(57)【要約】【課題】生分解性と抗血栓性とを併せ持ち、また、形状安定性に優れた、これまでにない新規構造の抗血小板粘着性を示す生分解性共重合体を提供する。【手段】疎水性成分と親水性成分との共重合体である脂肪族ポリエスエルであって、該親水性成分が、ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）、ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）、または、ポリエチレンオキシドの少なくとも１つを含み、該親水性成分のモル比が５％以上８５％以下である、抗血小板粘着性を示す生分解性共重合体。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
疎水性成分と親水性成分との共重合体である脂肪族ポリエスエルであって、
該親水性成分が、ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）、ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）、または、ポリエチレンオキシドの少なくとも１つを含み、
該親水性成分のモル比が５％以上８５％以下である、抗血小板粘着性を示す生分解性共重合体。
【請求項２】
前記疎水性成分が、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｄ−乳酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）、または、ポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体の少なくとも１つを含む、請求項１に記載の共重合体。
【請求項３】
前記親水性成分と疎水性成分との結合が、ランダム、ブロック、マルチブロックのいずれかである、請求項１または２に記載の共重合体。
【請求項４】
請求項１〜３の共重合体からなる、抗血小板粘着性および生分解性を有する薄膜。
【請求項５】
請求項１〜３の共重合体からなる、抗血小板粘着性および生分解性を有する成形体。
【請求項６】
請求項４または５の薄膜または成形体が、生体組織に接触する箇所に設けられている医療用具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗血小板粘着性を示す生分解性共重合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗血栓性材料（抗血小板粘着性を示す材料）の研究では日本が世界をリードしており、すでに生体膜を模倣したＭＰＣポリマー（特許文献１）と、ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）（ＰＭＥＡ）（特許文献２）が一部用途に対して実用化されている。
また、最近では、山形大学の田中、福島らが、脂肪族ポリカーボネートを主鎖とし、側鎖に親水性を付与した重合体を報告している（特許文献３、４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００８−２８０３９８
【特許文献２】特開２０１３−１２１４３０
【特許文献３】特開２０１７−２０３０６２
【特許文献４】特開２０１４−１６１６７５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、文献１、２の材料は、ビニルモノマーからの炭素−炭素結合を主鎖とする高分子であり、生分解性を示さない。このため、将来、取り出しの再手術を必要としない、生分解性と抗血栓性をあわせもつ材料の開発が世界的に求められている。
また、特許文献３、４の重合体は、生分解性と抗血栓性とを併せ持つ材料ではあるが、側鎖に親水性部位を有する共重合体であり、本開示の共重合体とは異なるコンセプトによる重合体である。
また、文献１、２、および、特許文献３、４の材料は、いずれも室温で柔らかく水を吸湿すると粘着性のある材料であり、形状安定性の点で課題がある。
以上、本願は、生分解性と抗血栓性とを併せ持ち、また、形状安定性に優れた、これまでにない新規構造の抗血小板粘着性を示す生分解性共重合体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、鋭意検討の結果、以下の知見を得た。
（１）脂肪族ポリエステルは、生分解性や生体吸収性を示すことが知られているが、親水性成分としてポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）（以下、ＰＤＸＯという場合がある。）、ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）（以下、ＰＤＯという場合がある）、または、ポリエチレンオキシド（以下、ＰＥＯという場合がある。）の少なくとも１つを含む脂肪族ポリエステル共重合体が、さらに、低い血小板粘着性を示し、抗血栓性材料としてきわめて有望である。
なお、最も一般的な生分解性高分子であるポリ乳酸やポリ乳酸−ポリグルコール酸共重合体は抗血小板粘着性を示さない。また、ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）は、親水性脂肪族ポリエステルであり、その合成自体は１９８９年に報告されていたが、これまで抗血小板粘着性は報告されていなかった。
（２）上記特定の親水性成分を含む脂肪族ポリエステル共重合体上では細胞培養が可能である。該共重合体は、生分解性、抗血栓性、および、細胞接着性をあわせもつ材料である。
（３）該共重合体は、生体内埋め込み材料へのコーティング、再生医療分野への細胞培養基材としての応用など、医療分野への様々な展開が期待される。
（４）該共重合体は、ランダム共重合体、ブロック共重合体、または、マルチブロック共重合体（ランダムマルチブロック共重合体、交互マルチブロック共重合体）のいずれの形態であってもよく、いずれであっても、抗血栓性を示す。
（５）該共重合体において、ＰＤＸＯ、ＰＤＯ、または、ＰＥＯ成分が所定のモル比にて導入されていると、より良好な抗血栓性を示す。
（６）該共重合体はミクロ相分離構造を形成している場合に、より良好な抗血栓性を示す。
（７）該共重合体がブロック共重合体またはマルチブロック共重合体である場合、において、ＰＤＸＯセグメント、ＰＤＯセグメント、または、ＰＥＯセグメントが所定の長さの場合に、より良好な抗血栓性を示す。
【０００６】
上記知見に基づいて、本願は上記課題を解決するために、第１の形態として、疎水性成分と親水性成分との共重合体である脂肪族ポリエステルであって、該親水性成分が、ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）、ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）、または、ポリエチレンオキシドの少なくとも１つを含み、該親水性成分のモル比（該共重合体を構成する単量体全体における、親水性成分を構成する単量体の割合）が５％以上８５％以下である、抗血小板粘着性を示す生分解性共重合体を開示する。
【０００７】
第１の形態において、前記疎水性成分は、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｄ−乳酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）、または、ポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体の少なくとも１つを含むことが好ましい。
【０００８】
第１の形態において、前記親水性成分と疎水性成分との結合は、ランダム、ブロック、マルチブロックのいずれかであることが好ましい。
【０００９】
第１の形態において、親水性成分の結合様式はランダムでもブロックでもよいが、結合様式がブロックの場合は親水性成分のセグメント長は５量体以上であることが好ましい。
【００１０】
本願は、上記課題を解決するために、第２の形態として、第１の形態の共重合体からなる、抗血小板粘着性および生分解性を有する薄膜を開示する。
【００１１】
本願は、上記課題を解決するために、第３の形態として、第１の形態の共重合体からなる、抗血小板粘着性および生分解性を有する成形体を開示する。
【００１２】
本願は、上記課題を解決するために、第４の形態として、第２または第３の形態の薄膜または成形体が、生体組織に接触する箇所に設けられている医療用具を開示する。
【発明の効果】
【００１３】
本開示の共重合体は、生分解性および抗血小板粘着性を示す。また、本開示の共重合体上では、細胞培養が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例１で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図２】実施例１で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図３】実施例２で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図４】実施例２で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図５】実施例３で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図６】実施例３で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図７】実施例３で得られた材料の原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）による位相像である。
【図８】実施例４で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図９】実施例４で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図１０】実施例４で得られた材料の原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）による形状像と位相像である。
【図１１】実施例５で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図１２】実施例５で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図１３】実施例６で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図１４】実施例６で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図１５】実施例７で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図１６】実施例８で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図１７】実施例９で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図１８】実施例９で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図１９】実施例１０で得られた材料の顕微鏡観察画像（暗視野）である。
【図２０】実施例１０で得られた材料の血小板粘着数を示したグラフである。
【図２１】実施例１１（細胞培養試験、Ｈｅｌａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上でのＨｅＬａ細胞培養の様子を示す画像である。
【図２２】実施例１１（細胞培養試験、Ｈｅｌａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、セルカウントによるＨｅＬａ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図２３】実施例１１（細胞培養試験、Ｈｅｌａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、ＷＳＴ試験によるＨｅＬａ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図２４】実施例１１（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上でのＨＵＶＥＣ細胞培養の様子を示す画像である。
【図２５】実施例１１（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、セルカウントによるＨＵＶＥＣ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図２６】実施例１１（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、ＷＳＴ試験によるＨＵＶＥＣ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図２７】実施例１１（細胞培養試験、ＨｅＬａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上でのＨｅＬａ細胞培養の様子を示す画像である。
【図２８】実施例１１（細胞培養試験、ＨｅＬａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上でのＨｅＬａ細胞培養の様子を示す画像である。
【図２９】実施例１１（細胞培養試験、ＨｅＬａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ，ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、セルカウントによるＨｅＬａ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図３０】実施例１１（細胞培養試験、ＨｅＬａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ，ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、ＷＳＴ試験によるＨｅＬａ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図３１】実施例１１（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上でのＨＵＶＥＣ細胞培養の様子を示す画像である。
【図３２】実施例１１（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上でのＨＵＶＥＣ細胞培養の様子を示す画像である。
【図３３】実施例１１（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ，ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、セルカウントによるＨＵＶＥＣ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図３４】実施例１１（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ，ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）で得られた材料上での、ＷＳＴ試験によるＨＵＶＥＣ細胞の培養挙動を示すグラフである。
【図３５】実施例１２で得られた材料の、加水分解による接触角変化を示すグラフである（ｐＨ７．４）。
【図３６】実施例１２で得られた材料の、加水分解による残存成分の分子量変化を示すグラフである（ｐＨ７．４）。
【図３７】実施例１３で得られた共重合体からなる自立膜の画像である。
【図３８】実施例１３で得られた共重合体からなる自立膜の応力−ひずみ曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
＜抗血小板粘着性を示す生分解性共重合体＞
本開示の共重合体は、疎水性成分と親水性成分とを構成成分として有する脂肪族ポリエスエル共重合体である。
抗血小板粘着性とは、材料表面に血小板が粘着しにくい性能であり、所定の血小板溶液を材料表面に接触させ、所定温度、所定時間インキュベートした後、材料上の血小板の数を、顕微鏡画像上でカウントすることにより、評価することができる。
本願の共重合体の抗血小板粘着性は、血小板濃度５．０×１０７ｐｌａｔｅｌｅｔｓ／ｍＬの血小板溶液を接触させて、３７℃、１時間インキュベートし、洗浄などの所定の処理を行った後の材料表面の血小板の数を顕微鏡画像上でカウントすることにより評価しているが、血小板の粘着数は使用した血小板溶液の状態により異なるため、粘着数の絶対値では評価できない。本願での血小板粘着試験ではコントロール（血小板がつきやすい表面ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣと血小板が付きにくい表面ＰＭＥＡ）と同時に実験を行い、有意差検定を行って評価した。
【００１６】
生分解性とは、加水分解、酵素分解、微生物分解等の作用により化学的に分解することが可能であることをいう。本開示の共重合体は、例えば、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）における加水分解試験において、１４週後に好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上の重量減少を示す。
【００１７】
（親水性成分）
本開示の共重合体は、親水性成分として、以下の式（１）で示すポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）、以下の式（２）で示すポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）、または、以下の式（３）で示すポリエチレンオキシドを含み、あるいは、これらから選ばれる複数を含んでいてもよい。
【００１８】
【化１】
2020056020.tif 000003
【００１９】
【化２】
2020056020.tif 000004
【００２０】
【化３】
2020056020.tif 000005
【００２１】
（疎水性成分）
本開示の共重合体は、疎水性成分として、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ−乳酸）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＤＬＬＡ）、または、ポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）の少なくとも１つを含む。
【００２２】
（共重合体の結合形式）
前記親水性成分と疎水性成分との結合形式は、ランダム、ブロック（ジブロック、トリブロック）、マルチブロック（ランダムマルチブロック、交互マルチブロック）のいずれであってもよい。
ただし、親水性成分と疎水性成分とは共重合している必要があり、親水性成分からなる重合体と疎水性成分からなる重合体とのポリマーブレンドでは、本発明の効果を奏しない。
【００２３】
（親水性成分のモル比）
本開示の共重合体における前記親水性成分のモル比（該共重合体を構成する単量体全体における、親水性成分を構成する単量体の割合）は、下限は、好ましくは５％以上、より好ましくは６％以上、さらに好ましくは１９％以上、特に好ましくは２９％以上であり、上限は、好ましくは８５％以下、より好ましくは７４％以下、さらに好ましくは６０％以下、である。一般的に、親水性成分のモル比を大きくすると、抗血小板粘着性が向上する傾向があるが、上記上限を超えると、抗血小板粘着性が大きく低下する。これは、親水性成分のドメイン径が大きくなり、所定のミクロ相分離構造を維持できなくなったためだと考えられる。
【００２４】
（共重合体の表面構造）
本開示の共重合体は、良好な抗血小板粘着性を示す点から、疎水性成分と親水性成分とが、均一な表面構造、または、ミクロ相分離構造を有していることが好ましく、ミクロ相分離構造を形成していることがより好ましい。
共重合体中に、親水性成分（ＰＤＸＯ、ＰＤＯ、または、ＰＥＯから選ばれる一種以上）が導入されていれば、共重合体はランダム共重合体、ブロック共重合体のいずれであってもよいが、親水性成分からなる重合体のみの場合、または、親水性成分からなる重合体と疎水性成分からなる重合体のブレンドの場合は、抗血小板粘着性が劣っており、例えば、図７に示したように、０．５μｍ以上の親水性成分の大きなドメイン構造が形成されていると好ましくないことが分かっている。
【００２５】
（親水性成分のセグメント長）
また、本開示の共重合体がブロック共重合体またはマルチブロック共重合体である場合、前記親水性成分のセグメント長は５量体以上であることが好ましく、１０量体以上であることがより好ましい。親水性成分のセグメント長を５量体以上とすることにより、良好な抗血小板粘着性を示すことができる。
【００２６】
（分子量）
本開示の共重合体の数平均分子量は、好ましくは１０，０００〜１５０，０００、より好ましくは２０，０００〜１００，０００、さらに好ましくは３０，０００〜８０，０００である。分子量を上記下限以上とすることにより、力学特性を良好なものとすることができ、分子量を上記上限以下とすることにより、加水分解性を良好にすることができる。
【００２７】
＜共重合体の製造方法＞
本願の共重合体は、親水性成分を形成する単量体として、１，５−ジオキセパン−２−オン、または、１，４−ジオキサン−２−オンの少なくとも１つを用いて、開環重合を行って形成することができる。また、親水性成分であるポリエチレンオキシドは、エチレングリコールを重合して形成してもよいし、市販のポリエチレンオキシドを使用してもよい。また、疎水性成分を形成する単量体としては、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、ＤＬ−乳酸、グリコール酸、またはこれらの混合物を用いて、脱水縮合を行って形成してもよいし、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、グリコリド、または、これらの混合物を用いて、開環重合を行って形成してもよい。
重合方法は特に限定されず、ランダム、ブロック、マルチブロックなど、所望の重合形態となるように、適宜、公知の重合方法（開始剤、溶媒、重合温度等）を採用することができる。
【００２８】
＜膜、抗血栓性材料＞
本開示の共重合体は、該共重合体が溶解可能な溶媒として、例えば、クロロホルムに溶解させ溶液を調整し、該溶液を適当な手段により、基体（例えば、ガラス基板）上に略均一の厚みにキャストし、溶液中の溶媒を除去するために、適宜、真空オーブン等を使用して乾燥させることにより製膜することが可能である。膜の厚みは特に限定されず、必要とされる用途により適宜調整することができるが、概ね、好ましくは０．５〜６０μｍとすることができる。また、乾燥時間は、該厚みにより適宜調整される。
上記膜は、基体とともに、抗血栓材料として使用してもよいし、また、基体から膜を単離して自立膜として使用してもよい。
また、膜以外にも、本開示の共重合体を用いて、種々の立体形状に成形することが可能であり、成形体としても使用することができる。成形体の形状は特に限定されず、用途に応じて、種々の形態とすることが可能である。各種成形体への成形方法については、公知の樹脂材料の成形方法を採用することができる。
（用途）
本開示の膜、抗血栓材料の用途としては、生体内組織や血液に接して使用されたときに、分解されるまでの間、血液や組織に対して異物反応を抑制するための用途であり、例えば、止血剤、生体組織の粘着剤、組織再生用の補修材、癒着防止膜、薬物徐放システムの担体、細胞工学用の足場のためのマトリックス、ステント材料の表面コーティング、繊維系人工血管のシール剤等が挙げられる。
【００２９】
（力学特性）
本開示の共重合体を含む膜、または、成形体は、共重合体組成やセグメント長により様々な力学特性を示す。特に１０量体以上の疎水性セグメントをもつ共重合体はミクロ相分離構造を形成し，自立膜の作成が可能となり以下の力学特性を示す。
・ヤング率（２５℃）が、好ましくは５ＭＰａ以上、より好ましくは２０ＭＰａ以上、さらに好ましくは５０ＭＰａ以上である。
・破断伸び（２５℃）が、好ましくは１００％以上、より好ましくは３００％以上、さらに好ましくは５００％以上である。
・引張強度（２５℃）が、好ましくは１０ＭＰａ以上、より好ましくは２０ＭＰａ以上である。
以上のように、本開示の共重合体からなる膜および成形体は、室温（２５〜４５℃）、特に体温（３５から４０℃）において、自立膜が作成可能であり、取扱いが容易であり、よく伸び、タフな膜である。よって、本開示の共重合体からなる膜および成形体は、生体適合材料として好適な力学特性を備えている。
【００３０】
＜医療用具＞
本開示の共重合体からなる薄膜または成形体を、医療用具における生体組織に接触する箇所に設けることができる。医療用具としては、例えばカテーテル、ステント、人工血管、癒着防止膜、人工臓器、生体内埋め込み型装置等を挙げることができる。中でも、本開示の薄膜または成形体は、生分解性と抗血小板粘着性を併せ持つ観点から、生体埋め込み用の人工血管、癒着防止膜、ステントの表面コーティング材料、繊維系人工血管のシール剤に適用することがより好ましい。
また、本開示の薄膜または成形体は、これら用具において血液と接触する部分の材料として、特に、血液と接触する部分の一部、好ましくは全部の材料として、用いることが好ましい。
【実施例】
【００３１】
＜合成例１＞
ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）２５量体交互マルチブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）の合成（工程１）ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）オリゴマー２５量体の合成
【００３２】
【化４】
2020056020.tif 000006
【００３３】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にＤＰＰ（ジフェニルフォスフェート）（０．３４４ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を加え、脱水トルエン３２ｍＬを加え溶解させた。これにＤＸＯ（３．９８ｇ、３４．３ｍｍｏｌ）とベンジルアルコール（１４４μＬ、１．３７ｍｍｏｌ）を加えて室温で１８ｈ反応させた。反応後アンバーリストＡ２１を加えて３０ｍｉｎ振とうし、ろ過によりアンバーリストＡ２１を取り除いた。ろ液をエバポレーターで乾固して４０℃で一晩乾燥させ、ベンジル末端を持つポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）オリゴマー２５量体を得た（収量：4.31g、収率：104%、GPC（CHCl3）：Mw/Mn=1.14、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：7.38（m、5H、ArH）、5.14（s、2H、ArCH2）、4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O））。
【００３４】
（工程２）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）２５量体ジブロック共重合体の合成と脱保護
【００３５】
【化５】
2020056020.tif 000007
【００３６】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にＬ−ラクチド（１．２６６ｇ、８．７８ｍｍｏｌ）、グリコリド（０．１１３ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、チオウレア（０．１８０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。エッペンドルフチューブにベンジル末端を持つＰＤＸＯオリゴマー２５（１．００ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を入れ脱水ジクロロメタン２ｍＬで溶解させたものをシュレンク管に加えたのち、脱水ジクロロメタン３ｍＬで溶解させ、Ｍｅ６ＴＲＥＮ（１２４．８μＬ、０．４９ｍｍｏｌ）を加えて室温で３ｈ反応させた。反応後安息香酸０．１２ｇを加えてクエンチし、メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過をした後４０℃で一晩真空乾燥し、白色固体としてポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）２５量体ジブロック共重合体を得た（収量：1.97g、収率：82%、GPC（CHCl3）：Mw/Mn=1.12、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：7.38（m、5H、ArH）、5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、5.14（s、2H、ArCH2）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））。
【００３７】
ジブロック共重合体１．８ｇをＴＨＦ８０ｍＬに溶解させてＰｄ／Ｃを０．１８ｇ加えた。これを窒素置換したのち、水素雰囲気下，室温で２４ｈ反応させた。これを窒素置換し、セライトろ過によりＰｄ／Ｃを取り除いたのち、ろ液をエバポレーターで濃縮してメタノール再沈殿をし、吸引ろ過により回収した後４０℃で真空乾燥させ、脱保護したジブロック共重合体を得た（収量：1.74g、収率：91%、1H NMR（m、500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）、3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））。
【００３８】
（工程３）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）２５量体交互マルチブロック共重合体の合成
【００３９】
【化６】
2020056020.tif 000008
【００４０】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）２５量体ジブロック共重合体（１．００ｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン  ｐ−トルエンスルホン酸（８．８ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（７．４ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加えて、脱水ジクロロメタン３ｍＬを加えて溶解させた。その後脱水のためモレキュラーシーブを加え一晩振とうさせ、ＤＩＰＣＩ（４０．９μＬ、０．２７６ｍｍｏｌ）を加えて室温で２４ｈ振とうにより反応させた。反応後、メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過の後４０℃で真空乾燥し目的物を得た（収量：0.699g、収率：68%、GPC（CDCl3）：Mw=72,000、Mw/Mn=1.84、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））。
【００４１】
＜合成例２＞
ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）ランダムマルチブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０）の合成
（工程１）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)共重合体オリゴマー２５量体の合成
【００４２】
【化７】
2020056020.tif 000009
【００４３】
ヒートガンで空焼きし、窒素置換したシュレンク管にＬ−ラクチド（５．２９５ｇ、３６．７ｍｍｏｌ）、グリコリド（０．４７３ｇ、４．０７ｍｍｏｌ）、チオウレア（０．７６５ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）を加え、脱水ジクロロメタン３０ｍＬを加えて溶解させた。ここにベンジルアルコール（１４４μＬ、１．３８ｍｍｏｌ）を加え溶解させたのち、Ｍｅ６ＴＲＥＮ（５２２μＬ、１．８６ｍｍｏｌ）を加えて室温で１ｈ反応させた。反応後、安息香酸０．５ｇを加えてクエンチし、メタノールに再沈殿した後４０℃で真空乾燥させて白色固体としてベンジル末端を持つポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体（ＰＬＧＡ）オリゴマー２５量体を得た（収量：5.09g、収率：86%、GPC（CHCl3）：Mw/Mn=1.17、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：7. 38（m、5H、ArH）、5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、5.14（s、2H、ArCH2）、4.81（m、2H、COCH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））。
【００４４】
（工程２）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)共重合体オリゴマー２５量体の脱保護
【００４５】
【化８】
2020056020.tif 000010
【００４６】
ベンジル末端を持つＰＬＧＡオリゴマー２．５ｇをＴＨＦ  １００ｍＬに溶解させ、Ｐｄ／Ｃ  ０．２５ｇを加えた。これを窒素置換したのち、水素雰囲気下，室温で４８ｈ反応させた。これを窒素置換したのちセライトろ過・メンブレンろ過によりＰｄ／Ｃを取り除き、ろ液をエバポレーターで乾固した後、クロロホルム１５ｍＬで再溶解させ、氷浴メタノールで再沈殿した後４０℃で真空乾燥させ、白色固体としてベンジル末端を外したポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)共重合体オリゴマー２５量体（ＰＬＧＡ２５）を得た（収量：2.32g、収率：92%、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））。
【００４７】
（工程３）ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）オリゴマー２５量体の合成（脱保護）
【００４８】
【化９】
2020056020.tif 000011
【００４９】
合成例１工程１で合成したベンジル末端を持つＰＤＸＯオリゴマー４．３ｇをＴＨＦ  １８０ｍＬに溶解させ、Ｐｄ／Ｃ  ０．４３ｇを加えた。これを窒素置換したのち、水素雰囲気下，室温で２４ｈ反応させた。これを窒素置換したのち、セライトろ過によりＰｄ／Ｃを取り除き、ろ液をエバポレーターで乾固した後４０℃で一晩真空乾燥させ、ベンジル末端を外したポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）オリゴマー２５量体（ＰＤＸＯ２５）を得た（収量：4.72g、収率：110%、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O））。
【００５０】
（工程４）仕込み比５０：５０のポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）２５量体ランダムマルチブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０）の合成
【００５１】
【化１０】
2020056020.tif 000012
【００５２】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にＰＬＧＡ２５（０．５ｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）、脱保護したＰＤＸＯ２５（０．３８８ｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）を加えたのち、ジメチルアミノピリジン  ｐ−トルエンスルホン酸（１５．６ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（１３．１ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）を加えて脱水ジクロロメタン３ｍＬで溶解した。その後脱水のためモレキュラーシーブを加えて一晩振とうし、ジイソプロピルカルボジイミド（８２．９μＬ、０．５５２ｍｍｏｌ）を加えて室温で２４ｈ振とうさせて反応させた。反応後、メタノールにより再沈殿を行い、吸引ろ過により回収した後４０℃で真空乾燥させて白色繊維状固体として目的物を得た（収量：0.70g、収率：80%、GPC（CHCl3）：Mw=89,000、Mw/Mn=1.67、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、PLGA/PDXO比：64/36）。
【００５３】
以下の仕込み比の異なるランダムマルチブロック共重合体はＰＬＧＡ２５とＰＤＸＯ２５の仕込み比を変えて合成した。
ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  １３：８７（収量：0.48g、収率：58%、GPC（CHCl3）：Mw=52,000、Mw/Mn=1.98、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、PLGA/PDXO比：13:87）。
【００５４】
ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ２６：７４（収量：0.59g、収率：75%、GPC（CHCl3）：Mw=65,000，Mw/Mn=1.48、
1H NMR（500 MHz，CDCl3）：5.18（q，1H，COCH(CH3)O），4.81（m，2H，COCH2O）， 4.25（t，2H，OCH2CH2O），3.78（t，2H，COCH2CH2O）3.66（t，2H，OCH2CH2O），2.62（t，2H，COCH2CH2O），1.58（d，3H，COCH(CH3)O），PLGA/PDXO比：26:74）。
【００５５】
ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ４０：６０（収量：0.27g、収率：63%、GPC（CHCl3）：Mw=65,000、Mw/Mn=1.76、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、PLGA/PDXO比：40/60）。
【００５６】
ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０（収量：0.33g、収率：75%、GPC（CHCl3）：Mw=55,000、Mw/Mn=1.55、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、PLGA/PDXO比：50/50）。
【００５７】
ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ７１：２９（収量：0.34g、収率：74%、GPC（CHCl3）：Mw=68,000、Mw/Mn=1.57、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、PLGA/PDXO比：71/29）。
【００５８】
ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ８１：１９（収量：0.40g、収率：85%、GPC（CHCl3）：Mw=123,000、Mw/Mn=1.65、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、PLGA/PDXO比：81/19）。
【００５９】
ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ９４：６（収量：0.83g、収率：79%、GPC（CHCl3）：Mw=78,000、Mw/Mn=1.96、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、 4.25（t、2H、OCH2CH2O）、3.78（t、2H、COCH2CH2O）3.66（t、2H、OCH2CH2O）、2.62（t、2H、COCH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、PLGA/PDXO比：94/6）。
【００６０】
＜合成例３＞
ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）ジブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＤＢＣ）の合成
（工程１）Ｂｎ−ＯＨ（ベンジルアルコール）を開始剤としたポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）オリゴマーの合成
【００６１】
【化１１】
2020056020.tif 000013
【００６２】
２０ｍｌシュレンク管をヒートガンを用いて加熱乾燥した後、ダイアフラムポンプを用いて脱気、窒素置換した。ＤＸＯ（８１５μＬ、７．７５ｍｍｏｌ)、触媒としてＤＰＰ（ジフェニルフォスフェート）（１９．４ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）、開始剤としてＢｎ−ＯＨ（８．０３μＬ、０．０７８ｍｍｏｌ、脱水トルエン１０倍希釈）を加え、オイルバス中で８０℃で７．５時間攪拌し反応させた。反応終了後、アンバーリストＡ２１、ジクロロメタンを入れ、３０分振とうさせた。その後、ろ過、ジクロロメタン洗浄し、エバポレーターで濃縮し、氷浴中でナス型フラスコにヘキサン再沈殿した。その後デカンテーションし、フラスコごと１００℃で1時間真空乾燥し、その後室温に戻しながら一晩真空乾燥させて液状のポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）  オリゴマーを得た。(収量：0.905ｇ、 収率: 100％)。1H NMR (500MHz、 CDCl3) : 7.35 (m、5H、C6H5)、5.13 (s、2H、C6H5CH2O)、4.23(t、2H、OCH2CH2O)、3.75(t、2H、COCH2CH2O)、3.66(t、2H、OCH2CH2O)、2.62(t、2H、COCH2CH2)、重合度n=110(NMR)。
【００６３】
（工程２）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）ジブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＤＢＣ）の合成
【００６４】
【化１２】
2020056020.tif 000014
【００６５】
２０ｍｌシュレンク管をヒートガンを用いて加熱乾燥した後、ダイヤフラムポンプを用いて脱気、窒素置換した。開始剤として工程１で合成したベンジル末端を持つポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）オリゴマー（重合度１１０、０．９０５ｇ、０．７０３ｍｍｏｌ）、モノマーとしてＬ−ラクチド（１．００ｇ、６．９６ｍｍｏｌ）及びグリコリド（８９７ｍｇ、０．７７３ｍｍｏｌ）、触媒としてＤＢＵ（１，８−ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［５．４．０］ｕｎｄｅｃ−７−ｅｎｅ)（５８．９μＬ、０．３８６ｍｍｏｌ)、脱水ＴＨＦ（４ｍｌ）を入れ、室温で1時間攪拌し、反応させた。その後、安息香酸（５３．９ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）を入れ１０分間撹拌し、ＤＢＵを失活した後、氷浴中でメタノール再沈殿し、吸引ろ過、４０℃で一晩真空乾燥し、白色粉末状固体としてベンジル末端を持つポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）ジブロック共重合体を得た。(収量: 1.77ｇ、収率: 88.5%)
1H NMR (500MHz、CDCl3): 7.35(m、5H、C6H5)、5.16(q、1H、COCH(CH3)O)、4.83(m、2H、COCH2O)、4.23(t、2H、OCH2CH2O)、3.76(t、2H、COCH2CH2O)、3.66(t、2H、OCH2CH2O)、2.62(t、2H、COCH2CH2)、1.58(d、3H、COCH(CH3)O)、 重合度n=125、x=112、y=12(NMR)
【００６６】
（工程３）ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＤＢＣの脱保護
【００６７】
【化１３】
2020056020.tif 000015
【００６８】
ナスフラスコにベンジル末端を持つＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＤＢＣ(１．７７ｇ)、溶媒としてＴＨＦ（テトラヒドロフラン）（７５ｍｌ）、Ｐｄ／Ｃ(０．２０ｇ)を入れ、ダイヤフラムポンプを用いて脱気および窒素置換、水素置換した。その後水素風船をつけて、室温で一晩激しく攪拌した。反応終了後、エバポレーター乾固し、クロロホルムに溶媒置換して３時間撹拌した。その後セライトろ過し、ろ液を減圧濃縮し、氷浴メタノールに再沈殿、吸引ろ過、４０℃で一晩真空乾燥し、ベンジル末端を外したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＤＢＣの白色粉状の固体を得た。(収量:1.65ｇ、収率:93.2%)
1H NMR (500MHz、CDCl3): 5.16(q、1H、COCH(CH3)O)、4.83(m、2H、COCH2O)、4.23(t、2H、OCH2CH2O)、3.76(t、2H、COCH2CH2O)、3.66(t、2H、OCH2CH2O)、2.66(t、2H、COCH2CH2)、1.58(d、3H、COCH(CH3)O)
【００６９】
＜合成例４＞
ポリ(Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ(１，５−ジオキセパン−２−オン)−ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)トリブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ−ＰＬＧＡ  ＴＢＣ）の合成
（工程１）  ２−メチル−１，３−プロパンジオールを開始剤とした両末端ＯＨ  ポリ(１，５−ジオキセパン−２−オン)オリゴマーの合成
【００７０】
【化１４】
2020056020.tif 000016
【００７１】
２０ｍｌシュレンク管をヒートガンを用いて加熱乾燥した後、ダイアフラムポンプを用いて脱気、窒素置換した。ＤＸＯ（８１５μＬ、７．７５ｍｍｏｌ）、触媒としてＤＰＰ（ジフェニルフォスフェート）（３．８８ｍｇ、１７．２ｍｍｏｌ）、開始剤として２−メチル−１，３−プロパンジオール（９．７０ｍｇ、３．８８×１０−５ｍｏｌ、ＴＨＦで１０倍希釈）加え、８０℃で７．５時間攪拌し、反応させた。反応終了後、アンバーリストＡ２１、ジクロロメタンを入れ、３０分振とうさせた。その後、ろ過、ジクロロメタンで洗浄し、エバポレーターで濃縮、氷浴ヘキサン再沈殿した。再沈殿後、デカンテーションし、エバポレーター乾固した。その後、減圧下でオイルバスで１００℃まで加熱し、３時間乾燥させたのち、室温で一晩真空乾燥させ、液状の両末端ＯＨ  ポリ(１，５−ジオキセパン−２−オン)オリゴマーを得た。(収量: 0.780ｇ、収率: 86.7%)
1H NMR (500MHz、CDCl3): 4.23(t、2H、OCH2CH2O)、3.75(t、2H、COCH2CH2O)、3.66(t、2H、OCH2CH2O)、2.62(t、2H、COCH2CH2)、0.99(d、3H、 CH2CH(CH3)CH2)、重合度2n=295(NMR)
【００７２】
（工程２）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ(１，５−ジオキセパン−２−オン)−ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）トリブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ−ＰＬＧＡ  ＴＢＣ)の合成
【００７３】
【化１５】
2020056020.tif 000017
【００７４】
２０ｍｌシュレンク管をヒートガンを用いて加熱乾燥した後、ダイヤフラムポンプを用いて脱気、窒素置換した。開始剤として両末端ＯＨ  ポリ(１，５−ジオキセパン−２−オン)オリゴマー（０．７１９ｇ、０．０２１２ｍｍｏｌ）、モノマーとしてＬ−ラクチド（８２３ｍｇ、５．７１ｍｍｏｌ）及びグリコリド（７３．１ｍｇ、０．６３４ｍｍｏｌ）、触媒としてＤＢＵ（４８．３μＬ、０．３１７ｍｍｏｌ）、脱水ＴＨＦ（４ｍｌ）を入れ、室温で１時間攪拌し、反応させた。その後、安息香酸（７７．４ｍｇ、０．６３５ｍｍｏｌ）を入れ１０分間撹拌し、ＤＢＵを失活した後、氷浴中でメタノール再沈殿し、吸引ろ過、４０℃で一晩真空乾燥し、白色粉末のＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ−ＰＬＧＡ  ＴＢＣを得た。(収量：1.54ｇ、収率：95.2%)
1H NMR (500MHz、CDCl3): 5.17 (q、1H、COCH(CH3)O)、4.83 (m、2H、COCH2O)、4.23(t、2H、OCH2CH2O)、3.76(t、2H、COCH2CH2O)、3.66(t、2H、OCH2CH2O)、2.62(t、2H、COCH2CH2)、1.58(d、3H、COCH(CH3)O)、0.99(d、3H、CH2CH(CH3)CH2)、重合度n=300、m=262、l=28.1(NMR)
【００７５】
＜合成例５＞
ポリ（Ｌ−ラクチド)−ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）ランダム共重合体（ＰＬＬＡ−ＰＤＸＯ  ＲＣ）の合成
【００７６】
【化１６】
2020056020.tif 000018
【００７７】
２０ｍｌシュレンク管をヒートガンを用いて加熱乾燥した後、ダイアフラムポンプを用いて脱気、窒素置換した。ＤＸＯ（５８３μＬ、５．５５ｍｍｏｌ)、Ｌ−ラクチド（０．８００ｇ、５．５５ｍｍｏｌ)、触媒としてＳｎ（Ｏｃｔ）２（５．０８μＬ、Ｌ−ラクチド×０.４ｗｔ％）を加え、オイルバス中で１００℃で０．５時間攪拌した。その後１３０℃で８時間撹拌し、反応させた。反応終了後、酢酸を数滴とクロロホルムを４ｍｌ加え触媒を失活させた。その後氷浴中でジエチルエーテル再沈殿した。その後デカンテーションし、室温で一晩真空乾燥させて粘性のある半液状のＰＬＬＡ−ＰＤＸＯ  ＲＣを得た。(収量：1.28ｇ、収率: 88.8％)
1H NMR (500MHz、CDCl3): 5.16(m、1H、COCH(CH3)O)、4.29 (m, 2H, OCH2CH2O)、4.23(t、2H、OCH2CH2O)、3.76(t、2H、COCH2CH2O)、3.66(t、2H、OCH2CH2O)、2.68(m, 2H, COCH2CH2)、2.62(t、2H、COCH2CH2)、1.59(d、3H、COCH(CH3)O)、1.52(m、3H、COCH(CH3)O)、Mw=53000、Mw/Mn=1.65(GPC)
【００７８】
＜合成例６＞
ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）交互マルチブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）の合成
（工程１）Ｂｎ−ＯＨ（ベンジルアルコール）を開始剤としたポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）オリゴマーの合成
【００７９】
【化１７】
2020056020.tif 000019
【００８０】
２０ｍｌシュレンク管をヒートガンを用いて加熱乾燥した後、ダイアフラムポンプを用いて脱気、窒素置換した。１，４-ジオキサン−２−オン（２．８  ｍＬ、３４．７ｍｍｏｌ)、触媒としてＤＰＰ（ジフェニルフォスフェート）（４３４．６ｍｇ、１．７４ ｍｍｏｌ）、開始剤としてＢｎ−ＯＨ（１７９．５μＬ、１．７４ ｍｍｏｌ）を加え、オイルバス中で１１０℃で１時間攪拌し反応させた。反応終了後、アンバーリストＡ２１、ジクロロメタンを入れ、３０分振とうさせた。その後、ろ過によりアンバーリストを取り除き、ろ液をエバポレーターで濃縮し、メタノールに再沈殿し、ろ過により回収した。４０℃で１２時間真空乾燥させてポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）（ＰＤＯ）  オリゴマーを得た。(収率: ６６％)。1H NMR (500MHz、 CDCl3) : 7.36 (m、5H、C6H5)、5.18 (s、2H、C6H5CH2O)、4.35(t、2H、OCH2CH2OCO)、4.18(s、2H、COCH2O)、3.79(t、2H、OCH2CH2OCO)、GPC（CHCl3）：Mw/Mn=1.47、重合度n=22.5(NMR)。
【００８１】
（工程２）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）ジブロック共重合体の合成と脱保護
【００８２】
【化１８】
2020056020.tif 000020
【００８３】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にベンジル末端をもつＰＤＯオリゴマー（重合度２２．５、１．８４３  ｇ、０．７６７ｍｍｏｌ)、Ｌ−ラクチド（２．６３３ｇ、１８．２７ｍｍｏｌ）、グリコリド（０．２３５６ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）、脱水ジクロロメタン１０ｍＬを加えた。ドライヤーでシュレンク管を温めながらかくはんすることですべてを溶解させ、室温に冷やしてから触媒としてＤＢＵ（１，８−ｄｉａｚａｂｉｃｙｃｌｏ［５．４．０］ｕｎｄｅｃ−７−ｅｎｅ)（１４７．７μＬ、１．０２ｍｍｏｌ)を加え、室温で1時間攪拌し、反応させた。反応後安息香酸０．１２ｇを加えてクエンチし、メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過をした後４０℃で一晩真空乾燥し、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）ジブロック共重合体を得た（収率：83%、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：7.35 (m、5H、C6H5)、5.18 (s、2H、C6H5CH2O)、5.16 (q、１Ｈ、COCH(CH3)O)、4.83(m、2H、COCH2OCO)、4.35(t、2H、OCH2CH2OCO)、4.18(s、2H、COCH2O)、3.79(t、2H、OCH2CH2OCO)、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））、GPC（CHCl3）：Mw/Mn=1.48。PDO重合度（n）=21.5、ＰＬＧＡ重合度（ｘ＋ｙ）＝23.1(NMR)
ナスフラスコにベンジル基をもつジブロック共重合体４．７８９ｇをヘキサフルオロイソプロパノール２００ｍＬに溶解させてＰｄ／Ｃを０．４７９ｇ加えた。これを窒素置換したのち、水素雰囲気下，室温で２０ｈ反応させた。反応終了後、窒素置換してからエバポレーターで濃縮乾固し、クロロホルムを加えて溶媒置換した。これをセライトろ過してＰｄ／Ｃを取り除いたのち、ろ液をエバポレーターで濃縮して氷浴メタノール再沈殿をし、吸引ろ過により回収した。４０℃で１２時間真空乾燥させ、脱保護したジブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  ＤＢＣ）を得た（収率：81%、1H NMR（500 MHz、CDCl3）： 5.16 (q、１Ｈ、COCH(CH3)O)、4.83(m、2H、COCH2OCO)、4.35(t、2H、OCH2CH2OCO)、4.18(s、2H、COCH2O)、3.79(t、2H、OCH2CH2OCO)、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））、GPC（CHCl3）：Mw/Mn=1.30。
【００８４】
（工程３）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)−ポリ（１，４−ジオキサン−２−オン）交互マルチブロック共重合体の合成
【００８５】
【化１９】
2020056020.tif 000021
【００８６】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にＰＬＧＡ−ＰＤＯ  ＤＢＣ（１．００ｇ）、ジメチルアミノピリジン  ｐ−トルエンスルホン酸（８．７ｍｇ）、ジメチルアミノピリジン（２．２ｍｇ）、脱水ジクロロメタン１０ｍＬを加えて溶解させた。その後脱水のためモレキュラーシーブを加え一晩振とうさせ、ＤＩＰＣＩ（５５．４μＬ）を加えて室温で３ｈ振とうにより反応させた。反応後、メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過の後４０℃で１２時間真空乾燥し目的物を得た（収率：96%、GPC（CDCl3）：Mw=120,000、Mw/Mn=1.63、1H NMR（500 MHz、CDCl3）： 5.16 (q、１Ｈ、COCH(CH3)O)、4.83(m、2H、COCH2OCO)、4.35(t、2H、OCH2CH2OCO)、4.18(s、2H、COCH2O)、3.79(t、2H、OCH2CH2OCO)、1.58（d、3H、COCH(CH3)O））。
【００８７】
＜合成例７＞
ポリ（Ｌ−ラクチド）５０量体−ポリエチレンオキシド共重合体（ＰＬＬＡ−ＰＥＯ  交互ＭＢＣ）の合成
（工程１）ポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体−ポリエチレンオキシド−ポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体トリブロック共重合体（ＰＬＬＡ２５−ＰＥＯ−ＰＬＬＡ２５  ＴＢＣ）の合成
【００８８】
【化２０】
2020056020.tif 000022
【００８９】
ヒートガンで空焼きし窒素置換した１００ｍＬシュレンク管にポリエチレングリコール（分子量２０５０）（１．４２４ｇ、０．６９４ｍｍｏｌ）を加え、オイルバス中１００℃で一晩攪拌し、脱水した。これを室温まで冷却した後、Ｌ−ラクチド（５．００ｇ、３４．７ｍｍｏｌ）を加え、脱水ジクロロメタン２５ｍＬを加え溶解させた。これに触媒としてＤＢＵ（ジアザビシクロウンデセン）（２６０μＬ、０．１７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌し、反応させた。反応後安息香酸（０．４２３ｇ、０．３４７ｍｍｏｌ）を加えて１０分間攪拌し、ＤＢＵを失活させた後、ジエチルエーテル再沈殿し、吸引ろ過、４０℃で一晩真空乾燥し、白色粉末固体として、ポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体−ポリエチレンオキシド−ポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体トリブロック共重合体（ＰＬＬＡ２５−ＰＥＯ−ＰＬＬＡ２５  ＴＢＣ）を得た。（収量:4.77 g、収率:74.4 %、GPC（CHCl3）:Mw/Mn=1.19、1H NMR（500 MHz、CDCl3）:5.16（q、1H、COCH(CH3)O）、3.64（s、4H、OC2H4）、1.59（d、3H、COCH(CH3)O）重合度ｍ＝５１(1H NMR、乳酸単位)）。
【００９０】
（工程２）無水コハク酸を末端導入したポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体−ポリエチレンオキシド−ポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体トリブロック共重合体（ＨＯＯＣ−ＰＬＬＡ２５−ＰＥＯ−ＰＬＬＡ２５−ＣＯＯＨ  ＴＢＣ）の合成
【００９１】
【化２１】
2020056020.tif 000023
【００９２】
ヒートガンで空焼きし窒素置換した５０ｍＬシュレンク管に（工程１）で合成したトリブロック共重合体（２．０ｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（７５．２μＬ、０．５４０ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（０．０５４ｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）（２．００ｍｇ、０．０１７３ｍｍｏｌ）を加え、そこへ脱水ジクロロメタン１０ｍＬを加え、室温で１２時間攪拌し、反応させた。その後、反応溶液をクロロホルム１００ｍＬで希釈し、蒸留水１００ｍＬで３回、０．５ｗｔ％クエン酸溶液で３回、５００ｍＬ分液漏斗を用いて分液を行った。その後、クロロホルム溶液を回収し、エバポレーターを用いて乾固させ、４０℃で真空乾燥し、白色粉末固体として、無水コハク酸を末端導入したポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体−ポリエチレンオキシド−ポリ（Ｌ−ラクチド）２５量体トリブロック共重合体（ＨＯＯＣ−ＰＬＬＡ２５−ＰＥＯ−ＰＬＬＡ２５−ＣＯＯＨ  ＴＢＣ）を得た。（収量:1.67 g、収率:84.2 %、GPC（CHCl3）:Mw/Mn=1.22）1H NMR（500 MHz、CDCl3）:5.16（q、1H、COCH(CH3)O）、3.64（s、4H、OC2H4）、2.73（t、4H、OCO(CH2)2COOH）1.59（d、3H、COCH(CH3)O）
【００９３】
（工程３）ポリ（Ｌ−ラクチド）５０量体−ポリエチレンオキシド共重合体（ＰＬＬＡ５０−ＰＥＯ  交互ＭＢＣ）の合成
【００９４】
【化２２】
2020056020.tif 000024
【００９５】
ヒートガンで空焼きし窒素置換した２０ｍＬシュレンク管に、（工程１）で合成したトリブロック共重合体（０．５ｇ、０．０５４１ｍｍｏｌ）、（工程２）で合成したトリブロック共重合体（０．５１１ｇ、０．０５４１ｍｍｏｌ）、ＤＰＴＳ（ジメチルアミノピリジン  ｐ−トルエンスルホン酸）（２．６４ｍｇ、０．０１０８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（ジメチルアミノピリジン）（２．６４ｍｇ、０．０２１６ｍｍｏｌ）を加え、そこへ脱水ジクロロメタン５ｍＬを加えて攪拌し、溶解させた。その後、ＤＩＰＣＩ（Ｎ，Ｎ´−ジイソプロピルカルボジイミド）（２５．０μＬ、０．１６２ｍｍｏｌ）を加えて１５時間攪拌し、反応させた。反応後、メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過、４０℃で真空乾燥させ、白色の繊維状の固体として、ポリ（Ｌ−ラクチド）５０量体−ポリエチレンオキシド共重合体（ＰＬＬＡ５０−ＰＥＯ  交互ＭＢＣ（ＰＬＬＡ：ＰＥＯ＝７８：２２））を得た。（収量:0.797 g、収率:79.2 %、GPC（CHCl3）: Mw=113000、Mw/Mn=1.73）1H NMR（500 MHz、CDCl3）:5.16（q、1H、COCH(CH3)O）、3.64（s、4H、OC2H4）、2.73（t、4H、OCO(CH2)2COOH）1.59（d、3H、COCH(CH3)O）、ＰＬＬＡ／ＰＥＯの重量比：７８／２２、
【００９６】
以下に示す異なるマルチブロック共重合体は、ＰＬＬＡとＰＥＯの重量比を変えて合成した。
ＰＬＬＡ２６−ＰＥＯ  交互ＭＢＣ（ＰＬＬＡ：ＰＥＯ＝６４：３６）（収量:0.860 g、収率:86.0 %、GPC（CHCl3）: Mw=137000、Mw/Mn=1.86）1H NMR（500 MHz、CDCl3）:5.16（q、1H、COCH(CH3)O）、3.64（s、4H、OC2H4）、2.73（t、4H、OCO(CH2)2COOH）1.59（d、3H、COCH(CH3)O）
PLLA/PEO重量比：64/36
【００９７】
＜比較合成例１＞
ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（ε−カプロラクトン）２５量体交互マルチブロック共重合体（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）の合成
（工程１）ポリ（ε−カプロラクトン）オリゴマー２５量体の合成
【００９８】
【化２３】
2020056020.tif 000025
【００９９】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にＤＰＰ（ジフェニルフォスフェート）（０．４５ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）を加え、脱水トルエン２５ｍＬを加え溶解させた。
これにε−カプロラクトン（５ｍＬ、４４．６ｍｍｏｌ）とベンジルアルコール（１８７μＬ、１．７９ｍｍｏｌ）を加えて室温で３ｈ反応させた。反応後アンバーリストＡ２１を加えて３０ｍｉｎ振とうし、ろ過によりアンバーリストＡ２１を取り除いた。ろ液をエバポレーターで濃縮し、氷浴ジエチルエーテルで再沈殿した後４０℃で一晩乾燥させ、白色固体としてベンジル末端を持つポリ（ε−カプロラクトン）オリゴマー２５量体を得た（収量：4.66g、収率：83%、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：7.19（m、5H、ArH）、5.34（s、2H、ArCH2）、4.08（t、2H、CH2CH2O）、2.31（t、2H、COCH2CH2）、1.66（m、4H、COCH2CH2CH2、CH2CH2CH2O）、1.39（m、2H、COCH2CH2CH2CH2CH2O））。
【０１００】
（工程２）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（ε−カプロラクトン）２５量体ジブロック共重合体の合成と脱保護
【０１０１】
【化２４】
2020056020.tif 000026
【０１０２】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にＬ−ラクチド（２．１２ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）、グリコリド（０．１９０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）、チオウレア（０．３０２ｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）、ベンジル末端を持つＰＣＬオリゴマー２５（１．６４ｇ、０．５１２ｍｍｏｌ）を加え、脱水ジクロロメタン８ｍＬで溶解させ、Ｍｅ６ＴＲＥＮ（２０９μＬ、０．７４４ｍｍｏｌ）を加えて室温で３ｈ反応させた。反応後、安息香酸０．１０ｇを加えてクエンチし、氷浴メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過をした後４０℃で一晩真空乾燥し、白色固体としてポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（ε−カプロラクトン）２５量体ジブロック共重合体を得た（収量：3.81g、収率：96%、GPC（CHCl3）：Mw/Mn=1.11、
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：7.38（m、5H、ArH）、5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、5.14（s、2H、ArCH2）、4.81（m、2H、COCH2O）、4.08（t、2H、CH2CH2O）、2.31（t、2H、COCH2CH2）、1.66（m、4H、COCH2CH2CH2、CH2CH2CH2O）、1.39（m、2H、COCH2CH2CH2CH2CH2O）。
ジブロック共重合体２．０ｇをＴＨＦ８０ｍＬに溶解させてＰｄ／Ｃを０．２０ｇ加えた。これを窒素置換したのち、水素雰囲気下，室温で２４ｈ反応させた。これを窒素置換し、溶媒をクロロホルムに置換して３ｈ撹拌させた後セライトろ過によりＰｄ／Ｃを取り除いた。ろ液をエバポレーターで濃縮してメタノール再沈殿をし、吸引ろ過により回収した後４０℃で真空乾燥させ、脱保護したジブロック共重合体を得た（収量：1.86g、収率：91%、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、4.08（t、2H、CH2CH2O）、2.31（t、2H、COCH2CH2）、1.66（m、4H、COCH2CH2CH2、CH2CH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、1.39（m、2H、COCH2CH2CH2CH2CH2O））。
【０１０３】
（工程３）ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（ε−カプロラクトン）２５量体交互マルチブロック共重合体(ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ)の合成
【０１０４】
【化２５】
2020056020.tif 000027
【０１０５】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体−ポリ（ε−カプロラクトン）２５量体ジブロック共重合体（１．００ｇ、０．１３８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン  ｐ−トルエンスルホン酸（８．８ｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（７．４ｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加えて、脱水ジクロロメタン３ｍＬを加えて溶解させた。その後脱水のためモレキュラーシーブを加え一晩振とうさせ、ＤＩＰＣＩ（４０．９μＬ、０．２７６ｍｍｏｌ）を加えて室温で２４ｈ振とうにより反応させた。反応後、メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過の後４０℃で真空乾燥し目的物を得た（収量：0.95g、収率：94%、GPC（CHCl3）：Mw=320,000、Mw/Mn=1.73、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、4.08（t、2H、CH2CH2O）、2.31（t、2H、COCH2CH2）、1.66（m、4H、COCH2CH2CH2、CH2CH2CH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）、1.39（m、2H、COCH2CH2CH2CH2CH2O））。
【０１０６】
＜比較合成例２＞
ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）（ＰＤＸＯ単独重合体）の合成
【０１０７】
【化２６】
2020056020.tif 000028
【０１０８】
２０ｍｌシュレンク管をヒートガンを用いて加熱乾燥した後、ダイアフラムポンプを用いて脱気、窒素置換した。ＤＸＯ（１．３５７ｍＬ)、触媒としてＳｎ（Ｏｃｔ）２（４．８０μＬ）を加え、オイルバス中で１００℃で０．５時間攪拌した。その後１３０℃で８時間撹拌し、反応させた。反応終了後、酢酸を数滴とクロロホルムを４ｍｌ加えて触媒を失活させた。その後氷浴中でジエチルエーテル再沈殿した。吸引ろ過により回収し室温で真空乾燥した。(収量：1.44ｇ、 収率: 95.8％、GPC（CHCl3）：Mw=128,000、Mw/Mn=6.48)
1H NMR（500 MHz、CDCl3）：4.23（t、2H、OCH2CH2OCO）、3.76（t、2H、OCOCH2CH2O）、3.67（t、2H、OCH2CH2OCO）、2.62（t、2H、OCOCH2CH2O）。
【０１０９】
＜比較合成例３＞
ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)（ＰＬＧＡ単独重合体）の合成
【０１１０】
【化２７】
2020056020.tif 000029
【０１１１】
ヒートガンで空焼きし窒素置換したシュレンク管にポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)２５量体（０．５０ｇ，０．１３８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン  ｐ−トルエンスルホン酸（８．８ｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（７．４ｇ，０．０５５ｍｍｏｌ）を加えて、脱水ジクロロメタン２ｍＬを加えて溶解させた。その後脱水のためモレキュラーシーブを加え一晩振とうさせ、ＤＩＰＣＩ（４０．９μＬ，０．２７６ｍｍｏｌ）を加えて室温で２４ｈ振とうにより反応させた。反応後、メタノール再沈殿を行い、吸引ろ過の後４０℃で真空乾燥し目的物を得た（収量：0.46g、収率：90 %、
GPC（CHCl3）：Mw=180,000，Mw/Mn=、1.49、1H NMR（500 MHz、CDCl3）：5.18（q、1H、COCH(CH3)O）、4.81（m、2H、COCH2O）、1.58（d、3H、COCH(CH3)O）。
【０１１２】
以上の合成例および比較合成例により合成したポリマーの１５ｍｇ／ｍＬのクロロホルム溶液を調製し、ガラス基板にキャストすることで薄膜を作製した。ポリ（１，５−ジオキセパン−２−オン）とポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド)の単独重合体の混合膜は比較合成例２、３で合成した各単独共重合体７．５ｍｇを１ｍLのクロロホルム中で混合し、上記と同様にガラス基板にキャストすることで薄膜を作製した。
【０１１３】
＜ヒト血小板粘着試験＞
遠沈管にクイックアイパートナー（クエン酸ナトリウム：抗凝固剤（ニプロ株式会社））を６本加え、ヒト血液６．７ｍＬを採取し撹拌した。これを９００ｒｐｍ、１０ｍｉｎで遠心分離し上清（ＰＲＰ（＝platelet rich plasma、血小板が多い血しょう））を回収した。その後条件を３０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎで遠心分離し上清（ＰＰＰ（＝platelet poor plasma、血小板が少ない血しょう））を回収した。このＰＲＰ、ＰＰＰ両方の血小板数をカウントした（ＰＲＰ＝７．０８×１０８platelets/mL、ＰＰＰ＝１．５０×１０７pletelets/mL）。これを血小板濃度５．０×１０７platelets/mLとなるよう、ＰＲＰは０．１ｍＬ、ＰＰＰは１．９ｍＬ加えて２ｍＬの血小板試料を調製した。
【０１１４】
サンプル薄膜をキャストしたガラス基板にリキッドブロッカーで疎水性サークルを描き、調整した血小板試料を約２００μＬ滴下した。これを３７℃で１ｈインキュベートし、インキュベート後のガラス基板をＰＢＳ（リン酸緩衝液水溶液）で洗浄し、１％グルタルアルデヒド溶液（固定化用試薬、和光純薬工業株式会社から購入した２０％グルタルアルデヒド溶液をＰＢＳで希釈して調製）を約２００μＬ滴下して再び３７℃で３０ｍｉｎインキュベートした。インキュベート後のガラス基板を洗浄し、ＢＤ  Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ溶液（透過用試薬、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙから購入したものをＰＢＳで１０倍に希釈して調製）を膜に約２００μＬ滴下して室温で１０ｍｉｎ静置した。その後ＡｃｔｉｎＧｒｅｅｎ溶液（ＢＤ  Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ溶液１ｍＬにＡｃｔｉｎＧｒｅｅｎ  ２滴を加えたもの、ＡｃｔｉｎＧｒｅｅｎはＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入）を調製し約２００μＬ滴下し、遮光して室温で３０ｍｉｎ静置した。静置したガラス基板をＰＢＳで洗浄し、顕微鏡で観察した。顕微鏡で得られた画像から接着した血小板の数をカウントし、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定によって有意差検定を行った。有意水準はＰ＝０．０１とした。
【０１１５】
＜実施例１＞
図１、２に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例１）の結果を示した。
図１に、顕微鏡観察画像（暗視野）を示した。また、図２に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１１６】
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）
合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１１７】
「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ」、「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０」はともに血小板粘着数が、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」より少なかった。また、「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ」と「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０」では血小板粘着数に大きな違いは見られなかった。
【０１１８】
＜実施例２＞
図３、４に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例２）の結果を示した。
図３に、顕微鏡観察画像（暗視野）を示した。また、図４に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１１９】
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  １３：８７）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  １３：８７からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ４０：６０）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ４０：６０からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ５０：５０からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ６４：３６）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ６４：３６からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ７１：２９）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ７１：２９からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ８１：１９）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ８１：１９からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ９４：６）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ９４：６からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１２０】
「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ９４：６」においても血小板粘着数は「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ」より少ないことが観察された。ＰＤＸＯセグメント比の増加とともに血小板粘着数は少なくなった。一方、「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＭＢＣ  １３：８７」では、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ」と同等の血小板粘着数を示した。
【０１２１】
＜実施例３＞
図５、６に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例３）の結果を示した。
図５に、顕微鏡観察画像（暗視野）を示した。また、図６に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１２２】
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＤＸＯ単独重合体）
比較合成例２において得られたＰＤＸＯ単独重合体からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  １３：８７）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  １３：８７からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ２６：７４）
合成例２において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ２６：７４からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ  ＰＤＸＯ混合物）
比較合成例２において得られたＰＤＸＯ単独重合体と比較合成例３において得られたＰＬＧＡ単独重合体の混合物からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１２３】
「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ２６：７４」は血小板粘着数が少ないが、「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ１３：８７」は血小板粘着数が多かった。「ＰＤＸＯ単独重合体」、「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ混合物」ではいずれも血小板粘着数は多かった。
【０１２４】
この理由については膜表面の状態の違いにあると考えられる。図７に各試料の原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）による位相像を示す。明るい部分がＰＤＸＯ成分から形成されるドメインである。血小板粘着数が少ない「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  ２６：７４」は両成分がミクロ相分離構造を形成していることがわかる。「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＲＭＢＣ  １３：８７」ではＰＤＸＯ成分が大部分を占め、ＰＬＧＡセグメントのドメインが分散していた。「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ混合物」においてはＰＤＸＯ成分の凝集体が大きなドメインを形成していることがわかる。「ＰＤＸＯ単独重合体」ではＰＤＸＯの均一な表面が観察された。これらより、ＰＤＸＯ成分そのもの、またはＰＤＸＯの大きなドメインが表面に形成されると血小板粘着が起こり、これがミクロ相分離構造になると抑制されると考えられる。
【０１２５】
＜実施例４＞
図８、９に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例４）の結果を示した。
図８に、顕微鏡観察画像（暗視野）を示した。また、図９に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１２６】
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＭＢＣ５）
合成例１と同様の方法で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ（セグメント長５量体）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＭＢＣ１０）
合成例１と同様の方法で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ（セグメント長１０量体）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＭＢＣ２５）
合成例１と同様の方法で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ（セグメント長２５量体）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
「ＭＢＣ５」であっても、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ」より血小板粘着数は少なかった。セグメント長の増加とともに粘着数は低下した。
【０１２７】
各試料の表面状態についてＡＦＭ測定を行った（図１０）。「ＭＢＣ１０」、「ＭＢＣ２５」では表面にミクロ相分離構造が観察され、これが血小板粘着抑制に効果的であると考えられる。一方、「ＭＢＣ５」では均一な膜表面となった。ＰＤＸＯ成分の効果により血小板粘着は抑制されるが、ミクロ相分離構造を形成する表面よりは粘着数が多かったと考えられる。
【０１２８】
＜実施例５＞
図１１、１２に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例５）の結果を示した。
図１１に、顕微鏡観察画像（暗視野）を示した。また、図１２に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１２９】
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＤＢＣ）
合成例３において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  ＤＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＴＢＣ）
合成例４において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ−ＰＬＧＡ  ＴＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＭＢＣ）
合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１３０】
「ＤＢＣ」、「ＴＢＣ」の血小板粘着数は少なく、その数は「ＭＢＣ」と同等であった。
【０１３１】
＜実施例６＞
図１３、１４に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例６）の結果を示した。
図１３に、顕微鏡観察画像（暗視野）を示した。また、図１４に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１３２】
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＤＬ）
合成例１と同様の方法で、ハードセグメントにＤ−乳酸とＬ−乳酸を用いたＰＤＬＬＡ（２５量体）とＰＤＸＯ（２５量体）の交互マルチブロック共重合体を合成し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＲＣ）
合成例５において得られた、ＰＬＬＡとＰＤＸＯのランダム共重合体(ＲＣ)からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１３３】
「ＤＬ」、「ＲＣ」のいずれも血小板粘着数は比較対象の「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ」より少なかった。
【０１３４】
＜実施例７＞
図１５に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例７）の結果を示し、マルチブロック共重合体におけるハードセグメント分子構造と血小板粘着数の関係を示した。
「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１３５】
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ）
比較合成例１と同様の方法によりＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ（Ｍｗ＝１４２，０００）を合成し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ）
合成例１と同様の方法により、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ（Ｍｗ＝１２９,０００）を合成し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＬＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ）
合成例１と同様の方法により、ハードセグメントにＬ−乳酸を用いたＰＬＬＡ（２５量体）とＰＤＸＯ（２５量体）の交互マルチブロック共重合体（Ｍｗ＝５４,０００）を作製し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１３６】
「ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ」と「ＰＬＬＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ」の血小板粘着数はともに「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」より少なく、ＰＬＧＡ系とＰＬＬＡ系には大きな差は観察されなかった。
【０１３７】
＜実施例８＞
図１６に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例８）の結果を示し、マルチブロック共重合体におけるハードセグメント分子構造と血小板粘着数の関係を示した。
「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１３８】
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ）
比較合成例１と同様の方法によりＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ（Ｍｗ＝１４２，０００）を合成し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＤＬＬＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ）
合成例１と同様の方法で、ハードセグメントにＤ−乳酸とＬ−乳酸を用いたＰＤＬＬＡ（２５量体）とＰＤＸＯ（２５量体）の交互マルチブロック共重合体（Ｍｗ＝３７,０００）を合成し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＤＬＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ）
合成例１と同様の方法で、ハードセグメントにＤ−乳酸を用いたＰＤＬＡ（２５量体）とＰＤＸＯ（２５量体）の交互マルチブロック共重合体（Ｍｗ＝１１６,０００）を合成し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成、Ｍｗ＝３６５，０００）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１３９】
「ＰＤＬＬＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ」、「ＰＤＬＡ−ＰＤＸＯ交互ＭＢＣ」についても血小板粘着数は少なく、ハードセグメントとしてＰＬＧＡ、ＰＬＬＡ、ＰＤＬＬＡ、ＰＤＬＡいずれも有効であることが示された。
【０１４０】
＜実施例９＞
図１７、１８に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験（実施例９）の結果を示した。
図１７に、顕微鏡観察画像（暗視野）を示した。また、図１８に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着し易い表面を有する例として挙げた。
【０１４１】
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）(ＰＭＥＡ)（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）
合成例１と同様の方法により、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ（Mw＝１３０，０００、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．２２）を合成し、この薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）
合成例６において得られたＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１４２】
これらの結果から、ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣに対する血小板粘着数はＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣより少なく、抗血栓性材料として利用可能であることが確認された。
【０１４３】
＜実施例１０＞
（ヒト血小板粘着試験）
以上の合成例により合成したポリマーの１０ｍｇ／ｍＬのクロロホルム溶液を調製し、ガラス基板にキャストすることで薄膜を作製した。その後、上記ヒト血小板粘着試験に示す方法により、作製したフィルムについて、血小板粘着試験を行い、抗血栓性材料としての使用用途について検討を行った。
【０１４４】
（ＰＭＥＡ）
ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）（ＰＭＥＡ）（ラジカル重合により合成）からなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＬＡ５０−ＰＥＯ  交互ＭＢＣ）
合成例７において得られたＰＬＬＡ５０−ＰＥＯ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＬＡ２６−ＰＥＯ  交互ＭＢＣ）
合成例７において得られたＰＬＬＡ２６−ＰＥＯ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
（ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ）
比較合成例１において得られたＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣからなる薄膜を用いて、上記試験を行った。
【０１４５】
図１９、２０に、上記に従って行ったヒト血小板粘着試験の結果を示した。図１９に、顕微鏡観察試験画像（暗視野）を示した。また、図２０に、得られた血小板粘着数の結果を示した。「ＰＭＥＡ」は、血小板が粘着しづらい表面を有する例として、「ＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣ」は、血小板が粘着しやすい表面を有する例として挙げた。これらの結果から、ＰＬＬＡ５０−ＰＥＯ  交互ＭＢＣ、ＰＬＬＡ２６−ＰＥＯ  交互ＭＢＣについて、どちらも血小板粘着数はＰＬＧＡ−ＰＣＬ  交互ＭＢＣより少なく、抗血栓性材料として利用可能であることが確認された。
【０１４６】
＜実施例１１＞
（細胞培養試験、Ｈｅｌａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ）
上記合成例１で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ、及び対比のため、ポジティブコントロールとしてＣｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ−Ｃ（新田ゼラチン株式会社、Ｃｏｌｌａｇｅｎ、ＴｙｐｅＩ、３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ３．０）、ネガティブコントロールとしてＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）を準備した。ヒト子宮頸癌由来の細胞であるＨｅＬａ細胞の培養を経過観察し、細胞を播種してから１日後、２日後、３日後にセルカウント、及びＷＳＴ試験を行い、細胞の増殖挙動を評価した。
オートクレーブ滅菌したガラスシャーレにクリーンベンチ内（無菌状態）でＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣのクロロホルム溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を直接キャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥してＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣでコーティングしたシャーレを作製した。ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６のメタノール溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を同様にキャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥して、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６でコーティングしたシャーレを作製した。Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ−ＣをＨＣｌ水溶液で１０６倍希釈し、オートクレーブ滅菌したガラスシャーレ上にいれて３０分以上静置した後、Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉａ（ＭＥＭ）培地で３〜４回洗浄してから使用した。
【０１４７】
調製したＨｅＬａ細胞液（４．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）１ｍＬをＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ、Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  ＴｙｐｅＩ−Ｃ、および、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６をコーティングしたシャーレ上にそれぞれ滴下し、３７℃で培養した。セルカウントの場合、１日後、２日後、３日後での細胞数を血球計算盤を使用して計数した。ＷＳＴ試験の場合、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＷＳＴ−１）を５０μＬ細胞培養中のガラスシャーレに加え、３時間３７℃で培養したのち、１５０μＬを９６ｗｅｌｌプレートに入れ、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。図２１に７２時間後の培養の様子、図２２にセルカウントの結果、図２３にＷＳＴ試験の結果を示す。いずれの結果からもＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ上でＨｅＬａ細胞が増殖しており、細胞培養可能な基材であることが確認された。
【０１４８】
(細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ)
上記合成例１で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ、及び対比のため、ポジティブコントロールとしてＣｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ−Ｃ（新田ゼラチン株式会社、Ｃｏｌｌａｇｅｎ、ＴｙｐｅＩ、３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ３．０）、ネガティブコントロールとしてＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）を準備した。試験に使用する細胞であるヒト臍帯静脈内皮細胞ＨＵＶＥＣ細胞は継代数５〜７の細胞を使用し、培養時には培地ＥＧＭ（登録商標）−２  ＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔｓ（登録商標）（ロンザジャパン株式会社、０．２ｍＬ  Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ、０．５ｍＬ  ＧＡ−１０００、１０ｍＬ  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ、２ｍＬ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ｂａｓｉｃ（ｈＦＧＦｂ）、０．５ｍＬ  Ｈｕｍａｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ（ｈＶＥＧＦ）、０．５ｍＬ  Ａｎａｌｏｇ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−１．  Ｌｏｎｇ  Ｒ３−ＩＧＦ−１、０．５ｍＬ  Ａｓｃｏｒｂｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、０．５ｍＬ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ（ｈＥＧＦ）、０．５ｍＬ  Ｈｅｐａｒｉｎを含む）を使用した。試験開始後、ＨＵＶＥＣ細胞の増殖を経過観察し、細胞を播種してから１日後、２日後、３日後にセルカウント、及びＷＳＴ試験を行い、細胞の増殖挙動を評価した。
【０１４９】
オートクレーブ滅菌したガラスシャーレにクリーンベンチ内（無菌状態）でＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣのクロロホルム溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を直接キャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥してＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣでコーティングしたシャーレを作製した。ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６のメタノール溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を同様にキャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥して、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６でコーティングしたシャーレを作製した。Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ−ＣをＨＣｌ水溶液で１０６倍希釈し、オートクレーブ滅菌したガラスシャーレ上にいれて３０分以上静置した後、Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉａ（ＭＥＭ）培地で３〜４回洗浄してから使用した。
【０１５０】
調整したＨＵＶＥＣ細胞懸濁液（２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）１ｍＬをＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ、Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  ＴｙｐｅＩ−Ｃ、および、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６をコーティングしたシャーレ上にそれぞれ滴下し、３７℃で培養した。セルカウントの場合、１日後、２日後、３日後での細胞数をそれぞれ血球計算盤を使用して計数した。ＷＳＴ試験の場合、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＷＳＴ−８）を５０μＬ細胞培養中のガラスシャーレに加え、４時間３７℃で培養したのち、上澄み１５０μＬを９６ｗｅｌｌプレートに入れ、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。図２４に７２時間後の培養の様子、図２５にセルカウントの結果、図２６にＷＳＴ試験の結果を示す。いずれの結果からもＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ上でＨＵＶＥＣ細胞が増殖しており、細胞培養可能な基材であることが確認された。
【０１５１】
(細胞培養試験、ＨｅＬａ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ)
上記合成例６で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ、及び対比のため、ポジティブコントロールとしてＣｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ‐Ｃ（新田ゼラチン株式会社、Ｃｏｌｌａｇｅｎ、ＴｙｐｅＩ、３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ３．０）、ネガティブコントロールとしてＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商業）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）、比較対象として合成例１で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣを準備した。
本実施例では、ヒト子宮頸癌由来の細胞であるＨｅＬａ細胞の培養を経過観察し、細胞を滴下したから１日後、２日後、３日後でセルカウント、及びＷＳＴ試験を行い、細胞培養基材としての使用用途について検討を行った。
オートクレーブ滅菌したガラスシャーレにクリーンベンチ内(無菌状態)でＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣのクロロホルム溶液（１２．５ｍｇ／２５０μＬ）を直接キャストし、シャーレのふたを閉めて、ホットプレート上で４０℃で加熱しながら１時間静置後、一晩真空乾燥してＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣでコーティングしたシャーレを作製した。また、オートクレーブ滅菌したガラスシャーレにクリーンベンチ内(無菌状態)でＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣのクロロホルム溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を直接キャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥してＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣでコーティングしたシャーレを作製した。ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６のメタノール溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を同様にキャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥して、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）でコーティングしたシャーレを作製した。Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ−ＣをＨＣｌ水溶液で１０６倍希釈し、オートクレーブ滅菌したガラスシャーレ上にいれて３０分以上静置した後、Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉａ（ＭＥＭ）培地で３〜４回洗浄してから使用した。
【０１５２】
細胞培養試験に用いた細胞溶液は、ＨｅＬａ細胞が培養されている１０ｃｍディッシュ上の培地を除去し、トリプシン／エチレンジアミンテトラ酢酸イオン（ＥＤＴＡ）酵素溶液を２ｍＬ入れ、３７℃で３分間インキュベートした。その後、培地８ｍＬを入れて酵素のはたらきをとめた後、１５００ｒｐｍで３分間遠心分離した。上澄みを除去後、顕微鏡にて細胞数をカウントし、培地を加え、播種密度が２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように細胞溶液を調製した。
調製したＨｅＬａ細胞懸濁液（２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）１ｍＬをＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ、および、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）をキャストしたシャーレと、Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ１−Ｃをコーティングしたシャーレ上にそれぞれ滴下し、３７℃で培養した。セルカウントの場合、１日後、２日後、３日後での細胞数をそれぞれ血球計算盤を使用して計数した。ＷＳＴ試験の場合、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＷＳＴ−８）を５０μＬ細胞培養中のガラスシャーレに加え、４時間３７℃で培養したのち、上澄み１５０μＬを９６ｗｅｌｌプレートに入れ、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。図２７、２８に７２時間後の培養の様子、図２９にセルカウントの結果、図３０にＷＳＴ試験の結果を示す。いずれの結果からもＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ上でＨｅＬａ細胞が増殖しており、細胞培養可能な基材であることが確認された。
【０１５３】
（細胞培養試験、ＨＵＶＥＣ細胞、ＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ）
上記合成例６で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ、及び対比のため、ポジティブコントロールとしてＣｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ‐Ｃ（新田ゼラチン株式会社、Ｃｏｌｌａｇｅｎ、ＴｙｐｅＩ、３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ３．０）、ネガティブコントロールとしてＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商業）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）、比較対象として合成例１で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣを準備した。
試験に使用する細胞であるヒト臍帯静脈内皮細胞ＨＵＶＥＣ細胞は継代数５〜７の細胞を使用し、培養時には培地ＥＧＭ（登録商標）‐２  ＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔｓ（登録商標）（ロンザジャパン株式会社、０．２ｍＬ  Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ、０．５ｍＬ  ＧＡ‐１０００、１０ｍＬ  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ、２ｍＬ  Ｈｕｍａｎ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ｂａｓｉｃ（ｈＦＧＦｂ）、０．５ｍＬ  Ｈｕｍａｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ（ｈＶＥＧＦ）、０．５ｍＬ  Ａｎａｌｏｇ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ‐Ｌｉｋｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ‐１．  Ｌｏｎｇ  Ｒ３‐ＩＧＦ‐１、０．５ｍＬ  Ａｓｃｏｒｂｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、０．５ｍＬ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ（ｈＥＧＦ）、０．５ｍＬ  Ｈｅｐａｒｉｎを含む）を使用した。試験開始後、ＨＵＶＥＣ細胞の増殖を経過観察し、細胞を播種してから１日後、２日後、３日後にセルカウント、及びＷＳＴ試験を行い、細胞の増殖挙動を評価した。
【０１５４】
オートクレーブ滅菌したガラスシャーレにクリーンベンチ内（無菌状態）でＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣのクロロホルム溶液（１２．５ｍｇ／２５０μＬ）を直接キャストし、シャーレのふたを閉めて、ホットプレート上で４０℃で加熱しながら１時間静置後、一晩真空乾燥してＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣでコーティングしたシャーレを作製した。また、オートクレーブ滅菌したガラスシャーレにクリーンベンチ内（無菌状態）でＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣのクロロホルム溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を直接キャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥してＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣでコーティングしたシャーレを作製した。ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６のメタノール溶液（４．７５ｍｇ／２５０μＬ）を同様にキャストし、３時間静置後、一晩真空乾燥して、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）でコーティングしたシャーレを作製した。Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  Ｔｙｐｅ  Ｉ−ＣをＨＣｌ水溶液で１０６倍希釈し、オートクレーブ滅菌したガラスシャーレ上にいれて３０分以上静置した後、Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉａ（ＭＥＭ）培地で３〜４回洗浄してから使用した。
【０１５５】
細胞培養試験に用いた細胞溶液は、ＨＵＶＥＣ細胞が培養されている１０ｃｍディッシュ上の培地を除去し、ＭＥＭ培地を２ｍＬ程度入れて一回洗浄し、ＭＥＭ培地を除去した後、トリプシン／エチレンジアミンテトラ酢酸イオン（ＥＤＴＡ）酵素溶液を２ｍＬ入れ、３７℃で３分間インキュベートした。その後、培地８ｍＬを入れて酵素のはたらきをとめた後、１５００ｒｐｍで３分間遠心分離した。上澄みを除去後、顕微鏡にて細胞数をカウントし、培地を加え、播種密度が２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように細胞溶液を調製した。
調整したＨＵＶＥＣ細胞懸濁液（２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）１ｍＬをＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ、ＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ  交互ＭＢＣ、および、ＬＩＰＩＤＵＲＥ（登録商標）−ＣＭ５２０６（ＭＰＣポリマー）をキャストしたシャーレと、Ｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ  ＴｙｐｅＩ−Ｃをコーティングしたシャーレ上にそれぞれ滴下し、３７℃で培養した。セルカウントの場合、１日後、２日後、３日後での細胞数をそれぞれ血球計算盤を使用して計数した。ＷＳＴ試験の場合、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＷＳＴ−８）を５０μＬ細胞培養中のガラスシャーレに加え、４時間３７℃で培養したのち、上澄み１５０μＬを９６ｗｅｌｌプレートに入れ、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。図３１、３２に７２時間後の培養の様子、図３３にセルカウントの結果、図３４にＷＳＴ試験の結果を示す。いずれの結果からもＰＬＧＡ−ＰＤＯ  交互ＭＢＣ上でＨＵＶＥＣ細胞が増殖しており、細胞培養可能な基材であることが確認された。
【０１５６】
＜実施例１２＞
（加水分解挙動）
図３５、図３６に合成例１で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ交互マルチブロック共重合体（セグメント重合度２５、Mw=129,000、Mw/Mn=2.03）のリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）における加水分解挙動を示す。加水分解の進行に伴い、接触角の減少、重量減少、分子量低下が観察された。図３５では初期の７０°前後の比較的疎水性の表面から加水分解の進行に伴い接触角が１０−２０°と極めて親水性になっていることがわかる。加水分解に伴いゆっくりと重量減少が確認され、１４週後では２４％の重量減少が見られた。図３６に残存成分の分子量を示す。残存成分の分子量は２５，０００−３０，０００程度であった。
【０１５７】
＜実施例１３＞
（力学特性）
図３７に合成例1で合成したＰＬＧＡ−ＰＤＸＯ交互マルチブロック共重合体（セグメント長２５量体）の自立膜を示す。クロロホルム溶液からキャストした膜はガラス基板からはがしても自立性を示し、取り扱いやすい状態であった。図３８にこの膜の引張り試験による応力−ひずみ曲線を、表１に力学特性データを示す。応力−ひずみ曲線の初期勾配から算出した高いヤング率（弾性率）はマルチブロック共重合体特有であり、自立膜としての扱いやすさを反映している（弾性率５ＭＰａ以下では柔らかすぎで扱いにくい）。破断伸びの平均は８００％を超えており、よく伸び、タフな膜であることが確認された。これらの特性は従来の抗血栓性材料であるＰＭＥＡ、ＰＭＰＣ、ポリトリメチレンカーボネートなどのガラス転移温度が室温以下の高分子では達成できない性質である。
【０１５８】
【表１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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