(57)【要約】      （修正有）【課題】進行期非扁平上皮肺癌を対象とした細胞障害性化学療法の治療感受性を判別するための方法を提供する。【解決手段】進行期非扁平上皮肺癌患者を対象とした化学療法の感受性を判別するための情報を提供する方法であって、進行期非扁平上皮肺癌患者由来のサンプルにおいて、少なくとも、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６７９３６｜ＴＰＭ４＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ２８０６６｜ＰＳＡ５＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｑ９Ｙ２６６｜ＮＵＤＣ＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６１１６０｜ＡＲＰ２＿ＨＵＭＡＮ及びＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６０１７４｜ＴＰＩＳ＿ＨＵＭＡＮの５種類のタンパク質の発現量を測定する工程、を含む進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法感受性を判別するための方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法反応性を評価するための情報の取得と判別法を提供する方法であって、
少なくとも、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６７９３６｜ＴＰＭ４＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ２８０６６｜ＰＳＡ５＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｑ９Ｙ２６６｜ＮＵＤＣ＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６１１６０｜ＡＲＰ２＿ＨＵＭＡＮ及びＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６０１７４｜ＴＰＩＳ＿ＨＵＭＡＮの５種類のタンパク質の発現量を測定する工程、
を含む進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法反応性を判別するための情報を提供する方法。
【請求項２】
請求項１に記載の少なくとも５種類のタンパク質の発現量を用いて治療抵抗性リスクを判別する工程、
を含む進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法感受性を判別するための方法。
【請求項３】
前記進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法感受性を判別する工程が、
請求項２に記載の少なくとも５種類のタンパク質の発現量に基づいた治療抵抗性リスクを用いて、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法反応性を評価する工程、
を含む進行期非扁平上皮肺癌患者の治療反応性を判別するための方法。
【請求項４】
請求項１に記載の少なくとも５種類のタンパク質と同じアミノ酸配列を有する合成タンパク質を含み、
前記合成タンパク質の各々が、同位体標識されたアミノ酸を含む内部標準。
【請求項５】
請求項１に記載の少なくとも５種類のタンパク質を検出するための抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法（カルボプラチンとペメトレキセド併用療法）反応性を評価し判別するため方法に関する。進行期非扁平上皮肺癌患者由来の血液中の特定タンパク質の発現量を測定することで、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法に対する反応性を判別し、有効な化学療法を実施するための判断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本を含む殆どの先進諸国において、がんによる部位別死亡者数の中で、肺癌による死亡は第１位を占めている。進行期肺癌に対しては、様々な治療薬の組合せに関する検討及び新たな分子標的薬の開発が行われているが、日本においては毎年約７０，０００人の肺癌患者（以下、単に「患者」と記載することがある。）が死亡している。
【０００３】
肺癌患者の半数以上は診断時にはすでに進行期にあり、手術治療による完治を目指す事が出来ず、化学療法による生存期間の延長やＱＯＬ（生活の質）の改善を目指した治療がおこなわれる。
【０００４】
化学療法とは、化学物質を基盤とした薬剤で、がん細胞のＤＮＡ合成に必要な代謝物やＤＮＡ合成を直接阻害する事により、がん細胞を死滅させることを目的とした治療法を示す。化学療法が医学的に肺癌に対して有効であるとは、癌の大きさが半分以下になり、その状態が４週間以上持続する事を示す。
【０００５】
化学療法は、がん細胞に細胞死を誘導する一定の効果が認められる半面、内臓機能の障害を誘導、さらには２次的がん発生の危険性を有するなど、健康上の重篤な不利益につながる可能性を秘めている。このため、より治療効果の高い患者を選択肢、効率的に化学療法を遂行することが望まれている。
【０００６】
一部の分子標的薬に関しては、有効性の高い患者の選択が可能である。例えば、ＥＧＦＲ遺伝子に点当然変異を有する肺癌患者ではＥＧＦＲを標的とする治療薬に対する反応性が良好であることが知られている。然しながら、現状では、細胞障害性化学物質を用いた化学療法については、有効な患者選択法が無く、病期あるいは全身状態を基盤情報として一律に化学療法が行われている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記従来の問題を解決するためになされた発明であり、鋭意研究を行ったところ、患者血液由来のサンプルにおいて、少なくとも、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６７９３６｜ＴＰＭ４＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ２８０６６｜ＰＳＡ５＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｑ９Ｙ２６６｜ＮＵＤＣ＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６１１６０｜ＡＲＰ２＿ＨＵＭＡＮ及びＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６０１７４｜ＴＰＩＳ＿ＨＵＭＡＮの５種類のタンパク質の発現量を測定し、当該発現量が化学療法抵抗性を示す肺癌患者の血液中で高値を示すことを見出した。なお、本発明のＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．は、全てＵｎｉｐｒｏｔデータベースの番号である。
【０００８】
すなわち、本発明の目的は、進行期非扁平上皮肺癌患者由来の血液中の特定タンパク質の発現量を測定することで、肺癌患者の化学療法に対する反応性を予測し、有効な化学療法を実施するための判断方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、以下に示す、進行期非扁平上皮肺癌患者由来の血液中の特定タンパク質の発現量を測定することで、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法に対する反応性を予測し、有効な化学療法を実施するための判断方法に関する。
【００１０】
（１）進行期非扁平上皮肺癌患者の予後を予測するための情報を提供する方法であって、
進行期非扁平上皮肺癌患者由来の血液サンプルにおいて、少なくとも、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６７９３６｜ＴＰＭ４＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ２８０６６｜ＰＳＡ５＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｑ９Ｙ２６６｜ＮＵＤＣ＿ＨＵＭＡＮ、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６１１６０｜ＡＲＰ２＿ＨＵＭＡＮ及びＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｓｐ｜Ｐ６０１７４｜ＴＰＩＳ＿ＨＵＭＡＮの５種類のタンパク質の発現量を測定する工程、
を含む進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法反応性を予測するための情報を提供する方法。
（２）上記（１）に記載の少なくとも５種類のタンパク質の発現量を用いて治療抵抗性リスクを判別する工程、
を含む進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法感受性を判別するための方法。
（３）上記（２）に記載の少なくとも５種類のタンパク質の発現量に基づいた治療抵抗性リスクを用いて、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法反応性を評価する工程、
を含む進行期非扁平上皮肺癌患者の治療反応性を判別するための方法。
【発明の効果】
【００１１】
患者由来のサンプル中の、少なくとも、Ｐ６７９３６、Ｐ２８０６６、Ｑ９Ｙ２６６、Ｐ６１１６０、及びＰ６０１７４タンパク質の発現量に基づき化学療法不応性リスクを評価することで、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学慮法反応性を判別できる。したがって、化学療法（カルボプラチンとペメトレキセドの併用療法）に対する抵抗性リスクが高い患者に対しては、化学療法に用いる抗がん剤の種類を変更ことができ、逆に、良好な治療感受性が期待される患者に対しては、患者に適した化学療法を行うことができる。
【００１２】
また、内部標準、抗体を提供することで、患者から得られたサンプルに含まれるタンパク質の発現量の絶対量を簡単に分析することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下に、本発明の進行期非扁平上皮肺癌患者の化学慮法反応性を評価するための情報を提供する方法、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学慮法反応性の評価方法、内部標準、抗体について説明する。
【００１４】
先ず、本発明における「肺癌」の種類は、腺癌、腺扁平上皮癌、大細胞癌、等が挙げられる。「肺癌患者由来のサンプル」とは、タンパク質を測定することができるサンプルを意味し、例えば、血液、尿、肺胞洗浄液、呼気などに含まれる肺癌由来タンパク質等が挙げられる。
【００１５】
本発明の、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学慮法反応性を判別する方法は、肺癌患者由来の血液中で発現している各種タンパク質の内、少なくとも、Ｐ６７９３６、Ｐ２８０６６、Ｑ９Ｙ２６６、Ｐ６１１６０、及びＰ６０１７４タンパク質の発現量を測定することを特徴としている。後述する実施例に示すとおり、前記少なくとも５種類のタンパク質は化学療法に対する反応性に関与している。そのため、前記少なくとも５種類のタンパク質の発現量の情報を提供することで、患者の化学療法反応性を評価することができる。したがって、より適切な抗がん剤の投与等、患者毎の適切な治療のための評価結果を提供することができる。
【００１６】
本発明の、進行期非扁平上皮肺癌患者の化学慮法反応性の評価方法は、上記の少なくとも５種類のタンパク質の発現量に基づいて、治療反応性を予測することを特徴としている。予後の予測は、測定した上記少なくとも５種類のタンパク質の発現量に基づいて、反応性を評価できるものであれば特に制限はない。以下に、質量分析装置（ＭＳ）を用いたサンプル中のタンパク質の発現量の比較定量結果から、統計的手段を用いて反応性を評価する手順を示す。
（１）採取・保存した患者の一定数のサンプルを教師群と検証群に分ける。
（２）教師群に割り当てられたサンプルを、複数サンプル間でタンパク質の存在量を網羅的に比較できるＳＷＡＴＨ解析法（登録商標）（Ｓｃｉｅｘ社）等を用いて質量分析を行うことでサンプル中のタンパク質の発現量を測定し、データベース化する。なお、データベース化の際には、測定したタンパク質の発現量とその患者の実際に観察された治療反応性、例えば、胸部CT検査などによる腫瘍の縮小・増大等の臨床情報を関連付けて記憶しておく。
（３）上記（２）で得られたデータを、統計処理し、手術後に再発の可能性が高いタンパク質群を同定する。統計処理は、治療反応群と治療抵抗群に分け、T-testを用いて化学療法反応性に関わるタンパク質群を特定する。
（４）上記（３）で同定した候補タンパク質群の閾値を設定し、閾値以上の存在量を示したタンパク質が３種類以上の場合には、治療反応性ありと判断する。
【００１７】
以下に実施例を掲げ、本発明を具体的に説明するが、この実施例は単に本発明の説明のため、その具体的な態様の参考のために提供されているものである。これらの例示は本発明の特定の具体的な態様を説明するためのものであるが、本願で開示する発明の範囲を限定したり、あるいは制限することを表すものではない。
【実施例】
【００１８】
＜実施例１＞
以下の手順により進行期非扁平上皮肺癌患者の化学慮法反応性を判別するために必要なタンパク質の同定と判別法の構築を行った。
〔サンプル〕
化学慮法を施行された進行期非扁平上皮肺癌患者から得た試料であって、治療後の実際に観察された反応性に関する情報を有する９６サンプルを準備した。
【００１９】
〔タンパク質発現量の比較定量及びデータベースの作製〕
（１）上記９６サンプルを、
・教師群：４９サンプル
・検証群：４７サンプル
に割り当てを行った。
（２）教師群のサンプル中に特異的に発現しているタンパク質を探索するために、先ず、次に手順により、サンプル内タンパク質の網羅的解析を行った。
（ｉ）対照として、健常者血清から抽出したタンパク質を混合した試料を準備した。
（ｉｉ）上記対照試料と化学慮法を施行された進行期非扁平上皮肺癌患者由来の血液試料から抽出したタンパク質から、酵素消化によりペプチドを作成した後、液体クロマトグラフィーによる分画化を行った。
（ｉｉｉ）分画化されたペプチドは、質量分析装置（Ｓｃｉｅｘ社）を用いたＳＷＡＴＨ法（登録商標）（Ｓｃｉｅｘ社）にて解析を行い、試料中のタンパク質の相対比較定量結果を取得した。
（ｉｖ）分析したサンプル毎に、タンパク質の発現量及びそのサンプルの患者の化学療法反応性を関連付けて分析結果をデータベース化した。検証群のサンプルについても、教師群と同様の手順で分析した。
【００２０】
〔統計処理及び化学療法反応性関連タンパク質の同定〕
上記〔タンパク質発現量の比較定量及びデータベースの作製〕で作製したデータベースを用い、図３に示す手順で統計処理を行った。
（１）教師群の４９サンプルを、治療反応群（３０サンプル）と治療抵抗群（１９サンプル）に分けた。
（２）２群間の発現量をT-testを用いて解析することによりｐ値が１０−６未満の治療反応性判別関連タンパク質を５個特定した。
（３）次に、５種類のタンパク質それぞれに関して、その発現量の閾値を設定し、５種類のタンパク質のうち３種類以上のタンパク質の存在量が閾値を越えた場合に、治療反応群と判別した。
【００２１】
【表１】
2020153742.tif 000002
教師群における、治療反応性と深く関連するタンパク質群の例。
【００２２】
【表２】
2020153742.tif 000003
検証群において、５種類の標的タンパク質の発現量を、治療反応群と抵抗群との間で比較検討を行った結果。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本発明に係る進行期非扁平上皮肺癌患者の化学療法反応性の判別方法を用いることで、肺癌患者の治療反応性を判別することができる。そのため、患者に適した化学療法を実施することができることから、医療機関や大学医学部などの研究機関等における肺癌患者の検査及び研究に有用である。