(57)【要約】      （修正有）【課題】バイオマーカーの組合せ物、および該組合せ物による脳損傷または軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）の検出方法の提供。【解決手段】脳損傷または軽度外傷性脳損傷をスクリーニングする方法であって、ＧＳＴＰ，ＦＡＢＰ，ＧＦＡＰ、ＮＳＥ、ＧＡＰ４３，ＮＦＨ、ＮＦＭ、ＮＦＬ，Ｓ１００Ｂ，タウ、スペクトリン分解産物、ＵＣＨ−Ｌ１，ＶＣＡＭ，ＳＡＡ，ＣＣＬ２３、ペルオキシドレドキシン１〜６およびＮＤＫＡからなる群から選択されるバイオマーカーを適切な条件で検出する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料において、ＴＢＩ、一過性虚血発作、脳腫瘍、発作、てんかん、脳膿腫、脳症および多発性硬化症からなる群から選択される疾病または障害をスクリーニングするための方法であって、試料を適切な条件下で使用するステップ、および少なくとも２種のバイオマーカーを適切な条件下で検出するステップを含み、前記バイオマーカーが、グルタチオンＳトランスフェラーゼπ（ＧＳＴＰ）、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）、グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロモジュリン（ＧＡＰ４３）、神経線維タンパク質Ｈ（ＮＦＨ）、神経線維タンパク質Ｍ（ＮＦＭ）、神経線維タンパク質Ｌ（ＮＦＬ）、Ｓ１００Ｂ、タウ、スペクトリン分解産物、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラーゼ−Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）、血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ペルオキシレドキシン１〜６およびヌクレオシド二リン酸キナーゼ（ＮＤＫＡ）からなる群から選択される、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の１種以上のバイオマーカーが、年齢または規定されたＧＣＳ、好ましくは１３〜１５であるマーカーと組み合わされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１に記載の１種以上のバイオマーカーが、規定された年齢もしくは年齢群または規定されたＧＣＳ群をスクリーニングするために使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
年齢群が、５０歳未満、６０歳未満の、または６０歳超、７０歳超、もしくは８０歳超の年齢を有する、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
ＧＣＳが、少なくとも１３または少なくとも１５である、請求項２、３または４に記載の方法。
【請求項６】
バイオマーカーが、Ｓ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＨＦＡＢＰ、ＶＣＡＭ、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ペルオキシレドキシン１〜６およびＮＤＫＡまたはそれらの断片、多様体もしくは突然変異体から選択される、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
試料が、血液、血漿、尿、唾液、涙（涙液）またはＣＳＦである、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＴＢＩが、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）である、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
個体の試料において、ＴＢＩ、一過性虚血発作、脳腫瘍、発作、てんかん、脳膿腫、脳症および多発性硬化症からなる群から選択される疾病または障害を検出するために有用な少なくとも２種のマーカーを含む、またはそれらからなる組成物であって、該マーカーが、グルタチオンＳトランスフェラーゼπ（ＧＳＴＰ）、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）、グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロモジュリン（ＧＡＰ４３）、神経線維タンパク質Ｈ（ＮＦＨ）、神経線維タンパク質Ｍ（ＮＦＭ）、神経線維タンパク質Ｌ（ＮＦＬ）、Ｓ１００Ｂ、タウ、スペクトリン分解産物、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラーゼ−Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）、血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ペルオキシレドキシン１〜６およびヌクレオシド二リン酸キナーゼ（ＮＤＫＡ）からなる群から選択される、組成物。
【請求項１０】
２種以上のマーカーを含む、またはそれらからなる組成物であって、該マーカーが、Ｓ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＨＦＡＢＰ、ＶＣＡＭ、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ペルオキシレドキシン１〜６およびＮＤＫＡまたはそれらの断片、多様体もしくは突然変異体から選択される、組成物。
【請求項１１】
ＴＢＩが、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の２種以上のマーカーを含む、またはそれらからなるキット。
【請求項１３】
請求項１に記載の２種以上のマーカーを含む、またはそれらからなるアッセイデバイス。
【請求項１４】
請求項１２に記載のアッセイデバイスであって、該デバイスが、バイオチップ、バイオマーカーパネル、キャリアまたは試験ストリップを含む、またはそれらからなる、アッセイデバイス。
【請求項１５】
感度が、９５％超、好ましくは１００％であり、かつ特異度が、５０％超、好ましくは５５％超、より好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超である、請求項１から１３までのいずれか１項に記載の方法、組成物、キットまたはアッセイ。
【請求項１６】
アルゴリズムを使用する、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオマーカー群、および新規のバイオマーカー群、該バイオマーカー群の、脳損傷または脳関連損傷、特に軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）の診断における使用、ならびに個体における該損傷の検出のための方法およびデバイスに関する。
【０００２】
発明の背景
脳損傷は、世界的に高い発生率を誇っている。特に、軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）は、世界中でかなりの発生率を誇り、高い医療費用の一因となっている。重度ＴＢＩとは異なり、ｍＴＢＩは明白には検出されないため、通常はコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを実施してから、有意な脳損傷の可能性が肯定または否定される。
【０００３】
これまでは、多くの神経学的損傷、特に軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）を有するどの患者を安全に帰宅させてよいかを特定することは、依然として一つの問題であった。従ってコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンは、これらの患者において脳病変を検出するための今日における主要なツールである。しかしながら、これらのスキャンの多くは役に立たずに、費用がかかる。従って、１３〜１５のグラスゴー・コーマ・スコア（ＧＣＳ）（ＪｅｎｎｅｔおよびＴｅａｓｄａｌｅ，ｃｈｅｃｋ，１９７８）で表されるものとして定義される軽度ＴＢＩについての臨床診断規則のいずれにおいても、頭蓋内病変を有する患者の迅速かつ信頼性の高い特定は、外傷後合併症を避け、二次的脳損傷を最小限にするために重要である（Ｇｒａｈａｍら，１９９８）。まず最初に簡単な血液試験で全ての軽度ＴＢＩ患者をスクリーニングして、不必要なＣＴスキャンの回数を減らし、患者をより素早く退院させることを目指す幾つかの研究が報告されている（Ｂｅｒｇｅｒら，２００７；Ｐｏｌｉ−ｄｅ−Ｆｉｇｕｅｉｒｅｄｏら，２００６）。昨年には、特にＳ１００Ｂが、ｍＴＢＩのための可能性を秘めた期待の持てるマーカーとして大規模に調査され、多くの会社によって推進されている。それにもかかわらず、その臨床的有用性は議論を呼んだままである。軽度ＴＢＩの成人においては、０．１０μｇ／Ｌのカットオフ未満のＳ１００Ｂは、ＣＴスキャンにおいてたった３０％の最大削減を可能にするにすぎないと説明されている。Ｓ１００Ｂは、小児ＴＢＩ患者のための関連の予後マーカーになり損ない、リスクの低いＴＢＩを有する子供の調査における補助として見られているにすぎない（Ｔａｖａｒｅｚら，２０１２）。
【０００４】
軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ、振盪症、軽症頭部外傷および軽症脳損傷／頭部外傷とも呼ばれる）は、３０分未満にわたる短時間の精神状態の変化（錯乱状態、失見当識もしくは記憶喪失）または意識消失を引き起こす鈍的外傷または加速力／減速力の結果として定義される閉鎖性頭部外傷の一種である。通常、意識消失は、非常に短時間であり、数秒から数分の間の範囲である。軽度ＴＢＩは、入院された全ての閉鎖性頭部脳損傷の事例のうちの最も大きな割合を保っている。最近では、臨床の現場におけるＴＢＩを有する患者の評価のための第一の判断基準は、ＴＢＩの後の意識レベルを評価するグラスゴー・コーマ・スケール（ＧＳＣ）である。軽度外傷性脳損傷は、損傷時点または入院時点で精神状態に変化がある場合（その人が幻惑しているか、錯乱しているか、または意識を失っている場合、ＧＣＳスコア１３〜１５）にだけ、間違いなく診断されるにすぎない。米国では、入院時点で、頭部外傷患者の１０％が、重度（ＧＳＣ  ８未満）ＴＢＩとして分類され、１０％が中等度（ＧＳＣ  ９〜１２）ＴＢＩとして分類され、残りの８０％が、軽度ＴＢＩ（ＧＣＳ  １３〜１５）として分類される（Ｎａｒａｙａｎ  ＲＫ，Ｍｉｃｈｅｌ  ＭＥら，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ．，２００２）。欧州の世界保健機構によっても、処置された頭部外傷の７０％〜９０％が軽度であると分類されたという同様の割合が指摘されている（Ｃａｓｓｉｄｙ  ＪＤら，２００４，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）。ｍＴＢＩを有する患者の１０％が、長期傷害、例えば頭痛、疲労、思考困難、記憶障害、注意欠陥、気分変動、睡眠障害、欲求不満およびてんかん症的事象さえも患うことがあるという公衆衛生問題が残る（ＪａｌｌｏおよびＮａｒａｙａｎ，２０００；Ｎａｒａｙａｎら，２００２）。病因が複雑なため、ｍＴＢＩを有するどの患者を、治療介入の必要なく安全に帰宅させてもよいかを特定するという問題が残る（Ｊａｇｏｄａら，２００８）。最近では、外傷後合併症および二次的脳損傷の可能性を避けるために、ｍＴＢＩ患者は、更にコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンおよび磁気共鳴画像法（利用できる場合）のようなツールで診断される（Ｇｒａｈａｍら，１９９８）。ｍＴＢＩを有する患者の群において、わずか３％〜１９％だけが、患者における急性頭蓋内病変を表す異常なＣＴ結果を呈するにすぎない（Ｊａｇｏｄａら，２００８；Ｂａｚａｒｉａｎら，２００６；Ｂｏｒｇら，２００４）。これらのスキャンのそれ以外の８０％以上は、損傷による合併症を示さない正常な頭部ＣＴを示すが、それ自体は安いものではなく、患者と医療従事者の両者とっても時間のかかるものである。
【０００５】
バイオマーカーの使用は、不必要なＣＴスキャンの量を減らす手段として（Ｂｅｒｇｅｒら，２００７；Ｐｏｌｉ−ｄｅ−Ｆｉｇｕｅｉｒｅｄｏら，２００６）、そしてＣＴ装置の利用の機会のない分散した場所で使用するために提案されている。しかしながら、これまでは、大部分の患者を適切に分類することができる試験結果がもたらされる、従って連続的スクリーニングにおいて有用なバイオマーカーアッセイは得られていない。
【０００６】
前記のように、ＴＢＩ検出のための既知のバイオマーカーでは信頼性が不十分であり、かつ偽陰性の結果の割合が高いため、今日に選ばれる方法はＣＴスキャンである。そのような既知の１つのバイオマーカーは、Ｓ１００Ｂである。
【０００７】
近年では、Ｓ１００Ｂは、ｍＴＢＩのための可能性を秘めた期待の持てるマーカーとして大規模に調査されている（Ｒｕａｎ  Ｓら，２００９；Ｇｏｙａｌら，２０１３）。それにもかかわらず、その臨床的有用性は議論を呼んだままである。ｍＴＢＩの成人においては、０．１μｇ／Ｌのカットオフ未満のＳ１００Ｂは、ＣＴスキャンにおいて３０％の最大削減（調査者に対して）が可能であるにすぎないと説明されている。Ｓ１００Ｂは、小児ＴＢＩ患者のための関連の予後マーカーになり損ない、リスクの低いＴＢＩを有する子供の調査における補助として見られているにすぎない（Ｔａｖａｒｅｚら，２０１２；Ｆｉｌｉｐｐｉｄｉｓら，２０１０）。
【０００８】
Ｓ１００Ｂは、例えば酵素活性の調節、細胞骨格要素の動力学、細胞成長および細胞分化ならびにＣａ２＋ホメオスタシスに関係する低分子量（９ｋＤａ〜１３ｋＤａ）の非遍在性のＣａ２＋被調節タンパク質である（Ｄｏｎａｔｏ  Ｒ．，２００３）。それは、中枢神経系（ＣＮＳ）において主として見出され、グリア細胞によって分泌される（Ｄｏｎａｔｏ  Ｒ．，２００３）。カルシウムホメオスタシスへの関与のため、該タンパク質は、神経保護機能を有し、例えば細胞内カルシウム濃度の増加によってグルコースの不在下でミトコンドリア機能不全および細胞死を防ぐか（Ｂａｒｇｅｒｏｒら，１９９５）、または神経突起成長および星状細胞増殖を促進する（Ｒｅｅｖｅｓら，１９９４）。かなり高められたＳ１００Ｂレベルは、重度のＴＢＩと関連していて、それが、構造損傷の進行および損傷後の細胞死をもたらすことがある（Ｉｎｇｅｂｒｉｇｔｓｅｎら，２００２、Ｍｉｓｓｌｅｒら，１９９９）。
【０００９】
ｍＴＢＩのような損傷において、ｍＴＢＩを示す患者が、誤診により退院させられて、深刻な合併症を患うか、またはその後に死ぬことさえ起こりかねないという有害な結果の点で、かなりの比率が偽陰性となる危険性があってはならない。従って、そのような試験について定義されたカットオフは、非常に高い特異度（１００％に近い）に対して偏る必要があり、その結果として非常に低い感度が生ずることがある。この制限により、ｍＴＢＩのための既知の個々のバイオマーカーは、臨床設備における通常の診断のために適したものとはならなかった。
【００１０】
ヘルスケアにおけるコスト圧およびＣＴスキャンの高コストの観点で、潜在的なｍＴＢＩ患者を分類する、信頼性が高くて費用のかからない代わりとなる経路を見出すことが大きく望まれており、長い間必要と考えられてきた。
【００１１】
このように、本出願の基礎をなす一つの課題は、任意の脳関連外傷状態の、特にｍＴＢＩのための検出または／および分類のための、代わりとなるもしくは新規の適切なバイオマーカーと、従って臨床的状況もしくは非臨床的状況で使用することができるｍＴＢＩ診断において有用かつ信頼性の高いアッセイおよびデバイスとを提供することであるか、または神経学的もしくはｍＴＢＩスクリーニングおよび分析のための既存のアプローチを改善することである。
【００１２】
発明の概要
一つの態様において、本発明は、脳外傷または障害もしくは疾病、例えばＴＢＩ、一過性虚血発作、脳腫瘍、発作、てんかん、脳膿腫、脳症および多発性硬化症を、グルタチオンＳトランスフェラーゼπ（ＧＳＴＰ）、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）、グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロモジュリン（ＧＡＰ４３）、神経線維タンパク質Ｈ（ＮＦＨ）、神経線維タンパク質Ｍ（ＮＦＭ）、神経線維タンパク質Ｌ（ＮＦＬ）、Ｓ１００Ｂ、タウ、スペクトリン分解産物、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラーゼ−Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）、血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ペルオキシレドキシン１〜６およびヌクレオシド二リン酸キナーゼ（ＮＤＫＡ）等のマーカー群の組合せ物の使用によって分類または検出するための方法、組成物、キット、アッセイを提供する。
【００１３】
もう一つの態様において、本発明は、試料における、ＴＢＩ、一過性虚血発作、脳腫瘍、発作、てんかん、脳膿腫、脳症および多発性硬化症からなる群から選択される疾病または障害等の脳損傷の信頼性の高い検出のための、特にｍＴＢＩの検出のための、血液脳バイオマーカー群（ＧＳＴＰ１、Ｈ−ＦＡＢＰ、ＶＣＡＭ、ＮＤＫＡ）から選ばれたものの組合せ物であって、任意に既知の（十分に特異的でない）Ｓ１００Ｂと組み合わせられた組合せ物を提供する。特に、これらのバイオマーカー群は、組み合わされて、９５％または１００％の固定された感度で５０％を上回る特異度が得られるパネルに調整される。このことは、医師でも救急医療従事者でも、検出された疾病または障害を、特に軽度ＴＢＩ患者をより良く管理することを可能にし、従ってＣＴスキャンを減らす可能性があるが、脳損傷の診断の遅れに関連した結果も減らすことを可能にするであろう。
【００１４】
もう一つの態様において、本発明は、早期に外傷性脳損傷（ＴＢＩ）の病変をより良好に検出するか、またはＳ１００Ｂを補完することで、軽度ＴＢＩ患者におけるＣＴスキャンの必要性を排除するためのデバイス、例えばバイオマーカーパネルに関する。
【００１５】
その他の態様において、本発明は、患者におけるＴＢＩおよびｍＴＢＩのようなの医学的状態の検出のための方法およびデバイスに関する。
【００１６】
もう一つの態様において、本発明は、試料における個体の医学的状態の検出のためにアルゴリズムを使用する方法およびデバイスに関する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、ｍＴＢＩ患者のコホートにおける１００％の感度の場合の、Ｓ１００Ｂ（特異度３７％）と、Ｓ１００Ｂ＋ＧＳＴＰ＋ＨＦＡＢＰの組合せ物（特異度５８％）との比較を示している。従って、本発明は、試験結果の信頼性を有意に改善することができ、そして、前記組合せ物が、そのような改善および有利な試験結果をもたらし得ることは予想外であった。
【図２】図２は、ｍＴＢＩ患者のコホートにおける１００％の感度の場合の、Ｓ１００Ｂ（特異度３７％）と、Ｓ１００Ｂ＋ＮＤＫＡの組合せ物（特異度４９％）との比較を示している。
【図３】図３は、ｍＴＢＩ患者のコホートにおける９５％〜１００％の感度の場合の、Ｓ１００Ｂ（特異度３７％）と、Ｓ１００Ｂ＋ＧＳＴＰ＋ＨＦＡＢＰの組合せ物（特異度６１％）との比較を示している。
【図４】図４は、ｍＴＢＩ患者のコホートにおける９５％〜１００％の感度の場合の、Ｓ１００Ｂ（特異度３７％）と、Ｓ１００Ｂ＋ＨＦＡＢＰの組合せ物（特異度５２％）との比較を示している。
【図５】図５は、ｍＴＢＩ患者のコホートにおける９５％〜１００％の感度の場合の、コホート全体におけるＳ１００Ｂ（特異度３７％）と、Ｓ１００Ｂ＋ＧＳＴＰの組合せ物＋年齢（特異度６４％）との比較を示している。この場合の年齢群は、年数で定義した。
【図６】図６は、ｍＴＢＩ患者のコホートにおける１００％の感度の場合の、Ｓ１００Ｂ（特異度３７％）と、ＶＣＡＭ（特異度４０％）との比較を示している。
【図７】図７は、ｍＴＢＩ患者のコホートにおける１００％の感度の場合の、Ｓ１００Ｂ（特異度３７％）と、ＨＦＡＢＰ＋ＶＡＣＭの組合せ物（特異度５９％）との比較を示している。
【図８】図８のスキームは、臨床設備における費用のかかるＣＴスキャンを避けるために本発明のバイオマーカーを使用することの利点を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
本発明は、検体（試料）において、ＴＢＩ、一過性虚血発作、脳腫瘍、発作、てんかん、脳膿腫、脳症および多発性硬化症からなる群から選択される疾病または障害をスクリーニングするための方法であって、試料を適切な条件下で使用するステップ、および少なくとも２種のバイオマーカーを適切な条件下で検出するステップを含み、前記バイオマーカーが、グルタチオンＳトランスフェラーゼπ（ＧＳＴＰ）、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）、グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロモジュリン（ＧＡＰ４３）、神経線維タンパク質Ｈ（ＮＦＨ）、神経線維タンパク質Ｍ（ＮＦＭ）、神経線維タンパク質Ｌ（ＮＦＬ）、Ｓ１００Ｂ、タウ、スペクトリン分解産物、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラーゼ−Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）、血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ペルオキシレドキシン１〜６およびヌクレオシド二リン酸キナーゼ（ＮＤＫＡ）からなる群から選択される、方法に関する。
【００１９】
本発明は、脳損傷、特にｍＴＢＩの管理における臨床業務に世界的な大きなインパクトを与える可能性を有する。本発明は、簡単に使用することができ、信頼性が高く、安全なマーカー群の診断パネルを提供するために適している。
【００２０】
これらの分子の少なくとも２種のＳ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＮＤＫＡ、ＶＣＡＭおよびＨ−ＦＡＢＰパネルについて以下に記載される結果は、ポイントオブケア検査（ＰＯＣＴ）またはアレイを、診断目的のために容易に使用することができることを明らかにしている。外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、世界中で４０歳未満の若さの成人および子供における死亡および身体障害の主な原因である。脳損傷後の初期脳損傷の正確な測定は、神経学的予測を確立し、処置オプションの危険性と利益のバランスを図るために極めて重要である。本発明は、有利にはそのようなツールおよび方法を提供する。
【００２１】
好ましい一実施形態においては、本発明は、バイオマーカーが、Ｓ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＨＦＡＢＰ、ＶＣＡＭおよびＮＤＫＡまたはそれらの断片、多様体もしくは突然変異体から選択される方法に関する。特に有用なのは、２種または３種のマーカーの組合せ物である。
【００２２】
予想外でありかつ驚くべきことに、発明者らは、本発明の少なくとも２種のマーカーを組み合わせることによって、検体を確実に分析し、それによりｍＴＢＩを特徴とする個体における脳損傷合併症の可能性を排除し、そしてそれにより費用のかかるＣＴスキャンを避けるか、またはその実施が可能な中央施設に輸送することさえも避ける、信頼性が高く、使用しやすい方法を提供できることを示すことができた。
【００２３】
本発明のマーカー群、ならびに一定のマーカー群または／および一定のマーカー群の組合せ物の具体的な選択を適用することで、本明細書に記載されるような脳損傷もしくは障害もしくは疾病または医学的合併症、特にＴＢＩおよびｍＴＢＩをアッセイするための、信頼性が高く特異的な方法が提供されることは予測できるものではなかった。本発明は、そのような分析、特にｍＴＢＩ分析において費用において良い影響を及ぼすのみならず、この医学分野における使用しやすく迅速な方法も表すこととなる。
【００２４】
特に、本発明は、Ｓ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＨＦＡＢＰ、ＶＣＡＭおよびＮＤＫＡ内の少なくとも２種のマーカーのパネルを使用して脳損傷またはその他の合併症および軽度ＴＢＩ患者におけるＣＴスキャンの必要性を排除するために、１００％の感度の場合に、改善された特異度（＞５０％）が得られる点で有利である。
【００２５】
利用可能な先行技術のマーカー群と本発明との直接的な比較により、本発明がどれほど有利であるかは明らかである。本発明の好ましい一実施形態による３種の新規のバイオマーカーのパネルでは、１００％の感度で、Ｓ１００Ｂマーカーの個別の分析の場合の３４％と比較して、ｍＴＢＩの５８％を直接的に退院させることができた。
【００２６】
もう一つの有利な実施形態は、本明細書に記載される分子マーカー群と、年齢またはＧＣＳ等のその他のマーカーとを組み合わせることである。特に、ＧＣＳスコア１３以上もしくは１５以上で特徴付けられる特定の患者群において、または特定の年齢群、例えば６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上において、本発明によるマーカー群を適用および利用することで、非常に有利かつ信頼性の非常に高い試験結果が得られることとなる。更に、このようにして、本発明は、技術的利点を有するのみならず、費用の観点からも有利である、より少ない分子マーカー群の使用によって信頼性の高い試験結果を達成できることを紛れもなく実現している。
【００２７】
本発明は、本明細書に記載される脳損傷および特定の医学的合併症を、完全装備の病院において特定でき、またスクリーニングできるだけでなく、単純な試験デバイスを使用することによって、資格のある医療従事者を要することなくどこでも特定およびスクリーニングすることができるという予想外の利点を提供する。
【００２８】
以下に、本発明の一定の用語を、より詳細に定義することとする。
【００２９】
「脳損傷」は、頭部または個体への突然の衝撃を原因とする患者または個体の任意の状態である。具体的な脳損傷は、ＴＢＩまたはｍＴＢＩである。
【００３０】
本発明の意義における「ＴＢＩ」は、先行技術に関して上記した外傷性の出来事によって引き起こされる任意の脳損傷である。
【００３１】
本発明の意義における「特定」もしくは「特定する」または「分類する」は、個体が脳損傷、特にＴＢＩまたはｍＴＢＩを有するかどうかを評価するための個体の試料の分析であり、例えばＴＢＩおよびｍＴＢＩの特定は、ＣＴスキャンまたはＭＲＩ分析の使用によって検証することができる。
【００３２】
本発明の意義における「診断法」または「診断」は、当該技術分野で一般的に知られる試験結果の検出、可視化および／または定量化のための適切な一連の方法工程を有する任意の有用な方法である。
【００３３】
本発明の意義における「アッセイ」は、ＴＢＩまたはｍＴＢＩを検出するための当該技術分野で一般的に知られる任意の方法、例えばＥＬＩＳＡまたはバイオマーカーの検出のための任意のその他の標準的な方法である。
【００３４】
本発明の意義における「デバイス」は、ＴＢＩまたはｍＴＢＩ検出のためのアッセイを実施するために使用することができる本発明によるバイオマーカー群の組合せ物またはバイオマーカー群のパネルである。その例は、当該技術分野で知られるキャリアプレート、試験ストリップ、バイオチップアレイ等である。
【００３５】
本発明の意義における「マーカー」または「バイオマーカー」または「分子マーカー」または「分子バイオマーカー」は、好ましくは血液、血漿、唾液、涙、ＣＳＦまたは尿の試料において、脳損傷、好ましくは外傷性脳損傷（ＴＢＩ）または以下に記載されるその他の障害を検出するために有用な任意のバイオマーカーであり、好ましくは、少なくとも２種のマーカーの組合せ物が、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）を検出するために適しており、該マーカー群は、適切なアッセイ装置で使用され、その際、好ましくは選択性は、１００％に設定され、かつ特異度は、好ましくは４０％より高く、更により好ましくは５０％より高く、５５％より高く、５８％、６０％もしくは７０％より高い。
【００３６】
本発明の意義におけるマーカーとしては、グリア細胞、ニューロン細胞または血管細胞の任意のマーカーも適格である。本発明の好ましいマーカー群は、以下の通りである：
グルタチオンＳトランスフェラーゼπ（ＧＳＴＰ）
脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）
グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）
ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）
ニューロモジュリン（ＧＡＰ４３）
神経線維タンパク質Ｈ（ＮＦＨ）
神経線維タンパク質Ｍ（ＮＦＭ）
神経線維タンパク質Ｌ（ＮＦＬ）
Ｓ１００Ｂ
タウ
ヌクレオシド二リン酸キナーゼ（ＮＤＫＡ）
スペクトリン分解産物
ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラーゼ−Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）
血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ）
血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）
ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）
ペルオキシレドキシン１〜６。
【００３７】
前記の「マーカー群」以外に、１種、２種、３種またはそれより多くのマーカーを、年齢またはＧＣＳスコアによる患者または個体の定義と組み合わせることができることも、本発明の範囲内である。こうして年齢およびＧＣＳは、本発明の意義における「マーカー」として示すことができる。年齢およびＧＣＳのようなマーカーは、本発明の意義において、患者サブグループまたは個体のサブグループを定義するために使用することもできる。好ましい年齢群は、５０歳未満、６０歳未満、７０歳未満、または５０歳超、６０歳超、６５歳超、７０歳超である。１３〜１５のＧＣＳは、好ましくは、患者のサブグループの定義のために使用することができ、本明細書に定義されるその他のマーカー群のいずれかと組み合わせて使用することができる。そのようにして、該個体は、層別化することができ、かつ患者群を、試験性能に適合するだけでなく高めるように形成することができ、または信頼性の高い試験結果を達成するために必要とされるマーカー群を減らすように形成することもでき、好ましくは検出法または試験キットの成分の特徴に適合するように形成することもできる。
【００３８】
本発明の意義におけるマーカー「パネル」は、適切な装置またはデバイスにおいて組み合わせて使用される、少なくとも２種のバイオマーカーの組合せ物、好ましくは２種または３種のマーカーの組合せ物である。
【００３９】
本発明の意義における「感度」は、ＴＢＩまたはｍＴＢＩの分析における真陽性のアッセイ結果を指す。好ましくは、本発明による分析における感度は、９５％〜１００％に、または１００％（すなわち、偽陰性の診断なし）に設定される。
【００４０】
本発明の意義における「特異度」は、ＴＢＩまたはｍＴＢＩを特定するアッセイにおける、いわゆる真陰性率である。特異度は、好ましくは、少なくとも５０％、好ましくはそれより高く、例えば５８％、６０％、６５％、７０％であることが目標とされる。
【００４１】
本発明の意義における「試料」または「検体」は、ＴＢＩ、好ましくはｍＴＢＩを特定するアッセイまたは検出法を実施するために有用な任意の流体または組織である。好ましくは、該試料は、個体から採取された血液、血漿または尿の試料である。該試料は、本発明によるマーカー分析に適したものに保つ、または適したものにする一般的に知られた方法に従って処理される。
【００４２】
以下に、本発明の好ましい実施形態を、記載することとする。
【００４３】
好ましい一実施形態においては、本発明は、試料が、血液、血漿、唾液、涙、ＣＳＦまたは尿である方法に関する。血液試料は、試料回収の点で非常に容易であり、こうして本発明による方法は、単純な手段で容易に実施できることとなる。
【００４４】
本発明による方法は、本明細書に記載される全ての障害、疾病または医学的合併症に適用することができ、ＴＢＩ、特に軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）のために特に有用である。
【００４５】
もう一つの実施形態において、本発明は、個体の試料におけるＴＢＩ検出のために有用な少なくとも２種のマーカーを含む、またはそれらからなる組成物であって、該マーカーが、グルタチオンＳトランスフェラーゼπ（ＧＳＴＰ）、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）、グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、ニューロモジュリン（ＧＡＰ４３）、神経線維タンパク質Ｈ（ＮＦＨ）、神経線維タンパク質Ｍ（ＮＦＭ）、神経線維タンパク質Ｌ（ＮＦＬ）、Ｓ１００Ｂ、タウ、スペクトリン分解産物、ユビキチンカルボキシル末端ヒドロラーゼ−Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）、血管細胞接着タンパク質１（ＶＣＡＭ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２３（ＣＣＬ２３）、ペルオキシレドキシン１〜６およびヌクレオシド二リン酸キナーゼ（ＮＤＫＡ）からなる群から選択される、組成物に関する。
【００４６】
前記組成物は、有利には、Ｓ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＨＦＡＢＰ、ＶＣＡＭおよびＮＤＫＡ、またはそれらの断片、多様体もしくは突然変異体から選択される２種または３種のマーカーを含んでいるか、またはそれらからなる。
【００４７】
もう一つの実施形態において、本発明は、前記の任意のマーカー群の２種もしくは３種のマーカーを含む、またはそれらからなるキットに関する。
【００４８】
更に、本発明は、前記の任意のマーカー群の２種もしくは３種のマーカーを含む、またはそれらからなるアッセイデバイスに関する。好ましくは、該アッセイデバイスは、バイオチップ、キャリア上のバイオマーカーパネルまたは試験ストリップを含む、またはそれらからなる。
【００４９】
上記実施形態に加えて、本発明の方法およびデバイスを、信頼性の高い個体の入院または退院の意思決定に導くであろう判断マトリックスの一部としての患者の非マーカー観察、例えば脳損傷スコア、瞳孔拡張、認識力試験等と組み合わせることも可能であると考えられる。
【００５０】
また本発明は、達成できる試験結果の点で有利なマーカーの組合せ物の更なるサブグループも包含する。これらのサブグループは、ＧＳＴＰ、ＦＡＢＰ、ＧＦＡＰ、ＮＳＥ、ＧＡＰ４３、ＮＦＨ、ＮＦＭ、ＮＦＬ、Ｓ１００Ｂ、ＶＣＡＭ、ＳＡＡ、ＣＣＬ２３、ペルオキシレドキシン１〜６およびＮＤＫＡからなる群から選択される２種、３種、４種または５種のマーカーの組合せ物である。特に好ましいのは、ＧＳＴＰ、ＦＡＢＰ、ＧＦＡＰ、ＮＳＥ、ＧＡＰ４３、ＮＦＨ、ＮＦＭ、ＮＦＬ、Ｓ１００Ｂ、ＶＣＡＭ、ＳＡＡ、ＣＣＬ２３、ペルオキシレドキシン１〜６およびＮＤＫＡの２種または３種のマーカーの組合せ物、より好ましくはＳ１００Ｂ、ＶＣＡＭおよびＨ−ＦＡＢＰの組合せ物、またはＧＳＴＰ、ＶＣＡＭおよびＨ−ＦＡＢＰの組合せ物、またはＧＳＴＰ、ＦＡＢＰおよびＧＦＡＰの組合せ物、またはＳＡＡ、ＶＣＡＭおよびＨ−ＦＡＢＰの組合せ物、またはペルオキシレドキシン１、ＶＣＡＭおよびＨ−ＦＡＢＰの組合せ物、またはＣＣＬ２３、ＶＣＡＭおよびＨ−ＦＡＢＰの組合せ物、またはＳ１００Ｂ、ＶＣＡＭおよびＣＣＬ２３の組合せ物、またはＳ１００Ｂ、ＣＣＬ２３およびＨ−ＦＡＢＰの組合せ物、またはＮＳＥ、ＧＡＰ４３およびＮＦＨの組合せ物、またはＮＦＭ、ＮＦＬおよびＳ１００Ｂの組合せ物、またはＦＡＢＰ、ＧＦＡＰおよびＮＳＥの組合せ物、またはＧＡＰ４３、ＮＦＨおよびＮＦＭの組合せ物、またはＮＦＬ、Ｓ１００ＢおよびＮＤＫＡの組合せ物、またはＧＡＰ４３、ＮＦＨおよびＮＦＭの組合せ物、またはＮＦＬ、Ｓ１００ＢおよびＮＤＫＡの組合せ物、またはＧＦＡＰ、ＮＳＥおよびＧＡＰ４３の組合せ物、またはＮＦＨ、ＮＦＭおよびＮＦＬの組合せ物である。
【００５１】
本発明を、以下の実施例においてより詳細に記載するが、それらは、説明を意図するものであって、何ら制限するものではなく、本発明の好ましい実施形態を表すものである。
【００５２】
本発明を説明する実験部から明らかであるように、本発明は、それが非常に信頼性の高い試験結果を達成するという利点を有する。従って、好ましい実施形態においては、感度が、９５％超、好ましくは１００％であり、かつ特異度が、５０％超、好ましくは５５％超、より好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超である、方法、組成物、キットまたはアッセイが提供される。
【００５３】
もう一つの実施形態においては、本発明は、検体において医学的状態を分析するための方法またはシステムであって、本明細書に記載される医療デバイスが適切な条件下で適用される方法またはシステム、本明細書に記載されるバイオマーカー群のいずれかを本発明の障害または疾病のいずれかの分析のために使用するための方法またはシステム、およびアルゴリズムを使用する方法またはシステムであって、試験結果が該アルゴリズムによって更に定義される、例えば定量化される、方法またはシステムを提供する。
【００５４】
そのような方法またはシステムのステップは、好ましい一実施形態においては、以下の通りである。
【００５５】
該方法およびシステムは、脳損傷等の医学的状態の診断のために有用な、個体の試料において少なくとも２つの試験結果を分析することができ、その際、該システムは、
（ａ）少なくとも２つのデータベースを含み、該データベースは、
（ｉ）第一の診断試験から収集された第一の試験結果、
（ｉｉ）第一の診断試験とは異なる第二の診断試験から収集された第二の試験結果、
（ｉｉｉ）任意に、上記１つ以上の診断試験とは異なる後続の１つ以上の診断試験から収集された後続の１つ以上の試験結果、
（ｉｖ）任意に、二次的な被験体の観察または測定、
（ｖ）第一の診断試験、第二の診断試験、後続の診断試験および被験体の観察または測定と関連する１つ以上の診断カットオフであって、まとめて統合することで、脳損傷状態の確率が評価される診断カットオフ、
を含むとともに、該システムは、
（ｂ）１つ以上のプロセッサを含み、該プロセッサは、演算的に符号化することで、自動的に
（ｉ）解釈アルゴリズムが適用されて、試験結果のデータベースに基づき被験体の結果座標を生成し、
（ｉｉ）任意に、第二の解釈アルゴリズムが適用されて、被験体の結果座標におけるエラー確率を生成する。
【００５６】
実施例
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明することを意図するものであって、何ら制限するものと解釈されるべきものではない。
【００５７】
ＴＢＩの発症後６時間以内のＣＴスキャンで脳病変を示す１３より高いグラスゴー・コーマ・スケールを有する患者または示さない患者の血中ＧＳＴＰ１、Ｈ−ＦＡＢＰ、ＮＤＫＡ、ＶＣＡＭおよびＳ１００Ｂ含量を定量化し、ＥＬＩＳＡ分析を使用して比較した。調査集団は、全体で９７の個体を含んでいた。
【００５８】
ＥＬＩＳＡは、他に記載（Ｔｕｒｃｋら，２０１２）されるＧＳＴ−πおよびＮＤＫＡ、Ｈｙｃｕｌｔ社（オランダ）製のＨ−ＦＡＢＰならびにＡｂｎｏｖａ社（台湾）社製のＣＣＬ２３、ＳＡＡ、ペルオキシレドキシン１およびＳ１００Ｂについての手製の９６ウェルアッセイを使用して実施した。それぞれの血漿試料を、二重反復アッセイし、プレートに無作為に分注した。
【００５９】
タンパク質レベルを、まず相対蛍光単位（ＲＦＵ）で表現し、そして濃度を、組換えタンパク質を有する同じプレートで得られた校正曲線を使用して計算した。統計分析は、ＩＢＭ  ＳＰＳＳ統計ソフトウェアのバージョン１９．０．０（ＩＢＭ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ニューヨーク州，米国）を使用して実施した。異なる集団間でタンパク質を区別する能力を評価するために、非パラメトリック検定を実施した。Ｗｉｌｃｏｘｏｎ符号付順位和検定を、年齢と性別に適合したデータについて行い、そしてマン・ホイットニー検定を、非適合データについて行った。２つより多くの群を含むデータについては、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用した。受信者操作特性（ＲＯＣ）曲線分析を実施し、その曲線からカットオフ（ＣＯ）ポイントを得た。最適なしきい値を選択することで、１００％感度の場合の最高の特異度を得た。多重ロジスティック回帰分析を使用することで、ＣＴスキャンの必要性を排除するマーカーとしての血漿中Ｓ１００Ｂ、Ｈ−ＦＡＢＰ、ＧＳＴ−π、ＶＣＡＭ、ＣＣＬ２３、ＳＡＡ、ペルオキシレドキシン１およびＮＤＫＡレベルの値を比較した。
【００６０】
これらの実験において、発明者らは、臨床の現場において有用となり得るバイオマーカー群または生体分子群のパネル（すなわち２種または３種の小規模な組）を提供することに成功した。発明者らは、該パネルのそれぞれの要素が、診断に異なる角度を与え、それらが一緒になってより正確な予測をもたらすことを示すことができた。該パネルのそれぞれの要素は、幾つかの基準を満たしている：第一に、それ自身予測力を有さねばならない、すなわち疾病型をある程度まで区別できねばならない。第二に、高い再現性をもって簡単に測定できねばならない。第三に、ネットワーク分析によって見出された生物学的過程において一定の役割を有するべきである。
【００６１】
Ｓ１００Ｂ、Ｈ−ＦＡＢＰ、ＧＳＴ−π、ＶＣＡＭ、ＣＣＬ２３、ＳＡＡ、ペルオキシレドキシン１およびＮＤＫＡは、本発明によるそのようなパネル分析において特に有用であると判明した。発明者らは、少数の分子から最適なパネルを取り出すことができ、かつ疾病型分類のための簡単かつ解釈しやすいしきい値ルールの組を提供するＰａｎｅｌｏｍｉＸツールボックを開発した。ルールベースの分類器は、その量が特定のしきい値を経る分子の数をちょうど計数する。それは、多くの臨床的スコアを構築する方式を模しており、従って臨床環境で働いている人たちによって理解しやすいものである。簡潔には、最適化されたカットオフ値を、全ての利用可能なパラメーターを使用して反復的置き換え型の応答計算によって得た。それぞれのカットオフ値を、２％の量の増分だけ反復的に変更し、そして特異度の最大が１００％感度に至るまで、それぞれの反復後に特異度を測定した。
【００６２】
結果
上記の図は、Ｓ１００Ｂ単独と、本発明の２種または３種の分子／バイオマーカーの種々のパネルとの特異度比較の結果を示している。感度は、１００％に設定されている。本発明のコホートは、Ｓ１００Ｂを分析する全ての公表されたｍＴＢＩコホートに匹敵することを裏付けている。感度が１００％にあるときに３７％の特異度が得られる。ＧＳＴＰおよびＨＦＡＢは、２５％の特異度を有し、ＮＤＫＡは１２％の特異度を有し、そしてＶＣＡＭは４０％の特異度を有する。これは、Ｓ１００Ｂ単独の陰性ＣＴ患者を除外する能力が限られているという全ての上述の結果と、追加のパラメータ／バイオマーカー群の必要性を裏付けている。
【００６３】
【表１】
2020042046.tif 000002
【００６４】
分子群が３種の分子のパネルへと組み合わされる場合に、特異度は５８％まで高まり（Ｓ１００Ｂ、ＨＦＡＢＰおよびＧＳＴＰ）、２つの分子が組み合わされる場合には（Ｓ１００ＢおよびＮＤＫＡ）特異度は４９％まで高まる。
【００６５】
【表２】
2020042046.tif 000003
【００６６】
示されたこれらの分子群の少なくとも２つの組合せ物または３種の組合せ物のＳ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＮＤＫＡ、ＶＣＡＭ、ＣＣＬ２３、ＳＡＡ、ペルオキシレドキシン１およびＨ−ＦＡＢＰパネルについて本明細書に記載される結果は、それらを、ＰＯＣＴまたは連続診断のためのアレイにおいて簡単に使用できることを明らかにしている。
【００６７】
パネルにおけるＧＳＴＰ１、Ｈ−ＦＡＢＰ、ＶＣＡＭ、ＮＤＫＡ、ＣＣＬ２３、ＳＡＡ、ペルオキシレドキシン１およびＳ１００Ｂのからの少なくとも２種の組合せ物は、１００％の感度の場合に５０％を上回る高められた特異度をもたらし、軽度ＴＢＩ患者におけるＣＴスキャンの必要性を排除している。
【００６８】
従って、１００％の感度の場合に改善された特異度（＞５０％）が得られることは、驚くべき、かつ予想外の利点であり、それにより、Ｓ１００Ｂ、ＧＳＴＰ、ＨＦＡＢＰ、ＶＣＡＭ、ＣＣＬ２３、ＳＡＡ、ペルオキシレドキシン１およびＮＤＫＡ内の少なくとも２種または３種のマーカーのパネルを使用して、軽度ＴＢＩ患者におけるＣＴスキャンの必要性が排除される。
【００６９】
実験結果および本発明の利点は、以下の表からも明らかである。
【００７０】
【表３】
2020042046.tif 000004
【００７１】
６１歳より高齢の患者のみを含む患者群における結果を、以下に示す。
【００７２】
【表４】
2020042046.tif 000005
【００７３】
前記の年齢群／患者集団（すなわち６１歳より高齢の患者）において、最良の単独のバイオマーカーは、もはやＳ１００Ｂではなく、以下に示されるように５０％の特異度を示すＧＳＴＰであることを示すこともできた。
【００７４】
【表５】
2020042046.tif 000006
【図１】
2020042046.tif 000007
【図２】
2020042046.tif 000008
【図３】
2020042046.tif 000009
【図４】
2020042046.tif 000010
【図５】
2020042046.tif 000011
【図６】
2020042046.tif 000012
【図７】
2020042046.tif 000013
【図８】
2020042046.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】令和2年1月3日(2020.1.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料において、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）をスクリーニングするための方法であって、試料を適切な条件下で使用するステップ、および前記試料において少なくとも２種のバイオマーカーを適切な条件下で検出するステップを含み、前記少なくとも２種のバイオマーカーが、脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）およびグリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）である、方法。
【請求項２】
前記２種以上のバイオマーカーが、年齢またはＧＣＳと組み合わされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＧＣＳが１３〜１５である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
年齢群が、５０歳未満、６０歳未満もしくは７０歳未満の、または５０歳超、６０歳超、６５歳超もしくは７０歳超の年齢を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
試料が、血液、血漿、尿、唾液、涙（涙液）またはＣＳＦである、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
資料が血液である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＴＢＩが、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）である、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を検出するためのアッセイを実施するデバイスであって、前記アッセイが試料中の脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）およびグリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）を検出するものである、デバイス。
【請求項９】
前記アッセイが、試料中の脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）およびグリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）検出する手段を有する、請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記ＴＢＩが、軽度ＴＢＩ（ｍＴＢＩ）である、請求項８または９のいずれかに記載のデバイス。
【請求項１１】
前記アッセイが、ポイントオブケア検査（ＰＯＣＴ）である、請求項８から１０までのいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１２】
バイオチップ、バイオマーカーパネル、キャリアまたは試験ストリップを含む、請求項８から１１までのいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１３】
（ａ）少なくとも２つのデータベースであって、
（ｉ）第一の診断試験から収集された第一の試験結果、
（ｉｉ）第一の診断試験とは異なる第二の診断試験から収集された第二の試験結果、
（ｉｉｉ）任意に、上記１つ以上の診断試験とは異なる後続の１つ以上の診断試験から収集された後続の１つ以上の試験結果、
（ｉｖ）任意に、二次的な被験体の観察または測定、
（ｖ）第一の診断試験、第二の診断試験、後続の診断試験および被験体の観察または測定と関連する１つ以上の診断カットオフであって、まとめて統合することで、脳損傷状態の確率が評価される診断カットオフ、
を含むデータベースと、
（ｂ）１つ以上のプロセッサであって、演算的に符号化することで、自動的に
（ｉ）解釈アルゴリズムが適用されて、試験結果のデータベースに基づき被験体の結果座標を生成し、
（ｉｉ）任意に、第二の解釈アルゴリズムが適用されて、被験体の結果座標におけるエラー確率を生成する、
プロセッサと、
を含む請求項８から１２までのいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１４】
感度が、９５％超、好ましくは１００％であり、かつ特異度が、５０％超、好ましくは５５％超、より好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超である、請求項１から７までのいずれか１項に記載の方法、または請求項８から１３までのいずれか１項に記載のデバイス。