(57)【要約】      （修正有）【課題】アンジオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３）を阻害する極めて強力で耐容性のある化合物の提供。【解決手段】１２〜３０個の連結ヌクレオシドから成り、且つ特定の配列からなる配列の核酸塩基１１４０〜１１５９の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、前記特定の配列からなる配列に少なくとも８０％相補的である、化合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２〜３０個の連結ヌクレオシドから成り、且つ配列番号１の核酸塩基１１４０〜１１５９の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物。
【請求項２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１５〜３０個、１８〜２４個、１９〜２２個、１３〜２５個、１４〜２５個、１５〜２５個、１６または２０個の連結ヌクレオシドからなる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の等長部分に相補的な少なくとも１０個、少なくとも１２個、少なくとも１４個、少なくとも１６個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
１２〜３０個の連結ヌクレオシドから成り、且つ配列番号１の核酸塩基１１４０〜１１５９の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または少なくとも２０個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物。
【請求項５】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも１００％相補的である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項７】
１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７、２０、１１０のいずれかの核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または少なくとも１６個の隣接核酸塩基を含む核酸塩配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
【請求項８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが一本鎖である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
少なくとも１つのヌクレオシド間連結が、修飾ヌクレオシド間連結である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
それぞれのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾糖を含む、請求項１〜１０のい
ずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
少なくとも１つの修飾糖が二環式糖である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
少なくとも１つの修飾糖が、２’−Ｏ−メトキシエチル、拘束エチル、３’−フルオロ−ＨＮＡ、または４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋を含み、ここでｎが１または２である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
少なくとも１個のヌクレオシドが修飾核酸塩基を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
前記修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、
連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント（ｇａｐ  ｓｅｇｍｅｎｔ）と、
連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント（ｗｉｎｇ  ｓｅｇｍｅｎｔ）と、
連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドが、修飾糖を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、２０個の連結ヌクレオシドからなり、
１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドが、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基が、５−メチルシトシンである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、２０個の連結ヌクレオシドからなる、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
２０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７のいずれかの等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドが、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基が、５−メチルシトシンである、化合物。
【請求項２０】
以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍ
Ｃｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅ［式中、
Ａ＝アデニンであり、
ｍＣ＝５’−メチルシトシンであり、
Ｇ＝グアニンであり、
Ｔ＝チミンであり、
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である］
による修飾オリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
以下の式による修飾オリゴヌクレオチド。
【化１】
2020072713.tif 000482
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物もしくは修飾オリゴヌクレオチド、またはその塩、及び薬学的に許容される担体または希釈剤。
【請求項２３】
療法に使用される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
ＡＮＧＰＴＬ３の上昇に関連する疾患の治療、予防、または進行の緩徐に使用される、請求項１９、２０または２１に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
【請求項２５】
前記疾患が、心血管及び／または代謝の疾患、障害、または状態である、請求項１９、２０または２１に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、電子フォーマットの配列表と共に出願されている。配列表は、表題がＢＩＯＬ０１７９ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔのファイルとして提出され、サイズは９８ＭＢであり、２０１４年１２月２２日に作成されている。電子フォーマットの配列表についての情報は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
動物においてアンジオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３）ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を低減する方法、化合物及び組成物が、本明細書において提供される。動物においてＡＮＧＰＴＬ３関連の疾患または状態を低減するためにＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を有する方法、化合物及び組成物も、本明細書において提供される。そのような方法、化合物及び組成物は、例えば、動物において任意の１つ以上の心血管疾患もしくは代謝症候群、またはこれらの症状を治療する、予防する、遅延する、または寛解するために有用である。
【背景技術】
【０００３】
糖尿病および肥満症（時々、集合的に「糖尿肥満症」と呼ばれる）は、肥満症が糖尿病の病理を悪化させることが知られており、糖尿病患者の６０％超が肥満である点において、相関している。大部分のヒトの肥満症は、インスリン抵抗性及びレプチン抵抗性に関連している。事実、肥満症は糖尿病それ自体よりもさらに大きな影響を、インスリン作用に対して有しうることが示唆されている（Ｓｉｎｄｅｌｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｓ．，２００２，５１，８５−９１）。加えて、糖尿病の治療用に市販されている幾つかの化合物は、この疾患の治療にとって非常に望ましくない副作用である体重増加を誘発することが知られている。
【０００４】
心血管疾患も、肥満症及び糖尿病と相関している。心血管疾患は、多種多様な病因を包含し、同様に多種多様な原因作用物質及び相関関係にある参与物質を有する。多くの原因作用物質が、非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ−Ｃ）を含むコレステロールの上昇した血漿レベルのような症状、並びに他の脂質関連障害に寄与している。そのような脂質関連障害は、一般に異脂肪血と呼ばれ、兆候の中でもとりわけ高脂血症、高コレステロール血症及び高トリグリセリド血症が含まれる。非ＨＤＬコレステロールの上昇は、動脈硬化症、冠動脈疾患、心筋梗塞、虚血発作及び他の形態の心疾患のような心血管疾患が含まれる、アテローム発生及びその続発症に関連する。これらは、先進工業国において最も蔓延している種類の病気として位置付けられている。事実、米国において推定１千２百万人が冠動脈疾患に罹患しており、約３千６百万人が、上昇したコレステロールレベルの治療を必要としている。
【０００５】
疫学及び実験による証拠は、高レベルの循環トリグリセリド（ＴＧ）が心血管疾患及び無数の代謝疾患に寄与しうることを示している（Ｖａｌｄｉｖｉｅｌｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．１；１０２（２）：２５０−６）。外来性または内在性の原因のいずれかに由来するＴＧが取り込まれ、腸からカイロミクロン、または肝臓から超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）が分泌される。いったん循環に入ると、ＴＧは、リポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）により加水分解され、得られた遊離脂肪酸は、次に局所組織に取り込まれ、エネルギー源として使用されうる。血漿ＴＧ及び代謝一般に対してＬｐＬが顕著な作用を有するので、ＬｐＬに影響を与える化合物を発見し、開発することは、大変興味深いことである。
【０００６】
代謝症候群は、心血管疾患及び糖尿病の危険性を増加する医学的障害の組み合わせである。高血圧、高トリグリセリド、ＨＤＬ減少及び肥満症を含む症状は、一部の個体において一緒に現れる傾向がある。多数の人々に群発的に影響を与える。幾つかの研究において、米国における有病率は人口の２５％に至ると計算されている。代謝症候群は、（代謝）症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群、Ｒｅａｖｅｎ症候群またはＣＨＡＯＳのような様々な他の名称で知られている。心血管障害及び代謝障害の高い有病率によって、これらの状態を治療する改善された手法の必要性が依然として存在する。
【０００７】
アンジオポエチンは、分泌増殖因子のファミリーである。対応する内皮特異的受容体と一緒になって、アンジオポエチンは血管新生において重要な役割を果たす。１つのファミリーメンバーであるアンジオポエチン様３（アンジオポエチン様タンパク質３、ＡＮＧＰＴ５、ＡＮＧＰＴＬ３、またはアンジオポエチン５としても知られている）は、主に肝臓に発現し、脂質代謝を制御する役割を果たすと考えられている（Ｋａｐｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．，２００３，４４，１３６−１４３）。ＨＤＬ、ＬＤＬ及びトリグリセリドの血漿濃度に関連する一般的な変種についてゲノムを調査するゲノムワイド関連走査（ＧＷＡＳ）は、トリグリセリドと、ＡＮＧＰＴＬ３の近くにある単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）との関連性を見出した（Ｗｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００８，４０（２）：１６１−１６９）。ホモ接合ＡＮＧＰＴＬ３機能欠失突然変異体を有する個体は、総コレステロール（ＴＣ）及びＴＧ、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）、アポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）、非ＨＤＬ−Ｃ、並びにＨＤＬ−Ｃのような、全てのアテローム発生性血漿脂質及びリポタンパク質を低レベルで提示する（Ｒｏｍｅｏ  ｅｔ  ａｌ．２００９，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１１９（１）：７０−７９；Ｍｕｓｕｎｕｒｕ  ｅｔ  ａｌ．２０１０  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６３：２２２０−２２２７；Ｍａｒｔｉｎ−Ｃａｍｐｏｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ，４１３：５５２−５５５；Ｍｉｎｉｃｏｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ，９７：ｅ１２６６−１２７５；Ｎｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ，３２：８０５−８０９；Ｐｉｓｃｉｏｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｇｅｎｅｔ，５：４２−５０）。この臨床表現型は、家族性複合型低脂血症（ＦＨＢＬ２）と呼ばれている。低減されたＶＬＤＬの分泌にも関わらず、ＦＨＢＬ２を有する対象は、肝脂肪含有量を増加しない。低い血漿グルコース及びインスリンレベルも有すると思われ、重要なことには、糖尿病及び心血管疾患が両方ともこれらの対象には不在であると思われる。有害な臨床表現型は、現在まで報告されていない（Ｍｉｎｉｃｏｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１３，Ｊ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４：３４８１−３４９０）。ＡＮＧＰＴＬ３の低減は、動物モデルにＴＧ、コレステロール及びＬＤＬレベルの減少をもたらすことが示されている（米国特許出願第１３／５２０，９９７号、ＰＣＴ特許公開ＷＯ２０１１／０８５２７１号）。ＡＮＧＰＴＬ３が欠乏しているマウスは、非常に低い血漿トリグリセリド（ＴＧ）及びコレステロールレベルを有し、一方、過剰発現は、逆の効果を生じる（（Ｋｏｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．２００２；Ｋｏｓｔｅｒ  ２００５；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ  ２００６）。したがって、脂質代謝におけるＡＮＧＰＴＬ３の潜在的な役割は、それを治療介入における魅力的なマーカーにする。
【０００８】
現在まで、ＡＮＧＰＴＬ３レベルを直接標的にして心血管代謝疾患を治療する治療戦略は、限定されている。ＡＮＧＰＴＬ３ポリペプチドフラグメント（米国特許出願第１２／１２８，５４５号）、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体（米国特許出願第１２／００１，０１２号）及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＡＮＧＰＴＬ３核酸阻害剤（米国特許出願第１３／５２０，９９７号、ＰＣＴ特許公開ＷＯ２０１１／０８５２７１号、これらはその全体が参照として本明細書に組み込まれる）が、以前に示唆され、開発されてきたが、ＡＮＧＰＴＬ３を直接標的にする化合物で、心血管代謝疾患の治療に承認されたものはない
。したがって、ＡＮＧＰＴＬ３を阻害する極めて強力で耐容性のある化合物への満たされない必要性が存在する。本明細書に開示されている発明は、ＡＮＧＰＴＬ３発現の新規で極めて強力な阻害剤の発見及び治療におけるその使用に関する。
【発明の概要】
【０００９】
ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節する組成物及び方法が、本明細書において提供される。特定の実施形態において、組成物はＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤である。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を減少する。
【００１０】
特定の実施形態において、組成物はＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤である。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は核酸である。特定の実施形態において、核酸はアンチセンス化合物である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は修飾オリゴヌクレオチドである。
【００１１】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも1３個、少なくと
も１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００１２】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１の核酸塩基１１４０〜１１５９の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を含む、修飾オリゴヌクレオチドであり、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列は、配列番号１に少なくとも８０％相補的である。
【００１３】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号２の核酸塩基９７１５〜９７３４の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を含む、修飾オリゴヌクレオチドであり、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列は、配列番号２に少なくとも８０％相補的である。
【００１４】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、２０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７の少なくとも８個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドであり、該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント（ｇａｐ  ｓｅｇｍｅｎｔ）と、（ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント（ｗｉｎｇ  ｓｅｇｍｅｎｔ）と、（ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【００１５】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、２０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７の少なくとも８個の隣接核酸塩基からなる核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドであり、該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイン
グセグメントからなり、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【００１６】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、以下の構造及び名称ＩＳＩＳ５６３５８０により表される修飾オリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は、以下の構造により表される修飾オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ５６３５８０を含む。
【００１７】
【化１】
2020072713.tif 000002
【００１８】
特定の実施形態は、本明細書に記載されている化合物またはその塩と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む組成物を提供する。
【００１９】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３発現の調節は、細胞または組織の中で生じる。特定の実施形態において、調節は、動物の細胞または組織の中で生じる。特定の実施形態において、動物はヒトである。特定の実施形態において、調節は、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルの低減である。特定の実施形態において、調節は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの低減である。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ及びタンパク質の両方が低減される。そのような低減は、時間依存的または用量依存的に生じる。
【００２０】
特定の実施形態は、療法に使用される組成物及び方法を提供する。特定の実施形態は、ＡＮＧＰＴＬ３関連疾患、障害及び状態を予防する、治療する、遅延する、進行を緩徐する、及び／または寛解する組成物及び方法を提供する。特定の実施形態において、そのよ
うな疾患、障害及び状態は、心血管及び／または代謝の疾患、障害及び状態である。特定の実施形態において、療法のための組成物及び方法は、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤を、それを必要とする個体に投与することを含む。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害剤は核酸である。特定の実施形態において、核酸はアンチセンス化合物である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は修飾オリゴヌクレオチドである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
前述の一般的な記載及び以下の詳細な記載は、両方とも例示及び説明のためだけのものであり、特許請求される本発明を限定するものではないことが理解されるべきである。本明細書において、単数の使用は、特に特定的に記述されない限り、複数を含む。本明細書で使用されるとき、「または」の使用は、特に記述のない限り、「及び／または」を意味する。更に、用語「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、並びに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれた（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」のような他の形態の使用は制限的ではない。また、「要素」または「構成成分」のような用語は、特に特定的に記述されない限り、１つの単位を含む要素及び構成成分と、１つを超える亜単位を含む要素及び構成成分の両方を包含する。
【００２２】
本明細書に使用される章の見出しは、構成の目的のためだけのものであり、記載される主題を制限するものと解釈されるべきではない。特許、特許出願、記事、書籍及び条約が含まれるが、これらに限定されない、本出願に引用されいる全ての文書、または文書の一部は、本明細書において考察される文書の一部、並びにそれらの全体が参照として明確に組み込まれる。  
【００２３】
定義
特に特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学、並びに医薬及び薬学化学に関連して、並びにこれらの手順及び技術に利用される命名法は、当該技術において周知であり、一般的に使用されるものである。標準的な技術を化学合成及び化学分析に使用することができる。容認される場合、全ての特許、出願、公開出願及び他の公報、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号及び全米バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）のようなデータベースを介して得られる関連配列情報、並びに本明細書の開示の全体を通して参照される他のデータは、本明細書において考察される文書の一部、並びにそれらの全体が参照として組み込まれる。
【００２４】
特に指示されない限り、以下の用語は以下の意味を有する。
【００２５】
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（また、２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３）は、フロシル（ｆｕｒｏｓｙｌ）環の２’位のＯ−メトキシ−エチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖が、修飾糖である。
【００２６】
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖部分を含むヌクレオチドを意味する。
【００２７】
「３’標的部位」または「３’終止部位」は、特定のアンチセンス化合物の最も３’にあるヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００２８】
「５’標的部位」または「５開始部位」は、特定のアンチセンス化合物の最も５’にあるヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００２９】
「５’−メチルシトシン」は、５’位に結合しているメチル基により修飾されたシトシ
ンを意味する。５−メチルシトシンが、修飾核酸塩基である。
【００３０】
「約」は、値の±１０％以内を意味する。例えば、「マーカーが約５０％増加しうる」と記述される場合、マーカーが４５％〜５５％増加しうることを示唆している。
【００３１】
「活性医薬品」は、個体に投与されたときに治療利益を提供する物質または薬学的組成物中の物質を意味する。例えば、特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、活性医薬品である。
【００３２】
「活性標的領域」または「標的領域」は、１つ以上の活性アンチセンス化合物が標的にする領域を意味する。
【００３３】
「活性アンチセンス化合物」は、標的核酸レベルまたはタンパク質レベルを低減するアンチセンス化合物を意味する。
【００３４】
「脂肪生成」は、前脂肪細胞からの脂肪細胞の発生を意味する。「脂質生成」は、脂肪変性または脂肪浸潤のいずれかである、脂肪の産生または形成を意味する。
【００３５】
「脂肪蓄積」または「肥満症」は、肥満している状態、または除脂肪体重に対して過剰に多い体脂肪もしくは脂肪組織の量を指す。体脂肪の量には、身体全体の脂肪分布、並びに脂肪組織沈着のサイズ及び量の両方の問題が含まれる。体脂肪分布は、皮脂厚測定、ウエスト・ヒップ円周比、または超音波、コンピュータ断層撮影法もしくは磁気共鳴画像法のような技術によって推定することができる。疾病管理予防センター（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）によると、３０以上の体重指数（ＢＭＩ）を有する個体は、肥満であると考慮される。用語「肥満症」には、本明細書で使用されるとき、身体中の脂肪組織の過剰蓄積の結果、身体的要求を超えた体脂肪の増加という状態が含まれる。用語「肥満症」には、以下の状態が含まれるが、これらに限定されない。成人発症型肥満症、食事性肥満症、内因性または代謝性肥満症、内分泌性肥満症、家族性肥満症、高インスリン性肥満症、過形成−肥大性肥満症、性腺機能低下性肥満症、甲状腺機能低下性肥満症、生涯型肥満症（ｌｉｆｅｌｏｎｇ  ｏｂｅｓｉｔｙ）、病的肥満症及び外因性肥満症。
【００３６】
「随伴的に投与される」は、両方の薬理学的効果が患者において同時に現れる任意の方法による２つの作用物質の共投与を指す。随伴投与は、両方の作用物質が単一の薬学的組成物により、同じ剤形により、または同じ投与経路により投与されることを必要としない。両方の作用物質の効果が同時に現れる必要はない。該効果は、ある時間にわたって重複することだけが必要であり、同一時間である必要はない。
【００３７】
「投与すること」は、作用物質を動物に提供することを意味し、医療従事者による投与及び自己投与が含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
「作用物質」は、動物に投与されたときに治療利益を提供することができる、活性物質を意味する。「第１の作用物質」は、本発明の治療化合物を意味する。例えば、第１の作用物質は、ＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドでありうる。「第２の作用物質」は、本発明の第２の治療化合物（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３を標的にする第２のアンチセンスオリゴヌクレオチド）及び／または非ＡＮＧＰＴＬ３治療化合物を意味する。
【００３９】
「寛解」は、関連する疾患、障害または状態の少なくとも１つの指標、兆候または症状の軽減を指す。指標の重篤度は、主観的または客観的測定によって決定することができ、
これらは当業者に知られている。
【００４０】
「ＡＮＧＰＴＬ３」は、ＡＮＧＰＴＬ３の任意の核酸またはタンパク質を意味する。
【００４１】
「ＡＮＧＰＴＬ３発現」は、ＡＮＧＰＴＬ３をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡのレベル、またはｍＲＮＡから翻訳されたタンパク質のレベルを意味する。ＡＮＧＰＴＬ３発現は、ノーザンまたはウエスタンブロットのような当該技術に既知の方法により決定することができる。
【００４２】
「ＡＮＧＰＴＬ３核酸」は、ＡＮＧＰＴＬ３をコードする任意の核酸を意味する。例えば、特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３核酸には、ＡＮＧＰＴＬ３をコードするＤＮＡ配列、ＡＮＧＰＴＬ３をコードするＤＮＡから転写されたＲＮＡ配列（イントロン及びエクソンを含むゲノムＤＮＡが含まれる）、並びにＡＮＧＰＴＬ３をコードするｍＲＮＡ配列が含まれる。「ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ」は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【００４３】
「動物」は、ヒト、またはマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタが含まれるが、これらに限定されない非ヒト動物、並びにサル及びチンパンジーが含まれるが、これらに限定されない非ヒト霊長類を指す。
【００４４】
「アンチセンス活性」は、アンチセンス化合物とその標的核酸とのハイブリッド形成に起因する任意の検出可能または測定可能な活性を意味する。特定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸の、またはそのような標的核酸によりコードされたタンパク質の量または発現の減少である。
【００４５】
「アンチセンス化合物」は、水素結合を介して標的核酸とハイブリッド形成することができるオリゴマー化合物を意味する。
【００４６】
「アンチセンス阻害」は、アンチセンス化合物の不在下での標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸と相補的なアンチセンス化合物の存在下での標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルの低減を意味する。
【００４７】
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸の対応する領域またはセグメントとのハイブリッド形成を許容する核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
【００４８】
「アポＢ含有リポタンパク質」は、タンパク質構成成分としてアポリポタンパク質Ｂを有し、ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ及びリポタンパク質（ａ）を含むことが意図され、脂質低下剤及び療法によって一般に標的にされうる、任意のリポタンパク質を意味する。「アポＢ−１００含有ＬＤＬ」は、アポＢ−１００アイソフォーム含有ＬＤＬを意味する。
【００４９】
「アテローム性動脈硬化症」は、大及び中動脈に影響を与える動脈の硬化を意味し、脂肪沈着の存在よって特徴付けられる。脂肪沈着は、「アテローム」または「プラーク」と呼ばれ、これらは主にコレステロール及び他の脂肪、カルシウム、並びに瘢痕組織からなり、動脈の内層を損傷する。
【００５０】
「二環式糖」は、２個の非ジェミナル（ｎｏｎ−ｇｅｍｉｎａｌ）環原子の架橋により修飾されたフロシル（ｆｕｒｏｓｙｌ）環を意味する。二環式糖が、修飾糖である。
【００５１】
「二環式核酸」または「ＢＮＡ」は、ヌクレオシドまたはヌクレオチドのフラノース部
分が、フラノース環の２個の炭素原子を接続し、それによって二環式環系を形成する架橋を含む、ヌクレオシドまたはヌクレオチドを指す。
【００５２】
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物のいずれかの末端に組み込まれている化学修飾を意味する。
【００５３】
「心血管疾患」または「心血管障害」は、心臓、血管または循環に関係する一群の状態を指す。心血管疾患または障害の例には、動脈瘤、狭心症、不整脈、アテローム性動脈硬化症、脳血管疾患（脳卒中）、冠動脈心疾患、高血圧症、異脂肪血症、高脂血症及び高コレステロール血症が含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
「心血管代謝疾患」または「心血管代謝障害」は、心血管系と代謝系の両方に関わる疾患または障害である。心血管代謝疾患または障害の例には、糖尿病及び異脂肪血症が含まれるが、これらに限定されない。
【００５５】
「化学的に異なる領域」は、同じアンチセンス化合物の別の領域と何らかの方法で化学的に異なるアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を有さないヌクレオチドを有する領域と化学的に異なる。
【００５６】
「キメラアンチセンス化合物」は、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
【００５７】
「共投与」は、個体への２つ以上の作用物質の投与を意味する。２つ以上の作用物質は、単一の薬学的組成物の中にありうる、または別々の薬学的組成物の中にありうる。２つ以上の作用物質は、それぞれ、同じ、または異なる投与経路を介して投与することができる。共投与は、並行または順次の投与を包含する。
【００５８】
「コレステロール」は、全ての動物組織の細胞膜に見出されるステロール分子である。コレステロールは、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）及び高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を含むリポタンパク質により動物の血漿に輸送されなければならない。「血漿コレステロール」は、血漿または血清に存在する全てのエステル化及び／または非エステル化リポタンパク質（ＶＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）コレステロールの合計を指す。
【００５９】
「コレステロール吸収阻害剤」は、食事から得た外来性コレステロールの吸収を阻害する作用物質を意味する。
【００６０】
「相補性」は、第１の核酸及び第２の核酸の核酸塩基を対形成する能力を意味する。特定の実施形態において、第１と第２の核酸の相補性は、２つのＤＮＡ鎖の間、２つのＲＮＡ鎖の間、またはＤＮＡ及びＲＮＡ鎖の間のことでありうる。特定の実施形態において、一方の鎖における幾つかの核酸塩基は、他方の鎖における相補的水素結合塩基と適合する。特定の実施形態において、一方の鎖における全ての核酸塩基は、他方の鎖における相補的水素結合塩基と適合する。特定の実施形態において、第１の核酸はアンチセンス化合物であり、第２の核酸は標的核酸である。特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは第１の核酸であり、標的核酸は第２の核酸である。
【００６１】
「隣接核酸塩基」は、互いに直ぐ近接している核酸塩基を意味する。
【００６２】
「冠動脈心疾患（ＣＨＤ）」は、心臓に血液及び酸素を供給する小血管の狭小化を意味
し、このことは多くの場合にアテローム性動脈硬化症が原因である。
【００６３】
「デオキシリボヌクレオチド」は、ヌクレオチドの糖部分の２’位に水素を有するヌクレオチドを意味する。デオキリボヌクレオチドは、様々な置換基のいずれかにより修飾されうる。
【００６４】
「真性糖尿病」または「糖尿病」は、不十分なインスリンレベルまたはインスリン感受性の低減によってもたらされる代謝障害及び異常な高血糖（高血糖症）により特徴付けられる症候群である。特徴的な症状は、高い血中グルコースレベルに起因する過剰尿産生（多尿症）、過度の口渇及び排尿の増加の代償を図る水分摂取量の増加（多飲症）、目の視力に作用する高い血中グルコースに起因する視覚のぼけ、不明な体重得減少、並びに嗜眠である。
【００６５】
「糖尿病性異脂肪血症」または「異脂肪血症を伴う２型糖尿病」は、２型糖尿病、ＨＤＬ−Ｃの低減、トリグリセリドの上昇及び小型（ｓｍａｌｌ  ｄｅｎｓｅ）ＬＤＬ粒子の上昇により特徴付けられる状態を意味する。
【００６６】
「希釈剤」は、薬理学的活性を欠いているが、薬学的に必要である、または望ましい、組成物中の成分を意味する。例えば、注射用組成物中の希釈剤は、液体、例えば食塩溶液でありうる。
【００６７】
「異脂肪血症」は、脂質及び／またはリポタンパク質の過剰産生または欠乏を含む、脂質及び／またはリポタンパク質代謝の障害を指す。異脂肪血症は、コレステロール及びトリグリセリドのような脂質、並びに低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールのようなリポタンパク質の上昇によって発症しうる。
【００６８】
「投与単位」は、医薬品が提供される形態、例えば、丸剤、錠剤、または当該技術に既知の他の投与単位を意味する。特定の実施形態において、投与単位は、凍結乾燥アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。特定の実施形態において、投与単位は、再構成アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【００６９】
「用量」は、単回投与により、または特定の時間帯において提供された医薬品の特定量を意味する。特定の実施形態において、用量は、１、２回、またはそれ以上でボーラス、錠剤または注射により投与されうる。例えば、皮下投与が望ましい特定の実施形態において、望ましい用量は、単回注射により容易に対応できない量を必要とし、したがって、２回以上の注射を使用して望ましい用量を達成することができる。特定の実施形態において、医薬品は、長時間にわたる、または連続的な注入により投与される。用量は、１時間、１日、１週間、または１か月あたりの医薬品の量として記述することができる。用量は、ｍｇ／ｋｇまたはｇ／ｋｇと表すことができる。
【００７０】
「有効量」または「治療有効量」とは、活性医薬品の、それを必要とする個体に望ま
しい生理学的結果を実現するのに十分な量を意味する。有効量は、治療される個体の健康及び身体状態、治療される個体の分類群、組成物の製剤、個体の医学的状態の評価、並びに他の関連する因子に応じて個体毎に変わりうる。
【００７１】
「完全に相補的」または「１００％相補的」は、第１の核酸の核酸塩基配列のそれぞれの核酸塩基が、第２の核酸の第２の核酸塩基配列において相補的核酸塩基を有することを意味する。特定の実施形態において、第１の核酸はアンチセンス化合物であり、標的核酸は第２の核酸である。
【００７２】
「ギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）」は、ＲＮアーゼＨ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内部領域が、１個以上のヌクレオシドを有する外部領域の間に位置し、該内部領域を含む該ヌクレオシドが、該外部領域を含む該ヌクレオシドと化学的に異なる、キメラアンチセンス化合物を意味する。内部領域を、「ギャップセグメント」と呼ぶことができ、外部領域を、「ウイングセグメント」と呼ぶことができる。
【００７３】
「ギャップ拡大」は、１〜６個のヌクレオシドを有する５’及び３’ウイングセグメントの間に直ぐ近接して位置する１２個以上の隣接２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有する、キメラアンチセンス化合物を意味する。
【００７４】
「グルコース」は、エネルギー源及び代謝中間体として細胞により使用される単糖である。「血漿グルコース」は、血漿に存在するグルコースを指す。
【００７５】
「高密度リポタンパク質−Ｃ（ＨＤＬ−Ｃ）」は、高密度リポタンパク質粒子に関連するコレステロールを意味する。血清（または血漿）中のＨＤＬ−Ｃ濃度は、典型的にはｍｇ／ｄＬまたはｎｍｏｌ／Ｌで定量化される。「血清ＨＤＬ−Ｃ」及び「血漿ＨＤＬ−Ｃ」は、血清及び血漿中のＨＤＬ−Ｃをぞれぞれ意味する。
【００７６】
「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」は、アトルバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン及びシンバスタチンのような、酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害を介して作用する作用物質を意味する。
【００７７】
「ハイブリッド形成」は、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。特定の実施形
態において、相補的核酸分子には、アンチセンス化合物及び標的核酸が含まれる。
【００７８】
「高コレステロール血症」は、成人における高コレステロールの検出、治療の評価についての全米コレステロール教育プログラムの専門委員会報告における指針（ｔｈｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｇｒａｍ  （ＮＣＥＰ）  ｏｆ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｉｎ  ａｄｕｌｔｓ）によると、コレステロールまたは循環（血漿）コレステロール、ＬＤＬ−コレステロール及びＶＬＤＬ−コレステロールの上昇により特徴付けられる状態を意味する（Ａｒｃｈ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．（１９８８）１４８，３６−３９を参照すること）。
【００７９】
「高脂血症」または「高脂質血症」は、血清脂質または循環（血漿）脂質の上昇により特徴付けられる状態である。この状態は、脂肪の異常に高い濃度を現す。循環血液中の脂質の分画は、コレステロール、低密度リポタンパク質、超低密度リポタンパク質及びトリグリセリドである。
【００８０】
「高トリグリセリド血症」は、トリグリセリドレベルの上昇により特徴付けられる状態を意味する。
【００８１】
「代謝または心血管疾患を有する対象を「特定する」または「選択する」ことは、代謝疾患、心血管疾患もしくは代謝症候群を有すると診断された対象を特定もしくは選択すること、または、高コレステロール血症、高血糖症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高血圧症、インスリン抵抗性の増加、インスリン感受性の減少、正常体重超過及び／もしくは正常体脂肪含有量超過、もしくはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない、代謝疾患、心血管疾患もしくは代謝症候群の任意の症状を有する対象を特定もしくは選択することを意味する。そのような特定は、血清または循環（血漿）コレステロール
を測定すること、血清または循環（血漿）グルコースを測定すること、血清または循環（血漿）トリグリセリドを測定すること、血圧を測定すること、体脂肪含有量を測定すること、体重を測定することなどのような標準的な臨床試験または評価が含まれるが、これらに限定されない任意の方法により達成することができる。
【００８２】
「糖尿病患者を「特定する」または「選択する」ことは、糖尿病と特定された対象を特定もしくは選択すること、または、少なくとも１１０ｍｇ／ｄＬの空腹時グルコース、糖尿、多尿症、多飲症、インスリン抵抗性の増加及び／もしくはインスリン感受性の減少を有することなどであるが、これらに限定されない、糖尿病（１型または２型）の任意の症状を有する対象を特定もしくは選択することを意味する。
【００８３】
「肥満対象を「特定する」または「選択する」ことは、肥満と診断された対象を特定もしくは選択すること、または３０を超えるＢＭＩ及び／もしくは男性で１０２ｃｍを超え、女性で８８ｃｍを超えるウエスト周囲を有する対象を特定もしくは選択することを意味する。
【００８４】
「異脂肪血症を有する対象を「特定する」または「選択する」ことは、脂質及び／またはリポタンパク質過剰産生または欠乏を含む、脂質及び／またはリポタンパク質代謝の障害を有すると診断された対象を特定または選択することを意味する。異脂肪血症は、コレステロール及びトリグリセリドのような脂質、並びに低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールのようなリポタンパク質の上昇によって発症しうる。
【００８５】
「脂肪蓄積の増加を有する対象を「特定する」または「選択する」ことは、身体全体にわたる脂肪分布、並びに脂肪組織沈着のサイズ及び量の一方または両方の問題が含まれる体脂肪（または脂肪蓄積）の量の増加を有する対象を特定または選択することを意味する。体脂肪分布は、皮脂厚測定、ウエスト・ヒップ円周比、または超音波、コンピュータ断層撮影法もしくは磁気共鳴画像法のような技術によって推定することができる。疾病管理予防センター（Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）によると、３０以上の体重指数（ＢＭＩ）を有する個体は、肥満であると考慮される。
【００８６】
「改善された心血管の結果」は、有害な心血管事象の発生またはその危険性の低減を
意味する。有害な心血管事象の例には、死亡、再梗塞、発作、心原性ショック、肺水腫、心停止及び心房調律異常（ａｔｒｉａｌ  ｄｙｓｒｈｙｔｈｍｉａ）が、限定されることなく含まれる。
【００８７】
「直ぐ近接している」とは、直ぐ近接している要素の間に介在要素がないことを意味する。
【００８８】
「個体」または「対象」または「動物」は、治療または療法のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００８９】
「発現または活性を阻害する」とは、発現または活性の低減または遮断を指し、必ずしも発現または活性の完全な排除を示しているわけではない。
【００９０】
「インスリン抵抗性」は、正常な量のインスリンが、細胞、例えば脂肪、筋肉及び／または肝細胞からの正常なインスリン応答を生じるには不十分である状態と定義される。脂肪細胞におけるインスリン抵抗性は、貯蔵トリグリセリドの加水分解をもたらし、このことは血漿中の遊離脂肪酸を上昇させる。筋肉におけるインスリン抵抗性は、グルコース取り込みを低減し、一方、肝臓におけるインスリン抵抗性は、グルコース貯蔵を低減し、両
方の作用は、血中グルコースを上昇させるように機能する。インスリン抵抗性に起因するインスリン及びグルコースの高血漿レベルは、多くの場合、代謝症候群及び２型糖尿病をもたらす。
【００９１】
「インスリン感受性」は、個体がどのようにグルコースを効果的に処理するかの測度である。高いインスリン感受性を有する個体は、有効にグルコースを処理し、一方、低いインスリン感受性を有する個体は、有効にグルコースを処理しない。
【００９２】
「ヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシドの間の化学結合を指す。
【００９３】
「静脈内投与」は、静脈の中への投与を意味する。
【００９４】
「連結ヌクレオシド」は、一緒に結合している近接ヌクレオシドを意味する。
【００９５】
「脂質低下」とは、対象における１つ以上の脂質の低減を意味する。脂質低下は、１つ以上の用量によって経時的に生じうる。
【００９６】
「脂質低下剤」は、対象において脂質の低下を達成するために、対象に提供される作用物質、例えばＡＮＧＰＴＬ３特異的調節因子を意味する。例えば、特定の実施形態において、脂質低下剤は、対象においてアポＢ、アポＣ−ＩＩＩ、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、小型ＬＤＬ粒子及びＬｐ（ａ）の１つ以上を低減するために、対象に提供される。
【００９７】
「脂質低下療法」は、対象において１つ以上の脂質を低減するために、対象に提供される治療レジメンを意味する。特定の実施形態において、脂質低下療法は、対象においてアポＢ、アポＣ−ＩＩＩ、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、小型ＬＤＬ粒子及びＬｐ（ａ）の１つ以上を低減するために提供される。
【００９８】
ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬのような「リポタンパク質」は、血清、血漿及びリンパ液において見出される一群のタンパク質を指し、脂質輸送にとって重要である。それぞれのリポタンパク質の化学組成は、ＨＤＬが、脂質よりも高い割合でタンパク質を有し、一方、ＶＬＤＬが、脂質より低い割合でタンパク質を有するように、異なっている。
【００９９】
「低密度リポタンパク質−コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）」は、低密度リポタンパク質粒子に担持されるコレステロールを意味する。血清（または血漿）中のＬＤＬ−Ｃ濃度は、典型的にはｍｇ／ｄＬまたはｎｍｏｌ／Ｌで定量化される。「血清ＬＤＬ−Ｃ」及び「血漿ＬＤＬ−Ｃ」は、血清及び血漿中のＬＤＬ−Ｃをぞれぞれ意味する。
【０１００】
「主要危険因子」は、特定の疾患または状態の高い危険性に寄与する因子を指す。特定の実施形態において、冠動脈心疾患の主要危険因子には、喫煙、高血圧、低ＨＤＬ−Ｃ、冠動脈心疾患の家族歴、年齢及び本明細書に開示されている他の因子が限定されることなく含まれる。
【０１０１】
「代謝障害」または「代謝疾患」は、代謝機能の変更または障害により特徴付けられる状態を指す。「代謝性（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ）」及び「代謝作用（ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）」は、当該技術において良く知られている用語であり、一般に、生体内で生じる生化学プロセスの全ての範囲を含む。代謝障害には、高血糖症、前糖尿病、糖尿病（１型及び２型）、肥満症、インスリン抵抗性、代謝症候群、並びに２型糖尿病に起因する異脂肪血症が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０２】
「代謝症候群」は、代謝性原因の一群の脂質及び非脂質心血管性危険因子により特徴付けられる状態を意味する。特定の実施形態において、代謝症候群は、以下の因子のいずれか３つの存在により特定される。男性では１０２ｃｍを超え、女性では８８ｃｍを超えるウエスト周囲、少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬの血漿トリグリセリド、男性では４０ｍｇ／ｄＬ未満であり、女性では５０ｍｇ／ｄＬ未満であるＨＤＬ−Ｃ、少なくとも１３０／８５ｍｍＨｇの血圧、及び少なくとも１１０ｍｇ／ｄＬの空腹時グルコース。これらの決定因子は、臨床実践において容易に測定することができる（ＪＡＭＡ，２００１，２８５：２４８６−２４９７）。
【０１０３】
「不適合」または「非相補的核酸塩基」は、第１の核酸の核酸塩基が第２または標的核酸の対応する核酸塩基と対形成することができない場合を指す。
【０１０４】
「混合型異脂肪血症」は、コレステロールの上昇及びトリグリセリドの上昇により特徴付けられる状態を意味する。
【０１０５】
「修飾ヌクレオシド間連結」は、天然に生じるヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）における置換または任意の変化を指す。
【０１０６】
「修飾核酸塩基」は、アデニン、シトシン、グアニン、チミジンまたはウラシル以外の任意の核酸塩基を指す。「非修飾核酸塩基」は、プリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、並びにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１０７】
「修飾ヌクレオシド」は、独立して１つ以上の修飾糖部分または修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１０８】
「修飾ヌクレオチド」は、独立して１つ以上の修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間連結、または修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」は、独立して１つ以上の修飾糖部分または修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１０９】
「修飾オリゴヌクレオチド」は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１１０】
「修飾糖」は、天然糖における置換または変化を指す。
【０１１１】
「モチーフ」は、アンチセンス化合物における化学的に異なる領域のパターンを意味する。
【０１１２】
「ＭＴＰ阻害剤」は、酵素のミクロソームトリグリセリド転移タンパク質を阻害する作用物質を意味する。
【０１１３】
「天然に生じるヌクレオシド間連結」は、３’から５’へのホスホジエステル連結を意味する。
【０１１４】
「天然糖部分」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）において見出される糖を意味する。
【０１１５】
「非アルコール性脂肪肝疾患」または「ＮＡＦＬＤ」は、アルコールの過度の使用（例えば、２０ｇ／日を超えるアルコール消費）に起因しない肝臓の脂肪性炎症により特徴付
けられる状態を意味する。特定の実施形態において、ＮＡＦＬＤは、インスリン抵抗性及び代謝症候群に関係する。ＮＡＦＬＤは、肝細胞における単純なトリグリセリド蓄積（脂肪肝）から、炎症を伴う脂肪肝（脂肪性肝炎）、線維症及び硬変までの疾患範囲を包含する。
【０１１６】
「非アルコール性脂肪性肝炎」（ＮＡＳＨ）は、トリグリセリドの付着を超えたＮＡＦＬＤの進行によって生じる。壊死、炎症及び線維症を誘発しうる「第２の攻撃」が、ＮＡＳＨの発生に必要とされる。第２の攻撃の候補を、広範な分類に分けることができる。酸化ストレスの増加を引き起こす因子及び炎症促進サイトカインの発現を促進する因子。肝臓トリグリセリドの増加は、動物及びヒトの肝細胞における酸化ストレスの増加を引き起こし、肝トリグリセリド蓄積、酸化ストレス及び脂肪肝からＮＡＳＨへの進行の潜在的な因果関係を示すことが示唆されている（Ｂｒｏｗｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｈｏｒｔｏｎ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，２００４，１１４，１４７−１５２）。高トリグリセリド血症及び高脂肪酸血症（ｈｙｐｅｒｆａｔｔｙａｃｉｄｅｍｉａ）は、末梢組織にトリグリセリド蓄積を引き起こしうる（Ｓｈｉｍａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ，２００４，３２２，１０８０−１０８５）。
【０１１７】
「核酸」は、モノマーヌクレオチドから構成される分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。核酸は、これらの要素の組み合わせを単一分子に含むこともできる。
【０１１８】
「核酸塩基」は、別の核酸の塩基と対形成することができる複素環式部分を意味する。
【０１１９】
「核酸塩基配列」は、任意の糖、連結または核酸塩基修飾から独立した隣接核酸塩基の順序を意味する。
【０１２０】
「ヌクレオシド」は、糖に連結した核酸塩基を意味する。
【０１２１】
「ヌクレオシド模倣体」には、例えば、モルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、ビシクロまたはトリシクロ糖模倣体、例は非フラノース糖単位のような、オリゴマー化合物の１つ以上の位置で、糖、または糖及び塩基の代わりに使用されるが、連結の代わりに使用されるとは限らない構造が含まれる。
【０１２２】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合的に連結しているホスフェート基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１２３】
「ヌクレオチド模倣体」には、例えば、ペプチド核酸またはモルホリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−もしくは他の非ホスホジエステル連結により連結しているモルホリノ）のような、オリゴマー化合物の１つ以上の位置でヌクレオシド及び連結の代わりに使用される構造が含まれる。
【０１２４】
「オリゴマー化合物」または「オリゴマー」は、２つ以上の下部構造を含み、核酸分子の領域とハイブリッド形成することができる、ポリマー構造を指す。特定の実施形態において、オリゴマー化合物はオリゴヌクレオシドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物はアンチセンス化合物である。特定の実施形態において、オリゴマー化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物はキメラオリゴヌクレオチドである。
【０１２５】
「オリゴヌクレオチド」は、それぞれ互いに独立して修飾されうる、または非修飾でありうる、連結ヌクレオチドのポリマーを意味する。
【０１２６】
「非経口投与」は、消化管を介する以外の方法による投与を意味する。非経口投与には、局所投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば、くも膜下腔内もしくは側脳室内投与が含まれる。投与は、連続的、または慢性的、または短期的、または断続的でありうる。
【０１２７】
「ペプチド」は、少なくとも２個のアミノ酸をアミド結合で連結することにより形成された分子を意味する。ペプチドは、ポリペプチド及びタンパク質を指す。
【０１２８】
「医薬品」は、個体に投与されたときに治療利益を提供する物質を意味する。例えば、特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬品である。
【０１２９】
「薬学的組成物」は、個体への投与に適した物質の混合物を意味する。例えば、薬学的組成物は、１つ以上の活性剤及び滅菌水溶液を含むことができる。
【０１３０】
「薬学的に許容される担体」は、オリゴヌクレオチドの構造または機能に干渉しない媒体または希釈剤を意味する。そのような担体の特定のものは、医薬品が、対象による経口摂取用に、例えば錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤及びロゼンジ剤として処方されることを可能にする。そのような担体の特定のものは、薬学的組成物が注射または注入用に処方されることを可能にする。例えば、薬学的に許容される担体は、滅菌水溶液である。
【０１３１】
「薬学的に許容される塩」は、アンチセンス化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの望ましい生物学的活性を保持し、望ましくない毒性効果を付与しない塩を意味する。
【０１３２】
「ホスホロチオエート連結」は、ホスホジエステル結合が、非架橋酸素原子の１個を硫黄原子に代えることにより修飾されている、ヌクレオシド間の連結を意味する。ホスホロチオエート連結は、修飾ヌクレオシド間連結である。
【０１３３】
「部分」は、核酸の確定された数の隣接（すなわち、連結された）核酸塩基を意味する。特定の実施形態において、部分は、標的核酸の確定された数の隣接核酸塩基である。特定の実施形態において、部分は、アンチセンス化合物の確定された数の隣接核酸塩基である。
【０１３４】
「予防」は、数分から無限の時間にわたって疾患、障害または状態の発症または進展を遅延すること、または未然に防ぐことを指す。予防は、疾患、障害または状態が発生する危険性を低減することも意味する。
【０１３５】
「プロドラッグ」は、身体またはその細胞内において、内在性酵素、または他の化学薬品もしくは条件の作用により活性形態に変換される不活性形態で調製される、治療剤を意味する。
【０１３６】
「副作用」は、望ましい効果以外の、治療に起因する生理学的応答を意味する。特定の実施形態において、副作用には、注射部位反応、肝臓機能試験異常、腎機能異常、肝臓毒性、腎臓毒性、中枢神経系異常、筋障害及び倦怠感が含まれる。例えば、血漿中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝臓毒性または肝臓機能異常を示しうる。例えば、
ビリルビンの増加は、肝臓毒性または肝臓機能異常を示しうる。
【０１３７】
「一本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補的鎖とハイブリッド形成していないオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１３８】
「特異的にハイブリッド形成可能な」とは、特定の結合が望ましい条件下において、すなわち、インビボアッセイ及び治療処置の場合では生理学的条件下において、所望の効果を誘発し、同時に、非標的核酸に対して最小限の作用を示す、または何も作用を示さないように、十分な相補性の程度を標的核酸に対して有するアンチセンス化合物を指す。
【０１３９】
「スタチン」は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を阻害する作用物質を意味する。
【０１４０】
「皮下投与」は、皮膚の直下への投与を意味する。
【０１４１】
「標的にする」または「標的にされる」とは、標的核酸と特異的にハイブリッド形成して、望ましい効果を誘発するアンチセンス化合物の設計及び選択の過程を意味する。
【０１４２】
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」及び「標的ＲＮＡ転写」は、全て、アンチセンス化合物に標的にされうる核酸を指す。
【０１４３】
「標的領域」は、少なくとも１つの特定可能な構造、機能または特徴を有する標的核酸の部分と定義される。
【０１４４】
「標的セグメント」は、１つ以上のアンチセンス化合物が標的にされる標的核酸のヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」または「５’開始部位」は、標的セグメントの最も５’にあるヌクレオチドを指す。「３’標的部位」または「３’終止部位」は、標的セグメントの最も３’にあるヌクレオチドを指す。
【０１４５】
「治療有効量」は、個体に治療利益を提供する作用物質の量を意味する。
【０１４６】
「治療的な生活習慣の変化（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｌｉｆｅｓｔｙｌｅ  ｃｈａｎｇｅ）」は、脂肪／脂肪組織量及び／またはコレステロールの低下が意図される食事及び生活習慣の変化を意味する。そのような変化は、心疾患発生の危険性を低減することができ、１日の総カロリー、総脂肪、飽和脂肪、多価不飽和脂肪、一価不飽和脂肪、炭水化物、タンパク質、コレステロール、不溶性繊維の食事摂取についての推奨、並びに身体活動についての推奨を含むことがある。
【０１４７】
「トリグリセリド」は、３つの脂肪酸分子と組み合わされたグリセロールからなる脂質または中性脂肪を意味する。
【０１４８】
「２型糖尿病」（「２型真性糖尿病」または「真性糖尿病、２型」としても知られて
おり、以前は「真性糖尿病２型」、「インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」、「肥満症関連糖尿病」または「成人発症型糖尿病」と呼ばれた）は、主にインスリン抵抗性、相対的インスリン欠乏及び高血糖症によって特徴付けられる代謝障害である。
【０１４９】
「治療する」とは、疾患、障害または状態の変更または改善を実施するために薬学的組成物を投与することを指す。
【０１５０】
「非修飾ヌクレオチド」は、天然に生じる核酸塩基、糖部分及びヌクレオシド間連結から構成されるヌクレオチドを意味する。特定の実施形態において、非修飾ヌクレオチドは
、ＲＮＡヌクレオチド（すなわわち、β−Ｄ−リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【０１５１】
特定の実施形態
本明細書に開示されている特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿０１４４９５．２に記載されている配列を有する（配列番号１として本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＴ＿０３２９７７．９ヌクレオチド３３０３２００１〜３３０４６０００に記載されている配列を有する（配列番号２として本明細書に組み込まれる）。
【０１５２】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、配列番号１〜２の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２〜３０個のヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物または組成物を提供する。
【０１５３】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、ＡＮＧＰＴＬ３に標的にされる１２〜３０個の連結ヌクレオシドの長さの修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物または組成物を提供する。ＡＮＧＰＴＬ標的は、配列番号１〜２のいずれか一方から選択される配列を有することができる。
【０１５４】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１の核酸塩基１１４０〜１１５９の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基を含む、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物または組成物を提供する。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１の核酸塩基１１４０〜１１５９の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基である。
【０１５５】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１の核酸塩基１１４０〜１１５９に相補的な核酸配列を含む、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物または組成物を提供する。
【０１５６】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１の核酸塩基１９０７〜１９２６の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基を含む、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物または組成物を提供する。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１の核酸塩基１９０７〜１９２６の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基である。
【０１５７】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１の核酸塩基１９０７〜１９２６に相補的な核酸配列を含む、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物または組成物を提供する。
【０１５８】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからな
り、且つ配列番号１の核酸塩基１４７〜１６２の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基を含む、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物または組成物を提供する。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１の核酸塩基１４７〜１６２の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または１６個の隣接核酸塩基である。
【０１５９】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１の核酸塩基１４７〜１６２に相補的な核酸配列を含む、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドの該核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物または組成物を提供する。
【０１６０】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜３０個、１５〜３０個、１８〜２４個、１９〜２２個、１３〜２５個、１４〜２５個、１５〜２５個、または１６〜２４個の連結ヌクレオシドからなる。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０個の連結ヌクレオシド、またはこれらの値の任意の２つにより確定された範囲からなる。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１６個の連結ヌクレオシドの長さである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、20個の連結ヌクレオシドの長さである。
【０１６１】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１または２の等長部分に相補的な少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基の部分を含む、核酸塩基配列を含む。
【０１６２】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１５〜２７、３０〜７３、７５〜８５、８７〜２３２、２３８、２４０〜２４３、２４５〜２４７、２４９〜２６２、２６４〜３９７、３９９〜４６９、４７１〜５４１、５４３〜６００、６０４〜７６０、７６２〜８１９、８２１〜９６６、９６８〜９７１、９７３〜９７５、９７７〜９９０、９９２〜１１１０、１１１２〜１１８６、１１８８〜１２１６、１２１８〜１２２６、１２２８〜１２７９、１２８１〜１２９３、１２９５〜１３０４、１３０６〜１９４３、１９４５〜１９５１、１９５３〜１９７７、１９７９〜１９８１、１９８３〜２０４４、２０４６〜２０９７、２０９９〜２１８１、２１８３〜２２３２、２２３４〜２２３８、２２４０〜２２５８、２２６０〜２２６５、２２６７〜２９７１、２９７３〜２９７６、２９７８〜４１６２、４１６４〜４３２９、４３３１〜４３８９、４３９１〜４３９４、４３９６〜４８７７のいずれか１つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物または組成物を提供する。
【０１６３】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチ
ドを含む、化合物または組成物を提供する。
【０１６４】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号２０の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、または２０個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物または組成物を提供する。
【０１６５】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１１０の核酸塩基配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、または１６個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物または組成物を提供する。
【０１６６】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたって測定して、配列番号１〜２のいずれか一方に少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％相補的である。
【０１６７】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物は、一本鎖オリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物は、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドである。
【０１６８】
特定の実施形態において、前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、修飾ヌクレオシド間連結である。特定の実施形態において、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である
【０１６９】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１個のヌクレオシドは、修飾糖を含む。特定の実施形態において、少なくとも１つの修飾糖は二環式糖である。特定の実施形態において、少なくとも１つの修飾糖は、２’−Ｏ−メトキシエチル、拘束エチル、３’−フルオロ−ＨＮＡ、または４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋を含み、ここでｎは１または２である。
【０１７０】
特定の実施形態において、前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１個のヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態において、修飾核酸塩基は、５−メチルシトシンである。
【０１７１】
本明細書に開示されている特定の実施形態は、ａ）連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、ｂ）連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、ｃ）連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物または組成物を提供する。ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖を含む。
【０１７２】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖を含む。
【０１７３】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号１〜２の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１７４】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結ヌクレオシドからなり、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１７５】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、２０個の連結ヌクレオシドからなり、且つ配列番号７７から選択される核酸塩基配列の少なくとも８個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１７６】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号７７の核酸塩基配列の２０個の連結ヌクレオシドからなり、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１７７】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ５６３５８０である。特定の実施形態において、ＩＳＩＳ５６３５８０は、ＧＧＡＣＡＴＴＧＣＣＡＧＴＡＡＴＣＧＣＡ（５’から３’まで）の配列（配列番号７７として本明細書に組み込まれる）を有する、５−１０−５ ＭＯＥギャップマーと特徴付けられ、それぞれのヌクレオシド間
連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれにシトシンは、５’−メチルシトシンであり、ヌクレオシド１〜５及び１６〜２０は、それぞれ２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、ヌクレオシド６〜１５は、それぞれ２’−デオキシヌクレオシドである。
【０１７８】
特定の実施形態において、ＩＳＩＳ５６３５８０は次の化学表記法：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  
Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅにより記載され、ここで、
Ａ＝アデニンであり、
ｍＣ＝５’−メチルシトシンであり、
Ｇ＝グアニンであり、
Ｔ＝チミンであり、
ｅ＝２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄ＝２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。
【０１７９】
特定の実施形態において、ＩＳＩＳ５６３５８０は、以下の化学構造により記載される。
【０１８０】
【化２】
2020072713.tif 000003
【０１８１】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、先行の化学構造により表されるＩＳＩＳ５６３５８０を含む。
【０１８２】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、配列番号２０から選択される核酸塩基配列の少なくとも８個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する２０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメ
ントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１８３】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２０の核酸塩基配列の２０個の連結ヌクレオシドからなり、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、５個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１８４】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、配列番号１１０の核酸塩基配列の少なくとも８個の隣接核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１６個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、該修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、３個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、３個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントは、少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチル糖及び少なくとも１つのｃＥｔ糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１８５】
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１１０の核酸塩基配列の１６個の連結ヌクレオシドからなり、１０個の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、３個の連結ヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、３個の連結ヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、該ギャップセグメントは、該５’ウイングセグメントと該３’ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントは、少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチル糖及び少なくとも１つのｃＥｔ糖を含み、それぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結であり、それぞれのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。
【０１８６】
特定の実施形態は、ＡＮＧＰＴＬ３発現を阻害するための、本明細書に記載されている化合物及び組成物の使用方法を提供する。特定の実施形態において、化合物または組成物は、ＡＮＧＰＴＬ３を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％阻害する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも５０％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも５５％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも６０％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも６５％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも７０％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも７５％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物
は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも８０％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも８５％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも９０％減少する。好ましい実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３を少なくとも９５％減少する。
【０１８７】
特定の実施形態は、トリグリセリド、ＬＤＬコレステロール、非ＨＤＬコレステロール、ＶＬＤＬコレステロール、総コレステロール、アポＢ及びアポＣ−ＩＩＩの１つ以上を低減するための、本明細書に記載されている化合物及び組成物の使用方法を提供する。特定の実施形態において、化合物または組成物は、トリグリセリド、ＬＤＬコレステロール、非ＨＤＬコレステロール、ＶＬＤＬコレステロール、総コレステロール、アポＢ及びアポＣ−ＩＩＩの１つ以上を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する。
【０１８８】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、実施例２〜３及び７〜１０に記載されているように、ヒト細胞、例えばＨｅｐ３Ｂ細胞系において試験されたとき、２０μＭ未満、１０μＭ未満、８μＭ未満、５μＭ未満、２μＭ未満、１μＭ未満、または０．８μＭ未満のＩＣ５０を有する。
【０１８９】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、実施例１３に記載されているようなパラメーターにより測定したとき、４０ｃＰ未満、３５ｃＰ未満、３０ｃＰ未満、２５ｃＰ未満、２０ｃＰ未満、または１５ｃＰ未満の粘度を有することによって効果的である。
【０１９０】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、実施例に記載されているインビボ耐容性測定により実証されているように、高い耐容性がある。特定の実施形態において、本明細書に記載されているアンチセンス化合物は、食塩水試験動物の４倍、３倍、２倍または１．５倍以下の増加をＡＬＴ及び／またはＡＳＴ値に有することによって実証されているように、高い耐容性がある。
【０１９１】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、修飾オリゴヌクレオチドの塩を含む。
【０１９２】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤を更に含む。
【０１９３】
特定の実施形態において、動物はヒトである。
【０１９４】
特定の実施形態は、療法における、本明細書に記載されている化合物及び組成物の使用方法を提供する。特定の実施形態において、療法は、ＡＮＧＰＴＬ３の上昇に関係する疾患を治療する、予防する、またはその進行を緩徐することに使用される。特定の実施形態において、疾患は、心血管及び／または代謝の疾患、障害または状態である。特定の実施形態において、代謝及び／または心血管疾患には、肥満症、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、異脂肪血症、脂肪異栄養症、冠動脈心疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、高脂肪酸血症、もしくは代謝症候群、またはこれらに組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。異脂肪血症は、高脂血症でありうる。高脂血症は、複合型高脂血症、家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ）、高コ
レステロール血症、高トリグリセリド血症、または高コレステロール血症と高トリグリセリド血症の両方でありうる。高コレステロール血症は、家族性ホモ接合型高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、家族性ヘテロ接合型高コレステロール血症（ＨｅＦＨ）でありうる。高トリグリセリド血症は、家族性カイミクロン血症症候群（ＦＣＳ）または高リポタンパク血症ＩＶ型でありうる。ＮＡＦＬＤは、脂肪肝または脂肪性肝炎でありうる。糖尿病は、２型糖尿病または異脂肪血症を伴う２型糖尿病でありうる。
【０１９５】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物または組成物は、第１の作用物質として指定され、本明細書に開示されている方法及び使用は、第２の作用物質を投与することを更に含む。特定の実施形態において、第１の作用物質及び第２の作用物質は、共投与される。特定の実施形態において、第１の作用物質及び第２の作用物質は、順次または随伴的に共投与される。
【０１９６】
特定の実施形態において、第２の作用物質はグルコース低下剤である。グルコース低下剤には、治療的な生活習慣の変化、ＰＰＡＲ作動薬、ジペプチジルペプチダーゼ（ＩＶ）阻害剤、ＧＬＰ−１類縁体、インスリンもしくはインスリン類縁体、インスリン分泌促進薬、ＳＧＬＴ２阻害剤、ヒトアミリン類縁体、ビグアナイド、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、またはこれらの組み合わせが含まれうるが、これらに限定されない。グルコース低下剤には、メトホルミン、スルホニル尿素、ロシグリタゾン、メグリチニド、チアゾリジンジオン、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、またはこれらの組み合わせが含まれうるが、これらに限定されない。スルホニル尿素は、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、グリメピリド、グリピジド、グリブリド、またはグリクラジドでありうる。メグリチニドは、ナテグリニドまたはレパグリニドでありうる。チアゾリジンジオンは、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾンでありうる。アルファ−グルコシダーゼは、アカルボースまたはミグリトールでありうる。
【０１９７】
特定の実施形態において、第２の作用物質は脂質低下療法である。特定の実施形態において、脂質低下療法には、治療的な生活習慣の変化、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、ＭＴＰ阻害剤（例えば、ＭＴＰを標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくはアンチセンス化合物）、アポＢ阻害剤（例えば、アポＢを標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくはアンチセンス化合物）、アポＣ３阻害剤（例えば、アポＣ３を標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくはアンチセンス化合物）、ＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、ＰＣＳＫ９を標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくはアンチセンス化合物）、ＣＥＴＰ阻害剤（例えば、ＣＥＴＰを標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくはアンチセンス化合物）、フィブレート、有益油（ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ  ｏｉｌ）（例えば、オキアミもしくは魚油（例えば、Ｖａｓｃｅｐａ（登録商標））、アマニ油、またはα−リノレン酸（ＡＬＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）もしくはエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）のようなオメガ−３脂肪酸が豊富な他の油）、あるいはこれらの任意の組み合わせが含まれうるが、これらに限定されない。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、アトルバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、またはシンバスタチンでありうる。コレステロール吸収阻害剤は、エゼチミブでありうる。フィブレートは、フェノフィブレート、ベザフィブレート、シプロフィブレート、クロフィブレート、ゲムフィブロジルなどでありうる。
【０１９８】
特定の実施形態において、投与は非経口投与を含む。
【０１９９】
特定の実施形態において、本明細書に開示されている化合物の投与は、トリグリセリドレベル、コレステロールレベル、インスリン抵抗性、グルコースレベル、またはこれらの組み合わせを含む脂質レベルの低減をもたらす。これらのレベルの１つ以上は、独立して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくと
も３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減されうる。化合物の投与は、改善されたインスリン感受性または肝臓インスリン感受性をもたらす。本明細書に開示されている化合物の投与は、アテローム性動脈硬化巣、肥満症、グルコース、脂質、グルコース抵抗性、コレステロールの低減、またはインスリン感受性の改善、あるいはこれらの任意の組み合わせをもたらすことができる。
【０２００】
特定の実施形態は、１つ以上の代謝疾患または心血管疾患を治療する、寛解する、遅延する、または予防する医薬の製造のための、本明細書に記載されている化合物の使用を提供する。
【０２０１】
特定の実施形態は、本明細書に記載されている１つ以上の代謝疾患または心血管疾患を治療する、予防する、または寛解するためのキットを提供し、該キットは、ａ）本明細書に記載されている化合物、及び場合によりｂ）本明細書に記載されている追加の作用物質または療法を含む。キットは、１つ以上の代謝疾患または心血管疾患を治療する、予防する、または寛解するためのキットの使用についての使用説明書またはラベルを更に含むことができる。
【０２０２】
アンチセンス化合物
オリゴマー化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類縁体、オリゴヌクレオチド模倣体、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対する「アンチセンス化合物」であり、すなわち、水素結合を介して標的核酸とハイブリッド形成することができることを意味する。
【０２０３】
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、５’から３’の方向に記載されるとき、それが標的にする標的核酸の標的セグメントの逆相補（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）を含む核酸塩基配列を有する。特定のそのような実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’の方向に記載されるとき、それが標的にする標的核酸の標的セグメントの逆相補を含む核酸塩基配列を有する。
【０２０４】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物は、１０〜３０個のヌクレオチドの長さである。換言すると、アンチセンス化合物は、１０〜３０個の連結核酸塩基のものである。他の実施形態において、アンチセンス化合物は、８〜８０個、１０〜８０個、１２〜５０個、１２〜３０個、１５〜３０個、１８〜２４個、１９〜２２個、または２０個の連結核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドである。特定のそのような実施形態において、アンチセンス化合物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、もしくは８０個の連結核酸塩基の長さ、または上記の値の任意の２つにより確定された範囲からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
【０２０５】
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、短縮型または切断型修飾オリゴヌクレオチドを含む。短縮型または切断型修飾オリゴヌクレオチドは、単一のヌクレオシドを５’末端から欠失した（５’切断）、あるいは３’末端から欠失した（３’切断）ものでありうる。短縮型または切断型オリゴヌクレオチドは、２個以上のヌクレオシドを５’末
端から欠失したものでありうる、あるいは２個以上のヌクレオシドを３’末端から欠失したものでありうる。あるいは、欠失ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの全体にわたって分散され、例えば、１個以上のヌクレオシドが５’末端から失され、１個以上のヌクレオシドが３’末端から欠失したアンチセンス化合物でありうる。
【０２０６】
単一の追加のヌクレオシドが伸長オリゴヌクレオチドに存在する場合、追加のヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端、３’末端、または中央位置に位置することができる。２個以上の追加のヌクレオシドが存在する場合、付加されたヌクレオシドは、互いに近接することができ、例えば、２個のヌクレオシドがオリゴヌクレオチドの５’末端に付加された（５’付加）、あるいは３’末端に付加された（３’付加）、または中央位置に付加されたオリゴヌクレオチドでありうる。あるいは、付加されたヌクレオシドは、アンチセンス化合物の全体にわたって分散され、例えば、１個以上のヌクレオシドが５’末端に付加され、１個以上のヌクレオシドが３’末端に付加され及び／または１個以上のヌクレオシドが中央位置に付加されたオリゴヌクレオチドでありうる。
【０２０７】
活性を排除することなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドのようなアンチセンス化合物の長さを増加もしくは減少すること、及び／または不適合塩基を導入することが、可能である。例えば、Ｗｏｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７３０５−７３０９，１９９２）において、１３〜２５個の核酸塩基長さの一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、卵母細胞注射モデルにおいて標的ＲＮＡの切断を誘発する能力について試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端近くに８または１１個の不適合塩基を有する、２５個の核酸塩基長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、不適合を含有しないアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも少ない程度であるが、標的ｍＲＮＡの特異的切断を指示することができた。同様に、標的特異的切断は、１または３個の不適合を有するものを含む、１３核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して達成された。
【０２０８】
Ｇａｕｔｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：４６３−４７１，Ｍａｒｃｈ  ２００１）は、ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡに１００％の相補性を有し、ｂｃｌ−ｘＬ  ｍＲＮＡに３個の不適合を有するオリゴヌクレオチドが、ｂｃｌ−２とｂｃｌ−ｘＬの両方の発現をインビトロ及びインビボにおいて低減する能力を実証した。更に、このオリゴヌクレオチドは、強力な抗腫瘍活性をインビボにおいて実証した。
【０２０９】
Ｍａｈｅｒ  ａｎｄ  Ｄｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１−３３５８，１９８８）は、一連の直列型１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド、並びに２または３個の直列型アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列から構成される２８及び４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを、それぞれ、ウサギ網状赤血球アッセイにおいてヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させる能力について試験した。３個の１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それぞれ単独で、２８または４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドより穏やかなレベルであるが、翻訳を阻害することができた。
【０２１０】
特定のアンチセンス化合物のモチーフ及び機構
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、阻害活性の増強、標的核酸への結合親和性の増加、またはインビボでのヌクレアーゼよる分解に対する抵抗性のような特性をアンチセンス化合物に付与するパターンまたはモチーフに配列された、化学的に修飾されたサブユニットを有する。キメラアンチセンス化合物は、典型的には、ヌクレアーゼ分解に対する抵抗性の増加、細胞取り込みの増加、標的核酸への結合親和性の増加、及び／または阻害活性の増加を付与するように修飾された、少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、別の望ましい特性を付与することができ、例えば、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する、細胞エンドヌクレアーゼであるＲＮア
ーゼＨの基質として機能することができる。
【０２１１】
アンチセンス活性は、アンチセンス化合物（例えば、オリゴヌクレオチド）と標的核酸とのハイブリッド形成を伴う任意の機構からもたらされることもあり、ハイブリッド形成は、最終的に生物学的効果をもたらす。特定の実施形態において、標的核酸の量及び／または活性は、調節される。特定の実施形態において、標的核酸の量及び／または活性は、低減される。特定の実施形態において、アンチセンス化合物と標的核酸のハイブリッド形成は、最終的に、標的核酸の分解をもたらす。特定の実施形態において、アンチセンス化合物と標的核酸のハイブリッド形成は、標的核酸の分解をもたらさない。特定の実施形態において、標的核酸とハイブリッド形成したアンチセンス化合物の存在（占有）は、アンチセンス活性の調節をもたらす。特定の実施形態において、特定の化学モチーフまたは化学調節のパターンを有するアンチセンス化合物は、１つ以上の機構を利用するために特に適している。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、２つ以上の機構を介して、及び／または解明されていない機構を介して機能する。したがって、本明細書に記載されているアンチセンス化合物は、特定の機構に限定されない。
【０２１２】
アンチセンス機構には、ＲＮアーゼＨ媒介アンチセンス；ＲＩＳＣ経路を利用し、ｓｉＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ及びマイクロＲＮＡ機構が限定されることなく含まれる、ＲＮＡｉ機構；並びに占有に基づいた機構が、限定されることなく含まれる。特定のアンチセンス化合物は、２つ以上のそのような機構を介して、及び／または追加の機構を介して作用することができる。
【０２１３】
ＲＮアーゼＨ媒介アンチセンス
特定の実施形態において、アンチセンス活性は、少なくとも部分的にはＲＮアーゼＨによる標的ＲＮＡの分解によりもたらされる。ＲＮアーゼＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。「ＤＮＡ様」である一本鎖アンチセンス化合物は、哺乳類細胞においてＲＮアーゼＨ活性を誘発することが、当該技術において知られている。したがって、ＤＮＡまたはＤＮＡ様ヌクレオシドの少なくとも一部を含むアンチセンス化合物は、ＲＮアーゼＨを活性化して、標的核酸の切断をもたらすことができる。特定の実施形態において、ＲＮアーゼＨを利用するアンチセンス化合物は、１個以上の修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態において、そのようなアンチセンス化合物は、１〜８個の修飾ヌクレオシドの少なくとも１ブロックを含む。特定のそのような実施形態において、修飾ヌクレオシドは、ＲＮアーゼＨ活性を支持しない。特定の実施形態において、そのようなアンチセンス化合物は、本明細書に記載されているギャップマーである。特定のそのような実施形態において、ギャップマーのギャップは、ＤＮＡヌクレオシドを含む。特定のそのような実施形態において、ギャップマーのギャップは、ＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。特定のそのような実施形態において、ギャップマーのギャップは、ＤＮＡヌクレオシド及びＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。
【０２１４】
ギャップマーモチーフを有する特定のアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物と考慮される。ギャップマーにおいて、ＲＮアーゼＨ切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内部領域は、内部領域のヌクレオシドと化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外部領域の間に位置している。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合において、ギャップセグメントは、一般にエンドヌクレアーゼ切断の基質として機能し、一方、ウイングセグメントは、修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態において、ギャップマーの領域は、それぞれ異なる領域を含む糖部分の種類によって差異化される。ギャップマーの領域を差異化するのに使用される糖部分の種類には、幾つかの実施形態において、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシヌクレオシド、２’−修飾ヌクレオシド（そのような２’−修飾ヌクレオシドには、とりわけ２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ−ＣＨ３が含まれうる）、並びに二環式糖修飾ヌクレオシド（そのような二
環式糖修飾ヌクレオシドには、拘束エチルを有するものが含まれうる）が含まれうる。特定の実施形態において、ウイングにおけるヌクレオシドには、例えば、２’−ＭＯＥを含む幾つかの修飾糖部分、及び拘束エチルまたはＬＮＡのような二環式糖部分が含まれうる。特定の実施形態において、ウイングは、幾つかの修飾及び非修飾糖部分を含むことができる。特定の実施形態において、ウイングは、２’−ＭＯＥヌクレオシド、拘束エチルヌクレオシドまたはＬＮＡヌクレオシドのような二環式糖部分及び２’−デオキシヌクレオシドの様々な組み合わせを含むことができる。
【０２１５】
それぞれ異なる領域は、均一糖部分、異型または交互糖部分を含むことができる。ウイングギャップウイングモチーフは、頻繁に「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載され、ここで、「Ｘ」は５’ウイングの長さを表し、「Ｙ」はギャップの長さを表し、「Ｚ」は３’ウイングの長さを表す。「Ｘ」及び「Ｚ」は、均一、異型または交互糖部分を含むことができる。特定の実施形態において、「Ｘ」及び「Ｙ」は、１つ以上の２’−デオキシヌクレオシドを含むことができる。「Ｙ」は、２’−デオキシヌクレオシドを含むことができる。本明細書で使用されるとき、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載されるギャップマーは、ギャップが５’ウイング及び３’ウイングのそれぞれに直ぐ近接して位置するような配置を有する。したがって、５’ウイングとギャップ、またはギャップと３’ウイングの間に介在ヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載されている任意のアンチセンス化合物は、ギャップマーモチーフを有することができる。特定の実施形態において、「Ｘ」及び「Ｚ」は同じであり、他の実施形態において、これらは異なっている。特定の実施形態において、「Ｙ」は、８〜１５個のヌクレオシドである。Ｘ、ＹまたはＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０個、またはそれ以上のヌクレオシドのいずれかでありうる。
【０２１６】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物は、ギャップが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の連結ヌクレオシドからなるギャップマーモチーフを有する。
【０２１７】
特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の式Ａ：（Ｊ）ｍ−（Ｂ）ｎ−（Ｊ）ｐ−（Ｂ）ｒ−（Ａ）ｔ−（Ｄ）ｇ−（Ａ）ｖ−（Ｂ）ｗ−（Ｊ）ｘ−（Ｂ）ｙ−（Ｊ）ｚにより記載される糖モチーフを有し、
式中、
各Ａは、独立して、２’置換ヌクレオシドであり、
各Ｂは、独立して、二環式ヌクレオシドであり、
各Ｊは、独立して、２’置換ヌクレオシドまたは２’−デオキシヌクレオシドであり、
各Ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｍは、０〜４であり、ｎは、０〜２であり、ｐは、０〜２であり、ｒは、０〜２であり、ｔは、０〜２であり、ｖは、０〜２であり、ｗは、０〜４であり、ｘは、０〜２であり、ｙは、０〜２であり、ｚは、０〜４であり、ｇは、６〜１４であるが、
但し、
ｍ、ｎ及びｒの少なくとも１つは、０以外であり、
ｗ及びｙの少なくとも一方は、０以外であり、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ及びｔの合計は、２〜５であり、
ｖ、ｗ、ｘ、ｙ及びｚの合計は、２〜５である。
【０２１８】
ＲＮＡｉ化合物
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は干渉ＲＮＡ化合物（ＲＮＡｉ）であり、二本鎖ＲＮＡ化合物（低分子干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡとも呼ばれる）及び一本鎖ＲＮＡｉ化合物（またはｓｓＲＮＡ）が含まれる。そのような化合物は、少なくとも部分的にＲＩＳＣ経路を介して作用して、標的核酸を分解する及び／または隔離する（したがっ
て、マイクロＲＮＡ／マイクロＲＮＡ模倣化合物が含まれる）。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、それらをそのような機構に特に適したものにする修飾を含む。
【０２１９】
ｉ．ｓｓＲＮＡ化合物
幾つかの実施形態において、一本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｓＲＮＡ）としての使用に特に適したものが含まれるアンチセンス化合物は、修飾５’末端部を含む。特定のそのような実施形態において、５’末端部は、修飾リン酸塩部分を含む。特定の実施形態において、そのような修飾リン酸塩は安定している（例えば、非修飾５’リン酸塩と比較して分解／切断に対して抵抗性がある）。特定の実施形態において、そのような５’末端ヌクレオシドは、５’亜リン酸部分を安定化する。特定の修飾５’末端ヌクレオシドは、当該技術、例えばＷＯ／２０１１／１３９７０２において見出すことができる。
【０２２０】
特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡ化合物の５’ヌクレオシドは、式ＩＩｃを有し、
【０２２１】
【化３】
2020072713.tif 000004
【０２２２】
式中、
Ｔ１は、場合により保護されている亜リン酸部分であり、
Ｔ２は、式ＩＩｃの化合物をオリゴマー化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、
Ａは、以下の式の１つを有し、
【０２２３】
【化４】
2020072713.tif 000005
【０２２４】
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＮ（Ｒ３）（Ｒ４）であり、
Ｑ３は、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ５）またはＣ（Ｒ６）（Ｒ７）であり、 
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ１〜Ｃ６アルコキシであり、
Ｍ３はＯ、Ｓ、ＮＲ１４、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）Ｃ（Ｒ１７）（Ｒ１８）、Ｃ（Ｒ１５）＝Ｃ（Ｒ１７）、ＯＣ（Ｒ１５）（Ｒ１６）、またはＯＣ（Ｒ１５）（Ｂｘ２）であり、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ
、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｂｘ１は、複素環式塩基部分であり、
またはＢｘ２が存在する場合、Ｂｘ２は、複素環式塩基部分であり、Ｂｘ１は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
あるいはＪ４は、Ｊ５またはＪ７の一方と架橋を形成し、前記架橋は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１９、Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）、Ｃ（Ｒ２０）＝Ｃ（Ｒ２１）、Ｃ［＝Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）］及びＣ（＝Ｏ）から選択される１〜３つの連結ビラジカル基を含み、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７のうちの他の２つは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
各Ｒ１９、Ｒ２０及びＲ２１は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｇは、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、またはＯ−［Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）］ｎ−［（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｘ１］ｊ−Ｚであり、
各Ｒ８及びＲ９は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｘ１は、Ｏ、Ｓ、またはＮ（Ｅ１）であり、
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、またはＮ（Ｅ２）（Ｅ３）であり、
Ｅ１、Ｅ２及びＥ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｎは、１〜約６であり、
ｍは、０または１であり、
ｊは、０または１であり、
各置換基は、ハロゲン、ＯＪ１、Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）、＝ＮＪ１、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＮ、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）及びＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）から独立して選択される１つ以上の場合により保護されている置換基を含み、
Ｘ２は、Ｏ、Ｓ、またはＮＪ３であり、 
各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｊが１である場合、Ｚは、ハロゲンまたはＮ（Ｅ２）（Ｅ３）以外であり、
ここで前記オリゴマー化合物は、８〜４０個のモノマーサブユニットを含み、標的核酸の少なくとも一部とハイブリッド形成可能である。
【０２２５】
特定の実施形態において、Ｍ３は、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＯＣＨ２、またはＯＣ（Ｈ）（Ｂｘ２）である。特定の実施形態において、Ｍ３はＯである。
【０２２６】
特定の実施形態において、Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７は、それぞれＨである。特定の実施形態において、Ｊ４は、Ｊ５またはＪ７の一方と架橋を形成する。
【０２２７】
特定の実施形態において、Ａは、下記式の１つを有し、
【０２２８】
【化５】
2020072713.tif 000006
【０２２９】
式中、
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシである。特定の実施形態において、Ｑ１及びＱ２は、それぞれＨである。特定の実施形態において、Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈまたはハロゲンである。特定の実施形態において、Ｑ１及びＱ２はＨであり、Ｑ１及びＱ２の他方は、Ｆ、ＣＨ３、またはＯＣＨ３である。
【０２３０】
特定の実施形態において、Ｔ１は、下記式を有し、
【０２３１】
【化６】
2020072713.tif 000007
【０２３２】
式中、
Ｒａ及びＲｃは、それぞれ独立して、保護ヒドロキシル、保護チオール、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、保護アミノ、または置換アミノであり、
Ｒｂは、ＯまたはＳである。特定の実施形態において、Ｒｂは、Ｏであり、Ｒａ及びＲｃは、それぞれ独立して、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、またはＣＨ（ＣＨ３）２である。
【０２３３】
特定の実施形態において、Ｇは、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ｆ、ＯＣＨＦ２、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｆ、ＯＣＨ２ＣＨＦ２、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）３−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＮ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１２）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、またはＯ（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒ１２）−Ｃ（＝ＮＲ１３）［Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）］であり、ここでＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。特定の実施形態において、Ｇは、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２、またはＯＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。特定の実施形態において、Ｇは、Ｆ、ＯＣＨ３、またはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である。特定の実施形態において、Ｇは、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である。
【０２３４】
特定の実施形態において、５’末端ヌクレオシドは、式ＩＩｅを有する。
【０２３５】
【化７】
2020072713.tif 000008
【０２３６】
特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡに特に適したものを含むアンチセンス化合物は、１種類以上の修飾糖部分及び／または天然に生じる糖部分を、オリゴヌクレオチドまたはその領域と共に、確定されたパターンまたは糖修飾モチーフに配列して含む。そのようなモチーフは、本明細書において考察された任意の糖修飾及び／または他の既知の糖修飾を含むことができる。
【０２３７】
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、均一糖修飾を有する領域を含む、または領域からなる。特定のそのような実施形態において、領域のそれぞれのヌクレオシドは、同じＲＮＡ様糖修飾を含む。特定の実施形態において、領域のそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｆヌクレオシドである。特定の実施形態において、領域のそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＯＭｅヌクレオシドである。特定の実施形態において、領域のそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。特定の実施形態において、領域のそれぞれのヌクレオシドは、ｃＥｔヌクレオシドである。特定の実施形態において、領域のそれぞれのヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。特定の実施形態において、均一な領域は、オリゴヌクレオチドの全て、または実質的に全てを構成する。特定の実施形態において、領域は、１〜４個の末端ヌクレオシドを除いてオリゴヌクレオチドの全体を構成する。
【０２３８】
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、交互糖修飾の１つ以上の領域を含み、ここでヌクレオシドは、第１の種類の糖修飾を有するヌクレオチドと第２の種類の糖修飾を有するヌクレオチドで交互になる。特定の実施形態において、両方の種類のヌクレオシドは、ＲＮＡ様ヌクレオシドである。特定の実施形態において、交互ヌクレオシドは、２’−ＯＭｅ、２’−Ｆ、２’−ＭＯＥ、ＬＮＡ及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態において、交互修飾は、２’−Ｆ及び２’−ＯＭｅである。そのような領域は、隣接していてもよく、または異なって修飾されたヌクレオシドもしくは抱合ヌクレオシドにより中断されていてもよい。
【０２３９】
特定の実施形態において、交互修飾の交互領域は、それぞれ単一のヌクレオシドから構成される（すなわち、パターンは、（ＡＢ）ｘＡｙであり、Ａは、第１の種類の糖修飾を有するヌクレオシドであり、Ｂは、第２の種類の糖修飾を有するヌクレオシドであり、ｘは、１〜２０であり、ｙは、０または１である）。特定の実施形態において、交互モチーフにおける１つ以上の交互領域は、ある種のヌクレオシドを１つを超えて含む。例えば、オリゴヌクレオチドは、以下のヌクレオシドモチーフ：
ＡＡＢＢＡＡ、
ＡＢＢＡＢＢ、
ＡＡＢＡＡＢ、
ＡＢＢＡＢＡＡＢＢ、
ＡＢＡＢＡＡ、
ＡＡＢＡＢＡＢ、
ＡＢＡＢＡＡ、
ＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ、
ＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ、または
ＡＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ
のいずれかの１つ以上の領域を含むことができ、
ここで、Ａは第１の種類のヌクレオシドであり、Ｂは第２の種類のヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ａ及びＢは、それぞれ２’−Ｆ、２’−ＯＭｅ、ＢＮＡ及びＭＯＥから選択される。
【０２４０】
特定の実施形態において、そのような交互モチーフを有するオリゴヌクレオチドは、式ＩＩｃまたはＩＩｅのもののように、修飾５’末端ヌクレオシドも含む。
【０２４１】
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、２−２−３モチーフを有する領域を含む。そのような領域は、以下のモチーフを含み、
−（Ａ）２−（Ｂ）ｘ−（Ａ）２−（Ｃ）ｙ−（Ａ）３−
ここで、Ａは、第１の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｂ及びＣは、Ａと異なって修飾されるヌクレオチドであるが、Ｂ及びＣは、互いに同じ、または異なる修飾を有してもよく、
ｘ及びｙは、１〜１５である。
【０２４２】
特定の実施形態において、Ａは、２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ｂ及びＣは、両方とも２’−Ｆ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ａは、２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドであり、Ｂ及びＣは、両方とも２’−Ｆ修飾ヌクレオシドである。
【０２４３】
特定の実施形態において、オリゴヌクレオシドは以下の糖モチーフを有し、
５’−（Ｑ）−（ＡＢ）ｘＡｙ−（Ｄ）ｚ
ここで、
Ｑは、安定したリン酸塩部分を含むヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ｑは、式ＩＩｃまたはＩＩｅを有するヌクレオシドであり、
Ａは、第１の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｂは、第２の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、近接するヌクレオシドと異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドである。したがって、ｙが０である場合、Ｄは、Ｂと異なって修飾されていなければならず、ｙが１である場合、Ｄは、Ａと異なって修飾されていなければならない。特定の実施形態において、Ｄは、Ａ及びＢの両方と異なる。
Ｘは、５〜１５であり、
Ｙは、０または１であり、
Ｚは、０〜４である。
【０２４４】
特定の実施形態において、オリゴヌクレオシドは以下の糖モチーフを有し、
５’−（Ｑ）−（Ａ）ｘ−（Ｄ）ｚ
ここで、
Ｑは、安定したリン酸塩部分を含むヌクレオシドである。  特定の実施形態において、Ｑは、式ＩＩｃまたはＩＩｅを有するヌクレオシドであり、
Ａは、第１の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、Ａと異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドである。
Ｘは、１１〜３０であり、
Ｚは、０〜４である。
【０２４５】
特定の実施形態において、上記のモチーフにおけるＡ、Ｂ、Ｃ及びＤは、２’−ＯＭｅ、２’−Ｆ、２’−ＭＯＥ、ＬＮＡ及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態において
、Ｄは、末端ヌクレオシドを表す。特定の実施形態において、そのような末端ヌクレオシドは、標的核酸とハイブリッド形成するように設計されていない（しかし、１個以上が偶然にハイブリッド形成することもある）。特定の実施形態において、各Ｄヌクレオチドの核酸塩基は、標的核酸の対応する位置における核酸塩基の素性に関係なく、アデニンである。特定の実施形態において、各Ｄヌクレオシドの核酸塩基は、チミンである。
【０２４６】
特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡとしての使用に特に適しているものが含まれるアンチセンス化合物は、修飾ヌクレオシド間連結を、オリゴヌクレオチドまたはその領域と共に、確定されたパターンまたは修飾ヌクレオシド間連結モチーフに配列して含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、交互ヌクレオシド間連結モチーフを有する領域を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、均一に修飾されたヌクレオシド間連結の領域を含む。特定のそのような実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結により均一に連結されている領域を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結により均一に連結されている。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択される。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択され、少なくとも１つのクレオシド間連結は、ホスホロチオエートである。
【０２４７】
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６連続ホスホロチオエートヌクレオシド間連結の少なくとも１ブロックを含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８連続ホスホロチオエートヌクレオシド間連結の少なくとも１ブロックを含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０連続ホスホロチオエートヌクレオシド間連結の少なくとも１ブロックを含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２連続ホスホロチオエートヌクレオシド間連結の少なくとも１ブロックを含む。特定のそのような実施形態において、少なくとも１つのそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端に位置する。特定のそのような実施形態において、少なくとも１つのそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端の３個のヌクレオシド内に位置する。
【０２４８】
本明細書に記載されている様々な糖モチーフのいずれかを有するオリゴヌクレオチドは、任意の連結モチーフを有することができる。例えば、上記に記載されたものが含まれるが、それらに限定されないオリゴヌクレオチドは、下記の表から非限定的に選択される連結モチーフを有することができる。
【０２４９】
【表１】
2020072713.tif 000009
【０２５０】
ｉｉ．ｓｉＲＮＡ化合物
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、二本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｉＲＮＡ）である。そのような実施形態において、一方または両方の鎖は、ｓｓＲＮＡについて上
記に記載された任意の修飾モチーフを含むことができる。特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡ化合物は、非修飾ＲＮＡでありうる。特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡ化合物は、非修飾ＲＮＡヌクレオシドを含むことができるが、修飾ヌクレオシド間連結を含むことができる。
【０２５１】
幾つかの実施形態は、二本鎖組成物に関し、それぞれの鎖は、１個以上の修飾または非修飾ヌクレオシドの位置によって確定されるモチーフを含む。特定の実施形態において、組成物は、完全または少なくとも部分的にハイブリッド形成して二重鎖領域を形成する第１と第２のオリゴマー化合物を含み、核酸標的と相補的であり、且つハイブリッド形成する領域を更に含む組成物が、提供される。そのような組成物は、核酸標的と完全または部分的な相補性を有するアンチセンス鎖である第１のオリゴマー化合物と、第１のオリゴマー化合物と相補性のある１つ以上の領域を有し、且つ少なくとも１つの二重鎖領域を形成するセンス鎖である第２のオリゴマー化合物とを含むことが、適している。
【０２５２】
幾つかの実施形態の組成物は、核酸標的とハイブリッド形成することにより遺伝子発現を調節し、正常な機能の欠失をもたらす。幾つかの実施形態において、標的核酸はＡＮＧＰＴＬ３である。特定の実施形態において、標的ＡＮＧＰＴＬ３の分解は、本明細書に開示されている組成物により形成される活性化されたＲＩＳＣ複合体により推進される。
【０２５３】
幾つかの実施形態は、一方の鎖が、例えば、ＲＩＳＣ（または、切断）複合体への逆鎖の優先的な装填に影響を及ぼすことに有用である、二本鎖組成物に向けられている。組成物は、選択された核酸分子を標的にすること及び１個以上の遺伝子の発現を調節することに有用である。幾つかの実施形態において、本発明の組成物は、標的ＲＮＡの部分とハイブリッド形成して、標的ＲＮＡの正常な機能の欠失をもたらす。
【０２５４】
特定の実施形態は、両方の鎖がヘミマー（ｈｅｍｉｍｅｒ）モチーフ、完全修飾モチーフ、位置修飾モチーフ、または交互モチーフを含む、二本鎖組成物に向けられている。本発明の組成物のそれぞれの鎖を修飾して、例えばｓｉＲＮＡ経路における特定の役割を実現することができる。それぞれの鎖における異なるモチーフ、またはそれぞれの鎖における異なる化学修飾を有する同じモチーフを使用することによって、アンチセンス鎖がＲＩＳＣ複合体を標的にし、同時にセンス鎖の組み込みを阻害することを可能にする。このモデルにおいて、それぞれの鎖は特定の役割が増強されるように独立して修飾されうる。アンチセンス鎖を５’末端で修飾して、ＲＩＳＣの１つの領域における役割を増強することができ、同時に３’末端を異なって修飾して、ＲＩＳＣの異なる領域における役割を増強することができる。
【０２５５】
二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、自己相補的センス及びアンチセンス領域を含む二本鎖ポリヌクレオチド分子であり、アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその部分に対応するヌクレオチド配列を有する。二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、２個の別個のオリゴヌクレオチドから組み立てることができ、一方の鎖はセンス鎖であり、他方はアンチセンス鎖であり、アンチセンス及びセンス鎖は、自己相補的である（すなわち、それぞれの鎖は、他方の鎖のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、例えば、アンチセンス鎖及びセンス鎖は、二重鎖または二本鎖構造を形成する場合、例えば、二本鎖領域が、約１５〜３０個、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個の塩基対である場合、アンチセンス鎖は、標的核酸分子またはその部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、標的核酸配列またはその部分に対応するヌクレオチド配列を含む（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド分子の約１５〜約２５個、またはそれ以上のヌクレオチドは、標的核酸またはその部分と相補的である）。あるいは、二本鎖オリ
ゴヌクレオチドは、一本鎖オリゴヌクレオチドから組み立てられ、ｓｉＲＮＡの自己相補的センス及びアンチセンス領域は、核酸に基づいた、または非核酸に基づいたリンカーによって連結される。
【０２５６】
二本鎖オリゴヌクレオチドは、自己相補的センス及びアンチセンス領域を有する、二重鎖、非対称二重鎖、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造を持つポリヌクレオチドであることができ、アンチセンス領域は、別個の標的核酸分子またはその部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその部分に対応するヌクレオチド配列を有する。二本鎖オリゴヌクレオチドは、２つ以上のループ構造と、自己相補的センス及びアンチセンス領域を含むステムとを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドであることができ、アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその部分に対応するヌクレオチド配列を有し、環状ポリヌクレオチドは、インビボまたはインビトロで処理されて、ＲＮＡｉを媒介することができる活性ｓｉＲＮＡ分子を生じることができる。
【０２５７】
特定の実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、別個のセンス及びアンチセ
ンス配列または領域を含み、センス及びアンチセンス領域は、当該技術において既知のヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカーにより共有結合的に連結されている、あるいはイオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、及び／またはスタッキング相互作用により非共有結合的に連結されている。特定の実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。別の実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現の阻害を引き起こすように、標的遺伝子のヌクレオチド配列と相互作用する。
【０２５８】
本明細書で使用されるとき、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡのみを含有する分子に限定される必要はなく、化学的に修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドを更に包含する。特定の実施形態において、低分子干渉核酸分子は、２’−ヒドロキシ（２’−ＯＨ）含有ヌクレオチドを欠いている。特定の実施形態において、低分子干渉核酸は、場合によりリボヌクレオチド（例えば、２’−ＯＨ基を有するヌクレオチド）を何も含まない。しかし、ＲＮＡｉを支持するために分子内にリボヌクレオチドの存在を必要としないような二本鎖オリゴヌクレオチドは、２’−ＯＨ基を有する１個以上のヌクレオチドを含有する、結合リンカー、または他の結合もしくは会合している基、部分、もしくは鎖を有することができる。場合により、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約５、１０、２０、３０、４０、または５０％のヌクレオチド部分にリボヌクレオチドを含むことができる。本明細書で使用されるとき、ｓｉＲＮＡという用語は、配列特異的ＲＮＡｉ、例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子干渉オリゴヌクレオチド、低分子干渉核酸、低分子干渉修飾オリゴヌクレオチド、化学修飾ｓｉＲＮＡ、転写後遺伝子抑制ＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）などを媒介することができる核酸分子を記載さするために使用される他の用語と同等であることが意図される。加えて、本明細書で使用されるとき、ＲＮＡｉという用語は、転写後遺伝子発現抑制、翻訳阻害、または後成学のような配列特異的ＲＮＡ干渉を記載するために使用される他の用語と同等であることが意図される。例えば、二本鎖オリゴヌクレオチドを使用して、転写後レベル及び転写前レベルの両方において遺伝子を後成的に発現抑制することができる。非限定例において、本発明のｓｉＲＮＡ分子による遺伝子発現の後成的制御は、クロマチン構造のｓｉＲＮＡ媒介修飾またはメチル化パターンによりもたらされて、遺伝子発現を変更することができる（例えば、Ｖｅｒｄｅｌ
ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３,６７２−６７６；Ｐａｌ−Ｂｈａ
ｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．,２００４,Ｓｃｉｅｎｃｅ,３０３,６６９−６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ,２００２,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２９７,１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅ  ｅｔ  ａｌ．
,２００２,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２９７,１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ,２００２,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２９７,２２１５−２２１８；及びＨａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．,２００２,Ｓｃｉｅｎｃｅ,２９７,２２３２−２２３７を参照すること）。
【０２５９】
本明細書において提供される幾つかの実施形態の化合物及び組成物は、例えば、自己相補的配列を有する単一のＲＮＡ鎖が、ＲＮＡの２つの別々の鎖を含む二本鎖立体構造または二重鎖ｄｓＲＮＡエフェクター分子を想定できる、「ヘアピン」またはステムループ二本鎖ＲＮＡエフェクター分子を含むｄｓＲＮＡ媒介遺伝子発現抑制またはＲＮＡｉ機構により、ＡＮＧＰＴＬ３を標的にできることが考慮される。様々な実施形態において、ｄｓＲＮＡは、例えば、２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４及び１９９９年４月２１日出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号に開示されているＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドのように、全体がリボヌクレオチドからなる、またはリボヌクレオチドとデオキシヌクレオチドの混合物からなる。ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡエフェクター分子は、分子の１つのセグメントのヌクレオチドが、分子の別のセグメントのヌクレオチドと塩基対形成するように、自己相補的な領域を有する単一の分子でありうる。様々な実施形態において、単一の分子からなるｄｓＲＮＡは、全体的がリボヌクレオチドからなる、またはデオキシリボヌクレオチドの領域と相補的であるリボヌクレオチドの領域を含む。あるいは、ｄｓＲＮＡは、互いに相補的な領域を有する２つの異なる鎖を含むことができる。
【０２６０】
様々な実施形態において、両方の鎖は、全体がリボヌクレオチドからなる、１つの鎖は、全体がリボヌクレオチドからなる、１つの鎖は、全体がデオキシリボヌクレオチドからなる、または一方もしくは両方の鎖は、リボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物を含有する。特定の実施形態において、相補性領域は、互いに及び標的核酸配列と、少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％相補的である。特定の実施形態において、二本鎖立体構造に存在在するｄｓＲＮＡの領域は、少なくとも１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、５０、７５，１００、２００、５００、１０００、２０００、または５０００個のヌクレオチドを含む、あるいはｄｓＲＮＡにおいて表されるｃＤＮＡまたは他の標的核酸配列の全てのヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、ｄｓＲＮＡは、一本鎖末端のように、一本鎖領域を何も含有しない、またはｄｓＲＮＡは、ヘアピンである。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、１つ以上の一本鎖領域またはオーバーハングを有する。特定の実施形態において、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドは、アンチセンス鎖または領域である（例えば、標的核酸に少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％の相補性を有する）ＤＮＡ鎖または領域、及びセンス鎖または領域である（例えば、標的核酸に少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％の同一性を有する）ＲＮＡ鎖または領域を含み、逆の場合も同じである。
【０２６１】
様々な実施形態において、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドは、本明細書に記載されている、または２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４もしくは１９９９年４月２１日出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号に記載されているような酵素または化学合成方法を使用して、インビトロで作製される。他の実施形態において、インビトロで合成されるＤＮＡ鎖は、細胞におけるＤＮＡ鎖の形質転換の前、後、またはそれと同時発生的に、インビボまたはインビトロで作製されたＲＮＡ鎖と複合体を形成する。なお他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、センス及びアンチセンス領域を含有する単一の環状核酸である、またはｄｓＲＮＡは、環状核酸と、第２の環状核酸または線状核酸のいずれかを含む（例えば、２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号を参照すること）。例示的な環状核酸は、ヌクレオチドの遊離５’ホスホリル基が別のヌクレオチドの２’ヒドロキシル基と折り返しで連結する、投げ縄構造を含む。
【０２６２】
他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、糖の２’位がハロゲン（例えば、フッ素基）を含有する、またはアルコキシ基（例えば、メトキシ基）を含有する、１個以上の修飾ヌクレオチドを含み、対応する２’位が水素またはヒドロキシル基を含有する対応するｄｓＲＮＡと比較してｄｓＲＮＡのインビトロまたはインビボにおける半減期を増加する。なお他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、天然に生じるホスホジエステル連結以外の近接ヌクレオチドの間に１つ以上の連結を含む。そのような連結の例には、ホスホルアミド、ホスホロチオエート及びホスホロジチオエート連結が含まれる。ｄｓＲＮＡは、米国特許第６，６７３，６６１号に教示されているように、化学的に修飾された核酸分子でもありうる。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、例えば、２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４及び１９９９年４月２１日出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号に開示されているように、１または２つのキャップされた鎖を含有する。
【０２６３】
他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、ＷＯ００／６３３６４に開示されているｄｓＲＮＡ分子の少なくとも部分的なもののいずれか、並びに米国仮出願第６０／３９９，９９８号、米国仮出願第６０／４１９，５３２号及びＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３３４６６に開示されているｄｓＲＮＡ分子のいずれかであることができ、これらの教示は、参照として本明細書に組み込まれる。ｄｓＲＮＡのいずれかは、本明細書に記載されている方法またはＷＯ００／６３３６４に記載されているような標準的な方法を使用して、インビトロまたはインビボにおいて発現させることができる。
【０２６４】
占有
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、ＲＮアーゼＨを介して標的核酸の切断をもたらすこと、またはＲＩＳＣ経路を介して切断もしくは隔離をもたらすことが予測されない。特定のそのような実施形態において、アンチセンス活性は、占有によってもたらされることがあり、ハイブリッド形成したアンチセンス化合物の存在は、標的核酸の活性を妨げる。特定のそのような実施形態において、アンチセンス化合物は、均一に修飾されうる、または修飾の混合、並びに／または修飾及び非修飾ヌクレオシドを含みうる。
【０２６５】
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
ＡＮＧＰＴＬ３をコードするヌクレオチド配列には、以下のＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿０１４４９５．２（配列番号１として組み込まれる）またはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＴ＿０３２９７７．９ヌクレオチド３３０３２００１〜３３０４６０００（配列番号２として組み込まれる）に記載されているヒト配列が、限定されることなく含まれる。本明細書に含有されている実施例のそれぞれの配列番号に記載されている配列は、糖部分、ヌクレオシド間連結、または核酸塩基に対するあらゆる修飾から独立していることが理解される。このように、配列番号により確定されたアンチセンス化合物は、糖部分、ヌクレオシド間連結、または核酸塩基に対して１つ以上の修飾を独立して含むことができる。ＩＳＩＳ番号により記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列とモチーフの組み合わせを示す。
【０２６６】
特定の実施形態において、標的領域は、標的核酸の構造的に確定された領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロン接合部、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域、または他の確定された核酸領域を包含することができる。ＡＮＧＰＴＬ３の構造的に確定された領域は、ＮＣＢＩのような配列データベースの受入番号により得ることができ、そのような情報は、本明細書に参照として組み込まれる。特定の実施形態において、標的領域は、標的領域内の１つの標的セグメントの５’標的部位から標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を、包含することができる。
【０２６７】
特定の実施形態において、「標的セグメント」は、核酸内の標的領域の小さな下位部分
である。例えば、標的セグメントは、１つ以上のアンチセンス化合物が標的にする標的核酸のヌクレオチドの配列でありうる。「５’標的部位」または「５’開始部位」は、標的セグメントの最も５’にあるヌクレオチドを指す。「３’標的部位」または「３’終止部位」は、標的セグメントの最も３’にあるヌクレオチドを指す。
【０２６８】
標的化には、アンチセンス化合物が、望ましい効果が生じるようにハイブリッド形成する少なくとも１つの標的セグメントを決定することが含まれる。特定の実施形態において、望ましい効果は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの低減である。特定の実施形態において、望ましい効果は、標的核酸によりコードされたタンパク質のレベルの低減、または標的核酸に関連する表現型の変化である。
【０２６９】
標的領域は、１つ以上の標的セグメントを含有することができる。標的領域内の複数の標的セグメントは、重複しうる。あるいは、これらは非重複でありうる。特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、約３００個以下のヌクレオチドにより隔てられている。特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、多数のヌクレオチドにより、すなわち、標的核酸の約２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０個の、これら以下の、およそこれら以下のヌクレオチド、または前述の値の任意の２つにより確定された領域により、隔てられている。特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸の５個以下、または約５個以下のヌクレオチドにより隔てられている。特定の実施形態において、標的セグメントは隣接している。本明細書に列挙されている５’標的部位または３’標的部位のいずれかの出発核酸を有する範囲により確定されている標的領域が、考慮される。
【０２７０】
適切な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソン、またはエクソン／イントロン接合部内に見出すことができる。開始コドンまたは終止コドンを含有する標的セグメントも、適切な標的セグメントである。適切な標的セグメントには、開始コドンまたは終止コドンのような特定の構造的に確定された領域を特異的に除くことができる。
【０２７１】
適切な標的セグメントの決定には、ゲノム全体にわたる標的核酸の配列と、他の配列との比較が含まれうる。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して、異なる核酸の間で類似性のある領域を特定することができる。この比較は、選択された標的核酸以外の配列（すなわち、非標的またはオフターゲット配列）と非特異的にハイブリッド形成しうるアンチセンス化合物配列の選択を、防止することができる。
【０２７２】
活性標的領域内のアンチセンス化合物の活性に変動がありうる（例えば、標的核酸レベルの低減率により確定される）。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルの低減は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質発現の阻害を示す。ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質のレベルの低減も、標的ｍＲＮＡ発現の阻害を示す。更に、コレステロール、ＬＤＬ、トリグリセリド、またはグルコースのレベルの低減のような表現型の変化は、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ及び／またはタンパク質発現の阻害を示すことができる。
【０２７３】
ハイブリッド形成
幾つかの実施形態において、ハイブリッド形成は、本明細書に開示されているアンチセンス化合物とＡＮＧＰＴＬ３核酸の間に生じる。ハイブリッド形成の最も一般的な機構は、核酸分子の相補的核酸塩基の間の水素結合（例えば、ワトソン・クリック、フーグスティーン、または逆フーグスティーン水素結合）を伴う。
【０２７４】
ハイブリッド形成は、異なる条件下で生じうる。厳密条件は、配列依存性であり、ハイブリッド形成する核酸の性質及び組成によって決定される。
【０２７５】
配列が標的核酸と特異的にハイブリッド形成するかを決定する方法は、当該技術において良く知られている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄ．，２００１）。特定の実施形態において、本明細書において提供されるアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３核酸と特異的にハイブリッド形成する。
【０２７６】
相補性
アンチセンス化合物及び標的核酸は、アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、望ましい効果（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３核酸のような標的核酸のアンチセンス阻害）が生じるように、標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合できる場合、互いに相補的である。
【０２７７】
アンチセンス化合物は、介在または近接セグメントがハイブリッド形成の事象（例えば、ループ構造、不適合、またはヘアピン構造）に関与しないように、ＡＮＧＰＴＬ３核酸の１つ以上のセグメントとハイブリッド形成することができる。
【０２７８】
特定の実施形態において、本明細書において提供されるアンチセンス化合物またはその特定の部分は、ＡＮＧＰＴＬ３核酸、標的領域、標的セグメント、またはこれらの特定の部分に７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％相補的である、または少なくともこれらの率の相補性がある。特定の実施形態において、本明細書において提供されるアンチセンス化合物またはその特定の部分は、配列番号１〜２の１つ以上の配列に７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％相補的である、または少なくともこれらの率の相補性がある。アンチセンス化合物と標的核酸の相補性の率は、日常的な方法を使用して決定することができる。
【０２７９】
例えば、アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基の１８個が標的領域と相補的であり、したがって特異的にハイブリッド形成するアンチセンス化合物は、９０パーセントの相補性を表す。この例では、残りの非相補的核酸塩基は、群を形成する、または相補的核酸塩基に散在することができ、互いに、もしくは相補的核酸塩基に隣接する必要はない。このように、標的核酸と完全に相補的な２つの領域が隣接している４個の非相補的核酸塩基を有する、１８個の核酸塩基長さであるアンチセンス化合物は、標的核酸と７７．８％の全体的な相補性を有し、したがって本発明の範囲内である。アンチセンス化合物と標的核酸の領域との相補性の率は、当該技術に既知のＢＬＡＳＴプログラム（塩基局所整列検索ツール（ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ））及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを日常的に使用して決定することができる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３  ４１０；Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９  ６５６）。相同性、配列同一性、または相補性の率は、例えば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズムを使用するＧａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓ．）により、初期設定を使用して、決定することができる（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２  ４８９）。
【０２８０】
特定の実施形態において、本明細書に提供されるアンチセンス化合物またはその特定の部分は、標的核酸またはその特定の部分と完全に相補的（すなわち、１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３核酸、または標的領域、またはそ
の標的セグメントもしくは標的配列と完全に相補的でありうる。本明細書で使用されるとき、「完全に相補的」とは、アンチセンス化合物のそれぞれの核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と正確に塩基対形成できることを意味する。例えば、２０核酸塩基アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物と完全に相補的である標的核酸の対応する２０核酸塩基部分がある限り、４００個の核酸塩基長さの標的配列と完全に相補的である。完全に相補的を、第１及び／または第２の核酸の特定の部分を参照して使用することもできる。  
例えば、３０核酸塩基アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分は、４００個の核酸塩基
長さである標的配列と「完全に相補的」でありうる。３０核酸塩基オリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は、標的配列が、それぞれの核酸塩基がアンチセンス化合物の２０核酸塩基部分と相補的である対応する２０核酸塩基部分を有する場合、標的配列と完全に相補的である。同時に、全ての３０核酸塩基アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の残りの１０個の核酸塩基も標的配列と相補的であるかによっては、標的配列と完全に相補的でありうる。
【０２８１】
非相補的核酸塩基の位置は、アンチセンス化合物の５’末端または３’末端でありうる。あるいは、非相補的核酸塩基または核酸塩基は、アンチセンス化合物の内部位置でありうる。２個以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、これらは隣接（すなわち、連結）しうる、または非隣接でありうる。１つの実施形態において、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメントに位置する。
【０２８２】
特定の実施形態において、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０個の核酸塩基長さである、またはこれらの数までの長さであるアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３核酸またはその特定の部分のような標的核酸に対して４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の非相補的核酸塩基を含む。
【０２８３】
特定の実施形態において、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０個の核酸塩基長さである、またはこれらの数までの長さであるアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３核酸またはその特定の部分のような標的核酸に対して４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の非相補的核酸塩基を含む。
【０２８４】
本明細書において提供されるアンチセンス化合物には、標的核酸の部分に相補的であるものも含まれる。本明細書で使用されるとき、「部分」は、標的核酸の領域またはセグメント内の確定された数の隣接（すなわち、連結）核酸塩基を指す。「部分」は、アンチセンス化合物の確定された数の隣接核酸塩基を指すこともできる。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分と相補的である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１０核酸塩基部分と相補的である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分と相補的である。標的セグメントの少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、もしくはそれ以上の核酸塩基部分、またはこれらの値の任意の２つにより確定された範囲に相補的であるアンチセンス化合物も、考慮される。
【０２８５】
同一性
本明細書において提供されるアンチセンス化合物は、特定のヌクレオチド配列、配列番号、または特定のＩＳＩＳ番号により表される化合物の配列、もしくはその部分と確定された同一性の率を有することもできる。本明細書で使用されるとき、アンチセンス化合物は、同じ核酸塩基対形成能力を有する場合、本明細書に開示されている配列と同一である。例えば、開示されているＤＮＡ配列にチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシルとチミジンの両方がアデニンと対形成するので、ＤＮＡ配列と同一であると考
慮される。本明細書に記載されているアンチセンス化合物の短縮型及び延長型、並びに本明細書において提供されるアンチセンス化合物に対して非同一塩基を有する化合物も、考慮される。非同一塩基は、互いに近接しうる、またはアンチセンス化合物の全体に分散されうる。アンチセンス化合物の正確な同一性は、比較される配列に対して同一塩基対形成を有する塩基の数によって計算される。
【０２８６】
特定の実施形態において、アンチセンス化合物またはその部分は、本明細書に開示されているアンチセンス化合物、または配列番号、またはその部分の１つ以上に少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である。
【０２８７】
修飾
ヌクレオシドは、塩基と糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても知られている）部分は、通常、複素環式塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合的に連結しているリン酸基を更に有するヌクレオシドである。ペントフルラノシル糖を含むこれらのヌクレオシドでは、リン酸基は、糖の２’、３’、または５’ヒドロキシル部分に連結することができる。オリゴヌクレオチドは、近接ヌクレオシドの互いの共有結合的連結を介して、線状ポリマーオリゴヌクレオチドを形成することによって形成される。オリゴヌクレオチド構造内において、リン酸基は、一般にオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結を形成するものとして参照される。
【０２８８】
アンチセンス化合物への修飾は、ヌクレオシド間連結、糖部分または核酸塩基における置換または変化を包含する。修飾されたアンチセンス化合物は、例えば、細胞取り込みの増強、核酸標的への親和性の増強、ヌクレアーゼの存在下での安定性の増加、または阻害活性の増加のような望ましい特性のため、多くの場合に未変性形態よりも好ましい。
【０２８９】
化学修飾ヌクレオシドを用いて、標的核酸への短縮型または切断型アンチセンスオリゴヌクレオチドの結合親和性を増加することもできる。したがって、匹敵する結果を、そのような化学的に修飾されたヌクレオシドを有する短縮型アンチセンス化合物から、多くの場合に得ることができる。
【０２９０】
修飾ヌクレオシド間連結
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に生じるヌクレオシド間連結は、３’から５’へのホスホジエステル連結である。１つ以上の修飾された、すなわち非天然に生じるヌクレオシド間連結を有するアンチセンス化合物は、例えば、細胞取り込みの増強、核酸標的への親和性の増強及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増加のような望ましい特性のため、天然に生じるヌクレオシド間連結を有するアンチセンス化合物より、多くの場合に選択される。
【０２９１】
修飾ヌクレオシド間連結を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間連結、並びにリン原子を有さないヌクレオシド間連結を含む。代表的なリン含有ヌクレオシド間連結には、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデート及びホスホロチオエートが含まれるが、これらに限定されない。リン含有及び非リン含有連結の調製方法は、良く知られている。
【０２９２】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾ヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態において、修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物のそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である
【０２９３】
修飾糖部分
本発明のアンチセンス化合物は、場合により、糖基が修飾されている１個以上のヌクレオシドを含有する。そのような糖修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の増強、結合親和性の増加、または他の有益な生物学的特性を、アンチセンス化合物に付与することができる。特定の実施形態において、ヌクレオシドは、化学的に修飾されたリボフラノース環部分を含む。化学的に修飾されたリボフラノース環の例には、置換基（非ジェミナル環原子を架橋して二環式核酸（ＢＮＡ）を形成する、５’及び２’置換基を含む）の付加、Ｓ、Ｎ（Ｒ）またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、もしくは保護基である）によるリボシル環酸素原子の交換、並びにこれらの組み合わせが、限定されることなく含まれる。化学的に修飾された糖の例には、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示されている５’，２’−ビス置換ヌクレオシドついては２００８年８月２１日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照すること）、または２’位における更なる置換を伴う、Ｓによるリボシル環酸素原子の交換（２００５年６月１６日に公開された米国特許出願公開ＵＳ２００５−０１３０９２３を参照すること）、あるいはＢＮＡの５’置換（ＬＮＡが例えば５’−メチルまたは５’−ビニル基で置換されている、２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１を参照すること）が含まれる。
【０２９４】
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例には、５’−ビニル、５’−メチル（ＲまたはＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドが、限定されることなく含まれる。２’位の置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択されることもでき、ここで各Ｒ１、Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈ、または置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。
【０２９５】
本明細書で使用されるとき、「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖分を含む修飾ヌクレオシドを指す。二環式核酸（ＢＮＡ）の例には、４’と２’のリボシル環原子の間に架橋を含むヌクレオシドが、限定されることなく含まれる。特定の実施形態において、本明細書において提供されるアンチセンス化合物は、１個以上のＢＮＡヌクレオシドを含み、ここで架橋は、式：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’及び４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’（並びにその類縁体、２００８年７月１５日発行の米国特許第７，３９９，８４５を参照すること）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’（及びその類縁体、２００９年１月８日に公開のＷＯ／２００９／００６４７８として公開されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２を参照すること）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’（及びその類縁体、２００８年１２月１１日に公開のＷＯ／２００８／１５０７２９として公開されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１を参照すること）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（２００４年９月２日に公開された米国特許出願ＵＳ２００４−０１７１５７０を参照すること）；ＲがＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは保護基である４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号を参照すること）；４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４を参照すること）；並びに４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’（及びその類縁体、２００８年１２月８日公開のＷＯ２００８／１５４４０１として公開されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４を参照すること）の１つ以上を含む。
【０２９６】
更なる二環式ヌクレオシドは、出版された文献に報告されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）
８３６２−８３７９；Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２；Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１；Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１−７；Ｏｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９−２４３；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０；Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９；米国特許第７，３９９，８４５号；同第７，０５３，２０７号；同第７，０３４，１３３号；同第６，７９４，４９９号；同第６，７７０，７４８号；同第６，６７０，４６１号；同第６，５２５，１９１号；同第６，２６８，４９０号；米国特許公開ＵＳ２００８−００３９６１８；ＵＳ２００７−０２８７８３１；ＵＳ２００４−０１７１５７０；米国特許出願第１２／１２９，１５４号；同第６１／０９９，８４４号；同第６１／０９７，７８７号；同第６１／０８６，２３１号；同第６１／０５６，５６４号；同第６１／０２６，９９８号；同第６１／０２６，９９５号；同第６０／９８９，５７４号；国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１；ＷＯ２００５／０２１５７０；ＷＯ  ２００４／１０６３５６；ＷＯ９４／１４２２６；並びにＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２；ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４；及びＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１を参照すること）。例えばα−Ｌ−リボフラノース及びβ−Ｄ−リボフラノースを含む１つ以上の立体化学糖配置を有する前述の二環式ヌクレオシドが、それぞれ調製されうる（ＷＯ９９／１４２２６として１９９９年３月２５日に公開されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３を参照すること）。
【０２９７】
本明細書で使用されるとき、「単環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分ではない修飾糖部分を含むヌクレオシドを指す。特定の実施形態において、ヌクレオシドの糖部分または糖部分類縁体を、任意の位置で修飾または置換することができる。
【０２９８】
本明細書で使用されるとき、「４’−２’二環式ヌクレオシド」または「４’〜２’二環式ヌクレオシド」は、糖環の２’炭素原子と４’炭素原子を接続する、フラノース環の２個の炭素原子を接続する架橋を含むフラノース環を含む、二環式ヌクレオシドを指す。
【０２９９】
特定の実施形態において、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分には、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−及び−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１つ、または１〜４つの連結基を含む架橋を限定されることなく含む、ペントフルラノシル糖部分の４’と２’炭素原子の間に少なくとも１つの架橋を有する化合物が、限定されることなく含まれ、ここで、ｘは、０、１、または２であり、ｎは、１、２、３、または４であり、各Ｒａ及びＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、
各Ｊ１及びＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置
換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
【０３００】
特定の実施形態において、二環式糖部分の架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−、または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。特定の実施形態において、架橋は、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、ここで各Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０３０１】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、異性体配置により更に確定される。例えば、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’架橋を含むヌクレオシドは、α−Ｌ配置またはβ−Ｄ配置でありうる。以前は、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡが、アンチセンス活性を示したアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれた（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
【０３０２】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドには、４’〜２’架橋を有するものが含まれ、ここでそのような架橋には、α−Ｌ−４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’、β−Ｄ−４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｓ−２’、４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’、４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’及び４’−（ＣＨ２）３−２’が、限定されることなく含まれ、Ｒは、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０３０３】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、下記式を有し、
【０３０４】
【化８】
2020072713.tif 000010
【０３０５】
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−、または−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり、
Ｒｃは、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、またはアミノ保護基であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合である。
【０３０６】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、下記式を有し、
【０３０７】
【化９】
2020072713.tif 000011
【０３０８】
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
Ｚａは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオール、または置換チオールである。
【０３０９】
１つの実施形態において、それぞれの置換基は、独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基により一または多置換され、ここで、各Ｊｃ、Ｊｄ及びＪｅは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、ＯまたはＮＪｃである。
【０３１０】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、下記式を有し、
【０３１１】
【化１０】
2020072713.tif 000012
【０３１２】
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
Ｚｂは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。
【０３１３】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、下記式を有し、
【０３１４】
【化１１】
2020072713.tif 000013
【０３１５】
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
Ｒｄは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１〜Ｃ６アミノアルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アミノアルキルである。
【０３１６】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、下記式を有し、
【０３１７】
【化１２】
2020072713.tif 000014
【０３１８】
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆは、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、
あるいは、ｑｅ及びｑｆは、一緒になって、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、
ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０３１９】
４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋を有するアデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン及びウラシル二環式ヌクレオシドの合成及び調製が、これらのオリゴマー化及び核酸認識特性と共に記載されている（Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０）。二環式ヌクレオシドの合成も、ＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６に記載されている。
【０３２０】
４’−ＣＨ２−Ｏ−２’及び４’−ＣＨ２−Ｓ−２’のような、４’〜２’架橋基を有する様々な二環式ヌクレオシドの類縁体も調製されている（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２）。核酸ポリメラーゼの基質として使用される二環式ヌクレオシドを含むオリゴデオキシヌクレオチド二重鎖の調製も、記載されている（Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９９／１
４２２６）。更に、新規の立体構造拘束型高親和性オリゴヌクレオチド類縁体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成が、当該技術に記載されている（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９）。加えて、２’−アミノ−及び２’−メチルアミノ−ＢＮＡが調製されており、相補的ＲＮＡ及びＤＮＡ鎖を有するこれらの二重鎖の熱安定性が、既に報告されている。
【０３２１】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、下記式を有し、
【０３２２】
【化１３】
2020072713.tif 000015
【０３２３】
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分、または支持媒体への共有結合であり、
各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、またはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、
ｑｉとｑｊ、またはｑｌとｑｋは、一緒になって、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、ここでｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０３２４】
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋及びアルケニル類縁体架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’を有する１つの炭素環式二環式ヌクレオシドが、記載されている（Ｆｒｉｅｒ  ｅｔ
ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３及びＡｌｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、これらのオリゴマー化及び生化学研究と共に記載されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９）。
【０３２５】
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドには、下記に描写されているような、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも呼ばれる）、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）ビニルＢＮＡが含まれるが、これらに限定されない。
【０３２６】
【化１４】
2020072713.tif 000016
【０３２７】
ここで、Ｂｘは、塩基部分であり、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはＣ１〜Ｃ６アルコキシである。
【０３２８】
本明細書で使用されるとき、用語「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾ＴＨＰヌクレオシド」は、正常なヌクレオシドにおいてペントフルラノシル残基を置換した６員テトラヒドロピラン「糖」を有するヌクレオシドを意味し、糖代替物と呼ぶことができる。修飾ＴＨＰヌクレオシドには、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール（ａｎｉｔｏｌ）核酸（ＡＮＡ）、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）核酸（ＭＮＡ）と当該技術において呼ばれるもの（Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１−８５４）、または下記に例示されているようなテトラヒドロピラニル環系を有するフルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３２９】
【化１５】
2020072713.tif 000017
【０３３０】
特定の実施形態において、下記式を有する糖代替物が選択され、
【０３３１】
【化１６】
2020072713.tif 000018
【０３３２】
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は、それぞれ独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類縁体をオリゴ
マー化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、あるいはＴ３及びＴ４の一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類縁体をオリゴマー化合物またはオリゴヌクレオチドに連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結共役基、または５’もしくは３’末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１及びＲ２の一方は、水素であり、他方は、ハロゲン、置換または非置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮから選択され、ここで、ＸはＯ、ＳまたはＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【０３３３】
特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれＨである。特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７の少なくとも１つは、Ｈ以外である。特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７の少なくとも１つは、メチルである。特定の実施形態において、Ｒ１及びＲ２の一方がＦであるＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態において、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はＨであるか、Ｒ１はメトキシであり、Ｒ２はＨであるか、Ｒ１はメトキシエトキシであり、Ｒ２はＨである。
【０３３４】
特定の実施形態において、糖代替物は、５個を超える原子及び１個を超えるヘテロ原子を有する環を含む。例えば、モルホリノ糖部分を含むヌクレオシド及びオリゴマー化合物におけるこれらの使用が、報告されている（例えば、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３−４５１０、並びに米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号及び同第５，０３４，５０６号を参照すること）。本明細書で使用されるとき、用語「モルホリノ」は、以下の式を有する糖代替物を意味する。
【０３３５】
【化１７】
2020072713.tif 000019
【０３３６】
特定の実施形態において、モルホリノは、例えば上記のモルホリノ構造において様々な置換基を付加する、または変更することによって修飾することができる。そのような糖代替物は、本明細書において「修飾モルホリノ」と呼ばれる。
【０３３７】
２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示されている５’，２’−ビス置換ヌクレオシドついては２００８年８月２１日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照すること）、並びにＳによるリボシル環酸素原子の交換及び２’位における更なる置換（２００５年６月１６日に公開された米国特許出願公開ＵＳ２００５−０１３０９２３を参照すること）、あるいは二環式核酸の５’置換（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’二環式ヌクレオシドが５’−メチルまたは５’−ビニル基により５’位で置換されている、２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１を参照すること）のような修飾の組み合わせも、限定されることなく提供される。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、これらのオリゴマー化及び生化学研究と共に記載されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９を参照すること）。
【０３３８】
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、１個以上の修飾シクロヘキセニルヌクレオシドを含み、これは、天然に生じるヌクレオシドのペントフラノシル残基の代わりに６員シクロヘキセニルを有するヌクレオシドである。修飾シクロヘキセニルヌクレオシドには、当該技術に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない（例えば、２０１０年４月１０日公開の共同所有公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０１０／０３６６９６；Ｒｏｂｅｙｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０（６），１９７９−１９８４；Ｈｏｒｖaｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔ
ｔｅｒｓ，２００７，４８，３６２１−３６２３；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（３０），９３４０−９３４８；Ｇｕ  ｅｔ  ａｌ．，，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２００５，２４（５−７），９９３−９９８；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，３３（８），２４５２−２４６３；Ｒｏｂｅｙｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ，Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｆ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００５，Ｆ６１（６），５８５−５８６；Ｇｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０（９），２１１１−２１２３；Ｇｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００３，１３（６），４７９−４８９；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００３，６８，４４９９−４５０５；Ｖｅｒｂｅｕｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，２９（２４），４９４１−４９４７；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００１，６６，８４７８−８２；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２００１，２０（４−７），７８５−７８８；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．，２０００，１２２，８５９５−８６０２；公開ＰＣＴ出願ＷＯ０６／０４７８４２；及び公開ＰＣＴ出願ＷＯ０１／０４９６８７を参照すること。それぞれの文章は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる）。特定の修飾シクロヘキセニルヌクレオシドは、式Ｘを有する。
【０３３９】
【化１８】
2020072713.tif 000020
【０３４０】
式Ｘの前記少なくとも１つのシクロヘキセニルヌクレオシド類縁体におけるそれぞれから独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は、それぞれ独立して、シクロヘキセニルヌクレオシド類縁体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、あるいはＴ３及びＴ４の一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類縁体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、連結共役基、または５’もしくは３’末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、ｑ７、ｑ８及びｑ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または他の糖置換基である。
【０３４１】
多くの他の単環式、二環式及び三環式環系が当該技術において知られており、本明細書に提供されているように、オリゴマー化合物への組み込みのためにヌクレオシドを修飾するのに使用できる糖代替物として適している（例えば、総説：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ  Ｊ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１−８５４を参照すること）。そのような環系は、様々な追加の置換を受けて、活性を更に増強させることができる。
【０３４２】
本明細書で使用されるとき、「２’修飾糖」は、２’位が修飾されているフラノシル糖を意味する。特定の実施形態において、そのような修飾には、置換及び非置換アルコキシ、置換及び非置換チオアルキル、置換及び非置換アミノアルキル、置換及び非置換アルキル、置換及び非置換アリル、並びに置換及び非置換アルキニルが含まれるが、これらに限定されないハロゲン化物から選択される置換基が含まれる。特定の実施形態において、２’修飾は、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２が含まれるが、これらに限定されない置換基から選択され、ここでｎ及びｍは、１〜約１０である。他の２’置換基も、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリルまたはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、介入物、アンチセンス化合物の薬物動態特性を改善する基または薬力学特性を改善する基、及び同様の特性を有する他の置換基から選択されうる。特定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４−１２０００）。そのような２’−ＭＯＥ置換は、非修飾ヌクレオシドと比較して、並びに２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル及びＯ−アミノプロピルのような他の修飾ヌクレオシドと比較して、改善された結合親和性を有すると記載されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、インビボにおける使用が有望である、遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることも示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４；Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６；Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７；及びＡｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６）。
【０３４３】
本明細書で使用されるとき、「２’修飾」または「２’置換」は、ＨまたはＯＨ以外の置換基を２’位に含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’修飾ヌクレオシドには、糖環の２個の炭素原子を接続する架橋が糖環の２’炭素と別の炭素を接続する、二環式ヌクレオシド、及びアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）のような非架橋２’置換基を有するヌクレオシドが含まれるが、これらに限定されず、ここで各Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。２’修飾ヌクレオシドは、他の修飾を、例えば糖の他の位置に、及び／または核酸塩基に更に含むことができる。
【０３４４】
本明細書で使用されるとき、「２’−Ｆ」は、フルオロ基を糖環の２’位に含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０３４５】
本明細書で使用されるとき、「２’−ＯＭｅ」または「２’−ＯＣＨ３」、「２’−Ｏ−メチル」または「２’−メトキシ」は、それぞれ、−ＯＣＨ３基を糖環の２’位に含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０３４６】
本明細書で使用されるとき、「ＭＯＥ」、または「２’−ＭＯＥ」、または「２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」、または「２’−Ｏ−メトキシエチル」は、それぞれ、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を糖環の２’位に含む糖を含むヌクレオシドを指す。
【０３４７】
修飾糖を調製する方法は、当業者には良く知られている。そのような修飾糖の調製を教示する幾つかの代表的な米国特許には、Ｕ．Ｓ．４，９８１，９５７；５，１１８，８００；５，３１９，０８０；５，３５９，０４４；５，３９３，８７８；５，４４６，１３７；５，４６６，７８６；５，５１４，７８５；５，５１９，１３４；５，５６７，８１１；５，５７６，４２７；５，５９１，７２２；５，５９７，９０９；５，６１０，３００；５，６２７，０５３；５，６３９，８７３；５，６４６，２６５；５，６７０，６３３；５，７００，９２０；５，７９２，８４７及び６，６００，０３２、並びに２００５年６月２日に出願され、２００５年１２月２２日にＷＯ２００５／１２１３７１として公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９２１９が限定されることなく含まれ、これらはそれぞれその全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【０３４８】
本明細書で使用されるとき、「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結ヌクレオシドを含む化合物を指す。特定の実施形態において、複数のヌクレオシドの１個以上は修飾されている。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１個以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
【０３４９】
修飾糖部分を有するヌクレオチドでは、核酸塩基部分（天然、修飾、またはこれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリッド形成のために維持される。
【０３５０】
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、修飾糖部分を有する１個以上のヌクレオシドを含む。特定の実施形態において、修飾糖部分は、２’−ＭＯＥである。特定の実施形態において、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフで配列される。特定の実施形態において、修飾糖部分は、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態において、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフのウイングの全体に配列される。
【０３５１】
修飾核酸塩基
核酸塩基（もしくは、塩基）修飾または置換は、天然に生じる、または合成の非修飾核酸塩基と構造的に区別可能であるが、それと機能的に交換可能である。天然及び修飾核酸塩基は、両方とも水素結合に参加することができる。そのような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性、または幾つかの他の有益な生物学的特性を、アンチセンス化合物に付与することができる。修飾核酸塩基には、例えば５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）のような合成及び天然核酸塩基が含まれる。５−メチルシトシン置換を含む特定の核酸塩基置換は、標的核酸へのアンチセンス化合物の結合親和性の増加に特に有用である。例えば、５−メチルシトシン置換は、核酸二重鎖の安定性を０．６〜１．２℃増加することが示されている（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，１９９３，ｐｐ．２７６−２７８）。
【０３５２】
追加の修飾核酸塩基には、アデニン及びグアニンの５−ヒドロキシメチルシトシン、キ
サンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル及び他のアルキル誘導体、ピリミジン塩基の２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル及びシトシン、並びに他アルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル、並びに他の８置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル、並びに他の５置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニン、並びに３−デアザグアニン及び３−デアザアデニンが含まれる。
【０３５３】
複素環塩基部分も、プリンまたはピリミジン塩基が他の複素環に代えられているもの、例えば、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシンン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンが含まれうる。アンチセンス化合物の結合親和性の増加に特に有用な核酸塩基には、２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンを含む、５−置換ピリミジン、６−アザピリジン、並びにＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリンが含まれる。
【０３５４】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物は、１個以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にする短縮型またはギャップ拡大型アンチセンス化合物は、１個以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態において、修飾核酸塩基は、５−メチルシトシンである。特定の実施形態において、シトシンは、それぞれ５−メチルシトシンである。
【０３５５】
薬学的組成物を処方する組成物及び方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドを、薬学的組成物または製剤の調製のために薬学的に許容される活性または不活性物質と混合することができる。薬学的組成物を処方する組成物及び方法は、投与経路、疾患の程度、または投与される用量が含まれるが、これらに限定されない多数の基準によって決まる。
【０３５６】
ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物を適切な薬学的に許容される希釈剤または単体と組み合わせることによって、薬学的組成物に利用することができる。薬学的に許容される希釈剤には、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。ＰＢＳは、非経口的に投与される組成物における使用に適した希釈剤である。したがって、１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物と、薬学的に許容される希釈剤とを含む薬学的組成物が、本明細書に記載されている方法に用いられる。特定の実施形態において、薬学的に許容される希釈剤はＰＢＳである。特定の実施形態において、アンチセンス化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０３５７】
アンチセンス化合物を含む薬学的組成物は、任意の薬学的に許容される塩、エステル、もしくはそのようなエステルの塩、またはヒトを含む動物に投与されたとき、生物学的に活性な代謝産物もしくはその残留物を（直接的または間接的に）提供することができる他の任意のオリゴヌクレオチドを包含する。したがって、例えば、本開示は、アンチセンス化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬学的に許容される塩、および他の生物学的同等物にも向けられている。適切な薬学的に許容される塩には、ナトリウム及びカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。
【０３５８】
プロドラッグは、体内の内在性ヌクレアーゼにより切断される、アンチセンス化合物の一方または両方の末端に追加のヌクレオシドの組み込みを含むことができる。
【０３５９】
抱合アンチセンス化合物
アンチセンス化合物は、得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取り込みを増強する１つ以上の部分または抱合体と、共有結合的に連結することができる。典型的な抱合基には、コレステロール部分及び脂質部分が含まれる。追加の抱合基には、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸塩、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン及び色素が含まれる。
【０３６０】
アンチセンス化合物を、一般にアンチセンス化合物の一方または両方の末端に結合する１つ以上の安定基を有するように修飾して、例えばヌクレアーゼ安定性のような特性を増強させることもできる。キャップ構造が、安定基に含まれる。これらの末端修飾は、末端核酸を有する安置センス化合物を、エキソヌクレアーゼ分解から保護し、細胞内の送達及び／または局在化を助けることができる。キャップは、５’末端（５’キャップ）もしくは３’末端（３’キャップ）に存在することができる、または両方の末端に存在することができる。キャップ構造は、当該技術において良く知られており、例えば、逆デオキシ脱塩基キャップが含まれる。アンチセンス化合物の一方または両方の末端をキャップして、ヌクレアーゼ安定性を付与することに使用できる更なる３’及び５’安定基には、２００３年１月１６日に公開されたＷＯ０３／００４６０２に開示されているものが含まれる。
【０３６１】
細胞培養及びアンチセンス化合物処理
ＡＮＧＰＴＬ３核酸のレベル、活性または発現に対するアンチセンス化合物の効果を、様々な種類の細胞においてインビトロで試験することができる。そのような分析に使用される細胞の種類は、市販の供給会社（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓｕｓ，ＶＡ；Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手可能であり、細胞は、市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して供給会社の使用説明書に従って培養される。例示的な細胞の種類には、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７（肝細胞癌）細胞、初代肝細胞、Ａ５４９細胞、ＧＭ０４２８１線維芽細胞及びＬＬＣ−ＭＫ２細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０３６２】
アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ試験
他のアンチセンス化合物による処理のために適切に修飾されうる細胞を、アンチセンスオリゴヌクレオチドにより処理する方法が、本明細書に記載されている。
【０３６３】
一般に、細胞が培養中でおよそ６０〜８０％の集密に達したときに、細胞はアンチセンスオリゴヌクレオチドにより処理される。
【０３６４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに一般的に使用される１つの試薬には、カチオン性脂質形質移入試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中のＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）と混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの望ましい最終濃度及びアンチセンスオリゴヌクレオチド１００ｎＭあたり典型的には２〜１２ｕｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）の濃度を達成する。
【０３６５】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の試薬には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ  ２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌ
ｓｂａｄ，ＣＡ）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１還元血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中のＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ  ２０００（登録商標）と混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの望ましい最終濃度及びアンチセンスオリゴヌクレオチド１００ｎＭあたり典型的には２〜１２ｕｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）の濃度を達成する。
【０３６６】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の試薬には、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１還元血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中のＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）と混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの望ましい最終濃度及びアンチセンスオリゴヌクレオチド１００ｎＭあたり典型的には２〜１２ｕｇ／ｍＬの範囲であるＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）の濃度を達成する。
【０３６７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の試薬には、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（商標）−１還元血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中のＯｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）と混合して、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）とオリゴヌクレオチドの比が１００ｎＭあたりおよそ０．２〜０．８μＬであるオリゴヌクレオチドの望ましい濃度を達成する。
【０３６８】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の試薬には、ＦｕＧＥＮＥ  ６（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）が含まれる。アンチセンスオリゴマー化合物を、１ｍＬの無血清ＲＰＭＩ中のＦｕＧＥＮＥ  ６と混合して、ＦｕＧＥＮＥ  ６とオリゴマー化合物の比が１００ｎＭあたり１〜４μＬのＦｕＧＥＮＥ ６であるオリゴヌクレオチドの望ましい最終濃度
を達成する。
【０３６９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞に導入するのに使用される別の技術には、電気穿孔が含まれる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄ．，２００１）。
【０３７０】
細胞は、日常的な方法によりアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて処理される。細胞は、典型的には、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理の１６〜２４時間後に採取され、この時点で、標的核酸のＲＮＡまたはタンパク質レベルを、当該技術に既知であり、本明細書に記載されている方法により測定する。一般に、処理が多数の複製において実施される場合、データは複製処理の平均として提示される。
【０３７１】
使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞系毎に異なる。特定の細胞系に最適なアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度を決定する方法は、当該技術において良く知られている。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ  ２０００（登録商標）、ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎまたはＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎにより形質移入された場合、１ｎＭ〜３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、電気穿孔を使用して形質移入された場合、６２５〜２０，０００ｎＭの範囲の高い濃度で使用される。
【０３７２】
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡにより実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は、当該技術において良く知られている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ
Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄ．，２００１）。ＲＮＡは、当該技術に周知の方法を使用して、例えば、製造会社の推奨プロトコールに従ってＴＲＩＺＯＬ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して調製される。
【０３７３】
標的レベルまたは発現の阻害の分析
ＡＮＧＰＴＬ３核酸のレベルまたは発現の阻害は、当該技術に既知の様々な方法によりアッセイすることができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄ．，２００１）。例えば、標的核酸レベルは、例えば、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、または定量的リアルタイムＰＣＲにより定量化することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡにより実施することができる。ＲＮＡ単離の方法は、当該技術において良く知られている。ノーザンブロット分析も、当該技術において日常的である。定量的リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡから入手可能な市販のＡＢＩ
ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００，７７００または７９００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して都合良く達成することができ、製造会社の使用説明書に従って使用することができる。
【０３７４】
標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析
標的ＲＮＡレベルの定量化は、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００，７７００または７９００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を、製造会社の使用説明書に従って使用して、定量的リアルタイムＰＣＲにより達成することができる。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は、当該技術において良く知られている。
【０３７５】
リアルタイムＰＣＲの前に、単離されたＲＮＡを逆転写酵素（ＲＴ）反応に付し、これは相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を産生し、次にこれをリアルタイムＰＣＲ増幅の基質として使用する。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ反応は、同じ試料ウエルにおいて順次実施することもできる。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から得られる。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ反応は、当業者に周知の方法により実施される。
【０３７６】
リアルタイムＰＣＲにより得られる遺伝子（またはＲＮＡ）の標的量は、シクロフィリンＡもしくはＧＡＤＰＨのような、発現が一定である遺伝子の発現レベルを使用することによって、またはＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）、Ｉｎｃ．Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）の使用により全ＲＮＡを定量化することによって、正規化することができる。シクロフィリンＡまたはＧＡＤＰＨ発現は、標的と同時に、多重的または別々に実施するリアルタイムＰＣＲにより定量化されうる。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬を使用して定量化することができる。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によるＲＮＡ定量化の方法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌにより教示されている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８−３７４）。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ（登録商標）４０００器具（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）蛍光を測定することができる。
【０３７７】
リアルタイムＰＣＲプローブ及びプライマーを設計する方法は、当該技術において良く
知られており、ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のようなソフトウエアの使用が含まれうる。リアルタイムＰＣＲに使用されるプローブ及びプライマーは、ＡＮＧＰＴＬ３特異的配列とハイブリッド形成するように設計され、下記の実施例に開示されている。標的特異的ＰＣＲプローブは、５’末端に共有結合的に連結しているＦＡＭ及び３’末端に共有結合的に連結しているＴＡＭＲＡまたはＭＧＢを有することができ、ここで、ＦＡＭは蛍光色素であり、ＴＡＭＲＡまたはＭＧＢは消光色素である。
【０３７８】
タンパク質レベルの分析
ＡＮＧＰＴＬ３核酸のアンチセンス阻害は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを測定することによって評価できる。ＡＮＧＰＴＬ３のタンパク質レベルは、免疫沈降、ウエスタンブロット分析（免疫ブロット）、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学、または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄ．，２００１）のような様々な当該技術に周知の方法により評価または定量化することができる。標的に向けられる抗体を特定することができ、ＭＳＲＳ抗体カタログ（Ａｅｒｉｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＭＩ）のような様々な供給源から得ることができる、または当該技術に周知の従来のモノクローナルもしくはポリクローナル抗体生成方法によって調製することができる。
【０３７９】
アンチセンス化合物のインビボ試験
アンチセンス化合物、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドを動物において試験して、これらの、ＡＮＧＰＴＬ３の発現を阻害する及び表現型の変化を生じる能力について評価する。試験は、正常な動物において、または実験疾患モデルにおいて実施することができる。動物への投与のため、アンチセンスオリゴヌクレオチドを、リン酸緩衝食塩水のような薬学的に許容される希釈剤で処方する。投与には、非経口投与経路が含まれる。アンチセンス化合物による治療期間の後、ＲＮＡを組織から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３核酸発現の変化を測定する。ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの変化も測定する。
【０３８０】
特定の適応症
特定の実施形態において、本明細書に記載されている１つ以上の薬学的組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が、本明細書に提供される。特定の実施形態において、個体は、代謝疾患及び／または心血管疾患を有する。特定の実施形態において、個体は、高コレステロール血症（例えば、家族性ホモ接合型高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、家族性ヘテロ接合型高コレステロール血症（ＨｅＦＨ））、異脂肪血症、高トリグリセリド血症（例えば、ヘテロ接合性ＬＰＬ欠乏症、ホモ接合性ＬＰＬ欠乏症）、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、家族性カイミクロン血症症候群（ＦＣＳ）、高リポタンパク血症ＩＶ型）、脂肪異栄養症、高脂血症（例えば、複合型高脂血症、家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ））、代謝症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、血管壁肥厚、高血圧（例えば、肺動脈性高血圧症）、硬化症（例えば、アテローム性動脈硬化症、全身性硬化症、進行性皮膚硬化症、並びに指潰瘍及び肺血管病変のような増殖性閉塞性血管症）を有する。
【０３８１】
特定の実施形態において、本明細書に記載されているＡＮＧＰＴＬ３を標的にする化合物は、動物において脂質及び／またはエネルギー代謝を調節する。特定の実施形態において、本明細書に記載されているＡＮＧＰＴＬ３を標的にする化合物は、高コレステロール血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、代謝症候群、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ及び／または糖尿病の生理学的マーカーまたは表現型を調節する。例えば、動物への化合物の投与は、ＶＬＤＬ、非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）、ＬＤＬ、コレステロール、トリグリセ
リド、グルコース、インスリン、またはＡＮＧＰＴＬ３のレベルの１つ以上を調節することができる。特定の実施形態において、生理学的マーカーまたは表現型の調節は、化合物によるＡＮＧＰＴＬ３の阻害によって評価することができる。
【０３８２】
特定の実施形態において、本明細書に記載されているＡＮＧＰＴＬ３を標的にする化合物は、肝臓ＴＧ蓄積（すなわち脂肪肝）、アテローム性動脈硬化症、血管壁肥厚（例えば、動脈内膜中膜肥厚）、高コレステロール血症（例えば、家族性ホモ接合型高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、家族性ヘテロ接合型高コレステロール血症（ＨｅＦＨ））、異脂肪血症、高トリグリセリド血症（例えば、ヘテロ接合性ＬＰＬ欠乏症、ホモ接合性ＬＰＬ欠乏症、家族性カイロミクロン血症症候群（ＦＣＳ）、高リポタンパク血症ＩＶ型）、脂肪異栄養症、高脂血症（例えば、複合型高脂血症、家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ））、代謝症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、高血圧、及び硬化症の１つ以上を低減及び／または予防する。特定の実施形態において、本明細書に記載されているＡＮＧＰＴＬ３を標的にする化合物は、インスリン感受性を改善する。
【０３８３】
特定の実施形態において、本明細書に記載されているようにＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物の投与は、ＡＮＧＰＴＬ３発現の低減を、およそ少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはこれらの値の任意の２つにより確定された範囲でもたらす。
【０３８４】
特定の実施形態において、本明細書に記載されているようにＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするアンチセンス化合物の投与は、トリグリセリド、ＬＤＬコレステロール、非ＨＤＬコレステロール、ＶＬＤＬコレステロール、総コレステロール、アポＢ及びアポＣ−ＩＩＩの１つ以上の低減を、およそ少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％、またはこれらの値の任意の２つにより確定された範囲でもたらす。
【０３８５】
特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンス化合物を含む薬学的組成物が、代謝疾患または心血管疾患に罹患している、または罹りやすくなっている患者を治療する医薬の調製に使用される。特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンス化合物を含む薬学的組成物は、高コレステロール血症（例えば、家族性ホモ接合型高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、家族性ヘテロ接合型高コレステロール血症（ＨｅＦＨ））、異脂肪血症、高トリグリセリド血症（例えば、家族性カイロミクロン血症症候群（ＦＣＳ）、高リポタンパク血症ＩＶ型）、脂肪異栄養症、高脂血症（例えば、複合型高脂血症、家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ））、代謝症候群、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、血管壁肥厚、高血圧、及び硬化症の１つ以上に罹患している、または罹りやすくなっている患者を治療する医薬の調製に使用される。
【０３８６】
投与
特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物及び組成物は、非経口投与される。
【０３８７】
特定の実施形態において、非経口投与は、注入によるものである。注入は、慢性的、または連続的、または短期的、または断続的でありうる。特定の実施形態において、注入医薬品は、ポンプにより送達される。
【０３８８】
特定の実施形態において、非経口投与は、注射によるものである。注射は、シリンジまたはポンプにより送達することができる。特定の実施形態において、注射はボーラス注射である。特定の実施形態において、注射は、組織または臓器に直接投与される。特定の実施形態において、注射は皮下である。
【０３８９】
特定の併用療法
特定の実施形態において、本明細書に開示されている修飾オリゴヌクレオチドを含む第１の作用物質は、１つ以上の第２の作用物質と共投与される。特定の実施形態において、そのような第２の作用物質は、本明細書に記載されている第１の作用物質と同じ疾患、障害または状態を治療するように設計される。特定の実施形態において、そのような第２の作用物質は、本明細書に記載されている第１の作用物質と異なる疾患、障害または状態を治療するように設計される。特定の実施形態において、そのような第２の作用物質は、本明細書に記載されている１つ以上の薬学的組成物の望ましくない副作用を治療するように設計される。特定の実施形態において、第２の作用物質は、第１の作用物質と共投与されて、第１の作用物質の望ましくない副作用を治療する。特定の実施形態において、第２の作用物質は、第１の作用物質と共投与されて、組み合わせ効果を生じる。特定の実施形態において、第２の作用物質は、第１の作用物質と共投与されて、相乗効果を生じる。
【０３９０】
特定の実施形態において、第１の作用物質及び１つ以上の第２の作用物質は、同じ時点で投与される。特定の実施形態において、第１の作用物質及び１つ以上の第２の作用物質は、異なる時点で投与される。特定の実施形態において、第１の作用物質及び１つ以上の第２の作用物質は、一緒に単一の薬学的製剤に調製される。特定の実施形態において、第１の作用物質及び１つ以上の第２の作用物質は、別々に調製される。
【０３９１】
特定の実施形態において、第２の作用物質には、グルコース低下剤または脂質低下剤が含まれるが、これらに限定されない。グルコース低下剤には、治療的な生活習慣の変化、ＰＰＡＲ作動薬、ジペプチジルペプチダーゼ（ＩＶ）阻害剤、ＧＬＰ−１類縁体、インスリンもしくはインスリン類縁体、インスリン分泌促進薬、ＳＧＬＴ２阻害剤、ヒトアミリン類縁体、ビグアナイド、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、またはこれらの組み合わせが含まれうるが、これらに限定されない。グルコース低下剤には、メトホルミン、スルホニル尿素、ロシグリタゾン、メグリチニド、チアゾリジンジオン、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤、またはこれらの組み合わせが含まれうるが、これらに限定されない。スルホニル尿素は、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、トルブタミド、トラザミド、グリメピリド、グリピジド、グリブリド、またはグリクラジドでありうる。メグリチニドは、ナテグリニドまたはレパグリニドでありうる。チアゾリジンジオンは、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾンでありうる。アルファ−グルコシダーゼは、アカルボースまたはミグリトールでありうる。特定の実施形態において、脂質低下療法には、治療的な生活習慣の変化、ナイアシン、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、ＭＴＰ阻害剤（例えば、ＭＴＰを標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくはアンチセンス化合物）、フィブレート、ＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、ＰＣＳＫ９を標的にするＰＣＳＫ９抗体、ポリペプチド、小分子、核酸化合物）、ＣＥＴＰ阻害剤（例えば、ＣＥＴＰを標的にするトルセトラピブ及びアナセトラピブのような小分子、ポリペプチド、抗体もしくは核酸化合物）、アポＣ−ＩＩＩ阻害剤（例えば、アポＣ−ＩＩＩを標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくは核酸化合物）、アポＢ阻害剤（例えば、アポＢを標的にする小分子、ポリペプチド、抗体もしくは核酸化合物）、オメガ−３脂肪酸が豊富な有益油、オメガ−３脂肪酸、またはこれらの組み合わせが含まれうるが、これらに限定されない
。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、アトルバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチンなどでありうる。コレステロール吸収阻害剤は、エゼチミブでありうる。フィブレートは、フェノフィブレート、ベザフィブレート、シプロフィブレート、クロフィブレート、ゲムフィブロジルなどでありうる。オメガ−３脂肪酸が豊富な有益油は、オキアミ、魚（例えば、Ｖａｓｃｅｐａ（登録商標））、アマニ油などでありうる。オメガ−３脂肪酸は、ＡＬＡ、ＤＨＡ、ＥＰＡなどでありうる。
【０３９２】
特定の化合物
ヒトＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以前の公報に記載されていた（その全体が参照として組み込まれる、２０１１年７月１４日公開のＰＣＴ特許公開ＷＯ２０１１／０８５２７１を参照すること）。インビトロで最も強力なアンチセンス化合物の上位１０個を含む、本明細書に記載されている幾つかのオリゴヌクレオチド（２３３６７６、２３３６９０、２３３７１０、２３３７１７、２３３７２１、２３３７２２、３３７４５９、３３７４６０、３３７４７４、３３７４７７、３３７４７８、３３７４７９、３３７４８１、３３７４８４、３３７４８７、３３７４８８、３３７４９０、３３７４９１、３３７４９２、３３７４９７、３３７４９８、３３７５０３、３３７５０５、３３７５０６、３３７５０８、３３７５１３、３３７５１４、３３７５１６、３３７５２０、３３７５２１、３３７５２５、３３７５２６及び３３７５２８）を、本明細書下記に記載される新たなアンチセンス化合物のインビトロ選別における選択全体におけるベンチマークとして使用した。ＷＯ２０１１／０８５２７１に記載されている最も強力な化合物のうち、ＩＳＩＳ２３３７２２には、ＡＮＧＰＴＬ３を阻害する能力に大きなばらつきがあることが見出された。したがって、最初はインビトロ研究における幾つかのうちに含まれたが、２３３７２２を更なる研究のベンチマークとして選択しなかった。以前に特定された強力なインビトロベンチマーク化合物のうち、５個（２３３７１０、２３３７１７、３３７４７７、３３７４７８、３３７４７９及び３３７４８７）を、ヒトｍＲＮＡ転写及びタンパク質発現を低減するのに最も強力なものを評価するため、ｈｕＡＮＧＰＴＬ３遺伝子導入マウスにおける、本明細書下記に記載されるインビボ試験のために選択した（実施例１１）。ＡＮＧＰＴＬ３レベルの低減に最高の初期インビボ効力を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド（２３３７１０）を、本明細書下記に記載される新たなアンチセンス化合物のインビボ評価のためのベンチマークとして使用した。
【０３９３】
特定の実施形態において、本明細書に記載されているアンチセンス化合物は、ＷＯ２０１１／０８５２７１に記載されているアンチセンス化合物と比べて、１つ以上の改善された特性によって有益である。これらの改善された特性は、本明細書の実施例において実証されており、実施例の非限定的要約が、容易な参照のために下記に提供される。
【０３９４】
本明細書に記載されている第１の選別において、ヒトＡＮＧＰＴＬ３を標的にする約３０００個の新たに設計された５−１０−５ＭＯＥギャップマーアンチセンス化合物を、インビトロのヒトＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに対する効果についてＨｅｐ３Ｂ細胞において試験した（実施例１）。新たなアンチセンス化合物のｍＲＮＡ阻害レベルを、選択研究にベンチマークとして使用した、幾つかの以前に設計されたアンチセンス化合物（２３３７１７、３３７４８４、３３７４８７、３３７４９２及び３３７５１６）により評価した。第１の選別からの約３０００個の新たに設計されたアンチセンス化合物のうち、約８５個のアンチセンス化合物を、最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）を決定するインビトロ用量依存性阻害研究のために選択した（実施例２〜３）。最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）について試験した約８５個の新たなアンチセンス化合物のうち、ＡＮＧＰＴＬ３の強力な用量依存性低減を実証した約３８個のアンチセンス化合物を、アンチセンス２３３７１０をベンチマークとして使用した、マウスにおけるインビボ効力及び耐容性（ＡＬＴ及びＡＳＴ）試験のために選択した（実施例１１〜１２）。
【０３９５】
本明細書に記載されている第２の選別において、ＭＯＥギャップマーモチーフまたは混合型モチーフ（デオキシ、５−１０−５ＭＯＥ及びｃＥＴギャップマー）を有する、ヒトＡＮＧＰＴＬ３を標的にする約２０００個の新たに設計されたアンチセンス化合物も、インビトロにおけるヒトＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに対する効果についてＨｅｐ３Ｂにおいて試験した（実施例４〜６）。新たなアンチセンス化合物の阻害レベルを、選択研究にベンチマークとして使用した、幾つかの以前に設計されたアンチセンス化合物（２３３７１７、３３７４８７、３３７５１３、３３７５１４及び３３７５１６）により評価した。第２の選別からの約２０００個の新たに設計されたアンチセンス化合物のうち、約１４７個のアンチセンス化合物を、最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）を決定するインビトロ用量依存性阻害研究のために選択した（実施例７〜１０）。最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）について試験した約１４７個の新たなアンチセンス化合物のうち、ＡＮＧＰＴＬ３の強力な用量依存性低減を実証した約７３個のアンチセンス化合物を、アンチセンス２３３７１０をベンチマークとして使用した、マウスにおけるインビボ効力及び耐容性（ＡＬＴ及びＡＳＴ）試験のために選択した（実施例１１〜１２）。
【０３９６】
マウスにおいて効力及び耐容性について試験した選別１及び２の約１１１個のアンチセンス化合物のうち、２４個を、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸トランス鵜網ナーゼ（ＡＳＴ）、アルブミン及びビリルビンのような肝臓代謝マーカー、並びに腎臓代謝マーカーのＢＵＮ及びクレアチニン、及び臓器重量を評価する、マウスにおけるより広範な耐容性試験のために選択した（実施例１２）。
【０３９７】
インビボネズミ研究と並行して、１７個のアンチセンス化合物を粘度試験のために選択した（実施例１３）。一般に、粘度が最適化されていないアンチセンス化合物は、更なる研究に進めなかった。
【０３９８】
マウス耐容性試験の結果基づいて、２０個のアンチセンス化合物を、ラットにおけるインビボ耐容性試験のために選択した（実施例１４）。ラットでは、ＡＬＴ、ＡＳＴ、アルブミン及びビリルビンのような肝臓代謝マーカー、体重及び臓器重量、並びにＢＵＮ、クレアチニン及び総タンパク質／クレアチニン比のような肝臓代謝マーカーを測定して、インビボにおける化合物の耐容性を決定した。
【０３９９】
ラットにおいて試験した２０個のアンチセンス化合物を、アカゲザルＡＮＧＰＴＬ３遺伝子配列との交差反応性についても評価した（実施例１５）。この研究のアンチセンス化合物をカニクイザルにおいて試験したが、カニクイザルＡＮＧＰＴＬ３配列は、比較のための完全長化合物の配列が入手できず、したがって、アンチセンス化合物の配列を、近縁関係にあるアカゲザルのものと比較した。８個のアンチセンス化合物の配列は、アカゲザルＡＮＧＰＴＬ３遺伝子配列と０〜２個の不適合を有することが見出され、カニクイザルにおいて更に研究した（実施例１５）。８個のアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ５６３５８０、ＩＳＩＳ５６０４００、ＩＳＩＳ５６７３２０、ＩＳＩＳ５６７３２１、ＩＳＩＳ５４４１９９、ＩＳＩＳ５６７２３３、ＩＳＩＳ５６１０１１及びＩＳＩＳ５５９２７７）を、サルにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ及びタンパク質発現の阻害、並びに耐容性について試験した。耐容性研究において、体重、肝臓代謝マーカー（ＡＬＴ、ＡＳＴ及びビリルビン）、腎臓代謝マーカー（ＢＵＮ及びクレアチニン）、血液学的パラメーター（血球数、ヘモグロビン及びヘマトクリット）、並びに炎症促進性マーカー（ＣＲＰ及びＣ３）を測定した。加えて、肝臓及び腎臓に存在する完全長オリゴヌクレオチド濃度を測定し、腎臓／肝臓における完全長オリゴヌクレオチドの比を計算した。
【０４００】
したがって、任意の１つ以上の改善された、例えばＷＯ２０１１／０８５２７１に記載されているアンチセンス化合物と比べて改善された特徴を有するアンチセンス化合物が、
本明細書において提供される。特定の実施形態において、配列番号１〜２のいずれか一方のヌクレオチドの領域を標的にする、または領域と特異的にハイブリッド形成する、本明細書に記載されている修飾オリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物が、本明細書において提供される。
【０４０１】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている特定のアンチセンス化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３発現の阻害における効力によって効果的である。特定の実施形態において、化合物または組成物は、ＡＮＧＰＴＬ３を、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％阻害する。
【０４０２】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている特定のアンチセンス化合物は、（実施例２〜３及び７〜１０に記載されているように）ヒト細胞、例えばＨｅｐ３Ｂ細胞系において試験されたとき、２０μＭ未満、１０μＭ未満、８μＭ未満、５μＭ未満、２μＭ未満、１μＭ未満、０．９μＭ未満、０．８μＭ未満、０．７μＭ未満、０．６μＭ未満、または０．５μＭ未満のインビトロＩＣ５０にによって効果的である。特定の実施形態において、＜１．０μＭのＩＣ５０を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１５、２０、２４、３４、３５、３６、３７、４２、４３、４４、４７、５０、５１、５７、５８、６０、７７、７９、８２、８７、８８、９０、９１、９３、９４、１００、１０１、１０４、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１６９、１７０、１７７、１８８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１及び２３２のものが含まれる。特定の実施形態において、＜０．９μＭのＩＣ５０を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１５、２０、３５、３６、４２、４３、４４、５０、５７、６０、７７、７９、８７、８８、９０、９１、９３、９４、１０１、１０４、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１７７、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１及び２３２のものが含まれる。特定の実施形態において、＜０．８μＭのＩＣ５０を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１５、２０、３５、３６、４２、４３、４４、５０、５７、６０、７７、７９、８７、８８、９０、９１、９３、９４、１０１、１０４、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１７７、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１��、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１及び２３２のものが含まれる。特定の実施形態において、＜０．７μＭのＩＣ５０を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１５、２０、３６、４２、４３、５７、６０、１１４、１１７、１２７、１３１
、１７７、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１及び２３２のものが含まれる。特定の実施形態において、＜０．６μＭのＩＣ５０を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１５、２０、３６、４２、４３、５７、６０、１１４、１１７、１２７、１３１、１７７、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１５、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１及び２３２のものが含まれる。特定の実施形態において、＜０．５μＭのＩＣ５０を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号４３、１１４、１１７、１２７、１３１、１７７、２０９、２１０、２１１、２１２、２１５、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２９、２３０及び２３２のものが含まれる。
【０４０３】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている特定のアンチセンス化合物は、（実施例１３に記載されているように）アッセイにより測定したとき、４０ｃＰ未満、３５ｃＰ未満、３０ｃＰ未満、２５ｃＰ未満、２０ｃＰ未満、１５ｃＰ未満、または１０ｃＰ未満の粘度を有することによって効果的である。４０ｃＰを超える粘度を有するオリゴヌクレオチドは、最適に満たない粘度を有する。特定の実施形態において、＜２０ｃＰの粘度を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１６、１８、２０、３４、３５、３６、３８、４９、７７、９０、９３及び９４のものが含まれる。特定の実施形態において、＜１５ｃＰの粘度を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１６、１８、２０、３４、３５、３８、４９、９０、９３及び９４のものが含まれる。特定の実施形態において、＜１０ｃＰの粘度を有する好ましいアンチセンス化合物には、配列番号１８、３４、３５、４９、９０、９３及び９４のものが含まれる。
【０４０４】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている特定のアンチ化合物は、実施例に記載されているインビボ耐容性測定により実証されているように、高い耐容性がある。特定の実施形態において、本明細書に記載されている特定のアンチセンス化合物は、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴ値に食塩水処理動物の３倍、２倍または１．５倍以下の増加を有することによって実証されているように、高い耐容性がある。
【０４０５】
特定の実施形態において、本明細書に記載されている特定のアンチセンス化合物は、５０％を超える阻害効力、１μＭ未満のインビトロＩＣ５０、２０ｃＰ未満の粘度、並びにＡＬＴ及び／またはＡＳＴの３倍以下の増加の１つ以上を有することによって効果的である。
【０４０６】
特定の実施形態において、ＩＳＩＳ５６３５８０（配列番号７７）が好ましい。この化合物は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子導入マウスにおける強力な阻害剤であり、最も耐容性のあるアンチセンス化合物であることが見出された。これは、約１６．８９ｃＰの許容可能な粘度及びインビトロで＜０．８μＭのＩＣ５０値を有した。マウスにおいて、食塩処理動物と比べてＡＬＴ及び／またはＡＳＴレベルに３倍以下の増加を有した。またサルでは、ＡＮＧＰＴＬ３の阻害において最も耐容性及び効力がある化合物のうちの１つであり、完全長オリゴヌクレオチド濃度の最適な比を有した。
【０４０７】
特定の実施形態において、ＩＳＩＳ５４４１９９（配列番号２０）が好ましい。この化合物は、強力な耐容性のあるアンチセンス化合物であることが見出された。これは、約１．７ｃＰの許容可能な粘度及びインビトロで＜０．５μＭのＩＣ５０値を有した。マウスにおいて、食塩処理動物と比べてＡＬＴ及び／またはＡＳＴレベルに３倍以下の増加を有した。またサルでは、ＡＮＧＰＴＬ３の阻害において最も効力がある化合物のうちの１つであり、完全長オリゴヌクレオチド濃度の良好な比を有した。
【０４０８】
特定の実施形態において、ＩＳＩＳ５５９２７７（配列番号１１０）が好ましい。この化合物は、強力な耐容性のあるアンチセンス化合物であることが見出された。これは、インビトロにおいて＜０．８μＭのＩＣ５０値を有した。マウスにおいて、食塩処理動物と比べてＡＬＴ及び／またはＡＳＴレベルに３倍以下の増加を有した。またサルでは、ＡＮＧＰＴＬ３の阻害において最も効力がある化合物のうちの１つであり、完全長オリゴヌクレオチド濃度の良好な比を有した。
【実施例】
【０４０９】
非限定的開示及び参照としての組み込み
本明細書に記載されている特定の化合物、組成物及び方法が、特定の実施形態に従って特定的に記載されてきたが、以下の実施例は、本明細書に記載されている化合物を例示するためだけに役立つものであり、それらを限定することは意図されない。本出願に引用されているそれぞれの参考文献は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【０４１０】
実施例１：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトアンジオポエチン様３のアンチセンス阻害
アンチセンスオリゴヌクレオチドを、アンジオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３）核酸を標的にするように設計し、インビトロでのＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに対するこれらの効果について試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似した培養条件を有した一連の実験によって試験した。それぞれの実験の結果を、下記に示す別々の表に提示する。１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度の培養Ｈｅｐ３Ｂ細胞に、電気穿孔を使用して、４，５００nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ２４時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢ（本明細書において配列番号４と指定されている順方向配列ＣＣＧＴＧＧＡＡＧＡＣＣＡＡＴＡＴＡＡＡＣＡＡＴＴ、本明細書において配列番号５と指定されている逆方向配列ＡＧＴＣＣＴＴＣＴＧＡＧＣＴＧＡＴＴＴＴＣＴＡＴＴＴＣＴ、本明細書において配列番号６と指定されているプローブ配列ＡＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＴＡＧＴＣＡＡＡＴＡ）を使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０４１１】
下記の表における新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。５−１０−５ＭＯＥギャップマーは、２０個のヌクレオシドの長さであり、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、それぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが５’方向及び３’方向に隣接している。５’ウイングセグメントにおけるそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントにおけるそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体におけるヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結である。それぞれのギャップマー全体における全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的にする最も５’にあるヌクレオシドを示す。「終止部位」は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的にするヒト遺伝子配列の最も３’にあるヌクレオシドを示す。下記の表に列挙されているそれぞれのギャップマーは、本明細書において配列番号１と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０１４４９５．２）、または本明細書において配列番号２と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３ゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０３２９７７．９、ヌクレオチド３３０３２００１〜３３０４６０００の切断型）を標的にする。「該当なし」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、その特定の遺伝子配列を１００％の相補性で標的にしないことを示す。
【０４１２】
【表２−１】
2020072713.tif 000021
【０４１３】
【表２−２】
2020072713.tif 000022
【０４１４】
【表２−３】
2020072713.tif 000023
【０４１５】
【表３−１】
2020072713.tif 000024
【０４１６】
【表３−２】
2020072713.tif 000025
【０４１７】
【表３−３】
2020072713.tif 000026
【０４１８】
【表３−４】
2020072713.tif 000027
【０４１９】
【表４−１】
2020072713.tif 000028
【０４２０】
【表４−２】
2020072713.tif 000029
【０４２１】
【表４−３】
2020072713.tif 000030
【０４２２】
【表５−１】
2020072713.tif 000031
【０４２３】
【表５−２】
2020072713.tif 000032
【０４２４】
【表５−３】
2020072713.tif 000033
【０４２５】
【表５−４】
2020072713.tif 000034
【０４２６】
【表６−１】
2020072713.tif 000035
【０４２７】
【表６−２】
2020072713.tif 000036
【０４２８】
【表６−３】
2020072713.tif 000037
【０４２９】
【表６−４】
2020072713.tif 000038
【０４３０】
【表７−１】
2020072713.tif 000039
【０４３１】
【表７−２】
2020072713.tif 000040
【０４３２】
【表７−３】
2020072713.tif 000041
【０４３３】
【表７−４】
2020072713.tif 000042
【０４３４】
【表７−５】
2020072713.tif 000043
【０４３５】
【表７−６】
2020072713.tif 000044
【０４３６】
【表７−７】
2020072713.tif 000045
【０４３７】
【表７−８】
2020072713.tif 000046
【０４３８】
【表７−９】
2020072713.tif 000047
【０４３９】
【表７−１０】
2020072713.tif 000048
【０４４０】
【表７−１１】
2020072713.tif 000049
【０４４１】
【表８−１】
2020072713.tif 000050
【０４４２】
【表８−２】
2020072713.tif 000051
【０４４３】
【表８−３】
2020072713.tif 000052
【０４４４】
【表８−４】
2020072713.tif 000053
【０４４５】
【表８−５】
2020072713.tif 000054
【０４４６】
【表８−６】
2020072713.tif 000055
【０４４７】
【表８−７】
2020072713.tif 000056
【０４４８】
【表８−８】
2020072713.tif 000057
【０４４９】
【表８−９】
2020072713.tif 000058
【０４５０】
【表８−１０】
2020072713.tif 000059
【０４５１】
【表８−１１】
2020072713.tif 000060
【０４５２】
【表９−１】
2020072713.tif 000061
【０４５３】
【表９−２】
2020072713.tif 000062
【０４５４】
【表９−３】
2020072713.tif 000063
【０４５５】
【表９−４】
2020072713.tif 000064
【０４５６】
【表９−５】
2020072713.tif 000065
【０４５７】
【表９−６】
2020072713.tif 000066
【０４５８】
【表９−７】
2020072713.tif 000067
【０４５９】
【表９−８】
2020072713.tif 000068
【０４６０】
【表９−９】
2020072713.tif 000069
【０４６１】
【表９−１０】
2020072713.tif 000070
【０４６２】
【表９−１１】
2020072713.tif 000071
【０４６３】
【表９−１２】
2020072713.tif 000072
【０４６４】
【表９−１３】
2020072713.tif 000073
【０４６５】
【表９−１４】
2020072713.tif 000074
【０４６６】
【表９−１５】
2020072713.tif 000075
【０４６７】
【表１０−１】
2020072713.tif 000076
【０４６８】
【表１０−２】
2020072713.tif 000077
【０４６９】
【表１０−３】
2020072713.tif 000078
【０４７０】
【表１０−４】
2020072713.tif 000079
【０４７１】
【表１０−５】
2020072713.tif 000080
【０４７２】
【表１０−６】
2020072713.tif 000081
【０４７３】
【表１０−７】
2020072713.tif 000082
【０４７４】
【表１０−８】
2020072713.tif 000083
【０４７５】
【表１０−９】
2020072713.tif 000084
【０４７６】
【表１０−１０】
2020072713.tif 000085
【０４７７】
【表１０−１１】
2020072713.tif 000086
【０４７８】
【表１０−１２】
2020072713.tif 000087
【０４７９】
【表１０−１３】
2020072713.tif 000088
【０４８０】
【表１０−１４】
2020072713.tif 000089
【０４８１】
【表１０−１５】
2020072713.tif 000090
【０４８２】
【表１０−１６】
2020072713.tif 000091
【０４８３】
【表１０−１７】
2020072713.tif 000092
【０４８４】
【表１０−１８】
2020072713.tif 000093
【０４８５】
【表１０−１９】
2020072713.tif 000094
【０４８６】
【表１１−１】
2020072713.tif 000095
【０４８７】
【表１１−２】
2020072713.tif 000096
【０４８８】
【表１１−３】
2020072713.tif 000097
【０４８９】
【表１１−４】
2020072713.tif 000098
【０４９０】
【表１１−５】
2020072713.tif 000099
【０４９１】
【表１１−６】
2020072713.tif 000100
【０４９２】
【表１１−７】
2020072713.tif 000101
【０４９３】
【表１１−８】
2020072713.tif 000102
【０４９４】
【表１１−９】
2020072713.tif 000103
【０４９５】
【表１１−１０】
2020072713.tif 000104
【０４９６】
【表１１−１１】
2020072713.tif 000105
【０４９７】
【表１１−１２】
2020072713.tif 000106
【０４９８】
【表１１−１３】
2020072713.tif 000107
【０４９９】
【表１１−１４】
2020072713.tif 000108
【０５００】
【表１１−１５】
2020072713.tif 000109
【０５０１】
【表１１−１６】
2020072713.tif 000110
【０５０２】
【表１２−１】
2020072713.tif 000111
【０５０３】
【表１２−２】
2020072713.tif 000112
【０５０４】
【表１２−３】
2020072713.tif 000113
【０５０５】
【表１２−４】
2020072713.tif 000114
【０５０６】
【表１２−５】
2020072713.tif 000115
【０５０７】
【表１２−６】
2020072713.tif 000116
【０５０８】
【表１２−７】
2020072713.tif 000117
【０５０９】
【表１２−８】
2020072713.tif 000118
【０５１０】
【表１２−９】
2020072713.tif 000119
【０５１１】
【表１２−１０】
2020072713.tif 000120
【０５１２】
【表１２−１１】
2020072713.tif 000121
【０５１３】
【表１３−１】
2020072713.tif 000122
【０５１４】
【表１３−２】
2020072713.tif 000123
【０５１５】
【表１３−３】
2020072713.tif 000124
【０５１６】
【表１３−４】
2020072713.tif 000125
【０５１７】
【表１３−５】
2020072713.tif 000126
【０５１８】
【表１３−６】
2020072713.tif 000127
【０５１９】
【表１３−７】
2020072713.tif 000128
【０５２０】
【表１３−８】
2020072713.tif 000129
【０５２１】
【表１３−９】
2020072713.tif 000130
【０５２２】
【表１３−１０】
2020072713.tif 000131
【０５２３】
【表１３−１１】
2020072713.tif 000132
【０５２４】
【表１３−１２】
2020072713.tif 000133
【０５２５】
【表１４−１】
2020072713.tif 000134
【０５２６】
【表１４−２】
2020072713.tif 000135
【０５２７】
【表１４−３】
2020072713.tif 000136
【０５２８】
【表１４−４】
2020072713.tif 000137
【０５２９】
【表１４−５】
2020072713.tif 000138
【０５３０】
【表１４−６】
2020072713.tif 000139
【０５３１】
【表１４−７】
2020072713.tif 000140
【０５３２】
【表１４−８】
2020072713.tif 000141
【０５３３】
【表１４−９】
2020072713.tif 000142
【０５３４】
【表１４−１０】
2020072713.tif 000143
【０５３５】
【表１４−１１】
2020072713.tif 000144
【０５３６】
【表１４−１２】
2020072713.tif 000145
【０５３７】
【表１４−１３】
2020072713.tif 000146
【０５３８】
【表１４−１４】
2020072713.tif 000147
【０５３９】
【表１４−１５】
2020072713.tif 000148
【０５４０】
【表１４−１６】
2020072713.tif 000149
【０５４１】
【表１４−１７】
2020072713.tif 000150
【０５４２】
【表１４−１８】
2020072713.tif 000151
【０５４３】
【表１４−１９】
2020072713.tif 000152
【０５４４】
【表１５−１】
2020072713.tif 000153
【０５４５】
【表１５−２】
2020072713.tif 000154
【０５４６】
【表１５−３】
2020072713.tif 000155
【０５４７】
【表１５−４】
2020072713.tif 000156
【０５４８】
実施例２：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３の用量依存性アンチセンス阻害
上記に記載された研究においてＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示した５−１０−５ＭＯＥギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において様々な用量で試験した。細胞を１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度で平板培養し、電気穿孔を使用して、下記の表に特定されているように０．７５μＭ、１．５０μＭ、３．００μＭ、６．００μＭ及び１２．００μＭの濃度でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ１６時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０５４９】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）も提示されている。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞において、用量依存的に有意に低減された。
【０５５０】
【表１６】
2020072713.tif 000157
【０５５１】
実施例３：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３の用量依存性アンチセンス阻害
上記に記載された研究においてＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示した５−１０−５ＭＯＥギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において様々な用量で試験した。細胞を１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度で平板培養し、電気穿孔を使用して、下記の表に特定されているように０．８１３μＭ、１．６２５μＭ、３．２５μＭ、６．５０μＭ及び１３．００μＭの濃度でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ１６時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０５５２】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）も提示されている。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞において、用量依存的に有意に低減された。
【０５５３】
【表１７】
2020072713.tif 000158
【０５５４】
【表１８】
2020072713.tif 000159
【０５５５】
【表１９】
2020072713.tif 000160
【０５５６】
【表２０】
2020072713.tif 000161
【０５５７】
【表２１】
2020072713.tif 000162
【０５５８】
【表２２】
2020072713.tif 000163
【０５５９】
【表２３】
2020072713.tif 000164
【０５６０】
【表２４】
2020072713.tif 000165
【０５６１】
実施例４：デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）−ｃＥｔギャップマーによるＨｅｐ３ＢにおけるヒトＡＮＧＰＴＬ３のアンチセンス阻害
追加のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするように設計し、インビトロでのＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに対するこれらの効果について試験した。１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度の培養Ｈｅｐ３Ｂ細胞に、電気穿孔を使用して、４，５００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ２４時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧ
Ｂを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０５６２】
下記の表における新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）−ｃＥｔオリゴヌクレオチドとして設計した。デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）−ｃＥｔオリゴヌクレオチドは、１６個のヌクレオシドの長さであり、ここでヌクレオシドは、ＭＯＥ糖修飾、（Ｓ）−ｃＥｔ修飾、またはデオキシ糖残基のいずれかを有する。それぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドの糖修飾は、「ｅｅｋ−ｄ１０−ｋｋｅ」と記載されており、ここで、「ｋ」は、（Ｓ）−ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」は、デオキシリボースを示し、数字は、デオキシリボース糖残基の数を示し、「ｅ」は、ＭＯＥ糖修飾を示す。それぞれのオリゴヌクレオチド全体におけるヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結である。それぞれのオリゴヌクレオチド全体における全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてオリゴヌクレオチドが標的にする最も５’にあるヌクレオシドを示す。「終止部位」は、オリゴヌクレオチドが標的にするヒト遺伝子配列の最も３’にあるヌクレオシドを示す。下記の表に列挙されているオリゴヌクレオチドは、それぞれ、本明細書において配列番号１と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０１４４９５．２）、または本明細書において配列番号２と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３ゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０３２９７７．９、ヌクレオチド３３０３２００１〜３３０４６０００の切断型）を標的にする。「該当なし」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、その特定の遺伝子配列を１００％の相補性で標的にしないことを示す。
【０５６３】
【表２５−１】
2020072713.tif 000166
【０５６４】
【表２５−２】
2020072713.tif 000167
【０５６５】
【表２５−３】
2020072713.tif 000168
【０５６６】
【表２５−４】
2020072713.tif 000169
【０５６７】
【表２５−５】
2020072713.tif 000170
【０５６８】
【表２５−６】
2020072713.tif 000171
【０５６９】
【表２５−７】
2020072713.tif 000172
【０５７０】
【表２５−８】
2020072713.tif 000173
【０５７１】
【表２５−９】
2020072713.tif 000174
【０５７２】
【表２５−１０】
2020072713.tif 000175
【０５７３】
【表２６−１】
2020072713.tif 000176
【０５７４】
【表２６−２】
2020072713.tif 000177
【０５７５】
【表２６−３】
2020072713.tif 000178
【０５７６】
【表２６−４】
2020072713.tif 000179
【０５７７】
【表２６−５】
2020072713.tif 000180
【０５７８】
【表２６−６】
2020072713.tif 000181
【０５７９】
実施例５：デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）−ｃＥｔギャップマーによるＨｅｐ３ＢにおけるヒトＡＮＧＰＴＬ３のアンチセンス阻害
追加のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするように設計し、インビトロでのＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに対するこれらの効果について試験した。５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ３３７４８７及びＩＳＩＳ２３３７１７も、ベンチマークオリゴヌクレオチドとしてアッセイに含めた。１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度の培養Ｈｅｐ３Ｂ細胞に、電気穿孔を使用して、４，５００ｎＭのア
ンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ２４時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０５８０】
下記の表における新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）−ｃＥｔオリゴヌクレオチドまたは５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。デオキシ、ＭＯＥ及び（Ｓ）−ｃＥｔオリゴヌクレオチドは、１６個のヌクレオシドの長さであり、ここでヌクレオシドは、ＭＯＥ糖修飾、（Ｓ）−ｃＥｔ修飾、またはデオキシ糖残基のいずれかを有する。それぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドの糖修飾は、「ｅｅｋ−ｄ１０−ｋｋｅ」と記載されており、ここで、「ｋ」は、（Ｓ）−ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」は、デオキシリボースを示し、数字は、デオキシリボース糖残基の数を示し、「ｅ」は、ＭＯＥ修飾を示す。５−１０−５ＭＯＥギャップマーは、２０個のヌクレオシドの長さであり、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、それぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが５’方向及び３’方向に隣接している。それぞれのオリゴヌクレオチド全体におけるヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結である。それぞれのオリゴヌクレオチド全体における全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてオリゴヌクレオチドが標的にする最も５’にあるヌクレオシドを示す。「終止部位」は、オリゴヌクレオチドが標的にするヒト遺伝子配列の最も３’にあるヌクレオシドを示す。下記の表に列挙されているオリゴヌクレオチドは、それぞれ、本明細書において配列番号１と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０１４４９５．２）、または本明細書において配列番号２と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３ゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０３２９７７．９、ヌクレオチド３３０３２００１〜３３０４６０００の切断型）を標的にする。「該当なし」は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、その特定の遺伝子配列を１００％の相補性で標的にしないことを示す。
【０５８１】
【表２７−１】
2020072713.tif 000182
【０５８２】
【表２７−２】
2020072713.tif 000183
【０５８３】
【表２７−３】
2020072713.tif 000184
【０５８４】
【表２７−４】
2020072713.tif 000185
【０５８５】
【表２７−５】
2020072713.tif 000186
【０５８６】
【表２７−６】
2020072713.tif 000187
【０５８７】
【表２７−７】
2020072713.tif 000188
【０５８８】
【表２７−８】
2020072713.tif 000189
【０５８９】
【表２７−９】
2020072713.tif 000190
【０５９０】
【表２７−１０】
2020072713.tif 000191
【０５９１】
【表２７−１１】
2020072713.tif 000192
【０５９２】
【表２７−１２】
2020072713.tif 000193
【０５９３】
【表２７−１３】
2020072713.tif 000194
【０５９４】
【表２７−１４】
2020072713.tif 000195
【０５９５】
【表２７−１５】
2020072713.tif 000196
【０５９６】
【表２７−１６】
2020072713.tif 000197
【０５９７】
【表２７−１７】
2020072713.tif 000198
【０５９８】
【表２７−１８】
2020072713.tif 000199
【０５９９】
【表２７−１９】
2020072713.tif 000200
【０６００】
【表２７−２０】
2020072713.tif 000201
【０６０１】
【表２７−２１】
2020072713.tif 000202
【０６０２】
【表２７−２２】
2020072713.tif 000203
【０６０３】
【表２７−２３】
2020072713.tif 000204
【０６０４】
【表２７−２４】
2020072713.tif 000205
【０６０５】
【表２７−２５】
2020072713.tif 000206
【０６０６】
【表２７−２６】
2020072713.tif 000207
【０６０７】
【表２７−２７】
2020072713.tif 000208
【０６０８】
【表２７−２８】
2020072713.tif 000209
【０６０９】
【表２７−２９】
2020072713.tif 000210
【０６１０】
【表２７−３０】
2020072713.tif 000211
【０６１１】
【表２７−３１】
2020072713.tif 000212
【０６１２】
【表２７−３２】
2020072713.tif 000213
【０６１３】
【表２７−３３】
2020072713.tif 000214
【０６１４】
【表２７−３４】
2020072713.tif 000215
【０６１５】
【表２７−３５】
2020072713.tif 000216
【０６１６】
【表２７−３６】
2020072713.tif 000217
【０６１７】
【表２７−３７】
2020072713.tif 000218
【０６１８】
【表２７−３８】
2020072713.tif 000219
【０６１９】
【表２７−３９】
2020072713.tif 000220
【０６２０】
【表２７−４０】
2020072713.tif 000221
【０６２１】
【表２７−４１】
2020072713.tif 000222
【０６２２】
【表２７−４２】
2020072713.tif 000223
【０６２３】
【表２７−４３】
2020072713.tif 000224
【０６２４】
【表２７−４４】
2020072713.tif 000225
【０６２５】
【表２７−４５】
2020072713.tif 000226
【０６２６】
【表２７−４６】
2020072713.tif 000227
【０６２７】
【表２７−４７】
2020072713.tif 000228
【０６２８】
【表２７−４８】
2020072713.tif 000229
【０６２９】
【表２７−４９】
2020072713.tif 000230
【０６３０】
【表２７−５０】
2020072713.tif 000231
【０６３１】
【表２７−５１】
2020072713.tif 000232
【０６３２】
【表２７−５２】
2020072713.tif 000233
【０６３３】
【表２７−５３】
2020072713.tif 000234
【０６３４】
【表２７−５４】
2020072713.tif 000235
【０６３５】
【表２７−５５】
2020072713.tif 000236
【０６３６】
【表２７−５６】
2020072713.tif 000237
【０６３７】
【表２７−５７】
2020072713.tif 000238
【０６３８】
【表２７−５８】
2020072713.tif 000239
【０６３９】
【表２７−５９】
2020072713.tif 000240
【０６４０】
【表２７−６０】
2020072713.tif 000241
【０６４１】
【表２７−６１】
2020072713.tif 000242
【０６４２】
【表２７−６２】
2020072713.tif 000243
【０６４３】
【表２７−６３】
2020072713.tif 000244
【０６４４】
【表２７−６４】
2020072713.tif 000245
【０６４５】
【表２７−６５】
2020072713.tif 000246
【０６４６】
【表２８−１】
2020072713.tif 000247
【０６４７】
【表２８−２】
2020072713.tif 000248
【０６４８】
【表２８−３】
2020072713.tif 000249
【０６４９】
【表２８−４】
2020072713.tif 000250
【０６５０】
【表２８−５】
2020072713.tif 000251
【０６５１】
【表２８−６】
2020072713.tif 000252
【０６５２】
【表２８−７】
2020072713.tif 000253
【０６５３】
【表２８−８】
2020072713.tif 000254
【０６５４】
【表２８−９】
2020072713.tif 000255
【０６５５】
【表２８−１０】
2020072713.tif 000256
【０６５６】
【表２８−１１】
2020072713.tif 000257
【０６５７】
【表２８−１２】
2020072713.tif 000258
【０６５８】
【表２８−１３】
2020072713.tif 000259
【０６５９】
【表２８−１４】
2020072713.tif 000260
【０６６０】
【表２８−１５】
2020072713.tif 000261
【０６６１】
【表２８−１６】
2020072713.tif 000262
【０６６２】
【表２８−１７】
2020072713.tif 000263
【０６６３】
【表２８−１８】
2020072713.tif 000264
【０６６４】
【表２８−１９】
2020072713.tif 000265
【０６６５】
【表２８−２０】
2020072713.tif 000266
【０６６６】
【表２８−２１】
2020072713.tif 000267
【０６６７】
【表２８−２２】
2020072713.tif 000268
【０６６８】
【表２８−２３】
2020072713.tif 000269
【０６６９】
【表２８−２４】
2020072713.tif 000270
【０６７０】
【表２８−２５】
2020072713.tif 000271
【０６７１】
【表２８−２６】
2020072713.tif 000272
【０６７２】
【表２８−２７】
2020072713.tif 000273
【０６７３】
【表２８−２８】
2020072713.tif 000274
【０６７４】
【表２８−２９】
2020072713.tif 000275
【０６７５】
【表２８−３０】
2020072713.tif 000276
【０６７６】
【表２８−３１】
2020072713.tif 000277
【０６７７】
【表２８−３２】
2020072713.tif 000278
【０６７８】
【表２８−３３】
2020072713.tif 000279
【０６７９】
【表２８−３４】
2020072713.tif 000280
【０６８０】
【表２８−３５】
2020072713.tif 000281
【０６８１】
【表２８−３６】
2020072713.tif 000282
【０６８２】
【表２８−３７】
2020072713.tif 000283
【０６８３】
【表２８−３８】
2020072713.tif 000284
【０６８４】
【表２８−３９】
2020072713.tif 000285
【０６８５】
【表２９−１】
2020072713.tif 000286
【０６８６】
【表２９−２】
2020072713.tif 000287
【０６８７】
【表２９−３】
2020072713.tif 000288
【０６８８】
【表２９−４】
2020072713.tif 000289
【０６８９】
【表２９−５】
2020072713.tif 000290
【０６９０】
【表２９−６】
2020072713.tif 000291
【０６９１】
【表２９−７】
2020072713.tif 000292
【０６９２】
【表２９−８】
2020072713.tif 000293
【０６９３】
【表２９−９】
2020072713.tif 000294
【０６９４】
【表２９−１０】
2020072713.tif 000295
【０６９５】
【表２９−１１】
2020072713.tif 000296
【０６９６】
【表２９−１２】
2020072713.tif 000297
【０６９７】
【表２９−１３】
2020072713.tif 000298
【０６９８】
【表２９−１４】
2020072713.tif 000299
【０６９９】
【表２９−１５】
2020072713.tif 000300
【０７００】
【表２９−１６】
2020072713.tif 000301
【０７０１】
【表２９−１７】
2020072713.tif 000302
【０７０２】
【表２９−１８】
2020072713.tif 000303
【０７０３】
【表２９−１９】
2020072713.tif 000304
【０７０４】
【表２９−２０】
2020072713.tif 000305
【０７０５】
【表２９−２１】
2020072713.tif 000306
【０７０６】
【表２９−２２】
2020072713.tif 000307
【０７０７】
【表２９−２３】
2020072713.tif 000308
【０７０８】
【表２９−２４】
2020072713.tif 000309
【０７０９】
【表３０−１】
2020072713.tif 000310
【０７１０】
【表３０−２】
2020072713.tif 000311
【０７１１】
【表３０−３】
2020072713.tif 000312
【０７１２】
【表３０−４】
2020072713.tif 000313
【０７１３】
【表３０−５】
2020072713.tif 000314
【０７１４】
【表３０−６】
2020072713.tif 000315
【０７１５】
【表３０−７】
2020072713.tif 000316
【０７１６】
【表３０−８】
2020072713.tif 000317
【０７１７】
【表３０−９】
2020072713.tif 000318
【０７１８】
【表３０−１０】
2020072713.tif 000319
【０７１９】
【表３０−１１】
2020072713.tif 000320
【０７２０】
【表３０−１２】
2020072713.tif 000321
【０７２１】
【表３０−１３】
2020072713.tif 000322
【０７２２】
【表３０−１４】
2020072713.tif 000323
【０７２３】
【表３０−１５】
2020072713.tif 000324
【０７２４】
【表３０−１６】
2020072713.tif 000325
【０７２５】
【表３０−１７】
2020072713.tif 000326
【０７２６】
【表３０−１８】
2020072713.tif 000327
【０７２７】
【表３０−１９】
2020072713.tif 000328
【０７２８】
【表３０−２０】
2020072713.tif 000329
【０７２９】
【表３０−２１】
2020072713.tif 000330
【０７３０】
【表３０−２２】
2020072713.tif 000331
【０７３１】
【表３０−２３】
2020072713.tif 000332
【０７３２】
【表３０−２４】
2020072713.tif 000333
【０７３３】
【表３０−２５】
2020072713.tif 000334
【０７３４】
【表３０−２６】
2020072713.tif 000335
【０７３５】
【表３０−２７】
2020072713.tif 000336
【０７３６】
【表３０−２８】
2020072713.tif 000337
【０７３７】
【表３０−２９】
2020072713.tif 000338
【０７３８】
【表３０−３０】
2020072713.tif 000339
【０７３９】
【表３０−３１】
2020072713.tif 000340
【０７４０】
【表３０−３２】
2020072713.tif 000341
【０７４１】
【表３０−３３】
2020072713.tif 000342
【０７４２】
【表３０−３４】
2020072713.tif 000343
【０７４３】
【表３０−３５】
2020072713.tif 000344
【０７４４】
【表３１−１】
2020072713.tif 000345
【０７４５】
【表３１−２】
2020072713.tif 000346
【０７４６】
【表３１−３】
2020072713.tif 000347
【０７４７】
【表３１−４】
2020072713.tif 000348
【０７４８】
【表３１−５】
2020072713.tif 000349
【０７４９】
【表３１−６】
2020072713.tif 000350
【０７５０】
【表３１−７】
2020072713.tif 000351
【０７５１】
【表３１−８】
2020072713.tif 000352
【０７５２】
【表３１−９】
2020072713.tif 000353
【０７５３】
【表３１−１０】
2020072713.tif 000354
【０７５４】
【表３１−１１】
2020072713.tif 000355
【０７５５】
【表３１−１２】
2020072713.tif 000356
【０７５６】
【表３１−１３】
2020072713.tif 000357
【０７５７】
【表３１−１４】
2020072713.tif 000358
【０７５８】
【表３１−１５】
2020072713.tif 000359
【０７５９】
【表３１−１６】
2020072713.tif 000360
【０７６０】
【表３１−１７】
2020072713.tif 000361
【０７６１】
【表３１−１８】
2020072713.tif 000362
【０７６２】
【表３１−１９】
2020072713.tif 000363
【０７６３】
【表３１−２０】
2020072713.tif 000364
【０７６４】
【表３１−２１】
2020072713.tif 000365
【０７６５】
【表３１−２２】
2020072713.tif 000366
【０７６６】
【表３１−２３】
2020072713.tif 000367
【０７６７】
【表３１−２４】
2020072713.tif 000368
【０７６８】
【表３１−２５】
2020072713.tif 000369
【０７６９】
【表３１−２６】
2020072713.tif 000370
【０７７０】
【表３１−２７】
2020072713.tif 000371
【０７７１】
【表３１−２８】
2020072713.tif 000372
【０７７２】
【表３１−２９】
2020072713.tif 000373
【０７７３】
【表３１−３０】
2020072713.tif 000374
【０７７４】
【表３１−３１】
2020072713.tif 000375
【０７７５】
【表３１−３２】
2020072713.tif 000376
【０７７６】
【表３１−３３】
2020072713.tif 000377
【０７７７】
【表３１−３４】
2020072713.tif 000378
【０７７８】
【表３１−３５】
2020072713.tif 000379
【０７７９】
【表３１−３６】
2020072713.tif 000380
【０７８０】
【表３１−３７】
2020072713.tif 000381
【０７８１】
【表３１−３８】
2020072713.tif 000382
【０７８２】
【表３１−３９】
2020072713.tif 000383
【０７８３】
【表３１−４０】
2020072713.tif 000384
【０７８４】
【表３１−４１】
2020072713.tif 000385
【０７８５】
【表３１−４２】
2020072713.tif 000386
【０７８６】
【表３１−４３】
2020072713.tif 000387
【０７８７】
【表３１−４４】
2020072713.tif 000388
【０７８８】
【表３１−４５】
2020072713.tif 000389
【０７８９】
【表３１−４６】
2020072713.tif 000390
【０７９０】
【表３１−４７】
2020072713.tif 000391
【０７９１】
【表３１−４８】
2020072713.tif 000392
【０７９２】
【表３１−４９】
2020072713.tif 000393
【０７９３】
【表３１−５０】
2020072713.tif 000394
【０７９４】
【表３１−５１】
2020072713.tif 000395
【０７９５】
【表３１−５２】
2020072713.tif 000396
【０７９６】
実施例６：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３のアンチセンス阻害
追加のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＡＮＧＰＴＬ３核酸を標的にするように設計し、インビトロでのＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに対するこれらの効果について試験した。１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度の培養Ｈｅｐ３Ｂ細胞に、電気穿孔を使用し
て、４，５００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ２４時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０７９７】
下記の表における新たに設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、５−１０−５ＭＯＥまたは３−１０−４ＭＯＥギャップマーとして設計した。５−１０−５ＭＯＥギャップマーは、２０個のヌクレオシドの長さであり、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドから構成され、それぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが５’方向及び３’方向に隣接している。３−１０-４ＭＯＥギャップ
マーは、１７個のヌクレオシドの長さであり、中央ギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドをから構成され、それぞれ３個及び４個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが５’方向及び３’方向に隣接している。５’ウイングセグメントにおけるそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントにおけるそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。５’ウイングセグメントにおけるそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントにおけるそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。それぞれのギャップマー全体におけるヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結である。それぞれのギャップマー全体における全てのシトシン残基は、５−メチルシトシンである。「開始部位」は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的にする最も５’にあるヌクレオシドを示す。「終止部位」は、ギャップマーが標的にするヒト遺伝子配列の最も３’にあるヌクレオシドを示す。下記の表に列挙されている各ギャップマーは、本明細書において配列番号１と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０１４４９５．２）、または本明細書において配列番号２と指定されるヒトＡＮＧＰＴＬ３ゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０３２９７７．９、ヌクレオチド３３０３２００１〜３３０４６０００の切断型）を標的にする。「該当なし」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、その特定の遺伝子配列を１００％の相補性で標的にしないことを示す。 
【０７９８】
【表３２−１】
2020072713.tif 000397
【０７９９】
【表３２−２】
2020072713.tif 000398
【０８００】
【表３２−３】
2020072713.tif 000399
【０８０１】
【表３２−４】
2020072713.tif 000400
【０８０２】
実施例７：Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３の用量依存性アンチセンス阻害
上記に記載された研究においてＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示したデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において様々な用量で試験した。両方とも５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ２３３７１７及びＩＳＩＳ３３７８４７も、研究に含めた。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似した培養条件を有した一連の実験によって試験した。それぞれの実験の結果を、下記の別々の表に提示する。
【０８０３】
細胞を１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度で平板培養し、電気穿孔を使用して、下記の表に特定されているように０．８１３μＭ、１．６２５μＭ、３．２５μＭ、６．５００μＭ及び１３．００μＭの濃度でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ１６時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴ
Ｓ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０８０４】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）も提示されている。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞において、用量依存的に有意に低減された。
【０８０５】
【表３３】
2020072713.tif 000401
【０８０６】
【表３４】
2020072713.tif 000402
【０８０７】
【表３５】
2020072713.tif 000403
【０８０８】
【表３６】
2020072713.tif 000404
【０８０９】
実施例８：Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３の用量依存性アンチセンス阻害 
上記に記載された研究においてＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示したデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において様々な用量で試験した。５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ３３７８４７も、研究に含めた。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、類似した培養条件を有した一連の実験によって試験した。それぞれの実験の結果を、下記の別々の表に提示する。
【０８１０】
細胞を１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度で平板培養し、電気穿孔を使用して、
下記の表に特定されているように０．１６０μＭ、０．４８１μＭ、１．４４４μＭ、４．３３３μＭ及び１３．００μＭの濃度でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ１６時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０８１１】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）も提示されている。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞において、用量依存的に有意に低減された。
【０８１２】
【表３７】
2020072713.tif 000405
【０８１３】
【表３８】
2020072713.tif 000406
【０８１４】
【表３９】
2020072713.tif 000407
【０８１５】
実施例９：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３の用量依存性アンチセンス阻害
上記の実施例においてＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示したＭＯＥギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において様々な用量で試験した。細胞を１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度で平板培養し、電気穿孔を使用して、下記の表に特定されているように０．１６０μＭ、０．４８１μＭ、１．４４４μＭ、４．３３３μＭ及び１３．００μＭの濃度でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ１６時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量
的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０８１６】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）も提示されている。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞において、用量依存的に有意に低減された。
【０８１７】
【表４０】
2020072713.tif 000408
【０８１８】
実施例１０：デオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３の用量依存性アンチセンス阻害
上記に記載された研究においてＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの有意なインビトロ阻害を示したデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において様々な用量で試験した。細胞を１ウエルあたり２０，０００個の細胞密度で平板培養し、電気穿孔を使用して、下記の表に特定されているように０．１１１μＭ、０．３３３μＭ、１．００μＭ、３．００μＭ及び９．００μＭの濃度でアンチセンスオリゴヌクレオチドを形質移入した。およそ１６時間の処理時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲにより測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定して、全ＲＮＡ含有量に従って調整した。結果を、未処理対照細胞と比べたＡＮＧＰＴＬ３の阻害率として提示する。
【０８１９】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半減阻害濃度（ＩＣ５０）も提示されている。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞において、用量依存的に有意に低減された。
【０８２０】
【表４１】
2020072713.tif 000409
【０８２１】
【表４２】
2020072713.tif 000410
【０８２２】
【表４３】
2020072713.tif 000411
【０８２３】
【表４４】
2020072713.tif 000412
【０８２４】
実施例１１：ｈｕＡＮＧＰＴＬ３遺伝子導入マウスにおけるヒトＡＮＧＰＴＬ３のアンチセンス阻害 
上記に研究において記載されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ヒトＡＮＧＰＴＬ３導入遺伝子を有するＣ５７Ｂｌ／６マウス（Ｔｇマウス）におけるヒトＡＮＧＰＴＬ３
ｍＲＮＡ転写物を低減する能力について更に評価した。
【０８２５】
研究１
雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研
究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８２６】
マウスの群は、５−１０−５ＭＯＥギャップマーの腹腔内注射を、５０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８２７】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢを用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。ｍＲＮＡレベルも、ヒトプライマープローブセットＲＴＳ１９８４（本明細書において配列番号７と指定されている順方向配列ＣＴＴＣＡＡＴＧＡＡＡＣＧＴＧＧＧＡＧＡＡＣＴ、本明細書において配列番号８と指定されている逆方向配列ＴＣＴＣＴＡＧＧＣＣＣＡＡＣＣＡＡＡＡＴＴＣ、本明細書において配列番号９と指定されているプローブ配列ＡＡＡＴＡＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＡＴ）を用いて測定した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。
【０８２８】
【表４５】
2020072713.tif 000413
【０８２９】
タンパク質分析
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。結果は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの低減をもたらしたことを示している。
【０８３０】
【表４６】
2020072713.tif 000414
【０８３１】
血漿化学マーカー
１０日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８３２】
【表４７】
2020072713.tif 000415
【０８３３】
研究２
雄Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８３４】
マウスの群は、５−１０−５ＭＯＥギャップマーの腹腔内注射を、５０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８３５】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ＲＴＳ１９８４を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによ
る治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。
【０８３６】
【表４８】
2020072713.tif 000416
【０８３７】
タンパク質分析
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。結果は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの低減をもたらしたことを示している。
【０８３８】
【表４９】
2020072713.tif 000417
【０８３９】
血漿化学マーカー
８日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（Ａ
ＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８４０】
【表５０】
2020072713.tif 000418
【０８４１】
研究３
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８４２】
マウスの群は、５−１０−５ＭＯＥギャップマーの腹腔内注射を、２．５ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、または２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、３週間にわたって受けた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８４３】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ｈＡＮＧＰＴＬ３＿ＬＴＳ０１０２２（本明細書において配列番号１０と指定されている順方向配列ＡＡＡＴＴＴＴＡＧＣＣＡＡＴＧＧＣＣＴＣＣ、本明細書において配列番号１１と指定されている逆方向配列ＴＧＴＣＡＴＴＡＡＴＴＴＧＧＣＣＣＴＴＣＧ、本明細書において配列番号１２と指定されているプローブ配列ＴＣＡＧＴＴＧＧＧＡＣＡＴＧＧＴＣＴＴＡＡＡＧＡＣＴＴＴＧＴＣＣ）を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。それぞれのギャップマーのＥＤ５０も、下記の表に提示されている。「決定されず」は、ＥＤ５０を決定できなかったことを示す。
【０８４４】
【表５１】
2020072713.tif 000419
【０８４５】
タンパク質分析
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。結果は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの低減をもたらしたことを示している。「決定されず」は、ＥＤ５０を決定できなかったことを示す。
【０８４６】
【表５２】
2020072713.tif 000420
【０８４７】
血漿化学マーカー
１７日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８４８】
【表５３】
2020072713.tif 000421
【０８４９】
研究４
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８５０】
マウスの群は、５−１０−５ＭＯＥギャップマーの腹腔内注射を、２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８５１】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ｈＡＮＧＰＴＬ３＿ＬＴＳ０１０２２を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。
【０８５２】
【表５４】
2020072713.tif 000422
【０８５３】
血漿化学マーカー
１０日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８５４】
【表５５】
2020072713.tif 000423
【０８５５】
研究５
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８５６】
マウスの群は、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、またはデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーの腹腔内注射を、２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８５７】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ＲＴＳ１９８４を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。
【０８５８】
【表５６】
2020072713.tif 000424
【０８５９】
血漿化学マーカー
９日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８６０】
【表５７】
2020072713.tif 000425
【０８６１】
研究６
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８６２】
マウスの群は、デオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドの腹腔内注射を、２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ２３３７１０も、ベンチマークとして含めた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８６３】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ｈＡＮＧＰＴＬ３＿ＬＴＳ０１０２２を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、幾つかのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。
【０８６４】
【表５８】
2020072713.tif 000426
【０８６５】
タンパク質分析
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。結果は、幾つかのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの低減をもたらしたことを示している。
【０８６６】
【表５９】
2020072713.tif 000427
【０８６７】
血漿化学マーカー
１０日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８６８】
【表６０】
2020072713.tif 000428
【０８６９】
研究７
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８７０】
マウスの群は、デオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドの腹腔内注射を、２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ２３３７１０も、ベンチマークとして含めた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８７１】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ｈＡＮＧＰＴＬ３＿ＬＴＳ０１０２２を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。
【０８７２】
【表６１−１】
2020072713.tif 000429
【０８７３】
【表６１−２】
2020072713.tif 000430
【０８７４】
タンパク質分析
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。結果は、幾つかのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、ＡＮＧＰＴＬ３レベルの低減をもたらしたことを示している。この場合、「０」値は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、発現を阻害せず、幾つかの場合では、発現レベルの増加が記録されたこともありうることを示唆している。
【０８７５】
【表６２】
2020072713.tif 000431
【０８７６】
血漿化学マーカー
９日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更
なる研究から除外した。
【０８７７】
【表６３−１】
2020072713.tif 000432
【０８７８】
【表６３−２】
2020072713.tif 000433
【０８７９】
研究８
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８８０】
マウスの群は、デオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドの腹腔内注射を、２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ２３３７１０も、ベンチマークとして含めた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８８１】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ｈＡＮＧＰＴＬ３＿ＬＴＳ０１０２２を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。
【０８８２】
【表６４】
2020072713.tif 000434
【０８８３】
タンパク質分析
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。結果は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、ＡＮＧＰＴＬ３レベルの低減をもたらしたことを示している。
【０８８４】
【表６５】
2020072713.tif 000435
【０８８５】
血漿化学マーカー
８日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８８６】
【表６６】
2020072713.tif 000436
【０８８７】
研究９
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８８８】
マウスの群は、デオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドの腹腔内注射を、２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ２３３７１０も、ベンチマークとして含めた。１つのマウス群は、ＰＢＳの皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８８９】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ｈＡＮＧＰＴＬ３＿ＬＴＳ０１０２２を用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、幾つかのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。この場合、「０」値は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、発現を阻害せず、幾つかの場合では、発現レベルの増加が記録されたこともありうることを示唆している。
【０８９０】
【表６７】
2020072713.tif 000437
【０８９１】
タンパク質分析
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。結果は、幾つかのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、ＡＮＧＰＴＬ３レベルの低減をもたらしたことを示している。この場合、「０」値は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、発現を阻害せず、幾つかの場合では、発現レベルの増加が記録されたこともありうることを示唆している。
【０８９２】
【表６８】
2020072713.tif 000438
【０８９３】
血漿化学マーカー
９日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０８９４】
【表６９】
2020072713.tif 000439
【０８９５】
研究１０
雄及び雌Ｔｇマウスを１２時間の明暗サイクルに維持した。動物を、実験を開始する前に、研究施設において少なくとも７日間順化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、緩衝食塩水（ＰＢＳ）により調製し、０．２ミクロンフィルターで濾過して滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳに溶解した。
【０８９６】
マウスの群は、５−１０−５ＭＯＥギャップマー、またはデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドの腹腔内注射を、５ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、または２５ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、２週間にわたって受けた。１つのマウス群は、ＰＢＳの
皮下注射を、毎週１回、２週間にわたって受けた。ＰＢＳ注射群は、対応するオリゴヌクレオチド治療群と比較するための対照群として機能した。
【０８９７】
ＲＮＡ分析
治療期間の終了時に、ＲＮＡを、ｈＡＮＧＰＴＬ３＿ＬＴＳ０１０２２を用いた及びＲＴＳ３４９２＿ＭＧＢも用いたＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、幾つかのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに低減をもたらした。
【０８９８】
【表７０】
2020072713.tif 000440
【０８９９】
血漿化学マーカー
８日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９００】
【表７１】
2020072713.tif 000441
【０９０１】
実施例１２：ＣＤ１マウスにおけるヒトＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
ＣＤ１（登録商標）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，ＭＡ）は、安全性及び効力試験に頻繁に利用される多目的マウスモデルである。マウスを、上記に記載された研究から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで治療し、様々な血漿化学マーカーのレベルの変化を評価した。
【０９０２】
研究１
雄ＣＤ１マウス（治療群あたり１匹の動物）に、２００ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを単回用量で腹腔内注射した。１匹のＣＤ１マウスに、単回用量のＰＢＳを皮下注射した。マウスを、最後の用量の４８時間後に安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９０３】
血漿化学マーカー
４日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に
提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９０４】
【表７２】
2020072713.tif 000442
【０９０５】
体重
体重を、単回用量のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの１日後に測定し、下記に表に提示する。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９０６】
【表７３】
2020072713.tif 000443
【０９０７】
研究２
雄ＣＤ１マウス（治療群あたり１匹の動物）に、２００ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを単回用量で腹腔内注射した。１匹のＣＤ１マウスに、単回用量のＰＢＳを皮下注射した。マウスを、最後の用量の４８時間後に安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９０８】
血漿化学マーカー
５日目のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼ（ＡＬＴ及びＡＳＴ）の血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、下記の表に提示する。これらの肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９０９】
【表７４】
2020072713.tif 000444
【０９１０】
体重
体重を、単回用量のＩＳＩＳオリゴヌクレオチド後の５日目に測定し、下記に表に提示する。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９１１】
【表７５】
2020072713.tif 000445
【０９１２】
研究３
雄ＣＤ１マウス（治療群あたり４匹の動物）に、１００ｍｇ／ｋｇの５−１０−５ＭＯＥギャップマーを１週間に１回、６週間にわたって腹腔内注射した。４匹の雄ＣＤ１マウスの１つの群には、ＰＢＳを１週間に１回、６週間にわたって腹腔内注射した。マウスを、最後の用量の４８時間後に安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９１３】
血漿化学マーカー
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、様々な肝臓及び腎臓機能マーカーの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して、４５日目に測定した。結果を、下記の表に提示する。これらのマーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９１４】
【表７６】
2020072713.tif 000446
【０９１５】
体重
体重を４３日目に測定し、下記に表に提示する。腎臓、肝臓及び脾臓の重量を、研究の終了時の４５日目に測定した。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９１６】
【表７７】
2020072713.tif 000447
【０９１７】
研究４
雄ＣＤ１マウス（治療群あたり４匹の動物）に、５０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇの５−１０−５ＭＯＥギャップマー、またはデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを１週間に１回、６週間にわたって腹腔内注射した。４匹の雄ＣＤ１マウスの１つの群には、ＰＢＳを１週間に１回、６週間にわたって腹腔内注射した。マウスを、最後の用量の４８時間後に安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９１８】
血漿化学マーカー
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、様々な肝臓及び腎臓機能マーカーの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して、４６日目に測定した。結果を、下記の表に提示する。これらのマーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９１９】
【表７８】
2020072713.tif 000448
【０９２０】
体重
体重を４４日目に測定し、下記に表に提示する。腎臓、肝臓及び脾臓の重量を、研究の終了時の４６日目に測定した。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９２１】
【表７９】
2020072713.tif 000449
【０９２２】
研究５
雄ＣＤ１マウス（治療群あたり４匹の動物）に、５０ｍｇ／ｋｇのデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを１週間に１回、６週間にわたって腹腔内注射した。４匹の雄ＣＤ１マウスの１つの群には、ＰＢＳを１週間に１回、６週間にわたって腹腔内注射した。マウスを、最後の用量の４８時間後に安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９２３】
血漿化学マーカー
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、様々な肝臓及び腎臓機能マーカーの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して、４３日目に測定した。結果を、下記の表に提示する。これらのマーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９２４】
【表８０】
2020072713.tif 000450
【０９２５】
体重
体重を、４１日目に測定し、下記に表に提示する。腎臓、肝臓及び脾臓の重量を、研究の終了時の４３日目に測定した。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９２６】
【表８１】
2020072713.tif 000451
【０９２７】
実施例１３：ヒトＡＮＧＰＴＬ３を標的にするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度の測定
上記に記載された研究から選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度を、４０センチポアズ（ｃＰ）を超える粘度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを選別して除く目的で測定した。４０ｃＰを超える粘度を有するオリゴヌクレオチドは、最適に及ばない粘度を有する。
【０９２８】
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド（３２〜３５ｍｇ）を計量して、ガラスバイアルに入れ、１２０μＬの水を加え、バイアルを５０℃に加熱することにより、アンチセンスオリゴヌクレオチドを溶液に溶解した。   予熱試料の一部（７５μＬ）を、マイクロ粘度計（Ｃ
ａｍｂｒｉｄｇｅ）にピペットで移した。マイクロ粘度計の温度を２５℃に設定し、試料の粘度を測定した。予熱試料の別の一部（２０μＬ）を、２６０ｎＭ、８５℃でのＵＶ読
み取り（Ｃａｒｙ  ＵＶ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）のため、１０ｍＬの水にピペットで加えた。結果を下記の表に提示し、それぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は３５０ｍｇ／ｍｌであり、大部分のアンチセンスオリゴヌクレオチド溶液は、上記に記述された基準下で粘度が最適であることを示している。
【０９２９】
【表８２】
2020072713.tif 000452
【０９３０】
実施例１４：Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおけるヒトＡＮＧＰＴＬ３を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドの耐容性
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは、安全性及び効力評価に使用される多目的モデルである。ラットを、上記の実施例に記載された研究のＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドにより治療し、様々な血漿化学マーカーのレベルの変化を評価した。
【０９３１】
研究１
雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを１２時間の明暗サイクルに維持し、Ｐｕｒｉｎａの通常のラット用固形飼料、ｄｉｅｔ  ５００１を自由に摂取させた。４匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの群には、それぞれ、ＰＢＳまたは１００ｍｇ／ｋｇの５−１０−５ＭＯＥギャップマーを１週間に１回、６週間にわたって皮下注射した。最後の用量の４８時間後に、ラットを安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９３２】
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）及びＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿レベルを４５日目に測定し、結果を、ＩＵ／Ｌで表して下記の表に提示する。ビリルビンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を使用して測定し、結果も、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。肝臓機
能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９３３】
【表８３】
2020072713.tif 000453
【０９３４】
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。結果を、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。総尿タンパク質及び尿クレアチニンのレベルを測定し、総尿タンパク質とクレアチニンとの比を評価した。結果を、下記の表に提示する。
【０９３５】
【表８４】
2020072713.tif 000454
【０９３６】
【表８５】
2020072713.tif 000455
【０９３７】
臓器重量
体重を４２日目に測定し、下記に表に提示する。肝臓、脾臓及び腎臓の重量を研究の終了時の４５日目に測定し、下記の表に提示する。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９３８】
【表８６】
2020072713.tif 000456
【０９３９】
研究２
雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを１２時間の明暗サイクルに維持し、Ｐｕｒｉｎａの通常のラット用固形飼料、ｄｉｅｔ  ５００１を自由に摂取させた。４匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの群には、それぞれ、ＰＢＳまたは５０ｍｇ／ｋｇもしくは１００ｍｇ／ｋｇの５−１０−５ＭＯＥギャップマー、もしくはデオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを１週間に１回、６週間にわたって皮下注射した。最後の用量の４８時間後に、ラットを安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９４０】
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）及びＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿レベルを４４日目に測定し
、結果を、ＩＵ／Ｌで表して下記の表に提示する。ビリルビンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を使用して測定し、結果も、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９４１】
【表８７】
2020072713.tif 000457
【０９４２】
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して４４日目に測定した。結果を、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。総尿タンパク質及び尿クレアチニンのレベルを測定し、総尿タンパク質とクレアチニンとの比を評価した。結果を、下記の表に提示する。
【０９４３】
【表８８】
2020072713.tif 000458
【０９４４】
【表８９】
2020072713.tif 000459
【０９４５】
臓器重量
体重を４２日目に測定し、下記に表に提示する。肝臓、脾臓及び腎臓の重量を研究の終了時の４４日目に測定し、下記の表に提示する。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９４６】
【表９０】
2020072713.tif 000460
【０９４７】
研究３
雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを１２時間の明暗サイクルに維持し、Ｐｕｒｉｎａの通常のラット用固形飼料、ｄｉｅｔ  ５００１を自由に摂取させた。４匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの群には、それぞれ、ＰＢＳまたは５０ｍｇ／ｋｇのデオキ
シ、ＭＯＥ及びｃＥｔオリゴヌクレオチドを１週間に１回、６週間にわたって皮下注射した。最後の用量の４８時間後に、ラットを安楽死させ、臓器及び血漿を更なる分析のために採取した。
【０９４８】
肝臓機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、トランスアミナーゼの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）及びＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿レベルを４４日目に測定し、結果を、ＩＵ／Ｌで表して下記の表に提示する。ビリルビンの血漿レベルも、同じ臨床化学分析器を使用して測定し、結果も、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。肝臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９４９】
【表９１】
2020072713.tif 000461
【０９５０】
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿レベルを、自動臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して４４日目に測定した。結果を、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルに、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。総尿タンパク質及び尿クレアチニンのレベルを測定し、総尿タンパク質とクレアチニンとの比を評価した。結果を、下記の表に提示する。
【０９５１】
【表９２】
2020072713.tif 000462
【０９５２】
【表９３】
2020072713.tif 000463
【０９５３】
臓器重量
体重を４２日目に測定し、下記に表に提示する。肝臓、脾臓及び腎臓の重量を研究の終了時の４４日目に測定し、下記の表に提示する。臓器の重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える任意の変化を引き起こしたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、更なる研究から除外した。
【０９５４】
【表９４】
2020072713.tif 000464
【０９５５】
実施例１５：カニクイザルにおけるヒトＡＮＧＰＴＬ３を標的にするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
カニクイザルを、上記の実施例に記載された研究から選択されたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した。肝臓及び腎臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの効力及び耐容性、並びにこれらの薬物動態プロフィールを、評価した。
【０９５６】
この研究を実施した時点では、カニクイザルのゲノム配列は、全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）のデータベースから入手可能ではなく、したがって、カニクイザルの遺伝子配列との交差反応を確認することができなかった。代わりに、カニクイザルに使用したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列を、アカゲザル配列と相同性について比較した。アカゲザル配列と相同性があるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、カニクイザル配列とも完全に交差反応することが、予測される。試験したヒトアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アカゲザルのゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＷ＿００１１０８６８２．１、ヌクレオチド３０４９００１〜３０６２０００の切断型、本明細書において配列番号３と指定されている）と交差反応する。ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザル配列との相補性が大きいほど、ヒトオリゴヌクレオチドがアカゲザル配列と交差反応できる可能性が大きくなる。配列番号３へのそれぞれのヌクレオチドの開始及び終止部位を下記の表に提示する。「開始部位」は、アカゲザル遺伝子配列においてギャップマーが標的にする最も５’にあるヌクレオチドを示す。   「不適合」は、アカゲザルのゲノム配
列と不適合である、ヒトオリゴヌクレオチドにおける核酸塩基の数を示す。
【０９５７】
【表９５】
2020072713.tif 000465
【０９５８】
治療
研究の前に、サルを少なくとも３０日間、隔離したままにし、その期間、動物を、一般的な健康について毎日観察した。サルは、年齢が２〜４歳であり、体重が２〜４ｋｇであった。５匹の無作為に指定した雄カニクイザルの９つの群のそれぞれには、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、時計回りで背部の４つの部位（すなわち、左側、上部、右側及び下部）に、１つの部位に１用量により皮下注射した。サルには、負荷投与量のＰＢＳまたは４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、第１週は２日に１回（１、３、５及び７日目に）与え、続いてＰＢＳまたは４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳヌクレオチドを１週間に１回、１２週間にわたって（１４、２１、２８、３５、４２、４９、５６、６３、７０、７７及び８４日目に）投与した。
【０９５９】
試験期間の間、サルを、病気または苦痛の兆候について毎日２回観察した。治療、損傷、または病気に起因する瞬間または軽微を超える疼痛または苦痛を経験する任意の動物は、研究指導者と相談した後に、承認された鎮痛薬または作用物質を用いて獣医職員が治療して、疼痛を緩和した。健康不良な、または瀕死状態の可能性がある任意の動物を、更なるモニタリング及び安楽死の可能性のために特定した。例えば、ＩＳＩＳ５６７３２１治療群の１匹の動物は、４５日目に瀕死であることが見出され、殺処分された。動物の予定安楽死は、８６日目（最終用量のおよそ４８時間後）に、ケタミン／キシラジン誘発性麻酔及びペントバルビタールナトリウム投与の後で瀉血により実施した。実施例に記載されているプロトコールは、実験動物委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。
【０９６０】
肝標的の低減
ＲＮＡ分析
８６日目に、ＲＮＡを、ＡＮＧＰＴＬ３のｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ分析のために、肝臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照と比べたｍＲＮＡの変化率として提示する。下記の表に示されているように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳ対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡに有意な低減をもたらした。ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルの分析は、両方ともアカゲザル配列と完全に交差反応するＩＳＩＳ５４４１９９及びＩＳ
ＩＳ５５９２７７が、発現レベルを有意に低減したことを明らかにした。不適合を有するサル配列を標的にする他のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドも、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルを低減することができた。
【０９６１】
【表９６】
2020072713.tif 000466
【０９６２】
タンパク質分析
およそ１ｍＬの血液を利用可能な全ての動物から８５日目に採血し、ＥＤＴＡのカリウム塩を含有する管に入れた。血液試料を、氷中に設置し、遠心分離して（３０００ｒｐｍにより４℃で１０分間）、血漿を得た。
【０９６３】
ヒトＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮのカタログ番号ＤＡＮＬ３０）の使用により、製造会社記載のプロトコールを使用して１：２０，０００に希釈した遺伝子導入血漿試料を用いて定量化した。結果を、下記の表に提示する。ＡＮＧＰＴＬ３の血漿の分析は、ＩＳＩＳ５６３５８０、５４４１９９及びＩＳＩＳ５５９２７７が、持続的にタンパク質レベルを低減したことを明らかにした。他のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドも、ＡＮＧＰＴＬ３レベルを低減することができた。
【０９６４】
【表９７】
2020072713.tif 000467
【０９６５】
耐容性研究
体重測定
動物の全体的な健康に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するため、体重を測定し、下記に表に提示する。結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの体重に対する治療効果が、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測範囲内であったことを示している。特にＩＳＩＳ５６３５８０による治療は、サルの体重に関して十分に耐容された。
【０９６６】
【表９８】
2020072713.tif 000468
【０９６７】
肝臓機能
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの肝機能への効果を評価するため、血液試料を全ての研究群から採血した。血液試料を橈側皮、伏在または大腿静脈から、投与の４８時間後に採血した。サルは、採血の前に一晩絶食させた。血液は、血清分離用の抗凝血薬を有さない管の中に採血した。管を室温で最低９０分間保持し、次に遠心分離して（およそ３，０００ｒｐｍで１０分間）、血清を得た。様々な肝臓機能マーカーのレベルを、Ｔｏｓｈｉｂａ
２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴの血漿レベルを測定し、結果を、ＩＵ／Ｌで表して下記の表に提示する。肝臓機能マーカーのビリルビンを同様に測定し、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。結果は、大部分のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える効果を、肝臓機能に対して有さなかったことを示している。特にＩＳＩＳ５６３５８０による治療は、サルの肝臓機能に関して十分に耐容された。
【０９６８】
【表９９】
2020072713.tif 000469
【０９６９】
【表１００】
2020072713.tif 000470
【０９７０】
【表１０１】
2020072713.tif 000471
【０９７１】
腎臓機能
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの腎臓機能への効果を評価するため、血液試料を全ての研究群から採血した。血液試料を橈側皮、伏在または大腿静脈から、投与の４８時間後に採血した。サルは、採血の前に一晩絶食させた。血液は、血清分離用の抗凝血薬を有さない管の中に採血した。管を室温で最低９０分間保持し、次に遠心分離して（およそ３，０００ｒｐｍで１０分間）、血清を得た。ＢＵＮ及びクレアチニンのレベルを、Ｔｏｓｈｉｂａ  ２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。結果を、ｍｇ／ｄＬで表して下記の表に提示する。
【０９７２】
血漿化学データは、大部分のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチドの予測された範囲を超える効果を、腎臓機能に対して有さなかったことを示している。特にＩＳＩＳ５６３５８０による治療は、サルの腎臓機能に関して十分に耐容された。
【０９７３】
【表１０２】
2020072713.tif 000472
【０９７４】
【表１０３】
2020072713.tif 000473
【０９７５】
血液学
カニクイザルにおけるＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの、血液学的パラメーターに対する任意の効果を評価するため、およそ０．５ｍＬの血液の血液試料を、利用可能な研究動物からそれぞれ採取して、Ｋ２−ＥＤＴＡを含有する管の中に入れた。試料を、ＡＤＶＩＡ１２０血液分析器（Ｂａｙｅｒ，ＵＳＡ）を使用して、赤血球（ＲＢＣ）数、白血球（ＷＢＣ）数、単球、好中球、リンパ球のような個別の白血球数、並びに血小板数、ヘモグロビン含有量及びヘマトクリットについて分析した。データを、下記の表に提示する。
【０９７６】
データは、オリゴヌクレオチドが血液学的パラメーターに、この用量のアンチセンスオリゴヌクレオチドに予測された範囲を超える任意の変化を引き起こさなかったことを示している。特にＩＳＩＳ５６３５８０による治療は、サルの血液学的パラメーターに関して十分に耐容された。
【０９７７】
【表１０４】
2020072713.tif 000474
【０９７８】
【表１０５】
2020072713.tif 000475
【０９７９】
炎症促進性分子に対する効果
カニクイザルにおけるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの任意の炎症効果を評価するため、血液試料を、Ｃ反応性タンパク質及びＣ３レベルの分析のために、投与前の８４日目に採取した。およそ１．５ｍＬの血液を、それぞれの動物から採血し、血清分離用の抗凝血薬を有さない管の中に入れた。管を室温で最低９０分間保持し、次におよそ３，０００ｒｐｍにより室温で１０分間遠心分離して、血清を得た。炎症のマーカーとして機能するＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び補体Ｃ３を、Ｔｏｓｈｉｂａ  ２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。結果は、ＩＳＩＳ５６３５８０による治療がサルにおいて耐容性があったことを示している。
【０９８０】
【表１０６】
2020072713.tif 000476
【０９８１】
【表１０７】
2020072713.tif 000477
【０９８２】
オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度を測定した。  使用した方法は、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出、続く固相抽出から構成される、以前に公開された方法（Ｌｅｅｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）の変更である。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７−アミノ塩基長２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートヌクレオシドのＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書において配列番号１３と指定されている）を、抽出の前に付加した。組織試料濃度を、定量下限（ＬＬＯＱ）がおよそ１．１４μｇ／ｇである較正曲線の使用により計算した。結果を、肝臓または腎臓組織をμｇ／ｇで表して下記の表に提示する。腎臓と肝臓における完全長オリゴヌクレオチド濃度の比を計算した。ＩＳＩＳ５６３５８０による治療後の腎臓と肝臓における完全長オリゴヌクレオチド濃度の比は、評価した他の化合物と比較して、最も最適であることが見出された。
【０９８３】
【表１０８】
2020072713.tif 000478
【０９８４】
実施例１６：ＩＳＩＳ５６３５８０の臨床試験
研究薬剤のＩＳＩＳ５６３５８０の効果を評価するため、第１相盲検無作為化プラセボ対照用量増加試験を、正常な脂質プロファイルを有する健康な志願者に実施した。研究は、研究薬剤ＩＳＩＳ５６３５８０の単回及び多回用量の後に、安全性、耐容性、薬物動態、ＡＮＧＰＴＬ３の血漿レベルに対する効果及び研究対象のリポタンパク質プロファイルを評価した。 
【０９８５】
研究集団は、年齢が１８歳から６５歳までを含む健康な男性及び女性であった。除外基
準には、いずれかの対象の病歴における及び実験値の選別における臨床的に有意な異常が含まれた。対象を、それぞれの単回用量及び多回用量群内でＩＳＩＳ５６３５８０またはプラセボを受けるために、３：１に無作為化した。対象には、研究薬剤またはプラセボを皮下（ＳＣ）投与した。
【０９８６】
血液及び尿試料を、安全性、薬物動態及び薬力学的分析について、研究全体にわたって定期的に集めた。ＩＳＩＳ５６３５８０の安全性及び耐容性は、有害事象の発生率、重篤度及び用量関連性、生命兆候、並びに臨床実験パラメーターを決定することによって評価した。ＩＳＩＳ５６３５８０を投与した対象における安全性の結果を、プラセボを投与した対象と比較した。
【０９８７】
最も頻繁な有害事象は、注射部位の軽度な局所反応である。ＩＳＩＳ５６３５８０による治療は、一般に十分に耐容され、許容される安全性プロファイルを実証した。
【０９８８】
研究薬剤及び単回用量研究による治療
２ｍＬの共栓付ガラスバイアルに含有された研究薬剤ＩＳＩＳ５６３５８０の溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍＬ）を、準備した。バイアルは使い捨て用であった。ＩＳＩＳ５６３５８０溶液及びプラセボは、薬剤師（または、有資格代理人）により調製される。熟練専門家が、研究薬剤の単回用量を腹部、大腿部または上腕部の外側領域に、それぞれの投与日に投与した。合計で１６人の対象がこの研究に登録した。研究設計を、下記の表に提示する。
【０９８９】
【表１０９】
2020072713.tif 000479
【０９９０】
皮下注射量は、Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤ群において、それぞれ０．２５、０．５、１．０及び２．０ｍＬであり、２．０ｍＬの量は２回の非連続的な１．０ｍＬの注射で与えられた。Ａ群では、群内の最初の２人の対象と残りの２人の対象への研究薬剤の投与には、少なくとも２４時間の間隔が必要であった。前の単回用量群の対象が投与を完了し、４日目安全性評価が許容される安全性プロファイルを実証した場合に、用量増加を進めた。
【０９９１】
それぞれの対象の参加期間は、４週間の選別期間、単回用量及び４週間の治療後評価期間を含む、およそ８週間であった。対象は、２、４、８、１５日目に研究施設に追跡調査のために来診し、３０日目に電話接触を受けた。研究薬剤の効果が評価されている。
【０９９２】
研究薬剤及び多回用量研究による治療
共栓付ガラスバイアルに含有された研究薬剤ＩＳＩＳ５６３５８０の溶液（２００ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍＬ）を、準備した。バイアルは使い捨て用であった。ＩＳＩＳ５６３５８０溶液及びプラセボは、薬剤師（または、有資格代理人）により調製される。熟練専門家が、研究薬剤を腹部、大腿部または上腕部の外側領域に、それぞれの投与日に投与した。合計で３２人の対象がこの研究に登録した。研究設計を、下記の表に提示する。
【０９９３】
【表１１０】
2020072713.tif 000480
【０９９４】
皮下注射量は、ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ及びＤＤ群において、それぞれ０．５、１．０、１．５及び２．０ｍＬであり、２．０ｍＬの量は２回の非連続的な１．０ｍＬの注射で与えられた。単回用量群（Ｄ群）の少なくとも４人の対象が投与を完了し、４日目評価が許容される安全性プロファイルを実証した後に、第１の群（ＡＡ群）の投与を開始した。対象は、研究薬剤を第１週には隔日で（１、３及び５日目に）３回の皮下用量を受け、続いて次の５週間にわたって１週間に１回（８、１５、２２、２９及び３６日目）の皮下投与を受け、合計８用量であった。
【０９９５】
それぞれの対象の参加期間は、４週間の選別期間、６週間の治療期間及び１３週間の治療後評価期間を含む、およそ５．５か月間であった。対象は、３７、４３、５０、６４、７８、９２、１０６及び１２７日目に研究施設に追跡調査のために来診した。３６日目の対象における脂質プロファイルの結果を、下記の表に提示する。星印は、統計的に有意な変化を示す（ｐ＜０．０５）。
【０９９６】
ＩＳＩＳ５６３５８０による治療は、３６日目に血漿ＡＮＧＰＴＬ３、トリグリセリド、ＬＤＬコレステロール、非ＨＤＬコレステロール、ＶＬＤＬコレステロール、総コレステロール、アポＢ及びアポＣ−ＩＩＩにおいて、一般に用量依存性低減を生じた。一般に、低減の程度はベースライン脂質レベルと関連し、ベースラインが高いほど大きな低減が対象において観察された。
【０９９７】
【表１１１】
2020072713.tif 000481
【配列表】
2020072713000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年2月6日(2020.2.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２〜３０個の連結ヌクレオシドから成り、且つ配列番号１の核酸塩基１１４０〜１１５９の等長部分に相補的な少なくとも８個の隣接核酸塩基の部分を含む核酸塩基配列を含む修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に少なくとも８０％相補的である、化合物。