(57)【要約】      （修正有）【課題】酸化に安定なペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩を含む製剤の製造方法を提供する。【解決手段】ペメトレキセドのように酸化による分解が簡単に起こる薬物を含む組成物の製造において、製造工程上で酸素を除去して安定性を高めた組成物およびその製造方法。前記製造方法は、密閉されたチャンバー内で凍結および脱気して製造の容易性を高めた製造方法であり、酸化に不安定な薬物の安定性を画期的に高めた組成物である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を凍結して凍結物を得る段階；および
（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階を含む、薬学組成物の製造方法。
【請求項２】
前記脱気された凍結物は、前記段階（ａ）の溶液に含有されている溶媒１００重量を基準に９５重量部〜１００重量部の溶媒を含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記段階（ｂ）で溶存酸素濃度１．５ｐｐｍ以下に脱気する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
前記段階（ｂ）の脱気段階は、１２時間以内に行われる、請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
前記段階（ａ）〜（ｂ）は、密閉されたチャンバー内で行われる、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
前記段階（ａ）の溶液は、脱気処理されていない溶液である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項７】
前記溶液は、薬学的に許容可能な賦形剤およびｐＨ調節剤からなる群より選択される１種以上を追加的に含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項８】
前記賦形剤は、マンニトールであるか、前記ｐＨ調節剤は、塩酸、水酸化ナトリウムまたはこれらの混合物である、請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記溶液は、抗酸化剤を追加的に含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記抗酸化剤は、モノチオグリセロール、硫化ナトリウム、アセチルシステイン、またはこれらの混合物である、請求項９に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記段階（ａ）で−２０℃以下に凍結する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記段階（ｂ）で真空減圧条件は、２，０００ｍＴｏｒｒ以下の条件である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記段階（ｂ）を行った後に、密封するか、窒素で充填した後に密封する段階を追加的に含む、 請求項１〜１２のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１４】
前記段階（ｂ）を行った後に、脱気された凍結物を解凍する段階を追加的に含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１５】
密封する段階を行った後に、脱気された凍結物を解凍する段階を追加的に含む、請求項１３に記載の製造方法。
【請求項１６】
ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含み、凍結および脱気されたことを特徴とする、薬学組成物。
【請求項１７】
凍結および脱気前に含有されている溶媒１００重量を基準に９５重量部〜１００重量部の溶媒を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
溶存酸素濃度１．５ｐｐｍ以下である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
薬学的に許容可能な賦形剤およびｐＨ調節剤からなる群より選択される１種以上を追加的に含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
前記賦形剤は、マンニトールであるか、前記ｐＨ調節剤は、塩酸、水酸化ナトリウムまたはこれらの混合物である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
抗酸化剤を追加的に含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２２】
前記抗酸化剤は、モノチオグリセロール、硫化ナトリウム、アセチルシステイン、またはこれらの混合物である、請求項に２１に記載の組成物。
【請求項２３】
解凍されたものである、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
液状非経口製剤として用いるためのものである、請求項２３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩を含む安定性が向上した薬学組成物およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペメトレキセド二ナトリウム塩は、新たな多重標的抗葉酸剤であり、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、悪性胸膜中皮腫（ｍｅｔｈｏｔｈｅｌｉｏｍａ）および乳癌、大腸癌、子宮癌、頭頸部癌および膀胱癌を含む広範囲な固形癌に優れた抗癌活性を有している。アリムタ（Ａｌｉｍｔａ：登録商標）は、臨床に使用されているペメトレキセド凍結乾燥剤型注射剤として、国内では化学療法を受けたことのない手術不可能な悪性胸膜中皮腫患者にシスプラチンと併用して使用したり、以前の化学療法実施後、局所進行性乳癌と非小細胞肺癌の単独療法剤として２００７年に発売されて使用されている。
【０００３】
現在使用されている大部分の凍結乾燥剤型の注射剤は、水溶液状で薬物の不安定性により凍結乾燥粉末の形態で製造し、これを患者に投薬する前に生理食塩水や注射用水などで再構成して使用している。しかし、このような再構成過程は、必要な量を測量して凍結乾燥剤バイアルに投入しなければならない煩わしさがあり、再構成過程で微生物汚染の危険があり、再構成後の一定時間内に使用しなければならない制限もある。そして、このような凍結乾燥剤型は、凍結乾燥過程で長い乾燥サイクルにより多くの時間が消費されて、生産費用が高まり、製造工程も複雑な問題点がある。そこで、製造時の経済性の面や使用者の便宜性などを考慮してみる時、安定性が確保された即時使用可能な（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）液状組成物の必要性が台頭してきた。
【０００４】
しかし、ペメトレキセドは、水溶液内で速い酸化を起こして様々な類縁物質を生成する代表的な薬物である。液状で薬物の不安定性により、薬物の安定性を高める方法として代表的なものが抗酸化剤を添加したり溶存酸素を除去する方法である。抗酸化剤を使用する方法としては、国際特許公開第ＷＯ２００１／５６５７５号でペメトレキセドをモノチオグリセロール、Ｌ−システインまたはチオグリコール酸の抗酸化剤と共に製剤化した液状製剤を開示している。大韓民国登録特許第１０−１２６０６３６号では、ペメトレキセドに抗酸化剤としてアセチルシステイン、緩衝剤としてクエン酸を使用して安定性を高めた製剤を開示している。国際特許公開第ＷＯ２０１２／１２１５２３号では、抗酸化剤を使用せずに注射溶液中の溶存酸素の濃度を１ｐｐｍ以下に調節して安定性を高める製造工程について開示している。しかし、前記文献に開示された製造工程は、実験室内における小規模生産は可能であるが、大規模の商業用生産には多くの工程の困難さがある。特に大規模生産時、注射用水や水溶液を真空脱気した後、ガラスバイアルに分注する場合、脱気状態を維持するのに相当な困難さがある短所がある。前記文献は、抗酸化剤などの安定化剤を使用せずに酸化を防止して安定性を高めることができる工程であるが、これを商業生産が可能な工程へ連結させることは容易なことではなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際特許公開第ＷＯ２００１／５６５７５号
【特許文献２】大韓民国登録特許第１０−１２６０６３６号
【特許文献３】国際特許公開第ＷＯ２０１２／１２１５２３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、前記問題点などを考慮して密閉されたチャンバー内ですべての工程を進行することができるため、大規模の商業生産が可能な、水溶液状態で安定した薬学組成物およびその製造方法を提供することを目的とする。
【０００７】
また本発明は、酸素を除去して安定性を高めた薬学組成物およびその製造方法を提供することを目的とする。
【０００８】
本発明のまた他の目的は、脱気した水溶液で密閉されたシステムで組成物を製造する煩わしさの代わりに、密閉されたチャンバー内で凍結および脱気して工程を簡単に行うことによって、酸化に不安定な薬物の安定性確保と共に大規模生産が可能な、ペメトレキセド含有薬学組成物およびその製造方法を提供することである。
【０００９】
本発明のまた他の目的は、抗酸化剤添加と共に前記凍結および脱気工程を行い、安定性はもちろん、色の変化まで遮断した、室温保管の可能な水溶液状態の薬学組成物およびその製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記のような課題を解決するための一つの実施形態として、本発明は、（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を凍結して凍結物を得る段階；および（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階を含む、薬学組成物の製造方法に関するものである。
【００１１】
本発明の他の実施形態は、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含み、凍結および脱気されたことを特徴とする、薬学組成物に関するものである。
【００１２】
前記段階（ａ）の溶液は、脱気処理されていない溶液であってもよく、段階（ａ）で−２０℃以下に凍結されてもよい。
【００１３】
前記段階（ａ）の溶液または薬学組成物は、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩をペメトレキセドとして５〜１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは２０〜３０ｍｇ／ｍｌ含んでもよい。
【００１４】
前記段階（ａ）の溶液または薬学組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤およびｐＨ調節剤からなる群より選択される１種以上を追加的に含んでもよく、例えば前記賦形剤は、マンニトールであるか、前記ｐＨ調節剤は、塩酸、水酸化ナトリウムまたはこれらの混合物であってもよい。前記賦形剤は、溶液または組成物の総重量に対して０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％、より好ましくは２〜３重量％用いることができ、前記ｐＨ調節剤は、溶液または組成物のｐＨを６〜８、好ましくは６．５〜８．０、より好ましくは６．６〜７．８、さらに好ましくは７．０〜７．５範囲に調節する量で用いてもよい。
【００１５】
前記段階（ａ）の溶液または薬学組成物は、抗酸化剤を追加的に含んでもよい。抗酸化剤としては、当業界で使用される通常のものを用いることができ、例えば、モノチオグリセロール、Ｌ−システイン、チオグリコール酸、アスコルビン酸、チオ硫酸ナトリウム、ブチル化ヒドロキシアニソール、プロピルガレート、ＥＤＴＡ、Ｌ−メチオニン、Ｌ−シスチン、亜硫酸ナトリウム、硫化ナトリウム、ＥＤＴＡ二ナトリウム、クエン酸、リポ酸、ジヒドロリポ酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタチオン、Ｌ−トリプトファン、またはこれらの混合物などを用いることができ、好ましくは、モノチオグリセロール、硫化ナトリウム、アセチルシステイン、またはこれらの混合物、より好ましくは、モノチオグリセロールを用いることができる。前記抗酸化剤は０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．１〜５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１〜３ｍｇ／ｍｌの濃度で用いることができる。
【００１６】
本発明では前記段階（ｂ）でペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液が凍結された凍結物を脱気することを一特徴とする。前記脱気された凍結物は、段階（ａ）の溶液に含有されている溶媒１００重量を基準に９５重量部〜１００重量部の溶媒を含むものであってもよく、前記段階（ｂ）で溶存酸素濃度１．５ｐｐｍ以下に脱気するものであってもよい。
【００１７】
好ましくは、前記凍結および脱気、選択的に密封する段階は、密閉されたチャンバー内で行われてもよく、前記段階（ｂ）を行った後に、または密封する段階を行った後に脱気された凍結物を解凍する段階を追加的に含むことができる。前記段階（ｂ）で真空減圧条件は２，０００ｍＴｏｒｒ以下の条件であってもよい。
【００１８】
本発明の一実施形態は、（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を凍結して凍結物を得る段階；および（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階を含む、薬学組成物の溶存酸素濃度を減少させる方法に関するものである。
【００１９】
本発明のまた他の実施形態は、（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を凍結して凍結物を得る段階；および（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階を含む、薬学組成物を安定化させる方法に関するものである。
【００２０】
本発明の好ましい実施形態は、密閉されたチャンバー内で（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を凍結して凍結物を得る段階および（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階；または（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を凍結して凍結物を得る段階、（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階および（ｃ）密封する段階を含む、水溶液状で溶存酸素を除去して酸化に弱い薬物の安定性を高める方法に関するものである。
【００２１】
本発明の他の実施形態で、段階（ａ）の溶液は、抗酸化剤を追加的に含むものであってもよい。通常の抗酸化剤を用いることができ、その例は前述したとおりである。
【００２２】
本発明は水溶液状で溶存酸素を除去して酸化に弱い薬物の安定性を高める方法であって、全ての工程が密閉されたチャンバー内で連続的に行われるため、汚染なく無菌空間で簡便に行われ得る工程であり、他の脱気方法より時間や便宜性、収率の面でも遥かに効果的である。
【００２３】
ひいては、本発明は、凍結および脱気と共に抗酸化剤を用い、安定性はもちろん、色の変化まで遮断した、室温保管の可能な水溶液状薬学組成物を効率的に製造することができる。
【発明の効果】
【００２４】
本発明による製造方法は、好ましくは密閉されたチャンバー内で凍結、脱気および密封工程が連続的に行われるため、大規模商業生産に適し、汚染なく無菌空間で簡便に行われ得る工程であって、他の脱気方法よりも時間や便宜性、収率の面でも顕著に効果的な工程である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明をより詳細に説明する。
本発明の一実施形態は、（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を凍結して凍結物を得る段階；および（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階を含む、安定性に優れた薬学組成物を大規模に商業生産することができる方法に関する。
【００２６】
本発明の追加の実施形態は、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含み、凍結および脱気されたことを特徴とする、薬学組成物を提供する。本発明による薬学組成物は、解凍されてもよく、液状非経口製剤、特に液状注射剤として用いられてもよい。
【００２７】
前記段階（ａ）で、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩と水性溶媒を含む溶液を製造し、これを凍結して凍結物を得ることができる。また、凍結前に前記溶液を充填容器に分注する段階を行うこともできる。本発明の製造方法では、前記段階（ａ）の溶液をアンプルまたはバイアルのような容器に分注した後に密閉されたチャンバー内で凍結、脱気および密封工程を順次に行うことができるため、大規模の生産時に脱気状態を維持するに有利であるという長所がある。
【００２８】
本発明において、「ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）」は、５−置換ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン化合物であって、具体的に下記の化学式１で表され、非小細胞肺癌、悪性胸膜中皮腫をはじめ多様な癌種で抗癌効能を示す多重標的抗葉酸剤を意味する。
［化学式１］
2020097570.tif 000002
【００２９】
本発明において、「薬学的に許容可能な塩」は、当該技術分野における通常の方法により製造された塩を意味する。具体的に、前記薬学的に許容可能な塩は、薬学的に許容される無機酸と有機酸および塩基から誘導された塩を含むが、これに限定されない。適した酸の例としては、塩酸、臭素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、ラクト酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などを含むことができる。適した塩基の例としては、アルカリ金属、例えば、ナトリウム、またはカリウム、アルカリ土類金属、例えば、マグネシウムを含むことができるが、これに制限されない。特に、ペメトレキセドの薬学的に許容可能な塩は、ペメトレキセド二ナトリウム塩であってもよいが、これに制限されない。
【００３０】
本発明において、「ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩」は、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩の水和物を含む概念であって、すべての形態の水和物、例えば２．５水和物、７水和物などを含むが、これらに制限されない。
【００３１】
前記水性溶媒は、水または緩衝溶液であってもよく、好ましくは注射用水または生理食塩水であってもよい。
【００３２】
本発明による薬学組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤およびｐＨ調節剤からなる群より選択される１種以上を追加的に含むことができ、例えば、前記賦形剤は、マンニトールであり／であるか、前記ｐＨ調節剤は、塩酸、水酸化ナトリウムまたはこれらの混合物であってもよい。前記賦形剤およびｐＨ調節剤は、段階（ａ）の溶液に追加されてもよい。
【００３３】
本発明による薬学組成物は、抗酸化剤を追加的に含むものであってもよい。抗酸化剤としては、当業界で使用される通常のものを用いることができ、例えばモノチオグリセロール、Ｌ−システイン、チオグリコール酸、アスコルビン酸、チオ硫酸ナトリウム、ブチル化ヒドロキシアニソール、プロピルガレート、ＥＤＴＡ、Ｌ−メチオニン、Ｌ−シスチン、亜硫酸ナトリウム、硫化ナトリウム、ＥＤＴＡ２ナトリウム、クエン酸、リポ酸、ジヒドロリポ酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタチオン、Ｌ−トリプトファン、またはこれらの混合物などを用いることができ、好ましくは、モノチオグリセロール、硫化ナトリウム、アセチルシステイン、またはこれらの混合物、より好ましくは、モノチオグリセロールを用いることができる。前記抗酸化剤は、段階（ａ）の溶液に追加されてもよい。前記抗酸化剤は、０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．１〜５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１〜３ｍｇ／ｍｌの濃度で用いることができる。例えば、モノチオグリセロールは、０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．１超過〜５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは０．２〜３ｍｇ／ｍｌ、例えば０．２４〜３ｍｇ／ｍｌ、例えば１〜３ｍｇ／ｍｌの濃度で用いることができる。
【００３４】
前記段階（ａ）の溶液または溶媒は、脱気処理されていないものであってもよい。従来は液状製剤の溶存酸素濃度を調節するために、水性溶媒それ自体または水性溶媒に薬物を溶解した溶液に対して溶存酸素濃度を調節するための段階を行う必要があるが、本発明は凍結後に脱気処理を行うため、その前段階で水性溶媒または薬物を含む溶液に対して脱気処理または溶存酸素の濃度を調節するための処理が必要でない。したがって、本発明によれば、安定性の高い液状製剤を容易に簡単に製造することができる。
【００３５】
前記段階（ａ）で前記溶液の凍結は−２０℃以下、好ましくは−３０℃以下、例えば−２０℃〜−５０℃、特に−３０℃〜−５０℃、より特に−４０℃の温度で凍結することができる。凍結方法は通常の液状製剤の凍結方法を適用することができる。
【００３６】
前記段階（ｂ）で脱気された凍結物は、段階（ａ）の溶液に含有されている溶媒１００重量を基準に９５重量部〜１００重量部、またはより好ましくは９８重量部〜１００重量部の溶媒を含むものであってもよく、凍結物の脱気後に溶媒含有量が大部分そのまま維持され解凍する場合に液状の組成物が得られ、したがって、再構成などを行う必要なく直ちに用いることができるという利点がある。従来の凍結乾燥された粉末型製剤とは異なり、本発明の方法により得られた薬学組成物は、段階（ｂ）で溶媒を除去する乾燥工程でなく、溶存酸素の含有量を減少させる脱気工程を行うことによって、酸素に不安定な薬物であるペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩の安定性を確保することができる。
【００３７】
前記段階（ｂ）で得られた脱気された凍結物または以降に解凍された組成物の溶存酸素濃度は１．５ｐｐｍ以下であってもよい。脱気工程を行って、組成物中に含有されている溶存酸素の含有量を減少させ、酸素に不安定な薬物であるペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩の安定性を確保することができる。
【００３８】
本発明のまた他の一例で、前記薬学組成物の製造方法は、凍結および脱気工程、好ましくは密封工程を密閉チャンバー内で行うことができる。具体的に、−２０℃以下の温度で前記段階（ａ）の溶液を凍結させた後、真空減圧して凍結状態の組成物から酸素を除去し、これを直ちに密封することによって一つのチャンバー内で一体の工程で凍結、脱気および密封をすべて行うことができる。
【００３９】
本発明の一例で、前記段階（ａ）の凍結および段階（ｂ）脱気工程以降および密封工程前に、組成物が充填された容器に窒素を充填する工程を追加的に含むことができる。充填容器の上部空間に真空でできた陰圧により大気中の空気が逆流する可能性を完全に排除するために、脱気工程後、密封工程前に、組成物が充填された容器に窒素を充填して陰圧を減らすことによってかかる危険性を大幅減少させることができる。具体的に、脱気後にゴムキャップで密封する前に窒素を充填して真空解除する工程を含む。脱気後に密封し、真空を解除しても溶存酸素を十分に除去するが、バイアル内に陰圧がかかっており、微細な孔にも空気が簡単に投入される可能性があるため、密封前に窒素を充填してバイアル内の陰圧を相当部分低めることによってかかる危険性を減らすことができる。
【００４０】
一般に溶液状態で真空減圧をすると蒸気圧により直ちに水分が沸いてあふれる現象が起こるが、密閉されたチャンバー内で溶液状態の薬学組成物を凍結および脱気する場合、組成物の成分および含有量損失なく真空減圧で水溶液より氷点の低い気体が除去可能である。本明細書で、「脱気」という用語は、固体または液体中に含まれている気体分子を除去することである。この気体分子を除去する基本原理は、ヘンリーの法則とダルタンの分圧の法則が適用される。ヘンリーの法則は、溶液中の溶存気体の量はその液体と接している気体の圧力に比例するということであり、液体と接する気体の圧力を低め、つまり、真空にして液体中の気体分子が排出されるようにするのが基本原理である。
【００４１】
他の方法としては、液体の温度により気体の溶存飽和度が変わることを利用して液体を加熱する方法がある。この方法は、液体を加熱するためのエネルギー消費の問題があり、また熱に弱い薬物や賦形剤の変性や濃度の変化などにより医薬品への適用には適した方法とはいえない。その他、膜脱気や触媒樹脂脱気などの方法があるが、生産工程が複雑で適用するには困難な部分が多くある。本発明では真空減圧脱気工程を通じて水溶液内に存在する酸素の濃度を顕著に低めることによって酸化反応を遮断することができる。
【００４２】
前記段階（ｂ）の脱気工程は、２，０００ｍＴｏｒｒ以下の圧力、好ましくは１，０００ｍＴｏｒｒ以下、より好ましくは５００ｍＴｏｒｒ以下、例えば３００ｍＴｏｒｒ以下の圧力で行うことができる。前記圧力は、０ｍＴｏｒｒ以上、例えば５ｍＴｏｒｒ以上、例えば１００ｍＴｏｒｒ以上であってもよい。例えば、脱気工程は、０〜２，０００ｍＴｏｒｒ、特に５〜１，０００ｍＴｏｒｒ、より特に１００〜５００ｍＴｏｒｒの圧力で行われてもよい。前記脱気工程は、目的とする真空度を達成した後に所定の時間真空度を維持し、凍結物に含有されている酸素または酸素を含む気体を除去することができる。
【００４３】
本発明が一般的な凍結乾燥工程と異なる点は、凍結後、真空減圧後に所望の真空度に到達すれば乾燥が起こる前に真空を解除しなければならない点である。これは乾燥が進行されるほど溶媒の減少による有効成分などの濃度増加が起こることがあるためである。乾燥を未然に防止するためには、目的とする減圧条件に到達した後に、真空度を好ましくは１２時間以内、より好ましくは１０時間以内、さらに好ましくは６時間以内に維持する。例えば、目的とする減圧条件に到達した後に直ちに（０時間に）密封および／または真空解除工程を行うことができる。
【００４４】
本発明の脱気された凍結物または解凍された溶液に含有されている溶媒の場合、凍結および脱気前に溶液に含有されている溶媒１００重量を基準に全く乾燥なしに１００重量部がそのまま残っていることが理想的であるが、好ましくは９５重量部〜１００重量部の溶媒を含むことができ、より好ましくは９８重量部〜１００重量部の溶媒を含むことができる。
【００４５】
また本発明では、密封後に解凍する工程において密閉されたチャンバー内で温度を上げながら解凍してもよく、密閉されたチャンバー内で取り出した後に解凍してもよい。過度に低い温度でバイアルを取り出せば、バイアル表面の湿気によりアルミニウムキャッピングの際に不便さを招くことがあるため、これは注意しなければならない。
【００４６】
ひいては、前記段階以降に凍結および脱気された前記薬学組成物を通常の方法、例えば滅菌濾過および／または加熱滅菌などの方法により滅菌処理することもできる。また本発明の段階（ａ）の水性溶媒、または溶液を通常の方法、例えば滅菌濾過および／または加熱滅菌などの方法により滅菌処理を行うこともできる。
【００４７】
以上のような本発明による方法により製造されたペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩および水性溶媒を含む薬学組成物は、凍結および脱気されたことを特徴とし、向上した安定性を示す。
【００４８】
［実施例］
以下、本発明を実施例を通じてより詳しく説明するが、これらは本発明を説明するためのものであり、本発明の範疇がこれらによって制限されるのではない。
【００４９】
［実施例１〜５］真空度による液状製剤の製造
（１）バイアルに充填された混合溶液
注射用水１５００ｍｌにペメトレキセド二ナトリウム２．５水和物４８．３ｇ（ペメトレキセドで含有量基準４０ｇ）を完全に溶かし、ここにマンニトール４０ｇを入れて完全に溶解した。前記溶液に０．１ＮのＨＣｌを加えてｐＨを７．３に合わせ、注射用水を加えて混合溶液の総重量を１，６００ｇに調節した。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は、約７．０ｐｐｍであった。前記製造した混合溶液を滅菌フィルターを利用して濾過し、クリーンベンチで５ｍｌバイアルに４ｍｌずつ充填し、ゴムキャップで密封して、前記バイアルに充填された混合溶液を得た。
【００５０】
（２）凍結および脱気
前記製造した溶液が盛られたガラスバイアルをゴムキャップを若干開いた状態で密閉されたチャンバーに入れて−４０℃で１時間凍結させた。完全に溶液が凍結したことを確認し、−４０℃に維持しながら密閉されたチャンバーの真空ポンプを作動させて真空減圧を始めた。下記表１のように真空度を調節し、所望の真空度まで下がると即時真空ポンプの作動を中止し、ゴムキャップで密封した。密封状態を確認した後、真空を解除し、ガラスバイアルを密閉されたチャンバーで取り出した後、解凍しアルミニウムキャップでキャッピングした。凍結および脱気を行って得る製剤の溶存酸素濃度を下記表１に示した。
【００５１】
溶存酸素の測定は、ＹＳＩ  ５５０Ａ溶存酸素測定器を使用して窒素で充填されているグローブボックス内で攪拌しながら測定した。前記解凍溶液の特性を表１に示した。
【表１】
2020097570.tif 000003
【００５２】
［実施例６］凍結および脱気後に窒素充填した液状製剤の製造
前記実施例１と同様な方法でバイアルに充填された混合溶液を得た。前記製造した溶液が盛られたガラスバイアルをゴムキャップを若干開いた状態で密閉されたチャンバーに入れて−４０℃で１時間凍結させた。完全に溶液が凍結したことを確認し、−４０℃に維持しながら密閉されたチャンバーの真空ポンプを作動させて真空減圧を始めた。真空度が３００ｍＴｏｒｒまで下がると、即時真空ポンプの作動を中止し、窒素を充填した後、ゴムキャップで密封した。密封状態を確認した後、真空が解除されるとガラスバイアルを密閉されたチャンバーで取り出した後、解凍しアルミニウムキャップでキャッピングした。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は、約０．５ｐｐｍであった。
【００５３】
[実施例７〜９]抗酸化剤添加および凍結脱気した液状製剤の製造
注射用数１５００ｍｌにペメトレキセド二ナトリウム２．５水和物４８．３ｇ（ペメトレキセドで含有量基準４０ｇ）を完全に溶かし、ここにマンニトール４０ｇを入れて完全に溶解した。ここに表２でのように抗酸化剤を添加し、前記溶液に０．１ＮのＨＣｌまたは０．１〜１ＮのＮａＯＨを加えてｐＨを７．３に合わせ、注射用数を加えて混合溶液の総重量を１，６００ｇに調節した。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は約７．０ｐｐｍであった。前記製造した混合溶液を滅菌フィルターを利用して濾過し、クリーンベンチで５ｍｌバイアルに４ｍｌずつ充填し、ゴムキャップで密封して、前記バイアルに充填された混合溶液を得た。前記製造した溶液が盛られたガラスバイアルをゴムキャップを若干開いた状態で密閉されたチャンバーに入れ、−４０℃で１時間以上十分に凍結させた。完全に溶液が凍結したことを確認し、−４０℃で維持しながら密閉されたチャンバーの真空ポンプを作動させて真空減圧を始めた。真空度が２００ｍＴｏｒｒまで下がると即時真空ポンプの作動を中止し、ゴムキャップで密封した。密封状態を確認した後、ガラスバイアルを密閉されたチャンバーで取り出した後、解凍しアルミニウムキャップでキャッピングした。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は約０．５ｐｐｍであった。
【表２】
2020097570.tif 000004
【００５４】
[実施例１０〜１５]抗酸化剤濃度の影響およびスケールアップの影響をみるための凍結脱気した液状製剤の製造
注射用数７５００ｍｌにペメトレキセド二ナトリウム２．５水和物２４１．５ｇ（ペメトレキセドで含有量基準２００ｇ）を完全に溶かし、ここにマンニトール２００ｇを入れて完全に溶解した。ここに表３でのように抗酸化剤の濃度を異なるように添加し、前記溶液に０．１ＮのＨＣｌまたは０．１〜１ＮのＮａＯＨを加えてｐＨを７．３に合わせ、注射用数を加えて混合溶液の総重量を８，０００ｇに調節した。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は約７．０ｐｐｍであった。前記製造した混合溶液を滅菌フィルターを利用して濾過し、クリーンベンチで５０ｍｌバイアルに４０ｍｌずつ充填し、ゴムキャップで密封して、前記バイアルに充填された混合溶液を得た。前記製造した溶液が盛られたガラスバイアルをゴムキャップを若干開いた状態で密閉されたチャンバーに入れ、−４０℃で３時間以上十分に凍結させた。完全に溶液が凍結したことを確認し、−４０℃に維持しながら密閉されたチャンバーの真空ポンプを作動させて真空減圧を始める。真空度が２００ｍＴｏｒｒまで下がると即時真空ポンプの作動を中止し、ゴムキャップで密封した。密封状態を確認した後、ガラスバイアルを密閉されたチャンバーで取り出した後、解凍しアルミニウムキャップでキャッピングした。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は約０．５ｐｐｍであった。
【表３】
2020097570.tif 000005
【００５５】
［比較例１］凍結および脱気していない液状製剤の製造
前記実施例１と同様な方法でバイアルに充填された混合溶液を得た。前記バイアルをアルミニウムキャップでキャッピングした。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は、約７．０ｐｐｍであった。
【００５６】
［比較例２］凍結および脱気せずに窒素充填した液状製剤の製造
前記実施例１と同様な方法でバイアルに充填された混合溶液を得た。前記バイアルに窒素を充填した後、ゴムキャップで密封し、アルミニウムキャップでキャッピングした。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は、約７．０ｐｐｍであった。
【００５７】
［比較例３〜５］抗酸化剤を添加し、凍結および脱気していない液状製剤の製造
前記実施例７〜９と同様な方法でバイアルに充填された混合溶液を得た。前記バイアルをゴムキャップで密封し、アルミニウムキャップでキャッピングした。前記得られた溶液の溶存酸素濃度は約７．０ｐｐｍであった。
【００５８】
［実験例１］加速安定性の試験
前記実施例１〜６および７〜９と比較例１〜２および比較例３〜５で製造した組成物に対して加速条件（４０℃／ＲＨ７５％）で安定性評価を行った。安定性評価は、水溶液の性状およびｐＨ、そして含有量および類縁物質の量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した。
【００５９】
Ａ．含有量の液体クロマトグラフの条件
ａ．コラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、３．５μｍ、またはこれと類似するコラム
ｂ．検出器：紫外部吸光光度計（測定波長：２８５ｎｍ）
ｃ．注入量：２０μｌ
ｄ．流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
ｅ．コラム温度：３０℃
ｆ．移動相：酢酸緩衝液：アセトニトリル＝（８９：１１）（ｖ／ｖ％）
＊酢酸緩衝液（３０ｍＭ、ｐＨ５．３±０．１）：精製水１Ｌ当り１．７ｍＬの酢酸無水物を入れてよく混合した後、５０％水酸化ナトリウムでｐＨ５．３±０．１に調節した後、必要時に濾過
【００６０】
Ｂ．類縁物質の液体クロマトグラフの条件
ａ．コラム：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ８、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、３．５μｍ、またはこれと類似するコラム
ｂ．検出器：紫外部吸光光度計（測定波長：２５０ｎｍ）
ｃ．注入量：２０μｌ
ｄ．流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
ｅ．コラム温度：２５℃
ｆ．自動注入器温度：２〜８℃
ｇ．移動相：勾配溶出
【表４】
2020097570.tif 000006
移動相Ａ：ギ酸緩衝液：アセトニトリル＝９５：５（ｖ／ｖ）
移動相Ｂ：ギ酸緩衝液：アセトニトリル＝７０：３０（ｖ／ｖ）
ギ酸緩衝液：アンモニウムギ酸２．９ｇを２Ｌの精製水に溶かした後、ギ酸を利用してｐＨ３．５±０．１に調整する。
【００６１】
前記のようにすべての実施例と比較例の加速安定性試験（４０℃／ＲＨ７５％）を１２週間行った結果を表５および６に提示した。安定性試験の評価基準は、ｐＨは６．６〜７．８、含有量は９５〜１０５％、総類縁物質は１．５％以下、個々の類縁物質は０．２％以下である。
【表５】
2020097570.tif 000007
2020097570.tif 000008
【００６２】
測定結果、実施例３〜６は、ほとんど類似する結果を示し、真空度は、５００ｍＴｏｒｒ以下ではほとんど脱気が類似に進行されたこととみられた。脱気工程を行わない比較例の場合、窒素充填の有無に関係なしに安定性が顕著に落ちることをみることができた。これによって、脱気を通じて溶存酸素を除去する工程は、ペメトレキセドの安定性を顕著に改善させる工程であることを示す。
【表６】
2020097570.tif 000009
【００６３】
測定結果、実施例７〜９は、含有量の変化や類縁物質の生成においてほとんど類似な結果を示し、基準以下の良い安定性を示した。性状まで考慮すれば実施例７と実施例９が優れた安定性を示すことが分かった。しかし、真空脱気をせずに抗酸化剤だけを用いた比較例３〜５をみると、使用されたすべての抗酸化剤の場合、真空脱気をせずに抗酸化剤だけを単独で用いる場合、安定性が顕著に落ちることをみることができた。これは真空脱気をして溶存酸素を除去する工程は、抗酸化剤を使用しても必ず必要な工程であることを示す。
【００６４】
［実験例２］苛酷安定性の試験
実施例５および７〜９と比較例１および３〜５の組成物に対して苛酷安定性試験（６０℃／ＲＨ８０％）を４週間行った結果を表７に提示した。
【表７】
2020097570.tif 000010
【００６５】
測定結果、実施例５は、苛酷安定性１ヶ月結果にも性状は若干変わったが、含有量の変化はほとんどなく、総類縁物質（基準：１．５％以下）や個々の類縁物質（基準：０．２％以下）も基準以下に維持されていた。しかし、脱気をしていない比較例１の場合、１週間ぶりに基準から含有量、類縁物質のすべてが逸脱し、性状も濃い褐色に変わったことをみることができるため、相当な酸化反応が進行することが分かった。
【００６６】
抗酸化剤を使用し、真空脱気工程を実施した実施例７と９は、含有量や類縁物質の変化は真空脱気だけを実施した実施例５のようによい安定性を示すが、色の変化の面では明確な効果を示した。実施例８の場合である硫化ナトリウムは、他の抗酸化剤に比べると変色に対する効果は少ないことが示された。しかし、比較例３〜５でみられるように、真空脱気をせずに抗酸化剤だけを用いた場合、比較例１と同様に、色の変化だけでなく、含有量や類縁物質の変化も大きく現れて薬物の安定化に効果を奏さないことと示された。前記の試験結果から推察すると、脱気工程を通じて安定性を画期的に改善した前記水溶液剤型は抗酸化剤と併用することによって色の変化までも遮断した、室温保管が可能な最も安定した水溶液剤型といえる。
【００６７】
［実験例３］抗酸化剤濃度による影響およびスケールアップ影響に対する苛酷安定性の試験
実施例５および実施例７と実施例１０〜１５の組成物に対して苛酷安定性試験（６０℃／ＲＨ８０％）を４週間行った結果を表８に提示した。
【表８】
2020097570.tif 000011
【００６８】
測定結果、抗酸化剤なしに１００ｍｇ／ｍｌ剤型で製造して凍結脱気を進行した実施例５と１０００ｍｇ／ｍｌ剤型で製造して凍結脱気した実施例１０の苛酷安定性結果を比較してみると、性状はほとんど類似に変わり、含有量の変化も殆どなく、総類縁物質（基準:１．５％以下）や個々の類縁物質（基準:０．２％以下）も基準以下に維持されていた。抗酸化剤（モノチオグリセロール２．４ｍｇ／ｍｌ）を使用して１００ｍｇ／ｍｌ剤型で製造した実施例７と同一の濃度の抗酸化剤を使用して１０００ｍｇ／ｍｌ剤型で製造して凍結脱気した実施例１１を比較しても、ほとんど類似な苛酷安定性結果が示され、本研究で進行した凍結真空脱気工程は少量生産および大量生産にすべて同一の機能を示す工程といえる。
【００６９】
抗酸化剤の濃度を異にして安定性を確認してみた結果、含有量および類縁物質を基準にみた時、モノチオグリセロールの濃度に関係なしに十分に基準内に入る安定性をみせている。しかし、色の変化をみると、実施例１５のモノチオグリセロールの濃度が０．１ｍｇ／ｍｌである場合、淡い微黄色に変色が起こることを確認することができた。これからみると、モノチオグリセロールを抗酸化剤として用いた場合、０．２４ｍｇ／ｍｌ以上の濃度では色および含有量類縁物質の面で差がない優れた安定性を示すことが分かる。
【００７０】
前記試験結果から推察すると、凍結真空脱気工程を通じて安定性を確保した前記水溶液剤型は、少量の抗酸化剤と併用することによって、色の変化までも遮断した、室温保管が可能な最も安定した水溶液剤型であることが確認され、このような凍結真空脱気工程は実験室だけでなく、工場でもそのまま適用可能であるため、スケールアップが可能な工程といえる。
【００７１】
[実験例４]抗酸化剤種類による苛酷安定性の試験
表２の組成のとおり製造して実施例７〜９の組成物に対して苛酷安定性試験（６０℃／ＲＨ８０％）を３ヶ月間行った結果を表９に提示した。
【表９】
2020097570.tif 000012
【００７２】
測定結果、３種類の抗酸化剤の場合、類縁物質や含有量の面ではすべて基準を満たした。しかし、色の面では実施例８の硫化ナトリウムの場合、時間の経過により黄色に変わり、実施例９のアセチルシステインの場合も淡いが、苛酷２ヶ月からは若干の変色をみることができた。類縁物質の面でもすべて基準値を満たしてはいるが、総類縁物質からみると、モノチオグリセロールを用いた組成が少しより優れた安定性を示すことをみることができる。
【００７３】
前記の実験結果からみると、抗酸化剤のうち、モノチオグリセロールが類縁物質の面や、色の変化の面で最も適した抗酸化剤であることが分かった。
【００７４】
以上で本発明の特定部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者に、このような具体的記述は単に好ましい実施例に過ぎず、これによって本発明の範囲が制限されるのでない点は明白であろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とそれらの等価物により定義されるといえる。
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月29日(2019.11.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ペメトレキセドまたはその薬学的に許容可能な塩、水性溶媒及び抗酸化剤を含む溶液を容器に分注した後、凍結して凍結物を得る段階；および
（ｂ）真空減圧条件下で前記凍結物を脱気して脱気された凍結物を得る段階を含み、
前記脱気された凍結物は、前記段階（ａ）の溶液に含有されている溶媒１００重量を基準に９５重量部〜１００重量部の溶媒を含み、
前記段階（ａ）〜（ｂ）は、密閉されたチャンバー内で行われる、
薬学組成物の製造方法。
【請求項２】
前記段階（ｂ）で溶存酸素濃度１．５ｐｐｍ以下に脱気する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記段階（ｂ）の脱気段階は、１２時間以内に行われる、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
前記段階（ａ）の溶液は、脱気処理されていない溶液である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
前記溶液は、薬学的に許容可能な賦形剤およびｐＨ調節剤からなる群より選択される１種以上を追加的に含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
前記賦形剤は、マンニトールであるか、前記ｐＨ調節剤は、塩酸、水酸化ナトリウムまたはこれらの混合物である、請求項５に記載の製造方法。
【請求項７】
前記抗酸化剤は、モノチオグリセロール、硫化ナトリウム、アセチルシステイン、またはこれらの混合物である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項８】
前記段階（ａ）で−２０℃以下に凍結する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項９】
前記段階（ｂ）で真空減圧条件は、２，０００ｍＴｏｒｒ以下の条件である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記段階（ｂ）を行った後に、密封するか、窒素で充填した後に密封する段階を追加的に含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記段階（ｂ）を行った後に、脱気された凍結物を解凍する段階を追加的に含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１２】
密封する段階を行った後に、脱気された凍結物を解凍する段階を追加的に含む、請求項１０に記載の製造方法。