(57)【要約】      （修正有）【課題】有機溶媒を使用しなくても反応速度が速い放射性元素の標識方法、及びこれを含む標識キットの提供。【解決手段】式（Ｉ）で表され、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物と、式（ＩＩ）で表され、放射性元素が標識されたキノン化合物とを反応させる放射性元素の標識方法。前記シクロオクチン化合物と、放射性元素が標識されたキノン化合物とを含む放射性元素標識用キット。2020200307.tif 0000342020200307.tif 000035【選択図】図２
2020200307.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（Ｉ）で表され、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物を提供する段階と、
前記シクロオクチン化合物と、下記化学式（ＩＩ）で表される放射性元素が標識されたキノン化合物とを反応させる段階と、を含む、放射性元素の標識方法。
【化１】
2020200307.tif 000026
（前記化学式（Ｉ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物である。）
【化２】
2020200307.tif 000027
（前記化学式（ＩＩ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【請求項２】
前記反応させる段階は常温及び大気条件下で行われる、請求項１に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項３】
前記反応させる段階は水溶液相で行われる、請求項１に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項４】
前記生体分子は、ペプチド、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、抗体、及びオリゴヌクレオチドからなる群より選択される少なくとも一つである、請求項１に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項５】
前記ナノ粒子化合物は、金属ナノ粒子、合成高分子ナノ粒子、 及び生体高分子ナノ粒子からなる群より選択される少なくとも一つである、請求項１に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項６】
前記金属ナノ粒子は、金（Ａｕ）、白金（Ｐｔ）、パラジウム（Ｐｄ）、銀（Ａｇ）、及び銅（Ｃｕ）からなる群より選択されるいずれか一つである金属、又はコバルト（Ｃｏ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、ニッケル（Ｎｉ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、モリブデン（Ｍｏ）、亜鉛（Ｚｎ）、及びクロム（Ｃｒ）からなる群より選択されるいずれか一つの金属の酸化物である、請求項５に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項７】
前記蛍光染料は、シアニン（ｃｙａｎｉｎｅ）、フルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、及びローダミン（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）染料から選択される少なくとも一つである、請求項１に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項８】
前記放射性元素Ｍは、Ｉ、Ｆ、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｚｒ、Ｙ、Ｈｏ、Ｓｍ、及びＬｕからなる群より選択される、請求項１に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項９】
前記放射性元素Ｍは、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｉ、１３１Ｉ、及び１３２Ｉからなる群より選択される少なくとも一つの放射性ヨウ素である、請求項１に記載の放射性元素の標識方法。
【請求項１０】
下記化学式（ＩＩ）又は化学式（ＩＩａ）で表される放射性標識化合物であり、シクロオクチン部分（ｍｏｉｅｔｙ）を有する分子を標識するための、放射性標識化合物。
【化３】
2020200307.tif 000028
【化４】
2020200307.tif 000029
（前記化学式（ＩＩ）及び化学式（ＩＩａ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【請求項１１】
下記化学式（Ｉ）で表され、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物と、
下記化学式（ＩＩ）又は化学式（ＩＩａ）で表され、放射性元素が標識されたキノン化合物と、を含む、放射性元素標識用キット。
【化５】
2020200307.tif 000030
（前記化学式（Ｉ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物である。）
【化６】
2020200307.tif 000031
【化７】
2020200307.tif 000032
（前記化学式（ＩＩ）及び化学式（ＩＩａ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【請求項１２】
前記生体分子は、ペプチド、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、抗体、及びオリゴヌクレオチドからなる群より選択される少なくとも一つであり、前記ナノ粒子化合物は、金属ナノ粒子、合成高分子ナノ粒子、及び生体高分子ナノ粒子からなる群より選択される少なくとも一つであり、前記金属ナノ粒子は、金（Ａｕ）、白金（Ｐｔ）、パラジウム（Ｐｄ）、銀（Ａｇ）、及び銅（Ｃｕ）からなる群より選択されるいずれか一つである金属、又はコバルト（Ｃｏ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、ニッケル（Ｎｉ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、モリブデン（Ｍｏ）、亜鉛（Ｚｎ）、及びクロム（Ｃｒ）からなる群より選択されるいずれか一つの金属の酸化物であり、そして、前記蛍光染料は、シアニン（ｃｙａｎｉｎｅ）、フルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、及びローダミン（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）染料から選択される少なくとも一つである、請求項１１に記載の放射性元素標識用キット。
【請求項１３】
下記化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物。
【化８】
2020200307.tif 000033
（前記化学式（ＩＩＩ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物であり、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【請求項１４】
請求項１３の化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を有効成分として含む、医療診断用組成物。
【請求項１５】
前記医療診断用組成物における医療診断は、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、マイクロ−ＰＥＴ、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、又は放射線診断機器の標的画像による診断である、請求項１４に記載の医療診断用組成物。
【請求項１６】
請求項１３の化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を有効成分として含む、がん治療用組成物。
【請求項１７】
前記放射性元素は１３１Ｉである、請求項１６に記載のがん治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キノン化合物を用いた放射性元素の標識方法、放射性標識化合物及びこれを含む放射性元素標識キットなどに関し、より詳細には、有機溶媒を用いなくても反応速度が速いキノン化合物を用いた放射性元素の標識方法、放射性標識化合物及びこれを含む放射性元素標識キットを用いた技術に関するものであって、医療診断及び治療の分野で適用することができる。
【背景技術】
【０００２】
ペプチド、タンパク質、抗体などの生理活性物質を分子画像又は病気の診断や治療などの目的で用いるために、生体分子の放射性標識技術が開発されてきた。従来は、生理活性物質にキレートを接合する技術が主に用いられた。かかる方法は、生理活性物質に別のキレートを化学的に導入する方法であって、キレートの接合時に低反応速度又は生理活性物質に適さない反応条件、例えば、高温反応、酸性又は塩基性反応、毒性を有する反応溶媒などを改良する必要があるという根本的な限界を有していた。
【０００３】
代表的に、過去数十年の間に放射性ヨウ素（ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｉｏｄｉｎｅ）は、診断及び治療を目的とした生体分子の放射性標識に用いられてきた。具体的には、１２４Ｉは陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ、ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）、１２３Ｉ及び１２５Ｉは単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ、ｓｉｎｇｌｅ  ｐｈｏｔｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｃｏｍｐｕｔｅｄ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）に主に用いられる放射性ヨウ素であり、１３１Ｉは甲状腺がんのような病気の診断及び治療に用いられていた。
【０００４】
上述のように、放射性ヨウ素が医学的に広く用いられるにつれて、生体分子及び小さい単位の分子に放射性ヨウ素を標識するための様々な標識方法が開発されてきた。そのうち、親電子性芳香族置換反応は、放射性同位元素を直接標識することができる方法であり高効率を示す。しかし、上記標識方法を介して合成した標識化合物は、大部分の動物体内で不安定であり、所望の画像結果が得られない場合が多く、標識のために用いられる強酸化剤は、生体物質の生理活性を減少させる結果を示した。上記のような問題を解決する方法として、放射性ヨウ素を間接的に標識且つ合成する方法についての研究がなされており、いくつかの補欠分子族（ｐｒｏｓｔｈｅｔｉｃ  ｇｒｏｕｐ）が開発された。しかし、現在まで開発された放射性ヨウ素を間接的に標識且つ合成する方法は、化合物の活性基に対する化学的選択性がないためランダムな標識化合物が生成される場合が多く、反応速度が遅く高収率のための過度な基質が要求されるという問題がある。
【０００５】
よって、生きている細胞及び動物内で安定する新しい放射性ヨウ素の標識方法についての開発が必要である。これに関連する従来技術であるＷＯ２００６−０５０２６２にはシクロオクチン化合物とアジド化合物を用いた反応が開示されているが、このような反応時にはトルエンやＤＭＳＯなどのような有機溶媒の使用が要求されるため、生きている細胞及び動物に対する使用が制限されていた。
【０００６】
そこで、放射性標識化合物と生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を利用して、速い反応速度及び高い放射化学収率により生体分子などの放射性元素を標識することができ、有機溶媒の使用を必要としない放射性標識化合物が提供される場合、これを用いて生体分子などの放射性元素標識及び医療診断に有効に活用することができるものが期待される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の一課題は、有機溶媒を使用しなくても、反応速度が速い放射性元素の標識方法を提供することである。
【０００８】
本発明の他の課題は、有機溶媒を使用しなくても、反応速度が速い放射性元素標識化合物を提供することである。
【０００９】
本発明の他の課題は、有機溶媒を使用しなくても、反応速度が速い放射性元素標識用キットを提供することである。
【００１０】
本発明のさらに他の課題は、放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらに他の課題は、これを含む医療診断用組成物を提供することである。
【００１２】
本発明のさらに他の課題は、これを含むがん治療用組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の一実施形態によると、下記化学式（Ｉ）で表され、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物を提供する段階と、上記シクロオクチン化合物と、下記化学式（ＩＩ）で表される放射性元素が標識されたキノン化合物とを反応させる段階と、を含む放射性元素の標識方法が提供される。
【化１】
2020200307.tif 000003
（上記化学式（Ｉ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物である。）
【化２】
2020200307.tif 000004
（上記化学式（ＩＩ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００１４】
本発明の他の実施形態によると、下記化学式（ＩＩ）又は化学式（ＩＩａ）で表される放射性標識化合物であり、シクロオクチン部分（ｍｏｉｅｔｙ）を有する分子を標識するための放射性標識化合物が提供される。
【化３】
2020200307.tif 000005
【化４】
2020200307.tif 000006
（上記化学式（ＩＩ）及び化学式（ＩＩａ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００１５】
本発明の他の実施形態によると、下記化学式（Ｉ）で表され、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物と、下記化学式（ＩＩ）又は化学式（ＩＩａ）で表され、放射性元素が標識されたキノン化合物と、を含む放射性元素標識用キットが提供される。
【化５】
2020200307.tif 000007
（上記化学式（Ｉ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物である。）
【化６】
2020200307.tif 000008
【化７】
2020200307.tif 000009
（上記化学式（ＩＩ）及び化学式（ＩＩａ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００１６】
本発明のさらに他の実施形態によると、下記化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が提供される。
【化８】
2020200307.tif 000010
（上記化学式（ＩＩＩ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物であり、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００１７】
本発明のさらに他の実施形態によると、上記化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を有効成分として含む医療診断用組成物が提供される。
【００１８】
本発明のさらに他の実施形態によると、上記化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を有効成分として含むがん治療用組成物が提供される。
【発明の効果】
【００１９】
本発明による放射性元素が標識されたキノン化合物を用いて放射性元素を標識する場合には、従来に比べて高い生体内安定性を有することから、甲状腺へのヨウ素−１２５の蓄積を著しく減少させることができる。尚、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物との反応速度が速く、生体内における安定性に優れるため、医療診断用及び治療用組成物などとして有効に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】放射性ヨウ化ＨＳＡ［１２５Ｉ］７のグループ当たりにｎ＝５匹の雄マウスに対する生体分布結果を示すものである。
【図２】正常マウスに静脈注射した後の、様々な時点における放射性ヨウ化したＨＳＡのＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像であって、（Ｂ）は本発明による実施例３の（［１２５Ｉ］７）を用いて合成した１５０μＣｉの精製された放射性ヨウ化ＨＳＡ、（Ａ）は比較例２の直接放射性ヨウ化（８）を用いて合成した１５０μＣｉの精製された放射性ヨウ化したＨＳＡの結果を示すものである。
【図３】放射性ヨウ化ＨＳＡ（［１２５Ｉ］）７、８、及び９から遊離した１２５Ｉの甲状腺における吸収度合いを示すものである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、添付の図面を参照して、本発明の好ましい実施形態を説明する。しかし、本発明の実施形態は、いくつかの他の形態に変形することができ、本発明の範囲が以下説明する実施形態に限定されるものではない。
【００２２】
本発明によると、甲状腺に対する蓄積が著しく改善した放射性元素標識化合物が提供され、より詳細には、放射性標識キノン化合物が提供される。このような化合物は、「追跡体」とも指すことができる。上記本発明の追跡体は、シクロオクチン部分（ｍｏｉｅｔｙ）が含まれる生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子との環化反応を介して速い反応速度及び高い放射化学収率により放射性元素を標識することができる。
【００２３】
より具体的には、本発明によると、下記化学式（Ｉ）で表され、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物を提供する段階と、上記シクロオクチン化合物と、下記化学式（ＩＩ）で表される放射性元素が標識されたキノン化合物とを反応させる段階と、を含む放射性元素の標識方法が提供される。
【化９】
2020200307.tif 000011
（上記化学式（Ｉ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物である。）
【化１０】
2020200307.tif 000012
（上記化学式（ＩＩ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００２４】
上記反応させる段階は、常温及び大気条件下で行われることができ、高温反応、酸性又は塩基性条件、毒性のある反応溶媒、及び有機溶媒の使用などが要求されない利点がある。
【００２５】
このとき、常温は、１０〜４０℃、例えば、２５〜３５℃であることができる。一方、上記化合物を獲得するためのｐＨ雰囲気は、特に制限されないが、ｐＨ１〜１４、好ましくは中性に近いｐＨ、例えば、ｐＨ６〜８であってもよい。
【００２６】
本発明の反応時に用いることができる溶媒は、特に制限されないが、水、すなわち、水溶液などであることが好ましく、ＤＭＳＯなどのような有機溶媒の使用は要求されない。したがって、上記反応させる段階は、例えば、水相、すなわち、水溶液相で行われることができる。
【００２７】
上記生体分子は、ペプチド、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、抗体、及びオリゴヌクレオチドからなる群より選択される少なくとも一つであることができ、上記ナノ粒子は、金属ナノ粒子、合成高分子ナノ粒子、及び生体高分子ナノ粒子からなる群より選択される少なくとも一つであることができる。そして、上記金属ナノ粒子は、金（Ａｕ）、白金（Ｐｔ）、パラジウム（Ｐｄ）、銀（Ａｇ）、及び銅（Ｃｕ）からなる群より選択されるいずれか一つである金属、又はコバルト（Ｃｏ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、ニッケル（Ｎｉ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、モリブデン（Ｍｏ）、亜鉛（Ｚｎ）、及びクロム（Ｃｒ）からなる群より選択されるいずれか一つである金属の酸化物であることができる。一方、上記蛍光染料は、シアニン（ｃｙａｎｉｎｅ）、フルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、及びローダミン（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）染料から選択される少なくとも一つであることができる。
【００２８】
このとき、上記ペプチドとしては、がん標的ペプチド（ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ）として、ＲＧＤペプチド、ＣＧＮＳＮＰＫＳＣペプチド、ＶＨＳＰＮＫＫペプチド、ＣＴＴＨＷＧＦＴＬＣペプチド、ＳＧＫＧＰＲＱＩＴＡＬペプチド、ＳＧＲＳＡペプチド、ＦＳＲＹＬＷＳペプチドなどが挙げられ、好ましくはＲＧＤペプチドである。
【００２９】
また、上記アフィボディとしては、特に限定されるものではないが、Ａβペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、アポリポ（Ａｐｏｌｉｐｏ）プロテインＡ１、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ｃ−Ｊｕｎ、ＥＧＦＲ、Ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩＩ、フィブリノーゲン（Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ）、Ｇｐ１２０、ＨＥＲ２、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩＬ−８、インスリン（Ｉｎｓｕｌｉｎ）、ＲＳＶ  Ｇプロテイン、Ｔａｑポリメラーゼ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）、ＴＮＦ−α、トランスフェリン（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）、トランスタイレチン（Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ）などのタンパク質に結合することができる７ＫＤａ内の小分子であることができる。
【００３０】
さらに、上記抗体は、これらに限定されるものではないが、Ａｎｔｉ−ＶＥＧＦＲ、Ａｎｔｉ−ＥＲＢＢ２、Ａｎｔｉ−ＣＤ２０、Ａｎｔｉ−ＣＤ１９、Ａｎｔｉ−ＣＤ２２、Ａｎｔｉ−ＣＤ３３、Ａｎｔｉ−ＣＤ２５、Ａｎｔｉ−ＨＬＡ−ＤＲ  １０β、Ａｎｔｉ−ｔｅｎａｓｃｉｎ、Ａｎｔｉ−ＣＥＡ、Ａｎｔｉ−ＭＵＣ１、Ａｎｔｉ−ＴＡＧ  ７２などであることができる。
【００３１】
また、上記オリゴヌクレオチドは、これらに限定されるものではないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどであることができる。
【００３２】
上記金属ナノ粒子は、これらに限定されるものではないが、金（Ａｕ）、白金（Ｐｔ）、パラジウム（Ｐｄ）、銀（Ａｇ）、銅（Ｃｕ）などの金属、又はコバルト（Ｃｏ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、ニッケル（Ｎｉ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、モリブデン（Ｍｏ）、亜鉛（Ｚｎ）、クロム（Ｃｒ）などの金属の酸化物などであることができ、好ましくは金ナノ粒子又は鉄ナノ粒子である。
【００３３】
また、上記合成高分子ナノ粒子は、これらに限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ））、ポリビニルアルコール（ｐｏｌｙ（ｖｉｎｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ））、ポリアクリル酸（ｐｏｌｙ（ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリヒドロキシエステル（ｐｏｌｙ（ｈｙｄｒｏｘｙｅｓｔｅｒ））、ポリカプロラクトン（ｐｏｌｙ（ε−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ））、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙ（ｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ））、ポリ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリホスファゲン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｇｅｎｅ）、ポリプロピレンフマル酸塩（ｐｏｌｙ（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅｆｕｍａｒａｔｅ））、ポリグリコール酸（ｐｏｌｙ（ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリ乳酸（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリヒドロキシ酪酸（ｐｏｌｙ（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ））、ポリ（ヒドロキシ酪酸−吉草酸）共重合体（ｐｏｌｙ（ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ−ｃｏ−ｖａｌｅｒａｔｅ））、ポリウレタン（ｐｏｌｙ（ｕｒｅｔｈａｎｅ））、ポリメチルメタクリレート（ｐｏｌｙ（ｍｅｔｈｙｌ  ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ））などがある。
【００３４】
さらに、上記生体高分子ナノ粒子は、これらに限定されるものではないが、キチン（ｃｈｉｔｉｎ）、キトサン（ｃｈｉｔｏｓａｎ）、ポリリジン、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸（ａｌｇｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、デキストラン（ｄｅｘｔｒａｎ）、セルロース（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）などであることができる。
【００３５】
また、上記ナノ粒子は、粒径サイズが１ｎｍ〜１０００ｎｍであり、好ましくは１０nｍ〜５００ｎｍ、より好ましくは５０ｎｍ〜２００ｎｍである。上記ナノ粒子の粒径サイズが１ｎｍ未満の場合には、本発明による放射性ヨウ素が標識されたナノ粒子を製造することが困難であるという問題があり、１０００ｎｍを超えると、ナノ粒子固有の特性を失う可能性があるという問題がある。
【００３６】
一方、上記蛍光染料は、シアニン（ｃｙａｎｉｎｅ）、フルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、及びローダミン（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）系染料から選択される少なくとも一つであることができる。
【００３７】
本発明に適用することができる上記放射性元素は、Ｉ、Ｆ、Ｔｃ、Ｒｅ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｚｒ、Ｙ、Ｈｏ、Ｓｍ、及びＬｕからなる群より選択されることができ、例えば、診断用放射性同位元素であるＩ−１２５、Ｆ−１８、Ｓｃ−４４、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｚｒ−８９、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１などや、治療用放射性同位元素であるＳｃ−４７、Ｙ−９０、Ｓｍ−１５３、Ｈｏ−１６６、Ｌｕ−１７７、Ｒｅ−１８８、Ｐｂ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｔｈ−２３２などをすべて含むことができる。但し、本発明に適用することができる放射性元素は、これらに制限されるものではなく、がんなどの治療のために用いられる治療用放射性同位元素であるアルファ線放出核種及びベータ線放出核種、診断のための診断用放射性同位元素である陽電子放出核種、及びガンマ線放出核種を制限せずに含むことができる。好ましくは、上記放射性元素Ｍは、Ｉ又はＦであることができる。
【００３８】
上記放射性ヨウ素は、例えば、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｉ、１３１Ｉ、及び１３２Ｉからなる群より選択される少なくとも一つの放射性ヨウ素であることができ、好ましくは１２５Ｉである。
【００３９】
本発明の他の実施形態によると、下記化学式（ＩＩ）又は化学式（ＩＩａ）で表される放射性標識化合物であり、シクロオクチン部分（ｍｏｉｅｔｙ）を有する分子を標識するための放射性標識化合物が提供される。
【化１１】
2020200307.tif 000013
【化１２】
2020200307.tif 000014
（上記化学式（ＩＩ）及び化学式（ＩＩａ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００４０】
このとき、上記化学式（ＩＩａ）で表される放射性標識化合物を用いる場合には、ジヒドロキシフェニル部−ＯＨ基を＝Ｏ基に酸化（ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）させる段階をさらに行うことで、化学式（ＩＩ）の化合物を獲得することができる。ここで、酸化段階を行う方法は、特に制限されるものではなく、例えば、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）などを用いて行うことができる。
【００４１】
上述のように、本発明に用いられる放射性元素が標識されたキノン化合物は、シクロオクチン部分を有する分子標識用放射性標識化合物として適用することができる。
【００４２】
本発明の他の実施形態によると、下記化学式（Ｉ）で表され、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が結合したシクロオクチン化合物と、下記化学式（ＩＩ）又は式（ＩＩａ）で表され、放射性元素が標識されたキノン化合物と、を含む放射性元素標識用キットが提供される。上記本発明の放射性元素標識用キットは、上述した本発明の放射性元素の標識方法によるものである。このとき、言及された内容がすべて同様に適用される。
【化１３】
2020200307.tif 000015
（上記化学式（Ｉ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物である。）
【化１４】
2020200307.tif 000016
【化１５】
2020200307.tif 000017
（上記化学式（ＩＩ）中、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００４３】
このとき、上記化学式（ＩＩａ）で表される放射性標識化合物を用いる場合には、ジヒドロキシフェニル部の−ＯＨ基を＝Ｏ基に酸化（ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）させる段階をさらに行うことで、化学式（ＩＩ）の化合物を獲得することができる。ここで、酸化段階を行う方法は、特に制限されるものではなく、例えば、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）などを用いて行うことができる。
【００４４】
すなわち、上記生体分子は、ペプチド、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、抗体、及びオリゴヌクレオチドからなる群より選択される少なくとも一つであり、上記ナノ粒子は、金属ナノ粒子、合成高分子ナノ粒子、及び生体高分子ナノ粒子からなる群より選択される少なくとも一つであり、上記金属ナノ粒子は、金（Ａｕ）、白金（Ｐｔ）、パラジウム（Ｐｄ）、銀（Ａｇ）、及び銅（Ｃｕ）からなる群より選択されるいずれか一つである金属、又はコバルト（Ｃｏ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、ニッケル（Ｎｉ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、モリブデン（Ｍｏ）、亜鉛（Ｚｎ）、及びクロム（Ｃｒ）からなる群より選択されるいずれか一つの金属の酸化物であり、そして、上記蛍光染料は、シアニン（ｃｙａｎｉｎｅ）、フルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）、及びローダミン（ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）系染料から選択される少なくとも一つであることができる。
【００４５】
本発明の他の実施形態によると、下記化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物が提供される。
【化１６】
2020200307.tif 000018
（上記化学式（ＩＩＩ）中、Ｚは、生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物であり、ｂは０又は１〜１０の整数であり、Ｌは、ＣＨ２、−ＣＯＯ−、又は−ＣＯＮＨ−であり、Ｍは放射性元素である。）
【００４６】
本発明のさらに他の実施形態によると、上記のような化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を有効成分として含む医療診断及び治療用組成物が提供される。
【００４７】
上記医療診断は、特に制限されるものではないが、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、マイクロ−ＰＥＴ、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、又は放射線診断機器の標的画像による診断であることができる。
【００４８】
さらに、本発明のさらに他の実施形態によると、上記のような化学式（ＩＩＩ）で表される放射性元素が標識された生体分子、蛍光染料、又はナノ粒子化合物を有効成分として含むがん治療用組成物が提供される。
【００４９】
上記放射性元素は１３１Ｉであることができ、上記がんは、例えば、甲状腺がんであることができる。
【００５０】
本発明による放射性ヨウ素の標識方法は、化学式（Ｉ）及び／又は化学式（ＩＩ）で表される化合物を用いることにより、生体分子、蛍光染料、ナノ粒子化合物、又はこれらの組み合わせで常温で追加の有機溶媒を用いることなく放射性ヨウ素を標識することができ、速い速度で反応が進むと同時に、高い放射化学収率の値を示すことから、放射性ヨウ素の標識方法として有効に用いることができる。
【００５１】
したがって、本発明によると、様々な対象化合物、例えば、ペプチドなどに対して効果的に放射性ヨウ素が標識された結果物を得ることができると期待される。また、この結果は、今後の研究だけでなく、臨床で活用可能な放射性医薬品の開発につながると期待される。
【実施例】
【００５２】
以下、具体的な実施例を挙げて本発明をより具体的に説明する。下記実施例は、本発明の理解のためのものであり、本発明を限定するものではない。
【００５３】
実施例
１．材料及び装備
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）タンパク質とトランスフェリンヒト（ＴＨＰ、Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ）タンパク質を含むすべての化学物質、試薬、溶媒、及び材料は、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）社から購入して追加の精製を行うことなく用いた。ペプチドｃ［ＲＧＤｙＫ］（ＦＣ−２２０２）は、韓国のフューチャーケム（ＦＵＴＵＲＥＣＨＥＭ）社から購入した。新たに合成されたすべての中間前駆体（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ）は、平均粒径が６０μｍである高純度シリカゲルを用いてシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。ガラス又はアルミニウム系シリカプレート（６０  Ｆ２５４純シリカゲル）を用いて反応の進行をモニターした。化合物は、ＵＶ光の波長２５４ｎｍを用いたり、着色剤又は加熱を介して可視化した。反応は低温（４℃）又は常温（２５℃）で行われた。ＮＭＲ（１Ｈ及び１３Ｃ）の分析は、ＪＥＯＬ  ＮＭＲ分光器（ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）（５００ＭＨｚ、ＫＡＥＲＩ、韓国井邑（チョンウプ））を用いて行った。ＮＭＲスペクトルは、溶媒としてクロロホルム−ｄ（ＣＤＣｌ３−ｄ１）、ジメチルスルホキシド−ｄ６（ＤＭＳＯ−ｄ６）、又はメタノール−ｄ４（ＣＤ３ＯＤ）を用いて得た。Ｂｒｕｋｅｒ  Ｑ−ＴＯＦ高解像度質量分析システムを用いて低分子量前駆体の高解像度質量分光を行った。タンパク質とペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析のためにＡＢ  ＳＣＩＥＸ  ＴＯＦ／ＴＯＦ  ５８００  ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦシステムが用いられた。３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシ桂皮酸（Ｓｉｎａｐｉｎｉｃ  Ａｃｉｄ）又は２，５−ジヒドロキシ安息香酸（ＤＨＢ）をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析のためのマトリックスとして用いた。生体分布研究のために、自動ガンマカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）を用いて、各臓器に蓄積された放射能を測定した。すべてのＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像はＩｎｖｅｏｎ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）小型動物マルチモードＳＰＥＣＴ／ＣＴシステムを用いて得た。
【００５４】
放射性化合物は、アジレントテクノロジー（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社が供給する分析ＨＰＬＣシステムで分析した。分析ＨＰＬＣシステム（１２９０  ｉｎｆｉｎｉｔｅ）には、Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ）及びガンマ検出器が装着された。ＨＰＬＣ精製のためには、ガンマ検出器及びＥｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ１８カラム（７μｍ、２１．２×１５０ｍｍ）が装着されたアジレントテクノロジー（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社製の分離精製用（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ）ＨＰＬＣシステム（１２６０  ｉｎｆｉｎｉｔｅ）を用いた。すべてのＨＰＬＣ分析は、溶媒Ａ（０．１％ ギ酸含有水）及び溶媒Ｂ（０．１％ ギ酸含有アセトニトリル）を用いて行った。ＨＰＬＣ精製のために分離精製用ＨＰＬＣ方法Ａ（流速：１０ｍＬ／分、溶離液勾配：０−３分：９５％Ａ／５％Ｂ、３−１５分：９５％Ａ／５％Ｂから３５％Ａ／６５％Ｂまでの線形勾配；１５−３５分：３５％Ａ／６５％Ｂから５％Ａ／９５％Ｂまでの線形勾配；３５−４５分：５％Ａ／９５％Ｂ）又は方法Ｂ（流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ、溶離液勾配：０−５分：９５％Ａ／５％Ｂ；５−２０分：９５％Ａ／５％Ｂから５０％Ａ／５０％Ｂまでの線形勾配；２０−３５分：５０％Ａ／５０％Ｂから５％Ａ／９５％Ｂまでの線形勾配；３５−４５分：５％Ａ／９５％Ｂから３％Ａ／９７％Ｂまでの線形勾配）を適用した。放射性製品を、５ｍＬのエタノールと１０ｍＬの水で条件化されたＳｅｐ  Ｐａｋ  Ｃ１８カートリッジに充填した（ｔｒａｐｐｅｄ）。２５ｍＣｉ活性を有する［１２５Ｉ］ＮａＩ水溶液（０．１Ｍ  ＮａＯＨ中）は、パーキンエルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）（韓国）社から購入した。
【００５５】
２．キノン化合物の合成
（１）中間体化合物Ｎ−（３，４−ジヒドロキシペンエチル）−４−ヨードベンズアミド（１）の合成
４−ヨード安息香酸（１ｇ、４ｍｍｏｌ）及びＨＢＴＵカップリング剤（１．５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ  １０ｍＬ）に溶解した。窒素雰囲気下で４−（２−アミノエチル）ベンゼン−１，２−ジオール塩酸塩（０．７６ｇ、４ｍｍｏｌ）及びＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）塩基（１ｇ、７．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２．５時間撹拌し、１Ｎ  ＨＣｌを添加して反応を終結させた（ｑｕｅｎｃｈｅｄ）。粗生成物を酢酸エチルに溶解した後、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー及び酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１）で精製して中間体化合物Ｎ−（３，４−ジヒドロキシペンエチル）−４−ヨードベンズアミド（１）（０．９ｇ、２．３ｍｍｏｌ、５８％）を得た。方法Ｂを用いる場合、生成物１のＨＰＬＣ滞留時間は２２．０分であった。
【００５６】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７２２（ｓ、１Ｈ）、８．６０９（ｓ、１Ｈ）、８．５５０（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．５５６（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．４０６−６．５９６（ｍ、３Ｈ、Ｐｈ）、３．３１９（ｑ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５９３（ｔ、Ｊ＝８．５、２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）１６５．８６２、１４５．５９３、１４４．０５８、１３７．６５８、１３３．８２５、１３０．７１３、１２９．６５５、１１９．７４４、１１６．５１１、１１６．００５、９９．１６１、４１．８５４、３５．０７３；ＨＲＭＳ（［Ｍ＋Ｈ］＋）ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ：３８４．１８５４；ｆｏｕｎｄ：３８４．１８５５．
【００５７】
（２）中間体化合物Ｎ−（３，４−ジヒドロキシペンエチル）−４−（トリブチルスタンニル）ベンズアミド（２）の合成
試薬ビス（トリブチルスズ）（１．５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）（０．１５ｇ、０．１３）及び中間体化合物１（０．５ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を２５ｍＬの１，４ジオキサンに溶解した。反応混合物を１６時間還流反応（ｒｅｆｌｕｘ）させた。粗生成物を２５℃で冷却させ、ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）セルロース濾紙で濾過して溶解されていない不純物を除去した。粗生成物を酢酸エチルに溶解した後、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー及び酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（３：７）で精製して中間体化合物Ｎ−（３，４−ジヒドロキシペンエチル）−４−（トリブチルスタンニル）ベンズアミド（２）（０．９ｇ、２．３ｍｍｏｌ、７０％）を得た。
【００５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７３２（ｓ、１Ｈ）、８．６１６（ｓ、１Ｈ）、８．４４２（ｔ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．６９５（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．４７０（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．４１５−６．６０２（ｍ、３Ｈ、Ｐｈ）、３．３４３（ｑ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、２．５９７（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、１．４０１−１．５５９（ｍ、６Ｈ）、１．２１１−１．２８４（ｍ、６Ｈ）、０．９５６−１．１３６（ｍ、６Ｈ）、０．８０６（ｔ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）１６６．８４５、１４６．０８９、１４５．５９３、１４４．０３８、１３６．５５１、１３４．９１０、１３０．７９９、１２６．８６９、１１９．７４４、１１６．５１１、１１６．００５、４１．８０７、３５．２０６、２９．１１１、２７．２０４、１４．０８８、９．７２０；ＨＲＭＳ（［Ｍ＋Ｈ］＋）ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ：５４８．３３９０；ｆｏｕｎｄ：５４８．３３９５．
【００５９】
３．シクロオクチン結合した化合物の合成
（１）ＢＣＮ結合したｃＲＧＤペプチド５ａの合成
ＤＭＳＯ（１００μＬ）内の（１Ｒ、８Ｓ、９ｓ）−ビシクロ［６．１．０］ノン−４−イン−９−イルメチルＮ−スクシンイミジルカーボネイト（ＢＣＮ−スクシンイミジルエステル）（９．３ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液にペプチド（ｃＲＧＤｙＫ）（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）を溶解した。溶液のｐＨをＤＩＰＥＡ（１７μＬ）を用いて８．２−８．５に調整した。反応を２．５時間行い、反応混合物を分離精製用ＨＰＬＣ（方法Ａ）で精製して５ａ（１９ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、７４％、滞留時間：１５．９分）を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（［Ｍ＋Ｈ］＋）、実測値：７９６．４４５０．
【００６０】
（２）ＢＣＮ結合したトランスフェリンヒト６ａの合成
４℃でＴＨＰ（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（５００μＭ、ｐＨ８．２、１００μＬ、１×ＰＢＳ）をＢＣＮ−スクシンイミジルエステル（２０ｍＭ、ＤＭＳＯ内の１０μＬ）とともに４時間インキュベーションした。６ａの精製のために、粗生成物を食塩水（２．５ｍＬ）で希釈してＰＤ−１０脱塩カラムを通過させた。抽出された生成物をアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）フィルター（３０ｋＤａ）を用いて遠心分離（４５００ｒｐｍ、１２分、４℃）した。ＢＣＮ変形されたタンパク質６ａが残留物から発見され、これをＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分光システムを用いて分析し、タンパク質定量システムを用いて濃度（ｍｇ／ｍＬ）を決定した。
【００６１】
（３）ＢＣＮ結合したヒト血清アルブミン７ａの合成
ＢＣＮ結合したヒト血清アルブミンタンパク質は、トランスフェリンヒトタンパク質に対して採用されたものと同一のプロトコルを用いて合成した。
【００６２】
４．放射性元素が標識された生体分子などの合成
実施例１：１２５Ｉ−ｃＲＧＤペプチド（［１２５Ｉ］５）の放射合成
（１）化合物［１２５Ｉ］１の合成
［１２５Ｉ］１の合成は、Ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  １２３Ｉ−ｌａｂｅｌｅｄ  ｈｅｓｐｅｒｅｔｉｎ  ｆｏｒ  ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｏｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｈｅｓｐｅｒｅｔｉｎ（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０６（２），ｐｐ．４３７−４４３，１．Ｊｅｏｎ，Ｊ．など）に公開された手順に従って若干の変形後に行われた。簡単に説明すると、上記２．で得られた中間前駆体２（１ｍｇ）を１ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、０．５Ｍのリン酸（２５０μＬ）及び０．５Ｍの過酸化酢酸（ｐｅｒａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（５００μＬ）を添加した。反応開始のために、０．１ＭのＮａＯＨ中に［１２５Ｉ］ＮａＩ（２ｍＣｉ、７μＬ）を添加し、常温で１０分間反応させた。少量のメタ重亜硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔａｂｉｓｕｌｆｉｔｅ）水溶液（０．５Ｍ）を添加して反応を終結させた（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ）。粗生成物を蒸留水で希釈し、最終体積を５ｍＬにし、分離精製用ＨＰＬＣシステム（方法Ｂ）により精製した。放射性ヨウ化した生成物［１２５Ｉ］を前処理されたＳｅｐ  Ｐａｃ  Ｃ１８カートリッジに閉じ込め、メタノール（１００μＬ）で溶出させて、［１２５Ｉ］を高い放射化学的収率（９５％±３、ｎ＝５）及び放射化学的純度（＞９９）で得た（分析ＨＰＬＣ滞留時間：２２．５分）。
【００６３】
【化１７】
2020200307.tif 000019
スキーム１：Ｎ−（３，４−ジヒドロキシペンエチル）−４−ヨードベンズアミド１、Ｎ−（３，４−ジヒドロキシペンエチル）−４−（トリブチルスタンニル）ベンズアミド２及び［１２５Ｉ］１化合物の合成
【００６４】
（２）１２５Ｉ−ｃＲＧＤペプチド（［１２５Ｉ］５）の合成
精製された化合物［１２５Ｉ］１（２００μＣｉ、メタノール中１０μＬ）を１０分間過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）（８０μｇ、水５０μＬ）で処理した。この溶液に３（１）で得られた化合物５ａ（メタノール中４０μＬ）を添加した。総反応体積は１００μＬであり、ｃＲＧＤペプチドの最終濃度は２５、１０又は５μＭであった。放射化学的収率はｒａｄｉｏ−ＨＰＬＣシステム（方法Ａ）を用いて反応時間及び濃度に応じた放射性標識の結果を分析して求めた。放射化学的収率の結果は下記表１にまとめた。
【００６５】
実施例２及び３：１２５Ｉ−ＴＨＰ（［１２５Ｉ］６）及び１２５Ｉ−ＨＳＡ（［１２５Ｉ］７）の合成
化合物［１２５Ｉ］１（２００μＣｉ、メタノール中１０μＬ）を過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）（８０μｇ、水中４０μＬ）で１０分間処理した。反応混合物を４０ｍＬの蒸留水で希釈し、放射能を事前に条件化したＳｅｐ  Ｐａｋ  Ｃ１８カートリッジに充填して未反応のＮａＩＯ４を除去した。酸化した放射性追跡体は、１００μＬのメタノールで溶離され、溶媒の体積は、減圧下で１０μＬに減少した。次に、放射性製品を、３．（２）及び３．（３）でそれぞれ得られた６ａ又は７ａ（１００μＬ、１×ＰＢＳ）とともに培養し、６ａ又は７ａの最終濃度が２５、１０、又は５μＭになるようにした。反応時間及び濃度に応じた抗体のヨウ化反応の進行は、異なる時点でｒａｄｉｏ−ＴＬＣシステムを用いてモニターされ、その結果は下記表１に要約されている。
【００６６】
【表１】
2020200307.tif 000020
＊ＲＣＹ：Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｙｉｅｌｄ（放射化学的収率）
＊＊ＴＨＰ：Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ
＊＊＊ＨＳＡタンパク質：Ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ
ａ溶媒システム及び反応条件；項目１〜３：メタノール／水（１：１）、（ｐＨ  ７．５）、常温；項目４〜９：１×ＰＢＳ溶液内の１０％メタノール、（ｐＨ  ７．５）、常温。
ｂ過ヨウ素酸ナトリウム（８０μｇ）処理後に精製された［１２５Ｉ］１と反応。
ｃｒａｄｉｏ−ＨＰＬＣによって決定された放射化学的収率。
ｄｒａｄｉｏ−ＴＬＣによって決定された放射化学的収率。
【００６７】
【化１８】
2020200307.tif 000021
スキーム２：［１２５Ｉ］５〜［１２５Ｉ］７の合成
【００６８】
比較例１：ヨウ化ｃＲＧＤペプチド５ｂの合成
１ｍＬ  ＭｅＯＨに溶解された中間体化合物１（５ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）（１当量、１ｍＬ  Ｈ２Ｏ）で１０分間処理した。中間体化合物５ａ（１０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。３０分後、粗生成物を分離精製用ＨＰＬＣ（方法Ａ）で精製してヨウ化ｃＲＧＤペプチド（５ｂ）（１２．５ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ、滞留時間：１９．０分）を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（［Ｍ＋Ｈ］＋）実測値：１１７７．３５６９。
【００６９】
【化１９】
2020200307.tif 000022
スキーム３：ヨウ化ｃＲＧＤペプチド５ｂの合成
【００７０】
比較例２：１２５Ｉ−ＨＳＡ（８）の合成（直接放射性ヨウ化）
ＨＳＡ（２５μＭ、１００μＬ食塩水）を、４℃で１０分間［１２５Ｉ］ＮａＩ（１ｍＣｉ、３．５μＬ）及びクロラミン−Ｔ（１００μｇ、１０μＬ）水溶液で処理した。反応を１０μＬのメタ重亜硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｅｔａｂｉｓｕｌｆｉｔｅ）水溶液（１ｍｇ、２０μＬ）で終結させた。粗生成物をＰＤ−１０脱塩カラムで精製してｒａｄｉｏ−ＴＬＣシステムによって決定された９３％の放射化学的収率及び９９％以上の放射化学的純度を有する８（１２５Ｉ−ＨＳＡ）を得た。
【００７１】
比較例３：１２５Ｉ−ＨＳＡ（９）の合成
試薬３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルは、シグマアルドリッチ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）（韓国）社から購入した。ＨＳＡタンパク質の放射性ヨウ化はＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｏｄｉｎｅ−１２４  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ  ｒｅａｇｅｎｔ（［１２４Ｉ］Ｉ−ＳＨＰＰ）  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｕｓｅ  ｆｏｒ  ｌａｂｅｌｌｉｎｇ  ａ  ＶＥＧＦ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｓ  ａ  ＰＥＴ  ｔｒａｃｅｒ（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．２００２  Ｏｃｔ  ３０；４５（１２）：１０７７−９０,Ｇｌａｓｅｒ  Ｍなど）で発表された手順に従って行われた。粗生成物をＰＤ−１０脱塩カラムで精製し、８５％の放射化学的収率及び９９％以上の放射化学純度を有する９を得た。
【００７２】
５．１２５Ｉ−ＨＳＡの生体分布研究
すべての動物実験は、機関動物倫理委員会のガイドラインに従って行われた。詳細な組織分布研究のために、２５匹のＩＣＲ雄マウスをオリエンタルバイオ（Ｏｒｉｅｎｔｂｉｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）（韓国）社から購入した。動物を５グループにランダムに分け、各グループに５匹のマウスを配置した。各マウスには、実施例３で得られた１２５Ｉ−ＨＳＡ（［１２５Ｉ］７）（１μＣｉ、１００μＬ食塩水）を注射した。下記表２の所定時間に動物を致死させて、重要な臓器及び血液を採取した。収集された臓器及び血液に加重値を付与して蓄積された放射能をガンマカウンターを用いて測定した。最終的な組織分布データは、血液又はマウスの血液または臓器のグラム当たりの％注入線量（ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｄｏｓｅ  ｐｅｒ  ｇｒａｍ、％ＩＤ／ｇ）として示した。その結果は図１に示した。
【００７３】
比較例２及び３でそれぞれ得られた放射性ヨウ化ＨＳＡタンパク質８及び９の組織分布は上記と同一の手順で行われた。その結果を下記表２及び３に示した。
【００７４】
【表２】
2020200307.tif 000023
ａｎ＝５グループ当たりに５匹；％注入放射能量／臓器のグラム。
【００７５】
【表３】
2020200307.tif 000024
ａｎ＝５グループ当たりに５匹；％注入放射能量／臓器のグラム。
【００７６】
６．競争反応の研究
ＢＣＮグループに対する酸化した［１２５Ｉ］１の反応選好度を決定するために２セットの実験が行われた。
【００７７】
実験（Ｉ）で酸化した［１２５Ｉ］１（２００μＣｉ、メタノール中２０μＬ）をＢＣＮグループと結合したｃＲＧＤペプチド（２５μＭ）及び非変形されたＨＳＡタンパク質（２５μＭ）が１×ＰＢＳ  ２００μＬに含有された混合物を常温（ｐＨ  ７．５）でインキュベーションした。反応を３０分間行い、５０ｋＤａアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）フィルターを用いて遠心分離（４５００ｒｐｍ、１２分、４℃）した。ガンマカウンターシステムを用いてｃＲＧＤペプチド（濾液）又はＨＳＡタンパク質（残基）に関連する放射能を測定した。
【００７８】
実験（ＩＩ）で酸化した［１２５Ｉ］１（２００μＣｉ、メタノール中２０μＬ）を実験（Ｉ）に用いられたものと同一の条件下でＢＣＮグループと結合したＨＳＡタンパク質（２５μＭ）及び非変形ｃＲＧＤペプチド（２５μＭ）とともにインキュベーションした。
【００７９】
各実験は３回繰り返された。尚、生成物の同一性は、ｒａｄｉｏ−ＨＰＬＣ又はｒａｄｉｏ−ＴＬＣシステムによって確認された。最終的な放射性標識の結果は下記表４に要約されている。
【００８０】
【表４】
2020200307.tif 000025
＊ＲＣＹ：Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｙｉｅｌｄ
【００８１】
７．１２５Ｉ−ＨＳＡのＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像
１２５Ｉ−ＨＳＡ（［１２５Ｉ］７）（１５０μＣｉ、生理食塩水１００μＬ）をＩＣＲマウスに静脈内注射した。与えられた時間（０．２５、１、４、１６、２４時間）でＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像を獲得した。その結果を図２（Ｂ）に示した。
【００８２】
比較のために、同一の手順を用いて８に対するＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像も獲得した。その結果を図２（Ａ）に示した。
【００８３】
８．［１２５Ｉ］７、８及び９から遊離した放射性ヨウ素の甲状腺吸収の比較
生体内脱ヨウ化、すなわち、放射性ヨウ化ＨＳＡ［１２５Ｉ］７、８及び９から遊離した１２５Ｉの甲状腺における吸収度合いを確認した結果、実施例３で獲得された１２５Ｉ−ＨＳＡ（［１２５Ｉ］７）が異なる二つの放射性療法と比較して顕著に安定することが分かった。その結果を図３に示した。
【００８４】
以上、本発明の実施例について詳細に説明したが、本発明の権利範囲はこれに限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載された本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内で多様な修正及び変形が可能であることは、当技術分野における通常の知識を有する者には自明である。
【図１】
2020200307.tif 000036
【図２】
2020200307.tif 000037
【図３】
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