(57)【要約】      （修正有）【課題】ウイルス感染、真菌感染、原生動物感染及び癌を患っている患者の同種又は自家治療においてガンマデルタＴ細胞を調製する方法の提供。【解決手段】第１の患者からのガンマデルタＴ細胞を第２の同種の対象へ提供するプロセスであって、第１の患者からのガンマデルタＴ細胞を含む試料を提供するステップと、前記ガンマデルタＴ細胞が第２の患者に投与されることを可能にするために前記試料中に存在する前記ガンマデルタＴ細胞を培養するステップとを含むプロセス。【選択図】図３
2020172522.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の対象からのガンマデルタＴ細胞を第２の同種の対象へ提供するプロセスであって、
第１の対象からのガンマデルタＴ細胞を含む試料を提供するステップと、
前記ガンマデルタＴ細胞が第２の対象に投与されることを可能にするために前記試料中に存在する前記ガンマデルタＴ細胞を培養するステップと
を含むプロセス。
【請求項２】
前記ガンマデルタＴ細胞を培養するステップが、前記試料における他の細胞型と比較して前記試料におけるガンマデルタＴ細胞の数の増加を提供する、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
前記培養するステップが、前記試料における他の細胞型から前記試料におけるガンマデルタＴ細胞を精製するステップを含む、請求項１または請求項２に記載のプロセス。
【請求項４】
前記精製するステップが、前記試料における前記他の細胞型から前記ガンマデルタＴ細胞を精製および単離するために抗ガンマデルタＴ細胞抗体を使用する、請求項３に記載のプロセス。
【請求項５】
前記ガンマデルタＴ細胞が、前記試料中に存在する細胞の総数の１０％超であるように培養または精製される、請求項１から４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項６】
前記培養するステップが、前記第１の対象からの前記試料における前記ガンマデルタＴ細胞上に存在する１種または複数のガンマデルタＴ細胞表面受容体タイプを減少または除去する１つまたは複数のサブステップを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項７】
前記培養するステップが、前記第１の対象からの未培養ガンマデルタＴ細胞の表面上に存在しなかった表面受容体タイプの、前記ガンマデルタＴ細胞における、発現を誘発するまたは前記第１の対象からの前記ガンマデルタＴ細胞の表面上に存在した細胞表面受容体タイプの発現の量の増加を誘発するステップを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項８】
前記試料における前記ガンマデルタＴ細胞の細胞表面受容体プロファイルを観察するステップをさらに含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項９】
個体における感染またはがんを治療する方法であって、前記個体に異なる同種の個体から得られたガンマデルタＴ細胞を提供するステップを含む方法。
【請求項１０】
前記ガンマデルタＴ細胞が、請求項１から８のいずれか一項に記載のプロセスによって提供される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
がんまたは感染を患っている第２の同種の対象の治療において使用するための第１の対象からのガンマデルタＴ細胞。
【請求項１２】
ガンマデルタＴ細胞が、免疫抑制薬と同時に、別々にまたは連続的に投与される、第２の同種の対象の治療において使用するための第１の対象からのガンマデルタＴ細胞。
【請求項１３】
前記感染が、ウイルス、真菌または原生動物の感染の少なくとも１つである、請求項９に記載の治療する方法または請求項１１もしくは１２に記載の第２の同種の対象の治療において使用するためのガンマデルタＴ細胞。
【請求項１４】
がんまたは感染の治療において使用するためのガンマデルタＴ細胞を含む医薬組成物。
【請求項１５】
がんあるいはウイルス、真菌または原生動物の感染の治療における同時、別々または連続的な使用のためのガンマデルタＴ細胞および抗体免疫療法を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ガンマデルタＴ細胞を調製および使用する方法ならびに具体的には、ウイルス感染、真菌感染、原生動物感染およびがんを含めた状態の治療のための同種または自家の被移植対象におけるガンマデルタＴ細胞の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
同種の幹細胞移植（ａｌｌｏ−ＳＣＴ）は、血液系腫瘍に関して提唱されかつ試行されてきた。しかしながら、こうした同種療法の主要な不都合は、移植不全および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の高発生率である。ＨＬＡハプロ一致ドナーは、こうした移植手術の成果を改善することを試みるために利用されている。さらに、Ｔ細胞除去ＨＬＡ一致ＳＣＴは、ＧＶＨＤを減少させるために移植片Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏでの除去を用いて試みられてきたが、これは移植不全のリスクの増加に繋がると考えられる。
【０００３】
被移植者が移植不全のリスクを減少するために徹底的に状態を整えられてＴ細胞除去移植片を受ける場合、免疫再構築は受容できずかつ多過ぎる患者が日和見感染から死亡するであろうと考えられる。
【０００４】
ガンマデルタＴリンパ球は、ヒトにおける末梢血内の細胞の小サブセットに相当する（１０％未満）。Ｖγ９Ｖδ２（ガンマ９デルタ２）Ｔ細胞受容体を発現しているガンマデルタＴ細胞は、調節不全のメバロン酸経路の結果としてがん細胞において過剰産生される内因性のイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）を認識する。ガンマデルタＴリンパ球のＩＦＮガンマのような豊富な炎症性サイトカインを産生する能力、それらの強力な細胞毒性効果の作用およびＭＨＣ非依存性の抗原の認識は、それらをがん免疫療法の重要な層にする。ガンマデルタＴ細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで白血病、神経芽細胞腫および種々の癌腫を含めた、多くの異なるタイプの腫瘍細胞株および腫瘍を殺傷することができることが示されている。さらには、ガンマデルタＴ細胞は、自然発生的にまたはゾレドロネートを含めた、異なるビスホスホネートで治療後に分化した多くの異なる腫瘍細胞を認識および殺傷し得ることが実証されている。ヒト腫瘍細胞は、ガンマデルタＴ細胞にそれらの増殖およびＩＦＮガンマ産生を含めてピロリン酸モノエステル化合物を効果的に与え得る。
【０００５】
現在、２つの戦略がガンマデルタＴ細胞腫瘍免疫療法と共に用いられている。第１の方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖したガンマデルタＴ細胞を患者へ戻す養子細胞移入（すなわち自家治療）を含む。第２の方法は、低用量組換え型ＩＬ−２と共にガンマデルタＴ細胞刺激リン酸化抗原またはアミノビスホスホネートのｉｎ  ｖｉｖｏでの治療適用を含む。
【０００６】
ガンマデルタＴ細胞の自家移植戦略は、同種の幹細胞移植に関して上述された不都合を克服するために利用されてきた。こうした自家移植技術の一部として、自家で治療効果を発揮するのに十分な数のガンマデルタＴ細胞を誘導および培養する方法は、以前より開示されており、例えば特許文献１である。しかしながら、自家治療戦略は、いくつかの不都合を被る。
【０００７】
したがって、代りのおよび／または改善された自家および同種の治療戦略が必要とされる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００２／０１０７３９２号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
がん療法に関してガンマデルタＴ細胞療法が自家使用に関して議論されてきた一方で、こうしたガンマデルタＴ細胞療法を同種的に提供することはこれまで考慮されてこなかった。こうしたガンマデルタＴ細胞療法の同種使用は、典型的には免疫系媒介性拒絶反応に関連した潜在的な問題が原因で考慮されてこなかったと考えられる。発明者らは、意外にもガンマデルタＴ細胞は典型的には移植片対宿主病を引き起こさず、かつ同種移植のためのガンマデルタＴ細胞の選択はＴ細胞を最小限の移植片対宿主病のリスクで被移植者に提供されることを可能にし得ると考える。ガンマデルタＴ細胞は、ＭＨＣ拘束性ではない（Ｔａｎａｋａ  Ｙら、１９９５年）。発明者らは、これは、ガンマデルタＴ細胞がＭＨＣ−ハプロタイプとは無関係に細胞溶解のために細胞を標的にできる実行可能な療法を提供するためにガンマデルタＴ細胞が同種移植において用いられることを可能にするであろうと考える。ガンマデルタＴ細胞によるＭＨＣ提示抗原の認識の不足の点から見て、本発明者らは、ＧＶＨＤのリスクが、Ｂ細胞およびアルファベータＴ細胞受容体（ＴＣＲ）Ｔ細胞を含めた他の白血球から十分に精製されたガンマデルタＴ細胞の高純度の同種の移入において最小化されるであろうと考える。その上、これに限らないが重篤なウイルス感染例えばエボラ、ＨＩＶおよびインフルエンザを有する患者ならびにＰＴＬＤ−ＥＢＶ患者および他のがん型を有する患者を含めた、ある種の病態における被移植者の免疫不全状態が原因で移植片拒絶の可能性は低いであろうと考えられる。
【００１０】
述べたように、先行の治療戦略は、同種幹細胞移植の前に、負の選択または正の選択方法論を用いる、ドナー血液、具体的には末梢血からのＴ細胞除去を含んでいる。
【００１１】
本発明者らは、ガンマデルタＴ細胞が被移植対象に対して治療効果を発揮し得るような、ドナー対象からの細胞の収集を可能にする方法および同種的に被移植対象への十分な数のガンマデルタＴ細胞の供給を可能にするこうしたドナー細胞の処理を特定した。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１Ａ】ＰＢＭＣの開始集団におけるγδＴ細胞の割合を検出するために抗Ｖｇａｍｍａ９−ＦＩＴＣ抗体で染色された０日目の単離されたＰＢＭＣのヒストグラム（ＰＢＭＣの１．３％がγδＴ細胞である）。
【図１Ｂ】抗ＣＤ３（Ｔ細胞）および抗Ｖｇａｍｍａ９（γδＴ細胞）で染色された選択的培養の１４日後の細胞集団のドットプロット分析（Ｔ細胞の７７．５％がγδＴ細胞である）。
【図１Ｃ】単離されたＰＢＭＣの明視野像。
【図１Ｄ】培養における増殖の１４日後の細胞集団の明視野像。
【図１Ｅ】それぞれの細胞培養集団内に存在するγδＴ細胞の割合を示す表。
【図２Ａ】合計４×１０９細胞が１２日目までに達成された増殖の最初の１２日間全体を通して培養における生存可能な細胞の総数を示す成長曲線。
【図２Ｂ】それぞれ３．１％（０日目）および８７．１％（１２日目）のγδＴ細胞（抗Ｖｇａｍｍａ９）を例証している開始ＰＢＭＣのフローサイトメトリー分析。
【図２Ｃ】培養における選択的増殖の１２日間の後の細胞集団のフローサイトメトリー分析。
【図２Ｄ】γδＴ細胞は、エフェクター：標的細胞比率５：１で１６時間５種のＥＢＶ陽性標的細胞株（ＢＬ２  Ｂ９５−８、ＢＬ３０  Ｂ９５−８、ＢＬ７４  Ｂ９５−８、ＲａｊｉおよびＩＢ４）と共にインキュベートされ、γδＴ細胞惹起細胞溶解は、非放射性Ｃｙｔｏｔｏｘ９６アッセイを用いて測定されて最大標的細胞溶解の割合として表される。
【図３】抗γδＴ細胞受容体−ＦＩＴＣ結合抗体を用いる精製前（Ａ）および精製後（Ｂ）の細胞集団のフローサイトメトリー免疫表現型検査分析。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
例として、発明者のガンマデルタＴ細胞増殖法は、密度勾配遠心分離法を用いる血液または白血球除去療法材料からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の分離を含んでいてよい。単離されたＰＢＭＣは、培養における増殖に先立って凍結保存してよく、一方で血漿は、後続のガンマデルタＴ細胞培養ステップにおいて使用するための自家由来賦形剤として同時抽出して確保される。実施形態において新たに単離されたＰＢＭＣ（または凍結保存から蘇生されたもの）は、ヒト組み換えＩＬ−２（例えば最大１０００Ｕ／ｍｌの濃度）およびゾレドロン酸（例えば５μＭ）を含有する成長培地内にインキュベートされる。γδＴリンパ球集団は、活性化されてゾレドロン酸の添加（０日目）および１４日間の培養期間にわたるＩＬ−２の連続的な封入によってＰＢＭＣから選択的に増殖してよい。細胞懸濁液は、この期間にわたって連続的に増殖してよい（典型的には１：２の継代比率（ｓｐｌｉｔ  ｒａｔｉｏ））。培養開始１４日後に細胞を採取して１００ｍｌの塩水を含有する点滴ボトルに移す前に乳酸リンゲル液およびＨＳＡ中に再懸濁させてよい。
【００１４】
増殖後、実施形態において、ガンマデルタＴ細胞産生物は、次の最低基準、全細胞の８０％より多くが、Ｔリンパ球（ＣＤ３陽性）であり、ガンマデルタＴリンパ球が、全Ｔリンパ球集団（Ｖｇａｍｍａ９陽性）の６０％以上を含み、ＮＫ細胞が、全Ｔリンパ球集団（ＣＤ３陰性／ＣＤ５６陽性）の２５％より少なく、細胞毒性Ｔ細胞が、全Ｔリンパ球集団（ＣＤ３／ＣＤ８陽性）の１０％未満でありかつヘルパーＴ細胞が、全Ｔリンパ球集団（ＣＤ３／ＣＤ４陽性）の５％未満である、に適合する。実施形態において、これらの基準に適合している細胞集団は、９９％より多いガンマデルタＴ細胞を有することを目標にする高純度同種細胞バンクの生成のための出発原料として用いられ得る。
【００１５】
本発明の第１の態様によれば
第１の対象からのガンマデルタＴ細胞を含む試料を提供するステップ、
ガンマデルタＴ細胞を第２の対象にそれらが投与されることを可能にするために培養するステップ
を含む第２の対象に同種的にガンマデルタＴ細胞を提供するためのプロセスが提供される。
【００１６】
実施形態において、提供するステップは、第１の対象からガンマデルタＴ細胞を収集するステップを含んでいてよい。収集は、ドナー対象が即時に分かる健康状態を有さないドナー対象からまたは臍帯血材料からであってよい。適切には被移植対象は、脊椎動物、例えば哺乳動物、例えばヒト、または商業的価値のある家畜類、研究動物、ウマ、ウシ、ヤギ、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、および同類のものであってよい。実施形態において第１および第２の対象は、ヒトであってよい。当然のことながら、本発明との関連で、第１の対象は、ガンマデルタＴ細胞が収集されるドナー対象であり、かつ細胞は、異なる第２の（被移植者）対象の同種治療において用いられる。適切には、第１の対象は、病気にかかる前の状態を有する。「病気にかかる前の」状態と言う語は、本明細書で使用する場合「健康な」、「疾患の無い」の絶対的な語、および「潜在的疾患進行における等級付け」、疾患後状態「よりも健康」または「よりも病気ではない」の相対的な語を対象として含む。「病気にかかる前」は、第１の対象が疾患と診断されるより前の時間によって定義され得るので、第１の対象は、絶対的な語において健康であってよくあるいは疾患がそれ自体まだ現れていないまたは診断もしくは発見されていない疾患を既に有していてもよい。実施形態において本発明の第１の態様は、ガンマデルタＴ細胞を第２の対象に提供可能にするために第１の対象から得られたガンマデルタＴ細胞を培養するステップを含む。
【００１７】
実施形態においてガンマデルタＴ細胞は、除去療法または白血球除去療法に従って得られた末梢血または末梢血単核細胞からあるいは臍帯血から収集してよい。末梢血からのガンマデルタＴ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏでの増殖は、リン酸化抗原またはアミノビスホスホネートで活性化された場合にＶγ９Ｖδ２表現型のガンマデルタＴ細胞を優先的に生じさせるであろう。ｅｘ  ｖｉｖｏでの増殖のための出発原料としての臍帯血の使用は、活性化抗原に依存するいくつかのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）サブタイプの選択的増殖を可能にする。これらのＴＣＲアイソタイプは、Ｖγ１〜９およびＶδ１〜８、例えば、これに限らないがＶδ１、Ｖδ２およびＶδ３  ＴＣＲ変異体からの任意のガンマデルタＴＣＲペアリングを含んでいてよい。ばらばらのサブタイプのガンマデルタＴ細胞は、異なる抗原を認識し、したがって標的細胞によって提示された抗原に依存して異なるレベルの細胞毒性を示すであろう。それぞれのデルタＴＣＲサブタイプの相対的存在量は、培養条件および提示された特有の抗原に大きく依存する。培養条件は、臍帯血から所望されるＴＣＲアイソタイプを優先的に増殖するように調整してよい。例えば、特異なＴＣＲアイソタイプを発現しているガンマデルタＴ細胞は、特定のがん型の治療においてまたは特有のウイルス感染の治療のためにより有効で有り得る。
【００１８】
実施形態において収集するステップは、第１の対象からガンマデルタＴ細胞を収集することに先立って、第１の対象にガンマデルタＴ細胞強化剤を投与するステップを含んでいてよい。
【００１９】
実施形態においてガンマデルタＴ細胞を収集する方法は、第１の対象にＧ−ＣＳＦ、アミノビスホスホネート、具体的にはパミドロン酸、アレンドロン酸、ゾレドロン酸、リセドロン酸、イバンドロン酸、インカドロン酸、その代わりに塩および／またはその水和物、ＴＮＦアルファまたはインターロイキン２などの骨髄からの白血球動員を誘発する成長因子などの強化剤を投与するステップを含んでいてよい（Ｍｅｒａｖｉｇｌｉａ  Ｓら、２０１０年）。
【００２０】
一実施形態においてプロセスは、
−  血液、例えば第１の対象（ドナー）からの臍帯血または除去療法／白血球除去療法由来の細胞を提供するステップ、
−  血液から末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）または臍帯血単核細胞（ＣＢＭＣ）を分離するステップ、
−  アミノビスホスホネートおよびＰＢＭＣまたはＣＢＭＣに対する標的抗原を加えるステップ、ならびに
−  ＰＢＭＣまたはＣＢＭＣを培養して標的抗原特異性細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ）およびガンマデルタＴ細胞を増殖／誘導するステップならびに場合によっては
−  ＰＢＭＣまたはＣＢＭＣあるいはＴ細胞を人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と共に同時培養して標的抗原特異性細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ）およびガンマデルタＴ細胞を増殖／誘導するステップ
のうちのいずれか１つまたは複数を含んでいてよい。
【００２１】
本発明者らは、全血の他の成分から実質的に単離されるガンマデルタＴ細胞を提供することが、それらの実質的に単離されたガンマデルタＴ細胞が同種的に第２の対象に投与される場合に移植不全を減少するであろうと考える。同種的にガンマデルタＴ細胞を提供するプロセスは、例えば抗ガンマデルタＴ細胞受容体抗体を用いて混合された細胞集団からガンマデルタＴ細胞を単離する活性精製のステップを含んでいてよい。その結果として、本発明のプロセスは、全血、またはその成分からガンマデルタＴ細胞を精製するステップを含んでいてよい。細胞の総数で１０％未満の末梢血がガンマデルタＴ細胞から構成されるので、試料の１０質量％より多くがガンマデルタＴ細胞からなるように、全血、またはその成分の試料を精製することは、被移植対象を同種的に治療することの有効性を向上させると考えられる。その結果として、本発明のためのプロセスは、精製された試料における細胞の総数の１０、２５、５０、７５、８５、９０、９５または９８％より多くがガンマデルタＴ細胞であることを達成するために、全血、またはその成分の試料を精製または増殖するステップを含んでいてよい。免疫反応および／または移植不全に繋がるであろう試料における細胞を減少しながら精製された試料における細胞の総数の１０、２５、５０、７５、８５、９０、９５または９８％より多くがガンマデルタＴ細胞であることを達成するために全血またはその成分の試料を精製または増殖することは、ガンマデルタＴ細胞の同種移入を可能にするであろうと考えられる。
【００２２】
全血、臍帯血またはその成分からガンマデルタＴ細胞を精製することができる当業者に既知の任意の方法は、本発明の一部をなしていてよい。明らかに、精製ステップは、ガンマデルタＴ細胞の生存能力に影響を与えないまたは最小限に影響すべきである。例えば、次のステップは、前述のガンマデルタＴ細胞の精製を達成するために、組み合わせて、または単独で用いてよい：透析のプロセス（例えば除去療法および／または白血球除去療法）、分画遠心分離、培養におけるガンマデルタＴ細胞の成長（例えば培養における優先成長）。
【００２３】
精製のステップは、少なくともある程度、培養するステップの間に実行してよい。例えば、培養するステップの間、アミノビスホスホネート具体的にはパミドロン酸、アレンドロン酸、ゾレドロン酸、リセドロン酸、イバンドロン酸、インカドロン酸、その代わりに塩および／またはその水和物などの特有の成分の少なくとも１つまたは組み合わせの添加は、ガンマデルタＴ細胞が培養において選択的に増殖されることを可能にする。細胞培養中の精製は、ホスホスチム／ブロモハロヒドリンピロリン酸（ＢｒＨＰＰ）（ｐｈｏｓｐｈｏｓｔｉｍ／ｂｒｏｍｏｈａｌｏｈｙｄｒｉｎ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、合成イソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）、（Ｅ）−４−ヒドロキシ−３−メチル−ブタ−２−エニルピロリン酸（ＨＭＢ−ＰＰ）などの合成抗原の添加または人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）との同時培養によっても達成され得る（Ｗａｎｇら、２０１１年）。こうした成分の添加は、典型的には精製された試料における総細胞数で７０％以上のガンマデルタＴ細胞の正の選択を可能にする培養環境を提供する。
【００２４】
アミノビスホスホネートは、ガンマデルタＴ細胞の培養の初日から任意の時に加えてよい。アミノビスホスホネートは、０．０５から１００マイクロモル、好ましくは０．１から３０マイクロモルの濃度で末梢血単核細胞に加えてよい。適切には、ビスホスホネートは、ピロリン酸の類似物でありかつピロリン酸骨格Ｐ−Ｏ−ＰのＯ（酸素原子）がＣ（炭素原子）で置換された化合物（Ｐ−Ｃ−Ｐ）である。ビスホスホネートは、一般には骨粗しょう症のための治療剤として用いられる。アミノビスホスホネートは、ビスホスホネートの中にＮ（窒素原子）を有する化合物を指す。例えば、本発明において用いられるアミノビスホスホネートは、特に限定されず、国際公開第２００６／００６７２０号および国際公開第２００７／０２９６８９号に開示されているようなアミノビスホスホネートおよび同類のものを用いてよい。その特定の例には、パミドロン酸、その塩および／またはそれらの水和物、アレンドロン酸、その塩および／またはそれらの水和物、ならびにゾレドロン酸、その塩および／またはそれらの水和物が含まれる（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｋ．ら、２０１０年）。アミノビスホスホネートの濃度は、好ましくはパミドロン酸、その塩および／またはそれらの水和物については１から３０μＭ、アレンドロン酸、その塩および／またはそれらの水和物については１から３０μＭ、ならびにゾレドロン酸、その塩および／またはそれらの水和物については０．１から１０μＭである。ここでは、５μＭのゾレドロン酸が、例として加えられる。
【００２５】
適切には、培養期間が７日間以上の場合、ガンマデルタＴ細胞を含む細胞群が高純度で得られ得るが、しかしながら、培養は、好ましくはガンマデルタＴ細胞の数をさらに増加させるために約１４日間実行される。
【００２６】
実施形態において、培養の期間は、約７日間以上であってよい。適切には培養の期間は、多数の実質的に精製されたガンマデルタＴ細胞集団を達成するために約１４日間以上実行してよい。
【００２７】
培養は、典型的には１４日間実行され、その後ガンマデルタＴ細胞は急激な増殖の継続を停止する。しかしながら、特定の実施形態は、延長された培養およびより大きな数までのガンマデルタＴ細胞の選択的増殖を提供する。こうした実施形態には、培養するための合成抗原の供給（例えば合成ＩＰＰ、ＤＭＡＰＰ、Ｂｒ−ＨＰＰ、ＨＭＢ−ＰＰ）、人工または照射抗原提示細胞への繰返し暴露、固定化された抗原または抗体の供給あるいは細胞培養のための出発原料としての臍帯血の使用が含まれる。
【００２８】
適切には、細胞は、最低限の少なくとも２の集団倍加の後にそれらの細胞表面受容体プロファイルを初期状態に戻すために少なくとも７日の期間この環境において培養してよい。
【００２９】
場合によっては、ガンマデルタＴ細胞を培養するステップは、ガンマデルタＴ細胞表面受容体プロファイルを変更するためのステップを含んでいてよい（Ｉｗａｓａｋｉ  Ｍ．ら、２０１１年）。
【００３０】
例えば、培養ステップは、第１の対象からの試料において提供されたガンマデルタＴ細胞に存在する１種または複数のガンマデルタＴ細胞表面受容体タイプを減少または除去する１つまたは複数のサブステップを含んでいてよい。こうしたステップは、ガンマデルタＴ細胞の受容体プロファイルを「初期状態に」または「部分的に初期状態に」戻して未処置のまたは部分的に未処置の形態に戻すと考えられ得る。こうした初期状態に戻すことは、ガンマデルタＴ細胞のがんおよびウイルス感染を治療する能力を向上させることが企図される。一部のＴ細胞受容体は、それからＴ細胞が取り出される対象におけるがんまたはウイルスの存在によって誘発され得ることが知られており、かつこれらの受容体は、ある場合にはＴ細胞による腫瘍またはウイルス感染への反応性を抑制し得ることが分かっている。その結果として、こうした受容体を除去することは、本発明のガンマデルタＴ細胞の効力を増加し得る。
【００３１】
１種または複数のガンマデルタＴ細胞受容体タイプの減少または除去は、細胞集団が何度も大きくなる日数にわたって第１の対象由来のガンマデルタＴ細胞を培養することによる本発明のプロセスによって達成され得る。例えば、細胞は、最低限の少なくとも２の集団倍加の後にそれらの細胞表面受容体プロファイルを初期状態に戻すために少なくとも７日の期間培養してよい。
【００３２】
ガンマデルタＴ細胞表面受容体プロファイルが初期状態に戻されている場合においては、例えば腫瘍特異的細胞表面受容体Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−ＤＣ／ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４などの初期の、未培養ガンマデルタ細胞上に存在した免疫チェックポイント阻害剤を含む細胞表面受容体は、培養増殖期間の間に存在しなくなるまたは実質的に数が減少され得る。
【００３３】
培養するステップは、選択されたガンマデルタＴ細胞表面受容体（例えば、上述の受容体（Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−ＤＣ／ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１およびＣＴＬＡ−４）のいずれか１つまたは任意の組み合わせ）を有意に減少または除去するために必要な培養するステップの適切な継続期間を決定するためにガンマデルタＴ細胞の表面受容体プロファイルを観察するステップをさらに含んでいてよい。ガンマデルタＴ細胞受容体を観察するプロセスは、例えば、Ｃｈａｎ  Ｄ．ら、２０１４年によって概説されているものなどの、フローサイトメトリー技術を用いて実行してよい。簡単に言えば、免疫チェックポイント阻害剤受容体および／またはリガンドに特異的な抗体は、それらの細胞表面上の免疫チェックポイント阻害剤を発現しているガンマデルタＴ細胞（例えば抗Ｖｇａｍｍａ９で共染色された）の部分集団を特定するために用いられるであろう。
【００３４】
加えて、または任意選択で、本発明の培養するステップは、第１の対象から抽出されたときに未培養ガンマデルタ細胞の表面上に存在しなかったガンマデルタＴ細胞表面受容体タイプのガンマデルタＴ細胞における発現を誘発するステップ（１つまたは複数）、または第１の対象から抽出されたときに未培養ガンマデルタ細胞の表面上に存在した細胞表面受容体タイプ（１種または複数）の発現の量の増加を誘発するステップ（１つまたは複数）を含んでいてよい。これは、がん、細菌、真菌、原生動物またはウイルス由来の抗原でガンマデルタＴ細胞を攻撃することによって達成され得る。この抗原は、増殖されたガンマデルタＴ細胞の有効性、抗原提示可能性および細胞毒性を増加するために培養増殖培地に加えてよい。適切には、抗原は、これに限らないが固定化された抗原または抗体、照射された腫瘍細胞株、人工抗原提示細胞および合成可溶性抗原の添加を含めた、種々の形式で提供してよい。抗原は、培養の初日に培養増殖培地に加えてよい。実施形態においてウイルスは、インフルエンザ、ＨＩＶ、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、ヘルペス変異体、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス、水痘、パピローマウイルス、エボラ、水痘帯状疱疹ウイルスまたは天然痘から選択してよい。あるいは抗原は、細胞感染、細菌感染、真菌感染または原生動物感染において見られる抗原であってよい。具体的には標的抗原は、インフルエンザ、ＨＩＶ、Ｃ型肝炎、Ｂ型肝炎、ヘルペス変異体、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エボラウイルス、エプスタインバーウイルス、水痘、パピローマウイルス、水痘帯状疱疹ウイルスまたは天然痘からであってよい。
【００３５】
適切には、抗原は、活性または不活性のウイルス断片、ペプチド、タンパク質、抗原セグメントまたはこうしたウイルス生物からの同類のものを含んでいてよい。
【００３６】
適切には、抗原には、腫瘍細胞上にのみ存在しかついかなる他の細胞上にも存在しない腫瘍特異的抗原ならびに／または一部の腫瘍細胞および一部の正常細胞上にも存在する腫瘍関連抗原が含まれ得る。こうした腫瘍特異的抗原には、これに限定されないが、がん胎児抗原、ＣＡ−１２５、ＭＵＣ−１、上皮腫瘍抗原およびＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥＡ３、ＭＡＧＥＡ４、ＭＡＧＥＡ１２、ＭＡＧＥＣ２、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＸＡＧＥ１Ｂ、ＣＴＡＧ２、ＣＴＡＧ１、ＳＳＸ２、またはＬＡＧＥ１あるいはその組み合わせを含めたＭＡＧＥタイプ抗原が含まれ得る。
【００３７】
適切には、感染細胞、壊死細胞、またはがん細胞の溶菌液は、適した抗原を提供するために利用してよい。実施形態において抗原は、合成された抗原、例えば、合成ペプチドであってよい。あるいは、抗原は、対象から採取してよい。適切には、抗原の１ｍｌ当り約０．０２〜２マイクログラムを培養するステップの間に細胞に提供してよい。
【００３８】
実施形態において、ガンマデルタＴ細胞の増殖およびＩＬ−２、ＩＬ−１５またはＩＬ−１８などの細胞表現型の維持を促進する因子（Ｇａｒｃｉａ  Ｖ．ら、１９９８年、Ｎｕｓｓｂａｕｍｅｒ  Ｏ．ら、２０１３年）は、血液単核細胞を培養するステップにおいて提供してよい。適切には、こうした実施形態においてＩＬ−２、ＩＬ−１５またはＩＬ−１８あるいはその組み合わせは、５０〜２０００Ｕ／ｍｌ、より好ましくは４００〜１０００Ｕ／ｍｌの範囲で培養培地に提供してよい。培養は、典型的には２から１０％、より好ましくは５％のＣＯ２の存在下で摂氏３４から３８度、より好ましくは摂氏３７度で実行される。培養培地は、培養された細胞の数に応じて加えてよい。適切には血清は、０．１から２０％の量で培養液に加えてよい。血清として、例えば、ウシ胎児血清ＡＢ血清、または自家血漿（ａｕｔｏ−ｐｌａｓｍａ）を用いてよい。
【００３９】
実施形態において、消耗したまたはアネルギーのガンマデルタＴ細胞の回復を促進する因子は、培養培地に加えてよい。適切には、これらの因子には、ＩＬ−１５またはＩＬ−１８などのサイトカインあるいは特有の免疫チェックポイント阻害剤受容体またはリガンドを標的にする抗体例えば抗ＰＤ−Ｌ１抗体が含まれ得るが（Ｃｈａｎｇ  Ｋ．ら、２０１４年）ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−２、ＬＡＧ３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３またはＡ２ａＲを対象とする抗体も含まれ得る。
【００４０】
実施形態において、提供するステップには、ドナー対象からの血液または臍帯血の収集が含まれていてよい。こうした採血は、約１５から２５ｍｌの血液であってよい。実施形態において提供するステップには、収集するステップが、単一の収集プロセスにおける第１の対象からの少なくともガンマデルタＴ細胞の収集である収集するステップが含まれていてよい。実施形態において収集するステップは、複数の収集セッションにわたっていてよい。
【００４１】
本発明の一実施形態においてガンマデルタＴ細胞を提供するためのプロセスは、第１の対象から収集された細胞の少なくとも１つの特徴を決定する分析するステップを含んでいてよい。実施形態において細胞の少なくとも１つの特徴は、細胞のＤＮＡもしくはＲＮＡ配列またはアミノ酸配列、細胞のプロテオームあるいは細胞の細胞表面マーカーであってよい。実施形態においてプロセスには、ガンマデルタＴ細胞を組織タイピングするステップが含まれていてよい。ガンマデルタ細胞表面マーカー特性には、（これに限定されないが）ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ６９、ＣＤ５６、ＣＤ２７  ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５、ＴＣＲ−Ｖｇ９、ＴＣＲ−Ｖｄ２、ＴＣＲ−Ｖｄ１、ＴＣＲ−Ｖｄ３、ＴＣＲ−ｐａｎ  ｇ／ｄ、ＮＫＧ２Ｄ、モノクローナルケモカイン受容体抗体ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＸＣＲ３またはＣＸＣＲ５あるいはその組み合わせが含まれ得る。このタイピングには、遺伝子型または表現型の情報が含まれ得る。表現型の情報には、顕微鏡、細胞、または分子レベルで観察可能なまたは測定可能な特性が含まれ得る。遺伝子型の情報は、特有の遺伝的変異または突然変異、例えば、ヒト白血球抗原（ドナーのＨＬＡ型）に関連し得る。適切にはガンマデルタＴ細胞は、多数の患者において使用するために増殖および分化してよい臨床等級の細胞株のバンクを提供し得る。実施形態において、ガンマデルタＴ細胞は、細胞バンクを埋めるために十分な数のガンマデルタＴ細胞を生成するために臍帯血出発原料からｅｘ  ｖｉｖｏで増殖してよくかつ複数のドナーからのものと組み合わせてよい。実施形態においてこうしたバンクは、適切にはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）一致の可能性を最大化するために選択されかつそれによって同種移植拒絶のリスクまたは免疫抑制薬の実質的な使用の必要性を最小化する血液型Ｏの健常なボランティアドナーから得られたガンマデルタＴ細胞で埋められるであろう。例えばＵＫ／ＥＵ患者のためのこうしたバンクは、拒絶のリスクを減少してＵＫ／ＥＵ住民数の有意の割合の治療を可能にするであろう次を含む。
【００４２】
【表１】
2020172522.tif 000003
【００４３】
実施形態において収集されかつ処理されたガンマデルタＴ細胞は、細胞バンクまたは保管所において後の使用のために預けられてよい。したがって、細胞は、ＤＭＳＯまたはＣｒｙｏＳｔｏｒ（商標）などの凍結保護物質内で貯蔵されかつ制御された凍結の速度および液体窒素内の貯蔵を受けてよい。ガンマデルタＴ細胞は、単一または複数の治療ステップの必要に応じて定義された単位または投薬量の単位に分けられた貯蔵において貯蔵してよい。
【００４４】
一実施形態においてプロセスは、収集された試料内のガンマデルタＴ細胞の貯蔵、生存能力または治療能力を向上させる薬剤で第１の対象から収集された細胞の集団を処置するステップを含んでいてよい。一実施形態において、プロセスは、ガンマデルタＴ細胞の試料中のガンマデルタＴ細胞に凍結保存剤が施される保存するステップを含んでいてよい。
【００４５】
実施形態においてガンマデルタＴ細胞は、リン酸化抗原イソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）増殖されたヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞であってよい。
【００４６】
実施形態においてガンマデルタＴ細胞は、増殖されたヒトＶδ１ＴまたはＶδ３Ｔ細胞であってよい。
【００４７】
本発明の第２の態様に従って前記個体に異なる個体から得られたガンマデルタＴ細胞を提供するステップを含む個体における感染またはがんを治療する方法が提供される。したがって、ドナーガンマデルタＴ細胞は、例えば、ウイルス、真菌または原生動物の感染の治療のため、あるいはドナーおよび被移植者が同一の個体ではない被移植対象におけるがんの治療のために用いられる。
【００４８】
ガンマデルタＴ細胞を被移植対象に提供するための投与の方法には、静脈内、皮内、または皮下注射が含まれ得る。投与は、患部内にまたは個体への全身にであってよい。
【００４９】
実施形態においてウイルス、真菌または原生動物に感染した第２の異なる対象の治療であって対象の前記治療が同種である治療において使用するために第１の対象からのガンマデルタＴ細胞が提供される。
【００５０】
実施形態においてウイルスに感染した第２の異なる対象の治療であって、前記ウイルスがＨＩＶ、インフルエンザ、または肝炎から選択され、前記治療が同種である治療のために第１の対象からのガンマデルタＴ細胞が提供される。一実施形態においてウイルスは、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎、インフルエンザ、ヘルペス変異体、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス、水痘、パピローマウイルス、水痘帯状疱疹ウイルスあるいは天然痘であってよい。
【００５１】
実施形態においてインフルエンザウイルスは、Ａ型インフルエンザ（Ｆｌｕ  Ａ）ウイルスであってよい。実施形態においてインフルエンザウイルスは、鳥類またはブタ由来パンデミックインフルエンザウイルス、例えば、Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ９およびＨ９Ｎ２（鳥類サブタイプ）またはＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ１、Ｈ３Ｎ１、Ｈ３Ｎ２  Ｈ２Ｎ３（ブタサブタイプ）であってよい。
【００５２】
実施形態においてがんを有する対象の治療であって前記治療が同種である治療のためのガンマデルタＴ細胞が提供される。
【００５３】
実施形態において第２の対象が少なくとも１種のウイルス、真菌または原生動物の感染を患っている第２の対象の治療において使用するために第１の対象からのガンマデルタＴ細胞が提供される。実施形態においてガンマデルタＴ細胞を提供されている対象は、免疫抑制薬と同時に、連続的にまたは別々に投与されてよい。免疫抑制薬の投与は、ガンマデルタＴ細胞に対する任意の有害な免疫システム反応の緩和を助け得る。
【００５４】
実施形態において、エプスタインバーウイルス誘発性のリンパ増殖性疾患（ＥＢＶ−ＬＰＤ）を有する対象の治療のためのガンマデルタＴ細胞が提供される。
【００５５】
エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）は、ガンマヘルペスウイルスファミリーのメンバーでありかつ西欧の住民において流行している（成人の＞９０％が血清陽性である）。ＥＢＶは、ウイルスの再活性化を防ぐ宿主の細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ）によって潜在性感染として維持されしたがってＥＢＶが宿主Ｂ細胞において潜在性感染として無症候性に生き残り続けることを可能にする。
【００５６】
ＥＢＶは、鼻咽頭癌腫（ＮＰＣ）および胃がんなどの上皮由来のがんに加えてバーキットリンパ腫（ＢＬ）、ホジキン病（ＨＤ）および移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）などのＢ細胞由来のいくつかの悪性腫瘍に関連する。
【００５７】
ＰＴＬＤは、固形臓器移植および造血幹細胞移植に関連した共通のリスクである。
【００５８】
実施形態においてＥＢＶ関連悪性腫瘍を有する第２の対象の治療において使用するための第１の対象からのガンマデルタＴ細胞が提供される。
【００５９】
実施形態において異なるウイルスの徴候の治療のための１種または複数の特有のガンマデルタＴＣＲアイソタイプのガンマデルタＴ細胞が提供される。例えば、Ｖδ２ｐｏｓサブタイプは、ＨＩＶおよびインフルエンザ感染の治療において最も有効で有り得る一方で（Ｗａｌｌａｃｅ  Ｍ．ら、１９９６年、Ｔｕ  Ｗ．ら、２０１１年）、ＥＢＶ感染細胞のコントロールにおける少なくとも２種のガンマデルタＴ細胞サブタイプ、Ｖδ１ｐｏｓ（Ｆａｒｎａｕｌｔ  Ｌ，ら、２０１３年）およびＶδ２ｐｏｓ細胞（Ｘｉａｎｇ  Ｚ．ら、２０１４年）の役割について証拠が存在する。適切には、ガンマデルタＴ細胞サブタイプの組み合わせは、ガンマデルタＴ細胞療法の有効性を増加するために選択されてよくかつ患者に投与してよい。適切には、これらは、個別の培養条件を用いて生成された単一のアイソタイプガンマデルタＴ細胞集団または定義された細胞培養パラメータの単一のセットを用いて同時に生成された多価のガンマデルタＴ細胞集団を含んでいてよい。
【００６０】
本発明の第２の態様において用いられるガンマデルタＴ細胞は、本発明の第１の態様、すなわち上述のような提供および培養するステップの後に記載されているもののいずれかであってよい。
【００６１】
本発明の第３の態様において、
対象からのガンマデルタＴ細胞の試料を提供するステップ、
ガンマデルタＴ細胞を対象にそれらが投与して戻されることを可能にするために培養するステップ
を含む対象にガンマデルタＴ細胞を自家由来で提供するためのプロセスが提供される。
【００６２】
本発明の第１の態様のための上述の提供および培養するステップのいずれかは、本発明の第３の態様に適用してよい。例えば、ガンマデルタＴ細胞を培養するステップは、上述のような、ガンマデルタＴ細胞表面受容体プロファイルを変更するためのステップを含んでいてよい
【００６３】
本発明の第４の態様において個体にその個体から得られたガンマデルタＴ細胞を提供するステップであって、ガンマデルタＴ細胞が本発明の第３の態様に記載のようなプロセスによって提供されているステップを含む前記個体における感染またはがんを治療する方法が提供される。
【００６４】
実施形態においてがんは、骨髄腫または黒色腫であってよい。実施形態においてがんは、これに限定されないが胃がん、腎細胞がん、肝細胞がん、膵臓がん、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ芽球性白血病、非小細胞肺がん、ＥＢＶ−ＬＰＤ、バーキットリンパ腫およびホジキン病を含めた、腫瘍型を含んでいてよい。
【００６５】
本発明のさらなる態様に従って本発明のプロセスのいずれかのガンマデルタＴ細胞を含む医薬組成物が提供される。
【００６６】
実施形態において組成物は、治療効果を提供するために個体に提供するのに適した統一された用量のガンマデルタＴ細胞を含む。
【００６７】
実施形態において医薬組成物は、一人当たり２５×１０９個のガンマデルタＴ細胞を超える総用量を含んでいてよい。
【００６８】
実施形態において、がんの治療において使用するためのガンマデルタＴ細胞および抗体免疫療法を含む医薬組成物が提供される。
【００６９】
実施形態において抗体免疫療法は、例えば、ＲｏｃｈｅおよびＢｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによって開発されているような、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１および／またはＣＴＬＡ−４阻害剤などの免疫カスケード遮断剤（ｉｍｍｕｎｅ  ｃａｓｃａｄｅ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１ならびにＣＴＬＡ−４阻害剤であってよい。
【００７０】
実施形態において医薬組成物は、ＣＴＬＡ−４阻害シグナルを遮断する能力がある抗体を含んでいてよい。ＣＴＬＡ−４シグナルの遮断は、Ｔリンパ球が細胞を認識および破壊することを可能にする。実施形態においてこうした抗体は、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１）であってよい。
【００７１】
実施形態において抗体は、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ−１）を阻害し得る。実施形態においてこうした抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）またはＭＤＸ−１１０５から選択してよい。
【００７２】
実施形態において医薬組成物は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２またはＩＬ−１２と組み合わせてよい。実施形態において医薬組成物は、インターフェロンガンマを含んでいてよい。
【００７３】
実施形態において、がんの治療において使用するためのガンマデルタＴ細胞および化学療法薬を含む医薬組成物が提供される。
【００７４】
実施形態において、ウイルスの治療において使用するためのガンマデルタＴ細胞および療法薬を含む医薬組成物が提供される。
【００７５】
実施形態において医薬組成物は、がんまたは感染のための治療または予防剤として用いてよい。
【００７６】
本発明の実施形態において、ガンマデルタＴ細胞は、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞であってよい。
【００７７】
本発明のそれぞれの態様の好ましい特徴および実施形態は、他の態様のそれぞれでは文脈上必要でない限り必要に応じて変更を加える。
【００７８】
本文において引用されている各文書、参照、特許出願または特許は、参照によってそれらの全体が本明細書において明白に組み込まれ、これは読者によって本文の一部として読まれかつ見なされるべきであることを意味する。本文において引用されている各文書、参照、特許出願または特許が本文において繰り返されないのは、単に簡潔さの理由のためである。
【００７９】
本文に引用されている資料または含まれている情報への参照は、資料または情報が共通一般知識の一部であったまたは任意の国において既知であったことの承認として理解されるべきではない。
【００８０】
全体を通して本明細書は、文脈上必要でない限り、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、あるいは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」または「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などの変形形態は、述べられた整数または整数の群の包含を意味するが、いかなる他の整数または整数の群の除外も意味しないと理解される。
【００８１】
本発明の実施形態は、ここで添付図面への参照と共に実施例のみの目的で記述される。
【００８２】
図１は、出発原料としてヒト血液から単離されたＰＢＭＣを用いて、培養プロセスの開始（０日目）および選択的増殖プロセス（１４日目）の終わりにおいて細胞集団のフローサイトメトリー免疫表現型検査が用いられるγδＴ細胞集団（Ｖｇａｍｍａ９  Ｖｄｅｌｔａ２）を選択的に活性化および増殖するための種培養ＰＢＭＣの免疫表現型検査および続く１４日間の培養における増殖を例示する：−Ａ−ＰＢＭＣの開始集団におけるγδＴ細胞の割合を検出するために抗Ｖｇａｍｍａ９−ＦＩＴＣ抗体で染色された０日目の単離されたＰＢＭＣのヒストグラム（ＰＢＭＣの１．３％がγδＴ細胞である）：Ｂ−抗ＣＤ３（Ｔ細胞）および抗Ｖｇａｍｍａ９（γδＴ細胞）で染色された選択的培養の１４日後の細胞集団のドットプロット分析（Ｔ細胞の７７．５％がγδＴ細胞である）：Ｃ、Ｄ−単離されたＰＢＭＣ（Ｃ）および培養における増殖の１４日後の細胞集団（Ｄ）の明視野像：Ｅ−それぞれの細胞培養集団内に存在するγδＴ細胞の割合を示す表。
【００８３】
図２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＥＢＶ陽性リンパ腫細胞株のパネルを用いてがん細胞の細胞溶解の強力なエフェクターであることが実証される有意の数の高純度γδＴ細胞が１２日目までに発生するγδＴ細胞集団（Ｖｇａｍｍａ９  Ｖｄｅｌｔａ２）を活性化および増殖するために培養において選択的に増殖された細胞の指数関数的成長を例示し、細胞集団のフローサイトメトリー免疫表現型検査が、出発原料としてヒト血液から単離されたＰＢＭＣを用いる、培養するプロセスの開始時（０日目）および後の選択的増殖プロセス（１２日目）に用いられる。：−Ａ−合計４×１０９細胞が１２日目までに達成された増殖の最初の１２日間全体を通して培養における生存可能な細胞の総数を示す成長曲線：Ｂ、Ｃ−それぞれ３．１％（０日目）および８７．１％（１２日目）のγδＴ細胞（抗Ｖｇａｍｍａ９）を例証している開始ＰＢＭＣ（Ｂ）および培養における選択的増殖の１２日間の後の細胞集団（Ｃ）のフローサイトメトリー分析：Ｄ−γδＴ細胞は、エフェクター：標的細胞比率５：１で１６時間５種のＥＢＶ陽性標的細胞株（ＢＬ２  Ｂ９５−８、ＢＬ３０  Ｂ９５−８、ＢＬ７４  Ｂ９５−８、ＲａｊｉおよびＩＢ４）と共にインキュベートされ、γδＴ細胞惹起細胞溶解は、非放射性Ｃｙｔｏｔｏｘ９６アッセイを用いて測定されて最大標的細胞溶解の割合として表される。
【００８４】
図３は、本実施例において、γδＴ細胞集団を極めて高純度で取得するために細胞がｐａｎ−抗γδＴ細胞受容体抗体で選択されている異種の細胞集団から別個の細胞表現型を単離するために用いられた抗体媒介精製法を例示し、抗γδＴ細胞受容体−ＦＩＴＣ結合抗体を用いる精製前（Ａ）および精製後（Ｂ）の細胞集団のフローサイトメトリー免疫表現型検査分析は、γδＴ細胞が４５％のγδＴ細胞出発原料から９９．７％の純度で得られることを実証する。
【００８５】
ガンマデルタＴ細胞は、Ｎｉｃｏｌ  Ａ．Ｊ．ら、２０１１年によって概説されている技術を用いて培養増殖してよい。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、バッキンガムシャー州、英国）ならびに１０％ヒトＡＢ血漿（Ｌｏｎｚａ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ、Ｌｏｎｚａ）およびゲンタマイシン（４０μｇ、Ｐｆｉｚｅｒ、ベントレー、西オーストラリア州、豪州）を補ったＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｌｏｎｚａ、ウォーカーズビル、メリーランド州、米国）におけるＰＢＭＣの培養によって選択的に増殖されたＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞を用いて密度勾配遠心分離法によって単離された。組み換えヒトＩＬ−２（７００ＩＵｍｌ−１、Ｎｏｖａｒｔｉｓ、バーゼル、スイス）およびゾレドロネート（１μＭ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が０日目に加えられて追加のＩＬ−２（３５０ＩＵｍｌ−１）が培養期間の間に２〜３日毎に加えられた。培養７〜１４日後、ｍｉｎｉＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、ベルギッシュグラートバッハ、独国）を用いるＣＤ４＋、ＣＤ８＋およびＣＤ５６＋細胞の除去によるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの機能評価のための７０〜９５％のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞を含有する精製されたエフェクター細胞集団が得られた。
【００８６】
ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖されたＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞での固形腫瘍を有する患者の自家治療は、臨床的利益を提供することが実証されている（Ｎｏｇｕｃｈｉら、２０１１年）。加えて、ＨＬＡが一致した、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖されたαβＴＣＲ陽性細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）での同種治療は、ＥＢＶ−ＰＴＬＤの治療において有効であることが証明されている（Ｈａｑｕｅ  Ｔら、２００７年）。本発明者らは、したがって同種のガンマデルタＴ細胞でのがんおよびウイルス感染の治療は、共に実現可能でありかつ証明可能な治療の利益を患者に提供できる見込みがあると考える。
【００８７】
本発明は、詳細には特定の例への参照と共に示されかつ記述されているが、形態および詳細における種々の変更は、本発明の範囲から逸脱すること無くその中で行ってよいことは、当業者によって理解されるであろう。
【００８８】
参考文献
【００８９】
Ｃｈａｎ  Ｄ．、Ｇｉｂｓｏｎ  Ｈ．Ｍ．、Ａｕｆｉｅｒｏ  Ｂ．Ｍ．、Ｗｉｌｓｏｎ  Ａ．Ｊ．、Ｈａｆｎｅｒ  Ｍ．Ｓ．、Ｍｉ  Ｑ．Ｓ．およびＷｏｎｇ  Ｈ．Ｋ。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ＣＴＬＡ−４  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ４＋  ｖｅｒｓｕｓ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ＮＦＡＴ１  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ４＋  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ。Ｇｅｎｅｓ  Ｉｍｍｕｎ．、２０１４年、１５（１）：２５〜３２。
【００９０】
Ｃｈａｎｇ  Ｋ、Ｓｖａｂｅｋ  Ｃ、Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｇｕｉｌｌａｍｅｔ  Ｃ、Ｓａｔｏ  Ｂ、Ｒａｓｃｈｅ  Ｄ、Ｗｉｌｓｏｎ  Ｓ、Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｐ、Ｕｌｂｒａｎｄｔ  Ｎ、Ｓｕｚｉｃｈ  Ｊ、Ｇｒｅｅｎ  Ｊ、Ｐａｔｅｒａ  ＡＣ、Ｂｌａｉｒ  Ｗ、Ｋｒｉｓｈｎａｎ  Ｓ、Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ  Ｒ。Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １：  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｌｉｇａｎｄ  １  ｐａｔｈｗａｙ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｐｓｉｓ。Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．、２０１４年、８：Ｒ３。
【００９１】
Ｆａｒｎａｕｌｔ  Ｌ．、Ｇｅｒｔｎｅｒ−Ｄａｒｄｅｎｎｅ  Ｊ．、Ｇｏｎｄｏｉｓ−Ｒｅｙ  Ｆ．、Ｍｉｃｈｅｌ  Ｇ．、Ｃｈａｍｂｏｓｔ  Ｈ．、Ｈｉｒｓｃｈ  ＩおよびＯｌｉｖｅ  Ｄ。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｎｇ  ｇａｍｍａ−ｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＥＢＶ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ。Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．、２０１３年、１１：１４７８〜９。
【００９２】
Ｇａｒｃｉａ  Ｖ．Ｅ．、Ｊｕｌｌｉｅｎ  Ｄ．、Ｓｏｎｇ  Ｍ．、Ｕｙｅｍｕｒａ  Ｋ．、Ｓｈｕａｉ  Ｋ．、Ｍｏｒｉｔａ  Ｃ．Ｔ．およびＭｏｄｌｉｎ  Ｒ．Ｌ。ＩＬ−１５  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  γδ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  Ｎｏｎｐｅｔｉｄｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９８年、１６０：４３２２〜４３２９。
【００９３】
Ｈａｑｕｅ  Ｔ、Ｗｉｌｋｉｅ  ＧＭ、Ｊｏｎｅｓ  ＭＭ、Ｈｉｇｇｉｎｓ  ＣＤ、Ｕｒｑｕｈａｒｔ  Ｇ、Ｗｉｎｇａｔｅ  Ｐ、Ｂｕｒｎｓ  Ｄ、ＭｃＡｕｌａｙ  Ｋ、Ｔｕｒｎｅｒ  Ｍ、Ｂｅｌｌａｍｙ  Ｃ、Ａｍｌｏｔ  ＰＬ、Ｋｅｌｌｙ  Ｄ、ＭａｃＧｉｌｃｈｒｉｓｔ  Ａ、Ｇａｎｄｈｉ  ＭＫ、Ｓｗｅｒｄｌｏｗ  ＡＪおよびＣｒａｗｆｏｒｄ  ＤＨ。Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ＥＢＶ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｐｏｓｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｈａｓｅ  ２  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ。Ｂｌｏｏｄ．２００７年８月１５日、１１０（４）：１１２３〜３１。
【００９４】
Ｉｗａｓａｋｉ  Ｍ．、Ｔａｎａｋａ  Ｙ．、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｈ．、Ｍｕｒａｔａ−Ｈｉｒａｉ  Ｋ．、Ｍｉｙａｂｅ  Ｈ．、Ｓｕｇｉｅ  Ｔ．、Ｔｏｉ  Ｍ．およびＭｉｎａｔｏ  Ｎ。Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−１  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｔｈａｔ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  ｐｈｏｓｐｈｏａｎｔｉｇｅｎｓ。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１１年、４１：３４５〜３５５。
【００９５】
Ｍｅｒａｖｉｇｌｉａ  Ｓ、Ｅｂｅｒｌ  Ｍ、Ｖｅｒｍｉｊｌｅｎ  Ｄ、Ｔｏｄａｒｏ  Ｍ、Ｂｕｃｃｈｅｒｉ  Ｓ、Ｃｉｃｅｒｏ  Ｇ、Ｌａ  Ｍｅｎｄｏｌａ  Ｃ、Ｇｕｇｇｉｎｏ  Ｇ、Ｄ’Ａｓａｒｏ  Ｍ、Ｏｒｌａｎｄｏ  Ｖ、Ｓｃａｒｐａ  Ｆ、Ｒｏｂｅｒｔｓ  Ａ、Ｃａｃｃａｍｏ  Ｎ、Ｓｔａｓｓｉ  Ｇ、Ｄｉｅｌｉ  Ｆ、Ｈａｙｄａｙ  ＡＣ。Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖｇａｍｍａ９Ｖｄｅｌｔａ２  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ  ａｎｄ  ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ。Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１０年、１６１（２）：２９０〜７。
【００９６】
Ｎｉｃｏｌ  Ａ．Ｊ．、Ｔｏｋｕｙａｍａ  Ｈ．、Ｍａｔｔａｒｏｌｌｏ  Ｓ．Ｒ．、Ｈａｇｉ  Ｔ．、Ｓｕｚｕｋｉ  Ｋ．、Ｙｏｋｏｋａｗａ  Ｋ．およびＮｉｅｄａ  Ｍ。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｇａｍｍａ  ｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｕｒｓ。Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、２０１１年、１０５（６）：７７８〜８６。
【００９７】
Ｎｏｇｕｃｈｉ  Ａ、Ｋａｎｅｋｏ  Ｔ、Ｋａｍｉｇａｋｉ  Ｔ、Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  Ｋ、Ｏｚａｗａ  Ｍ、Ｓａｉｔｏ  Ｍ、Ａｒｉｙｏｓｈｉ  ＮおよびＧｏｔｏ  Ｓ。Ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｖγ９γδ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｓ  ｆｅａｓｉｂｌｅ  ａｎｄ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｔｈｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  γδ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ。Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ．２０１１年１月、１３（１）：９２〜７。
【００９８】
Ｎｕｓｓｂａｕｍｅｒ  Ｏ．、Ｇｒｕｅｎｂａｃｈｅｒ  Ｇ．、Ｇａｎｄｅｒ  Ｈ．、Ｋｏｍｕｃｚｋｉ  Ｊ．、Ｒａｈｍ  Ａ．およびＴｈｕｒｎｈｅｒ  Ｍ。Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｏｆ  ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  γδ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１３年、１９１（３）：１３４６〜５５。
【００９９】
Ｔａｎａｋａ  Ｙ、Ｍｏｒｉｔａ  ＣＴ、Ｔａｎａｋａ  Ｙ、Ｎｉｅｖｅｓ  Ｅ、Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＭＢ、Ｂｌｏｏｍ  ＢＲ。Ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｇａｍｍａ  ｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ。Ｎａｔｕｒｅ。１９９５年、３７５（６５２７）：１５５〜８。
【０１００】
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｋ．、Ｒｏｅｌｏｆｓ  Ａ．Ｊ．、Ｊａｕｈｉａｉｎｅｎ  Ｍ．、Ｍｏｎｋｋｏｎｅｎ  Ｈ．、Ｍｏｎｋｋｏｎｅｎ  Ｊ．およびＲｏｇｅｒｓ  Ｍ．Ｊ。Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  γδ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ（Ｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｉｇｙ、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６５８、ＤＯＩ  １０．１００７／９７８−１−４４１９−１０５０−９＿２の章）
【０１０１】
Ｔｕ  Ｗ．、Ｚｈｅｎｇ  Ｊ．、Ｌｉｕ  Ｙ．、Ｓｉａ  Ｓ．Ｆ．、Ｌｉｕ  Ｍ．、Ｑｉｎ  Ｇ．、Ｎｇ  Ｉ．Ｈ．、Ｘｉａｎｇ  Ｚ．、Ｌａｍ  Ｋ．Ｔ．、Ｐｅｉｒｉｓ  Ｊ．Ｓ．およびＬａｕ  Ｙ．Ｌ。Ｔｈｅ  ａｍｉｎｏｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ａ  ｇａｍｍａｄｅｌｔａ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｍｉｃｅ。Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．、２０１１年、２０８（７）：１５１１〜２２。
【０１０２】
Ｗａｌｌａｃｅ  Ｍ．、Ｂａｒｔｚ  Ｓ．Ｒ．、Ｃｈａｎｇ  Ｗ．Ｌ．、Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ  Ｄ．Ａ．、Ｐａｕｚａ  Ｃ．Ｄ．およびＭａｌｋｏｖｓｋｙ  Ｍ。Ｇａｍｍａ  ｄｅｌｔａ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ＨＩＶ。Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６年、１０３（２）：１７７〜８４。
【０１０３】
Ｗａｎｇ  Ｈ．、Ｓａｒｉｋｏｎｄａ  Ｇ．、Ｐｕａｎ  Ｋ．、Ｔａｎａｋａ  Ｙ．、Ｆｅｎｇ  Ｊ．、Ｇｉｎｅｒ  Ｊ．、Ｃａｏ  Ｒ．、Ｍｏｎｋｋｏｎｅｎ  Ｊ．、Ｏｌｄｆｉｅｌｄ  Ｅ．およびＭｏｒｉｔａ  Ｃ．Ｔ。Ｉｎｄｉｒｅｃｔ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｖｇ２Ｖｄ２  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１１年、１８７：  ５０９９〜１１３。
【０１０４】
Ｘｉａｎｇ  Ｚ．、Ｌｉｕ  Ｙ．、Ｚｈｅｎｇ  Ｊ．、Ｌｉｕ  Ｍ．、Ｌｖ  Ａ．、Ｇａｏ  Ｙ．、Ｈｕ  Ｈ．、Ｌａｍ  Ｋ．Ｔ．、Ｃｈａｎ  Ｇ．Ｃ．、Ｙａｎｇ  Ｙ．、Ｃｈｅｎ  Ｈ．、Ｔｓａｏ  Ｇ．Ｓ．、Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ  Ｍ．、Ｌａｕ  Ｙ．Ｌ．およびＴｕ  Ｗ。Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｖγ９Ｖδ２−Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｅｐｓｔｅｉｎ−ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ。Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、２０１４年、２６（４）：５６５〜７６。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
2020172522.tif 000005
【図１Ｃ】
2020172522.tif 000006
【図１Ｄ】
2020172522.tif 000007
【図１Ｅ】
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【図２Ａ】
2020172522.tif 000009
【図２Ｂ】
2020172522.tif 000010
【図２Ｃ】
2020172522.tif 000011
【図２Ｄ】
2020172522.tif 000012
【図３】
2020172522.tif 000013
【外国語明細書】
2020172522000001.pdf