(57)【要約】【課題】餌料用プランクトンを低コストかつ効率的に増殖させる方法を提供すること。【解決手段】培養液を収容する培養槽で餌料用プランクトンを培養する方法であって、培養液に第一の餌料用プランクトンを添加して、第一の餌料用プランクトンを培養する工程と、第一の餌料用プランクトンを含む培養液に第二の餌料用プランクトンを添加して、第一及び第二の餌料用プランクトンを培養する工程と、を備え、第一の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリであり、第二の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリ以外の餌料用プランクトンである、方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
培養液を収容する培養槽で餌料用プランクトンを培養する方法であって、
前記培養液に第一の餌料用プランクトンを添加して、前記第一の餌料用プランクトンを培養する工程と、
前記第一の餌料用プランクトンを含む培養液に第二の餌料用プランクトンを添加して、前記第一及び第二の餌料用プランクトンを培養する工程と、
を備え、
前記第一の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリであり、前記第二の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリ以外の餌料用プランクトンである、
方法。
【請求項２】
前記第二の餌料用プランクトンは、パブロバ・ルセリよりも増殖速度の速い餌料用プランクトンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第二の餌料用プランクトンは、キートセロス・グラシリス及びナンノクロロプシス・オキュラータからなる群から選択される餌料用プランクトンである、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記第一の餌料用プランクトンを添加する前の培養液及び／又は培養槽は滅菌処理されていない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第一の餌料用プランクトンを添加する前の培養液及び／又は培養槽は細菌を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、餌料用プランクトンを培養する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
水産養殖の分野において、餌料用プランクトンは、アサリをはじめとする貝類や甲殻類等の水産動物の餌料として利用されてきた。このような水産動物の生産量は、餌料用プランクトンの供給量に大きく依存するため、安価に効率良く餌料用プランクトンを培養する方法が求められている。
【０００３】
餌料用プランクトンの培養にあたっては、無菌的な環境に保つことが好ましいとされているため、通常、培養開始前に、培養槽や培養液に滅菌処理ないし殺菌処理を施している。その方法としては、流水紫外線殺菌法、濾過滅菌法、蒸気滅菌法等が知られているが、いずれも大規模な設備が必要となり、コストの負担が大きい。また、大規模な設備を必要としない方法として、塩素殺菌法が知られているが、残留塩素が人体に有害であり、安全性の面で問題がある。このような背景から、生物が有する特性を利用した滅菌方法が検討されており、例えば、特許文献１には、珪藻が有する抗菌活性を引き出す方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００９−２９６９１１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者らは、植物プランクトンの一種であるパブロバ・ルセリ（Ｐａｖｌｏｖａ  ｌｕｔｈｅｒｉ）が、細菌を捕食することを見出した。本発明は、この新規な知見に基づき、餌料用プランクトンを低コストかつ効率的に増殖させる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一側面は、培養液を収容する培養槽で餌料用プランクトンを培養する方法であって、上記培養液に第一の餌料用プランクトンを添加して、上記第一の餌料用プランクトンを培養する工程と、上記第一の餌料用プランクトンを含む培養液に第二の餌料用プランクトンを添加して、上記第一及び第二の餌料用プランクトンを培養する工程と、を備え、上記第一の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリであり、上記第二の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリ以外の餌料用プランクトンである、方法に関する。
【０００７】
パブロバ・ルセリは、通常は、活動性の低い植物プランクトンである。しかしながら、細菌が共存する環境下において、パブロバ・ルセリは、活発に遊泳し、細菌を捕食する性質があることを本発明者らは見出した。すなわち、上記方法では、パブロバ・ルセリが細菌を捕食するため、培養液及び培養槽における細菌の増殖が抑えられる。したがって、餌料用プランクトンの培養開始前に培養液及び培養槽を滅菌する必要がなく、培養中に混入する細菌の増殖をも防ぐことが可能となる。このため、上記方法によれば、餌料用プランクトンを低コストかつ効率的に増殖させることができる。
【０００８】
一態様において、上記第二の餌料用プランクトンは、パブロバ・ルセリよりも増殖速度の速い餌料用プランクトンであってよい。
【０００９】
一態様において、上記第二の餌料用プランクトンは、キートセロス・グラシリス（Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ  ｇｒａｃｉｌｉｓ）及びナンノクロロプシス・オキュラータ（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ  ｏｃｕｌａｔａ）からなる群から選択される餌料用プランクトンであってよい。
【００１０】
一態様において、上記第一の餌料用プランクトンを添加する前の培養液及び／又は培養槽は滅菌処理されていなくてよい。
【００１１】
一態様において、上記第一の餌料用プランクトンを添加する前の培養液及び／又は培養槽は細菌を含んでいてよい。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、餌料用プランクトンを低コストかつ効率的に増殖させる方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１（ａ）は実施培養液の画像であり、図１（ｂ）はコントロール培養液の画像である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の好適な実施形態について説明する。ただし、本発明は下記の実施形態に何ら限定されるものではない。
【００１５】
本実施形態に係る、培養液を収容する培養槽で餌料用プランクトンを培養する方法は、培養液に第一の餌料用プランクトンを添加して、第一の餌料用プランクトンを培養する工程と、第一の餌料用プランクトンを含む培養液に第二の餌料用プランクトンを添加して、第一及び第二の餌料用プランクトンを培養する工程と、を備えている。第一の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリであり、第二の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリ以外の餌料用プランクトンである。
【００１６】
本実施形態において、培養槽は、第一及び第二の餌料用プランクトンと、第一及び第二の餌料用プランクトンを培養するための培養液と、を収容する。培養槽の形状は、特に限定されず、例えば、角槽、丸槽、円形ポンド型培養槽、レースウェイポンド型培養槽、フラットパネル型培養槽、チューブ型培養槽等であってよい。また、培養槽は、屋外に設置してもよく、屋内に設置してもよい。
【００１７】
本実施形態において、培養液は、餌料用プランクトンの栄養となる成分を含む液体である。餌料用プランクトンの栄養となる成分としては、例えば、プランクトン用栄養塩、葉酸、チミン、ビオチン等が挙げられる。
【００１８】
パブロバ・ルセリは、細菌の共存下で、活発化して細菌を捕食することから、培養槽及び／又は培養液は細菌を含んでいてよい。すなわち、パブロバ・ルセリを培養液に添加する前に、培養槽及び培養液を滅菌処理する必要がない。細菌としては、例えば、ビブリオ属菌、シュードモナス属菌、エロモナス属菌、アルテロモナス属菌等が挙げられる。
【００１９】
本実施形態において、第二の餌料用プランクトンは、パブロバ・ルセリ以外の餌料用プランクトンである。第二の餌料用プランクトンは、パブロバ・ルセリよりも優勢に増殖させる目的から、パブロバ・ルセリよりも増殖速度の速い餌料用プランクトンが好ましい。第二の餌料用プランクトンとしては、例えば、ナンノクロロプシス・オキュラータ、イソクリシス・タヒチ株、スケルトネマ・コスタツム等であってよく、栄養性の観点から、キートセロス・グラシリス及びキートセロス・カルシトランスが好ましい。
【００２０】
本実施形態に係る方法は、培養液に第一の餌料用プランクトンを添加して、第一の餌料用プランクトンを培養する工程を備えている。第一の餌料用プランクトンは、パブロバ・ルセリである。
【００２１】
培養液にパブロバ・ルセリを添加するにあたって、パブロバ・ルセリを直接添加してもよいが、海水、人工海水、ＳＷＭ−３培地、ダイゴＩＭＫ培地等で希釈した溶液の形態で添加してもよい。
【００２２】
パブロバ・ルセリの初発密度は、細菌の捕食効果を高める目的から、１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以上が好ましく、３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以上がより好ましく、１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以上が更に好ましい。また、パブロバ・ルセリの初発密度は、パブロバ・ルセリよりも第二の餌料用プランクトンを優勢に増殖させる目的から、１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以下が好ましく、５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以下がより好ましく、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以下が更に好ましい。
【００２３】
パブロバ・ルセリを培養する期間は、培養槽及び培養液内の細菌数を減らすため、６時間以上が好ましく、１２時間以上がより好ましく、２４時間以上が更に好ましい。また、パブロバ・ルセリを培養する期間は、パブロバ・ルセリよりも第二の餌料用プランクトンを優勢に増殖させる目的から、３日以下が好ましく、２日以下がより好ましく、１日以下が更に好ましい。
【００２４】
パブロバ・ルセリを培養する温度は、例えば、１２℃以上であってよく、１５℃以上が好ましく、２０℃以上がより好ましい。また、パブロバ・ルセリを培養する温度は、例えば、３２℃以下であってよく、３０℃以下が好ましく、２８℃以下がより好ましい。
【００２５】
本実施形態に係る方法は、第一の餌料用プランクトンを含む培養液に第二の餌料用プランクトンを添加して、第一及び第二の餌料用プランクトンを培養する工程を備えている。第一の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリであり、第二の餌料用プランクトンはパブロバ・ルセリ以外の餌料用プランクトンである。
【００２６】
パブロバ・ルセリを含む培養液に第二の餌料用プランクトンを添加するにあたって、第二の餌料用プランクトンを直接添加してもよいが、海水、人工海水、ＳＷＭ−３培地、ダイゴＩＭＫ培地等で希釈した溶液の形態で添加してもよい。
【００２７】
第二の餌料用プランクトンの初発密度は、パブロバ・ルセリよりも第二の餌料用プランクトンを優勢に増殖させる目的から、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以上が好ましく、１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以上がより好ましく、３×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以上が更に好ましい。また、添加する第二の餌料用プランクトンの初発密度は、好適な細胞増殖を促す観点から、１×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以下が好ましく、３×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以下がより好ましく、１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ以下が更に好ましい。
【００２８】
パブロバ・ルセリの初発密度Ｃ１に対する第二の餌料用プランクトンの初発密度Ｃ２の比（Ｃ２／Ｃ１）は、パブロバ・ルセリよりも第二の餌料用プランクトンを優勢に増殖させる目的から、１以上が好ましく、３以上がより好ましく、１０以上が更に好ましい。また、上記比は、パブロバ・ルセリによる細菌の捕食効果の観点から、１００以下が好ましく、５０以下がより好ましく、２０以下が更に好ましい。
【００２９】
パブロバ・ルセリ及び第二の餌料用プランクトンを培養する温度は、第二の餌料用プランクトンの種類に応じて好適な温度を選択することができる。上記温度は、例えば、１２℃以上であってよく、１５℃以上が好ましく、２０℃以上がより好ましい。また、上記温度は、例えば、３４℃以下であってよく、３０℃以下が好ましく、２８℃以下がより好ましい。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【００３１】
アサリの死貝を海水中に３日間放置し、細菌を増殖させ、細菌を含む海水（細菌濃度：８×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）を得た。培養槽（容積：１００ｍｌ）に、得られた細菌を含む海水３０ｍｌを投入した。次いで、プランクトン用栄養塩（１００倍濃縮ＳＷＭ−３培地）３００μｌ及びパブロバ・ルセリを投入し、初発細胞密度１．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌの実験培養槽とした。パブロバ・ルセリを投入せずに、プランクトン用栄養塩（１００倍濃縮ＳＷＭ−３培地）３００μｌのみを投入し、コントロール培養槽とした。翌日、実験培養槽及びコントロール培養槽に、餌料用プランクトンとしてキートセロス・グラシリス濃密原液１ｍｌを投入し、初発密度２５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌにてキートセロス・グラシリスの培養を開始した。実験は３回行った。
【００３２】
培養開始から７日後の実験培養槽及びコントロール培養槽から、それぞれ培養液７μｌを血球計算盤に取り出し、対物レンズ１０倍の正立型生物顕微鏡（オリンパス光学工業株式会社製「ＢＨＳ」）を用いて観察を行った。図１（ａ）は実験培養槽の培養液（以下、「実験培養液」ともいう）の画像を示し、図１（ｂ）はコントロール培養槽の培養液（以下、「コントロール培養液」ともいう）の画像を示す。丸い粒状物質がキートセロス・グラシリスである。
【００３３】
また、実験培養液及びコントロール培養液のキートセロス・グラシリスの細胞密度を比較した。上述の培養瓶中の培養液の細胞数を、血球計算盤（株式会社ワンセル社製「ワンセルカウンター」）を用いて計数した。実験培養液及びコントロール培養液における、１ｍｌあたりの細胞数を表１に示す。
【００３４】
【表１】
2020089274.tif 000002
【００３５】
実験培養液とコントロール培養液とを比較すると、３回の実験の平均で、実験培養液ではキートセロス・グラシリスの細胞密度がコントロール培養液の２．４６倍以上だった。
【図１】
2020089274.tif 000003