(57)【要約】      （修正有）【課題】肝臓内に沈着する脂質の量を減少させる等により、非アルコール性脂肪性肝疾患を予防又は治療するための薬物を調製するための組成物の使用を提供する。【解決手段】３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］フラン−２，５−ジオン、３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−１−オール−２，５−ジオン、３Ｒ＊，４Ｓ＊−１−ヒドロキシ−３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］ピロリジン−２，５−ジオン、及び３Ｒ＊，４Ｒ＊−１−ヒドロキシ−３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］ピロリジン−２，５−ジオン等の、アントロジン化合物を含む組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を予防するかまたは治療するための薬物を調製するための組成物の使用であって、前記組成物は、治療有効量の式（Ｉ）を有する化合物：
【化１】
2020200329.tif 000023
またはその互変異性体、その立体異性体、そのラセミ体、その代謝物、その多形体、その塩、またはその溶媒和物を含み、
式中、
Ｘは、ＮまたはＯであり；
Ｒ１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキルオキシ、Ｃ２〜１０アルケニルオキシ、またはＣ２〜１０アルキニルオキシであり；
Ｒ２は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０アルキニルであり；
Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０アルキニルであり；
2020200329.tif 000024
は、単結合または二重結合を表し；
ＸがＯのとき、Ｒ３は存在しないものとし；
2020200329.tif 000025
が単結合を示すとき、前記化合物は：
【化２】
2020200329.tif 000026
【化３】
2020200329.tif 000027
【化４】
2020200329.tif 000028
【化５】
2020200329.tif 000029
のいずれかである、使用。
【請求項２】
前記非アルコール性脂肪性肝疾患が、非アルコール性脂肪肝及び非アルコール性脂肪性肝炎である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記化合物が、３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］フラン−２，５−ジオン、３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−１−オール−２，５−ジオン、３Ｒ＊，４Ｓ＊−１−ヒドロキシ−３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］ピロリジン−２，５−ジオン、及び３Ｒ＊，４Ｒ＊−１−ヒドロキシ−３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］ピロリジン−２，５−ジオンからなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記化合物が、３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−１−オール−２，５−ジオン、３Ｒ＊，４Ｓ＊−１−ヒドロキシ−３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］ピロリジン−２，５−ジオンまたはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記治療有効量の前記化合物により、前記肝臓内に沈着する脂質の前記量を減少させることにより、前記非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記治療有効量の前記化合物が肝機能マーカーを低下させることにより、前記非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記治療有効量の前記化合物が、メタボリックシンドロームの関連指標を低下させることにより、前記非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
メタボリックシンドロームの前記関連指標が、血糖、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、総コレステロール（ＴＣ）または総トリグリセリド（ＴＧ）である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記治療有効量の前記化合物が、インスリン及びマロンジアルデヒドの発現を減少させることにより、前記非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記治療有効量の前記化合物が、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患を予防するかまたは治療するための薬物を調製するための組成物の使用に関し、組成物は、アントロジン化合物を含む。
【背景技術】
【０００２】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、世界において最も一般的な慢性肝疾患である。ＮＡＦＬＤは、肝臓の脂肪酸の取り込み及び肝臓の脂肪酸合成の速度が、肝臓内での脂肪酸の酸化及び脂肪酸の輸出の速度よりも速い場合の、肝臓内でのトリグリセリドの蓄積による脂肪症を特徴とする。ＮＡＦＬＤは、肥満、高血糖、高血圧、及び脂質異常症などのメタボリックシンドロームと非常に関連が高い。ＮＡＦＬＤ患者の約３０％は慢性炎症を伴っており、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に進行し得る。継続的な慢性炎症は、進行性肝線維症、肝硬変及び肝細胞癌となる。ＮＡＦＬＤ有病率は、８，３１０万人（２０１５年）〜１億９０万人（２０３０年）へ２１％、ＮＡＡＳＨ有病率は１，６５２万人〜２，７００万人へ６３％増加することが予測されている。ＮＡＳＨ患者人口の急速な増加からは、肝移植の待機患者における肝細胞癌の主要な原因として、ＮＡＳＨが間もなくＣ型慢性肝炎またはアルコール性肝疾患（ＡＬＤ）に取って代わることが示唆されている。肝脂肪蓄積を減少させることは、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの治療目標のうちの１つであり、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨを治療するための他のアプローチとしては、酸化ストレスの低減、抗炎症、抗アポトーシス、抗線維化／肝硬変、及びマイクロバイオームの調節が挙げられる。
【０００３】
牛樟芝（Ａｎｔｒｏｄｉａ  ｃｉｎｎａｍｏｍｅａ  ＣＨＡＮＧ  ＴＴ＆ＷＮ  ＣＨＯＵ（中国名、ｎｉｕ−ｃｈａｎｇ−ｃｈｉｈまたはｎｉｕ−ｃｈａｎｇ−ｋｕ；同義語Ａｎｔｒｏｄｉａ  ｃａｍｐｈｏｒａｔａ）は、シカタケ属（サルノコシカケ科、ヒダナシタケ目）の新種であり、固有種牛樟（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｋａｎｅｈｉｒａｉ  Ｈａｙ）の内腔に寄生する。この絶滅危惧種は、台湾では、中国の民間薬として、食中毒、アルコール中毒、薬物中毒、下痢、腹痛、高血圧、皮膚のかゆみ、及び肝臓がんなどの治療に使用されてきた。牛樟芝の熱湯抽出物は、肝保護効果を有する報告には、肝毒性がプロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐ．ａｃｎｅｓ）−リポ多糖（ＬＰＳ）によって誘導されるマウスにおける牛樟芝の抽出物の肝保護活性が示された。
【０００４】
米国特許第７１０９２３２号明細書には、牛樟芝菌糸体由来の化合物１〜５、及び肝保護、抗炎症また腫瘍活性などのそれらの使用が開示されている。上記化合物１〜５は、別の論文内でも別名アントロジンＡ〜Ｅとされている（Ｐｈｕｏｎｇ  ｄｏ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ａｎｔｒｏｄｉｎｓ  Ａ−Ｅ  ｆｒｏｍ  Ａｎｔｒｏｄｉａ  ｃｉｎｎａｍｏｍｅａ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｏｎ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｐｒｏｔｅａｓｅ，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ，２００９年４月，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４，ｐ．５８２−５８４）。これら２つの先行技術によれば、牛樟芝菌糸体由来の化合物１〜５は、類似の構造を有するのみでなく、類似の活性も有する。
【０００５】
米国特許第７７３２４８２号明細書には、牛樟芝菌糸体由来の化合物によって哺乳動物での線維症を治療する方法を開示している。ここでは、線維症がＴＧＦ−βによって媒介されており、ＴＧＦ−βは炎症を介した慢性肝疾患の進行と関連している。しかし、ＮＡＦＬＤへの経路である肝臓内での脂肪滴またはトリグリセリドレベルの蓄積を減少させることによって、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨを治療するためにアントロジンを使用することに関する報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第７１０９２３２号明細書
【特許文献２】米国特許第７７３２４８２号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｐｈｕｏｎｇ  ｄｏ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ａｎｔｒｏｄｉｎｓ  Ａ−Ｅ  ｆｒｏｍ  Ａｎｔｒｏｄｉａ  ｃｉｎｎａｍｏｍｅａ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｏｎ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｐｒｏｔｅａｓｅ，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ，２００９年４月，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．４，ｐ．５８２−５８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患するリスクがあるか、または非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患している対象者において、非アルコール性脂肪性肝疾患を予防するかまたは治療するための方法であって、治療有効量の牛樟芝菌糸体またはアントロジン化合物の抽出物を含む組成物を対象者に投与することを含む方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
特許または出願ファイルには、カラーで行われる少なくとも１つの図面を含む。この特許の複製またはカラー図面（複数可）を含む特許出願の刊行物は、要求に応じて、必要な手数料の支払により、官庁から提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】１００μｇ／ｍｌ以下の濃度でアントロジンにより処理したＨｅｐ  Ｇ２細胞の細胞生存率を示す図である。
【図２】アントロジンにより処理した遊離脂肪酸誘導Ｈｅｐ  Ｇ２細胞における脂質蓄積を示す図である。
【図３】Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）投与後の肝臓の外観及び肝臓切片のＨ＆Ｅ染色（１００倍、倍率）を示す図である。
【図４】アントロジンＢまたはアントロジンＣ投与後の肝臓外観を示す図である。
【図５】アントロジンＢまたはアントロジンＣ投与後の肝臓切片のＨ＆Ｅ染色を示す図である（１００倍、倍率）。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、牛樟芝菌糸体またはアントロジン化合物の抽出物により、肝臓内の脂肪滴の大きさ、肝重量、肝機能マーカーの発現、他の関連する代謝指標、及び肝臓内に沈着した脂質の量を減少させることによって、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療できることを実証している。
【００１２】
本明細書で使用される用語「ａ」または「ａｎ」は、本発明の要素及び成分を説明するためのものである。この用語は、便宜上、及び本発明の基本的な概念を提供するためにのみ使用されている。さらに、本明細書は、１つまたは少なくとも１つを構成するものとして理解されるべきであり、文脈によって特に明示的に示されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。特許請求の範囲において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という単語と組み合わせて使用される場合、「ａ」または「ａｎ」という用語は、１つ以上を意味し得る。
【００１３】
本明細書で使用される「または」という用語は、「及び／または」を意味し得る。
【００１４】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患するリスクがあるか、または非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患している対象者において、非アルコール性脂肪性肝疾患を予防するかまたは治療するための方法であって、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物を含む組成物を対象者に投与することを含む方法を提供する。
【００１５】
一実施形態では、牛樟芝菌糸体の抽出物は、牛樟芝菌糸体の水または有機溶媒抽出物である。好ましい実施形態では、有機溶媒は、アルコール、エステル、アルカンまたはハロゲン化アルカンである。より好ましい実施形態では、アルコールはエタノールである。
【００１６】
一実施形態では、牛樟芝菌糸体の抽出物は、アントロジン化合物である。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＡ、アントロジンＢ、アントロジンＣ、アントロジンＤ及びアントロジンＥである。より好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ、アントロジンＣ及びアントロジンＤである。別の実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ及びアントロジンＣである。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＤ及びアントロジンＥである。
【００１７】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患するリスクがあるか、または非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患している対象者において、非アルコール性脂肪性肝疾患を予防するかまたは治療するための方法であって、治療有効量の式（Ｉ）を有する化合物：
【００１８】
【化１】
2020200329.tif 000002
またはその互変異性体、その立体異性体、そのラセミ体、その代謝物、その多形体、その塩、またはその溶媒和物を含み、
式中、
Ｘは、ＮまたはＯであり；
Ｒ１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキルオキシ、Ｃ２〜１０アルケニルオキシ、またはＣ２〜１０アルキニルオキシであり；
Ｒ２は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０アルキニルであり；
Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０アルキニルであり；
2020200329.tif 000003
は、単結合または二重結合を表し；
ＸがＯのとき、Ｒ３は存在しないものとし；
2020200329.tif 000004
が単結合を表すとき、化合物は次式のいずれかを有する：
【００１９】
【化２】
2020200329.tif 000005
【００２０】
【化３】
2020200329.tif 000006
【００２１】
【化４】
2020200329.tif 000007
【００２２】
【化５】
2020200329.tif 000008
【００２３】
本明細書で使用されるとき、用語「非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）」とは、アルコール摂取歴がないか、またはアルコール摂取が脂肪酸肝疾患の発生に関係のない患者が罹患する脂肪酸疾患を指す。脂肪肝とは、正常なレベルのトリグリセリドと比較して、トリグリセリドの過剰な蓄積が肝細胞内に存在する現象を指す。正常な肝臓の約５％は脂肪組織で構成されており、脂肪の主成分はトリグリセリド、脂肪酸、リン脂質、コレステロール、及びコレステロールエステルである。しかし、脂肪肝を発症すると、脂肪の成分のほとんどがトリグリセリドに置き換わる。トリグリセリドの量が肝重量の５％以上になると脂肪肝と診断される。脂肪肝は、脂質代謝障害または肝細胞内の過剰な脂肪が肝臓から運ばれるプロセスでの欠陥によって引き起こされ、主に肝臓内の脂質代謝障害によって引き起こされる。脂肪肝に蓄積される脂肪のほとんどはトリグリセリドである。非アルコール性脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎、肝硬変、肝癌などであり、これらに限定されないが、本発明の組成物により予防されるかまたは治療される脂肪肝疾患も含む。好ましい実施形態では、非アルコール性脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪肝及び非アルコール性脂肪肝炎である。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、本発明の組成物の投与によって非アルコール性脂肪性肝疾患が改善するかまたは遅延させる作用のすべてを指す。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「治療する」という用語は、疾患または障害、例えばＮＡＦＬＤに関連する状態の進行または重症度を逆転させる、緩和する、改善する、阻害する、減速させるまたは停止させる治療的処置を指す。「治療する」という用語は、ＮＡＦＬＤに関連する状態、疾患または障害のうちの少なくとも１つの副作用または症状を軽減するかまたは緩和することを含む。１つ以上の症状または臨床マーカーが減少した場合には、治療は一般に「有効」である。あるいは、疾患の進行が減少するかまたは停止した場合には、治療は「有効」である。すなわち、「治療」には、症状またはマーカーの改善のみでなく、治療を行わない場合に予想されるものと比較して、進行の停止もしくは少なくとも進行の遅延、または症状の悪化が含まれる。有益なまたは望ましい臨床結果としては、これらに限定されないが、検出可能か否かにかかわらず、１つ以上の症状（複数可）の緩和、疾患範囲の縮小、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化していない）、疾患の進行の遅延もしくは疾患の進行速度の低下、病状の改善または緩和、寛解（部分または完全）、介入の減少、入院期間の短縮、及び／または死亡率の低下が挙げられる。疾患の「治療」という用語は、疾患の症状または副作用からの緩和（緩和的治療など）を提供することも含む。この文脈において治療には、完全な「治癒」は含まないまたは包含しない。
【００２６】
一実施形態では、化合物は、アントロジン化合物である。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＡ（３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］フラン−２，５−ジオン）、アントロジンＢ（３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン）、アントロジンＣ（３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］−１Ｈ−ピロール−１−オール−２，５−ジオン）、アントロジンＤ（３Ｒ＊，４Ｓ＊−１−ヒドロキシ−３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］ピロリジン−２，５−ジオン）、及びアントロジンＥ（３Ｒ＊，４Ｒ＊−１−ヒドロキシ−３−イソブチル−４−［４−（３−メチル−２−ブテニルオキシ）フェニル］ピロリジン−２，５−ジオン）からなる群から選択される。より好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ、アントロジンＣ、及びアントロジンＤからなる群から選択される。
【００２７】
別の実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ、アントロジンＣまたはそれらの組み合わせである。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＤ、アントロジンＥまたはそれらのラセミ体である。
【００２８】
一実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物は、肝臓内に沈着する脂質の量を減少させることにより非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するのに十分である。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、肝臓内に沈着する脂質の量を減少させることにより非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するのに十分である。
【００２９】
別の実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物は、肝機能マーカーを減少させることにより非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するのに十分である。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、肝機能マーカーを減少させることにより非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するのに十分である。
【００３０】
一実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物は、メタボリックシンドロームの関連指標を低下させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するのに十分である。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、メタボリックシンドロームの関連指標を低下させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するのに十分である。より好ましい実施形態では、メタボリックシンドロームの関連指標は、血糖、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、総コレステロール（ＴＣ）または総トリグリセリド（ＴＧ）である。
【００３１】
別の実施形態では、化合物はさらに脂肪肝関連代謝性疾患を治療する。好ましい実施形態では、脂肪肝関連代謝性疾患は糖尿病である。より好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、血糖及びインスリンの発現を減少させることによって脂肪肝関連代謝性疾患を治療するのに十分である。
【００３２】
一実施形態では、化合物は、非アルコール性脂肪性肝疾患によって引き起こされる炎症反応をさらに阻害する。好ましい実施形態では、化合物は、マロンジアルデヒドの発現を減少させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患によって引き起こされる炎症反応を阻害するのに十分である。
【００３３】
一実施形態では、治療有効量の化合物は、インスリン及びマロンジアルデヒドの発現を減少させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するのに十分である。
【００３４】
一実施形態では、対象は動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
【００３５】
一実施形態では、組成物は医薬組成物である。好ましい実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体などの担体を任意により含み得る。好ましい実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。薬学的に許容される担体は、投与される特定の組成物によって、ならびに組成物を投与するために使用される特定の方法によって部分的に決定される。したがって、医薬組成物の多種多様な好適な配合物が存在する。非経口投与に好適である配合物は、例えば、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、及び皮下経路用に配合できる。薬学的に許容される担体としては、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、ならびに配合物を意図したレシピエントの血液と等張にさせる溶質、ならびに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、防腐剤、リポソーム、ミクロスフェア及びエマルジョンを含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液を含むことができる水性等張滅菌注射液を挙げることできる。「薬学的に許容される」という用語は、過度の毒性なく、哺乳動物に投与され得る化合物及び組成物を指す。
【００３６】
本発明の組成物（牛樟芝菌糸体の抽出物または本発明の化合物である）及び薬学的に許容される担体は、当技術分野で公知である複数の異なる経路を介して対象に投与できる。一実施形態では、組成物及び薬学的に許容される担体は、外部、静脈内、皮下、局所、経口、または筋肉または吸入によって投与される。医薬組成物は、消化器系または循環系によって標的部位に送達される。
【００３７】
組成物（牛樟芝菌糸体または化合物の抽出物など）及び薬学的に許容される担体は、無菌の水溶液または分散液、水性懸濁液、油性エマルジョン、Ｗ／Ｏ／Ｏ型エマルション、特定のエマルション液、長滞留型乳化剤、粘性のあるエマルション、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、リポソーム、微粒子、ミクロスフィア、ナノスフィア、ナノ粒子、微量水銀、及び天然または合成ポリマーのいくつかの持続可能な放出を介して配合され得る。薬学的に許容される担体及び組成物は、エアロゾル、錠剤、ピル、カプセル、無菌粉末、坐剤、ローション、クリーム、軟膏、ペースト、ゲル、ヒドロゲル、持続送達デバイス、または薬物送達に使用され得る他の配合物としても調製され得る。
【００３８】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、特定の条件下で対象において発症した症状を予防する、減少させる、停止させる、もしくは逆転させることができる、または対象が治療を受け始めたときに特定の条件下ですでに存在している症状を部分的に完全に緩和することができる治療用量である。
【００３９】
一実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物は、０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜１００ｍｇ／Ｋｇの範囲である。好ましい実施形態では、治療有効量の牛樟芝の抽出物は、０．０５ｍｇ／Ｋｇ〜８０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。より好ましい実施形態では、治療有効量の牛樟芝の抽出物は、０．１ｍｇ／Ｋｇ〜５０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。
【００４０】
別の実施形態では、治療有効量の化合物は、０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜１００ｍｇ／Ｋｇの範囲である。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、０．０５ｍｇ／Ｋｇ〜８０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。より好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、０．１ｍｇ／Ｋｇ〜５０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。
【００４１】
本発明はさらに、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を予防するかまたは治療するための薬物を調製するための組成物の使用を提供し、組成物は、牛樟芝菌糸体の抽出物である。
【００４２】
一実施形態では、牛樟芝菌糸体の抽出物は、牛樟芝菌糸体の水または有機溶媒抽出物である。好ましい実施形態では、有機溶媒は、アルコール、エステル、アルカンまたはハロゲン化アルカンである。より好ましい実施形態では、アルコールはエタノールである。
【００４３】
一実施形態では、牛樟芝菌糸体の抽出物は、アントロジン化合物である。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＡ、アントロジンＢ、アントロジンＣ、アントロジンＤ及びアントロジンＥである。より好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ、アントロジンＣ及びアントロジンＤである。別の実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ及びアントロジンＣである。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＤ及びアントロジンＥである。
【００４４】
本発明はまた、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を予防するかまたは治療するための薬物を調製するための組成物の使用を提供し、ここで組成物は、治療有効量の式（Ｉ）を有する化合物：
【００４５】
【化６】
2020200329.tif 000009
またはその互変異性体、その立体異性体、そのラセミ体、その代謝物、その多形体、その塩、またはその溶媒和物を含み、
式中、
Ｘは、ＮまたはＯであり；
Ｒ１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキルオキシ、Ｃ２〜１０アルケニルオキシ、またはＣ２〜１０アルキニルオキシであり；
Ｒ２は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０アルキニルであり；
Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ２〜１０アルケニルまたはＣ２〜１０アルキニルであり；
2020200329.tif 000010
は、単結合または二重結合を表し；
ＸがＯのとき、Ｒ３は存在しないものとし；
2020200329.tif 000011
が単結合を表すとき、化合物は次式のいずれかを有する：
【００４６】
【化７】
2020200329.tif 000012
【００４７】
【化８】
2020200329.tif 000013
【００４８】
【化９】
2020200329.tif 000014
【００４９】
【化１０】
2020200329.tif 000015
【００５０】
一実施形態では、非アルコール性脂肪性肝疾患は、非アルコール性脂肪肝及び非アルコール性脂肪肝炎である。
【００５１】
一実施形態では、化合物は、アントロジン化合物である。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＡ、アントロジンＢ、アントロジンＣ、アントロジンＤ及びアントロジンＥからなる群から選択される。より好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ、アントロジンＣ、及びアントロジンＤからなる群から選択される。
【００５２】
別の実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＢ、アントロジンＣまたはそれらの組み合わせである。好ましい実施形態では、アントロジン化合物は、アントロジンＤ、アントロジンＥまたはそれらのラセミ体である。
【００５３】
一実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物は、肝臓内に沈着する脂質の量を減少させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物により、肝臓内に沈着する脂質の量を減少させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する。
【００５４】
別の実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物により、肝機能マーカーを減少させることにより非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、肝機能マーカーを減少させることにより非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する。
【００５５】
一実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物は、メタボリックシンドロームの関連指標を低下させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、メタボリックシンドロームの関連指標を低下させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する。より好ましい実施形態では、メタボリックシンドロームの関連指標は、血糖、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧまたはＴＣである。
【００５６】
別の実施形態では、化合物はさらに脂肪肝関連代謝性疾患を治療する。好ましい実施形態では、脂肪肝関連代謝性疾患は糖尿病である。より好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、血糖及びインスリンの発現を減少させることによって脂肪肝関連代謝性疾患を治療する。
【００５７】
一実施形態では、化合物は、非アルコール性脂肪性肝疾患によって引き起こされる炎症反応をさらに阻害する。好ましい実施形態では、化合物は、マロンジアルデヒドの発現を減少させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患によって引き起こされる炎症反応を阻害する。
【００５８】
一実施形態では、治療有効量の化合物は、インスリン及びマロンジアルデヒドの発現を減少させることにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する。
【００５９】
一実施形態では、組成物は医薬組成物である。好ましい実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。医薬組成物は、消化器系または循環系によって標的部位に送達される。
【００６０】
一実施形態では、治療有効量の牛樟芝菌糸体の抽出物は、０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜１００ｍｇ／Ｋｇの範囲である。好ましい実施形態では、治療有効量の牛樟芝の抽出物は、０．０５ｍｇ／Ｋｇ〜８０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。より好ましい実施形態では、治療有効量の牛樟芝の抽出物は、０．１ｍｇ／Ｋｇ〜５０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。
【００６１】
別の実施形態では、治療有効量の化合物は、０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜１００ｍｇ／Ｋｇの範囲である。好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、０．０５ｍｇ／Ｋｇ〜８０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。より好ましい実施形態では、治療有効量の化合物は、０．１ｍｇ／Ｋｇ〜５０ｍｇ／Ｋｇの範囲である。
【実施例】
【００６２】
以下の実施例は非限定的であり、本発明の様々な態様及び特徴の単なる代表である。
【００６３】
材料及び方法
１  細胞内での脂質蓄積の阻害
１．１  細胞培養
ヒト肝癌細胞株Ｈｅｐ  Ｇ２は、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地中高グルコース（ＤＭＥＭ−ＨＧ）で、インキュベーター内、５％ＣＯ２下、３７℃で培養した。
【００６４】
１．２  細胞生存率試験
Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）は、牛樟芝菌糸体の水または有機溶媒抽出物から調製された、牛樟芝菌糸体由来の混合物であった。牛樟芝菌糸体の抽出物は、アントロジンＢ〜Ｅを含めた。５ｘ１０３個のＨｅｐ  Ｇ２細胞を９６ウェルプレートに２４時間播種し、次に様々な濃度のＨｅｐａｓｉｍ（登録商標）、アントロジンＢ、アントロジンＣ、アントロジンＤと共に７２時間インキュベートした。処理後、細胞をアラマーブルー（１０％、ｗ／ｖ）と共に３時間インキュベートし、５４０ｎｍ及び６３０ｎｍで読み取りを行った。細胞生存率は、［（ＯＤ５７０-ＯＤ６００）ｔｅｓｔ／（ＯＤ５７０-ＯＤ６００）ｃｏｎｔｒｏｌ］ｘ１００によって算出した。
【００６５】
１．３  遊離脂肪酸（ＦＦＡ）による脂質の蓄積及びオイルレッドの測定
１ｘ１０５個のＨｅｐ  Ｇ２細胞を９６ウェルプレートに播種し、１％ＢＳＡを含む無血清細胞培地で２４時間インキュベートした。脂質蓄積を誘導するために、上記の細胞を０．３３ｍＭパルミチン酸と０．６６ｍＭオレイン酸の混合物に２４時間播種し、アントロジンを含む無血清培地または含まない無血清培地に溶解させた。脂質蓄積及びアントロジン処理後、細胞をＰＢＳで洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで室温で１５分間固定した。固定した細胞をＰＢＳで５分間洗浄した後、６０％イソプロパノールで２回すすいだ。その後、１ｍｌのオイルレッドキットで１０分間インキュベートした。細胞脂質の定量分析のために、細胞脂質中の色素を０．５ｍｌのイソプロパノールで抽出して、４９０ｎｍで測定した。
【００６６】
２  動物モデルにおける脂肪肝疾患相関指数の改善
２．１  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｔａｉｐｅｉ，Ｔａｉｗａｎ）から購入した８週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（Ｂ６）マウスを使用した。全動物を、２３±２℃の温度、及び１２時間の明／１２時間の暗のサイクルで動物室に維持した。
【００６７】
２．２  動物群
「Ｈｅａｌｔｈｙ  ｆｏｏｄ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｈｅａｌｔｈ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ」（Ｔａｉｗａｎ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｔａｉｗａｎ）に従って、すべての８週齢の試験マウスは、対照群、高脂肪食群、及び試験群（投与量の異なるＨｅｐａｓｉｍ（登録商標）、アントロジンＢまたはアントロジンＣを含む高脂肪食）群に無作為に割り付けた。各群には３〜４匹のマウスを含むものとした。
【００６８】
２．３  試験法（予防プロセス）
対照群には通常食を１８週間与え、他の群には高脂肪食を１８週間与えた。対照群及び高脂肪食群には脱イオン水の強制経口投与を行い、Ｈｅｐａｓｉｍ群には毎日３０ｍｇ／ＫｇのＨｅｐａｓｉｍ（登録商標）の強制経口投与を行った。各群のマウスの体重を毎週記録した。１８週間の終わりに、すべてのマウスをＣＯ２の過剰摂取により屠殺した。マウスの死亡時に、血液をマウスの心臓から採取した。血清を分離するために、全血を冷蔵遠心機で１５，７００ｘｇ、４℃で５分間遠心分離した。肝臓をマウスから取り出し、氷冷生理食塩水ですすいだ。肝臓のサンプルは、様々なアッセイ及び組織学的評価のために分配した。
【００６９】
２．４  試験法（治療プロセス）
対照群には通常食を２０週間与え、他のすべての群には高脂肪食を２０週間与えた。対照群及び高脂肪食群には、脱イオン水の強制経口投与を行い、アントロジンＢまたはアントロジンＣ群には、１１週目から２０週目に毎日、１０ｍｇ／Ｋｇまたは３０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＢまたはアントロジンＣの強制経口投与を行った。各群のマウスの体重を毎週記録した。２０週間の終わりに、すべてのマウスをＣＯ２の過剰摂取により屠殺した。マウスの死亡時に、血液をマウスの心臓から採取した。血清を分離するために、全血を冷蔵遠心機で１５，７００ｘｇ、４℃で５分間遠心分離した。肝臓をマウスから取り出し、次に氷冷生理食塩水ですすいだ。肝臓のサンプルは、様々なアッセイ及び組織学的評価のために分配した。
【００７０】
２．５  各指標の決定方法
保存した肝臓サンプル（０．１ｇ）を１ｍｌＰＢＳで均質化し、冷蔵遠心機で１５，７００ｘｇ、４℃で、５分間遠心分離してペレットを除去した。血清及び肝臓のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、総コレステロール（ＴＣ）、及び総トリグリセリド（ＴＧ）のレベルを、対応する検出キット（Ｒａｎｄｏｘ）により測定した。全血中の血糖値は、血糖測定器（Ｒｏｃｈｅ）で検出した。血漿インスリンは、インスリンマウスＥＬＩＳＡキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により検出した。肝臓内のマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）レベルは、脂質過酸化アッセイキット（比色分析／蛍光分析）を使用して測定した（ａｂｃａｍ、＃ａｂ１１８９７７）。肝臓のサンプルは、様々なアッセイ及び組織学的評価のために分配した。
【００７１】
２．６  組織学的評価
肝臓をマウスから取り出し、１０％神経ホルマリンで固定した。肝臓サンプルは、様々な濃度（３０、５０、７０、９５、９９．５％）のエタノール及びキシレンに入れて脱水した。最後に、肝臓サンプルをパラフィン切片に埋め込んだ。ヘマトキシリン−エオシン染色では、脱脂のために肝臓組織切片をキシレンに３０分間入れ、次いで、９９．５％エタノールに１０分間、９０％エタノールに５分間、７０％エタノールに１分間、５０％エタノールに１分間、及び３０％エタノールに１分間順次入れて再水和し、その後、蒸留水に１０分間浸漬した。核を染色するために、サンプルをヘマトキシリン溶液に４分間浸漬した後、蒸留水に数分間浸漬し、その後エオシン溶液に２分間浸漬して細胞質を染色し、次いで蒸留水で１０分間洗浄した。最後に、サンプルを９０％エタノールに２分間、９９．５％エタノールに２分間、及びキシレンに２０分間順次入れ、封入剤で封入した。
【００７２】
２．７  統計分析
すべての結果を平均値±ＳＤとして表した。有意差は、両側スチューデントのｔ検定で分析した。Ｐ＜０．０５は、２つの群間の統計的差異を表す。
【００７３】
結果
１  細胞内での脂質蓄積の阻害
１．１  細胞生存率試験
アラマーブルー処理では、すべての群において、対照群と比較して吸光度の値に有意差を示さなかった（図１）。この結果では、Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）、アントロジンＢ、アントロジンＣ、及びアントロジンＤが１００μｇ／ｍｌ未満の濃度ではＨｅｐ  Ｇ２細胞に対して細胞毒性を有さないことが示された。
【００７４】
１．２  オイルレッドアッセイ
オイルレッドアッセイは、細胞内の脂質蓄積を直接検出するための方法である。すべての群内の細胞を遊離脂肪酸とインキュベートして、細胞の脂質蓄積を誘導した。細胞の脂質蓄積を誘導するために遊離脂肪酸と共にインキュベートしていないブランク群と比較して、対照群では、細胞内の脂質が６０％増加した。
【００７５】
試験群では、アントロジンＢ、アントロジンＣ、アントロジンＤでは、対照群と比較して細胞の脂質蓄積が有意に減少した（図２）。１０μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌのアントロジンＢでは、それぞれ細胞内の脂質蓄積を１２．８％及び９．３％減衰させた。１０μｇ／ｍｌ及び１００μｇ／ｍｌのアントロジンＣでは、それぞれ細胞内の脂質蓄積を２０．６％及び２４．１％減衰させた。１００μｇ／ｍｌのアントロジンＤでは、細胞内の脂質蓄積を１８．６％減衰させた。
【００７６】
２  動物モデルにおける脂肪肝疾患相関指数の改善
２．１  Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）では、高脂肪食により生じる体重及び肝重量の増加が大幅に減少した
高脂肪食群では、対照群（通常食）と比較して、体重及び肝重量が双方とも増加した。試験群では、マウスに３０ｍｇ／ＫｇのＨｅｐａｓｉｍ（登録商標）を含む高脂肪食を与えることにより、高脂肪食によって生じる体重及び肝重量の増加が有意に減少できた。１４週間の終わりに、Ｈｅｐａｓｉｍ群の体重及び肝重量は、高脂肪食群と比較して、それぞれ３２．７％及び３５．２％減少した。すべてのデータを表１に示す。
【００７７】
【表１】
2020200329.tif 000016
【００７８】
２．２  脂肪肝疾患相関指数は、Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）による治療により有意に改善された
高脂肪食群でのＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ、ＴＣの血清レベルは、対照群と比較して急速に増加し、一方、Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）では、高脂肪食によって誘導されたＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ、ＴＣの増加を、高脂肪食群と比較して、それぞれ約６８％、７０％、２８．８％、及び２７．５％減衰させた。さらに、Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）では、肝臓内でのＴＧレベル及びＴＣレベルを、それぞれ約２８．８％及び２０．６％有意に減少させた。すべての値を表２及び表３に示した。
【００７９】
【表２】
2020200329.tif 000017
【００８０】
【表３】
2020200329.tif 000018
【００８１】
２．３  肝臓の外観及び肝臓切片のＩＨＣ
高脂肪食群のマウスの肝臓の色は、対照群に比較して脂肪肝の現象である淡色であったが、その状態はＨｅｐａｓｉｍ群のマウスの肝臓では観察されなかった。肝臓切片のヘマトキシリン−エオシン染色によれば、高脂肪食群のマウスの肝臓内により多くの脂肪滴が存在し、Ｈｅｐａｓｉｍ（登録商標）では、肝臓内の脂肪滴の増加が減衰した（図３）。
【００８２】
３  アントロジン治療による動物モデルにおける脂肪肝疾患相関指数の改善
３．１  アントロジンＢ及びアントロジンＣでは、高脂肪食により生じる体重及び肝重量の増加が減少した
高脂肪食群では、対照群（通常食）と比較して、体重及び肝重量が双方とも有意に増加した。２０週間の終了時に、動物に１０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＢ、１０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＣまたは３０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＣを含む高脂肪食を与えると、高脂肪食群と比較して、体重増加率がそれぞれ１４％、４．５％、または１２．９％減少させることができた。体重増加率＝［（各群の体重−対照群の体重）／対照群の体重］＊１００％。１０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＢ、１０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＣ、または３０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＣを与えても、肝肥大が有意に阻害された。すべてのデータを表４に示す。
【００８３】
【表４】
2020200329.tif 000019
【００８４】
３．２  脂肪肝疾患相関指数は、アントロジンＢまたはアントロジンＣで治療することにより改善した
高脂肪食群のマウスの血清中の血糖、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ及びＴＣのレベルは、対照群と比較して、有意に増加し、アントロジンＣ１０ｍｇ／Ｋｇによる治療では、高脂肪食群と比較して、血糖、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ及びＴＣの増加がそれぞれ約３４．７８％、１２．３％、３９．３５％、１１．５７％、及び６６．８３％減衰した。アントロジンＣ３０ｍｇ／Ｋｇによる治療では、高脂肪食群と比較して、血糖、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ及びＴＣの増加がそれぞれ約７９．４８％、４８．９６％、７４．１７％、２１．９６％及び８６．２６％減衰した。これらの結果は、アントロジンＣが脂肪肝疾患を有意に改善できることを示唆するものであった。すべての値を表５に示す。
【００８５】
【表５】
2020200329.tif 000020
【００８６】
３．３  高脂肪食マウスでの血漿インスリンは、アントロジンＢまたはアントロジンＣで治療することにより改善した
糖尿病は、脂肪肝と非常に相関しており、多くの脂肪肝患者は高血糖症状も有する。高脂肪食マウスでは、アントロジンにより血糖が減少され得ることが証明された。別の糖尿病指数である血漿インスリンも、アントロジンＢまたはアントロジンＣで治療したときに改善した。高脂肪食マウスの血漿インスリンは、対照群と比較して、０．５ｎｇ／ｍｌから２．２ｎｇ／ｍｌに上昇した。１０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＢ、３０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＢ、１０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＣまたは３０ｍｇ／ＫｇのアントロジンＣで治療したときに、血漿インスリンレベルの増加率は、それぞれ２２３．６％、６９．１％、８１．８％または１７６．３％減少した。血漿インスリンレベルの増加率＝［（各群の血漿インスリンレベル−対照群の血漿インスリンレベル）／対照群の血漿インスリンレベル］＊１００％。この結果により、アントロジンＢ及びアントロジンＣの両方により、糖尿病などの脂肪肝関連代謝性疾患を改善できることが示された。すべての値を表６に示す。
【００８７】
【表６】
2020200329.tif 000021
【００８８】
３．４  高脂肪食マウスでの酸化ストレスは、アントロジンＢまたはアントロジンＣで治療することにより改善した
マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）、活性酸素種（ＲＯＳ）の誘導体は、身体内の酸化ストレスの一般的な指標である。この実験では、高脂肪食は、マウスにおいてＭＤＡレベルの２２６％の増加を有意に誘導した。この結果は、マウスでは、高脂肪食により酸化ストレスが増加することを示すものであった。１０％アントロジンＢ、３０％アントロジンＢ、１０％アントロジンＣまたは３０％アントロジンＣで治療した場合、マウスでのＭＤＡレベルの増加率は２４．８％、１２９．６％、８６％または１３６．７％減少した。この結果は、アントロジンＢまたはアントロジンＣにより、酸化ストレスを減少させることにより（それのみではないが）、炎症に関連する肝疾患を改善できることを示した。すべての値を表７に示す。
【００８９】
【表７】
2020200329.tif 000022
【００９０】
３．５  アントロジンＢまたはアントロジンＣによる治療による高脂肪食マウスでの肝臓の外観及び肝臓切片のＩＨＣ
肝臓切片のヘマトキシリンエオシン染色または肝臓外観（油の蓄積または肥大）は、炎症または脂肪肝に関連する肝疾患の指標のうちの１つである。高脂肪食群のマウスの肝臓の色は淡色であり、対照群と比較して脂肪肝の現象であったが、アントロジンＢ群またはアントロジンＣ群では、同じ状態は観察されなかった（図４）。肝臓切片のヘマトキシリン−エオシン染色によれば、高脂肪食群のマウスの肝臓にはより多くの脂肪滴があったが、１０％のアントロジンＢ、３０％のアントロジンＢ、１０％のアントロジンＣまたは３０％のアントロジンＣでは、肝臓での脂肪滴の増加が有意に減衰した（図５）。これらの結果は、アントロジンＢまたはアントロジンＣにより、炎症または脂肪肝に関連する肝疾患が改善したことを明確に示すものであった。
【００９１】
本明細書に例示的に記載された本発明は、本明細書に具体的に開示されていない任意の要素（複数可）、限定（複数可）がなくても実施され得る。使用されている用語及び表現は、限定するものではなく説明の用語として使用されており、そのような用語及び表現の使用において、示され説明された特徴またはその一部のあらゆる同等物を除外する意図はないが、特許請求された本発明の範囲内で様々な変更が可能であることが認識される。したがって、本発明は、好ましい実施形態及び任意の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書で開示される概念の修正及び変形は、当業者によって行われ得ること、ならびにそのような修正及び変形は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であるとみなされることは理解されるべきである。
【図１】
2020200329.tif 000030
【図２】
2020200329.tif 000031
【図３】
2020200329.tif 000032
【図４】
2020200329.tif 000033
【図５】
2020200329.tif 000034
【外国語明細書】
2020200329000001.pdf