(57)【要約】      （修正有）【課題】細胞シグナリングおよび／または細胞活性をモジュレートする薬剤を提供する。【解決手段】成長因子レベルおよび／または活性をモジュレートするのに有用なタンパク質、抗体、アッセイおよび方法が提供される。一部の実施形態において、このような成長因子は、タンパク質のＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーである。【選択図】図３
2020062007.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜４０、７０、７１、８８、８９、９８〜１０９、１１６〜１４２、１６２
〜１７０およびそれらの組合せまたは断片からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸
配列を含む組換えタンパク質。
【請求項２】
前記組換えタンパク質が、配列番号１４３〜１６１、２８６〜２９４およびそれらの組
合せまたは断片からなる群から選択される１つ以上の配列を含むタンパク質と複合体化し
ている、請求項１に記載の組換えタンパク質。
【請求項３】
前記組換えタンパク質が、潜在型ＴＧＦ−β結合タンパク質（ＬＴＢＰ）１、ＬＴＢＰ
１Ｓ、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン−１、フィブリリン−２、フ
ィブリリン−３、フィブリリン−４、糖タンパク質Ａ反復優位型（ＧＡＲＰ）、ロイシン
リッチリピート含有（ＬＲＲＣ）３３およびそれらの組合せまたは断片からなる群から選
択される１つ以上のタンパク質と複合体化している、請求項１に記載の組換えタンパク質
。
【請求項４】
前記組換えタンパク質が、１つ以上の検出可能な標識を含む、請求項１に記載の組換え
タンパク質。
【請求項５】
前記１つ以上の検出可能な標識は、少なくとも１つのビオチン標識、ポリヒスチジンタ
グおよびフラッグタグの少なくとも一つを含む、請求項４に記載の組換えタンパク質。
【請求項６】
前記組換えタンパク質が、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位および１つ以上の分泌
シグナル配列の少なくとも一方を含む、請求項１に記載の組換えタンパク質。
【請求項７】
少なくとも２つのトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）−β関連タンパク質からの
１つ以上のタンパク質モジュールを含むキメラタンパク質であって、前記１つ以上のタン
パク質モジュールは、成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）、潜在型関連ペプチド（Ｌ
ＡＰ）、ＬＡＰ様ドメイン、ストレートジャケット領域、成長因子ドメイン、ファスナー
領域、フーリン開裂部位領域、アーム領域、フィンガー領域、細胞外会合のためのＮ末端
領域、潜在型ループ、α１ヘリカル領域、ＲＧＤ配列領域、トリガーループ領域、ボウタ
イ領域、ＬＴＢＰ会合のための残基、ＧＡＲＰ会合のための残基、骨形成タンパク質（Ｂ
ＭＰ）／トロイド開裂部位、および、配列番号３８〜９７または１７１〜１９８のアミノ
酸配列のいずれかを含むタンパク質モジュール、からなる群から選択されるキメラタンパ
ク質。
【請求項８】
前記１つ以上のタンパク質モジュールは、１つ以上の脊椎動物種から選択される、請求
項７に記載のキメラタンパク質。
【請求項９】
前記キメラタンパク質が、ＧＰＣを含む、請求項７に記載のキメラタンパク質。
【請求項１０】
前記ＧＰＣは、
ｉ．ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくとも１つのＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメ
イン、
ｉｉ．ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくとも１つの成長因子ドメイン
を含み、
ｉｉｉ．前記少なくとも１つのＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインおよび前記少なくとも１
つの成長因子ドメインは、異なるＴＧＦ−βファミリーメンバーからのものである、請求
項９に記載のキメラタンパク質。
【請求項１１】
前記少なくとも１つのＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインおよび前記少なくとも１つの成長
因子ドメインは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、成長分化因子（ＧＤＦ）
−８、ＧＤＦ−１１およびインヒビンβＡからなる群から選択されるＴＧＦ−βファミリ
ーメンバータンパク質に由来する、請求項１０に記載のキメラタンパク質。
【請求項１２】
前記ＧＰＣは、
ｉ．ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくとも１つのＮ末端領域、
ｉｉ．ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくとも１つのＣ末端領域
を含み、
ｉｉｉ．前記少なくとも１つのＮ末端領域および前記少なくとも１つのＣ末端領域は、
異なるＴＧＦ−βファミリーメンバーからのものである、請求項９に記載のキメラタンパ
ク質。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのＮ末端領域および前記少なくとも１つのＣ末端領域は、ＴＧＦ−
β１末端領域、ＴＧＦ−β２末端領域、ＴＧＦ−β３末端領域、ＧＤＦ−８末端領域、Ｇ
ＤＦ−１１末端領域およびインヒビンβＡ末端領域からなる群から選択される、請求項１
２に記載のキメラタンパク質。
【請求項１４】
前記ＧＰＣは、少なくとも１つのＴＧＦ−βファミリーメンバーを含み、前記少なくと
も１つのＴＧＦ−βファミリーメンバーは、代替ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少
なくとも１つのアーム領域を含む、請求項９に記載のキメラタンパク質。
【請求項１５】
前記ＧＰＣは、少なくとも１つのＴＧＦ−βファミリーメンバーを含み、前記少なくと
も１つのＴＧＦ−βファミリーメンバーは、代替ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少
なくとも１つのトリガーループ領域を含む、請求項９に記載のキメラタンパク質。
【請求項１６】
前記キメラタンパク質が、タンパク質モジュール組合せを含み、前記タンパク質モジュ
ール組合せは、配列番号１９９〜２３６および２７３からなる群から選択されるアミノ酸
配列を含む、請求項９に記載のキメラタンパク質。
【請求項１７】
前記キメラタンパク質が、
ｉ．ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ１Ｓ、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン
−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３、フィブリリン−４、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３
３、パールカン、デコリン、エラスチンおよびコラーゲンからなる群から選択されるタン
パク質、または
ｉｉ．配列番号１５３〜１６１、２８６〜２９４およびそれらの組合せまたは断片から
なる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含むタンパク質
と複合体化している、請求項７に記載のキメラタンパク質。
【請求項１８】
前記キメラタンパク質が、１つ以上の検出可能な標識を含む、請求項７に記載のキメラ
タンパク質。
【請求項１９】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質または請求項７〜１８のいずれ
か一項に記載のキメラタンパク質に結合し得る抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、安定化抗体および阻害抗体の少なくとも一方である、請求項１９に記載の
抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、放出抗体および活性化抗体の少なくとも一方である、請求項１９に記載の
抗体。
【請求項２２】
前記組換えタンパク質は、
ｉ．ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ１Ｓ、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン
−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３、フィブリリン−４、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３
３、パールカン、デコリン、エラスチンおよびコラーゲンからなる群から選択されるタン
パク質、または
ｉｉ．配列番号１５３〜１６１、２８６〜２９４およびそれらの組合せまたは断片から
なる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含むタンパク質
と複合体化している、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、安定化抗体および阻害抗体の少なくとも一方である、請求項２２に記載の
抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、放出抗体および活性化抗体の少なくとも一方である、請求項２２に記載の
抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の抗
体。
【請求項２６】
前記抗体が、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の
抗体。
【請求項２７】
生体系における成長因子活性をモジュレートする方法であって、
請求項１９〜２６のいずれか一項に記載の抗体と前記生体系を接触させることを含む、
方法。
【請求項２８】
所望の抗体を選択する方法であって、
１つ以上のアッセイの使用を含み、前記１つ以上のアッセイは、１つ以上の組換えタン
パク質を含み、前記１つ以上の組換えタンパク質は、配列番号１〜４０、７０、７１、７
４、７５、８８、９０、９８〜１４２、１６２〜１７０、１９９〜２３６、２７３および
それらの組合せまたは断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、方法。
【請求項２９】
ｉ．抗体結合アッセイを含む前記１つ以上のアッセイを提供するステップ、
ｉｉ．前記抗体結合アッセイを１つ以上の候補抗体と接触させるステップ、
ｉｉｉ．結合データを得るステップであって、前記結合データは、前記１つ以上の組換
えタンパク質についての前記１つ以上の候補抗体の親和性を示すステップ、および
ｉｖ．前記結合データに基づき、前記所望の抗体を選択するステップ
を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体結合アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、および蛍光関連
細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）ベースアッセイの少なくとも一方を含む、請求項２９に記
載の方法。
【請求項３１】
前記１つ以上の組換えタンパク質は、
ｉ．ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ１Ｓ、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン
−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３、フィブリリン−４、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３
３、パールカン、デコリン、エラスチンおよびコラーゲンからなる群から選択されるタン
パク質、または
ｉｉ．配列番号１５３〜１６１、２８６〜２９４およびそれらの組合せまたは断片から
なる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含むタンパク質
と複合体化している、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記１つ以上の組換えタンパク質は、キメラタンパク質を含み、前記キメラタンパク質
は、配列番号１９９〜２３６および２７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記キメラタンパク質は、
ｉ．ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ１Ｓ、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン
−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３、フィブリリン−４、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３
３、パールカン、デコリン、エラスチンおよびコラーゲンからなる群から選択されるタン
パク質、または
ｉｉ．配列番号１５３〜１６１、２８６〜２９４およびそれらの組合せまたは断片から
なる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含むタンパク質
と複合体化している、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ｉ．成長因子活性アッセイを含む前記１つ以上のアッセイを提供するステップ、
ｉｉ．前記成長因子活性アッセイを１つ以上の候補抗体と接触させるステップ、
ｉｉｉ．成長因子活性データを得るステップ、および
ｉｖ．前記成長因子活性データに基づき、前記所望の抗体を選択するステップ
を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記成長因子活性アッセイは、ルシフェラーゼベースアッセイおよび増殖アッセイから
なる群から選択される細胞ベースアッセイを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記細胞ベースアッセイは、
ｉ．前記１つ以上の組換えタンパク質を発現する１つ以上の発現細胞、および
ｉｉ．１つ以上の応答細胞を含み、
前記成長因子活性データは、前記１つ以上の応答細胞から得られた遺伝子発現データおよ
び生存率データの少なくとも一方を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組換えタンパク質、請求項７〜１８のいずれか一
項に記載のキメラタンパク質、および請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の抗体のい
ずれか一つ、ならびに少なくとも１つの賦形剤を含む、組成物。
【請求項３８】
前記少なくとも１つの賦形剤は、薬学的に許容可能な賦形剤を含む、請求項３７に記載
の組成物。
【請求項３９】
対象におけるＴＧＦ−β関連徴候を治療する方法であって、
前記対象を請求項３８に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
【請求項４０】
前記ＴＧＦ−β関連徴候は、肺線維症、腎線維症、肝線維症、心血管線維症、皮膚線維
症、および骨髄の線維症からなる群から選択される線維症徴候を含む、請求項３９に記載
の方法。
【請求項４１】
前記ＴＧＦ−β関連徴候は、骨髄線維症を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＴＧＦ−β関連徴候は、１つ以上のタイプの癌または癌関連病態を含む、請求項３
９に記載の方法。
【請求項４３】
前記１つ以上のタイプの癌または癌関連病態は、大腸癌、腎癌、乳癌、悪性黒色腫およ
び膠芽細胞腫からなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＴＧＦ−β関連徴候は、筋障害および損傷の少なくとも一方を１つ以上含む、請求
項３９に記載の方法。
【請求項４５】
前記筋障害および損傷の少なくとも一方の１つ以上は、悪液質、筋ジストロフィー、慢
性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、運動ニューロン疾患、外傷、神経変性疾患、感染、関節リ
ウマチ、不動症候群、非活動性萎縮、サルコペニア、封入体筋炎および糖尿病からなる群
から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＴＧＦ−β関連徴候は、免疫障害および自己免疫障害の少なくとも一方を１つ以上
含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
請求項３７に記載の組成物およびその使用説明書を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の実施形態は、組換えタンパク質およびそのようなタンパク質に指向される抗体
を含み得る。一部の実施形態において、このようなタンパク質および抗体は、ＴＧＦ−β
ファミリーメンバー生物学の分野に関連し得る。
【背景技術】
【０００２】
細胞シグナリング分子は、種々の細胞活性を刺激する。このようなシグナリングは、多
くの場合、他の生体分子、細胞外マトリックス、および細胞マトリックスの少なくとも一
つとの相互作用を介して、または特定の細胞環境もしくはニッチ内で厳密に調節されるこ
とが多い。このような相互作用は、直接または間接的であり得る。
【０００３】
細胞シグナリングカスケードは、多数の多様な生物学的経路、例として、限定されるも
のではないが、細胞成長のモジュレーション、組織ホメオスタシスのモジュレーション、
細胞外マトリックス（ＥＣＭ：ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ）ダイナミク
ス、細胞遊走のモジュレーション、侵入および免疫モジュレーション／抑制に関与する。
一部の場合において、細胞シグナリングに関与するタンパク質は、潜在型形態で合成され
、および／または封鎖され、シグナリングイベントに関与するためのある種の刺激を要求
する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
細胞シグナリングおよび／または細胞活性をモジュレートする薬剤、ツールおよび方法
が当技術分野において依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一部の実施形態において、本発明は、成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ：ｇｒｏｗ
ｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｒｏｄｏｍａｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ）、潜在型関連ペプチド（Ｌ
ＡＰ：ｌａｔｅｎｃｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ）、ＬＡＰ様ドメイン、
ストレートジャケット領域、成長因子ドメイン、ファスナー領域、フーリン開裂部位領域
、アーム領域、フィンガー領域、細胞外会合のためのＮ末端領域、潜在型ループ、α１ヘ
リカル領域、α２ヘリカル領域、ＲＧＤ配列領域、トリガーループ領域およびボウタイ領
域からなる群から選択される１つ以上のタンパク質モジュールを含む１つ以上のＴＧＦ−
β関連タンパク質を含む組換えタンパク質を提供する。一部の実施形態において、本発明
の組換えタンパク質は、脊椎動物種からの１つ以上のタンパク質モジュールを含み得る。
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、１つ以上の突然変異を含む１つ
以上のタンパク質モジュールを含み得る。一部の実施形態において、本発明の組換えタン
パク質は、１つ以上のフーリン開裂部位領域を含む１つ以上の突然変異を含み得る。一部
の実施形態において、このような突然変異は、本発明の組換えタンパク質の酵素的開裂を
防止し得る。一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、アミノ酸配列ＲＸ
ＸＲのアミノ酸配列ＲＸＧへの突然変異を含む１つ以上の突然変異を含み得る。一部の実
施形態において、本発明の組換えタンパク質は、アミノ酸配列ＲＸＸＲのアミノ酸配列Ａ
ＸＸＡへの突然変異を含む１つ以上の突然変異を含み得る。一部の実施形態において、本
発明の組換えタンパク質は、細胞外会合のためのＮ末端領域を含む１つ以上の突然変異を
含み得る。一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、最初の約４、５、６
または７つのＮ末端アミノ酸残基内に存在する少なくともの１つのシステイン残基の置換
および／または欠失を含む１つ以上の突然変異を含み得る。一部の実施形態において、本
発明の組換えタンパク質は、少なくとも１つのシステイン残基の少なくとも１つのセリン
残基による１つ以上の置換を含み得る。
【０００６】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ１Ｓ、
ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリ
リン−３、フィブリリン−４、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３およびそれらの組合せまたは断片
からなる群から選択されるタンパク質と複合体化させることができる。一部の実施形態に
おいて、本発明の組換えタンパク質は、１つ以上の検出可能な標識を含み得る。このよう
な検出可能な標識は、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグおよび／またはフラッグ（ｆｌ
ａｇ）タグを含み得る。
【０００７】
一部の実施形態において、本発明は、少なくとも２つのＴＧＦ−β関連タンパク質から
の１つ以上のタンパク質モジュールを含むキメラタンパク質であって、前記タンパク質モ
ジュールは、成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）、潜在型関連ペプチド（ＬＡＰ）、
ＬＡＰ様ドメイン、ストレートジャケット領域、成長因子ドメイン、ファスナー領域、フ
ーリン開裂部位領域、アーム領域、フィンガー領域、細胞外会合のためのＮ末端領域、潜
在型ループ、α１ヘリカル領域、ＲＧＤ配列領域、トリガーループ領域、ボウタイ領域、
ならびに表２、３および１１に列記のもののいずれかからなる群から選択され得るキメラ
タンパク質を提供する。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、１つ以
上の脊椎動物種から選択される１つ以上のタンパク質モジュールを含み得る。一部の実施
形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＧＰＣを含み得る。一部の実施形態におい
て、このようなＧＰＣは、ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくとも１つのＬＡＰ
またはＬＡＰ様ドメインおよびＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくとも１つの成
長因子ドメインを含み得、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインおよび成長因子ドメインは、異
なるＴＧＦ−βファミリーメンバーからのものである。一部の実施形態において、本発明
のキメラタンパク質は、少なくとも１つのＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインおよび少なくと
も１つの成長因子ドメインを含み得、それらのそれぞれは、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２
、ＴＧＦ−β３、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−１１およびインヒビンβＡからなる群から選択さ
れる。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、１つ以上のＧＰＣを含み
得、少なくとも１つのＮ末端領域は、ＴＧＦ−βファミリーメンバーからのものであり、
少なくとも１つのＣ末端領域は、ＴＧＦ−βファミリーメンバーからのものであり、Ｎ末
端領域およびＣ末端領域は、異なるＴＧＦ−βファミリーメンバーからのものである。一
部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＴＧＦ−β１末端領域、ＴＧＦ−
β２末端領域、ＴＧＦ−β３末端領域、ＧＤＦ−８末端領域、ＧＤＦ−１１末端領域およ
びインヒビンβＡ末端領域から選択される少なくとも１つのＮ末端領域および少なくとも
１つのＣ末端領域を含み得る。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、
異なるＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくとも１つのアーム領域を含む少なくと
も１つのＴＧＦ−βファミリーメンバーからのＧＰＣを含み得る。一部の実施形態におい
て、本発明のキメラタンパク質は、異なるＴＧＦ−βファミリーメンバーからの少なくと
も１つのトリガーループ領域を含む少なくとも１つのＴＧＦ−βファミリーメンバーを含
むＧＰＣを含み得る。一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、表１２に
列記されるタンパク質モジュール組合せのいずれかを含み得る。
【０００８】
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ１Ｓ、
ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリ
リン−３、フィブリリン−４、ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３ならびにそれらの組合せまた
は断片からなる群から選択されるタンパク質と複合体化させることができる。一部の実施
形態において、本発明のキメラタンパク質は、１つ以上の検出可能な標識を含み得る。一
部の実施形態において、このような検出可能な標識は、少なくとも１つのビオチン標識、
ポリヒスチジンタグおよび／またはフラッグタグを含み得る。
【０００９】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書に開示の組換えタンパク質および／また
はキメラタンパク質のいずれかに指向される抗体を提供する。一部の実施形態において、
このような抗体は、モノクローナル抗体を含む。一部の実施形態において、本発明の抗体
は、実質的に単離されている。一部の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は
、安定化抗体である。一部の実施形態において、本発明の安定化抗体は、１つ以上のＧＰ
Ｃと会合している成長因子のレベルに対する遊離成長因子のレベルを低減させる。一部の
実施形態において、安定化抗体は、成長因子依存性細胞シグナリングを低減させ得る。一
部の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、放出抗体を含み得る。このよう
な抗体は、１つ以上のＧＰＣと会合している成長因子のレベルに対する遊離成長因子のレ
ベルを増加させ得る。一部の実施形態において、本発明の放出抗体は、成長因子依存性細
胞シグナリングを増加させ得る。
【００１０】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の組換えタンパク質のいずれかの
１つ以上、キメラタンパク質のいずれかの１つ以上および／または抗体のいずれかの１つ
以上を、少なくとも１つの賦形剤との組合せで含む組成物を提供する。
【００１１】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の１つ以上の組成物の使用を含む
、対象または細胞ニッチ中の遊離成長因子のレベルをモジュレートする方法を提供する。
一部のこのような方法において、成長因子シグナリングのレベルをモジュレートする。
【００１２】
一部の実施形態において、本発明は、１つ以上のアッセイの使用を含む所望の抗体を選
択する方法であって、そのようなアッセイは、本発明の１つ以上の組換えタンパク質を含
む方法を提供する。一部のこのような方法は、１）抗体結合アッセイを提供するステップ
、２）結合アッセイを１つ以上の候補抗体と接触させるステップ、３）１つ以上の組換え
タンパク質についての候補抗体親和性に関する結合データを得るステップ、および４）結
合データに基づき、所望の抗体を選択するステップを含む。このような方法による結合ア
ッセイとしては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ：ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ
ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）および／または蛍光関連細胞ソーティング
（ＦＡＣＳ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｓｏｒｔｉ
ｎｇ）ベースアッセイを挙げることができる。一部の場合において、このようなアッセイ
の組換えタンパク質は、配列番号１５３〜１６１および２８６〜２９２からなる群から選
択されるタンパク質と複合体化させることができ、またはＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ１Ｓ、Ｌ
ＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、フィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリリ
ン−３、フィブリリン−４、ＧＡＲＰ、ＬＲＲＣ３３、パールカン、デコリン、エラスチ
ンおよびコラーゲンからなる群から選択されるタンパク質と複合体化させることができる
。一部の場合において、組換えタンパク質は、配列番号１９９〜２３６および２７３から
なる群から選択されるアミノ酸配列を含むキメラタンパク質を含み得る。
【００１３】
所望の抗体を選択する他の方法は、１）成長因子活性アッセイを提供するステップ、２
）成長因子活性アッセイを１つ以上の候補抗体と接触させるステップ、３）成長因子活性
データを得るステップ、および４）成長因子活性データに基づき、所望の抗体を選択する
ステップを含み得る。このような方法による成長因子活性アッセイは、ルシフェラーゼベ
ースアッセイおよび増殖アッセイからなる群から選択される細胞ベースアッセイを含み得
る。このような細胞ベースアッセイは、本発明の１つ以上の組換えタンパク質またはその
複合体を発現する１つ以上の発現細胞を含み得る。このようなアッセイは、遺伝子発現デ
ータおよび／または生存データを生じさせる１つ以上の応答細胞をさらに含み得る。
【００１４】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の組換えタンパク質のいずれかの
１つ以上、本明細書に記載のキメラタンパク質のいずれかの１つ以上および／または本明
細書に記載の抗体のいずれかの１つ以上ならびに少なくとも１つの医薬賦形剤を含む医薬
組成物を提供する。
【００１５】
本発明の一部の方法は、対象を本発明の組成物と接触させることを含む、対象における
ＴＧＦ−β関連徴候の治療を含む。ＴＧＦ−β関連徴候としては、線維症徴候（例えば、
肺線維症、腎線維症、肝線維症、心血管線維症、皮膚線維症、および骨髄の線維症）、骨
髄線維症、癌または癌関連病態（例えば、大腸癌、腎癌、乳癌、悪性黒色腫および膠芽細
胞腫）ならびに筋障害および／もしくは損傷［例えば、悪液質、筋ジストロフィー、慢性
閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ：ｃｈｒｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒ
ｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）、運動ニューロン疾患、外傷、神経変性疾患、感染、関節リウマチ
、不動症候群、サルコペニア、封入体筋炎および糖尿病］を挙げることができる。
【００１６】
一部の実施形態において、本発明は、本発明の組成物およびその使用説明書を含むキッ
トを提供する。
上記および他の目的、特徴部および利点は、添付の図面において説明される以下の本発
明の特定の実施形態の記載から明らかである。図面は必ずしも一定の縮尺ではなく、その
代わりに本発明の種々の実施形態の原理を説明することに重点を置く。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＴＧＦ−βスーパーファミリー系統図。多様性は枝の長さに比例する。
【図２】翻訳される成長因子モノマーの線形表示の一実施形態の模式図。こうした実施形態において、翻訳される成長因子は、分泌シグナルペプチド、プロドメインおよび成長因子ドメインを含み得る。本図に示される実施形態による実施形態において、翻訳される成長因子は、プロドメインおよび成長因子領域間の開裂部位も含み得る。
【図３】成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）の一実施形態、ならびに遊離成長因子ダイマーおよび遊離潜在型関連ペプチド（ＬＡＰ）ダイマーの一実施形態の模式図。矢印は、遊離および複合体化形態間で変わる、この実施形態によるタンパク質の能力を示す。
【図４】標識特徴部およびタンパク質モジュールの少なくとも一方を有する遊離ＬＡＰダイマーおよび遊離成長因子ダイマーの１つの実施形態の模式図。
【図５】組換えＧＰＣの一実施形態の模式図。
【図６】突然変異組換えＧＰＣの一実施形態の模式図。
【図７】５つの組換えタンパク質の単独またはＬＴＢＰもしくはＧＡＲＰとの複合体での模式的表示を示す図。
【図８−１】ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質間の構造ベースアラインメントを示す図［出典  シー（Ｓｈｉ）ら（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９、その内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）］。ＬＴＢＰおよびＧＡＲＰの少なくとも一方との相互作用に要求されるシステイン残基を枠により囲う。カムラチ・エンゲルマン症候群において突然変異している残基を星印により示す。プロテアーゼ開裂部位を上向き矢印により示す。タンパク質モジュールおよび二次構造エレメントを黒色バーにより示す。ＧＤＦ−８のＮ末端において下線を付した残基は、代わりに予測されるシグナルペプチドプロセシング部位に対応する。「キメラモジュールブレイクポイント」は、構造特徴部が保存されており、全てのファミリーメンバーにおけるキメラタンパク質構築（ファミリーメンバー間のモジュールの交換）のためのモジュールを提供する領域を示す。Ｎ末端領域を（Ａ）に示し、内側領域を（Ｂ）に示し、Ｃ末端領域を（Ｃ）に示す。
【図８−２】ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質間の構造ベースアラインメントを示す図。［出典  シー（Ｓｈｉ）ら（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９、その内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）］。ＬＴＢＰおよびＧＡＲＰの少なくとも一方との相互作用に要求されるシステイン残基を枠により囲う。カムラチ・エンゲルマン症候群において突然変異している残基を星印により示す。プロテアーゼ開裂部位を上向き矢印により示す。タンパク質モジュールおよび二次構造エレメントを黒色バーにより示す。ＧＤＦ−８のＮ末端において下線を付した残基は、代わりに予測されるシグナルペプチドプロセシング部位に対応する。「キメラモジュールブレイクポイント」は、構造特徴部が保存されており、全てのファミリーメンバーにおけるキメラタンパク質構築（ファミリーメンバー間のモジュールの交換）のためのモジュールを提供する領域を示す。Ｎ末端領域を（Ａ）に示し、内側領域を（Ｂ）に示し、Ｃ末端領域を（Ｃ）に示す。
【図８−３】ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質間の構造ベースアラインメントを示す図。［出典  シー（Ｓｈｉ）ら（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９、その内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）］。ＬＴＢＰおよびＧＡＲＰの少なくとも一方との相互作用に要求されるシステイン残基を枠により囲う。カムラチ・エンゲルマン症候群において突然変異している残基を星印により示す。プロテアーゼ開裂部位を上向き矢印により示す。タンパク質モジュールおよび二次構造エレメントを黒色バーにより示す。ＧＤＦ−８のＮ末端において下線を付した残基は、代わりに予測されるシグナルペプチドプロセシング部位に対応する。「キメラモジュールブレイクポイント」は、構造特徴部が保存されており、全てのファミリーメンバーにおけるキメラタンパク質構築（ファミリーメンバー間のモジュールの交換）のためのモジュールを提供する領域を示す。Ｎ末端領域を（Ａ）に示し、内側領域を（Ｂ）に示し、Ｃ末端領域を（Ｃ）に示す。
【図８−４】ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質間の構造ベースアラインメントを示す図。［出典  シー（Ｓｈｉ）ら（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９、その内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）］。ＬＴＢＰおよびＧＡＲＰの少なくとも一方との相互作用に要求されるシステイン残基を枠により囲う。カムラチ・エンゲルマン症候群において突然変異している残基を星印により示す。プロテアーゼ開裂部位を上向き矢印により示す。タンパク質モジュールおよび二次構造エレメントを黒色バーにより示す。ＧＤＦ−８のＮ末端において下線を付した残基は、代わりに予測されるシグナルペプチドプロセシング部位に対応する。「キメラモジュールブレイクポイント」は、構造特徴部が保存されており、全てのファミリーメンバーにおけるキメラタンパク質構築（ファミリーメンバー間のモジュールの交換）のためのモジュールを提供する領域を示す。Ｎ末端領域を（Ａ）に示し、内側領域を（Ｂ）に示し、Ｃ末端領域を（Ｃ）に示す。
【図８−５】ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質間の構造ベースアラインメントを示す図。［出典  シー（Ｓｈｉ）ら（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９、その内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）］。ＬＴＢＰおよびＧＡＲＰの少なくとも一方との相互作用に要求されるシステイン残基を枠により囲う。カムラチ・エンゲルマン症候群において突然変異している残基を星印により示す。プロテアーゼ開裂部位を上向き矢印により示す。タンパク質モジュールおよび二次構造エレメントを黒色バーにより示す。ＧＤＦ−８のＮ末端において下線を付した残基は、代わりに予測されるシグナルペプチドプロセシング部位に対応する。「キメラモジュールブレイクポイント」は、構造特徴部が保存されており、全てのファミリーメンバーにおけるキメラタンパク質構築（ファミリーメンバー間のモジュールの交換）のためのモジュールを提供する領域を示す。Ｎ末端領域を（Ａ）に示し、内側領域を（Ｂ）に示し、Ｃ末端領域を（Ｃ）に示す。
【図９Ａ】ＴＧＦ−βファミリーに見出されるアミノ酸配列間の同一性パーセントを示す表を提示する図であって、図９Ａは、プロタンパク質（プロドメインおよび成長因子）間の同一性パーセントを実証する図。
【図９Ｂ】ＴＧＦ−βファミリーに見出されるアミノ酸配列間の同一性パーセントを示す表を提示する図であって、成長因子ドメイン間の同一性パーセントを図９Ｂに提示する一方、プロドメイン間の同一性パーセントを図９Ｃに提示する図。
【図９Ｃ】ＴＧＦ−βファミリーに見出されるアミノ酸配列間の同一性パーセントを示す表を提示する図であって、成長因子ドメイン間の同一性パーセントを図９Ｂに提示する一方、プロドメイン間の同一性パーセントを図９Ｃに提示する図。
【図１０−１】ＧＤＦ−８（ミオスタチン）、ＧＤＦ−１１、インヒビンＡおよびＧＤＦ−８ダイマー間で実施されたアラインメントを提示する図。矢印は、開裂部位を示す。内部相互作用に関与する領域を枠により囲う。黒色矩形は、キメラ構築物中の立体衝突に関与すると予測される残基の上に現れる。星印は、タンパク質モジュール中の重要なブレイクポイントを示す。
【図１０−２】ＧＤＦ−８（ミオスタチン）、ＧＤＦ−１１、インヒビンＡおよびＧＤＦ−８ダイマー間で実施されたアラインメントを提示する図。矢印は、開裂部位を示す。内部相互作用に関与する領域を枠により囲う。黒色矩形は、キメラ構築物中の立体衝突に関与すると予測される残基の上に現れる。星印は、タンパク質モジュール中の重要なブレイクポイントを示す。
【図１１】組換え抗原および抗体複合体の発現および精製を示す図（クーマシーブルー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥ）。
【図１２−１】ＴＧＦ−β１／ＧＡＲＰ複合体を安定的に発現する細胞系の分析からの結果を提示する図。空のベクター対照（Ａ）、プロＴＧＦ−β１−ＧＡＲＰ（Ｂ）またはＴＧＦ−β１ＬＡＰ−ＧＡＲＰ（Ｃ）により安定的に形質転換された３００．１９細胞を、発現タンパク質に指向される抗体により蛍光標識し、フローサイトメトリにより蛍光強度について試験した。ルシフェラーゼアッセイデータを（Ｄ）に提示し、これらの細胞とαｖβ６インテグリンを発現する細胞との共培養から得られたＴＧＦ−βシグナリング活性を示す。
【図１２−２】ＴＧＦ−β１／ＧＡＲＰ複合体を安定的に発現する細胞系の分析からの結果を提示する図。空のベクター対照（Ａ）、プロＴＧＦ−β１−ＧＡＲＰ（Ｂ）またはＴＧＦ−β１ＬＡＰ−ＧＡＲＰ（Ｃ）により安定的に形質転換された３００．１９細胞を、発現タンパク質に指向される抗体により蛍光標識し、フローサイトメトリにより蛍光強度について試験した。ルシフェラーゼアッセイデータを（Ｄ）に提示し、これらの細胞とαｖβ６インテグリンを発現する細胞との共培養から得られたＴＧＦ−βシグナリング活性を示す。
【図１３】クーマシー染色により可視化された、還元および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離された組換えヒスチジンタグ化プロＧＤＦ−８を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
成長因子は、種々の細胞活性を刺激する細胞シグナリング分子である。生体系内のこれ
らの幅広い影響に起因して、成長因子シグナリングは、多くの場合、他の生体分子、細胞
外マトリックス、および細胞マトリックスの少なくとも一つとの相互作用を介して、また
は特定の細胞環境もしくはニッチ内で厳密に調節される。これらの相互作用は、直接また
は間接的であり得る。
【００１９】
トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）ファミリーの成長因子は、種々の細胞
プロセスに関与する。ＩＩ型受容体への成長因子結合は、Ｉ型受容体リン酸化および活性
化をもたらす（デニコート，Ｃ．（Ｄｅｎｉｃｏｕｒｔ，Ｃ．）ら著、「トランスフォー
ミング成長因子β誘導細胞周期停止クロニクルの別のねじれ（Ａｎｏｔｈｅｒ  ｔｗｉｓ
ｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  β−ｉｎ
ｄｕｃｅｄ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ  ａｒｒｅｓｔ  ｃｈｒｏｎｉｃｌｅ）、米国科学ア
カデミー紀要（ＰＮＡＳ）、２００３年、第１００巻（第２６号）：ｐ．１５２９０〜１
）。活性化されたＩ型受容体は、次いで、受容体関連ＳＭＡＤ（Ｒ−ＳＭＡＤ）をリン酸
化し、共通ＳＭＡＤ（例えば、ＳＭＡＤ４）ダイマー／トリマー形成ならびに核移行を促
進する。ＳＭＡＤ複合体は、補因子と協働してＴＧＦ−βファミリーメンバー標的遺伝子
の発現をモジュレートする。
【００２０】
ＴＧＦ−βファミリーメンバーシグナリングカスケードは、多数の多様な生物学的経路
、例として、限定されるものではないが、細胞成長の阻害、組織ホメオスタシス、細胞外
マトリックス（ＥＣＭ）リモデリング、細胞遊走および侵入における上皮間葉移行（ＥＭ
Ｔ：ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｔｏ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）
ならびに免疫モジュレーション／抑制ならびに間葉上皮移行に関与する。成長阻害および
組織ホメオスタシスに関連するＴＧＦ−βシグナリングは、ｐ２１およびｐｌ５ＩＮＫの
活性化を介して上皮、内皮、造血および免疫細胞に影響して細胞周期停止を媒介し、ｍｙ
ｃを抑制し得る。ＥＣＭリモデリングに関連して、ＴＧＦ−βシグナリングは、線維芽細
胞集団およびＥＣＭ沈着（例えば、コラーゲン）を増加させ得る。細胞遊走および侵入に
関連するＴＧＦ−βシグナリングは、上皮および／または内皮細胞に影響し得、幹細胞様
表現型を誘導する。シグナリングのこの態様は、血管手術および／またはステント植込み
術後の平滑筋細胞増殖における役割を担い得る。免疫系において、ＴＧＦ−βリガンドは
、Ｔ制御性細胞機能ならびに免疫前駆細胞成長およびホメオスタシスの維持に必要である
。ほぼ全ての免疫細胞は、ＴＧＦ−βについての受容体を含み、ＴＧＦ−βノックアウト
マウスは、部分的に炎症病変に起因して生後に死亡する。最後に、ＴＧＦ−βは、ナチュ
ラルキラー細胞のインターフェロンガンマ誘導活性化を抑制する（内容が参照により全体
として本明細書に組み込まれるウィー，Ｊ．（Ｗｉ，Ｊ．）ら著、２０１１年、ヘパトロ
ジー（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ）、第５３巻（第４号）、ｐ．１３４２〜５１）。
【００２１】
ＴＧＦ−βの潜在型形態の結晶構造の近年の解明は、全ＴＧＦ−βファミリーについて
最初であり、それらの複合体への深い洞察を提供する（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著
、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月
１５日、第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９）。ＴＧＦ−βファミリーにおけ
るほぼ全てのシグナリングは、２つのＩ型および２つのＩＩ型受容体を含有するヘテロテ
トラマー受容体複合体によりダイマーリガンドが認識される共通の経路を通過する。それ
ぞれの受容体は、セリン−トレオニンキナーゼドメインを有する。ＩＩ型受容体は、Ｉ型
受容体をリン酸化し、次いでそれが受容体調節Ｓｍａｄをリン酸化し、それが核中に移行
し、核中で蓄積し、転写を調節する。
【００２２】
ヒトにおいてＴＧＦ−βファミリーの３３個の異なるメンバーが存在する（図１）。メ
ンバーとしては、骨形成タンパク質（ＢＭＰ：ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  
ｐｒｏｔｅｉｎ）、インヒビン、アクチビン、成長分化因子（ＧＤＦ：ｇｒｏｗｔｈ  ａ
ｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｆａｃｔｏｒ）、ミオスタチン、ノーダル、抗ミュラ
ー管ホルモン、およびレフティタンパク質が挙げられる。ＴＧＦ−βファミリーメンバー
、関連するシグナリング分子およびそれらの関係の概要は、内容が参照により全体として
本明細書に組み込まれるマッサグ（Ｍａｓｓａｇｕｅ）著、２０００年、ネイチャー・レ
ビューズ・モレキュラー・セル・バイオロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第１巻、ｐ．１６９〜７８に見出すことが
できる。一部の実施形態において、成熟成長因子は、それらのプロドメインとともに単一
のポリペプチド鎖として合成される（図２参照）。一部の実施形態において、このような
ポリペプチド鎖は、成熟成長因子からのプロドメインの分離のための開裂部位を含み得る
。一部の実施形態において、このような開裂部位は、プロタンパク質変換酵素により認識
および開裂されるフーリン開裂部位である。
【００２３】
一般に、ＴＧＦ−βファミリーメンバー成長因子ドメイン間の相同性は、比較的高い。
興味深いことに、プロドメイン相同性は、かなり低い。この相同性の欠落は、ファミリー
メンバー間の成長因子調節の変更における重要な因子であり得る。一部の場合において、
プロドメインは、成長因子ドメインの適正なフォールディングおよび／またはダイマー化
をガイドし得る。プロドメインは、一部の場合において、潜在型からの成長因子放出を引
き起こす他のシグナルが受容されるまで、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）および／または
細胞マトリックス中の規定の局在への成長因子の指向（分泌後）における重要な機能を有
することがごく最近、認識された。潜在型からの放出は、成長因子が短い距離（例えば、
約１細胞直径〜約数細胞直径、約２細胞直径〜約１００細胞直径および／または約１０細
胞直径〜約１０，０００細胞直径）にわたり作用し得、それらが循環に到達したらクリア
ランスされる高度に局在化された環境中で生じ得る。一部の成長因子−プロドメイン複合
体は、ホモダイマーとして分泌される。一部の実施形態において、プロドメイン−成長因
子複合体は、ヘテロダイマーとして分泌させることができる。
【００２４】
本明細書において使用される場合、用語「ＴＧＦ−β関連タンパク質」は、ＴＧＦ−β
アイソフォーム、ＴＧＦ−βファミリーメンバーまたはＴＧＦ−βファミリーメンバー関
連タンパク質を指す。ＴＧＦ−βファミリーメンバーとしては、限定されるものではない
が、図１に示され、および／または表１に列記されるもののいずれかを挙げることができ
る。これらとしては、限定されるものではないが、ＴＧＦ−βタンパク質、ＢＭＰ、ミオ
スタチン、ＧＤＦおよびインヒビンが挙げられる。一部の実施形態において、本発明は、
ＴＧＦ−β関連タンパク質を単離し、特徴決定し、および／またはモジュレートするため
のツールおよび方法の少なくとも一方を提供する。本発明の態様は、ＴＧＦ−β関連タン
パク質シグナリングに関連する細胞活性を特徴決定し、および／またはモジュレートする
ためのツールおよび方法の少なくとも一方を提供する。他の実施形態において、本発明の
ツールは、１つ以上のＴＧＦ−β関連タンパク質の１つ以上の構成要素を含む抗原を含み
得る。一部のツールは、本発明の抗原に指向される抗体を含み得る。追加の実施形態にお
いて、本発明のツールは、ＴＧＦ−β関連タンパク質の検出および特徴決定の少なくとも
一方、ＴＧＦ−β関連タンパク質に指向される抗体の検出および特徴決定の少なくとも一
方、および／または、ＴＧＦ−β関連タンパク質に関連した細胞活性および／またはそれ
らの細胞シグナリングの検出および特徴決定の少なくとも一方のためのアッセイを含み得
る。
【００２５】
目的タンパク質
ＴＧＦ−β関連タンパク質は、多数の細胞プロセスに関与する。胚発生において、タン
パク質のＴＧＦ−βファミリーの３３個のメンバーが、主要な発生プロセスおよび多くの
器官の形成の細部の調節に関与する。この調節のほとんどは、生前に生じるが、このファ
ミリーは生後の多くのプロセス、例として、限定されるものではないが、免疫応答、創傷
治癒、骨成長、内分泌機能および筋肉量を調節し続ける。ＴＧＦ−β関連タンパク質は、
それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる２０１２年１１月６日に
出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９１９号明細書；２０１２年１１月６日に出
願された米国仮特許出願第６１／７２２、９６９号明細書および２０１３年５月１５日に
出願された米国仮特許出願第６１／８２３，５５２号明細書に列記および記載されている
。
【００２６】
例示的なＴＧＦ−βファミリープロタンパク質、すなわち、分泌シグナル配列除去後の
タンパク質のリストを表１に示す。プロタンパク質は、プロドメインおよび成長因子を含
有し、その前駆体である。表に、由来するＴＧＦ−βファミリーメンバーの名称およびプ
ロタンパク質配列を示す。さらに、プロタンパク質変換酵素開裂部位を「太字」および「
下線」において識別する。開裂時、得られるプロドメインは、この部位を保持する一方、
成熟成長因子は、開裂部位の次から始まる。レフティ１およびレフティ２は、成熟成長因
子の開始直前にプロタンパク質変換酵素により開裂されないことに留意されたい。
【００２７】
【表１】
2020062007.tif 000003
2020062007.tif 000004
2020062007.tif 000005
2020062007.tif 000006
2020062007.tif 000007
2020062007.tif 000008
2020062007.tif 000009
一部のプロドメインは、プロタンパク質変換酵素により開裂され得ることに留意された
い。本明細書において使用される場合、用語「プロタンパク質変換酵素」は、翻訳された
タンパク質からプロドメインを開裂してタンパク質成熟を促進する酵素を指す。本発明の
一部のプロタンパク質変換酵素としては、スブチリシン様プロタンパク質変換酵素（ＳＰ
Ｃ：ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ）
ファミリーメンバー酵素が挙げられる。ＳＰＣファミリーは、カルシウム依存性セリンエ
ンドプロテアーゼを含み、それとしては、限定されるものではないが、フーリン／ＰＡＣ
Ｅ、ＰＣｌ／３、ＰＣ２、ＰＣ４、ＰＣ５／６、ＰＡＣＥ４およびＰＣ７が挙げられる（
内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるフラー（Ｆｕｌｌｅｒ）ら著、２０
０９年、インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・サイエンス
（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ）、第５０巻（第１２号）、ｐ
．５７５９〜６８）。ＧＤＦ−１１は、一部の場合において、ＰＣ５／６により開裂され
得る。一部の場合において、プロタンパク質変換酵素は、表１に示されるもの以外の追加
の部位におけるプロタンパク質を開裂し得る。一部の実施形態において、プロタンパク質
は、第１の開裂部位（第１の部位は、Ｎ末端に最も近い部位である）において開裂され得
る。他の実施形態において、プロタンパク質は、第１の開裂部位以外の開裂部位において
開裂され得る。一部の場合において、プロタンパク質変換酵素開裂は、細胞内で生じ得る
。一部の場合において、プロタンパク質変換酵素開裂は、細胞外で生じ得る。
【００２８】
多くのＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質は、プロドメインとともに合成される
。一部のプロドメインは、開裂後に成長因子と会合しているままであり得る。このような
会合は、細胞シグナリングについての成長因子の利用可能性をモジュレートする潜在型成
長因子−プロドメイン複合体（ＧＰＣ）を形成し得る。成長因子は、１つ以上の細胞外タ
ンパク質との会合を介してＧＰＣ中の潜在型から放出され得る。一部の場合において、成
長因子放出は、細胞外タンパク質相互作用を介してＧＰＣに適用される力に依存し得る。
このような力は、ＧＰＣのＣ末端および／またはＮ末端領域を引き寄せ得、会合成長因子
の放出をもたらす。
【００２９】
一部のＴＧＦ−βファミリーメンバーにおいて、ＧＰＣのプロドメイン部分は、成長因
子保持および保持される成長因子とそれらの受容体との相互作用の遮断を担う。これに関
して機能するＧＰＣのプロドメイン部分は、潜在型関連ペプチド（ＬＡＰ）と称される。
ＴＧＦ−β１、２および３は、ＬＡＰを含むことが公知である。一部のプロドメインは、
ＬＡＰ様ドメインを含み得る。本明細書において使用される場合、用語「ＬＡＰ様ドメイ
ン」は、ＬＡＰと構造的に類似し得、またはそれと類似の様式で合成され得るが、成長因
子／受容体相互作用を防止するように機能し得ないＧＰＣのプロドメイン部分および／ま
たは遊離プロドメインを指す。ＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１は、ＬＡＰ様ドメインを含
む。
【００３０】
種々の因子に応じて、成長因子は、遊離または１つ以上のＬＡＰもしくはＬＡＰ様ドメ
インと会合していてよい。図３は、成長因子ダイマーがＬＡＰダイマーと会合し得る実施
形態を示す模式図である。一部の実施形態において、ＧＰＣは、成長因子シグナリング、
分泌、潜在型および／または潜在型ＧＰＣからの放出の異なる態様に必要なタンパク質モ
ジュールを含む。本明細書において使用される場合、用語「タンパク質モジュール」は、
タンパク質の任意の構成要素、領域および／または特徴部を指す。タンパク質モジュール
は、長さが変動し得、１つ以上のアミノ酸を含む。タンパク質モジュールは、約２アミノ
酸残基長〜約５０アミノ酸残基長、約５アミノ酸残基長〜約７５アミノ酸残基長、約１０
アミノ酸残基長〜約１００アミノ酸残基長、約２５アミノ酸残基長〜約１５０アミノ酸残
基長、約１２５アミノ酸残基長〜約２５０アミノ酸残基長、約１７５アミノ酸残基長〜約
４００アミノ酸残基長、約２００アミノ酸残基長〜約５００アミノ酸残基長および／また
は少なくとも５００アミノ酸残基長であり得る。
【００３１】
一部の実施形態において、タンパク質モジュールは、公知の機能特徴部を有する１つ以
上の領域（例えば、タンパク質結合ドメイン、核酸結合ドメイン、疎水性ポケットなど）
を含む。タンパク質モジュールは、成長因子シグナリング、分泌、潜在型および／または
潜在型立体構造からの放出の異なる態様に必要な機能タンパク質ドメインを含み得る。
【００３２】
一部の実施形態において、タンパク質モジュールは、ＴＧＦ−β関連タンパク質から由
来し得る。このようなタンパク質モジュールとしては、限定されるものではないが、潜在
型関連ペプチド（ＬＡＰ）、ＬＡＰ様ドメイン、成長因子ドメイン、ファスナー領域、プ
ロタンパク質変換酵素開裂部位（例えば、フーリン開裂部位）、Ｂ／ＴＰ開裂部位、アー
ム領域、フィンガー領域、細胞外タンパク質［例えば、潜在型ＴＧＦ−β結合タンパク質
（ＬＴＢＰ：ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、フィブリ
リンおよび／または糖タンパク質Ａ反復優位型（ＧＡＲＰ：ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  
Ａ  ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ  ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ）タンパク質］会合のための残基
（例えば、システイン残基など）、潜在型ループ（本明細書において潜在型ラッソ（ｌａ
ｔｅｎｃｙ  ｌａｓｓｏ）とも称される）、α１ヘリカル領域、α２ヘリカル領域、ＲＧ
Ｄ配列およびボウタイ領域を挙げることができる。図４は、タンパク質モジュールを含む
ＬＡＰおよび成長因子ダイマーを示す実施形態の模式図である。
【００３３】
一部の実施形態において、タンパク質モジュールは、１つ以上のＴＧＦ−βアイソフォ
ーム（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３）に由来し得る
。このようなタンパク質モジュールは、表２に列記のタンパク質モジュールおよび／また
はアミノ酸配列を含み得る。本発明の一部のタンパク質モジュールは、表２のものと類似
するが、列記のものよりも追加または少ないアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。こ
のようなアミノ酸配列は、約１つ多いもしくは少ないアミノ酸、約２つ多いもしくは少な
いアミノ酸、約３つ多いもしくは少ないアミノ酸、約４つ多いもしくは少ないアミノ酸、
約５つ多いもしくは少ないアミノ酸、約６つ多いもしくは少ないアミノ酸、約７つ多いも
しくは少ないアミノ酸、約８つ多いもしくは少ないアミノ酸、約９つ多いもしくは少ない
アミノ酸、約１０個多いもしくは少ないアミノ酸または１０個超多いもしくは少ないアミ
ノ酸をＮ末端および／またはＣ末端の終端上に含み得る。
【００３４】
【表２】
2020062007.tif 000010
2020062007.tif 000011
2020062007.tif 000012
一部の実施形態において、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインは、ＴＧＦ−β関連タンパク
質および／またはＧＰＣのプロドメイン部分を含む。一部のＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメイ
ンは、ＧＰＣ中で成長因子と会合し得る。一部のＬＡＰは、１つ以上の細胞受容体との成
長因子会合を立体的に防止し得る。ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインは、アーム領域および
／またはストレートジャケット領域を含み得る。一部のＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインは
、本明細書において「ボウタイ領域」と称されるＣ末端領域を含み得る。一部のＬＡＰま
たはＬＡＰ様ドメインダイマーにおいて、それぞれのモノマーのボウタイ領域は、会合お
よび／または相互作用し得る。このような会合は、ＴＧＦ−βアイソフォームＬＡＰのモ
ノマー間で見出されるようなジスルフィド結合形成を含み得る。
【００３５】
一部の実施形態において、アーム領域は、トリガーループ領域を含み得る。トリガール
ープは、インテグリンと会合する領域を含み得る。このような領域は、ＲＧＤ（Ａｒｇ−
Ｇｌｙ−Ａｓｐ）を含むアミノ酸配列を含み得る。ＲＧＤ配列を含む領域は、本明細書に
おいてＲＧＤ配列領域と称される。一部の実施形態において、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメ
インは、潜在型ループ（本明細書において、潜在型ラッソとも称される）を含む。一部の
潜在型ループは、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインおよびＧＰＣ内に存在する成長因子間の
会合を維持し得る。ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインは、ファスナー領域も含み得る。この
ようなファスナー領域は、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインおよびＧＰＣ内に存在する成長
因子間の会合を維持し得る。一部のファスナー領域は、成長因子保持を促進するＬＡＰま
たはＬＡＰ様ドメイン立体構造を維持し得る。
【００３６】
一部の場合において、ＧＰＣは、結合成長因子の解離のための酵素的開裂を要求し得る
。このような開裂は、一部の場合において、ＢＭＰ−１／トロイド様プロテイナーゼ（Ｂ
／ＴＰ：ＢＭＰ−１／Ｔｏｌｌｏｉｄ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ）ファミリーの
メンバーにより実施され得る（内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるムイ
ル（Ｍｕｉｒ）ら著、２０１１年、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（
Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ）、第２８６巻（第４９号）、ｐ．４１９０５〜１１）。これら
のメタロプロテイナーゼとしては、限定されるものではないが、ＢＭＰ−１、哺乳動物ト
ロイドタンパク質（ｍＴＬＤ）、哺乳動物トロイド様１（ｍＴＬＬｌ：ｍａｍｍａｌｉａ
ｎ  ｔｏｌｌｏｉｄ−ｌｉｋｅ  １）および哺乳動物トロイド様２（ｍＴＬＬ２：ｍａｍ
ｍａｌｉａｎ  ｔｏｌｌｏｉｄ−ｌｉｋｅ  ２）を挙げることができる。このようなメタ
ロプロテイナーゼにより開裂され得る例示的なＧＰＣとしては、限定されるものではない
が、ＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１を挙げることができる。一部の場合において、ＧＤＦ
−８は、ｍＴＬＬ２により開裂され得る。一部の場合において、トロイド開裂は、細胞内
で生じ得る。一部の場合において、トロイド開裂は、細胞外で生じ得る。
【００３７】
ストレートジャケット領域は、α１ヘリカル領域を含み得る。一部の実施形態において
、α１ヘリカル領域は、成長因子モノマー間に位置され得る。一部のα１ヘリカル領域は
、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインのＮ末端領域を含む。α１ヘリカル領域は、細胞外会合
のためのＮ末端領域も含み得る。このような細胞外会合は、細胞外マトリックスタンパク
質および／または細胞外マトリックスと会合しているタンパク質を含み得る。一部の細胞
外会合は、例として、限定されるものではないが、ＬＴＢＰ（例えば、ＬＴＢＰ１、ＬＴ
ＢＰ２、ＬＴＢＰ３および／またはＬＴＢＰ４）、フィブリリン（例えば、フィブリリン
−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３および／またはフィブリリン−４）、パール
カン、デコリンおよび／またはＧＡＲＰ（例えば、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３
）を挙げることができるタンパク質との会合を含み得る。Ｎ末端細胞外会合は、システイ
ン残基間のジスルフィド結合を含み得る。一部の場合において、細胞外マトリックスタン
パク質および／または細胞外マトリックスと会合しているタンパク質は、Ｎ末端領域以外
のＬＡＰ／ＬＡＰ様ドメインの１つ以上の領域との結合を含み得る。
【００３８】
一部の実施形態において、成長因子ドメインは、１つ以上の成長因子モノマーを含む。
一部の成長因子ドメインは、成長因子ダイマーを含む。このような成長因子ドメインは、
成長因子ホモダイマーまたはヘテロダイマー（異なるＴＧＦ−β関連タンパク質からの成
長因子モノマーを含む）を含み得る。一部の成長因子ドメインは、フィンガー領域を含み
得る。このようなフィンガー領域は、βプリーツシートを含み得る。フィンガー領域は、
ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインと会合し得る。一部のフィンガー領域は、成長因子ドメイ
ンおよびＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメイン間の会合を維持し得る。
【００３９】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、成長分化因子（ＧＤＦ）タン
パク質からのタンパク質モジュールを含み得る。このようなＧＤＦタンパク質モジュール
は、表３に列記のタンパク質モジュールおよび／またはアミノ酸配列を含み得る。一部の
実施形態において、本発明のタンパク質モジュールは、表３のものと類似するが、列記の
ものよりも追加のまたは少ないアミノ酸を含むアミノ酸配列を含み得る。一部のこのよう
なアミノ酸配列は、約１つ多いまたは少ないアミノ酸、約２つ多いもしくは少ないアミノ
酸、約３つ多いもしくは少ないアミノ酸、約４つ多いもしくは少ないアミノ酸、約５つ多
いもしくは少ないアミノ酸、約６つ多いもしくは少ないアミノ酸、約７つ多いもしくは少
ないアミノ酸、約８つ多いもしくは少ないアミノ酸、約９つ多いもしくは少ないアミノ酸
、約１０個多いもしくは少ないアミノ酸または１０個超多いもしくは少ないアミノ酸をＮ
末端および／またはＣ末端の終端上に含み得る。
【００４０】
【表３】
2020062007.tif 000013
2020062007.tif 000014
本発明の一部の組換えタンパク質は、ＧＤＦ−１５、ＧＤＦ−１５シグナリング経路関
連タンパク質ならびに／またはそれらのモジュールおよび／もしくは部分を含み得る。Ｇ
ＤＦ−１５は、肝中で高度に発現されるＴＧＦ−βファミリータンパク質である。ＧＤＦ
−１５の発現は、肝損傷後に大幅に上方調節される（シャオ（Ｈｓｉａｏ）ら著、２００
０年、モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ）
、第２０巻（第１０号）、ｐ．３７４２〜５１）。さらに、マクロファージ中のその発現
は、おそらく接着分子発現の調節を介してアテローム性動脈硬化症に関する保護機能を提
供し得る（プルーシュ（Ｐｒｅｕｓｃｈ）ら著、２０１３年、ヨーロピアン・ジャーナル
・オブ・メディカル・リサーチ（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ）、第１８巻、ｐ．１９）
。ＴＧＦ−βファミリーのメンバー、ＧＤＦ−１５は他のメンバーと３０％未満の相同性
を含む一方、それによりファミリーの最も多様なメンバーとなる（内容が参照により全体
として本明細書に組み込まれるタンノ（Ｔａｎｎｏ）ら著、２０１０年、カレント・オピ
ニオン・イン・ヘマトロジー（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ）、第１７巻（第３
号）、ｐ．１８４〜９０）。成熟形態は可溶性であり、血流中で見出すことができる。興
味深いことに、循環中のＧＤＦ−１５レベルは、ヘプシジンレベルと負に相関することが
見出され、このことは鉄負荷および／または代謝におけるＧＤＦ−１５についての役割を
示唆した（フィンケンシュテッド（Ｆｉｎｋｅｎｓｔｅｄｔ）ら著、２００８年、ブリテ
ィッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  
Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ）、第１４４巻、ｐ．７８９〜９３）。血液中のＧＤＦ−１５の
上昇は、例えば、β−サラセミアまたは赤血球生成不全貧血を罹患する対象における無効
なおよび／またはアポトーシス性の赤血球生成にも関連する。
【００４１】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、アクチビンサブユニットから
のタンパク質モジュールを含み得る。このようなタンパク質モジュールは、表４に列記の
アクチビンサブユニットインヒビンβＡのタンパク質モジュールおよび／またはアミノ酸
配列を含み得る。一部の実施形態において、本発明のタンパク質モジュールは、表４のも
のと類似するが、列記のものよりも追加のまたは少ないアミノ酸を含むアミノ酸配列を含
み得る。一部のこのようなアミノ酸配列は、約１つ多いもしくは少ないアミノ酸、約２つ
多いもしくは少ないアミノ酸、約３つ多いもしくは少ないアミノ酸、約４つ多いもしくは
少ないアミノ酸、約５つ多いもしくは少ないアミノ酸、約６つ多いもしくは少ないアミノ
酸、約７つ多いもしくは少ないアミノ酸、約８つ多いもしくは少ないアミノ酸、約９つ多
いもしくは少ないアミノ酸、約１０個多いもしくは少ないアミノ酸または１０個超多いも
しくは少ないアミノ酸をＮ末端および／またはＣ末端の終端上に含み得る。
【００４２】
【表４】
2020062007.tif 000015
ＴＧＦ−βファミリーメンバー間の成長因子ドメインは、より高度に保存されている一
方、プロドメインは、ファミリーメンバー間のかなり低い同一性パーセントを含む（図９
）。表５は、ＴＧＦ−βアイソフォーム間のこの傾向を実証する。
【００４３】
【表５】
2020062007.tif 000016
プロドメインは、長さが約５０〜約２００、約１００〜約４００または約３００〜約５
００アミノ酸残基で変動し得る。一部の実施形態において、プロドメインは、約１６９〜
約４３３残基の範囲である。プロドメインは、配列が無関連であり、および／または相同
性が低いことがある。一部のプロドメインは、類似のフォールドおよび／または三次元構
造を有し得る。ＴＧＦ−βファミリーメンバーのプロドメインは、潜在型ループを含み得
る。このようなループは、プロリンリッチであり得る。潜在型ループ長は、成長因子フィ
ンガー領域を包囲するそのようなループの能力を決定し得る。
【００４４】
一部の実施形態において、一部のＴＧＦ−βファミリーメンバーからのタンパク質モジ
ュールは、他のＴＧＦ−βファミリーメンバーからのタンパク質モジュールとの低い配列
同一性を含む。このような低い配列同一性は、区別されるタンパク質モジュールを有する
そのようなファミリーメンバーについての特殊化された役割を示し得る。
【００４５】
ＧＰＣと細胞外タンパク質との会合は、プロドメイン−成長因子相互作用を強化し得る
。一部の実施形態において、このような細胞外タンパク質としては、限定されるものでは
ないが、ＬＴＢＰ、フィブリリンおよび／またはＧＡＲＰを挙げることができる。一部の
場合において、細胞外タンパク質会合は、成長因子がＧＰＣ中で潜在型であることを保持
することが要求される。
【００４６】
ＧＡＲＰ発現は、造血起源の細胞の表面上のＧＰＣの表面発現に要求されることが示さ
れている（トラン，Ｄ．Ｑ．（Ｔｒａｎ，Ｄ．Ｑ．）ら著、「ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）
は、血小板および活性化ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞上の潜在型ＴＧＦ−βの表面発現に不
可欠である（ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓ
ｕｒｆａｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｏｎ  ｐｌａ
ｔｅｌｅｔｓ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＦＯＸＰ３＋  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ
ｃｅｌｌｓ）」、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、２００９年６月２日、第１０
６巻（第３２号）、ｐ．１３４４５〜５０）。ＧＡＲＰは、それらの細胞、例として、限
定されるものではないが、制御性Ｔ細胞および／または血小板の表面上でＧＰＣを定位置
に保持するためのテザーとして作用し得る。
【００４７】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質の
ファミリーの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含み得る。ＢＭＰからの配列を含むタンパク
質モジュールは、図８に開示のそれらのＢＭＰモジュールのいずれかからの配列を含み得
る。他のＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質に関連する一方、ＢＭＰは、一般に、
ＳＭＡＤ１、５および８タンパク質を介してシグナリングする一方、ＴＧＦ−βアイソフ
ォーム（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３）は、ＳＭＡＤ２およ
びＳＭＡＤ３を介してシグナリングする。
【００４８】
一部のＢＭＰ受容体および／または共受容体も、他のＴＧＦ−βファミリーメンバータ
ンパク質から区別される。これらの間には、タンパク質の分泌型ガイダンス分子（ＲＧＭ
）ファミリーがある。ＲＧＭタンパク質は、ＢＭＰシグナリングのための共受容体として
作用する。３つのＲＧＭファミリーメンバー、ＲＧＭＡ、ＲＧＭＢおよびＲＧＭＣ［ヘモ
ジュベリン（Ｈｊｖ）としても公知］が存在する。１つ以上のＢＭＰタンパク質モジュー
ルを含む本発明の組換えタンパク質は、ＲＧＭタンパク質とのＢＭＰ相互作用を試験し、
向上させ、および／または摂動させるための抗体および／またはアッセイの開発に有用で
あり得る。
【００４９】
ＧＤＦ／ＢＭＰ相互作用タンパク質の別のファミリーは、Ｃ末端システインノット様（
ＣＴＣＫ）ドメイン含有タンパク質である。一部の場合において、ＣＴＣＫドメイン含有
タンパク質は、ＧＤＦ／ＢＭＰシグナル伝達に関してアンタゴニスト的に作用し得る。Ｃ
ＴＣＫドメイン含有タンパク質としては、限定されるものではないが、ケルベロス（Ｃｅ
ｒｂｅｒｕｓ）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、ＤＡＮドメインファミリーメンバー５
（ＤＡＮＤ５）、グレムリン−１（ＧＲＥＭ１）、グレムリン−２（ＧＲＥＭ２）、ムチ
ン−１９（ＭＵＣ１９）、ムチン−２（ＭＵＣ２）、ムチン−５ＡＣ（ＭＵＣ５ＡＣ）、
ムチン−５Ｂ（ＭＵＣ５Ｂ）、ムチン−６（ＭＵＣ６）、腫瘍原性の神経芽腫サプレッサ
ー（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉ
ｃｉｔｙ）１（ＮＢＬ１）、ノリン（Ｎｏｒｒｉｎ）（ＮＤＰ）、オトゲリン（Ｏｔｏｇ
ｅｌｉｎ）（ＯＴＯＧ）、オトゲリン様タンパク質（ＯＴＯＧＬ）、タンパク質ＣＹＲ６
１（ＣＹＲ６１）、タンパク質ＮＯＶホモログ（ＮＯＶ）、スクレロスチン（ＳＯＳＴ）
、スクレロスチンドメイン含有タンパク質１（ＳＯＳＴＤＣ１）、ＳＣＯ−スポンジン（
ＳＳＰＯ）、スリットホモログ１タンパク質（ＳＬＩＴｌ）、スリットホモログ２タンパ
ク質（ＳＬＩＴ２）、スリットホモログ３タンパク質（ＳＬＩＴ３）、フォン・ヴィレブ
ランド因子（ＶＷＦ）、ＷＮＴｌ誘導性シグナリング経路タンパク質１（ＷＩＳＰ１）お
よびＷＮＴｌ誘導性シグナリング経路タンパク質３（ＷＩＳＰ３）が挙げられる。
【００５０】
組換えタンパク質
一部の実施形態において、本発明は、組換えタンパク質を提供する。本明細書において
使用される場合、用語「組換えタンパク質」は、人工遺伝子および／またはプロセス（例
えば、遺伝子操作）により産生されるタンパク質を指す。このような組換えタンパク質は
、１つ以上のＴＧＦ−β関連タンパク質からの１つ以上のタンパク質モジュールを含み得
る。本明細書に開示の一部の組換えタンパク質は、組換え抗原として有用であり得る。本
明細書において使用される場合、用語「組換え抗原」は、そのような組換え抗原上に存在
する１つ以上のエピトープに指向される抗体の産生のために１つ以上の宿主を免疫化する
ために使用することができる組換えタンパク質を指す。一部の組換え抗原は、細胞ベース
抗原であり得る。本明細書において使用される場合、用語「細胞ベース抗原」は、細胞表
面上のそのような抗原の提示のために細胞中で発現される組換え抗原を指す。このような
細胞ベース抗原に指向される抗体の産生のために宿主を免疫化するためにそのような細胞
を使用することができる。
【００５１】
一部の実施形態において、本明細書に開示の組換えタンパク質は、治療薬として使用す
ることができる。本明細書に開示の組換えタンパク質は、１つ以上の対象および／または
ニッチへの投与および／または導入時に成長因子（例えば、ＴＧＦ−β関連タンパク質を
含む成長因子）レベルおよび／または活性（例えば、シグナリング）をモジュレートし得
る。
【００５２】
一部の実施形態において、本明細書に開示の組換えタンパク質は、成長因子（例えば、
ＴＧＦ−β関連タンパク質を含む成長因子）レベルおよび／または活性（例えば、シグナ
リング）をアッセイするために使用することができる。本明細書に開示の一部の組換えタ
ンパク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質に指向される抗体の単離において使用することが
できる。本発明の組換えタンパク質は、安定化［２つの作用物質間の解離（例えば、ＧＰ
Ｃからの成長因子放出、１つ以上のタンパク質相互作用からのＧＰＣ放出）を低減させ、
または防止する］および／または放出［２つの作用物質間の解離（例えば、ＧＰＣからの
成長因子放出、１つ以上のタンパク質相互作用からのＧＰＣ放出）を向上させる］抗体の
発生における組換え抗原として使用することもできる。本発明の組換えタンパク質は、Ｔ
ＧＦ−βファミリーメンバータンパク質ならびにその構成要素および／またはタンパク質
モジュールを含み得る。本発明の一部の組換えタンパク質は、会合成長因子を有さないプ
ロドメイン、フーリン開裂欠損突然変異体、細胞外タンパク質会合を欠損する突然変異体
および／またはそれらの組合せを含み得る。
【００５３】
一部の実施形態において、組換えタンパク質は、検出可能な標識を含み得る。検出可能
な標識は、組換えタンパク質の検出および／または単離を可能とするために使用すること
ができる。一部の検出可能な標識は、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグおよび／または
フラッグタグを含み得る。このようなタグは、タグ化タンパク質を単離するために使用す
ることができる。産生されるタンパク質は、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位をコー
ドする付加アミノ酸を含み得る。このような部位は、３Ｃプロテアーゼ、例として、限定
されるものではないが、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼによる処理時の３Ｃプロテアー
ゼ開裂部位における開裂を可能とする。このような開裂部位は、導入して組換えタンパク
質からの検出可能な標識の除去を可能とするために導入する。
【００５４】
組換えＧＰＣ
図５は、組換えＧＰＣの実施形態を示す模式図である。ＴＧＦ−βファミリーメンバー
タンパク質を含む図５による組換えタンパク質は、特徴部、例として、限定されるもので
はないが、成熟成長因子のＣ末端領域、プロドメインのＮ末端領域および／またはプロタ
ンパク質開裂部位を含み得る。組換えＴＧＦ−βＧＰＣのプロタンパク質開裂部位は、例
えば、フーリンコンセンサス配列ＲＸＸＲを含み得、Ｒは、アルギニンであり、Ｘは、Ｔ
ＧＦ−βファミリーメンバー間で変動し得るアミノ酸残基を示す。それぞれのＴＧＦ−β
ファミリーメンバーについてのフーリン開裂部位配列（限定されるものではないが、フー
リン単独による開裂、他のプロタンパク質変換酵素による開裂を挙げることができる）を
、表１に示す。図５に示される実施形態による組換えＧＰＣは、プロドメインのＮ末端領
域内および／または近傍に１つ以上のシステイン残基も含み得る。このようなシステイン
残基は、プロドメインのＮ末端から約１〜約１０アミノ酸、約４〜約１５アミノ酸、約５
〜約２０アミノ酸および／または約７〜約５０アミノ酸で存在し得る。組換えＧＰＣは、
検出可能な標識も含み得る。このような検出可能な標識は、組換えＧＰＣの検出および／
または単離に有用であり得る。検出可能な標識は、２つ以上のヒスチジン（Ｈｉｓ）残基
を含み得る。このような検出可能な標識は、本明細書においてポリヒスチジンタグと称す
ることもできる。ポリヒスチジンタグとしては、６つのヒスチジン残基の鎖を含むヘキサ
ヒスチジンタグまたはＨＩＳ−ＴＡＧ（商標）（ＥＭＤバイオサイエンシズ（ＥＭＤ  Ｂ
ｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ダルムシュタット、独国）を挙げることができる。一部のポリ
ヒスチジンタグは、本明細書に開示の組換えタンパク質のＮ末端において存在し得る。一
部のポリヒスチジンタグは、本明細書に開示の組換えタンパク質のＣ末端において存在し
得る。産生されるタンパク質は、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位をコードする付加
アミノ酸を含み得る。このような部位は、３Ｃプロテアーゼ、例として、限定されるもの
ではないが、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼによる処理時に３Ｃプロテアーゼ開裂部位
における開裂を可能とする。一部の開裂部位は、組換えタンパク質からの検出可能な標識
の除去を可能とするために導入することができる。
【００５５】
本発明の一部の実施形態において、組換えＧＰＣは、野生型配列と比較して１つ以上の
アミノ酸の突然変異を含み得る。一部の場合において、タンパク質分解プロセシングの１
つ以上の領域は、突然変異させることができる。このような領域は、プロタンパク質変換
酵素開裂部位を含み得る。プロタンパク質変換酵素（例えば、フーリン）開裂部位突然変
異は、その部位における酵素的開裂を防止し、および／または成長因子のそれらのプロド
メインからの酵素的開裂を防止する（図６参照）。ＲＸＸＲ配列を含む一部のプロタンパ
ク質変換酵素開裂部位は、ＲＸＧ（Ｘは、アミノ酸残基が変動可能であり得る部位を示す
）に突然変異させることができる。このような突然変異は、本明細書において「Ｄ２Ｇ」
突然変異と略記され、酵素的開裂に対して耐性であり得る。一部の実施形態において、Ｒ
ＸＸＲ配列を含むフーリン開裂部位は、ＡＸＸＡに突然変異している。このようなＡＸＸ
Ａ配列も、酵素的開裂に対して耐性であり得る。
【００５６】
一部の実施形態において、トロイドおよび／またはトロイド様タンパク質によるタンパ
ク質分解プロセシングの領域は、そのようなタンパク質分解プロセシングを防止するよう
に突然変異させることができる。一部の実施形態において、ＧＤＦ−８および／またはＧ
ＤＦ−１１上のトロイドプロセシング領域は、突然変異させることができる。一部の実施
形態において、トロイドプロセシング領域内のアスパラギン酸残基のアラニン残基への突
然変異は、トロイドプロセシングを防止する。ＧＤＦ−８（ミオスタチン）プロタンパク
質のアスパラギン残基７６（Ｄ７６）の突然変異は、潜在型ＧＤＦ−８のタンパク質分解
活性化を防止することが示されている（ウォルフマン，Ｎ．Ｍ．（Ｗｏｌｆｍａｎ，Ｎ．
Ｍ．）ら著、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、２００３年１０月６日、第１００巻
（第２６号）、ｐ．１５８４２〜６）。一部の実施形態において、ＧＤＦ−１１中のＡｓ
ｐ１２０（Ｄ１２０、翻訳されるタンパク質からカウントした残基番号、配列番号４のプ
ロタンパク質からのＤ９８）は、トロイドプロセシングを防止するように突然変異させる
ことができる（ゲ（Ｇｅ）ら著、２００５年、モレキュラー・アンド・セルラー・バイオ
ロジー（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ）、第２５巻（第１４号）、ｐ．５８４６〜５８、
それらの内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）。
【００５７】
一部の実施形態において、潜在性の低下した組換えＧＰＣを形成するために１つ以上の
アミノ酸を突然変異させることができる。このような突然変異は、本明細書において「活
性化突然変異」と称される。これらの突然変異は、複合体プロドメインおよび成長因子ド
メイン間の立体衝突の１つ以上の領域を導入し得る。本明細書において使用される場合、
用語「立体衝突」は、２つのタンパク質間または同一タンパク質内の２つのドメインおよ
び／もしくはエピトープ間の相互作用を指す場合、三次元空間中の重複位置に起因するそ
のようなタンパク質、ドメインおよび／またはエピトープ間の反発性相互作用を指す。Ｇ
ＰＣ中の立体衝突は、プロドメインおよび成長因子ドメイン間の親和性を低減させ得、遊
離成長因子と潜在型成長因子との比の上昇をもたらす。一部の実施形態において、潜在性
の向上した組換えＧＰＣを形成するために１つ以上のアミノ酸を突然変異させることがで
きる。このような突然変異は、本明細書において「安定化突然変異」と称される。これら
の突然変異は、プロドメインおよび成長因子ドメイン間の親和性を増加させ得、潜在型成
長因子に対する遊離成長因子の比の減少をもたらす。
【００５８】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、表６に列記の配列またはそれ
らの断片のいずれかを含み得る。
【００５９】
【表６】
2020062007.tif 000017
2020062007.tif 000018
2020062007.tif 000019
2020062007.tif 000020
一部の実施形態において、活性化突然変異は、ＬＡＰまたはＬＡＰ様タンパク質ダイマ
ー化に重要な残基を含み得る。一部の活性化突然変異は、ＴＧＦ−βアイソフォーム（Ｔ
ＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３）を含み得る。活性化突然変異を
有する突然変異ＧＰＣは、カムラチ・エンゲルマン病（ＣＥＤ：Ｃａｍｕｒａｔｉ−Ｅｎ
ｇｅｌｍａｎｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）において同定された突然変異に対応する突然変異を含
み得る。ＣＥＤを罹患する対象は、典型的には、ＴＧＦ−β１の遺伝子異常を有する。こ
のような対象において同定された突然変異としては、限定されるものではないが、残基Ｙ
８１、Ｒ２１８、Ｈ２２２、Ｃ２２３およびＣ２２５の突然変異が挙げられる。残基Ｃ２
２３およびＣ２２５は、ＬＡＰダイマー化におけるジスルフィド結合形成に必要である。
Ｒ２１８、Ｈ２２２、Ｃ２２３および／またはＣ２２５の突然変異は、ジスルフィド結合
形成およびＬＡＰダイマー化の減弱または破壊をもたらし得る。一部の実施形態において
、ＣＥＤ突然変異は、ＴＧＦ−βの放出の上昇および／またはＴＧＦ−β活性の増加をも
たらす。一部の実施形態において、ＣＥＤ突然変異を有するＴＧＦ−β１を含む組換えＧ
ＰＣは、表７に列記の配列を含む。これらのタンパク質中で示されるアミノ酸置換は、翻
訳されるタンパク質（分泌シグナル配列の除去前）の開始点からカウントされる残基番号
を反映する。
【００６０】
【表７】
2020062007.tif 000021
2020062007.tif 000022
ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣは、本発明に関していくつか使用することができる。一部
の実施形態において、このようなＧＰＣは、ＧＡＲＰと複合体化しているＬＡＰまたはＬ
ＡＰ様ドメインを含む組換えタンパク質を産生するために使用することができる。全ＧＰ
ＣとＧＡＲＰとの共発現は、一部の実施形態において、適正な会合およびフォールディン
グに必要であり得る。ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣの発現を介して、成長因子は、所望の
ＧＡＲＰ−ＬＡＰ複合体を残して解離し得る。これに関して、Ｙ８１Ｈ突然変異が有用で
あり得る。Ｙ８１Ｈ突然変異は、成長因子放出をもたらすが、Ｃ２２３およびＣ２２５残
基におけるＬＡＰモノマー間のジスルフィド結合を破壊しない。したがって、Ｙ８１Ｈ  
ＧＰＣ突然変異体の発現を介して形成されるＧＡＲＰ−ＬＡＰ複合体は、成長因子が解離
したインタクトＬＡＰダイマーを含み得る。一部の実施形態において、産生プロセスの間
のフーリンの追加の共発現または過剰フーリンの添加も同様に、成長因子解離を向上させ
得る。
【００６１】
ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣは、成熟成長因子の産生および放出を可能とするように発
現させることができる。本方法により発現される一部のＧＰＣ遊離成長因子は、例えば、
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）において抗体反応性を評価するために使用する
ことができる。ＣＥＤ突然変異を含む一部のＧＰＣは、ＧＰＣ結合成長因子の産生および
放出を可能とするように発現させることができる。ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣは、他の
ＴＧＦ−βファミリーメンバーからの１つ以上のタンパク質モジュールと発現されるＴＧ
Ｆ−β１ＬＡＰ（またはそのタンパク質モジュールもしくは断片）を含むキメラタンパク
質の産生および放出を可能とするように発現させることができる。このようなキメラタン
パク質は、ＴＧＦ−β１ＬＡＰおよびＴＧＦ−β２またはＴＧＦ−β３成長因子ドメイン
を含み得る。
【００６２】
本発明の組換えタンパク質のフーリン開裂は、一部の場合において、細胞内で生じ得る
。一部の場合において、本発明の組換えタンパク質のフーリン開裂は、細胞外で生じ得る
。
【００６３】
一部の実施形態において、本発明の組換えＧＰＣは、細胞外会合のための１つ以上のＮ
末端領域中の突然変異を含み得る。本明細書において使用される場合、用語「細胞外会合
のためのＮ末端領域」は、１つ以上のＮ末端領域との細胞外会合に必要であり得るタンパ
ク質Ｎ末端における、またはその近傍の領域を指す。このような領域は、少なくとも最初
のＮ末端残基、少なくとも最初の５つのＮ末端残基、少なくとも最初の１０個のＮ末端残
基、少なくとも最初の２０個のアミノ酸残基および／または少なくとも最初の５０個のア
ミノ酸残基を含み得る。一部の突然変異は、約１つのアミノ酸残基〜約３０個のアミノ酸
残基、約５つのアミノ酸残基〜約４０個のアミノ酸残基および／または約１０個のアミノ
酸残基〜約５０個のアミノ酸残基をタンパク質Ｎ末端において、またはその近傍に含み得
る。このような領域は、ＬＴＢＰ、フィブリリンおよび／またはＧＡＲＰ会合のための残
基を含み得る。一部の場合において、細胞外会合のためのＮ末端領域内および／またはそ
の近傍に存在する１つ以上のシステイン残基が、このような会合に必要であり得る。一部
の実施形態において、細胞外会合のためのＮ末端領域内および／またはその近傍に存在す
るシステイン残基は、最初の約２つのＮ末端残基、最初の約３つのＮ末端残基、最初の約
４つのＮ末端残基、最初の約５つのＮ末端残基、最初の約６つのＮ末端残基、最初の約７
つのＮ末端残基および／または少なくとも最初の３０個のＮ末端残基内に存在する。細胞
外会合のための１つ以上のＮ末端領域中の一部の突然変異は、そのようなシステイン残基
の置換および／または欠失を含む。このような突然変異は、ＧＰＣおよび／またはプロド
メインと、１つ以上の細胞外タンパク質、例として、限定されるものではないが、ＬＴＢ
Ｐ、フィブリリンおよび／またはＧＡＲＰとの会合をモジュレートし得る。これらの突然
変異は、１つ以上のシステインの別のアミノ酸による置換も含み得る。システイン残基置
換は、本明細書において「Ｃ＃Ｘ」と略記され、＃は、元のシステイン残基の残基番号［
プロタンパク質（シグナルペプチドを有さない）のＮ末端からカウント］を表し、Ｘは、
置換に使用されるアミノ酸についての１文字アミノ酸コードを表す。このような置換に任
意のアミノ酸を使用することができる。一部の場合において、システイン残基を置換する
ためにセリン（Ｓ）残基を使用する。このような突然変異の非限定的な例としては、Ｃ４
Ｓ、Ｃ５Ｓおよび／またはＣ７Ｓを挙げることができる。ＴＧＦ−β１からのＮ末端プロ
ドメイン領域を含む組換えＧＰＣにおいて、アミノ酸位置番号４において残留するシステ
イン残基を突然変異させることができる。ＴＧＦ−β２からのＮ末端プロドメイン領域を
含む組換えＧＰＣにおいて、アミノ酸位置番号５において残留するシステイン残基を突然
変異させることができる。ＴＧＦ−β３からのＮ末端プロドメイン領域を含む組換えＧＰ
Ｃにおいて、位置７におけるシステイン残基を突然変異させることができる。
【００６４】
一部の場合において、ＧＰＣの１つ以上の他の領域中の１つ以上のシステインは、置換
または欠失させることができる。一部の実施形態において、このようなＧＰＣ改変は、プ
ロドメインからの成熟成長因子の放出を促進し得る。一部の場合において、このようなシ
ステインとしては、成熟成長因子、α２ヘリックス、ファスナー、潜在型ラッソおよび／
またはボウタイ領域の１つ以上に存在するものを挙げることができる。
【００６５】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、１つ以上の種、例として、哺
乳動物、例として、限定されるものではないが、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、サルお
よび／またはヒトに由来するタンパク質モジュールを含み得る。組換えタンパク質は、表
８に列記の１つ以上の非ヒトタンパク質配列に由来する１つ以上のアミノ酸配列からの１
つ以上のアミノ酸を含み得る。一部の場合において、本発明の組換えタンパク質は、天然
シグナルペプチドを有するまたは有さないこのような配列を含み得る。
【００６６】
【表８】
2020062007.tif 000023
2020062007.tif 000024
2020062007.tif 000025
2020062007.tif 000026
2020062007.tif 000027
2020062007.tif 000028
2020062007.tif 000029
2020062007.tif 000030
2020062007.tif 000031
2020062007.tif 000032
2020062007.tif 000033
一部の実施形態において、組換えタンパク質は、１つ以上の追加の組換え構成要素と組
み合わせ、および／または複合体化させることができる。このような構成要素としては、
ＧＰＣと会合することが公知の細胞外タンパク質、例として、限定されるものではないが
、ＬＴＢＰ、フィブリリン、パールカン、ＧＡＳＰ１／２タンパク質、フォリスタチン、
フォリスタチン関連遺伝子（ＦＬＲＧ）、デコリンおよび／またはＧＡＲＰ（例として、
限定されるものではないが、そのようなタンパク質の組換え体）を挙げることができる。
本発明の一部の組換えＧＰＣは、適正な発現および／またはフォールディングのためにそ
のような細胞外タンパク質の１つ以上と共発現させなければならない。
【００６７】
一部の実施形態において、複合体化ＬＴＢＰとしては、限定されるものではないが、Ｌ
ＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３および／またはＬＴＢＰ４を挙げることができる。複
合体化ＬＴＢＰは、ＬＴＢＰ断片および／または突然変異を含み得る。組換えＧＰＣと複
合体化しているＬＴＢＰの一部の組換え体は、ＬＴＢＰのオルタナティブスプライシング
バリアントを含み得る。ＬＴＢＰ１の一部のこのようなバリアントは、Ｎ末端において短
縮しており、本明細書においてＬＴＢＰ１Ｓと称される。本発明の一部の組換えタンパク
質は、表９に列記のアミノ酸配列を含むＬＴＢＰ、その断片または突然変異体を含み得る
。
【００６８】
【表９】
2020062007.tif 000034
2020062007.tif 000035
2020062007.tif 000036
一部の実施形態において、ＬＴＢＰは、検出可能な標識を含み得る。検出可能な標識は
、ＬＴＢＰを含む組換えタンパク質の検出および／または単離を可能とするために使用す
ることができる。一部の検出可能な標識は、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグおよび／
またはフラッグタグを含み得る。このようなタグは、タグ化タンパク質を単離するために
使用することができる。産生されるタンパク質は、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位
をコードする付加アミノ酸を含み得る。このような部位は、３Ｃプロテアーゼ、例として
、限定されるものではないが、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼによる処理時に３Ｃプロ
テアーゼ開裂部位における開裂を可能とする。このような開裂部位は、組換えタンパク質
からの検出可能な標識の除去を可能とするために導入することができる。
【００６９】
一部の実施形態において、ＧＡＲＰ、例として、限定されるものではないが、ＧＡＲＰ
の組換え体は、組換えＧＰＣと複合体化させることができる。本発明の一部の組換えＧＰ
Ｃは、ＧＡＲＰと共発現させて適正なフォールディングおよび／または発現を確保するこ
とができる。他の実施形態において、ＧＡＲＰホモログ、ロイシンリッチリピート含有（
ｌｅｕｃｉｎｅ  ｒｉｃｈ  ｒｅｐｅａｒｔ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）３３（ＬＲＲＣ３
３）、またはその断片および／もしくは突然変異体を、ＧＡＲＰ［本明細書においてロイ
シンリッチリピート含有３２（ＬＲＲＣ３２）とも称される］に代えて用いることができ
る。このようなＬＲＲＣ３３断片および／または突然変異体は、以下の表１０に列記のＬ
ＲＲＣ３３配列からの１つ以上の領域を含み得る。組換えＧＡＲＰは、突然変異体および
／またはＧＡＲＰ断片も含み得る。一部の組換えＧＡＲＰは、可溶性であり得る（本明細
書においてｓＧＡＲＰと称される）。
【００７０】
一部の実施形態において、組換えＧＡＲＰは、表１０に列記の１つ以上のアミノ酸配列
を含み得る。本明細書において使用される一部の組換えＧＡＲＰは、Ｎ末端残基ＡＱなし
で発現させることができる。発現されるＧＡＲＰは、検出可能な標識を含み得る。このよ
うな検出可能な標識は、検出および／または単離を可能とするために使用することができ
る。一部の検出可能な標識は、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグおよび／またはフラッ
グタグを含み得る。このようなタグは、タグ化タンパク質を単離するために使用すること
ができる。産生されるタンパク質は、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位をコードする
付加アミノ酸を含み得る。このような部位は、３Ｃプロテアーゼ、例として、限定される
ものではないが、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼによる処理時に３Ｃプロテアーゼ開裂
部位における開裂を可能とする。３Ｃプロテアーゼ開裂部位は、組換えタンパク質からの
検出可能な標識の除去を可能とするために導入することができる。
【００７１】
【表１０】
2020062007.tif 000037
2020062007.tif 000038
ＬＴＢＰに結合しているＧＰＣは、ＧＡＲＰまたは他のマトリックスタンパク質に結合
しているＧＰＣについて見出される立体構造から区別される三次元立体構造を採用し得る
。このことは、一部の場合において、ＧＡＲＰ上のジスルフィド結合形成に利用可能な対
応するシステインよりも互いからの異なる距離を含むＧＰＣとのジスルフィド結合形成に
利用可能なＬＴＢＰ上のシステインの存在に起因し得る。三次元立体構造中のこのような
差異は、ＧＰＣ上のユニークな立体構造依存性エピトープを提供し得る。一部の実施形態
において、本発明の抗体は、このような立体構造依存性エピトープに指向される。このよ
うな抗体は、結合タンパク質（例えば、ＬＴＢＰまたはＧＡＲＰ）のアイデンティティに
応じて成長因子活性を活性化または阻害するように選択的に機能し得る。一部の場合にお
いて、異なる立体構造依存性エピトープは、ＬＴＢＰまたはＧＡＲＰに結合しているプロ
ＴＧＦ−βのＮ末端αヘリックス上に存在し得る。
【００７２】
本発明の組換えタンパク質は、ＧＤＦ関連血清タンパク質（ＧＡＳＰ：ＧＤＦ−ａｓｓ
ｏｃｉａｔｅｄ  ｓｅｒｕｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ）１および／またはＧＡＳＰ−２と共発現
させることができる。このような組換えタンパク質としては、限定されるものではないが
、ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−１１を挙げることができる。ＧＡＳＰは、ＧＤＦ−
８およびＧＤＦ−１１に結合し、その活性を防止する循環タンパク質である（ヒル，Ｊ．
Ｊ．（Ｈｉｌｌ，Ｊ．Ｊ．）ら著、２００３年、モレキュラー・エンドクリノロジー（Ｍ
ｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）、第１７巻（第６号）、ｐ．１１４４−５４および
ヒル，Ｊ．Ｊ．（Ｈｉｌｌ，Ｊ．Ｊ．）ら著、２００２年、ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（ＪＢＣ）、第２７７巻（第４３号）、ｐ．４０７３５〜４１、そ
れらのそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）。興味深いこと
に、ＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１成長因子は、血清中の遊離が見出されない。約７０％
がＧＰＣ中に存在し、残り３０％はＧＡＳＰおよび他のタンパク質（例えば、フォリスタ
チン、フォリスタチン様関連遺伝子およびデコリン）と会合している。ＧＡＳＰ−１およ
び／またはＧＡＳＰ−２の発現を欠くマウスを使用する研究は、ミオスタチンおよび／ま
たはＧＤＦ−１１過剰活性を示す表現型を示す（リー（Ｌｅｅ）ら著、２０１３年、米国
科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第１１０巻（第３９号）、ｐ．Ｅ３７１３〜２２）。
ＧＡＳＰ結合ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−１１は、ＩＩ型受容体に結合せず、関連
細胞シグナルを伝達し得ない。
【００７３】
一部の組換えタンパク質は、パールカンと共発現させることができる。このような組換
えタンパク質としては、限定されるものではないが、ＧＤＦ−８を挙げることができる。
セングル（Ｓｅｎｇｌｅ）ら（セングル（Ｓｅｎｇｌｅ）ら著、２０１１年、ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ）、第２８６巻（第７
号）、ｐ．５０８７〜９９、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）
による研究は、ＧＤＦ−８プロドメインがパールカンと会合することを見出した。さらな
る研究は、パールカンノックアウトが筋肥大をもたらすことを示し、このことは、ＧＤＦ
−８およびパールカン間の相互作用がＧＤＦ−８活性に寄与し得ることを示唆する（シュ
ウ（Ｘｕ）ら著、２０１０年、マトリックス・バイオロジー（Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ）
、第２９巻（第６号）、ｐ．４６１〜７０）。
【００７４】
一部の場合において、本発明の組換えタンパク質は、フォリスタチンおよび／またはＦ
ＬＲＧと共発現させることができる。このような組換えタンパク質としては、限定される
ものではないが、ＧＤＦ−８を挙げることができる。フォリスタチンおよびＦＬＲＧの両
方は、一部のＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質、例として、限定されるものでは
ないが、ＧＤＦ−８をアンタゴナイズすることが公知である（リー，Ｓ−Ｊ．（Ｌｅｅ，
Ｓ−Ｊ．）ら著、２０１０年、モレキュラー・エンドクリノロジー（Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃ
ｒｉｎｏｌ）、第２４巻（第１０号）、ｐ．１９９８〜２００８、タケハラ−カサマツ，
Ｙ．（Ｔａｋｅｈａｒａ−Ｋａｓａｍａｔｓｕ，Ｙ．）ら著、２００７年、ジャーナル・
オブ・メディカル・インベスティゲーション（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｉｎｖｅｓｔ）、第５４巻（
第３−４号）、ｐ．２７６〜８８、それらのそれぞれの内容は参照により全体として本明
細書に組み込まれる）。フォリスタチンは、遊離成長因子に結合し、受容体結合を防止す
ることによりＧＤＦ−８活性を遮断することが示されている。フォリスタチンおよびＦＬ
ＲＧの両方は、発生の間の成長因子活性のモジュレーションに関与する。
【００７５】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、デコリンと共発現させること
ができる。このような組換えタンパク質としては、限定されるものではないが、ＴＧＦ−
βおよびＧＤＦ−８を挙げることができる。デコリンは、ＴＧＦ−β活性の公知のアンタ
ゴニストであり（ジュウ，Ｊ．（Ｚｈｕ，Ｊ．）ら著、２００７年、ジャーナル・オブ・
バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ）、第２８２巻、ｐ．２５８５
２〜６３、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）、他のＴＧＦ−β
ファミリーメンバー、例として、限定されるものではないが、ＧＤＦ−８もアンタゴナイ
ズし得る。ＴＧＦ−βおよびＧＤＦ−８活性のデコリン依存性阻害は、種々の組織中の線
維症を低減させることが示されている。デコリン発現は、遊離ＧＤＦ−８の公知のインヒ
ビターのフォリスタチンの発現を増加させることも示されている。
【００７６】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、図７に示されるものを含み得
る。本発明の一部の組換えタンパク質は、図７に示される実施形態からのタンパク質モジ
ュールの１つ以上の特徴部および／または組合せを含み得る。
【００７７】
組換え成長分化因子（ＧＤＦ）、アクチビンおよびインヒビン
成長分化因子（ＧＤＦ）、アクチビンおよびインヒビンは、多数の細胞および／または
発生活性に関与するＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質である。本発明の一部の実
施形態において、組換えタンパク質は、１つ以上のＧＤＦ、アクチビンおよび／またはイ
ンヒビンからの１つ以上のタンパク質モジュールを含み得る。さらなる実施形態において
、ＧＤＦタンパク質モジュールは、ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−１１タンパク質モ
ジュールを含み得る。
【００７８】
潜在型複合体として分泌されるＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１（セングル（Ｓｅｎｇｌ
ｅ）ら著、２０１１年、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏ
ｌ  Ｃｈｅｍ）、第２８６巻（第７号）、ｐ．５０８７〜９９；ゲ（Ｇｅ）ら著、２００
５年、モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ）
、第２５巻（第１４号）、ｐ．５８４６〜５８）は、ファスナー残基の保存を示す（ＴＧ
Ｆ−β１のＬｙｓ２７およびＴｙｒ７５；図８参照）。ＧＤＦ−８（本明細書においてミ
オスタチンとも称される）は、筋肉量の調節に関与し、その欠損は、複数種、例として、
ヒトにおいて筋肉量を増加させる（ロディノ−クラパック，Ｌ．Ｒ．（Ｒｏｄｉｎｏ−Ｋ
ｌａｐａｃ，Ｌ．Ｒ．）ら著、２００９年、マッスル・アンド・ナーブ（Ｍｕｓｃｌｅ  
Ｎｅｒｖｅ）、第３９巻（第３号）、ｐ．２８３〜９６）。ＧＤＦ−８は、潜在型形態で
循環中で見出すことができるが、ＬＴＢＰ３に結合して（アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏ
ｎ）ら著、２００７年、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏ
ｌ  Ｃｈｅｍ）、第２８３巻（第１１号）、ｐ．７０２７〜３５）、またはパールカンに
結合して（セングル（Ｓｅｎｇｌｅ）ら著、２０１１年、ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ）、第２８６巻（第７号）、ｐ．５０８７
〜９９）、細胞外マトリックス中でも貯蔵され得る。ＧＤＦ−８は、そのプロドメインと
複合体化している一方、ＩＩ型受容体ＡｃｔＲＩＩＢとの受容体結合に関与し得ない（セ
ングル（Ｓｅｎｇｌｅ）ら著、２００８年、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロ
ジー（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．）、第３８１巻（第４号）、ｐ．１０２５〜３９．）。Ｇ
ＤＦ−８は、主として筋肉中で発現される一方、ＧＤＦ−１１発現は、より全身性であり
、その活性は、複数のプロセスに関与すると考えられる（リー（Ｌｅｅ）ら著、２０１３
年、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第１１０巻（第３９号）、ｐ．Ｅ３７１３〜
２２）。これは、複数の組織、例として、限定されるものではないが、網膜、腎臓、膵臓
および嗅覚系の発生に関与することが考えられる。これは、血液中の循環因子であること
も考えられる（シンハ，Ｍ．（Ｓｉｎｈａ，Ｍ．）ら著、２０１４年、サイエンス・エク
スプレス（Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓ）、第１０巻、１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．
１２５１１５２、ｐ２〜６およびカチンパルディ，Ｌ．（Ｋａｔｓｉｍｐａｒｄｉ，Ｌ．
）ら著、２０１４年、サイエンス・エクスプレス（Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓ）、
第１０巻、１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１２５１１４１、それらのそれぞれの内容は参照
により全体として本明細書に組み込まれる）。
【００７９】
ＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１は、かなりの相同性も共有する。プロドメインは４８％
のホモロジーを共有するにすぎない一方、ＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１成長因子ドメイ
ンは、９０％の相同性を共有する（プロドメインおよび成長因子をまとめると６０％の相
同性）。
【００８０】
潜在型ＧＰＣからのＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１の放出は、ＢＭＰ１／トロイドメタ
ロプロテイナーゼによるＢＭＰ／トロイド開裂部位（ＧＤＦ−８中のＡｒｇ７５およびＡ
ｓｐ７６間およびＧＤＦ−１１中のＧｌｙ９７およびＡｓｐ９８間に局在）におけるプロ
ドメインの開裂を要求する。この開裂は、α２ヘリックスおよびファスナー間に存在する
。したがって、ストレートジャケットをほどく少なくとも２つの異なる方法、力およびタ
ンパク質分解が、潜在型からファミリーメンバーを放出し得る。
【００８１】
一部の実施形態において、ＧＤＦを含む本発明の組換えタンパク質は、表１１に列記の
配列またはそれらの断片を含み得る。
【００８２】
【表１１】
2020062007.tif 000039
2020062007.tif 000040
2020062007.tif 000041
アクチビンおよびインヒビンは、ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質であり、
そのそれぞれの活性は、逆の機能をもたらすことが多い（ビレジクジアン（Ｂｉｌｅｚｉ
ｋｊｉａｎ）ら、２０１２年）。他のファミリーメンバーと同様に、これらのタンパク質
は、生理学的にダイマーとして生じる。アクチビンおよびインヒビンは、部分的には、イ
ンヒビン−βＡ、インヒビン−βＢ、インヒビン−βＣおよびインヒビン−βＥ（本明細
書においてそれぞれβ−サブユニットＡ、Ｂ、ＣおよびＥと称される）を含み得る同一の
β−サブユニットから構築される。アクチビンおよびインヒビン間の差異は、構造的に、
アクチビンがβ−サブユニットダイマーである一方、インヒビンはヘテロダイマーである
ことであり、第２のサブユニットは、インヒビン−αである。アクチビンは、それらのサ
ブユニットペアにちなんで命名され、その結果、アクチビンＡは、２つのＡサブユニット
のホモダイマーを含み、アクチビンＡＢは、ＡおよびＢサブユニットのダイマーを含み、
Ｂは、Ｂサブユニットのダイマーを含む、などである（メンスター（Ｍｕｅｎｓｔｅｒ）
ら、２０１１年）。アクチビンは、例として、限定されるものではないが、細胞成長、分
化、プログラム細胞死、内分泌機能、細胞代謝、骨成長などを挙げることができる種々の
機能に関与する。これらは、生殖ホルモン周期のそれらの制御のために特に認識される。
アクチビンおよびインヒビンシグナリングは、これに関してアンタゴニスト的に機能する
ことが多い。
【００８３】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、インテグリンを含み得る。イ
ンテグリンは、αおよびβサブユニットにより形成される細胞表面ヘテロダイマーであり
、そのそれぞれは、膜貫通ドメインを有し、細胞外ドメインのＮ末端部分中で一緒になっ
てリガンド結合部位を形成する。本発明の組換えタンパク質は、インテグリンおよび／ま
たはインテグリンサブユニットを含み得る。このようなインテグリンおよび／またはイン
テグリンサブユニットは、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる２０１２
年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９１９号明細書に開示のもの
のいずれかを含み得る。
【００８４】
本発明の組換えタンパク質としては、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１：ｉｎｔｅｒｃ
ｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  １）を挙げることができる。一
部の場合において、本発明のＩＣＡＭ−１タンパク質を抗体発生および／または抗体試験
の間の対照タンパク質として使用することができる。一部の場合において、ＩＣＡＭ−１
は、ファージディスプレイ技術を使用する結合分子の選択の間の対照として使用すること
ができる。一部の場合において、本発明のＩＣＡＭ−１のタンパク質は、１つ以上の検出
可能な標識を含む。検出可能な標識としては、例えば、ヒスチジンタグを挙げることがで
きる。
【００８５】
キメラタンパク質
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、キメラタンパク質を含み得る
。本明細書において使用される場合、用語「キメラタンパク質」は、少なくとも２つの異
なるタンパク質［同一遺伝子（例えば、オルタナティブスプライシングから生じるバリア
ント）から、または異なる遺伝子から形成される］からの１つ以上のタンパク質モジュー
ルを含むタンパク質を指す。キメラタンパク質は、２つ以上のＴＧＦ−βファミリーメン
バータンパク質からのタンパク質モジュールを含み得る。このようなキメラタンパク質は
、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３からのタンパク質モジュール
を含み得る。本発明の一部のキメラタンパク質は、タンパク質モジュール、例として、限
定されるものではないが、表１２（残基番号は、表１に列記のプロタンパク質配列に対応
する）に列記のタンパク質モジュールおよび／またはアミノ酸配列を含み得る。本発明の
一部のキメラタンパク質は、表１２のものと類似のアミノ酸配列を含むが、列記のものよ
りも追加のまたは少ないアミノ酸を含むタンパク質モジュールを含み得る。このようなモ
ジュールは、約１つ多いもしくは少ないアミノ酸、約２つ多いもしくは少ないアミノ酸、
約３つ多いもしくは少ないアミノ酸、約４つ多いもしくは少ないアミノ酸、約５つ多いも
しくは少ないアミノ酸、約６つ多いもしくは少ないアミノ酸、約７つ多いもしくは少ない
アミノ酸、約８つ多いもしくは少ないアミノ酸、約９つ多いもしくは少ないアミノ酸、約
１０個多いもしくは少ないアミノ酸または１０個超多いもしくは少ないアミノ酸をＮ末端
および／またはＣ末端の終端上に含み得る。
【００８６】
【表１２】
2020062007.tif 000042
2020062007.tif 000043
2020062007.tif 000044
2020062007.tif 000045
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、表１２に列記のタンパク質モ
ジュールのいずれかの組合せを含み得る。ＧＰＣを含む一部のキメラタンパク質は、表１
２に列記のタンパク質モジュールのいずれかにより置換されたタンパク質モジュールを含
み得る。
【００８７】
一部の実施形態において、キメラタンパク質は、ＧＤＦおよび／またはインヒビンから
のタンパク質モジュールを含み得る。このようなＧＤＦとしては、ＧＤＦ−１１および／
またはＧＤＦ−８を挙げることができる。一部のこのようなキメラタンパク質は、ＧＤＦ
−１１からのプロドメインおよびＧＤＦ−８からの成長因子を含み得る。このような実施
形態において、キメラタンパク質は、ＧＤＦ−１１およびＧＤＦ−８間の置換Ｎ末端領域
を含み得る。他の実施形態において、キメラタンパク質は、ＧＤＦ−８からのプロドメイ
ンおよびＧＤＦ−１１からの成長因子を含み得る。このようなキメラタンパク質は、ＧＤ
Ｆ−１１からのアミノ酸残基１〜１０８およびＧＤＦ−８からのタンパク質のアミノ酸残
基９０から終端を含み得る。一部のキメラタンパク質は、ＧＤＦ−１１からのアーム領域
を含み得る。
【００８８】
本発明の一部のキメラは、ＧＤＦ−１１のアーム領域を含むＧＤＦ−８を含み得る。こ
のようなキメラは、ＧＤＦ−１１アームからの残基Ｆ９５およびキメラＧＰＣのα２ヘリ
ックス間の立体衝突に起因して不安定であり得る。したがって、一部の場合において、Ｇ
ＤＦ８／ＧＤＦ１１／アクチビンキメラは、そのようなキメラタンパク質のアーム領域が
α２ヘリックスを含有するように設計することができる。さらに、Ｆ９５は、ＧＤＦ１１
についての潜在型の付与における重要な残基であり得る。この残基は、ＴＧＦ−β１中に
見出されるカムラチ・エンゲルマン突然変異Ｙ８１Ｈ（図８参照）と類似の位置中に存在
し、したがって、この残基のより小分子のアミノ酸、例えば、アラニンへの突然変異は、
ＧＰＣからの成熟ＧＤＦ１１成長因子の解離を促進するために実施することができる。こ
のような突然変異は、ＧＤＦ１１活性化抗体をスクリーニングするためのアッセイの設計
における陽性対照分子として有用であり得る。
【００８９】
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、タンパク質モジュール組合せ
、例として、限定されるものではないが、表１３に列記のタンパク質モジュールおよび／
またはアミノ酸配列の組合せを含み得る。本発明の一部のキメラタンパク質は、表１３の
ものと類似するアミノ酸配列が含むが、列記のものよりも追加のまたは少ないアミノ酸を
含むタンパク質モジュールを含み得る。このようなアミノ酸配列は、約１つ多いもしくは
少ないアミノ酸、約２つ多いもしくは少ないアミノ酸、約３つ多いもしくは少ないアミノ
酸、約４つ多いもしくは少ないアミノ酸、約５つ多いもしくは少ないアミノ酸、約６つ多
いもしくは少ないアミノ酸、約７つ多いもしくは少ないアミノ酸、約８つ多いもしくは少
ないアミノ酸、約９つ多いもしくは少ないアミノ酸、約１０個多いもしくは少ないアミノ
酸または１０個超多いもしくは少ないアミノ酸をＮ末端および／またはＣ末端の終端上に
含み得る。
【００９０】
【表１３】
2020062007.tif 000046
2020062007.tif 000047
2020062007.tif 000048
2020062007.tif 000049
2020062007.tif 000050
2020062007.tif 000051
2020062007.tif 000052
キメラタンパク質は、ＧＰＣと会合しているエピトープを特徴決定および／またはマッ
ピングするために使用することができる。本明細書において使用される場合、用語「マッ
ピングする」または「マッピング」は、１つ以上のタンパク質の１つ以上の機能領域の同
定、特徴決定および／または決定を指す。このような特徴決定は、１つ以上のタンパク質
モジュールおよび別の作用物質（例えば、別のタンパク質および／またはタンパク質モジ
ュール）間の相互作用の決定に必要であり得る。一部のキメラタンパク質は、１つ以上の
タンパク質および／またはタンパク質モジュールに関連する機能を特徴決定するために使
用することができる。
【００９１】
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、表１４に列記の配列またはそ
れらの断片を含み得る。
【００９２】
【表１４】
2020062007.tif 000053
2020062007.tif 000054
一部の実施形態において、キメラタンパク質は、ＴＧＦ−β２からの１つ以上のタンパ
ク質モジュールを含み得る。ＴＧＦ−β２成長因子についての結晶構造が解明されている
が（ダオピン，Ｓ．（Ｄａｏｐｉｎ，Ｓ．）ら著、「トランスフォーミング成長因子−β
２の結晶構造：スーパーファミリーについての特有のフォールド（Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔ
ｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−β２
：ａｎ  ｕｎｕｓｕａｌ  ｆｏｌｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ）」、サ
イエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、１９９２年、第２５７巻（第５０６８号）、ｐ．３６９〜
７３）、活性化機序は依然として十分に理解すべきである。活性化は、ＴＧＦ−β２トリ
ガーループおよびα９β１インテグリン間の１つ以上の相互作用に依存し得る。ＴＧＦ−
β２トリガーループは、ＲＧＤ配列に関連する類似の構造および／または機能特徴部を含
み得る。ＴＧＦ−β２トリガーループは、インテグリン、例として、限定されるものでは
ないが、α９β１インテグリンに結合し得る。
【００９３】
マウス組織染色によれば、インテグリンサブユニットα９は、骨格筋および心筋、内臓
平滑筋、肝細胞、気道上皮、扁平上皮、脈絡叢上皮中で、さらには好中球上で広く発現さ
れる（パルマー，Ｅ．Ｌ．（Ｐａｌｍｅｒ，Ｅ．Ｌ．）ら著、「上皮および筋肉中に広く
分布するβ１の新規相手のインテグリンα９サブユニットの配列および組織分布（Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔ
ｅｇｒｉｎ  α９  ｓｕｂｕｎｉｔ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐａｒｔｎｅｒ  ｏｆ  β１  ｔ
ｈａｔ  ｉｓ  ｗｉｄｅｌｙ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ  ｉｎ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａ  ａ
ｎｄ  ｍｕｓｃｌｅ）」、ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏ
ｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、１９９３年、第１２３巻（第５号）、ｐ．１２８９〜
９７）。α９の発現は、Ｅ１２．５よりも早期には検出されず、このことは、それが早期
組織形態発生における主要な役割を担わないことを示唆する（ワン，Ａ．（Ｗａｎｇ，Ａ
．）ら著、「ネズミ胚中のインテグリンサブユニットα９の発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｓｕｂｕｎｉｔ  α９  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｕｒｉｎ
ｅ  ｅｍｂｒｙｏ）」、デベロップメンタル・ダイナミクス（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａ
ｌ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）、１９９５年、第２０４巻、ｐ．４２１〜３１）。α９のインビ
ボ機能は、不明瞭である。ノックアウトマウスにおいて観察される表現型は、リンパ管弁
発生における役割を示唆する（バジゴウ，Ｅ．（Ｂａｚｉｇｏｕ，Ｅ．）ら著、「インテ
グリン−α９は、リンパ管弁形態発生の間のフィブロネクチンマトリックスアセンブリに
要求される（ｉｎｔｅｇｒｉｎ−α９  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｆｉｂｒｏｎ
ｅｃｔｉｎ  ｍａｔｒｉｘ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｖ
ａｌｖｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ）」、デベロップメンタル・セル（Ｄｅｖ  Ｃｅ
ｌｌ）、２００９年８月、第１７巻（第２号）、ｐ．１７５〜８６）。報告されたインテ
グリンα９β１の相互作用相手としては、ＶＣＡＭ−１、テネイシンＣの第３Ｆｎｌｌｌ
ドメイン、オステオポンチン、ポリドム（ｐｏｌｙｄｏｍ）／ＳＶＥＰ１、ＶＥＧＦ−Ａ
およびＮＧＦが挙げられる（ヨカサキ，Ｙ．（Ｙｏｋａｓａｋｉ，Ｙ．）ら著、「テネイ
シンＣのフィブロネクチンＩＩＩ型リピート中のインテグリンα９β１についてのリガン
ド結合部位の同定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉ
ｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  α９β１  ｉｎ  ｔｈｅ  
ｔｈｉｒｄ  ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｔｙｐｅ  ＩＩＩ  ｒｅｐｅａｔ  ｏｆ  ｔｅｎ
ａｓｃｉｎ  Ｃ）」、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｔｈｅ  
Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９９８年、第
２７３巻（第１９号）、ｐ．１１４２３〜８；マーシンキウィッツ，Ｃ．（Ｍａｒｃｉｎ
ｋｉｅｗｉｃｚ，Ｃ．）ら著、「ＭＬＤＧ含有ヘテロダイマーディスインテグリンの阻害
効果は、インテグリンα９β１と、ＶＣＡＭ−１、テネイシン−Ｃ、およびオステオポン
チンとの相互作用のための区別される構造的要件を明らかにする（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＭＬＤＧ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉ
ｃ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎｓ  ｒｅｖｅａｌ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａ
ｌ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎ
ｔｅｇｒｉｎ  α９β１  ｗｉｔｈ  ＶＣＡＭ−１，ｔｅｎａｓｃｉｎ−Ｃ，ａｎｄ  ｏ
ｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（ＪＢＣ
）、２０００年、第２７５巻（第４１号）、ｐ．３１９３０〜７；オーメン，Ｓ．（Ｏｏ
ｍｍｅｎ，Ｓ．）ら著、「血管内皮成長因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）は、インテグリンα９β
１への直接結合を介して内皮および癌細胞遊走を誘導する（Ｖａｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔ
ｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  Ａ  （ＶＥＧＦ−Ａ）ｉｎｄｕｃｅｓ  ｅ
ｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｔｈｒ
ｏｕｇｈ  ｄｉｒｅｃｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  α９β１）」、ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（ＪＢＣ）、２０１１年、第２８６巻（
第２号）、ｐ．１０８３〜９２；サトウ−ニシウチ，Ｒ．（Ｓａｔｏ−Ｎｉｓｈｉｕｃｈ
ｉ，Ｒ．）ら著、「ポリドム／ＳＶＥＰ１は、インテグリンα９β１についてのリガンド
である「Ｐｏｌｙｄｏｍ／ＳＶＥＰ１  ｉｓ  ａ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｇｒ
ｉｎ  α９β１）」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（ＪＢＣ）、２
０１２年、第２８７巻（第３０号）、ｐ．２５６１５〜３０；スタニスシェフスカ，Ｉ．
（Ｓｔａｎｉｓｚｅｗｓｋａ，Ｉ．）ら著、「インテグリンα９β１は、神経成長因子お
よび他のニュートロフィンについての受容体である（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  α９β１  ｉｓ
ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  
ｏｔｈｅｒ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ）」、ジャーナル・オブ・セル・サイエンス（
Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２００７年、第１２１巻（第４部
）、ｐ．５０４〜１３；ヨコサキ，Ｙ．（Ｙｏｋｏｓａｋｉ，Ｙ．）ら著、「インテグリ
ンα９β１は、オステオポンチンのトロンビン開裂アミノ末端断片中の新規認識配列（Ｓ
ＶＶＹＧＬＲ）に結合する（Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  α９β１  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  
ａ  ｎｏｖｅｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＳＶＶＹＧＬＲ）ｉｎ  
ｔｈｅ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｃｌｅａｖｅｄ  ａｍｉｎｏ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｒａｇ
ｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（ＪＢＣ）、１９９９年、第２７４巻（第５１号）、ｐ．３６３２８〜３４）
。
【００９４】
α９β１と相互作用するタンパク質上の結合部位は、直鎖ペプチドを使用してマッピン
グされている。これらの部位としては、テネイシンＣ（ＡＥＩＤＧＩＥＬ；配列番号２３
７）、オステオポンチン（ＳＶＶＹＧＬＲ；配列番号２３８）、ポリドム／ＳＶＥＰ１（
ＥＤＤＭＭＥＶＰＹ；配列番号２３９）およびＶＥＧＦ−Ａ（ＥＹＰ）上の結合部位が挙
げられる。α４β１およびα５β１とは異なり、α９β１は、カノニカルＲＧＤ配列モチ
ーフを要求しない。一部の、全てではないが、報告された標的は、酸性残基／疎水性残基
／プロリンモチーフを有する。一部は、チロシン残基も含む。
【００９５】
ＴＧＦ−β１およびＴＧＦβ３のトリガーループは、ＲＧＤ配列を担持し、αｖβ６お
よび／またはαｖβ８が結合して成長因子放出を可能とする。ＴＧＦ−β２トリガールー
プ領域は、ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β３のものと異なり、配列ＦＡＧＩＤＧＴＳＴＹ
ＴＳＧＤＱＫＴＩＫＳＴＲＫＫＮＳＧＫＴＰ（配列番号６５）を含み、ＲＧＤトリマーを
有さない。この領域のうち、残基ＡＧＩＤＧＴＳＴ（配列番号２４０）は、α９β１結合
部位としてマッピングされたテネイシン−Ｃの第３ＦｎＩＩＩドメイン上のペプチドとア
ラインする。さらに、この領域に続くチロシンは、潜在的なα９β１結合における役割を
担い得る。したがって、ＴＧＦ−β２へのα９β１結合は、生理学的に関連し得る。一部
の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、表１５に列記の配列のいずれかを含
むトリガーループ配列を含み得る。
【００９６】
【表１５】
2020062007.tif 000055
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、１つ以上のＴＧＦ−β２トリ
ガーループを含み得る。このようなキメラタンパク質は、ＴＧＦ−β２のものと類似の様
式で調節される活性化（例えば、成長因子放出）を示し得る。本発明の一部のキメラタン
パク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質を含み得、１つ以上のタンパク質モジュールは、１
つ以上のＴＧＦ−β２トリガーループを含む１つ以上のタンパク質モジュールにより置換
されている。一部のキメラタンパク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質を含み、少なくとも
１つのＲＧＤ配列を含む１つ以上のタンパク質モジュールは、１つ以上のＴＧＦ−β２ト
リガーループを含む１つ以上のタンパク質モジュールにより置換されている。他の実施形
態において、キメラタンパク質は、ＴＧＦ−β１および／またはＴＧＦ−β３タンパク質
を含み得、少なくとも１つのＲＧＤ配列を含む１つ以上のタンパク質モジュールは、１つ
以上のＴＧＦ−β２トリガーループを含む１つ以上のタンパク質モジュールにより置換さ
れている。このようなキメラタンパク質は、ＴＧＦ−β１活性を示し得る。
【００９７】
一部の実施形態において、本発明のキメラタンパク質は、ＢＭＰからの１つ以上のタン
パク質モジュールを含み得る。ＢＭＰからの配列を含むタンパク質モジュールは、図８に
開示のそれらのＢＭＰモジュールのいずれかからの配列を含み得る。１つ以上のＢＭＰタ
ンパク質モジュールを含む本発明のキメラタンパク質は、ＢＭＰの他のタンパク質、例と
して、限定されるものではないが、ＲＧＭタンパク質との相互作用を試験し、向上させ、
および／または摂動させるための抗体および／またはアッセイの開発に有用であり得る。
【００９８】
キメラタンパク質は、検出可能な標識を含み得る。検出可能な標識は、キメラタンパク
質の検出および／または単離を可能とするために使用することができる。このような検出
可能な標識は、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグおよび／またはフラッグタグを含み得
る。タグは、タグ化タンパク質を同定および／または単離するために使用することができ
る。産生されるタンパク質は、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位をコードする付加ア
ミノ酸を含み得る。このような部位は、３Ｃプロテアーゼ、例として、限定されるもので
はないが、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼによる処理時の３Ｃプロテアーゼ開裂部位に
おける開裂を可能とする。３Ｃプロテアーゼ開裂部位は、キメラタンパク質からの検出可
能な標識の除去を可能とするために導入することができる。
【００９９】
タンパク質発現
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質の合成は、当技術分野において公
知の任意の方法により実施することができる。一部のタンパク質合成は、インビトロで実
施することができる。一部のタンパク質合成は、細胞を使用して実施することができる。
このような細胞は、細菌および／または真核細胞であり得る。一部の実施形態において、
真核細胞をタンパク質合成に使用することができる。一部のこのような細胞は、哺乳動物
細胞であり得る。タンパク質発現に使用される一部の哺乳動物細胞としては、限定される
ものではないが、マウス細胞、ウサギ細胞、ラット細胞、サル細胞、ハムスター細胞およ
びヒト細胞を挙げることができる。このような細胞は、細胞系に由来し得る。他の実施形
態において、ヒト細胞を使用することができる。さらなる実施形態において、細胞系とし
ては、限定されるものではないが、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｓｗ
−４８０細胞、ＥＬ４Ｔリンパ腫細胞、ＴＭＬＣ細胞、２９３Ｔ／１７細胞、Ｈｓ６８細
胞、ＣＣＤ１１１２ｓｋ細胞、ＨＦＦ−１細胞、ケロイド線維芽細胞、Ａ２０４細胞、Ｌ
Ｉ７ＲＩＢ細胞およびＣ２Ｃ１２細胞を挙げることができる。
【０１００】
一部の実施形態において、２９３細胞が本発明の組換えタンパク質の合成に使用される
。これらの細胞は、タンパク質をヒト様構造（例えば、グリカン）により翻訳後修飾する
ヒト細胞である。このような細胞は、容易に形質移入可能であり、スケーラブルであり、
懸濁液培養物中で高密度に成長し得る。２９３細胞としては、２９３Ｅ細胞を挙げること
ができる。２９３Ｅ細胞は、ＥＢＮＡ１（エプスタイン・バーウイルス核抗原１）を安定
的に発現するＨＥＫ２９３細胞である。一部の場合において、２９３Ｅ細胞は、血清フリ
ー培地中で成長させて下流精製を簡易化することができる。一部の場合において、２９３
−６Ｅ細胞（カナダ国立研究機関、オタワ、カナダ）を使用することができる。このよう
な細胞は、トランケートＥＢＮＡ１（ＥＢＮＡ１ｔ）を発現し、向上した産生の組換えタ
ンパク質を含み得、血清フリー培地中の成長および／またはタンパク質発現について最適
化して下流の精製を簡易化することができる。一部の場合において、本発明の組換えタン
パク質を発現させるために昆虫細胞を使用することができる。一部の場合において、昆虫
細胞発現は、ヨトウガイ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞、例とし
て、限定されるものではないが、Ｓｆ９および／またはＳｆ−２１細胞を使用して実施す
ることができる。一部の場合において、昆虫細胞培養物は、イラクサギンウワバ（Ｔｒｉ
ｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ）細胞、例として、限定されるものではないが、Ｔｎ−３６８
および／またはハイ−ファイブ（ＨＩＧＨ−ＦＩＶＥ）（商標）ＢＴＩ−ＴＮ−５Ｂ１−
４細胞を含み得る。例示的な昆虫細胞系のさらなるリストは、内容が参照により全体とし
て本明細書に組み込まれる米国特許第５，０２４，９４７号明細書に見出すことができる
。
【０１０１】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、Ｆｃ融合タンパク質を創成す
るための抗体Ｆｃドメインを含み得る。本明細書に記載の組換えタンパク質のいずれかと
のＦｃ融合タンパク質の形成は、当技術分野において公知の任意の方法、例として、チャ
イコフスキー，Ｄ．Ｍ．（Ｃｚａｊｋｏｗｓｋｙ，Ｄ．Ｍ．）ら著、２０１２年、ＥＭＢ
Ｏモレキュラー・メディシン（ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ）、第４巻（第１０号）、ｐ．
１０１５〜２８ならびに米国特許第５，１１６，９６４号明細書、米国特許第５，５４１
，０８７号明細書および米国特許第８，６３７，６３７号明細書に記載のもの（それらの
それぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）により実施することが
できる。本発明のＦｃ融合タンパク質は、Ｆｃヒンジ領域中のシステイン残基を介してＩ
ｇＧ  Ｆｃのヒンジ領域に結合させることができる。得られるＦｃ融合タンパク質は、抗
体様構造を含み得るが、ＣＨＩドメインも軽鎖も有さない。一部の場合において、Ｆｃ融
合タンパク質は、天然抗体と同等の薬物動態プロファイルを含み得る。一部の場合におい
て、本発明のＦｃ融合タンパク質は、延長された循環中の半減期および／または変更され
た生物学的活性を含み得る。一部の場合において、本発明のＦｃ融合タンパク質は、本明
細書に記載のＴＧＦ−βファミリータンパク質またはＴＧＦ−β関連タンパク質のいずれ
かを使用して調製することができる。一部の場合において、Ｆｃ融合タンパク質は、ＴＧ
Ｆ−β、ＧＤＦ−８および／またはＧＤＦ−１１を含み得る。
【０１０２】
本発明の組換えタンパク質をコードする配列は、発現のために当技術分野において公知
の多数のＤＮＡベクター中に挿入することができる。このようなベクターとしては、プラ
スミドを挙げることができる。一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質をコ
ードする配列は、ｐＴＴ５ベクター（カナダ国立研究機関バイオテクノロジー研究所（Ｎ
ＲＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、モントリ
オール、ケベック）中にクローニングする。他の実施形態において、ｐＴＴ２２、ｐＴＴ
２８、ｐＹＤ５、ｐＹＤ７、ｐＹＤ１１（カナダ国立研究機関バイオテクノロジー研究所
（ＮＲＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、モ
ントリオール、ケベック）および／またはｐＭＡベクター（ライフ・テクノロジーズ（Ｌ
ｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、カールスバッド、カリフォルニア）を使用するこ
とができる。ベクターは、本発明の組換えタンパク質をコードする配列の発現をモジュレ
ートするためのプロモータ配列を含み得る。このようなプロモータは、構成的に活性であ
り得、ならびに／または外因性および／もしくは内因性因子により調節することができる
。一部の外因性因子は、本発明の組換えタンパク質をコードする配列の発現を向上させ、
または抑制するために使用することができる。一部のベクターは、本発明の組換えタンパ
ク質を翻訳時に取り込むことができる核局在化シグナルをコードし得る。一部のベクター
は、核外移行シグナルを含むｍＲＮＡ転写物を産生し得る。改変ｐＴＴ５ベクター（ｐＴ
Ｔ５−ＷＰＲＥ）から転写されるＲＮＡは、転写物の核外移行を容易にするエレメントを
含有する。一部のベクターは、１つ以上のライゲーション非依存性クローニング（ＬＩＣ
）カセットの挿入により改変してより簡易なクローニングを提供することができる。
【０１０３】
本発明の組換えタンパク質をコードするベクターは、当技術分野において公知の任意の
方法、例として、限定されるものではないが、形質移入、エレクトロポレーションおよび
／または形質導入により細胞に送達することができる。一部の実施形態において、ベクタ
ーは、宿主細胞中のベクター複製を向上させるための１つ以上のエレメントを含み得る。
一部の実施形態において、ベクターは、ＥＢＮＡ−１を発現する細胞中のエピソーム複製
のためのｏｒｉＰ部位を含み得る。
【０１０４】
一部の場合において、細胞を安定的に形質移入して本発明の組換えタンパク質を産生す
る。安定的に形質移入された細胞は、細胞分裂の間に形質移入遺伝子を娘細胞に移し、し
たがって、形質移入の繰り返しの必要性を排除する。一部の場合において、形質移入遺伝
子が形質移入細胞のゲノム中に安定的に挿入される。形質移入遺伝子は、細胞選択のため
の遺伝子、例えば、１つ以上の毒性または抑制化合物に対する耐性を付与する遺伝子を含
み得る。このような遺伝子は、そのような１つ以上の毒性または抑制化合物（例えば、ピ
ューロマイシン、ケノマイシン（ｋｅｎｏｍｙｃｉｎ）など）の存在下で成長させた場合
、形質移入遺伝子の安定的な取り込みを有する細胞のみの成長を支持するために使用する
ことができる。細胞選択は、全組換えタンパク質発現レベルに基づき細胞を選択すること
も含み得る。このようなレベルの測定は、例えば、ウエスタンブロットおよび／またはＥ
ＬＩＳＡにより実施することができる。
【０１０５】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質をコードするヌクレオチド配列は
、１つ以上のウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）を含み得る
。このようなエレメントを含むＲＮＡ核酸は、配列ＧＣＣＡＣＧＧＣＧＧＡＡＣＵＣＡＵ
ＣＧＣＣＧＣＣＵＧＣＣＵＵＧＣＣＣＧＣＵＧＣＵＧＧＡＣＡＧＧＧＧＣＵＣＧＧＣＵＧ
ＵＵＧＧＧＣＡＣＵＧＡＣＡＡＵＵＣＣＧＵＧＧＵ（配列番号２５５）を含み得る。ＷＰ
ＲＥを含むＲＮＡは、配列ＡＡＴＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＴＴＧＴＧ
ＡＡＡＧＡＴＴＧＡＣＴＧＧＴＡＴＴＣＴＴＡＡＣＴＡＴＧＴＴＧＣＴＣＣＴＴＴＴＡＣ
ＧＣＴＡＴＧＴＧＧＡＴＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＧＣＣＴＴＴＧＴＡＴＣＡＴＧＣＴ
ＡＴＴＧＣＴＴＣＣＣＧＴＡＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＡＴＡ
ＡＡＴＣＣＴＧＧＴＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＴＴＡＴＧＡＧＧＡＧＴＴＧＴＧＧＣＣＣＧＴ
ＴＧＴＣＡＧＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＴＧＴＴＴＧＣＴＧＡＣ
ＧＣＡＡＣＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＧＧＧＧＣＡＴＴＧＣＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＣＡＧＣ
ＴＣＣＴＴＴＣＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＧＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＣＣＣＴＡＴＴＧＣＣＡＣ
ＧＧＣＧＧＡＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＡＣＡ
ＧＧＧＧＣＴＣＧＧＣＴＧＴＴＧＧＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＴＧＴ
ＣＧＧＧＧＡＡＧＣＴＧＡＣＧＴＣＣＴＴＴＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＣＣＴＧＴＧＴ
ＴＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＴＴＣＴＧＣＧＣＧＧＧＡＣＧＴＣＣＴＴＣＴＧＣＴＡＣＧＴＣ
ＣＣＴＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡＡＴＣＣＡＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣＣＧＣＧＧＣＣ
ＴＧＣＴＧＣＣＧＧＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＴＣＴＴＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＣＣＴＴＣＧ
ＣＣＣＴＣＡＧＡＣＧＡＧＴＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＣＧ
ＣＣＴＧ（配列番号２５６）を含むＤＮＡから転写させることができる。ＷＰＲＥは、Ｗ
ＰＲＥを含む核酸の翻訳を向上させ得る。このような翻訳の向上は、新たに転写されるｍ
ＲＮＡの細胞質移行の増加に起因し得る。
【０１０６】
一部の実施形態において、組換えタンパク質は、１つ以上の分泌シグナル配列を含み得
る。本明細書において使用される場合、用語「分泌シグナル配列」は、タンパク質の一部
である場合、細胞からのそのようなタンパク質の分泌をモジュレートするアミノ酸（また
はそれらを核酸レベルにおいてコードするヌクレオチド）の鎖を指す。一部の分泌シグナ
ル配列は、タンパク質末端において局在させることができる。他の実施形態において、分
泌シグナル配列は、Ｎ末端アミノ酸配列であり得る。他の分泌シグナル配列は、Ｉｇカッ
パ鎖の分泌シグナルを含み得る。このようなＩｇカッパ鎖は、ヒトＩｇカッパ鎖であり得
る。一部の実施形態において、分泌シグナル配列は、アミノ酸配列ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬ
ＧＬＬＬＬＷＦＳＧＶＬＧ（配列番号２５７）を含み得る。
【０１０７】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、適正な発現、フォールディン
グ、分泌、活性および／または機能のために１つ以上の他のタンパク質との共発現を要求
し得る。本発明の一部の組換えＧＰＣは、ＬＴＢＰ、フィブリリンおよび／またはＧＡＲ
Ｐと共発現させることができる。
【０１０８】
一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、ビオチン化することができる
。本明細書において使用される場合、用語「ビオチン化」は、１つ以上のビオチン標識の
付着を指す。このようなビオチン標識は、ビオチン化された組換えタンパク質と、アビジ
ンおよび／またはストレプトアビジンコート表面および／またはタンパク質との相互作用
を容易にし得る。本明細書において使用される場合、「ビオチン標識」は、１つ以上のビ
オチン分子を含む検出可能な標識を指す。用語「ビオチン化された」は、１つ以上のビオ
チン標識を含む分子またはタンパク質を指す。ビオチン分子は、アビジンおよびストレプ
トアビジン分子に高親和性で結合する。この特性は、アビジンおよび／またはストレプト
アビジンコート材料を使用してビオチン化タンパク質を捕捉するために使用することがで
きる。本発明の一部の組換えＧＰＣは、Ｎ末端近傍でビオチン化させることができる。こ
のような組換えＧＰＣは、アビジンおよび／またはストレプトアビジンコート細胞培養物
表面に導入することができ、そのような結合ＧＰＣの配向および結合がＧＰＣのＬＴＢＰ
、フィブリリンおよび／またはＧＡＲＰへの配向および結合を模倣するような様式の表面
へのビオチン化された組換えＧＰＣの接着を可能とする。
【０１０９】
一部の実施形態において、産生される組換えタンパク質は、品質管理目的のために分析
して生物物理学的特性および生物活性特性の両方を評価することができる。生物物理学的
特徴決定としては、還元および／または非還元ＳＤＳ  ＰＡＧＥ後のタンパク質移動パタ
ーンの評価を挙げることができる。生物物理学的特徴決定は、ゲル濾過、質量分析ならび
に／またはＬＡＰもしくはＬＡＰ様ドメインおよび成長因子ドメインの会合／解離の分析
も含み得る。生物活性特性は、抗体との反応性ならびに／または解離成長因子および／も
しくは潜在型ＧＰＣのシグナリング活性を評価することにより分析することができる。
【０１１０】
産生される一部のタンパク質は、精製のための１つ以上の検出可能な標識［例えば、ポ
リヒスチジンタグ、フラッグタグなど］をコードする付加アミノ酸を含み得る。一部の実
施形態において、タンパク質は、Ｎ末端標識されている。一部の実施形態において、タン
パク質は、Ｃ末端標識されている。一部の実施形態において、タンパク質は、ビオチン化
されている。一部の実施形態において、本発明の組換えタンパク質は、Ｎ末端ビオチン化
されている。
【０１１１】
産生されるタンパク質は、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位をコードする付加アミ
ノ酸を含み得る。このような部位は、３Ｃプロテアーゼ、例として、限定されるものでは
ないが、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼによる処理時に３Ｃプロテアーゼ開裂部位の残
基ＱおよびＧ間の開裂を可能とする。一部の実施形態において、このような開裂部位は、
組換えタンパク質からの検出可能な標識の除去を可能とするために導入する。
【０１１２】
一部の実施形態において、発現される成長因子プロタンパク質の改変は、酵素的開裂に
より実施することができる。一部の場合において、プロタンパク質変換酵素を使用するこ
とができる。このようなプロタンパク質変換酵素としては、限定されるものではないが、
フーリン／ＰＡＣＥ３、ＰＣｌ／３、ＰＣ２、ＰＣ４、ＰＣ５／６、ＰＡＣＥ４およびＰ
Ｃ７を挙げることができる。プロタンパク質変換酵素の開裂は、溶液中または組織培養物
中で実施することができる。一部の場合において、プロタンパク質変換酵素は、開裂され
るべきプロタンパク質を発現する細胞中で発現させる。一部の場合において、プロタンパ
ク質変換酵素は、開裂されるべきプロタンパク質を発現する細胞の組織培養物に添加する
。
【０１１３】
抗体
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、抗体またはその断
片を含み得る。本明細書において使用される場合、用語「抗体」は、最も広い意味で称さ
れ、具体的には、種々の実施形態、例として、限定されるものではないが、モノクローナ
ル抗体、ポリクローナル抗体、多特異的抗体（例えば、少なくとも２つのインタクト抗体
から形成される二重特異的抗体）、および抗体断片、例えば、ダイアボディを、それらが
所望の生物学的活性を示す限りカバーする。抗体は、主としてアミノ酸ベース分子である
が、１つ以上の修飾（例として、限定されるものではないが、糖部分、蛍光部分、化学的
タグなどの付加）も含み得る。
【０１１４】
抗体生成における組換えおよびキメラタンパク質の使用
一部の実施形態において、本明細書に記載の組換えおよび／またはキメラタンパク質は
、抗原（本明細書において抗原タンパク質と称される）として使用して抗体を生成するこ
とができる。このような抗原タンパク質は、類似の野生型タンパク質中の抗体生成につい
て利用可能でないことがあるエピトープを含み得る。本発明の抗原タンパク質に指向され
る一部の抗体は、１つ以上のＧＰＣ）からの１つ以上の成長因子の放出をモジュレートし
得る。一部のこのような抗体は、安定化［２つの作用物質間の解離（例えば、ＧＰＣから
の成長因子放出、１つ以上のタンパク質相互作用からのＧＰＣ放出）を低減させ、または
防止する］および／または放出［２つの作用物質間の解離（例えば、ＧＰＣからの成長因
子放出、１つ以上のタンパク質相互作用からのＧＰＣ放出）を向上させる］抗体であり得
る。本発明の抗原タンパク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質ならびにその構成要素および
／またはタンパク質モジュールを含み得る。一部の場合において、本発明の抗原タンパク
質は、会合成長因子を有さないプロドメイン、フーリン開裂欠損突然変異体、細胞外タン
パク質会合を欠損する突然変異体および／またはそれらの組合せを含み得る。
【０１１５】
一部の実施形態において、抗原タンパク質は、ＴＧＦ−β関連タンパク質および／また
はそのモジュールを含み得る。このような抗原タンパク質は、成長因子がプロドメインと
会合し、またはそれと立体的に近接する領域からのエピトープを含み得る。このようなエ
ピトープに指向される本発明の抗体は、成長因子およびプロドメイン間の重複領域に結合
し得る。このような抗体は、ＧＰＣからの成長因子の解離を立体的に阻害し得る。
【０１１６】
一部の実施形態において、抗原タンパク質は、特定のＧＰＣからのプロドメインのみま
たは成長因子のみを含む。このような抗原タンパク質上に存在するエピトープは、インタ
クトＧＰＣ中でシールドされ得、または未露出であり得る。本発明の一部の抗体は、この
ようなエピトープに指向させることができる。このような抗体は、ＧＰＣからの成長因子
解離を促進する放出抗体であり得る。さらなる抗体は、プロドメイン結合について遊離成
長因子と競合し得、それによりＧＰＣからの成長因子解離を促進する。
【０１１７】
一部の実施形態において、抗原タンパク質は、プロタンパク質変換酵素（例えば、フー
リン）開裂部位突然変異を含み得る。このような突然変異は、成長因子のそのプロドメイ
ンからの酵素的開裂を防止し得る。本発明の一部の抗体は、そのような突然変異タンパク
質上に存在するエピトープに指向させることができる。このような抗体は、プロドメイン
および成長因子間の会合を安定化し得る。一部の実施形態において、フーリン開裂部位突
然変異体は、本明細書に記載のＤ２Ｇ突然変異体を含む。
【０１１８】
一部の実施形態において、プロドメインを含む抗原タンパク質は、ＬＴＢＰおよび／ま
たはＧＡＲＰとのプロドメイン会合の減少をもたらすＮ末端突然変異を含み得、したがっ
て、そうでなければそれらの会合によりシールドされ得るＮ末端領域中のエピトープを提
示し得る。本発明の一部の抗体は、そのようなエピトープに指向させることができる。Ｔ
ＧＦ−β１プロドメインを含む一部の抗原タンパク質は、Ｃ４Ｓ突然変異を含み得る。こ
のような突然変異は、抗原タンパク質とＬＴＢＰおよび／またはＧＡＲＰとの会合を防止
し得、それによりそれらのタンパク質がＮ末端エピトープの提示に有用になる。Ｃ４Ｓ突
然変異体に指向される抗体は、ＬＴＢＰおよび／またはＧＡＲＰとのＧＰＣ会合を防止し
得る。Ｃ４Ｓ突然変異体に指向される一部の抗体は、特定のニッチ中の成長因子シグナリ
ングを低減させ得る。一部のこのような抗体は、細胞外マトリックスと確実に会合するＧ
ＰＣの能力を遮断することにより成長因子の放出を低減させ、または防止し得る。
【０１１９】
一部の実施形態において、抗原タンパク質は、１つ以上の組換えＬＴＢＰを含み得る。
このような組換えＬＴＢＰは、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３、ＬＴＢＰ４、それ
らのオルタナティブスプライシングバリアントおよび／または断片を含み得る。組換えＬ
ＴＢＰは、１つ以上の検出可能な標識を含むように改変することもできる。このような検
出可能な標識としては、限定されるものではないが、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグ
、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／または蛍光タグを挙げることができる。
【０１２０】
一部の実施形態において、抗原タンパク質は、１つ以上の組換えＬＴＢＰと複合体化し
ている１つ以上の組換えタンパク質および／またはキメラタンパク質を含み得る。一部の
抗原タンパク質は、１つ以上の組換えＬＴＢＰと複合体化しているプロタンパク質変換酵
素開裂部位突然変異体（例えば、Ｄ２Ｇ突然変異体、ＡＸＸＡ突然変異体）を含み得る。
一部のこのような組換えＬＴＢＰは、ＬＴＢＰ１Ｓを含み得る。一部の組換えＬＴＢＰは
、１つ以上の検出可能な標識、例として、限定されるものではないが、ビオチン標識、ポ
リヒスチジンタグおよび／またはフラッグタグを含み得る。
【０１２１】
一部の実施形態において、抗原タンパク質は、ＧＡＲＰ（またはそのホモログ、例とし
て、限定されるものではないが、ＬＲＲＣ３３）を含み得る。このようなＧＡＲＰは、本
明細書において組換えＧＡＲＰと称される組換え体であり得る。一部の組換えＧＡＲＰは
、野生型ＧＡＲＰと比較して１つ以上の改変、トランケーションおよび／または突然変異
を含み得る。組換えＧＡＲＰは、可溶性になるように改変することができる。他の実施形
態において、組換えＧＡＲＰは、１つ以上の検出可能な標識を含むように改変する。さら
なる実施形態において、このような検出可能な標識としては、限定されるものではないが
、ビオチン標識、ポリヒスチジンタグ、フラッグタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグおよび／ま
たは蛍光タグを挙げることができる。一部の実施形態において、抗原タンパク質は、１つ
以上の組換えＧＡＲＰと複合体化している１つ以上の組換えタンパク質および／またはキ
メラタンパク質を含み得る。一部の実施形態において、抗原タンパク質は、組換えＧＡＲ
Ｐと複合体化しているＬＡＰ（例えば、ＴＧＦ−βＬＡＰ）および／またはＬＡＰ様ドメ
インを含む。一部の実施形態において、抗原タンパク質は、組換えＧＡＲＰと複合体化し
ているＤ２Ｇ突然変異体（例えば、ＴＧＦ−βＤ２Ｇ突然変異体）を含む。一部の実施形
態において、複合体化している組換えＧＡＲＰは、ＧＡＲＰの可溶性形態（ｓＧＡＲＰ）
であり得る。一部の実施形態において、ｓＧＡＲＰは、１つ以上のビオチン標識、ポリヒ
スチジンタグおよび／またはフラッグタグを含む。
【０１２２】
一部の実施形態において、ＬＡＰおよび／またはＬＡＰ様ドメインと複合体化している
ＧＡＲＰは、アッセイにおける、および／または抗体発生のための抗原として望ましい。
このような実施形態において、ＬＡＰおよび／またはＬＡＰ様ドメインは、ＣＥＤ突然変
異を含み得る。このようなＬＡＰおよび／またはＬＡＰ様ドメインは、ＧＰＣとして発現
させて適正なタンパク質フォールディング、立体構造および／または発現を容易にするこ
とができるが、存在するＣＥＤ突然変異は、成長因子放出を向上させ得、所望のＧＡＲＰ
−ＬＡＰ（またはＬＡＰ様ドメイン）複合体を後に残す。ＧＡＲＰ−ＬＡＰ（またはＬＡ
Ｐ様ドメイン）複合体は、ＧＡＲＰ会合ＧＰＣを特異的に標的化する放出抗体の産生にお
ける抗原として有用であり得る。
【０１２３】
一部の実施形態において、ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣは、低減した成長因子会合（遊
離ＬＡＰもしくはＬＡＰ様ドメイン、ならびに／またはＧＡＲＰおよび／もしくはＬＴＢ
Ｐ／ＬＡＰ複合体の両方として）を特徴とするＬＡＰ（またはＬＡＰ様ドメイン）の天然
に集中した立体構造を安定化するように作用し得、それにより野生型タンパク質中で露出
されることが少ないエピトープを露出する。このような突然変異は、ＬＡＰまたはＬＡＰ
−様ドメインの立体構造平衡をシフトして活性化抗体の産生を容易にし得る。
【０１２４】
一部の実施形態において、本発明の抗原タンパク質は、ＧＤＦ（例えば、ＧＤＦ−１１
および／またはＧＤＦ−８）からの１つ以上のタンパク質モジュールを含み得る。一部の
実施形態において、本発明の抗体は、ＧＤＦ−８タンパク質モジュールを含む抗原タンパ
ク質に指向させることができる。一部の実施形態において、このような抗体は、１つ以上
のニッチ中のＧＤＦ−８レベルおよび／または活性をモジュレートし得る。一部の実施形
態において、本発明の抗体は、ＧＰＣからのＧＤＦ−８成長因子の放出を防止し得る。一
部の実施形態において、本発明の抗体は、筋組織を修復し、および／または向上させるた
めに使用することができる。
【０１２５】
一部の実施形態において、本明細書に記載の組換えタンパク質（例として、限定される
ものではないが、キメラタンパク質）は、抗体発生のための重要な標的であり得るエピト
ープを同定およびマッピングするための試験において使用することができる。このような
試験は、抗体結合時の成長因子放出またはＧＰＣの安定化を促進し得るエピトープを同定
するために使用することができる。
【０１２６】
放出抗体
本明細書において使用される場合、用語「放出抗体」は、ＧＰＣ、細胞、ニッチ、天然
貯蔵部、または成長因子封鎖の任意の他の部位への抗体の導入時に、不活性成長因子およ
び／またはプロドメイン会合成長因子に対する活性成長因子および／または遊離成長因子
の比を増加させる抗体を指す。これに関して、放出抗体は、アゴニストとして特徴付ける
ことができる。本明細書において使用される場合、用語「天然貯蔵部」は、レベルの増加
した生体分子またはイオンが貯蔵される細胞、組織または器官内の位置を指す。例えば、
細胞外マトリックスは、１つ以上の成長因子のための天然貯蔵部として作用し得る。
【０１２７】
成長因子放出に必要な接触は、成長因子の放出のための、ＧＰＣもしくはその構成要素
との、または細胞構造との抗体の直接的または間接的な接触と定義することができる。こ
うした細胞構造としては、例えば、細胞外および／または細胞のマトリックスタンパク質
、細胞外および／または細胞のマトリックスと会合しているタンパク質［例えば、ＬＴＢ
Ｐ（例えば、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３および／またはＬＴＢＰ４）、フィブ
リリン（例えば、フィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３および／また
はフィブリリン−４）、パールカン、デコリン、エラスチン、コラーゲンおよび／または
ＧＡＲＰ（例えば、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３）］などである。成長因子の少
なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９
０％以上の放出が、本発明の抗体を放出抗体として特徴付けるために十分である。抗体投
与後の成長因子放出は、局所的であり得、持続的な期間にわたり生じ得、放出のピークま
たはスパイクを含み得ることが理解されたい。本発明の抗体は、１つ以上の成長因子を数
分間、数時間、数日間またはそれより長く放出するように作用し得る。
【０１２８】
放出プロファイルは、インビボ接触の約４時間〜約７日以内またはインビトロのより短
い期間内の初期ピークまたはバーストを有し得る。例えば、初期ピークまたはバーストは
、約４時間〜約５時間、または約４時間〜約６時間、または約４時間〜約７時間、または
約４時間〜約８時間、または約４時間〜約９時間、または約４時間〜約１０時間、または
約４時間〜約１１時間、または約４時間〜約１２時間、または約４時間〜約２４時間、ま
たは約４時間〜約３６時間、または約４時間〜約４８時間、または約１日〜約７日、また
は約１日〜約２日、または約１日〜約３日、または約１日〜約４日、または約４日〜約５
日、または約４日〜約６日、または約４日〜約７日で生じ得る。本発明の化合物および／
または組成物は、存在する成長因子の５〜１００％の放出を刺激し得る。例えば、成長因
子放出のパーセントは、約５％〜約１０％、または約５％〜約１５％、または約５％〜約
２０％、または約５％〜約２５％、または約１０％〜約３０％、または約１０％〜約４０
％、または約１０％〜約５０％、または約１０％〜約６０％、または約２０％〜約７０％
、または約２０％〜約８０％、または約４０％〜約９０％、または約４０％〜約１００％
であり得る。
【０１２９】
本明細書に記載の方法により生成される放出抗体は、表１に列記のプロタンパク質のい
ずれかを含むＧＰＣから成長因子を放出するように生成することができる。一部の場合に
おいて、放出抗体は、ＴＧＦ−βアイソフォームおよび／またはそのようなアイソフォー
ムの１つ以上のモジュールを含むＧＰＣに指向される。一部の場合において、放出抗体は
、ＧＤＦおよび／またはＧＤＦからの１つ以上のモジュールを含むＧＰＣに指向される。
【０１３０】
安定化抗体
本明細書において使用される場合、用語「安定化抗体」は、１つ以上のＧＰＣ、細胞、
ニッチ、天然貯蔵部、および成長因子封鎖の任意の他の部位のうちの少なくとも一つへの
抗体の導入時に、不活性成長因子および／またはプロドメイン会合成長因子に対する活性
成長因子および／または遊離成長因子の比を減少させる抗体を指す。これに関して、抗体
は、アンタゴニストして特徴付けることができる。本明細書において使用される場合、「
アンタゴニスト」は、別のものの生理学的作用を干渉または阻害するものである。アンタ
ゴニスト作用は、下流のシグナリングの刺激または活性化ももたらし得、したがって、ア
ンタゴナイズされるものとは別個に別の経路に対してアゴニスト的に作用し得る。経路は
、相互関連し、したがって、１つの非限定的な例において、ＴＧＦ−βアンタゴニストは
ＢＭＰアゴニストとして作用し得、その逆も同様である。細胞イベントに関して、本明細
書において使用される場合、用語「下流」は、本発明の化合物および／または組成物によ
る作用、結合または標的化後に起こる任意のシグナリングまたは細胞イベントを指す。
【０１３１】
阻害または安定化に必要な接触は、抗体と、ＧＰＣもしくはその構成要素との間、また
は細胞構造との間の直接的または間接的接触であり得、それにより成長因子の放出が阻害
される。こうした細胞構造としては、例えば、細胞外および／または細胞マトリックスタ
ンパク質、細胞外および／または細胞マトリックスと会合しているタンパク質［例えば、
ＬＴＢＰ（例えば、ＬＴＢＰ１、ＬＴＢＰ２、ＬＴＢＰ３および／またはＬＴＢＰ４）、
フィブリリン（例えば、フィブリリン−１、フィブリリン−２、フィブリリン−３および
／またはフィブリリン−４）、パールカン、デコリン、エラスチン、コラーゲンおよび／
またはＧＡＲＰ（例えば、ＧＡＲＰおよび／またはＬＲＲＣ３３）］などである。成長因
子の少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０
％、９０％以上の放出の阻害が、一部の場合において、本発明の抗体を阻害または安定化
抗体として特徴付けるために十分であり得る。阻害抗体は、ＧＰＣを安定化し、それをヘ
テロダイマーとして捕捉し得る。
【０１３２】
本発明の１つ以上の抗体との接触後の成長因子放出の阻害は、局所的であり得、持続的
な期間にわたり生じ得、ピーク、トラフまたはスパイクを含み得ることを理解されたい。
ＧＰＣを安定化するようにも機能する阻害抗体は、その放出キネティクスにより定義する
ことができる。成長因子の放出および対応する放出キネティクスは、局所的なものであっ
ても、直接計測し、または下流のシグナリングイベントにより推定することができる。一
部の実施形態において、タンパク質もしくは核酸濃度または表現型応答の変化は、本発明
の化合物および／または組成物の効果を示し得る。
【０１３３】
本発明の抗体は、成長因子の放出を数分間、数時間または数日間にわたり阻害するよう
に作用し得る。阻害および／または安定化プロファイルは、インビボ導入の約４時間〜約
７日以内またはインビトロのより短い期間内の初期トラフを有し得る。例えば、阻害また
は安定化の初期トラフは、約４時間〜約５時間、または約４時間〜約６時間、または約４
時間〜約７時間、または約４時間〜約８時間、または約４時間〜約９時間、または約４時
間〜約１０時間、または約４時間〜約１１時間、または約４時間〜約１２時間、または約
４時間〜約２４時間、または約４時間〜約３６時間、または約４時間〜約４８時間、また
は約１日〜約７日、または約１日〜約２日、または約１日〜約３日、または約１日〜約４
日、または約４日〜約５日、または約４日〜約６日、または約４日〜約７日で生じ得る。
本発明の化合物および／または組成物の導入は、存在する成長因子の５％〜１００％の阻
害および／または安定化をもたらし得る。例えば、成長因子阻害または安定化のパーセン
トは、約５％〜約１０％、約５％〜約１５％、約５％〜約２０％、約５％〜約２５％、約
１０％〜約３０％、約１０％〜約４０％、約１０％〜約５０％、約１０％〜約６０％、約
２０％〜約７０％、約２０％〜約８０％、約４０％〜約９０％または約４０％〜約１００
％であり得る。
【０１３４】
本明細書に記載の方法により生成される安定化抗体は、表１に列記のプロタンパク質の
いずれかを含むＧＰＣからの成長因子の放出を遮断するように生成することができる。こ
のような抗体は、ＧＰＣプロテアーゼ開裂部位と物理的に相互作用し、および／またはそ
のような開裂部位を標的化し得るタンパク質分解酵素の相互作用を遮断し得る。一部の場
合において、安定化抗体は、ＴＧＦ−βアイソフォームおよび／またはそのようなアイソ
フォームの１つ以上のモジュールを含むＧＰＣに指向される。一部の場合において、安定
化抗体は、ＧＤＦおよび／またはＧＤＦからの１つ以上のモジュールを含むＧＰＣに指向
される。
【０１３５】
ＧＤＦ−８を含むＧＰＣに指向される安定化抗体は、そのような複合体のメタロプロテ
イナーゼ開裂を遮断し得る。このような薬剤は、そのようなＧＰＣおよびそのようなＧＰ
Ｃを標的化するメタロプロテイナーゼ間の相互作用を物理的に防止するようにＧＤＦ−８
を含むＧＰＣに結合し得る。メタロプロテイナーゼ自体を実際に標的化する薬剤は、既に
記載されている（内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第７，５
７２，５９９号明細書参照）。
【０１３６】
抗体選択
所望の抗体は、所望の抗原および／またはエピトープと会合する所望の抗体の能力に基
づき２つ以上の候補抗体のより大きいプールから選択することができる。このような抗原
および／またはエピトープとしては、限定されるものではないが、本明細書に記載のもの
のいずれか、例として、限定されるものではないが、組換えタンパク質、キメラタンパク
質、ＧＰＣ、プロドメイン（例えば、ＬＡＰまたはＬＡＰ−様ドメイン）、成長因子、タ
ンパク質モジュール、ＬＴＢＰ、フィブリリン、ＧＡＲＰ、ＴＧＦ−β関連タンパク質お
よび／またはそれらの突然変異体および／またはバリアントおよび／または複合体および
／または組合せを挙げることができる。所望の抗体の選択は、抗体結合アッセイ、例えば
、表面プラズモン共鳴ベースアッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または
蛍光関連細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）ベースアッセイを使用して実施することができる
。このようなアッセイは、所望の抗原を利用して所望の抗体に結合させ、次いで１つ以上
の検出方法を使用して結合を検出し得る。
【０１３７】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、２つ以上の候補抗体のより大きいプールか
ら、複数種からの所望の抗原および／またはエピトープと会合するそれらの能力に基づき
選択することができる（本明細書において「陽性選択」と称される）。
【０１３８】
一部の実施形態において、このような種は、脊椎動物種を含み得る。一部の実施形態に
おいて、このような種は、哺乳動物種を含み得る。一部の実施形態において、このような
種としては、限定されるものではないが、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ブタ
、ウマ、ウシおよび／またはヒトを挙げることができる。
【０１３９】
一部の実施形態において、２つ以上の候補抗体のより大きいプールから抗体を除去する
ために陰性選択を使用する。本明細書において使用される場合、用語「陰性選択」は、群
からの１つ以上の因子の、１つ以上の不所望な抗原および／またはエピトープに結合する
それらの能力に基づく排除を指す。一部の実施形態において、不所望な抗原および／また
はエピトープとしては、限定されるものではないが、本明細書に記載のもののいずれか、
例として、限定されるものではないが、組換えタンパク質、キメラタンパク質、ＧＰＣ、
プロドメイン（例えば、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメイン）、成長因子、タンパク質モジュ
ール、ＬＴＢＰ、フィブリリン、ＧＡＲＰ、ＴＧＦ−β関連タンパク質および／またはそ
れらの突然変異体および／またはバリアントおよび／または組合せおよび／または複合体
を挙げることができる。
【０１４０】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、所与のニッチ中の成長因子シグナリングお
よび／またはレベル（例えば、ＴＧＦ−β成長因子シグナリングおよび／またはレベル）
を減少させるプロドメイン（例えば、ＧＰＣのプロドメイン部分および／または遊離ＬＡ
ＰもしくはＬＡＰ様ドメイン）に指向させることができる。一部の実施形態において、本
発明の抗体は、所与のニッチ中の成長因子シグナリングおよび／またはレベルを増加させ
るＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメインに指向させることができる。一部の実施形態において、
本発明の抗体は、ＬＴＢＰ、フィブリリンおよび／またはＧＡＲＰと複合体化している場
合のみ、プロドメイン（例えば、ＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメイン）および／またはＧＰＣ
に指向させることができる。
【０１４１】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、２つ以上の候補抗体のより大きいプールか
ら成長因子レベルおよび／または活性をモジュレートするそれらの能力に基づき選択する
ことができる。一部の場合において、成長因子活性をモジュレートする候補抗体の能力を
試験するために成長因子活性アッセイを使用することができる。成長因子活性アッセイと
しては、以下に記載の細胞ベースアッセイを挙げることができる。成長因子活性に対する
候補抗体の効果を決定するために使用することができる追加のアッセイとしては、限定さ
れるものではないが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロッティ
ング、レポータアッセイ（例えば、ルシフェラーゼベースレポータアッセイまたは他の酵
素ベースレポータアッセイ）、ＰＣＲ分析、ＲＴ−ＰＣＲ分析および／または当技術分野
において公知の他の方法、例として、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に
組み込まれる２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９１９
号明細書および２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９６
９号明細書に記載の方法のいずれかを挙げることができる。
【０１４２】
一部の実施形態において、本明細書に開示の１つ以上の組換えタンパク質または抗体は
、抗体を試験し、発生させ、および／または選択するためのアッセイにおいて使用するこ
とができる。組換えＧＰＣを発現させ、アッセイされる１つ以上の抗体の放出および／ま
たは安定化能を試験することができる。一部の実施形態において、組換えタンパク質は、
アッセイの陽性または陰性対照構成要素として発現させることができる。一部の実施形態
において、複数の組換えタンパク質を１回で発現させて成長因子放出および／または活性
をモジュレートすることができ、そのような組換えタンパク質は、そのようなモジュレー
ションにおいて相乗的にまたはアンタゴニスト的に作用し得る。
【０１４３】
一部の実施形態において、ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣは、放出抗体を試験するために
設計されるアッセイにおける成長因子活性のベースラインレベルを提供し得る。それとい
うのも、これらの突然変異タンパク質はヒトにおける生物学的効果を産生するために十分
であるためである。一部の実施形態において、ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣは、放出抗体
のスクリーニングを目的とする活性アッセイにおける陽性対照として使用することができ
る。一部の実施形態において、ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣは、安定化抗体活性のスクリ
ーニングに使用することができる。それというのも、それらはインテグリンの不存在下で
活性化され得ることが想定されるためである。このようなアッセイにおいて、ＣＥＤ突然
変異を含むＧＰＣは、細胞系（例えば、２９３細胞など）中で発現させることができ、成
長因子活性および／または放出は、試験される抗体の存在下または不存在下で評価するこ
とができる。一部の実施形態において、ＣＥＤ突然変異を含むＧＰＣと野生型ＧＰＣ（例
として、限定されるものではないが、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、またはＴＧＦ−β３
）との共発現も使用して遊離成長因子レベルを調節することができる。このような実施形
態において、遊離成長因子レベルのモジュレーションは、異なる比の野生型および突然変
異ＧＰＣ（例えば、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０）の同時形質移
入により達成することができる。一部の実施形態において、１つ以上の追加のレベルの遊
離成長因子モジュレーションを追加するためにＬＴＢＰ、フィブリリンまたはＧＡＲＰの
さらなる共発現を実施することができる。
【０１４４】
抗体発生（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）
一部の実施形態において、上記の抗体、抗体断片、それらのバリアントまたは誘導体を
含む本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載の抗原タンパク質に特異的
に免疫反応性を有する。
【０１４５】
本発明の抗体は、それらの標的分子により、それらを生成するために使用される抗原に
より、それらの機能（アゴニスト、アンタゴニスト、成長因子放出、ＧＰＣ安定化、活性
化および／または阻害抗体として）により、および／またはそれらが機能する細胞ニッチ
により特徴決定することができる。
【０１４６】
本明細書において使用される場合、用語「抗体断片」は、インタクト抗体の任意の部分
を指す。一部の実施形態において、抗体断片は、インタクト抗体からの抗原結合領域を含
む。抗体断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’
）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体；単鎖抗体分子；および抗体断片から形
成される多特異的抗体を挙げることができる。抗体のパパイン消化は、それぞれ単一の抗
原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と称される２つの同一抗原結合断片を産生する。名称
が容易に結晶化するその能力を反映する残部の「Ｆｃ」断片も産生される。ペプシン処理
は、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋し得るＦ（ａｂ’）２断片を生じ
させる。本発明の化合物および／または組成物は、それらの断片の１つ以上を含み得る。
本明細書における目的のため、「抗体」は、重鎖および軽鎖可変ドメインならびにＦｃ領
域を含み得る。
【０１４７】
本明細書において使用される場合、用語「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）
鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される１５０，０００ダルトンのヘテロテトラ
マー糖タンパク質を指す。それぞれの軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に
結合している一方、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖
間で変動する。それぞれの重鎖および軽鎖は、規則的に間隔の空いた鎖内ジスルフィド架
橋も有する。それぞれの重鎖は、一端部において可変ドメイン（ＶＨ）とそれに続くいく
らかの定常ドメインを有する。それぞれの軽鎖は、一端部における可変ドメイン（ＶＬ）
およびその他端部における定常ドメインを有し；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定
常ドメインとアラインしており、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインとアラインして
いる。
【０１４８】
本明細書において使用される場合、用語「可変ドメイン」は、抗体間で配列が広く異な
り、それぞれの特定の抗体のその特定の抗原についての結合および特異性において使用さ
れる規定の抗体ドメインを指す。
【０１４９】
本明細書において使用される場合、用語「Ｆｖ」は、完全抗原認識および抗原結合部位
を含む抗体断片を指す。これらの領域は、緊密な非共有会合の１つの重鎖および１つの軽
鎖可変ドメインのダイマーからなる。
【０１５０】
本明細書において使用される場合、用語「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基
づきカッパおよびラムダと称される２つの明確に異なるタイプの１つに割り当てられる任
意の脊椎動物種からの抗体の構成要素を指す。抗体は、それらの重鎖の定常ドメインのア
ミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てることができる。インタクト抗体の５つの
主要なクラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、それらのいくつ
かは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４
、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。本明細書において使用される場
合、用語「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、ＶＨおよびＶＬ抗体ドメインの融合タンパ
ク質を指し、それらのドメインは、単一ポリペプチド鎖に一緒に結合している。一部の実
施形態において、Ｆｖポリペプチドリンカーにより、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の
構造を形成することが可能となる。
【０１５１】
本明細書において使用される場合、用語「二重特異的抗体」は、２つの異なる抗原に結
合し得る抗体を指す。このような抗体は、典型的には、少なくとも２つの異なる抗体から
の領域を含む。二重特異的抗体としては、それぞれの内容が参照により全体として本明細
書に組み込まれるリースマラ，Ｇ．（Ｒｉｅｔｈｍｕｌｌｅｒ，Ｇ．）、２０１２年、キ
ャンサー・イミュニティ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ）、第１２巻、ｐ．１２〜１
８、マーヴィン，Ｊ．Ｓ．（Ｍａｒｖｉｎ，Ｊ．Ｓ．）ら著、２００５年、アクタ・ファ
ーマコロジカ・シニカ（Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ）、第
２６巻（第６号）、ｐ．６４９〜５８およびシェーファ，Ｗ．（Ｓｃｈａｅｆｅｒ，Ｗ．
）ら著、２０１１年、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、第１０８巻（第２７号）、
ｐ．１１１８７〜９２に記載のもののいずれかを挙げることができる。
【０１５２】
本明細書において使用される場合、用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有
する小分子抗体断片を指す。ダイアボディは、同一ポリペプチド鎖中で軽鎖可変ドメイン
ＶＬに連結している重鎖可変ドメインＶＨを含む。短すぎて同一鎖上の２つのドメイン間
の対合を可能としないリンカーを使用することにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメイ
ンと強制的に対合させ、２つの抗原結合部位を創成する。ダイアボディは、例えば、それ
ぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる欧州特許第４０４，０９７号
明細書；国際公開第９３／１１１６１号パンフレット；およびホリンガー（Ｈｏｌｌｉｎ
ｇｅｒ）ら（ホリンガー，Ｐ．（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｐ．）ら著、「「ダイアボディ」
：小分子二価および二重特異的抗体断片（“Ｄｉａｂｏｄｉｅｓ”：Ｓｍａｌｌ  ｂｉｖ
ａｌｅｎｔ  ａｎｄ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ）
」、米国科学アカデミー紀要（ＰＮＡＳ）、１９９３年、第９０巻、ｐ．６４４４〜８）
により詳細に記載されている。
【０１５３】
本明細書において使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に同種の細
胞（またはクローン）の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の
抗体は同一であり、および／または同一のエピトープに結合し、但し、モノクローナル抗
体の産生の間に生じ得る考えられるバリアント、例えば、一般に少量で存在するバリアン
トを除く。典型的には、異なる抗原決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体
を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、抗原
上の単一の抗原決定基に対して指向される。
【０１５４】
修飾句「モノクローナル」は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の性質を示
し、任意の特定の方法による抗体の産生を要求するものとして解釈すべきではない。本明
細書におけるモノクローナル抗体としては、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）およびそ
うした抗体の断片を含む。「キメラ」抗体において、重鎖および軽鎖の少なくとも一方の
一部分は、特定種から由来する抗体中、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属
する抗体中の対応する配列と同一もしくは相同である一方、その残りの鎖は、別の種に由
来する抗体中、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列
と同一もしくは相同である。
【０１５５】
本明細書において使用される場合、用語「ヒト化抗体」は、１つ以上の非ヒト（例えば
、ネズミ）抗体源からの最低限の部分を含み、残部が１つ以上のヒト免疫グロブリン源に
由来するキメラ抗体を指す。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリ
ン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの抗体からの超可変領域からの残基は、所
望の特異性、親和性、および／または能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラット、
ウサギまたは非ヒト霊長類の抗体（ドナー抗体）からの超可変領域からの残基により置き
換えられている。
【０１５６】
本明細書において使用される場合、用語「超可変領域」は、抗原結合を担うアミノ酸残
基を含む抗体の抗原結合ドメイン内の領域を指す。超可変領域内に存在するアミノ酸は、
相補性決定領域（ＣＤＲ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  
ｒｅｇｉｏｎ）の構造を決定する。本明細書において使用される場合、用語「ＣＤＲ」は
、標的抗原またはエピトープに相補的な構造を含む抗体の領域を指す。
【０１５７】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、抗体模倣体であり
得る。本明細書において使用される場合、用語「抗体模倣体」は、抗体の機能または効果
を模倣し、それらの分子標的に特異的に、および高親和性で結合する任意の分子を指す。
一部の実施形態において、抗体模倣体は、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（Ｆｎ３）
をタンパク質足場として取り込むように設計されるモノボディであり得る（米国特許第６
，６７３，９０１号明細書；米国特許第６，３４８，５８４号明細書）。一部の実施形態
において、抗体模倣体は、当技術分野において公知のもの、例として、限定されるもので
はないが、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）分子、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎ）、ア
フィチン（ａｆｆｉｔｉｎ）、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、アビマー（ａｖｉ
ｍｅｒ）、センチリン（Ｃｅｎｔｙｒｉｎ）、ダーピン（ＤＡＲＰＩＮ）（商標）、Ｆｙ
ｎｏｍｅｒ（フィノマー）およびクニッツ（Ｋｕｎｉｔｚ）ならびにドメインペプチドで
あり得る。他の実施形態において、抗体模倣体は、１つ以上の非ペプチド領域を含み得る
。
【０１５８】
本明細書において使用される場合、用語「抗体バリアント」は、天然抗体と比較してア
ミノ酸配列、組成または構造のいくらかの差異を含む、構造および／または機能が抗体に
似ている生体分子を指す。
【０１５９】
抗体の調製は、モノクローナルかポリクローナルかにかかわらず、当技術分野において
公知である。抗体の産生技術は、当技術分野において周知であり、例えば、ハーロウ（Ｈ
ａｒｌｏｗ）およびレーン（Ｌａｎｅ）著、「抗体、実験室マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、コールド・スプリング・ハーバ
ー・ラボラトリー・プレス（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８８年；ハーロウ（Ｈａｒｌｏｗ）およびレーン（Ｌａｎｅ）
著、「抗体の使用：実験室マニュアル（Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・
プレス（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）
、１９９９年および「治療抗体工学：医薬産業において最も強力な成長分野を推進する現
在および将来の進歩（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉ
ｎｇ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｄｒｉｖｉｎｇ  ｔ
ｈｅ  Ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ａｒｅａ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ）」、ウッドヘッド・パブリッシング（Ｗｏｏｄｈｅａ
ｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）、２０１２年に記載されている。
【０１６０】
標準的モノクローナル抗体生成
一部の実施形態において、抗体は、所望の標的抗原をコードする遺伝子を欠くノックア
ウトマウス中で生成される。このようなマウスは寛容化されず抗原を標的化するので、ヒ
トおよびマウス形態の抗原と交差反応し得るような抗原に対する抗体の生成のために、よ
り良好に適合されうる。モノクローナル抗体の産生のため、宿主マウスを組換えタンパク
質により免疫化してそのようなタンパク質に特異的に結合するリンパ球を誘発することが
できる。得られるリンパ球は回収し、不死化細胞系と融合させることができる。得られる
ハイブリドーマ細胞は、選択薬剤を有する好適な培養培地中で培養して融合細胞のみの増
殖を支持することができる。
【０１６１】
所望のハイブリドーマ細胞系は、標的ペプチドについての分泌抗体の結合特異性分析を
介して同定することができ、限定希釈手順を介してそのような細胞のクローンをサブクロ
ーニングし、標準的方法により増殖させることができる。サブクローニングされたハイブ
リドーマ細胞により産生される抗体は、標準的免疫グロブリン精製手順により培養培地か
ら単離および精製することができる。
【０１６２】
組換え抗体
本発明の組換え抗体は、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれ
る２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９１９号明細書、
および２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９６９号明細
書に開示の方法のいずれかにより生成することができる。一部の実施形態において、組換
え抗体は、本明細書に記載の方法により産生されたハイブリドーマ細胞を使用して産生す
ることができる。抗体の重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡ配列は、標準的生化学技術を使
用して決定することができる。トータルＲＮＡは、抗体産生ハイブリドーマ細胞から抽出
し、逆転写酵素（ＲＴ：ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ）ポリメラーゼ連
鎖反応（ＰＣＲ：ｐｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）によりｃＤＮＡ
に変換することができる。ＰＣＲ増幅は、得られたｃＤＮＡに対して実施して可変領域遺
伝子を増幅することができる。このような増幅は、重鎖および軽鎖配列の増幅に特異的な
プライマーの使用を含み得る。次いで、配列分析のために、得られたＰＣＲ産物をプラス
ミド中にサブクローニングすることができる。配列決定したら、発現ベクター中に抗体コ
ード配列を配置することができる。ヒト化のため、相同ネズミ配列に代えて用いるために
ヒト重鎖および軽鎖定常ドメインについてのコード配列を使用することができる。次いで
、大規模翻訳のために哺乳動物細胞中に得られた構築物を形質移入することができる。
【０１６３】
細胞毒性抗体の発生
一部の実施形態において、本発明の抗体は、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ：
ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘ
ｉｃｉｔｙ）、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎ
ｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）および／または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ：ａｎ
ｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）を誘導し得
る。ＡＤＣＣは、免疫細胞攻撃の結果として細胞が溶解される免疫機序である。このよう
な免疫細胞としては、ＣＤ５６＋細胞、ＣＤ３−ナチュラルキラー（ＮＫ：ｎａｔｕｒａ
ｌ  ｋｉｌｌｅｒ）細胞、単球および好中球を挙げることができる（内容が参照により全
体として本明細書に組み込まれるストロール，Ｗ．Ｒ．（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｗ．Ｒ．）著、
「治療抗体工学（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
）」、ウッドヘッド・パブリッシング（Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ）、フ
ィラデルフィア、ペンシルベニア、２０１２年、第８章、ｐ．１８６）。
【０１６４】
一部の場合において、本発明の抗体は、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰが抗体結合時に望まれ
るか否かに応じて所与のアイソタイプを含むように操作されることができる。このような
抗体は、例えば、アルダーソン，Ｋ．Ｌ．（Ａｌｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｌ．）ら著、ジャー
ナル・オブ・バイオメディシン・アンド・バイオテクノロジー（Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ）、２０１１年、第２０１１巻、ｐ．３７９１２３）により開示の方法
のいずれかにより操作されることができる。マウス抗体の場合において、異なるアイソタ
イプの抗体は、ＡＤＣＣの促進においてより有効である。ＩｇＧ２ａは、例えば、ＡＤＣ
Ｃの誘導においてＩｇＧ２ｂよりも有効である。マウスＩｇＧ２ｂ抗体を含む本発明の一
部の抗体は、ＩｇＧ２ａ抗体を含むように再操作されることができる。このような再操作
（リエンジニアリング）抗体は、細胞会合抗原の結合時にＡＤＣＣの誘導においてより有
効であり得る。
【０１６５】
一部の実施形態において、本発明の方法により発生された抗体の可変領域をコードする
遺伝子は、ヒトＦｃ領域をコードする哺乳動物発現ベクター中にクローニングすることが
できる。このようなＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１κからのＦｃ領域を含み得る。ＩｇＧ１κ
Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体結合および抗体依存性細胞媒介細胞毒性ＡＤＣＣを向上させるこ
とが公知のアミノ酸突然変異を含み得る。
【０１６６】
一部の場合において、抗体は、ＡＤＣＣを低減させるように操作されることができる。
ＡＤＣＣを活性化しない、または低いレベルのＡＤＣＣを伴う抗体は、一部の場合におい
て、免疫媒介クリアランス無し、または限定された免疫媒介クリアランスに起因して本発
明の抗体実施形態に望ましいことがあり、循環中のより長い半減期を可能とする。
【０１６７】
抗体断片ディスプレイライブラリースクリーニング技術
一部の実施形態において、本発明の抗体は、高スループット発見法を使用して産生およ
び／または最適化することができる。このような方法としては、それぞれの内容が参照に
より全体として本明細書に組み込まれる２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出
願第６１／７２２，９１９号明細書、および２０１２年１１月６日に出願された米国仮特
許出願第６１／７２２，９６９号明細書に開示のディスプレイ技術（例えば、ディスプレ
イライブラリースクリーニング技術）のいずれかを挙げることができる。一部の実施形態
において、合成抗体は、ディスプレイ技術（例えば、ファージディスプレイ技術）を使用
して標的抗原をスクリーニングすることにより設計、選択または最適化することができる
。ファージディスプレイライブラリーは、ウイルスコート上でユニーク抗体断片をそれぞ
れ発現する数百万から数十億のファージ粒子を含み得る。一部の場合において、それぞれ
の断片をコードするｃＤＮＡは、相補性決定領域（ＣＤＲ）の可変ループをコードするユ
ニーク配列を除き同一配列を含有し得る。ＣＤＲのＶＨ鎖は、ウイルスコートタンパク質
（例えば、ウイルスｐＩＩＩコートタンパク質のＮ末端）に結合している融合タンパク質
として発現させることができる。ＶＬ鎖は、ウイルスコート中への複合体取り込みの前に
ペリプラズム中のＶＨ鎖とのアセンブリのために別個に発現させることができる。
【０１６８】
選択のため、標的抗原は、インビトロで、陽性結合相手の沈殿のためにファージディス
プレイライブラリー粒子とインキュベートすることができる。このプロセスは、本明細書
において「ファージ濃縮」と称される。一部の場合において、ファージ濃縮は、固相ファ
ージ濃縮を含む。このような濃縮によれば、標的抗原を基体（例えば、受動吸着による）
に結合させ、ファージ粒子を含む１つ以上の溶液と接触させる。このような標的抗原につ
いての親和性を有するファージ粒子を溶液から沈殿させる。一部の場合において、ファー
ジ濃縮は、標的抗原がファージ溶液と合わせられた溶液中に存在する液相ファージ濃縮を
含む。このような方法によれば、標的抗原は、溶液からの回復および結合ファージの回収
を容易にするための検出可能な標識（例えば、ビオチン標識）を含み得る。
【０１６９】
選択後、沈殿したライブラリーメンバーのＣＤＲをコードするｃＤＮＡは、結合ファー
ジから配列決定することができる。このような配列は、組換え抗体産生のために抗体配列
中に直接取り込み、またはインビトロ親和性成熟を介してさらなる最適化のために突然変
異させ、利用することができる。
【０１７０】
一部の場合において、広く多様なパネルの抗体を生成するためにファージディスプレイ
スクリーニングを使用することができる。このような多様性は、抗体配列の多様性および
／または標的化されるエピトープの多様性により計測することができる。
【０１７１】
親和性成熟技術
本発明の親和性成熟技術は、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込
まれる２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９１９号明細
書および２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９６９号明
細書に開示のもののいずれかを含み得る。標的抗原に結合し得る抗体断片を同定した後（
例えば、上記のファージディスプレイライブラリーの使用を介して）、親和性成熟のプロ
セスを介してそれらから高親和性突然変異体を得ることができる。親和性成熟技術は、標
的抗原についての最大の親和性を有するＣＤＲをコードする配列を同定するために使用す
る。このような技術を使用して、数百万から数十億のバリアントを創成するために選択Ｃ
ＤＲ配列（例えば、本明細書に記載の方法により単離または生成されたもの）を全体とし
てランダムに、または規定の残基において突然変異させることができる。このようなバリ
アントは、標的抗原に結合するそれらの能力について親和性スクリーニング（例えば、デ
ィスプレイライブラリースクリーニング）の繰り返しラウンドに供することができる。選
択、突然変異および発現のこのような繰り返しラウンドは、標的抗原についての最大の親
和性を有する抗体断片配列を同定するために実施することができる。このような配列は、
組換え抗体産生のために抗体配列中に直接取り込むことができる。
【０１７２】
抗体特徴決定
抗体を含む本発明の化合物および／または組成物は、食作用、飲作用による除去、また
は細胞外マトリックスおよび／もしくは細胞マトリックス中のアセンブリの阻害を介して
１つ以上のＧＰＣの局所濃度を減少させるように作用し得る。本発明の化合物および／ま
たは組成物の導入は、所与の区域中に存在する成長因子の５％〜１００％の除去をもたら
し得る。例えば、成長因子除去のパーセントは、約５％〜約１０％、約５％〜約１５％、
〜約５％〜約２０％、約５％〜約２５％、約１０％〜約３０％、約１０％〜約４０％、約
１０％〜約５０％、約１０％〜約６０％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約８０％、約
４０％〜約９０％または約４０％〜約１００％であり得る。
【０１７３】
１つ以上の成長因子の放出、阻害または除去の計測は、標準または正常な生理学的条件
下の成長因子の天然放出もしくは活性に対してインビトロまたはインビボで行うことがで
きる。計測は、抗体の存在または不存在下に対して行うこともできる。成長因子レベル、
放出、阻害または除去を計測するこのような方法としては、組織および／または体液（例
えば、血清または血液）中の標準的計測、例えば、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸
着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、活性アッセイ、レポータアッセイ、ルシフェラーゼアッセイ
、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アレイ、遺伝子アレイ、リアルタイム逆転写酵素（Ｒ
Ｔ）ＰＣＲなどが挙げられる。
【０１７４】
本発明の抗体は、ＧＰＣまたはそれらの関連構造上の、またはそれに沿う多数のエピト
ープに結合し、またはそれと相互作用して成長因子シグナリングを向上させ、または阻害
し得る。このようなエピトープとしては、ＧＰＣ機能を変更し、向上させ、または阻害す
るための任意および全ての考えられる部位を挙げることができる。一部の実施形態におい
て、このようなエピトープとしては、限定されるものではないが、成長因子、調節エレメ
ント、ＧＰＣ、ＧＰＣモジュレート因子、成長因子受容細胞もしくは受容体、ＬＡＰもし
くはＬＡＰ様ドメイン、ファスナー領域、フーリン開裂部位、アーム領域、フィンガー領
域、ＬＴＢＰ結合ドメイン、フィブリリン結合ドメイン、糖タンパク質Ａ反復優位型（Ｇ
ＡＲＰ）結合ドメイン、潜在型ラッソ、α１領域、ＲＧＤ配列、ボウタイ領域、細胞外マ
トリックスおよび／もしくは細胞マトリックス構成要素上または内のエピトープならびに
／または上記のいずれかの領域もしくは部分を合わせることにより形成されるエピトープ
が挙げられる。
【０１７５】
本発明の化合物および／または組成物は、抗体認識の１つ以上のエピトープおよび／ま
たは領域への結合（可逆的または不可逆的）を介してそれらの効力を付与する。理論によ
り拘束されるものではないが、抗体についてのこのような結合部位は、タンパク質、タン
パク質ドメインまたは領域により形成されることが最も多い。しかしながら、結合部位は
、生体分子、例えば、糖、脂質、核酸分子または結合エピトープの任意の他の形態を含み
得る。
【０１７６】
一部の実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗体は、ＴＧＦ−βプロドメインに
結合し得、例えば、ＲＧＤ部位を遮断することにより、または構造を安定化することによ
り、インテグリン媒介放出を安定化および防止する。このような抗体は、プロドメイン中
の突然変異が過剰なＴＧＦ−β活性化を引き起こすカムラチ・エンゲルマン病の治療にお
いて有用である。このような抗体は、フィブリリンまたはＬＴＢＰ中の突然変異がＴＧＦ
−βおよびＢＭＰ活性化を変更するマルファン症候群においても有用である。
【０１７７】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、ＬＴＢＰと会合しているＧＰＣからのＴＧ
Ｆ−βの放出を選択的に阻害するが、ＧＡＲＰと会合しているものからの放出は阻害しな
い。このような抗体は、抗線維症治療薬として機能するが、最小の炎症効果を示す。一部
の実施形態において、ＧＰＣ−ＬＴＢＰ複合体結合抗体は、ＧＰＣ−ＧＡＲＰ複合体に結
合しない。一部の実施形態において、このような抗体は、特定のＬＴＢＰまたはＧＰＣに
特異的であり得ないが、ＧＡＲＰ結合部位に近接するまたはそれと重複するＧＰＣに結合
し得、その結果、結合はＧＡＲＰにより妨げられるが、ＬＴＢＰによっては妨げられない
。一部の実施形態において、ＧＡＲＰおよびプロＴＧＦ−β間の１つ以上のコンビナトリ
アルエピトープに選択的に結合する抗体が提供される。本発明の一部の実施形態において
、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦ−β複合体からのＴＧＦ−βの放出を誘導する化合物および／ま
たは組成物が提供される。このような抗体は、ＧＡＲＰプロドメイン二元複合体に結合す
るが、ＧＡＲＰ−プロＴＧＦ−β三元複合体にも、ＧＡＲＰ単独にも、プロドメイン単独
にも結合しないそれらの能力について選択することができる。
【０１７８】
あるいは、またはさらに、本発明の抗体は、ＧＰＣの内在化を誘導するリガンド模倣体
として機能し得る。このような抗体は、非慣習的なペイロード担体として作用し得、結合
またはコンジュゲート薬物ペイロードを規定のＧＰＣおよび／またはＧＰＣ関連部位に送
達および／または運搬するように作用する。
【０１７９】
本発明の抗体により誘発される変化は、細胞の新形態変化をもたらし得る。本明細書に
おいて使用される場合、用語「新形態変化」は、新たなまたは異なる変化または変更を指
す。例えば、抗体により標的化される特定のＧＰＣと典型的に会合しない１つ以上の成長
因子の放出または安定化を誘発する抗体は、新形態抗体であり、放出は、新形態変化であ
る。
【０１８０】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、タンパク質分解イ
ベントを変更および／または制御するように作用し得る。一部の実施形態において、この
ようなタンパク質分解イベントは、細胞内または細胞外イベントであり得る。一部の実施
形態において、このようなタンパク質分解イベントとしては、フーリン開裂および／また
は他のタンパク質分解プロセシングイベントの変更を挙げることができる。一部の実施形
態において、このようなタンパク質分解イベントは、成長因子シグナリング分子のタンパ
ク質分解プロセシングまたは成長因子シグナリング分子により開始される下流カスケード
を含み得る。
【０１８１】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、成長因子（リガン
ド）またはそれらの受容体のダイマー化またはマルチマー化を誘導または阻害し得る。一
部の実施形態において、このような作用は、モノマー、ダイマーもしくはマルチマー形態
の安定化を介するものまたはダイマーもしくはマルチマー複合体の破壊を介するものであ
り得る。
【０１８２】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、受容体群またはＧ
ＰＣまたは他のシグナリング分子ペアのいずれかを含むモノマー単位のホモおよび／また
はヘテロダイマーに対して作用し得る。
【０１８３】
本発明の抗体は、標的抗原の結合前に細胞中に内在化させることができる。内在化時、
このような抗体は、１つ以上のシグナリングイベントを増加もしくは減少させ、１つ以上
のＧＰＣを放出もしくは安定化し、成長因子放出を遮断もしくは容易にし、および／また
は１つ以上の細胞ニッチを変更するように作用し得る。
【０１８４】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上のＧＰＣ
中の１つ以上の成長因子の滞留時間も変更し、ならびに／または細胞外マトリックスおよ
び／もしくは細胞マトリックス中の１つ以上のＧＰＣの滞留時間も変更し得る。このよう
な変更は、不可逆的局在化および／または一過的局在化をもたらし得る。
【０１８５】
本発明の抗体は、当業者に公知の任意の方法を使用して設計、製造および／または選択
することができる。一部の実施形態において、本発明の抗体および／または抗体産生細胞
は、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる２０１２年１１月６
日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９１９号明細書および２０１２年１１月
６日に出願された米国仮特許出願第６１／７２２，９６９号明細書に列記の方法のいずれ
かにより産生する。
【０１８６】
ノックアウトマウス中の抗体生成
一部の実施形態において、本発明の抗体は、１つ以上の所望の抗原をコードする遺伝子
を欠くノックアウトマウス中で生成することができる。このようなマウスは、そのような
抗原に対して寛容化されず、したがって、ヒトおよびマウス形態の抗原と交差反応する抗
原に対する抗体を生成し得る。モノクローナル抗体の産生のため、宿主マウスを標的ペプ
チドにより免疫化してそのペプチドに特異的に結合するリンパ球を誘発する。リンパ球は
回収し、不死化細胞系と融合させる。得られるハイブリドーマ細胞は、選択薬剤を有する
好適な培養培地中で培養して融合細胞のみの増殖を支持する。
【０１８７】
一部の実施形態において、１つ以上の成長因子遺伝子のノックアウトは、致死的であり
、および／または生存不能な胎児もしくは新生児を産生し得る。一部の実施形態において
、新生児動物は、わずか数週間（例えば、１、２、３、４または５週間）生存し得るにす
ぎない。このような実施形態において、免疫化は、新生児動物中で生後直後に実施するこ
とができる。オイダ（Ｏｉｄａ）ら（オイダ，Ｔ．（Ｏｉｄａ，Ｔ．）ら著、「ＴＧＦ−
βは、ＦｏｘＰ３誘導から独立してネズミＣＤ４Ｔ細胞上の表面ＬＡＰ発現を誘導する（
ＴＧＦ−β  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｓｕｒｆａｃｅ  ＬＡＰ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  
Ｍｕｒｉｎｅ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ＦｏｘＰ３  
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）」、プロス・ワン（ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ）、２０１０年、第５巻（第
１１号）、ｐ．ｅ１５５２３）は、生存を延長（典型的には、それらのマウスの生後３〜
４週間）させるためのガレクチン−１注射の使用を介する新生児ＴＧＦ−βノックアウト
マウスの免疫化を実証している。ネズミＴＧＦ−βを発現する細胞により、生後８日目か
ら開始して１０日間１日おきにマウスを免疫化し、生後２２日目に脾細胞を回収した。回
収された脾細胞は骨髄腫細胞と融合させ、得られたハイブリドーマ細胞のうち、多くが抗
ＬＡＰ抗体を良好に産生することが見出された。本発明の一部の実施形態において、これ
らの方法は、抗体を生成するために使用することができる。一部の実施形態において、こ
のような方法は、ヒト抗原の使用を含み得る。一部の実施形態において、免疫化に使用さ
れる細胞は、ＴＧＦ−βおよびＧＡＲＰを発現し得る。このような実施形態において、Ｇ
ＡＲＰは、天然膜貫通ドメインと発現させてＧＡＲＰ−ＴＧＦ−β複合体を免疫化から使
用される形質移入細胞の細胞表面にテザリングしたままにすることを可能とすることがで
きる。一部の抗原は、ＬＴＢＰ（例えば、ＬＴＢＰ１Ｓ）にテザリングしているプロＴＧ
Ｆ−β１を含み得る。一部の場合において、抗原として他のＴＧＦ−βファミリーメンバ
ーに関連する組換えタンパク質を使用することができる。
【０１８８】
本発明の方法は、１つ以上の追加および／または改変ステップと組み合わせた、オイダ
（Ｏｉｄａ）らにより記載されている免疫化法の１つ以上のステップも含み得る。改変ス
テップとしては、限定されるものではないが、融合のための代替細胞型の使用、融合を実
施する場合の変動数の脾細胞のプール、注射レジメンの変更、脾細胞回収の期日の変更、
免疫原の変更および／または免疫原用量の変更を挙げることができる。追加のステップと
しては、免疫化されたマウスからの他の組織（例えば、リンパ節）の回収を挙げることが
できる。
【０１８９】
活性化および阻害抗体
本発明の抗体は、活性化および阻害抗体を含み得る。本明細書において使用される場合
、用語「活性化抗体」は、成長因子活性を促進する抗体を指す。活性化抗体は、成長因子
活性を促進する任意のエピトープを標的化する抗体を含む。このようなエピトープは、プ
ロドメイン（例えば、ＬＡＰおよびＬＡＰ様ドメイン）、成長因子、または抗体が結合し
た場合に成長因子活性をもたらす他のエピトープ上に存在し得る。本発明の活性化抗体と
しては、限定されるものではないが、ＴＧＦ−β活性化抗体、ＧＤＦ−８活性化抗体、Ｇ
ＤＦ−１１活性化抗体およびＢＭＰ活性化抗体を挙げることができる。
【０１９０】
本明細書において使用される場合、用語「阻害抗体」は、成長因子活性を低減させる抗
体を指す。阻害抗体は、そのような抗体と会合した場合に成長因子活性を低減させる任意
のエピトープを標的化する抗体を含む。このようなエピトープは、プロドメイン（例えば
、ＬＡＰおよびＬＡＰ様ドメイン）、成長因子、または抗体が結合した場合に成長因子活
性の低減をもたらす他のエピトープ上に存在し得る。本発明の阻害抗体としては、限定さ
れるものではないが、ＴＧＦ−β阻害抗体、ＧＤＦ−８阻害抗体、ＧＤＦ−１１阻害抗体
およびＢＭＰ阻害抗体を挙げることができる。
【０１９１】
本発明の実施形態は、溶液中、細胞培養物中、および対象中の少なくとも一つにおいて
、活性化抗体および阻害抗体の少なくとも一方を使用して成長因子シグナリングを改変す
る方法を含む。
【０１９２】
抗ＬＡＰおよび抗ＬＡＰ様ドメイン抗体
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、プロドメイン、例
として、ＬＡＰおよび／またはＬＡＰ様ドメインを標的化する１つ以上の抗体を含み得る
。このような抗体は、そのような抗体により結合される規定のＬＡＰまたはＬＡＰ様ドメ
インに応じて、および／または標的化される規定のエピトープに応じて成長因子シグナリ
ングを低減または上昇させ得る。本発明の抗ＬＡＰおよび／または抗ＬＡＰ様タンパク質
抗体は、ＧＰＣからの遊離成長因子の解離を促進し得る。このような解離は、ＧＰＣへの
抗体結合時に誘導することができ、または解離は、遊離成長因子とＬＡＰもしくはＬＡＰ
様タンパク質との再会合を防止することにより促進することができる。一部の場合におい
て、抗ＴＧＦ−βＬＡＰ抗体が提供される。抗ＴＧＦ−βＬＡＰ抗体は、ＴＧＦ−β活性
化抗体を含み得る。このような抗体は、一部の場合において、潜在型ＧＰＣからＴＧＦ−
β遊離成長因子を放出することおよび／または遊離ＴＧＦ−β成長因子とＬＡＰとの再会
合を防止することによりＴＧＦ−β活性を増加させ得る。一部の場合において、抗ＴＧＦ
−βＬＡＰ抗体は、プロＴＧＦ−βがＬＴＢＰと会合している場合により好ましくＴＧＦ
−β活性を増加させ得る。一部の場合において、抗ＴＧＦ−βＬＡＰは、プロＴＧＦ−β
がＧＡＲＰと会合している場合により好ましくＴＧＦ−β活性を増加させ得る。一部の場
合において、抗ＴＧＦ−βＬＡＰ抗体は、他のＴＧＦ−β活性化因子（例えば、αｖβ６
および／またはαｖβ８）と相乗的に機能してＴＧＦ−β活性を増加させ得る。
【０１９３】
バリエーション
本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の核酸、複数の核酸、核酸の断片に
より独立してコードされ得る全ポリペプチド、複数のポリペプチドまたはポリペプチドの
断片または上記のいずれかのバリアントとして存在し得る。本明細書において使用される
場合、用語「ポリペプチド」は、最も多くの場合ペプチド結合によって繋ぎ合わされたア
ミノ酸残基（天然または非天然）のポリマーを指す。この用語は、本明細書において使用
される場合、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、およびペプ
チドを指す。一部の場合において、コードされるポリペプチドは約５０アミノ酸よりも小
さく、その場合、そのポリペプチドはペプチドと称される。ポリペプチドがペプチドであ
る場合、それは、少なくとも約２、３、４、または少なくとも５アミノ酸残基長である。
したがって、ポリペプチドとしては、上記の遺伝子産物、天然存在ポリペプチド、合成ポ
リペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、断片および他の均等物、バリアント、お
よびアナログが挙げられる。ポリペプチドは、単一分子であり得、または多分子複合体、
例えば、ダイマー、トリマーもしくはテトラマーであり得る。これらは、単一鎖または複
数鎖ポリペプチドも含み得、会合または結合していてよい。ポリペプチドという用語は、
１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然存在アミノ酸の人工化学アナログであるアミノ酸
ポリマーにも当てはまり得る。
【０１９４】
本明細書において使用される場合、用語「ポリペプチドバリアント」は、アミノ酸配列
が天然または参照配列と異なる分子を指す。アミノ酸配列バリアントは、天然または参照
配列と比較してアミノ酸配列内のある位置における置換、欠失、および／または挿入を有
し得る。通常、バリアントは、天然または参照配列に対して少なくとも約５０％の同一性
（相同性）を有し、好ましくは、それらは、天然または参照配列に対して少なくとも約８
０％、より好ましくは、少なくとも約９０％同一（相同）である。
【０１９５】
一部の実施形態において、「バリアント模倣体」が提供される。本明細書において使用
される場合、用語「バリアント模倣体」は、活性化配列を模倣する１つ以上のアミノ酸を
含有するバリアントを指す。例えば、グルタミン酸は、ホスホ−トレオニンおよび／また
はホスホ−セリンについての模倣体として機能し得る。あるいは、バリアント模倣体は、
失活または模倣体を含有する産物の不活化をもたらし得、例えば、フェニルアラニンは、
チロシンについての不活化置換として作用し得；またはアラニンは、セリンについての不
活化置換として作用し得る。本発明の化合物および／または組成物のアミノ酸配列は、天
然存在アミノ酸を含み得、それ自体、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、またはそれ
らの断片であるとみなすことができる。あるいは、化合物および／または組成物は、天然
および非天然存在アミノ酸の両方を含み得る。
【０１９６】
本明細書において使用される場合、用語「アミノ酸配列バリアント」は、天然または出
発配列と比較してアミノ酸配列のいくらかの差異を有する分子を指す。アミノ酸配列バリ
アントは、アミノ酸配列内のある位置における置換、欠失、および／または挿入を有し得
る。本明細書において使用される場合、用語「天然」または「出発」は、配列を指す場合
、比較することができる元の分子を指す相対的な用語である。天然または出発配列は、野
生型配列と混合すべきでない。天然配列または分子は、野生型（天然に見出されるその配
列）を表し得るが、野生型配列と同一である必要はない。
【０１９７】
通常、バリアントは、天然配列に対して少なくとも約７０％の相同性を有し、好ましく
は、それらは、天然配列に対して少なくとも約８０％、より好ましくは、少なくとも約９
０％相同である。
【０１９８】
本明細書において使用される場合、用語「相同性」は、それがアミノ酸配列に適用され
る場合、配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入して最大相同性パーセントを達
成した後の第２の配列のアミノ酸配列中の残基と同一である候補アミノ酸配列中の残基の
割合として定義される。アラインメントのための方法およびコンピュータプログラムは、
当技術分野において周知である。相同性は、同一性パーセントの計算に依存するが、計算
において導入されるギャップおよびペナルティに起因して値が異なり得ることを理解され
たい。
【０１９９】
本明細書において使用される場合、用語「ホモログ」は、それがアミノ酸配列に適用さ
れる場合、第２の種の第２の配列に対して実質的な同一性を有する他の種の対応する配列
を意味する。
【０２００】
本明細書において使用される場合、用語「アナログ」は、親ポリペプチドの特性を依然
として維持する１つ以上のアミノ酸変更、例えば、アミノ酸残基の置換、付加または欠失
だけ異なるポリペプチドバリアントを含むことを意味する。
【０２０１】
本明細書において使用される場合、用語「誘導体」は、用語「バリアント」と同義的に
使用され、参照分子または出発分子に対して任意の手法で改変され、または変化した分子
を指す。
【０２０２】
本発明は、バリアントおよび誘導体を含むアミノ酸ベースであるいくつかのタイプの化
合物および／または組成物を企図する。これらは、置換、挿入、欠失および共有結合バリ
アントおよび誘導体を含む。したがって、本発明の範囲内に、置換、挿入、付加、欠失お
よび／または共有結合改変を含む化合物および／または組成物が含まれる。例えば、配列
タグまたはアミノ酸、例えば、１つ以上のリジンを本発明のペプチド配列に付加すること
ができる（例えば、Ｎ末端またはＣ末端の終端において）。配列タグは、ペプチド精製ま
たは局在化に使用することができる。ペプチド溶解度を増加させ、またはビオチン化を可
能とするためにリジンを使用することができる。あるいは、ペプチドまたはタンパク質の
アミノ酸配列のカルボキシおよびアミノ末端領域において局在するアミノ酸残基は、場合
により、欠失させてトランケート配列を提供することができる。あるいは、あるアミノ酸
（例えば、Ｃ末端またはＮ末端残基）は、例えば、可溶性または固体担体に結合している
より大きい配列の一部としての配列の発現としての配列の使用に応じて欠失させることが
できる。
【０２０３】
「置換バリアント」は、タンパク質を指す場合、天然または出発配列中の少なくとも１
つのアミノ酸残基が除去され、同一位置におけるその場所に異なるアミノ酸が挿入された
ものである。置換は、分子中の１つのみのアミノ酸が置換された単置換であり得、または
それらは、同一分子中で２つ以上のアミノ酸が置換された多置換であり得る。
【０２０４】
本明細書において使用される場合、用語「保存的アミノ酸置換」は、通常、配列中に存
在するアミノ酸を、類似したサイズ、電荷または極性を有する異なるアミノ酸によって置
換することを指す。保存的置換の例としては、非極性（疎水性）残基、例えば、イソロイ
シン、バリンおよびロイシンの、別の非極性残基についての置換が挙げられる。同様に、
保存的置換の例としては、ある極性（親水性）残基の、別のものについての置換、例えば
、アルギニンおよびリジン間、グルタミンおよびアスパラギン間、ならびにグリシンおよ
びセリン間の置換が挙げられる。さらに、塩基性残基、例えば、リジン、アルギニンもし
くはヒスチジンの、別のものについての置換、またはある酸性残基、例えば、アスパラギ
ン酸またはグルタミン酸の、別の酸性残基についての置換が、保存的置換の追加の例であ
る。非保存的置換の例としては、非極性（疎水性）アミノ酸残基、例えば、イソロイシン
、バリン、ロイシン、アラニン、メチオニンの、極性（親水性）残基、例えば、システイ
ン、グルタミン、グルタミン酸もしくはリジンについての置換、および／または、極性残
基の非極性残基についての置換が挙げられる。
【０２０５】
本明細書において使用される場合、用語「挿入バリアント」は、タンパク質を指す場合
、天然または出発配列中の特定の位置におけるアミノ酸に直接隣接して１つ以上のアミノ
酸が挿入されたものである。本明細書において使用される場合、用語「直接隣接」は、出
発または参照アミノ酸のα−カルボキシまたはαアミノ官能基のいずれかに連結している
隣接アミノ酸を指す。
【０２０６】
本明細書において使用される場合、用語「欠失バリアント」は、タンパク質を指す場合
、天然または出発アミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸が除去されたものである。通常、
欠失バリアントは、分子の特定の領域中の１つ以上のアミノ酸が欠失している。
【０２０７】
本明細書において使用される場合、用語「誘導体」は、本明細書において称される場合
、有機タンパク質性または非タンパク質性誘導化剤による１つ以上の改変、および翻訳後
修飾を含む天然または出発タンパク質のバリアントを含む。共有結合改変は、慣習的には
、タンパク質の標的化アミノ酸残基を、選択側鎖もしくは末端残基と反応し得る有機誘導
化剤と反応させることにより、または選択組換え宿主細胞中で機能する翻訳後修飾の機序
を利用することにより導入する。得られる共有結合誘導体は、生物学的活性に重要な残基
の同定を目的とするプログラムにおいて、免疫アッセイに、または組換え糖タンパク質の
免疫親和性精製のための抗タンパク質抗体の調製に有用である。このような改変は、当業
者の技能の範囲内であり、過度の実験を行うことなく実施される。
【０２０８】
ある翻訳後修飾は、発現されるポリペプチドに対する組換え宿主細胞の作用の結果であ
る。グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、高頻度で翻訳後修飾により脱アミド化さ
れて対応するグルタミルおよびアスパルチル残基になる。あるいは、これらの残基は、穏
やかな酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれかの形態が、本発明により
使用されるタンパク質中に存在し得る。
【０２０９】
他の翻訳後修飾としては、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリルまたはトレ
オニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、およびヒスチジン側鎖の
α−アミノ基のメチル化が挙げられる（Ｔ．Ｅ．クレイトン（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏ
ｎ）著、「タンパク質：構造および分子特性（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  
ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）」、Ｗ．Ｈ．フリーマン社（Ｗ．
Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．）、サンフランシスコ、ｐ．７９〜８６（１９８３年））。
【０２１０】
共有結合誘導体としては、具体的には、本発明のタンパク質が非タンパク質性ポリマー
に共有結合している融合分子が挙げられる。非タンパク質性ポリマーは、通常、親水性合
成ポリマー、すなわち、他の場合に天然に見出されないポリマーである。しかしながら、
天然に存在し、組換え体またはインビトロ法により産生されるポリマーは、天然から単離
されたポリマーであるため、有用である。親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニ
ルアルコールおよびポリビニルピロリドンは、本発明の範囲内である。特に、ポリビニル
アルキレンエーテル、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールが有
用である。タンパク質は、種々の非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコ
ール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンに、米国特許第４，６４０
，８３５号明細書；米国特許第４，４９６，６８９号明細書；米国特許第４，３０１，１
４４号明細書；米国特許第４，６７０，４１７号明細書；米国特許第４，７９１，１９２
号明細書または米国特許第４，１７９，３３７号明細書に記載の様式で結合させることが
できる。
【０２１１】
本明細書において使用される場合、用語「特徴部」は、タンパク質を指す場合、分子の
区別されるアミノ酸配列ベース構成要素として定義される。本発明のタンパク質の特徴部
としては、表面発現物、局所的立体構造形状、フォールド、ループ、半ループ、ドメイン
、半ドメイン、部位、末端またはそれらの任意の組合せが挙げられる。
【０２１２】
本明細書において使用される場合、用語「表面発現物」は、タンパク質を指す場合、最
外表面上に出現するタンパク質のポリペプチドベース構成要素を指す。
本明細書において使用される場合、用語「局所的立体構造形状」は、タンパク質を指す
場合、タンパク質の限定空間内に局在するタンパク質のポリペプチドベース構造発現物を
指す。
【０２１３】
本明細書において使用される場合、用語「フォールド」は、タンパク質を指す場合、エ
ネルギー最小化時に得られるアミノ酸配列の立体構造を指す。フォールドは、フォールデ
ィングプロセスの二次または三次レベルにおいて生じ得る。二次レベルフォールドの例と
しては、βシートおよびαヘリックスが挙げられる。三次フォールドの例としては、エネ
ルギー力の凝集または分離に起因して形成されるドメインおよび領域が挙げられる。この
ように形成される領域としては、疎水性および親水性ポケットなどが挙げられる。
【０２１４】
本明細書において使用される場合、用語「ターン」は、それがタンパク質立体構造に関
する場合、ペプチドまたはポリペプチドの骨格の方向を変更し、１、２、３、またはそれ
より多いアミノ酸残基を含み得る屈曲部を指す。
【０２１５】
本明細書において使用される場合、用語「ループ」は、タンパク質を指す場合、ペプチ
ドまたはポリペプチドの骨格の方向を反転させ、４つ以上のアミノ酸残基を含むペプチド
またはポリペプチドの構造的特徴部を指す。オリバ（Ｏｌｉｖａ）らは、少なくとも５つ
のクラスのタンパク質ループを同定している（オリバ，Ｂ．（Ｏｌｉｖａ，Ｂ．）ら著、
「タンパク質ループの構造の自動分類（Ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｏｏｐｓ）
」、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ）、１９９
７年、第２６６巻（第４号）、ｐ．８１４〜３０）。
【０２１６】
本明細書において使用される場合、用語「半ループ」は、タンパク質を指す場合、それ
が由来するループの少なくとも半数のアミノ酸残基を有する同定ループの部分を指す。ル
ープは、偶数のアミノ酸残基を常に含有し得ないことを理解されたい。したがって、ルー
プが奇数のアミノ酸を含有し、または含むと同定された場合において、奇数ループの半ル
ープは、ループの整数部分または次の整数部分（ループのアミノ酸の数／２＋／−０．５
個のアミノ酸）を含む。例えば、７アミノ酸ループと同定されたループは、３つのアミノ
酸または４つのアミノ酸（７／２＝３．５＋／−０．５で３または４になる）の半ループ
を産生し得る。
【０２１７】
本明細書において使用される場合、用語「ドメイン」は、タンパク質を指す場合、１つ
以上の同定可能な構造または機能特徴または特性（例えば、結合能、タンパク質−タンパ
ク質の相互作用についての部位として機能する）を有するポリペプチドのモチーフを指す
。
【０２１８】
本明細書において使用される場合、用語「半ドメイン」は、タンパク質を指す場合、そ
れが由来するドメインの少なくとも半数のアミノ酸残基を有する同定ドメインの部分を指
す。ドメインが偶数のアミノ酸残基を常に含有し得ないことを理解されたい。したがって
、ドメインが奇数のアミノ酸を含有し、または奇数のアミノ酸を含むと同定された場合に
おいて、奇数ドメインの半ドメインは、ドメインの整数部分または次の整数部分（ドメイ
ンのアミノ酸の数／２＋／−０．５個のアミノ酸）を含む。例えば、７アミノ酸ドメイン
と同定されたドメインは、３つのアミノ酸または４つのアミノ酸（７／２＝３．５＋／−
０．５で３または４になる）の半ドメインを産生し得る。サブドメインがドメインまたは
半ドメイン内で同定され得、これらのサブドメインは、それらが由来したドメインまたは
半ドメインで同定された構造または機能特性の全て未満の構造または機能特性を有するこ
とも理解されたい。本明細書のドメインタイプのいずれかを含むアミノ酸は、ポリペプチ
ドの骨格に沿って隣接している必要はない（すなわち、非隣接アミノ酸が構造的にフォー
ルドしてドメイン、半ドメイン、またはサブドメインを産生し得る）ことも理解されたい
。
【０２１９】
本明細書において使用される場合、用語「部位」は、それがアミノ酸ベースの実施形態
に関する場合、「アミノ酸残基」および「アミノ酸側鎖」と同義に使用される。部位は、
本発明のポリペプチドベース分子内で改変、操作、変更、誘導体化、または変動され得る
ペプチドまたはポリペプチド内の位置を表す。
【０２２０】
本明細書で使用される場合、用語「末端（ｔｅｒｍｉｎｉ）」または「末端（ｔｅｒｍ
ｉｎｕｓ）」、タンパク質を指す場合、ペプチドまたはポリペプチドの端部を指す。この
ような端部は、ペプチドまたはポリペプチドの最初のまたは最終部位のみに限定されるの
ではなく、末端領域中の付加アミノ酸も含み得る。本発明のポリペプチドベース分子は、
Ｎ末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）を有するアミノ酸により終結する）およびＣ末端（遊離
カルボキシル基（ＣＯＯＨ）を有するアミノ酸により終結する）の両方を有すると特徴決
定することができる。本発明のタンパク質は、一部の場合において、ジスルフィド結合ま
たは非共有結合力（マルチマー、オリゴマー）により一緒になっている複数のポリペプチ
ド鎖から構成される。これらの種類のタンパク質は、複数のＮ末端およびＣ末端を有する
。あるいは、ポリペプチドの末端は、それらが場合により、非ポリペプチドベース部分、
例えば、有機コンジュゲートから開始し、またはそれで終了するように改変することがで
きる。
【０２２１】
これらの特徴部のいずれかが本発明の分子の構成要素であると同定または定義されると
、これらの特徴部のいくつかの操作および／または改変のいずれも、移動、交換、反転、
欠失、ランダム化または複製により実施することができる。さらに、特徴部の操作が本発
明の分子への改変と同一の結果をもたらし得ることを理解されたい。例えば、ドメインの
欠失を含む操作は、核酸に全長分子未満をコードさせる改変と同じような分子の長さの変
更をもたらす。
【０２２２】
改変および操作は、当技術分野において公知の方法、例えば、部位特異的変異誘発によ
り達成することができる。次いで、得られる改変分子は、インビトロまたはインビボアッ
セイ、例えば、本明細書に記載のもの、または当技術分野において公知の任意の他の好適
なスクリーニングアッセイを使用して活性について試験することができる。
【０２２３】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、同位体である１つ
以上の原子を含み得る。本明細書において使用される場合、用語「同位体」は、１つ以上
の追加の中性子を有する化学元素を指す。一部の実施形態において、本発明の化合物は、
重水素化することができる。本明細書において使用される場合、用語「重水素化する」は
、物質中の１つ以上の水素原子を重水素同位体により置き換えるプロセスを指す。重水素
同位体は、水素の同位体である。水素の核は１つの陽子を含有する一方、重水素の核は陽
子および中性子の両方を含有する。本発明の化合物および／または組成物は、重水素化し
て１つ以上の物理的特性、例えば、安定性を変化させ、または診断および／もしくは実験
用途における化合物および／もしくは組成物の使用を可能とすることができる。
【０２２４】
コンジュゲートおよび組合せ
本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の同種または異種分子と複合体化さ
せ、コンジュゲートさせ、または組み合わせることができることが本発明により企図され
る。本明細書において使用される場合、用語「同種分子」は、出発分子に対して構造また
は機能の少なくとも１つが類似する分子を指す一方、「異種分子」は、出発分子に対して
構造または機能の少なくとも１つが異なるものである。したがって、構造的ホモログは、
実質的に構造的に類似し得る分子である。一部の実施形態において、このようなホモログ
は同一であり得る。機能的ホモログは、実質的に機能的に類似し得る分子である。一部の
実施形態において、このようなホモログは同一であり得る。
【０２２５】
本発明の化合物および／または組成物は、コンジュゲートを含み得る。本発明のこのよ
うなコンジュゲートとしては、天然存在物質またはリガンド、例えば、タンパク質（例え
ば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ：ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ）、低密度
リポタンパク質（ＬＤＬ：ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）、高密度
リポタンパク質（ＨＤＬ：ｈｉｇｈ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｏｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）、また
はグロブリン）；炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌ
リン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸）；または脂質を挙げることができる。コ
ンジュゲートは、組換えまたは合成分子、例えば、合成ポリマー、例えば、合成ポリアミ
ノ酸、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）でもあり得る。ポリアミノ酸の例とし
ては、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレ
ン−無水マレイン酸コポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコライド）コポリマー
、ジビニルエーテル−無水マレイン酸コポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタ
クリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニル
アルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクルリル（ｅｔｈｙｌａｃｒ
ｙｌｌｉｃ）酸）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマー、またはポリホスファジン
を挙げることができる。ポリアミンの例としては、ポリエチレンイミン、ポリリジン（Ｐ
ＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、シュードペプチド−ポリアミン、ペプ
チド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カ
チオン脂質、カチオンポルフィリン、ポリアミンの第４級塩、またはαヘリカルペプチド
が挙げられる。
【０２２６】
一部の実施形態において、コンジュゲートは、標的化基も含み得る。本明細書において
使用される場合、用語「標的化基」は、所望の領域、組織、細胞および／またはタンパク
質への薬剤の局在化を容易にする薬剤に付着している官能基または部分を指す。このよう
な標的化基としては、限定されるものではないが、細胞または組織標的化剤または基（例
えば、レクチン、糖タンパク質、脂質、タンパク質、規定の細胞型、例えば、腎細胞また
は他の細胞型に結合する抗体）を挙げることができる。一部の実施形態において、標的化
基は、チロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントプロ
テインＡ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチル−ガラク
トサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン、多価マンノース、多価フコース、グリコシル化
ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタメ
ート、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、ホレート、ビ
タミンＢ１２、ビオチン、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチド模倣体またはアプタマーを含
み得る。
【０２２７】
一部の実施形態において、標的化基は、タンパク質、例えば、糖タンパク質、またはペ
プチド、例えば、コリガンド（ｃｏ−ｌｉｇａｎｄ）についての特異的親和性を有する分
子、または抗体、例えば、規定の細胞型、癌細胞、内皮細胞、もしくは骨細胞に結合する
抗体であり得る。標的化基は、ホルモンおよび／またはホルモン受容体も含み得る。
【０２２８】
一部の実施形態において、標的化基は、規定の受容体を標的化し得る任意のリガンドで
あり得る。例としては、限定されるものではないが、ホレート、ＧａｌＮＡｃ、ガラクト
ース、マンノース、マンノース−６−リン酸、アパタマー（ａｐａｔａｍｅｒ）、インテ
グリン受容体リガンド、ケモカイン受容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロ
トニン受容体リガンド、ＰＳＭＡ、エンドセリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬ
、およびＨＤＬリガンドが挙げられる。一部の実施形態において、標的化基は、アプタマ
ーである。このようなアプタマーは、非修飾であり得、または本明細書に開示の修飾の任
意の組合せを含み得る。
【０２２９】
さらに他の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、細胞浸透ポリ
ペプチドに共有結合によりコンジュゲートさせることができる。一部の実施形態において
、細胞浸透ペプチドは、シグナル配列も含み得る。一部の実施形態において、本発明のコ
ンジュゲートは、増加した安定性、増加した細胞形質移入および／または変更された生体
分布（例えば、規定の組織または細胞型に標的化）を有するように設計することができる
。
【０２３０】
一部の実施形態において、コンジュゲート部分は、それらがクリアランスのために標的
への検出可能な標識の付着を可能とするように本発明の化合物および／または組成物に付
加することができる。このような検出可能な標識としては、限定されるものではないが、
ビオチン標識、ユビキチン、蛍光分子、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）、ｃ
−ｍｙｃ、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、フラッグ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（Ｇ
ＳＴ）、Ｖ５（パラミクソウイルスのシミアンウイルス５エピトープ）、ビオチン、アビ
ジン、ストレプトアビジン、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）およびジゴキシ
ゲニンが挙げられる。
【０２３１】
一部の実施形態において、本発明の化合物は、抗体Ｆｃドメインとコンジュゲートさせ
てＦｃ融合タンパク質を創成することができる。本明細書に記載の化合物のいずれかとの
Ｆｃ融合タンパク質の形成は、当技術分野において公知の任意の方法、例として、それぞ
れの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第５，１１６，９６４
号明細書、米国特許第５，５４１，０８７号明細書および米国特許第８，６３７，６３７
号明細書に記載のものにより実施することができる。本発明のＦｃ融合タンパク質は、Ｆ
ｃヒンジ領域中のシステイン残基を介してＩｇＧ  Ｆｃのヒンジ領域に結合している本発
明の化合物を含み得る。得られるＦｃ融合タンパク質は、抗体様構造を含み得るが、ＣＨ
１ドメインも軽鎖も有さない。一部の場合において、Ｆｃ融合タンパク質は、天然抗体と
同等の薬物動態プロファイルを含み得る。一部の場合において、本発明のＦｃ融合タンパ
ク質は、延長された循環中の半減期および／または変更された生物学的活性を含み得る。
【０２３２】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、疾患および／また
は病態の治療において互いに、または他の分子と組み合わせることができる。
核酸
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、核酸分子によりコ
ードさせることができる。このような核酸分子としては、限定されるものではないが、Ｄ
ＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ分子、ベクタ
ー、プラスミドなどが挙げられる。一部の実施形態において、本発明は、本発明の化合物
および／または組成物をコードする核酸分子を発現するようにプログラムまたは生成され
た細胞を含み得る。
【０２３３】
使用方法
本発明の方法は、１つ以上の生体系中の成長因子活性を改変する方法を含む。このよう
な方法は、１つ以上の生体系を本発明の化合物および／または組成物と接触させることを
含み得る。一部の場合において、これらの方法は、生体系中（例えば、細胞ニッチまたは
対象中）の遊離成長因子のレベルを改変することを含む。このような方法による化合物お
よび／または組成物としては、限定されるものではないが、生体分子、例として、限定さ
れるものではないが、本明細書に記載の組換えタンパク質、タンパク質複合体および／ま
たは抗体を挙げることができる。
【０２３４】
一部の実施形態において、本発明の方法は、成長因子活性を開始または増加させるため
に使用することができ、その方法は本明細書において「活性化法」と称される。一部のこ
のような方法は、ＧＰＣからの成長因子放出および／または潜在型ＧＰＣへの成長因子再
会合の阻害を含み得る。一部の場合において、活性化方法は、抗体、組換えタンパク質お
よび／またはタンパク質複合体の使用を含み得る。一部の活性化方法によれば、１つ以上
の活性化抗体を提供する。このような方法において、１つ以上の成長因子を放出させ、ま
たはＧＰＣに戻るのを防止することができる。１つの非限定的な例において、成長因子お
よびＧＰＣ間の解離を向上させ、および／またはＧＰＣの再形成を防止する抗ＬＡＰ抗体
を提供することができる。
【０２３５】
本発明の実施形態は、抗ＬＡＰおよび／または抗ＬＡＰ様ドメイン抗体を使用して成長
因子活性を改変する方法を含む。一部の場合において、このような方法は、ＴＧＦ−β活
性化抗体としての抗ＴＧＦ−β−ＬＡＰ抗体の使用を含み得る。一部の場合において、こ
のような抗体を使用し、および／または試験する方法は、内容が参照により全体として本
明細書に組み込まれるツァン，Ｍ．（Ｔｓａｎｇ，Ｍ．）ら著、１９９５年、サイトカイ
ン（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ）、第７巻（第５号）、ｐ．３８９〜９７に教示の方法のいずれか
を含み得る。
【０２３６】
一部の実施形態において、本発明の方法は、成長因子活性を低減させ、または排除する
ために使用することができ、その方法は本明細書において「阻害方法」と称される。一部
のこのような方法は、ＧＰＣ中の成長因子保持および／または潜在型ＧＰＣへの成長因子
の再会合の促進を含み得る。一部の場合において、阻害方法は、抗体の使用を含み得る。
【０２３７】
治療薬
一部の実施形態において、本発明の組成物および方法は、広範な疾患、障害および／ま
たは病態を治療するために使用することができる。一部の場合において、このような疾患
、障害および／または病態は、ＴＧＦ−β関連徴候であり得る。本明細書において使用さ
れる場合、用語「ＴＧＦ−β関連徴候」は、ＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質の
発現、活性および／もしくは代謝に関連する任意の疾患、障害および／もしくは病態、ま
たは１つ以上のＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質の活性および／もしくはレベル
のモジュレーションから利益を受け得る任意の疾患、障害および／もしくは病態を指す。
ＴＧＦ−β関連徴候としては、限定されるものではないが、線維症、加齢の貧血、癌（例
として、限定されるものではないが、大腸癌、腎癌、乳癌、悪性黒色腫および膠芽細胞腫
）、化学療法後の急速な造血の助長、骨治癒、内皮増殖症候群、喘息およびアレルギー、
胃腸管疾患、大動脈瘤、オーファン徴候（例えば、マルファン症候群およびカムラチ・エ
ンゲルマン病）、肥満、糖尿病、関節炎、多発性硬化症、筋ジストロフィー、筋委縮性側
索硬化症（ＡＬＳ：ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、
パーキンソン病、骨粗しょう症、骨関節炎、骨減少症、メタボリックシンドローム、栄養
障害、器官萎縮、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、および食欲不振を挙げることができる
。追加の徴候としては、それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる
米国特許出願公開第２０１３／０１２２００７号明細書、米国特許第８，４１５，４５９
号明細書または国際公開第２０１１／１５１４３２号パンフレットに開示のもののいずれ
かを挙げることができる。
【０２３８】
疾患の治療または良化の効力は、例えば、疾患進行、疾患寛解、症状重症度、疼痛の低
減、クオリティオブライフ、治療効果を持続するために要求される医薬の用量、疾患マー
カのレベルまたは治療もしくは予防のために標的化される所与の疾患に適切な任意の他の
計測可能なパラメータを計測することにより評価することができる。このようなパラメー
タのいずれか１つ、またはパラメータの任意の組合せを計測することにより治療または予
防の効力をモニタリングすることは、十分に当業者の能力の範囲内である。本発明の組成
物の投与に関連して、例えば、癌「に対して有効」は、臨床的に適切な様式の投与が少な
くとも統計的に有意な患者の割合についての利益的効果、例えば、症状の改善、治癒、疾
患負荷の低減、腫瘍量もしくは細胞数の低減、寿命延長、クオリティオブライフの改善、
または特定のタイプの癌の治療に精通する医師により一般に好影響として認識される他の
効果をもたらすことを示す。
【０２３９】
治療または予防的効果は、疾患状態の１つ以上のパラメータの統計的に有意な改善が存
在する場合に、または他の場合に予想される症状の悪化もしくは発達の停止により証明さ
れる。一例として、疾患の計測可能なパラメータの少なくとも１０％の好ましい変化、好
ましくは、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％またはそれより多い変化が、有効
な治療を示し得る。本発明の所与の化合物または製剤についての効力は、当技術分野にお
いて公知の所与の疾患についての実験動物モデルを使用して判断することもできる。実験
動物モデルを使用する場合、治療の効力は、統計的に有意な変化が観察される場合に証明
される。
【０２４０】
線維症のための治療薬
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、線維症の変更に有
用であり得る。一部の実施形態において、このような化合物および／または組成物は、Ｔ
ＧＦ−βのアンタゴニストである。ＴＧＦ−βは、線維症応答の中心的なオーケストレー
タとして認識される。ＴＧＦ−βを標的化する抗体は、多数の前臨床モデルにおいて線維
症を減少させる。このような抗体および／または抗体ベース化合物としては、ＬＹ２３８
２７７０（イーライ・リリー（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、インディアナポリス、インディア
ナ）が挙げられる。それぞれの内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国
特許第６，４９２，４９７号明細書、米国特許第７，１５１，１６９号明細書および米国
特許第７，７２３，４８６号明細書ならびに米国特許出願公開第２０１１／０００８３６
４号明細書に記載のものも含まれる。
【０２４１】
線維症は、多くのタイプの組織破壊疾患の続発症としてよく見られる。通常、組織中の
ニッチを占有する分化細胞、前駆または幹細胞の破壊により新たな空間が創成される場合
、デフォルト経路は、空の空間中の満たすための結合組織細胞、例えば、線維芽細胞の増
殖であると考えられる。これに、組織の瘢痕化および永続的な消失をもたらす細胞外マト
リックス構成成分、例として、コラーゲンの産生が伴う。
【０２４２】
線維症の異なる態様は、その慢性性であり、それは、実質細胞の基礎となる破壊が終結
され、または細胞が幹細胞プールにより、もしくは移植により置き換えられるまで継続治
療を要求し得る。線維症は、反転させるよりも停止させることがかなり容易であると考え
られている。ＴＧＦ−βファミリーは、線維芽細胞の成長および細胞外マトリックス構成
成分、例として、コラーゲンの産生の調節において中心的に重要である。インテグリンα
ｖβ６およびαｖβ８（およびおそらくαｖβ１）は、ＴＧＦ−β１および３の活性化に
関与し得る。インテグリンＶＬＡ−１は、コラーゲンについての受容体であり、それらの
活性化の後にのみリンパ球上で発現され、線維症疾患の発生に強力に関与する。
【０２４３】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、線維症を阻害する
ためにＴＧＦ−βのインテグリンαｖβ６、αｖβ８およびαｖβ１活性化を遮断するよ
うに設計される。一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、Ｇ
ＰＣおよびＬＴＢＰ間の相互作用部位を標的化する一方、ＧＰＣおよびＧＡＲＰ間の相互
作用部位に影響を与えないように設計される。本発明のこのような化合物および／または
組成物は、阻害抗体として作用し得、成長因子シグナリングを防止し、線維症を阻害する
。一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、ＴＧＦ−β１、２
および３またはそれらのキメラ抗原の１つ以上を標的化するように設計される。
【０２４４】
本発明の化合物および／または組成物を治療的に使用することができる線維症徴候とし
ては、限定されるものではないが、肺徴候［例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ：Ｉｄｉｏ
ｐｈａｔｉｃ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ
）、アレルギー性喘息、急性肺損傷、好酸球性食道炎、肺動脈高血圧症および化学ガス損
傷］、腎臓徴候［例えば、糖尿病性糸球体硬化症、巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ：
Ｆｏｃａｌ  ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｃｌｅｒｏｓｉｓ）、慢性腎疾患
、腎移植および慢性拒絶に伴う線維症、ＩｇＡ腎症および溶血性尿毒症症候群］、肝線維
症［例えば、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ：Ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔ
ｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、慢性ウイルス肝炎、寄生虫血症、先天性の代謝異常、毒
素媒介性線維症、例えば、アルコール線維症、非アルコール性脂肪性肝炎−肝細胞癌（Ｎ
ＡＳＨ−ＨＣＣ：Ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ−ｈｅ
ｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、原発性胆汁性肝硬変および硬化性胆
管炎］、心血管線維症（例えば、心筋症、肥大性心筋症、アテローム性動脈硬化症および
再狭窄）、全身性硬化症、皮膚線維症（例えば、全身性硬化症における皮膚線維症、びま
ん性皮膚全身性硬化症、強皮症、病理学的な皮膚瘢痕化、ケロイド、術後瘢痕化、瘢痕形
成術、放射線誘導性瘢痕化および慢性創傷）および癌または続発性線維症（例えば、骨髄
線維症、頭頸部癌、Ｍ７急性巨核芽球性白血病および粘膜炎）が挙げられる。本発明の化
合物および／または組成物を使用して治療することができる線維症に関連する他の疾患、
障害または病態としては、限定されるものではないが、マルファン症候群、スティフ皮膚
症候群、強皮症、関節リウマチ、骨髄の線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、全身性エリ
テマトーデス、筋ジストロフィー、デュピュイトラン拘縮、カムラチ・エンゲルマン病、
神経瘢痕化、増殖性硝子体網膜症、角膜損傷、緑内障ドレナージ術後の合併症および多発
性硬化症が挙げられる。
【０２４５】
線維症の変更についての本発明の化合物および／または組成物の効力の決定において有
用なアッセイとしては、限定されるものではないが、線維芽細胞をカウントする組織学的
アッセイおよび当技術分野において公知の基本的な免疫組織化学分析が挙げられる。
【０２４６】
動物モデルも、線維症の変更における本発明の化合物および／または組成物の効力の分
析に利用可能である。このような分析に有用な動物線維症モデルの例としては、例えば、
内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるシェーファ，Ｄ．Ｗ．（Ｓｃｈａｅ
ｆｅｒ，Ｄ．Ｗ．）ら著、２０１１年、ヨーロピアン・レスピラトリー・レビュー（Ｅｕ
ｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｖ）、第２０巻、第１２０号、ｐ．８５〜９７により教示される
もののいずれかを挙げることができる。このようなモデルとしては、限定されるものでは
ないが、その刊行物の表１に記載のもの、例として、肺モデル、腎モデル、肝モデル、心
血管モデルおよび／またはコラーゲン誘導モデルを挙げることができる。シェーファ（Ｓ
ｃｈａｅｆｅｒ）らは、線維症の治療におけるピルフェニドンの使用も教示している。一
部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、ピルフェニドンとの組合せ
で使用することができる。
【０２４７】
一部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、肺線維症の治療におい
て使用することができる。肺線維症モデルを、本発明の化合物および／または組成物の開
発および／または試験において使用することができる。肺線維症モデルとしては、ブレオ
マイシン誘導肺損傷モデルおよび／または慢性ブレオマイシン誘導肺損傷モデルを挙げる
ことができる。ブレオマイシン誘導肺損傷モデルは、シェーファ（Ｓｃｈａｅｆｅｒ）ら
、およびさらにはホラン（Ｈｏｒａｎ）ら（ホラン，Ｇ．Ｓ．（Ｈｏｒａｎ  Ｇ．Ｓ．）
ら著、２００８年、アメリカン・ジャーナル・オブ・レスピラトリー・アンド・クリティ
カル・ケア・メディシン（Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ）、第
１７７巻（第１号）、ｐ．５６〜６５、イーパブ（Ｅｐｕｂ）、２００７年１０月４日、
それらのそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）により記載さ
れているとおり実施することができる。ホラン（Ｈｏｒａｎ）の研究によれば、ＳＶ１２
９マウスをブレオマイシンに気管曝露させ、肺線維症の発生をもたらす。このモデルにつ
いて、腹腔内注射を介して潜在的な治療薬を投与する一方、検視肺組織または気管支肺胞
洗浄液回収物を線維症活性の指標としてのヒドロキシプロリンのレベルについてアッセイ
することができる。同一の技術を使用して、コラーゲンＩα２遺伝子プロモータによりド
ライブされるルシフェラーゼレポータ遺伝子を担持するマウスを、そのモデルにおいて使
用することができ、その結果、コラーゲン遺伝子誘導に応じたルシフェラーゼ活性アッセ
イにより線維症活性を決定することができる。追加のブレオマイシン誘導肺モデルは、ス
ラル（Ｔｈｒａｌｌ）ら（スラル，Ｒ．Ｓ．（Ｔｈｒａｌｌ、Ｒ．Ｓ．）ら著、１９７９
年、アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ）、第９５巻
、ｐ．１１７〜３０、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）により
記載されるものにより実施することができる。追加の肺モデルとしては、マウス喘息モデ
ルを挙げることができる。気道リモデリング（肺線維症）は、慢性喘息を有する対象にお
いて深刻な問題であり得る。喘息モデルとしては、ニアルズ（Ｎｉａｌｓ）ら（ニアルズ
，Ａ．Ｔ．（Ｎｉａｌｓ，Ａ．Ｔ．）ら著、２００８年、ディジーズ・モデルズ・アンド
・メカニズムズ（Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｍｏｄｅｌｓ  ａｎｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ）、第
１巻、ｐ．２１３〜２０、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）に
より記載されるもののいずれかを挙げることができる。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の
モデルを使用することができる。このようなモデルとしては、ブラホス（Ｖｌａｈｏｓ）
ら（ブラホス，Ｒ．（Ｖｌａｈｏｓ，Ｒ．）ら著、２０１４年、クリニカル・サイエンス
（Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ）、第１２６巻、ｐ．２５３〜６５、その内容は参照により全体とし
て本明細書に組み込まれる）により記載のもののいずれかを挙げることができる。喫煙に
よる肺気腫のモデルを使用することができる。このようなモデルは、内容が参照により全
体として本明細書に組み込まれるマ（Ｍａ）ら著、２００５年、ジャーナル・オブ・クリ
ニカル・インベスティゲーション（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ）、第１１５巻、ｐ．３
４６０〜７２に記載のとおり実施することができる。慢性肺線維症のモデルを使用するこ
とができる。げっ歯類におけるこのようなモデルは、内容が参照により全体として本明細
書に組み込まれるロバーツ，Ｓ．Ｎ．（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｓ．Ｎ．）ら著、１９９５年、
ジャーナル・オブ・パソロジー（Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ）、第１７６巻（第３号）、ｐ．３０
９〜１８に記載の気管内フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ：ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）点滴モデルにより実施することができる。ア
スベストおよびシリカ誘導肺損傷のモデルを使用することもできる。このようなモデルは
、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるコイン，Ｐ．Ｇ．（Ｃｏｉｎ，Ｐ
．Ｇ．）ら著、１９９６年、アメリカン・ジャーナル・オブ・レスピラトリー・アンド・
クリティカル・ケア・メディシン（Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅ
ｄ）、第１５４巻（第５号）、ｐ．１５１１〜９に記載のとおり実施することができる。
一部の場合において、肺放射線照射のモデルを使用することができる。このようなモデル
は、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるポーラン，Ｊ．（Ｐａｕｌｕｈ
ｎ，Ｊ．）ら著、２００１年、トキシコロジー（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ）、第１６１巻、
ｐ．１５３〜６３に記載のとおり実施することができる。一部の場合において、ホルボー
ルミリステートアセテート（ＰＭＡ）誘導肺損傷モデルを使用することができる。このよ
うなモデルは、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるテイラー，Ｒ．Ｇ．
（Ｔａｙｌｏｒ，Ｒ．Ｇ．）ら著、１９８５年、ラボラトリー・インベスティゲーション
（Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ）、第５２巻（第ｌ号）、ｐ．６１〜７０に記載のとおり実施す
ることができる。
【０２４８】
本発明の化合物および／または組成物を開発し、および／または試験するために腎線維
症モデルを利用することができる。一部の実施形態において、腎線維症の十分確立された
モデルの片側尿管閉塞（ＵＵＯ：ｕｒｅｔｅｒａｌ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）モデルを
使用することができる。このモデルにおいて、マウスを近位尿管結紮に供する。数時間か
ら数日間の期間後、結紮により遮断された領域中で線維症を試験する（マ，Ｌ．Ｊ．（Ｍ
ａ，Ｌ．Ｊ．）ら著、２００３年、アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａｍｅ
ｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）、第１６３巻（第４号）、ｐ
．１２６１〜７３、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）。一例に
おいて、この方法は、メング，Ｘ．Ｍ．（Ｍｅｎｇ，Ｘ．Ｍ．）ら（メング，Ｘ．Ｍ．（
Ｍｅｎｇ、Ｘ．Ｍ．）ら著、「Ｓｍａｄ２は、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄ３媒介腎線維症を保
護する（Ｓｍａｄ２  Ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ／Ｓｍａｄ
３−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｒｅｎａｌ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ）」、ジャーナル・オブ・ジ・ア
メリカン・ソサエティ・オブ・ネフロロジー（Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ）、２
０１０年９月、第２１巻（第９号）、ｐ．１４７７〜８７、イーパブ（Ｅｐｕｂ）２０１
０年７月１日）により利用されて腎線維症におけるＳＭＡＤ−２の役割が試験された。Ｓ
ＭＡＤ−２は、ＴＧＦ−β細胞シグナリング経路の細胞内メンバーである。一部の場合に
おいて、シクロスポリンＡ誘導腎症モデルを使用することができる。このようなモデルは
、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるリング，Ｈ．（Ｌｉｎｇ，Ｈ．）
ら著、２００３年、ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ソサエティ・オブ・ネフロロジ
ー（Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ）、第１４巻、ｐ．３７７〜８８に記載のとおり
実施することができる。一部の場合において、アルポート症候群の腎モデルを使用するこ
とができる。アルポート症候群試験においてコラーゲンＩＩＩノックアウトを有するトラ
ンスジェニックマウスを使用することができる。これらのマウスは、それらの腎中で進行
性線維症を発症する。アルポート症候群モデルは、それぞれの内容が参照により全体とし
て本明細書に組み込まれるコェプケ，Ｍ．Ｌ．（Ｋｏｅｐｋｅ，Ｍ．Ｌ．）ら著、２００
７年、ネフロロジー・ダイアリシス・トランスプランテーション（Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉ
ａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、第２２巻（第４号）、ｐ．１０６２〜９および／または
ハーム，Ｋ．（Ｈａｈｍ，Ｋ．）ら著、２００７年、アメリカン・ジャーナル・オブ・パ
ソロジー（Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ）、第１７０巻（第１号）、ｐ．１１０〜５に記載の
とおり実施することができる。
【０２４９】
一部の場合において、心血管線維症徴候の治療のための本発明の化合物および／または
組成物を開発し、および／または試験するために心血管線維症のモデルを使用することが
できる。一部の場合において、血管損傷モデルを使用することができる。このようなモデ
ルとしては、バルーン損傷モデルを挙げることができる。一部の場合において、これらは
、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるスミス（Ｓｍｉｔｈ）ら著、１９
９９年、サーキュレーション・リサーチ（Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ）、第８４巻（第１０号）、
ｐ．１２１２〜２２に記載のとおり実施することができる。このモデルにおけるＴＧＦ−
βの遮断は、新生内膜形成を遮断することが示された。したがって、本発明のＴＧＦ−β
阻害抗体を使用して新生内膜形成を低減させ、および／または遮断することができる。
【０２５０】
一部の実施形態において、肝線維症徴候の治療のための本発明の化合物および／または
組成物を開発し、および／または試験するために肝線維症のモデルを使用することができ
る。肝モデルとしては、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるイレダール
，Ｊ．Ｐ．（Ｉｒｅｄａｌｅ，Ｊ．Ｐ．）著、２００７年、ジャーナル・オブ・クリニカ
ル・インベスティゲーション（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ）、第１１７巻（第３号）、
ｐ．５３９〜４８に記載のもののいずれかを挙げることができる。これらとしては、限定
されるものではないが、表１および／または２に列記のモデルのいずれかが挙げられる。
一部の場合において、肝モデルとしては、四塩化炭素誘導肝線維症モデルを挙げることが
できる。このようなモデルは、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるフジ
イ，Ｔ．（Ｆｕｊｉｉ，Ｔ．）ら著、２０１０年、ＢＭＣガストロエンテロロジー（ＢＭ
Ｃ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ）、第１０巻、ｐ．７９に記載の方法により実施
することができる。
【０２５１】
一部の実施形態において、線維症創傷徴候の治療のための本発明の化合物および／また
は組成物を開発し、および／または試験するために創傷治癒のモデルを使用することがで
きる。創傷モデルとしては、慢性創傷モデルを挙げることができる。
【０２５２】
一部の場合において、ＧＩ関連線維症の治療のための本発明の化合物および／または組
成物を開発し、および／または試験するためにＧＩ損傷関連線維症のモデルを使用するこ
とができる。このような損傷モデルとしては、限定されるものではないが、２，４，６−
トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘導大腸炎モデルを挙げることができる。こ
のようなモデルは、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるシャイフェル，
Ｆ．（Ｓｃｈｅｉｆｆｅｌｅ，Ｆ．）ら著、２００２年、カレント・プロトコル・イン・
イムノロジー（Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ）、第１５章、第１５．１９部
に記載のとおり実施することができる。
【０２５３】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、骨髄の線維症に関
連する疾患、障害および／または病態を治療するために使用することができる。一部の場
合において、そのような化合物および／または組成物を開発し、および／または試験する
ために骨髄の線維症モデルを使用することができる。モデルとしては、ラコウト，Ｃ．（
Ｌａｃｏｕｔ，Ｃ．）ら著、２００６年、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１０８巻（第５号
）、ｐ．１６５２〜６０に記載の骨髄細胞養子移植モデルおよびトランスジェニックマウ
スモデル、例として、限定されるものではないが、ヴァンヌッキ，Ａ．Ｍ．（Ｖａｎｎｕ
ｃｃｈｉ，Ａ．Ｍ．）ら著、２００２年、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１００巻（第４号
）、ｐ．１１２３〜３２（それらのそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組
み込まれる）に記載のモデルを挙げることができる。さらなるモデルとしては、トロンボ
ポエチン誘導骨髄線維症のモデルを挙げることができる。このようなモデルは、内容が参
照により全体として本明細書に組み込まれるチャグラウイ，Ｈ．（Ｃｈａｇｒａｏｕｉ，
Ｈ．）ら著、２００２年、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１００巻（第１０号）、ｐ．３４
９５〜５０３に記載のとおり実施することができる。
【０２５４】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、筋ジストロフィー
（ＭＤ：ｍｕｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、例として、限定されるものではない
が、デュシェンヌ型ＭＤおよびベッカー型ＭＤに関連する疾患、障害および／または病態
を治療するために使用することができる。一部の場合において、そのような化合物および
／または組成物を開発し、および／または試験するためにＭＤモデルを使用することがで
きる。このようなモデルとしては、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる
セコ，Ｅ．（Ｃｅｃｏ，Ｅ．）ら著、２０１３年、フェデレーション・オブ・ヨーロピア
ン・バイオケミカル・ソサエティズ・ジャーナル（ＦＥＢＳ  Ｊ）、第２８０巻（第１７
号）、ｐ．４１９８〜２０９に記載のものを挙げることができる。
【０２５５】
本発明の化合物および／または組成物は、一部の場合において、１つ以上の線維症徴候
の治療のための１つ以上の他の治療薬と組み合わせることができる。このような他の治療
薬の例としては、限定されるものではないが、ＬＰＡ１受容体アンタゴニスト、リジルオ
キシダーゼ２阻害剤、ヘッジホッグ阻害剤、ＩＬ−３／ＩＬ−４阻害剤、ＣＴＧＦ阻害剤
、抗αｖβ６抗体および抗ＩＬ−１３抗体を挙げることができる。
【０２５６】
一部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、ＴＧＦ−β成長因子活
性を増加させて線維症を促進して線維症が有利であり得る疾患、障害および／または病態
を治療するように設計される。このような化合物としては、活性化抗体を挙げることがで
きる。
【０２５７】
骨髄線維症のための治療薬
骨髄線維症は、骨髄幹細胞中の突然変異により引き起こされる慢性血液癌である。疾患
は、正常血液細胞を作製する能力の損害を特徴とする。患者は、脾腫および肝腫大を発症
し、過剰の線維症が骨髄中で生じる。骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ：Ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉ
ｆｅｒａｔｉｖｅ  ｎｅｏｐｌａｓｍ）は、異なる臨床的特性を有する３つの関連タイプ
の骨髄線維症：原発性骨髄線維症（ＰＭＦ：ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｅｌｏｆｉｂｒｏｓｉ
ｓ）、本態性血小板血症および真性赤血球増加症の集合的名称である。３つ全ては、ＪＡ
Ｋ−ＳＴＡＴ細胞シグナリング経路の過剰活性シグナリングを有する（内容が参照により
全体として本明細書に組み込まれるクランプフィ（Ｋｌａｍｐｆｉ）ら著、２０１３年、
ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（ＮＥＪＭ）、第３６９巻、ｐ．
２３７９〜９０）。原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）は、血管新生、レチクリンおよびコラー
ゲン線維症の増加を特徴とする。疾患が進行するにつれ、破骨細胞の数が増加し、骨髄が
吸引不能になる。ＰＭＦの一部の線維症は、幹細胞移植（ＳＣＴ：ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  
ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）により反転させることができる。真性赤血球増加症を
有する個体の９８％が、過剰活性ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナリングをもたらす突然変異ＪＡ
Ｋ２を有する。
【０２５８】
ＭＰＮのための現在の治療薬としては、同種造血細胞移植（ＨＣＴ：ｈｅｍａｔｏｐｏ
ｉｅｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）およびヤヌスキナーゼ（ＪＡ
Ｋ：Ｊａｎｕｓ  ｋｉｎａｓｅ）阻害が挙げられる。同種ＨＣＴは、最大１０％の致死性
ならびにグラフト不全および重大な副作用および毒性を伴う。ＪＡＫ阻害療法は、ＭＰＮ
を治療するために２０１１年に承認されたＪＡＫ２の小分子阻害剤ルキソリチニブ（Ｒｕ
ｘ）の使用を含む。Ｒｕｘは、インサイト・ファーマシューティカルズ（Ｉｎｃｙｔｅ  
ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（ウィルミントン、デラウェア）およびノバルティス
（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）（バーゼル、スイス）によりＪＡＫＡＦＩ（登録商標）およびＪＡ
ＫＡＶＩ（登録商標）の名称で市販されている。Ｒｕｘは、脾腫および肝腫大を改善し得
るが、治癒性でなく、一部の試験は、それほど利益を示さない（内容が参照により全体と
して本明細書に組み込まれるオデニケ，Ｏ．（Ｏｄｅｎｉｋｅ，Ｏ．）著、２０１３年、
ヘマトロジー（Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ）、２０１３年（第ｌ号）、ｐ．５４５〜５２）。
【０２５９】
一部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、骨髄増殖性障害、例と
して、限定されるものではないが、原発性骨髄線維症、二次骨髄線維症、本態性血小板血
症、真性赤血球増加症、特発性骨髄線維症および慢性骨髄白血病を治療するために使用す
ることができる。一部の場合において、治療は、骨髄線維症のための１つ以上の公知の治
療法、例として、限定されるものではないが、同種ＨＣＴ、ＪＡＫ阻害、ＴＧＦ−β１、
２および３を遮断するためのフレソリムマブ（ＧＣ１００８；ジェンザイム（Ｇｅｎｚｙ
ｍｅ）、ケンブリッジ、マサチューセッツ）治療（内容が参照により全体として本明細書
に組み込まれるマスカレンハス，Ｊ．（Ｍａｓｃａｒｅｎｈａｓ，Ｊ．）ら著、２０１４
年、ロイケミア・アンド・リンフォーマ（Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ
）、第５５巻、ｐ．４５０〜２）、リジルオキシダーゼ活性およびコラーゲン架橋を遮断
するためのシムツズマブ（ギリード・バイオサイエンシズ（Ｇｉｌｅａｄ  Ｂｉｏｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ）、フォスターシティ、カリフォルニア）治療ならびに制御性マクロファージ
を刺激し、骨髄線維芽細胞を阻害するためのペントラキシン−２（プロメディオール（Ｐ
ｒｏｍｅｄｉｏｒ）、レキシントン、マサチューセッツ）治療との組合せで実施すること
ができる。一部の場合において、骨髄線維症の治療向けの本発明のそのような化合物およ
び／または組成物を開発し、および／または試験するために骨髄増殖性障害のモデルを使
用することができる。モデルとしては、ラコウト，Ｃ．（Ｌａｃｏｕｔ，Ｃ．）ら著、２
００６年、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１０８巻（第５号）、ｐ．１６５２〜６０に記載
の骨髄細胞養子移植モデルおよびトランスジェニックマウスモデル、例として、限定され
るものではないが、ヴァンヌッキ，Ａ．Ｍ．（Ｖａｎｎｕｃｃｈｉ，Ａ．Ｍ．）ら著、２
００２年、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１００巻（第４号）、ｐ．１１２３〜３２（それ
らのそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）に記載のモデルを
挙げることができる。骨髄線維症モデルとしては、トロンボポエチン誘導骨髄線維症を挙
げることができる。このようなモデルは、内容が参照により全体として本明細書に組み込
まれるチャグラウイ，Ｈ．（Ｃｈａｇｒａｏｕｉ，Ｈ．）ら著、２００２年、ブラッド（
Ｂｌｏｏｄ）、第１００巻（第１０号）、ｐ．３４９５〜５０３に記載のとおり実施する
ことができる。ＴＧＦ−β１は、このモデルにより線維症の主アゴニストであることが示
されている。さらなる骨髄線維症モデルは、内容が参照により全体として本明細書に組み
込まれるムラリー，Ａ．（Ｍｕｌｌａｌｌｙ，Ａ．）ら著、２０１０年、キャンサー・セ
ル（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ）、第１７巻、ｐ．５８４〜９６に記載のとおり実施するこ
とができる。
【０２６０】
瘢痕化および創傷治癒のための治療薬
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、創傷治癒および／
または瘢痕形成の変更において有用であり得る。一部の場合において、本発明の化合物お
よび／または組成物は、適正な創傷治癒（例として、限定されるものではないが、慢性創
傷）を確保し得る。一部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、瘢痕
形成の低減、治療およびまたは予防に使用することができる。このような化合物および／
または組成物は、抗ＴＧＦ−β抗体を含み得る。一部の場合において、創傷の治癒を促進
するためにＴＧＦ−β活性化抗体を使用することができる。
【０２６１】
鉄代謝の障害のための治療薬
一部の実施形態において、本発明の方法、化合物および／または組成物は、鉄代謝の障
害を治療するために使用することができる。このような障害としては、低減した鉄レベル
を含む障害（例えば、貧血）または上昇した鉄レベルを含む障害（例えば、ヘモクロマト
ーシス）を挙げることができる。ＢＭＰ−６およびヘモジュベリンは、相互作用してヘプ
シジン発現をモジュレートする。本明細書に開示の一部の方法、化合物および／または組
成物は、ヘプシジンレベルを変更するために使用することができ、それにより体内鉄レベ
ルを調節する。
【０２６２】
本発明の一部の実施形態は、ヘプシジンアゴニストまたはヘプシジンアンタゴニストを
含み得る。ヘプシジンアゴニストは、ヘプシジンの発現および／または生理学的作用を活
性化または促進し得る。このようなアゴニストは、低いヘプシジンレベルおよび／または
活性に起因して鉄過剰負荷の治療または予防において有用であり得る。一部の場合におい
て、アゴニストは、既に罹患される鉄過剰負荷を反転させ得ないが、組織の鉄損傷を縮小
させ得る。本発明の一部のヘプシジンアゴニストは、ＢＭＰ−６／ヘモジュベリンシグナ
リングの活性化および／または向上を介してヘプシジンの産生を上昇させ得る。
【０２６３】
ヘプシジンアンタゴニストは、ヘプシジンの発現および／または生理学的作用を遮断し
、または低減させ得る。このようなアンタゴニストは、高いヘプシジンレベルに起因する
鉄欠乏の場合において有用であり得る。一部の実施形態において、本発明のヘプシジンア
ンタゴニストは、ヘモジュベリンを介するＢＭＰ−６シグナリングを破壊する抗体を含み
得る。
【０２６４】
貧血は、赤血球および／またはヘモグロビン数の減少に伴う病態および／または疾患で
ある。本発明の化合物および／または組成物は、貧血の治療において有用であり得る。こ
のような貧血としては、炎症による貧血（ＡＩ：ａｎｅｍｉａ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａ
ｔｉｏｎ）とも称される慢性疾患の貧血（ＡＣＤ：ａｎｅｍｉａ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ
ｄｉｓｅａｓｅ）を挙げることができる。ＡＣＤを有する対象は、関節リウマチ、癌、
感染などに起因する慢性腎不全または急性炎症を罹患し得る。ＡＣＤを罹患する対象は、
典型的には、上昇したレベルのヘプシジンおよび低下した赤血球生成を含む。サス（Ｓａ
ｓｕ）ら（サス（Ｓａｓｕ）ら著、２０１０年、ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１１５巻（
第１７号）、ｐ．３６１６〜２４）による研究において、ヘプシジンについての高い親和
性を有する抗体が炎症のマウスモデルにおけるネズミ貧血の治療において有効であった。
この研究により、最も有効な治療は、抗体を赤血球生成刺激剤（ＥＳＡ）と組み合わせる
ことを含むことが見出された。したがって、本発明の一部の化合物および／または組成物
は、ＥＳＡとの組合せで使用して効力を増加させることができる。ＡＣＤの治療に試験さ
れている現在の抗ヘプシジン抗体としては、Ａｂ１２Ｂ９（アムジェン（Ａｍｇｅｎ）、
サウザンドオークス、カリフォルニア）およびＬＹ２７８７１０６（イーライ・リリー（
Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、インディアナポリス、インディアナ）が挙げられる。ＦＧ４５９
２（フィブロジェン（ＦｉｂｒｏＧｅｎ）、サンフランシスコ、カリフォルニア）は、貧
血を治療するために現在も使用される低酸素誘導因子（ＨＩＦ）の小分子阻害剤である。
【０２６５】
一部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、胃バイパス術に伴う鉄
欠乏性貧血（ＩＤＡ：ｉｒｏｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｙ  ａｎｅｍｉａ）および／または
炎症性腸疾患（ＩＢＤ：ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）を有
する対象を治療するために使用することができる。胃バイパス術により、対象は近位胃嚢
および十二指腸のバイパスに起因して鉄を代謝する能力が低減したままとなる（ワーシュ
（Ｗａｒｓｈ）ら、２０１３年、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれ
る）。ＩＢＤ患者は、腸内血液損失に起因する鉄欠乏および炎症に起因する吸収の減少を
罹患することが多い。
【０２６６】
本発明の一部の化合物および／または組成物は、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ
）を罹患する対象を治療するために使用することができる。ＩＲＩＤＡは、酵素マトリプ
ターゼ−２の異常により引き起こされる遺伝子疾患である（デファルコ，Ｌ．（Ｄｅ  Ｆ
ａｌｃｏ，Ｌ．）ら、２０１３年、その内容は参照により全体として本明細書に組み込ま
れる）。膜貫通セリンプロテアーゼのマトリプターゼ−２は、重要なヘプシジン調節因子
である。マトリプターゼ−２は、ヘモジュベリンを酵素的に開裂し得る。異常マトリプタ
ーゼ−２活性を有する対象は、分解の欠落に起因する上昇したレベルのヘモジュベリンを
有し、したがって、ヘプシジン発現は高いままであり、鉄レベルは低減する。疾患の特徴
としては、限定されるものではないが、小球性低色素性貧血、トランスフェリンの低い飽
和および正常から高いレベルのヘプシジンが挙げられる。ＩＲＩＤＡを有する一部の対象
は、生後直後に診断されるが、多くは成人期まで診断されない。本明細書に記載の治療は
、ＩＲＩＤＡに伴う不規則なヘプシジンレベルをモジュレートするために使用することが
できる。
【０２６７】
鉄過剰負荷貧血は、輸血の結果として生じ得る。輸血された血液に伴う過剰鉄は、天然
には分泌され得ず、除去のための追加の治療、例えば、キレート療法を要求する。このよ
うな治療法は、一般に、十分忍容されず、多くの副作用を含み得る。したがって、新たな
、より良好な忍容される治療法が臨床的に必要とされる。追加の治療法としては、輸血非
依存性サラセミア（ＮＴＤＴ）症候群を有する１０歳以上の患者の治療のためのエックス
ジェード（ＥＸＪＡＤＥ）（登録商標）が挙げられる。ＴＧＦ−βスーパーファミリーメ
ンバーを遮断するリガンドトラップＡＣＥ−５３６も含まれる。エックスジェード（ＥＸ
ＪＡＤＥ）およびＡＣＥ−５３６の両方が、赤血球生成を上昇させることが公知である。
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、鉄過剰負荷を制御す
るために使用することができる。一部のこのような実施形態は、鉄を実質から、鉄がより
良好に忍容されるマクロファージに再分布させるように機能し得る。一部の場合において
、これはヘプシジンレベルの上昇を介して実施することができる。ガーデンジ（Ｇａｒｄ
ｅｎｇｈｉ）ら（ガーデンジ（Ｇａｒｄｅｎｇｈｉ）ら著、２０１０年、ジャーナル・オ
ブ・クリニカル・インベスティゲーション（ＪＣＩ）、第１２０巻（第１２号）、ｐ．４
４６６〜７７）による研究において、ネズミヘプシジンの過剰発現は、β−サラセミアの
マウスモデルおよびヘモクロマトーシスのマウスモデルにおいてヘモグロビンレベルを増
加させ、鉄過剰負荷を減少させ得た（ヴィアッテ（Ｖｉａｔｔｅ）ら著、２００６年、ブ
ラッド（Ｂｌｏｏｄ）、第１０７巻、ｐ．２９５２）。
【０２６８】
循環中のＧＤＦ−１５レベルは、ヘプシジンレベルと負に相関することが見出され、こ
のことは、鉄負荷および／または代謝におけるＧＤＦ−１５についての役割を示唆する（
フィンケンシュテッド（Ｆｉｎｋｅｎｓｔｅｄｔ）ら著、２００８年、ブリティッシュ・
ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａ
ｔｏｌｏｇｙ）、第１４４巻、ｐ．７８９〜９３、その内容は参照により全体として本明
細書に組み込まれる）。ＧＤＦ−１５をコードする遺伝子の転写は、ストレスおよび／ま
たは低酸素条件下で上方調節させることができる。一部の場合において、本発明の化合物
および／または組成物は、ＧＤＦ−１５シグナリング活性を変更することにより鉄障害お
よび／または貧血を罹患する対象を治療するために使用することができる。このような化
合物および／または組成物は、ＧＤＦ−１５ＧＰＣを安定化もしくは脱安定化し得、また
はＧＤＦ−１５および１つ以上の補因子間の１つ以上の相互作用のモジュレーションを介
して安定化もしくは脱安定化し得る抗体を含み得る。
【０２６９】
ヘモクロマトーシスは、食事に含まれる鉄の過剰吸収に起因する鉄過剰負荷を特徴とす
る疾患である。遺伝性ヘモクロマトーシス（ＨＨ：ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ｈｅｍｏｃｈ
ｒｏｍａｔｏｓｉｓ）において、この過剰負荷は、両親からのＨＦＥ遺伝子の共通の常染
色体劣性コピーの遺伝的形質により引き起こされる。このような場合において、鉄は血漿
中ならびに器官および組織、例として、限定されるものではないが、膵臓、肝臓および皮
膚中に過剰負荷され得、鉄沈着により引き起こされる損傷をもたらす（ツッシング−ハン
フレイズ（Ｔｕｓｓｉｎｇ−Ｈｕｍｐｈｒｅｙｓ）ら、２０１３年）。ＨＨのための現在
の治療法としては、年に複数回の静脈切開術を挙げることができる。一部の実施形態にお
いて、本発明の化合物および／または組成物は、対象の鉄レベルをモジュレートすること
によりＨＨを治療するために使用することができる。
【０２７０】
ヘプシジン（ＨＡＭＰ）および／またはヘモジュベリン（ＨＦＥ２）遺伝子の突然変異
は、若年性ヘモクロマトーシスとして公知のヘモクロマトーシスの重度の形態を担う（ロ
エット（Ｒｏｅｔｔｏ）ら、２００３年；パパニコラウオウ（Ｐａｐａｎｉｋｏｌａｕｏ
ｕ）ら、２００４年）。若年性ヘモクロマトーシスに関連するヘモジュベリンの一部の突
然変異は、タンパク質のミスフォールディングをもたらし、細胞からのヘモジュベリン分
泌を低減させ、したがって、全ヘモジュベリンシグナリング活性を減少させる。他の突然
変異は、他のシグナリング分子とのヘモジュベリン相互作用に影響する。突然変異Ｇ９９
Ｒを含むヘモジュベリンは、例えば、ＢＭＰ−２に結合し得ない。突然変異Ｌ１０１Ｐを
含むヘモジュベリンは、ＢＭＰ−２ともネオゲニンとも会合し得ない。本発明の一部の治
療実施形態は、ヘモジュベリンシグナリングのモジュレーションを含み得る。
【０２７１】
化学療法の間、癌性細胞の成長および拡散を防止するために細胞分裂を一時的に停止さ
せる。不所望な副作用は、骨髄細胞の活性細胞分裂に依存する赤血球細胞の損失である。
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、化学療法に関連する
貧血を治療するために使用することができる。
【０２７２】
一部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載の治療
薬のいずれかと組み合わせて効力を増加させることができる。
貧血、血小板減少症および好中球減少症のための治療薬
化学療法の間、癌性細胞の成長および拡散を防止するために細胞分裂を一時的に停止さ
せる。不所望な副作用は、骨髄細胞の活性細胞分裂に依存する赤血球、血小板および白血
球の損失である。一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、貧
血（赤血球の損失）、血小板減少症（血小板数の減少）および／または好中球減少症（好
中球数の減少）を罹患する患者を治療するように設計することができる。
【０２７３】
癌のための治療薬
本発明の化合物および／または組成物により種々の癌を治療することができる。本明細
書において使用される場合、用語「癌」は、周囲組織に侵入し、新たな体内部位に転移す
る傾向がある未分化細胞の増殖を特徴とする種々の悪性新生物のいずれかを指し、そのよ
うな悪性新生物成長を特徴とする病理学的状態も指す。癌は、腫瘍または血液学的悪性腫
瘍であり得、それとしては、限定されるものではないが、全てのタイプのリンパ腫／白血
病、癌腫および肉腫、例えば、肛門、膀胱、胆管、骨、脳、乳房、頸部、結腸／直腸、子
宮内膜、食道、眼、胆嚢、頭頸部、肝臓、腎臓、咽頭、肺、縦隔（胸部）、口腔、卵巣、
膵臓、陰茎、前立腺、皮膚、小腸、胃、脊髄、尾骨、睾丸、甲状腺および子宮中に見出さ
れるそれらの癌または腫瘍が挙げられる。
【０２７４】
癌において、ＴＧＦ−βは、成長促進または成長阻害のいずれかであり得る。一例とし
て、膵癌において、ＳＭＡＤ４野生型腫瘍は、ＴＧＦ−βに応答して成長の阻害が認めら
れ得るが、疾患が進行するにつれ、構成的に活性化されるＩＩ型受容体が典型的に存在す
る。さらに、ＳＭＡＤ４ヌル膵癌が存在する。一部の実施形態において、本発明の化合物
および／または組成物は、１つ以上の形態の癌においてユニークに機能するＴＧＦ−βシ
グナリング経路の構成要素を選択的に標的化するように設計される。白血病、または白血
球細胞、すなわち、白血球の異常増殖を特徴とする血液もしくは骨髄の癌は、４つの主要
な分類に分類することができ、それとしては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性
リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病または急性骨髄白血病（ＡＭＬ）（１０
および１１番染色体［ｔ（１０、１１）］、８および２１番染色体［ｔ（８；２１）］、
１５および１７番染色体［ｔ（１５；１７）］間の転座、ならびに１６番染色体中の反転
［ｉｎｖ（１６）］を有するＡＭＬ；多分化異形成を有するＡＭＬ、それとしては、過去
に骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）またはＡＭＬに変形する骨髄増殖性疾患を有した患者が挙
げられる；治療関連のＡＭＬおよび骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、そのカテゴリーとして
は、過去に化学療法および／または放射線を有し、続いてＡＭＬまたはＭＤＳを発症する
患者が挙げられる；ｄ）特にカテゴリー化されないＡＭＬ、それとしては、上記のカテゴ
リーに入らないＡＭＬのサブタイプが挙げられる；ならびにｅ）系統不詳の急性白血病、
白血病細胞を骨髄細胞ともリンパ腫細胞とも分類することができない場合、または両方の
細胞型が存在する場合に生じる）；ならびに慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ：Ｃｈｒｏｎｉｃ
ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）が挙げられる。
【０２７５】
このタイプの癌腫としては、限定されるものではないが、乳頭腫／癌腫、絨毛腫、内胚
葉洞腫瘍、奇形腫、腺腫／腺癌、黒色腫、線維腫、脂肪腫、平滑筋腫、横紋筋腫、中皮腫
、血管腫、骨腫、軟骨腫、神経膠腫、リンパ腫／白血病、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞
未分化癌、基底細胞癌および副鼻腔未分化癌が挙げられる。
【０２７６】
肉腫のタイプとしては、限定されるものではないが、軟部組織肉腫、例えば、胞状軟部
肉腫、血管肉腫、皮膚線維肉腫、類腱腫、線維形成小円形細胞腫、骨外性軟骨肉腫、骨外
性骨肉腫、線維肉腫、血管外皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リン
パ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、お
よびアスキン腫瘍、ユーイング肉腫（原発性神経外胚葉性腫瘍）、悪性血管内皮腫、悪性
シュワン腫、骨肉腫、ならびに軟膏肉腫が挙げられる。
【０２７７】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または方法を使用し、限定されるも
のではないが、大腸癌、腎癌、乳癌、悪性黒色腫および膠芽細胞腫を挙げることができる
１つ以上のタイプの癌または癌関連病態を治療することができる（シュリンゲンシーペン
（Ｓｃｈｌｉｎｇｅｎｓｉｅｐｅｎ）ら、２００８年；オーティット（Ｏｕｈｔｉｔ）ら
、２０１３年）。
【０２７８】
高悪性度の神経膠腫（例えば、未分化星状細胞腫および膠芽細胞腫）は、悪性脳腫瘍の
約６０％を構成する。ＴＧＦ−β２は、そのような神経膠腫の９０％を上回って過剰発現
され、発現レベルは腫瘍進行と相関することが見出されている。さらに、癌患者における
ｍＲＮＡレベルにおけるＴＧＦ−β２低減を使用する試験は、腫瘍アウトカムの有意な改
善を示した（ボグダーン（Ｂｏｇｄａｈｎ）ら、２０１０年）。これらの研究に照らして
、本発明の一部の組成物を治療的に使用して高悪性度の神経膠腫を有する個体を治療する
ことができる。このような組成物は、遊離ＴＧＦ−β２のレベルおよび／またはＴＧＦ−
β２活性のレベルを低下させるように作用し得る。
【０２７９】
一部の場合において、ＴＧＦ−β２活性は、免疫学的腫瘍サーベイランスを損なう転移
、血管新生、増殖および／または免疫抑制機能のモジュレーションを介して腫瘍発生に寄
与し得る（シュリンゲンシーペン（Ｓｃｈｌｉｎｇｅｎｓｉｅｐｅｎ）ら、２００８年）
。リード（Ｒｅｅｄ）ら（リード（Ｒｅｅｄ）ら、１９９４年）による研究は、大きい割
合のメラニン細胞病巣、例として、原発性侵襲黒色腫および転移性黒色腫中のＴＧＦ−β
２ｍＲＮＡ発現を実証した。本発明の一部の化合物および／または組成物は、そのような
病巣中のＴＧＦ−β２活性および／またはレベルをモジュレートし、およびまたは病巣形
成を予防するために使用することができる。脳実質中の黒色腫細胞成長は、ＴＧＦ−β２
活性により影響を受けることも示されている（チャン（Ｚｈａｎｇ）ら、２００９年）。
本発明の一部の化合物および／または組成物は、ＴＧＦ−β２活性および／またはレベル
のモジュレーションを介してそのような細胞成長を予防または制御するために使用するこ
とができる。
【０２８０】
世界中の女性のなかで、乳癌は最も蔓延した形態の癌である。乳癌転移は、部分的には
、癌細胞および細胞外マトリックス構成要素、例えば、ヒアルロン酸（ＨＡ）間の相互作
用を介して媒介される。ＣＤ４４は、癌細胞上のＨＡについての主要な受容体であること
が示されている（オーティット（Ｏｕｈｔｉｔ）ら、２０１３年）。ＣＤ４４およびＨＡ
間の相互作用は、細胞運動性、生存接着および増殖のモジュレーションをもたらす。ＴＧ
Ｆ−β２転写は、ＣＤ４４シグナリング活性によっても上方調節され、得られる細胞運動
性の変化に寄与すると考えられている。不所望なことに、現在の治療法は、限定された効
力を有し、多くは特異性の欠落に起因する副作用を有する。一部の場合において、本発明
の化合物および／または組成物は、ＴＧＦ−β２上方調節により誘導される細胞活性を変
更するために使用することができる。
【０２８１】
本発明は、１つ以上の形態の癌を治療するための、本発明の化合物および／または組成
物の、他の医薬品および／または他の治療方法と、例えば、公知の医薬品および／または
公知の治療方法、例えば、それらの障害の治療に現在用いられるものなどとの組合せでの
使用にさらに関する。例えば、本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の追加
の抗癌治療、例えば、生物療法、化学療法およびラジオセラピーと同時に投与することも
できる。したがって、治療としては、例えば、イマチニブ（グリーベック（Ｇｌｅｅｖａ
ｃ））、オールトランスレチノイン酸、モノクローナル抗体治療（ゲムツズマブ、オゾガ
マイシン）、化学療法（例えば、クロラムブシル、プレドニゾン、プレドニゾロン、ビン
クリスチン、シタラビン、クロファラビン、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、デ
シタビン、ＭＤＲ１の阻害剤）、リツキシマブ、インターフェロン−α、アントラサイク
リン薬（例えば、ダウノルビシンまたはイダルビシン）、Ｌ−アスパラギナーゼ、ドキソ
ルビシン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ブレオマイシン、フルダラビン、エト
ポシド、ペントスタチン、またはクラドリビン）、骨髄移植、幹細胞移植、放射線療法、
代謝拮抗薬（メトトレキセートおよび６−メルカプトプリン）、またはそれらの任意の組
合せを挙げることができる。
【０２８２】
放射線療法（ラジオセラピー、Ｘ線療法、または放射線照射とも称される）は、癌細胞
を殺滅し、腫瘍を縮小させるためのイオン化放射線の使用である。放射線療法は、外部ビ
ームラジオセラピー（ＥＢＲＴ：ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｂｅａｍ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐ
ｙ）を介して外部から、または小線源療法を介して内部から施すことができる。放射線療
法の効果は、治療される領域に局在化および限定される。放射線療法は、ほとんどの全て
のタイプの固形腫瘍、例として、脳、乳房、頸部、咽頭、肺、膵臓、前立腺、皮膚、胃、
子宮の癌、または軟部組織肉腫を治療するために使用することができる。放射線は白血病
およびリンパ腫を治療するためにも使用される。
【０２８３】
化学療法は、癌細胞を破壊し得る薬物による癌の治療である。現在の使用法において、
用語「化学療法」は、通常、一般に標的療法とは対照的に急速に分裂する細胞に影響する
細胞毒性薬を指す。化学療法薬は、種々の考えられる手法で、例えば、ＤＮＡの重複また
は新たに形成される染色体の分離により細胞分裂を干渉する。ほとんどの形態の化学療法
は、全ての急速に分裂する細胞を標的化し、癌細胞に特異的でないが、多くの癌細胞がＤ
ＮＡ損傷を修復することができない一方、正常細胞は一般に修復し得ることから、ある程
度の特異性が生じ得る。
【０２８４】
ほとんどの化学療法レジメンは、組合せで与えられる。例示的な化学療法薬としては、
限定されるものではないが、５−ＦＵエンハンサー、９−ＡＣ、ＡＧ２０３７、ＡＧ３３
４０、アグリカナーゼ阻害剤、アミノグルテチミド、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、ア
スパラギナーゼ、アザシチジン、バチマスタット（ＢＢ９４）、ＢＡＹ１２−９５６６、
ＢＣＨ−４５５６、ビス−ナフタルイミド、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチ
ン、カルムスタイン（Ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ）＋ポリフェプロザン（Ｐｏｌｉｆｅｐｒ
Ｏｓａｎ）、ｃｄｋ４／ｃｄｋ２阻害剤、クロロムブシル（Ｃｈｌｏｒｏｍｂｕｃｉｌ
）、ＣＩ−９９４、シスプラチン、クラドリビン、ＣＳ−６８２、シタラビンＨＣｌ、Ｄ
２１６３、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、
デキシフォスアミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、ドセタキセル、ドラスタイン（Ｄｏ
ｌａｓｔａｉｎ）、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ＤＸ８９５１ｆ、Ｅ７０７０、
ＥＧＦＲ、エピルビシン、エリスロポエチン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エト
ポシド（ＶＰ１６−２１３）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＦＫ３１７、フ
ラボピリドール、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フ
ルタミド、フラジリン（Ｆｒａｇｙｌｉｎｅ）、ゲムシタビン、ヘキサメチルメラミン（
ＨＭＭ）、ヒドロキシウレア（ヒドロキシカルバミド）、イホスファミド、インターフェ
ロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、インターロイキン−２、イリノテカン、ＩＳ
Ｉ６４１、クレスチン（Ｋｒｅｓｔｉｎ）、レモナール（Ｌｅｍｏｎａｌ）ＤＰ２２０２
、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ放出因子アナログ）、レバミゾール、ＬｉＧＬＡ（ガンマ
−リノレン酸リチウム）、ロジンシード（Ｌｏｄｉｎｅ  Ｓｅｅｄ）、ロメテクソール、
ロムスチン（ＣＣＮＵ）、マリミスタット（Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ）、メクロレタミンＨ
Ｃｌ（ナイトロジェンマスタード）、酢酸メゲステロール、メグラミン（Ｍｅｇｌａｍｉ
ｎｅ）ＧＬＡ、メルカプトプリン、メスナ、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリ
オキサールビスーグアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミ
トキサントロン、ミトキサントロンＨＣｌ、ＭＭＩ２７０、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１
５１４、オクトレオチド、ＯＤＮ６９８、ＯＫ−４３２、経口白金剤、経口トキソイド、
パクリタキセル（タキソール（ＴＡＸＯＬ）（登録商標））、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＤ１８
３８０５、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、ＰＫＣ４１２、プリカマイ
シン、プロカルバジンＨＣｌ、ＰＳＣ８３３、ラリトレキセド、ＲＡＳファルネシルトラ
ンスフェラーゼ阻害剤、ＲＡＳ癌遺伝子阻害剤、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、スト
レプトゾシン、スラミン、クエン酸タモキシフェン、タキサンアナログ、テモゾロミド、
テニポシド（ＶＭ−２６）、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、チロシンキナーゼ、
ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）、バルルビシン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシン、
ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＹＭ１１６、ＺＤ０１０１、ＺＤ０４７３／アノーメッド
（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＺＤ１８３９、ＺＤ９３３１が挙げられる。
【０２８５】
生物療法は、体内免疫系を直接もしくは間接的に使用して癌を撲滅し、または一部の癌
治療により引き起こされ得る副作用を弱める。一部の実施形態において、本発明の化合物
および／または組成物は、例えば、それらが１つ以上の腫瘍に対する免疫系作用を刺激し
得るという点で生物療法とみなすことができる。しかしながら、このアプローチは、他の
そのような生物学的アプローチ、例えば、免疫応答改変療法、例えば、インターフェロン
、インターロイキン、コロニー刺激因子、他のモノクローナル抗体、ワクチン、遺伝子療
法の投与とともに生物療法とみなすこともでき、非特異的免疫調節剤も、本発明の化合物
および／または組成物と組み合わせることができる抗癌療法と想定される。
【０２８６】
小分子標的療法薬は、一般に、癌細胞内の突然変異、過剰発現、またはそうでなければ
重要なタンパク質に対する酵素的ドメインの阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤イ
マチニブ（グリーベック（Ｇｌｅｅｖｅｃ）／グリベック（Ｇｌｉｖｅｃ））およびゲフ
ィチニブ（イレッサ（Ｉｒｅｓｓａ））である。本発明の化合物および／または組成物と
使用することができるモノクローナル抗体療法の例としては、限定されるものではないが
、乳癌において使用される抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体トラスツズマブ（ハーセプチン（Ｈｅ
ｒｃｅｐｔｉｎ））、および種々のＢ細胞悪性腫瘍において使用される抗ＣＤ２０抗体リ
ツキシマブが挙げられる。一部の癌の成長は、あるホルモンを提供または遮断することに
より阻害することができる。ホルモン感受性腫瘍の一般例としては、あるタイプの乳癌お
よび前立腺癌が挙げられる。エストロゲンまたはテストステロンの除去または遮断は、重
要な追加の治療であることが多い。ある癌において、ホルモンアゴニスト、例えば、プロ
ゲストーゲンの投与は、治療的に有益であり得る。
【０２８７】
癌免疫療法は、患者自身の免疫系を誘導して腫瘍を撲滅するように設計される多様な治
療方針のセットを指し、それとしては、限定されるものではないが、表在性膀胱癌のため
の膀胱内ＢＣＧ免疫療法、例えば、悪性黒色腫および腎細胞癌のための特異的免疫応答を
生成するためのワクチン、ならびに患者からの樹状細胞に前立腺酸ホスファターゼペプチ
ドを負荷して前立腺由来細胞に対する特異的免疫応答を誘導する前立腺癌のためのシプリ
ューセル−Ｔの使用が挙げられる。
【０２８８】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、Ｔ細胞阻害を防止
するように設計される。このような化合物および／または組成物は、ＧＰＣのプロドメイ
ンからの、または細胞外マトリックスおよび／もしくは細胞マトリックス構成要素、例と
して、限定されるものではないが、ＧＡＲＰ、フィブリリンもしくはＬＴＢＰからの成長
因子の解離を防止し得る。
骨治癒のための治療薬
本発明の化合物および／または組成物は、骨障害を治療し、および／または骨治癒もし
くは修復を改善するために使用することができる。骨の細胞リモデリングは、骨格統合性
を維持するのに役立つ一生のプロセスである。このプロセスは、骨の異常および脆弱区域
を修復するように機能する破骨細胞骨吸収および新たな骨形成のサイクルを含む。ＴＧＦ
−βファミリーメンバー、好ましくは、ＢＭＰは、破骨細胞による吸収および形成のプロ
セスのカップリングにおいて重要な因子であると考えられている。ＴＧＦ−βファミリー
メンバーは、骨マトリックス中で優勢であり、骨損傷により上方調節される。ＴＧＦ−β
ファミリーメンバーは、完全に形成された骨マトリックスに強度を付与し、骨折に対する
耐性を付与するとも考えられている。骨リモデリングにおけるＴＧＦ−βファミリーメン
バーの役割により、それらは骨障害および疾患を治療するための潜在的な治療薬のための
魅力的な標的となる。
【０２８９】
多数の疾患および／または障害は、骨および関節を冒す。このような疾患および／また
は障害は、先天的、遺伝的および／または後天的であり得る。このような疾患および／ま
たは障害としては、限定されるものではないが、骨嚢胞、感染性関節炎、骨のパジェット
病、オスグッド・シュラッター病、ケーラ骨疾患、骨棘（オステオファイト）、骨腫瘍、
頭蓋骨癒合症、進行性骨化性線維形成異常症、線維性骨異形成、骨巨細胞腫、低ホスファ
ターゼ血症、クリッペル・ファイル症候群、代謝性骨疾患、骨関節炎、変形性骨炎、嚢胞
性線維性骨炎、恥骨骨炎、硬化性骨炎、腸骨硬化性骨炎、離断性骨軟骨症、骨軟骨腫、骨
形成不全症、骨軟化症、骨髄炎、骨減少症、大理石骨病、骨粗しょう症、骨肉腫、多孔性
骨化過剰症、原発性副甲状腺機能亢進症、腎性骨ジストロフィーおよび膝にたまった水が
挙げられる。
【０２９０】
骨発生および修復に対する治療薬の有効性を評価するためのマウスモデルは、当技術分
野において周知である。ムハンマド（Ｍｏｈａｍｍａｄ）ら（ムハンマド，Ｋ．Ｓ．（Ｍ
ｏｈａｍｍａｄ，Ｋ．Ｓ．）ら著、「ＴＧＦ−βＩ型受容体キナーゼの薬理学的阻害は、
骨に対する同化作用および抗異化作用効果を有する（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ｉｎ
ｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｋｉｎａｓｅ  ｈａｓ  ａｎａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｃａｔａｂｏｌｉｃ  
ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｂｏｎｅ）」、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ）、２００９年
、第４巻（第４号）、ｐ．ｅ５２７５、イーパブ（Ｅｐｕｂ）、２００８年４月１６日）
により実証される１つのこのようなモデルにおいて、ＴＧＦ−βＩ型受容体の阻害が、１
日２回の強力な阻害剤ＳＤ−２０８の強制経口投与を介してＣ５７Ｂ１／６マウスにおい
て実施された。続いて、骨ミネラル密度（ＢＭＤ）がピクシマス（ＰＩＸＩｍｕｓ）マウ
ス密度計（ＧＥルナＩＩ（ＧＥ  Ｌｕｎａｒ  ＩＩ）、ファキシトロン・コーポレーショ
ン（Ｆａｘｉｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐ．）、ホイーリング、イリノイ）を使用して分析された
。ＢＭＤの変化は、スキャンされた面積の変化割合として表現される。試験により、処理
６週間後、雄マウスは４．１２％の骨発生の増加を呈する一方、雌マウスは５．２％の増
加を呈することが見出された。
【０２９１】
本発明の化合物および／または組成物は、単純もしくは複雑骨折および／または骨修復
のための治療法として有用であり得る。このような治療において、本発明の化合物および
／または組成物を損傷部位に直接的に、または移植デバイスおよびコーティング生体マト
リックス中への取り込みを介して導入することができる。さらに、本発明の化合物および
／または組成物は、１つ以上のＧＰＣと一緒に治療区域中で供給し、そのようなＧＰＣか
らの１つ以上の成長因子の持続放出を容易にする治療が企図される。
【０２９２】
血管新生および内皮増殖病態のための治療薬
本発明の化合物および／または組成物は、血管新生および内皮増殖症候群、疾患または
障害を治療するために使用することができる。用語「血管新生」は、本明細書において使
用される場合、新たな血管の形成および／または再組織化を指す。血管新生疾患は、体内
の血管新生の制御の損失を含む。このような場合において、血管成長、形成または再組織
化は、過剰活性（例として、非制御細胞成長が増加した血液供給を要求する腫瘍成長およ
び癌の間）または健常組織を持続するための不十分であり得る。このような病態としては
、限定されるものではないが、血管腫、血管肉腫、毛細血管拡張症、リンパ管腫、先天性
血管異常、腫瘍血管新生および術後血管構造を挙げることができる。過剰な血管新生は、
癌、黄斑変性症、糖尿病性失明、関節リウマチ、乾癬および多くの他の病態に見られる。
過剰な血管新生は、過剰な血管新生成長因子発現により促進されることが多い。本発明の
化合物および／または組成物は、過剰な血管新生に関与する成長因子を遮断するように作
用し得る。あるいは、本発明の化合物および／または組成物を利用して成長因子シグナリ
ングを促進して血管新生が阻害される病態において血管新生を向上させることができる。
このような病態としては、限定されるものではないが、冠動脈疾患、卒中、糖尿病および
慢性創傷が挙げられる。
【０２９３】
オーファン徴候および疾患のための治療薬
本発明の化合物および／または組成物は、オーファン徴候および／または疾患を治療す
るために使用することができる。このような疾患としては、マルファン症候群が挙げられ
る。この症候群は、身体成長および発生に影響を及ぼす結合組織障害である。最も重度に
危険になる組織および器官としては、心臓、血管、骨、眼、肺および脊髄を包囲する結合
組織が挙げられる。不所望なことに、この効果は生命を危険にさらし得る。マルファン症
候群は、身体結合組織の主要な構成要素のフィブリリンを産生する遺伝子中の遺伝子突然
変異により引き起こされる。潜在型ＴＧＦ−β結合タンパク質（ＬＴＢＰ）は、フィブリ
リンタンパク質ファミリーメンバーに対して緊密な同一性を示すＴＧＦ−βシグナリング
の重要な調節因子である。機能的ＬＴＢＰは、活性ＴＧＦ−βの放出の制御に要求される
（オクル，Ｒ．（Ｏｋｌｕ，Ｒ．）ら著、「潜在型トランスフォーミング成長因子β結合
タンパク質（ＬＴＢＰ）ファミリー（Ｔｈｅ  ｌａｔｅｎｔ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ
ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＴＢＰ
）ｆａｍｉｌｙ）」、バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ）、２０００年
１２月１５日、第３５２巻、第３部、ｐ．６０１〜１０）。一部の実施形態において、本
発明の化合物および／または組成物は、ＴＧＦ−βの放出プロファイルを変更するように
設計される。このような実施形態において、化合物および／または組成物は、阻害抗体と
して特徴決定された抗体を含み得る。
【０２９４】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、カムラチ・エンゲ
ルマン病（ＣＥＤ）の治療において有用であり得る。この疾患は、主に骨を冒し、増加し
た骨密度をもたらす。特に、脚および腕部の長骨が冒され；しかしながら、皮膚および臀
部の骨も冒され得る。疾患は、脚および腕部疼痛ならびに種々の他の症状をもたらす。Ｃ
ＥＤは、極めてまれであり、世界中でおよそ２００人の個体において報告されており、Ｔ
ＧＦ−β遺伝子中の突然変異により引き起こされる。これらの個体の体内で産生されるＴ
ＧＦ−βは、異常プロドメインを有し、過剰活性ＴＧＦ−βシグナリングをもたらす（ヤ
ンセンス，Ｋ．（Ｊａｎｓｓｅｎｓ，Ｋ．）ら著、「カムラチ・エンゲルマン病における
トランスフォーミング成長因子−β１突然変異は、突然変異タンパク質の活性化または分
泌のいずれかの変更によりシグナリングの増加をもたらす（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  
ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ｂｅｔａ  １  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｃａｍｕｒａ
ｔｉ−Ｅｎｇｅｌｍａｎｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｌｅａｄ  ｔｏ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓ
ｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  ａｌｔｅｒｉｎｇ  ｅｉｔｈｅｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏ
ｒ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｕｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」、ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ）、２００３年２月
２８日、第２７８巻（第９号）、ｐ．７７１８〜２４、イーパブ（Ｅｐｕｂ）、２００２
年１２月１８日）。シー（Ｓｈｉ）ら（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧ
Ｆ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎ
ｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、
第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９）により記載されているとおり、ＣＥＤ突
然変異のうち、Ｙ８１Ｈは、ＴＧＦ−βフィンガーを有するα２−ヘリックス残基を破壊
する。電荷反転Ｅ１６９ＫおよびＨ２２２Ｄ突然変異は、プロドメインのダイマー化界面
中のＧｌｕ１６９およびＨｉｓ２２２間のｐＨ調節塩架橋を破壊する。残基Ａｒｇ２１８
は、実質的に埋められ：それは、Ｔｙｒ１７１とのカチオンπ結合および成長因子プロド
メイン複合体（ＧＰＣ）の「ボウタイ」領域の残基Ａｓｐ２２６とのダイマー界面にわた
る塩架橋を形成する。さらに、Ｃｙｓ２２３およびＣｙｓ２２５のＣＥＤ突然変異は、Ｔ
ＧＦ−βの不活性形態での保持のためのボウタイ領域中のジスルフィド結合の重要性を実
証する。この実施形態において、１つ以上の阻害抗体を含む本発明の化合物および／また
は組成物は、症状を緩和するように機能する。一部の実施形態において、投与は、新生児
対象に対してなされる。
【０２９５】
免疫疾患および自己免疫疾患および障害のための治療薬
本発明の化合物および／または組成物は、免疫障害および自己免疫障害を治療するため
に使用することができる。このような障害としては、限定されるものではないが、急性散
在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ：Ａｃｕｔｅ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｏ
ｇｙｅｌｉｔｉｓ）、急性壊死性出血性白質脳炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症
、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質
症候群（ＡＰＳ：Ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、自己免疫性
血管内皮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性肝炎、自
己免疫性脂質異常症、自己免疫性免疫不全症、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ：Ａｕｔｏ
ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｎｅｒ  ｅａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性
膵炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ：Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ
ｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ）、自己免疫性甲状腺疾患、自
己免疫性蕁麻疹、軸索および神経の神経障害、バロー病、ベーチェット病、水泡性類天疱
瘡、心筋症、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性疲労症候群、慢性炎
症脱髄性多発性神経障害（ＣＩＤＰ：Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｅ
ｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、慢性再発性多発性骨髄炎（
ＣＲＭＯ：Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｕｌｔｉｆｏｃｕｌ  ｏｓｔｏｍｙ
ｅｌｉｔｉｓ）、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、ク
ローン病、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ク
レスト病、本態性混合寒冷グロブリン血症、脱髄性神経障害、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、
デビック病（視神経脊髄炎）、Ｉ型糖尿病、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内
膜症、好酸球性食道炎、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、実験的アレルギー性脳脊髄炎、エ
バンス症候群、線維筋痛、線維化性肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、糸球体腎炎
、グッドパスチャー症候群、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ：Ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓ
ｉｓ  ｗｉｔｈ  Ｐｏｌｙａｎｇｉｉｔｉｓ）（ウェゲナー病）、グレーブス病、ギラン
・バレー症候群、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑
病、妊娠性疱疹、低ガンマグロブリン血症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ：Ｉｄｉ
ｏｐａｔｈｉｃ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ）、ＩｇＡ腎症、
ＩｇＧ４関連硬化症、免疫調節性リポタンパク質、封入体筋炎、インスリン依存型糖尿病
（１型）、間質性膀胱炎、若年性関節炎、若年型糖尿病、川崎症候群、ランバート・イー
トン症候群、大血管障害、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬、木質性結
膜炎、線状ＩｇＡ疾患（ＬＡＤ：Ｌｉｎｅａｒ  ＩｇＡ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ループス（
ＳＬＥ）、ライム病、慢性メニエール病、顕微鏡的多発性血管炎、混合結合組織疾患（Ｍ
ＣＴＤ：Ｍｉｘｅｄ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）、モーレ
ン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性硬化症、筋炎、重症
筋無力症、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病）、好中球減少症、眼の瘢痕性類
天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ
ｃｕｓ）に関連する小児自己免疫性神経精神疾患）、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘ
モグロビン尿症（ＰＮＨ：Ｐａｒｏｘｙｓｍａｌ  ｎｏｃｔｕｒｎａｌ  ｈｅｍｏｇｌｏ
ｂｉｎｕｒｉａ）、パリー・ロンベルグ症候群、パーソネージ・ターナ症候群、扁平部炎
（末梢ブドウ膜炎）、天疱瘡、末梢神経障害、静脈周囲の脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭ
Ｓ症候群、結節性多発動脈炎、多腺性自己免疫症候群Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型、多腺
性内分泌障害、リウマチ性多筋痛、多発筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、プ
ロゲステロン皮膚炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、
特発性肺線維症；壊疽性膿皮症、赤芽球癆、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神
経性ジストロフィー、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、下肢静止不能症候群、後腹
膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、
強皮症、シェーグレン症候群、小血管炎、精子および精巣の自己免疫病、スティッフパー
ソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ：Ｓｕｂａｃｕｔｅ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  
ｅｎｄｏｃａｒｄｉｔｉｓ）、スザック症候群、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／
巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ：Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐ
ｕｒｐｕｒａ）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、管自己免疫障害、潰瘍性大腸炎
、未分化結合組織疾患（ＵＣＴＤ：Ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｃｏｎｎｅｃｔ
ｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ブドウ膜炎、小水疱水疱性皮膚病、血管炎、
白斑ならびにヴェゲナー肉芽腫症（多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）としても公知）が挙
げられる。
【０２９６】
ＴＧＦ−βは、白血球分化、増殖および活性化における活性役割を担い、それにより免
疫および自己免疫疾患における重要な因子となる。さらに、ＴＧＦ−βは、白血球の走化
性を促進し、接着分子媒介局在化に影響を与える。心臓、肺および胃炎症におけるＴＧＦ
−βについて役割が実証されている。さらに、ＳＭＡＤ３欠損マウスは、Ｔ細胞活性化損
害および粘膜免疫性の低減の結果として慢性粘膜感染を生じやすい（ブローブ，Ｇ．Ｃ．
（Ｂｌｏｂｅ，Ｇ．Ｃ．）ら著、「ヒト疾患におけるトランスフォーミング成長因子βの
役割（Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅ
ｔａｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）」、ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ
・メディシン（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ）、２０００年５月４日、第３４２巻（第１８
号）、ｐ．１３５０〜８）。免疫抑制薬として、ＴＧＦ−βは、炎症細胞の機能を阻害し
、制御性Ｔ細胞の機能を向上させることが示されている。近年の研究は、潜在型ＴＧＦ−
β成長因子プロドメイン複合体（ＧＰＣ）が、糖タンパク質Ａ反復無名タンパク質（ＧＡ
ＲＰ）との相互作用を介して制御性Ｔ細胞に結合することを示している。実際、ＧＡＲＰ
は、Ｔ細胞とのＴＧＦ−β会合に必要である（トラン，Ｄ．Ｑ．（Ｔｒａｎ，Ｄ．Ｑ．）
ら著、「ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）は、血小板および活性化ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞上
の潜在型ＴＧＦ−βの表面発現に不可欠である（ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）  ｉｓ  ｅｓ
ｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌａ
ｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β  ｏｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＦＯ
ＸＰ３＋  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）」、米国科学アカデミー紀要（ＰＮ
ＡＳ）、２００９年、第１０６巻（第３２号）、ｐ．１３４４５〜５０）。この相互作用
は、インテグリン依存的にＧＰＣから活性ＴＧＦ−βを放出するために必要なプラットフ
ォームを提供する（ワン，Ｒ．（Ｗａｎｇ，Ｒ．）ら著、「ＧＡＲＰは、ＴＧＦ−βのバ
イオアベイラビリティおよび活性化を調節する（ＧＡＲＰ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ
ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦ−β
）」、モレキュラー・バイオロジー・オブ・ザ・セル（Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｃｅｌｌ）、
２０１２年３月、第２３巻（第６号）、ｐ．１１２９〜３９、イーパブ（Ｅｐｕｂ）２０
１２年１月２５日）。一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は
、ＧＡＲＰおよびＴＧＦ−β間の相互作用をモジュレートする。このようなモジュレーシ
ョンは、疾患（例えば、自己免疫疾患および／または癌）の治療のためにＴ細胞活性を選
択的にモジュレートし得る。一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組
成物は、免疫および／または自己免疫障害の治療に使用することができる。一部の実施形
態において、本発明の化合物および／または組成物は、ＧＡＲＰ結合ＧＰＣ、ＧＡＲＰま
たはＧＡＲＰおよびＧＰＣ間の相互作用部位を特異的に標的化し得る。一部の実施形態に
おいて、抗体を含む本発明の化合物および／または組成物は、ＧＡＲＰ結合ＧＰＣからの
成長因子（例として、限定されるものではないが、ＴＧＦ−β）の放出を促進する一方、
ＬＴＢＰ結合ＧＰＣからの成長因子放出に影響しないように設計される。本発明の化合物
および／または組成物による免疫および自己免疫障害の治療は、標準的治療（ＳＯＣ）と
の組合せで、または併用診断薬との相乗的組合せで存在し得る。
【０２９７】
感染作用物質のための治療薬
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、例えば、１つ以上
の感染を有する対象において感染性疾患および／または障害の治療に有用であり得る。一
部の実施形態において、対象は、１つ以上の感染を有し、または１つ以上の感染を発症す
るリスクがある。本明細書において使用される場合、用語「感染」は、宿主内で繁殖し得
る１つ以上の外来生物または作用物質の存在に起因する宿主中の疾患または病態を指す。
感染は、典型的には、１つ以上の感染生物または作用物質による１つ以上の正常粘膜また
は他の組織障壁の破損を含む。１つ以上の感染を有する対象は、それらの体内に存在する
１つ以上の客観的に計測可能な感染生物または作用物質を含む対象である。１つ以上の感
染を有するリスクがある対象は、１つ以上の感染を発症しやすい対象である。このような
対象としては、例えば、１つ以上の感染生物または作用物質への既知または疑われる曝露
を有する対象を挙げることができる。一部の実施形態において、感染を有するリスクがあ
る対象としては、免疫応答を感染生物および／または作用物質にマウントする能力の損傷
に伴う病態を有する対象、例えば、先天性および／または後天性免疫不全を有する対象、
放射線療法および／または化学療法を受ける対象、火傷損傷を有する対象、外的損傷を有
する対象ならびに手術または他の侵襲性医学もしくは歯科的手術を受ける対象を挙げるこ
ともできる。
【０２９８】
感染は、関与する感染生物および／または作用物質のカテゴリーに基づき細菌、ウイル
ス、真菌、および／または寄生虫として広く分類される。他の一般的でないタイプの感染
として、例えば、リケッチア、マイコプラズマを含む感染、ならびにスクレイピー、ウシ
海綿状脳症（ＢＳＥ：ｂｏｖｉｎｅ  ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔ
ｈｙ）、およびプリオン病（例えば、クールーおよびクロイツフェルト・ヤコブ病）を引
き起こす作用物質も当技術分野において公知である。感染を引き起こす細菌、ウイルス、
真菌、および寄生虫の例は、当技術分野において周知である。感染は、急性、亜急性、慢
性、または潜在性であり得、それは、局在性または全身性であり得る。本明細書において
使用される場合、用語「慢性感染」は、自然または適応免疫応答の正常の作用によりクリ
アランスされず、長期間、数週間、数ヵ月間、および数年間の桁で対象中で持続するそれ
らの感染を指す。慢性感染は、感染作用物質の潜在性を反映し得、感染症状が存在しない
期間、すなわち、無症候期を含み得る。慢性感染の例としては、限定されるものではない
が、ＨＩＶ感染およびヘルペスウイルス感染が挙げられる。さらに、感染は、宿主中の感
染生物または作用物質の生活環の少なくとも１つの期の間、主に細胞内または細胞外感染
であり得る。
【０２９９】
本発明の化合物および／または組成物ならびに追加の治療剤は、同一の組成物中で組合
せで（例えば、非経口的に）、別個の組成物の一部として、または本明細書に記載の別の
方法により投与することができる。
【０３００】
眼関連疾患、障害および／または病態のための治療薬
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、眼に関連する疾患
、障害および／または病態の治療において有用であり得る。これらとしては、限定される
ものではないが、緑内障、ドライアイおよび／または角膜創治癒を挙げることができる。
一部の実施形態において、化合物および／または組成物は、緑内障の治療において有用で
あり得る。証拠は、ＴＧＦ−β２が緑内障において上方調節されることを示唆する（ピヒ
ト，Ｇ．（Ｐｉｃｈｔ，Ｇ．）ら著、「異なるタイプの緑内障の房水中のトランスフォー
ミング成長因子β２レベルおよびフィルタリングブレブ発生との関連（Ｔｒａｎｓｆｏｒ
ｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｅｔａ  ２  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  
ａｑｕｅｏｕｓ  ｈｕｍｏｒ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｔｙｐｅｓ  ｏｆ  ｇｌａｕ
ｃｏｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｆｉｌｔｅｒｉｎｇ  ｂｌｅｂ  
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）」、グレフェス・アーカイブ・フォア・クリニカル・エクスペ
リメンタル・オフタルモロジー（Ｇｒａｅｆｅｓ  Ａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｐｈ
ｔｈａｌｍｏｌ）、２００１年３月、第２３９巻（第３号）、ｐ．１９９〜２０７；トリ
パーシ，Ｒ．Ｃ．（Ｔｒｉｐａｔｈｉ，Ｒ．Ｃ．）ら著、「緑内障眼中の房水は、増加し
たレベルのＴＧＦ−β２を含有する（Ａｑｕｅｏｕｓ  ｈｕｍｏｒ  ｉｎ  ｇｌａｕｃｏ
ｍａｔｏｕｓ  ｅｙｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ａｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｌｅｖｅｌ  
ｏｆ  ＴＧＦ−β２）」、エクスペリメンタル・アイ・リサーチ（Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅ
ｓ）、１９９４年１２月、第５９巻（第６号）、ｐ．７２３〜７）。これとしては、原発
性開放隅角緑内障および若年性緑内障が挙げられる。ＴＧＦ−β２が、眼圧を制御するヒ
ト小柱網細胞（緑内障において機能不全であることが多い）における老化様効果を誘導し
得る証拠も存在する（ユー，Ａ．Ｌ．（Ｙｕ，Ａ．Ｌ．）ら著、「ＴＧＦ−β２は、ヒト
小柱網細胞の老化に伴う変化を誘導する（ＴＧＦ−β２  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｓｅｎｅｓｃ
ｅｎｃｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｒａｂｅｃｕ
ｌａｒ  ｍｅｓｈｗｏｒｋ  ｃｅｌｌｓ）」、インベスティゲイティブ・オフタルモロジ
ー・アンド・ビジュアル・サイエンス（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  
Ｓｃｉ）、２０１０年１１月、第５１巻（第１１号）。ｐ．５７１８〜２３）。一部の実
施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、緑内障により冒され、または
それに関連する眼組織中またはその周辺の遊離ＴＧＦ−β２とＧＰＣ結合（不活性）ＴＧ
Ｆ−β２との比を減少させるために使用することができる。ＴＧＦ−β関連タンパク質は
、角膜創治癒にも影響を及ぼし得る（例えば、外科的修復および／またはレーシック治療
後）（フー，Ｍ．Ｉ．（Ｈｕｈ，Ｍ．Ｉ．）ら著、「ＴＧＦ−βアイソフォームの分布お
よびシグナリングは、角膜線維芽細胞創傷修復において介在する（Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉ
ｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦ−β  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎｔｅｒ
ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｉｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｗｏｕｎｄ  ｒｅｐａｉ
ｒ）」、ジャーナル・オブ・セルラー・バイオケミストリー（Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ）、２００９年１０月１日、第１０８巻（第２号）、ｐ．４７６〜８８；スミオカ，
Ｔ．（Ｓｕｍｉｏｋａ，Ｔ．）ら著、「角膜内皮の損傷誘導線維症に対するＴＧＦ−β／
Ｓｍａｄシグナルを遮断する阻害効果（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｂ
ｌｏｃｋｉｎｇ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ／Ｓｍａｄ  ｓｉｇｎａｌ  ｏｎ  ｉｎｊｕｒｙ−ｉ
ｎｄｕｃｅｄ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ）」
、モレキュラー・ビジョン（Ｍｏｌ  Ｖｉｓ）、２００８年、第１４巻、ｐ．２２７２〜
８１、イーパブ（Ｅｐｕｂ）２００８年１２月１１日；カリントン，Ｌ．Ｍ．（Ｃａｒｒ
ｉｎｇｔｏｎ，Ｌ．Ｍ．）ら著、「ＴＧＦ−βアイソフォームおよびそれらの阻害剤によ
る早期角膜創治癒における主要段階の示差的調節（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｅｇｕ
ｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｋｅｙ  ｓｔａｇｅｓ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｗｏ
ｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｂｙ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ
ｉｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）」、インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド
・ビジュアル・サイエンス（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ）、
２００６年５月、第４７巻（第５号）、ｐ．１８８６〜９４）。本発明の化合物および／
または組成物は、角膜中のＴＧＦ−β関連タンパク質をモジュレートして創傷治癒を可能
とし、および／または向上させるために使用することができる。このような化合物および
／または組成物は、従来の試みが不成功である分野において受け入れられる。ミード（Ｍ
ｅａｄ）ら（ミード，Ａ．Ｌ．（Ｍｅａｄ，Ａ．Ｌ．）ら著、「緑内障手術における新た
な術後抗瘢痕化剤としての抗ＴＧＦ−β２抗体の評価（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ
ｎｔｉ−ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ２  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｓ  ａ  ｎｅｗ  ｐｏｓｔｏｐｅ
ｒａｔｉｖｅ  ａｎｔｉ−ｓｃａｒｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔ  ｉｎ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｓ
ｕｒｇｅｒｙ）」、インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・
サイエンス（Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ）、２００３年８月
、第４４巻（第８号）、ｐ．３３９４〜４０１）は、眼組織中の瘢痕化を予防するための
抗ＴＧＦ−β２抗体を発生させ；しかしながら、臨床試験の結果は決定的でなかった。一
部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、ＴＧＦ−β２レベル（
遊離対ＧＰＣ結合）をモジュレートするために使用することができ、それにより抗瘢痕化
療法のアプローチの代替法を提供する。
【０３０１】
心血管徴候のための治療薬
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の心血管
徴候、例として、限定されるものではないが、心臓肥大を治療するために使用することが
できる。心臓肥大は、典型的には、心臓細胞の細胞容積の増加に起因する心臓の肥大を含
む（アウリゲンマ（Ａｕｒｉｇｅｍｍａ）著、２００６年、ニュー・イングランド・ジャ
ーナル・オブ・メディシン（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ）、第３５５巻（第３号）、ｐ．
３０８〜１０）。加齢に関連する心臓肥大は、部分的には、ＧＤＦ−１１の循環レベルの
低減に起因し得る。ロッフレード（Ｌｏｆｆｒｅｄｏ）ら（ロッフレード（Ｌｏｆｆｒｅ
ｄｏ）ら著、２０１３年、セル（Ｃｅｌｌ）、第１５３巻、ｐ．８２８〜３９）による研
究は、若齢および老齢マウス間の循環系の融合が、心臓肥大に関する保護的効果を有する
ことを見出した。この研究は、マウスの週齢とともに減少し、投与が心臓肥大も低減させ
得ることを示し得る循環因子としてＧＤＦ−１１を同定した。本発明の一部の化合物およ
び／または組成物は、心臓肥大を治療および／または予防するために使用することができ
る。このような化合物および／または組成物は、一部の場合において、潜在型ＧＰＣから
のＧＤＦ−１１成長因子の解離の向上を介して循環ＧＤＦ−１１のレベルを上昇させるＧ
ＤＦ−１１アゴニストを含み得る。
【０３０２】
一部の実施形態において、本発明の組成物および方法は、１つ以上のタイプの動脈障害
を治療するために使用することができる。このような障害としては、限定されるものでは
ないが、大動脈瘤の発症を挙げることができる。大動脈瘤は、種々の原因から生じ得るが
、ほとんどは、最終的にＴＧＦ−β２の過剰発現をもたらす。ボアロー（Ｂｏｉｌｅａｕ
）ら（ボアロー（Ｂｏｉｌｅａｕ）ら著、ネイチャー・ジェネティクス・レターズ（Ｎａ
ｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）、２０１２年、第４４巻（第８号）、ｐ
．９１６〜２３、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）による研究
は、胸部大動脈疾患に対して感受性の一部の遺伝型に関連するＴＧＦ−β２中の原因突然
変異をカバーしなかった。興味深いことに、突然変異が、ＴＧＦ−β２についてのハプロ
不全を引き起こすことが予測されたが、そのような突然変異を有する個体の動脈組織は、
免疫染色により決定されたとおり増加したレベルのＴＧＦ−β２を含んだ。類似の知見は
、マルファン症候群を罹患する個体からの動脈組織中で見出された（ナタアトマジャ（Ｎ
ａｔａａｔｍａｄｊａ）ら、２００６年）。一部の場合において、本発明の化合物および
／または組成物は、上昇したＴＧＦ−β２シグナリングを低減または予防するために使用
することができ、そのような例において、それにより動脈瘤の発症および／または進行を
制限する。
【０３０３】
一部の実施形態において、心血管疾患、障害および／または病態の治療において使用さ
れる本発明の化合物および／または組成物を開発し、および試験するために動物モデルを
使用することができる。一部の場合において、血管損傷モデルを使用することができる。
このようなモデルとしては、バルーン損傷モデルを挙げることができる。一部の場合にお
いて、これらは、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるスミス（Ｓｍｉｔ
ｈ）ら著、１９９９年、サーキュレーション・リサーチ（Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．）、第８４
巻（第１０号）、ｐ．１２１２〜２２に記載のとおり実施することができる。
【０３０４】
筋障害および／または損傷に関連する治療薬
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の筋障害
および／または損傷を治療するために使用することができる。一部の場合において、この
ような化合物および／または組成物としては、限定されるものではないが、ＧＤＦ−８、
ＧＤＦ−１１および／またはアクチビン活性をモジュレートする抗体を挙げることができ
る。筋は、総体重の約４０〜５０％を構成し、それにより体内の最大器官になる。筋障害
としては、悪液質（例えば、筋消耗）を挙げることができる。筋消耗は、種々の疾患およ
び異化障害（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、癌、癌悪液質、腎不全、鬱血性心疾患、筋ジス
トロフィー、非活動性萎縮、慢性閉塞性肺疾患、運動ニューロン疾患、外傷、神経変性疾
患、感染、関節リウマチ、不動症候群、糖尿病など）に伴い得る。このような障害におい
て、ＧＤＦ−８および／またはアクチビンシグナリング活性は、筋異化に寄与し得る（ハ
ン（Ｈａｎ）ら著、２０１３年、インターナショナル・ジャーナル・オブ・バイオケミス
トリー・アンド・セル・バイオロジー（Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ
ｌ．）、第４５巻（第１０号）、ｐ．２３３３〜４７；リー（Ｌｅｅ）著、２０１０年、
イムノロジー・エンドクライン・メタボリック・エージェンツ・イン・メディシナル・ケ
ミストリー（Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒ  Ｍｅｔａｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ  Ｃｈ
ｅｍ．）、第１０巻、ｐ．１８３〜９４、それらのそれぞれの内容は参照により全体とし
て本明細書に組み込まれる）。他の筋障害は、サルコペニアを含み得る。サルコペニアは
、加齢に伴う筋および機能の進行性損失である。老齢者において、サルコペニアは、虚弱
、衰弱、疲労および運動性の損失を引き起こし得る（モアリー（Ｍｏｒｅｌｙ）著、２０
１２年、ファミリー・プラクティス（Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ）、第２９巻、ｐ
．ｉ４４〜ｉ４８）。老齢人口の数が増加するにつれ、サルコペニアは、より深刻な公衆
衛生上の問題に徐々になりつつある。ハムリック（Ｈａｍｒｉｃｋ）ら（ハムリック（Ｈ
ａｍｒｉｃｋ）ら著、２０１０年、第６９巻（第３号）、ｐ．５７９〜８３）による研究
は、ＧＤＦ−８阻害が、外側コンパートメント筋損傷を含む腓骨骨切り術のマウスモデル
中の筋を修復し得ることを実証した。ＧＤＦ−８プロペプチドの投与は、筋量を約２０％
だけ増加させ、骨折治癒を改善するために十分であった。本発明の一部の化合物および／
または組成物は、ＧＤＦ−８活性をモジュレートすることにより筋疾患、障害および／ま
たは損傷を治療するために使用することができる。一部の場合において、本発明の化合物
は、ＧＤＦ−８シグナリング活性を防止し、または低減させるＧＤＦ−８シグナリングア
ンタゴニストであり得る。
【０３０５】
封入体筋炎（ＩＢＭ：Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  ｂｏｄｙ  ｍｙｏｓｉｔｉｓ）は、典型的
には、中年から老年期に生じる進行性筋損失を特徴とする疾患である。この疾患は、筋中
の自己抗原に対する自己免疫応答に起因して生じ、それが筋線維のＴ細胞侵入を引き起こ
し、筋線維破壊をもたらすと考えられている（グリーンベルグ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ）著
、２０１２年、カレント・オピニオン・ニューロロジ（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏ
ｌ）、第２５巻（第５号）、ｐ．６３０〜９）。治療化合物、例として、ＧＤＦ−８およ
び／またはアクチビンシグナル伝達を妨害し、それにより筋の産生および強化を刺激する
、ＩＩ型アクチビン受容体を標的化する抗体ビマグルマブ（ＢＹＭ３３８；ノバルティス
（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、バーゼル、スイス）が調査されている［臨床試験番号ＮＣＴ０１
９２５２０９、標題「ｓＩＢＭ患者における身体機能、筋強度、運動性に対する５２週間
におけるビマグルマブ／ＢＹＭ３３８の効力および安全性（Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  
Ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  Ｂｉｍａｇｒｕｍａｂ／ＢＹＭ３３８  ａｔ  ５２  Ｗｅｅｋｓ  
ｏｎ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｍｕｓｃｌｅ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ，Ｍｏｂ
ｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｓＩＢＭ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ）」（レジリエント（ＲＥＳＩＬＩＥＮ
Ｔ））参照］。本発明の一部の化合物および／または組成物は、ＩＢＭを有する対象を治
療するために使用することができる。一部の場合において、このような化合物および／ま
たは組成物は、ＧＤＦ−８活性を遮断し得る（例えば、ＧＤＦ−８ＧＰＣの安定化を介し
て）。ＩＢＭに加え、ＢＹＭ３３８は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療について調
査されている。一部の場合において、ＩＢＭ治療に利用される本発明の化合物および／ま
たは組成物は、ＣＯＰＤも同様に治療するために使用することができる。一部の場合にお
いて、本発明の化合物および／または組成物は、ＢＹＭ３３８との組合せで、および／ま
たはそれとの協調で投与することができる。
【０３０６】
糖尿病のための治療薬
骨格筋は、栄養のためにグルコースを使用および貯蔵する。これに起因して、骨格筋は
、循環グルコースレベルの重要な調節因子である。筋によるグルコースの取り込みは、収
縮またはインスリン刺激のいずれかにより刺激され得る（参照により全体として本明細書
に組み込まれるマクフェロン（ＭｃＰｈｅｒｒｏｎ）ら著、２０１３年、アディポサイト
（Ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）、第２巻（第２号）、ｐ．９２〜８）。グオ（Ｇｕｏ）ら（グオ
（Ｇｕｏ）ら著、２０１２年、ダイアベティス（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）、第６１巻（第１０
号）、ｐ．２４１４〜２３）による近年の研究は、ＧＤＦ−８受容体欠損マウスをＡ−Ｚ
ＩＰ／Ｆ１マウス（リポジストロフィーマウス株、糖尿病モデルとして使用）と交配した
場合、ハイブリッド子孫は、低減したレベルの血中グルコースおよび改善されたインスリ
ン感受性を示すことを見出した。過食症（過剰摂食）もこれらのマウスにおいて低減され
た。一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、糖尿病および／
または過食症を治療するために使用することができる。一部のこのような治療は、血中グ
ルコースを低減させ、および／またはインスリン感受性を改善するために使用することが
できる。一部の場合において、このような治療は、ＧＤＦ−８シグナリングアンタゴニス
ト、例えば、ＧＤＦ−８のそのプロドメインからの解離を防止する１つ以上の抗体を含み
得る。
【０３０７】
胃腸管疾患、障害および／または病態のための治療薬
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上のタイプ
の胃腸管（ＧＩ）障害を治療するために使用することができる。このような障害としては
、限定されるものではないが、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン病および潰瘍
性大腸炎）を挙げることができる。
【０３０８】
ＴＧＦ−β２は、腸ホメオスタシスにおいて役割を担い得、抗炎症役割を有し得、ＧＩ
関連障害、例えば、粘膜炎およびある形態の大腸炎から保護する。一研究において、ＴＧ
Ｆ−β２は、腸の発生においてマクロファージ炎症応答を抑制し、炎症粘膜損傷から保護
することが示された（マヘシュワリ（Ｍａｈｅｓｈｗａｒｉ）ら、２０１１年）。興味深
いことに、ＴＧＦ−β２のレベルは母乳中で高く、このことは、ＴＧＦ−β２が一部の場
合において、局所的に機能し得ることを示唆する。実際、母乳中のＴＧＦ−β２は、炎症
応答を減衰し得る（ラウタバ（Ｒａｕｔａｖａ）ら、２０１１年）。本発明の一部の化合
物、組成物および／または方法は、ホメオスタシスの維持および／またはＧＩ関連障害の
管理においてＧＩ  ＴＧＦ−β２レベルおよび／または活性をモジュレートするために使
用することができる。
【０３０９】
一部の場合において、ＧＩ関連疾患、障害および／または病態の治療のための本発明の
化合物および／または組成物を開発し、および／または試験するためにＧＩ関連疾患、障
害および／または病態のモデルを使用することができる。一部の場合において、ＧＩ損傷
モデルを使用することができる。このような損傷モデルとしては、限定されるものではな
いが、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘導大腸炎モデルを挙げ
ることができる。このようなモデルは、内容が参照により全体として本明細書に組み込ま
れるシェイフェル，Ｆ．（Ｓｃｈｅｉｆｆｅｌｅ，Ｆ．）ら著、２００２年、カレント・
プロトコルズ・イン・イムノロジー（Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、第
１５章、第１５．１９部に記載のとおり実施することができる。
【０３１０】
獣医用途
一部の実施形態において、本発明の組成物および方法は、獣医医療、例として、非ヒト
脊椎動物の医療および治療の分野において利用されることが企図される。本明細書におい
て使用される場合、用語「脊椎動物」は、全ての脊椎動物、例として、限定されるもので
はないが、魚類、両生類、鳥類、爬虫類および哺乳動物（例として、限定されるものでは
ないが、アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤ
ル、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、マウス、サル、ラバ、ブタ、ウサギ、ラット、トナ
カイ、ヒツジ、スイギュウ、ヤクおよびヒト）を含む。本明細書において使用される場合
、用語「非ヒト脊椎動物」は、ヒト（すなわち、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ））を
除く任意の脊椎動物を指す。例示的な非ヒト脊椎動物としては、野生および飼育種、例え
ば、愛玩動物および家畜が挙げられる。家畜としては、材料、例えば、食物、労働、およ
び派生製品、例えば、繊維および化学物質を産生するために農業環境において飼育される
飼育動物が挙げられる。一般に、家畜は、潜在的な農業重要性を有する全ての哺乳動物、
鳥類および魚類を含む。特に、四足食肉用動物としては、去勢雄牛、若齢雌牛、雌牛、子
牛、雄牛、畜牛、ブタおよびヒツジが挙げられる。
【０３１１】
バイオプロセス
一部の実施形態において、本発明は、宿主細胞中で、標的遺伝子の発現をモジュレート
し、または成長因子シグナリング分子のレベルを変更し得、そのようなモジュレーション
または変更は生物学的産物の産生を向上させる本発明の化合物および／または組成物とそ
のような細胞を接触させることにより、１つ以上の生物学的産物を産生する方法を提供す
る。本発明によれば、本発明の１つ以上の化合物および／または組成物を使用することに
よりバイオプロセス方法を改善することができる。これらは、１つ以上の化合物および／
または組成物を補給、置き換えまたは添加することにより改善することもできる。
【０３１２】
医薬組成物
本明細書に記載の医薬組成物は、バイオアベイラビリティ、治療窓および／または分布
体積の１つ以上により特徴決定することができる。
【０３１３】
バイオアベイラビリティ
一部の実施形態において、医薬組成物は、本発明の化合物および／または組成物とＧＰ
Ｃとの複合体を含む。このような実施形態において、複合体は、複合体からの成長因子の
一定の解離が所望の期間にわたり生じ得る所望の治療部位に移植することができる。一部
の実施形態において、複合体の移植は、スポンジおよび／または骨様マトリックスと会合
させて実施することができる。このような移植としては、限定されるものではないが、歯
科移植部位および／または骨修復の部位を挙げることができる。
【０３１４】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、フーリン欠損細胞
中で作製する。このような細胞中で産生されるＧＰＣは、インビボのフーリン開裂がＧＰ
Ｃプロセシングの間に律速的である事実に起因して放出が減速される区域における治療に
有用であり得る。一部の実施形態において、ＧＰＣ中の１つ以上のトロイドおよび／また
はフーリン部位が突然変異しており、内因性トロイドおよび／またはフーリンプロテアー
ゼの作用を減速させる。このような実施形態において、成長因子放出を減速させることが
できる（例えば、移植の部位において）。
【０３１５】
本発明の抗体は、本明細書に記載の送達／製剤化剤またはビヒクルとともに組成物に製
剤化される場合、本明細書に記載の送達剤を欠く組成物と比較して増加したバイオアベイ
ラビリティを示し得る。本明細書において使用される場合、用語「バイオアベイラビリテ
ィ」は、対象に投与される所与の量の特定の薬剤の全身性利用可能性を指す。バイオアベ
イラビリティは、哺乳動物への化合物の投与後の未変化形態の化合物の曲線下面積（ＡＵ
Ｃ：ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｕｒｖｅ）または最大血清もしくは血漿濃度（Ｃ
ｍａｘ）を計測することにより評価することができる。ＡＵＣは、横軸（Ｘ軸）に沿う時
間に対する縦軸（Ｙ軸）に沿う化合物の血清または血漿濃度をプロットする曲線下面積の
決定である。一般に、特定の化合物についてのＡＵＣは、当業者に公知の方法を使用し、
内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるＧ．Ｓ．バンカー（Ｇ．Ｓ．Ｂａｎ
ｋｅｒ）著、「現代の薬学、薬物および薬科学（Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃｓ，Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
）」、第７２巻、マーセル・デッカー、ニューヨーク社（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，
Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９６年に記載のとおり計算することができる。
【０３１６】
Ｃｍａｘ値は、対象への化合物の投与後に対象の血清または血漿中で達成される化合物
の最大濃度である。特定の化合物のＣｍａｘ値は、当業者に公知の方法を使用して計測す
ることができる。本明細書において使用される場合、語句「バイオアベイラビリティを増
加させること」または「薬物動態を改善すること」は、対象中の本発明の化合物および／
または組成物の全身性利用可能性を増加させ得る作用を指す（ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、または
Ｃｍｉｎにより計測して）。一部の実施形態において、このような作用は、本明細書に記
載の１つ以上の送達剤との共投与を含み得る。一部の実施形態において、化合物および／
または組成物のバイオアベイラビリティは、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少な
くとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少な
くとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少な
くとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少な
くとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少な
くとも約９０％、少なくとも約９５％または約１００％だけ増加し得る。
【０３１７】
治療窓
本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載の１つ以上の送達剤と製剤化
される場合、本明細書に記載の１つ以上の送達剤を用いずに投与される化合物および／ま
たは組成物の治療窓と比較して化合物および／または組成物投与の治療窓の増加を示し得
る。本明細書において使用される場合、用語「治療窓」は、治療効果を誘発する確率が高
い、作用部位における治療有効物質の血漿濃度の範囲、またはレベルの範囲を指す。一部
の実施形態において、化合物および／または組成物の治療窓は、本明細書に記載の１つ以
上の送達剤と共投与される場合、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１
０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３
０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５
０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７
０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９
０％、少なくとも約９５％または約１００％だけ増加し得る。
【０３１８】
分布体積
本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載の１つ以上の送達剤と製剤化
される場合、本明細書に記載の１つ以上の送達剤を欠く製剤と比較して、改善された（例
えば、低減または標的化された）分布容積（Ｖｄｉｓｔ）を示し得る。Ｖｄｉｓｔは、同
一薬剤の血液または血漿中濃度に対する体内の薬剤の量に関する。本明細書において使用
される場合、用語「分布容積」は、血液または血漿中と同一の濃度で、体内で薬剤の総量
を含有するために要求される流体容積を指し：Ｖｄｉｓｔは、体内の薬剤の量／血液また
は血漿中の薬剤の濃度に等しい。例えば、１０ｍｇ用量の所与の薬剤および１０ｍｇ／Ｌ
の血漿濃度について、分布容積は１リットルである。分布容積は、薬剤が血管外組織中に
存在する程度を反映する。大きい分布容積は、血漿タンパク質と比較して組織構成要素に
結合する薬剤の傾向を反映する。臨床環境において、Ｖｄｉｓｔは、定常状態濃度を達成
するための負荷用量を決定するために使用することができる。一部の実施形態において、
本発明の化合物および／または組成物の分布容積は、本明細書に記載の１つ以上の送達剤
と共投与される場合、少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少な
くとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少な
くとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少な
くとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％減少し
得る。
【０３１９】
製剤、投与、送達および用量
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、医薬組成物である
。本明細書において使用される場合、用語「医薬組成物」は、１つ以上の薬学的に許容可
能な賦形剤と製剤化された本発明の化合物および／または組成物を指す。一部の実施形態
において、医薬組成物は、場合により、１つ以上の追加の活性物質、例えば、治療および
／または予防活性物質を含み得る。医薬剤の製剤および／または製造における一般的な考
察は、例えば、レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）著、「製薬の科学および実践（Ｔｈｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２１版、
リッペンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年（参照により本明細書に組み込まれる）に見
出すことができる。
【０３２０】
一部の実施形態において、組成物は、ヒト、ヒト患者、または対象に投与することがで
きる。本開示の目的のため、語句「活性成分」は、一般に、本明細書に記載のとおり送達
すべき本発明の化合物および／または組成物を指す。
【０３２１】
本明細書に提供される医薬組成物の記載は、原則としてヒトへの投与に好適な医薬組成
物を対象とするが、そのような組成物は、一般に、他の対象、例えば、非ヒト動物、例え
ば、非ヒト哺乳動物への投与に好適であることが当業者により理解される。組成物を種々
の動物への投与に好適なものとするための、ヒトへの投与に好適な医薬組成物の改変は十
分理解されており、通常の技能を有する獣医薬理学者は、そのような改変を、行うとして
も単なる通常の実験により設計および／または実施することができる。医薬組成物の投与
が企図される対象としては、限定されるものではないが、ヒトおよび／または他の霊長類
；哺乳動物、例として、商業関連の哺乳動物、例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ
、イヌ、マウス、および／もしくはラット；ならびに／または鳥類、例として、商業関連
の鳥類、例えば、猛禽類、ニワトリ、カモ、ガン、および／もしくはシチメンチョウが挙
げられる。
【０３２２】
一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学分野において
公知の、または後に開発される任意の方法により調製することができる。一般に、このよ
うな調製方法は、活性成分を賦形剤および／または１つ以上の他の副成分と会合させるス
テップ、ならびに次いで、必要であればおよび／または所望により、生成物を所望の単一
または多用量単位に分類、成形および／また包装するステップを含む。
【０３２３】
一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、バルクで、単一単位用量として、お
よび／または複数の単一単位用量として調製、包装および／または販売することができる
。本明細書において使用される場合、用語「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬
組成物の個別量を指す。活性成分の量は、一般に、対象に投与される活性成分の投与量、
および／またはそのような投与量の利便的な分数、例えば、そのような投与量の２分の１
または３分の１などに等しい。
【０３２４】
一部の実施形態において、本発明の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形
剤、および／または任意の追加の成分の相対量は、アイデンティティ、サイズ、および／
または治療すべき対象の病態に応じて、ならびにさらには組成物を投与すべき経路に応じ
て変動し得る。例として、組成物は、約０．１％〜１００％、例えば、約０．５％〜約５
０％、約１％〜約３０％、約５％〜約８０％または少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成
分を含み得る。一部の実施形態において、活性成分は、調節エレメントおよび／またはＧ
ＰＣに指向される抗体である。
【０３２５】
製剤
本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の賦形剤を使用して製剤化して、（
１）安定性を増加させ；（２）細胞浸透性を増加させ；（３）持続性放出もしくは遅延放
出を許容し（例えば、そのような製剤からの化合物および／または成長因子の）；および
／または（４）生体内分布を変更する（例えば、化合物を規定の組織または細胞型に標的
化する）ことができる。さらに、慣習的な賦形剤、例えば、任意のおよび全ての溶媒、分
散媒体、希釈剤、液体ビヒクル、分散助剤、懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤、乳
化剤および保存剤に加え、本発明の製剤は、限定されるものではないが、リポソーム、脂
質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コア−シェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質
、本発明の化合物および／または組成物により形質移入された細胞（例えば、対象中への
移植のため）ならびにそれらの組合せを含み得る。
【０３２６】
賦形剤
医薬組成物を製剤化するための種々の賦形剤および組成物を調製するための技術は、当
技術分野において公知である（レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）著、「製薬の科学およ
び実践（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ
）、第２１版、Ａ．Ｒ．ジェンナロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）、リッペンコット・ウィ
リアムズ・アンド・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋ
ｉｎｓ）、ボルティモア、メリーランド、２００６年参照；参照により本明細書に組み込
まれる）。
【０３２７】
一部の実施形態において、慣用の賦形剤媒体の使用は、本開示の範囲内で企図され、但
し、任意の慣用の賦形剤媒体が、例えば、任意の不所望な生物学的効果を産生することに
より、またはそうでなければ医薬組成物の任意の他の構成要素と有害に相互作用すること
により物質および／またはそれらの誘導体と不適合であり得る場合を除く。
【０３２８】
本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の分野において公知または後に開発され
る任意の方法により調製することができる。一般に、このような調製方法は、活性成分を
賦形剤および／または他の副成分と会合させるステップを含む。
【０３２９】
本開示による医薬組成物は、バルクで、単一単位用量として、および／または複数の単
一単位用量として調製、包装、および／または販売することができる。
本開示の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、および／または任意の
追加の成分の相対量は、アイデンティティ、サイズ、および／または治療される対象の病
態に応じて、ならびにさらには医薬組成物を投与することができる経路に応じて変動し得
る。
【０３３０】
一部の実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤は、少なくとも９５％、少なくと
も９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の純
度である。一部の実施形態において、賦形剤は、ヒトにおける使用および／または動物へ
の使用に承認されている。一部の実施形態において、賦形剤は、米国食品医薬品局により
承認されている。一部の実施形態において、賦形剤は、医薬グレードである。一部の実施
形態において、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ：Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｐｏｅｉａ）、欧州薬局方（ＥＰ：Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅ
ｉａ）、英国薬局方および／または国際薬局方の基準を満たす。
【０３３１】
一部の実施形態において、本発明の薬学的に許容可能な賦形剤としては、限定されるも
のではないが、不活性希釈剤、分散剤および／もしくは顆粒化剤、表面活性剤および／も
しくは乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、滑沢剤、ならびに／または油剤を挙げ
ることができる。このような賦形剤を、場合により、医薬組成物中に含めることができる
。
【０３３２】
例示的な希釈剤としては、限定されるものではないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウ
ム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、
リン酸ナトリウム  ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリ
ン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、トウ
モロコシデンプン、粉糖など、および／またはそれらの組合せが挙げられる。
【０３３３】
例示的な顆粒化剤および／または分散剤としては、限定されるものではないが、ジャガ
イモデンプン、トウモロコシデンプン、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリ
ウム、クレイ、アルギン酸、グアーガム、シトラスパルプ、寒天、ベントナイト、セルロ
ースおよび木製品、天然海綿体、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナ
トリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシ
メチルデンプン（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架
橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）、メチルセルロース、
α化デンプン（デンプン１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルシウム
カルボキシメチルセルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ヴィーガム（ＶＥＥＧ
ＵＭ）（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第４級アンモニウム化合物など、およ
び／またはそれらの組合せが挙げられる。
【０３３４】
例示的な表面活性剤および／または乳化剤としては、限定されるものではないが、天然
乳化剤（例えば、アカシアゴム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカン
ト、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼ
ラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックスおよびレシチン）、コロイ
ド状クレイ（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］およびヴィーガムＶＥＥＧＵ
Ｍ（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量
アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、
モノステアリン酸トリアセチン、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸
グリセリル、およびモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、
カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、
およびカルボキシビニルポリマー）、カラゲナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロ
キシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、
ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン［ツ
イーン（ＴＷＥＥＮ）（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ツイーンｎ
（ＴＷＥＥＮｎ）（登録商標）６０］、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン［
ツイーン（ＴＷＥＥＮ）（登録商標）８０］、モノパルミチン酸ソルビタン［スパン（Ｓ
ＰＡＮ）（登録商標）４０］、モノステアリン酸ソルビタン［スパン（Ｓｐａｎ）（登録
商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標）６５］、
モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［スパン（ＳＰＡＮ）（登録商標
）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、モノステアリン酸ポリオキシエチレ
ン［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシル化
ヒマシ油、ステアリン酸ポリオキシメチレン、およびソルトールＳＯＬＵＴＯＬ（登録商
標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えばク
レモホル（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ）（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば
ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル−
ピロリドン）、モノラウリン酸ジエチレングリコール、オレイン酸トリエタノールアミン
、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリ
ン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、プルオリンク（ＰＬＵＯＲＩＮＣ）（登録商標）
Ｆ６８、ポロキサマー（ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ）（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム
、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドクサートナトリウムなど、ならび
に／またはそれらの組合せが挙げられる。
【０３３５】
例示的な結合剤としては、限定されるものではないが、デンプン（例えば、トウモロコ
シデンプンおよびデンプン糊）；ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキ
ストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然お
よび合成ゴム（例えば、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、アイリシュモスのエキス
、パンワール（ｐａｎｗａｒ）ガム、ガティガム、イサポール（ｉｓａｐｏｌ）皮の粘液
、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチ
ルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミニウ
ムマグネシウム（ヴィーガム（Ｖｅｅｇｕｍ）（登録商標））、およびカラマツアラボガ
ラクタン（ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ））；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポ
リエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ワックス；水
；アルコールなど；およびそれらの組合せが挙げられる。
【０３３６】
例示的な保存剤としては、限定されるものではないが、酸化防止剤、キレート剤、抗菌
保存剤、抗真菌保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤、および／または他の保存剤を挙
げることができる。例示的な酸化防止剤としては、限定されるものではないが、αトコフ
ェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アコルビル（ａｃｏｒｂｙｌ）、ブチル化ヒド
ロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸
カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナト
リウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および／または亜硫酸ナトリウムが挙げられる。例示
的なキレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エ
デト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エ
デト酸ナトリウム、酒石酸、および／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。例示的
な抗菌保存剤としては、限定されるものではないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼ
トニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、
クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾ
ール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノ
キシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール
、および／またはチメロサールが挙げられる。例示的な抗真菌保存剤としては、限定され
るものではないが、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベ
ン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸
ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、および／またはソルビン酸が挙げられる。例示的
なアルコール保存剤としては、限定されるものではないが、エタノール、ポリエチレング
リコール、フェノール、フェノール系化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒド
ロキシ安息香酸塩、および／またはフェニルエチルアルコールが挙げられる。例示的な酸
性保存剤としては、限定されるものではないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、
β−カロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、および／
またはフィチン酸が挙げられる。他の保存剤としては、限定されるものではないが、トコ
フェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ）、セ
トリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエンド（
ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリ
ウム（ＳＬＳ）、ラウリル硫酸エーテルナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、
メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、グリダントプラス（
ＧＬＹＤＡＮＴ  ＰＬＵＳ）（登録商標）、フェノニップ（ＰＨＥＮＯＮＩＰ）（登録商
標）、メチルパラベン、ゲルマール（ＧＥＲＭＡＬＬ）（登録商標）１１５、ゲルマベン
（ＧＥＲＭＡＢＥＮ）（登録商標）ＩＩ、ネオロン（ＮＥＯＬＯＮＥ）（商標）、カトン
（ＫＡＴＨＯＮ）（商標）、および／またはユーキシル（ＥＵＸＹＬ）（登録商標）が挙
げられる。
【０３３７】
例示的な緩衝剤としては、限定されるものではないが、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、
リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウ
ム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、Ｄ−グ
ルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシ
ウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、リ
ン酸三カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物
、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナト
リウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二
塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメ
タミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、パイロジェンフリー水
、等張食塩水、リンガー液、エチルアルコールなど、および／またはそれらの組合せが挙
げられる。
【０３３８】
例示的な滑沢剤としては、限定されるものではないが、ステアリン酸マグネシウム、ス
テアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、グリセリルベハネート（
ｂｅｈａｎａｔｅ）、硬化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸
ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナト
リウムなど、およびそれらの組合せが挙げられる。
【０３３９】
例示的な油剤としては、限定されるものではないが、アーモンド油、杏仁油、アボカド
油、ババス油、ベルガモット油、ブラックカラント種油、ルリチシャ油、ジュニパーター
ル油、カモミール油、キャノーラ油、カラウェー油、カルナバ油、ヒマシ油、桂皮油、コ
コアバター油、ヤシ油、肝油、コーヒー油、トウモロコシ油、綿実油、エミュー油、ユー
カリ油、月見草油、魚油、亜麻仁油、ゲラニオール油、ウリ油、ブドウ種子油、ヘーゼル
ナッツ油、ヒソップ油、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバン
ジン油、ラベンダー油、レモン油、リツェアクベバ油、マカデミアナッツ油、ゼニアオイ
油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ナツメグ油、オリーブ油、オレ
ンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、ピーチ核油、ラッカセイ油、ポピ
ー種子油、カボチャ種子油、菜種油、米糠油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン
油、サザンカ油、セイボリー油、シーバックソーン油、ゴマ油、シアバター油、シリコー
ン油、大豆油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ油、ベチベル油、クルミ
油、および小麦胚種油が挙げられる。例示的な油剤としては、限定されるものではないが
、ステアリン酸ブチル、トリカプリル酸グリセリル、トリカプリン酸グリセリル、シクロ
メチコーン、セバシン酸ジエチル、ジメチコーン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱
油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、および／またはそれら
の組合せが挙げられる。
【０３４０】
賦形剤、例えば、ココアバターおよび坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤
、矯味剤、および／または着香剤が、配合者の判断により組成物中に存在し得る。
製剤ビヒクル：リポソーム、リポプレックス、および脂質ナノ粒子
本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上のリポソーム、リポプレックスおよ
び／または脂質ナノ粒子を使用して製剤化することができる。一部の実施形態において、
医薬組成物は、リポソームを含む。リポソームは、主として脂質二重層から構成され得、
栄養素および医薬製剤の投与のための送達ビヒクルとして使用することができる人工調製
小胞である。リポソームは、様々なサイズのものであり得、例えば、限定されるものでは
ないが、数百ナノメートルの直径であり得、狭い水性コンパートメントにより離隔してい
る一連の同心二重層を含有し得る多層小胞（ＭＬＶ：ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅ
ｓｉｃｌｅ）、５０ｎｍ未満の直径であり得る小型単細胞小胞（ＳＵＶ：ｓｍａｌｌ  ｕ
ｎｉｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）および５０〜５００ｎｍの直径であり得る大型
単層小胞（ＬＵＶ：ｌａｒｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）であり得る
。リポソーム構成要素としては、限定されるものではないが、非健常組織へのリポソーム
の付着を改善するため、またはイベント、例えば、限定されるものではないが、エンドサ
イトーシスを活性化するためのオプソニンまたはリガンドを挙げることができる。リポソ
ームは、低または高ｐＨを含み得る。一部の実施形態において、リポソームｐＨは、医薬
製剤の送達を改善するために変動させることができる。
【０３４１】
一部の実施形態において、リポソーム形成は、物理化学的特徴、例えば、限定されるも
のではないが、捕捉される医薬製剤、リポソーム成分、脂質小胞を分散させる媒体の性質
、捕捉される物質の有効濃度、捕捉される物質の潜在的毒性、小胞の適用および／または
送達の間に含まれる追加のプロセス、最適化サイズ、多分散性、意図される適用のための
小胞の保存期間、バッチ間再現性ならびに安全および十分なリポソーム産物の大規模産生
の可能性に依存し得る。
【０３４２】
一部の実施形態において、製剤および組成物がインビボで異なる細胞型に受動的または
活性的に指向されるように、製剤をアセンブルし、または組成物を変更することができる
。
【０３４３】
一部の実施形態において、製剤は、限定されるものではないが、ホレート、トランスフ
ェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミミン（ＧａｌＮＡｃ）により例示される製剤表面上の
異なるリガンドの発現、および抗体標的アプローチを介して選択的に標的化することがで
きる。
【０３４４】
一部の実施形態において、本発明の医薬組成物は、リポソーム、リポプレックスおよび
／または脂質ナノ粒子とともに製剤化して機能の効力を改善することができる。このよう
な製剤は、医薬組成物による細胞形質移入を増加させ得る。一部の実施形態において、リ
ポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子は、医薬組成物安定性を増加させるため
に使用することができる。
【０３４５】
一部の実施形態において、リポソームは、具体的には、１つ以上の抗体を含む医薬組成
物のために配合される。このようなリポソームは、当技術分野において公知の技術、例え
ば、エプシュタイン（Ｅｐｐｓｔｅｉｎ）ら（エプシュタイン，Ｄ．Ａ．（Ｅｐｐｓｔｅ
ｉｎ，Ｄ．Ａ．）ら著、「リポソーム封入ネズミインターフェロンガンマの生物学的活性
は、細胞膜受容体により媒介される（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  
ｌｉｐｏｓｏｍｅ−ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  
ｇａｍｍａ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｃ
ｅｐｔｏｒ）」、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ
ＳＡ）、１９８５年６月、第８２巻（第１１号）、ｐ．３６８８〜９２）；ウォン（Ｈｗ
ａｎｇ）ら（ウォン，Ｋ．Ｊ．（Ｈｗａｎｇ，Ｋ．Ｊ．）ら著、「単層スフィンゴミエリ
ン／コレステロールリポソームの肝臓取り込みおよび分解：速度論的研究（Ｈｅｐａｔｉ
ｃ  ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  
ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ／ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：ａ  ｋｉ
ｎｅｔｉｃ  ｓｔｕｄｙ）」、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ
Ｓｃｉ  ＵＳＡ）、１９８０年７月、第７７巻（第７号）、ｐ．４０３０〜４）；米国
特許第４，４８５，０４５号明細書および米国特許第４，５４４，５４５号明細書により
記載されているものにより調製することができる。持続循環時間を有するリポソームの産
生は、米国特許第５，０１３，５５６号明細書にも記載されている。
【０３４６】
一部の実施形態において、抗体を含む本発明のリポソームは、ポリエチレングリコール
誘導体化された脂質、例えば、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびホスファチ
ジルエタノールアミンを利用する逆相蒸発を使用して生成することができる。所望の直径
のリポソームを押出するために規定細孔サイズを有するフィルタを使用する。別の実施形
態において、本発明の化合物および／または組成物は、マーチン（Ｍａｒｔｉｎ）ら（マ
ーチン，Ｆ．Ｊ．（Ｍａｒｔｉｎ，Ｆ．Ｊ．）ら著、「予備形成小胞への免疫グロブリン
断片の不可逆的カップリング。リポソーム標的化の改善された方法（Ｉｒｒｅｖｅｒｓｉ
ｂｌｅ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ
ｔｏ  ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ．Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｍｅｔｈｏ
ｄ  ｆｏｒ  ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）」、ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカル・ケミストリー（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．）、１９８２年１月１０日、第２５７
巻（第１号）、ｐ．２８６〜８）により記載されているとおり、リポソームの外部表面に
ジスルフィド交換反応によりコンジュゲートすることができる。
【０３４７】
製剤ビヒクル：ポリマーおよびナノ粒子
本発明の化合物および／または組成物は、天然および／または合成ポリマーを使用して
製剤化することができる。送達に使用することができるポリマーの非限定的な例としては
、限定されるものではないが、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、キトサン、シクロデ
キストリン、およびポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ：ｐｏｌｙ（ｌａｃｔ
ｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）ポリマーが挙げられる。一部の実施形態にお
いて、ポリマーは、生分解性であり得る。
【０３４８】
一部の実施形態において、ポリマー製剤は、化合物および／または組成物の持続性放出
および／または遅延放出を許容し得る（例えば、筋肉内および／または皮下注射後）。本
発明の化合物および／または組成物についての変更された放出プロファイルは、例えば、
延長された期間にわたり化合物放出をもたらし得る。ポリマー製剤は、本発明の化合物お
よび／または組成物の安定性を増加させるために使用することもできる。
【０３４９】
一部の実施形態において、ポリマー製剤は、限定されるものではないが、ホレート、ト
ランスフェリン、およびＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）により例示される
異なるリガンドの発現を介して選択的に標的化することができる（ベノア，Ｄ．Ｓ．（Ｂ
ｅｎｏｉｔ，Ｄ．Ｓ．）ら著、「標的化ｓｉＲＮＡ送達のためのホレート官能化ＲＡＦＴ
ポリマーの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｆｏｌａｔｅ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚ
ｅｄ  ＲＡＦＴ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｓｉＲＮＡ  ｄｅｌｉ
ｖｅｒｙ）」、バイオマクロモレキュールズ（Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）、
２０１１年、第１２巻、ｐ．２７０８〜１４；ロゼマ，Ｄ．Ｂ．（Ｒｏｚｅｍａ、Ｄ．Ｂ
．）ら著、「肝細胞へのｓｉＲＮＡの標的化インビボ送達のための動的ポリコンジュゲー
ト（Ｄｙｎａｍｉｃ  ｐｏｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｎ
ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ  ｔｏ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ）」
、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ）、２００
７年、第１０４巻、ｐ．１２９８２〜１２８８７；デイビス，Ｍ．Ｅ．（Ｄａｖｉｓ，Ｍ
．Ｅ．）ら著、「自己集合シクロデキストリンポリマーベースナノ粒子を介するヒトにお
けるｓｉＲＮＡの最初の標的化送達：構想から臨床へ（Ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｔａｒｇｅ
ｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ｖｉａ  ａ  ｓｅ
ｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇ，ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  ｐｏｌｙｍｅｒ−ｂａｓｅｄ
ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ：ｆｒｏｍ  ｃｏｎｃｅｐｔ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃ）、モレ
キュラー・ファーマコロジ（Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ）、２００９年、第６巻、ｐ．６５９〜
６６８；デイビス，Ｍ．Ｅ．（Ｄａｖｉｓ，Ｍ．Ｅ．）ら著、「標的化ナノ粒子を介して
全身投与されたｓｉＲＮＡからのヒトにおけるＲＮＡｉの証拠（Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ
ＲＮＡｉ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ｆｒｏｍ  ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉ
ｓｔｅｒｅｄ  ｓｉＲＮＡ  ｖｉａ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ）
、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年、第４６４巻、ｐ．１０６７〜７０；それら
のそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）。
【０３５０】
本発明の化合物および／または組成物は、ポリマー、脂質、および／または他の生分解
性薬剤、例えば、限定されるものではないが、リン酸カルシウムの組合せを使用してナノ
粒子として製剤化することができる。一部の実施形態において、構成要素をコア−シェル
、ハイブリッド、および／または多層アーキテクチャ中で組み合わせてナノ粒子構造の微
調整を可能とすることができ、そうして送達を向上させることができる。本発明の抗体の
ために、自己集合してナノメートルサイズの小胞を形成するｐＨ感受性ジブロックコポリ
マーのポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン−ブロック−（２−
（ジイソプロピルアミノ）エチルメタクリレート）、（ＰＭＰＣ−ＰＤＰＡ）（ポリマー
ソームとしても公知）をベースとする系を生理学的ｐＨにおいて使用することができる。
これらのポリマーソームは、生細胞内で比較的高い抗体ペイロードを良好に送達すること
が示されている（マッシナニ，Ｍ．（Ｍａｓｓｉｇｎａｎｉ，Ｍ．）ら著、「抗体の細胞
送達：有効な標的化細胞内イメージングおよび新たな治療ツール（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｔａｒｇｅｔｅｄ
ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ｔｏｏｌ）、ネイチャー・プロシーディングス（Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ
ｓ）、２０１０年。ｐ．１〜１７）。
【０３５１】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物の送達のためのナノ粒
子を形成するためにＰＥＧ電荷変換型ポリマー（ピテラ，Ｆ．（Ｐｉｔｅｌｌａ，Ｆ．）
ら著、「細胞毒性がわずかな有効な遺伝子ノックダウンのためのリン酸カルシウムおよび
ＰＥＧ−ブロック電荷変換型ポリマーからのｓｉＲＮＡを取り込むハイブリッドナノ粒子
のエンドソームエスケープの向上（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｅｎｄｏｓｏｍａｌ  ｅｓｃａｐ
ｅ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ−ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇ  ｈｙｂｒｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔ
ｉｃｌｅｓ  ｆｒｏｍ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｎｄ  ＰＥＧ−ｂｌｏ
ｃｋ  ｃｈａｒｇｅ−ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎａｌ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃ
ｉｅｎｔ  ｇｅｎｅ  ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ  ｗｉｔｈ  ｎｅｇｌｉｇｉｂｌｅ  ｃｙｔｏ
ｔｏｘｉｃｉｔｙ）」、バイオマテリアルズ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）、２０１１年
、第３２巻、ｐ．３１０６〜１４）を使用することができる。一部の実施形態において、
ＰＥＧ電荷変換型ポリマーは、酸性ｐＨにおいてポリカチオンに開裂させ、したがってエ
ンドソームエスケープを向上させることによりＰＥＧ−ポリアニオンブロックコポリマー
を改善し得る。
【０３５２】
一部の実施形態において、ポリマーナノ粒子の複合体化、送達および／または内在化は
、コアおよびシェルナノ粒子構成要素の両方の化学組成を変更することにより正確に制御
することができる（シーグワルト，Ｄ．Ｊ．（Ｓｉｅｇｗａｒｔ，Ｄ．Ｊ．）ら著、「細
胞内送達のための化学的に多様なコア−シェルナノ粒子のコンビナトリアル合成（Ｃｏｍ
ｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｄｉｖｅｒ
ｓｅ  ｃｏｒｅ−ｓｈｅｌｌ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｒａｃｅｌ
ｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａ
ｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ）、２０１１年、第１０８巻、ｐ．１２９９６〜３００１）。
【０３５３】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物を送達するためにポリ
（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）のマトリックスを使用する。このようなマトリックスは
、他者により記載されている（シャーウッド，Ｊ．Ｋ．（Ｓｈｅｒｗｏｏｄ，Ｊ．Ｋ．）
ら著、「抗体送達系の制御（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ）」、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ）、１９９２年、第１０巻、ｐ．１４４６〜９）。
【０３５４】
抗体製剤
本発明の抗体は、静脈内投与または血管外投与のために製剤化することができる（ドー
アティ（Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ）ら著、「モノクローナル抗体治療薬についての製剤および
送達の論点（Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｉｓｓｕｅｓ  ｆｏ
ｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」、アドバ
ンスト・ドラッグ・デリバリー・レビューズ（Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．
）、２００６年８月７日、第５８巻（第５−６号）、ｐ．６８６〜７０６および米国特許
出願公開第２０１１／０１３５５７０号明細書、それらのそれぞれの内容は参照により全
体として本明細書に組み込まれる）。血管外投与経路としては、限定されるものではない
が、皮下投与、腹腔内投与、脳内投与、眼内投与、病巣内投与、局所投与および筋肉内投
与を挙げることができる。
【０３５５】
一部の実施形態において、抗体構造は、治療薬としての有効性を改善するように改変す
ることができる。改善としては、限定されるものではないが、熱力学的安定性の改善、Ｆ
ｃ受容体結合特性の低減および／またはフォールディング効率の改善を挙げることができ
る。改変としては、限定されるものではないが、アミノ酸置換、グリコシル化、パルミト
イル化および／またはタンパク質コンジュゲーションを挙げることができる。
【０３５６】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、酸化防止剤とともに製剤化して抗体酸化を
低減させることができる。本発明の抗体は、添加剤とともに製剤化してタンパク質凝集を
低減させることもできる。このような添加剤としては、限定されるものではないが、アル
ブミン、アミノ酸、糖、尿素、塩化グアニジニウム、ポリアルコール、ポリマー（例えば
、ポリエチレングリコールおよびデキストラン）、界面活性剤（例として、限定されるも
のではないが、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０）またはさらには他の抗体
を挙げることができる。
【０３５７】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、抗体構造および機能に対する水の影響を低
減させるように製剤化することができる。このような製剤中の抗体調製物は、凍結乾燥さ
せることができる。凍結乾燥に供される製剤は、抗体構造を保護および／または安定化す
るための炭水化物またはポリオール化合物を含み得る。このような化合物としては、限定
されるものではないが、スクロース、トレハロースおよびマンニトールを挙げることがで
きる。
【０３５８】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、ポリマーとともに製剤化することができる
。一部の実施形態において、ポリマー製剤は、疎水性ポリマーを含み得る。このようなポ
リマーは、水中油中固体封入法を介してポリラクチド−ｃｏ−グリコリドと配合されるマ
イクロスフェアであり得る。一部の実施形態において、エチレン−ビニルアセテートコポ
リマーを含むマイクロスフェアも、抗体送達に使用し、および／または送達部位における
抗体放出の時間経過を延長させることができる。一部の実施形態において、ポリマーは、
水性ゲルであり得る。このようなゲルは、例えば、カルボキシメチルセルロースを含み得
る。一部の実施形態において、水性ゲルは、ヒアルロン酸ヒドロゲルも含み得る。一部の
実施形態において、抗体は、組織、例として、限定されるものではないが、中枢神経系の
組織中の持続送達を可能とするヒドラゾン結合を介してそのようなゲルに共有結合させる
ことができる。
【０３５９】
製剤ビヒクル：ペプチドおよびタンパク質
本発明の化合物および／または組成物は、ペプチドおよび／またはタンパク質とともに
製剤化することができる。一部の実施形態において、医薬製剤を送達するためにペプチド
、例えば、限定されるものではないが、細胞浸透ペプチドおよび／または細胞内送達を可
能とするタンパク質／ペプチドを使用することができる。本発明の医薬製剤について使用
することができる細胞浸透ペプチドの非限定的な例としては、細胞内空間への送達を容易
にするポリカチオンに付着している細胞浸透ペプチド配列、例えば、ＨＩＶ由来ＴＡＴペ
プチド、ペネトラチン、トランスポータン、またはｈＣＴ由来細胞浸透ペプチドが挙げら
れる（例えば、カロン，Ｎ．Ｊ．（Ｃａｒｏｎ，Ｎ．Ｊ．）ら著、「筋細胞中へのＴａｔ
−ｅＧＦＰ融合タンパク質の細胞内送達（Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒ
ｙ  ｏｆ  ａ  Ｔａｔ−ｅＧＦＰ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｏ  ｍｕｓｃ
ｌｅ  ｃｅｌｌｓ）」、モレキュラー・セラピー（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、２００１年、
第３巻（第３号）、ｐ．３１０〜８；ランゲル，Ｕ．（Ｌａｎｇｅｌ，Ｕ．）著、「細胞
浸透ペプチド：方法および用途（Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ
：Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、ＣＲＣプレス（ＣＲＣ
Ｐｒｅｓｓ）、ボカラトン、フロリダ、２００２年；エルアンダロウシ，Ｓ．（Ｅｌ−
Ａｎｄａｌｏｕｓｓｉ，Ｓ．）ら著、「細胞浸透ペプチド：機序および用途（Ｃｅｌｌ−
ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌ
ｉｃａｔｉｏｎｓ）」、カレント・ファーマシューティカル・デザイン（Ｃｕｒｒ  Ｐｈ
ａｒｍ  Ｄｅｓ．）、２００３年、第１１巻（第２８号）、ｐ．３５９７〜６１１；およ
びデシャイエズ，Ｓ．（Ｄｅｓｈａｙｅｓ，Ｓ．）ら著、「細胞浸透ペプチド：治療薬の
細胞内送達のためのツール（Ｃｅｌｌ−ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｔ
ｏｏｌｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａ
ｐｅｕｔｉｃｓ）」、セルラー・アンド・モレキュラー・ライフ・サイエンシズ（Ｃｅｌ
ｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．）、２００５年、第６２巻（第１６号）、１８３９〜４
９参照、それらのそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）。本
発明の化合物および／または組成物は、細胞内空間への組成物の送達を向上させる細胞浸
透剤、例えば、リポソームを含むように製剤化することもできる。本発明の化合物および
／または組成物は、ペプチドおよび／またはタンパク質、例えば、限定されるものではな
いが、エイルロン・セラピューティクス（Ａｉｌｅｒｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）
（ケンブリッジ、マサチューセッツ）およびペルメオン・バイオロジクス（Ｐｅｒｍｅｏ
ｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）（ケンブリッジ、マサチューセッツ）からのペプチドおよび／
またはタンパク質と複合体化させて細胞内送達を可能とすることができる（クロニカン，
Ｊ．Ｊ．（Ｃｒｏｎｉｃａｎ，Ｊ．Ｊ．）ら著、「スーパーチャージドタンパク質を使用
するインビトロおよびインビボにおける哺乳動物細胞中への機能タンパク質の強力な送達
（Ｐｏｔｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  
ｉｎｔｏ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖ
ｏ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｓｕｐｅｒｃｈａｒｇｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」、ＡＣＳケミカル
バイオロジー（ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．）、２０１０年、第５巻、ｐ．７４７〜５
２；マクノートン，Ｂ．Ｒ．（ＭｃＮａｕｇｈｔｏｎ，Ｂ．Ｒ．）ら著、「スーパーチャ
ージドタンパク質による哺乳動物細胞浸透、ｓｉＲＮＡ形質移入、およびＤＮＡ形質移入
（Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ，ｓｉＲＮＡ  ｔｒａｎｓｆ
ｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ＤＮＡ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｓｕｐｅｒｃｈａｒ
ｇｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ
Ｓｃｉ，ＵＳＡ）、２００９年、第１０６巻、ｐ．６１１１〜６；ヴェルディン，Ｇ．
Ｌ．（Ｖｅｒｄｉｎｅ，Ｇ．Ｌ．）ら著、「細胞内薬物標的のためのステープルドペプチ
ド（Ｓｔａｐｌｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｒｕ
ｇ  ｔａｒｇｅｔｓ）」、メソッズ・イン・エンジモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙ
ｍｏｌ．）、２０１２年、第５０３巻、ｐ．３〜３３；それらのそれぞれの内容は、参照
により全体として本明細書に組み込まれる）。
【０３６０】
一部の実施形態において、細胞浸透ポリペプチドは、第１および第２のドメインを含み
得る。第１のドメインは、スーパーチャージドポリペプチドを含み得る。第２のドメイン
は、タンパク質結合相手を含み得る。本明細書において使用される場合、タンパク質結合
相手としては、限定されるものではないが、抗体およびその機能断片、足場タンパク質お
よび／またはペプチドを挙げることができる。細胞浸透ポリペプチドは、タンパク質結合
相手についての細胞内結合相手をさらに含み得る。一部の実施形態において、細胞浸透ポ
リペプチドは、本発明の化合物および／または組成物を導入することができる細胞から分
泌させることができる。
【０３６１】
ペプチドおよび／またはタンパク質を含む本発明の組成物は、細胞形質移入を増加させ
、および／または化合物／組成物の生体内分布を変更するために使用することができる（
例えば、特異的組織または細胞型を標的化することにより）。
【０３６２】
製剤ビヒクル：細胞
本発明の化合物および／または組成物の細胞ベース製剤は、細胞形質移入を確保し（例
えば、細胞担体中）、または生体内分布を変更するために使用することができる（例えば
、細胞担体を特異的組織または細胞型に標的化することにより）。
【０３６３】
細胞移入方法
種々の方法、例として、ウイルスおよび非ウイルス媒介技術が当技術分野において公知
であり、細胞中への核酸またはタンパク質の導入に好適である。典型的な非ウイルス媒介
技術の例としては、限定されるものではないが、エレクトロポレーション、リン酸カルシ
ウム媒介移入、ヌクレオフェクション、ソノポレーション、熱ショック、マグネトフェク
ション、リポソーム媒介移入、マイクロインジェクション、マイクロプロジェクティル（
ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ）媒介移入（ナノ粒子）、カチオンポリマー媒介移入（
ＤＥＡＥ−デキストラン、ポリエチレンイミン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など
）または細胞融合が挙げられる。
【０３６４】
ソノポレーション、または細胞音波処理の技術は、細胞原形質膜の浸透性を改変するた
めの音波（例えば、超音波周波数）の使用である。ソノポレーション法は、当技術分野に
おいて公知であり、インビボで核酸を送達するために使用される（ヨーン，Ｃ．Ｓ．（Ｙ
ｏｏｎ，Ｃ．Ｓ．）ら著、「超音波媒介遺伝子送達（Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ−ｍｅｄｉａ
ｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」、エキスパート・オピニオン・オン・ドラッグ
・デリバリー（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．）、２０１０年、第７
巻、ｐ．３２１〜３０；ポステマ，Ｍ．（Ｐｏｓｔｅｍａ，Ｍ．）ら著、「超音波指向薬
物送達（Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」、
カレント・ファーマシューティカル・バイオテクノロジー（Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２００７年、第８巻、ｐ．３５５〜６１；ニューマン，Ｃ．Ｍ．
（Ｎｅｗｍａｎ，Ｃ．Ｍ．）ら著、「遺伝子療法の進歩および展望：遺伝子移入のための
超音波（Ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ：
ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）」、ジーン・セラピー（
Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２００７年、第１４巻（第６号）、ｐ．４６５〜７５；それら
のそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）。ソノポレーション
法は、当技術分野において公知であり、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０１９６
９８３号明細書中で細菌に関するものとして、および例えば、米国特許出願公開第２０１
０／０００９４２４号明細書（それらのそれぞれの内容は、参照により全体として本明細
書に組み込まれる）中では他の細胞型に関するものとして教示もされている。
【０３６５】
エレクトロポレーション技術も当技術分野において周知であり、インビボで、および臨
床的に核酸を送達するために使用される（アンドレ，Ｆ．Ｍ．（Ａｎｄｒｅ，Ｆ．Ｍ．）
ら著、「インビボ核酸電気移入：機序および実践の態様（Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  
ｅｌｅｃｔｒｏｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｐ
ｒａｃｔｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ）」、カレント・ジーン・セラピー（Ｃｕｒｒ  Ｇｅ
ｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１０巻、ｐ．２６７〜８０；キアレラ，Ｐ．（Ｃｈ
ｉａｒｅｌｌａ，Ｐ．）ら著、「ＤＮＡワクチン接種プロトコルにおけるエレクトロポレ
ーションの用途（Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ  ｉ
ｎ  ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）」、カレント・ジーン・セ
ラピー（Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１０巻。ｐ．２８１〜６；
ホマン，Ｐ．（Ｈｏｊｍａｎ、Ｐ．）著、「筋電気移入の基本原理および臨床的進歩（Ｂ
ａｓｉｃ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔ
ｓ  ｏｆ  ｍｕｓｃｌｅ  ｅｌｅｃｔｒｏｔｒａｎｓｆｅｒ」、カレント・ジーン・セラ
ピー（Ｃｕｒｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．）、２０１０年、第１０巻、ｐ．１２８〜３８；
それらのそれぞれの内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）。一部の実施
形態において、本発明の化合物および／または組成物は、エレクトロポレーションにより
送達することができる。
【０３６６】
投与および送達
本発明の化合物および／または組成物は、当技術分野において公知の標準的方法または
経路のいずれかにより投与することができる。このような方法としては、治療有効アウト
カムをもたらす任意の経路を挙げることができる。これらとしては、限定されるものでは
ないが、腸、胃腸、硬膜外、経口、経皮、硬膜外（硬膜周囲）、脳内（大脳中に）、脳室
内（脳室内中に）、皮膚（皮膚上への適用）、皮内（皮膚自体中に）、皮下（皮膚の下）
、経鼻投与（鼻を介して）、静脈内（静脈中に）、動脈内（動脈中に）、筋肉内（筋肉中
に）、心臓内（心臓中に）、骨内注入（骨髄中に）、鞘内（脊柱管中に）、腹腔内（腹膜
中への注入または注射）、膀胱内注入、硝子体内（眼を介して）、陰茎内注射（陰茎の基
部中に）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布のための無傷の皮膚を介する
拡散）、経粘膜（粘膜を介する拡散）、吹送（吸い込み）、舌下、下唇、浣腸、点眼（結
膜上に）、または点耳が挙げられる。具体的な実施形態において、本発明の化合物および
／または組成物は、それらの血液脳関門、血管関門、または他の上皮関門の横断を可能と
する手法で投与することができる。製剤化および投与の方法としては、それぞれの内容が
参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０１２２０
０７号明細書、米国特許第８，４１５，４５９号明細書または国際公開第２０１１／１５
１４３２号パンフレットに開示のもののいずれかを挙げることができる。本発明の化合物
および／または組成物のための非限定的な投与経路を以下に記載する。
【０３６７】
非経口および注射投与
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、非経口投与するこ
とができる。経口および非経口投与のための液体剤形としては、限定されるものではない
が、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、液剤、懸濁液、シロップ
剤、および／またはエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加え、液体剤形は、当技術分
野において一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および
乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル
、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレング
リコール、ジメチルホルムアミド、油（例えば、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油
、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリ
ルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそ
れらの混合物などを含み得る。不活性希釈剤の他、経口組成物は、助剤、例えば、湿潤剤
、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、矯味剤、および／または着香剤を含み得る。非経口投
与のためのある実施形態において、組成物を可溶化剤、例えば、クレモホル（ＣＲＥＭＯ
ＰＨＯＲ）（登録商標）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シク
ロデキストリン、ポリマー、および／またはそれらの組合せと混合する。他の実施形態に
おいて、界面活性剤、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースを含める。
【０３６８】
注射製剤、例えば、無菌注射水性または油性懸濁液は、好適な分散剤、湿潤剤、および
／または懸濁化剤を使用する公知技術により製剤化することができる。無菌注射製剤は、
非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤および／または溶媒、例えば、１，３−ブタンジオ
ール中の溶液としての無菌注射溶液、懸濁液、および／またはエマルションであり得る。
用いることができる許容可能なビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー液（米国薬局方）
および等張塩化ナトリウム溶液がある。無菌固定油が、溶媒または懸濁化媒体として慣用
的に用いられる。この目的のため、任意の無刺激性固定油、例として、合成モノまたはジ
グリセリドを用いることができる。注射剤の調製において脂肪酸、例えば、オレイン酸を
使用することができる。
【０３６９】
注射製剤は、例えば、細菌捕集フィルタを介する濾過により、および／または使用前に
滅菌水もしくは他の無菌注射媒体中で溶解もしくは分散させることができる無菌固体組成
物の形態の滅菌剤を取り込むことにより滅菌することができる。
【０３７０】
活性成分の効果を延長させるため、皮下または筋肉内注射からの活性成分の吸収を減速
させることが望ましいことが多い。これは、不十分な水溶性を有する結晶またはアモルフ
ァス材料の液体懸濁液の使用により達成することができる。活性成分の吸収速度は溶解速
度に依存し、この場合、溶解速度は結晶サイズおよび結晶形態に依存し得る。あるいは、
非経口投与される薬物形態の吸収の遅延は、薬物を油性ビヒクル中で溶解または懸濁させ
ることにより達成される。注射デポー形態は、生分解性ポリマー、例えば、ポリラクチド
−ポリグリコリド中の薬物のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより作製さ
れる。薬物とポリマーとの比および用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出
の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエス
テル）およびポリ（無水物）が挙げられる。デポー注射製剤は、身体組織と適合性である
リポソームまたはマイクロエマルション中で薬物を捕捉することにより調製される。
【０３７１】
経直腸および経膣投与
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、経直腸および／ま
たは経膣投与することができる。経直腸または経膣投与のための組成物は、典型的には、
坐剤であり、それは、周囲温度において固体であるが、体温において液体であるため、直
腸または膣腔中で融解し、活性成分を放出する好適な非刺激性の賦形剤、例えば、ココア
バター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ワックスと組成物を混合することにより調製
することができる。
【０３７２】
経口投与
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、経口投与すること
ができる。経口投与のための固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、ピル、散剤、および
顆粒剤が挙げられる。このような固体剤形において、活性成分を、少なくとも１つの不活
性な薬学的に許容可能な賦形剤、例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウ
ムおよび／または充填剤もしくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、
グルコース、マンニトール、およびケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロ
ース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア
ゴム）、保湿剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジ
ャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、あるケイ酸塩、および炭酸ナトリウム）
、溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、パラフ
ィン）、吸収促進剤（例えば、第４級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルア
ルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリンおよびベン
トナイトクレイ）、ならびに滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステア
リン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、ならび
にこれらの混合物などと混合する。カプセル剤、錠剤およびピルの場合、剤形は緩衝剤を
さらに含み得る。
【０３７３】
局所または経皮投与
本明細書に記載のとおり、本発明の化合物および／または組成物は、局所投与のために
製剤化することができる。皮膚は、それが容易に到達可能なため、送達のための理想的な
標的部位であり得る。一般に、３つの経路が本発明の化合物および／または組成物を皮膚
に送達することが考えられる：（ｉ）局所適用（例えば、局所／局部治療および／または
化粧品用途のため）；（ｉｉ）皮内注射（例えば、局所／局部治療および／または化粧品
用途のため）；および（ｉｉｉ）全身送達（例えば、皮膚および皮膚外領域の両方を冒す
皮膚疾患の治療のため）。本発明の化合物および／または組成物は、当技術分野において
公知のいくつかの異なるアプローチにより皮膚に送達することができる。
【０３７４】
一部の実施形態において、本発明は、本発明の方法を利便的および／または効率的に実
施するための種々の被覆材（例えば、創傷被覆材）または包帯（例えば、接着包帯）を提
供する。典型的には、被覆材または包帯は、使用者が複数回治療を実施することを可能と
するために十分な量の本明細書に記載の本発明の化合物および／または組成物を含み得る
。
【０３７５】
局所および／または経皮投与のための剤形としては、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤
、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、噴霧剤、吸入剤および／または貼付剤を挙げるこ
とができる。一般に、活性成分は、薬学的に許容可能な賦形剤ならびに／または任意の必
要とされる保存剤および／もしくは緩衝液と無菌条件下で混合する。さらに、本発明は、
本発明の化合物および／または組成物の体内への送達制御を提供する追加の利点を有する
ことが多い経皮貼付剤の使用を企図する。このような剤形は、例えば、化合物および／ま
たは組成物を適正な媒体中で溶解または分散させることにより調製することができる。あ
るいは、またはさらに、速度は律速膜を提供し、ならびに／または化合物および／もしく
は組成物をポリマーマトリックスおよび／またはル中で分散させることにより制御するこ
とができる。
【０３７６】
局所投与に好適な製剤としては、限定されるものではないが、液体および／もしくは半
液体製剤、例えば、塗布剤、ローション剤、水中油型および／もしくは油中水型エマルシ
ョン、例えば、クリーム剤、軟膏剤および／もしくはペースト剤、ならびに／または液剤
および／もしくは懸濁液が挙げられる。
【０３７７】
局所投与可能な製剤は、例えば、約１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得るが
、活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の溶解限度ほど高いことがある。局所投与のため
の製剤は、本明細書に記載の追加の成分の１つ以上をさらに含み得る。
【０３７８】
デポー投与
本明細書に記載のとおり、一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組
成物は、徐放のためのデポーに製剤化する。一般に、投与のために特異的器官または組織
（「標的組織」）を標的化する。
【０３７９】
本発明の一部の態様において、本発明の化合物および／または組成物は、標的組織内、
またはそれに近接
して空間的に保持される。化合物および／または組成物が標的組織中で実質的に保持され
るような条件下で、すなわち、組成物の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０
、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９％、
または９９．９９％超が標的組織中で保持されるような条件下で、標的組織（１つ以上の
標的細胞を含む）を化合物および／または組成物と接触させることにより、哺乳動物対象
の標的組織に化合物および／または組成物を提供する方法が提供される。有利には、保持
率は、１つ以上の標的細胞に進入する化合物および／または組成物の量を計測することに
より決定する。例えば、対象に投与された化合物および／または組成物の少なくとも１％
、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、または
９９．９９％超が、投与後の一定の時点において細胞内に存在する。例えば、哺乳動物対
象への筋肉内注射は、本発明の化合物および／または組成物ならびに１つ以上の形質移入
試薬を含む水性組成物
を使用して実施することができ、保持率は、筋細胞中に存在する化合物および／または組
成物の量を計測することにより決定する。
【０３８０】
本発明のある態様は、本発明の化合物および／または組成物が標的組織中で実質的に保
持されるような条件下で、標的組織（１つ以上の標的細胞を含む）を化合物および／また
は組成物と接触させることにより、哺乳動物対象の標的組織に本発明の化合物および／ま
たは組成物を提供する方法を対象とする。化合物および／または組成物は、目的の効果が
少なくとも１つ以上の標的細胞中で産生されるように十分な活性成分を含む。一部の実施
形態において、化合物および／または組成物は、一般に、１つ以上の細胞浸透剤を含むが
、薬学的に許容可能な担体を有し、または有さない「裸
」製剤（例えば、細胞浸透剤も他の薬剤も有さない）も企図される。
【０３８１】
一部の実施形態において、組織中の細胞中に存在する成長因子の量は、望ましくは増加
する。好ましくは、成長因子のこの増加は、標的組織内の細胞に空間的に制限される。し
たがって、哺乳動物対象の組織中の目的成長因子の量を増加させる方法が提供される。一
部の実施形態において、提供される単位量が、標的組織の所定の容積内に含有されるかな
りの割合の細胞中で所望レベルの目的成長因子を産生するように決定されたことを特徴と
する化合物および／または組成物を含む製剤が提供される。
【０３８２】
一部の実施形態において、製剤は、複数の異なる化合物および／または組成物を含み、
１つまたは２つ以上が目的生体分子を標的化する。場合により、製剤は、化合物および／
または組成物の細胞内送達を支援するための細胞浸透剤も含み得る。このような実施形態
において、所定容積の標的組織内に含有されるかなりの割合の細胞中で目的生体分子を標
的化する（一般に、隣接または遠位組織中の目的生体分子を標的化せずに）ために要求さ
れる化合物および／または組成物の用量を決定する。次いで、決定された用量を対象組織
中に直接導入する。一部の実施形態において、本発明は、２回以上の投与で、または分割
用量投与により送達すべき化合物および／または組成物を提供する。
【０３８３】
経肺投与
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、経肺投与に好適な
製剤で調製、包装、および／または販売することができる。一部の実施形態において、こ
のような投与は、口腔を介する。一部の実施形態において、製剤は、活性成分を含む乾燥
粒子を含み得る。このような実施形態において、乾燥粒子は、約０．５ｎｍ〜約７ｎｍま
たは約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲の直径を有し得る。一部の実施形態において、製剤は、乾
燥粉末を分散させるように推進剤の流れを向けることができる乾燥粉末リザーバを含むデ
バイスを使用する投与のための乾燥粉末の形態であり得る。一部の実施形態において、自
己推進溶媒／粉末分注容器を使用することができる。このような実施形態において、活性
成分は、密封容器中の低沸点推進剤中で溶解および／または懸濁させることができる。こ
のような粉末は、重量基準の粒子の少なくとも９８％が０．５ｎｍを上回る直径を有し、
数基準の粒子の少なくとも９５％が７ｎｍ未満の直径を有する粒子を含み得る。あるいは
、重量基準の粒子の少なくとも９５％は、１ｎｍを上回る直径を有し、数基準の粒子の少
なくとも９０％は、６ｎｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は、固体微粉末希釈剤、
例えば、糖を含み得、単位用量形態で利便的に提供される。
【０３８４】
低沸点推進剤は、一般に、大気圧において１８．３℃（６５°Ｆ）未満の沸点を有する
液体推進剤を含む。一般に、推進剤は、組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を構成し
得、活性成分は、組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を構成し得る。推進剤は、追加の
成分、例えば、液体非イオン性および／または固体非イオン性界面活性剤および／または
固体希釈剤（活性成分を含む粒子と同一の桁の粒子サイズを有し得る）をさらに含み得る
。
【０３８５】
肺送達のために製剤化される医薬組成物は、液剤および／または懸濁液の液滴の形態で
活性成分を提供し得る。このような製剤は、活性成分を含む、場合により無菌の水性およ
び／または希アルコール性液剤および／または懸濁液として調製、包装、および／または
販売することができ、任意のネブライゼーションおよび／またはアトマイゼーションデバ
イスを使用して利便的に投与することができる。このような製剤は、１つ以上の追加の成
分、例として、限定されるものではないが、矯味剤、例えば、サッカリンナトリウム、揮
発性油、緩衝剤、表面活性剤、および／または保存剤、例えば、ヒドロキシ安息香酸メチ
ルをさらに含み得る。この投与経路により提供される液滴は、約０．１ｎｍ〜約２００ｎ
ｍの範囲の平均直径を有し得る。
【０３８６】
鼻腔内、経鼻およびバッカル投与
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、経鼻および／また
は鼻腔内投与することができる。一部の実施形態において、肺送達に有用な本明細書に記
載の製剤は、鼻腔内送達にも有用であり得る。一部の実施形態において、鼻腔内投与のた
めの製剤は、活性成分を含み、約０．２μｍ〜５００μｍの平均粒子を有する粗粉末を含
む。このような製剤は、鼻呼吸する様式で、すなわち、鼻の近くに保持された粉末の容器
からの鼻道を介する急速な吸入により投与する。
【０３８７】
経鼻投与に好適な製剤は、例えば、約０．１％（ｗ／ｗ）ほど少なく、および１００％
（ｗ／ｗ）ほど多くの活性成分を含み得、本明細書に記載の追加の成分の１つ以上を含み
得る。医薬組成物は、バッカル投与に好適な製剤で調製、包装、および／または販売する
ことができる。このような製剤は、例えば、慣用の方法を使用して作製される錠剤および
／またはトローチ剤の形態であり得、例えば、０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を
含み得、残部は経口的に溶解可能および／または分解可能な組成物および場合により本明
細書に記載の追加の成分の１つ以上を含む。あるいは、バッカル投与に好適な製剤は、活
性成分を含む粉末ならびに／またはエアロゾル化および／もしくはアトマイズ化液剤およ
び／もしくは懸濁液を含み得る。このような粉末化、エアロゾル化、および／またはエア
ロゾル化製剤は、分散された場合、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均粒子および
／または液滴サイズを含み得、本明細書に記載の任意の追加の成分の１つ以上をさらに含
み得る。
【０３８８】
経眼または経耳投与
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、経眼または経耳投
与に好適な製剤で調製、包装および／または販売することができる。このような製剤は、
例えば、点眼および／または点耳剤の形態、例として、例えば、水性および／または油性
液体賦形剤中の活性成分の０．１／１．０％（ｗ／ｗ）液剤および／または懸濁液であり
得る。このような点滴剤は、緩衝剤、塩、および／または本明細書に記載の１つ以上の他
の任意の追加の成分をさらに含み得る。有用な他の経眼投与可能な製剤としては、活性成
分を微結晶形態で、および／またはリポソーム調製物中で含むものが挙げられる。網膜下
インサートを投与の形態として使用することもできる。
【０３８９】
ペイロード投与：検出可能な薬剤および治療剤
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、生物学的標的への
物質（「ペイロード」）の送達、例えば、標的の検出のための検出可能な物質の送達、ま
たは治療および／もしくは診断剤の送達が望まれる多数の異なるシナリオで使用すること
ができる。検出法としては、限定されるものではないが、インビトロおよびインビボイメ
ージング法の両方、例えば、免疫組織化学、生物発光イメージング（ＢＬＩ：ｂｉｏｌｕ
ｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ：Ｍａｇｎｅ
ｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ）、ポジトロン放射断層撮影（ＰＥＴ：ｐ
ｏｓｉｔｉｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）、電子顕微鏡観察、Ｘ線コ
ンピュータ断層撮影、ラマンイメージング、光干渉断層撮影、吸収イメージング、サーマ
ルイメージング、蛍光反射イメージング、蛍光顕微鏡観察、蛍光分子断層撮影イメージン
グ、核磁気共鳴イメージング、Ｘ線イメージング、超音波イメージング、光音響イメージ
ング、実験室アッセイ、またはタグ化／染色／イメージングが要求される任意の状況にお
けるものを挙げることができる。
【０３９０】
一部の実施形態において、化合物および／または組成物は、リンカーおよびペイロード
の両方を任意の有用な配向で含むように設計することができる。例えば、一端をペイロー
ドに、ならびに他端を化合物および／または組成物に付着させるために２つの末端を有す
るリンカーを使用することができる。本発明の化合物および／または組成物は、２つ以上
のペイロードを含み得る。一部の実施形態において、化合物および／または組成物は、１
つ以上の開裂可能なリンカーを含み得る。一部の実施形態において、ペイロードは、リン
カーを介して化合物および／または組成物に付着させることができ、例えば、細胞内のイ
ンビボトラッキングのために蛍光標識することができる。
【０３９１】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、細胞中への可逆性
薬物送達において使用することができる。
本発明の化合物および／または組成物は、特異的オルガネラへのペイロード、例えば、
検出可能な薬剤または治療剤の細胞内標的化において使用することができる。さらに、本
発明の化合物および／または組成物は、治療剤を例えば、生存動物中の細胞または組織に
送達するために使用することができる。例えば、本明細書に記載の化合物および／または
組成物は、化学療法剤を送達して癌細胞を殺滅するために使用することができる。化合物
および／または組成物は、１つ以上のリンカーを介して治療剤に付着させることができ、
それは膜浸透を容易にし得、治療剤が細胞中に移動して細胞内標的に到達することを可能
とする。
【０３９２】
一部の実施形態において、ペイロードは、治療剤、例えば、細胞毒素、放射性イオン、
化学療法薬、または他の治療剤であり得る。細胞毒素および／または細胞毒性剤としては
、細胞に有害であり得る任意の薬剤を挙げることができる。例としては、限定されるもの
ではないが、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチ
ン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コル
ヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙ
ｄｒｏｘｙａｎｔｈｒａｃｉｎｅｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、ア
クチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テ
トラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、メイタンシノイド、例
えば、メイタンシノール（全体として本明細書に組み込まれる米国特許第５，２０８，０
２０号明細書参照）、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５、それぞれの内容が参照により全
体として本明細書に組み込まれる米国特許第５，４７５，０９２号明細書、米国特許第５
，５８５，４９９号明細書、および米国特許第５，８４６，５４５号明細書参照）、およ
びそれらのアナログまたはホモログが挙げられる。放射性イオンとしては、限定されるも
のではないが、ヨウ素（例えば、１２５ヨウ素または１３１ヨウ素）、８９ストロンチウ
ム、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸塩、コバルト、９０イットリウム
、１５３サマリウム、およびプラセオジムが挙げられる。他の治療剤としては、限定され
るものではないが、代謝拮抗剤（例えばメトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−
チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシル  デカルバジン）、アルキル化剤（例
えば、メクロレタミン、チオテパ  クロラムブシル、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）
、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファ
ミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ５
、ならびにシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）（シスプラチン）、アントラ
サイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧名ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、
抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧名アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミト
ラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、および抗有糸分裂剤（例えば、ビン
クリスチン、ビンブラスチン、タキソール、およびメイタンシノイド）が挙げられる。
【０３９３】
一部の実施形態において、ペイロードは、検出可能な薬剤、例えば、種々の有機小分子
、無機化合物、ナノ粒子、酵素または酵素基質、蛍光材料、発光材料（例えば、ルミノー
ル）、生物発光材料（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリン）、化
学発光材料、放射性材料（例えば、１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉ
ｎ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、または９９
ｍＴｃ（例えば、過テクネチウム酸塩（テクネチウム酸塩（ＶＩＩ）、ＴｃＯ４−））、
および造影剤（例えば、金（例えば、金ナノ粒子）、ガドリニウム（例えば、キレートＧ
ｄ）、酸化鉄（例えば、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ：ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉ
ｃ  ｉｒｏｎ  ｏｘｉｄｅ）、単結晶酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ：ｍｏｎｏｃｒｙｓｔａ
ｌｌｉｎｅ  ｉｒｏｎ  ｏｘｉｄｅ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）、および超小型超常磁
性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ：ｕｌｔｒａｓｍａｌｌ  ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ  
ｉｒｏｎ  ｏｘｉｄｅ））、マンガンキレート（例えば、Ｍｎ−ＤＰＤＰ）、硫酸バリウ
ム、ヨード造影剤（イオヘキソール）、マイクロバブル、またはペルフルオロカーボン）
であり得る。このような光学的に検出可能な標識としては、例えば、限定されるものでは
ないが、４−アセトアミド−４’−イソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン
酸；アクリジンおよび誘導体（例えば、アクリジンおよびアクリジンイソチオシアネート
）；、５−（２’−アミノメチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；
４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５−ジスル
ホネート；Ｎ−（４−アニリノ−１−ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ボデ
ィパイ（ＢＯＤＩＰＹ）；ブリリアントイエロー、クマリンおよび誘導体（例えば、クマ
リン、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン１２０）、および７−アミノ
−４−トリフルオロメチルクマリン（クマリン１５１））；シアニン色素；シアノシン；
４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’，５’’−ジブロモ
ピロガロール−スルホンフタレイン（ブロモピロガロールレッド）；７−ジエチルアミノ
−３−（４’−イソチオシアナトフェニル）−４−メチルクマリン；ジエチレントリアミ
ンペンタアセテート；４，４’−ジイソチオシアナトジヒドロ−スチルベン−２，２’−
ジスルホン酸；４，４’−ジイソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン酸；５
−［ジメチルアミノ］ナフタレン−１−スルホニルクロリド（ＤＮＳ、ダンシルクロリド
）；４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴ
Ｃ）；エオシンおよび誘導体（例えば、エオシンおよびエオシンイソチオシアネート）；
エリスロシンおよび誘導体（例えば、エリスロシンＢおよびエリスロシンイソチオシアネ
ート）；エチジウム；フルオレセインおよび誘導体（例えば、５−カルボキシフルオレセ
イン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン
（ＤＴＡＦ）、２’７’−ジメトキシ−４’５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセ
イン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、Ｘ−ローダミン−５−（お
よび−６）−イソチオシアネート（ＱＦＩＴＣまたはＸＲＩＴＣ）、およびフルオレスカ
ミン）；２−［２−［３−［［１，３−ジヒドロ−１，１−ジメチル−３−（３−スルホ
プロピル）−２Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール−２−イリデン］エチリデン］−２−［４−
（エトキシカルボニル）−１−ピペラジニル］−１−シクロペンテン−１−イル］エテニ
ル］−１，１−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−１Ｈ−ベンズ［ｅ］インドリウ
ム水酸化物、内部塩、ｎ，ｎ−ジエチルエタナミンとの化合物（１：１）ＩＲ１４４；５
−クロロ−２−［２−［３−［（５−クロロ−３−エチル−２（３Ｈ）−ベンゾチアゾー
ル−イリデン）エチリデン］−２−（ジフェニルアミノ）−１−シクロペンテン−１−イ
ル］エテニル］−３−エチルベンゾチアゾリウムペルクロレート（ＩＲ１４０）；マラカ
イトグリーンイソチオシアネート；４−メチルウンベリフェロンオルトクレゾールフタレ
イン；ニトロチロシン；パラロスアニリン；フェノールレッド；Ｂ−フィコエリスリン；
ｏ−フタルジアルデヒド；ピレンおよび誘導体（例えば、ピレン、酪酸ピレン、およびス
クシンイミジル１−ピレン）；ブチレート量子ドット；リアクティブレッド４（シバクロ
ン（ＣＩＢＡＣＲＯＮ）（商標）ブリリアントレッド３Ｂ−Ａ）；ローダミンおよび誘導
体（例えば、６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（
Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢ塩化スルホニルローダミン（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ
、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホロ
ーダミン１０１、およびスルホローダミン１０１の塩化スルホニル誘導体（テキサスレッ
ド）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）テ
トラメチルローダミン、およびテトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ
））；リボフラビン；ロゾール酸；テルビウムキレート誘導体；シアニン−３（Ｃｙ３）
；シアニン−５（Ｃｙ５）；シアニン−５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン−７（Ｃｙ７）
；ＩＲＤ７００；ＩＲＤ８００；アレクサ（Ａｌｅｘａ）６４７；ラジョルタブルー；フ
タロシアニン；ならびにナフタロシアニンが挙げられる。
【０３９４】
一部の実施形態において、検出可能な薬剤は、活性化時に検出可能になる非検出可能な
前駆体（例えば、蛍光性テトラジン−フルオロフォア構築物（例えば、テトラジン−ボデ
ィパイ（ＢＯＤＩＰＹ）ＦＬ、テトラジン−オレゴングリーン４８８、またはテトラジン
−ボディパイ（ＢＯＤＩＰＹ）ＴＭＲ−Ｘ）または酵素活性化可能蛍光性薬剤（例えば、
プロセンス（ＰＲＯＳＥＮＳＥ）（登録商標）（ヴィスエン・メディカル（ＶｉｓＥｎ  
Ｍｅｄｉｃａｌ））））であり得る。酵素標識組成物を使用することができるインビトロ
アッセイとしては、限定されるものではないが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ
ｓ）、免疫沈降アッセイ、免疫蛍光、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ：ｅｎｚｙｍｅ  ｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ：ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａ
ｙ）、およびウエスタンブロット分析が挙げられる。
【０３９５】
組合せ
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の他の治
療、予防、診断、またはイメージング剤との組合せで使用することができる。「との組合
せで」は、薬剤を同時に投与し、および／または、送達のために一緒に製剤化しなければ
ならないことを意味するものではないが、これらの送達の方法は、本開示の範囲内である
。本発明の化合物および／または組成物は、１つ以上の他の所望の治療薬および／または
医学的手順と同時に、それより前に、またはそれに続いて投与することができる。一般に
、それぞれの薬剤は、その薬剤について決定される用量において、および／または時間ス
ケジュールで投与する。一部の実施形態において、本開示は、医薬、予防、診断、または
イメージング組成物の、それらのバイオアベイラビリティを改善し、それらの代謝を低減
させ、および／もしくは改変し、それらの排泄を阻害し、ならびに／またはそれらの体内
分布を改変し得る薬剤との組合せの送達を包含する。
【０３９６】
一部の場合において、本発明の化合物および／または組成物は、当技術分野において公
知の１つ以上の治療剤と組み合わせることができる。このような薬剤としては、ＢＹＭ３
３８（ノバルティス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、バーゼル、スイス）を挙げることができ、投
与は、臨床試験番号ＮＣＴ０１９２５２０９、標題「ｓＩＢＭ患者における身体機能、筋
強度、運動性に対する５２週間におけるビマグルマブ／ＢＹＭ３３８の効力および安全性
（Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  Ｂｉｍａｇｒｕｍａｂ／ＢＹＭ３３
８  ａｔ  ５２  Ｗｅｅｋｓ  ｏｎ  Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｍｕｓｃｌ
ｅ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ，Ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｓＩＢＭ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ）」（レ
ジリエント（ＲＥＳＩＬＩＥＮＴ））に開示の方法のいずれかを含み得る。本発明の化合
物および／または組成物との組合せで使用することができる他の薬剤としては、それぞれ
の内容が参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０
１２２００７号明細書、米国特許第８，４１５，４５９号明細書または国際公開第２０１
１／１５１４３２号パンフレットに開示のもののいずれかを挙げることができる。
【０３９７】
投与および剤形
本開示は、薬物送達の科学の好ましい進歩を考慮して、任意の適切な経路による治療、
医薬、診断またはイメージングのいずれかのための本発明の化合物および／または組成物
の送達を包含する。送達は、裸、または配合送達であり得る。
【０３９８】
裸送達
本発明の化合物および／または組成物は、裸形態で細胞、組織、器官および／または生
物に送達することができる。本明細書において使用される場合、用語「裸」は、形質移入
または浸透性を促進する薬剤も改変も有さずに送達される化合物および／または組成物を
指す。裸化合物および／または組成物は、当技術分野において公知の、および本明細書に
記載の投与経路を使用して細胞、組織、器官および／または生物に送達することができる
。一部の実施形態において、裸送達としては、生理食塩水またはＰＢＳなどの単純緩衝液
中の製剤を挙げることができる。
【０３９９】
製剤化された送達
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、本明細書に記載の
方法を使用して製剤化することができる。製剤は、改変および／または未改変であり得る
化合物および／または組成物を含み得る。製剤は、限定されるものではないが、細胞浸透
剤、薬学的に許容可能な担体、送達剤、生体内分解性または生体適合性ポリマー、溶媒、
および／または持続放出送達デポーをさらに含み得る。本発明の製剤化は、当技術分野に
おいて公知の、および本明細書に記載の投与経路を使用して細胞に送達することができる
。
【０４００】
組成物は、当技術分野におけるいくつかの手法のいずれかで、例として、限定されるも
のではないが、直接浸漬または浸浴、カテーテルを介して、ゲル剤、散剤、軟膏剤、クリ
ーム剤、ゲル剤、ローション剤、および／または点滴剤により、組成物によりコーティン
グまたは含浸された基材、例えば、ファブリックまたは生分解性材料を使用することなど
により、器官または組織への直接送達のために製剤化することもできる。
【０４０１】
投与
本発明は、１つ以上の化合物および／または組成物を、それが必要とされる対象に投与
することを含む方法を提供する。本発明の化合物および／または組成物、またはその予防
的組成物は、疾患、障害および／または病態の予防、治療、診断、またはイメージングに
有効な任意の量および任意の投与経路を使用して対象に投与することができる。要求され
る正確な量は、種、年齢および／または全身対象状態、疾患の重症度、特定の組成物、投
与方式、活性方式などに応じて対象ごとに変動する。本発明による組成物は、典型的には
、投与の容易性および投与量の均一性のために単位剤形に製剤化する。しかしながら、本
発明の組成物の総１日使用量は、担当医により妥当な医学的判断の範囲内で決定されるこ
とを理解されたい。任意の特定の患者についての規定の治療有効、予防有効、または適切
なイメージング用量レベルは、種々の因子、例として、治療される障害および障害の重症
度；用いられる規定の化合物の活性；用いられる規定の組成物；患者の年齢、体重、全身
的健康状態、性別および食事；用いられる規定の化合物の投与時間、投与経路、および排
泄速度；治療の持続時間；用いられる規定の化合物との組合せで、またはそれと同時に使
用される薬物；ならびに医学分野において周知の同様の因子に依存する。
【０４０２】
ある実施形態において、本発明による組成物は、１日１回以上、１日当たり対象体重基
準で約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍ
ｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／
ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋ
ｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇを送達するために十分な投与量レベルにお
いて投与して所望の治療、診断、予防、またはイメージング効果を得ることができる。所
望の投与量は、１日３回、１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、毎週１回、２
週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回送達することができる。
ある実施形態において、所望の投与量は、複数回投与（例えば、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回、またはそれより多い投与）を使用して送
達することができる。
【０４０３】
本発明によれば、本発明の化合物および／または組成物は、分割用量レジメンにおいて
投与することができる。本明細書において使用される場合、「分割用量」は、単一単位用
量または総１日用量を２つ以上に分割した用量、例えば、単一単位用量の２回以上の投与
である。本明細書において使用される場合、「単一単位用量」は、１用量／１回／単一経
路／単一の接触点で、すなわち、単一投与イベントで投与される任意の治療薬の用量であ
る。本明細書において使用される「総１日用量」は、２４時間の期間で与えられ、または
処方される量である。一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は
、単一単位用量として投与することができる。一部の実施形態において、本発明の化合物
および／または組成物は、分割用量で対象に投与することができる。一部の実施形態にお
いて、本発明の化合物および／または組成物は、緩衝液のみの中で、または、本明細書に
記載の製剤中に製剤化することができる。本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、局所
、鼻腔内、気管内、または注射可能な（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓
内、腹腔内、皮下）本明細書に記載の剤形に製剤化することができる。医薬剤の製剤化お
よび／または製造における一般的考察は、例えば、レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）著
、「製薬の科学および実践（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、リッペンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキ
ンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年（参照
により本明細書に組み込まれる）に見出すことができる。
【０４０４】
コーティングまたはシェル
錠剤、糖衣錠、カプセル剤、ピル、および顆粒剤の固体剤形は、コーティングおよびシ
ェル、例えば、腸溶コーティングおよび医薬製剤分野において周知の他のコーティングに
より調製することができる。これらは、場合により、乳白剤を含み得、それらが活性成分
のみを、またはそれを優先的に、腸管のある部分においては場合により遅延様式で放出す
る組成物のものであり得る。使用することができる包埋組成物の例としては、ポリマー物
質およびワックスが挙げられる。類似タイプの固体組成物は、ラクトースおよび／または
乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用する軟および硬
充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として用いることができる。
【０４０５】
アッセイ
一部の実施形態において、本明細書に開示の組換えタンパク質（例として、限定される
ものではないが、キメラタンパク質）および／またはそのようなタンパク質に指向される
抗体は、本明細書に記載のアッセイを使用して発生させることができる。一部の実施形態
において、本明細書に開示の組換えタンパク質（例として、限定されるものではないが、
キメラタンパク質）および／またはそのようなタンパク質に指向される抗体は、本発明の
他の組換えタンパク質および／または抗体を発生させるためのアッセイにおいて使用する
ことができる。
【０４０６】
結合アッセイ
一部の実施形態において、本発明は、結合アッセイを提供する。本明細書において使用
される場合、用語「結合アッセイ」は、会合する２つ以上の因子の能力を評価するために
使用されるアッセイを指す。このようなアッセイは、所望の抗体に結合する所望の抗原の
能力を評価し、次いで結合を検出するために１つ以上の検出法を使用し得る。本発明の結
合アッセイとしては、限定されるものではないが、表面プラズモン共鳴ベースアッセイ、
ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳベースアッセイを挙げることができる。本発明の結合アッセイ
は、本明細書に記載の１つ以上の組換えタンパク質、例として、限定されるものではない
が、任意のＴＧＦ−βファミリーメンバータンパク質、任意のキメラタンパク質、任意の
補因子および任意のモジュール、それらの組合せまたは断片の使用を含み得る。
【０４０７】
細胞ベースアッセイ
一部の実施形態において、本発明は、細胞ベースアッセイを提供する。本明細書におい
て使用される場合、用語「細胞ベースアッセイ」は、生細胞または細胞培養物の使用を含
む少なくとも１つの局面を含むアッセイを指す。一部の実施形態において、これらは、本
明細書において「成長因子放出アッセイ」と称されるＧＰＣからの成長因子放出のモジュ
レーションの評価に有用であり得る。一部の実施形態において、細胞ベースアッセイは、
本明細書において「成長因子活性アッセイ」と称される成長因子活性のモジュレーション
の評価に有用であり得る。本発明の細胞ベースアッセイは、発現細胞および／または応答
細胞を含み得る。本明細書において称される発現細胞は、特定のアッセイにおいて分析さ
れる１つ以上の因子を発現する細胞である。このような発現は、天然であり得、または外
来遺伝子の形質移入および／もしくは形質導入の結果であり得る。一部の実施形態におい
て、発現細胞による１つ以上の因子の発現は、１つ以上の外来因子の添加により向上させ
、または抑制することができる。一部の実施形態において、発現細胞は、細胞系（例えば
、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞、ＴＭＬＣ細胞、２９３Ｔ／１７細胞、Ｈｓ６８細胞、
ＣＣＤ１１１２ｓｋ細胞、ＨＦＦ−１細胞、ケロイド線維芽細胞またはＳｗ−４８０細胞
）を含み得る。一部の実施形態において、発現細胞を含む細胞系は、本発明の１つ以上の
組換えタンパク質を発現し得る（例えば、天然に、ならびに／または形質移入、安定的形
質移入、および／もしくは形質導入を介して）。
【０４０８】
一部の実施形態において、成長因子放出／活性アッセイは、ＧＰＣを発現する発現細胞
を含み得る。このような実施形態において、追加の因子を発現細胞中で共発現させ、およ
び／または発現細胞と組み合わせてそのようなＧＰＣからの成長因子放出に対するそれら
の効果を決定することができる。一部の実施形態において、インテグリン（例として、限
定されるものではないが、αｖβ６インテグリン、αｖβ８インテグリンおよび／または
α９β１インテグリン）は、共発現させ、および／またはそうでなければＧＰＣを発現す
る発現細胞に導入する。一部の実施形態において、このような追加のインテグリン発現は
、成長因子放出を容易にし得る。一部の実施形態において、ＬＴＢＰ、フィブリリンおよ
び／またはＧＡＲＰおよび／またはそれらのバリアントを共発現させ、および／またはそ
うでなければ発現細胞中に導入する。
【０４０９】
一部の実施形態において、１つ以上の遺伝子は、特定のアッセイの目的に応じて発現細
胞中でノックアウト、ノックダウンおよび／またはそうでなければモジュレートすること
ができる。一部の実施形態において、１つ以上の遺伝子産物は、ＲＮＡおよび／またはタ
ンパク質レベルにおいてモジュレートすることができる。一部の実施形態において、遺伝
子産物は、発現細胞へのｓｉＲＮＡ分子の導入を介して低減させることができる。一部の
実施形態において、ＬＴＢＰ、フィブリリンおよび／またはＧＡＲＰ遺伝子からの遺伝子
産物は、低減させ、および／または本発明の発現細胞から排除することができる。
【０４１０】
本発明の細胞ベースアッセイ、例として、限定されるものではないが、成長因子放出／
活性アッセイは、応答細胞を含み得る。本明細書において使用される場合、用語「応答細
胞」は、アッセイ中に導入される１つ以上の因子に対する応答を受ける細胞を指す。一部
の実施形態において、このような応答は、遺伝子発現の変化を含み得、このような細胞は
、導入される１つ以上の因子との接触時に１つ以上の遺伝子の転写をモジュレートする。
一部の実施形態において、応答細胞は、表現型、挙動および／または生存率の変化を受け
得る。
【０４１１】
一部の実施形態において、応答細胞は、１つ以上のレポータ遺伝子を含む。本明細書に
おいて使用される場合、用語「レポータ遺伝子」は、典型的には、プロモータおよび１つ
以上の検出可能な遺伝子産物をコードするタンパク質コード領域を含む合成遺伝子を指す
。レポータ遺伝子は、典型的には、それらの発現を特定のアッセイにより分析される１つ
以上の因子に応答してモジュレートすることができるような手法で設計される。これは、
レポータ遺伝子のプロモータを操作することにより実施することができる。本明細書にお
いて使用される場合、プロモータという用語は、遺伝子の転写を開始させる遺伝子の一部
を指す。プロモータは、典型的には、所与の遺伝子のアンチセンス鎖の３’末端における
ヌクレオチドを含み、遺伝子発現の間に転写されない。プロモータは、典型的には、１つ
以上の転写因子およびＲＮＡポリメラーゼ酵素との相互作用を介して機能して遺伝子のタ
ンパク質コード部分の転写を開始させる。１つ以上の転写因子および／またはポリメラー
ゼ酵素と物理的に相互作用するプロモータのセグメントは、本明細書において応答エレメ
ントと称される。一部の実施形態において、レポータ遺伝子は、所与のアッセイにおいて
分析される１つ以上の因子（例として、限定されるものではないが、成長因子）に対して
応答性であることが公知のプロモータおよび／または応答エレメントを含むように設計さ
れる。応答細胞遺伝子発現の変化を当技術分野において利用可能な任意の方法により計測
して遺伝子発現データを得ることができる。このような遺伝子発現データは、ルシフェラ
ーゼ活性データの形態で得ることができる［相対光単位（ＲＬＵ：ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｌ
ｉｇｈｔ  ｕｎｉｔ）に関して計測されることが多い］。
【０４１２】
一部の場合において、応答細胞は、アッセイ中に導入される１つ以上の因子に応答して
生存率の変化を受ける。このような応答細胞は、本明細書に記載の増殖アッセイにおいて
使用することができる。応答細胞生存率の変化は、細胞カウントおよび／または当業者に
公知の他の方法により検出して応答細胞生存率データを得ることができる。
【０４１３】
レポータ遺伝子のタンパク質コード領域は、典型的には、１つ以上の検出可能なタンパ
ク質をコードする。検出可能なタンパク質は、当技術分野において公知の１つ以上の方法
を介して検出し得る任意のタンパク質を指す。このような検出法としては、限定されるも
のではないが、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、検出可能なタンパク質の酵素活
性のアッセイ（例えば、カタラーゼ活性、β−ガラクトシダーゼ活性および／またはルシ
フェラーゼ活性）、免疫細胞化学検出、表面プラズモン共鳴検出および／または蛍光検出
可能タンパク質の検出を挙げることができる。レポータ遺伝子をアッセイにおいて使用す
る場合、検出可能なタンパク質の発現は、レポータ遺伝子中に存在するプロモータを活性
化する、アッセイされる因子の能力と相関する。成長因子放出／活性アッセイを含む実施
形態において、レポータ遺伝子プロモータは、典型的には、成長因子シグナリングに対し
て応答する。このような実施形態において、産生される検出可能なタンパク質のレベルは
、成長因子シグナリングのレベルと相関し、所与の成長因子の放出および／または活性を
示す。
【０４１４】
一部の実施形態において、レポータ遺伝子は、ルシフェラーゼ酵素をコードする。ルシ
フェラーゼ酵素および基質分子間の化学反応は、発光反応である。このような発光反応に
起因して、基質分子の添加および後続の発光の光検出を介してルシフェラーゼ酵素レベル
を定量することができる。一部の実施形態において、本発明のレポータ遺伝子は、配列が
フォチヌス・ピラリス（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ）からクローニングされたホ
タルルシフェラーゼをコードする。一部の実施形態において、本発明の応答細胞は、成長
因子に対して応答性のプロモータを有するルシフェラーゼを発現するレポータ遺伝子を含
む。このような実施形態において、ルシフェラーゼ活性は、成長因子活性レベルと相関し
得、成長因子活性および／またはＧＰＣからのその放出の決定を可能とする。
【０４１５】
一部の実施形態において、レポータ遺伝子を細菌プラスミド中に挿入して複製を可能と
し、および／または細胞中への導入を容易にする。一部の実施形態において、このような
プラスミドは、検出可能な遺伝子産物をコードする配列を含むように設計し、１つ以上の
目的因子に対して応答性であり得るプロモータ配列を挿入するように操作することができ
る。これらのプラスミドは、本明細書において、レポータプラスミドと称される。本発明
の一部の実施形態において、１つ以上の目的因子に対して応答性であり得るプロモータは
、レポータプラスミド中に、検出可能な遺伝子産物をコードする配列の上流で挿入してそ
のようなレポータプラスミド内で機能レポータ遺伝子を形成することができる。少なくと
も１つの機能レポータ遺伝子を含むレポータプラスミドは、本明細書においてレポータ構
築物と称される。一部の実施形態において、本発明のレポータ構築物は、ｐＧＬ２レポー
タプラスミド（プロメガ・バイオサイエンシズ（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ
ｓ）社、マディソン、ウィスコンシン）、ｐＧＬ３レポータプラスミド（プロメガ・バイ
オサイエンシズ（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）社、マディソン、ウィスコ
ンシン）、ｐＧＬ４レポータプラスミド（プロメガ・バイオサイエンシズ（Ｐｒｏｍｅｇ
ａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）社、マディソン、ウィスコンシン）またはそれらのバリア
ントを含み得る。このようなレポータ構築物は、プロモータ活性化に応答してホタルルシ
フェラーゼを発現する。
【０４１６】
一部の実施形態において、レポータ構築物は、発現細胞中に直接導入することができ、
または１つ以上の応答細胞中に導入することができる。１つ以上のレポータ遺伝子を含む
本発明の応答細胞は、本明細書においてレポータ細胞と称される。一部の実施形態におい
て、レポータ細胞は、レポータ構築物により一過的に形質移入することができ、またはそ
のような構築物の安定的発現を含み得る（例えば、レポータ構築物は、細胞分裂のそれぞ
れのラウンドの間にゲノムＤＮＡとともに連続的に複製される）。レポータ構築物を安定
的に含む細胞系は、本明細書においてレポータ細胞系と称される。一部の実施形態におい
て、レポータ細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態において、レポータ細胞は、
マウス細胞、ウサギ細胞、ラット細胞、サル細胞、ハムスター細胞およびヒト細胞を含み
得る。一部の実施形態において、レポータ遺伝子の一過的および／または安定的発現に有
用な細胞系としては、限定されるものではないが、ＨＥＫ２９３細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｓ
ｗ−４８０細胞、ＴＭＬＣ細胞［アベ（Ａｂｅ）ら（アベ，Ｍ．（Ａｂｅ，Ｍ．）ら著、
「プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１プロモータ−ルシフェラーゼ構築物によ
り形質移入された細胞を使用するトランスフォーミング成長因子βについてのアッセイ（
Ａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−
β  ｕｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐｌａｓｍｉｎ
ｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｐｒｏｍｏｔｅｒ−ｌｕｃｉ
ｆｅｒａｓｅ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）」、アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９９４年、第２１６巻、ｐ．２７６〜
８４）により開示］、２９３Ｔ／１７細胞、Ｈｓ６８細胞、ＣＣＤ１１１２ｓｋ細胞、Ｈ
ＦＦ−１細胞、ケロイド線維芽細胞、Ａ２０４細胞、Ｌ１７ＲＩＢ細胞［キャッシュ（Ｃ
ａｓｈ）ら（キャッシュ，Ｊ．Ｎ（Ｃａｓｈ，Ｊ．Ｎ）ら著、「ミオスタチンの構造：フ
ォリスタチン２８８：受容体利用およびヘパリン結合に対する洞察（Ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ  ｏｆ  ｍｙｏｓｔａｔｉｎ：ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ  ２８８：ｉｎｓｉｇｈ
ｔｓ  ｉｎｔｏ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｅｐａｒｉｎ
ｂｉｎｄｉｎｇ）」、ザ・ＥＭＢＯジャーナル（Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ）
、２００９年、第２８巻、ｐ．２６６２〜７６）により開示］、Ｃ２Ｃ１２細胞およびＥ
Ｌ４Ｔリンパ腫細胞を挙げることができる。
【０４１７】
１つ以上のレポータ遺伝子および／またはレポータ細胞系を利用する実施形態において
、このような細胞は、共培養系の一部としての発現細胞と培養することができる。一部の
実施形態において、レポータ細胞／レポータ細胞系は、発現細胞とは別個に培養すること
ができる。このような実施形態において、発現細胞からの溶解物および／または培地をレ
ポータ細胞／レポータ細胞系培養物と合わせて発現される因子（例として、限定されるも
のではないが、成長因子）を評価することができる。
【０４１８】
一部の実施形態において、本発明の細胞ベースアッセイは、発現細胞のみを含み得、応
答細胞を含み得ない。このような実施形態において、発現されるタンパク質、例として、
限定されるものではないが、ＧＰＣおよび／または成長因子は、細胞ベースでない１つ以
上の方法により検出することができる。このような方法としては、限定されるものではな
いが、ウエスタンブロッティング、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫細胞
化学、表面プラズモン共鳴およびタンパク質検出の分野において公知の他の方法を挙げる
ことができる。一部の実施形態において、発現細胞培養物および／または培養培地中のＴ
ＧＦ−β放出は、ＥＬＩＳＡにより検出することができる。一部の実施形態において、こ
のようなアッセイは、複数種、例として、限定されるものではないが、ウシ、ニワトリ、
マウスおよびヒト中のＴＧＦ−βアイソフォーム１、２および３を認識し得る捕捉抗体と
しての抗ＴＧＦ−β抗体のクローン１Ｄ１１抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔ
ｅｍｓ）、ミネアポリス、ミネソタ）を利用し得る。一部の実施形態において、ビオチン
化抗ＴＧＦ−β１ニワトリＩｇＹ（ＢＡＦ２４０；Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔ
ｅｍｓ）、ミネアポリス、ミネソタ）を検出抗体として使用することができる。一部の実
施形態において、発現細胞培養物および／または培養培地中のＧＤＦ−８／ミオスタチン
放出は、ＥＬＩＳＡにより検出することができる。一部の実施形態において、ＧＤＦ−８
／ミオスタチンクアンチカイン（ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ）ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄシス
テムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ミネアポリス、ミネソタ）を使用することができる
。検出に使用することができる抗ＧＤＦ−８／ミオスタチン抗体の例としては、ＡＦ１５
３９、ＭＡＢ７８８およびＡＦ７８８（Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、
ミネアポリス、ミネソタ）が挙げられる。
【０４１９】
一部の実施形態において、本発明のレポータ遺伝子は、成長因子応答性プロモータを含
む。本明細書において使用される場合、用語「成長因子応答性プロモータ」は、１つ以上
の成長因子により誘導される成長因子細胞シグナリングに応答して下流遺伝子の転写を容
易にする遺伝子プロモータを指す。一部の実施形態において、成長因子応答性プロモータ
は、ＴＧＦ−βファミリーメンバー成長因子シグナリングに対して応答性である。一部の
実施形態において、本発明の成長因子応答性プロモータは、表１６に列記の１つ以上の配
列またはそれらの断片もしくはバリアントを含む。これらとしては、２つのバージョンの
プラスミノーゲン活性化因子インヒビター１型（ＰＡＩ−１）プロモータ［アベ，Ｍ．（
Ａｂｅ，Ｍ．）ら著、「プラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１プロモータ−ルシ
フェラーゼ構築物により形質移入された細胞を使用するトランスフォーミング成長因子β
についてのアッセイ（Ａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗ
ｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−β  ｕｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ
ａ  ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１  ｐｒｏ
ｍｏｔｅｒ−ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）」、アナリティカル・バイオ
ケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９９４年、第２
１６巻、ｐ．２７６〜８４）により開示のＶ１および国際公開第２０１１／０３４９３５
号パンフレット（それらの内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる）に開
示のＶ２］、コラーゲン１型α１プロモータ、コラーゲン１型α２プロモータ、ＦｏｘＰ
３プロモータ、ＣＡＧＡ１２プロモータ［ティース（Ｔｈｉｅｓ）ら（ティース，Ｒ．Ｓ
．（Ｔｈｉｅｓ，Ｒ．Ｓ．）ら著、「ＧＤＦ−８プロペプチドは、ＧＤＦ−８に結合し、
ＧＤＦ−８受容体結合を阻害することにより生物学的活性をアンタゴナイズする（ＧＤＦ
−８  ｐｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ＧＤＦ−８  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎ
ｉｚｅｓ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  Ｇ
ＤＦ−８  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」、グロース・ファクターズ（Ｇｒｏｗ
ｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ）、２００１年、第１８巻、ｐ．２５１〜９）によるレポータとし
てＳｍａｄ依存性シグナリングに応答性およびアデノウイルス主要後期プロモータが挙げ
られる。
【０４２０】
【表１６】
2020062007.tif 000056
2020062007.tif 000057
2020062007.tif 000058
一部の実施形態において、ミンク肺上皮／ＰＡＩレポータ細胞系を使用することができ
る。ミンク肺上皮細胞は、ＴＧＦ−βを産生しないが、高レベルのＴＧＦ−β受容体を発
現する（ムンガー（Ｍｕｎｇｅｒ）ら）。ミンク肺上皮／ＰＡＩレポータ細胞系は、ルシ
フェラーゼ遺伝子のタンパク質コード部分の発現をモジュレートするＴＧＦ−β応答性遺
伝子ＰＡＩおよび／またはＣＯＬ１Ａからのプロモータエレメントを含むレポータ構築物
を含む。一部の実施形態において、他のレポータ構築物をミンク肺上皮細胞と使用するこ
とができる。一部の実施形態において、ＳＭＡＤ３応答性レポータ構築物を使用すること
ができる。
【０４２１】
ＴＧＦ−β２放出アッセイ
一部の実施形態において、本発明は、ＴＧＦ−β２の放出および／または活性を検出す
るためのアッセイを提供する。このようなアッセイは、ＴＧＦ−β２および／またはそれ
らの組換え体および／またはキメラタンパク質誘導体を含むＧＰＣを発現する（例えば、
天然に、ならびに／または形質移入、安定的形質移入、および／もしくは形質導入を介し
て）細胞系（例えば、ＨＥＫ２９３細胞、２９３Ｔ／１７細胞、Ｈｓ６８細胞、ＣＣＤ１
１１２ｓｋ細胞、ＨＦＦ−１細胞、ケロイド線維芽細胞またはＳｗ−４８０細胞）を含み
得る。一部の実施形態において、ＴＧＦ−β２発現細胞中で追加の因子を発現させ、およ
び／またはそれと組み合わせてＴＧＦ−β２成長因子放出に対するそれらの効果を決定す
る。一部の実施形態において、インテグリンを発現させることができる。一部の実施形態
において、α９β１インテグリンを発現させることができる。
【０４２２】
一部の実施形態において、ＴＧＦ−β２放出は、本明細書に記載のものによる１つ以上
の成長因子放出アッセイにより検出することができる。一部の実施形態において、このよ
うなアッセイは、ＴＧＦ−β２放出および／または活性を計測するためのミンク肺上皮／
ＰＡＩレポータ細胞系の使用を含み得る。一部の実施形態において、ＴＧＦ−β２放出ア
ッセイは、ＧＰＣからのＴＧＦ−β２放出および活性に関する阻害および／または活性化
特性について抗体をスクリーニングするために使用することができる。
【０４２３】
Ｔｒｅｇ誘導アッセイ
Ｔｒｅｇ細胞は、自己免疫の調節において重要なサプレッサー細胞機能を含む免疫細胞
である。このような細胞は、ＦｏｘＰ３遺伝子の誘導後の前駆細胞に由来する（ウッド（
Ｗｏｏｄ）およびサカグチ（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ）著、ネイチャー・レビューズ（Ｎａｔ
ｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ）、２００３年）。ＦｏｘＰ３は、転写因子であり、その発現は
、ＴＧＦ−β関連タンパク質によりある程度調節され得る。ワン（Ｗａｎ）およびフラベ
ル（Ｆｌａｖｅｌｌ）（２００５年）は、外因性ＴＧＦ−βに応答して、活性化初代Ｔ細
胞はデノボＦｏｘＰ３ならびに「ノックインされた」蛍光タンパク質発現およびサプレッ
サー細胞機能の誘導を示すことを実証した。トーン（Ｔｏｎｅ）ら（２００８年）は、初
代Ｔ細胞中のＦｏｘＰ３発現をドライブするキーＴＧＦ−β応答性エンハンサーエレメン
トがＥＬ４Ｔリンパ腫系中に存在することを実証した。一部の実施形態において、本発明
は、レポータ構築物の発現をモジュレートするＦｏｘＰ３遺伝子からのプロモータエレメ
ントを含むレポータ構築物（本明細書においてＦｏｘＰ３ドライブレポータ構築物と称さ
れる）を提供する。一部の実施形態において、ＦｏｘＰ３ドライブレポータ構築物は、Ｔ
ＧＦ−β関連タンパク質細胞シグナリング活性に対して応答性のプロモータエレメントを
含む。一部の実施形態において、ＦｏｘＰ３ドライブレポータ構築物は、１つ以上の細胞
および／または細胞系に導入する（一過的および／または安定的）。このような細胞は、
本明細書においてＦｏｘＰ３ドライブレポータ細胞と称される。一部の実施形態において
、このような細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態において、このような哺乳動
物細胞としては、限定されるものではないが、マウス細胞、ウサギ細胞、ラット細胞、サ
ル細胞、ハムスター細胞およびヒト細胞を挙げることができる。このような細胞は、細胞
系に由来し得る。一部の実施形態において、ヒト細胞を使用することができる。一部の実
施形態において、細胞系としては、限定されるものではないが、ＨＥＫ２９３細胞、Ｈｅ
Ｌａ細胞、Ｓｗ−４８０細胞、ＥＬ４Ｔリンパ腫細胞、ＴＭＬＣ細胞、２９３Ｔ／１７細
胞、Ｈｓ６８細胞、ＣＣＤ１１１２ｓｋ細胞、ＨＦＦ−１細胞、ケロイド線維芽細胞、Ａ
２０４細胞、ＬＩ７ＲＩＢ細胞およびＣ２Ｃ１２細胞を挙げることができる。一部の実施
形態において、ＥＬ４Ｔリンパ腫細胞を使用することができる。ＥＬ４Ｔリンパ腫細胞は
、ＴＧＦ−β関連タンパク質シグナリングに対して応答性である転写エンハンサーエレメ
ントを含むことが公知である。一部の実施形態において、ＦｏｘＰ３ドライブレポータ細
胞は、ＦｏｘＰ３依存性遺伝子発現を活性化および／または阻害する能力について抗体を
スクリーニングするために使用することができる。
【０４２４】
増殖アッセイ
一部の実施形態において、本発明の細胞ベースアッセイは、増殖アッセイを含み得る。
本明細書において使用される場合、用語「増殖アッセイ」は、細胞増殖に対する１つ以上
の薬剤に対する効果を決定するアッセイを指す。
【０４２５】
一部の場合において、増殖アッセイは、ＨＴ２増殖アッセイを含み得る。このようなア
ッセイは、例えば、内容が参照により全体として本明細書に組み込まれるツァン，Ｍ．（
Ｔｓａｎｇ，Ｍ．）ら著、１９９５年、サイトカイン（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ）、第７巻（第
５号）、ｐ．３８９〜９７に記載の方法により実施することができる。ＨＴ２細胞（ＡＴ
ＣＣ  ＣＲＬ−１８４１）は、それらが培養培地中でＴＧＦ−β１に対して非感受性であ
るＩＬ−２の存在下で成長させる。ＨＴ２細胞をＩＬ−４含有培地に切り替えた場合、そ
れらは増殖し続けるが、アポトーシスの誘導により培養培地中でＴＧＦ−β１に対して応
答する。ＩＬ−４含有培地中で、培養培地中のＴＧＦ−β１に起因する細胞死は用量依存
的に生じ、それは、ＴＧＦ−βシグナリング経路を干渉する多数の試薬により遮断するこ
とができる。これにより、ＴＧＦ−β１活性化をモジュレートするための試薬をスクリー
ニングするためのこのアッセイの使用が可能となる。
【０４２６】
細胞数の変化の検出は、一部の場合において、細胞中のＡＴＰレベルの検出および／ま
たは定量を介して実施することができる。ＡＴＰレベルは、典型的には、所与の試験試料
、ウェル、プレートまたはディッシュ中に存在する細胞の数と相関する。一部の実施形態
において、ＡＴＰレベルは、セルタイター−ＧＬＯ（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ）（登
録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉ
ｔｙ  Ａｓｓａｙ）（プロメガ・バイオサイエンシズ（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＢｉｏＳｃｉｅ
ｎｃｅｓ）社、マディソン、ウィスコンシン）を使用して測定することができる。
【０４２７】
キットおよびデバイス
本発明の化合物および／または組成物のいずれかは、キット中に含めることができる。
非限定的な例において、化合物および／または組成物を生成するための試薬、例として、
抗原分子を１つ以上のキット中に含める。一部の実施形態において、キットは、本発明の
化合物および／または組成物を創成および／または合成するための試薬および／または説
明書をさらに含み得る。一部の実施形態において、キットは、１つ以上の緩衝液も含み得
る。一部の実施形態において、本発明のキットは、タンパク質もしくは核酸アレイまたは
ライブラリーを作製するための構成要素を含み得、したがって、例えば、固体担体を含み
得る。
【０４２８】
一部の実施形態において、キット構成要素は、水性培地中で、または凍結乾燥形態で包
装することができる。キットの容器手段は、一般に、少なくとも１つのバイアル、試験管
、フラスコ、瓶、シリンジまたは構成要素を装入し、好ましくは、好適にアリコート化す
ることができる他の容器手段を含む。２つ以上のキット構成要素（標識試薬および標識は
、一緒に包装することができる）が存在する場合、キットは、一般に、追加の構成要素を
別個に装入することができる第２、第３または他の追加の容器も含有し得る。一部の実施
形態において、キットは、無菌の薬学的に許容可能な緩衝液および／または他の希釈剤を
含有するための第２の容器手段も含み得る。一部の実施形態において、１つ以上のバイア
ル中に構成要素の種々の組合せを含めることができる。本発明のキットは、典型的には、
本発明の化合物および／または組成物、例えば、タンパク質、核酸を含有するための手段
、ならびに任意の他の試薬容器を市販のために厳重に密封して含み得る。このような容器
は、所望のバイアルが保持される射出またはブロー成形プラスチック容器を含み得る。
【０４２９】
一部の実施形態において、キット構成要素は、１つ以上の溶液中で提供する。一部の実
施形態において、溶液は、水溶液であり、無菌水溶液が特に好ましい。一部の実施形態に
おいて、キット構成要素は、乾燥粉末として提供することができる。試薬および／または
構成要素を乾燥粉末として提供する場合、そのような粉末は、好適な容量の溶媒の添加に
より再構成することができる。一部の実施形態において、溶媒は、別の容器手段中で提供
することもできることが想定される。一部の実施形態において、標識色素を乾燥粉末とし
て提供する。一部の実施形態において、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８
０、９０、１００、１２０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０
、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１００
０マイクログラムまたは少なくとももしくは多くともそれらの量の乾燥色素を本発明のキ
ット中で提供することが企図される。このような実施形態において、次いで、色素を任意
の好適な溶媒、例えば、ＤＭＳＯ中で再懸濁させることができる。
【０４３０】
一部の実施形態において、キットは、キット構成要素を用いるための、およびキット中
に含まれない任意の他の試薬の使用のための説明書を含み得る。説明書は、実行すること
ができるバリエーションを含み得る。
【０４３１】
一部の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、デバイスと組み合
わせ、デバイス上にコーティングし、またはデバイス中に包埋することができる。デバイ
スとしては、限定されるものではないが、歯科インプラント、ステント、骨置換物、人工
関節、弁、ペースメーカおよび／または他の移植可能な治療デバイスを挙げることができ
る。
【０４３２】
定義
本明細書中の種々の箇所において、本開示の化合物の置換基を群で、または範囲で開示
する。本開示は、そのような群および範囲のメンバーのそれぞれおよび全ての個々の下位
の組合せを含むことが具体的に意図される。用語の定義の非限定的なリストを以下に示す
。
【０４３３】
活性：本明細書において使用される場合、用語「活性」は、事象が生じており、または
なされている状態を指す。本発明の組成物は、活性を有し得、この活性は、１つ以上の生
物学的イベントを含み得る。一部の実施形態において、このような生物学的イベントは、
成長因子および／または成長因子シグナリングを含み得る。一部の実施形態において、生
物学的イベントは、成長因子および受容体相互作用に伴う細胞シグナリングイベントを含
み得る。一部の実施形態において、生物学的イベントは、ＴＧＦ−βまたはＴＧＦ−β関
連タンパク質の、１つ以上の対応する受容体との相互作用に伴う細胞シグナリングイベン
トを含み得る。
【０４３４】
組合せで投与する：本明細書において使用される場合、用語「組合せで投与する」また
は「組合せ投与」は、同時に、または対象がある時点において両方の薬剤に同時に曝露さ
れるような、および／もしくは患者に対するそれぞれの薬剤の効果の重複が存在し得るよ
うな間隔内で投与される２つ以上の薬剤への１つ以上の対象の同時の曝露を指す。一部の
実施形態において、少なくとも１つの用量の１つ以上の薬剤を、少なくとも１つの用量の
１つ以上の他の薬剤の約２４時間、１２時間、６時間、３時間、１時間、３０分、１５分
、１０分、５分、または１分以内に投与する。一部の実施形態において、投与は、重複投
与量レジメンで行う。本明細書において使用される場合、用語「投与量レジメン」は、時
間間隔を空けた複数の用量を指す。このような用量は、規則的な間隔において生じ得、ま
たは投与の１つ以上の中断を含み得る。一部の実施形態において、個々の用量の本明細書
に記載の本発明の１つ以上の化合物および／または組成物の投与は、組合せ（例えば、相
乗）効果が達成されるように十分に近い間隔で一緒に行う。
【０４３５】
動物：本明細書において使用される場合、用語「動物」は、動物界の任意のメンバーを
指す。一部の実施形態において、「動物」は、任意の発生段階におけるヒトを指す。一部
の実施形態において、「動物」は、任意の発生段階における非ヒト動物を指す。ある実施
形態において、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、
サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、またはブタ）である。一部の実施形態におい
て、動物としては、限定されるものではないが、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類
および蠕虫が挙げられる。一部の実施形態において、動物は、トランスジェニック動物、
操作された動物、またはクローンであり得る。
【０４３６】
目的抗原または所望の抗原：本明細書において使用される場合、用語「目的抗原」また
は「所望の抗原」は、本明細書に記載の本発明の抗体および／またはそれらの断片、突然
変異体、バリアント、および／または変更物と免疫特異的に結合し、またはそれと相互作
用する本明細書に提供されるそれらのタンパク質および／または他の生体分子を指す。一
部の実施形態において、目的抗原は、ＴＧＦ−β関連タンパク質、成長因子、プロドメイ
ン、ＧＰＣ、それらの間の重複のタンパク質モジュールまたは領域を含み得る。
【０４３７】
およそ：本明細書において使用される場合、用語「およそ」または「約」は、１つ以上
の目的値に適用される場合、記述される参照値と類似する値を指す。ある実施形態におい
て、用語「およそ」または「約」は、特に記載のない限り、またはそうでなければ文脈か
ら明らかでない限り、記述される参照値の前後（大きいまたは小さい）２５％、２０％、
１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、
９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれより小さい範囲内
の値の範囲を指す（このような数が考えられる値の１００％を超過する場合を除く）。
【０４３８】
〜と会合する：本明細書において使用される場合、用語「〜と会合している」、「コン
ジュゲートしている」、「結合している」、「付着している」および「テザリングしてい
る」は、２つ以上の部分に関して使用される場合、それらの部分が直接または結合剤とし
て機能する１つ以上の追加の部分を介して互いに物理的に会合または連結して十分に安定
的な構造を形成し、その結果、それらの部分がその構造が使用される条件、例えば、生理
学的条件下で物理的に会合したままであることを意味する。「会合」は、厳密には、直接
共有化学結合を介するものである必要はない。これは、「会合している」実体が物理的に
会合しているままであるように十分に安定的なイオンまたは水素結合またはハイブリダイ
ゼーションベースの連結性も示唆し得る。
【０４３９】
生体分子：本明細書において使用される場合、用語「生体分子」は、アミノ酸ベース、
核酸ベース、炭水化物ベースまたは脂質ベースなどの任意の天然分子である。
生物学的に活性：本明細書において使用される場合、語句「生物学的に活性」は、生体
系および／または生物中で活性を有する任意の物質の特徴を指す。例えば、生物に投与さ
れた場合、その生物に対する生物学的効果を有する物質を生物学的に活性であるとみなす
。特定の実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、一部が生物学的に
活性であり、または生物学的に関連するとみなされる活性を模倣する場合であっても、生
物学的に活性とみなすことができる。
【０４４０】
生体系：本明細書において使用される場合、用語「生体系」は、一緒に機能して細胞膜
、細胞コンパートメント、細胞、組織、器官、器官系、多細胞生物、または任意の生物学
的実体内である生物学的タスクを実行する器官、組織、細胞、細胞内構成要素、タンパク
質、核酸、分子（例として、限定されるものではないが、生体分子）の群を指す。一部の
実施形態において、生体系は、細胞内および／または細胞外細胞シグナリング生体分子を
含む細胞シグナリング経路である。一部の実施形態において、生体系は、細胞外マトリッ
クス、細胞マトリックスおよび／または細胞ニッチ内の成長因子シグナリングイベントを
含む。
【０４４１】
候補抗体：本明細書において使用される場合、用語「候補抗体」は、１つ以上の所望の
抗体を選択することができる１つ以上の抗体のプールからの抗体を指す。
細胞マトリックス：本明細書において使用される場合、用語「細胞マトリックス」は、
細胞膜の外側部と会合している生化学および構造的環境を指す。このような細胞膜として
は、血小板細胞膜も挙げることができる。細胞マトリックスの構成要素としては、限定さ
れるものではないが、プロテオグリカン、炭水化物分子、内在性膜タンパク質、糖脂質な
どを挙げることができる。一部の場合において、細胞マトリックス構成要素としては、成
長因子および／または成長因子活性のモジュレータを挙げることができる。一部の細胞マ
トリックスタンパク質としては、インテグリン、ＧＡＲＰおよびＬＲＲＣ３３が挙げられ
る。
【０４４２】
化合物：本明細書において使用される場合、用語「化合物」は、区別される化学実体を
指す。この用語は、本明細書において、本発明のペプチド、タンパク質、タンパク質複合
体または抗体を指すために使用することができる。一部の実施形態において、特定の化合
物は、１つ以上の異性体または同位体形態（例として、限定されるものではないが、立体
異性体、幾何異性体および同位体）で存在し得る。一部の実施形態において、化合物は、
単一のそのような形態でのみ提供または利用する。一部の実施形態において、化合物は、
２つ以上のそのような形態の混合物（例として、限定されるものではないが、立体異性体
のラセミ混合物）として提供または利用する。当業者は、一部の化合物が異なるそのよう
な形態で存在し、異なる特性および／または活性（例として、限定されるものではないが
、生物学的活性）を示すことを認識する。このような場合において、本発明により使用さ
れる特定の形態の化合物を選択または回避することは当業者の技能の範囲内である。例え
ば、不斉置換炭素原子を含有する化合物は、光学活性またはラセミ体で単離することがで
きる。光学活性出発材料から光学活性体を調製する方法は、当技術分野において公知であ
り、例えば、ラセミ混合物の分割または立体選択合成による。
【０４４３】
保存されている：本明細書において使用される場合、用語「保存されている」は、それ
ぞれ、比較される２つ以上の配列の同一位置で未変化で生じるものであるポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。相対的に保存され
ているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列中のいずれかの場所で出現するヌクレオチド
またはアミノ酸よりも関連する配列間で保存されているものである。
【０４４４】
一部の実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合
、「完全に保存されている」と言われる。一部の実施形態において、２つ以上の配列は、
それらが互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、
または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。一部の
実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに約７０％同一、約８０％同一、約
９０％同一、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存されて
いる」と言われる。一部の実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに少なく
とも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一
、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なく
とも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。一部の実施形態において、
２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０
％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、ま
たは約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、オリゴヌ
クレオチドもしくはポリペプチドの全長に当てはまり得、またはそれらの部分、領域もし
くは特徴部に当てはまり得る。
【０４４５】
一実施形態において、保存されている配列は、連続的でない。当業者は、連続アライン
メント中のギャップが配列間に存在する場合にアラインメントをいかに達成するか、およ
び存在する挿入または欠失にかかわらず、対応する残基をいかにアラインするかを認識す
ることができる。
【０４４６】
送達：本明細書において使用される場合、「送達」は、化合物、物質、実体、部分、積
み荷またはペイロードを送達する作用または様式を指す。
送達剤：本明細書において使用される場合、「送達剤」は、細胞、対象または他の生体
系細胞への１つ以上の物質（例として、限定されるものではないが、本発明の化合物およ
び／または組成物）のインビボ送達を少なくとも部分的に容易にする任意の薬剤を指す。
【０４４７】
所望の抗体：本明細書において使用される場合、用語「所望の抗体」は、一部の場合に
おいて、候補抗体のプールから追及される抗体を指す。
脱安定化された：本明細書において使用される場合、用語「脱安定的」、「脱安定化す
る」、または「脱安定化された領域」は、同一領域または分子の出発、参照、野生型また
は天然形態よりも安定的でない領域または分子を意味する。
【０４４８】
検出可能な標識：本明細書において使用される場合、「検出可能な標識」は、別の実体
と付着し、取り込まれ、または会合する１つ以上のマーカ、シグナル、または部分を指し
、それらのマーカ、シグナルまたは部分は、当技術分野において公知の方法、例として、
ラジオグラフィ、蛍光、化学発光、酵素活性、吸光度、免疫学的検出などにより容易に検
出される。検出可能な標識としては、放射性同位体、フルオロフォア、クロモフォア、酵
素、色素、金属イオン、リガンド、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンおよびハプ
テン、量子ドット、ポリヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、フラッグタグ、ヒトインフルエン
ザヘマグルチニン（ＨＡ）タグなどを挙げることができる。検出可能な標識は、それらが
付着し、取り込まれ、または会合する実体中の任意の位置において局在化させることがで
きる。例えば、ペプチドまたはタンパク質中で付着し、取り込まれ、またはそれと会合す
る場合、それらは、アミノ酸、ペプチド、もしくはタンパク質内に存在し、またはＮもし
くはＣ末端において局在させることができる。
【０４４９】
遠位：本明細書において使用される場合、用語「遠位」は、中心から離れて、または目
的の箇所もしくは領域から離れて位置することを意味する。
操作された（人工的に改変された）：本明細書において使用される場合、構造的か化学
的かにかかわらず、出発点、野生型または天然分子とは異なる特徴部または特性を有する
ようにそれらを設計する場合、本発明の実施形態は、「操作されている」。したがって、
操作された薬剤または実体は、その設計および産生の少なくとも一方が人の手の作用を含
むものである。
【０４５０】
エピトープ：本明細書において使用される場合、「エピトープ」は、免疫系の構成要素
、例として、限定されるものではないが、抗体と相互作用し得る分子上の表面または領域
を指す。一部の実施形態において、タンパク質またはタンパク質モジュールを指す場合、
エピトープは、アミノ酸の直鎖ストレッチまたはフォールドされたアミノ酸鎖により形成
される三次元構造を含み得る。
【０４５１】
発現：本明細書において使用される場合、核酸配列の「発現」は、以下のイベントの１
つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの産生（例えば、転写による
）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ
形成、および／または３’末端プロセシングによる）；（３）ＲＮＡのポリペプチドまた
はタンパク質への翻訳；（４）ポリペプチドまたはタンパク質のフォールディング；およ
び（５）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
【０４５２】
細胞外マトリックス：本明細書において使用される場合、用語「細胞外マトリックス」
または「ＥＣＭ」は、典型的には、構造タンパク質およびシグナリング分子を含む細胞を
包囲する区域および／または細胞間の区域を指す。細胞外マトリックスの構成要素として
は、限定されるものではないが、細胞外環境の構造構成要素と直接または間接的に会合し
得るタンパク質、核酸、膜、脂質および糖を挙げることができる。細胞外マトリックスの
構造構成要素としては、限定されるものではないが、タンパク質、多糖（例えば、ヒアル
ロン酸）、グリコサミノグリカンおよびプロテオグリカン（例えば、硫酸ヘパリン、硫酸
コンドロイチンおよび硫酸ケラチン）を挙げることができる。このような構造構成要素と
しては、限定されるものではないが、線維構成要素（例えば、コラーゲンおよびエラスチ
ン）、フィブリリン、フィブロネクチン、ラミニン、アグリン、パールカン、デコリンな
どを挙げることができる。細胞外マトリックスの構成要素であり得る他のタンパク質とし
ては、ＬＴＢＰが挙げられる。細胞外マトリックス構成要素としては、成長因子および／
または成長因子活性のモジュレータを挙げることもできる。
【０４５３】
特徴部：本明細書において使用される場合、「特徴部」は、特徴、特性、または独特な
エレメントを指す。
製剤：本明細書において使用される場合、「製剤」は、少なくとも本発明の化合物およ
び／または組成物ならびに送達剤を含む。
【０４５４】
断片：「断片」は、本明細書において使用される場合、部分を指す。例えば、タンパク
質の断片は、培養細胞から単離された全長タンパク質を消化することにより得られたポリ
ペプチドを含み得る。一部の実施形態において、タンパク質の断片は、少なくとも３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、
８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０またはそれより多いアミノ酸を含む
。一部の実施形態において、抗体の断片は、酵素的消化に供され、またはそれ自体で合成
された抗体の部分を含む。
【０４５５】
機能的：本明細書において使用される場合、「機能的」生物学的分子は、特徴決定され
る特性および／または活性を示す構造を有し、それを示す形態の生物学的実体である。
相同性：本明細書において使用される場合、用語「相同性」は、ポリマー分子間、例え
ば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／またはポリペ
プチド分子間の全体的な関連性を指す。一部の実施形態において、ポリマー分子は、それ
らの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０
％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一また
は類似である場合、互いに「相同性」とみなされる。用語「相同的」は、必然的に少なく
とも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。本発明に
よれば、２つのポリヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが少なくとも
約２０アミノ酸の少なくとも１つのストレッチについて少なくとも約５０％、６０％、７
０％、８０％、９０％、９５％、またはさらには９９％である場合、相同的とみなされる
。一部の実施形態において、相同的ポリヌクレオチド配列は、少なくとも４〜５つのユニ
ークに規定されるアミノ酸のストレッチをコードする能力により特徴決定する。６０ヌク
レオチド長未満のポリヌクレオチド配列について、相同性は、典型的には、少なくとも４
〜５つのユニークに規定されるアミノ酸のストレッチをコードする能力により決定する。
本発明によれば、２つのタンパク質配列は、タンパク質が少なくとも約２０アミノ酸の少
なくとも１つのストレッチについて少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、また
は９０％同一である場合、相同的とみなされる。多くの実施形態において、相同的タンパ
ク質は、大きい全体的な相同性の程度および少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５
、４０、４５、５０またはそれより多いアミノ酸の少なくとも１つの短いストレッチにわ
たる高い相同性の程度を示し得る。多くの実施形態において、相同的タンパク質は、１つ
以上の特徴的な配列エレメントを共有する。本明細書において使用される場合、用語「特
徴的な配列エレメント」は、関連タンパク質中に存在するモチーフを指す。一部の実施形
態において、そのようなモチーフの存在は、特定の活性（例えば、生物学的活性）と相関
する。
【０４５６】
同一性：本明細書において使用される場合、用語「同一性」は、ポリマー分子間、例え
ば、オリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間、およ
び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。２つのポリヌクレオチド配列の
同一性パーセントの計算は、例えば、２つの配列を最適な比較目的のためにアラインする
ことにより実施することができる（例えば、最適なアラインメントのために第１および第
２の核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較目的のために同一
でない配列を無視することができる）。ある実施形態において、比較目的のためにアライ
ンされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なく
とも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０
％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するヌクレオチド位置のヌ
クレオチドを比較する。第１の配列中のある位置が第２の配列中の対応する位置と同一の
ヌクレオチドにより占有されている場合、分子はその位置において同一である。２つの配
列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要が
あるギャップの数、およびそれぞれのギャップの長さを考慮し、配列により共有される同
一位置の数の関数である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、
数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列
間の同一性パーセントは、「計算分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、レスク，Ａ．Ｍ．（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．）編、オックス
フォード大学プレス（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨー
ク、１９８８年；「生物計算科学：情報科学およびゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐ
ｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）」、
スミス，Ｄ．Ｗ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．）編、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９３年；「分子生物学における配列分析（Ｓｅｑｕ
ｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、フォン
ハインチェ，Ｇ．（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．）著、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年；「配列データのコンピュータ分析、第Ｉ部（Ｃｏｍ
ｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ）」
、グリフィン，Ａ．Ｍ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．）、およびグリフィン，Ｈ．Ｇ．（
Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ｈ．Ｇ．）編、ヒュマーナプレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュ
ージャージ、１９９４年；ならびに「配列分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）」、グリプスコフ，Ｍ．（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．）およびデ
ブルー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）編、Ｍストックトンプレス（Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔ
ｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９１年（それらのそれぞれは、参照により本明
細書に組み込まれる）に記載のものなどの方法を使用して決定することができる。例えば
、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、例えば、メイヤーズ（Ｍｅｙｅｒｓ
）およびミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）（コンピュータ・アプリケーションズ・イン・ザ・バイ
オサイエンシズ（ＣＡＢＩＯＳ）、１９８９年、第４巻、ｐ．１１〜１７）のアルゴリズ
ムを使用して決定することができ、これはＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に
組み込まれており、ＰＡＭ１２０加重残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌ
ｅ）、ギャップ長さペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用する。あるいは、
２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリッ
クスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを使用して決定する
ことができる。配列間の同一性パーセントを決定するために一般に用いられる方法として
は、限定されるものではないが、参照により本明細書に組み込まれるカリッロ，Ｈ（Ｃａ
ｒｉｌｌｏ，Ｈ）、およびリップマン，Ｄ．（Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．）著、ＳＩＡＭジャー
ナル・オン・アプライド・マスマティクス（ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．
）、第４８巻、ｐ．１０７３（１９８８年）に開示のものが挙げられる。同一性を決定す
るための技術は、公的に利用可能なコンピュータプログラムにコード化されている。２つ
の配列間の相同性を決定するための例示的なコンピュータソフトウェアとしては、限定さ
れるものではないが、ＧＣＧプログラムパッケージ、デベロー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ
，Ｊ．）ら著、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ）、第１２巻（第１号）、ｐ．３８７（１９８４年））、ＢＬＡＳＴＰ、Ｂ
ＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ  アルツシュール，Ｓ．Ｆ．（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ
．）ら著、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ
）、第２１５巻、ｐ．４０３（１９９０年））が挙げられる。
【０４５７】
遺伝子の発現を阻害する：本明細書において使用される場合、語句「遺伝子の発現を阻
害する」は、遺伝子の発現産物の量の低減を引き起こすことを意味する。発現産物は、遺
伝子から転写されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）または遺伝子から転写されたｍＲＮＡか
ら翻訳されるポリペプチドであり得る。典型的には、ｍＲＮＡのレベルの低減は、それか
ら翻訳されるポリペプチドのレベルの低減をもたらす。発現のレベルは、ｍＲＮＡまたは
タンパク質を計測するための標準的技術を使用して決定することができる。
【０４５８】
インビトロ：本明細書において使用される場合、用語「インビトロ」は、生物（例えば
、動物、植物、または微生物）内ではなく、人工的環境において、例えば、試験管または
反応槽中、細胞培養物中、ペトリ皿中などで生じるイベントを指す。
【０４５９】
インビボ：本明細書において使用される場合、用語「インビボ」は、生物（例えば、動
物、植物、もしくは微生物またはそれらの細胞もしくは組織）内で生じるイベントを指す
。
【０４６０】
単離された：本明細書において使用される場合、用語「単離された」は、「分離された
」と同義であるが、人の手によって分離が実施されたという推定を伴う。一実施形態にお
いて、単離された物質または実体は、それが事前に会合した（天然環境か実験環境かを問
わない）構成要素の少なくとも一部から分離されたものである。単離された物質は、それ
らが会合していた物質に対して変動レベルの純度を有し得る。単離された物質および／ま
たは実体は、それらが最初に会合した他の構成要素の少なくとも約１０％、約２０％、約
３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれよ
り多くから分離することができる。一部の実施形態において、単離された薬剤は、約８０
％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６
％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％を上回って純粋である。本明細書に
おいて使用される場合、物質は、それが他の構成要素を実質的に含まない場合、「純粋」
である。
【０４６１】
実質的に単離された：「実質的に単離された」は、化合物が、それが形成または検出さ
れた環境から実質的に分離されることを意味する。部分分離物は、例えば、本開示の化合
物が濃縮された組成物を含み得る。実質的分離物は、重量基準で少なくとも約５０％、少
なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少
なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％の本開示の化合物、
またはその塩を含有する組成物を含み得る。化合物およびその塩を単離する方法は、当技
術分野において定型的である。一部の実施形態において、物質または実体の単離は、化学
会合および／または結合の破壊を含む。一部の実施形態において、単離は、単離される物
質または実体が既に合わさった構成要素からの分離のみを含み、そのような破壊を含まな
い。
【０４６２】
リンカー：本明細書において使用される場合、リンカーは、２つ以上のドメイン、部分
または実体を連結する部分を指す。一実施形態において、リンカーは、１０個以上の原子
を含み得る。さらなる実施形態において、リンカーは、原子の群、例えば、１０〜１，０
００個の原子を含み得、原子または基、例えば、限定されるものではないが、炭素、アミ
ノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、およびイミ
ンを含めることができる。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のヌクレオチ
ドを含む１つ以上の核酸を含み得る。一部の実施形態において、リンカーは、アミノ酸、
ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質を含み得る。一部の実施形態において、リンカ
ーにより結合される部分としては、限定されるものではないが、原子、化学基、ヌクレオ
シド、ヌクレオチド、ヌクレオ塩基、糖、核酸、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タ
ンパク質、タンパク質複合体、ペイロード（例えば、治療剤）、またはマーカ（例として
、限定されるものではないが、化学、蛍光、放射性または生物発光マーカ）を挙げること
ができる。リンカーは、任意の有用な目的に使用し、本明細書に記載のとおり、例えば、
マルチマーまたはコンジュゲートを形成し、ペイロードを投与することができる。リンカ
ー中に取り込むことができる化学基の例としては、限定されるものではないが、上記のと
おりアルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エ
ステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、またはヘテロシクリル（それぞれは
、場合により置換されていてよい）が挙げられる。リンカーの例としては、限定されるも
のではないが、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えば、エチレンまたはプロ
ピレングリコールモノマー単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコー
ル、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、
またはテトラエチレングリコール）、およびデキストランポリマーが挙げられる。他の例
としては、限定されるものではないが、還元剤または光分解を使用して開裂させることが
できるリンカー内の開裂可能な部分、例えば、ジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）またはア
ゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）などが挙げられる。選択的に開裂可能な結合の非限定的な例として
は、例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、もしくは他の還
元剤の使用、および／または光分解により開裂させることができるアミド結合、ならびに
例えば、酸または塩基加水分解により開裂させることができるエステル結合が挙げられる
。
【０４６３】
改変された：本明細書において使用される場合、用語「改変された」は、親または参照
分子または実体と比較して分子または実体の変化した状態または構造を指す。分子は、多
くの手法で、例として、化学的、構造的、および機能的に改変することができる。一部の
実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、非天然アミノ酸の導入によ
り改変する。
【０４６４】
突然変異：本明細書において使用される場合、用語「突然変異」は、変化および／また
は変更を指す。一部の実施形態において、突然変異は、タンパク質（例として、ペプチド
およびポリペプチド）および／または核酸（例として、ポリ核酸）の変化および／または
変更であり得る。一部の実施形態において、突然変異は、タンパク質および／または核酸
配列の変化および／または変更を含む。このような変化および／または変更は、１つ以上
のアミノ酸（タンパク質および／またはペプチドの場合）および／またはヌクレオチド（
核酸およびまたはポリ核酸の場合）の付加、置換およびまたは欠失を含み得る。突然変異
がアミノ酸および／またはヌクレオチドの付加および／または置換を含む実施形態におい
て、このような付加および／または置換は、１つ以上のアミノ酸および／またはヌクレオ
チド残基を含み得、改変されたアミノ酸および／またはヌクレオチドを含み得る。
【０４６５】
天然存在：本明細書において使用される場合、「天然存在」は、人工的な支援も人の手
の関与も伴わない天然の存在を意味する。
ニッチ：本明細書において使用される場合、用語「ニッチ」は、場所、帯域および／ま
たは環境を指す。一部の実施形態において、ニッチは、細胞ニッチを含む。本明細書にお
いて使用される場合、用語「細胞ニッチ」は、哺乳動物生物内の、またはそれに由来する
組織、器官または器官系内の細胞系中の生理学的条件のユニークなセットを指す。細胞ニ
ッチは、インビボ、インビトロ、エクスビボ、またはインサイチュで生じ得る。成長因子
シグナリングに関与する複雑な性質および動的なプロセスを考慮すると、細胞ニッチは、
機能的、空間的もしくは時間的に特徴決定することができ、または１つ以上の細胞を包含
する任意の環境を指すために使用することができる。したがって、一部の実施形態におい
て、細胞ニッチは、支持を提供する別の細胞、例えば、ナース細胞などに隣接する任意の
細胞の環境を含む。一部の実施形態において、ニッチとしては、それぞれの内容が参照に
より全体として本明細書に組み込まれる２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許出
願第６１／７２２，９１９号明細書および２０１２年１１月６日に出願された米国仮特許
出願第６１／７２２，９６９号明細書に記載のものを挙げることができる。
【０４６６】
非ヒト脊椎動物：本明細書において使用される場合、「非ヒト脊椎動物」は、ヒト（Ｈ
ｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）を除く全ての脊椎動物、例として、野生および飼育種を含む。
非ヒト脊椎動物の例としては、限定されるものではないが、哺乳動物、例えば、アルパカ
、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモ
ット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、スイギュウ、およびヤクが
挙げられる。
【０４６７】
オフターゲット：本明細書において使用される場合、「オフターゲット」は、任意の１
つ以上の標的、遺伝子および／または細胞転写物に対する任意の意図されない効果を指す
。
【０４６８】
作動可能に結合している：本明細書において使用される場合、語句「作動可能に結合し
ている」は、２つ以上の分子、構築物、転写物、実体、部分などの間の機能的連結を指す
。
【０４６９】
パラトープ：本明細書において使用される場合、「パラトープ」は、抗体の抗原結合部
位を指す。
受動吸着：本明細書において使用される場合、「受動吸着」は、固相反応物質を１つ以
上の表面（例えば、膜、皿、培養皿、アッセイプレートなど）上で固定化する方法を指す
。固定化は、典型的には、そのような反応物質および表面構成要素間の親和性に起因して
生じる。
【０４７０】
患者：本明細書において使用される場合、「患者」は、治療を求め得、もしくは必要と
され得、治療を要求し、治療を受けており、治療を受ける対象、または特定の疾患もしく
は病態について熟練（例えば、資格）専門家による治癒中の対象を指す。
【０４７１】
ペプチド：本明細書において使用される場合、用語「ペプチド」は、約５０アミノ酸長
以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０ア
ミノ酸長のアミノ酸の鎖を指す。
【０４７２】
薬学的に許容可能な：語句「薬学的に許容可能な」は、本明細書において、過剰な毒性
も、刺激も、アレルギー応答も、他の問題または合併症もなく、合理的な利益／リスク比
と一致する、ヒトおよび動物の組織との接触における使用に好適な、妥当な医学的判断の
範囲内であるそれらの化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために用いられ
る。
【０４７３】
薬学的に許容可能な賦形剤：本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容可
能な賦形剤」は、本明細書において使用される場合、医薬組成物中に存在し、対象中で実
質的に非毒性および非炎症性である特性を有する活性成分（例えば、本明細書に記載の）
以外の任意の成分を指す。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤は、活性
剤を懸濁および／または溶解し得るビヒクルである。賦形剤としては、例えば、抗接着剤
、酸化防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、色素（着色剤）、エモリエ
ント剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤またはコーティング剤、矯味剤、芳香剤
、流動促進剤（流動向上剤）、滑沢剤、保存剤、印刷インク、吸着剤、懸濁化または分散
剤、甘味剤、および水和水を挙げることができる。例示的な賦形剤としては、限定される
ものではないが、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カル
シウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピ
ロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒド
ロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステア
リン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メ
チルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、
ポビドン、α化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸
化ケイ素、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、クエン酸ナトリウム、デンプングリ
コール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロ
ース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、およびキシリトー
ルが挙げられる。
【０４７４】
薬学的に許容可能な塩：本明細書に記載の化合物の薬学的に許容可能な塩は、酸または
塩基部分がその塩形態（例えば、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させることにより生成
される）である開示化合物の形態である。薬学的に許容可能な塩の例としては、限定され
るものではないが、塩基性残基、例えば、アミンの鉱酸または有機酸塩；酸性残基、例え
ば、カルボン酸のアルカリまたは有機塩などが挙げられる。代表的な酸付加塩としては、
酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼン
スルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファー
スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル
硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘ
ミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−
ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル
硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレン
スルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パ
モン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン
酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、
チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉相酸塩などが挙げられる。
代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム
、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに非毒性アンモニウム、第４級アンモニウム、
およびアミンカチオン、例として、限定されるものではないが、アンモニウム、テトラメ
チルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメ
チルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられる。薬学的に許容可能な塩
としては、慣用の非毒性塩、例えば、非毒性無機または有機酸からのものが挙げられる。
一部の実施形態において、薬学的に許容可能な塩は、慣用の化学的方法により、塩基性ま
たは酸性部分を含有する親化合物から調製する。一般に、このような塩は、それらの化合
物の遊離酸または塩基形態を、化学量論量の適切な塩基または酸と、水中で、または有機
溶媒中で、またはそれら２つの混合物中で反応させることにより調製することができ；一
般に、非水性媒体、例えば、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、ま
たはアセトニトリルが好ましい。好適な塩のリストは、それぞれが参照により全体として
本明細書に組み込まれるレミントンの薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第１７版、マック・パブリッシング社（Ｍａｃｋ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、イーストン、ペンシルベニア、１９８５年
、ｐ．１４１８、「薬学的塩：特性、選択、および使用（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ）」、Ｐ．
Ｈ．シュタール（Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ）およびＣ．Ｇ．ウェルムス（Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕ
ｔｈ）（編）、ウィリー−ＶＣＨ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ）、２００８年、およびベルジ（
Ｂｅｒｇｅ）ら著、ジャーナル・オブ・ファーマシューティカル・サイエンス（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第６６巻、ｐ．１〜
１９（１９７７年）に見出される。薬学的に許容可能な溶媒和物：用語「薬学的に許容可
能な溶媒和物」は、本明細書において使用される場合、好適な溶媒の分子が結晶格子中に
取り込まれている化合物の結晶形態を指す。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、または
それらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶、または沈殿により調製することができ
る。好適な溶媒の例は、エタノール、水（例えば、一、二および三水和物）、Ｎ−メチル
ピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３−ジメチル
−２−イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒド
ロ−２−（ｌＨ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレン
グリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２−ピロリドン、安息香酸ベンジルなど
である。水が溶媒である場合、溶媒和物は「水和物」と称される。一部の実施形態におい
て、溶媒和物中に取り込まれる溶媒は、溶媒和物が投与（例えば、医薬組成物の単位剤形
で）される生物に対して生理学的に忍容可能であるタイプのものまたはレベルにおけるも
のである。
【０４７５】
薬物動態：本明細書において使用される場合、「薬物動態」は、それが生存生物に投与
される物質の運命の決定に関する場合、分子または化合物の任意の１つ以上の特性を指す
。薬物動態は、いくつかの区域、例として、吸収、分布、代謝ならびに排泄の程度および
速度に分類される。これは、一般に、ＡＤＭＥと称され：（Ａ）吸収は、血液循環に進入
する物質のプロセスであり；（Ｄ）分布は、身体の体液および組織全体にわたる物質の分
散または消散であり；（Ｍ）代謝（または生体内転換）は、親化合物の娘代謝物への不可
逆的転換であり；（Ｅ）排泄（または排除）は、身体からの物質の排除を指す。まれな場
合、一部の薬物は、身体組織中で不可逆的に蓄積する。
【０４７６】
物理化学的：本明細書において使用される場合、「物理化学的」は、物理および／また
は化学的特性のものまたはそれに関連するものを意味する。
予防：本明細書において使用される場合、用語「予防」は、感染、疾患、障害および／
もしくは病態の発症の部分的もしくは完全な遅延；特定の感染、疾患、障害、および／も
しくは病態の１つ以上の症状、特徴、または臨床的兆候の発症の部分的もしくは完全な遅
延；特定の感染、疾患、障害、および／もしくは病態の１つ以上の症状、特徴、または兆
候の発症の部分的もしくは完全な遅延；感染、特定の疾患、障害および／もしくは病態か
らの進行の部分的もしくは完全な遅延；ならびに／または感染、疾患、障害、および／も
しくは病態に伴う病変を発症するリスクの減少を指す。
【０４７７】
プロドラッグ：本開示は、本明細書に記載の化合物のプロドラッグも含む。本明細書に
おいて使用される場合、「プロドラッグ」は、化学または物理的変更時に治療薬として作
用する物質、分子または実体についての基礎形態である任意の物質、分子または実体を指
す。プロドラッグは、哺乳動物対象への投与前、投与時または投与後に活性薬物部分に変
換されるまである手法で共有結合させ、または封鎖することができる。プロドラッグは、
親化合物の定型的操作で、またはインビボのいずれかで修飾が開裂されるように、化合物
中に存在する官能基を修飾することにより調製することができる。プロドラッグとしては
、ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、またはカルボキシル基が、任意の基に結合し
ており、哺乳動物対象に投与された場合にそれが開裂して遊離ヒドロキシル、アミノ、ス
ルフヒドリル、またはカルボキシル基をそれぞれ形成する化合物が挙げられる。プロドラ
ッグの調製および使用は、両方とも参照により全体として本明細書に組み込まれるＴ．ヒ
グチ（Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ）およびＶ．ステラ（Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ）著、「新規送達系と
してのプロドラッグ（Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙ
ｓｔｅｍｓ）」、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズ（Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ
Ｓｅｒｉｅｓ）の第１４巻、および薬物設計における生体可逆性担体（Ｂｉｏｒｅｖｅ
ｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ）、エドワード  Ｂ．
（Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．）編、ロシュ（Ｒｏｃｈｅ）、米国医薬協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）およびペルガモンプレス（Ｐ
ｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年に考察されている。
【０４７８】
増殖する：本明細書において使用される場合、用語「増殖する」は、成長、拡張、複製
もしくは増加し、または成長、拡張、複製もしくは増加を引き起こすことを意味する。「
増殖性」は、増殖能を有することを意味する。「抗増殖性」は、増殖特性と逆の、または
それに対向する特性を有することを意味する。
【０４７９】
目的タンパク質：本明細書において使用される場合、用語「目的タンパク質」または「
所望のタンパク質」は、本明細書に提供されるものならびにその断片、突然変異体、バリ
アント、および変更物を含む。
【０４８０】
近位：本明細書において使用される場合、用語「近位」は、中心または目的の箇所もし
くは領域のより近くに位置することを意味する。
精製された：本明細書において使用される場合、用語「精製する」は、不所望な構成要
素、物質の汚染物、混合物または不完全物から実質的に純粋または澄明とすることを意味
する。「精製された」は、純粋である状態を指す。「精製」は、純粋とするプロセスを指
す。
【０４８１】
領域：本明細書において使用される場合、用語「領域」は、帯域または一般区域を指す
。一部の実施形態において、タンパク質またはタンパク質モジュールを指す場合、領域は
、タンパク質もしくはタンパク質モジュールに沿うアミノ酸の直鎖配列を含み得、または
三次元区域、エピトープおよび／もしくはエピトープのクラスタを含み得る。一部の実施
形態において、領域は、末端領域を含む。本明細書において使用される場合、用語「末端
領域」は、所与の薬剤の終端または末端において局在する領域を指す。タンパク質を指す
場合、末端領域は、Ｎおよび／またはＣ末端を含み得る。Ｎ末端は、遊離アミノ基を有す
るアミノ酸を含むタンパク質の終端を指す。Ｃ末端は、遊離カルボキシル基を有するアミ
ノ酸を含むタンパク質の終端を指す。したがって、Ｎおよび／またはＣ末端領域は、Ｎお
よび／またはＣ末端ならびに包囲するアミノ酸を含み得る。一部の実施形態において、Ｎ
および／またはＣ末端領域は、約３アミノ酸〜約３０アミノ酸、約５アミノ酸〜約４０ア
ミノ酸、約１０アミノ酸〜約５０アミノ酸、約２０アミノ酸〜約１００アミノ酸および／
または少なくとも１００アミノ酸を含む。一部の実施形態において、Ｎ末端領域は、Ｎ末
端を含むが、Ｃ末端を含まない任意の長さのアミノ酸を含み得る。一部の実施形態におい
て、Ｃ末端領域は、Ｃ末端を含むが、Ｎ末端を含まない任意の長さのアミノ酸を含み得る
。
【０４８２】
抗体認識の領域：本明細書において使用される場合、用語「抗体認識の領域」は、対応
する抗体により特異的に認識および結合される１つ以上の抗原上の、または２つ以上の抗
原間の１つ以上の領域を指す。一部の実施形態において、抗体認識の領域は、１、２、３
、４、５、６、７、８、９または少なくとも１０アミノ酸残基を含み得る。一部の実施形
態において、抗体認識の領域は、２つのタンパク質間の、または互いに近接する同一タン
パク質の２つのドメイン間の接合部を含む。
【０４８３】
試料：本明細書において使用される場合、用語「試料」は、資源から採取され、および
／または分析もしくは処理のために提供されるアリコートまたは部分を指す。一部の実施
形態において、試料は、生物学的資源、例えば、組織、細胞または構成要素部分（例えば
、体液、例として、限定されるものではないが、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液
、唾液、羊膜液、羊膜帯血、尿、膣液および精液）からのものである。一部の実施形態に
おいて、試料は、生物全体またはその組織、細胞もしくは構成要素部分のサブセット、ま
たはその分画もしくは一部、例として、限定されるものではないが、例えば、血漿、血清
、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部片、呼吸器、腸および尿生殖路、涙液、唾液、乳汁、血
液細胞、腫瘍、器官から調製されるホモジネート、溶解物または抽出物であり得、または
それを含み得る。一部の実施形態において、試料は、細胞構成要素、例えば、タンパク質
または核酸分子を含有し得る媒体、例えば、栄養ブロスまたはゲルであり、またはそれを
含む。一部の実施形態において、「一次」試料は、資源のアリコートである。一部の実施
形態において、一次試料を１つ以上の処理（例えば、分離、精製など）ステップに供して
分析または他の使用のための試料を調製する。
【０４８４】
シグナル配列：本明細書において使用される場合、語句「シグナル配列」は、タンパク
質の輸送または局在化を指向し得る配列を指す。
単一単位用量：本明細書において使用される場合、「単一単位用量」は、１用量／１回
／単一経路／単一の接触点で、すなわち、単一投与イベントで投与される任意の治療薬の
用量である。一部の実施形態において、単一単位用量は、区別される剤形（例えば、錠剤
、カプセル剤、貼付剤、充填シリンジ、バイアルなど）として提供する。
【０４８５】
類似性：本明細書において使用される場合、用語「類似性」は、ポリマー分子間、例え
ば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／
またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。互いのポリマー分子の類似性パーセ
ントの計算は、同一性パーセントの計算と同一の様式で実施することができるが、但し、
類似性パーセントの計算は、当技術分野において理解されるとおり保存的置換を考慮する
。
【０４８６】
分割用量：本明細書において使用される場合、「分割用量」は、単一単位用量または総
１日用量を２つ以上に分割した用量である。
安定的：本明細書において使用される場合、「安定的」は、反応混合物から有用な純度
の程度で単離後に残るほど十分に堅牢であり、好ましくは、有効な治療剤に配合すること
ができる化合物または実体を指す。
【０４８７】
安定化された：本明細書において使用される場合、用語「安定化する」、「安定化され
た」、「安定化された領域」は、安定をなし、または安定的になることを意味する。一部
の実施形態において、安定性は、絶対値に対して計測する。一部の実施形態において、安
定性は、参照化合物または実体に対して計測する。
【０４８８】
対象：本明細書において使用される場合、用語「対象」または「患者」は、例えば、実
験、診断、予防および／または治療目的のために本発明による組成物を投与することがで
きる任意の生物を指す。典型的な対象としては、動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウ
ス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、およびヒト）および／または植物が挙げられる。
【０４８９】
実質的には：本明細書において使用される場合、用語「実質的には」は、目的の特徴ま
たは特性の全範囲もしくは程度またはそれに近い範囲もしくは程度を示す定性的条件を指
す。生物学分野の当業者は、生物学的および化学的現象が、完了し、および／または完全
性に進行し、もしくは絶対的結果を達成もしくは回避することは、あるとしても、まれで
あることを理解する。したがって、用語「実質的には」は、多くの生物学的および化学的
現象において固有の完全性の潜在的な欠落を補足するために本明細書において使用される
。
【０４９０】
実質的に等しい：本明細書において使用される場合、用量間の時間差に関する場合、こ
の用語は、プラス／マイナス２％を意味する。
実質的に同時に：本明細書において使用される場合、および複数の用量に関する場合、
この用語は、典型的には、約２秒以内を意味する。
【０４９１】
を罹患する：疾患、障害、および／または病態「を罹患する」個体は、疾患、障害、お
よび／または病態の１つ以上の症状が診断されており、またはそれを呈する。
に対して感受性である：疾患、障害、および／または病態「に対して感受性である」個
体は、その疾患、障害、および／または病態の症状が診断されておらず、および／または
それを呈し得ないが、疾患またはその症状を発症する傾向を保有する。一部の実施形態に
おいて、疾患、障害、および／または病態（例えば、癌）に対して感受性である個体は、
以下の１つ以上により特徴決定することができる：（１）その疾患、障害、および／また
は病態の発症に関連する遺伝子突然変異；（２）その疾患、障害、および／または病態の
発症に関連する遺伝子多型；（３）その疾患、障害、および／または病態に関連するタン
パク質および／または核酸の発現および／または活性の増加および／または減少；（４）
その疾患、障害、および／または病態の発症に関連する習慣および／または生活様式；（
５）その疾患、障害、および／または病態の家族の既往歴；ならびに（６）その疾患、障
害、および／または病態の発症に関連する微生物への曝露および／またはそれによる感染
。一部の実施形態において、疾患、障害、および／または病態に対して感受性である個体
は、その疾患、障害、および／または病態を発症する。一部の実施形態において、疾患、
障害、および／または病態に対して感受性である個体は、その疾患、障害、および／また
は病態を発症しない。
【０４９２】
合成：用語「合成」は、人の手により産生、調製、および／または製造されることを意
味する。本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドまたは他の分子の合成は、化学的
または酵素的であり得る。
【０４９３】
「標的細胞」：本明細書において使用される場合、「標的細胞」は、任意の１つ以上の
目的細胞を指す。この細胞は、インビトロ、インビボ、インサイチュまたは生物の組織も
しくは器官中で見出すことができる。生物は、動物、好ましくは、哺乳動物、より好まし
くは、ヒト、最も好ましくは、患者であり得る。
【０４９４】
標的部位：用語「標的部位」は、本明細書において使用される場合、本発明の所与の化
合物、組成物または方法により標的化される領域または区域を指す。標的部位としては、
限定されるものではないが、細胞、組織、器官、器官系、ニッチなどを挙げることができ
る。
【０４９５】
治療剤：用語「治療剤」は、対象に投与された場合、治療、診断、および／もしくは予
防効果を有し、ならびに／または所望の生物学的および／もしくは薬理学的効果を誘発す
る任意の薬剤を指す。
【０４９６】
治療有効量：本明細書において使用される場合、用語「治療有効量」は、感染、疾患、
障害、および／または病態を罹患し、またはそれらに対して感受性である対象に投与され
た場合、感染、疾患、障害、および／または病態の症状を治療し、改善し、それらの発症
を診断し、予防し、および／または遅延させるために十分である、送達すべき薬剤（例え
ば、核酸、薬物、治療剤、診断剤、予防剤など）の量を意味する。一部の実施形態におい
て、治療有効量は、単一用量で提供する。一部の実施形態において、治療有効量は、複数
の用量を含む投与量レジメンで投与する。当業者は、一部の実施形態において、単位剤形
は、それがそのような投与量レジメンの一部として投与される場合に有効な量を含む場合
、治療有効量の特定の薬剤または実体を含むとみなすことができることを認識する。
【０４９７】
治療有効アウトカム：本明細書において使用される場合、用語「治療有効アウトカム」
は、感染、疾患、障害、および／または病態の症状を治療し、改善し、それらの発症を診
断し、予防し、および／または遅延させるために十分な、感染、疾患、障害、および／ま
たは病態を罹患し、またはそれらに対して感受性である対象におけるアウトカムを意味す
る。
【０４９８】
総１日用量：本明細書において使用される場合、「総１日用量」は、２４時間の期間で
与えられ、または処方される量である。これは、単一単位用量として投与することができ
る。
【０４９９】
転写因子：本明細書において使用される場合、用語「転写因子」は、例えば、転写の活
性化または抑制によりＤＮＡのＲＮＡへの転写を調節するＤＮＡ結合タンパク質を指す。
一部の転写因子は、転写の調節を単独で生じさせる一方、他の転写因子は、他のタンパク
質と協調して作用する。一部の転写因子は、ある条件下で転写を活性化および抑制し得る
。一般に、転写因子は、標的遺伝子の調節領域中の特異的標的配列または特異的コンセン
サス配列と高度に類似する配列に結合する。転写因子は、標的遺伝子の転写を単独で、ま
たは他の分子との複合体で調節し得る。
【０５００】
治療：本明細書において使用される場合、用語「治療」は、特定の感染、疾患、障害、
および／または病態の１つ以上の症状もしくは特徴の部分的または完全な緩和、良化、改
善、軽減、それらの発症の遅延、進行の阻害、重症度の低減、および／または発生率の低
減を指す。例えば、癌の「治療」は、腫瘍の生存、成長、および／または拡散の阻害を指
し得る。治療は、疾患、障害、および／または病態に伴う病変を発症するリスクを減少さ
せる目的のため、疾患、障害、および／もしくは病態の徴候を呈さない対象、ならびに／
または疾患、障害、および／もしくは病態の初期徴候のみを呈する対象に施すことができ
る。
【０５０１】
未改変：本明細書において使用される場合、「未改変」は、任意の手法で変化する前の
任意の物質、化合物または分子を指す。未改変は、常にというわけではないが、野生型ま
たは天然形態の生体分子または実体を指し得る。分子または実体は、それぞれの改変産物
が後続の改変のための「未改変」出発分子または実体として機能し得る一連の改変を受け
得る。
【０５０２】
均等物および範囲
当業者は、単に定型的な実験を使用して、本明細書に記載の本発明による具体的な実施
形態の多くの均等物を認識し、または確認することができる。本発明の範囲は、上記の詳
細な説明に限定されるものではなく、添付の特許請求の範囲に記載されるものである。
【０５０３】
特許請求の範囲において、冠詞、例えば、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、お
よび「その（ｔｈｅ）」は、反対であることが記載されており、またはそうでなければ文
脈から明確でない限り、１つまたは２つ以上を意味し得る。群の１つ以上のメンバー間の
「または」を含む特許請求の範囲または詳細な説明は、反対であることが示されており、
またはそうでなければ文脈から明らかでない限り、群メンバーの１つ、２つ以上、または
全てが所与の産物またはプロセスに存在し、用いられ、またはそうでなければ関連する場
合、満たされるとみなす。本発明は、群の正確に１つのメンバーが所与の産物またはプロ
セスに存在し、用いられ、またはそうでなければ関連する実施形態を含む。本発明は、２
つ以上の、または全ての群メンバーが所与の産物またはプロセスに存在し、用いられ、ま
たはそうでなければ関連する実施形態を含む。
【０５０４】
用語「含む」は、無制限であるものとし、追加の要素またはステップの包含を許容する
が、要求するものではないことも留意されたい。したがって、用語「含む」が本明細書に
おいて使用される場合、用語「からなる」も、包含および開示される。
【０５０５】
範囲が与えられる場合、終点を含める。さらに、特に記載のない限り、またはそうでな
ければ、文脈および当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表現される値は、文
脈が特に明示しない限り範囲の下限値の単位の１０分の１まで、本発明の異なる実施形態
において記述される範囲内の任意の規定値または下位範囲を想定し得ることを理解すべき
である。
【０５０６】
さらに、従来技術の範囲内である本発明の任意の特定の実施形態は、特許請求の範囲の
いずれか１つ以上から明示的に排除され得ることを理解すべきである。このような実施形
態は当業者に公知であると考えられるため、それらは、排除が本明細書に明示されていな
い場合であっても、排除され得る。本発明の組成物の任意の特定の実施形態（例えば、任
意の核酸またはそれによりコードされるタンパク質；任意の産生方法；任意の使用方法な
ど）は、従来技術の存在に関連するか否かにかかわらず、任意の理由でいずれか１つ以上
の請求の範囲から排除され得る。
【０５０７】
全ての引用源、例えば、参照文献、刊行物、データベース、データベースエントリ、お
よび本明細書に引用される技術は、引用中で明示されていない場合であっても、参照によ
り本出願に取り込まれる。引用源および本出願の記述が矛盾する場合、本出願の記述が優
先される。
【０５０８】
セクションおよび表の見出しは、限定的なものではない。
（実施例）
実施例１
タンパク質発現系
タンパク質発現は、２９３Ｅ細胞を使用して実施する。２９３Ｅ細胞は、ＥＢＮＡ１（
エプスタイン・バーウイルス核抗原１）を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞である。こ
れらの細胞は、タンパク質をヒト様構造（例えば、グリカン）により翻訳後修飾するヒト
細胞である。このような細胞は、容易に形質移入可能およびスケーラブルであり、懸濁液
培養物中で高密度に成長し得る。タンパク質産生の間、２９３Ｅ細胞は、血清フリー培地
中で成長させて下流精製を容易にする。産生されるタンパク質の一部は、精製のための１
つ以上の検出可能な標識をコードする付加アミノ酸を含む［例えば、ポリヒスチジンタグ
、フラッグタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ；配列番号２６５）など］。タンパク質は、Ｎ末端標
識、Ｃ末端標識および／またはビオチン化する。
【０５０９】
産生されるタンパク質の一部は、１つ以上の３Ｃプロテアーゼ開裂部位（ＬＥＶＬＦＱ
ＧＰ；配列番号２６６）をコードする付加アミノ酸を含む。このような部位は、３Ｃプロ
テアーゼ、例としてライノウイルス３Ｃプロテアーゼによる処理時に３Ｃプロテアーゼ開
裂部位の残基ＱおよびＧ間の開裂を可能とする。開裂部位は、組換えタンパク質からの検
出可能な標識の除去を可能とするために導入する。
【０５１０】
本発明の組換えタンパク質をコードする配列は、細胞中への形質移入のためにｐＴＴ５
ベクター（カナダ国立研究機関バイオテクノロジー研究所（ＮＲＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、モントリオール、ケベック）中に
クローニングする。このようなベクターは、小型（約４．４ｋｂ）であり、一過的形質移
入を容易にし、堅牢なタンパク質合成のための強力なＣＭＶプロモータを含み、ＥＢＮＡ
１発現細胞中のエピソーム複製のためのｏｒｉＰを含む。
【０５１１】
実施例２
抗体の生成
標準的なモノクローナル抗体生成により産生される抗体
抗体は、所望の標的抗原をコードする遺伝子を欠くノックアウトマウス中で生成する。
このようなマウスは、寛容化されずに抗原を標的化するので、ヒトおよびマウス形態の抗
原と交差反応し得るような抗原に対する抗体を生成する。モノクローナル抗体の産生のた
め、宿主マウスを組換えタンパク質により免疫化してそれらのタンパク質に特異的に結合
するリンパ球を誘発する。リンパ球は回収し、不死化細胞系と融合する。融合細胞のみの
成長を支持するために選択薬剤を有する好適な培養培地中で得られたハイブリドーマ細胞
を培養する。
【０５１２】
次いで、標的ペプチドについての分泌された抗体の結合特異性分析を介して所望のハイ
ブリドーマ細胞系を同定し、限定希釈手順を介してそれらの細胞のクローンをサブクロー
ニングし、標準的方法により成長させる。これらの細胞により産生された抗体は、標準的
な免疫グロブリン精製手順により培養培地から単離および精製する。
【０５１３】
組換え産生される抗体
組換えタンパク質は、上記の産生されたハイブリドーマ細胞を使用して産生する。抗体
の重鎖および軽鎖可変領域ｃＤＮＡ配列は、標準的な生化学的手順を使用して決定する。
トータルＲＮＡは、抗体産生ハイブリドーマ細胞から抽出し、逆転写酵素（ＲＴ）ポリメ
ラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりｃＤＮＡに変換する。ＰＣＲ増幅は、重鎖および軽鎖配
列の増幅に特異的なプライマーを使用して得られたｃＤＮＡに対して実施する。次いで、
配列分析のためにプラスミド中にＰＣＲ産物をサブクローニングする。配列決定したら、
発現ベクター中に抗体コード配列を配置する。ヒト化のため、相同的ネズミ配列に代えて
用いるためにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインについてのコード配列を使用する。得られ
た構築物は、大規模翻訳し得る哺乳動物細胞中に形質移入する。
【０５１４】
抗体断片ディスプレイライブラリースクリーニング技術を使用することにより産生され
る抗体
本発明の抗体は、高スループット発見法を使用して産生することができる。合成抗体は
、ファージディスプレイライブラリーを使用して標的抗原をスクリーニングすることによ
り設計する。ファージディスプレイライブラリーは、数百万から数十億のファージ粒子か
ら構成され、それぞれは、ユニークなＦａｂ抗体断片または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を
それらのウイルスコート上で発現する。Ｆａｂ抗体断片ライブラリーにおいて、それぞれ
の断片をコードするｃＤＮＡは、相補性決定領域（ＣＤＲ）の可変ループをコードするユ
ニーク配列を除き同一配列を含有する。ＣＤＲのＶＨ鎖は、ウイルスｐＩＩＩコートタン
パク質のＮ末端に結合している融合タンパク質として発現させる。ＶＬ鎖は、ウイルスコ
ート中への複合体の取り込み前に別個に発現させ、ペリプラズム中でＶＨ鎖とアセンブル
する。標的抗原をインビトロで、ファージディスプレイライブラリーのメンバーとインキ
ュベートし、結合したファージ粒子を沈殿させる。結合したファージから、結合したＦａ
ｂサブユニットのＣＤＲをコードするｃＤＮＡを配列決定する。ｃＤＮＡ配列は、組換え
抗体産生のために抗体配列中に直接取り込み、またはインビトロ親和性成熟を介してさら
なる最適化のために突然変異させ、利用する。
【０５１５】
親和性成熟技術を使用して産生される抗体
標的抗原に結合し得るＦａｂは、上記のライブラリーを使用して同定し、親和性成熟の
プロセスを介してそれらから高親和性突然変異体を得る。親和性成熟技術を使用し、標的
抗原についての最大親和性を有するＣＤＲをコードする配列を同定する。この技術を使用
して、数百万から数十億のバリアントを創成するため、上記のファージディスプレイライ
ブラリー選択プロセスを使用して単離されたＣＤＲ配列を全体としてランダムに、または
規定の残基において突然変異させる。ファージディスプレイライブラリー中のＦａｂ抗体
断片融合タンパク質中でこれらのバリアントを発現させ、標的抗原に結合するそれらの能
力についてスクリーニングする。標的抗原についての最大親和性を有する抗体断片配列を
同定するために選択、突然変異および発現の数回のラウンドを実施する。これらの配列は
、組換え抗体産生のために抗体配列中に直接取り込むことができる。
【０５１６】
実施例３
組換えタンパク質に指向される抗体の同定および特徴決定
組換えタンパク質は、実施例１の方法により合成し、または市販源から得る。発現され
る組換えタンパク質としては、表１７に列記のものが挙げられる。
【０５１７】
【表１７】
2020062007.tif 000059
表１７に列記の組換えタンパク質のヒトおよび非ヒト（例として、限定されるものでは
ないが、マウス）アイソフォームの両方を発現させる。
【０５１８】
実施例２に記載の方法により、発現される組換えタンパク質に結合する抗体を生成し、
スクリーニングに供して所望の結合特性を有する抗体を同定する。所望の抗原についての
親和性を実証する一方、不所望の抗原についての親和性の低減を示し、または親和性を示
さない抗体候補を同定するためにＥＬＩＳＡアッセイを最初に使用する。
【０５１９】
ＴＧＦ−β１ＧＰＣに指向される安定化抗体の同定
陽性および陰性選択抗原への結合を検出するためにＥＬＩＳＡを使用してプロＴＧＦ−
β１Ｃ４Ｓに指向される抗体をスクリーニングする。抗体は、プロドメイン（リガンドの
有無にかかわらず）と会合し、ＴＧＦ−βシグナリングを減少させるそれらの能力につい
て全体的に評価する。ニュートラビジンによりＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、ビ
オチン化プロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ組換えタンパク質とインキュベートする。付属のエレメ
ント（例えば、ポリヒスチジンタグ、フラッグタグおよび／または３Ｃプロテイナーゼ開
裂部位）に結合する抗体を同定および排除するため、そのような付属のエレメントの１つ
以上を含むヒトＩＣＡＭ−１タンパク質とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをイン
キュベートする。遊離ＴＧＦ−β１成長因子および／またはＬＡＰに結合する抗体を同定
および排除するため、ヒトＴＧＦ−β１ＬＡＰＣ４Ｓおよび／またはＴＧＦ−β１成長因
子とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートする。ネズミ型に特異的で
あり得る抗体は、ビオチン化ネズミプロＴＧＦ−β１Ｃ４ＳとコーティングされたＥＬＩ
ＳＡプレートをインキュベートすることにより同定する。ＥＬＩＳＡプレート上で結合し
た抗体と会合する組換えタンパク質は、結合した組換えタンパク質上に存在する検出可能
な標識に結合する検出（例えば、比色、蛍光）のための酵素とコンジュゲートしている二
次抗体を使用して検出する。抗体は、追加の選択のラウンドについて選択し、または得ら
れた結果に基づき試験プールから排除する。
【０５２０】
プロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓに指向される抗体は、ＴＧＦ−β１ＧＰＣを安定化するそれら
の能力についてさらに評価する。選択された抗体と、ＧＰＣおよび／またはαｖβ６イン
テグリンを発現する細胞をインキュベートし、ＴＧＦ−β応答性レポータ構築物を含む細
胞の培養物を処理して遊離成長因子依存性の遺伝子発現活性を検出するために得られた上
清を使用する。選択された抗体により結合される抗体認識の領域および特異的細胞型（例
えば、線維芽細胞および／またはＴ細胞）中の成長因子モジュレーションを特徴決定する
ために追加のアッセイを実施する。最後に、ビン抗体に対する交差遮断実験を使用し、お
よび親和性分析装置、例として、限定されるものではないが、オクテット（Ｏｃｔｅｔ）
（登録商標）（フォルテバイオ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）、メンロパーク、カルフォルニア）
ファミリー装置の使用を介して親和性結合を推定する。抗体は、代替ＴＧＦ−βＧＰＣア
イソフォーム（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３）およ
び他の種からのＴＧＦ−β１ＧＰＣを安定化するそれらの能力に基づきさらに選択する。
【０５２１】
遊離ＴＧＦ−β１ＬＡＰに指向される放出抗体の同定
ＴＧＦ−β１ＧＰＣ放出抗体の生成のための１つの方式に従って、陽性および陰性選択
抗原への結合を検出するためにＥＬＩＳＡを使用してプロＴＧＦ−β１ＬＡＰＣ４Ｓに指
向される抗体をスクリーニングする。抗体は、ＬＡＰと会合し、ＴＧＦ−β１遊離成長因
子レベルおよび／またはシグナリングを増加させるそれらの能力について全体的に評価す
る。ニュートラビジンによりＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、ビオチン化プロＴＧ
Ｆ−β１ＬＡＰＣ４Ｓ組換えタンパク質とインキュベートする。付属のエレメント（例え
ば、ポリヒスチジンタグ、フラッグタグおよび／または３Ｃプロテイナーゼ開裂部位）に
結合する抗体を同定および排除するため、そのような付属のエレメントの１つ以上を含む
ヒトＩＣＡＭ−１タンパク質とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベート
する。遊離ＴＧＦ−β１成長因子に結合する抗体を同定および排除するため、ヒトＴＧＦ
β１成長因子とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートする。潜在型Ｔ
ＧＦ−β１に結合する抗体を同定および排除するため、ヒトＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓとコーテ
ィングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートする。ネズミ型に特異的であり得る抗
体は、ビオチン化ネズミＴＧＦ−β１ＬＡＰＣ４ＳとコーティングされたＥＬＩＳＡプレ
ートをインキュベートすることにより同定する。ＥＬＩＳＡプレート上で結合した抗体と
会合する組換えタンパク質は、結合した組換えタンパク質上に存在する検出可能な標識に
結合する検出（例えば、比色、蛍光）のための酵素とコンジュゲートしている二次抗体を
使用して検出する。抗体は、追加の選択のラウンドについて選択し、または得られた結果
に基づき試験プールから排除する。
【０５２２】
プロＴＧＦ−β１ＬＡＰＣ４Ｓに指向される抗体は、ＧＰＣからＴＧＦ−β１を放出す
るそれらの能力についてさらに評価する。選択された抗体と、ＧＰＣおよび／またはαｖ
β６インテグリンを発現する細胞をインキュベートし、ＴＧＦ−β応答性レポータ構築物
を含む細胞の培養物を処理して遊離成長因子依存性の遺伝子発現活性を検出するために得
られた上清を使用する。選択された抗体により結合される抗体認識の領域および特異的細
胞型（例えば、線維芽細胞および／またはＴ細胞）中の成長因子モジュレーションを特徴
決定するために追加のアッセイを実施する。最後に、ビン抗体に対する交差遮断実験を使
用し、および親和性分析装置、例として、限定されるものではないが、オクテット（Ｏｃ
ｔｅｔ）（登録商標）（フォルテバイオ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）、メンロパーク、カリフォ
ルニア）ファミリー装置の使用を介して親和性結合を推定する。抗体は、代替ＴＧＦ−β
ＧＰＣアイソフォーム（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β
３）および他の種からのＴＧＦ−β１ＧＰＣを用いて潜在型成長因子に対する遊離成長因
子を上昇させるそれらの能力に基づきさらに選択する。
【０５２３】
ＬＴＢＰとの関連でＴＧＦ−β１ＧＰＣに指向される安定化抗体の同定
陽性および陰性選択抗原への結合を検出するためにＥＬＩＳＡを使用してＬＴＢＰ１Ｓ
と複合体化しているプロＴＧＦ−β１に指向される抗体をスクリーニングする。抗体は、
プロドメインと会合し、ＴＧＦ−βシグナリングを減少させるそれらの能力について全体
的に評価する。ニュートラビジンによりＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、ＬＴＢＰ
１Ｓ抗体プールと複合体化しているビオチン化プロＴＧＦ−β１とインキュベートし、１
つ以上の検出可能な標識を含む組換えタンパク質とインキュベートする。付属のエレメン
ト（例えば、ポリヒスチジンタグ、フラッグタグおよび／または３Ｃプロテイナーゼ開裂
部位）に結合する抗体を同定および排除するため、そのような付属のエレメントの１つ以
上を含むヒトＩＣＡＭ−１タンパク質とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキ
ュベートする。遊離ＴＧＦ−β１に結合する抗体を同定および排除するため、ヒトＴＧＦ
−β１成長因子とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートする。ネズミ
型に特異的であり得る抗体は、ＬＴＢＰ１Ｓと複合体化しているネズミプロＴＧＦ−β１
とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートすることにより同定する。Ｅ
ＬＩＳＡプレート上で結合した抗体と会合する組換えタンパク質は、結合した組換えタン
パク質上に存在する検出可能な標識に結合する検出（例えば、比色、蛍光）のための酵素
とコンジュゲートしている二次抗体を使用して検出する。抗体は、追加の選択のラウンド
について選択し、または得られた結果に基づき試験プールから排除する。
【０５２４】
ＬＴＢＰ１Ｓと複合体化しているプロＴＧＦ−β１に指向される抗体は、細胞上で発現
されたαｖβ６による活性化に対してＴＧＦ−β１ＧＰＣを安定化するそれらの能力につ
いてさらに評価する。選択された抗体と、ＧＰＣおよび／またはαｖβ６インテグリンを
発現する細胞をインキュベートし、ＴＧＦ−β応答性レポータ構築物を含む細胞の培養物
を処理して遊離成長因子依存性の遺伝子発現活性を検出するために得られた上清を使用す
る。選択された抗体により結合される抗体認識の領域および特異的細胞型（例えば、線維
芽細胞および／またはＴ細胞）中の成長因子モジュレーションを特徴決定するために追加
のアッセイを実施する。最後に、ビン抗体に対する交差遮断実験を使用し、および親和性
分析装置、例として、限定されるものではないが、オクテット（Ｏｃｔｅｔ）（登録商標
）（フォルテバイオ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）、メンロパーク、カリフォルニア）ファミリー
装置の使用を介して親和性結合を推定する。抗体は、代替ＴＧＦ−βＧＰＣアイソフォー
ム（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３）および他の種か
らのＴＧＦ−β１ＧＰＣを安定化するそれらの能力に基づきさらに選択する。
【０５２５】
ＧＡＲＰとの関連でＴＧＦ−β１ＬＡＰに指向される放出抗体の同定
陽性および陰性選択抗原への結合を検出するためにＥＬＩＳＡを使用してｓＧＡＲＰと
複合体化しているＴＧＦ−β１ＬＡＰに指向される抗体をスクリーニングする。抗体は、
ＬＡＰと会合するが、遊離ＧＡＲＰと会合しないそれらの能力ならびにＴＧＦ−β１遊離
成長因子レベルおよび／またはシグナリングを増加させるそれらの能力について全体的に
評価する。ニュートラビジンによりＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、次いでｓＧＡ
ＲＰ抗体プールと複合体化しているビオチン化ＴＧＦ−β１ＬＡＰとインキュベートし、
１つ以上の検出可能な標識を含む組換えタンパク質とインキュベートする。付属のエレメ
ント（例えば、ポリヒスチジンタグ、フラッグタグおよび／または３Ｃプロテイナーゼ開
裂部位）に結合する抗体を同定および排除するため、そのような付属のエレメントの１つ
以上を含むヒトＩＣＡＭ−１タンパク質とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをイン
キュベートする。遊離ＧＡＲＰに結合する抗体を同定および排除するため、ｓＧＡＲＰと
コーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートする。ネズミ型に特異的であり
得る抗体は、ｓＧＡＲＰと複合体化しているネズミＴＧＦ−β１ＬＡＰとコーティングさ
れたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートすることにより同定する。ＥＬＩＳＡプレート
上で結合した抗体と会合する組換えタンパク質は、結合した組換えタンパク質上に存在す
る検出可能な標識に結合する検出（例えば、比色、蛍光）のための酵素とコンジュゲート
している二次抗体を使用して検出する。抗体は、追加の選択のラウンドについて選択し、
または得られた結果に基づき試験プールから排除する。
【０５２６】
ｓＧＡＲＰと複合体化しているＴＧＦ−β１ＬＡＰに指向される抗体は、ＧＰＣからＴ
ＧＦ−β１を放出するそれらの能力についてさらに評価する。選択された抗体と、ＧＰＣ
および／またはαｖβ６インテグリンを発現する細胞をインキュベートし、ＴＧＦ−β応
答性レポータ構築物を含む細胞の培養物を処理して遊離成長因子依存性の遺伝子発現活性
を検出するために得られた上清を使用する。
【０５２７】
抗体は、Ｔ細胞特異的ＴＧＦ−β依存性遺伝子発現を活性化する能力についても試験す
る。ＦｏｘＰ３は、Ｔ細胞中で発現される転写因子であり、免疫調節的であることが公知
である。これは、Ｔ細胞表面ＧＡＲＰと会合しているＴＧＦ−βにより調節されることが
公知である。選択された抗体と、ＧＰＣおよびＧＡＲＰを発現する細胞をインキュベート
し、ＦｏｘＰ３レポータ構築物を含むＥＬ４細胞の培養物を処理するために得られた上清
を使用する。
【０５２８】
選択された抗体により結合される抗体認識の領域をおよび特異的細胞型（例えば、線維
芽細胞および／またはＴ細胞）中の成長因子モジュレーション特徴決定するために追加の
アッセイを実施する。最後に、ビン抗体に対する交差遮断実験を使用し、および親和性分
析装置、例として、限定されるものではないが、オクテット（Ｏｃｔｅｔ）（登録商標）
（フォルテバイオ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）、メンロパーク、カリフォルニア）ファミリー装
置の使用を介して親和性結合を推定する。抗体は、代替ＴＧＦ−βＧＰＣアイソフォーム
（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３）および他の種から
のＴＧＦ−β１ＧＰＣを用いて潜在型成長因子に対する遊離成長因子を上昇させるそれら
の能力に基づきさらに選択する。
【０５２９】
ＧＡＲＰとの関連でＴＧＦ−β１ＧＰＣに指向される安定化抗体の同定
陽性および陰性選択抗原への結合を検出するためにＥＬＩＳＡを使用してｓＧＡＲＰと
複合体化しているプロＴＧＦ−β１に指向される抗体をスクリーニングする。抗体は、プ
ロドメインと会合し、ＴＧＦ−βシグナリングを減少させるそれらの能力について全体的
に評価する。ニュートラビジンによりＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、次いでｓＧ
ＡＲＰ抗体プールと複合体化しているビオチン化プロＴＧＦ−β１とインキュベートし、
１つ以上の検出可能な標識を含む組換えタンパク質とインキュベートする。付属のエレメ
ント（例えば、ポリヒスチジンタグ、フラッグタグおよび／または３Ｃプロテイナーゼ開
裂部位）に結合する抗体を同定および排除するため、そのような付属のエレメントの１つ
以上を含むヒトＩＣＡＭ−１タンパク質とコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをイン
キュベートする。遊離ＧＡＲＰに結合する抗体を同定および排除するため、ヒトｓＧＡＲ
ＰとコーティングされたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートする。ネズミ型に特異的で
あり得る抗体は、ｓＧＡＲＰと複合体化しているネズミプロＴＧＦ−β１とコーティング
されたＥＬＩＳＡプレートをインキュベートすることにより同定する。ＥＬＩＳＡプレー
ト上で結合した抗体と会合する組換えタンパク質は、結合した組換えタンパク質上に存在
する検出可能な標識に結合する比色検出のための酵素（例えば、セイヨウワサビペルオキ
シダーゼ）とコンジュゲートしている二次抗体を使用して検出する。抗体は、追加の選択
のラウンドについて選択し、または得られた結果に基づき試験プールから排除する。
【０５３０】
ｓＧＡＲＰと複合体化しているプロＴＧＦ−β１に指向される抗体は、ＴＧＦ−β１Ｇ
ＰＣを安定化するそれらの能力についてさらに評価する。選択された抗体と、ＧＰＣを発
現する細胞をインキュベートし、ＴＧＦ−β応答性レポータ構築物を含む細胞の培養物を
処理して遊離成長因子依存性の遺伝子発現活性を検出するために得られた上清を使用する
。
【０５３１】
抗体は、Ｔ細胞特異的ＴＧＦ−β依存性遺伝子発現を低減させる能力についても試験す
る。選択された抗体とＧＰＣおよびＧＡＲＰを発現する細胞をインキュベートし、Ｆｏｘ
Ｐ３レポータ構築物を含むＥＬ４細胞の培養物を処理するために得られた上清を使用する
。選択された抗体により結合される抗体認識の領域および特異的細胞型（例えば、線維芽
細胞および／またはＴ細胞）中の成長因子モジュレーションを特徴決定するために追加の
アッセイを実施する。最後に、ビン抗体に対する交差遮断実験を使用し、および親和性分
析装置、例として、限定されるものではないが、オクテット（Ｏｃｔｅｔ）（登録商標）
（フォルテバイオ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）、メンロパーク、カリフォルニア）ファミリー装
置の使用を介して親和性結合を推定する。抗体は、代替ＴＧＦ−βＧＰＣアイソフォーム
（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３）および他の種から
のＴＧＦ−β１ＧＰＣを安定化するそれらの能力に基づきさらに選択する。
【０５３２】
実施例４
配列アラインメントを使用するキメラタンパク質設計
キメラタンパク質設計のため、保存されている構造特徴部およびそれらの特徴部の保存
の程度を同定するためにＴＧＦ−βファミリーメンバーのアラインメントを構築した（図
８）。Ｎ末端領域配列間の比較により、プロドメインのＮ末端領域間のより高いレベルの
保存が明らかになった。この配列アラインメントおよびそれらのタンパク質モジュールの
構造的特徴部に基づき、アームドメインがファミリーメンバー間で交換されている（全ア
ームドメイン、または示されるアームドメインのサブセットのいずれか）キメラが設計さ
れるように、ＴＧＦ−βファミリーメンバーについての遺伝子キメラ設計方針を採用した
。
【０５３３】
具体的には、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２および／またはＴＧＦ−β３のタンパク質モ
ジュールを含むキメラの生成のため、標準的アプローチを使用してそれら３つのアライン
メントを実施し、それらの配列アラインメントは、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３をブ
タＴＧＦ−β１の結晶構造と比較する相同性モデルを創成するために使用した（シー，Ｍ
．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ
−ｂｅｔａ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」、ネイチャー（Ｎ
ａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻（第７３５１号）、ｐ．３４３〜９）
。手短に述べると、テンプレート構造および標準的手順を使用する標準的な空間的拘束の
充足を伴う配列アラインメントに基づきＴＧＦ−β２またはＴＧＦ−β３の配列をモデリ
ングした。提案されるキメラ組合せが立体衝突の区域をいかに含み得るかを可視化するた
めにこれらの三次元モデルを分析した。本明細書において使用される場合、用語「立体衝
突」は、相互作用に関与するそれぞれの実体、それぞれの部分または２つ以上の部分を含
む実体の形状および／または立体構造に悪影響を及ぼす２つ以上の実体および／または部
分間の相互作用を指す。三次元モデリングにより、ＴＧＦ−β２の潜在型ループおよびＴ
ＧＦ−β１の成熟成長因子間の考えられる立体衝突が明らかになった。具体的には、ＴＧ
Ｆ−β２潜在型ループは、側鎖がＴＧＦ−β１成長因子の領域と重複し得るＤ−Ｙ−Ｐア
ミノ酸配列を含む。
【０５３４】
実施例５
ＴＧＦ−β２トリガーループを有するＴＧＦ−β１キメラタンパク質
ＴＧＦ−β２についての活性化機序は、依然として十分に理解すべきである。活性化は
、ＴＧＦ−β２トリガーループおよびα９β１インテグリン間の１つ以上の会合に依存的
であり得る。ＴＧＦ−β２活性のこの機序を評価するため、ＴＧＦ−β１を含むＧＰＣを
含むキメラタンパク質であって、配列ＳＧＲＲＧＤＬＡＴＩ（配列番号２４２）を含むタ
ンパク質モジュールは、配列ＧＴＳＴＹＴＳＧＤＱＫＴＩＫＳＴＲＫ（配列番号１８０）
を含むＴＧＦ−β２トリガーループを含むタンパク質モジュールにより置換されているキ
メラタンパク質を合成する。細胞ベースアッセイによりこれらのキメラタンパク質（ＴＧ
Ｇ−β１トリガーループ（短鎖）β２キメラタンパク質）の活性化機序を試験する。ＴＧ
Ｆ−β２を含むＧＰＣ、ＴＧＦ−β１トリガーループ（短鎖）β２を含むＧＰＣおよび／
または突然変異ＴＧＦ−β２（トリガーループは、突然変異Ｙ２４０Ａ、Ｄ２４５Ａおよ
び／またはＱ２４６Ａを含む）を含むＧＰＣ（非活性対照として）のいずれかに加え、α
９β１インテグリンを用いてまたは用いずに細胞（ＨＥＫ２９３またはＳｗ−４８０細胞
）を形質移入する。成長因子放出を検出するためにレポータ細胞系を使用する。
【０５３５】
実施例６
α９β１−ＴＧＦ−β２結合および成長因子放出の評価
α９β１およびＴＧＦ−β２間の結合ならびに後続の成長因子放出は、当技術分野にお
いて十分に理解されていない。この会合に関与する残基を解明することができれば、α９
β１−ＴＧＦ−β２会合を破壊するように設計される抗体を発生させ、ＴＧＦ−β２成長
因子放出を特異的に標的化するためにそれを使用することができる。
【０５３６】
ＴＧＦ−β２の変更形態を含む突然変異体構築物およびキメラは、活性化アッセイによ
り試験し、その結果、ＴＧＦ−β２上のα９β１結合部位をマッピングすることができる
。このことは、トリガーループ（一部の実施形態において、アミノ酸配列ＦＡＧＩＤＧＴ
ＳＴＹＴＳＧＤＱＫＴＩＫＳＴＲＫＫＮＳＧＫＴＰ；配列番号６５を含む）中またはその
周囲のアミノ酸残基の欠失および／もしくは突然変異を有し、またはアラニンの残基特異
的突然変異を有するＴＧＦ−β１／ＴＧＦ−β２キメラを生成することにより行う。一部
の場合において、ＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β３は、α９β１結合についての陰性対照
として機能してもしなくてもよい。一部の実施形態において、α９β１結合部位マッピン
グに使用される組換えタンパク質としては、表１８に列記のものを挙げることができる。
これとしては、トリガーループ内のアミノ酸欠失を含むプロＴＧＦ−β２−Ｍｌ、プロＴ
ＧＦ−β２−Ｍ２、プロＴＧＦ−β２−Ｍ３、プロＴＧＦ−β２−Ｍ４およびプロＴＧＦ
−β２−Ｍ５が挙げられる。Ｉｌｅ−ＡｓｐのＰｈｅ−Ｔｈｒへの２つの残基の突然変異
を含むプロＴＧＦ−β２−Ｍ６も含まれる。最後に、トリガーループの部分がＴＧＦ−β
１からのトリガーループの部分により置換されたＴＧＦ−β２を含むキメラタンパク質を
含める。
【０５３７】
【表１８】
2020062007.tif 000060
2020062007.tif 000061
細胞ベースアッセイにより、これらの組換えタンパク質の活性化機序を試験する。ＴＧ
Ｆ−β２を含むＧＰＣ、トリガーループ中のそれぞれの残基についてのアラニン置換突然
変異を含むＧＰＣ（それぞれの試験ＧＰＣは、単一置換を含む）（表１８に列記の組換え
タンパク質の１つ）および／またはＴＧＦ−β２の不活性突然変異体を含むＧＰＣ（非活
性対照として）のいずれかに加え、α９β１インテグリンを用いてまたは用いずに細胞（
ＨＥＫ２９３またはＳｗ−４８０細胞）を形質移入する。形質移入された細胞から採取さ
れた培地試料中の成長因子放出を検出するためにレポータ細胞系を使用する。トリガール
ープ内のどの残基がα９β１依存性ＴＧＦ−β２成長因子放出に必要であるかを決定する
ために結果を使用する。
【０５３８】
実施例７
配列アラインメント
ＴＧＦ−βファミリーメンバーの多重配列アラインメントは、シー（Ｓｈｉ）ら、２０
１１年（シー，Ｍ．（Ｓｈｉ，Ｍ．）ら著、「潜在型ＴＧＦ−β構造および活性化（Ｌａ
ｔｅｎｔ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）」
、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年６月１５日、第４７４巻（第７３５１号）、
ｐ．３４３〜９）から適合させた。標準的方法を使用してヒトＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β
２、ＴＧＦ−β３、ＧＤＦ−１１、インヒビンβＡ、インヒビンαＡ、ＢＭＰ９、ＢＭＰ
２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８Ａ、レフティ１、ならびにネズミＴＧＦ−
β１、ＧＤＦ１１、ＧＤＦ８ならびにカニクイザルＴＧＦ−β１、およびＧＤＦ８の配列
をアラインメントに追加し、配列は全長タンパク質を含んだ（シグナルペプチド配列を除
く）（図８）。
【０５３９】
実施例８
ミオスタチン増殖アッセイ
アッセイの実施前に１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ：ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅ
ｒｕｍ；ライフ・テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、カールスバ
ッド、カリフォルニア）を有するダルベッコ改変必須培地（ＤＭＥＭ；ライフ・テクノロ
ジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、カールスバッド、カリフォルニア）中
でＣ２Ｃ１２ネズミ筋芽細胞（米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）、マナサス、バー
ジニア）を培養する。ＦＢＳの割合は、変動させ、および／または変動濃度のウシ血清ア
ルブミン（ＢＳＡ：ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ）により置き換える。細
胞増殖アッセイは、未コーティング９６ウェルプレート中で実施する。Ｃ２Ｃ１２培養物
は、１ウェル当たり１０００個の細胞において播種する。細胞を１６時間付着させた後、
ミオスタチン試験培地を添加する。標準曲線作成に組換えヒトミオスタチン（Ｒ＆Ｄシス
テムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ミネアポリス、ミネソタ）を使用する。実験系のた
め、実験抗体による処理後、ミオスタチンを過剰発現する２９３Ｅ細胞からの上清を添加
する。全ての試料は８つのレプリケートでランする。プレートは、３７℃および５％のＣ
Ｏ２の雰囲気中で７２時間インキュベートする。増殖は、セルタイター−Ｇｌｏ（Ｃｅｌ
ｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ）（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ
Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ）（プロメガ・バイオサイエンシズ（Ｐｒ
ｏｍｅｇａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）社、マディソン、ウィスコンシン）を使用して評
価し、それにより、細胞溶解は、培養物中に存在する細胞の数に正比例して存在するＡＴ
Ｐの量に比例する発光シグナルを生成する（トーマス，Ｍ．（Ｔｈｏｍａｓ，Ｍ．）ら著
、「筋肉成長の陰性調節因子ミオスタチンは、筋芽細胞増殖を阻害することにより機能す
る（Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ，ａ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｍｕｓｃ
ｌｅ  ｇｒｏｗｔｈ，ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｍｙｏｂｌａ
ｓｔ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、２０００年、第２７５巻（第５１号）、ｐ．４０
２３５〜４３）。
【０５４０】
実施例９
ビオチン化によるＧＰＣ固定化およびインテグリン媒介成長因子放出の検出
本発明の組換えＧＰＣは、Ｎ末端ビオチン化し、ストレプトアビジン／アビジンコーテ
ィング培養物表面上でインキュベートする。細胞培養物表面に種々のインテグリンを発現
する細胞を添加し、２４時間培養する。培地は取り出し、成長因子活性に応答してルシフ
ェラーゼを発現する成長因子レポータ細胞培養物に添加する。２４時間後、細胞は洗浄し
、溶解させ、ルシフェラーゼ活性について分析する。
【０５４１】
実施例１０
Ｎｉ−ＮＴＡによるタンパク質精製
４ｍＭのグルタミン、０．１％のプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ６８および２５
μｇ／ｍｌのＧ４１８が補給された血清フリー培地中（フリースタイル（ＦｒｅｅＳｔｙ
ｌｅ）Ｆ１７培地、ライフ・テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、
カールスバッド、カリフォルニア）で、Ｈｉｓタグ化タンパク質を発現する細胞（２９３
−６Ｅ細胞）を培養する。これらの生存率が５０％未満に降下したら、組織培養物上清を
回収し、４℃の２００×重力における１０分間の遠心分離により澄明化する。次いで、０
．２２または０．４５μｍ細孔フィルタに通すことにより上清を濾過する。トリス、Ｎａ
ＣｌおよびＮｉＣｌ２と濾過された上清を合わせ、最終濃度を５０ｍＭのトリスｐＨ８．
０、５００ｍＭのＮａＣｌおよび０．５ｍＭのＮｉＣｌ２とする。ＳＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ：ｐｏｌｙ  ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔ
ｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）またはウエスタンブロットによる後の分析のために調整溶液の１
ｍｌを回収する一方、調整溶液の別の部分を洗浄したＮｉ−ＮＴＡ樹脂（ライフ・テクノ
ロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、カールスバッド、カリフォルニア）
と、調整溶液３００ｍｌ当たり５〜１０ｍｌのＮｉ−ＮＴＡ樹脂の濃度において合わせる
。次いで、懸濁された磁気撹拌棒を使用してこの合わせた溶液を４℃において撹拌する（
Ｎｉ−ＮＴＡアガロースの粉砕を防止するため）。次に、４℃の２００×重力における１
０分間の遠心分離によりＮｉ−ＮＴＡ樹脂を回収する。
【０５４２】
次に、１５カラム容量（ＣＶ：ｃｏｌｕｍｎ  ｖｏｌｕｍｅ）の洗浄緩衝液（２０ｍＭ
のトリス、ｐＨ８．０、５００ｍＭのＮａＣｌおよび２０ｍＭのイミダゾール）によりカ
ラムを洗浄する。分析のために最終洗浄物のアリコートを回収する。次いで、３ＣＶの溶
出緩衝液（２０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、５００ｍＭのＮａＣｌおよび３００ｍＭのイ
ミダゾール）によりカラムを溶出させ、分析のために１／３カラム容量分画を回収する。
【０５４３】
溶出させた回収分画のそれぞれにおいて２８０ｎｍにおける吸光度を計測し、ブランク
溶出緩衝液の２８０ｎｍにおける吸光度と比較する。より初期の分画は、典型的には、イ
ミダゾール勾配に起因して陰性吸収を有し；しかしながら、より多量のタンパク質を含有
する分画は陽性値を有する。次いで、分析のためにＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で回収された分画
をランし、さらなる精製のために関連分画をプールする。
【０５４４】
実施例１１
ＧＤＦ−８／ＧＤＦ−ｌｌ／アクチビンキメラの設計
シュレディンガー・バイオルミネート（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎａ
ｔｅ）ソフトウェアを使用してＧＤＦ−８およびＧＤＦ−１１からのモジュールの組合せ
を含む潜在的なキメラタンパク質の三次元モデルを構築するためにＴＧＦ−βファミリー
メンバーの構造ベースアラインメントを使用した。ＧＤＦ−１１のアーム領域を含むＧＤ
Ｆ−８のキメラモデル（配列番号２１６）により、ＧＤＦ−１１残基Ｆ９５が関与する潜
在的な立体衝突の領域が明らかになった。このモデルによれば、ＧＤＦ−１１アームから
のＦ９５は、キメラＧＰＣのα２ヘリックスの脱安定化を引き起こす。したがって、キメ
ラのアーム領域がα２ヘリックスを含有するようにＧＤＦ８／ＧＤＦ１１／アクチビンキ
メラを設計した。
【０５４５】
実施例１２
ＥＬＩＳＡ分析
抗体結合を評価するために酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）分析を実施する。
より中性ｐｌを有するストレプトアビジンの脱グリコシル化型のニュートラビジンにより
９６ウェルＥＬＩＳＡアッセイプレートをコーティングする。ヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ
を用いてまたは用いずに標的タンパク質を発現させ、ビオチン化に供する。ニュートラビ
ジンコーティングＥＬＩＳＡアッセイプレートと室温において２時間、ビオチン化標的タ
ンパク質をインキュベートし、洗浄緩衝液（２５ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、
０．１％のＢＳＡ、０．０５％のツイーン（ＴＷＥＥＮ）（登録商標）−２０）により３
回洗浄することにより未結合タンパク質を除去する。それぞれのウェルに試験される一次
抗体を添加し、室温において１時間以上インキュベートする。次いで、洗浄緩衝液により
３回洗浄することにより未結合抗体を除去する。次いで、それぞれのウェル中で室温にお
いて３０分間、試験される一次抗体に結合し得、検出可能な標識とコンジュゲートしてい
る二次抗体をインキュベートする。洗浄緩衝液により３回洗浄することにより未結合二次
抗体を除去する。最後に、検出される二次抗体上に存在する検出可能な標識に応じて酵素
反応、蛍光検出および／または発光検出により結合二次抗体を検出する。
【０５４６】
実施例１３
ファージ選択を使用する抗体の同定
標的抗原に結合する抗体パネルを生成するためにスクリーニングプログラムを実施する
。抗体パネル多様性は、抗体配列の多様性とは反対にエピトープ多様性により計測する。
固相ファージ濃縮方針および液相濃縮方針の両方を用いる。
【０５４７】
使用前に標的抗原（固相および液相濃縮の両方について）を生物物理学的特徴決定、例
として、還元および非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供して純度を確立し、サイズ排除クロマト
グラフィー（ＳＥＣ：ｓｉｚｅ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）
に供して許容可能な凝集レベルを確立する。さらに、標的抗原生物活性を確認するために
機能アッセイを実施する。
【０５４８】
３回のみのラウンドが必要であるとの見込みで２〜３回の濃縮のラウンドを実施する。
後の使用のために選択ラウンド２〜４からのファージのアリコートを保存する。濃縮後、
標的抗原および非標的抗原への結合を試験するためにＥＬＩＳＡにより、ランダムに選択
されたクローンをスクリーニングする。これらの分析に基づき、ヌクレオチド配列決定お
よび区別される抗体の数ならびに単離の頻度および区別されるＶＨおよびＶＬ領域の数の
分析のために最大５００個のクローンを選択する。これらの後続の分析に基づき、表面プ
ラズモン共鳴技術（または同等のアプローチ）を使用するエピトープ関連性によるエピト
ープビニングのために最大１００個のクローンを選択する。それぞれについての解離定数
（ｋｏｆｆ）を決定し、さらなる特徴決定のために最大５０個のクローンを選択する。
【０５４９】
二価抗体構築物として最終候補を発現させ、精製し、それぞれについてのｋｏｆｆを決
定する。精製二価抗体を特徴決定するために細胞ベース機能アッセイを使用する。
実施例１４
プロＧＤＦ−８の活性化を遮断する抗体の同定
プロＧＤＦ−８に結合し、成熟成長因子の放出を遮断する抗体を同定するために多様な
パネルの抗体の産生を実施する。実施例１２の方法により抗体生成を実施し、固相濃縮に
組換えプロＧＤＦ−８を使用し、液相濃縮にビオチン化プロＧＤＦ−８を使用する。凝集
レベルについて抗原調製物を試験して＞９５％がダイマー種であることを確保する。濃縮
されたクローンのＥＬＩＳＡ分析において、６つの抗原への結合を評価する（プロＧＤＦ
−８、ＧＤＦ−８プロドメイン、ＧＤＦ−８成長因子、ネズミプロＧＤＦ−８、プロＧＤ
Ｆ−１１およびプロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ）。ＥＬＩＳＡ分析に基づき選択されたクローン
は配列決定し、実施例１２の方法により抗体を発生させる。
【０５５０】
実施例１５
潜在型ＧＰＣからのＧＤＦ−１１成長因子の放出を活性化する抗体の同定
ＧＤＦ−１１のプロドメインに結合し、成熟成長因子の放出を活性化する抗体を同定す
るために多様なパネルの抗体の産生を実施する。実施例１２の方法により抗体生成を実施
し、固相濃縮に組換えＧＤＦ−１１プロドメインを使用し、液相濃縮にビオチン化ＧＤＦ
−１１プロドメインを使用する。凝集レベルについて抗原調製物を試験して＞９５％がモ
ノマー種であることを確保する。濃縮されたクローンのＥＬＩＳＡ分析において、６つの
抗原への結合を評価する（ＧＤＦ−１１プロドメイン、プロＧＤＦ−１１、ＧＤＦ−１１
成長因子、ＧＤＦ−８プロドメイン、ネズミＧＤＦ−１１プロドメインおよびプロＴＧＦ
−β１Ｃ４Ｓ）。ＥＬＩＳＡ分析に基づき選択されたクローンは配列決定し、実施例１２
の方法により抗体を発生させる。
【０５５１】
実施例１６
プロＴＧＦ−Ｂ１／ＧＡＲＰ複合体からのＴＧＦ−β１の放出を活性化する抗体の同定
ｓＧＡＲＰと複合体化しているＴＧＦ−β１ＬＡＰ（ＴＧＦ−β１ＬＡＰ−ｓＧＡＲＰ
）に結合し、成熟成長因子の放出を活性化する抗体を同定するために多様なパネルの抗体
の産生を実施する。実施例１２の方法により抗体産生を実施し、固相濃縮に組換えビオチ
ン化ＴＧＦ−β１ＬＡＰ−ｓＧＡＲＰを使用し、液相濃縮にビオチン化ＴＧＦ−β１ＬＡ
Ｐ−ｓＧＡＲＰを使用する。凝集レベルについて抗原調製物を試験して種の＞９５％がモ
ノマーｓＧＡＲＰと複合体化しているダイマーＴＧＦ−β１ＬＡＰを含むことを確保する
。濃縮されたクローンのＥＬＩＳＡ分析において、８つの抗原への結合を評価する（ＴＧ
Ｆ−β１ＬＡＰ−ｓＧＡＲＰ、プロＴＧＦ−ｂ１−ｓＧＡＲＰ、ｓＧＡＲＰ、ＴＧＦ−β
１ＬＡＰ  Ｃ４Ｓ、プロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ、ＬＴＢＰ１−プロＴＧＦ−ｂ１、ＩＣＡＭ
−１Ｎ−Ｈｉｓ、ＩＣＡＭ−１Ｃ−Ｈｉｓ）。ＥＬＩＳＡ分析に基づき選択されたクロー
ンは配列決定し、実施例１２の方法により抗体を発生させる。
【０５５２】
実施例１７
プロＴＧＦ−β１／ＧＡＲＰ複合体からの成熟成長因子の放出を遮断する抗体の同定
プロＴＧＦ−β１およびＧＡＲＰにより形成される複合体（プロＴＧＦβ１−ＧＡＲＰ
）に結合し、成熟成長因子の放出を阻害する抗体を同定するために多様なパネル抗体の産
生を実施する。実施例１２の方法により抗体産生を実施し、固相濃縮に組換えビオチン化
プロＴＧＦ−β１−ｓＧＡＲＰを使用し、液相濃縮にビオチン化プロＴＧＦ−β１−ＧＡ
ＲＰを使用する。凝集レベルについて抗原調製物を試験して種の＞９５％がモノマーｓＧ
ＡＲＰと複合体化しているダイマープロＴＧＦ−β１を含むことを確保する。濃縮された
クローンのＥＬＩＳＡ分析において、８つの抗原への結合を評価する（プロＴＧＦ−β１
−ＧＡＲＰ、ＴＧＦ−β１ＬＡＰ、プロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ、プロＴＧＦ−β１／ＬＴＢ
Ｐ１Ｓ複合体、ＴＧＦ−β１ＬＡＰ−ｓＧＡＲＰ、ｓＧＡＲＰ、ＩＣＡＭ−１Ｃ−Ｈｉｓ
、ＩＣＡＭ−１Ｎ−Ｈｉｓ）。ＥＬＩＳＡ分析に基づき選択されたクローンは配列決定し
、実施例１２の方法により抗体を発生させる。
【０５５３】
実施例１８
ＬＴＢＰ１Ｓと複合体化しているプロＴＧＦ−β１からのＴＧＦ−β１の放出を遮断す
る抗体の同定
ＬＴＢＰ１Ｓと複合体化しているプロＴＧＦ−β１（プロＴＧＦ−β１−ＬＴＢＰ１Ｓ
）に結合し、成熟成長因子の放出を阻害する抗体を同定するために多様なパネルの抗体の
産生を実施する。実施例１２の方法により抗体生成を実施し、固相濃縮に組換えプロＴＧ
Ｆ−β１−ＬＴＢＰ１Ｓを使用し、液相濃縮にビオチン化プロＴＧＦ−β１−ＬＴＢＰ１
Ｓを使用する。凝集レベルについて抗原調製物を試験して種の＞９５％がモノマーＬＴＢ
Ｐ１Ｓと複合体化しているダイマープロＴＧＦ−β１を含むことを確保する。濃縮された
クローンのＥＬＩＳＡ分析において、８つの抗原への結合を評価する（プロＴＧＦ−β１
−ＬＴＢＰ１Ｓ、ＴＧＦ−β１ＬＡＰ、ＴＧＦ−β１成長因子、プロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ
、ネズミプロＴＧＦ−β１−ＬＴＢＰ１Ｓ、ＬＴＢＰ１Ｓ、ＧＤＦ−８プロドメインおよ
びプロＴＧＦ−β２）。ＥＬＩＳＡ分析に基づき選択されたクローンは配列決定し、実施
例１２の方法により抗体を発生させる。
【０５５４】
実施例１９
プロＴＧＦ−β１からのＴＧＦ−β１の放出を遮断するパン特異的抗体の同定
プロＴＧＦ−β１に結合し、成熟成長因子の放出を阻害する抗体を同定するために多様
なパネルの抗体の産生を実施する。実施例１２の方法により抗体生成を実施し、固相濃縮
に組換えプロＴＧＦ−β１を使用し、液相濃縮にビオチン化プロＴＧＦ−β１を使用する
。凝集レベルについて抗原調製物を試験して＞９５％がダイマー種であることを確保する
。濃縮されたクローンのＥＬＩＳＡ分析において、７つの抗原への結合を評価する（ＴＧ
Ｆ−β１ＬＡＰ、ＴＧＦ−β１成長因子、プロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ、ネズミプロＴＧＦ−
β１Ｃ４Ｓ、ＧＤＦ−８プロドメインおよびプロＴＧＦ−β２）。ＥＬＩＳＡ分析に基づ
き選択されたクローンは配列決定し、実施例１２の方法により抗体を発生させる。
【０５５５】
実施例２０
プロＴＧＦ−β１からのＴＧＦ−β１の放出を活性化するパン特異的抗体の同定
ＴＧＦ−β１ＬＡＰに結合し、成熟成長因子の放出を活性化する抗体を同定するために
多様なパネルの抗体の産生を実施する。実施例１２の方法により抗体生成を実施し、固相
濃縮に組換えＴＧＦ−β１ＬＡＰ  Ｃ４Ｓを使用し、液相濃縮にビオチン化ＴＧＦ−β１
ＬＡＰ  Ｃ４Ｓを使用する。凝集レベルについて抗原調製物を試験して＞９５％がダイマ
ー種であることを確保する。濃縮されたクローンのＥＬＩＳＡ分析において、７つの抗原
への結合を評価する（ＴＧＦ−β１ＬＡＰ  Ｃ４Ｓ、プロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ、ネズミプ
ロＴＧＦ−β１Ｃ４Ｓ、ＴＧＦ−β１成熟成長因子、プロＧＤＦ−８およびプロＴＧＦ−
β２）。ＥＬＩＳＡ分析に基づき選択されたクローンは配列決定し、実施例１２の方法に
より抗体を発生させる。
【０５５６】
実施例２１
ＴＧＦ−β１ノックアウトマウスの免疫化
オイダ（Ｏｉｄａ）ら（オイダ，Ｔ．（Ｏｉｄａ，Ｔ．）ら著、「ＴＧＦ−βは、Ｆｏ
ｘＰ３誘導から独立してネズミＣＤ４Ｔ細胞上の表面ＬＡＰ発現を誘導する（ＴＧＦ−β
ｉｎｄｕｃｅｓ  ｓｕｒｆａｃｅ  ＬＡＰ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｍｕｒｉｎ
ｅ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ＦｏｘＰ３  ｉｎｄｕｃ
ｔｉｏｎ）」、プロス・ワン（ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ）、２０１０年、第５巻（第１１号）、
ｐ．ｅ１５５２３、その内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）の方法に
より新生児マウスを免疫化する。ＴＧＦ−β欠損新生児マウスは、ガレクチン−１注射を
受けて生存を延長させる（典型的には、それらのマウスにおいて生後３〜４週間）。生後
８日目から開始して１０日間１日おきに腹腔内注射によりマウスを免疫化するために抗原
タンパク質を安定的に産生する細胞（例えば、プロＴＧＦ−β１−ＧＡＲＰまたはＴＧＦ
−β１ＬＡＰ−ＧＡＲＰ；１０〜２５μｌのＰＢＳ中１〜４×１０６個の細胞）または精
製抗原タンパク質を使用する。脾細胞は、生後２２日目に回収する。回収された脾細胞は
、ＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合させる。得られたハイブリドーマ細胞は、抗プロＴＧＦ−
β１抗体の良好な産生について評価する。
【０５５７】
実施例２２
ＴＧＦ−β１複合体の発現およびタンパク質分析
実施例１０の方法により、Ｈｉｓタグ化ＬＴＢＰ１ＳまたはｓＧＡＲＰを用いてまたは
用いずにプロＴＧＦ−β１発現を実施した。ＬＴＢＰ１ＳもｓＧＡＲＰも用いずに発現さ
れたプロＴＧＦ−β１は、それらの因子およびＮ末端Ｈｉｓタグとのプロドメイン会合を
防止するためのＣ４Ｓ突然変異を含む。精製タンパク質を還元または非還元条件（タンパ
ク質ダイマーまたは複合体を維持するため）下のいずれかでＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析
した。図１１は、これらのタンパク質およびタンパク質複合体の良好な発現を示す結果を
示す。
【０５５８】
実施例２３
ＴＧＦ−β１／ＧＡＲＰ複合体の細胞ベース抗原発現
（膜結合）ＧＡＲＰおよびプロＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β１ＬＡＰの両方を安定的
に発現するプロＢ細胞リンパ腫細胞系を発生させた。ｐＹＤ７ベクター（カナダ国立研究
機関、オタワ、カナダ）中に膜会合ＧＡＲＰをクローニングした一方、ｐｃＤＮＡ３．１
ベクター（ライフ・テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、カールス
バッド、カリフォルニア）中にプロＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β１ＬＡＰをクローニン
グした。これらのベクターは、それぞれブラスチシジンおよびＧ４１８ベース選択を可能
とする。空のベクター対照またはＧＡＲＰによりＢＡＬＢ／ｃスイスマウスからのプレＢ
細胞リンパ腫由来細胞（本明細書において３００．１９細胞と称される）を形質移入し、
プロＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β１ＬＡＰのいずれかと共発現させ、Ｇ４１８とブラス
チシジンにより選択した。耐性細胞はサブクローニングし、単一コロニーを選択した。得
られた細胞系から培養された細胞は、発現されるタンパク質に指向される抗体（蛍光粒子
とコンジュゲートしている）によりプロービングし、蛍光強度についてフローサイトメト
リにより試験した。図１２は、得られた細胞から収集された蛍光強度データを示す。図１
２Ａに空のベクター対照により形質移入された細胞に関連するベースライン値を示す一方
、図１２Ｂおよび１２Ｃの上昇した蛍光強度は、ＧＡＲＰ複合体の細胞表面発現を示す。
表面発現されたタンパク質の定量は追加の分析を介して実施し、図１２に示されるデータ
を生成するために使用される同一の蛍光標識細胞を、標準曲線の作成のために規定の抗体
結合能を有するビーズと一緒にフローサイトメトリにより試験した。これらのビーズは、
細胞を標識するために使用される同一の抗体により標識し、得られた蛍光値を使用して表
面発現タンパク質に結合した抗体の数を外挿した。プロＴＧＦ−β１−ＧＡＲＰを発現す
る３００．１９細胞は、約８３，０００コピー／細胞を発現することが決定された一方、
ＴＧＦ−β１ＬＡＰ−ＧＡＲＰを発現する３００．１９細胞は、約６６，０００コピー／
細胞を発現することが決定された。
【０５５９】
次に、潜在型ＧＰＣからＴＧＦ−β１成長因子を放出することが公知のαｖβ６インテ
グリンを発現する細胞の存在下でＴＧＦ−β１活性について細胞系を試験した。ＴＧＦ−
β受容体およびＴＧＦ−β応答性プロモータＰＡＩ−１によりドライブされるルシフェラ
ーゼ遺伝子を含むレポータ細胞を処理するためにこれらの共培養物からの馴化培地を使用
した。これは、中和抗体の抗ＴＧＦ−βクローン１Ｄ１１の存在下または不存在下で行っ
た。得られたルシフェラーゼ活性をルミノメトリーにより評価した。結果は、空のベクタ
ーおよびＴＧＦ−β１ＬＡＰ−ＧＡＲＰ複合体を発現する細胞からの馴化培地がベースラ
イン値と比較してルシフェラーゼ発現を誘導し得なかった一方、プロＴＧＦ−β１−ＧＡ
ＲＰを発現する細胞からの馴化培地がルシフェラーゼ発現を誘導する能力の向上を示した
ことを示す（図１２Ｄ参照）。
【０５６０】
実施例２４
プロＴＧＦ−β１−ＬＴＢＰ１の細胞ベース抗原発現
プロＴＧＦ−β１−ＬＴＢＰ１を安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を発
生させる。これらの分泌タンパク質は、細胞表面に結合し、または細胞外マトリックス中
で堆積する。
【０５６１】
実施例２５
ＬＴＢＰ３発現
種々のモジュール、断片、Ｎ末端分泌シグナル配列（例えば、配列番号２５７）および
／またはＮもしくはＣ末端ヒスチジンタグを用いてまたは用いずに組換えＬＴＢＰ３タン
パク質を発現させる。一部の発現タンパク質中に含まれるモジュールとしては、表１９に
列記のものが挙げられる。
【０５６２】
【表１９】
2020062007.tif 000062
一部の発現タンパク質中に含まれるＬＴＢＰ３断片としては、表２０に列記のものが挙
げられる。
【０５６３】
【表２０】
2020062007.tif 000063
発現されるさらなるタンパク質としては、表２１に列記のものが挙げられる。
【０５６４】
【表２１】
2020062007.tif 000064
実施例２６
ＧＤＦ−８活性についての２９３Ｔ  ＣＡＧＡ−ルシフェラーゼアッセイ
ＧＤＦ−８活性をモジュレートする抗体を試験するためにＣＡＧＡ−ルシフェラーゼア
ッセイを実施する。フィブロネクチンの５０μｇ／ｍｌ溶液を調製し、１００μｌを９６
ウェルプレートのそれぞれのウェルに添加する。室温において３０分間プレートをインキ
ュベートしてからＰＢＳを使用して遊離フィブロネクチンを洗浄除去する。次いで、フィ
ブロネクチンコーティングウェルに播種（完全成長培地中の２×１０４個の細胞／ウェル
）するために制御プロモータまたはｓｍａｄ１／２応答性ＣＡＧＡ配列を含むプロモータ
の制御下のｐＧＬ４の一過的または安定的発現を含む２９３Ｔ細胞（プロメガ（Ｐｒｏｍ
ｅｇａ）、マディソン、ウィスコンシン）を使用する。翌日、０．１％のウシ血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）を有する１５０μｌ／ウェルの細胞培養培地により細胞を洗浄してから、
試験抗体を用いてまたは用いずにＧＤＦ−８により処理する。３７℃において６時間細胞
をインキュベートしてからブライト−ＧＬＯ（ＢＲＩＧＨＴ−ＧＬＯ）（商標）試薬（プ
ロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、マディソン、ウィスコンシン）を製造業者の説明書に従って
使用してルシフェラーゼ発現を検出する。
【０５６５】
実施例２７
ＦＡＣＳによるミオゲニン発現の検出
２４ウェルプレート中で４×１０４個の細胞／ウェルにおいて２５７３８４ロンザ（Ｌ
ｏｎｚａ）細胞（ロンザ（Ｌｏｎｚａ）、バーゼル、スイス）をプレーティングする。翌
日、細胞培地を分化培地［２％のウマ血清を有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥ
Ｍ）／Ｆ１２］により置き換える。変動濃度のＧＤＦ−８も、試験抗体の存在下または不
存在下で分化培地中に含める。次いで、細胞を３日間分化させる。
【０５６６】
３日間の期間後、ミオゲニン発現レベルの分析を介してそれぞれのウェルの分化状態を
分析する。それぞれの処理群からの細胞をプールし、ＢＤファーミンゲン（ＢＤ  Ｐｈａ
ｒｍｉｎｇｅｎ）（ＢＤバイオサイエンシズ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、フラン
クリンレイクス、ニュージャージ）からの転写因子緩衝液セット（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ
ｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｓｅｔ）、製品番号５６２５７４を製造業者の説
明書に従って使用する処理に供する。固定および透過化後、細胞に５μｌのフィコエリス
リン（ＰＥ）−ミオゲニンまたは１．２５μｌのＰＥ対照を添加し、４℃において５０分
間インキュベートする。次いで、細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁させてから細
胞蛍光をＦＡＣＳにより分析する。
【０５６７】
実施例２８
ＨＴ２細胞増殖アッセイ
ＴＧＦ−β活性をモジュレートする能力について抗体を試験するためにＨＴ２細胞増殖
アッセイを使用する。ＩＬ−４含有培地中のＨＴ２細胞増殖は、遊離ＴＧＦ−β成長因子
の存在下で低減する。ＴＧＦ−βＧＰＣを安定化することにより、または遊離成長因子の
放出および／もしくは蓄積を促進することにより遊離成長因子レベルをモジュレートする
能力を有する抗体は、本明細書に記載のＨＴ２培養系を使用して試験することができる。
αｖβ６インテグリンを発現する細胞とプロＴＧＦ−βを発現する細胞を共培養する。種
々の濃度の試験抗体、精製ＴＧＦ−β１（陽性対照として）または陰性対照としての抗Ｔ
ＧＦ−β抗体１Ｄ１１（Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ミネアポリス、
ミネソタ）により培養物を処理する。
【０５６８】
ＨＴ２細胞は、成長培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓ、４ｍＭ
のＧｌｎ、５０μＭのβ−メルカプトエタノールおよび１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−２）中で
、１．５×１０５個の細胞／ｍｌにおいて培養して次の日に細胞が対数成長期になること
を確保する。翌日、ＨＴ２アッセイ培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％のＦＢＳ、１％のＰ
／Ｓ、４ｍＭのＧｌｎ、５０μＭのβ−メルカプトエタノールおよび７．５ｎｇ／ｍＬの
ＩＬ−４）中で試験される細胞上清を希釈する。ＨＴ２細胞培養物から成長培地を除去し
、サイトカインフリー培地により細胞を洗浄する。それぞれのＨＴ２細胞培養ウェルに希
釈上清を添加し、３７℃および５％のＣＯ２において４８時間ＨＴ２細胞を培養する。次
いで、セルタイターＧＬＯ（ＣＥＬＬ−ＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ）（登録商標）試薬（プロメ
ガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、マディソン、ウィスコンシン）を製造業者の説明書に従って使用
してＨＴ２細胞培養物中の細胞生存率を決定する。結果は、細胞生存率と相関する相対光
単位（ＲＬＵ）として得る。
【０５６９】
実施例２９
組換え発現されたＧＤＦ−８の分析
実施例１０の方法により、ヒスチジンタグ化プロＧＤＦ−８を発現させた。還元または
非還元条件（タンパク質ダイマーを維持するため）下のいずれかでＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
り精製タンパク質を分析した。図１３は、それらのタンパク質およびタンパク質複合体の
良好な発現を示す結果を示す。
【０５７０】
実施例３０
ＴＧＦ−β２キメラ
ＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β３からのアーム領域置換を有するＴＧＦ−β２を含むキ
メラタンパク質を合成する。キメラタンパク質は、Ｎ末端Ｃ５Ｓ突然変異も含む。これら
の発現キメラタンパク質（表２２に列記）は、一部の他のキメラタンパク質に対して改善
された安定性を有する。
【０５７１】
【表２２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【図８−５】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
2020062007.tif 000083
【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年9月30日(2019.9.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月14日(2019.11.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロドメイン及び成長因子を含むプロタンパク質を含むタンパク質複合体に結合し、
それにより前記プロタンパク質からの前記成長因子の放出を阻害する単離抗体またはその抗原結合断片を選択する方法であって、
前記タンパク質複合体は、以下の
ａ）ＧＡＲＰ、
ｂ）ＴＧＦ−β１、及び
ｃ）ＴＧＦ−β１潜在型関連ペプチド（ＬＡＰ）
を含み、
前記ＧＡＲＰは、ＬＲＲＣ３２またはＬＲＲＣ３３であり、
前記抗体または断片は、遊離ＴＧＦ−β１に結合せず、且つ、ＴＧＦ−βスーパーファミリー成長因子の別のメンバーに結合せず、
前記抗体又はその断片を選択する方法は、
ｉ．１つ以上のアッセイに使用される、１つ以上の組換えタンパク質を含むタンパク質複合体を提供するステップ、
ここで、前記１つ以上のアッセイは、抗体結合アッセイを含み、
ｉｉ．前記抗体結合アッセイにおいて、１つ以上の組換えタンパク質を含む前記タンパク質複合体を、１つ以上の候補抗体又はその断片と接触させるステップ、
ｉｉｉ．結合データを得るステップ、
ここで、前記結合データは、１つ以上の組換えタンパク質を含む前記タンパク質複合体についての、前記１つ以上の候補抗体又はその断片の親和性を示し、
及び、
ｉｖ．前記結合データに基づき、所望の抗体又はその断片を選択するステップ
を含み、
１つ以上の組換えタンパク質を含む前記タンパク質複合体は、前記ａ）、ｂ）、及び、ｃ）を含む、方法。
【請求項２】
前記抗体結合アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体結合アッセイは、蛍光関連細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）ベースのアッセイを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記所望の抗体は、ＴＧＦ−β１成長因子のレベル及び／又は活性を阻害する能力に基づいてさらに選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＴＧＦ−β１成長因子のレベル及び／又は活性は、細胞ベースのアッセイを用いて測定される、請求項４に記載の方法。