(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒト対象に投与された二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片を含む用量が該ヒト対象内でＩＬ−４またはＩＬ−１３に特異的に結合するかどうかを決定するを提供する。【解決手段】（ａ）該用量を該ヒト対象に投与する工程；（ｂ）該ヒト対象から抜き取られた血液、血漿、または血清サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７タンパク質の量を測定する工程であって、該用量が投与される前に測定された該対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、該血液サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の減少がＩＬ−４またはＩＬ−１３への該二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片の結合を知らせる工程；および（ｃ）工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の該減少に依存して、該用量を増加させるまたは減少させる工程を含む方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合する二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片のヒト対象における安全用量であって、該抗体様タンパク質またはその断片最大約２００ｍｇを含む前記安全用量。
【請求項２】
抗体様タンパク質またはその断片約２００ｍｇを含む、請求項１に記載の安全用量。
【請求項３】
抗体様タンパク質またはその断片約１００ｍｇを含む、請求項１に記載の安全用量。
【請求項４】
抗体様タンパク質またはその断片約５０ｍｇを含む、請求項１に記載の安全用量。
【請求項５】
ヒト対象が特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の安全用量。
【請求項６】
ヒト対象に投与された二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片を含む用量が該ヒト対象内でＩＬ−４またはＩＬ−１３に特異的に結合するかどうかを決定する方法であって：
（ａ）該用量を該ヒト対象に投与する工程；
（ｂ）該ヒト対象から抜き取られた血液、血漿、または血清サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７タンパク質の量を測定する工程であって、該用量が投与される前に測定された該対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、該血液サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の減少がＩＬ−４またはＩＬ−１３への該二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片の結合を知らせる前記工程；および
（ｃ）工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の該減少に依存して、該用量を増加させるまたは減少させる工程
を含む前記方法。
【請求項７】
工程（ｃ）が、工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値未満である場合、用量を増加させること、または工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値を超えている場合、用量を減少させることをさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
閾値が、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約４３％の減少である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
用量が皮下投与される、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量が酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって検出される、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
ヒト対象が特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ヒト対象におけるＩＬ−４もしくはＩＬ−１３または両方への抗体または抗体様結合タンパク質の結合に関するタンパク質バイオマーカーであって、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７である前記タンパク質バイオマーカー。
【請求項１３】
抗体または抗体様結合タンパク質が二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質である、請求項１２に記載のタンパク質バイオマーカー。
【請求項１４】
ヒト対象が特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する、請求項１２または１３に記載のタンパク質バイオマーカー。
【請求項１５】
特発性肺線維症（ＩＰＦ）を処置する方法であって、ＩＰＦを有するヒト対象に二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片最大２００ｍｇを投与する工程を含む前記方法。
【請求項１６】
二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片がＩＬ−４、ＩＬ−１３、または両方に結合する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片が週１回投与される、請求項１５または１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
インターロイキン−４（ＩＬ−４）は、リンパ球ＢおよびＴ細胞、ならびに単球、内皮細胞および線維芽細胞を含めた多くの非リンパ球細胞に対し広域の生物学的効果を有する多面的サイトカインである。例えば、ＩＬ−４は、休止Ｂ細胞上でのクラスＩＩ主要組織適合複合体分子の発現を誘導し、ヒトＢ細胞によるＩｇＧ４およびＩｇＥの分泌を増強する。ＩＬ−４は、Ｔｈ２−型免疫応答に関連しており、Ｔｈ２細胞によって産生され、Ｔｈ２細胞の分化を促進する。ＩＬ−４は、アレルギーおよび喘息などのいくつかの疾患に関連づけられてきた。
【０００２】
ＩＬ−１３は、活性化後、活性化Ｔリンパ球、Ｂリンパ球およびマスト細胞によって分泌される１１２アミノ酸のサイトカインである（非特許文献１、および非特許文献２）。ＩＬ−４と共有されたその多数の生物学的性質に基づいて、ＩＬ−１３は、ＩＬ−４様サイトカインとして報告されてきた。その活性は、Ｂ細胞（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５）、単球（非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０）および他の非造血細胞（非特許文献１１、および非特許文献１２）に対するＩＬ−４の活性と実に類似している。他方では、ＩＬ−４に反して、それは、休止または活性化Ｔ細胞に対し特定の効果を発揮しない（非特許文献１３）。
【０００３】
単球／マクロファージ、Ｂリンパ球およびいくつかの造血前駆体に対するＩＬ−１３の様々な生物活性は、Ａ．Ｊ．Ｍｉｎｔｙによって、およびＩＬ−１３に関する総説において詳細に報告されてきた。いくつかのデータは、さらに、このサイトカインが他の細胞型に対し多面的効果を有することを示している。ＩＬ−１３によって直接影響されるこれらの非造血細胞は、内皮およびミクログリア細胞、ケラチノサイトならびに腎臓および結腸癌である。
【０００４】
細胞内の生物学的分子によって伝達されるシグナルの分析における段階の１つは、その膜受容体を同定することにある。この目的のために行われたＩＬ−１３受容体に関する調査研究は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４が共通の受容体、または共通の受容体複合体の構成成分の少なくとも一部、および共通のシグナル伝達エレメントを有することを示した（非特許文献１４、非特許文献１５、非特許文献１６、非特許文献１７）。この受容体は、考慮される細胞型に応じて異なる数で、様々な細胞型の表面に存在する。ＩＬ−１３およびＩＬ−４受容体の比較分布は、非特許文献１８によって示された。
【０００５】
細胞表面受容体および受容体複合体は、種々の親和性でＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に結合する。ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に結合する受容体および受容体複合体の主成分は、ＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−１３ＲαｌおよびＩＬ−１３Ｒα２である。これらの鎖は、ＩＬ−４Ｒα／ＩＬ−１３Ｒαｌ（ＩＩ型ＩＬ−４Ｒ）またはＩＬ−４Ｒα／ｃ（Ｉ型ＩＬ−４Ｒ）のモノマーまたはヘテロダイマーとして細胞の表面上で発現される。ＩＬ−４ＲαモノマーおよびＩＬ−４Ｒα／ｃヘテロダイマーは、ＩＬ−４に結合するが、ＩＬ−１３に結合しない。ＩＬ−１３Ｒα１およびＩＬ−１３Ｒα２モノマーは、ＩＬ−１３に結合するが、ＩＬ−４に結合しない。ＩＬ−４Ｒα／ＩＬ−１３Ｒα１ヘテロダイマーは、ＩＬ−４とＩＬ−１３の両方に結合する（非特許文献１９）。
【０００６】
Ｔｈ２−型免疫応答は、抗体作製および液性免疫を促進し、細胞外病原体を撃退するように精巧に作り上げられている。Ｔｈ２細胞は、Ｉｇ産生（液性免疫）のメディエーターであり、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３を産生する（非特許文献２０）。Ｔｈ２−型免疫応答は、いくつかのサイトカイン（例えば、
ＩＬ−４、ＩＬ−１３）および抗体の特定の型（ＩｇＥ、ＩｇＧ４）の産出によって特徴付けられ、涙目ならびに気道炎症および肺における気道筋細胞の収縮などの喘息症状をもたらし得るアレルギー反応の典型である。
【０００７】
ＩＬ−４とＩＬ−１３の両方は、それらの生物学的機能に基づいて、治療的に重要なサイトカインであり、多くの疾患において決定的役割を果たす。ＩＬ−４は、自己免疫疾患を阻害することができることが示され、ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、どちらも、抗腫瘍免疫応答を増強する潜在力を示した。ＩＬ−４およびＩＬ−１３ならびにそれらの受容体の上昇は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の発病と関連づけられた（非特許文献２１）。文献における証拠は、ＴＨ２サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−１３が、この肺組織リモデリングおよび線維症のメディエーターとしてＩＰＦの発病における複数の役割を果たすことを実証している。肺におけるＴｈ２−型ＣＤ４＋Ｔ細胞は、おそらくＩＬ−４およびＩＬ−１３の主な供給源であり、細胞外マトリックスリモデリングの重要な制御因子として意味づけられているが（非特許文献２２）、マスト細胞、好塩基球、好酸球、マクロファージおよび上皮細胞を含めた他の細胞型もこれらのサイトカインの潜在的な供給源とすることができる（非特許文献２３）。ＩＰＦ患者では、気管支肺胞洗浄液におけるＩＬ−１３およびＩＬ−４レベルが正常対照と比較して上昇している。かかる証拠は、これらのサイトカインを抑えるまたは中和する能力がある療法がＩＰＦ患者における線維症の進行を遅延させる潜在力を有することを示唆している。両方のサイトカインがアレルギー性疾患または線維性疾患の発病に関与しているので、これらのサイトカインの阻害剤は、治療的利点を提供するであろう。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍｉｎｔｙ，Ａ．ら，Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２，２４８−２５０
【非特許文献２】ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ａ．Ｎ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，１９９３，９０，３７３５−３７３９
【非特許文献３】Ｄｅｆｒａｎｃｅ，Ｔ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９４，１７９，１３５−１４３
【非特許文献４】Ｐｕｎｎｏｎｅｎ，Ｊ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），１９９３，９０，３７３０−３７３４
【非特許文献５】Ｆｉｏｒ，Ｒ．ら，Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ，１９９４，５，５９３−６００
【非特許文献６】Ｍｕｚｉｏ，Ｍ．Ｒ．Ｆ．ら，Ｂｌｏｏｄ，１９９４，８３，１７３８−１７４３
【非特許文献７】Ｄｅ  Ｗａａｌ  Ｍａｌｅｆｙｔ，Ｒ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９３，１５１，６３７０−６３８１
【非特許文献８】Ｄｏｙｌｅ，Ａ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，２４，１４４１−１４４５
【非特許文献９】Ｍｏｎｔａｎｅｒ，Ｌ．Ｊ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９３，１７８，７４３−７４７
【非特許文献１０】Ｓｏｚｚａｎｉ，Ｐ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０，５０８４−５０８８
【非特許文献１１】Ｈｅｒｂｅｒｔ，Ｊ．Ｍ．ら，Ｆｅｂｓ  Ｌｅｔｔ．，１９９３，３２８，２６８−２７０
【非特許文献１２】Ｄｅｒｏｃｑ，Ｊ．Ｍ．ら，Ｆｅｂｓ  Ｌｅｔｔ．１９９４，３４３，３２−３６
【非特許文献１３】Ｚｕｒａｗｕｋｉ，Ｇ．ら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１９９４，１５，１９−２６
【非特許文献１４】Ｚｕｒａｗｓｋｉ  Ｓ．Ｍ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１９９３，１２，２６６３−２６７０
【非特許文献１５】Ａｖｅｒｓａ，Ｇ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９３，１７８，２２１３−２２１８
【非特許文献１６】Ｖｉｔａ，Ｎ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０，３５１２−３５１７
【非特許文献１７】Ｌｅｆｏｒｔ，Ｓ．ら，ＦｅｂｓＬｅｔｔ．，１９９５，３６６，１２２−１２６
【非特許文献１８】Ａ．Ｊ．Ｍｉｎｔｙ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１３  ｆｏｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｄｓ  Ｄ．Ｇ．Ｒｅｍｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｓ．Ｆｒｉｅ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎ．Ｙ．１９９６）
【非特許文献１９】Ｍｕｒａｔａら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．，１９９９，６９，１３−２０
【非特許文献２０】Ｔａｎａｋａ，ら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍｏｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２５１−２７２，Ｓｎａｐｐｅｒ，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９６）
【非特許文献２１】Ｊａｋｕｂｚｉｃｋら，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．（２００４）１６４：１９８９−２００１；Ｍｕｒｒａｙら  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００８）４０：２１７４−８２
【非特許文献２２】Ｗｙｎｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，（２００４）４：５８３−５９４
【非特許文献２３】Ｇｏｒｄｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｒｅｖ．（２０１０）３２：５９３−６０４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、ＩＬ−４を阻害する、ＩＬ−１３を阻害する改善された薬剤、および非免疫原性であり、かつヒトにおける使用に安全である、ＩＬ−４とＩＬ−１３の両方を阻害する単剤が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、従来技術に優るいくつかの利点および進歩を提供する。一態様では、本発明は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合する二重Ｖ領域抗体様タンパク質（ｄｕａｌ−Ｖ−ｒｅｇｉｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）またはその断片のヒト対象における安全用量（ｓａｆｅ  ｄｏｓｅ）を提供し、ここで、用量は、抗体様タンパク質またはその断片最大約２００ｍｇを含む。一部の実施形態では、ヒト対象は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する。一部の実施形態では、安全用量は、抗体様タンパク質またはその断片約２００ｍｇを含む。一部の実施形態では、安全用量は、抗体様タンパク質またはその断片約１００ｍｇを含む。一部の実施形態では、安全用量は、抗体様タンパク質またはその断片約５０ｍｇを含む。一部の実施形態では、安全用量は、週１回投与される。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与される。
【００１１】
別の態様では、本発明は、ヒト対象に投与された二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片を含む用量がヒト対象内でＩＬ−４またはＩＬ−１３に特異的に結合するかどうかを決定する方法であって、（ａ）用量をヒト対象に投与する工程；および（ｂ）ヒト対象から抜き取られた血液、血漿、または血清サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７タンパク質の量を測定する工程であって、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、血液サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の減少がＩＬ−４またはＩＬ−１３への二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片の結合を知らせる工
程を含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、工程（ｃ）：工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少の大きさに依存して用量を増加させるまたは減少させる工程をさらに含む。
【００１２】
一部の実施形態では、工程（ｃ）は、工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値未満である場合、用量を増加させること、または工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値を超えている場合、用量を減少させることをさらに含む。一部の実施形態では、工程（ｃ）の閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約２０％から約６０％の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約４０％から約５０％の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約４３％の減少である。
【００１３】
決定する方法の一部の実施形態では、用量は、皮下投与される。一部の実施形態では、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって工程（ｂ）において検出される。一部の実施形態では、ヒト対象は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、ヒト対象におけるＩＬ−４もしくはＩＬ−１３または両方への抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片の結合に関するタンパク質バイオマーカーを提供し、ここで、バイオマーカーは、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７である。一部の実施形態では、抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片は、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片である。一部の実施形態では、ヒト対象は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を処置する方法であって、ＩＰＦを有するヒト対象に二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片最大２００ｍｇを投与する工程を含む方法を提供する。一部の実施形態では、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、またはＩＬ−４とＩＬ−１３の両方に結合する。一部の実施形態では、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、週１回投与される。一部の実施形態では、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、皮下投与される。
【００１６】
別の態様では、本発明は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の処置のための二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片の安全用量の使用を提供する。一部の実施形態では、安全用量は、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片最大２００ｍｇである。一部の実施形態では、安全用量は、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片約５０ｍｇ、または約１００ｍｇ、または約２００ｍｇである。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与される。一部の実施形態では、安全用量は、週１回投与される。一部の実施形態では、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、またはＩＬ−４とＩＬ−１３の両方に結合する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の処置のための二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片の安全用量を提供する。一部の実施形態では、安全用量は、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片最大２００ｍｇである。一部の実施形態では、安全用量は、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片約５０ｍｇ、または約１００ｍｇ、または約２００ｍｇである。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与される。一部の実施形態では、安全用量は、週１回投与される。一部の実施形態では、
二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、またはＩＬ−４とＩＬ−１３の両方に結合する。
【００１８】
本発明の実施形態の以下の詳細な説明は、以下の図面と合わせて読めば最もよく理解される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７シグナル伝達とのＩＬ−４およびＩＬ−１３の関係を示す図である。
【図２】ＳＡＲ１５６５９７の用量の増加と共にヒト対象の血液における低下したＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７発現の傾向を示す図である。
【図３】ＳＡＲ１５６５９７の最初の投与後１８週のヒト対象の血液におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７発現の持続的な低下を示す図である。グラフは、ＳＡＲ１５６５９７  ５０ｍｇ、１００ｍｇ、または２００ｍｇをＳＣで週１回投与された患者の血液におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の平均量対時間を示す。
【図４】用量レベルによる経時的なＳＡＲ１５６５９７トラフ濃度を示す図である（ｎ＝６、１００ｍｇでのｎ＝５を除く）。
【図５】図５Ａ〜５Ｃは、ＦＲＡ−２過剰発現トランスジェニックマウスの肺における経時的な線維性変化を示す図である。Ａ．発達中の肺重量の増加；Ｂ．第１６週での肺サイズの増加；Ｃ．Ｔｇ（ＦＲＡ２）およびＷｔ対照マウスの肺におけるヒドロキシプロリン含有量の増加。
【図６】９、１４、および１７週でのＦＲＡ−２過剰発現マウスの肺サンプルの画像を示す図である。
【図７】野生型対照と比較した、１３および１６週でのＦＲＡ２マウスの皮膚における（ヒドロキシプロリンによって測定された）コラーゲン含有量を示す図である。
【図８】野生型対照と比較した、８、１３、および１６週でのＦＲＡ２マウスからのサンプル中の増加した真皮厚さを示す図である。
【図９】発達しているかつ繊維化している肺および皮膚のサイトカインプロファイル分析を示す図である。
【図１０】重要なシグナトリー線維性マーカーの増加を示している、ＦＲＡ２マウスからの肺および皮膚の遺伝子発現分析を示す図である。
【図１１】ＩＬ−１３抗体処置ＦＲＡ２マウス肺におけるヒドロキシプロリンレベルを示す図である。
【図１２】ＦＲＡ２および同腹仔対照肺の病理組織学分析を示す図である。
【図１３】ＦＲＡ２および同腹仔対照肺の病理組織学分析の定量された結果を示す図である。
【図１４】ＩＰＦバイオマーカーＦＮ１、ＳＰＤＥＦ、およびＭＵＣ５Ｂに関するリアルタイムＰＣＲによる転写分析を示す図である。
【図１５】プロフィブロティック（ｐｒｏｆｉｂｒｏｔｉｃ）マーカーＣＣＬ２、ＣＣＬ１１、およびＣＣＬ２２に関するリアルタイムＰＣＲによる転写分析を示す図である。
【図１６】ＩＬ−６、ＡＲＧ１、およびＩＬ１３Ｒａ２に関するリアルタイムＰＣＲによる転写分析を示す図である。
【図１７】ＥＬＩＳＡによって分析された、肺ホモジネートにおけるＩＬ−１３、ＩＬ−４、およびＩＬ−１７タンパク質発現レベルを示す図である。
【図１８】ＥＬＩＳＡによって分析された、肺ホモジネートにおけるＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）、ＣＣＬ１７、およびＹＫＬ−４０タンパク質発現レベルを示す図である。
【図１９】図１９Ａは、Ｅｆｅｒｌら，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０５（３０）：１０５２５−１０５３０において使用されたｉｎ  ｖｉｖｏでのＦｒａ−２の異所性発現に関するトランスジェニック構築物を示す図である。図１９Ｂは、実施例５において記載された、本明細書で使用されたＦｒａ−２トランスジェニックベクターを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
当業者は、図におけるエレメントが単純化および明確化のために例示され、必ずしも一定の縮尺で描かれたのではないことを理解することになる。例えば、図におけるエレメントのいくつかの寸法は、本発明の実施形態の理解を改善するのに役立つように、他のエレメントと比較して誇張されることがある。
【００２１】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的かつ科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通例理解されるものと同じ意味を有する。
【００２２】
本明細書で引用された、各刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、本開示と矛盾しない程度までその全体が参照によって明確に組み入れられる。
【００２３】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特に断りのない限り、ここでは複数形の参照を含むことに留意されたい。
【００２４】
「好ましくは」、「通例」、および「典型的に」のような用語は、特許請求された発明の範囲を限定するためにまたはいくつかの特色が特許請求された発明の構造または機能に決定的、必須、または重要でさえもあることを暗示するために本明細書で利用されるのではないことに留意されたい。むしろ、これらの用語は、本発明の特定の実施形態において利用することができるまたはできない代替のまたは追加の特色を強調することが単に意図されている。
【００２５】
本発明を記載するかつ定義する目的のために、「実質的に」という用語は、任意の定量的比較、値、測定、または他の表示に起因する不確実性の固有の程度を表すために本明細書で利用されることに留意されたい。「実質的に」という用語は、定量的表示が問題の主題の基本的な機能の変化をもたらすことなく、述べられた参照から変動し得る程度を表すためにも本明細書で利用される。
【００２６】
さらに、本発明に従って、当技術分野の技術内である従来の分子生物学、微生物学、および組換えＤＮＡ技法を用いることができる。かかる技法は、文献において完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ＆Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（本明細書では、“Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９”）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｄ．１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ  ｅｄ．１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ［Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｄｓ．（１９８５）］；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ［Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）］；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６）］；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ［ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）］；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ
，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照されたい。
【００２７】
いくつかの用語およびフレーズの以下の非限定的な定義は、当業者を導くために提供される。
【００２８】
本明細書では、「ポリペプチド」、「タンパク質」、および「ペプチド」という用語は、互換的であり、ペプチド結合によって連結したアミノ酸モノマーの鎖を表す。典型的に、ポリペプチド鎖は、分岐していない。本明細書では、「残基」および「タンパク質残基」という用語は、互換的であり、タンパク質内で１つまたはそれ以上のペプチド結合によって他のアミノ酸に結合しているアミノ酸を表す。
【００２９】
「インターロイキン−４」（ＩＬ−４）は、天然にあるまたは内在性の哺乳動物ＩＬ−４タンパク質におよび天然にあるまたは内在性の相当する哺乳動物ＩＬ−４タンパク質のものと同じであるアミノ酸配列を有するタンパク質（例えば、組換えタンパク質、合成タンパク質（すなわち、有機合成化学の方法を使用して作製された））に関する。したがって、本明細書で定義されるように、この用語は、成熟ＩＬ−４タンパク質、多型または対立形質バリアント、およびＩＬ−４の他のアイソフォームおよび前述のものの修飾または非修飾形（例えば、脂質付加された、グリコシル化された）を含む。天然にあるまたは内在性のＩＬ−４は、成熟ＩＬ−４、多型または対立形質バリアントならびに哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類）において天然に生じる他のアイソフォームおよび変異形などの野生型タンパク質を含む。かかるタンパク質は、例えば、ＩＬ−４を天然に産生する供給源から回収または単離することができる。これらのタンパク質および天然にあるまたは内在性の相当するＩＬ−４と同じアミノ酸配列を有するタンパク質は、相当する哺乳動物の名称で称される。例えば、相当する哺乳動物がヒトである場合、タンパク質は、ヒトＩＬ−４と命名される。ＷＯ０３／０３８０４１において開示されているものなどのいくつかの変異ＩＬ−４タンパク質が当技術分野で公知である。
【００３０】
「インターロイキン−１３」（ＩＬ−１３）は、天然にあるまたは内在性の哺乳動物ＩＬ−１３タンパク質、および天然にあるまたは内在性の相当する哺乳動物ＩＬ−１３タンパク質のものと同じであるアミノ酸配列を有するタンパク質（例えば、組換えタンパク質、合成タンパク質（すなわち、有機合成化学の方法を使用して作製された））を表す。したがって、本明細書で定義されるように、この用語は、成熟ＩＬ−１３タンパク質、多型または対立形質バリアント、およびＩＬ−１３の他のアイソフォーム（例えば、選択的スプライシングまたは他の細胞プロセスによって生じた）、および前述のものの修飾または非修飾形（例えば、脂質付加、グリコシル化）を含む。天然にあるまたは内在性のＩＬ−１３は、成熟ＩＬ−１３、多型または対立形質バリアントならびに哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類）において天然に生じる他のアイソフォームおよび変異形などの野生型タンパク質を含む。例えば、本明細書では、ＩＬ−１３は、喘息（アトピー性および非アトピー性喘息）に関連する、成熟ヒトＩＬ−１３の位置１１０のＡｒｇがＧｉｎ（成熟ＩＬ−１３の位置１１０は、前駆タンパク質の位置１３０に相当する）で置き換えられているヒトＩＬ−１３バリアントおよびＩＬ−１３の他のバリアントを包含する。（Ｈｅｉｎｚｍａｎｎら，Ｈｕｍ  ＭｏＩ  Ｇｅｎｅｔ．（２０００）９：５４９−５５９）。かかるタンパク質は、例えば、ＩＬ−１３を天然に産生する供給源から回収または単離することができる。これらのタンパク質および天然にあるまたは内在性の相当するＩＬ−１３と同じアミノ酸配列を有するタンパク質は、相当する哺乳動物の名称で称される。例えば、相当する哺乳動物がヒトである場合、タンパク質は、ヒトＩＬ−１３と命名される。ＷＯ０３／０３５８４７において開示されているものなどのいくつかの変異ＩＬ−１３タンパク質が当技術分野で公知である。
【００３１】
一部の態様では、本発明は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の処置に関する。ＩＬ−４およ
びＩＬ−１３は、それらの生物学的機能に基づいて治療的に重要なサイトカインであり、喘息を含めた多くの疾患において決定的な役割を果たす（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５，Ｖｏ．５，１６１−１６６）。ＩＬ−４は、自己免疫疾患を阻害することができることが示され、ＩＬ−４およびＩＬ−１３は、どちらも抗腫瘍免疫応答を増強する潜在力を示した。ＩＬ−４およびＩＬ−１３ならびにそれらの受容体の上昇は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）の発病と関連づけられた（ＪａｋｕｂｚｉｃｋＣ．ら，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．２００４：１６４（６）：１９８９−２００１；Ｍｕｒｒａｙ  ＬＡら  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００８：４０（１０）：２１７４−８２）。文献における証拠は、ＴＨ２サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−１３がこの肺組織リモデリングおよび線維症のメディエーターとしてＩＰＦの発病における複数の役割を果たし（Ｗｙｎｎ，ＴＡ，Ｎａａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，４：５８３−５９４，２００４）、マスト細胞、好塩基球、好酸球、マクロファージおよび上皮細胞を含めた他の細胞型もこれらのサイトカインの潜在的な源とすることができることを実証した（Ｇｏｒｄｏｎ  Ｓ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎｅｚ  ＦＯ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｒｅｖ．３２：５９３−６０４，２０１０）。ＩＰＦ患者では、気管支肺胞洗浄液におけるＩＬ−１３およびＩＬ−４レベルは、正常対照と比較して上昇している。かかる証拠は、これらのサイトカインを抑えるまたは中和する能力がある療法がＩＰＦ患者における線維症の進行を遅延させる潜在力を有することを示唆している。両方のサイトカインは、アレルギー性疾患または線維性疾患の発病に関与しているので、これらのサイトカインの阻害剤は、治療的利点を提供する。
【００３２】
抗体鎖ポリペプチド配列に関する「実質的に同一」というフレーズは、参照ポリペプチド配列との少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示す抗体鎖と解釈することができる。核酸配列に関する用語は、参照核酸配列との少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示す一連のヌクレオチドと解釈することができる。同一性は、当業者が利用可能な任意のバイオインフォマティクスツールを使用することによって決定することができる。例えば、Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）が配列同一性を決定するために通例用いられる（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，ＪｏｕｒｎａＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９０）２１５：４０３−４１０）。
【００３３】
「同一性」または「相同性」という用語は、配列全体に関する最大パーセント同一性を達成するために、必要な場合、配列を整列させ、ギャップを導入した後、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮せずに、それが比較される相当する配列の残基と同一である候補配列におけるヌクレオチド塩基またはアミノ酸残基の百分率を意味し得る。Ｎ末端またはＣ末端伸長も挿入も同一性または相同性を低下させると解釈されない。整列のための方法およびコンピュータープログラムが利用可能であり、当技術分野で公知である。配列同一性は、配列分析ソフトウェアを使用して測定することができる。
【００３４】
「置換」バリアントは、除去され、同じ位置でその場所に挿入された異なるアミノ酸で置き換えられた天然配列における少なくとも１つのアミノ酸残基を有するものである。置換は単一とすることができ、ここでは分子における１つのアミノ酸のみが置換されており、または置換は複数とすることができ、ここでは２つまたはそれ以上のアミノ酸が同じ分子において置換されている。複数の置換は、連続した部位において、とすることができる。また、１つのアミノ酸は、複数の残基で置き換えることができ、その場合、かかるバリアントが置換と挿入の両方を含む。「挿入」バリアントは、天然配列における特定の位置にあるアミノ酸に直接隣接した挿入された１つまたはそれ以上のアミノ酸を有するものである。アミノ酸に直接隣接したは、アミノ酸のα−カルボキシルまたはα−アミノ官能基に結合していることを意味する。「欠失」バリアントは、除去された天然アミノ酸配列に
おける１つまたはそれ以上のアミノ酸を有するものである。通常、欠失バリアントは、分子の特定の領域において欠失した１つまたは２つのアミノ酸を有することになる。
【００３５】
「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含めた）、ポリクローナル抗体、多特異的抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗体断片またはポリペプチドが望ましい生物活性を示す限り、１つまたはそれ以上のＣＤＲまたはＣＤＲ由来配列を有する合成ポリペプチドを特に包含する。抗体（Ａｂ）および免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造特徴を有する糖タンパク質である。一般に、抗体は、定義されたまたは認識された特異性を有するＩｇと考えられる。したがって、抗体が特定の標的への結合特異性を示す一方、免疫グロブリンは、抗体と、標的特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。本発明の抗体は、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡなど）、またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２など）のものとすることができる（「型」および「クラス」、ならびに「亜型」および「サブクラス」は、本明細書で互換的に使用される）。天然または野生型、つまり、集団の人工的に操作されていないメンバーから得られた、抗体および免疫グロブリンは、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各重鎖は、いくつかの定常ドメインが後に続く可変ドメイン（ＶＨ）を一端に有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）およびもう一方の端に定常ドメインを有する。「人工的に操作されていない」は、外来性抗原結合分子を含有するまたは発現するように処置されていないことを意味する。野生型は、突然変異誘発、抗原結合分子のアミノ酸を変化させるための組換え方法などの使用などの操作の形によって得られた対立遺伝子もしくは多型、またはバリアントもしくは誘導体と比較して、集団において見出される最も広く認められる対立遺伝子または種をまたは操作されていない動物から得られた抗体を表し得る。
【００３６】
本明細書では、「抗ＩＬ−４抗体」は、その受容体へのＩＬ−４の結合を阻害するもしくは実質的に低下させるまたはＩＬ−４活性を阻害する分子を含むが、これらに限定されない、本明細書で定義されたＩＬ−４に特異的に結合する抗体またはそこに由来するポリペプチド（誘導体）を意味する。
【００３７】
本明細書では、「抗ＩＬ−１３抗体」は、その受容体へのＩＬ−１３の結合を阻害するもしくは実質的に低下させるまたはＩＬ−１３活性を阻害する分子を含むが、これらに限定されない、本明細書で定義されたＩＬ−１３に特異的に結合する抗体またはそこに由来するポリペプチド（誘導体）を意味する。
【００３８】
抗体の可変ドメインの文脈における「可変」という用語は、抗体間で配列が広範に異なり、その特定の標的に関する特定の抗体の特定の認識および結合において使用される関連する分子のいくつかの部分を表す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインにわたって均等に分布していない。可変性は、軽鎖と重鎖可変ドメインの両方における、超可変領域としても公知である相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）と称される３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域または配列と称される。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは、β−シート構造を繋ぐループを形成する、場合によっては、β−シート構造の部分を形成する３つのＣＤＲによって繋がれたβ−シート配置を主にとっている４つのＦＲ領域をそれぞれ含む。各鎖におけるＣＤＲは、しばしばＦＲ領域によって接近して一緒に保持され、もう一方の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の標的（エピトープまたは決定基）結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９８７）を
参照されたい）。本明細書では、免疫グロブリンアミノ酸残基のナンバリングは、別段の指示がない場合、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基ナンバリングシステムに従って行われる。１つのＣＤＲは、同族のエピトープに特異的に結合する能力を有し得る。
【００３９】
「ヒンジ」または「ヒンジ領域」という用語は、本発明では、抗体の第１と第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを表す。
【００４０】
抗体、抗原、または抗原結合タンパク質の「断片」、「機能的断片」、「バリアント」、「誘導体」、または「類似体」などのフレーズおよび用語、およびその語形は、目的の全長抗体または抗原と共通して定性的生物活性を有する化合物または分子である。例えば、抗ＩＬ−４抗体の機能的断片または類似体は、ＩＬ−４分子に結合し得る、またはリガンド、もしくはアゴニストもしくはアンタゴニスト抗体がＩＬ−４に結合する能力を防ぎ得るまたは実質的に低下させ得るものである。
【００４１】
さらに、「断片」および「抗体断片」という用語は、インタクトなもしくは全長鎖または抗体の部分、一般に、標的結合または可変領域を表す。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片を含むが、これらに限定されない。例えば、抗ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３抗体の断片または類似体は、受容体がリガンドに結合するまたはシグナル伝達を開始する能力を防ぎ得るまたは実質的に低下させ得るものである。本明細書では、「断片」、「機能的断片」、および「抗体断片」は、抗体に関して一般に同義であり、受容体がリガンドに結合するまたはシグナル伝達を開始する能力を防ぎ得るまたは実質的に低下させ得るＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２などの断片を表し得る。
【００４２】
「Ｆｖ」断片は、非共有結合の１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの二量体（ＶＨ−ＶＬ二量体）からなる。その配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲは、インタクトな抗体におけるように、相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の標的結合部位を規定する。集団的に、６つのＣＤＲは、標的結合特異性をインタクトな抗体に与える。しかしながら、単一可変ドメイン（または標的に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）さえも、標的を認識し、これに結合する能力を有し得る。
【００４３】
「単一鎖Ｆｖ」、「ｓＦｖ」または「ｓｃＡｂ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここで、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメイン間のしばしば可動性分子であるポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓＦｖが標的結合のための望ましい構造を形成することを可能にする。
【００４４】
「ダイアボディ」という用語は、同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合している重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を表す。短すぎて同じ鎖上の２つの可変ドメイン間に対形成することができないリンカーを使用することによって、ダイアボディドメインは、別のペプチド鎖上の結合ドメインと対形成して、２つの抗原結合部位を作ることを強いられる。
【００４５】
「Ｆａｂ」断片は、軽鎖の可変および定常ドメインならびに重鎖の可変および第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたはそれ以上のシステインを含むようなＣＨ１ドメインのカルボキシル終端での少しの残基の付加だけＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’断片は、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化産物のヒンジシステインでのジスルフィド結合の切断によって作製することができる。抗体の追加的な酵素的および化学的処置は、目的の他の機能的断片をもたらし得る。
【００４６】
「直鎖状Ｆａｂ」という用語は、Ｍｉｌｌｅｒら（２００３），Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１７０：４８５４−４８６１によって報告された四価の抗体を表す。直鎖状Ｆａｂは、各ＣＨ１−ＶＨ位置で同一軽鎖と対形成した、同じＣＨ１−ＶＨドメインのタンデムからなる。これらの分子は、アビディティー効果を通してその機能的親和性を増強するための抗体の結合価を増加させるために開発されたが、それらは、単一特異性である。
【００４７】
モノクローナル抗体は、本明細書では、重鎖および／または軽鎖の部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラス（型もしくは亜型）に属する抗体における相当する配列と同一であるまたはこれと相同であり、鎖の残りは、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一であるまたはこれと相同である「キメラ」抗体、ならびにＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に結合するまたはＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３活性もしくは代謝に影響する望ましい生物活性を示す限り、かかる抗体の断片を特に含む（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，８１６，５６７；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４），Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８１：６８５１）。したがって、抗体の１つのクラスからのＣＤＲは、異なるクラスまたはサブクラスの抗体のＦＲ中に移植することができる。
【００４８】
モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一標的部位、エピトープまたは決定基に対するものである。さらに、抗原の種々の決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、標的上の単一決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、宿主細胞によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されておらず、有利であり、その鎖の抗体をコードする関連する遺伝子およびｍＲＮＡのクローニングを提供する。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示し、いかなる特定の方法による抗体の作製も必要とすると解釈されない。例えば、本発明での使用のためのモノクローナル抗体は、公知の技法を使用してファージ抗体ライブラリーから単離することができるまたはポリクローナル調製物から精製することができる。本発明に従って使用される親モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５），Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって報告されたハイブリドーマ方法によって作製することができる、または当技術分野で公知の組換え方法によって作製することができる。
【００４９】
「多価抗体」という用語は、本発明では、同時に同じまたは異なる構造を有し得る、２つまたはそれ以上の抗原結合部位を含み、したがって、２つまたはそれ以上の抗原に結合することができる抗体を表す。「二価の」という用語は、抗体が２つの抗原結合部位を含むことを意味する。「四価の」という用語は、抗体が４つの抗原結合部位を含むことを意味する。
【００５０】
「抗原結合部位」という用語は、本発明では、抗原の部分または全てに特異的に結合し、これと相補的である領域を含む抗体の部分を表す。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定の部分にのみ結合し得、その部分は、エピトープと称される。抗原結合ドメインは、１つまたはそれ以上の抗体可変ドメインによって提供される。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）および抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）の結合からなる。
【００５１】
「抗原」という用語は、本発明では、本発明の抗体によって結合される能力がある分子または分子の一部分を表す。抗原は、１つまたはそれ以上のエピトープを有し得る。本発明の抗体によって認識される抗原の例は、血清タンパク質、例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９およびＩＬ−１３などのサイトカイン、生理活性ペプチド、細胞表面分子、例えば受容体、トランスポーター、イオンチャネル、ウイルスおよび細菌タンパク質を含むが、これらに限定されない。
【００５２】
「単一特異性」という用語は、本発明では、本発明の多価抗体が１つの抗原、同一である全ての抗原結合部位のみを認識することを意味する。
【００５３】
「二重特異性」という用語は、本発明では、本発明の多価抗体が同じまたは２つの異なる抗原上の２つの異なるエピトープを認識することを意味する。
【００５４】
「二重特異性抗体」（ＢｓＡｂ）という用語は、単一分子内で２つの抗体の抗原結合部位を組み合わせた分子を表す。したがって、二重特異性抗体は、２つの異なる抗原を同時に結合することができる。診断目的の適用に加えて、ＢｓＡｂは、強力なエフェクター系を患部に向け直すことによってまたは抗体の中和もしくは刺激活性を増加させることによって、新しい治療的適用の道を開く。
【００５５】
単一分子内で２つの抗体の抗原結合部位を組み合わせた二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）を作製することは興味深い。したがって、かかる分子は、２つの異なる抗原を同時に結合することができる。診断目的の適用に加えて、それらは、例えば、強力なエフェクター系を患部（抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）のように、癌細胞がモノクローナル抗体によってトリガされる正常な免疫応答を抑える機構をしばしば発達させる）に向け直すことによって、または抗体の中和もしくは刺激活性を増加させることによって、新しい治療的適用の道を開く。治療目的で種々の標的抗原に対する２つの全抗体の結合特異性をカップルする最初の試みは、化学的に融合したヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）分子を利用した（Ｓｔａｅｒｚら（１９８５），Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：６２８−６３１）。
【００５６】
二重特異性抗体は、それぞれ異なる免疫グロブリンを作製することができる２つのハイブリドーマを融合することによって元々は作製された（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，１９８４）が、細胞培養において生じる分子種の複雑さ（最大１０の異なる分子種）により、精製は困難かつ高価である（Ｇｅｏｒｇｅ  ａｎｄ  Ｈｕｓｔｏｎ，１９９７）。上記の細胞融合物から作製されたヘテロコンジュゲートまたは二重特異性抗体を使用して得られた有望な結果にもかかわらず、いくつかの因子により、それらは、大規模な治療的適用に非実用的であった。かかる因子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのヘテロコンジュゲートの迅速なクリアランス、分子の両方の型を産出するのに必要な実験室集中的技法、ホモコンジュゲートまたは単一特異性抗体から隔たって、ヘテロコンジュゲートの広範な精製の必要性および一般に低い収量を含む。
【００５７】
遺伝子工学は、結合性質およびエフェクター機能の望ましいセットを有する抗体または抗体誘導体を設計する、修飾する、かつ作製するために使用される頻度が増加している。いろいろな組換え方法が、抗体断片（Ｃａｒｔｅｒら（１９９５），Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒａｐｙ  ４：４６３−４７０；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｏｌｏｇｙ  ３：８３−１０５；Ｔｏｄｏｒｏｖｓｋａら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：４７−６６）と全長ＩｇＧフォーマット（Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：７−１５）の両方としてのＢｓＡｂの効率的な作製のために開発された。
【００５８】
Ａｂｂｏｔｔは、米国特許ＵＳ７６１２１８１においてマウスＤｕａｌ−Ｖａｒｉａｂｌｅ−Ｄｏｍａｉｎ  ＩｇＧ（ＤＶＤ−ＩｇＧ）二重特異性抗体を報告し、これは、Ｕｎｉｌｅｖｅｒ特許（ＵＳ５９８９８３０）において報告された二重−Ｆｖフォーマットに基づいている。ヒト化二重特異性フォーマットは、その全体が参照によって本明細書に組み入れられているＷＯ２００９／０５２０８１（ＴＢＴＩ）において報告された。Ｄｕａｌ−Ｆｖのそれぞれの鎖への定常ドメインの付加（重鎖へのＣＨ１−Ｆｃおよび軽鎖へのカッパーまたはラムダ定常ドメイン）は、機能的二重特異性二重Ｖ領域抗体様結合タンパ
ク質をもたらした。
【００５９】
ＩＬ−４およびＩＬ−１３に特異的に結合する４つの結合部位を有する二重特異性二重−可変−領域（二重−Ｖ−領域）抗体様結合タンパク質が、どちらもその全体が参照によって本明細書に組み入れられている、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７９７８７（ＷＯ２００９／０５２０８１）およびＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０２９１４７（ＷＯ２０１２／１２５７７５）において報告された。
【００６０】
本発明の実施形態は、同じまたは２つの異なる抗原上の２つの異なるエピトープに特異的に結合する二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片を含むように操作された二重特異性抗体である。本発明の実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、ここで、前記可変軽鎖ドメインは、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号３を含む。本発明のさらなる実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、ここで、前記可変重鎖ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２および配列番号５を含む。本発明の別の実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、ここで、前記可変重鎖ドメインは、アミノ酸配列の配列番号２および配列番号４を含む。本発明の実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号３を含む可変軽鎖ドメイン、ならびにアミノ酸配列の配列番号２および配列番号４を含む可変重鎖ドメインを含む。本発明のさらなる実施形態は、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号３を含む可変軽鎖ドメイン、ならびにアミノ酸配列の配列番号２および配列番号４を含む可変重鎖ドメインを含み、ここで、ペプチドリンカーが配列番号１を配列番号３に連結し、ペプチドリンカーが配列番号２を配列番号４に連結する。
【００６１】
本発明の実施形態は、（ａ）配列番号１および配列番号３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメイン；（ｂ）配列番号２および配列番号４のアミノ酸配列を含む可変重鎖ドメイン；（ｃ）配列番号１を配列番号３に連結するペプチドリンカー、および配列番号２を配列番号４に連結するペプチドリンカーであって、配列番号６からなるアミノ酸配列を有するペプチドリンカー；ならびに（ｄ）定常領域ドメインを含む、ＩＬ−１３およびＩＬ−４に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片を含むｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１またはＳＡＲ１５６５９７である。
【００６２】
「多特異的」という用語は、本発明では、本発明の多価抗体が同じまたは複数の異なる抗原上の複数の異なるエピトープを認識することを意味する。
【００６３】
「リンカー」という用語は、本発明では、本発明の抗体構築物の可変ドメインに結合するように適合させたペプチドを表す。ペプチドリンカーは、任意のアミノ酸を含有し得、アミノ酸グリシン（Ｇ）およびセリン（Ｓ）が好ましい。リンカーは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチド間ならびに内で互いに等しくてもまたは異なっていてもよい。さらに、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸長を有し得る。軽鎖ドメインに関するように、重鎖ドメインに関する好ましいペプチドリンカー単位は、ＧＧＧＧＳである
。重鎖のおよび軽鎖のリンカー単位の数は、互いに等しくても（対称的序列）または異なっていても（非対称的序列）よい。
【００６４】
ペプチドリンカーは、好ましくは、抗体部分が例えば、立体障害によって互いの活性に干渉することを防ぐ、適切なタンパク質折り畳みを可能にする、かつ、必要な場合、抗体分子が２つまたはそれ以上の、おそらく互いの間隔が広い、同じ細胞上の受容体と相互作用することを可能にする可動性の十分な程度を提供するのに十分長いが；それは、好ましくは、抗体部分が細胞において安定な状態を保つことを可能にするのに十分な程短い。
【００６５】
したがって、ペプチドリンカーの長さ、組成および／または立体構造は、多価抗体の望ましい性質を最適化するために、当業者によって容易に選択される。
【００６６】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形は、ヒト抗体と比較して、非ヒト免疫グロブリン由来の配列を含有する、（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の標的結合サブ配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ）などの）キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片である。一般に、ヒト化抗体は、１つ、典型的に２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここで、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン鋳型配列のものである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に、選択されたヒト免疫グロブリン鋳型のものの少なくとも一部分も含み得る。一般に、目標は、ヒトにおいて最小に免疫原性である抗体分子を有することである。したがって、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３への１つまたはそれ以上のＣＤＲの特異的結合機能を実質的に最小化することなく、１つまたはそれ以上のＣＤＲにおける１つまたはそれ以上のアミノ酸を、ヒト宿主に対して免疫原性がより低いものに変えることもできる可能性がある。代わりに、ＦＲは、非ヒトとすることができるが、最も免疫原性のアミノ酸は、免疫原性がより低いもので置き換えられる。それにもかかわらず、上記のように、ＣＤＲ移植は、ヒト化抗体を得るための唯一の方法ではない。例えば、フレームワーク残基がＣＤＲループの三次元構造およびそのリガンドへの抗体の全体的な親和性を決定することにおける役割を有することは珍しくないので、ＣＤＲ領域だけを修飾することは、不十分であり得る。したがって、非ヒト親抗体分子が修飾されて、ヒトに対して免疫原性がより低いものとなるように、任意の手段を実行することができ、ヒト抗体との包括的な配列同一性は、必ずしも必要であるとは限らない。したがって、ヒト化は、例えば、ほんの少数の残基、特に、抗体分子上で曝露され、分子内に埋められていない、したがって、宿主免疫系が容易に到達できないものの単なる置換によっても達成することができる。かかる方法は、抗体分子上の「移動性」または「可動性」残基を置換することに関して本明細書で教示されており、目標は、そのエピトープまたは決定基への抗体の特異性を含むことなく、結果として生じる分子の免疫原性を低下させるまたは鈍らせることである。例えば、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ  ７（６）８０５−８１４，１９９４；Ｍｏｌ  Ｉｍｍ  ４４：１９８６−１９８８，２００７；Ｓｉｍｓら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１：２６２３（１９９３）、ＷＯ２００６／０４２３３３およびＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，８６９，６１９を参照されたい。
【００６７】
「抗体相同体」または「相同体」は、本明細書で教示された、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３を特異的に結合する任意の分子を表す。したがって、抗体相同体は、修飾されていてもまたはされていなくても、天然または組換え抗体、ＦａｂもしくはＦｖ分子などのＩＬ−４またはＩＬ−１３に結合するなどの目的の生物学的性質を保持する抗体の部分、単鎖抗体、１つまたはそれ以上のＣＤＲ領域を有するポリペプチドなどを含む。相同体
のアミノ酸配列は、天然にある抗体のものと同一である必要はなく、増強されたまたは他の有利な性質を有するポリペプチドを得るために、置換アミノ酸、挿入アミノ酸、欠失アミノ酸、タンパク質において通常見出される２０種以外のアミノ酸などを有するように改変または修飾することができる。
【００６８】
相同配列を有する抗体は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３または本発明の二重特異性ＩＬ−４／ＩＬ−１３抗体のアミノ酸配列と配列相同性を有するアミノ酸配列を有する抗体である。好ましくは、相同性は、本発明の抗体の可変領域のアミノ酸配列とである。本明細書でアミノ酸配列に適用される「配列相同性」は、例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５，２４４４−２４４８（１９８８）に従ってＦＡＳＴＡ探索方法によって決定される、別のアミノ酸配列との少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列相同性を有する配列として定義される。
【００６９】
キメラ抗体は、種々の抗体、抗体の種々のクラス、種々の動物種などの種々の供給源由来の抗体の種々の部分を有するもの、例えば、ヒト免疫グロブリン定常領域と対形成したマウスモノクローナル抗体由来の可変領域を有する抗体などである。したがって、ヒト化抗体は、キメラ抗体の一種である。キメラ抗体を作製するための方法は、当技術分野で公知であり、例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２；Ｏｉら，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓら，１９８９，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１  ２０２；ならびにＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，８０７，７１５、４，８１６，５６７、および４，８１６，３９７を参照されたい。
【００７０】
人工抗体は、それぞれ抗原結合またはエピトープ結合能力を有する、ｓｃＦｖ断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよび分子認識単位（ｍｒｕ）（Ｗｉｎｔｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９による総説；およびＨｕｄｓｏｎ，１９９９，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍ  １１：５４８−５５７を参照されたい）を含む。単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）では、抗体のＶＨおよびＶＬドメインは、可動性ペプチドによって連結されている。典型的に、リンカーは、約１５アミノ酸のペプチドである。リンカーがはるかに小さい、例えば、５アミノ酸である場合、ダイアボディが形成される。抗体の最も小さい結合単位は、ＣＤＲ、典型的に、十分な特異的認識および結合能力を有する重鎖のＣＤＲ２である。かかる断片は、分子認識単位またはｍｒｕと称される。いくつかのかかるｍｒｕは、短いリンカーペプチドで一緒に連結され、したがって、単一ｍｒｕよりも高いアビディティーを有する人工結合タンパク質を形成する。
【００７１】
目的の抗体の機能的同等物も本発明の範囲内に含まれる。「機能的同等物」という用語は、相同配列を有する抗体、抗体相同体、キメラ抗体、人工抗体および修飾抗体を含み、例えば、ここで、各機能的同等物は、ＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３に結合する、ＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３シグナル伝達能力もしく機能を阻害する、またはその受容体へのＩＬ−４および／もしくはＩＬ−１３の結合を阻害する能力によって定義される。当業者は、「抗体断片」と称される分子の群と「機能的同等物」と称される群において重複があることを理解することになる。ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３結合能力を保持する機能的同等物を作製する方法は、当業者に公知であり、例えば、ＷＯ９３／２１３１９、ＥＰＯ  Ｓｅｒ．Ｎｏ．２３９，４００、ＷＯ８９／０９６２２、ＥＰＯ  Ｓｅｒ．Ｎｏ．３３８，７４５およびＥＰＯ  Ｓｅｒ．Ｎｏ．３３２，４２４において開示されている。
【００７２】
本出願の機能的同等物は、修飾抗体、例えば、抗体への任意の型の分子の共有結合によ
って修飾された抗体も含む。例えば、修飾抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、アミド分解、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドへの連結、毒素もしくは細胞傷害性部分または他のタンパク質への連結などによって修飾されている抗体を含む。共有結合は、抗イディオタイプ応答を産出することを免れた抗体を必ずしももたらさない。修飾は、特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、代謝合成などを含むが、これらに限定されない公知の技法によって達成することができる。さらに、修飾抗体は、１つまたはそれ以上の非古典的アミノ酸を含有し得る。
【００７３】
処置の目的に関する「哺乳動物」は、ヒト、家畜、非ヒト霊長類、およびイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどの動物園の動物、運動競技用の動物またはペット動物を含めた哺乳動物に分類される任意の動物を表す。
【００７４】
「処置」という用語は、本発明では、療法の過程としての治療的処置と予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）措置の両方を表す。それは、疾患状況、疾患進行、疾患原因物質（例えば、細菌またはウイルス）または他の異常な状態の有害な効果を防ぐ、治癒する、元に戻す、減弱させる、軽減する、最小化する、抑えるまたは停止させることを表す。
【００７５】
「単離」または「精製」抗体は、タンパク質が由来する細胞もしくは組織供給源もしくは培地からの細胞物質もしくは他の汚染タンパク質を実質的に含まない、または化学的に合成される場合、化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という用語は、ポリペプチド／タンパク質がそこから同じものが単離されるまたは組換えで作製される細胞の細胞構成成分から分離された抗体の調製物を含む。したがって、細胞物質を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、５％、２．５％または１％未満（乾燥重量で）の汚染タンパク質を有する抗体の調製物を含む。抗体が組換えで作製される場合、それは、培養培地も好ましくは実質的に含まない、すなわち、培養培地は、約２０％、１０％、５％、２．５％または１％未満のタンパク質調製物の体積に相当する。抗体が化学合成によって作製される場合、それは、化学的前駆体または他の化学物質および試薬を好ましくは実質的に含まない、すなわち、目的の抗体は、タンパク質の合成に関与している化学的前駆体または他の化学物質から分離されている。したがって、抗体のかかる調製物は、約３０％、２０％、１０％、５％または１％未満（乾燥重量で）の目的の抗体以外の化学的前駆体または化合物を有する。本発明の好ましい実施形態では、抗体は、単離されているまたは精製されている。
【００７６】
本明細書では、「治療薬」という用語は、異常なＩＬ−４および／またはＩＬ−１３代謝および活性に関連する疾患、障害、疾病などの処置、管理または回復において使用することができる任意の薬剤を表す。
【００７７】
本明細書では、「用量」は、異常なＩＬ−４および／またはＩＬ−１３代謝および活性に関連する疾患、障害、疾病などの処置、管理または回復において使用することができる任意の薬剤の量を表す。
【００７８】
本明細書では、「安全用量」は、臨床的に容認できるベネフィット／リスクプロファイルを維持しながら、異常なＩＬ−４および／またはＩＬ−１３代謝および活性に関連する疾患、障害、疾病などの処置、管理または回復において使用することができる任意の薬剤または任意の薬剤の用量を表す。本明細書で開示された二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片の安全用量は、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、８０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、および３００ｍｇからなる群から選択される。安全用量の実施形態は、約１０ｍｇから約３００ｍｇである。安全用量のさらなる実施形態は
、２００ｍｇ、約２００ｍｇ、最大２００ｍｇである、または約２００ｍｇを超えない任意の用量である。他の実施形態では、安全用量は、約５０ｍｇ、または約１００ｍｇ、または約２００ｍｇである。一部の実施形態では、安全用量は、週１回投与される。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与（ＳＣ）される。
【００７９】
それらの細胞表面受容体とのＩＬ−４およびＩＬ−１３のライゲーション後の細胞内シグナル伝達は、シグナル伝達分子シグナル伝達性転写因子６（Ｓｔａｔ６）のリン酸化によって部分的に媒介される。
【００８０】
ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１７（ＣＣＬ１７）は、ＣＣケモカインファミリーに属する低分子サイトカインである。ＣＣＬ１７は、胸腺および活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）としても公知である。ＴＡＲＣは、Ｓｔａｔ６リン酸化を通してＩＬ−４および／またはＩＬ−１３によって誘導される（Ｗｉｒｎｓｂｅｒｇｅｒら，（２００６）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１８８２−９１；Ｌｉｄｄｉａｒｄら，（２００６）ＢＭＣ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２９：７：４５；Ｍｏｎｉｃｋら，（２００７）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：１６４８−５８）。したがって、例えば、ＩＬ−４／ＩＬ−１３結合抗体様タンパク質によるＩＬ−４および／またはＩＬ−１３媒介シグナル伝達の阻害は、ＴＡＲＣ誘導の阻害と関連している。一部の実施形態では、本明細書で開示された方法は、対象に投与された抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片のＩＬ−４および／またはＩＬ−１３への結合を検出する方法であって、（ａ）抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片を対象に投与する工程；および（ｂ）対象から抜き取られた血液、血清、または血漿サンプル内のＣＣＬ１７／ＴＡＲＣの量を決定する工程であって、抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片の投与前に対象から抜き取られたサンプルと比較した、サンプル中のＣＣＬ１７／ＴＡＲＣの量の減少がＩＬ−４および／またはＩＬ−１３への抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片の結合を知らせる工程を含む方法を含む。一部の実施形態では、対象は、ヒト対象である。一部の実施形態では、抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片は、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片である。一部の実施形態では、二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、ＩＬ−４またはＩＬ−１３に特異的である、またはＩＬ−４およびＩＬ−１３に二重特異的である。一部の実施形態では、工程（ｃ）は、工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値未満である場合（すなわちＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７レベルが十分減少しない場合）、用量を増加させること、または工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値を超えている場合（すなわちＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７が過剰に減少する場合）、用量を減少させることをさらに含む。一部の実施形態では、工程（ｃ）の閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約１０％の減少、または約１５％の減少、または約２０％の減少、または約２５％の減少、または約３０％の減少、または約３５％の減少、または約４０％の減少、または約４５％の減少、または約５０％の減少、または約５５％の減少、または約６０％の減少、または約６５％の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約２０％から約６０％の減少、または約４０％から約５０％の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約４３％��減少である。例えば、２００ｍｇ用量に関する４３％の減少は、ＩＬ−４／ＩＬ−１３への二重特異性抗ＩＬ−４／ＩＬ−１３二重Ｖ領域抗体様結合タンパク質の２００ｍｇ用量の結合を知らせる。
【００８１】
「約」という用語は、数値に関連して使用された場合、示された数値よりも５％、１０％、または１５％小さい下限を有し、かつ示された数値よりも５％、１０％、または１５％大きい上限を有する範囲内の数値を包含するものとする。
【実施例】
【００８２】
以下の例は、本発明の特定の実施形態、およびその様々な使用の例示である。それらは、説明目的でのみ記載され、本発明を限定すると解釈されるべきではない。
【００８３】
「ｈｕＴＢＴＩ３＿２＿１」および「ＳＡＲ１５６５９７」という用語は、互換的であり、アミノ酸配列の配列番号１および配列番号３を含む可変軽鎖ならびにアミノ酸配列の配列番号２および配列番号４を含む可変重鎖を含む同じ二重Ｖ領域抗体様タンパク質を表す。
【実施例１】
【００８４】
臨床研究フォーマット
多施設、無作為、二重盲検、プラセボ対照臨床試験を行って、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する患者の最大３回の連続的、漸増用量コホートにおいて６週間の期間にわたって週１回皮下（ＳＣ）投与されたＳＡＲ１５６５９７の反復用量の安全性および忍容性を評価した。ＩＰＦは、２から３年の生存期間中央値を有し、一様に致命的である、未知の原因の進行性、汎発性、かつ明瞭な慢性線維性間質性肺炎である。
【００８５】
各用量コホートでは、８人の患者（ＳＡＲ１５６５９７を投与された６人およびプラセボを投与された２人）がＳＡＲ１５６５９７または対応するプラセボ対照の反復ＳＣ、週１回用量を投与された。第２のコホートをＤＭＣによる第１のコホートの安全性の検討後に開始した。２００ｍｇの用量の第３のコホートを２つの先行するコホートの安全性の検討後に開始した。
【００８６】
各患者に関して、研究期間は、２２週であり、以下の通りであった：４週のスクリーニング；６週の処置期間（７回の投与）；１２週の追跡調査。
【００８７】
第１２週で、免疫原性に関する抗薬物抗体（ＡＤＡ）が存在する場合、追加の追跡調査訪問を上昇したパラメーターを試験するために最初の投与後最低６ヶ月で行った。臨床治験の終わりは、最後の患者がプロトコールにおいて計画された最後の訪問を完了した日と定義した。
【００８８】
研究集団の選択。患者を以下の基準に従って研究に含めた。
【００８９】
包含基準
−  成人（年齢＞１８歳）男性または女性患者。
−  現在のＡＭＥＲＩＣＡＮ  ＴＨＯＲＡＣＩＣ  ＳＯＣＩＥＴＹ（ＡＴＳ）／ＴＨＥ
ＥＵＲＯＰＥＡＮ  ＲＥＳＰＩＲＡＴＯＲＹ  ＳＯＣＩＥＴＹ（ＥＲＳ）／ＴＨＥ  ＪＡＰＡＮＥＳＥ  ＲＥＳＰＩＲＡＴＯＲＹ  ＳＯＣＩＥＴＹ（ＪＲＳ）／ＴＨＥ  ＬＡＴＩＮ  ＡＭＥＲＩＣＡＮ  ＴＨＯＲＡＣＩＣ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ（ＡＬＡＴ）ガイドラインに従ったＩＰＦの文書化された診断、すなわち、間質性肺疾患の他の公知の原因（例えば家庭内および職業環境的曝露、結合組織疾患、ならびに薬物毒性）の排除；および（１）外科的肺生検に供されていない患者における高解像度コンピューター断層撮影法（ＨＲＣＴ）における通常の間質性肺炎パターンの存在；または（２）外科的肺生検に供された患者におけるＨＲＣＴおよび外科的生検パターンの特定の組合せ。
−  研究に関連したあらゆる手順前に得られた、文書の、署名された、かつ日付のあるインフォームドコンセント。
【００９０】
排除基準
−  努力肺活量＜予測値の５０％。
−  一酸化炭素拡散肺容量（ヘモグロビンに関して補正された）＜３５％予測値。
−  安静時（１０分間の座位）に周囲空気を呼吸している間のパルスオキシメトリによる酸素飽和＜９０％。
−  ＩＰＦ以外の重要な呼吸障害（例えば、反応性亢進気道疾患、結核、サルコイドーシス、アスペルギルス症、肺気腫または慢性閉塞性肺疾患［ＣＯＰＤ］、または嚢胞性線維症）の公知の診断。
−  活動性脈管障害または血管作用薬（例えば、ホスホジエステラーゼ４阻害剤、カルシニューリン阻害剤、タクロリムス、シクロスポリン）の使用。
−  公知のＨＩＶまたは慢性ウイルス肝炎。
−  活動性結核または潜伏結核感染を有する患者（結核に関連した排除：活動性結核または不完全に処置された結核の病歴；スクリーニングでの陽性ＱｕａｎｔｉＦＥＲＯＮ−ＴＢ  Ｇｏｌｄ（登録商標）試験（以前の処置状況にかかわらず）；少なくとも後側−前面像を有する胸部Ｘ線写真に基づく以前の／活動性結核感染と一致した臨床的に重要な異常（Ｘ線写真は、スクリーニング訪問前の１２週以内にまたはスクリーニング期間中に撮影しなければならない）。追加の側面像が推奨されるが、必須ではない。その後の適切な抗結核処置にかかわらず、以前の腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−ａ）−アンタゴニストまたは他の非抗ＴＮＦ−α  ｂｉｏＤＭＡＲＤ処置中に潜伏結核感染を再活性化した患者。肺外結核感染の疑い；活動性または潜伏結核を有する個体との密接な接触など、結核に罹患する高リスクにある患者。）。
−  研究者の判断における患者安全性に影響し得る、任意の臨床的に重要な、重度もしくは不安定、急性もしくは慢性的進行性の医学的（ＩＰＦ以外）もしくは外科的疾患、または任意の状態の証拠。
−  スクリーニングでの臨床的に重要な異常な心電図（ＥＣＧ）（ＱＴｃ≧５００ｍｓを含めた）。
−  スクリーニングでの臨床的に重要な実験室試験：アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）＞正常範囲の２倍の上限（ＵＬＮ）；男性ではヘモグロビン＜１２ｇ／１００ｍＬおよび女性では＜１１ｇ／１００ｍＬ；好中球＜１５００／ｍｍ３（アフリカ人の家系のものに関する＜１０００／ｍｍ３を除く）；血小板＜１５００００／ｍｍ３；クレアチニン≧１５０μｍｏｌ／Ｌ。
−  物質および／またはアルコール乱用の現在の病歴。
−  授乳中である、または妊娠中である女性。
−  スクリーニングで陽性尿ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（β−ＨＧＣ）妊娠検査を有し、避妊の容認できる形（例えば、経口避妊薬、子宮内避妊器具、植込錠、Ｄｅｐｏ−Ｐｒｏｖｅｒａ（商標）の輸注、二重障壁法、禁欲、精管切除したパートナー−地方の保健機関によって容認されていない場合を除いて）を使用していない、出産の可能性がある（閉経後２年未満または外科的に不妊ではない）の女性。
−  スクリーニング前４週間以内のＩＰＦを処置することを目標とした任意の登録された治療薬の使用。
−  スクリーニング前４週間以内のアザチオプリン、シクロホスファミド、メトトレキサートおよびシクロスポリンを含むが、これらに限定されない、任意の細胞傷害性／免疫抑制剤の使用。
−  スクリーニングの１２週間または５半減期（リツキシマブでは２４週およびアレファセプトでは２４ヶ月）以内の任意のサイトカインモジュレーター（エタネルセプト、アダリムマブ、エファリズマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、リツキシマブ）の使用。
−  公知である場合、スクリーニングの１ヶ月、または５半減期（いずれか長い方）以内の任意の治験薬の使用。
【００９１】
治験医薬生成物（ＩＭＰ）をＳＣ用量溶液の調製のための凍結乾燥形でＳＡＲ１５６５９７として提供した。ＳＡＲ１５６５９７  １８５ｍｇおよび添加剤を含有する各バイア
ルを２℃から８℃（３６°Ｆから４６°Ｆ）で保管した。ＩＭＰを室温で１．７ｍＬの無菌、非発熱性蒸留水で投薬の朝に（ＳＣ輸注前１時間を超えない）復元した。輸注のための復元後の溶液中の構成物の濃度は、以下であった：７．０の最終ｐＨを有する６．３ｍｍｏｌ／Ｌリン酸一ナトリウム、３．７ｍｍｏｌ／Ｌトロメタミン、５％（重量／体積）スクロース、３％（ｗ／Ｖ）プロリン、および０．２％（ｗ／Ｖ）ポリソルベート８０におけるＳＡＲ１５６５９７  １００ｍｇ／ｍＬ。
【００９２】
プラセボには、復元されたＳＡＲ１５６５９７製剤に関するものと同じ濃度で同じ添加剤を含有する液体２ｍＬを含有する各バイアルを提供した。
【００９３】
１ｍＬシリンジを１．０ｍＬ以下の体積を送達するために使用し；２から３ｍＬを送達するように目盛りづけされたシリンジを、１ｍＬを超える体積を送達するために使用した。様々な計画された用量レベルに必要な要求された体積の要約を表１に示す。
【００９４】
【表１】
2020060580.tif 000002
【００９５】
ＩＭＰ（ＳＡＲ１５６５９７またはプラセボ）を臍周囲ＳＣ輸注として投与した。復元の１時間以内に、用量を腰のくびれの上の左または右腹部における臍から４から１０ｃｍの範囲において投与した。
【００９６】
研究における用量の選択
ＳＡＲ１５６５９７は、ＩＬ−４とＩＬ−１３の両方に結合し中和する、操作されたヒト化二重特異性免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）−４抗体である。ＳＡＲ１５６５９７は、ヒトとカニクイザルの両方からのＩＬ−４およびＩＬ−１３への高親和性を示す。
【００９７】
各患者に関して、６週間の週１回のＳＣ用量を投与し（合計７回の投与）、コホート１から３における用量漸増を以下のように行った：全て対応するプラセボと共に、コホート１は５０ｍｇ（０．５ｍＬ）でのＳＡＲ１５６５９７、コホート２は１００ｍｇ（１ｍＬ）でのＳＡＲ１５６５９７、およびコホート３は２００ｍｇ（２．０ｍＬ）でのＳＡＲ１５６５９７。
【実施例２】
【００９８】
薬力学（ＰＤ）評価
ＳＡＲ１５６５９７の反復漸増用量の効果を肺機能試験（ＰＦＴ）、呼吸器症状において、および選択されたバイオマーカーにおいて評価した。より具体的には、以下のＰＤ変数を評価した：
１．肺機能試験（ＰＦＴ）：ヘモグロビンに関して補正された、一酸化炭素拡散容量（ＤＬＣＯ）；努力（呼気性）肺活量（ＦＶＣ）；１秒にわたる努力呼気量（ＦＥＶ１）；総肺気量（ボディプレチスモグラフィー）（ＴＬＣ）；残気量（ボディプレチスモグラフィー）（ＲＶ）。２回のＰＦＴを投薬前３週間以内に行った。第１のＰＦＴを行って、患者
をスクリーニングし、第２のＰＦＴ（無作為化訪問での）からのデータを第１のものと平均して、ベースライン値を確立した；これらの試験を別々の日に行った。ＰＦＴを第８訪問（第６週）／処置の終わり（ＥＯＴ）および第１４訪問（第１８週／研究処置の最後の投与後１２週）でも行った。
２．酸素飽和をスクリーニングでのＳｐＯ２、ベースラインを使用して、第６週／ＥＯＴ、および第１８週（研究処置の最後の投与後１２週）で評価した。第１のＳｐＯ２測定をスクリーニングで行い、第２の測定からのデータを第１のものと平均してベースライン値を確立した；これらの試験を別々の日に行った。
３．クオリティオブライフ（ＱｏＬ）に対するＩＰＦの影響を、ベースライン、第６週／ＥＯＴ、および第１８週（研究処置の最後の投与後１２週）で、Ｓｔ．Ｇｅｏｒｇｅ’ｓ
Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＳＧＲＱ）を使用して評価した。
４．全血からの選択されたバイオマーカーをスクリーニング、ベースライン、第６週／ＥＯＴで、および追跡調査期間の終わり（第１８週）で評価した。血清および血漿サンプルをスクリーニング、ベースライン（第１の投薬前）、第６週／ＥＯＴで、および追跡調査期間の終わり（第１８週）で収集した。サンプル調製および分析の手法は、以下の通りであった：各血清サンプルに関して、血液３ｍＬを、血餅活性化因子を有さない乾燥チューブ中に採取した。室温での１時間後、チューブを３０００ｇで１５分間、＋４℃で遠心分離し、血清をアリコートし、使用まで−７０℃で保管した。各血漿サンプルに関して、血液４．５ｍＬをクエン酸ナトリウムチューブにおいて収集し、チューブを１０回緩やかに反転することによってすぐに混合した。チューブを２０００ｇで１５分間遠心分離し、血漿をアリコートし、使用まで−７０℃で保管した。ＴＡＲＣをキットマニュアルの説明に従って、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製のヒトＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ
ＥＬＩＳＡキットを使用して定量した。このアッセイに関して、定量下限は、３１．２ｐｇ／ｍＬであり、定量上限は、２０００ｐｇ／ｍＬであった。いくつかのアーカイブサンプルを調製し、研究の完了後に行う可能性がある、アッセイを使用することによってバイオマーカーに関するより多くの知識を得る将来の使用のために保管した。タンパク質バイオマーカーには、ケモカイン［Ｃ−Ｃモチーフ］リガンド１８［ＣＣＬ−１８］、Ｋｒｅｂｓ  ｖｏｎ  ｄｅｎ  Ｌｕｎｄｇｅｎ  ６［ＫＬ−６］、サーファクタントタンパク質Ａ［ＳＰ−Ａ］、サーファクタントタンパク質Ｄ［ＳＰ−Ｄ］、哺乳動物キチナーゼ様タンパク質［ＹＫＬ−４０］、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−８、免疫グロブリンＥ［ＩｇＥ］、エオタキシン、細胞間接着分子１［ＩＣＡＭ１］、ペリオスチン、胸腺および活性化制御ケモカイン［ＴＡＲＣ］ＣＣＬ−１７、マトリックスメタロプロテイナーゼ−７［ＭＭＰ７］、およびＲＮＡ（ｍＲＮＡ、ミクロＲＮＡ）発現が含まれた。
【００９９】
薬力学的結果
ＰＤエンドポイント：５つのＰＦＴ（ＦＶＣ、ＦＥＶ１、ＴＬＣ、ＤＬＣＯ、およびＲＶ）におけるベースラインからの変化を分析した。処置の終わり（第８訪問、第６週でのＥＯＴ）で、処置群間で比較可能であった主要パラメーター（パーセント予測ＦＶＣおよびパーセント予測ＤＬＣＯ）のベースラインからの平均変化によって明らかなように、患者肺機能は、全体的に見て変化していなかった。ＥＯＴ後１２週で、％予測ＦＶＣおよび％予測ＤＬＣＯのベースラインからの平均変化は、肺機能が全ての処置群において変化しないままであったことを示した。
【０１００】
二次的ＰＤエンドポイント：二次的ＰＤ変数（ＳｐＯ２、タンパク質／ＲＮＡバイオマーカー、およびＳＧＲＱ）を６週処置の終わりおよび処置後追跡調査期間に測定した。これらのＰＤ結果は、研究のサンプルサイズの小ささおよび短い処置期間により、決定的ではなかった。
【０１０１】
ＳＡＲ１５６５９７の用量の増加と共に血液における低下したＴＡＲＣ（ＣＣＬ−１７
）発現の傾向があった（図２）。低下したＴＡＲＣ発現は、ＥＯＴ後続いた（図３）。
【実施例３】
【０１０２】
安全性データの分析
安全性評価は、個々の値（臨床的に重要な異常）の検討、記述統計量（要約表、グラフィックス）に基づいた。全ての安全性分析を、安全性集団（ｓａｆｅｔｙ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）を使用して行った。
【０１０３】
全ての安全性データに関して、観察期間を３段階に分けた：
−  患者がインフォームドコンセントを示した時とＩＭＰ投与の最初の用量間の時間として定義された処置前段階。
−  ＩＭＰ投与の最初の用量から第１８週訪問（含まれた）までの時間として定義されたオントリートメント（ｏｎ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）段階。
−  第１８週訪問（除外された）後の時間として定義された処置後段階。
【０１０４】
有害事象をバージョン１６．１を使用してＭｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ（ＭｅｄＤＲＡ）に従ってコード化した。
【０１０５】
臨床実験のために、バイタルサイン、およびＥＣＧパラメーター、および潜在的に臨床的に重要な異常（ＰＣＳＡ）を表２に示されたＰＣＳＡリストを使用して分析した。
【０１０６】
【表２】
2020060580.tif 000003
【０１０７】
【表３】
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【０１０８】
【表４】
2020060580.tif 000005
【０１０９】
有害事象
有害事象（ＡＥ）を経時的基準に従って予め定義された標準的カテゴリーに分類した：
【０１１０】
処置前有害事象：処置前段階中に発生したまたは悪化したＡＥ；
処置中有害事象（ＴＥＡＥ）：オントリートメント段階中に発生したまたは悪化したＡＥ；
処置後有害事象：処置後段階中に発生したまたは悪化したＡＥ。
【０１１１】
ＴＥＡＥをＡＥ発生時に投与されたＩＭＰに割り当てた。
【０１１２】
少なくとも１つのＴＥＡＥ、重度のＴＥＡＥ、重篤なＴＥＡＥ、死につながるＴＥＡＥ、および持続的な処置中止につながるＴＥＡＥを有する患者の数および百分率を処置群に
よって要約した。
【０１１３】
全てのＴＥＡＥを要約し、プライマリー器官別大分類（ＳＯＣ）および基本語（ＰＴ）によって一覧表にした。さらに、全てのＡＥを一覧表にし、患者および発生日時によって分別した。
【０１１４】
臨床実験評価
生化学および血液学
この研究におけるベースライン値は、第１日投与前評価中に収集された値であった。
【０１１５】
実験室レンジおよび／または異常基準を有するパラメーター（ＰＣＳＡ）に関して、「オントリートメント」分析を、再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に行われた全てのポストベースライン（ｐｏｓｔｂａｓｅｌｉｎｅ）評価を使用して行った。
【０１１６】
血管炎、血清学、および検尿の補足試験
全ての個々のデータを処置群、患者、および訪問によって一覧表にした。
【０１１７】
体重および肥満度指数：体重を生パラメーター値およびベースラインからのパーセント変化として分析した。個々の肥満度指数を生値として分析した。ベースライン値は、第１日に収集された投与前値であった。全てのパラメーターに関して、「オントリートメント」分析を、全ての再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に収集された全てのポストベースライン値を使用して行った。
【０１１８】
バイタルサイン：
心拍数および血圧。心拍数および血圧（収縮期および拡張期血圧）を生パラメーター値（利用可能な仰臥位および立位に関する）、ベースラインからの変化（仰臥位のみに関する）として、および起立性パラメーター（立位−仰臥位パラメーター値）として分析した。ベースライン値は、第１日に収集された投与前値であった。全てのパラメーターに関して、「オントリートメント」分析を、全ての計画外のおよび再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に収集された全てのポストベースライン値を使用して行った。
【０１１９】
体温：体温を生パラメーター値およびベースラインからの変化として分析した。ベースライン値は、第１日に収集された投与前値であった。
【０１２０】
心電図：心拍数、ＰＲ−、ＱＲＳ−、ＱＴ−、および補正ＱＴ−間隔（ＱＴｃ）を生パラメーター値およびベースラインからの変化として分析した。ベースライン値は、第１日に収集された投与前値であった。全てのパラメーターに関して、「オントリートメント」分析を、全ての再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に収集された全てのポストベースライン値を使用して行った。
【０１２１】
他の関連する安全性パラメーター（ＩＭＰ輸注部位での局所的忍容性）：紅斑サイズおよび浮腫サイズをパラメーター、処置群、および時点によって記述統計量で要約した。現在の痛み強度、紅斑、浮腫、かゆみ、丘疹、小胞化、および膿疱グレードの最も極端な定性的評価を有する患者の数（％）を研究全体にわたって処置群で要約した。
【０１２２】
曝露の程度
大多数の患者は、各処置群において７回全てのＩＭＰ輸注を受けた。各ＳＡＲ１５６５９７用量群における１人の患者は、研究薬物の７回全ての用量を受けなかった。ＳＡＲ１５６５９７  ５０ｍｇおよび２００ｍｇ用量群のそれぞれにおける１人の患者は、増加し
たｈｓＣＲＰに関する評価に関連した用量妨害を有し、ＳＡＲ１５６５９７  １００ｍｇ用量群における１人の患者は、結核のＳＡＥにより研究処置を中止した。
【０１２３】
有害事象
全体的に見て、処置中有害事象（ＴＥＡＥ）の数は、処置群にわたって偏りがなかった。大多数のＴＥＡＥは、強度が軽度から中程度であり、３つの事象のみが重度として報告された：プラセボ用量群における耳感染の１つの事象、ＳＡＲ１５６５９７  ５０ｍｇ用量群における大腿骨骨折の１つの事象、およびＳＡＲ１５６５９７  ２００ｍｇ用量群におけるＩＰＦの１つの事象。３人の患者は、少なくとも１つの重篤な有害事象（ＳＡＥ）を経験した：ＳＡＲ１５６５９７処置群のそれぞれにおける１人の患者（表３）。
【０１２４】
【表５】
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【０１２５】
最も一般に報告されたＡＥは、感染症であり、その頻度は、処置群間で比較可能であった（プラセボ、ＳＡＲ１５６５９７  ５０ｍｇおよびＳＡＲ１５６５９７  １００ｍｇ用量群のそれぞれにおいて６人中３人の患者；ＳＡＲ１５６５９７  ２００ｍｇ用量群において６人中２人の患者）（表４）。転倒事故の４つの症例がＴＥＡＥとして報告された。ＳＡＲ１５６５９７  ５０ｍｇ用量群において重篤として報告された転倒の１つの事象は、その後、大腿骨骨折のＳＡＥをもたらし、ＳＡＲ１５６５９７  ２００ｍｇ用量群において報告された３つの他の症例は、強度が軽度であった。
【０１２６】
【表６】
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【０１２７】
【表７】
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【０１２８】
【表８】
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【０１２９】
【表９】
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【０１３０】
３人の患者が少なくとも１つのＳＡＥを経験した（ＳＡＲ１５６５９７処置群のそれぞ
れにおける１人）：ＳＡＲ１５６５９７  ５０ｍｇ用量群における転倒および大腿骨骨折のＳＡＥを有する１人の患者、ＳＡＲ１５６５９７  １００ｍｇ用量群における結核のＳＡＥを有する１人の患者、およびＳＡＲ１５６５９７  ２００ｍｇ用量群における細菌性肺炎およびＩＰＦ悪化のＳＡＥを有する１人の患者。１人の患者は、結核の処置中ＳＡＥによりＳＡＲ１５６５９７  １００ｍｇ用量群における研究処置を中止した。
【０１３１】
特定の興味の有害事象（ＡＥＳＩ）：＞１０ｍｇ／Ｌかつ＞ベースライン値の２×であるｈｓＣＲＰの持続性の上昇（少なくとも７２時間）または他の臨床所見に基づく血管炎の疑いがこの研究におけるＡＥＳＩであった。この研究において報告された増加したＣ反応性タンパク質の３つの症例があった。潜在的血管炎に関する初期疑いとして報告された上昇したｈｓＣＲＰのこれらの症例では、いずれも血管炎であると確認されず、これらのｈｓＣＲＰ増加の大多数は、感染症も生じた時間枠においてである（ｈｓＣＲＰによってトリガされた１つのＡＥＳＩは、精巣上体感染と関連しており、１つの事象は、細菌性肺炎と関連しており、１つの事象は、感染性結膜炎と関連していた）かまたは研究者によって臨床的に重要ではないと考えられた。
【０１３２】
ＳＡＲ１５６５９７  ２００ｍｇ用量群では、１人の患者は、血管炎と潜在的に関連していると研究者によって疑われた線状出血の初期報告を有した。さらなる評価で、この事象は、その後、爪ジストロフィーと診断され、血管炎の疑いは、最終的に無視された。
【０１３３】
血液学的パラメーター：プラセボ群と比較してＳＡＲ１５６５９７処置群において少し多くの患者が０．１Ｇｉｇａ／Ｌを超える好塩基球数のＰＣＳＡを有したことを除いて、血液学パラメーターの著しい変化は検出されなかった。
【０１３４】
生化学パラメーター：３つのＳＡＲ１５６５９７処置群のそれぞれにおける１人の患者は、この研究中にｈｓＣＲＰの一過性の上昇を有した。
【０１３５】
バイタルサイン：起立性ＳＢＰおよび起立性ＤＢＰを有する患者の数は、プラセボ群と比較してＳＡＲ１５６５９７処置群においてより高かった。
【０１３６】
心電図：ＱＴｃＢ延長を有する患者の数は、プラセボ群と比較して処置群においてより高かった。この研究中にＱＴｃＢ延長を有した４人の患者（ＳＡＲ１５６５９７  ５０ｍｇ群における１人の患者、ＳＡＲ１５６５９７  １００ｍｇ群における２人の患者、およびＳＡＲ１５６５９７  ２００ｍｇ群における１人の患者）があった。
【０１３７】
輸注部位忍容性：報告された局所的輸注部位反応はほとんどなく、事象の大多数は、重症度が軽度であった。
【０１３８】
個々の臨床的に関連する異常：ＰＣＳＡに関する基準を満たしたバイタルサインのいずれも、全て他の同定可能な、潜在的に寄与している因子を有した、起立性ＳＢＰの４つの症例および起立性ＤＢＰの５つの症例を含めた、いずれの臨床的に関連する徴候とも関連していなかった。ＰＣＳＡに関する基準を満たしたＥＣＧ結果のいずれも、補正処置を必要とするいずれの臨床的に関連する徴候とも関連していなかった。
【０１３９】
安全性結論
結核のＳＡＥにより、研究薬物の３用量の投与後に研究処置を中止しなければならなかったＳＡＲ１５６５９７  １００ｍｇ  ＳＣ毎週用量群における１人の患者を除いて、全ての患者が６週間の処置期間を完了した。
【０１４０】
少なくとも１つのＴＥＡＥを有する患者の数は、処置群間で比較可能であり（プラセボ
および２００ｍｇ群における６人中５人の患者、５０ｍｇおよび１００ｍｇ群における６人中６人の患者）、大多数のＴＥＡＥは、強度が軽度から中程度であった。最も一般的に報告されたＴＥＡＥは、感染症であり、これは、処置群間で偏りがなかった（プラセボ、５０ｍｇ、および２００ｍｇ群における６人中３人の患者、１００ｍｇ群における６人中２人の患者）。
【０１４１】
重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、３つのＳＡＲ１５６５９７用量群のそれぞれにおける１人（５０ｍｇ用量群における転倒および大腿骨骨折のＳＡＥを有する１人の患者、１００ｍｇ用量群における結核のＳＡＥを有する１人の患者、および２００ｍｇ用量群における細菌性肺炎のＳＡＥを有する１人の患者）である、３人の患者において報告された。
【０１４２】
研究期間のいずれの時においても死亡は報告されなかった。
【０１４３】
血液学および生化学実験結果、バイタルサイン、ならびにＥＣＧからのＰＣＳＡのいずれも、いずれの臨床徴候とも関連していなかった。ｈｓＣＲＰの一過性の上昇を有する全ての患者は、感染症などの臨床事象と関連していた、または臨床的に関連していないと研究者によって判断された。この研究において血管炎の確認された症例はなかった。
【０１４４】
全体的に見て、３つの異なる用量レベル（５０、１００、および２００ｍｇ  ＳＣ）で６週間毎週ＳＣ投与されたＳＡＲ１５６５９７は、一般的に安全かつ忍容性がよかった。
【実施例４】
【０１４５】
薬物動態（ＰＫ）評価
ＰＫ分析のサンプルを第２から第８訪問中の投与前（各用量投与前２時間以内）に収集した。第９／早期中止（ＥＴ）、第１１、および第１４訪問中の薬物動態サンプルを午前中に収集した。抗ＳＡＲ１５６５９７抗体（ＡＤＡ）サンプルを、第２、第９／ＥＴ、第１１、および第１４訪問でＰＫサンプルとほぼ同じ時に収集した。第１２週で、免疫原性に関するＡＤＡが存在する場合、追加の追跡調査訪問を上昇したパラメーターを試験するために最初の投与後最低６ヶ月で行った。
【０１４６】
ＳＡＲ１５６５９７血漿濃度を、Ｂｅｒｔｉｎ  Ｐｈａｒｍａ（Ｌ．Ｅ．Ｍ．Ｍ．［Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅ  ｄ’Ｅｔｕｄｅ  ｄｕ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｅ  ｄｅｓ  Ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ］，ＤＳＶ／ｉＢｉＴｅｃ−Ｓ／ＳＰＩ，ＣＥＡ−Ｓａｃｌａｙ，Ｇｉｆ  ｓｕｒ  Ｙｖｅｔｔｅ  Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）の責任の下で０．０５μｇ／ｍＬの定量下限（ＬＬＯＱ）で、検証された酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）方法（ＤＯＨ０８５０）を使用して決定した。生化学分析研究からの全ての生データは、試験場所で使用されている手順に従ってＢｅｒｔｉｎ  Ｐｈａｒｍａで保管されている。
【０１４７】
血漿中のＡＤＡをＤｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｓａｆｅｔｙ＆Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ（Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓａｙｓ  ｇｒｏｕｐ）、Ｓａｎｏｆｉの責任の下で検証されたＥＬＩＳＡ方法（ＤＯＨ０８５１）を使用してアッセイした。全てのサンプルをスクリーニングアッセイを使用して最初に評価した。次いで、スクリーニングアッセイにおいて陽性であると見出されたサンプルを確認アッセイにおいて試験した。陽性であることが確認されたサンプルに関してのみ力価を報告した。生化学分析研究からの全ての生データは、試験場所で使用されている手順に従ってｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ，Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅで保管されている。
【０１４８】
薬物動態学的パラメーターを母集団ＰＫ（ベイジアン）手法を使用して推定し、表５に示す。
【０１４９】
【表１０】
2020060580.tif 000011
【０１５０】
ベイジアン分析をマルチプロセッサーコンピューターのＬＩＮＵＸクラスター上で作動するＮＯＮＭＥＭ（登録商標）コンピュータープログラム（バージョン７．１．２）で行った。
【０１５１】
ベイジアンデータセットを３つのコホート（用量５０、１００、および２００ｍｇ）のデータを使用して構築した。ＮＯＮＭＥＭソフトウェア（バージョン７．１．２）を使用して、データを分析した。ＰＯＨ０３３８研究において得られた最終母集団ＰＫモデル（以前の研究からのＰＫデータを使用して構築された）を個々のパラメーターおよび濃度予測の評価に関する事前の推定値としてそのパラメーター推定値を用いてベイジアンデータセットに適用した。推定工程を、最終母集団ＰＫモデルにおいて得られたθ（モデル、すなわち、ＰＫパラメーターの固定効果）、ω（個人間変動）、およびσ（個人内変動）の最終母集団推定値に基づいて個々の推定値をコンピューター処理するために選択ＭＡＸＥＶＡＬ＝０を使用して省略した。
【０１５２】
薬物動態学的データの分析
全てのＰＫ分析を母集団ＰＫ手法を使用して行った。以下のＰＫパラメーターをこの研究において決定した：
観察されたＳＡＲ１５６５９７血漿トラフ濃度（Ｃｔｒｏｕｇｈ）；
最初および最後の投与後の個々の予測Ｃｍａｘ、および予測ＡＵＣ０−１６８ｈ；
最後の投与後の個々の予測ｔ１／２ｚ。
【０１５３】
統計分析
アッセイされたＳＡＲ１５６５９７  Ｃｔｒｏｕｇｈ濃度および予測Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０−１６８ｈ、およびｔ１／２ｚを、Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｓａｆｅｔｙ＆Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓａｎｏｆｉの責任の下で各処置群に関する記述統計量（算術および幾何平均、中央値、ＳＤ、変動係数［ＣＶ％］、最小値、最大値、中央値、ならびに利用可能な観察値の数）によって要約した。定常状態評価、ｔ１／２ｚに対する用量効果および用量比例性などの他の統計分析をＢｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，Ｓａｎｏｆｉの責任の下で行った。
【０１５４】
全ての統計分析前に、Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０−１６８ｈ、およびｔ１／２ｚを対数変換した。
【０１５５】
定常状態の出現を、ＳＡＳ  ＮＬＭＩＸＥＤ手順を使用してＣｔｒｏｕｇｈ値を非線形混合効果モデルに当てはめることによって評価した。
【０１５６】
ｔ１／２ｚの用量効果を線形固定効果モデルで評価した。
【０１５７】
ＣｍａｘおよびＡＵＣ０−１６８ｈの用量比例性を、パワーモデルを使用して評価した。
【０１５８】
薬物動態学的データ取扱いおよびデータ品質保証：ＳＡＲ１５６５９７に関する０．０５μｇ／ｍＬのＬＬＯＱ未満の血漿薬物濃度を平均値の計算においてゼロとして処理した。平均値およびそれらの関連する統計値を四捨五入していない数から産出し、これらは、四捨五入された数を使用して決定された値とはわずかに異なり得る。いったん最終ＰＫ分析を行うと、ＰＫパラメーターをさらなる統計分析のためにＢｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔに電子的に転送した。濃度およびＰＫパラメーター値を３有効数字に四捨五入した。
【０１５９】
薬物動態評価
血漿濃度：ＳＡＲ１５６５９７に無作為化された１８人全ての患者をＳＡＲ１５６５９７に曝露した。ＳＡＲ１５６５９７は、６人のプラセボ患者からの血漿において検出されなかった。１００ｍｇでの１人の患者は、投与された用量数が不十分であったためＰＫ分析から除外した。ＳＡＲ１５６５９７トラフ濃度を図４に図で示す。
【０１６０】
週１回投与されたＳＡＲ１５６５９７の１００ｍｇおよび２００ｍｇ用量に関して、定常状態の９０％に達する時間中央値は、第３４日あたりであった。週１回投与されたＳＡＲ１５６５９７の５０ｍｇ用量に関して、統計分析は、１０１日あたりで定常状態に達する予想外の時間中央値を提供する。５０ｍｇ用量群における定常状態推定値までの上記の時間は、低い血漿トラフ濃度のために、信頼できない可能性がある。したがって、非線形混合効果モデルは、５０ｍｇ用量群に関する初期傾斜パラメーターを正しく評価することに明らかに失敗し、この用量レベルでの定常状態までの時間の過大評価につながった。
【０１６１】
そのうえ、ベイジアンＰＫ分析は、ＡＵＣ０−１６８ｓｓの定常状態に、第６週でのＳＡＲ１５６５９７の７回目の投与後に５０ｍｇ用量群に関して８９％、１００ｍｇ用量群に関して９４．８％、および２００ｍｇ用量群に関して９３．７％で達すると予測した。
【０１６２】
薬物動態学的パラメーター：第１週でのＳＡＲ１５６５９７の単回ＳＣ投与後に得られたＳＡＲ１５６５９７のＰＫパラメーターの記述統計量を表６に要約する。
【０１６３】
【表１１】
2020060580.tif 000012
【０１６４】
第６週でのＳＡＲ１５６５９７の毎週の反復ＳＣ投与後に得られたＳＡＲ１５６５９７のＰＫパラメーターの記述統計量を表７に要約する。
【０１６５】
【表１２】
2020060580.tif 000013
【０１６６】
９０％ＣＩを有するＳＡＲ１５６５９７  ｔ１／２ｚ推定値を表８に示す。ｔ１／２ｚは、２６０時間（約１１日）から３４８時間（約１５日）にわたり、ｔ１／２ｚに対し予想外の有意な用量効果があった（ｐ＝０．０４９）。
【０１６７】
【表１３】
2020060580.tif 000014
【０１６８】
用量比例性評価を第１週および第６週に行い、それぞれ、表９および１０に示す。
【０１６９】
【表１４】
2020060580.tif 000015
【０１７０】
【表１５】
2020060580.tif 000016
【０１７１】
第１週および第６週で、ＳＡＲ１５６５９７曝露は、用量をわずかに超えて比例的に増加した。ＳＡＲ１５６５９７用量の４倍の増加は、Ｃｍａｘの５．２１から５．９２倍の増加およびＡＵＣ０−１６８の５．１７から５．８３倍の増加を実証した。
【０１７２】
免疫原性：血漿中のＡＤＡ決定。ＡＤＡ結果の要約を表１１に示す。
【０１７３】
【表１６】
2020060580.tif 000017
【０１７４】
２人の患者がＡＤＡ陽性サンプルを有した。ＳＡＲ１５６５９７  ２００ｍｇ処置群における１人の患者（患者番号１５２００３００２）は、第１日での処置前サンプルにおいてＡＤＡ反応性を示したが、ＡＤＡ反応性は、第１８週までの全てのサンプルにおいて陰性であった。第２の患者（患者番号４８４００２００３）は、プラセボ処置においてであり、第１２週および第１８週にＡＤＡ陽性であった。したがって、ＡＤＡは、ＳＡＲ１５６５９７  ＰＫパラメーター推定値への影響を有さないと考えられた。
【０１７５】
２００ｍｇ処置群における１人の患者（患者番号１２４００３００１）に関しては、サンプルが利用できないために、処置後ＡＤＡ分析は行わなかった（サンプルが収集されなかった）。
【０１７６】
薬物動態学的結論
ＳＡＲ１５６５９７に無作為化された１７人全ての患者をＳＡＲ１５６５９７に曝露した。ＳＡＲ１５６５９７は、６人のプラセボ患者からの血漿において検出されなかった。
【０１７７】
ベイジアンＰＫ分析は、定常状態の８９％から９４．７％が第６週でのＳＡＲ１５６５９７の７回の投与後に到達されると予測した。
【０１７８】
ｔ１／２ｚは、２６０時間（約１１日）から３４８時間（約１５日）にわたり、ｔ１／２ｚに対し予想外の有意な用量効果があった（ｐ＝０．０４９）。
【０１７９】
第１週および第６週で、ＳＡＲ１５６５９７曝露は、用量をわずかに超えて比例的に増加した。ＳＡＲ１５６５９７用量の４倍の増加は、Ｃｍａｘの５．２１から５．９２倍の増加およびＡＵＣ０−１６８の５．１７から５．８３倍の増加を実証した。
【０１８０】
ＳＡＲ１５６５９７での処置の結果として、著しい処置中ＡＤＡ反応性は発達しなかった。
【実施例５】
【０１８１】
ＩＬ−１３は、ＦＲＡ−２トランスジェニックマウスモデルにおいて肺線維症を駆動するものである
間質性肺疾患（ＩＬＤ）は、間質に影響する２００を超える肺疾患の大きな群を表す。強皮症患者の著しいサブセットは、間質性肺異常および易感染性肺機能をもたらす実質性肺障害を有する肺徴候を示す。この致命的な末期状態は、間質性肺炎および瘢痕によって特徴付けられる。
【０１８２】
転写因子のＡＰ−１ファミリーは、いろいろな細胞機能を制御するいくつかの標的遺伝子の発現を調節する。ＡＰ−１複合体は、ＪｕｎおよびＦｏｓタンパク質からなる。タンパク質のＦｏｓファミリーのメンバーである、Ｆｏｓ様抗原２、ＦＲＡ−２は、調節機能を有するＡＰ−１複合体形成に関与する。
【０１８３】
Ｅｆｅｒｌらは、トランスジェニックマウスにおけるＦＲＡ−２の過剰発現がいくつかの器官において線維症を引き起こしたが、肺組織および皮膚に主に影響したことを以前実証した（Ｅｆｅｒｌら，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０５（３０）：１０５２５−１０５３０）。
【０１８４】
この例は、Ｆｒａ−２遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスの新しい系統の特徴付けを説明する。これらのマウスは、第１３週で開始する、発達中の肺の線維症を示した。線維症の発達は、循環および肺Ｔｈ２サイトカインの上昇したレベルと一致する。
【０１８５】
Ｅｆｅｒｌらによって作製された導入遺伝子では、ＥＧＦＰ遺伝子を導入遺伝子発現の可視化を可能にするための構築物に操作した。全長ＦＲＡ２遺伝子を導入遺伝子の遍在性発現をもたらすＨ２ｋｂプロモーターによって駆動した。Ｅｆｅｒｌトランスジェニック構築物を図１９Ａに示し、これは、Ｈ２Ｋｂプロモーター、ゲノムＦｒａ−２座、レポーターＩＲＥＳ−ＥＧＦＰ配列、およびポリアデニル化シグナル（ｐＡ）をもつＬＴＲ配列からなる。Ｅ１〜Ｅ４は、Ｆｒａ−２のエキソン１〜４であり；サザンブロット分析に使用されるＨｉｎｄＩＩＩ（Ｈ）制限部位およびプローブ位置（Ｐ）を示す。
【０１８６】
対照的に、図１９Ｂは、マウスＨ２Ｋｂプロモーター駆動マウスＦｒａ−２遺伝子およびＴ２Ａ−ＥＧＦＰ−ｐｏｌｙＡ−ｌｏｘＰ−ｈＵＢｐ−ＥＭ７−Ｎｅｏ−ｌｏｘＰカセット（４，８９８ｂｐ）を含有する、ここで使用されたトランスジェニックベクターの概略図を示す。導入遺伝子の４から８つのコピーを宿主染色体に無作為に組み込んだ。ＦＲＡ２を過剰発現する５つの樹立トランスジェニック系統を産出し；３つの系統を導入遺伝子発現に基づいて、さらなる特徴付けのために選別した。断片のゲノム座標は、以下の通りであった：Ｈ２Ｋｂ（Ｈ２−Ｋ１）プロモーター：Ｃｈｒ１７：Ｍｏｒｅｌｌｏら，１９８６，ＥＭＢＯ  Ｊ．５（８）：１８７７−８３の後３４，１３７，２２２−３４，１３９，２４４（−）；Ｆｒａ−２（ＦｏｓＩ２）遺伝子（ストップなし）：Ｃｈｒ５：３２，４３８，８５９−３２，４５５，５５９。
【０１８７】
予備観察研究では、発達中の導入遺伝子の影響を第８、１４および１６週に研究した。野生型対照とＦＲＡ２マウス間にこの期間中に体重または死亡率の差はなかった。この観察は、Ｅｆｅｒｌらによる第１６週での５０％の死亡率の観察と対照的であった。
【０１８８】
ＦＲＡ−２過剰発現トランスジェニックマウスは、ヒドロキシプロリン含有量によって測定されるコラーゲンの増加した沈着を伴う、年齢と共に増加する肺重量を示した（図５）。
【０１８９】
このモデルでは、肺中への炎症性細胞の流入を有する初期炎症性段階があった（図６）。組織学的分析も肺サンプル中のコラーゲンの時間と共に増加した沈着を示し、これは、
以下のように行われた。安楽死後、肺に固定圧力下で固定液を吹き込んだ。次いで、肺を除去し、固定液中に置いた。固定が完了した後、肺を１％寒天液中に包埋し、３ｍｍ厚さ段階切片にトランスアジタルに（ｔｒａｎｓｓａｇｉｔａｌｌｙ）スライスした。プロセシング後、全ての切片をパラフィンブロック中に包埋した。全てのパラフィンブロックを４μｍでミクロトームし、コラーゲン沈着（青）を実証するためのＭａｓｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色および全体的な形態を示すためのＨ＆Ｅ染色を使用して染色した（図６）。
【０１９０】
同様に、皮膚では、野生型対照と比較して、皮膚におけるコラーゲン沈着と類似して、経時的なＦＲＡ２マウスの真皮厚さの増加があった（図７および８）。
【０１９１】
このモデルでは、肺中への炎症性細胞の流入およびＴｈ２サイトカイン様ＩＬ−４＆ＩＬ−１３の上方調節を有する初期炎症性段階があった。肺および皮膚における線維性遺伝子（ＥＣＭタンパク質＆メディエーター）の上方調節がある場合、後期線維性段階が続く。
【０１９２】
発達しているかつ繊維化している肺のサイトカインプロファイル分析は、Ｔｈ２サイトカインプロファイル（ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３）の増加を示した（図９）。ＩＬ−４およびＩＬ−１３レベルの著しい増加を発達の第１３週までに観察し、これは、これらの動物における肺線維症の発達に類似する第１７週にわたって上昇したままであった。
【０１９３】
発生遺伝子調節研究におけるＦＲＡ２マウスからの肺および皮膚の遺伝子発現分析は、ＴＧＦ−ｂ経路転写物、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＳＴＡＴ６、プロフィブロティックケモカイン、およびＬＯＸを含めた、重要なシグナトリー線維性マーカーの増加を示した（図１０）。
【０１９４】
この発生肺線維症マウスモデルを使用して、線維症におけるＩＬ−４およびＩＬ−１３の役割を研究した。最初に、線維症を促進することにおけるＩＬ−１３の役割を、ＦＲＡ２マウスモデルにおいて中和活性を有する検証された代理マウスＩＬ−１３抗体（げっ歯類におけるＳＡＲ１５６５９７の交差反応性がないため）を使用して評価した。１３週齢ＦＲＡ２マウスに代理マウスＩＬ−１３抗体を、２９日間週２回、ｉｐ経路によって投与された１０ｍｐｋで投薬した。１０ｍｐｋでのラットＩｇＧ１アイソタイプを対照として類似のＦＲＡ２マウスに投薬した。同様に、ＦＲＡ２マウスの第３の群に第２の対照群として生理食塩水を投与した。以下の表は、研究において使用された種々の処置群を示す。
【０１９５】
【表１７】
2020060580.tif 000018
【０１９６】
研究の終わりに、マウスを安楽死させ、それらの肺を除去し、プロセシングして、（１）タンパク質分析のための肺ホモジネート、（２）ＲＮＡ調製物、および（３）１つの肺葉を提供し、１つの肺葉を縛り、通気し、切除し、組織学的分析のために固定した。肺ホモジネートを使用して、コラーゲンの量を定量した。図１１に示すように、ＦＲＡ２マウス肺のヒドロキシプロリン含有量は、ｗｔ同腹仔対照と比較して増加した。ＩＬ−１３抗体処置ＦＲＡ２マウス肺におけるヒドロキシプロリンレベルは、有意に減少した。
【０１９７】
この観察をＦＲＡ２および同腹仔対照肺の病理組織学分析によって細胞レベルで確認した（図１２）。トリクローム青染色肺切片は、相当する野生型マウスと比較して、ＦＲＡ２マウス対照群（生理食塩水およびアイソタイプ対照処置）における増加したコラーゲン沈着を示した。低下したコラーゲン含有量を反映するトリクローム青染色の減少を抗ＩＬ−１３抗体処置マウス肺において観察した（図１３において定量した）。これらの結果は、コラーゲン沈着を通して肺線維症を促進することにおけるＩＬ−１３の役割および代理抗ＩＬ−１３抗体がコラーゲン沈着を阻害する能力を明瞭に実証している。
【０１９８】
リアルタイムＰＣＲによる転写分析を使用して、ＩＬ−１３によって調節されるいろいろな線維性マーカー、プロフィブロティックメディエーターおよび遺伝子の発現を追跡した。ＩＰＦバイオマーカーＦＮ１、ＳＰＤＥＦ、およびＭＵＣ５Ｂの結果を図１４に示す。プロフィブロティックマーカーＣＣＬ２およびＣＣＬ１１の結果を図１５に示す。ＩＬ−６、ＡＲＧ１、およびＩＬ１３Ｒａ２の結果を図１６に示す。
【０１９９】
ＩＬ−１３調節タンパク質発現をＥＬＩＳＡによって肺ホモジネートにおいてさらに研究した。ＩＬ−１３、ＩＬ−４およびＩＬ−１７レベルは、野生型肺と比較してＦＲＡ２肺ホモジネートにおいて増加し、これらのサイトカインレベルは、抗ＩＬ−１３抗体処置後に減弱した（図１７）。減少したＩＬ−１３レベルは、４週処置後の肺における抗体負荷を確認した（図１７）。
【０２００】
ＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）は、肺線維症と関連するよく特徴付けられたケモカインであり、ＩＬ−１３によって調節される。同様に、ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣおよびＹＫＬ−４０は、ＩＬ−１３調節タンパク質である。代理抗体処置後、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１７およびＹＫＬ−４０は、著しく阻害された（図１８）。
【０２０１】
全体的に見て、これらの結果は、ＦＲＡ２マウスモデルにおける肺線維症を促進することにおけるＩＬ−１３の役割を実証している。ＩＬ−１３発現の阻害は、肺コラーゲン含
有量および肺線維症関連バイオマーカーの減少と関連している。
【０２０２】
本発明を詳細に、その特定の実施形態を参照することによって記載したが、変更形態および変形形態が添付の特許請求の範囲において定義された本発明の範囲から逸脱することなく、可能であることが明らかとなろう。より具体的には、本発明の一部の態様が特に有利であると本明細書で同定されたが、本発明は、本発明のこれらの特定の態様に必ずしも限定されないことが企図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2020060580.tif 000028
【図１１】
2020060580.tif 000029
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月18日(2019.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象に投与された二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片を含む用量が該ヒト対象内でＩＬ−４またはＩＬ−１３に特異的に結合するかどうかを決定する方法であって：
（ａ）該用量を該ヒト対象に投与する工程；
（ｂ）該ヒト対象から抜き取られた血液、血漿、または血清サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７タンパク質の量を測定する工程であって、該用量が投与される前に測定された該対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、該血液サンプル中のＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の減少がＩＬ−４またはＩＬ−１３への該二重Ｖ領域抗体様タンパク質またはその断片の結合を知らせる前記工程；および
（ｃ）工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の該減少に依存して、該用量を増加させるまたは減少させる工程
を含む前記方法。
【請求項２】
工程（ｃ）が、工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値未満である場合、用量を増加させること、または工程（ｂ）において測定されたＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の減少が閾値を超えている場合、用量を減少させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
閾値が、用量が投与される前に測定された対象におけるＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量と比較した、ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量の約４３％の減少である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
用量が皮下投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７の量が酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって検出される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ヒト対象が特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【外国語明細書】
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