉｓタンパク質に対するヒト化抗ＣＤ２７．１３１Ａ  ｈＩｇＧ１およびｈＩｇ
Ｇ４変異体の親和性を要約する。
【表７】
2020114241.tif 000009
【０３６２】
実施例７：マウス腫瘍モデルにおける１Ｆ５−ｈＩｇＧ１と比較した１３１ＡＶＨ６Ｖ
Ｌ６−ｈＩｇＧ１の抗腫瘍活性
マウスＣＤ２７遺伝子の細胞外ドメインをヒトＣＤ２７遺伝子の細胞外ドメインと交換
し、続いて１４４９  ＳＮＰ分析が９７．９５％〜９８．９９％のＣ５７ＢＬ／６レシピ
エントゲノムを示すまでＣ５６ＢＬ６／Ｊバックグラウンドへ戻し交配することによって
、マウス：Ｂ６．Ｃｇ−Ｃｄ２７ｔｍ１（ＣＤ２７）Ｊｂｏ／Ｔａｃマウス（ｈｕＣＤ２
７ＫＩマウス）を作製した。平均体重２０．３グラム（１７．５〜２３．５グラムの範囲
）の約８〜１２週齢のメスｈｕＣＤ２７ＫＩマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ）で維持されているＭｅｒｃｋ繁殖コロニーから得
た。従来の飼料および水を自由に摂取させた。
【０３６３】
抗体試薬：モノクローナル抗体を、凍結（−８０℃）ストックとして内部供給源から入
手した。１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１抗体および１Ｆ５−ｈＩｇＧ１を組換え細胞
株によって産生した。マウスＩｇＧ２ａアイソタイプ対照（アイソタイプ対照）をハイブ
リドーマ細胞培養物から産生したが、感染性滑液嚢病ウイルスＶＰ２−４−３＿ＧＶに特
異的であった。
【０３６４】
抗体試薬の製剤：製剤緩衝液は、タンパク質を安定化し沈殿を防ぐために、各抗体に特
異的であった。製剤は、以下の通り、アイソタイプ対照：２０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％
スクロース、ｐＨ５．５、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１：２０ｍＭ酢酸ナトリウム
、９％スクロース、ｐＨ５．５、１Ｆ５−ｈＩｇＧ１：１０ｍＭリン酸ナトリウム＋７５
ｍＭ  ＮａＣｌ＋３％スクロース、ｐＨ７．４であった。
【０３６５】
腫瘍細胞株の調製および移植：ＭＣ３８は、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウス結腸腺癌に由来す
る細胞株である。凍結ストックからのＭＣ３８細胞を、空気中５％ＣＯ２の雰囲気中で３
７℃で１０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｃａｔ．ＳＨ３００８８．０３）を補充し
たＤＭＥＭ培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ  Ｃａｔ．１０−０１３ＣＶ）中の単層培養物としてイ
ンビトロで維持した。１×１０６対数期およびサブコンフルエントなＭＣ３８細胞を、各
マウスの右後側腹部の１００μＬ容量のＤＭＥＭ基本培地に皮下（ＳＣ）注入した。マウ
スを最初に移植に使用されるであろう領域において、電子バリカンで剃毛した。
【０３６６】
腫瘍測定および体重：腫瘍を最初の投与の前日およびその後週に２回測定した。腫瘍の
長さおよび幅を電子ノギスを使用して測定し、腫瘍体積を、
式  体積（ｍｍ３）＝０．５×長さ×幅２、ここで長さはより長い寸法である、
を使用して決定した。マウスの体重を定期的に量り、一般的な健康状態をモニターした。
処置前にマウスの体重を量り、個々のマウスからの腫瘍を測定した。偏りを防ぐために、
体重または腫瘍体積による異常値を取り除き、残りのマウスを同等の平均腫瘍サイズを有
する処置群に分配した。ＭＣ３８腫瘍を有するマウスの平均腫瘍体積が移植後約５日で約
８５ｍｍ３（範囲７０〜１００ｍｍ３）に達したとき、投薬を開始した。動物に下記のよ
うに抗体を投与した。
【０３６７】
投薬溶液の調製、投与、および分析：動物モデルで試験される抗体の凍結ストックを融
解し、ぬれた氷に移した。凍結融解が繰り返されるのを避けるために、ストックの各バイ
アルを１回融解し、４℃で保存した。融解したら、抗体を１ヶ月以内に使用した。各投薬
前に、各抗体のストック溶液を適切な希釈剤中で公称濃度に希釈し直ちに投与した。投薬
溶液のアリコートをドライアイス中で急速凍結させ、分析まで−８０℃で保存した。電気
化学発光検出とパターン化アレイの組合せである投薬溶液をマルチアレイ技術に基づくＭ
ｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ（登録商標）、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、
ＭＤ）プラットフォームを使用して評価した。
【０３６８】
投薬および結果：ＭＣ３８腫瘍を有するｈｕＣＤ２７ノックインマウスに、５ｍｇ／ｋ
ｇの用量で、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１、１Ｆ５−ｈＩｇＧ１、またはアイソタ
イプ対照を、３〜４日毎に合計７回の用量で腹腔内投与した。投薬後、動物をモニターし
続け、腫瘍体積を週に２回測定した。図４に示される結果によって実証されるように、１
３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１に対する抗腫瘍応答は、１Ｆ５−ｈＩｇＧ１に対する抗
腫瘍応答よりも大きかった。
【０３６９】
実施例８：マウス腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた１３１ＡＶＨ６Ｖ
Ｌ６−ｈＩｇＧ１の抗腫瘍活性
マウス：平均体重２１．２１グラム（１８．０６〜２３．２１グラムの範囲）の約１０
〜１３週齢のメスＢ６．Ｃｇ−Ｃｄ２７ｔｍ１（ＣＤ２７）Ｊｂｏ／Ｔａｃ（ｈｕＣＤ２
７ＫＩ）マウスをＴａｃｏｎｉｃ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＮＹ
）で維持されている繁殖コロニーから得た。従来の飼料および水を自由に摂取させた。
【０３７０】
抗体試薬：モノクローナル抗体を凍結（−８０℃）ストックとして内部供給源から入手
した。１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１および抗マウスＰＤ−１マウスＩｇＧ１抗体（
ｍｕＤＸ４００）を組換え細胞株によって産生した。アイソタイプ対照は、伝染性滑液嚢
病ウイルスＶＰ２−４−３＿ＧＶに特異的なマウスＩｇＧ２ａであり、ハイブリドーマ細
胞培養物から産生した。
【０３７１】
抗体試薬の製剤：全ての抗体を、タンパク質を安定化し、沈殿を防ぐために、２０ｍＭ
酢酸ナトリウム、９％スクロース、ｐＨ５．５中で製剤化した。
【０３７２】
腫瘍細胞株の調製および移植：ＭＢ４９は、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウス膀胱癌に由来する
腫瘍細胞株である。凍結ストックからのＭＢ４９細胞を空気中５％ＣＯ２  の雰囲気中で
３７℃で１０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｃａｔ．ＳＨ３００８８．０３）を補充
したＤＭＥＭ培地（Ｃｅｌｌｇｒｏ  Ｃａｔ．１０−０１３ＣＶ）中の単層培養物として
インビトロで維持した。５×１０５対数期およびサブコンフルエントなＭＢ４９細胞を各
マウスの右後側腹部の１００μＬ容量のＤＭＥＭ基本培地に皮下（ＳＣ）注入した。マウ
スを最初に移植に使用されるであろう領域において、電子バリカンで剃毛した。
【０３７３】
腫瘍測定および体重：腫瘍を最初の投与の前日およびその後週に２回測定した。腫瘍の
長さおよび幅を、電子ノギスを使用して測定し、腫瘍体積を、
式  体積（ｍｍ３）＝０．５×長さ×幅２、ここで長さはより長い寸法である、
を使用して決定した。マウスの体重を定期的に量り、一般的な健康状態をモニターした。
処置前に、マウスの体重を量り個々のマウスからの腫瘍を測定した。偏りを防ぐために、
体重または腫瘍体積による異常値を取り除き、残りのマウスを同等の平均腫瘍サイズを有
する処置群に分配した。ＭＢ４９腫瘍を有するマウスの平均腫瘍体積が移植後約７日で約
９１．５６ｍｍ３（範囲８０．９４〜１０２．８９ｍｍ３）に達したとき投薬を開始した
。動物に下記のように抗体を投与した。
【０３７４】
投薬溶液の調製、投与、および分析：動物モデルで試験される抗体の凍結ストックを融
解し、ぬれた氷に移した。凍結融解が繰り返されるのを避けるために、ストックの各バイ
アルを１回融解し、アリコートを１回の使用に十分な量にした。ポリプロピレン、低接着
性チューブをこの目的のために使用した。アリコートをドライアイス中で急速凍結し、−
８０℃で保存した。各投薬前に、１つのアリコートを融解し、適切な希釈剤中で公称濃度
に希釈し、直ちに投与した。投薬溶液のアリコートをドライアイス中で急速凍結させ、分
析まで−８０℃で保存した。投薬溶液を、電気化学発光検出とパターン化アレイの組合せ
であるマルチアレイ技術に基づくＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ（
登録商標）、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）プラットフォームを使用して評価した。
【０３７５】
投与および結果：ＭＢ４９腫瘍を有するｈｕＣＤ２７  ＫＩマウスに１３１ＡＶＨ６Ｖ
Ｌ６−ｈＩｇＧ１、ｍｕＤＸ４００、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１＋ｍｕＤＸ４０
０、またはアイソタイプ対照を、５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与した。１３１ＡＶＨ６
ＶＬ６−ｈＩｇＧ１を３〜４日毎に合計６回投与した。ｍｕＤＸ４００を毎週合計４回投
与した。投薬後、動物をモニターし続け、腫瘍体積を週に２回測定した。図５に示される
結果によって実証されるように、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１またはｍｕＤＸ４０
０単独に対して最小の抗腫瘍応答があったが、１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１＋ｍｕ
ＤＸ４００での併用療法は、著しく増強された抗腫瘍有効性につながった。
【０３７６】
実施例９：ＮＦ−κＢ活性化アッセイ
細胞：ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（ｐＮｉＦｔｙ２−Ｌｕｃ、Ｉｎ
ｖｉｖｏｇｅｎ）を含有するＨＥＫ２９３ＦＴヒト胚腎臓細胞を、Ｚｅｏｃｉｎ薬剤選択
（２９３ＦＴ−ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼ細胞）を使用した安定なトランスフェクショ
ン法によって前もって産生した。
【０３７７】
細胞培養：２９３ＦＴ−ＮＦκＢ−ルシフェラーゼ細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔
血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１×Ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ／グルタミン（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、お
よび２００μｇ／ｍｌ  Ｚｅｏｃｉｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充し
たＤＭＥＭ＋２ｍＭグルタミン（Ｃｅｌｌｇｒｏ）中で増殖させた。
【０３７８】
抗体：ｈＣＤ２７．１３１Ａ  ＩｇＧ１およびＩｇＧ４抗体を、ＣＨＯ−ＥＸＰＩまた
は２９３−ＥＸＰＩ細胞のいずれかにおける一過性発現によって産生した。１Ｆ５  Ｉｇ
Ｇ１を、２９３−ＥＸＰＩ細胞における一過性発現によって産生した。ｈＣＤ２７．１５
−４Ｂ  ＩｇＧ４を、ＣＨＯ細胞における安定発現によって産生した。全ての抗体を標準
的なプロテインＡ方法論によって精製した。
【０３７９】
トランスフェクション：ヒトＣＤ２７  ＷＴ（配列参照ＮＰ＿００１２３３）、ヒトＣ
Ｄ２７変異体ｐ．Ａｌａ５９Ｔｈｒ（「Ａ５９Ｔ」、対立遺伝子頻度０．２、配列参照ｒ
ｓ２５６８０）、またはアカゲザル／カニクイザルＣＤ２７（配列参照ＸＰ＿００１１０
４３３７．１／ＸＰ＿００５５６９９６３．１）に関するタンパク質をコードする全長ｃ
ＤＮＡを、ｐＣＩ−ｎｅｏ発現ベクターにクローニングした。ＣＤ２７プラスミドを、Ｌ
ｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し
て、２９３ＦＴ−ＮＦκＢ−ルシフェラーゼ細胞に一過性にトランスフェクトした。フロ
ーサイトメトリーを使用して、全てのＣＤ２７構築物の表面発現を確認した。
【０３８０】
抗体での刺激：ＣＤ２７構築物の一過性トランスフェクションの約１６〜２０時間後、
細胞を細胞解離緩衝液（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）またはＴｙｒｐＬＥ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｌ
ｉｆｅ）で収集し、計数し、９６ウェルの透明底ルミネッセンスプレート（Ｃｏｒｎｉｎ
ｇ）中にウェルあたり５，０００〜１０，０００細胞でＯｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に再び蒔き、可溶性抗ＣＤ２７抗体での刺激前に３７℃で３０
〜１８０分間静置／接着させた。次いで、可溶性抗ｈＣＤ２７  ｈＣＤ２７．１３１Ａ  
ＩｇＧ１またはｈＣＤ２７．１３１Ａ  ＩｇＧ４（最高用量１０μｇ／ｍｌ）、１Ｆ５  
ＩｇＧ１（最高用量１０μｇ／ｍｌ）およびｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ４（最高用
量１６０μｇ／ｍｌ）抗体を、示されているように４倍または１０倍希釈系列でトリプリ
ケートで細胞に添加し、細胞を３７℃で１６〜２０時間インキュベートした。
【０３８１】
ＮＦ−κＢ活性に関するアッセイ：３７℃で１６〜２０時間の抗体でのインキュベーシ
ョン後、細胞を、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）の添加前に、室温で５分間静
置した。次いで、プレートを光から保護し、室温で１０分間インキュベートした後、ルミ
ノメーター／ルミネッセンスプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ−Ｌ
ＪＬ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍまたはＥｎｖｉｓｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ）上で分析した。抗体
での倍率変化値を、抗体を用いない条件に基づいて計算した。倍率変化値を使用して、Ｇ
ｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア［モデル：制約を適用しない、ｌｏｇ（アゴニ
スト）対応答−可変勾配（４つのパラメータ）］を使用して用量応答に非線形曲線フィッ
トを適用した。
【０３８２】
ＣＤ２７アイソフォームにわたる可溶性活性を比較すると、ｈＣＤ２７．１３１Ａ  Ｖ
Ｈ６ＶＬ６  ｈｕＩｇＧ１は、全てのアイソフォームにわたってＮＦ−κＢ活性を誘導す
るための最も高い潜在性を示した（図６）。
【０３８３】
ｈＣＤ２７．１３１Ａ  ＶＨ６ＶＬ６  ｈｕＩｇＧ１は、ＷＴおよびＡ５９ＴヒトＣＤ
２７に対して匹敵する効力（それぞれ、平均ＥＣ５０  ２．２２および４．７２ｎＭ）、
およびアカゲザルＣＤ２７に対して約７倍強い効力（平均０．２９ｎＭ）を示した（表８
）。対照的に、１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１は、可溶型では一貫しては活性ではなく、したがっ
て、ＥＣ５０値は、１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１に関して計算することができなかった（図６）
。
【０３８４】
ｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ４（同一のＣＤＲ領域、配列番号４１および４２を有
する国際公開第２０１２／００４３６７号からのｈＣＤ２７．１５のヒト化バージョン）
は、ｈＣＤ２７  ＷＴ発現細胞に対して一貫して活性を示したが、ＣＤ２７  Ａ５９Ｔ発
現細胞またはアカゲザルＣＤ２７発現細胞に対しては活性を示さなかった。これは、ｈＣ
Ｄ２７．１５−４Ｂが、包括的に２０％の頻度で存在するＣＤ２７のＡ５９Ｔ対立遺伝子
に対して活性ではないことを示唆している。同じ傾向が親ｈＣＤ２７．１５クローンに関
して見られた（データは示さず）。さらに、ｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ４  ｍＡｂ
は、ｈＣＤ２７．１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈｕＩｇＧ１と比較して、ＮＦ−κＢ活性の誘
導においてそれほど強力ではない。これらの実験では、ｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ
４は、１６０μｇ／ｍｌの用量でさえもＮＦ−κＢシグナリングのプラトーを誘発せず、
したがって、ＥＣ５０値は測定できない。表９は、より低い用量での活性の違いを例示す
るために、単一の２．５μｇ／ｍｌ濃度でのＮＦ−κＢ活性化に関する倍率変化値を示す
。例えば、ＷＴ  ＣＤ２７発現細胞における２．５μｇ／ｍｌでは、ｈＣＤ２７．１３１
Ａ  ＶＨ６ＶＬ６  ｈｕＩｇＧ１は、ｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ４と比較して（平
均倍率変化：２．５２±０．４５対１．８２±０．３８、対応のあるｔ検定ｐ値：０．０
１）または１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１と比較して（倍率変化：１．３４±０．２９、ｐ値：０
．００１）、より高い効力を示す。全体として、これらのデータは、ｈＣＤ２７．１３１
Ａ  ＶＨ６ＶＬ６  ｈｕＩｇＧ１がＷＴ  ＣＤ２７およびＣＤ２７のＡ５９Ｔマイナー変
異体対立遺伝子ならびにアカゲザルＣＤ２７に対する明らかなＮＦ−κＢルシフェラーゼ
活性を示すことを示し、ｈＣＤ２７．１３１Ａ  ＶＨ６ＶＬ６  ｈｕＩｇＧ１がどのよう
に１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１と比較してより高い活性およびｈＣＤ２７．１５−４Ｂ  ＩｇＧ
４と比較してより強力な活性を示すかを例示している。
【０３８５】
いくつかのヒト化ｈＣＤ２７．１３１Ａ変異体をＣＤ２７誘導ＮＦ−κＢルシフェラー
ゼ活性に関して試験した（図７）。全てのヒト化変異体は、１Ｆ５  ＩｇＧ１よりも高い
活性を示した。キメラマウス−ヒトｈＣＤ２７．１３１Ａ抗体の直接比較は、ＮＦ−κＢ
ルシフェラーゼ活性に対するキメラｈｕＩｇＧ１またはｈｕＩｇＧ４フレームワークの類
似の活性化を示した（図７Ａ）。全体として、全てのヒト化ｈＣＤ２７．１３１Ａ  ｈｕ
ＩｇＧ１変異体は、互いに類似した挙動をし、１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１と比較して明らかに
高いＮＦ−κＢルシフェラーゼ活性を示した（１０μｇ／ｍｌメジアン倍率変化５．３２
対２．２３、図７Ａ）。同様に、全てのヒト化ｈＣＤ２７．１３１Ａ  ＩｇＧ４変異体は
、１Ｆ５  ｈｕＩｇＧ１と比較してより高い活性を示し（１０μｇ／ｍｌメジアン倍率変
化３．０６対１．７３）、より大きな活性範囲が個々の１３１Ａ  ＩｇＧ４抗体間で観察
された（図７Ｂ）。
【表８】
2020114241.tif 000010
【表９】
2020114241.tif 000011
【０３８６】
実施例１０：初代ヒトおよびアカゲザルＴ細胞共刺激アッセイにおける生物活性
ヒト濃縮ＣＤ８＋Ｔ細胞を、製造者の指示に従ってＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒトＣＤ８＋
Ｔ細胞濃縮カクテル（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅ
ｒ、Ｃａｎａｄａ）を使用してバフィーコートから得た。簡単に述べると、バフィーコー
トを抗体カクテルと共にインキュベートし、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳで希釈し、次いで、浮遊
密度培地Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｎｉｔ
ｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）で遠心分離して、不要な細胞をＲＢＣと共にペレット化した。次
いで、濃縮ＣＤ８＋Ｔ細胞を血漿および密度培地界面から取り出し、徹底的に洗浄し、Ａ
ＣＫ溶解緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、ＭＡ、ＵＳＡ）で溶解した。ナイーブＣ
Ｄ８＋Ｔ細胞を、ヒトナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞濃縮セット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して試料をさらにプロセシングすることによって単離した。細
胞を新鮮なまま使用するか、または将来の実験に使用するために凍結した。
【０３８７】
活性化アッセイのために、ナイーブＣＤ８＋細胞をＤＭＥＭ−Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ、Ｃ
Ａ，ＵＳＡ）、５％熱不活性化ヒト血清（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）、５０μＭ  ２−
メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび
１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ、スイス）に７．５×１０５細胞／ｍ
ｌで再懸濁した。１．５×１０５細胞を、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で３日
間、平底９６ウェルプレートにおいて、可溶性１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１、１Ｆ
５−ｈＩｇＧ１、アイソタイプまたは抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８単独と共に、最適以下の用量
のαＣＤ３（０．０２５〜０．０５μｇ／ｍｌクローンＯＫＴ３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、
ＣＡ、ＵＳＡ）およびαＣＤ２８（１μｇ／ｍｌクローン１５Ｅ８、Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）の存在下で培養した。刺激に続いて、細胞をＰＢＳで洗浄し、
次いで、４℃で３０分間、固定可能な生存率色素（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＣＡ、ＵＳ
Ａ）で染色した。過剰な色素を洗浄により除去し、細胞をＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（Ｂ
ｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）で遮断した。次いで、細胞を、洗浄し１％パラホルム
アルデヒドで固定する前に、４℃で３０分間、表現型抗体（ＦＩＴＣマウス抗ヒトＣＤ６
９（クローンＦＮ５０、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＰＥ／ＣＦ５
９４マウス抗ヒトＣＤ４（クローンＬ２００、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＡ、Ｕ
ＳＡ）、ＰＥ／Ｃｙ７マウス抗ヒトＣＤ２５（クローンＭ−Ａ２５１、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）およびＰａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅマウス抗ヒトＣＤ３（ク
ローンＳＰ３４−２、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）およびＡＰＣ／Ｃ
ｙ７マウス抗ヒトＣＤ８ａ（クローンＲＰＡ−Ｔ８、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＣＡ、ＵＳＡ
））と共にインキュベートした。Ｔ細胞の活性化を、表面マーカーＣＤ２５およびＣＤ６
９に関して、ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、
ＣＡ、ＵＳＡ）上のフローサイトメトリーによって測定した。ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を、
ＣＤ２５＋ＣＤ６９＋である％ＣＤ８＋Ｔ細胞によって測定する。
【０３８８】
１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１は、可溶型における初代ＣＤ８＋Ｔ細胞アッセイに
おいて活性を有した一方（アイソタイプ対照と比較して平均２．３倍の増加）、１Ｆ５−
ｈＩｇＧ１は、活性を示さなかった（図１４）。
【表１０】
2020114241.tif 000012
【０３８９】
実施例１１：初代ヒト腫瘍培養物中の生物活性
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、腎細胞癌（ＲＣＣ）、および頭頸部癌（Ｈ＆Ｎ）を有す
る患者からのヒト腫瘍標本を、州および連邦の規制に従って、商業的販売者から入手した
。
【０３９０】
混合腫瘍ＴＩＬを産出するためのヒト腫瘍の消化
新鮮な腫瘍組織を手術部位で回収し、ＡＱＩＸ培地（ＡＱＩＸ、ＵＫ）中４℃、一晩で
、Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃ
Ａに輸送した。単一細胞をメスで細かく切断することによって腫瘍から解離させ、続いて
１００ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼＩ型（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ｃａｔ＃１７１００−０１
７）、および１０，０００Ｕ／ｍＬのＤＮａｓｅ  Ｉ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌ、ｃａｔ＃ＬＳ００２０６０）と共に、１０ｍＬのＤｕｌｂｅｃｃｏ’
ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ）を含有する消化培地（Ｃｅｌｌｇｒ
ｏ、ｃａｔ＃１０−０１３−ＣＶ）中で３７℃で３０分のインキュベーションを行った。
消化された試料を数回上下にピペッティングし、７０μＭのストレーナーでろ過し、ＤＭ
ＥＭ完全培地で洗浄した。細胞生存率が３０％未満の場合、Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配分離を
行って生細胞を濃縮した。腫瘍消化からの混合細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌ
ｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃａｔ＃１７−１４４０−０３）密度勾配遠心分離
に１０００×ｇで２０分間適用した。濃縮生細胞を培地Ｆｉｃｏｌｌ界面から回収し、ダ
ルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で２回洗浄した。
【０３９１】
腫瘍浸潤Ｔ細胞活性化に関する腫瘍ＴＩＬ培養上清中のＩＦＮγの検出
合計０．１×１０６／ウェルの腫瘍消化細胞を９６ウェル丸底プレート中で培養し、指
示濃度の１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１（ＣＨＯ−ＥＸＰＩ細胞の一過性プラスミド
トランスフェクション−懸濁培養）、抗ＰＤ１（ペムブロリズマブ）、またはｈＣＤ２７
．１５−４ＢＩｇＧ４、ＩＦ５−ｈＩｇＧ１、またはアイソタイプ（抗ＰＣＳＫ９、Ｉｇ
Ｇ１およびＩｇＧ４）の存在下で、１０ｎｇ／ｍｌの可溶性抗ＣＤ３（ＢｉｏＬｅｇｅｎ
ｄ、クローンＯＫＴ３、ｃａｔ＃３７１３０４）で刺激した。上清を６日目に集め、そし
てＩＦＮγをヒトＩＦＮγ組織培養キット（ＭＳＤ、ｃａｔ＃Ｋ１５１ＡＥＢ）を使用し
て測定した。
【０３９２】
ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞上で発現されるため、我々は、１３
１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１が腫瘍浸潤メモリーＴ細胞における共刺激効果を有するだ
ろうと仮定した。１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１がヒト腫瘍免疫抑制環境においてＴ
細胞を活性化する能力を評価するために、我々は、実験のためのヒト腫瘍消化からの混合
細胞集団を使用した。１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１の０．１、１、１０、および２
０μｇ／ｍｌを、１０ｎｇ／ｍｌの抗ＣＤ３の存在下で６日間、単一消化腫瘍組織細胞培
養物に添加した。ＩＦＮγを６日上清において測定した。２０の腫瘍からの結果を図８に
示す。１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１は、１０および２０μｇ／ｍｌで統計的に有意
な変化により（それぞれ、ｐ＜０．００１およびｐ＜０．０１）、ヒト腫瘍ＴＩＬの抗Ｃ
Ｄ３誘導ＩＦＮγ産生を用量依存的に増強した。１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１を、
１３の腫瘍からのＴＩＬ  ＩＦＮγ産生アッセイにおいて、他の２つの抗ＣＤ２７  ｍＡ
ｂ、ｈ２７．１５−４ＢＩｇＧ４およびＩＦ５−ＩｇＧ１と比較することによっても研究
した（図９）。１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１は、抗ＣＤ３誘導ＩＦＮγ産生の統計
的に有意な増加を示す唯一のｍＡｂであった（ｐ＜０．０５）。
【０３９３】
実施例１２：抗ＣＤ２７抗体のエピトープの同定のためのアラニンスキャンニング
いくつかの抗ｈＣＤ２７抗体が一連のｈＣＤ２７アラニンミュータントに結合する能力
を、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、一過性にトランスフェクトされたｐＣＩ−ｎｅｏ空ベクター、ｐ
ＣＩ−ｎｅｏ．ｈＣＤ２７およびいくつかのｐＣＩ−ｎｅｏ．ＣＤ２７Ａｌａミュータン
ト構築物を使用して決定した。トランスフェクションを、製造者の指示に従って、両方と
もＯＰＴＩ−ＭＥＭＩ（Ｇｉｂｃｏ、ｃａｔ．ｎｏ．３１９８５）で希釈した、ウェルあ
たり４μｇのプラスミドＤＮＡおよび１０μｌのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００
試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１１６６８−０１９）を用いて６ウェルプレートにおいて
行った。
【０３９４】
トランスフェクト細胞を加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２で１日間インキ
ュベートした後、それらをＤＰＢＳで１回洗浄し、４００μｌの無酵素細胞解離溶液（Ｇ
ｉｂｃｏ、１３１５１−０１４）で剥離し、８００μｌ氷冷ＭＡＣＳ緩衝液（Ｍｉｌｔｅ
ｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、１３０−０９１−２２１）に回収した。剥離した細胞を、９６ウ
ェル丸底ウェルプレートに約１．２×１０５細胞／ウェルで移した。細胞をスピンダウン
し、上清を捨て細胞を残存容量に再懸濁した後、一次抗体を添加し４℃で３０分間インキ
ュベートした。細胞をＤＰＢＳ／ＢＳＡ１％で３回洗浄し、続いて遠心分離し、上清を捨
て残存容量に再懸濁した。一次抗体の結合を、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｂ
ｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、３４９０３１、２μｌ／ウェル）またはヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＩＴ
Ｃ（γ鎖特異的）（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、２０４０−０２、２μｌ／ウェ
ル）で４℃で３０分間染色することによって検出した。１回洗浄した後、抗体結合を、デ
ータ分析のためにＨＴＳプレートリーダー（ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）およびＦｌｏ
ｗＪｏソフトウェアを使用して検出した。デブリ、死細胞およびダブレットを分析から除
外した。結合を、１００％に設定されたｈＣＤ２７への抗体結合に対するＦＩＴＣシグナ
ルの幾何平均として表した。
【０３９５】
図１０に示されるように、アミノ酸Ｐ８、Ｈ３６、Ｒ３７およびＫ３８を変異させると
、濃い網掛けで示されているように、ｈＣＤ２７へのマウスｈＣＤ２７．１３１Ａの結合
が失われる。ｈＣＤ２７．１３１Ａは、ｈＣＤ２７．１５、１Ａ４、および１Ｆ５ＩｇＧ
１とは別個の結合プロファイルを示す。
【０３９６】
実施例１３：Ｘ線結晶構造によるＣＤ２７および１３１ＡＶＨ６ＶＬ６−ｈＩｇＧ１の
エピトープマッピング
複合体形成および精製
ＣＤ２７／１３１ＡＶＨ６ＶＬ６Ｆａｂ複合体を、それぞれ、２：１  ０６ＡＯＶ（Ｃ
Ｄ２７）および０１ＡＰＮ（Ｆａｂ）のモル比で４℃で４８時間インキュベートすること
によって形成した。次いで、反応混合物をＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  ＨｉＬｏａｄ  １
６／６００（１２０ｍＬ）カラムにロードし、画分をＳＥＣ−ＵＰＬＣ分析に基づいてプ
ールした。次いで、複合体プールを２５ｍＭトリス、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０
に対して透析した。透析した材料を遠心分離し、２２μｍシリンジフィルタでろ過した。
【０３９７】
ＣＤ２７＋Ｆａｂ結晶化手順
結晶化のための試料を、２５ｍＭトリスｐＨ＝８．０および１００ｍＭ塩化ナトリウム
からなる緩衝液中の２５μＬアリコートのＣＤ２７−Ｆａｂ複合体に６．２５μＬの４０
ｍＭ塩化カドミウムストックを添加することによって調製した。最終試料タンパク質濃度
は、１２．６ｍｇ／ｍｌであり、塩化カドミウム濃度は、８．０ｍＭであった。試料を設
定前に室温で約１時間保持した。
【０３９８】
最初のスクリーニングを、Ｔｏｐａｚフリー界面拡散マイクロ流体システム、Ｔｏｐａ
ｚ  ４．９６チップ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）および市販のスクリーンを使用して行った。チ
ップを室温で設定し、続いて１８℃に保持した。以下の条件を蒸気拡散システムへの変換
のために選択した。
【０３９９】
スクリーン：Ｒｉｇａｋｕ  Ｗｉｚａｒｄ  Ｃｒｙｏ  １−２（Ｃａｔ＃１００８６４
９）
条件：０．１Ｍイミダゾール  ｐＨ＝８．０＋４０％ｖ／ｖ  ＰＥＧ  ４００
スクリーン：Ｊｅｎａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｌａｓｓｉｃ  ＨＴＳ１（Ｃａｔ＃
ＣＳ−２０１Ｌ）
条件：０．１ＭトリスｐＨ＝８．５＋３０％ｖ／ｖ  ＰＥＧ３０００＋０．２Ｍ硫酸リ
チウム
Ｘ線回折研究用の結晶を、シッティングドロップ蒸気拡散法を使用して製造した。１０
０ｍＭトリスｐＨ８．０〜８．５およびＰＥＧ４００  ３０〜５０％ｖ／ｖからなるプレ
ートウェル条件を、Ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒ（Ｆｏｒｍｕｌａｔｒｉｘ）を使用して分配し
た。等容量のウェルおよびタンパク質（０．２２μＬ＋０．２２μＬ）からなる液滴を、
Ｏｒｙｘ４（Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して室温で分配し、続い
て１８℃に保った。結晶を１ヶ月の期間にわたって成長させた。
【０４００】
結晶を、１００ｍＭトリスｐＨ＝８．５および４０％ｖ／ｖのＰＥＧ４００からなる緩
衝液中で調製したシードストックを添加することによっても産生した。０．３０μＬタン
パク質＋０．２０μＬウェル＋０．１μＬシードストックからなる液滴を、Ｏｒｙｘ４（
Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して室温で分配し、続いて１８℃に保
った。結晶を１ヶ月の期間にわたって成長させた。
【０４０１】
結晶収穫とデータ回収
結晶化トレイル＃４４８２液滴Ｆ１からの結晶を、０．３ｍｍメッシュのＬｉｔｈｏｌ
ｏｏｐ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ  Ｌｔｄ、Ｓｕｆｆｏｌｄ、ＵＫ）
で結晶化液滴から収穫し、液体窒素中でクライオ凍結した。データ収集をＡｒｇｏｎｎｅ
Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＡＮＬ、Ｌｅｍｏｎｔ、ＩＬ）でのＩｎｄ
ｕｓｔｒｉａｌ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  Ａ
ｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＩＭＣＡ）のビームライン、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  
Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）のセクター１７で行った。
【０４０２】
データをＰｉｌａｔｕｓ  ６Ｍ検出器（Ｄｅｃｔｒｉｓ  ＡＧ、Ｂａｄｅｎ−Ｄａｔｔ
ｗｉｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して１．０Åの波長で回収した。データを、索
引付けおよび統合のためのＸＤＳ、スケーリングのためのＡＩＭＬＥＳＳ、データ分析の
ためのＰＯＩＮＴＬＥＳＳ、および異方性回折限界を適用するためのＳＴＡＲＡＮＩＳＯ
を呼び出すａｕｔｏＰＲＯＣ自動プロセシングソフトウェアを使用してプロセシングした
。結晶ユニット格子パラメータは、ａ＝１１４．２０、ｂ＝１２６．１０、ｃ＝１３１．
６００、α＝９０°、β＝９０°、γ＝９０°、空間群Ｃ２２２（１）である。
【０４０３】
構造の解明と洗練
構造をＭＯＬＲＥＰプログラムを使用して分子置換によって解明した。ＰＤＢエントリ
ー２ＸＴＪおよび５ＴＬＳを、それぞれ、Ｆａｂおよび抗原に関する探索プローブとして
使用した。デフォルトパラメータを使用して、ＶＨ＋ＶＬ領域を最初に位置づけ（Ｒｆ／
シグマ＝７．９１、ＴＦ／シグマ＝１０．８３）、次いで、変換のための固定入力モデル
として可変領域を使用して、ＣＨ１＋ＣＬ断片（Ｒｆ／シグマ＝１１．５６、ＴＦ／シグ
マ＝２３．７０）を位置づけた。しかしながら、この段階では、抗原は、明確に配置する
ことはできなかった（最良の「溶液」Ｒｆ＝４．７３、Ｔｆ／シグマ＝３．７７）。次い
で、モデルをａｕｔｏＢＵＳＴＥＲソフトウェアを使用して洗練した。Ｒｆｒｅｅおよび
Ｒｗｏｒｋの値は高い（それぞれ、４１．４％および３８．４％）が、電子密度マップは
、プローブとして使用されるＦａｂと最終構造との間のほとんどの配列置換および挿入ま
たは欠失との一貫性を示した。これらは、プログラムＣＯＯＴを使用して修正した。得ら
れた構造を、ａｕｔｏＢＵＳＴＥＲを用いて、それぞれ、３４．３％および３０．８％の
ＲｆｒｅｅおよびＲｗｏｒｋに再び洗練した。分子置換を、このモデルを固定座標として
使用して再び試み、これは、並進関数に関する明確な解をもたらした（ＴＦ／ｓｉｇｍａ
＝１７．６７）。再構築と洗練の追加ステップにより、ＲｆｒｅｅおよびＲｗｏｒｋの最
終値は、それぞれ、２２．４％と２０．０％になった。最終モデルは、ＣＤ２７残基６〜
８８および９４〜１００、Ｆａｂ軽鎖残基１〜２１２、Ｆａｂ重鎖残基１〜１３１および
１３７〜２１７、６カドミウムカチオン、１つのＰＥＧ４００分子および２８８の水を含
有する。規則正しいグリコシル化部位は、見出されなかった。
【０４０４】
Ｆａｂ−抗原相互作用の分析
以下の表は、Ｆａｂと抗原間の全ての接触を列挙している（太字「Ｈ」のＨ結合、太字
斜体（「ＳＢ」）の塩橋、３．３０Åのカットオフが極性相互作用に使用される）。
【表１１】
2020114241.tif 000013
2020114241.tif 000014
2020114241.tif 000015
【０４０５】
多数のファンデルワールス接触に加えて、いくつかのＨ結合および塩橋が接点に関与し
ている。パラトープは、各軽鎖および重鎖からの３つ全ての相補性決定領域（ＣＤＲ）を
伴う。しかしながら、エピトープは、１番目のシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）に限
定されている。Ｎ末端付近のセグメント、残基８〜１１および残基１７に加えて、全ての
接触は、残基３４〜３８で行われる（図１１および１２を参照されたい）。抗原−抗体複
合体の形成時に埋められた表面の総量は、それぞれ、６７９Å２および６１６Å２のＣＤ
２７およびＦａｂ溶媒接近可能表面である（図１１を参照されたい）。
【０４０６】
実施例１４：ｈＣＤ２７への結合に関する抗ＣＤ２７抗体の競合研究
ｈＣＤ２７を安定的に発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞を、９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、
１６７００８）に４×１０４細胞／ウェルで播種し、加湿インキュベーター内３７℃およ
び５％ＣＯ２でインキュベートした。抗ｈＣＤ２７抗体の段階希釈物を、３７℃および５
％ＣＯ２で２時間結合させておいた。次に、第二抗ｈＣＤ２７抗体を固定された濃度で添
加し、３７℃および５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。ＥＬｘ４０５ＢｉｏＴＥＫ
洗浄機を使用して、細胞をＤＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ中で３回洗浄した。固定さ
れた濃度で添加した抗ｈＣＤ２７抗体の結合を、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓ
ｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９−０３５−０８８、１：１０００希釈）
またはヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、１０３０−０
５、１：５０００希釈）のいずれかを添加することによって検出した。プレートを３７℃
および５％ＣＯ２で１時間インキュベートし、上記のように３回洗浄した。ＴＭＢ安定化
クロモゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＳＢ０２）を添加し、細胞を室温で約１０分間イン
キュベートした。反応を等容量の０．５Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加することによって停止させ
た。最後に、ｉＥＭＳ  Ｒｅａｄｅｒ  ＭＦ（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）またはＥｎｖｉｓ
ｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、４６０および６２０
ｎｍの吸光度を測定した。
【０４０７】
マウスｈＣＤ２７．１３１ＡおよびマウスｈＣＤ２７．１５が、ｈＣＤ２７への結合に
関して１Ｆ５ＩｇＧ１と交差競合することができるかどうかを決定するために、競合細胞
に基づくＥＬＩＳＡを行った。１Ｆ５ＩｇＧ１の段階希釈物をＣＨＯ−Ｋ１細胞上に発現
されたｈＣＤ２７に結合させておいた。次に、マウスｈＣＤ２７．１３１Ａまたはマウス
ｈＣＤ２７．１５の結合を検出した。逆の実験も行い、ここで、マウスｈＣＤ２７．１３
１ＡまたはマウスｈＣＤ２７．１５の段階希釈物を結合させておき、続いて１Ｆ５ＩｇＧ
１の結合を検出した。図１３に示されるように、マウスｈＣＤ２７．１３１Ａは、１Ｆ５
ＩｇＧ１の結合を妨害せず、これは、これら２つの抗体がｈＣＤ２７上の別個のエピトー
プに結合することを示している。マウスｈＣＤ２７．１５に関しても類似のデータが得ら
れ、これは、ｈＣＤ２７への結合に関して１Ｆ５ＩｇＧ１と競合しないことが示された。
１Ｆ５ＩｇＧ１を最初に結合させておいた場合にのみ、マウスｈＣＤ２７．１５の結合の
中程度の喪失が高濃度で観察された。
【０４０８】
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国仮出願第６２／３９９，
８３７号および米国仮出願第６２／５４６，２１４号の優先権を主張する。本明細書にお
いて引用された全ての参考文献は、個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇ
ｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許が具体的かつ
個別に参考によって組み込まれていると示されているのと同じ程度まで参照によって組み
込まれている。参照による組込みのこの陳述は、出願人により、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．
５７（ｂ）（１）に従って、たとえそのような引用が参照による組込みの専用の陳述に直
接隣接していないとしても、それぞれ３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（２）に従って
明確に同定されている、各全ての個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅ
ｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許に関連づけるこ
とが意図されている。明細書中に参照による組込みの専用の陳述の包含があったとしても
、それは、参照による組込みのこの一般的な陳述を決して弱めるものではない。本明細書
での参考文献の引用は、その参考文献が関連する先行技術であることを自認することを意
図するものではなく、またこれらの刊行物または文書の内容または日付に関するいかなる
自認も構成しない。参照が本明細書で提供される定義と矛盾する特許請求された用語に関
する定義を提供する程度まで、本明細書で提供される定義は、特許請求された発明を解釈
するために使用されるべきである。
【０４０９】
本発明は、本明細書に記載された特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではな
い。実際、本明細書に記載されたものに加えた本発明の様々な変更形態が前述の説明およ
び添付の図面から当業者には明らかになることになる。そのような変更形態は、添付の特
許請求の範囲の範囲内に入ることが意図されている。
【０４１０】
前述の明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分であると考えら
れる。本明細書で示され記載されたものに加えて本発明の様々な変更形態は、前述の記載
から当業者に明らかとなり、かつ添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることになる。
【表１２】
2020114241.tif 000016
2020114241.tif 000017
2020114241.tif 000018
2020114241.tif 000019
2020114241.tif 000020
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2020114241.tif 000024
2020114241.tif 000025
2020114241.tif 000026
【表１３】
2020114241.tif 000027
2020114241.tif 000028
【表１４】
2020114241.tif 000029
2020114241.tif 000030
2020114241.tif 000031
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年3月31日(2020.3.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【外国語明細書】
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