(57)【要約】【課題】核輸送を調節する化合物を提供すること。【解決手段】所定の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2020037585.tif 000048
の化合物
（式中、
Ｒ１は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ２は、ＯおよびＳから選択され；
Ｒ３は、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロアリールから選択され（式中、Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレン、ヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分は、任意選択的に独立して置換される）；
Ｒ４は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される）、
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１が、水素およびメチルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、水素である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＯである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４が水素である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロアリールから選択され：
Ｒ３のあらゆるアルキルまたはアルキレン部分が、任意選択的に、独立して、オキソおよび−Ｎ（Ｒ５）２からなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換され、式中、各Ｒ５は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキル、から独立して選択され；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル部分が、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり、任意選択的に、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換され；
Ｒ３のあらゆるヘテロアリール部分が、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり、任意選択的に、１つまたは複数のＣ１〜Ｃ４アルキルで置換される、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が、−（Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記ヘテロシクリルが、ピラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、およびピラゾリルから選択される、請求項７または請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記ヘテロシクリルが、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＣＨ２−ピラジン−２−イル、−ピラジン−２−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択されるモルホリニルＲ３である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレン、ヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、任意選択的に、独立して、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルからなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換される、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレン、ヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、任意選択的に、独立して、式−Ｎ（Ｒ５）２（式中、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される）を有するアミノ基で置換される、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３のあらゆるヘテロアリール部分が、任意選択的に、独立して、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルからなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換され；
Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレンまたはヘテロシクリル部分が、任意選択的に、独立して、オキソ、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルからなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換される、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３が、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３のあらゆるアルキルまたはアルキレン部分が、任意選択的に−Ｎ（Ｒ５）２（式中、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される）で置換され；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、任意選択的にＣ１〜Ｃ４アルキルで置換される、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３が、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジニル、ピペリジニル、ヒドロキシピペリジニル、Ｎ−メチルピペリジニル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、およびメチルピラゾリルから選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３が、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３が、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＣＨ２−ピラジン−２−イル、−ピラジン−２−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
構造式、
【表１】
2020037585.tif 000049
のいずれか１つによって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１９】
化合物１、２、３、４、８、１１、１２、および１３のいずれか１つから選択される、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる医薬組成物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の医薬組成物の治療有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含んでなる、ＣＲＭ１活性関連障害を治療する方法。
【請求項２２】
前記障害が、増殖性疾患、炎症性疾患、自己免疫障害、ウイルス感染症、眼科疾患、神経変性疾患、異常な組織成長障害、食物摂取量関連障害、アレルギー、および呼吸器疾患から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患が、がんである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記がんが、リンパ腫である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が、がんを治療するのに有用な第２の治療薬と共に投与される、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記疾患が、関節炎である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記疾患が、乾癬である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記疾患が、肥満である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
請求項２０に記載の医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含んでなる、それを必要とする対象において創傷治癒を促進する方法。
【請求項３０】
前記創傷が、外傷、外科的創傷、内傷、慢性創傷、潰瘍、火傷であり、または放射線被曝の結果である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記創傷が、火傷、切創、開放創、手術創または手術後創、糖尿病性病変、熱傷、化学火傷、放射線火傷、褥瘡、床擦れ、および糖尿病または芳しくない循環に関連した病状からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核内輸送調節因子およびその使用に関する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年５月９日に出願された米国仮特許出願第６１／６４４，８０２号明細書、および２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９８，１８８号明細書の優先権を主張する。上記出願の教示全体は、参照によって本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００３】
ほとんどの主要なヒト固形および血液悪性腫瘍からの細胞は、多様な発がん性タンパク質、腫瘍サプレッサータンパク質、および細胞周期制御因子の異常な細胞局在を示す（Ｃｒｏｎｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．２００４、Ｆａｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．２００６）。例えば特定のｐ５３変異は、核内でなく細胞質中への局在化をもたらす。これは腫瘍サプレッサー機能が無傷であるにもかかわらず、正常な増殖制御の喪失をもたらす。その他の腫瘍では、野生型ｐ５３は細胞質中に隔離され、または迅速に分解されて、この場合もまた、そのサプレッサー機能の喪失につながる。機能性ｐ５３タンパク質の適切な核局在化の復元は、新生物細胞のいくつかの特性を正常化し得て（Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．２００８；Ｈｏｓｈｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．２００８；Ｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９９ａ；Ｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９９ｂ；Ｓｍａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）、ＤＮＡ損傷剤に対するがん細胞の感受性を復元し得て（Ｃａｉ  ｅｔ  ａｌ．２００８）、確立した腫瘍（Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ  ＆  ＤｅＰｉｎｈｏ  ２００７、Ｘｕｅ  ｅｔ  ａｌ．２００７）の退縮をもたらし得る。フォークヘッド（Ｔｕｒｎｅｒａｎｄ  Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ２００８）およびｃ−Ａｂｌ（Ｖｉｇｎａｒｉ  ａｎｄ  Ｗａｎｇ  ２００１）などのその他の腫瘍サプレッサータンパク質についても、同様のデータが得られている。これに加えて、いくつかの腫瘍サプレッサーおよび増殖制御タンパク質の異常な局在化が、自己免疫疾患の発病に関与することもある（Ｄａｖｉｓ  ２００７、Ｎａｋａｈａｒａ  ２００９）。ＣＲＭ１の阻害は、特異的腫瘍サプレッサータンパク質（ＴＳＰ）が欠失し、または機能不全である、家族性がん症候群（例えば１つのｐ５３対立遺伝子の欠損に起因するリー・フラウメニ症候群、ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２がん症候群）において特に興味深い効用を提供してもよく、ＣＲＭ１阻害剤の全身性（または局所性）投与によるＴＳＰレベルの増大は、正常な腫瘍サプレッサー機能の復元を助け得る。
【０００４】
特定のタンパク質およびＲＮＡは、それらが分子を核内に搬入する場合はインポーチンに分類され、分子を核外に搬出する場合はエクスポーチンに分類される、特化された輸送分子によって核に搬入され、それから搬出される（Ｔｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．２００７；Ｓｏｒｏｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２００７）。核に搬入されそれから搬出されるタンパク質は、妥当な輸送体との相互作用する可能にする、核内搬入／局在化（ＮＬＳ）または搬出（ＮＥＳ）配列を含有する。エクスポーチン−１またはＸｐｏ１とも称されるＣｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  Ｒｅｇｉｏｎ  Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  １（Ｃｒｍ１）は、主要なエクスポーチンである。
【０００５】
Ｃｒｍ１の過剰発現は、ヒト卵巣がん（Ｎｏｓｋｅ  ｅｔ  ａｌ．２００８）、子宮頸がん（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．２００９）、膵臓がん（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００９）、肝細胞がん（Ｐａｓｃａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．２００５）、および骨肉腫（Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．２００９）をはじめとするいくつかの腫瘍において報告されており、独立してこれらの腫瘍型の芳しくない臨床転帰と関連付けられている。
【０００６】
Ｃｒｍ１の阻害は、遺伝子発現、細胞増殖、血管新生、およびエピジェネティックスと関連付けられている、ｐ５３、ｃ−Ａｂｌ、ｐ２１、ｐ２７、ｐＲＢ、ＢＲＣＡ１、ＩｋＢ、ＩＣｐ２７、Ｅ２Ｆ４、ＫＬＦ５、ＹＡＰ１、ＺＡＰ、ＫＬＦ５、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５またはフォークヘッドタンパク質（例えばＦＯＸＯ３ａ）などの腫瘍サプレッサータンパク質および／または増殖制御物質の核からの大量流出をブロックする。Ｃｒｍ１阻害剤は、正常な（非形質転）細胞を残しながら、発がん性活性化または増殖促進シグナル存在下であってさえも、がん細胞にアポトーシスを誘導することが示されている。Ｃｒｍ１の阻害の大多数の研究は、天然Ｃｒｍ１阻害剤レプトマイシンＢ（ＬＭＢ）を利用している。ＬＭＢそれ自体は、新生物細胞に対して高度に毒性であるが、耐容性に劣り、動物（Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８６）およびヒト（Ｎｅｗｌａｎｄｓ  ｅｔ  ａｌ．１９９６）において著しい胃腸毒性がある。薬剤様特性を改善するためのＬＭＢの誘導体化は、動物腫瘍モデルにおいて、抗腫瘍活性を維持して耐容性がより良い化合物をもたらす（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００７、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００８、Ｍｕｔｋａ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。したがって核外搬出阻害剤は、新生物およびその他の増殖性疾患において、有益な効果を有し得る。しかし今まで、生体外および生体内で使用するための、小分子薬剤様Ｃｒｍ１阻害剤は、稀であった。
【０００７】
腫瘍サプレッサータンパク質に加えて、Ｃｒｍ１はまた、炎症過程に関与するいくつかの重要なタンパク質も搬出する。これらとしては、ＩｋＢ、ＮＦ−ｋＢ、Ｃｏｘ−２、ＲＸＲα、Ｃｏｍｍｄ１、ＨＩＦ１、ＨＭＧＢ１、ＦＯＸＯ、ＦＯＸＰ、その他が挙げられる。それが免疫グロブリンκ遺伝子発現を駆動するという発見に名前が由来する、転写活性化因子の核因子κＢ（ＮＦ−ｋＢ／ｒｅｌ）ファミリーは、炎症、増殖、免疫、および細胞生存に関与する、多様な遺伝子のｍＲＮＡ発現を調節する。基本条件下では、ＩｋＢと称されるＮＦ−ｋＢのタンパク質阻害剤は、核内でＮＦ−ｋＢに結合して、複合体ＩｋＢ−ＮＦ−ｋＢは、ＮＦ−ｋＢ転写機能を不活性化する。炎症性刺激に応えて、ＩｋＢはＩｋＢ−ＮＦ−ｋＢ複合体から解離し、それはＮＦ−ｋＢを遊離させて、その強力な転写活性を曝露させる。ＮＦ−ｋＢを活性化する多数のシグナルは、ＩｋＢをタンパク質分解の標的にすることでＮＦ−ｋＢを活性化する（ＩｋＢのリン酸化は、それをユビキチン化、次にタンパク質分解のために「標識する」）。核ＩｋＢａ−ＮＦ−ｋＢ複合体は、Ｃｒｍ１によって細胞質に搬入され得て、そこで解離してＮＦ−ｋＢが再活性化され得る。ユビキチン化ＩｋＢもまたＮＦ−ｋＢ複合体から解離して、ＮＦ−ｋＢ転写活性が復元されてもよい。ヒト好中球およびマクロファージ様細胞（Ｕ９３７）へのＣｒｍ１誘導性搬入のＬＭＢによる阻害は、転写的に不活性の核ＩｋＢａ−ＮＦ−ｋＢ複合体の蓄積をもたらすだけでなく、細胞刺激時であってもさえもＮＦ−ｋＢの初期活性化もまた妨げる（Ｇｈｏｓｈ  ２００８、Ｈｕａｎｇ  ２０００）。別の研究では、ＬＭＢによる処理は、肺微小血管内皮細胞中で、ＩＬ−１β誘導性ＮＦ−ｋＢＤＮＡ結合（ＮＦ−ｋＢ転写活性化の最初のステップ）、ＩＬ−８発現、および細胞間接着分子発現を阻害した（Ｗａｌｓｈ  ２００８）。ＣＯＭＭＤ１は、ＮＦ−ｋＢおよび低酸素誘導因子１（ＨＩＦ１）転写活性の双方に対する、別の核阻害剤である。Ｃｒｍ１阻害によってＣＯＭＭＤ１の核外搬出をブロックすることは、ＮＦ−ｋＢおよびＨＩＦ１転写活性阻害の増大をもたらす（Ｍｕｌｌｅｒ  ２００９）。
【０００８】
Ｃｒｍ１はまた、レチノイドＸ受容体α（ＲＸＲα）輸送も媒介する。ＲＸＲαは肝臓中で高度に発現されて、胆汁酸、コレステロール、脂肪酸、ステロイド、および異物代謝、および恒常性の調節において、中心的役割を果たす。肝臓炎症中には、主にＣｒｍ１によるＲＸＲαの炎症媒介核外搬出のために、核ＲＸＲαレベルは顕著に低下する。Ｌｅｐ  Ｂは、ヒト肝臓由来細胞において、ＩＬ−１β誘導性の細胞質におけるＲＸＲαレベル増大を妨げることができる（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ２００６）。
【０００９】
ＮＦ−ｋＢ、ＨＩＦ−１、およびＲＸＲαシグナル伝達におけるＣｒｍ１媒介の核外搬出の役割は、核外搬出をブロックすることが、血管系（血管炎、動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、アテローム性動脈硬化）、皮膚科学的（上記参照）、リウマチ学的（リウマチ性および関連関節炎、乾癬性関節炎、脊椎関節症、結晶性関節症、全身性エリテマトーデス、混合性結合組織疾患、筋炎症候群、皮膚筋炎、封入体筋炎、未分化結合組織病、シェーグレン症候群、強皮症、および重複症候群など）をはじめとする、複数の組織および臓器にわたる多数の炎症過程において、潜在的に有益であり得ることを示唆する。
【００１０】
ＣＲＭ１の阻害は、ＩＣｐ２７、Ｅ２Ｆ４、ＫＬＦ５、ＹＡＰ１、ＺＡＰのような一連の転写因子を阻害／活性化することで、遺伝子発現に影響を及ぼす。
【００１１】
Ｃｒｍ１の阻害は、炎症性皮膚疾患（アトピー、アレルギー性皮膚炎、化学性皮膚炎、乾癬）、日焼けによる損傷（紫外線／ＵＶ損傷）、および感染症をはじめとする、多数の皮膚科学的症候群に対する潜在的な治療効果を有する。ＬＭＢを用いて最も良く研究されたＣＲＭ１の阻害は、正常なケラチノサイトに対する最小の影響を示し、ＵＶ、ＴＮＦａ、またはその他の炎症性刺激に曝露したケラチノサイトに対する抗炎症活性を発揮した（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  ＆  Ｓｈｉｎｋａｉ  ２００５、Ｋａｎｎａｎ  ＆  Ｊａｉｓｗａｌ  ２００６）。Ｃｒｍ１の阻害はまた、ケラチノサイト（Ｓｃｈａｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２０１０、Ｋａｎｎａｎ  ＆  Ｊａｉｓｗａｌ  ２００６）およびその他の細胞型（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００９）を酸化損傷から保護する、ＮＲＦ２（核因子赤血球系関連因子２）活性を上方制御する。ＬＭＢは、ＨＰＶ１６などの発がん性ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）株に感染したケラチノサイトにアポトーシスを誘導するが、未感染ケラチノサイトでは誘導しない（Ｊｏｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。
【００１２】
Ｃｒｍ１はまた、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病、および筋萎縮性側索硬化をはじめとする、神経変性疾患に有用であってもよい、重要な神経保護タンパク質の輸送も媒介する。例えば、（１）ＮＲＦ２（Ｗａｎｇ  ２００９）、ＦＯＸＡ２（Ｋｉｔｔａｐｐａ  ｅｔ  ａｌ．２００７）などの重要な神経防護作用制御因子の核内保持を強制して神経細胞内に留め、および／または（２）グリア細胞の核内へのＩκＢ隔離によりＮＦκＢ転写活性を阻害することで、Ｃｒｍ１の阻害は、これらの障害で見られる神経細胞死を遅延または予防し得る。異常なグリア細胞増殖を、ＣＲＭ１レベルまたはＣＲ１機能の異常と結びつける証拠もある（Ｓｈｅｎ  ２００８）。
【００１３】
主にＣＲＭ１を通じて媒介される、損なわれていない核外搬出はまた、多数のウイルスの損なわれていない成熟にも必要である。それらの生活環に、核外搬出、および／またはＣＲＭ１それ自体が関係があるとされるウイルスとしては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、アデノウイルス、サルレトロウイルス１型、ボルナ病ウイルス、インフルエンザ（通常株ならびにＨ１Ｎ１および鳥類Ｈ５Ｎ１株）、Ｂ（ＨＢＶ）およびＣ（ＨＣＶ）型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、デング（Ｄｕｎｇｅｅ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス、黄熱病ウイルス、西ナイルウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、およびメルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＶ）が挙げられる。（Ｂｈｕｖａｎａｋａｎｔｈａｍ  ２０１０、Ｃｏｈｅｎ  ２０１０、Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  １９９８）。損なわれていない核外搬出に依存する、追加的なウイルス感染症が近い将来発見されるものと思われる。
【００１４】
核小体を通り抜けて、核と細胞質の間を往復するＨＩＶ−１  Ｒｅｖタンパク質は、Ｒｅｖ応答要素（ＲＲＥ）ＲＮＡを含有する、スプライシングされていない、そして個々にスプライスされている、ＨＩＶ転写物のＣＲＭ１搬出経路による搬出を容易にする。ＬｅｐＢまたはＰＫＦ０５０−６３８などのＣＲＭ１阻害剤を使用するＲｅｖ媒介ＲＮＡ輸送の阻害は、ＨＩＶ−１転写過程を停止させ、新しいＨＩＶ−１ビリオン生成を阻害して、それによってＨＩＶ−１レベルを低下させ得る（Ｐｏｌｌａｒｄ  １９９８、Ｄａｅｌｅｍａｎｓ  ２００２）。
【００１５】
デングウイルス（ＤＥＮＶ）は、一般的な節足動物媒介ウイルス疾患であるデング熱（ＤＦ）と、そのより重篤で潜在的に致死性のデング出血熱（ＤＨＦ）の病原体である。ＤＨＦは、ＤＥＮＶに対する過剰な炎症応答の結果のようである。ＮＳ５は、ＤＥＮＶの最大かつ最も良く保存されたタンパク質である。ＣＲＭ１は、核から、ＮＳ５の機能の大部分がそこで媒介される細胞質への、ＮＳ５輸送を調節する。ＣＲＭ１が媒介するＮＳ５の搬出阻害は、ウイルス生成動態の変化をもたらし、炎症性ケモカインインターロイキン−８（ＩＬ−８）の誘導を低下させ、ＤＥＮＶ、そしてＣ型肝炎ウイルスをはじめとする、その他の医学的に重要なフラビウイルスによって引き起こされる疾患の治療に、新しい手段を提示する（Ｒａｗｌｉｎｓｏｎ  ２００９）。
【００１６】
核外に出るためにＣＲＭ１を使用する、ウイルスにコードされたその他のＲＮＡ結合タンパク質としては、ＨＳＶ１型テグメントタンパク質（ＶＰ１３／１４、またはｈＵＬ４７）、ヒトＣＭＶタンパク質ｐｐ６５、ＳＡＲＳコロナウイルスＯＲＦ  ３ｂタンパク質、およびＲＳＶマトリックス（Ｍ）タンパク質が挙げられる（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ２００８、Ｓａｎｃｈｅｚ  ２００７、Ｆｒｅｕｎｄｔ  ２００９、Ｇｈｉｌｄｙａｌ  ２００９）。
【００１７】
興味深いことに、これらのウイルスの多くは、慢性ＨＢＶまたはＨＣＶ感染症に起因する肝細胞がん（ＨＣＣ）、ＨＰＶに起因する子宮頸がん、およびＭＣＶと関連付けられているメルケル細胞がんをはじめとする、特定タイプのヒトのがんと関連付けられている。したがってＣＲＭ１阻害剤は、ウイルス伝染過程、ならびにこれらのウイルスに起因する悪性形質転換過程の双方に対して、有益な効果を有し得る。
【００１８】
ＣＲＭ１は核局在化を制御し、ひいてはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）、およびヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴ）をはじめとする酵素を代謝する、複数のＤＮＡの活性を制御する。不可逆的ＣＲＭ１阻害剤による心筋細胞肥大の抑制が実証されており、肥大性遺伝的プログラムを抑制することが知られている酵素である、ＨＤＡＣ５の核内保持（および活性化）と関連があると考えられる（Ｍｏｎｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．２００９）。したがってＣＲＭ１阻害は、特定形態のうっ血性心不全および肥大性心筋症をはじめとする肥大性症候群において、有益な効果を有してもよい。
【００１９】
ＣＲＭ１はまた、その他の障害とも関連付けられている。網膜神経節細胞の変性および視力喪失によって特徴付けられる遺伝性疾患であるレーバー病は、ＣＲＭ１スイッチの不活動と関連付けられている（Ｇｕｐｔａ  Ｎ  ２００８）。神経変性障害を核輸送異常と結びつける証拠もある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｍｕｔｋａ  Ｓ，Ｙａｎｇ  Ｗ，Ｄｏｎｇ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．２００９．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６９：５１０−７．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
上記を鑑みて、核輸送を調節する化合物の発見が望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明は、核輸送調節因子として有用な化合物およびその薬学的に許容可能な塩と、本発明の化合物を含んでなる薬学的に許容可能な組成物と、前記組成物を様々な障害の治療において使用する方法とに関する。今や、本発明の核輸送調節因子およびその薬学的に許容可能な塩および／または組成物が、マウス中でＡＵＣによって判定される望ましい生体内曝露を提供する一方で、その他の調節因子と比較してより低い脳透過性レベルを示すことが分かった。本発明の化合物は、一般式Ｉ：
【化１】
2020037585.tif 000002
またはその薬学的に許容可能な塩を有し、式中、各変数は、本明細書に定義され記載されるとおりである。
【００２３】
本発明の化合物およびその薬学的に許容可能な組成物は、不適当な核輸送によって引き起こされる、異常な細胞応答にと関連づけられている、多様な疾患、障害または病状の治療に有用である。このような疾患、障害、または病状としては、本明細書で記載されるものが挙げられる。
【００２４】
本発明によって提供される化合物はまた、生物学的および病理学的現象における核輸送調節の研究；このようなキナーゼによって媒介される細胞内情報伝達経路の研究；および新しい核輸送調節因子の比較評価のためにも有用である。
【００２５】
前述の事項は、以下の本発明の例証的実施形態のより具体的な説明から、明らかになるであろう。
【００２６】
即ち、本発明の要旨は、
〔１〕式Ｉ：
【化Ａ】
2020037585.tif 000003
の化合物
（式中、
Ｒ１は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ２は、ＯおよびＳから選択され；
Ｒ３は、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロアリールから選択され（式中、Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレン、ヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分は、任意選択的に独立して置換される）；
Ｒ４は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される）、
またはその薬学的に許容可能な塩、
〔２〕Ｒ１が、水素およびメチルから選択される、〔１〕に記載の化合物、
〔３〕Ｒ１が、水素である、〔２〕に記載の化合物、
〔４〕Ｒ２がＯである、〔１〕〜〔３〕のいずれか一に記載の化合物、
〔５〕Ｒ４が水素である、〔１〕〜〔４〕のいずれか一に記載の化合物、
〔６〕Ｒ３が、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロアリールから選択され：
Ｒ３のあらゆるアルキルまたはアルキレン部分が、任意選択的に、独立して、オキソおよび−Ｎ（Ｒ５）２からなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換され、式中、各Ｒ５は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキル、から独立して選択され；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル部分が、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり、任意選択的に、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換され；
Ｒ３のあらゆるヘテロアリール部分が、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり、任意選択的に、１つまたは複数のＣ１〜Ｃ４アルキルで置換される、
〔１〕〜〔５〕のいずれか一に記載の化合物、
〔７〕Ｒ３が、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルである、〔６〕に記載の化合物、
〔８〕Ｒ３が、−（Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルである、〔７〕に記載の化合物、
〔９〕前記ヘテロシクリルが、ピラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、およびピラゾリルから選択される、〔７〕または〔８〕に記載の化合物、
〔１０〕前記ヘテロシクリルが、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＣＨ２−ピラジン−２−イル、−ピラジン−２−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択されるモルホリニルＲ３である、〔９〕に記載の化合物、
〔１１〕Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレン、ヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、任意選択的に、独立して、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルからなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換される、
〔１〕〜〔５〕のいずれか一に記載の化合物、
〔１２〕Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレン、ヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、任意選択的に、独立して、式−Ｎ（Ｒ５）２（式中、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される）を有するアミノ基で置換される、
〔１〕〜〔５〕のいずれか一に記載の化合物、
〔１３〕Ｒ３のあらゆるヘテロアリール部分が、任意選択的に、独立して、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルからなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換され；
Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレンまたはヘテロシクリル部分が、任意選択的に、独立して、オキソ、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルからなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換される、
〔１〕〜〔５〕のいずれか一に記載の化合物、
〔１４〕Ｒ３が、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロアリールから選択され；
Ｒ３のあらゆるアルキルまたはアルキレン部分が、任意選択的に−Ｎ（Ｒ５）２（式中、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される）で置換され；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分が、任意選択的にＣ１〜Ｃ４アルキルで置換される、
〔１〕〜〔５〕のいずれか一に記載の化合物、
〔１５〕Ｒ３が、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジニル、ピペリジニル、ヒドロキシピペリジニル、Ｎ−メチルピペリジニル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、およびメチルピラゾリルから選択される、〔１４〕に記載の化合物、
〔１６〕Ｒ３が、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される、〔１５〕に記載の化合物、
〔１７〕Ｒ３が、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＣＨ２−ピラジン−２−イル、−ピラジン−２−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される、〔１６〕に記載の化合物、
〔１８〕構造式、
【表Ａ】
2020037585.tif 000004
のいずれか１つによって表される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、
〔１９〕化合物１、２、３、４、８、１１、１２、および１３のいずれか１つから選択される、〔１８〕に記載の化合物、
〔２０〕〔１〕〜〔１９〕のいずれか一に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる医薬組成物、
〔２１〕〔２０〕に記載の医薬組成物の治療有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含んでなる、ＣＲＭ１活性関連障害を治療する方法、
〔２２〕前記障害が、増殖性疾患、炎症性疾患、自己免疫障害、ウイルス感染症、眼科疾患、神経変性疾患、異常な組織成長障害、食物摂取量関連障害、アレルギー、および呼吸器疾患から選択される、〔２１〕に記載の方法、
〔２３〕前記疾患が、がんである、〔２２〕に記載の方法、
〔２４〕前記がんが、リンパ腫である、〔２３〕に記載の方法、
〔２５〕前記組成物が、がんを治療するのに有用な第２の治療薬と共に投与される、〔２３〕または〔２４〕に記載の方法、
〔２６〕前記疾患が、関節炎である、〔２１〕に記載の方法、
〔２７〕前記疾患が、乾癬である、〔２１〕に記載の方法、
〔２８〕前記疾患が、肥満である、〔２１〕に記載の方法、
〔２９〕〔２０〕に記載の医薬組成物の治療有効量を対象に投与するステップを含んでなる、それを必要とする対象において創傷治癒を促進する方法、
〔３０〕前記創傷が、外傷、外科的創傷、内傷、慢性創傷、潰瘍、火傷であり、または放射線被曝の結果である、〔２９〕に記載の方法、
〔３１〕前記創傷が、火傷、切創、開放創、手術創または手術後創、糖尿病性病変、熱傷、化学火傷、放射線火傷、褥瘡、床擦れ、および糖尿病または芳しくない循環に関連した病状からなる群から選択される、〔２９〕に記載の方法
に関する。
【発明の効果】
【００２７】
本発明により、核輸送を調節する化合物が提供され得る。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ビヒクル、８０ｍｇ／ｋｇシクロホスファミド、１５ｍｇ／ｋｇの化合物２または７．５ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置されたマウスにおける、Ｚ−１３８異種移植腫瘍の群平均体積を示す、経時的平均腫瘍体積のグラフである（誤差棒は各群のＳＥＭを表す）。
【図２】ビヒクル、５ｍｇ／ｋｇシスプラチン、１０ｍｇ／ｋｇの化合物２または５ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置されたマウスにおける、Ａ５４９異種移植腫瘍の群平均体積を示す、経時的平均腫瘍体積のグラフである（誤差棒は各群のＳＥＭを表す）。
【図３Ａ】１２日間の観察期間にわたる、ビヒクル、デキサメタゾン、４ｍｇ／ｋｇの化合物２または７．５ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された、抗コラーゲン抗体誘発性オスＢＡＬＢ／ｃ関節炎マウスの臨床関節炎スコアを示す、経時的総合関節炎スコアのグラフである（￥＝ビヒクル処置群と有意差があるデキサメタゾン処置群；＃＝ビヒクル処置群と有意差がある７．５ｍｇ／ｋｇの化合物２処置群；†＝ビヒクル処置群と有意差がある４ｍｇ／ｋｇの化合物２処置群）。
【図３Ｂ】１２日間の観察期間にわたる、ビヒクル、デキサメタゾン、４ｍｇ／ｋｇの化合物２または７．５ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された、抗コラーゲン抗体誘発性オスＢＡＬＢ／ｃ関節炎マウスの群平均後肢厚さを示す、経時的平均後肢グラフである（￥＝ビヒクル処置群と有意差があるデキサメタゾン処置群；＃＝ビヒクル処置群と有意差がある７．５ｍｇ／ｋｇの化合物２処置群；†＝ビヒクル処置群と有意差がある４ｍｇ／ｋｇの化合物２処置群）。
【図４Ａ】陽性対照または化合物２によってＣＩＡモデルに従って処置された、未感作ラットおよびラットにおける、０〜４の尺度で測定された関節腫脹を示す、経時的関節腫脹のグラフである。
【図４Ｂ】陽性対照または化合物２によってＣＩＡモデルに従って処置された、未感作ラットおよびラット臨関節炎スコアを示す、時間の関数としての臨床スコアのグラフである。
【図５】陽性対照または化合物２によってモデルに従って処置された、未感作ラットおよびラットの後足の組織病理学を示す、ＣＩＡモデルにおける各処置群からの代表的画像である。
【図６Ａ】ビヒクル、ＰＭＡとビヒクル、ＰＭＡと化合物２、またはＰＭＡとベタメタゾンで処置されたメスＢＡＬＢ／ｃマウス左耳介厚の群平均を示す、経時的耳介厚のグラフである。
【図６Ｂ】ビヒクル、ＰＭＡとビヒクル、ＰＭＡと化合物２、またはＰＭＡとベタメタゾンで処置されたメスＢＡＬＢ／ｃマウス右耳介厚の群平均を示す、経時的耳介厚のグラフである。
【図６Ｃ】ビヒクル、ＰＭＡとビヒクル、ＰＭＡと化合物２、またはＰＭＡとベタメタゾンで処置されたメスＢＡＬＢ／ｃマウス左耳介疾患活動性の群平均を示す、疾患活動性グラフである。
【図６Ｄ】ビヒクル、ＰＭＡとビヒクル、ＰＭＡと化合物２、またはＰＭＡとベタメタゾンで処置されたメスＢＡＬＢ／ｃマウス右耳介疾患活動性の群平均を示す、疾患活動性グラフである。
【図７Ａ】ＩＭＱ投与前に、ビヒクル、ＩＭＱとビヒクル、ＩＭＱと１μＭの化合物２、またはＩＭＱと１０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドで処置された、オスＢＡＬＢ／ｃマウスの疾患活動性を示す、経時的疾患活動指数のグラフである。
【図７Ｂ】ＩＭＱ投与後に、ビヒクル、ＩＭＱとビヒクル、ＩＭＱと１μＭの化合物２、またはＩＭＱと１０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドで処置された、オスＢＡＬＢ／ｃマウスの疾患活動性を示す、経時的疾患活動指数のグラフである。
【図８Ａ】ビヒクル（ＶＥＨ）、１．５ｍｇ／ｋｇの化合物または３．０ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された、痩せ型Ｚｕｃｋｅｒラットおよび肥満型Ｚｕｃｋｅｒラットの累積食物摂取量を示す、経時的累積食物摂取量のグラフである。
【図８Ｂ】ビヒクル（ＶＥＨ）、１．５ｍｇ／ｋｇの化合物または３．０ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された、痩せ型Ｚｕｃｋｅｒラットおよび肥満型Ｚｕｃｋｅｒラットの平均食物摂取量を示す、経時的平均食物摂取量のグラフである。
【図９】実験の処置期間（試験１０〜１７日目）および休薬期間（試験２４日目）における、ビヒクル（ＶＥＨ）、１．５ｍｇ／ｋｇの化合物または３．０ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された、痩せ型Ｚｕｃｋｅｒラットおよび肥満型Ｚｕｃｋｅｒラットの百分率体重変化を示す、経時的体重変化百分率の棒グラフである。
【図１０Ａ】研究のベースライン、処置、および洗い出し段階における、ビヒクル、１．５ｍｇ／ｋｇの化合物または３．０ｍｇ／ｋｇ化合物２で処置された、標準固形飼料を与えたラットおよび高脂肪食を与えたラットの累積食物摂取量を示す、経時的累積食物摂取量のグラフである。
【図１０Ｂ】研究のベースライン、処置、および洗い出し段階における、ビヒクル、１．５ｍｇ／ｋｇの化合物または３．０ｍｇ／ｋｇ化合物２で処置された、標準固形飼料を与えたラットおよび高脂肪食を与えたラットの平均体重を示す、経時的平均体重のグラフである。
【図１１】ビヒクル、１．５ｍｇ／ｋｇの化合物または３．０ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された、標準固形飼料を与えたラットおよび高脂肪食を与えたラットの百分率体重変化を示す、経時的体重変化百分率の棒グラフである。
【図１２Ａ−Ｂ】１２Ａ。ノックダウン条件をはじめとする多様な条件下における、Ｎｒｆ２発現のグラフである。１２Ｂ。ノックダウン条件をはじめとする多様な条件下における、ＮＱＯ１発現のグラフである。
【図１２Ｃ】ノックダウン条件をはじめとする多様な条件下における、ＥＰＨＸ１発現のグラフである。
【図１３Ａ−Ｂ】１３Ａ。化合物１が、ＣＯＸ−２転写に影響を及ぼさないことを示す、ＣＯＸ−２  ｍＲＮＡ発現の倍数変化の棒グラフである。未処理ＨｅＬａ細胞（対照）のｑＲＴ−ＰＣＲによるＣＯＸ−２  ｍＲＮＡ発現解析は、１０μＭの化合物１、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα、または１０μＭの化合物１＋２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαで処理されたＨｅＬａ細胞と比較された。１３Ｂ。化合物１が、ＴＮＦα−誘導性ＣＯＸ−２タンパク質発現を阻害することを示す、ＣＯＸ−２タンパク質発現強度のグラフである。
【図１４Ａ】多様な炎症関連ＣＲＭ１カーゴタンパク質の局在化を示す、ＤＭＳＯ、２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦα、または化合物１＋２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαで処理された細胞の画像である。
【図１４Ｂ】ＩκＢ、ＮＦκＢ、ＮＲＦ２、ＰＰＡＲγ、およびＲＸＲαの局在化を示す、ＤＭＳＯ、２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦα、または化合物１＋２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαで処理された細胞の画像である。
【図１５Ａ】ＭＷＭ試験の習得段階中のプラットフォームに到達するまでのマウスの遅延時間に対する、偽処置、対照処置、プロゲステロン処置、および様々な用量の化合物１の効果を示す、ＭＷＭ試験における、時間の関数としてのプラットフォームに到達するまでの遅延時間のグラフである（データは、平均値±ＳＥＭを表す）。
【図１５Ｂ】ラット血漿中のいくつかのサイトカインの濃度を示す、サイトカイン濃度のグラフである。
【図１５Ｃ】ビブラトーム切出し前の脳全体の定性的外観検査結果を示す、偽処置（Ｓｈａｍ）、ＣＣＩ＋ビヒクル（対照）、またはＣＣＩ＋化合物１（６ｍｇ／ｋｇ）を投与された動物の脳全体の写真である。検査は、いずれのＳｈａｍ動物も（４匹中０匹）、背側−内側皮質組織の損傷を示さなかったことを示唆した。全く対照的に、４匹のＣＣＩ対照は全て、皮質のこの領域に限定される、重度の両側性傷害を示した。化合物１を投与されたＣＣＩ動物は、中等度から最小にわたる損傷を示した。特に、化合物１群中で最も重度の傷害を示す脳でも、ＣＣＩ対照群の全ての脳に比べて、それほど極端でなかった。
【図１５Ｄ】偽処置（Ｓｈａｍ）、ＣＣＩ＋ビヒクル処置（対照）、およびＣＣＩ＋化合物１処置（ＫＰＴ）動物における、背側皮質領域および腹側皮質領域のＮｅｕＮ標識の低倍率顕微鏡写真である。
【図１５Ｅ】偽処置（Ｓｈａｍ）、ＣＣＩ＋ビヒクル処置（対照）、およびＣＣＩ＋化合物１処置（ＫＰＴ）動物における、ラットＩｇＧおよびＴＮＦαの免疫蛍光標識顕微鏡写真である。
【図１６Ａ】未感作メスＬｅｗｉｓラット、対照関節炎メスＬｅｗｉｓラット、または化合物２で処置された関節炎メスＬｅｗｉｓラットの臨関節炎スコアを示す、時間の関数としての臨床スコアのグラフである。
【図１６Ｂ】未感作メスＬｅｗｉｓラット、対照関節炎メスＬｅｗｉｓラット、または化合物２で処置された関節炎メスＬｅｗｉｓラットにおける、０〜４の尺度で評価された関節腫脹を示す、時間の関数としての関節腫脹のグラフである。
【図１７Ａ】未感作メスＬｅｗｉｓラット、対照関節炎メスＬｅｗｉｓラット、または化合物２で処置された関節炎メスＬｅｗｉｓラットにおける、足根骨の骨塩密度（ＢＭＤ）のグラフである。
【図１７Ｂ】未感作メスＬｅｗｉｓラット、対照関節炎メスＬｅｗｉｓラット、または化合物２で処置された関節炎メスＬｅｗｉｓラットの後足の三次元マイクロＣＴ画像診断による視覚化である。
【図１７Ｃ−Ｆ】１７Ｃ。ＣＩＡ試験Ｎｏ．２の２１日目および２７日目における、Ａ群（未感作）、Ｂ群（モデル）、およびＣ群（毎日５ｍｇ／ｋｇの化合物２）ラットから採取された滑液中のＩＬ−１β濃度を示す、時間の関数として滑液中ＩＬ−１β濃度のグラフである。１７Ｄ。ＣＩＡ試験Ｎｏ．２の２１日目および２７日目における、Ａ群（未感作）、Ｂ群（モデル）、およびＣ群（毎日５ｍｇ／ｋｇの化合物２）ラットから採取された滑液中のＩＬ−６濃度を示す、時間の関数としての滑液中ＩＬ−６濃度のグラフである。１７Ｅ。ＣＩＡ試験Ｎｏ．２の２１日目および２７日目における、Ａ群（未感作）、Ｂ群（モデル）、およびＣ群（毎日５ｍｇ／ｋｇの化合物２）ラットから採取された滑液中のＭＣＰ−１濃度を示す、時間の関数としての滑液中ＭＣＰ−１濃度のグラフである。１７Ｆ。ＣＩＡ試験Ｎｏ．２の２１日目および２７日目における、Ａ群（未感作）、Ｂ群（モデル）、およびＣ群（毎日５ｍｇ／ｋｇの化合物２）ラットから採取された滑液中のＣＲＰ濃度を示す、時間の関数としての滑液中ＣＲＰ濃度のグラフである。
【図１７Ｇ】ＣＩＡ試験Ｎｏ．２の１５日目および２７日目における、Ａ群（未感作）、Ｂ群（モデル）、およびＣ群（毎日５ｍｇ／ｋｇの化合物２）ラットから採取されたラット血清サンプル中のＩＬ−１β濃度を示す、時間の関数としての血清中ＩＬ−１β濃度のグラフである。
【図１８Ａ】本明細書に記載されるメスマウスにおける、ＭＯＧ誘発性ＥＡＥマウスモデルの概略図である。
【図１８Ｂ】本明細書に記載されるＭＯＧ誘発性ＥＡＥマウスモデルにおける、メスマウスの臨床スコアに対する、ビヒクル処置、デキサメタゾン処置、および化合物１処置の効果を示す、試験日の関数としての臨床スコアのグラフである。
【図１９】創傷形成５日後に実施された創傷形態学評価結果を示す、化合物１またはその適切なビヒクルによって局所的または全身的に処置された創傷の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
発明の化合物
第１の実施形態は、式Ｉ：
【化２】
2020037585.tif 000005
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供し、
式中、
Ｒ１は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ２は、ＯおよびＳから選択され；
Ｒ３は、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ４アルキレン）−ヘテロアリールから選択され、（式中、Ｒ３のあらゆるアルキル、アルキレン、ヘテロシクリル、またはヘテロアリール部分は、任意選択的に独立して置換される）；
Ｒ４は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される。
【００３０】
第１の実施形態の第１の態様では、Ｒ１は水素およびメチルから選択される。残りの変数の値は、第１の実施形態に記載される。
【００３１】
第１の実施形態の第２の態様では、Ｒ１は水素である。残りの変数の値は、第１の実施形態に記載される。
【００３２】
第１の実施形態の第３の態様では、Ｒ２はＯである。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１または第２の態様に記載される。
【００３３】
第１の実施形態の第４の態様では、Ｒ２はＳである。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第３の態様に記載される。
【００３４】
第１の実施形態の第５の態様では、Ｒ４は水素である。
【００３５】
第１の実施形態の第６の態様では、Ｒ３は、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロアリールから選択され、Ｒ３のあらゆるアルキルまたはアルキレン部分は、任意選択的に−Ｎ（Ｒ５）２（式中、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される）で置換され、；Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分は、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり；Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分は、任意選択的にＣ１〜Ｃ４アルキルで置換される。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００３６】
第１の実施形態の第７の態様では、Ｒ３は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジニル、ピペリジニル、ヒドロキシピペリジニル、Ｎ−メチルピペリジニル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、およびメチルピラゾリルから選択される。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００３７】
第１の実施形態の第８の態様では、Ｒ３は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００３８】
第１の実施形態の第９の態様では、Ｒ３は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＣＨ２−ピラジン−２−イル、−ピラジン−２−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００３９】
第２の実施形態は、式の化合物（Ｉ）、またはその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ｒ３は、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロアリールから選択され、
式中、
Ｒ３のあらゆるアルキルまたはアルキレン部分は、任意選択的に、−Ｎ（Ｒ５）２（式中、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される）で置換され、；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分は、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル、およびヘテロアリール部分は、任意選択的に、Ｃ１〜Ｃ４アルキルで置換される。
【００４０】
第２の実施形態の第１の態様では、Ｒ３は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジニル、ピペリジニル、ヒドロキシピペリジニル、Ｎ−メチルピペリジニル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、およびメチルピラゾリルから選択される。
【００４１】
第２の実施形態の第２の態様では、Ｒ３は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＮＨ−シクロプロピル、−（ＣＨ２）０〜１−ピラジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される。
【００４２】
第２の実施形態の第３の態様では、Ｒ３は、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＣＨ２−ピラジン−２−イル、−ピラジン−２−イル、−ＣＨ２−モルホリン−４−イル、および５−メチル−１−Ｈ−ピラゾール−４−イルから選択される。
【００４３】
第３の実施形態は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供し、
式中、
Ｒ３は、−Ｎ（Ｒ４）−（Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−Ｃ３〜Ｃ６アルキル、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリル、および−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロアリールから選択され、式中、
あらゆるＲ３のあらゆるアルキルまたはアルキレン部分は、任意選択的に、独立して、オキソおよび−Ｎ（Ｒ５）２からなる群から選択される、１つまたは複数の置換基で置換され、式中、各Ｒ５は水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択され；
Ｒ３のあらゆるヘテロシクリル部分は、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり、任意選択的に、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびオキソからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換され；
Ｒ３のあらゆるヘテロアリール部分は、環内に少なくとも１つの窒素原子を含んでなり、任意選択的に、１つまたは複数のＣ１〜Ｃ４アルキルで置換される。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００４４】
第３の実施形態の第１の態様では、Ｒ３は、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルである。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００４５】
第３の実施形態の第２の態様では、Ｒ３は、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルであり、式中、ヘテロシクリルは、ピラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、およびピラゾリルから選択される。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００４６】
第３の実施形態の第３の態様では、Ｒ３は、−（Ｃ０〜Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルであり、ヘテロシクリルは、モルホリニルである。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００４７】
第３の実施形態の第４の態様では、Ｒ３は、−（Ｃ１アルキレン）−ヘテロシクリルである。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００４８】
第３の実施形態の第５の態様では、Ｒ３は、−（Ｃ１アルキレン）−モルホリニルである。残りの変数の値は、第１の実施形態、またはその第１〜第５の態様に記載される。
【００４９】
式Ｉの例示的な化合物は、表１に記載される。
【００５０】
【表１】
2020037585.tif 000006
【００５１】
【表２】
2020037585.tif 000007
【００５２】
【表３】
2020037585.tif 000008
【００５３】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、化合物１〜１１のいずれか１つから選択される。これらの実施形態の一態様では、化合物は、化合物１、２、３、４、８、および１１のいずれか１つから選択される。
【００５４】
薬物動態（ＰＫ）は、創薬研究開発においてますます重要な役割を果たしている。薬物動態は、薬物の吸収、分布、代謝および／または排出の経時変化の定量的研究である。薬物が投与されると、それは投与部位から、全身の血液循環へ急速に分布する。治療薬の分布程度の１つの基準は、最終測定濃度（ＡＵＣｔ）まで計算されて、無限時間（ＡＵＣＩｎｆ）に外挿される、血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）である。したがってＡＵＣは、薬剤曝露を定量化するのに頻繁に使用される。
【００５５】
一般に、治療薬曝露が高いほど、作用物質の効果は大きい。しかし高い治療薬曝露は、脳などの特定組織に有害な影響を及ぼすこともある。内皮細胞間の密着結合からなる保護ネットワークである血液脳関門（ＢＢＢ）が、親水性および／または大型分子の拡散を制限する一方で、ＡＵＣの高い薬剤は、なおもＢＢＢおよび／または脳脊髄液に透過できる。このような透過は、往々にして望ましくなく、望まれない副作用をもたらし得る。現行の創薬努力は、一つには、薬物曝露（すなわちＡＵＣ）の最大化と、脳透過性の最小化を上手く両立させることを目指している。
【００５６】
脳対血漿（Ｂ：Ｐ）比は、循環している脳組織内の治療薬の相対的分布を定量する、このような１つの（ｏｎｃｅ）方法である。このような比率は、所与の治療薬の脳透過性の１つの指標を提供する。脳および脳脊髄液をはじめとする中枢神経系（ＣＮＳ）に局在する疾患を標的とする場合は、高い脳：血漿比が好ましい。しかし脳透過性を最小化して可能な副作用を回避するために、非ＣＮＳ治療薬では、より低い脳対血漿比が一般に好ましい。したがって脳およびＣＮＳ組織内における望まれない治療薬の蓄積を回避するために、低い脳対血漿比が好ましい。
【００５７】
実施例セクションでより詳細に記載されるように、本発明の化合物は、２０１１年３月５日に出願されて、２０１１年１１月１０日に米国特許出願公開第２００９／０２７５６０７号明細書として公開された、所有者共通の米国特許出願第１３／０４１，３７７号明細書で開示されるものなどの、その他の核輸送阻害剤と比較して、より高いＡＵＣおよび／またはより低いＢ：Ｐを示す。いくつかの実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物を提供し、化合物は、１０ｍｇ／ｋｇでマウスに経口投与されると、＜１μＭ（１μＭ未満）の核外搬出活性、約３５００を超えるＡＵＣＩｎｆ；および約２．５未満のＢ：Ｐを有する。
【００５８】
本発明の新規特性は、以下の発明の詳細な説明を分析すれば、当業者には明白になるであろう。しかし発明の詳細な説明とそれに続く特許請求の範囲から、本発明の精神と範囲内の様々な変更と修正は当業者には明白になるので、報告される発明の詳細な説明および特定の実施例は、本発明の特定の実施形態を示す一方で、例証のみを目的として提供されるものと理解すべきである。
【００５９】
化合物および定義
本発明の化合物は、上で概説され、本明細書で開示されるクラス、サブクラス、およびクラスによってさらに例証されるものを含む。本明細書の用法では、特に断りのない限り、以下の定義が適用されるものとする。本発明の目的では、化学元素はＰｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，第７５版に従って同定される。さらに有機化学の一般的原理は、その内容全体を参照によって本明細書に援用する、“Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９、および“Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，第５版，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００１に記載される。
【００６０】
本明細書で特に断りのない限り、本明細書で使用される命名法は、その例示的な化学構造名および化学構造命名法について、参照によって本明細書に援用する、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｔｉｏｎｓ  Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，ａｎｄ  Ｈ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９７９に述べられる例と規則に一般に従う。任意選択的に、化合物名は、化学物質命名プログラムＡＣＤ／ＣｈｅｍＳｋｅｔｃｈ，バージョン５．０９／Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００１，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｃａｎａｄａを使用して、生成してもよい。
【００６１】
本発明の化合物は、（例えばＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ  ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，Ｓｔｅｒｅｏ−ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４，ｐａｇｅｓ  １１１９−１１９０に記載されるように）不斉中心、キラル軸、およびキラル面を有して、ラセミ体、ラセミ混合物として、および個々のジアステレオマーまたは鏡像異性体として存在してもよく、光学異性体をはじめとする全ての可能な異性体およびそれらの混合物は、本発明に包含される。
【００６２】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、明細書の用法では、ハロゲンを意味し、例えば非限定的に、放射性および非放射性形態の双方のフルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードなどが挙げられる。
【００６３】
「アルキル」という用語は、本明細書の用法では、特に断りのない限り、典型的にＣ１〜Ｃ１２、好ましくはＣ１〜Ｃ６である、直鎖または分枝飽和一価炭化水素遊離基を意味する。したがって「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は、１〜６個（例えば１、２、３、４、５または６個）の炭素原子を有する、直鎖または分枝飽和一価炭化水素遊離基を意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびｔ−ブチルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００６４】
本発明の化合物上の置換基および置換パターンは、化学的に安定しており、当該技術分野で公知の技術、ならびに下記の方法によって容易に合成され得る化合物を与えるように、当業者によって選択され得るものと理解される。一般に「置換される」という用語は、「任意選択的に」という用語がそれに先行するかどうかに関わりなく、指定された部分の１つまたは複数の水素が、適切な置換基で置換されることを意味する。特に断りのない限り、「任意選択的に置換される基」は、基の置換可能な各位置で適切な置換基を有し得て、あらゆる所与の構造内の２つ以上の位置が、特定の群から選択される２つ以上の置換基で置換されてもよい場合、置換基は各位置で同一であるか、または異なり得る。代案としては、「任意選択的に置換される基」は非置換であり得る。
【００６５】
本発明によって想定される置換基の組み合わせは、安定したまたは化学的に実現可能な化合物の形成をもたらすものであることが好ましい。置換基それ自体が、２つ以上の基によって置換される場合、安定した構造が得られさえすれば、これらの複数の基は、同一炭素原子または異なる炭素原子上にあり得るものと理解される。「安定した」という用語は、本明細書の用法では、それらの生成、検出、および特定の実施形態では、それらの回収、精製、および本明細書で開示される目的の１つまたは複数のための使用を可能にする条件に置かれた際に、実質的に変性しない化合物を指す。
【００６６】
「任意選択的に置換される基」の置換可能な炭素原子上の適切な一価の置換基は、独立して、ハロゲン；−（ＣＨ２）０〜４Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４ＯＲ°；−Ｏ（ＣＨ２）０〜４Ｒ°、−Ｏ−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＣＨ（ＯＲ°）２；−（ＣＨ２）０〜４ＳＲ°；Ｒ°で置換されてもよい−（ＣＨ２）０〜４Ｐｈ；Ｒ°で置換されてもよい−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ；Ｒ°で置換されてもよい−ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ°で置換されてもよい−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１−ピリジル；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ°３；−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０〜４ＳＲ−，ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°、−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４ＳＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ°２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｐ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ°）２；ＳｉＲ°３；−（Ｃ１〜４直鎖または分枝アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２；または−（Ｃ１〜４直鎖または分枝アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２であり、式中、各Ｒ°は、以下に定義するように置換されてもよく、独立して、水素、Ｃ１〜６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、−ＣＨ２−（５〜６員ヘテロアリール環）、または窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和、またはアリール環であり、または上の定義に妨げられることなく、２つの独立したＲ°の存在は、それらの介在原子と一緒になって、窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する３〜１２員の飽和、部分不飽和、またはアリール単環または二環を形成し、それは以下に定義するように置換されてもよい。
【００６７】
Ｒ°（またはそれらの介在原子と共に２つの独立したＲ°の存在を一緒することで形成される環）上の適切な一価の置換基は、独立して、ハロゲン、−（ＣＨ２）０〜２Ｒ●、−（ｈａｌｏＲ●）、−（ＣＨ２）０〜２ＯＨ、−（ＣＨ２）０〜２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＣＨ（ＯＲ●）２；−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＨ、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＮＲ●２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ●３、−ＯＳｉＲ●３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、−（Ｃ１〜４直鎖または分枝アルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または−ＳＳＲ●であり、式中、各Ｒ●は非置換であり、または「ハロ」が先行する場合は１つまたは複数のハロゲンのみで置換され、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、または窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和、またはアリール環から独立して選択される。Ｒ°の飽和炭素原子上の適切な二価の置換基としては、＝Ｏおよび＝Ｓが挙げられる。
【００６８】
「任意選択的に置換される基」の飽和炭素原子上の適切な二価の置換基としては、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊２））２〜３Ｏ−、および−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊２））２〜３Ｓ−が挙げられ、式中、各独立したＲ＊の存在は、水素、以下に定義するように置換されてもよいＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５〜６員の飽和、部分不飽和またはアリール環から選択される。「任意選択的に置換される」基の隣接する置換可能な炭素に結合する適切な二価の置換基としては、−Ｏ（ＣＲ＊２）２〜３Ｏ−が挙げられ、式中、各独立したＲ＊の存在は、水素、以下に定義するように置換されてもよいＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５〜６員の飽和、部分不飽和またはアリール環から選択される。
【００６９】
Ｒ＊の脂肪族基上の適切な置換基としては、ハロゲン、−Ｒ●、−（ｈａｌｏＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ｈａｌｏＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、および−ＮＯ２が挙げられ、式中、各Ｒ●は、非置換であり、または「ハロ」が先行する場合は、１つまたは複数のハロゲンのみで置換されて、独立して、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、または窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和、またはアリール環である。
【００７０】
「任意選択的に置換される基」の置換可能な窒素上の適切な置換基としては、−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２、および−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†が挙げられ、；式中、各Ｒ＊は、独立して、水素、以下に定義するように置換されてもよいＣ１〜６脂肪族、非置換−ＯＰｈ、または窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の５〜６員の飽和、部分不飽和またはアリール環から選択され、または上の定義に妨げられることなく、２つの独立したＲ†の存在は、それらの介在原子と一緒になって、窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換の３〜１２員の飽和、部分不飽和、またはアリール単環または二環を形成する。
【００７１】
Ｒ†の脂肪族基上の適切な置換基は、独立して、ハロゲン、−Ｒ●、−（ｈａｌｏＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ｈａｌｏＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、または−ＮＯ２であり、式中、各Ｒ●は、非置換であり、または「ハロ」が先行する場合は、１つまたは複数のハロゲンのみで置換されて、独立して、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、または窒素、酸素、およびイオウから独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員の飽和、部分不飽和、またはアリール環である。
【００７２】
ヘテロアリール上の好ましい置換基は、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルからなる群から選択され得る。アルキル、アルキレン、およびヘテロシクリル上の好ましい置換基としては、ヘテロアリールおよびオキソ上の好ましい置換基が挙げられる。一実施形態では、アルキル、アルキレン、ヘテロシクリルまたはヘテロアリール上の置換基は、式−Ｎ（Ｒ５）２を有するアミノ基であり、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される。
【００７３】
アルキル、アルキレン（ａｋｌｙｌｅｎｅ）、ヘテロシクリル、およびヘテロアリール上の置換基は、−ＯＨ、−ＳＨ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルコキシ、およびＣ１〜Ｃ１２アルキルスルファニルから選択され得る。一実施形態では、置換基は、式、−Ｎ（Ｒ５）２を有するアミノ基であり、式中、各Ｒ５は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルから独立して選択される。
【００７４】
「シクロアルキル」という用語は、本明細書の用法では、飽和環状炭化水素、すなわち全ての環原子が炭素である化合物を意味する。シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルが挙げられるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、任意選択的に、−ＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、アミノ、ニトロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルまたはＣ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、およびＣ１〜Ｃ１２ハロアルコキシから選択される、１つまたは複数の置換基で置換され得る。
【００７５】
「ヘテロアリール」という用語は、本明細書の用法では、１つまたは複数のヘテロ原子（Ｏ、Ｓ、またはＮ）を含有する芳香族基を指す。ヘテロアリール基は、例えば１つまたは複数の炭素環芳香族基またはその他の単環ヘテロアリール基に融合した単環ヘテロアリール環などの単環または多環であり得る。本発明のヘテロアリール基はまた、１つまたは複数のオキソ部分で置換される環系も含み得る。ヘテロアリール基の例としては、ピリジニル、ピリダジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プリニル、オキサジアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、ジヒドロキノリル、テトラヒドロキノリル、ジヒドロイソキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ベンゾフリル、フロピリジニル、ピロロピリミジニル、およびアザインドリルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００７６】
前述のヘテロアリール基は、（可能な場合）Ｃ付着性またはＮ付着性であってもよい。例えばピロールから誘導される基は、ピロール−１−イル（Ｎ付着性）またはピロール−３−イル（Ｃ付着性）であってもよい。
【００７７】
「ヘテロシクリル」は、Ｎ、ＯまたはＳから独立して選択される、１、２、３、４または５個のヘテロ原子を含有する、４〜１３員の飽和または不飽和脂肪族環を意味する。１つのヘテロ原子がＳである場合、それは任意選択的に、一または二酸素化され得る（すなわち−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−）。ヘテロシクリルは、単環、融合二環、架橋二環、スピロ二環または多環であり得る。
【００７８】
「オキソ」は、＝Ｏを意味する。
【００７９】
本明細書の用法では、「アルケニル」という用語は、２〜１２個の炭素原子を有して、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、飽和直鎖または分枝非環状炭化水素を意味する。アルケニル基は、任意選択的に、１つまたは複数の置換基で置換されてもよい。
【００８０】
本明細書の用法では、「アルキニル」という用語は、２〜１２個の炭素原子を有して、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する、飽和直鎖または分枝非環状炭化水素を意味する。アルキニル基は、任意選択的に、１つまたは複数の置換基で置換されてもよい。
【００８１】
本明細書の用法では、「アルキレン」という用語は、化合物の残部に対して２つの付着点を有するアルキル基を指す。アルキレン基の非限定的例としては、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）などが挙げられる。アルキレン基は、任意選択的に、１つまたは複数の置換基で置換されてもよい。
【００８２】
「ハロアルキル」という用語は、本明細書の用法では、１つまたは複数のＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩで置換されるアルキルを含み、アルキルは上で定義される。
【００８３】
「アルコキシ」という用語は、本明細書の用法では、「アルキル−Ｏ−」基を意味し、アルキルは上で定義される。アルコキシ基の例としては、メトキシまたはエトキシ基が挙げられる。
【００８４】
本明細書の用法では、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー性応答などなしで、ヒトおよび下等動物組織と接触させる使用に適し、利点／リスクの比率が妥当に釣り合った塩を指す。薬学的に許容可能な塩は、当該技術分野で周知である。例えばＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．は、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９で、薬学的に許容可能な塩について詳細に記載する。本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩としては、適切な無機および有機酸および塩基から誘導される塩が挙げられる。薬学的に許容可能な無毒の酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、および過塩素酸などの無機酸によって、または酢酸、トリフルオロ酢酸（２，２，２−トリフルオロ酢酸）、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸またはマロン酸などの有機酸によって、またはイオン交換などの当該技術分野で使用されるその他の方法を使用して、形成されるアミノ基の塩である。その他の薬学的に許容可能な塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、硫酸ラウリル塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸（２，２，２−トリフルオロ酢酸）、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。
【００８５】
適切な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、およびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。薬学的に許容可能なさらなる塩としては、適切な場合、無毒のアンモニウムと、四級アンモニウムと、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸、硝酸塩、低級アルキルスルホネート、およびアリールスルホネートなどの対イオンを使用して形成されるアミンカチオンとが挙げられる。
【００８６】
特に断りのない限り、本明細書で描写される構造は、例えば各不斉中心のＲおよびＳ立体配置、ＺおよびＥ二重結合異性体、そしてＺおよびＥ立体構造異性体などの構造の全ての異性体（例えば鏡像異性、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体構造的））形態もまた含むことが意図される。したがって本化合物の単一立体化学異性体、ならびに鏡像異性、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体構造）混合物は、本発明の範囲内である。特に断りのない限り、本発明の化合物の全ての互変異性形態は、本発明の範囲内である。それに加えて特に断りのない限り、本明細書で描写される構造は、１つまたは複数の同位体濃縮原子の存在のみが異なる、化合物を含むことが意図される。例えば、重水素またはトリチウムによる水素の置換、または１３Ｃ富化または１４Ｃ富化炭素による炭素の置換を含む本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイのプローブとして、または本発明に従った治療薬として、有用である。
【００８７】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、患者の治療に適合する酸付加塩または塩基付加塩のいずれかを意味する。
【００８８】
いくつかの実施形態では、適切な塩を形成する例示的な無機酸としては、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸と、オルトリン酸一水素ナトリウム、および硫酸水素カリウムなどの酸金属塩とが挙げられるがこれに限定されるものではない。適切な塩を形成する例証的な有機酸としては、モノ−、ジ−、およびトリカルボン酸が挙げられる。このような酸の例は、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸（２，２，２−トリフルオロ酢酸）、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、２−フェノキシ安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸とメタンスルホン酸や２−ヒドロキシエタンスルホン酸などのその他のスルホン酸である。一酸塩または二酸塩のいずれかが形成され得て、このよう塩は、水和、溶媒和または実質的に無水の形態のいずれかで存在し得る。一般に、これらの化合物の酸付加塩は、それらの遊離塩基形態と比較して、水や種々の親水性有機溶媒中でのより溶解性であり、一般により高い融点を示す。実験室での使用のために、または引き続く薬学的に許容可能な酸付加塩への変換のために、例えば式Ｉの化合物の単離において、例えばシュウ酸塩などのその他の薬学的に許容可能でない塩を使用してもよい。
【００８９】
「薬学的に許容可能な塩基性付加塩」は、式Ｉによって表される酸化合物のあらゆる無毒の有機または無機塩基付加塩、またはその中間体のいずれかである。適切な塩を形成する例証的な無機塩基としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムまたはバリウムの水酸化物が挙げられるが、これに限定されるものではない。適切な塩を形成する例証的な有機塩基としては、メチルアミン、トリメチルアミン、およびピコリンなどの脂肪族、脂環式または芳香族有機アミン、またはアンモニアが挙げられる。分子中の他の箇所にエステル官能基がもしあれば、加水分解されないように、適切な塩の選択が重要なこともある。適切な塩の選択基準は、当業者に知られている。
【００９０】
式Ｉの化合物の酸付加塩は、最も適切には、薬学的に許容可能な酸から生成され、例えば塩化水素、硫酸またはリン酸などの無機酸、そして例えばコハク酸、マレイン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸またはフマル酸などの有機酸によって形成されるものが挙げられる。実験室での使用のために、または引き続く薬学的に許容可能な酸付加塩への変換のために、例えば式Ｉの化合物の単離において、例えばシュウ酸塩などのその他の薬学的に許容可能でない塩を使用してもよい。本発明の化合物の塩基付加塩（ナトリウム、カリウム、およびアンモニウム塩などの）、溶媒和化合物、および水和物もまた、本発明の範囲内に含まれる。所与の化合物塩を所望の化合物塩に変換することは、当業者に良く知られている標準的な技術を適用して、達成される。
【００９１】
「立体異性体」という用語は、空間内のそれらの原子の配向のみが異なる、個々の分子の全ての異性体を指す一般用語である。これには、鏡像異性体（鏡像異性体）、幾何学的（シス／トランス）異性体、および互いに鏡像（ジアステレオマー）でない２つ以上のキラル中心がある化合物の異性体が含まれる。
【００９２】
「治療する」または「治療」という用語は、一時的または恒久的ベースのいずれかで、症状を緩和し、症状の原因を排除すること、前記の障害または病状のまたは症状出現を予防し、または遅延させることを意味する。
【００９３】
「治療有効量」という用語は、疾患または病状の１つまたは複数の症状を治療し、または重症度を低下させるのに効果的な化合物の量を意味する。
【００９４】
本明細書で開示される要素に言及する場合、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「前記（ｓａｉｄ）」は、１つまたは複数の要素があることを意味することが意図される。「含んでなる」、「有する」、「はじめとする」という用語には、制約がないことが意図され、列挙する要素の他に追加的な要素があってもよいことを意味する。
【００９５】
使用、配合、および投与
薬学的に許容可能な組成物
別の実施形態によると、本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な誘導体と、薬学的に許容できる担体、アジュバント、またはビヒクルとを含んでなる組成物を提供する。本発明の組成物中の化合物の量は、生物学的サンプル中または患者において、ＣＲＭ１を測定可能な程度に阻害するのに効果的な量である。特定の実施形態では、本発明の組成物は、このような組成物を必要とする患者への投与のために調合される。「患者」という用語は、本明細書の用法では動物を意味する。いくつかの実施形態では、動物は哺乳類である。特定の実施形態では、患者は獣医学の患者（すなわち非ヒト哺乳類患者）である。いくつかの実施形態では、患者はイヌである。別の実施形態では、患者はヒトである。
【００９６】
「薬学的に許容できる担体、アジュバント、またはビヒクル」という用語は、それが一緒に調合される化合物の薬理学的活性を破壊しない、無毒の担体、アジュバント、またはビヒクルを指す。本発明の組成物中で使用されてもよい薬学的に許容可能な担体、アジュバントまたはビヒクルとしては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミンやリン酸水素二ナトリウムやリン酸水素カリウムや塩化ナトリウムや亜鉛塩などの塩または電解質、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００９７】
本発明の組成物は、吸入噴霧、局所、直腸内、鼻腔内、口腔内、膣内、または埋め込み式リザバーを通じて、経口投与、非経口投与（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内を含む）されてもよい。いくつかの実施形態では、提供される化合物または組成物は、静脈内および／または腹腔内投与可能である。
【００９８】
「非経口」という用語は、本明細書の用法では、皮下、静脈内、筋肉内、眼内、硝子体内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、クモ膜下腔内、肝臓内、腹腔内病巣内、および頭蓋内注射または点滴技法を含む。好ましくは、組成物は、経口、皮下、腹腔内または静脈内投与される。本発明の組成物の無菌注射用形態は、水性または油性懸濁液であってもよい。これらの懸濁液は、適切な分散または湿潤剤と、懸濁剤とを使用して、当該技術分野で公知の技術によって調合されてもよい。無菌注射用製剤はまた、例えば１，３−ブタンジオール溶液などの無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。用いてもよい許容可能なビヒクルおよび溶剤は、特に水、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液である。これに加えて、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒として従来法で用いられる。
【００９９】
本発明の薬学的に許容可能な組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液、または溶液をはじめとするが、これに限定されるものではない、あらゆる経口的に許容可能な剤形で、経口的に投与してもよい。経口使用される錠剤の場合、通常、使用される担体としては、乳糖およびコーンスターチが挙げられる。ステアリン酸マグネシウムなどの平滑剤もまた、典型的に添加される。カプセル形態での経口投与のための有用な希釈剤としては、乳糖および乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使用のために水性懸濁液が必要な場合、活性成分は、乳化および懸濁剤と組み合わされる。所望ならば、特定の甘味剤、着香料または着色剤もまた、添加してもよい。いくつかの実施形態では、提供される経口製剤は、即時放出または持続／遅延放出のために調合される。いくつかの実施形態では、組成物は、錠剤、ロゼンジ、および香錠をはじめとする、バッカルまたは舌下投与に適する。提供される化合物はまた、マイクロカプセル化形態であり得る。
【０１００】
代案としては、本発明の薬学的に許容可能な組成物は、直腸投与のための坐薬の形態で投与してもよい。本発明の薬学的に許容可能な組成物はまた、特に治療の標的が、眼、皮膚、または下部腸管の疾患をはじめとする、局所塗布によって容易にアクセスできる領域または臓器を含む場合に、局所的に投与してもよい。適切な局所製剤は、これらの各領域または臓器のために、容易に調製される。
【０１０１】
下部腸管のための局所施用は、直腸坐薬製剤（上記を参照されたい）で、または適切な浣腸製剤でもたらし得る。局所的経皮パッチもまた、使用してもよい。
【０１０２】
眼科用途では、提供される薬学的に許容可能な組成物は、微粉化懸濁液として、またはペトロラタムなどの軟膏中で、調合してもよい。
【０１０３】
本発明の薬学的に許容可能な組成物はまた、経鼻煙霧剤または吸入によって投与してもよい。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本発明の薬学的に許容可能な組成物は、腹腔内投与のために調合される。
【０１０５】
単回投与形態の組成物を製造するために、担体材料と組み合わせてもよい本発明の化合物の量は、治療される宿主、特定の投与様式に応じて変動する。一実施形態では、提供される組成物は、これらの組成物を与えられる患者に、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量の阻害剤が投与され得るように調合すべきである。別の実施形態では、投与量は、約０．５〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重、または４〜１２０時間毎に１ｍｇ〜１０００ｍｇ／投与であり、または特定の薬剤の要件に従う。典型的に本発明の医薬組成物は、１日あたり約１〜約６回投与される。
【０１０６】
任意の特定患者のための特定の用量および治療計画が、用いられる特定化合物の活性、年齢、体重、総体的な健康、性別、食餌、投与時間、排出速度、薬剤併用、主治医の判断、および治療される特定疾患の重症度をはじめとする多様な要素に左右されることもまた理解される。組成物中の本発明の化合物の量はまた、組成物中の特定化合物にも左右される。
【０１０７】
必要ならば、患者の病状改善に際して、本発明の化合物、組成物または組み合わせの維持用量を投与し得る。引き続いて、症状が所望のレベルまで緩和された際の改善された病状が保持されるレベルまで、投与の用量または頻度、またはその双方を症状に応じて低下させ得る。しかし患者は、あらゆる疾患症状の再発に際して、長期的に断続的治療を必要とすることもある。
【０１０８】
化合物および薬学的に許容可能な組成物の使用
本明細書に記載される化合物および組成物は、一般にＣＲＭ１を阻害するのに有用であり、したがってＣＲＭ１活性と関連付けられている、１つまたは複数の障害を治療にするのに有用である。したがって特定の実施形態では、本発明は、それを必要とする患者に、本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な組成物を投与するステップを含んでなる、ＣＲＭ１媒介疾患を治療する方法を提供する。本明細書に記載される化合物および組成物はまた、例えば試験管内でまたは生体外で培養中の細胞に、または例えば生体内などで対象に投与して、本明細書で以下の実施例をはじめとする、多様な障害を治療、予防、および／または診断し得る。
【０１０９】
本発明でＣＲＭ１阻害剤として利用される化合物の活性は、生体外、生体内または細胞系中でアッセイしてもよい。本発明でＣＲＭ１阻害剤として利用される化合物をアッセイする詳細な条件は、実施例に記載される。
【０１１０】
本明細書の用法では、「ＣＲＭ１媒介性」障害または病状という用語は、本明細書の用法では、その中でＣＲＭ１が役割を果たすことが知られている、あらゆる疾患またはその他の有害な病状を意味する。したがって本発明の別の実施形態は、ＣＲＭ１が役割を果たしていることが知られている、１つまたは複数の疾患を治療し、または重症度を低下させることに関する。いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される化合物の治療有効量を患者に投与するステップを含んでなる、対象中で、ｐ５３、ｐ７３、ｐ２１、ｐＲＢ、ｐ２７、ＩκＢ、ＮＦκＢ、ｃ−Ａｂｌ、ＦＯＸＯタンパク質、ＣＯＸ−２、またはＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）の発現または活性と関連付けられている疾患を治療する方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、増殖性疾患（例えばがん）、炎症性疾患、自己免疫障害、ウイルス感染症、眼科疾患または神経変性疾患から選択される、疾患または病状を治療し、または重症度を低下させる方法に関し、前記方法は、本発明による化合物または組成物をそれを必要とする患者に投与するステップを含んでなる。より具体的な実施形態では、本発明は、がんを治療し、または重症度を低下させる方法に関する。上記障害の特定の例は、下で詳細に記載される。
【０１１１】
本発明の化合物によって治療可能ながんとしては、血液悪性腫瘍（白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫と骨髄異形成と骨髄増殖性症候群とをはじめとする骨髄腫）および固形腫瘍（前立腺、乳房、肺、結腸、膵臓、腎臓の、卵巣ならびに軟部組織などのがん腫、骨肉腫、および間質腫瘍）が挙げられるが、これに限定されるものではない。乳がん（ＢＣ）としては、基底細胞様乳がん（ＢＬＢＣ）、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）、およびＢＬＢＣとＴＮＢＣの双方である乳がんが挙げられる。さらに乳がんとしては、侵襲性または非侵襲性乳管または小葉がん、乳房の管状、髄様、粘液性、乳頭、篩状がん、男性乳がん、再発性または転移性乳がん、乳房の葉状腫瘍、および乳首のパジェット病が挙げられる。
【０１１２】
本発明の化合物によって治療可能な炎症性疾患としては、多発性硬化症、関節リウマチ、変性関節疾患、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、血管炎症候群（小、中、および大血管）、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、クローン病、粘液性大腸炎、潰瘍性大腸炎、胃炎、敗血症、乾癬およびその他の外皮炎症性疾患（湿疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、蕁麻疹、強皮症、および急性炎症性要素を伴う皮膚病、天疱瘡、類天疱瘡、アレルギー性皮膚炎など）、および蕁麻疹症候群が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１１３】
本発明の化合物によって治療可能なウイルス性疾患としては、急性熱性咽頭炎、咽頭結膜熱、流行性角結膜炎、乳児胃腸炎、コクサッキー感染症、伝染性単核症、バーキットリンパ腫、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞がん、原発性ＨＳＶ−１感染症（例えば小児歯肉口内炎、成人扁桃炎および咽頭炎、角結膜炎）、不顕性ＨＳＶ−１感染症（例えば口唇ヘルペスおよび単純疱疹）、原発性ＨＳＶ−２感染症、不顕性ＨＳＶ−２感染症、無菌性髄膜炎、伝染性単核症、巨細胞封入体病、カポジ肉腫、多中心性キャッスルマン病、原発性滲出液リンパ腫、ＡＩＤＳ、インフルエンザ、ライ症候群、はしか、後感染性脳脊髄炎、おたふく風邪、過形成上皮病変（例えば尋常性、扁平、足底、および肛門性器疣贅、喉頭乳頭腫、疣贅状表皮発育異常症）、子宮頸がん、扁平上皮がん、クループ、肺炎、細気管支炎、感冒、灰白髄炎、狂犬病、インフルエンザ様症候群、肺炎を伴う重症細気管支炎、風疹、先天性風疹、水痘、および帯状疱疹が挙げられるが、これに限定されるものではない。本発明の化合物によって治療可能なウイルス性疾患としてはまた、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎をはじめとする、長期ウイルス感染症が挙げられる。
【０１１４】
例示的な眼科疾患としては、黄斑浮腫（糖尿病性および非糖尿病性黄斑浮腫）、湿潤および乾燥形態の加齢性（ａｇｅｄ  ｒｅｌａｔｅｄ）黄斑変性、加齢円板状黄斑変性症、嚢胞状黄斑浮腫、眼瞼浮腫、網膜浮腫、糖尿病性網膜症、網脈絡膜症、血管新生黄斑症、血管新生緑内障、ブドウ膜炎、虹彩炎、網膜血管炎、眼内炎、全眼球炎、転移性眼炎、脈絡膜炎、網膜色素上皮炎（ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｉｔｉｓ）、結膜炎、毛様体炎、強膜炎、上強膜炎、視神経炎、球後視神経炎、角膜炎、眼瞼炎、滲出性網膜離脱、角膜潰瘍、結膜潰瘍、慢性貨幣状角膜炎、低酸素症または虚血に伴う眼疾患、未熟児網膜症、増殖性糖尿病性網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症、網膜血管腫状増殖、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞、コーツ病、家族性滲出性硝子体網膜症、脈なし病（高安病）、イールズ病、抗リン脂質抗体症候群、白血病性網膜症、過粘稠度症候群、マクログロブリン血症、インターフェロン網膜症、高血圧性網膜症、放射線網膜症、角膜上皮幹細胞不全症または白内障が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１１５】
式Ｉの化合物によって治療可能な神経変性疾患としては、パーキンソン病、アルツハイマー病、およびハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化（ＡＬＳ／ルー・ゲーリック病）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１１６】
本明細書に記載される化合物および組成物はまた、拡張型心筋症、肥大性心筋症、拘束性心筋症、肺線維症、肝線維症、糸球体腎炎、多嚢胞性腎障害（ＰＫＤ）、およびその他の腎障害をはじめとする、異常な組織増殖および線維症障害を治療するのにも使用してもよい。
【０１１７】
本明細書に記載される化合物および組成物はまた、肥満症および過食症などの、食物摂取量に関連した障害を治療するのに使用してもよい。
【０１１８】
別の実施形態では、本明細書に記載される化合物または組成物を使用して、喘息、気管支炎、肺線維症、アレルギー性鼻炎、酸素毒性、肺気腫、慢性気管支炎、急性呼吸窮迫症候群、およびあらゆる慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）をはじめとする、アレルギーおよび呼吸器疾患を治療または予防してもよい。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ＣＲＭ１活性関連疾患または病状は、次のとおりである。筋ジストロフィー、例えば骨関節炎および関節リウマチなどの関節炎、強直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  ｓｐｏｎｄｉｌｉｔｉｓ）、外傷性脳損傷、脊髄損傷、敗血症、リウマチ性疾患、がんアテローム性動脈硬化、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、レプトスピラ症（ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｉｏｓｉｓ）腎疾患、緑内障、網膜疾患、加齢、頭痛、疼痛、複合性局所疼痛症候群、心臓肥大、筋消耗、異化作用障害、肥満症、胎児の成長遅延、高コレステロール血症、心疾患、慢性心不全、虚血／再灌流、脳卒中、脳動脈瘤、狭心症、肺疾患、嚢胞性線維症、酸誘導肺傷害、肺高血圧症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、シェーグレン症候群、肺硝子膜症、腎臓病、糸球体疾患、アルコール性肝疾患、腸疾患、腹膜子宮内膜症、皮膚病、副鼻腔炎、中皮腫、免疫不全を伴う無汗性外胚葉形成不全症、ベーチェット病、色素失調症、結核、喘息、クローン病、大腸炎、眼アレルギー、虫垂炎、パジェット病、膵臓炎、歯周炎（ｐｅｒｉｏｄｏｎｉｔｉｓ）、子宮内膜症、炎症性腸疾患、炎症性肺疾患、シリカ誘発性疾患、睡眠時無呼吸、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ−１、自己免疫疾患、抗リン脂質抗体症候群、狼瘡、狼瘡性腎炎、家族性地中海熱、遺伝性周期熱症候群、心理社会的ストレス病、神経病理学的疾患、家族性アミロイドポリニューロパチー、炎症性神経障害、パーキンソン病、多発性硬化症、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、ハンチントン病、白内障、または難聴。
【０１２０】
別の実施形態では、ＣＲＭ１活性関連疾患または病状は、次のとおりである。頭部外傷、ブドウ膜炎、炎症性疼痛、アレルゲン誘発性喘息、非アレルゲン誘発性喘息、糸球体腎炎、潰瘍性大腸炎、壊死性腸炎、周期熱を伴う高グロブリンＤ血症（ＨＩＤＳ）、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、クリオピリン関連周期性症候群、マックル・ウェルズ症候群（蕁麻疹−難聴−アミロイドーシス）、家族性寒冷蕁麻疹、新生児期発症多臓器性炎症性疾患周期熱（ＮＯＭＩＤ）、周期熱−アフタ性口内炎−咽頭炎−扁桃腺炎（ＰＦＡＰＡ症候群）、ブラウ症候群、化膿性無菌性関節炎、壊疽性膿皮症、座瘡（ＰＡＰＡ）、インターロイキン１受容体拮抗欠乏症（ＤＩＲＡ）、クモ膜下出血、多発性嚢胞腎、移植、臓器移植、組織移植、骨髄異形成症候群、刺激物質誘発性炎症、植物刺激物誘発性炎症、ツタウルシ／ウルシオール油誘発性炎症、化学的刺激物誘発性炎症、蜂刺傷誘発性炎症、咬虫症誘発性炎症、日光皮膚炎、火傷、皮膚炎、内毒血症、肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、アルコール性肝炎、または寄生虫感染症によって引き起こされる腎臓損傷。
【０１２１】
さらなる態様では、本発明は、対象中で、ｐ５３、ｐ７３、ｐ２１、ｐＲＢ、ｐ２７、ＩκＢ、ＮＦκＢ、ｃ−Ａｂｌ、ＦＯＸＯタンパク質、ＣＯＸ−２またはＨＤＡＣの発現または活性と関連付けられている疾患を治療する薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、がんおよび／または新生物障害、血管新生、自己免疫障害、炎症性疾患および／または疾患、エピジェネティックス、ホルモン障害および／または疾患、ウイルス性疾患、神経変性障害および／または疾患、創傷、および眼科的障害のいずれかを治療するための薬剤の製造における、式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物の薬学的に許容可能な塩、またはその薬学的に許容可能な組成物を生物学的サンプルに接触させ、または患者に投与するステップを含んでなる、生物学的サンプル中でＣＲＭ１を阻害する方法を提供する。
【０１２３】
新生物障害
本明細書に記載される化合物または組成物は、新生物疾患を治療するのに使用し得る。「新生物障害」は、例えば増殖性細胞成長によって特徴付けられる異常な状態または病状などの、自律的増殖または複製能力を有する細胞によって特徴付けられる、疾病または障害である。例示的な新生物障害としては、例えば、前立腺、脳、骨、結腸、肺、乳、卵巣、および肝臓起源の腫瘍などのがん腫、肉腫、転移性障害、例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫およびその他の悪性形質細胞などの障害造血性新生物障害、および転移性腫瘍が挙げられる。蔓延しているがんとしては、乳、前立腺、結腸、肺、肝臓、および膵臓がんが挙げられる。化合物による治療は、例えば細胞増殖低下、腫瘤量低下など、新生物障害の少なくとも１つの症状を改善するのに効果的な量で実施し得る。
【０１２４】
開示される方法は、例えば、固形腫瘍、軟部組織腫瘍、およびそれらの転位をはじめとするがんを予防および治療するのに、ならびにリー・フラウメニ症候群、家族性乳−卵巣がん（ＢＲＣＡ１またはＢＲＡＣ２変異）症候群などの家族性がん症候群において、有用である。開示される方法はまた、非固形がんを治療するのに有用である。例示的な固形腫瘍としては、肺、乳、リンパ系、消化器（例えば結腸）などの様々な臓器系、および泌尿生殖器（例えば腎臓、尿路上皮、または精巣腫瘍）経路、咽頭、前立腺、および卵巣の悪性腫瘍（例えば肉腫、腺がん、およびがん腫）が挙げられる。例示的な腺がんとしては、結腸直腸がん、腎臓細胞がん腫、肝臓がん、非小細胞肺がん、および小腸がんが挙げられる。
【０１２５】
米国国立がん研究所によって記載される例示的ながんとしては、以下が挙げられる。急性リンパ芽球性白血病、成人；急性リンパ芽球性白血病、小児期；急性骨髄性白血病、成人；副腎皮質がん；副腎皮質がん、小児期；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍；肛門がん；星細胞腫、小児期小脳；星細胞腫、小児期脳；胆管がん、肝臓外；膀胱がん；膀胱がん、小児期；骨がん、骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳幹神経膠腫、小児期；脳腫瘍、成人；脳腫瘍、脳幹神経膠腫、小児期；脳腫瘍、小脳星細胞腫、小児期；脳腫瘍、脳星細胞腫／悪性神経膠腫、小児期；脳腫瘍、上衣細胞腫、小児期；脳腫瘍、髄芽細胞腫、小児期；脳腫瘍、小脳テント上腫瘍原始神経外胚葉性腫瘍、小児期；脳腫瘍、視覚路および視床下部神経膠腫、小児期；脳腫瘍、小児期（その他の）；乳がん；乳がんおよび妊娠；乳がん、小児期；乳がん、男性；気管支腺腫／カルチノイド、小児期；カルチノイド腫瘍、小児期；カルチノイド腫瘍、胃腸；がん腫、副腎皮質；がん腫、膵島細胞；路の原発性がん腫；中枢神経系リンパ腫、原発性；小脳星細胞腫、小児期；脳星細胞腫／悪性神経膠腫、小児期；子宮頸がん；小児期がん；慢性リンパ球性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性髄増殖性疾患；腱鞘の明細胞肉腫；大腸がん；結腸直腸がん、小児期；皮膚のＴ細胞（ＣｅＩｌ）リンパ腫；子宮内膜がん；上衣細胞腫、小児期；上皮がん、卵巣；食道がん；食道がん、小児期；ユーイングファミリー腫瘍；頭蓋外胚細胞腫瘍、小児期；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管がん；眼がん、眼球内黒色腫；眼がん、網膜芽細胞腫；胆嚢がん；胃がん；胃がん、小児期；消化管カルチノイド腫瘍；胚芽細胞腫瘍、頭蓋外、小児期；胚芽細胞腫瘍、性腺外；胚芽細胞腫瘍、卵巣；妊娠性絨毛性腫瘍；神経膠腫、小児期脳幹；神経膠腫、小児期視覚路および視床下部；有毛細胞白血病；頭頸部がん；肝細胞（肝臓）がん、成人（原発性）；肝細胞（肝臓）がん、小児期（原発性）；ホジキンリンパ腫、成人；ホジキンリンパ腫、小児期；妊娠中ホジキンリンパ腫；下咽頭がん；視床下部および視覚路神経膠腫、小児期；眼球内黒色腫；膵島細胞がん腫（内分泌膵）；カポジ肉腫；腎臓がん；喉頭がん；喉頭がん、小児期；白血病、急性リンパ芽球性、成人；白血病、急性リンパ芽球性、小児期；白血病、急性骨髄性、成人；白血病、急性骨髄性、小児期；白血病、慢性リンパ球性；白血病、慢性骨髄性；白血病、有毛細胞；口唇および口腔がん；肝臓がん、成人（原発性）；肝臓がん、小児期（原発性）；肺がん、非小細胞；肺がん、小細胞；リンパ芽球性白血病、成人急性；リンパ芽球性白血病、小児期急性；リンパ球性白血病、慢性；リンパ腫、ＡＩＤＳ関連；リンパ腫、中枢神経系（原発性）；リンパ腫、皮膚Ｔ細胞（ＣｅＩｌ）；ホジキンリンパ腫、成人；ホジキンリンパ腫、小児期；ホジキンリンパ腫、妊娠中；非ホジキンリンパ腫、成人；非ホジキンリンパ腫、小児期；非ホジキンリンパ腫、妊娠中；リンパ腫、原発性中枢神経系；マクログロブリン血症、ワルデンシュトレーム；男性乳がん；悪性中皮腫、成人；悪性中皮腫、小児期；悪性胸腺腫；髄芽細胞腫、小児期；黒色腫；黒色腫、眼球内；メルケル細胞がん；中皮腫、悪性；原発不明の転移性扁平上皮頸部がん；多発性内分泌腺腫症候群、小児期；多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍；菌状息肉腫；骨髄異形成症候群；骨髄性白血病、慢性；骨髄性白血病、小児期急性；骨髄腫、多発性；骨髄増殖性疾患、慢性；鼻腔および副鼻腔がん；鼻咽頭がん；鼻咽頭がん、小児期；神経芽細胞腫；非ホジキンリンパ腫、成人；非ホジキンリンパ腫、小児期；妊娠中の非ホジキンリンパ腫；非小細胞肺がん；口腔がん、小児期；口腔および口唇がん；中咽頭がん；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣がん、小児期；卵巣上皮がん；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性潜在的腫瘍；膵臓がん；膵臓がん、小児期；膵臓がん、膵島細胞；副鼻腔および鼻腔がん；副甲状腺がん；陰茎がん；褐色細胞腫；松果体および小脳テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児期；脳下垂体腫瘍；形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫；胸膜肺芽腫；妊娠および乳がん；妊娠およびホジキンリンパ腫；妊および非ホジキンリンパ腫；原発性中枢神経系リンパ腫；原発性肝臓がん、成人；原発性肝臓がん、小児期；前立腺がん；直腸がん；腎細胞（腎臓）がん；腎細胞がん、小児期；腎盂および尿管、移行上皮がん；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫、小児期；唾液腺がん；唾液腺がん、小児期；ユーイング肉腫ファミリー腫瘍；肉腫、カポジ；肉腫（骨肉腫）／骨の悪性線維性組織球腫；肉腫、横紋筋肉腫、小児期；肉腫、軟部組織、成人；肉腫、軟部組織、小児期；セザリー症候群；皮膚がん；皮膚がん、小児期；皮膚がん（黒色腫）；皮膚がん、メルケル細胞；小細胞肺がん；小腸がん；軟部組織肉腫、成人；軟部組織肉腫、小児期；原発不明扁平上皮頸部がん、転移性；胃がん；胃がん、小児期；小脳テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児期；Ｔ細胞（ＣｅＩｌ）リンパ腫、皮膚；精巣がん；胸腺腫、小児期；胸腺腫、悪性；甲状腺がん；甲状腺がん、小児期；腎盂および尿管の移行上皮がん；絨毛性腫瘍、妊娠性；未知原発部位、がん、小児期；小児期の稀ながん；尿管および腎盂、移行上皮がん；尿道がん；子宮肉腫；膣がん；視覚路および視床下部神経膠腫、小児期；外陰がん；ワルデンシュトレームのマクログロブリン血症；およびウィルムス腫瘍。
【０１２６】
さらなる例示的ながんとしては、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）が挙げられる。
【０１２７】
前述のがんの転移もまた、本明細書に記載される方法に従って、処置または予防し得る。
【０１２８】
併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、追加的な「第２の」治療薬または治療と共に投与される。第２の治療薬は、指示される疾患または病状を治療する単剤療法で典型的に使用される、あらゆる作用物質から選択されてもよい。本明細書の用法では、「共に投与される」という用語および関連用語は、本発明による治療薬の同時または逐次の投与を指す。例えば本発明の化合物は、別個の単一剤形で同時または順次に、または単一剤形中で合わせて、別の治療薬と共に投与してもよい。したがって本発明は、式Ｉの化合物、追加的な治療薬、および薬学的に許容できる担体、アジュバント、またはビヒクルを含んでなる、単一剤形を提供する。
【０１２９】
第２の治療薬が対象に投与される本発明の一実施形態では、本発明の化合物の有効量は、第２の治療薬が投与されない場合のその有効量を下回る。別の実施形態では、第２の治療薬の有効量は、本発明の化合物が投与されない場合のその有効量を下回る。このようにして、作用物質のいずれかの高用量に付随する、望まれない副作用が最小化されてもよい。（制限なしに、投薬計画改善および／または薬剤コスト低下をはじめとする）その他の可能な利点は、当業者には明白であろう。追加的な作用物質は、複数回投与レジメンの一部として、本発明の化合物とは別に投与してもよい。代案としては、これらの薬剤は、本発明の化合物と合わせて単一組成物に混合された、単回投与剤形の一部であってもよい。
【０１３０】
がん併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、追加的ながん治療薬と共に投与される。例示的な、さらなるがん治療法としては、例えば、化学療法、抗体療法などの標的療法、キナーゼ阻害剤、免疫療法、およびホルモン療法、エピジェネティック療法、プロテオソーム療法、および抗血管新生療法が挙げられる。これらの各治療の例は、下で提供される。本明細書の用法では、「組み合わせ」、「組み合わせた」という用語および関連用語は、本発明による治療薬の同時または逐次の投与を指す。例えば本発明の化合物は、別個の単一剤形で同時または順次に、または単一剤形中で併せて、別の治療薬と共に投与し得る。したがって本発明は、本発明の化合物、追加的な治療薬、および薬学的に許容できる担体、アジュバント、またはビヒクルを含んでなる、単一剤形を提供する。
【０１３１】
（上述したような追加的治療薬を含んでなる組成物中で）単回投与剤形を製造するために、担体材料と組み合わせ得る本発明の化合物および追加的な治療薬の双方の量は、治療される宿主および特定の投与様式に応じて変動する。好ましくは、本発明の組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量の本発明の化合物が投与され得るように、調合されるべきである。
【０１３２】
化学療法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、化学療法と共に投与される。化学療法は、がん細胞を破壊する薬剤によるがんの治療法である。「化学療法」は、通常は標的療法とは対照的に、一般に急速に分裂する細胞に影響を及ぼす細胞毒性薬を指す。化学療法薬は、例えばＤＮＡの複製または新たに形成された染色体の分離などの細胞分裂を、様々な可能な様式で妨げる。化学療法のほとんどの形態は、急速に分裂する全ての細胞を標的とし、がん細胞に特異的ではないが、ＤＮＡ損傷を多くのがん細胞が修復できないのに対して、正常細胞は一般に修復できることから、ある程度の特異性が得られることもある。
【０１３３】
がん療法で使用される化学療法薬の例としては、例えば、代謝拮抗剤（例えば葉酸、プリン、およびピリミジン誘導体）、およびアルキル化剤（例えばナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、白金、アルキルスルホネート、ヒドラジン、トリアゼン、アジリジン、紡錘体阻害剤、細胞毒性薬、トポイソメラーゼ阻害剤など）が挙げられる。例示的な作用薬としては、アクラルビシン、アクチノマイシン、アリトレチノイン、アルトレタミン、アミノプテリン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アトラセンタン、ベロテカン、ベキサロテン、ベンダムスチン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルボコン、カルモフール、カルムスチン、セレコキシブ、クロランブシル、クロルメチン、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンパスターゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン、デメコルチン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エファプロキシラル、エレスクロモール、エルサミトルシン、エノシタビン、エピルビシン、エストラムスチン、エトグルシド、エトポシド、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル（５ＦＵ）、フォテムスチン、ゲムシタビン、グリアデルインプラント、ヒドロキシカルバミド、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、イロフルベン、イクサベピロン、ラロタキセル、ロイコボリン、リポソーム性ドキソルビシン、リポソーム性ダウノルビシン、ロニダミン、ロムスチン、ルカントン、マンノスルファン、マソプロコール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、アミノレブリン酸メチル、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトタン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ネダプラチン、ニムスチン、オブリメルセン、オマセタキシン、オルタタキセル、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペグアスパラガーゼ、ペメトレキセド、ペントスタチン、ピラルビシン、ピクサントロン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、ラニムスチン、ルビテカン、サパシタビン、セムスチン、シチマジーンセラデノベック、ストラタプラチン、ストレプトゾシン、タラポルフィン、テガフール−ウラシル、テモポルフィン、テモゾロマイド、テニポシド、テセタキセル、テストラクトン、四硝酸塩、チオテパ、チアゾフリン、チオグアニン、ティピファニブ、トポテカン、トラベクテジン、トリアジコン、トリエチレンメラミン、トリプラチン、トレチノイン、トレオスルファン、トロホスファミド、ウラムスチン、バルルビシン、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ボリノスタット、ゾルビシン、および本明細書に記載されるその他の細胞分裂阻害剤または細胞毒性薬が挙げられる。
【０１３４】
いくつかの薬剤は、単独よりも合わせたときにより良く機能するので、２種以上の薬剤が同時に投与されることが多い。頻繁に、２種以上の化学療法剤が、併用化学療法として使用される。いくつかの実施形態では、（併用化学療法をはじめとする）化学療法剤を、本明細書に記載される化合物と組み合わせて使用し得る。
【０１３５】
標的療法
標的療法は、がん細胞の無秩序なタンパク質に対して特異的な、作用薬の使用からなる。小分子標的療法剤は、一般にがん細胞内の変異した、過剰発現した、またはさもなければ重要な、タンパク質の酵素ドメインの阻害剤である。顕著な例は、アキシチニブ、ボスチニブ、セジラニブ、ダサチニブ（ｄｅｓａｔｉｎｉｂ）、エルロチニブ（ｅｒｏｌｏｔｉｎｉｂ）、イマチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、セマキサニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、およびバンデタニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤であり、アルボシジブおよびセリシクリブなどのサイクリン依存性キナーゼ阻害剤もまた挙げられる。モノクローナル抗体療法は、治療薬が、がん細胞表面タンパク質に特異的に結合する抗体である、別のストラテジーである。例としては、典型的に乳がんで使用される、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））と、典型的に多様なＢ細胞悪性腫瘍で使用される、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブおよびトシツモマブとが挙げられる。その他の例示的な抗体としては、セツキシマブ、パニツマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、ベバシズマブ、エドレコロマブ、およびゲムツズマブが挙げられる。例示的な融合タンパク質としては、アフリベルセプトおよびデニロイキンジフチトクスが挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物と組み合わせて、標的療法を使用し得る。例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（Ｖｉｇｎａｒｉａｎｄ  Ｗａｎｇ  ２００１）。
【０１３６】
標的療法はまた、腫瘍周囲の細胞表面受容体に、または罹患した細胞外基質に結合し得る「自動誘導装置」としての小型ペプチドを含み得る。これらのペプチドに付着する放射性核種（例えばＲＧＤ）は、核種が細胞近傍で崩壊すれば、最終的にがん細胞を殺滅する。このような治療法の一例としては、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）が挙げられる。
【０１３７】
血管新生
本明細書に記載される化合物および方法は、血管新生関連疾患または障害を治療または予防するのに使用してもよい。血管新生と関連付けられている疾患としては、がん、心血管疾患、および黄斑変性が挙げられる。
【０１３８】
血管新生は、既存の血管からの新血管の増殖を伴う、生理学的過程である。血管新生は、成長および発達、ならびに創傷治癒および肉芽組織における、正常かつ不可欠な過程である。しかしそれはまた、休眠状態から悪性状態への腫瘍の移行における必須段階でもある。血管新生は、芳しくない血管新生または異常な血管系のいずれかによって特徴付けられる疾患に取り組むための、標的であってもよい。
【０１３９】
体内で新血管生成を阻害または誘導することもある特定化合物の施用は、このような疾患に対する戦いの一助になることもある。存在すべきでない部位における血管の存在は、組織の機械的特性に影響を及ぼすこともあり、破損の可能性を増大させる。修復中またはさもなければ代謝的に活動性の組織における血管の不在は、修復またはその他の本質的機能を阻害することもある。虚血性慢性創傷などのいくつかの疾患は、破損または不十分な血管形成の結果であり、血管の局所的増殖によって、したがってその部位に新しい栄養素を供給して、修復を促進することで治療してもよい。加齢黄斑変性などのその他の疾患は、正常な生理学的過程と干渉する、血管の局所的増殖によって生じることもある。
【０１４０】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、血管新生の主要原因であり、所与のネットワーク中の毛細管数を増大させることが、実証されている。ＶＥＧＦの上方制御は、運動に対する生理学的応答の主要構成要素であり、血管新生におけるその役割は、血管損傷における可能な治療法であると考えられている。生体外実験は、この増殖因子存在下において、播種された内皮細胞が増殖して移動し、最終的には毛細血管と似た管構造を形成することから、ＶＥＧＦが血管新生の強力な刺激物質であることを明確に実証する。
【０１４１】
腫瘍は、様々な増殖因子（例えばＶＥＧＦ）を分泌することにより、血管増殖（血管新生）を誘導する。ｂＦＧＦおよびＶＥＧＦなどの増殖因子は、腫瘍中の毛細血管増殖を誘導し得て、幾人かの研究者は、これが必要な栄養素を供給して、腫瘍の増殖を可能にすると考えている。
【０１４２】
血管新生は、心血管疾患治療法のための優れた治療標的に相当する。これは、我々の身体が、重要臓器への血液供給の減少に応答する自然な様式、すなわち虚血傷害を克服するための新しい側副血管血管の生成の基礎となる、強力な生理学的過程である。
【０１４３】
ＶＥＧＦの過剰発現は、血管新生の刺激に加えて、血管透過性の増大を引き起こす。湿潤黄斑変性においては、ＶＥＧＦは、網膜中の毛細血管の増殖を引き起こす。血管新生の増大は、浮腫もまた引き起こすため、血液およびその他の網膜液が網膜中に漏れて、視力喪失を引き起こす。
【０１４４】
抗血管新生療法としては、スニチニブやソラフェニブなどの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を標的とするキナーゼ阻害剤；またはベバシズマブまたはＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ、をはじめとする、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体に対するモノクローナル抗体または受容体「デコイ」；またはサリドマイドまたはその類似体（レナリドミド、ポマリドミド）；または線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、アンギオポエチン、またはアンギオスタチンまたはエンドスタチンなどの非ＶＥＧＦ血管新生標的を標的とする作用薬が挙げられる。
【０１４５】
エピジェネティックス
本明細書に記載される化合物および方法は、エピジェネティックス関連疾患または障害を治療または予防するのに使用してもよい。エピジェネティックスは、根本的なＤＮＡ配列の変化以外の機構によって引き起こされる、表現型または遺伝子発現における遺伝性変化の研究である。真核生物学におけるエピジェネティックなの変化の一例は、細胞分化過程である。形態形成中に、幹細胞は様々な胚細胞系になり、それは次に完全に分化した細胞になる。換言すれば、単一受精卵細胞は、分裂を続ける間に、ニューロン、筋肉細胞、上皮、血管などをはじめとする、多数の細胞型に変化する。これは、その他の遺伝子を抑制する一方で、いくつかの遺伝子を活性化することで、そうなる。
【０１４６】
エピジェネティックな変化は、細胞が分裂する際に保存される。ほとんどのエピジェネティックな変化は、１つの個体の生涯においてのみ生じるが、受精をもたらした精子または卵細胞中で、ＤＮＡ中の変異が引き起こされたのであれば、いくつかのエピジェネティックな変化は、１つの世代から次世代に遺伝する。特定のエピジェネティックな過程としては、パラミューテーション、ブックマーキング、刷り込み、遺伝子サイレンシング、Ｘ染色体不活性化、位置効果、再プログラミング、トランスベクション、母性効果、発がんの進行、催奇形因子の多数の影響、ヒストン修飾およびヘテロクロマチンの調節、および単為発生とクローニングに影響を及ぼす技術的限界が挙げられる。
【０１４７】
エピジェネティックスと関連付けられている例示的な疾患としては、ＡＴＲ症候群、脆弱Ｘ症候群、ＩＣＦ症候群、アンジェルマン症候群、プラダー・ウィリー（Ｐｒａｄｅｒ−Ｗｉｌｌｓ）症候群、ＢＷＳ、レット症候群、αサラセミア、がん、白血病、ルビンシュタイン・テイビ症候群、およびコフィン・ローリー症候群が挙げられる。
【０１４８】
エピジェネティックスと結びつけられた最初のヒト疾患は、がんである。研究者らは、結腸直腸がん患者からの患部組織が、同一患者の正常組織よりも、より少ないＤＮＡメチル化を有することを見出した。メチル化遺伝子は、典型的にスイッチオフされるので、ＤＮＡメチル化の喪失は、クロマチン配置を変化させることにより、異常に高い遺伝子活性化を引き起こし得る。他方では、過剰なメチル化は、保護的腫瘍サプレッサー遺伝子の作用を取り消し得る。
【０１４９】
ＤＮＡメチル化はＣｐＧ部位で生じ、哺乳類においてはＣｐＧシトシンの大部分はメチル化されている。しかしプロモーター領域の近くには、正常細胞ではメチル化を含まないＣｐＧ部位を、より高濃度で有する一続きのＤＮＡがある（ＣｐＧアイランドとして知られている）。がん細胞中では、これらのＣｐＧアイランドが過剰にメチル化され、それによって発現停止されるべきではない遺伝子がスイッチオフされる。この異常は、腫瘍中で生じるエピジェネティックな変化を象徴する特徴であり、がん発生初期に起きる。ＣｐＧアイランドの過剰メチル化は、腫瘍抑制遺伝子をスイッチオフすることで、腫瘍を引き起こし得る。事実上、これらのタイプの変化は、ヒトのがんにおいて、ＤＮＡ配列の変異よりもより一般的なこともある。
【０１５０】
さらにエピジェネティックな変化は、ＤＮＡ配列を変化させないが、それらは変異を引き起こし得る。家族性または遺伝性形態のがんを引き起こす遺伝子の約半分は、メチル化によりスイッチオフされる。これらのほとんどの遺伝子は、常態では、腫瘍形成を抑制して、Ｏ６−メチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＭＧＭＴ）、ＭＬＨ１サイクリン依存性キナーゼ阻害剤２Ｂ（ＣＤＫＮ２Ｂ）、およびＲＡＳＳＦ１Ａをはじめとする、ＤＮＡ修復を助ける。例えばＭＧＭＴプロモーターの過剰メチル化は、Ｇ−ｔｏ−Ａ変異の数を増大させる。
【０１５１】
過剰メチル化はまた、反復ＤＮＡ配列であるマイクロサテライトの不安定性をもたらし得る。マイクロサテライトは、正常な個体において一般的であり、それらは通常、ジヌクレオチドＣＡの反復からなる。ＤＮＡ修復遺伝子ＭＬＨ１のプロモーターの過剰なメチル化は、マイクロサテライトを不安定化し、それを延長または短縮し得る。マイクロサテライトの不安定性は、結腸直腸、子宮内膜、卵巣、および胃がんをはじめとする、多数のがんと結びつけられている。
【０１５２】
脆弱Ｘ症候群は、特に男性において、最も頻繁に遺伝する精神障害である。男女ともこの病状を発症し得るが、男性は、Ｘ染色体を１つだけ有するので、１つの脆弱Ｘは男性に対してより重大な影響を及ぼす。実際に、脆弱Ｘ症候群は、４，０００人の男性あたり約１人、８，０００人の女性あたり１人に発生する。この症候群がある人々は、重篤な知的障害、言語発達遅延、「自閉症様」挙動を有する。
【０１５３】
脆弱Ｘ症候群は、顕微鏡下における、遺伝子異常を含有するＸ染色体部分の見え方から、その名称を得た。それは、通常、糸でぶら下がっているように見えて、容易に破損する。症候群は、ＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）遺伝子中の異常によって引き起こされる。脆弱Ｘ症候群のない人々は、ＦＭＲ１遺伝子中に、６〜５０の三塩基ＣＧＧの反復を有する。しかし２００を超える反復がある個人は、完全な変異を有して、通常、症候群の症状を示す。多すぎるＣＧＧによって、ＣｐＧアイランドは、ＦＭＲ１遺伝子のプロモーター領域でメチル化されるようになり；常態では、それらはメチル化されない。このメチル化は遺伝子をスイッチオフして、ＦＭＲ１遺伝子が、脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質と称される重要なタンパク質を生成するのを停止させる。この特定のタンパク質の低下が、脆弱Ｘ症候群を引き起こす。脆弱Ｘの原因として、ＣＧＧ増幅変異が注目を集めているが、ＦＭＲ１メチル化に付随するエピジェネティックな変化が、症候群の真犯人である。
【０１５４】
エピジェネティックな変化を伴う精神遅滞に関連する障害は、脆弱Ｘ症候群だけではない。その他のこのような病状としては、ルビンシュタイン・テイビ（Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ−Ｔａｙｂｉ）、コフィン・ローリー、プラダー・ウィリー、アンジェルマン、ベックウィズ・ヴィーデマン、ＡＴＲ−Ｘ、およびレット症候群が挙げられる。
【０１５５】
エピジェネティック治療法としては、エピジェネティックな修飾を制御する酵素の阻害剤、具体的にはいくつかの悪性腫瘍に対し有望な抗腫瘍形成性効果を示したＤＮＡメチルトランスフェラーゼとヒストンデアセチラーゼ、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびｓｉＲＮＡが挙げられる。
【０１５６】
免疫療法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、免疫療法と共に投与される。がん免疫療法は、患者自身の免疫系が腫瘍と闘うよう誘導するようにデザインされた、治療ストラテジーの多様なセットを指す。腫瘍に対する免疫応答を生じさせる現代的な方法としては、表在性膀胱がんのための膀胱内ＢＣＧ免疫療法、前立腺がんワクチンであるプロベンジ、および腎細胞がんおよび黒色腫患者において、免疫応答を誘導するためのインターフェロンおよびその他のサイトカインの使用が挙げられる。
【０１５７】
同種異系造血幹細胞移植は、供与者の免疫細胞が、移植片対腫瘍効果で腫瘍を攻撃することが多いので、免疫療法の一形態と見なし得る。いくつかの実施形態では、免疫療法剤を本明細書に記載される化合物と組み合わせて使用し得る。
【０１５８】
ホルモン療法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、ホルモン療法と共に投与される。ある種のがんの増殖は、特定のホルモンを提供するか、または遮断することによって抑制し得る。ホルモン感受性腫瘍の一般例としては、特定タイプの乳がんおよび前立腺がん、ならびに特定のレチノイド／レチノイン酸に応答する特定タイプの白血病が挙げられる。エストロゲンまたはテストステロンを除去またはブロックすることは、往々にして重要な追加治療である。特定のがんでは、プロゲストーゲンなどのホルモン作動薬の投与が、治療的に有益なこともある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物と組み合わせて、ホルモン療法剤を使用し得る。
【０１５９】
ホルモン療法剤としては、ホルモン作動薬またはホルモン拮抗薬の投与が挙げられ、レチノイド／レチノイン酸、エストロゲンまたはテストステロンを阻害する化合物、ならびにプロゲストーゲン投与が挙げられる。
【０１６０】
炎症および自己免疫疾患
本明細書に記載される化合物および方法は、特にヒトおよびその他の哺乳類において、炎症関連疾患または障害を治療または予防するのに使用してもよい。本明細書に記載される化合物は、炎症の発生前、発生時、または発生後に投与してもよい。予防的に使用される場合、化合物は、好ましくは、あらゆる炎症応答または症状に先立って提供される。化合物の投与は、炎症性応答または症状を予防または軽減し得る。例示的な炎症状態としては、例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、変性関節疾患、脊椎関節症（ｓｐｏｎｄｏｕｌｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｉｅｓ）、その他の血清反応陰性炎症性関節炎、リウマチ性多発性筋痛、様々な血管炎（例えば巨細胞性動脈炎、ＡＮＣＡ＋血管炎）、痛風性関節炎、全身性エリテマトーデス、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、骨関節炎、骨粗鬆症、糖尿病（例えばインスリン依存性糖尿病または若年発症糖尿病）、月経痙攣、嚢胞性線維症、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、クローン病、粘液性大腸炎、潰瘍性大腸炎、胃炎、食道炎、膵臓炎、腹膜炎、アルツハイマー病、ショック、強直性脊椎炎、胃炎、結膜炎、膵臓炎（ｐａｎｃｒｅａｔｉｓ）（急性または慢性）、多臓器損傷症候群（例えば敗血症または外傷に続発する）、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化、脳卒中、再灌流傷害（例えば心肺のバイパスまたは腎臓透析に起因する）、急性糸球体腎炎、熱的傷害（すなわち日光皮膚炎）、壊死性腸炎、顆粒球輸血関連症候群、および／またはシェーグレン症候群が挙げられる。例示的な皮膚の炎症状態としては、例えば、湿疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、蕁麻疹、強皮症（ｓｃｈｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、乾癬、および急性炎症性要素を伴う皮膚病が挙げられる。
【０１６１】
別の実施形態では、本明細書に記載される化合物および方法は、喘息、気管支炎、肺線維症、アレルギー性鼻炎、酸素毒性、肺気腫、慢性気管支炎、急性呼吸困難症候群、およびいずれかの慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）をはじめとする、アレルギーおよび呼吸の病状を治療または予防するのに使用してもよい。化合物は、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎をはじめとする、慢性肝炎感染を治療するのに使用しもよい。
【０１６２】
さらに、本明細書に記載される化合物または方法は、自己免疫疾患および／または炎症を治療するのに使用してもよい。臓器組織自己免疫疾患（例えばレイノー症候群）、強皮症、重症筋無力症、移植拒絶反応、内毒素ショック、敗血症、乾癬、湿疹、皮膚炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、ブドウ膜炎、全身性エリテマトーデス、アジソン病、多腺性自己免疫疾患（多腺性自己免疫症候群としてもまた知られている）、およびグレーブス病などの自己免疫疾患と関連付けられている。
【０１６３】
特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、多発性硬化症を治療するのに使用し得る。特定の態様では、多発性硬化症を治療するのに使用される化合物は、化合物１、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−１−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）プロプ−２−エン−１−オン）である。
【０１６４】
併用療法
特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、単独で、または炎症を治療または予防するのに有用なその他の化合物と組み合わせて、投与してもよい。例示的な抗炎症剤としては、例えば、ステロイド（例えばコルチゾール、コルチゾン、フルドロコルチゾン、プレドニゾン、６［α］−メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、トリアムシノロン、ベタメタゾンまたはデキサメタゾン）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ（例えばアスピリン、アセトアミノフェン、トルメチン、イブプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、ナブメトン、ロフェコキシブ、セレコキシブ、エトドラクまたはニメスリド）が挙げられる。別の実施形態では、もう一方の治療薬は抗生物質である（例えばバンコマイシン、ペニシリン、アモキシシリン、アンピシリン、セフォタキシム、セフトリアキソン、セフィキシム、リファンピンメトロニダゾール、ドキシサイクリンまたはストレプトマイシン）。別の実施形態では、もう一方の治療薬はＰＤＥ４阻害剤である（例えばロフルミラストまたはロリプラム）。別の実施形態では、もう一方の治療薬は抗ヒスタミン剤である（例えばシクリジン、ヒドロキシジン、プロメタジンまたはジフェンヒドラミン）。別の実施形態では、もう一方の治療薬は抗マラリア剤である（例えばアルテミシニン、アルテメーター、アルテスナート（ａｒｔｓｕｎａｔｅ）、リン酸クロロキン、塩酸メフロキン、ドキシサイクリン塩酸塩、塩酸プログアニル、アトバクオンまたはハロファントリン）。一実施形態では、もう一方の化合物はドロトレコギンアルファである。
【０１６５】
抗炎症剤のさらなる例としては、例えば、アセクロフェナク、アセメタシン、ｅ−アセトアミドカプロン酸、アセトアミノフェン、アセトアミノサロール、アセトアニリド、アセチルサリチル酸、Ｓ−アデノシルメチオニン、アルクロフェナック、アルクロメタゾン、アルフェンタニル、アルゲストン、アリルプロジン、アルミノプロフェン、アロキシプリン、アルファプロジン、ビス（アセチルサリチル酸塩）アルミニウム、アムシノニド、アンフェナク、アミノクロルテノキサジン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、２−アミノ−４−ピコリン、アミノプロピロン、アミノピリン、アミキセトリン、サリチル酸アンモニウム、アンピロキシカム、アムトルメチングアシル、アニレリジン、アンチピリン、アントラフェニン、アパゾン、ベクロメタゾン、ベンダザック、ベノリレート、ベノキサプロフェン、ベンズピペリロン、ベンジダミン、ベンジルモルヒネ、ベルモプロフェン、ベタメタゾン、１７−吉草酸ベタメタゾン、ベジトラミド、［α］−ビサボロール、ブロムフェナク、ｐ−ブロモアセトアニリド、５−ブロモサリチル酸酢酸塩、ブロモサリゲニン、ブセチン、ブクロキシ酸、ブコローム、ブデソニド、ブフェキサマック、ブマジゾン、ブプレノルフィン、ブトアセチン、ブチブフェン、ブトルファノール、カルバマゼピン、カルビフェン、カルプロフェン、カルサラム、クロロブタノール、クロロプレドニゾン、クロルテノキサジン、サリチル酸コリン、シンコフェン、シンメタシン、シラマドール、クリダナク、クロベタゾール、クロコルトロン、クロメタシン、クロニタゼン、クロニキシン、クロピラク、クロプレドノール、クローブ、コデイン、臭化メチルコデイン、リン酸コデイン、硫酸コデイン、コルチゾン、コルチバゾール、クロプロプアミド、クロテトアミド、シクラゾシン、デフラザコート、デヒドロテストステロン、デソモルヒネ、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、デキサメタゾン−２１−イソニコチン酸、デキソキサドロール、デキストロモラミド、デキストロプロポキシフェン、デオキシコルチコステロン、デゾシン、ジアンプロマイド、ジアモルホンジアモルホン、ジクロフェナク、ジフェナミゾール、ジフェンピラミド、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルニサール、ジフルプレドナート、ジヒドロコデイノンエノールアセタート、ジヒドロモルヒネ、アセチルサリチル酸ジヒドロキシアルミニウム、ジメノキサドール、ジメヘプタノール、ジメチルチアンブテン、酪酸ジオキサフェチル、ジピパノン、ジプロセチル、ジピロン、ジタゾール、ドロキシカム、エモルファゾン、エンフェナム酸、エノキソロン、エピリゾール、エプタゾシン、エテルサレート、エテンザミド、エトヘプタジン、エトキサゼン、エチルメチルチアンブテン、エチルモルヒネ、エトドラク、エトフェナメート、エトニタゼン、オイゲノール、フェルビナク、フェンブフェン、フェンクロジン酸、フェンドサール、フェノプロフェン、フェンタニル、フェンチアザック、フェプラジノール、フェプラゾン、フロクタフェニン、フルアザコート、フルクロロニド、フルフェナム酸、フルメタゾン、フルニソリド、フルニキシン、フルノキサプロフェン、フルオシノロンアセトニド、フル���シノニド、フルオシノロンアセトニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン（ｆｌｕｏｃｏｉｔｏｌｏｎｅ）、フルオレソン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルピルチン、フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルプロクアゾン、フルランドレノリド、フルルビプロフェン、フルチカソン、ホルモコータル、ホスホサール、ゲンチジン酸、グラフェニン、グルカメタシン、サリチル酸グリコール、グアイアズレン、ハルシノニド、ハロベタソール、ハロメタゾン、ハロプレドノン、ヘロイン、ヒドロコドン、ヒドロコルタメート、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾン、ヘミコハク酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン‐２１‐リジネート、ヒドロコルチゾンシピオネート、ヒドロモルホン、ヒドロキシペチジン、イブフェナック、イブプロフェン、イブプロキサム、サリチル酸イミダゾール、インドメタシン、インドプロフェン、イソフェゾラク、イソフルプレドン、酢酸イソフルプレドン、イソラドール、イソメタドン、イソニキシン、イソキセパック、イソキシカム、ケトベミドン、ケトプロフェン、ケトロラック、ｐ−ラクトフェネチド、レフェタミン、レバロルファン、レボルファノール、レボフェナシル−モルファン、ロフェンタニル、ロナゾラク、ロルノキシカム、ロキソプロフェン、アセチルサリチル酸リジン、マジプレドン、メクロフェナム酸、メドリゾン、メフェナム酸、メロキシカム、メペリジン、メプレドニゾン、メプタジノール、メサラミン、メタゾシン、メサドン、メトトリメプラジン、メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、メチルプレドニゾロンスレプトナート、メチアジン酸、メトホリン、メトポン、モフェブタゾン、モフェゾラク、モメタゾン、モラゾン、モルヒネ、塩酸モルヒネ、硫酸モルヒネ、サリチル酸モルホリン、ミロフィン、ナブメトン、ナルブフィン、ナロルフィン、サリチル酸１−ナフチル、ナプロキセン、ナルセイン、ネホパム、ニコモルフィン、ニフェナゾン、ニフルム酸、ニメスリド、５’−ニトロ−２’−プロポキシアセトアニリド、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、オルサラジン、アヘン、オキサセプロール、オキサメタシン、オキサプロジン、オキシコドン、オキシモルホン、オキシフェンブタゾン、パパベレタム、パラメタゾン、パラニリン、パルサルミド、ペンタゾシン、ペリソキサール、フェナセチン、フェナドキソン、フェナゾシン、塩酸フェナゾピリジン、フェノコール、フェノペリジン、フェノピラゾン、フェノモルファン、アセチルサリチル酸フェニル、フェニルブタゾン、サリチル酸フェニル、フェニラミドール、ピケトプロフェン、ピミノジン、ピペブゾン、ピペリロン、ピラゾラク、ピリトラミド、ピロキシカム、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニバール、プレドニリデン、プログルメタシン、プロヘプタジン、プロメドール、プロパセタモール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、プロピフェナゾン、プロカゾン、プロチジン酸、プロキサゾール、ラミフェナゾン、レミフェンタニル、メチル硫酸リマゾリウ���、サラセタミド、サリシン、サリチルアミド、サリチルアミドｏ−酢酸、サリチル酸、サリチル硫酸、サルサレート、サルベリン、シメトリド、スフェンタニル、スルファサラジン、スリンダク、超酸化物ジスムターゼ、スプロフェン、スキシブゾン、タルニフルメート、テニダップ、テノキシカム、テロフェナメート、テトランドリン、チアゾリノブタゾン、チアプロフェン酸、チアラミド、チリジン、チノリジン、チキソコルトール、トルフェナム酸、トルメチン、トラマドール、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トロペシン、ビミノール、キセンブシン、キシモプロフェン、ザルトプロフェン、およびゾメピラックが挙げられる。
【０１６６】
一実施形態では、本明細書に記載される化合物は、炎症を治療または予防するために、選択的ＣＯＸ−２阻害剤と共に投与されてもよい。例示的な選択的ＣＯＸ−２阻害剤としては、例えば、デラコキシブ、パレコキシブ、セレコキシブ、バルデコキシブ、ロフェコキシブ、エトリコキシブ、およびルミラコキシブが挙げられる。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、提供される化合物は、アントラサイクリンまたはＴｏｐｏ  ＩＩ阻害剤と組み合わせて投与される。特定の実施形態では、提供される化合物は、ドキソルビシン（Ｄｏｘ）と組み合わせて投与される。特定の実施形態では、提供される化合物は、ボルテゾミブ（より広義にはカーフィルゾミブを含む）と組み合わせて投与される。Ｄｏｘまたはボルテゾミブと組み合わせた化合物の提供は、相乗（ｓｙｎｅｒｇｙｓｔｉｃ）効果（すなわち相加効果を上回る）をもたらすことが、驚くことに分かった。
【０１６８】
ウイルス感染症
本明細書に記載される化合物および方法は、特にヒトおよびその他の哺乳類において、ウイルス感染症関連疾患または障害を治療または予防するのに使用してもよい。本明細書に記載される化合物は、ウイルス感染症の発生前、発生時、または発生後に投与してもよい。予防的に使用される場合、化合物は、好ましくは、あらゆるウイルス感染症またはその症状に先立って提供される。
【０１６９】
例示的なウイルス性疾患としては、急性熱性咽頭炎、咽頭結膜熱、流行性角結膜炎、乳児胃腸炎、コクサッキー感染症、伝染性単核症、バーキットリンパ腫、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞がん、原発性ＨＳＶ−１感染症（例えば小児における歯肉口内炎、成人における扁桃炎および咽頭炎、角結膜炎）、潜在性ＨＳＶ−１感染症（例えば口唇ヘルペス（ｈｅｒｐｅｓ  ｌａｂｉａｌｉｓ）および単純ヘルペス（ｃｏｌｄ  ｓｏｒｅｓ）、原発性ＨＳＶ−２感染症、潜在性ＨＳＶ−２感染症、無菌性髄膜炎、伝染性単核症、巨細胞封入体病、カポジ肉腫、多中心性キャッスルマン病、原発性滲出液リンパ腫、ＡＩＤＳ、インフルエンザ、ライ症候群、はしか、後感染性脳脊髄炎、おたふく風邪、過形成上皮病変（例えば尋常性、扁平、足底、および肛門性器疣贅、喉頭乳頭腫、疣贅状表皮発育異常症）、子宮頸がん、扁平上皮がん、クループ、肺炎、細気管支炎、感冒、灰白髄炎、狂犬病、インフルエンザ様症候群、肺炎を伴う重症細気管支炎、風疹、先天性風疹、水痘、および帯状疱疹が挙げられる。
【０１７０】
例示的な病原性ウイルスとしては、アデノウイルス、コクサッキーウイルス、デングウイルス、脳炎ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、肝炎Ａウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、ヒトパピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、西ナイルウイルス、デング（Ｄｕｎｇｅｅ）、および黄熱病ウイルスが挙げられる。病原性ウイルスとしては、耐性ウイルス感染症を引き起こすウイルスもまた挙げられる。
【０１７１】
抗ウイルス薬剤は、ウイルス感染症を治療するのに特異的に使用される、薬剤クラスである。抗ウイルス作用は、一般に３つの機構の内１つに分類される。ウイルスが標的細胞に侵入する能力への干渉（例えばアマンタジン、リマンタジン、およびプレコナリル）、ウイルス合成の抑制（例えばアシクロビルやジドブジン（ＡＺＴ）のようなヌクレオシド類似体など）、およびウイルス放出の抑制（例えばザナミビルおよびオセルタミビル）。
【０１７２】
眼科
本明細書に記載される化合物および方法は、眼科（ｏｐｈｔｈａｍｏｌｏｇｙ）疾患を治療しまたは予防するのに使用してもよい。例示的な眼科（ｏｐｈｔｈａｍｏｌｏｇｙ）障害としては、黄斑浮腫（糖尿病性および非糖尿病性黄斑浮腫）、加齢性湿潤および乾燥型黄斑変性、加齢性円板状黄斑変性（ａｇｅｄ  ｄｉｓｃｉｆｏｒｍ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、嚢胞状黄斑浮腫、眼瞼浮腫、網膜浮腫、糖尿病性網膜症、脈絡網膜症、血管新生黄斑症、血管新生緑内障、ブドウ膜炎、虹彩炎、網膜血管炎、眼内炎、全眼球炎、転移性眼炎、脈絡膜炎、網膜色素上皮炎、結膜炎、毛様体炎、強膜炎、上強膜炎、視神経炎、球後視神経炎、角膜炎、眼瞼炎、滲出性網膜離脱、角膜潰瘍、結膜潰瘍、慢性貨幣状角膜炎、低酸素症または虚血に付随する眼疾患、未熟児網膜症、増殖性糖尿病性網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症、網膜血管腫状増殖、網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、コーツ病、家族性滲出性硝子体網膜症、脈なし病（高安病）、イールズ病、抗リン脂質抗体症候群、白血病性網膜症、血液過粘稠度症候群、マクログロブリン血症、インターフェロン網膜症、高血圧性網膜症、放射線網膜症、角膜上皮幹細胞不全症、および白内障が挙げられる。
【０１７３】
本明細書に記載される化合物および方法を使用して治療可能なその他の眼科疾患としては、増殖性硝子体網膜症および慢性網膜離脱が挙げられる。
【０１７４】
炎症性眼疾患もまた、本明細書に記載される化合物および方法を使用して治療可能である。
【０１７５】
神経変性疾患
神経変性は、神経細胞の死をはじめとする、神経細胞の構造または機能の進行性喪失を示す、包括的用語である。パーキンソン病、アルツハイマー病、およびハンチントン病をはじめとする多数の神経変性疾患は、神経変性過程の結果として発生する。研究が進むにつれて、細胞内レベルでこれらの疾患を互いに関連付ける、多数の類似性が現れた。これらの類似性の発見は、多数の疾患を同時に改善し得る治療法の進歩に対する希望を提供する。異なる神経変性障害の間には、非定型タンパク質アセンブリーならびに誘導細胞死をはじめとする、多数の類似点がある。
【０１７６】
アルツハイマー病は、大脳皮質および特定の皮質下の領域内における、ニューロンおよびシナプスの喪失によって特徴付けられる。この喪失は、側頭葉と頭頂葉、および前頭皮質と帯状回の一部における変性をはじめとする、罹患領域の肉眼的萎縮をもたらす。
【０１７７】
ハンチントン病は、アストログリオーシスと、中型有棘ニューロンの喪失を引き起こす。脳の領域は、それらの構造と、それらが含有するニューロン型次第で影響を被り、累積的に細胞を喪失するに連れて、サイズが低下する。影響を受ける領域は、主に線条体中にあるが、前頭皮質および側頭皮質中にもある。線条体の視床下核は、運動を開始して調節する淡蒼球に、制御シグナルを送る。したがって視床下核からのシグナル低下は、動作の開始と調節に低下を引き起こして、疾患に特徴的な動作をもたらす。ハンチントン病の例示的な治療薬としては、テトラベナンジン、神経弛緩薬、ベンゾジアゼピン、アマンタジン、レマセミド、バルプロ酸、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）、ミルタザピン、および抗精神病薬が挙げられる。
【０１７８】
パーキンソン病における脳細胞が失われる機序は、損傷を受けた細胞中における、ユビキチンに結合したタンパク質α−シヌクレインの異常な蓄積からなることもある。α−シヌクレイン−ユビキチン複合体は、プロテアソーム（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍｅ）に誘導され得ない。このタンパク質蓄積は、レビー小体と称されるタンパク質性細胞質封入体を形成する。疾患の病因に関する最新の研究は、α−シヌクレインによるドーパミン作動性ニューロンの死が、２つの主要な細胞内小器官である小胞体（ＥＲ）とゴルジ体の間でタンパク質を輸送する機構の欠陥に起因することを示している。Ｒａｂ１のような特定のタンパク質は、動物モデルにおいて、α−シヌクレインによって引き起こされるこの欠陥を逆転させることもある。例示的なパーキンソン病療法としては、レボドパと、ブロモクリプチン、ペルゴリド、プラミペキソール、ロピニロール、ピリベジル、カベルゴリン、アポモルフィン、およびリスリドなどをはじめとするドーパミン作動薬と、ドーパ脱炭酸酵素阻害薬（ｄｏｐａ  ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）と、セレギリン（ｓｅｌｅｇｉｌｅｎｅ）およびラサギリン（ｒａｓａｇｉｌｅｎｅ）などのＭＡＯ−Ｂ阻害剤と、抗コリン薬と、アマンタジンとが挙げられる。
【０１７９】
筋萎縮性側索硬化（ＡＬＳ／ルー・ゲーリック病）は、運動ニューロンが選択的に変性対象になる疾患である。例示的なＡＬＳ療法としては、リルゾール、バクロフェン、ジアゼパム、トリヘキシフェニジル、およびアミトリプチリンが挙げられる。
【０１８０】
その他の例示的な神経変性治療薬としては、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび幹細胞が挙げられる
【０１８１】
創傷治癒
創傷は、細胞または組織損傷によって特徴付けられる病状の一種である。創傷治癒は、至適には、組織の完全性と機能の修復をもたらす動的過程である。創傷治癒過程は、３つの重複する段階からなる。第１段階は、恒常性維持、血小板凝集、および脱顆粒によって特徴付けられる炎症期である。最初の応答としての血小板は、複数の成長因子を放出して、免疫細胞、上皮細胞、および内皮細胞を動員する。炎症期は、典型的に０〜５日間にわたって起きる。創傷治癒の第２段階は、その間にマクロファージおよび顆粒球が創傷に侵入する、増殖期である。浸潤性線維芽細胞は、コラーゲンを産生し始める。この時期の原則的特徴は、上皮化、血管新生、肉芽組織形成、およびコラーゲン産生である。増殖期は、典型的に３〜１４日間にわたって起きる。第３段階は、マトリックス形成が起きる再構築期である。線維芽細胞、上皮細胞、および内皮細胞は、再構築のために、コラーゲンおよびコラゲナーゼ、ならびにマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）を産生し続ける。コラーゲン架橋が生じて、創傷を収縮させる。再構築期は、典型的に７日目〜１年間にわたって起きる。
【０１８２】
本明細書に記載される化合物および組成物は、創傷治癒を促進させる（例えば創傷閉鎖および／または創傷治癒を促進または加速させ、創傷組織および／またはその周辺の瘢痕線維症を軽減し、創傷周囲または近接細胞のアポトーシスを阻害する）ために使用し得る。したがって、特定の実施形態では、本発明は、化合物（例えばＣＲＭ１阻害剤）、またはその薬学的に許容可能な塩または組成物を対象に投与するステップを含んでなる、対象中で創傷治癒を促進する方法を提供する。方法は、創傷の完全な治癒または閉鎖を達成する必要はなく；方法は、あらゆる程度の創傷閉鎖を促進するれば十分である。この点において、方法は、負傷組織治癒のために、単独でまたはその他の方法の補助剤として用い得る。
【０１８３】
本明細書に記載される化合物および組成物を使用して、炎症期（または初期）、創傷治癒増殖期（または中期）、および／または創傷治癒再構築期（または後期）において、創傷を治療し得る。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、創傷治癒を必要とする対象は、ヒトまたは、例えば、ウマ、ブタ、またはマウスのような齧歯類などの動物である。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、創傷治癒に有用な本明細書に記載される化合物および組成物は、例えば創傷部位に近接して局所投与され、または全身投与される。
【０１８６】
より具体的には、本明細書に記載される化合物または組成物は、創傷を被覆することで、または、本明細書に記載される化合物または組成物で被覆または処理された、絆創膏、充填材料、縫合などを施用することで、（任意選択的にその他の薬剤と組み合わせて）創傷部位に投与し得る。したがって本明細書に記載される化合物および組成物は、表面創傷を治療する局所投与のために調合し得る。局所製剤としては、口を介した（バッカル）送達製剤、本明細書に記載される化合物または組成物を皮膚層（すなわち表皮、真皮、および／または皮下層）に接触させる皮膚送達製剤が挙げられる。局所送達系を使用して、本明細書に記載される化合物および組成物の局所製剤を投与してもよい。
【０１８７】
代案としては、本明細書に記載される化合物および組成物は、例えば本明細書に記載される化合物または組成物を含んでなる、溶液の注射、持続放出調合物の注射、または生分解性移植片の導入によって、創傷部位またはその近くに投与し得る。
【０１８８】
本明細書に記載される化合物および組成物を使用して、急性創傷または慢性創傷を治療し得る。慢性創傷は、正常な修復過程が中断されると生じる。慢性創傷は、無認識の持続性感染または不十分な一次処置の結果として、急性損傷から生じ得る。しかしほとんどの場合、慢性損傷は、静脈、動脈、または代謝血管疾患、褥瘡、放射線障害、または腫瘍に起因する、進行性組織破壊の終末期である。
【０１８９】
慢性創傷では、糖尿病性潰瘍における不適当な循環、火傷や感染症などにおける顕著な壊死をはじめとする、多様な理由から治癒が起きない。これらの慢性創傷では、生存または回復期が律速段階であることが多い。細胞はもはや生存できず、したがって最初の回復期は、好ましくない創傷床環境によって延長される。
【０１９０】
慢性創傷としては、慢性虚血性皮膚病変；強皮症潰瘍；動脈潰瘍；糖尿病性足部潰瘍；褥瘡；静脈潰瘍；非治癒性下肢創傷；炎症状態に起因する潰瘍；および／または長期にわたる創傷が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１９１】
特定の実施形態では、対象における、糖尿病性創傷治癒のために、または糖尿病または虚血に続発する下肢および足部潰瘍治癒を加速するために、本明細書に記載される化合物および組成物を使用し得る。
【０１９２】
一実施形態では、創傷は外傷である。別の実施形態では、創傷は手術創（例えば腹部または胃腸手術創）である。さらなる実施形態では、創傷は火傷である。さらに別の実施形態では、創傷は放射線被曝の結果である。
【０１９３】
本明細書に記載される化合物および組成物はまた、糖尿病性創傷の治癒、胃腸創傷の治癒、または例えば手術に起因する癒着の治癒のために使用し得る。
【０１９４】
本明細書に記載される化合物および組成物を使用して、別の疾患に続発する創傷もまた回復させ得る。例えば乾癬および皮膚炎などの炎症性皮膚疾患においては、疾患に続発して、皮膚の深い亀裂によって、または皮膚を掻くことで引き起こされる、多数の皮膚病変事象がある。本明細書に記載される化合物および組成物を使用して、これらの疾患に続発する、例えば乾癬や皮膚炎のような炎症性皮膚疾患などの創傷を回復させ得る。
【０１９５】
さらなる実施形態では、創傷は内傷である。特定の態様では、内傷は慢性創傷である。別の特定の態様では、創傷は血管創傷である。さらに別の特定の態様では、内傷は潰瘍である。
【０１９６】
創傷の例としては、擦過傷、裂離、開放性気胸症（すなわち開放気胸）、火傷創傷、挫傷、銃創、切創、解放創、貫通創、穿孔創、穿刺創、串線創、刺創、手術創、皮下創傷、糖尿病性病変、または接線創が挙げられるが、これに限定されるものではない。本明細書に記載される化合物および組成物によって治療し得る創傷の追加的な例としては、熱傷、化学火傷、急性病状または創傷、化学的火傷、照射火傷、過剰な紫外線照射への曝露によって引き起こされる火傷（例えば日光皮膚炎）；陣痛および出産の結果としての会陰などの身体組織への損傷；会陰切開術などの医学的手技中に受けた損傷；切断、切開、表皮剥離をはじめとする、外傷誘発性損傷；事故から受けた損傷；術後の損傷、ならびに褥瘡、床擦れ、糖尿病および芳しくない循環関連の病状、および全てのタイプの座瘡などの慢性病状が挙げられる。さらに創傷としては、膿痂疹や間擦疹や毛嚢炎や湿疹などの皮膚炎、歯科手術に続く創傷；歯周病；外傷に続く創傷；および腫瘍関連創傷が挙げられる。創傷のなおもその他の例としては、動物咬創、動脈疾患、昆虫刺症と咬創、骨感染症、損傷皮膚／筋移植、壊疽、皮膚裂傷または裂創、皮膚老化、回復が遅いまたは非治癒性の手術創をはじめとする外科的切開、脳内出血、動脈瘤、皮膚無力症、および術後感染症が挙げられる。
【０１９７】
好ましい実施形態では、創傷は、火傷、切創、開放創、手術創または手術後創、糖尿病性病変、熱傷、化学火傷、放射線火傷、褥瘡、床擦れ、および糖尿病または芳しくない循環に関連した病状からなる群から選択される。
【０１９８】
本開示はまた、対象において創傷治癒中に瘢痕形成を軽減させる方法および組成物にも関する。本明細書に記載される化合物および組成物は、創傷および／またはその周辺で、瘢痕形成を軽減させるのに有効な量で、直接創傷に、または創傷に近接する細胞に投与し得る。
【０１９９】
創傷としては、対象の身体のあらゆる部分に対する、あらゆる傷害が挙げられる。実施形態に従って、熱傷に罹患している対象中で、瘢痕形成を改善し、軽減させ、または低下させる方法が提供される。好ましい実施形態に従って、急性または慢性創傷または傷害に罹患している対象中で、肥大性瘢痕を治療し、出現を低減し、または発症確率を低下させる方法が提供される。
【０２００】
その他の障害
本明細書に記載される化合物および組成物はまた、拡張型心筋症、肥大性心筋症、拘束性心筋症、肺線維症、肝線維症、糸球体腎炎、およびその他の腎障害をはじめとする、異常な組織増殖および線維症障害を治療するのにも使用してもよい。
【０２０１】
併用放射線療法
本明細書に記載される化合物および組成物は、放射線増感剤として有用である。したがって本明細書に記載される化合物および組成物は、放射線療法と組み合わせて投与し得る。放射線療法は、腫瘍を縮小させて、悪性細胞を殺滅するための、高エネルギー照射（例えばＸ線、ガンマ線、荷電粒子）の医学的使用であり、一般にがん治療法の一部として使用される。放射線療法は、それらのＤＮＡを損傷することで悪性細胞を殺滅する。
【０２０２】
放射線療法は、いくつかの方法で患者に送達し得る。例えば照射は、外部ビーム放射線療法におけるように、患者の身体の外部の装置などの外部線源から送達し得る。がん治療のための外部ビーム放射線療法は、典型的に、６０Ｃｏ、１３７Ｃｓなどの放射性同位体、または線形加速器などの高エネルギーＸ線源のいずれかである、患者の外部にある放射線源を使用する。外部線源は、患者の腫瘍部位に向けて平行ビームを生じる。外部線源放射線療法は、内部線源放射線療法の問題のいくつかを回避するが、それは腫瘍性組織と共に、放射線ビーム経路中で、望ましくなくかつ必然的に大量の非腫瘍性または健康な組織を照射する。
【０２０３】
健康な組織を照射することの有害な影響は、ビームで腫瘍部位をカバーしながら、外部放射線ビームを多様な「ガントリー」角度で患者に投射することにより、腫瘍性組織中の所与の放射線量を保ちながら低下させ得る。放射線ビームの経路に沿った健康な組織の特定の体積要素は変化して、治療全体における健康な組織のこのような各要素に対する総線量が低下する。
【０２０４】
健康な組織の照射はまた、放射線ビーム軸に垂直な腫瘍断面全体に対して、放射線ビームを厳密に視準することによっても低下させ得る。このような外周視準を生じる多数のシステムが存在し、そのいくつかは、任意の輪郭の放射線不透過性マスクを区分的に生じ得る複数のスライド式シャッターを利用する。
【０２０５】
外部ビーム照射の投与のために、線量は、治療容積に対して、少なくとも隔日１回、少なくとも約１グレイ（Ｇｙ）画分であり得る。特定の実施形態では、照射は、少なくとも１日１回、少なくとも約２グレイ（Ｇｙ）画分で、治療容積に投与される。別の特定の実施形態では、照射は、週あたり連続して５日間にわたり、少なくとも１日１回、少なくとも約２グレイ（Ｇｙ）画分で治療容積に投与される。別の特定の実施形態では、照射は、隔日、週に３回、１０Ｇｙ画分で治療容積に投与される。別の特定の実施形態では、少なくとも合計約２０Ｇｙが、それを必要とする患者に投与される。別の特定の実施形態では、少なくとも合計約３０Ｇｙが、それを必要とする患者に投与される。別の特定の実施形態では、少なくとも約４０Ｇｙが、それを必要とする患者に投与される。
【０２０６】
典型的に患者は、外部ビーム治療法を週に４または５回受ける。全治療過程は、がんのタイプと治療目的に応じて、通常は、１〜７週間にわたる。例えば２Ｇｙ／日の用量を、患者に３０日間にわたり投与し得る。
【０２０７】
内部放射線療法は局在性放射線療法であり、放射線源は腫瘍部位または患部に配置される。内部放射線療法は、放射線源を、治療を要する領域の内部または隣に配置させることで送達し得る。内部放射線療法は、近接照射療法とも称される。近接照射療法としては、腔内（ｉｎｔｅｒｃａｖｉｔａｒｙ）療法および間質内療法が挙げられる。腔内療法では、放射線源を収容する容器が、腫瘍に入れられまたはその近くに置かれる。放射線源は、体腔に入れられる。間質内療法では、放射線源のみが腫瘍に入れられる。これらの放射線源は、患者の中に恒久的に留まり得る。典型的に放射線源は、数日後に患者から取り出される。放射線源は、容器内にある。
【０２０８】
放射性医薬品を投与する、いくつかの方法がある。例えば放射性医薬品は、放射性標識抗体、放射性標識ペプチド、およびリポソーム送達系などの標的化放射性複合体の標的化送達または全身性送達によって投与し得る。標的化送達の特定の一実施形態では、放射標識医薬品は放射標識抗体であり得る。例えばその内容を参照によって本明細書に援用する、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００１；６１：２００８−２０１４  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒ，Ｄ．Ｍ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２００２；４３（５）：６９３−７１３を参照されたい。
【０２０９】
標的化送達の別の特定の実施形態では、放射性医薬品は、小型単層小胞、大型単層小胞、および多重膜小胞などのリポソーム送達系の形態で投与し得る。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの多様なリン脂質から生成され得る。例えばその内容を参照によって本明細書に援用する、Ｅｍｆｉｅｔｚｏｇｌｏｕ  Ｄ，Ｋｏｓｔａｒｅｌｏｓ  Ｋ，Ｓｇｏｕｒｏｓ  Ｇ．Ａｎ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ  ｓｔｕｄｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ−ｌｉｐｏｓｏｍｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ２００１；４２：４９９−５０４を参照されたい。
【０２１０】
標的化送達のさらに別の特定の実施形態では、放射性標識医薬品は、放射性標識ペプチドであり得る。例えばその内容を参照によって本明細書に援用する、Ｗｅｉｎｅｒ  ＲＥ，Ｔｈａｋｕｒ  ＭＬ．Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｐｐｌ  Ｒａｄｉａｔ  Ｉｓｏｔ  ２００２  Ｎｏｖ；５７（５）：７４９−６３を参照されたい。
【０２１１】
標的化送達に加えて、近接照射療法（ｂｒａｃｙｔｈｅｒａｐｙ）を使用して、放射性医薬品を標的部位に送達し得る。近接照射療法は、腫瘍部位の可能な限り近くに、放射線源を置く技術である。往々にして線源は、腫瘍に直接挿入される。放射線源は、ワイヤ、シードまたはロッドの形態であり得る。一般に、セシウム、イリジウムまたはヨウ素が使用される。
【０２１２】
全身放射線療法は、別のタイプの放射線療法であり、血中の放射性物質の使用を伴う。全身放射線療法は、標的療法の一形態である。全身放射線療法では、患者は、典型的に、放射性ヨウ素などの放射性物質、またはモノクローナル抗体に結合した放射性物質を摂取し、または注射される。
【０２１３】
本明細書で定義される「放射性医薬品」は、少なくとも１つの放射線放出性放射性同位体を含有する医薬品を指す。放射性医薬品は、慣例的に、様々な疾患の診断および／または治療ために核医学で使用される。例えば放射標識抗体などの放射標識医薬品は、放射線源の役割を果たす放射性同位体（ＲＩ）を含有する。本明細書における意図では、「放射性同位体」という用語は、金属および非金属放射性同位体を含む。放射性同位体は、放射性標識医薬品の医療用途に基づいて選択される。放射性同位体が、金属放射性同位体である場合、キレート化剤が典型的に用いられて、金属放射性同位体を分子残部に結合する。放射性同位体が非金属放射性同位体である場合、非金属放射性同位体は、典型的に、分子残部直接結合し、またはリンカーによって結合する。
【０２１４】
本明細書の用法では，「金属放射性同位体」は、生体内または試験管内治療または診断手順で有用なあらゆる適切な金属放射性同位体である。適切な金属放射性同位体としては、アクチニウム−２２５、アンチモン−１２４、アンチモン−１２５、ヒ素−７４、バリウム−１０３、バリウム−１４０、ベリリウム−７、ビスマス−２０６、ビスマス−２０７、ビスマス−２１２、ビスマス−２１３、カドミウム−１０９、カドミウム−１１５ｍ、カルシウム−４５、セリウム−１３９、セリウム−１４１、セリウム−１４４、セシウム−１３７、クロム−５１、コバルト−５５、コバルト−５６、コバルト−５７、コバルト−５８、コバルト−６０、コバルト−６４、銅−６０、銅−６２、銅−６４、銅−６７、エルビウム−１６９、ユウロピウム−１５２、ガリウム−６４、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ガドリニウム−１５３、ガドリニウム−１５７金−１９５、金−１９９、ハフニウム−１７５、ハフニウム−１７５−１８１、ホルミウム−１６６、インジウム−１１０、インジウム−１１１、イリジウム−１９２、鉄５５、鉄−５９、クリプトン−８５、鉛−２０３、鉛−２１０、ルテチウム−１７７、マンガン−５４、水銀−１９７、水銀−２０３、モリブデン−９９、ネオジム−１４７、ネプツニウム−２３７、ニッケル−６３、ニオブ−９５、オスミウム−１８５＋１９１、パラジウム−１０３、パラジウム−１０９、白金−１９５ｍ、プラセオジム−１４３、プロメチウム−１４７、プロメチウム−１４９、プロトアクチニウム−２３３、ラジウム−２２６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、ルビジウム−８６、ルテニウム−９７、ルテニウム−１０３、ルテニウム−１０５、ルテニウム−１０６、サマリウム−１５３、スカンジウム−４４、スカンジウム−４６、スカンジウム−４７、セレン−７５、銀−１１０ｍ、銀−１１１、ナトリウム−２２、ストロンチウム−８５、ストロンチウム−８９、ストロンチウム−９０、イオウ−３５、タンタル−１８２、テクネチウム−９９ｍ、テルル−１２５、テルル−１３２、タリウム−２０４、トリウム−２２８、トリウム−２３２、タリウム−１７０、スズ−１１３、スズ−１１４、スズ−１１７ｍ、チタン−４４、タングステン−１８５、バナジウム−４８、バナジウム−４９、イッテルビウム−１６９、イットリウム−８６、イットリウム−８８、イットリウム−９０、イットリウム−９１、亜鉛−６５、ジルコニウム−８９、およびジルコニウム−９５が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２１５】
本明細書の用法では，「非金属放射性同位体」は、生体内または試験管内治療または診断手順で有用なあらゆる適切な非金属放射性同位体（非金属放射性同位体）である。適切な非金属放射性同位体としては、ヨウ素−１３１、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１２３、リン−３２、アスタチン−２１１、フッ素−１８、炭素−１１、酸素−１５、臭素−７６、および窒素−１３が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２１６】
放射線療法のために最も適切な同位体を同定するには、多様な要因の検討が必要である。これらとしては、腫瘍取り込みおよび保持、血液クリアランス、照射送達速度、放射性同位体半減期および比活性、および経済的な放射性同位体の大規模生産の実現可能性が挙げられる。治療用放射性医薬品の要点は、管理し難い副作用を引き起こさずに、必要な照射用量を腫瘍細胞に送達して、細胞毒性または殺腫瘍効果を達成することである。
【０２１７】
治療用放射性同位体の物理半減期は、腫瘍部位における放射性医薬品の生物学的半減期と同様であることが好ましい。例えば放射性同位体の半減期が短かすぎる場合、崩壊の大半は、放射性医薬品が最大標的／背景比に達する前に起きる。他方、長すぎる半減期は、正常組織に対して不要な放射線量を引き起こし得る。理想的には、放射性同位体は、十分長い半減期を有して、最小線量率を達成し、細胞周期中の最も照射感受性の高い段階で、全ての細胞を照射すべきである。これに加えて放射性同位体の半減期は、製造、リリース、および輸送に十分な時間を与えるのに、十分長くなくてはならない。
【０２１８】
腫瘍治療法において、特定用途のために放射性同位体を選択する上での、別の実用的考察は、入手可能性および品質である。放射性医薬品の放射性標識および放射化学純度には、痕跡量の不純物が影響を及ぼし得るため、純度は十分高く再現可能でなくてはならない。
【０２１９】
腫瘍中の標的受容体部位は、典型的に数が限られている。したがって放射性同位体は、高い比活性を有することが好ましい。比活性は、主に製造法に左右される。微量金属汚染物質は、キレート化剤について、放射性同位体と往々にして競合し、またそれらの金属複合体は、受容体結合について、放射性標識キレート剤と競合するために、最小化されなくてはならない。
【０２２０】
本発明の方法で使用するのに適した照射タイプは、変動し得る。例えば照射は、本質的に電磁または微粒子であり得る。本発明の実施において有用な電磁放射としては、Ｘ線およびガンマ線が挙げられるが、これに限定されるものではない。本発明の実施で有用な微粒子照射としては、電子ビーム（ベータ粒子）、プロトンビーム（ｐｒｏｔｏｎｓ  ｂｅａｍｓ）、中性子ビーム、アルファ粒子、および負のパイ中間子が挙げられるが、これに限定されるものではない。照射は、従来の放射線学的治療装置および方法を使用して、および術中および定位固定法によって送達し得る。本発明の実施で使用するのに適した放射線治療に関する追加的な考察はＳｔｅｖｅｎ  Ａ．Ｌｅｉｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（１９９８）（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙによる出版）の全体を通じて記載され、特に第１３章および１４章に記載される。照射はまた、例えば放射性「シード」による、または標的化放射性複合体の全身性送達による、標的化送達などのその他の方法によって送達し得る。Ｊ．Ｐａｄａｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  Ｒａｄｉｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ  ｉｎ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃ３ＨＢＡ  Ｍａｍｍａｒｙ  Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｄ  ｗｉｔｈ  Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ｌｕｃａｎｔｈｏｎｅ  ｉｎ  ａｎ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｂｉｏａｓｓａｙ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．７：３４７−３５７（１９８１）。その他の照射送達法も、本発明実施で使用し得る。
【０２２１】
腫瘍療法のために、αおよびβ粒子放出体の双方が調査されている。アルファ粒子は、１または２細胞直径内に大量のエネルギーを散逸するので、特に優れた細胞毒性薬である。β粒子放出体は、エネルギーレベル次第で、比較的長い透過範囲（組織中で２〜１２ｍｍ）を有する。長い透過範囲は、不均一の血流および／または受容体発現を有する固形腫瘍で、特に重要である。β粒子放出体は、それらが標的組織内で不均一に分布している場合でさえも、より均質な線量分布をもたらす。
【０２２２】
特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物および組成物の治療有効量を放射線療法の治療有効量と組み合わせて投与して、がん（例えば非小細胞肺がんなどの肺がん）を治療する。必要な照射量は、特定のタイプのがんのための既知の用量に基づいて、当業者によって判定され得る。例えばＣａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５ｔｈ  ｅｄ．，Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｒ．Ｃ．Ｂａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｕｌｙ  ２０００，ＢＣ  Ｄｅｃｋｅｒを参照されたい。
【０２２３】
上の開示は、本発明について概説する。以下の特定の実施例を参照して、より完全な理解が得られ得る。これらの実施例は、例証のみを目的として記載され、本発明の範囲を制限することは意図されない。状況に応じて、または好都合であれば、形態の変更および同等物の置換が検討される。本明細書では、特定の用語が用いられているが、このような用語は記述的観念であることが意図され、制限目的ではない。
【実施例】
【０２２４】
略語
ａｑ．水性
Ｂｏｃ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＣＨ２Ｃｌ２  ジクロロメタン
ＤＡＢＣＯ  １，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン
ＤＩＰＥＡ  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ｅｑ．当量
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥｔＯＨ  エタノール
ｈ  時間
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィー質量分析
ＬｉＯＨ  水酸化リチウム
ＮＭＲ  核磁気共鳴
ＲＴ  室温または滞留時間
Ｔ３Ｐ  プロピルホスホン酸無水物
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
【０２２５】
このような方法の以下の説明全体を通じて、適切な場合は、有機合成の当業者に容易に理解される様式で、様々な反応物質および中間体に、適切な保護基が付加され、引き続いてそれから除去されるものと理解される。このような保護基を使用する従来の手順、ならびに適切な保護基の例は、例えば“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）に記載される。化学処理による、基または置換基から別の基または置換基への変換が、最終生成物に向かう合成経路上のあらゆる中間体または最終生成物に対して実施され得ることもまた理解され、その中では、可能なタイプの変換は、変換に用いられる条件または試薬に対する、その段階で分子が有するその他の官能基の固有の不適合性によってのみ制限される。このような固有の不適合性と、それらを適切な変換および合成段階を適切な順番で実施することによって回避する方法は、有機合成の当業者には容易に理解されるであろう。変換の例は下述され、記載される変換は、それについて変換が例示される、一般的な基または置換基のみに限定されないものと理解される。その他の適切な変換に関する参考文献および説明は、“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ−Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ”Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，ＶＨＣ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．（１９８９）にある。その他の適切な反応に関する参考文献および説明は、例えば、“Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｍａｒｃｈ，第４版ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ（１９９２）、または“Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｓｍｉｔｈ，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，（１９９４）などの有機化学教科書に記載される。中間体および最終製品を精製する技術としては、例えば、カラムまたは回転板上の順相および逆相クロマトグラフィー、再結晶、蒸留、および液体−液体または固体−液体抽出が挙げられ、これらは当業者には容易に理解されるであろう。置換基および基の定義は、異なって定義される場合を除き、式Ｉのとおりである。「室温」および「周囲温度」という用語は、特に断りのない限り、１６〜２５℃の温度を意味するものとする。「還流」という用語は、特に断りのない限り、用いられた溶媒に関して、指名された溶媒の沸点以上の温度を意味するものとする。
【０２２６】
実施例１．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−ピバロイルアクリロヒドラジド（化合物１）の合成
化合物１は、以下のスキームに従って合成された。
【化３】
2020037585.tif 000009
３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンゾチオアミド（ステップ１）
２Ｌの３つ口丸底フラスコに、ＤＭＦ（１Ｌ）中の３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（２００ｇ）の溶液を装填した。次に溶液をＮａＳＨ（１２３．７ｇ、２．０ｅｑ．）およびＭｇＣｌ２（１８６．７ｇ、１．０ｅｑ．）で処理して、反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を氷水スラリー（１０Ｌ）中に注ぎ入れて、化合物をＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を水性飽和塩化ナトリウム溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して、濾過し、減圧下で濃縮して、２０５ｇの所望の粗製３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンゾチオアミド（収率：９０％）を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０２２７】
３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（ステップ２）
５Ｌの３つ口丸底フラスコに、ＤＭＦ（１．０３Ｌ）中の３，５−ビス（トリフルオロメチル）ベンゾチオアミド（２０５．６５ｇ）の溶液を装填した。ヒドラジン水和物（７３．２ｍＬ、２．０ｅｑ．）を滴下して添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。ＨＣＯＯＨ（１．０３Ｌ）を滴下して添加し、反応混合物を９０℃で３時間還流させた。室温に放冷後、反応混合物を飽和水性炭酸水素ナトリウム溶液（７Ｌ）中に注ぎ入れて、ＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を水性飽和塩化ナトリウム溶液（３×５００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過して、減圧下（３５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、１８０ｇの粗生成物をもたらした。粗製物を石油エーテル（３×５００ｍＬ）と共に撹拌し、濾過して、乾燥し、淡黄色固体として得られる、１６０ｇの所望される３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールを得た（収率：７５％）。
【０２２８】
（Ｚ）−イソプロピル３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリレート（ステップ３）
２Ｌの３つ口丸底フラスコに、ＤＭＦ（９６０ｍＬ）中の３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（１６０ｇ）の溶液を装填した。溶液をＤＡＢＣＯ（１２７．７４ｇ、２ｅｑ．）で処理して、３０分間撹拌した後、（Ｚ）−３−ヨードアクリル酸イソプロピル（１５０．３２ｇ、１．１ｅｑ．）を滴下して添加した。１時間後、反応混合物を氷水スラリー（５Ｌ）中に注ぎ入れて、ＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を水性飽和塩化ナトリウム溶液（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して、濾過し、減圧下（３５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮して、２５０ｇの粗生成物を得て、それを酢酸エチル／ｎ−ヘキサン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはヘキサン中で充填し、所望の化合物は２％ＥｔＯＡｃ／ｎ−ヘキサンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−イソプロピル３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリレート（１３８ｇ、収率：６１％）を得た。
【０２２９】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（ステップ４）
５Ｌの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−イソプロピル３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリレート（１３０ｇ、１．０ｅｑ．）をＴＨＦ（１．３Ｌ）中に溶解した。溶液に、水（１．３Ｌ）中のＬｉＯＨ（６９．３ｇ、５．０ｅｑ．）の溶液を滴下して添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌した後、４００ｍＬの氷水スラリーでクエンチして、希釈水性ＨＣｌで酸性（ｐＨ＝２〜３）にした。混合物をＥｔＯＡｃ（３×１Ｌ）で抽出して、合わせた有機層を水性飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して減圧下で濃縮し、１１０ｇの（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（収率：９４％）、（ＬＣＭＳによるシス含量＝９０．０％、トランス含量＝８．２％）を得た。
【０２３０】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−ピバロイルアクリロヒドラジド（化合物１）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（０．２ｇ、１．０ｅｑ．）をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解して、−６０℃に冷却し、ピバロヒドラジド（０．０８ｇ、１．２ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（０．４ｍＬ、４ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．４ｍＬ、４ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−ピバロイルアクリロヒドラジド（０．１１ｇ、収率：４３％）を得た。
【０２３１】
実施例２．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−モルホリノアセチル）アクリロヒドラジド（化合物２）の合成
２−モルホリノアセトヒドラジド
２５ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、メチル２−モルホリノ酢酸（０．２５ｇ、１．０ｅｑ．）を室温でエタノール（５ｍＬ）に溶解した。ヒドラジン水和物（０．０８７ｇ、１．１ｅｑ．）を室温で滴下して添加して、反応混合物を９５℃で２０時間還流させた。反応混合物を減圧下で濃縮し（４０℃、２０ｍｍＨｇ）、粗製２−モルホリノアセトヒドラジド（０．２３ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０２３２】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−モルホリノアセチル）アクリロヒドラジド（化合物２）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（実施例１、ステップ４；０．５ｇ、１．０ｅｑ．）をＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ、２：１）に溶解して、−６０℃に冷却し、２−モルホリノアセトヒドラジド（０．２３ｇ、１．０ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（１．２７ｍＬ、１．５ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．９６ｍＬ、２ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−モルホリノアセチル）アクリロヒドラジド（０．１ｇ、収率：１４％）を得た。
【０２３３】
実施例３．（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボヒドラジド（化合物３）の合成
５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボヒドラジド
２５ｍＬの封管内で、エチル５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（０．２５ｇ、１．０ｅｑ．）を室温でエタノール（５ｍＬ）に溶解した。ヒドラジン水和物（１ｍＬ、５ｅｑ．）を室温で滴下して添加し、反応混合物を１２０℃で２０時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮し（４０℃、２０ｍｍＨｇ）、粗製５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボヒドラジド（０．２４ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０２３４】
（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボヒドラジド（化合物３）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（実施例１、ステップ４；０．５ｇ、１．０ｅｑ．）をＥｔＯＡｃ：ＥｔＯＨ（１５ｍＬ、２：１）に溶解し、−６０℃に冷却して、５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボヒドラジド（０．２４ｇ、１．０ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（１．６９ｍＬ、１．５ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（２ｍＬ、８ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボヒドラジド（０．２ｇ、収率：４２％）を得た。
【０２３５】
実施例４．（Ｚ）−２−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−Ｎ−シクロプロピルヒドラジンカルボチオアミド（化合物４）の合成
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（実施例１、ステップ４；０．５ｇ、１．０ｅｑ．）をＥｔＯＡｃ：ＥｔＯＨ（１５ｍＬ、２：１）に溶解し、−６０℃に冷却して、Ｎ−シクロプロピルヒドラジンカルボチオアミド（０．２２ｇ、１．２ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（１．６９ｍＬ、２ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（１ｍＬ、４ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−２−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−Ｎ−シクロプロピルヒドラジンカルボチオアミド（０．０６ｇ、収率：９％）を得た。
【０２３６】
実施例５．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−メチル−Ｎ’−（２−モルホリノアセチル）アクリロヒドラジド（化合物５）の合成
Ｎ−メチル−２−モルホリノアセトヒドラジド
２５ｍＬの封管内で、メチル２−モルホリノ酢酸（０．５ｇ、１．０ｅｑ．）を室温でエタノール（５ｍＬ）に溶解した。メチルヒドラジン（０．１６ｇ、１．１ｅｑ．）を室温で滴下して添加して、反応混合物を９５℃で４８時間還流させた。反応混合物を減圧下で濃縮し（４０℃、２０ｍｍＨｇ）、粗製Ｎ−メチル−２−モルホリノアセトヒドラジド（０．２７ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０２３７】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−メチル−Ｎ’−（２−モルホリノアセチル）アクリロヒドラジド（化合物５）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（実施例１、ステップ４；０．３ｇ、１．０ｅｑ．）をＴＴＨＦ：ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ、２：１）に溶解し、−６０℃に冷却して、Ｎ−メチル−２−モルホリノアセトヒドラジド（０．２３ｇ、１．５ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（１．２７ｍＬ、２．５ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．４５ｍＬ、３ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−メチル−Ｎ’−（２−モルホリノアセチル）アクリロヒドラジド（０．０５２ｇ、収率：１２％）を得た。
【０２３８】
実施例６．（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ピペリジン−３−カルボヒドラジド（化合物６）の合成
ピペリジン−３−カルボヒドラジド
３０ｍＬの封管内で、エチルメチルピペリジン−３−カルボキシレート（１ｇ、１．０ｅｑ．）を室温でエタノール（５ｍＬ）に溶解した。ヒドラジン水和物（１．０５ｇ、３ｅｑ．）を室温で滴下して添加し、反応混合物を１２０℃で２０時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮し（４０℃、２０ｍｍＨｇ）、粗製ピペリジン−３−カルボヒドラジド（０．８ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０２３９】
（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ピペリジン−３−カルボヒドラジド（化合物６）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（実施例１、ステップ４；０．２５ｇ、１．０ｅｑ．）をＴＨＦ：ＥｔＯＨ（１５ｍＬ、２：１）に溶解し、−６０℃に冷却して、ピペリジン−３−カルボヒドラジド（０．１１３ｇ、１．１ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（１．６９ｍＬ、４ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．２５ｍＬ、２ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ピペリジン−３−カルボヒドラジド（０．０１ｇ、収率：２．４％）を得た。
【０２４０】
実施例７．（Ｓ，Ｚ）−２−アミノ−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−３−メチルブタンヒドラジド２，２，２−トリフルオロ酢酸（化合物７）の合成
化合物７は、以下のスキームによって合成された。
【化４】
2020037585.tif 000010
【０２４１】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロヒドラジド（ステップ１）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（実施例１、ステップ４；０．５ｇ、１．０ｅｑ．）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、−１０℃に冷却して、ＮＭＰ（０．３ｇ、２．１ｅｑ．）を添加して、反応混合物を５分間撹拌した。次にクロロギ酸イソブチル（０．４６５ｇ、２．４ｅｑ．）を添加して、反応混合物を１時間撹拌した。形成した固形物を濾過して除去した。濾液を０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド（０．２１ｇ、１．１ｅｑ．）を添加した。反応混合物が室温に暖まるまで放置して、１時間撹拌した。反応混合物を氷水スラリーに注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水性飽和塩化ナトリウム溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過して、減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、０．５ｇの粗生成物をもたらした。次に粗生成物をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解して、ＴＦＡ（２ｍＬ）を室温で滴下して添加し、反応混合物を２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し（２５℃、２０ｍｍＨｇ）、形成された固形物をペンタンと共に摩砕して、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロヒドラジド（０．２５ｇ、収率：４８．５％）を得た。
【０２４２】
（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸
２５ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタン酸（０．８ｇ、１．０ｅｑ．）を水（４ｍＬ）に溶解した。炭酸水素ナトリウム（０．６３ｇ、１．１ｅｑ．）とそれに続く二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．９７ｇ、２．０ｅｑ．）を添加して、応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水性飽和塩化ナトリウム溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して、濾過し、減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮して、１．２ｇの粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸を得た（０．７ｇ、収率：４７．３％）。
【０２４３】
（Ｓ，Ｚ）−２−アミノ−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−３−メチルブタンヒドラジド２，２，２−トリフルオロ酢酸（化合物７）
１０ｍＬ丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロヒドラジド（０．２５ｇ、１．０ｅｑ．）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解して、−６０℃に冷却し、（Ｓ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（０．１９ｇ、１．３ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（０．８１ｍＬ、２ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．４８ｍＬ、４ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｓ，Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（２−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ヒドラジニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを得た（０．０７ｇ、収率：１８％）。次に、１０ｍＬ丸底フラスコ内で、（Ｓ，Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（２−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ヒドラジニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートをジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解した。ＴＦＡ（０．０５ｍＬ）を添加して、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し（２５℃、２０ｍｍＨｇ）、粗生成物（０．０１ｇ）を得て、それを石油エーテルと共に摩砕して減圧下で乾燥させ、（Ｓ，Ｚ）−２−アミノ−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−３−メチルブタンヒドラジド２，２，２−トリフルオロ酢酸（０．００６ｇ、収率：２％）を得た。
【０２４４】
実施例８．（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ピラジン−２−カルボヒドラジド（化合物８）の合成
２５ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（実施例１、ステップ４；０．５ｇ、１．０ｅｑ．）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、−６０℃に冷却して、ピラジン−２−カルボヒドラジド（０．２１６ｇ、１．１ｅｑ．）を添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（３．３９ｍＬ、４ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、２ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ピラジン−２−カルボヒドラジド（０．１３ｇ、収率：１９．４％）を得た。
【０２４５】
実施例９．（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−１−メチルピペリジン−４−カルボヒドラジド（化合物９）の合成
１−メチルピペリジン−４−カルボヒドラジド。２５ｍＬの封管内で、メチル１−メチルピペリジン−４−カルボキシレート（０．２ｇ、１．０ｅｑ．）を室温でエタノール（５ｍＬ）に溶解した。ヒドラジン水和物（０．１２７ｇ、２ｅｑ．）を室温で滴下して添加し、反応混合物を１２０℃で２０時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮し（４０℃、２０ｍｍＨｇ）、粗製１−メチルピペリジン−４−カルボヒドラジド（０．１４５ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０２４６】
（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−１−メチルピペリジン−４−カルボヒドラジド（化合物９）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（０．２５ｇ、１．０ｅｑ．）をＥｔＯＡｃ：ＴＨＦ（１５ｍＬ；２：１）に溶解して、−６０℃に冷却し、１−メチルピペリジン−４−カルボヒドラジド（０．１２３ｇ、１．１ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（０．８５ｍＬ、２ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．３１ｍＬ、２．５ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（３５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−１−メチルピペリジン−４−カルボヒドラジド（０．０１６ｇ、収率：４．５％）を得た。
【０２４７】
実施例１０．（Ｓ，Ｚ）−２−アミノ−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−３−メチルブタンヒドラジド２，２，２−トリフルオロ酢酸（化合物１０）の合成
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸。２５ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｒ）−２−アミノ−３−メチルブタン酸（０．８ｇ、１．０ｅｑ．）を水（４ｍＬ）に溶解した。炭酸水素ナトリウム（０．３９４ｇ、１．１ｅｑ．）、とそれに続く二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．８６ｇ、２．０ｅｑ．）を添加して、反応混合物を２室温で時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水性飽和塩化ナトリウム溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して濾過し、減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮して、０．７５ｇの粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸を得た（０．４４ｇ、収率：４７．３％）。
【０２４８】
（Ｒ，Ｚ）−２−アミノ−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−３−メチルブタンヒドラジド２，２，２−トリフルオロ酢酸（化合物１０）
１０ｍＬ丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロヒドラジド（０．０５ｇ、１．０ｅｑ．）をＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解して、−６０℃に冷却し、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（０．０３８ｇ、１．３ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（０．１６ｍＬ、２ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．０９５ｍＬ、４ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｒ，Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（２−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ヒドラジニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを得た（０．０１７ｇ、収率：２６％）。次に、１０ｍＬ丸底フラスコ内で、（Ｒ，Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル（１−（２−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）ヒドラジニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートをジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解した。ＴＦＡ（０．２ｍＬ）を添加して、反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し（２５℃、２０ｍｍＨｇ）、粗生成物（０．０２ｇ）を得て、それを石油エーテルと共に摩砕して減圧下で乾燥させ、（Ｒ，Ｚ）−２−アミノ−Ｎ’−（３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリロイル）−３−メチルブタンヒドラジド２，２，２−トリフルオロ酢酸（０．００７ｇ、収率：３５％）を得た。
【０２４９】
実施例１１．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（ピラジン−２−イル）アセチル）アクリロヒドラジド（化合物１１）の合成
２−（ピラジン−２−イル）アセトヒドラジド
２５ｍＬの封管内で、メチル２−（ピラジン−２−イル）酢酸エステル（０．２５ｇ、１．０ｅｑ．）を室温でエタノール（５ｍＬ）に溶解した。ヒドラジン水和物（０．３３ｇ、４ｅｑ．）を室温で滴下して添加し、反応混合物を１２０℃で２０時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮し（４０℃、２０ｍｍＨｇ）、粗製２−（ピラジン−２−イル）アセトヒドラジド（０．２ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【０２５０】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（ピラジン−２−イル）アセチル）アクリロヒドラジド（化合物１１）
５０ｍＬの３つ口丸底フラスコ内で、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（０．３ｇ、１．０ｅｑ．）をＥｔＯＡｃ：ＴＨＦ（１５ｍＬ；２：１）に溶解して、−６０℃に冷却し、２−（ピラジン−２−イル）アセトヒドラジド（０．１２９ｇ、１．１ｅｑ．）を滴下して添加した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中の５０％）（１．０１ｍＬ、２ｅｑ．）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．３５ｍＬ、２．５ｅｑ．）がそれに続き、反応混合物を−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下（２５℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粗生成物を得て、それをメタノール／ジクロロメタン勾配を使用して、カラムクロマトグラフィー（６０／１２０シリカゲル）によって精製した（カラムはジクロロメタン中で充填し、所望の化合物は３％メタノール／ジクロロメタンから溶出し始めた）。所望の化合物を含有する画分を合わせて、（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（ピラジン−２−イル）アセチル）アクリロヒドラジド（０．０２５ｇ、収率：５％）を得た。
【０２５１】
実施例１２．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−モルホリノ−２−オキソアセチル）アクリロヒドラジド（化合物１２）の合成
【化５】
2020037585.tif 000011
エチル２−モルホリノ−２−オキソ酢酸の合成：
【化６】
2020037585.tif 000012
ジエチルエーテル（５ｍＬ）中のエチル２−クロロ−２−オキソ酢酸（１．２５ｇ、９．１８ｍｍｏｌ）溶液をジエチルエーテル（２０ｍＬ）中のモルホリン（１．０ｇ、１１．４８ｍｍｏｌ）溶液、およびトリエチルアミン（１．１６ｇ、１１．４８ｍｍｏｌ）に０℃で滴下して添加した。反応混合物が室温になるまで放置して、２時間撹拌した。反応混合物を濾過して、濾液を減圧下で濃縮した。黄色油を２５ｍＬの氷水に移し入れて、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して１ｇの粗生成物を得て、それをいかなる精製もなくさらに使用した。粗収率４７％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ４．３３−４．３８（ｑ，２Ｈ），３．７２−３．７６（ｍ，４Ｈ），３．６５−３．６８（ｍ，２Ｈ），３．４７−３．５０（ｍ，２Ｈ），１．３７−１．４０（ｔ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １８７．９３［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ＝０．５２５  ｍｉｎ．
【０２５２】
２−モルホリノ−２−オキソアセトヒドラジドの合成：
【化７】
2020037585.tif 000013
エチル２−モルホリノ−２−オキソ酢酸（１．０ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）をエタノール（７ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン水和物（０．２６７ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）を０℃で滴下して添加した。反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、０．９ｇの粗生成物を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。粗収率９０％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ９．７９（ｓ，１Ｈ），４．４３−４．４８（ｍ，２Ｈ），３．５６−３．６１（ｍ，４Ｈ），３．４０−３．４８（ｍ，４Ｈ）．ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １７４．１６［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ＝２．０３１  ｍｉｎ．
【０２５３】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−モルホリノ−２−オキソアセチル）アクリロヒドラジドの合成：
【化８】
2020037585.tif 000014
ＴＨＦ（３ｍＬ）中の（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（０．２ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）および２−モルホリノ−２−オキソアセトヒドラジド（０．０２ｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）の溶液を−６０°Ｃに冷却した。Ｔ３Ｐ（０．０９８ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）（０．５０ｍＬ）を滴下して添加し、ＤＩＰＥＡ（０．１１ｇ、０．８５４ｍｍｏｌ）がそれに続き、−６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬの氷水に移し入れ、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥して、減圧下で濃縮して０．３ｇの粗生成物を得て、それをクロマトグラフィー（０〜４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製し、０．１５ｇの（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−モルホリノ−２−オキソアセチル）アクリロヒドラジド（収率５０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．７０−１０．８８（ｍ，２Ｈ），９．５６（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｓ，２Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．５２−７．５５（ｄ，Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．０−６．０３（ｄ，Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．５１−３．６４（ｍ，８Ｈ）．ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５０７．２５［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ＝２．０１２  ｍｉｎ．
【０２５４】
実施例１３．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３，５−ジメチルモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジド（化合物１３）の合成
【化９】
2020037585.tif 000015
２，２’−アザンジイルジプロパン−１−オールの合成：
【化１０】
2020037585.tif 000016
２−アミノプロパン−１−オール（５ｇ、６６．５７ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシプロパン−２−オン（５．７７ｇ、７７．８９ｍｍｏｌ）をエタノール（１１５ｍＬ）に溶解し、５０ｍｇのＰｔＯ２を添加した。反応混合物は、室温５０ｐｓｉ  Ｈ２の圧力で２４時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した。粗収率７９％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ４．４５（ｂｓ，２Ｈ），３．４２−３．４３（ｍ，１Ｈ），３．１６−３．２２（ｍ，４Ｈ），２．６５−２．６９（ｍ，２Ｈ）０．８７−０．９１（ｍ，６Ｈ）：ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １３３．９９［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ：４．０７７  ｍｉｎ．
【０２５５】
３，５−ジメチルモルホリンの合成：
【化１１】
2020037585.tif 000017
２，２’−アザンジイルジプロパン−１−オール（７ｇ、５２ｍｍｏｌ）を濃Ｈ２ＳＯ４（５．３ｍＬ、９９．８ｍｍｏｌ）に室温で懸濁し、１８０℃で８時間加熱した。反応混合物を０℃に冷却し、６０ｍＬの水中のＫＯＨ（１１．７９ｇ、２１．０２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液をＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（８５：１５；５×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥して減圧下で濃縮し、３．５ｇの粗生成物を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した（粗収率：５８％）。
【０２５６】
エチル２−（３，５−ジメチルモルホリノ）酢酸の合成：
【化１２】
2020037585.tif 000018
炭酸カリウム（０．３１１ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）とブロモ酢酸エチル（０．３１９ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４ｍＬ）中の３，５−ジメチルモルホリン（０．２ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）溶液に室温で添加した。反応混合物を６０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を氷水に移し入れ、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して減圧下で濃縮し、粗生成物を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した（粗収率：５４％）。
【０２５７】
エチル２−（３，５−ジメチルモルホリノ）アセトヒドラジドの合成：
【化１３】
2020037585.tif 000019
エチル−２−（３，５−ジメチルモルホリノ）酢酸（０．１９ｇ、０．９４４ｍｍｏｌ）をエタノール（４ｍＬ）に溶解し、ｄヒドラジン水和物（０．０４７ｇ、０．９４４ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。反応混合物を８０℃で２０時間撹拌し、反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、それをさらに精製せずに引き続くステップで使用した。粗収率９７％。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．９５（ｓ，２Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），３．６０−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．２５−３．２９（ｍ，２Ｈ），３．１４（ｓ，２Ｈ），３．０５（ｓ，２Ｈ），０．８６−０．８８（ｍ，６Ｈ）：ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １８８．１２［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ  ４．７１６  ｍｉｎ．
【０２５８】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３，５−ジメチルモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジドの合成：
【化１４】
2020037585.tif 000020
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（０．２ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）および２−（３，５−ジメチルモルホリノ）アセトヒドラジド（０．１０６ｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｔ３Ｐ（０．５４３ｇ、０．８５４ｍｍｏｌ）と、それに続いてＤＩＰＥＡ（０．１１０ｇ、０．８５４ｍｍｏｌ）とを−６０℃で添加して、２時間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬの氷水に移し入れて、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を鹹水で洗浄して、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、それをクロマトグラフィー（０〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、０．０２ｇの（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３，５−ジメチルモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジド（収率：７％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．５８（ｓ，１Ｈ），９．８３（ｓ，１Ｈ），９．５６（ｓ，１Ｈ），８．５４−８．５６（ｍ，２Ｈ），８．２５−８．３０（ｍ，１Ｈ），７．４９−７．５１（ｄ，Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，１Ｈ）），６．０１−６．０４（ｄ，Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４４−３．５７（ｍ，２Ｈ），３．２８−３．３４（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｓ，１Ｈ），３．１５（ｓ，１Ｈ），２．８４−２．８８（ｍ，２Ｈ），０．９３−１．０４（ｍ，６Ｈ）：ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５２１．１８［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ  １．８９８  ｍｉｎ．
【０２５９】
実施例１４．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３−オキソモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジド（化合物１４）の合成
【化１５】
2020037585.tif 000021
エチル２−（３−オキソモルホリノ）酢酸の合成：
【化１６】
2020037585.tif 000022
モルホリン−３−オン（３ｇ、２９．６７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ、２９．６７ｍｍｏｌ）に溶解して、ＮａＨ（１．７８ｇ、４４．５１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、ブロモ酢酸エチル（３．７６ｍＬ、３２．６４ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。反応混合物を室温で３時間さらに撹拌し、５０ｍＬの水に移し入れて、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し（２×５０ｍＬ）、無水硫酸ナトリウム上で乾燥して、減圧下で濃縮し粗生成物を得て、それをクロマトグラフィー（０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製し、６００ｍｇのエチル−２−（３−オキソモルホリノ）酢酸（収率：１０％）を得た。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ １８７［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ  ２．５０５  ｍｉｎ．
【０２６０】
２−（３−オキソモルホリノ）アセトヒドラジドの合成：
【化１７】
2020037585.tif 000023
エチル−２−（３−オキソモルホリノ）酢酸（６００ｍｇ、３．２１ｍｍｏｌ）をエタノール（３ｍＬ）に溶解し、ヒドラジン水和物（１６０．４６ｍｇ、３．２１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を８０℃で１時間加熱した。反応混合物を５０ｍＬの水に移し入れ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄して無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、それをさらに精製せずに引き続くステップで使用した（粗収率：５４％）。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １７４．０５  ［Ｍ＋Ｈ］＋ｔＲ  ２．４８９  ｍｉｎ．
【０２６１】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３−オキソモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジドの合成：
【化１８】
2020037585.tif 000024
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（０．４００ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍＬ）に溶解して、２−（３−オキソモルホリノ）アセトヒドラジド（０．２９５ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を添加した。Ｔ３Ｐ（１．０９ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）と、それに続くＤＩＰＥＡ（２２０．８０ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）とを６０℃で滴下して添加し、反応混合物を１時間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬの氷水に移し入れ、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄して無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、クロマトグラフィー（０−４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製し、０．０５ｇの（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３−オキソモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジド（収率：８％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．３３（ｂｓ，２Ｈ），９．６３（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｓ，２Ｈ），８．３０（ｓ，１Ｈ），７．５０−７．５２（ｄ，Ｊ＝８  Ｈｚ，１Ｈ）），６．０１−６．０３（ｄ，Ｊ＝８  Ｈｚ，１Ｈ），４．０８−４．１２（ｍ，４Ｈ），３．８５−３．８７（ｍ，２Ｈ），３．４１−３．４４（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５０７．１３［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ  １．９５０  ｍｉｎ．
【０２６２】
実施例１５．（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３，３−ジメチルモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジド（化合物１５）の合成
【化１９】
2020037585.tif 000025
エチル２−（３，３−ジメチルモルホリノ）酢酸の合成：
【化２０】
2020037585.tif 000026
３，３−ジメチルモルホリン（１ｇ、８．６８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５ｍＬ）に溶解して、炭酸カリウム（１．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、ブロモ酢酸エチル（１．１ｍＬ、９．５５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６０℃で１時間加熱した。次に反応混合物を５０ｍＬの水に移し入れ、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄して無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、それをさらに精製せずに次のステップで使用した（粗収率：９１％）。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２０２．９［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ  ２．３３  ｍｉｎ．
【０２６３】
２−（３，３−ジメチルモルホリノ）アセトヒドラジドの合成：
【化２１】
2020037585.tif 000027
タノール（３ｍＬ）中のエチル２−（３−オキソモルホリノ）酢酸（６００ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）の溶液に、エヒドラジン水和物（０．２０ｍＬ、２．９８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を８０℃で１時間加熱し、室温に放冷して５０ｍＬの水に移し入れ、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄して無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、それをさらに精製せずに引き続くステップで使用した（粗収率：２８％）。ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  １８８［Ｍ＋Ｈ］＋  ｔＲ：１８８  ｍｉｎ．
【０２６４】
（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３，３−ジメチルモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジドの合成：
【化２２】
2020037585.tif 000028
ＴＨＦ（２．５ｍＬ）中の（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）アクリル酸（０．２５０ｇ、０．７ｍｍｏｌ）および２−（３，３−ジメチルモルホリノ）アセトヒドラジド（０．１６０ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｔ３Ｐ（０．６３ｍＬ、１．０６ｍｍｏｌ）と、それに続くＤＩＰＥＡ（０．１８ｍＬ、１．０６ｍｍｏｌ）とを−６０℃で滴下して添加した。反応混合物を１時間撹拌し、２５ｍＬの氷水に移し入れ、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄して無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、クロマトグラフィー（０〜４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製し、０．０５ｇの（Ｚ）−３−（３−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−Ｎ’−（２−（３，３−ジメチルモルホリノ）アセチル）アクリロヒドラジド（収率：１３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １０．５５（ｓ，１Ｈ），９．８１（ｓ，１Ｈ），９．６２（ｓ，１Ｈ），８．５６（ｓ，２Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ），７．４９−７．５１（ｄ，Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，１Ｈ）），６．０１−６．０３（ｄ，Ｊ＝１０．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．６５−３．６７（ｍ，２Ｈ），３．３０−３．３４（ｍ，２Ｈ），３．０８（ｂｓ，２Ｈ），２．５５−２．５８（ｍ，２Ｈ），０．９６（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ５２１．１８  ［Ｍ＋Ｈ］＋，ｔＲ  １．９３７  ｍｉｎ．
【０２６５】
実施例１６．アッセイ
（下に示される）化合物Ｘ−１、Ｘ−２、およびＸ−３と共に、特定の発明の化合物を様々なアッセイで試験した。
【化２３】
2020037585.tif 000029
【０２６６】
核外搬出の阻害
発明の化合物によるＣＲＭ１媒介性核外搬出の阻害を判定した。結果は、表２に示される。ＣＲＭ１タンパク質に対する化合物の阻害活性は、ＲｅｖＧＦＰアッセイで判定した。発明の化合物は、Ｒｅｖ−ＧＦＰアッセイにおいて＜１０μＭのＩＣ５０で活性であり、最も好ましい化合物は、１μＭのＩＣ５０値の活性を有する。
【０２６７】
実験プロトコル：Ｒｅｖは、ヒト免疫不全ウイルス型１（ＨＩＶ−１）からのタンパク質であり、そのＣ末端ドメインに核外搬出シグナル（ＮＥＳ）、そのＮ末端領域に核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含有する。Ｒｅｖタンパク質の核外搬出は、古典的ＮＥＳ／ＣＲＭ１経路に依存する（Ｎｅｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９７、Ｋａｕ  ｅｔ  ａｌ．２００３）。Ｒｅｖの核蓄積は、ＬＭＢなどのＣＲＭ１の特異的阻害剤で処理した細胞中で観察される（Ｋａｕ  ｅｔ  ａｌ．２００３）。このアッセイでは、実験の前日に、Ｕ２ＯＳ−ＲｅｖＧＦＰ細胞を３８４ウェル黒クリアボトムプレート上に接種する。別個の３８４ウェルプレート中の４０μＭから開始して、ＤＭＥＭで化合物を１：２に連続希釈し、次に細胞上に移す。細胞を化合物と共に約１時間インキュベートした後、３．７％ホルムアルデヒドで固定して、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８で核染色する。細胞核中のＧＦＰ量を測定して、化合物のＩＣ５０を判定した（Ｋａｕ  ｅｔ  ａｌ．２００３）。
【０２６８】
ＭＴＴ細胞増殖アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）をＭＭ．１Ｓ、ＪｕｒｋａｔおよびＨＣＴ−１１６細胞で使用して、化合物の細胞毒性および細胞分裂阻害特性を試験した。アッセイは、電子結合試薬ＰＥＳ（フェナジンエトスルファート）の存在下における、テトラゾリウム塩、ＭＴＳの切断に基づく。ＭＴＳテトラゾリウム化合物は、細胞によって生体還元されて着色ホルマザン生成物になり、それは組織培養液に可溶性である。この変換は、恐らくは、代謝的に活性な細胞中のデヒドロゲナーゼ酵素によって生成されるＮＡＤＰＨまたはＮＡＤＨによって、達成される。アッセイは、少量のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ溶液試薬を直接培養ウェルに添加して、１〜４時間インキュベートし、次に９６ウェルプレートリーダーを用いて４９０ｎｍで吸光度を読み取って実施される。吸光度は、細胞数とそれらの代謝活性が、直接相関することを明らかにした。細胞は、９６ウェルプレートの各ウェル内の１００μＬの新鮮な培養液中に、（細胞型に応じて）５×１０３〜１．５×１０４個の細胞で接種して、付着細胞を一晩付着させた。化合物の原液を細胞培養液で希釈して、１ｎＭ〜３０μＭの範囲にわたる８つの濃度の各薬剤を得て、１％ｖ／ｖ未満のＤＭＳＯを陰性対照として使用した。７２時間の処理後、９６ウェルアッセイプレートの各ウェルに、２０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ試薬を添加して、プレートを加湿５％ＣＯ２雰囲気内、３７℃で１〜４時間培養した。次に９６ウェルプレートリーダーを使用して、各ウェルの吸光度を４９０ｎｍで記録した。ほとんどの場合、アッセイは三連で実施し、結果は下に記載される最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）として提示した。化合物濃度と対比して光学濃度をプロットし、非直線回帰方程式（ＥｘｃｅｌＦｉｔ）を使用して分析し、各化合物のＩＣ５０を計算した。結果は、表２に示される。
【０２６９】
薬物動態（ＰＫ）および脳：血漿比の判定
マウス（Ｎ＝３）から採血して、全部で１０時点（投与前、投与後５分間、１５分間、３０分間、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、および２４時間）を提供した。マウスは交代制で採血され、各マウスは３つの時点における採血を提供した。指定された時点で、動物をイソフルラン下で麻酔し、眼窩後方穿刺によって、１時点あたり約１１０μＬの血液を採取して、予冷したＫ２ＥＤＴＡ（抗凝固剤）管内に入れた。血液サンプルを湿潤氷上にのせて、試料採取の３０分以内に、遠心分離（２０００ｇ、４℃で５分間）して血漿を得た。全てのサンプルは、分析まで約−８０℃で冷凍保存した。分析に先だって、サンプルをアセトニトリル中の内標準（デキサメタゾン）と混合してボルテックスし、遠心分離して上清を分析のために注入した。血漿中の化合物濃度は、ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ計測手段を使用して測定した（ＡＰＩ  ４０００、エレクトロスプレーイオン化によるトリプル四重極；Ａｃｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙカラムＣ１８、有機溶媒としてＭｅＯＨおよびギ酸）。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  ６．２ソフトウェアパッケージ、ノンコンパートメント法薬物動態モデルＮＣＡ２００を使用して、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、ｔ１／２、ＡＵＣｌａｓｔ、ＡＵＣｉｎｆをはじめとするが、これに限定されるものではないＰＫパラメータを計算した。
【０２７０】
脳対血漿比（Ｂ：Ｐ）
別個のマウス群（Ｎ＝３）に投薬し（特に断りのない限り１０ｍｇ／ｋｇの経口）、次に最大血漿濃度の時点（投与後２時間における推定Ｔｍａｘ）で殺処分し、最終血漿および脳を採取した。採取に続いて、脳組織を冷生理食塩水で洗浄して、濾紙上で乾燥して秤量し、ドライアイスにのせて、急速凍結した。全てのサンプルは、分析まで約−８０℃で冷凍保存した。分析時には、脳組織を均質化して（均質化溶液ＰＢＳ、ｐＨ７．４）、アセトニトリル中の内標準（デキサメタゾン）と混合してボルテックスし、遠心分離して、ＬＣ−ＭＳ−ＭＳ手順を使用する化合物濃度の分析のために上清を注入した（ＡＰＩ  ４０００、エレクトロスプレーイオン化によるトリプル四重極；Ａｃｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙカラムＣ１８、有機溶媒としてＭｅＯＨおよびギ酸）。血漿サンプルを（均質化段階を除いて）同一方法で処理し、作成された標準曲線に基づいて、どちらかのマトリックス中の化合物濃度を計算した。結果は、表２に示される。
【０２７１】
【表４】
2020037585.tif 000030
【０２７２】
化合物Ｘ−１のＡＵＣＩｎｆは、マウスに１０ｍｇ／ｋｇ経口で投与した場合、検出限界未満であった。５ｍｇ／ｋｇ静注で投与した場合、化合物Ｘ−１は、２０９ｈｒ・ｎｇ／ｍＬの低いＡＵＣＩｎｆによって示されるように、最小の曝露を示した。化合物Ｘ−１の脳対血漿比は、経口投与時におけるその無視できる脳内レベル（定量限界未満）のために、判定しなかった。
【０２７３】
化合物Ｘ−２のＡＵＣＩｎｆは、ラットに１０ｍｇ／ｋｇ経口投与した場合、６８．３ｈｒ・ｎｇ／ｍＬと計算された。このような曝露レベルは、化合物Ｘ−３および本発明の式Ｉの化合物と比較して、極めて低い。しかし化合物Ｘ−２は、中程度の脳：血漿比を呈示する。低いＡＵＣＩｎｆは、無視できない脳：血漿比と相まって、化合物Ｘ−２が、低曝露レベルにもかかわらず、ＢＢＢを通過し得ることを示唆する。出願人らは、そのＡＵＣＩｎｆが増大すれば、化合物Ｘ−２が、顕著により高い脳：血漿比を有したであろうと考える。
【０２７４】
化合物Ｘ−３のＡＵＣＩｎｆは、ラットに１０ｍｇ／ｋｇ経口投与した場合、１２３００ｈｒ・ｎｇ／ｍＬと計算され、良好な曝露を示す。しかしＸ−３は、５．０という高いＢ：Ｐ比を実証した。
【０２７５】
式Ｉの化合物は全て、高いＡＵＣＩｎｆ（＞３５００ｈｒ・ｎｇ／ｍＬ）と、比較的低いＢ：Ｐ（＜２．５）とを示す。一般に、治療薬のより大きな曝露レベルは、脳透過の可能性を増大させることが多い。したがって式Ｉの化合物が、高いＡＵＣＩｎｆレベルを示しながら、比較的低い脳：血漿比を示すことは、驚くべきであり意外である。
【０２７６】
実施例１７．モデル
ＳＣＩＤマウス中で異種移植として増殖させたＺ−１３８リンパ腫細胞系の腫瘍成長に対する化合物２の効果の評価
Ｚ−１３８（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−３００１）マントル細胞リンパ腫細胞は、ＡＴＣＣから得た。１０％ウマ血清、１％ペニシリンおよびストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＩＭＥＭ培地中で、これらの細胞を培養した。細胞を１：５〜１：１０の比率で希釈して、二次培養した。２４匹の５〜６週齢メスＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ系統コード２３６）を使用した。マウスあたり４×１０７個の細胞に相当する、体積０．２ｍＬのＺ−１３８細胞をＳＣＩＤマウスの左側腹部に接種した。
【０２７７】
腫瘍が８４．３ｍｍ３の平均体積に達したら、処置を開始した。処置開始に先だって、各群の平均腫瘍体積が、７７〜９２ｍｍ３の範囲に収まるように、腫瘍体積に基づいてマウスを８匹ずつ４群に割り当てた。表３に示されるように、ビヒクル、標準的治療薬剤／陽性対照薬剤（シクロホスファミド）または化合物２で、マウスを処置した。
【０２７８】
【表５】
2020037585.tif 000031
【０２７９】
動物には、Ｌａｂｄｉｅｔ（登録商標）５００１齧歯類固形飼料および滅菌水を自由摂取させた。腫瘍は、マイクロキャリパーで、２日毎に１回測定し、腫瘍体積は（長さ×幅×幅）／２として計算した。処置に起因する可能な毒性の指標として、処置群中の体重の可能な違いを評価するために、全ての動物を毎日計量した。それらの開始体重の２０％を上回る体重減少がある動物は、安楽死させた。それらの開始体重の１５％を上回る体重減少があるマウスは、体重減少がそれらの開始体重の５％未満に回復するまで、再処置しなかった。腫瘍体積が１５００ｍｍ３を超えるあらゆる動物は、安楽死させた。
【０２８０】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製した。化合物２は、６９．６１％の化合物２を含有して、残りはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８およびＰＶＰ  Ｋ２９／３２で構成される、凍結乾燥粉末として提供された。これは凍結乾燥粉末を滅菌水に溶解して調製した。シクロホスファミドは、８ｍｇ／ｍＬで無菌注射用水に溶解した。全ての被験物質は、１０ｍＬ／ｋｇ体重の容積で投与した。
【０２８１】
処置群間の統計学的差は、棄却限界値０．０５で、マン−ホイットニー順位和またはＡＮＯＶＡ検定を使用して判定した。
【０２８２】
図１は、腫瘍体積および腫瘍体積百分率の双方に対し、ＡＮＯＶＡ検定を使用して成長曲線下面積を比較することで評価した際に、ビヒクルと比較して腫瘍成長に統計学的に有意な低下を示した、全ての処置群を示す。これらの処置群は、ｐ＜０．０００１で有意な腫瘍成長低下を示した。１５ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された群でいくらかの体重減少が観察され、統計学的に有意ではあるが、ビヒクル対照と比較して、重度の体重減少は少数の動物に限定された。
【０２８３】
経口投与された化合物２は、７．５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇ投与の双方で、用量依存的な抗腫瘍効果があった。
【０２８４】
Ａ５４９小細胞肺がんモデルにおける化合物２の抗腫瘍活性
Ａ５４９細胞系は、５８才の白人男性の肺胞がん腫組織外植片培養に由来した。細胞は、１０％ウシ胎仔血清と１％ペニシリン／ストレプトマイシンとを添加した、ハムＦ１２−Ｋ組織培地中で培養した。細胞を慣例的にトリプシン処理して、１：１０で継代した。処置前平均体重１６．３グラムの３２匹の５〜６週齢のメスＣＢ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ系統コード２３６）を使用した。処置開始に先だって、腫瘍体積に基づいて、マウスを８匹ずつ４群に分けた。移植当日、細胞をＰＢＳで洗浄し、トリプシン処理して、２×１０７細胞／ｍＬの密度で完全培地に再懸濁してから、等容積のマトリゲルと混合した。次に２３Ｇ針を使用して、この混合物を０．１ｍＬの容積で、マウスに皮下接種した。
【０２８５】
表４に示されるように、ビヒクル、標準的治療薬剤／陽性対照薬剤（シスプラチン）または化合物２で、マウスを処置した。動物の体重および状態を毎日記録し、月曜日、水曜日、金曜日にマイクロキャリパーで腫瘍を測定し、腫瘍体積を（長さ×幅×幅）／２として計算した。
【０２８６】
【表６】
2020037585.tif 000032
【０２８７】
それらの開始体重の２０％を上回る体重減少がある動物は、安楽死させた。それらの開始体重の１５％を上回る体重減少があるマウスは、体重減少がそれらの開始体重の５％未満に回復するまで、再処置しなかった。腫瘍体積が１５００ｍｍ３を超えるあらゆる動物は、安楽死させた。
【０２８８】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製した。化合物２は、６９．６１％の化合物２を含有して、残りはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８およびＰＶＰ  Ｋ２９／３２で構成される、凍結乾燥粉末として提供された。これは凍結乾燥粉末を滅菌水に溶解して調製した。シスプラチンは、５ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯ中に溶解し、無菌注射用水中で１：１０に希釈した。全ての被験物質は、０．１ｍＬ／ｇ体重の容積で投与した。
【０２８９】
処置群間の統計学的差は、棄却限界値０．０５で、マン−ホイットニー順位和またはＡＮＯＶＡ検定を使用して判定した。
【０２９０】
試験中の腫瘍体積変化のデータは、図２に示される。ビヒクル対照群の平均腫瘍体積は、１日目の９５ｍｍ３から２９日目の１６６９ｍｍ３に増大した。シスプラチン処置群は、１日目に１０４ｍｍ３の平均腫瘍体積を有し、２９日目に１１３６ｍｍ３に増大した。１０ｍｇ／ｋｇ経口の化合物２で処置されたマウス（第３群）は、１日目に１０１ｍｍ３の平均腫瘍体積を有し、それは２９日目までに６８６ｍｍ３に増大した。５ｍｇ／ｋｇ経口の化合物２で処置されたマウス（第６群）は、１日目に１０１ｍｍ３の平均腫瘍体積を有し、それは２９日目までに１２３１ｍｍ３に増大した。
【０２９１】
各腫瘍の平均曲線下面積（ＡＵＣ）計算し、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を使用して群を比較することで、腫瘍体積データの追加的な分析を実施した。この分析は、ビヒクル対照群と、１０ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置された群の間に、統計学的有意差（ｐ＝０．０００５）があったことを示唆した。陽性対照群（シスプラチン）の腫瘍成長には、統計学的に有意な低下がなかったことに留意すべきである。
【０２９２】
経口投与された化合物２は、５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ投与の双方で、用量依存的な抗腫瘍効果があった。しかしビヒクル処置群と比較して、統計的有意差を示したのは１０ｍｇ／ｋｇ群のみであった。
【０２９３】
抗コラーゲン抗体誘発性関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｒｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）（ＣＡＩＡ）マウスモデルにおける化合物２の評価
６〜８週齢の２４匹のオスＢａｌｂ／ｃマウスを使用した。処置開始時点における動物の重量偏差は、平均体重の±２０％を超えなかった。動物は、ビヒクル、デキサメタゾンまたは化合物２が投与される３群に無作為に割り当てた。試験の０日目（試験開始日）、全てのマウスにＡｒｔｈｒｉｔｏＭＡｂＴＭ抗体カクテル（ＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ＃Ｓ１２０３００１）の２ｍｇ静脈内注射を実施して、試験３日目のＬＰＳ（１００μｇ／マウス）の腹腔内注射がそれに続いた。試験動物は、経口的７．５ｍｇ／ｋｇの化合物２または４ｍｇ／ｋｇの化合物２で；腹腔内１ｍｇ／ｋｇデキサメタゾンで；または経口的ビヒクルで処置した。治療薬は、休薬期間が適用される場合を除いて、全ての群で、４、６、８、および１０日間にわたり毎日１回投与される。動物の体重が８７％未満に低下した場合、０日目体重の９０％以上に体重が増えるまで動物に投薬しなかった。
【０２９４】
試験の０、３〜８、１０および１２日目に、全てのマウスで関節炎発症、臨床徴候、および体重をモニターした。観察は、皮膚、毛皮、目、粘膜の変化；分泌物および排泄物（例えば下痢）の出現；および自律神経活動（例えば流涙、流涎、立毛、瞳孔サイズ、異常な呼吸パターン）を含んだ。試験０日目の関節炎誘導と試験物または対照物投与前、引き続いて試験の３〜８、１０、および１２日目（研究終了日）に、各動物の全ての足（左右前足、および左右後足）を関節炎誘発応答徴候について検査した。下の表５に示されるように、重症度の昇順で０〜４の尺度に従って、関節炎（Ａ  ｒｔｈｒｉｔｉｓ）反応を採点し記録した。ダイアルキャリパー（Ｋｒｏｅｐｌｉｎ，Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、足の厚さもまた評価した。
【０２９５】
【表７】
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【０２９６】
動物の体重が平均して２０ｇであるという仮説に基づいて、投与量を計算した。デキサメタゾンの原液は、１００％エタノール中で調製し、使用前にＰＢＳで適切な濃度に希釈した。ビヒクル対照群のためのビヒクルは、０．６ｇのプルロニックおよび０．６ｇのＰＶＰを１００ｍＬの蒸留脱イオン水に溶解して調製した。ＭＡｂ原液（１０ｍｇ／ｍＬ）は、ＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｒｗｅｌｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨから供給された。ＬＰＳをＰＢＳで希釈して、適切な濃度にした。その注射の直前に、徹底的なボルテックスが必要であった。化合物２は、７０．７１％の化合物２を含有して、残りはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８およびＰＶＰ  Ｋ２９／３２で構成される、凍結乾燥薬剤粉末として提供された。２００μＬの固定容積を各マウスに投与した。
【０２９７】
評価は、主に、関節炎採点および足の厚さ測定値の平均値に基づいた。適切な場合は、チューキー事後検定を伴うＡＮＯＶＡによるデータ分析を適用して、治療効果の有意性を判定した。
【０２９８】
図３Ａおよび３Ｂは、ＣＡＩＡマウスモデル実験の結果を示す。３日目のＬＰＳ追加免疫に続いて、全ての群で、ＬＰＳ−投与に伴う臨床徴候が発症した。ビヒクル処置マウスと比較して、７．５ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置されたマウスは、５〜１２および６〜１２日目の総関節炎スコアが、それぞれ有意に低下した。デキサメタゾン処置は、ビヒクル群と比較して、６〜１２日目に総関節炎スコアを有意に低下させた。ビヒクル処置マウスと比較して、７．５ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置されたマウスは、５〜１２日目に後肢関節炎スコアが有意に低下した。デキサメタゾン処置は、ビヒクル群と比較して、５および１２日目に後足関節炎スコアを有意に低下させた。ビヒクル処置群と試験物処置群の間で、体重に有意差はなかった。
【０２９９】
本試験の所見を考慮すると、経口的に送達された７．５ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの化合物２は、関節リウマチの抗コラーゲン抗体誘発性モデルにおいて、平均関節炎スコアの持続性の低下および足厚の低下をもって、有意な抗関節炎活性を示した。
【０３００】
Ｌｅｗｉｓラットにおけるコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）に対する化合物２の有効性試験
処置前体重が１８０〜２００ｇの範囲である、６〜８週齢の４０匹のメスＬｅｗｉｓラット（ＢＫ）を各１０匹ずつの４群（Ａ〜Ｄ群）に無作為に分けた。Ｂ〜Ｄ群のラットは、尾の付け根近くの背中の３箇所で、０日目に５００μＬの乳剤（各部位毎に２００μＬ、２００μＬ、１００μＬ）で、ＩＦＡ中のウシＣＩＩで皮内免疫化した。７日目にＢ〜Ｄ群のラットに、先の注射部位近くの皮内に、同一量の乳剤で追加免疫注射を行った。治療処置モデル（ＣおよびＤ群）では、関節炎発症後に、表６に示されるように、ＣＩＡがあるラットに、デキサメタゾンまたは化合物２を経口投与した。ラットは、毎日計量し、１３％を上回る体重減少があれば、動物に休薬日を与えた。
【０３０１】
【表８】
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【０３０２】
ＣＩＡ発症は、巨視的採点および足腫脹測定値によって評価した。これは、感作（７日目）後最初の５日間は毎日、そして残りの期間は週２回（月曜日と木曜日）、表７に示される各足のための臨床採点システムによって評価した。
【０３０３】
【表９】
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【０３０４】
足容積は、研究期間全体を通じて、関節炎測定と同日の体積測定法によって測定した。各後足の容積および腫脹比を測定し、以下の式を使用した。
腫脹比＝（ＣＮ−Ｃ０）／Ｃ０×１００％
【０３０５】
図４Ａは経時的関節腫脹のグラフであり、陽性対照または化合物２によってモデルに従って処置された、未感作ラットおよびラットにおける、０〜４の尺度で測定された関節腫脹を示す。
【０３０６】
４ｍｇ／ｍＬのウシＣＩＩ（１０ｍＭの酢酸中）を等容積のＦＡと共に乳化した。
【０３０７】
臨床スコアを各動物毎に合計し、各群中の全動物の全平均を平均関節炎スコアとして表した。図４Ｂは、時間の関数としての臨床スコアのグラフであり、陽性対照または化合物２によってモデルに従って処置された、未感作ラットおよびラット臨関節炎スコアを示す。
【０３０８】
試験の２８日目には、各処置群を代表する３匹を安楽死させ、後足を採取して、４％中性緩衝ホルマリン中に貯蔵した。調製した後足の切片に、ヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色を施した。
【０３０９】
対照動物の組織病理学分析は、疾患経過と一致して、軟骨糜爛およびパンヌス形成を示した。しかし化合物２で処置されたラットでは、関節表面に比較的無傷の軟骨が見られ、パンヌス形成は最小限であった。組織学的分析の結果は、図５に示される。
【０３１０】
臨床スコア、関節腫脹、および組織学的検査データは、相関を示した。結果はまた、臨床スコア、関節腫脹、および組織学的検査に対するその効果によって示されるように、４ｍｇ／ｋｇ（ＭＰＫ）の化合物２の治療有効性を示した。ＬｅｗｉｓラットにおけるＣＩＡモデルの結果は、図４Ａと４Ｂ、および図５に描写される。
【０３１１】
メスＢＡＬＢ／Ｃマウスにおけるホルボール−１２−ミリステート−１３−酢酸（ＰＭＡ）誘発性乾癬に対する化合物２の抗乾癬活性
体重２２〜３０ｇの６〜８週齢の２４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスを使用した。マウスは、各８匹ずつの４群に無作為化した。動物のグループ分けは、以下のようであった：Ｉ群（未感作；エタノール）、ＩＩ群（ＰＭＡ；エタノール）、ＩＩＩ群（ＰＭＡ；１０μＭの化合物２）、およびＩＶ群（ＰＭＡ；ベタメタゾン）。２０μＬのＰＭＡ（４μｇ／２０μＬのアセトン）をＩＩ群〜ＩＶ群の全ての動物の耳介上面に局所的に塗布した。ＰＭＡを左の耳に毎日塗布し、１〜９日目には右の耳に隔日（月水金）に塗布した。ＰＭＡ塗布の３０分後、ビヒクルまたは標準化合物（ベタメタゾン）または化合物２を異なる群の動物の耳に局所的に塗布した。１〜１２日目には、異なる動物の双方の耳に、ビヒクル、標準化合物、および化合物２が毎日塗布されたことに留意されたい。
【０３１２】
動物は、あらゆる処置関連症状について、１２日間にわたり毎日観察した。基礎耳介厚は、Ｔ０時間（１日目）にデジタル式スクリューゲージを使用して、（ＰＭＡ塗布前に）全ての動物で記録した。試験の持続期間全体にわたり、ビヒクル、標準化合物、または化合物２の塗布の４時間後に、デジタル式スクリューゲージを使用して耳の厚さを毎日測定し、紅斑、鱗屑、および皺のコアを記録した。耳介損傷の重症度は、表８で示される採点システムによって評価した。
【０３１３】
【表１０】
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【０３１４】
動物には、実験期間全体を通じて、栄養的にバランスのとれた高圧蒸気滅菌ペレット飼料（Ｎｕｔｒｉｖｅｔ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｕｎｅ（Ｉｎｄｉａ））を自由摂取させ、普通の飲料水にアクセスさせた。
【０３１５】
市販の１００％ＤＭＳＯ（ＬＲ等級）およびエタノール（ＬＲ等級）を使用して、製剤を調製した。１０ｍｇのＰＭＡを５０．０ｍＬのアセトンに溶解して、ＰＭＡを調製した。１．４７ｍｇの化合物２を３００μＬの１００％ＤＭＳＯに溶解して、化合物２を調製した。
【０３１６】
実験結果は、平均±ＳＥＭとして図６Ａ〜６Ｄに表される。体重、食品、および水消費量に関して、全ての処置群間に有意差はなかった。ＰＭＡ塗布は、（ｉ）左ならびに右の耳の厚さ増大（ＩＩ群対未感作）、および（ｉｉ）左ならびに右の耳の疾患活動指数（ＤＡＩ）の増大（ＩＩ群対未感作）を示した。重要なことには、化合物２の局所塗布は、（ｉ）左右耳介厚、および（ｉｉ）左右耳のＤＡＩのＰＭＡ誘発性増大に顕著な低下をもたらした。この効果は、試験の６〜８日目に顕著であり、化合物２で処置されたより多くの動物が、低下した左／右耳介厚（ＩＩ群の動物と比較して）とＤＡＩ（ＩＩ群の動物と比較して）を有した。化合物２が媒介する、左／右耳介厚およびＤＡＩのＰＭＡ誘発性増大の低下は、試験の進行につれて（１０日目以降）減少したことに留意されたい。
【０３１７】
マウスにおけるＰＭＡ誘導乾癬モデルでは、化合物２は、統計学的に有意な抗乾癬活性を示した。
【０３１８】
イミキモド（ＩＭＱ）誘発性皮膚炎症／乾癬モデルにおける化合物２の抗乾癬活性（試験１）
前処置体重２２〜３０ｇの６〜８週齢の４０匹のオスＢＡＬＢ／ｃマウスを使用した。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、群あたり１０匹ずつの４）群に無作為化した。全動物の背側皮膚の小領域（約２×２ｃｍ２）をきれいに剃毛した。Ｉ群動物は、未感作動物の役割を果たした。１〜１３日目にかけて、動物の背側に３１．２５ｍｇのＩＭＱクリームを毎日局所塗布して、ＩＩ〜ＩＶ群［ＩＩ群（ＩＭＱ；ビヒクル）、ＩＩＩ群（ＩＭＱ；化合物２（１μＭ））、およびＩＶ群（ＩＭＱ；シクロホスファミド（１０ｍｇ／ｋｇ）］で乾癬を誘発した。１〜１３日目にかけて毎日、ＩＭＱ塗布の４時間後、ビヒクルまたは標準化合物（シクロホスファミド）または化合物２を適切な群に（局所的に３０μＬ；経口的に体重に準じて）投与した。ビヒクルまたは標準化合物または化合物２の投与の２時間後、皮膚の紅斑、鱗屑、皺、および肥厚を記録して、疾患活動指数（ＤＡＩ）を判定した。
【０３１９】
動物は、あらゆる処置関連症状について、１３日間にわたり毎日観察した。毎日の観察は体重、飼料摂取量、皮膚肥厚、鱗屑、皺、紅斑、鼻汁、動作、呼吸、被毛、膨隆腹、皮膚状態、毛皮、粘膜、分泌物の存在または不在、目の状態、尾の挙上、運動能、姿勢、および歩行を含んだ。表９の皮膚の項目に従って、外観観察に基づいて紅斑、鱗屑、皺、および皮膚肥厚スコアを割り当てることで、皮膚背側部の損傷重症度を評価した。
【０３２０】
【表１１】
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【０３２１】
市販の１００％ＤＭＳＯ（ＬＲ等級）、エタノール（ＬＲ等級）、シクロホスファミド（ＣＭＣ）、ＰＶＰ、およびプルロニックを使用して、製剤を調製した。１．４７ｍｇの化合物２を３００μＬの１００％ＤＭＳＯに溶解して、化合物２を調製した。シクロホスファミドは、５００ｍｇのＣＭＣを１００ｍＬの蒸留水に溶解して調製した。
【０３２２】
図７Ａおよび７Ｂで示される実験結果は、平均±ＳＥＭとして表される。
【０３２３】
試験持続期間中に、対照群と比較して、処置群の体重、摂食量、および水摂取量に有意差はなかった。化合物２は、ＩＭＱ誘発性疾患の症状発現を低下させた。
【０３２４】
化合物２は、ビヒクル処置群と比較した、疾患活動指数の低下によって証明されたように、抗乾癬活性を示す。さらに化合物２は、体重、食物および水摂取量に悪影響を及ぼすことなく、この効果を引き起こした。
【０３２５】
イミキモド（ＩＭＱ）誘発性皮膚炎症／乾癬モデルにおける化合物２の抗乾癬活性（試験２）
４０匹のオスＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｈｙｄｅｒａｂａｄ（ＣＰＣＳＥＡ登録番号：３６／９９／ＣＰＣＳＥＡ））を各１０匹からなる４群に分けた。動物をそれらの体重に基づいて無作為化した。群は、Ｉ群（未感作）、ＩＩ群（ＩＭＱ；ビヒクル（ＰＥＧ４００およびＨＰＢＣＤ））、ＩＩＩ群（ＩＭＱ；化合物２（２．５ｍｇ／ｋｇ））、およびＩＸ群（ＩＭＱ；シクロホスファミド（１０ｍｇ／ｋｇ））と命名された。
【０３２６】
各マウスの背側の小領域を剃毛して、これらの領域が確実に同等のサイズ／面積になるようにした。１日目〜６日目にかけて、動物の背側に毎日５０ｍｇのＩＭＱクリームを局所塗布して、ＩＩ〜ＩＶ群で乾癬を誘発した。試験の１日目および２日目に、ＩＭＱの局所塗布の４時間後に、化合物２または陽性対照（シクロホスファミド）またはビヒクルを妥当な群の動物に投与した。ＩＩ群およびＩＩＩ群動物は、皮下注射されたのに対し、ＩＶ群動物は、経口投与されたことに留意されたい。化合物２、ビヒクル、およびシクロホスファミド処置は、２日目に終了した。これらの動物群では、毎日のＩＭＱ処置を６日目まで継続した。７日目に、累積疾患活動指数（ＣＤＡＩ）に基づいて、乾癬誘発動物を各１０匹からなる３群に再度無作為化した。７日目〜９日目にかけて、動物にビヒクルまたは陽性対照または化合物２を投与した。この間、動物は、ＩＭＱで処置されなかったことに留意されたい。１０日目〜１４日目にかけて、動物は、二者択一に、ＩＭＱ（１０、１２、および１４日目）、またはビヒクル、陽性対照または化合物２（１１、１３日目）で処置された。
【０３２７】
全ての動物は、肉眼的観察、体重および飼料および水摂取量について、１６日間にわたり毎日観察した。１および２日目には、ビヒクル／陽性対照／試験化合物投与の２時間後に、紅斑、鱗屑、皺、および皮膚肥厚の採点を記録し、３〜１４日目には、ＩＭＱ塗布の、または陽性対照、ビヒクルまたは化合物２投与の、４時間後に採点を記録した。動物背側に対する誘導の重症度を評価して、表１０に示されるように採点した。
【０３２８】
ビヒクルは、４０ｍｇのＨＰＢＣＤを７０．０ｍＬの蒸留水に溶解して調製した。化合物２は、３．５９ｍｇを０．５％ＰＶＰおよび０．５％プルロニックに溶解して調製した。シクロホスファミドは、５００ｍｇのＣＭＣを１００ｍＬの蒸留水に溶解して調製した。
【０３２９】
表１０で示される実験結果は、平均±ＳＥＭとして表される。データは、一元配置ＡＮＯＶＡを使用して評価し、事後検定はダネット検定を使用して実施した。
【０３３０】
【表１２】
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【０３３１】
化合物２で処置された動物における疾患活動指数の低下率は、ビヒクル処置動物で観察されたものよりも、有意により大きいことが観察された。試験持続期間中に、対照群と比較して、処置群の体重、摂食量、および水摂取量に有意差はなかった。
【０３３２】
得られた結果は、化合物２による処置が、食物または水摂取量に大幅に影響することなく、したがって処置群の動物体重に対するいかなる影響も示すことなく、ＩＭＱ誘発性疾患の症状発現を低下させたことを示す。
【０３３３】
Ｚｕｃｋｅｒラットにおける化合物２の効果
７ヶ月齢の２１匹のオスＺｕｃｋｅｒラットを同等の体重および食品摂取量に基づいて、Ｎ＝７の３群に割り当てた。対照として、同年齢のＺｕｃｋｅｒ痩せ型対照の追加的なＮ＝７の群を含めた。体重および食品および水摂取量は、毎日ほぼ同じ時間（１４：３０〜１５：３０ｈ）に評価した。処置日には、１４：３０〜１５：３０ｈに投薬した（消灯の約２時間前）。
【０３３４】
Ｚｕｃｋｅｒ肥満および痩せ型対照は、平日中毎日、経口的に、ビヒクル（１０ｍＬ／ｋｇ投与容積；水中の０．５％プルロニックＦ６８および０．５％ＰＶＰ  Ｋ２９／３２）で処置した。化合物２（１．５ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）の双方の群は、平日中毎日、経口的に処置した（１０ｍＬ／ｋｇ投与容積；水中の０．５％プルロニックＦ６８および０．５％ＰＶＰ  Ｋ２９／３２）。処置段階に先だって、４日間の基線データを収集した。処置段階は１６日間にわたり、洗い出し段階の６日間もまた含まれた。
【０３３５】
図８Ａおよび８Ｂおよび図９は、Ｚｕｃｋｅｒラットに対する化合物２の効果を示す。ベースラインでは、３つのＺｕｃｋｅｒ肥満群の間で、体重および毎日の食物摂取量に有意差はなかった。しかし全ての群は、Ｚｕｃｋｅｒ痩せ型群と著しく異なった。
【０３３６】
化合物２（１．５〜３ｍｇ／ｋｇ経口）は、Ｚｕｃｋｅｒ対照群と比較して、１６日間の処置期間にわたり、毎日の食物摂取量および体重に用量依存性の低下を生じた。化合物２処置はまた、同期間中に測定された水摂取量を有意に増大させた。３ｍｇ／ｋｇの化合物２群とＺｕｃｋｅｒビヒクル群との間では、体重増加に有意差があった。１．５ｍｇ／ｋｇの化合物２処置群とＺｕｃｋｅｒビヒクル群との間では、体重増加に有意差がなかった。
【０３３７】
化合物２は、毎日の食物の用量依存性低下効果を示し、より高用量（３ｍｇ／ｋｇ）は、１．５ｍｇ／ｋｇの用量よりも効果的であった。さらに３ｍｇ／ｋｇの化合物２群は、とＺｕｃｋｅｒ対照群比較して、より低い体重増加を示した。
【０３３８】
食餌誘発性肥満症モデルにおける化合物２の効果
２ヶ月齢のオススプラーグドーリー系ラットに高脂肪食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．、製品コードＤ１２４９２、６０％ｋｃａｌ％脂肪）を３ヶ月間与えた。一群の年齢をマッチさせたラットに、標準ｌａｂ固形飼料（ＬａｂＤｉｅｔ  ５００１、約１３％ｋｃａｌ％脂肪）を与え、これらの動物は、ＤＩＯ群の対照の役割を果たした。
【０３３９】
４ヶ月齢において、２ヶ月間の高脂肪食後に、全てのラットを同等の体重および食品摂取量に基づいて、Ｎ＝７の３群に割り当てた。体重および食物および水摂取量は、毎日ほぼ同じ時間に測定した。処置日には、消灯の約２時間前に投薬した。
【０３４０】
ＤＩＯ対照群は、平日中毎日、ビヒクル（経口、１０ｍＬ／ｋｇ投与容積；水中の０．５％プルロニックＦ６８および０．５％ＰＶＰ  Ｋ２９／３２）で処置した。１．５ｍｇ／ｋｇの化合物２群は、処置段階を通じて、平日中毎日、経口的に処置した（用量１０ｍＬ／ｋｇ投与容積；水中の０．５％プルロニックＦ６８および０．５％ＰＶＰ  Ｋ２９／３２）。３ｍｇ／ｋｇの化合物２群（１０ｍＬ／ｋｇ投与容積；水中の０．５％プルロニックＦ６８および０．５％ＰＶＰ  Ｋ２９／３２）は、最初の１週間は毎日１回、次に２週間にわたり週２回（月曜日、水曜日）、経口的に処置した。処置の３および４週目には、３ｍｇ／ｋｇの化合物２による週２回の処置を継続したが、投薬は月曜日と木曜日であった。
【０３４１】
処置段階に先だって、３日間の基線データを収集した。処置段階は４週間にわたった。１０日間の洗い出し段階もまた含まれた。
【０３４２】
化合物２は、粉末形態で供給された。試験化合物は、６５．８９％の活性百分率を有した。活性百分率は１．４３７のＢＥＷを使用して調節し、０．５％ｗ／ｖのプルロニックＦ−６８および０．５％ｗ／ｖのＰＶＰ  Ｋ−２９−３２ビヒクル溶液に溶解することで調製した。ビヒクル溶液は毎週調製した一方で、化合物２は２日毎に新鮮に調製して、＋４℃で保存した。動物には、１０ｍＬ／ｋｇの容積を投与した。個々の用量は最新の体重に基づいて計算し、適切なｍｇ／ｋｇ／日の投与量を提供した。
【０３４３】
図１０Ａおよび１０Ｂおよび図１１は、食餌誘発性肥満症モデルにおける化合物２の効果を示す。ベースラインでは、３つのＤＩＯ群間で体重および毎日の食物および水摂取量に有意差はなかった。しかし全てのＤＩＯ群は、普通食群と有意差があった。特に、普通食を与えた動物は、高脂肪食を与えたラットと比較して、体重が有意により低かった。反対に、高脂肪食を与えたラットは、普通食を与えたラットと比較して、毎日有意により少ない食物および水を摂取した。
【０３４４】
化合物２（１．５〜３ｍｇ／ｋｇ経口）は、ＤＩＯ対照群と比較して、２８日間の処置期間にわたり、毎日の食物摂取量および体重に用量依存性の低下を生じた。化合物２処置はまた、同期間中に測定された水摂取量を有意に増大させた。（Ｆ３，２７＝１１．２、Ｐ＜０．０１）。
【０３４５】
体重増加に対する処置の効果に関して、これは形式上、試験３日目からの体重変化百分率として評価された。処置７日目（試験１０日目）および１４日目（試験１７日目）には、ＤＩＯ対照と比較して、双方の化合物２群で体重増加に有意な低下があった。
【０３４６】
体重、食品／水摂取量は、洗い出し段階中、毎日の測定した。化合物２群における食物摂取量は、ＤＩＯ対照と同様であった。化合物２群の体重は、ＤＩＯ対照よりも低いままであった。
【０３４７】
化合物２は、毎日の食物摂取量を用量依存的に低下させる。化合物２はまた、１．５および３ｍｇ／ｋｇ用量の双方で、体重増加に影響を及ぼす。
【０３４８】
化合物１のＮｒｆ２抗炎症性経路誘導
ＴＨＰ−１（ヒト急性単球性白血病細胞）細胞を使用して、炎症環境におけるＮｒｆ２経路に対する化合物１の効果を評価した。核因子（赤血球系由来２）様２（Ｎｒｆ２）は、抗炎症性転写因子である。通常の状態では、Ｎｒｆ２は、ユビキチン化によってＮｒｆ２を分解する、Ｋｅｌｃｈ様ＥＣＨ結合タンパク質１（ＫＥＡＰ１）によって、細胞質内に保たれる。Ｎｒｆ２はまた、ＣＲＭ１カーゴとして核内に移動し、細胞質に戻り得る。本試験では、Ｎｒｆ２は、ｓｉＲＮＡによるＫＥＡＰ１のノックダウンによって、分解から保護される。次にＫＥＡＰ１枯渇細胞をＴＮＦαで処置して、炎症を誘導し、Ｎｒｆ２経路の上方制御によって炎症を逆転させる化合物１の能力を試験した。Ｎｒｆ２経路の活性化を実証するために、その２つの下流遺伝子であるＮＡＤ（Ｐ）Ｈデヒドロゲナーゼ［キノン］１（ＮＱＯ１）およびエポキシドヒドロラーゼ１（ＥＰＨＸ１）の発現を、定量ＰＣＲによって定量化した。
【０３４９】
２つの１０ｃｍ培養皿（６＊１０６細胞／皿）に、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および２−メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｌｏｎｚａ）と共に、ＴＨＰ−１（急性単球性白血病）細胞を０．０５ｍＭの最終濃度に播種した。リポフェクタミンＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、１つの培養皿の細胞に５０ｎＭのＫＥＡＰ１  ｓｉＲＮＡ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｉｌｅｎｃｅｒ  Ｓｅｌｅｃｔ、ｓｉＲＮＡ  ＩＤ＃ｓ１８９８２）を形質移入する一方で、別の培養皿の細胞には、５０ｎＭの対照ｓｉＲＮＡ、Ｂｌｏｃｋ−ｉＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を形質移入した。形質移入細胞は、７２時間置いてから、ＫＥＡＰ１に対するプローブを使用して、定量ＰＣＲによってＫＥＡＰ１ノックダウン効率を計算した。
【０３５０】
次に各培養皿からの細胞を、別の６ウェルプレート内の４ウェルに等分した。各プレートからのウェルの１つを１μＭの化合物１で１時間、それに続いて２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαで２４時間、前処理した。その他のウェルは、１μＭの化合物１または２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαのいずれかで２４時間処理し、またはどちらによっても処理しなかった。処置に続いて、ＲＮＡ抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡを細胞から抽出した。各処置群からのＲＮＡサンプルを逆転写して、Ｎｒｆ２およびその２つの下流遺伝子ＮＱＯ１およびＥＰＨＸ１に対するプローブを使用して、対応するｃＤＮＡ配列にリアルタイムＰＣＲを実施した。ＴＨＰ−１細胞は、ＫＥＡＰ１  ｓｉＲＮＡで形質移入した。４０％のノックダウン効率が達成された。ＫＥＡＰ１ノックダウン細胞は、１μＭの化合物１または２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαのいずれかで、またはその双方で、２４時間処理した。
【０３５１】
図１２Ａは、未処理細胞と比較した、ＴＮＦαおよび化合物１の組み合わせで処理された細胞中における、Ｎｒｆ２発現の２．５倍の増大を示す。しかしＮｒｆ２  ｍＲＮＡレベルの同様の（最大で３倍）増大はまた、ＫＥＡＰ１ノックダウンなしに化合物１およびＴＮＦαで処理された細胞にも見られる。ＫＥＡＰ１ノックダウンの有無にかかわらず、化合物１またはＴＮＦα単独では、Ｎｒｆ２発現に対するいかなる有意な効果も有さなかった。
【０３５２】
図１２Ｂは、ＫＥＡＰ１ノックダウンありまたはなしでの細胞中における、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈデヒドロゲナーゼ［キノン］１またはＮＱＯ１の発現を示す。図１２Ｂは、ＫＥＡＰ１ノックダウンが、ＮＱＯ１発現に対する効果を有したことを示す。さらにいかなる処理もしなかったサンプルは、ＫＥＡＰ１ノックダウン時に、そのｍＲＮＡレベルに２倍の増大を示した。化合物１とＴＮＦαの組み合わせは、ＫＥＡＰ１ノックダウンのない細胞中の同じ組み合わせで見られた２倍の増大と比較して、ＫＥＡＰ１ノックダウンサンプルのＮＱＯ１発現に４倍の増大をもたらした。
【０３５３】
図１２Ｃは、化合物１および／またはＴＮＦαによるＫＥＡＰ１ノックダウン後処理ありまたはなしの細胞中における、エポキシドヒドロラーゼ１またはＥＰＨＸ１のｍＲＮＡレベルを示す。図１２Ｃは、化合物１が、ＴＮＦαの存在または不在下で、ＥＰＨＸ１の発現を上方制御したことを示す。化合物１およびＫＥＡＰ１ノックダウンがあるサンプル中では、最大で２．５倍の誘導が観察されたことから、ＫＥＡＰ１ノックダウンは化合物１の効果を高める。
【０３５４】
２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαの存在下における１μＭ化合物１で２４時間の処理は、Ｎｒｆ２シグナル伝達を上方制御した。ＫＥＡＰ１ノックダウンなしのそれらの発現レベルと比較して、より大きなＮＱＯ１の誘導倍数（２倍対４倍）およびＥＰＨＸ１（１．５倍対２．５倍）に見られるように、ＫＥＡＰ１ノックダウンは、この効果を増強した。結果は、ＣＲＭ１阻害が、炎症中にＮｒｆ２経路を活性化し得ることを示し、ＫＥＡＰ１阻害剤と組み合わされた化合物１での処理が、化合物１のみの処理よりも効果的であり得ることを示唆する。
【０３５５】
ＮＦ−κＢ転写活性に対する化合物１、２、および１２の効果
ＴＮＦαは、ＮＦ−κＢの転写活性を誘導し得る。この転写活性は、ＮＦκＢに結合してその活性を阻害するＩκＢが分解されると、開始される。次に、クラスＩファミリーのメンバーｐ５０とヘテロ二量体を構成する、ＮＦ−κＢタンパク質のクラスＩＩファミリーのメンバーＲｅｌＡまたはｐ６５が、核内に移動する。ｐ６５サブユニットは、そのＣ末端にトランス活性化ドメインを有し、それは炎症関連遺伝子の転写を活性化する。ＮＦ−κＢと同様に、ＩκＢもまた、細胞核内に移動し得る。分解は主に細胞質内で起きるので、ＩκＢの核内蓄積は、タンパク質を分解から保護する。ＣＲＭ１は、ＩκＢの核外搬出に関与する。核ＩκＢはＮＦ−κＢに結合して、ＮＦ−κＢがＤＮＡ配列に結合するのを妨げるので、ＣＲＭ１の阻害を通じてＩκＢの核外搬出を遮断することは、ＮＦ−κＢ活性を最小化する。
【０３５６】
化合物をＨｅＬａ（腺がん）細胞上で試験して、ＮＦ−κＢ転写活性を阻害するそれらの能力を定量化した。ＴＮＦαによってＨｅＬａ細胞中でＮＦ−κＢ活性を誘発し、次に化合物を添加して、誘導性ＮＦ−κＢ活性を阻害した。いくつかの化合物、すなわち化合物１、化合物２、および化合物１２の最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）は、用量応答試験によって測定した。
【０３５７】
ＨｅＬａ細胞を１２ウェルプレート内に播種して（２００，０００細胞／ウェル）、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および５０μｇ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加した、Ｌｏｎｚａからのイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で培養して、一晩放置して付着させた。細胞は、連続希釈（３０μＭで開始；１：３希釈）化合物で１時間前処理し、次に無血清培地中で２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦα（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）に４時間曝露した。処理後、細胞をＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で洗浄し、ＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に溶解した。製造会社の説明書に従って、化学発光転写因子アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログ番号８９８５９）によって、細胞中のＮＦ−κＢの転写活性を測定した。簡単に述べると、ＮＦ−κＢビオチン化共通配列結合９６ウェルプレート内で、各処理からの１．５ｍｇ／ｍＬのＲＩＰＡ溶解ホールセル抽出物を培養した。共通配列に結合した活性ＮＦ−κＢ転写因子は、ＮＦ−κＢ  ｐ６５一次抗体と共に、次に二次ＨＲＰ共役抗体と共に培養した。化学発光基質をウェルに添加して得られたシグナルを照度計を使用して検出した。ＩＣ５０曲線の各濃度について、３回の別個の実験を分析した。ＸＬＦｉｔモデル２０５を使用して、ＩＣ５０曲線を計算した。
【０３５８】
１時間の化合物の前処理と、それに続く４時間の２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦα曝露後に、化合物１、化合物２および化合物１２の連続希釈によって、ＮＦ−κＢ転写活性阻害を測定した。各濃度について３回の独立した実験を採点し、平均をここに提示する。化合物１は１．５９μＭのＩＣ５０値、化合物２は１．２２μＭのＩＣ５０値、そして化合物１２は１．４６μＭのＩＣ５０値を有した。
【０３５９】
試験管内培養ＨｅＬａ細胞中における炎症促進性タンパク質ＣＯＸ−２の発現に対する化合物１の効果の評価
ＨｅＬａ細胞は、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）添加ＥＭＥＭ培地（Ｌｏｎｚａ）と共に、６ウェル培養皿（２．５×１０５細胞／ウェル）に播種した。プレートのウェルの２つを１０μＭの化合物１で３０分間前処理し、その時点で、ウェルの１つを２０ｎｇ／ｍｌＴＮＦα（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ）に１時間曝露した。その他のウェルは、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαで１時間処理し、または何の処理もしなかった。処理に続いて、ＲＮＡ抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡを細胞から抽出した。各処理群からのＲＮＡサンプルを逆転写して、ＣＯＸ−２に対するプローブ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、対応するｃＤＮＡ配列上で定量的リアルタイム（ｑＲＴ）ＰＣＲを実施した。
【０３６０】
ＨｅＬａ細胞は、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）添加ＥＭＥＭ培地（Ｌｏｎｚａ）と共に、６ウェル培養皿（５×１０５細胞／ウェル）に播種した。プレートのウェルの２つを１μＭの化合物１で３０分間前処理し、その時点で、ウェルの１つを２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ）に２４時間曝露した。その他のウェルは、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαで２４時間処理し、または何の処理もしなかった。処理に続いて、プロテアーゼとホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）とを添加したＲＩＰＡ緩衝液で溶解し、細胞からホールセル溶解産物を作成した。抗ＣＯＸ−２抗体（Ｃａｙｍａｎ）を使用して、ＣＯＸ−２タンパク質の免疫ブロット検出を実施した。各サンプルについて、ＣＯＸ−２タンパク質のシグナル強度をβアクチン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）について正規化し、任意の強度単位としてグラフをプロットした。
【０３６１】
ｑＲＴ−ＰＣＲによるｍＲＮＡ分析からのデータは、図１３Ａに示される。処理の１時間後、ＴＮＦαは、対照と比較して、ＣＯＸ−２  ｍＲＮＡの発現に約８倍の増大を誘導した一方で、化合物１のみでは、ＣＯＸ−２発現のレベルに影響を及ぼさなかった。化合物１は、ＣＯＸ−２  ｍＲＮＡ発現の増大を引き起こさなかった。
【０３６２】
免疫ブロットによるタンパク質分析からのデータは、図１３Ｂに示される。ＨｅＬａ細胞は、未処理のままにし、または２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαまたは１μＭの化合物１のいずれかで処理し、または２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαおよび１μＭの化合物１で２４時間で処理し、次に免疫ブロット検出によって、存在するＣＯＸ−２タンパク質の量を評価した。ＣＯＸ−２タンパク質は、未処理対照および化合物１処理細胞と比較して、ＴＮＦα刺激細胞中で２４時間目までに増大した一方で、化合物１は、ＴＮＦαの存在下でＣＯＸ−２タンパク質の量を低下させた。ＣＯＸ−２タンパク質の免疫ブロットシグナル強度は、各サンプルのβ−アクチンについて正規化し、グラフで表した。
【０３６３】
化合物１は、ＴＮＦα誘発性のＣＯＸ−２発現に影響を及ぼさないが、ＴＮＦα誘発性のＣＯＸ−２タンパク質発現の量を低下させる。
【０３６４】
化合物１は核に向かう炎症関連ＣＲＭ１カーゴに局在化する
炎症誘導因子ＴＮＦα単独で、または１〜１０μＭの化合物１との組み合わせで、ＨｅＬａおよびＴＨＰ−１（ヒト急性単球性白血病）細胞を４〜２４時間処理し、次に免疫蛍光（ＩＦ）によって、炎症関連ＣＲＭ１カーゴタンパク質ＩκＢ、Ｎｒｆ２、ＨＭＧＢ１、ＦｏｘＰ３、ＦＯＸＯ１ａ、ＲｘＲα、ＰＰＡＲγ、およびＮＦκＢ（ｐ６５サブユニット）の核局在化について分析した。
【０３６５】
ＩｋＢ、Ｎｒｆ２、ＲｘＲα、およびＰＰＡＲγ局在化を検出するために、細胞を１０μＭ化合物１と共に３０分間前培養し、無血清培地中での２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαとの４時間の培養がそれに続いた。ＨＭＧＢ１、ＦｏｘＰ３、およびＦｏｘｏ１Ａを検出するために、細胞を１μＭの化合物１と共に２時間前培養し、２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαとの２４時間の培養がそれに続いた。ＮＦκＢを検出するために、細胞を１μＭの化合物１と共に２時間前培養し、２０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαとの２４時間の培養がそれに続いた。細胞は、１００％氷冷メタノール（ＭｅＯＨ）で固定して、０．１％ツイーン２０、０．３Ｍグリシン、およびＰＢＳ中１％ＢＳＡで透過処理／ブロックし、あるいはＰＦＡ（ＰＢＳ中の３％パラホルムアルデヒドおよび２％スクロースｉｎ）で固定して、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００およびＰＢＳ中１％ＢＳＡで透過処理／ブロックした。ＩκＢは、Ａｂｃａｍからの一次ウサギモノクローナル（Ｅ１３０）抗体（ａｂ３２５１８）によって検出され；Ｎｒｆ２は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚからの一次ウサギポリクローナル抗体（ｓｃ７２２）によって検出され；ＲｘＲアルファは、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚからの一次ウサギポリクローナル抗体（ｓｃ５５３）によって検出され；ＰＰＡＲガンマは、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇからの一次ウサギモノクローナル［Ｅ１３０］抗体（＃２４４３）によって検出され；Ｆｏｘｏ１Ａは、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇからの一次ウサギモノクローナル［Ｃ２９Ｈ４］抗体（＃２８８０）によって検出され；ＨＭＧＢ１は、Ａｂｃａｍからの一次ウサギポリクローナル（ｐｏｌｙｏｃｌｏｎａｌ）抗体（ａｂ１８２５６）によって検出され；ＦｏｘＰ３は、Ａｂｃａｍからの一次ウサギポリクローナル抗体（ａｂ１０５６３）によって検出され；ＮＦκＢ−ｐ６５は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇからの一次ウサギモノクローナル［Ｃ２２Ｂ４］抗体（＃４７６４）によって検出された。全ての染色で、ウサギ二次抗体Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａ１１００８）を使用した。画像は、２０倍の倍率で撮影した。
【０３６６】
核内への炎症関連ＣＲＭ１カーゴの閉じ込めは、炎症に対して悪影響を有し、したがってＩＦアッセイは、ＣＲＭＩ阻害剤の抗炎症効果の生物マーカーの役割を果たし得る。
【０３６７】
ＩκＢは、炎症促進性経路．の発現を誘導するＮＦκＢの阻害剤である。大部分のＩκＢ分解は細胞質中で起きるので、その核局在化は、ＩκＢを分解から保護してそれが核ＮＦκＢに結合できるようにし、ＮＦκＢの炎症促進活性を遮断する。Ｎｒｆ２は、核内で抗炎症活性の発現を誘導する、ロイシンジッパー転写因子である。ＨＭＧＢ１は高移動度群ボックス１因子であり、通常はクロマチンと密接に結合する。損傷を受けた細胞からの能動的分泌または受動的放出た放出に際して、ＨＭＧＢ１は、サイトカインとして機能し、炎症促進性応答を誘導する。核内へのＨＭＧＢ１の閉じ込めは、その炎症促進効果を妨げる。ＦｏｘＰ３（フォークヘッドボックスＰ３）は、免疫抑制活性を有する調節Ｔ細胞の発達と機能において、マスター転写因子として機能する。ＦＯＸＯ１ａは、アンギオポエチン−２などの抗炎症性遺伝子を誘導する能力のある転写因子である。したがって核局在化は、ＦＯＸＯ１ａをリン酸化、核排除、そして引き続く分解から保護する。ＲｘＲαは、マクロファージ内でＣｃｌ６およびＣｃｌ９などのケモカインの発現を調節する、レチノイド核内受容体である。ＲｘＲαは、炎症部位への白血球動員に必須である。ＲｘＲαの核封入は、さもなければＮＦκＢなどの炎症促進性転写因子の結合に役立つ、転写活性化補助因子の動員および枯渇をもたらす。ＰＰＡＲγは、核内受容体スーパーファミリーに属するリガンド活性化転写因子であり、抗炎症遺伝子の発現を調節する。
【０３６８】
図１４Ａおよび１４Ｂに示される結果は、炎症を誘導することが知られているＴＮＦαの存在下であってさえも、上記カーゴの核局在化を実証する。結果は、化合物１が抗炎症経路を誘導して、炎症を克服する能力を示す。
【０３６９】
ラットにおけるＢＣＣＩ傷害後の認知障害に対する化合物１の効果の評価
オスＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットの前頭皮質中央（ＭＦＣ）に対する、両側性制御式皮質衝撃（ＢＣＣＩ）傷害を、皮質挫傷装置により誘導した。ＣＣＩ後、あらゆる皮質表面出血は制御され、筋膜および頭皮は縫合された。偽手術されたラットは、麻酔し、定位固定装置に載せて、開頭手術を実施した。
【０３７０】
１６ｍｇ／ｍＬのプロゲステロンを２２．５％２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンに溶解して、傷害の１時間後に、最初の注射剤を腹腔内投与（１６ｍｇ／ｋｇ）した。傷害の６時間後に残りの注射剤（全て１６ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与して、傷害後５日間継続した。プロゲステロン注射は、１ｍＬ／ｋｇの濃度で作成した。プロゲステロンは、対照として使用した。
【０３７１】
０．２、０．４、および０．６ｍｇ／ｍＬの化合物１をビヒクル（水中の０．６％ｗ／ｖプルロニック（登録商標）Ｆ−６８および０．６％ｗ／ｖＰＶＰＫ−２９／３２）に懸濁して、傷害の１６時間前および傷害の２時間後に１０ｍＬ／ｋｇの濃度で経口投与し、投与を４日間継続した。同時点で、対照ラットには、化合物１のビヒクル同等物の注射剤を投与した。処置群は、表１１に要約される。
【０３７２】
【表１３】
2020037585.tif 000039
【０３７３】
モリス水迷路（ＭＷＭ）試験は、視覚的手がかりを使用する。齧歯類における学習および記憶を測定する、空間進路決定課題である。対象は、数日間にわたって、隠されたプラットフォームの発見を学習する。ＭＷＭ試験は、傷害の２週間後に実施される。オスＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットが、タンクの南西四分円に位置するプラットフォームに到達するまで、または９０秒間が経過するまで、プール内で泳がせた。プール上部に吊したビデオカメラによって、行動を追跡し、ビデオ追跡ソフトウェア（ＡＮＹ−ｍａｚｅ）を使用して、記録し分析した。
【０３７４】
ＭＷＭ検査の習得に対する、化合物１およびプロゲステロンの効果は、図１５Ａに示される。二元配置反復測定ＡＮＯＶＡは、有意な治療効果を見出した。偽傷害ラットと比較して、ＢＣＣＩ傷害ラットは、５日間の習得期（図１５Ａ）における、隠されたプラットフォーム発見の待ち時間の有意な増大によって示される、顕著な空間的学習障害を示した。ビヒクル処置ＢＣＣＩ傷害ラットと比較して、化合物１（２、４、および６ｍｇ／ｋｇ）は、隠されたプラットフォーム発見の待ち時間に用量依存性の短縮を示し、有意な効果は、傷害の１７および１８日後の６ｍｇ／ｋｇ、および１８日後の４ｍｇ／ｋｇで見られた。データは、化合物１が神経保護効果を有することを示唆する。
【０３７５】
図１５Ｃは、ビブラトーム切出し前の脳全体の定性的外観検査結果を示す、偽処置（Ｓｈａｍ）、ＣＣＩ＋ビヒクル（対照）、またはＣＣＩ＋化合物１（６ｍｇ／ｋｇ）を受けた、動物の脳全体の写真である。検査は、いずれのＳｈａｍ動物も（４匹中０匹）、内側足背皮組織の損傷を示さなかったことを示唆した。全く対照的に、４匹のＣＣＩ対照は全て、皮質のこの領域に限定される、重度の両側性傷害を示した。化合物１を投与されたＣＣＩ動物は、中等度から最小にわたる損傷を示した。特に、化合物１群中で最も重度の傷害を示す脳でも、ＣＣＩ対照群の全ての脳に比べて、それほど極端でなかった。
【０３７６】
各処置群のラットから採取された血漿中で、いくつかのサイトカインの発現レベルを測定した。サンプルは凍結して−８０℃で保存した。実験当日、サンプルを解凍して４倍に希釈し、ルミネックスプラットフォーム上で、サイトカイン発現について分析した。サンプルは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅによって製造されたｍｕｌｔｉｐｌｉｅｘキットを使用して、サイトカインＧＲＯ／ＫＣ、ＩＦＮｙ、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、およびＴＮＦａについて分析した。図１５Ｂに示されるように、サンプル間で発現レベルに同一パターンが観察された。最大の変化は、ＩＬ−１０にあった。６ｍｇ／ｋｇの化合物１は、ビヒクル処置対照群と比較してＩＬ−１０を低下させた。
【０３７７】
多くの場合、外傷性傷害は、二次傷害応答を引き起こす。ほとんどの場合、結果は炎症である。炎症応答は、サイトカインおよびケモカインによって駆動され、損傷組織由来生成物（損傷関連分子パターン）によって部分的に伝播する。
【０３７８】
臓器機能が逐次漸進的に失われる、ほとんど解明されていない症候群である多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）は、最も頻繁に、傷害後の遅発性死亡を引き起こし、罹患率および死亡率のかなりの割合を占める。ＭＯＤＳは、ある程度、炎症経路の過剰なまたは不適応な活性化に起因すると見なされる。
【０３７９】
細胞密度の定量的測定は、ブレグマの約２〜３ｍｍ前方の抗ＮｅｕＮ免疫標識された小区分から収集された。ＣＣＩ処置動物中の傷害部位に、または偽処置動物中の同等の領域（背側皮質）に、隣接する皮質領域内の層ＩＶ−ＶＩ周辺から対象領域（ＲＯＩ）を取り出した（実験条件について盲検）。同一切片中の腹側皮質領域内で、同様の領域のＲＯＩもまた評価した。Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−ＩＩ分析器ソフトウェアの細胞計数モジュールを使用して、細胞同定を実施した。各ＲＯＩについて、細胞対灰白質（ＣＧ）面積係数を判定した。偽処置動物は、背側および腹側領域内の双方で、一様な高密度標識を示した。予測されたように、ＣＣＩ対照動物は、偽処置動物と対比して、背側（偽処置との比較で−４５％）および腹側（偽処置との比較で−３０％）皮質領域の双方で、ＣＧ係数低下を示した（図１５Ｄ）。ＣＧ係数のＣＣＩ誘発性低下は、化合物１での処置によって腹側皮質で軽減された（偽処置との比較で−３％；ｐ＝０．０９）。腹側皮質中の化合物１の効果は、ビヒクル処置と対比して統計学的に有意でなかったが、この効果は、より大規模な研究では、統計的有意性を破ることが予期される。傷害部位に隣接する背側皮質領域では、化合物１の効果は検出されなかった（偽処置との比較で−３２％）。化合物１で観察された、背側領域への効果と腹側領域への効果の違いは、傷害部位からの距離と逆相関する傷害程度に関連する閾値効果かもしれない。したがって背側皮質領域に対する損傷は、これらの条件下で化合物１によってレスキューするには、重症すぎた可能性がある。
【０３８０】
免疫蛍光を実施して、いくつかの免疫応答経路に対するＴＢＩの影響を評価し、化合物１が、これらの経路の１つまたは複数によって、その神経保護効果を仲介するかどうかを判定した。抗ラットＩｇＧに対する免疫蛍光標識（血液脳関門（ＢＢＢ）透過性の指標）、およびＴＮＦα（神経炎症の指標）を使用して、二次傷害応答の半定量的測定を調べた。全てのマーカーは、ＮｅｕＮ標識アセスメントで使用された領域の３００μｍ以内の隣接小区分の傷害部位を取り囲む皮質領域で、２０倍の倍率で造影した。各標識で、標的ＲＯＩは、損傷部位（または偽処置動物の背側皮質に相当する領域）のＩＶ−ＶＩ隣接層内で輪郭を描き、基準ＲＯＩは腹側皮質中の同一皮質層から収集した。２つのＲＯＩのそれぞれで、正規化された蛍光強度を評価した。全ての標識について、腹側皮質基準部位は群間で異ならない（ｐ＞０．５）と判定され；したがって基準値（ＩＦ）に対する標的百分率を判定した。
【０３８１】
傷害組織のニューロン（図１５Ｅで矢印によって表示される）中で、抗ラットＩｇＧを発現させた。図１５Ｅは、抗ラットＩｇＧが、皮質組織の損傷領域のニューロフィル（ｎｅｕｒｏｐｈｉｌ）内に分布していることを示す。抗ラットＩｇＧは、偽処置組織中には存在しない。ＴＮＦα免疫陽性細胞（図１５Ｅで矢印によって表示される）は、対照動物において、傷害部位を取り囲む損傷組織中で明確に視認できる。これらの要素は、化合物１処置動物および偽処置動物にはほとんど存在しない。図１５Ｅは、化合物１が、脳損傷に曝露したラットで、二次傷害応答を低下させることを示す。
【０３８２】
コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）試験Ｎｏ．２
炎症生物マーカー対にする本明細書に記載される化合物の効果をさらに調査するために、第２のＣＩＡモデルを創始した。このモデルでは、群は、Ａ群（未感作）、Ｂ群（モデル；ビヒクル処置）、Ｃ群（毎日５ｍｇ／ｋｇの化合物２）と命名された。ＢおよびＣ群のラットは、０日目にＩＦＡ中のウシＩＩ型コラーゲンで皮内免疫化し、７日目に追加免疫注射を実施した。化合物２は、関節炎発症（１１日目）後に、ＣＩＡがあるラットに経口投与した。ＣＩＡ発症は、巨視的採点および足腫脹測定値によって評価した。これは、上の表７に記載される臨床採点システムを使用して、感作（７日目）後最初の５日間にわたり毎日評価し、次に２８日目まで週２回（月曜日および木曜日）評価した。さらに全ての動物群で、化合物処置の４日後（試験の１５日目）、および１０日後（試験の２１日目−疾患のピーク）、および試験最終日（試験の２８日目）に、ＣＤ４５、ＣＲＰ、ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１、ＴＮＦ−α、ＩＬ１−β、ＩＬ−６、ＩＬ−１７のＥＬＩＳＡ、そしてカテプシンＫおよびエラスターゼの測定を実施した。さらに試験最終日（試験の２８日目）に、各群からの少数の代表的な動物に対して、踵骨の三次元マイクロ断層デンシトメトリーを実施して、足の骨侵食を定量化した。
【０３８３】
図１６Ａおよび１６Ｂは、５ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置されたラットが、ビヒクル処置ラットと比較して、有意に低下した関節腫脹（図１６Ｂ）および臨床スコア（図１６Ａ）を有したことを示す。
【０３８４】
図１７Ａおよび１７Ｂは、５ｍｇ／ｋｇの化合物２で処置されたラットが、ビヒクル処置ラットと比較して、有意に低下した後足の骨侵食を有したことを示す。化合物２で処置された動物の関節の状態は、未感作動物と同等であった。対照的に、ビヒクル処置動物は、後足の骨侵食に、統計学的に有意な増大を示した。
【０３８５】
ルミネックス（登録商標）アッセイおよびＥＬＩＳＡを使用して、炎症促進性サイトカインおよび炎症マーカーのレベルに対する、化合物２の効果を測定した。最初の免疫化の２１日後に、モデル群の２匹のラットおよび化合物２処置群の２匹のラットから、試験の終わりに未感作群の２匹のラット、モデル群の３匹のラット、および化合物２処置群の３匹のラットから滑液を採取した。
【０３８６】
図１７Ｃ〜１７Ｆは、モデル群と比較して、化合物２が、滑液サンプル中の炎症促進性サイトカインおよび炎症マーカーの生成抑制効果を示したこと示す。低下したサイトカインには、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＭＣＰ−１が含まれ、炎症マーカーはＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である。
【０３８７】
ルミネックス（登録商標）アッセイはまた、血清中の炎症促進性サイトカインレベルを測定するのにも（ｍｅａｕｒｅ）使用した。血清サンプル（各ラットにつき１ｍＬの血液）を化合物処置の４日後（１５日目）、化合物処置の１０日後（通常は疾患ピーク−２１日目）、および試験終了日（２７日目）に採取した。
【０３８８】
図１７Ｇは、モデル群と比較して、化合物２が血清サンプル中のＩＬ−１β産生に対して、阻害効果を示したことを示す。
【０３８９】
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル
ＥＡＥモデルは、多発性硬化症などのヒトＣＮＳ脱髄性疾患研究のための認められたモデルである。メスＣ５７Ｂ１／６ＪマウスのＥＡＥマウスモデル中のＭＯＧ誘発性における、化合物１の効果を調べた。動物は、Ｉ群（ビヒクル対照）、ＩＩ群（デキサメタゾン陽性対照）、およびＩＩＩ群（７．５ｍｇ／ｋｇの化合物１）と命名された、３群に分けた。図１８Ａに示されるスケジュールに従って、生理食塩水、デキサメタゾン、および化合物１を投与した。０日目から開始して、生理食塩水およびデキサメタゾンを毎日腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎａｌｌｙ）投与した。１１日目（疾患発症）から開始して連続３週間、月曜日、水曜日、金曜日に、７．５ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口投与した。疾患は、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に乳化したＭＯＧの試験０日目の単回皮内注射と、それに続く試験０日目のそして再度試験２日目（４８時間後）の百日咳毒素（ＰＴ）による腹腔内追加免疫賦活によって誘導した。
【０３９０】
図１８Ｂに示されるように、疾患最初の徴候は、ＭＯＧ免疫化に続いて７〜９日目に気付かれ、疾患ピークの発生は、試験１７日目であった。０日目から１ｍｇ／ｋｇ  ＩＰの用量で開始するデキサメタゾン処置（ＩＩ群）は、ビヒクル対照（Ｉ群）と比較して、試験の８〜３７日目に臨床スコアを有意に低下させた。７．５ｍｇ／ｋｇの用量で、１１日目に開始する化合物１による処置（ＩＩＩ群）は、疾患スコアおよび重症度を有意に低下させた。これらの結果は、図１８Ｂに示される。
【０３９１】
この試験条件下で得られた所見を考慮すると、試験１１日目に開始する、７．５ｍｇ／ｋｇ経口の用量の化合物１による処置は、疾患スコアおよび重症度を有意に低下させた。
【０３９２】
実施例１８．創傷治癒モデル
材料
マウス−Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス、オス、６〜８週齢、ＳＰＦは、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  ＬＴＤから入手した。マウスは、無菌個別換気ケージ（ＩＶＣ）内で飼育し、食物および水は自由摂取させた。１２ｈ／１２ｈの明暗周期、１９〜２１℃の温度管理、４０〜６０％の湿度管理、動物室内陽圧、選択された歩哨動物で３ヶ月毎の健康報告管理が実施された。
ブタ−ブタ（ｓｕｓｓ  ｃｒｏｆａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）、家畜ブタ（主にランドレースＸ大型白色）、メス、約６０Ｋｇ、４〜５ヶ月齢、Ｌａｈａｖ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｋｉｂｂｕｔｚ  Ｌａｈａｖ，Ｉｓｒａｅｌ。ブタは清浄な非ＳＰＦ環境で飼育して、公共水道水を直接自由摂取させ、食物は、獣医の監督下で標準的な成長表の推奨に従った。
吸入用イソフルラン９９．９％、ロット６０２７９６２、Ａｂｂｏｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ
水−注射用水、バッチ１１４８１０１２、Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ  ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ
生理食塩水−注射用０．９％塩化ナトリウム、バッチ１２２２４０１２、Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ  ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ
ＤＭＳＯ−ジメチルスルホキシド、Ｄ２６５０、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉｎｃ．，Ｕ．Ｓ．
プルロニック（登録商標）Ｆ−６８
ＰＶＰ  Ｋ−２９／３２
【０３９３】
Ｃ５７ＢＬマウス皮膚創傷に対する化合物１の全身投与および局所塗布の効果の評価
マウス縦方向全層皮膚切開創傷モデルにおける、皮膚創傷治癒に対する化合物１の効果を試験した。動物は到着時に、耳標で識別し、秤量して、実験開始前に数日間、環境に順応させた。創傷形成当日にマウスを秤量し、体重差層別無作為化に従って、６匹ずつ６実験群に分けた。外科手術に先だって、マウスをイソフルランで麻酔し、動物の背中の毛を刈った。標準外科用メスの刃を使用して、動物の背中に（背骨に平行に）２０ｍｍの全層縦方向切開を実施した。創傷形成３時間後、皮膚の弾性と動物の活動のために、切開は楕円形状になった。この段階で、創傷の最も広い領域を測定して、ベースライン創傷幅を確立した。創傷治癒評価は、創傷の最も広い領域の測定によって行った。処置群は、強制経口投与または局所投与群からなった。実験中、創傷を写真記録して、形態学的分析を実施した。創傷形成８日後の実験終了時、マウスを殺処分して、創傷幅を評価し、創傷領域の生検を採取して、分析に供した。
【０３９４】
【表１４】
2020037585.tif 000040
【０３９５】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製した。強制経口投与用の化合物１は、凍結乾燥粉末として提供され、水性０．６％ｗ／ｖプルロニック（登録商標）Ｆ−６８および０．６％ｗ／ｖ  ＰＶＰＫ−２９／３２溶液で戻して、０．７５ｍｇ／ｍＬ貯蔵懸濁液を作成し、７．５ｍｇ／ｋｇおよび４ｍｇ／ｋｇの使用液を調製するために、それを引き続いて水性０．６％ｗ／ｖプルロニック（登録商標）Ｆ−６８および０．６％ｗ／ｖ  ＰＶＰＫ−２９／３２で希釈した。局所塗布用の化合物１は、凍結乾燥粉末として提供され、水に１０ｍＭ濃度に懸濁し、それを水でさらに希釈して、局所塗布用の最終使用濃度にした。
【０３９６】
毎日の形態学的評価の一部として、デジタルカメラＦｉｎｅＰｉｘ  Ｓ７００を使用して写真記録を実施した。図１９は、創傷形成後５日目の各実験群からの典型的な創傷の写真である。黒い棒目盛は、１ｃｍを表す。３３匹のマウスで、合計３３の創傷を作った。形態学的評価は、経口的または局所的投与の双方で、化合物１による処置の好ましい効果を実証した。全ての処置は、対照よりも優れた創傷治癒を誘導した。処置された創傷はサイズがより小さく、痂皮は、亀裂なしに、より軽量でより薄く均質で、創傷治癒の後期を示唆した。処置群と同日に評価された対照群創傷は、サイズがより大きいようであり、創傷の縁と中央の双方で、未治癒創傷領域（赤みを帯びたピンク色の領域として観察される）を曝露する、厚くひび割れた挽き割り痂皮で覆われていた。
【０３９７】
形態学的分析は、前臨床動物試験の創傷治癒評価で、およびヒト創傷の臨床治療で利用される、主要なパラメータである。形態学的分析に基づいて、化合物１は有効性を示し、創傷治癒に好ましい影響を及ぼした。創傷サイズの低下とより良い痂皮形成特性による判定で、化合物１の局所塗布および全身投与の双方が、より良い創傷治癒をもたらしたことに留意されたい。
【０３９８】
ブタ皮膚創傷への試験化合物の局所塗布の効果の評価
皮膚創傷治癒に対する試験化合物の効果は、ブタ縦方向全層皮膚切開創傷モデルで試験し得る。動物は到着時に、耳標で識別し、秤量して、実験開始前に数日間、環境に順応させる。外科手術の３日前に、順応させるためにブタを入院設備に移す。処置の１２時間前に、給餌を停止する。外科手術当日、ケタミン、キシラジン、ジアゼパム、およびイソフルランを使用して、ブタを麻酔する。Ｏｓｔｅｒ（登録商標）毛刈り機（ブレードサイズ３０）を使用して、背側胸郭（ｄｏｒｓｕｍ  ｔｈｏｒａｘ）および腹部の被毛を注意深く刈り、２０個の４ｃｍ２の個別領域のそれぞれを２列で標識する（列あたり１０個の領域）。＃１１外科用メスの刃を使用して、背側正中線の両側から４ｃｍで、１０対の２．５ｃｍの全層縦方向皮膚切開を作成する。
【０３９９】
外科手術に続いて、創傷を実験群に分けて、創傷領域および創傷縁への局所塗布によって毎日処置する。処置領域は、創傷中心から２ｃｍの距離までの皮膚の表面からなる。投与液は、全治療容積（例えば１ｍＬの生理食塩水または試験化合物）が組織に吸収されるまで、ピペットを使用して、各創傷に少しずつ塗布する。
【０４００】
創傷形成の数時間後、皮膚の弾性と動物の活動のために、切開は楕円形状になる。この段階で、創傷の最も広い領域を測定して、ベースライン創傷幅を確立する。創傷治癒評価は、創傷の最も広い領域の測定によって行う。実験中、創傷を写真記録して、形態学的分析を実施する。
【０４０１】
実験終了時（例えば創傷形成の１２日後）、麻酔薬およびＫＣｌを投与して、ブタを殺処分する。創傷形態学を評価して、創傷幅を測定し、創傷領域の生検を採取して、さらなる分析のために４％パラホルムアルデヒドを使用して固定する。固定化に続いて、例えばＦｉｎｅＰｉｘ  Ｓ７００などの高解像度デジタルカメラを使用して創傷生検を写真記録し、創傷領域の生検を組織病理学分析に供する。創傷治癒の評価は、試験化合物で処置された各創傷が、背側正中線の反対側の同一解剖学的位置の対照創傷と直接比較される、対合様式で実施される。ブタの背中の異なる領域における皮膚の血管新生および血液循環の程度に伴う変動性のために、この治癒の対合評価は、処置創傷と非処置創傷の客観的評価および客観的比較の観点から、重要である。頚部近くの前面に位置する創傷は、後方背面に位置する創傷よりもはるかに良い治癒特性を示す。
【０４０２】
【表１５】
2020037585.tif 000041
【０４０３】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製する。試験化合物は凍結乾燥粉末として提供され、注射用０．９％塩化ナトリウムでさらに戻して、３ｍｇ／ｍＬの貯蔵懸濁液を作成する。貯蔵懸濁液を注射用０．９％塩化ナトリウムでさらに希釈して、局所塗布のための３μＭおよび１μＭの最終濃度にする。
【０４０４】
創傷からの漏出、出血または分泌事象がない、均質で薄く、一様に組織化した痂皮表面は、創傷治癒を示唆する。非常に不均一でひび割れた暗色の痂皮は、創傷治癒過程における、多数の滲出、漏出、および出血事象を示唆する。
【０４０５】
ブタにおける初期創傷治癒過程に対する試験化合物の局所塗布の効果の評価
初期創傷治癒に対する試験化合物の効果は、ブタにおいて縦方向全層皮膚切開の創傷モデルで試験し得る。麻酔したブタの背中の正面部分で、＃１１外科用メスの刃を使用して、背側正中線の両側から４センチメートルで、５対の２．５ｃｍの縦方向全層切開を実施する。処置後数時間以内に、縦方向切開は、楕円形創傷になる。
【０４０６】
創傷を実験群に分けて、創傷領域（縁および創傷の近くの皮膚領域を含む）への局所塗布によって、毎日処置する。処置段階は、創傷形成に続いて２４時間後に開始する。投与液は、ピペットを使用して、治療容積全体（例えば１ｍＬの生理食塩水または試験化合物）が組織に吸収されるまで、各創傷に少しずつ塗布する。
【０４０７】
５日目に、以下のパラメータに従って、創傷治癒の状態および形態学を評価する：出血、漏出、腫脹、炎症、膿分泌、および痂皮形成。評価は、試験化合物で処置された各創傷が、背側正中線の反対側の同一解剖学的位置の対照創傷と直接比較される、対合様式で実施される。
【０４０８】
【表１６】
2020037585.tif 000042
【０４０９】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製する。試験化合物は凍結乾燥粉末として提供され、０．９％塩化ナトリウムで戻して、３ｍｇ／ｍＬの貯蔵懸濁液にする。最終３μＭ局所溶液を調製するために、この貯蔵懸濁液を０．９％塩化ナトリウムでさらに希釈する。
【０４１０】
形態学的創傷治癒評価は、処置の５日目に実施される。腫脹を検査して、各創傷の重症度に従って採点し、軽度、中等度または重度として記録する。中等度および重度の腫脹を示す創傷は、実験群の全創傷の百分率として提示される。分泌はバイナリモードで検査され採点される：最小の分泌を示す創傷はこのパラメータについて陽性と見なされ、いかなる検出可能な分泌もない創傷は、陰性と見なされる。分泌物を示す創傷（このパラメータについて陽性）は、実験群の全創傷の百分率として提示される。痂皮は、硬く乾燥して赤味を帯びた暗黄色または褐色の構造の連続層が、創傷領域全体を被覆し、創傷床に強く付着して、したがって外部環境と損傷組織との間に連続した強力な障壁を提供する場合に、完全に形成したと見なされる。痂皮形成は、バイナリモードで検査され採点される：乾燥して強力な完全に形成された痂皮を示す創傷は、このパラメータに関して陽性と見なされ、痂皮のないまたは初期段階の痂皮がある創傷は、陰性と見なされる。完全に形成された痂皮のある創傷は、実験群あたりの全創傷の百分率として提示される。
【０４１１】
腫脹、分泌、および痂皮形成もまた評価される。腫脹および分泌は、組織修復を遅延させ、非審美的瘢痕を誘発するかもしれない、過剰な炎症応答の一部である。
【０４１２】
ブタ皮膚の初期創傷治癒に対する、および損傷皮膚または負傷皮膚に伴う過敏症およびひっかき行動に対する、試験化合物の局所塗布の効果の評価
皮膚創傷治癒に対する試験化合物の効果は、ブタにおける縦方向全層皮膚切開創傷モデルで試験し得る。外科手術の３日前に、順応させるためにブタを入院設備に移す。外科処置の１２時間前に、給餌を停止する。外科手術当日、ケタミン、キシラジン、ジアゼパム、およびイソフルランを使用して、ブタを麻酔する。Ｏｓｔｅｒ（登録商標）毛刈り機（ブレードサイズ３０）を使用して、背側胸郭（ｄｏｒｓｕｍ  ｔｈｏｒａｘ）および腹部の被毛を刈った。１０対の各４ｃｍ２のセクションを標識し、＃１１外科用メスの刃を使用して、２．５ｃｍの全層縦皮膚切開を背正中線の両側に作る。
【０４１３】
外科手術に続いて、創傷を実験群に分けて、創傷領域（端、および創傷からあらゆる方向に２ｃｍの距離までの近くの皮膚領域を含む）への局所塗布によって、毎日処置する。投与液は、ピペットを使用して、治療容積全体（例えば１ｍＬのビヒクルまたは試験化合物）が組織に吸収されるまで、各創傷に少しずつ塗布する。
【０４１４】
処置後数時間以内に、縦方向切開は、皮膚弾性および動物活動のために楕円形創傷になる。実験中、創傷を写真記録して、形態学的分析を実施する。創傷治癒の評価は、試験化合物で処置された各創傷が、背側正中線の反対側の同一解剖学的位置の対照創傷と直接比較される、対合様式で実施される。創傷形成に続く最初の５日間、創傷形態学および動物行動を記録する。
【０４１５】
【表１７】
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【０４１６】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製する。試験化合物は、凍結乾燥粉末として提供され、１００％ＤＭＳＯで１５ｍＭの原液濃度に溶解する。注射用水でさらなる希釈を実施して、局所塗布のための３μＭおよび１μＭの最終濃度にする。
【０４１７】
毎日の形態学的評価の一部として、例えばデジタル高解像度カメラＦｉｎｅＰｉｘ  Ｓ７００などを使用して、創傷の写真記録を実施する。創傷状態に加えて、炎症を起こして掻き傷がある皮膚領域を観察する。動物が創傷に到達するのが困難でほぼ不可能であるように、創傷は背側正中線近くの背面に作成されるので、通常は、ひっかき行動は、創傷に損傷を引き起こさず、または創傷治癒過程に干渉しない。
【０４１８】
マウスにおける皮膚治癒に伴うにひっかき行動に対するＰＶＰ／プルロニック（登録商標）Ｆ−６８中の化合物１および水中の化合物１の効果の評価
本明細書に記載されるマウスにおける皮膚創傷試験では、動物の行動もまた観察し、瘢痕除去の試み、不快感の徴候、および創傷領域のひっかき行動を定量化した。マウスで実施した全試験からの異常な行動、および異常なひっかき行動の提示、および疼痛の徴候を分析した。これらの試験では、ＰＶＰ／プルロニック（登録商標）Ｆ−６８中の化合物１、および水中の化合物１、および各ビヒクル対照を使用して、処置を実施した。
【０４１９】
マウスにおける全ての創傷治癒実験中に、創傷近くの領域と、処置された皮膚領域で、創傷治癒に伴う治癒パラメータ、皮膚過敏症徴候、およびその他の皮膚状態のモニタリングを実施する。さらに全ての皮膚治癒モデルの処置段階において、不快感と疼痛の徴候；および創傷と皮膚のひっかきといじりすぎの徴候などの動物行動に、特別な注意を払った。処置化合物の緩和および沈静効果は、それらの創傷をいじりがちな対照動物と比較して、非常に明白であった。
【０４２０】
マウスでは、ＰＶＰ／プルロニック（登録商標）Ｆ−６８中の化合物１または水中の化合物１による治療は、ビヒクル処置マウス（水中のＤＭＳＯ、生理食塩水、ＰＶＰ／プルロニックまたは水）と比較して、創傷のいじりすぎを低下させた。
【０４２１】
マウスでは、創傷のいじりすぎは、通常は痂皮除去と出血、または痂皮に強く付着する創傷床に新たに形成された組織の損傷をもたらした。このような事象の大部分は、ビヒクル処置群で起きた（全実験の約２０〜３０％）。
【０４２２】
皮膚状態および動物行動の概要によると、ＰＶＰ／プルロニック（登録商標）Ｆ−６８中の化合物１または水中の化合物１による創傷処置は、恐らく、損傷し炎症を起こした皮膚に対する、処置化合物のいくらかの緩和および沈静効果のために、マウスにおける創傷のいじりすぎを予防すると結論付け得る。
【０４２３】
マウスにおける皮膚創傷治癒に対する試験化合物用量応答
皮膚創傷治癒に対する試験化合物の効果は、マウス縦方向全層皮膚切開創傷モデルで試験し得る。動物は到着時に、耳標で識別し、秤量して、実験開始前に数日間、環境に順応させる。創傷形成当日にマウスを秤量し、体重差層別無作為化に従って７実験群（Ｎ＝６またはＮ＝７）に分ける。ビヒクル群に水中の０．１％ＤＭＳＯを投与する一方で、陽性対照群は、水性０．６％ｗ／ｖプルロニック（登録商標）Ｆ−６８および０．６％ｗ／ｖ  ＰＶＰＫ−２９／３２で処置する。外科手術に先だって、マウスをイソフルランで麻酔し、動物の背中の被毛を刈る。標準外科用メスの刃を使用して、動物の背中に（背骨に平行に）２０ｍｍの全層縦方向切開を実施する。創傷形成の３時間後、皮膚の弾性と動物の活動のために、切開は楕円形状になる。この段階で、創傷の最も広い領域を測定して、ベースライン創傷幅を確立する。創傷治癒評価は、創傷の最も広い領域の測定によって行う。創傷処置は、投与液（例えば０．２ｍＬ）を創傷に直接（毎日）局所塗布することで実施する。
【０４２４】
【表１８】
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【０４２５】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製する。試験化合物は凍結乾燥粉末として提供され、水中の０．１％ＤＭＳＯで３ｍｇ／ｍＬの貯蔵懸濁液に戻される。貯蔵懸濁液を水中の０．１％ＤＭＳＯでさらに希釈して、最終局所溶液を調製する。対照群の創傷は、水中の０．１％ＤＭＳＯ、または水性０．６％ｗ／ｖプルロニック（登録商標）Ｆ−６８および０．６％ｗ／ｖ  ＰＶＰＫ−２９／３２溶液で局所的に処置される。
【０４２６】
創傷形成８日後の実験終了時に、ＣＯ２吸入によってマウスを殺処分し、創傷の幅を測定し、創傷領域の生検を採取して、組織学的分析に供する。４％パラホルムアルデヒドを使用して、生検を固定する。創傷領域全体の固定化に続いて、創傷の最も幅広い領域の５ｍｍの切開を実施して、これらの標本をパラフィン包埋する。パラフィンブロックは、組織の段階的脱水およびパラフィン包埋の標準手順を使用して調製する。その後、組織学的切片を調製して、組織をヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色で染色する。Ｈ＆Ｅ染色スライドを検査して、創傷治癒有効性の評価を実施する。
【０４２７】
進行した皮膚閉鎖は、エオジン染色された健康な真皮と、創傷間隙に新たに形成された真皮縁の検査によって、８日目に評価する。顕微鏡（ＢＸ４１  ＯｌｙｍｐｕｓまたはＡｘｉｏｖｅｒｔ  ２５、Ｚｅｉｓｓ）の１００倍の視野で、双方の真皮縁が観察された創傷は、進行した皮膚閉鎖治癒パラメータについて陽性と見なされる。進行した皮膚閉鎖がある創傷数を実験群中の全創傷の百分率として提示する。
【０４２８】
進行した表皮閉鎖は、創傷の最も幅広い領域の組織切片を分析することで、Ｈ＆Ｅ染色を使用して８日目に評価される。顕微鏡の４００倍の視野で観察された、創傷間隙全体を覆う表皮連続層の存在を示す創傷、および最も進行した表皮縁の移動がある創傷は、進行した皮膚閉鎖パラメータについて陽性と見なされる。結果は、実験群あたりの総百分率として提示される。
【０４２９】
表皮移動は、Ｈ＆Ｅ染色を使用して、双方の創傷縁で濃縮ヘマトキシリン染色された新たに形成された表皮を分析することで、８日目に評価される。表皮縁は、新たに形成された表皮縁が、創傷間隙の２０〜３０％を被覆する場合に、移動性と見なされる。群中の移動性表皮縁を数え、表皮縁の総数（群中の創傷数の２倍）の百分率として提示する。双方の表皮縁は、完全なまたは進行した表皮閉鎖を示す創傷中で、移動性と見なされる。６２匹のマウスで、合計６２の創傷を作る。
【０４３０】
試験化合物による創傷処置は、表皮過形成や癒着などの創傷治癒合併症を予防する
皮膚創傷治癒に対する試験化合物の効果は、マウス縦方向全層皮膚切開創傷モデルで試験し得る。外科手術に先だって、マウスをイソフルランで麻酔し、動物の背中の毛を刈る。外科用メスの刃を使用して、動物の背中に（背骨に平行に）２０ｍｍの全層縦方向切開を実施する。創傷形成の３時間後、皮膚の弾性と動物の活動のために、切開は楕円形状になる。創傷治癒評価は、創傷の最も広い領域の測定によって行う。例えば０．２ｍＬの試験化合物を毎日直接創傷に局所塗布して、創傷処置を実施する。創傷ケア過程は部分的に湿潤環境であり、毎日の処置後、創傷はしばらく湿潤である。創傷形成８日後の実験終了時、マウスを殺処分して、創傷幅を評価し、創傷領域の生検を採取して、分析に供する。
【０４３１】
【表１９】
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【０４３２】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製する。試験化合物は凍結乾燥粉末として提供され、水中の０．１％ＤＭＳＯで３ｍｇ／ｍＬの貯蔵懸濁液に戻され、引き続いて水中の０．１％ＤＭＳＯで希釈して、局所塗布の使用濃度にする。対照群の創傷は、水中の０．１％ＤＭＳＯ、または水性０．６％ｗ／ｖプルロニック（登録商標）Ｆ−６８および０．６％ｗ／ｖ  ＰＶＰＫ−２９／３２で局所的に処置される。
【０４３３】
創傷形成８日後の処置段階終了時、ＣＯ２吸入によってマウスを殺処分し、創傷領域の生検を採取する。４％パラホルムアルデヒドを使用して、創傷組織の固定化を実施する。創傷領域全体の固定化に続いて、創傷の最も幅広い領域の５ｍｍの切開を実施して、パラフィン包埋する。段階的脱水の標準手順を使用して、パラフィンブロックを調製する。その後、組織学的切片を調製して、組織をヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色する。創傷治癒パラメータを評価してグラフ表示する。
【０４３４】
表皮の過形成は、８日目に評価する。群中の非移動性および過形成表皮縁を数え、表皮縁の総数（群中の創傷数の２倍）の百分率として提示する。過形成表皮縁は、表皮の濃縮ヘマトキシリン染色領域を分析することで、Ｈ＆Ｅ染色を使用して評価する。表皮縁が、健康な皮膚領域の正常な表皮よりも厚いように見えて、このような表皮縁が創傷間隙封鎖に向けた移動を示さない場合、それは過形成で非移動性であると見なされる。
【０４３５】
創傷間隙の癒着は、８日目に評価される。癒着は、創傷間隙における細胞および組織構造の分析によって評価される。創傷癒着は、軽度、中等度または重度の尺度で採点される。創傷間隙に血餅がある場合、または正常肉芽組織が骨格筋または広範なリンパ組織などのその他の組織によって置き換えられている場合、負のスコアと見なされる。創傷間隙領域の４０％以上を占めるいくつかの癒着または異常な顆粒化は、重症と見なされる。接着は、それが顕著でなく、正常皮膚組織再生に干渉しなければ、軽度と見なされる。重度の癒着がある創傷は、実験群あたりの全創傷の百分率として計算し、示されるようにグラフ表示される。３２匹のマウスにおいて、合計３２の創傷（６４の表皮縁）が生成される。
【０４３６】
最重要な創傷治癒合併症の１つは、表皮の過形成である。創傷形成に伴うストレスシグナルに対する応答として、表皮基底層中の細胞増殖が起きて皮膚喪失を代償する。常態では、平穏無事な創傷治癒では、表皮細胞は、増殖後すぐに、創傷間隙の封鎖に向けて移動を開始する。例えば糖尿病性創傷における血糖症によって引き起こされる皮膚合併症などのように、移動が起きない場合、または遅延した場合、表皮性過形成が顕著になり、創傷治癒においてさらなる合併症を引き起こすこともある。この実験で用いられるモデルのような急性解放創では、または術後の創傷などの急性縫合創傷では、表皮縁過形成に伴う表皮治癒の低下が、汚染のリスク、そして創傷裂開、創傷からの流体排出、または創傷からの組織突出などのその他の創傷治癒合併症のリスクを増大させる。
【０４３７】
効果的な創傷治癒過程では、創傷間隙に肉芽組織を生成するために、一次血餅が漸進的変化を受け、それは再構築に続いて、最終的に、機能が完全に回復した新たに形成された皮膚組織になる。創傷間隙で非皮膚関連組織の接着が起きると、肉芽組織が適切に形成せず、その結果、最後の組織再構築が制限される。これは、治癒皮膚の機能にさらなる制限を引き起こすこともある。
【０４３８】
生理食塩水ベースの調合物中の試験化合物による創傷処置は、創傷治癒を改善し、重度の癒着を防止する
皮膚創傷治癒に対する試験化合物の効果は、マウス縦方向全層皮膚切開創傷モデルで試験された。イソフルランで麻酔した７〜８週齢のＣ５７ＢＬオスマウスで、外科手術を実施する。外科手術に先だって、マウスをイソフルランで麻酔して毛を刈る。標準外科用メスの刃を使用して、２０ｍｍの全層縦方向切開を実施する。創傷形成の３時間後、皮膚の弾性と動物の活動のために、切開は楕円形状になる。この段階で、創傷の最も広い領域を測定して、ベースライン創傷幅を確立する。創傷治癒評価は、創傷の最も広い領域の測定によって行う。創傷処置は、０．２ｍＬの溶液を毎日直接創傷に局所塗布して、実施する。毎日の処置後、創傷はしばらく（３〜５時間）湿潤であるので、創傷ケア過程は部分的に湿潤環境で実施される。創傷形成８日後の実験終了時、マウスを殺処分して、創傷幅を評価し、創傷領域の生検を採取して、分析に供する。
【０４３９】
【表２０】
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【０４４０】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製する。試験化合物は凍結乾燥粉末として提供され、生理食塩水で戻して３ｍｇ／ｍＬの貯蔵懸濁液を作成し、引き続いて生理食塩水で希釈して、局所塗布用の３μＭの使用濃度にする。対照群の創傷は、局所的に生理食塩水で処置する。
【０４４１】
創傷形成８日後の処置段階終了時、ＣＯ２吸入によってマウスを殺処分し、創傷領域の生検を採取する。４％パラホルムアルデヒドを使用して、創傷組織の固定化を実施する。創傷領域全体の固定化に続いて、創傷の最も幅広い領域の５ｍｍの切開を実施して、切開領域をパラフィン包埋する。段階的脱水の標準手順を使用して、パラフィンブロックを調製する。その後、組織学的切片を調製して、組織をヘマトキシリンおよびエオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色する。創傷治癒パラメータを評価してグラフ表示する。
【０４４２】
表皮閉鎖は、Ｈ＆Ｅ染色を使用して、創傷の最も幅広い領域で組織切片を分析して評価する。顕微鏡の４００倍の視野で観察された、創傷間隙全体を覆う表皮連続層の存在を示す創傷、および最も進行した表皮端の移動がある創傷は、進行した皮膚閉鎖パラメータについて陽性と見なされる。結果は、実験群あたりの総百分率として提示される。
【０４４３】
皮膚治癒は、エオジン染色された健康な真皮と、創傷間隙に新たに形成された真皮縁の検査によって評価される。顕微鏡（ＢＸ４１  ＯｌｙｍｐｕｓまたはＡｘｉｏｖｅｒｔ  ２５、Ｚｅｉｓｓ）の１００倍の視野で、双方の真皮縁が観察された創傷は、進行した皮膚閉鎖治癒パラメータについて陽性と見なされる。進行した皮膚閉鎖がある創傷数を実験群中の全創傷の百分率として提示する。
【０４４４】
肉芽組織はＨ＆Ｅ染色を使用して評価する。一次フィブリン血栓が、脂肪細胞を含有する線維性結合組織、新しい毛細血管、そしてリンパ系細胞とマクロファージと血漿細胞とを含有する浸潤物で置き換えられると、肉芽組織は初期と見なされる。多数の線維芽細胞とコラーゲン繊維がある組織で置き換えられた初期肉芽組織は、後期と見なされる。全体的には、創傷間隙の後期肉芽組織領域は、全創傷間隙領域の百分率として記録される。創傷間隙の４０％を覆う後期肉芽組織形成を提示する創傷間隙は、このパラメータについて陽性と見なされる。結果は、群あたりの全創傷の百分率として計算される。
【０４４５】
癒着は、創傷間隙における細胞および組織構造の分析によって評価される。創傷癒着は、軽度、中等度または重度の尺度で採点される。創傷間隙に血餅がある場合、または正常肉芽組織が骨格筋または広範なリンパ組織などのその他の組織によって置き換えられている場合、負のスコアと見なされる。創傷間隙領域の４０％以上を占めるいくつかの癒着または異常な顆粒化は、重症と見なされる。接着は、それが顕著でなく、正常皮膚組織再生に干渉しなければ、軽度と見なされる。重度の癒着がある創傷は、実験群あたりの全創傷の百分率として計算される。１９匹のマウスにおいて、１９の創傷（３８の表皮縁）を作成する。
【０４４６】
ブタ皮膚上の創傷治癒後期の治癒過程および瘢痕に対する、試験化合物の局所塗布の効果の評価
縦方向全層切開のブタ創傷モデルで、皮膚創傷治癒後期に対する試験化合物の効果を調べる。外科手術当日、ケタミン、キシラジン、ジアゼパム、およびイソフルランを使用して、ブタを麻酔する。背側胸郭（ｄｏｒｓｕｍ  ｔｈｏｒａｘ）および腹部の被毛を刈って、＃１１外科用メスの刃を使用して、背側正中線の両側から４センチメートルで、１０対の２．５ｃｍ全層縦方向皮膚切開を実施する。外科手術に続いて、創傷を実験群に分けて、創傷中心からあらゆる方向に最大で２ｃｍの距離までの創傷領域近くの皮膚の処置を含めて、創傷領域と創傷縁への局所塗布によって毎日処置する。投与液は、全治療容積（例えば１ｍＬのビヒクルまたは試験化合物）が組織に吸収されるまで、ピペットを使用して、各創傷に少しずつ塗布する。創傷近くの皮膚は、試験化合物またはビヒクル溶液に浸漬したガーゼで処置する。
【０４４７】
実験中、創傷を写真記録して、形態学的分析を実施する。処置段階終了時（創傷形成後１９日目）、麻酔薬およびＫＣｌの投薬によってブタを殺処分する。創傷の形態学を検査し、創傷を写真記録して、固定化とさらなる形態学的および組織学的分析のために創傷領域の生検を採取する。
【０４４８】
【表２１】
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【０４４９】
投与液は、毎投薬日に、新鮮に調製する。試験化合物は、凍結乾燥粉末として提供され、１００％ＤＭＳＯで溶解して、１５ｍＭの原液濃度に調製される。引き続いて、注射用水でさらなる希釈を実施して、局所塗布のための３μＭおよび１μＭの最終濃度にする。
【０４５０】
処置段階終了時（創傷形成後１９日目）に、創傷治癒の評価を実施する。完全に治癒した創傷は、群あたりの全創傷の百分率として報告される。完全に治癒して、完全な痂皮剥離を示す創傷中の瘢痕の平均幅もまた報告される。瘢痕を測定し（ｍｍ）、瘢痕の平均幅と標準偏差を計算した。合計２０の創傷を実施した。
【０４５１】
処置段階終了時（創傷形成後１９日目）に、麻酔薬およびＫＣｌの過量供給によってブタを殺処分し、創傷領域の生検を採取する。４％パラホルムアルデヒドを使用して、創傷生検の固定化を実施する。固定化に続いて、例えばデジタルカメラＦｉｎｅＰｉｘ  Ｓ７００を使用して、最大解像度で創傷生検を写真記録する。
【０４５２】
参考文献
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Ｃａｉ  Ｘ  ａｎｄ  Ｌｉｕ  Ｘ．２００８．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｈｒ−５５  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｐ５３  ｎｕｃｌｅａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ．ＰＮＡＳ．１０５：１６９５８−１６９６３．
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Ｇｈｉｌｄｙａｌ  Ｒ，Ｈｏ  Ａ，Ｄｉａｓ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ  ２００９  Ｔｈｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｃｙｔｉａｌ  ｖｉｒｕｓ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ  ａ  Ｃｒｍ１−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８３（１１）：５３５３−６２．
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Ｍｕｔｋａ  Ｓ  ２００７  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｅｘｐｏｒｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（ＮＥＩｓ）ａｓ  ｎｏｖｅｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ．Ｐｏｓｔｅｒ  ５６０９．
Ｍｕｔｋａ  Ｓ，Ｙａｎｇ  Ｗ，Ｄｏｎｇ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．２００９．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６９：５１０−７．
Ｎａｋａｈａｒａ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．２００９．Ａｂｎｏｒｍａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＴＩＰ３０  ａｎｄ  ａｒｒｅｓｔｅｄ  ｎｕｃｌｅｏｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｗｉｔｈｉｎ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１１９：１６９−１８１．
Ｎｏｓｋｅ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．２００８．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｒｅｇｉｏｎ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ／ｅｘｐｏｒｔｉｎ  １／Ｘｐｏ１  ｉｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ．１１２：１７３３−１７４３．
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Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｖ，Ｍａｈｒ  Ｊ，Ｏｒａｚｉｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ  ２００７  Ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｔｅｇｕｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｐ６５  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｃｒｍ１  ｅｘｐｏｒｔｅｒ．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８１（２１）：１１７３０−６．
Ｓｏｒｏｋｉｎ  ＡＶ  ｅｔ  ａｌ．２００７．Ｎｕｃｌｅｏｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７２：１４３９−１４５７．
Ｔｅｒｒｙ  ＬＪ  ｅｔ  ａｌ．２００７．Ｃｒｏｓｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ：ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｏｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１８：１４１２−１４１６．
Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗａｔｔ  ＰＪ  ｅｔ  ａｌ．２００８．Ｔｈｅ  Ｋａｒｙｏｐｈｅｒｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｃｒｍ１  ａｎｄ  Ｋａｒｙｏｐｈｅｒｉｎ  ｂｅｔａ１，ａｒｅ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ａｒｅ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃ．１２４：１８２９−１８４０．
Ｗａｌｓｈ  ＭＤ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｅｘｐｏｒｔｉｎ  １  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｓｈｏｃｋ  ２９：１６０−１６６．
Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｐ，Ｖｅｒｈａｇｅｎ  Ｊ，Ｅｌｌｉｏｔｔ  Ｇ  ２００８  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ＣＲＭ１−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｓｉｇｎａｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃ  ｔｅｒｍｉｎｕｓ  ｏｆ  ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｔｅｇｕｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＵＬ４７．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８２（２１）：１０９４６−５２．
Ｙａｎｇ  Ｗ  ２００７  Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ（ＮＥＩｓ）ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｍｏｄｅｌｓ．ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ．Ｐｏｓｔｅｒ  ５５９７．
Ｙａｏ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．２００９．Ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＲＭ１  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ．Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．２１：２２９−３５．
Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ＴＬ  ｅｔ  ａｌ  ２００６  Ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  Ｘ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ｂｅｔａ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  ＪＮＫ  ａｎｄ  ＳＥＲ２６０．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２８１：１５４３４−１５４４０．
【０４５３】
本明細書に引用された、全ての特許、公開出願、および参考文献の教示は、その内容全体を参照によって援用する。
【０４５４】
その実施形態例に言及して、本発明を具体的に示して説明した一方で、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を逸脱することなく、形態および詳細に様々な変更を加えてもよいことが、当業者には理解されるであろう。
【図１】
2020037585.tif 000050
【図２】
2020037585.tif 000051
【図３Ａ】
2020037585.tif 000052
【図３Ｂ】
2020037585.tif 000053
【図４Ａ】
2020037585.tif 000054
【図４Ｂ】
2020037585.tif 000055
【図５】
2020037585.tif 000056
【図６Ａ】
2020037585.tif 000057
【図６Ｂ】
2020037585.tif 000058
【図６Ｃ】
2020037585.tif 000059
【図６Ｄ】
2020037585.tif 000060
【図７Ａ】
2020037585.tif 000061
【図７Ｂ】
2020037585.tif 000062
【図８Ａ】
2020037585.tif 000063
【図８Ｂ】
2020037585.tif 000064
【図９】
2020037585.tif 000065
【図１０Ａ】
2020037585.tif 000066
【図１０Ｂ】
2020037585.tif 000067
【図１１】
2020037585.tif 000068
【図１２Ａ−Ｂ】
2020037585.tif 000069
【図１２Ｃ】
2020037585.tif 000070
【図１３Ａ−Ｂ】
2020037585.tif 000071
【図１４Ａ】
2020037585.tif 000072
【図１４Ｂ】
2020037585.tif 000073
【図１５Ａ】
2020037585.tif 000074
【図１５Ｂ】
2020037585.tif 000075
【図１５Ｃ】
2020037585.tif 000076
【図１５Ｄ】
2020037585.tif 000077
【図１５Ｅ】
2020037585.tif 000078
【図１６Ａ】
2020037585.tif 000079
【図１６Ｂ】
2020037585.tif 000080
【図１７Ａ】
2020037585.tif 000081
【図１７Ｂ】
2020037585.tif 000082
【図１７Ｃ−Ｆ】
2020037585.tif 000083
【図１７Ｇ】
2020037585.tif 000084
【図１８Ａ】
2020037585.tif 000085
【図１８Ｂ】
2020037585.tif 000086
【図１９】
2020037585.tif 000087