(57)【要約】【課題】補体経路の活性を阻止する、制御する、または低下させるために用いても良い抗体及び当該抗体をコードするポリヌクレオチドの提供。【解決手段】本開示は、補体経路の活性を阻止する、制御する、または低下させるために用いても良い抗体及び当該抗体をコードするポリヌクレオチドに関する。また、本開示は、補体Ｂｂ因子によって媒介される疾患、または補体Ｂｂ因子に関係する疾患を診断し治療するための組成物及び方法を対象とする。特に、本開示は、抗補体Ｂｂ因子抗体に関する。【選択図】図３
2020078304.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂｂ因子抗体であって、前記抗体が、Ｂ因子への親和性より大きな親和性でＢｂ因子に結合する；及び補体依存溶血反応を抑制する前記抗体。
【請求項２】
約１ｎＭ未満のＫｄでＢｂ因子に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体が、患者の膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成をブロックする、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
重鎖及び軽鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記軽鎖が、配列番号８〜１１からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む；及び前記重鎖が配列番号１２〜１５からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
前記軽鎖が、配列番号２４〜２７からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む；及び前記重鎖が配列番号２８〜３１からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、重鎖及び軽鎖可変配列：配列番号８／配列番号１２；配列番号８／配列番号１３；配列番号８／配列番号１４；配列番号８／配列番号１５；配列番号９／配列番号１２；配列番号９／配列番号１３；配列番号９／配列番号１４；配列番号９／配列番号１５；配列番号１０／配列番号１２；配列番号１０／配列番号１３；配列番号１０／配列番号１４；及び配列番号１０／配列番号１５；配列番号１１／配列番号１２；配列番号１１／配列番号１３；配列番号１１／配列番号１４；及び配列番号１１／配列番号１５から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む抗体である、請求項４に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、軽鎖及び重鎖可変ドメインアミノ酸配列：配列番号２４／配列番号２８；配列番号２４／配列番号２９；配列番号２４／配列番号３０；配列番号２４／配列番号３１；配列番号２５／配列番号２８；配列番号２５／配列番号２９；配列番号２５／配列番号３０；配列番号２５／配列番号３１；配列番号２６／配列番号２８；配列番号２６／配列番号２９；配列番号２６／配列番号３０；及び配列番号２６／配列番号３１；配列番号２７／配列番号２８；配列番号２７／配列番号２９；配列番号２７／配列番号３０；及び配列番号２７／配列番号３１から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む抗体である、請求項４に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、配列番号１１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及び配列番号１５の重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、単クローン抗体、多クローン抗体、遺伝子組換え抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、またはこれらの抗体フラグメントである、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、Ｆｖフラグメント、二重特異性抗体、または一本鎖抗体分子である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体がＩｇＧ１−型、ＩｇＧ２−型、ＩｇＧ３−型またはＩｇＧ４−型である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、標識基に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体を分泌する宿主細胞に由来する前記抗体を調製することを含む、請求項１記載の分離抗体を調製する方法。
【請求項１５】
請求項１記載の分離抗体をコードする核酸分子。
【請求項１６】
請求項１記載の抗体及び製剤的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【請求項１７】
さらに追加の活性剤を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
治療または予防が必要な患者の状態を治療または予防するための方法であって、前記患者に有効量の請求項１に記載の抗体を投与し、これにより、前記状態を治療または予防することを含む前記方法。
【請求項１９】
前記状態が、眼球の疾患である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記状態が、老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）である、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１４年２月２７日に出願した米国特許仮出願第６１／９４５、６１３号、及び２０１４年３月４日に出願した米国特許仮出願第６１／９４７、８８０号の優先権を主張するものであり、共にその全体が参照により組み込まれる。
【０００２】
本開示は、抗補体抗体及びその組成物、これをコードするポリヌクレオチド、抗体の生成のための発現ベクター及び宿主細胞、並びに補体によって媒介される疾患を診断及び治療するための組成物及び方法に関する。特に、Ｂ因子及びＢｂ因子関連疾患、特に、老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）を診断及び治療するのに使用される抗Ｂ因子及び抗Ｂｂ因子抗体が開示される。
【背景技術】
【０００３】
補体系は、宿主防御の初期段階、異物のオプソニン処理及び組織ホメオスタシスをもたらす先天性免疫系の一部として機能するおよそ５０の個々のタンパク質からなる。（Ｒｉｃｋｌｉｎ  Ｄ．，２０１０、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ：ａ  Ｋｅｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ  ａｎｄ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７８５−７９５）。補体系は、全多細胞生物にみられ、系統学的に適応免疫系の形成に先んじる（Ｚａｒｋａｄｉｓ  Ｉ．Ｋ．，２００１  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７４５−７６２）。
【０００４】
３つの主要な経路：古典的経路、レクチン経路及び副経路で、補体系の活性化が生じる。活性化プロセス中、逐次的タンパク質−タンパク質相互作用及びタンパク質分解活性により、Ｃ３及びＣ５コンベルターゼが生成される。これらのコンベルターゼは、オプソニン処理、アナフィラトキシンの生成、及び膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成にとって重要な補体カスケードのエフェクター分子の代表例である補体活性化分解産物の生成を担っている。これらのうち後者は、補体カスケードの溶菌活性にとって不可欠である（Ｒｉｃｋｌｉｎ  Ｄ．，２０１０）。通常条件下で、補体カスケードの活性化により、病原細菌に対する防御、並びに疾患組織及び損傷組織の除去がもたらされる。通常、ＭＡＣの形成は、ＣＦＨ、ＣＦＨ関連タンパク質、Ｃ４ＢＰ、ＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９、及び補体因子Ｉ（ＣＦＩ）を含む細胞表面及び可溶性調節成分の存在のため、周囲組織に影響を及ぼさない。しかし、過剰に活性化が生じる場合、または補体の負の調節成分を生成することができない場合、急性及び慢性疾患状態が誘発される。補体活性化の非制御が、ヒトの病状の原因と考えられている例としては、糸球体腎炎、全身性エリテマトーデス、発作性夜間血色素尿症、アルツマイマー病、家族性多発性血管腫、重症筋無力症及び老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）が挙げられる（Ｒｉｃｋｌｉｎ＆Ｌａｍｂｒｉｓ、２０１３、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｅ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：Ｐｔｈａｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、３８３１−３８３８）。
【０００５】
補体Ｂ因子は、１本鎖ポリペプチドとして血液中で循環するタンパク質である。副経路が活性化されると、Ｂ因子（およそ７５０ａａ）が補体Ｄ因子によって切断されて２つのポリペプチドを生成する。小さい方が、非触媒鎖Ｂａ（約２３０ａａ；３つの補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメインを含む）であり、大きい方が触媒サブユニットＢｂ（約５１０ａａ；タンパク質相互作用ドメイン及びセリンプロテアーゼドメインを含む）である。Ｂｂ因子は、副経路のＣ３コンベルターゼ並びに第２のプロテアーゼ、Ｃ５タンパク質を切断し、Ｃ５ａ及びＣ５ｂを生成するＣ５コンべルターゼを形成するＣ３ｂと関係するセリンプロテアーゼである。分解産物Ｃ５ｂにより、膜侵襲経路が開始され、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）がもたらされる。ＭＡＣは、膜透過チャンネルであり、標的病原体の浸透圧溶解がもたらされる。このため、Ｂ因子の切断及びＢｂ因子の生成が、補体プロセスを助ける。
【０００６】
Ｂ因子は、しっかりと調節され、きわめて特異的なセリンプロテアーゼである。その活性化形態では、Ｂ因子が、補体活性化の中枢性増幅ステップに触媒作用を及ぼし、炎症性反応、細胞分解、食作用及びＢ−細胞刺激を開始する（Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：９８１−９８６（２００４））。Ｂ因子は、アセンブリプロセスにより活性化される。すなわち、アセンブリプロセスにより、表面結合Ｃ３ｂ、またはその液相カウンターパートＣ３（Ｈ2Ｏ）が結合され、その後、Ｂ因子によって、フラグメントＢａ（残基１〜２３４；Ｂａ因子、フラグメントＢａ、補体Ｂａ因子）及びＢｂ（残基２３５〜７３９；Ｂｂ因子、フラグメントＢｂ、補体Ｂｂ因子）に切断される。フラグメントＢａが、複合体から分離し、Ｃ３を切断しＣ３ａ及びＣ３ｂを生成する副経路Ｃ３コンべルターゼ複合体Ｃ３ｂ−Ｂｂが残る。
【０００７】
老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、先進国で高齢者の失明の主な原因となっている。米国の集団だけでも、進行形態のＡＭＤの罹患率は、およそ２百万の個体で生じる視覚消失と関係している。また、中間ＡＭＤの７百万の個体が、進行形態のＡＭＤを発現するリスクが高い。ヨーロッパの集団を含めると、影響を受ける個体の数がおよそ２倍になる。ＡＭＤは、視神経網膜並びに網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）及び脈絡毛細管板を含む支持組織の進行性変性を引き起こす準炎症プロセスに起因する視覚の進行性消失を特徴とする。神経変性変化が、良好な視力を担う眼球のきわめて特異的な領域、黄斑内で中心視覚の領域に影響を与える場合に、臨床的に重大な視覚消失の大半は、生じる。この疾患は、視覚消失及び毎日の作業を実施するための家人への依存の増大のため、個体の身体的及び精神的健康にきわめて大きな影響がある。
【０００８】
補体系の調節解除は、ＡＭＤの発現と相関性が高い。第１に、補体遺伝子の遺伝子突然変異が、ヒトのＡＭＤを発現するリスクを変化させる。また、ＡＭＤ関連炎症は、病理学的解析によって全身循環及びＡＭＤ組織中の補体活性化産物の上昇が示されるとおり、補体活性の調節解除と関係している。新しい発見が、疾患発生での膜侵襲複合体の病理的影響の可能性を強調した（Ｗｈｉｔｍｏｒｅ  Ｓ、ｅｔ  ａｌ．２０１４、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈｏｒｉｏｃａｐｉｌｌａｒｉｓ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ＡＭＤ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｐａｔｈｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ５．２０１４  ＥＰｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）。
【０００９】
本発明は、補体関連疾患、ＡＭＤ、及び他の補体関連眼球状態の予防及び治療のための抗Ｂｂ因子抗体をもたらす。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、抗Ｂｂ因子抗体を含む方法及び組成物を包含する。１つの実施形態では、抗Ｂｂ因子抗体が、補体Ｂ因子への親和性より大きな親和性で補体Ｂｂ因子に結合する。もう１つの態様では、抗Ｂｂ因子抗体が、Ｂｂ因子に結合し、補体依存溶血反応を抑制する。もう１つの態様では、抗Ｂｂ因子抗体が、約１ｎＭ未満のＫｄで補体Ｂｂ因子に結合する。もう１つの態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成をブロックする。
【００１１】
もう１つの実施形態では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、第１のアミノ酸配列及び第２のアミノ酸配列を含み、第１のアミノ酸配列が、（ｉ）（ａ）ＣＤＲ１アミノ酸配列ＧＤＩＦＳＳＨＷ、配列番号１；（ｂ）ＧＤＩＦＳＳＨＷ、配列番号１、から選択される計２つ以下のアミノ酸付加、欠失、または置換が異なるＣＤＲ１アミノ酸配列；及び（ｃ）ＧＤＩＦＳＳＸ1ＷのＣＤＲ１アミノ酸配列（Ｘ1が、ヒスチジンであり、１つの他のアミノ酸が、アラニンで置換される）から選択されるＣＤＲ１；（ｉｉ）（ａ）ＣＤＲ２アミノ酸配列ＥＩＬＰＲＳＧＩＴＨＹＮＥＮＦＮＧ、配列番号２；（ｂ）ＥＩＬＰＲＳＧＩＴＨＹＮＥＮＦＮＧ、配列番号２、から選択される計２つ以下のアミノ酸付加、欠失、または置換が異なるＣＤＲ２アミノ酸配列；及び（ｃ）Ｘ1ＩＸ2ＰＸ3ＳＧＩＴＨＹＮＥＮＦＮＧのＣＤＲ２アミノ酸配列（Ｘ1が、グルタミン酸であり、Ｘ2が、ロイシンであり、Ｘ3が、アルギニンであり、１つの他のアミノ酸が、アラニンで置換される）から選択されるＣＤＲ２及び（ｉｉｉ）（ａ）ＣＤＲ３アミノ酸配列ＡＩＮＷＥＤＳ、配列番号３；（ｂ）ＡＩＮＷＥＤＳ、配列番号３、から選択される計２つ以下のアミノ酸付加、欠失、または置換が異なるＣＤＲ３アミノ酸配列；及び（ｃ）ＡＸ1ＮＸ2Ｘ3Ｘ4ＳのＣＤＲ３アミノ酸配列（Ｘ1が、イソロイシン酸であり、Ｘ2が、トリプトファンであり、Ｘ3が、グルタミン酸であり、Ｘ4が、アスパラギン酸であり、１つの他のアミノ酸が、アラニンで置換される）から選択されるＣＤＲ３である；並びに第２のアミノ酸配列が、（ｉ）（ａ）ＣＤＲ１アミノ酸配列ＨＡＳＱＮＶＮＶＷＬ、配列番号４；（ｂ）ＨＡＳＱＮＶＮＶＷＬ、配列番号４、から選択される計２つ以下のアミノ酸付加、欠失、または置換が異なるＣＤＲ１アミノ酸配列；及び（ｃ）ＨＡＳＱＮＶＮＶＸ1ＬのＣＤＲ１アミノ酸配列（Ｘ1が、トリプトファンであり、１つの他のアミノ酸が、アラニンで置換される）から選択されるＣＤＲ１；（ｉｉ）（ａ）ＣＤＲ２アミノ酸配列ＫＡＳＮＬＨＴ、配列番号５；（ｂ）ＫＡＳＮＬＨＴ、配列番号５、から選択される計２つ以下のアミノ酸付加、欠失、または置換が異なるＣＤＲ２アミノ酸配列；及び（ｃ）ＫＡＳＮＬＨＸ1のＣＤＲ２アミノ酸配列（Ｘ1が、トレオニンであり、１つの他のアミノ酸が、アラニンで置換される）から選択されるＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）（ａ）ＣＤＲ３アミノ酸配列ＱＱＧＱＳＹＰＹＴ、配列番号６；（ｂ）ＱＱＧＱＳＹＰＹＴ、配列番号６、から選択される計２つ以下のアミノ酸付加、欠失、または置換が異なるＣＤＲ３アミノ酸配列；及び（ｃ）ＱＸ1ＧＱＳＹＰＸ2ＴのＣＤＲ３アミノ酸配列（Ｘ1が、グルタミン酸であり、Ｘ2が、チロシンであり、１つの他のアミノ酸が、アラニンで置換される）から選択されるＣＤＲ３である。
【００１２】
もう１つの実施形態では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、配列番号８〜１１からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び配列番号１２〜１５からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一である重鎖可変領アミノ酸配列を有する。もう１つの実施形態では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、配列番号２４〜２７からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、及び配列番号２８〜３１からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一である重鎖可変領アミノ酸配列を有する。もう１つの態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、配列番号８〜１１からなる群から選択される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及び配列番号１２〜１５からなる群から選択される重鎖可変領アミノ酸配列を有する。もう１つの態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、配列番号２４〜２７からなる群から選択される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及び配列番号２８〜３１からなる群から選択される重鎖可変領アミノ酸配列を有する。他の態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、配列番号１１の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及び配列番号１５の重鎖可変領アミノ酸配列を有する。
【００１３】
もう１つの実施形態では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、軽鎖及び重鎖可変領アミノ酸配列：配列番号８／配列番号１２；配列番号８／配列番号１３；配列番号８／配列番号１４；配列番号８／配列番号１５；配列番号９／配列番号１２；配列番号９／配列番号１３；配列番号９／配列番号１４；配列番号９／配列番号１５；配列番号１０／配列番号１２；配列番号１０／配列番号１３；配列番号１０／配列番号１４；及び配列番号１０／配列番号１５；配列番号１１／配列番号１２；配列番号１１／配列番号１３；配列番号１１／配列番号１４；及び配列番号１１／配列番号１５から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。
【００１４】
もう１つの実施形態では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、軽鎖及び重鎖可変領アミノ酸配列：配列番号２４／配列番号２８；配列番号２４／配列番号２９；配列番号２４／配列番号３０；配列番号２４／配列番号３１；配列番号２５／配列番号２８；配列番号２５／配列番号２９；配列番号２５／配列番号３０；配列番号２５／配列番号３１；配列番号２６／配列番号２８；配列番号２６／配列番号２９；配列番号２６／配列番号３０；及び配列番号２６／配列番号３１；配列番号２７／配列番号２８；配列番号２７／配列番号２９；配列番号２７／配列番号３０；及び配列番号２７／配列番号３１から選択される重鎖及び軽鎖可変ドメインを含む。
【００１５】
もう１つの態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、単クローン抗体、多クローン抗体、遺伝子組換え抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体、または抗体フラグメントである。もう１つの態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、Ｆｖフラグメント、二重特異性抗体、または一本鎖抗体分子である。もう１つの態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４型抗体である。もう１つの態様では、本発明の抗Ｂｂ因子抗体が、標識基に結合している。この標識基は、光ラベル、放射性同位体、放射性核種、酵素基、またはビオチニル基とすることができる。
【００１６】
もう１つの実施形態では、本発明が、抗体を分泌する宿主細胞から本発明の抗体を調製することを含む本発明の分離抗体を調製するプロセスである。１つの態様では、これは、宿主細胞が成長する細胞培養培地から抗体を分離する、または精製することを意味する。
【００１７】
もう１つの実施形態では、本発明が、本発明の分離抗体をコードする核酸分子である。１つの態様では、本発明の抗体をコードする核酸分子が、制御配列に作動可能に結合している。
【００１８】
もう１つの実施形態では、本発明が、本発明の少なくとも１つの抗体及び製剤的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物である。１つの態様では、医薬組成物が、また、追加の活性剤を含んでも良い。
【００１９】
もう１つの実施形態では、本発明が、治療または予防が必要な患者の状態を治療または予防するための方法であって、前記患者に有効量の少なくとも１つの本発明の抗Ｂｂ因子抗体を投与し、これにより、前記状態を治療または予防することを含む前記方法である。１つの態様では、前記状態が、眼球の疾患である。もう１つの態様では、前記状態が老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】抗Ｂｂ因子単クローン抗体の結合分析を示す。
【図２】１０％正常ヒト血清の存在下で抗Ｂ因子または抗Ｂｂ因子抗体のいずれかを用いた溶血反応アッセイの結果を示す。
【図３】補体Ｂ因子構造のダイヤグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本明細書に用いられるセクションの表題は、組織化する目的だけにあり、記載した内容を制限するものではない。
【００２２】
遺伝子組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質変換、タンパク質精製などのために、標準的技術を用いることができる。酵素的反応及び精製技法は、製造者の仕様書に従って、または、当技術分野で一般に実行されるように、または、本明細書に記載の通りに、実施することができる。以下の方法及び技術は、一般に当技術分野で良く知られている従来の方法に従って、及び本明細書書全体に引用及び記載されているさまざまな一般的及びさらに特定の文献に記載された通りに、実施することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、３rd  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照。これらは、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される分子生物学、生物化学、物理及び生物物理学化学、分析化学、有機化学、並びに医薬品及び薬品化学と関連して用いられる名称並びにこれらの実験方法及び技術は、当技術分野でよく知られるもの及び一般に用いられるものである。化学合成、化学分析、薬品調製、製剤及びデリバリー並びに患者の治療には、標準的技術を用いることができる。
【００２３】
以下の定義が本明細書に用いられる。
【００２４】
「タンパク質」は、本明細書で用いられる場合、少なくとも２つの共有結合されたアミノ酸を指すことを意味し、ポリペプチド、オリゴペプチド、及びペプチドと交換可能に用いられる。２つ以上の共有結合されたアミノ酸は、ペプチド結合によって結合される。
【００２５】
「Ｂ因子」は、ヒトＢ因子を指し、そのアミノ酸配列は、配列番号１６に示される。Ｂ因子、タンパク質Ｂ、補体Ｂ因子、補体タンパク質Ｂは、配列番号１６と同じ配列を指す。Ｂ因子と同じもの、またはＢ因子の変異体を指すために他の用語を用いることができる（例えば、「プレプロタンパク質Ｂ」）。Ｂａ因子（配列番号１７）は、Ｂ因子の１つのポリペプチドフラグメントである。
【００２６】
「Ｂｂ因子」は、ヒト因子のポリペプチドフラグメント（配列番号７）を指す。
【００２７】
用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は、複数のＣＤＲ及び抗原のエピトープの結合によって特定の抗原と相互作用する１つ以上のポリペプチド鎖を含むタンパク質を指すために、最も広い意味で交換可能に用いられる。抗体は、単クローン（例えば、完全長またはインタクト単クローン抗体）、多クローン、多価、及び／または多重特異性（例えば、所望の生物活性を示す限り、二重特異性抗体）とすることができる。抗体は、また、抗体フラグメント（本明細書に記載のとおり）とすることができる、またはこれを含むことができる。
【００２８】
「エピトープ」は、抗体によって認識及び結合される配列、構造、または分子を指すために用いられる。エピトープは、「抗原部位」を指すことができる。
【００２９】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部だけを含み、前記部分が、インタクト抗体中に存在する場合、好ましくは、通常、その部分と関係する機能の少なくとも１つ、好ましくはほとんどまたはすべてを保持する。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；二重特異性抗体；直鎖抗体；１本鎖抗体分子；及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。１つの実施形態では、抗体フラグメントが、インタクト抗体の抗原結合部位を含み、このため、抗原を結合する能力を保持する。もう１つの実施形態では、抗体フラグメント、例えば、Ｆｃ領域を含むものが、インタクト抗体中に存在する場合、通常、Ｆｃ領域と関係する少なくとも１つの生体機能、例えば、ＦｃＲ結合、抗体半減期調節、ＡＤＣＣ機能及び補体結合を保持する。１つの実施形態では、抗体フラグメントが、インタクト抗体と実質的にほぼ同じｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する一価抗体である。例えば、かかる抗体フラグメントが、フラグメントにｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を与えることができるＦｃ配列と結合する抗原結合アームを含んで良い。
【００３０】
「単クローン」抗体は、本明細書で用いられる場合、細胞の集団から得られる抗体を指し、前記細胞の集団が、同一親細胞からクローン由来する。単クローン抗体は、均一抗体である。すなわち、集団を含む個々の抗体が、同じ遺伝子から由来するように同一であり、少量で存在することができ、天然に存在する可能性がある変異型、及びいくつかの場合では異なる可能性がある翻訳後修飾を除いて、同じアミノ酸配列及びタンパク質構造を有する。単クローン抗体は、いくつかの実施形態では、きわめて特異的なものとすることができる。いくつかの実施形態では、単クローン抗体は、単一抗原部位に向けることができる。さらに、異なる決定因子（エピトープ）に向けられた異なる抗体を含む他の抗体調製とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は抗原の単一決定因子に向けられる。個々の単クローン抗体は、任意の特定の方法によって生成することができる。例えば、本開示に従って用いられる単クローン抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって生成することができる、または遺伝子組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４、８１６、５６７号を参照）によって、またはＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから生成することができる。
【００３１】
「多クローン」抗体は、親の異質集団、抗体生成細胞に由来する抗体の異質集団を示すために用いられる。ほとんどの場合では、多クローン抗体が、異なったエピトープへの異なる親和性を有し、異なった配列を有する遺伝子から生成される。
【００３２】
「キメラ」抗体は、２つ以上の異種に由来するアミノ酸配列を含む抗体である。
【００３３】
「ヒト化」抗体は、非ヒト親抗体に由来するキメラ抗体である。多くの場合では、ヒト化抗体の特定のアミノ酸位置が、ヒト抗体の対応する位置で、アミノ酸の同一性と一致するように変わる。多くの場合では、親（非ヒト）抗体の可変部領域の位置が、ヒト種の可変部領域からのアミノ酸と置換される。これにより所望の特異性、親和性、及び能力を有するヒト化マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長動物抗体が生成される。
【００３４】
「変異体」は、親配列と比べて少なくとも１つの差を含む配列を指す。変異体ポリペプチドは、親配列と少なくとも約７５％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質である。変異体タンパク質は、天然、または野生型アミノ酸配列と少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有することができる。いくつかの場合では、変異体抗体が、親抗体と比べてアミノ酸配列の１つ以上の差（単数及び複数）を有する抗体である。ヒト化及びキメラ抗体は、変異体抗体である。このため、変異体抗体は、親抗体と１００％未満の配列同一性を含む。
【００３５】
「分離した」または「精製した」は、その自然環境の少なくとも１つの成分から分離及び／または回復した分子を指し、前記成分は、分子の使用、または活性を妨げる可能性がある物質である。成分としては、ペプチド、糖、核酸、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質または非タンパク質溶質が挙げられる。
【００３６】
「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、１つ以上のＣＤＲの残基が、抗原結合を助ける抗体内の１つ以上の領域を指す。多くの場合では、ＣＤＲの個々のアミノ酸が、標的抗原の原子のすぐ近くにある可能性がある。いくつかの実施形態では、ＣＤＲが、３つのＣＤＲ領域からなっても良い免疫グロブリン中に位置しても良い。いくつかの場合では、より大きなアミノ酸配列中に１つ以上のＣＤＲ配列がある場合、ＣＤＲは、他の配列から分離して、ＣＤＲ番号付けしても良い。いくつかの場合では、複数のＣＤＲが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と認識される。各ＣＤＲは、カバット（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））によって定義されるとおり、相補性決定領域からのアミノ酸残基を含んでも良い。ＣＤＲのアミノ酸位置番号、並びに抗体内の他の配列、または抗体フラグメントは、カバットの定義に従う。多くの場合では、ＣＤＲは、可変部領域配列中のＣＤＲの位置（カバット番号）によって定義することができ、例えば、軽鎖ＣＤＲ１は、位置２４及び位置３３の間；ＬＣ  ＣＤＲ２では、位置５０及び位置５６の間；及びＬＣ  ＣＤＲ３では、位置８９及び位置９７の間にアミノ酸配列を含んでも良い；また、重鎖ＣＤＲは、ＣＤＲ１では、位置２６及び位置３３の間；ＨＣ  ＣＤＲ２では、位置５０及び位置６６の間；ＨＣ  ＣＤＲ３では、位置９７及び位置１０３の間に位置しても良い、及び／または超可変ループは、軽鎖残基２６〜３２（ＬＣ  ＣＤＲ１）、残基５０〜５２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び残基９１〜９６（ＬＣ  ＣＤＲ３）；並びに重鎖残基２６〜３２（ＨＣ  ＣＤＲ１）、残基５３〜５５（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び残基９７〜１０１（ＨＣ  ＣＤＲ３）の間に位置しても良い。いくつかの例では、相補性決定領域が、カバットに従って定義されたＣＤＲ領域及び超可変ループからのアミノ酸を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗体が一本鎖免疫グロブリンである場合、１つ以上のＣＤＲ、２つ以上のＣＤＲ、３つ以上のＣＤＲ、４つ以上のＣＤＲ、５つ以上のＣＤＲが存在しても良い。いくつかの実施形態では、抗体が、６つのＣＤＲから構成されても良い。
【００３７】
「フレームワーク領域」、ＦＲは、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。ほとんどの実施形態では、可変ドメインが、逐次的に認識される２〜４つのＦＲを有する。例えば、３つのＣＤＲを含む可変部領域が、４つのＦＲ：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を有する。ＣＤＲがカバットに従って定義される場合、軽鎖ＦＲ残基は、残基１〜２３（ＬＣＦＲ１）、３４〜４９（ＬＣＦＲ２）、５７〜８８（ＬＣＦＲ３）、及び９８〜１０７（ＬＣＦＲ４）に位置し、重鎖ＦＲ残基は、重鎖残基中の残基１〜２５（ＨＣＦＲ１）、３４〜４９（ＨＣＦＲ２）、６７〜９６（ＨＣＦＲ３）、及び１０４〜１１３（ＨＣＦＲ４）に位置する。ＣＤＲが超可変ループからのアミノ酸残基を含む場合、軽鎖ＦＲ残基は、軽鎖中の残基１〜２３（ＬＣＦＲ１）、３４〜４９（ＬＣＦＲ２）、５７〜８８（ＬＣＦＲ３）、及び９８〜１０７（ＬＣＦＲ４）に位置し、重鎖ＦＲ残基は、重鎖残基中の残基１〜２５（ＨＣＦＲ１）、３４〜４９（ＨＣＦＲ２）、６７〜９６（ＨＣＦＲ３）、及び１０４〜１１３（ＨＣＦＲ４）に位置する。いくつかの例では、ＣＤＲがカバットによって定義されるＣＤＲ及び超可変ループのＣＤＲからのアミノ酸を含む場合、ＦＲ残基は、これに応じて調節される。例えば、ＨＣ  ＣＤＲ１がアミノ酸Ｈ２６〜Ｈ３５を含む場合、重鎖ＦＲ１残基は、位置１〜２５に位置し、ＦＲ２残基は、位置３６〜４９に位置する。
【００３８】
「可変ドメイン」は、相補性決定領域（ＣＤＲ）、及びフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む従来の抗体分子軽鎖及び重鎖の部分を指す。ＶＨは、重鎖の可変ドメインを指す。ＶＬは、軽鎖の可変ドメインを指す。
【００３９】
「Ｆｖ」または「Ｆｖフラグメント」は、ＦＲ及びＣＤＲ配列を含み、完全抗原認識及び結合部位を含有する抗体フラグメントを指す。多くの実施形態では、Ｆｖが、緊密に結合した１本の重鎖及び１本の軽鎖可変ドメインの二量体からなり、本質的に共有結合とすることができ、例えば、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）である。各可変ドメインの３つのＣＤＲは、相互作用し、ＶＨ−ＶＬポリペプチドの表面に抗原結合部位を定義する。集合的に、６つのＣＤＲまたはこれらのサブセットが、抗体に抗原結合特異性を与える。しかし、通常、全結合部位より親和性が低いが、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲだけを含むＦｖの半分）でも、いくつかの場合では、抗原を認識及び結合する能力を有する。
【００４０】
「Ｆａｂ」または「Ｆａｂフラグメント」は、軽鎖の可変及び不変部ドメイン（ＣＬ）並びに重鎖の可変ドメイン及び第１の不変部ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆ（ａｂ’）2抗体フラグメントは、１対のＦａｂフラグメントを含み、この間ではヒンジシステインによって一般にカルボキシ末端の近くで共有結合される。また、抗体フラグメントの他の化学結合が、当技術分野に知られている。
【００４１】
「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列同一性の一部として保存的置換を考慮せず、必要であれば、最大パーセント配列同一性を実現するために、配列をアラインし、ギャップを導入した後の参照配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、当技術分野の技術内にあるさまざまな方法で、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウエア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアを用いて実現することができる。当業者であれば、比較される配列の完全長を越える最大アラインメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための好適なパラメーターを決定することができる。その後、長い方の配列に対して配列同一性が計算される。すなわち、短い方の配列が長い方の配列の一部と１００％の配列同一性を示しても、全配列同一性は、１００％未満となる。
【００４２】
「パーセント（％）アミノ酸配列相同性」は、必要であれば、最大パーセント配列相同性を実現するために、配列をアラインし、ギャップを導入した後の参照配列中のアミノ酸残基と相同である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。この方法は、保存的置換を考慮に入れる。保存的置換は、アミノ酸がほぼ同じアミノ酸と置換される置換である。アミノ酸は、いくつかの特性、例えば、サイズ、形状、疎水性、親水性、電荷、等電点、極性、芳香族性などでほぼ同じである可能性がある。パーセントアミノ酸配列相同性を決定するためのアラインメントは、当業者の技術内であるさまざまな方法で実現することができる。いくつかの場合では、公に入手可能なコンピューターソフトウエア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアを用いてアミノ酸配列をアラインすることができる。当業者であれば、比較される配列の完全長を越える最大アラインメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための好適なパラメーターを決定することができる。その後、長い方の配列に対して配列相同性が計算される。すなわち、短い方の配列が長い方の配列の一部と１００％の配列相同性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を示しても、全配列相同性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）は、１００％未満となる。
【００４３】
「パーセント（％）核酸配列同一性」は、必要であれば、最大パーセント配列同一性を実現するために、配列をアラインし、ギャップを導入した後の参照配列中のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセンテージと定義される。パーセント核酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、当技術分野の技術内にあるさまざまな方法で、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウエア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアを用いて実現することができる。当業者であれば、比較される配列の完全長を越える最大アラインメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための好適なパラメーターを決定することができる。その後、長い方の配列に対して配列同一性が計算される。すなわち、短い方の配列が長い方の配列の一部と１００％の配列同一性を示しても、全配列同一性は、１００％未満となる。
【００４４】
分子の「活性」または「生物活性」は、分子の型及び与えられる活性をアッセイするための試験の有効性に依存する可能性がある。例えば、Ｂｂ因子抗体の場合、活性が、Ｂｂ因子の生物活性を部分的にまたは完全に抑制するその能力、例えば、他の補体タンパク質への結合、セリンプロテアーゼ活性、またはＭＡＣ形成を指す。クレームされているＢｂ因子抗体の好ましい生物活性が、状態、例えば、Ｂｂ因子関連疾患または状態、例えば、補体関連眼球状態の病理の測定可能な改善を実現する能力である。いくつかの場合では、開示した抗Ｂｂ因子抗体によって抑制される活性が、Ｂｂ因子プロテアーゼまたは切断活性である。他の場合では、前記活性が、複合体中の他の補体タンパク質を結合する能力である。いくつかの実施形態では、開示した抗Ｂｂ因子抗体の活性が、溶血反応を抑制するその能力によって測定される。前記活性は、関連動物モデル、またはヒト臨床試験を用いる結合アッセイを含むｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ試験を用いることによって測定することができる。
【００４５】
「補体関連眼球状態」は、最も広い意味で用いられ、全眼球状態を含み、古典的、レクチン、副経路または外因性経路のいずれかによって活性化される補体に関連する状態の病理である。補体関連眼球状態としては、黄斑変性疾患、例えば、乾燥性及び滲出性（非−滲出性及び滲出性）形態を含む老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）の全ステージ、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性黄斑浮腫を含む糖尿病性及び他の虚血関連網膜症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、網膜分枝静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、及び他の眼内血管新生疾患、例えば、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォンヒッペルリンドウ病、眼球のヒストプラズマ症、角膜血管新生、及び網膜血管新生が挙げられるが、これらに限定されない。補体関連眼球状態の好ましいグループとしては、乾燥性及び湿性（非−滲出性及び滲出性）ＡＭＤを含む老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、黄斑末梢血管拡張症、ブドウ膜炎、糖尿病性及び他の虚血関連血管新生関連網膜症、または細胞変性糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォンヒッペルリンドウ病、眼球のヒストプラズマ症、ドイン蜂巣状網膜ジストロフィ／レバンチン病、シュタルガルト病、緑内障（Ｇｌｕｃｏｍａ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、ＢＲＶＯ、角膜血管新生、網膜血管新生が挙げられる。
【００４６】
「製剤的に許容可能な」は、動物、及びさらに具体的にヒトに使用するために、連邦または州政府の規制当局によって承認される、もしくは承認可能なこと、または米国薬局方または他の一般に認識される薬局方に記載されることを指す。
【００４７】
「製剤的に許容可能な塩」は、親化合物の所望の薬理活性を保持する化合物の塩を指す。かかる塩としては、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などで形成される酸付加塩；または有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１、２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンフルスルホン酸、４−メチルビシクロ［２２２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などで形成される酸付加塩；及び親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、またはアルミニウムイオンによって置換される場合に形成される塩；または有機塩基、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎメチルグルカミンなどとの配位結合物（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ）が挙げられる。特定の実施形態では、製剤的に許容可能な塩が、塩酸塩である。特定の実施形態では、製剤的に許容可能な塩が、ナトリウム塩である。
【００４８】
「製剤的に許容可能な賦形剤」は、製剤的に許容可能な希釈剤、製剤的に許容可能なアジュバント、製剤的に許容可能なビヒクル、製剤的に許容可能なキャリア、または患者に本開示によって提供される化合物を投与することができる前記のいずれかの組み合わせを指し、これらの薬理活性が破壊されず、治療有効量の化合物またはこれらの薬理学的活性代謝物質をもたらすのに十分な用量で投与される場合に非毒性である。
【００４９】
「治療」は、障害の発現を予防する、または障害の病理を変化させる、または障害の症状を軽減する、もしくは減らすための少なくとも１つの治療薬剤の投与である。それゆえに、治療は、治療的治療及び予防的または予防手段の両者を指す。治療が必要なものは、すでに障害があるもの並びに障害を予防しなければならないものを含む。本明細書に開示したとおり、投与に好ましい薬剤は、少なくとも１つの開示した抗Ｂｂ因子抗体を含む。補体関連疾患の治療では、前記治療薬剤は、少なくとも１つの本明細書に本開示の抗体またはかかる抗体のコード配列を含み、補体経路の成分の反応の大きさを直接または間接に変えても良く、または他の治療薬剤、例えば、抗生物質、抗真菌薬、抗炎症薬、化学療法薬などによって疾患をさらに治療しやすいものにしても良い。
【００５０】
「治療有効量」は、疾患、または疾患の少なくとも１つの臨床的症状を治療するために対象に投与する場合、疾患またはその症状のかかる治療をもたらすのに十分な薬剤の量を指す。特定の治療有効量は、例えば、薬剤、疾患及び／または疾患の症状、疾患の重症度及び／または疾患の症状、治療される患者の年齢、体重及び／または健康、並びに処方医の判断に応じて変えても良い。任意の与えられる化合物の好適な量は、当業者によって確かめることができる、及び／または通常の実験によって決定することができる。
【００５１】
「治療有効用量」は、患者の疾患に有効な治療をもたらす用量を指す。治療有効用量は、薬剤及び／または患者に応じて変えても良く、因子、例えば、患者の状態及び疾患の重症度に依存しても良い。治療有効用量は、当業者に知られる通常の薬理方法に従って決定することができる。
【００５２】
疾患の「病理」、例えば、補体関連眼球状態が、患者の健康状態を損なう全現象を含む。これは、異常または制御不能細胞成長、タンパク質生成、異常または非制御細胞死、自己抗体生成、補体生成、補体活性化、ＭＡＣ形成、隣接細胞の正常機能の妨害、異常レベルのサイトカインまたは他の分泌産物の放出、任意の炎症性または免疫反応の抑制または誇張、炎症性細胞の細胞空間への浸透、などを含むが、これらに限定されない。
【００５３】
「哺乳動物」は、本明細書で用いられる場合、哺乳動物に分類される任意の動物を指し、ヒト、高等霊長動物、飼育動物及び家畜、並びに動物園、スポーツまたはペット動物、例えば、ウマ、ブタ、ウシ、イヌ、ネコ及びフェレットなどを含むが、これらに限定されない。本発明の好ましい実施形態では、哺乳動物がヒトである。
【００５４】
さらに１つ以上の治療薬剤「と組み合わせて」の投与は、同時（併用）及び任意の順序での連続投与を含む。
【００５５】
本開示は、Ｂｂ因子タンパク質を結合する抗体を提供する。
【００５６】
本明細書に記載の抗体は、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する足場構造を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲが、１つ以上の親配列の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３からの２つ以下のアミノ酸付加、欠失、または置換を含む。他の実施形態では、ＣＤＲが、本明細書に記載のとおり、共通保存アミノ酸配列及び可変アミノ酸配列を有するコンセンサス配列によって定義される。
【００５７】
特定の実施形態では、本開示のＢｂ因子抗体の足場構造が、これらに限定されないが、単クローン抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（例えば、抗体ミメティック）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体フュージョン（例えば、抗体コンジュゲート）、及びそれぞれのフラグメントを含む抗体に基づくものとすることができる。さらに本明細書の以下に、さまざまな構造が、記載され及び定義される。Ｂｂ因子抗体は、Ｂｂ因子活性に関係する予後、症状、及び／または病理を治療するのに有用である。これらは、アテローム硬化症、急性心筋梗塞後の虚血−再潅流、ヘノッホシェーンライン紫斑病性腎炎、免疫複合体性脈管炎、リウマチ様関節炎、血管炎、動脈瘤、脳卒中、心筋症、出血性ショック、打撲傷、多発臓器不全、低血液量性ショック及び腸管虚血、移植拒絶、心臓手術、ＰＴＣＡ、自然流産、神経細胞損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ギランバレー症候群、パーキンソン病、アルツハイマー病、急性呼吸困難症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、輸血関連急性肺損傷、急性肺損傷、グッドパスチャー病、心筋梗塞、心肺バイパス後の炎症、心肺バイパス、敗血症性ショック、移植拒絶、異種移植、熱傷、全身性エリテマトーデス、膜性腎炎、ベルジェ病、乾癬、水疱性類天疱瘡、皮膚筋炎、抗リン脂質抗体症候群、炎症性腸疾患、血液透析、白血球分離、血漿交換、ヘパリン誘導性体外膜型酸素付加ＬＤＬ沈降法、体外膜型酸素付加白血球分離、血漿交換、ヘパリン誘導性体外膜型酸素付加ＬＤＬ沈降法、体外膜型酸素付加などを含むが、これらに限定されない。
【００５８】
本開示の抗体の他の使用は、例えば、補体及びＢｂ因子関連疾患の診断を含む。
【００５９】
本開示の態様によって、Ｂｂ因子抗体、特に、以下でさらに詳細に記載したとおり、重及び／または軽ＣＤＲまたはこれらの組み合わせを含む少なくとも１つのＣＤＲを含む抗体がもたらされる。
【００６０】
１つの態様では、Ｂｂ因子抗体が、Ｂｂ因子の活性を抑制する、またはタンパク質複合体を形成するＢｂ因子の能力を抑制する。特定の機序または理論に束縛されないと、いくつかの実施形態では、当該抗体が、補体経路を妨げ、これにより、補体カスケード、ＭＡＣの形成、及び細胞分解を妨げる。この妨害は、乾燥性及び湿性（非−滲出性及び滲出性）ＡＭＤ、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性及び他の虚血関連網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォンヒッペルリンドウ病、眼球のヒストプラズマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、網膜血管新生などを含んでも良いが、これらに限定されない。
【００６１】
このため、本開示の抗体は、補体系に関連する状態またはＢｂ因子関連疾患もしくは状態を確認する役割を果たしても良い。また、当該抗体は、Ｂ因子及び／または他の下流補体タンパク質によって媒介される作用を調節及び／または抑制するために用いることができ、補体及び／またはＢｂ因子に関連するさまざまな疾患または状態の治療及び予防に有効である。この妨害は、アテローム硬化症、急性心筋梗塞後の虚血−再潅流、ヘノッホシェーンライン紫斑病性腎炎、免疫複合体性脈管炎、リウマチ様関節炎、血管炎、動脈瘤、脳卒中、心筋症、出血性ショック、打撲傷、多発臓器不全、低血液量性ショック及び腸虚血、移植拒絶、心臓手術、ＰＴＣＡ、自然流産、神経細胞損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ギランバレー症候群、パーキンソン病、アルツハイマー病、急性呼吸困難症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、輸血関連急性肺損傷、急性肺損傷、グッドパスチャー病、心筋梗塞、心肺バイパス後の炎症、心肺バイパス、敗血症性ショック、移植拒絶、異種移植、熱傷、全身性エリテマトーデス、膜性腎炎、ベルジェ病、乾癬、水疱性類天疱瘡、皮膚筋炎、抗リン脂質抗体症候群、炎症性腸疾患、血液透析、白血球分離、血漿交換、ヘパリン誘導性体外膜型酸素付加ＬＤＬ沈降法、体外膜型酸素付加白血球分離、血漿交換、ヘパリン誘導性体外膜型酸素付加ＬＤＬ沈降法、体外膜型酸素付加、などを含むが、これらに限定されない。
【００６２】
さらに具体的には、本開示によって、抗Ｂｂ因子抗体及びこれをコードするポリヌクレオチドが提供される。さまざまな態様では、抗Ｂｂ因子抗体が、Ｂｂ因子及び／または他の補体タンパク質によって媒介される少なくとも１つの生物反応を抑制し、補体関連及びＢｂ因子関連疾患または障害の作用を改善するのに有用である可能性がある。また、本開示によって、Ｂｂ因子抗体の生成のための哺乳動物細胞系及び細菌細胞を含む発現系並びにＢｂ因子に関連する疾患を治療する方法が提供される。
【００６３】
本開示の抗体は、足場構造及びＢｂ因子に結合する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。１つの実施形態では、アミノ酸配列が、配列番号１〜６または配列番号１８〜２３のいずれかを含む。
【００６４】
さまざまな実施形態では、当該抗体が、第１のアミノ酸配列及び／または第２のアミノ酸配列を含む。１つの実施形態では、第１のアミノ酸配列及び／または第２のアミノ酸配列が、配列番号８〜１５または配列番号２４〜３１からなる群から選択される。
【００６５】
さまざまな実施形態では、当該抗体が、第１のアミノ酸配列及び第２のアミノ酸配列のうち１つまたは両者を含むことができる。第１のアミノ酸配列及び第２のアミノ酸配列は、単一直鎖アミノ酸配列とすることができ、ジスルフィド架橋による共有結合とすることができ、または非−共有結合とすることができる。
Ｂｂ因子
【００６６】
補体Ｂ因子は、ＣＦＢ遺伝子によってコードされる単一９３，０００Ｄａポリペプチド鎖からなるグリコシル化タンパク質である。これは、補体活性化の副経路の不可欠な成分であり、およそ２００μｇ／ｍＬでヒト血漿中にみられる。Ｍｇ++の存在下で、Ｂ因子が、Ｃ３ｂに結合し、Ｃ３ｂ：Ｂ複合体は、活性トリプシン−様セリンプロテアーゼとして循環するセリンプロテアーゼであるＤ因子によって活性化することができる。Ｄ因子によるＢ因子の切断が、Ｂａフラグメント（３３，０００Ｄａ）を放出させ、Ｃ３ｂに結合した（６０，０００Ｄａ）Ｂｂフラグメントが残る。このＢｂサブユニットは、Ｃ３及びＣ５コンべルターゼと称されるセリンプロテアーゼである。これは、それぞれ小さなペプチドＣ３ａ及びＣ５ａに切断することによって、これらのタンパク質をともにその活性形態に転換するためである。
【００６７】
Ｂ因子は、しっかりと調節され、きわめて特異的なセリンプロテアーゼである。その活性化形態では、Ｂ因子が、補体活性化の中枢性増幅ステップに触媒作用を及ぼし、炎症性反応、細胞分解、食作用及びＢ−細胞刺激を開始する。Ｂ因子は、表面−結合Ｃ３ｂ、またはその可溶性カウンターパートＣ３（Ｈ2Ｏ）のいずれかとのアセンブリにより活性化される。Ｃ３に結合後、Ｂ因子は、Ｄ因子によって小さなフラグメント、Ｂａ因子（残基１〜２３４）及び大きなフラグメント、Ｂｂ因子（残基２３５〜７３９）に切断される。Ｂａ因子が、複合体から分離し、Ｃ３を切断しＣ３ａ及びＣ３ｂを生成する副経路Ｃ３コンべルターゼ複合体Ｃ３ｂ−Ｂｂが残る。Ｃ３ｂ−Ｂｂプロテアーゼ複合体は、安定しておらず、一旦、複合体Ｂｂ因子から分離されると、Ｃ３ｂと再会合しない。
【００６８】
プロ酵素Ｂ因子は、３つのＮ−末端補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメインからなり、４５−残基リンカーによってＶＷＡドメイン及びＣ−末端セリンプロテアーゼ（ＳＰ）ドメインに結合され、触媒中心を運ぶ。他のセリンプロテアーゼとの著しい相違が、Ｂ因子の活性中心にみられる。Ｂｂ因子は、Ｃ−末端セリンプロテアーゼドメインを含み、ＣＣＰドメインは、Ｂａ因子にみられる。
【００６９】
ヒトＢ因子のアミノ酸配列は、配列番号１６に示される。本開示で有用な他の形態のＢ因子には、配列番号１６のヒト天然Ｂ因子配列と少なくとも７０％または少なくとも９０％相同である変異体及び変異が含まれる。
【００７０】
ヒトＢｂ因子のアミノ酸配列は、配列番号７である。本開示で有用な他の形態のＢｂ因子には、配列番号７の天然Ｂｂ因子配列と少なくとも７０％または少なくとも９０％相同である変異体及び変異が含まれる。
【００７１】
ヒトＢａ因子のアミノ酸配列は、配列番号１７である。本開示で有用な他の形態のＢａ因子には、配列番号１７の天然Ｂａ因子配列と少なくとも７０％または少なくとも９０％相同である変異体及び変異が含まれる。
【００７２】
本明細書に記載のとおり、Ｂ因子、Ｂｂ因子、またはＢａ因子の機能／活性を抑制することは、Ｂｂ因子の抑制を示す。補体副経路をアッセイする１つの例が、溶血反応アッセイである：副経路（ＡＰ）の活性化では、古典的経路より高い濃度の血清が必要とされる。一般に、ＥＧＴＡがＣａ++を優先的にキレートするアッセイでは、５ｍＭのＥＧＴＡの存在下で最終濃度５ｍＭのＭｇ++が用いられる。ほとんどの哺乳動物種のＡＰは、ウサギ赤血球によって自然に活性化され、その結果、都合が良い標的となる。ＧＶＢ０（ＣｏｍｐＴｅｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ）で３回洗浄し、５Ｘ１０8／ｍｌに再懸濁させることによってウサギ赤血球（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）を調製する。ＧＶＢ０で異なる量の抗Ｂｂ因子抗体を希釈した。氷上で、逐次希釈した抗Ｂｂ因子抗体、０．１Ｍ  ＭｇＥＧＴＡ（ＣｏｍｐＴｅｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ）、１／２ＮＨＳ（ＧＶＢ０で１／２に希釈した正常ヒト血清）、及びウサギＥｒの順序で１００ｕｌ反応物を混合する。その後、シェーカー上で、３０分間、３７℃で、反応物をインキュベートする。１．０ｍｌ低温ＧＶＢＥを添加する。混合し、約１０００ｘｇ以上で、３分間、遠心分離機にかけ、細胞をペレットする。１００ｕｌの上澄みを９６−ウエルプレートに移動し、４１２ｎｍ（ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ４．７．１）で読む。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６を用いてデータを分析した。
Ｂｂ因子抗体
【００７３】
１つの態様では、本開示により、Ｂ因子を結合するよりより大きな親和性でＢｂ因子を結合する抗体が提供される。
【００７４】
特定の態様では、本開示により、Ｂｂ因子、すなわちＢｂ因子抗体または抗Ｂｂ因子抗体を結合する遺伝子組換え抗体が提供される。この文脈では、以下に記載したとおり、遺伝子組換え技術を用いて、すなわち、遺伝子組換え核酸の発現によって遺伝子組換え抗体を生成することができる。遺伝子組換えタンパク質の生成のための方法及び技術が、当技術分野によく知られている。
【００７５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体が、分離される、または精製される。分離した、または精製した抗体は、通常、その天然状態に関係がある少なくともいくつかの物質が添加されていないものとすることができる（汚染物質）。好ましい実施形態では、汚染物質が、与えられる試料の総重量の約５０重量％未満、さらに好ましくは約２０重量％未満、及びさらに好ましくは約１０重量％未満を占める。いくつかの実施形態では、汚染物質は、タンパク質またはペプチドとしても良い。
【００７６】
純粋タンパク質が、総タンパク質の少なくとも約５０重量％、好ましくは、少なくとも約８０重量％、及び特に好ましくは、少なくとも約９０重量％を含む。多くの実施形態では、精製した抗Ｂｂ因子抗体が、由来する生物以外の生物中で、または生物から生成される。いくつかの実施形態では、抗Ｂｂ因子抗体は、誘導性プロモーターまたは高発現プロモーターを使用して、通常みられる濃度より有意に高い濃度で生成することができ、その結果、抗体が、増大した濃度レベルで生成される。
【００７７】
いくつかの実施形態では、分離または精製した抗体は、抗体の診断及び／または治療用使用を妨げる可能性がある成分から除去することができる。好ましい実施形態では、ローリー法によって測定されるとおり、抗体の９０重量％以上、及び最も好ましくは９９重量％以上で、通常のアミノ酸配列技術（例えば、エドマン分解法及び質量分析法）を使用することによって少なくとも１５残基のＮ−末端または内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、またはクマシーブルーまたは銀染色法を用いて還元または非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一度まで抗体が精製される。抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、分離抗体が、ｉｎ  ｓｉｔｕで、遺伝子組換え細胞内の抗体を含む。しかし、通常、分離抗体が少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
【００７８】
本開示の抗体は、Ｂｂ因子に特異的に結合することができ、Ｂｂ因子の生物活性を抑制または調節するために用いることができる。特定の実施形態では、本開示の抗体が、動物の免疫処置によって生成され、他の場合では、遺伝子組換えＤＮＡ技術によって抗体を生成することができる。さらに別の実施形態では、自然抗体の酵素的または化学的切断によって抗Ｂｂ因子抗体を生成することができる。いくつかの実施形態では、当該抗体が、四量体を含むことができる。これらの実施形態のうちいくつかでは、各四量体が、通常、２つの同一対のポリペプチド鎖からなり、各対が、１つの軽鎖（通常、分子量が約２５ｋＤａである）及び１つの重鎖（通常、分子量が約５０〜７０ｋＤａである）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変部領域を含み、抗原認識を担うことができる。各鎖のカルボキシ末端部分は、不変部領域を定義することができ、主にエフェクター機能を担う。ヒト軽鎖は、κ及びλ軽鎖に分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α、またはεに分類され、当該抗体のイソ型をそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧは、いくつかのサブクラスを有し、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない。
【００７９】
いくつかの自然抗体、例えば、ラクダ及びラマにみられる抗体は、２本の重鎖からなり、軽鎖を含まないニ量体とすることができる。Ｍｕｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２；Ｄｅｓｍｙｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０。ラクダ抗体の結晶学的研究が、これらの抗体のＣＤＲ３領域が抗原と相互作用する表面を形成し、このため、より典型的な四量体抗体中などで抗原結合に重要であることを明らかにした。本開示は、Ｂｂ因子に結合する、及び／またはＢｂ因子の生物活性を抑制することができる２本の重鎖、またはそのフラグメントからなるニ量体抗体を包含する。
【００８０】
本開示の抗体は、Ｂｂ因子タンパク質、好ましくはヒトＢｂ因子に特異的に結合する。標的抗原への結合親和性が、他の抗原またはタンパク質より高い抗体である場合、抗体が標的抗原に特異的に結合することができる。このため、本明細書に記載の抗体は、他のタンパク質への親和性より高い親和性でＢｂ因子に結合する。通常、結合親和性は、平衡結合定数、例えばＫd（またはＫｄ）、またはＫa（またはＫａ）を測定することによって測定される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体が、Ｋｄが、約１０-7Ｍ〜約１０-12Ｍ、または約１０-8Ｍ〜約１０-11Ｍ、または約１０-9Ｍ〜約１０-10Ｍで標的抗原に結合する。ほとんどの場合では、本開示の抗体の非標的抗原とのＫｄは、標的抗原とのＫｄより高くすることができ、例えば、標的とのＫｄは、１０-10Ｍであり、非標的とのＫｄは、１０-8Ｍである。いくつかの場合では、他の抗原とのＫｄが、標的抗原とのＫｄの１Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの２Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの３Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの４Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの５Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの６Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの７Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの８Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの９Ｘ以上、標的抗原とのＫｄの１０Ｘ以上（例えば、抗体のＫｄが標的抗原のＸ-09Ｍである場合、抗体のもう１つの抗原とのＫｄは、１０Ｘ以上、またはＸ-08Ｍとすることができる）、または１００Ｘ以上（例えば、抗体のＫｄが標的抗原のＸ-10Ｍである場合、抗体のもう１つの抗原とのＫｄは、１０Ｘ以上、またはＸ-08Ｍとすることができる）である。いくつかの場合では、平衡結合定数は、平衡会合定数、ＫaまたはＫａとして表すことができる。
【００８１】
平衡結合定数は、さまざまな方法を用いて測定することができる。いくつかの場合では、本開示の抗体の平衡結合定数が、タンパク質結合アッセイでオン（ｋ1）及びオフ（ｋ-1）レートを測定することによって測定される。平衡結合定数を測定する１つの例示的な方法が、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によるものである。ＢＬＩは、溶液中の結合キネティクスを測定することができる無標識技術である。１つの例示的な方法では、抗体はヒトＩｇＧとすることができ、製造者の指示に従って抗−ヒトＩｇＧＦｃキャプチャ（ＡＨＣ）バイオセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって抗体を捕捉することができる。他の型のタンパク質結合アッセイとしては、共免疫沈降；蛍光タンパク質再構成法；親和性電気泳動；プルダウンアッセイ；ラベルトランスファー；酵母ツーハイブリッドスクリーニング法；ファージディスプレイ；光反応性アミノ酸類似体を用いたタンパク質複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ架橋；タンデム親和性精製；化学的架橋；化学的架橋に続いての高質量ＭＡＬＤＩ質量分析法；ＳＰＩＮＥ（ストレップタンパク質相互作用実験）；ノックダウンと組み合わせた定量的免疫沈降；近接連結反応アッセイバイオレイヤー干渉法；二面偏波式干渉法；静的光散乱法；動的光散乱法；表面プラズモン共鳴；蛍光偏光／異方性；蛍光相関分光法；蛍光共鳴エネルギー移動；ＮＭＲ緩和または２Ｄ−ＦＴ分光法データセットの非線形回帰分析と組み合わせたＮＭＲ多核緩和測定によるタンパク質活性測定、または溶液中の２Ｄ−ＦＴ  ＮＭＲ分光法；タンパク質間ドッキング；等温滴定型熱量測定；及び、マイクロスケール熱泳動が挙げられる。
【００８２】
当該抗体が治療用に用いられる実施形態では、Ｂｂ因子抗体の１つの特性が、Ｂｂ因子の１つ以上の生物活性、または、Ｂｂ因子によって媒介される１つ以上の生物活性を調節及び／または抑制することができることである。この場合では、Ｂｂ因子に抗体を特異的に結合することができ、Ｂｂ因子の活性を実質的に調節することができる、及び／またはＢｂ因子の他のタンパク質（例えば、因子Ｃ３）への結合を抑制することができる。いくつかの場合では、当該抗体が、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％以上、Ｂｂ因子のセリンプロテアーゼ活性を抑制することができる。
【００８３】
多くの実施形態では、Ｂｂ因子活性、及びその活性を抑制する当該抗体の能力が、１０％ヒト血清の存在下で赤血球の溶解分析によって測定される。副経路（ＡＰ）の活性化には、古典的経路より高い濃度の血清が必要である。一般に、ＥＧＴＡがＣａ++を優先的にキレートするアッセイでは、５ｍＭのＥＧＴＡの存在下で最終濃度５ｍＭのＭｇ++が用いられる。ほとんどの哺乳動物種のＡＰは、ウサギ赤血球によって自然に活性化され、その結果、都合が良い標的となる。ＧＶＢ０（ＣｏｍｐＴｅｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ）で３回洗浄し、５Ｘ１０8／ｍｌに再懸濁させることによってウサギ赤血球（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）を調製する。ＧＶＢ０で異なる量の抗Ｂｂ因子抗体を希釈した。氷上で、逐次希釈した抗Ｂｂ因子抗体、０．１Ｍ  ＭｇＥＧＴＡ（ＣｏｍｐＴｅｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ）、１／２ＮＨＳ（ＧＶＢ０で１／２に希釈した正常ヒト血清）、及びウサギＥｒの順序で１００ｕｌ反応物を混合する。その後、シェーカー上で、３０分間、３７℃で、反応物をインキュベートする。１．０ｍｌ低温ＧＶＢＥを添加する。混合し、約１０００ｘｇ以上で、３分間、遠心分離機にかけ、細胞をペレットする。１００ｕｌの上澄みを９６−ウエルプレートに移動し、４１２ｎｍ（ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ４．７．１）で読む。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６を用いてデータを分析した。
【００８４】
抗原に特異的に結合する抗体がすべて、その正常リガンドへの抗原結合をブロックし、この結果、抗原の生物学的作用を抑制または調節することができるわけではない。当技術分野に知られているとおり、かかる作用は、抗体が抗原のどの部分に結合するか、並びに抗原及び抗体（この場合では、Ｂｂ因子抗体）の絶対濃度及び相対濃度の両者に依存する可能性がある。本明細書で意味するとおり、Ｂｂ因子の生物活性を抑制または調節することができるのを考慮すると、抗体が、例えば、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％以上、Ｂｂ因子のセリンプロテアーゼ活性またはヒト血清媒介溶血反応を抑制することができる。
【００８５】
Ｂｂ因子の活性を抑制するのに必要な抗体の濃度は、広い範囲で変えることができ、抗体がＢｂ因子に結合する緊密度に依存しても良い。例えば、Ｂｂ因子の１分子当たり１つの分子以下の抗体は、生物活性を抑制するのに十分なものとすることができる。いくつかの実施形態では、約２：１、１：１、１：２、１：４、１：６、１：８、１：１０、１：２０、１：４０、１：６０、１：１００、１：５００、１：１，０００以上を含む、約１，０００：１〜約１：１，０００のＢｂ因子抗体の割合が、Ｂｂ因子の生物活性を抑制するのに必要なものとすることができる。多くの場合では、Ｂｂ因子の活性を抑制する能力が、Ｂｂ因子の濃度及び／またはＢｂ因子抗体の濃度に依存しても良い。
【００８６】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体が、（ａ）足場、及び（ｂ）１つまたは複数のＣＤＲ、抗原結合特異性及び親和性に限定的な領域を含む。相補性決定領域つまりＣＤＲは、抗原結合の大半の表面接触点を占める抗体の領域である。１つ以上のＣＤＲが、抗体の足場構造に組み込まれている。本開示の抗体の足場構造は、抗体、またはフラグメントまたはこれらの変異体のフレームワークとすることができる、または本質的に完全に合成とすることができる。本開示の抗体のさまざまな足場構造は、さらに本明細書に記載されている。
【００８７】
本明細書に開示した抗体の好ましい実施形態では、当該抗体は、親抗体のアミノ酸配列と少なくとも７５％アミノ酸配列同一性または類似性を有するアミノ酸配列を有する変異体抗体とすることができる。例えば、いくつかの実施形態では、変異体抗体の重または軽鎖可変ドメイン配列が、親抗体の重または軽鎖可変ドメイン配列と７５％同一、さらに好ましくは少なくとも８０％同一、さらに好ましくは少なくとも８５％同一、さらに好ましくは少なくとも９０％同一、及び最も好ましくは少なくとも９５％同一である。ほとんどの場合では、変異体抗体が、ＣＤＲ配列とほとんど変化がない、または変化がない。このため、変異体抗体は、ほとんどの場合では、親和性がほぼ同じ標的抗原に結合する。この配列に関しての同一性または類似性が、必要であれば、最大パーセント配列同一性を実現するために、配列をアラインし、ギャップを導入した後に、親抗体のアミノ酸配列と同一（すなわち、同じ残基）または類似（すなわち、共通の側鎖特性に基づいた同じグループからのアミノ酸残基、以下を参照）である変異体配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書に定義される。Ｎ−末端、Ｃ−末端または可変ドメイン外の抗体配列への内部伸長、欠失、または挿入が、配列同一性または類似性に影響を及ぼすと解釈されない。
【００８８】
ＣＤＲ
本開示の抗体は、足場領域及び１つ以上のＣＤＲを含む。本開示の抗体は、１つ〜６つのＣＤＲ（通常、自然抗体である）、例えば、１つの重鎖ＣＤＲ１（「ＨＣ  ＣＤＲ１」または「ＨＣ  ＣＤＲ１」）、及び／または１つの重鎖ＣＤＲ２（「ＨＣ  ＣＤＲ２」または「ＨＣ  ＣＤＲ２」）、及び／または１つの重鎖ＣＤＲ３（「ＨＣ  ＣＤＲ３」または「ＨＣ  ＣＤＲ３」）、及び／または１つの軽鎖ＣＤＲ１（「ＬＣ  ＣＤＲ１」または  「ＬＣ  ＣＤＲ１」）、及び／または１つの軽鎖ＣＤＲ２（「ＬＣ  ＣＤＲ２」または「ＬＣ  ＣＤＲ２」）、及び／または１つの軽鎖ＣＤＲ３（「ＬＣ  ＣＤＲ３」または「ＬＣ  ＣＤＲ３」）を有しても良い。用語「自然の」は、明細書全体にわたって生物材料、例えば、ポリペプチド、核酸、宿主細胞などと関連して用いられる場合、自然にみられる材料を指す。自然抗体では、重鎖ＣＤＲ１が、通常、約５（５）〜約７（７）のアミノ酸を含み、重鎖ＣＤＲ２が、通常、約１６（１６）〜約１９（１９）のアミノ酸を含み、重鎖ＣＤＲ３通常が、約３（３）〜約２５（２５）のアミノ酸を含む。軽鎖のＣＤＲ１が、通常、約１０（１０）〜約１７（１７）のアミノ酸を含み、軽鎖ＣＤＲ２が、通常、約７（７）のアミノ酸を含み、軽鎖ＣＤＲ３が、通常、約７（７）〜約１０（１０）のアミノ酸を含む。
【００８９】
本開示のアミノ酸が、天然及び合成アミノ酸（例えば、ホモフェニルアラニン、シトルリン、オルニチン、及びノルロイシン）を含む。特に抗体が、当技術分野でよく知られる従来の方法によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成される場合、かかる合成アミノ酸を組み入れることができる。また、ペプチド模倣、合成及び自然残基／構造の任意の組み合わせを用いることができる。アミノ酸には、イミノ酸残基、例えば、プロリン及びヒドロキシプロリンが含まれる。アミノ酸「Ｒ基」または「側鎖」は、（Ｌ）−配置または（Ｓ）−配置のいずれかとすることができる。特定の実施形態では、アミノ酸は、（Ｌ）−配置または（Ｓ）−配置である。いくつかの実施形態では、アミノ酸が、ペプチド模倣構造、すなわち、ペプチドまたはタンパク質類似体、例えば、ペプトイド（Ｓｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：９３６７を参照、参照により本明細書に組み入れられる）を形成することができ、プロテアーゼまたは他の生理学的及び／または保存状態に対して耐性がある可能性がある。
【００９０】
自然抗体内のＣＤＲの構造及び特性は、さらに以下に記載されている。簡潔にいうと、従来の抗体足場では、ＣＤＲが、抗原結合及び認識を担う領域の一部をなす重及び軽鎖可変部領域中のフレームワーク内に組み込まれている。可変部領域が、フレームワーク領域（１９９１年にＫａｂａｔらによって示されたフレームワーク領域１〜４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、１９８７も参照）内に少なくとも３つの重または軽鎖ＣＤＲを含む（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３も参照）。しかし、本開示によって提供されるＣＤＲは、本明細書に記載のとおり、従来の抗体構造の抗原結合ドメインを定義するために用いても良いだけでなく、さまざまな他の足場構造に組み込むことができる。
【００９１】
改変されると、抗Ｂｂ因子抗体の結合親和性を変化させるＣＤＲ配列中のアミノ酸位置を特定するためにアラニンスキャニングを用いた。
【００９２】
本開示の抗体に用いられる特定のＣＤＲが、表１に示されており、アンダーラインを引いたアミノ酸が、アラニンへの置換により、実質的に結合が低下したアミノ酸である。
2020078304.tif 000003
【００９３】
Ｂ因子、Ｂａ因子及びＢｂ因子の配列は、表２に示されている。
2020078304.tif 000004
2020078304.tif 000005
【００９４】
もう１つの実施形態では、本開示は、Ｂｂ因子（配列番号７）を結合する抗体を提供し、前記抗体が、配列番号１〜３または配列番号１８〜２０のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている少なくとも１つのＨＣ  ＣＤＲ領域、及び／または配列番号４〜６または配列番号２１〜２３のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている少なくとも１つのＬＣ  ＣＤＲ領域を含む。本開示のさまざまな重鎖及び軽鎖可変部領域が、表３及び配列番号８〜１５または配列番号２４〜３１に示されている。いくつかの実施形態では、ＨＣ  ＣＤＲ３またはＬＣ  ＣＤＲ３領域を有する抗体が特に用いられる。さらに、いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号１〜３または配列番号１８〜２０のいずれかのＨＣ  ＣＤＲ領域から選択される配列の２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている１つのＣＤＲ及び配列番号４〜６または配列番号２１〜２３のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失、または置換されているＬＣ  ＣＤＲを有することができる（例えば、抗体が、２つのＣＤＲ領域、１つのＨＣ  ＣＤＲ及び１つのＬＣ  ＣＤＲ、を有し、特定の実施形態では、抗体がＨＣ  ＣＤＲ３及びＬＣ  ＣＤＲ３の両者、例えば、配列番号３及び６を有する）。
2020078304.tif 000006
2020078304.tif 000007
2020078304.tif 000008
【００９５】
変異体ＣＤＲ配列
さらに本開示の１つの態様が、Ｂｂ因子を結合する分離抗体を提供し、当該分離抗体が、配列番号１２〜１５または配列番号２８〜３１のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている重鎖アミノ酸配列、または配列番号８〜１１または配列番号２４〜２７のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００９６】
さらに本開示の１つの態様が、Ｂｂ因子を結合する分離抗体を提供し、当該分離抗体が、配列番号１２〜１５または配列番号２８〜３１のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８〜１１または配列番号２４〜２７のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている軽鎖アミノ酸配列を含む。重鎖配列のいずれかと、軽鎖配列のいずれかを混合し、適合させることができることを明記する。
【００９７】
もう１つの実施形態では、本開示が、Ｂｂ因子を結合する抗体を提供し、前記抗体が、配列番号１〜３または配列番号１８〜２０のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、またはＨＣ  ＣＤＲ３領域（前記に記載したとおり）のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている少なくとも１つのＨＣ  ＣＤＲ領域及び／または配列番号４〜６または配列番号２１〜２３のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、またはＬＣ  ＣＤＲ３領域（前記に記載したとおり）のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている少なくとも１つのＬＣ  ＣＤＲ領域を含む。この実施形態では、ＨＣ  ＣＤＲ３またはＬＣ  ＣＤＲ３領域を有する抗体が特に用いられる。さらに、実施形態では、配列番号１〜３または配列番号１８〜２０のいずれかのＨＣ  ＣＤＲ領域から選択される配列の２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている１つのＣＤＲ、及び配列番号４〜６または配列番号２１〜２３のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失、または置換されているＬＣ  ＣＤＲ領域を有する抗体が、用いられる（例えば、抗体が、２つのＣＤＲ領域、１つのＨＣ  ＣＤＲ及び１つのＬＣ  ＣＤＲを有し、特定の実施形態では、抗体がＨＣ  ＣＤＲ３及びＬＣ  ＣＤＲ３領域の両者、例えば、配列番号３及び６を有する）。
【００９８】
当業者が理解するとおり、示した配列からの１つ以上のＣＤＲを有する抗体では、示した配列から独立して選択されるＣＤＲの組み合わせが有用である。このため、１、２、３、４、５または６つの独立して選択されるＣＤＲを有する抗体を生成することができる。しかし、当業者が理解するとおり、特定の実施形態では、一般に、例えば、抗体が一般に２つのＨＣ  ＣＤＲ２領域などで生成されない、非反復型であるＣＤＲの組み合わせが用いられる。
【００９９】
さらに本開示の１つの態様が、Ｂｂ因子を結合する分離抗体を提供し、当該分離抗体が、配列番号１２〜１５または配列番号２８〜３１のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている重鎖アミノ酸配列、または配列番号８〜１１または配列番号２４〜２７のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている軽鎖アミノ酸配列を含む。
【０１００】
さらに本開示の１つの態様が、Ｂｂ因子を結合する分離抗体を提供し、当該分離抗体が、配列番号１２〜１５または配列番号２８〜３１のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８〜１１または配列番号２４〜２７のいずれかの２つ（２）以下のアミノ酸が付加、欠失または置換されている軽鎖アミノ酸配列を含む。重鎖配列のいずれかと、軽鎖配列のいずれかを混合し、適合させることができることを明記する。
【０１０１】
一般に、本明細書に記載した個々の変異体ＣＤＲ間のアミノ酸相同性、類似性、または同一性は、本明細書に開示した配列と比べて少なくとも８０％である。多くの場合では、ａａ相同性、類似性、または同一性が、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、及び９９％である。
【０１０２】
配列同一性／相同性
当技術分野に知られているとおり、タンパク質または核酸が公知の配列を有する配列同一性または類似性の程度を特定するために多くのさまざまなプログラムを用いることができる。
【０１０３】
アミノ酸配列では、当技術分野で知られる標準的技術を用いることによって配列同一性及び／または類似性が測定される。標準的技術としては、ローカル配列同一性アルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ、１９８１、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２）、配列同一性アラインメントアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３）、類似性サーチ方法（Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４）、これらの  アルゴリズムのコンピューターによる実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及び  ＴＦＡＳＴＡ）、ベストフィット配列プログラム（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１２：３８７−３９５によって示された）が挙げられるが、これらに限定されず、好ましくはデフォルト設定を用いる、またはインスペクションによるものとする。好ましくは、パーセント同一性が、以下のパラメーター：ミスマッチペナルティ１；ギャップペナルティ１；ギャップサイズペナルィ０．３３；及びジョイニングペナルティ３０に基づくＦａｓｔＤＢによって計算される（「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐｐ  １２７−１４９（１９８８）、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．）。
【０１０４】
有用なアルゴリズムの例が、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、プログレッシブ、ペアワイズアラインメントを用いて関連配列のグループから複数の配列アラインメントを生成する。これは、また、アラインメントを生成するために用いられるクラスタリング関係を示すツリーをプロットすることができる。ＰＩＬＥＵＰは、プログレッシブアラインメント法の単純化を用いる（Ｆｅｎｇ＆Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０）；当該方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３に記載されたものとほぼ同じである。有用なＰＩＬＥＵＰパラメーターとしては、デフォルトギャップウエイト３．００、デフォルトギャップレングスウエイト０．１０、及びウェイティッドエンドギャップが挙げられる。
【０１０５】
有用なアルゴリズムのもう１つの例が、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；及びＫａｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３−５７８７に記載されている。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムが、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０から得たＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２プログラムである。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、いくつかのサーチパラメーターを用い、そのほとんどがデフォルト値に設定される。調整可能パラメーターが、タンパク質の以下の値で設定される：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワードスレショールド、Ｔ＝１１。ＨＳＰ  Ｓ及びＨＳＰ  Ｓ２パラメーターは、動的値であり、特定の配列の組成物及び対象の配列がサーチされる特定のデータベースの組成物に応じてプログラムそのものによって定められる；しかし、この値は、感度を増大するように調整することができる。
【０１０６】
さらに、有用なアルゴリズムが、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２によって報告されたとおり、ギャップドＢＬＡＳＴである。ギャップドＢＬＡＳＴは、ＢＬＯＳＵＭ−６２置換スコアを用いる；スレショールドＴパラメーターを９に設定；ツーヒット法が非ギャップエクステンションをトリガーし、ギャップレングスｋに１０＋ｋのコストをチャージ；Ｘuを１６に設定しアルゴリズムのデータベースサーチステージのためにＸgを４０に設定し、アウトプットステージのためにＸgを６７に設定。ギャップドアラインメントは、約２２ビットに対応するスコアによってトリガーされる。
【０１０７】
一般に、個々の変異体ＣＤＲまたは可変部領域間のアミノ酸相同性、類似性、または同一性は、本明細書に示した配列に対して少なくとも８０％であり、さらに、通常、好ましくは相同性または同一性が、少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、及びほぼ１００％増大している。
【０１０８】
同様に、パーセント（％）核酸配列同一性は、本開示の抗体の核酸配列に関して、抗体のコード配列中のヌクレオチド残基と同一である候補配列中のヌクレオチド残基のパーセンテージである。特定の方法では、デフォルトパラメーターに設定され、オーバーラップスパン及びオーバーラップフラクションがそれぞれ１及び０．１２５に設定されたＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２のＢＬＡＳＴＮモジュールが用いられる。
【０１０９】
一般に、個々の変異体ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列及び変異体可変ドメイン配列間の核酸配列相同性、類似性、または同一性は、少なくとも８０％であり、さらに通常、好ましくは、相同性または同一性が、少なくとも８５％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、及びほぼ１００％増大している。多くの場合では、非同一の核酸配列が、遺伝子コードの縮重のために、同じアミノ酸配列をコードすることができる。
【０１１０】
ヌクレオチド配列間の相同性は、互いにハイブリダイズする能力によって定義されることが多い。いくつかの実施形態では、選択的ハイブリダイゼーションが、特異性が高い結合を指すことができる。本開示に従ったポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド及びこれらのフラグメントが、測定可能な量の非特異的核酸への検出可能結合を最少化するハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、核酸ストランドに選択的にハイブリダイズする。当技術分野に知られ、本明細書に記載されたとおり、高ストリンジェンシィ条件を用いて選択的ハイブリダイゼーション条件を実現することができる。
【０１１１】
ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシィは、当業者が容易に確かめることができ、一般に、プローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存した経験的計算である。一般に、適切なアニーリングにはプローブが長いほど高い温度が必要であり、プローブが短いほど低い温度が必要である。相補ストランドがその融解温度以下の環境に存在する場合、ハイブリダイゼーションは、一般に、変性ＤＮＡの再アニーリングする能力に依存する。プローブ及びハイブリダイズ可能配列間の所望の相同性の程度が高いほど、高い相対温度を用いることができる。その結果、相対温度が高い方が、反応条件のストリンジェンシィが増す傾向があり、温度が低いと、ストリンジェンシィが減るということになる。さらにハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシィの詳細及び説明には、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、（１９９５）を参照。
【０１１２】
高いストリンジェンシィ条件は、当技術分野で知られている；例えば、前記のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、、及びＳｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２を参照。両者とも参照により本明細書に組み入れられる。ストリンジェント条件は、配列に依存し、異なる環境では異なる。配列が長いほど、高い温度で特異的にハイブリダイズされる。核酸のハイブリダイゼーションについての広範囲にわたるガイドが、Ｔｉｊｓｓｅｎ、Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ−−Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｐｒｏｂｅｓ、「Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ａｓｓａｙｓ」（１９９３）にみられる。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、ストリンジェント条件または高ストリンジェンシィ条件は、以下によって特定することができる：（１）洗浄に低イオン強度及び高い温度を用いる、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウム；（２）ハイブリダイゼーション中に変性剤を用いる、例えば、ホルムアミド、例えば、０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液と、ｐＨ６．５で、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムと４２Ｃで、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミド；または（３）４２℃で、５０％ホルムアミド、５ＸＳＳＣ（０．７５ＭＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５Ｘデンハート溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０．ｍｕ．ｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％硫酸デキストランを用い、４２℃で、０．２ＸＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中で洗浄し、５５℃で、５０％ホルムアミド中で洗浄し、その後、５５℃で、０．１ＸＳＳＣ含有ＥＤＴＡからなる高ストリンジェンシィ洗浄を行う。
【０１１４】
一般に、ストリンジェント条件は、規定イオン強度及びｐＨで特定の配列に対して融点（Ｔｍ）よりも約５〜１０℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的配列に相補的なプローブの５０％が、平衡で（標的配列が過剰に存在するため、Ｔｍでは、プローブの５０％が、平衡で占められる）標的配列にハイブリダイズする温度（規定イオン強度、ｐＨ及び核酸濃度のもとで）である。ストリンジェント条件は、塩濃度が、ｐＨ７．０〜８．３で約１．０Ｍ未満のナトリウムイオン濃度、通常、約０．０１〜１．０Ｍナトリウムイオン濃度（または他の塩）であり、温度が、ショートプローブ（例えば、１０〜５０ヌクレオチド）では、少なくとも約３０℃であり、ロングプローブ（例えば、以上５０ヌクレオチド）では少なくとも約６０℃である条件である。ストリンジェント条件は、また、脱安定剤、例えば、ホルムアミドを添加して実現しても良い。
【０１１５】
もう１つの実施形態では、低ストリンジェントハイブリダイゼーション条件が用いられる；例えば、当技術分野で知られているとおり、中等度または低ストリンジェンシィ条件を用いることができる；前記のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；前記のＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２及び前記のＴｉｊｓｓｅｎ、１９９３、を参照。
【０１１６】
いくつかの場合では、中等度ストリンジェント条件が、洗浄溶液の使用及び前記に記載したものより低ストリンジェントのハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度及び％ＳＤＳ）を含むことができる。中等度ストリンジェント条件の１つの例が、２０％ホルムアミド、５ＸＳＳＣ（１５０ｍＭＮａＣｌ、１５ｍＭトリクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５Ｘデンハート溶液、１０％硫酸デキストラン、及び２０ｍｇ／ｍＬ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中で、３７℃で一晩インキュベーションし、その後、１ＸＳＳＣ中で、約３７〜５０℃でフィルターを洗浄することである。当業者であれば、温度、イオン強度などの調節方法、必要に応じて、因子、例えば、プローブ長などの適応方法を理解するであろう。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体及びその変異体は、抗体をコードするＤＮＡ配列内のヌクレオチドの部位特異的突然変異誘発によって調製することができる。これは、本明細書に示したとおり、カセットまたはＰＣＲ突然変異誘発または当技術分野でよく知られる他の技術を用いて、変異体をコードするＤＮＡを生成し、その後、細胞培養中で遺伝子組換えＤＮＡを発現させて、実現することができる。いくつかの場合では、確立した技術を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ合成によって、最大約１００〜１５０残基を有する変異体ＣＤＲを含む抗体フラグメントを調製することができる。以下にさらに詳細に示したとおり、変異体は、また、改変した特性を有するものから選択することができるが、これらの変異体フラグメントは、自然類似体と同じ定性的生物活性、例えば、Ｂｂ因子への結合を示し、補体を抑制することができる。
【０１１８】
アミノ酸配列変異を導入するための部位または領域は、あらかじめ定められるが、変異それ自体は、あらかじめ定める必要はない。例えば、所与の部位で変異を最適化するために、最適の所望の抗体活性をスクリーニングした標的コドンまたは領域及び発現抗体ＣＤＲまたは可変部領域配列変異体で、ランダム突然変異誘発を実施することができる。公知の配列を有するＤＮＡ中の所定の部位で置換変異を生じさせる技術がよく知られており、例えば、Ｍ１３プライマー突然変異誘発及びＰＣＲ突然変異誘発である。抗体活性、例えば、Ｂｂ因子結合のアッセイを用いて、変異体がスクリーニングされる。
【０１１９】
アミノ酸置換は、通常、単一残基のアミノ酸置換である；かなり大きな挿入を許容することができるが、挿入は、通常、約１（１）〜約２０（２０）のアミノ酸残基程度である。いくつかの場合では、欠失はさらに大きくすることができるが、欠失の範囲は、約１（１）〜約２０（２０）のアミノ酸残基である。
【０１２０】
最終誘導体または変異体に達するように、置換、欠失、挿入またはこれらの任意の組み合わせを用いることができる。一般に分子の変質、特に抗体の免疫原性及び特異性を最小化するために、いくつかのアミノ酸でこれらの変化が行われる。しかし、特定の環境では、さらに大きな変化を許容することができる。保存的置換は、一般に、表４に示した以下の図表に従って行われる。
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【０１２１】
表４に示したものより保存的ではない置換を選択することによって、機能または免疫同一性の変化を生じさせることができる。例えば、変質の範囲中のポリペプチド主鎖の構造、例えば、αヘリックス構造またはβシート構造；標的部位の分子の電荷または疎水性；または側鎖の容積にさらに有意に影響を及ぼす置換を生じさせることができる。一般的にポリペプチドの特性に最も大きな変化を生じさせると予測される置換は、（ａ）親水性残基、例えば、セリルまたはトレオニルが、疎水性残基、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリルまたはアラニルに（またはこれらによって）置換される；（ｂ）システインまたはプロリンが、他の残基に（またはこれによって）置換される；（ｃ）陽電性側鎖、例えば、リシル、アルギニル、またはヒスチジルを有する残基、が陰電性残基、例えば、グルタミルまたはアスパルチルに（またはこれらによって）置換される；または（ｄ）巨大側鎖、例えば、フェニルアラニンを有する残基が、側鎖を有しない残基、例えば、グリシンに（またはこれらによって）置換されるものである。
【０１２２】
変異体は、また、必要に応じて、本開示のＢｂ因子抗体の特性を改変するように選択されるが、変異体は、通常、自然類似体と同じ定性的生物活性を示し、同じ免疫反応を誘発する。代わりに、本開示の抗体の生物活性を変化させる変異体を選択することができる。例えば、本明細書に記載したとおり、グリコシル化部位を変化させる、または除去することができる。
【０１２３】
ポリペプチド配列相同である配列番号１〜６及び８〜１５並びに配列番号１８〜２３及び配列番号２４〜３１が、本明細書に開示される。本明細書に開示したポリペプチドは、開示したアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含むことができる。他の場合では、クレームされているポリペプチドが、開示した配列と比べて保存的アミノ酸置換を含むことができるアミノ酸配列を含む。保存的アミノ酸置換は、置換アミノ酸と特性を共有するアミノ酸を含むことができる。さまざまな場合では、ポリペプチドの構造または機能の有意な変化なしで、保存的置換を生じさせることができる。
【０１２４】
側鎖、サイズ、電荷、疎水性、親水性、等電点などの相対的類似性に基づいて保存的アミノ酸置換を生じさせることができる。さまざまな場合では、通常の試験によって、タンパク質の機能への作用について置換を分析することができる。アミノ酸は、アミノ酸の疎水性及び電荷に基づくことができる疎水親水指数を有するため、保存アミノ酸置換は、親水性の値がほぼ同じアミノ酸を含む。さまざまな場合では、同じクラスのアミノ酸、例えば、非極性アミノ酸、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、及び中性アミノ酸間で保存アミノ酸置換を生じさせることができる。保存的置換は、また、サイズまたは容積に基づくものとすることができる。アミノ酸は、また、所与の構造、例えば、αヘリックス、βシート、または分子内または分子間相互作用を形成または切断する能力に基づいて分類することができる。さまざまな場合では、保存的アミノ酸置換は、１つ以上の特性に基づく。
【０１２５】
本明細書に開示したポリペプチドは、自然及び非自然アミノ酸を含むことができる。さまざまな場合では、非自然側鎖で自然アミノ酸側鎖を置換することができる。さまざまな場合では、アミノ酸を誘導体化することができる。
【０１２６】
本開示のポリペプチドは、配列番号１〜６及び８〜１５並びに配列番号１８〜３１の配列と相同であるポリペプチドを含む。相同性は、％同一性または％類似性または％陽性として表すとができる。さまざまな場合では、％同一性は、２つのアラインしたポリペプチド間で同一であるアミノ酸のパーセンテージであり、％類似性または％陽性は、同一でないが、保存的置換を示すアミノ酸のパーセンテージである。保存的置換は、電荷が同じアミノ酸、サイズが同じアミノ酸、極性が同じアミノ酸などの置換としても良い。例えば、リジンからアルギニンは、電荷を考慮すると、保存的置換と考えることができる。
【０１２７】
さまざまな場合では、アルゴリズム、例えばＢＬＡＳＴｐによって、２つのポリペプチドをアラインすることができる。さまざまな場合では、２つのポリペプチドの長い方の長さと比べて等しい、より長い、またはより短い最大標的配列長で、ＢＬＡＳＴｐパラメーターを設定することができ、予測スレショールドを１０に設定し、ワードサイズを３に設定することができ、エグジステンス１１及びエクステンション１のギャップコストとし、スコアマトリックスをＢＬＯＳＵＭ６２とすることができる。ＢＬＡＳＴｐにより、アラインしたポリペプチドの相同性を「同一性」及び「陽性」として報告することができる。アラインした配列は、アラインメントを実現するためにギャップを含むことができる。
【０１２８】
さまざまな場合では、アミノ酸配列の相同性は、前記に記載したとおり、最適にアラインした場合、同一性または陽性のパーセンテージを反映する可能性がある。さまざまな場合では、比較ウィンドウ内のアラインしたアミノ酸の数を割ることによって％相同性（％陽性）または％同一性を計算することができる。２つのポリペプチドの長さが等しくない場合、比較ウィンドウは、ポリペプチドの一方または他方の全長とすることができる。他の場合では、比較ウィンドウは、ポリペプチドの一方の一部とすることができる。さまざまな場合では、２つのポリペプチド配列の相同性または同一性を測定するための比較ウィンドウは、約４０以上のａａ（アミノ酸）、４５以上のａａ、５０以上のａａ、５５以上のａａ、６０以上のａａ、６５以上のａａ、７０以上のａａ、７５以上のａａ、８０以上のａａ、８５以上のａａ、９０以上のａａ、９５以上のａａ、１００以上のａａ、１５０以上のａａ、または２００以上のａａ、及び／または約２００未満のａａ、１５０未満のａａ、１００未満のａａ、９５未満のａａ、９０未満のａａ、８５未満のａａ、８０未満のａａ、７５未満のａａ、７０未満のａａ、６５未満のａａ、６０未満のａａ、５５未満のａａ、５０未満のａａ、または４５未満のａａである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ配列を有する場合、比較ウィンドウは、４０未満のａａ、例えば約２５未満のａａ、２４未満のａａ、２３未満のａａ、２２未満のａａ、２１未満のａａ、２０未満のａａ、１９未満のａａ、１８未満のａａ、１７未満のａａ、１６未満のａａ、１５未満のａａ、１４未満のａａ、１３未満のａａ、１２未満のａａ、１１未満のａａ、１０未満のａａ、９未満のａａ、８未満のａａ、７未満のａａ、６未満のａａ、５未満のａａ、または４未満のａａと、約３以上のａａ、４以上のａａ、５以上のａａ、６以上のａａ、７以上のａａ、８以上のａａ、９以上のａａ、１０以上のａａ、１１以上のａａ、１２以上のａａ、１３以上のａａ、１４以上のａａ、１５以上のａａ、１６以上のａａ、１７以上のａａ、１８以上のａａ、１９以上のａａ、２０以上のａａ、２１以上のａａ、２２以上のａａ、２３以上のａａ、または２４以上とのａａの間としても良い。
【０１２９】
さまざまな場合では、クレームされているアミノ酸配列は、％同一性または％相同性（％陽性）が、所与の比較ウィンドウに対して、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上、及び／または約１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８５％、８０％、７５％、または７０％未満であるものとすることができる。
【０１３０】
さまざまな場合では、動的、ローカル、及びグローバルアラインメントを含むさまざまなアルゴリズムを用いて、配列アラインメントを実施することができる。例えば、ｔｈｅ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｏｆ  Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ、１９８１、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ  ２：４８２；ｔｈｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｏｆ  Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３；ｔｈｅ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４を参照。さまざまな場合では、コンピュータープログラムにより、これらのアルゴリズム（例えば、ＥＭＢＯＳＳ、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＴＦＡＳＴＡＢＬＡＳＴ、ＢＬＯＳＵＭなど）を実行することができる。
【０１３１】
別の場合では、アミノ酸残基を、例えば、非極性、酸性、塩基性及び中性クラス（以下のとおり：非極性：Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；塩基性：Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ；中性：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ）にアミノ酸を分割する同じクラス中のもう１つのアミノ酸残基に置換して、保存アミノ酸置換を生じさせることができる。
【０１３２】
いくつかの場合では、アミノ酸残基を親水性の値がほぼ同じ（例えば、値がプラスまたはマイナス２．０以内）もう１つのアミノ酸残基に置換して、保存アミノ酸置換を生じさせることができる。疎水親水指数が約−１．６のアミノ酸、例えば、Ｔｙｒ（−１．３）またはＰｒｏ（−１．６）が、アミノ酸残基：Ａｒｇ（＋３；０）；Ｌｙｓ（＋３．０）；Ａｓｐ（＋３．０）；Ｇｌｕ（＋３．０）；Ｓｅｒ（＋０．３）；Ａｓｎ（＋０．２）；Ｇｉｎ（＋０．２）；Ｇｌｙ（Ｏ）；Ｐｒｏ（−０．５）；Ｔｈｒ（−０．４）；Ａｌａ（−０．５）；Ｈｉｓ（−０．５）；Ｃｙｓ（−１．０）；Ｍｅｔ（−１．３）；Ｖａｌ（−１．５）；Ｌｅｕ（−１．８）；Ｉｌｅ（−１．８）；Ｔｙｒ（−２．３）；Ｐｈｅ（−２．５）；及びＴｒｐ（−３．４）に対応付けられる。
【０１３３】
別の場合では、アミノ酸残基を疎水親水指数がほぼ同じ（例えば、値がプラスまたはマイナス２．０以内）もう１つのアミノ酸残基に置換して、保存アミノ酸置換を生じさせることができる。このような場合では、各アミノ酸残基は、以下のとおり、その疎水性及び電荷特性に基づいて疎水親水指数に対応付けすることができる：ｌｉｅ（＋４．５）；Ｖａｌ（＋４．２）；Ｌｅｕ（＋３．８）；Ｐｈｅ（＋２．８）；Ｃｙｓ（＋２．５）；Ｍｅｔ（＋１．９）；Ａｌａ（＋１．８）；Ｇｌｙ（−０．４）；Ｔｈｒ（−０．７）；Ｓｅｒ（−０．８）；Ｔｒｐ（−０．９）；Ｔｙｒ（−１．３）；Ｐｒｏ（−１．６）；Ｈｉｓ（−３．２）；Ｇｌｕ（−３．５）；Ｇｌｎ（−３．５）；Ａｓｐ（−３．５）；Ａｓｎ（−３．５）；Ｌｙｓ（−３．９）；及びＡｒｇ（−４．５）。
【０１３４】
別の場合では、保存的アミノ酸変化が、親水性または疎水性、サイズまたは容積、または電荷の考慮に基づいた変化を含む。アミノ酸は、一般に、主にアミノ酸側鎖の特性に応じて、疎水性または親水性と特徴付けることができる。Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇらの標準化コンセンサス疎水性スケール（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．１７９：１２５−１４２、１８４）に基づいて、疎水性アミノ酸は、０を越える疎水性を示し、親水性アミノ酸は、０未満の親水性を示す。遺伝的コード化疎水性アミノ酸としては、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｌｉｅ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ及びＴｒｐが挙げられ、遺伝的コード化親水性アミノ酸としては、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、及びＬｙｓが挙げられる。非遺伝的コード化疎水性アミノ酸としては、ｔ−ブチルアラニンが挙げられ、非遺伝的コード化親水性アミノ酸としては、シトルリン及びホモシステインが挙げられる。
【０１３５】
疎水性または親水性アミノ酸は、その側鎖の特性に基づいてさらに細分することができる。例えば、芳香族アミノ酸は、少なくとも１つの芳香族または複素環式芳香族環を含有する側鎖を有する疎水性アミノ酸であり、１つ以上の置換基、例えば、−−ＯＨ、−−ＳＨ、−−ＣＮ、−−Ｆ、−−Ｃｌ、−−Ｂｒ、−−Ｉ、−−ＮＯ2、−−ＮＯ、−−ＮＨ2、−−ＮＨＲ、−−ＮＲＲ、−−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−−Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、−−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ、−−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、などを含有することができ、式中、Ｒが、独立して（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、置換される（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ0−Ｃ6）アルケニル、置換される（Ｃ1−Ｃ6）アルケニル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキニル、置換される（Ｃ0−Ｃ6）アルキニル、（Ｃ5−Ｃ20）アリール、置換される（Ｃ0−Ｃ20）アリール、（Ｃ6−Ｃ26）アルカリール、置換される（Ｃ6−Ｃ26）アルカリール、５〜２０員環ヘテロアリール、置換される５〜２０員環ヘテロアリール、６〜２６員環アルクヘテロアリールまたは置換される６〜２６員環アルクヘテロアリールである。遺伝的コード化芳香族アミノ酸としては、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、及びＴｒｐが挙げられる。
【０１３６】
非極性または無極アミノ酸は、生理学的ｐＨで荷電していない側鎖、及び２個の原子によって共有される１対の電子が、一般に２個の原子のそれぞれによって均一に保持される結合を有する側鎖（すなわち、側鎖は、極性ではない）を有する疎水性アミノ酸である。遺伝的コード化無極アミノ酸としては、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、及びＭｅｔが挙げられる。無極アミノ酸は、さらに細分することができ、脂肪族アミノ酸を含み、脂肪族炭化水素側鎖を有する疎水性アミノ酸である。遺伝的コード化脂肪族アミノ酸としては、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、及びＩｌｅが挙げられる。
【０１３７】
極性アミノ酸は、生理学的ｐＨで荷電していないが、２個の原子によって共有される１対の電子がさらにその原子の１つによって緊密に保持される１つの結合を有する側鎖を有する親水性アミノ酸である。遺伝的コード化極性アミノ酸としては、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、及びＧｌｎが挙げられる。
【０１３８】
酸性アミノ酸は、側鎖ｐＫａ値が７未満である親水性アミノ酸である。酸性アミノ酸は通常、水素イオン欠失のため、生理学的ｐＨで陰性荷電側鎖を有する。遺伝的コード化酸性アミノ酸としては、Ａｓｐ及びＧｌｕが挙げられる。塩基性アミノ酸は、側鎖ｐＫａ値が７以上である親水性アミノ酸である。塩基性アミノ酸は、通常、ヒドロニウムイオンとの結合のため、生理学的ｐＨで陽性荷電側鎖を有する。遺伝的コード化塩基性アミノ酸としては、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、及びＨｉｓが挙げられる。
【０１３９】
％アミノ酸配列同一性の値は、比較ウィンドウ中の一致した同一残基の数を「より長い」配列の残基の総数で割ることによって測定される。「より長い」配列は、比較ウィンドウ中で最も多い実際の残基を有する配列である（アラインメントスコアを最大化するためにＷＵ−Ｂｌａｓｔ−２によって導入されるギャップは無視する）。
【０１４０】
アラインメントは、アラインされる配列中のギャップの導入を含むことができる。また、本開示のポリペプチドの配列によってコードされるタンパク質より多いまたは少ないアミノ酸を含有する配列では、１つの場合では、配列同一性のパーセンテージは、アミノ酸の総数に対する同一アミノ酸の数に基づいて測定されると理解される。パーセント同一性の計算では、比重は、配列変異のさまざまな発現、例えば、挿入、欠失、置換などに対応付けられない。
【０１４１】
１つの場合では、同一性だけを陽性（＋１）とつけ、ギャップを含む配列変異の全形態は、値「０」に対応付けられ、以下に記載したとおり、配列類似性計算のためのスケールまたはパラメーターの重み付けの必要性を除去する。パーセント配列同一性は、例えば、アラインした領域中の一致した同一残基の数を「より短い」配列の残基の総数で割り、１００をかけることによって計算することができる。「より長い」配列は、アラインした領域中で最も多い実際の残基を有する配列である。
足場
【０１４２】
本明細書に示したとおり、本開示の抗体は、前記に記載したＣＤＲ（単数及び複数）をグラフトすることができる足場構造を含むことができる。１つの実施形態では、足場構造は、従来の抗体構造であり、すなわち、２本の重鎖及び２本の軽鎖可変ドメイン配列を含む抗体である。いくつかの場合では、本明細書に記載の抗体の組み合わせが、重鎖及び／または軽鎖を形成する追加の成分（フレームワーク、Ｊ及びＤ領域、不変部領域など）を含むことができる。いくつかの実施形態では、ヒト足場成分の使用を含む。
【０１４３】
それゆえに、さまざまな実施形態では、本開示の抗体が、従来の抗体の足場を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒト及び単クローン抗体、二重特異性抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体、キメラ抗体、抗体フュージョン、及びそれぞれのフラグメントとすることができる。前記記載のＣＤＲ及びＣＤＲの組み合わせは、以下の足場のいずれかにグラフトすることができる。
【０１４４】
本開示のキメラ抗体は、特定の種に由来する対応する配列と同一または相同である重鎖及び／または軽鎖配列を含むことができる。例えば、１つの実施形態では、抗Ｂｂ因子抗体が、ヒトＦｃドメインを含むキメラ抗体であり、抗体の残りは、対応するマウスまたはげっ歯類配列と同一または相同とすることができる。キメラ抗体は、フラグメントが、所望の生物活性を示し、もう１つの種、抗体のクラス、または抗体のサブクラスに由来する配列を含む限り、かかる抗体のフラグメントとすることができる（米国特許第４、８１６、５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５）。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示した抗Ｂｂ因子抗体の可変部領域が、少なくとも３本の重鎖または軽鎖ＣＤＲを含み、（前記のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤを参照；また、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３を参照）、フレームワーク領域内に組み込まれている（前記の１９９１年にＫａｂａｔらによって示されたフレームワーク領域１〜４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４、；また、前記のＣｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、１９８７を参照）。
【０１４６】
いくつかの場合では、当該抗体は、重鎖可変領配列または軽鎖可変ドメイン配列からなるものとすることができる。いくつかの場合では、重鎖または軽鎖可変ドメイン配列が、表３の配列から選択される配列を含んでも良い。
【０１４７】
従来の抗体構造単位は、ほとんどの場合では、四量体を含む。各四量体が、通常、２つの同一対のポリペプチド鎖からなり、各対が、１つの軽鎖（通常、分子量が約２５ｋＤａである）及び１つの重鎖（通常、分子量が約５０〜７０ｋＤａである）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変部領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、不変部領域を定義し、重鎖が計３つの不変部領域（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を含んでも良く、不変部領域が、エフェクター機能の調節を助けても良い。ヒト軽鎖は、κ及びλ軽鎖に分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α、またはεに分類され、当該抗体のイソ型をそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧは、いくつかのサブクラスを有し、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されない。ＩｇＭは、サブクラスを有し、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むがこれらに限定されない。
【０１４８】
軽鎖及び重鎖内では、可変及び不変部領域が、約１２（１２）以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖は、また、約１０（１０）以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般に、Ｐａｕｌ、Ｗ．，ｅｄ．，１９８９、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７、２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．を参照。軽鎖及び重鎖の各対の可変部領域は、抗体結合部位を形成する。
【０１４９】
いくつかの自然抗体、例えば、ラクダ及びラマにみられるものは、２本の重鎖からなるニ量体であり、軽鎖を含まない。Ｍｕｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２；Ｄｅｓｍｙｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０。ラクダ抗体の結晶学的研究が、ＣＤＲ３領域が抗原と相互作用する表面を形成し、このため、より典型的な四量体抗体中などで抗原結合に重要であることを明らかにした。本開示は、Ｂｂ因子に結合する、及び／またはＢｂ因子の生物活性を抑制することができる２本の重鎖、またはそのフラグメントからなるニ量体抗体を包含する。
【０１５０】
重鎖及び軽鎖の可変部領域は、通常、３つの相補性決定領域またはＣＤＲによって結合される比較的保存フレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。ＣＤＲは、抗原認識及び結合を担う抗体の超可変部領域を含む。各対の２本の鎖からのＣＤＲは、フレームワーク領域によってアラインされ、支持され、特定のエピトープに結合することができる。Ｎ−末端からＣ−末端まで、軽鎖及び重鎖ともドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸のアサインメントは、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔの定義に従う。Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３。
【０１５１】
ＣＤＲは、抗原結合の大半の表面接触点を占める。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照。さらに、軽鎖のＣＤＲ３及び、特に、重鎖のＣＤＲ３は、軽鎖及び重鎖可変部領域内で抗原結合の最も重要な決定因子を構成しても良い。例えば、前記の  Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、１９８７  ；Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３１０：６０３−６１５；Ｘｕ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ、２０００、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５；Ｄｅｓｍｙｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０；及びＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ、２００１、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２を参照。いくつかの抗体では、重鎖ＣＤＲ３が、抗原及び抗体間の接触の主な範囲を構成すると思われる（前記のＤｅｓｍｙｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。抗体の結合特性を変化させるためにＣＤＲ３だけが変わるｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択スキームを用いることができる（前記のＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ、２００１；前記のＤｅｓｉｄｅｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【０１５２】
自然抗体は、通常、抗体をタンパク質分泌の細胞経路に向け、成熟抗体に存在しないシグナル配列を含む。本開示の抗体をコードするポリヌクレオチドが、以下に記載したとおり、自然シグナル配列または異種シグナル配列をコードしても良い。
【０１５３】
１つの実施形態では、抗Ｂｂ因子抗体が、本明細書に示したとおり、１（１）〜６つ（６）のＣＤＲを有する単クローン抗体である。本開示の抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＥ抗体を含むいずれかの型とすることができる。特定の実施形態では、当該抗体がＩｇＧ型抗体である。さらに特定の実施形態では、当該抗体がＩｇＧ２型抗体である。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、当該抗体が完全重鎖及び軽鎖を含むことができ、全ＣＤＲが同じ種、例えば、ヒトに由来する。代わりに、例えば、抗体が、前記に示した配列からの６未満のＣＤＲを含有する実施形態では、追加のＣＤＲは、他の種（例えば、マウスＣＤＲ）に由来するものとすることができる、または当該配列に示したものと異なるヒトＣＤＲとすることができる。例えば、本明細書で特定される好適な配列からのヒトＨＣ  ＣＤＲ３及びＬＣ  ＣＤＲ３領域を用いることができ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＬＣ  ＣＤＲ１及びＬＣ  ＣＤＲ２は、任意で別種、または異なるヒト抗体配列、またはこれらの組み合わせから選択される。例えば、本開示のＣＤＲは、市販の該当するキメラまたはヒト化抗体のＣＤＲ領域に置き換えることができる。
【０１５５】
特定の実施形態では、ヒト成分である抗体の足場成分が用いられる。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、しかし、足場成分は、異なる種からの混合物とすることができる。こうして、当該抗体は、キメラ抗体及び／またはヒト化抗体とすることができる。一般に、キメラ抗体及びヒト化抗体とも１つ以上の種からの領域またはアミノ酸を混合する抗体とすることができる。例えば、キメラ抗体が、ほとんどの実施形態では、マウス、ラット、ウサギ、または他の好適な非ヒト動物からの可変部領域（単数及び複数）及びヒトからの不変部領域（単数及び複数）を含む。
【０１５７】
ヒト化抗体は、当初から非ヒト抗体に由来する抗体、例えばマウス抗体である。ヒト化抗Ｂｂ因子抗体のさまざまな実施形態では、非ヒト抗体に由来する可変部領域フレームワーク領域またはフレームワークアミノ酸は、ヒト抗体で対応する位置にみられるアミノ酸同一性となるように変化させることができる。ヒト化抗体のいくつかの実施形態では、ＣＤＲを除く全抗体が、ヒト由来のポリヌクレオチドによってコードすることができる、またはそのＣＤＲ内を除いてかかる抗体と同一である。他の実施形態では、ヒト化抗体は、同一性が対応するヒト抗体の同じ位置またはほぼ同じ位置の同一性に変化する特定のアミノ酸位置を含んでも良い。ＣＤＲは、非ヒト生物由来の核酸によってその一部または全部をコードすることができ、抗体を生成するためにヒト抗体可変部領域のβシートフレームワークにグラフトされ、その特異性は、グラフトしたＣＤＲによって測定される。かかる抗体の生成は、例えば、ＷＯ  ９２／１１０１８、Ｊｏｎｅｓ、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６に記載されている。ヒト化抗体は、また、遺伝子組み換え免疫系のマウスを用いて生成することができる（Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ヒトとすることができ、このため、この文脈では、ヒト化及びキメラ抗体ともいくつかの非ヒトＣＤＲを含む。いくつかの場合では、ＨＣ  ＣＤＲ３及びＬＣ  ＣＤＲ３領域を含み、１つ以上の他のＣＤＲ領域が異なる特殊な由来の領域であるヒト化抗体を生成することができる。
【０１５８】
１つの実施形態では、Ｂｂ因子抗体は、多重特異性抗体、及び特に二重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）とすることができる。これらは、２つ（以上）の異なる抗原、例えば、Ｂｂ因子、及びもう１つの抗原、またはＢｂ因子の２つの異なるエピトープに結合する抗体である。当技術分野に知られるさまざまな方法で、二重特異性抗体を作製することができ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ、１９９３、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６−４４９）、例えば、化学的にまたはハイブリッドハイブリドーマから調製することができる。
【０１５９】
１つの実施形態では、Ｂｂ因子抗体がミニボディである。ミニボディは、ＣＨ３ドメインに結合されるｓｃＦｖを含む最少化抗体−様タンパク質である（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１）。
【０１６０】
１つの実施形態では、Ｂｂ因子抗体がドメイン抗体である；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照。ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）は、分子量がおよそ１３ｋＤａである、または完全抗体のサイズの１／１０未満であるヒト抗体ｄＡＢｓの重鎖（ＶＨ）または軽（ＶＬ）鎖の可変部領域に対応する抗体の機能的結合ドメインである。ｄＡＢｓは、細菌、酵母、及び哺乳動物細胞系を含むさまざまな宿主でよく発現される。また、ｄＡｂｓは、極めて安定しており、厳しい条件、例えば、凍結乾燥または熱変性を受けた後でも活性を保持している。例えば、米国特許第６，２９１，１５８号；６，５８２，９１５号；６，５９３，０８１号；６，１７２，１９７号；ＵＳ  Ｓｅｒｉａｌ  Ｎｏ．２００４／０１１０９４１；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  ０３６８６８４；ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ６，６９６，２４５、ＷＯ０４／０５８８２１、ＷＯ０４／００３０１９及びＷＯ０３／００２６０９を参照。全て、参照により全体が組み入れられる。
【０１６１】
１つの実施形態では、Ｂｂ因子抗体が、抗体フラグメントであり、すなわち、Ｂｂ因子への結合特異性を保持する本明細書に示した抗体のいずれかのフラグメントである。さまざまな実施形態では、当該抗体がＦ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖフラグメントである。少なくとも、抗体が、本明細書で意味するとおり、抗原に特異的に結合することができるポリペプチドを含み、当該ポリペプチドが軽鎖及び／または重鎖可変部領域の全部または一部を含む。
【０１６２】
特定の抗体フラグメントとしては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｉｖ）単一可変部からなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、（ｖ）分離したＣＤＲドメイン、（ｖｉ）２つの結合Ｆａｂフラグメントを含むＦ（ａｂ’）2フラグメント、二価フラグメント（ｖｉｉ）、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが、２つのドメインを結合させて抗原結合部位を形成するペプチドリンカーによって結合する一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５８７９−５８８３）、（ｖｉｉｉ）二重特異性一本鎖Ｆｖニ量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）及び（ｉｘ）遺伝子フュージョンによって構成される二重特異性抗体または三量体、多価または多重特異性フラグメント（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ．ａｌ．，２０００、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３２６：４６１−４７９；ＷＯ９４／１３８０４；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８）が挙げられるが、これらに限定されない。抗体フラグメントは、改変することができる。例えば、当該分子は、ＶＨ及びＶＬドメインを結合するジスルフィド架橋の組み入れによって安定させることができる（Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５）。また、本明細書に示したとおり、これらのフラグメントの非ＣＤＲ成分は、好ましくはヒト配列である。
【０１６３】
１つの実施形態では、Ｂｂ因子抗体が、従来の抗体、例えば、ヒト免疫グロブリンである。この実施形態では、前記に示したとおり、特定の構造が、ＣＤＲ領域を含む完全重鎖及び軽鎖を含む。別の実施形態では、他のヒト抗体に由来する他のＣＤＲ、フレームワーク領域、Ｊ及びＤ領域、不変部領域などとともに１つ以上の本開示のＣＤＲを用いる。例えば、本開示のＣＤＲは、任意の数のヒト抗体、特に市販の該当する抗体のＣＤＲに置き換えることができる。
【０１６４】
１つの実施形態では、Ｂｂ因子抗体が、抗体フュージョンタンパク質（例えば、抗体コンジュゲート）である。この実施形態では、当該抗体は、コンジュゲーションパートナーに融合される。コンジュゲートパートナーは、タンパク性または非−タンパク質性とすることができる；後者は、一般に抗体（抗体の共有結合修飾の記載を参照）及びコンジュゲートパートナーの官能基を用いて生成される。例えばリンカーは、当技術分野で知られている；例えば、ホモまたはヘテロ二官能性リンカーがよく知られている（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ｃａｔａｌｏｇ、ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｓｅｃｔｉｏｎ  ｏｎ  ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｒｓ、ｐａｇｅｓ  １５５−２００を参照。これは参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６５】
１つの実施形態では、Ｂｂ因子抗体が、抗体類似体である。いくつかの場合では、抗体類似体が、合成抗体を指すことができる。例えば、さまざまな最近の研究では、別のタンパク質足場またはグラフトしたＣＤＲを有する人工足場が用いられる。かかる足場としては、抗体の三次元構造を安定させるために導入される変異並びに例えば生体親和性ポリマーからなる完全合成足場が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｆｕｎｃｔｉｏｎ、ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、Ｖｏｌｕｍｅ  ５３、Ｉｓｓｕｅ  １：１２１−１２９．  Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４を参照。また、ペプチド抗体ミメティック（ＰＡＭ）を用いることができ、並びに抗体ミメティックに基づく研究では、足場としてフィブロネクチン成分を用いている。
【０１６６】
ＶＨ及びＶＬ変異体
前記に示したとおり、いくつかの実施形態では、本開示は、前記に定義したとおり、配列番号１〜３を含む重鎖可変部領域及び／または配列番号４〜６の軽鎖可変部領域それぞれ、またはこれらのフラグメントを含む、またはこれらからなる抗体を提供する。このため、これらの実施形態では、当該抗体が、少なくとも１つのＣＤＲまたは変異体だけでなく、また、示したフレームワーク配列の少なくとも一部を含む。また、本開示は、かかる重鎖可変配列または軽鎖可変配列の変異体を包含する。
【０１６７】
変異体可変部領域が、一般に、親可変部領域と少なくとも８０％のアミノ酸相同性、類似性、または同一性、例えば、本明細書に開示したものを共有する。いくつかの実施形態では、変異体及び親の配列相同性または同一性が少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％及びほぼ１００％である。本明細書に示した個々の変異体ＶＨ及びＶＬと核酸配列をコードするヌクレオチド配列間の核酸配列相同性、類似性、または同一性は、本明細書に示したものの少なくとも７０％であり、さらに通常、好ましくは相同性または同一性が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％及びほぼ１００％増大する。また、変異体可変部領域が、多くの実施形態では、生物機能を共有することができ、親ＣＤＲの特異性及び／または活性の少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を含むがこれらに限定されない。いくつかの場合では、相同性及び／または同一性が、同一とすることができるＣＤＲ配列以外で測定されるにすぎない。他の場合では、相同性及び／または同一性が、ＣＤＲ配列を含む全配列にわたって測定される。いくつかの実施形態では、また、不変部領域変異体が含まれても良い。
【０１６８】
さまざまな場合では、アミノ酸配列の相同性は、前記に記載したとおり、最適にアラインした場合、同一性または陽性のパーセンテージを反映する可能性がある。さまざまな場合では、比較ウィンドウ内のアラインしたアミノ酸の数を割ることによって％相同性（％陽性）または％同一性を計算することができる。２つのポリペプチドの長さが等しくない場合、比較ウィンドウは、ポリペプチドの一方または他方の全長とすることができる。他の場合では、比較ウィンドウは、ポリペプチドの一方の一部とすることができる。さまざまな場合では、２つのポリペプチド配列の相同性または同一性を測定するための比較ウィンドウは、約４０以上のａａ（アミノ酸）、４５以上のａａ、５０以上のａａ、５５以上のａａ、６０以上のａａ、６５以上のａａ、７０以上のａａ、７５以上のａａ、８０以上のａａ、８５以上のａａ、９０以上のａａ、９５以上のａａ、１００以上のａａ、１５０以上のａａ、または２００以上のａａ、及び／または約２００未満のａａ、１５０未満のａａ、１００未満のａａ、９５未満のａａ、９０未満のａａ、８５未満のａａ、８０未満のａａ、７５未満のａａ、７０未満のａａ、６５未満のａａ、６０未満のａａ、５５未満のａａ、５０未満のａａ、または４５未満のａａである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ配列を有する場合、比較ウィンドウは、４０未満のａａ、例えば約２５未満のａａ、２４未満のａａ、２３未満のａａ、２２未満のａａ、２１未満のａａ、２０未満のａａ、１９未満のａａ、１８未満のａａ、１７未満のａａ、１６未満のａａ、１５未満のａａ、１４未満のａａ、１３未満のａａ、１２未満のａａ、１１未満のａａ、１０未満のａａ、９未満のａａ、８未満のａａ、７未満のａａ、６未満のａａ、５未満のａａ、または４未満のａａと、約３以上のａａ、４以上のａａ、５以上のａａ、６以上のａａ、７以上のａａ、８以上のａａ、９以上のａａ、１０以上のａａ、１１以上のａａ、１２以上のａａ、１３以上のａａ、１４以上のａａ、１５以上のａａ、１６以上のａａ、１７以上のａａ、１８以上のａａ、１９以上のａａ、２０以上のａａ、２１以上のａａ、２２以上のａａ、２３以上のａａ、または２４以上のａａとの間としても良い。
【０１６９】
さまざまな場合では、クレームされているアミノ酸配列は、％同一性または％相同性（％陽性）が、所与の比較ウィンドウに対して、約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％以上、及び／または約１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８５％、８０％、または７５％未満であるものとすることができる。
【０１７０】
抗Ｂｂ因子抗体の共有結合修飾
抗体の共有結合修飾が、この開示の範囲内に含まれるが、一般に、翻訳後修飾で必ずしも行われるわけではない。例えば、選択した側鎖またはＮ−末端またはＣ−末端残基と反応させることができる有機誘導化剤と抗体の特定のアミノ酸残基を反応させることによって、抗体のいくつかの型の共有結合修飾が、分子に導入される。
【０１７１】
システイニル残基が、最も一般にα−ハロアセテート（及び対応するアミン）、例えば、クロロ酢酸またはクロロアセトアミドと反応し、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体が得られる。システイニル残基は、また、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリベンゾエート、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノール、またはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応によって誘導体化される。
【０１７２】
ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５〜７．０でジエチルピロカーボネートとの反応によって誘導体化される。これは、この薬剤が比較的ヒスチジル側鎖に特異的であるためである。また、パラ−ブロモフェナシルブロミドが有用である；反応は、好ましくは０．１Ｍカコジール酸ナトリウム中でｐＨ６．０で実施される。
【０１７３】
リシニル及びアミノ末端残基は、コハク酸無水物または他のカルボン酸無水物と反応する。これらの薬剤による誘導体化には、リシニル残基の電荷を逆にする作用がある。α−アミノ−含有残基を誘導体化する他の好適な薬剤としては、イミドエステル、例えば、メチルピコリンイミデート；ピリドキサールホスフェート；ピリドキサール；クロロボロハイドライド；トリニトロベンゼンスルホン酸；Ｏ−メチルイソ尿素；２，４−ペンタンジオン；及びグリオキシレートとのトランスアミナーゼ−触媒反応物が挙げられる。
【０１７４】
アルギニル残基は、１つまたはいくつかの従来の試薬、例えば、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオン及びニンヒドリンとの反応によって改変される。アルギニン残基の誘導体化は、グアニジン官能基のｐＫaが高いため、アルカリ性条件で反応を実施する必要がある。さらに、これらの試薬は、リジン基並びにアルギニンε−アミノ基と反応させても良い。
【０１７５】
チロシル残基の特定の修飾は、特に芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によって、チロシル残基にスペクトル標識を導入して行うことができる。最も一般に、Ｎ−アセチルイミジゾール及びテトラニトロメタンを用いて、それぞれＯ−アセチルチロシル種及び３−ニトロ誘導体が形成される。125Ｉまたは131Ｉを用いてチロシル残基をヨウ素化し、前記に記載した放射性イムノアッセイ、クロラミンＴ法に使用するのに好適な標識タンパク質が調製される。
【０１７６】
カルボキシル側基（アスパルチルまたはグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ’−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−−Ｒ’）との反応によって選択的に改変され、式中、Ｒ及びＲ’が、任意で異なるアルキル基、例えば、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドである。さらに、アスパルチル及びグルタミル残基が、アンモニウムイオンとの反応によってアスパラギニル及びグルタミニル残基に変換される。
【０１７７】
二官能性薬剤による誘導体化は、さまざまな方法に使用され、抗体を水不溶性支持マトリックスまたは表面に架橋するのに有用である。一般に用いられる架橋薬剤としては、例えば、１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば、４−アジドサリチル酸とのエステル、ジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、例えば、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）、及び二官能性マレイミド、例えば、ビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンが挙げられる。誘導化剤、例えば、メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートにより、光の存在下で架橋を形成することができる光活性化可能中間体が生成される。代わりに、反応性水不溶性マトリックス、例えば、臭化シアン活性化炭水化物及び米国特許第３，９６９，２８７号；３，６９１，０１６号；４，１９５，１２８号４，２４７，６４２号；４，２２９，５３７号；及び４，３３０，４４０号に記載された反応性基質が、タンパク質固定に用いられる。
【０１７８】
グルタミニル及びアスパラギニル残基それぞれが、たびたび対応するグルタミル及びアスパルチル残基に脱アミド化される。代わりに、これらの残基が弱酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態もこの開示の範囲内に入る。
【０１７９】
他の修飾としては、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、１９８３、ｐｐ．７９−８６）、Ｎ−末端アミンのアセチル化、及びＣ−末端カルボキシル基のいずれかのアミド化が挙げられる。
【０１８０】
グリコシル化
この開示の範囲内に含まれる抗体のもう１つの型の共有結合修飾は、タンパク質のグリコシル化パターンを変化させることを含む。当技術分野に知られているとおり、グリコシル化パターンは、タンパク質の両配列（例えば、以下に記載した特定のグリコシル化アミノ酸残基が存在する、または存在しない）、またはタンパク質を生成する宿主細胞もしくは生物に依存する可能性がある。特定の発現系が以下に記載される。
【０１８１】
ポリペプチドのグリコシル化は、通常、Ｎ−結合型またはＯ−結合型のいずれかである。Ｎ−結合型は、炭水化物部分がアスパラギン残基の側鎖に結合することを指す。トリ−ペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−トレオニン（Ｘがプロリンを除くアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素的結合のための認識配列である。このため、ポリペプチド中のこれらのトリ−ペプチド配列のいずれかの存在が、潜在的グリコシル化部位を生じさせる。Ｏ−結合型グリコシル化は、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンを用いても良いが、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうち１つがヒドロキシアミノ酸、最も一般にセリンまたはトレオニンに結合することを指す。
【０１８２】
グリコシル化部位の本開示の抗体への付加は、（Ｎ−結合型グリコシル化部位では）１つ以上の前記記載のトリ−ペプチド配列を含有するようにアミノ酸配列を変化させることによって従来から実施されている。変質は、また、（Ｏ−結合型グリコシル化部位では）、出発配列に１つ以上のセリンまたはトレオニン残基を付加して、または出発配列を１つ以上のセリンまたはトレオニン残基で置換して行っても良い。容易には、抗体のアミノ酸配列は、所望のアミノ酸に翻訳するコドンが生成されるように、好ましくはＤＮＡレベルの変化により、特にあらかじめ選択した塩基で標的ポリペプチドをコードするＤＮＡを変異させることによって変えられる。
【０１８３】
抗体の炭水化物部分の数を増大するもう１つの手段が、グリコシドのタンパク質への化学的または酵素的カップリングである。これらの方法は、Ｎ−及びＯ−結合型グリコシル化のグリコシル化能力がある宿主細胞中のタンパク質の生成が必要ではないという点で有利である。用いられるカップリング方法に応じて、糖（単数及び複数）は、（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）遊離スルフヒドリル基、例えば、システインの遊離スルフヒドリル基、（ｄ）遊離ヒドロキシル基、例えば、セリン、トレオニン、またはヒドロキシプロリンの遊離ヒドロキシル基、（ｅ）芳香族残基、例えば、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンの芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基に結合させることができる。これらの方法は、１９８７年９月１１日に公開されたＷＯ  ８７／０５３３０、及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ、１９８１、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６に記載されている。
【０１８４】
出発抗体に存在する炭水化物部分の除去は、化学的にまたは酵素的に実施することができる。化学的脱グリコシル化では、化合物トリフルオロメタンスルホン酸、または同等化合物へのタンパク質の暴露が必要である。この処置の結果、結合糖（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン）を除く糖のほとんどまたはすべてが切断されるが、ポリペプチドは完全なままである。化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１によって記載されている。Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０に記載されたとおり、さまざまなエンド−グリコシダーゼ及びエキソ−グリコシダーゼを使用することによって、ポリペプチドの炭水化物部分の酵素的切断を実施することができる。Ｄｕｓｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：３１０５．に記載されたとおり、化合物ツニカマイシンを使用することによって、潜在的グリコシル化部位のグリコシル化は、阻止することができる。ツニカマイシンが、タンパク質−Ｎ−グリコシド結合の形成をブロックする。
【０１８５】
ペグ化
抗体のもう１つの型の共有結合修飾は、参照により全体が組み入れられる米国特許第４，６４０，８３５号；４，４９６，６８９号；４，３０１，１４４号；４，６７０，４１７号；４，７９１，１９２号及び／または４，１７９，３３７号に記載された方法で、さまざまなポリオール、例えば、これらに限定されないが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンを含む、さまざまな非タンパク質ポリマーに抗体を結合することを含む。また、当技術分野で知られているとおり、ポリマー、例えば、ＰＥＧの付加を促進するために抗体内のさまざまな位置で、アミノ酸置換を生じさせることができる。
【０１８６】
標識
いくつかの実施形態では、本開示の抗体の共有結合修飾が、１つ以上の標識の付加を含む。
【０１８７】
用語「標識基」は、検出可能標識を意味する。好適な標識基の例としては、放射性同位体または放射性核種（例えば、3Ｈ、14Ｃ、15Ｎ、35Ｓ、90Ｙ、99Ｔｃ、111Ｉｎ、125Ｉ、131Ｉ）、蛍光基（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素基（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光基、ビオチニル基、または２次リポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、２次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、標識基が、立体障害可能性を減らすためにさまざまな長さのスペーサーアームによって抗体に結合される。タンパク質を標識付けするさまざまな方法が、当技術分野で知られており、本開示で実施するのに用いることができる。
【０１８８】
一般に、標識は、以下の標識：ａ）放射性または重同位体とすることができる同位体標識；ｂ）磁気標識（例えば、磁気粒子）；ｃ）酸化還元活性部分；ｄ）光学性染料；酵素基（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；ｅ）ビオチン化基；及びｆ）２次リポーター（例えば、ロイシンジッパーペア配列、２次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグなど）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ、を検出するアッセイに応じてさまざまなクラスに入る。いくつかの実施形態では、標識基が、立体障害可能性を減らすためにさまざまな長さのスペーサーアームによって抗体に結合される。タンパク質を標識付けするさまざまな方法が、当技術分野で知られており、本開示で実施するのに用いることができる。
【０１８９】
特定の標識としては、発色団、蛍光体及び蛍光団を含むがこれらに限定されない光学性染料が挙げられ、多くの例で後者が特異的である。蛍光団は、「小分子」蛍光体、またはタンパク質蛍光体のいずれかとすることができる。
【０１９０】
蛍光標識は、その固有蛍光特性によって検出することができる任意の分子とすることができる。好適な蛍光標識としては、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリトロジン、クマリン、メチル−クマリン、ピレン、Ｍａｌａｃｉｔｅ  ｇｒｅｅｎ、スチルベン、Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ、Ｃａｓｃａｄｅ  ＢｌｕｅＪ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、ＩＡＥＤＡＮＳ、ＥＤＡＮＳ、ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ、ＬＣ  Ｒｅｄ  ６４０、Ｃｙ  ５、Ｃｙ  ５５、ＬＣ  Ｒｅｄ  ７０５、Ｏｒｅｇｏｎ  ｇｒｅｅｎ、ｔｈｅ  Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ｄｙｅｓ  （Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６８０）、Ｃａｓｃａｄｅ    Ｂｌｕｅ、Ｃａｓｃａｄｅ    Ｙｅｌｌｏｗ  及び  Ｒ−ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）、ＦＩＴＣ、ローダミン、及び  Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、Ｃｙ５、Ｃｙ５.５、Ｃｙ７（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。好適な光学性染料が、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｐ．  ＨａｕｇｌａｎｄによってＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋに記載されている（参照により本明細書に明確に組み入れられる）蛍光団を含む。
【０１９１】
また、好適なタンパク質蛍光標識が、Ｒｅｎｉｌｌａ、ＧＦＰのＰｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ、またはＡｅｑｕｏｒｅａ種（Ｃｈａｌｆｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６３：８０２−８０５）、ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．，Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  Ｕ５５７６２）を含む緑色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．１８０１  ｄｅ  Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ  Ｂｌｖｄ．Ｗｅｓｔ、８ｔｈ  Ｆｌｏｏｒ、Ｍｏｎｔｒｅａｌ、Ｑｕｅｂｅｃ、Ｃａｎａｄａ  Ｈ３Ｈ  １Ｊ９；Ｓｔａｕｂｅｒ、１９９８、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２４：４６２−４７１；Ｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．６：１７８−１８２）、増強黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．）、ルシフェラーゼ（Ｉｃｈｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４０８−５４１７）、βガラクトシダーゼ（Ｎｏｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２６０３−２６０７）及びＲｅｎｉｌｌａ（ＷＯ９２／１５６７３、ＷＯ９５／０７４６３、ＷＯ９８／１４６０５、ＷＯ９８／２６２７７、ＷＯ９９／４９０１９、米国特許第５２９２６５８号、５４１８１５５号、５６８３８８８号、５７４１６６８号、５７７７０７９号、５８０４３８７号、５８７４３０４号、５８７６９９５号、５９２５５５８号）（全て、参照により全体が組み入れられる）を含むが、これらに限定されない。
【０１９２】
抗Ｂｂ因子抗体をコードするポリヌクレオチド
特定の態様では、本開示によって、本明細書に記載の抗体をコードする核酸分子が提供される。いくつかの場合では、本開示の核酸が、ＩｇＧ、可変部領域、または本明細書に記載のＣＤＲをコードする。核酸が、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子をともに含む。核酸は、自然核酸または合成核酸のいずれかとすることができる。本開示の核酸は、通常、ポリ核酸；すなわち、３’，５’リン酸ジエステル結合によって共有結合される個々のヌクレオチドのポリマーである。さまざまな場合では、ヌクレオチド配列は、一本鎖、二本鎖、またはこの組み合わせとすることができる。いくつかの変型では、ヌクレオチド配列は、自然核酸、合成核酸、非自然核酸、及び／または核酸類似体を含むことができる。当該ヌクレオチド配列は、さらに、他の非核酸分子、例えば、アミノ酸、及び他のモノマーを含むことができる。
【０１９３】
多くの実施形態では、コード配列は、分離核酸分子としても良い。分離核酸分子は、通常、自然源に関係する少なくとも１つの成分から同定及び分離される。いくつかの場合では、１つの成分は、ヌクレオチド配列、タンパク質、または非タンパク質分子とすることができる。分離した抗Ｂｂ因子抗体をコードする核酸分子が、自然にみられる形態またはセッティングと異なる。分離した抗Ｂｂ因子抗体をコードする核酸分子は、このため、自然細胞に存在するようなコード核酸分子（単数及び複数）と識別される。しかし、分離した抗Ｂｂ因子抗体をコードする核酸分子が、通常、抗Ｂｂ因子抗体を発現する細胞に含有される抗Ｂｂ因子抗体をコードする核酸分子、例えば、染色体位置が自然細胞と異なる核酸分子を含む。分離核酸分子は、このため、生物中に存在するような核酸分子と識別される。しかし、いくつかの場合では、分離核酸分子は、細胞内に含有される核酸とすることができ、例えば、分離核酸分子が、細胞に導入され、染色体外位置またはその天然位置と異なる染色体位置に存在する。
【０１９４】
その使用に応じて、核酸は、二本鎖、一本鎖とすることができる、または両二本鎖または両一本鎖配列の部分を含有することができる。当業者が理解するとおり、一本鎖の記述（「Ｗａｔｓｏｎ」）が、また、他のストランドの配列（「Ｃｒｉｃｋ」）を定義する。遺伝子組換え核酸は、通常、自然にみられない形態で、一般に、エンドヌクレアーゼによる核酸の操作によって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで元来、形成される核酸とすることができる。このため、分離抗体は、直鎖形態で核酸によってコードすることができ、または通常、結合されず、ＤＮＡ分子をリゲートすることによってｉｎ  ｖｉｔｒｏで形成される発現ベクターと共に、この開示の目的のための遺伝子組換えと考えられる。遺伝子組換え核酸は、一度、必要な全制御要素とともに、生成され、宿主細胞または生物に再導入され、非遺伝子組換えで、すなわち、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ操作ではなく宿主細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ細胞機構を用いて複製することができると理解されている；しかし、一度、遺伝子組換えで生成されるかかる核酸は、その後に非遺伝子組換えで複製されているが、なお本開示の目的のための遺伝子組換えと考えられる。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、遺伝子組換え核酸が、１つ以上の制御要素または制御配列を含んでも良い。制御要素及び制御配列は、特定の宿主生物中の作動可能結合コード配列の発現に必要な核酸配列を指す。原核生物に好適な制御配列は、例えば、プロモーター、任意でオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞がプロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを用いることが知られている。本明細書で用いられる場合、作動可能結合配列は、もう１つの核酸配列と機能的関係の核酸配列である。例えば、核酸コード配列は、核酸制御配列に作動可能に結合することができる。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に結合される；プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に結合される；またはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置する場合、コード配列に作動可能に結合される。ほとんどの実施形態では、作動可能結合配列が、例えば、分泌リーダー配列に共有結合したＤＮＡ配列である。多くの実施形態では、エンハンサー配列がコード配列に隣接する必要はなく、それどころか、２つの配列は、１つ以上の核酸で分離しても良い。
【０１９６】
さまざまな場合では、本開示のヌクレオチド配列の核酸が、自然ヌクレオチドとほぼ同じように代謝されるヌクレオチドを含むことができる。また、リン酸ジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホラミデート、アルキルホスホトリエステル、スルファメート、３’−チオアセタール、メチレン（メチルイミノ）、３’−Ｎ−カルバメート、モルホリノカルバメート、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）を含むがこれらに限定されない合成主鎖類似体を有する核酸様構造が含まれる（例えば、「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ、ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１）；「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ」、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌｕｍｅ  ６００、Ｅｄｓ．Ｂａｓｅｒｇａ  ａｎｄ  Ｄｅｎｈａｒｄｔ（ＮＹＡＳ  １９９２）；Ｍｉｌｌｉｇａｎ（１９９３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６：１９２３−１９３７；ａｎｄ  “Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”（１９９３、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）を参照）。ＰＮＡは、非イオン性主鎖、例えば、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン単位を含有する。ホスホロチオエート結合は、ＷＯ  ９７／０３２１１；ＷＯ  ９６／３９１５４；及びＭａｔａ（１９９７）Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４４：１８９−１９７に記載されている。この用語に包含される他の合成主鎖としては、メチル−ホスホネート結合または別のメチル−ホスホネート及びリン酸ジエステル結合（Ｓｔｒａｕｓｓ−Ｓｏｕｋｕｐ（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３６：８６９２−８６９８）、及びベンジル−ホスホネート結合（Ｓａｍｓｔａｇ（１９９６）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  ６：１５３−１５６）が挙げられる。
【０１９７】
当業者が理解するとおり、遺伝子コードの縮合のため、極めて多くの核酸を生成することができ、その全てが本開示のＣＤＲ（ならびに当該抗体の重鎖及び軽鎖または他の成分）をコードする。このため、当業者であれば、特定のアミノ酸配列を特定し、コードされたタンパク質のアミノ酸配列を変化させないように１つ以上のコドンの配列を単に改変することによって任意の数の異なる核酸を生成することができる。
【０１９８】
さまざまな場合では、配列番号１〜６及び８〜１５及び１８〜３１のポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列が含まれる。これらのヌクレオチドコード配列は、本開示のポリペプチド配列と同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドに翻訳することができる。多くの場合では、同一のポリペプチドをコードするヌクレオチドが、同一のヌクレオチド配列を有しなくても良い。これは、遺伝子コードの縮合によるものである。本開示のコード配列は、さらに非翻訳配列、例えば、ポリアデニル化配列を含むことができる。本発明のコード配列は、また、イントロン配列または介在配列、翻訳前に転写ｍＲＮＡがスプライシングで切り出される非翻訳配列を含むことができる。さまざまな場合では、転写ｍＲＮＡは、末端７−メチルグアノシンでキャップすることができる。いくつかの実施形態では、コード配列が、最終抗体にあらわれないアミノ酸のコード配列、例えば、抗体の拡散に必要な配列を含む。
【０１９９】
いくつかの変型では、遺伝子コードの縮合のために、複数のヌクレオチドコード配列が、同じポリペプチド配列をコードすることができる。本発明の核酸コード配列は、また、本開示のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と相同とすることができる。当該ヌクレオチドコード配列は、前記に記載したとおり、ＢＬＡＳＴｎによってアラインすることができる。さまざまな場合では、これらのアラインしたヌクレオチド配列の相同性（またはＢＬＡＳＴｎの同一性）は、約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以上及び／または約１００％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、または４５％未満とすることができる。さまざまな場合では、相同アライン配列は、約７００ｎｔ、６００ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、９０ｎｔ、８０ｎｔ、７０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔまたは４０ｎｔ未満、及び／または約５０ｎｔ、６０ｎｔ、７０ｎｔ、８０ｎｔ、９０ｎｔ、１００ｎｔ、２００ｎｔ、３００ｎｔ、４００ｎｔ、５００ｎｔ、または６００ｎｔ以上とすることができる。
【０２００】
さまざまな場合では、コード配列は、標準的遺伝子コードに従ってアミノ酸配列に翻訳することができるリボ核酸配列の転写を指図する。さまざまな場合では、当該コードが、カノニカルコードの変型を含むことができる。いくつかの変型では、コード配列は、アミノ酸をコードしないが、転写され、その後、リボ核酸がポリペプチドに翻訳される前に除去することができるイントロン配列または介在配列を含むことができる。
【０２０１】
抗体を生成する方法
本開示は、また、前記のとおり、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むプラスミド、発現ベクター、転写または発現カセットの形態で、発現系及び構成体を提供する。また、本開示は、かかる発現系または構成体を含む宿主細胞を提供する。
【０２０２】
通常、宿主細胞のいずれかに用いられる発現ベクターが、プラスミド維持ならびに外因性ヌクレオチド配列のクローニング及び発現のための配列を含有する。かかる配列は、まとめてフランキング配列と称され、特定の実施形態では、通常、以下のヌクレオチド配列の１つの以上を含む：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナー及び受容スプライス部位を含有する完全イントロン配列、ポリペプチド分泌のリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現するポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、及び選択可能マーカー要素。これらの配列のそれぞれを以下に記載する。
【０２０３】
任意で、ベクターは、「タグ」コード配列、すなわち、Ｂｂ因子抗体コード配列の５’または３’末端に位置するオリゴヌクレオチド分子を含有しても良い；オリゴヌクレオチド配列は、ｐｏｌｙＨｉｓタグ（例えば、ｈｅｘａＨｉｓ）、またはもう１つの「タグ」、例えば、市販の抗体が存在するＦＬＡＧ、ＨＡ（ヘマアグルチニンインフルエンザウイルス）、またはｍｙｃをコードすることができる。このタグは、通常、ポリペプチドの発現時にポリペプチドに融合され、親和性精製または宿主細胞由来のＢｂ因子抗体の検出の手段として役割を果たすことができる。親和性精製は、例えば、親和性マトリックスとして抗タグ抗体を用いて、カラムクロマトグラフィーによって実施することができる。任意で、当該タグは、その後、さまざまな手段によって、例えば、切断のために特定のペプチダーゼを用いて、精製したＢｂ因子抗体から除去することができる。
【０２０４】
フランキング配列は、同種（すなわち、宿主細胞と同じ種及び／または菌株に由来）、異種（すなわち、宿主細胞種または菌株以外の種に由来）、ハイブリッド（すなわち、１つ以上のソースに由来するフランキング配列の組み合わせ）、合成または天然とすることができる。こうして、フランキング配列が、宿主細胞機序で機能を果し、宿主細胞機序によって活性化することができるという条件で、フランキング配列のソースは、前核または真核生物、脊椎または無脊椎生物、または植物とすることができる。
【０２０５】
この開示のベクターに有用なフランキング配列は、当技術分野によく知られるいくつかの方法のいずれかによって得ることができる。通常、本明細書で有用なフランキング配列は、マッピング及び／または制限エンドヌクレアーゼ消化によって事前に特定され、このため、好適な制限エンドヌクレアーゼを用いて好適な組織ソースから分離することができる。いくつかの場合では、フランキング配列の完全ヌクレオチド配列をわかることができる。本明細書で、フランキング配列は、核酸合成またはクローニングのための本明細書に記載の方法を用いて合成することができる。
【０２０６】
フランキング配列の全てがわかっているか、フランキング配列の部分だけがわかっているかにかかわらず、それは、ポリメラーゼ鎖反応物（ＰＣＲ）を用いて、及び／または好適なプローブ、例えば、同じ種または別の種に由来するオリゴヌクレオチド及び／またはフランキング配列フラグメントで、ゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる。フランキング配列がわかっていない場合、フランキング配列を含有するＤＮＡのフラグメントは、例えば、コード配列または、さらにもう１つの遺伝子または別の遺伝子を含有しても良いＤＮＡの大部分から分離することができる。分離は、好適なＤＮＡフラグメントを生成するために制限エンドヌクレアーゼ消化によって実施され、続いて、アガロースゲル精製、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）、または当業者に知られる他の方法を用いて分離することができる。この目的を達成するための好適な酵素の選択は、当業者には容易に明らかである。
【０２０７】
複製起点は、通常、市販されている前核発現ベクターの一部を購入したものであり、この起点は、宿主細胞中のベクターの増幅を助ける。選択したベクターが複製起点部位を含有しない場合、公知の配列に基づいて化学的に１つの複製起点部位を合成し、ベクターにリゲートすることができる。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）からの複製起点は、ほとんどのグラム陰性菌に好適であり、及びさまざまなウイルス起源（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、またはパピローマウイルス例えば、ＨＰＶまたはＢＰＶ）は、哺乳動物細胞のクローニングベクターに有用である。一般に、複製起点成分は、哺乳動物発現ベクター（例えば、ＳＶ４０起源が、用いられることが多く、その理由はウイルス初期プロモーターも含有するということだけである）に必要ではない。
【０２０８】
転写終結配列は、通常、ポリペプチドコード領域の末端の３’に位置し、転写を終結させる役割を果たす。通常、前核細胞の転写終結配列は、ポリ−Ｔ配列に続くＧ−Ｃ  リッチフラグメントである。当該配列は、ライブラリーから容易にクローン化される、またはベクターの一部として市販されており、それを購入することもあるが、また、核酸合成の方法、例えば、本明細書に記載の方法を用いて容易に合成することができる。
【０２０９】
選択可能マーカー遺伝子は、選択的培養培地で成長した宿主細胞の生存及び成長に必要なタンパク質をコードする。通常の選択マーカー遺伝子は、（ａ）前核宿主細胞に抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、テトラサイクリン、またはカナマイシンへの耐性を与える；（ｂ）細胞の栄養要求欠乏を補完する；または（ｃ）複合体または規定培地から入手することができない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。特定の選択可能マーカーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）及びテトラサイクリン耐性遺伝子である。また、有利には、前核及び真核宿主細胞の両者で選択のためにネオマイシン耐性遺伝子を用いても良い。
【０２１０】
発現される遺伝子を増幅するために他の選択可能遺伝子を用いることができる。増幅は、成長または細胞生存に重要なタンパク質の生成に必要な遺伝子が、遺伝子組換え細胞の継代の染色体内でダンデムで繰り返すプロセスである。哺乳動物細胞に好適な選択可能マーカーの例としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）及びプロモーターを持たないチミジン（ｔｈｙｒｎｉｄｉｎｅ）キナーゼ遺伝子が挙げられる。哺乳動物細胞転換体は、選択圧下に置かれ、転換体だけがベクター中に存在する選択可能遺伝子によって生存するように一意的に適合される。選択圧は、培地中の選択薬剤の濃度が連続して増大する条件下で、転換細胞を培養することによってかけられ、これにより、選択可能遺伝子及びもう１つの遺伝子、例えば、Ｂｂ因子ポリペプチドまたはＢｂ因子エピトープに結合する抗体をコードするＤＮＡの両者を増幅させる。その結果、増加した量のポリペプチド、例えば、Ｂｂ因子抗体が増幅ＤＮＡから合成される。
【０２１１】
リボソーム−結合部位は、通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、シャイン−ダルガルノ配列（原核生物）またはコザック配列（真核生物）によって特徴づけられる。当該要素は、通常、発現されるポリペプチドのプロモーターの３’及びコード配列の５’に位置する。
【０２１２】
いくつかの場合では、例えば、真核宿主細胞発現系で、グリコシル化が望まれる場合、グリコシル化または収量を改善するためにさまざまなプレ配列またはプロ配列を操作しても良い。例えば、特定のシグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を変化させても良い、またはプロ配列を付加しても良い、また、グリコシル化に影響を与えても良い。最終タンパク質生成物は、発現に起こりやすい−１位置（成熟タンパク質の第１のアミノ酸に対して）の１つ以上の付加アミノ酸を有しても良く、完全に除去しなくても良い。例えば、最終タンパク質生成物は、ペプチダーゼ切断部位にみられ、アミノ−末端に結合される１つまたは２つのアミノ酸残基を有しても良い。代わりに、酵素が成熟ポリペプチド内のかかる範囲で切断する場合、いくつかの酵素切断部位を使用して、わずかに短縮した形態の所望のポリペプチドとしても良い。
【０２１３】
本開示の発現及びクローニングベクターは、通常、宿主生物によって認識され、Ｂｂ因子抗体をコードする分子に作動可能に結合されるプロモーターを含有する。プロモーターは、構造遺伝子の転写を制御する構造遺伝子（一般に約１００〜１０００ｂｐ以内）出発コドンの上流（すなわち、５’）に位置する非転写配列である。プロモーターは、従来から２つのクラス：誘導プロモーター及び構成プロモーターの１つに分類される。誘導プロモーターは、培養条件のいくつかの変化、例えば、栄養素が存在する、もしくは存在しない、または温度の変化に反応する制御下で、ＤＮＡからの転写レベルの増大を開始する。構成プロモーターは、一方、構成プロモーターが作動可能に結合されている遺伝子を均一に転写する、すなわち、または遺伝子発現をほとんど制御しない、または制御しない。さまざまな潜在宿主細胞によって認識される多くのプロモーターが、よく知られている。好適なプロモーターは、制限酵素消化によりソースＤＮＡからのプロモーターを除去すること及びベクターに所望のプロモーター配列を挿入することによって、本開示のＢｂ因子抗体を含む重鎖または軽鎖をコードするＤＮＡに作動可能に結合される。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、酵母細胞を用いて、本明細書に開示したＢｂ因子抗体を生成しても良い。また、酵母宿主とともに用いられる好適なプロモーターが、当技術分野でよく知られている。酵母エンハンサーは、有利には、酵母プロモーターとともに用いられる。哺乳動物宿主細胞とともに用いられる好適なプロモーターが、よく知られており、ウイルスのゲノムから得られるもの、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトロメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及び最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）が挙げられるが、これらに限定されない。他の好適な哺乳動物プロモーターとしては、異種哺乳動物プロモーター、例えば、熱ショックプロモーター及びアクチンプロモーターが挙げられる。
【０２１５】
さらに、対象とすることができるプロモーターとしては、ＳＶ４０初期プロモーター（Ｂｅｎｏｉｓｔ  ａｎｄ  Ｃｈａｍｂｏｎ、１９８１、Ｎａｔｕｒｅ  ２９０：３０４−３１０）；ＣＭＶプロモーター（Ｔｈｏｒｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６５９−６６３）；ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含有されるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０、Ｃｅｌｌ  ２２：７８７−７９７）；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４４−１４４５）；メタロチオネイン遺伝子からのプロモーター及び調節配列（Ｐｒｉｎｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２、Ｎａｔｕｒｅ  ２９６：３９−４２）；及び前核プロモーター、例えば、β−ラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７５：３７２７−３７３１）；またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１−２５）が挙げられるが、これらに限定されない。また、組織特異性を示し、トランスジェニック動物に用いられる以下の動物転写制御領域が、対象となる：脾臓腺房細胞中で活性があるエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４、Ｃｅｌｌ  ３８：６３９−６４６；Ｏｒｎｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９；ＭａｃＤｏｎａｌｄ、１９８７、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ７：４２５−５１５）；膵臓ベータ細胞中で活性があるインシュリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ  ３１５：１１５−１２２）；リンパ系細胞中で活性がある免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４、Ｃｅｌｌ  ３８：６４７−６５８；Ａｄａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５、Ｎａｔｕｒｅ  ３１８：５３３−５３８；Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：１４３６−１４４４）；睾丸、乳腺、リンパ系及びマスト細胞中で活性があるマウス乳腺腫瘍ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６、Ｃｅｌｌ  ４５：４８５−４９５）；肝臓中で活性があるアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．１  ：２６８−２７６）；肝臓中で活性があるαフェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９−１６４８；Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：５３−５８）；肝臓中で活性があるα１−アンチトリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−１７１）；骨髄性細胞中で活性があるβグロブリン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５、Ｎａｔｕｒｅ  ３１５：３３８−３４０；Ｋｏｌｌｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６、Ｃｅｌｌ  ４６：８９−９４）；脳の乏突起膠細胞中で活性があるミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｃｅｌｌ  ４８：７０３−７１２）；骨格筋中で活性があるミオシン軽鎖−２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２８３−２８６）；及び視床下部中で活性がある生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３４：１３７２−１３７８）。
【０２１６】
本開示のＢｂ因子抗体を含む軽鎖または重鎖をコードするＤＮＡの転写を増大させるために高等真核生物によってベクターにエンハンサー配列を挿入することができる。エンハンサーは、ＤＮＡのシス作用エレメントであり、通常、長さが約１０〜３００ｂｐであり、転写を増大させるためにプロモーター上で作用する。エンハンサーは、配向及び位置に比較的依存しておらず、転写単位の位置５’及び３’にみられる。哺乳動物遺伝子から入手できるいくつかのエンハンサー配列が知られている（例えば、ゴブリン、エラスターゼ、アルブミン、αフェトプロテイン及びインシュリン）。しかし、通常、ウイルスに由来するエンハンサーが用いられる。当技術分野で知られているＳＶ４０エンハンサー、サイトロメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが真核プロモーターの活性化のための例示的なエンハンシング要素である。エンハンサーは、コード配列のベクター５’または３’に位置することができるが、通常、プロモーターから部位５’に位置する。好適な天然または異種シグナル配列（リーダー配列またはシグナルペプチド）をコードする配列は、抗体の細胞外分泌を促進するために発現ベクターに組み入れることができる。シグナルペプチドまたはリーダーの選択は、抗体が生成される宿主細胞の型に依存し、異種シグナル配列は、天然シグナル配列に置き換えることができる。哺乳動物宿主細胞で機能するシグナルペプチドの例としては、以下のものが挙げられる：米国特許第４、９６５、１９５号に記載されたインターロイキン−７（ＩＬ−７）のシグナル配列；Ｃｏｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７６８に記載されたインターロイキン−２レセプターのシグナル配列；ＥＰ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．０３６７  ５６６に記載されたインターロイキン−４レセプターシグナルペプチド；米国特許第４、９６８、６０７号に記載されたＩ型インターロイキン−１レセプターシグナルペプチド；ＥＰ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．０  ４６０  ８４６．に記載されたＩＩ型インターロイキン−１レセプターシグナルペプチド。
【０２１７】
本明細書にクレームされている本開示の抗体を発現するための発現ベクターは、出発ベクター、例えば、市販のベクターから構成することができる。かかるベクターは、所望の全フランキング配列を含有しても良い、または含有しなくても良い。１つ以上の本明細書に記載のフランキング配列が、ベクターに既に存在しない場合、個別にこれを得て、ベクターにリゲートすることができる。各フランキング配列を得るために用いられる方法が、当業者によく知られている。
【０２１８】
ベクターを構成し、ベクターの好適な部位に軽鎖をコードする核酸分子、重鎖、または軽鎖、及びＢｂ因子抗原結合配列を含む重鎖を挿入した後、増幅及び／またはポリペプチド発現のために好適な宿主細胞に完成したベクターを挿入することができる。Ｂｂ因子抗体の発現ベクターの選択した宿主細胞への形質変換は、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共同沈降反応、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、または他の公知の技術を含むよく知られる方法によって実施することができる。選択した方法は、部分的に、用られる宿主細胞の型の機能となる。これらの方法及び他の好適な方法が、当業者によく知られており、例えば、前記のＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔａｌ．，２００１に記載されている。
【０２１９】
宿主細胞は、好適な条件下で培養される場合、Ｂｂ因子抗体を合成する。Ｂｂ因子抗体は、その後に、培養培地から採集することができる（宿主細胞が培地にそれを分泌する場合）、またはそれを生成する宿主細胞から直接採集することができる（それが分泌されない場合）。好適な宿主細胞の選択は、さまざまな因子、例えば、所望の発現レベル、活性（例えば、グリコシル化またはリン酸化）に好適であり、または必要であり、生物学的活性分子にフォールドするのが容易であるポリペプチド修飾に依存する。宿主細胞は、真核または前核細胞とすることができる。
【０２２０】
発現の宿主として利用できる哺乳動物細胞系が、当技術分野でよく知られており、これらに限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヘラ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、及び多くの他の細胞系を含む、Ａｍｅｒｉｃａｎ  ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  （ＡＴＣＣ）から入手できる不死化細胞系が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、細胞系は、どの細胞系が、高い発現レベルを有し、構成的にＢｂ因子結合特性で抗体を生成するかを決定して選択することができる。もう１つの実施形態では、それ自体の抗体を生成しないが、異種抗体を生成し、分泌する能力があるＢ細胞系列からの細胞系を選択することができる。
診断及び治療目的のためのＢｂ因子抗体の使用
【０２２１】
本開示の抗体は、生物試料中のＢｂ因子を検出し、Ｂｂ因子タンパク質を生成する細胞または組織の特定に有用である。例えば、本開示のＢｂ因子抗体は、組織または細胞中に発現したＢｂ因子を検出及び／または定量化するために、診断アッセイ、例えば、結合アッセイに用いることができる。Ｂｂ因子のレベルの増大は、疾患、例えば、眼球障害、癌、感染、及び／または潰瘍性大腸炎、の徴候となり得る。Ｂｂ因子のレベルの減少は、硬変症、糸球体腎炎、遺伝性血管性浮腫、肝炎、腎臓移植拒絶、ループス腎炎、栄養不良、及び／または全身性ループスエリテマトーデスの徴候となり得る。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、Ｂｂ因子媒介疾患の治療で、これが必要な患者にＢｂ因子に特異的に結合する本開示の抗体を用いることができる。また、本開示のＢｂ因子抗体を用いて、Ｂｂ因子が他の補体タンパク質と複合体を形成するのを抑制し、これにより、細胞または組織中のＢｂ因子の生物活性を調節することができる。Ｂｂ因子に結合する抗体は、このため、他の結合化合物との相互作用を調節及び／またはブロックすることができ、Ｂｂ因子媒介疾患を改善するのに治療用に使用しても良い。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、Ｂｂ因子抗体が、Ｂｂ因子のプロテアーゼ活性をブロックしても良い。いくつかの場合では、Ｂｂ因子抗体によるＢｂ因子の結合の結果、Ｂｂ因子誘発シグナル伝達カスケードの中断となっても良い。
診断方法
【０２２４】
Ｂｂ因子またはＢ因子に関係する疾患及び／または状態を検出する、診断する、またはモニターする診断目的のために本開示の抗体を用いることができる。本開示により、当技術分野の技術に知られる古典的免疫組織学的方法を用いて、試料中のＢｂ因子の存在の検出が提供される（例えば、Ｔｉｊｓｓｅｎ、１９９３、Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、ｖｏｌ  １５（Ｅｄｓ  Ｒ．Ｈ．Ｂｕｒｄｏｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ｈ．ｖａｎ  Ｋｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）；Ｚｏｌａ、１９８７、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、ｐｐ．１４７−１５８（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；Ｊａｌｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：９７６−９８５；Ｊａｌｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１０５：３０８７−３０９６）。Ｂｂ因子の検出は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することができる。
【０２２５】
本明細書で提供される診断用途は、Ｂｂ因子の発現及び／またはＢｂ因子への結合を検出するための抗体の使用を含む。Ｂｂ因子の存在の検出に有用な方法の例としては、イムノアッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）及び放射性イムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられる。
【０２２６】
診断用途では、抗体は、通常、検出可能標識基で標識付けすることができる。好適な標識基としては、放射性同位体または放射性核種（例えば、3Ｈ、14Ｃ、15Ｎ、35Ｓ、90Ｙ、99Ｔｃ、111Ｉｎ、125Ｉ、131Ｉ）、蛍光基（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素基（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光基、ビオチニル基、または２次リポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、２次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、標識基が、立体障害可能性を減らすためにさまざまな長さのスペーサーアームによって抗体に結合される。タンパク質を標識付けするさまざまな方法が、当技術分野で知られており、本開示で実施するのに用いることができる。
【０２２７】
本開示の１つの態様では、Ｂｂ因子を発現する細胞（単数及び複数）が特定される。特定の実施形態では、抗体が、標識基で標識付けされ、標識付けされた抗体のＢｂ因子への結合が検出される。さらに特定の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗体のＢｂ因子への結合を検出することができる。さらに特定の実施形態では、抗体／Ｂｂ因子複合体が、当技術分野で知られる技術を用いて分離され、測定される。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、１９８８、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（ｅｄ．１９９１  及び  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）；Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ、ｅｄ．，１９９３、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓを参照。
【０２２８】
本開示のもう１つの態様では、本開示の抗体によるＢｂ因子への結合と競合する試験分子の存在が検出される。１つのかかるアッセイの例では、試験分子が存在する、または存在しない一定量のＢｂ因子を含有する溶液中で遊離抗体の量を検出することを含む。遊離抗体（すなわち、Ｂｂ因子に結合されない抗体）の量が増大すると、試験分子が抗体とのＢｂ因子結合と競合することができることを示す。１つの実施形態では、抗体が、標識基で標識付けされる。代わりに、試験分子が標識付けされ、遊離試験分子の量が、抗体が存在しても存在しなくても、モニターされる。
【０２２９】
適応
この補体系は、アテローム硬化症、急性心筋梗塞後の虚血−再潅流、ヘノッホシェーンライン紫斑病性腎炎、免疫複合体性脈管炎、リウマチ様関節炎、血管炎、動脈瘤、脳卒中、心筋症、出血性ショック、打撲傷、多発臓器不全、低血液量性ショック及び腸虚血、移植拒絶、心臓手術、ＰＴＣＡ、自然流産、神経細胞損傷、脊髄損傷、重症筋無力症、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ギランバレー症候群、パーキンソン病、アルツハイマー病、急性呼吸困難症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、輸血関連急性肺損傷、急性肺損傷、グッドパスチャー病、心筋梗塞、心肺バイパス後炎症、心肺バイパス、敗血症性ショック、移植拒絶、異種移植、熱傷、全身性エリテマトーデス、膜性腎炎、ベルジェ病、乾癬、水疱性類天疱瘡、皮膚筋炎、抗リン脂質抗体症候群、炎症性腸疾患、血液透析、白血球分離、血漿交換、ヘパリン誘導性体外膜型酸素付加ＬＤＬ沈降法、体外膜型酸素付加、及び黄斑変性を含むいくつかの急性及び慢性状態に寄与することに関与している。
【０２３０】
黄斑変性疾患、例えば、老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）の全ステージは、乾燥性及び湿性（非−滲出性及び滲出性）形態、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、ブドウ膜炎、糖尿病性及び他の虚血関連網膜症、及び他の眼内血管新生疾患、例えば、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォンヒッペルリンドウ病、眼球のヒストプラズマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、網膜分枝静脈閉塞症（ＢＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生を含む。補体関連眼球状態の好ましいグループが、非滲出性（湿性）及び滲出性（乾燥性または委縮性）ＡＭＤを含む老人性黄斑変性症（ＡＭＤ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、及び眼内炎を含む。
【０２３１】
１つ以上のサイトカイン、リンホカイン、造血因子（単数及び複数）、及び／または抗炎症性薬剤と組み合わせて本明細書に開示した抗Ｂｂ因子抗体を用いることができる。
【０２３２】
本明細書に記載した疾患及び障害の治療は、１つ以上の本明細書に提供した抗体による治療と組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）、痛み及び炎症の制御のための第一選択薬の使用を含むことができる。これらの薬剤は、非ステロイド系、抗炎症性薬剤（ＮＳＡＩＤ）に分類される。第２の治療は、副腎皮質ホルモン、遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）、または寛解導入（ＤＭ）薬を含む。以下の化合物に関する情報が、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｍｅｒｃｋ、Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ、Ｎ．Ｊ．（１９９２）及びＰｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ、ＰＪＢ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．にみつけることができる。
【０２３３】
特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載した疾患及び障害の治療で、抗体及び１つ以上のＮＳＡＩＤのいずれかの使用を対象とする。ＮＳＡＩＤの抗炎症性作用は、少なくとも部分的に、プロスタグランジン合成の抑制によるものである（Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ  ｉｎ  “Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”、ＭａｃＭｉｌｌａｎ  ７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８５））。ＮＳＡＩＤは、少なくとも９の基：（１）サリチル酸誘導体；（２）プロピオン酸誘導体；（３）酢酸誘導体；（４）フェナム酸誘導体；（５）カルボン酸誘導体；（６）酪酸誘導体；（７）オキシカム；（８）ピラゾール及び（９）ピラゾロンに特徴づけることができる。
【０２３４】
もう１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のサリチル酸誘導体、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。かかるサリチル酸誘導体、プロドラッグエステル及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、アセトアミノサロール、アロキシプリン、アスピリン、ベノリレート、ブルモサリゲニン、アセチルサリチル酸カルシウム、コリンマグネシウムトリサリチル酸、サリチル酸マグネシウム、サリチル酸コリン、ジフルニサル（ｄｉｆｌｕｓｉｎａｌ）、エテルサレート、フェンドサル、ゲンチシン酸、サリチル酸グリコール、サリチル酸イミダゾール、アセチルサリチル酸リジン、メサラミン、サリチル酸モルホリン、サリチル酸１−ナフチル、オルサラジン、パルサルミド、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェニル、サルアセトアミド、サリチルアミドＯ−酢酸、サルサレート、サリチル酸ナトリウム及びスルファサラジンを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連サリチル酸誘導体が、このグループに包含されることを意図している。
【０２３５】
さらに、特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のプロピオン酸誘導体、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。プロピオン酸誘導体、プロドラッグエステル、及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシ酸、カルプロフェン、デキシンドプロフェン、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、フルクロプロフェン、イブプロフェン、イブプロフェンアルミニウム、イブプロキサム、インドプロフェン、イソプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピケトプロフェン、ピメプロフエン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、ピリドキシプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸及びチオキサプロフェンを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連プロピオン酸誘導体が、このグループに包含されることを意図している。
【０２３６】
さらにもう１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上の酢酸誘導体、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。酢酸誘導体、プロドラッグエステル、及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、アセメタシン、アルクロフェナク、アンフェナク、ブフェキサマク、シンメタシン、クロピラック、デルメタシン、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、フェルビナク、フェンクロフェナク、フェンクロラク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、フロフェナク、グルカメタシン、イブフェナク、インドメタシン、イソフェゾラク、イソキセパック、ロナゾラク、メチアジン酸、オキサメタシン、オキシピナク、ピメタシン、プログルメタシン、スリンダク、タルメタシン、チアラミド、チオピナク、トルメチン、トルメチンナトリウム、ジドメタシン及びゾメピラクを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連酢酸誘導体が、このグループに包含されることを意図している。
【０２３７】
もう１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のフェナム酸誘導体、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。フェナム酸誘導体、プロドラッグエステル及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、エンフェナム酸、エトフェナメート、フルフェナム酸、イソニキシン、メクロフェナム酸、メクロフェナム酸ナトリウム、メドフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸、タルニフルメート、テロフェナメート、トルフェナム酸及びウフェナメートを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連フェナム酸誘導体が、このグループに包含されることを意図している。
【０２３８】
さらに１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のカルボン酸誘導体、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。用いることができるカルボン酸誘導体、プロドラッグエステル、及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、クリダナク、ジフルニサール、フルフェニサール、イノリジン、ケトロラク及びチノリジンを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連カルボン酸誘導体が、このグループに包含されることを意図している。
【０２３９】
さらにもう１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上の酪酸誘導体、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。酪酸誘導体、プロドラッグエステル、及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン及びキセンブシンを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連酪酸誘導体が、このグループに包含されることを意図している。
【０２４０】
もう１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のオキシカム、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。オキシカム、プロドラッグエステル、及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、ドロキシカム、エノリカム、イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカム、テノキシカム及び４−ヒドロキシル−１，２−ベンゾチアジン１，１−ジオキシド４−（Ｎ−フェニル）−カルボキサミドを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連オキシカムが、このグループに包含されることを意図している。
【０２４１】
さらにもう１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のピラゾール、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。用いることができるピラゾール、プロドラッグエステル、及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、ジフェナミゾール及びエピリゾールを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連ピラゾールが、このグループに包含されることを意図している。
【０２４２】
さらに１つの特定の実施形態では、本開示は、１つ以上のピラゾロン、プロドラッグエステル、またはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。用いることができるピラゾロン、プロドラッグエステル及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、アパゾン、アザプロパゾン、ベンズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、ピペブゾン、プロピルフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾン及びチアゾリノブタゾンを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連ピラゾロン（ｐｙｒａｚａｌｏｎｅｓ）が、このグループに包含されることを意図している。
【０２４３】
もう１つの特定の実施形態では、本開示は、以下のＮＳＡＩＤの１つ以上のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする：ε−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシル−メチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、アニトラザフェン、アントラフェニン、ベンダザック、ベンダザックリジネート、ベンジダミン、ベプロジン、ブロペラモール、ブコローム、ブフェゾラク、シプロクアゾン、クロキシメート、ダジダミン、デボキサメト、デトミジン、ジフェンピラミド、ジフェンピラミド、ジフィサラミン、ジタゾール、エモルファゾン、メシル酸フェネチゾール、フェンフルミゾール、フロクタフェニン、フルミゾール、フルニキシン、フルプロクアゾン、フォピルトリン、ホスフォサール、グアイメサール、グアイアゾレン、イソニキシルン、塩酸レフェタミン、レフルノミド、ロフェミゾール、ロチファゾール、リジンクロニキシネート、メセクラゾン、ナブメトン、ニクチンドール、ニメスリド、オルゴテイン、オルパノキシン、オキサセプロール、オキサパドール、パラニリン、ペリソキサール、クエン酸ペリソキサール、ピフォキシム、ピプロキセン、ピラゾラク、ピルフェニドン、プロカゾン、プロキサゾール、チエラビンＢ、チフラミゾール、チメガジン、トレクチン、トルパドール、トリプタミド、ならびに４８０１５６Ｓ、ＡＡ８６１、ＡＤ１５９０、ＡＦＰ８０２、ＡＦＰ８６０、ＡＩ７７Ｂ、ＡＰ５０４、ＡＵ８００１、ＢＰＰＣ、ＢＷ５４０Ｃ、ＣＨＩＮＯＩＮ１２７、ＣＮ１００、ＥＢ３８２、ＥＬ５０８、Ｆ１０４４、ＦＫ−５０６、ＧＶ３６５８、ＩＴＦ１８２、ＫＣＮＴＥＩ６０９０、ＫＭＥ４、ＬＡ２８５１、ＭＲ７１４、ＭＲ８９７、ＭＹ３０９、ＯＮＯ３１４４、ＰＲ８２３、ＰＶ１０２、ＰＶ１０８、Ｒ８３０、ＲＳ２１３１、ＳＣＲ１５２、ＳＨ４４０、ＳＩＲ１３３、ＳＰＡＳ５１０、ＳＱ２７２３９、ＳＴ２８１、ＳＹ６００１、ＴＡ６０、ＴＡＩ−９０１（４−ベンゾイル−１−インダンカルボン酸）、ＴＶＸ２７０６、Ｕ６０２５７、ＵＲ２３０１及びＷＹ４１７７０などの企業コード番号で示されるもの。また、ＮＳＡＩＤとほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連ＮＳＡＩＤが、このグループに包含されることを意図している。
【０２４４】
さらにもう１つの特定の実施形態では、本開示は、急性及び慢性炎症例えば、リウマチ性疾患、対宿主移植片病及び多発性硬化症を含む本明細書に記載した疾患及び障害の治療のため、１つ以上の副腎皮質ホルモン、プロドラッグエステルまたはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。副腎皮質ホルモン、プロドラッグエステル及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、ヒドロコルチゾン、及びヒドロコルチゾンに由来する化合物、例えば、２１−アセトキシプレグネノロン、アルクロメラゾン、アルゲストン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン、クロベタゾール、プロピオン酸クロベタゾール、クロベタゾン、酪酸クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコン、デソニド、デソキシメラゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、エノキソロン、フルアザコルト、フルクロロニド、フルメタゾン、ピバル酸フルメタゾン、フルシノロンアセトニド、フルニソリド、フルオシノニド、フルオロシノロンアセトニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、ヘキサン酸フルオコルトロン、吉草酸ジフルオコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルランデノリド、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、酢酸ハロプレドン、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾン２１−ナトリウム、テブト酸ヒドロコルチゾン、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２１−ジエドリアミノアセテート、リン酸プレドニゾロンナトリウム、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンナトリウム２１−ｍ−スルホベンゾエート、プレドニゾロンナトリウム２１−ステアログリコレート、テブト酸プレドニゾロン、プレドニゾロン２１−ジエドリアミノアセテート、プレドニゾン、プレドニバル、プレドニリデン、プレドニリデン２１−ジエチルアミノアセテート、チキソコルトール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、及びトリアムシノロンヘキサセトニドを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連副腎皮質ホルモンが、このグループに包含されることを意図している。
【０２４５】
もう１つの特定の実施形態では、本開示は、急性及び慢性炎症例えば、リウマチ性疾患、対宿主移植片病及び多発性硬化症を含む本明細書に記載した疾患及び障害の治療のため、１つ以上の遅効性抗リウマチ薬（ＳＡＡＲＤ）または寛解導入抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、プロドラッグエステルまたはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。ＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤ、プロドラッグエステル及びこれらの製剤的に許容可能な塩が、アロクプレイドナトリウム、オーラノフィン、オーロチオグルコース、オーロチオグリカニド、アザチオプリン、ブレキナルナトリウム、ブシラミン、３−オーロチオ−２−プロパノール−１−スルホン酸カルシウム、クロラムブシル、クロロキン、クロブザリト、クプロキソリン、シクロ−ホスファミド、シクロスポリン、ダプソン、１５−デオキシスペルガリン、ジアセレイン、グルコサミン、金塩（例えば、シクロキン金塩、チオリンゴ酸金ナトリウム、チオ硫酸金ナトリウム）、ヒドロキシクロロキン、硫酸ヒドロキシクロロキン、ヒドロキシ尿素、ケブゾン、レバミソール、ロベンザリット、メリチン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ミゾリビン、ミコフェノレートモフェチル、ミオラール、ナイトロジェンマスタード、Ｄ−ペニシラミン、ピリジノールイミダゾール、例えば、ＳＫＮＦ８６００２及びＳＢ２０３５８０、ラパマイシン、チオール、チモポエチンを含む。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連ＳＡＡＲＤまたはＤＭＡＲＤが、このグループに包含されることを意図している。
【０２４６】
さらにもう１つの特定の実施形態では、本開示は、急性及び慢性炎症を含む本明細書に記載した疾患及び障害の治療のため、１つ以上のＣＯＸ２抑制剤、プロドラッグエステルまたはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。ＣＯＸ２抑制剤、プロドラッグエステルまたはこれらの製剤的に許容可能な塩の例としては、例えば、セレコキシブが挙げられる。また、ほぼ同じ鎮痛及び抗炎症性特性を有する構造関連ＣＯＸ２抑制剤が、このグループに包含されることを意図している。ＣＯＸ−２選択的抑制剤の例としてはエトリコキシブ、バルデコキシブ、セレコキシブ、リコフェロン、ルミラコキシブ、ロフェコキシブ、などが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４７】
さらにもう１つの特定の実施形態では、本開示は、急性及び慢性炎症を含む本明細書に記載した疾患及び障害の治療のため、１つ以上の抗菌剤、プロドラッグエステルまたはこれらの製剤的に許容可能な塩のいずれかと組み合わせた（治療前、治療後、または同時治療）抗体の使用を対象とする。抗菌剤としては、例えば、幅広いクラスのペニシリン、セファロスポリン及び他のβ−ラクタム、アミノグリコシド、アゾール、キノロン、マクロライド、リファマイシン、テトラサイクリン、スルホンアミド、リンコサミド及びポリミキシンが挙げられる。ペニシリンとしては、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フロキサシリン、アンピシリン、アンピシリン／スルバクタム、アモキシシリン、アモキシシリン／クラブラネート、ヘタシリン、シクラシリン、バカンピシリン、カルべニシリン、カルべニシリンインダニル、チカルシリン、チカルシリン／クラブラネート、アズロシリン、メズロシリン、ピペラシリン、及びメシリナムが挙げられるが、これらに限定されない。セファロスポリン及び他のβ−ラクタムとしては、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セフラジン、セファゾリン、セファドロキシル、セファクロール、セファマンドール、セフォテタン、セフォキシチン、セルロキシム、セフォニシド、セフォラジン、セフィキシム、セフォタキシム、モキサラクタム、セフティゾキシム、セトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジム、イミペネム及びアズトレオナムが挙げられるが、これらに限定されない。アミノグリコシドとしては、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ネチルミシン、カナマイシン及びネオマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。アゾールとしては、フルコナゾールが挙げられるが、これらに限定されない。キノロンとしては、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、エノキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン及びテマフロキサシンが挙げられるが、これらに限定されない。マクロライドとしては、エリスロマイシン、スピラマイシン及びアジスロマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。リファマイシンとしては、リファンピンが挙げられるが、これらに限定されない。テトラサイクリンとしては、スピサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、デオキシサイクリン、グアメサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セノシクリン及びテトラサイクリンが挙げられるが、これらに限定されない。スルホンアミドとしては、スルファニルアミド、スルファメトキサゾール、スルファセタミド、スルファジアジン、スルフイソキサゾール及びコトリモキサゾール（トリメトプリム／スルファメトキサゾール）が挙げられるが、これらに限定されない。リンコサミドとしては、クリンダマイシン及びリンコマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。ポリミキシン（ポリペプチド）としては、ポリミキシンＢ及びコリスチンが挙��られるが、これらに限定されない。
【０２４８】
治療方法：医薬製剤、投与経路
製剤的に許容可能な希釈剤、キャリア、溶解補助剤、乳化剤、防腐剤及び／またはアジュバントとともに治療有効量の１つまたは複数の本開示の抗体を含む組成物を開示する。また、本開示は、かかる医薬組成物を投与することによって患者を治療する方法を提供する。患者は、ヒト対象または動物対象のいずれかとすることができる。
【０２４９】
Ｂｂ因子活性を低下させるために１つ以上の抗体を含む医薬組成物を用いることができる。Ｂｂ因子活性に関係する予後、症状、及び／または病理を治療するのに１つ以上の抗体を含む医薬組成物を用いることができる。補体経路及び／または他の補体タンパク質に結合するＢｂ因子を抑制する方法に、１つ以上の抗体を含む医薬組成物を用いることができる。特定の実施形態では、当該抗体が、Ｂｂ因子のプロテアーゼ活性を抑制する。さらに別の実施形態では、Ｂｂ因子のプロテアーゼ活性を抑制する方法に、１つ以上の抗体を含む医薬組成物を用いることができる。Ｂｂ因子活性に関係する予後、症状、及び／または病理を治療する方法に、１つ以上の抗体を含む医薬組成物を用いることができる。生成ＭＡＣを抑制する方法に、１つ以上の抗体を含む医薬組成物を用いることができる。黄斑変性を抑制する方法に、１つ以上の抗体を含む医薬組成物を用いることができる。
【０２５０】
好ましくは、許容可能な製剤材料が、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して毒性がない。特定の実施形態では、治療有効量のＢｂ因子抗体を含む医薬組成物が提供される。
【０２５１】
特定の実施形態では、許容可能な製剤材料が、好ましくは、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して毒性がない。特定の実施形態では、当該医薬組成物が、例えば、組成物のｐＨ、容量オスモル濃度、粘度、透明度、色、等張力、におい、無菌性、安定性、溶解または放出速度、吸着または浸透を変化させる、維持する、または保つための製剤材料を含有しても良い。かかる実施形態では、好適な製剤材料としては、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；抗菌剤；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝剤（例えば、ホウ酸塩、炭酸水素塩、トリス塩酸、クエン酸塩、リン酸塩または他の有機酸）；増量薬剤（例えば、マニトールまたはグリシン）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）；充填剤；単糖；二糖；及び他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；着色剤、香味剤及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；低分子量ポリペプチド；塩−形成対イオン（例えば、ナトリウム）；防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）；糖アルコール（例えば、マニトールまたはソルビトール）；懸濁化剤；表面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパル）；安定性増進薬剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）；等張化増進薬剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属、好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マニトールソルビトール）；デリバリービヒクル；希釈剤；賦形剤及び／または医薬アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ、１８th  Ｅｄｉｔｉｏｎ、（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ、ｅｄ．）、１９９０、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙを参照。
【０２５２】
特定の実施形態では、最適医薬組成物が、例えば、所期の投与経路、デリバリー形態及び所望の用量に応じて当業者によって決定される。例えば、前記のＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳを参照。特定の実施形態では、かかる組成物が、本開示の抗体の物理状態、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出の速度及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスの速度に影響を及ぼしても良い。特定の実施形態では、医薬組成物中の一次ビヒクルまたはキャリアは、本質的に水性または非水性のいずれかとすることができる。例えば、好適なビヒクルまたはキャリアは、非経口投与用の組成物でよくみられる他の材料を補うことができる注入用の水、生理食塩水または人工脳脊髄液、とすることができる。さらに、中性緩衝化生理食塩水または血清アルブミンと混合した生理食塩水が、例示的なビヒクルである。特定の実施形態では、医薬組成物が約ｐＨ７．０〜８．５のトリス緩衝液、または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝液を含み、さらにソルビトールまたはこれらの好適な代替物を含んでも良い。本開示の特定の実施形態では、Ｂｂ因子抗体組成物は、任意の製剤薬剤と所望の純度の選択した組成物を混合することによって（前記ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ）、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態で保管用に調製することができる。さらに、特定の実施形態では、Ｂｂ因子抗体生成物は、好適な賦形剤、例えば、スクロースを用いて凍結乾燥物として製剤化することができる。
【０２５３】
非経口デリバリー用に本開示の医薬組成物を選択することができる。代わりに、吸入用または消化管を通るデリバリー、例えば、経口用に組成物を選択することができる。かかる製剤的に許容可能な組成物の調製は、当技術分野の技術内である。
【０２５４】
製剤成分は、投与される部位に許容可能であるように存在し、好ましくは、投与される部位に許容可能な濃度である。特定の実施形態では、生理学的ｐＨで、またはこれよりわずかに低いｐＨで、通常、約５〜約８のｐＨ範囲内で当該組成物を維持するために緩衝液が用いられる。
【０２５５】
非経口投与が検討される場合、この開示に用いられる治療組成物は、製剤的に許容可能なビヒクル中に所望のＢｂ因子抗体を含み、パイロジェンを含まず非経口で許容可能な水溶液の形態で提供することができる。非経口注入用の特に好適なビヒクルは、Ｂｂ因子抗体が無菌等張溶液として製剤化され、適切に保存されている無菌蒸留水である。特定の実施形態では、当該調製物が、蓄積注入によってデリバリーすることができる生成物の制御性または持続性放出をもたらす可能性があり、薬剤、例えば、注入可能微小球、生物浸食性粒子、ポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸またはポリグリコール酸）、ビーズまたはリポソームと所望の分子の製剤を含むことができる。特定の実施形態では、また、循環中の持続時間を促進する作用があるヒアルロン酸を用いても良い。特定の実施形態では、所望の抗体を導入するためにインプラント可能な薬剤デリバリー器具を用いることができる。
【０２５６】
本開示の医薬組成物は、吸入用に製剤化することができる。これらの実施形態では、Ｂｂ因子抗体が、有利には、乾燥吸入可能粉末として製剤化される。特定の実施形態では、また、エアゾールデリバリー用に噴射剤とともにＢｂ因子抗体吸入溶液を製剤化しても良い。特定の実施形態では、溶液を霧状にすることができる。このため、肺投与及び製剤方法が、さらにＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５に記載されており、これは参照により組み入れられ、化学的に改変したタンパク質の肺デリバリーを記載している。また、経口で投与することができる製剤を検討している。この方法で投与されるＢｂ因子抗体は、通常、固体剤形、例えば、錠剤及びカプセルの配合に用いられるキャリアありで、またはキャリアなしで製剤化することができる。特定の実施形態では、カプセルは、生物学的利用率を最大化し、前全身性分解を最少化する場合、消化管中のポイントで製剤の活性部分を放出するように設計することができる。Ｂｂ因子抗体の吸収を促進するために追加の薬剤を含むことができる。また、希釈剤、香味剤、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤を用いても良い。
【０２５７】
本開示の医薬組成物は、好ましくは、錠剤の作製に好適な非毒性賦形剤との混合物中に、有効量の１つまたは複数のＢｂ因子抗体を含むように提供される。無菌水、またはもう１つの好適なビヒクル中で錠剤を溶解することによって、単位用量形態で溶液を調製することができる。好適な賦形剤としては、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸水素塩、ラクトース、またはリン酸カルシウム；または結合薬剤、例えば、デンプン、ゼラチン、またはアカシア；または潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５８】
追加の医薬組成物は、当業者に明らかであり、持続性デリバリー製剤または制御性デリバリー製剤中にＢｂ因子抗体を含む製剤を含む。また、さまざまな他の持続性デリバリーまたは制御性デリバリー手段、例えば、リポソームキャリア、生物浸食性ミクロ粒子または多孔性ビーズ及び蓄積注入を製剤化する技術が、当業者に知られている。例えば、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮｏＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９を参照。これは、参照により組み入れられ、医薬組成物のデリバリーのための多孔性ポリマーミクロ粒子の制御放出を記載している。持続放出調製物が、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態で、半透過性ポリマーマトリックスを含んでも良い。持続放出マトリックスが、ポリエステル、ハイドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３、７７３、９１９号及びＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＥＰ０５８４８１に開示されており、それぞれが参照により組み入れられる）、Ｌ−グルタミン酸及びγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ２：５４７−５５６）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−インエタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔａｌ．，１９８１、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７及びＬａｎｇｅｒ、１９８２、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５）、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔａｌ．，１９８１、前記）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＥＰ１３３、９８８）を含んでも良い。また、持続放出組成物が、当技術分野に知られるいくつかの方法のいずれかによって調製することができるリポソーム含んでも良い。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔａｌ．，１９８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：３６８８−３６９２；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏｓ．ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８，０４６及びＥＰ１４３，９４９を参照。これは参照により組み入れられる。
【０２５９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に用いられる医薬組成物は、通常、無菌調製物として提供される。滅菌は、無菌濾過膜による濾過によって実施することができる。当該組成物を凍結乾燥する場合、この方法を用いた滅菌は、凍結乾燥及び再調製の前または後に実施することができる。非経口投与のための組成物は、凍結乾燥形態で、または溶液中に保管することができる。非経口組成物は、一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグ、または皮下注入針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルに入れられる。
【０２６０】
一度、医薬組成物が製剤化されると、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、結晶として、または脱水粉末もしくは凍結乾燥粉末として、無菌バイアル中に保管することができる。かかる製剤は、使用準備済の形態で、または投与前に再調製される形態（例えば、凍結乾燥）で、保管することができる。本開示は、また、単一用量投与単位を生成するキットを提供する。本開示のキットは、それぞれ乾燥タンパク質を有する第１の容器及び水性製剤を有する第２の容器の両容器を含有しても良い。この開示の特定の実施形態では、単一及びマルチチャンバープレフィルドシリンジ（例えば、液体シリンジ及びライオシリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅｓ））を含有するキットが提供される。
【０２６１】
用いられる治療有効量のＢｂ因子抗体を含有する医薬組成物は、例えば、治療の背景及び目的に依存する。当業者であれば、治療のための好適な用量レベルは、部分的に、デリバリーされる分子、Ｂｂ因子抗体を用いる症状、投与の経路、及び患者のサイズ（体重、体表面または臓器のサイズ）及び／または状態（年齢及び一般的健康）に応じて変わると理解するであろう。特定の実施形態では、医師が、最適治療効果を得るために用量をタイターし、投与の経路を変更しても良い。通常の用量は、前記に記載した因子に応じて約０．１μｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ以上の範囲としても良い。特定の実施形態では、用量は、０．１μｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、任意で１μｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇまたは１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲としても良い。
【０２６２】
投与回数は、用いられる製剤中の特定のＢｂ因子抗体の薬物動態学的パラメーターに依存する。通常、用量が所望の作用を実現する用量に達するまで、医師が組成物を投与する。このため、当該組成物は、経時的に単一用量、または２つ以上の用量（同じ量の所望の分子を含有しても良い、または含有しなくても良い）として、またはインプラント器具またはカテーテルによる継続的輸血として投与しても良い。さらに好適な用量の改良が、当業者によって日常的に行われ、当業者によって日常的に実施される作業の範囲内である。好適な用量は、好適な用量−反応データを使用して決定することができる。特定の実施形態では、患者に長期間にわたって本開示の抗体を投与することができる。本開示の抗体の連続投与が、完全ヒト抗体ではない抗体、例えば、非ヒト動物中のヒト抗原に対して生じた抗体、例えば、非ヒト種中で生成された非完全ヒト抗体または非ヒト抗体と一般に関係する有害免疫またはアレルギー反応を最少化する。
【０２６３】
当該医薬組成物の投与の経路は、公知の方法（例えば、経口で、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、硝子体内、網膜下、動脈内、門脈内、または腫瘍内経路による注入によって；持続放出系によってまたはインプラント器具による）と一致する。特定の実施形態では、ボーラス注入によって、または継続的に輸血によって、またはインプラント器具によって、当該組成物を投与することができる。
【０２６４】
当該組成物また、所望の分子が吸収された、または封入された膜、スポンジまたはもう１つの好適な材料のインプラントを介して局所に投与することができる。特定の実施形態では、インプラント器具を用いる場合、好適な組織または臓器に器具をインプラントすることができ、所望の分子のデリバリーは、拡散、持効性ボーラス、または連続投与により行うことができる。眼球のインプラントでは、インプラントは、眼内注入、硝子体内注入、網膜下注入、脈絡膜上注入、球後注入またはテノン下空間への注入によって、インプラントすることができる。
【０２６５】
また、本開示に従って、ｅｘ  ｖｉｖｏで、Ｂｂ因子抗体の医薬組成物を用いることが好ましい可能性がある。かかる例では、患者から除去した細胞、組織または臓器をＢｂ因子抗体の医薬組成物に暴露し、その後、患者に細胞、組織及び／または臓器をインプラントする。
【０２６６】
特に、Ｂｂ因子抗体を発現する及び分泌するために、方法、例えば、本明細書に記載の方法を用いて、遺伝子組み換えした特定の細胞をインプラントすることによって、Ｂｂ因子抗体をデリバリーすることができる。特定の実施形態では、かかる細胞は、動物またはヒト細胞とすることができ、自己由来、異種、またはゼノジェネイックとすることができる。特定の実施形態では、当該細胞は、不死化することができる。他の実施形態では、免疫反応の機会を減らすために、当該細胞を封入して、周囲組織の浸潤を回避することができる。さらに実施形態では、封入材料は、通常、タンパク質生成物（単数及び複数）を放出するが、患者の免疫系による、または周囲組織からの他の有害因子による当該細胞の分解を阻止する生体親和性の半透過ポリマー介在物または膜である。
【０２６７】
本明細書の本文内に記載した全文献は、全体が参照により本明細書に明確に組み入れられる。
【０２６８】
実施例
実施した実験及び達成した結果を含む以下の実施例は、例示目的だけのために提供しており、本開示を限定すると解釈してはならない。
【０２６９】
実施例１−抗Ｂ因子抗体と比較した抗Ｂｂ因子抗体の結合アッセイ
抗Ｂｂ因子単クローン抗体とＢｂ因子（ＣｏｍｐＴｅｃｈ（登録商標））及びヒトＢ因子抗原（ＣｏｍｐＴｅｃｈ（登録商標））の結合キネティクスを測定するために、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、無標識技術を用いた。抗−ヒトＩｇＧＦｃ捕獲（ＡＨＣ）バイオセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ、ＵＳＡ）を備えたＯｃｔｅｔ  ＱＫeで親和性測定を実施した。３０℃で、１ｘＰＢＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、ＰＢＳ  ｐＨ７．２）中でアッセイを実施した。１０００ｒｐｍで試料を攪拌した。分析前に、１５分間、センサーを加湿した。
【０２７０】
ＡＨＣセンサーチップで、精製した抗Ｂｂ因子抗体の結合能力を試験した。２０μｇ／ｍｌの抗Ｂｂ因子抗体を用いてチップにロードした。ローディングが３００秒間進んだ結果、捕獲レベルが１．８〜２ｎｍとなった。結合分析のために、１ｘＰＢＳ中で５０ｎＭの濃度に希釈することによってＢｂ因子またはＢ因子抗原を調製した。会合を開始させ、２００秒間モニターし、その後、解離をモニターするために、因子タンパク質を含まない１ｘＰＢＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ、ＰＢＳ  ｐＨ７．２）にチップを移動した。全実験にわたってセンサーデータを収集し、Ｏｃｔｅｔデータ分析ソフトウエア７（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ）を用いてプロセスし、分析した。
【０２７１】
Ｂｂ因子及びＢ因子タンパク質の結合正反応速度を比較することによって、最初に抗Ｂｂ因子抗体の選択性を試験した。Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ（登録商標）のＯｃｔｅｔ  ＱＫeシステムを用いて、この分析を実施した。５０ｎＭのタンパク質調製物中で２００秒以上測定した結合は、抗Ｂｂ因子抗体が特異的にＢｂ因子に結合するが、Ｂ因子への結合は有意に少ないことを示している（図１）。
【０２７２】
実施例２−抗Ｂｂ因子単クローン抗体の機能アッセイ
溶血反応アッセイ−−副経路（ＡＰ）の活性化には、古典的経路より高い濃度の血清が必要である。一般に、ＥＧＴＡがＣａ++を優先的にキレートするアッセイでは、５ｍＭＥＧＴＡの存在下で最終濃度５ｍＭのＭｇ＋＋が用いられる。ほとんどの哺乳動物種のＡＰは、ウサギ赤血球によって自然に活性化され、その結果、都合が良い標的となる。ＧＶＢ０（ＣｏｍｐＴｅｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ）で３回洗浄し、５Ｘ１０8／ｍｌに再懸濁させることによってウサギ赤血球（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）を調製する。ＧＶＢ０で異なる量の抗Ｂｂ因子抗体を希釈した。氷上で、逐次希釈した抗Ｂｂ因子抗体、０．１Ｍ  ＭｇＥＧＴＡ（ＣｏｍｐＴｅｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ）、１／２ＮＨＳ（ＧＶＢ０で１／２に希釈した正常ヒト血清）、及びウサギＥｒの順序で１００ｕｌ反応物を混合する。その後、シェーカー上で、３０分間、３７℃で、反応物をインキュベートする。１．０ｍｌ低温ＧＶＢＥを添加する。混合し、約１０００ｘｇ以上で、３分間、遠心分離機にかけ、細胞をペレットする。１００ｕｌの上澄みを９６−ウエルプレートに移動し、４１２ｎｍ（ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ４．７．１）で読む。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４を用いてデータを分析した。
【０２７３】
結果−−抗Ｂｂ因子抗体の効力、ＩＣ５０ｎＭ（溶血反応の５０％を抑制するために必要な抗体の量）を測定するために、ＡＰ溶血反応アッセイを実施した。データは、本明細書に開示した抗Ｂｂ因子抗体のＩＣ５０が約４０ｎＭであり、抗Ｂ因子抗体のＩＣ５０が約１００ｎＭであることを示した（図２）。このため、ＡＰ溶血反応アッセイでは、抗Ｂｂ因子抗体の方が、抗Ｂ因子抗体より約１０倍強力である。
【０２７４】
実施例３−ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性モデル
非ヒト霊長動物軽損傷モデルで、ヒト化Ｈ４Ｌ４  ９９Ａ１２抗体（それぞれの配列番号：１５及び１１）を試験した。Ｈ４Ｌ４  ９９Ａ１２抗体の硝子体内投与では、対照に対して網膜中の補体沈着をブロックする有効性をもたらした。このデータは、Ｈ４Ｌ４  ９９Ａ１２抗体の局所デリバリーが、黄斑変性及び他の眼球の適応症のヒトの治療に関係のあるｉｎ  ｖｉｖｏモデルで有効であることを示している。
【図１】
2020078304.tif 000010
【図２】
2020078304.tif 000011
【図３】
2020078304.tif 000012
【配列表】
2020078304000001.app
【外国語明細書】
2020078304000001.pdf