(57)【要約】【課題】化粧品、医薬品、医薬部外品若しくは飲食品または医療行為若しくは美容行為等に利活用する細胞（特定の数量や組成の細胞）を提供するために、生細胞の数を計数することができる細胞計数装置を提供する。【解決手段】細胞を培養する培養容器手段と、培養した前記細胞の数を計数する細胞計数手段とを有し、前記培養容器手段は、前記細胞を培養するための培養液を保持する培養液保持部と、前記培養液保持部の内部に配置される細胞吸着平板部と、を備え、前記細胞計数手段は、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影部と、前記撮影部が撮影した画像データを画像処理する画像処理部と、前記画像処理部が画像処理した画像処理結果に基づいて前記細胞の数を計数する算出部と、を備える、ことを特徴とする。【選択図】図１
2020182411.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の数を計数する細胞計数装置であって、
前記細胞を培養する培養容器手段と、
培養した前記細胞の数を計数する細胞計数手段と
を有し、
前記培養容器手段は、前記細胞を培養するための培養液を保持する培養液保持部と、前記培養液保持部の内部に配置される細胞吸着平板部と、を備え、
前記細胞計数手段は、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影部と、前記撮影部が撮影した画像データを画像処理する画像処理部と、前記画像処理部が画像処理した画像処理結果に基づいて前記細胞の数を計数する算出部と、を備える、
ことを特徴とする細胞計数装置。
【請求項２】
前記細胞吸着平板部は、生細胞の特性に基づいて、該細胞吸着平板部の表面に前記生細胞を吸着配置し、
前記撮影部は、前記細胞吸着平板部の表面に吸着配置した前記生細胞を含む前記画像データを取得し、
前記画像処理部は、前記撮影部が撮影した前記画像データを用いて、前記生細胞が配置された部分と前記生細胞が配置されていない部分とを区別する修正画像データを作成し、
前記算出部は、前記画像処理部が作成した前記修正画像データに基づいて、前記細胞の数を計数する、
ことを特徴とする、請求項１に記載の細胞計数装置。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載の細胞計数装置と、前記細胞計数装置が計数した前記細胞の数に基づいて培養環境を調整する培養監視手段と、を含む、ことを特徴とする細胞培養システム。
【請求項４】
細胞の数を計数する細胞計数方法であって、
前記細胞を培養する培養容器手段と、
培養した前記細胞の数を計数する細胞計数手段と
を有し、
前記培養容器手段は、前記細胞を培養するための培養液を保持する培養液保持部と、前記培養液保持部の内部に配置される細胞吸着平板部と、を備え、
前記細胞計数手段は、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影部と、前記撮影部が撮影した画像データを画像処理する画像処理部と、前記画像処理部が画像処理した画像処理結果に基づいて前記細胞の数を計数する算出部と、を備え、
前記培養容器手段は、前記細胞を培養するための培養液を保持する培養液保持部と、前記培養液保持部の内部に配置される細胞吸着平板部と、を備え、
前記細胞計数手段は、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影部と、前記撮影部が撮影した画像データを画像処理する画像処理部と、前記画像処理部が画像処理した画像処理結果に基づいて前記細胞の数を計数する算出部と、を備える、
ことを特徴とする細胞計数装置を用いて、
前記細胞吸着平板部を撮影する撮影ステップと、
前記撮影ステップで撮影した画像データを画像処理する画像処理ステップと、
前記画像処理ステップで画像処理した画像処理結果に基づいて、前記細胞の数を計数する細胞数算出ステップと
を含む、
ことを特徴とする細胞計数方法。
【請求項５】
請求項４に記載の細胞計数方法と、
前記細胞計数方法で計数した前記細胞の数に基づいて、培養環境を調整する培養監視ステップと、
を含む、
ことを特徴とする細胞培養方法。
【請求項６】
請求項４に記載の細胞計数方法または請求項５に記載の細胞培養方法をコンピュータに実行させるためのプログラム。
【請求項７】
請求項６に記載のプログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧品、医薬品、医薬部外品若しくは飲食品または美容行為若しくは医療行為等に利活用するために培養した細胞の数を計数する細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法に関する。また、本発明は、その細胞計数方法のプログラムまたはそれらのプログラムを記録した記録媒体に関するものであってもよい。
【背景技術】
【０００２】
医薬品の生産、遺伝子治療、再生医療、免疫療法などの医薬学・生化学分野において、細胞（組織、微生物、ウイルスなどを含む）を人工的な環境下で培養する方法が提案されている。培養工程においては、品質管理や効率的なプロセス制御を目的として培養中の細胞数をモニタリングすることが重要である。例えば高生産性の連続培養プロセスでは細胞の増殖に合わせて培地や添加物を制御するため、生細胞数のモニタリングを行う必要がある。細胞数をモニタリングする技術として、培養液を間欠的に無菌サンプリングして細胞を計数する方法（オフライン計測）が知られている。特許文献１では、培養中の細胞数をモニタリングする方法であって、培地由来の蛍光を低減するか及び／又は細胞由来の蛍光を増強した上で、励起光により発生した蛍光強度を測定し、測定された蛍光強度に基づいて細胞数を算出する前記モニタリング方法（オンライン計測）に関する技術を開示している。特許文献２では、細胞培養モジュールに培地を供給することによって細胞の培養を行うとともに、培養途中で細胞培養モジュールに培地を供給する培養流路から細胞培養モジュールにメディエータを供給して同メディエータの還元によって生細胞数の測定を行う測定流路に流路を切替えて、生細胞数の測定を行うことを特徴とする生細胞数測定方法（オンライン計測）に関する技術を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１３−１９２４７７号公報
【特許文献２】特開２００４−３３７０２９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
大量の細胞を培養する高生産性の連続培養プロセスにおいて、品質管理や効率的なプロセス制御のためにリアルタイム（オンライン）で細胞の数を計数する方法が求められている。また、培養した細胞の利活用の方法に対応した数の細胞を提供するために、培養中の生細胞の数をより高精度に直接、計数できる方法が求められている。
【０００５】
本発明は、美容行為や医療行為、機能性食品などの効果や精度の向上を目指して、化粧品、医薬品、医薬部外品若しくは飲食品または医療行為若しくは美容行為等に利活用する細胞（特定の数量や組成の細胞）を提供するために、リアルタイムで細胞の数を計数することができる細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するために、本発明の一つの実施形態は、細胞の数を計数する細胞計数装置であって、前記細胞を培養する培養容器手段と、培養した前記細胞の数を計数する細胞計数手段とを有し、前記培養容器手段は、前記細胞を培養するための培養液を保持する培養液保持部と、前記培養液保持部の内部に配置される細胞吸着平板部と、を備え、前記細胞計数手段は、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影部と、前記撮影部が撮影した画像データを画像処理する画像処理部と、前記画像処理部が画像処理した画像処理結果に基づいて前記細胞の数を計数する算出部と、を備える、ことを特徴とする細胞計数装置を提供する。本発明の他の実施形態は、上記の細胞計数装置であって、前記細胞吸着平板部は、生細胞の特性に基づいて、該細胞吸着平板部の表面に前記生細胞を吸着配置し、前記撮影部は、前記細胞吸着平板部の表面に吸着配置した前記生細胞を含む前記画像データを取得し、前記画像処理部は、前記撮影部が撮影した前記画像データを用いて、前記生細胞が配置された部分と前記生細胞が配置されていない部分とを区別する修正画像データを作成し、前記算出部は、前記画像処理部が作成した前記修正画像データに基づいて、前記細胞の数を計数する、ことを特徴とする細胞計数装置であってもよい。また、本発明の他の実施形態は、上記のいずれかの細胞計数装置と、前記細胞計数装置が計数した前記細胞の数に基づいて培養環境を調整する培養監視手段と、を含む、ことを特徴とする細胞培養システムであってもよい。
【０００７】
本発明の他の実施形態は、細胞の数を計数する細胞計数方法であって、前記細胞を培養する培養容器手段と、培養した前記細胞の数を計数する細胞計数手段とを有し、前記培養容器手段は、前記細胞を培養するための培養液を保持する培養液保持部と、前記培養液保持部の内部に配置される細胞吸着平板部と、を備え、前記細胞計数手段は、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影部と、前記撮影部が撮影した画像データを画像処理する画像処理部と、前記画像処理部が画像処理した画像処理結果に基づいて前記細胞の数を計数する算出部と、を備え、前記培養容器手段は、前記細胞を培養するための培養液を保持する培養液保持部と、前記培養液保持部の内部に配置される細胞吸着平板部と、を備え、前記細胞計数手段は、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影部と、前記撮影部が撮影した画像データを画像処理する画像処理部と、前記画像処理部が画像処理した画像処理結果に基づいて前記細胞の数を計数する算出部と、を備える、ことを特徴とする細胞計数装置を用いて、前記細胞吸着平板部を撮影する撮影ステップと、前記撮影ステップで撮影した画像データを画像処理する画像処理ステップと、前記画像処理ステップで画像処理した画像処理結果に基づいて、前記細胞の数を計数する細胞数算出ステップとを含む、ことを特徴とする細胞計数方法を提供する。また、本発明の他の実施形態は、上記の細胞計数方法と、前記細胞計数方法で計数した前記細胞の数に基づいて、培養環境を調整する培養監視ステップと、を含む、ことを特徴とする細胞培養方法であってもよい。
【０００８】
本発明の他の実施形態は、上記の細胞計数方法または細胞培養方法をコンピュータに実行させるためのプログラムであってもよい。また、本発明の他の実施形態は、そのプログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体であってもよい。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係る細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法によれば、美容行為や医療行為、機能性食品などの効果や精度の向上を目指して、化粧品、医薬品、医薬部外品若しくは飲食品または医療行為若しくは美容行為等に利活用する細胞（特定の数量や組成の細胞）を提供するために、細胞の数を計数することができる。本発明に係る細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法によれば、大量の細胞を培養する高生産性の連続培養プロセスにおいて、培養中の細胞の数をより高精度に直接、計数でき、リアルタイムで培養中の細胞の数を監視（モニタリング）することができる。また、本発明に係る細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法によれば、大量の細胞を培養する高生産性の連続培養プロセスにおいて、培養中の細胞を監視（モニタリング）することができるので、不良細胞などの不具合に対応することができ、高品質の細胞を培養することができる。さらに、本発明によれば、培養中の生細胞の数をより高精度に直接、計数できるので、医療や美容、健康、再生医療などの医薬学分野、生化学分野において大きく貢献できるものである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の実施形態に係る細胞培養システム（細胞計数装置）の一例を示す概略構成図である。
【図２】本発明の実施形態に係る培養容器手段の一例を説明する説明図である。
【図３】培養した細胞の一例を説明する説明図である。
【図４】本発明の実施形態に係る細胞計数手段（細胞計数装置）の計数結果の一例を説明する説明図である。
【図５】本発明の実施形態に係る細胞計数方法の動作の一例を説明するフローチャート図である。
【図６】本発明の実施形態に係る細胞培養方法の動作の一例を説明するフローチャート図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
実施形態に係る細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法の例を用いて、本発明を説明する。なお、本発明は、以後に説明する細胞計数装置、細胞培養システム、細胞計数方法および細胞培養方法以外でも、細胞を培養するもの（装置、機械、部品、手段、システム、アプリケーションなど）や方法であれば、いずれにも用いることができる。なお、培養する細胞は、特に限定されない。また、細胞を培養するための基礎培地（細胞培養に使われる培地で、細胞の維持と増殖に必要な最低限の成分を含んだもの）は、特に限定されない。
【００１２】
本発明において、培養・計数の対象となる細胞として、例えば幹細胞、動物細胞、植物細胞、真菌細胞、細菌細胞、プロトプラスト、樹立された細胞株、人為的に遺伝子改変が施された細胞、等のあらゆる細胞が対象となり得る。幹細胞は、自己複製能と分化能とを有する細胞であれば特に制限されず、多能性幹細胞でもよく、体性幹細胞でもよい。多能性幹細胞は、自己複製能と、外胚葉、中胚葉および内胚葉のいずれにも分化し得る多分化能とを有する細胞である。多能性幹細胞としては、胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性生殖細胞、胚性癌細胞、多能性成体前駆細胞、成体多能性幹細胞、Ｍｕｓｅ細胞などが挙げられる。体性幹細胞としては、例えば、間葉系幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞などが挙げられる。
【００１３】
培養の対象となる細胞の他の例は、生体を構成する体細胞である。具体的には、リンパ球、好中球、単球、巨核球、マクロファージ、線維芽細胞、基底細胞、ケラチノサイト、上皮前駆細胞、周皮細胞、内皮細胞、脂肪前駆細胞、筋芽細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、肝実質細胞、膵β細胞、グリア細胞、等が挙げられる。
【００１４】
下記に示す順序で、本発明を説明する。
１．細胞計数装置の構成
２．細胞培養システムの構成
３．細胞計数方法
４．細胞培養方法
５．培養した細胞および化粧品、医薬品、医薬部外品、飲食品
【００１５】
（１．細胞計数装置の構成）
図１乃至図４を用いて、本発明の実施形態に係る細胞計数装置の構成を説明する。ここで、図１は、本発明の実施形態に係る細胞計数装置１００（細胞培養システム１００Ｓ）の一例を示す概略構成図である。図２（ａ）は、本発明の実施形態に係る培養容器手段１１の細胞吸着平板部１１ａ１の一例（ディッシュの場合）を説明する説明図である。図２（ｂ）は、本発明の実施形態に係る培養容器手段１１の細胞吸着平板部１１ａ２の一例（密封器の場合）を説明する説明図である。図２（ｃ）は、本発明の実施形態に係る培養容器手段１１の細胞吸着平板部１１ａ３の一例（フラスコの場合）を説明する説明図である。図３は、培養した細胞の一例を説明する説明図である。図４（ａ）および（ｂ）は、本発明の実施形態に係る細胞計数手段（細胞計数装置）の計数結果の一例を説明する説明図である。なお、図１等に示す例は一例であり、本発明は図１等に示す例に限定されるものではない。
【００１６】
図１に示すように、本発明に係る細胞計数装置１００は、細胞の数を計数するものである。細胞計数装置１００は、細胞を培養する培養容器手段１１と、培養した細胞の数を計数する細胞計数手段１２とを有する。
【００１７】
以下に、各構成を具体的に説明する。
【００１８】
培養容器手段１１は、細胞を培養するものである。培養容器手段１１は、基礎培地に細胞（培養する細胞）を配置され、所定の環境（温度、ＣＯ２濃度、培養時間など）で培養する。培養液（基礎培地および細胞）は、特に制限されず、あらゆる培養液を適用することができる。なお、所定の環境は、公知の技術を利用することができ、実験、設計、計画などで予め定められた環境とすることができる。また、細胞の培養は、例えば数日おきに培地の交換を行い細胞の遊走・成長を促し、細胞の増殖が十分に確認されたら継代を行い、さらに細胞数を増やしてもよい。
【００１９】
培養容器手段１１は、細胞を培養するための培養液（細胞、基礎培地、添加物など）を保持する培養液保持部１１ｂと、培養液保持部１１ｂの内部に配置される細胞吸着平板部１１ａと、を備える。培養容器手段１１は、たとえば必要な細胞種を培養液で懸濁した細胞懸濁溶液に播種し、インキュベータで培養することができる。また、培養容器手段１１は、フラスコを用いた場合には、培養容器内側と外界との境界面にフィルターを設けることで無菌状態を保ちながら空気の交換を行うことができる。また、培養容器手段１１は、必要に応じて培養液の交換を行う。
【００２０】
図２（ａ）乃至図２（ｃ）に示すように、培養液保持部１１ｂは、ディッシュ（図２（ａ））、密封器（図２（ｂ））、フラスコ（図２（ｃ））、等を用いることができる。なお、本発明に係る培養液保持部は、とくに限定されない。本発明に係る培養液保持部は、公知の技術を利用することができ、実験、設計、計画などで予め定められた容器とすることができる。
【００２１】
図２（ａ）乃至図２（ｃ）に示すように、細胞吸着平板部１１ａは、培養液保持部１１ｂの内部に配置される。図２（ａ）および図２（ｃ）に示すように、細胞吸着平板部１１ａは、培養液保持部１１ｂの底面を利用する構成であってもよい。細胞吸着平板部１１ａは、生細胞の特性に基づいて、細胞吸着平板部１１ａの表面に生細胞または細胞を吸着配置するものである。細胞吸着平板部１１ａの表面は、培養する細胞と親和性のある表面処理を施すことが好ましい。これにより、本発明に係る細胞計数装置１００は、細胞吸着平板部１１ａの表面上に、細胞計数手段１２（後述する撮影部１２ａ）で撮影する細胞を特定（配置）することができる。なお、本発明に係る細胞吸着平板部は、細胞が配置または吸着する平板であれば、材質などはとくに限定されない。また、本発明に係る細胞吸着平板部の形状は、実験、設計、計画などで予め定められた形状とすることができる。
【００２２】
細胞計数手段１２は、培養した細胞の数を計数するものである。細胞計数手段１２は、細胞吸着平板部１１ａを撮影する撮影部１２ａと、撮影部１２ａが撮影した画像データを画像処理する画像処理部１２ｂと、画像処理部１２ｂが画像処理した画像処理結果に基づいて細胞の数を計数する算出部１２ｃと、を備える。
【００２３】
撮影部１２ａは、細胞吸着平板部１１ａの表面を撮影し、細胞吸着平板部１１ａの表面上の細胞を撮影するものである。撮影部１２ａは、本実施形態では、細胞吸着平板部１２ａの表面に吸着配置した細胞（たとえば生細胞）を含む画像データを取得する。図３に、撮影部１２ａが撮影した培養した細胞（画像データ）の一例を示す。なお、撮影部の撮影方法は、公知の技術を利用することができ、実験、設計、計画などで予め定められた方法とすることができる。撮影部１２ａは、細胞が成長していく様子を日々観察することができ、細胞吸着平板部１１ａの表面上で成長し続ける細胞のコンフルエンシー（集密度）及び状態を確認することができる。
【００２４】
画像処理部１２ｂは、撮影部１２ａが撮影した画像データを画像処理するものである。画像処理部１２ｂは、本実施形態では、撮影部１２ａが撮影した画像データ（たとえば図３）を用いて、「生細胞が配置された部分」と「生細胞が配置されていない部分」とを区別する修正画像データ（画像処理結果）を作成する。図４（ａ）および図４（ｂ）に、細胞計数手段（細胞計数装置）の計数結果の一例を示す。図４（ａ）および図４（ｂ）に示すように、細胞計数手段１２は、本実施形態では、撮影部１２ａを用いて画像データＩｒを取得し、画像処理部１２ｂを用いて修正画像データＩｍを作成する。なお、画像処理部の画像処理方法は、公知の技術を利用することができ、実験、設計、計画などで予め定められた方法とすることができる。
【００２５】
画像処理部１２ｂは、たとえば（１）スケーリング処理（画像データの画像のサイズを変更して処理速度を向上）、（２）背景除去処理（バックグラウンドを除去し、強いぼかしをかけた画像を作成し、入力画像から差し引く）、（３）レベル調整処理（明るさ／コントラスト、ＲＧＢ度合、ガンマ補正、エッジ強調、およびその他画像編集処理）、（４）ぼかし処理（細胞輪郭をもとに画像をぼかし細胞部分を塗りつぶす）、（５）二値化処理（たとえば中央値付近で二値化）、などにより画像処理することで、修正画像データを生成することができる。これにより、本発明に係る細胞計数装置１００（画像処理部１２ｂ）は、「生細胞が配置された部分」と「生細胞が配置されていない部分」とを区別する修正画像データ（画像処理結果）を作成することができる。
【００２６】
算出部１２ｃは、画像処理した画像処理結果に基づいて、細胞の数を計数するものである。算出部１２ｃは、本実施形態では、画像処理部が作成した修正画像データに基づいて、細胞の数を計数する。図４（ａ）および図４（ｂ）に、細胞計数手段（細胞計数装置）の計数結果の一例を示す。図４（ａ）および図４（ｂ）に示すように、算出部１２ｃは、本実施形態では、撮影部１２ａを用いて画像データＩｒを取得し、画像処理部１２ｂを用いて修正画像データＩｍを作成し、修正画像データＩｍに基づいて細胞の数を計数する。
【００２７】
算出部１２ｃは、たとえば（１）面積算出処理（二値化処理した画像から被覆面積（「生細胞が配置された部分」）を算出）、（２）基準値処理（培養した細胞の情報から基準値（細胞１つの面積）を算出）、（３）細胞数算出処理（被覆面積を基準値で割って、撮影面積あたりの細胞数を算出）、（４）全細胞数算出処理（全領域に対応した係数をかけて、培養容器手段１１の全領域の細胞の総数を算出）、などにより細胞の数を計数することができる。
【００２８】
以上のとおり、本発明に係る細胞計数装置によれば、培養した細胞の数（たとえば生細胞の数）を計数することができる。また、本発明に係る細胞計数装置によれば、大量の細胞を培養する高生産性の連続培養プロセスにおいて、培養中の生細胞の数をより高精度に直接、計数でき、リアルタイムで培養中の生細胞の数を監視（モニタリング）できる。さらに、本発明に係る細胞計数装置は、培養中の生細胞の数をより高精度に直接、計数できるので、医療や美容、健康、再生医療などの医薬学分野、生化学分野において大きく貢献できるものである。
【００２９】
また、本発明に係る細胞計数装置によれば、撮影した画像データに基づいて細胞の数を算出することができるので、容易に導入することができ、特別な設備や装置を必要とせず、低コストで、高性能、短時間で且つ非侵略的に細胞の数を算出することができる。また、本発明に係る細胞計数装置によれば、撮影した画像データに基づいて細胞の数を算出することができるので、再生医療を行うクリニックなどに提供する予定細胞数に対して正確な数の細胞を提供することができる。また、本発明に係る細胞計数装置によれば、撮影した画像データに基づいて細胞の数を算出することができるので、細胞をサンプリングして計測するオフライン計測方法（培養容器から細胞を剥離し洗浄・遠心・回収・再懸濁後、その一部を細胞染色液で染色し血球計算盤でカウントして、細胞濃度・細胞数を算出する方法、試薬を使用しその反応過程の生成物を測定する方法）と比較して、培養中の細胞にかける負荷を大幅に低減でき、かつ、計数時間の大幅に短縮することができ、多種の細胞を扱うことができ、汎用性の高い方法を提供できる。
【００３０】
（２．細胞培養システムの構成）
図１を用いて、本発明の実施形態に係る細胞培養システムの構成を説明する。ここで、図１は、本発明の実施形態に係る細胞培養システム１００Ｓ（細胞計数装置１００）の一例を示す概略構成図である。なお、図１等に示す例は一例であり、本発明は図１等に示す例に限定されるものではない。
【００３１】
図１に示すように、本発明に係る細胞培養システム１００Ｓは、前述の（１．細胞計数装置の構成）の細胞計数装置１００を含むものである。このため、以下の説明では、（１．細胞計数装置の構成）と異なる部分を主に説明する。
【００３２】
図１に示すように、本発明に係る細胞培養システム１００Ｓは、前述の（１．細胞計数装置の構成）の細胞計数装置１００と、培養環境を調整・監視する培養監視手段１３と、を含む。また、細胞培養システム１００Ｓは、本実施形態では、細胞培養システム１００Ｓの全体の動作を制御する制御手段１０を、さらに含む。
【００３３】
制御手段１０は、細胞培養システム１００Ｓの各構成に動作を指示し、細胞培養システム１００Ｓの動作を制御する手段である。制御手段１０は、例えばＣＰＵ及びメモリで構成される演算装置を用いることができる。また、制御手段１０は、細胞計数装置１００に予め搭載されている演算装置、コントローラ又はその他制御手段を利用する構成であってもよい。
【００３４】
培養監視手段１３は、細胞計数装置１００が計数した細胞の数に基づいて、培養環境を調整・監視する手段である。培養監視手段１３は、所定の環境（温度、ＣＯ２濃度、培養時間など）を監視し、たとえば培養している細胞の数が所定の数になるまで、培養液（基礎培地・添加物など）を補充する。なお、培養監視手段の監視方法は、公知の技術を利用することができ、実験、設計、計画などで予め定められた方法とすることができる。
【００３５】
以上のとおり、本発明に係る細胞培養システム１００Ｓによれば、上記の（１．細胞計数装置の構成）と同様の効果を得ることができる。また、本発明によれば、培養した細胞の利活用の方法に応じて、所望の細胞（特定の組成や数量の細胞）を提供することができるので、依頼や委託された特定種の細胞を指定の数で受注し生産することができ、「高精度に細胞数を保証する一定数の細胞」という製品を提供することができる。また、本発明によれば、培養した細胞の利活用の方法に応じて、所望の細胞（特定の組成や数量の細胞）を提供することができるので、年齢、既往歴、症状、体重に応じた細胞及び細胞数（医薬など）の正確性が求められる場合でも、最小限のリスクで最大限の効果を出すために患者ごとに最適な細胞及び細胞数を設定することができる「高精度に細胞数を保証する一定数の細胞」という製品を提供することができる。
【００３６】
（３．細胞計数方法）
図５を用いて、本発明に係る細胞計数方法を説明する。ここで、図５は、本発明の実施形態に係る細胞計数方法の一例を説明する説明図である。なお、図５に示す細胞計数方法は一例であり、本発明は図５に示す細胞計数方法に限定されるものではない。
【００３７】
図５に示すように、本実施形態に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０１において、先ず、細胞の数を計数する動作を開始する。細胞計数方法は、例えば培養者、使用者の都合のよいタイミングで、細胞の数を計数する動作を開始することができる。本発明に係る細胞計数方法は、上記の（１．細胞計数装置の構成）の細胞計数装置１００を用いて、細胞の数を計数する動作を開始する。その後、本発明に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０２に進む。
【００３８】
次に、本発明に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０２において、細胞計数手段１２の撮影部１２ａを用いて、細胞吸着平板部１１ａ（培養容器手段１１）を撮影する（撮影ステップ）。ここで、撮影部１２ａは、細胞吸着平板部１１ａの表面に吸着配置した生細胞を含む画像データを取得する。その後、本発明に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０３に進む。なお、撮影する方法は、上記の（１．細胞計数装置の構成）に記載の方法を利用することができる。
【００３９】
次いで、本発明に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０３において、細胞計数手段１２の画像処理部１２ｂを用いて、ステップＳ５０２で取得した画像データを画像処理する（画像処理ステップ）。ここで、画像処理部１２ｂは、撮影した画像データを用いて、生細胞が配置された部分と生細胞が配置されていない部分とを区別する修正画像データを作成する。その後、本発明に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０３に進む。なお、画像処理する方法は、上記の（１．細胞計数装置の構成）に記載の方法を利用することができる。
【００４０】
ステップＳ５０４において、本発明に係る細胞計数方法は、細胞計数手段１２の算出部１２ｃを用いて、ステップＳ５０３で生成した修正画像データに基づいて、細胞の数を計数する（細胞数算出ステップ）。ここで、算出部１２ｃは、たとえば（１）面積算出処理（二値化処理した画像から被覆面積（「生細胞が配置された部分」）を算出）、（２）基準値処理（培養した細胞の情報から基準値（細胞１つの面積）を算出）、（３）細胞数算出処理（被覆面積を基準値で割って、撮影面積あたりの細胞数を算出）、（４）全細胞数算出処理（全領域に対応した係数をかけて、培養容器手段１１の全領域の細胞の総数を算出）、などにより細胞の数を計数することができる。その後、本発明に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０５に進む。なお、細胞の数を計数する方法は、上記の（１．細胞計数装置の構成）に記載の方法を利用することができる。
【００４１】
ステップＳ５０５において、本発明に係る細胞計数方法は、細胞の数を計数する動作を繰り返すか否かを判断する。これにより、本発明に係る細胞計数方法は、所望の個数の細胞を培養するまで、培養することができる。その後、細胞の数を計数する動作を繰り返すと判断した場合には、本発明に係る細胞計数方法は、ステップＳ５０２に戻る。細胞の数を計数する動作を終了すると判断した場合には、本発明に係る細胞計数方法は、図中の「ＥＮＤ」に進み、動作を終了する。
【００４２】
以上のとおり、本発明に係る細胞計数方法によれば、前述の（１．細胞計数装置の構成）と同様の効果を得ることができる。
【００４３】
本発明に係る細胞計数方法のプログラムは、図５のステップ５０１からステップ５０５の方法を実行する。上記のプログラムによれば、前述の（３．細胞計数方法）と同等の効果が得られる。また、本発明は、上記のプログラムを記録したコンピュータによって読み取り可能な記録媒体としてもよい。記録媒体には、フレキシブルディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ、及び、メモリーカード等、コンピュータ読み取り可能な媒体を利用することができる。更に、本発明は、プログラムをインターネット等のネットワークを介して送信することが可能な伝送可能媒体であってもよい。上記の記録媒体によれば、前述の（３．細胞計数方法）と同等の効果が得られる。
【００４４】
（４．細胞培養方法）
図６を用いて、本発明に係る細胞培養方法を説明する。ここで、図６は、本発明の実施形態に係る細胞培養方法の一例を説明する説明図である。なお、図６に示す細胞培養方法は一例であり、本発明は図６に示す細胞培養方法に限定されるものではない。本発明に係る細胞培養方法は、前述の（３．細胞計数方法）の細胞計数方法を含むものである。このため、以下の説明では、（３．細胞計数方法）と異なる部分を主に説明する。
【００４５】
図６に示すように、本発明の実施形態に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０１において、先ず、細胞を培養する動作を開始する。細胞培養方法は、例えば培養者、使用者の都合のよいタイミングで、細胞を培養する動作を開始することができる。本発明に係る細胞培養方法は、上記の（２．細胞培養システムの構成）の細胞培養システム１００Ｓを用いて、所望の数の細胞を培養する動作を開始する。その後、本発明に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０２に進む。
【００４６】
次に、本発明に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０２において、例えば培養者、使用者によって、培養液（培養する細胞、基礎培地、添加物など）を培養容器手段１１（図１）に配置する。ここで、培養容器手段１１は、基礎培地に所望の細胞（培養する細胞）を配置される。その後、本発明に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０３に進む。
【００４７】
次いで、本発明に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０３において、培養監視手段１３を用いて、ステップＳ６０２で配置した細胞の培養状態を監視し、培養環境を調整する（培養監視ステップ）。ここで、培養監視手段１３は、たとえば細胞を所定の環境（温度、ＣＯ２濃度、培養時間など）で培養する。なお、所定の環境は、公知の技術を利用することができ、実験、設計、計画などで予め定められた環境とすることができる。また、細胞の培養は、例えば数日おきに培地の交換を行い細胞の遊走・成長を促し、細胞の増殖が十分に確認されたら継代を行い、さらに培養してもよい（細胞の数を増やしてもよい）。その後、本発明に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０４に進む。
【００４８】
ステップＳ６０４乃至ステップＳ６０６において、本発明に係る細胞培養方法は、（３．細胞計数方法）のステップＳ５０２乃至ステップＳ５０４と同様に、撮影ステップ、画像処理ステップおよび細胞数算出ステップを実施する。その後、本発明に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０７に進む。
【００４９】
ステップＳ６０７において、本発明に係る細胞培養方法は、細胞を培養する動作を繰り返すか否かを判断する。これにより、本発明に係る細胞培養方法は、所望の個数の細胞を培養することができる。その後、細胞を培養する動作を繰り返すと判断した場合には、本発明に係る細胞培養方法は、ステップＳ６０３に戻る。細胞を培養する動作を終了すると判断した場合には、本発明に係る細胞培養方法は、図中の「ＥＮＤ」に進み、動作を終了する。
【００５０】
以上のとおり、本発明に係る細胞培養方法によれば、前述の（３．細胞計数方法）と同様の効果を得ることができる。また、本発明によれば、培養した細胞の利活用の方法に応じて、所望の細胞（特定の組成や数量の細胞）を提供することができるので、依頼や委託された特定種の細胞を指定の数で受注し生産することができ、「高精度に細胞数を保証する一定数の細胞」という製品を提供することができる。また、本発明によれば、培養した細胞の利活用の方法に応じて、所望の細胞（特定の組成や数量の細胞）を提供することができるので、年齢、既往歴、症状、体重に応じた細胞及び細胞数（医薬など）の正確性が求められる場合でも、最小限のリスクで最大限の効果を出すために患者ごとに最適な細胞及び細胞数を設定することができる「高精度に細胞数を保証する一定数の細胞」という製品を提供することができる。
【００５１】
本発明に係る細胞計数方法のプログラムは、図６のステップ６０１からステップ６０７の方法を実行する。上記のプログラムによれば、前述の（４．細胞培養方法）と同等の効果が得られる。また、本発明は、上記のプログラムを記録したコンピュータによって読み取り可能な記録媒体としてもよい。記録媒体には、フレキシブルディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ、及び、メモリーカード等、コンピュータ読み取り可能な媒体を利用することができる。更に、本発明は、プログラムをインターネット等のネットワークを介して送信することが可能な伝送可能媒体であってもよい。上記の記録媒体によれば、前述の（４．細胞培養方法）と同等の効果が得られる。
【００５２】
（５．培養した細胞および化粧品、医薬品、医薬部外品、飲食品）
本発明は、上記の（３．細胞計数方法）または（４．細胞培養方法）を用いて培養した細胞であってもよい。また、上記の（３．細胞計数方法）または（４．細胞培養方法）を用いて培養した細胞を含有する化粧品、医薬品若しくは医薬部外品、飲食品であってもよい。なお、培養した細胞を化粧品、医薬品若しくは医薬部外品または飲食品に加工する方法は、公知の技術を利用することができる。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明は、培養した細胞を利活用する遺伝子治療、免疫療法、再生医療、抗体医薬生産、美容分野（化粧品など）、食品分野などにおいて好適に利用することが可能である。また、本発明によれば、培養した細胞の利活用の方法に応じて、所望の細胞（特定の組成や数量の細胞）を提供することができるので、依頼や委託された特定種の細胞を指定の数で受注し生産することができ、「高精度に細胞数を保証する一定数の細胞」という製品を提供することができる。本発明によれば、培養した細胞の利活用の方法に応じて、所望の細胞（特定の組成や数量の細胞）を提供することができるので、年齢、既往歴、症状、体重に応じた細胞及び細胞数（医薬など）の正確性が求められる場合でも、最小限のリスクで最大限の効果を出すために患者ごとに最適な細胞及び細胞数を設定することができる「高精度に細胞数を保証する一定数の細胞」という製品を提供することができる。
【００５４】
以上のとおり、本発明に係る実施形態について説明したが、本発明は上記の実施形態に限定されるものではない。すなわち、本発明は、請求の範囲に記載の内容に基づいて、様々に変形、変更又はその他任意に改変され得る。
【符号の説明】
【００５５】
１００Ｓ：  細胞培養システム
１００  ：  細胞計数装置
１０  ：  制御手段
１１  ：  培養容器手段
１１ａ，１１ａ１，１１ａ２，１１ａ３：  細胞吸着平板部
１１ｂ，１１ｂ１，１１ｂ２，１１ｂ３：  培養液保持部
１２  ：  細胞計数手段
１２ａ：  撮影部
１２ｂ：  画像処理部
１２ｃ：  算出部
１３  ：  培養監視手段
Ｉｒ  ：  画像データ
Ｉｍ  ：  修正画像データ
【図１】
2020182411.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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