(57)【要約】【課題】本発明は、適切な金属中心に結合したときにイメージング剤として、特に腫瘍のイメージングにとって有用であるヒドロキサム酸系化合物に関する。本発明は、その化合物を含む組成物およびその化合物を使用して患者をイメージングする方法にも関する。【解決手段】本出願に記載されている本発明は、適切な金属中心に結合したときにイメージング剤として、特に腫瘍のイメージングにとって有用であるヒドロキサム酸系化合物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2020114860.tif 000019
（式中、Ｌはアジド、ハロゲン、シアナート及びＯＲから選択される脱離基であり、ＲはＣ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケン、Ｃ２〜Ｃ１０アルキン、アリール、アリール、−ｐ−トルエンスルホニル、−ベンゼンスルホニルおよび−ｍ−ニトロベンゼンスルホニルから選択される）
の化合物またはその薬学的に許容される塩と、標的分子とのコンジュゲート体であって、前記標的分子が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの所望の部位、細胞中の所望の部位、または生検サンプル中の所望の部位に前記コンジュゲート体を標的させる役割を果たす、コンジュゲート体。
【請求項２】
ＬがＯＲである、請求項１に記載のコンジュゲート体。
【請求項３】
Ｒが、Ｃ１〜Ｃ６アルキルである、請求項２に記載のコンジュゲート体。
【請求項４】
ＯＲが、Ｏ−ｐ−トルエンスルホニル、Ｏ−メタンスルホニル、Ｏ−トリフルオロメタンスルホニル、Ｏ−ベンゼンスルホニルおよびＯ−ｍ−ニトロベンゼンスルホニルから選択される、請求項２に記載のコンジュゲート体。
【請求項５】
前記標的分子が、特定の組織を標的とする能力を有する生体分子または生体分子の断片である、請求項１から４のいずれか一項に記載のコンジュゲート体。
【請求項６】
前記標的分子が、腫瘍を標的とする能力を有する生体分子または生体分子の断片である、請求項１から４のいずれか一項に記載のコンジュゲート体。
【請求項７】
前記標的分子が、ポリペプチドである、請求項１から６のいずれか一項に記載のコンジュゲート体。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、抗体である、請求項７に記載のコンジュゲート体。
【請求項９】
前記抗体が、トラスツズマブ、リツキシマブおよびセツキシマブから選択される、請求項８に記載のコンジュゲート体。
【請求項１０】
前記抗体が、ラニビズマブ、ベバシズマブ、フレソリムマブ、パニツムマブ、ペルツズマブおよびオファツムマブから選択される、請求項８に記載のコンジュゲート体。
【請求項１１】
前記標的分子が、ペプチドである、請求項１から６のいずれか一項に記載のコンジュゲート体。
【請求項１２】
前記ペプチドが、標的ペプチドである、請求項１１に記載のコンジュゲート体。
【請求項１３】
前記標的ペプチドが、環状ＲＧＤ配列、ボンベシンおよびｇｌｕ−Ｎ（ＣＯ）Ｎ−ｌｙｓ  ＰＳＭＡから選択される、請求項１２に記載のコンジュゲート体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、適切な金属中心に結合したときにイメージング剤として、特に腫瘍のイメージングにとって有用であるヒドロキサム酸系化合物に関する。本発明は、その化合物を含む組成物およびその化合物を使用して患者をイメージングする方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ジルコニウム−８９（８９Ｚｒ）は、医用イメージング装置に使用される陽電子放出核種である。それは、特に、癌の検出のための陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）およびイメージングに使用される。それは、医用イメージングに使用される他の放射性核種（１８Ｆなど）より半減期が長い（ｔ１／２＝７９．３時間）。例えば、１８Ｆのｔ１／２は１１０分であり、このことは、これを使用するには、これが組み込まれる作用剤を調製するために、サイクロトロン施設に近接していることと、迅速で収率の高い合成技術とが必要であることを意味する。８９Ｚｒは、これらの同様の問題に直面せず、このため、８９Ｚｒは、医用イメージング装置において使用するのに特に魅力的なものになっている。
【０００３】
デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）は、鉄過剰症を処置するために１９６０年代後半から使用されてきた細菌のシデロフォアである。ＤＦＯ中の３つのヒドロキサム酸基がＦｅ３＋イオンと配位結合を形成し、このため、ＤＦＯは実質的にＦｅ３＋イオンをキレート化する六座配位子になっている。８９Ｚｒの配位構造が理由で、ＤＦＯはＰＥＴイメージング用途における８９Ｚｒのキレーターとしても使用されてきた（非特許文献１）。
【０００４】
他のＤＦＯ系の放射性同位体キレーターもＰＥＴイメージング用途で使用するために調製されてきた。これらには、Ｎ−スクシニル−デスフェリオキサミン−テトラフルオロフェノールエステル（Ｎ−ｓｕｃ−ＤＦＯ−ＴＦＰエステル）、ｐ−イソチオシアナトベンジル−デスフェリオキサミン（ＤＦＯ−Ｂｚ−ＮＣＳ、別称ＤＦＯ−Ｐｈ−ＮＣＳ）およびデスフェリオキサミン−マレイミド（ＤＦＯ−マレイミド）が含まれる。これらのキレーターは全て、抗体または抗体断片にコンジュゲートされて、イメージング剤に、イメージングされるべき腫瘍を標的させる手段を提供することができる。
【０００５】
しかしながら、これらのキレーターには複数の不利点がある。Ｎ−ｓｕｃ−ＤＦＯ−ＴＦＰエステルの合成は、テトラフルオロフェノールエステルがデスフェリオキサミン（ＤＦＯ）のヒドロキサマート基の１つと反応するのを防ぐために、Ｆｅ３＋の添加を必要とする。合成（Ｎ−ｓｕｃ−ＤＦＯ−ＴＦＰエステルを抗体にカップリングさせるステップを含む）が完了すると、次にＦｅ３＋を除去する必要がある。これは、１００倍モル過剰のＥＤＴＡをｐＨ４．２〜４．５で使用して実現される。これらの条件は、ｐＨ感受性抗体に有害となり得る。
【０００６】
ＤＦＯ−Ｂｚ−ＮＣＳに関して、この化合物を振盪も適切な混合もせず、あまりに急速に抗体溶液に添加すると、ＤＦＯ−Ｂｚ−ＮＣＳは抗体の凝集体の形成を引き起こす。さらに、放射標識されかつ抗体にコンジュゲートされたキレーターは、長期間保管された場合に安定性が懸念され、塩化物イオンを含有する緩衝液は、錯体から放射性核種を脱離させるため、回避される必要がある。
【０００７】
ＤＦＯ−マレイミドはチオール基へのマイケル付加によって抗体にコンジュゲートする。これには２つの主な問題がある。第１に、チオールへのマイケル付加によって異性体の混合物が生じる可能性がある。異性体は生物システムと異なる方法で相互作用する場合があるため、これは不利点である。第２の問題は、チオール基へのマイケル付加は可逆的であることである。これはＤＦＯ−マレイミド−ラジオヌリド（ｒａｄｉｏｎｕｌｉｄｅ）錯体が抗体から分離して、身体全体に錯体が分布するリスクを増加させる。これはイメージングの選択性を低減させるだけでなく、錯体中の放射性核種から放出される放射線が他の器官と相互作用するため、毒性副作用の可能性も増加させる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｈｏｌｌａｎｄ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ  １０：１５８６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、これらの欠点のない、放射性同位体と一緒に使用するための新規な作用剤を開発する必要がある。
【００１０】
本明細書中のいずれの従来技術の記載も、この従来技術がいずれかの管轄において共通一般知識の一部を形成すること、またはこの従来技術が当業者によって理解され、有意義であると考えられ、および／または他の従来技術と組み合わされると当然期待され得ることを承認または示唆するものではない。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、下記の式（Ｉ）：
【化１】
2020114860.tif 000002
（式中、Ｌは脱離基である）
の化合物（本明細書では「ＤＦＯ−スクアルアミド（ＤＦＯ−ｓｑｕａｒａｍｉｄｅ）」または「ＤＦＯＳｑ」とも称す）、およびその生体分子とのコンジュゲート体（８９Ｚｒなどの放射性核種を錯体化した場合）が、有効なＰＥＴイメージング剤であることを発見した。一実施形態では、ＬはＯＲである。Ｒは、それぞれ任意選択により置換されているＣ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケン、Ｃ２〜Ｃ１０アルキンおよびアリールから選択されてもよい。Ｒは、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチルなどのＣ１〜Ｃ６アルキル）であってもよい。Ｒはメチルでもエチルでもよい。Ｒはエチルでもよい。
【００１２】
したがって、一態様において、本発明は、上記に定義した式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。
【００１３】
別の態様において、本発明は、式（Ｉ）：
【化２】
2020114860.tif 000003
（式中、Ｌは脱離基である）
の化合物またはその薬学的に許容される塩の放射性核種錯体に関する。ＬはＯＲでもよい。Ｒは、それぞれ任意選択により置換されているＣ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケン、Ｃ２〜Ｃ１０アルキンおよびアリールから選択されてもよい。Ｒは、アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチルなどのＣ１〜Ｃ６アルキル）であってもよい。Ｒはメチルでもエチルでもよい。Ｒはエチルでもよい。
【００１４】
放射性核種は、ジルコニウム、ガリウムまたはインジウムの放射性同位体であってもよい。ジルコニウムの放射性同位体は８９Ｚｒでもよい。ガリウムの放射性同位体は６８Ｇａでもよい。インジウムの放射性同位体は１１１Ｉｎでもよい。放射性核種はジルコニウムの放射性同位体（例えば８９Ｚｒ）でもよい。
【００１５】
別の態様において、本発明は、
−  式（Ｉ）：
【化３】
2020114860.tif 000004
（式中、Ｌは脱離基である（本明細書に定義したとおり））
の化合物またはその薬学的に許容される塩と、
−  標的分子と
のコンジュゲート体にも関する。
【００１６】
標的分子は、ポリペプチド（輸送タンパク質または抗体など）であってもよい。標的分子は、ペプチド（標的ペプチドなど）でもよい。ポリペプチドは抗体でもよい。抗体は、ハーセプチン（トラスツズマブ）、リツキシマブおよびセツキシマブから選択されてもよい。
【００１７】
別の態様において、本発明は、
−  式（Ｉ）：
【化４】
2020114860.tif 000005
（式中、Ｌは脱離基である（本明細書に定義したとおり））
の化合物またはその薬学的に許容される塩と、
−  標的分子と、
−  式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に錯体化された放射性核種と
の放射性核種で標識されたコンジュゲート体に関する。
【００１８】
標的分子は、ポリペプチド（輸送タンパク質または抗体など）であってもよい。標的分子は、ペプチド（標的ペプチドなど）でもよい。ポリペプチドは抗体でもよい。抗体は、ハーセプチン（トラスツズマブ）、リツキシマブおよびセツキシマブから選択されてもよい。
【００１９】
放射性核種は、ジルコニウム、ガリウムまたはインジウムの放射性同位体であってもよい。ジルコニウムの放射性同位体は８９Ｚｒでもよい。ガリウムの放射性同位体は６８Ｇａでもよい。インジウムの放射性同位体は１１１Ｉｎでもよい。放射性核種はジルコニウムの同位体（例えば８９Ｚｒ）でもよい。
【００２０】
放射性核種で標識された錯体および放射性核種で標識されたコンジュゲート体は、ＤＦＯ−Ｐｈ−ＮＣＳ、またはＤＦＯ−Ｐｈ−ＮＣＳと標的分子とのコンジュゲート体と比較した際に改善された親和性を有する。
【００２１】
別の態様において、本発明は、
−  上記に定義した放射性核種で標識されたコンジュゲート体を患者に投与するステップと、
−  患者をイメージングするステップと
を含む、患者をイメージングする方法に関する。
【００２２】
別の態様において、本発明は、
−  上記に定義した放射性核種で標識されたコンジュゲート体を細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生検サンプルに投与するステップと、
−  細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生検サンプルをイメージングするステップと
を含む、細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生検サンプルをイメージングする方法に関する。
【００２３】
本発明のさらなる態様および上記の段落に記載した態様のさらなる実施形態は、例として挙げられ、かつ添付の図面を参照する以下の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】８９Ｚｒ（ＤＦＯ−スクアラート−トラスツズマブ）を使用したＨＥＲ２陽性腫瘍（ＢＴ４７４乳癌モデル）のＭｉｃｒｏ−ＰＥＴイメージングである。
【図２】８９Ｚｒ（ＤＦＯ−マレイミド−トラスツズマブ）を使用したＨＥＲ２陽性腫瘍（ＬＳ１７４Ｔ結腸直腸腫瘍モデル）のＭｉｃｒｏ−ＰＥＴイメージングである。
【図３】８９ＺｒＣｌを使用したＨＥＲ２陽性腫瘍（ＬＳ１７４Ｔ結腸直腸腫瘍モデル）のＭｉｃｒｏ−ＰＥＴイメージングである。
【図４】対照サンプル（即ちＤＦＯＳｑ無し）のラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラムである。
【図５】８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ錯体のラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から６０分後）である。
【図６】対照サンプルの２つのサイズ排除ＨＰＬＣ  ＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラム（２８０および２５４ｎｍの２つの異なる吸収波長での）および放射線クロマトグラムである。
【図７】８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ錯体の２つのサイズ排除ＨＰＬＣ  ＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラム（８９Ｚｒの添加から７８時間後）である。
【図８】８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から６０分後に取得）である。
【図９】ＤＦＯＳｑ−トランスフェリン（ＤＦＯＳｑ−Ｔｆ）のＬＣＭＳスペクトルである。
【図１０】８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｔｆのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から２０分後に取得）である。
【図１１】８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｔｆの２つのサイズ排除ＨＰＬＣ  ＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラム（８９Ｚｒの添加から２０分後）である。
【図１２】ＤＦＯＳｑ−ハーセプチン（ＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃ）のＬＣＭＳスペクトルである。
【図１３】８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から２５分後に取得）である。
【図１４】精製した８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラムである。
【図１５】非放射性（即ち非標識の）ＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃの２つのサイズ排除ＨＰＬＣ  ＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラムである。
【図１６】８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃの２つのサイズ排除ＨＰＬＣ  ＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラム（精製から２４時間後に取得）である。
【図１７】８９ＺｒＤＦＯＳｑ−ハーセプチン投与後のマウス１のＰＥＴ画像である。
【図１８】８９ＺｒＤＦＯＳｑ−ハーセプチン投与後のマウス２のＰＥＴ画像である。
【図１９】ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ（非標識のトラスツズマブ＝１４８，２３２）のデコンボリューションされたＥＳＩ−ＭＳである。
【図２０】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ反応混合物の３０分後のｉＴＬＣ分析である（原点は５５ｍｍ、溶媒先端は１５０ｍｍにある；標識されたトラスツズマブは原点に留まり、＞７０ｍｍの距離（ｒ．ｆ．＞０．１）での活性は非キレート化８９Ｚｒを表す）。
【図２１】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブのＰＤ−１０精製後のＳＥ−ＨＰＬＣ分析である（上：２８０ｎｍでの吸光度；下：放射線シグナル（ｍＶ）；８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブは約１２分で溶出し、ゲンチサートは２０〜２５分で溶出する）。
【図２２−１】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブを使用したＢＴ４７４腫瘍担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスのＰＥＴイメージングである。
【図２２−２】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブを使用したＢＴ４７４腫瘍担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスのＰＥＴイメージングである。
【図２３】ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ（非標識のトラスツズマブ＝１４８，２３２）のデコンボリューションされたＥＳＩ−ＭＳである。
【図２４】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ反応混合物の１時間後のｉＴＬＣ分析である（原点は７０ｍｍ、溶媒先端は１６０ｍｍにある；標識されたトラスツズマブは原点に留まり、＞８０ｍｍの距離（ｒ．ｆ．＞０．１）での活性は非キレート化８９Ｚｒを表す）。
【図２５】精製した８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブのＳＥ−ＨＰＬＣ分析による放射線トレース（生成物保持時間約１２．５分）である。
【図２６】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ反応混合物の１．５時間後のｉＴＬＣ分析である（原点は７０ｍｍ、溶媒先端は１４５ｍｍにある；標識されたトラスツズマブは原点に留まり、＞８０ｍｍの距離（ｒ．ｆ．＞０．１）での活性は非キレート化８９Ｚｒを表す）。
【図２７】精製した８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブのＳＥ−ＨＰＬＣ分析による放射線トレース（生成物保持時間約１２．５分）である。
【図２８−１】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブをイメージング剤として使用したＳＫＯＶ３腫瘍担持マウスのＰＥＴイメージングである。
【図２８−２】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブをイメージング剤として使用したＳＫＯＶ３腫瘍担持マウスのＰＥＴイメージングである。
【図２９−１】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブをイメージング剤として使用したＬＳ１７４Ｔ腫瘍担持マウスのＰＥＴイメージングである。
【図２９−２】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブをイメージング剤として使用したＬＳ１７４Ｔ腫瘍担持マウスのＰＥＴイメージングである。
【図３０】ＤＦＯＰｈＮＣＳの１Ｈ  ＮＭＲ分析（ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）である。
【図３１】精製したＤＦＯＰｈＮＣＳの分析用ＨＰＬＣトレース（２１４ｎｍでの吸光度）（１．５分でのシグナル＝ＤＭＳＯ、８．９５分でのシグナル＝ＤＦＯＰｈＮＣＳ）である。
【図３２】精製したＤＦＯＰｈＮＣＳのＥＳＩ−ＭＳ分析である。
【図３３】ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブのデコンボリューションされたＥＳＩ−ＭＳ（非標識のトラスツズマブ＝１４８，２３４；１つのＤＦＯＰｈＮＣＳが結合したトラスツズマブ＝１４８，９８７）である。
【図３４ａ】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ反応混合物の１時間後のｉＴＬＣ分析であり、約３０％の標識効率を示す（原点は６０ｍｍ、溶媒先端は１５０ｍｍにある；標識されたトラスツズマブは原点に留まり、＞７０ｍｍの距離（ｒ．ｆ．＞０．１）での活性は非キレート化８９Ｚｒを表す）。
【図３４ｂ】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ反応混合物の１．５時間後のｉＴＬＣ分析であり、約５０％の標識効率を示す（原点は５５ｍｍ、溶媒先端は１３５ｍｍにある；標識されたトラスツズマブは原点に留まり、＞６５ｍｍの距離（ｒ．ｆ．＞０．１）での活性は非キレート化８９Ｚｒを表す）。
【図３４ｃ】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ反応混合物の２時間後のｉＴＬＣ分析であり、約６５％の標識効率を示す（原点は６０ｍｍ、溶媒先端は１４５ｍｍにあり；標識されたトラスツズマブは原点に留まり、＞７０ｍｍの距離（ｒ．ｆ．＞０．１）での活性は非キレート化８９Ｚｒを表す）。
【図３５】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブのＰＤ−１０精製後のｉＴＬＣ分析である（原点は５５ｍｍ、溶媒先端は１５０ｍｍにあり；標識されたトラスツズマブは原点に留まり、＞７０ｍｍの距離（ｒ．ｆ．＞０．１）での活性は非キレート化８９Ｚｒを表す）。
【図３６】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブのＰＤ−１０精製後のＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析である（上：２８０ｎｍでの吸光度；下：放射線シグナル（ｍＶ）；８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブは約１２分で溶出し始め、ゲンチシンアシック（ｇｅｎｔｉｓｉｃ  ａｃｉｃ）は２０〜２５分で溶出する）。
【図３７−１】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブをイメージング剤として使用したＳＫＯＶ３腫瘍担持マウスのＰＥＴイメージングである。
【図３７−２】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブをイメージング剤として使用したＳＫＯＶ３腫瘍担持マウスのＰＥＴイメージングである。
【図３８】ＳＫＯＶ３腫瘍担持マウスにおける８９Ｚｒ−ＤＦＯ−Ｓｑ／ハーセプチンｖｓ８９Ｚｒ−ＤＦＯ−Ｐｈ−ＮＣＳ／ハーセプチンの取込みのＰＥＴイメージング結果である。
【図３９】８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−ｃＲＧＤｆＫ反応混合物のＨＰＬＣ分析である；上：２８０／２５４ｎｍでの吸光度；下：放射線。
【図４０】８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫ反応混合物のＨＰＬＣ分析である；上：２５４での吸光度；中：２８０ｎｍでの吸光度；下：放射線。
【図４１】ＤＦＯＰｈＮＣＳ−ｃＲＧＤｆＫ／ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫ／８９Ｚｒ反応混合物のＨＰＬＣ分析である；上：２８０／２５４ｎｍでの吸光度；下：放射線。
【図４２】ＤＦＯＳｑＴａｕｒの１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）スペクトルである。
【図４３】ＤＦＯＳｑＴａｕｒのＥＳＩ−ＭＳスペクトルである。［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値）ｍ／ｚ＝７６４．３５。
【図４４】ＤＦＯＰｈＳＯ３Ｈの１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）スペクトルである。
【図４５】ＤＦＯＰｈＳＯ３ＨのＥＳＩ−ＭＳスペクトルである。［Ｍ＋Ｈ］＋（計算値）ｍ／ｚ＝７７６．３３。
【図４６】ＤＦＯＰｈＳＯ３Ｈ／ＤＦＯＳｑＴａｕｒ／Ｚｒ反応混合物のＥＳＩ−ＭＳスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明者らは、式（Ｉ）の化合物の合成（および特に、この化合物と生体分子とのコンジュゲート体の合成）は、ヒドロキサム酸基を保護するためにＦｅ３＋イオンを使用する必要がないため、Ｎ−ｓｕｃ−ＤＦＯ−ＴＦＰの合成より簡易で、抗体などのｐＨ感受性分子の存在に対する可変性が高いことを発見した。このため、抗体のコンジュゲートおよび８９Ｚｒとの放射標識が容易になる。さらに、式（Ｉ）の化合物は、塩化物を含有する緩衝液に感受性がなく、生体分子とコンジュゲートしている間に凝集体を形成せず、生体分子と可逆的な結合をしない。
【００２６】
さらに、意外にも、式（Ｉ）の化合物と標的分子との放射標識されたコンジュゲート体は、ＰＥＴイメージング剤として使用される複数の既知の放射性核種キレーター（特に他のＤＦＯ系キレーター）より、腫瘍標的および組織選択性が改善されている。
【００２７】
この腫瘍標的および組織選択性の改善に寄与する可能性があると考えられる複数の要因があり、その要因には、放射性同位体がキレート化される強度、代謝安定性、および代謝生成物の排泄率などがある。本発明の化合物のこれらの利点は、従来技術には開示されておらず、予測することもできなかった。また、本発明の化合物の全体的な改善性能に対するそれらの利点の寄与の相対的な重要性は知られていない。
【００２８】
本明細書に開示している化合物の「薬学的に許容される塩」とは、一般に当技術分野においてヒトまたは動物の組織に接触して使用するのに好適であると考えられている、過剰な毒性も発癌性もなく、好ましくは刺激作用、アレルギー応答、または他の問題もしくは障害のない酸塩または塩基塩である。このような塩として、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩および有機酸塩、ならびにカルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩が挙げられる。
【００２９】
好適な薬学的に許容される塩として、以下に限定されるものではないが、塩酸、リン酸、臭化水素酸、リンゴ酸、グリコール酸、フマル酸、硫酸、スルファミン酸、スルファニル酸、ギ酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエチルスルホン酸、硝酸、安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ステアリン酸、サリチル酸、グルタミン酸、アスコルビン酸、パモ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、プロピオン酸、ヒドロキシマイエイク酸（ｈｙｄｒｏｘｙｍａｉｅｉｃ）、ヨウ化水素酸、フェニル酢酸およびアルカン酸（例えば、酢酸、ｎが０〜６の任意の整数、即ち０、１、２、３、４、５または６であるＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ）などの酸の塩が挙げられる。同様に、薬学的に許容される陽イオンとして、以下に限定されるものではないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウムおよびアンモニウムが挙げられる。当業者は、本明細書で提供される化合物用として、別の薬学的に許容される塩を識別するであろう。一般に、薬学的に許容される酸塩または塩基塩は、任意の従来の化学的方法により、塩基性部分または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。簡単に言えば、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態または遊離塩基形態と、化学量論量の適切な塩基または酸とを、水中もしくは有機溶媒（例えば、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリル）中で、またはこの２つの混合液中で反応させることによって調製することができる。
【００３０】
式（Ｉ）の化合物は、水和物、溶媒和物または非共有結合錯体（放射性核種以外の金属との）として存在してもよいが、そうである必要はないことは明らかであろう。さらに、種々の結晶形および多形が本発明の範囲内にあり、本明細書で提供される化合物のプロドラッグも同様である。
【００３１】
「プロドラッグ」とは、本明細書で提供される化合物の構造的要件を十分に満たしていなくてもよいが、対象または患者に投与された後にｉｎ  ｖｉｖｏで修飾されて、本明細書で提供されるような放射標識されたコンジュゲート体を生成する化合物である。例えば、プロドラッグは、放射標識されたコンジュゲート体のアシル化誘導体とすることができる。プロドラッグには、哺乳動物の対象に投与されると開裂して遊離ヒドロキシル基または遊離アミン基をそれぞれ形成する任意の基に、ヒドロキシル基またはアミン基が結合する化合物が含まれる。プロドラッグの例として、以下に限定されるものではないが、放射標識されたコンジュゲート体中のアミン官能基のアセタート誘導体、ホルマート誘導体、ホスファート誘導体およびベンゾアート誘導体が挙げられる。プロドラッグは、修飾部がｉｎ  ｖｉｖｏで開裂して親化合物を生成するように、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製することができる。
【００３２】
「置換基」とは、本明細書で使用する場合、対象の分子中の原子に共有結合している分子の部分を指す。「置換されている」という用語は、本明細書で使用する場合、指定された原子についている任意の１つまたは複数の水素が、指示された置換基群からの選択物で置き換えられており、但し、指示された原子の正常な原子価を超えず、置換によって安定な化合物、即ち、生物学的活性のために単離され、特徴づけられ、試験されることが可能な化合物が得られることを意味する。置換基がオキソ、即ち＝Ｏであれば、その場合、原子についている２つの水素が置き換えられる。芳香族炭素原子の置換基であるオキソ基は、−ＣＨ−から−Ｃ（＝Ｏ）−に転換し、芳香族性を失う。例えば、オキソで置換されたピリジル基はピリドンである。好適な置換基の例は、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の各原子）、ＯＨ、＝Ｏ、ＳＨ、ＳＯ２、ＮＨ２、ＮＨアルキル、＝ＮＨ、Ｎ３およびＮＯ２の各基である。
【００３３】
「任意選択により置換されている」という用語は、１つ、２つまたは３つ以上の水素原子が、アルキル、ハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の各原子）、ＯＨ、＝Ｏ、ＳＨ、＝Ｓ、ＳＯ２、ＮＨ２、ＮＨアルキル、＝ＮＨ、Ｎ３またはＮＯ２の各基で、互いに独立して置き換えられている基を指す。
【００３４】
本明細書で使用する場合、長さの範囲の限度を定義する表現、例えば、「１〜５」は、１〜５、即ち、１、２、３、４および５の任意の整数を意味する。換言すると、明示された２つの整数で定義された任意の範囲は、前記限度を定義する任意の整数および前記範囲に含まれる任意の整数を含み、かつ開示するものとする。
【００３５】
「脱離基」という用語は、標的分子と反応すると、スクアラート部分から離れることが可能な任意の部分を指す。脱離基が離れ、標的分子の基（リシン側鎖のアミノ基など）とスクアラートとの間に結合が形成される。一実施形態では、脱離基（「Ｌ」）はＯＲである。一実施形態では、Ｒは、それぞれ任意選択により置換されているＣ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ヘテロアルキル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケンおよびＣ２〜Ｃ１０アルキンならびにアリールから選択される。一実施形態では、ＲはＣ１〜Ｃ１０アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはブチルなどのＣ１〜Ｃ６アルキル）である。一実施形態では、Ｒはメチルまたはエチルである。一実施形態では、Ｒはエチルである。別の実施形態では、Ｌはハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）であり、またはＬはアジド基である。
【００３６】
「アルキル」という用語は、１〜１０個の炭素原子を含有する飽和の直鎖または分岐鎖の炭化水素基（例えばｎ−オクチル基）、特に、１〜６個、即ち１、２、３、４、５または６個の炭素原子を含有する飽和の直鎖または分岐鎖の炭化水素基を指す。アルキル基の具体的な例は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよび２，２−ジメチルブチルである。
【００３７】
「ヘテロアルキル」という用語は、酸素、窒素および硫黄から選択される１つまたは複数のヘテロ原子を含有する上記に定義したアルキル基を指す。ヘテロアルキル基の具体的な例は、メトキシ、トリフルオロメトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソ−プロピルオキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、メトキシメチル、エトキシメチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、メトキシエチル、１−メトキシエチル、１−エトキシエチル、２−メトキシエチルまたは２−エトキシエチル、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソ−プロピルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、イソ−プロピル−エチルアミノ、メチルアミノメチル、エチルアミノメチル、ジ−イソ−プロピルアミノエチル、メチルチオ、エチルチオ、イソ−プロピルチオ、メタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、エノールエーテル、ジメチルアミノメチル、ジメチルアミノエチル、アセチル、プロピオニル、ブチリルオキシ、アセチルオキシ、メトキシカルボニル、エトキシ−カルボニル、プロピオニルオキシ、アセチルアミノ、プロピオニルアミノ、カルボキシメチル、カルボキシエチルまたはカルボキシプロピル、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルカルバモイルおよびＮ−メチルカルバモイルである。ヘテロアルキル基のさらなる例は、ニトリル、イソ−ニトリル、シアナート、チオシアナート、イソ−シアナート、イソ−チオシアナートおよびアルキルニトリルの各基である。
【００３８】
「アルケニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子、特に２〜６個、即ち２、３、４、５または６個の炭素原子を含有する少なくとも部分的に不飽和の直鎖または分岐鎖の炭化水素基を指す。アルケニル基の具体的な例は、エテニル（ビニル）、プロペニル（アリル）、イソ−プロペニル、ブテニル、エチニル、プロピニル、ブチニル、アセチレニル、プロパルギル、イソ−プレニルおよびヘキサ−２−エニル基である。アルケニル基は１つまたは２つの二重結合を有するのが好ましい。
【００３９】
「アルキニル」という用語は、２〜１０個の炭素原子、特に２〜６個、即ち２、３、４、５または６個の炭素原子を含有する少なくとも部分的に不飽和の直鎖または分岐鎖の炭化水素基を指す。アルキニル基の具体的な例は、エチニル、プロピニル、ブチニル、アセチレニルおよびプロパルギルの各基である。アルキニル基は、１つまたは２つの（特に好ましくは１つの）三重結合を有するのが好ましい。
【００４０】
「アリール」という用語は、６〜１４個の環炭素原子、好ましくは６〜１０個（特に６個）の環炭素原子を含有する１つまたは複数の環を含有する芳香族基を指す。その例は、フェニル、ナフチルおよびビフェニルの各基である。本発明において使用するのに好適な、置換されているアリール基の例として、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｓ）、ベンゼンスルホニル（Ｂｓ）およびｍ−ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｓ）が挙げられる。
【００４１】
本発明の好ましい化合物は、ＲがＣ１〜Ｃ１０アルキルである（および特に、Ｒがエチルである）ものである。
【００４２】
一実施形態では、脱離基は、ＯＣＨ２ＣＨ３、Ｏ−ｐ−トルエンスルホナート（ＯＴｓ）、Ｏ−メタンスルホナート（ＯＭｓ）、Ｏ−トリフルオロメタンスルホナート（ＯＴｆ）、Ｏ−ベンゼンスルホナート（ＯＢｓ）、Ｏ−ｍ−ニトロベンゼンスルホナート（ＯＮｓ）、シアナート（ＣＮ）、アジド（Ｎ３）およびハロゲン（例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素）から選択される。
【００４３】
本明細書で使用する場合、「放射性核種錯体」とう用語は、放射性核種と配位錯体を形成した、上記に定義した式（Ｉ）の化合物を指す。一般に、これは式（Ｉ）の化合物の電子供与基（ヒドロキサマート基など）と放射性核種との間の配位結合の形成の結果として生じるものである。
【００４４】
本発明の化合物において、配位結合は、ＤＦＯのヒドロキサム酸基と放射性核種との間に形成されることが前提とされる。しかしながら、理論に縛られることを望むものではないが、本発明者らは、スクアラート部分のオキソ基も（ＤＦＯのヒドロキサム酸基に加えて）ドナー原子として作用し、式（Ｉ）の化合物が放射性核種に結合することができる１つまたは２つの追加の部位を供給するとも考えている。これによって八配位錯体がもたらされ、このことは、八配位構造を有する放射性核種（８９Ｚｒなど）にとって安定性の観点から極めて好ましく、本発明の錯体について観察される安定性を説明するものであり得る。特に、このことは、放射性核種が標的組織から（骨などの他の組織へ）容易に浸出しない（このため、他のＤＦＯ系イメージング剤と比較した際にイメージングの質が改善されている）理由を説明するものであり得る。現在使用されているキレーターに対する本発明の化合物のこれらの利点は、図および実施例に例示されている。
【００４５】
図１、１８および２２に示すように、８９Ｚｒ（ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ）は極めて選択的に標的し、ＨＥＲ２陽性腫瘍ＢＴ４７４（乳癌）の部位に集中して留まっている。これは、放射性核種（それぞれ８９Ｚｒ（ＤＦＯ−マレイミド−トラスツズマブ）および８９ＺｒＣｌとして投与した場合）がマウスの身体全体に顕著に分布していることを示す図２および３の結果とは対照的である。上記のように、この改善された特異性に寄与すると考えられるものの１つは、スクアラート系作用剤が強力なキレート化力を有し、これにより、身体全体へのその分布ならびに他の組織、例えば、骨（ジルコニウムは骨に極めて高い親和性を有する）、肝臓および腎臓中の蓄積が防止されるというものである。
【００４６】
８９Ｚｒ（ＤＦＯ−ＰｈＮＣＳ）と比較した際のジルコニウムの高い親和性は、競争試験に示されている（実施例および図３９〜４１を参照）。吸光度および放射線スペクトルは、８９Ｚｒが本発明のコンジュゲート体（ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫ）とＤＦＯＰｈＮＣＳ−ｃＲＧＤｆＫとの混合物に曝露されると、８９Ｚｒはほとんど本発明のコンジュゲート体のみに錯体化されることを示している。
【００４７】
他に、特異性に寄与するものは、本発明の放射性核種で標識された化合物の代謝安定性であり得る。放射性核種を含有するが、トラスツズマブ部分を含まない代謝生成物（「非標的代謝生成物」）は、標的能力をもたず、放射性核種を身体全体に分布させることになる。この本発明の化合物の代謝安定性は予測され得ず、容易には説明され得ない。
【００４８】
本発明者らは、本発明の放射性核種で標識されたコンジュゲート体の代謝生成物が形成されるとしても、その代謝生成物は排泄率が高く、非標的部位での放射性核種の蓄積が低減され得ることも推論している。これも予想外の特性となるであろう。
【００４９】
本発明のコンジュゲート体のこの特異性および安定性は図２８および２９でも例証されており、これらは、他のＨＥＲ２陽性腫瘍（結腸直腸腫瘍モデルであるＬＳ１７４Ｔ、および卵巣癌モデルであるＳＫＯＶ３）についての８９Ｚｒ（ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ）のイメージング能力を示している。ＳＫＯＶ３腫瘍モデルにおいて８９Ｚｒ（ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ）について得られた結果（図２８）も、同じ腫瘍モデルであるが８９Ｚｒ（ＤＦＯ−ＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ）をイメージング剤として使用して得られた結果（図３７を参照）とは定性的に対照をなすものであり得、後者は、処置したマウス全体に放射性核種の顕著な分布を示している。
【００５０】
本発明の放射標識されたコンジュゲート体が他のコンジュゲート体、例えば８９Ｚｒ（ＤＦＯ−ＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ）より活性が優れていることは、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−ＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ）を使用したＳＫＯＶ３腫瘍のイメージングから得られた標準取込値（ＳＵＶ）（実施例の表７を参照）と比較した場合の、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−スクアラート−トラスツズマブ）を使用したＳＫＯＶ３腫瘍のイメージングから得られたＳＵＶ（実施例の表３を参照）によっても示されている。ＳＵＶは、基本的に、投与放射能で除算し、動物の体重で除算した組織の放射能濃度（時点ｔでの）である。したがって、ＳＵＶは、投与された放射能の様々な量および動物のサイズに対して標準化するものである。
【００５１】
一般に、最良の画像（および非標的器官に対して放射能毒性の少ない）は、腫瘍における放射能イメージング剤の取込み対非標的組織（骨および肝臓など）によるこの剤の取込みの比がより高い場合に得られる。比が高いほど、画像および放射能イメージング剤の選択性が良好になる。図３８のグラフは、本発明の放射標識されたコンジュゲート体（８９Ｚｒ（ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ））および８９Ｚｒ（ＤＦＯ−ＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ）について、腫瘍ＳＵＶｍａｘ、ならびに腫瘍：バックグラウンド、腫瘍：肝臓および腫瘍：骨のＳＵＶ比を示している。図３８から、全ての実験にわたって８９Ｚｒ（ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブのＳＵＶ比は、他の組織（肝臓および骨）中より標的部位に放射能が多いため、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−ＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ）のＳＵＶ比より高いことが見て取れる。このことは、本発明の放射標識されたコンジュゲート体が、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−ＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ）より選択的で安定した作用剤であることを示す。この腫瘍：バックグラウンド比の高さは有利である。
【００５２】
とりわけ、本発明の放射標識されたコンジュゲート体の取込みは、腫瘍のＨＥＲ２発現レベルにも依存している。ここに示すデータは、ＨＥＲ２発現レベルの高い腫瘍（ＢＴ４７４など）は、ＨＥＲ２発現の低い腫瘍（例えばＬＳ１７４Ｔで、これは「よりぼやけた」画像になる）よりコンジュゲート体の取込みが多い（したがって、より鮮明なＰＥＴ画像が生成する）ことを示している。ＨＥＲ２発現レベルが変わることで起こる、この画像の鮮明度の差違は、得られるＰＥＴ画像の鮮明度に影響するのは腫瘍のＨＥＲ２発現レベルであり、様々な代謝生成物の存在ではないことを強く示すものである。
【００５３】
本明細書で使用する場合、「放射性核種」という用語（一般に、放射性同位体または放射性同位元素とも呼ばれる）は、不安定核を有する原子である。これは放射性崩壊して、核放射線（例えばγ線および／またはα粒子もしくはβ粒子などの亜原子粒子）を放出する。一実施形態では、放射性核種は放射免疫治療用途にも有用なもの（例えばβ粒子放射体）である。放射性核種は八配位構造を有するのが好ましい。本発明において使用するのに好適な放射性核種の例として、ジルコニウム（例えば８９Ｚｒ）、ガリウム（例えば６７Ｇａおよび６８Ｇａ）、ルテチウム（例えば１７６Ｌｕおよび１７７Ｌｕ）、ホルミウム（例えば１６６Ｈｏ）、スカンジウム（例えば４４Ｓｃおよび４７Ｓｃ）、チタン（例えば４５Ｔｉ）、インジウム（例えば１１１Ｉｎおよび１１５Ｉｎ）、イットリウム（例えば８６Ｙおよび９０Ｙ）、テルビウム、例えば（１４９Ｔｂ、１５２Ｔｂ、１５５Ｔｂおよび１６１Ｔｂ）、テクネチウム（例えば９９ｍＴｃ）、サマリウム（例えば１５３Ｓｍ）およびニオブ（例えば９５Ｎｂおよび９０Ｎｂ）の各放射性同位体が挙げられる。本発明において使用する放射性核種は、ガリウム（特に６７Ｇａおよび６８Ｇａ）、インジウム（特に１１１Ｉｎ）およびジルコニウム（特に８９Ｚｒ）から選択されてもよい。本発明において使用する放射性核種は、６８Ｇａ、１１１Ｉｎおよび８９Ｚｒから選択されてもよい。例えば、６８ＧａはＤＦＯに結合することが示されており（Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ（２０１５）Ｍｏｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｂｉｏｌ，ｖｏｌ．１７，ｐａｇｅｓ  １０２−１１０を参照）、インジウムはジルコニウムと類似の配位化学構造を有する（したがって、同様に式（Ｉ）の化合物に結合すると予測される）。
【００５４】
本発明の化合物は、イメージング用途、例えばＭＲＩに使用される非放射性金属も錯体化し得ることが当業者には理解される。このような金属の例はガドリニウム（例えば１５２Ｇｄ）である。
【００５５】
上記のように、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩と標的分子とのコンジュゲート体にも関する。
【００５６】
本明細書で使用する場合、「標的分子」という用語は、特定の組織または腫瘍を標的とする能力を有する生体分子または生体分子の断片を指す。標的分子は、ポリペプチド、例えば、タンパク質（例えばトランスフェリンなどの輸送タンパク質）、アルブミン（例えば血清アルブミン）または抗体（例えばトラスツズマブ、別名ハーセプチン、ラニビズマブ、ベバシズマブ、フレソリムマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、ペルツズマブおよびオファツムマブ）であってもよい。抗体は、ハーセプチン、リツキシマブおよびセツキシマブから選択されてもよい。標的分子は、ペプチド（例えば腫瘍血管新生に関与している細胞を標的するために使用される標的ペプチド、例えば環状ＲＧＤ配列、または別の標的ペプチド、例えばオクトレオタート、ボンベシンおよびｇｌｕ−Ｎ（ＣＯ）Ｎ−ｌｙｓ  ＰＳＭＡ）であってもよい。標的分子は、スクアラート部分と反応して、標的分子と式（Ｉ）の化合物との間に共有結合を形成する官能基（リシン残基のアミン基など）を有する。このため、コンジュゲート体が形成される。コンジュゲート体は、式（Ｉ）の化合物に錯体化された放射性核種も含み得る。このようにして、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩と、標的分子と、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に錯体化された放射性核種との、放射性核種で標識されたコンジュゲート体が生成する。一実施形態では、放射性核種はジルコニウムの放射性同位体（例えば８９Ｚｒ）である。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物と放射性核種との錯体は、当業者に公知の任意の好適な方法で合成することができる。合成法の一例を以下のスキーム１に示す。
【化５】
2020114860.tif 000006
【００５８】
放射性核種錯体は、当業者に公知の任意の好適な方法で、対象の標的分子とコンジュゲート（して、放射標識されたコンジュゲート体を生成）することができる。好適な方法の一例を以下に記載する：
１．標的分子のホウ酸緩衝液溶液を、ｐＨ９、反応混合物の最終緩衝濃度が０．５Ｍになるような濃度で調製する。
２．ＤＦＯＳｑの４％ＤＭＳＯ溶液のＭｉｌｌｉＱ水溶液（ＤＦＯＳｑが十分に溶解していることを確実にするためにＤＭＳＯを最初に添加すべきである）を調製する。
３．ＤＦＯＳｑ溶液を必要に応じて標的分子に添加し、反応混合物を室温で終夜静置すべきである（反応時間が短いと、標的分子当たりの平均キレーター量が低くなる）。
４．コンジュゲート体は、スピンフィルターを適切な分画分子量（少なくとも１ｋＤａ）で使用して精製することができる。初期濾過後、コンジュゲート体をスピンフィルター上でＭｉｌｌｉＱ中４％ＤＭＳＯを用いて少なくとも２回洗浄し、過剰な全てのＤＦＯＳｑを除去するべきである。
５．スピンフィルターを使用しての緩衝液交換ステップにより、その後、コンジュゲート体の保管が可能になる（０．９％ＮａＣｌ溶液がＤＦＯＳｑ−ハーセプチンに推奨される）。
【００５９】
コンジュゲート体は放射性核種の非存在下でも調製され得ることも当業者には明白である。この実施形態では、コンジュゲート体が調製されてから、放射性核種がコンジュゲート体に添加される。
【００６０】
本発明は、
−  式（Ｉ）：
【化６】
2020114860.tif 000007
（式中、Ｌは脱離基である（本明細書に定義したとおり））
の化合物またはその薬学的に許容される塩と、
−  標的分子と、
−  式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に錯体化された放射性核種と
の放射性核種で標識されたコンジュゲート体、ならびに１種または複数種の薬学的に許容される担体物質、添加剤および／または補助剤を含む医薬組成物にも関する。
【００６１】
医薬組成物には、例えば、１種または複数種の水、緩衝液（例えば、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、クエン酸緩衝液および酢酸緩衝液）、エタノール、油、炭水化物（例えば、グルコース、フルクトース、マンノース、スクロースおよびマンニトール）、タンパク質、ポリペプチドもしくはアミノ酸、例えばグリシン、酸化防止剤（例えば亜硫酸水素ナトリウム）、等張化剤（例えば、塩化カリウムおよび塩化カルシウム）、キレート化剤、例えばＥＤＴＡもしくはグルタチオン、ビタミン類ならびに／または防腐剤を含めてもよい。
【００６２】
医薬組成物は、非経口投与用に製剤されるのが好ましいであろう。「非経口」という用語は、本明細書で使用する場合、皮下、皮内、血管内（例えば静脈内）、筋肉内、脊髄、頭蓋内、くも膜下腔内、眼内、眼周囲、眼窩内、滑液嚢内および腹腔内の各注射、ならびに任意の類似の注射または注入技術を含む。静脈内投与が好ましい。非経口製剤の好適な成分およびこのような製剤の作製方法は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」をはじめとする種々の文献に詳述されている。
【００６３】
本発明の組成物は、通常の方法で非経口的に患者に投与されることになる。その後、ＤＦＯ−スクアルアミドコンジュゲート錯体は、１時間〜２４時間のいずれかの時間をかけて、身体全体に分布して標的部位に向かうことができる。望ましい分布が実現したら、患者をイメージングすることになる。
【００６４】
したがって、本発明は、
−  上記に定義した放射性核種で標識されたコンジュゲート体を患者に投与するステップと、
−  前記患者をイメージングするステップと
を含む、患者をイメージングする方法にも関する。
【００６５】
本発明は、
−  本明細書に定義した放射性核種で標識されたコンジュゲート体を細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生検サンプルに投与するステップと、
−  細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生検サンプルをイメージングするステップと
を含む、細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生検サンプルをイメージングする方法に関する。
【００６６】
標的分子は、コンジュゲート体を、ｉｎ  ｖｉｖｏでの所望の部位に、または細胞中もしくは生検サンプル中の所望の部位に標的させる役割を果たすのが好ましい。所望の部位は腫瘍であるのが好ましい。
【００６７】
当然のことながら、任意の特定の患者用の特定の用量レベル、および作用剤が標的部位に到達するのにかかる時間の長さは、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路および排泄率ならびに治療を受けている特定の障害の重症度を含む種々の要因に依存するであろう。
【００６８】
「有効量」という用語は、放射性核種で標識されたコンジュゲート体を患者に投与した後に検出可能な放射線の量になる量を指す。当業者は、放射性核種で標識されたコンジュゲート体をどの程度の量で患者に投与すると、毒性の観点から問題を引き起こすことなく最適なイメージング能力を実現するかがわかるであろう。本発明の放射性核種で標識されたコンジュゲート体は、臨床医が、癌がどこにあるのか（標的、例えば受容体が腫瘍に均質に存在しているかどうかを含む）、癌がどのような処置に応答するか（これは処置の選択および最適投与量の決定を容易にする）、およびどの程度の量の処置が最終的に標的部位に到達するかを判断するのを補助することに特定の用途がある。本発明の放射性核種で標識されたコンジュゲート体は、特定の標的分子の薬物動態および生体内分布を試験する（例えば、モノクローナル抗体などの新規な生物学的治療剤の薬物開発中において）ために使用することもできる。
【００６９】
患者として、以下に限定されるものではないが、霊長目、特にヒト、飼われている伴侶動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ならびに家畜、例えば、ウシ、ブタおよびヒツジを挙げることができ、投与量は本明細書に記載されている。
【００７０】
上記のように、本発明の放射性核種で標識されたコンジュゲート体は、腫瘍（細胞の制御不能または進行性の増殖の結果として形成する）をイメージングするのに特に有用である。制御不能に増殖するこのような細胞には良性のものもあるが、「悪性」と呼ばれ、生体の死亡につながる恐れのあるものもある。悪性新生物または「癌」は、活発な細胞増殖を呈することに加えて、周辺組織に侵入し、転移する恐れがあるという点で、良性腫瘍と区別される。さらに、悪性新生物は、分化の喪失が大きく（「脱分化」が大きい）、互いに対するおよびその周辺組織に対する組織化の喪失が大きいことを特徴とする。この特性は、「退形成性」とも呼ばれている。本発明によって処置可能な新生物には、固形相の腫瘍／悪性腫瘍、即ち癌腫、局所進行性の腫瘍およびヒト軟部肉腫も含まれる。癌腫には、周辺組織に浸潤（侵入）し、転移性の癌を引き起こす（リンパ行性転移を含む）、上皮細胞由来の悪性新生物が含まれる。
【００７１】
腺癌とは、腺組織に由来する癌腫、または認識できる腺状構造を形成する癌腫である。別の広範な分類の癌には、細胞が胎生結合組織のような原線維物質または同質の物質中に埋没している腫瘍である肉腫が含まれる。
【００７２】
本発明によるイメージングに適用できる場合がある癌または腫瘍細胞の種類には、例えば、乳癌、結腸癌、肺癌および前立腺癌、消化管癌（食道癌、胃癌、結腸直腸癌、結腸直腸新生物に関連するポリープ、膵癌および胆嚢癌を含む）、副腎皮質の癌、ＡＣＴＨ産生腫瘍、膀胱癌、脳癌（内因性脳腫瘍、神経芽細胞腫、星細胞脳腫瘍、神経膠腫、および中枢神経系の転移性腫瘍細胞侵入を含む）、ユーイング肉腫、頭頚部癌（口腔癌および喉頭癌を含む）、腎癌（腎細胞癌を含む）、肝癌、肺癌（小細胞肺癌および非小細胞肺癌を含む）、悪性の腹水、悪性の胸水、皮膚癌（悪性黒色腫、ヒト皮膚ケラチノサイトの腫瘍進行、扁平上皮癌、基底細胞癌および血管周皮腫を含む）、中皮腫、カポジ肉腫、骨癌（骨腫を含む）および肉腫（線維肉腫および骨肉腫など）、女性生殖器官の癌（子宮癌、子宮内膜癌、卵巣癌、卵胞中の卵巣（生殖細胞）癌および固形腫瘍、腟癌、外陰部の癌、および子宮頚癌を含む）、乳癌（小細胞および乳管）、陰茎癌、網膜芽細胞腫、精巣癌、甲状腺癌、絨毛性新生物ならびにウィルムス腫瘍が含まれる。
【００７３】
本発明の放射性核種で標識されたコンジュゲート体は、抗癌活性を有する薬物と一緒に投与することも有利な場合がある。この点で好適な薬物の例として、フルオロウラシル、イミキモド、アナストロゾール、アキシチニブ、ベリノスタット、ベキサロテン、ビカルタミド、ボルテゾミブ、ブスルファン、カバジタキセル、カペシタビン、カルムスチン、シスプラチン、ダブラフェニブ、ダウノルビシン塩酸塩、ドセタキセル、ドキソルビシン、エロキサチ（ｅｌｏｘａｔｉ）、エルロチニブ、エトポシド、エキセメスタン、フルベストラント、メトトレキサート、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、イホスファミド、イリノテカン、イキサベピロン、ラナリドミド（ｌａｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、レトロゾール、ロムスチン、酢酸メゲストロール、テモゾロミド、ビノレルビン、ニロチニブ、タモキシフェン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ラロキシフェン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、サリドマイド、トポテカン、ベルムラフェニブ（ｖｅｒｍｕｒａｆｅｎｉｂ）およびビンクリスチンが挙げられる。
【００７４】
本発明の放射性核種で標識されたコンジュゲート体は、特定の腫瘍が１種または複数種の受容体を有しているかどうか、したがって患者が特定の治療の恩恵を受けることができるかどうかを判断するためにも使用することができる。例えば、放射標識されたコンジュゲート体中にハーセプチンを標的分子として使用することにより、患者の腫瘍のＨＥＲ２受容体の存在を試験することができる。腫瘍がＨＥＲ２陰性である（即ちＨＥＲ２受容体を有していない）場合、イメージング剤は腫瘍に「付着する」ことがなく、ハーセプチンはその患者に有用な治療になり得ないことを示す。
【００７５】
当然のことながら、本明細書に開示され、定義されている本発明は、記載されているまたは本明細書もしくは図面から明白な２つ以上の個々の特長の、全ての選択し得る組合せに及ぶものである。これらの異なる組合せの全ては、本発明の種々の選択し得る態様を構成する。
【実施例】
【００７６】
試薬および溶媒は全て、標準的な販売元から入手し、特記しない限り、受領したままの状態で使用した。
【００７７】
１Ｈスペクトルおよび１３Ｃスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ  ＦＴ−ＮＭＲ  ４００またはＶａｒｉａｎ  ＦＴ−ＮＭＲ  ５００（Ｖａｒｉａｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）を用いて記録した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、４００または５００ＭＨｚで取得し、１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは１０１または１２５ＭＨｚで取得した。ＮＭＲスペクトルは全て、特記しない限り２５℃で記録した。報告された化学シフト（百万分率において）は、残留溶媒シグナルに関して記載されている。
【００７８】
非タンパク質サンプルのＥＳＩ−ＭＳを、Ａｇｉｌｅｎｔ  ６５１０  ＥＳＩ−ＴＯＦ  ＬＣ／ＭＳ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）で記録した。
【００７９】
分析用逆相ＨＰＬＣをＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓで行った。Ａｇｉｌｅｎｔ  ６２２０  ＥＳＩ−ＴＯＦ  ＬＣ／ＭＳ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＬＣシステムに連結させて（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＰａｌｏＡｌｔｏ、ＣＡ）使用して、タンパク質サンプルを分析した。全てのデータが得られ、参照質量をデュアルスプレーエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源によって補正した。データ取得はＡｇｉｌｅｎｔ  Ｍａｓｓ  Ｈｕｎｔｅｒ  ＡｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアバージョンＢ．０２．０１（Ｂ２１１６．３０）を使用して行った。イオン化モード：エレクトロスプレーイオン化；乾燥ガス流量：７Ｌ／分；ネブライザー：３５ｐｓｉ；乾燥ガス温度：３２５℃；キャピラリー電圧（Ｖｃａｐ）：４０００Ｖ；フラグメンター：３００Ｖ；スキマー：６５Ｖ；ＯＣＴ  ＲＦＶ：２５０Ｖ；得られたスキャン範囲：３００〜３２００ｍ／ｚ；内部基準イオン：陽イオンモード＝ｍ／ｚ＝１２１．０５０８７３および９２２．００９７９８。
【００８０】
タンパク質の脱塩およびクロマトグラフィーの分離を、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  ２．１×７５ｍｍ、５μｍカラムを使用し、５％（ｖ／ｖ）アセトニトリルを送液してなくなるまで（０〜５分）使用して、行った。サンプルを脱塩した後、流れをＥＳＩ源に戻し入れ、次に（５％（ｖ／ｖ）〜１００％（ｖ／ｖ））アセトニトリル／０．１％ギ酸を用いて８分にわたり０．２５ｍＬ／分で勾配溶離を行った。Ｍａｓｓ  ＨｕｎｔｅｒバージョンＢ．０６．００をＢｉｏＣｏｎｆｉｒｍソフトウェアとともに使用し、最大エントロピータンパク質デコンボリューションアルゴリズム；質量ステップ（ｍａｓｓ  ｓｔｅｐ）１Ｄａ；ベースライン係数３．００；不確定に設定したピーク幅を用いて分析を行った。
【００８１】
サイズ排除ＨＰＬＣを、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＣＬ−１０Ａ  ＶＰ／ＬＣ−１０  ＡＴ  ＶＰシステムとＳｈｉｍａｄｚｕ  ＳＰＤ−１０Ａ  ＶＰ  ＵＶ検出器とで行い、次いで放射線検出器（前置増幅器であるＯｒｔｅｃ  ９２５−ＳＣＩＮＴ  ＡＣＥ  ｍａｔｅ前置増幅器を接続したＯｒｔｅｃモデル２７６光電子増倍管ベース、ＢＩＡＳ  ｓｕｐｐｌｙ  ａｎｄ  ＳＣＡ、Ｂｉｃｒｏｎ  １Ｍ  １１／２光電子増倍管）で行った。Ｂｉｏｓｕｉｔｅ  １２５  ＨＲ  ＳＥＣ  ５μｍ  ７．８×３００ｍｍカラムを、流速０．６ｍＬ／分で、溶離液として５％イソプロパノールを含むダルベッコＰＢＳとともに使用した。Ｒａｙｔｅｓｔ  Ｒｉｔａ−Ｓｔａｒ  ＴＬＣスキャナーを使用してラジオ−ｉＴＬＣを分析した。
【００８２】
ＤＦＯ−スクアルアミド（ＤＦＯＳｑ）の合成
【化７】
2020114860.tif 000008
デスフェリオキサミンＢメシラート（０．２０ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）との混合物をＥｔＯＨ（６ｍＬ）中で５０℃において撹拌した。１時間後、ＥｔＯＨ（９ｍＬ）中３，４−ジエトキシ−３−シクロブテン−１，２−ジオン（０．１ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）を添加した。５０℃でさらに３０分撹拌してから、溶媒を減圧留去し、残渣をＥｔＯＨ（３×１０ｍＬ）でトリチュレートした。生成物を真空乾燥して、ＤＦＯＳｑを白色粉末（０．１７ｇ、８３％）として得た。
【００８３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，５００ＭＨｚ）δ  ９．６１（ｓ，６Ｈ），８．７７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．５８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，５Ｈ），４．６４（ｐ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，５Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），３．３８（ｓ，５Ｈ），３．２６（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，６．４Ｈｚ，１０Ｈ），２．５６（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），２．２６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９６（ｓ，７Ｈ），１．５０（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），１．４２−１．３１（ｍ，３Ｈ），１．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝２０．２，１４．７，８．０Ｈｚ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，１０１ＭＨｚ）δ  １８９．３９，１８９．３０，１８２．０５，１８１．８４，１７６．９３，１７６．４７，１７２．５８，１７２．１７，１７１．９７，１７１．３０，１７０．１３，７０．１８，６８．７７，６８．７３，４７．０９，４７．０１，４６．７９，４３．６８，４３．３９，３９．５２，３８．４２，３０．１０，２９．９０，２９．６０，２８．８２，２７．５６，２６．０４，２５．８２，２３．５０，２２．９２，２０．３５，１５．６４；ＨＲＭＳ  ＥＳＩ［Ｍ＋Ｈ＋］：６８５．３７６８，（Ｃ３１Ｈ５３Ｎ６Ｏ１１）＋の計算値：６８５．３７６７，［Ｍ＋Ｎａ＋］：７０７．３５８９，（Ｃ３１Ｈ５２ＮａＮ６Ｏ１１）＋の計算値：７０７．３５８６。
【００８４】
放射標識
Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２Ｍ、４．５μＬ）を、８９Ｚｒの１Ｍシュウ酸（１０ＭＢｑ、１０μＬ）溶液に、ｐＨが増加して１０になるまで添加した。次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、５０μＬ）を添加し、この溶液を５分間静置した。中性ｐＨを確認し、次いでＤＦＯＳｑのＤＭＳＯ（１μＬ、０．１８μｍｏｌ）溶液を添加した。１時間後、反応完了をラジオ−ｉＴＬＣ（シリカ注入ガラス繊維プレート、２０ｍＭ  ｐＨ５クエン酸緩衝液、生成物Ｒｆ＝０）およびＳＥＨＰＬＣ（ＢｉｏＳｕｉｔｅ  １２５、５μｍ  ＨＲ  ＳＥＣ  ７．８×３００ｍｍカラム、溶離液として５％ｉ−ＰｒＯＨを含む２０ｍＭ  ｐＨ７ダルベッコＰＢＳ、０．６ｍＬ／分、生成物保持時間２１．８０分）によって確認した。
【００８５】
ラジオ−ｉＴＬＣ
対照（即ちＤＦＯＳｑなし）のクロマトグラムが図４に示されている。これは、ＤＦＯＳｑが存在しない場合、ジルコニウムを含有する溶液が溶媒先端とともに動く（予測どおり）ことを示している。
【００８６】
８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ錯体のクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から６０分後）が図５に示されている。これは、ジルコニウムがＤＦＯＳｑに錯体化されているため、この場合はジルコニウムが基線（即ち「原点」）に保持されていることを示している。
【００８７】
サイズ排除ＨＰＬＣ
対照のＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラム（２８０および２５４ｎｍの２つの異なる吸収波長での）および放射線クロマトグラム（検出器としてガイガー計数管を使用して取得）が図６に示されている。
【００８８】
８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ錯体のＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラム（８９Ｚｒの添加から７８時間後）が図７に示されている。
【００８９】
８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫの合成および分析
ＤＦＯＳｑ（５ｍｇ、７μｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３５μＬ）溶液をｐＨ９ホウ酸緩衝液（０．５Ｍ、９６５μＬ）中ｃＲＧＤｆＫ（３ｍｇ、５μｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で５日間静置し、次いでセミ分取ＨＰＬＣ（ＰｒｏｔｅＣｏｌ  Ｃ１８カラム）で精製してＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫを白色固体（０．００２ｇ、３２％）として得た。
【００９０】
ＨＲＭＳ  ＥＳＩ［Ｍ＋Ｈ＋］：６０４．３１９６、（Ｃ２７Ｈ４２Ｎ９Ｏ７）＋の計算値：６０４．３２０２、［Ｍ＋２Ｈ＋］：３０２．６６３７、（Ｃ２７Ｈ４３Ｎ９Ｏ７）２＋の計算値：３０２．６６３８。
【００９１】
放射標識するため、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２Ｍ、４．５μＬ）を、８９Ｚｒの１Ｍシュウ酸（１０ＭＢｑ、１０μＬ）溶液に、ｐＨが増加して１０になるまで添加した。次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、５０μＬ）を添加し、この溶液を５分間静置した。中性ｐＨを確認し、次いでＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫのＨ２Ｏ溶液（１０μＬ、０．００８μｍｏｌ）を添加した。７０分後、反応完了をラジオ−ｉＴＬＣ（シリカ注入ガラス繊維プレート、溶離液として０．１Ｍ  ｐＨ６クエン酸緩衝液、生成物Ｒｆ＝０）によって確認した。
【００９２】
８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から６０分後に取得）が図８に示されている。
【００９３】
８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ−トランスフェリンの合成および分析
ＤＦＯＳｑ（０．１７ｍｇ、０．２５μｍｏｌ）のＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ（１：１０、２６μＬ）溶液をヒトホロ−トランスフェリン（１．０ｍｇ、０．０１３μｍｏｌ）のｐＨ９ホウ酸緩衝液（０．５Ｍ、９７４μＬ）溶液に添加した。反応混合物を室温で１７時間静置し、次いでＡｍｉｃｏｎ  １０ｋＤａ遠心分離フィルターを使用して濾過した。粗生成物をＮａＣｌ溶液（０．９％ｗ／ｖ、２×４００μＬ）で洗浄し、濃縮物を回収してＤＦＯＳｑ−トランスフェリン（１．２５ｍｇ、０．０１２μｍｏｌ）を得た。生成物をＬＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  ５μｍ  ２．１  ７５ｍｍカラム）で分析し、その分析により、トランスフェリン（Ｔｆ）と２〜８個のキレーターとの混合物および平均４．５個のキレーター／タンパク質が示された（図９を参照）。
【００９４】
放射標識するために、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２Ｍ、１０μＬ）を、８９Ｚｒの１Ｍシュウ酸（１．２ＭＢｑ、２０μＬ）溶液に、ｐＨが増加して１０になるまで添加した。次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、３０μＬ）を添加し、この溶液を５分間静置した。中性ｐＨを確認し、次いでＤＦＯＳｑ−Ｔｆの０．９％ＮａＣｌ（２μＬ、１００μｇ）溶液を添加した。２０分後、反応が完了し、これをラジオ−ｉＴＬＣ（シリカ注入ガラス繊維プレート、溶離液として０．１Ｍ  ｐＨ６クエン酸緩衝液、生成物Ｒｆ＝０）およびＳＥＨＰＬＣ（ＢｉｏＳｕｉｔｅ  １２５、５μｍ  ＨＲ  ＳＥＣ  ７．８×３００ｍｍカラム、溶離液として５％ｉＰｒＯＨを含む２０ｍＭ  ｐＨ７ダルベッコＰＢＳ、生成物保持時間１２．５６分）によって確認した。
【００９５】
８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｔｆのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から２０分後に取得）が図１０に示されている。
【００９６】
８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−ＴｆのＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラム（８９Ｚｒの添加から２０分後）が図１１に示されている。
【００９７】
ＢＴ４７４腫瘍担持マウスにおける８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ−ハーセプチンの合成および分析  −  試験１
ＤＦＯＳｑ（０．４６ｍｇ、０．６７μｍｏｌ）のＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ（１：１０、２２８μＬ）溶液を臨床グレードのトラスツズマブ（５．０ｍｇ、０．０３４μｍｏｌ）の溶液に添加し、反応混合物を周囲温度でｐＨ９ホウ酸緩衝液（０．５Ｍ、総体積１．０ｍＬ）に入れて静置した。１６時間後、この溶液を、Ａｍｉｃｏｎ  ５０ｋＤａ遠心分離フィルターを使用して濃縮した。次いでフィルターを使用して、粗生成物をＮａＣｌ／ＤＭＳＯ溶液（０．９％ｗ／ｖ  ＮａＣｌ、５％ＤＭＳＯ、４×４００μＬ）で洗浄し、次いでＮａＣｌ溶液（０．９％ｗ／ｖ、４００μＬ）で洗浄し、濃縮物を回収して、ＤＦＯＳｑ−ハーセプチン（１．４ｍｇ、０．００９３μｍｏｌ、２８％）を得た。生成物をＬＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  ５μｍ  ２．１  ７５ｍｍカラム）で分析し、その分析により、ハーセプチン（Ｈｅｒｃ）と２〜７個のキレーターとの混合物および平均４．５個のキレーター／抗体が示された（図１２を参照）。
【００９８】
放射標識するために、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２Ｍ、２５μＬ）を、８９Ｚｒの１Ｍシュウ酸（５５ＭＢｑ、７５μＬ）溶液に、ｐＨが増加して１０になるまで添加した。次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、１００μＬ）を添加し、この溶液を５分間静置した。中性ｐＨを確認し、次いでＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃの０．９％ＮａＣｌ（４μＬ、２２５μｇ）溶液を添加した。２５分後、反応完了をラジオ−ｉＴＬＣ（シリカ注入ガラス繊維プレート、溶離液として０．１Ｍ  ｐＨ６クエン酸緩衝液、生成物Ｒｆ＝０）によって確認した。反応混合物を、ＰＤ−１０サイズ排除カラムにおいて、溶離液としてｐＨ７のＰＢＳ（２０ｍＭ、５％ゲンチジン酸ナトリウムを含む）を使用して精製した。カラム充填後、素通り画分を廃棄し、第１の画分（１．５ｍＬ、４５ＭＢｑ）を回収した。生成物をラジオ−ｉＴＬＣおよびＳＥＨＰＬＣ（ＢｉｏＳｕｉｔｅ  １２５、５μｍ  ＨＲ  ＳＥＣ  ７．８×３００ｍｍカラム、溶離液として５％ｉＰｒＯＨを含む２０ｍＭ  ｐＨ７ダルベッコＰＢＳ、生成物保持時間１２．５５分）で分析した。
【００９９】
８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラム（８９Ｚｒの添加から２５分後に取得）が図１３に示されている。
【０１００】
精製した８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−Ｈｅｒｃのラジオ−ｉＴＬＣクロマトグラムが図１４  に示されている。
【０１０１】
非放射性（即ち非標識の）ＤＦＯＳｑ−ＨｅｒｃのＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラムが図１５に示されている。
【０１０２】
８９Ｚｒ標識ＤＦＯＳｑ−ＨｅｒｃのＵＶ−Ｖｉｓクロマトグラムおよび放射線クロマトグラム（精製から２４時間後に取得）が図１６に示されている。
【０１０３】
８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ−ハーセプチンを使用したマウスイメージング
５％ゲンチジン酸ナトリウム（２００μＬ、６．０ＭＢｑずつ）を含む８９ＺｒＤＦＯＳｑ−ハーセプチンの２０ｍＭ  ＰＢＳ（ｐＨ７）溶液を２用量調製し、ＢＴ４７４腫瘍担持マウスに尾静脈注射によって投与した。ＰＥＴ画像を、投与後２２時間、４６時間、９４時間および８日の間隔で取得した（図１７および１８を参照）。
【０１０４】
下表（表１）に各マウスの各時点での標準取込値（ＳＵＶ）を記載している。
【０１０５】
【表１】
2020114860.tif 000009
【０１０６】
比較試験も行い、腫瘍イメージング剤としての本発明の化合物（特に８９Ｚｒ（ＤＦＯ−スクアラート−トラスツズマブ））の有効性を、他の２種のイメージング剤（８９Ｚｒ（ＤＦＯ−マレイミド−トラスツズマブ）および９ＺｒＣｌ）と比較した。８９Ｚｒ（ＤＦＯ−マレイミド−トラスツズマブ）は、５０倍過剰のＤＦＯ−マレイミドを水に溶解し、これをＰＢＳ緩衝液中トラスツズマブ（ハーセプチン）に添加して調製した。未反応のＤＦＯ−マレイミドをスピン濾過によって除去し、精製したコンジュゲート体を、ＤＦＯ−スクアラートについて上に記載したように８９Ｚｒ（ｏｘ）４で放射標識した。
【０１０７】
ＨＥＲ２陽性腫瘍を有するマウスに、５％ゲンチジン酸ナトリウム（２００μＬ、６．０ＭＢｑずつ）を伴う、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−スクアラート−トラスツズマブ）、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−マレイミド−トラスツズマブ）または８９ＺｒＣｌを含有する２０ｍＭ  ＰＢＳ（ｐＨ７）溶液２用量を注射した。ＰＥＴ画像を、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−スクアラート−トラスツズマブ）で処置したマウスについては投与後２２時間、４６時間、９４時間および８日の間隔で取得し、８９Ｚｒ（ＤＦＯ−マレイミド−トラスツズマブ）で処置したマウスおよび８９ＺｒＣｌで処置したマウスについては２４時間で取得した（それぞれ図１、２および３を参照）。
【０１０８】
ＢＴ４７４腫瘍担持マウスにおいて８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ−ハーセプチンを使用したイメージング試験  −  試験２
トラスツズマブ（２ｍｇ）をｐＨ９．０ホウ酸緩衝液（０．５Ｍ、３５５μＬ）に希釈し、ＤＦＯＳｑのＤＭＳＯ（１ｍｇ／ｍＬ、４５μＬ、５当量）溶液を添加した。この混合物を周囲温度で４０時間インキュベートし、５０ｋＤａ  Ａｍｉｃｏｎスピンフィルターを使用して精製し、４％ＤＭＳＯの生理食塩水溶液（３×３００μＬ）で洗浄し、次いで生理食塩水のみ（３００ｕＬ）で洗浄した。精製したコンジュゲート体のＥＳＩ  ＭＳ分析により、０〜５個のキレーターの結合および平均２個のキレーター／ｍＡｂが示された。精製したＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ溶液を直ちに使用して放射標識した。
【０１０９】
ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブの８９Ｚｒ放射標識
８９Ｚｒの１Ｍシュウ酸（１５０ＭＢｑ、１１２μＬ）溶液をＭｉｌｌｉＱ水（２５０μＬ）で希釈し、ｐＨが増加して７になるまでＮａ２ＣＯ３水溶液（２Ｍ、３２．５μＬ）を少量ずつ添加した。次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、１２０μＬ）を添加し、この溶液を５分間静置した。０．９％ＮａＣｌ（５６μＬ、６７５μｇ）中ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブを添加した。３０分後、反応完了をラジオ−ｉＴＬＣ（シリカ注入ガラス繊維プレート、溶離液として０．１Ｍ  ｐＨ６クエン酸緩衝液、生成物Ｒｆ＝０）によって確認した。反応混合物を、ＰＤ−１０サイズ排除カラムにおいて、溶離液としてｐＨ７ダルベッコＰＢＳ（２０ｍＭ、５％ゲンチジン酸ナトリウムを含む）を使用して精製した。カラム充填後、素通り画分を廃棄し、２つの画分（画分Ａ：０．５ｍＬ、画分Ｂ：１．０ｍＬ、９０．２ＭＢｑ）を回収した。画分ＢをＳＥ−ＨＰＬＣ（ＢｉｏＳｕｉｔｅ  １２５、５μｍ  ＨＲ  ＳＥＣ  ７．８×３００ｍｍカラム、溶離液として５％ｉＰｒＯＨを含む２０ｍＭ  ｐＨ７ダルベッコＰＢＳ、生成物保持時間約１２．５分）で分析した。
【０１１０】
８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ：マウスＰＥＴイメージング（ＢＴ４７４）
４用量（７．５ＭＢｑずつ）を、精製したｍＡｂ溶液から引き上げ、ＢＴ４７４腫瘍担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに投与した。ＰＥＴイメージングを２４時間、４８時間および９６時間時点で行った。９６時間で生体内分布データを取るためにマウスを処分した。
【０１１１】
【表２】
2020114860.tif 000010
【０１１２】
ＳＫＯＶ３またはＬＳ１７４Ｔ腫瘍担持マウスにおける８９Ｚｒ  ＤＦＯＳｑ−ハーセプチンの合成、分析およびイメージング試験
ＤＦＯＳｑのトラスツズマブへのコンジュゲート
トラスツズマブ（１０ｍｇ）をｐＨ９．０ホウ酸緩衝液（０．５Ｍ、１．５ｍＬ）に希釈し、ＤＦＯＳｑのＤＭＳＯ（２ｍｇ／ｍＬ、４５５μＬ、１６当量）溶液を添加した。この混合物を周囲温度で終夜インキュベートし、５０ｋＤａ  Ａｍｉｃｏｎスピンフィルターを使用して精製し、４％ＤＭＳＯの生理食塩水（２×３００μＬ）溶液で洗浄し、次いで生理食塩水のみ（３００ｕＬ）で洗浄した。精製したコンジュゲート体のＥＳＩ  ＭＳ分析により、１〜６個のキレーターの結合および平均３．４個のキレーター／ｍＡｂが示された。精製したＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ溶液を４℃で８〜９日間保管してから放射標識した。
【０１１３】
ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブの８９Ｚｒ放射標識
８９Ｚｒの１Ｍシュウ酸（１５０ＭＢｑ、１９５μＬ）溶液をＭｉｌｌｉＱ水（３５０μＬ）で希釈し、ｐＨが増加して８になるまでＮａ２ＣＯ３水溶液（２Ｍ、６５μＬ）を少量ずつ添加した。次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、２００μＬ）を添加し、この溶液を５分間静置した。０．９％ＮａＣｌ（８μＬ、６７５μｇ）中ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブを添加した。１時間後、反応完了をラジオ−ｉＴＬＣ（シリカ注入ガラス繊維プレート、溶離液として０．１Ｍ  ｐＨ６クエン酸緩衝液、生成物Ｒｆ＝０）によって確認した。反応混合物を、ＰＤ−１０サイズ排除カラムにおいて、溶離液としてｐＨ７ダルベッコＰＢＳ（２０ｍＭ、５％ゲンチジン酸ナトリウムを含む）を使用して精製した。カラム充填後、素通り画分を廃棄し、第１の画分（１．０ｍＬ、５４ＭＢｑ）を回収した。生成物をＳＥＨＰＬＣ（ＢｉｏＳｕｉｔｅ  １２５、５μｍ  ＨＲ  ＳＥＣ  ７．８×３００ｍｍカラム、溶離液として５％ｉＰｒＯＨを含む２０ｍＭ  ｐＨ７ダルベッコＰＢＳ、生成物保持時間約１２．５分）によって分析した。
【０１１４】
８９Ｚｒの１Ｍシュウ酸（１４５ＭＢｑ、１９５μＬ）溶液をＭｉｌｌｉＱ水（４００μＬ）で希釈し、ｐＨが増加して１０になるまでＮａ２ＣＯ３水溶液（２Ｍ、７５μＬ）を少量ずつ添加した。次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７、２５０μＬ）を添加し、この溶液を５分間静置した。０．９％ＮａＣｌ（８μＬ、６７５μｇ）中ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブを添加した。１．５時間後、反応完了をラジオ−ｉＴＬＣ（シリカ注入ガラス繊維プレート、溶離液として０．１Ｍ  ｐＨ６クエン酸緩衝液、生成物Ｒｆ＝０）によって確認した。反応混合物を、ＰＤ−１０サイズ排除カラムにおいて、溶離液としてｐＨ７ダルベッコＰＢＳ（２０ｍＭ、５％ゲンチジン酸ナトリウムを含む）を使用して精製した。カラム充填後、１ｍＬの素通り画分を廃棄し、第１の画分（１．０ｍＬ、４７ＭＢｑ）を回収した。生成物をＳＥＨＰＬＣ（ＢｉｏＳｕｉｔｅ  １２５、５μｍ  ＨＲ  ＳＥＣ  ７．８×３００ｍｍカラム、溶離液として５％ｉＰｒＯＨを含む２０ｍＭ  ｐＨ７ダルベッコＰＢＳ、生成物保持時間約１２．５分）によって分析した。１１分時点でのシグナルは、放射標識前の保管中の振動により生じた抗体の凝集によるものと推定される。
【０１１５】
８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ：マウスＰＥＴイメージング（ＳＫＯＶ３）
３用量（７．５ＭＢｑずつ）を、精製したｍＡｂ溶液から引き上げ、ＳＫＯＶ３腫瘍担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに投与した。ＰＥＴイメージングを２４時間、４８時間および９６時間時点で行った。９６時間で生体内分布データを取るためにマウスを処分した。
【０１１６】
【表３】
2020114860.tif 000011
【０１１７】
【表４】
2020114860.tif 000012
【０１１８】
８９Ｚｒ−ＤＦＯＳｑ−トラスツズマブ：マウスＰＥＴイメージング（ＬＳ１７４Ｔ）
３用量（７．５ＭＢｑずつ）を、精製したｍＡｂ溶液から引き上げ、ＬＳ１７４Ｔ腫瘍担持ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに投与した。ＰＥＴイメージングを２４時間、４８時間および９６時間時点で行った。９６時間で生体内分布データを取るためにマウスを処分した。
【０１１９】
【表５】
2020114860.tif 000013
【０１２０】
【表６】
2020114860.tif 000014
【０１２１】
ＳＫＯＶ３腫瘍担持マウスにおける８９Ｚｒ  ＤＦＯ−Ｐｈ−ＮＣＳ−ハーセプチンの合成、分析およびイメージング試験
ＤＦＯＰｈＮＣＳの合成
【化８】
2020114860.tif 000015
デスフェリオキサミン（２０３ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）をｉＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ（３２：３ｍＬ）中で撹拌し、Ｐｈ（ＮＣＳ）２（２７１ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３（２０ｍＬ）溶液を添加した。トリエチルアミン（１００μＬ、０．７１７ｍｍｏｌ）を直ちに添加し、反応混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。ＨＣｌ（０．１Ｍ、２５ｍＬ）を添加し、有機層を分離した。溶媒を蒸発させてベージュ色固体を得、これをＣＨ２Ｃｌ２でトリチュレートした。残留固体を濾別し、乾燥させてＤＦＯＰｈＮＣＳを白色粉末（２０７ｍｇ、８９％）として得た。ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋：７５３．３４、（Ｃ３３Ｈ５３Ｎ８Ｏ８Ｓ２）＋の計算値：７５３．３４。分析用ＨＰＬＣ：方法Ａ、保持時間８．９５分。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ｄｍｓｏ）δ  ７．９８（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．５２−３．３９（ｍ，Ｊ＝１３．９，７．０Ｈｚ，８Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，６．５Ｈｚ，４Ｈ），２．６１−２．５４（ｍ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，４Ｈ），２．３１−２．２４（ｍ，Ｊ＝１０．４，５．４Ｈｚ，４Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．５９−１．４５（ｍ，Ｊ＝２２．１，１４．６，７．３Ｈｚ，８Ｈ），１．４２−１．３３（ｍ，４Ｈ），１．３０−１．１６（ｍ，Ｊ＝１８．８，１５．３，７．１Ｈｚ，８Ｈ）。
【０１２２】
ＤＦＯＰｈＮＣＳのトラスツズマブへのコンジュゲート
手順はＶｏｓｊａｎ，Ｍ．Ｊ．Ｗ．Ｄ．；Ｐｅｒｋ，Ｌ．Ｒ．；Ｖｉｓｓｅｒ，Ｇ．Ｗ．Ｍ．；Ｂｕｄｄｅ，Ｍ．；Ｊｕｒｅｋ，Ｐ．；Ｋｉｅｆｅｒ，Ｇ．Ｅ．；ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ，Ｇ．Ａ．Ｍ．Ｓ．，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２０１０，５（４），７３９−７４３のとおりに従った。
【０１２３】
トラスツズマブ（３．０３ｍｇ）を生理食塩水（１ｍＬ）に希釈し、この溶液を０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３でｐＨ９に調整した。ＤＭＳＯ（２．３ｍｇ／ｍＬ、２０μＬ）中３倍過剰のＤＦＯＰｈＮＣＳを、小分けにして継続的に緩やかに振盪させながらｍＡｂ溶液に添加した。この混合物を３７℃において５５０ｒｐｍで３０分間インキュベートし、ＰＤ−１０カラムにおいて、溶離液としてゲンチジン酸（５ｍｇ／ｍＬ）／酢酸ナトリウム（０．２５Ｍ）緩衝液（ｐＨ５．５）を使用して精製した。精製したＤＦＯＰｈＮＣＳ−ｍＡｂ溶液を−２０℃で５日間保管してから放射標識した。コンジュゲート体のＥＳＩ  ＭＳ分析により、０〜１個のキレーター結合および平均０．２個のキレーター／ｍＡｂが示された。
【０１２４】
ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブの８９Ｚｒ放射標識
手順はＶｏｓｊａｎ、Ｍ．Ｊ．Ｗ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ（上記）のとおりに従った。
【０１２５】
Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍ、９０μＬ）を８９Ｚｒ（２００μＬ、５５ＭＢｑ）のシュウ酸（１Ｍ）溶液に添加した。この混合物を周囲温度で３分間、緩やかに振盪させながらインキュベートした。次に、ＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７．２、３００μＬ）、次いでＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ溶液（７１０μＬ）、次いでＨＥＰＥＳ緩衝液（０．５Ｍ、ｐＨ７．０、７００μＬ）を添加した。反応混合物を、周囲温度で頻繁に緩やかに振盪しながらインキュベートした。ｉＴＬＣ分析（溶離液として２０ｍＭクエン酸、ｐＨ５）を様々な時点で行い、放射標識の進行をモニターした（１時間：３０％標識、１．５時間：５３％標識、２時間：％標識）。
【０１２６】
２時間の反応時間後、混合物を、新たに作製した酢酸ナトリウム（０．２５Ｍ）／ゲンチジン酸（５ｍｇ／ｍＬ）緩衝液、ｐＨ５〜６を用いて調整したＰＤ−１０カラムを使用して精製した。精製した８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ（１ｍＬ、２１．８ＭＢｑ）をｉＴＬＣおよびＳＥＣ−ＨＰＬＣによって分析した。
【０１２７】
８９Ｚｒ−ＤＦＯＰｈＮＣＳ−トラスツズマブ：マウスＰＥＴイメージングＳＫＯＶ３
３用量（３．５ＭＢｑずつ）を、精製したｍＡｂ溶液から引き上げ、ＳＫＯＶ３腫瘍担持ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに投与した。ＰＥＴイメージングを２４時間、４８時間および９６時間時点で行った。９６時間で生体内分布データを取るためにマウスを処分した。
【０１２８】
【表７】
2020114860.tif 000016
【０１２９】
競争試験１
ＤＦＯ−ｃＲＧＤｆＫ誘導体の合成
炭酸ナトリウム溶液を使用して、ｃＲＧＤｆＫ（１００ｕＬ、２ｍｇ、２μｍｏｌ）の水溶液のｐＨを９まで増加させた。ＤＭＳＯ（１００ｕＬ、２当量）中ＤＦＯＳｑのｐＨ９ホウ酸緩衝液（０．５Ｍ、１００μＬ）溶液である。反応混合物を室温で終夜静置し、次いでセミ分取ＨＰＬＣ（ＰｒｏｔｅＣｏｌ  Ｃ１８カラム、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ、０．１％ＴＦＡ）によって精製し、凍結乾燥して、ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫを白色固体として得た。同様の手順を使用してＤＦＯＰｈＮＣＳ−ｃＲＧＤｆＫをＤＦＯ−Ｐｈ−ＮＣＳから調製したが、沈殿したため、精製する前にこれを遠心分離し、可溶性の物質のみを精製した。各ＤＦＯ−ｃＲＧＤｆＫ誘導体の水溶液を等濃度で調製し、これをＦｅ３＋滴定によってＵＶ−Ｖｉｓ分光法（４２５ｎｍ）を使用して確認した。
【０１３０】
競争実験
８９Ｚｒ（２ｕＬ、約２ＭＢｑ）の１Ｍシュウ酸溶液をＨ２Ｏ（５０ｕＬ）で希釈し、２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３（１ｕＬ）を使用して中和し、次いでｐＨ７．４のＨＥＰＥＳ緩衝液（５ｕＬ）で緩衝した。次いで、緩衝したＺｒ溶液少量（５ｕＬ）を各ＤＦＯ−ｃＲＧＤｆＫ溶液（５０ｕＬずつ）に添加した。２０分後、反応完了をラジオ−ｉＴＬＣで確認した。各サンプルを標準としてＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａカラム）に供した。ＤＦＯＰｈＮＣＳ−ｃＲＧＤｆＫ配位子は２０．１分で溶出し、Ｚｒ錯体は１８．５分で溶出する（図３９）。ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫ配位子は１８．０分で溶出し、Ｚｒ錯体は１５．５分で溶出する（図４０）。ＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫ配位子溶液中の未同定の不純物も１８．０分で溶出したが、これにＺｒは結合していなかった。
【０１３１】
両配位子の等濃度の溶液（４０ｕＬずつ）を調製し、完全に混合し、緩衝したＺｒ溶液５ｕＬを添加した。４５分後に反応混合物をＨＰＬＣによって分析し、その分析により、専らＺｒＤＦＯＳｑ−ｃＲＧＤｆＫ錯体のみが形成されていることが示された（図４１）。
【０１３２】
競争試験２
ＤＦＯ−ＳＯ３Ｈ誘導体の合成：ＤＦＯＳｑＴａｕｒ
【化９】
2020114860.tif 000017
トリエチルアミン少量（５滴）をタウリン（１８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ溶液に添加した。ＤＦＯＳｑ（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯに溶解し、タウリン溶液に添加し、反応混合物を周囲温度で終夜撹拌した。この溶媒を蒸発させ、粗製物質を緩やかに加熱しながらＨ２Ｏに溶解し、未反応のＤＦＯＳｑはいずれも遠心分離で除去した。溶媒を蒸発させて白色粉末を得た。図４２および４３は、ＤＦＯＳｑＴａｕｒの１Ｈ  ＮＭＲおよびＥＳＩ−ＭＳスペクトルを示している。
【０１３３】
ＤＦＯ−ＳＯ３Ｈ誘導体の合成：ＤＦＯＰｈＳＯ３Ｈ
【化１０】
2020114860.tif 000018
トリエチルアミン少量（５滴）を、イソチオシアン酸４−スルホフェニルナトリウム塩一水和物（３８ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液に添加した。ＤＦＯメシラート（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、溶解性を高めるためにＨ２Ｏ（１ｍＬ）を添加した。反応混合物を周囲温度で終夜撹拌した。溶媒を蒸発によって除去し、粗製白色粉末をＭｅＯＨで４０℃において完全に洗浄して、生成物を白色粉末として得た。図４４および４５は、ＤＦＯＰｈＳＯ３Ｈの１Ｈ  ＮＭＲおよびＥＳＩ−ＭＳスペクトルを示している。
【０１３４】
競争実験
各配位子、即ちＤＦＯＰｈＳＯ３ＨおよびＤＦＯＳｑＴａｕｒの３ｍＭストック溶液をＨ２ＯとＭｅＯＨとの混合液中で調製した（希釈する前に、濃度をＵＶ−Ｖｉｓ  Ｈ２Ｏ中Ｆｅ３＋滴定によって確認した、４３０ｎｍ）。両溶液（２５ｕＬずつ）の混合物を完全に混合し、５０℃まで加熱した。ＺｒＣｌ４（ＴＨＦ）２のＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ（３ｍＭ）中ストック溶液も調製し、この２０ｕＬを配位子混合物に添加した。この混合物を５０℃で７時間インキュベートした。この混合物の７時間でのＥＳＩ−ＭＳ分析（図４６）により、ＺｒＤＦＯＳｑＴａｕｒ錯体（図４６）、［Ｍ］＋ｍ／ｚ（計算値）＝８５０．２２の存在が示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2020114860.tif 000027
【図９】
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【図１０】
2020114860.tif 000029
【図１１】
2020114860.tif 000030
【図１２】
2020114860.tif 000031
【図１３】
2020114860.tif 000032
【図１４】
2020114860.tif 000033
【図１５】
2020114860.tif 000034
【図１６】
2020114860.tif 000035
【図１７】
2020114860.tif 000036
【図１８】
2020114860.tif 000037
【図１９】
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【図２０】
2020114860.tif 000039
【図２１】
2020114860.tif 000040
【図２２−１】
2020114860.tif 000041
【図２２−２】
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【図２３】
2020114860.tif 000043
【図２４】
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【図２５】
2020114860.tif 000045
【図２６】
2020114860.tif 000046
【図２７】
2020114860.tif 000047
【図２８−１】
2020114860.tif 000048
【図２８−２】
2020114860.tif 000049
【図２９−１】
2020114860.tif 000050
【図２９−２】
2020114860.tif 000051
【図３０】
2020114860.tif 000052
【図３１】
2020114860.tif 000053
【図３２】
2020114860.tif 000054
【図３３】
2020114860.tif 000055
【図３４ａ】
2020114860.tif 000056
【図３４ｂ】
2020114860.tif 000057
【図３４ｃ】
2020114860.tif 000058
【図３５】
2020114860.tif 000059
【図３６】
2020114860.tif 000060
【図３７−１】
2020114860.tif 000061
【図３７−２】
2020114860.tif 000062
【図３８】
2020114860.tif 000063
【図３９】
2020114860.tif 000064
【図４０】
2020114860.tif 000065
【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
2020114860.tif 000070
【図４６】
2020114860.tif 000071