(57)【要約】【課題】全死亡、心血管死亡及び心血管イベントを予測するバイオマーカーを提供する。【解決手段】本発明にかかるバイオマーカーは、全死亡、心血管死亡及び心血管イベントを予測するためのバイオマーカーであって、そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高い場合に、全死亡、心血管死亡及び心血管イベント発生のリスクが高いことを特徴とする。血液試料は、VEGF-Dの濃度を測定できるものであれば特に制限はないが、例えば血清、血漿、全血であり、好ましくは血清である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
全死亡を予測するためのバイオマーカーであって、
そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、
VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、全死亡のリスクが高いことを特徴とするバイオマーカー。
【請求項２】
心血管死亡を予測するためのバイオマーカーであって、
そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、
VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、心血管死亡のリスクが高いことを特徴とするバイオマーカー。
【請求項３】
心血管イベントの発生を予測するためのバイオマーカーであって、
そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、
VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、心血管イベントの発生のリスクが高いことを特徴とするバイオマーカー。
【請求項４】
全死亡を予測する方法であって、
被検者の血液試料中のVEGF-Dの濃度を測定する工程と、
VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に全死亡のリスクが高いと判定する工程と、を含むことを特徴とする全死亡を予測する方法。
【請求項５】
心血管死亡を予測する方法であって、
被検者の血液試料中のVEGF-Dの濃度を測定する工程と、
VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に心血管死亡のリスクが高いと判定する工程と、を含むことを特徴とする心血管死亡を予測する方法。
【請求項６】
心血管イベントの発生を予測する方法であって、
被検者の血液試料中のVEGF-Dの濃度を測定する工程と、
VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に心血管イベントの発生のリスクが高いと判定する工程と、を含むことを特徴とする心血管イベントの発生を予測する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全死亡、心血管死亡及び心血管イベントを予測するためのバイオマーカー並びに全死亡、心血管死亡及び心血管イベントの予測方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管内皮増殖因子(VEGF)ファミリーとその内皮チロシンキナーゼ受容体は血管新生及びリンパ管新生において中心的役割を果たす。哺乳類のVEGFファミリーにはVEGF(あるいはVEGF-A)、胎盤由来増殖因子(PlGF)、VEGF-B、VEGF-C、及び、VEGF-D、の５つが存在する。VEGFがVEGF受容体2に結合することによって主要な血管新生シグナルが活性化される。VEGF受容体1は発生の段階では、血管新生の負の制御因子として働き、成体においてはPlGFとVEGF-Bの結合により、病的血管新生に関わる。VEGF-CとVEGF-DはVEGF受容体3に結合してリンパ管新生シグナルを活性化する(非特許文献１)。
【０００３】
VEGF-Dは、分泌型糖タンパクであり、発生段階や疾患において、内皮特異的チロシンキナーゼ受容体を活性化し、血管とリンパ管のリモデリング(再構築)を促進する(非特許文献２)。 最近の基礎研究と展開医療研究の結果、癌、心血管疾患、肺疾患等の病態において、VEGF-Dが役割を果たす分子メカニズムが明らかになり、診断または治療標的として注目されている。特に、難病指定されている希少疾患、リンパ脈管筋腫症lymphangioleiomyomatosisにおいて、血清VEGF-Dは診断と治療効果判定のバイオマーカーとして確立されている(非特許文献２)。また、難治性狭心症の治療にアデノウィルスベクターを用いた心筋へのVEGF-D遺伝子導入がフェーズI/IIa臨床研究を終えて、その効果が報告されている(非特許文献３)。
【０００４】
VEGF-CとVEGF-Dの２つのリンパ管新生因子の内、VEGF-Cは生理的リンパ管新生及び病的リンパ管新生のいずれにおいても中心的な役割を果たす(非特許文献４〜９)。本発明者らは、被検者の血液試料中のVEGF-Cの濃度が所定の値よりも低い場合に全死亡及び心血管死亡のリスクがあることを報告している(非特許文献１０)。しかしながら、血中VEGF-Dレベルと冠動脈疾患（虚血性心疾患）重症度との関連、あるいは冠動脈疾患患者の血中VEGF-Dレベルと将来の死亡及び心血管イベント発症との関連は不明であった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Lohela M, Bry M, Tammela T, Alitalo K. VEGFs and receptors involved in angiogenesis versus lymphangiogenesis. Curr Opin Cell Biol. 2009;21:154-65.
【非特許文献２】Stacker SA, Achen MG. Emerging Roles for VEGF-D in Human Disease. Biomolecules. 2018 Jan 4;8(1). pii: E1. doi: 10.3390/biom8010001. Review.
【非特許文献３】Hartikainen J, Hassinen I, Hedman A, Kivela A, Saraste A, Knuuti J, Husso M, Mussalo H, Hedman M, Rissanen TT, Toivanen P, Heikura T, Witztum JL, Tsimikas S, Yla-Herttuala S. Adenoviral intramyocardial VEGF-DΔNΔC gene transfer increases myocardial perfusion reserve in refractory angina patients: a phase I/IIa study with 1-year follow-up. Eur Heart J. 2017 Sep 1;38(33):2547-2555. doi:10.1093/eurheartj/ehx352.
【非特許文献４】Joukov V, Pajusola K, Kaipainen A, et al. A novel vascular endothelial growth factor, VEGF-C, is a ligand for the Flt4 (VEGFR-3) and KDR (VEGFR-2) receptor tyrosine kinases. EMBO J. 1996;15:290-8.
【非特許文献５】Yang Y, Oliver G. Development of the mammalian lymphatic vasculature. J Clin Invest. 2014;124:888-97.
【非特許文献６】Karaman S, Detmar M. Mechanisms of lymphatic metastasis. J Clin Invest. 2014;124:922-8.
【非特許文献７】Vuorio T, Tirronen A, Yla-Herttuala S. Cardiac Lymphatics - A New Avenue for Therapeutics Trends Endocrinol Metab. 2017;28:285-96.
【非特許文献８】Karkkainen MJ, Haiko P, Sainio K, et al. Vascular endothelial growth factor C is required for sprouting of the first lymphatic vessels from embryonic veins. Nat Immunol. 2004;5:74-80.
【非特許文献９】Jeltsch M, Kaipainen A, Joukov V, et al. Hyperplasia of lymphatic vessels in VEGF-C transgenic mice. Science. Science. 1997;276:1423-5.
【非特許文献１０】Wada H, Suzuki M, Matsuda M, Ajiro Y, Shinozaki T, Sakagami S, Yonezawa K, Shimizu M, Funada J, Takenaka T, Morita Y, Nakamura T, Fujimoto K, Matsubara H, Kato T, Unoki T, Takagi D, Ura S, Wada K, Iguchi M, Masunaga N, Ishii M, Shimatsu A, Kotani K, Satoh-Asahara N, Abe M, Akao M and Hasegawa K. Vascular Endothelial Growth Factor-C Levels and Cardiovascular and All-cause Mortality in Patients With Suspected Coronary Artery Disease: From the ANOX Study. Circulation. 2017;136:A13751.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、全死亡を予測するバイオマーカーを提供することを目的とする。また、本発明は、心血管死亡を予測するバイオマーカーを提供することを目的とする。本発明は、心血管イベントの発生を予測するバイオマーカーを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明にかかるバイオマーカーは、全死亡を予測するためのバイオマーカーであって、そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、全死亡のリスクが高いことを特徴とする。本発明にかかるバイオマーカーは、心血管死亡を予測するためのバイオマーカーであって、そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、心血管死亡のリスクが高いことを特徴とする。本発明にかかるバイオマーカーは、心血管イベントの発生を予測するためのバイオマーカーであって、そのバイオマーカーは被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、心血管イベントの発生のリスクが高いことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、全死亡、心血管死亡及び心血管イベントを予測できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】VEGF-Dにつき４群に分けた場合の全死亡発症率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。
【図２】VEGF-Dにつき４群に分けた場合の心血管死亡発症率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。
【図３】VEGF-Dにつき４群に分けた場合の心血管イベント発生率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。
【図４】VEGF-D第4四分位(75パーセンタイルより高値)の全死亡、心血管死亡及び心血管イベントに対するハザード比(95%信頼区間)である。値は多変量Cox比例ハザード解析を用いて算出した。各モデルの調整因子は以下の通りである。  モデル1, 年齢、性別  モデル2, 年齢、性別、脂質異常、高血圧、糖尿病、現在喫煙、肥満、慢性腎臓病、心血管イベント既往、冠動脈疾患、多岐又は左主幹部病変、スタチン使用、アスピリン使用、降圧薬使用
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、添付の図面を参照して本発明の実施形態について具体的に説明するが、当該実施形態は本発明の原理の理解を容易にするためのものであり、本発明の範囲は、下記の実施形態に限られるものではなく、当業者が以下の実施形態の構成を適宜置換した他の実施形態も、本発明の範囲に含まれる。
【００１１】
本発明にかかるバイオマーカーは、被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、全死亡を予測するためのバイオマーカーである。VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、全死亡のリスクが高いと予想できる。全死亡とは、がん、脳卒中、心臓病その他全ての死亡の合計である。
【００１２】
また、本発明にかかるバイオマーカーは、被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、心血管死亡を予測するためのバイオマーカーである。VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、心血管死亡のリスクが高いと予想できる。心血管死亡とは、心血管疾患に起因する死亡をいい、例えば、心臓死（致死性心筋梗塞、致死性心不全、心臓突然死等）、致死性脳卒中等が挙げられる。
【００１３】
また、本発明にかかるバイオマーカーは、被検者の血液試料中のVEGF-Dであり、心血管イベントの発生を予測するためのバイオマーカーである。VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に、心血管イベントの発生のリスクが高いと予想できる。心血管イベントとは、心血管死亡（中枢神経系外の出血死を除く心血管／脳血管起因等）、非致死性心筋梗塞、非致死性脳卒中（虚血性、出血性及び不明な脳卒中）が挙げられる。
【００１４】
血液試料中のVEGF-Cはその濃度が所定の値よりも低い場合に全死亡及び心血管死亡のリスクがあるが、同じVEGFファミリーに属するもののVEGF-DはVEGF-Cと同様の傾向は示さない。本発明者は、意外にも、血液試料中のVEGF-Dはその濃度が所定の値よりも高い場合に全死亡、心血管死亡及び心血管イベント発生のリスクがあることを新知見として取得し、かかる事実に基づいて本発明を完成させた。
【００１５】
本明細書において、全死亡のリスクとは、例えば、検査を行った日以降少なくとも1080日又は1095日までの間に全死亡のイベントの発症を引き起こす可能性があるリスクを意味する。
【００１６】
本明細書において、心血管死亡のリスクとは、例えば、検査を行った日以降少なくとも1080日又は1095日までの間に心血管死亡のイベントの発生を引き起こす可能性があるリスクを意味する。
【００１７】
本明細書において、心血管イベントの発生のリスクとは、例えば、検査を行った日以降少なくとも1080日又は1095日までの間に心血管イベントの発生を引き起こす可能性があるリスクを意味する。
【００１８】
血液試料は、VEGF-Dの濃度を測定できるものであれば特に制限はないが、例えば血清、血漿、全血であり、好ましくは血清である。被検者から血液試料を採取するタイミングは、特に制限されない。
【００１９】
また、本発明にかかる全死亡を予測する方法は、被検者の血液試料中のVEGF-Dの濃度を測定する工程と、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に全死亡のリスクが高いと判定する工程と、を含む。
【００２０】
また、本発明にかかる心血管死亡を予測する方法は、被検者の血液試料中のVEGF-Dの濃度を測定する工程と、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に心血管死亡のリスクが高いと判定する工程と、を含む。
【００２１】
また、本発明にかかる心血管イベントの発生を予測する方法は、被検者の血液試料中のVEGF-Dの濃度を測定する工程と、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合に心血管イベントの発生のリスクが高いと判定する工程と、を含む。
【００２２】
なお、被検者から採取した血液試料中の特定成分の有無・含有量を指標とした従来の検査方法と組み合わせたり、臨床症候の観察と心エコー、MRI、MRA、頚部血管エコー等の結果とを関連付けた複合指標を用いたりすることで、より的確に全死亡のリスク、心血管死亡のリスク及び心血管イベントの発生のリスクを予想することも可能である。
【００２３】
本発明によれば、例えば、血清中のVEGF-Dのレベルが所定値よりも高い、冠動脈疾患疑い患者は、全死亡、心血管死亡及び心血管イベントの発生が有意に高いので、高リスク患者の抽出に有効である。高リスク患者には死亡につながる原因の全身スクリーニング、生活習慣改善、冠危険因子の管理の他、慢性腎臓病や貧血の管理等を厳重に行なうことにより、死亡のリスクを低下させることができる。またVEGF-Dを標的とした新たな創薬の開発につながる可能性がある。
【実施例】
【００２４】
冠動脈疾患疑いで心臓カテーテル検査を受けた患者2,418名から同意を得て、血清VEGF-Dレベルを測定した。VEGF-Dレベルで四分位に分けて、3年間フォローアップした。その結果、第4四分位(75パーセンタイルより高値)の患者群において、全死亡率が有意に最も高かった。年齢、性別、危険因子、肥満、慢性腎臓病、心血管イベント既往、冠動脈疾患、多枝又は左主幹部病変（重症冠動脈疾患）、スタチン、アスピリン、降圧剤で調整しても、VEGF-Dレベルと全死亡との関連は有意であった。
【００２５】
図１は、VEGF-Dの四分位の全死亡率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。図２は、VEGF-Dの四分位の心血管死亡発症率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。図３は、VEGF-Dの四分位の心血管イベント発生率についての生存曲線(カプランマイヤー曲線)である。図１から、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合、全死亡のリスクが高いことが示される。図２から、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合、心血管死亡のリスクが高いことが示される。図３から、VEGF-Dの濃度が500 pg/mLより高値の場合、心血管イベントの発生リスクが高いことが示される。
【００２６】
VEGF-Dはその値が高いほど、全死亡のリスクは有意に上昇する。図４から、この関連は、年齢、性別で調整(モデル１)しても、更に既知の危険因子(脂質異常、高血圧、糖尿病、現在喫煙、肥満、慢性腎臓病、心血管イベントの既往、冠動脈疾患、多枝又は左主幹部病変、スタチン使用、アスピリン使用、降圧剤使用)で調整(モデル2)しても有意であった。
【００２７】
カットオフ値を75パーセンタイルとした場合、すなわち、VEGF-Dが500 pg/mLより高値の場合の全死亡のハザード比(95%信頼区間)は、無調整で2.47(1.92-3.16)、モデル１で2.24(1.74-2.87)、モデル２で1.78(1.37-2.32)であった。
【００２８】
VEGF-Dはその値が高いほど、心血管死亡のリスクは有意に上昇する。図４から、この関連は、年齢、性別で調整(モデル１)しても、更に既知の危険因子（脂質異常、高血圧、糖尿病、現在喫煙、肥満、慢性腎臓病、心血管イベントの既往、冠動脈疾患、多枝又は左主幹部病変、スタチン使用、アスピリン使用、降圧剤使用）で調整(モデル２)しても有意であった。
【００２９】
カットオフ値を75パーセンタイルとした場合、すなわち、VEGF-Dが500 pg/mLより高値の場合の心血管死亡のハザード比(95%信頼区間)は、無調整で3.54(2.33-5.39)、モデル１で3.26(2.14-4.97)、モデル２で2.33(1.50-3.63）であった。
【００３０】
VEGF-Dはその値が高いほど、心血管イベント発生のリスクは有意に上昇する。図４から、この関連は、年齢、性別で調整(モデル１)しても、更に既知の危険因子(脂質異常、高血圧、糖尿病、現在喫煙、肥満、慢性腎臓病、心血管イベントの既往、冠動脈疾患、多枝又は左主幹部病変、スタチン使用、アスピリン使用、降圧剤使用)で調整(モデル２)しても有意であった。
【００３１】
カットオフ値を75パーセンタイルとした場合、すなわち、VEGF-Dが500 pg/mLより高値の場合の心血管イベント発生のハザード比(95%信頼区間)は、無調整で2.03(1.48-2.77)、モデル１で1.93(1.40-2.63)、モデル２で1.47(1.05-2.04)であった。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
全死亡、心血管死亡及び心血管イベントの予測に利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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