(57)【要約】【課題】神経等への縫合に適した機械的強度を有し、かつ神経再生後の除去が不要であり、神経再生促進に有用なグラフトを提供する。【解決手段】神経再生促進用グラフトとしての管状構造体１を、キトサン、ポリグリコール酸及びポリカプロラクタンからなる群より選ばれる１種以上の材料から構成される外側管状構造層１０Ａと、細胞外マトリックスから構成される内側管状構造層１０Ｂとから構成する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経再生を促進するための管状構造体であって、
キトサン、ポリグリコール酸及びポリカプロラクタンからなる群より選ばれる１種以上の材料から構成される外側管状構造層と、
細胞外マトリックスから構成される内側管状構造層とを含む、管状構造体。
【請求項２】
外側管状構造層がキトサンから構成されている、請求項１に記載の管状構造体。
【請求項３】
細胞外マトリックスがコラーゲンである、請求項１又は２に記載の管状構造体。
【請求項４】
内側管状構造層が、その内部又は内周面に、神経再生促進物質、前記物質を分泌する細胞、及び前記細胞を破壊して得られる細胞構築物からなる群より選ばれる１種以上を含んでいる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の管状構造体。
【請求項５】
神経再生を促進するための管状構造体を製造する方法であって、
（１）管状の成形用外型の内周面と、前記外型に挿通した棒状又は管状の成形用内型の外周面との間に形成される管状空間に、キトサン、ポリグリコール酸及びポリカプロラクタンからなる群より選ばれる１種以上の材料の溶液を充填し、固化させ、前記外型及び内型を取り外して、外側管状構造層を形成する工程と、
（２）前記外側管状構造層に棒状又は管状の積層用内型を挿通し、前記外側管状構造層の内周面と前記積層用内型の外周面との間に形成される管状空間に、細胞外マトリックスの溶液を充填し、固化させ、前記積層用内型を取り外して、前記外側管状構造層の内周面に内側管状構造層を積層する工程とを含む、製造方法。
【請求項６】
工程（２）において、前記積層用内型の中心を前記外側管状構造層の中心と同軸に保持する治具を用いる、請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
工程（１）においてキトサンの溶液を使用する、請求項５又は６に記載の製造方法。
【請求項８】
工程（２）の細胞外マトリックスの溶液がコラーゲンの溶液である、請求項５〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
工程（２）の細胞外マトリックスの溶液が、神経再生促進物質、前記物質を分泌する細胞、及び前記細胞を破壊して得られる細胞構築物からなる群より選ばれる１種以上を含んでいる、請求項５〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
内側管状構造層の内部及び／又は内周面において、神経再生促進物質を分泌する細胞を培養する工程を更に含む、請求項５〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
内側管状構造層の内周面上で培養した細胞を破壊して、前記内周面上に保持された破壊細胞構築物を設ける工程を更に含む、請求項５〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経再生促進用のグラフトとして利用可能な管状構造体に関する。
【背景技術】
【０００２】
病気やケガ等により欠損又は断裂した神経の神経再生手術では、人工の管状構造体（グラフト）で欠損部及び断裂部を覆うことによる神経再生促進が提案されている（特許文献１及び非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２０１６−５２０３２８号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Progress in Neurobiology, Vol.93, No.2, pp.204-230, 2011
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、従来の管状構造体には、（１）強度不足のため神経組織へ縫合できない、（２）強度不足により管状構造体同士を縫合して長さを延長することができないため、断端した神経間の距離が短い（４０ｍｍ以下）にのみ適用できる、（３）強度は十分であるが神経再生促進能力に劣る等の課題があることを本発明者は見いだした。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
神経再生促進用の管状構造体について鋭意検討したところ、本発明者は、縫合に適した機械的強度をもたらす材料から構成される外側管状構造層と、神経再生促進を可能にする細胞外マトリックスから構成される内側管状構造層とからなる管状構造体を用いると前記課題を解決できることを見いだした。本発明はこの知見に基づいてなされたものである。
【０００７】
すなわち、本発明は、下記〔１〕〜〔１１〕に関するものである。
〔１〕神経再生を促進するための管状構造体であって、
キトサン、ポリグリコール酸及びポリカプロラクタンからなる群より選ばれる１種以上の材料から構成される外側管状構造層と、
細胞外マトリックスから構成される内側管状構造層とを含む、管状構造体。
〔２〕外側管状構造層がキトサンから構成されている、前記〔１〕に記載の管状構造体。
〔３〕細胞外マトリックスがコラーゲンである、前記〔１〕又は〔２〕に記載の管状構造体。
〔４〕内側管状構造層が、その内部又は内周面に、神経再生促進物質、前記物質を分泌する細胞、及び前記細胞を破壊して得られる細胞構築物からなる群より選ばれる１種以上を含んでいる、前記〔１〕〜〔３〕のいずれか１項に記載の管状構造体。
〔５〕神経再生を促進するための管状構造体を製造する方法であって、
（１）管状の成形用外型の内周面と、前記外型に挿通した棒状又は管状の成形用内型の外周面との間に形成される管状空間に、キトサン、ポリグリコール酸及びポリカプロラクタンからなる群より選ばれる１種以上の材料の溶液を充填し、固化させ、前記外型及び内型を取り外して、外側管状構造層を形成する工程と、
（２）前記外側管状構造層に棒状又は管状の積層用内型を挿通し、前記外側管状構造層の内周面と前記積層用内型の外周面との間に形成される管状空間に、細胞外マトリックスの溶液を充填し、固化させ、前記積層用内型を取り外して、前記外側管状構造層の内周面に内側管状構造層を積層する工程とを含む、製造方法。
〔６〕工程（２）において、前記積層用内型の中心を前記外側管状構造層の中心と同軸に保持する治具を用いる、前記〔５〕に記載の製造方法。
〔７〕工程（１）においてキトサンの溶液を使用する、前記〔５〕又は〔６〕に記載の製造方法。
〔８〕工程（２）の細胞外マトリックスの溶液がコラーゲンの溶液である、前記〔５〕〜〔７〕のいずれか１項に記載の製造方法。
〔９〕工程（２）の細胞外マトリックスの溶液が、神経再生促進物質、前記物質を分泌する細胞、及び前記細胞を破壊して得られる細胞構築物からなる群より選ばれる１種以上を含んでいる、前記〔５〕〜〔８〕のいずれか１項に記載の製造方法。
〔１０〕内側管状構造層の内部及び／又は内周面において、神経再生促進物質を分泌する細胞を培養する工程を更に含む、前記〔５〕〜〔８〕のいずれか１項に記載の製造方法。
〔１１〕内側管状構造層の内周面上で培養した細胞を破壊して、前記内周面上に保持された破壊細胞構築物を設ける工程を更に含む、前記〔５〕〜〔８〕のいずれか１項に記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の管状構造体は、その外層が縫合に適した機械的強度を有しているので神経組織へ容易に縫合できる。更に管状構造体同士を縫合して管の長さを延長できるので、断端した神経間の距離が長い神経欠損にも適用できる。本発明の管状構造体は、その内層が細胞外マトリックスから構成されているので、欠損部又は断裂部を保護してその再生を促進できる。更に外層及び内層は、生体内に存在する酵素により分解されるので、神経再生後に管状構造体を除去する手術が不要となる。
したがって、本発明は神経再生手術で使用するグラフトとして有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、本発明の管状構造体の一態様を示している。
【図２】図２は、本発明の管状構造体の製造方法の一態様を示している。
【図３】図３は、本発明の管状構造体の使用法の一態様を示している。
【図４】図４は、本発明の管状構造体の外側管状構造層の断面（４Ａ）と、前記管状構造体の断面（４Ｂ）を示している。
【図５】図５は、本発明の管状構造体の分解性試験の結果を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
〔神経再生を促進するための管状構造体〕
本発明の管状構造体（グラフト）は、病気やケガ等により欠損又は断裂した神経の神経再生手術において欠損部及び断裂部を覆い保護することで神経再生を促進するために用いられる。
対象となる神経の種類は特に制限されず、末梢神経及び中枢神経の何れにも適用可能であるが、末梢神経（特に、軸索）の再生に好適に使用できる。
【００１１】
〔管状構造体の構造〕
本発明の管状構造体の一態様を、図１を参照しながら詳細に説明する。この態様は本発明の一例を示したものであって、本発明はこれに限定されるものではない。
管状構造体１は、外側管状構造層１０Ａと内側管状構造層１０Ｂとが積層されてなる構造を有する。
管状構造体１の断面形状（管状構造体１の軸方向に直交する平面で切断した場合の断面形状）は特に限定されず、図１に示されるような円形でもよく、楕円形や多角形（三角形や四角形等）でもよい。
管状構造体１の長さは特に制限されないが、例えば１ｍｍ〜数ｃｍである。
管状構造体１の外径及び中空部の直径（内側管状構造層１０Ｂの内径）も特に制限されないが、例えば外径は０．５〜５ｍｍであり、中空部の直径は２００〜２０００μｍである。
管状構造体１の形状は、図１に示されるように直線状でもよく、曲線状（例えば、円弧状、楕円状、２次曲線状、双曲線状、螺旋状に湾曲してなる湾曲状や、複数の直線部分が屈曲して連結してなる屈曲状等）でもよいが、汎用性の点で直線状が好ましい。曲線状の管状構造体１は、曲線状のものを直接製造してもよく、直線状の管状構造体を製造後に湾曲又は屈曲させることで製造してもよい。
【００１２】
〔外側管状構造層〕
外側管状構造層１０Ａは、神経組織との縫合や管状構造体同士の縫合を可能にする機械的強度を得るために設けられる。
外側管状構造層は、キトサン、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）及びポリカプロラクタン（Polycaprolactone）からなる群より選ばれる１種以上の材料（以下、「外層構成材料」ともいう）から構成される。これらの外層構成材料を用いることで、縫合を可能にする機械的強度が得られる。また、これらの外層構成材料は生体内で分解される材料でもある。
外層構成材料の分子量は特に制限されないが、例えばキトサンの場合300kDa〜500kDaであると、より優れた強度が得られる。
外層構成材料としては、その目的（縫合）を達成後に生体内に存在する酵素（例えばリゾチーム）で容易に分解され、更に分解産物に細胞毒性がないキトサンが好ましい。
外層構成材料は市場で容易に入手可能であるか、又は公知の方法で調製可能である。
外層構成材料は１種類を単独で用いてもよく、複数種類を組み合わせて用いてもよい。
外側管状構造層は、後述する神経再生促進物質（例えば、神経成長因子）を更に含んでいてもよい。
【００１３】
〔内側管状構造層〕
内側管状構造層１０Ｂは、神経欠損部又は断裂部を覆い保護して神経断端部からの神経再生を促進するために設けられる。なお、神経再生促進には、軸索の伸長方向の誘導が含まれる。
内側管状構造層を構成する材料（以下、「内層構成材料」ともいう）としては、細胞外マトリックスとして知られているものを特に制限なく使用できる（但し、外層構成材料に該当するものは除く）。
細胞外マトリックスの具体例としては、コラーゲン、ラミニン、ゼラチン、カドヘリン、ヒアルロン酸、フィブロネクチン、フィブリリン、エラスチン、キチン、ビトロネクチンや、プロテオグリカン等が挙げられる。これらのなかでは、汎用性の点でコラーゲンが好ましい。
コラーゲンの種類は特に制限されないが、Ｉ型コラーゲンが好ましい。
内層構成材料は市場で容易に入手可能であるか、又は公知の方法で調製可能である。
内層構成材料は１種類を単独で用いてもよく、複数種類を組み合わせて用いてもよい。
【００１４】
神経再生をより促進するために、内側管状構造層１０Ｂは、その内部又は内周面に（１）神経再生促進物質、（２）前記物質を分泌する細胞、及び（３）前記細胞を破壊して得られる細胞構築物からなる群より選ばれる１種以上を含んでいることが好ましい。
神経再生促進物質としては、例えば神経成長因子（Neural Growth Factor(NGF)）や神経栄養因子（Neurotrophic Factor(NF)）等が挙げられる。
神経再生促進物質を分泌する細胞としては、例えばシュワン細胞（NGF，NFを分泌）や幹細胞（間葉系幹細胞や神経幹細胞等）（多様な組織治癒性のサイトカイン及びエクソソームを分泌）等が挙げられる。
「神経再生促進物質を分泌する細胞破壊し得られる細胞構築物」とは、前記細胞を細胞破壊液で処理することによって細胞内容物が除去され細胞膜及び／または細胞外マトリックスのみとなった細胞構築物を意味する。
前記の物質、細胞及び細胞構築物は市場で容易に入手可能であるか、又は公知の方法で調製可能である。
前記の物質、細胞及び細胞構築物はそれぞれ１種類を単独で用いてもよく、複数種類を組み合わせて用いてもよい。
【００１５】
〔管状構造体の製造方法〕
本発明の管状構造体１の製造方法を、図２Ａ〜２Ｅを参照しながら説明する。
【００１６】
〔工程（１）：外側管状構造層を形成する工程〕
大径な管状の成形用外型５１と、小径な棒状又は管状の成形用内型５２とを用意する（図２Ａ）。成形用外型５１及び成形用内型５２の材質は特に限定されないが、例えば、ガラス、樹脂、金属やセラミック等を使用できる。内部の様子が見えるように、ガラス等の透明材料を用いてもよい。
成形用外型５１の内側に成形用内型５２を挿通する。
成形用外型５１の内周面と成形用内型５２の外周面との間に形成された管状空間に、外層構成材料の溶液Ｌ（例えば、キトサンの水溶液）を充填する（図２Ａ）。溶液Ｌは、外層構成材料の他にクエン酸や酢酸等を含んでいてもよい。充填はシリンジ等を用いて実施できる。
次いで、管状空間に充填された外層構成材料を固化させる。固化手段は、外層構成材料の種類に応じて適宜設定でき、例えばゲル化剤や加温等を使用できる。溶液Ｌとしてキトサンとクエン酸とを含む水溶液を用いる場合、溶液Ｌが充填された状態の成形用外型５１及び成形用内型５２の全体を、ゲル化剤としてのトリポリリン酸ナトリウム（ＳＴＰＰ）の水溶液Ｍに浸漬することで、キトサンを固化させることができる（図２Ｂ）。
外層構成材料が固化した後、成形用外型５１及び成形用内型５２を取り外すことで、外側管状構造層１０Ａが得られる。
【００１７】
工程（１）では、成形用外型５１の中心を成形用内型５２の中心と同軸に保持するための治具を用いてもよい。
【００１８】
〔工程（２）：内側管状構造層を積層する工程〕
外側管状構造層１０Ａの内側に小径な棒状又は管状の積層用内型５３を挿通する。
積層用内型５３の材質は特に限定されないが、例えば、金属（タングステン等）ガラス、樹脂やセラミック等を使用できる。
外側管状構造層１０Ａの内周面と積層用内型５３の外周面との間に形成された管状空間に、内層構成材料（細胞外マトリックス）の溶液Ｎ（例えば、コラーゲン溶液）を充填する（図２Ｃ）。溶液Ｎは、内層構成材料の他、内層形成を促進する物質（例えば、コラーゲンの再構成用緩衝液）、増粘剤や、架橋剤等を含んでいてもよい。充填はマイクロシリンジ等を用いて実施できる。
次いで、管状空間に充填された内層構成材料を固化させる。固化手段は、内層構成材料の種類に応じて適宜設定でき、例えば加温やpH変化等を使用できる。溶液Ｎとしてコラーゲン溶液を用いる場合、例えば３７℃下でインキュベートすることで、コラーゲンを固化（ゲル化）させることができる（図２Ｄ）。
内層構成材料が固化した後、積層用内型５３を取り外すことで、内側管状構造層１０Ｂが形成される（図２Ｅ）。
【００１９】
工程（２）では、積層用内型５３の中心を外側管状構造層１０Ａの中心と同軸に保持するための治具を用いてもよい。
例えば、下記（ａ）及び（ｂ）の条件を満たす円錐台状かつ管状の治具を使用できる。
（ａ）一端部の外径が外側管状構造層１０Ａの内径よりも小さく、且つ、前記一端部の内径が積層用内型５３の外径と同径に形成されている。
（ｂ）他端部の外径が前記一端部の外径よりも大きく、且つ、前記他端部の内径が前記一端部の内径よりも大きく形成されている。
【００２０】
内側管状構造層１０Ｂは、その内部及び／又は内周面に（１）神経再生促進物質、（２）前記物質を分泌する細胞、及び（３）前記細胞を破壊して得られる細胞構築物からなる群より選ばれる１種以上を含んでいてもよい。
このような内側管状構造層は、例えば、神経再生促進物質及び／又は神経再生促進物質を分泌する細胞を含む溶液Ｎを用いて工程（２）を実施することで形成できる。
神経再生促進物質を分泌する細胞を用いる場合、前記細胞を培養する工程を更に実施してもよい。
更に、内側管状構造層１０Ｂの内周面に神経再生促進物質を分泌する細胞を播種し培養することでも、内周面上に前記細胞の層を設けることができる。
細胞構築物は、内側管状構造層の内周面上で培養した細胞を低浸透圧処理によって細胞内容物を除去する方法、または、界面活性剤を用いて脱細胞化する等により作成できる。
【００２１】
〔管状構造体の使用方法〕
本発明の管状構造体は、病気やケガ等により欠損又は断裂した神経の神経再生手術において使用できる。例えば、（１）管状構造体を神経線維(軸索)の欠損部又は断端部間に配置し、（２）内側管状構造層の中空部に通した一方の残存神経断端（軸索断端）部分と管状構造体とを縫合し、次いで（３）他方の残存神経断端（軸索断端）も同様に管状構造体と縫合することで、欠損部または断裂部間に管状構造体を固定（縫合）する。これにより、神経欠損部又は断裂部が外部環境から保護され、内側管状構造層の中空部内で神経軸索の伸展（神経再生）が促進される。
なお、図３に示すように、管状構造体と縫合した神経の断端（軸索Ｓの断端）同士は、直接接触していなくてもよい。
内側管状構造層の内部及び／又は内周面に（１）神経再生促進物質、（２）前記物質（図３のＦ）を分泌する細胞（図３のＣ）、及び／又は（３）前記細胞を破壊して得られる細胞構築物が含まれていると神経再生がより促進される。
外側管状構造層は、生体内に存在する酵素（例えばリゾチーム）で分解される材料で構成されているので、その目的（縫合）を達成後に生体内で分解される。また、内側管状構造層を構成する細胞外マトリックスも生体内で分解される。よって、本発明の管状構造体は神経再生促進機能を発揮後に消失するので、除去するための手術は不要である。
【００２２】
次に、実施例により本発明の効果を具体的に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２３】
〔実施例１：管状構造体の作製〕
キトサンから構成される外側管状構造層１０Ａと、コラーゲン（細胞外マトリックス）で構成される内側管状構造層１０Ｂとを含む管状構造体１を作製した。
【００２４】
〔成形用外型及び成形用内型の準備〕
ガラスキャピラリ（内径２．４ｍｍ）の内腔を、０．０１％ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）の１０倍希釈溶液（溶媒：純水）で満たし、常温で３０分間静置して、ガラスキャピラリの内周面をＰＬＬでコーティングした。次いで、ガラスキャピラリ内からＰＬＬ希釈溶液を取り除き、純水で３回洗い流して乾燥させたものを管状の成形用外型５１として使用した。ガラスキャピラリ（外径１ｍｍ）を、管状の成形用内型５２として使用した。
【００２５】
〔工程（１）：外側管状構造層を形成する工程〕
成形用外型５１の中空部へ成形用内型５２を挿通した。外型５１の内周面と、前記外型に挿通した内型５２の外周面との間に形成された管状空間に、キトサン溶液Ｌ（濃度：５質量％。溶媒：２０質量％クエン酸水溶液。キトサンの分子量：310kDa〜375kDa）を、シリンジを用いて充填した。次いで、アクリル板で作製した治具を用いて、外型５１の中心を内型５２の中心と同軸に保持した。
キトサン溶液Ｌが充填された状態の外型５１及び内型５２の全体を、１０質量％のトリポリリン酸ナトリウム水溶液Ｍに浸漬し、常温で５日間静置してキトサンをゲル化（固化）させた。
その後、外型５１及び内型５２を取り外して、キトサンから構成される外側管状構造層１０Ａを得た（図４Ａ）。
【００２６】
〔工程（２）：内側管状構造層を形成する工程〕
細胞外マトリックスとしてコラーゲンを使用した。また、タングステンワイヤ（外径０．３ｍｍ（３００μｍ））を棒状の積層用内型５３として使用した。
外側管状構造層１０Ａに積層用内型５３を挿通し、前記外側管状構造層１０Ａの内周面と前記積層用内型５３の外周面との間に形成された管状空間に、コラーゲン溶液Ｎ（10XHANKSと、再構成緩衝液（NaHCO3, NaOH, HEPES）と、Ｉ型コラーゲン酸性溶液とを、1:1:8の質量比で混合したもの。コラーゲン濃度：０．４質量％）を、シリンジを用いて充填した。次いで、プラスティック製の治具を用いて、積層用内型５３の中心を外側管状構造層１０Ａの中心と同軸に保持した。
コラーゲン溶液Ｎが充填された状態の外側管状構造層１０Ａと積層用内型５３の全体を、インキュベータ中３７℃で２時間保持して、コラーゲンをゲル化（固化）させた。
その後、積層用内型５３を引き抜いて、外側管状構造層１０Ａの内周面に積層された、コラーゲンから構成される内側管状構造層１０Ｂを得た。
得られた管状構造体１は、キトサンから構成される外側管状構造層１０Ａと、コラーゲンで構成される内側管状構造層１０Ｂとを含んでいた（図４Ｂ）。
【００２７】
〔参考例１：キトサンゲルとコラーゲンゲルの機械的強度〕
キトサンゲルとコラーゲンゲルの機械的強度（ヤング率）を測定した。
【００２８】
〔キトサンゲルの調製〕
２０質量％クエン酸水溶液と実施例１で使用したキトサンとを用い、キトサン濃度が２質量％、３質量％、４質量％及び５質量％のキトサン溶液を調製した。円筒状の型（モールド）に充填した各キトサン溶液を１０質量％トリポリリン酸ナトリウム水溶液に浸漬し、４℃で５日間静置してキトサンゲルを得た。
【００２９】
〔コラーゲンゲルの調製〕
10XHANKSと、再構成緩衝液（NaHCO3, NaOH, HEPES）と、Ｉ型コラーゲン酸性溶液とを、1:1:8の質量比で混合して、コラーゲン濃度が０．４質量％のコラーゲン溶液を作製した。混合元のＩ型コラーゲン酸性溶液を、塩酸を加えることにより希釈し、コラーゲン濃度が０．２質量％又は０．３質量％のコラーゲン溶液を作製した。円筒状の型（モールド）に充填した各コラーゲン溶液を、４０℃のホットプレート上で２時間加熱してコラーゲンゲルを得た。
【００３０】
〔ヤング率測定〕
キトサンゲル及びコラーゲンゲルのヤング率を、フォースゲージ（日本電産シンポ，FGP-1）を用いて測定した。結果を表１に示す。
【００３１】
表１
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【００３２】
実施例１において、外側管状構造層の形成に用いたキトサン溶液の濃度は５質量％であり、内側管状構造層の形成に用いたコラーゲン溶液の濃度は０．４質量％であった。表１より、実施例１の管状構造体では、外側管状構造層が内側管状構造層よりも高い機械的強度を有していたことが理解される。
【００３３】
〔参考例２：管状構造体の収縮率〕
外径の異なる管状構造体を作製して、その収縮率を評価した。
成形用外型であるガラスキャピラリの内径を２．１ｍｍ、４．０ｍｍ、５．０ｍｍ又は８．０ｍｍに変更したことを除き、実施例１と同じ手順に従い、管状構造体を作製した。実施例１で成形用外型として使用したガラスキャピラリの内径は２．４ｍｍであった。
各管状構造体を４℃で２日間保存した後、その収縮率を下記式に従い算出した。結果を表２に示す。
収縮率＝保存後の管状構造体の外径（実寸値）／成形用外型の内径
【００３４】
表２
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【００３５】
表２は、管状構造体の収縮率がその外径に拘わらず低いことを示している。この結果より、本発明の管状構造体は保存性に優れていることが理解される。
【００３６】
〔参考例３：管状構造体の外側管状構造層の分解性及び細胞毒性〕
キトサンから構成される外側管状構造層の分解性及び細胞毒性を評価した。
実施例１の工程（１）に記載の手順に従い、キトサンから構成される外側管状構造層（以下、キトサンチューブという）を作製した。
キトサンチューブを生理食塩水で３回洗浄した。その後、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）での洗浄と、DMEMに３０分間浸しての静置とを１セットとし、これを４セット繰り返した。次いで、ＤＭＥＭに浸した状態のキトサンチューブにＵＶを照射して滅菌することで、滅菌済キトサンチューブを得た。
【００３７】
〔分解性試験〕
リゾチーム（キトサン分解酵素）を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させたＰＢＳで満たした３５ｍｍディッシュ上に、滅菌済キトサンチューブを添加して３７℃で６日間インキュベートした。リゾチームを添加せずインキュベートしたものを対照とした。結果を図５に示す。
図５は、リゾチームによりキトサンチューブが分解したことを示している。リゾチームは生体内に存在するので、この結果より、本発明の管状構造体を構成する外側管状構造層は、その目的（縫合）を達成後に生体内で分解されることが理解される。
【００３８】
〔細胞毒性試験〕
ＤＭＥＭで満たした３５ｍｍディッシュ上に、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞（スイス製マウス胎児皮膚由来線維芽細胞）を２．０×１０3 cells/ｃｍ2の密度で播種し、１時間インキュベートして、細胞をディッシュに接着させた。その後、ＤＭＥＭを取り除き、リゾチーム（キトサン分解酵素）を２０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させたＤＭＥＭと、滅菌済キトサンチューブとをディッシュに添加して細胞培養を行った。
培養２日後に、Trypsin-EDTA（TE）を用いてディッシュから細胞を剥がし、遠心して回収後、血球計算盤を用いて細胞数をカウントした。キトサンチューブとリゾチーム（キトサン分解酵素）を添加せずに培養したものを対照とした。結果を表３に示す。
【００３９】
表３
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【００４０】
表３は、キトサンチューブとリゾチームの存在下で細胞が増殖したことを示している。キトサンはリゾチームによって分解されるので、この結果より、本発明の管状構造体の外側管状構造層を構成するキトサン（及びその分解物）に細胞毒性がないことが理解される。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明は、整形外科や脳神経外科等における神経再生手術で利用できる。
【符号の説明】
【００４２】
１：管状構造体
１０Ａ：外側管状構造層
１０Ｂ：内側管状構造層
５１：成形用外型
５２：成形用内型
Ｌ：外層構成材料の溶液
Ｍ：ゲル化剤の水溶液
５３：積層用内型
Ｎ：内層構成材料（細胞外マトリックス）の溶液
Ｓ：軸索
Ｆ：神経再生促進物質
Ｃ：神経再生促進物質を分泌する細胞
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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