(57)【要約】【課題】優れた抗酸化活性を有し、かつ優れた水溶性等を有する光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体、その塩、もしくは高純度の同誘導体またはその塩を含有する凍結乾燥製剤の提供。【解決手段】式（Ｉ）で表される光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体、その塩、または高純度のそれらの化合物を含有する凍結乾燥製剤。2020200295.tif 000011（式中、ｍ１、ｍ２、ｎ１およびｎ２は、それぞれ同一または異なって１〜６の整数を意味する。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体、その塩または高純度のそれらの化合物を含有する凍結乾燥製剤。
【化１】
2020200295.tif 000010
（式中、ｍ１、ｍ２、ｎ１およびｎ２は、同一または異なって１〜６の整数を意味する。）
【請求項２】
式（Ｉ）中のｍ１およびｍ２がそれぞれ１の整数を意味し、ｎ１およびｎ２がそれぞれ３の整数を意味する請求項１記載の凍結乾燥製剤。
【請求項３】
塩がナトリウム塩である請求項１または２記載の凍結乾燥製剤。
【請求項４】
さらに、糖類を含有する請求項１〜３のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５】
糖類が、ラクトース、トレハロースまたはそれらの混合物である請求項４記載の凍結乾燥製剤。
【請求項６】
さらに、ｐＨ調節剤を含有する請求項４または５記載の凍結乾燥製剤。
【請求項７】
ｐＨ調節剤が、リン酸バッファー、クエン酸バッファーまたはそれらの混合物である請求項６記載の凍結乾燥製剤。
【請求項８】
ｐＨ調節剤が、ｐＨを中性域に調整するｐＨ調節剤である請求項６または７記載の凍結乾燥製剤。
【請求項９】
凍結乾燥製剤が凍結乾燥粉末である請求項１〜８のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。
【請求項１０】
凍結乾燥製剤が凍結乾燥医薬製剤である請求項５〜９のいずれか一項記載の凍結乾燥製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランス−アスタキサンチン誘導体を含有する凍結乾燥製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アスタキサンチンは、一部の藻類、オキアミ、エビ、鯛、鮭などに含まれる色素物質であり、強力な抗酸化活性を有し、紫外線や脂質過酸化反応から生体を防御する因子として作用していると考えられている。このアスタキサンチンの水溶性および経口吸収性を改善し、優れた抗炎症作用を有する化合物として、特許文献１にアスタキサンチンの両端シクロヘキセノン環のヒドロキシ基に種々の官能基を付加導入した以下の式（Ｉ）の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体が報告されている。
【０００３】
【化１】
2020200295.tif 000002
【０００４】
（式中、ｍ１、ｍ２、ｎ１およびｎ２は、それぞれ同一または異なって１〜６の整数を意味する。）
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１９／６５６７４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、式（Ｉ）の化合物は安定性の点で必ずしも十分とはいえず、特に水溶液中では加水分解等により分解して不安定であり、式（Ｉ）の化合物を安定して含有する長期保存可能な製剤の確保が大きな課題であった。
本発明の課題は、式（Ｉ）の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体、その塩および高純度のそれらの化合物を安定して含有する長期保存可能な製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者らは、式（Ｉ）の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体を安定して含有する長期保存可能な製剤を得るべく鋭意検討した結果、式（Ｉ）の誘導体、その塩または高純度のそれらの化合物を含有する凍結乾燥製剤を見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の発明〔１〕〜〔１０〕を提供するものである。
【０００９】
〔１〕式（Ｉ）で表される光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体、その塩または高純度のそれらの化合物を含有する凍結乾燥製剤。
【００１０】
【化２】
2020200295.tif 000003
【００１１】
（式中、ｍ１、ｍ２、ｎ１およびｎ２は、それぞれ同一または異なって１〜６の整数を意味する。）
〔２〕式（Ｉ）中のｍ１およびｍ２がそれぞれ１の整数を意味し、ｎ１およびｎ２がそれぞれ３の整数を意味する〔１〕記載の凍結乾燥製剤。
〔３〕塩がナトリウム塩である〔１〕または〔２〕記載の凍結乾燥製剤。
〔４〕さらに、糖類を含有する〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【００１２】
〔５〕糖類が、ラクトース、トレハロースまたはそれらの混合物である〔４〕記載の凍結乾燥製剤。
〔６〕さらに、ｐＨ調節剤を含有する〔４〕または〔５〕記載の凍結乾燥製剤。
〔７〕ｐＨ調節剤が、リン酸バッファー、クエン酸バッファーまたはそれらの混合物である〔６〕記載の凍結乾燥製剤。
〔８〕ｐＨ調節剤が、ｐＨを中性域に調整するｐＨ調節剤である〔６〕または〔７〕記載の凍結乾燥製剤。
［９〕凍結乾燥製剤が凍結乾燥粉末である〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
〔１０〕凍結乾燥製剤が凍結乾燥医薬製剤である〔５〕〜〔９〕のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の凍結乾燥製剤は、式（Ｉ）で表される光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体、その塩または高純度のそれらの化合物が安定な状態で存在する長期保存可能な製剤として優れたものであり、優れた抗酸化作用、水溶性を有し経口吸収可能な抗酸化剤である式（Ｉ）の化合物の医薬用製剤として極めて優れたものである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明に用いられる光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体は、前記式（Ｉ）で表される。
本発明の式（Ｉ）の化合物において、トランスとはトランスの幾何異性体、即ち、アスタキサンチン基本骨格中の中級炭素鎖部分における幾何異性体を形成し得る二重結合部分が、基本全てトランスの異性体（以下、全トランス体と表す）となっていることを意味する。
また、式（Ｉ）の化合物において、光学活性とはアスタキサンチン基本骨格に結合する二個のエステル基が同基本骨格に対し共にＳの立体配置であることを意味する。従って、式（Ｉ）のシクロヘキセノン骨格中の不斉炭素原子の立体配置は、３Ｓ，３’Ｓである。
【００１５】
上記式（Ｉ）の化合物中では、ｍ１およびｍ２がそれぞれ１の整数を意味しｎ１およびｎ２がそれぞれ３の整数を意味する化合物並びにその塩が好ましい。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物は、分子内にカルボキシル基を有することから望まれる塩基性物質または塩基性化合物と通常の塩形成反応をさせることにより薬学上許容される塩を形成することができる。そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、リシン塩、オルニチン塩、アルギニン塩のようなアミノ酸塩を挙げることができ、中でもナトリウム塩を好ましいものとして挙げることができる。
【００１７】
高純度の式（Ｉ）の光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体とは、有効成分の少なくとも９５％以上、好ましくは９８％以上の高純度で光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体が存在することを意味する。この化合物の塩は、通常の塩形成反応をさせることにより、本発明に係る式（Ｉ）の高純度の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体の塩とすることができる。
【００１８】
本発明の高純度の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体およびその塩は、アスタキサンチンのフリー体で効果が確認されている活性酸素がかかわる疾病の治療に用いることができる。改善・予防が可能な活性酸素がかかわる疾病としては、例えば、高脂血症、肥満症、耐糖能不全、高血圧症、インスリン抵抗性、メタボリックシンドローム、脂肪肝、糖尿病、糖尿病合併症（例えば、網膜症、腎症、神経症、白内障、糖尿病性黄斑浮腫、冠動脈疾患等）、脂肪肝炎、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、Ｃ型肝炎、動脈硬化症、妊娠性糖尿病、多嚢胞卵巣症候群、心血管性疾患（例えば、虚血性心疾患）、アテローム性動脈硬化症、血管不全、脳卒中（例えば、脳血栓症、脳塞栓症、一過性脳虚血発作、脳出血、くも膜下出血）、痛風、炎症性疾患（例えば、疼痛、発熱、リウマチ性関節炎、炎症性腸炎、アクネ、日焼け、乾癬、湿疹、アレルギー性疾患、ＧＩ潰瘍、悪液質、自己免疫疾患、膵炎等）、変形性関節症、胃潰瘍、ガン、骨粗鬆症、白内障、緑内障、眼精疲労、認知症（例えば、レビー小体型認知症、脳血管性認知症、前頭側頭型認知症、若年性認知症、アルコール性認知症等）、うつ病、双極性障害、統合失調症、慢性疲労、廃用性筋萎縮、筋萎縮、サルコペニア、悪液質、尿酸抑制作用、発毛促進作用、創傷改善、肺疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患、喘息）、疼痛疾患（例えば、炎症性疼痛、神経障害性疼痛、線維筋痛症、ガン性疼痛、片頭痛等）、泌尿器疾患（例えば、間質性膀胱炎、過活動膀胱等）および手術後の術後痛、創傷治癒改善を挙げることができる。
好適には、腸炎特に好ましくは大腸炎、中でも潰瘍性大腸炎や変形性膝関節症の予防剤および／または治療剤としての使用が好ましい。
【００１９】
本発明の式（Ｉ）で示される光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体、その塩または高純度のそれらの化合物を含有する凍結乾燥製剤において、光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体、その塩または高純度のそれらの化合物の配合量は特に制限されず、本製剤の製造過程において同化合物が可溶化し得る範囲で配合すればよい。
【００２０】
本凍結乾燥製剤において、賦形剤としては、糖類、具体的には、ラクトース、トレハロース、それらの混合物を好適に使用することができ、中でもラクトースの使用が好ましい。それらの使用量は、特に制限されないが、通常、式（Ｉ）の化合物の長期保存安定性の点から、高純度の式（Ｉ）の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体またはその塩の使用質量（１質量部）に対し、１質量部〜１００質量部、好ましくは５質量部〜１０質量部、特に好ましくは８質量部〜９質量部使用すればよい。
【００２１】
本凍結乾燥製剤のｐＨについては、基本、式（Ｉ）の化合物の長期保存安定性の点から、中性域、具体的には、６．３〜７．４、特に好ましくは６．８〜７．１程度に調節すればよい。
ｐＨ調節には、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、それらを混合するリン酸バッファー、或いはクエン酸三ナトリウム、クエン酸やそれらクエン酸類を混合するクエン酸バッファー等を好適に使用することができる。
【００２２】
次に、本発明の凍結乾燥製剤の製造法について説明する。
式（Ｉ）の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体またはその塩を、通常注射用蒸留水に懸濁或いは溶解し、これに必要に応じてＬ−リシン溶液または水酸化ナトリウム水溶液或いはそれらの混合液を加え混和し前記化合物の水溶液を調製する。
当該水溶液に上記のｐＨ調節剤の水溶液を加えて目的のｐＨに調節し、次いでフィルターを用いて濾過し、また必要に応じて無菌濾過処理も行い凍結前の水溶液とすればよい。以上の水溶液の調製においては、必要に応じて窒素ガス等の不活性なガスを用いてバブリングを適宜することも可能である。
【００２３】
また、上記の凍結前の水溶液の調製においては、必要に応じて界面活性剤や防腐剤等の添加剤を加えてもよく、その添加量は、通常使用される量とすればよい。
【００２４】
以上のようにして得られる式（Ｉ）の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体またはその塩の水溶液を、必要に応じてバイアルやアンプル等に分注した後、通常の凍結乾燥技術を使用することにより、目的とする本発明の凍結乾燥製剤を製造することができる。
【００２５】
本発明の凍結乾燥製剤は、バイアルやアンプル中に凍結乾燥後得られる凍結乾燥粉末を含有する或いは充填するバイアル剤、アンプル剤や前記の凍結乾燥粉末自身を意味し、それらは、総称として凍結乾燥製剤とすることができる。
得られた凍結乾燥粉末については、適宜必要に応じてカプセル充填等、各種の医薬品用投与製剤に応用、展開することができる。
【実施例】
【００２６】
以下、本発明を参考例、実施例および試験例により詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
なお、実施例で使用した原薬（ＡＰＩ）は以下の化合物である。
４−（３−｛４−［１８−（４（Ｓ）−［３−（３−ｃａｒｂｏｘｙｌｐｒｏｐｙｌ）ｕｒｅｉｄｏａｃｅｔｏｘｙ］−２，６，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−３−ｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘａ−１−ｅｎｙｌ）−３，７，１２，１６−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｏｃｔａｄｅｃａ−１，３，５，７，９，１１，１３，１５，１７−ｎｏｎａｅｎｙｌ］−３，５，５−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘａ−３−ｅｎｙｌ−1（Ｓ）−ｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌｍｅｔｈｙｌ｝−ｕｒｅｉｄｏ）ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ
【００２７】
実施例（表１．処方Ｎｏ．１）
ＡＰＩ６０．９１４ｇを注射用水２１００ｍＬで懸濁し、加温しながら窒素ガスでバブリングした。該懸濁液にＬ−リシン溶液（Ｌ−リシン塩酸塩３７．７ｇと水酸化ナトリウム水溶液１００ｍＬに注射用水を加えて５Ｌにメスアップして調製）３０００ｍＬを少しずつ加えて溶解した。溶解液のｐＨが７．６〜７．９であることを確認した後、窒素ガスで溶解液をバブリングした。該溶解液に乳糖水和物５４０ｇを加え、撹拌し、溶解した。該溶解液にリン酸バッファー（リン酸水素ナトリウム水和物２９．８８ｇおよびリン酸二水素カリウム１４．４０ｇを注射用水に溶解し、３００ｍＬにメスアップして調製）２００ｍＬを加え、該溶液のｐＨが６．９付近であることを確認した。注射用水で該溶液の重量を６２２２ｇに調整した後、孔径０．２２μｍ、膜材ポリエーテルサルフォン（ＰＥＳ）のフィルターを用いて、窒素ガスにより加圧濾過した。ろ液を充填量２．７０（±０．０２）ｍＬでバイアルに分注、充填した。充填後、ゴム栓を半打栓し、凍結乾燥し、凍結乾燥製剤バイアルを得た。
同様にして、処方Ｎｏ．２〜１３の凍結乾燥製剤を得た。
【００２８】
【表１】
2020200295.tif 000004
【００２９】
試験例
実施例で得られた凍結乾燥製剤につき、安定性試験を実施した。
具体的には、いわゆる加速安定性試験（４０℃、７５±５％相対湿度保存）および過酷安定性試験（６０℃、温度以外は特に条件設定なし）の条件下、本発明の凍結乾燥製剤を特定期間保存後、原薬の含量を以下の定量方法に従って測定した。原薬の残存率を保存開始時の定量値を１００％として算出し表２および表３に示した。
【００３０】
【表２】
2020200295.tif 000005
【００３１】
【表３】
2020200295.tif 000006
【００３２】
比較試験例（上記原薬の水溶液中での安定性）
原薬の残存率を再溶解液の保存開始時の定量値を１００％として算出。
【００３３】
【表４】
2020200295.tif 000007
【００３４】
上記表２および３の結果と表４の結果から、本発明の凍結乾燥製剤は、式（Ｉ）の化合物の安定性を改善し、式（Ｉ）の化合物の長期保存製剤として優れたものであることが確認された。賦形剤としては、ラクトースおよびトレハロースが好ましく、ラクトースが特に好ましいことがわかる。また、ｐＨは、中性域が好ましく、ｐＨ６．３〜７．４がより好ましく、ｐＨ６．８〜７．１がさらに好ましいことがわかる。
【００３５】
（ＡＰＩの定量方法）
凍結乾燥製剤（ＡＰＩ２７ｍｇ含有）を蒸留水１ｍＬおよび溶解液注１）で溶解し、５０ｍＬとした。当該溶液５ｍＬに内標準溶液注２）５ｍＬを加え、溶解液で５０ｍＬとし、試料溶液とした。別途、ＡＰＩの標準品約５０ｍｇを蒸留水１０ｍＬ、Ｌ−リシン溶液注３）５ｍＬ、溶解液注１）で溶解し、１００ｍＬとした。当該溶液５ｍＬに内標準溶液５ｍＬを加え、溶解液で５０ｍＬとし、標準溶液とした。
注１）無水リン酸二水素ナトリウム０．６０ｇおよび無水リン酸水素二ナトリウム０．７１ｇを蒸留水で溶解し、１０００ｍＬとした。当該溶液５００ｍＬにＨＰＬＣ用アセトニトリル５００ｍＬを加えた。
注２）メチルレッドナトリウムの溶解液溶液（１→２０００）
注３）Ｌ−リシン約７５ｍｇを蒸留水で溶解し、２０ｍＬとした。
試料溶液および標準溶液１０μＬにつき、液体クロマトグラフィーで試験を行い、内標準物質のピーク面積とＡＰＩの面積比ＱTおよびＱSを求め、下式に従い、ＡＰＩの含量を算出した。
【００３６】
【数１】
2020200295.tif 000008
【００３７】
液体クロマトグラフィーの測定は、カラムに内径４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填したものを使用した。移動相には、０．０２５％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（移動相Ａ）、０．０２５％トリフルオロ酢酸水溶液（移動相Ｂ）を用い、表５の濃度勾配に従い、送液した。測定波長は４７４ｎｍ、カラム温度は２５℃付近、流量は１．０ｍＬ／ｍｉｎとした。
【００３８】
【表５】
2020200295.tif 000009