(57)【要約】      （修正有）【課題】ナノ粒子産生細胞を使用して高純度酸化鉄ナノ粒子を産生する方法の提供。【解決手段】以下を含む方法：a）予備成長培地およびまたは流加培地でナノ粒子産生細胞を増幅することを含む予備成長ステップ、ｂ）成長培地およびまたは流加培地での予備成長ステップから生じるナノ粒子産生細胞を増幅することを含む成長ステップ、ここで、予備成長培地およびまたは成長培地およびまたは流加培地は、予備成長培地およびまたは成長培地およびまたは流加培地のキログラムまたはリットルあたり以下を含む：i）0.005グラム以下の酵母エキス、およびii）0.001グラム以下のホウ酸およびニトリロ三酢酸から選択されるCMR剤、流加培地は、予備成長およびまたは成長培地を補う培地である。また成長ステップでは予備成長ステップより多くのナノ粒子が生成される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナノ粒子生産細胞を使用して高純度酸化鉄のナノ粒子を生産する方法であって、
a）予備成長培地および追加されることもある流加培地でナノ粒子産生細胞を増殖することを含む予備成長ステップ、
および
ｂ）上記予備成長ステップから生じるナノ粒子産生細胞を成長培地および追加されることもある流加培地で増殖することを含む成長ステップ、
を含み、
上記事予備成長培地および上記成長培地および上記流加培地の任意の組み合わせは、その１キログラムまたは1リットルあたりに、
i）0〜0.005グラムの酵母エキス、
および
ii）ホウ酸およびニトリロ三酢酸からなるグループから選択される0から0.001グラムのCMR剤
を含み、
上記流加培地が存在する場合、それは上記予備成長培地および上記成長培地を補う培地であり、
上記成長ステップでは、上記予備成長ステップよりも多くのナノ粒子が生成される、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記成長ステップが、以下に列挙する特性から選択される少なくとも１つの特性により前記予備成長ステップと異なる方法 :
i）1よりも大きいCFeGS のCFePGSに対する比、ここで、CFeGSおよびCFePGSは、それぞれ前記成長培地および前記予備成長培地の鉄または鉄源の濃度である、
ii）1より大きいCCGSのCCPGSに対する比率、CCGSおよびCCPGSは、それぞれ前記成長培地および前記予備成長培地の炭素または炭素源の濃度である、
iii）1より大きいCNGSのCNPGSの比率、CNGSおよびCNPGSは、それぞれ前記成長培地および前記予備成長培地の窒素または窒素源の濃度である、
iv）1よりも小さいDpHGSのDpHPGSの比、DpHGSとDpHPGSは、それぞれ前記成長培地と前記予備成長培地のpH変動である、
v）1より大きいQGGS / QGPGSの比、QGGSおよびQGPGSはそれぞれ、成長培地および予備成長培地に導入または発泡されたガス、酸素、または空気の量である、
vi）1よりも小さいNSSGSの NSSPGSの比、NSSGSとNSSPGSはそれぞれ前記成長ステップのサブステップの数と前記予備成長ステップのサブステップの数であり、2つのサブステップはナノ粒子産生細胞の第1のサブステップから第2のサブステップへの移動で区切られている、および
vii）前記成長培地には前記流加培地が補充されるが、前記予備成長培地には前記硫化培地は補充されない。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記予備成長培地および前記成長培地および前記流加培地の任意の組み合わせが、次に列挙した成分をキログラムまたはリットル当たりその列挙のそれぞれに示された量または種類以下にしか含まない方法、
i）質量または体積で5”10-3 %または 0.5g または 0.5 mLまたは10-8 molのビタミンまたは化学組成物で次に列挙したものから選択されるもの、
葉酸、葉酸、ピリドキシン、ピリドキシンHCl、ピリドキサミン、ピリドキサール、リボフラビン、ビオチン、チアミン、チアミンHCl、ニコチン酸、パントテン酸、パントテン酸カルシウム、イノシトール、p-アミノ安息香酸、アミノ安息香酸、チオ酸、オールトランスレチノール、レチナール、オールトランスベータカロチンを含む代替プロビタミンA機能カロテノイド、ナイアシン、ナイアシンアミド、ニコチンアミド、リボシド、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、アデノシルコバラミン、アスコルビン酸、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、トコフェロール、トコトリエノール、フィロキノン、メナキノン、ビタミンA、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB5、ビタミンB6、ビタミンB7、ビタミンB9、ビタミンB、ビタミ C、ビタミンD、ビタミンD2、ビタミンD3、ビタミンE、ビタミンK、ビタミンViここでVはAからZまでの任意の文字、iは1から100までの任意の整数、およびその誘導体、
ii）６種類のビタミンまたは化学成分で次に列挙するグループから選択されるもの：
葉酸、葉酸塩、ピリドキシン、ピリドキシンHCl、ピリドキサミン、ピリドキサール、リボフラビン、ビオチン、チアミン、チアミンHCl、ニコチン酸、パントテン酸、パントテン酸カルシウム、 イノシトール、p-アミノ安息香酸、アミノ安息香酸、チオン酸、オールトランスレチノール、レチナール、
オールトランス-β-カロチンを含む代替プロビタミンA機能性カロテノイド、ナイアシン、ナイアシンアミド、ニコチンアミド、リボシド、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、アデノシルコバラミン、アスコルビン酸、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、ビタミン、トコフェロール、トコトリエノール、フィロキノン、メナキノン、ビタミンA、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB5、ビタミンB6、ビタミンB7、ビタミンB9、ビタミンB12、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンD2、ビタミンD3、ビタミンE、ビタミンK、ビタミンViここで、VはAからZまでの任意の文字、iは1から100までの任意の整数、およびその誘導体、
iii）質量または体積で10-2％または1グラムまたは1 mLまたは10-7モルまたは10-8 モルのミネラルまたは化学成分で次に列挙したものから選択される成分：
ニトリロ三酢酸、硫酸マグネシウム、ナトリウム塩化物、硫酸マンガン、硫酸第一鉄、硫酸第一鉄七水和物、硝酸コバルト、塩化カルシウム、硫酸亜鉛、硫酸亜鉛七水和物、硫酸銅、硫酸銅水和物、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムカリウム十二水和物、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、 タングステン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム二水和物、塩化ニッケル、EDTA、MgSO4、MnSO4、NaCl、FeSO4、CoSO4、CaCl2、ZnSO4、CuSO4、KAl(SO4)2、H3BO3、Na2MoO4、NiCl2、Na2SeO3、およびそれらの誘導体、
iv）7種類のミネラルまたは化学成分で次に列挙したものから選択される成分：
ニトリロ三酢酸、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄、 硫酸第一鉄、硫酸第一鉄七水和物、硝酸コバルト、塩化カルシウム、硫酸亜鉛、硫酸亜鉛七水和物、硫酸銅、硫酸銅水和物、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムカリウム十二水和物、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム 二水和物、塩化ニッケル、EDTA、MgSO4、MnSO4、NaCl、FeSO4、CoSO4、CaCl2、ZnSO4、CuSO4、KAl(SO4)2、H3BO3、Na2MoO4、NiCl2、Na2SeO3、およびそれらの誘導体、
v）0.005グラムまたは10-8 Mの酵母エキスの少なくとも1つの成分、または酵母エキスに由来する次に列挙した化合物から選択される少なくとも1つの化合物：
少なくとも1つのタンパク質、少なくとも1つの核酸、少なくとも1つの機能性 ペプチド、グルタチオン、デキストラン、マンナン、トレハロース、フレーバーヌクレオチド、ビタミンB、ビオチン、少なくとも1つの揮発性芳香族化合物、カルシウム、リン、亜鉛、鉄、クロムまたはクロム、カリウム、コバルト、マンガン、ストロンチウム、マグネシウム、およびそれらの誘導体 、
vi）5種類の酵母エキスの成分または酵母エキスに由来する化合物で次の列挙するものから選択されるもの：
少なくとも1つのタンパク質、少なくとも1つの核酸、少なくとも1つの機能性ペプチド、グルタチオン、デキストラン、マンナン、トレハロース、フレーバーヌクレオチド、B ビタミン、ビオチン、少なくとも1つの揮発性芳香族化合物、カルシウム、リン、亜鉛、鉄、クロムまたはクロム、カリウム、コバルト、マンガン、ストロンチウム、マグネシウム、およびそれらの誘導体、
vii）0.01グラムまたは10-8 Mのペプトンの少なくとも1つの成分、またはペプトンに由来する少なくとも1つの化合物で、次に列挙するものから選択されるもの：
灰、タンパク質、ショ糖、スタキオース、ラフィノース、中性洗剤繊維、エーテル抽出物、およびそれらの誘導体、
viii）５種類のペプトンまたはペプトンに由来する化合物で次に列挙するものから選択されたもの：
灰、タンパク質、ショ糖、スタキオース、ラフィノース、中性洗剤繊維、エーテル抽出物、およびそれらの誘導体
ix）0.001グラムのEDTA、
x）0.001グラムの少なくとも1つのアミノ酸、
xi）5種類の異なるアミノ酸、
xii）12種類のCMR、毒性または細胞毒性化合物で、次に列挙する化合物から選択される化合物：
ニトリロ三酢酸、硫酸マンガン、硝酸コバルト、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸アルミニウムカリウム、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、塩化ニッケル、および その誘導体、
xiii) 5つの異なる化学元素または重金属で以下からなるグループから選択されるもの：カドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、銅、およびそれらの誘導体、
xiv）10-5グラムの次に列挙した元素から選択される少なくとも1つの化学元素または重金属：
カドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、銅、およびそれらの誘導体、
xv）10-5グラムの次に列挙された化合物から選択される少なくとも1つのCMR、毒性または細胞毒性の化合物：
ニトリロ三酢酸、硫酸マンガン、硝酸コバルト、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸アルミニウムカリウム、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、ナトリウム タングステン酸塩、塩化ニッケル、およびその誘導体、
およびまたは
xvi）0.01グラムのペプトン。
【請求項４】
請求項1に記載の方法であって、前記予備成長培地および前記成長培地またはその一方の少なくとも1つの化合物が、濃度C2または濃度Ctotal = C1 + C2を有し、ここで、
C1は、ナノ粒子産生細胞によって消費されない前記予備成長培地および前記成長培地またはその一方の少なくとも1つの化合物の濃度であり、
C2は、ナノ粒子産生細胞によって消費される前記予備成長培地および前記成長培地またはその一方の少なくとも1つの化合物の濃度であり、
そしてC1およびC2は、前記予備成長ステップおよび前記成長ステップまたはその一方の開始時、最中、または終了時に測定または検討される。
【請求項５】
請求項1に記載の方法であって、前記予備成長培地、前記成長培地、および前記流加培地の任意の組み合わせが、以下に列挙したものから選択される少なくとも1つの化合物を、ナノ粒子産生細胞の成長またはナノ粒子の生産に影響を与える濃度で含まない、または前記予備成長培地、前記成長培地、および前記流加培地の任意の組み合わせがそれらから実質的にフリーであるような方法：
1）WolfのビタミンまたはWolfのビタミンの種々の成分の総数の半分以上を含む媒体、2 ）Wolfのビタミンの一成分、3）葉酸、4）ピリドキシン、5）リボフラビン、6）ビオチン、7）チアミン、8）ニコチン酸、9）パントテン酸、10）ビタミンB12、11）アミノ安息香酸、12 ）チオ酸、13）Wolfの鉱物またはWolfの鉱物の種々の成分の総数の半分以上を含む培地、14）ニトリロ三酢酸、15）硫酸マグネシウム、16）塩化ナトリウム、17）硫酸マンガン、18）鉄硫酸塩七水和物、19）硝酸コバルト、20）塩化カルシウム、21）硫酸亜鉛７水和物、22）硫酸銅水和物、23）硫酸アルミニウムカリウム12水和物、24）ホウ酸、25）モリブデン酸ナトリウム、26）亜セレン酸ナトリウム、27）タングステン酸ナトリウム２水和物、28）酵母エキスまたは酵母エキスの種々の成分の総数の半分以上を含む培地、29）酵母エキスの等価物、または酵母エキスの等価物の種々の成分の総数の半分以上を含む培地、30）酵母エキスから由来するまたは酵母エキスに含まれる1、2、または5のタンパク質、31）酵母エキスに由来する、または酵母エキスに含まれる1、2または5の核酸、32）酵母に由来する、または酵母に含まれる1、2または5個のペプチドまたは機能性ペプチドエキス、33）グルタチオン、34）デキストラン、35）マンナン、36）トレハロース、37）酵母エキスに由来するまたは含まれるフレーバーヌクレオチド、38）ビタミンB、39）ビオチン、40）酵母エキスに由来する、または酵母エキスに含まれる1、2または5の揮発性芳香族化合物、41）クロム、42）コバルト、43）ストロンチウム、44）塩化ニッケル、45）鉱物エリキシルの種々の成分の総数の半分以上を含む培地、46) MnSO4、47) NaCl、48) FeSO4、49) CoSO4、50) CaCl2、51) ZnSO4、52) CuSO4、53) KAl(SO4)2、54) H3BO3、55) Na2MoO4、56) NiCl2、57) Na2SeO3、58）ペプトンまたはペプトンの種々の成分の総数の半分以上を含む培地、59）ペプトンの1つの成分、60）ペプトンに由来する、またはペプトンに含まれる1、2または5のタンパク質、61）ペプトンに由来または含まれる糖、62）ペプトンに由来または含まれる1つのアミノ酸、63）ペプトンに含まれるまたは由来の灰、64）ペプトンに由来する、または含まれる1つの繊維、65）1つのCMR剤、66）ホウ酸、67）1つのアミノ酸、68）アラニン、69）アルギニン、70）アスパラギン、71）アスパラギン酸、 72）システイン、73）グルタミン、74）グルタミン酸、75）グリシン、76）ヒスチジン、77）イソロイシン、78）ロイシン、79）リジン、80）メチオニン、81）フェニルアラニン、82）プロリン、83）セリン、84 ）トレオニne、85）トリプトファン、86）チロシン、87）バリン、88）1つの細胞毒性または毒性化合物、89）硫酸マンガン、90）硫酸銅、91）硫酸アルミニウムカリウム、92）ホウ酸、93）タングステン酸ナトリウム、94）鉄とは異なる1つの重金属、95）チタン、96）バナジウム、97）マンガン、98）ニッケル、99）銅、100）亜鉛、101）ガリウム、102）ゲルマニウム、103）ヒ素、104）ジルコニウム、105）ニオブ、106）モリブデン、107）テクネチウム、108）ルテニウム、109）ロジウム、110）パラジウム、111）銀、112）カドミウム、113）インジウム、114）スズ、115）テルル、116）ルテチウム、117）ハフニウム、118 ）タンタル、119）タングステン、120）レニウム、121）オスミウム、122）イリジウム、123）プラチナ、125）金、126���水銀、127）タリウム、128）鉛、129）ビスマス、130）ポロニウム、131）アスタチン、132）ランタン、133）セリウム、134）プラセオジム、135）ネオジム、136）プロメチウム、137）サマリウム、138）ユーロピウム、139）ガドリニウム、140）テルビウム、141）ジスプロシウム、142）ホルミウム、143）エルビウム、144 ）ツリウム、145）イッテルビウム、146）アクチニウム、147）トリウム、148）プロトアクチニウム、149）ウラン、150）ネプツニウム、151）プルトニウム、152）アメリシウム、153）キュリウム、154）バーケリウム、155）カリホルニウム、156）アインステイニウム、157）フェルミウム、158）ノーベリウム、159）ラジウム、160）ローレンシウム、 161）ラザホージウム、162）ドブニウム、163）シーボーギウム、164）ボーリウム、165）ハッシウム、166）マイトネリウム、167）ダルムスタチウム、168）レントゲニウム、169）コペルニシウム、170）元素113-118、171）ヘリウム、172）リチウム、173）ベリリウム、174）ボア、175）フッ素、176）アルミニウム、177）シリコン、178）アルゴン、179）スカンジウム、180）クロム、181）ニッケル、182）銅、183）セレン、184）ブロム、185 ）クリプトン、186）ルビジウム、187）イットリウム、188）Sn、189）アンチモン、190）ヨウ素、191）キセノン、192）セシウム、193）バリウム、194）ルテシウム、195）アステート、196）ラドン、197）フランシウム、198）メンデレビウム、199）マウント、200）ウンウンビウム、201）ウンウントリウム、202）ウンウンクジウム、203）ウンウンペンチウム、204）ウンウンヘキシウム、205）ウンウンセプチウム、206）ウンウンオクチウム、および207）上記 1) から206) までの化学物質の塩、および 208) それらの誘導体。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、ナノ粒子産生細胞の成長およびナノ粒子産生またはその一方に影響を与える少なくとも１つの化合物の濃度が、前記予備成長培地、前記成長培地および前記流加培地の任意の組み合わせの濃度であって、それは前記予備成長培地、前記成長培地および前記流加培地 1リットルあたりの化合物で1pM、または1μM、または1mM、または前記予備成長培地、前記成長培地およびまたは前記流加培地の1リットルあたりの化合物で10-3ng、または前記予備成長培地、前記成長培地およびまたは前記流加培地の1リットルあたりの化合物で1 ng、または前記予備成長培地、前記成長培地およびまたは前記流加培地の1リットルあたり化合物で103 ng である方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法であって、さらに、前記成長培地およびまたは前記予備成長培地が前記流加培地により補充され、かつ：
i）前記流加培地のpHが、前記予備成長およびまたは前記成長培地のpHよりも低い、そして、または、
ii）a）リンまたはリン酸源、b）カリウム源、c）マグネシウム源、d）鉄源、e）ビタミン源、f）カルシウム源、g）KH2PO4、h）MgSO4、i）FeCl3、 j）チアミン、k）CaCl2、およびそれらの誘導体からなるグループから選択された少なくとも1つの化学要素の濃度が、前記予備成長およびまたは前記成長培地よりも前記流加培地で大きい方法。
【請求項８】
請求項1に記載の方法であって、
-ナノ粒子産生細胞が走磁性細菌である、そしてまたは
-ナノ粒子はマグネトソームである方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法であって、前記予備成長およびまたは成長培地が、炭素の供給源、窒素の供給源、リン酸塩またはリンの供給源、硫黄の供給源、鉄の供給源、ビタミンの供給源、およびカルシウムの供給源を含み、かつ、
炭素の供給源の前記予備成長培地およびまたは前記成長培地の濃度は、以下からなる群から選択される前記予備成長培地および前記成長培地の少なくとも1つの化合物の濃度よりも大きい、
リン酸またはリンの供給源、硫黄の供給源、ビタミンの供給源、およびカルシウムの供給源、
そして、または、
窒素の供給源は、前記予備成長培地および前記成長培地の濃度が、前記予備成長培地および前記成長培地の少なくとも1つの化合物の濃度よりも大きい方法、
リン酸またはリンの供給源、硫黄の供給源、ビタミンの供給源、およびカルシウムの供給源。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記予備成長培地および前記成長培地およびまたは前記流加培地にナノ粒子産生細胞のバンクを保存、増殖、調製、または挿入するステップをさらに含み、前記バンク前記予備成長培地および前記成長培地およびまたは前記流加培地の化合物と同じ化合物を少なくとも1％含むバンク培地で保存、増殖、または調製する方法。
【請求項１１】
請求項1に記載の方法であって、さらに高純度酸化鉄ベースのナノ粒子を得るための精製ステップを含み、該精製ステップは、少なくとも1つの加熱ステップを使用して、前記成長ステップで生成されたナノ粒子から少なくとも1つの不純物を除去するステップを含み、前記成長ステップで生成されたナノ粒子の温度が温度Tに上昇し、1秒から20年の間に加熱時間中Tに維持され、Tは50°Cから700 °Cである方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法により得られた高純度のナノ粒子産生細胞で、
i)   ＭＦｅＣが高純度ナノ粒子中の鉄の質量であり、MMCが、高純度のナノ粒子産生細胞における鉄と鉄以外の金属または半金属の質量であるとき、ＭＦｅＣ ／ ＭＭＣ比に基づいて５０％を超える鉄を含む,
ii)  M1 / M2の比率 に基づいて鉄、および次のグループから選択される鉄以外の少なくとも1つの金属を含む：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、テクネチウム、 インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なお、ここで、M1は、高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループで選択された少なくとも1つの他の金属の質量である、または、
iii)           M3 / M4比に基づく鉄および以下のグループから選択される少なくとも1つの非金属：水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄と上記グループから選択される少なくとも1つの非金属の質量であり、M4は 高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての化学要素の質量である、
高純度のナノ粒子産生細胞。
【請求項１３】
請求項12に記載の高純度のナノ粒子産生細胞で、高純度のナノ粒子産生細胞の中の鉄以外の金属または半金属が、次のグループから選択されるナノ粒子産生細胞：
ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、 ユウロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、少なくとも5つの異なる金属または半金属、およびそれらの誘導体
【請求項１４】
高純度のナノ粒子産生細胞が走磁性細菌である、請求項１２に記載の高純度のナノ粒子産生細胞。
【請求項１５】
請求項１２に記載の高純度ナノ粒子産生細胞を含む組成物。
【請求項１６】
請求項１に記載の方法により得られた高純度酸化鉄ナノ粒子であって、93%を超える次のものを含む高純度酸化鉄ナノ粒子、
i)               MFeNが、 高純度酸化鉄ナノ粒子における鉄の質量であり、MMNが高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および鉄以外の金属または半金属の質量であるとき、MFeN ／ MMNの比に基づく鉄、または、
ii)             M1 / M2の比率に基づく鉄および次のグループから選択される鉄以外の少なくとも1つの金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン 、テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記グループから選択された鉄以外の少なくとも1つの他の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である、および/または
iii)           M3 / M4比に基づく鉄及び次のグループから選択される少なくとも1つの非金属 :水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄と上記グループで選択される少なくとも1つの非金属の質量であり、M4は高純度の酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属の質量である。
【請求項１７】
請求項16に記載の高純度酸化鉄ベースのナノ粒子であって、高純度酸化鉄ナノ粒子およびまたは高純度のナノ粒子産生細胞中の鉄以外の金属または半金属が以下からなるグループから選択されるナノ粒子：
ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、 ユウロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、タングステン酸塩、少なくとも5つの異なる金属または半金属、およびそれらの誘導体。
【請求項１８】
前記高純度酸化鉄ベースのナノ粒子がマグネトソームである請求項１６に記載の高純度酸化鉄ベースのナノ粒子。
【請求項１９】
請求項１８に記載の高純度酸化鉄ベースのナノ粒子を含む組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載の方法により得られた高純度ナノ粒子産生細胞と高純度酸化鉄ナノ粒子とを含む組成物であって、
高純度のナノ粒子産生細胞は次の物を 50% 以上含む：
i)               MFeC / MMFe比に基づいた鉄、なおここで、MFeCは高純度のナノ粒子産生細胞中の鉄の質量であり、MMCは鉄と鉄以外の金属または半金属の質量、
ii)              M1 / M2の比率に基づく鉄、および以下のグループから選択される少なくとも1つの鉄以外の金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、 テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループから選択される少なくとも1つの鉄以外の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である、 および/または
iii)           M3 / M4比に基づく鉄、および以下の群から選択される少なくとも1つの非金属、水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループで選択される少なくとも1つの非金属の質量であり、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属の質量である、
そして、
高純度のナノ粒子は次のものを 93 % 以上含む、
i)   MFeN / MMN比に基づいた鉄、なおここで、MFeNは高純度のナノ粒子産生細胞中の鉄の質量であり、MMNは鉄と鉄以外の金属または半金属の質量、
ii)  M1 / M2の比率に基づく鉄、および以下のグループから選択される少なくとも1つの他の金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、 テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループから選択される少なくとも1つの鉄以外の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である、または、
iii)     M3 / M4比に基づく鉄、および以下のグループから選択される少なくとも1つの非金属：水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループから選択される少なくとも1つの非金属の質量であり、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属の質量である。
【請求項２１】
高純度ナノ粒子産生細胞およびまたは高純度酸化鉄ナノ粒子を含む組成物であって、
ナノ粒子産生細胞は50% 以上の次のものを含み：
i)   MFeC / MMFe比に基づいた鉄、なおここで、MFeCは高純度のナノ粒子産生細胞中の鉄の質量であり、MMCは鉄と鉄以外の金属または半金属の質量である、
ii)      M1 / M2の比率に基づく鉄、および以下のグループから選択される少なくとも1つの鉄以外の金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、 テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループから選択される少なくとも1つの鉄以外の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である、 および/または、
iii)     M3 / M4比に基づく鉄、および以下の群から選択される少なくとも1つの非金属、水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループで選択される少なくとも1つの非金属の質量であり、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属の質量である、
そして、
上記高純度酸化鉄ナノ粒子は次のものを 93% 以上含む：
i)      MFeN / MMN比に基づいた鉄、なおここで、MFeNは高純度のナノ粒子産生細胞中の鉄の質量であり、MMNは鉄と鉄以外の金属または半金属の質量、
ii)    M1 / M2の比率に基づく鉄、および以下のグループから選択される少なくとも1つの他の金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、 テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループから選択される少なくとも1つの鉄以外の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である、または、
iii)  M3 / M4比に基づく鉄、および以下のグループから選択される少なくとも1つの非金属：水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループから選択される少なくとも1つの非金属の質量であり、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属の質量である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野は不純物の含有の少ないナノ粒子を生物学的生産に属する。
【背景技術】
【０００２】
走磁性細菌などのナノ粒子を産生する細菌は、結晶構造に不純物を蓄積することが知られている。例えば、走磁性細菌がコバルトの存在下で増殖すると、酸化鉄とコバルトを含むマグネトソームが生成される（非特許参考文献１参照）。医療用途では、ナノ粒子にはコバルトなどの毒性不純物の含有率が低いことが望ましい。
【参考文献】
【０００３】
【非特許文献１】S. Stanilおよび 他、Nature nanotechnology、V. 3、P. 158（2008）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ナノ粒子産生細胞を使用して高純度酸化鉄ナノ粒子を産生する方法に関し、以下を含む：
ａ）ナノ粒子産生細胞がナノ粒子を本質的に産生しないように、予備増殖およびまたは流加培地で優先的にナノ粒子産生細胞を増殖することを含む予備増殖ステップ、そして
ｂ）ナノ粒子産生細胞がナノ粒子産生細胞を産生するように、増殖およびまたは流加培地での予備成長ステップに由来するナノ粒子産生細胞を優先的に増殖することを含む増殖ステップ、
ここで、予備成長または成長または流加培地は、予備成長または成長または流加培地のキログラムまたは1リットルあたりに、以下をその分量より少なく含む：
ｉ）5.105、5.103、50、5、0.5、0.005、0.0005、0.00005 または 5.10-10 グラムの酵母エキス、
およびまたは
ｉｉ）105、103、10、1、0.1、0.001、10-5 または 10-10 グラムの優先的にはホウ酸およびニトリロ3酢酸からなる群から選択されるCMR剤、
ここで、流加培地が存在する場合それは優先的には予備成長およびまたは成長培地を補足する培地であり、
ここで、少なくとも0、0.1、0.5、2、5、10、103、105 または 1010の係数で、予備成長の段階よりも成長段階で優先的に多くのナノ粒子が生成され、この係数はQ2 / Q1とすると、Q1およびQ2はそれぞれ、予備成長および成長ステップまたはサブステップで生成されるナノ粒子の量である。そしてまたは、
優先的に、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地は、細菌の成長および/またはマグネトソームの生産または合成に優先的に関与する少なくとも別の化合物を含み、優先的に他の化合物は炭素、窒素、カルシウム、ビタミン、酸素、鉄、リン酸塩、リン、および/またはマグネシウムの供給源である。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】全体の走磁性細菌および溶菌の条件2に従って走磁性細菌から抽出されたマグネトソームのTGA-DSC分析。（a）3 mgの凍結乾燥した走磁性細菌を含むサンプルの20°Cから600°の間に6°C / minの速度で加熱されたときの温度の関数としての重量パーセントの変化、および温度の関数としてのこの変化の導関数。（b）3 mgの凍結乾燥した走磁性細菌を含むサンプルの20°Cから600°の間に6°C / minの速度で加熱されたときの温度の関数としてのmW単位の熱流量。（c）3 mgの凍結乾燥したマグネトゾームを含むサンプルの条件2で20°Cから600°の間に6°C / minの速度で加熱されたときの温度の関数としての重量パーセントの変動、および温度の関数としてのこの変動の導関数.（d）3 mgの凍結乾燥したマグネトゾームを含むサンプルの条件2で20°Cから600°の間に6°C / minの速度で加熱されたときの温度の関数としてのmW単位の熱流量図1（a）と1（c）に関して、y軸は質量のパーセンテージで置き換えることができ、同じプロットになる。
【図２】および化学合成されたSIGMAナノ粒子のTGA-DSC分析。（a）条件3に従って走磁性細菌から抽出された3 mgの凍結乾燥したマグネトゾームを含むサンプルの温度の関数としての重量パーセントの変動、および温度の関数としてのこの変動の導関数.（ｂ）条件3に従って走磁性細菌から抽出された3 mgの凍結乾燥したマグネトゾームを含むサンプルの温度の関数としてのmWでの熱流量（c）3 mgの凍結乾燥したSIGMAナノ粒子を含むサンプルの温度の関数としての重量パーセントの変動、および温度の関数としてのこの変動の導関数.（d）、3 mgの凍結乾燥SIGMAナノ粒子を含むサンプル温度の関数としてのmW単位の熱流量図2（a）と2（c）については、y軸を質量のパーセンテージで置き換えると、同じプロットが得られます。
【図３】一連の予備成長ステップ1、i、およびi + 1の後の、本発明による方法の使用の例示的な例であり、ここでは予備成長ステップは、ナノ粒子産生細胞の予備成長ステップVPGS1（通常〜50 mL）のボリューム内の細胞バンク（通常107個の細胞）への挿入によって開始される。ナノ粒子産生細胞はこのボリュームで通常〜7日間増殖される。その後ナノ粒子産生細胞はVPGS1からVPGSi（VPGSi通常〜500mL）転送され、ナノ粒子産生細胞はこのボリュームで通常〜3日間増殖される。ナノ粒子産生細胞はVPGSiからVPGSi + 1（VPGS i + 1通常〜5L）に移され、ナノ粒子産生細胞はこの中で通常3日間増殖され通常1のOD(光学密度)になる。その後VGS0（通常45リットル）に移され、そこでVGS0に〜5日間の成長段階で流加培地（通常5-10リットル）が補充され酸素泡立ての存在する成長培地で、通常5から40のODまでの細菌増殖、および成長培地1リットルあたり5から500 mgのマグネトソームの生成を可能にする。ここで、増殖前培地は鉄または鉄源の限られた濃度を含み（優先的に<2 μM）ナノ粒子の生成を防ぎ、成長培地は鉄または鉄源を含み（優先的に> 2 μM）、ナノ粒子の生成を促進する。
【図４】予備成長段階の開始時と終了時の炭素源、窒素源、鉄源の濃度C1およびC2。
【図５】および
【図６】開始時、開始後20時間、開始後40時間、成長ステップ開始後40時間以上の炭素源、窒素源、鉄源の濃度C1およびC2。
【発明の詳細な説明】
【０００７】
本発明の一実施形態において、ナノ粒子産生細胞は、好ましくはナノ粒子を産生または合成する能力を有する細胞、優先的には真核生物または原核生物であり、少なくとも1つの化合物を含む媒体に挿入またはそこで増殖された場合、それは ナノ粒子に10-6、1または106 μMを超える濃度で含まれる。
【０００８】
本発明の一実施形態において、ナノ粒子産生細胞は、これらの細胞が予備成長または成長または流加培地1リットルあたり1050、1010、105、103、10、1、10-1、10-3または10-5mg以下のナノ粒子を産生する場合、または予備成長または成長または流加培地がナノ粒子産生細胞を（s）予備成長または成長または流加培地1リットルあたり1050、1010、105、103、10、1、10-1、10-3または10-5 mg以下のナノ粒子を 含む場合。ナノ粒子を本質的に産生しない。
【０００９】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、これらの細胞が予備成長または成長または流加培地1リットルあたり0、10-50、10-20、10-10、10-5、10-1、1、10、103 または105mg以上を産生する場合、または予備成長または成長または流加培地1リットルあたり0、10-50、10-20、10-10、10-5、10-1、1、10、103または105 mgを超えるナノ粒子を含場合、ナノ粒子を産生する。
【００１０】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子細胞によって生成されるナノ粒子の量は、Ｑ２−Ｑ１に等しく、ここでＱ１およびＱ２は、予備成長およびまたは成長ステップの時刻ｔ１およびｔ２で生成されるナノ粒子の量であり、t2がt1より大きく、優先的にはt2 / t1は1、2、5、10または103より大きく、優先的にはt2は予備成長およびまたはの終わりであり、t1は予備成長およびまたはの開始である。
【００１１】
本発明の一実施形態では、成長ステップでナノ粒子セルによって生成されるナノ粒子の量は、Q’2-Q’1に等しく、Q’1およびQ’2は、時刻t’1および t’2で生成されるナノ粒子の量である。 成長ステップのt’2はt’1より大きく、t’2 / t’1は1、2、5、10または103より大きく、t’2は 成長ステップの終わりであり、t’1は成長ステップの始まりである。
優先的に、Q’2-Q’1はQ2-Q1よりも優先的に少なくとも0、10-10、10-1、1、5、10、103、または105倍大きくなる。
優先的に、ナノ粒子産生細胞によって産生されるナノ粒子の総量は、Qtotal = Q’2-Q’1 + Q2-Q1に等しくなる。
【００１２】
場合によっては、Qtotalは、優先的には予備成長培地およびまたは成長培地 1リットルあたり、優先的にはナノ粒子、優先的にはナノ粒子に含まれる鉄の10-50、10-10、10-5、10-3、10-1、0、1、5、10または100 mgよりも大きくなる。
【００１３】
他のいくつかのケースでは、Qtotalは、優先的に予備成長およびまたは成長培地/培地1リットルあたり優先的にナノ粒子に含まれる鉄の1050、1010、105、103、100、50、10、または100 mg以下である可能性がある 。
【００１４】
本発明の一実施形態において、酵母エキスとは、ｉ）全て酵母エキス、ｉｉ）全酵母エキスからの化合物の１、１０、５０または９０％以上を含む培地、および iii）酵母エキスの化学的同等物の1要素である。
【００１５】
本発明の一実施形態において、ペプトンとはｉ）全ペプトン、ｉｉ）全ペプトンからの化合物の１、１０、５０または９０％を超える化合物を含む媒体、およびｉｉｉ）ペプトンの化学的同等物、からなる群から選択される１つの要素である。
【００１６】
本発明は、ナノ粒子産生細胞を用いて高純度酸化鉄ナノ粒子を製造する方法に関し、優先的にナノ粒子を本質的に生成せずナノ粒子産生細胞を優先的に増殖することを含む予備成長ステップを含み、続いて、ナノ粒子を生成しながら成長培地で予備成長ステップから生じるナノ粒子生成細胞を増殖することを含む成長ステップが続く構成であり、ここで、成長ステップは、以下からなるグループから選択された少なくとも1つの特徴によって予備成長ステップと異なる：
i)          CFeGS / CFePGSの比で0、10-5、10-3、1、10、103、または105よりも大きいもの、ここで、CFeGSおよびCFePGSは、それぞれ成長培地および予備長培地の鉄または鉄源の濃度である 、
ii)         CCGS / CCPGSの比で0、10-5、10-3、1、10、103、または105より大きいもの、ここでCCGSおよびCCPGSはそれぞれ成長培地および予備成長培地の炭素または炭素源の濃度である、
iii)       CNGS / CNPGSの比で0、10-5、10-3、1、10、103、または105より大きいもの、ここでCNGSおよびCNPGSはそれぞれ成長培地および予備成長培地の窒素または窒素源の濃度である、
iv)       DpHGS/DpHPGS の比で0、 1010、 105,、103,、102、1、 0.5 または 0.1 以下であるもの、ここでDpHGS および DpHPGS はそれぞれ、成長培地と予備成長培地のpH変動である、
v)         QGGS / QGPGSの比で0、 1010、 105,、103,、102、1、 0.5 または 0.1 以下であるもの、ここでQGGSとQGPGSは、それぞれ成長培地と予備成長培地に持ち込まれたまたはバブルされたガス、酸素、または空気の量である、
vi)       NSSGS / NSSPGSの比で0、10-5、10-3、1、10、103、または105よりも大きいもの。ここで、NSSGSおよびNSSPGSはそれぞれ成長ステップのサブステップの数と予備成長ステップのサブステップの数であり、2つのサブステップは、ナノ粒子産生細胞を第1のサブステップから第2のサブステップに移すことにより、互いに分離されている、および
vii)      成長培地には流加培地が補充されるが、予備成長培地にはそのような培地が補充されない、
ここで、予備成長、成長または硫化培地は以下を含みあるいは含まない：
I. 以下のグループから選択される酵母エキスに含まれるまたは由来する少なくとも1つの化合物または化合物の集合体：
I1)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のタンパク質の予備成長または成長または流加培地、
I2)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上の核酸の予備成長または成長または流加培地、
I3)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のグルタチオンの予備成長または成長または流加培地、
I4)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のデキストラン、マンナン、トレハロース、フレーバーヌクレオチド、ビタミンB群、ビオチン、および揮発性芳香族化合物からなる群から選択される少なくとも1つの化合物の予備成長または成長または流加培地、
I5)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のカルシウムの予備成長または成長または流加培地、
I6)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のリンの予備成長または成長または流加培地、
I7)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上の亜鉛の予備成長または成長または流加培地、
I8)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のクロムの予備成長または成長または流加培地、
I9)           0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のカリウムの予備成長または成長または流加培地、
I10)        0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のコバルトの予備成長または成長または流加培地、
I11)        0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のマンガンの予備成長または成長または流加培地、
I12)        0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のストロンチュームの予備成長または成長または流加培地、
I13)        0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のマグネシュームの予備成長または成長または流加培地、
I14)        0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上の酵母エキスの予備成長または成長または流加培地、および
I15)        0、1、5、10、15、20または50種以上の酵母エキス由来の成分、
II. 以下のグループから選択されるペプトンに含まれるまたは由来する少なくとも1つの化合物または化合物の集合：
II 1)          0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上の灰の予備成長または成長または流加培地、
II 2)          0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上の蛋白質の予備成長または成長または流加培地、
II 3)          0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のスクロースの予備成長または成長または流加培地、
II 4)          0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のラフィノースの予備成長または成長または流加培地、
II 5)          0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上の中性洗剤繊維の予備成長または成長または流加培地、
II 6)          0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のエーテル抽出物の予備成長または成長または流加培地、
II 7)          0、10-10、10-5、10-1、1、103、または105グラム/リットル以上のペプトンの予備成長または成長または流加培地、および
II 8)          0、1、5、10、15、20または50種以上のペプトンに由来する成分
III. 以下のグループから選択されるオオカミの鉱物または鉱物エリキシルに含まれる、またはオオカミの鉱物エリキシルに由来する少なくとも1つの化合物または化合物の集合体：
III 1)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のニトリロ三酢酸の予備成長または成長または流加培地、
III 2)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の硫酸マグネシウムの予備成長または成長または流加培地、
III 3)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の塩化ナトリウムの予備成長または成長または流加培地、
III 4)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の硫酸マンガンの予備成長または成長または流加培地、
III 5)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の硫酸第一鉄の予備成長または成長または流加培地、
III 6)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の硝酸コバルトの予備成長または成長または流加培地、
III 7)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の塩化カルシウムの予備成長または成長または流加培地、
III 8)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の硫酸亜鉛の予備成長または成長または流加培地、
III 9)          0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の硫酸銅の予備成長または成長または流加培地、
III 10)       0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来する硫酸アルミニウムカリウムの予備成長または成長または流加培地、
III 11)       0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のホウ酸の予備成長または成長または流加培地、
III 12)       0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のモリブデン酸ナトリウムの予備成長または成長または流加培地、
III 13)       0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の亜セレン酸ナトリウムの予備成長または成長または流加培地、
III 14)       0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のタングステン酸ナトリウムの予備成長または成長または流加培地、
III 15)       0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の塩化ニッケルの予備成長または成長または流加培地、
III 16)       0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のWolfのミネラルまたはミネラルエリキシル22の予備成長または成長または流加培地、
III 17)       ０、１０以上のWolfのミネラルまたはミネラルエリキシルのさまざまな成分
IV. 0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のEDTAの予備成長または成長または流加培地、およびまたは、
V. 以下のグループから選択Wolfのビタミンに含まれる、またはWolfのビタミンに由来する少なくとも1つの化合物または化合物の集合体
i)      0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のビオチンの予備成長または成長または流加培地、
ii)      0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のパントテン酸カルシウムの予備成長または成長または流加培地、
iii)    0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上の葉酸の予備成長または成長または流加培地、
iv)     0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のイノシトールの予備成長または成長または流加培地、
v)      0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のニコチン酸の予備成長または成長または流加培地、
vi)     0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のp-アミノ安息香酸の予備成長または成長または流加培地、
vii)   0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のピリドキシンHClの予備成長または成長または流加培地、
viii) 0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のリボフラビンの予備成長または成長または流加培地、
ix)     0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のチアミンHClの予備成長または成長または流加培地、
x)      0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のチオクト酸の予備成長または成長または流加培地、
xi)     0、10-20、10-5、10-1、1、103、または105リットル当たりモル以上のオオカミのビタミンの少なくとも1つの成分、および
xii)   0、1、5、10、15、20種以上のオオカミのビタミン、
そしてあるいは、ここで、予備成長、成長、または流加培地は、測定すると、予備成長、成長または流加培地のmg あたりgあたり、ミリリットルあたり、またはリットルあたりで以下を含むあるいは含まない：
1)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのタンパク質で、酵母エキスから由来するもの、
2)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの核酸で、酵母エキスから由来するもの、
3)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのグルタチオンで、酵母エキスから由来するもの、
4)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのデキストラン、マンナン、トレハロース、フレーバーヌクレオチド、ビタミンB群、ビオチン、および揮発性芳香族化合物のグループから選択される酵母エキスに由来する少なくとも1つの化合物、
5)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのカルシウムで、酵母エキスから由来するもの、
6)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのリンで、酵母エキスから由来するもの、
7)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの亜鉛で、酵母エキスから由来するもの、
8)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのクロムで、酵母エキスから由来するもの、
9)             0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのカリウムで、酵母エキスから由来するもの、
10)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのコバルトで、酵母エキスから由来するもの、
11)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのマンガンで、酵母エキスから由来するもの、
12)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのストロンチュームで、酵母エキスから由来するもの、
13)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのマグネシュームで、酵母エキスから由来するもの、
14)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの酵母エキス、
15)          0、1、5、10、15、20種以上の成分で酵母エキスから由来するもの、
16)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの灰で、ペプトンから由来するもの、
17)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの蛋白質で、ペプトンから由来するもの、
18)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのスクロースで、ペプトンから由来するもの、
19)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのラフィノースで、ペプトンから由来するもの、
20)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの中性洗剤繊維で、ペプトンから由来するもの、
21)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのエーテル抽出物で、ペプトンから由来するもの、
22)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのラフィノースで、ペプトンから由来するもの、
23)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのペプトン、
24)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのニトリロ三酢酸でWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
25)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの硫酸マグネシウムでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
26)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの塩化ナトリウムでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
27)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの硫酸マンガンでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
28)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの硫酸第一鉄でWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
29)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの硝酸コバルトでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
30)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの塩化カルシウムでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
31)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの硫酸亜鉛でWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
32)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの硫酸銅でWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
33)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのアルミニウムカリウムでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
34)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのホウ酸でWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
35)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのモリブデン酸ナトリウムでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
36)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの亜セレン酸ナトリウムでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
37)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのタングステン酸ナトリウムでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
38)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムの塩化ニッケルでWolfの鉱物または鉱物エリキシルに由来するもの、
39)          0、10-20、10-10、10-5、10-3または1グラムのWolfの鉱物または鉱物エリキシル、
40)          Wolfのミネラルまたはミネラルエリキシルの0、1、5、10、または20種類の成分、
41)          0、10-20、10-10、10-5、10-1、1モルのEDTA、
42)          オオカミのビタミンに由来する0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのビオチン、
43)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するカルシウム、
44)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来する葉酸、
45)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するイノシトール、
46)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するニコチン酸、
47)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するp-アミノ安息香酸、
48)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するピリドキシンHCl、
49)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するリボフラビン、
50)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するチアミンHCl、
51)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンに由来するチオクト酸、
52)          0、10-50、10-30、10-9、10-3、10-1または1モルのオオカミのビタミンの１成分、
53)          0、1、5、10 または 20種類のオオカミのビタミン、
54)          0、1、2、3、6、10 または 100種類のビタミン、
55)          0、10-50、10-20、10-9、10-8、10-7、10-5、10-3 、10-1 または 1モルの少なくとも1つのビタミン、
56)          0、10-50、10-20、10-10、10-5、10-4、10-2、10-1、1、10 または 103 g の酵母エキス、
57)          0、10-50、10-20、10-9、10-3、10-1、1、5 または 10 モルの酵母エキスの少なくとも1つの成分、
58)          0、1、2、5、10 または 100 種類の酵母エキスの成分、
59)          0、10-50、10-10、10-5、10-1、1、10 または 103 g のペプトン、
60)          0、10-50、10-9、10-5、10-3、10-1、1 または 10 モルのペプトンの成分、
61)          0、1、2、5、10 または 100 種類のペプトンの成分、
62)          0、1、2、5、10 または 100 種類のCMR触媒、
63)          0、10-50、10-9、10-5、0.05、10-1、1、10、103 または 106 mgの少なくとも1つのCMR触媒、
64)          0、1、2、5、10 または 100 種類のキレート剤、
65)          0、10-50、10-20、10-9、10-8、10-3、10-1、1、5、10 または 103 モルの少なくとも1つのキレート剤、
66)          0、1、2、5、10 または 100 種類のアミノ酸、
67)          0、10-50、10-10、10-5、10-3、1、10、103、105 または 1010 mg の少なくとも1つのアミノ酸、
68)          0、1、2、5、10 または 100 種類の毒性または細胞毒性化合物、
69)          0、10-50、10-10、10-5、10-3、10-1、1、10、103 または 105 mg の少なくとも1つの毒性または細胞毒性化合物、
70)          0、1、3 または 7 種類の鉄とは異なる重金属、
71)          0、10-50、10-10、10-5、10-3、10-1、1、10、103 または 105 mg の鉄とは異なる重金属、
72)          0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 のカドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、銅の中から選択された金属または化学元素、
73)          1 mg のカドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、銅、
74)          0、10-50、10-10、0.5、1、5、10、103 または 106 mL または 10-50、10-30、10-10、10-8、10-5、10-3、1、10、103 または 106 モルのオオカミのビタミン、
75)          10-50、10-20、10-9、 10-5、10-1、1、5、10、103 または 105 モルの少なくとも1つのオオカミのビタミン、
76)          0、1、2、5、10 または 100 種類のオオカミのビタミンの成分、
77)          0、10-50、10-10、0.5、1、5、10、103 または 106 mL または 10-50、10-30、10-10、10-8、10-5、10-3、1、10、103 または 106 モルのオオカミのミネラル、
78)          10-50、10-20、10-9、10-5、10-1、1、5、10、103 または 105 モルの少なくとも1つのオオカミのミネラルの成分、
79)          0、1、2、5、7、10、15 または 100 種類のオオカミのミネラルの成分、
80)          10-50、10-20、10-9、10-5、10-1、1、5、10、103 または 105 モルのミネラルエリキシル、
81)          10-50、10-20、10-9、10-5、10-1、1、5、10、103 または 105 モルのミネラルエリキシルの少なくとも1つの成分、そしてまたは、
82)          0、1、2、5、10、14 または 100 種類のミネラルエリキシル。
【００１７】
本発明はまた、流加培地が、鉄、鉄源、炭素、炭素源、窒素、窒素源、およびそれらの組み合わせからなるグループから選択される少なくとも１つの化合物を含み、そして、流加培地中の少なくとも1つの化合物の濃度が10-6μM、1μM、または106μMより大きい本発明による方法に関する。
【００１８】
本発明の一実施形態では、少なくとも1つのビタミン、Wolfのビタミンの成分またはビタミン溶液は以下のグループから選択される：葉酸、葉酸塩、ピリドキシン、ピリドキサミン、ピリドキサール、リボフラビン、ビオチン、チアミン、ニコチン酸、パントテン酸、 ビタミンB12、アミノ安息香酸、チオン酸、オールトランスレチノール、レチナール、オールトランスベータカロチンを含む代替プロビタミンA機能カロテノイド、ナイアシン、ナイアシンアミド、ニコチンアミド、リボシド、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、アデノシルコバラミン、アスコルビン 酸、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、トコフェロール、トコトリエノール、フィロキノン、メナキノン、ビタミンA、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB5、ビタミンB6、ビタミンB7、ビタミンB9、ビタミンB12、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンD2 、ビタミンD3、ビタミンE、ビタミンK、ビタミンVi（VはAからZまでの任意の文字、iは1から100までの任意の整数）、およびそれらの誘導体。
【００１９】
本発明の別の実施形態において、Wolfの鉱物の少なくとも１つの成分は以下のグループから選択される：ニトリロ三酢酸、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄七水和物、硝酸コバルト、塩化カルシウム、硫酸亜鉛七水和物、硫酸銅水和物、硫酸アルミニウムカリウム十水和物、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム二水和物、塩化ニッケル、およびそれらの誘導体。
【００２０】
本発明の別の実施形態では、酵母エキスの少なくとも1つの成分は以下のグループから選択される： i）少なくとも1つのタンパク質、ii）少なくとも1つの核酸、iii）少なくとも1つの機能性ペプチド、iv）グルタチオン、v）デキストラン、vi）マンナン、vii）トレハロース、viii）フレーバーヌクレオチド、ix）ビタミンB、x）ビオチン、x）少なくとも1つの揮発性芳香族化合物、xi）カルシウム、xii）リン、xiii）亜鉛、xiv）鉄、 xv）クロム、xvi）カリウム、xvii）コバルト、xviii）マンガン、xix）ストロンチウム、xx）マグネシウム、およびxxi）それらの誘導体。
【００２１】
本発明の別の実施形態では、ミネラルエリキシルの少なくとも1つの成分は以下のグループから選択される： ニトリロ三酢酸、MgSO4、MnSO4、NaCl、FeSO4、CoSO4、CaCl2、ZnSO4、CuSO4、KAl(SO4)2、H3BO3、Na2MoO4、NiCl2、Na2SeO3、およびそれらの誘導体。
【００２２】
本発明の一実施形態では、予備成長、成長、または流加培地は、少なくとも1つの化合物の特定の量または濃度または数を超える量を含むまたは含まないということと、予備成長、成長、または流加培地は、少なくとも1つの化合物の特定の量または濃度または数以下を含むと言うこととは同等である。
【００２３】
本発明の一実施形態では、、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地のグループ中で増殖されまたは成長するナノ粒子産生細胞は、好ましくは予備成長およびまたは成長培地で増殖または成長し、流加培地ではそうしない。
【００２４】
本発明の一実施形態では、成長およびまたは予備成長培地は、次の成長およびまたは予備成長培地のいずれかを含む：ｉ）流加培地が成長に挿入される前のおよびまたは存在しない予備成長培地及びまたは成長培地、またはｉｉ）流加培地が存在し挿入された後の成長培地およびまたは予備成長培地。
【００２５】
本発明の一実施形態では、流加培地は、流加培地または成長およびまたは予備成長培地に挿入される前の培地である。
【００２６】
本発明の別の実施形態では、流加培地は、成長およびまたは予備成長培地に挿入された後の予備成長およびまたは成長培地の一部である。
【００２７】
本発明の一実施形態では、パラメータＣＦＥＧＳ、ＣＦｅＰＧＳ、ＣＣＧＳ、ＣＣＰＧＳ、ＣＮＧＳ、ＣＮＰＧＳ、ΔｐＨＧＳ、およびまたはΔｐＨＰＧＳは、予備成長、成長およびまたは流加培地に存在するか、または測定される。
【００２８】
本発明の一実施形態では、パラメータQGGS、QGPGS、NSSGS、およびNSSPGS、ならびに成長培地に流加培地が補充される状況は、 予備成長培地にはそのような培地が補充されないが、予備成長およびまたは成長段階の最中、開始時、または終了時に発生する。
【００２９】
本発明の一実施形態では、その誘導体は、以下のグループから選択される少なくとも1つの第1化合物の誘導体である：i）少なくとも1つの第1化合物と少なくとも1つの異なる原子または官能基が異なる第2化合物であり、選択的に少なくとも1つの第1化合物の変換した後の少なくとも1つの第1化合物に由来し、選択的に少なくとも1つの第1化合物と共通の少なくとも1つの原子または官能基を共通に持つ、ii）少なくとも1つの第1の化合物の非水和形態、iii）少なくとも1つの第1化合物の水和形態、iv）少なくとも1つの第1化合物の還元形、v）少なくとも1つの第1化合物の酸化形、vi）少なくとも1つの第1化合物の酸性形、vii）少なくとも1つの第1化合物の基本形態、viii）少なくとも1つの第1化合物の結晶形または固体形態、ix）少なくとも1つの第1化合物の可溶性または可溶化形態、およびx）少なくとも1つの第1化合物の塩。
【００３０】
本発明は、本発明による方法に関し、ここで、成長ステップは、以下からなる群から選択される少なくとも１つの特性により、予備成長ステップと異なる：
i）    CFeGS / CFePGSの比が10-5、10-3、1、10、103、または105よりも大きい。ここで、CFeGSおよびCFePGSは、それぞれ成長培地および予備成長培地の鉄または鉄源の濃度である。
ii）CCGS / CCPGSの比が10-5、10-3、1、10、103、または105よりも大きい。ここで、CCGSおよびCCPGSは、それぞれ成長培地および予備成長培地の炭素または炭素源の濃度である。
iii）CNGS/CNPGSの比が10-5、10-3、1、10、103、または105よりも大きい。ここで、CNGS および CNPGSは、それぞれ成長培地および予備成長培地の窒素または窒素源の濃度である。
iv）DpHGS/DpHPGSの比が1010、105、103、102、1、0.5、または0.1以下である。ここで、DpHGS および DpHPGSは、それぞれ成長培地および予備成長培地のpH変動である。
v）QGGS / QGPGSの比率で1010、105、103、102、1、0.5、または0.1以下であるもの、QGGS および QGPGSは、それぞれ、成長培地および予備成長培地に持ち込まれたまたは泡立ったガス、酸素、または空気の量である。
vi）NSSGS/NSSPGSの比率で10-5、10-3、1、10、103、または105よりも大きいもの。ここで、NSSGS および NSSPGSは、それぞれ成長ステップのサブステップの数と、予備成長ステップのサブステップの数、ここでナノ粒子産生細胞の第1のサブステップから、優先的に第1の量中でのナノ粒子産生細胞の成長に関連して、第2のサブステップへ、優先的に第２の量中でのナノ粒子産生細胞の成長に関連して、の移動によって2つのサブステップは互いに分離されている、
vii）成長培地には流加培地が補充されるが、予備成長培地にはそのような培地は補充されない。
【００３１】
本発明は、本発明による方法に関し、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地は、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地のキログラムまたはリットル当たり次の各々の量以下を含む：
i）質量または体積で103％、または質量または体積で1％、または質量または体積で10-2％、または質量または体積で5.10-3％、または103グラム、または102グラム、または10グラム、または 1010mL、または105mL、または103mL、または10mL、または5mL、または1mL、または0.5mL、または10-5mL、または103mol、または10mol、または1mol、または10-5mol 、または10-8 mol、または10-9 mol、または10-10 molの次のグループから選択されたWolfのビタミンまたはビタミン溶液、または化学化合物：葉酸、葉酸、ピリドキシン、塩酸ピリドキシン、ピリドキサミン、ピリドキサール、リボフラビン、ビオチン、チアミン、チアミンHCl、ニコチン酸、パントテン酸、パントテン酸カルシウム、イノシトール、p-アミノ安息香酸、アミノ安息香酸、チオン酸、オールトランス- レチノール、レチナール、オールトランス-β-カロテン、ナイアシン、ナイアシンアミド、ニコチンアミド、リボシド、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、アデノシルコバラミン、アスコルビン酸、コレカルシフェロール、エルコカルシフェロン、トコフェノロール、トコフェノロール、トコフェノロール、トコフェノロール、トコフェノロール、トコフェノロール、トコフェノロール ビタミンA、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB5、ビタミンB6、ビタミンB7、ビタミンB9、ビタミンB12、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンD2、ビタミンD3、ビタミンE、ビタミンK、ビタミンVi  AからZまでの任意の文字であり、iは1から100までの任意の整数、およびその誘導体、
ii）
iii） 1、5、6、10または20種類の以下のグループから選択されたWolfのビタミンまたはビタミン溶液 :  葉酸、葉酸塩、ピリドキシン、ピリドキシンHCl、ピリドキサミン、ピリドキサール、、リボフラビン、ビオチン、チアミン、チアミンHCl、ニコチン酸、パントテン酸、パントテン酸カルシウム、ビタミンB12、アミノ安息香酸、イノシトール、p-アミノ安息香酸、ピリドキシンHCl、チオン酸、オールトランスレチノール、レチナール、オールトランスベータカロチン、ナイアシン、ナイアシンアミド、ニコチンアミド、リボシド、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、メチルコバラミン、アデノシルコバラミン、アスコルビン酸、コレカルシフェロール、トルコフェロール、エルゴカルコフェロール、エルゴカルコフェロール、エルゴカルコフェロール、エルゴカルコ 、フィロキノン、メナキノン、ビタミンA、ビタミンB1、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB5、ビタミンB6、ビタミンB7、ビタミンB9、ビタミンB12、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンD2、ビタミンD3、ビタミンE、ビタミンK、 Vi、ここで、VはA〜Zの任意の文字、iは1〜100の整数である、およびそれらの誘導体、
iv）以下のグループから選択された1 mLまたは10-7 molのWolfの鉱物または鉱物エリキシルまたは微量元素：ニトリロ三酢酸、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄、硫酸第一鉄七水和物、硝酸コバルト、塩化カルシウム、 硫酸亜鉛、硫酸亜鉛七水和物、硫酸銅、硫酸銅水和物、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムカリウム十二水和物、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム二水和物、塩化ニッケル、EDTA、およびそれらの誘導体、
v）質量または体積103％、または質量または体積10％、または質量または体積1％、または質量または体積10-2％、または質量または体積10-5％、または103グラム、または 10グラム、または1グラム、または105mL、または103mL、または10mL、または1mL、または10-3mL、または103mol、または10mol、または1mol、または10-3mol、または10- 7モル、または10-8モル、または10-10モルのミネラル、優先的にはウルフのミネラルまたはミネラルエリキシル、または化学成分で以下からなるグループから選択されるもの： ニトリロ三酢酸、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸マンガン、硫酸第一鉄、硫酸第一鉄七水和物、硝酸コバルト、塩化カルシウム、硫酸亜鉛、硫酸亜鉛七水和物、硫酸銅、硫酸銅水和物、硫酸アルミニウムカリウム、アルミニウムカリウム 硫酸塩12水和物、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム二水和物、塩化ニッケル、EDTA、MgSO4、MnSO4、NaCl、FeSO4、CoSO4、CaCl2、ZnSO4、CuSO4、KAl(SO4)2、H3BO3、Na2MoO4、NiCl2、Na2SeO3、およびその誘導体、
vi）ミネラル、優先的にはWolfのミネラルまたはミネラルエリキシルの1、3、7、または10種類の成分、または以下からなるグループから選択された化学成分：ニトリロ三酢酸、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、 硫酸マンガン、硫酸第一鉄、硫酸第一鉄、硫酸第一鉄七水和物、硝酸コバルト、塩化カルシウム、硫酸亜鉛、硫酸亜鉛七水和物、硫酸銅、硫酸銅水和物、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムカリウム十二水和物、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム 、タングステン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム二水和物、塩化ニッケル、EDTA、MgSO4、MnSO4、NaCl、FeSO4、CoSO4、CaCl2、ZnSO4、CuSO4、KAl(SO4)2、H3BO3、Na2MoO4、NiCl2、Na2SeO3、およびそれらの誘導体、
vii）10-50グラム、10-10グラム、10-5グラム、0.005グラム、10-1グラム、1グラム、10グラムまたは105グラムまたは10-50 M、10-8 M、10-3 M、1M、103M の酵母エキスの少なくとも1つの成分または酵母エキスに由来する少なくとも1つの成分で、以下の化合物のグループから選択されるもの：少なくとも1つのタンパク質、少なくとも1つの核酸、少なくとも1つの機能性ペプチド、グルタチオン、デキストラン、マンナン、トレハロース、フレーバーヌクレオチド、ビタミンB、ビオチン、少なくとも1つの揮発性芳香族化合物、カルシウム、リン、亜鉛、鉄、クロムまたはクロミューム、カリウム、コバルト、マンガン、ストロンチウム、マグネシウム、およびそれらの誘導体 、
viii）1、2、3、5、10、15、20、または50種類の酵母エキスの成分または酵母エキス由来の成分で以下のグループから選択されるもの：少なくとも1つのタンパク質、少なくとも1つの核酸、少なくとも1つの機能性 ペプチド、グルタチオン、デキストラン、マンナン、トレハロース、フレーバーヌクレオチド、ビタミンB、ビオチン、少なくとも1つの揮発性芳香族化合物、カルシウム、リン、亜鉛、鉄、クロムまたはクロム、カリウム、コバルト、マンガン、ストロンチウム、マグネシウム、およびそれらの誘導体 、
ix）10-50グラム、10-10グラム、10-3グラム、0.01グラム、1グラム、5グラム、10グラムまたは105グラム、または10-50 M、10-20 M、10-8 M、10-3 M、10-1M、1M、10M、または103Mのペプトンの少なくとも1つの成分、または以下のグループから選択されるペプトンに由来する少なくとも1つの化合物：灰、タンパク質、ショ糖、スタキオース、ラフィノース、中性洗剤繊維、エーテル抽出物、およびその誘導体、
x）1、3、5、10、20、または50種類ペプトンの成分、または以下のグループから選択されたペプトンに由来する化合物：灰、タンパク質、ショ糖、スタキオース、ラフィノース、中性洗剤繊維、エーテル抽出物、およびそれらの誘導体、
xi）10-50、10-10、10-5、0.001、10-1、1、10、103または105グラムのEDTA、
xii）10-50、10-10、10-5、0.001、10-1、1、10、103または105グラムの少なくとも1つのアミノ酸、
xiii）1、3、5、10、20、または50種類のアミノ酸、
xiv）1、5、7、12、15、20 または 50種類のCMR、毒性または細胞毒性化合物で以下のグループから選択されるもの：ニトリロトリ酢酸、硫酸マンガン、硝酸コバルト、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸アルミニウムカリウム、ホウ酸、ナトリウム モリブデン酸塩、亜セレン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、塩化ニッケル、およびそれらの誘導体、
xv）１，２，５，10，50または100種類の以下のグループから選択される元素または重金属：カドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、 ニッケル、リチウム、アンチモン、および銅、
xvi）10-50、10-10、10-5、10-1、1、10、103、または105グラムの毒性または細胞毒性化合物で以下のグループから選択されるもの：ニトリロ三酢酸、硫酸マンガン、硝酸コバルト、 硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸アルミニウムカリウム、ホウ酸、モリブデン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、塩化ニッケル、およびまたはそれらの誘導体、およびまたは、
xvii）10-50、10-10、10-5、0.01、10-1、1、10、103または105グラムのペプトン。
【００３２】
本発明はまた、本発明による方法に関し、ここで、優先的には予備成長およびまたは成長培地の少なくとも１つの化合物の濃度は、濃度Ｃ２または濃度Ｃｔｏｔａｌ ＝ Ｃ１ ＋ Ｃ２であり、ここで、
- C1は、ナノ粒子産生細胞によって消費されない予備成長およびまたは成長培地の少なくとも1つの化合物の濃度であり、
- C2は、ナノ粒子産生細胞によって消費される予備成長およびまたは成長培地の少なくとも1つの化合物の濃度であり、
- C1およびまたはC2は、遠心分離または接線ろ過など、ナノ粒子産生細胞によって消費されない少なくとも1つの化合物から、ナノ粒子産生細胞によって消費される少なくとも1つの化合物を分離できる方法を使用して優先的に測定または分離または区別され、さらに、
- C1およびまたはC2は、予備成長およびまたは成長ステップの開始時、最中、または終了時に優先的に測定または検討される。
【００３３】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞によって消費される予備成長およびまたは成長培地の1つの化合物は、ナノ粒子産生細胞がそのような化合物を消費する場合、ナノ粒子細胞に含まれる1つの化合物である。
【００３４】
本発明の別の実施形態において、ナノ粒子産生細胞によって消費されない予備成長およびまたは成長培地の1つの化合物は、優先的にナノ粒子産生細胞がそのようなものを消費しない場合、ナノ粒子細胞の外側に含まれる1つの化合物である。
【００３５】
一実施形態では、消費化合物と非消費化合物を分離する方法が使用される。この方法は、そのようなバクテリアを含まない予備成長およびまたは成長培地からバクテリア全体を優先的に分離する。この方法は、遠心分離またはろ過、優先的には接線ろ過、または予備成長およびまたは成長培地に含まれる低サイズおよびまたは低重量の要素と、全バクテリア中の大きなサイズおよびまたは大きな重量の要素との間の分離に基づいて、液体培地からバクテリア全体を分離できる方法である。
【００３６】
本発明はまた本発明による方法に関し、そこでは流加培地に含まれる少なくとも１つの化合物、好ましくは鉄、鉄源、炭素、炭素源、窒素、およびまたは窒素源の濃度が、10-6 μM、1 μM、およびまたは106 μMより大きい。
【００３７】
本発明はまた、本発明による方法に関し、ここで、予備成長、成長、およびまたは流加培地は、優先的にナノ粒子産生細胞の成長 /またはナノ粒子の生産に影響を与える濃度で、以下のグループから選択される少なくとも1つの成分を含まず、そしてまたは予備成長、成長、およびまたは流加培地は以下のグループから選択される少なくとも1つの成分が含まれていない：
1）WolfのビタミンまたはWolfのビタミンの種々の成分の総数の半分以上を含む媒体、2）Wolfのビタミンの1つの成分、3）葉酸、4）ピリドキシン、5）リボフラビン、6）ビオチン、7）チアミン、8）ニコチン酸、9）パントテン酸、10）ビタミンB12、11）アミノ安息香酸、12）チオ酸、13）Wolfの鉱物またはWolfの鉱物の異なる成分の総数の半分以上を含む培地、14）ニトリロ三酢酸、15）硫酸マグネシウム、16）塩化ナトリウム、 17）硫酸マンガン、18）硫酸第一鉄７水和物、19）硝酸コバルト、20）塩化カルシウム、21）硫酸亜鉛七水和物、22）硫酸銅水和物、23）硫酸アルミニウム１２水和物、24）ホウ酸、25）モリブデン酸ナトリウム、 26）亜セレン酸ナトリウム、27）タングステン酸ナトリウム２水和物、28）酵母エキスまたは酵母エキスの異なる成分の総数の半分以上を含む培地、29）酵母エキスまたは酵母エキスと同等物のさまざまな成分の総数の半分以上を含む培地、30）酵母エキスに由来する、または酵母エキスに含まれる1、2または5個のタンパク質、31）酵母抽出物に由来または含まれる1、2または5個の核酸、32）酵母抽出物に由来または含まれる1、2または5個のペプチドまたは機能性ペプチド、33）グルタチオン、34 ）デキストラン、35）マンナン、36）トレハロース、37）酵母エキスに由来するまたは含まれるフレーバーヌクレオチド、38）ビタミンB、39）ビオチン、40）酵母エキス由来またはそれに含まれる1、2または5の揮発性芳香族化合物、41）クロム、42）コバルト、43）ストロンチウム、44）塩化ニッケル、45）または鉱物エリキシルの異なる成分の総数の半分以上を含む媒体、46）MnSO4、47）NaCl、48）FeSO4、 49）CoSO4、50）CaCl2、51）ZnSO4、52）CuSO4、53）KAl(SO4)2、54）H3BO3、55）Na2MoO4、56）NiCl2、57）Na2SeO3、58）ペプトンまたはペプトンの種々の成分の総数の半分以上を含む媒体、59）ペプトンの1つの成分、60）ペプトンに由来する、またはペプトンに含まれる1、2または5のタンパク質、61）ペプトンに由来または含まれる糖、62）ペプトンに由来または含まれる1つのアミノ酸、63）ペプトンに由来または含まれる灰、64）ペプトンに由来または含まれる1つの繊維、65）1つのCMR剤、 66）ホウ酸、67）1つのアミノ酸、68）アラニン、69）アルギニン、70）アスパラギン、71）アスパラギン酸、72）システイン、73）グルタミン、74）グルタミン酸、75）グリシン、76）ヒスチジン、77 ）イソロイシン、78）ロイシン、79）リジン、80）メチオニン、81）フェニルアラニン、82）プロリン、83）セリン、84）トレオニン、85）トリプトファン、86）チロシン、87）バリン、88）1つの細胞毒性または毒性化合物、89）硫酸マンガン、90）硫酸銅、91）アルミニウムカリウム 硫酸塩、92）ホウ酸、93）タングステン酸ナトリウム、94）鉄とは異なる重金属、95）チタン、96）バナジウム、97）マンガン、98）ニッケル、99）銅、100）亜鉛、101）ガリウム、102）ゲルマニウム、103）ヒ素、104）ジルコニウム、105）ニオブ、106）モリブデン、107）テクネチウム、108）ルテニウム、109）ロジウム、110）パラジウム、111）銀、112）カドミウム、113 ）インジウム、114）スズ、115）テルル、116）ルテチウム、117）ハフニウム、118）タンタル、119）タングステン、120）レニウム、121）オスミウム、122）イリジウム、123）プラチナ、125）金、126）水銀、127）タリウム、128）鉛、129）ビスマス��130）ポロニウム、131）アスタチン、132）ランタン、133）セリウム、134） プラセオジム、135）ネオジム、136）プロメチウム、137）サマリウム、138）ユーロピウム、139）ガドリニウム、140）テルビウム、141）ジスプロシウム、142）ホルミウム、143）エルビウム、144）ツリウム、145）イッテルビウム、146）アクチニウム、 147）トリウム、148）プロタクチニウム、149）ウラン、150）ネプツニウム、151）プルトニウム、152）アメリシウム、153）キュリウム、154）バーケリウム、155）カリホルニウム、156）アインステイニウム、157）フェルミウム、158）ノベリウム、159） ラジウム、160）ローレンシウム、161）ラザホージウム、162）ドブニウム、163）シーボーギウム、164）ボーリウム、165）ハッシウム、166）マイトネリウム、167）ダルムスタチウム、168）レントゲニウム、169）コペルニシウム、170）元素113-118、171）ヘリウム、172）リチウム、173）ベリリウム、174）ボア、175）フッ素、176）アルミニウム、177）シリコン、178）アルゴン、179）スカンジウム、180）クロム、181）ニッケル、182）銅、183）セレン、184）ブロム、185 ）クリプトン、186）ルビジウム、187）イットリウム、188）Sn、189）アンチモン、190）ヨウ素、91）キセノン、192）セシウム、193）バリウム、194）ルテシウム、195）アステート、196）ラドン、197）フランシウム、198）メンデレビウム、199）マウント、200）ウンウンビウム、201）ウンウントリウム、202）ウンウンクアジウム、203） ウンウンペンチウム、204）ウンウンヘキシウム、205）ウンウンセプチウム、206）ウンウンオクチウム、207）これらの化合物、1）から206）の塩、および208）これらの誘導体。
【００３８】
本発明はまた、ナノ粒子産生細胞の成長およびまたはナノ粒子産生に影響を与える化合物の濃度が次である予備成長、成長およびまたは流加培地の濃度である本発明による方法に関する：i）1ピコモル、1マイクロモル、1ミリモル、10-50 M、10-10または10-5 Mより大きい、またはii）予備成長、成長およびまたは流加培地1リットルあたり10-50、10-10、10-5または10-3グラムより大きい。
【００３９】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞の成長およびまたはナノ粒子産生に影響を与える化合物の濃度は、次のような予備成長、成長およびまたは流加培地の濃度である： 予備成長、成長、およびまたは流加培地1リットルあたりi）1050、1、10-5、10-6、または10-9 M以下、またはii）1010、1、10-10、または10-20グラム以下。
【００４０】
本発明は、成長培地およびまたは流加培地に流加培地が補充されかつ：
i）流加培地のpHは、予備成長およびまたは予備成長培地のpHより少なくとも10-5、0.1、0.5、1、2、3 または 5 pHユニットだけ低い、およびまたは
ii） a）リンまたはリン酸源、b）カリウム源、c）マグネシウム源、d）鉄源、e）ビタミン源、f）カルシウム源、 g)  KH2PO4、h) MgSO4、i) FeCl3、j) チアミン、k)CaCl2、および l) それらの誘導体からなるグループから優先的に選択される少なくとも1つの化学元素の濃度は、流加培地では予備成長およびまたは成長培地におけるより、優先的に少なくとも10-50、10-10、0、1.1、5、10または103倍大きい。
【００４１】
一実施形態では、上記の条件ｉ）およびｉｉ）は、少なくとも１つの化合物のpHおよび濃度を以下の時に考慮することにより検証される：
i）流加培地が流加培地として予備成長およびまたは成長培地に挿入される前、およびまたは
ii）流加培地が、予備成長およびまたは成長培地に挿入される前、最中、およびまたはその後。
【００４２】
本発明は、本発明による方法に関し、ここで：
-ナノ粒子産生細胞が走磁性バクテリアである、およびまたは
-ナノ粒子はマグネトソームである。
【００４３】
本発明の別の実施形態では、ナノ粒子は、高純度のナノ粒子産生細胞である。
【００４４】
本発明の別の実施形態では、ナノ粒子は、高純度ナノ粒子、優先的には高純度酸化鉄ベースのナノ粒子であり、高純度ナノ粒子は、好ましくは次のグループから選択される元素の質量数で、100、99、90、50、20、10、1、または0.1％以下を含むナノ粒子であり： カドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、銅、および誘導体、ここで、高純度酸化鉄ベースのナノ粒子は、 鉄およびまたは酸素およびまたは酸化鉄を原子数または質量で1、50、90、93または99％以上含む。
【００４５】
本発明はまた本発明による方法にも関し、そこでは予備成長およびまたは成長培地が、カルシウムの供給源、炭素の供給源、窒素の供給源、リン酸塩またはリンの供給源、硫黄の供給源、鉄の供給源、ビタミンの供給源、およびカルシウムの供給源を含み、かつ：
- 予備成長およびまたは成長培地中の炭素の供給源の濃度は、少なくとも予備成長およびまたは成長培地中のリン酸またはリンの供給源、硫黄の供給源、ビタミンの供給源、およびカルシウムの供給源からなる群から選択される1つの成分より、少なくとも0、0.5、1.1、2、4、10または100倍以上の濃度であり、およびまたは
- 予備成長およびまたは成長培地中の窒素源の濃度は、少なくとも予備成長およびまたは成長培地中のリン酸塩またはリン源、硫黄源、ビタミン源、およびカルシウム源からなる群から選択される1つの化合物より少なくとも0、0.5、1.1、2、4、10または100倍以上の濃度である。
【００４６】
本発明はまた、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地中に、ナノ粒子産生細胞のバンクを保存、増殖、調製または挿入するステップをさらに含む本発明による方法に関し、そこで、このようなバンクは、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地における同じ成分の優先的に成分の数において少なくとも10-50、10-10、10-1、0、1、5、10、50、70、90または99％を優先的に含むバンクメディアで優先的に保存、増殖、準備され、優先的に予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地のものとは異なるビタミン、ミネラル、キレート剤、ショ糖、およびまたは凍結保護剤などの少なくとも1つの化合物は：
i）予備成長およびまたは成長中およびまたは または、流加培地に存在しない、または
ii）バンクメディアにおけるより予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地における濃度が低い。
【００４７】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、ナノ粒子産生細胞のマスター、ワーキングまたはリサーチ細胞バンクである。場合によっては、そのようなバンクは、優先的に、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地1ミリリットルまたはリットル当たり1、10、103、1010または1020個を超えるナノ粒子産生細胞を含む。いくつかの他の場合、そのようなバンクは、10100、1050、1020、1010、または103個以下のナノ粒子産生細胞を含む。
【００４８】
本発明の別の実施形態では、細胞バンクは、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地でナノ粒子産生細胞の増殖を開始するために使用される少なくとも１つの細胞の集合体である。
【００４９】
本発明の一実施形態では、細胞バンクは、予備成長およびまたは成長ステップの条件と同じまたは同様の条件で調製される。
【００５０】
本発明の別の実施形態において、細胞バンクは、優先的にはバンク媒体の体積に対して相対的に、酸素の５０、１０または１％以下の低酸素濃度を含むバンク媒体にガスをバブリングまたは挿入することにより調製される。
【００５１】
本発明はさらに、成長ステップの終わりに得られたナノ粒子産生細胞から分離されたナノ粒子から開始し、高純度酸化鉄ベースのナノ粒子を得るための精製ステップを含む本発明による方法に関する。精製ステップは、優先的には成長ステップで生成される本発明によるナノ粒子の温度が上昇する少なくとも1つの加熱ステップを使用して、成長ステップで生成されるナノ粒子から少なくとも1つの不純物を除去することを優先的に含む。その加熱ステップのナノ粒子の温度は温度Tiまで上がり、1秒から20年の間に含まれる加熱時間thiの間Tiに維持される。ここでTiは50℃から700℃の間に含まれる。
【００５２】
本発明の一実施形態では、Ｔiは‐273、‐100、‐50、0、1、10、20、50、100、200、500、700または10３℃よりも高い。
【００５３】
本発明の一実施形態では、Ｔiは10２０、10１０、10５、10３、100、50、10、0、‐10または‐50℃より低い。
【００５４】
本発明のさらに別の実施形態では、Ｔｉは10〜10５、50〜10４、100〜10３、150〜700、または200〜500℃である。
【００５５】
本発明の一実施形態では、thiは10−30、10−10、10−8、10−１、1、10、10２、10３、10５または1010秒よりも長い。
【００５６】
本発明の別の実施形態では、thiｔｈｉは１０１００、１０５０、１０１０、１０５、１０３、１０、１０、５、２または１秒よりも短い。
【００５７】
本発明のさらに別の実施形態では、thiは10-5秒から1年、1秒から20年、1秒から1年、1秒から1ヶ月、1秒から1週間、1秒から1日、または 1秒から1時間の間である。
【００５８】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子が加熱するために使用される装置に挿入されるとき、優先的にナノ粒子の温度に優先的に対応する初期温度から優先的にTiまで温度を上げる時間は、優先的に thiよりも1.1、5、10、または103の係数で短い。
【００５９】
本発明の別の実施形態では、温度をＴｉまで上昇させる時間は、ｔｈｉよりも少なくとも１．１、５、１０または１０３倍長い。
【００６０】
本発明の一実施形態では、酸化鉄ベースのナノ粒子は、この割合でコーティングまたは賦形剤材料を考慮せずに、優先的に酸化鉄の質量で1％、50％、70％、90％または99％を超えるナノ粒子である。
【００６１】
本発明はまた、本発明による方法によって優先的に得られる高純度のナノ粒子産生細胞にも関し、高純度のナノ粒子産生細胞は次を含む：
i)MFeC / MMC比に基づいて鉄を10-10、1、5、10、50、75、80、90、95、99または99.9％より多く含む。ここで、MFeCは高純度ナノ粒子産生細胞内の鉄の質量であり、MMCは高純度の細胞を生産するナノ粒子産生細胞内の鉄および鉄以外の金属または半金属の質量である。および、
ii)        M1 / M2の比率に基づいた 以下のグループから選択された少なくとも1つの鉄以外の金属、なおここでM1  は高純度酸化鉄ナノ粒子中の 以下のグループから選択された少なくとも1つの金属の質量、およびM2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、テクネチウム、インジウム、 セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、および、
iii)                     M3 / M4の比率に基づいた、水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素からなるグループから選択された少なくとも1つの非金属、なお、ここでM3は上記グループで選択された少なくとも1つの他の非金属の質量、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての化学元素の質量である。
【００６２】
本発明はまた、以下のグループから選択される少なくとも1つの重金属の1、10 -3、10 -6または10-9％以下を含む純粋な培地で、ナノ粒子産生細胞を増殖または成長させることにより得られる高純度ナノ粒子産生細胞または高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関する： 
コバルト、マンガン、亜鉛、ニッケル、銀、アルミニウム、ヒ素、バリウム、カドミウム、クロム、銅、モリブデン、鉛、アンチモン、セレン、シリカ、タイタン、タリウム、水銀、バナジウム、金、イリジウム、オスミウム、ロジウム、ルテニウム、白金、リチウム、アンチモン、スズ、タングステン、およびその誘導体。ここで、このパーセントはCFeM / CMMに基づいており、ここでCFeMは純粋な培地中の鉄の濃度であり、そしてCMMは、純粋培地中の鉄および鉄以外の金属または半金属の濃度である。
【００６３】
本発明はまた、本発明による方法によって優先的に得られる高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関し、高純度のナノ粒子産生細胞は次を含む：
i)    MFeC / MMC比に基づいて鉄を10-10、1、5、10、50、75、80、90、95、99または99.9％より多く含む。ここで、MFeCは高純度ナノ粒子産生細胞内の鉄の質量であり、MMCは高純度の細胞を生産するナノ粒子産生細胞内の鉄および鉄以外の金属または半金属の質量である。および、
ii)  M1 / M2の比率に基づいた 鉄と以下のグループから選択された少なくとも1つの鉄以外の金属、なおここでM1  は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄と 以下のグループから選択された少なくとも1つの金属の質量、およびM2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、テクネチウム、インジウム、 セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、および、
iii) M3 / M4の比率に基づいた、鉄と、水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素からなるグループから選択された少なくとも1つの非金属、なお、ここでM3は鉄と上記グループで選択された少なくとも1つの他の非金属の質量、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属化学元素の質量である。
【００６４】
本発明はまた、本発明による高純度のナノ粒子産生細胞およびまたは本発明による高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関し、ここで、高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄以外の金属またはメタロイドは、以下のグループから選択される :コバルト、マンガン、亜鉛、ニッケル、銀、アルミニウム、ヒ素、バリウム、カドミウム、クロム、銅、モリブデン酸塩、鉛、アンチモン、セレニウム 、シリカ、タイタン、タリウム、水銀、バナジウム、金、イリジウム、オスミウム、ロジウム、ルテニウム、白金、リチウム、アンチモン、スズ、タングステン、およびそれらの誘導体。
【００６５】
本発明はまた、高純度酸化鉄ベースのナノ粒子がマグネトソームである高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関する。
【００６６】
本発明はまた高純度酸化鉄ベースのナノ粒子を含む組成物に関する。
【００６７】
本発明はまた、本発明による高純度ナノ粒子産生細胞とも呼ばれる高純度のナノ粒子産生細胞に関し、ここで、高純度ナノ粒子産生細胞は走磁性細菌である。
【００６８】
本発明はまた、高純度ナノ粒子産生細胞を含む組成物に関する。
【００６９】
本発明はまた、本発明による方法によって優先的に得られる高純度ナノ粒子産生細胞および高純度酸化鉄ナノ粒子を含む組成物に関し、ここで：
【００７０】
高純度のナノ粒子産生細胞は、以下の組成物を0、1、10、50、70、90、95、または99％以上含む：
i）MFeC / MMFe比に基づく鉄、ここでMFeCは高純度ナノ粒子産生細胞の鉄の質量、MMCは高純度ナノ粒子産生細胞の鉄と鉄以外の金属または半金属の質量である、
ii）M1 / M2の比率に基づく鉄および以下のグループから選択される少なくとも1つの鉄以外の金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、 テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1はの高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄と少なくとも1つの鉄以外の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である、 および/または
iii）M3 / M4比に基づく鉄、および水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素からなるグループから選択される少なくとも1つの非金属 、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループで選択された少なくとも1つの他の非金属の質量であり、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属の質量である。
【００７１】
本発明はまた、高純度のナノ粒子産生細胞およびまたは高純度の酸化鉄ナノ粒子を含む組成物に関する。そこで、
高純度のナノ粒子生成細胞は、0、10-50、10-10、10-5、10-2、1、5、10、25、50、75、90、95、99 %の次の物を含む：
i）MFeC / MMC比に基づく鉄。ここで、MFeCは高純度のナノ粒子産生細胞における鉄の質量であり、MMCは高純度のナノ粒子産生細胞における鉄と金属以外の金属または半金属の質量である。
ii）M1 / M2の比率に基づく鉄、および以下のグループから選択される鉄意外の金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、 テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループで選択される少なくとも1つの鉄以外の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である、およびまたは、
iii）M3 / M4比に基づく鉄および以下からなる群から選択される少なくとも1つの非金属：水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、 酸素、なおここでM3は鉄および上記グループで選択される少なくとも1つの他の非金属の高純度酸化鉄ナノ粒子中の質量であり、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属元素の質量である。そして、
【００７２】
高純度酸化鉄ベースのナノ粒子は、0、10-50、10-10、10-5、10-3、10-1、0、1、5、10、25、50、75、93、95、99、または99.9％以上に以下を含む：
i）MFeN / MMNの比に基づく鉄、ここで、MFeNは高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄の質量であり、MMNは高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および鉄以外の金属または半金属の質量である。
ii）M1 / M2の比率の比に基づく鉄、および以下のグループで選択される少なくとも1つの鉄以外の金属：ナトリウム、マグネシウム、アルミニウム、カリウム、カルシウム、スカンジウム、チタン、クロム、マンガン、亜鉛、ガリウム、ストロンチウム、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、 テクネチウム、インジウム、セシウム、バリウム、ランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、ルテチウム、ハフニウム、レニウム、およびタングステン酸塩、なおここで、M1は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループで選択される少なくとも1つの鉄以外の金属の質量であり、M2は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての金属の質量である。 およびまたは 
iii）M3 / M4比に基づく鉄、および水素、炭素、窒素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、ヘリウム、ネオン、アルゴン、クリプトン、キセノン、ラドン、および酸素からなる群から選択される少なくとも1つの非金属 、なおここで、M3は高純度酸化鉄ナノ粒子中の鉄および上記のグループで選択される少なくとも1つの非金属の質量であり、M4は高純度酸化鉄ナノ粒子に含まれるすべての非金属の質量である。
【００７３】
ここで、高純度およびまたは高純度酸化鉄系ナノ粒子のナノ粒子産生細胞は、少なくとも1つの金属または非金属を実質的に含まないまたは、10M未満、または1M、または10-1M、または10-3M、または10-6M、または1ナノモルの少なくとも1つの金属または非金属を含み、その少なくとも1つの金属または非金属は以下のグループから選択される 成長培地でナノ粒子産生細胞を培養することにより優先的に得られる：
1）カドミウム、2）鉛、3）ヒ素、4）水銀、5）コバルト、6）バナジウム、7）ニッケル、8）リチウム、9）アンチモン、10）銅、11）バリウム、12）モリブデン酸塩、13）セレン、14）バリウム、15）クロム、16） ストロンチウム、17）放射性化学元素、18）ベリリウム、19）ルビジウム、20）ルテニウム、21）ロジウム、22）パラジウム、23）プロメチウム、24）イッテルビウム、25）タンタル、26）オスミウム、27）イリジウム、28 ）ビスマス、29）ポロニウム、30）フランシウム、31）ラジウム、32）アクチニウム、33）トリウム、34）プロタクチニウム、35）ウラン、36）ネプツニウム、37）プルトニウム、38）アメリシウム、39）キュリウム、40）ベルケリウム 、41）カリホルニウム、アインステイニウム、42）フェルミウム、43）メンデレビウム、44）ノーベリウム、45）ローレンシウム、46）ラザホージウム、47）ダブニウム、48）シーボーギウム、49）ボーリウム、50）ハッシウム、51）マイトネリウム、52）ダルムスタチウム 、53）レントゲン、54）コペルニシウム、55）ニホニウム、56）フレロビウム、57）モスコビウム、58）リバモリウム、59）アスタチン、60）テネシン、61）オガネソン、および62）その誘導体。
【００７４】
本発明の一実施形態において、高純度ナノ粒子産生細胞およびまたは高純度酸化鉄ベースのナノ粒子は、次の物の中でナノ粒子産生細胞を培養およびまたは増殖することにより得られる：
a）予備成長およびまたは成長培地、
およびまたは
b）優先的に以下のグループから選択される鉄以外の少なくとも1つの金属または半金属を、含まないまたはナノ粒子産生細胞の成長に影響を与える濃度で含まない培地：コバルト、マンガン、亜鉛、ニッケル、 銀、アルミニウム、ヒ素、バリウム、カドミウム、クロム、銅、モリブデン、鉛、アンチモン、セレン、シリカ、タイタン、タリウム、水銀、バナジウム、金、イリジウム、オスミウム、ロジウム、ルテニウム、プラチナ、リチウム、アンチモン、スズ、 タングステンおよびその誘導体。
【００７５】
本発明はまた、本発明による高純度のナノ粒子産生細胞、およびまたは本発明による高純度のナノ粒子産生細胞から優先的に得られる高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関し、ここで：
-高純度のナノ粒子産生細胞は、走磁性細菌/細菌であり、およびまたは
-高純度酸化鉄ナノ粒子はマグネトソームである。
【００７６】
本発明はまた、ナノ粒子産生細胞を含む組成物、医療機器、薬物、製剤、懸濁液、化粧品組成物、植物組成物、生物学的組成物、鉱物組成物、およびまたはナノ粒子組成物であって、本発明による高純度ナノ粒子産生細胞、およびまたは本発明による高純度酸化鉄ナノ粒子によるものに関する。
【００７７】
本発明はまた、ＭＦｅＣ ／ ＭＭＣ比に基づいて１、２５、５０、７５、９０または９９％を超える鉄を含む高純度のナノ粒子産生細胞に関し、ここで、ＭＦｅＣはナノ粒子産生細胞中の鉄の質量、MMCは高純度ナノ粒子産生細胞中の鉄および鉄以外の金属または半金属の質量であり、およびまたは高純度の酸化鉄ベースのナノ粒子はMFeN / MMNの比率に基づいて1、10、50、75、93または99％を超える鉄を含み、ここでMFeNは高純度酸化鉄ナノ粒子の鉄の質量であり、MMNは高純度の酸化鉄ベースのナノ粒子中の鉄および鉄以外の金属または半金属の質量であり、高純度ナノ粒子産生細胞およびまたは高純度の酸化鉄ベースのナノ粒子は、実質的に次のグループから選択された金属を含まない成長培地でナノ粒子産生細胞を培養することにより得られる：カドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、銅。
【００７８】
本明細書における「実質的に含まない」という用語は、培地に意図的に添加されないが、不純物として存在する可能性がある物質を指す。
【００７９】
場合によっては、MFeN / MMNおよびまたはMFeN / MMNは100、99、95、90、50、25、10、5 または 1%.より小さいことがある。本発明はまた、予備成長段階で増殖されたナノ粒子産生細胞を続く成長ステップ使用して高純度酸化鉄ナノ粒子を産生する本発明による方法に関し、ここで：
a）予備成長のステップは、次の特性の少なくとも1つによって特徴付けられる：
ａ１）少なくとも１つのサブステップｉを含み、その間、ナノ粒子産生細胞は、予備成長培地を含む体積ＶＰＧＳiで増殖される、
a2）VPGSiは、サブステップiの開始と終了の間で1、10、50、80、90、または99％を超えて変化しない、
a3）iは優先的に1〜5、1〜10、または1〜1000で構成される、
a4）VPGSi + 1 / VPGSiは1.001〜1000または1.1〜50で構成される、
a5）各サブステップiは、1秒から1年、1分から1か月、10分から1週間、または60分から3日間の期間にわたって続く、
a6）少なくとも1つのサブステップiが1秒または1時間以上続く、
a7）少なくとも1つのサブステップの予備成長培地の温度は、10〜60℃、20〜50℃、または30〜40℃で構成される、
a8）予備成長の培地の酸素または空気または圧縮空気の濃度が次のように低下する：
―次の各値から：a8i）少なくとも1つのサブステップiの開始時に、50 mbarより大きく、最も210 mbarに等しい酸素、空気、または圧縮空気の分圧、またはa8ii）酸素または空気 または、酸素、空気、または圧縮空気が占める飽和予備成長媒体の最大容積に対する容積の酸素、空気、または圧縮空気の割合が、少なくとも1つのサブステップiの開始時に25〜100％の割合に等しい、またはa8iii）少なくとも1つのサブステップiの開始時に予備成長の培地の体積に対する酸素または空気または圧縮空気の体積が5〜25％含まれる、
-次の各値まで下がる：iv）少なくとも1つのサブステップiの終了時に100ミリバールより低く、最低で0ミリバールに等しい酸素、空気、または圧縮空気の分圧、またはa8v）飽和予備成長媒体に占める酸素または空気または圧縮空気の最大体積に対する酸素または空気または圧縮空気の割合が、少なくとも1つのサブステップｉの終了時に、0〜50％の割合に等しい、またはａ８ｖｉ）少なくとも１つのサブステップｉの終了時に予備成長の培地の体積に対する酸素または空気または圧縮空気の体積が０〜１０％に等しい、
a9）予備成長ステップの少なくとも1つのサブステップiでボリュームVPGSiに運ばれる酸素または空気または圧縮空気の量が好ましくは、少なくとも1つのサブステップiの全持続時間の少なくとも0、1、5、10、または50％の時間中において、毎分100リットル、1000 mLまたは100 mLの酸素または空気または圧縮空気より少ない 、。
a10）サブステップiの全体または一部の間に予備成長の培地を、毎分0から100回転または毎分0から103メートルの速度で攪拌する。この速度は、予備成長の培地が液体、気体、または固体の状態の少なくとも1つの化合物である速度である、
a11）鉄の供給源を含む増殖前培地に流加培地または増殖前培地以外の別の培地を加えないことにより、増殖前培地のpHが固定pHに維持されない、
a12）予備成長培地のpHは、少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間で、7より小さい最小値から7より大きな最大値まで10-5、10-1、0.5、または1 pH単位以上変化する。
a13）予備成長培地に105、103、102、10、または2 μM以下の鉄または鉄のソースの含む流加培地を添加することにより、予備成長培地のpHは3から11または6から8の間のpHに維持される、
a14）予備成長培地は、鉄、鉄源、炭素、炭素源、窒素、および窒素源の少なくとも1つを含み、それは少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間に、100、50、20、10、5または1％以下に変化する。
a15）予備成長培地は、予備成長培地1リットルあたり105 mM、103 mM、10 mM、2 mM以下の鉄または鉄源、または105、103、102、50、10、5、2、１、0.5 g以下の鉄または鉄源の総濃度を含む 、
a16）予備成長培地は、予備成長培地1リットルあたり10-50 Mまたは1 pMの鉄または鉄源、または0.4 ngの鉄または鉄源を超える総濃度で鉄または鉄源を含む、
a17）予備成長培地は、予備成長培地1リットルあたり2 Mまたは260 gの炭素または炭素源より少ない総濃度で炭素または炭素源を含む、
a18）予備成長培地は、予備成長培地1リットルあたり0.1 nMまたは0.1 ngを超える総濃度で炭素または炭素源を含む、
a19）予備成長培地は、予備成長培地1リットルあたり740 mMまたは40 gより低い窒素または窒素源の総濃度で窒素または窒素源を含む、
a20）予備成長培地は、予備成長培地1リットルあたり0.1 nMまたは0.1 ngより多い窒素または窒素源の総濃度で窒素または窒素源を含む。
a21）少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間にナノ粒子産生細胞によって消費される炭素または炭素源の量または濃度または割合が次の値より大きい：
‐予備成長培地1リットルあたり10-50、0.01、1または10 gの炭素または炭素源、または1 mMの炭素または炭素源、およびまたは 
‐10-10、1、50、または75％、この割合は、(QC f - QCi) / QCiに等しく,
ここでQCfとQCiは、それぞれ少なくとも1つのサブステップi成長の終わりと始まりの予備成長の培地に含まれる炭素の量である、
a22）少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間で、ナノ粒子産生細胞によって消費される窒素または窒素源の量または濃度または割合が次の値より大きい：
‐予備成長培地1リットルあたり10-50、0.001、1または10 gの窒素または窒素源、または0.1 mMの窒素または窒素源、およびまたは
‐10-10、1、50、または75％。この割合は、(QNf ‐ QNi) / QNiに等しく、QNfとQNiは、それぞれ成長の少なくとも1つのサブステップiの終わりと初めに予備成長の培地に含まれる窒素の量である。
a23）少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間にナノ粒子産生細胞によって消費される鉄または鉄源の量または濃度または割合が次の値よりも大きい：
‐予備成長培地1リットルあたり10-10、0.0001、1、10または1010 mgの鉄または鉄源、または0.5 μMの鉄または鉄源、およびまたは
‐10-10、1、20、50または75％、このパーセント値は、優先的に (QFef - QFei)/ QFeiの比に基づいており、QFefとQFeiは、それぞれ少なくとも1つのサブステップiの最後と最初の予備成長の培地に含まれる鉄の量である。
a24）少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間にナノ粒子産生細胞によって消費される炭素、炭素源、窒素、窒素源、鉄、およびまたは鉄源の量が予備成長培地の炭素、炭素源、窒素、窒素源、鉄、およびまたは鉄源の総濃度よりも少ない、
a25）予備成長培地の炭素、炭素源、窒素、窒素源、鉄、およびまたは鉄源の総濃度は、サブステップiの開始と終了の間に1、10、20、50、80、または99％を超えて変化しない。
a26）ナノ粒子産生細胞によって消費される炭素、炭素源、窒素、窒素源、鉄、およびまたは鉄源の濃度はサブステップiの始まりと終わりで1、10、20、50、80、90または99％以上増加した、
ここで、そのような条件は、以下の特性の少なくとも1つを有するナノ粒子産生細胞を優先的にもたらす：
a27）ナノ粒子産生細胞はナノ粒子を本質的に産生しないか、ナノ粒子産生細胞は予備成長培地1リットルあたり1010、105、1、10-3または10-6 mg以下のナノ粒子を産生する、ここで、この量は、少なくとも1つのサブステップiの終了時に生成されるナノ粒子の量、または少なくとも1つのサブステップiの終了時に生成されるナノ粒子の量と、 少なくとも1つのサブステップiの始まりに生成されるナノ粒子の量との間の差である。
a28）ナノ粒子産生細胞は、少なくとも1つのサブステップiの終わりに集中することなく、優先的に0から105 nm、最も優先的に565 nmで測定される光学密度をもたらし、 次のプロパティの少なくとも1つで特徴づけられる：
a28i）予備成長ステップの少なくとも1つのサブステップiの間に、10-20〜1020または0.0001〜40の光学濃度の範囲内で変化する。
a28ii）少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間で、0、0.5、1、1.1、5、10、103、または105を超える係数で増加する。この係数は、優先的に サブステップiの終わりに測定された光学密度とサブステップiの始めに測定された光学密度との間の比である。
a28iii）少なくとも1つのサブステップiの開始と終了の間で、1010、105、2000、103、102、10、5、2、または1以下の係数で増加する。
a28iv）少なくとも1つのサブステップiの終わりに、105、103、または100以下の最大値がある。
a28v）少なくとも1つのサブステップiの開始時に、0、10-50、10-10、0.0001、10-3または10-1より大きい最小値がある。
a29）ナノ粒子産生細胞は、予備成長ステップの少なくとも1つのサブステップiの間に倍加時間または2の係数で乗算する期間によって特徴付けられ、それは：
a29i）10-50、10-5、1、10、102または103分より長い、
a29ii）103、10、1または0.1ヶ月以下; およびまたは
a29iii）1秒から1か月の間、または1分から1か月の間。
ｂ）少なくとも１つの成長ステップ、好ましくは１つの成長ステップのみ、最も好ましくは予備成長ステップのサブステップiの数よりも小さい数の成長ステップで、予備成長ステップから生じたおよびまたは予備成長ステップ中に生成されたナノ粒子産生細胞を増殖することを含む成長ステップ。ここで、少なくとも1つの成長ステップは以下のグループから選択される特性で特徴付けられる：
b1）ナノ粒子産生細胞は、成長培地を含むボリュームVGSで増殖される。
b2）VGSは、予備成長ステップの少なくとも1つのサブステップiのボリュームよりも少なくとも0、1、1.1、5、10または103倍大きくなる。
b3）VGSは、VGS0 + VFBに等しい。ここで、VGS0は、成長ステップの開始時の成長培地を含む体積であり、VFBは、成長ステップ中に成長培地に添加される流加培地の体積である。
b4）VGSは、少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間で望ましくは 成長ステップ中に成長培地に流加培地を加えることにより10-3、10-1、1、5、10、25、50、または75％を超えて変化する。
ｂ５）少なくとも１つの成長ステップの開始時に成長培地を含む体積ＶＧＳ０は、少なくとも１つの成長ステップ中に成長培地に添加された流加培地の体積ＶＦＢよりも優先的に少なくとも0、1、1.1、1.5、2、5、10、または103の係数で大きい。
b6）少なくとも1つの成長ステップの期間は、1分から1か月、優先的には40時間から15日間で構成される。
b7）少なくとも1つの成長ステップの期間は、予備成長ステップの少なくとも1つのサブステップiの期間よりも優先的に少なくとも0、1、1.1、2、5、10または103倍だけ長い。
b8）成長培地の温度は、10〜60℃、20〜50℃、または30〜40℃で構成される。
b9）成長培地中の酸素または空気または圧縮空気の濃度が減少する：
―  からb9i）少なくとも1つの成長ステップの開始時に優先的に1または10 mbarを超える、最も優先的には210 mbarに等しい酸素、空気、または圧縮空気の分圧、またはb9ii）酸素または空気、または 少なくとも1つの成長ステップの開始時に、飽和成長培地の酸素、空気、または圧縮空気が占める最大体積に対する圧縮空気の体積の割合は、10〜100％の割合に優先的に等しい。または9iii）少なくとも1つの成長ステップの開始時に成長培地の体積に対する酸素または空気または圧縮空気の体積が、優先的に1から25％の間に含まれる。
―  までb1iv）少なくとも1つの成長ステップの終了時に優先的に50または500 mbar以下、最も優先的に0 mbarに等しい酸素、空気、または圧縮空気分圧、またはb9v）少なくとも1つの成長ステップの終了時に、酸素または空気 または、飽和成長培地の酸素、空気、または圧縮空気が占める最大体積に対する体積の割合は、0〜25％の割合に優先的に等しい 、またはb9vi）少なくとも1つの成長ステップの終了時に予備成長の培地の体積に対する酸素または空気または圧縮空気の体積は優先的に0〜5％の間に含まれる。
b10）成長ステップの全期間の1％の時間に、成長ステップ全体または成長ステップ全体の一部で体積VGSに運ばれる酸素または空気または圧縮空気の量が、1分あたり1、10または200 mLを超える酸素、空気または圧縮空気より大きい。
b11）成長ステップ中にボリュームVGSに運ばれる酸素または空気または圧縮空気の量が、優先的には成長ステップの開始時よりも終了時で少なくとも0、1、1.1、5、10または103倍の係数で多い。
b12）成長ステップ全体または成長ステップ全体の一部で、体積VGSに運ばれる酸素または空気または圧縮空気の量が、１分あたり10-10、10-5、1、10、または105 mLの酸素または空気または圧縮空気より多い。
b13）成長段階の全体または一部の間、成長培地は、成長培地よりも速い速度で、好ましくは毎分1、10または100回転を超える速度で、または毎分0〜103メートルの間で攪拌され 、この速度は成長培地の液体、気体、または固体状態にかかわらず、成長培地の少なくとも1つの成分の速度である。
b14）優先的に成長培地に流加培地または成長培地とは別の培地を加えることにより、成長培地のpHは増殖前培地のpHより少なく変化するか、1〜14または6.5〜7.5の固定pHに維持されるか、0.1、0.5、または10 pHユニットを超えて変化しない。
b15）増殖ステップの開始と終了の間で、成長培地のpHは、10、0.5、または0.1 pH単位以下、優先的に7.5より低い最小値から優先的に6.5より大きい最大値まで変化する。
b16）成長培地は、炭素、炭素源、窒素、窒素源、鉄、およびまたは鉄源の合計濃度が、少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間で0、10-5、1または50％以上変化する。
ｂ１７）成長培地は、成長培地１リットル当たり総濃度で１０ −５ ｍＭまたは０．１ ｍＭまたは１０ −５ ｇまたは０．０１ ｇを超える炭素または炭素源のを含む。
b18）成長培地は、成長培地1リットルあたり総濃度で103 Mまたは2 Mまたは103 gまたは180 g以下の炭素または炭素源を含む。
ｂ１９）成長培地は、成長培地１リットル当たり総濃度で１０-５０ｍＭまたは０．０１ｍＭまたは５．１０-１０ｇまたは0.00005ｇを超える窒素または窒素源を含む。
ｂ２０）成長培地は、成長培地１リットル当たり総濃度で１０１０ｍＭまたは１１１ｍＭまたは１０５ｇまたは６ｇより低い窒素または窒素源を含む。
b21）成長培地は、成長培地1リットルあたり総濃度で10-5 nMまたは1 nMまたは10-10 gまたは3.10-7 gの鉄または鉄源を含む。
ｂ２２）成長培地は、成長培地１リットル当たり総濃度で１０５または１ｍＭまたは１０５ｇまたは０．３ｇより低い鉄または鉄源を含む。
b23）少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間にナノ粒子産生細胞によって消費される炭素または炭素源の量または濃度または割合が、次よりも大きい：
‐成長培地1リットルあたり10-10、10-5、0.1、1、10または103 gの炭素または炭素源、または1 mMの炭素または炭素源、およびまたは
‐10-50、10-10、10-5、10-1、1、5、10、50、または75％。このパーセンテージは(QCf - QCi）/ QCiに等しく、QCfおよびQCiはそれぞれ 少なくとも1つの成長ステップの終了時と開始時に成長培地に含まれる炭素の量である。
b24）少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間にナノ粒子産生細胞によって消費される窒素または窒素源の量または濃度または割合が以下よりも大きい。
‐成長培地1リットルあたり10-10、10-5、0.01、1または10 gの窒素または窒素源、または0.6 mMの窒素または窒素源、およびまたは
‐10-50、10-10、10-5、10-1、1、5、10、50、または75％。この割合は(QNf ‐ QNi)/ QNiに優先的に等しく、QNfおよびQNiはそれぞれ少なくとも1つの成長ステップの終了時および開始時に成長培地に含まれる窒素。
b25）少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間にナノ粒子産生細胞によって消費される鉄または鉄源の量、濃度、または割合が以下よりも大きい。
‐成長培地1リットルあたり10-10、10-5、0.01または1 mgの鉄または鉄源、または0.04 μMの鉄または鉄源、およびまたは
‐10-50、10-10、10-5、10-1、1、5、10、50、または75％。この割合は優先的に(QFef ‐ Qfei) / QFeiに等しく、QFefおよびQFeiはそれぞれ 少なくとも1つの成長ステップの終了時と開始時に成長培地に含まれる鉄の量。
b26）少なくとも1つの増殖ステップの開始と終了の間に、成長培地に運ばれる鉄または鉄源の量は、優先的に成長培地1リットルあたり10-10 mgまたは0.3 mgの鉄または鉄源、または10-3 μMまたは1 μMの鉄または鉄源より多い。
b27）少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間に、優先的に流加培地によって成長培地にもたらされる炭素または炭素源の量は、成長培地1リットルあたり10-50、10-10、10-5または0.07 gの炭素または炭素源、または10-10、10-5、10-3、0.8、1または103 mMを超える炭素または炭素源より大きい。
b28）少なくとも1つの増殖ステップの開始と終了の間に成長培地に運ばれる窒素または窒素源の量は、優先的に成長培地1リットルあたり、10-10、0.006または1 gの窒素または窒素源または0.4 mMの窒素または窒素源より多い。
b29）少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間にナノ粒子産生細胞によって消費される炭素、炭素源、窒素、窒素源、鉄、およびまたは鉄源の量は、総濃度で成長源の炭素、炭素源、窒素、窒素源、鉄および鉄源よりも少ない。
ここで、そのような条件は、以下の特性の少なくとも1つを有するナノ粒子産生細胞をもたらす：
b30）ナノ粒子産生細胞がナノ粒子を産生するか、ナノ粒子産生細胞が成長培地1リットルあたり10-50、10-10、0.01または1 mgを超えるナノ粒子を産生し、この量は、成長ステップの終了時に生成されるナノ粒子の量、または成長ステップの終了時に生成されるナノ粒子の量と成長ステップの開始時に生成されるナノ粒子の量との差である。
b31）ナノ粒子産生細胞は、優先的に少なくとも1つの成長ステップの終了時に濃縮されることなく、0から104 nm、優先的に565 nmで測定される光学濃度をもたらし、 次のプロパティの少なくとも1つの特性で特徴付けられる：
b31i）成長ステップの終了時の光学濃度が、少なくとも1つの予備成長ステップの終了時の光学濃度よりも少なくとも0、0.5、1、1.1、1.5、2、5、10または103倍大きい 。
b31ii）成長ステップの光学密度は、0.001から300の間に含まれる光学密度の範囲内で変化する。
b31iii）光学密度は、少なくとも1つの成長ステップの開始と終了の間で0、0.5、1、1.1、5、10、または103を超える係数で増加し、この係数は、少なくとも１つの成長ステップの終了時に測定される光学密度と、少なくとも１つの成長ステップの開始時に測定される光学密度との間の比である。
ｂ３１ｉｖ）光学密度は、少なくとも１つの成長ステップの開始と終了との間で１０１０、１０４または１０以下の係数で増加する。
ｂ３１ｖ）光学密度は、少なくとも１つの成長ステップの終了時に、１０１０、１０５、３００または１０より小さい最大値を有する。
b31vi）光学密度は、少なくとも1つの成長ステップの開始時に10-50、10-10、0.001または0.01より大きい最小値を持つ。そして/または
b32）ナノ粒子産生細胞は、倍加時間または倍数を2倍するための期間を特徴とし、それは全成長ステップまたは全成長ステップの部分の間であり、さらにそれは次の期間である：
b32i）1分より長い。
b32ii）1ヶ月以下。
b32iii）1分から1か月の間に含まれる。およびまたは
b32iv）優先的に予備成長ステップの少なくとも1つのサブステップiの倍加時間よりも少なくとも1.1倍短い。
ここで、優先的に、予備成長、成長、およびまたは流加培地は、優先的に、予備成長、成長およびまたは流加培地1リットルあたりの測定で、以下を含まない：i） 1、2、3、または6種類のビタミン、ii）10-9 molの少なくとも1つのビタミン、iii）10-4 gの酵母エキス、iv）10-9 molの酵母エキスの少なくとも1つの成分、v）酵母エキスの1 、2、5、または10成分、vi）10-5 gのペプトン、vii）1または2種類の異なるCMR剤、viii）0.05 mgの少なくとも1種類のCMR剤、ix）1、2、または5種類のキレート薬剤、x）10-8 molの少なくとも1つのキレート剤、xi）1、2または5種類の異なるアミノ酸、xii）1 mgの少なくとも1種類のアミノ酸、xiii）1、2または5種類の異なる毒性または細胞毒性化合物、 xiv）1 mgの少なくとも1つの毒性または細胞毒性化合物、xv）1、3または7種類の鉄と異なる重金属、xvi）1 mgの少なくとも1種類の鉄と異なる重金属、xvii）カドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、および銅から選択された1、2、3、4、5、6、7、8、9、10種の金属または化学元素、、xviii）1 mgのカドミウム、鉛、ヒ素、水銀、コバルト、バナジウム、ニッケル、リチウム、アンチモン、およびまたは銅、xix）0.5 mLまたは10-8 molのオオカミのビタミン、xx）10-9 molのオオカミのビタミンの少なくとも1つの成分、xxi）1、2、5または10種類のオオカミのビタミンの成分、xxii）5 mLまたは10-8モルのオオカミミネラル、xxiii）10-8モルのオオカミのミネラルの少なくとも1つの成分、xxiv）1、2、5、7、10または15種類のWolfのミネラルの成分、xxv）10-9モルのミネラルエリキシル、xxvi）10-9ミネラルエリキシルの少なくとも1つの成分9モル、およびまたはxxvii）ミネラルエリキシルの1、2、5、10または14の異なる成分。
【００８０】
本発明は、本発明による方法にも関し、ここで、予備成長およびまたは成長ステップの終了は、以下の特性のうちの少なくとも１つによって特徴付けられる 、
i）予備成長/成長培地の光学密度が飽和または予備成長およびまたは成長ステップの1時間あたり1 O.D.単位以下増加する。
ii）予備成長およびまたは成長培地のバイオマスは、飽和または予備成長およびまたは成長ステップの1時間あたり1 g以下のナノ粒子産生細胞が増加する。
iii）ナノ粒子生産細胞は、ナノ粒子の生産を停止するか、予備成長およびまたは成長段階の1時間あたり0.01 mg以下のナノ粒子を生産する。iv）流加培地は、予備増殖およびまたは成長培地にそれ以上追加されない。そして
v）酸素は、予備成長およびまたは成長培地にそれ以上泡挿入されない。
【００８１】
本発明はまた、本発明による方法に関し、ここで、予備成長およびまたは成長ステップの開始は、以下の特性のうちの少なくとも１つによって特徴付けられる。
i）予備成長およびまたは成長培地の光学密度は、予備成長およびまたは成長段階の1日あたり0.1 O.D単位以上増加し始める。
ii）予備成長およびまたは成長培地のバイオマスは、予備成長およびまたは成長段階の1日あたり0.1g以上のナノ粒子産生細胞が増加し始める。
iii）ナノ粒子生産細胞は、ナノ粒子の生産を開始し、優先的には、予備成長およびまたは成長段階の1日あたり0.01 mgを超えるナノ粒子が生産される。
iv）流加培地は、予備成長およびまたは成長培地への添加を開始する。
v）酸素が予備成長およびまたは成長培地に泡挿入を始める。
【００８２】
本発明はまた、予備成長、成長、およびまたは流加培地組成物が以下のように定義される本発明による方法に関する、
i)   優先的に予備成長の培地は、少なくとも1、2、3、4、5、6、または7の次の化学要素または誘導体であり、この誘導体は優先的には、炭素、窒素、リン酸塩、マンガン、カリウム、カルシウム、ビタミン、およびまたは塩素であるかその源を含んでいる、
i）乳酸ナトリウムまたは炭素源、優先的には予備成長培地の1リットルあたり10-20と0.0023 の間のモルまたはグラムの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源と、予備成長培地1リットルあたり0.23または105モルまたはグラムの乳酸ナトリウムまたは炭素源、最も優先的には、予備成長培地1リットルあたり0.023±0.01モルの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源、
ii）塩化アンモニウムまたは窒素源、優先的には予備成長培地1リットルあたり10-20と7.4 10-4の間のモルまたはグラムの塩化アンモニウムまたは窒素源と予備成長培地1リットルあたり7.4 10-2または105モルの間に含まれる濃度の塩化アンモニウムまたは窒素源、最も優先的には予備成長培地1リットルあたり(7.5±1).10-3 モルの塩化アンモニウムまたは窒素源、
iii）KH2PO4またはカリウム源またはリン源、優先的には予備成長培地1リットルあたり10-20または1.55・10-5の濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、予備成長培地1リットルあたり1.55・10-3または105モルの濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、最も優先的には予備成長培地1リットルあたり（1.5±1）10-4モルの濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、
iv）MgSO4またはマグネシウム源、優先的には予備成長培地1リットルあたり10-10または4.1・10-5 モルまたはグラムの濃度のMgSO4またはマグネシウム源と、予備成長培地1リットルあたり4.1・10-3または105モルまたはグラムの濃度のMgSO4またはマグネシウム源、最も優先的には予備成長培地リットル1リットルあたり（4±1）・10-4モルの濃度のMgSO4またはマグネシウム源培地、
v）鉄の供給源またはFeCl3、優先的には予備成長培地1リットルあたり10-20と2・10-7の間のモルまたはグラムの濃度の鉄の供給源またはFeCl3、および予備成長培地1リットルあたり10-5または105モルまたはグラムの濃度のFeCl3または鉄の供給源、最も優先的には予備成長培地1リットルあたり（2±1）10-6モルまたはグラムの濃度のFeCl3または鉄の供給源、
vi）チアミンまたはビタミン、優先的には、予備成長培地1リットルあたり10-20と8・10-9の間のモルまたはグラムの濃度のビタミンまたはチアミンと、予備成長培地1リットルあたり8・10-7または105モルまたはグラムの濃度のビタミンまたはチアミン、最も優先的には、予備成長培地1リットルあたり（8±2）10-8 モルの濃度のビタミンまたはチアミン、
vii）CaCl2またはカルシウムまたは塩素源、優先的には予備成長培地1リットルあたり10-20または10-5の間のモルまたはグラムの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源、および予備成長培地1リットルあたり10-3または105モルまたはグラムの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源、最も優先的には 予備成長培地1リットルあたり（1±0.8）・10-4モルの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源。
【００８３】
成長培地は、優先的に流加培地を成長培地に添加する前に、優先的に以下の化学元素または誘導体の少なくとも1、2、3、4、5、6、または7を含み、その誘導体は炭素、窒素、リン酸塩、マンガン、カリウム、カルシウム、ビタミン、およびまたは塩素であるか、またはそれらを含む、
i）乳酸ナトリウムまたは炭素源、成長培地1リットルあたり優先的には10-20または0.0014の間のモルまたはグラムの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源、および成長培地1リットルあたり0.14または105モルまたはグラムの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源、最も優先的には成長培地1リットルあたり（0.014±0.01）モルの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源、
ii）塩化アンモニウムまたは窒素源、優先的には成長培地1リットルあたり10-20と4.1・10-4の間のモルまたはグラムの塩化アンモニウムまたは窒素源と成長培地1リットルあたり4.1・10-2または105モルの間に含まれる濃度の塩化アンモニウムまたは窒素源、最も優先的には成長培地1リットルあたり(4.1±1).10-3 モルの塩化アンモニウムまたは窒素源、
iii）KH2PO4またはカリウム源またはリン源、優先的には成長培地1リットルあたり10-20または1.55・10-5の濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、成長培地1リットルあたり1.55・10-3または105モルの濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、最も優先的には成長培地1リットルあたり（1.5±1）10-4モルの濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、
iv）MgSO4またはマグネシウム源、優先的には成長培地1リットルあたり10-20または4.1・10-5 モルまたはグラムの濃度のMgSO4またはマグネシウム源と、成長培地1リットルあたり4.1・10-3または105モルまたはグラムの濃度のMgSO4またはマグネシウム源、最も優先的には成長培地リットル1リットルあたり（4±1）・10-4モルの濃度のMgSO4またはマグネシウム源培地、
v）鉄の供給源またはFeCl3、優先的には成長培地1リットルあたり10-20と10-7の間のモルまたはグラムの濃度の鉄の供給源またはFeCl3、および成長培地1リットルあたり10-5または105モルまたはグラムの濃度のFeCl3または鉄の供給源、最も優先的には成長培地1リットルあたり（2±1）10-6モルまたはグラムの濃度のFeCl3または鉄の供給源、
vi）チアミンまたはビタミン、優先的には、成長培地1リットルあたり10-20と8・10-9の間のモルまたはグラムの濃度のビタミンまたはチアミンと、成長培地1リットルあたり8・10-7または105モルまたはグラムの濃度のビタミンまたはチアミン、最も優先的には、成長培地1リットルあたり（8±2）10-8 モルの濃度のビタミンまたはチアミン、
vii）CaCl2またはカルシウムまたは塩素源、優先的には成長培地1リットルあたり10-20と10-5の間のモルまたはグラムの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源、および成長培地1リットルあたり10-3または105モルまたはグラムの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源、最も優先的には 成長培地1リットルあたり(1±0.8)・10-4モルの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源。
【００８４】
流加培地は、優先的に成長培地に添加される前に、優先的に以下の化学元素または誘導体の少なくとも1、2、3、4、5、6、または7を含み、その誘導体は炭素、窒素、リン酸塩、マンガン、カリウム、カルシウム、ビタミン、およびまたは塩素であるか、またはそれらを含む、
i）乳酸ナトリウムまたは炭素源、流加培地1リットルあたり優先的には10-20または10-1の間のモルまたはグラムの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源、および流加培地1リットルあたり10または105モルまたはグラムの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源、最も優先的には流加培地1リットルあたり(1±0.5)モルの濃度の乳酸ナトリウムまたは炭素源、
ii）アンモニウムまたは窒素源、優先的には流加培地1リットルあたり10-20と2.8・10-2の間のモルまたはグラムのアンモニウムまたは窒素源と流加培地1リットルあたり2.8または105モルの間に含まれる濃度のアンモニウムまたは窒素源、最も優先的には流加培地1リットルあたり(2.8±1).10-1 モルのアンモニウムまたは窒素源、
iii）KH2PO4またはカリウム源またはリン源、優先的には流加培地1リットルあたり10-20または1.7・10-3の濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、流加培地1リットルあたり1.7・10-1または105モルの濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、最も優先的には流加培地1リットルあたり（1.7±1）10-2モルの濃度のKH2PO4またはカリウム源またはリン源、
iv）MgSO4またはマグネシウム源、優先的には流加培地1リットルあたり10-20または2・10-4 モルまたはグラムの濃度のMgSO4またはマグネシウム源と、流加培地1リットルあたり2・10-2または105モルまたはグラムの濃度のMgSO4またはマグネシウム源、最も優先的には流加培地リットル1リットルあたり（2±1）・10-3モルの濃度のMgSO4またはマグネシウム源培地、
v）鉄の供給源またはFeCl3、優先的には流加培地1リットルあたり10-20と10-4の間のモルまたはグラムの濃度の鉄の供給源またはFeCl3、および流加培地1リットルあたり10-1または105モルまたはグラムの濃度のFeCl3または鉄の供給源、最も優先的には流加培地1リットルあたり（7±4）10-3モルまたはグラムの濃度のFeCl3または鉄の供給源、
vi）チアミンまたはビタミン、優先的には、流加培地1リットルあたり10-20と10-8の間のモルまたはグラムの濃度のビタミンまたはチアミンと、流加培地1リットルあたり10-4または105モルまたはグラムの濃度のビタミンまたはチアミン、最も優先的には、流加培地1リットルあたり（2±1.5）10-6 モルの濃度のビタミンまたはチアミン、
vii）CaCl2またはカルシウムまたは塩素源、優先的には流加培地1リットルあたり10-20と10-5の間のモルまたはグラムの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源、および流加培地1リットルあたり10-2または105モルまたはグラムの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源、最も優先的には 流加培地1リットルあたり(1±0.8)・10-3モルの濃度のCaCl2またはカルシウムまたは塩素源。
【００８５】
本発明はまた、本発明によって予備成長、成長、およびまたは流加培地が、以下のグループから選択される少なくとも１つの供給源を含む方法に関する。
i)               優先的に1 nM〜2 Mol / Lの濃度で次のグループから選択される炭素源、少なくとも1つの炭素原子を含む少なくとも1つのの化合物、すなわち、乳酸、乳酸ナトリウム、乳酸、酢酸、グリコール酸、グルコース、ピルビン酸、コハク酸、二酸化炭素、グリセロール、およびそれらの組み合わせ、
ii)             1nM〜 2.10-3 Mol / Lの濃度の鉄の供給源、少なくとも1つの鉄原子を含む少なくとも1つのの化合物、すなわち、クエン酸鉄、キナ酸鉄、塩化鉄、硫酸鉄、FeCl3、およびそれらの組み合せ、
iii)           優先的に1nM〜4Mol / Lの濃度の窒素の供給源、少なくとも1つの窒素原子を含む少なくとも1つのの化合物、すなわち、硝酸塩、窒素ガス、アンモニウム、アンモニア、アンモニウム塩、尿素、アミノ酸、アンモニアガス、およびそれらの組み合せ、
iv)            次のグループから選択される酸素源、少なくとも1つの酸素原子を含む少なくとも1つのの化合物、すなわち、酸素または空気または圧縮空気、酸素源は優先的にガスの形態で、場合によっては成長培地に毎分5 mLのガスと毎分50000 mLのガスの間に含まれるガス速度で泡立てられるかまたは導入される、
v)             優先的に1 nM〜2.10-1 Mol / Lの間に含まれる濃度の、少なくとも1つのリン原子を含む少なくとも1つの化合物からなるリン酸塩源、
vi)            優先的に1 nMから2.10-1 Mol / Lの間で含まれる濃度の、少なくとも1つのカリウム原子を含む少なくとも1つの化合物からなるカリウム源、
vii)          優先的に1nMから4.10-1Mol / Lの間に含まれる濃度の、硫黄または硫酸塩の少なくとも1つの原子を含む少なくとも1つの化合物からなる硫黄または硫酸塩の供給源、
viii)        1 nM〜4.10-1 Mol / Lの間に優先的に含まれる濃度の、少なくとも1つのマンガン原子を含む少なくとも1つの化合物からなるマンガン源、
ix)            優先的に1nMから10-4Mol / Lの間に含まれる濃度の、少なくとも1つのビタミン、ビオチン、カルシウム、パントテン酸、葉酸、イノシトール、ニコチン酸、p-アミノ安息香酸、ピリドキシンHCl、リボフラビン、チアミン、チアミンHCLからなるグループから選択されるビタミン源、およびその誘導体およびその組み合わせ、
x)             優先的に1nM〜10 -1 Mol / Lの間に含まれる濃度の、少なくとも1つのカルシウム原子を含む少なくとも1つの化合物からなるカルシウム源。
【００８６】
本発明の一実施形態では、炭素、窒素、カリウム、リン、マグネシウム、カルシウム、ビタミン、鉄、酸素、およびまたは塩素の供給源は、少なくとも1、2、5、10または103個の炭素、窒素、カリウム、リン、マグネシウム、カルシウム、ビタミン、鉄、酸素、およびまたは塩素、原子を優先的にこれらのソースの化学式または分子またはコンポーネント内に含む。
【００８７】
本発明のさらに別の実施形態では、化合物または量または要素または特性P1が化合物または量または要素または特性P2よりも高い、長い、または大きい場合、P1 =a・P2であることを意味し、ここでaは優先的に 1より大きい数値または整数、またはP1 =a+ P2。ここで、aは優先的に0より大きい数値または整数である。
【００８８】
本発明のさらに別の実施形態では、化合物または量または要素または特性P1が化合物または量または要素または特性P2よりも低い、短い、または小さい場合、P1 = P2 /a、ここで優先的にaは、1より大きい数または整数、またはP1 =P2-aで、aは、優先的に0より大きい数または整数である。
【００８９】
本発明の一実施形態では、ＣＭＲ化合物は、発癌性、突然変異誘発性、およびまたは生殖毒性化合物である。場合によっては、発がん性化合物は、優先的に生きている生物またはヒトにおいて、がんを誘発するか、がんを産出または誘発すると疑われる化合物である。場合によっては、変異原性化合物は、生物またはヒトの少なくとも1つの遺伝子、DNA、RNA、DNA鎖、RNA鎖、およびまたは核酸の突然変異、修飾、数またはサイズの変化を生成または誘導する、または生成または誘導すると疑われる化合物である。場合によっては、生殖毒性化合物は、生きている生物または人間において、生殖器官、胚、胎児の毒性、突然変異、修飾、変化を生成または誘導する、または生成または誘導すると疑われる化合物である。
【００９０】
本発明の一実施形態において、毒性または細胞傷害性化合物は、個人または生物において、毒性、死、体重減少、臓器への損傷、行動の変化、食物または水の消費における変化、壊死、アポトーシス、細胞内在化、細胞の数、形状およびまたは配置の変化を生成または誘導する、または生成または誘導すると疑われる化合物である。
【００９１】
場合によっては、化合物は10-6、10-3、10-1、1、10、103 または 106 μMを超える濃度でCMRまたは細胞毒性または毒性を示す。
他の場合には、化合物は、1020、106、103、10、1、10-1、10-3 または 10-6 μM以下の濃度でCMRまたは細胞毒性または毒性である。
【００９２】
本発明は、ナノ粒子生成細胞を使用して高純度酸化鉄ナノ粒子を生成する方法に関し、以下を含む、
i）ナノ粒子産生細胞が本質的にナノ粒子を生成しないように、予備成長培地でナノ粒子産生細胞を増殖することからなる予備成長ステップ、
および
ii）ナノ粒子産生細胞がナノ粒子を産生するように、成長培地で予備成長段階から生じるナノ粒子産生細胞を増殖することからなる成長ステップ。
【００９３】
本発明は、ナノ粒子生成細胞を使用して高純度酸化鉄ナノ粒子を生成する方法に関し、以下を含む :
i）ナノ粒子産生細胞が本質的にナノ粒子を産生しないように、予備成長培地でナノ粒子産生細胞を増殖することからなる予備成長ステップ、
または、
ii）ナノ粒子産生細胞がナノ粒子を産生するように、成長培地で予備成長段階から生じるナノ粒子産生細胞を増殖することからなる成長ステップ。
【００９４】
本発明の一実施形態では、成長培地に流加培地が補充される。
【００９５】
本発明の一実施形態では、流加培地により補充される成長培地は成長培地である。
【００９６】
本発明の一実施形態では、成長培地は、予備成長培地およびまたは流加培地と少なくとも１つの特性を共有する。
【００９７】
本発明の一実施形態では、成長培地およびまたは予備成長培地次から選択される少なくとも１つの供給源を含む,
ｉ）炭素またはナトリウムまたは乳酸、好ましくは乳酸ナトリウム、
ｉｉ） アンモニウム源、優先的に塩化アンモニウム、
iii）マグネシウム源、優先的に硫酸マグネシウム、
iv）カリウム源、優先的にリン酸カリウム、
v）ビタミン源、優先的にチアミン、
vi）カルシウム源、優先的に 塩化カルシウム、および
vii）鉄源、優先的には塩化鉄。各ソースは、10-6〜103、10-3〜100mM、0.01〜10mM、または0.1〜10mMの濃度で成長培地およびまたは予備成長培地に優先的に含まれる。
【００９８】
本発明の一実施形態では、予備成長培地およびまたは成長培地において、ビタミンおよびまたはカルシウム源およびまたは鉄源の濃度は、少なくとも0、0.5、１、1.1、1.2、1.5、5、10、103または105よりも小さい係数で、ナトリウム源およびまたはアンモニウム源およびまたはマグネシウム源およびまたはカリウム源の濃度よりも高い。
【００９９】
本発明の一実施形態では、流加培地は次のグループから選択される少なくとも1つの源を含む、ｉ）炭素源、優先的に乳酸、ｉｉ）アンモニア、ｉｉｉ）カリウム源、優先的にカリウムからなる群から選択される少なくとも１つの源を含む。リン酸、iv）マグネシウム源、優先的に硫酸マグネシウム、v）鉄源、優先的に塩化鉄、vi）ビタミン源、優先的にチアミン、vii）カルシウム源、優先的に塩化カルシウム、およびviii）源 鉄、優先的には塩化鉄。各供給源は、0.001から100mMの間、0.01から10mMの間、または0.1から10mMの間の濃度で増殖およびまたは予備成長培地に優先的に含まれる。
【０１００】
本発明の一実施形態では、流加培地において、ビタミンおよびまたはカルシウム源の濃度は、少なくとも0、0.5、1、1.1、1.2、1.5、5、10、103または105倍の係数で、ナトリウム源およびまたはアンモニウム源およびまたはマグネシウム源およびまたはカリウム源およびまたは鉄源の濃度よりも小さい。
【０１０１】
本発明の一実施形態では、本発明によるナノ粒子は、成長培地1リットルあたりのナノ粒子でまたはナノ粒子産生細胞あたりのナノ粒子で、1、2、5、10、103、105、1010、1020、1050または10100を超えるナノ粒子の集合体であるか、それを含む。場合によっては、酸化鉄は1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100の鉄原子およびまたは1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100の酸素原子の集合体を表すか、それらの集合体である。いくつかの他の場合では、ナノ粒子に含まれる化学元素、およびまたは不純物は、1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100を超える化学物質およびまたはナノ粒子に含まれる不純物である。
【０１０２】
本発明の別の実施形態では、本発明によるナノ粒子は、成長培地1リットルあたりのナノ粒子またはナノ粒子産生細胞あたりのナノ粒子で、10100、1050、1020、1010、105、103、100、50、10、5 または 2個以下のナノ粒子の集合体であるか、それを含む。場合によっては、酸化鉄は、1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100鉄原子およびまたは1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100以下の酸素原子の集合体であるかそれを表す。さらに他のいくつかの場合、ナノ粒子に含まれる化学元素およびまたは不純物は、10100、1050、1020、1010、105、103、100、50、10、5 または 2以下の化学元素、およびまたはナノ粒子に含まれる不純物であるかそれを表す。
【０１０３】
本発明の一実施形態では、少なくとも１つの不純物がナノ粒子に含まれる。
【０１０４】
本発明の一実施形態では、高純度酸化鉄ナノ粒子は、例えば、本方法により少量の不純物を含むナノ粒子を得ることを可能にする場合、少量の不純物を含む。場合によっては、ナノ粒子は、少なくとも1つの不純物を、またはthan 1050、1020、1010、105、102、10、5、2、5、1、10-2、10-10、10-20 または 10-50以下の不純物、ナノ粒子1グラムあたり不純物またはナノ粒子1グラムあたりグラムの不純物を含まない。いくつかの他の場合では、ナノ粒子の内部または表面に含まれる不純物の割合は、優先的に質量でのパーセントで、100、90、80、70、60、50、30、20、10、10 5、1、0.1、または0.001％以下である。  本発明によれば、この不純物の割合は、場合によっては、ナノ粒子に含まれる不純物の原子数、量、質量、または体積の比率をナノ粒子に含まれるすべての化学要素の全ての原子数、量、質量、または体積で割ったものとして定義することができる。ナノ粒子に含まれるすべての化学元素の原子、量、質量、または体積。場合によっては、ナノ粒子に含まれるすべての化学元素は、ナノ粒子に含まれる酸化鉄、ドーピング材料、および不純物の合計である。さらに他のいくつかの場合では、ナノ粒子の内部または表面に含まれる不純物の濃度は、ナノ粒子1グラムあたりの不純物でthan 1050、1030、1010、105、103、500、100、50、10、1、10-1、10-3、10-5、10-10 または 10-50μg より低い。さらに他のいくつかの場合では、ナノ粒子の内部または表面に含まれる不純物の濃度は、ナノ粒子1グラムあたりの不純物でthan 10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、10-1、1、10、50、100、103、105 または 1010 μg より高い。
【０１０５】
場合によっては、不純物は同じ不純物、すなわち不純物は優先的に同じ化学要素を含む不純物であり得る。
【０１０６】
いくつかの他の場合では、不純物は種々の不純物、すなわち、少なくとも1つの異なる化学要素を含む不純物であり得る。
【０１０７】
本発明の一実施形態では、その化学元素は以下のグループから選択される、
アクチニド、アクチニウム、アルミニウム、アメリシウム、アンチモン、アルゴン、ヒ素、アスタチン、バリウム、ベルケリウム、ベリリウム、ビスマス、ボーリウム、ホウ素、臭素、セシウム、カルシウム、カリホルニウム、炭素、セリウム、塩素、クロム、コバルト、コペルニカム、カドミウム、銅、キュリウム、ダルムスタチウム、ドブニウム、ジスプロシウム、アインステイニウム、エルビウム、ユーロピウム、フェルミウム、フレビウム、フッ素、フランシウム、ガドリニウム、ガリウム、ゲルマニウム、金、ハフニウム、ヘリウム、ヘシウム、ホルミウム、水素、インジウム、ヨウ素、イリジウム、鉄、クリプトン、ランタニド、ランタン、ローレンシウム、鉛、リチウム、肝臓モリウム、ルテチウム、マグネシウム、マンガン、マグネシウム、メンデレビウム、水銀、モリブデン、ネオジム、ネオン、ネプツニウム、ニッケル、ニオブ、窒素、ノベリウム、オスミウム、酸素、パラジウム、リン、白金、プルトニウム、ポロニウム、カリウム、プラセオジム、プロクチニウム、プロメチウム、ラジウム、ラドン、レニウム、ロジウム、レンテニウム、ルビジウム、ルテニウム、ラザフォルジウム、サマリウム、セレン、シリコン、銀、ナトリウム、ストロンチウム、硫黄、スカンジウム、シーボルギウム、テルル、テルビウム、トリウム、ツリウム、スズ、タンタル、テクネチウム、タリウム、チタン、タングステン、ウンウンオクチウム、ウンウンペンチウム、ウンウンセプチウム、ウンウントリウム、ウラン、バナジウム、キセノン、イッテルビウム、イットリウム、亜鉛、ジルコニウム、およびこれらの化学元素のいくつかの組み合わせ。
【０１０８】
本発明はまた、不純物が、鉄、酸素、およびまたは酸化鉄とは異なる少なくとも１つの化学要素である本発明による方法に関する。
【０１０９】
本発明はまた、不純物が優先的に炭素または炭素質物質である、本発明による方法に関する。
【０１１０】
本発明のさらに別の実施形態において、炭素または炭素質物質は、ナノ粒子産生細胞に由来するか、ナノ粒子産生細胞によって産生されるか、またはナノ粒子産生細胞に由来する。
【０１１１】
本発明は、本発明による方法により得られるナノ粒子が酸化鉄を含み、その酸化鉄は以下の特性のうちの少なくとも1つを有する方法にも関する、
i）少なくとも1つの鉄の原子と１つの酸素の原子を含む、
ii）、結晶構造または鉱物構造を形成する。
iii）化学式としてFeO、FeO2、Fe3O4、Fe4O5、Fe5O6、Fe5O7、Fe25O32、Fe13O19、α-Fe2O3、β -Fe2O3、γ-Fe2O3、ε-Fe2O3を持ち得る。
iv）ウスタイト、二酸化鉄、磁鉄鉱、赤鉄鉱、マグヘマイトで構成され得る。
v）イプシロン相、アルファ相、ベータ相、ガンマ相にあり得る。
vi）それは様々なレベルの酸化である可能性があり、
vii）化学式FeaObDgを有し、where、a、bおよびまたはgは係数、優先的には化学量論係数である。場合によっては、a、b、およびまたはgは0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、19、または20に等しい。その他のいくつか場合、a、b、およびまたはgは0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、19、または20よりも大きい、さらに他のいくつかのケースでは、a、b、およびまたはgは0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、19、または20よりも低い。他のいくつかの場合には、Dはナノ粒子のドーピング材料である。場合によっては、ドーピング材料は、アルミニウム、アンチモン、バリウム、クロム、銅、金、マンガン、銀、スズ、チタン、および亜鉛からなるグループから選択できる。
【０１１２】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子に含まれる酸化鉄は、ナノ粒子の主要な化学要素である。場合によっては、高純度の酸化鉄ナノ粒子は大量の酸化鉄を含む可能性がある。場合によっては、ナノ粒子に含まれる酸化鉄の割合は、優先的に質量で、10-40、10-20、10-10、10-5、10-2、10-1、1、5、10、25、50、75、80、90、99、または99.9％よりも大きい。本発明によれば、この酸化鉄の割合は、場合によっては、ナノ粒子中の酸化鉄の原子数、量、質量または体積をナノ粒子に含まれるすべての化学要素の原子数、量、質量または体積の総数で割った比として定義することができる。さらに他のいくつかの場合、ナノ粒子に含まれる酸化鉄の濃度は、ナノ粒子のグラムあたりの酸化鉄で、10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、10-1、1、10、50、100、103、105 または 1010 μg より高い。
【０１１３】
本発明の一実施形態において、高純度酸化鉄ナノ粒子は、例えばナノ粒子が処理されたりおよびまたは部分的または完全に破壊されたりおよびまたは生物に投与される場合、または方法が大量の酸化鉄を組みことが不可能な場合、酸化鉄を含む量が少ない。場合によっては、ナノ粒子の内部または表面に含まれる酸化鉄の割合が優先的に質量で、100、90、80、70、50、30、10、5、1、0.1 または0.001％以下である。他の場合には、ナノ粒子に含まれる酸化鉄の濃度は、ナノ粒子1グラムあたりの酸化鉄で、1050、1030、1010、105、103、500、100、50、10、1、10-1、10-3、10-5、10-10、または 10-50 μg 以下である。
【０１１４】
本発明の別の実施形態では、ナノ粒子に含まれる酸化鉄の百分率、濃度、原子数、量、質量、または体積は、優先的に1.00001、1.001、1.1、2、5、10、50、102、103、105、1010、1020 または 1050の係数で、ナノ粒子に含まれる不純物の百分率、濃度、原子数、量、質量、または体積よりも大きい。
【０１１５】
本発明の一実施形態では、酸化鉄およびまたは不純物は、次の場所に存在するかまたは挿入される： i）ナノ粒子の内部、ii）ナノ粒子の表面、iii） ナノ粒子の外部、iv）ナノ粒子の結晶またはアモルファス構造、v）ナノ粒子の欠陥、およびまたはvi）ナノ粒子の空孔。
【０１１６】
本発明の一実施形態では、酸化鉄およびまたは不純物は、ナノ粒子と静電、強い、弱い、核、金属、ファンデルワールス、デバイ、ロンドン、またはの水素相互作用などの相互作用にある。
【０１１７】
本発明の一実施形態では、酸化鉄およびまたは不純物は、ナノ粒子から、好ましくは1050以下のナノ粒子の中心または表面からの距離が 1050、1020、1010、105、103、100、10、5 または 1 nm 以内に位置する。場合によっては、ナノ粒子の中心とは、化学要素の領域または体積または場所または化学要素の集合体で、ナノ粒子の最大、最小位置の中央、およびまたは平均寸法であって、球形ナノ粒子の直径の半分または、ナノ粒子の最大、最小の半分、およびまたは平均のような位置である。いくつかの他の場合では、ナノ粒子の表面は、ナノ粒子にとどまりながらナノ粒子の中心から最大距離にある化学要素の領域または場所または集合体である。
【０１１８】
本発明のさらに別の実施形態では、酸化鉄およびまたは不純物は、ナノ粒子から、好ましくはナノ粒子の中心または表面から、0.001、0.01、0.1、1、10、100、103、105、1010、1020 または 1050 nm より遠い距離に位置する。
II 1)            本発明の別の実施形態では、本発明によるナノ粒子は、ナノ粒子のコアを優先的に取り囲むコアおよびまたはコーティングで構成される。
II 2)            本発明の一実施形態では、ナノ粒子のコアおよびまたはコーティングは、酸化鉄およびまたは不純物の濃度など、ナノ粒子と共通の少なくとも１つの特性を有する。
【０１１９】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子、ナノ粒子のコアおよびまたはコーティングは、以下の特性のうちの少なくとも１つを有する。
（a）磁気、反磁性、超常磁性、強磁性、フェリ磁性、およびまたは常磁性の挙動または特性が、優先的に10-50、10-40、10-20、10-10、10-5、10-2 または 10-1 T以上 の強度で、1010、105、103、102、10 または 1 K 以下の温度で優先的に観察されます。場合によっては、コアはコーティングとは異なる磁気特性を持つことができ、例えば、コアは強磁性または超常磁性であり得、コーティングは反磁性または常磁性であり得る。
b）、少なくとも1、2、5、10、50、100、103、105、107、109、1020 または 1050の結晶面または優先的に電子顕微鏡で観察または測定できる結晶秩序構造を含む結晶部分または構造を含みます。場合によっては、コアはコーティングとは異なる結晶構造を持つことができます。例えば、コアは、1、5、10、103 または 105を超える結晶面または結晶秩序構造を含むことがあり、コーティングは、105、103、10、5 または 2以下の結晶面または順序付けられた結晶秩序構造を含むことがある。
（c）、金属または金属酸化物、優先的には酸化鉄、最も優先的にはマグヘマイトおよびまたはマグネタイトからなる組成物である。場合によっては、コアはコーティングとは異なる組成物を含む。例えば、コアは1、5、10、25、50、75、90、95 または 99パーセントまたは質量パーセントを超える酸化鉄を含み、コーティングは99、95、90、75、50、10、5 または 1パーセントまたは酸化鉄の質量パーセントを含む。この割合は、コアおよびまたはコーティングに含まれる酸化鉄の量、体積、原子数、質量を、コアおよびまたはコーティングに含まれるすべての化学要素の総量、総体積、総原子数、総質量で割った比率である。
（d）単一ドメイン、または磁気的に単一ドメインであること、
（e）磁力線の存在を特徴とする磁気微細構造。これは、[111]のようなナノ粒子のコアの磁化容易軸または結晶学的方向などの優先方向に向けることができる。このような磁気微細構造は、特定の条件下で、特に電子ホログラフィによって観察可能になる場合がある。
（f）寸法が 1 nm および 105 mm、1 nm および 103 mm、1 nm および 100 mm、1 nm および 10 mm、1 nm および 1 μm、5 nm および 1 mm、5 および 500 nm、5 および 250 nm、5 および 100 nm、5 および 80 nm、5 および 60 nm、10 nm および 1 mm、10 および 500 nm、10 および 250 nm、10 および 100 nm、10 および 80 nm、10 および 60 nm、15 nm および 1 mm、15 および 500 nm、15 および 250 nm、15 および 100 nm、15 および 80 nm、15 および 60 nm、20 nm および 1 mm、20 および 500 nm、20 および 250 nm、20 および 100 nm、20 および 80 nm、または between 20 および 60 nm の間にある。
（g）場合によっては0.1、1、2、5、10、15、20、25、30、35、または40 nmより大きいサイズ。
（h）他のある場合によってはthan 1010、105、104、2000、1000、500、400、300、200、150、120、100、95、90、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25、20、15、10 または 5 nm以下の寸法。
（i）優先的には0〜14、1〜13、2〜12、3〜11、4〜10、5〜9、または6〜8のpHにおいて、1010 mVと1010 mV、-105 mVと105 mV、-104 mVと104 mV、-103 mV、-102 mVと102 mV、-10および 10 mVの間にあるゼータ電位、電荷、または表面電荷。
（j）ゼータ電位、電荷、または表面電荷、これは場合によっては優先的に0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12または13より大きいpHでthan -1050、-1020、-1010、-105、-103、-10、-5、-1、0、5、10、20、50、または 100 mVよりも高い。
（k）ゼータ電位、電荷、または表面電荷、これは他の場合には-優先的に14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1または0以下のpHで than -1050、-1020、-1010、-105、-103、-10、-5、-1、0、5、10、20、50、または 100 mV より低い。
（l）ゼータ電位、電荷、または表面電荷、これは他の場合には優先的に0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12または13より大きいpHで、than 1050、1020、1010、105、103、10、5、1、0、-5、-10、-20、-50、または -100 mV より高い。
（m）ゼータ電位、電荷、または表面電荷。他の場合には、1050、1020、1010、105、103、10、5、1、0、-5、-10、-20、- 50、または-100 mV、優先的に14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1または0以下のpHで低い。
（n）0と14、1と13、2と12、3と11、4と10、5と9、または6と8の間に含まれる等電点。
（o）場合によっては、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、または13より大きい等電点。
（p）他の場合には、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、または0よりも小さい等電点。
【０１２０】
本発明の一実施形態では、コアおよびまたはコーティングは、ナノ粒子産生細胞によって合成される。
【０１２１】
本発明の別の実施形態では、コアおよびまたはコーティングは、ナノ粒子産生細胞によって合成されない。
【０１２２】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞または細胞とも呼ばれるナノ粒子を産生する細胞は、真核細胞または原核細胞である。いくつかの場合、それらは、予備成長およびまたは成長培地によってその中に産生されるか、含まれるか、または増殖された細胞である。
【０１２３】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞の１００、８０、７０、５０、１０、２０、１０、５、１０、２、１０、０．１または１０-１０％以下が少なくとも１つのナノ粒子を含むかまたは産生する。場合によっては、この割合は、少なくとも1つのナノ粒子を含むまたは生成する予備成長およびまたは成長培地に含まれる細胞の数を、予備成長およびまたは または成長培地/メディアに含まれる細胞の総数で割ったものである。
【０１２４】
本発明の別の実施形態では、100、80、70、50、10、20、10、5、2、1、0.1または10-10％を超えるナノ粒子産生細胞が、少なくとも1つのナノ粒子を含むかまたは産生する。
【０１２５】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞は全細胞である。
【０１２６】
本発明のさらに別の実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、細胞膜、小胞、酵素、タンパク質、脂質、DNA、RNA、オルガネラ、コンパートメント、細胞質、ウイルスなどの細胞の部分であって、その合成細胞に含まれる、それを起源とする、その中で複製をする、またはそれによって生成される。
【０１２７】
本発明の一実施形態では、上記合成細胞は、優先的に成長およびまたは流加培地に含まれ、優先的にそれらが成長または分裂する時にナノ粒子を合成する細胞であり、予備成長培地で成長、分裂、または構成されるときにはナノ粒子を合成しない細胞である。
【０１２８】
本発明の一実施形態では、細胞によって合成されたナノ粒子は、細胞合成ナノ粒子と呼ばれる。
【０１２９】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、その細胞内でナノ粒子を合成する。優先的にナノ粒子は、合成、組み立て、結晶化、部分的または完全に合成されるときに、次のような細胞内で合成される：
i）オルガネラ、ゴルジ小胞または装置、エンドソーム、エキソソーム、リボソーム、小胞体、アクチンフィラメント、核、ペルオキシソーム、微小管、リソソーム、ミトコンドリア、フィラメント、中心体、鞭毛、または細胞膜、などの細胞の側で中でまたはその近くまたは内部で
ii）細胞内にある領域で、または
iii）細胞の一部から105、103、100、10 または 1 nm以下の距離にある領域で、
である。
【０１３０】
本発明の別の実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、細胞外でナノ粒子を合成する。優先的にナノ粒子は、部分的にまたは完全に合成、組み立て、結晶化される場合、次のような細胞外で合成される：
i)               細胞外にある領域、または
ii)             細胞の一部から1、10、100、103、または105 nmより大きい距離にある領域。
【０１３１】
場合によっては、細胞は、優先的に成長培地1リットルあたり1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100 個を超える細胞の集合体である。いくつかの他の場合では、細胞は、優先的に成長培地1リットル当たり10100、1050、1020、1010、105、103、100、50、10、5 または 2個以下の細胞の集合体である。
【０１３２】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞は真核細胞であり、優先的にはヒト、動物、植物、木、小麦粉、枝、キノコ、菌類、古細菌、鳥、魚、ハト、マス、哺乳類、アリ、ミツバチ、または昆虫に属する。
【０１３３】
[]本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、原核細胞または細菌である。
【０１３４】
場合によっては、ナノ粒子産生細胞は、マイコバクテリウム、優先的にはパラ結核マイコバクテリウム、シェワネラ菌、優先的には・シャワネラ・オネイデンシ、ジオスリックス、優先的にはジオスリックス・フェルメンタンスであり得る。これらの細菌は、細胞外でナノ粒子を優先的に合成する。
【０１３５】
他のいくつかの場合では、ナノ粒子産生細胞は、マグネトスピリルムマグネティカム株AMB-1、走磁性球菌株MC-1、３種のビブリオ株通性嫌気性ビブリオ株MV-1、MV-2およびMV-4、磁気走性株MS-1、マグネトスピリルム・グルフィスワルデンス株MSR-1、通性好気性磁気走性スピリルム、マグネトスピリルムマグネティカム株MGT-1、および偏性嫌気性菌、デサルフォビブリオ・メグネティカス嫌気呼吸菌 RS-1などの走磁性バクテリアである。これらの細菌は、細胞内でナノ粒子を合成する。
【０１３６】
本発明の一実施形態において、ナノ粒子産生細胞は、予備成長ステップのためにまたその間に予備成長培地でまたはそれを使用して、およびまたは成長ステップのためにまたその間に成長培地でまたはそれを使用して培養される。成長ステップの間に流加培地を使用またはそれを使用する。場合によっては、予備成長培地および成長培地は、ナノ粒子産生細胞が増殖される培地である。場合によっては、流加培地は、優先的に増殖ステップ中に成長培地に添加される培地である。
【０１３７】
本発明の一実施形態において、予備成長培地および成長培地の全ては、化学要素、水、およびナノ粒子産生細胞の少なくとも１つの供給源を含むことができる。いくつかの他の場合では、部分的予備成長およびまたは成長培地は、ナノ粒子産生細胞を含まない化学要素の少なくとも1つの源と水を含む。さらに他のいくつかの場合では、予備成長およびまたは成長培地はナノ粒子産生細胞のみを含む。
【０１３８】
本発明の一実施形態では、予備成長および成長および流加培地は、少なくとも１つの供給源、優先的に化学要素の１つの供給源を含むか、優先的に液体中の少なくとも１つの化学要素を含む。気体、およびまたは固体状態。場合によっては、予備成長およびまたは成長およびまたは流加培地は、液体、気体、およびまたは固体状態にある。
【０１３９】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地中の鉄などの化学元素の濃度は次における化学要素の濃度である、ｉ）予備成長および成長培地の全体、ii）予備成長および成長培地の部分、またはiii）ナノ粒子産生細胞。
【０１４０】
本発明の一実施形態では、細胞の特定の量または体積は、これらの細胞を含む成長培地の特定の量または体積であり得る。いくつかの他の場合、細胞の特定の量または体積は、水なしまたは細胞の水性環境なしで、または水または細胞の水性環境が例えば凍結乾燥により除去された後の細胞の特定の量または体積のであり得る。
【０１４１】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長ステップ中の細胞の増殖条件により、ナノ粒子産生細胞の遺伝的改変を防止することが可能になる。場合によっては、ナノ粒子産生細胞の遺伝的修飾は、遺伝子の、遺伝子の一部、DNAの部分、またはヌクレオチドの少なくとも10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、5、10、50、75、90 または 95%の修飾であり、この割合は、ナノ粒子産生細胞で改変された遺伝子の数または量、遺伝子の部分、DNA部分、またはヌクレオチドの数、のナノ粒子産生細胞に属するすべての遺伝子、遺伝子の一部、DNA部分の総数または量 、ヌクレオチドに対する比である。
【０１４２】
本発明のさらに別の実施形態では、予備成長培地およびまたは成長培地は、優先的に精製水、脱イオン水、または超純水であり、好ましくは10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、1、10、50、75、80、90、99、99.99 または 99.99999 percentパーセント以上の水または水の質量パーセントである。この割合は、予備成長およびまたは成長培地に含まれるすべての化学物質の総量、質量、体積、または原子数で除算した、予備成長培地およびまたは成長培地に含まれる水の原子の量、質量、体積、または数の比率である。
【０１４３】
本発明の一実施形態では、予備成長培地およびまたは成長培地は、少なくとも１つの化学元素または化学要素の１つの供給源を含む。場合によっては、予備成長培地およびまたは成長培地中の鉄などの化学要素の濃度は、予備成長およびまたは成長段階の任意の時点でのこの化学要素の濃度である。場合によっては、この濃度を測定するには、この化学要素のまたは占有しているモル数、質量、または体積を、予備成長およびまたは成長培地のすべての化学要素のまたは占有しているモル数、総質量、総体積で除算することでできる。
【０１４４】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つの炭素源を含む。場合によっては、炭素源は周期表Cの化学元素を含む。場合によっては、炭素源は、酢酸塩、グリコール酸塩、グルコース、乳酸塩、ピルビン酸塩、コハク酸塩、二酸化炭素、 グリセロール、およびこれらの化合物の誘導体または組み合わせである。
【０１４５】
本発明の一実施形態では、成長およびまたは予備成長の培地は、少なくとも１つの窒素源を含む。場合によっては、窒素源は周期表Nの化学元素を含む。場合によっては、窒素源は、アンモニウム塩、硝酸塩、尿素、アミノ酸、アンモニウム塩、アンモニア、窒素ガス、およびこれらの化合物の誘導体または組み合わせから成るグループから選択できる。
【０１４６】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つの硫黄または硫酸塩の供給源を含む。場合によっては、硫黄または硫酸塩の供給源は周期表Sの化学元素を含みます。場合によっては、硫黄または硫酸塩の供給源は硫酸塩または硫化水素である場合がある。
【０１４７】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、リンまたはリン酸塩の少なくとも１つの供給源を含む。場合によっては、リンまたはリン酸塩の供給源は周期表Pの化学元素を含む。いくつかの場合では、リンまたはリン酸塩の供給源はリン酸塩であり得る。
【０１４８】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つのカルシウム源を含む。場合によっては、カルシウムの供給源は周期表Caの化学元素を含んでいる。場合によっては、カルシウムの供給源はカルシウム塩であり得る。
【０１４９】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つのカリウム源を含む。場合によっては、カリウムの供給源は周期表Kの化学元素を含む。場合によっては、カリウムの供給源はカリウム塩である。
【０１５０】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つのマグネシウム源を含む。場合によっては、マグネシウム源は周期表Mgの化学元素を含んでいる。場合によっては、マグネシウムの供給源はマグネシウム塩である。
【０１５１】
本発明の一実施形態において、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つの酸素源を含む。場合によっては、酸素源は周期表Oの化学元素を含む。場合によっては、酸素源は有機化合物、二酸化炭素、または二酸素である。
【０１５２】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つの水素源を含む。場合によっては、水素源は周期表Hの化学元素を含む。場合によっては、水素源は有機化合物または２水素である。
【０１５３】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つの鉄源を含む。場合によっては、鉄の供給源は周期表Feの化学元素を含んでいる。場合によっては、鉄の供給源は鉄であるか、鉄からなるか、または鉄を含む。場合によっては、鉄の供給源はクエン酸鉄、キナ酸鉄、塩化鉄、または硫酸鉄である。
【０１５４】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つの硫黄源を含む。場合によっては、硫黄源は周期表Sの化学元素を含むす。場合によっては、硫黄源は少なくとも1つのビタミンに含まれる。
【０１５５】
本発明の一実施形態では、炭素、窒素、硫黄、硫酸リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、または鉄の供給源は、10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、5、10、25、50、75、80、90 または 95パーセントの質量の炭素、窒素、硫黄、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、または鉄を含む。場合によっては、それらは気体、液体、または固体の状態にある。他の場合には、それらを使用して、予備成長およびまたは成長培地を準備することができる。場合によっては、予備成長およびまたは成長培地は、2、3、4、5、10、50、100、、103、105、1010 または 1050を超える異なる炭素、窒素、硫黄源を含む、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、およびまたは鉄の源を含む。いくつかの他の場合、予備成長およびまたは成長培地は、2、3、4、5、10、50、100、、103、105、1010 または 1050個以下の異なる源の炭素、窒素、硫黄硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、およびまたは鉄を含む。
【０１５６】
本発明の一実施形態では、予備成長培地の炭素、窒素、硫黄、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、およびまたは鉄の少なくとも1つの供給源は、成長培地のそれと同じである。
【０１５７】
本発明の別の実施形態では、予備成長培地の炭素、窒素、硫黄、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、およびまたは鉄の少なくとも1つの供給源は、成長培地のそれらとは異なる。
【０１５８】
本発明の別の実施形態において、予備成長およびまたは成長培地は、炭素、窒素、硫黄、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素及びまたは鉄の供給源を10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1 、1、10、102、103、105 または 1010 mMより大きい濃度で含む。
【０１５９】
本発明の別の実施形態において、予備成長およびまたは成長培地は、炭素、窒素、硫黄、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素およびまたは鉄の供給源を10100、1050、1020、1010、105、103、10、1、10-1、10-3、10-6、10-9、10-20、10-50 または 10-100 mMの濃度で含む。
【０１６０】
本発明の別の実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、医薬品グレードまたは超高純度の化学物質または化学元素を使用して調製される。
【０１６１】
本発明のさらに別の実施形態では、培地不純物は、予備成長およびまたは成長培地およびまたは流加培地に含まれる不純物である。
【０１６２】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少量の培地不純物を含む。場合によっては、培地の不純物の割合は、100、1020、1010、105、102、10、5、1、0.1、または 0.001%以下である。優先的に、予備成長およびまたは成長培地は、培地不純物の量または濃度が、優先的に少なくとも1.00001、1.1、1.5、2、5、10、103、1010 または 1020の係数で、少なくとも1つの炭素、窒素、硫黄、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、およびまたは鉄の供給源の量または濃度よりも低い。本発明によれば、培地の不純物の割合は、場合によっては、予備成長およびまたは成長に含まれる培地の不純物の原子数、量、質量、または体積を、予備成長およびまたは成長培地に含まれるすべての化学要素の原子の総数、量、質量、または体積で除した比として定義することができる。いくつかの他の場合、予備成長およびまたは成長培地に含まれる培地不純物の濃度は、予備成長およびまたは成長培地1 mLあたりの培地不純物で1050、1030、1010、105、103、500、100、50、10、1、10-1、10-3、10-5、10-10 または 10-50 μgよりも低い。
【０１６３】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、かなりの量の培地不純物を含む。場合によっては、培地の不純物の質量での割合は 0、10-40、10-20、10-10、10-5、10-2、10-1、1、5、10、25、50、75、80、または 90%よりも大きい。いくつかの他の場合、予備成長およびまたは成長培地に含まれる培地不純物の濃度は、前培地およびまたは培地1 mLあたりの培地不純物でthan 10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、10-1、1、10、50、100、103、105、または 1010 μgよりも大きい。
【０１６４】
場合によっては、予備成長およびまたは成長培地から生成または取得または生成されるナノ粒子はマグネトソームであり得る。
【０１６５】
本発明の一実施形態では、本発明による方法は、予備成長培地でナノ粒子産生細胞を産生するようにナノ粒子産生細胞を増殖することからなり、本質的にナノ粒子産生細胞がナノ粒子を生産しない、事予備成長ステップを含む。
【０１６６】
本発明の一実施形態では、予備成長ステップを開始するために使用されるナノ粒子産生細胞は、以下の特性のうちの少なくとも1つを有する細胞である：
i）それらは、予備成長ステップの予備成長ステップの開始の0.001、0.1、1、5、10、103、105 または 1010時間以上前の細胞である。
ii）それらはマスター細胞バンク、 ワーキング細胞バンク、またはリサーチ細胞バンクといった細胞バンクに含まれる。
iii）細胞あたり1、5、10、103、105 または 1010個以上のナノ粒子で構成されている。
iv）それらは、優先的に大部分の水を含み、予備成長およびまたは成長培地と組成が優先的に同一または類似の液体または培地に含まれる。v）それらは100、10、1、10-1、10-2、10-3、10-5 または 10-10 μM以下の培地の不純物濃度の培地に含まれている。
vi）それらはまたはナノ粒子1グラムあたり100、10、1、0.1または0.01グラム以下の不純物を維持または有することを可能にする培地に含まれるか、その条件で保持される。
vii）それらは10-100 および 10100、10-50 および 1050、10-30 および 1030、10-20 および 1020、10-10 および 1010、10-6 および 105、10-6 および 104、10-6 および 102、または 10-6 および 1リットルの間にある体積で構成されている。
viii）それら最初の予備成長ステップの体積の少なくとも10倍低い体積で構成される。
ix）それらは、優先的に予備成長およびまたは成長培地1リットルあたりの細胞数として、1 および 10100、2、および 1050、3 および 1020、または between 10 および 1010 cells、vii)、they have an optical density comprised between 10-50 および 1050、10-20 および 1020、10-10 および 10、10-5 および 105、10-5 および 103、10-5 および 102、10-5 および 1、10-5 および 10-1、10-5 および 10-2、または between 10-5 および 10-3の間に含まれる光学密度であるか、またはそれを表す。
x）優先的に1時間あたりまたは1時間あたり予備増殖およびまたは成長培地の1リットルあたり1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100以下の細胞分裂数を有する。
Xi）100、50、25、または0°C以下の温度で、優先的に77 Kまたは-20°Cで保管または保管される。
【０１６７】
本発明の一実施形態では、予備成長ステップを開始するために使用されるナノ粒子産生細胞は、以下の特性のうちの少なくとも1つを有する：
i)               それらは、培地不純物濃度が 10-50、10-20、10-10、10-5、10-2、10-1、1 または 10 μMを超える培地に含まれる。
ii)             ナノ粒子1グラムあたりの不純物が10-40、10-20 または 10-10グラム以上を保つまたは持つことを可能にする培地に含まれるまたはその条件に保たれる。
vii）優先的に1時間あたりまたは1時間あたり予備成長およびまたは成長培地の1リットルあたりの細胞分裂が、1、10、103、105、1010、1020、1050 または 10100より多くある。
viii）細胞あたり1、5、10、103、105 または 1010以下のナノ粒子を含む。これは、ナノ粒子の生成を防止するために十分に低い鉄濃度を含む媒体から維持されるか、または由来する場合に該当する。
【０１６８】
本発明の一実施形態では、予備成長ステップを開始するために使用されるナノ粒子産生細胞の特性の少なくとも1つは、ナノ粒子産生細胞の死または破壊または消失または変性または不活性化の防止を可能にする。
【０１６９】
本発明の一実施形態において、細胞の光学密度は、細胞が予備成長およびまたは成長培地、溶液中、または水中に含まれる場合、優先的には成長培地が 除去され、細胞は水に再懸濁されたときに測定される。場合によっては、細胞の光学密度は、1、2、5、10、50、100、200、300、400、450、500、550、600、900、103、 105または107 nm以上の波長で測定される。いくつかの他の場合、細胞の光学密度は、107、105、103、900、600、550、500、450、400、300、200、100、50、10、5、2 または 1 nmよりも短い波長で測定される。他のいくつかの場合でも、細胞の光学密度は、1〜107 nm、50〜105 nm、100〜103 nm、200〜900 nm、または400〜800 nmの波長で測定される。
【０１７０】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長ステップの２つの時点ｔ０とｔ１との間の細胞増殖の数は、以下に等しいか、または比例する。i ) t1で測定された細胞の数 n(t1) およびまたは ii) t1で測定された細胞の数 n(t1) とt0で測定された細胞数n（t0）の間のの比率。
【０１７１】
本発明の一実施形態では、細胞分裂の速度または速度は、
[n（t1）-n（t0）]/（t1-t0）
である。
【０１７２】
別の実施形態では、細胞分裂の速度またはレートは、
[n（t1）- n（t0）]/[（t1-t0）・V]
であり、Vは、細胞が培養または増殖される予備成長およびまたは成長培地の体積である。
【０１７３】
本発明の一実施形態では、予備成長ステップは、優先的には100、50、25、10または0℃以下の温度から0、10、25、50または100℃を超える温度まで予備成長のステップを開始するために解凍または加熱することにより開始される。その後、ナノ粒子産生細胞を予備成長培地に挿入されるまたは追加される。いくつかの場合には、予備成長ステップのこの初期段階は、10-50 および 1050、10-50 および 1010、10-30 および 105、10-20 および 103、10-10 および 102、または between 10-5 および 10の間の時間が経過する間に行われる。
【０１７４】
本発明の別の実施形態では、予備成長ステップは、異なる、優先的に増加するボリュームＶ０、Ｖ１、…、Ｖｉ… Vjの増殖に対応するサブステップ０、１、…、ｉ、…、ｊに分割される。ここで、iは異なるボリュームでの増殖の数iを指定する整数（0 <i <j）、jは異なるボリュームでの増殖の合計数を指定する整数、V0、Vi、およびVjは初期値、i番目、および最終の増殖量である。場合によって、予備成長の段階で、例えば、優先的にthan 10100、1050、1020、1010、105、103、102、10、5、3 または 2以下の少量の細胞から予備成長段階を開始する場合、異なる容量での細胞増殖または細胞増殖の数が重要になることがあります、例えば、優先的に1リットルまたは1ミリリットルまたは1マイクロリットルの予備成長培地または水溶液に含まれる 10100、1050、1020、1010、105、103、102、10、5、3 または 2個以下の細胞で予備成長ステップが始まる場合である。これらの場合、iおよびまたはjは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、10、103、105 または 1010より大きくすることができる。いくつかの他のケースでは、異なる量の細胞増殖または細胞増殖の数は、例えば、予備成長ステップが大量に、優先的に1リットル、1ミリリットル、または1マイクロリットルの予備成長培地または水溶液に含まれる優先的に2、3、5、10、102、103、105、1010、1020、1050 または 10100より多い細胞から始まる場合、低い可能性がある。これらの場合、iおよびまたはjは1010、105、103、102、10、5、4、3、2 または 1以下である。
【０１７５】
本発明の一実施形態では、比Ｖｉ ／ Ｖi-1は大きく、優先的には10-50、10-30、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、10-1、1、1.00001、1.0001、1.001、1.01、1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、7、10、102、103、105 または 1010より大きい。場合によっては、予備成長ステップのサブステップi-1とサブステップiの間で、細胞分裂の数が、1時間あたり、または1時間あたりの予備成長培地1リットルあたり、1、5、10、103、1010 または 1020より多く、または細胞の光学密度が1時間あたり1.00001、1.1、2、5、10、103、105 または 107を超えて増加する場合、Vi / Vi-1は大きい。
【０１７６】
本発明の別の実施形態では、比Vi / Vi-1は低く、優先的に10100、1050、1010、105、103、102、10、5、3、2、1.01、1.001、1.000001、1、10-5、10-10 または 10-50である。場合によっては、優先的には1時間あたり、または1時間あたり増殖前培地1リットルあたりの細胞分裂の数が1050、1010、103、102、10、5 または 1より小さい場合、または 細胞の光学密度が1時間あたり1.00001、1.1、2、5、10、103、105 または 107以下の係数で増加する場合、Vi / Vi-1は低い。
【０１７７】
場合によっては、Vi / Vi-1を減らすことで、異なるボリュームでの予備成長ステップの数を増やすことができる。他の場合には、Vi / Vi-1を増やすことで、異なるボリュームでの予備成長ステップの数を減らすことができる。
【０１７８】
本発明の一実施形態では、予備成長のステップおよびまたはそのサブステップの少なくとも１つは、体積Ｖi内の細菌懸濁液の光学密度（ 1 <i <j）は、
i）10-50、10-30、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、5、10、15、50、102、103 または 10以上の値に達する 。およびまたは
ii）予備成長のステップの開始時よりも終了時に、およびまたは予備成長のステップの少なくとも1つのサブステップの開始時よりも終了時に、優先的に1.000001、1.0001、1.01、1.1、1.5、2、5、10、102、103、105、1010 または 1020を超える係数でより大きい。
【０１７９】
本発明の一実施形態では、予備成長のステップおよびまたはそのサブステップの少なくとも１つでは、体積Ｖｉ内の細菌懸濁液の光学密度（ 1 <i <j）は、
i）10-50、10-30、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、5、10、15、50、102、103 または 105以下の値に達する 、およびまたは
ii）優先的に1.000001、1.0001、1.01、1.1、1.5、2、5、10、102、103、105、1010 または 1020,を超える係数で、予備成長ステップの開始時よりも終了時に、およびまたは予備成長ステップの少なくとも１つのサブステップの開始時よりも終了時により低い。
【０１８０】
本発明の一実施形態では、ボリュームＶ０の増殖の開始は時間tPG0bで行われ、ボリュームＶ０の増殖の終了は時間tPG0eで行われ、ボリュームＶｉの増殖の開始は時間tPGibで行われＶｉの増殖の終了は時間tPGie、で行われ、体積Vjの増殖の開始は時間tPGjbで行われ、およびまたは体積Vjの増殖の終了は時間tPGjeで行われる。
【０１８１】
本発明の一実施形態では、ｉ）時間tPG0bでの予備成長ステップの開始、および時間tPGjeでの予備成長ステップの終了、を分離する時間の長さはtPGje-tPG0b であり、およびまたはii）サブステップiの開始tPGib、およびサブステップiの終了tPGieを分離する時間の長さはtPGie-tPGibに等しく、それは10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、10-1、1、2、5、10、24、100、103、105 または 107時間以上である。場合によっては、tPGje-tPG0bおよびまたはtPGie-tPGibは、細胞分裂が困難またはゆっくりであって、1時間あたり10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、10、103 または 105個の細胞分裂または1時間あたり予備成長培地１リットルあたりの細胞分裂であるときには、大きくなる。
【０１８２】
本発明のさらに別の実施形態では、、tPGje-tPG0b およびまたは tPGie-tPGibは、1040、1030、1020、1010、105、103、102、10、5、2、1、10-1、10-3、10-5 または 10-10以下である。場合によっては、tPGje-tPG0b およびまたは tPGie-tPGibは、細胞が容易にまたは急速に分裂し、好ましくは10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、10、103 または 105以上の細胞分裂または1時間あたりの細胞分裂または予備成長培地1リットルあたり1時間あたりの細胞分裂であるときには短い。
【０１８３】
本発明の他の実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、tPGib または tPG0bで導入することにより、または予備成長ステップもしくはそのサブステップの少なくとも１つの間で予備成長培地の鉄濃度を10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2 または 10-1 μM以上に維持することにより、予備成長ステップ中に増殖される。
【０１８４】
本発明の別の実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、酸素を消費することにより、予備成長のステップまたはそのサブステップの少なくとも1つの間に増殖される。場合によっては、予備成長の培地の酸素の割合が次の値から減少する：i）tPGibまたはtPG0bにおいて10-50、10-10、10-5、10-3、1、5、10、20、50、75、90、95、99 または 99.9%,以上の値、優先的に21％または10〜30％の値から、tPGieまたはtPGje において、99.9、95、90、80、75、50、20、5、2、1、10-3、10-5、10-10 または 10-50 %以下の値まで、優先的に0％、または、0~10%の間の値まで減少する。およびまたはii）予備成長の培地での酸素の割合は、tPG0b と tPGje の間およびまたはtPGib および tPGie の間に1.0001、1.001、1.1、1.2、1.5、2、5、10、50、102、103、105 または 1010以上の係数で減少する。場合によっては、予備成長のステップまたはそのサブステップの少なくとも1つで予備成長の培地に酸素が添加されず、バクテリアによる酸素の消費があり、その結果、予備成長の培地の酸素の割合が減少する。いくつかの他の場合では、予備成長ステップまたはそのサブステップの少なくとも1つで、予備成長媒体に酸素が追加され、その結果、バクテリアによる酸素の消費と予備成長培地への酸素の添加に起因する予備成長媒体の酸素割合の変動が生じる。
【０１８５】
本発明の一実施形態において、酸素の割合、優先的に予備成長培地およびまたは成長培地中のＯ2は、予備成長およびまたは成長培地中の溶存酸素、好ましくはＯ2の割合である。場合によっては、100％の割合は予備成長およびまたは成長培地で可溶化されるO2の最大量に相当し、予備成長およびまたは成長培地1リットルあたり10-5から1020 mg、優先的には1から10 mgの溶存O2で構成される。
【０１８６】
本発明の一実施形態では、予備成長ステップは、細胞を増殖することからなり、そのような増殖は次の各項に関連し、対応し、そのものである：
i）細胞分裂の速度またはレートまたは数は、優先的には予備成長培地1リットルのように単位体積あたり、優先的にthan 1.000001、1.0001、1.01、1.1、1.2、1.5、2、5、10、102、103、105、1010、1020 または 1050倍以上の係数で予備成長のステップまたはそのサブステップの終わりより始まりで、またはtPGieまたはtPGje よりもtPGibまたはtPG0bでおおきい。
ii）細胞分裂の速度またはレートまたは優先的に予備成長培地の1リットルなどの単位体積あたりの数は、予備成長のステップまたはそのサブステップの1つの開始時または、tPGibまたはtPG0bで、10100、1050、1020、1010、105、103、102、10、5 または 2以下の数の細胞または1時間あたりの細胞から、数予備成長ステップまたはそのサブステップの1つの終了時またはtPGieまたはtPGjeで、2、5、10、102、103、105、1010、1020、1050 または 10100以上の細胞または1時間あたりの細胞まで、増加する、
iii）1リットルなどの固定された予備成長ボリュームに含まれる細胞について優先的に測定される光学密度は、予備成長ステップまたはそのサブステップのいずれかの開始時またはtPGibまたはtPG0bにおいて光学密度が10、1、10-1、10-2 または 10-3に等しいか低いところから、予備成長ステップまたはそのサブステップの1つの終了時またはtPGieまたはtPGjeで光学濃度が10-10、10-2、10-1、1 または 10に等しいか大きいところまで、1.00001、1.1、1.2、1.5、2、5、10、103、105、1010、1020 または 1050より大きい係数で増加する。
【０１８７】
本発明の一実施形態では、予備成長ステップ中、またはそのサブステップの少なくとも１つの最中、開始時、または終了時に、ナノ粒子を本質的に生成しない細胞は、次に掲げる特性の少なくとも1つで特徴付けられる：
i）細胞に含まれるナノ粒子の数が103; 102、50、20、10、5、2 または 1より少なく、優先的に10または5、または0〜103、優先的に0〜10または0〜5の間の数以下である。
ii）少なくとも1つのナノ粒子を含む細胞の割合100、99、90、80、50、20、10、1、0.1％以下、優先的に10または1％以下、または0〜99％、0〜50、0〜10％の間、優先的に0〜 5％の間にあり、この割合は優先的に、予備成長培地に含まれる少なくとも1つのナノ粒子を含む細胞の数と細胞の総数との間の比である。
iii）光学密度が10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、0.1、0.2、0.5、1、5、10 または 100以上である。
iv）細胞の数が1、5、10、102、103、105、1010、1020、1050 または 10100、以上である。
v）それらは0.0001、0.001、0.1、1、10、50、102、103、105 または 1010リットル以上の体積に含まれている。
vi） 細胞生成の数が1 および 1010、1 および 103の間、優先的に50から300で構成される、
vii）予備成長のステップの終わりODPGEに測定された光学密度と予備成長のステップの始まりODPGBで測定された光学密度との比、ODPGE / ODPGB が1、2、5、10、15、25、50、100、103、105、1010、1050 または 10100,より大きい。およびまたは
viii）予備成長ステップのサブステップiの終わりに測定された光学密度ODPGiEと、予備成長ステップのサブステップiの始めに測定された光学密度ODPGiBの比率、ODPGiE / ODPGiBが、1、2、5、10、15、25、50、100、103、105、1010、1050 または 10100に等しいかそれ以上である。
【０１８８】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子を本質的に生成しない細胞は非磁性細胞である。
【０１８９】
本発明の一実施形態では、優先的に、予備成長ステップまたはそのサブステップの少なくとも１つの最中、開始時または終了時に、非磁性細胞の割合が10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、5、10、50 または 75%より大きい値が得られる。場合によっては、非磁性細胞の割合はnNMC /（nMC + nNMC）に等しく、nMCとnNMCはそれぞれ磁性細胞と非磁性細胞の数である。
【０１９０】
本発明の別の実施形態では、非磁性細胞は磁気応答を示さない。ここで、磁気応答は、少なくとも1つの細胞の磁場に平行な向きとなる、または磁場の強さに比例する細胞の速度での動きであり得る。ここで磁場の強さは10-9、10-3、10-1、1、103 または 106  mTより大きい場合があり、およびまたは磁場が優先的に細胞に適用される。
【０１９１】
本発明の一実施形態では、この方法は、成長培地での予備成長ステップから生じるナノ粒子産生細胞を増殖することからなる成長ステップを含み、ナノ粒子産生細胞がナノ粒子を産生するようにする。場合によっては、成長ステップは、温度、pH、鉄濃度、およびまたは成長培地の酸素濃度の制御を可能にする発酵槽または装置で実行される。
【０１９２】
本発明の別の実施形態において、成長ステップは、予備成長のステップから得られた細胞を成長培地に挿入することにより始まる。場合によっては、成長ステップまたはそのサブステップの少なくとも1つは、10-50 および 1050、10-50 および 1010、10-30 および 105、10-20 および 103、10-10 および 102、または between 10-5 および 24時間の間に含まれる経過中に行われる。いくつかの他の場合では、成長ステップまたはそのサブステップの少なくとも1つは、1020、1010、105、103、102、10、5、2、1、10-1、10-2、10-3、10-5、10-10 または 10-20時間以下の経過時間の間に行われる。さらに他のいくつかのケースでは、成長ステップまたはそのサブステップの少なくとも1つは、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、10-1、1、2、5、10、102、103、105、1010 または 1020以上の経過時間中に行われる。他のいくつかのケースでは、iおよびまたはi は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、10、103、105 または 1010以下である。
【０１９３】
本発明の一実施形態では、各サブセットｉは、好ましくは流加培地の助けを借りて、成長培地へまたは中に異なる量の酸素をバブリングまたはもたらし、およびまたは成長培地へまたは中に異なる量の鉄をもたらすことにある。
【０１９４】
本発明の一実施形態では、成長ステップは、圧縮空気または１％を超えるＯ2を含むガスなどのガスが優先的に1 から 1010、5 から 105、10 から 104、100 から 103、または 100 から 300回転/分の条件の攪拌下で成長培地に導入される以下のサブステップの少なくとも１つを含む：
i)               10-3〜103時間または優先的に2〜16時間続く最初のサブステップ中、 ガスは成長培地1リットルあたり0〜1010、優先的に0.001〜40 mL / minで構成され、その結果細胞の光学密度が10-10〜103、優先的には0.08〜0.12の間の最初のサブステップの開始時の値から、最初のサブステップの終了時の値までの値が1.0000001、1.1、1.5、2、5、10 または 103より大きい係数で増加し、10-9 および 104の間、 優先的に0.2 および 1の間にある値となる。
ii)             10-3〜103時間または優先的に2〜120時間続く2番目のサブステップでは、ガスの不足が1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または 103の係数で増加し、最初のサブステップと比較して、または成長培地1リットルあたり0から1010、優先的に1から50 mL / minで構成され、その結果2番目の開始時の値から細胞の光学密度が増加し、最初のスタブステップの終わりに得られるサブステップに等しいか、10-9から104の間、優先的には0.2から1の間で構成され、2番目のサブステップの終わりに2番目のサブステップの開始時の値よりも1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103より大きい係数で、または10-9から104の間、優先的には0.5から4の間の値である。
iii)           10-3〜103時間、または優先的に2〜120時間続く3番目のサブステップでは、ガスの不足が1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103よりも大きく増加する。2番目のサブステップで、または成長培地1リットルあたり0〜1010、優先的に50〜120 mL / minで構成され、3番目のサブステップの開始時の値から細胞の光学密度が増加し、 2番目のサブステップの終わりに得られるステップに等しいか、10-9から104の間、優先的には0.5から4の間で、3番目のサブステップの終わりに1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103以上の係数で、3番目のサブステップの開始時の値より増加し、優先的に3番目のサブステップの最後にまたは10-9から104の間、優先的に1から8までの値となる。
iv)            10-3〜103時間、優先的に2〜120時間続く4番目のサブステップでは、ガスの不足が1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103よりも大きく増加する。3番目のサブステップで、または成長培地1リットルあたり0〜1010、優先的に200〜300 mL / minで構成され、4番目のサブステップの開始時の値から細胞の光学密度が増加し、 3番目のサブステップの終わりに取得したステップに等しいか、10-9から104の間、優先的には1から8の間で、4番目のサブステップの終わりに4番目のサブステップの開始時の値よりも優先的に1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、103の係数で増加し、10-9から104の間、優先的には4番目サブステップの最後に2から16までの値となる。
v)             10-3から103時間、優先的には2から120時間続く5番目のサブステップでは、ガスの不足が、 4番目のサブステップより1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103以上の係数で増加し、成長培地1リットルあたり0〜1010、優先的に300〜500 mL / minで構成され、その結果4番目のサブステップの終わりに得られる値と等しい5番目のサブステップの開始時の値から細胞の光学密度が増加し、 10-9から104の間、優先的には2から16の間で、5番目のサブステップの終わりには、5番目のサブステップの開始時の値よりも1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103の係数で増加し、または10-9から104の間の値、優先的に5番目のサブステップの最後に4から32の間の値 となる。
【０１９５】
本発明の一実施形態では、サブステップｉ、好ましくはサブステップ２〜５の間に、
ｉ）酸素の割合は、細胞による酸素の消費によって、空気の不足によって0.01%または0.1 mBarより高く0.9% または 9 mBarより低く維持される。
ii）ガスの不足が成長培地1リットルあたり0から1010、1から105、5から104、10から103 mL / minの間で構成されている。
iii）成長培地は1から105、10から104、50から103、または100から500回転/分で構成される速度で攪拌されている。
iv）媒体の攪拌速度を上げることでガスの不足を減らすことができる。
v）気体の不足は、培地の攪拌速度を下げることによって増加させることができ、およびまたは
vi）細胞の光学密度は、サブステップiの開始時に優先的に10-50から103の間に含まれる値からサブステップiの終わりに優先的に10-20から105の間に含まれる値に増加する。
【０１９６】
本発明の一実施形態では、成長ステップは、少なくとも１つのサブステップを含み、その間長培地のｐＨは、０から１４、２から１３の間の固定または決定または選択されたｐＨ、すなわち 4と11、5と10の間、優先的に5と8の間、最も優先的に6.9に等しく維持される。それは優先的に毎分回転で1〜1010、優先的に100〜300の攪拌条件下で流加培地に含まれる鉄の酸性源を加えることにより行われる。場合によっては、成長培地は、成長ステップまたはそのサブステップの開始時の鉄濃度を含み、それは
i）、1010、105または102 μM以下、優先的には10または2 μM以下、およびまたは
ii）10-10〜1010、10-5〜105、10-3〜103 μM、優先的に0.2〜20 μMで構成される。
いくつかの他の場合、成長ステップまたはそのサブステップの1つで、成長培地の鉄濃度は、優先的に成長培地への流加培地の添加で増加し、終了時次の値に達する
i）10-10、10-5、10-1または1μMより大きい、2μMより優先的に大きい、およびまたは
ii）10-10から1010 μMの間に含まれる、優先的には2 μM〜5 mM、または2 μM〜0.5 mM。
【０１９７】
本発明の一実施形態では、成長ステップは、以下のサブステップのうちの少なくとも１つを含み、そこでは：
・10-3から103、優先的には2から16時間続く第１サブステップ中に、成長培地への流加培地の挿入により、10-10から1010 μMの間、優先的には2〜20 μMに含まれる成長培地中の鉄濃度が生じる。バクテリアによる鉄の消費を考慮しない場合もあれば、細菌による鉄の消費を考慮した場合もある。これにより、第１サブステップの開始から終了まで、1.0000001、1.1、1.5、2、5、10または103を超える係数で増加する。優先的には第1サブステップの開始時に成長培地1リットル当たりナノ粒子10-10から1010の間、好ましくは0.001から0.1mgの間から、第１サブステップの終わりには成長培地1リットル当たりナノ粒子10-10および1010の間の値、好ましくは1から10mgの間の値のナノ粒子が生成される。
・10-3から103、優先的には2から120時間続く第2サブステップ中に、成長培地への流加培地の挿入により、10-10から1010 μM好ましくは20 および 40 μMの間に含まれる成長培地中の鉄濃度が生じる。細菌による鉄の消費を考慮に入れない場合もあれば、考慮に入れる場合もある。この結果、第２サブステップの開始から終了までナノ粒子が、1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103を超える係数で増加する、または第２のサブステップの開始時に10-10および1010の間の値、好ましくは１〜10mg の値から、2番目のサブステップの終わりには成長培地１リットル当たりナノ粒子１０-１０〜１０１０の間、好ましくは２〜２０ｍｇからなる値まで優先的に生成される。
・10-3から103、優先的には2から120時間続く第３サブステップ中に、成長培地への流加培地の挿入により、10-10から1010 μM、好ましくは40 および 150 μMの間に含まれる成長培地中の鉄濃度が生じる。細菌による鉄の消費を考慮に入れない場合もあれば、考慮に入れる場合もある。この結果、第３サブステップの開始から終了までナノ粒子が、1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103を超える係数で増加する、または第３のサブステップの開始時に10-10および1010の間の値、好ましくは2 および 20 mgの間の値から、３番目のサブステップの終わりには成長培地１リットル当たりナノ粒子１０-１０〜１０１０の間、好ましくは4 および 40 mgの間からなる値まで優先的に生成される。
・10-3から103、優先的には2から120時間続く第４サブステップ中に、成長培地への流加培地の挿入により、10-10から1010 μMの間、好ましくは150 および 500 μMの間に含まれる成長培地中の鉄濃度が生じる。細菌による鉄の消費を考慮に入れない場合もあれば、考慮に入れる場合もある。この結果、第４サブステップの開始から終了までナノ粒子が、1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103を超える係数で増加する、または第４サブステップの開始時に10-10および1010の間の値、好ましくは4 および 40 mgの間の値から、第４サブステップの終わりには成長培地１リットル当たりナノ粒子１０-１０〜１０１０の間、好ましくは8 および 80の間からなる値まで優先的に生成される。
10-3から103、優先的には2から120時間続く第５サブステップ中に、成長培地への流加培地の挿入により、10-10から1010 μMの間、好ましくは500 および 1000 μMの間に含まれる成長培地中の鉄濃度が生じる。細菌による鉄の消費を考慮に入れない場合もあれば、考慮に入れる場合もある。この結果、第５サブステップの開始から終了までナノ粒子が、1.0000001、1.1、1.5、2、5、10、または103を超える係数で増加する、または第５のサブステップの開始時に10-10および1010の間の値、好ましくは8 および 80 mgの間の値から、第５サブステップの終わりには成長培地１リットル当たりナノ粒子１０-１０〜１０１０の間、好ましくは16 および 160 mgの間からなる値まで優先的に生成される。
【０１９８】
本発明の一実施形態では、成長ステップまたは成長ステップのサブステップｉ、優先的にはサブステップ１〜５は：
ｉ）その間に、成長培地の鉄濃度は１０-１０から1010μＭ、好ましくは２μＭを超えて増加する。優先的には、鉄を含む流加培地を成長培地に加え、細胞による鉄の消費のために1010 mM以下、優先的に5 mMを加える。
ii）成長培地1リットルあたりの鉄の総量は成長培地1リットルあたり10-6から15、優先的に2・10-4から1.5gの鉄である。およびまたは
iii）ナノ粒子の量が成長ステップまたはそのサブステップの開始時に成長培地1リットルあたり0から500mg、優先的には0から80 mgのナノ粒子から、成長ステップまたはそのサブステップの1つの終わりには成長培地1リットルあたり１から105 mgの間の値、優先的には10から200 mgのナノ粒子に成長する。
【０１９９】
本発明の一実施形態では、成長ステップは、細胞の増殖からなり、そのような増殖は、細胞分裂の速度またはレートまたは数または光学密度に関連しまたは対応する。その量は、予備成長またはそのサブステップの少なくとも1つ ステップよりも成長ステップまたはそのサブステップの少なくとも1つで優先的に1.000001、1.0001、1.01、1.1、1.2、1.5、2、5、10、、102、103、105、1010、1020 または 1050以上の倍数で成長する。
【０２００】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子産生細胞は、優先的に、成長ステップ中、またはそのサブステップの少なくとも1つの最中、開始時、または終了時に、以下の特性の少なくとも1つを有するか、または特徴付けられる： 
i）細胞中のナノ粒子の数は1、2、5、10、50、102または103より大きい、優先的に0、1または2または0と103の間より大きい、優先的に0と100の間、または 0と10の間である。
ii）少なくとも1つのナノ粒子を有する細胞の割合は10-4、10-2、10-1、1、5、10、50、75、または95％よりも大きい、優先的には10または 50％よりも大きい、または0〜99％、10〜75、5〜90、優先的に20〜100％の間にある。
iii）光学密度が10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-2、0.1、0.2、0.5、1、5、10 または 100より大きい、
iv）細胞の数が 1、5、10、102、103、105、1010、1020、1050 または 10100より大きい。
v）細胞の体積が、0.0001、0.001、0.1、1、10、50、102、103、105 または 1010リットルより大きい。
vi）細胞の生成数が1から1010、1から103、優先的には50から300の間に含まれる。
vii）成長ステップの終わりに測定された光学密度ODGE、および成長ステップの開始に測定された光学密度ODGBの比率、ODGE / ODGBはthan 1、2、5、10、15、25、50、100、103、105、1010、1050 または 10100より大きい。または
viii） 成長ステップのサブステップiの終わりで測定された光学密度ODGiEと、成長ステップのサブステップiの始まりで測定された光学密度ODGiBの間の比、ODGiE / ODGiBは、1、2、5、10、15、25、50、100、103、105、1010、1050 または 10100より大きい。
【０２０１】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子を本質的に生成しない細胞は非磁性細胞である。
【０２０２】
本発明の一実施形態では、成長ステップまたはそのサブステップの少なくとも１つの間に、開始時にまたは終了時に、磁気細胞の割合で10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、5、10、50 または 75%,が得られる。場合によっては、磁気細胞の割合はnMC /（nMC + nNMC）に等しく、nMCおよびnNMCはそれぞれ磁気細胞と非磁気細胞の数である。
【０２０３】
場合によっては、予備成長ステップ、成長ステップ、またはそれらのサブステップの少なくとも1つは、-250、-200、-150、-100、-50、-20、 -10、-5、-2、-1、0、1、2、5、10、20、50、75、100、103、105、107°C、でまた温度の変化が10-5、10- 3、10-2、0.1、1、5、10、50、100または150°C以上で実施される。いくつかの他の場合、予備成長ステップ、成長ステップ、またはそれらのサブステップの少なくとも1つは、107、105、103、100、75、50、40、30、20、10、5、2、1、0、-1、-2、-5、-10、-20、-50、-100、-150、-200 または -250 °Cより低い温度でまたは温度変動が、105、103、102、50、20、10、5、2、1 または 0.1 °C以下で実施される。
【０２０４】
場合によっては、予備成長のステップ、成長ステップ、またはそれらのサブステップの少なくとも1つは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、または14より大きいpHでまたはpH変動が10-10、10-7、10-5、10-4、10-3、10-1、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 または 14pH単位以上で実行される。いくつかの他の場合では、予備成長ステップ、成長ステップ、またはそれらのサブステップの少なくとも1つは、1、2、3、4、5、6、7、8、9より低いpHで、または10-10、10-7、10-5、10-4、10-3、10-1、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 または 14 pH単位以下で実行される。
【０２０５】
場合によっては、温度、温度変動、pH、またはpH変動は、1時間あたり少なくとも1、5、10、103、105、1010 または 1050の細胞分裂または時間当たり細胞分裂を可能にするのに十分な大きさである。
【０２０６】
他の場合には、温度、温度変動、pH、またはpH変動が十分に低く、1、5、10、103、105、1010 または 1050を超える細胞または 1時間あたりの細胞の破壊、消失、または変性を防ぐ。
【０２０７】
本発明はまた、本発明によって予備成長培地は、鉄または少なくとも１つの鉄源を含まない方法に関する。
【０２０８】
本発明は、本発明による方法に関し、予備成長培地は、鉄または少なくとも1つの鉄源を含み、鉄または鉄源はその性質およびまたは量が、細胞の成長を可能にしながら、優先的に本質的に細胞によるナノ粒子の生産を可能にしない。
【０２０９】
本発明の一実施形態では、鉄源の性質は、組成、化学式、鉄源の種類、または鉄源自体である。場合によっては、鉄源は第一鉄または第一鉄の源である。いくつかのケースではそれが次の化学式であるか、または含む、またはからなる、またはを有することができる、
Cl3Fe、C10H12FeN2NaO8、Fe2O12S3、C6H8FeNO7、C6H5FeO7、FeH18N3O18、C30H21FeN3O15-3、FeO4P、C6H7FeO8、Fe2H2O13S3、Fe2H12O18S3、C10H12FeN2NaO8、C10H13FeN2O8、FeH28NO20S2、C10H15FeN2NaO8、C10H14FeN2NaO8+4、C14H21FeN3O10、C18Fe7N18、Fe4H2O22S5、Fe4O21P6、F3Fe、C6H11FeNO7+3、C6H11FeNO7、C18H15FeO9、C12H29Fe5Na2O23、C12H22Fe2O14、C15H21FeO6、C15H24FeO6、C6H5FeO7、C10H16FeN3O8、C4H10FeO5、C54H105FeO6、AsFeH13O9+、AsFeO4、Fe+3、C6H12FeN3O12、C6H18As3FeO6、FeH2O5P、C21H21FeO9S3、C6H11FeNaO7+3、C14H22FeN3NaO10、FeNaO7P2、C3H9As3Fe3O9、C18H24Fe4O42P6、C6H11FeO10、C9H18FeN3S6、Cl3FeO12、C6H9FeNO7+、Cr3Fe2O12、C6H10FeNO8、FeH3O3、C15H30FeN3S6、C30H27FeN3O15、C3FeN3S3、C6H12FeKO6+4、FeH3O3、FeN3O9、C3H3FeO6、C6H8FeO7、C24H45FeO6、FeO6P3、Fe2H14O19S3、C18H33FeO21、C6H9FeO9、C18H27FeO24、C6FeN6-3、C10H12FeN2O8-、C22H36N4O13、C3FeN3、C6H12FeN3O12、C6H9FeO6、C15H27FeO6、FeH4O6P、C21H15FeO9、FeH8O8P、C6H6FeNO6、C4FeKO8、C12H12Fe2O18、C33H35FeN4O4、Cl3FeH4O2、C24H45FeO6、C10H15FeN2O7、FeH4NO8S2、C32H31FeN4O5、Fe2H6O3、AlF6Fe、C4H4FeNO8、C81H84FeN3O33、Fe2S3、Cl3FeH14O7、C18H6FeN9O21、Cl3FeO9、FeI3、C6H14FeO10、C6H10FeO8、C55H80FeN17O21S3、 C10H16FeN5O13P3、C18H34FeO16+3、C12H12Fe2O15、C6FeNa3O12、C10H12FeKN2O8、C21H24FeN3O9、 C6H6Fe2O12、C6Fe2O12、AsFe、C35H33FeN5O11-3、Cl3FeH2O、C18H30Fe2N6O12、FeI3O9、C10H18FeN2NaO11、Cl3FeH18O9、Cr2FeH4NO8、C9H21Fe2O18P3、C18H34FeO2、C30H27FeO6、C30H24FeN3O15、C54H102FeO6、Fe4H18O30P6、Fe2Se3、C54H99FeO6、C15H21FeO6、C10H18FeN2O7+2、C10H18FeN2O7+2、C10H19FeN3O8、C22H14FeO4、C39H63FeN6O15+3、C10H19FeN3O8、C4FeNaO8、FeO4V、C6H15FeN3O12、C6Fe2O12、C18H24Fe2O24-6、C18H19FeN2NaO6、C18H19FeN2NaO6、C12H18Fe2O12、C6FeK3N6、C24H47FeO25-、 C18H38FeO19、C15H21FeO6、C18H39FeO24、C6H11FeNO7、C6H12FeO6、 C12H28FeO14、FeHO2、C45H36FeN3O6、Fe3H2O4、Fe2O3、C36H72FeO6、C12H18Fe2O15、C9H18FeO9、FeH6O3、 C54H102FeO6、C42H84FeO6、C16H31FeO2+2、C36H69FeO6、Fe3H8O4、C8H15Fe2O2+4、C12H48Fe2N12O12S3、C48H96FeO6、C9H15FeO9、C35H39N5O11、C42H81FeO6、C48H93FeO6、C10H24O2、Fe2H18O21S3、FeH12N3O15、C24H23FeN10O6S2、C18H14Cl3FeN10S2、C21H15FeO6、Fe2H10O17S3、C10H19FeN3O8、C18H20FeN2NaO6、C3F9FeO9S3、C5H14FeO4、C6H19FeNO11、C18H16FeN2NaO6、C32H36N4O9、C15H30FeO6、C15H24FeO6、C15H15F9FeO6、C21H21Cl3FeIS、C6H12Fe2O18、C6H18FeO12、C6H15FeO12、C6H18Fe2O18、C6H8FeO7、C6H13FeO11、C6H4Fe2N7、FeH2O4S、C42H60N12O16、C6Fe2N6、C3Fe2O9、C162H297FeO27-6、C21H27Cl4FeN2O、C6H4FeNaO7、C27H50FeN6O10、C25H48FeN6O8、C27H48FeN6O9、C6H7FeO6+2、Fe2H2O4、C14H26FeN5O10、Cl4FeH4N、Cl3FeH12O18、C6H17FeN2NaO7+3、C10H11FeNO6、C15H15F9FeO6、C6Fe2N6Na、C9H21Fe2O18P3、C21H27ClN2
O、C2H3FeO、C10H12Fe2N2O8、FeH3O3P、C7H5FeO2、C7H5FeO2、FeI3O12、C3H4FeNO2S、C2H2FeNO2、C12H12Fe2O12、C8H7FeNO3、C2HFe、C6H7FeO2S4、C6H11FeO6、C14H19FeO12、BFeH3O3、C21H18FeO15、C35H56FeN6O13、C12H30FeO3、CHFe、C47H48FeNO14、Fe2H6O3、Fe2O9Sn3、C18H18FeO3、Fe2O9Se3 、Fe2O9Si3、Fe2O9S3、Br3FeO9、FeN3O6、C24H54FeO3、C66H129FeO6、FeP、C6H18FeO24P6+3、C33H72FeO3、C40H75FeO4、C2H3FeS、C3FeN3、C21H39FeO6、FeSi、C30H29FeN3O16、C22H36FeN4O13、C30H57FeO6、C60H117FeO6、C18H12FeN3O6、C18H31FeO2+2、FeS2、C6H11FeN4O2、C6H5FeO7、C6H5FeS、C10H13FeN2O10-、C8H13FeOS2、C27H51FeO6、C24H44FeO25-,C6H15FeN3O6、C6H12FeO9、Cl3FeO9S3、CFeNS、Fe4H12O12Si3、C3H6FeO12、C4H3FeO4S2、C4H4FeO6、C6H3FeN3O6、C5H5FeO2、C10H24FeN4O9、C14H19FeN3NaO10、C10H14FeN2Na2O8、C36H44FeN4、C6FeNa3O12、Fe2H3OS3、C16H27FeO4、C6H8Fe2O13、C6H7FeO3、C4H4FeO6S2、C2H5FeN2、C5H7FeOS2、C18H18FeNa6O21、C3H9FeO9S3、C24H54FeO12P3、C36H55FeN6O11、Fe2H2O10Si3、C2H4FeNO2、C4H11FeN2O4、AsFeH2O5、C12H13FeO13、C36H67FeO6、C12H13FeO13、C3H6FeN3O6、C18H15FeO9S3、C36H75FeO12S3、Fe2H4O5、C28H24FeN4+3、F3Fe、C30H30FeO6、BFe、C2H8N2O4、C8H5FeN2O5、Fe2H4O11Se3、C6H7FeO6S4、C4H10FeN3、C6H12Fe2O15、C15H23FeO5、C8H12FeNO12、C49H56ClFeN4O6、FeH4NO8S2、C36H75FeO9S3、B3F12Fe、FeP、Fe2H20O22S3、Cl3FeH12O15、C18H9FeN6、Fe2H12O15Se3、C56H51FeN4、Fe2H8O13Se3、C44H27FeN4、C33H30FeN4O6-2、CrFeO3、C18H12FeN3O15S3、Cl3FeH18O21、C6H5FeNa3O13、C18H14FeN13O9S2、C15H24FeO6、C24H27FeO9S3、C27H54FeN3S6、Cl3FeH12O6、C16H36Pb、C8H18Fe2O12P2、Cl3FeH24O12、C24H30FeO9S3、C21H24FeO9S3、C18H15FeO12S3、Cl3FeH20O10、C28H24FeN6O6+,C66H121Fe2NaO65、Cr3FeH3O12、C12H28Fe2O14、C3H8FeNS2Zn-,F3FeH6O3、C30H51FeO6、C30H48Fe4N6O24、C30H18FeN3O6、C20H36FeO4、C6H6FeK3O15、C15H6F18FeO6、C10H13FeN2O8、C6FeN6、C15H3F18FeO6、C15H12FeN3O3S3、C21H23FeO10S3、FeH2O+3、C24H44FeNaO28、Cr3FeO6、Fe2H2O+6、C6H12FeN9、FeH5NO4S、C2K2O4、C18H13FeN6、C30H27FeO6、C34H38N4O4、Cl3FeH15O18、C6H18FeO6P3S6、C6H11ClFeNO10S2、C5H4F3FeO2+2、C6H6Cr2O12、C4H3CrKO8、C2MgO4、C12H25FeO14、C2H2MgO4+2、C2CrO4+,C2HNaO4、C2HKO4、C6Cr2O12、C2H2FeO4、C2H4MgO6、C6AlO12-3、C6Al2O12、C2Li2O4、C2MgO4、C44H30N4O12S4、C10H19FeN2NaO10、C5H4CuFeN6O3、C10H14FeN2NaO9、C30H15FeN3Na3O15S3、C27H15FeN12O6、C9H18FeN3S6、C30H30FeN3O15+3、C9H18FeN3S6、C6FeN6、C18Fe7N18、C18H18FeN2NaO6、C30H21FeN12O6、C44H30FeN4+3、C14H18FeK2N3O10、C10H16FeN2NaO8、C33H29FeNO11+、C25H18FeN4O6S+,C35H24FeN6O2S+,C32H32ClFeN4O6、C30H12F9FeN12O6、C30H18Cl3FeN12O9、C60H72FeN9O9+3、C60H66FeN9O9+3、C15H24FeO6、C22H25Cl2FeN3O9+,C18H23Cl3FeN3O12、C11H24FeNO11、C49H54FeN4O9+,C42H54Cl8Fe2N4O2、C44H26Cl4
FeN4+3、C34H32FeN4O4+,C44H38FeN8+7、C9H11Cl2FeN4O2S、C18H32FeN4O8+3、C34H32ClFeN4O6、または C19H25FeN4O6 . 
いくつかの他の場合では、鉄源は次の化学式であるか、それを含むか、それでできている、または有することができる: 
Fe+2、FeH14O11S、FeH8N2O8S2、FeO4S、Cl2Fe、FeS、C4H2FeO4、C12H26FeO16、C4H5FeNO4、C12H10Fe3O14、C16H30FeO4、FeH2O5S、C10H12FeN2Na2O8、As2Fe3O8、CFeO3、C6H12FeO6、FeH12N2O12、C12H10Fe3O14、C6H5FeNaO7、C34H32FeN4O4、C12H22FeO14、C12H14FeO12、C6H10FeO6、C4H8FeN2O4、C12H28FeO16、FeI2、FeH4N2O6S2、C34H32FeN4O4-2、C34H32FeN4O4、F2Fe、C6H18FeO9、C6H5FeO7-、C2FeO4、C4H4FeO4、Cl2FeO8、Fe3O8P2、FeO、B2F8Fe、FeH8O8S、C4H6FeO4、C4H4FeO4、C12H10FeNa4O14、C22H14FeO4、C2H4FeO6、C12H24FeO14、C14H20FeN3O10-、Cl2FeH8O4、C12H8FeN2O4、C4H8FeO4、C5H7FeNO4、C8H12FeN2O8、C12H10Fe3O14、C6H16FeO9、C19H19FeN7O10S、C10H16FeN2O8、C12H10Ca2FeO14、C2H6FeO6、C36H70FeO4、C6H6FeO7、C4H2FeO4、C36H21Cl2FeN9O14、C32H62FeO4、FeH2O2、C4H6FeO6、C6H8CaFeO7+4、C4H10Cl2FeN2O4、C36H24Cl2FeN6O8、C6H14FeO7、C12H16FeO12、BFe、C32H16FeN8、C12H26FeO15、C12H10Fe3O14、FeH8I2O4、C4H10FeN2O8S、C30H24Cl2FeN6O8、C39H30Cl2FeN6O8、C12H14FeO12、C30H24FeN6+2、C4H2FeO4-2、C4H4FeO4、C10H16FeO4、C36H24FeN6O4S、C2H4FeO6、C2H2FeO6、C8H15Fe2O2+4、C32H16FeN8、C12H16Fe3O14、C12H24FeO14、C2FeN2S2、C12H16FeN6O4、C14H20FeN3O10、C12H7FeN3O6S、C20H12FeN4、C12H16Ca2FeO14、C46H54FeO9、C6H5FeO7、FeH4O6S、C10H15FeN2NaO7、C10H6FeN4O8、Fe2P、C4H4FeO6、C14H26FeO16、Cl2FeH12O14、C4H8Cl2FeN2O4、C6Fe3N6、C4H12As2FeO8、C10H16FeO4、FeH20N2O14S2、C16H30FeO4、C40H40FeN8O4+、Fe2Na8O21P6、C14H8FeO10、C14H8FeO4、C12H20FeO4、C8H8FeS、C5H4FeO、C2H3FeNO2、C10H14FeN2O8、C6H2FeN3O7+、C2H2Fe、C10H6FeN2、C6H15FeN3O7、C72H124FeO8-2、FeH22N2O15S2、C40H78FeO4、FeH2N2O6+2、C44H86FeO4、C10H20FeN2O8S2、C20H38FeO4、C36H66FeO4、C24H46FeO4、C29H26FeP+、C36H64FeO6、C14H26FeO4、C26H28FeNP、C28H54FeO4、C36H32FeN4O4、C36H36FeN4O8、C6H9FeNO7+、C5H6FeO2、C4H11BFeO4、C8H19BFeO4、C4H4FeO4S2、C6H6FeO7、C18H34FeO4、C12H20FeO13、C4H4FeO6、C5H7FeNO3、Fe3H8O4、C2FeN2S2、FeH2O2、Fe3H2O4、C44H28FeN4、C2H6FeO5、Fe2H6O11S2、C3H4FeN2O3、Fe3H2O9P2、C6H14Fe3N3O7-3、C4H10FeN2O6、Cl2FeH2O、FeO4W、C6H5FeO3P、C6H8FeO7、FeTe、C4H2FeO4、C20H20Cl2FeN8、C14H12FeO6、C3H3FeO7P、C4H7FeNO4、FeO3Si、Cl2FeH12O6、Cl2FeH2O9、FeH10O9S、FeH12O10S、C8H17FeO3P、C4H14FeO8、Fe3H16O16P2、F6FeSi、C72H42FeN6Na6O22S7、FeH4O5S、C39H30FeN6O4S、C40H50O4、C4H10FeN2O4、C2H4FeN2O4S、Br2FeH2O、C98H200FeN10、C36H21FeN9O10S、C10H10Fe、C2H6FeN2、F6FeH12O6Si、C48H48FeN6O4S、FeO4S、C2H10FeN2O8S2、C44H27FeN5O、C30H24FeN6O4S、C6H8O6、C6H7NaO6、FeH4O2+2、FeH2O+2、C3H7FeNO7S、C30H18FeN3NaO6、C2H18FeN2O12S2、C4H4FeO4、C7H7FeN4O+、Br2Fe、C18H22Cl2FeN2、C32H28FeN6O6S2、C12H14MgO12、C2H5FeNO6S、C45H60FeN2O8、C30H22Cl2FeN2、C38H26FeN8O2S2、C30H28FeN2O6、C14H12Cl6FeO4、C12H14Fe、C36H36Cl2FeN6O8、C17H14FeN4O
4S、C24H30FeN4O4、C34H32ClFeN4O6、C12H12Fe、Fe3H14O12P2+6、C32H16FeN8、FeS2、C16H15FeNO2+2、C29H20FeO6、C23H28FeO2、C11H10FeO2、C13H14FeO2、C12H12FeO2、C46H48FeN4O6+2、C47H59FeN13O8+2、C46H59FeN13O8+2、C48H62FeN12O8S+2、C50H65FeN13O8+2、C48H63FeN13O8+2、C48H62FeN12O8S+2、C55H76FeN14O9+2、C25H19FeN3、C15H17FeN3OS+2、C22H23FeN3OS+2、C26H28ClFeN3、C28H33ClFeN4、C27H31ClFeN4、C29H35ClFeN4、C30H37ClFeN4、C28H33ClFeN4、C27H30ClFeN3、C26H28ClFeN3、C29H35ClFeN4、C27H30ClFeN5O+2、C41H38ClFeN5O3+2、C42H41FeN5O3+2、C41H38FFeN5O3+2、C42H47FeN5O3+2、C43H49FeN5O3+2、C42H41FeN5O3+2、C42H40ClFeN5O3+2、C42H40ClFeN5O3+2、C42H40FFeN5O3+2、C41H45FeN5O3+2、C42H47FeN5O3+2、C41H39FeN5O3+2、C22H25FeN5O5+2、C24H23ClFeN4O2+2、C24H23FFeN4O2+2、C24H24FeN4O2+2、C15H21FeN3S+2、C29H34FeN4O2+2、C28H31ClFeN4O2+2、C28H31FFeN4O2+2、C30H35ClFeN4O3+2、C30H35FFeN4O3+2、C28H32FeN4O2+2、C27H30FeN4O2+2、C26H27ClFeN4O2+2、C30H36FeN4O3+2、C28H31ClFeN4O3+2、C28H31FFeN4O3+2、C28H32FeN4O3+2、C27H29ClFeN4O3+2、C26H27FFeN4O2+2、C26H28FeN4O2+2、C26H28FeN4O2+2、C27H29FFeN4O3+2、C27H30FeN4O3+2、C26H27ClFeN4O3+2、C26H27FFeN4O3+2、C26H28FeN4O3+2、C25H25ClFeN4O3+2、C25H25FFeN4O3+2、C25H26FeN4O3+2、C24H23ClFeN4O3+2、C24H23FFeN4O3+2、C24H24FeN4O3+2、C25H25ClFeN4O2+2、C25H25FFeN4O2+2、C25H26FeN4O2+2、C25H26FeN4O2+2、C29H32ClFeN7+2、C33H32ClFeN7+2、C22H27ClFeN3RuS+、C18H19ClFeN3RuS+、C19H19BFeO3+2、C28H25ClFeN4O+2、C31H38FeN4O3、C29H34FeN4O3、C31H41FeN3O、C28H32FeN4O3、C26H29FeN3O2、C26H30FeN2O、C31H36FeN4O3、C30H35FeN5O4、C29H35FeN5O3、C32H41FeN5O3、C35H38FeN4O3、C32H40FeN4O3、C19H13BBr2F2FeO2、C19H14BClF2FeO2、C19H14BBrF2FeO2、C19H15BF2FeO2、C21H20FeO4、C20H18FeO3、C20H18FeO3、C20H18FeO3、C19H14F2FeO2、C19H14Br2FeO2、C19H15BrFeO2、C14H12FeO3、C21H19BF2FeO4、C20H17BF2FeO3、C20H17BF2FeO3、C20H17BF2FeO3、C19H13BF4FeO2、C19H13BCl2F2FeO2、C21H29AuCl2FeN4S+、C30H24Cl2FeN6+2、C22H21Cl2FeN3+2、C23H22FeN6+2、C21H19FeN7+2、C23H24FeN6O+2、C47H64FeN14O9、C46H60FeN12O10、C41H53FeN11O7、C47H65FeN15O8、C45H59FeN13O9、C42H54FeN12O7、C43H67FeN15O8、C48H65FeN13O8、C47H64FeN12O8、C54H77FeN17O9、C51H71FeN15O10、C19H16FeO2、C44H48FeN9O17P3、C13H9Cl2FeN3O6S、C19H15FeNO3、C20H18FeO2、C20H18FeO3、C21H20FeO3、C17H20FeN2O2、C18H15FeNO、C17H14FeOS、C17H14FeOS、C17H14FeO2、C22H22FeO4、C20H18FeO2、C20H18FeO2、C19H14Cl2FeO、C21H20FeO3、C48H28FeN4O8、C17H15FeNS、C34H30FeN4O4-2、C30H26Br2FeN4O4、C10H18FeN2O7+2、C14H12FeO4、C44H20Cl8FeN4、C64H64FeN8O12S4、C56H56FeN8O8S4、C56H44Br8FeN4、C56H52FeN4、C52H40FeN8O12S4、C44H32FeN8O8S4、または C44H28FeN4  。
他のいくつかのケースでは、鉄の源は次の化学式を持っている：
CaHbFecOdNeSfBrgClhPiNajAskKlAlmCrnVoIpBqFrTesWt、
ここでa、b、c、d、e、f、g、h、I、j、k l、m、n、o、p、q、r、s、t は0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、または 21〜1000000000000のその他の整数。C、H、Fe、O、N、S、Br、Cl、P、Na、As、K、Al、Cr、V、I、B、F、Te、およびW 原子は優先的にそれぞれ1番目、2番目、3番目、4番目、5番目、6番目、7番目、8番目、9番目、10番目、11番目、12番目、13番目、14番目、15番目、16番目、17番目、18番目、19番目、20番目の位置を占有する。場合によっては、化学式の少なくとも1つの原子は、式の20の位置のいずれか1つを占めることができる。他のいくつかの場合、鉄の供給源は、次のグループから選択される化学官能基を含むことができる：
炭化水素、アルカン（R（CH2）nH）、アルケン（R2C = CR2）、アルキン（RC≡CR ‘）、ベンゼン誘導体（RC6H5）; ハロゲンを含むグループ、ハロアルカン（RX）、酸素を含むグループ、アルコール（ROH）、カルボニル（RCまたは ’）、アルデヒド（RCHO）、ハロゲン化アシル（RCOX）、炭酸塩（ROCOまたは’）、カルボン酸（RCOO-）、カルボン酸（ RCOOH）、エステル（RCOまたは ’）、メトキシ（ROCH3）、ヒドロペルオキシド（ROOH）、過酸化物（ROまたは’）、エーテル（Rまたは ’）、ヘミアセタール（RCH（または’）（OH））、ヘミケタール（RC（または”）（ OH）R）、アセタール（RCH（または’）（または”））、ケタール（RC（または”）（または’’’）R ‘）、オルソエステル（RC（または’）（または”）（または’’’））、複素環（PhOCOPh）、オルト炭酸エステル（C（または）（または‘）（または”）（または’’））、窒素を含む基、アミド（RCONR2）、アミン（RNH2、R2NH、R3N、R4N +）、イミン（RC（= NH）R ‘、RC（= NR’ ‘）R’、RC（= NH）H、RC（= NR ‘）H、イミド（（RCO）2NR’）、アジド（RN3）、アゾ化合物（RN2R ‘） 、シアン酸塩（ROCN、RNCO）、硝酸塩（RONO2）、ニトリル（RCN、RNC）、亜硝酸塩（RONO）、ニトロ化合物（RNO2）、ニトロソ化合物（RNO）、オキシム（RCH = NOH）、ピリジン誘導体（RC5H4N）、硫黄、チオール（RSH）、スルフィド（RSR ‘）、ジスルフィド（RSSR’）、スルホキシド（RSまたは ‘）、スルホン（RSO2R’）、スルフィン酸（RSO2H）、スルホン酸（RSO3H）、チオシアン酸塩（RSCN、RNCS）を含むグループ、チオケトン（RCSR ‘）、チアール（RCSH）、リンを含むグループ、ホスフィン（R3P）、ホスホン酸（RP（= O）（OH）2）、リン酸塩（ROP（= O）（OH）2）、ホスホジエステル（HOPO（または）2）、ホウ素、ボロン酸（RB（OH）2）、ボロン酸エステル（RB（または）2）、ボリン酸（R2BOH）、ボリン酸エステル（R2Bまたは）、およびこれらのグループからのいくつかの組み合わせを含むグループ
他のいくつかのケースでは、鉄源は鉄キレートエージェントである。
【０２１０】
場合によっては、鉄源の量は、優先的には鉄源から、優先的には予備成長培地およびまたは成長培地での、鉄源または鉄の量または濃度である。
【０２１１】
本発明はまた、本発明の方法に関し、ここで、鉄または予備成長培地中の鉄の供給源は、Fe2+およびまたはFe3+からなるかまたは含む。
【０２１２】
場合によっては、鉄の化学式にFe2が含まれている場合、鉄の供給源にはFe2+が含まれている。他のいくつかの場合では、鉄の供給源は、化学式にFe3を含む場合、Fe3+を含む。
【０２１３】
本発明は、予備成長培地中の鉄または鉄源の濃度が20μM以下である方法に関する。場合によっては、予備成長培地の鉄または鉄源の濃度は、10100、1050、1020、1010、105、103、102、または 20 μM以下である。他の場合には、予備成長培地の鉄または鉄源の濃度は、0、10-50、10-20、10-5、10-1、1、5、10 または 20 μMよりも大きくなる。さらに他のいくつかのケースでは、予備成長の培地中の鉄または鉄源の濃度は、10-50 および 1050、10-10 および 1010、10-10 および 105、10-10 および 103、または between 10-10 および 1 の間のμM である。
【０２１４】
本発明は、成長培地が鉄または少なくとも1つの鉄源を含み、鉄または鉄源の性質および量がナノ粒子産生細胞およびまたは細胞増殖によるナノ粒子の産生を可能にする方法に関する。
【０２１５】
本発明は、成長培地の鉄の供給源が予備成長培地の鉄の供給源と同じである方法に関する。
【０２１６】
本発明は、成長培地中の鉄または鉄源の濃度が、予備成長培地中の鉄または鉄源の濃度以上である方法に関する。
【０２１７】
場合によっては、成長培地中の鉄または鉄源の濃度は、10100、1050、1020、1010、105、103、102、または 20 μM以下である。他の場合には、成長培地中の鉄または鉄源の濃度は、0、10-50、10-20、10-5、10-1、1、5、10 または 20 μMよりも大きくなります。さらに他のいくつかの場合、成長培地中の鉄または鉄源の濃度は、10-50 および 1050、10-10 および 1010、10-10 および 105、10-10 および 103、または 10-10 および 1の間の μMである。
【０２１８】
本発明は、成長培地に流加培地が補充される方法に関する。
【０２１９】
本発明の一実施形態では、流加培地は、予備成長およびまたは成長培地と共通の少なくとも１つの供給源を含む。場合によっては、この供給源の濃度は、流加培地において、予備成長およびまたは成長培地よりも1.00001、1.1、2、5、10、103 または 105より大きい。いくつかの他の場合では、この供給源の濃度は、流加培地では予備成長およびまたは成長培地よりも少なくとも105、103、10、1、1.1または1.00000001低い。
【０２２０】
本発明は、流加培地が、10-50、10-20、10-10、10-5、10-1、1、5、10、20、50、100、103 または 105 μMよりも高い濃度の鉄または鉄源を含む方法に関する。いくつかの他の場合、流加培地は、1050、1020、1010、105、102、10-2、10-10 または 10-20 μMよりも低い濃度の鉄または鉄源を含む。さらに他のいくつかの場合において、流加培地は、流加培地を成長培地に加える前において、10-50 および 1050、10-15 および 1015、10-10 および 105、10-5 および 105、between 10-3 および 103 μM、または0.5 nM〜50 M である。
【０２２１】
本発明の一実施形態では、流加培地は酸性であるか、または７、６、５、４または３より低いｐＨを有し、優先的に２以下である。場合によっては、流加培地は０または1より大きいｐＨを有する。
【０２２２】
本発明は、流加培地が１時間当たり10-15リットルから１時間当たり1015リットルまたは１時間当たり10-15μＭと1015 μＭの間の鉄で構成される速度で成長培地に導入される方法に関する。場合によっては、成長培地の細胞分裂数が低く、1秒または1時間または1日または1か月あたり1020、1010、105、103、10、1以下 の細胞分裂である場合、流加培地は低速度で、優先的には10100、1050、1020、1010、105、102、10、5、1、10-2、10-3、10-5 または 10-10リットルの流加培地または1分あたりμMの鉄分よりも低い速度で成長培地に添加される。いくつかの他の場合では、成長培地の細胞分裂数が大きく、1秒または1時間または1日または1か月あたり1、2、5、10、103、105、1010 または 1020回より大きい場合、培地は成長培地に高速度で、優先的には10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-2、1、5、10、102、103、105 または 1010よりもリットルの流加培地/分またはμM鉄/分の速い速度で添加される。場合によっては成長ステップの2つのサブステップ間で、流加培地の不足が優先的に1.0000001、1.00001、1.0001、1.01、1.1、1.2、1.5、2、5、10、103、105、107 または 109.を超える係数で減少する。他のいくつかの 場合によっては流加培地の不足は、優先的に1.0000001、1.00001、1.0001、1.01、1.1、1.2、1.5、2、5、10、103、105、107 または 109.以上の係数で増加する。
【０２２３】
本発明の一実施形態では、成長培地に添加される前に、流加培地は成長培地の鉄濃度より少なくとも1.000001、1.001、1、1.5、2、5、10、102、103 または 105の係数で大きい鉄濃度を有する。
【０２２４】
本発明の別の実施形態では、優先的に成長培地に添加された後、流加培地は成長培地の一部になる。
【０２２５】
本発明は、本発明によって予備成長培地およびまたは成長培地が、ビオチン、パントテン酸カルシウム、葉酸、イノシトール、ニコチン酸、p-アミノ安息香酸、塩酸ピリドキシン、リボフラビン、チアミンHCL、およびこれらのビタミンの誘導体からなる群から選択される１つのみのビタミンを含む方法に関する。
【０２２６】
場合によっては、予備成長およびまたは成長培地は、1050、1020、1010、105、103、100、75、50、25、10、5、3、2 または 1個以下のビタミンまたは複数の異なるビタミンを含むことができる。場合によっては、異なるビタミンは、少なくとも1、2、5、10、102、103、105、1010、1020、または 1050個の異なる化学要素を含むビタミンである場合がある。いくつかの他の場合において、予備成長培地およびまたは成長培地は、1、2、5、10、102、103、105 または 1010個以上の複数の異なるビタミンを含む。
【０２２７】
場合によっては、ビタミンは水溶性ビタミンである場合がある。他のいくつかの場合では、ビタミンは脂溶性ビタミンであり得る。さらに他のいくつかのケースでは、ビタミンはA、D、E、K、B1、B2、B3、B5、B6、B7、B9、B12、またはCビタミンに属することがあり得る。さらに他のいくつかのケースでは、ビタミンはナノ粒子産生細胞によって産生されない。さらに他のいくつかのケースでは、このビタミンは、ビタミン欠乏によって引き起こされる、またはそれに関連する病気などの病気を治療するために使用されるビタミンです。
【０２２８】
本発明のさらに別の実施形態では、そのビタミンは次のグループから選択される：
アデノシルコバラミン、アミノ安息香酸、アスコルビン酸、ビオチン、カルシウムD-（+）-パントテン酸、カロチンチアミン、カロテノイドベータ、コレカルシフェロール（ D3）、シアノコバラミン、シアナコバラミン、エルゴカルシフェロール（D2）、葉酸塩、葉酸、フォリン酸、ヒドロキソコバラミン、イノシトール、メナキノン（K2）、メチルコバラミン、ナイアシン、ナイアチナリド、ナイアシンアミド、ニコチンアミドリボシド、ニコチン酸、パントキンオン 、または1つまたは複数のこの/これらのビタミンの誘導体または組み合わせ。
【０２２９】
本発明のさらに別の実施形態では、成長培地に含まれる少なくとも１つのビタミンは、ビオチン、葉酸、リボフラビン、ニコチン酸またはチアミンＨＣｌである。
【０２３０】
場合によっては、予備成長培地に含まれるビタミンは、成長培地に含まれるビタミンと同じである。他の場合には、予備成長培地に含まれるビタミンは、成長培地に含まれるビタミンとは異なる。
【０２３１】
本発明はまた、予備成長培地およびまたは成長培地に含まれる少なくとも１つのビタミンの濃度が10100、1050、1020、1010、105、103、10、1、10-1、10-3、10-4、10-6、10-9、10-20、10-50 または 10-100 Mより低い、または優先的に0.002 mol / L以下である方法に関する。
【０２３２】
本発明の別の実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つのビタミンまたは少なくとも１つのビタミンに含まれる１つの化学要素を、10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-4、10-3、または 10-1、1、10、102、103、105 または 1010 Mを超える濃度で含む。
【０２３３】
本発明は、本発明によって方法にも関し、そこでは、予備成長およびまたは成長培地は、少なくとも１つのビタミンを、炭素、窒素、硫黄、硫酸塩、リン、リン酸塩、カルシウム、カリウム、マグネシウム、酸素、水素、およびまたは鉄の供給源の濃度よりも、好ましくは1.0001、1.2、1.5、2、5、10、103 または 105以上の係数で低い濃度で含む。場合によっては、細胞は、ナノ粒子を成長、分裂、およびまたは合成するために高濃度のビタミンを必要としない。
【０２３４】
本発明は、本発明による方法にも関し、ここで、予備成長およびまたは成長培地は、成長または予備成長培地のグラムまたはｍＬあたりで次の量以下を含む：
ｉ）１ｍｇ以下の酵母エキス、
ii）1mgの酵母エキスの少なくとも1つの成分、
iii）1mgのペプトン、
iv）1mgのペプトンの少なくとも1つの成分、
v）1mg のCMR剤、
vi） 1 mgの少なくとも1つのキレート剤、
vii）1 mgの少なくとも1つのアミノ酸、
viii）1 mgの毒性または細胞毒性化合物、およびまたは
ix）1 mgの少なくとも1つの重金属。
【０２３５】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、酵母エキス、ペプトン、ＣＭＲ剤、キレート剤、アミノ酸、毒性または細胞毒性化合物、およびまたは重金属を、予備成長/成長培地の1リットルまたは1ミリリットルあたり10100、1050、1020、1010、105、102、10、1、10-3 または 10-5 μgの酵母エキス、ペプトン、CMR剤、キレート剤、アミノ酸、毒性または細胞毒性化合物、およびまたは重金属 の濃度で含む。場合によっては、この状況は、酵母エキス、ペプトン、CMR剤、キレート剤、アミノ酸、毒性または細胞毒性化合物、およびまたは重金属が予備成長または成長培地から除去されているか含まれていない場合に発生する可能性がある。
【０２３６】
本発明の一実施形態では、第１およびまたは第２の培地は、酵母エキス、ペプトン、アミノ酸、およびまたは重金属を、予備成長培地およびまたは成長培地のリットルまたはミリリットルあたり10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-2、10-1、1、10、103 または 105 μgの酵母エキス、ペプトン、アミノ酸、およびまたは重金属の濃度で含む。場合によっては、この状況は、酵母エキス、ペプトン、CMR剤、キレート剤、アミノ酸、およびまたは重金属が、優先的に不本意ながら、予備成長およびまたは成長培地に添加された場合に発生する可能性がある 。
【０２３７】
本発明の一実施形態では、酵母エキスは、ペプチド、アミノ酸、プリン塩基、ピリミジン塩基、およびまたはB群の水溶性ビタミンであるか、またはそれらを含む。
【０２３８】
本発明の一実施形態では、アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、 スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびまたはバリンである。
【０２３９】
本発明の一実施形態では、重金属は、ヒ素（Ａｓ）、カドミウム（Ｃｄ）、クロム（Ｃｒ）、銅（Ｃｕ）、水銀（Ｈｇ）、ニッケル（Ｎｉ）、鉛（Ｐｂ）である。、セレン（Se）、およびまたは亜鉛（Zn）である。
【０２４０】
本発明の一実施形態では、発癌性、変異原性、または生殖毒性であり、ＣＭＲ剤とも呼ばれる薬剤は、ニトリロ酢酸、三ナトリウム塩、およびまたはホウ酸である。
【０２４１】
本発明の一実施形態では、毒性化合物または細胞毒性化合物は、優先的に予備成長およびまたは成長培地に優先的には10-10、10-5、10-2、1、5、10、103、または 10 μM、preferentially at a concentration comprised between 10-10 および 1010 μMを超える濃度で、優先的には10-10と1010μMの間に含まれる濃度で導入されたときに、優先的にナノ粒子産生細胞の細胞または生物、ナノ粒子産生細胞の死を産生する化合物である 。
【０２４２】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、次のグループから選択される群から選択されるミネラルを含まない：
C6H6NO6Na3、ニトリロ酢酸三ナトリウム塩、CoN2O6 6 H2O、 MnO4S H2O、マンガン(II)硫酸一水和物、NaCl、塩化ナトリウム、CoN2O6 6 H2O、硝酸コバルト(II)六水和物、O4SZn 7 H2O、硫酸亜鉛七水和物、CuO4S 5 H2O、硫酸銅(II)五水和物、AlKO8S2 12 H2O、硫酸カリウム12水和物、 H3BO3、ホウ酸、Na2MoO4 2H2O、モリブデン酸ナトリウム二水和物、Cl2Ni 6H2O、塩化ニッケル（II）六水和物、Na2SeO3、亜セレン酸ナトリウム、およびこれらの化合物の誘導体または組み合わせ。
【０２４３】
本発明の一実施形態では、予備成長およびまたは成長培地は、成長培地1リットルまたは1ミリリットルあたり10100、1050、1020、1010、105、102、10、1、10-1、10-3 または 10-5 μgよりも低いミネラル濃度を含む。場合によっては、予備成長およびまたは成長培地からミネラルが除去されたときにこの状況が発生する可能性がある。
【０２４４】
本発明の一実施形態では、それは第１の（予備成長）およびまたは第２の成長培地が、成長培地1リットルまたは1ミリリットルあたり10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-2、10-1、1、10、103 または 105 μgよりも多いミネラルの濃度を含む。場合によっては、この状況は、優先的に不本意ながら、鉱物が予備成長およびまたは成長培地から除去されたときに発生する可能性がある。
【０２４５】
本発明はまた、ナノ粒子から少なくとも１つの不純物を除去することにより高純度酸化鉄ナノ粒子を精製する追加のステップを含む方法に関する。
【０２４６】
本発明の一実施形態において、高純度酸化鉄ナノ粒子を精製する追加のステップは、ナノ粒子から不純物を除去すること、およびまたはナノ粒子に含まれる不純物を変性およびまたは破壊することからなる。
【０２４７】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子を精製する追加のステップの前に、細胞からナノ粒子を単離または抽出する先行するステップが行われる。場合によっては、この先行するステップはナノ粒子を回収するステップである。場合によっては、この先行するステップは次のように実行されます。
i）増殖段階で優先的に得られた細胞を、KOHやNaOHなどの界面活性剤と混合し、
ii）細胞を-270、-250、-200、-150、-100、-50、-30、-10、-5、0、5、10、20、30、50、75、100、150、200、500、103、105 または 1010 °Cを超える温度、または-270 および 1010、-100 および 105、または 0 および 100 °Cの間の温度で加熱し、
iii）1時間または分または秒あたり10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、2、5、10、103、105 または 1010 °Cを超える、または1時間、分または秒あたり10-50 および 1010 °Cの間に含まれる温度勾配を誘発する、
iii）たとえばフレンチプレスを使用して、優先的に1、10、100、500、103、104、105、106、107、108 または 109気圧よりも大きいまたは1から109気圧の間の圧力を細胞に加え、およびまたは
iv）優先的に10-50、10-20、10-5、10-1、1、10、102、103、105 または 1010 Wより大きい出力で細胞を超音波処理する。
【０２４８】
本発明の別の実施形態では、ナノ粒子を精製する追加のステップは、次のように除去することを可能にする：
i）不純物の質量パーセンテージで、10-20、10-10、10-5、10-2、10-1、1、5、10、25、50、75、80 または 90%より多く、または
ii）ナノ粒子1グラムあたり10-50、10-20、10-10、10-5、10-1、1、5、10、103、105 または 1010 μgを超える不純物 。
【０２４９】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子を精製する追加のステップによって優先的に除去される不純物は、炭素または炭素質材料であり、かつ/または酸化鉄ではない。優先的に、この/これらの不純物はナノ粒子のコーティングに存在する。
【０２５０】
本発明の一実施形態では、不純物は、ナノ粒子のコアおよびまたはコーティングから、好ましくはナノ粒子のコーティングから除去される。優先的に、除去される不純物は、浅い不純物である。他の場合には、除去される不純物は、深い不純物である。
【０２５１】
本発明はまた、ナノ粒子の温度が上昇する少なくとも１つの加熱ステップを含む、ナノ粒子から少なくとも１つの不純物を除去することにより高純度酸化鉄ナノ粒子を精製する方法の追加のステップに関し、その加熱ステップでは、ナノ粒子の温度はT0まで、そして優先的に1秒から1分、1秒から1時間、1秒から12時間、1秒から1日、1秒から1週間、 1秒から1か月、または1秒から1年の間に含まれる加熱時間の間、T0に維持され、なおT0は優先的に-200 および 105、-100 および 105、-50 および 105、-10 および 105、0 および 105 °C、10 および 105、20 および 105、30 および 105、100 および 105、200 および 105 °C、100 および 104、100 および 103、または 100 および 500 °C の間に含まれる。
【０２５２】
本発明はまた、ナノ粒子から少なくとも１つの不純物を除去することにより高純度酸化鉄ナノ粒子を精製する方法の追加のステップに関し、それは少なくとも２つの加熱ステップを含み、そこでは：
i) ステップ1では、ナノ粒子の温度は温度T1に上昇し、1秒から20年の加熱時間中にT1に維持され、なおT1は150°Cから250°Cの間に含まれる。
ii) ステップ2では、ナノ粒子の温度は温度T2に上昇し、1秒から20年の加熱時間の間T2に維持され、なおT2は350℃から450℃の間に含まれる。
【０２５３】
場合によっては、高純度酸化鉄ナノ粒子を精製する方法の追加のステップまたは加熱ステップを精製方法として指定することができる。
【０２５４】
本発明は、高純度酸化鉄ナノ粒子から少なくとも1つの不純物を除去する方法に関し、ステップ1と2の間の追加のステップを含み、そこではナノ粒子の温度は温度T3まで上昇し、その後、 1秒から20年の間に含まれる加熱時間の間T3に維持され、なおT3は250℃から350℃の間に含まれる。
【０２５５】
場合によっては、ナノ粒子の温度が温度T1、T2、およびまたはT3に維持される期間は、100年、50年、20年、10年、5年、2年、1年、11ヶ月、6ヶ月、3ヶ月、2ヶ月、1ヶ月、3週間、2週間、1週間、6日、5日、3日、1日、23時間、12時間、6時間、1時間、 50分、30分、20分、10分、5分、2分、1分、50秒、30秒、10秒、1秒、1ミリ秒、または1マイクロ秒より短い。他のいくつかの場合、ナノ粒子の温度が温度T1、T2、およびまたはT3に維持される期間は、1マイクロ秒、1ミリ秒、1秒、10秒、30秒、50秒,1分、2分、5分、10分、1時間、6時間、12時間、23時間、1日、3日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1か月、2か月 、3か月、6か月、11か月、1年、2年、5年、10年、20年、50年、または100年より長い。さらに他のいくつかの場合、ナノ粒子の温度が温度T1、T2、およびまたはT3に維持される期間は、1マイクロ秒から100年、1秒から20年、1秒から1年、1秒と1か月、1秒と1日、1分と1日、5分と1日、10分と12時間、30分と6時間、または30分と3時間の間に含まれる。
【０２５６】
本発明の一実施形態では、加熱時間は、温度がT1、T2、およびまたはT3まで上昇する時間より、好ましくは1.001、1.1、1.5、2、5、10、103、105 または 1010以上の係数で長い。
【０２５７】
場合によっては、T1は-273 °C および 250 °C、-200 °C および 250 °C、-100 および 250 °C、0 および 250 °C、50 および 250 °C、150 および 250 °C、または 180 および 220 °Cの間に含まれる。その他の場合、T2は200 および 105、250 および 105、300 および 105、350 および 105、350 および 103、350 および 500、350 および 450、または 360 および 400 °Cの間に含まれる。場合によっては、T3はbetween -273 および 105、-200 および 103、-100 および 500、-50 および 200、0 および 500、100 および 500、200 および 500、200 および 400、または between 250 および 350 °Cの間に含まれる。
【０２５８】
本発明のさらに別の実施形態では、Ｔ３はＴ１とＴ２の間に含まれる。場合によっては、T3はT2よりも優先的に1.0001、1.1、1.2、1.5、2、5、10、103 または 105を超える係数で短くなる。他の場合では、T3はT1よりも優先的に1.0001、1.1、1.2、1.5、2、5、10、103 または 105の係数で長くなる。
【０２５９】
本発明の一実施形態において、ナノ粒子の温度は、精製方法によるナノ粒子の処理の前、最中、または後に、ナノ粒子を加熱するために使用されるおよびまたはナノ粒子を含む加熱装置または炉の温度である。
【０２６０】
本発明の一実施形態では、[TT1、T2]として指定されるT1とT2を分離する温度間隔は :|
i）ナノ粒子が温度の関数として重量または質量の最大の変動または損失を示し、または
ii）温度の関数としてのナノ粒子の重量または質量の変動または損失の導関数が最大である。
【０２６１】
本発明の一実施形態では、比率 [%W(T2)-%W(T1)] / (T2-T1)、（ここで%W(T2) および %W(T1)は、それぞれT2およびT1におけるナノ粒子の重量または質量の百分率である）は、10-50、10-30、10-20、10-10、10-5、0.01、0.02、0.03、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1、10 または 105 %/°Cより大きい。場合によっては、この比率は、ナノ粒子中の炭素の質量の割合が、優先的には精製法によって、または精製法でナノ粒子を処理する前に、大きく、優先的には10-20、10-10、10-5、10-2、10-1、1、5、10、20、50、75、85、95 または 100%より大きい場合に大きくなる。
【０２６２】
本発明の別の実施形態では、比率 [%W(T2) - %W(T1)] / (T2-T1)は、1050、1030、1020、1010、105、10、5、2、1、0.5、0.05、10-3、10-5、10-10 または 10-20 %/°Cよりも低い。場合によっては、ナノ粒子中の炭素の質量の割合が、優先的には精製法によって、または精製法でナノ粒子を処理する前に低く、優先的には100、95、80、70、50、30、20、10、5、2、1、10-1、10-3、10-5、10-10 または 10-20%より低い場合、この比率は低くなる。
【０２６３】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子の温度は、T1、T2、およびまたはT3が105、103、90、80、70、60、50、40、30、20、10、5、3、2、1、10-5、10-10 または 10-20%以下だけ変化する場合、T1、T2、およびまたはT3に維持される。場合によっては、各温度T1、T2、およびまたはT3について、この割合はTmaxi-Tmini / Taviに等しく、Tmaxi、Tmini、およびTavi（i = 1、2、3）は温度が温度T1、T2、およびまたはT3に維持された後またはそのときに、加熱時間中または加熱ステップ中に到達した最大、最小、および平均温度である。場合によっては、炉または加熱装置が大きな変動なしで安定した温度を維持できる場合、およびまたはナノ粒子が吸熱およびまたは発熱反応を起こしにくい場合、このパーセンテージは低くなる。場合によっては、吸熱反応は、ナノ粒子を取り囲む媒体からナノ粒子に熱またはエネルギーが移動する反応である。他のいくつかの場合、発熱反応は、熱またはエネルギーがナノ粒子からナノ粒子を取り囲む媒体に移動する反応である。
【０２６４】
本発明の一実施形態では、ナノ粒子の温度が105、103、90、80、70、60、50、40、30、20、10、5、3、2、1、10-5、10-10 または 10-20%を超えて変化する場合、ナノ粒子の温度はＴ１、Ｔ２、およびまたはＴ３に維持されない。場合によっては、炉または加熱装置が大きな変動なしに温度を安定に維持できない場合、およびまたはナノ粒子が吸熱およびまたは発熱反応を起こしやすい場合、この割合は大きくなる。
【０２６５】
本発明の一実施形態では、温度T1およびまたはＴ2は、以下によって決定される：
i）ナノ粒子が2つの温度TT <T1とTT> T2の間で加熱されるとき、温度の関数としてナノ粒子の重量または質量のパーセンテージの変化を測定する。ここで、TT <T1はT1より低く、TT> T2は T2より高い。
ii）温度の関数としてのこの割合の変動の微分係数の少なくとも1つのピークを測定、表示、検討、調査、または使用する。
iii）温度の関数としてのナノ粒子の重量または質量のパーセンテージの変動から、この変動が最大となる温度の間隔を推定または推定する。この間隔の最小および最大温度はそれぞれT1およびT2である。
【０２６６】
場合によっては、温度の関数としてナノ粒子の重量または質量のパーセンテージの変動の導関数の減少がピークを示す、またはその、または開始する温度は、ピークの開始時のものである。いくつかの他の場合、温度の関数としてのナノ粒子の重量または質量のパーセンテージの変動の導関数のピークが増加を示すのを停止する、またはそのための、またはその時の温度は、ピークの終わりのものである。
【０２６７】
本発明の別の実施形態では、ナノ粒子の熱流束は、好ましくは炉などの加熱装置でナノ粒子を加熱する場合、ナノ粒子によって生成されるか、ナノ粒子から放出されるか、ナノ粒子に由来する熱流束である。優先的に、熱流束は、装置または熱分析法を使用して、または示差熱分析（DTA）または示差走査熱量測定（DSC）を使用して測定できる。
【０２６８】
本発明の一実施形態では、本発明による精製方法の加熱ステップi（iは優先的に0以上の整数である）は、以下の相の少なくとも１つを含む。
・最初の相では、ナノ粒子の温度は時間ti1Pの経過中に温度Tiから温度Tiavまで上昇する。
・第二相では、ナノ粒子の温度は時間ti2Pの経過中に温度Tiavに維持される。
・第3相では、時間ti3Pの経過中に、ナノ粒子の温度がTiavからTfに低下する。
【０２６９】
本発明はまた、少なくとも１つの加熱工程ｉを含む本発明による精製方法に関し、ここで、加熱工程は、以下の第１、第２およびまたは第３相の少なくとも１つを含み、ここで：
・最初の段階では、ナノ粒子の温度は時間ti1Pの経過中に温度Tiから温度Tiavまで上昇する。
・第二段階では、ナノ粒子の温度は時間ti2Pの経過中に温度Tiavに維持される。
・ 第3段階では、時間ti3Pの経過中に、ナノ粒子の温度がTiavからTfに低下する。
【０２７０】
場合によっては、Tiおよびまたはti1Pは、Tiavおよびまたはti2Pよりも少なくとも1.0001、1.1、1.5、2、5、10または100倍低い。場合によっては、TiavはT1、T2、またはT3に等しく、およびまたはti1Pは温度がTiに達するまで上昇する時間に等しい。さらに他のいくつかのケースでは、Tfおよびまたはti3Pは、Tiおよびまたはti1Pと1.0001、1.1、1.5、2、5、10、102または105倍以上の差はない。
【０２７１】
本発明はまた、本発明による方法、優先的に精製する方法に関し、ここではナノ粒子から10質量％を超える炭素または炭素質材料が除去され、このパーセンテージは(%CAT-%CBT)/%CBTに等しい。ここで、％CATと％CBTは、それぞれナノ粒子をメソッドで処理した後と処理する前の炭素または炭素質材料の割合である。
【０２７２】
場合によっては、(%CAT-%CBT) / %CBTは10-50、10-20、10-5、10-2、10-1、1、5、10、50、75、90、95 または 99%より大きい。これは、精製方法が効率的である場合、または精製方法でナノ粒子を処理する前にナノ粒子に含まれる炭素または炭素質材料の量が特定のしきい値より低い場合、優先的には99、90、70、60、50、40、30、20、10 または 1%よりも低い場合にそうなり得る。
【０２７３】
その他の場合、(%CAT-%CBT) / %Cは99、90、70、60、50、40、30、20、10 または 1%％以下である。これは、精製方法が効率的でない場合、または精製方法でナノ粒子を処理する前のナノ粒子に含まれる炭素または炭素質材料の量が特定のしきい値、優先的には99、90、70、60、50、40、30、20、10 または 1%より大きい場合である。
【０２７４】
さらに他のいくつかのケースでは、(%CAT-%CBT) / %CBTは0.1〜100、1〜99、10〜99、50〜99、または80〜99％の間である。
【０２７５】
本発明は、本発明の方法により得られる高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関する。
【０２７６】
本発明はまた、本方法によって得られない高純度ナノ粒子または高純度ナノ粒子に関する。
【０２７７】
本発明の一実施形態では、高純度ナノ粒子、好ましくはこれらのナノ粒子のコーティングは以下で構成される：
ｉ）ナノ粒子のグラム当たり0.8 および 0.999999999 gの間の酸化鉄、およびまたは
ｉｉ）ナノ粒子1グラムあたり10-40 および 105 μgの間の不純物。
【０２７８】
本発明の一実施形態において、高純度ナノ粒子は質量パーセントで、90、10、5、2、好ましくは1、0.5、0.4 または 0.3%以下の炭素または炭素質材料を含む。場合によっては、炭素の質量のこのような低い割合は、ナノ粒子を産生する細胞に由来しないコーティングでナノ粒子をコーティングすることを可能にする。
【０２７９】
本発明の一実施形態では、高純度酸化鉄ナノ粒子のＳＡＲ（比吸収率）はナノ粒子1グラムあたり、10-100、10-50、10-20、10-10、10-5、10-3、10-1、1、10、103 または 105ワットより大きい。場合によっては、ナノ粒子内の不純物の量が最も少ないときに、ナノ粒子のSARが最大になる。場合によっては、高純度酸化鉄ナノ粒子のSARは、ナノ粒子1グラムあたり10-100 および 10100、10-1 および 105、または 0.1 および 103ワットの間で構成される。場合によっては、ナノ粒子のSARは、優先的に水、生物材料、身体などの媒体に囲まれた、ナノ粒子の時間による温度変化の勾配、優先的には初期勾配（DT /dt）に比例するが、なお、 （DT/dt）は優先的に°C / secで推定され、またSAR =a（DT/dt）である。場合によっては、a= Cv / Cnanoであり、ここでCvはナノ粒子を含む水、生物材料、身体の一部、または組織の固有熱容量、Cnanoは優先的水、生物材料、身体の一部、または組織内に含まれるナノ粒子の濃度またはナノ粒子の量または数である。場合によっては、SARは、高純度の酸化鉄ナノ粒子を放射線、優先的には熱を生成する放射線、優先的にはレーザー、磁場、交番磁場、音波、超音波、高周波電波にさらすことによって測定される。
【０２８０】
本発明の一実施形態では、高純度酸化鉄ナノ粒子は、1050、1020、1010、105、103、102、10、1、10-1、10-2 または 10-5 nm以下のサイズ分布を有する。場合によっては、本発明による方法が低サイズ分布を有するナノ粒子の製造を可能にする場合、ナノ粒子サイズ分布は低い。
【０２８１】
本発明の別の実施形態では、高純度酸化鉄ナノ粒子は、優先的には、mlまたはmm3あたりまたは細胞あたり10-6、10-3、10-1、1 または 10 mgのナノ粒子を超える濃度で、1、10、103、106 または 109個より多くの細胞を破壊する。
【０２８２】
本発明はまた優先的には細胞あたり、優先的には1リットルの予備成長およびまたは成長培地あたり、10-50、10-30、10-10、10-5、10-2、10-1、1、5、10、50、102、103 または 105 mgを超える収率で生成される高純度酸化鉄ナノ粒子またはナノ粒子に含まれる鉄に関する。
【０２８３】
本発明はまた、本発明の方法により得られるナノ粒子に関し、ここで、ナノ粒子生成の収率は、優先的には細胞あたり、優先的には予備成長およびまたは成長培地1リットルあたり、1050、1030、1010、105、102、10、5、1、10-1、10-2、10-3 または 10-5 mg以下のナノ粒子またはナノ粒子に含まれる鉄のmgである。
【０２８４】
本発明はまた、高純度酸化鉄ナノ粒子がマグネトソームである、本発明による高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関する。
【０２８５】
本発明の一実施形態では、マグネトソームは、以下のステップの少なくとも1つに従って優先的に処理される走磁性細菌によって生成されるナノ粒子である：
i）ナノ粒子を細菌から抽出およびまたは単離し、優先的に生体膜により囲まれた結晶化ミネラルを含むマグネトソームを得る、
ii）優先的に精製ステップを使用して生体膜が除去される、
iii）マグネトソームは、安定化のためにナノ粒子産生細胞に由来しないコーティングでコーティングされ、マグネトソームが凝集するおよびまたは堆積することを優先的に回避する。
【０２８６】
本発明はまた、本発明による高純度酸化鉄ナノ粒子を含む組成物、薬物、医療機器、診断組成物、治療組成物、または化粧品組成物に関する。
【０２８７】
本発明の別の実施形態では、高純度酸化鉄ナノ粒子は次のものをもたらす：
i）、例えば、病理細胞、ウイルス、細菌、癌細胞の破壊を可能にすることにより、または病理細胞、ウイルス、細菌、癌細胞よりも健康な組織に対する毒性が低いことにより、医学的または治療的活性をもたらす。
ii）診断活動、例えば、病理学的細胞、ウイルス、細菌、癌細胞の検出を可能にすること、または健康な組織に対する毒性が低いこと、およびまたは、
ii）  化粧品 たとえば、人間の外見を改善することによる活動。
【０２８８】
本発明の別の実施形態では、高純度酸化鉄ナノ粒子は、非免疫原性または非発熱性である。この場合、それらは優先的に：
i）少数の免疫細胞、好ましくは1、5、10、103、1010、1050 または 10100以下の免疫細胞を誘引または出現させる、およびまたは
ii）温度を生成105、103、102、50、20、10、5、2、1 または 0.1 °C以下の生体組織の温度の向上。
【０２８９】
本発明はまた、次のグループから選択される疾患の治療に使用するための本発明によるナノ粒子、優先的には高純度酸化鉄ベースのナノ粒子に関する：
ｉ）健康な個人の細胞増殖とは異なる細胞の増殖に関連する疾患。
ii）身体部分または個体における腫瘍または癌細胞などの病理学的細胞の存在に関連する疾患、
iii）病的部位、すなわち個体または身体部分の病理学的細胞を含む部位の存在に関連する疾患、
iv）身体部分の疾患または障害または機能不全、
v）放射線耐性、音響耐性、レーザー耐性または磁場耐性の細胞の存在に関連する疾患 、
vi）感染症、
vii）自己免疫疾患、
viii）神経病理学、
ix）がん、
x）腫瘍、
xi）少なくとも1つの癌または腫瘍細胞を含む疾患、
xii）皮膚の状態、
xiii）内分泌疾患、
xiv）眼の疾患または障害、
xv）腸疾患、
xvi）コミュニケーション障害、
xvii）遺伝的障害、
xviii）神経障害、
xix）音声障害、
xx）外陰膣障害、
xxi）肝障害、
xxii）心臓障害、
xxiii）加熱障害、
xxiv）気分障害、
xxv）貧血、優先的に鉄性貧血、
xxvi）人格障害、
xxvii）助剤、特にニューロエイド、
xxviii）パーキンソン、
xxix）アルツハイマー病、
xxx）細菌およびまたは真菌感染または 汚染、
xxxi）例えば効率的な凝固の欠如または欠如による血液疾患、およびxxxii）免疫機能の欠如または免疫疾患による疾患。
【０２９０】
本発明の一実施形態において、癌または腫瘍は次のグループから選択される：
臓器の癌、血液の癌、生体のシステムの癌、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸/直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、眼がん、胆嚢がん、心臓がん、腎臓がん、喉頭および下咽頭がん、白血病、肝臓がん、肺がん、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔および口腔咽頭がん、骨肉腫がん、卵巣がん、膵臓がん、膵臓陰茎がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、皮膚がん、小腸がん、胃がん、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、子宮がん、子宮肉腫がん、膣がん、外陰がん、ワルデンストロームマクログロブリン血症ウィルムス腫瘍、キャッスルマン病ユーイング腫瘍、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、骨髄異形成症候群、下垂体腫瘍、および妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫などの癌性疾患。
【０２９１】
本発明のさらに別の実施形態では、本発明によるナノ粒子による疾患の治療は、ナノ粒子が放射線に曝露されたときに発生または活性化され、ナノ粒子が放射線に曝露されないときに優先的に発生または活性化されない。
【０２９２】
さらに別の実施形態では、放射線は、レーザー、超音波などの音響波、Ｘ線、ガンマ線、およびまたは磁場、優先的には交代磁場である。
【０２９３】
さらに他のいくつかの実施形態では、放射線の出力または強度は、10-50、10-20、10-10、10-5、10-1、0、1 mT、T、W、W/cm、W/cm2 または W/cm3 および 1、5、10、103、105、1010、1020 または 1050 mT、T、W、W/cm、W/cm2 または W/cm3である。
【０２９４】
本発明のさらに別の実施形態では、本特許出願の個々の実施形態またはセクションまたは文に記載されているナノ粒子または方法の特性または特徴を優先的に組み合わせて、ナノ粒子または方法の特性または機能の組み合わせを得ることができる。
【０２９５】
本発明のさらに別の実施形態では、ナノ粒子または化学元素などの化合物が、条件2（P2）の特性よりも条件1（P1）が高い、長い、または係数だけ大きい特性を有する場合 、P1 =a・P2またはP1 =a+ P2を意味する。ここで、aは優先的に1または0より大きい数値または整数である。
【０２９６】
本発明のさらに別の実施形態では、ナノ粒子または化学要素などの化合物が、条件2（P2）の特性よりも小さいか、または係数だけ低い特性1（P1）の特性を有する場合、 これは、P1 = P2 / aまたはP1 = P2-aを意味する。ここで、aは優先的に1または0より大きい数または整数である。
【実施例】
【０２９７】
【材料と方法】
【０２９８】
バクテリアの成長を評価するための完全走磁性細菌の懸濁液の光学密度測定：Secomam UviLine9400分光光度計を使用して、OD565nmと呼ばれる565 nmで、静磁性細菌のさまざまな懸濁液の光学密度を測定した。OD565nmの値は、懸濁液中の細菌の濃度に比例する。
【０２９９】
光学顕微鏡観察を使用した磁場の印加下でのこれらの生きている走磁性細菌の磁気応答の測定：MSR-1走磁性細菌の懸濁液1mLを14500rpmで10分間遠心分離した。成長培地を除去し、PBS 0.1Xの量で置き換えて、OD565nmが0.5に到達した。このMSR-1走磁性細菌懸濁液1 μLを、X40倍率のZeiss Primo Vert光学顕微鏡を使用した顕微鏡観察のために、平行六面体顕微鏡スライド（Menzel-Glaeser、24mmx60 mm、厚さ0.13-16 mm）に堆積させた。強度1.3 Tの4つの小さな立方体ネオディニウム磁石（Supermagnet、N42 W-10-N 10x10x10 mm）を、顕微鏡のプラットフォーム上で、細菌の懸濁液から約2 cmの距離で、磁場を生成するように配置した。観察者の位置または2つの双眼鏡の間の線に平行（位置1）、またはこの位置に垂直に（位置2）、磁石を位置1または2に配置してから20秒後に、200の走磁性細菌を考慮して、磁場の方向に並んだ細菌の割合を推定した。磁石によって生成された磁場と同じ方向に整列していない細菌は、非磁性とみなされ、それらの番号はnBNMとして指定された。磁石によって生成された磁場の方向に整列された細菌は、磁性があるとみなされ、それらの番号はnBMとして指定された。磁性細菌の割合は、nBM /（nBM + nBNM）によって与えられ、 磁性細菌の正の磁気応答は、nBM /（nBM + nBNM）> 0.5に相当した。磁性細菌の負の磁気応答は、nBM /（nBM + nBNM）<0.5に対応します。
場合によっては、磁場の存在下で顕微鏡下で光学観察することにより、磁性細菌の割合を測定できる。
【０３００】
細胞内鉄濃度の測定：走磁性細菌内部の鉄濃度は、破壊的鉄化学分析によって決定された。そのために、2 mLのMSR-1走磁性細菌を14500 gで10分間遠心分離し、次いで、細菌ペレットを1X PBSおよびMilliQ水で2回洗浄した。2回目の洗浄後、細菌ペレットを収集し、1 mLの12 N塩酸（HCl）を化学フードの下のペレットに加えた。サンプルを300 rpmで撹拌しながら75℃で2時間加熱して、細胞内鉄をFe 3+およびFe 2+イオンに変換した。次に、Fe2 +イオンは、20％の過酸化水素（H2O2）でFe3 +に酸化した。酸性媒体にチオシアン酸カリウム（KCN、2mol / L）を加えると、Fe3 +イオンの存在が明らかになり、サンプル中のFe3 +の濃度に依存する赤オレンジ色の溶液が形成される。KCNを添加するとすぐに、溶液の吸光度が476 nmで測定されました。次に、476 nmで測定された吸光度の値と塩化鉄(III)の濃度との決定された関係を使用して、サンプルの鉄濃度を推定した。この方法により、総細胞内鉄濃度を推定することが可能である。
【０３０１】
ICP-AESによるマグネトソームの元素化学組成の分析：発酵後、MSR-1磁気走性細菌を5 Lの容量で接線濾過により濃縮し、25〜30の光学密度に到達させる。その後、細菌を1時間溶解しました マグネトソームを含む細菌溶解物をネオジム磁石に12時間置き、次に、マグネトソームを細菌溶解物から分離し、10X PBSに再懸濁した。この洗浄手順を10X PBSで2回、MilliQ水で3回繰り返しました。次いで、マグネトソームを凍結乾燥し、マッフル炉内で以下に説明する条件で加熱して、低炭素含有量の高純度酸化鉄結晶を含むマグネトソーム粉末を得る。元素の化学組成を分析するために、この粉末500μgの溶液を12N HCl 200μlおよび2％ろ過HNO3 10 mlと混合する。粉末のICP-AES測定により、マグネトソームに含まれる化学元素の量が、マグネトソームに含まれる鉄1 gあたりこれらの化学元素（Ag、Al、As、Ba、Cd、Co、Cr、Cu、Mn、Mo、Ni、Pb、Sb、Se、Si、Sn、Ti、Tl、W、Zn）について求まる。
【０３０２】
成長培地の調製に使用される化学製品：硫酸アルミニウム12水和物（AlK（SO4）212H2O、ref。NFG A6435、Merck）; 水酸化アンモニウム（NH4OH、ref。NFG 1336-21-6、Acros またはganics; ref。FG 105422、Merck）; 塩化アンモニウム（NH4Cl、ref。NFG A9434、Merck; ref。FG 1011420001、Merck）; 硫酸アンモニウム（（NH4）2SO4、ref。NFG A4418）; ビオチン（C10H16N2O3S、ref。NFG B4639、Merck; ref。FG B301、Merck）; ホウ酸（H3BO3、ref。NFG B6768、Merck）; 塩化カルシウム（CaCl2、ref。NFG 223506、Merck; ref。FG 1.42002、Merck）; パントテン酸カルシウム（HOCH2C（CH3）2CH（OH）CONHCH2CH2CO2・1 / 2Ca、参照FG C0400000、メルク）; 硝酸コバルト（II）六水和物（硝酸コバルト（II）六水和物、ref。FG 239267、Merck）; 硫酸銅（II）五水和物（CuO４S。5 H2O）（ref。NFG C8027、メルク）、DL-メチオニン（CH3SCH2CH2CH（NH2）COOH、ref。NFG M2768、Merck）; DL-トリプトファン（C11H12N2O2、ref。NFG T3300、Merck）; EDTA（（HO2CCH2）2NCH2CH2N（CH2CO2H）2、ref。NFG E6758、メルク）; クエン酸第二鉄（C6H5FeO7、ref。NFG F3388、メルク; ref。FG B301、メルク）; 葉酸（C19H19N7O6、ref。NFG F7876、メルク; ref。FG F0300000、メルク）; イノシトール（C6H12O6、ref。FG PHR1351、メルク）; 硫酸鉄（II）七水和物（FeO４S.7H2O、ref。NFG F8633、Merck; ref。FG 1.03963、Merck）; シュウ酸鉄（III）六水和物（Fe2（C2O4）3.6H2O、ref。NFG 381446、Merck）; L-ヒスチジン（C6H9N3O2、ref。FG PHR1108、Merck）; 硫酸マグネシウム七水和物（MgSO4.7H2O、ref。NFG 63138、Merck; ref。FG 105882、Merck）; 硫酸マンガン（II）一水和物（MnO４S.H2O、ref。NFG M7899、Merck）;塩化ニッケル（II）六水和物（Cl2Ni.6H2O、ref。NFG N6136、Merck）;ニコチン酸（C6H5NO2、ref。NFG N4126、Merck）;ニトリロ三酢酸三ナトリウム塩（C6H6NO6Na3、ref。NFG N0253、Merck）; p-アミノ安息香酸（H2NC6H4CO2H、ref。NFG A9878、メルク）;二塩基性リン酸カリウム（K2HPO4、ref。NFG P8281、Merck; ref。FG 105101、Merck）;一塩基性リン酸カリウム（KH2PO4、ref。NFG P9791、メルク）;プロトポルフィリンIX（C34H34N4O4、ref。NFG P8293、メルク）;ピリドキシンHCl（C12H17ClN4OS.HCl、ref。NFG P9755、メルク）;リボフラビン（C17H20N4O6、ref。NFG R9504、メルク; ref。FG PHR1054、メルク）;塩化ナトリウム（NaCl、ref。NFG S7653、Merck）;乳酸ナトリウム（C3H5NaO3、ref。NFG L1375、Merck; ref。FG 106522、Merck）;モリブデン酸ナトリウム二水和物（Na2Mo4.2H2O、ref。NFG M1003、Merck）;亜セレン酸ナトリウム五水和物（Na2SeO3.5H2O、ref。FG 89771、Merck）;チアミンHCL（C12H17ClN4OS.HCl、ref。NFG 47858、Merck、ref。FG PHR1037、Merck）;酵母エキス（ref。NFG Y1625、Merck）;硫酸亜鉛七水和物（O４Zn.7H2O、ref。NFG Z0251、Merck）。NFGは、成長培地の調製に使用される非医薬品グレードの化学物質を指定する。FGは、成長培地の調製に使用される医薬品グレードの化学物質を指定する。また、抵抗率15MΩの脱イオン水（H20）も使用する。
【０３０３】
さまざまなミネラルエリキシルの組成：さまざまなミネラルエリキシル（V0、CB1、V2、CB2、CB3、CB4、CB5、CB7、CB9、CB10、CB11、CB12、CB13）の組成を表6に示す。これらのエリキシル剤の1リットルを調製するために使用されるさまざまな化学物質の量（グラム単位）が示されている。
【０３０４】
さまざまな酵母エキスの組成：さまざまな酵母エキス(ViT1X、Vit5X、ViT10X、Vit0.5X、Vit0.1X) の組成を表7に示す。1リットルの酵母の調製に使用されるさまざまな化学物質の量（グラム）を示す。YNBWAA、YNBWoAA、YNBWoAA.ASは還元酵母エキスを示し、YEは非還元酵母エキスを示す（参照：Y0875、Sigma）。YEは、窒素化合物、炭素、硫黄、微量栄養素、ビタミンB複合体およびその他の重要な成長因子で構成されている。
【０３０５】
さまざまなビタミンカクテルの組成：さまざまなビタミンカクテル（ViT1X、Vit5X、ViT10X、Vit0.5X、Vit0.1X）の組成を表8に示す。これらのビタミンカクテルのリットルが示されている。
【０３０６】
条件1の予備成長培地の組成（表1）：予備成長培地1リットルには、脱イオン水1リットルに乳酸ナトリウム2.6 g、塩化アンモニウム0.4 g、硫酸マグネシウム七水和物0.1 g、 二塩基性リン酸カリウム、酵母エキスYE0.1 g（表7）、およびミネラルエリキシルV0、CB1、V2、CB2、CB3、CB4、CB5、CB7、CB9、CB10、CB11、CB12、またはCB13のいずれか0.5 mL（表6）。
【０３０７】
条件1（表1）の成長培地の組成：1リットルの成長培地は、1リットルの脱イオン水に2.6 gの乳酸ナトリウム、0.4 gの塩化アンモニウム、0.1 gの硫酸マグネシウム七水和物、0.5 gの二塩基性リン酸カリウム、 酵母エキスYE（表7）0.1 g、ミネラルエリキシルV0、CB1、V2、CB2、CB3、CB4、CB5、CB7、CB9、CB10、CB11、CB12、またはCB13のいずれか0.5 mL（表6） 、および10 mLのクエン酸第二鉄（初期濃度20 mM）。
【０３０８】
条件2の予備成長培地の組成（表2）：予備成長培地1リットルは、脱イオン水1リットルに含まれている：乳酸ナトリウム2.6 g、塩化アンモニウム0.4 g、硫酸マグネシウム七水和物0.1 g、0.5 g 二塩基性リン酸カリウム、酵母エキスYE、YNBWAA、YNBWoAA、YNBWoAA.AS（表7）のいずれか0.1 g、およびミネラルエリキシルCB3（表6）0.5 mL。
【０３０９】
条件2の成長培地の組成（表2）：1リットルの成長培地は、1リットルの脱イオン水に2.6 gの乳酸ナトリウム、0.4 gの塩化アンモニウム、0.1 gの硫酸マグネシウム七水和物、0.5 gの二塩基性リン酸カリウム、 酵母エキスYE、YNBWAA、YNBWoAA、またはYNBWoAA.AS（表7）のいずれかの0.1 g、ミネラルエリキシルCB3（表6）0.5 mL、クエン酸第二鉄（20 mM初期濃度）10 mL。
【０３１０】
条件3（表3）の予備成長培地の組成：予備成長培地1リットルには、脱イオン水1リットルに乳酸ナトリウム2.6 g、塩化アンモニウム0.4 g、硫酸マグネシウム七水和物0.1 g、 二塩基性リン酸カリウム、ビタミンViT1X、Vit5X、ViT10X、Vit5X、Vit0.5X、Vit0.1Xのいずれか0.1 mL（表8）、0.5 mLのミネラルエリキシルCB3（表6）。
【０３１１】
条件3の成長培地の組成（表3）：1リットルの成長培地は、1リットルの脱イオン水に2.6 gの乳酸ナトリウム、0.4 gの塩化アンモニウム、0.1 gの硫酸マグネシウム七水和物、0.5 gの二塩基性リン酸カリウム、 ビタミンカクテルViT1X、Vit5X、ViT10X、Vit5X、Vit0.5X、またはVit0.1Xのいずれか0.1 mL（表8）、0.5 mLのミネラルエリキシルCB3（表6）、および10 mLのクエン酸第二鉄（20 mM初期濃度） ）。
【０３１２】
条件4（表4）の予備成長培地の組成：予備成長培地1リットルには、脱イオン水1リットルに乳酸ナトリウム2.6 g、塩化アンモニウム0.4 g、硫酸マグネシウム七水和物0.1 g、 二塩基性リン酸カリウム、0.1 mLの個々のビタミンBt、CP、FA、I、NA、AA、P、R、またはTのいずれか（表9）、0.5 mLのミネラルエリキシルCB3（表6）。
【０３１３】
条件4の成長培地の組成（表4）：1リットルの成長培地は、1リットルの脱イオン水に2.6 gの乳酸ナトリウム、0.4 gの塩化アンモニウム、0.1 gの硫酸マグネシウム七水和物、0.5 gの二塩基性リン酸カリウム、 個々のビタミンBt、CP、FA、I、NA、AA、P、R、またはTのいずれか0.1 mL（表9）、ミネラルエリキシルCB3 0.5 mL（表6）、およびクエン酸第二鉄10 mL（ 20mM初期濃度）。
【０３１４】
条件5の予備成長培地の組成（表5）：さまざまな濃度の予備成長培地の主成分、すなわち乳酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫酸マグネシウム七水和物、リン酸カリウムを含むさまざまな予備成長培地の組成 二塩基性（N、SL0、SL0.5X、SL0.2X、SL0.1X、AC0、AC0.5X、AC0.2X、AC0.1X、MG0、MG0.5X、MG0、MG0.5X、MG0.2X、MG0。1X、P、P0.5X、P0.2X、P0.1X）を表5に示します。表5には、これらの予備成長培地1リットルを調製するために使用されるさまざまな化学物質の量（グラム）が示されています。
【０３１５】
条件5の成長培地の組成（表5）：さまざまな濃度の予備成長培地の主成分、すなわち乳酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫酸マグネシウム七水和物、リン酸二カリウム（N、 SL0、SL0.5X、SL0.2X、SL0.1X、AC0、AC0.5X、AC0.2X、AC0.1X、MG0、MG0.5X、MG0、MG0.5X、MG0.2X、MG0.1X、P、 P0.5X、P0.2X、P0.1X）を表5に示します。表5には、これらの成長培地1リットルを調製するために使用されるさまざまな化学物質の量（グラム）を示す。
【０３１６】
非医薬品グレードの化学物質を使用して調製された条件6の予備成長培地、成長培地、流加培地の組成（表14（a））：予備成長培地B1およびB4は、1リットルの脱イオン水2.6 gで構成される乳酸ナトリウム、0.4gの塩化アンモニウム、0.1gの硫酸マグネシウム七水和物、0.5gの二塩基性リン酸カリウム、0.1mLのビタミンカクテルVit 0.1X（表8）、および0.5mLのミネラルエリキシルCB3（表6）。成長培地B1およびB4は、1リットルの脱イオン水に104 gの乳酸ナトリウム、16 gの塩化アンモニウム、1.2 gの硫酸マグネシウム七水和物、2.8 gの二塩基性リン酸カリウム、3.2 mLのビタミンカクテルVit0.1Xを含む（表8 ）、2.8 mLのミネラルエリキシルCB3（表6）。流加培地B1およびB4は、1リットルの水に100 gの乳酸、4.8 gのアンモニア、6 gの二塩基性リン酸カリウム、2.4の硫酸マグネシウム七水和物、1 mLのビタミンカクテルVit0.1Xを含む（表8） 、7 mLのミネラルエリキシルCB3（表6）、および1.8 gのクエン酸第二鉄（B1）または2 gの鉄III塩化物（B4）。
【０３１７】
医薬品グレードの化学薬品を使用して調製された条件6の予備成長培地、成長培地、流加培地の組成（表14（b））：予備成長培地B2およびB3は、1リットルの脱イオン水に2.6 gの乳酸ナトリウム、塩化アンモニウム0.4 g、硫酸マグネシウム七水和物0.1 g、二塩基性リン酸カリウム0.5 g、ビタミンカクテルVit 0.1X（表8）0.1 mL、およびミネラルエリキシルCB3（表6）0.5 mLを含む。成長培地B1およびB4は以下を含む：1リットルの脱イオン水に104 gの乳酸ナトリウム、16 gの塩化アンモニウム、1.2 gの硫酸マグネシウム七水和物、2.8 gの二塩基性リン酸カリウム、3.2 mLのビタミンカクテルVit0.1X（表8 ）、2.8 mLのミネラルエリキシルCB3（表6）。流加培地B1およびB4は以下を含む：1リットルの水に100 gの乳酸、4.8 gのアンモニア、6 gの二塩基性リン酸カリウム、2.4の硫酸マグネシウム七水和物、1 mLのビタミンカクテルVit0.1X（表8） 、7 mLのミネラルエリキシルCB3（表6）、および1.8 gのクエン酸第二鉄（B2）または2 gの鉄III塩化物（B3）。
【０３１８】
さまざまな培養に使用されるMSR-1走磁性細菌のストック：MSR-1走磁性細菌は、DSMZ社によってDSM 6361の基準で商品化されている。受入れ後、MSR-1細菌懸濁液はOD565nm（565 nm）0.01で15 mLチューブ（チューブあたり細菌5 mLの懸濁液）または1.5 mLエッペンドルフチューブ（チューブあたり細菌600μLの懸濁液）で -80°Cの冷凍庫に保存される。-80°Cの冷凍庫に保存されたMSR-1バクテリアの懸濁液が細胞ストックを構成する。場合によっては、培養およびまたは前培養成長培地は、成長およびまたは予備成長培地と同じであってもよい。
【０３１９】
表記：DXのDの後の数値Xは、予備成長ステップの開始後の日数を示す。これは走磁性細菌が初めて、または予備成長ステップの最初のサブステップ中に、予備成長培地に挿入される日である。
【０３２０】
例1：バクテリアの成長とマグネトソーム合成を可能にする最小ミネラルエリキシルの決定：
この例では、ミネラルエリキシル組成を可能な限り減らす一方で、これらによるMSR-1走磁性細菌の成長とこれらの細菌によるマグネトソームの合成を可能にする実験プロトコルについて説明する。この例では、成長培地の調製に非医薬品グレードの化学物質が使用される。この例（条件1）で使用される1リットルの予備成長培地と成長培地の組成を表1に示す。実験の初日（D1）に、最初のステップは -80°Cの冷凍庫からのMSR-1細胞ストックチューブの５mLを含む15ｍＬのチューブを集めることである。それらをフード内で室温で10分間放置して解凍することで、これらのチューブから、5 mLのろ過された増殖前培地を含む50 mLチューブに挿入した5・106 MSR-1走磁性細菌を含む100 μlを収集する。全体として、テストされた13の異なるミネラルエリキシルに対応して、13の異なる培養条件がテストされた。50 mlのチューブを、150 rpmの振動条件下で、29.5°Cの培養器でD1とD6の間の6日間培養した。次のステップは、鉄源を成長培地に添加して、MSR-1バクテリアによるマグネトソームの合成を可能にすることであった。6日間の予備成長後、D6で50 mlチューブをフードに入れ、その後、30 mlのろ過された培地を50 mLチューブに加え、細菌はD6とD13の間増殖した。D13での正の磁気応答と、 V0、V2、CB2、CB3、CB4、CB5、CB7、CB10、CB11、CB12、CB13に対してV13では、D13の光学密度とD6の光学密度の比が1より大きいことが観察された（条件1）。対照的に、ミネラルエリキシルを構成する化学元素の濃度が10-5 g / l以下の条件CB1およびCB9に対して磁気応答はない。結論として、光学密度の大幅な増加を伴うMSR-1バクテリアの増殖（4.8よりも大きいOD565nmD13 / OD565nmD6）およびマグネトソームの合成（正の磁気応答）を可能にする最小限のミネラルエリキシルは、1 g / lの濃度の硫酸鉄七水和物および20 g / lの濃度の塩化カルシウムのみで構成されるCB13である。
【０３２１】
例2：走磁性細菌の増殖およびマグネトソームの合成を可能にする酵母エキスを含まない成長培地の決定：この実施例は、MSR-1走磁性細菌の増殖そしてこれらの細菌によるマグネトソームの合成を可能にする酵母エキスを置換する還元培地を決定するために使用される実験プロトコルを説明する。この例では、成長培地の調製に非医薬品グレードの化学物質を使用した。脱イオン水1リットル中の予備成長および成長培地の組成を、表2（条件2）、表3（条件3）、および表4（条件4）に示す。実験の第1日（D1）に、最初のステップは、-80°Cのフリーザーから5 mLのMSR-1細胞ストックチューブを含む15 mlのチューブを収集し、室温に置いてチューブを解凍することである。フードの中で、これらのチューブから、条件2（表2）、条件3（表3）または条件4（表4）のいずれかのろ過した予備成長培地8 mLを含む50 mLチューブに挿入した5.106 MSR-1走磁性細菌100μlを収集した。
50 mlのチューブを、150 rpmの振動条件下で、29.5°Cの培養器でD1とD6の間で6日間培養した。次のステップは、鉄源を成長培地に添加して、MSR-1バクテリアによるマグネトソームの合成を可能にすることであった。6日間の予備成長後、D6で50 mlチューブをフードに入れた。次に、30 mlのろ過成長培地を50 mLチューブ（条件2、表2、条件3、表3、条件4、表4）にD6に添加し、細菌はD6とD13の間で増殖した。表11および12は、酵母エキスYE、YNBWAA、YNBWAA、YNBWoAA、YNBWoAA、 YNBWoAA.AS（条件2）、ViT1X、Vit0.5X、Vit0.1X、（条件3）、ビオチン（Bt）、葉酸（FA）、ニコチン酸（NA）、リボフラビン（R）、チアミンHCl（T ）（条件4）で、D13で90％を超える磁気応答があり、D13で測定された光学密度とD6で測定された光学密度の比が1より大きい比率が観察されたことを示している。
対照的に、磁気応答は、条件Vit5X、ViT10X（条件3）では0、条件CP、I、AA、P（条件4）では非常に低い。結論として、酵母エキスは、ビオチン、葉酸、リボフラビン、ニコチン酸またはチアミンHClである単一のビタミンで置き換えることができる。これらのビタミンは、OD565nmD13 / OD565nmD6の値が9.8（ビオチン）、2.9（葉酸）、4.8（リボフラビン）、2.4（ニコチン酸）、5.8（チアミンHCl）、および磁気応答の90％（表11）である。
【０３２２】
例３：成長培地の主要成分（乳酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫酸マグネシウム、リン酸カリウム）の最小濃度の決定、これにより、走磁性細菌の増殖およびこれらの細菌によるマグネトソームの合成が可能になる。
この例では、MSR-1走磁性細菌の増殖とこれらの細菌によるマグネトソームの合成を可能にする削減した成長培地の決定に使用される実験プロトコルについて説明する。この例では、成長培地の調製に非医薬品グレードの化学物質を使用した。表5に乳酸ナトリウム（条件SL0、SL0.5X、SL0.2X、SL0.1X）、塩化アンモニウム（AC0、AC0.5X、AC0.2X、AC0.1X）、硫酸マグネシウム七水和物（MG0、MG0.5X、MG0.2X、MG0.1X）、二塩基性リン酸カリウム（P0、P0.5X、P0.2X、P0.1X）。予備成長および成長培地N、SL0、SL0.5X、SL0.2X、SL0.1X、AC0、AC0.5X、AC0.2X、AC0.1X、MG0、MG0.5X、MG0.2X、MG0.1X、P0、P0.5X、P0.2X、P0.1Xの化学組成と濃度が成長培地1リットルについてまとめられている。
実験の第１日（D1）に、最初のステップは、-80°Cのフリーザーから5 mLのMSR-1細胞ストックチューブを含む15 mlのチューブを収集し、10分間部屋の温度に置いてチューブを解凍することである。フードの下で、8 mLの予備成長培地を満たした50 mLチューブに挿入した5.106 MSR-1走磁性細菌100 μlを含むこれらのチューブを収集した（条件5、表5）。50 mlのチューブを、150 rpmの振動条件下で、29.5°Cの培養器でD1とD6の間で6日間培養した。
次のステップは、鉄源を成長培地に添加して、MSR-1バクテリアによるマグネトソームの合成を可能にすることであった。6日間の予備成長後、D6で50 mlチューブをフードに入れた。次に、30 mlのろ過した成長培地をD6の50 mLチューブに加え、細菌をD6とD13の間で増殖させた。条件N、P0.5X、P0.2Xの場合、成長率、またはD13で測定された光学密度とD6で測定された光学密度の比率は1より大きく、正の磁気応答（磁気応答> 90％）が D13で観察された。これらの条件がバクテリアの成長とマグネトソームの生成を可能にしたことを示している。
対照的に、条件SL0、SL0.5X、SL0.2X、SL0.1X、AC0、AC0.5X、AC0.2X、AC0.1X、MG0、MG0.5X、MG0.2X、MG0.1X、P0.1X 、P0、マグネトソームの合成は非常に低かった（磁気応答<50％）。結論として、マグネトソームの成長と生産に影響を与えることなく、リン酸カリウムの濃度を成長培地で2または5の係数で減らすことができる。実際、これらの条件では、OD565nmD13 / OD565nmD6の値が1.5（条件P0.5X）、2.1（条件P0.2X）、および細菌間の陽性磁気応答の割合が90％を超えている（表13）。
対照的に、培地の他の化学物質（塩化アンモニウム、乳酸ナトリウム、リン酸マグネシウム）の濃度は、MSR-1走磁性細菌の増殖およびまたは磁気応答に大きな影響を与えることなく低下させることはできなかった。
【０３２３】
例4：走磁性細菌の増殖およびこれらの細菌によるマグネトソームの合成を可能にする1リットル発酵槽の鉄源の決定、および予備成長培地およびまたは成長培地の調製のために高医薬品グレードの化学製品を使用することにより得られる不純物の低減 
この例では、鉄源を決定するために使用される実験プロトコルについて説明する。それにより、MSR-1走磁性細菌の増殖とこれらの細菌によるマグネトソームの合成、および医薬品グレードの化学物質を使用して得られたマグネトソームに含まれる不純物の低減が可能になる（条件6）。この例では、医薬品グレードの化学物質を使用してB2およびB3成長培地（表14（b））を調製し、非医薬品グレードの化学物質を使用してB1およびB4成長培地（表14（a））を調製した。
予備成長の培地、成長培地、および流加培地の組成は、表14（a）および14（b）に培地1リットルについて示されている。第1日（D1）に、予備成長の最初のステップは、-80°Cのフリーザーから5 mLのMSR-1細胞ストックチューブを含む1.5 mlのエッペンドルフのチューブを収集し、10分間部屋の温度に置いてチューブを解凍することである。フードの下で、250 mLの予備成長培地を満たした500 mLのボトルに挿入した5.106 MSR-1走磁性細菌300 μlを含むこれらのチューブを収集した。500mlのボトルを、150 rpmの振動条件下で、29.5°Cの培養器でD1とD7の間で7日間培養した。
予備成長の2番目のステップは、より大きな2 Lボトルで実行された。7日間の予備成長後、D8で500 mLのボトルをフードに入れた。MSR-1細菌を含む増殖前培地を、増殖前の第2段階のために1.5Lの濾過済み増殖前培地を満たした2L滅菌ボトルに手動で移した。2 Lボトルを、D8とD9の間で1日、29.5°Cの培養器で150 rpmの振とう条件下で培養した。9日目（D9）に、成長段階が始まった。
そのために、1.5 Lの4つの発酵槽（条件、B1、B2、B3、B4）に780 mLの脱イオン水を満たし、加圧滅菌した。次に、発酵槽に20 mLのろ過成長培地を満たした。次に、4つの発酵槽（条件、B1、B2、B3、B4）のそれぞれに、予備増殖の2番目のステップに由来するMSR-1バクテリアを含む予備成長培地200 mLを充填した。
D9とD11の間に、鉄源を含む酸性流加培地を成長培地に添加して、成長培地のpHを6.9に維持しながら、MSR-1細菌によるマグネトソームの合成を可能にした。
成長段階の間、温度は29.5℃、気流は0.05 mL / min、攪拌は200 rpmに維持した。予備成長段階（D0およびD8）および成長段階（D9、D10、D11）の異なる日の細菌懸濁液の565 nmで測定された光学密度を、条件B1、B2、B3、 およびB4について表15に示した。D13での発酵の後、発酵槽B1、B2、B3、およびB4からのMSR-1細胞（条件B1からB4）を4000 rpmで45分間の遠心分離によって濃縮した。細菌を溶解するために、発酵槽B1、B2、B3、B4からのMSR-1細胞を15 mLの1 M KOH溶液に再懸濁し、20 mLガラスびんで25 kHzの超音波処理槽で80°Cで2時間加熱した。バクテリアの溶解後、MSR-1細胞のマグネトソームは、ネオジム磁石を一晩使用して有機材料から分離された。
D14では、条件B1、B2、B3、B4のマグネトソームを、10 mLのリン酸緩衝生理食塩水15 mLを使用して2回、ネオジム磁石を使用した脱イオン水15 mLを使用して2回洗浄した。各洗浄の間、マグネトソーム懸濁液は、マグネトソームを引き付けるネオジム磁石に対して2時間置かれた。有機破片を含む上清を廃棄し、15 mLの10Xリン酸緩衝生理食塩水または15 mLの脱イオン水で置き換えました。D16では、最後の洗浄後、上澄み液を廃棄し、条件B1、B2、B3、B4のマグネトソームをセラミックカップに移し、終日ネオジム磁石に当てて乾燥させました。
D17で、残りの液体を廃棄し、マグネトソームをセラミックカップに挿入してマッフル炉に配置し、200℃で30分間、300℃で1時間、380℃で1時間加熱した。D17で、条件B1、B2、B3、B4の精製マグネトソーム約1 mgを200 μLのHCL 12Nで満たした15 mLチューブに挿入した。マグネトソームを含む15 mLのチューブを渦巻気にし、室温で2時間培養した後、9.8 mLの2％HNO3で満たした。その後、ナノ粒子1グラムあたりの元素不純物のμg単位の濃度をICP-AESで測定した。
これらの測定の結果は、条件B1、B2、B3、B4について表16に示されている。そこでは元素不純物がAg（銀）、Al（アルミニウム）、As（ヒ素）、Ba（バリウム）、Cd（カドミウム）、Co（コバルト）、Cr（クロム）、Cu（銅）、Mn（マンガン）、Mo（モリブデン）、Ni（ニッケル）、Pb（鉛）、Sb（アンチモン）、Se（セレン）、Si（シリカ）、Sn （スズ）、Ti（チタン）、Tl（タリウム）、W（タングステン酸塩）、Zn（亜鉛）であった。
結論として、条件B3はOD565nmD11 / OD565nmD9の最大値が26.8であり、細菌間で正の磁気応答の割合（> 90％）（表15）を示しており、塩化鉄（III）が最適な鉄源であることを示している。さらに、Pbを除き、医薬品グレードの化学物質が使用された条件B3では、非医薬品グレードの化学物質が使用された条件B4と比較して、元素不純物濃度が減少している（表16）。
【０３２４】
例5（精製方法）：
材料および方法：
【０３２５】
注：この例では、重量を質量に置き換えることができ、優先的に同じ意味になる。
【０３２６】
さまざまなサンプルの分析と加熱に使用される機器：
【０３２７】
TGA-DSC：「示差走査熱量測定」（DSC）と組み合わせた「熱重量分析」（TGA）を使用して、熱流（mW）または凍結乾燥マグネトソームを含む粉末の質量損失の割合（処理または非処理）を測定する。または、これらの粉末の加熱温度の関数としての凍結乾燥された細菌全体または凍結乾燥されたSIGMAナノ粒子測定のために、粉末は20°Cから600°Cの間で毎分6°Cの速度で加熱される。TGA-DSCプロファイルは、マグネトソームまたはナノ粒子の表面または表面にある材料、優先的には有機材料が劣化する温度を定義することを可能にする。ATGおよびDSC分析は、SDT Q600（TA Instrument）を使用して実行された。これは、密閉された筐体、温度制御付きの炉、マイクロ天秤、および温度を測定する熱電対。TGA-DSC分析には、3 mgの凍結乾燥細菌、凍結乾燥マグネトソーム、SIGMAナノ粒子粉末がCHNS測定に使用される。
【０３２８】
炉：マッフル炉（Nabertherm L9 / 11 / B410）を使用して、条件番号1または2に従って200°Cを超える熱処理なしで、または200°Cを超える熱処理ありで（条件番号3、4、5、6、7、8、9、10、または11による）、 走磁性細菌から抽出された30 mgまたは500 mgのマグネトソームを加熱する。そのために、各サンプルの30または500 mgの粉末を、覆いのない磁器カップに入れ、炉の中央に置く。プログラムを使用して、さまざまな加熱条件が実行できる。炉は、ナノ粒子そしてまたは炉内の温度を、所定の温度プラスマイナス2°Cに保つことができ、または炉は、最大2°Cの変動で20〜380°Cの安定した温度を得ることができる。
【０３２９】
完全走磁性細菌を含むサンプル（サンプル0）：条件1（ミネラルエリキシルV2、表1）で得られた走磁性細菌を収集し、接線ろ過システムを使用して、565 nm（OD565nm）で測定した100から200の間の光学密度に濃縮した。サンプル0は、凝縮した全身の走磁性細菌で構成されている。
【０３３０】
200°Cを超える熱処理なしで走磁性細菌から抽出されたマグネトソームを含むサンプル（サンプル1および2）：
【０３３１】
溶解の条件1（サンプル1）：120のOD565nmで濃縮された100 mlのサンプル0を400 mlの5M NaOHと混合し、音波浴を使用して60°Cで1時間加熱し、バクテリアを溶解した。次に、溶解した細菌懸濁液を含む容器の壁にネオジニウム磁石を一晩置き、培地と細菌の破片を含む上清を1X PBSで置き換えることにより、処理したマグネトソームを細菌の破片から単離した。次に、得られた懸濁液を1X PBSの存在下で10Wで20秒間超音波処理し、15分間ネオジニウム磁石に当てて、上清を除去し、処理したマグネトソームを1X PBSに再懸濁した。超音波処理と磁気分離のこのシーケンスを4回繰り返した。発酵槽全体について、この処理を10種類の容量で10回繰り返した。こうして、MSR-1走磁性細菌から抽出された発熱性マグネトソーム鎖が得られた、すなわち、1.7mlの水に含まれるマグネトソームの鉄中の約500mgである。サンプル1は、溶解の条件1から得られたマグネトソームを含む。
【０３３２】
溶解の条件2（サンプル2）：濃縮された走磁性細菌を-80°Cで48時間凍結した。30のOD565nmを得るためにMilliQ水で濃縮物を解凍および希釈した後、1Mの最終KOH濃度を得るために濃縮バクテリアを得るためにある量のKOHを加えた。この溶液をポリプロピレン（PP）ボトルに移し、80℃の水浴に入れ、機械的攪拌パッド（Fisher Scientific）で150 rpmで30分間攪拌した。次に、ボトルの内容物を2 Lの4つの他のガラスボトルに移した。各ボトルを12時間NdFeB磁石に当てて、抽出したマグネトソームを細菌の破片から磁気的に分離しました。マグネトソームは、透明な上清が得られるまで、磁気選択により500 mLボトルで6回洗浄された。最初の2回の洗浄は10X PBSで行った。これにより、中性pHに戻すことができた。次に、他の4回の洗浄を水で行った。溶解後、KOHによって引き起こされた溶解物の基本pHは、マグネトソームを損傷しないように中性pHに戻された。こうして、MSR-1株から抽出された発熱性マグネトソーム鎖が得られた、すなわち、1.7mlのマグネトソームの鉄中約500mgである。サンプル2は、溶解条件2の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３３３】
走磁性細菌から抽出され、フェノール-クロロホルムで処理されたマグネトソームを含むサンプル（条件3）：
【０３３４】
処理の条件3（サンプル3）：溶解の条件1に従って得られたマグネトソームの鉄30 mgを含む懸濁液100 μlを、1％Triからn X-100および1％SDSを含む200 mlの溶液と混合した。混合物を50℃で一晩加熱し、ネオジニウム磁石に当てて、上清を除去し、pH 8の80mLのフェノールで置き換えた。得られた懸濁液を60℃で超音波処理しながら2時間加熱し、一晩保持した。超音波処理せずに60°Cで磁石に当て、懸濁液の上清を除去し、80 mLのクロロホルムで置き換えた。クロロホルムを含む懸濁液をネオジニウムの磁石に対して置き、上清を除去し、処理されたマグネトソームの表面に吸着した残留クロロホルムを、これらのマグネトソームをフードの下で2時間加熱することにより除去した。最後に、このようにして得られたマグネトソームのコアを、音波浴で60℃で1時間加熱した80mlの1M NaOHを加えることにより、それらを含むチューブのガラス壁から脱着させた。マグネトソームのコアを含む懸濁液は、ネオジニウム磁石に対して置かれた。上清を除去し、滅菌MilliQ水で置き換えた。懸濁液を10Wで20秒間超音波処理し、この洗浄シーケンスを4回繰り返した。精製された発熱物質を含まないマグネトソームは、少量の発熱物質を含まない水で得られた。サンプル3は、処置の条件3の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３３５】
走磁性細菌から抽出され、200°Cを超える温度で加熱されたマグネトソームを含むサンプル（サンプル4から11）：
【０３３６】
熱処理の条件4（サンプル4）：条件2の溶解後、MSR-1走磁性細菌から抽出されたマグネトソームの鉄に約30 mgを含む懸濁液100μlを凍結乾燥し、磁器るつぼに入れ、炉NaberthermL9 / 11 / B410で焼いた。加熱プロトコルは以下の通りであった。炉の温度が200℃に達するまで、炉の温度を6℃/ minの速度で20℃から200℃に上げ、炉内の200℃の温度を1時間維持した。その後、炉の温度は12時間で200℃から25℃に低下した。サンプル４は、治療の条件４の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３３７】
熱処理の条件5（サンプル5）：条件2の溶解後、MSR-1走磁性細菌から抽出されたマグネトソームの鉄に約30 mgを含む懸濁液100μlを凍結乾燥し、磁器るつぼに入れ、炉NaberthermL9 / 11 / B410で焼いた。加熱プロトコルは以下の通りであった。炉の温度は、炉の温度が400℃に達するまで、6℃/分の速度で20℃から400℃に上げられた。炉内の温度は400℃で1時間維持されました。その後、炉の温度は20時間で400℃から25℃に低下した。サンプル５は、治療の条件５の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３３８】
熱処理の条件6（サンプル6）：溶解の条件2に従って調製したマグネトソームの鉄に30 mgを含む懸濁液100μlを凍結乾燥し、磁器製るつぼに入れ、炉Nabertherm L9 / 11 / B410内で加熱した。熱処理は以下の通りであった。炉の温度は、9°C /分の速度で20分で20°Cから200°Cに上昇した。次に、炉の温度を200℃で30分間維持した。次に、炉の温度を10°C / minの速度で10分で200°Cから300°Cに上げた。その後、炉の温度を300℃に1時間維持した。その後、炉の温度は12時間で300℃から25℃に低下した。サンプル6は、治療の条件6の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３３９】
熱処理の条件7（サンプル7）：溶解の条件2に従って調製したマグネトソームの鉄30 mgを含む懸濁液100μlを凍結乾燥し、磁器るつぼに入れて、炉Nabertherm L9 / 11 / B410で加熱した。熱処理は以下の通りであった。炉の温度は、9°C /分の速度で20分で20°Cから200°Cに上昇した。次に、炉の温度を200℃で30分間維持した。次に、炉の温度を10°C / minの速度で10分で200°Cから300°Cに上げた。その後、炉の温度を300℃に1時間維持した。次に、炉の温度を8°C / minの速度で10分で300°Cから380°Cに上げた。次に、炉の温度を380℃に1時間維持した。次に、炉の温度を8.5°C / minの速度で20分で380°Cから550°Cに上げ、その後、炉の温度を550℃に1時間維持した。その後、20時間で炉の温度が550℃から25℃に低下した。サンプル7は、治療条件後に得られたマグネトソームを含む。
【０３４０】
熱処理の条件8（サンプル8）：溶解の条件2に従って調製したマグネトソームの鉄30 mgを含む懸濁液100μlを凍結乾燥し、磁器製るつぼに入れて、炉Nabertherm L9 / 11 / B410で焼成した。熱処理は以下の通りであった。炉の温度は、9°C /分の速度で20分で20°Cから200°Cに上昇し、 次に、炉の温度を200℃で30分間維持した。次に、炉の温度を10°C / minの速度で10分で200°Cから300°Cに上げ、その後、炉の温度を300℃に1時間維持した。炉の温度は、8°C /分の速度で10分で300°Cから380°Cに上昇した。その後、炉の温度を380°Cで1時間維持し、その後、炉の温度は12時間で380℃から25℃に低下した。サンプル8は、治療の条件8の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３４１】
熱処理の条件9（サンプル9）：溶解の条件1に従って調製したマグネトソームの鉄に30 mgを含む懸濁液100μlを凍結乾燥し、磁器製るつぼに入れ、炉Nabertherm L9 / 11 / B410で加熱した 。熱処理は以下の通りであった。炉の温度は、9°C /分の速度で20分で20°Cから200°Cに上昇し、 次に、炉の温度を200℃で30分間維持した。次に、炉の温度を10°C / minの速度で10分で200°Cから300°Cに上げ、その後、炉の温度を300℃に1時間維持した。炉の温度は、8°C /分の速度で10分で300°Cから380°Cに上昇し、その後、炉の温度を380°Cで1時間維持した。その後、炉の温度は12時間で380℃から25℃に低下した。サンプル9は、治療条件9の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３４２】
熱処理の条件10（サンプル10）：条件第2の溶解に従って調製したマグネトソームの鉄500 mgを含む懸濁液1.7 mLを凍結乾燥し、磁器製るつぼに入れて、炉Nabertherm L9 / 11/ B410で加熱した。熱プロトコルは以下の通りであった。炉の温度は、1.2°C /分の速度で2時間30分で20°Cから200°Cに上昇しました。次に、炉の温度を200℃で1時間維持し、次に、炉の温度を1.25°C / minの速度で1時間20分で200°Cから300°Cに上げた。次に、炉の温度を300℃に2時間維持し、次に、炉の温度を1°C / minの速度で1時間20分で300°Cから380°Cに上げた。その後、炉の温度を380℃に2時間維持した。その後、炉の温度は12時間で380℃から25℃に低下した。サンプル１０は、治療の条件１０の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３４３】
熱処理の条件11（サンプル11）：溶解の条件第1に従って調製されたマグネトソームの鉄に500 mgを含む懸濁液1.7 mLを凍結乾燥した後、磁製るつぼに入れ、炉Nabertherm L9 / 11/ B410で加熱した。熱処理は以下の通りであった。炉の温度は、1.2°C /分の速度で2時間30分で20°Cから200°Cに上昇した。次に、炉の温度を200℃で1時間維持し、次に、炉の温度を1.25°C / minの速度で1時間20分で200°Cから300°Cに上げた。次に、炉の温度を300℃に2時間維持し、次に、炉の温度を1°C / minの速度で1時間20分で300°Cから380°Cに上げた。その後、炉の温度を380℃に2時間維持した。その後、炉の温度は12時間で380℃から25℃に低下した。サンプル１１は、治療の条件１１の後に得られたマグネトソームを含む。
【０３４４】
化学合成ナノ粒子（SIGMA、リファレンス：637106、バッチ番号：MKBK2270V）：化学合成ナノ粒子の粉末はSIGMAから購入されている。サイズは35±13 nmで、酸化鉄に加えて、198 ppmのアルミニウム（Al）、600 ppmのカルシウム（Ca）74 ppmのクロム（Cr）、72 ppmのマグネシウム（Mg）、642.5 ppmのマンガン（Mn）、30 ppmのニッケル（Ni）、128 ppmのナトリウム（Na）、34 ppmのチタン（Ti）、8.3 ppmのバナジウム（V）、56.5 ppmの亜鉛（Zn）を含む。
【０３４５】
結果：
【０３４６】
図1（a）は、サンプルの温度が20°Cから600に上昇したときの、サンプル温度の関数として、3 mgの凍結乾燥した完全MSR-1走磁性細菌を含むサンプル（サンプル0）の重量損失の割合を示している。1分あたり6°Cの割合での°C、およびこのパーセンテージの1次導関数。これらの測定は、温度の関数として材料の示差走査熱量測定を使用した熱流と熱重量測定を使用した重量変化の両方を測定する、TGA-DTA / DSCを組み合わせた装置で実行された。凍結乾燥した全MSR-1走磁性細菌3 mg（サンプル0）のCHNS測定では、加熱される前に44％の大きな割合の炭素が含まれていることが示されている（表19）。このサンプルの重量パーセントは、20°Cでの100％から600°Cでの5.5％まで減少し、サンプルが20〜600°Cでほとんどの重量を失うことを示している。より具体的には、図1（a）では、温度の関数としての重量パーセントの変動の勾配が2つの温度範囲内で最大であることがわかる：200と400°Cの間（間隔1）と400と 540°C（間隔2）。200から400℃の間では、温度の関数としての重量パーセントの勾配の温度の関数としての変動は、最大が260℃と315℃にある二重ピークを示している。この二重ピークは、有機材料の完全走磁性細菌による損失による可能性があり、 260°cを中心とするピークの有機材料は優先的にはタイプ1、そして優先的にタイプ2などのタイプ1とは異なるタイプのピークの中心は315°Cである。400〜540℃では、温度の関数としての重量変化の割合の勾配の温度の関数としての変化がピークを示します。このピークは、優先的にはタイプ1またはタイプ3などのタイプ2とは異なるタイプの有機材料のナノ粒子による損失が原因である可能性がある。
【０３４７】
図1（b）は、サンプルの温度が 1分あたり６°Cの割合で20°Cから600°Cに上昇したときの、凍結乾燥した完全走磁性細菌3 mgを含むサンプルの温度の関数としての熱流をミリワット単位で示している。これらの測定は、TGA-DSC装置を使用して実施されている。図1（b）は、330°Cと500°Cの温度で最大熱流が観測された2つのピークを示している。330°Cを中心とするピークは、ナノ粒子の質量の燃焼に起因する可能性がある。500°Cのピークは、500〜540°Cで失われたナノ粒子の塊の燃焼に起因する可能性がある。
【０３４８】
図1（c）は、サンプルの温度が毎分6℃の速度で20°Cから600℃まで上昇した場合に、溶解の条件2に従って調製された3 mgのマグネトソームの凍結乾燥鎖を含むサンプルの重量の変化の割合およびこの割合の一次導関数をサンプル温度の関数として示している。これらの測定は、TGA-DSC装置を使用して実施されている。マグネトソームの凍結乾燥鎖（条件第２）のCHNS測定では、加熱される前に7％の炭素の割合が含まれていることが示されており、これは完全走磁性細菌の炭素の割合よりはるかに低い（表19）。マグネトソームの鎖を含むサンプルの重量パーセントは、20°Cで100％から600°Cで91.4％に減少し、マグネトソームの鎖を含むサンプルの損失は、8.6％ 20°C〜600°Cの完全走磁性細菌を含むサンプルよりもはるかに少ない。より具体的には、温度の関数としてのマグネトソームの鎖の重量パーセントの変動の勾配は、200〜400℃の温度範囲内で最大であることが図1（c）に表示されている。温度の関数としてのマグネトソームの鎖の重量パーセントの勾配の温度の関数としての変動は、200から400℃の間で、完全バクテリアで観察されたダブルピークのものと同様の位置にある最大が260℃と315℃の二重ピークを示す。このダブルピークは、260° Cを中心とするピークでは有機材料、優先的にタイプ1の有機材料、31 5°Cを中心とするピークでは優先的にタイプ2の有機材料のマグネトソームの鎖による損失が原因である可能性がある。この有機物質は、マグネトソームの無機酸化鉄コアを取り囲む有機膜層に由来する可能性が高い。
【０３４９】
図1（d）は、サンプルの温度が20°Cから600°Cまで1分あたり6°Cの割合で上昇した場合の、3 mgのマグネトソームの凍結乾燥鎖を含むサンプルの熱流をサンプル温度の関数としてミリワット単位で示している。これらの測定は、TGA-DSC装置を使用して実施される。図1（d）は、250°C、360°C、および525°Cの温度で最大熱流が観測された3つのピークを示しています。250°Cと360°Cを中心とするピークは、200〜400°Cで失われたナノ粒子の塊の燃焼に起因する可能性がある。525°Cのピークは、500°C以上で失われたナノ粒子の塊の燃焼、およびまたはマグネタイト、マグヘマイト、またはマグネタイトとマグヘマイト間の中間組成の酸化鉄からヘマタイトへのマグネトソームの酸化に起因する可能性があり、マグヘマイトから赤鉄鉱へと変化し、発熱反応により熱流が発生する可能性がある。
【０３５０】
図2（a）は、サンプルの温度が1分あたり6°Cの速度で20°Cから600°Cに増加した場合に、条件3に従って調製された3 mgの凍結乾燥マグネトソームを含むサンプル（サンプル3）の重量パーセントの変化およびこの割合の一次導関数をサンプル温度の関数として示している。これらの測定は、TGA-DSC装置を使用して実施されている。条件3に従って調製された凍結乾燥マグネトソームのCHNS測定は、加熱される前に4％の炭素の割合を含むことを示している。これは、条件2に従って調製されたマグネトソームの炭素の割合よりも低い。マグネトソームを含む（サンプル3）は、20°Cで100％から600°Cで95.1％に減少し、これは条件３に従って調製されたマグネトソームを含むサンプル３はサンプル２より少なく、すなわち4.9%の重量減少であった。より具体的には、図2（a）には、温度の関数としての重量パーセントの変動の勾配が200〜400℃の温度範囲内で最大であるように見えます。200から400℃の間では、温度の関数としての重量パーセントの勾配の温度の関数としての変動は、最大が264℃、286℃、325、および331℃にある四極ピークを示します。264°Cと325°Cの2つのピークは、ピークショルダーに関連付けられます。この4極ピークは、有機材料のナノ粒子による損失が原因である可能性があり、264°cのピークの中心は優先的にはタイプ1の有機材料、286°Cのピークの中心は優先はタイプ3の有機材料、325°Cを中心とするピークでは優先的にタイプ2、331°Cを中心とするピークでは優先的にタイプ4であり、この有機材料はマグネトソームのコアの無機酸化鉄の周囲または表面の有機材料に由来する可能性が高い。
【０３５１】
図2（b）は、条件3（サンプル3）に従って調製された3 mgの凍結乾燥マグネトソームを含むサンプルがサンプルの温度が毎分6°Cの速度で20°Cから600°Cまで上昇した場合の熱流を、サンプル温度の関数としてミリワット単位で示している。これらの測定は、TGA-DSC装置を使用して実行されました。図2（b）は、最大熱流が観測された277℃、335℃、455℃、および522℃の温度で4つのピークを示している。277℃と335℃を中心とするピークは、200〜400℃で失われたナノ粒子の質量の燃焼に起因する可能性がある。455および522°Cのピークは、500°C以上で失われたナノ粒子の塊の燃焼、およびまたはマグネタイト、マグヘマイト、またはマグネタイトとマグヘマイト中間組成物の酸化鉄組成物からヘマタイトへのマグネトソームの酸化に起因する可能性があり、その結果発熱反応により熱流が発生する可能性がある。
【０３５２】
図2（c）は、サンプルの温度が毎分6℃の速度で20°Cから600℃まで上昇した場合に、Merck Sigmaから購入したSIGMAナノ粒子の粉末3 mgを含むサンプルの重量パーセントの変化およびこのパーセンテージの一次導関数を、サンプル温度の関数として示している。これらの測定は、TGA-DSC装置を使用して実施されています。凍結乾燥されたSIGMAナノ粒子のCHNS測定では、加熱前の0.3％の炭素の割合が含まれており、条件3に従って調製されたマグネトソームの炭素の割合よりも低いことが示されている（サンプル3）。SIGMAナノ粒子を含むサンプルの重量パーセントは、20°Cで100％から600°Cで98.7％に減少する。これは、SIGMAナノ粒子を含むサンプルの損失が条件2に従って調製されたマグネトソームよりも少ない、つまり1.3％であることを示している。より具体的には、図2（c）には、温度の関数としてのSIGMAナノ粒子の重量パーセントの変動の勾配が、200〜400℃の温度範囲内で最大であるように見える。温度の関数としてのSIGMAナノ粒子の重量の割合の勾配の温度の関数としての変動は、200〜400℃で、最大が296℃のピークを示す。このピークは、有機材料のナノ粒子による損失が原因である可能性があり、優先的にタイプ5の場合、この有機材料はSIGMAナノ粒子の表面または表面に吸着した、または表面に含まれる有機材料に由来する。
【０３５３】
図2（d）は、SIGMAナノ粒子の粉末3 mgを含むサンプルについて、サンプルの温度が1分あたり6°Cの割合で20°Cから600°Cまで上昇したときの、サンプル温度の関数としてのの熱流をミリワット単位で示している。これらの測定は、TGA-DSC装置を使用して実施されている。図2（d）は、200°Cと515°Cの温度で最大熱流が観測される2つのピークを示しています。200°Cを中心とするピークは、200〜400°Cで失われたナノ粒子の質量の燃焼に起因する可能性がある。515°Cを中心とするピークは、500°C以上で失われたナノ粒子の質量の燃焼、およびまたはマグネタイト、マグヘマイト、またはマグネタイトとマグヘマイトの中間組成物の酸化鉄組成からヘマタイトへと変化するマグネトソームの酸化に起因する可能性があり、その結果、酸化による発熱反応によって熱流が発生する可能性がある。
【０３５４】
ナノ粒子から除去、放出、または解離できるさまざまなタイプの不純物、優先的には有機材料の決定：マグネトソームまたはシグマナノ粒子の重量パーセントの変動の微分の最大値に対応する各温度は、ナノ粒子から除去される特定の種類の有機材料に関連付けることができる。したがって、これらの温度の値を知ることにより、異なるサンプル間でナノ粒子から除去できる有機材料のタイプを比較することができる。
【０３５５】
マグネトソームが炉内で加熱される温度の決定：調査したさまざまなサンプル（完全走磁性細菌、図1（a）、走磁性細菌から抽出されたマグネトソームの鎖、図1（c）、マグネトソームの抽出および加熱 、図2（a））、において、200〜400°Cで走磁性細菌から抽出されたマグネトソームから有機物質の大部分が除去または放出される。つまり、重量変動（％）および重量変動の導関数（％/ °C）は、この温度範囲内で最大となる。したがって、磁気走性細菌から抽出されたマグネトソームを200〜400°Cのさまざまな温度で加熱することを選択した。
【０３５６】
マグネトソーム中に最少量の炭素をもたらす溶解法の決定：KOHを含む走磁性細菌から抽出されたマグネトソームは、NaOHを含む走磁性細菌から抽出されたマグネトソームよりも少ない量の炭素を有する（KaOHを含むサンプル2で7.1％を、NaOHを含むサンプル1の14％と比較）。KOHで走磁性細菌から抽出され、200°Cで30分間、300°Cで1時間、380°Cで1時間加熱されたマグネトソームは、NaOHで走磁性細菌から抽出されて200℃で30分間、300℃で1時間、380℃で1時間加熱されたマグネトソームよりも炭素の割合が低い（KOHのサンプル8で0.3％、、NaOHのサンプル9で1％）。KOHで走磁性細菌から抽出され、200°Cで1時間、300°Cで2時間、380°Cで2時間加熱されたマグネトソームは、NaOHで走磁性細菌から抽出され、200°Cで1時間、300°Cで2時間、380°Cで2時間加熱されたマグネトソームよりも炭素の割合が低い（KOHのサンプル10では0.23％、はNaOHで0.8％）。これは、KOHがマグネトソーム内の炭素の割合が低く、したがって高レベルの精製を行うための最良の溶解方法であることを示している。
【０３５７】
NaOHで走磁性細菌から抽出され、フェノールとクロロホルムを使用した化学的方法で精製されたマグネトソームは、NaOHで磁気走性細菌から抽出され、30分間200°Cで加熱されたマグネトソームよりも炭素の割合が大きい、300 1時間は°C、1時間は380°C（サンプル3の5％の炭素とサンプル9の1％の炭素）。
【０３５８】
マグネトソームで最も少ない量の炭素をもたらす加熱温度の決定：KOHで溶解したマグネトソームを考慮すると、マグネトソームを1時間400°Cで加熱すると、1時間200°Cで加熱するよりも炭素量が少なくなります （400°Cのサンプル5で3％の炭素、、200°Cのサンプル4で5％の炭素）、加熱温度を上げるとより多くの炭素を除去できることを示している。
【０３５９】
マグネトソーム中の炭素量が最小になる加熱ステップの数の決定：KOHで溶解したマグネトソームを考慮し、200と300°Cの2つの異なる温度（サンプル6）または200°C、300°C、および380°Cの3つの異なる温度（サンプル8）で加熱すると、1つの温度だけで加熱するよりも多くの炭素を除去できる（200°Cと300°Cで加熱するサンプル6で、マグネトソームに0.65％の炭素が残る、200、300、および380°Cに加熱するサンプル8では、0.3％の炭素がマグネトソームに残る）。これは、マグネトソームで低レベルの炭素に到達するために、マグネトソームを200°C、300°C、380°Cなど、200°Cから380°Cの2つ以上の異なる温度で加熱できることを示唆している 。
【０３６０】
マグネトソーム中の炭素の量が最小になる加熱時間の決定：KOHで溶解し、200°C、300°C、および380°Cで加熱するマグネトソームを考慮して、200°Cでの加熱時間を30分から1時間に増やし、 300°Cおよび380°Cでの加熱時間を1時間から2時間に増やすと、熱処理後にマグネトソームに残る炭素の割合がわずかに減少する（サンプル8の0.3％と比較して、サンプル10の0.23％） 。
【０３６１】
結論として、磁気走性細菌と呼ばれる特定の細胞によって生成されるマグネトソームと呼ばれるナノ粒子を加熱する方法を開発した。これにより、細胞によって合成されない化学的に合成されたナノ粒子に見られるのと同様に、非常に低い割合の炭素に到達することができる。
【表の説明】
【０３６２】
表1：条件1に続いて50ミリリットルのチューブでMSR-1走磁性細菌を成長させるために使用した予備成長培地および成長培地1リットルの水の組成。この条件では、13種類の予備成長培地と13種類の成長培地を準備した 13種類のミネラルエリキシル（VO、CB1、V2、CB2、CB3、CB4、CB5、CB7、CB9、CB10、CB11、CB12、CB13）を使用し、1リットルの脱イオン水での組成を表6に示す。
【０３６３】
表2：条件2に続いて50ミリリットルのチューブでMSR-1走磁性細菌を成長させるために使用した予備成長培地および成長培地1リットルの水に含まれる組成物に 4種類の酵母エキス（YE、YNBWAA、YNBWoAA、YNBWoAA.AS）を使用する、その1リットルの脱イオン水中の組成を表7に示す。
【０３６４】
表3：条件3に続いて50ミリリットルのチューブでMSR-1走磁性細菌を成長させるために使用した予備成長培地および成長培地1リットルの水に含まれる組成物。5種類のビタミンカクテル（ViT1X、Vit5X、ViT10X、Vit0.5X、Vit0.1X）を使用する。その1リットルの脱イオン水中の組成を表8に示す。
【０３６５】
表4：条件4に続いて50ミリリットルのチューブでMSR-1走磁性細菌を成長させるために使用した予備成長培地および成長培地1リットルの水に含まれる組成物。9種類の個別ビタミン（Bt、CP、FA、I、NA、AA、P、R、T）を使用する。その1リットルの脱イオン水中の組成を表9に示す。
【０３６６】
表5：条件5に続いて50ミリリットルのチューブでMSR-1走磁性細菌を成長させるために使用した予備成長および成長培地の1リットルの水の組成。この条件では、4種類の濃度の乳酸ナトリウム（SL0、SL0.5 SL0.2X、SL0.1X）、塩化アンモニウム（A0、A0.5X、A0.2X、A0.1X）、硫酸マグネシウム七水和物（MG0、MG0.5X、MG0.2X、MG0.1X）、リン酸二カリウム（ P0、P0.5X、P0.2X、P0.1X）がテストされた。
【０３６７】
表6：さまざまなミネラルエリキシル（VO、CB1、V2、CB2、CB3、CB4、CB5、CB7、CB9、CB10、CB11、CB12、CB13）の1リットルの水の組成。
【０３６８】
表7：さまざまな酵母エキス（YE、YNBWAA、YNBWoAA、YNBWoAA.AS）の1リットルの水の組成。
【０３６９】
表8：さまざまなビタミンカクテル（ViT1X、Vit5X、ViT10X、Vit0.5X、Vit0.1X）の1リットルの水の組成。
【０３７０】
表9：さまざまな個々のビタミン（ビオチンBt、パントテン酸カルシウムCP、葉酸FA、イノシトールI、ニコチン酸NA、p-アミノ安息香酸AA、ピリドキシンHCl P、リボフラビンR、チアミンHCl T）の1リットルの水の組成 。
【０３７１】
表10：条件1の場合、予備成長のステップの終わり、成長の開始から6日後、ODD6、または成長の開始から13日後の光学密度、ODD13、ODD13 / ODD6の比率、および磁気応答の割合。
【０３７２】
表11：条件2および3の場合、予備成長のステップの終わり、成長の開始から6日後、ODD6、または成長の開始から13日後の光学密度、ODD13、比ODD13 / ODD6、および磁気応答の割合。
【０３７３】
表12：条件4について、予備成長のステップの終わり、成長の開始から6日後、ODD6、または成長の開始から13日後の光学密度、ODD13、ODD13 / ODD6の比率、および磁気応答の割合。
【０３７４】
表13：条件5の場合、予備成長のステップの終わり、成長の開始から6日後、ODD6、または成長の開始から13日後の光学密度、ODD13、ODD13 / ODD6の比率、および磁気応答の割合。
【０３７５】
表14（a）：1リットルの発酵槽でのMSR-1走磁性細菌の増殖の条件6、非医薬品グレードの化学物質を使用して調製されたB1およびB4の増殖前培地、成長培地、流加培地の組成
【０３７６】
表14（b）：1リットルの発酵槽でのMSR-1走磁性細菌の増殖の条件6の場合、医薬品グレードの化学物質を使用して調製されたB2およびB3の増殖前培地、成長培地、流加培地の組成
【０３７７】
表15：条件6に対して、250 mLの増殖前培地に挿入された細菌の増殖前ステップの開始時（D0）で、増殖前の終了時に測定されたmLあたりの細胞密度と細胞数 、1.5リットルの増殖前培地で増殖した細菌の予備成長ステップの最後、増殖ステップの開始時（D9）での増殖ステップのD9、増殖ステップのD11で細菌を800 mL成長培地で増殖させたとき 、D11で測定された細菌の光学密度とD9で測定された細菌の光学密度の比率。D11で測定された磁気応答の割合。
【０３７８】
表16：条件6で生産されたマグネトソームの場合、走磁性細菌から抽出され、99％以上の炭素質物質を除去するために精製され、不純物（Ag、Al、As、Ba、Cd、Co、Cr、Cu、Mn、Mo、 Ni、Pb、Sb、Se、Si、Sn、Ti、W、Zn）は、培地B1、B2、B3、およびB4に対するマグネトソーム1グラムあたりの不純物のμgである。
【０３７９】
表17：発酵槽B1、B2、B3、B4での以下で含まれる鉄濃度。
i）、D0（0日目）、D8、D9、
ii）の予備成長培地、開始から0時間後の成長培地 D9での成長ステップの開始後6時間、D9での成長ステップの開始後12時間、D10での成長ステップの開始後24時間、D11での成長ステップの開始後48時間、D9での成長ステップ、
iii）成長培地に導入された流加培地の量は、D9の成長工程の開始後0時間、D9の成長工程の開始後6時間、D9の成長工程の開始後12時間、開始の24時間後 D9での成長ステップ、D11での成長ステップの開始から48時間後。
【０３８０】
表18：さまざまなサンプル（サンプル0からサンプル11）の処理条件：溶解条件（NaOH、KOH、またはNaOH +フェノールとクロロホルムを使用）、サンプルを加熱する前の初期温度（Ti）などを含む。温度T1、温度がTiからT1に上昇する割合ri1、温度がT1に維持される時間T1、
温度T2、温度がT1からT2に上昇する割合r12、温度がTiからT2に上昇する時間、温度がT2に維持される時間T2、
温度T3、温度がT1からT3に上昇する速度r13、温度が上昇する速度r32 T3〜T2、温度がt3に維持される時間t3、
温度T4、温度がT3からT4に上昇する速度r34、温度がT4に維持される時間t4、
最終温度Tf 、tにおけるレートr1f温度がT1からTfに低下し、温度がT2からTfに低下する速度r2f、温度がT3からTfに低下する速度r3f、温度がT4からTfに低下する速度r4f 。
【０３８１】
表19：異なるサンプル（サンプル3からサンプル11）、条件3から11によるナノ粒子の処理後の炭素（％C）および窒素（％N）の質量の割合、炭素の質量の割合、および （％Ci）および窒素（％Ni）は、熱処理の前の条件1または2（サンプル4から11）またはフェノール-クロロホルムでの処理の前（サンプル3）に続く走磁性細菌から抽出されたマグネトソームである。
D％C =％Ci-％C、D％N =％Ni-％N、(100D％C) /％Ci、(100.D％N) / D％Niの値。
【０３８２】
【表１】
2020078293.tif 000002
【０３８３】
【表２】
2020078293.tif 000003
【０３８４】
【表３】
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【０３８５】
【表４】
2020078293.tif 000005
【０３８６】
【表５】
2020078293.tif 000006
【０３８７】
【表６】
2020078293.tif 000007
【０３８８】
【表７】
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【０３８９】
【表８】
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【０３９０】
【表９】
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【０３９１】
【表１０】
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【０３９２】
【表１１】
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【０３９３】
【表１２】
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【０３９４】
【表１３】
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【０３９５】
【表１４ａ】
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【０３９６】
【表１４ｂ】
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【０３９７】
【表１５】
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【０３９８】
【表１６】
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【０３９９】
【表１７】
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【０４００】
【表１８】
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【０４０１】
【表１９】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【外国語明細書】
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2020078293000002.pdf
2020078293000003.pdf
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