(57)【要約】【課題】結晶性抗体製剤の提供。【解決手段】抗ＰＣＳＫ９抗体結晶、このような抗体結晶及び抗体結晶を含む製剤を作製する方法が、本明細書に記載される。本明細書に記載される結晶または製剤では、抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧは、抗体、すなわち２１Ｂ１２の重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９におけるＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）、配列番号９におけるＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２、及び配列番号９におけるＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、ならびに配列番号５におけるＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、配列番号５におけるＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２、及び配列番号５におけるＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３を含むＩｇＧである。【選択図】図１Ａ
2020172526.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年７月１４日出願の米国特許仮出願第６２／０２４，３９３号の利益を主張し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
電子的に提出された資料の参照による援用
本出願は、開示の別個の一部として、その全体が参照によって組み込まれるコンピュータ可読形式の配列表（ファイル名称：Ｓｅｑ  Ｌｉｓｔ１０−０７−１３＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０１４年６月２６日に作成されたもので、サイズは４２ＫＢである）を含有する。
【背景技術】
【０００２】
モノクローナル抗体は、生物学的治療薬として幅広く使用され、送達のために１００ｍｇ／ｍｌを超える高濃度を満たすことがますます要求されている。このことは、好ましい皮下投与限度が１．２ｍｌであるため、皮下経路による溶解度が制限されたタンパク質についての課題を提示する（Ｙａｎｇ，Ｍ．Ｘ．，Ｓｈｅｎｏｙ，Ｂ．，Ｄｉｓｔｔｌｅｒ，Ｍ．，Ｐａｔｅｌ，Ｒ．，ＭｃＧｒａｔｈ，Ｍ．，Ｐｅｃｈｅｎｏｖ，Ｓ．，Ｍａｒｇｏｌｉｎ，Ａ．Ｌ．（２００３）Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＰＮＡＳ  １００，６９３４−６９３９）。高濃度製剤の開発には、製剤化、分析、安定性、製造及び薬物送達の観点から多くの課題を伴う（Ｓｈｉｒｅ，Ｓ．Ｊ．，Ｚａｈｒａ，Ｓ．，Ｌｉｕ，Ｊ．（２００４）Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３，１３９０−１４０２）。今のところ、高濃度製剤の要求は、安定性を増加し、凝集及び粘度を減少させるアミノ酸、糖及び塩のような賦形剤の添加により満たされている（上記Ｓｈｉｒｅ及びＪｅｎｋｉｎｓ，Ｔ．Ｗ．（１９９８）Ｔｈｒｅｅ
ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｐｒｏｂｌｅｍ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ７：３７６−３８２）。
【０００３】
タンパク質結晶は、多くの場合タンパク質構造体への中間体にすぎないと見なされるが、それらはまた製剤化の面で重要な役割を有する。結晶形のタンパク質分子は最も低いエントロピーを有し、したがって液体状態よりも、それらをさらに３〜６ｋｃａｌ／ｍｌ安定にさせる（Ｄｒｅｕｔｈ，Ｊ．，Ｈａａｓ，Ｃ．（１９９２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，Ｊ．Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  １２２，１０７−１０９）。結晶製剤の主な利点としては、高タンパク質濃度、より低い粘度、安定性、高濃度による頻繁な投与の排除及び制御放出特性が挙げられる（上記Ｙａｎｇ及びＢａｓｕ，Ｓ．Ｋ．，Ｇｏｖａｒｄｈａｎ，Ｃ．Ｐ．，Ｊｕｎｇ，Ｃ．Ｗ．，Ｍａｒｇｏｌｉｎ，Ａ．Ｌ．（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒａ．４，３０１−３１７）。
【０００４】
結晶化条件は、所望の制御放出特性のために異なる形態を達成するように操作され得る（Ｐｅｃｈｅｎｏｖ，Ｓ．，Ｓｈｅｎｏｙ，Ｂ．，Ｙａｎｇ，Ｍ．Ｘ．，Ｂａｓｕ，Ｓ．，Ｍａｒｇｏｌｉｎ，Ａ．Ｌ．（２００４）Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ９６，１４９−１５８）。インスリン結晶製剤は１９２０年代に初めて報告され、今日では、ＦＤＡにより承認された最初の組換えタンパク質治療薬であるだけでなく、初めて承認された結晶性タンパク質治療薬でもある（Ｈａｇｅｄｏｒｎ  Ｈ．Ｃ．；Ｊｅｎｓｅｎ，Ｂ．Ｎ．；Ｋｒａｒｕｐ，Ｎ．Ｂ．；Ｗｏｄｓｔｒｕｐ，Ｉ．Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ  ｉｎｓｕｌｉｎａｔｅ，（１９３６）Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｎ．１０６，１７７−１８０；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｉ．Ｓ．（２００３）Ｔｈｅ  ｔｒｉａｌｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｂｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｄｒｕｇ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２，７４７−７５１；及びＢａｓｕ，Ｓ．Ｋ．，Ｇｏｖａｒｄｈａｎ，Ｃ．Ｐ．，Ｊｕｎｇ，Ｃ．Ｗ．，Ｍａｒｇｏｌｉｎ，Ａ．Ｌ．（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒａ．４，３０１−３１７）。高分子はそれらの固有の柔軟性により結晶化が難しいが、一旦結晶化すると、多くの場合に製剤化及び調節の面で課題を伴う（上記Ｂａｓｕ及びＪｅｎ，Ａ．，Ｍｅｒｋｌｅ，Ｈ．Ｐ．（２００１）Ｄｉａｍｏｎｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｏｕｇｈ：Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｃｒｙｓｔａｌｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１８，１４８３−１４８８．）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｙａｎｇ，Ｍ．Ｘ．，Ｓｈｅｎｏｙ，Ｂ．，Ｄｉｓｔｔｌｅｒ，Ｍ．，Ｐａｔｅｌ，Ｒ．，ＭｃＧｒａｔｈ，Ｍ．，Ｐｅｃｈｅｎｏｖ，Ｓ．，Ｍａｒｇｏｌｉｎ，Ａ．Ｌ．（２００３）Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＰＮＡＳ  １００，６９３４−６９３９
【非特許文献２】Ｓｈｉｒｅ，Ｓ．Ｊ．，Ｚａｈｒａ，Ｓ．，Ｌｉｕ，Ｊ．（２００４）Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３，１３９０−１４０２
【非特許文献３】Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｔ．Ｗ．（１９９８）Ｔｈｒｅｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｐｒｏｂｌｅｍ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ７：３７６−３８２
【非特許文献４】Ｄｒｅｕｔｈ，Ｊ．，Ｈａａｓ，Ｃ．（１９９２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，Ｊ．Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  １２２，１０７−１０９
【非特許文献５】Ｂａｓｕ，Ｓ．Ｋ．，Ｇｏｖａｒｄｈａｎ，Ｃ．Ｐ．，Ｊｕｎｇ，Ｃ．Ｗ．，Ｍａｒｇｏｌｉｎ，Ａ．Ｌ．（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒａ．４，３０１−３１７
【非特許文献６】Ｐｅｃｈｅｎｏｖ，Ｓ．，Ｓｈｅｎｏｙ，Ｂ．，Ｙａｎｇ，Ｍ．Ｘ．，Ｂａｓｕ，Ｓ．，Ｍａｒｇｏｌｉｎ，Ａ．Ｌ．（２００４）Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ９６，１４９−１５８
【非特許文献７】Ｈａｇｅｄｏｒｎ  Ｈ．Ｃ．；Ｊｅｎｓｅｎ，Ｂ．Ｎ．；Ｋｒａｒｕｐ，Ｎ．Ｂ．；Ｗｏｄｓｔｒｕｐ，Ｉ．Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ  ｉｎｓｕｌｉｎａｔｅ，（１９３６）Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｎ．１０６，１７７−１８０
【非特許文献８】Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｉ．Ｓ．（２００３）Ｔｈｅ  ｔｒｉａｌｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｂｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｄｒｕｇ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２，７４７−７５１
【非特許文献９】Ｊｅｎ，Ａ．，Ｍｅｒｋｌｅ，Ｈ．Ｐ．（２００１）Ｄｉａｍｏｎｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｏｕｇｈ：Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１８，１４８３−１４８８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、非経口投与用の結晶製剤での使用に好適な抗ＰＣＳＫ９免疫グロブリンＧ型（ＩｇＧ）抗体（より具体的には、抗体２１Ｂ１２）の結晶；このような結晶を製造するための溶液、塩及び方法；医薬として使用するための結晶製剤を調製するために、このような結晶を使用する方法、ならびに哺乳動物、特にヒトを処置するために、このような結晶製剤を使用する方法に関する。
【０００７】
本明細書に記載される結晶または製剤では、抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧは、抗体、すなわち２１Ｂ１２の重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９におけるＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）、配列番号９におけるＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２、及び配列番号９におけるＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、ならびに配列番号５におけるＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、配列番号５におけるＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２、及び配列番号５におけるＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３を含むＩｇＧである。いくつかのその他の実施形態では、抗体は、配列番号１１におけるＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）、配列番号１１におけるＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２、及び配列番号１１におけるＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、ならびに配列番号７におけるＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、配列番号７におけるＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２、及び配列番号７におけるＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２０または配列番号２１（２１Ｂ１２  ＣＤＲＨ１）、及び配列番号２２（２１Ｂ１２  ＣＤＲＨ２）、及び配列番号２３（２１Ｂ１２  ＣＤＲＨ３）、ならびに配列番号２４（２１Ｂ１２  ＣＤＲＬ１）、及び配列番号２５（２１Ｂ１２  ＣＤＲＬ２）、及び配列番号２６（２１Ｂ１２  ＣＤＲＬ３）のアミノ酸配列を含むＩｇＧである。
【０００８】
本明細書に記載される結晶または製剤では、抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧ抗体は、抗体２１Ｂ１２と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含み得る。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０００９】
本明細書に記載される結晶または製剤では、抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧ抗体は、各々好適な定常領域に融合される上記の重鎖及び軽鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体２１Ｂ１２の成熟重鎖及び軽鎖（配列番号１６または１７の２１Ｂ１２成熟軽鎖及び配列番号１８または１９の２１Ｂ１２成熟重鎖）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１６及び配列番号１８を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１７及び配列番号１９を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、哺乳動物宿主細胞において、本明細書に記載されるような抗体２１Ｂ１２の重鎖及び／もしくは軽鎖、またはあるいは各々好適な定常領域に融合される重鎖及び／もしくは軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡを発現することにより得ることができるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１０−７以下のＫＤ結合親和性（より小さい数値が、より高い結合親和性を意味する）で、配列番号１のＰＣＳＫ９に結合する。
【００１０】
本明細書に記載される抗体結晶は、例えばサイズ、形状、形態、塩含有量、結晶充填、及びその他の特性により特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、結晶の長さは、約５μＭ〜約５０μＭの範囲であり、場合により針状、六角形の棒状、板状、フットボール状（アーモンド状）の形態、またはこれらの混合物を有する。場合により、結晶はクラスターである。結晶はまた、Ｘ線回折により特徴付けられる。例えば、抗体２１Ｂ１２結晶は、針形状、六角形の棒形状、板形状、フットボール形状（アーモンド形状）、もしくはこれらの混合物、またはその他の形状を示してよい。いくつかの実施形態では、抗体２１Ｂ１２結晶は、六角形の棒形状を示した。
【００１１】
いくつかのまたは任意の実施形態では、本明細書に記載される抗体結晶は、塩の種類により特徴付けられる。抗体２１Ｂ１２結晶の製造に好適な塩としては、以下のうち１種以上が挙げられるが、これらに限定されない：リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二カリウム、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、酒石酸ナトリウムカリウム四水和物、クエン酸ナトリウム二水和物、酢酸ナトリウム三水和物、リン酸水素二アンモニウム、酒石酸ナトリウムカリウム、酢酸カルシウム、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳ、Ｔｒｉｓ、硫酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、硫酸ナトリウム。例えば、抗体２１Ｂ１２結晶の製造のためのその他の塩（水和物を含む）としては、例えば、一価カチオン（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム）または二価カチオン（例えば、亜鉛、マグネシウム、カルシウムを含むがこれらに限定されない）との、その他のリン酸二水素塩、リン酸水素塩、リン酸塩、塩化物塩、硫酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、カコジル酸塩を挙げることができる。いくつかのまたは任意の実施形態では、抗体２１Ｂ１２結晶は、リン酸二水素塩、リン酸水素塩及び／または酒石酸塩を用いて製造される。
【００１２】
いくつかのまたは任意の実施形態では、抗体結晶は、結晶成長及び／または形状に影響を与え得る結晶化添加剤により特徴付けられる。好適な結晶化添加剤としては、沈殿剤、例えば約４００ｋＤ〜約２０，０００ｋＤ、または約１０００ｋＤ〜約５０００ｋＤの分子量を有するＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ３３５０）などが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかのまたは任意の実施形態では、結晶はまた、残留不純物を含む、結晶が製造されるプロセスにより特徴付けられる。いくつかの実施形態では、添加剤（例えば、ＰＥＧ、グリセロール）は、０．１％〜約７５％ｗ／ｖもしくはｖ／ｖ、または約０．１〜５０％、または約０．１〜１０％、または約１０％〜約５０％、または約２０％〜５０％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％である。本発明の別の態様は、本明細書に記載される結晶を作製する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、抗体２１Ｂ１２の溶液と、前述した塩のいずれかを含む適切な塩を含む結晶化試薬、及び／または前述した添加剤のいずれかを含む結晶化添加剤とを組み合わせることを含む。本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、結晶化試薬中の塩は、約０．１Ｍ〜約３０Ｍ、場合により０．１Ｍ〜約１０Ｍ、または約０．１〜約２Ｍ、または約１Ｍ〜約１０Ｍの濃度で存在する。本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、添加剤（例えば、ＰＥＧ、グリセロール）は、約０．１％〜約７５％ｗ／ｖもしくはｖ／ｖ、または約０．１％〜約５０％、または約０．１％〜約１０％、または約１０％〜約５０％、または約２０％〜５０％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％の濃度で存在する。
【００１３】
抗体結晶を作製する方法は、場合により結晶が形成された後に結晶化緩衝液の少なくとも一部を（例えば、遠心分離により）除去することをさらに含む。
【００１４】
抗体結晶を作製する方法は、場合により形成した結晶を（例えば、結晶を空気乾燥すること、または結晶を真空もしくは窒素ガスに曝露することにより）乾燥させるステップをさらに含む。
【００１５】
本明細書に記載される抗体結晶を製造する例示的な方法としては、蒸気拡散及びバッチ結晶化が挙げられ、これらは当該技術分野において既知である。
【００１６】
本明細書に記載される別の態様は、結晶製剤（例えば、粉末結晶製剤及び液体結晶製剤）、及びヒトを含む哺乳動物の治療のための、結晶製剤などの医薬を調製するために、本明細書に記載される抗体結晶を使用する方法である。場合により本明細書に記載される投薬及びタイミングレジメンのいずれかを使用する、本明細書に記載されるいずれかの状態の治療が企図される。結晶製剤は、本明細書に記載される特性（例えば、サイズ、長さ、形状、塩含有量、添加剤含有量、結晶充填またはその他の特性）のうち１つ以上を有する抗体結晶、例えば抗体２１Ｂ１２を含む。
【００１７】
結晶製剤は非経口投与に好適であり、例えば無菌であって、非経口投与に許容されるエンドトキシンレベル、例えば＜０．２５ＥＵ／ｍＬまたは０．００８ＥＵ／ｍｇを有し、薬学的に許容される賦形剤を含む。結晶製剤はまた、好ましくは高タンパク質濃度のもの、例えば、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ  １４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２１０ｍｇ／ｍＬ、２２０ｍｇ／ｍＬ、２３０ｍｇ／ｍＬ、２４０ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、２６０ｍｇ／ｍＬ、２７０ｍｇ／ｍＬ、２８０ｍｇ／ｍＬ、２９０ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、３１０ｍｇ／ｍＬ、３２０ｍｇ／ｍＬ、３３０ｍｇ／ｍＬ、３４０ｍｇ／ｍＬ、３５０ｍｇ／ｍＬ、３６０ｍｇ／ｍＬ、３７０ｍｇ／ｍＬ、３８０ｍｇ／ｍＬ、３９０ｍｇ／ｍＬ、４００ｍｇ／ｍＬ、４１０ｍｇ／ｍＬ、４２０ｍｇ／ｍＬ、４３０ｍｇ／ｍＬ、４４０ｍｇ／ｍＬ、４５０ｍｇ／ｍＬ、４６０ｍｇ／ｍＬ、４８０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬまたはそれを超えるものである。
【００１８】
いくつかのまたは任意の実施形態では、結晶製剤は、アミノ酸、スクロース、トレハロース及びソルビトール、またはその他の糖もしくはポリオールを含むがこれらに限定されない賦形剤を含む。
【００１９】
いくつかのまたは任意の実施形態では、結晶製剤は、約２〜約１２、または約６〜約９、または約６〜８．５、または約７〜約７．５の範囲のｐＨ及び約１８０〜約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２００〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２５０〜約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲のオスモル濃度を有する。等張（２５０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ）及び生理学的ｐＨ（約７〜７．５）が好ましいが、製剤は、結晶が生理学的関連条件で製剤化される限り、これらの範囲外で調製されてよい。
【００２０】
場合により、非経口投与（例えば、皮下または筋肉内）に好適な結晶製剤は、容器内、例えば単回用量バイアル、複数回用量バイアル、シリンジ、プレフィルドシリンジまたは注射デバイス内などにある。いくつかのまたは任意の実施形態では、容器は、単回用量の抗ＰＣＳＫ９抗体（例えば、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体）を含む。例示的な一実施形態では、容器は抗ＰＣＳＫ９抗体の結晶製剤を、約１００ｍｇまたは１１０ｍｇまたは１２０ｍｇ  １３０ｍｇまたは１４０ｍｇまたは１５０ｍｇ  １６０ｍｇまたは１７０ｍｇまたは１８０ｍｇまたは１９０ｍｇまたは２００ｍｇまたは２１０ｍｇまたは２２０ｍｇ  ２３０ｍｇまたは２４０ｍｇまたは２５０ｍｇ  ２６０ｍｇまたは２７０ｍｇまたは２８０ｍｇまたは２９０ｍｇまたは３００ｍｇ含有してよく、約２、３、４、５または６〜最大約１６ｍｇ／ｋｇ体重の単回用量を投与するのに好適であろう。その他の実施形態では、容器は抗ＰＣＳＫ９抗体の結晶製剤を、約１５０ｍｇ、もしくは約１６０ｍｇ、もしくは約１７０ｍｇ、もしくは約１８０ｍｇ、もしくは約１９０ｍｇ、もしくは約２００ｍｇ、もしくは約２１０ｍｇもしくは約２２０ｍｇもしくは約２３０ｍｇ；もしくは約２４０ｍｇ、もしくは約２５０ｍｇ；または約２５０〜４５０ｍｇ；もしくは約２８０ｍｇ、もしくは約２９０ｍｇもしくは約３００ｍｇ、もしくは約３５０ｍｇもしくは約３６０ｍｇ；もしくは約４２０ｍｇもしくは約４３０ｍｇもしくは約４４０ｍｇもしくは約４５０ｍｇ；または約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ；もしくは約５５０ｍｇ、もしくは約６００ｍｇ、もしくは約７００ｍｇ、もしくは約８００ｍｇ、もしくは約９００ｍｇ、もしくは約１０００ｍｇ、もしくは約１１００ｍｇ、もしくは約１２００ｍｇ含有してよい。このような実施形態のいずれにおいても、容器は、約２、３、４、５または６〜最大約１６ｍｇ／ｋｇ体重の単回用量を投与するのに好適であってよい。これらの実施形態のいずれにおいても、容器は、本明細書に記載されるものなどの高タンパク質濃度で抗体を含んでよい。これらの実施形態のいずれにおいても、容器は粉末製剤を含んでよく、約０．５〜２ｍＬの体積での再構成用であってよい。
【００２１】
上記粉末製剤のいずれかを再構成する方法であって、本明細書に記載されるものなどの高タンパク質構成を達成するために、滅菌希釈剤を添加することを含む方法もまた開示される。
【００２２】
このような容器、及び約１００ｍｇ〜約１２００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体、または約２〜１６ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量を達成するのに必要な、適切な体積または量の結晶製剤を使用するための説明書を含むラベルを含むキットもまた、本明細書で開示される。
【００２３】
室温で少なくとも１か月、３か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、１８か月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年またはそれを超えて安定である結晶製剤（例えば、粉末結晶製剤及び／または液体結晶製剤）もまた、本明細書で開示される。いくつかの実施形態では、結晶製剤は抗体２１Ｂ１２結晶を含み、製剤は室温で少なくとも１か月、３か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１年、１８か月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年またはそれを超えて安定である。
【００２４】
コレステロール関連障害を処置及び／または予防するために本明細書に記載される製剤を使用する方法もまた、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、「コレステロール関連障害」（「血清コレステロール関連障害」を含む）としては、以下：家族性高コレステロール血症、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心疾患、メタボリックシンドローム、糖尿病、冠動脈性心疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病及び一般的な脂質異常症のうちいずれか１つ以上が挙げられ、これらは例えば、血清総コレステロールの上昇、ＬＤＬの上昇、トリグリセリドの上昇、ＶＬＤＬの上昇、及び／または低ＨＤＬによって示され得る。本明細書に記載する製剤を、単独でまたは１種以上のその他の薬剤と組み合わせたいずれかで使用して処置され得る、原発性及び続発性脂質異常症のいくつかの非限定的例としては、メタボリックシンドローム、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、ヘテロ接合型高コレステロール血症、ホモ接合型高コレステロール血症、家族性欠陥アポプリポタンパク質（ａｐｏｐｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）Ｂ−１００；多遺伝子性高コレステロール血症を含む、家族性高コレステロール血症；レムナント除去病、肝性リパーゼ欠損症；以下：食傷、甲状腺機能低下症、エストロゲン及びプロゲスチン療法を含む薬物、ベータ遮断薬、及びチアジド利尿薬のうちいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、ヘパトーマ、胆汁鬱滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、ならびにアルコール誘発性高トリグリセリド血症が挙げられる。本明細書に記載される製剤は、アテローム性動脈硬化疾患、例えば、心血管死亡、非心血管死亡または全死因死亡、冠動脈性心疾患、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、または脳血管疾患及び急性冠症候群、心筋梗塞ならびに不安定狭心症などの予防または処置にも有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される製剤は、致死性及び非致死性心臓発作、致死性及び非致死性脳卒中、ある特定の種類の心臓手術、心不全のための入院、心疾患に罹患している患者の胸痛、ならびに／または既存の心疾患、例えば以前の心臓発作、以前の心臓手術などによる心血管イベント、ならびに／または閉塞動脈の徴候を有する胸痛ならびに／または移植関連血管疾患のリスクを減少させるのに有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される製剤は、ＣＲＰまたはｈｓＣＲＰの上昇による心血管リスクを予防する、または減少させるのに有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される製剤は、再発性心血管イベントのリスクを減少させるために使用され得る。コレステロール関連障害を処置または予防するための抗ＰＣＳＫ９抗体の例示的な用量は、約１００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、もしくは約２２０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、もしくは約２８０ｍｇ〜約４５０ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体または１ｍｇ／ｋｇ〜約１６ｍｇ／ｋｇ、もしくは約３ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋ、もしくは約５〜７ｍｇ／ｋｇ体重の抗ＰＣＳＫ９抗体の範囲である。
【００２５】
当業者には理解されるように、スタチンの使用により一般に対処可能な（処置可能または予防可能ないずれかの）疾患または障害は、本明細書に記載される製剤の適用からも恩恵を受け得る。加えて、いくつかの実施形態では、コレステロール合成の予防またはＬＤＬＲ発現の増加から恩恵を受け得る障害または疾患も、本明細書に記載される製剤により処置され得る。加えて、当業者には理解されるように、本明細書に記載される製剤の使用は、糖尿病の処置に特に有用であり得る。糖尿病は、冠動脈性心疾患のリスク因子であるだけでなく、インスリンがＰＣＳＫ９の発現を増加させる。すなわち、糖尿病に罹患している人々は、（高ＰＣＳＫ９レベルに関連し得る）上昇した血漿脂質レベルを有し、これらのレベルの低下から恩恵を受け得る。これは一般に、Ｃｏｓｔｅｔら（「Ｈｅｐａｔｉｃ  ＰＣＳＫ９  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｔｕｓ  ｖｉａ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｎｄ  Ｓｔｅｒｏｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  １Ｃ」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１：６２１１−６２１８，２００６）でより詳細に述べられ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００２６】
別の態様では、哺乳動物対象における血清ＬＤＬコレステロールレベルを低下させる方法であって、本明細書に記載される結晶製剤を、投薬前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比較した場合に血清ＬＤＬコレステロールレベルを低下させるのに効果的な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象における血清ＬＤＬコレステロールレベルは、投薬前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比較した場合に少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、血清ＬＤＬコレステロールレベルが減少し、この減少は、少なくとも約７日間、２週間、３週間、４週間、１か月、５週間、６週間、７週間、８週間、２か月、３か月またはそれを超える期間持続する。
【００２７】
別の態様では、哺乳動物対象におけるＰＣＳＫ９値を低下させる方法であって、本明細書に記載される結晶製剤を、投薬前のＰＣＳＫ９値と比較した場合にＰＣＳＫ９値を低下させるのに効果的な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象におけるＰＣＳＫ９値は、投薬前のＰＣＳＫ９値と比較した場合に少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、ＰＣＳＫ９値が減少し、この減少は、少なくとも約７日間、２週間、３週間、４週間、１か月、５週間、６週間、７週間、８週間、２か月、３か月またはそれを超える期間持続する。
【００２８】
別の態様では、哺乳動物対象における総コレステロールレベルを低下させる方法であって、本明細書に記載される結晶製剤を、投薬前の総コレステロールレベルと比較した場合に総コレステロールレベルを低下させるのに効果的な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象における総コレステロールレベルは、投薬前の総コレステロールレベルと比較した場合に少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、総コレステロールレベルが減少し、この減少は、少なくとも約７日間、２週間、３週間、４週間、１か月、５週間、６週間、７週間、８週間、２か月、３か月またはそれを超える期間持続する。
【００２９】
別の態様では、哺乳動物対象における非ＨＤＬコレステロールレベルを低下させる方法であって、本明細書に記載される結晶製剤を、投薬前の非ＨＤＬコレステロールレベルと比較した場合に非ＨＤＬコレステロールレベルを低下させるのに効果的な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象における総コレステロールレベルは、投薬前の非ＨＤＬコレステロールレベルと比較した場合に少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、非ＨＤＬコレステロールレベルが減少し、この減少は、少なくとも約７日間、２週間、３週間、４週間、１か月、５週間、６週間、７週間、８週間、２か月、３か月またはそれを超える期間持続する。
【００３０】
別の態様では、哺乳動物対象におけるＡｐｏＢレベルを低下させる方法であって、本明細書に記載される結晶製剤を、投薬前のＡｐｏＢレベルと比較した場合にＡｐｏＢレベルを低下させるのに効果的な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象におけるＡｐｏＢレベルは、投薬前のＡｐｏＢレベルと比較した場合に少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、ＡｐｏＢレベルが減少し、この減少は、少なくとも約７日間、２週間、３週間、４週間、１か月、５週間、６週間、７週間、８週間、２か月、３か月またはそれを超える期間持続する。
【００３１】
別の態様では、哺乳動物対象におけるリポタンパク質Ａ（「Ｌｐ（ａ）」レベルを低下させる方法であって、本明細書に記載される結晶製剤を、投薬前のＬｐ（ａ）レベルと比較した場合にＬｐ（ａ）レベルを低下させるのに効果的な量で哺乳動物対象に投与することを含む方法が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、哺乳動物対象におけるＬｐ（ａ）レベルは、投薬前のＬｐ（ａ）レベルと比較した場合に少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、またはそれを超えて減少する。いくつかの実施形態では、Ｌｐ（ａ）レベルが減少し、この減少は、少なくとも約７日間、２週間、３週間、４週間、１か月、５週間、６週間、７週間、８週間、２か月、３か月またはそれを超える期間持続する。
【００３２】
本明細書における様々な実施形態は、「を含む」という言語を使用して提示されるが、様々な状況下において、関連実施形態はまた「から成る」または「から本質的に成る」という言語を使用して記載されてよいと、理解されるべきである。「ａ」または「ａｎ」という用語は１つ以上を指し、例えば「ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ」は、１つ以上の免疫グロブリン分子を表すと理解されることに留意すべきである。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上の（ｏｎｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）」、及び「少なくとも１つの（ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ）」という用語は、本明細書において同じ意味で使用され得る。
【００３３】
値の範囲を記載する場合、記載されている特徴は、その範囲内に見出される個々の値であり得ることもまた理解されるべきである。例えば、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、ｐＨ４、４．２、４．６、５．１、５．５など、及びこのような値の間における任意の値であり得るが、これらに限定されない。さらに、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、問題となっている製剤のｐＨが、保存中にｐＨ４〜ｐＨ６の範囲で２ｐＨ単位変動することを意味すると解釈されるべきではなく、むしろ値は溶液のｐＨのその範囲内で選択されてよく、ｐＨはほぼそのｐＨで緩衝を維持する。いくつかの実施形態において、「約（ａｂｏｕｔ）」という用語が使用される場合、これは列挙された数字のプラスマイナス５％、１０％、１５％またはそれを超えるその列挙された数字を意味する。意図される実際の変動は、文脈から決定できる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
配列番号９におけるＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）、配列番号９におけるＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２、及び配列番号９におけるＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、ならびに配列番号５におけるＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、配列番号５におけるＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２、及び配列番号５におけるＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３を含む、抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧ抗体の結晶。
（項目２）
前記抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧ抗体が、配列番号９または配列番号１１の軽鎖可変領域と少なくとも９０％同一である軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７の重鎖可変領域と少なくとも９０％同一である重鎖可変領域を含む、項目１に記載の結晶。
（項目３）
前記抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧ抗体が、配列番号９または配列番号１１に示される前記アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７に示される前記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目２に記載の結晶。
（項目４）
前記結晶が、約５μＭ〜約５０μＭの長さを有する、項目１〜４に記載の結晶。
（項目５）
前記結晶が、棒及び針から成る群から選択される形状を有する、項目１〜４に記載の結晶。
（項目６）
前記結晶が、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二カリウム、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、酒石酸ナトリウムカリウム四水和物、クエン酸ナトリウム二水和物、酢酸ナトリウム三水和物、リン酸水素二アンモニウム、酒石酸ナトリウムカリウム、酢酸カルシウム、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳ、Ｔｒｉｓ、硫酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、硫酸ナトリウムから成る群から選択される塩を含む、先行項目のいずれかに記載の結晶。
（項目７）
抗体２１Ｂ１２の結晶の作製方法であって、抗体２１Ｂ１２の溶液と、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二カリウム、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、酒石酸ナトリウムカリウム四水和物、クエン酸ナトリウム二水和物、酢酸ナトリウム三水和物、リン酸水素二アンモニウム、酒石酸ナトリウムカリウム、酢酸カルシウム、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳ、Ｔｒｉｓ、硫酸リチウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、硫酸ナトリウムから成る群から選択される塩を含む結晶化試薬とを組み合わせることを含む、前記方法。
（項目８）
前記結晶化緩衝液中の塩の濃度が、約０．１Ｍ〜約１０Ｍである、項目７に記載の方法。（項目９）
結晶が形成した後に前記結晶化緩衝液の少なくとも一部を除去することをさらに含む、項目７に記載の方法。
（項目１０）
結晶化緩衝液の前記部分が、遠心分離により除去される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記結晶が、有機添加剤を含有する溶液中に置かれる、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記溶液への賦形剤の添加をさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
形成した結晶を乾燥させることをさらに含む、項目７に記載の方法。
（項目１４）
前記結晶が、空気への曝露により、または真空への曝露により、または窒素ガスへの曝露により乾燥される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
項目７に記載の方法により製造される２１Ｂ１２抗体結晶。
（項目１６）
抗体２１Ｂ１２の結晶製剤。
（項目１７）
哺乳動物対象における血清ＬＤＬコレステロールの低下方法または血清ＬＤＬコレステロールのレベル増加と関連する障害の処置方法であって、先行項目のいずれかに記載の結晶または結晶製剤を、投薬前の血清ＬＤＬコレステロールレベルと比較した場合に、前記対象における血清ＬＤＬコレステロールレベルを低下させるのに効果的な量で投与することを含む、前記方法。
【００３４】
本明細書に記載される範囲のいずれにおいても、範囲の端点はその範囲に含まれる。しかしながら、本記載は、下限及び／または上限の端点が除外される同じ範囲も企図する。本発明の追加の特性及び変化形態は、図面及び詳細な説明を含む、本出願の全体から当業者には明らかであり、このような特性は全て、本発明の態様として意図される。同様に、本明細書に記載される本発明の特性は、特性の組み合わせが本発明の態様または実施形態として上で具体的に言及されているか否かに関係なく、本発明の態様としても意図される追加の実施形態に再び組み合わされ得る。また、本発明にとって重要であると本明細書に記載されるこのような限定のみが、そのようなものとして見なされるべきであり；重要であると本明細書に記載されていない限定を欠く本発明の変化形態は、本発明の態様として意図される。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１Ａ】下線が引かれたプロドメインを有するＰＣＳＫ９の成熟型のアミノ酸配列を図示する。
【図１Ｂ−１】図１Ｂ１〜図１Ｂ４は、下線が引かれたプロドメイン及び太字のシグナル配列を有するＰＣＳＫ９のアミノ酸配列及び核酸配列を図示する。
【図１Ｂ−２】図１Ｂ１〜図１Ｂ４は、下線が引かれたプロドメイン及び太字のシグナル配列を有するＰＣＳＫ９のアミノ酸配列及び核酸配列を図示する。
【図１Ｂ−３】図１Ｂ１〜図１Ｂ４は、下線が引かれたプロドメイン及び太字のシグナル配列を有するＰＣＳＫ９のアミノ酸配列及び核酸配列を図示する。
【図１Ｂ−４】図１Ｂ１〜図１Ｂ４は、下線が引かれたプロドメイン及び太字のシグナル配列を有するＰＣＳＫ９のアミノ酸配列及び核酸配列を図示する。
【図２Ａ】図２Ａ及び図２Ｂは、抗体２１Ｂ１２の可変ドメインのアミノ酸配列及び核酸配列を図示し、ＣＤＲは下線が引かれている、及び／または四角く囲まれている。
【図２Ｂ】図２Ａ及び図２Ｂは、抗体２１Ｂ１２の可変ドメインのアミノ酸配列及び核酸配列を図示し、ＣＤＲは下線が引かれている、及び／または四角く囲まれている。
【図３】様々な定常ドメインのアミノ酸配列を図示する。
【図４Ａ】図４Ａ及び図４Ｂは、抗体２１Ｂ１２の成熟重鎖及び成熟軽鎖のアミノ酸配列を図示する。
【図４Ｂ】図４Ａ及び図４Ｂは、抗体２１Ｂ１２の成熟重鎖及び成熟軽鎖のアミノ酸配列を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
抗ＰＣＳＫ９免疫グロブリンＧ型（ＩｇＧ）抗体の結晶が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９免疫グロブリンＧ型（ＩｇＧ）抗体の結晶は、非経口投与用の結晶製剤での使用に好適である。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９免疫グロブリンＧ型（ＩｇＧ）抗体の結晶は、精製及び原薬保存に好適である。医薬として使用するための結晶製剤を調製するために、このような抗ＰＣＳＫ９免疫グロブリンＧ型（ＩｇＧ）抗体の結晶を使用する方法；高濃度の結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体を含む製剤、これらの製剤を処置に使用する方法、これらの製剤を、例えば皮下または筋肉内に投与する方法、及びこれらの製剤を含む容器またはキットもまた、本明細書に記載される。
【００３７】
Ｉ．製剤中の抗体
いくつかの実施形態では、製剤中の抗ＰＣＳＫ９抗体は、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、約１０１ｍｇ／ｍｌ、約１０２ｍｇ／ｍｌ、約１０３ｍｇ／ｍｌ、約１０４ｍｇ／ｍｌ、約１０５ｍｇ／ｍｌ、約１０６ｍｇ／ｍｌ、約１０７ｍｇ／ｍｌ、約１０８ｍｇ／ｍｌ、約１０９ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１１１ｍｇ／ｍｌ、約１１２ｍｇ／ｍｌ、約１１３ｍｇ／ｍｌ、約１１４ｍｇ／ｍｌ、約１１５ｍｇ／ｍｌ、約１１６ｍｇ／ｍｌ、約１１７ｍｇ／ｍｌ、約１１８ｍｇ／ｍｌ、約１１９ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１２１ｍｇ／ｍｌ、約１２２ｍｇ／ｍｌ、約１２３ｍｇ／ｍｌ、約１２４ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１２６ｍｇ／ｍｌ、約１２７ｍｇ／ｍｌ、約１２８ｍｇ／ｍｌ、約１２９ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１３１ｍｇ／ｍｌ、約１３２ｍｇ／ｍｌ、約１３２ｍｇ／ｍｌ、約１３３ｍｇ／ｍｌ、約１３４ｍｇ／ｍｌ、約１３５ｍｇ／ｍｌ、約１３６ｍｇ／ｍｌ、約１３７ｍｇ／ｍｌ、約１３８ｍｇ／ｍｌ、約１３９ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、約１４１ｍｇ／ｍｌ、約１４２ｍｇ／ｍｌ、約１４３ｍｇ／ｍｌ、約１４４ｍｇ／ｍｌ、約１４５ｍｇ／ｍｌ、約１４６ｍｇ／ｍｌ、約１４７ｍｇ／ｍｌ、約１４８ｍｇ／ｍｌ、約１４９ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ、約１５１ｍｇ／ｍｌ、約１５２ｍｇ／ｍｌ、約１５３ｍｇ／ｍｌ、約１５４ｍｇ／ｍｌ、約１５５ｍｇ／ｍｌ、約１５６ｍｇ／ｍｌ、約１５７ｍｇ／ｍｌ、約１５８ｍｇ／ｍｌ、約１５９ｍｇ／ｍｌ、約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１６１ｍｇ／ｍｌ、約１６２ｍｇ／ｍｌ、約１６３ｍｇ／ｍｌ、約１６４ｍｇ／ｍｌ、約１６５ｍｇ／ｍｌ、約１６６ｍｇ／ｍｌ、約１６７ｍｇ／ｍｌ、約１６８ｍｇ／ｍｌ、約１６９ｍｇ／ｍｌ、約１７０ｍｇ／ｍｌ、約１７１ｍｇ／ｍｌ、約１７２ｍｇ／ｍｌ、約１７３ｍｇ／ｍｌ、約１７４ｍｇ／ｍｌ、約１７５ｍｇ／ｍｌ、約１７６ｍｇ／ｍｌ、約１７７ｍｇ／ｍｌ、約１７８ｍｇ／ｍｌ、約１７９ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ、約１８１ｍｇ／ｍｌ、約１８２ｍｇ／ｍｌ、約１８３ｍｇ／ｍｌ、約１８４ｍｇ／ｍｌ、約１８５ｍｇ／ｍｌ、約１８６ｍｇ／ｍｌ、約１８７ｍｇ／ｍｌ、約１８８ｍｇ／ｍｌ、約１８９ｍｇ／ｍｌ、約１９０ｍｇ／ｍｌ、約１９１ｍｇ／ｍｌ、約１９２ｍｇ／ｍｌ、約１９３ｍｇ／ｍｌ、約１９４ｍｇ／ｍｌ、約１９５ｍｇ／ｍｌ、約１９６ｍｇ／ｍｌ、約１９７ｍｇ／ｍｌ、約１９８ｍｇ／ｍｌ、約１９９ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、約２０１ｍｇ／ｍｌ、約２０２ｍｇ／ｍｌ、約２０３ｍｇ／ｍｌ、約２０４ｍｇ／ｍｌ、約２０５ｍｇ／ｍｌ、約２０６ｍｇ／ｍｌ、約２０７ｍｇ／ｍｌ、約２０８ｍｇ／ｍｌ、約２０９ｍｇ／ｍｌ、約２１０ｍｇ／ｍｌ、約２１１ｍｇ／ｍｌ、約２１２ｍｇ／ｍｌ、約２１３ｍｇ／ｍｌ、約２１４ｍｇ／ｍｌ、約２１５ｍｇ／ｍｌ、約２１６ｍｇ／ｍｌ、約２１７ｍｇ／ｍｌ、約２１８ｍｇ／ｍｌ、約２１９ｍｇ／ｍｌ、約２２０ｍｇ／ｍｌ、約２２１ｍｇ／ｍｌ、約２２２ｍｇ／ｍｌ、約２２３ｍｇ／ｍｌ、約２２４ｍｇ／ｍｌ、約２２５ｍｇ／ｍｌ、約２２６ｍｇ／ｍｌ、約２２７ｍｇ／ｍｌ、約２２８ｍｇ／ｍｌ、約２２９ｍｇ／ｍｌ、約２３０ｍｇ／ｍｌ、約２３１ｍｇ／ｍｌ、約２３２ｍｇ／ｍｌ、約２３２ｍｇ／ｍｌ、約２３３ｍｇ／ｍｌ、約２３４ｍｇ／ｍｌ、約２３５ｍｇ／ｍｌ、約２３６ｍｇ／ｍｌ、約２３７ｍｇ／ｍｌ、約２３８ｍｇ／ｍｌ、約２３９ｍｇ／ｍｌ、約２４０ｍｇ／ｍｌ、約２４１ｍｇ／ｍｌ、約２４２ｍｇ／ｍｌ、約２４３ｍｇ／ｍｌ、約２４４ｍｇ／ｍｌ、約２４５ｍｇ／ｍｌ、約２４６ｍｇ／ｍｌ、約２４７ｍｇ／ｍｌ、約２４８ｍｇ／ｍｌ、約２４９ｍｇ／ｍｌ、約２５０ｍｇ／ｍｌの濃度（「高タンパク質濃度」）で存在し、最大で、例えば約４５０ｍｇ／ｍｌ、約４４０ｍｇ／ｍｌ、４３０ｍｇ／ｍｌ、４２０ｍｇ／ｍｌ、４１０ｍｇ／ｍｌ、４００ｍｇ／ｍｌ、約３９０ｍｇ／ｍｌ、約３８０ｍｇ／ｍｌ、約３７０ｍｇ／ｍｌ、約３６０ｍｇ／ｍｌ、約３５０ｍｇ／ｍｌ、約３４０ｍｇ／ｍｌ、約３３０ｍｇ／ｍｌ、約３２０ｍｇ／ｍｌ、約３１０ｍｇ／ｍｌ、約３００ｍｇ／ｍｌ、約２９０ｍｇ／ｍｌ、約２８０ｍｇ／ｍｌ、約２７０ｍｇ／ｍｌ、または約２６０ｍｇ／ｍｌの範囲であってよい。上記端点の組み合わせを特徴とする任意の範囲が企図され、約７０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ〜約３００ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌ〜約３２０ｍｇ／ｍｌまたは約１５０ｍｇ／ｍｌ〜約３５０ｍｇ／ｍｌを含むが、これらに限定されない。
【００３８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、抗体２１Ｂ１２である。抗体２１Ｂ１２は、米国特許第ＵＳ８，０３０，４５７号に前述されていて、配列表を含むその開示全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【００３９】
本明細書に記載される抗ＰＣＳＫ９抗体は、１０−６以下、または１０−７以下、または１０−８以下、または１０−９以下のＫＤ（より小さい数値が、より高い結合親和性を意味する）で、配列番号１のＰＣＳＫ９に結合する。親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ技術によるものを含む、当該技術分野において既知の任意の手段により決定され得る。
【００４０】
「２１Ｂ１２抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、２本の軽鎖及び２本の重鎖で構成されるＩｇＧ免疫グロブリンを指し、軽鎖は、配列番号９におけるＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）、配列番号９におけるＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２、及び配列番号９におけるＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３を含み、重鎖は、配列番号５におけるＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、配列番号５におけるＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２、及び配列番号５におけるＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３を含む。いくつかのその他の実施形態では、抗体は、配列番号１１におけるＣＤＲＬ１配列の軽鎖相補性領域（ＣＤＲ）、配列番号１１におけるＣＤＲＬ２配列のＣＤＲＬ２、及び配列番号１１におけるＣＤＲＬ３配列のＣＤＲＬ３、ならびに配列番号７におけるＣＤＲＨ１配列の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、配列番号７におけるＣＤＲＨ２配列のＣＤＲＨ２、及び配列番号７におけるＣＤＲＨ３配列のＣＤＲＨ３を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、２１Ｂ１２抗体は、配列番号２４（２１Ｂ１２  ＣＤＲＬ１）、及び配列番号２５（２１Ｂ１２  ＣＤＲＬ２）、及び配列番号２６（２１Ｂ１２  ＣＤＲＬ３）ならびに配列番号２０または配列番号２１（２１Ｂ１２  ＣＤＲＨ１）、及び配列番号２２（２１Ｂ１２  ＣＤＲＨ２）、及び配列番号２３（２１Ｂ１２  ＣＤＲＨ３）のアミノ酸配列を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９  ＩｇＧ抗体は、抗体２１Ｂ１２と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の配列同一性を有する、抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号５または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含むＩｇＧである。
【００４２】
いくつかの実施形態では、２１Ｂ１２抗体の軽鎖は、配列番号９または配列番号１１（２１Ｂ１２軽鎖可変領域）のアミノ酸配列を含み、２１Ｂ１２抗体の重鎖は、配列番号５または配列番号７（２１Ｂ１２重鎖可変ドメイン）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、２１Ｂ１２抗体の軽鎖は、配列番号９（２１Ｂ１２軽鎖可変領域）のアミノ酸配列を含み、２１Ｂ１２抗体の重鎖は、配列番号５（２１Ｂ１２重鎖可変領域）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、２１Ｂ１２抗体の軽鎖は、配列番号１１（２１Ｂ１２軽鎖可変領域）のアミノ酸配列を含み、２１Ｂ１２抗体の重鎖は、配列番号７（２１Ｂ１２重鎖可変領域）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は軽鎖定常領域に融合され、重鎖可変領域はＩｇＧ定常領域に融合される。いくつかの実施形態では、２１Ｂ１２抗体は、抗体２１Ｂ１２の重鎖及び／または軽鎖可変領域、すなわちアイソタイプＩｇＧ１、２、３もしくは４のヒト重鎖定常領域に融合される配列番号５（２１Ｂ１２重鎖可変領域）（例えば、天然、コンセンサスまたは修飾されていて、結合に影響しないことが知られている多数の修飾が当該技術分野において既知である）、及び／もしくはヒト軽鎖定常領域に融合される配列番号９（２１Ｂ１２軽鎖可変領域）（例えば、天然、コンセンサスまたは修飾されていて、結合に影響しないことが知られている多数の修飾が当該技術分野において既知である）、またはアイソタイプＩｇＧ１、２、３もしくは４のヒト重鎖定常領域に融合される配列番号７（２１Ｂ１２重鎖可変領域）、及び／もしくはヒト軽鎖定常領域に融合される配列番号１１（２１Ｂ１２軽鎖可変領域）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体２１Ｂ１２の成熟重鎖及び軽鎖（配列番号１６または１７の２１Ｂ１２成熟軽鎖及び配列番号１８または１９の２１Ｂ１２成熟重鎖）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１６及び配列番号１８を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１７及び配列番号１９を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、抗体は、哺乳動物宿主細胞において、抗体２１Ｂ１２の重鎖及び／もしくは軽鎖、またはあるいは重鎖及び／もしくは軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡを発現することにより得ることができるアミノ酸配列を含む。「抗体」という用語は、インタクトな免疫グロブリン、例えばＩｇＧの場合、２本の重鎖及び２本の軽鎖で構成される四量体免疫グロブリン（例えば、好ましくは全長重鎖及び／または軽鎖を有し、場合により抗ＰＣＳＫ９結合特性を保持するフレームワークまたは定常領域内に変異を有する、キメラ、ヒト化、またはヒト型）を指す。
【００４４】
「単離」抗体は、その用語が本明細書で定義される場合、その自然環境の成分から同定及び分離された抗体を指す。その自然環境の汚染成分は、抗体の診断または治療的使用に干渉するであろう材料であり、酵素、ホルモン、及びその他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含む場合がある。ある種の実施形態では、抗体は、（１）９５重量％超の抗体、最も好ましくは９９重量％超まで、（２）Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー、もしくは好ましくは銀染色を使用した還元もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製されるだろう。単離した天然に存在する抗体は、組換え細胞内でｉｎ  ｓｉｔｕの抗体を含み、これは抗体の自然環境の少なくとも１種の成分が存在しないだろうからである。しかしながら、通常、単離抗体は少なくとも１つの精製ステップにより調製されるだろう。
【００４５】
「モノクローナル」抗体は、多様なエピトープと結合する多様な配列の抗体の混合集団を指す「ポリクローナル」抗体と比較して、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、少量で存在する場合もある天然に存在し得る変異を除いては集団に含まれる個々の抗体が同一である。「ヒト化抗体」という語句は、配列をよりヒト様にする修飾を含む非ヒト抗体、典型的にはげっ歯類モノクローナル抗体の配列に由来する抗体を指す。あるいは、ヒト化抗体はキメラ抗体に由来してよい。「ヒト」抗体という語句は、例えば、ファージディスプレイなどの既知の技術によりヒト抗体遺伝子のライブラリーをスクリーニングすることによってヒト配列に由来する抗体、または内因性免疫グロブリン産生を全く有さず、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するように操作されたトランスジェニック動物を使用して産生される抗体を指す。
【００４６】
「免疫グロブリンＧ」または「天然ＩｇＧ抗体」は、四量体糖タンパク質である。天然に存在する免疫グロブリンでは、各四量体は２つの同一のポリペプチド鎖対で構成され、各対は１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識に関与する約１００〜１１０以上のアミノ酸の「可変」（「Ｖ」）領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能に関与する定常領域を定義する。免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインにおけるアミノ酸配列に応じて異なるクラスに割り当てられ得る。重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（Δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）、及びイプシロン（ε）に分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥと定義する。これらのいくつかは、さらにサブクラスまたはアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分けられてよい。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有し；例えば、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。ヒト軽鎖は、カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖に分類される。軽鎖及び重鎖内において、可変領域及び定常領域は、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結され、重鎖はさらに約１０のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。
【００４７】
「超可変」領域という用語は、相補性決定領域すなわちＣＤＲからのアミノ酸残基（すなわち、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）により記載されているような、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインにおける３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）及び９５〜１０２（Ｈ３））を指す。「フレームワーク」すなわちＦＲ残基は、超可変領域残基以外のそれらの可変領域残基である。
【００４８】
「バリアント」という用語は、抗体に関連して使用される場合、可変領域または可変領域と同等の部分に少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する、抗体のポリペプチド配列を指すが、ただし、バリアントが所望の結合親和性または生物活性を保持することを条件とする。加えて、本明細書に記載されるような抗体は、半減期もしくはクリアランス、ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性を含む、抗体のエフェクター機能を修飾するアミノ酸修飾を定常領域に有してよい。このような修飾は、例えば、薬物動態を増強する、または癌の処置における抗体の有効性を増強し得る。Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１−６６０４（２００１）（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。ＩｇＧ１の場合、定常領域、特にヒンジまたはＣＨ２領域に対する修飾は、ＡＤＣＣ及び／またはＣＤＣ活性を含むエフェクター機能を増加または低減させる場合がある。その他の実施形態では、ＩｇＧ２定常領域は、抗体−抗原凝集体形成を低減させるように修飾される。ＩｇＧ４の場合、定常領域、特にヒンジ領域に対する修飾は、半抗体の形成を減少させる場合がある。
【００４９】
「修飾」という用語は、本明細書に記載される抗体またはポリペプチドに関連して使用される場合、１つ以上のアミノ酸変化（置換、挿入または欠失を含む）；ＰＣＳＫ９結合活性に干渉しない化学修飾；治療剤または診断剤への複合化；標識化（例えば、放射性核種または様々な酵素による）；ＰＥＧ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）などの共有ポリマー結合及び非天然アミノ酸の化学合成による挿入または置換による共有結合修飾を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の修飾ポリペプチド（抗体を含む）は、本発明の非修飾分子の結合特性を保持するだろう。
【００５０】
「誘導体」という用語は、本発明の抗体またはポリペプチドに関連して使用される場合、治療剤または診断剤への複合化、標識化（例えば、放射性核種または様々な酵素による）、ＰＥＧ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）などの共有ポリマー結合及び非天然アミノ酸の化学合成による挿入または置換によって共有結合修飾された抗体またはポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、本発明の誘導体は、本発明の非誘導体化分子の結合特性を保持するだろう。
【００５１】
タンパク質及び非タンパク質薬剤は、当該技術分野において既知の方法によって抗体に複合化されてよい。複合化方法としては、直接連結、共有結合したリンカーによる連結、及び特異的結合対要素（例えば、アビジン−ビオチン）が挙げられる。このような方法としては、例えば、ドキソルビシンの複合化については、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０，６６００−６６０７（１９９０）により記載されているもの、ならびに白金化合物の複合化については、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３０３，７９−９０（１９９１）により、及びＫｉｓｅｌｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（ＵＳＳＲ）２５，５０８−５１４（１９９１）により記載されているものが挙げられる。
【００５２】
ＩＩ．結晶、結晶製剤及び組成物の製造
ポリペプチド結晶は、水溶液から、または有機溶媒もしくは添加剤を含有する水溶液からの制御されたポリペプチド結晶化により成長する。制御されてよい溶液条件としては、例えば、溶媒、有機溶媒または添加剤の蒸発速度、適切な共溶質及び緩衝剤の存在、ｐＨ、ならびに温度が挙げられる。タンパク質の結晶化に影響する様々な要因の包括的な概説は、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ（１９８５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １１４：１１２−１２０）により公開されている。加えて、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ及びＧｉｌｌｉｌａｎｄ（１９８８，Ｊ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ，９０：５１−５９）は、結晶化したポリペプチド、ならびにそれらが結晶化した条件の包括的な一覧表を編集した。結晶及び結晶化手法の概要、ならびに解析済みのタンパク質構造の座標に関するリポジトリは、ブルックヘブン国立研究所のＰｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｐｄｂ／；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １１２：５３５−５４２）により維持されている。しかしながら、上に引用した参考文献の多くで報告されている条件は、ほとんどの場合、いくつかの大きな回折品質の結晶を生じるように最適化されていることに留意すべきである。したがって、これらの条件はタンパク質ごとに変動し、任意の所与のポリペプチド結晶を大規模製造するための高収率プロセスを提供する訳ではないことが、当業者には理解されるだろう。
【００５３】
一般に結晶は、結晶化されるポリペプチド（すなわち、抗体）と、適切な水性溶媒または適切な結晶化剤、例えば塩もしくは有機溶媒もしくは添加剤などを含有する水性溶媒（総じて「結晶化試薬」）とを組み合わせることにより製造される。溶媒はポリペプチドと組み合わされ、結晶化の誘導に適切であって、ポリペプチド活性及び安定性の維持に許容されるように実験的に決定される温度で攪拌を行ってよい。結晶化の実験室規模での方法としては、ハンギングドロップ蒸気拡散、シッティングドロップ蒸気拡散、微量透析、マイクロバッチ、オイル下、ゲル中及びサンドイッチドロップ法が挙げられる。溶媒は、場合により共結晶化添加剤、例えば沈殿剤、脂肪酸、還元剤、グリセロール、スルホベタイン、界面活性剤、ポリオール、二価カチオン、補因子、またはカオトロープ、及びアミノ酸など、ならびにｐＨを制御するための緩衝剤種を含み得る。
【００５４】
「共結晶化添加剤」は、ポリペプチドの結晶化を促進する化合物及び／またはタンパク質を安定させて変性から保護する化合物を含む。共溶質の例としては、酢酸アンモニウム、塩化アンモニウム、フッ化アンモニウム、ギ酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化カドミウム、硫酸カドミウム、酢酸カルシウム、塩化カルシウム、塩化セシウム、塩化コバルト、ＣＨ３（ＣＨ２）１５Ｎ（ＣＨ３）３＋Ｂｒ．−（ＣＴＡＢ）、クエン酸二アンモニウム、リン酸水素二アンモニウム、リン酸二アンモニウム、酒石酸二アンモニウム、リン酸二カリウム、リン酸二ナトリウム、酒石酸二ナトリウム、ＤＬ−リンゴ酸、塩化第二鉄、Ｌ−プロリン、酢酸リチウム、塩化リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウム、酢酸マグネシウム、塩化マグネシウム、ギ酸マグネシウム、硝酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ニッケル、酢酸カリウム、臭化カリウム、塩化カリウム、クエン酸カリウム、フッ化カリウム、ギ酸カリウム、硝酸カリウム、リン酸カリウム、酒石酸ナトリウムカリウム、硫酸カリウム、チオシアン酸カリウム、酢酸ナトリウム、臭化ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、ギ酸ナトリウム、マロン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、チオシアン酸ナトリウム、コハク酸、タクシメート、クエン酸三アンモニウム、クエン酸三リチウム、トリメチルアミンＮ−オキシド、クエン酸三カリウム、クエン酸三ナトリウム、酢酸亜鉛、硫酸亜鉛、及び共溶質を供給するように機能するその他の化合物が挙げられる。「結晶化」は、ポリペプチドの結晶化を促進するために、溶液のｐＨを所望の範囲に維持する化合物を含む。例としては、ＡＣＥＳ（Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸）、ＢＥＳ（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン）、ＢＩＳ−ＴＲＩＳ（２，２−ビス−（ヒドロキシメチル）−２，２’，２’’−ニトリロトリエタノール）、ホウ酸、ＣＡＰＳ（３−［シクロヘキシルアミノ］−１−プロパンスルホン酸）、クエン酸、ＥＰＰＳ（ＨＥＰＰＳ、４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−プロパンスルホン酸）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（ＮＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＯＯＨ、グリシル−グリシン）、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸）、イミダゾール、ＭＥＳ（２−モルホリノエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルホリノ）−プロパンスルホン酸）、ＰＩＰＥＳ（ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸））、塩化カリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム（リン酸二水素ナトリウム）、二塩基性リン酸ナトリウム、ＴＡＰＳ（Ｎ−［トリス−（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプロパンスルホン酸）、ＴＡＰＳＯ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸）、トリシン（Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン）、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ＴＲＩＺＭＡ（２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール）、及び溶液を特定のｐＨにまたはその近傍に維持するように機能するその他の化合物が挙げられる。
【００５５】
沈殿剤の選択は、結晶化に影響する１つの要因である。例として、例えば分子量２００〜２０，０００ｋＤのＰＥＧ生成物が使用され得る。ＰＥＧ３３５０は、体積排除効果により作用する長鎖ポリマー沈殿剤または脱水剤である。硫酸アンモニウムなどのリオトロピック塩は、カプリル酸などの短鎖脂肪酸と同様に、沈殿プロセスを促進する。ポリイオン種もまた、有用な沈殿剤である。
【００５６】
例えば、皮下注射用製剤で使用するための抗体は、好ましくは生理学的ｐＨ範囲で、及び等張オスモル濃度を提供する結晶化試薬中で沈殿する。
【００５７】
添加剤、共溶質、緩衝剤などの必要性、及びそれらの濃度は、結晶化を促進するように実験的に決定される。ポリペプチドの好適な結晶化条件のいくつかの例は、以下の実施例に記載されている。
【００５８】
抗体２１Ｂ１２は、様々な条件下で結晶化される。様々な形態の抗体２１Ｂ１２結晶は、液体製剤中の抗体が、ある体積の既知の結晶化試薬に添加されて密閉容器内で保存されることにより、スケールアップ条件下で成長し得る。抗体２１Ｂ１２結晶は、室温でこれらの条件下において２４時間未満で成長し得、約３０％〜約９９％％の収率をもたらすことが示されている。
【００５９】
工業規模プロセスでは、結晶化をもたらす制御された沈殿は、ポリペプチド、沈殿剤、共溶質及び場合により緩衝剤の単純な組み合わせにより、バッチプロセスで最適に実施され得る。別の選択肢としては、ポリペプチドは、出発材料としてポリペプチド沈殿物を使用すること（「播種」）により結晶化されてよい。この場合、ポリペプチド沈殿物は、結晶化溶液に添加され、結晶が形成されるまでインキュベートされる。代替の実験室結晶化方法、例えば透析または蒸気拡散などもまた採用され得る。上記のＭｃＰｈｅｒｓｏｎ及び上記のＧｉｌｌｉｌａｎｄには、結晶化文献のそれらの概説において、好適な条件の包括的な一覧表を含む。時として、結晶化ポリペプチドが架橋される場合、意図される架橋剤と結晶化媒体との間の不適合により、結晶をより好適な溶媒系に交換することが必要となる場合がある。
【００６０】
いくつかの実施形態によれば、ポリペプチド結晶、結晶製剤及び組成物は、以下のプロセスにより調製される：最初に、ポリペプチドを結晶化する。次に、本明細書に記載されるような賦形剤または成分を、直接母液に添加する。あるいは、母液を除去した後、最短で１時間〜最長で２４時間、結晶を賦形剤またはその他の製剤成分の溶液中に懸濁する。賦形剤濃度は、典型的には約０．０１〜３０％ｗ／ｗであり、これは、それぞれ９９．９９〜７０％ｗ／ｗのポリペプチド結晶濃度に相当する。一実施形態では、賦形剤濃度は約０．１〜１０％であり、これは、それぞれ９９．９〜９０％ｗ／ｗの結晶濃度に相当する。母液は、濾過、緩衝液交換により、または遠心分離のいずれかにより、結晶スラリーから除去できる。その後、結晶は、任意の注射用等張ビヒクルを、これらのビヒクルが結晶を溶解しない限りこれらを用いて、場合により５０〜１００％の１種以上の有機溶媒または添加剤、例えばエタノール、メタノール、イソプロパノールもしくは酢酸エチル、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの溶液を用いて、室温または−２０℃〜２５℃のいずれかの温度で洗浄する。加えて、水を使用して結晶を洗浄することができる。結晶は、結晶の上に窒素気流、空気流、または不活性ガス流のいずれかを通過させることにより乾燥させる。最後に、必要であれば結晶の微粉化を実施することができる。ポリペプチド結晶の乾燥は、Ｎ２、空気、もしくは不活性ガスによる乾燥；真空オーブン乾燥；凍結乾燥；揮発性有機溶媒による洗浄もしくは添加剤による洗浄に続く溶媒の蒸発；またはヒュームフード内での蒸発を含む手段による、水、有機溶媒もしくは添加剤、または液体ポリマーの除去である。典型的には、乾燥は、結晶が自由流動性粉末となる時に達成される。乾燥は、湿潤結晶の上にガス流を通過させることにより実施してよい。ガスは、窒素、アルゴン、ヘリウム、二酸化炭素、空気またはこれらの組み合わせから成る群から選択されてよい。達成される粒子の直径は、０．１〜１００マイクロメートルの範囲内、または０．２〜１０マイクロメートルの範囲内、または１０〜５０マイクロメートルの範囲内、または０．５〜２マイクロメートルの範囲内であり得る。吸入によって投与される製剤について、一実施形態では、ポリペプチド結晶から形成される粒子は、０．５〜１マイクロメートルの範囲内である。
【００６１】
いくつかの実施形態によれば、タンパク質結晶、タンパク質結晶製剤または組成物を調製する場合、結晶化の間に界面活性剤などの促進剤は添加されない。いくつかのその他の実施形態によれば、タンパク質結晶、タンパク質結晶製剤または組成物を調製する場合、結晶化の間に界面活性剤などの促進剤が添加される。賦形剤または成分は、約１〜１０％ｗ／ｗの濃度で、あるいは約０．１〜２５％ｗ／ｗの濃度で、あるいは約０．１〜５０％ｗ／ｗの濃度で結晶化後に母液に添加される。これらの濃度は、それぞれ９９〜９０％ｗ／ｗ、９９．９〜７５％ｗ／ｗ及び９９．９〜５０％ｗ／ｗの結晶濃度に相当する。賦形剤または成分は、母液中で結晶と共に約０．１〜３時間インキュベートされ、あるいはインキュベーションは、０．１〜１２時間実施され、あるいはインキュベーションは、０．１〜２４時間実施される。
【００６２】
いくつかのまたは任意の実施形態では、成分または賦形剤は母液以外の溶液に溶解され、タンパク質結晶が母液から取り出されて、賦形剤または成分の溶液中に懸濁される。いくつかの実施形態では、賦形剤または成分の溶液（または再懸濁ビヒクル）は、等張かつ注射用の、賦形剤または成分または界面活性剤の混合物である。いくつかの実施形態では、賦形剤または成分の溶液（または再懸濁ビヒクル）は、等張かつ注射用の、賦形剤または成分または界面活性剤の混合物ではない。成分または賦形剤濃度及びインキュベーション時間は、上記のものと同じである。
【００６３】
ポリペプチド結晶
本明細書で使用する場合、「結晶」または「結晶性」は、物質の固体状態の一形態を指し、第２の形態、すなわち非晶質固体状態とは異なる。結晶は、格子構造、特徴的な形状、ならびに光学特性、例えば屈折率及び複屈折などを含む、特徴的な特性を示す。結晶は、３次元で周期的に繰り返すパターンで配置された原子から成る（Ｃ．Ｓ．Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍｅｔａｌｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５２，ｐ．１）。対照的に、非晶質材料は、物質の非結晶性固体形態であって、非晶質沈殿物と称されることもある。このような沈殿物は、結晶性固体状態に特徴的な分子格子構造を全く有さず、物質の結晶形に典型的な複屈折またはその他の分光学的特徴を示さない。
【００６４】
ポリペプチド結晶は、結晶格子に配置されたポリペプチド分子である。ポリペプチド結晶は、３次元で周期的に繰り返される特定のポリペプチド−ポリペプチド相互作用のパターンを含有する。本発明のポリペプチド結晶は、ポリペプチドの非晶質固体形態または沈殿物、例えばポリペプチド溶液を凍結乾燥することにより得られるものなどとは区別されるべきである。
【００６５】
ポリペプチド結晶では、ポリペプチド分子は、共に配置されて対称単位を形成する非対称単位を形成する。ポリペプチド結晶の対称単位の幾何学的構造は、例えば、立方晶系、六方晶系、単斜晶系、斜方晶系、正方晶系、三斜晶系、または三方晶系であり得る。それら全ての結晶の全体構造は、例えば、両錐体、立方体、針、板、角柱、菱形、棒、もしくは球体、またはこれらの組み合わせの形態であり得る。その他の観察される形態としては、ブロック状、ＵＦＯ状、フットボール状、葉状、小麦状、シングレット状、羽毛状、ストロー状、菊状、球状またはこれらの混合物が挙げられる。いくつかの実施形態では、結晶は、クラスターで観察される。「立方」構造クラスの結晶は、より具体的には十八面体または十二面体結晶形を有し得る。結晶の直径は、マーチン径として定義される。これは、無作為に配向した結晶を２つの等しい投影面積に分ける、視覚スケールに平行な線の長さとして測定される。針または棒などの形態の結晶はまた、本明細書において結晶の長さと称される最大寸法を有するだろう。結晶はまた、Ｘ線回折により特徴付けられる。
【００６６】
結晶性ポリペプチドの特性試験
ポリペプチド結晶が形成された後、それらのポリペプチド含有量を確認し、さらにそれらの物理構造を検査するために、その結晶で様々な分析を行うことができる。例えば、必要であれば個々の結晶を結晶化溶液から取り出して、水性もしくは有機溶媒または添加剤で洗浄し、次いで（例えば、空気乾燥により、結晶の上に不活性ガス流を通過させることにより、凍結乾燥により、または真空により）乾燥させることができる。結晶を単離し、結晶成長液滴から取り出して、次いでＸ線回折のために搭載することができる。
【００６７】
結晶はまた、当該技術分野で記載されている様々な手段により特徴付けられ得る。例えば、タンパク質結晶製造及び製剤化手順、ならびに結晶及びそれらの成分タンパク質を特徴付けるための分析ツールの開示に関して、Ｂａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒａ．４，３０１−３１７（２００４）（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。粉末Ｘ線回折は、一般的に結晶性材料を同定するために使用されるが、これは非常に大きく完全なタンパク質結晶を必要とし、結晶製剤で典型的に使用されるタンパク質微結晶には一般的に適用されない。電子線回折及び固体核磁気共鳴（ｓｓＮＭＲ）が、結晶を特徴付けるために適用され得る。結晶サイズ、形状及び形態（例えば、表面形態）は、例えば、光学顕微鏡、透過型電子顕微鏡、走査型電子顕微鏡、原子間力顕微鏡、及び／または光散乱（例えば、光子相関分光法またはＤＬＳ、低角度レーザー光散乱またはＬＡＡＬＳ）により検査され得る。結晶の全表面積及び空隙率もまた特徴付けられ得る。質量分析、マイクロ減衰全反射フーリエ変換赤外分光（ＦＴＩＲ）及び／または示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、タンパク質の一次及び二次構造についての情報を提供し得る。
【００６８】
別の例としては、ポリペプチド結晶を結晶化溶液から取り出して洗浄もしくはすすぐことができる、または結晶化溶液の大部分を結晶から除去して、異なる溶液と置き換えることができる。このように、結晶化手順で使用した特定の塩を、結晶格子内で異なる塩と置き換えることができる。本発明の一実施形態では、結晶化した抗体２１Ｂ１２を結晶化緩衝液から分離して、ナトリウム、カリウム、またはマグネシウムの塩（例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸カリウム、または硫酸マグネシウム）を含有する溶液中に置く。Ｘ線回折のために、置換溶液は、結晶化ポリペプチドの原子座標の決定に有用な重原子を含有し得る。
【００６９】
さらなる一実施例では、ポリペプチド結晶を結晶化溶液から取り出して、さらなる試験のために適切な緩衝液、例えばゲル電気泳動による、結晶化されたポリペプチドの分析用のＳＤＳ含有緩衝液中などに可溶化することができる。ゲル電気泳動によるタンパク質の分析方法は周知であって、この方法は銀またはクーマシーブルー色素によるゲルの染色、及び結晶化されたポリペプチドの電気泳動と、既知分子量のポリペプチドマーカーの泳動との比較を含む。別の方法では、ポリペプチドは、ポリペプチドに特異的に結合する標識化抗体の使用によってゲル内で可視化する。結晶化されたポリペプチドはまた、エドマン分解によるアミノ酸配列決定のために、質量分析のために、その他の分光学的散乱、屈折、回折、もしくは吸収研究のために、または標識分子とポリペプチドとの結合によるポリペプチドの標識化のために適切な緩衝液中に可溶化することができる。
【００７０】
ＩＩＩ．治療的投与のための製剤
本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、本明細書で使用する場合、少なくとも２種の成分を含む混合物を意味する。特に、結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体を含む組成物、または結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体を使用して調製される組成物が、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体を含む、またはそれを使用して調製される組成物または製剤は、それを必要とする患者への注射及び／または投与に好適であるように調製される。薬学的目的で患者に投与される組成物は、実質的に無菌であり、レシピエントにとって過度に毒性または感染性のある薬剤を一切含有しない。
【００７１】
いくつかの実施形態では、結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体、例えば結晶性抗体２１Ｂ１２などは、以下：生理学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤のうち１種以上を用いて製剤化される結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体を含む、生理学的に許容される組成物（本明細書においては、医薬組成物または医薬製剤とも称される）の形態で投与される。このような担体、賦形剤、または希釈剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントにとって非毒性である。通常、このような組成物の調製は、結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体を、以下：緩衝剤、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸など、低分子量ポリペプチド（１０未満のアミノ酸を有するものなど）、タンパク質、アミノ酸、例えばロイシン、プロリン、アラニン、バリン、グリシン、セリン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、イソロイシン、トレオニン、システイン、チロシン、ヒスチジン、リジン及びアルギニンなど、炭水化物、例えばグルコース、スクロースまたはデキストリンなど、キレート剤、例えばＥＤＴＡなど、グルタチオンならびにその他の安定剤及び賦形剤のうち１種以上と組み合わせることを必要とする。液体製剤では、中性緩衝生理食塩水または非特異的血清アルブミンと混合した生理食塩水は、適切な例示的希釈剤である。適切な業界標準に従って、ベンジルアルコールなどの防腐剤もまた添加されてよい。医薬製剤に用いられてよい成分のさらなる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０，ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎによって共同出版されたＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓに提示されている。
【００７２】
一実施形態では、本明細書に記載される製剤はバルク製剤として調製され、したがって医薬組成物の成分は、投与に必要とされるであろう成分よりも多くなるように調節され、投与前に適切に希釈されることが企図される。
【００７３】
本明細書に記載される抗体結晶は、保存及び取り扱いに好適な形態で、ならびに吸入または経肺投与に好適な形態で、例えばエアロゾル製剤の調製用粉末の形態で固体結晶製剤または粉末製剤として製剤化され得る。さらなる一実施形態では、抗体結晶は、このような結晶の溶液で、またはこのような結晶のスラリーで製剤化され得る。別の実施形態では、抗体結晶は、治療的投与のための水性製剤などの液体製剤を調製するために使用される。
【００７４】
Ａ．固体結晶製剤
抗体結晶の固体製剤は、溶液から実質的に単離されていて、または乾燥されていて、例えば粉末形態中の自由結晶として、または粒子として存在する結晶を含む。これに関連して、「粉末」という表現は、本質的に乾燥粒子、すなわち含水率が約１０重量％未満、または６重量％未満、または４重量％未満である粒子の群を指す。ポリペプチド結晶または粉末は、場合により担体または界面活性剤と組み合わされ得る。好適な担体剤としては、１）炭水化物、例えば単糖類、例えばフルクトース、ガラクトース、グルコース、ソルボースなど；２）二糖類、例えばラクトース、トレハロースなど；３）多糖類、例えばラフモース（ｒａｆｆｍｏｓｅ）、マルトデキストリン、デキストランなど；４）アルジトール、例えばマンニトール、キシリトールなど；５）無機塩、例えば塩化ナトリウムなど；及び６）有機塩、例えばクエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウムなどが挙げられる。ある種の実施形態では、担体は、トレハロース、ラフィノース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、イノシトール、スクロース、塩化ナトリウム、及びクエン酸ナトリウムから成る群から選択される。界面活性剤は、脂肪酸の塩、胆汁塩、リン脂質またはポリソルベートから成る群から選択され得る。脂肪酸塩としては、Ｃ１０〜１４脂肪酸の塩、例えばカプリン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、及びミリスチン酸ナトリウムなどが挙げられる。胆汁塩としては、ウルソデオキシコール酸塩、タウロコール酸塩、グリココール酸塩、及びタウロジヒドロフシド酸塩の塩が挙げられる。ポリソルベートとしては、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０が挙げられる。一実施形態では、界面活性剤は、タウロコール酸塩の塩、例えばタウロコール酸ナトリウムなどである。界面活性剤として使用され得るリン脂質としては、リゾホスファチジルコリンが挙げられる。一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート２０であり、別の実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８０である。
【００７５】
Ｂ．溶液またはスラリー中の結晶
ポリペプチド結晶を、懸濁液中での保存に好適とする方法であって、結晶化緩衝液（母液）を非水性溶媒と置き換えることを含む方法もまた、本明細書に記載される。さらに別の実施形態では、結晶スラリーは、第１溶媒を回転除去し、第２有機溶媒または添加剤を使用して残存する結晶性固体を洗浄して水を除去し、続いて非水性溶媒を蒸発させることにより固体にされ得る。結晶性治療用タンパク質の非水性スラリーは、皮下送達に特に有用である。
【００７６】
このような一実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチド結晶は、ポリペプチド結晶を安定化させることを目的として液体有機添加剤と組み合わされる。このような混合物は、ｎ％の有機添加剤（ここで、ｎは１〜９９である）及びｍ％の水溶液（ここで、ｍは１００−ｎである）を含む、水性−有機混合物として特徴付けられ得る。有機添加剤の例としては、フェノール化合物、例えばｍ−クレゾールもしくはフェノールもしくはこれらの混合物など、及びアセトン、メチルアルコール、メチルイソブチルケトン、クロロホルム、１−プロパノール、イソプロパノール、２−プロパノール、アセトニトリル、１−ブタノール、２−ブタノール、エチルアルコール、シクロヘキサン、ジオキサン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、ジクロロエタン、ヘキサン、イソオクタン、塩化メチレン、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、トルエン、四塩化炭素、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７７】
Ｃ．液体製剤
本明細書で提供される別の実施形態は、医薬組成物の安定した長期保存を可能にする水性製剤であり、結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体は、医薬組成物の調製に使用される活性成分である。この製剤が有用である理由の１つは、この製剤が再水和などの任意の追加ステップを必要としないことから、患者への使用により便利であるからである。本明細書で使用する場合、「溶液」または「液体製剤」は、好適な溶媒または相互に混和性の溶媒の混合物に溶解される１種以上の化学物質を含有する液体調製物を意味することを意図する。再構成は、適切な緩衝液または医薬製剤中におけるポリペプチド結晶または結晶製剤または組成物の溶解である。
【００７８】
Ｄ．医薬製剤の成分
本医薬組成物は、上記のような結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体に加えて、その多くまたは全てが市販業者から入手可能である、以下の段落に列挙された以下の種類の成分または賦形剤のうち１種以上を組み合わせることにより調製される。組成物に含まれる様々な成分の組み合わせは、任意の適切な順序で行われ得、すなわち、緩衝剤が最初に、途中でまたは最後に添加され得、張度調節剤もまた最初に、途中でまたは最後に添加され得ることが、当業者には理解されるだろう。これらの化学物質のいくつかは、ある種の組み合わせにおいて不適合であり得、したがって類似した特性を有するが関連混合物に適合する異なる化学物質と容易に置換されることもまた、当業者には理解されるべきである。例えば、医薬組成物の保存に使用される容器及び／または治療的投与に使用されるデバイス内に存在する賦形剤及びその他の成分または材料の様々な組み合わせの適合性に関する知識が、当該技術分野に存在する（例えば、Ａｋｅｒｓ，２００２，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ９１：２２８３−２３００を参照のこと）。
【００７９】
本明細書に記載される製剤中に含まれ得る追加の薬剤の非限定的例としては、酸性化剤（酢酸、氷酢酸、クエン酸、フマル酸、塩酸、希塩酸、リンゴ酸、硝酸、リン酸、希リン酸、硫酸、酒石酸、及びその他の好適な酸を含むが、これらに限定されない）；活性成分（適切な投与量の、注射部位の不快感を減少させる追加の活性成分、及び非ステロイド性抗炎症薬、例えばトロメタミンなどを含むが、これらに限定されない）；エアロゾル噴射剤（ブタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、イソブタン、プロパン及びトリクロロモノフルオロメタンを含むが、これらに限定されない）；アルコール変性剤（安息香酸デナトニウム、メチルイソブチルケトン、オクタ酢酸スクロースを含むが、これらに限定されない）；アルカリ化剤（強アンモニア溶液、炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、水酸化カリウム、重炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、トロラミンを含むが、これらに限定されない）；固化防止剤（ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、コロイド状二酸化ケイ素及びタルクを含むが、これらに限定されない）；消泡剤（ジメチコン及びシメチコンを含むが、これらに限定されない）；キレート剤（金属イオン封鎖剤とも呼ばれる）（エデト酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸及び塩ならびにエデト酸を含むが、これらに限定されない）；コーティング剤（カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、エチルセルロース、ゼラチン、医薬用釉薬、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸コポリマー、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリ酢酸フタル酸ビニル、シェラック、スクロース、二酸化チタン、カルナバワックス、微結晶ワックス及びゼインを含むが、これらに限定されない）；着色料（カラメル、エリトロシン（ＦＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．３）；ＦＤ＆Ｃ  Ｒｅｄ  Ｎｏ．４０；ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．５；ＦＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｎｏ．６；ＦＤ＆Ｃ
Ｂｌｕｅ  Ｎｏ．１；赤、黄色、黒、青またはブレンド及び酸化第二鉄を含むが、これらに限定されない）；錯化剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びその塩、エデト酸、ゲンチシン酸エタノールメイド（ｅｔｈａｎｏｌｍａｉｄｅ）ならびに硫酸オキシキノリンを含むが、これらに限定されない）；乾燥剤（塩化カルシウム、硫酸カルシウム及び二酸化ケイ素を含むが、これらに限定されない）；濾過助剤（粉末セルロース及び精製ケイ質土を含むが、これらに限定されない）；香味料及び香料（アネトール、アニス油、ベンズアルデヒド、桂皮油、ココア、エチルバニリン、メントール、サリチル酸メチル、グルタミン酸モノナトリウム、オレンジ花油、オレンジ油、ペパーミント、ペパーミント油、ペパーミント精、ローズ油、強ローズ水、チモール、トルーバルサムチンキ、バニラ、バニラチンキ及びバニリンを含むが、これらに限定されない）；保湿剤（グリセリン、へキシレングリコール、プロピレングリコール及びソルビトールを含むが、これらに限定されない）；軟膏基剤（ラノリン、無水ラノリン、親水軟膏、白色軟膏、黄色軟膏、ポリエチレングリコール軟膏、ワセリン、親水ワセリン、白色ワセリン、ローズ水軟膏及びスクアランを含むが、これらに限定されない）；可塑剤（ヒマシ油、ジアセチル化モノグリセリド、フタル酸ジエチル、グリセリン、モノ及びジアセチル化モノグリセリド、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、トリアセチンならびにクエン酸トリエチルを含むが、これらに限定されない）；ポリマー膜（酢酸セルロースを含むが、これに限定されない）；溶媒（アセトン、アルコール、希アルコール、アミレン水和物、安息香酸ベンジル、ブチルアルコール、四塩化炭素、クロロホルム、コーン油、綿実油、酢酸エチル、グリセリン、へキシレングリコール、イソプロピルアルコール、メチルアルコール、塩化メチレン、メチルイソブチルケトン、鉱油、ピーナッツ油、ポリエチレングリコール、炭酸プロピレン、プロピレングリコール、ゴマ油、注射用水、注射用滅菌水、灌注用滅菌水及び精製水を含むが、これらに限定されない）；吸着剤（粉末セルロース、木炭、精製ケイ質土；ならびに二酸化炭素吸着剤：水酸化バリウム石灰及びソーダ石灰を含むが、これらに限定されない）；硬化剤（硬化ヒマシ油、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、セチルエステルワックス、硬質脂肪、パラフィン、ポリエチレン賦形剤、ステアリルアルコール、乳化ワックス、白色ワックス及び黄色ワックスを含むが、これらに限定されない）；坐剤基剤（ココアバター、硬質脂肪及びポリエチレングリコールを含むが、これらに限定されない）；懸濁化剤及び／または増粘剤（アカシア、寒天、アルギン酸、モノステアリン酸アルミニウム、ベントナイト、精製ベントナイト、マグマベントナイト、カルボマー９３４ｐ、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム１２、カラギーナン、微結晶及びカルボキシメチルセルロースナトリウムセルロース、デキストリン、ゼラチン、グアーガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル���ース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、メチルセルロース、ペクチン、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポビドン、アルギン酸プロピレングリコール、二酸化ケイ素、コロイド状二酸化ケイ素、アルギン酸ナトリウム、トラガカントならびにキサンタンガムを含むが、これらに限定されない）；甘味剤（アスパルテーム、デキストレート、デキストロース、賦形剤デキストロース、フルクトース、マンニトール、サッカリン、サッカリンカルシウム、サッカリンナトリウム、ソルビトール、溶液ソルビトール、スクロース、圧縮糖、粉砂糖及びシロップを含むが、これらに限定されない）；錠剤結合剤（アカシア、アルギン酸、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶セルロース、デキストリン、エチルセルロース、ゼラチン、液体グルコース、グアーガム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリエチレンオキシド、ポビドン、アルファ化デンプン及びシロップを含むが、これらに限定されない）；錠剤及び／またはカプセル希釈剤（炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、三塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶セルロース、粉末セルロース、デキストレート、デキストリン、デキストロース賦形剤、フルクトース、カオリン、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、アルファ化デンプン、スクロース、圧縮糖及び粉砂糖を含むが、これらに限定されない）；錠剤崩壊剤（アルギン酸、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コースポビドン（ｃｏｒｓｐｏｖｉｄｏｎｅ）、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、デンプン及びアルファ化デンプンを含むが、これらに限定されない）；錠剤及び／またはカプセル潤滑剤（ステアリン酸カルシウム、ベヘン酸グリセリル、ステアリン酸マグネシウム、軽質鉱油、ポリエチレングリコール、フマル酸ステアリルナトリウム、ステアリン酸、精製ステアリン酸、タルク、硬化植物油及びステアリン酸亜鉛を含むが、これらに限定されない）；ビヒクル（香味及び／または甘味付けされたもの（芳香エリキシル剤、複合ベンズアルデヒドエリキシル剤、イソアルコールエリキシル剤、ペパーミント水、ソルビトール溶液、シロップ、トルーバルサムシロップ）を含むが、これらに限定されない）；油性（アーモンド油、コーン油、綿実油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、鉱油、軽質鉱油、ミリスチルアルコール、オクチルドデカノール、オリーブ油、ピーナッツ油、パーシック油、ゴマ油、大豆油、スクアラン）；固体担体、例えば糖球など；ならびに滅菌ビヒクル（注射用静菌水、静菌性塩化ナトリウム注射液）；ならびに防水剤（シクロメチコン、ジメチコン及びシメチコンを含むが、これらに限定されない）が挙げられる。
【００８０】
不適切または不必要な三元または四元複合体に会合するポリペプチドの傾向を減少させる凝集阻害剤もまた、本明細書に記載される製剤中に含まれ得る。好適な凝集阻害剤としては、アミノ酸Ｌ−アルギニン及び／またはＬ−システインが挙げられ、これらは長期間、例えば２年以上にわたりＦｃドメインを含有するポリペプチドの凝集を減少させるように作用し得る。製剤中の凝集阻害剤の濃度は、約１ｍＭ〜１Ｍ、または約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ、または約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ、または約１５ＭＭ〜約７５ｍＭ、または約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、または約２５ｍＭであり得る。
【００８１】
酸化防止剤もまた、本明細書に記載される製剤中に含まれてよい。製剤の調製における使用に企図される酸化防止剤としては、アミノ酸、例えばグリシン及びリジンなど、キレート剤、例えばＥＤＴＡ及びＤＴＰＡなど、ならびにフリーラジカルスカベンジャー、例えばソルビトール及びマンニトールなどが挙げられる。追加の酸化防止剤としては、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、トコフェロール、及びトコフェロール賦形剤が挙げられる。窒素または二酸化炭素オーバーレイもまた、酸化の阻害における使用に企図される。窒素または二酸化炭素オーバーレイは、充填プロセス中にバイアルまたはプレフィルドシリンジのヘッドスペースに導入され得る。
【００８２】
医薬製剤のｐＨを所望の範囲内に維持する緩衝剤もまた、本明細書に記載される製剤中に含まれ得る。医薬組成物のｐＨが生理学的レベルにまたはその近傍に設定される場合、投与時における患者の快適さが最大化される。特に、ある種の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約４．０〜８．４のｐＨ範囲内、または約５．０〜８．０のｐＨ範囲内、または約５．８〜７．４、もしくは約６．２〜７．０のｐＨ範囲内である。ｐＨは必要に応じて、特定の製剤中においてポリペプチドの安定性及び溶解度を最大化するように調節され得、したがって、生理学的範囲外であるが患者にとって許容可能なｐＨが、本発明の範囲内であると理解されるべきである。本発明の医薬組成物での使用に好適な種々の緩衝剤としては、ヒスチジン、アルカリ塩（リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウムまたはそれらの水素塩もしくは二水素塩）、クエン酸ナトリウム／クエン酸、酢酸ナトリウム／酢酸、クエン酸カリウム、マレイン酸、酢酸アンモニウム、トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）、様々な形態の酢酸塩及びジエタノールアミン、炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、ホウ酸、乳酸、リン酸、メタリン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、乳酸ナトリウム溶液、ならびに当該技術分野において既知の、任意のその他の薬学的に許容されるｐＨ緩衝剤が挙げられる。ｐＨ調整剤、例えば塩酸、水酸化ナトリウム、またはそれらの塩などもまた、所望のｐＨを得るために含まれてよい。１つの好適な緩衝剤は、医薬組成物をｐＨ６．２にまたはその近傍に維持するためのリン酸ナトリウムである。別の例では、酢酸塩はｐＨ６よりもｐＨ５においてより効率的な緩衝剤であるため、ｐＨ６の場合よりも少ない酢酸塩がｐＨ５の溶液において使用されてよい。製剤中の緩衝剤の濃度は、約１ｍＭ〜約１Ｍ、または約１０ｍＭ〜約３００ｍＭであり得る。
【００８３】
ポリマー担体もまた、本明細書に記載される製剤中に含まれ得る。ポリマー担体は、生物学的送達を含むポリペプチドの送達のための、ポリペプチド結晶のカプセル化に使用されるポリマーである。このようなポリマーは、生体適合性及び生分解性ポリマーを含む。ポリマー担体は単一ポリマー型であってよい、またはこの担体は、ポリマー型の混合物で構成されてよい。ポリマー担体として有用なポリマーとしては、例えば、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、例えばポリ（乳酸）すなわちＰＬＡ、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）すなわちＰＬＧＡ、ポリ（Ｂ−ヒドロキシブトリエート（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｒｙａｔｅ））、ポリ（カプロラクトン）及びポリ（ジオキサノン）など；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール、アルブミン、天然及び合成ポリペプチド、アルギン酸塩、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、硫酸化多糖類、またはポリペプチド結晶をカプセル化するであろう任意の従来の材料が挙げられる。
【００８４】
防腐剤、例えば抗菌防腐剤などもまた、本明細書に記載される製剤での使用に企図される。好適な防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンザルコニウム溶液、塩化ベンゼルトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、ブチルパラベン、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、クロロクレゾール、クレゾール、デヒドロ酢酸、エチルパラベン、メチルパラベン、メチルパラベンナトリウム、フェノール、フェニルエチルアルコール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、プロピルパラベン、プロピルパラベンナトリウム、安息香酸ナトリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、ソルビン酸、チメロサール、及びチモールが挙げられるが、これらに限定されない。含まれる防腐剤の量は、０％〜２％（ｗ／ｖ）の範囲内または約１％（ｗ／ｖ）であろう。
【００８５】
ポリペプチドの溶解度を増加させる、及び／または溶液中で（または乾燥もしくは凍結形態で）ポリペプチドを安定させる可溶化剤及び安定剤（乳化剤、共溶質、または共溶媒とも称される）もまた、医薬組成物に添加され得る。可溶化剤及び安定化剤の例としては、糖／ポリオール、例えばスクロース、ラクトース、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、マルトース、イノシトール、トレハロース、グルコースなど；ポリマー、例えば血清アルブミン（ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒトＳＡ（ＨＳＡ）、または組換えＨＡ）、デキストラン、ＰＶＡ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリエチレンイミン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）など；非水性溶媒、例えば多価アルコール（例えば、ＰＥＧ、エチレングリコール及びグリセロール）、ジメチスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）（ＤＭＳＯ）、及びジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）など；アミノ酸、例えばプロリン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−セリン、グルタミン酸ナトリウム、アラニン、グリシン、リジン塩酸塩、サルコシン、及びガンマ−アミノ酪酸など；界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ−８０、Ｔｗｅｅｎ−２０、ＳＤＳ、ポリソルベート、ポリオキシエチレンコポリマーなど；ならびに多岐にわたる安定化賦形剤、例えばリン酸カリウム、酢酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、トリメチルアミンＮ−オキシド、ベタイン、金属イオン（例えば、亜鉛、銅、カルシウム、マンガン、及びマグネシウム）、ＣＨＡＰＳ、モノラウレート、２−Ｏ−ベータ−マンノグリセレートなど；もしくは以下：アカシア、コレステロール、ジエタノールアミン（補助剤）、モノステアリン酸グリセリル、ラノリンアルコール、レシチン、モノ及びジグリセリド、モノエタノールアミン（補助剤）、オレイン酸（補助剤）、オレイルアルコール（安定剤）、ポロキサマー、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、ポリオキシル１０オレイルエーテル、ポリオキシル２０セトステアリルエーテル、ポリオキシル４０ステアレート、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、ポリソルベート１００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、プロピレングリコールジアセテート、モノステアリン酸プロピレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ステアリン酸、トロラミン、乳化ワックスのいずれか；湿潤剤及び／もしくは可溶化剤、例えば塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、ドキュセートナトリウム、ノノキシノール９、ノノキシノール１０、オクトキシノール９、ポリオキシル５０ステアレート、チロキサポールなど；または上記の任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。製剤中の可溶化剤／安定剤の濃度は、約０．００１〜５重量％、または約０．１〜２重量％であり得る。一実施形態では、安定剤は、ソルビタンモノ−９−オ���タデセノエートポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）誘導体から選択され、これはポリソルベート８０またはポリソルベート２０を含むが、これらに限定されない。本実施形態で使用されるポリソルベート２０または８０の量は、単回使用において、または複数回用量製剤において、０．００１％〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲内、例えば０．００５％（ｗ／ｖ）などである。別の実施形態では、０．０５ｍＭ〜５０ｍＭの範囲内の遊離Ｌ−メチオニンが製剤中に含まれ、遊離Ｌ−メチオニンの量は、単回使用製剤については０．０５ｍＭ〜５ｍＭ、及び複数回用量製剤については１ｍＭ〜１０ｍＭである。
【００８６】
張度調節剤もまた、本明細書に記載される製剤中に含まれ得る。張度調節剤は、溶液のオスモル濃度に寄与する分子であると理解されている。医薬組成物のオスモル濃度は、活性成分の安定性を最大化し、さらに投与時の患者の不快感を最小限に抑えるために、好ましくは制御される。血清は、１キログラム当たりおよそ３００＋／−５０ミリオスモルである。一般に、医薬組成物が血清と等張である、すなわち同じまたは類似のオスモル濃度を有することが好ましく、これは張度調節剤の添加により達成され、したがって、オスモル濃度は約１８０〜約４２０ミリオスモルであろうことが企図されるが、オスモル濃度は、特定の条件に必要な場合により高いまたはより低い濃度のいずれかであり得ることが理解されるべきである。オスモル濃度の調節に好適な張度調節剤の例としては、アミノ酸（例えば、アルギニン、システイン、ヒスチジン及びグリシン）、塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム及びクエン酸ナトリウム）及び／または糖類（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、グリセリン、及びマンニトール）が挙げられるが、これらに限定されない。製剤中の張度調節剤の濃度は、約１ｍＭ〜１Ｍ、または約１０ｍＭ〜約２００ｍＭであり得る。一実施形態では、張度調節剤は、０ｍＭ〜２００ｍＭの濃度範囲内の塩化ナトリウムである。別の実施形態では、張度調節剤はソルビトールまたはトレハロースであり、塩化ナトリウムは全く存在しない。
【００８７】
ある種の実施形態では、製剤は、以下から選択される化合物、またはこれらの任意の組み合わせを含む：１）アミノ酸、例えばグリシン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アスパラギン、グルタミン、プロリンなどの塩；２）炭水化物、例えば単糖類、例えばグルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、アラビノース、キシロース、リボースなど；３）二糖類、例えばラクトース、トレハロース、マルトース、スクロースなど；４）多糖類、例えばマルトデキストリン、デキストラン、デンプン、グリコーゲンなど；５）アルジトール、例えばマンニトール、キシリトール、ラクチトール、ソルビトールなど；６）グルクロン酸、ガラクツロン酸；７）シクロデキストリン、例えばメチルシクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンなど；８）無機塩、例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、ナトリウム及びカリウムのリン酸塩、ホウ酸、炭酸アンモニウム及びリン酸アンモニウムなど；９）有機塩、例えば酢酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、乳酸塩など；１０）乳化剤または可溶化剤、例えばアカシア、ジエタノールアミン、モノステアリン酸グリセリル、レシチン、モノエタノールアミン、オレイン酸、オレイルアルコール、ポロキサマー、ポリソルベート、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノステアレート、及びその他のソルビタン誘導体、ポリオキシル誘導体、ワックス、ポリオキシエチレン誘導体、ソルビタン誘導体など；１１）増粘試薬、例えば寒天、アルギン酸及びその塩、グアーガム、ペクチン、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、セルロース及びその誘導体、炭酸プロピレン、ポリエチレングリコール、ヘキシレングリコール、チロキサポールなど；ならびに１２）特定の成分、例えばスクロース、トレハロース、ラクトース、ソルビトール、ラクチトール、イノシトール、ナトリウム及びカリウムの塩、例えば酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、ホウ酸塩など、グリシン、アルギニン、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ヘキシレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなど。
【００８８】
Ｅ．徐放性形態
いくつかの実施形態では、結晶性抗ＰＣＳＫ９抗体の徐放性形態（「制御放出」形態とも呼ばれる）が使用され、これは結晶性抗体２１Ｂ１２の徐放性形態；結晶性抗体２１Ｂ１２、及び結晶性抗体２１Ｂ１２の物理的放出または生物学的利用能を、所望の期間にわたって延長するための物質を含む徐放性または制御放出形態を含む。
【００８９】
開示される方法での使用に好適な徐放性形態としては、徐放性手段、例えば低速溶解生体適合性ポリマー（例えば、本明細書に記載されるポリマー担体、米国特許第６，０３６，９７８号に記載されているアルギン酸塩マイクロ粒子、または米国特許第６，０８３，５３４号に記載されているポリエチレン−酢酸ビニル及びポリ（乳酸−グルコール酸（ｇｌｕｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ））組成物）などにカプセル化される、このようなポリマーと混合される（局所適用ヒドロゲルを含む）、及び／または生体適合性半透過性インプラント内に封入される結晶性抗体２１Ｂ１２が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のさらなる実施形態としては、追加の徐放性形態、例えばポリマーマイクロ粒子であって、活性成分と徐放性手段、例えばポリマー（例えば、ＰＬＧＡ）などとの混合物が連続相内に分散され、得られた分散物が直接凍結乾燥されて水及び有機溶媒または添加剤を除去し、前記マイクロ粒子を形成する（米国特許第６，０２０，００４号（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））；生分解性アニオン性多糖類、例えばアルギン酸エステルなど、ポリペプチド、及び少なくとも１つの結合した多価金属イオンを含む、注射用ゲル組成物（米国特許第６，４３２，４４９号（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）；逆熱ゲル化特性及び場合によりｐＨ応答性ゲル化／脱ゲル化特性を有する、注射用生分解性ポリマーマトリックス（米国特許第６，５４１，０３３号及び第６，４５１，３４６号（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）；生体適合性ポリオール：油懸濁液、例えば懸濁液が約１５重量％〜約３０重量％の範囲内でポリオールを含むものなど（米国特許第６，２４５，７４０号（その全体が参照によって組み込まれる）などが挙げられる。このような徐放性形態は、デポー剤の形態での投与によるポリペプチドの持続送達に好適であり、デポー剤はインプラントであり得る、または注射用ミクロスフェア、ナノスフェア、もしくはゲルの形態であり得る。上に列挙された米国特許（米国特許第６，０３６，９７８号；第６，０８３，５３４号；第６，０２０，００４号；第６，４３２，４４９号；第６，５４１，０３３号；第６，４５１，３４６号、及び第６，２４５，７４０号）は、それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。加えて、本発明の結晶性ポリペプチドの徐放性または制御放出形態は、Ｋｉｍ，Ｃ．，２０００，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ  Ｄｅｓｉｇｎ”，Ｔｅｃｈｏｎｏｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ  Ｐａ．に記載されているものなどの徐放性手段の種類を含み、これらとしては以下のものが挙げられる：天然ポリマー（ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、アラビアガム、またはキトサン）、半合成ポリマーまたはセルロース誘導体（メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、酢酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロース、酢酸フタル酸セルロ��ス、またはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、及び合成ポリマー（イオン交換樹脂（メタクリル酸、スルホン化ポリスチレン／ジビニルベンゼン）、ポリアクリル酸（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）、ポリ（ＭＭＡ／ＭＡＡ）、ポリ（ＭＭＡ／ＤＥＡＭＡ）、ポリ（ＭＭＡ／ＥＡ）、ポリ（酢酸フタル酸ビニル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸／グリコール酸）、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリ（ジメチルシリコーン）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（エチレン／酢酸ビニル）、ポリ（エチレン／ビニルアルコール）、ポリブタジエン、ポリ（無水物）、ポリ（オルトエステル）、及びポリ（グルタミン酸））。
【００９０】
本明細書に開示されるさらなる実施形態は、米国特許第６，５４１，６０６号（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されているように、少なくとも１種のポリマー担体内にカプセル化される抗体２１Ｂ１２結晶であって、ポリマー担体のマトリックス内へのカプセル化によりミクロスフェアを形成し、それらの天然及び生物学的に活性な三次構造を維持する結晶を含む。カプセル化される抗体２１Ｂ１２結晶またはその製剤は、有機溶媒または添加剤に溶解したＰＬＧＡなどのポリマー担体中に懸濁される。このようなカプセル化抗体２１Ｂ１２結晶は、同等の条件下で保存された場合、溶液中の抗体２１Ｂ１２よりも長期間、抗体２１Ｂ１２の生物活性を維持する。
【００９１】
ＩＶ．キット
追加の態様として、本明細書に記載される１種以上の製剤を含むキットであって、対象への投与のためにその使用を容易にする方法でパッケージ化されたキットが、本明細書に記載される。一実施形態では、このようなキットは、本明細書に記載される製剤（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれかを含む組成物）を含み、製剤は容器、例えば密閉ボトル、槽、単回使用もしくは複数回使用バイアル、プレフィルドシリンジ、またはプレフィルド注射デバイスなどの中にパッケージ化されて、場合により方法の実施における化合物または組成物の使用について記載し、容器に貼り付けられる、またはパッケージ内に含まれるラベルを有する。一態様では、化合物または組成物は、単位剤形内にパッケージ化される。キットは、特定の投与経路による組成物の投与に好適なデバイスをさらに含んでよい。好ましくはキットは、本明細書に記載される抗体または本明細書に記載される製剤の使用について記載するラベルを含有する。
【００９２】
Ｖ．投与量
本明細書に記載される状態を処置する方法に関与する投与レジメンは、薬物の作用を調節する様々な要因、例えば、患者の年齢、状態、体重、性別及び食事、任意の感染の重症度、投与時期ならびにその他の臨床的要因を考慮して、主治医により決定されるだろう。様々な態様では、投与量は、体重１キログラム当たり０．１〜５０ｍｇの抗体調製物の範囲内である（化学修飾を含まない、タンパク質単独での質量を計算する）。いくつかの実施形態では、投与量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、投与量は、約１２０ｍｇ〜約１２００ｍｇ、または約２８０〜約４５０ｍｇである。
【００９３】
様々な態様では、抗ＰＣＳＫ９抗体、例えば抗体２１Ｂ１２の投与量は、抗ＰＣＳＫ９抗体、例えば抗体２１Ｂ１２の少なくとも約１００ｍｇ〜約１４００ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜約１２００ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜約１０００ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜約８００ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜約７００ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１２０ｍｇ〜最大約４８０ｍｇ；または約１００ｍｇ〜最大約４８０ｍｇ；または約１２００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１４５ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約１８０ｍｇ〜約４８０ｍｇまたは約１９０ｍｇ〜約４８０ｍｇまたは約２００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約２９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３７０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３８０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約３９０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４００ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４１０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４２０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４３０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４４０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４５０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４６０ｍｇ〜約４８０ｍｇ；または約４７０ｍｇ〜約４８０ｍｇの範囲であり得る。
【００９４】
ある種の実施形態では、投薬頻度は、使用される製剤中の抗ＰＣＳＫ抗体及び／または任意の追加治療剤の薬物動態パラメータを考慮に入れるだろう。ある種の実施形態では、臨床医は、所望の効果を達成する投与量に到達するまで製剤を投与するだろう。したがって、ある種の実施形態では、製剤は単回用量として、または経時的に２回、３回、４回またはそれを超える用量（同じ量の所望の分子を含有しても、または含有しなくてもよい）として、または埋め込みデバイスもしくはカテーテルによる持続注入として投与され得る。製剤はまた、標準的な針及びシリンジで皮下または静脈内に送達され得る。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達デバイス、ならびに自動注射器送達デバイスは、本発明の医薬製剤の送達に適用性を有する。適切な投与量のさらなる改良は、当業者により日常的に行われ、当業者により日常的に実施される業務の範囲内である。ある種の実施形態では、適切な投与量は、適切な用量反応データの使用により確認され得る。いくつかの実施形態では、投与量及び投与頻度は、得られるべき所望の（血清及び／または総）コレステロールレベルならびに対象の現在のコレステロールレベル、ＬＤＬレベル、及び／またはＬＤＬＲレベルを考慮に入れることができ、これらの全ては当業者に周知の方法によって得られ得る。
【００９５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体、例えば抗体２１Ｂ１２の少なくとも約１００ｍｇ；または最大約１１０ｍｇ；または最大約１１５ｍｇ、または最大約１２０ｍｇ；または最大約１４０ｍｇ；または最大約１６０ｍｇ；または最大約２００ｍｇ；または最大約２５０ｍｇ；または最大２８０ｍｇ；または最大３００ｍｇ；または最大３５０ｍｇ；または最大４００ｍｇ；または最大４２０ｍｇの投与量が、それを必要とする患者に１週間おきに１回（または２週間ごとに）（Ｑ２Ｗ）投与される。
【００９６】
ある種のその他の実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体、例えば抗体２１Ｂ１２の少なくとも約２５０ｍｇ；または最大約２８０ｍｇ；または最大約３００ｍｇ；または最大約３５０ｍｇ；または最大約４００ｍｇ；または最大約４２０ｍｇ；または最大約４５０ｍｇ；または最大４８０ｍｇの投与量が、それを必要とする患者に４週間に１回（または月に１回）投与される。
【００９７】
製剤は一般に、非経口的に、例えば静脈内、皮下、筋肉内、エアロゾル（肺内または吸入投与）により、または長期放出のためのデポー剤により投与される。いくつかの実施形態では、製剤は、医薬品の治療循環レベルを維持するために最初のボーラスに続いて持続注入により静脈内投与される。その他の実施形態では、製剤は１回用量として投与される。当業者は、適切な医療行為及び個々の患者の臨床状態により決定されるように、有効投与量及び投与レジメンを容易に最適化するだろう。投薬頻度は、薬剤の薬物動態パラメータ及び投与経路に依存するだろう。最適な医薬製剤は、投与経路及び所望の投与量に応じて当業者により決定されるだろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  １８０４２）１４３５−１７１２頁を参照（その開示は参照によって本明細書に組み込まれる）のこと。このような製剤は、投与される薬剤の物理的状態、安定性、インビボ放出の速度、及びインビボクリアランスの速度に影響を与える場合がある。投与経路に応じて、好適な用量は、体重、体表面積または臓器サイズにより計算されてよい。上述した製剤の各々に関与する処置のための適切な投与量を決定するのに必要な計算のさらなる精密化は、特に本明細書に開示される投与量情報及びアッセイ、ならびに上述したヒト臨床試験で観察される薬物動態データに照らして、過度な実験をすることなく当業者により日常的に行われる。適切な投与量は、適切な用量反応データと組み合わせて血中レベル投与量を決定するための確立されたアッセイの使用により確認されてよい。最終的な投与レジメンは、薬物の作用を調節する様々な要因、例えば、薬物の比活性、損傷の重症度及び患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別及び食事、任意の感染の重症度、投与時期ならびにその他の臨床的要因を考慮して、主治医により決定されるだろう。研究が実施されるにつれて、適切な投与量レベルならびに様々な疾患及び状態の処置期間に関するさらなる情報が現れるだろう。
【００９８】
ＶＩ．製剤の治療的使用
当業者には理解されるように、多様なコレステロール、ＬＤＬ、ＬＤＬＲ、ＰＣＳＫ９、ＶＬＤＬ−Ｃ、アポタンパク質Ｂ（「ＡｐｏＢ」）、リポタンパク質Ａ（「Ｌｐ（ａ）」）、トリグリセリド、ＨＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、及び総コレステロールレベルに関連し、それらに関与し、またはそれらによって影響され得る障害は、本発明の医薬製剤によって対処され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、血清コレステロールレベルの上昇に関連する、または血清コレステロールレベルの上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、ＰＣＳＫ９値の上昇に関連する、またはＰＣＳＫ９値の上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、総コレステロールレベルの上昇に関連する、または総コレステロールレベルの上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、非ＨＤＬコレステロールレベルの上昇に関連する、または非ＨＤＬコレステロールレベルの上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、ＡｐｏＢレベルの上昇に関連する、またはＡｐｏＢレベルの上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、Ｌｐ（ａ）レベルの上昇に関連する、またはＬｐ（ａ）レベルの上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、トリグリセリドレベルの上昇に関連する、またはトリグリセリドレベルの上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。一態様では、抗ＰＣＳ９抗体製剤は、ＶＬＤＬ−Ｃレベルの上昇に関連する、またはＶＬＤＬ−Ｃレベルの上昇が関連する障害を処置及び／もしくは予防する、ならびに／またはその障害のリスクを減少させる方法に使用され得る。
【００９９】
当業者には理解されるように、本発明の抗ＰＣＳ９抗体製剤は、コレステロール関連障害を処置及び／または予防するのに治療的に有用であり得る。本発明の医薬製剤の投与により処置または予防され得る、例示的で非限定的な疾患及び障害としては、家族性高コレステロール血症、非家族性高コレステロール血症、高脂血症、心疾患、メタボリックシンドローム、糖尿病、冠動脈性心疾患、脳卒中、心血管疾患、アルツハイマー病及び一般的な脂質異常症が挙げられ、これらは例えば、血清総コレステロールの上昇、ＬＤＬの上昇、トリグリセリドの上昇、ＶＬＤＬの上昇、及び／または低ＨＤＬによって示され得る。本明細書に記載される製剤を、単独でまたは１種以上のその他の薬剤と組み合わせたいずれかで使用して処置され得る、原発性及び続発性脂質異常症のいくつかの非限定的例としては、メタボリックシンドローム、真性糖尿病、家族性複合型高脂血症、家族性高トリグリセリド血症、ヘテロ接合型高コレステロール血症、ホモ接合型高コレステロール血症、家族性欠陥アポプリポタンパク質（ａｐｏｐｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）Ｂ−１００；多遺伝子性高コレステロール血症を含む、家族性高コレステロール血症；レムナント除去病、肝性リパーゼ欠損症；以下：食傷、甲状腺機能低下症、エストロゲン及びプロゲスチン療法を含む薬物、ベータ遮断薬、及びチアジド利尿薬のうちいずれかに続発する脂質異常症；ネフローゼ症候群、慢性腎不全、クッシング症候群、原発性胆汁性肝硬変、糖原病、ヘパトーマ、胆汁鬱滞、先端巨大症、インスリノーマ、成長ホルモン単独欠損症、ならびにアルコール誘発性高トリグリセリド血症が挙げられる。本発明の製剤は、アテローム性動脈硬化疾患、例えば、心血管死亡、非心血管死亡または全死因死亡、冠動脈性心疾患、冠動脈疾患、末梢動脈疾患、脳卒中（虚血性及び出血性）、狭心症、または脳血管疾患及び急性冠症候群、心筋梗塞ならびに不安定狭心症などの予防または処置にも有用であり得る。いくつかの実施形態では、製剤は、致死性及び非致死性心臓発作、致死性及び非致死性脳卒中、ある特定の種類の心臓手術、心不全のための入院、心疾患に罹患している患者の胸痛、ならびに／または既存の心疾患、例えば以前の心臓発作、以前の心臓手術などによる心血管イベント、ならびに／または閉塞動脈の徴候を有する胸痛ならびに／または移植関連血管疾患のリスクを減少させるのに有用である。いくつかの実施形態では、製剤は、ＣＲＰまたはｈｓＣＲＰの上昇による心血管リスクを予防する、または減少させるのに有用である。いくつかの実施形態では、製剤及び方法は、再発性心血管イベントのリスクを減少させるために使用され得る。
【０１００】
当業者には理解されるように、スタチンの使用により一般に対処可能な（処置可能または予防可能ないずれかの）疾患または障害は、本発明の製剤の適用からも恩恵を受け得る。加えて、当業者には理解されるように、本発明の製剤の使用は、糖尿病の処置に特に有用であり得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、真性糖尿病、腹部大動脈瘤、アテローム性動脈硬化症及び／または末梢血管疾患を有する患者に、その患者の血清コレステロールレベルをより安全な範囲まで低減させるために投与される。いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、本明細書に記載される障害のいずれかを発症するリスクがある患者に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の製剤は、喫煙している、または以前に喫煙していた（すなわち、喫煙経験者）、高血圧である、または若年心臓発作の家族歴を有する対象に投与される。
【０１０２】
製剤は、障害を持つ対象を治癒する必要はない。製剤は、全体的もしくは部分的にコレステロール関連障害もしくはその症状を改善するために、または全体的もしくは部分的にコレステロール関連障害もしくはその症状のさらなる進行から保護するために治療的に使用されてよい。実際に、本発明の材料及び方法は、血清ＬＤＬコレステロールの低下及びある期間にわたる血清ＬＤＬコレステロールの減少の維持に特に有用である。
【０１０３】
本明細書に記載される製剤の１回以上の投与は、例えば約２週間〜約１２か月（例えば、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、または約１１か月）の治療期間にわたって実施されてよい。いくつかの実施形態では、対象は、血清ＬＤＬコレステロールを低下させるために製剤の１回以上の用量を投与される。「血清ＬＤＬコレステロールの減少を維持する」という用語は、本明細書で使用する場合、製剤の初期用量から得られる血清ＬＤＬコレステロールの減少が、約２週間、約１か月、約２か月、約３か月、約６か月、約９か月、約１年、約１８か月、約２年にわたって、または患者の生涯にわたって）約１％〜約５％を超えて降下しないことを意味する。
【０１０４】
加えて、特定の対象のために選択された治療レジメンに応じて、複数回用量の製剤を投与すること、または用量の投与間隔を空けることが有利である場合がある。製剤は、１年以下の期間（例えば、９か月以下、６か月以下、または３か月以下）にわたって周期的に投与され得る。この点に関して、製剤は、約７日、または２週間、または３週間、または１か月、または５週間、または６週間、または７週間、または２か月、または９週間、または１０週間、または１１週間、または３か月、または１３週間、または１４週間、または１５週間、または４か月、または１７週間、または１８週間、または１９週間、または５か月、または２１週間、または２２週間、または２３週間、または６か月、または１２か月に１回ヒトに投与され得る。
【０１０５】
ＶＩＩ．併用療法
同じ病原体または生化学的経路を標的とする２種以上の薬剤を組み合わせることによる病状の処置は、各薬剤単独の治療に関連する用量の使用と比較して、より高い有効性及び副作用の減少をもたらすことがある。いくつかの場合には、混合薬の有効性は相加的（混合の有効性が各薬剤単独での効果の和にほぼ等しい）であるが、その他の場合には、効果は相乗的（混合の有効性が所与の各薬剤単独での効果の和よりも高い）であり得る。本明細書で使用する場合、「併用療法」という用語は、２種類の化合物が同時に、例えば並行して送達され得る、または化合物のうちの１種が最初に投与されて、続いて第２薬剤が投与されるような、例えば連続して送達され得ることを意味する。望ましい結果は、投与のレシピエントにおける１つ以上の症状の主観的な軽減または客観的に特定可能な改善のいずれかであり得る。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、製剤は、低減した骨ミネラル密度の処置のための標準治療薬の前に、それと同時に、またはそれの後に投与される。本明細書で使用する場合、「標準治療」という用語は、ある種の病気と診断されたある種類の患者に対する、臨床医によって一般に認められている処置を指す。いくつかの実施形態では、標準治療薬は、少なくとも１種のその他のコレステロール低下（血清及び／または全身コレステロール）剤である。例示的な薬剤としては、スタチン（アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン）、ニコチン酸（ナイアシン）（ＮＩＡＣＯＲ、ＮＩＡＳＰＡＮ（徐放性ナイアシン）、ＳＬＯ−ＮＩＡＣＩＮ（徐放性ナイアシン）、ＣＯＲＤＡＰＴＩＶＥ（ラロピプラント））、フィブリン酸（ＬＯＰＩＤ（ゲムフィブロジル）、ＴＲＩＣＯＲ（フェノフィブラート）、胆汁酸捕捉剤（ＱＵＥＳＴＲＡＮ（コレスチラミン）、コレセベラム（ＷＥＬＣＨＯＬ）、ＣＯＬＥＳＴＩＤ（コレスチポール））、コレステロール吸収阻害剤（ＺＥＴＩＡ（エゼチミブ））、ニコチン酸とスタチンとの組み合わせ（ＡＤＶＩＣＯＲ（ＬＯＶＡＳＴＡＴＩＮ及びＮＩＡＳＰＡＮ）、スタチンと吸収阻害剤との組み合わせ（ＶＹＴＯＲＩＮ（ＺＯＣＯＲ及びＺＥＴＩＡ）及び／または脂質修飾剤が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、製剤は、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト、スクアレンシンターゼ阻害剤、ＣＥＴＰ阻害剤、降圧剤、抗糖尿病剤（スルホニル尿素、インスリン、ＧＬＰ−１類似体、ＤＤＰＩＶ阻害剤、例えばメタホルミンなど）、ＡｐｏＢモジュレーター、例えばミポメルサン（ｍｉｐｏｍｅｒｓａｎ）など、ＭＴＰ阻害剤及び／または閉塞性動脈硬化症処置と組み合わされる。いくつかの実施形態では、製剤は、対象においてＬＤＬＲタンパク質のレベルを増加させる薬剤、例えばスタチン、オンコスタチンＭのようなある種のサイトカイン、エストロゲン、及び／またはベルベリンなどのある種の薬草成分などと組み合わされる。いくつかの実施形態では、製剤は、対象において血清コレステロールレベルを増加させる薬剤（ある種の抗精神病剤、ある種のＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、食事要因、例えば高フルクトース、スクロース、コレステロールまたはある種の脂肪酸など、ならびにＲＸＲ、ＲＡＲ、ＬＸＲ、ＦＸＲに対するある種の核内受容体アゴニスト及びアンタゴニストなど）と組み合わされる。いくつかの実施形態では、製剤は、対象においてＰＣＳＫ９のレベルを増加させる薬剤、例えばスタチン及び／またはインスリンなどと組み合わされる。２種の組み合わせは、その他の薬剤の望ましくない副作用が製剤によって軽減されることを可能にし得る。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、製剤は、本明細書に記載される標準治療薬の処置が禁忌である場合に対象に投与される。
【実施例】
【０１０８】
実施例１−抗体２１Ｂ１２の結晶化
ｐＨ５．０の２０ｍＭの酢酸ナトリウム、２２０ｍＭのプロリン、０．０１０％ポリソルベート８０中における抗体２１Ｂ１２（配列番号１７及び１９、図４Ａ及び図４Ｂ）（１２０ｍｇ／ｍｌ）を、Ｂｉｏ−Ｒａｄの脱塩カラムを使用して、ｐＨ５．０の２０ｍＭの酢酸緩衝液中で脱塩した。抗体２１Ｂ１２を、様々な条件下で結晶化した。
【０１０９】
抗体２１Ｂ１２の結晶化は、「ハンギングドロップ」蒸気拡散として知られる高分子の結晶化方法を用いる、３つの異なる結晶化スクリーン（Ｅｍｅｒａｌｄ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）を使用して達成した。タンパク質と結晶化試薬（「結晶化緩衝液」または「母液」または「結晶成長溶液」または「リザーバー溶液」）との混合物で構成される液滴を、シリコン処理したカバーガラスの下面に滴下し、次いでカバーガラス上の液滴を、封止のためにウェルの縁に油を塗布した後、典型的には２４ウェルＶＤＸトレイ（Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、アリソビエホ、カリフォルニア州（ＨＲ３−１４０）上に置き、試薬の液体リザーバーとの蒸気平衡を生じさせる。平衡を達成するために、液滴とトレイのウェル内における５００〜６００μＬのリザーバー溶液との間で水蒸気が交換される。液滴から水がなくなるにつれて、タンパク質の相対濃度が増加し、これは最終的に過飽和をもたらす場合がある。結晶化が生じるのに必要なのは、タンパク質の過飽和である。典型的には液滴は、リザーバーよりも低い濃度の試薬を含有し、典型的には等体積の試料及び試薬を混合して液滴を形成したため、液滴はリザーバー内試薬の半分の濃度を含有した。
【０１１０】
これらの実験において、液滴中の初期タンパク質濃度は、およそ１０ｍｇ／ｍｌであった。結晶化スクリーンを、シーラント付きの２４ウェルＶＤＸトレイに設置した。ＶＤＸトレイにおける各位置は、５００〜６００μＬの試薬リザーバーを含有したが、数々の異なる結晶化緩衝液条件を確立するために、各ウェルにおける試薬リザーバーは、その他のウェルにおける試薬リザーバーとは組成が異なっていた。１〜１０μＬのタンパク質を１〜１０μｌのリザーバー溶液に添加して、液滴を形成した。トレイを周囲室温でインキュベートした。
【０１１１】
結晶化スクリーン：抗体２１Ｂ１２を、３つの異なる結晶化スクリーンを使用して、合計でおよそ１４４の条件でスクリーニングし、２１の結晶ヒットをもたらした。
【０１１２】
抗体２１Ｂ１２を、Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ（Ｅｍｅｒａｌｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＥＢＳ−ＷＩＺ−１）、Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ（Ｅｍｅｒａｌｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＥＢＳ−ＷＩＺ−２）及びＣｒｙｏ  Ｉ（Ｅｍｅｒａｌｄ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＥＢＳ−ＣＲＹＯ−１）でスクリーニングした。主なスクリーン変数は、ｐＨ４．５〜ｐＨ１０．５で広範囲な結晶化領域を網羅する緩衝液、塩である。合計で１４４の条件をスクリーニングし、抗体２１Ｂ１２は、以下の条件で結晶化した：Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃５（３０％ＰＥＧ４００、ｐＨ１０．５の０．１ＭのＣＡＰＳ）では、１４日後に針の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃９（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ４．５の０．１Ｍの酢酸塩）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃１０（２０％のＰＥＧ  ２Ｋ  ＭＭＥ、ｐＨ７の０．１ＭのＴｒｉｓ）では、１日後に微小な針の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃１３（１．２６Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ６．５の０．１Ｍのカコジル酸塩）では、１４日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃１５（１０％ＰＥＧ３０００、ｐＨ８．０の０．１Ｍのイミダゾール、０．２ＭのＬｉ２ＳＯ４）では、１４日後に（アーモンド状の楕円形のような）尖った楕円形の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃２０（０．４Ｍ／１．６ＭのＮａＨ２／Ｋ２ＨＰＯ４、ｐＨ８．０の０．１Ｍのイミダゾール、０．２ＭのＮａＣｌ）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃２７（１．２Ｍ／０．８ＭのＮａＨ２／Ｋ２ＨＰＯ４、ｐＨ１０．５の０．１ＭのＣＡＰＳ、０．２ＭのＬｉ２ＳＯ４）では、１４日後に長い棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃３４（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ８．０の０．１Ｍのイミダゾール）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃４６（１０％のＰＥＧ  ８Ｋ、ｐＨ８．０の０．１Ｍのイミダゾール、０．２Ｍの酢酸Ｃａ）では、１４日後に糸様針の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  Ｉ  ＃４７（１．２６Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ８．５の０．１のＴｒｉｓ、０．２ＭのＬｉ２ＳＯ４）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃６（１０％ＩＰＡ、ｐＨ４．２の０．１Ｍのリン酸クエン酸塩、０．２ＭのＬｉ２ＳＯ４）では、２２日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃１０（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ８．５の０．１ＭのＴｒｉｓ）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃１９（１．６Ｍ／０．４ＭのＮａＨ２ＰＯ４／Ｋ２ＨＰＯ４、ｐＨ４．２の０．１Ｍのリン酸クエン酸塩）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃２６（３０％ＰＥＧ４００、ｐＨ９．５の０．１ＭのＣＨＥＳ）では、２２日後に細い針の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３１（１．０Ｍのクエン酸Ｎａ、ｐＨ７．０の０．１ＭのＴｒｉｓ、０．２ＭのＮａＣｌ）では、２２日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３３（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ５．５の０．１Ｍのクエン酸塩、０．２のＮａＣｌ）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３４（１０％ＰＥＧ８０００、ｐ���８．０の０．１のイミダゾール）では、２２日後に微小な針の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３７（１．０Ｍの酒石酸Ｎａ／Ｋ、ｐＨ７．０の０．１ＭのＴｒｉｓ、０．２ＭのＬｉ２ＳＯ４）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３９（２０％ＰＥＧ８０００、ｐＨ１０．５の０．１ＭのＣＡＰＳ、０．２ＭのＮａＣｌ）では、２２日後に針の結晶形態で；Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃４６（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ８．０の０．１Ｍのイミダゾール、０．２のＮａＣｌ）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で；及びＷｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃４８（１．０Ｍの酒石酸Ｎａ／Ｋ、ｐＨ６．０の０．１ＭのＭＥＳ）では、１日後に六角形の棒の結晶形態で結晶化した。
【０１１３】
様々な形態の抗体２１Ｂ１２結晶は、液体製剤中の抗体が、ある体積の既知の結晶化試薬に添加されて密閉容器内で保存されることにより、スケールアップ条件下で成長し得る。抗体２１Ｂ１２結晶は、これらの条件下において２４時間未満で成長し得る。
【０１１４】
本実施例は、抗体２１Ｂ１２が様々な結晶化条件下で結晶化可能であったが、結晶は試験した全ての条件下で形成した訳ではなかったことを実証している。およそ１４４の結晶化条件を、多数の異なる市販の（すなわち、Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｅｍｅｒａｌｄ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）及び独自のスクリーンで試験した。
【０１１５】
実施例２−抗体２１Ｂ１２結晶ヒットのマイクロバッチ最適化
実施例１に記載されるように抗体２１Ｂ１２結晶の生成に成功することを証明した一定の条件を、以下の通りにマイクロバッチ最適化のために選択した。別段の注記がない限り、全ての条件で、Ｂｉｏ−Ｒａｄの脱塩カラムを使用してｐＨ５．０の２０ｍＭの酢酸緩衝液中で脱塩した、ｐＨ５．０の１０ｍＭの酢酸ナトリウム、２２０ｍＭのプロリン、０．０１０％ポリソルベート８０中における抗体２１Ｂ１２（１２０ｍｇ／ｍｌ）を使用した。２本の成熟重鎖（配列番号１９）及び２本の成熟軽鎖（配列番号１７）の各々をコードするＤＮＡによって組換え産生された、これらの鎖から成る抗体２１Ｂ１２を、様々な条件下で結晶化した。
【０１１６】
７〜１０ｍｇ／ｍｌでのＷｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃１０（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ８．５の０．１ＭのＴｒｉｓ）：
抗体２１Ｂ１２を、７〜１０ｍｇ／ｍｌでＷｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃１０（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ８．５の０．１ＭのＴｒｉｓ）でスクリーニングし、以下の表２．１に記載されている条件を使用して最適化した。
【表２−１Ａ】
2020172526.tif 000003
【表２−１Ｂ】
2020172526.tif 000004
【０１１７】
抗体２１Ｂ１２結晶を、１日後にｐＨ４〜９において、０．６５Ｍ〜０．８Ｍの塩濃度で観察した。結晶形態は、（条件に基づいて短い及び長い）棒であった。
【０１１８】
Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３３（１．０Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ５．５の０．１Ｍのクエン酸塩、０．２ＭのＮａＣｌ）：
この条件では、異なる（ＮＨ４）２ＨＰＯ４濃度、異なるＮａＣｌ濃度、及び異なる抗体２１Ｂ１２濃度を試験した。最適条件は、０．６Ｍの（ＮＨ４）２ＨＰＯ４、ｐＨ５．５の０．０５Ｍのクエン酸塩、０．１ＭのＮａＣｌであった。結晶のサイズは不均一であって、（ＮＨ４）２ＨＰＯ４塩は、より低いｐＨにおいてＮａＣｌなしで抗体２１Ｂ１２を結晶化した。Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３３の最適化条件は、以下の表２．２及び２．３に記載している。
【表２−２Ａ】
2020172526.tif 000005
【表２−２Ｂ】
2020172526.tif 000006
【表２−３Ａ】
2020172526.tif 000007
【表２−３Ｂ】
2020172526.tif 000008
【０１１９】
Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃４８（１．０Ｍの酒石酸Ｎａ／Ｋ、ｐＨ６．０の０．１ＭのＭＥＳ）：
この条件では、異なる酒石酸Ｎａ／Ｋ濃度及び異なる抗体２１Ｂ１２濃度を試験した。また、異なる緩衝液をＭＥＳ緩衝液と置き換えて試験した。最適条件は、０．７Ｍの酒石酸Ｎａ／Ｋ、ｐＨ６．０の０．０５Ｍの酢酸塩であった。最適化条件は、以下の表２．４に記載している。
【表２−４Ａ】
2020172526.tif 000009
【表２−４Ｂ】
2020172526.tif 000010
【０１２０】
Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃１９（１．６Ｍ／０．４ＭのＮａＨ２ＰＯ４／Ｋ２ＨＰＯ４、ｐＨ４．２の０．１Ｍのリン酸クエン酸塩）
この条件では、異なるＮａＨ２ＰＯ４／Ｋ２ＨＰＯ４緩衝液濃度（リン酸塩濃度）、異なるｐＨ及び異なる抗体２１Ｂ１２濃度を試験した。脱塩した抗体２１Ｂ１２の最適条件は、ｐＨ５．３の１．４Ｍのリン酸塩、１３ｍｇ／ｍｌの抗体２１Ｂ１２であって、９５％超の結晶化収率をもたらした。ｐＨ５．０の１０ｍＭの酢酸塩、２２０ｍＭのプロリン、０．０１％ポリソルベート８０中における抗体２１Ｂ１２の最適条件は、ｐＨ５．３の１．３Ｍのリン酸塩、６４ｍｇ／ｍＬの抗体２１Ｂ１２であって、９９％の収率であった。最適化条件は、表２．５及び２．６に記載している。
【表２−５Ａ】
2020172526.tif 000011
【表２−５Ｂ】
2020172526.tif 000012
【表２−５Ｃ】
2020172526.tif 000013
【表２−６Ａ】
2020172526.tif 000014
【表２−６Ｂ】
2020172526.tif 000015
【表２−６Ｃ】
2020172526.tif 000016
【０１２１】
Ｗｉｚａｒｄ  ＩＩ  ＃３４（１０％ＰＥＧ８０００、ｐＨ８．０の０．１Ｍのイミダゾール）：
この条件では、異なるＰＥＧ及び抗体２１Ｂ１２濃度を、ｐＨ８．０のＴｒｉｓ緩衝液で試験した。より若干の毛様で細い針をバッチで観察した。最適化条件は、以下の表２．７及び２．８に記載している。
【表２−７Ａ】
2020172526.tif 000017
【表２−７Ｂ】
2020172526.tif 000018
【表２−８Ａ】
2020172526.tif 000019
【表２−８Ｂ】
2020172526.tif 000020
【０１２２】
実施例３−１ｍｌのバッチ結晶化及び状態図
ｐＨ５．０の２０ｍＭの酢酸塩、２２０ｍＭのプロリン、０．０１％ポリソルベート８０中における抗体２１Ｂ１２（配列番号１７及び１９、図４Ａ及び図４Ｂ）を、１．５ｍｌの遠心管内において１．０ｍｌの最終体積でバッチ結晶化した。抗体２１Ｂ１２の結晶化条件は、ｐＨ５．３の１．３Ｍのリン酸塩、６４ｍｇ／ｍＬの抗体２１Ｂ１２であって、９９％の収率であった。ｐＨ５．０の２０ｍＭの酢酸塩中で脱塩した抗体２１Ｂ１２を、１．５ｍｌの遠心管内において１ｍｌの最終体積で、１．４Ｍのリン酸塩（ｐＨ５．３）の最終濃度で、１３ｍｇ／ｍＬの抗体２１Ｂ１２を用いて９７％の収率でバッチ結晶化した。
【０１２３】
バッチを、１．５ｍＬの微量遠心管にリン酸塩及び抗体２１Ｂ１２を添加し、フィッシャー（ｆｉｓｈｅｒ）のデジタルミキサー上で３０００に設定し、急速にボルテックスして混合すること（混合物が均一に混合されたように見えるまで数秒）により作製した。より高濃度バッチは、より低濃度の抗体２１Ｂ１２バッチよりも、混合にさらに数秒を要した（より低濃度には約５秒、より高濃度には約８秒を要した）。この最初の混合後、バッチを室温で静止状態にして、一晩または２日間インキュベートした。
【０１２４】
状態図を、この結晶化条件について１ｍｌスケールで決定し、結晶化パラメータ、例えばリン酸塩ｐＨ、リン酸塩濃度、抗体２１Ｂ１２濃度及び温度などの変化の影響を調べた。
【０１２５】
リン酸塩ｐＨスクリーン：
結晶形成は、他のｐＨと比較してｐＨ４．２で急激に速くなった。したがって、このｐＨを選択し、リン酸塩濃度を試験した。リン酸緩衝液のストック溶液を、３．５Ｍの濃度で３．７〜４．７のｐＨ範囲において０．２ｐＨ単位ずつ増加させて作製した。バッチを、最終抗体２１Ｂ１２濃度が８２．８ｍｇ／ｍＬで、最終リン酸塩濃度が１．３Ｍのリン酸塩であるように、異なる試験ｐＨで作製した。リン酸塩を３回に分けて添加し、添加の間に３０分間インキュベートした。最初に０．９Ｍを一度に全て添加し、次いで総リン酸塩濃度を１．３Ｍにするための残りの量を０．２Ｍずつ２回に分けて添加した。バッチを２ｍＬの遠心管内において作製し、ボルテックスミキサー上でリン酸塩を添加するごとに３０００ｒｐｍで約１０〜１５秒間混合し、室温で静止状態にしてインキュベートした。収率及び結晶サイズを３．０〜３．５時間で測定した。実験の概要を以下の表３．１に示す。
【表３−１】
2020172526.tif 000021
【０１２６】
リン酸塩濃度スクリーン：
リン酸緩衝液のストック溶液を、３．５Ｍの濃度においてｐＨ４．２で作製した。０．５Ｍ〜１．５Ｍのリン酸塩濃度を、０．２Ｍずつ増加させて試験した。バッチを２ｍＬの遠心管内において、最終抗体２１Ｂ１２濃度が７５ｍｇ／ｍＬで、最終リン酸塩濃度が０．５〜１．５ＭであるようにｐＨ４．２で作製した。リン酸塩の最終濃度が１．５Ｍに到達するリン酸塩量の増加に伴い、抗体２１Ｂ１２を７５ｍｇ／ｍＬまで希釈した。リン酸塩を、０．５Ｍ〜１．５Ｍのバッチで一度に全て抗体２１Ｂ１２に添加し、最高速度設定で約１０秒間ボルテックス混合し、室温で静止状態を維持した。収率及び結晶サイズを３．０〜３．５時間で測定した。１．３及び１．５Ｍの最終リン酸塩濃度について一度での添加に加えて、１．３Ｍでは２段階添加（０．９Ｍ＋０．４Ｍ）ならびに１．５Ｍのリン酸塩では２段階添加（０．９Ｍ＋０．６Ｍ）及び３段階添加（０．９＋０．３Ｍ＋０．３Ｍ）を、各添加について３０分間隔で実施し、各添加におけるリン酸塩の耐性を確認する。実験の概要を表３．２に示す。１．１〜１．５Ｍには一度でのリン酸塩添加に耐性がなく、ゲル形成をもたらした。したがって、以下の実験では結晶化収率を改善するために、リン酸塩の段階添加を選択した。
【表３−２】
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【０１２７】
抗体２１Ｂ１２濃度スクリーン：
結晶化バッチを、６０、７０及び８０ｍｇ／ｍＬの最終抗体２１Ｂ１２濃度において１ｍＬスケールで作製した。バッチを、２Ｍｌの遠心管内においてｐＨ４．２で１．３Ｍのリン酸塩濃度で作製した。リン酸塩を３回に分けて添加し、添加の間に３０分間インキュベートした。最初に０．９Ｍを一度に全て添加し、次いで総リン酸塩濃度を１．３Ｍにするための残りの量を０．２Ｍずつ２回に分けて添加した。バッチを、ボルテックスミキサー上でリン酸塩の添加ごとに最高速度設定で１０〜１５秒間混合し、室温でインキュベートした。収率及び結晶サイズをおよそ３．５時間で試験した。実験の概要を表３．３に示す。６０ｍｇ／ｍｌのタンパク質バッチに対して、８０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度では良好な品質の結晶及び良好な収率が得られたので、およそ８０ｍｇ／ｍｌのタンパク質をさらなる最適化実験において選択した。
【表３−３】
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【０１２８】
温度スクリーン：
結晶化バッチを、１５℃〜２５℃の範囲で２℃ずつ増加させた異なる温度において１ｍＬスケールで実施した。バッチを、ｐＨ４．２において１．３Ｍのリン酸塩濃度で作製し、最終抗体２１Ｂ１２濃度が８２．８ｍｇ／ｍＬであった。バッチを、２ｍＬの遠心管内において試験温度に平衡させた抗体２１Ｂ１２及び試薬を用いて作製した。リン酸塩を３回に分けて添加し、添加の間に３０分間インキュベートした。最初に０．９Ｍを一度に全て添加し、次いで総リン酸塩濃度を１．３Ｍにするための残りの量を０．２Ｍずつ２回に分けて添加した。バッチを、ボルテックスミキサー上でリン酸塩の添加ごとに最高速度設定でおよそ１０〜１５秒間混合し、温度制御水槽内でインキュベートした。収率及び結晶サイズをおよそ３．５時間で試験した。実験の概要を表３．４に示す。より高い１９〜２５℃での結晶化は、温度の増加に伴い高品質な結晶をもたらした。
【表３−４】
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【０１２９】
実施例４−１０ｍｌスケールでのバッチ最適化：
バッチを、実施例３におけるような１ｍＬスケールで生成した状態図のさらなる確認のために１０ｍＬスケールで作製した。１０ｍＬの実験では、データは連続混合を用いて生成したが、その理由とはこのパラメータを１ｍＬスケールで調査できなかったからである。
【０１３０】
１０ｍＬスケールでの結晶化を丸底ガラス管において、サイズＡ５１１の傾斜翼プロペラ及びデジタルスターラーを使用したオーバーヘッド連続混合で実施した。混合速度を、１０ｍＬバッチでは５００ｒｐｍに設定した。リン酸塩を、２段階添加プロセスを使用し、蠕動ポンプを使用して制御した流速で抗体２１Ｂ１２溶液にポンプ注入した。最初に、２．１８ｍＬの３．５Ｍリン酸塩（総リン酸塩濃度を０．９Ｍにする）を０．４ｍＬ／分の流速で添加し、１時間のインキュベーション後、残りのリン酸塩（１．５６ｍＬ）を０．２ｍＬ／分の流速で添加した（総リン酸塩濃度を１．３Ｍにする）。結晶化を合計で３時間実施し、次いで結晶サイズ及び収率を測定した。連続混合条件下において、試薬ｐＨ、試薬濃度及び結晶化温度のようなパラメータを１０ｍｌスケールで再評価した。
【０１３１】
リン酸塩ｐＨ：
ｐＨ４．１〜４．７のリン酸塩溶液を、０．２ｐＨ単位ずつ増加させてスクリーニングした。実験の概要を以下の表４．１に示す。バッチを作製し、室温で最終抗体２１Ｂ１２濃度がおよそ８０ｍｇ／ｍＬであり１．３Ｍのリン酸塩であった。結果は表４．１にまとめた。次のパラメータ試験のために、結晶化ｐＨ範囲の中間である試薬ｐＨ４．４を選択した。
【表４−１】
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【０１３２】
リン酸塩濃度：
１．０Ｍ、１．２Ｍ、１．４Ｍ及び１．５Ｍのリン酸塩濃度を、４．４のｐＨで試験した。実験の概要を以下の表４．２に示す。バッチを作製し、室温で最終抗体２１Ｂ１２濃度がおよそ８０ｍｇ／ｍＬであり、１．０Ｍ、１．２Ｍ及び１．３Ｍのリン酸塩であった。１．４Ｍ及び１．５Ｍのリン酸塩については、所望のリン酸塩濃度を達成するにはより多くのストック溶液が必要であったため、抗体２１Ｂ１２濃度をそれぞれおよそ７７ｍｇ／ｍＬ及びおよそ７３ｍｇ／ｍＬまで減少させた。結果は表４．２にまとめた。１．５Ｍのリン酸塩濃度は、より低いリン酸塩濃度と比較して、肉眼での観測で結晶懸濁液の流動が比較的容易であった。したがって、１．５Ｍのリン酸塩を、次のパラメータを最適化するためにｐＨ４．４と共に選択した。
【表４−２】
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【０１３３】
温度：
２１、２３、２５、２７、３０及び３５℃の温度を、４．４のｐＨで１．５Ｍのリン酸塩濃度において試験した。結果を含む、実験の概要を以下の表４．３に示す。バッチを作製し、最終抗体２１Ｂ１２濃度がおよそ７３ｍｇ／ｍＬであった。
【表４−３】
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【０１３４】
実施例５−２０ｍｌのバッチ結晶化及び％収率
抗体２１Ｂ１２（配列番号１７及び１９、図４Ａ及び図４Ｂ）を、ｐＨ４．４で１．５Ｍの最終リン酸塩濃度を有するリン酸緩衝液及び７３．８ｍｇ／ｍＬの最終２１Ｂ１２抗体濃度を使用して結晶化した。
【０１３５】
混合速度の影響を２０ｍＬスケールで研究した。バッチを、５００ｒｐｍ混合及び８００ｒｐｍ混合を並べて、両方の混合速度についてリン酸塩添加を同じ流速に維持しながら作製した。実験の第１セットでは、第１段階のリン酸塩添加を１．０、２．０及び３．０ｍＬ／分で試験し、第２段階におけるリン酸塩添加の速度を０．２ｍＬ／分に固定した。実験の第２セットでは、第１段階のリン酸塩添加の速度を０．８ｍＬ／分に固定し、第２段階のリン酸塩添加の速度を０．５、１．０及び２．０ｍＬ／分で変動させた。実験は、実施例４に記載されている１０ｍＬスケールバッチと同様の条件を使用して設定した。サイズＡ５１１の傾斜翼プロペラを備え、オーバーヘッド攪拌を用いる丸底ガラス管を室温で設置した。結晶化により、およそ７３ｍｇ／ｍＬの最終抗体２１Ｂ１２濃度及び４．４のｐＨにおける１．５Ｍのリン酸塩が得られた。結晶サイズ及び収率を３時間で測定した。結晶形態は、短い六角形の棒であった。収率及び結晶サイズは、およそ５〜１０μｍであって、実験の開始３．０時間後に測定した。結晶サイズを、ｉｍａｇｅ  ｐｒｏソフトウェアを使用して顕微鏡で測定した。結果を含む、実験の概要を以下の表５．１及び５．２に示す。
【表５−１】
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【表５−２】
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【０１３６】
実施例６−５０ｍｌのバッチ結晶化及び％収率
実施例５に記載されるように抗体２１Ｂ１２結晶の生成に成功することを証明した一定の条件を、以下の通りに最適化のために選択した：
【０１３７】
結晶化を、丸底ポリカーボネート管（Ｎａｌｇｅｎｅの上部が切断された遠心ボトル、直径５．８ｃｍ）及びサイズＡ５２１の傾斜翼プロペラにおいて設定した。２つのバッチを作製し、１つは５００ｒｐｍ混合で、もう一方は７００ｒｐｍ混合であった。リン酸塩添加速度は、総結晶化体積において０．９Ｍのリン酸塩に到達するように、第１段階のリン酸塩添加については３ｍＬ／分とした。１時間のインキュベーション後、リン酸塩の第２添加を１．５Ｍの最終リン酸塩濃度を得るように１．０ｍＬ／分で行った。抗体２１Ｂ１２の最終濃度は、４．４のｐＨでおよそ７３ｍｇ／ｍＬであった。結晶サイズはおよそ５μｍであり、形状は六角形の短い棒であった。実験の概要を以下の表６．１に示す。５００ｒｐｍの混合速度による結晶化は、実験の開始からおよそ１時間の試薬の第１添加後では均一に混合していなかったが、７００ｒｐｍによる実験では、結晶化全体を通して懸濁液を均一に混合していた。第２添加後、５００ｒｐｍ及び７００ｒｐｍでの両方の結晶化実験では均一に混合し、同様の種類の結晶品質をもたらした。
【表６−１】
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【０１３８】
実施例７−１００ｍｌのバッチ結晶化及び％収率
実施例６に記載されるように抗体２１Ｂ１２結晶の生成に成功することを証明した一定の条件を、以下の通りに最適化のために選択した：
【０１３９】
１００ｍＬバッチの結晶化を、室温に近い温度の２１及び２５℃で実施した。タンパク質溶液を、丸底ポリカーボネート管（Ｎａｌｇｅｎｅの上部が切断された遠心ボトル、直径５．８ｃｍ）内に入れ、サイズＡ５２１のプロペラを用いて８００ｒｐｍで混合した。リン酸塩添加速度は、総結晶化体積において０．９Ｍのリン酸塩に到達するように、第１段階の添加において３ｍＬ／分とした。１時間のインキュベーション後、リン酸塩の第２添加を１．５Ｍの最終リン酸塩濃度を得るように１．０ｍＬ／分で行った。抗体２１Ｂ１２の最終濃度は、４．４のｐＨでおよそ７３ｍｇ／ｍＬであった。結晶サイズ及び収率を、リン酸塩添加の開始から１５、３０、６０、９０及び１８０分でモニターした。結晶サイズは、およそ２〜５μｍで変動した。最初のうちは、より小さな結晶が多く、より大きく成長して経時的にサイズが均一になった。結晶形状は、六角形の短い棒であった。さらに収率も７４％（１５分）〜９９．５％（９０分）と経時的に改善し、１８０分でも同じままであった。
【０１４０】
１００ｍＬバッチについては、結晶化を、上記のようなリン酸塩添加及び混合速度に従って３５℃で実施した。実験では結晶を製造することなく、ゲル形成による大きな塊の形成をもたらした。結果を含む、実験の概要を以下の表７．１に示す。
【表７−１】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ−１】
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【図１Ｂ−２】
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【図１Ｂ−３】
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【図１Ｂ−４】
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【図２Ａ】
2020172526.tif 000037
【図２Ｂ】
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【図３】
2020172526.tif 000039
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
2020172526.tif 000041
【配列表】
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【外国語明細書】
2020172526000001.pdf