(57)【要約】      （修正有）【課題】動物におけるヒト血漿プレカリクレイン（ＰＫＫ）のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を低下させるための化合物、組成物、及び方法を提供する。【解決手段】ＰＫＫのｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を低下させるためのアンチセンス化合物及びＰＫＫの発現を低下させる方法を開示する。このような方法、化合物、及び組成物は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、及び脳浮腫などのＰＫＫと関連する疾患、障害、及び容態を治療、予防、または寛解させるのに有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３０〜２２２６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号５７０の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項３】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号７０５の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項４】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１６６６の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項５】
２０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号５７０の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項６】
２０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号７０５の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項７】
１６個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１６６６の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項８】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号６２、７２、１０３、２１３、３１２、３３４〜３３９、３４４、３４５、３４６、３４８、３４９、３５１、３６９、３７３、３８１、３８２、３８３、３８５、３８７〜３９１、３９９、４１１、４１２、４１４、４１６、４４４、４４６〜４４９、４５２、４５３、４５４、４５９、４６０、４６２〜４７２、４７３、４７６、４７７、４７９、４８０、４８１、４８４、４８９〜４９５、４９７、５００、５０４、５０６、５２２、５２６、５３５、５５８、５５９、５６０、５６４、５６６、５６８〜５７１、５７３、５７６、５７７、５７８、５８７、５９５、５９７〜６０４、６０７、６０８、６１０、６１３、６１５、６１８、６１９、６２２、６２３、６２４、６３３、６３５、６３６、６３８、６３９、６４０、６４２、６４３、６４５、６５２、６５５〜６５８、６６０、６６１、６７０、６７４〜６７９、６８４、６８５、６９８、７０４、７０５、７０７、７０８、７１３、７１６、７１７、７２８、７３４、７３６、７６７、７６８、７７６、７９７、７９８、８００、８
０２、８１０、８１５、８７６、８８０、８８２、８８３、８８６、８９１、９０１〜９０５、９０８〜９１１、９２２、９２３、９２４、９３１、９４２、９５０〜９５７、９７２、９７４、９７８、９７９、９８０、９８７〜９９１、１００５、１０１７〜１０２１、１０２５、１０２６、１０２９、１０３０、１０３２、１０３４、１０３５、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０４６、１０５１、１０５４、１０５９、１０６０、１０６１、１０６４、１０６５、１０６６、１０７５、１０７６、１０８７、１０８９、１１１１、１１１４、１１１６、１１１７、１１２５、１１３３、１１５３、１１６９、１１７７、１１８１、１１８２、１１８７、１１９６、１２００、１２１４、１２２２、１２６７、１２７６、１２７７、１２８５、１２８６、１２８９、１２９０、１２９１、１３０３、１３６７、１３８９、１３９３、１３９８〜１４０１、１４０６、１４０７、１４０８、１４１１、１４１９〜１４２２、１４２６、１４３０、１４３１、１４３２、１４３４〜１４３７、１４３９、１４４０、１４４３、１４４４、１４５１、１４５２、１４７１、１５１６、１５２７、１５３５、１５３７、１５３８、１５３９、１５４０、１５４１、１５６３、１５６４、１５６７、１５６８、１６１６、１６１７、１６２３、１６２９、１６６４、１６６５、１６６６、１６７９、１６８７、１７３４、１８０４、１８７６、１８８６、１９１５、２００８、２０１８、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項９】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも８０％ｍＲＮＡ阻害を達成する、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号６２、７２、１０３、２１３、３３４〜３３９、３４４、３４６、３４８、３４９、３５１、３８１、３８２、３８３、３８５、３８９、３９０、３９１、４４６、４４８、４５２、４５３、４５４、４６６〜４７３、４７６、４８１、４８４、４９１、４９２、４９４、４９５、４９７、５０４、５２６、５５８、５５９、５６６、５６８〜５７１、５７６、５７８、５８７、５９５、５９７、５９８、６００〜６０４、６０７、６１０、６１３、６１８、６１９、６２４、６３５、６３８、６３９、６４５、６５２、６５６、６５７、６５８、６６０、６７４、６７５、６７６、６８４、６９８、７０４、７０５、７０７、７１３、７１６、７６８、８７６、８８０、９０１〜９０５、９０８〜９１１、９２２、９２３、９２４、９３１、９４２、９５１、９５４〜９５７、９７２、９７４、９７８、９７９、９８７、９８８、９９０、１００５、１０１９、１０２０、１０２１、１０２５、１０３２、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０５４、１０５９、１０６０、１０６１、１０６４、１０６５、１０６６、１０７５、１１１１、１１１６、１１１７、１１２５、１１３３、１１５３、１１６９、１１７７、１２００、１２２２、１２６７、１２８５、１２９０、１２９１、１３０３、１３６７、１３９８、１３９９、１４０１、１４０６、１４０８、１４１１、１４１９、１４２０、１４２１、１４２６、１４３０、１４３１、１４３２、１４３４〜１４３７、１４４０、１４４３、１４４４、１４５１、１５３７〜１５４０、１５６３、１６１６、１６７９、１６８７、１８０４、２００８、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項１１】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも８５％ｍＲＮＡ阻害を達成する、請求項１０に記載の化合物、
【請求項１２】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３５１、３８２、３９０、３９１、４４６、４４８、４５２、４５３、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７６、４８１、４９１、４９５、５０４、５５８、５６６、５６８、５７０、５７１、５７８、５８７、５９７、５９８、６００、６０４、６１３、６３５、６３８、６４５、６５６、６５８、６６０、６７４、６７５、６８４、７０４、７０５、８８０、９０１〜９０５、９０９、９２２、９３１、９５１、９５４、９５６、９９０、１００５、１０２０、１０３２、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０５４、１０７５、１１１１、１１２５、１１３３、１１５３、１２００、１２６７、１２９１、１３０３、１３９８、１３９９、１４０１、１４０６、１４２０、１４２６、１４３０、１４３１、１４３４、１４３５、１４３６、１４４０、１４４３、１４５１、１５３７〜１５４０、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項１３】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも９０％ｍＲＮＡ阻害を達成する、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３９１、４４８、４６８、４６９、５６８、５７０、５９８、６３５、６５８、６７４、６８４、７０５、９０１、９０３、９０４、９２２、９９０、１２６７、１２９１、１４２０、１４３０、１４３１、１４３４、１４３５、１４３６、１５３７、１５３８、及び１５４０の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項１５】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも９５％ｍＲＮＡ阻害を達成する、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３３８、３４６、３４９、３８２、３８３、３９０、４４８、４５２、４５３、４５４、４９５、５２６、５５９、５７０、５８７、５９８、６３５、６６０、７０５、９０１、９０３、９０４、９０８、９２３、９３１、９５５、９７４、９８８、９９０、１０２０、１０３９、１０４０、１１１１、１１１７、１２６７、１２９１、１３４９、１３５２、１３６７、１３８９、１３９３、１３９９、１４０１、１４０８、１４１１、１４２６、１４９９、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６３、１５６４、１５６８、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６２３、１６２４、１６４３、１６６１、１６６５、１６６６、１６７３、１６７９、１６９５、１７２０、１８０４、１８１７、１８７６、１８８１、１８８６、１９４０、１９４７、２００８、２０１８、２０１９、２０３１、２０４４、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項１７】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．４以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３４９
、３８２、４５３、４５４、４９５、５２６、５７０、５８７、５９８、６３５、６６０、９０１、９０３、９０４、９３１、９５５、９９０、１０２０、１１１１、１２６７、１３４９、１３５２、１３６７、１３８９、１３９９、１４０８、１４１１、１４２６、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６３、１５６４、１５６８、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６２３、１６４３、１６６１、１６６５、１６６６、１６７３、１６９５、１８０４、１８７６、１８８１、２０１９、２０４４、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項１９】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．３以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３８２、４５３、４９５、５２６、５７０、５８７、５９８、６３５、９０１、９０４、９３１、９５５、１０２０、１１１１、１３４９、１３５２、１３８９、１４２６、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６４、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６６５、１６６６、１８０４、１８７６、１８８１、２０１９、２０４４、２１０１、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２１】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．２以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、４９５、５８７、５９８、６３５、１３４９、１３５２、１３８９、１５１６、１５４４、１５４８、１５６９、１５９８、１６１７、１６６５、１６６６、１８０４、１８８１、及び２０１９の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２３】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．２未満のＩＣ５０（μＭ）を達成する、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２５】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修
飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２６】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２７】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２１の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２８】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４８の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項２９】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項３０】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２５の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項３１】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４１の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項３２】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３９の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項３３】
１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつＰＫＫ核酸のエキソン９、エキソン１２、またはエキソン１４の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項３４】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項２４〜３３に記載の化合物。
【請求項３５】
一本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、修飾されたヌクレオシド間結合である、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である、請求項３６に記載の化合物。
【請求項３８】
各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である、請求項３７に記載の化合物。
【請求項３９】
少なくとも１つのヌクレオシドは、修飾された核酸塩基を含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
前記修飾された核酸塩基は、５−メチルシトシンである、請求項３９に記載の化合物。
【請求項４１】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾された糖を含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４２】
前記修飾された糖は、２’修飾された糖、ＢＮＡ、またはＴＨＰである、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
前記修飾された糖は、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−メチル、拘束されたエチル、ＬＮＡ、または３’−フルオロ−ＨＮＡのうちのいずれかである、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、拘束されたエチルヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシド、または３’−フルオロ−ＨＮＡヌクレオシドを含む、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４５】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウィングセグメント、及び
５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウィングセグメント
を含み、この中で、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントと３’ウィングセグメントの間に位置取られ、かつこの中で各ウィングセグメントの各ヌクレオシドは修飾された糖を含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４６】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４７】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、１９個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４８】
前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、１８個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４９】
以下の式、すなわち、Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物であって、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である、化合物。
【請求項５０】
以下の式、すなわち、ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物であって、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である、化合物。
【請求項５１】
以下の式、すなわち、ｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｋｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ
Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物であって、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｋ＝ｃＥｔ修飾されたヌクレオシド、
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である、化合物。
【請求項５２】
以下の式
【化１】
2020072732.tif 000231
による修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、化合物。
【請求項５３】
以下の式
【化２】
2020072732.tif 000232
による修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、化合物。
【請求項５４】
以下の式
【化３】
2020072732.tif 000233
による修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、化合物。
【請求項５５】
請求項１〜５４のいずれか一項に記載のの化合物またはその塩と、医薬として許容し得る担体または希釈剤のうちの少なくとも１つとを含む、組成物。
【請求項５６】
請求項１〜５５のいずれか一項に記載の化合物または組成物を動物へ投与することを含む、方法。
【請求項５７】
前記動物はヒトである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記化合物を投与することは、ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態を予防、治療、または寛解させる、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態とは、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、脳浮腫、血栓症、塞栓症、血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、脳卒中、または梗塞である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
炎症性疾患または血栓塞栓症性疾患を治療するための薬剤の製造のための請求項１〜５９のいずれか一項に記載の化合物または組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（配列表）
本出願は、電子フォーマットにおける配列表とともに出願している。当該配列表は、２０１４年８月１５日作成のＢＩＯＬ０１７２ＷＯＷＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという表題のファイルとして提供され、これはおよそ６３２ＫＢの大きさである。当該配列表の電子フォーマットにおける情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（分野）
動物におけるヒト血漿プレカリクレイン（ＰＫＫ）のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を低下させるための化合物、組成物、及び方法が提供される。このような組成物及び方法は、炎症性容態及び血栓塞栓性容態を治療、予防、または寛解させるのに有用である。
【背景技術】
【０００３】
血漿プレカリクレイン（ＰＫＫ）は、血漿カリクレイン（ＰＫ）の前駆体であり、ＫＬＫＢ１遺伝子によってコードされる。ＰＫＫは、血液凝固、線維素溶解、キニン生成、及び炎症の表面依存性活性化に関与する糖タンパク質である。ＰＫＫは、内部Ａｒｇ−Ｉｌｅペプチド結合の切断による第ＸＩＩａ因子によって、ＰＫへと変換される。ＰＫは、キニノーゲンからキニンを遊離し、また、プラスミノーゲンからプラスミンを生成する。ＰＫは、炎症、血圧制御、凝固、及び疼痛におけるある役割を担っているいくつかのタンパク質からなるキニン−カリクレイン経路の一員である。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書で提供されるのは、ＰＫＫのｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節するための化合物、組成物、及び方法である。ある実施形態において、ＰＫＫのｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節するのに有用な化合物は、アンチセンス化合物である。ある実施形態において、当該アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０００５】
ある実施形態において、調節は細胞または組織において生じることができる。ある実施形態において、当該細胞または組織は動物である。ある実施形態において、当該動物はヒトである。ある実施形態において、ＰＫＫｍのＲＮＡレベルは低下する。ある実施形態において、ＰＫＫタンパク質レベルは低下する。このような低下は、時間依存的な様式でまたは用量依存的な様式で生じることができる。
【０００６】
また提供されるのは、ＰＫＫと関連した疾患、障害、及び容態を予防、治療、及び寛解させるのに有用な化合物、組成物、及び方法である。ある実施形態において、このようなＰＫＫと関連する疾患、障害、及び容態は炎症性疾患である。ある実施形態において、当該炎症性疾患は急性または慢性炎症性疾患であり得る。ある実施形態において、このような炎症性疾患には、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、及び脳浮腫が含まれ得る。ある実施形態において、このようなＰＫＫと関連する疾患、障害、及び容態は、血栓塞栓性疾患である。ある実施形態において、このような血栓塞栓性疾患には、血栓症、血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、脳卒中、及び梗塞が含まれ得る。
【０００７】
このような疾患、障害、及び容態は共通して、１つ以上の危険因子、原因、または転帰を有することができる。
【０００８】
炎症性疾患の発症についてのある危険因子及び原因には、炎症性疾患及び環境因子に対
する遺伝的な素因を含む。ある実施形態において、対象は、突然変異した補体１エステラーゼ阻害薬（Ｃ１−ＩＮＨ）遺伝子または突然変異した第ＸＩＩ遺伝子を有する。ある実施形態において、当該対象は、アンギオテンシン変換酵素阻害薬（ＡＣＥ阻害薬）またはアンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を摂取してきたかまたは摂取中である。ある実施形態において、当該対象は、血管浮腫に至るアレルギー反応をこれまで有している。ある実施形態において、当該対象は、Ｉ型ＨＡＥを罹患している。ある実施形態において、当該対象は、ＩＩ型ＨＡＥを有している。ある実施形態において、当該対象は、ＩＩＩ型ＨＡＥを有している。
【０００９】
炎症性疾患の発症と関連したある転帰には、四肢（すなわち、手、足、腕、脚）、腸（腹部）、顔、生殖器、喉頭（すなわち、発声器）を含む種々の身体部分における浮腫／腫脹、血管透過性、血管漏出、全身性炎症、腹部痛、腹部膨満、嘔吐、下痢、痒い皮膚、呼吸器（喘息）反応、鼻炎、アナフィラキシー、気管支収縮、低血圧、昏睡、及び死亡が含まれる。
【００１０】
血栓塞栓性疾患の発症についてのある危険因子及び原因には、血栓塞栓性疾患に対する遺伝的な素因、不動、手術（特に、整形外科手術）、悪性病変、妊娠、高齢、経口避妊薬の使用、心房細動、以前の血栓塞栓性容態、慢性炎症性疾患、及び遺伝性もしくは後天性の血栓形成促進性凝固障害が含まれる。血栓塞栓性容態の発症と関連したある転帰には、罹患した血管を流れる血流の低下、組織の死滅、及び死亡が含まれる。
【００１１】
ある実施形態において、治療方法には、治療を必要とする個体へＰＫＫアンチセンス化合物を投与することを含む。ある実施形態において、治療方法には、治療を必要とする個体へＰＫＫアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例１１に説明する血液試料由来の高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）のウェスタンブロットによる定量化である。
【図２】図２は、実施例１４に説明する血液試料由来のＨＭＷＫのウェスタンブロットによる定量化である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
前述の一般的な説明及び以下の詳細な説明は両方とも、例示的かつ説明的であるに過ぎず、かつ、主張する通り、本発明を制限するものではないことは理解されるべきである。本明細書で、別段の具体的な記載がない限り、単数形の使用は複数形を含む。本明細書で使用する場合、「または」の使用は、別段の記載がない限り、「及び／または」を意味する。さらに、「を含むこと」という用語の使用は、「を含む」及び「を含んだ」などの他の形態と同様に、限定的ではない。また、「要素」もしくは「構成要素」などの用語は、別段の具体的な記載がない限り、１単位を含む要素及び構成要素と１つを超えるサブユニットを含む要素及び構成要素との両方を包含する。
【００１４】
本明細書で使用する節の見出しは、組織化目的のためにのみあり、説明する対象事項を制限するものとして解釈されるべきではない。特許、特許出願、文献、書籍、及び専門書を含むがこれらに限定せず、本出願において引用する文書全部または文書の部分は、本明細書で論議する文書の部分について及び当該文書の全体において参照により本明細書により明確に組み込まれる。
【００１５】
（定義）
別段の具体的な定義が提供されていない限り、本明細書で説明する分析化学、合成有機化学、ならびに医化学及び医薬化学に関連して利用する命名法ならびに手段及び技術は、
当該技術分野で周知のものであり、かつ当該技術分野において普遍的に使用されている。標準的な技術は、化学合成及び化学分析に使用され得る。許可される場合、特許、出願、出願公開ならびに他の公開物、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）などのデータベースを通じて得ることのできるＧＥＮＢＡＮＫ受託番号及び関連配列情報、ならびに本明細書での開示において至る所で言及される他のデータはすべて、本明細書で論議する文書の部分についての、及び当該文書の部分の全体における参照により組み込まれる。
【００１６】
別段の記載がない限り、以下の用語は以下の意味を有する。
【００１７】
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（２’−ＭＯＥ及び２’−ＯＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３及びＭＯＥともいう）は、フラノース環の２’位のＯ−メトキシエチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾した糖は、修飾された糖である。
【００１８】
「２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド」（「２’−ＭＯＥヌクレオシド」ともいう）は、２’−ＭＯＥ修飾された糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００１９】
「２’−置換ヌクレオシド」は、ＨもしくＯＨ以外のフラノース環の２’位において置換基を含むヌクレオシドを意味する。ある実施形態において、２’置換ヌクレオシドには、二環式糖修飾を有するヌクレオシドを含む。
【００２０】
「２’−デオキシヌクレオシド」は、ヌクレオシドの糖部分の２’位において水素を含むヌクレオシドを意味する。
【００２１】
「３’標的部位」は、特定のアンチセンス化合物の３’末端ヌクレオチドと相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００２２】
「５’標的部位」は、特定のアンチセンス化合物の５’末端ヌクレオチドと相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００２３】
「５−メチルシトシン」は、５位に結合したメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは、修飾された核酸塩基である。
【００２４】
「約」は、値の±７％以内を意味する。例えば、「化合物はＰＫＫの少なくとも約７０％阻害に影響した」と記載する場合、当該ＰＫＫレベルは６３％及び７７％の範囲内で阻害されることが含意される。
【００２５】
「併用して投与される」は、２つの医薬の両方の薬理学的効果が患者において同時に顕著であるいずれかの様式における当該２つの医薬の併用投与を指す。併用投与は、両方の医薬が単一の医薬組成物において、同じ剤形で、または同じ投与経路によって投与されることを必要としない。両方の医薬の効果は、同時に顕著になる必要はない。当該効果は、ある時間に重複している必要があるに過ぎず、同一の広がりを持つ必要はない。
【００２６】
「投与すること」は、医薬を動物へ提供することを意味し、医学専門家による投与及び自己投与を含むが、これらに限定しない。
【００２７】
「寛解」は、容態または疾患の重症度の少なくとも１つの指標の減弱、遅延、停止、または逆転を指す。指標の重症度は、当業者に公知の主観的尺度または客観的尺度によって判断してもよい。
【００２８】
「動物」は、ヒトまたは、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ならびにサル
及びチンパンジーを含むがこれらに限定しない非ヒト霊長類を含むがそれらに限定しない非ヒト動物を指す。
【００２９】
「アンチセンス活性」は、アンチセンス化合物の標的核酸に対する当該アンチセンス化合物のハイブリッド形成に起因し得るいずれかの検出可能なまたは測定可能な活性を意味する。ある実施形態において、アンチセンス活性とは、標的核酸またはこのような標的核酸によってコードされるタンパク質の量または発現の低下である。「アンチセンス化合物」は、水素結合を通じて標的核酸へのハイブリッド形成を受けることのできるオリゴマー化合物を意味する。アンチセンス化合物の例としては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及び占有率ベースの化合物など、一本鎖及び二本鎖の化合物が挙げられる。
【００３０】
「アンチセンス化合物」は、水素結合を通じて標的核酸へのハイブリッド形成を受けることのできるオリゴマー化合物を意味する。アンチセンス化合物の例としては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及び占有率ベースの化合物など、一本鎖及び二本鎖の化合物が挙げられる。
【００３１】
「アンチセンス阻害」は、標的核酸レベルと比較して標的核酸と相補的なアンチセンス化合物の存在下での、または当該アンチセンス化合物の非存在下での、標的核酸レベルの低下を意味する。「アンチセンス機序」とは、化合物と標的核酸とのハイブリッド形成を包含する当該機序全部であり、この中で、ハイブリッド形成の結果または効果は、例えば転写またはスプライシングを包含する細胞機械の付随した失速による標的分解または標的占有のいずれかである。
【００３２】
「アンチセンス機序」とは、化合物と標的核酸とのハイブリッド形成を包含する当該機序全部であり、この中で、ハイブリッド形成の結果または効果は、例えば転写またはスプライシングを包含する細胞機械の付随した失速による標的分解または標的占有のいずれかである。
【００３３】
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸の対応するセグメントへのハイブリッド形成を許容する核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。「塩基相補性」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基と標的核酸における対応する核酸塩基との精確な塩基対形成（すなわち、ハイブリッド形成）のための能力を指し、対応する核酸塩基間のワトソン・クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン水素結合によって仲介される。
【００３４】
「塩基相補性」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基と標的核酸における対応する核酸塩基との精確な塩基対形成（すなわち、ハイブリッド形成）のための能力を指し、対応する核酸塩基間のワトソン・クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン水素結合によって仲介される。
【００３５】
「二環式糖」は、２つの原子の架橋によって修飾されるフラノース環を意味する。二環式糖は、修飾された糖である。
【００３６】
「二環式ヌクレオシド」（二環式核酸またはＢＮＡともいう）は、糖環の２つの炭素原子を結合する架橋を含む糖部分を有し、それにより二環式環系を形成するヌクレオシドを意味する。ある実施形態において、当該架橋は、糖環の４’−炭素及び２’−炭素を結合する。
【００３７】
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物のいずれかの末
端に組み込まれた化学修飾を意味する。
【００３８】
「ｃＥｔ」または「拘束されたエチル」は、４’−炭素及び２’−炭素を結合する架橋を含む糖部分を有する二環式ヌクレオシドを意味し、この中で、当該架橋は式：４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’を有する。
【００３９】
「ｃＥｔ修飾されたヌクレオシド」（「拘束されたエチルヌクレオシド」ともいう）は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００４０】
「化学的に別個の領域」は、ある方法で同じアンチセンス化合物の別の領域とは化学的に異なるアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を有さないヌクレオシドを有する領域とは化学的に別個である。
【００４１】
「キメラアンチセンス化合物」は、少なくとも２つの化学的に別個の領域を有するアンチセンス化合物を意味し、各位置は複数のサブユニットを有する。
【００４２】
「併用投与」は、個体への２つ以上の医薬剤の投与を意味する。当該２つ以上の医薬剤は、単一の医薬組成物中にあってもよく、または個別の医薬組成物中にあってもよい。当該２つ以上の医薬剤の各々は、同じまたは異なる投与経路を通じて投与してもよい。併用投与は、並行投与または連続投与を包含する。
【００４３】
「相補性」は、第一の核酸と第二の核酸の核酸塩基間の対形成のための能力を意味する。
【００４４】
「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「を含んでいる」は、記載した工程もしくは要素または工程もしくは要素の群の包含を含意するが、その他の工程もしくは要素または工程もしくは要素の群を排除するものではないことは理解される。
【００４５】
「連続する核酸塩基」は、互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
【００４６】
「を設計している」または「へ設計された」は、選択した核酸分子と特異的にハイブリッド形成するオリゴマー化合物を作製する過程を指す。
【００４７】
「希釈剤」は、薬理学的活性を欠失するが医薬として必要または所望である、組成物中の成分を意味する。例えば、注射する薬剤において、当該希釈剤は液体、例えば、塩類溶液であってもよい。
【００４８】
「用量」は、単回投与でまたは指定した時間において提供される、医薬剤の指定した量を意味する。ある実施形態において、用量は、１、２、またはそれより多数回のボーラス、錠剤、または注射で投与してもよい。例えば、皮下投与が所望であるある実施形態において、所望の用量は単回注射によって容易には収容されない容積を必要とし、それゆえ、２回以上の注射を使用して、所望の用量を達成してもよい。ある実施形態において、当該医薬剤は、延長した時間にわたってまたは持続的に注入によって投与される。用量は、１時間、１日、１週間、または１か月間当たりの医薬剤の量として記載してもよい。
【００４９】
「下流」は、核酸の３’末端またはＣ末端へ向かう相対的な方向を指す。
【００５０】
活性を調節する脈絡または容態を治療もしくは予防する脈絡での「有効量」は、このような調節、治療、または予防を必要とする対象への、当該効果の調節に有効な、または当該容態の治療もしくは予防もしくは改善に有効な当該量の医薬剤の、単回用量におけるまたは一連の一部としてのいずれかの投与を意味する。当該有効量は、治療されることになっている個体の健康及び身体条件、治療されることになっている個体の分類学上の群、組成物の製剤、個体の医学的容態の評価、及び他の関連因子に応じて、個体間で変えてもよい。
【００５１】
「効能」は、所望の効果を生じることができる能力を意味する。
【００５２】
「発現」には、遺伝子のコードした情報が細胞中に存在しかつ作動する構造へと変換される機能全部を含む。このような構造には、転写及び翻訳の産物を含むが、これに限定しない。
【００５３】
「完全に相補的な」または「１００％相補的な」は、第一の核酸の各核酸塩基が第二の核酸中の相補的な核酸塩基を有することを意味する。ある実施形態において、第一の核酸はアンチセンス化合物であり、かつ標的核酸は第二の核酸である。
【００５４】
「ギャップマー」は、１つ以上のヌクレオシドを有する外部領域間に、ＲＮアーゼＨ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内部領域が位置取られたキメラアンチセンス化合物を意味し、この中で、内部領域を含むヌクレオシドは、外部領域を含むヌクレオシドまたは複数のヌクレオシドとは化学的に別個である。当該内部領域は「ギャップ」と呼ばれることがあり、かつ当該外部領域は「ウィング」と呼ばれることがある。
【００５５】
「ハイブリッド形成」は、相補的な核酸分子のアニーリングを意味する。ある実施形態において、相補的な核酸分子には、アンチセンス化合物及び標的核酸が含まれるが、これらに限定しない。ある実施形態において、相補的な核酸分子には、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び核酸標的が含まれるが、これに限定しない。
【００５６】
「炎症性疾患を有する動物を識別すること」は、炎症性疾患と診断されたまたは炎症性疾患を発症しやすい動物を識別することを意味する。炎症性疾患を発症しやすい個体には、環境因子を含む炎症性疾患を発症するための１つ以上の危険因子を有する個体、１つ以上の炎症性疾患に対して個人歴もしくは家族歴、または遺伝的なかかりやすさを有する個体を含む。このような識別は、個体の病歴及び、遺伝子検査などの標準的な臨床試験もしくは判定を評価することを含むいずれかの方法によって達成され得る。
【００５７】
「ＰＫＫ関連疾患を有する動物を識別すること」は、ＰＫＫ関連疾患と診断された、またはＰＫＫ関連疾患を発症しやすい動物を識別することを意味する。ＰＫＫ関連疾患を発症しやすい個体には、１つ以上のＰＫＫ関連疾患に関する個人歴もしくは家族歴、または遺伝的なかかりやすさを有することを含む、ＰＫＫ関連疾患を発症させるための１つ以上の危険因子を有する個体を含む。このような識別は、個体の病歴及び、遺伝子検査などの標準的な臨床試験もしくは判定を評価することを含むいずれかの方法によって達成され得る。
【００５８】
「血栓塞栓性疾患を有する動物を識別すること」は、血栓塞栓性疾患と診断されたまたは血栓塞栓性疾患を発症しやすい動物を識別することを意味する。血栓塞栓性疾患を発症しやすい個体には、１つ以上の血栓塞栓性疾患、不動、手術（特に整形外科手術）、悪性病変、妊娠、高齢、経口避妊薬の使用、心房細動、以前の血栓塞栓性容態、慢性炎症性疾患、及び遺伝性もしくは後天性の血栓形成促進性凝固障害の個人歴もしくは家族歴、または遺伝的なかかりやすさを有することを含む、血栓塞栓性疾患を発症させることについて
の１つ以上の危険因子を有する個体を含む。このような識別は、個体の病歴及び、遺伝子検査などの標準的な臨床試験もしくは判定を評価することを含むいずれかの方法によって達成され得る。
【００５９】
「直接隣接する」は、直接的に隣接する要素間に何ら介在する要素がないことを意味する。「個体」は、治療または療法のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００６０】
「個体」は、治療または療法のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００６１】
「ＰＫＫを阻害すること」は、ＰＫＫのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルまたは発現を低下させることを意味する。ある実施形態において、ＰＫＫのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのＰＫＫアンチセンス化合物の非存在下でＰＫＫのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルの発現と比較して、ＰＫＫを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＰＫＫを標的とするアンチセンス化合物の存在下で阻害される。
【００６２】
「発現または活性を阻害すること」は、当該発現または活性の低下または遮断を指し、発現または活性の全体的な排除を必ずしも示してはいない。
【００６３】
「ヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の化学的な結合を指す。
【００６４】
「連結されたヌクレオシド」は、ヌクレオシド間結合によって互いに連結された隣接するヌクレオシドを意味する。
【００６５】
「ロックされた核酸」または「ＬＮＡ」または「ＬＮＡヌクレオシド」は、当該ヌクレオシド糖単位の４’位と２’位の間で２つの炭素原子を結合する架橋を有し、それにより二環式糖を形成する核酸単量体を意味する。このような二環式糖の例としては、以下に図示するようなＡ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＬＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＬＮＡ及び（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＬＮＡを含むが、これらに限定しない。
【００６６】
【化１】
2020072732.tif 000002
【００６７】
本明細書で使用する場合、ＬＮＡ化合物には、糖の４’位と２’位の間に少なくとも１つの架橋を有する化合物が含まれるが、これに限定せず、この中で、架橋の各々は独立して、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｃ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲ１）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒ１）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−及び−Ｎ（Ｒ１）−から独立して選択される２〜４個の連結基を含み、式中ｘは０、１、または２であり、ｎは１、２、３、または４であり、Ｒ１及びＲ２は独立してＨ、保護基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環式
ラジカル、置換複素環式ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、かつ各Ｊ１及びＪ２は独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
【００６８】
ＬＮＡの定義内に包含される４’−２’架橋基の例としては、式−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−または −Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−のうちの１つを含むが、これに限定しない。
さらに、ＬＮＡの定義内に包含される他の架橋基は、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−２’−架橋であり、式中、各Ｒ１及びＲ２は独立してＨ、保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【００６９】
また、本発明によるＬＮＡの定義内に含まれるのは、リボシル糖環の２’−ヒドロキシ基が当該糖環の４’炭素原子へ結合し、それによりメチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）架橋を形成し、当該二環式糖部分を形成する、ＬＮＡである。当該架橋はまた、２’酸素原子及び４’炭素原子を結合するメチレン（−ＣＨ２−）基であることができ、これについては、用語メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡを使用する。さらに、この位置におけるエチレン架橋基を有する二環式糖部分の場合、用語エチレンオキシ（４’−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡを使用する。メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＬＮＡの異性体であるα−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）も、本明細書で使用する場合、ＬＮＡの定義内に包含される。
【００７０】
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」は、第一の核酸の核酸塩基が第二のまたは標的核酸の対応する核酸塩基と対形成することができない場合を指す。
【００７１】
「修飾されたヌクレオシド間結合」は、天然のヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換またはいずれかの変化を指す。
【００７２】
「修飾された核酸塩基」は、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン（５−メチルウラシルとしても公知）、またはウラシル以外のいずれかの核酸塩基を意味する。「修飾されていない核酸塩基」は、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミジン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【００７３】
「修飾されたヌクレオシド」は、独立して、修飾された糖部分及び／または修飾された核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【００７４】
「修飾されたヌクレオチド」は、修飾された糖部分、修飾されたヌクレオシド間結合、及び／または修飾された核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。
【００７５】
「修飾されたオリゴヌクレオチド」は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合、修飾された糖、及び／または修飾された核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【００７６】
「修飾された糖」は、天然の糖部分からの置換及び／またはいずれかの変化を意味する。
【００７７】
「単量体」は、オリゴマーの単一の単位を意味する。単量体には、天然であろうと修飾されていようと、ヌクレオシド及びヌクレオチドを含むが、これらに限定しない。
【００７８】
「モチーフ」は、アンチセンス化合物における修飾されていない及び修飾されたヌクレオシドのパターンを意味する。
【００７９】
「天然糖部分」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）において見出される糖部分を意味する。
【００８０】
「天然ヌクレオシド間結合」は、３’と５’のホスホジエステル結合を意味する。
【００８１】
「非相補的核酸塩基」は、互いに水素結合を形成しない、またはその他の点ではハイブリッド形成を支持する一対の核酸塩基を指す。
【００８２】
「核酸」は、単量体ヌクレオチドから構成される分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれるが、これらに限定しない。
【００８３】
「核酸塩基」は、別の核酸の塩基と対形成することのできる複素環式部分を意味する。
【００８４】
「核酸塩基相補性」は、別の核酸塩基と塩基対形成することのできる核酸塩基を指す。例えば、ＤＮＡにおいて、アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）と相補的である。例えば、ＲＮＡにおいて、アデニン（Ａ）はウラシル（Ｕ）と相補的である。ある実施形態において、相補的な核酸塩基は、その標的核酸の核酸塩基と塩基対形成することのできるアンチセンス化合物の核酸塩基を指す。例えば、アンチセンス化合物のある位置にある核酸塩基が、標的核酸のある位置における核酸塩基と水素結合することができる場合、オリゴヌクレオチドと標的核酸の間の水素結合の位置は、当該核酸塩基対で相補的であるとみなされる。
【００８５】
「核酸塩基配列」は、いずれかの糖、結合、及び／または核酸塩基修飾とは独立した連続した核酸塩基の順序を意味する。
【００８６】
「ヌクレオシド」は、糖へ結合した核酸塩基を意味する。
【００８７】
「ヌクレオシド模倣薬」には、糖または糖及び塩基を置き換えるのに使用する構造が含まれ、必ずしも、例えば、モルフォリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、ビシクロ、またはトリシクロ糖模倣薬、例えば、非フラノース糖単位を有するヌクレオシド模倣薬などのオリゴマー化合物の１つ以上の位置での連結は含まれない。ヌクレオチド模倣薬には、例えば、ペプチド核酸またはモルフォリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または他の非ホスホジエステル結合によって結合するモルフォリノ）などのオリゴマー化合物の１つ以上の位置でヌクレオシド及び連結を置き換えるのに使用する構造を含む。糖代用薬は、わずかにより広めの用語であるヌクレオシド模倣薬と重複するが、糖単位（フラノース環）のみの置換を示すよう企図されてはいない。本明細書で提供するテトラヒドロピラニル環は、フラノース糖基がテトラヒドロピラニル環系と置換された糖代用薬の一例を説明する。「模倣薬」は、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合と置換される基を指す。概して、模倣薬は、糖または糖−ヌクレオシド間結合の組み合わせの代わりに使用され、核酸塩基は、選択した表的とのハイブリッド形成のために
維持される。
【００８８】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分へ共有結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【００８９】
「オフターゲットの効果」は、企図する標的核酸以外の遺伝子のＲＮＡまたはタンパク質発現の調節と関連した望ましくないまたは有害な生物学的効果を指す。
【００９０】
「オリゴマー化合物」または「オリゴマー」は、核酸分子の少なくとも一領域とハイブリッド形成することのできる連結した単量体サブユニットの重合体を意味する。
【００９１】
「オリゴヌクレオチド」は、互いに独立して、各々が修飾されることのできるまたは非修飾であることのできる結合したヌクレオシドの重合体を意味する。
【００９２】
「非経口投与」は、注射（例えば、ボーラス注射）または注入を通じての投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば、髄腔内投与もしくは脳室内投与が含まれる。
【００９３】
「ペプチド」は、アミド結合によって少なくとも２つのアミノ酸を結合させることによって形成される分子を意味する。本明細書で使用する場合、制限なしで、ペプチドはポリペプチド及びタンパク質を指す。
【００９４】
「医薬剤」は、個体へ投与する場合に治療上の利益を提供する物質を意味する。例えば、ある実施形態において、ＰＫＫを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬剤である。
【００９５】
「医薬組成物」は、対象へ投与するのに適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド及び滅菌済み水溶液を含み得る。
【００９６】
「医薬として許容し得る誘導体」は、本明細書で説明する化合物の医薬として許容し得る塩、共役体、プロドラッグまたは異性体を包含する。
【００９７】
「医薬として許容し得る塩」は、アンチセンス化合物の生理学的にかつ医薬として許容し得る塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物活性を保有しかつ望ましくない毒性効果を与えない塩を意味する。
【００９８】
「ホスホロチオアート結合」は、ホスホジエステル結合が非架橋性酸素原子のうちの１つを硫黄原子と置換することによって修飾されるヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオアート結合とは、修飾されたヌクレオシド間結合である。
【００９９】
「ＰＫＫ」は、ヒト血漿プレカリクレインを含む哺乳類動物血漿プレカリクレインを意味する。血漿プレカリクレイン（ＰＫＫ）は、血漿カリクレイン（ＰＫ）の前駆体であり、ＫＬＫＢ１遺伝子によってコードされる。
【０１００】
「ＰＫＫ関連疾患」は、いずれかのＰＫＫ核酸またはその発現産物と関連したいずれかの疾患を意味する。このような疾患には、炎症性疾患または血栓塞栓性疾患が含まれ得る。このような疾患には遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）が含まれ得る。
【０１０１】
「ＰＫＫｍＲＮＡ」は、ＰＫＫをコードするＤＮＡ配列のいずれかの伝令ＲＮＡ発現産物を意味する。
【０１０２】
「ＰＫＫ核酸」は、ＰＫＫをコードするいずれかの核酸を意味する。例えば、ある実施形態において、ＰＫＫ核酸には、ＰＫＫをコードするＤＮＡ配列、（イントロン及びエキソンを含むゲノムＤＮＡを含む）ＰＫＫをコードするＤＮＡから転写されたＲＮＡ配列、及びＰＫＫをコードするｍＲＮＡ配列が含まれる。「ＰＫＫｍＲＮＡ」は、ＰＫＫタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【０１０３】
「ＰＫＫタンパク質」は、ＰＫＫ核酸のポリペプチド発現産物を意味する。
【０１０４】
「部分」は、規定した数の核酸の連続した（すなわち、結合した）核酸塩基を意味する。ある実施形態において、部分とは、標的核酸の連続した核酸塩基の規定した数である。ある実施形態において、部分とは、アンチセンス化合物の連続した核酸塩基の規定した数である。
【０１０５】
「予防する」または「予防すること」は、疾患、障害、または容態の開始または発症を数分間から数日間、数週間ないし数か月間の期間、または無限に遅延または未然に防ぐことを指す。
【０１０６】
「プロドラッグ」は、内在性酵素または他の化学物質及び／もしくは条件の作用によって身体またはその細胞内で活性形態（すなわち、薬剤）へと変換される不活性形態で調製された治療薬を意味する。
【０１０７】
「予防有効量」は、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）な利点を動物へ提供する医薬剤の量を指す。
【０１０８】
「領域」は、少なくとも１つの識別可能な構造、機能、または特徴を有する標的核酸の一部として定義される。
【０１０９】
「リボヌクレオチド」は、ヌクレオチドの糖部分の２’位にヒドロキシを有するヌクレオチドを意味する。リボヌクレオチドは、種々の置換基のうちのいずれかで修飾してもよい。
【０１１０】
「塩」は、アンチセンス化合物の生理学的にかつ医薬として許容し得る塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物活性を保有しかつ望ましくない毒性効果を与えない塩を意味する。
【０１１１】
「セグメント」は、標的核酸内の領域のより小さなまたは副部分として定義される。
【０１１２】
「副作用」は、所望の効果以外の治療に起因し得る生理学的応答を意味する。ある実施形態において、副作用には、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系以上、及びミオパチーが含まれるがこれらに限定されない。
【０１１３】
「一本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補鎖とハイブリッド形成しないオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１１４】
「部位」は本明細書で使用する場合、標的核酸内の独特な核酸塩基位置として定義される。
【０１１５】
「特異的にハイブリッド形成可能な」または「特異的にハイブリッド形成する」は、特異的結合が所望である条件下で、すなわち、インビボでのアッセイ及び治療的処置の場合
の生理学的条件下で、非標的核酸に最低限しかまたは全く効果を呈しない一方で、所望の効果を誘導するためにアンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸の間の十分な程度の相補性を有するアンチセンス化合物を指す。
【０１１６】
「厳密なハイブリッド形成条件」または「厳密な条件」は、オリゴマー化合物がその標的配列とハイブリッド形成するが、最少数の他の配列とハイブリッド形成する条件を指す。
【０１１７】
「対象」は、治療または療法のために選択したヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【０１１８】
「標的」は、調節が望まれるタンパク質を指す。
【０１１９】
「標的遺伝子」は、標的をコードする遺伝子を指す。
【０１２０】
「標的とする」または「標的とされる」は、標的核酸と特異的にハイブリッド形成しかつ所望の効果を誘導するアンチセンス化合物の設計及び選択の過程を意味する。
【０１２１】
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、及び「標的ＲＮＡ転写産物」及び「核酸標的」はすべて、アンチセンス化合物によって標的とすることのできる核酸を意味する。
【０１２２】
「標的領域」は、１つ以上のアンチセンス化合物が標的とされる標的核酸の一部を意味する。
【０１２３】
「標的セグメント」は、アンチセンス化合物が標的とする標的核酸のヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」は、標的セグメントの５’末端ヌクレオチドを指す。「３’標的部位」は、標的セグメントの３’末端ヌクレオチドを指す。
【０１２４】
「治療有効量」は、個体へ治療上の利点を提供する医薬剤の量を意味する。
【０１２５】
「治療する」または「治療すること」または「治療」は、疾患または容態の改善をもたらすための組成物を投与することを指す。
【０１２６】
「修飾されていない核酸塩基」は、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１２７】
「修飾されていないヌクレオチド」は、天然の核酸塩基、糖部分、及びヌクレオシド間結合から構成されたヌクレオチドを意味する。ある実施形態において、修飾されていないヌクレオチドとは、ＲＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【０１２８】
「上流」は、核酸の５’末端またはＮ末端へ向かう相対的な方向を指す。
【０１２９】
「ウィングセグメント」は、標的核酸に対する高い阻害活性、高い結合親和性、またはインビボでのヌクレアーゼによる分解に対する抵抗性などのオリゴヌクレオチド特性に対して与えるよう修飾された複数のヌクレオシドを意味する。
【０１３０】
（ある実施形態）
ある実施形態は、血漿プレカリクレイン（ＰＫＫ）のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を阻害するための化合物、組成物、及び方法を提供する。ある実施形態は、ＰＫＫのｍＲＮ
Ａレベル及びタンパク質レベルを低下させるための化合物、組成物、及び方法を提供する。
【０１３１】
ある実施形態は、血漿プレカリクレイン（ＰＫＫ）核酸を標的とするアンチセンス化合物を提供する。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸とは、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００８９２．３（配列番号１として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＤＣ４１２９８４．１（配列番号２として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＣＮ２６５６１２．１（配列番号３として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＡＫ２９７６７２．１（配列番号４として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＤＣ４１３３１２．１（配列番号５として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＡＶ６８８８５８．２（配列番号６として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＣＤ６５２０７７．１（配列番号７として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＢＣ１４３９１１．１（配列番号８として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＣＢ１６２５３２．１（配列番号９として本明細書に組み込まれている）、核酸塩基１１１６９３００１から核酸塩基１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９（配列番号１０として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００８４５５．２（配列番号１１として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＢＢ５９８６７３．１（配列番号１２として本明細書に組み込まれている）、核酸塩基６１１４００１から核酸塩基６１４４０００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０３９４６０．７（配列番号１３として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０１２７２５．２（配列番号１４として本明細書に組み込まれている）、核酸塩基１０９５２００１から核酸塩基１０９８２０００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿０４７４７３．１（配列番号１５として本明細書に組み込まれている）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＸＭ＿００２８０４２７６．１（配列番号１７として本明細書に組み込まれている）、及び核酸塩基２３５８０００から核酸塩基２３９１０００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１（配列番号１８として本明細書に組み込まれている）に示される配列である。
【０１３２】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３０〜２２２６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１３３】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号５７０の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１３４】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号７０５の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１３５】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１６６６の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１３６】
ある実施形態は、２０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号５７０の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１３７】
ある実施形態は、２０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号７０５の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１３８】
ある実施形態は、１６個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１６６６の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１３９】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号６２、７２、１０３、２１３、３１２、３３４〜３３９、３４４、３４５、３４６、３４８、３４９、３５１、３６９、３７３、３８１、３８２、３８３、３８５、３８７〜３９１、３９９、４１１、４１２、４１４、４１６、４４４、４４６〜４４９、４５２、４５３、４５４、４５９、４６０、４６２〜４７２、４７３、４７６、４７７、４７９、４８０、４８１、４８４、４８９〜４９５、４９７、５００、５０４、５０６、５２２、５２６、５３５、５５８、５５９、５６０、５６４、５６６、５６８〜５７１、５７３、５７６、５７７、５７８、５８７、５９５、５９７〜６０４、６０７、６０８、６１０、６１３、６１５、６１８、６１９、６２２、６２３、６２４、６３３、６３５、６３６、６３８、６３９、６４０、６４２、６４３、６４５、６５２、６５５〜６５８、６６０、６６１、６７０、６７４〜６７９、６８４、６８５、６９８、７０４、７０５、７０７、７０８、７１３、７１６、７１７、７２８、７３４、７３６、７６７、７６８、７７６、７９７、７９８、８００、８０２、８１０、８１５、８７６、８８０、８８２、８８３、８８６、８９１、９０１〜９０５、９０８〜９１１、９２２、９２３、９２４、９３１、９４２、９５０〜９５７、９７２、９７４、９７８、９７９、９８０、９８７〜９９１、１００５、１０１７〜１０２１、１０２５、１０２６、１０２９、１０３０、１０３２、１０３４、１０３５、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０４６、１０５１、１０５４、１０５９、１０６０、１０６１、１０６４、１０６５、１０６６、１０７５、１０７６、１０８７、１０８９、１１１１、１１１４、１１１６、１１１７、１１２５、１１３３、１１５３、１１６９、１１７７、１１８１、１１８２、１１８７、１１９６、１２００、１２１４、１２２２、１２６７、１２７６、１２７７、１２８５、１２８６、１２８９、１２９０、１２９１、１３０３、１３６７、１３８９、１３９３、１３９８〜１４０１、１４０６、１４０７、１４０８、１４１１、１４１９〜１４２２、１４２６、１４３０、１４３１、１４３２、１４３４〜１４３７、１４３９、１４４０、１４４３、１４４４、１４５１、１４５２、１４７１、１５１６、１５２７、１５３５、１５３７、１５３８、１５３９、１５４０、１５４１、１５６３、１５６４、１５６７、１５６８、１６１６、１６１７、１６２３、１６２９、１６６４、１６６５、１６６６、１６７９、１６８７、１７３４、１８０４、１８７６、１８８６、１９１５、２００８、２０１８、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも８０％ｍＲＮＡ阻害を達成する。
【０１４０】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号６２、７２、１０３、２１３、３３４〜３３９、３４４、３４６、３４８、３４９、３５１、３８１、３８２、３８３、３８５、３８９、３９０、３９１、４４６、４４８、４５２、４５３、４５４、４６６〜４７３、４７６、４８１、４８４、４９１、４９２、４９４、４９５、４９７、５０４、５２６、５５８、５５９、５６６、５６８〜５７１、５７６、５７８、５８７、５９５、５９７、５９８、６００〜６０４、６０７、６１０、６１３、６１８、６１９、６２４、６３５、６３８、６３９、６４５、６５２、６５６、６５７、６５８、６６０、６７４、６７５、６７６、６８４、６９８、７０４、７０５、７０７、７１３、７１６、７６８、８７６、８８０、９０１〜９０５、９０８〜９１１、９２２、９２３、９２４、９３１、９４２、９５１、９５４〜９５７、９７２、９７４、９７８、９７９、９８７、９８８、９９０、１００５、１０１９、１０２０、１０２１、１０２５、１０３２、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０５４、１０５９、１０６０、１０６１、１０６４、１０６５、１０６６、１０７５、１１１１、１１１６、１１１７、１１２５、１１３３、１１５３、１１６９、１１７７、１２００、１２２２、１２６７、１２８５、１２９０、１２９１、１３０３、１３６７、１３９８、１３９９、１４０１、１４０６、１４０８、１４１１、１４１９、１４２０、１４２１、１４２６、１４３０、１４３１、１４３２、１４３４〜１４３７、１４４０、１４４３、１４４４、１４５１、１５３７〜１５４０、１５６３、１６１６、１６７９、１６８７、１８０４、２００８、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも８５％ｍＲＮＡ阻害を達成する。
【０１４１】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３５１、３８２、３９０、３９１、４４６、４４８、４５２、４５３、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７６、４８１、４９１、４９５、５０４、５５８、５６６、５６８、５７０、５７１、５７８、５８７、５９７、５９８、６００、６０４、６１３、６３５、６３８、６４５、６５６、６５８、６６０、６７４、６７５、６８４、７０４、７０５、８８０、９０１〜９０５、９０９、９２２、９３１、９５１、９５４、９５６、９９０、１００５、１０２０、１０３２、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０５４、１０７５、１１１１、１１２５、１１３３、１１５３、１２００、１２６７、１２９１、１３０３、１３９８、１３９９、１４０１、１４０６、１４２０、１４２６、１４３０、１４３１、１４３４、１４３５、１４３６、１４４０、１４４３、１４５１、１５３７〜１５４０、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも９０％ｍＲＮＡ阻害を達成する。
【０１４２】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３９１、４４８、４６８、４６９、５６８、５７０、５９８、６３５、６５８、６７４、６８４、７０５、９０１、９０３、９０４、９２２、９９０、１２６７、１２９１、１４２０、１４３０、１４３１、１４３４、１４３５、１４３６、１５３７、１５３８、及び１５４０の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列
を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも９５％ｍＲＮＡ阻害を達成する。
【０１４３】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３３８、３４６、３４９、３８２、３８３、３９０、４４８、４５２、４５３、４５４、４９５、５２６、５５９、５７０、５８７、５９８、６３５、６６０、７０５、９０１、９０３、９０４、９０８、９２３、９３１、９５５、９７４、９８８、９９０、１０２０、１０３９、１０４０、１１１１、１１１７、１２６７、１２９１、１３４９、１３５２、１３６７、１３８９、１３９３、１３９９、１４０１、１４０８、１４１１、１４２６、１４９９、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６３、１５６４、１５６８、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６２３、１６２４、１６４３、１６６１、１６６５、１６６６、１６７３、１６７９、１６９５、１７２０、１８０４、１８１７、１８７６、１８８１、１８８６、１９４０、１９４７、２００８、２０１８、２０１９、２０３１、２０４４、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．４以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する。
【０１４４】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３４９、３８２、４５３、４５４、４９５、５２６、５７０、５８７、５９８、６３５、６６０、９０１、９０３、９０４、９３１、９５５、９９０、１０２０、１１１１、１２６７、１３４９、１３５２、１３６７、１３８９、１３９９、１４０８、１４１１、１４２６、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６３、１５６４、１５６８、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６２３、１６４３、１６６１、１６６５、１６６６、１６７３、１６９５、１８０４、１８７６、１８８１、２０１９、２０４４、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．３以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する。
【０１４５】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３８２、４５３、４９５、５２６、５７０、５８７、５９８、６３５、９０１、９０４、９３１、９５５、１０２０、１１１１、１３４９、１３５２、１３８９、１４２６、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６４、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６６５、１６６６、１８０４、１８７６、１８８１、２０１９、２０４４、２１０１、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．２以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する。
【０１４６】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、４９５、５８７、５９８、６３５、１３４９、１３５２、１３８９、１５１６、１５４４、１５４８、１５６９、１５９８、１６１７、１６６５、１６６６、１８０４、１８８
１、及び２０１９の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．２未満のＩＣ５０（μＭ）を達成する。
【０１４７】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１４８】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１４９】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５０】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５１】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４７の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５２】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５３】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２４の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なく
とも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５４】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５５】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５６】
ある実施形態は、１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつＰＫＫ核酸のエキソン９、エキソン１２、またはエキソン１４の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
【０１５７】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である。
【０１５８】
ある実施形態において、化合物は、一本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドからなる。
【０１５９】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、修飾されたヌクレオシド間結合である。
【０１６０】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である。
【０１６１】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である。
【０１６２】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは、修飾された核酸塩基を含む。
【０１６３】
ある実施形態において、修飾された核酸塩基は、５−メチルシトシンである。
【０１６４】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾され
た糖を含む。
【０１６５】
ある実施形態において、修飾された糖は、２’修飾された糖、ＢＮＡ、またはＴＨＰである。
【０１６６】
ある実施形態において、修飾された糖は、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−メチル、拘束されたエチル、ＬＮＡ、または３’−フルオロ−ＨＮＡのうちのいずれかである。
【０１６７】
ある実施形態において、化合物は、少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、拘束されたエチルヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシド、または３’−フルオロ−ＨＮＡヌクレオシドを含む。
【０１６８】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウィングセグメント、及び
５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウィングセグメント
を含み、この中で、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントと３’ウィングセグメントの間に位置取られ、かつこの中で各ウィングセグメントの各ヌクレオシドは修飾された糖を含む。
【０１６９】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０個の連結したヌクレオシドからなる。
【０１７０】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１９個の連結したヌクレオシドからなる。
【０１７１】
ある実施形態において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、１８個の連結したヌクレオシドからなる。
【０１７２】
ある実施形態は、以下の式、すなわち、Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物を提供し、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である。
【０１７３】
ある実施形態は、以下の式、すなわち、ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ
Ｇｄｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物を提供し、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である。
【０１７４】
ある実施形態は、以下の式、すなわち、ｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｋｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物を提供し、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｋ＝ｃＥｔ修飾されたヌクレオシド、
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である。
【０１７５】
ある実施形態は、以下の式
【０１７６】
【化２】
2020072732.tif 000003
【０１７７】
による化合物を提供する。
【０１７８】
ある実施形態は、以下の式
【０１７９】
【化３】
2020072732.tif 000004
【０１８０】
による化合物を提供する。
【０１８１】
ある実施形態は、以下の式
【０１８２】
【化４】
2020072732.tif 000005
【０１８３】
による化合物を提供する。
【０１８４】
ある実施形態は、いずれかの先行する請求項の化合物またはその塩及び医薬として許容し得る担体または希釈剤のうちの少なくとも１つを含む組成物を提供する。
【０１８５】
ある実施形態は、いずれかの先行する請求項の化合物または組成物を動物へ投与することを含む方法を提供する。
【０１８６】
ある実施形態において、動物はヒトである。
【０１８７】
ある実施形態において、化合物を投与することは、ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態を予防、治療、または寛解させる。
【０１８８】
ある実施形態において、ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態とは、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、脳浮腫、血栓症、塞栓症、血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、脳卒中、及び梗塞である。
【０１８９】
ある実施形態は、炎症性疾患または血栓塞栓症性疾患を治療するための薬剤の製造のためのいずれかの先行する請求項の化合物または組成物の使用を提供する。
【０１９０】
（アンチセンス化合物）
オリゴマー化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣薬、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定しない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対して「アンチセンス」であってもよく、水素結合を通じて標的核酸とのハイブリッド形成を受けることができることを意味している。
【０１９１】
ある実施形態において、アンチセンス化合物は、５’から３’の方向で記載されている場合、標的とされる標的核酸の標的セグメントの逆相補体を含む核酸塩基配列を有する。あるこのような実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’の方向で記載されている場合、標的とされる標的核酸の標的セグメントの逆相補体を含む核酸塩基配列を有する。
【０１９２】
ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１２〜３０サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１２〜２５サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１２〜２２サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１４〜２０サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１５〜２５サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１８〜２２サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１９〜２１サブユニットである。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、長さ８〜８０個、１２〜５０個、１３〜３０個、１３〜５０個、１４〜３０個、１４〜５０個、１５〜３０個、１５〜５０個、１６〜３０個、１６〜５０個、１７〜３０個、１７〜５０個、１８〜３０個、１８〜５０個、１９〜３０個、１９〜５０個、または２０〜３０個の連結したサブユニットである。
【０１９３】
ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１２サブ
ユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１３サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１４サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１５サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１６サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１７サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１８サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１９サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２０サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２１サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２２サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２３サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２４サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２５サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２６サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２７サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２８サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ２９サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ３０サブユニットである。ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０個の、または上記の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲の連結したサブユニットである。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、連結したサブユニットはヌクレオシドである。
【０１９４】
ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、短縮しまたは切り詰められていてもよい。例えば、単一のサブユニットは、５’末端から欠失していてもよく（５’切り詰め）、またはそれに替わるものとして３’末端から欠失していてもよい（３’切り詰め）。ＰＫＫ核酸を標的とする短縮しまたは切り詰められたアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の５’末端から２つのサブユニットが欠失していてもよく、またはそれに替わるものとして、３’末端から２つのサブユニットが欠失していてもよい。あるいは、欠失したヌクレオシドは、例えば、５’末端から１つのヌクレオシドが欠失しかつ３’末端から１つのヌクレオシドが欠失したアンチセンス化合物において、アンチセンス化合物中に分散していてもよい。
【０１９５】
単一の追加的なサブユニットが長くなったアンチセンス化合物中に存在する場合、追加的なサブユニットは、アンチセンス化合物の５’末端または３’末端に配置されていてもよい。２つ以上の追加的なサブユニットが存在する場合、付加されたサブユニットは、例えば、２つのサブユニットがアンチセンス化合物の５’末端へ付加された（５’付加）アンチセンス化合物、またはそれに替わるものとして、３’末端へ付加された（３’付加）アンチセンス化合物において、互いに対して隣接していてもよい。あるいは、付加されたサブユニットは、例えば５’末端へ１つのサブユニットが付加されかつ３’末端へ１つのサブユニットが付加されたアンチセンス化合物において、アンチセンス化合物中に分散していてもよい。
【０１９６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増減することは可能であり、及び／または活性を除去することなくミスマッチ塩基を導入することは可能である。例えば、Ｗｏｏｌｆら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７３０５〜７３０９，１９９２）において、長さ１３〜２５核酸塩基の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、卵母細胞注入モデルにおける標的ＲＮＡの切断を誘導する能力について検査した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの両端近くの８個または１１個のミスマッチ塩基を有する長さ２５核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含有していないアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも低い程度までであるにもかかわらず、標的ｍＲＮＡの特異的切断を方向づけることができた。同様に、標的特異的切断は、１個または３個のミスマッチを有するものを含む、１３個の核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて達成した。
【０１９７】
Ｇａｕｔｓｃｈｉら（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：４６３〜４７１，２００１年３月）は、ｂｃｌ−２ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有しかつｂｃｌ−ｘＬｍＲＮＡに対して３個のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドが、インビトロ及びインビボでｂｃｌ−２及びｂｃｌ−ｘＬの両方の発現を低下させる能力を実証した。さらに、このオリゴヌクレオチドは、インビボで強力な抗腫瘍活性を実証した。
【０１９８】
Ｍａｈｅｒ及びＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１〜３３５８，１９８８）は、ウサギ網状赤血球アッセイにおけるヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させる能力について、一連の直列の１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドならびに当該直列アンチセンスオリゴヌクレオチドのうちの２つまたは３つの配列から構成される２８核酸塩基及び４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを検査した。３つの１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド単独の各々も、２８核酸塩基または４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも中程度のレベルであるにもかかわらず、翻訳を阻害することができた。
【０１９９】
（アンチセンス化合物モチーフ）
ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、パターンまたはモチーフにおいて配置されたサブユニットを化学的に修飾し、高い阻害活性、標的核酸に対する高い結合親和性、またはインビボでのヌクレアーゼによる分解に対する抵抗性などの特性をアンチセンス化合物へ与えた。
【０２００】
キメラアンチセンス化合物は典型的には、ヌクレアーゼ分解に対する高い抵抗性、高い細胞内取り込み、標的核酸に対する高い結合親和性、及び／または高い阻害活性を与えるよう修飾された少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第二の領域は任意に、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞内エンドヌクレアーゼＲＮアーゼＨに対する基質として機能し得る。
【０２０１】
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物と考えられる。ギャップマーにおいて、ＲＮアーゼＨ切断を支援する複数のヌクレオチドを有する内部領域が、内部領域のヌクレオシドとは化学的に別個の複数のヌクレオチドを有する外部領域間に位置取られる。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは概して、エンドヌクレアーゼ切断のための基質として機能するのに対し、ウィングセグメントは、修飾されたヌクレオシドを含む。ある実施形態において、ギャップマーの領域は、各別個の領域を含む糖部分の種類によって分化する。ギャップマーの領域を分化させるのに使用する糖部分の種類は、いくつかの実施形態において、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾されたヌクレオシド（このような２’−修飾されたヌクレオシドにはとりわけ、２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ−ＣＨ３を含み得る）、及び二環式糖修飾したヌクレオシド（このよう
な二環式糖修飾したヌクレオシドには、４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中ｎ＝１またはｎ＝２）及び４’−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−２’を有するものを含み得る）を含み得る。ある実施形態において、ウィングには例えば２’−ＭＯＥを含むいくつかの修飾された糖部分を含み得る。ある実施形態において、ウィングには、いくつかの修飾された及び修飾されていない糖部分を含み得る。ある実施形態において、ウィングには、２’−ＭＯＥヌクレオシド及び２’−デオキシヌクレオシドの種々の組み合わせを含み得る。
【０２０２】
各別個の領域は、均一な糖部分、バリアント、または交互の糖部分を含み得る。ウィング−ギャップ−ウィングモチーフは頻繁に、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と説明され、式中「Ｘ」は５’ウィングの長さを表し、「Ｙ」はギャップの長さを表し、かつ「Ｚ」は３’ウィングの長さを表す。「Ｘ」及び「Ｚ」は均一なバリアントまたは交互の糖部分を含み得る。ある実施形態において、「Ｘ」及び「Ｙ」には１つ以上の２’−デオキシヌクレオシドを含み得る。「Ｙ」は２’−デオキシヌクレオシドを含み得る。本明細書で使用する場合、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」として説明されるギャップマーは、当該ギャップが５’ウィング及び３’ウィングの各々に直接隣接して位置取られるような立体配置を有する。したがって、５’ウィングとギャップの間、またはギャップと３’ウィングの間には介在性ヌクレオチドは存在しない。本明細書で説明するアンチセンス化合物のうちのいずれかは、ギャップマーモチーフを有することができる。ある実施形態において、「Ｘ」及び「Ｚ」は同じであり、他の実施形態において、「Ｘ」及び「Ｚ」は異なっている。
【０２０３】
ある実施形態において、本明細書で提供するギャップマーには、例えば、５−１０−５のモチーフを有する２０マーが含まれる。
【０２０４】
（標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列）
ヒト血漿プレカリクレイン（ＰＫＫ）をコードするヌクレオチド配列には、以下、すなわち、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００８９２．３（配列番号１として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＤＣ４１２９８４．１（配列番号２として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＣＮ２６５６１２．１（配列番号３として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＡＫ２９７６７２．１（配列番号４として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＤＣ４１３３１２．１（配列番号５として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＡＶ６８８８５８．２（配列番号６として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＣＤ６５２０７７．１（配列番号７として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＢＣ１４３９１１．１（配列番号８として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＣＢ１６２５３２．１（配列番号９として本明細書に組み込まれる）、核酸塩基１１１６９３００１〜１１１７３００００を切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９（配列番号１０として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００８４５５．２（配列番号１１として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＢＢ５９８６７３．１（配列番号１２として本明細書に組み込まれる）、核酸塩基６１１４００１〜６１４４０００を切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０３９４６０．７（配列番号１３として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０１２７２５．２（配列番号１４として本明細書に組み込まれる）、核酸塩基１０９５２００１〜１０９８２０００を切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿０４７４７３．１（配列番号１５として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＸＭ＿００２８０４２７６．１（配列番号１７として本明細書に組み込まれる）、及び核酸塩基２３５８０００〜２３９１０００を切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１（配列番号１８として本明細書に組み込まれる）を含むが、これらに限定しない。
【０２０５】
本明細書に含有される実施例における各配列番号において示す配列が、糖部分、ヌクレ
オシド間結合、または核酸塩基に対するいずれかの修飾とは独立していることは理解される。このようなものとして、配列番号によって規定されるアンチセンス化合物は独立して、糖部分、ヌクレオシド間結合、または核酸塩基に対する１つ以上の修飾を含み得る。国際科学情報サービス番号（Ｉｓｉｓ  Ｎｏ）によって説明されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列及びモチーフの組み合わせを示す。
【０２０６】
ある実施形態において、標的領域とは、標的核酸の構造上規定された領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エキソン、イントロン、エキソン／イントロン接合部、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域、または他の規定された核酸領域を包含し得る。ＰＫＫについて構造上規定された領域は、ＮＣＢＩなどの配列データベースから受託番号によって得ることができ、このような情報は、参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態において、標的領域は、標的領域内の１つの標的セグメントの５’標的部位から同じ標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含し得る。
【０２０７】
標的化には、所望の効果が生じるようアンチセンス化合物がハイブリッド形成する少なくとも１つの標的セグメントの決定が含まれる。ある実施形態において、所望の効果とは、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの低下である。ある実施形態において、所望の効果とは、標的核酸によってコードされるタンパク質レベルの低下、または標的核酸と関連する表現型の変化である。
【０２０８】
標的領域は、１つ以上の標的セグメントを含有し得る。標的領域内の複数の標的セグメントは重複していてもよい。あるいは、複数の標的セグメントは重複していなくてもよい。ある実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、約３００ヌクレオチド以下によって分離されている。ある実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、または１０個のヌクレオチドである、およそそれである、それ以下である、およそそれ以下である、あるいは先の値のうちのいずれか２つによって規定される範囲であるいくつかのヌクレオチドによって分離されている。ある実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の５個以下の、または約５個以下のヌクレオチドによって分離されている。ある実施系チアにおいて、標的セグメントは連続的である。本明細書に列挙される５’標的部位または３’標的部位のうちのいずれかである出発核酸を有する範囲によって規定される標的領域が企図されている。
【０２０９】
適切な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エキソン、またはエキソン／イントロン接合部内に認められ得る。開始コドンまたは終止コドンを含有する標的セグメントも適切な標的セグメントである。適切な標的セグメントは、開始コドンまたは終止コドンなどのある構造上規定された領域を特異的に除外し得る。
【０２１０】
適切な標的セグメントの決定には、標的核酸の配列とゲノム中の他の配列との比較を含み得る。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して、異なる核酸間の類似性の領域を識別し得る。この比較は、選択した標的核酸以外の配列（すなわち、非標的配列またはオフターゲット配列）と非特異的な様式でハイブリッド形成し得るアンチセンス化合物配列の選択を防止することができる。
【０２１１】
活性のある標的領域内でのアンチセンス化合物の活性（例えば、標的核酸レベルの％低下によって定義されるような）において変化があってもよい。ある実施形態において、ＰＫＫｍＲＮＡレベルの低下は、ＰＫＫ発現の阻害を示す。ＰＫＫタンパク質のレベルの低下はまた、標的ｍＲＮＡ発現の阻害を示す。さらに、表現型の変化は、ＰＫＫの発現の阻害を示す。例えば、炎症の低下または予防は、ＰＫＫ発現の阻害を示すことができる。別
の例では、浮腫／腫脹の低下または予防は、ＰＫＫ発現の阻害を示すことができる。別の例では、血管透過性の低下または予防は、ＰＫＫ発現の阻害を示すことができる。別の例では、血管漏出の低下または予防は、ＰＫＫ発現の阻害を示すことができる。ある実施形態において、血管透過性は、エバンスブルーなどの色素の定量化によって測定される。
【０２１２】
（ハイブリッド形成）
いくつかの実施形態において、ハイブリッド形成は、本明細書で開示するアンチセンス化合物と標的核酸の間で生じる。最も共通したハイブリッド形成機序は、核酸分子の相補的核酸塩基間の水素結合（例えば、ワトソン・クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン水素結合）を包含する。
【０２１３】
ハイブリッド形成は、変動する条件下で生じることができる。厳密な条件は、配列依存的であり、ハイブリッド形成されることになっている核酸分子の性質及び組成によって決定される。
【０２１４】
配列が標的核酸と特異的にハイブリッド形成可能であるかどうかを判定する方法は当該技術分野で周知である。ある実施形態において、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、標的核酸と特異的にハイブリッド形成可能である。
【０２１５】
（相補性）
アンチセンス化合物及び標的核酸は、アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができる場合に互いに相補的であり、それにより所望の効果が生じる（例えば、ＰＫＫ核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）。
【０２１６】
アンチセンス化合物とＰＫＫ核酸の間の非相補的核酸塩基は耐容性があり得、ただし、アンチセンス化合物が標的核酸と特異的にハイブリッド形成できるままであることを条件とする。その上、アンチセンス化合物は、介在性セグメントまたは隣接するセグメントがハイブリッド形成事象（例えば、ループ構造、ミスマッチまたはヘアピン構造）に関与しないように、ＰＫＫ核酸の１つ以上のセグメントにわたってハイブリッド形成してもよい。
【０２１７】
ある実施形態において、本明細書に定義されるアンチセンス化合物またはその特定の部分は、ＰＫＫ核酸、その標的領域、標的セグメントまたは特定部分と７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的であり、または少なくとも７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相補的である。アンチセンス化合物と標的核酸との％相補性は、所定の方法を用いて判定することができる。
【０２１８】
例えば、アンチセンス化合物の２０核酸塩基のうちの１８が標的領域と相補的でありそれゆえ特異的にハイブリッド形成するであろうアンチセンス化合物は、９０％の相補性を表すであろう。この例において、残余の非相補的核酸塩基は、相補的核酸塩基とクラスター形成または散在してもよく、互いにまたは相補的な核酸塩基と連続している必要がない。このようなものとして、標的核酸との完全な相補性の２つの領域によって隣接する４つの非相補的核酸塩基を有する長さ１８核酸塩基であるアンチセンス化合物は、標的核酸と７７．８％の全体的な相補性を有するであろうし、したがって、本発明の範囲内に収まるであろう。アンチセンス化合物と標的核酸の領域との％相補性は、当該技術分野で公知のＢＬＡＳＴプログラム（塩基性局所整列検索ツール）及びパワーＢＬＡＳＴプログラムを用いて所定のとおり判定することができる（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．，１９９０，２１５，４０３  ４１０、Ｚｈａｎｇ及びＭａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９  ６５６）。％相同性、配列同一性または相補性は、例えば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズム（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ，１９８１，２，４８２  ４８９）を用いる、既定の設定を用いたＧａｐプログラム（ウィスコンシン配列分析パッケージ、Ｕｎｉｘ用バージョン８、遺伝学コンピュータグループ、ユニバーシティリサーチパーク、ウィスコンシン州マジソン市）によって判定することができる。
【０２１９】
ある実施形態において、本明細書に提供するアンチセンス化合物またはその特定部分は、標的核酸またはその特定部分と完全に相補的（すなわち、１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、血漿プレカリクレイン核酸、またはその標的領域、もしくは標的セグメントもしくは標的配列と完全に相補的であってもよい。本明細書で使用する場合、「完全に相補的」は、アンチセンス化合物の各核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と精確な塩基対形成をすることができることを意味する。例えば、２０個の核酸塩基アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物と完全に相補的な標的核酸の対応する２０核酸塩基部分がある限り、４００核酸塩基長である標的配列と完全に相補的である。完全に相補的は、第一及び／または第二の核酸の特定部分に関して使用することもできる。例えば、３０核酸塩基アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分は、４００核酸塩基長である標的配列に対して「完全に相補的」であることができる。３０核酸塩基オリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は、標的配列が対応する２０核酸塩基部分を有する場合、標的配列に対して完全に相補的であり、この中で各核酸塩基は、アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分と相補的である。同時に、３０核酸塩基アンチセンス化合物全体は、アンチセンス化合物の残余の１０核酸塩基も標的配列と相補的であるかどうかに応じて、標的配列と完全に相補的であってもよくまたは完全に相補的でなくてもよい。
【０２２０】
非相補的核酸塩基の位置は、アンチセンス化合物の５’末端または３’末端であってもよい。あるいは、非相補的核酸塩基または複数の非相補的核酸塩基は、アンチセンス化合物の内部位置にあってもよい。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、当該核酸塩基は連続していても（すなわち、連結されていても）よく、または非連続的であってもよい。一実施形態において、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウィングセグメントの中に配置される。
【０２２１】
ある実施形態において、長さ１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０であるまたはそれ以下であるアンチセンス化合物は、標的核酸またはその特定部分に対して４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の非相補的核酸塩基を含む。
【０２２２】
ある実施形態において、長さ１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０であるまたはそれ以下であるアンチセンス化合物は、標的核酸またはその特定部分に対して６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の非相補的核酸塩基（複数可）を含む。
【０２２３】
提供されるアンチセンス化合物にはまた、標的核酸の一部と相補的なアンチセンス化合物を含む。本明細書で使用する場合、「部分」は、標的核酸の領域またはセグメント内の規定数の連続した（すなわち、連結されている）核酸塩基を指す。「部分」はまた、アンチセンス化合物の規定した数の連続した核酸塩基を指すことができる。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分と相補的である。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも９核酸塩基部分と相補的である。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメン
トの少なくとも１０核酸塩基部分と相補的である。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１１核酸塩基部分と相補的である。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分と相補的である。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１３核酸塩基部分と相補的である。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１４核酸塩基部分と相補的である。ある実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分と相補的である。また、標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれより多数の、あるいはこれらの値のうちのいずれか２つによって規定される範囲の核酸塩基部分と相補的であるアンチセンス化合物が企図される。
【０２２４】
（同一性）
本明細書で提供されるアンチセンス化合物はまた、特定のヌクレオチド配列、配列番号、または特定国際科学情報サービス番号によって表される化合物、あるいはこれらの部分と規定される％同一性を有してもよい。本明細書で使用する場合、アンチセンス化合物は、同じ核酸塩基対形成能を有する場合、本明細書に開示した配列と同一である。例えば、開示したＤＮＡ配列におけるチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシル及びチミジンの両方がアデニンと対形成するので、ＤＮＡ配列と同一とみなされるであろう。本明細書に説明するアンチセンス化合物の短縮した及び伸長したバージョンならびに本明細書に提供するアンチセンス化合物に対して非同一の塩基を有する化合物も企図される。非同一塩基は、互いに隣接していてもよくまたはアンチセンス化合物中に散在していてもよい。アンチセンス化合物の％同一性は、比較されている配列に対して同一の対形成を有する塩基の数に従って算出される。
【０２２５】
ある実施形態において、アンチセンス化合物またはその部分は、本明細書に開示するアンチセンス化合物もしくは配列番号、またはこれらの部分のうちの１つ以上と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。
【０２２６】
ある実施形態において、アンチセンス化合物の一部は、標的核酸の等しい長さの部分と比較される。ある実施形態において、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分は、標的核酸の等しい長さ部分と比較される。
【０２２７】
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部は、標的核酸の等しい長さの部分と比較される。ある実施形態において、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分は、標的核酸の等しい長さ部分と比較される。
【０２２８】
（修飾）
ヌクレオシドは、塩基−糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても公知）部分は通常、複素環式塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分と共有結合したリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含む当該ヌクレオシドについて、リン酸基は、糖の２’、３’または５’ヒドロキシ部分へ結合することができる。オリゴヌクレオチドは、互いに隣接したヌクレオシドの共有結合を通じて形成され、直鎖状重合体オリゴヌクレオチドを形成する。オリゴヌクレオチド構造内では、リン酸基は通常、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成しているものとして言及される。
【０２２９】
アンチセンス化合物への修飾は、ヌクレオシド間結合、糖部分、または核酸塩基への置
換または変化を包含する。修飾されたアンチセンス化合物はしばしば、天然形態よりも好ましく、例えば、高い細胞内取り込み、核酸標的に対する高い親和性、ヌクレアーゼの存在下での高い安定性、または高い阻害活性などの望ましい特性があるからである。
【０２３０】
化学的に修飾されたヌクレオシドはまた、その標的核酸に対して短縮したまたは切り詰められたアンチセンスオリゴヌクレオチドの結合親和性を高めるよう採用してもよい。結果的に、比較可能な結果はしばしば、このような化学的に修飾されたヌクレオシドを有する短めのアンチセンス化合物を用いて得ることができる。
【０２３１】
（修飾されたヌクレオシド間結合）
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然ヌクレオシド間結合は、３’から５’のホスホジエステル結合である。１つ以上の修飾された、すなわち、非天然のヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物は、例えば、高い細胞内取り込み、標的核酸に対する高い親和性、及びヌクレアーゼの存在下での高い安定性などの望ましい特性のため、天然ヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物を上回ってしばしば選択される。
【０２３２】
修飾されたヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドには、リン原子を保有するヌクレオシド間結合、及びリン原子を有さないヌクレオシド間結合がある。ヌクレオシド間結合を含有する代表的なリンには、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホナート、ホスホルアミダート、及びホスホロチオアートが含まれるが、これらに限定しない。リン含有結合及びリン非含有結合の調製の方法は周知である。
【０２３３】
ある実施形態において、血漿プレカリクレイン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾されたヌクレオシド間結合を含む。ある実施形態において、修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である。ある実施形態において、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である。
【０２３４】
（修飾された糖部分）
アンチセンス化合物は任意に、糖基が修飾された１つ以上のヌクレオシドを含有することができる。このような糖修飾型ヌクレオシドは、高いヌクレアーゼ安定性、高い結合親和性、またはアンチセンス化合物に対するいくつかの他の有益な生物学的特性を与え得る。ある実施形態において、ヌクレオシドは、化学的に修飾されたリボフラノース環部分を含む。化学的に修飾されたリボフラノース環の例としては、置換基の付加（５’及び２’置換基、二環式核酸（ＢＮＡ）を形成するための非ジェミナルな環原子の架橋、リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）との置換（Ｒ、Ｒ１及びＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは保護基である））ならびにこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定しない。化学的に修飾された糖の例としては、２’−Ｆ−５’−メチル置換したヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換したヌクレオシドについて２００８年８月２１日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照されたい）またはリボシル環酸素原子のＳとの置換にさらに２’位で置換したもの（２００５年６月１６日公開の米国特許出願公開ＵＳ２００５−０１３０９２３を参照されたい）またはそれに替わるものとしてＢＮＡの５’−置換（ＬＮＡが例えば５’−メチル基または５’−ビニル基と置換された２００７年１１月２２日公開のＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１を参照されたい）が挙げられる。
【０２３５】
修飾された糖部分を有するヌクレオシドの例としては、５’−ビニル、５’−メチル（ＲまたはＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定しない。２’位の置換基はまた、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ
−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択することができ、式中、Ｒ１、Ｒｍ及びＲｎは独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。
【０２３６】
本明細書で使用する場合、「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を含む修飾されたヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例としては、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子の間の架橋を含むヌクレオシドが挙げられるが、これに限定しない。ある実施形態において、本明細書で提供されるアンチセンス化合物には、４’から２’の架橋を含む１つ以上の二環式ヌクレオシドを含む。このような４’から２’の架橋した二環式ヌクレオシドの例としては、式４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）、４‘−（ＣＨ２）−Ｓ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（拘束されたエチルまたはｃＥｔとも呼ぶ）及び４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’（及びその類似体、２００８年７月１５日発行の米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）、４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’（及びその類似体、２００９年１月８日公開のＷＯ／２００９／００６４７８として公開のＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２を参照されたい）、４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’（及びその類似体、２００８年１２月１１日公開のＷＯ／２００８／１５０７２９として公開のＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１を参照されたい）、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（２００４年９月２日公開の米国特許出願公開ＵＳ２００４−０１７１５７０を参照されたい）、４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（式中ＲはＨ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または保護基である（２００８年９月２３日発行の米国特許第７，４２７，６７２号を参照されたい））、４’−ＣＨ２−Ｃ−（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８〜１３４)、ならびに４’−ＣＨ２−
Ｃ（＝ＣＨ２）−２’（及びその類似体、２００８年１２月８日公開のＷＯ２００８／１５４４０１として公開のＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４を参照されたい)のうちの
１つが挙げられるが、これらに限定しない。
【０２３７】
二環式ヌクレオシドに関連するさらなる報告は、公表された文献においても見出すことができる（例えば、Ｆｒｉｅｄｅｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５〜６３７２、Ｓｉｎｇｈら，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５〜４５６、Ｋｏｓｈｋｉｎら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７〜３６３０、Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３〜５６３８、Ｋｕｍａｒら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９〜２２２２、Ｓｉｎｇｈら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５〜１００３９、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）８３６２〜８３７９、Ｅｌａｙａｄｉら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８〜５６１、Ｂｒａａｓｃｈら，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１〜７、及びＯｒｕｍら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９〜２４３、米国特許第６，２６８，４９０号、第６，５２５，１９１号、第６，６７０，４６１号、第６，７７０，７４８号、第６，７９４，４９９号、第７，０３４，１３３号、第７，０５３，２０７号、第７，３９９，８４５号、第７，５４７，６８４号、及び第７，６９６，３４５号、米国特許公開第ＵＳ２００８−００３９６１８号、第ＵＳ２００９−００１２２８１号、第ＵＳ２００７−０２８７８３１号、第ＵＳ２００４−０１７１５７０号、米国特許出願第１２／１２９，１５４号、第６０／９８９，５７４号、第６１／０２６，９９５号、第６１／０２６，９９８号、第６１／０５６，５６４号、第６１／０８６，２３１号、第６１／０９７，７８７号、及び第６１／０９９，８４４号、ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ１９９４／０１４２２６、ＷＯ２００４／１０６３５６、
ＷＯ２００５／０２１５７０、ＷＯ２００７／１３４１８１、ＷＯ２００８／１５０７２９、ＷＯ２００８／１５４４０１、及びＷＯ２００９／００６４７８を参照されたい）。例えばα−Ｌ−リボフラノース及びβ−Ｄ−リボフラノースを含む１つ以上の立体化学糖配置を有する先の二環式ヌクレオシドの各々を調製することができる（ＷＯ９９／１４２２６として１９９９年３月２５日公開のＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３を参照されたい）。
【０２３８】
ある実施形態において、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分には、ペントフラノシル糖部分の４’位と２’位の間に少なくとも１つの架橋を有する化合物が含まれるが、これに限定せず、この中で、このような架橋は独立して、［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、及びＮ（Ｒａ）−から独立して選択される１または２〜４個の結合基を含み、
式中、
ｘは０、１、または２であり、
ｎは１、２、３、または４であり、
各Ｒａ及びＲｂは独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、かつ
各Ｊ１及びＪ２は独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
【０２３９】
ある実施形態において、二環式糖部分の架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。ある実施形態において、当該架橋は４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、式中各Ｒは独立して、Ｈ、保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２４０】
ある実施形態において、二環式ヌクレオシドはさらに、異性体配置によって規定される。例えば、４’−２’メチレン−オキシ架橋を含むヌクレオシドは、α−Ｌ配置またはβ−Ｄ配置であってもよい。すでに、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡは、アンチセンス活性を示したアンチセンスオリゴヌクレオチドへと組み込まれている（Ｆｒｉｅｄｅｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５〜６３７２）。
【０２４１】
ある実施形態において、二環式ヌクレオシドには、以下
【０２４２】
【化５】
2020072732.tif 000006
【０２４３】
に示すような（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、及び（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）炭素環式メチル（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、（Ｊ）炭素環式プロプレン（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡ及び（Ｋ）ビニルＢＮＡが含まれるが、これらに限定されず、
式中、Ｂｘは塩基部分であり、かつＲは独立してＨ、保護基、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはＣ１−Ｃ１２アルコキシである。
【０２４４】
ある実施形態において、式Ｉ
【０２４５】
【化６】
2020072732.tif 000007
【０２４６】
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり、
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−または−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり、
ＲｃはＣ１−Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり、かつ
Ｔａ及びＴｂは各々独立して、Ｈ、ヒドロキシ保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合である。
【０２４７】
ある実施形態において、式ＩＩ
【０２４８】
【化７】
2020072732.tif 000008
【０２４９】
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは各々独立して、Ｈ、ヒドロキシ保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合であり、
Ｚａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオールまたは置換チオである。
【０２５０】
一実施形態において、置換基の各々は独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシ、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ、及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基で単置換または多置換されており、式中各Ｊｃ、Ｊｄ及びＪｅは独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキルでありかつＸはＯまたはＮＪｃである。
【０２５１】
ある実施形態において、式ＩＩＩ
【０２５２】
【化８】
2020072732.tif 000009
【０２５３】
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは各々独立して、Ｈ、ヒドロキシ保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合であり、
Ｚｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。
【０２５４】
ある実施形態において、式ＩＶ
【０２５５】
【化９】
2020072732.tif 000010
【０２５６】
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは各々独立して、Ｈ、ヒドロキシ保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合であり、
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、アシル、置換アシル、Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルである。
【０２５７】
ある実施形態において、式Ｖ
【０２５８】
【化１０】
2020072732.tif 000011
【０２５９】
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは各々独立してＨ、ヒドロキシ保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合であり、
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆは各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、
またはｑｅ及びｑｆは互いに＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、
ｑｇ及びｑｈは各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２６０】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ単量体アデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン及びウラシルの合成及び調製は、そのオリゴマー化及
び核酸認識特性とともにすでに説明されている（Ｋｏｓｈｋｉｎら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７〜３６３０）。ＢＮＡ及びその調製はまた、ＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６において説明されている。
【０２６１】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ及び２’−チオ−ＢＮＡの類似体もすでに調製されている（Ｋｕｍａｒら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９〜２２２２）。核酸ポリメラーゼに対する基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド二本鎖を含むロックされたヌクレオシド類似体の調製も説明されている（Ｗｅｎｇｅｌら，ＷＯ９９／１４２２６）。さらに、新規の立体配座的に（ｃｏｍｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｌｙ）制限された高親和性オリゴヌクレオチド類似体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成は、当該技術分野において既に説明されている（Ｓｉｎｇｈら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５〜１００３９）。加えて、２’−アミノ−及び２’−メチルアミノ−ＢＮＡは調製されており、当該ＢＮＡと相補的ＲＮＡ鎖及びＤＮＡ鎖との二本鎖の熱安定性は既に報告されている。
【０２６２】
ある実施形態において、式ＶＩ
【０２６３】
【化１１】
2020072732.tif 000012
【０２６４】
を有する二環式ヌクレオシドが提供され、式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは各々独立して、Ｈ、ヒドロキシ保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合であり、
各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、かつ
ｑｉ及びｑｊまたはｑｌ及びｑｋは互いに、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、式中、ｑｇ及びｑｈは各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２６５】
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋及びアルケニル類似体架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’を有する１つの炭素環式二環式ヌクレオシドはすでに説明されている（Ｆｒｅｉｅｒら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９〜４４４３及びＡｌｂａｅｋら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１〜７７４０）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も当該ヌクレオシドのオリゴマー化及び生化学的研究とともにすでに説明されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６），８３６２〜８３７９）。
【０２６６】
本明細書で使用する場合、「４’−２’二環式ヌクレオシド」または「４’から２’の
二環式ヌクレオシド」は、糖環の２’炭素原子及び４’炭素原子を結合するフラノース環の２つの炭素原子を結合する架橋を含むフラノース環を含む二環式ヌクレオシドを指す。
【０２６７】
本明細書で使用する場合、「単環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分ではない修飾された糖部分を含むヌクレオシドを指す。ある実施形態において、ヌクレオシドの糖部分、または糖部分類似体は、いずれかの位置において修飾または置換され得る。
【０２６８】
本明細書で使用する場合、「２’−修飾された糖」は、２’位で修飾されたフラノシル糖を意味する。ある実施形態において、このような修飾には、置換及び非置換のアルコキシ、置換及び非置換のチオアルキル、置換及び非置換のアミノアルキル、置換及び非置換のアルキル、置換及び非置換のアリル、ならびに置換及び非置換のアルキニルを含むがこれらに限定しないハロゲン化物から選択された置換基が含まれる。ある実施形態において、２’修飾は、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２を含むがこれらに限定しない置換基から選択され、式中ｎ及びｍは１〜約１０である。他の２’−置換基は、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリールもしくはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、挿入基、アンチセンス化合物の薬物動態特性を改善するための基もしくは薬力学的特性を改善するための基、及び類似の特性を有する他の置換基からも選択することができる。ある実施形態において、修飾されたヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４〜１２０００）。このような２’−ＭＯＥ置換は、２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、及びＯ−アミノプロピルなど、修飾されていないヌクレオシド及び他の修飾されたヌクレオシドと比較して結合親和性が改善されているものとして説明されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドはまた、インビボでの使用のための有望な特徴を有する遺伝子発現おアンチセンス阻害薬であることが示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６〜５０４、Ａｌｔｍａｎｎら，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８〜１７６、Ａｌｔｍａｎｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０〜６３７、及びＡｌｔｍａｎｎら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７〜９２６）。
【０２６９】
本明細書で使用する場合、「修飾されたテトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾されたＴＨＰヌクレオシド」は、正常なヌクレオシドにおけるペントフラノシル残基について置換された６員のテトラヒドロピラン「糖」を有するヌクレオシドを意味する（糖代用物）。修飾されたＴＨＰヌクレオシドには、当該技術分野においてヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール核酸（ＡＮＡ）、マンニトール核酸（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１〜１９５４を参照されたい）または以下
【０２７０】
【化１２】
2020072732.tif 000013
【０２７１】
に示すようなテトラヒドロピラン環系を有するフルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）と呼ばれるものが含まれるが、これらに限定しない。
【０２７２】
ある実施形態において、式ＶＩＩ
【０２７３】
【化１３】
2020072732.tif 000014
【０２７４】
を有する糖代用物が選択され、式中、式ＶＩＩの当該少なくとも１つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体の各々について独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは各々独立して、アンチセンス化合物に対するテトラヒドロピランヌクレオシド類似体を結合するヌクレオシド間結合基であり、またはＴａ及びＴｂのうちの１つは、アンチセンス化合物に対するテトラヒドロピランヌクレオシド類似体を結合するヌクレオシド間結合基であり、Ｔａ及びＴｂのうちのもう１つは、Ｈ、ヒドロキシ保護基、結合した共役基、または５’もしくは３’−末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は各々独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、かつＲ１及びＲ２の各々は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、置換もしくは非置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮであり、式中ＸはＯ、ＳまたはＮＪ１でありかつ各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０２７５】
ある実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７が各々Ｈである式ＶＩＩの修飾されたＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つは、Ｈ以外である。ある実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つはメチルである。ある実施形態において、Ｒ１及びＲ２のうちの１つがフルオロである式ＶＩＩのＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある実施形態において、Ｒ１はフルオロでありかつＲ２はＨであり、Ｒ１はメトキシでありかつＲ２はＨであり、及びＲ１はメトキシエトキシでありかつＲ２はＨである。
【０２７６】
ある実施形態において、糖代用物は、５個超の原子及び１個超のヘテロ原子を有する環を含む。例えば、モルフォリノ糖部分を含むヌクレオシド及びオリゴマー化合物における当該部分の使用はすでに報告されている（例えば、Ｂｒａａｓｃｈら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３〜４５１０、ならびに米国特許第５，６９８，６８５号、第５，１６６，３１５号、第５，１８５，４４４号及び第５，０３４，５０６号を参照されたい。）。本明細書で使用する場合、用語「モルフォリノ」は、以下の式
【０２７７】
【化１４】
2020072732.tif 000015
【０２７８】
を有する糖代用物を意味する。ある実施形態において、モルフォリノは、例えば、上述のモルフォリノ構造由来の種々の置換基を付加または変更することによって修飾してもよい。このような糖代用物は本明細書では、「修飾されたモルフォリノ」と呼ぶ。
【０２７９】
２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについて２００８年８月２１日公開のＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００８／１０１１５７号を参照されたい）ならびにリボシル環酸素原子とＳとの置換及び２’位でのさらなる置換（２００５年６月１６日公開の米国特許出願公開ＵＳ２００５−０１３０９２３を参照されたい）、またはそれに替わるものとして二環式核酸の５’−置換（２００７年１１月２２日公開のＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００７／１３４１８１を参照されたく、この中で４’−ＣＨ２−Ｏ−２’二環式ヌクレオシドはさらに、５’位で５’−メチル基または５’−ビニル基と置換される。）などだがこれらに限定しない修飾の組み合わせも提供される。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、当該ヌクレオシドのオリゴマー化及び生化学的研究とともにすでに説明されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２〜８３７９を参照されたい）。
【０２８０】
ある実施形態において、アンチセンス化合物は、天然ヌクレオシドにおけるペントフラノシル残基の代わりに６員のシクロヘキセニルを有するヌクレオシドである、１つ以上の修飾されたシクロヘキセニルヌクレオシドを含む。修飾されたシクロヘキセニルヌクレオシドには、当該技術分野で説明されたものが含まれるが、これらに限定しない（例えば、共通して所有される２０１０年４月１０日公開のＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１０／０３６６９６号、Ｒｏｂｅｙｎｓら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０（６），１９７９〜１９８４、Ｈｏｒｖaｔｈら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，
２００７，４８，３６２１〜３６２３、Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（３０），９３４０〜９３４８、Ｇｕら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２００５，２４（５〜７），９９３〜９９８、Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，３３（８），２４５２〜２４６３、Ｒｏｂｅｙｎｓら，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ，第Ｆ節：Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００５，Ｆ６１（６），５８５〜５８６、Ｇｕら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０（９），２１１１〜２１２３、Ｇｕら，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００３，１３（６），４７９〜４８９、Ｗａｎｇら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００３，６８，４４９９〜４５０５、Ｖｅｒｂｅｕｒｅら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，２９（２４），４９４１〜４９４７、Ｗａｎｇら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００１，６６，８４７８〜８４８２、Ｗａｎｇら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２００１，２０（４〜７），７８５〜７８８、Ｗａｎｇら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．，２０００，１２２，８５９５〜８６０２、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ０６／０４７８４２号、及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ０１／０４９６８７号を参照されたく、各々の文書はそれらが全体として参照により本明細書に組み込まれる。）。ある修飾されたシクロヘキセニルヌクレオシドは、式Ｘ
【０２８１】
【化１５】
2020072732.tif 000016
【０２８２】
を有し、式中、式Ｘの当該少なくとも１つのシクロヘキセニルヌクレオシド類似体について独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は各々独立して、シクロヘキセニルヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物へ結合するヌクレオシド間結合基であり、あるいはＴ３及びＴ４のうちの１つは、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物へ結合するヌクレオシド間結合基であり、かつＴ３及びＴ４のうちのもう１つはＨ、ヒドロキシ保護基、結合した共役基、または５’−もしくは３’末端基であり、かつ
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、ｑ７、ｑ８及びｑ９は各々独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、または他の糖置換基である。
【０２８３】
本明細書で使用する場合、「２’−修飾された」または「２’−置換」は、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’−修飾されたヌクレオシドには、二環式ヌクレオシド（この中で、糖環の２つの炭素原子を結合する架橋は、２’炭素と糖環の別の炭素を結合させる）、及びアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）（式中、各Ｒｍ及びＲｎは独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである）などの非架橋性２’置換基を有するヌクレオシドが含まれるがこれらに限定されない。２’−修飾されたヌクレオシドは、例えば糖及び／または核酸塩基の他の位置に他の修飾をさらに含んでもよい。
【０２８４】
本明細書で使用する場合、「２’−Ｆ」は、糖環の２’位でフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２８５】
本明細書で使用する場合、「２’−ＯＭｅ」または「２’−ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メチル」は各々、糖環の２’位で−ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２８６】
本明細書で使用する場合、「ＭＯＥ」または「２’−ＭＯＥ」または「２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メトキシエチル」は各々、糖環の２’位で−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０２８７】
本明細書で使用する場合、「オリゴヌクレオチド」は、複数の結合したヌクレオシドを含む化合物を指す。ある実施形態において、複数のヌクレオシドのうちの１つ以上は修飾されている。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
【０２８８】
本明細書で提供されるようなアンチセンス化合物への組み込みのためにヌクレオシドを
修飾するために使用することができる多くの他の単環、二環及び三環の糖代用物環系も当該技術分野で公知である（例えば、総説文献：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１〜１９５４を参照されたい）。このような環系は、活性を高めるために種々の追加的な置換を受けることができる。
【０２８９】
修飾された糖の調製のための方法は、当業者に周知である。このような修飾された糖の調製を教示するいくつかの代表的な米国特許には、米国特許第４，９８１，９５７号、第５，１１８，８００号、第５，３１９，０８０号、第５，３５９，０４４号、第５，３９３，８７８号、第５，４４６，１３７号、第５，４６６，７８６号、第５，５１４，７８５号、第５，５１９，１３４号、第５，５６７，８１１号、第５，５７６，４２７号、第５，５９１，７２２号、第５，５９７，９０９号、第５，６１０，３００号、第５，６２７，０５３号、第５，６３９，８７３号、第５，６４６，２６５号、第５，６７０，６３３号、第５，７００，９２０号、第５，７９２，８４７号及び第６，６００，０３２号、ならびに２００５年６月２日に出願及び２００５年１２月２２日にＷＯ２００５／１２１３７１として公開された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９２１９号が含まれるが、これらに限定されず、これらの各々はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２９０】
修飾された糖部分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分（中性型、修飾型またはこれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリッド形成のために維持される。
【０２９１】
ある実施形態において、アンチセンス化合物は、修飾された糖部分を有する１つ以上のヌクレオシドを含む。ある実施形態において、修飾された糖部分とは２’−ＭＯＥである。ある実施形態において、２’−ＭＯＥ修飾されたヌクレオシドは、ギャップマーモチーフにおいて配置される。ある実施形態において、修飾された糖部分とは、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。ある実施形態において、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）修飾されたヌクレオシドは、ギャップマーモチーフのウィング中に配置される。
【０２９２】
（共役型アンチセンス化合物）
アンチセンス化合物は、結果として生じるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞内分布または細胞内取り込みを高める１つ以上の部分または共役体へ共有結合してもよい。典型的な共役基には、コレステロール部分及び脂質部分が含まれる。追加的な共役基には、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び色素が含まれる。
【０２９３】
アンチセンス化合物はまた、例えばヌクレアーゼ安定性などの特性を高めるためにアンチセンス化合物の片方のまたは両方の末端へ概して結合した１つ以上の安定化基を有するよう修飾することができる。安定柿に含まれるのはキャップ構造である。これらの末端修飾は、末端核酸を有するアンチセンス化合物をエキソヌクレアーゼ分解から保護し、細胞内での送達及び／または局在化において役に立つことができる。キャップは、５’末端（５’−キャップ）、もしくは３’末端（３’−キャップ）に存在することができ、または両末端に存在することができる。キャップ構造は当該技術分野で周知であり、例えば逆デオキシ脱塩基性キャップが含まれる。ヌクレアーゼ安定性を与えるためにアンチセンス化合物の片方のまたは両方の末端をキャッピングするために使用することのできるさらなる３’及び５’安定化基には、２００３年１月１６日公開のＷＯ０３／００４６０２において開示されている者が含まれる。
【０２９４】
（細胞培養及びアンチセンス化合物の治療）
ＰＫＫ核酸のレベル、活性、または発現に及ぼすアンチセンス化合物の効果は、種々の細胞型においてインビトロで検査することができる。このような分析に使用する細胞型は
、商業的販売業者（例えば、米国培養細胞系統保存機関，バージニア州マナサス（Ｍａｎａｓｓｕｓ）市、Ｚｅｎ−Ｂｉｏ社，ノースカロライナ州リサーチトライアングルパーク、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ社，メリーランド州ウォーカーズビル町）から入手可能であり、市販の試薬（例えば、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カリフォルニア州カールスバッド市）を用いて販売業者の説明書に従って培養する。実例となる細胞型には、ＨｅｐａＲＧ（商標）Ｔ細胞及びマウス初代肝細胞が挙げられるが、これらに限定しない。
【０２９５】
（アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ検査）
本明細書に説明されるのは、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで治療するための方法であり、他のアンチセンス化合物を用いた治療のために適切に改変することができる。
【０２９６】
細胞は、培養中におよそ６０〜８０％の集密度に到達する場合にアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて治療してもよい。
【０２９７】
培養した細胞中へアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するのに共通して使用する1
つの試薬には、陽イオン性脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カリフォルニア州カールスバッド市）がある。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ１（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カリフォルニア州カールスバッド市）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮと混合して、所望の終濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２uｇ／ｍＬに及び得るＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ濃度に到達し得る。
【０２９８】
培養した細胞中へアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するのに使用する別の試薬には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カリフォルニア州カールスバッド市）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ１還元型血清培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カリフォルニア州カールスバッド市）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥと混合して、所望の濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２uｇ
／ｍＬに及び得るＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ濃度に到達する。
【０２９９】
培養した細胞中へアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するのに使用する別の技術には、電気穿孔法が含まれる。
【０３００】
培養した細胞中へアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するのに使用するさらに別の技術には、細胞によるオリゴヌクレオチドの自由な取り込みが含まれる。
【０３０１】
細胞は、所定の方法によってアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて治療される。細胞は、アンチセンスオリゴヌクレオチド治療の１６〜２４時間後に収集され得、この時点で標的核酸のＲＮＡレベルまたはタンパク質レベルは、当該技術分野で公知のかつ本明細書で説明する方法によって測定される。概して、治療が複数の複製物において実施される場合、データは複製物治療の平均として表される。
【０３０２】
使用するアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞系統によって変わる。特定の細胞系統について最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を判定する方法は、当該技術分野で周知である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは典型的には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥをトランスフェクトした場合、１〜３００ｎＭに及ぶ濃度で使用する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、電気穿孔法を用いてトランスフェクトする場合、６２５〜２０，０００ｎＭに及ぶ比較的高濃度で使用する。
【０３０３】
（ＲＮＡ単離）
ＲＮＡ分析は、全細胞またはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡについて実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は当該技術分野で周知である。ＲＮＡは、当該技術分野で周知の方法を用いて、例えば、製造元の推奨プロトコルによるＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，カリフォルニア州カールスバッド市）を用いて調製する。
【０３０４】
（標的レベルまたは発現の阻害に関する分析）
ＰＫＫ核酸のレベルまたは発現の阻害は、当該技術分野で公知の種々の方法においてアッセイすることができる。例えば、標的核酸レベルは、例えばノザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または定量的リアルタイムＰＣＲによって定量化することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡについて実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は当該技術分野で周知である。ノザンブロット分析も当該技術分野で所定である。定量的リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州フォスター市）から入手可能なかつ製造元の説明書によって使用する市販のＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７６００、７７００、または７９００配列検出システムを用いて簡便に達成することができる。
【０３０５】
（標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析）
標的ＲＮＡレベルの定量化は、製造元の説明書により、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７６００、７７００、または７９００配列検出システム（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，カリフォルニア州フォスター市）を用いる定量的リアルタイムＰＣＲによって達成してもよい。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は当該技術分野で周知である。
【０３０６】
リアルタイムＰＣＲの前に、単離したＲＮＡを逆転写酵素（ＲＴ）反応へ供して、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生成した後、これをリアルタイムＰＣＲ増幅のための基質として使用する。ＲＴ  ＰＣＲ反応及びリアルタイムＰＣＲ反応は、同じ試料ウェルにおいて連続的に実施される。ＲＴ  ＰＣＲ試薬及びリアルタイムＰＣＲ試薬は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（カリフォルニア州カールスバッド市）から得てもよい。ＲＴ・リアルタイムＰＣＲ反応は、当業者に周知の方法によって実施する。
【０３０７】
リアルタイムＰＣＲによって得られる遺伝子（またはＲＮＡ）標的量は、シクロフィリンＡなど、発現が定常的である遺伝子の発現レベル、またはＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，カリフォルニア州カールスバッド市）を用いて全ＲＮＡを定量化することによってのいずれかを用いて標準化される。シクロフィリンＡ発現は、リアルタイムＰＣＲによって、標的とともに同時に実行することによって、乗算して、または別個に定量化される。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ  ＲＮＡ定量化試薬（Ｉｎｖｅｔｒｏｇｅｎ社，オレゴン州ユージーン市）を用いて定量化される。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによるＲＮＡ定量化の方法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．ら（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８〜３７４）において教示されている。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ  ４０００機（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮの蛍光を測定する。
【０３０８】
プローブ及びプライマーは、ＰＫＫ核酸へハイブリッド形成するよう設計される。リアルタイムＰＣＲプローブ及びプライマーを設計するための方法は、当該技術分野で周知であり、ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，カリフォルニア州フォスター市）などのソフトウェアの使用を含み得る。
【０３０９】
（タンパク質レベルの分析）
ＰＫＫ核酸のアンチセンス阻害は、ＰＫＫタンパク質レベルを測定することによって評価することができる。ＰＫＫのタンパク質レベルは、免疫沈降、ウェスタンブロット分析
（イムノブロッティング）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（たとえば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学または蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）など、当該技術分野で周知の種々の方法において評価または定量化することができる。標的へ向かう抗体は、抗体のＭＳＲＳカタログ（Ａｅｒｉｅ社，ミシガン州バーミンガム市）などの種々の源から識別及び入手することができ、または当該技術分野で周知の従来のモノクローナルもしくはポリクローナル抗体生成方法を介して調製することができる。
【０３１０】
（アンチセンス化合物のインビボでの検査）
アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの発現を阻害して表現型の変化を生じる能力を評価するために動物において検査される。
【０３１１】
ある実施形態において、このような表現型変化には、低い炎症、浮腫／腫脹、血管透過性、及び血管漏出など、炎症性疾患と関連する変化が含まれる。ある実施形態において、炎症は、動物における浮腫の増減、温度、疼痛、組織の色、及び腹部機能を測定することによって測定される。
【０３１２】
ある実施形態において、このような表現型変化には、長いａＰＴＴ、正常なＰＴとともにある長いａＰＴＴ時間、低い血小板因子４（ＰＦ−４）の量、及び低い血栓形成もしくは血栓形成のための長い時間など、血栓塞栓性疾患と関連した変化が含まれる。
【０３１３】
検査は、正常な動物において、または実験的疾患モデルにおいて実施してもよい。動物への投与のために、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝塩類溶液など、医薬として許容し得る希釈剤中に製剤化される。投与には、腹腔内、静脈内及び皮下などの非経口投与経路が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチド薬用量及び投薬頻度の算出は、当業者の能力内であり、投与経路及び動物体重などの因子に左右される。アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた治療の期間の後、ＲＮＡは、肝組織から単離され、ＰＫＫ核酸発現の変化が測定される。
【０３１４】
（ある徴候）
ある実施形態において、本発明は、本明細書に説明する１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法を提供する。
【０３１５】
ある実施形態において、個体は炎症性疾患を罹患している。ある実施形態において、個体は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、及び脳浮腫を含むがこれらに限定しない炎症性容態を発症する危険にある。当該個体には、炎症の危険に至る獲得性の問題、疾患、または障害、例えば、炎症性容態、環境因子、ならびに例えばＡＣＥ阻害薬及びＡＲＢを含むある投薬への曝露に対する遺伝的素因を有する個体が含まれる。ある実施形態において、個体は、抗炎症性療法の必要があると識別された。このような個体の例としては、補体１エステラーゼ阻害薬（すなわち、Ｃ１−ＩＮＨ）または第ＸＩＩ因子についての遺伝暗号における突然変異を有する個体が挙げられるが、これらに限定しない。ある実施形態において、異常な暗号は、Ｃ１−ＩＮＨ（すなわち、Ｉ型ＨＡＥ）における欠損、既存のＣ１−ＩＮＨが適切に機能できないこと（ＩＩ型ＨＡＥ）、または過剰機能性第ＸＩＩ因子（すなわち、ＩＩＩ型ＨＡＥ）をもたらすことができる。
【０３１６】
ある実施形態において、個体は、血栓塞栓性疾患を罹患している。ある実施形態において、個体は、梗塞、血栓症、塞栓症、深部静脈血栓症などの血栓塞栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、及び脳卒中を含むがこれらに限定しない血液凝固障害についての危険にある。当該個体には、血栓症、例えば手術、癌、不動、敗血症、粥状硬化症心房細動、ならびに遺伝
的素因、例えば、抗リン脂質症候群、及び常染色体優性遺伝容態、第Ｖ因子ライデンの危険に至る獲得性の問題、疾患、または障害を有する個体が含まれる。ある実施形態において、個体は、抗凝固療法の必要があると識別された。このような個体の例としては、主要な整形外科手術（例えば、臀部／膝置換または臀部骨折手術）を受けている個体、ならびに脳卒中を予防するために心房細動に苦しんでいる患者など、慢性的な治療を必要とする患者が挙げられるが、これらに限定しない。
【０３１７】
ある実施形態において、本発明は、個体におけるＰＫＫ発現を予防的に低下させるための方法を提供する。ある実施形態には、ＰＫＫ核酸を標的とする治療有効量のアンチセンス化合物を個体へ投与することによって治療を要する個体を治療することが含まれる。
【０３１８】
一実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とする治療有効量のアンチセンス化合物の投与は、アンチセンス化合物の投与に対する個体の応答を判断するために、個体の血清中のＰＫＫレベルのモニタリングが付随する。アンチセンス化合物の投与に対する個体の応答は、治療介入の量及び継続期間を判断するために医師によって使用される。
【０３１９】
ある実施形態において、ＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は結果的に、ＰＫＫ発現の低下を少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％、またはこれらの値のうちのいずれか２つによって規定される範囲だけＰＫＫ発現の低下を生じる。ある実施形態において、ＰＫＫを標的とするアンチセンス化合物を含む医薬組成物は、炎症性疾患もしくは血栓塞栓性疾患を罹患しているまたはその疑いのある患者を治療するための薬剤の調製のために使用される。
【０３２０】
（ある組成物）
（１．ＩＳＩＳ５４６２５４）
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４６２５４は、（５’から３’へと）ＴＧＣＡＡＧＴＣＴＣＴＴＧＧＣＡＡＡＣＡの配列（配列番号５７０として本明細書に組み込まれる）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴づけられ、この中で、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオアート結合であり、各シトシンは５’−メチルシトシンであり、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々は２’−Ｏ−メトキシエチル修飾したヌクレオシドであり、かつヌクレオシド６〜１５の各々は２’−デオキシヌクレオシドである。
【０３２１】
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４６２５４は、以下の化学表記法。すなわち、Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ
Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅによって説明され、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾したヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である。
【０３２２】
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４６２５４は、以下の化学構造
【０３２３】
【化１６】
2020072732.tif 000017
【０３２４】
によって説明される。
【０３２５】
ある実施形態において、実施例２（後述）に提供するように、ＩＳＩＳ５４６２５４は、２４時間の処置期間の後、電気穿孔法を用いて５，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトし、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を用いて定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量によって調整した場合、培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞（ウェルあたり２０，０００個の細胞密度）においてヒトＰＫＫｍＲＮＡの９５％阻害を達成した。
【０３２６】
ある実施形態において、実施例５に提供するように（後述の表３４及び表４１を参照されたい）、ＩＳＩＳ５４６２５４は、１６の処置期間の後、電気穿孔法を用いてトランスフェクトし、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を用いる定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した場合、培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞（ウェルあたり２０，０００個の細胞密度）において４点用量応答曲線（０．１９μＭ、０．５６μＭ、１．６７μＭ、及び５．０μＭ）における０．２μＭ及び０．３μＭのＩＣ５０を達成した。
【０３２７】
ある実施形態において、実施例７（後述）に提供するように、ＩＳＩＳ５４６２５４は、２．５ｍｇ／ｋｇ／週、５．０ｍｇ／ｋｇ／週、１０ｍｇ／ｋｇ／週または２０ｍｇ／ｋｇ／週でＩＳＩＳ５４６２５４を用いて週２回、３週間皮下注射した場合、ヒトＰＫＫ遺伝子配列を有するトランスジェニックマウスにおける３１％、５５％、８４％、及び８３％のヒトＰＫＫｍＲＮＡ阻害、ならびに０％、３６％、５１％、及び７６％のヒトＰＫＫタンパク質阻害を達成した。
【０３２８】
ある実施形態において、実施例８（後述）に提供するように、ＩＳＩＳＩ５４６２５４は、ＰＫＫのｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を阻害するのに有効であり、霊長類動物にお
いて許容できる。
【０３２９】
（２．ＩＳＩＳ５４６３４３）
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４６３４３は、（５’から３’へと）ＣＣＣＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＡＧＣＣＡＧＣの配列（配列番号７０５として本明細書に組み込まれる）を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして特徴づけられ、この中で、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオアート結合であり、各シトシンは５’−メチルシトシンであり、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０の各々は２’−Ｏ−メトキシエチル修飾したヌクレオシドであり、ヌクレオシド６〜１５の各々は２’−デオキシヌクレオシドである。
【０３３０】
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４６３４３は、以下の化学表記法、すなわち、ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅによって説明され、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン、
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン、
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾したヌクレオシド、
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である。
【０３３１】
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４６３４３は、以下の化学構造
【０３３２】
【化１７】
2020072732.tif 000018
【０３３３】
によって説明される。
【０３３４】
ある実施形態において、実施例２に提供するように（後述の表９及び表１０を参照されたい）、ＩＳＩＳ５４６３４３は、２４時間の処置期間の後に電気穿孔法を用いて５，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトし、ヒトプライマーブローブセットＲＴＳ３４５４を用いる定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した場合、培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞（ウェルあたり２０，０００個の細胞密度）における９７％及び９１％のヒトＰＫＫｍＲＮＡ阻害を達成した。
【０３３５】
ある実施形態において、実施例５に２回提供するように（後述の表３４及び表４１を参照されたい）、ＩＳＩＳ５４６３４３は、１６の処置期間の後に電気穿孔法を用いてトランスフェクトし、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を用いる定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように全ＲＮＡ含有量により調整した場合、培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞（ウェルあたり２０，０００個の細胞密度）における４点用量応答曲線（０．１９μＭ、０．５６μＭ、１．６７μＭ、及び５．０μＭ）における０．４μＭのＩＣ５０を達成した。
【０３３６】
ある実施形態において、実施例７（後述）に提供するように、ＩＳＩＳ５４６３４３は、ＩＳＩＳ５４６３４３を週２回、３週間、２．５ｍｇ／ｋｇ／週、５．０ｍｇ／ｋｇ／週、１０ｍｇ／ｋｇ／週または２０ｍｇ／ｋｇ／週で皮下注射した場合、ヒトＰＫＫ遺伝子配列を有するトランスジェニックマウスにおいて、４６％、６６％、及び８６％のヒトＰＫＫｍＲＮＡ阻害、ならびに０％、３８％、及び７９％のヒトＰＫＫタンパク質阻害を達成した。
【０３３７】
ある実施形態において、実施例８（後述）に提供するように、ＩＳＩＳＩ５４６３４３は、ＰＫＫのｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を阻害するのに有効であり、霊長類動物において許容できる。
【０３３８】
（３．ＩＳＩＳ５４８０４８）
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４８０４８は、核酸塩基配列（５’から３’へと）ＣＧＡＴＡＴＣＡＴＧＡＴＴＣＣＣ（配列番号１６６６として本明細書に組み込まれる）を有し、１６個の２’−デオキシヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾したヌクレオシド及びｃＥｔ修飾したヌクレオシドの組み合わせからなる修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドとして特徴づけられ、この中で、ヌクレオシド３、１４、及び１５の各々は、ｃＥｔ修飾したヌクレオシドであり、この中で、ヌクレオシド４〜１３の各々は２’−デオキシヌクレオシドであり、この中で、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオアートヌクレオシド間結合であり、ならびにこの中で各シトシンは５’−メチルシトシンである。
【０３３９】
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４８０４８は、以下の化学表記法、すなわちｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｋｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｅによって説明され、この中で
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン、
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾したヌクレオシド
ｋ＝ｃＥｔ修飾したヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である。
【０３４０】
ある実施形態において、ＩＳＩＳ５４８０４８は、以下の化学構造
【０３４１】
【化１８】
2020072732.tif 000019
【０３４２】
によって説明される。
【０３４３】
ある実施形態において、実施例３（後述）に提供するように、ＩＳＩＳ５４８０４８は、２４時間の処置期間の後、電気穿孔法を用いて１，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトし、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を用いる定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した場合、培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞（ウェルあたり２０，０００個の細胞密度）における８４％ｍＲＮＡ阻害を達成した。
【０３４４】
ある実施形態において、実施例６（後述）に提供するように、ＩＳＩＳ５４８０４８は、１６の処置期間の後に電気穿孔法を用いてトランスフェクトし、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を用いる定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した場合、培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞（ウェルあたり２０，０００個の細胞密度）における４点用量応答曲線（０．１１μＭ、０．３３μＭ、１．００μＭ、及び３．００μＭ）において０．１μＭのＩＣ５０を達成した。
【０３４５】
ある実施形態において、実施例７（後述）に提供するように、ＩＳＩＳ５４８０４８は、ＩＳＩＳ５４８０４８を週２回、３週間、２．５ｍｇ／ｋｇ／週、５．０ｍｇ／ｋｇ／
週、１０ｍｇ／ｋｇ／週または２０ｍｇ／ｋｇ／週で皮下注射した場合、ヒトＰＫＫ遺伝子配列を有するトランスジェニックマウスにおいて、７％、７７％、７２％、及び８０％のヒトＰＫＫｍＲＮＡ阻害、ならびに２３％、７０％、８９％、及び９８％のヒトＰＫＫタンパク質阻害を達成した。
【０３４６】
ある実施形態において、実施例８（後述）に提供するように、ＩＳＩＳＩ５４８０４８は、ＰＫＫのｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を阻害するのに有効であり、霊長類動物において許容できる。
【０３４７】
（あるホットスポット領域）
（１．配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１〜１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６はホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３４８】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６は、以下のＩＳＩＳ番号５３０９９３、５３０９９４、５３０９９５、５４６２５１、５４６２５２、５４６２５３、５４６２５４、５４６２５５、５４６２５６、５４７４１０、５４７４１１、５４７９７８、５４７９７９、５４７９８０、及び５４７９８１によって標的とされる。
【０３４９】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６は、以下の配列番号９４、９５、９６、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５７２、５７３、１５９７、１５９８、１５９９、及び１６００によって標的とされる。
【０３５０】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基２７４２７〜２７４６６は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫ及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも ３７％
、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、
少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【０３５１】
（２．配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３５２】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２は、以下のＩＳＩＳ番号５３１０５２、５３１０５３、５３１０５４、５３１０５５、５３１０５６、５３１０５７、５３１１５８、５４６３４３、５４６３４５、５４７４８０、５４７４８１、５４７４８２、及び５４７４８３によって標的とされる。
【０３５３】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基３３１８３〜３３２４２は、以下の配列番号１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、２６１、７０２、７０３、７０４、７０５、７０６、及び７０７によって標的とされる。
【０３５４】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基３３１８３〜３３２４２は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫのｍＲＮＡレベル及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少
なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【０３５５】
（３．配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３５６】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０は、以下のＩＳＩＳ番号５３１０２６、５４６３０９、５４６３１０、５４６３１１、５４６３１３、５４７４５３、５４７４５４、５４７４５５、５４７４５６、５４７４５７、５４７４５８、５４８０４６、５４８０４７、５４８０４８、５４８０４９、及び５４８０５０によって標的とされる。
【０３５７】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基３０５７０〜３０６１０は、以下の配列番号１２９、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６１、１６６４、１６６５、１６６６、１６６７、及び１６６８によって標的とされる。
【０３５８】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基３０５７０〜３０６１０は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫのｍＲＮＡレベル及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少
なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【０３５９】
（４．配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３６０】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０は、以下のＩＳＩＳ番号５３０９９３〜５３０９９９、５４６２５１〜５４６２５６、５４６２５８〜５４６２６０、５４６２６３、５４６２６５〜５４６２６８、５４７４１０〜５４７４１７、及び５４７９７８〜５４７９９２によって標的とされる。
【０３６１】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基２７４２７〜２７５２０は、以下の配列番号９４〜１００、５６６〜５８７、及び１５９７〜１６１１によって標的とされる。
【０３６２】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基２７４２７〜２７５２０は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫ及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％
、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【０３６３】
（５．配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４７）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４７を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４７は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４７は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３６４】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４７は、以下のＩＳＩＳ番号５３１０４１〜５３１１５８、５４６３３６、５４６３３９、５４６３４０、５４６３４３、５４６３４５、５４７４７４〜５４７４８３、５４７７７８、５４８０７７〜５４８０８２、及び５４８６７７〜５４８６７８によって標的とされる。
【０３６５】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基３３０８５〜３３２４７は、以下の配列番号１４４〜１６０、２６１、６９３〜７０７、１２５６、１３２０〜１３２５、２２１４、及び２２１５によって標的とされる。
【０３６６】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基３３０８５〜３３２４７は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫ及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５
％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【０３６７】
（６．配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３６８】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９は、以下のＩＳＩＳ番号５３１０２１〜５３１０２９、５３１１４６、５４６２９７、５４６２９９〜５４６３０４、５４６３０６〜５４６３１１、５４６３１３、５４６３１６〜５４６３１９、５４７４４４〜５４７４６２、５４８０３１、５４８０３２、及び５４８０３４〜５４８０５６によって標的とされる。
【０３６９】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基３０４７５〜３０６３９は、以下の配列番号１２４〜１３２、２４９、６３３〜６６９、及び１６５０〜１６７４によって標的とされる。
【０３７０】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基３０４７５〜３０６３９は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫ及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％
の低下を達成する。
【０３７１】
（７．配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２４）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２４を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、核酸塩基２７３６２〜２７５２４は、ＰＫＫ（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）のエキソン９に対応する。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２４は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２４は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３７２】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基２７３６１〜２７５２４は、以下のＩＳＩＳ番号５３０９８５〜５３０９９９、５４６２４４、５４６２４７〜５４６２５６、５４６２５８〜５４６２６０、５４６２６３、５４６２６５〜５４６２６８、５４７４０３〜５４７４１７、５４７７２３、５４７９６８〜５４７９７０、及び５４７９７２〜５４７９９２によって標的とされる。
【０３７３】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基２７３６１〜２７５２４は、以下の配列番号８６〜１００、５５４〜５８７、１２１７、及び１５８８〜１６１１によって標的とされる。
【０３７４】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基２７３６２〜２７５２４は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫ及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なく
とも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【０３７５】
（８．配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、核酸塩基３３１０１〜３３２４０は、ＰＫＫ（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）のエキソン１４に対応する。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３７６】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０は、以下のＩＳＩＳ番号５３１０４１〜５３１１５８、５４６３３６、５４６３３９、５４６３４０、５４６３４３、５４６３４５、５４７４７４〜５４７４８３、５４８０７７〜５４８０８２、及び５４８６７８〜５４８６７８によって標的とされる。
【０３７７】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基３３１０１〜３３２４０は、以下の配列番号１４４〜１６０、２６１、６９３〜７０７、１３２０〜１３２５、及び２２１５によって標的とされる。
【０３７８】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基３３１０１〜３３２４０は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫ及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％
、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【０３７９】
（９．配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８）
ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８を標的とするよう設計される（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）。ある実施形態において、核酸塩基３０４６３〜３０６３８は、ＰＫＫ（核酸塩基１１１６９３００１から１１１７３００００まで切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）のエキソン１２に対応する。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８は、ホットスポット領域である。ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによって標的とされる。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さ１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基である。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーである。ある実施形態において、ギャップマーは、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−９−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、４−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、３−１０−４ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。ある実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合によって結合している。
【０３８０】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８は、以下のＩＳＩＳ番号５３１０２１〜５３１０２９、５３１１４６、５４６２９７、５４６２９９〜５４６３０４、５４６３０６〜５４６３１１、５４６３１３、５４６３１６〜５４６３１９、５４７４４４〜５４７４６２、５４８０３１、５４８０３２、及び５４８０３４〜５４８０５６によって標的とされる。
【０３８１】
ある実施形態において、配列番号１０の核酸塩基核酸塩基３０４６３〜３０６３８は、以下の配列番号１２４〜１３２、２４９、６３３〜６６９、及び１６５０〜１６７４によって標的とされる。
【０３８２】
ある実施形態において、配列番号１０のアンチセンスオリゴヌクレオチド標的核酸塩基３０４６３〜３０６３８は、インビトロ及び／またはインビボでのＰＫＫ及び／またはタンパク質レベルの少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、
少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の低下を達成する。
【実施例】
【０３８３】
（非限定的な開示及び参照による組み込み）
本明細書に説明するある化合物、組成物及び方法は、ある実施形態に従って具体的に説明されてきたが、以下の実施例は、本明細書に説明する化合物を説明するために機能しているに過ぎず、当該化合物を限定するよう意図するものではない。本出願に列挙する参考文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３８４】
（実施例１：２’−ＭＯＥ糖修飾を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドによるＨｅｐａＲＧ（商標）細胞におけるヒトＰＫＫのアンチセンス阻害）
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫ核酸を標的とするよう設計されており、インビトロでのＰＫＫｍＲＮＡに及ぼす当該ヌクレオチドの効果について検査した。ヒト肝前駆細胞系統由来の末端として分化した肝細胞である、かつ初代ヒト幹細胞の多くの特徴を保有する（Ｌｕｂｂｅｒｓｔｅｄｔ  Ｍ．ら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０１１  ６３：５９〜６８）ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞をスクリーニングに使用した。
【０３８５】
以下の表におけるキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。ギャップマーは、長さ２０ヌクレオシドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含み、かつ各々５個のヌクレオシドを含む５’方向及び３’方向でウィングセグメントによって隣接している。５’ウィングセグメントにおける各ヌクレオシド及び３’ウィングセグメントにおける各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を有する。各ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である。各ギャップマー中のシトシン残基はすべて、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする５’−末端ヌクレオシドを示す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする３’−末端ヌクレオシドを示す。以下の表に列挙する各ギャップマーは、ヒトＰＫＫゲノム配列の配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００８９２．３）として本明細書に指定されたヒトＰＫＫｍＲＮＡ、または配列番号１０（ヌクレオチド１１１６９３００１〜１１１７３００００を切り詰められたＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１６３５４．１９）として本明細書に指定されたヒトＰＫＫゲノム配列のいずれかを標的とし、「該当なし」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定の遺伝子配列を標的としていないことを示す。
【０３８６】
ウェルあたり２０，０００個の細胞密度で培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞に、電気穿孔法を用いて３，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。およそ２４時間の処置時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＰＫＫｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマーブローブセットＲＴＳ３４５４（配列番号２０として本明細書で指定する順方向配列ＣＣＡＡＡＡＡＡＧＧＴＧＣＡＣＣＡＧＴＡＡＣＡ、配列番号２１として本明細書で指定する逆方向配列ＣＣＴＣＣＧＧＧＡＣＴＧＴＡＣＴＴＴＡＡＴＡＧＧ、配列番号２２として本明細書で指定するプローブ配列ＣＡＣＧＣＡＡＡＣＡＴＴＴＣＡＣＡＡＧＧＣＡＧＡＧＴＡＣＣ）を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは
、類似の培養条件を有する一連の実験において検査した。各実験についての結果は、以下に示す個別の表に表される。結果は、未処置の対照細胞と比較したＰＫＫの％阻害として表す。
【０３８７】
【表１−１】
2020072732.tif 000020
【０３８８】
【表１−２】
2020072732.tif 000021
【０３８９】
【表１−３】
2020072732.tif 000022
【０３９０】
【表２−１】
2020072732.tif 000023
【０３９１】
【表２−２】
2020072732.tif 000024
【０３９２】
【表２−３】
2020072732.tif 000025
【０３９３】
【表３−１】
2020072732.tif 000026
【０３９４】
【表３−２】
2020072732.tif 000027
【０３９５】
【表３−３】
2020072732.tif 000028
【０３９６】
【表４−１】
2020072732.tif 000029
【０３９７】
【表４−２】
2020072732.tif 000030
【０３９８】
【表４−３】
2020072732.tif 000031
【０３９９】
【表４−４】
2020072732.tif 000032
【０４００】
【表４−５】
2020072732.tif 000033
【０４０１】
【表４−６】
2020072732.tif 000034
【０４０２】
（実施例２：２’−ＭＯＥ糖修飾を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドによるＨｅｐａＲＧ（商標）細胞におけるヒトＰＫＫのアンチセンス阻害）
追加的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＰＫＫ核酸を標的とするよう設計し、インビトロでのＰＫＫｍＲＮＡに及ぼす効果について検査した。
【０４０３】
以下の表におけるキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを５−１０−５ＭＯＥギャップマー、４−９−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−４ＭＯＥギャップマー、４−１０−３ＭＯＥギャップマー、３−１０−４ＭＯＥギャップマー、または３−１０−３ＭＯＥギャップマーとして設計した。５−１０−５ＭＯＥギャップマーは長さ２０ヌクレオシドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、かつ各５個のヌクレオシドを含む５’方向及び３’方向におけるウィングセグメントによって隣接している。４−９−４ＭＯＥギャップマーは長さ１７ヌクレオシドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、９個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、各４個のヌクレオシドを含む５’方向及び３’方向におけるウィングセグメントによって隣接している。４−１０−４ＭＯＥギャップマーは長さ１８ヌクレオシドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、２’−デオキシヌクレオシドから構成され、各４個のヌクレオシドを含む５’方向及び３’方向におけるウィングセグメントによって隣接している。４−１０−３ＭＯＥギャップマーは長さ１７ヌクレオシドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、それぞれ４個及び３個のヌクレオシドを含む５’方向及び３’方向におけるウィングセグメントによって隣接している。３−１０−４ＭＯＥギャップマーは長さ１７ヌクレオシドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、それぞれ３個及び４個のヌクレオシドを含む５’方向及び３’方向におけるウィングセグメントによって隣接している。３−１０−３ＭＯＥギャップマーは長さ１６ヌクレオシドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、各３個のヌクレオシドを含む５’方向及び３’方向におけるウィングセグメントによって隣接している。５’ウィングセグメントにおける各ヌクレオシド及
び３’ウィングセグメントにおける各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を有している。各ギャップマー中にあるヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である。各ギャップマー中にあるシトシン残基はすべて、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする５’−末端ヌクレオシドを示す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする３’−末端ヌクレオシドを示す。以下の表において列挙する各ギャップマーは、配列番号１または配列番号１０のいずれかを標的とする。「該当なし」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定の遺伝子配列を標的としないことを示す。
【０４０４】
１ウェルあたり２０，０００個の細胞密度で培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞に５、０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドを電気穿孔法を用いてトランスフェクトした。およそ２４時間の処置期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＰＫＫｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、類似の培養条件を有する一連の実験において検査した。各実験についての結果を以下に示す個別の表において表す。結果は、未処置の対照細胞に対するＰＫＫの％阻害として表す。
【０４０５】
【表５−１】
2020072732.tif 000035
【０４０６】
【表５−２】
2020072732.tif 000036
【０４０７】
【表５−３】
2020072732.tif 000037
【０４０８】
【表６−１】
2020072732.tif 000038
【０４０９】
【表６−２】
2020072732.tif 000039
【０４１０】
【表６−３】
2020072732.tif 000040
【０４１１】
【表７−１】
2020072732.tif 000041
【０４１２】
【表７−２】
2020072732.tif 000042
【０４１３】
【表７−３】
2020072732.tif 000043
【０４１４】
【表８−１】
2020072732.tif 000044
【０４１５】
【表８−２】
2020072732.tif 000045
【０４１６】
【表８−３】
2020072732.tif 000046
【０４１７】
【表９−１】
2020072732.tif 000047
【０４１８】
【表９−２】
2020072732.tif 000048
【０４１９】
【表９−３】
2020072732.tif 000049
【０４２０】
【表１０−１】
2020072732.tif 000050
【０４２１】
【表１０−２】
2020072732.tif 000051
【０４２２】
【表１０−３】
2020072732.tif 000052
【０４２３】
【表１１−１】
2020072732.tif 000053
【０４２４】
【表１１−２】
2020072732.tif 000054
【０４２５】
【表１１−３】
2020072732.tif 000055
【０４２６】
【表１２−１】
2020072732.tif 000056
【０４２７】
【表１２−２】
2020072732.tif 000057
【０４２８】
【表１２−３】
2020072732.tif 000058
【０４２９】
【表１３−１】
2020072732.tif 000059
【０４３０】
【表１３−２】
2020072732.tif 000060
【０４３１】
【表１３−３】
2020072732.tif 000061
【０４３２】
【表１３−４】
2020072732.tif 000062
【０４３３】
【表１３−５】
2020072732.tif 000063
【０４３４】
【表１３−６】
2020072732.tif 000064
【０４３５】
【表１３−７】
2020072732.tif 000065
【０４３６】
【表１３−８】
2020072732.tif 000066
【０４３７】
【表１３−９】
2020072732.tif 000067
【０４３８】
【表１４−１】
2020072732.tif 000068
【０４３９】
【表１４−２】
2020072732.tif 000069
【０４４０】
【表１４−３】
2020072732.tif 000070
【０４４１】
【表１４−４】
2020072732.tif 000071
【０４４２】
【表１４−５】
2020072732.tif 000072
【０４４３】
【表１４−６】
2020072732.tif 000073
【０４４４】
【表１４−７】
2020072732.tif 000074
【０４４５】
【表１４−８】
2020072732.tif 000075
【０４４６】
【表１４−９】
2020072732.tif 000076
【０４４７】
【表１４−１０】
2020072732.tif 000077
【０４４８】
【表１４−１１】
2020072732.tif 000078
【０４４９】
【表１４−１２】
2020072732.tif 000079
【０４５０】
【表１４−１３】
2020072732.tif 000080
【０４５１】
【表１５−１】
2020072732.tif 000081
【０４５２】
【表１５−２】
2020072732.tif 000082
【０４５３】
【表１５−３】
2020072732.tif 000083
【０４５４】
【表１５−４】
2020072732.tif 000084
【０４５５】
【表１５−５】
2020072732.tif 000085
【０４５６】
【表１６−１】
2020072732.tif 000086
【０４５７】
【表１６−２】
2020072732.tif 000087
【０４５８】
【表１６−３】
2020072732.tif 000088
【０４５９】
【表１７−１】
2020072732.tif 000089
【０４６０】
【表１７−２】
2020072732.tif 000090
【０４６１】
【表１７−３】
2020072732.tif 000091
【０４６２】
【表１７−４】
2020072732.tif 000092
【０４６３】
【表１８−１】
2020072732.tif 000093
【０４６４】
【表１８−２】
2020072732.tif 000094
【０４６５】
【表１８−３】
2020072732.tif 000095
【０４６６】
【表１８−４】
2020072732.tif 000096
【０４６７】
【表１８−５】
2020072732.tif 000097
【０４６８】
【表１８−６】
2020072732.tif 000098
【０４６９】
【表１８−７】
2020072732.tif 000099
【０４７０】
【表１８−８】
2020072732.tif 000100
【０４７１】
【表１８−９】
2020072732.tif 000101
【０４７２】
【表１８−１０】
2020072732.tif 000102
【０４７３】
【表１８−１１】
2020072732.tif 000103
【０４７４】
【表１８−１２】
2020072732.tif 000104
【０４７５】
【表１８−１３】
2020072732.tif 000105
【０４７６】
【表１８−１４】
2020072732.tif 000106
【０４７７】
【表１８−１５】
2020072732.tif 000107
【０４７８】
【表１８−１６】
2020072732.tif 000108
【０４７９】
【表１８−１７】
2020072732.tif 000109
【０４８０】
【表１８−１８】
2020072732.tif 000110
【０４８１】
【表１８−１９】
2020072732.tif 000111
【０４８２】
【表１８−２０】
2020072732.tif 000112
【０４８３】
【表１８−２１】
2020072732.tif 000113
【０４８４】
【表１８−２２】
2020072732.tif 000114
【０４８５】
【表１８−２３】
2020072732.tif 000115
【０４８６】
【表１８−２４】
2020072732.tif 000116
【０４８７】
【表１８−２５】
2020072732.tif 000117
【０４８８】
【表１８−２６】
2020072732.tif 000118
【０４８９】
【表１８−２７】
2020072732.tif 000119
【０４９０】
【表１８−２８】
2020072732.tif 000120
【０４９１】
【表１８−２９】
2020072732.tif 000121
【０４９２】
【表１８−３０】
2020072732.tif 000122
【０４９３】
【表１８−３１】
2020072732.tif 000123
【０４９４】
【表１８−３２】
2020072732.tif 000124
【０４９５】
【表１８−３３】
2020072732.tif 000125
【０４９６】
【表１８−３４】
2020072732.tif 000126
【０４９７】
（実施例３：ＭＯＥ、デオキシ及びｃＥｔ糖修飾を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドによるＨｅｐａＲＧ（商標）細胞におけるヒトＰＫＫのアンチセンス阻害）
ＰＫＫ核酸を標的とする追加的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでのＰＫＫｍＲＮＡに及ぼす効果について検査した。
【０４９８】
以下の表におけるキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドをデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーとして設計した。ギャップマーは長さ１６ヌクレオシドであり、この中で、ヌクレオシドはＭＯＥ糖修飾、ｃＥｔ糖修飾、またはデオキシ修飾のいずれかを有している。「化学物質」の列は、各オリゴヌクレオチドの糖修飾を説明している。「ｋ」は、ｃＥｔ糖修飾を示し、数はデオキシヌクレオシドの数を示し、その他、「ｄ」はデオキシヌクレオシドを示し、かつ「ｅ」は２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を示す。各ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である。各オリゴヌクレオチド中のシトシン残基はすべて５−メチルシトシンである。「開始部位」はギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とされる５’−末端ヌクレオシドを示す。「停止部位」は、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とされる３’−末端ヌクレオシドを示す。以下の表に列挙する各ギャップマーは、配列番号１として本明細書で指定するヒトＰＫＫｍＲＮＡまたは配列番号１０として本明細書で指定するヒトＰＫＫゲノム配列のいずれかを標的とする。「該当なし」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定の遺伝子配列を標的としないことを示す。
【０４９９】
１ウェルあたり２０，０００個の細胞密度で培養したＨｅｐａＲＧ（商標）細胞に１、０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドを電気穿孔法を用いてトランスフェクトした。およそ２４時間の処置期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＰＫＫｍＲＮＡを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＩＳＩＳ５３１２３１も本アッセイに含んだ。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、類似の培養条件を有する一連の実験において検査した。各実験についての結果を以下に示す個別の表において表す。結果は、未処置の対照細胞に対するＰＫＫの％阻害として表す。
【０５００】
【表１９−１】
2020072732.tif 000127
【０５０１】
【表１９−２】
2020072732.tif 000128
【０５０２】
【表１９−３】
2020072732.tif 000129
【０５０３】
【表２０−１】
2020072732.tif 000130
【０５０４】
【表２０−２】
2020072732.tif 000131
【０５０５】
【表２０−３】
2020072732.tif 000132
【０５０６】
【表２１−１】
2020072732.tif 000133
【０５０７】
【表２１−２】
2020072732.tif 000134
【０５０８】
【表２１−３】
2020072732.tif 000135
【０５０９】
【表２２−１】
2020072732.tif 000136
【０５１０】
【表２２−２】
2020072732.tif 000137
【０５１１】
【表２２−３】
2020072732.tif 000138
【０５１２】
【表２３−１】
2020072732.tif 000139
【０５１３】
【表２３−２】
2020072732.tif 000140
【０５１４】
【表２３−３】
2020072732.tif 000141
【０５１５】
【表２４−１】
2020072732.tif 000142
【０５１６】
【表２４−２】
2020072732.tif 000143
【０５１７】
【表２４−３】
2020072732.tif 000144
【０５１８】
【表２５−１】
2020072732.tif 000145
【０５１９】
【表２５−２】
2020072732.tif 000146
【０５２０】
【表２５−３】
2020072732.tif 000147
【０５２１】
【表２６−１】
2020072732.tif 000148
【０５２２】
【表２６−２】
2020072732.tif 000149
【０５２３】
【表２６−３】
2020072732.tif 000150
【０５２４】
【表２６−４】
2020072732.tif 000151
【０５２５】
【表２７−１】
2020072732.tif 000152
【０５２６】
【表２７−２】
2020072732.tif 000153
【０５２７】
【表２７−３】
2020072732.tif 000154
【０５２８】
【表２８−１】
2020072732.tif 000155
【０５２９】
【表２８−２】
2020072732.tif 000156
【０５３０】
【表２８−３】
2020072732.tif 000157
【０５３１】
【表２９−１】
2020072732.tif 000158
【０５３２】
【表２９−２】
2020072732.tif 000159
【０５３３】
【表２９−３】
2020072732.tif 000160
【０５３４】
【表２９−４】
2020072732.tif 000161
【０５３５】
【表３０−１】
2020072732.tif 000162
【０５３６】
【表３０−２】
2020072732.tif 000163
【０５３７】
【表３０−３】
2020072732.tif 000164
【０５３８】
【表３０−４】
2020072732.tif 000165
【０５３９】
【表３０−５】
2020072732.tif 000166
【０５４０】
【表３０−６】
2020072732.tif 000167
【０５４１】
【表３０−７】
2020072732.tif 000168
【０５４２】
【表３０−８】
2020072732.tif 000169
【０５４３】
【表３０−９】
2020072732.tif 000170
【０５４４】
【表３０−１０】
2020072732.tif 000171
【０５４５】
【表３０−１１】
2020072732.tif 000172
【０５４６】
【表３０−１２】
2020072732.tif 000173
【０５４７】
【表３１−１】
2020072732.tif 000174
【０５４８】
【表３１−２】
2020072732.tif 000175
【０５４９】
【表３１−３】
2020072732.tif 000176
【０５５０】
（実施例４：ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞におけるヒトＰＫＫの用量依存的アンチセンス阻害）
ＰＫＫｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を呈する先に説明した研究由来のギャップマーを選択し、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞における種々の用量で検査した。細胞をウェルあた
り２０，０００個の細胞密度で播種し、電気穿孔法を用いて０．１２μＭ、０．３７μＭ、１．１１μＭ、３．３３μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。およそ１６時間の処置期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＰＫＫｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＰＫＫプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を用いてｍＲＮＡレベルを測定した。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似の培養条件を有する一連の実験において検査した。各実験についての結果は、以下に示す個別の表に表す。結果は、未処置の対照細胞に対するＰＫＫの％阻害として表す。
【０５５１】
各オリゴヌクレオチドの最大半量の阻害濃度（ＩＣ５０）も表す。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した細胞において用量依存的な様式で有意に低下した。
【０５５２】
【表３２】
2020072732.tif 000177
【０５５３】
【表３３】
2020072732.tif 000178
【０５５４】
（実施例５：ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞におけるヒトＰＫＫの用量依存的アンチセンス阻害）
ＰＫＫｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を呈する先に説明した研究由来のギャップマーを選択し、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞における種々の用量で検査した。細胞は、ウェルあたり２０，０００個の細胞密度で播種し、０．１９μＭ、０．５６μＭ、１．６７μＭ、及び５，００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを電気穿孔法を用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処置期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＰＫＫｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＰＫＫプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、類似の培養条件を有する一連の実験において検査した。各実験についての結果を以下に示す個別の表に表す。結果は、未処置の対照細胞に対するＰＫＫの％阻害として表す。「該当なし」は、当該特定の用量について当該特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドについて実施した測定がないことを示す。
【０５５５】
各オリゴヌクレオチドの最大半量の阻害濃度（ＩＣ５０）も表す。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した細胞において用量依存的な様式で有意に低下した。
【０５５６】
【表３４】
2020072732.tif 000179
【０５５７】
【表３５】
2020072732.tif 000180
【０５５８】
【表３６】
2020072732.tif 000181
【０５５９】
【表３７】
2020072732.tif 000182
【０５６０】
【表３８】
2020072732.tif 000183
【０５６１】
【表３９】
2020072732.tif 000184
【０５６２】
【表４０】
2020072732.tif 000185
【０５６３】
【表４１】
2020072732.tif 000186
【０５６４】
【表４２】
2020072732.tif 000187
【０５６５】
【表４３】
2020072732.tif 000188
【０５６６】
（実施例６：ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞におけるヒトＰＫＫの用量依存的アンチセンス阻害）
ＰＫＫｍＲＮＡの有意なインビトロでの阻害を呈する先に説明した研究由来のギャップマーを選択して、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞における種々の用量で検査した。細胞は、ウェルあたり２０，０００個の細胞密度で播種し、０．１１μＭ、０．３３μＭ、１．００μＭ、及び３．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドを電気穿孔法を用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処置期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＰＫＫｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＰＫＫプライマープローブセットＲＴＳ３４５４を使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似の培養条件を有する一連の実験において検査した。各実験についての結果は、以下に示す個別の表に表す。結果は、未処置の対照細胞に対するＰＫＫの％阻害として表す。「該当なし」は、当該特定用量についての当該特定アンチセンスオリゴヌクレオチドについて実施した測定がないことを示す。
【０５６７】
各オリゴヌクレオチドの最大半量の阻害濃度（ＩＣ５０）も表す。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した細胞において用量依存的な様式で有意に低下した。
【０５６８】
【表４４】
2020072732.tif 000189
【０５６９】
【表４５】
2020072732.tif 000190
【０５７０】
【表４６】
2020072732.tif 000191
【０５７１】
【表４７】
2020072732.tif 000192
【０５７２】
（実施例７：トランスジェニックマウスにおけるヒトＰＫＫを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの効能）
ヒトＫＬＫＢ１遺伝子配列（染色体４：位置１８７１４８６７２〜１８７１７９６２５、受託番号：ＮＣ＿０００００４．１１）の３７，３９０塩基対断片を含有するトランスジェニックマウスを先に説明した研究から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて処置し、このモデルにおける効能について評価した。
【０５７３】
（処置）
トランスジェニックマウスの群に２．５ｍｇ／ｋｇ／週、５．０ｍｇ／ｋｇ／週、１０ｍｇ／ｋｇ／週または２０ｍｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ５４６２３２、ＩＳＩＳ５４６２５１、ＩＳＩＳ５４６２５４、ＩＳＩＳ５４６３４３、ＩＳＩＳ５４６８２８、ＩＳＩＳ５４７４５５、ＩＳＩＳ５４７４５７、ＩＳＩＳ５４７９２７、及びＩＳＩＳ５４８０４８を１週間に２回、３週間皮下注射した。トランスジェニックマウスの１群にＰＢＳを１週間に２回、３週間皮下注射した。マウスを最後の用量の４８時間後に安楽死させ、器官及び血漿をさらなる分析のために収集した。
【０５７４】
（ＲＮＡ分析）
標的の減少に及ぼすＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、ＲＮＡをヒトＰＫＫのリアルタイムＰＣＲ分析のために肝組織から抽出した。結果は、ＰＢＳ対照に対するＰＫＫｍＲＮＡの％阻害として表す。表４８に示すように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた処置は結果的に、ＰＢＳ対照と比較して、ＰＫＫｍＲＮＡの有意な減少を生じた。
【０５７５】
【表４８】
2020072732.tif 000193
【０５７６】
（タンパク質分析）
血漿ＰＫＫタンパク質レベルを全群において評価した。結果は、ＰＢＳ対照に対するＰＫＫタンパク質の％阻害として表す。表４９に示すように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた処置は結果的に、ＰＢＳ対照と比較してＰＫＫタンパク質レベルの有意な減少を生じた。
【０５７７】
【表４９】
2020072732.tif 000194
【０５７８】
（実施例８：カニグイザルにおけるヒトＰＫＫを標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果）
先に説明した研究から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いてカニクイザルを処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの効能及び許容性を評価した。検
査したヒトアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アカゲザルゲノム配列（ヌクレオチド２３５８０００〜２３９１０００を切り詰められたかつ配列番号１８として本明細書に指定のＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１）と交差反応性がある。配列番号１８に対する各オリゴヌクレオチドの標的開始部位は、表５０に表す。「ミスマッチ」は、オリゴヌクレオチドがアカゲザル配列に対してミスマッチしているヌクレオチド数を示す。ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザル配列の間の相補性が大きければ大きいほど、ヒトオリゴヌクレオチドはアカゲザル配列と交差反応することがよりできがちである。「該当なし」は、オリゴヌクレオチドがアカゲザル遺伝子配列と３個を超えるミスマッチを有することを示す。
【０５７９】
【表５０】
2020072732.tif 000195
【０５８０】
（処置）
本研究に先立ち、サルは３０日間検疫に維持し、その間、動物は総合的な健康について毎日観察した。サルは２〜４歳であり、体重は２ｋｇと４ｋｇの間であった。４つの無作為に割り当てられた雄カニクイザルの１０個の群は各々、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを皮下注射した。４０ｍｇ／ｋｇの用量のＰＢＳ溶液またはＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを本研究の最初の週に４回用量（１日後、３日後、５日後、及び７日後）からなる負荷処方で初期的に投与し、次いで、１４日後に始まる週１回の投与からなる維持処方を投与した（第２〜１３週）。皮下注射は、背中の４部位に時計回りの回転で実施し、１つの用量につき１つの部位とした。注射部位は、ケタミンを用いて鎮静させながら、入れ墨によって描写し、最低３ｃｍほど分離した。
【０５８１】
研究期間の間、サルを病気または苦痛の徴候について毎日最低１回観察した。処置、損傷または病気による一時的なまたはわずかなものを超える疼痛または苦痛を受けているいずれの動物も責任獣医及び研究管理者に速やかに報告した。健康不十分なまたは起こり得る瀕死の容態のいずれの動物もさらなるモニタリング及び起こり得る安楽死のために識別した。例えば、ＩＳＩＳ５４７４４５を用いて処置した２匹のサルは、抑制した行動、側臥位、刺激に対する応答の欠如及び呼吸の減少のため、安楽死させた。実施例において説明するプロトコルは、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可されていた。
【０５８２】
（標的減少）
（ＲＮＡ分析）
８７日後または８８日後、プライマープローブセットＲＴＳ３４５５（順方向配列ＣＣＴＧＴＧＴＧＧＡＧＧＧＴＣＡＣＴＣＡ、配列番号２３として本明細書に指定；逆方向配
列ＣＣＡＣＴＡＴＡＧＡＴＧＣＧＣＣＡＡＡＣＡＴＣ、配列番号２４として本明細書に指定；プローブ配列ＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＴＧＡＴＧＧＧＣＴＴＣＣＣ、配列番号２５として本明細書に指定）を用いるＰＫＫのリアルタイムＰＣＲ分析のために、最終用量の４８時間後にＲＮＡを肝組織から抽出した。本結果は、ハウスキーピング遺伝子であるシクロフィリンに対して標準化した。結果は、ＰＢＳ対照に対するＰＫＫｍＲＮＡの％阻害として表す。表５１に示すように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた処置は結果的に、ＰＢＳ対照と比較して、ＰＫＫｍＲＮＡの有意な減少を生じた。
【０５８３】
【表５１】
2020072732.tif 000196
【０５８４】
（タンパク質分析）
およそ０．９ｍｌの血液を投与前、１７日後、３１日後、４５日後、５９日後、及び７３日後に入手可能な動物すべてから各回収集し、３．２％クエン酸ナトリウムを含有するチューブに入れた。チューブを遠心分離して（室温で３０００ｒｐｍ、１０分間）血漿を得た。ＰＫＫタンパク質レベルをＥＬＩＳＡによって血漿中で測定した。結果は、表５２に表し、ＰＢＳ対照レベルと比較した％阻害として表す。本結果は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドがＰＫＫタンパク質レベルを有意に減少させたことを示す。
【０５８５】
【表５２】
2020072732.tif 000197
【０５８６】
（許容性試験）
（肝機能）
肝機能に及ぼすＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、サルを一晩絶食させた。およそ１．５ｍＬの血液試料をすべての試験群から収集した。血液を血清分離のために抗凝固薬を有さないチューブへ収集した。チューブを室温で最低９０分間維持した後、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。種々の肝機能マーカーのレベルは、東芝１２０ＦＲ  ＮＥＯ化学物質分析装置（株式会社東芝，日本）を用いて測定した。本結果は表５３に表し、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチドについての期待される範囲外で肝機能に何ら効果を有していなかったことを示す。
【０５８７】
【表５３】
2020072732.tif 000198
【０５８８】
（血液学）
血液学的パラメータに及ぼすカニクイザルにおけるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドのいずれかの効果を評価するために、およそ１．２ｍＬの血液の血液試料を投与前及び８７日後または８８日後に入手可能な試験動物の各々からＫ２−ＥＤＴＡを含有するチューブの中に収集した。試料は、赤血球（ＲＢＣ）計数、白血球（ＷＢＣ）計数、血小板計数、ヘモグロビン含有量及びヘマトクリットについて、ＡＤＶＩＡ２１２０ｉ血液学分析装置（ＳＩＥＭＥＮＳ，米国）を用いて分析した。本データは表５４に表す。
【０５８９】
本データは、オリゴヌクレオチドのほとんどを用いた処置が、この用量におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドについて期待された範囲外で血液学的パラメータにおけるいずれの変化も生じなかったことを示す。
【０５９０】
【表５４】
2020072732.tif 000199
【０５９１】
（腎機能）
腎機能に及ぼすＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、サルを一晩絶食させた。およそ１．５ｍＬの血液試料を試験群すべてから収集した。血清分離のために抗凝固薬を有さないチューブに血液を収集した。チューブを室温で最低９０分間維持した後、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。ＢＵＮ及びクレアチニンのレベルを東芝１２０ＦＲ  ＮＥＯ化学物質分析装置（株式会社東芝，日本）を用いて測定した。結果は表５５に表し、ｍｇ／ｄＬで表す。血漿化学データは、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドのほとんどが、アンチセンスオリゴヌクレオチドに対して期待される範囲外で腎機能にいずれの効果も有していなかったことを示す。具体的には、ＩＳＩＳ５４６２５４の処置は、サルの腎機能の点で十分許容性があった。
【０５９２】
腎機能はまた、検尿によって評価した。全動物由来の新鮮尿を、濡らした氷の上で透明なケージパンを用いて収集した。新鮮尿収集を実施する前日に食餌を一晩除去したが、水は供給した。総タンパク質及びクレアチニンレベルを、東芝１２０ＦＲ  ＮＥＯ自動化学物質分析装置（株式会社東芝，日本）を用いて測定し、クレアチニンに対するタンパク質の比を算出した。本結果は、表５６に表す。
【０５９３】
【表５５】
2020072732.tif 000200
【０５９４】
【表５６】
2020072732.tif 000201
【０５９５】
（Ｃ反応性タンパク質レベル分析）
カニクイザルにおけるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドのいずれかの炎症性効果を評価するために、サルを一晩絶食させた。およそ１．５ｍＬの血液試料を試験群すべてから収集した。血液は、血清分離のために抗凝固薬を有さないチューブに収集した。チューブを室温で最低９０分間維持した後、３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。肝臓において合成されかつ炎症のマーカーとして機能するＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を、東芝１２０ＦＲ  ＮＥＯ化学物質分析装置（株式会社東芝，日本）を用いて測定した。補体Ｃ３も同様に測定したので、データは基線値の％として表す。本結果は表５７に表し、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを用いた処置が、サルにおけるいずれの炎症も生じなかったことを示す。
【０５９６】
【表５７】
2020072732.tif 000202
【０５９７】
（実施例９：マウス初代肝細胞におけるネズミＰＫＫｍＲＮＡのアンチセンス阻害）
ネズミＰＫＫ核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、インビトロでのＰＫＫｍＲＮＡに及ぼす効果について検査した。ウェルあたり１０，０００個の細胞密度で培養したマウス初代肝細胞に、サイトフェクチン試薬を用いて１２．５ｎＭ、２５．０ｎＭ、５０．０ｎＭ、１００．０ｎＭ、及び２００．０ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。およそ２４時間の処置期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、マウスＰＫＫｍＲＮＡレベルをネズミプライマープローブセットＲＴＳ３３１３（順方向配列ＴＧＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＡＧＣＴＴＴＣＴＣ、配列番号２２２８として本明細書に指定；逆方向配列ＴＧＧＣＡＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＡＡＴＧＣＴ、配列番号２２２９として本明細書に指定；プローブ配列ＣＧＴＧＡＣＴＣＣＡＣＣＣＡＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＴＡＡＡＣＧ、配列番号２２３０として本明細書に指定）を用いる定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによって測定するように、全ＲＮＡ含有量により調整した。
【０５９８】
キメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。ギャップマーは長さ２０ヌクレオチドであり、この中で、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、各５ヌクレオシドを含むウィングによって両側で（５’方向及び３’方向において）隣接している。５’ウィングセグメントにおける各ヌクレオシド及び３’ウィングセグメントにおける各ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を有する。各ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である。各ギャップマー中のシトシン残基はすべて、５−メチルシトシンである。結果は、ＰＫＫｍＲＮＡレベルが用量依存的様式で有意に減少したことを実証する。
【０５９９】
１つの具体的な例において、ＩＳＩＳ４８２５８４（ＧＧＣＡＴＡＴＴＧＧＴＴＴＴＴＧＧＡＡＴ，配列番号２２４４）は、８４ｎＭの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を生じる用量依存的様式でＰＫＫｍＲＮＡを減少させた（表５８を参照されたい）。ＩＳＩＳ４８２５８４は、配列番号１１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿００８４５５．２）を標的とし、１５８６の標的開始部位及び１６０５の標的停止部位を有する。「標的開始部位」は、ギャップマーが標的とする５’−末端ヌクレオチドを示す。「標的停止部位」は、ギャップマーが標的とする３’−末端ヌクレオチドを示す。
【０６００】
【表５８】
2020072732.tif 000203
【０６０１】
（実施例１０：ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＰＫＫｍＲＮＡのアンチセンス阻害）
ＩＳＩＳ４８２５８４をインビボでのネズミＰＫＫｍＲＮＡに及ぼす効果について検査した。
【０６０２】
（処置）
雄ＢＡＬＢ／ｃマウス６群を各々、２．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、２０．０ｍｇ／ｋｇ、４０．０ｍｇ／ｋｇ、または８０．０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４で処置し、１週間に２回、３週間皮下投与した（週用量５．０ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、２０．０ｍｇ／ｋｇ、４０．０ｍｇ／ｋｇ、８０．０ｍｇ／ｋｇ、または１６０．０ｍｇ／ｋｇ）。対照群のＢＡＬＢ／ｃマウスをＰＢＳで処置し、１週間に２回、３週間皮下投与した。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳの最後の用量の２日後に、全群由来のマウスを、腹腔内注射によって投与する１０ｍｇ／ｋｇキシラジンと混合した１５０ｍｇ／ｋｇのケタミンで麻酔した。肝臓はＲＮＡ分析のために収集した。
【０６０３】
（ＲＮＡ分析）
ＲＮＡは、ＰＫＫのリアルタイムＰＣＲ分析のために肝臓組織から抽出した。ＰＫＫｍＲＮＡレベルは、ネズミプライマープローブセット（順方向配列ＡＣＡＡＧＴＧＣＡＴＴＴＴＡＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＴＡＣ、配列番号２２３１として本明細書に指定；逆方向配列ＧＧＴＴＧＴＣＣＧＣＴＧＡＣＴＴＴＡＴＧＣＴ、配列番号２２３２として本明細書に指定；プローブ配列ＡＡＧＣＡＣＡＧＴＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＣＡＣＣＣ、配列番号２２３３として本明細書に指定）を用いて測定した。結果は、ＰＢＳ対照に対するＰＫＫの％阻害として表す。表５９に示すように、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置は結果的に、ＰＢＳ対照と比較してＰＫＫｍＲＮＡの有意な用量依存的減少を生じた。
【０６０４】
【表５９】
2020072732.tif 000204
【０６０５】
（タンパク質分析）
血漿は、抗凝固薬としてクエン酸ナトリウムを含有するチューブに収集した。試料は、４〜１２％勾配のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で泳動した後、ネズミＰＫＫ抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いたイムノブロッティングを実施した。ブロットは、二次フルオロフォア標識抗体（ＬＩ−ＣＯＲ）とともにインキュベートし、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｅｒ（ＬＩ−ＣＯＲ）において撮像した。結果はＰＢＳ対照に対するＰＫＫの％阻害として表す。表６０に示すように、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置は結果的に、ＰＢＳ対照と比較してＰＫＫ血漿タンパク質の有意な用量依存的減少を生じた。
【０６０６】
【表６０】
2020072732.tif 000205
【０６０７】
（実施例１１：血管浮腫マウスモデルにおけるネズミＰＫＫのアンチセンス阻害のインビボでの効果）
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）は、皮下組織における局所的腫脹及び血管透過性の亢進を特徴とする（Ｍｏｒｇａｎ，Ｂ．Ｐ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６３：５８１〜８３，２０１０）。補体系のタンパク質であるＣ１阻害薬の欠乏が原因である。Ｃ１−ＩＮＨ欠乏症の確立されたマウスモデル及びカプトプリル誘発性浮腫モデルを含む２つのマウスモデルを本研究に使用し、これらは両方とも、ＨＡＥの特徴である血管透過性を引き起こす。血管透過性の逆転には、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）の高い血漿レベルが付随する。
【０６０８】
第一のモデルにおいて、血管浮腫は、マウスにおける血管透過性を高めかつ遺伝性血管浮腫の病因を複製する公知の降圧薬であるカプトプリルを用いた処置によって誘発した。
【０６０９】
第二のモデルにおいて、血管浮腫は、マウスにおける血管透過性を高めかつ遺伝性血管浮腫の病因を複製する、ネズミＣ１阻害薬ｍＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４６１７５６を用いた処置によって誘発した。ＩＳＩＳ４６１７５６（配列番号２２４５；ＡＡＡＧＴＧＧＴＴＧＡＴＡＣＣＣＴＧＧＧ）は、ＮＭ＿００９７７６．３（配列番号２２４３）の５−１０−５ＭＯＥギャップマー標的ヌクレオシド１７３０〜１７４９である。
【０６１０】
ＨＯＥ−１４０及び、ＰＫＫのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害薬であるＩＳＩＳ４８２５８４の効果は、血管透過亜聖のカプトプリル及びＩＳＩＳ４６１７５６誘発性マウスモデルにおいて評価した。ネズミ群のうちのいくつかは、血管拡張お及び血管透過性を遮断するブラジキニンＢ２受容体の選択的アンタゴニストであるＨＯＥ−１４０を用い
て処置した（Ｃｒｕｄｅｎ及びＮｅｗｂｙ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．９：２３８３〜２３９０，２００８）。他のマウスは、ＰＫＫｍＲＮＡ発現を阻害するＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した。ＨＯＥ−１４０を用いた処置の効果を、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置の効果と比較した。
【０６１１】
（処置）
本アッセイについての種々の処置群を表６１に表す。
【０６１２】
第１群は、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した４匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｙｒｃ−２Ｊマウスからなった。血管透過性の基線レベルを測定するための対照群として機能する第１群へは、他の処置は何ら投与しなかった。
【０６１３】
第２群は、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した８匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｙｒｃ−２Ｊマウスからなった。処置の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第２群は、カプトプリル誘発性血管透過性についてのＰＢＳ対照群として機能した。
【０６１４】
第３群は、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した８匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｙｒｃ−２Ｊマウスからなった。１４日後に、マウスを、週２回、２週間皮下投与する５０ｍｇ／ｋｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド標的Ｃ１阻害薬ＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第３群は、カプトプリル及びＩＳＩＳ４６１７５６誘発性血管透過性についてのＰＢＳ対照群として機能した。
【０６１５】
第４群は、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した８匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｙｒｃ−２Ｊマウスからなった。１４日後に、マウスを、週２回、２週間皮下投与する５０ｍｇ／ｋｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド標的Ｃ１阻害薬ＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。また、マウスに次に、３０μｇのＨＯＥ−１４０を腹腔内投与した。第４群は、ＨＯＥ−１４０を用いた血管透過性の阻害についての陽性対照として機能した。
【０６１６】
第５群は、週２回、４週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇの何ら公知のネズミ標的を有さない５−１０−５ＭＯＥギャップマーである対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３（ＣＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＧＧＴＴＣＣＴＣＣ、配列番号２２４６）を用いて処置したＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｙｒｃ−２Ｊマウスからなった。１４日後に、マウスを週２回、２週間皮下投与する５０ｍｇ／ｋｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド標的Ｃ１阻害薬ＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第５群は、カプトプリル及びＩＳＩＳ４６１７５６誘発性血管透過性についての対照群として機能した。
【０６１７】
第６群は、８匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｙｒｃ−２Ｊマウスからなり、週２回、４週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第６群は、カプトプリル誘発性血管透過性に及ぼすＰＫＫ  ＡＳＯの効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６１８】
第７群は、週２回、４週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した８匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊ−Ｔｙｒｃ−２Ｊマウスからなった。１４日後に、マウスを、週２回、２週間皮下投与する５０ｍｇ／ｋｇのアンチセンスオリゴヌクレオチド標的Ｃ１阻害薬ＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに
２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第７群は、カプトプリル及びＩＳＩＳ４６１７５６誘発性血管透過性に及ぼすＰＫＫ  ＡＳＯの効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６１９】
次に、全群に、３０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルー溶液を尾静脈へと注射した。エバンスブルー溶液投与の３０分後にマウスを屠殺し、結腸、足、耳、及び小腸を収集した。血液試料は、心穿刺を通じて採血した。
【０６２０】
【表６１】
2020072732.tif 000206
【０６２１】
（血管透過性の定量化）
足、結腸、耳、及び小腸から収集した組織を、ホルムアミド溶液中に個別に一晩置いて、エバンスブルー色素を浸出させた。耳及び足の組織を含有するホルムアミド溶液は、５５℃まで加熱して一晩放置した。色素注入したホルムアミド溶液の色彩強度を次に、ＯＤ６００ｎｍで測定したので、表６２に表す。血管浮腫のいずれかの徴候を示すマウスは、より多くの色素を取り込んでおり、それゆえ、高いＯＤ値を示す。
【０６２２】
表６２に表すように、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置は、カプトプリルを用いて処置したマウス（第６群）において及びカプトプリル及びＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置したマウス（第７群）において、個々のＰＢＳ対照群（第２群及び第３群）と比較して、血管透過性を防止する。第６群及び第７群のマウスにおける血管透過性の程度も、対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を用いて処置したマウス（第５群）と比較して組織のほとんどで低下し、当該マウスにおいて血管透過性は、カプトプリル及びＩＳＩＳ４６１７５６を用いて誘発された。両処置群（第６群及び第７群）の結腸及び足の組織における血管透過性の程度は、ＰＢＳのみを用いて処置したマウス（第１群）において観察されるように、基線レベルに匹敵した。ＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置したマウスにおける血管透過性の低下は、本アッセイにおいて陽性対照として機能するブラジキニン２受容体アンタゴニストであるＨＯＥ１４０を用いて処置したマウスにおいて見られる血管透過性の低下に匹敵した。
【０６２３】
それゆえ、ＰＫＫｍＲＮＡのアンチセンス阻害は、ＨＡＥに関して症候性である血管透過性の治療及び予防に有益であり得る。
【０６２４】
【表６２】
2020072732.tif 000207
【０６２５】
（高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）の定量化）
血液試料由来のＨＭＷＫのウェスタンブロット定量化を図１に表す。
【０６２６】
図１に示すように、第１群及び第２群由来の試料は、第６群及び第７群において血管透過性が逆転することを示す第６群及び第７群と比較して、低レベルのＨＭＷＫを有している。また、図１に示すように、第１群及び第２群由来の試料は、第６群及び第７群と比較して高いＨＭＷＫ切断産物を有している。したがって、ＨＭＷＫの欠失は、ＨＭＷＫの切断産物（ブラジキニン及びＨＫａを含む）へのＰＫＫ切断によって生じる。
【０６２７】
（実施例１２：マウスにおける基線透過性及びカプトプリル誘発性透過性に及ぼすネズミＰＫＫのアンチセンス阻害のインビボでの効果）
基線透過性とは、天然の未処置のマウスの組織において生じる血管透過性のレベルである。血管透過性の予防におけるＩＳＩＳ４８２５８４の効果は、基線のまたはカプトプリル誘発性のいずれかで評価した。
【０６２８】
（処置）
本アッセイについての種々の処置群は、表６３に表す。
【０６２９】
第１群は、８匹のマウスからなり、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。血管透過性の基線レベルを測定するための対照群として機能する第１群へは他の処置は投与しなかった。
【０６３０】
第２群は、８匹のマウスからなり、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第２群は、カプトプリル誘発性血管透過性についての陰性対照群として機能した。
【０６３１】
第３群は、８匹のマウスからなり、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに３０μｇのＨＯＥ−１４０を腹腔内投与した。第３群は、基線血管透過性の阻害についての陽性対照として機能した。
【０６３２】
第４群は、８匹のマウスからなり、週２回、４週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。マウスにはまた、３０μｇのＨＯＥ−１４０を腹腔内投与した。第４群は、カプトプリル誘発性血管透過性の阻害のための陽性対照として機能した。
【０６３３】
第５群は、８匹のマウスからなり、週２回、４週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した。第５群は、基線血管透過性に及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４の効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６３４】
第６群は、８匹のマウスからなり、週２回、４週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第６群は、カプトプリル誘発性血管透過性に及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４の効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６３５】
次に、全群に３０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルー溶液を注射した。マウスは、エバンスブルー溶液投与３０分後に屠殺し、結腸、足、耳、及び小腸を収集した。
【０６３６】
【表６３】
2020072732.tif 000208
【０６３７】
（血管透過性の定量化）
足、結腸、耳、及び小腸から収集した組織を、ホルムアミド溶液中に個別に一晩置いて、エバンスブルー色素を浸出させた。耳及び足の組織を含有するホルムアミド溶液は、５５℃まで加熱して一晩放置した。色素注入したホルムアミド溶液の色彩強度を次に、ＯＤ６００ｎｍで測定したので、表６４に表す。血管浮腫のいずれかの徴候を示すマウスは、より多くの色素を取り込んでおり、それゆえ、高いＯＤ値を示す。
【０６３８】
表６４に表すように、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置したマウスは、ＰＢＳ対照と比較して低い基線血管透過性を示した（第５群対第１群）。ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置による基線血管透過性における低下は、ＨＯＥ−１４０を用いた処置によって生じる基線血管透過性の低下に匹敵した（第３群、陽性対照として機能した）。ＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置したマウスはまた、ＰＢＳ対照に比べてたいていの組織における低いカプトプリル誘発性血管透過性を示した（第６群対第２群）。ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置によるカプトプリル誘発性血管透過性における低下は、ＨＯＥ−１４０を用いた処置によって生じる血管透過性における低下に匹敵した（第４群、陽性対照として機能した）。
【０６３９】
【表６４】
2020072732.tif 000209
【０６４０】
（実施例１３：カプトプリル誘発性血管透過性に及ぼすネズミＰＫＫのアンチセンス阻害の用量依存的効果）
カプトプリル誘発性血管透過性に及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４に関する用量を変化させる効果を評価した。
【０６４１】
（処置）
本アッセイについての種々の処置群は、表６５に表す。
【０６４２】
第１群は、４匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。血管透過性の基線レベルを測定するための対照群として機能する第１群へは他の処置は投与しなかった。
【０６４３】
第２群は、８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第２群は、カプトプリル誘発性血管透過性についての対照群として機能した。
【０６４４】
第３群は、４匹のマウスからなり、週2回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置し
た。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。マウスはまた３０μｇのイカチバント（ＨＯＥ−１４０）を腹腔内投与した。第４群は、カプトプリル誘発性血管透過性の阻害についての陽性対照として機能した。
【０６４５】
第４、５、６、７、８、及び９群は、各々８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＩＳＩＳ４８２５８４それぞれ２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇ（週あたり、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、または１６０ｍｇ／ｋｇに相当）を用いて処置した。処置期間の終了時に、全群のマウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第４〜９群は、カプトプリル誘発性血管透過性に及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４の用量を変化させる効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６４６】
次に、全群に、３０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルー溶液を尾静脈に注射した。エバンスブルー溶液投与の３０分後にマウスを屠殺し、結腸、足、耳、及び小腸を収集した。血液試料は、心穿刺を通じて採血した。
【０６４７】
【表６５】
2020072732.tif 000210
【０６４８】
（血管透過性の定量化）
収集した組織を、ホルムアミド溶液中に一晩置いて、エバンスブルー色素を浸出させた。足及び耳の組織を含有するホルムアミド溶液は、５５℃まで加熱して一晩放置した。色素注入したホルムアミド溶液の色彩強度を次に、ＯＤ６００ｎｍで測定したので、表６６に表す。血管浮腫のいずれかの徴候を示すマウスは、より多くの色素を取り込んでおり、それゆえ、高いＯＤ値を示す。
【０６４９】
表６６に表すように、より多量の用量のＩＳＩＳ４８２５８４で処置したマウス（第４、５、及び６群）は、対応するＰＢＳ対照群（第２群）と比較して低レベルのカプトプリル誘発性血管透過性を有していた。これらの処置群（第４群及び第５群）のマウスにおける血管透過性の低下は、（第１群において示すような）基線血管透過性のレベルならびにＨＯＥ−１４０を用いて処置したマウス（第３群）において匹敵した。
【０６５０】
【表６６】
2020072732.tif 000211
【０６５１】
（血管漏出の定量化）
心穿刺を通じて採血した血液を即時、氷冷エタノールの容積の３倍と混合した。溶液は
、１５，０００ｇ、４℃で２０分間遠心分離して、細胞デブリを除去し、血漿タンパク質を沈殿させた。エタノール抽出物は、１０ｋＤａＭＷＣＯフィルターによる限外濾過によってさらに精製した。エタノールにより抽出した血漿溶液の色彩強度は次に、ＯＤ６２０ｎｍで測定した。本結果は、第１群ＰＢＳ対照のＯＤ値の％増または％減として表６７に表す。血管浮腫の徴候を表すマウス由来の組織は、血漿からより多くの色素を漏出すると期待され、それゆえ、低いＯＤ値を示すのに対し、処置群は、低い血管漏出による比較的高いＯＤ値を示し得る。１６０ｍｇ／ｋｇ／週及び８０ｍｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ４８２５８４で処置したマウス（第４群及び第５群）は、カプトプリルで処置したＰＢＳ陰性対照（第２群）と比較して血管漏出が低いことを示した。第４群及び第５群由来の結果は、ＨＯＥ−１４０を用いて処置した陽性対照（第３群）に匹敵した。
【０６５２】
【表６７】
2020072732.tif 000212
【０６５３】
（実施例１４：マウスにおける基線透過性に及ぼすネズミＰＫＫのアンチセンス阻害の用量依存的効果）
基線血管透過性に及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４に関する用量を変化させる効果を評価した。
【０６５４】
（処置）
本アッセイについての種々の処置群は、表６８に表す。
【０６５５】
第１群は、８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。血管透過性の基線レベルを測定するために対照群として機能する第１群へは他の処置は投与しなかった。
【０６５６】
第２群は、４匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに３０μｇのＨＯＥ−１４０を腹腔内投与した。第２群は、基線血管透過性の阻害についての陽性対照として機能した。
【０６５７】
第３、４、５、６、７、及び８群は、各々８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＩＳＩＳ４８２５８４をそれぞれ２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇ（週あたり５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、または１６０ｍｇ／ｋｇに相当）用いて処置した。第４〜９群は、基線血管透過性の阻害に及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４の用量を変化させる効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６５８】
全群は次に、３０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルー溶液を尾静脈に注射した。エバンスブルー溶液投与の３０分後にマウスを屠殺し、結腸、足お及び耳を収集し、透過性欠損について検討した。血液試料は、心穿刺を通じて採血した。
【０６５９】
【表６８】
2020072732.tif 000213
【０６６０】
（血管透過性の定量化）
足、結腸、及び耳から収集した組織をホルムアミド溶液中に一晩置いて、エバンスブルー色素を浸出させた。足及び耳の組織を含有するホルムアミド溶液は、５５℃まで加熱して一晩放置した。色素注入したホルムアミド溶液の色彩強度を次に、ＯＤ６００ｎｍで測定したので、表６９に表す。より高いＯＤ値は、より高いレベルの透過性と関連している。
【０６６１】
表１０に表すように、すべての用量におけるＩＳＩＳ４８２５８４で処置したマウス（第３〜８群）の組織のほとんどは、ＰＢＳ対照（第１群）と比較して低い基線血管透過性を示した。ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処置群の基線血管透過性の低下は、ＨＯＥ−１４０で処置した陽性対照群（第２群）において示したものに匹敵した。
【０６６２】
【表６９】
2020072732.tif 000214
【０６６３】
（血管漏出の定量化）
心穿刺を通じて採血した血液を即時、氷冷エタノールの容積の３倍と混合した。溶液を１５，０００ｇ、４℃で２０分間遠心分離して細胞デブリを除去し、血漿タンパク質を沈殿させた。エタノール抽出物は、１０ｋＤａＭＷＣＯフィルターによる限外濾過によってさらに精製した。次に、エタノール抽出した血漿溶液の色彩強度は、ＯＤ６２０ｎｍで測定した。結果は、第１群ＰＢＳ対照のＯＤ値の％増または％減として、表７０に表す。処置群が低い血管漏出により比較的高いＯＤ値を示すかもしれないことが期待された。ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処置群におけるマウスはすべて、ＰＢＳ陰性対照と比較して有意に低い血管漏出を示した。
【０６６４】
【表７０】
2020072732.tif 000215
【０６６５】
（高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）の定量化）
血液試料由来のＨＭＷＫのウェスタンブロット定量化は、図２ならびに表７１及び表７２に表す。
【０６６６】
表７１に示すように、４８２５８４で処置した群は、ＰＢＳ対照と比較して高レベルのＨＭＷＫを有し、用量依存的様式で高くなった。ＰＫＫアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた処置は、ＨＭＷＫの安定化を結果的に生じた。したがって、血管透過性は、用量依存的様式でＩＳＩＳ４８２５８４処置した群において低い。表７２に示すように、ＩＳＩＳ４８２５８４で処置した群は、ＰＢＳ対照と比較して低いＨＭＷＫ切断産物を有し、用量依存的様式で下がった。したがって、低いＨＭＷＫは、ＨＭＷＫの切断産物（ブラジキニン及びＨＫａを含む）へのＰＫＫ切断によって生じる。データは、濃度計によって測定するように強度単位で表す。
【０６６７】
【表７１】
2020072732.tif 000216
【０６６８】
【表７２】
2020072732.tif 000217
【０６６９】
（実施例１５：マウスにおけるカプトプリル誘発性血管透過性に及ぼすＰＫＫ及び第ＸＩＩ因子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの併用療法）
マウスを、カプトプリル誘発性血管透過性モデルにおける５−１０−５ＭＯＥギャップマー標的第ＸＩＩ因子であるＩＳＩＳ４１０９４４（ＧＣＡＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＴＧＧＴＧＣ、配列番号２２４７）及びＩＳＩＳ４８２５８４の変化用量で処置した。
【０６７０】
（処置）
本アッセイについての種々の処置群は、表７３に表す。
【０６７１】
第１群は、４匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。血管透過性の基線レベルを測定するための対照群として機能する第１群へは他の処置は投与しなかった。
【０６７２】
第２群は、８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第２群は、カプトプリル誘発性血管透過性についての対照群として機能した。
【０６７３】
第３群は、４匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。マウスはまた、３０μｇのＨＯＥ−１４０を腹腔内投与した。第３群は、カプトプリル誘発性血管透過性の阻害についての陽性対照として機能した。
【０６７４】
第４、５、６、７、及び８群は、各々８匹のマウスからなり、週２回、３週間各々皮下投与するＩＳＩＳ４８２５８４及びＩＳＩＳ４１０９４４のそれぞれ２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇ（週あたり５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇに相当）を用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに２０μｇのカプ全群のマウスに２０μｇのカプトプリルを腹腔内投与した。第４〜８群は、カプトプリル誘発性血管透過性に及ぼすＩＳＩＳ４１０９４４及びＩＳＩＳ４８２５８４の効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６７５】
次に、全群に３０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルー溶液を尾静脈に注射した。エバンスブルー溶液投与３０分後にマウスを屠殺し、結腸、足、耳、及び小腸を収集した。
【０６７６】
【表７３】
2020072732.tif 000218
【０６７７】
（血管透過性の定量化）
足、結腸、及び耳から収集した組織をホルムアミド溶液に一晩置いて、エバンスブルー色素を浸出させた。足及び耳の組織を含有するホルムアミド溶液は、５５℃まで加熱して一晩放置した。色素注入したホルムアミド溶液の色彩強度を次に、ＯＤ６００ｎｍで測定したので、表７４に表す。より高いＯＤ値は、より高レベルの透過性と関連している。
【０６７８】
表７４に表すように、全用量でのＩＳＩＳ４８２５８４及びＩＳＩＳ４１０９４４の組み合わせを用いて処置したマウス（第３〜８群）の組織のほとんどは、ＰＢＳ対照（第１群）と比較して低い血管透過性を示した。ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処置群の血管透過性の低下は、基線ＰＢＳ対照（第１群）及びＨＯＥ１４０を用いて処置した陽性対照群（第２群）において示したものに匹敵した。ＰＫＫ及び第ＸＩＩ因子アンチセンスオリゴヌクレオチドの組み合わせは結果的に、透過性における相乗的な低下を生じる。期待したように、血管漏出における対応する相乗的な低下も観察した。
【０６７９】
【表７４】
2020072732.tif 000219
【０６８０】
（実施例１６：マウスにおける基線血管透過性に及ぼすＰＫＫ及び第ＸＩＩ因子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの併用療法）
基線血管透過性モデルにおいて第ＸＩＩ因子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４１０９４４、及びＩＳＩＳ４８２５８４の変化用量を用いてマウスを処置した。
【０６８１】
（処置）
本アッセイのための種々の処置群は、表７５に表す。
【０６８２】
第１群は、８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。血管透過性の基線レベルを測定するための対照群として機能する第１群へは他の処置は投与しなかった。
【０６８３】
第２群は、４匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。処置期間の終了時に、マウスに３０μｇのＨＯＥ−１４０を腹腔内投与した。第２群は、基線血管透過性の阻害についての陽性対照として機能した。
【０６８４】
第３、４、５、６、及び７群は、各々８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＩＳＩＳ４８２５８４及びＩＳＩＳ４１０９４４のそれぞれ２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇ（週あたり５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇ）を用いて処置した。第３〜７群は、基線血管透過性に及ぼすＩＳＩＳ４１０９４４及びＩＳＩＳ４８２５８４の効果を検討するための実験処置群として機能した。
【０６８５】
次に、全群に３０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルー溶液を尾静脈に注射した。エバンスブルー溶液投与３０分後にマウスを屠殺し、結腸、足、耳、及び小腸を収集した。
【０６８６】
【表７５】
2020072732.tif 000220
【０６８７】
（血管透過性の定量化）
足、結腸、小腸、及び耳から収集した組織をホルムアミド溶液に一晩置いて、エバンスブルー色素を浸出させた。足及び耳の組織を含有するホルムアミド溶液は、５５℃まで加熱して一晩放置した。色素注入したホルムアミド溶液の色彩強度を次に、ＯＤ６００ｎｍで測定したので、表７６に表す。より高いＯＤ値は、より高いレベルの透過性と関連している。
【０６８８】
表７６に表すように、すべての用量におけるＩＳＩＳ４８２５８４及びＩＳＩＳ４１０９４４の組み合わせを用いて処置したマウス（第２〜７群）の組織のほとんどは、ＰＢＳ対照（第１群）と比較して低い血管透過性を示した。ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処置群の血管透過性の低下は、ＨＯＥ１４０で処置した陽性対照群（第２群）において示したものに匹敵した。ＰＫＫ及び第ＸＩＩ因子アンチセンスオリゴヌクレオチドの併用は結果的に、透過性における相乗的な低下を生じる。期待したように、血管漏出における対応する相乗的な低下も観察した。
【０６８９】
【表７６】
2020072732.tif 000221
【０６９０】
（実施例１７：ＩＳＩＳ４８２５８４による第ＸＩＩ因子タンパク質活性化の阻害）
第ＸＩＩ因子タンパク質活性化に及ぼすＰＫＫｍＲＮＡのアンチセンス阻害の効果を評価した。
【０６９１】
（処置）
本アッセイについての種々の処置群は、表７７に表す。
【０６９２】
第１群は、８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。第ＸＩＩ因子活性化を測定するための対照群として機能する第１群へは他の処置は投与しなかった。
【０６９３】
第２、３、４、５、及び６群は、各々８匹のマウスからなり、週２回、３週間皮下投与するＩＳＩＳ４８２５８４それぞれ２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇ（週あたり、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、または１６０ｍｇ／ｋｇに相当）を用いて処置した。第２〜６群は、第ＸＩＩ因子活性化に及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４の効果を測定するための処置群として機能した。
【０６９４】
処置期間の終了時に、血漿中の第ＸＩＩ因子についてのＳｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ（登録商標）第ＸＩＩａ因子を基にしたアミドリシスアッセイのために、血漿をマウスから収集した。
【０６９５】
【表７７】
2020072732.tif 000222
【０６９６】
（血漿中の第ＸＩＩ因子活性化についてのアッセイ）
９６ウェルポリプロペレン（ｐｏｌｙｐｒｏｐｅｌｅｎｅ）マイクロプレート中の１u
ｇ／ｍｌ硫酸デキストラン（５００ｋＤａ）含有ＰＢＳ８５μＬへ血漿（５μＬ）を添加し、溶液を室温で５分間インキュベートした。Ｓｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ（登録商標）ＦＸＩＩａ（２ｍＭ溶液１０μＬ）及び０．２ｍＭのＫＡＬＬＩＳＴＯＰ（商標）溶液を添加し、吸光度動態を４０５ｎｍで測定した。第ＸＩＩ因子活性化は、吸光度の蓄積の線形相において測定した。本結果は、ＰＢＳ対照試料において測定した第ＸＩＩ因子活性化の％として表７８に表す。表７８に見られるように、ＩＳＩＳ４８２５８４によるＰＫＫの阻害は結果的に、第ＸＩＩの基質による第ＸＩＩ因子の低い活性化を生じ、ＰＫＫが適切な第ＸＩＩ因子活性化に必要であることを含意している。
【０６９７】
【表７８】
2020072732.tif 000223
【０６９８】
（実施例１８：Ｃ１−ＩＮＨアンチセンスオリゴヌクレオチド誘発性血管透過性に及ぼすネズミＰＫＫのアンチセンス阻害のインビボでの効果）
ネズミＣ１阻害薬ｍＲＮＡを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドであるＩＳＩＳ４６１７５６によって誘導される血管透過性は、マウスにおける血管透過性を高めかつ遺伝性血管浮腫の病因を複製する。このモデルに及ぼすＩＳＩＳ４８２５８４の効果を評価した。
【０６９９】
（処置）
１群８匹のマウスを、週２回、３週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇ（週用量８０ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した。８匹のマウスからなる第二の群を週２回、３週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇ（週用量８０ｍｇ／ｋｇ）の対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３を用いて処置した。８匹のマウスからなる第三の群を、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。１４日後、全群を週２回、３週間皮下投
与する１２．５ｍｇ／ｋｇ（週用量２５ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置した。対照群のマウスを週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置したが、ＩＳＩＳ４６１７５６は投与しなかった。
【０７００】
処置期間の終了時に、全群に３０ｍｇ／ｋｇのエバンスブルー溶液を尾静脈中へ注射した。エバンスブルー溶液投与３０分後にマウスを屠殺し、結腸、足、耳、及び小腸を収集した。肝臓もＲＮＡ分析のために収集した。
【０７０１】
（ＲＮＡ分析）
Ｃ１−ＩＮＨ及びＰＫＫｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ分析のために肝臓からＲＮＡを単離した。Ｃ１−ＩＮＨについてのプライマープローブセットは、ＲＴＳ３２１８（順方向配列ＧＡＧＴＣＣＣＣＣＡＧＡＧＣＣＴＡＣＡＧＴ、本明細書で配列番号２２３４として指定；逆方向配列ＴＧＴＣＡＴＴＴＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＧＣＴＡＣＡ、配列番号２２３５として本明細書で指定；プローブ配列ＣＴＧＣＣＣＴＣＴＡＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＣＡ、配列番号２２３６として本明細書で指定）である。ＰＫＫについてのプライマープローブセットは、ＲＴＳ３２８７（順方向配列ＡＣＡＡＧＴＧＣＡＴＴＴＴＡＣＡＧＡＣＣＡＧＡＧＴＡＣ、配列番号２２３７として本明細書で指定；逆方向配列ＧＧＴＴＧＴＣＣＧＣＴＧＡＣＴＴＴＡＴＧＣＴ、配列番号２２３８として本明細書で指定；プローブ配列ＡＡＧＣＡＣＡＧＴＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＣＡＣＣＣ、配列番号２２３９として本明細書で指定）である。本結果は、ＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置していないＰＢＳ対照と比較した％阻害として表７９に表す。本データは、ＩＳＩＳ４６１７５６がＣ１−ＩＮＨｍＲＮＡ発現を有意に低下させず、かつ、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置がＰＫＫ発現を有意に低下させたことを示す。
【０７０２】
【表７９】
2020072732.tif 000224
【０７０３】
（血管透過性の定量化）
足、結腸、及び小腸から収集した組織をホルムアミド溶液中に一晩置いて、エバンスブルー色素を浸出させた。足組織を含有するホルムアミド溶液は、５５℃まで加熱し、一晩放置した。次に、色素注入したホルムアミド溶液の色彩強度をＯＤ６００ｎｍで測定した。本データは、ＩＳＩＳ４６１７５６を用いて処置されていないＰＢＳ対照と比較した％増または％減として表８０に表す。本データは、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置が、ＩＳＩＳ４６１７５６によって誘発される血管浸透性を防止したことを示す。
【０７０４】
【表８０】
2020072732.tif 000225
【０７０５】
（実施例１９：ＦｅＣｌ３誘発性下大静脈血栓症モデルにおけるネズミＰＫＫのアンチセンス阻害のインビボでの効果）
ＰＫＫの有意なインビトロ及びインビボでの阻害を示すＩＳＩＳ４８２５８４を、ＦｅＣｌ３誘発性下大静脈血栓症マウスモデルにおいて評価した。
【０７０６】
（処置）
１群８匹の雄ＢＡＬＢ／ｃマウスからなる３群を、週２回、３週間皮下投与した１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した（週用量２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇ）。各１２匹のＢＡＬＢ／ｃマウスからなる２つの対照群は、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳの最後の投与の２日後に全群由来のマウスを１０ｍｇ／ｋｇキシラジンと混合した１５０ｍｇ／ｋｇケタミンを用いて麻酔し、腹腔内注射によって投与した。血栓形成は、第一の対照群以外、麻酔したマウス全群において、ＦｅＣｌ３を用いて誘発させた。
【０７０７】
ＦｅＣｌ３処置を受けているマウスにおいて、血栓形成は、１０％ＦｅＣｌ３溶液で事前に飽和させておいた一片のろ紙（２×４ｍｍ）を大静脈上に直接適用することによって誘発させた。曝露３分後、ろ紙を取り外した。ろ紙適用の３０分後、血栓を含有する固定長の静脈を血小板分析のために摘出した。肝臓は、ＲＮＡ分析のために収集した。
【０７０８】
（血小板組成の定量化）
血小板因子４（ＰＦ−４）のリアルタイムＰＣＲ定量化を用いて、血栓形成の尺度としての静脈における血小板を定量化した。ＰＦ−４ｍＲＮＡレベルは、ネズミプライマープローブセットｍＰＦ４＿ＬＴＳ＿０００８６（順方向配列ＡＧＡＣＣＣＡＴＴＴＣＣＴＣＡＡＧＧＴＡＧＡＡＣＴ、配列番号２２４０として本明細書で指定；逆方向配列ＣＧＣＡＧＣＧＡＣＧＣＴＣＡＴＧ、配列番号２２４１として本明細書で指定；プローブ配列ＴＣＴＴＴＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＴＴ、配列番号２２４２として本明細書で指定）を用いて測定した。結果は、２つのＰＢＳ処置対照群と比較した場合の、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処置マウスにおけるＰＦ−４の％として表す。表８１に示すように、ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置は、ＰＢＳ対照との比較においてＰＦ−４の有意な低下を結果的に生じた。それゆえ、本明細書で提供する化合物によるＰＫＫの低下は、血栓形成を阻害するのに有用である。
【０７０９】
【表８１】
2020072732.tif 000226
【０７１０】
（実施例２０：尾部放血アッセイにおけるネズミＰＫＫのアンチセンス阻害のインビボでの効果）
ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置がマウスにおける過剰な放血または出血を生じるかどうかを観察するために、尾部放血を測定した。
【０７１１】
（処置）
１群１０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスからなる群を、週２回、３週間皮下投与する１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇ（週用量２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した。８匹のＢＡＬＢ／ｃマウスからなる対照群は、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。
【０７１２】
（尾部放血アッセイ）
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳの最終処置の２日後、マウスを尾部放血チャンバーの中に置いた。イソフルランを用いてマウスをチャンバーの中で麻酔した。次に、小片の尾部（先端からおよそ４ｍｍ）を滅菌はさみで切断した。切断した尾部をすぐに、３７℃へ加温したおよそ１０ｍｌの０．９％ＮａＣｌ緩衝液で満たした１５ｍｌファルコンチューブの中に入れた。血液を４０分間の時間経過の間収集した。塩類溶液を充填したチューブを放血の前後両方で秤量した。本結果は、表８２に提供する。
【０７１３】
ＩＳＩＳ４８２５８４を用いた処置は、放血に有意に影響しなかった。これらのデータは、本明細書に提供する化合物の出血能力が低いことを示唆している。これらのデータは、実施例１９に提供した結果とともに、本明細書に説明する化合物を用いたＰＫＫの阻害が、関連する放血の危険なしで抗血栓性活性を提供するのに有用であることを示唆している。
【０７１４】
【表８２】
2020072732.tif 000227
【０７１５】
（実施例２１：ＦｅＣｌ３誘発性腸間膜血栓症モデルにおけるネズミＰＫＫのアンチセンス阻害のインビボでの効果）
ＩＳＩＳ４８２５８４をＦｅＣｌ３誘発性腸間膜血栓症マウスモデルにおいて評価した。
【０７１６】
（処置）
１群６〜８匹のスイス・ウェブスター系マウス１群を、週２回、３週間皮下投与する４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した（週用量８０ｍｇ／ｋｇ）。６匹のスイス・ウェブスターマウスの対照群を、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳで処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳの最終投与の２日後、全群由来のマウスを、皮下注射によって投与する、２５ｍｇ／ｋｇキシラジンと混合した７５ｍｇ／ｋｇケタミンで麻酔した。
【０７１７】
５ｍｇ／ｋｇの投薬量でローダミン６Ｇ色素を皮下注射して、血小板を染色した。１ｍｇ／ｋｇの投薬量のアレクサ６４７標識した抗フィブリノーゲン抗体を、尾静脈注射を介して注射し、フィブリンを染色した。腹部を正中切開線によって開口した。内臓肋間膜をガラスカバースライド上に延展し、顕微鏡下での観察によって肋間膜細動脈（７０〜１２０μｍ）を特定した。６％ＦｅＣｌ３溶液で事前に飽和しておいた綿糸（２×０．３ｍｍ）を標的血管上に直接適用することによって、血栓形成を誘発させた。曝露３分後、意図を取り出し、両色素の色彩強度を適切なフィルターを用いる蛍光顕微鏡（オリンパスＦｌｕｏＶｉｅｗ１０００共焦点レーザ走査顕微鏡）によって７０分間記録した。
【０７１８】
対照群及び処置群における血小板凝集についての結果は、任意の単位（ａ．ｕ．）で表現して表８３に表す。血小板凝集は、ＰＢＳで処置したマウスと比較して８０ｍｇ／ｋｇ／週の用量でＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置したマウスにおいて低下した。対照群及び処置群におけるフィブリン形成についての結果は、これもまた任意の単位（ａ．ｕ．）で表現して表８４に表す。フィブリン形成は、ＰＢＳで処置したマウスと比較して８０ｍｇ／ｋｇ／週の用量でＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置したマウスにおいて低下した。それゆえ、これらの結果は、ＩＳＩＳ４８２５８４が血栓形成を阻害することを示唆する。
【０７１９】
【表８３】
2020072732.tif 000228
【０７２０】
【表８４】
2020072732.tif 000229
【０７２１】
（実施例２２：狭窄誘発性下大静脈血栓症モデルにおけるネズミＰＫＫのアンチセンス阻害のインビボでの効果）
ＩＳＩＳ４８２５８４を、狭窄誘発性下大静脈（ＩＶＣ）血栓症モデルにおいて評価した。低い血流及び内皮損傷は、Ｓｔ．Ｔｏｍａｓモデルとしても公知のこのモデルの特徴である。
【０７２２】
（処置）
１群６〜８匹のＢＡＬＢ／ｃマウス４群を、週２回、３週間皮下投与する５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８２５８４を用いて処置した（週用量１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇ）。１群８匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの対照群を、週２回、３週間皮下投与するＰＢＳを用いて処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳの最終用量を投与した２日後に、２．５％吸入用イソフルランを用いて全群由来のマウスを麻酔した。マウスのＩＶＣを左腎静脈下の正中腹部切開線を介して露出させ、鈍的切開によって腹部動脈から分離した。６−０絹タイ（Ｅｔｈｉｃｏｎ，英国）を左腎静脈直下の血管の背後に置き、金属４−０縫合糸（Ｅｔｈｉｃｏｎ，英国）をＩＶＣ上に長軸方向に置き、上部の上で絹タイを結んだ。金属縫合糸を次に取り出した。２つの神経血管手術クリップ（Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ社，ペンシルバニア州）を各２０秒間、結紮の下の２つの別個の位置に置き、その後、取り出した。次に腹腔内容物を置き換え、腹部を閉じた。２４時間後、ＩＶＣを露出させ、血栓形成についてチェックした。形成した血栓はすべて収集し、１０％ホルマリン中で２４時間固定した。
【０７２３】
血栓を秤量したので、結果をミリグラムで表現する表８５に表す。本結果によって示されるように、ＩＳＩＳ４８２５８４の上昇する用量を用いた処置は結果的に、対応する血栓重量の減少を生じた。本結果は、ＰＫＫのアンチセンス阻害が血栓形成を阻害するのに有用であることを示している。
【０７２４】
【表８５】
2020072732.tif 000230
【図１】
2020072732.tif 000234
【図２】
2020072732.tif 000235
【配列表】
2020072732000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年1月31日(2020.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２〜５０個の結合したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、プレカリクレイン（ＰＫＫ）核酸の等しい長さの部分と少なくとも９０％相補的であり、該修飾されたオリゴヌクレオチドがＰＫＫ核酸及び／又はＰＫＫタンパク質のレベルの量を低下させることができる、上記化合物。
【請求項２】
ＰＫＫ核酸が配列番号１〜１８のいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、配列番号３０〜２２２６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも１２個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、
（ｉ）配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６、
（ｉｉ）配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２、
（ｉｉｉ）配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０、
（ｉｖ）配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０、
（ｖ）配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４８、
（ｖｉ）配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９、
（ｖｉｉ）配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２４、
（ｖｉｉｉ）配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０、
（ｉｘ）配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８、
の等しい長さの部分と１００％相補的な少なくとも１２個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、
（ｉ）配列番号９４〜９６、５６６〜５７３、及び１５９７〜１６００；
（ｉｉ）配列番号１５５〜１６０、２６１、及び７０２〜７０７；
（ｉｉｉ）配列番号１２９、６５２〜６６１、及び１６６４〜１６６８；
（ｉｖ）配列番号９４〜１００、５６６〜５８７、及び１５９７〜１６１１；
（ｖ）配列番号１４４〜１６０、２６１、６９３〜７０７、１２５６、１３２０〜１３２５、２２１４、及び２２１５；
（ｖｉ）配列番号１２４〜１３２、２４９、６３３〜６６９、及び１６５０〜１６７４；
（ｖｉｉ）配列番号８６〜１００、５５４〜５８７、１２１７、及び１５８８〜１６１１；
（ｖｉｉｉ）配列番号１４４〜１６０、２６１、６９３〜７０７、１３２０〜１３２５、及び２２１５；又は
（ｉｘ）配列番号１２４〜１３２、２４９、６３３〜６６９、及び１６５０〜１６７４
より選択される配列の少なくとも１２個の連続した核酸塩基を含む、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、１５〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１０の等しい長さの部分と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項１〜６に記載の化合物。
【請求項８】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、一本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
一本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドがギャップマーである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、
１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウィングセグメント、及び
５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウィングセグメント
を含み、ギャップセグメントが、５’ウィングセグメントと３’ウィングセグメントに直接隣接し、かつその間に位置取られ、各ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾された糖を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、配列番号１〜１８のいずれか１つより選択される配列の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
ａ．修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合が、修飾されたヌクレオシド間結合であり、場合により、該修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である；又は
ｂ．修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、修飾されたヌクレオシド間結合であり、場合により、該修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である、
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つの核酸塩基が、修飾された核酸塩基であり、場合により、該修飾された核酸塩基が５−メチルシトシンである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
ａ．修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つの核酸塩基が、修飾された糖を含む；又は
ｂ．修飾されたオリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、修飾された糖を含む、
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
修飾された糖が二環式糖であり、場合により、該二環式糖が、
ａ．４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎは１又は２である）；又は
ｂ．４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋、
を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
修飾された糖が、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−フルオロ、及び２’−Ｏ−メチルより選択される２’−置換基を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物を含む、共役型アンチセンス化合物。
【請求項１９】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物を含む、二本鎖の化合物。
【請求項２０】
請求項１９に記載の二本鎖の化合物を含む、共役型アンチセンス化合物。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、請求項１９に記載の二本鎖の化合物、又は請求項１８若しくは２０に記載の共役型アンチセンス化合物と、医薬として許容し得る担体又は希釈剤とを含む、組成物。
【請求項２２】
ａ．医薬として許容し得る希釈剤がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である；及び／又は
ｂ．修飾されたオリゴヌクレオチドがナトリウム塩である、
請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、請求項１９に記載の二本鎖の化合物、請求項１８若しくは２０に記載の共役型アンチセンス化合物、又は請求項２１若しくは２２に記載の組成物を含む、ＰＫＫと関連する疾患、障害又は容態を予防、治療、又は寛解するための医薬組成物。
【請求項２４】
前記ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態が、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、脳浮腫、血栓症、塞栓症、血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、脳卒中、または梗塞である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物、請求項１９に記載の二本鎖の化合物、請求項１８若しくは２０に記載の共役型アンチセンス化合物、又は請求項２１若しくは２２に記載の組成物を含む、炎症性疾患又は血栓塞栓症性疾患を予防、治療、又は寛解するための医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０７２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０７２４】
【表８５】
2020072732.tif 000236
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３０〜２２２６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号５７０の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様３］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号７０５の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様４］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１６６６の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様５］２０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号５７０の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様６］２０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号７０５の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様７］１６個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１６６６の核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様８］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号６２、７２、１０３、２１３、３１２、３３４〜３３９、３４４、３４５、３４６、３４８、３４９、３５１、３６９、３７３、３８１、３８２、３８３、３８５、３８７〜３９１、３９９、４１１、４１２、４１４、４１６、４４４、４４６〜４４９、４５２、４５３、４５４、４５９、４６０、４６２〜４７２、４７３、４７６、４７７、４７９、４８０、４８１、４８４、４８９〜４９５、４９７、５００、５０４、５０６、５２２、５２６、５３５、５５８、５５９、５６０、５６４、５６６、５６８〜５７１、５７３、５７６、５７７、５７８、５８７、５９５、５９７〜６０４、６０７、６０８、６１０、６１３、６１５、６１８、６１９、６２２、６２３、６２４、６３３、６３５、６３６、６３８、６３９、６４０、６４２、６４３、６４５、６５２、６５５〜６５８、６６０、６６１、６７０、６７４〜６７９、６８４、６８５、６９８、７０４、７０５、７０７、７０８、７１３、７１６、７１７、７２８、７３４、７３６、７６７、７６８、７７６、７９７、７９８、８００、８０２、８１０、８１５、８７６、８８０、８８２、８８３、８８６、８９１、９０１〜９０５、９０８〜９１１、９２２、９２３、９２４、９３１、９４２、９５０〜９５７、９７２、９７４、９７８、９７９、９８０、９８７〜９９１、１００５、１０１７〜１０２１、１０２５、１０２６、１０２９、１０３０、１０３２、１０３４、１０３５、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０４６、１０５１、１０５４、１０５９、１０６０、１０６１、１０６４、１０６５、１０６６、１０７５、１０７６、１０８７、１０８９、１１１１、１１１４、１１１６、１１１７、１１２５、１１３３、１１５３、１１６９、１１７７、１１８１、１１８２、１１８７、１１９６、１２００、１２１４、１２２２、１２６７、１２７６、１２７７、１２８５、１２８６、１２８９、１２９０、１２９１、１３０３、１３６７、１３８９、１３９３、１３９８〜１４０１、１４０６、１４０７、１４０８、１４１１、１４１９〜１４２２、１４２６、１４３０、１４３１、１４３２、１４３４〜１４３７、１４３９、１４４０、１４４３、１４４４、１４５１、１４５２、１４７１、１５１６、１５２７、１５３５、１５３７、１５３８、１５３９、１５４０、１５４１、１５６３、１５６４、１５６７、１５６８、１６１６、１６１７、１６２３、１６２９、１６６４、１６６５、１６６６、１６７９、１６８７、１７３４、１８０４、１８７６、１８８６、１９１５、２００８、２０１８、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様９］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも８０％ｍＲＮＡ阻害を達成する、態様８に記載の化合物。
［態様１０］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号６２、７２、１０３、２１３、３３４〜３３９、３４４、３４６、３４８、３４９、３５１、３８１、３８２、３８３、３８５、３８９、３９０、３９１、４４６、４４８、４５２、４５３、４５４、４６６〜４７３、４７６、４８１、４８４、４９１、４９２、４９４、４９５、４９７、５０４、５２６、５５８、５５９、５６６、５６８〜５７１、５７６、５７８、５８７、５９５、５９７、５９８、６００〜６０４、６０７、６１０、６１３、６１８、６１９、６２４、６３５、６３８、６３９、６４５、６５２、６５６、６５７、６５８、６６０、６７４、６７５、６７６、６８４、６９８、７０４、７０５、７０７、７１３、７１６、７６８、８７６、８８０、９０１〜９０５、９０８〜９１１、９２２、９２３、９２４、９３１、９４２、９５１、９５４〜９５７、９７２、９７４、９７８、９７９、９８７、９８８、９９０、１００５、１０１９、１０２０、１０２１、１０２５、１０３２、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０５４、１０５９、１０６０、１０６１、１０６４、１０６５、１０６６、１０７５、１１１１、１１１６、１１１７、１１２５、１１３３、１１５３、１１６９、１１７７、１２００、１２２２、１２６７、１２８５、１２９０、１２９１、１３０３、１３６７、１３９８、１３９９、１４０１、１４０６、１４０８、１４１１、１４１９、１４２０、１４２１、１４２６、１４３０、１４３１、１４３２、１４３４〜１４３７、１４４０、１４４３、１４４４、１４５１、１５３７〜１５４０、１５６３、１６１６、１６７９、１６８７、１８０４、２００８、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１１］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも８５％ｍＲＮＡ阻害を達成する、態様１０に記載の化合物、
［態様１２］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３５１、３８２、３９０、３９１、４４６、４４８、４５２、４５３、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７６、４８１、４９１、４９５、５０４、５５８、５６６、５６８、５７０、５７１、５７８、５８７、５９７、５９８、６００、６０４、６１３、６３５、６３８、６４５、６５６、６５８、６６０、６７４、６７５、６８４、７０４、７０５、８８０、９０１〜９０５、９０９、９２２、９３１、９５１、９５４、９５６、９９０、１００５、１０２０、１０３２、１０３７、１０４０、１０４１、１０４５、１０５４、１０７５、１１１１、１１２５、１１３３、１１５３、１２００、１２６７、１２９１、１３０３、１３９８、１３９９、１４０１、１４０６、１４２０、１４２６、１４３０、１４３１、１４３４、１４３５、１４３６、１４４０、１４４３、１４５１、１５３７〜１５４０、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１３］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも９０％ｍＲＮＡ阻害を達成する、態様１２に記載の化合物。
［態様１４］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３９１、４４８、４６８、４６９、５６８、５７０、５９８、６３５、６５８、６７４、６８４、７０５、９０１、９０３、９０４、９２２、９９０、１２６７、１２９１、１４２０、１４３０、１４３１、１４３４、１４３５、１４３６、１５３７、１５３８、及び１５４０の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１５］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、ＰＫＫの少なくとも９５％ｍＲＮＡ阻害を達成する、態様１４に記載の化合物。
［態様１６］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３３８、３４６、３４９、３８２、３８３、３９０、４４８、４５２、４５３、４５４、４９５、５２６、５５９、５７０、５８７、５９８、６３５、６６０、７０５、９０１、９０３、９０４、９０８、９２３、９３１、９５５、９７４、９８８、９９０、１０２０、１０３９、１０４０、１１１１、１１１７、１２６７、１２９１、１３４９、１３５２、１３６７、１３８９、１３９３、１３９９、１４０１、１４０８、１４１１、１４２６、１４９９、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６３、１５６４、１５６８、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６２３、１６２４、１６４３、１６６１、１６６５、１６６６、１６７３、１６７９、１６９５、１７２０、１８０４、１８１７、１８７６、１８８１、１８８６、１９４０、１９４７、２００８、２０１８、２０１９、２０３１、２０４４、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１７］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．４以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する、態様１６に記載の化合物。
［態様１８］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３４９、３８２、４５３、４５４、４９５、５２６、５７０、５８７、５９８、６３５、６６０、９０１、９０３、９０４、９３１、９５５、９９０、１０２０、１１１１、１２６７、１３４９、１３５２、１３６７、１３８９、１３９９、１４０８、１４１１、１４２６、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６３、１５６４、１５６８、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６２３、１６４３、１６６１、１６６５、１６６６、１６７３、１６９５、１８０４、１８７６、１８８１、２０１９、２０４４、２１００、２１０１、２１１５、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１９］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．３以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する、態様１８に記載の化合物。
［態様２０］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、３４６、３８２、４５３、４９５、５２６、５７０、５８７、５９８、６３５、９０１、９０４、９３１、９５５、１０２０、１１１１、１３４９、１３５２、１３８９、１４２６、１５１６、１５３５、１５４４、１５４８、１５６４、１５６９、１５９８、１６１６、１６１７、１６６５、１６６６、１８０４、１８７６、１８８１、２０１９、２０４４、２１０１、及び２１１６の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２１］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．２以下のＩＣ５０（μＭ）を達成する、態様２０に記載の化合物。
［態様２２］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号３３４、４９５、５８７、５９８、６３５、１３４９、１３５２、１３８９、１５１６、１５４４、１５４８、１５６９、１５９８、１６１７、１６６５、１６６６、１８０４、１８８１、及び２０１９の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２３］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、０．２未満のＩＣ５０（μＭ）を達成する、態様２２に記載の化合物。
［態様２４］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２５］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２６］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２７］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２１の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２８］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４８の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２９］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様３０］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２５の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様３１］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４１の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様３２］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつ配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３９の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様３３］１２〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、かつＰＫＫ核酸のエキソン９、エキソン１２、またはエキソン１４の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様３４］前記修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１０と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、態様２４〜３３に記載の化合物。
［態様３５］一本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、態様１〜３４のいずれか一に記載の化合物。
［態様３６］少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、修飾されたヌクレオシド間結合である、態様１〜３５のいずれか一に記載の化合物。
［態様３７］少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である、態様３６に記載の化合物。
［態様３８］各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオアート結合である、態様３７に記載の化合物。
［態様３９］少なくとも１つのヌクレオシドは、修飾された核酸塩基を含む、態様１〜３８のいずれか一に記載の化合物。
［態様４０］前記修飾された核酸塩基は、５−メチルシトシンである、態様３９に記載の化合物。［態様４１］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾された糖を含む、態様１〜４０のいずれか一に記載の化合物。
［態様４２］前記修飾された糖は、２’修飾された糖、ＢＮＡ、またはＴＨＰである、態様４１に記載の化合物。
［態様４３］前記修飾された糖は、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−メチル、拘束されたエチル、ＬＮＡ、または３’−フルオロ−ＨＮＡのうちのいずれかである、態様４２に記載の化合物。
［態様４４］少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、拘束されたエチルヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシド、または３’−フルオロ−ＨＮＡヌクレオシドを含む、態様１〜４３のいずれか一に記載の化合物。
［態様４５］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、
１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウィングセグメント、及び
５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウィングセグメント
を含み、この中で、ギャップセグメントは、５’ウィングセグメントと３’ウィングセグメントの間に位置取られ、かつこの中で各ウィングセグメントの各ヌクレオシドは修飾された糖を含む、態様１〜４４のいずれか一に記載の化合物。
［態様４６］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、２０個の連結したヌクレオシドからなる、態様１〜４５のいずれか一に記載の化合物。
［態様４７］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、１９個の連結したヌクレオシドからなる、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様４８］前記修飾されたオリゴヌクレオチドは、１８個の連結したヌクレオシドからなる、態様１〜４７のいずれか一に記載の化合物。
［態様４９］以下の式、すなわち、Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物であって、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である、化合物。
［態様５０］以下の式、すなわち、ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物であって、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である、化合物。
［態様５１］以下の式、すなわち、ｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｋｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｅによる修飾されたオリゴヌクレオチドからなる化合物であって、式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’−メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾されたヌクレオシド
ｋ＝ｃＥｔ修飾されたヌクレオシド、
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオアートヌクレオシド間結合
である、化合物。
［態様５２］以下の式
【化１９】
2020072732.tif 000237
による修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、化合物。
［態様５３］以下の式
【化２０】
2020072732.tif 000238
による修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、化合物。
［態様５４］以下の式
【化２１】
2020072732.tif 000239
による修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、化合物。
［態様５５］態様１〜５４のいずれか一に記載の化合物またはその塩と、医薬として許容し得る担体または希釈剤のうちの少なくとも１つとを含む、組成物。
［態様５６］態様１〜５５のいずれか一に記載の化合物または組成物を動物へ投与することを含む、方法。
［態様５７］前記動物はヒトである、態様５６に記載の方法。
［態様５８］前記化合物を投与することは、ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態を予防、治療、または寛解させる、態様５７に記載の方法。
［態様５９］前記ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態とは、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、脳浮腫、血栓症、塞栓症、血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、脳卒中、または梗塞である、態様５７に記載の方法。
［態様６０］炎症性疾患または血栓塞栓症性疾患を治療するための薬剤の製造のための態様１〜５９のいずれか一に記載の化合物または組成物の使用。
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月11日(2020.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２〜５０個の結合したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、プレカリクレイン（ＰＫＫ）核酸の等しい長さの部分と少なくとも９０％相補的であり、該修飾されたオリゴヌクレオチドがＰＫＫ核酸及び／又はＰＫＫタンパク質のレベルの量を低下させることができる、上記化合物。
【請求項２】
ＰＫＫ核酸が配列番号１〜１８のいずれか１つより選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１〜１８のいずれか１つより選択される配列の等しい長さの部分と相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
１２〜５０個の結合したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾されたオリゴヌクレオチドが、
（ｉ）配列番号１０の核酸塩基３３１８３〜３３２４２、
（ｉｉ）配列番号１０の核酸塩基３０５７０〜３０６１０、
（ｉｉｉ）配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７５２０、
（ｉｖ）配列番号１０の核酸塩基３３０８５〜３３２４８、
（ｖ）配列番号１０の核酸塩基３０４７５〜３０６３９、
（ｖｉ）配列番号１０の核酸塩基２７３６２〜２７５２４、
（ｖｉｉ）配列番号１０の核酸塩基３３１０１〜３３２４０、
（ｖｉｉｉ）配列番号１０の核酸塩基３０４６３〜３０６３８、又は
（ｉｘ）配列番号１０の核酸塩基２７４２７〜２７４６６、
の等しい長さの部分と相補的である少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、又は少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、上記化合物。
【請求項５】
１２〜５０個の結合したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾されたオリゴヌクレオチドが、
（ｉ）配列番号７０５、１５５〜１６０、２６１、７０２〜７０４、７０６、及び７０７；
（ｉｉ）配列番号１２９、６５２〜６６１、及び１６６４〜１６６８；
（ｉｉｉ）配列番号９４〜１００、５６６〜５８７、及び１５９７〜１６１１；
（ｉｖ）配列番号１４４〜１６０、２６１、６９３〜７０７、１２５６、１３２０〜１３２５、２２１４、及び２２１５；
（ｖ）配列番号１２４〜１３２、２４９、６３３〜６６９、及び１６５０〜１６７４；
（ｖｉ）配列番号８６〜１００、５５４〜５８７、１２１７、及び１５８８〜１６１１；
（ｖｉｉ）配列番号１４４〜１６０、２６１、６９３〜７０７、１３２０〜１３２５、及び２２１５；
（ｖｉｉｉ）配列番号１２４〜１３２、２４９、６３３〜６６９、及び１６５０〜１６７４；又は
（ｉｘ）配列番号９４〜９６、５６６〜５７３、及び１５９７〜１６００；
より選択される配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、又は少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、上記化合物。
【請求項６】
１２〜５０個の結合したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾されたオリゴヌクレオチドが、配列番号７０５、３０〜７０４、及び７０６〜２２２６のいずれか１つより選択される配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、又は少なくとも２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、上記化合物。
【請求項７】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、１５〜３０個の結合したヌクレオシドからなる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号１０の等しい長さの部分と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項１〜７に記載の化合物。
【請求項９】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、一本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
一本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドがギャップマーである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
修飾されたオリゴヌクレオチドが、
１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウィングセグメント、及び
５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウィングセグメント
を含み、ギャップセグメントが、５’ウィングセグメントと３’ウィングセグメントに直接隣接し、かつその間に位置取られ、各ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、修飾された糖を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
ａ．修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間結合が、修飾されたヌクレオシド間結合であり、場合により、該修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である；又は
ｂ．修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、修飾されたヌクレオシド間結合であり、場合により、該修飾されたヌクレオシド間結合が、ホスホロチオアートヌクレオシド間結合である、
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つの核酸塩基が、修飾された核酸塩基であり、場合により、該修飾された核酸塩基が５−メチルシトシンである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
ａ．修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも１つの核酸塩基が、修飾された糖を含む；又は
ｂ．修飾されたオリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、修飾された糖を含む、
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
修飾された糖が二環式糖であり、場合により、該二環式糖が、
ａ．４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（式中、ｎは１又は２である）；又は
ｂ．４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋、
を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
修飾された糖が、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−フルオロ、及び２’−Ｏ−メチルより選択される２’−置換基を含む、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号７０５からなる、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該修飾されたオリゴヌクレオチドが、５’ウィングセグメント、中央ギャップセグメント、及び３’ウィングセグメントからなるギャップマーであり、
該５’ウィングセグメントが、５個の２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドからなり、
該中央ギャップセグメントが、１０個のβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドからなり、及び
該３’ウィングセグメントが、５個の２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドからなり、
該修飾されたオリゴヌクレオチドが核酸塩基配列５’−ＣＣＣＣＣＴＴＣＴＴＴＡＴＡＧＣＣＡＧＣ−３’（配列番号７０５）を有し、該修飾されたオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合がホスホロチオアートヌクレオシド間結合である、上記化合物。
【請求項１９】
修飾されたオリゴヌクレオチドからなる、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物を含む、共役型アンチセンス化合物。
【請求項２１】
請求項１〜８及び１１〜１９のいずれか１項に記載の化合物を含む、二本鎖の化合物。
【請求項２２】
請求項２０に記載の二本鎖の化合物を含む、共役型アンチセンス化合物。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物、請求項２１に記載の二本鎖の化合物、又は請求項２０若しくは２２に記載の共役型アンチセンス化合物と、医薬として許容し得る担体又は希釈剤とを含む、組成物。
【請求項２４】
ａ．医薬として許容し得る希釈剤がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である；及び／又は
ｂ．修飾されたオリゴヌクレオチドがナトリウム塩である、
請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物、請求項２１に記載の二本鎖の化合物、請求項２０若しくは２２に記載の共役型アンチセンス化合物、又は請求項２３若しくは２４に記載の組成物を含む、ＰＫＫと関連する疾患、障害又は容態を予防、治療、又は寛解するための医薬組成物。
【請求項２６】
前記ＰＫＫと関連する疾患、障害または容態が、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、浮腫、血管浮腫、腫脹、眼瞼血管浮腫、眼浮腫、黄斑浮腫、脳浮腫、血栓症、塞栓症、血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、脳卒中、または梗塞である、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物、請求項２１に記載の二本鎖の化合物、請求項２０若しくは２２に記載の共役型アンチセンス化合物、又は請求項２３若しくは２４に記載の組成物を含む、炎症性疾患又は血栓塞栓症性疾患を予防、治療、又は寛解するための医薬組成物。