(57)【要約】【目的】特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物を含有する皮膚外用剤や内用剤を提供する。【構成】本発明のオタネニンジンの発芽した新芽は、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果が優れており、さらに、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物は、抗酸化効果及びＭＭＰ阻害効果がより優れていることを見出した。これらを含有する皮膚外用剤又は内用剤は特に有効である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培したオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が、３：１〜２：１であることを特徴とする請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン。
【請求項４】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項５】
波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする食品。
【請求項６】
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項７】
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
【請求項８】
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
【請求項９】
オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン生成促進効果等に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内には活性酸素消去酵素が存在しており、その能力を超える活性酸素が発生しないかぎり活性酸素の傷害から皮膚細胞を防衛している。ところが、皮膚細胞内の活性酸素消去酵素の活性は加齢とともに低下することが知られており、活性酸素による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。また、皮膚以外の臓器においても、その活性酸素消去能を越える活性酸素に曝されたとき、機能低下が起こり老化したり、ガンや心筋梗塞等様々な生活習慣病が発症したりすると考えられる。そこで、活性酸素による傷害からの防御を目的として活性酸素消去剤や抗酸化剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質等の活性酸素消去剤や抗酸化剤を配合した食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等が開発されている（特許文献１，２参照）。
【０００３】
皮膚は、紫外線、乾燥、寒冷、熱、薬物等の様々な物理的及び化学的ストレスに日々曝されている。その結果、皮膚の機能低下が引き起こされ、様々な皮膚の老化現象が顕在化する。皮膚の老化現象の一つに、しわがある。しわには、表皮性のしわと、真皮性のしわの二種類が存在することが知られている。表皮性のしわは小じわと呼ばれ、皮膚の乾燥により、表皮角質層中の水分量が低下することによって一時的に生じるしわである。小じわの改善方法としては、保湿効果を有する化粧品の使用が一般的である。一方、真皮性のしわは、太陽光線に含まれる紫外線や加齢によって形成されるしわである。その形成メカニズムとしては、紫外線や加齢による真皮線維芽細胞におけるコラーゲン合成能の低下や、ＭＭＰの増加によるコラーゲンの分解促進が挙げられる。
【０００４】
乾燥に起因する表皮性のしわと真皮性のしわでは、組織学的形態、発症メカニズム、治療方法が異なり、紫外線や加齢により生じる真皮性のしわは、保湿効果を有する化粧品の使用によっては改善できない。
【０００５】
これまでに、紫外線によって生じる真皮性のしわを改善することを目的として、加水分解アーモンドを有効成分とする皮膚のしわ形成防止・改善剤（特許文献３）、ジョチョウケイ、テンキシ及びキセンウの抽出物を有効成分とする紫外線照射に起因するしわの改善剤（特許文献４）が報告されている。
【０００６】
また、真皮には線維芽細胞やコラーゲンが存在し、Ｉ型コラーゲンが全体の８０％を占める。Ｉ型コラーゲンのほかにはＩＩＩ、Ｖ、ＸＩＩ及びＸＩＶ型コラーゲンの存在が知られている。しわやたるみの原因の一つとして、Ｉ型コラーゲンの減少があげられる。従って、Ｉ型コラーゲンの生成を促進させることが、しわ・たるみの予防・改善に有効であると考えられる。また、Ｉ型コラーゲンの生成促進は皮膚の創傷治癒の改善にも有効である。
【０００７】
また、線維芽細胞はコラーゲン等のタンパク質を産生して真皮結合組織を形成し、皮膚のハリを保っている。この結合組織が収縮力を失い、さらに弾力性を失う結果として皮膚のしわやたるみが発生すると考えられている。
【０００８】
コラーゲンは、哺乳動物組織の約１/３を占める主要な構造タンパク質であり、軟骨、骨、腱、及び皮膚を含む多くのマトリックス組織の必須な成分である。ＭＭＰに属するコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）により１箇所を切断されると、通常の組織内では安定なコラーゲン分子は、変性して一本鎖のゼラチンとなり、他の様々なプロテアーゼにより分解されるようになる。その結果、マトリックス組織の構造の完全性が失われてしまう。
【０００９】
ＭＭＰに属するゼラチナーゼは、線維芽細胞や内皮細胞、ガン細胞等が産生する酵素であり、コラーゲン、ゼラチン、エラスチン（動脈、腱、皮膚等、弾性組織の特殊成分をなす構造タンパク質）等の基質を分解する。従って、ゼラチナーゼに対して阻害活性を有する物質は、ガン組織における血管新生やガンの転移を抑制する効果が期待され、ガン疾患の予防、治療に有用であると考えられる。さらにＭＭＰはガン疾患のみならず、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等の種々の病態での細胞外基質の分解に関与していることが報告されている。よって、ＭＭＰの阻害活性を有すれば、ガンの転移、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等、ＭＭＰの亢進が原因で起こる各種疾患の治療及び改善に有用である。
【００１０】
角質層の保湿性に重要な役割を果たしているのが天然保湿因子（ＮＭＦ）であることは古くから知られており、これまでＮＭＦ成分は保湿剤の開発に応用されてきた。角質層におけるＮＭＦの減少は、その保湿性を低下させ乾燥を招く。その結果として乾燥性のカユミが引き起こされる。近年、ＮＭＦの主体をなすアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒の主成分であるフィラグリンというタンパク質の分解により産生されることが明らかとなった（非特許文献１）。すなわち、表皮顆粒層において合成されたプロフィラグリンはケラトヒアリン顆粒に蓄積された後、顆粒層上層から角質層に至る過程で脱リン酸、加水分解を経てフィラグリンに分解される。さらにフィラグリンは角質層上層に至る過程でアミノ酸に分解されＮＭＦの主体となる。一方、乾燥肌を呈する病態とフィラグリンに関する研究が進められ、老人性乾皮症やアトピー性皮膚炎等の角質層中ではアミノ酸が減少していることが知られているが、それらの皮膚ではフィラグリンの発現が低下していることが明らかにされている（非特許文献２）。したがって、角質層の保湿性維持の目的でＮＭＦの産生を高めるためにはケラチノサイトにおけるフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進が重要であると考えられるようになり、特許文献５、６等の植物成分を用いたフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進剤が報告されている。
【００１１】
オタネニンジンは、中国東北部又は朝鮮の原産で、その根を薬用に用い、加工法によって呼び方が異なる。例えば周皮をはいで乾燥したものを白参（はくじん）、せいろで２〜４時間蒸してから熱風乾燥したものを紅参（こうじん）と呼ぶ。漢方で不老長寿、強壮、強精薬あるいは賦活、精神安定薬として虚証の者に用いるが、新陳代謝機能を活発にさせ、かつ強心利尿作用を持っているので、胃衰弱に伴う新陳代謝の衰えた病弱者の胃食欲不振、消化不良、はきけ、下痢などにも使われる（非特許文献３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開平９−１１８６３０号公報
【特許文献２】特開平９−２０８４８４号公報
【特許文献３】特開２０００−１１９１２５号公報
【特許文献４】特開２００６−１９９６１１号公報
【特許文献５】特開２００１−２６１５６８号公報
【特許文献６】特開２００２−２０１１２５号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｓｃｏｔｔ Ｉ．Ｒ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，  Ｖｏｌ．７１９，  ｐｐ１１０−１１７，１９８２
【非特許文献２】Ｓｅｇｕｃｈｉ Ｔ．，  Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｒｅｓ，  Ｖｏｌ．２８８，  ｐｐ４４２−４４６，１９９６
【非特許文献３】木村康一（１９８４）「オタネニンジン」，『原色日本薬用植物図鑑』ｐ１５１，保育社．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、抗酸化効果、ＭＭＰ阻害効果、フィラグリン生成促進効果等に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、オタネニンジンの発芽した新芽は、抗酸化効果、ＭＭＰ阻害効果及びフィラグリン産生促進効果が優れており、さらに、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物は、抗酸化効果及びＭＭＰ阻害効果がより優れていることを見出した。また、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンは生育が向上することも発見し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（９）からなる。
【００１７】
（１）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培したオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
（２）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が、３：１〜２：１であることを特徴とする（１）に記載の皮膚外用剤。
（３）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン。
（４）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする医薬品。
（５）波長域５７０〜７３０ｎｍと４００〜５１５ｎｍとの光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）比が３：１〜１：１の光を照射して栽培することによって、蛍光灯又は太陽光で栽培したオタネニンジンと比較して、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果から選ばれる一種又は二種以上の効果を高めることを特徴とするオタネニンジン、又は、そのオタネニンジンの水、低級アルコール及び液状多価アルコールから選ばれる一種又は二種以上の溶媒による抽出物を含有することを特徴とする食品。
（６）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
（７）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
（８）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
（９）オタネニンジンの発芽した新芽の抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のオタネニンジン又はその抽出物は、優れた抗酸化効果、ＭＭＰ阻害効果、フィラグリン生成促進効果を有しており、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品の分野において貢献できるものである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下に、本発明について詳細に述べる。
【００２０】
本発明に用いるオタネニンジンとは、ウコギ科（学名  Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）に属しており、韓国、北朝鮮、中国北部や日本の各地で栽培されている植物である。一般的な市場では、主に、根を乾燥したものが生薬として扱われているが、本発明においては、発芽した新芽又は特定の波長域を有する２種の光を同時に照射して栽培したものを用いることができ、その一部又は全草を用いることができる。特に、効果や生産効率の面から、地上部を用いることが好ましい。
【００２１】
その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出や低温抽出したものであっても良い。また、本発明においては、抽出物の代わりに、植物体のまま使用することもでき、生のままでも、乾燥して用いることもでき、目的によって使い分けることができる。さらには、抽出物と植物体を併用することもできる。
【００２２】
本発明のオタネニンジンの「発芽した新芽」の栽培方法としては、オタネニンジンの芽切種子を湿らせたペーパータオル、バーミキュライト、スポンジ等の播種床に播種し、冷蔵０〜１０℃下で休眠打破することにより発芽させ、葉を展開させずに、１〜１５ｃｍ程度に伸長した植物体を用いることができる。照明はあってもよいが、強いと緑化し、葉が展開し、伸長が停止するので、発芽した新芽の収量を確保するためにはできる限り暗室が好ましい。芽切種子は、種子を湿った砂と混合して、３〜４ヶ月木陰に置いたものが好ましく、市販品を購入できる。
【００２３】
本発明の光を照射して栽培するオタネニンジンの栽培方法としては、病害虫予防の為、外界と隔離栽培し易いバーミキュライト等の人工培養土を用いた栽培や水耕栽培で行うことが好ましい。苗は、芽切種子を「発芽した新芽」と同様に低温下で休眠打破することにより栽培に供することができるが、市販苗を用いることもできる。栽培は、温度、光等が制御された施設で栽培することが好ましい。栽培温度は、１５〜３０℃、好ましくは２０〜２５℃である。栽培期間は、照射する光条件によって異なるが、概ね１０〜２００日で収穫でき、地上部の利用には１〜２ヶ月程度栽培することが効率的である。
【００２４】
光源は、植物の栽培施設で用いる光源等を使用することができ、発光ダイオード（ＬＥＤ）、レーザーダイオード等の光半導体素子が挙げられるが、特定の範囲の波長域が選択的に照射できる光源であれば光半導体素子に限らない。
【００２５】
照射する波長としては、波長域４００〜５１５ｎｍの青色光、５７０〜７３０ｎｍの赤色光であることが好ましく、それぞれ波長域４３０〜４６０ｎｍ、６３０〜６８０ｎｍの光がさらに好ましい。これらの光は、同時に照射することが最も好ましい。このときの波長は、照射スペクトルの極大波長（ピーク波長）のことをいう。このような波長のピークを有する光源であれば、独自に作成したものや市販のものを使用することもできる。また、上記波長を選択的に照射できるように、光学フィルタを用いても良い。上記の２種の範囲の光に加え、太陽光や蛍光灯等の光源を補助的に使用することもできる。
【００２６】
照射する光量としては、光合成光量子束密度（ＰＰＦＤ）として表される。発光体を２種組み合わせて照射する場合には、その合計の光量を意味する。その光量は、発芽後は１０〜２００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１が好ましく、５０〜１５０μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１がさらに好ましい。この範囲外の光強度の場合は、生育障害、生育不良になる場合がある。照射は、オタネニンジンの上部１０〜５０ｃｍの位置から照射することが好ましい。照射時間は、植物の特性や目的に応じて適宜変更できるが、６時間以上が好ましく、１２〜２４時間がより好ましい。
【００２７】
赤色と青色の光量比においては、それぞれのＰＰＦＤの比を意味しており、収量や有効性の向上等、目的に応じて選択が可能である。
【００２８】
中でも、植物体の収量を高めるには、赤色と青色の光量比は２：１が最も優れていた。
【００２９】
活性酸素消去作用（フリーラジカル捕捉除去作用）を高めるには、赤色と青色の光量比は３：１〜１：１がよく、３：１〜２：１がさらに好ましい。
【００３０】
ＭＭＰ阻害作用を高めるには、赤色と青色の光量比が３：１〜１：１がよく、２：１がさらに好ましい。
【００３１】
以上のことを総じていえば、赤色と青色の光量比が３：１〜１：１が好ましく、３：１〜２：１がさらに好ましく、２：１が最も好ましい。
【００３２】
抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール）、液状多価アルコール類（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００３３】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。さらには、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。また、サラダ等、生で食することもできる。
【００３４】
本発明の外用剤又は内用剤には、食品も含むものとし、これには、上記植物体及び／又は抽出物をそのまま使用しても良く、これらの効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品等に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分を配合することもできる。
【００３５】
本発明は、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品等に用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、錠菓、飲料、ティーバッグ、スパイス等が挙げられる。
【００３６】
本発明に用いる上記抽出物の含有量は、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１〜１０重量％がより好ましい。さらに、０．０１〜５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。１０重量％を越えて含有した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。一方、内用の場合、投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人１人当たりの１日の量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ〜５ｇがより好ましい。さらに、１００ｍｇ〜１ｇが最も好ましい。
【００３７】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるオタネニンジンやオタネニンジンの発芽した新芽の栽培例、その抽出物の製造例、実験例及び処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す％とは重量％を示す。また、処方例に示す混合抽出物とは、各抽出物を等量混合したものである。
【実施例１】
【００３８】
（１）実験材料及び生育条件
オタネニンジンの芽切り種子を、水分を含んだメッシュに包んで、遮光下で休眠打破して発芽させた。そのまま遮光下で栽培し、１〜３ｃｍに伸長した苗をスポンジに包み、水耕栽培装置を用いて、室温２１〜２３℃で１２時間、植物の真上３０ｃｍの位置から、赤色ＬＥＤ（ピーク波長６６０ｎｍ）及び青色ＬＥＤ（ピーク波長４５０ｎｍ）を同時に照射し、赤色と青色ＬＥＤの合計光合成光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１となるように、赤色と青色の光量比を３：１〜１：１にして、栽培を行った。また、比較栽培例１として光合成光量子束密度１００μｍｏｌ・ｍ−２ｓ−１となるように白色蛍光灯下で栽培を行い、なお、栽培中は光量比を変えなかった。４週間栽培した後、収穫し、生のオタネニンジンを得た。これを約６０℃で温風乾燥させることで、オタネニンジンの乾燥物を得た（表１）。なお、比較栽培例として、太陽光下でも実施したが、生育が悪くてサンプルが得られなかったため、比較製造例２のサンプルとして太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）を用いた。
【００３９】
【表１】
2020097548.tif 000002
【００４０】
栽培例４  発芽した新芽の乾燥物
「（１）実験材料及び生育条件」において、１〜３ｃｍに伸長した苗を、一部、約６０℃で温風乾燥させることで、発芽した新芽の乾燥物を得た。
【００４１】
（２）抽出
製造例１Ａ  地上部の熱水抽出物
栽培例１の地上部の乾燥物１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を得た（表２）。
【００４２】
製造例１Ｂ  地上部の５０％エタノール抽出物
栽培例１の地上部の乾燥物１ｇに５０％エタノール水溶液２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物を得た（表２）。
【００４３】
製造例１Ｃ  地上部のエタノール抽出物
栽培例１の地上部の乾燥物１ｇにエタノール２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物を得た（表２）。
【００４４】
製造例１Ｄ  根の熱水抽出物
栽培例１の根の乾燥物１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物を得た（表２）。
【００４５】
製造例１Ｅ  根の５０％エタノール抽出物
栽培例１の根の乾燥物１ｇに５０％エタノール水溶液５ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物を得た（表２）。
【００４６】
製造例１Ｆ  根のエタノール抽出物
栽培例１の根の乾燥物１０ｇにエタノール５０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物を得た（表２）。
【００４７】
栽培例２，３及び比較栽培例１のオタネニンジンを用いて、上記の製造例１Ａ〜１Ｆと同様に抽出し、製造例２Ａ〜３Ｆ、比較製造例１Ａ〜１Ｆとした（表２）。
【００４８】
【表２】
2020097548.tif 000003
【００４９】
製造例４Ａ  発芽した新芽の熱水抽出物
栽培例４の発芽した新芽の乾燥物１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物０．３５ｇを得た。
【００５０】
製造例４Ｂ  発芽した新芽の５０％エタノール抽出物
栽培例４の発芽した新芽の乾燥物１ｇに５０％エタノール水溶液２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物０．１４ｇを得た。
【００５１】
製造例４Ｃ  発芽した新芽のエタノール抽出物
栽培例４の発芽した新芽の乾燥物１ｇにエタノール２０ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物０．１ｇを得た。
【００５２】
比較製造例２Ａ  根（市販品）の熱水抽出物
太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）１ｇに精製水２０ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して熱水抽出物０．２６ｇを得た。
【００５３】
比較製造例２Ｂ  根（市販品）の５０％エタノール抽出物
太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）１ｇに５０％エタノール水溶液５ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、５０％エタノール抽出物０．２８ｇを得た。
【００５４】
比較製造例２Ｃ  根（市販品）のエタノール抽出物
太陽光にて栽培した根の乾燥物（市販品）１ｇにエタノール５ｍＬを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、エタノール抽出物０．１４ｇを得た。
【実施例２】
【００５５】
実験例１  活性酸素消去作用
各種栽培条件で栽培したオタネニンジンの各試料について、フリーラジカルの一種であるα，α−ジフェニル−β−ピクリルヒドラジル（以下ＤＰＰＨとする）を用い、ＤＰＰＨラジカルの消去作用を測定した。
各試料を、最終濃度０．１ｍｇ／ｍＬとなるように加えた０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）０．４ｍＬに無水エタノール０．４ｍＬ及び０．５ｍＭ  ＤＰＰＨ無水エタノール溶液０．２ｍＬを加えて反応液とした。また、油溶性の試料の場合は無水エタノール０．４ｍＬに試料を加えて反応液とした。その後、３７℃で３０分間反応させ、水を対照として波長５１７ｎｍの吸光度（Ａ）を測定した。また、ブランクとして試料の代わりに精製水を用いて吸光度（Ｂ）を測定した。ＤＰＰＨラジカル消去率は、以下に示す式より算出した。
ＤＰＰＨラジカル消去率（％）＝（１−Ａ／Ｂ）×１００
【００５６】
これらの試験結果を表３に示した。本発明のオタネニンジンの抽出物は、優れたＤＰＰＨラジカル消去作用を有していることが認められた。特に、赤色と青色の光量比が３：１〜２：１のオタネニンジンの抽出物に高い効果が認められた。
【００５７】
【表３】
2020097548.tif 000004
【００５８】
実験例２  ＭＭＰ阻害効果
ＭＭＰ−１  ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を６０ｍｍ  ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、各試料を最終濃度１０μｇ／ｍＬを添加したＤＭＥＭ（−）培養液にて２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏ  Ｐｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＭＭＰ−１  ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＭＭＰ−１発現抑制率は、コントロールのＭＭＰ−１  ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＭＭＰ−１  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００５９】
ＭＭＰ−１用のプライマーセット
ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣ（配列番号１）
ＴＧＡＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣ（配列番号２）
β―ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
【００６０】
これらの実験結果を表４に示した。その結果、本発明のオタネニンジンの抽出物は、優れたＭＭＰ発現抑制効果（ＭＭＰ阻害効果）が認められた。特に、赤色と青色の光量比が３：１〜１：１のオタネニンジンの抽出物に高い効果が認められた。その中でも、赤色と青色の光量比が２：１のオタネニンジンの抽出物は特に優れていた。
【００６１】
【表４】
2020097548.tif 000005
【００６２】
実験例４  フィラグリン（ＦＬＧ）生成促進試験
ＦＬＧ  ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒトケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を６０ｍｍ  ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、各試料を最終濃度１０μｇ／ｍＬを添加したＤＭＥＭ（−）培養液にて２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏ  Ｐｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＦＬＧ発現抑制率は、コントロールのＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００６３】
ＦＬＧ用のプライマーセット
ＧＧＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＴＡＴＡＧＡＣＣＡＣＡＡＣＡ（配列番号５）
ＴＧＡＧＣＣＡＡＣＴＴＧＡＡＴＡＣＣＡＴＣＡＧＡ（配列番号６）
β―ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号３）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号４）
【００６４】
これらの試験結果を表５に示した。その結果、本発明のオタネニンジンの抽出物には優れたＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現促進効果（フィラグリン生成促進効果）が認められた。一方、市販品であるオタネニンジンの根の熱水抽出物（比較製造例２Ａ）には、本発明のオタネニンジンの抽出物とは反対に、ＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現を抑制する作用が確認された。
【００６５】
【表５】
2020097548.tif 000006
【実施例３】
【００６６】
処方例１  化粧水
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物                                            ０．０５
２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
３．グリセリン                                                    ２．０
４．キサンタンガム                                                ０．０２
５．クエン酸                                                      ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．１
７．エタノール                                                    ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００６７】
処方例１において、製造例２Ａの抽出物を製造例１Ａの抽出物、製造例３Ａの抽出物及び製造例４Ａの抽出物に置き換えたものを、それぞれ処方例２、３及び４とした。
【００６８】
処方例５  クリーム
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ｂ、２Ｂ、３Ｂの混合抽出物                            ０．１
２．スクワラン                                                    ５．５
３．オリーブ油                                                    ３．０
４．ステアリン酸                                                  ２．０
５．ミツロウ                                                      ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                  ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０  
８．ベヘニルアルコール                                            １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．５
１０．香料                                                          ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２５
１２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。
【００６９】
処方例６  乳液
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａ、３Ａの混合抽出物                            ０．５
２．スクワラン                                                    ５．０
３．オリーブ油                                                    ５．０
４．ホホバ油                                                      ５．０
５．セタノール                                                    １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
９．香料                                                          ０．１
１０．プロピレングリコール                                          １．０
１１．グリセリン                                                    ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。
【００７０】
処方例７  ゲル剤
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ｃ、２Ｃ、３Ｃの混合抽出物                            ０．０１
２．エタノール                                                    ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
５．香料                                                          適量
６．１，３‐ブチレングリコール                                    ５．０
７．グリセリン                                                    ５．０
８．キサンタンガム                                                ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
１０．水酸化カリウム                                                ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５と、成分６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００７１】
処方例８  パック
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ｂの抽出物                                            ０．５
２．製造例２Ｅの抽出物                                            ０．５
３．ポリビニルアルコール                                        １２．０
４．エタノール                                                    ５．０
５．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）                ０．５
８．クエン酸                                                      ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                            ０．３
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００７２】
処方例９  ファンデーション
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物                                            ０．０１
２．ステアリン酸                                                  ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
５．セタノール                                                    １．０
６．液状ラノリン                                                  ２．０
７．流動パラフィン                                                ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                                      ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．１
１０．ベントナイト                                                  ０．５
１１．プロピレングリコール                                          ４．０
１２．トリエタノールアミン                                          １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１４．二酸化チタン                                                  ８．０
１５．タルク                                                        ４．０
１６．ベンガラ                                                      １．０
１７．黄酸化鉄                                                      ２．０
１８．香料                                                          適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００７３】
処方例１０  浴用剤１
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物                                          ０．５
２．製造例２Ｂの抽出物                                          ０．５
３．炭酸水素ナトリウム                                        ５０．０
４．黄色２０２号（１）                                            適量
５．香料                                                          適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。
【００７４】
処方例１１  軟膏
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ｂ、３Ｂの混合抽出物                                  ０．５
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                                  １０．０
４．流動パラフィン                                                ５．０
５．セタノール                                                    ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
７．プロピレングリコール                                        １０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００７５】
処方例１２  散剤
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ｄの混合抽出物                                ２０．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ３０．０
３．微結晶セルロース                                            ５０．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、散剤とする。
【００７６】
処方例１３  錠剤
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ａの抽出物                                            ３．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ２７．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム                        ２０．０
４．微結晶セルロース                                            ４０．０
５．ポリビニルピロリドン                                          ７．０
６．タルク                                                        ３．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【００７７】
処方例１４  錠菓
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａ、３Ａ、４Ａの混合抽出物                      ０．５
２．乾燥コーンスターチ                                          ５０．０
３．エリスリトール                                              ４０．０
４．クエン酸                                                      ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                                          ３．０
６．香料                                                          適量
７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００７８】
処方例１５  飲料
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ｅの抽出物                                            １．０
２．果糖ブドウ糖液糖                                            １２．５
３．クエン酸                                                      ０．１
４．香料                                                          ０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を混合し、飲料とする。
【００７９】
処方例１６  粉末飲料
処方                                                            含有量（％）
１．製造例２Ａ、３Ａの混合抽出物                                １０．０
２．粉糖                                                        ６５．０
３．粉末ピーチ果汁                                              １５．０
４．Ｌ−アスコルビン酸                                            ８．０
５．結晶クエン酸                                                  １．２
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．７５
７．アスパルテーム                                                ０．０２
８．粉末ピーチ香料                                                ０．０３
［製造方法］成分１〜８を混合し、粉末飲料とする。
【００８０】
処方例１７  ハーブティー
処方                                                            含有量（％）
１．栽培例２の地上部の乾燥物                                    ５０．０
２．ペパーミント                                                ２５．０
３．ローズヒップ                                                ２５．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、ティーバッグに２ｇを封入してハーブティーとする。
【００８１】
処方例１８  浴用剤２
処方                                                            含有量（％）
１．栽培例２の地上部の乾燥粉砕物の４２メッシュ篩過品              １．０
２．栽培例２の根の乾燥粉砕物の４２メッシュ篩過品                  １．０
３．炭酸水素ナトリウム                                          ５０．０
４．黄色２０２号（１）                                            適量
５．香料                                                          適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
以上のことから、本発明のオタネニンジンの発芽した新芽は、抗酸化効果、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果及びフィラグリン産生促進効果が優れており、さらに、特定の波長域を有する光を照射して栽培したオタネニンジンの抽出物は、抗酸化効果及びＭＭＰ阻害効果がより優れている。これらを含有する皮膚外用剤又は内用剤は特に有効である。
【配列表】
2020097548000001.app