(57)【要約】      （修正有）【課題】免疫系を刺激及び／又は増強する製剤の製造における、有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物を含む組成物の使用を提供する。【解決手段】ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が水抽出物又は溶媒抽出物であり、前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物はユーリコマノン、タンパク質、多糖類及びグリコサポニンを含む有効成分を適量含む。抽出物は、Ｔ細胞数を増加させる活性、総体的免疫機能の総合インデックスである免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる活性、Ｔ細胞数及び増殖活性に基づいた免疫機能の分かりやすい形式である免疫学的年齢を下げる活性、疲労感を低減する活性、並びにストレスを緩和又は低減する活性からなる群から選ばれる活性を有し、有効量のユウリコマ・ロンギフォリアの抽出物を個体に投与することを含む方法を開示する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のユウリコマ・ロンギフォリア（Ｅｕｒｙｃｏｍａ  ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ）抽出物を含む組成物の、免疫系を刺激及び／又は増強する製剤の製造における使用。
【請求項２】
前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が水抽出物又は溶媒抽出物である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、ユーリコマノン、タンパク質、多糖類及びグリコサポニンを含む有効成分を適量含む、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、下記からなる群から選ばれる活性を有する、請求項１に記載の使用：
Ｔ細胞数を増加させる活性；
総体的免疫機能の総合インデックスである免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる活性；
疲労感を低減する活性；及び
ストレスを緩和又は低減する活性。
【請求項５】
前記免疫力スコアリング（ＳＩＶ）が、Ｔ細胞、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比、ナイーブＴ細胞、ナイーブＴ細胞／メモリーＴ細胞比、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、Ｔ増殖活性の少なくとも一つを向上させることを含む、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、医薬的又は栄養学的に許容可能な担体を更に含む、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物と、医薬的又は栄養学的に許容可能な担体と、を含む、免疫系を刺激及び／又は増強する組成物。
【請求項８】
前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が水抽出物又は溶媒抽出物である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、ユーリコマノン、タンパク質、多糖類及びグリコサポニンを含む有効成分を適量含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
Ｔ細胞数を増加させる活性；
総体的免疫機能の総合インデックスである免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる活性；
疲労感を低減する活性；及び
ストレスを緩和又は低減する活性
からなる群から選ばれる活性を有する、請求項７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、生物活性を有する天然物の分野に関する。詳細には、本発明は、ユウリコマ・ロンギフォリア（Ｅｕｒｙｃｏｍａ  ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ）の抽出物に由来する組成物、並びに免疫系の増強及び／又は刺激におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ユウリコマ・ロンギフォリア（一般的には、トンカット・アリ（ｔｏｎｇｋａｔ  ａｌｉ）又はパサック・ブミ（ｐａｓａｋ  ｂｕｍｉ）と呼ばれる）は、ニガキ科の薬草である顕花植物であり、マレーシアやインドネシア、また、多くはないがタイ、ベトナム、ラオス等の東南アジア地域原産である。この植物は、緑色の長い葉を持つ全長１０メートルに達する灌木である。葉は羽状に形成されている（すなわち、小葉が対になっている）。この木の花は雌雄異株であり、その卵形の果実は熟すと暗褐色に変化する。
【０００３】
ユウリコマ・ロンギフォリアはその催淫効果、解熱効果及び抗マラリア効果のために伝統的に使用されてきた。一般的な強壮剤としても消費される。上記植物の長い木根の煎じ汁はこれらの効果を達成するために経口摂取される。また、従来の食品及び飲料品に栄養添加物として混合される。トンカット・アリの根の効能には、エネルギーや活力の回復、血流促進及び産後の機能回復等が含まれる。その葉は、マラリア、潰瘍、性感染症、歯肉疾患、及び虫刺されの治癒に使用される。
【０００４】
ユウリコマ・ロンギフォリアはまた、病気の治療及び健康増進、特に男性における性的健康の増強を目的に様々な民族に知られている。前記した素晴らしい健康上の利点によるユウリコマ・ロンギフォリアの需要の高まりにより、ユウリコマ・ロンギフォリア製剤が、根を乾燥し粉砕した粗原料粉として、現在、健康食品市場で広く入手可能となっている。また、ユウリコマ・ロンギフォリアは、粗原料粉又は標準抽出物を含有するカプセルとしても入手可能である。ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、有効成分を抽出し、製剤が既定の含有量の構成物質を含むよう調整し、標準レベルまで濃縮することにより製剤化される。その他には、ユウリコマ・ロンギフォリアは、コーヒーや缶加工飲料に調合する添加物としても入手可能である。ユウリコマ・ロンギフォリアは、腹腔投与等の他の手段では毒性が約１００倍高められるため、経口投与が推奨されている。
【０００５】
幅広い化学化合物が、特にユウリコマ・ロンギフォリアの根から単離されてきた。それら化合物には、ユーリコマノン（ｅｕｒｙｃｏｍａｎｏｎｅ）、ユーリコマノール（ｅｕｒｙｃｏｍａｎｏｌ）、ユウリコマラクトン（ｅｕｒｙｃｏｍａｌａｃｔｏｎｅ）、カンチン−６−オン（ｃａｎｔｈｉｎ−６−ｏｎｅ）アルカロイド、９−ヒドロキシカンチン−６−オン、１４，１５β−ジヒドロキシクライネアノン、フェノール性成分、タンニン類、クワシノイド類（ｑｕａｎｉｓｓｏｉｄｓ）、及びトリテルペン類が含まれる。これら化合物の存在により、根は、解熱特性、抗マラリア特性、抗細菌特性、及び抗腫瘍特性に加えて、男性の性的強化特性という点において効果的な医学的価値を有すると報告されてきた。ユウリコマ・ロンギフォリアは高濃度のスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）による抗酸化特性を発揮することが立証されている。ユウリコマ・ロンギフォリアは、アンドロゲンホルモン（特にテストステロン）の生成や作用を刺激する能力による催淫効果を有することでも知られている。よって、様々な関連する状態、例えば、アンドロゲン欠乏による男性の骨粗鬆症の治療などにおいて、テストステロン代替療法のための代替手段として使用可能である。
【０００６】
特許文献１は、３０〜３９アミノ酸及び糖残基からなる分子量４，３００ダルトンのグリコペプチドを含むユウリコマ・ロンギフォリア水性抽出物が、テストステロン合成増加活性、ライディッヒ細胞からのテストステロン放出増加活性、精子数及び精子運動性増加活性を有することを広く主張している。この抽出物の組成物は、性機能障害又は男性不妊の治療についても特許請求されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第７，１３２，１１７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らの知見によれば、今日まで、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物の免疫系に対する効果及び免疫刺激性効果について信頼できる開示はなかった。よって、本発明は、細菌又はウイルス感染に起因し得る感染性疾患からヒト及び／又は動物を保護することに関連する、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物の免疫系に対する効果及び免疫刺激性効果に着目している。
【０００９】
よって、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、睡眠不足、ストレス、バランスの悪い食事及び加齢により免疫力が低下した個体の免疫力を増加する可能性がある。免疫調節及び増強効果は、がん治療に起因する免疫力低下を原因とする疾患感受性による罹患を助長及び早めるリスクを抱えるがん患者等の免疫低下した個体にとっても関連性があると思われる。この情報は、免疫系の今後の研究及び免疫系関連疾患に対するより総合的な天然医薬的アプローチの開発に有用かつ応用可能となる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の第一の態様によれば、免疫系／免疫機能を刺激及び／又は増強する製剤の製造における、有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物を含む組成物の使用が提供される。
【００１１】
好ましい一実施形態では、上記抽出物は水抽出物又は溶媒抽出物である。
【００１２】
別の好ましい実施形態では、上記抽出物は、適量の下記有効成分を含む：
ユーリコマノン；
タンパク質；
多糖類；
グリコサポニン。
【００１３】
また別の好ましい実施形態では、上記抽出物は、下記からなる群から選ばれる活性を有する：
Ｔ細胞数を増加させる活性；
Ｔ細胞、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比、ナイーブＴ細胞、ナイーブＴ細胞／メモリーＴ細胞比、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及びＴ増殖活性を最適に機能させることを含む総体的免疫機能の総合インデックスである免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる活性；
Ｔ細胞数及び増殖活性に基づいた免疫機能の分かりやすい形式による免疫学的年齢を低下させる活性；
疲労感を低減する活性；及び
ストレスを緩和する又は低減する活性。
【００１４】
上述の活性は、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が免疫系／免疫機能を増強及び／又は刺激し、アンチエイジング効果を有することにより、感染性疾患から身体を保護し、それにより低下した免疫系に起因する罹患（例えば、がん及び加齢等の疾病状態）を低減することを示す。
【００１５】
本発明の第二の態様によれば、有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物と、医薬的又は栄養学的に許容可能な担体と、を含む、免疫系を刺激及び／又は増強するための組成物が提供される。
【００１６】
ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、水抽出物又は溶媒抽出物であることが好ましい。
【００１７】
抽出物は、ユーリコマノン、タンパク質、多糖類、及びグリコサポニンを適量含む有効成分を含む。
【００１８】
上記組成物は、下記からなる群から選ばれる活性を有することが好ましい：
Ｔ細胞数を増加させる活性；
総体的免疫機能の総合インデックスである免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる活性；
Ｔ細胞数及び増殖活性に基づいた免疫機能の分かりやすい形式による免疫学的年齢を低下させる活性；
疲労感を低減する活性、及び
ストレスを緩和する又は低減する活性。
【００１９】
本発明の第三の態様によれば、下記からなる群から選ばれるアウトカムを達成するために、個体を治療する方法であって、
Ｔ細胞数を増加させること、
免疫力スコアリングであるＳＩＶ（すなわち、総体的免疫機能の総合インデックス）を向上させること、
免疫学的年齢（すなわち、免疫機能の分かりやすい形式）を低下させること、
疲労感を低減すること、及び
ストレスを緩和する又は低減すること、
有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物を上記個体に投与することを含む上記方法が提供される。
【００２０】
上述のアウトカムは免疫機能を高め、アンチエイジング効果を有することにより、感染性疾患から個体の身体を保護する。
【００２１】
本発明の製剤は、許容可能な担体に入れられて提供され、粉末、顆粒剤、錠剤、カプセル、水性医薬、又は注射剤等の当業者に公知の如何なる方法で投与可能である。
【００２２】
前述のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物の組成物は、標準的な方法により、ソフトゲルカプセル等のカプセル、錠剤、生薬（ｇａｌｅｎｉｃａｌｓ）、粉末、顆粒剤、水性医薬、及び注射剤等の臨床使用のための様々な医薬又は栄養補助製剤に製剤化できる。上記の標準的な方法では、有効性及び毒性に基づいた有効治療量の有効成分を、単独又は他の化学物質との併用により、経口、舌下、静脈内、筋肉内投与等の様々な投与経路で、提示及び投与する。有効量は、Ｔ細胞数を増加させることにより免疫力を高める及び／又は刺激するのに十分な量である。
【００２３】
免疫力を高める及び／又は刺激するための有効量は、治療される病態の重症度；年齢、身体的状態、大きさ及び体重を含む個別の患者パラメーター；併用療法及び薬物間相互作用；治療頻度；及び投与形態に依存する。
【００２４】
抽出物の有効量は１０ｍｇ〜２０００ｍｇであることが好ましく、有効量は２００ｍｇ〜４００ｍｇであることが更に好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、本発明に係る治験対象母集団のフローチャートである。
【図２】図２は、本発明に係る共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）解析によるＳＩＶのサブスコアを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、免疫系／免疫機能を増強及び／又は刺激における、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物を含む組成物の使用を提供する。
【００２７】
本明細書に記載のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、ユウリコマ・ロンギフォリア植物（好ましくはユウリコマ・ロンギフォリア植物の根）由来の所望の有効成分を含有し、更に分離して特性評価してもよい。
【００２８】
抽出物は、当該技術分野で公知の抽出手順により得られ、この手順には、植物材料（例えば、根）を前洗浄、乾燥、又は凍結乾燥すること、植物材料をすりつぶしてして均一な試料を得ること、多くの場合、分析抽出の動力学を向上すること、及び溶媒系と試料表面との接触を増加させること、を基本工程として含む。ユウリコマ・ロンギフォリア植物試料の抽出物を製剤化する間に起こり得る、有効成分／構成物質の喪失、変質、又は破壊が起こらないように、適切な作業を行う必要がある。
【００２９】
このようにして得られた抽出物は、乾燥抽出物のままでも、チンキ剤及び抽出液の形態でも、薬剤として使用可能であり、更に加工して、錠剤やカプセル等のいかなる剤形としてもよく、分画して各化学物質として単離してもよい。よって、抽出手順の標準化は、植物薬の最終品質に大きく貢献する。
【００３０】
好ましい一実施形態では、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は水抽出物である。水抽出物は、いかなる公知の抽出方法によって得ることができ、例えば、風乾した粉状の植物部分（例えば、根）を水で約１０分間煮た後、室温まで冷やす等により得ることができる。続いて水抽出物をろ過して粒子状物質を除去する。そして、煮ている間に気化した水を補うように、各ろ液の最終量を、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０含有蒸留水で１００ｍｌとする。
【００３１】
別の好ましい実施形態では、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は溶媒抽出物である。溶媒抽出物は、公知の抽出手順で有機溶媒を使用して得ることができる。この溶媒抽出手順により、有効成分、テルペノイド類及び脂肪酸類、化合物等の様々な植物物質を、異なる溶媒における溶解度に応じて分離可能である。使用可能な抽出用溶媒の例としては、ブタン、プロパン、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、酢酸ブチル、二酸化炭素、及び亜酸化窒素が挙げられる。これら有機溶媒を用いた抽出により、食物及び植物製薬品質の全植物抽出物又は所望の分画が、製造コストをかけ過ぎずに得られる。
【００３２】
ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、超臨界流体抽出やコールドプレス等の当該技術分野で公知のその他の抽出方法で製造することもできる。
【００３３】
本発明に係る免疫系を刺激及び／又は増強することが可能なユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、下記の有効成分を含む。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
一実施形態では、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、ユウリコマ・ロンギフォリアの根を水で抽出することにより製造される。ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、グリコサポニン類及びユーリペプチド類（ｅｕｒｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）を含む。いくつかの実施形態では、約４０重量％のグリコサポニン類及び約２２重量％のユーリペプチドを含むように、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物を製造する。本明細書において、「ユーリペプチド類」とは、ユウリコマ・ロンギフォリア由来のペプチド類と定義される。これらのペプチド類は、例えば、粉砕したユウリコマ・ロンギフォリアの根を水で煮ることにより抽出してもよい。
【００３６】
本発明の組成物は、Ｔ細胞数を増加させること、免疫力スコアリングであるＳＩＶ（すなわち、総体的免疫機能の総合インデックス）を向上させること、Ｔ細胞数及び増殖活性に基づいた免疫機能の分かりやすい形式による免疫学的年齢を低下させること、疲労感を低減すること、及びストレスを緩和する又は低減することにより、免疫系又は免疫機能を刺激及び／又は増強するために使用してもよい。
【００３７】
本発明のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物の免疫系／免疫機能を刺激及び／又は増強する効果は、Ｈｉｒｏｋａｗａによる欧州特許公開公報第２０４２８６７号明細書に記載されている方法によって評価される。本明細書において「免疫力スコアリング（Ｓｃｏｒｉｎｇ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｖｉｇｏｒ）（ＳＩＶ）」と定義されるこの評価方法は、試料血液に含まれる免疫細胞用の免疫細胞マーカーを使用して免疫力を評価する。本方法は、二以上の種類の免疫細胞マーカーのそれぞれについて、試料血液に含まれる各免疫細胞マーカーに基づいて評価値を決定する工程；少なくとも二種類以上の免疫細胞マーカーについて、得られた評価値を足す工程；及び足したアウトカムから免疫力を評価する工程を含む。具体的には、上記方法では、Ｔ細胞、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比、ナイーブＴ細胞、ナイーブＴ細胞／メモリーＴ細胞比、Ｂ細胞、ＮＫ細胞及びＴ増殖活性を最適に機能させることを含む、総体的免疫機能の総合インデックスを用いて免疫力を評価する。
【００３８】
更に本発明は、下記からなる群から選択されるアウトカムを達成し、個体を治療する方法を提供する：
Ｔ細胞数を増加させること；
ＳＩＶ（すなわち、総体的免疫機能の総合インデックス）を向上させること；
免疫学的年齢（すなわち、免疫機能の分かりやすい形式）を下げること；
疲労感を低減すること；及び
ストレスを緩和する又は低減すること。
【００３９】
本方法の一実施形態は、個体に有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物を投与することを含む。
【００４０】
ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物は、水抽出物又は溶媒抽出物であってよい。
【００４１】
免疫力を刺激及び／又は増強する有効量は、治療される病態の重症度；年齢、身体的状態、大きさ及び体重を含む個別の患者パラメーター；併用療法及び薬物間相互作用；治療頻度；及び投与形態に依存する。
【００４２】
抽出物の有効量は１０ｍｇ〜２０００ｍｇであることが好ましく、有効量は２００ｍｇ〜４００ｍｇであることがより好ましい。
【００４３】
上述のアウトカムは免疫機能を高め、アンチエイジング効果を有することにより、個体の身体を感染性疾患から保護する。
【００４４】
本明細書における「感染性疾患」という用語は、伝染病又は感染症として定義され、宿主生物個体における病原性生物因子の感染、存在及び増殖に起因する臨床的に明らかな疾病（すなわち、特徴的な医学的兆候及び／又は疾患の症状）を含む。
【００４５】
上記感染は、通常、ウイルス、ウイロイド、及びプリオン等の感染性因子、細菌等の微生物、回虫及び蟯虫等の線虫、マダニ、ダニ、ノミ、及びシラミ等の節足動物、白癬等の真菌、並びに条虫等のその他の大寄生虫により引き起こされる。
【００４６】
本明細書で言及される感染性疾患は、限定されるものではないが、典型的なリスク順で示す下記の６つの曝露カテゴリーに体系化できる。しかしながら、下記に示す国別エントリーの一連の曝露カテゴリーは、現地の状況に応じて変わり得ることに注意しなくてはならない。
ｉ．Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｅ型肝炎、腸チフス等の、地域経済における飲食を介して起こる食品又は水媒介性疾患
ｉｉ．マラリア、デング熱、黄熱病、日本脳炎、アフリカ睡眠病、皮膚リーシュマニア症、ペスト、クリミア・コンゴ出血熱、リフトバレー熱、チクングニア熱等の、感染した節足動物の咬合により起こるベクター媒介性疾患
ｉｉｉ．レプトスピラ症、住血吸虫症等の、淡水湖、水路、及び川での水泳や水中歩行により起こる水媒介性疾患
ｉｖ．ラッサ熱等の、げっ歯類の尿に汚染されたエアロゾルの吸入を介して起こる噴霧された粉塵又は土壌媒介性疾患
ｖ．髄膜炎菌性髄膜炎、インフルエンザ等の、感染者との密な接触を介して起こる呼吸器系疾患
ｖｉ．ニパウイルス、コロナウイルス等の感染性微生物により引き起こされる呼吸器系関連疾患
ｖｉ．狂犬病等の、現地動物と直接的接触を介して起こる動物との接触による疾患
【００４７】
ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物の上記特性を評価するために、様々な実験を抽出物の製剤を用いて行う。実験の詳細は、下記実施例に記載されている。
【００４８】
一実施形態において、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物等のユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物の他に、本発明の製剤は、経口投与のための医薬的又は栄養学的に許容可能な担体を含む。
【００４９】
経口投与を容易にするために、ユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物を、様々な経口投与用の医薬的に許容可能な担体のいずれかと混合してもよい。「経口投与用の医薬的又は栄養学的に許容可能な担体」という用語は、非毒性で、ヒトの消化器系を刺激せず、ユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物と混合可能であり、溶液、シロップ、乳剤、ゲル、パウダーミックス又は固形物として得られる組成物を意味する。当該技術分野で公知の方法により、静脈、筋肉内、皮下といった通常の非経口投与製剤として製造してもよい。
【００５０】
経口投与用の医薬的又は栄養学的に許容可能な担体としては、限定されるものではないが、ラクトース、グルコース、及びスクロース等の糖類；トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン等のデンプン類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース等のセルロース及びその誘導体；トラガカント粉；モルト；ゼラチン；タルク；ステアリン酸；ステアリン酸マグネシウム；硫酸カルシウム；コーン油、綿実油、及びオリーブ油等の植物油；プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール等のポリオール類；リン酸緩衝液；ココアバター；乳化剤；並びに医薬品製剤に使用されるその他の非毒性の相溶性物質が挙げられる。ステアリン酸マグネシウム等の湿潤剤及び潤滑剤、並びに着色剤、香味剤、賦形剤、錠剤化剤、安定化剤、抗酸化剤、及び保存料を含むこともできる。本発明の組成物に使用される医薬的に許容可能な担体には、その他の相溶性医薬品添加物及び活性化剤が含まれていてもよい。
【００５１】
経口投与用の製剤は、遅延型、徐放型、放出調整型製剤を含む錠剤、カプセル、軟質及び硬質ゼラチンカプセル、丸剤（ピル）や、分散性粉剤又は顆粒剤、トローチ剤、分包剤、カシェー剤、懸濁液、乳剤、溶液、シロップ、及びエアロゾル等の剤形であってもよい。
【００５２】
その他の実施形態において、本発明の製剤は、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物等のユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物の他に、局所適用用の医薬的又は栄養学的に許容可能な担体を含む。このような医薬的又は栄養学的に許容可能な担体は、当該技術分野において公知であり、基本的には、現在使用されている市販の皮膚科若しくは化粧品製剤、又はそれらの組み合わせのいずれかを含んでいてもよい。よって、ユウリコマ・ロンギフォリア由来の組成物を添加し、必要に応じて構成物質比を調節して局所適用に適した稠度に調節することにより、入手可能な皮膚科又は化粧品製剤を調整するだけでもよい。
【００５３】
本明細書において使用される「局所適用の医薬的又は栄養学的に許容可能な担体」という用語は、ヒトの皮膚への刺激を誘発せずに、ユウリコマ・ロンギフォリア由来の組成物と混合して液剤、乳剤、ゲル剤、ローション剤、軟膏剤、バーム剤、クリーム剤、又は塗布可能固形物若しくはペースト剤に成形可能な、塗布又は擦り込みによるヒトの皮膚への局所適用に適した組成物を意味する。このような医薬的に許容可能な担体には、皮膚軟化剤、界面活性剤、保湿剤、潤滑剤、増粘剤、防水処理化剤、抗菌剤、経皮浸透剤、及び保存料が含まれてもよい。また、局所適用の医薬的に許容可能な担体には、香料や顔料等の様々な化粧品剤が含まれてもよい。
【００５４】
本明細書に記載される、Ｔ細胞数を増加させること、免疫力スコアリングであるＳＩＶ（すなわち、総体的免疫機能の総合インデックス）を向上させること、免疫学的年齢（すなわち、免疫機能の分かりやすい形式）を下げること、疲労感を低減すること、及びストレスを緩和又は低減すること、からなる群から選ばれるアウトカムを達成するために、個体を治療するための組成物の使用の一実施形態は、ユウリコマ・ロンギフォリア由来抽出物を対象に投与することである。
【００５５】
ユウリコマ・ロンギフォリア由来抽出物は、水抽出物又は溶媒抽出物であってよい。
【００５６】
上述のアウトカムは、免疫系／免疫機能を増強及び／又は刺激し、アンチエイジング効果を有することにより、感染性疾患から個体の身体を保護する。
【００５７】
本明細書において、上記対象は、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、魚類、エビ類、ニワトリ、げっ歯類、及びその他多数である。全ての実施形態において、ヒト対象が好ましい。
【００５８】
本明細書において「感染性疾患」という用語は、伝染病又は感染症として定義され、宿主生物個体における病原性生物因子の感染、存在及び増殖に起因する臨床的に明らかな疾病（すなわち、特徴的な医学的兆候及び／又は疾患の症状）を含む。
【００５９】
上記感染は、通常、ウイルス、ウイロイド、及びプリオン等の感染性因子、細菌等の微生物、回虫及び蟯虫等の線虫、マダニ、ダニ、ノミ、及びシラミ等の節足動物、白癬等の真菌、並びに条虫等の他の大寄生虫により引き起こされる。
【００６０】
本明細書で言及される感染性疾患は、限定されるものではないが、典型的なリスク順で示す下記の６つの曝露カテゴリーに体系化できる。しかしながら、下記に示す国別エントリーの一連の曝露カテゴリーは、現地の状況に応じて変わり得ることに注意しなくてはならない。
ｉ．Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｅ型肝炎、腸チフス等の、地域経済における飲食を介して起こる食品又は水媒介性疾患
ｉｉ．マラリア、デング熱、黄熱病、日本脳炎、アフリカ睡眠病、皮膚リーシュマニア症、ペスト、クリミア・コンゴ出血熱、リフトバレー熱、チクングニア熱等の、感染した節足動物の咬合により起こるベクター媒介性疾患
ｉｉｉ．レプトスピラ症、住血吸虫症等の、淡水湖、水路、及び川での水泳や水中歩行により起こる水媒介性疾患
ｉｖ．ラッサ熱等の、げっ歯類の尿に汚染されたエアロゾルの吸入を介して起こる噴霧された粉塵又は土壌媒介性疾患
ｖ．髄膜炎菌性髄膜炎、インフルエンザ等の、感染者との密な接触を介して起こる呼吸器系疾患
ｖｉ．ニパウイルス、コロナウイルス等の感染性微生物により引き起こされる呼吸器系関連疾患
ｖｉ．狂犬病等の、現地動物と直接的接触を介して起こる動物との接触による疾患
【００６１】
本発明の一実施形態では、Ｔ細胞数を増加させる、免疫力スコアリングであるＳＩＶ（すなわち、総体的免疫機能の総合インデックス）を向上させる、免疫学的年齢（すなわち、免疫機能の分かりやすい形式）を下げる、疲労感を低減する、及びストレスを緩和又は低減するための方法が開示される。本方法は、生物活性剤を含むユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物を含有する製剤を使用し、ユーリコマノンが０．３〜３．５％、総タンパク質が１０％超、総多糖類が２０％超、及びグリコサポニンが３０％超となるよう標準化されている。生物活性剤を含むユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物は、ユーリコマノンが０．８〜２．５％、総タンパク質が２２％超、総多糖類が３０％超、及びグリコサポニンが４０％超となるよう標準化されることが好ましい。
【００６２】
一実施形態では、ユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物の製剤を、Ｔ細胞数増加、ＳＩＶ向上、免疫学的年齢低下、疲労感低減、及びストレス緩和又は低減を目的として、当業者に公知のその他の薬剤と併用して投与してもよい。
【００６３】
ユウリコマ・ロンギフォリア由来組成物は、単独で又は他の化合物との混合物として製剤化し、有効量で投与することが可能である。有効量とは、Ｔ細胞数増加、ＳＩＶ向上、免疫学的年齢低下、疲労感低減、及びストレス緩和又は低減に十分な量である。
【００６４】
有効量は、勿論、治療される病態の重症度；年齢、身体的状態、大きさ及び体重を含む個別の患者パラメーター；併用療法；治療頻度；及び投与形態に依存する。これらの要素は、当業者に周知であり、過度の実験を要さずに対処可能である。適正な医学的判断による最大安全投与量である最大用量で使用することが通常好ましい。
【００６５】
一般的に、活性化合物の一日投与量は、約１０ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日である。１日当たり１回から数回に分けて２００〜４００ｍｇの範囲内で経口投与することにより、所望の結果が得られると期待される。このような用量では対象における反応が不十分である場合には、患者の耐性が許容する限り、更に高用量（又は他のより局所的な投与経路での効果的な高用量）としてもよい。投与量の範囲は、個別の患者の治療の必要性、及び治療対象の具体的な状況に基づいて調節可能である。一日複数回の投与とし、化合物の全身濃度が適切になるようにすることも考えられる。
【００６６】
本発明の方法は、臨床的に許容できない副作用を引き起こすことなく、活性化合物の有効濃度を達成する、医学的に許容可能ないずれかの投与形態を用いて実施してもよい。このような投与形態には、経口投与、経直腸投与、局所投与、経鼻投与、経皮投与、又は非経口投与が含まれる。「非経口」という用語には、皮下、静脈内、筋肉内、又は点滴による投与が含まれる。静脈内及び筋肉内経路は、長期療法及び予防において、特に適してはいない。
【００６７】
上記組成物は、単位剤形（ｕｎｉｔ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ）とすることが好適であり、当該技術分野における如何なる公知の方法によって調製してもよい。通常、上記組成物は、活性化合物に、液体担体、微粉化固形担体、又はその両方を均一且つ密接に接触させ、必要に応じて成形することによって製剤される。
【００６８】
経口投与に適した組成物は、既定量の活性化合物をそれぞれ含有するカプセル剤、カシェート剤、錠剤、ソフトゲル剤又はトローチ剤等、個別の構成単位としてもよい。その他の組成物としては、シロップ剤や乳剤等の、水性又は非水性液体の懸濁液剤が挙げられる。
【実施例】
【００６９】
以下、本発明を、非限定的実施例を参照して更に詳細に説明する。
【００７０】
＜実施例１：ユウリコマ・ロンギフォリア水抽出物の調製＞
ユーリコマノンを０．８〜２．５％、総タンパク質を２２％より多く、総多糖類を３０％より多く、及びグリコサポニンを４０％より多く含有することを特徴とする、ユウリコマ・ロンギフォリアの水抽出物を調製し、ユウリコマ・ロンギフォリアの免疫刺激性及び／又は免疫系増強活性の評価に使用した。
【００７１】
［方法］
１０００ｋｇのトンカット・アリの木片を乾燥し、粉砕した後、パーコレーションタンクへ投入した。５０００Ｌの精製水でこのタンクを満たし、１０５℃±１０℃まで加熱した。加熱水を循環させ、約６時間、タンク中でパーコレートした。タンクを２〜３時間放置することにより、タンク内の固形物を沈殿させた。濃縮するために、全てのミセラ（ｍｉｓｃｅｒａ）を、フィルターを介して緩衝液タンク内へ排出した。このミセラを薄膜、熱及び真空を用いて濃縮した。固形分２０〜３０％の濃縮物が得られるまで濃縮プロセスを続けた。その後、濃縮物を滅菌器に通した。滅菌後、濃縮物を凍結乾燥機で乾燥した。この乾燥濃縮物を製粉して微粉末とし、標準化のためにブレンダーで混ぜた。この抽出物を、下記の実施例に記載される生物活性実験に使用した。
【００７２】
＜実施例２：ユウリコマ・ロンギフォリア水抽出物の免疫刺激効果＞
上記ユウリコマ・ロンギフォリア根の水抽出物のヒトにおける免疫刺激性効果を調べた。参加者は、４０歳〜５９歳の日常的に疲労感を感じる健常人である。抽出物の４週間経口投与による参加者の免疫力に対する効果を調べた。
【００７３】
具体的には、本試験はユウリコマ・ロンギフォリアが下記効果を有するか調べることを目的とする：
Ｔ細胞数を増加させる効果；
総合的免疫力の発現の指標として提案されている免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる効果；
免疫学的年齢を下げる効果；
疲労感を軽減する効果；
ストレスを緩和又は低減する効果。
【００７４】
【表２】
2020172523.tif 000004
【００７５】
［材料及び方法］
１．試験実施場所
試験実施機関である医療法人社団盛心会タカラクリニックは、日本国内の地域クリニックである。データ収集及び分析は、日本国内の株式会社オルトメディコが実施した。
【００７６】
２．参加者
・適格性、スクリーニング、及び割当基準
ｉ．組入れ基準
ａ．募集時に「日常的に疲労感を感じますか」という選択的「はい／いいえ」質問に対して、「はい」と回答した健常成人。
ｂ．年齢が４０〜５９歳の人。
ｃ．０週目のテストにおいて免疫力スコアが低い（ＳＩＶが２３未満）人。
ｉｉ．除外基準
ａ．心不全及び心筋梗塞の既往歴がある人。
ｂ．下記病気のいずれかを治療中の人：心房細動、心不整脈、肝障害、腎障害、脳血管障害、リウマチ、脂質異常症、高血圧、及びその他の慢性疾患。
ｃ．過去３０日間に医薬、植物薬、又は栄養補助食品を摂取した人。
ｄ．アレルギーがある人。
ｅ．治験期間中に妊娠している女性、授乳中の女性、又は妊娠を希望する女性。
ｆ．花粉症の参加者。
ｇ．喫煙者。
ｈ．本治験への参加に同意する前の過去３ヶ月間に、他の臨床治験に登録された人。
ｉ．治験責任医師により治験への参加が適切でないと判断された人。
ｉｉｉ．選択基準（スクリーニングテスト時）
ａ．免疫学的活力（ＳＩＶ）スコアが通常よりも比較的低い人を選択した（表１参照）。
ｉｖ．割当基準
ａ．ベースラインにおけるＳＩＶの平均値及びＳＤが、ＴＡ群及びＰ群間で有意差がない。
【００７７】
【表３】
2020172523.tif 000005
【００７８】
・無作為化
ｉ．割付手順
「Ｓｔａｔｌｉｇｈｔ＃１１（ユックムス社（Ｙｕｋｍｓ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）によるエクセル・アドオン）を使用してコンピューター生成されたランダムな番号で、層別無作為化シーケンスを作成した。本発明者らは、下記２階層をセットし交差させた：性別（男性又は女性）及び年齢人口動態（４０歳代又は５０歳代）。これにより、下記４階層を作成した：４０歳代男性、５０歳代男性、４０歳代女性、及び５０歳代女性。無作為化シーケンスを各階層で作成した。最終的に、本発明者は、４つの無作為化の結果を統合し、結合したものを本治験の最終無作為化シーケンスとして割り付けた。
【００７９】
これらの登録及び割当は、キーコントローラーにより行われた。
【００８０】
ｉｉ．割付の秘匿
ａ．同じ外見の試験材料を使用し、割当情報を秘匿とすることで、参加者が割当られた群について、参加者を盲検化した。
ｂ．割当情報を秘匿とすることで、医師及び臨床スタッフを盲検化した。医師及び臨床スタッフは、外来での診察を行うために、割当情報を知る必要はなかった。
ｃ．一次解析が終了するまで、割当情報を秘匿とすることで統計解析者を盲検化した。
＊＊上述したとおり、割当及び登録手順は、キーコントローラーが実施した。割当情報は、統計学的解析者が一次解析を終了するまで開示されなかった。
【００８１】
・サンプルサイズ
ｉ．サンプルサイズの決定
プロトコルを最終決定する前に、本発明者らは、十分なサンプルサイズを決定するために、ＥＺＲ  ｐａｃｋａｇｅ  ｖｅｒ．１．１１のＲ２．１３．０版を用いて下記設定で、本発明者らの以前のデータに基づいて、検出力分析を行った：統計的検出力を８０％、有意水準をｐ＜０．０５、上記２群間におけるＳＩＶ変化の平均差を標準偏差の２／３、割当比を１：１とした。
【００８２】
検出力分析により、各群３６名の参加者が必要であると計算された。それにより、離脱者及び研究プロトコルからの事後逸脱を考慮して、本発明者らは４２名の参加者を各群に割り当てた。
【００８３】
・参加者の管理
ｉ．日記
摂取期間中、参加者は書面による日記の記載を義務づけられた。参加者は毎週日記を連絡担当者又は執行機関へ送付した。
【００８４】
ｉｉ．採血前に、参加者の健康状態を把握するために既往歴を取得した。
【００８５】
ｉｉｉ．下記順守事項をインフォームドコンセント取得前に参加者へ提示した。
ａ．参加者は、採血前６時間は水以外の食品及び飲料は摂取してはならない。
ｂ．参加者はプロトコルに従って試験物質を摂取しなくてはならない。
ｃ．参加者は、食べ過ぎたり飲みすぎたりせず、極度な性活動を避けるべきであり、通常の生活や生活習慣を継続すべきである。
ｄ．参加者は、治験期間中は試験材料以外のいかなる健康食品、機能性食品及び栄養補助食品の摂取も避けなくてはならない。
ｅ．参加者は、クリニックスタッフ／治験責任医師に、薬物療法（併用薬物療法）中であるか開示しなくてはならない。＊
ｆ．参加者は、外来患者調査前日の飲酒及び過度の運動等、試験結果に影響する可能性のある全てのその他の要素を避けなくてはならない。
ｇ．参加者はいかなる副作用を経験した場合も、本治験のオペレーターへ報告する必要がある。
＊注：治験責任医師は、試験の妨げになるかを決定する。
【００８６】
・治験からの離脱
参加者は、希望によりいつでも治験中止可能とした。参加者の健康状態が不良であるか、態度に問題がある場合、治験の治験責任医師は参加者の治験参加を中止可能とした。
【００８７】
ｉ．離脱者
ａ．参加者が治験参加の中止を希望する場合。
ｂ．参加者が、治験参加を止めた場合。
ｃ．治験責任医師が、重篤な有害事象により治験継続を中止する場合。
ｄ．参加者が、治験責任医師及び執行機関の指示に従わない場合。
ｅ．参加者が、治験中ライフスタイルガイダンスに従わない場合。
ｆ．治験責任医師が、該当する被験者を離脱者とみなす決定をした場合。
【００８８】
ｉｉ．中止
ａ．治験責任医師が、重篤な有害事象により個人の治験参加の中止を決定した場合。
ｂ．治験責任医師が、他覚症状により参加の中止を決定した場合。
ｃ．治験責任医師が、他の理由により参加の中止を決定した場合。
【００８９】
３．介入
（１）試験物質（表２参照）
ｉ．ＴＡ群：標準凍結乾燥トンカット・アリ／ユウリコマ・ロンギフォリア水抽出物
ｉｉ．Ｐ群：プラセボ
（２）期間：４週間
（３）用法・用量
各群の参加者は、前記試験物質を１日１カプセル摂取した。
（４）供給元及び製造業者
【００９０】
調査対象の標準抽出物は、Ｂｉｏｔｒｏｐｉｃｓ  Ｍａｌａｙｓｉａ  Ｂｅｒ
ｈａｄにより製造され、試験物質は、渡辺薬品工業株式会社により製造された。渡辺薬品工業株式会社による前記試験物質のバッチ番号はＴＡ／３０６／８であった。臨床治験は、本治験の執行機関である株式会社オルトメディコにより運営された。
【００９１】
【表４】
2020172523.tif 000006
【００９２】
４．アウトカム
（１）一次アウトカム：免疫学的パラメーター
ｉ．免疫学的パラメーター
ａ．フローサイトメトリーにより決定したＴ細胞の亜集団におけるポジティブ及びネガティブ率
ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋、ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋、ＣＤ３−ＣＤ２０＋
ｂ．Ｔリンパ球サブセット数（ａ．及び白血球百分率を使用）
Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞、ＣＤ８＋ＣＤ２８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞
ｃ．細胞培養
Ｔ細胞増殖活性
ｄ．上記及び下記パラメーターから計算
ＣＤ４／ＣＤ８比、ナイーブ／メモリー比、Ｔ細胞増殖指標、免疫学的年齢＊、Ｔリンパ球年齢、ＳＩＶ＊、免疫学的等級
＊本発明者らは、特にこれら２つの指標に注目した。
【００９３】
（２）二次的アウトカム：質問
ｉ．自覚症状
ａ．日本語版感情プロフィール検査（ＰＯＭＳ）の簡略化版６）
ｂ．独自に開発したリッカート尺度スケール
【００９４】
項目：「肉体的疲労を感じる」、「不眠に悩んでいる」、「十分な休息と睡眠が取れていてもほとんどリフレッシュできない」、「最近あまり幸せでないと感じる」、「喉が腫れやすい」、「顔にシミができやすい上に肌荒れがひどい」、「便秘の感じがしてしょっちゅう気分が悪い」、「よく下痢する」、「イライラしやすい」、「よく火照る感じがする」、「性的欲求が低い」、「やる気が出ない」
【００９５】
回答：この項目は・・・１：自分には全く当てはまらない。２：自分にはほとんど当てはまらない。３：自分には本当に当てはまらない。４：自分には多少当てはまる。５：自分にはある程度当てはまる。６：自分にはほぼ完全に当てはまる。
【００９６】
（３）安全パラメーター
ｉ．身体検査
身長＊、体重、肥満度指数（ＢＭＩ）、体脂肪率、収縮期血圧、拡張期血圧、脈拍
＊インフォームドコンセントを実施した後に、１回だけ身長を計測した。
ｉｉ．尿検査＊＊
尿中タンパク質、尿中グルコース、ウロビリノーゲン、ビリルビン、ケトン体、ｐＨ、潜血
＊＊採取量：約２５ｍｌ
ｉｉｉ．血液検査
ａ．採取条件
＋  参加者は採血前に少なくとも６時間絶食した。
＋  免疫アッセイ用試料を含め約２５ｍｌの血液を採取した。
ｂ．血液学的検査
白血球数（ＷＢＣ）、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘモグロビン、ヘマトクリット、血小板数、平均赤血球量（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）、平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）、白血球像
ｃ．生物医学的検査
アスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）、アラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ（γ−ＧＴＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、ロイシンアミノペプチダーゼ（ＬＡＰ）、総ビリルビン、直接ビリルビン、間接ビリルビン、コリンエステラーゼ、硫酸亜鉛混濁試験（ＺＴＴ）、総タンパク質、尿素窒素、クレアチニン、尿酸、クレアチニンキナーゼ（ＣＫ）、カルシウム（Ｃａ）、ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、塩素（Ｃｌ）、無機リン（ＩＰ）、血清鉄（Ｆｅ）、血清アミラーゼ、総コレステロール（Ｔ−ｃｈｏ）、高比重リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−ｃｈｏ）、低比重リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−ｃｈｏ）、トリグリセリド（ＴＧ）、遊離脂肪酸、血中グルコース、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ、ＮＧＳＰ）、グリコアルブミン。
【００９７】
５．解析
（１）解析の原理
本発明者は、事後に明らかにされるプロトコルからの逸脱を考慮して、治療意図の原理による解析（ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）に代えてプロトコルに適合した対象集団による解析（ｐｅｒ−ｐｒｏｔｏｃｏｌ）を使用した。
【００９８】
（２）一次解析
統計解析を実施し、「トンカット・アリはいずれのエンドポイントにおいても全く効果がなかった」という帰無仮説を評価した。下記２つの要素の効果を推定する二因子多変量解析を実施した：介入（２群間：トンカット・アリ、プラセボ）及びテスト期間（２期間内：０週目、４週目）。
【００９９】
（３）追加解析
ｉ．変化の群間比較
０週目〜４週目の変化が、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物（ＴＡ）群とプラセボ（Ｐ）群との間で異なるかを明らかにするために、本発明者らは、各アウトカムパラメーターにおける変化を、独立ｔ検定を用いて比較した。変化は、各成果のベースライン値から対応する４週目の値を差し引くことにより計算した。
【０１００】
ｉｉ．共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）
アウトカムに対するベースライン値及びその他の交絡因子の効果をコントロールするため、本発明者らは追加的に、一元配置共分散分析（１−ｗａｙ  ＡＮＣＯＶＡ）を一次及び二次アウトカムに対して行った。共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）は本治験開始前に上記試験プロトコルにより規定されていなかったが、ベースライン変動を考慮すると、共分散分析は多変量解析よりも統計学的に適していると思われた。
【０１０１】
最大解析対象集団の共分散分析では、本発明者らは、介入として独立変数、独立変数として各アウトカムの４週目の値、各アウトカムの性別、年齢、及びベースライン値を共変量として設定した。また、性別階層化のための共分散分析では、本発明者らは、共変量として各アウトカムの年齢及びベースライン値を設定し、独立変数及び非独立変数は上記の最大解析対象集団と同様に設定した。
【０１０２】
（４）設定及びソフトウェア
ＩＢＭ  ＳＰＳＳ  ｖｅｒ．１８．０を解析に使用した。両側検定における０．０５未満のｐ値を統計学的に有意とした。
【０１０３】
＜結果＞
１．治験対象母集団
８４名の参加者中、計８３名が治験を完了した。１名の参加者は、スクリーニングテスト後にダイエットを開始し、これが治験の順守事項に抵触したため、摂取開始前に離脱した。２名の参加者が、統計学的解析から除外された。１名の参加者は、４週目直前に風邪にかかり、免疫状態に影響すると思われた。もう１名の参加者は、治験プロトコルに従って充分に試験物質を摂取せず、摂取率が必要とする全摂取量の９０％未満となった。図１に治験対象母集団のフローチャートを示す。
【０１０４】
従って、８１名の参加者を統計学的に解析した。表５に、人口統計上のベースラインデータ、体重、ＢＭＩ、免疫学的年齢、及びＳＩＶを示す。
【０１０５】
【表５】
2020172523.tif 000007
【０１０６】
２．一次解析
免疫学的パラメーター
表６に免疫学的パラメーターの結果を示す。多くの有意な群間差が認められた。特に、ユウリコマ・ロンギフォリア／トンカット・アリ抽出物（ＴＡ）群におけるＳＩＶ及び免疫学的等級の増加量は、プラセボ（Ｐ）群と比較して有意に大きかった。同様に、ＴＡ群における免疫学的年齢の低下は、Ｐ群と比較して有意に大きかった。これらの傾向は好ましい方向性である。更に、ＴＡ群におけるいくつかの項目の変化値は、Ｐ群と比較して有意に大きかった。これらの項目は、Ｔ細胞数、ナイーブＴ細胞数、Ｎ／Ｍ比、Ｂ細胞数、及びＴ細胞増殖活性である。これらの項目は、ＳＩＶを上昇させるいくつかの構成要素である。
【０１０７】
【表６】
2020172523.tif 000008
【０１０８】
【表７】
2020172523.tif 000009
【０１０９】
３．自覚症状
表７にＰＯＭＳの結果を示し、表８にリッカート尺度の結果を示す。ＰＯＭＳに関しては、有意な群間差は認められなかったが、ユウリコマ・ロンギフォリア／トンカット・アリ抽出物（ＴＡ）群における「緊張−不安」及び「疲労感」のスコア変化は、プラセボ（Ｐ）群よりも大きく、僅かに優位であった。
【０１１０】
リッカート尺度に関しては、一次解析と比較して顕著な差が見られた。有意な群間差が、下記の３項目において認められた：「肉体的疲労を感じる」、「不眠に悩んでいる」、及び「最近あまり幸せでないと感じる」。ユウリコマ・ロンギフォリア／トンカット・アリ抽出物（ＴＡ）群におけるこれらの項目の変化は、プラセボ（Ｐ）群と比較して大きかった。また、僅かに有意な差にとどまったものの、「十分な休息と睡眠が取れていてもほとんどリフレッシュできない」では、上記した３項目と同様の傾向が見られた。
【０１１１】
【表８】
2020172523.tif 000010
【０１１２】
【表９】
2020172523.tif 000011
【０１１３】
４．最大解析対象集団を用いた共分散分析解析の結果
ｔ検定及び共分散分析は追加解析であったが、出願人は、主に群間比較のための共分散分析の結果について報告する。その理由は、共分散分析はベースライン変動を考慮するので、共分散分析は、二元配置多変量解析よりも統計学的により適切であるとみなされるからである。
【０１１４】
４−１．免疫学的パラメーター
表９に、免疫学的パラメーターの結果を示し、図２にＳＩＶのサブスコアを示す。ＳＩＶ及び免疫学的等級において、有意な群間差が認められた。これらの値はユウリコマ・ロンギフォリア／トンカット・アリ抽出物（ＴＡ）群においてプラセボ（Ｐ）群よりも高かった。また、僅かな有意差にとどまったものの、ユウリコマ・ロンギフォリア／トンカット・アリ抽出物（ＴＡ）群の参加者は、プラセボ（Ｐ）群の参加者よりも免疫学的年齢が比較的低かった。８つの項目中、ＴＡ群におけるＴ細胞数及びナイーブＴ細胞数が、Ｐ群よりも有意に大きかった。
【０１１５】
【表１０】
2020172523.tif 000012
【０１１６】
【表１１】
2020172523.tif 000013
【０１１７】
４−２．自覚症状
表１０はＰＯＭＳの結果を示し、表１１はリッカート尺度の結果を示す。ＰＯＭＳに関しては、有意な群間差は見られなかった。ユウリコマ・ロンギフォリア／トンカット・アリ抽出物（ＴＡ）による緊張−不安の平均値は、プラセボ（Ｐ）より低く、僅かに顕著であった。
【０１１８】
リッカート尺度に関しては、「不眠に悩んでいる」及び「最近あまり幸せでないと感じる」の項目で有意差が見られた。ＴＡ群の参加者は、これら２項目でＰ群の参加者よりも比較的低いスコアを示し、ＴＡ群では睡眠及び幸福感においてより良い心理状態であることがわかる。
【０１１９】
【表１２】
2020172523.tif 000014
【０１２０】
【表１３】
2020172523.tif 000015
【０１２１】
検討
本発明の研究の第一の目的は、ヒトにおけるユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ（ＴＡ）の免疫刺激効果を評価することである。１２６名の健常人中計８４が、上記スクリーニングテストを通過し、８３名の参加者が本治験を完了した。
【０１２２】
出願人は、群間比較を行うために３種類の統計学的解析を実施した。まず、本治験の研究プロトコルに規定される事前に選択した統計学的解析として、二元配置多変量解析を行った。次に、２群間における０週目〜４週目の変化を独立ｔ検定により記録した。最後に、共変量として年齢、性別、及び各指標のベースライン値を考慮して、一元配置共分散分析を用いて４週目の平均値を比較した。ｔ検定及び共分散分析は追加解析であったが、出願人の報告は、主に群間比較のための共分散分析の結果に関するものである。その理由は、共分散分析は、二元配置多変量解析よりも統計学的により適切であるとみなされるからである。なぜなら共分散分析は、ベースライン変動を考慮するためである。
【０１２３】
ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ（ＴＡ）の免疫刺激効果
本治験の結果は、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ抽出物がヒトにおける免疫刺激効果を有することを示す。総体的免疫機能の総合インデックスであるＳＩＶは、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ（ＴＡ）群の参加者で有意に向上し、年齢、性別、及びＳＩＶのベースライン値を考慮しても、４週目ではＴＡ群においてプラセボ（Ｐ）群より有意に高かった。また、免疫機能の容易に分かりやすい形式である免疫学的年齢は、ＴＡ群においてＰ群より低く、これはＴＡ群の免疫機能が、プラセボ（Ｐ）よりも「若い」ことを示す。
【０１２４】
よって、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ（ＴＡ）は、アンチエイジング効果を有する可能性がある。これらの結果から、ユウリコマ・ロンギフォリアリ抽出物／トンカット・アリは、ヒトにおける免疫系／免疫機能を増強及び／又は刺激すること、並びに、がん患者等の免疫力が低下した個体における感染性疾患及び感染から人体を保護することに関連している可能性が示唆される。
【０１２５】
各免疫学的成分については、ＴＡ群参加者のＴ細胞数及びナイーブＴ細胞数は、Ｐ群よりも有意に高かった。Ｔ細胞は、獲得及び細胞媒介性免疫の主成分の一つであるため、高いＴ細胞数は、個人の高い免疫学的能力、特に獲得及び細胞媒介性免疫を意味する。獲得免疫は、細胞媒介性免疫がウイルス及び変異細胞からヒトを保護する前に、免疫メモリーの獲得のために、少なくとも過去１回侵入した感染性病原体である抗原から効率的に人体を保護する。ナイーブＴ細胞は、いかなる抗原にも曝露されたことがない未分化Ｔ細胞である。すなわち、ナイーブＴ細胞は、免疫メモリーの「獲得」に関係し、獲得免疫における重要な役割を担う。ナイーブＴ細胞は、「新規な」抗原又は病原体からヒトを保護するが、加齢又はストレスにより悪化する。なぜならこれらの細胞は、加齢により悪化することが良く知られており、トンカット・アリ（ＴＡ）は、免疫学的機能及びストレスを受けた個体の加齢に対し予防的効果を有するように見受けられる。
【０１２６】
自覚症状（ＰＯＭＳ）
ＰＯＭＳの全ての項目において、０週目〜４週目の間に両群において有意な変化があった。両群において、上記の５つのネガティブな項目（緊張−不安、抑うつ、怒り−敵意、疲労感、及び混乱）のスコアは４週目に低下し、上記の１つのポジティブな項目である活力のスコアは増加した。これらの変化は全て好ましいものである。共分散分析を用いた群間比較では、最大解析対象集団における差は見られなかったが、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ（ＴＡ）での緊張−不安は、プラセボ（Ｐ）より低く、僅かに顕著であった。これらの結果からは、年齢、性別、及びこれらのベースライン値を考慮しても、トンカット・アリの摂取によりプラセボよりも、緊張−不安が改善した可能性が示唆される。
【０１２７】
自覚症状（リッカート尺度）
群間で多くの項目が、有意に改善したが、これらの変化はユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ（ＴＡ）群においてよりはっきりと観察された。群間比較に関しては、最大解析対象集団における不眠及び幸福感に関する項目はプラセボ（Ｐ）よりもＴＡ群においてより改善した。要するに、プラセボと比較して、トンカット・アリ（ＴＡ）はいくつかの自覚症状を改善させた。
【０１２８】
本明細書において得られた結果からは、ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物／トンカット・アリ（ＴＡ）が、Ｔ細胞及びそのサブセットにより推定されるヒトにおける免疫刺激効果、特に獲得及び細胞媒介性免疫を有することが示される。トンカット・アリは、東南アジアでは滋養強壮剤又は解熱剤として従来使用されてきたが、免疫機能との関連性についてはこれまで研究されてこなかった。よって、本研究の結果は、非常に重要且つ意味がある。なぜならこの結果によりヒトにおけるトンカット・アリの免疫刺激効果が初めて明らかになり、疲労感又は感染性疾患に使用される補完的医薬群にトンカット・アリを含めることができると考えられるからである。また、トンカット・アリは免疫学的年齢を下げるため、アンチエイジング特性を有すると考えられる。
＜付記＞
＜項１＞  有効量のユウリコマ・ロンギフォリア（Ｅｕｒｙｃｏｍａ  ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ）抽出物を含む組成物の、免疫系を刺激及び／又は増強する製剤の製造における使用。
＜項２＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が水抽出物又は溶媒抽出物である、＜項１＞に記載の使用。
＜項３＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、ユーリコマノン、タンパク質、多糖類及びグリコサポニンを含む有効成分を適量含む、＜項１＞に記載の使用。
＜項４＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、下記からなる群から選ばれる活性を有する、＜項１＞に記載の使用：
Ｔ細胞数を増加させる活性；
総体的免疫機能の総合インデックスである免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる活性；
Ｔ細胞数及び増殖活性に基づいた免疫機能の分かりやすい形式である免疫学的年齢を下げる活性；
疲労感を低減する活性；及び
ストレスを緩和又は低減する活性。
＜項５＞  前記免疫力スコアリング（ＳＩＶ）が、Ｔ細胞、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比、ナイーブＴ細胞、ナイーブＴ細胞／メモリーＴ細胞比、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＴ増殖活性を最適に機能させることを含む、＜項４＞に記載の使用。
＜項６＞  前記組成物が、医薬的又は栄養学的に許容可能な担体を更に含む、＜項１＞に記載の使用。
＜項７＞  有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物と、医薬的又は栄養学的に許容可能な担体と、を含む、免疫系を刺激及び／又は増強する組成物。
＜項８＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が水抽出物又は溶媒抽出物である、＜項７＞に記載の組成物。
＜項９＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、ユーリコマノン、タンパク質、多糖類及びグリコサポニンを含む有効成分を適量含む、＜項７＞に記載の組成物。
＜項１０＞  Ｔ細胞数を増加させる活性；
総体的免疫機能の総合インデックスである免疫力スコアリング（ＳＩＶ）を向上させる活性；
Ｔ細胞数及び増殖活性に基づいた免疫機能の分かりやすい形式である免疫学的年齢を下げる活性；
疲労感を低減する活性；及び
ストレスを緩和又は低減する活性
からなる群から選ばれる活性を有する、＜項７＞に記載の組成物。
＜項１１＞  Ｔ細胞数を増加させること、免疫力スコアリングであるＳＩＶ（すなわち、総体的免疫機能の総合インデックス）を向上させること、免疫学的年齢（すなわち、免疫機能の分かりやすい形式）を下げること、疲労感を低減すること、及びストレスを緩和又は低減すること、からなる群から選ばれるアウトカムを達成して、個体を治療する方法であって、
有効量のユウリコマ・ロンギフォリア抽出物を前記個体に投与することを含む前記方法。
＜項１２＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が水抽出物又は溶媒抽出物である、＜項１１＞に記載の方法。
＜項１３＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、ユーリコマノン、タンパク質、多糖類及びグリコサポニンを含む有効成分を適量含む、＜項１１＞に記載の方法。
＜項１４＞  前記有効量が１０ｍｇ〜２０００ｍｇである、＜項１１＞に記載の方法。
＜項１５＞  前記有効量が２００ｍｇ〜４００ｍｇである、＜項１４＞に記載の方法。
＜項１６＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、前記免疫機能を増強及び／又は刺激し、アンチエイジング効果を有することにより、感染性疾患から前記個体の身体を保護する、＜項１１＞に記載の方法。
＜項１７＞  前記ユウリコマ・ロンギフォリア抽出物が、医薬的又は栄養学的に許容可能な担体を更に含む、＜項１１＞に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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