(57)【要約】      （修正有）【課題】侵襲的な医療処置の必要もなく、また、処方薬からの危険な副作用もない、アテローム性動脈硬化プラークの効果的な処置のための組成物の提供。【解決手段】低融点および高ヨウ素価を有する高濃度の一価不飽和脂肪酸を含む組成物、および、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化プラークを減少させるための、栄養補助食品、機能性食品または医薬としてのそのような組成物の使用。低融点温度および約５０〜約１３０のヨウ素価を有する高濃度の一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）を、アテローム性動脈硬化症を効果的に処置するために使用することができることが見出された。疫学研究は、オリーブ油中にある大量のＣ１８：１を消費するそれらの集団が、アテローム性動脈硬化症などの血管疾患に対して守られることを示唆する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
約５０〜約１３０のヨウ素価を有する２つの一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）群を含む組成物であって、
第一のＭＵＦＡ群は、炭素数１６以下のアシル炭素長鎖を有するＭＵＦＡを含み、かつ組成物の約１８重量％〜約４０重量％で存在し、
第二のＭＵＦＡ群は、炭素数１８以上のアシル炭素長鎖を有するＭＵＦＡを含み、かつ組成物の約４０重量％〜約８０重量％で存在し、
第一および第二のＭＵＦＡ群の総重量は、組成物の８０重量％を超え、
機能性食品、栄養補助食品、または医薬品である、
組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、アテローム性動脈硬化プラークを処置するための低融点および高ヨウ素価を有する高濃度の一価不飽和脂肪酸組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
アテローム性動脈硬化症およびそれに関連する血管合併症は、心臓発作および脳卒中につながる心血管疾患および脳血管疾患の主な原因である。アテローム性動脈硬化症は、動脈内壁への脂肪質またはプラークの沈着を特徴とする疾患である。経時的にプラーク沈着物は大きさが増大し、酸素が下流の器官に到達するのを妨げる。心臓への不可欠な動脈が閉塞されると、それにより狭心症および心臓発作を引き起こすことがあり、もしかすると死に至ることもある。また、アテローム性動脈硬化症は、脳に至る動脈にも発症し、脳血栓症または脳卒中を引き起こし、その結果、筋麻痺、認知能力の喪失、および認知症のリスクをもたらし得る。また、脚の動脈もアテローム性動脈硬化プラークで閉塞される状態になる可能性があり、痛みおよび歩行困難、ならびに、もしかすると患部組織（ｅｆｆｅｃｔｅｄ  ｔｉｓｓｕｅ）の壊死および壊疽のリスクを引き起こす。
【０００３】
アテローム性動脈硬化プラークは、酸化コレステロールの蓄積に応答して動脈壁の向こう側に移動する単球の相互作用によって引き起こされると理論付けられている。動脈壁の内部で、単球は、酸化コレステロール上でそれ自身を貪り食い、脂肪を積んだ「泡沫細胞」に変換される。泡沫細胞が死ぬと、その脂質分が放出され、動脈壁内部に脂質コアが生み出される。カルシウム、脂肪酸および他の物質と共に脂質コアの蓄積は、最終的にプラークを形成する。経時的にプラークは石灰化して硬化する。動脈壁内での継続したプラークの成長は、管腔（ｌｕｍｅｎ）への侵入を回避するために動脈壁を外側へ拡大させることになる。プラークの成長が、動脈壁の補填し得る能力を超えて広がると、プラークは管腔に侵入する。プラークの破裂が脂質コアを血液にさらせ、血栓を生み出す。血栓は、動脈を閉塞させて血流を遮断することがあり、または、剥離して下流の動脈をふさぐことがある。アテローム性動脈硬化症を患う患者は、アテローム性動脈硬化プラークが動脈壁中に蓄積する間、何年間も無症状であるかもしれない。ほとんどの場合、患者は、脳卒中または心臓発作が起こるまで疾患に気付かない。
【０００４】
アテローム性動脈硬化症を処置するたいていの方法は、処方薬の使用を伴う。例えば、スタチンとして知られている薬剤群は、高コレステロールを伴う患者におけるアテローム性動脈硬化症を処置するために処方されるが、女性および７０歳を超える人々におけるその効果は不明である。ビタミンであるナイアシンもまた、アテローム性動脈硬化症を処置するために処方されているが、皮膚の潮紅を引き起こし、また、血糖レベルを上昇させ、糖尿病患者にとって危険な可能性がある。エゼチミブのようなコレステロールの吸収を制限するための薬物もまた、アテローム性動脈硬化症の患者に処方されているが、これらの患者の心臓発作および脳卒中のリスクの低減におけるその有効性は不明である。
【０００５】
アテローム性動脈硬化症を処置する他の方法としては、外科的ステント留置、プラークの外科的切除（ｅｘｃｉｓｉｏｎ）、プラークの除去（ａｂｌａｔｉｏｎ）、およびバイパス手術／移植などの医療処置が含まれる。これらの処置はコストがかかり、また、リスクや制限がないわけではない。動脈壁のステント留置は、血栓のリスクを伴い、経時的にステント自体が閉塞される状態になることもある。外科的切除および除去は、プラーク粒子を放出する可能性があり、これが脳に至る動脈の閉塞をもたらし、脳卒中を引き起こす可能性がある。自己血管を用いた動脈移植もまた、脳卒中、心臓発作、腎機能低下、および不整脈などの他の合併症をもたらす可能性がある。すべてのこれらの外科処置はまた、特定の動脈のみを標的とすることにより、また、アテローム性動脈硬化症によって冒されるかもしれない他の動脈を未処置のままにしておくことにより、酷く限定的なものである。
【０００６】
アテローム性動脈硬化症は、禁煙、運動の増加、肥満患者の体重管理、血圧の引き下げ、血液の脂質レベルのモニタリング、および、不十分な食習慣の変更などのリスクファクターの修正によって予防または緩和することができる。さらに、アテローム性動脈硬化症になるリスクのある患者は、食事をオリーブ油などの天然油にある不飽和脂肪酸に代えることによって、コレステロールおよび飽和脂肪の摂取量を減らすことを勧められる。しかしながら、オリーブ油および他の天然に存在する油はまた、アテローム性動脈硬化症に寄与することが知られている他の望ましくない脂肪酸も含んでいる。
【０００７】
アテローム性動脈硬化症は、その研究、予防、および処置の進歩にもかかわらず、人々の死亡または障害の主な原因のままである。したがって、侵襲的な医療処置の必要もなく、また、処方薬からの危険な副作用もない、アテローム性動脈硬化プラークの効果的な処置が必要とされている。
【発明の概要】
【０００８】
低融点温度および約５０〜約１３０のヨウ素価を有する高濃度の一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）を、アテローム性動脈硬化症を効果的に処置するために使用できることが見出された。疫学研究は、オリーブ油中にある大量のＣ１８：１を消費するそれらの集団（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）が、アテローム性動脈硬化症などの血管疾患に対して守られることを示唆する。しかしながら、オリーブ油などの天然油はまた、プラーク形成に寄与するかもしれない高濃度の他の飽和脂肪酸、および、望まない共有結合型複合体を生成する架橋反応を起こすかもしれない多価不飽和脂肪酸を含む。約２９℃〜約３４℃の低融点および約５０〜約１３０の高ヨウ素価を有する高濃度のＭＵＦＡを含む組成物を投与することは、血管組織におけるアテローム性動脈硬化病変を有意に減少させることが発見された。本明細書で意図されるＭＵＦＡは、短アシル長鎖（ｓｈｏｒｔ  ａｃｙｌ  ｌｅｎｇｔｈ  ｃｈａｉｎ）および長アシル長鎖（ｌｏｎｇ  ａｃｙｌ  ｌｅｎｇｔｈ  ｃｈａｉｎ）を有する脂肪酸のブレンドまたは混合物である。栄養補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、機能性食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）、および医薬としての前記組成物の投与は、外科的処置のリスクおよびコストなしでアテローム性動脈硬化症を処置するという追加された利点がある。
【０００９】
本発明の一実施態様において、約２９℃〜約３４℃の融点および約５０〜約１３０のヨウ素価を有する少なくとも２つの脂肪酸群を含み、第一のＭＵＦＡ群が炭素数１６以下のアシル炭素長鎖（「短炭素鎖基（ｓｈｏｒｔ  ｃａｒｂｏｎ  ｃｈａｉｎ  ｇｒｏｕｐ）」）を有し、第二のＭＵＦＡ群が炭素数１８以上のアシル炭素長鎖（「長炭素鎖基（ｌｏｎｇ  ｃａｒｂｏｎ  ｃｈａｉｎ  ｇｒｏｕｐ）」）を有し、第一および第二の脂肪酸群の総重量濃度が組成物の約８０重量％を超える、ＭＵＦＡ組成物が提供される。
【００１０】
本発明の別の実施態様において、第一群のＭＵＦＡの少なくとも１種（ｍｅｍｂｅｒ）はＣ１２：１、Ｃ１４：１およびＣ１６：１脂肪酸から選択され、第二群のＭＵＦＡの少なくとも１種はＣ２２：１、Ｃ２０：１およびＣ１８：１脂肪酸から選択される。
【００１１】
本発明の別の実施態様において、第一群は、組成物の約１８重量％〜約４０重量％で存在する短炭素鎖ＭＵＦＡを含み、第二のＭＵＦＡ群は、組成物の約４０重量％〜約８０重量％で存在する長炭素鎖ＭＵＦＡを含み、組成物中のＭＵＦＡの総濃度は８０％を超える。
【００１２】
本発明の別の実施態様において、第一群は、組成物の約２０重量％〜約４０重量％で存在する短炭素鎖ＭＵＦＡを含み、第二のＭＵＦＡ群は、組成物の約６０重量％〜約８０重量％で存在する長炭素鎖ＭＵＦＡを含み、組成物中のＭＵＦＡの総濃度は８０％を超える。
【００１３】
本発明の別の実施態様において、第一群は、組成物の約１８重量％〜約２３重量％で存在する短炭素鎖ＭＵＦＡを含み、第二のＭＵＦＡ群は、組成物の約６０重量％〜約８０重量％で存在する長炭素鎖ＭＵＦＡを含み、組成物中のＭＵＦＡの総濃度は８０％を超える。
【００１４】
本発明の別の実施態様において、第一群は、組成物の約２０重量％〜約２３重量％で存在する短炭素鎖ＭＵＦＡを含み、第二のＭＵＦＡ群は、組成物の約６０重量％〜約８０重量％で存在する長炭素鎖ＭＵＦＡを含み、組成物中のＭＵＦＡの総濃度は８０％を超える。
【００１５】
本発明の別の実施態様において、約１５重量％までの飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸をさらに含む、短炭素鎖および長炭素鎖ＭＵＦＡの高濃度組成物が提供される。
【００１６】
本発明の別の実施態様において、約１８重量％〜約４０重量％、好ましくは約２０重量％〜約４０重量％、より好ましくは約１８重量％〜約２３重量％、さらにより好ましくは約２０重量％〜約２３重量％のＣ１６：１脂肪酸を含む、高濃度のＭＵＦＡを用いてアテ
ローム性動脈硬化症を処置するための組成物が提供される。前記組成物はまた、約４０重量％〜約８０重量％、好ましくは約６０重量％〜約８０重量％のＣ１８：１脂肪酸を含み、Ｃ１６：１およびＣ１８：１の総濃度が組成物の８０重量％を超える。Ｃ１６：１およびＣ１８：１ＭＵＦＡ組成物は、任意に１５％までの飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸を含むことができる。
【００１７】
本発明の別の実施態様において、約１８重量％〜約４０重量％、好ましくは約２０重量％〜約４０重量％、より好ましくは約１８重量％〜約２３重量％、さらにより好ましくは約２０重量％〜約２３重量％の短炭素鎖ＭＵＦＡの組成物、および約４０重量％〜約８０重量％、より好ましくは約６０重量％〜約８０重量％の長炭素鎖ＭＵＦＡの組成物を含み、前記ＭＵＦＡの総濃度が組成物の８０重量％を超える、高濃度のＭＵＦＡを用いてアテローム性動脈硬化症を処置する方法が提供される。処置は、前記ＭＵＦＡ組成物を毎日体重４０ｋｇあたり約１５グラムで少なくとも８週間投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、それぞれの食餌開始後の時間の関数としての対照群および処置群の体重（ｇ）のグラフである。
【図２】図２は、対照食対処置食を与えられた動物の下行胸部大動脈における食餌３カ月後の病変領域を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
詳細な説明
本発明は、アテローム性動脈硬化プラークの蓄積が、アルカリ溶液（ｐＨ７．０を超える）およびトリグリセリド（脂肪）の存在下で、カルシウム、マグネシウム、または鉄などの二価のまたは三価の金属と結合した（ｃｏｕｐｌｅｄ）遊離脂肪酸アニオンの結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）によって引き起こされるという発見に基づくものである。脂肪酸、カルシウムおよび脂肪の比率は、アテローム性動脈硬化プラークが「スメア（ｓｍｅａｒ）」またはワックス状（ｗａｘｙ）（ソフトプラーク）または硬質沈殿物（ハードプラーク）であるかどうかを決定するだろう。脂肪酸成分は、主に飽和パルミチン（ｐａｌｍｉｔａｔｅ）（Ｃ１６：０）およびステアリン（ｓｔｅａｒａｔｅ）（Ｃ１８：０）脂肪酸である。これらの飽和脂肪酸は高融点を有し、カルシウム塩と共にハードプラークを形成する。
【００２０】
アテローム性動脈硬化プラークの回復（ｒｅｖｅｒｓａｌ）は、非常に低い融点と高ヨウ素価（５０を超え１３０未満）との両方を有するＭＵＦＡを有効成分として含む組成物の規則的かつ体系的投与によって、達成されることができると考えられる。高融点（すなわち、３８℃以上）を有する脂肪酸とそのアテローム形成性（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃｉｔｙ）に対して、相関的な効果が認められている。例えば、パルミチン（Ｃ１６：０）およびステアリン（Ｃ１８：０）脂肪酸などの飽和脂肪酸は、アテローム形成性（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｉｃ）であると考えられる。これらの飽和脂肪酸は、室温（約２５℃）および生理的温度（約３７℃）のいずれにおいても固体である。対照的に、通常、パルミチン酸およびステアリン酸と同じ長さのアシル鎖を有するが、１つまたは複数の不飽和結合がある、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、オレイン酸（Ｃ１８：１）およびリノール酸（Ｃ１８：２）などの脂肪酸は、低い融点温度を有し、そのため、上記温度において液体である。表１にいくつかの一般的な脂肪酸の融点を提供する。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
表１に見られる脂肪酸の多くは、植物、ナッツおよび動物などの天然源中にトリグリセリドとして見つけられることができる。しかしながら、これらの天然のトリグリセリド源は、アシル鎖長と飽和度のいずれもが異なる多くの脂肪酸の混合物を含む。例えば、ラード（豚に由来する）、牛脂（牛に由来する）および羊脂（羊に由来する）は室温で固体脂肪であり、そのアシル基の４０％〜５０％は飽和Ｃ１６：０およびＣ１８：０である。一価不飽和オレイン酸（Ｃ１８：１）がそのアシル含有量の約４０％〜５０％を構成し、残りの大部分は多価不飽和リノール酸（Ｃ１８：２）である。対照的に、室温で液体である、大部分の植物油は、わずか１０％〜２０％のパルミチン酸エステルおよびステアリン酸エステルを有し、残りはほぼ不飽和オレイン酸エステルおよびリノール酸エステルである。
【００２３】
ヨウ素価は、油脂の炭素−炭素二重結合の程度の尺度である。飽和（炭素−炭素二重結合を有さない）油脂はヨウ素を取り入れず、そのため、そのヨウ素価はゼロである。対照的に、不飽和油脂はヨウ素を取り入れる。より多くの二重結合が存在するほど、より多くのヨウ素が結合し、ヨウ素価がより高くなり、油脂がより反応的で不安定になる。ヨウ素価が１３０を超える脂肪酸は、架橋および重合して体内に沈着物を形成する可能性があるが、約５０〜約１３０のヨウ素価を有する脂肪酸は、より安定であり、重合しにくく、動脈壁へ付着しにくいことが発見されている。
【００２４】
表２にいくつかの一般的な脂肪酸に対するヨウ素価を提供する。
【００２５】
【表２】
2020182497.tif 000003
【００２６】
低融点および高ヨウ素価を有する、栄養補助食品、機能性食品および医薬として、約８０重量％を超えるＭＵＦＡの混合物またはブレンドを含む高濃縮物（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）の投与は、アテローム性動脈硬化症の処置において有効であることができる。具体的には、本発明は、約２９℃〜約３４℃の融点および約５０〜約１３０のヨウ素価を有する高濃度のＭＵＦＡが、抗アテローム形成性効果を有することを提供する。そのようなＭＵＦＡの代表例は、Ｃ２２：１、Ｃ２０：１、Ｃ１８：１、Ｃ１６：１、Ｃ１４：１およびＣ１２：１である。
【００２７】
本明細書に記載の発明はさらに、約２９℃〜約３４℃の融点および約５０〜約１３０のヨウ素価を有する少なくとも２つの脂肪酸群を含み、第一の脂肪酸群が炭素数１６以下のアシル炭素長鎖（「短炭素鎖基」）を有し、第二の脂肪酸群が炭素数１８以上のアシル炭素長鎖（「長炭素鎖基」）を有し、第一および第二の脂肪酸群の総重量が組成物の８０重量％を超える、高ＭＵＦＡ濃度の組成物の投与が、アテローム性動脈硬化症の処置に有用であることを提供する。
【００２８】
本明細書に記載のＭＵＦＡ組成物は、Ｃ１２：１、Ｃ１４：１、およびＣ１６：１の群から選択される少なくとも１種を含む短炭素鎖の第一の脂肪酸群、ならびに、Ｃ２２：１、Ｃ２０：１、およびＣ１８：１の群から選択される少なくとも１種を含む長炭素鎖の第二の脂肪酸群を含む。
【００２９】
約１８重量％〜約４０重量％の第一の短炭素鎖群と、約４０重量％〜約８０重量％の第二の長炭素鎖群とを含む、好ましいＭＵＦＡ組成物が提供される。長炭素鎖ＭＵＦＡに対する短炭素鎖ＭＵＦＡの比濃度を伴う、本明細書で意図される組成物の代表例が、表３に提供される。
【００３０】
【表３】
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【００３１】
アテローム性動脈硬化症を処置する方法はまた、本明細書で述べられる組成物を投与することによって提供される。そのような方法の例としては、患者に表３に記載の組成物を１日当たり体重４０ｋｇ当たり約１５グラムで少なくとも８週間投与することが含まれる。
【００３２】
ＭＵＦＡは、アシル炭化水素鎖に沿って、１つの、ビニル性または炭素−炭素二重結合を有する。以下に、脂肪酸の構造は、Ｃｘ：ｙｎ−ａのような表記によって特徴付けられるだろう。「Ｃｘ」は、脂肪アシル基が「ｘ」個の炭素原子を含むことを示す。「ｙ」はアシル鎖における炭素−炭素二重結合の数を示し、「ｎ−ａ」は最も遠位の二重結合が末端メチル端から数えて「ａ」番目の炭素で終結することを示す。
【００３３】
本発明のために選択されるＭＵＦＡとしては、約２９℃〜約３４℃の低い融点温度および約５０〜約１３０の高ヨウ素価を有する脂肪酸のブレンドまたは混合物が含まれる。高濃度の少なくとも２つの群の選択されたＭＵＦＡを組み合わせた組成物であって、第一のＭＵＦＡ群の少なくとも１種が、短炭素鎖ＭＵＦＡ（アシル炭素長が炭素数１６以下）から選択され、ＭＵＦＡの第二群の少なくとも１種が、長炭素鎖ＭＵＦＡ（アシル炭素長が炭素数１８以上）から選択される、組成物を用いた処置は、動脈におけるプラークの大きさおよび数を減少させるのに有用である。本明細書で意図されるＭＵＦＡの非限定的な例は、以下の表４に見られることができる。代表的な短炭素鎖ＭＵＦＡとしては、Ｃ１２：１、Ｃ１４：１およびＣ１６：１が含まれ、長炭素鎖ＭＵＦＡとしては、Ｃ２２：１、Ｃ２０：１およびＣ１８：１が含まれる。本発明で論じられるＭＵＦＡは、シスまたはトランス構造のいずれで存在してもよく、両方の幾何異性体が本発明で意図される。
【００３４】
【表４】
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【００３５】
本明細書に記載の短炭素鎖ＭＵＦＡおよび長炭素鎖ＭＵＦＡは、全組成物の少なくとも約８０重量％を構成すべきである。短炭素鎖ＭＵＦＡ群は、好ましくは組成物の約１８重量％〜約４０重量％、より好ましくは組成物の約１８重量％〜約２３重量％、さらにより好ましくは組成物の約２０重量％〜約２３重量％を構成する。長炭素鎖ＭＵＦＡ群は、好ましくは組成物の約４０重量％〜約８０重量％、より好ましくは組成物の約６０重量％〜約８０重量％を構成する。
【００３６】
好ましい脂肪酸はＣ１６：１およびＣ１８：１である。脂肪酸Ｃ１６：１は、Ｃ１６：１ｎ−７、Ｃ１６：１ｎ−６、Ｃ１６：１ｎ−５、Ｃ１６：１ｎ−４、およびＣ１６：１ｎ−３を含むその位置異性体、ならびにそのシスおよびトランス−幾何異性体のいずれかを含むことができる。より好ましい脂肪酸はＣ１６：１ｎ−７である。Ｃ１６：１ｎ−７の慣用名はパルミトレイン酸であり、通常、式Ｉによって表される。
【００３７】
ＣＨ３（ＣＨ２）５ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＯＯＨ
（式Ｉ）
Ｃ１６：１は、通常、少量ではあるけれども、天然に存在する油（「原料油」）において入手できる。Ｃ１６：１を含む所望の油画分は、特定の微生物、並びに、植物油、種子もしくはナッツ油、魚油、動物脂肪、または塩水もしくは淡水植物などの水生植物油などの様々な種類の油（すなわち、様々な原料油）から、当業者によく知られている、従来の冷却および蒸留技術、ならびに／または溶媒抽出（「精製」技術）によって、容易に得る
ことができる。通常、植物油はもちろん、ナッツまたは種子油も、所望のＣ１６：１含有量が高くない。本発明のＣ１６：１を多量に含む油源としては、約１０重量％〜約１６重量％のＣ１６：１ｎ−７を含むことができる、イワシおよびメンハーデンなどの魚油が含まれ、一方、マッコウクジラ油は約１３重量％以上を含むことができる。ナッツ油は、通常、Ｃ１６：１ｎ−７脂肪酸を有さないけれども、Ｃ１６：１ｎ−７を油の総重量の約１６％〜約２５％の量で含むマカダミアナッツ油は、その例外であるが、他の望ましくない脂肪酸も含む。バターオイル、鶏脂、ラード、および牛脂などの動物脂肪は、通常、Ｃ１６：１ｎ−７が高含量であるが、高レベルの他の望ましくない脂肪酸も含む。
【００３８】
Ｃ１６：１ｎ−７脂肪酸はもちろん、対応するアルコール、ジグリセリド、トリグリセリドおよび塩も、上述の種類の油（すなわち、原料油）から、最初に油を所望のＣ１６：１ｎ−７の凝固点または融点温度未満の温度に冷却し、次いで残りの液体部分を除去することによって、抽出されることができる。除去した液体油は、次いで蒸留にさらすことができ、ここで、Ｃ１６：１ｎ−７等、Ｃ１４：１ｎ−５等、Ｃ１２：１ｎ−３よりも高い沸点を有する化合物を除去することができる。当業者には明らかであるように、Ｃ１６：１またはその対応するアルコール、ジグリセリド、トリグリセリドおよび／もしくは塩が濃縮量で得られるまで、冷却−蒸留プロセスは繰り返すことができる。あるいは、Ｃ１６：１（ならびに／または対応するアルコール、ジグリセリド、トリグリセリドおよび塩）を溶解するが、油の他の成分は溶解しない、様々な１種または複数種の溶媒を利用することができ、そのため、溶媒の蒸発に際し、その選択的な脂肪酸（ならびに／または対応するアルコール、ジグリセリド、トリグリセリドおよび塩）を得られる。そのような技術およびプロセスは、当該技術および文献においてよく知られている。例えば、参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許第５，１９８，２５０号に明記される記載、例えばその例１を参照されたい。
【００３９】
原料油を精製することにより、約１０％〜約３５％、または約５０％、または約７５％、または約９０％などの高いまたは濃縮量のＣ１６：１を得ることができる。そのような精製された原料油はまた、Ｃ１２：０、Ｃ１４：０、Ｃ１６：０、およびＣ１８：０などの少量の様々な飽和脂肪酸成分を、組成物中の脂肪酸成分の総量に基づいて、例えば、２０体積％未満、１５体積％未満、１２体積％以下、１０体積％未満、さらには５体積％以下で含んでもよい。同様に、精製された原料油はまた、Ｃ１２：２またはＣ１２：３、Ｃ１４：２またはＣ１４：３、Ｃ１６：２またはＣ１６：３、Ｃ１８：２またはＣ１８：３、それに類するものなどの少量の多価不飽和脂肪酸油成分を、組成物中の脂肪酸成分の総量に基づいて、例えば、２０体積％未満、１５体積％未満、１２体積％未満、１０体積％未満、さらには５体積％未満で含む。
【００４０】
Ｃ１６：１の望ましい原料油の製造に関しては、様々な藻類株が好適である。藻類は、その中にリン酸塩などの栄養分を含むタンク内で栽培することができる。高いシス−パルミトレイン酸含有量を有する、シアノバクテリア、フォルミジウム種ＮＫＢＧ  ０４１１０５およびオシラトリア種ＮＫＢＧ  ０９１６００（それぞれ、全脂肪酸の５４．５％および５４．４％）などの、数多くの藻類株が、比較的高いパルミトレイン酸含有量を有する。フォルミジウム種ＮＫＢＧ  ０４１１０５は、バイオマス当たり最も高いシス−パルミトレイン酸含有量（４６．３ｍｇ（ｇ乾燥細胞重量）−１）を有し、シス−パルミトレイン酸組成は、様々な温度で一定であることが発見された。同様の方法で、シーバックソーンなどの他の水生植物もまた、栽培し利用することができる。それから、藻類、シーバックソーン等は、冷却−蒸留または溶媒抽出などの既知の技術によって処理して、中〜高濃度のＣ１６：１ｎ−７油画分を得ることができる。さらに、２００９年８月２９日公開のＷＯ２００９／１０５６２０および２００８年３月２７日公開のＷＯ２００８／０３６６５４において、Ｃ１６：１の原料油として好適な更なる藻類が確認されている。両刊行物は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。
【００４１】
脂肪酸Ｃ１８：１は、Ｃ１８：１ｎ−９を含む、任意の位置異性体を含むことができる。オレイン酸の慣用名で知られる脂肪酸Ｃ１８：１ｎ−９は、Ｃ１８：１の好ましい脂肪酸であり、通常、式ＩＩで表される。
【００４２】
ＣＨ３（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）７ＣＯＯＨ
（式ＩＩ）
Ｃ１８：１は、米国特許第６，６６４，４０５号に記述されるように、ベニバナ油またはオリーブ油などの天然源から抽出するか、あるいは、Ｓｅａ  Ｌａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｃａｒｇｉｌｌ、およびＥｍｏｒｙなどの商業源から購入することができる。
【００４３】
本明細書で意図されるＭＵＦＡは、遊離脂肪酸、脂肪酸エチルエステル、脂肪酸アミドもしくはその誘導体、塩、モノグリセリド、ジグリセリド、またはトリグリセリドとして含む、任意の形態で使用されてもよい。ＭＵＦＡに対するどんな改変でも、生理学的に許容できる組成物となるはずである。本明細書で使用されるとき、用語「生理学的に許容できる」エステルまたは塩は、組成物を受け入れる対象にとって有害ではない、栄養補助食品、機能性食品または医薬組成物の他の成分と適合する、有効成分のエステルまたは塩の形態を意味する。
【００４４】
本明細書で使用されるとき、用語「モノグリセリド」は、エステル結合を介してグリセロール分子に共有結合している脂肪酸を指す。用語「ジグリセリド」は、エステル結合を介してグリセロール分子に共有結合している、２つの脂肪酸鎖を指す。用語「トリグリセリド」は、エステル結合を介してグリセロール分子に共有結合している３つの脂肪酸鎖を指す。ジまたはトリグリセリドのグリセロール分子に結合している脂肪酸鎖の各々は、同一であってもよいし、同一でなくてもよい。
【００４５】
一価不飽和脂肪アルコールは、文献または当該技術において知られているように、水素化アルミニウムリチウムなどの強塩基などによる、その還元と、これに限定されないが、分留などの第２の分離工程とによって、上記のＭＵＦＡから得られることができる。したがって、脂肪アルコール誘導体は、その点で、本明細書で論じられるＭＵＦＡに関して明記されたものと同数の総炭素原子を有することができ、一価不飽和であることができ、同位置に二重結合を含むことができる。好適な上記ＭＵＦＡの塩、または一価不飽和脂肪アルコール、または一価不飽和脂肪酸、モノ、ジもしくはトリグリセリドとしては、塩素などの種々のハロゲン化物が含まれる。
【００４６】
アテローム性動脈硬化症は、活性成分（ａｃｔｉｖｅ  ｐｒｉｎｃｉｐａｌ）として、約２９℃〜の約３４℃の融点、および約５０〜約１３０、好ましくは約６８〜約１３０のヨウ素価を有する８０重量％を超えるＭＵＦＡを含む組成物の投与によって処置することができることが発見された。本明細書で提供されるＭＵＦＡ組成物は、短炭素鎖ＭＵＦＡの第一群、および長炭素鎖ＭＵＦＡの第二群を含む。短炭素鎖群の好ましいＭＵＦＡはＣ１６：１であり、長炭素鎖群の好ましいＭＵＦＡはＣ１８：１である。そのようなＭＵＦＡのブレンドまたは混合物を含む組成物は、約１８重量％〜約４０重量％のＣ１６：１、および約４０重量％〜約８０重量％のＣ１８：１を含む。好ましくは、そのような濃度としては、約１８重量％〜約２３重量％のＣ１６：１および約６０重量％〜約８０重量％のＣ１８：１が含まれる。より好ましくは、約２０重量％〜約２３重量％のＣ１６：１および約６０重量％〜約８０重量％のＣ１８：１である。前記組成物の規則的かつ体系的な投与は、アテローム性動脈硬化プラーク形成を阻害し、動脈におけるプラークの大きさおよび数を減少させることを示している。
【００４７】
「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、治療的処置および予防または防止手段の両方を指し、アテローム性動脈硬化プラークの発生または進行などの望ましくない生理学的変化または障害を、減少させ、阻害し、防止し、または減速（軽減）することを目的とする。
【００４８】
アテローム性動脈硬化プラークを減少させることには、新しいアテローム性動脈硬化プラークの形成を防止すること、および／または、既存のアテローム性動脈硬化プラークの大きさを減少させることの両方が含まれる。プラークの大きさを減少させることには、（ｉ）哺乳動物の１つもしくは複数の動脈においてアテローム性動脈硬化プラークによって冒されている表面積の割合、（ｉｉ）哺乳動物の１つもしくは複数の動脈において発見されるプラークの数、および／または、（ｉｉｉ）そのようなプラークの重症度を減少させることを含むことができる。例えば、減少は、本明細書に開示されるか、または当該技術において知られている、任意の適切な測定技術またはアッセイによって決定される、未処置のまたは対照の対象に比べて、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％の減少、またはそれらの間の任意の点を含むことができる。アテローム性動脈硬化プラークの減少は、大動脈、冠動脈、頸動脈および大脳動脈などの特定の動脈で起こるかもしれない。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、用語「組成物」は、治療用および食事療法用の製剤を含む。本発明の組成物は、短炭素鎖および長炭素鎖ＭＵＦＡ；Ｃ２２：１、Ｃ２０：１、Ｃ１８：１、Ｃ１６：１、Ｃ１４：１およびＣ１２：１に代表される、低融点および約５０〜約１３０のヨウ素価を有する、所望の高濃度のＭＵＦＡを提供するために、栄養補助食品、機能性食品または医薬組成物の脂肪酸含有量を操作または調整するという意味で、処方される（ｆｏｒｍｕｌａｔｅ）。用語「栄養補助食品」は、栄養素を含む摂取を意図した製品である。栄養素は、数ある物質の中でも、以下の物質：ビタミン、ミネラル、繊維、脂肪酸、またはアミノ酸のうちの１種、または任意の組合せであってよい。用語「機能性食品」は、当該食品の生理活性を超える生理活性を有する任意の食品である。本明細書で意図される高ＭＵＦＡ組成物は、通常、食品には発見されない。
【００５０】
本明細書で提供されるＭＵＦＡは処方されたものであり、すなわち、純化された原料から個々の成分が混ぜ合わされて、本明細書に記載の高濃度の短炭素鎖および長炭素鎖ＭＵＦＡを生成するということを意味する。あるいは、天然に存在する食品を本明細書に記載の高組成のＭＵＦＡに強化することもできる。そのような強化食品は、食品中に含まれている、低い水準のＭＵＦＡを有するかもしれない。食品の短炭素鎖および長炭素鎖ＭＵＦＡの最終濃度が、合計で約８０重量％を超え、短炭素鎖および長炭素鎖ＭＵＦＡの各群の重量百分率が、表３に提供される濃度範囲内に入るように、その時には、本明細書で提供される長炭素鎖および短炭素鎖ＭＵＦＡが、食品に添加または補足される。
【００５１】
本明細書で意図される組成物はまた、医薬組成物の形態で哺乳動物に投与されてもよい。そのような医薬組成物は、有効成分として、本明細書で意図されるＭＵＦＡのみを含んでもよい。医薬組成物はまた、前記有効成分を、１種または複数種の薬剤的に許容できる担体および任意の追加成分と共に含んでもよい。
【００５２】
「薬剤的に許容できる担体」は、有効成分の活性の有効性に干渉せず、かつそれが投与される宿主に対して有毒でない、任意の担体を包含するものとする。薬剤的に許容できる担体は、当業者には既知である。
【００５３】
「追加成分」は、以下の１種または複数種を意味する：賦形剤、界面活性剤、分散剤、不活性希釈剤、造粒剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、甘味料、着香剤、着色剤、防腐剤、生理的に分解可能な組成物（例えば、ゼラチン）、水性ビヒクル、水性溶媒、油性ビヒクルおよび油性溶媒、懸濁剤、分散剤、湿潤剤、乳化剤、粘滑剤、緩衝剤、塩、増粘剤、充填
剤、乳化剤、酸化防止剤、抗生物質、抗真菌剤、安定化剤、ならびに薬剤的に許容できる高分子または疎水性材料。医薬組成物に含まれることができる、他の「追加成分」は既知である。好適な追加成分は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｇｅｎａｒｏ編、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．（１９８５）に記載される。
【００５４】
本明細書に記載の医薬組成物は、任意の既知の方法または薬理学の技術分野で今後開発される方法によって調製することができる。通常、そのような予備的な方法は、前記有効成分を、担体および／または１種もしくは複数種の他の補助成分と組み合わせ、次いで、必要な場合または望ましい場合には、生成物を所望の単回または複数回投与単位に成形または包装する工程を含む。
【００５５】
本明細書で提供される医薬組成物は、主にヒトへの倫理的投与に適したものに向けられているが、そのような組成物は、通常、あらゆる種類の哺乳動物に適していると理解される。
【００５６】
経口製剤は、各々が所定量の有効成分を含む、錠剤、硬もしくは軟カプセル剤、カシェ剤、トローチ剤またはロゼンジなどの個別の固体投与単位として調製、包装、および／または販売することができる。他の経口製剤としては、粉末または顆粒製剤、水性または油性懸濁液、水性または油性溶液、および乳剤が含まれる。本明細書で使用されるとき、「油性」液体は、水よりも低い極性を示す炭素含有液体分子である。有効成分を含む硬カプセル剤および軟ゼラチンカプセル剤は、ゼラチンなどの、生理的に分解可能な組成物を用いて製造することができる。硬カプセル剤は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、およびカオリンなどの不活性固体希釈剤をさらに含むことができる。カルシウム希釈剤は許容できるが、脂肪酸との負の相互作用を避けるために、その濃度を最小限にすべきである。本明細書で意図されるＭＵＦＡを有効成分として含む軟ゼラチンカプセル剤は、ゼラチンなどの、生理的に分解可能な組成物を用いて製造することができる。そのような軟カプセル剤は有効成分を含み、他の賦形剤と混合してもよい。経口投与に適した液体医薬製剤は、液体形態で調製、包装、および販売することができる。
【００５７】
本明細書に記載の、ＭＵＦＡ、栄養補助食品、機能性食品、および医薬組成物はいずれも、本明細書に記載の方法に従って投与することができる。通常、本明細書に記載の組成物は、体重４０ｋｇあたり約１５グラムで投与することができる。投与量は、個人の年齢、健康状態、および／または既存のアテローム性動脈硬化プラークの重症度などの他の要因に応じて変化することができる。
【００５８】
非限定的な例として、本明細書に記載の組成物は、１日当たり約１５グラム〜約６０グラムまたはその間の任意の値で人に投与することができる。体重７２ｋｇを超える人は、１日当たり合計で約３０グラム〜約６０グラムの範囲の投与量を投与することができる。好ましくは、１日当たり合計で、約３０グラム、約４０グラム、約５０グラムおよび約６０グラム、またはそれらの間の任意の値である。体重が７２ｋｇ未満の人は、１日当たり合計で、約１５グラム〜約３０グラムまたはその間の任意の値の投与量を投与することができる。好ましくは、約１５グラム、約２０グラム、約２５グラムおよび約３０グラムまたはそれらの間の任意の値である。
【００５９】
人は、本明細書で意図される高濃度のＭＵＦＡ組成物を、栄養補助食品、機能性食品、または医薬として、液体、固体または半固体を含む、本明細書に記載の任意の形態で、受け取ることができる。人は、アテローム性動脈硬化プラークが発見される前または後に、前記高濃度のＭＵＦＡ組成物を用いた処置を受けることができる。アテローム性動脈硬化プラークを生じさせる高いリスクファクターを有する人に、ＭＵＦＡ組成物を投与することは有利であるかもしれない。本明細書で意図される方法は、毎日投与することができ、約８週間、またはアテローム性動脈硬化プラークが消失するまで、またはさらに長く継続することができる。
【００６０】
アテローム性動脈硬化症を処置するためのＭＵＦＡ組成物は、約２９℃〜約３４℃の融点温度および約５０〜約１３０のヨウ素価を有する高濃度のＭＵＦＡの組合せ、混合物またはブレンドを含む。前記高濃度のＭＵＦＡは、全組成物の少なくとも約８０重量％〜約１００重量％に寄与することができる。前記ＭＵＦＡは、さらに、全組成物の少なくとも約９０重量％および９５重量％に寄与することができる。任意に、前記高ＭＵＦＡ組成物に、他の脂肪酸を組み込むことができる。そのような任意の脂肪酸は、飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸であることができる。そのような任意の脂肪酸は、組成物の総重量の１５％以下を構成することが好ましい。
【００６１】
短炭素鎖群からの好ましい脂肪酸としては、Ｃ１６：１が含まれ、長炭素鎖群からの好ましい脂肪酸としては、Ｃ１８：１が含まれる。本明細書に記載の組成物は、各群から選択される単一の脂肪酸に限定されない。例えば、Ｃ１６：１は代表的なＭＵＦＡとして選択されるが、しかしながら、短鎖ＭＵＦＡ種の組成物全体が、組成物の４０重量％を超えないように、Ｃ１２：１またはＣ１４：１を含む群の他の短鎖炭素種と組み合わせることができる。同様に、本明細書で論じられるＭＵＦＡの長炭素鎖種は、長炭素鎖種の組成物全体が、約８０％を超えないように、Ｃ２２：１およびＣ２０：１を含む他の種を含むことができるので、Ｃ１８：１に限定されない。短炭素鎖および長炭素鎖ＭＵＦＡの組合せは、全組成物の少なくとも約８０重量％〜約１００重量％を構成することができる。さらに、組み合わせた短炭素鎖および長炭素鎖ＭＵＦＡは、全組成物の少なくとも約９０重量％および９５重量％を構成することができる。
【００６２】
任意に、飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸を含む他の脂肪酸は、Ｃ１６：１およびＣ１８：１脂肪酸組成物に組み込まれることができる。そのような任意の飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸は、組成物全体の約１５重量％を超えることはできない。飽和脂肪酸は、１種または複数種の飽和脂肪酸を含むことができ、さらに、全組成物の約１５重量％までの任意の値、好ましくは全組成物の約７重量％まで、より好ましくは全組成物の約１重量％〜約５重量％を構成することができる。飽和脂肪酸の非限定的な例としては、Ｃ１６：０、Ｃ１２：０、Ｃ１４：０、およびＣ１０：０が含まれる。表５は、本発明で意図される通常の飽和脂肪酸を提供する。
【００６３】
【表５】
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【００６４】
多価不飽和脂肪酸は、１種または複数種の多価不飽和脂肪酸を含むことができ、さらに、全組成物の約１５重量％までの任意の値、好ましくは全組成物の約７重量％まで、より好ましくは全組成物の約１重量％〜約５重量％を構成することができる。多価不飽和脂肪酸の非限定的な例としては、Ｃ１８：２、Ｃ１８：１およびＣ２０：４が含まれる。表６は、本発明で意図される通常の多価不飽和脂肪酸を提供する。
【００６５】
【表６】
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【００６６】
任意に、組成物は、少量（ｔｒａｃｅ）または微量（ｍｉｎｕｔｅ  ａｍｏｕｎｔ）の他の脂肪酸を含むことができる。該少量の脂肪酸は、本明細書に記載のそれらの脂肪酸を含む、Ｃ８：０〜Ｃ２０：４の範囲の、哺乳動物の食餌中に通常発見される、任意の脂肪酸を指すものと理解されるだろう。そのような少量の脂肪酸は、任意に、全組成物の約３重量％までの量で含まれることができる。
【００６７】
Ｃ１６：１およびＣ１８：１を含む本明細書で論じられるＭＵＦＡは、典型的には処方されたものであり、すなわち、個々の成分が、先ずその原料物質から精製および純化され、その後、混ぜ合わされて、本明細書に記載の所望の組成物を生成するということを意味する。さらに、Ｃ１６：１およびＣ１８：１の所望の重量百分率に達するように、天然に存在する食品は、本明細書に記載のＭＵＦＡの少なくとも１種を用いて、該食品を、添加する、調整する、または、置換することによって、本明細書に記載の組成物に強化されることができると考えられる。任意に、飽和脂肪酸および多価不飽和脂肪酸を含む他の脂肪酸は、前記強化組成物中に含まれることができるが、しかしながら、好ましくはそのような任意の脂肪酸は組成物全体の約１５重量％を超えることはできない。
【００６８】
本発明および本発明の範囲内に包含される代表的な組成物が、以下の例に提供される。下記のこれらの例および調製物は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することができるために提供される。これらは、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではなく、単にその実例となり代表的なものであるとみなされるべきである。
【００６９】
【表７】
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【００７０】
【表８】
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【００７１】
【表９】
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【００７２】
【表１０】
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【００７３】
【表１１】
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【００７４】
【表１２】
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【００７５】
【表１３】
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【００７６】
【表１４】
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【００７７】
例１
３４匹の雄アポＥノックアウトマウスについて動物食餌実験を実施した。マウスに２月齢まで標準マウス固形飼料を与え、その後、無作為に２群（各々ｎ＝１７）に割り振った。一つの群のマウスには、半固体形態の飽和脂肪およびＣ１８：１を含む対照西洋高脂肪食（対照食）を与えた。もう一方の群には、液体形態の高濃度のＣ１６：１およびＣ１８：１脂肪酸食（処置食）を与えた。食餌の粘稠度は、混合してペーストとし、水は自由に入手できた。食餌の開始後、第８週および第１２週に血液試料を得た。第１２週に、すべてのマウスを屠殺し、結果を分析した。
【００７８】
【表１５】
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【００７９】
対照食中の２０％飽和脂肪は、カプリル、デカン、ラウリン、ミリスチンおよびパルミチン飽和脂肪酸を含む、合計で９０重量％を超える飽和脂肪酸、ならびに、合計で約１０重量％の一価不飽和オレイン酸および他の脂肪酸を含む。
【００８０】
大動脈病変の定量
アテローム性動脈硬化病変によって占有される大動脈の表面積は、Ｐａｌｉｎｓｋｉら、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｉｔｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｏｆ  ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ＬＤＬ  ｉｎ  ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌ
ｅｒｏｓｉｓ」、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓ  Ｂｉｏｌ．、１９９５；１５（１０）：１５６９−７６から改変した手法を用いて、正面（ｅｎ  ｆａｃｅ）オイルレッドＯ染色により定量した。マウスを殺した後、カテーテルを左心室に挿入し、動脈樹をＰＢＳ（２５ｍｌ）、次いで４％緩衝ホルムアルデヒド（２０ｍｌ、ＰＨ７．４）で１００ｍｍＨｇの圧力下でかん流した。顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  Ｍ５００）下で、心臓に付属した大動脈全体を解剖し、外膜脂肪を解剖した。上行大動脈を横切開し、大動脈基部（ａｏｒｔｉｃ  ｒｏｏｔ）のアテローム性動脈硬化症の評価のために心臓をヒストチョイス（ｈｉｓｔｏ−ｃｈｏｉｃｅ）に配置した。残りの大動脈をスーダンＩＶで染色した。大動脈を縦方向に開き、黒色シリコーン被覆皿上に正面に向けてピンで留め、ＰＢＳに浸漬させた間に撮影した。病変領域を、コンピュータ制御のデジタル顕微鏡面積測定ソフトウェアパッケージ（Ｉｍａｇｅ−ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ、バージョン４．０  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ、ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）を用いて、スーダンＩＶレッド染色によって占有される表面積百分率として、定量した。
【００８１】
大動脈洞病変の定量
ヒストチョイス中で固定後、心臓を最適切断温度（ＯＣＴ：ｏｐｔｉｍｕｍ  ｃｕｔｔｉｎｇ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）コンパウンドに配置し、ドライアイス上で凍結させた。心尖（ａｐｅｘ）から始まり、大動脈弁領域を通って上行大動脈中までに至る、クリオスタット切片（１０μｍ）を、大動脈洞レベルで切り、スーパーフロスト（ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ）顕微鏡グラススライド上に採取し、分析するまで−２０℃で保存した。切片をオイルレッドＯおよびヘマトキシリン（Ｓｉｇｍａ）で染色し、ライトグリーン（Ｓｉｇｍａ）で対比染色した。大動脈洞について、各々８０μｍ離れた５切片の病変を、コンピュータ制御のデジタル顕微鏡面積測定ソフトウェアパッケージ（Ｉｍａｇｅ−ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ、バージョン４．０  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ、ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）を用いて測定した。
【００８２】
血清脂質のアッセイ
開始時および２カ月時点において尾静脈から得て採取した血清試料、ならびに３月齢における安楽死の際に心臓穿刺により採取した血清試料を、個別に血中脂質について評価した。Ｒｏｃｈｅ自動臨床化学分析装置のトリグリセリド、コレステロールおよびＨＤＬ−コレステロールの直接定量測定のための酵素的インビトロ試験を用いた。すべての試薬はＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ  ＩＮ）から入手したものであり、装置はＨｉｔａｃｈｉ  ９１１である。すべてのアッセイで、ＮＩＳＴ（アメリカ国立標準技術研究所（ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ））トレーサブルな、またＲｏｃｈｅから入手したものである、校正標準を用いた比色分析法を使用した。さらに、ＣＤＣ（アメリカ疾病予防管理センター（ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ））の脂質標準化プログラムを使用して、そのアッセイの結果を検証した。
【００８３】
統計分析
データは平均±ＳＤとして示す。統計分析はｔ検定により実施した。Ｐ＜０．０５は統計的有意性を示す。
【００８４】
体重の結果
ベースライン、第４週および第１２週のフォローアップにおいて、対照群と処置群との間に体重の有意差は認められなかった（Ｐ＞０．０５、図１）。図１は、それぞれの食餌開始後の時間の関数としての対照群および処置群の体重（ｇ）を表すチャートである。ベースラインおよびフォローアップ時点で有意差はなかった。
【００８５】
血液脂質レベル
表７は、得られた血中脂質の血清中濃度を示す。第８週および第１２週のフォローアップのいずれにおいても二つの群の間に総コレステロールおよび総トリグリセリドのレベルの有意差はなかった。実験処置群におけるＨＤＬ−コレステロールは、ベースライン、ならびに、第８週および第１２週のフォローアップにおける対照群と比較して、有意に増加した（Ｐ＜０．０１）。
【００８６】
【表１６】
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【００８７】
表７は、対照西洋食および処置食を受けた動物に対して、ベースライン、第８週および第１２週のフォローアップでの血中脂質レベルをまとめたものである。
【００８８】
アテローム性動脈硬化病変の形成
大動脈基部のオイルレッドＯ染色は、対照群において、大動脈洞の重度のアテローム性動脈硬化症を示した（図２、表８）。処置群では、アテローム性動脈硬化病変の大きさにおいて、対照群と比較して４７％と有意な減少が明らかとなった（対照０．３３±０．０９  対  処置０．１８±０．０７ｍｍ２  Ｐ＜０．００）。実験処置群の大動脈におけるアテローム性動脈硬化病変領域もまた、有意に抑制された（表９）（対照９．６３±２．８０％  対  処置３．１７±１．６０％  Ｐ＜０．００１）。
【００８９】
【表１７】
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【００９０】
【表１８】
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【００９１】
図２は、対照西洋食（白丸）および処置食（赤丸）を与えられた動物由来の下行胸部大動脈における食餌３カ月後の病変領域を示す。実線の棒線（ｓｏｌｉｄ  ｂａｒ）は病変の大きさの平均を表す。対照西洋食（Ａ）を受けた動物由来および処置食（Ｂ）を受けた動物由来のアテローム性病変を検出するために、大動脈基部の代表的オイルレッドＯ染色を実施した。結果は、処置食を受けた動物において、大動脈基部の洞のアテローム性動脈硬化症の程度における、劇的な低下を示す。
【００９２】
処置群では、対照群と比較して、第８週および第１２週のフォローアップ時でのＨＤＬ−コレステロールにおける有意な増加が示された。この効果は、食餌中の高濃度のＣ１６：１およびＣ１８：１に起因すると考えられるかもしれない。さらに、データは、高濃度のＣ１６：１およびＣ１８：１の投与が、大動脈基部でのアテローム性動脈硬化形成を有意に抑制することができ、アテローム形成性アポＥ欠損マウスにおける大動脈のアテローム性動脈硬化領域を劇的に減少させることができることを示唆する。
【００９３】
上述の発明は、明瞭化および理解のために、説明および例を通して、いくらか詳細に記載されている。添付の特許請求の範囲内で変更および修正を行うことができることは、当業者には明らかであろう。したがって、上記の記述は、限定的なものではなく、説明を意図したものと理解されるべきである。したがって、本発明の範囲は、上記の記述を基準として決定されるべきではなく、その代わりに、下記添付の特許請求の範囲を基準として、当該特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲と共に、決定されるべきである。
【００９４】
本出願において引用されるすべての特許、特許出願および刊行物は、あらゆる目的のために、個々の特許、特許出願または刊行物の各々が、個々に示されているのと同じ程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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