(57)【要約】      （修正有）【課題】インスリン受容体において部分アゴニストとして作用するインスリン二量体の提供。【解決手段】2020097572.tif 000218を有する化合物であって、Ａ鎖ポリペプチドのＣｙｓ６残基とＣｙｓ１１残基との間のジスルフィド結合ならびにＡ鎖のＣｙｓ７およびＣｙｓ２０とＢ鎖ポリペプチドのＣｙｓ７およびＣｙｓ１９との間のジスルフィド結合は、それぞれ、その間の実線によって表され；連結部分は示されるリジン残基のεアミノ酸と共有結合している、化合物。【選択図】図１
2020097572.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と、第２のインスリンまたは
インスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、
各ヘテロ二量体はＡ鎖ポリペプチドとＢ鎖ポリペプチドとを含み、
前記Ａ鎖ポリペプチドと前記Ｂ鎖ポリペプチドとは鎖間ジスルフィド結合によって連結
しており；
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は、前記２つ
のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのアミノ酸側鎖を連結す
る連結部分によって一緒に共有結合しており；
前記Ａ鎖ポリペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドのうちの少なくとも１つのアミノ末
端は置換基と共有結合しており、
但し、前記連結部分はジスルフィド結合を含まない、
インスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項２】
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が同じである
か、または
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異なってい
る、請求項１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項３】
それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ
基を介して前記第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と前記第２のイ
ンスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体を共有結合している連結部分を含む、請
求項１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項４】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり
得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）および糖類であり得る）を含む、請求項１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項５】
アセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル
、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、Ｐ
ＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される
置換基を含む、請求項１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項６】
第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログを含み、
当該第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログが、天然ヒトインスリン、
インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０インスリンおよびインスリング
ラルギンからなる群から独立に選択される、請求項１に記載のインスリン受容体部分アゴ
ニスト。
【請求項７】
各Ａ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）
を含み、
各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）
を含み、
Ｘ２がイソロイシンまたはスレオニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシン
であり；Ｘ８がスレオニンまたはヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタ
ミンであり；Ｘ１９がチロシン、４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−
アミノフェニルアラニンであり；Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２が
フェニルアラニンまたはデスアミノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまた
はスレオニンであり；Ｘ２６がロイシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニ
ンまたはアスパラギン酸であり；Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３
０がヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸
であり；Ｘ３１がアスパラギン酸、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたは
プロリンであり；Ｘ３３がスレオニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニ
ンまたは非存在であり；Ｘ３５がアルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ
３２の少なくとも１つがリジンである、請求項１に記載のインスリン受容体部分アゴニス
ト。
【請求項８】
前記連結部分が、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていても
よいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖を含み、
当該炭化水素鎖において、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、
−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−
Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（
Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよ
く、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂
肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分、およびポリ（エチ
レングリコール）（ＰＥＧ）を含む、請求項１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト
。
【請求項９】
前記連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝０
〜４である）、アシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレン
グリコール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シク
ロオクチン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）
を含む、請求項１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載のインスリン受容体部分アゴニストと、薬学的に
許容される担体とを含む組成物。
【請求項１１】
式：
Ｄ１−Ｌ−Ｄ２
（式中、Ｄ１およびＤ２はそれぞれ独立に、インスリンまたはインスリンアナログポリ
ペプチドであり、
各インスリンポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合によって連結しているＡ鎖ポリペプ
チドおよびＢ鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体であり；
Ｌは前記リンカー部分の一端がＤ１のカルボキシル基またはその近くのアミノ酸残基と
結合しており、前記リンカー部分の他端がＤ２のカルボキシル末端またはその近くのアミ
ノ酸残基と結合している連結部分であり、但し、Ｌはジスルフィド結合を含まず；
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログポリペプチドは前記Ａ鎖ポ
リペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドのアミノ末端と結合した置換基を含む）
を含むインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項１２】
Ｄ１およびＤ２が同じであるか、または異なっている、請求項１１に記載のインスリン
受容体部分アゴニスト。
【請求項１３】
Ｄ１およびＤ２のカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介してＤ
１とＤ２を共有結合している連結部分を含む、請求項１１に記載のインスリン受容体部分
アゴニスト。
【請求項１４】
一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、
直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および糖類で
あり得る）を有する置換基を含む、請求項１１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト
。
【請求項１５】
アセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル
、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、Ｐ
ＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される
置換基を含む、請求項１１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項１６】
天然ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０インス
リンおよびインスリングラルギンからなる群から独立に選択されるＤ１およびＤ２を含む
、請求項１１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項１７】
各Ａ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）
を含み、
各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）
を含み、
Ｘ２がイソロイシンまたはスレオニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシン
であり；Ｘ８がスレオニンまたはヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタ
ミンであり；Ｘ１９がチロシン、４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−
アミノフェニルアラニンであり；Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２が
フェニルアラニンまたはデスアミノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまた
はスレオニンであり；Ｘ２６がロイシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニ
ンまたはアスパラギン酸であり；Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３
０がヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸
であり；Ｘ３１がアスパラギン酸、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたは
プロリンであり；Ｘ３３がスレオニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニ
ンまたは非存在であり；Ｘ３５がアルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ
３２の少なくとも１つがリジンである、請求項１１に記載のインスリン受容体部分アゴニ
スト。
【請求項１８】
前記連結部分が、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていても
よいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖を含み、
当該炭化水素鎖において、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、
−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−
Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（
Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよ
く、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂
肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分、およびポリ（エチ
レングリコール）（ＰＥＧ）を含む、請求項１１に記載のインスリン受容体部分アゴニス
ト。
【請求項１９】
前記連結部分が、アルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝
０〜４である）、アシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（式中、Ｒはアルキル鎖、ポリ（
エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有
鎖、シクロオクチン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖
である）を含む、請求項１１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項２０】
請求項１１から１９のいずれか一項に記載のインスリン受容体部分アゴニストと、薬学
的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項２１】
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と、第２のインスリンまたは
インスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、
各ヘテロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、
前記Ａ鎖ポリペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドは、鎖間ジスルフィド結合によって
連結しており；
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は前記２個の
それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結す
る連結部分によって一緒に共有結合しており；
前記第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドの前記Ａ鎖ポ
リペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドのうちの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と
共有結合していてもよく、
但し、（１）前記連結部分はジスルフィド結合を含まず、（２）前記Ａ鎖ポリペプチド
および前記Ｂ鎖ポリペプチドの前記アミノ末端が置換基を含まない場合、前記連結部分が
オキサリル（Ｃ２）部分でも、スベリオル（Ｃ８）部分でも、ドデカンジオイル（Ｃ１２
）部分でもない、
インスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項２２】
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が同じである
か、または、
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異なってい
る、請求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項２３】
それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ
基を介して前記第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と前記第２のイ
ンスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体を共有結合している連結部分を含む、請
求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項２４】
一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、
直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および糖類で
あり得る）を有する置換基を含む、請求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト
。
【請求項２５】
アセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル
、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、Ｐ
ＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される
置換基を含む、請求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項２６】
天然ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０インス
リンおよびインスリングラルギンからなる群から独立に選択される第１および第２のイン
スリンまたはインスリンアナログを含む、請求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴ
ニスト。
【請求項２７】
各Ａ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）
を含み、
各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）
を含み、
Ｘ２がイソロイシンまたはスレオニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシン
であり；Ｘ８がスレオニンまたはヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタ
ミンであり；Ｘ１９がチロシン、４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−
アミノフェニルアラニンであり；Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２が
フェニルアラニンまたはデスアミノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまた
はスレオニンであり；Ｘ２６がロイシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニ
ンまたはアスパラギン酸であり；Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３
０がヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸
であり；Ｘ３１がアスパラギン酸、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたは
プロリンであり；Ｘ３３がスレオニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニ
ンまたは非存在であり；Ｘ３５がアルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ
３２の少なくとも１つがリジンである、請求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴニ
スト。
【請求項２８】
前記連結部分が、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていても
よいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖を含み、
当該炭化水素鎖において、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、
−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−
Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（
Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよ
く、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂
肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分、およびポリ（エチ
レングリコール）（ＰＥＧ）を含む、請求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴニス
ト。
【請求項２９】
前記連結部分が、アルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝
０〜４である）、アシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレ
ングリコール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シ
クロオクチン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である
）を含む、請求項２１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項３０】
請求項２１から２９のいずれか一項に記載のインスリン受容体部分アゴニストと、薬学
的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項３１】
式：
Ｄ１−Ｌ−Ｄ２
（式中、Ｄ１およびＤ２はそれぞれ独立に、インスリンまたはインスリンアナログポリ
ペプチドであり、各インスリンポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結してい
るＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体であり；
Ｌは前記リンカー部分の一端がＤ１のカルボキシル基またはその近くのアミノ酸残基と
結合しており、前記リンカー部分の他端がＤ２のカルボキシル末端またはその近くのアミ
ノ酸残基と結合している連結部分であり、但し、Ｌはジスルフィド結合を含まず、
Ｄ１またはＤ２の少なくとも１つはＤ１またはＤ２の前記Ａ鎖ポリペプチドまたは前記
Ｂ鎖ポリペプチドのアミノ末端と結合した置換基を含んでいてもよく、
但し、（１）前記連結部分はジスルフィド結合を含まず、（２）前記インスリンまたは
インスリンアナログがヒトインスリンまたはインスリンアナログでなく、前記Ａ鎖ポリペ
プチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドの前記アミノ末端が置換基を含まない場合、前記連結
部分はオキサリル（Ｃ２）部分でも、スベリオル（Ｃ８）部分でも、ドデカンジオイル（
Ｃ１２）部分でもない）
を含むインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項３２】
Ｄ１およびＤ２が同じであるか、または異なっている、請求項３１に記載のインスリン
受容体部分アゴニスト。
【請求項３３】
Ｄ１およびＤ２のカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介してＤ
１とＤ２を共有結合している連結部分を含む、請求項３１に記載のインスリン受容体部分
アゴニスト。
【請求項３４】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ
’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およ
び糖類であり得る）を含む、請求項３１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項３５】
アセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル
、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、Ｐ
ＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される
置換基を含む、請求項３１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項３６】
天然ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０インス
リンおよびインスリングラルギンからなる群から独立に選択されるＤ１およびＤ２を含む
、請求項３１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項３７】
各Ａ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）
を含み、
各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）
を含み、
Ｘ２がイソロイシンまたはスレオニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシン
であり；Ｘ８がスレオニンまたはヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタ
ミンであり；Ｘ１９がチロシン、４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−
アミノフェニルアラニンであり；Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２が
フェニルアラニンまたはデスアミノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまた
はスレオニンであり；Ｘ２６がロイシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニ
ンまたはアスパラギン酸であり；Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３
０がヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸
であり；Ｘ３１がアスパラギン酸、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたは
プロリンであり；Ｘ３３がスレオニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニ
ンまたは非存在であり；Ｘ３５がアルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ
３２の少なくとも１つがリジンである、請求項３１に記載のインスリン受容体部分アゴニ
スト。
【請求項３８】
前記連結部分が、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていても
よいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖を含み、
当該炭化水素鎖において、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、
−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−
Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（
Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよ
く、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂
肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分、およびポリ（エチ
レングリコール）（ＰＥＧ）を含む、請求項３１に記載のインスリン受容体部分アゴニス
ト。
【請求項３９】
前記連結部分が、アルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝
０〜４である）、アシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（式中、Ｒはアルキル鎖、ポリ（
エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有
鎖、シクロオクチン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖
である）を含む、請求項３１に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項４０】
請求項３１から３９のいずれか一項に記載のインスリン受容体部分アゴニストと、薬学
的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項４１】
第１のインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはインスリンアナログ
ヘテロ二量体とを含むインスリンアナログ二量体であって、
各ヘテロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、
前記Ａ鎖ポリペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合によって連
結しており；
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は前記２個の
それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結す
る連結部分によって一緒に共有結合しており；
前記インスリンアナログはインスリンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０イ
ンスリンおよびインスリングラルギンから選択され；
前記第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドの前記Ａ鎖ポ
リペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は、置換基と共有
結合していてもよく、
但し、前記連結部分はジスルフィド結合を含まない、
インスリンアナログ二量体。
【請求項４２】
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が同じである
か、または前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異
なっている、請求項４１に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項４３】
それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ
基を介して前記第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と前記第２のイ
ンスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体とを共有結合している連結部分を含む、
請求項４１に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項４４】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ
’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およ
び糖類であり得る）を含む、請求項４１に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項４５】
アセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル
、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、Ｐ
ＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される
置換基と結合している前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログの少な
くとも１つを含む、請求項４１に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項４６】
前記連結部分が、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていても
よいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖を含み、
当該炭化水素鎖において、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、
−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−
Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（
Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよ
く、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂
肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分、およびポリ（エチ
レングリコール）（ＰＥＧ）を含む、請求項４１に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項４７】
前記連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝０
〜４である）、アシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレン
グリコール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シク
ロオクチン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）
を含む、請求項４１に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項４８】
請求項４１から４７のいずれか一項に記載のインスリンアナログ二量体と、薬学的に許
容される担体とを含む組成物。
【請求項４９】
式：
Ｄ１−Ｌ−Ｄ２
（式中、Ｄ１およびＤ２はそれぞれ独立に、インスリンまたはインスリンアナログポリ
ペプチドであり、各インスリンポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結してい
るＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体であり；
Ｌはリンカー部分の一端がＤ１のカルボキシル基またはその近くのアミノ酸残基と結合
しており、リンカー部分の他端がＤ２のカルボキシル末端またはその近くのアミノ酸残基
残基と結合している連結部分であり、但し、Ｌはジスルフィド結合を含まず；
前記インスリンアナログはインスリンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０イ
ンスリンおよびインスリングラルギンから選択され；
Ｄ１またはＤ２の少なくとも１つはＤ１またはＤ２の前記Ａ鎖ポリペプチドまたは前記
Ｂ鎖ポリペプチドのアミノ末端と結合した置換基を含んでいてもよく；
但し、前記連結部分はジスルフィド結合を含まない）
を含む、インスリンアナログ二量体。
【請求項５０】
Ｄ１およびＤ２が同じであるか、または異なっている、請求項４９に記載のインスリン
アナログ二量体。
【請求項５１】
Ｄ１およびＤ２のカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介してＤ
１とＤ２を共有結合している連結部分を含む、請求項４９に記載のインスリンアナログ二
量体。
【請求項５２】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり
得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）および糖類であり得る）を含む、請求項４９に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項５３】
アセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル
、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、Ｐ
ＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される
置換基を含む、請求項４９に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項５４】
前記連結部分が、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていても
よいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖を含み、
当該炭化水素鎖において、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、
−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−
Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（
Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよ
く、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂
肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分、およびポリ（エチ
レングリコール）（ＰＥＧ）を含む、請求項４９に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項５５】
前記連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝０
〜４である）、アシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（式中、Ｒはアルキル鎖、ポリ（エ
チレングリコール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖
、シクロオクチン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で
ある）を含む、請求項４９に記載のインスリンアナログ二量体。
【請求項５６】
請求項４９から５５のいずれか一項に記載のインスリンアナログ二量体と、薬学的に許
容される担体とを含む組成物。
【請求項５７】
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、
各ヘテロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、
前記Ａ鎖ポリペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合によって連
結しており；
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は前記２個の
それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結す
る連結部分によって一緒に共有結合しており；
前記第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドの前記Ａ鎖ポ
リペプチドおよび前記Ｂ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と共有結
合していてもよく；
前記インスリン受容体部分アゴニストは、機能的リン酸化アッセイによって測定される
、ヒトインスリン受容体（ＩＲ）に対する天然ヒトインスリンの最大応答の約２０％、２
５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％または７０％
のＩＲに対する最大応答を有する、
インスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項５８】
連結部分を含み、
当該連結部分が、ジスルフィド結合を含まず、かつ、前記Ａ鎖ポリペプチドおよび前記
Ｂ鎖ポリペプチドの前記アミノ末端が置換基を含まない場合、オキサリル（Ｃ２）部分で
も、スベリオル（Ｃ８）部分でも、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分でもない、請求項５
７に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項５９】
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が同じである
か、または
前記第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異なってい
る、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項６０】
前記インスリン受容体二量体がそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはそ
の近くのリジン残基のεアミノ基を介して前記第１のインスリンまたはインスリンアナロ
グヘテロ二量体と前記第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体を共有結
合している連結部分を含む、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項６１】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり
得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）および糖類であり得る）を含む、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニスト
。
【請求項６２】
アセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル
、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、Ｐ
ＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される
置換基を含む、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項６３】
第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログを含み、
当該第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログが、独立に、天然ヒトイン
スリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０インスリンまたはイン
スリングラルギンである、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項６４】
各Ａ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）
を含み、
各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列：
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）
を含み、
Ｘ２がイソロイシンまたはスレオニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシン
であり；Ｘ８がスレオニンまたはヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタ
ミンであり；Ｘ１９がチロシン、４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−
アミノフェニルアラニンであり；Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２が
フェニルアラニンまたはデスアミノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまた
はスレオニンであり；Ｘ２６がロイシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニ
ンまたはアスパラギン酸であり；Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３
０がヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸
であり；Ｘ３１がアスパラギン酸、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたは
プロリンであり；Ｘ３３がスレオニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニ
ンまたは非存在であり；Ｘ３５がアルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ
３２の少なくとも１つがリジンである、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニ
スト。
【請求項６５】
前記連結部分が、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていても
よいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖を含み、
当該炭化水素鎖において、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、
−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−
Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（
Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよ
く、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂
肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分、およびポリ（エチ
レングリコール）（ＰＥＧ）を含む、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニス
ト。
【請求項６６】
前記連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝０
〜４である）、アシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（式中、Ｒはアルキル鎖、ポリ（エ
チレングリコール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖
、シクロオクチン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖で
ある）を含む、請求項５７に記載のインスリン受容体部分アゴニスト。
【請求項６７】
請求項５７から６６のいずれか一項に記載のインスリン受容体部分アゴニストと、薬学
的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項６８】
糖尿病を治療する方法であって、
治療上有効量の請求項１から９、１１から１９、２１から２９、３１から３９、４１か
ら４７、４９から５５または５７から６６のいずれか一項に記載のインスリン受容体部分
アゴニストを含む組成物を糖尿病の個体に投与するステップを含む方法。
【請求項６９】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項６８に記載の
方法。
【請求項７０】
請求項１から９、１１から１９、２１から２９、３１から３９、４１から４７、４９か
ら５５または５７から６６のいずれか一項に記載のインスリン受容体部分アゴニストを含
む、糖尿病を治療するための組成物。
【請求項７１】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項７０に記載の
組成物。
【請求項７２】
糖尿病を治療するための医薬品を製造するための請求項１から９、１１から１９、２１
から２９、３１から３９、４１から４７、４９から５５または５７から６６のいずれか一
項に記載のインスリン受容体部分アゴニストの使用。
【請求項７３】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項７２に記載の
使用。
【請求項７４】
以下：
【化１】
2020097572.tif 000173
2020097572.tif 000174
2020097572.tif 000175
2020097572.tif 000176
2020097572.tif 000177
2020097572.tif 000178
2020097572.tif 000179
2020097572.tif 000180
2020097572.tif 000181
2020097572.tif 000182
2020097572.tif 000183
2020097572.tif 000184
2020097572.tif 000185
2020097572.tif 000186
2020097572.tif 000187
2020097572.tif 000188
2020097572.tif 000189
2020097572.tif 000190
2020097572.tif 000191
2020097572.tif 000192
2020097572.tif 000193
2020097572.tif 000194
2020097572.tif 000195
2020097572.tif 000196
2020097572.tif 000197
2020097572.tif 000198
2020097572.tif 000199
2020097572.tif 000200
2020097572.tif 000201
2020097572.tif 000202
2020097572.tif 000203
2020097572.tif 000204
2020097572.tif 000205
2020097572.tif 000206
2020097572.tif 000207
2020097572.tif 000208
2020097572.tif 000209
2020097572.tif 000210
2020097572.tif 000211
2020097572.tif 000212
2020097572.tif 000213
2020097572.tif 000214
2020097572.tif 000215
からなる群から選択される化合物であって、
Ａ鎖ポリペプチドのＣｙｓ６残基とＣｙｓ１１残基との間のジスルフィド結合ならびに
それぞれＡ鎖のＣｙｓ７およびＣｙｓ２０とＢ鎖ポリペプチドのＣｙｓ７およびＣｙｓ１
９との間のジスルフィド結合は、その間の実線によって表され；
連結部分は示されるリジン残基のεアミノ酸と共有結合しており、
二量体１〜４０、４２〜５２、５４〜８６および８８〜９４のＡ鎖ポリペプチドは配列
番号１に示されるアミノ酸配列を有し；
二量体５６のＡ鎖ポリペプチドは配列番号１１について示されるアミノ酸配列を有し；
二量体１〜１７、２１〜２７、３６、３７、３９〜４０および４２〜５２、５４〜８２
、８４〜８６および８８〜９４のＢ鎖ポリペプチドは配列番号２に示されるアミノ酸配列
を有し；
二量体１８および３２〜３５のＢ鎖ポリペプチドは配列番号６に示されるアミノ酸配列
を有し；
二量体１９および８３のＢ鎖ポリペプチドは配列番号９に示されるアミノ酸配列を有し
；
二量体２０、２８〜３１および３８のＢ鎖ポリペプチドは配列番号１０に示されるアミ
ノ酸配列を有し；
二量体５３および８７のＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドはそれぞれ、配列番
号７および配列番号８である、化合物。
【請求項７５】
１種または複数の請求項７４に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む組成
物。
【請求項７６】
糖尿病を治療する方法であって、
治療上有効量の請求項７５に記載のインスリン受容体部分アゴニストを含む組成物を糖
尿病の個体に投与するステップを含む方法。
【請求項７７】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項７６に記載の
方法。
【請求項７８】
請求項７４に記載の化合物を含む、糖尿病を治療するための組成物。
【請求項７９】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項７８に記載の
組成物。
【請求項８０】
糖尿病を治療するための医薬品を製造するための、請求項７４に記載の化合物の使用。
【請求項８１】
前記糖尿病が、１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項８０に記載の
使用。
【請求項８２】
リンカー１、リンカー２、リンカー３、リンカー１０、リンカー１１、リンカー１２、
リンカー１３、リンカー１４、リンカー１５、リンカー１６、リンカー１７、リンカー１
８、リンカー１９、リンカー２０、リンカー２１、リンカー２２、リンカー２３、リンカ
ー２４、リンカー２５、リンカー２６、リンカー２７、リンカー２８、リンカー２９、リ
ンカー３０、リンカー３１、リンカー３２、リンカー３３、リンカー３４、リンカー３５
、リンカー３６、リンカー３７、リンカー３８、リンカー３９、リンカー４０、リンカー
４１、リンカー４２、リンカー４３、リンカー４４、リンカー４５、リンカー４６、リン
カー４７、リンカー４８、リンカー４９およびリンカー５０からなる群から選択される二
官能性リンカーによって結合された、第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプ
チドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと
、第２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２のインスリンヘテ
ロ二量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓとを含むインスリン二量体であって、
但し、前記二官能性リンカーがリンカー１０、リンカー１１、リンカー１２、リンカー
１３またはリンカー１４である場合、前記第１または第２のＡ鎖またはＢ鎖ポリペプチド
の少なくとも１つがそのＮ末端アミノ酸で置換基と結合しているか、あるいは少なくとも
前記第１のインスリンヘテロ二量体分子のＮ末端アミノ酸が置換基と結合しているか、あ
るいは前記第１のインスリンヘテロ二量体と第２のインスリンヘテロ二量体の両方のＮ末
端アミノ酸が置換基と結合している、
インスリン二量体。
【請求項８３】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり
得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含
む、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【請求項８４】
前記置換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、メチル基、メトキシ基、ジメチ
ル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ６アルキル基またはＰＥＧ２基
である、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【請求項８５】
第１のリンカーおよび第２のリンカーを介して結合した、リンカー５およびリンカー７
からなる群から選択される第１のリンカーと結合した第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１
のＢ鎖ポリペプチドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ
２８  Ｌｙｓと、
リンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカー９からなる群から選択される第２
のリンカーと結合した第２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第
２のインスリンヘテロ二量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと
を含むインスリン二量体。
【請求項８６】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり
得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含
む、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【請求項８７】
前記置換基が、カルバモイル基、アセチル基、グリシン、メチル基、メトキシ基、ジメ
チル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ６アルキル基またはＰＥＧ２
基である、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【請求項８８】
リンカー５およびリンカー７からなる群から選択される第１のリンカーと結合した第１
のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチドを有する第１のインスリンヘテロ二量
体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと、
リンカー５およびリンカー７からなる群から選択される第２のリンカーと結合した第２
のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２のインスリンヘテロ二量
体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと
を含むインスリンアナログ二量体であって、
前記第１および前記第２のリンカーが構造：
【化２】
2020097572.tif 000216
（Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複素脂肪
族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても
よい基である）
を有する架橋リンカーを介して結合しており、
特定の態様では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシ
ル基またはＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、
ＰＥＧ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である
、
インスリンアナログ二量体。
【請求項８９】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり
得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含
む、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【請求項９０】
前記置換基が、カルバモイル基、アセチル基、グリシン、メチル基、メトキシ基、ジメ
チル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ６アルキル基またはＰＥＧ２
基である、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【請求項９１】
リンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカー９からなる群から選択される第１
のリンカーと結合した第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチドを有する第
１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと、
リンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカー９からなる群から選択される第２
のリンカーと結合した第２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第
２のインスリンヘテロ二量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと
を含むインスリンアナログ二量体であって、
前記第１および第２のリンカーが構造
【化３】
2020097572.tif 000217
（Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複素脂肪
族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても
よい基である）
を有する架橋リンカーを介して結合しており、
特定の態様では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシ
ル基またはＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、
ＰＥＧ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である
、
インスリンアナログ二量体。
【請求項９２】
前記置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（式中、ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり
得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含
む、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【請求項９３】
前記置換基が、カルバモイル基、アセチル基、グリシン、メチル基、メトキシ基、ジメ
チル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ６アルキル基またはＰＥＧ２
基である、請求項８２に記載のインスリン二量体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インスリン受容体で部分アゴニストとして作用するインスリン二量体および
インスリンアナログ二量体に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリンは、１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）患者および多くの２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）に必
須の療法であり、過去１０年間の全抗糖尿病薬使用者の中の米国患者の３分の１近くに処
方されている。インスリンの世界市場は２０１３年に２０４億米ドルであり、他の全抗糖
尿病薬を合わせたよりも速い速度で成長している。
【０００３】
しかしながら、狭いＴＩから低血糖および体重増加までを含む現在のインスリン療法の
課題が、その広範囲での採用と、患者が理想的な血糖管理を達成する可能性とを制限して
いる。
【０００４】
食事に応答した食事のインスリン分泌に加え、膵臓は血漿グルコースレベルによって大
いに支配される「基礎」速度でインスリンを放出して適切な空腹時グルコース調節を維持
している。これは主に、内因性インスリンの肝臓選択作用により肝臓グルコース放出を制
御することによって達成される。現代のインスリンアナログは、速効型インスリンおよび
基礎インスリン、ならびにこれら２種の混合物を含む。速効型インスリンアナログ（ＲＡ
Ａ）は食後高血糖を制御するために開発されており、一方、長時間作用を有するインスリ
ンは基礎グルコースレベルを調節する。長時間作用性インスリンは、全てのＴ１ＤＭによ
って（食事の注射と組み合わせて）使用されており、Ｔ２ＤＭ患者の大部分がそのインス
リン療法を基礎製品から始めている。世界的な糖尿病人口（特にＴ２ＤＭ）が跳ね上がっ
ているために、基礎インスリン消費は急速に増加している。
【０００５】
過去数十年にわたる連続的な開発努力にもかかわらず、利用可能な長時間作用性インス
リンは生理学的基礎インスリンに比べて未だ最適化されていない。これは一部は、これら
のアナログのＰＫ平坦性を改善することに焦点が当てられており、低血糖リスクの増加に
寄与する末梢組織の相対的過剰インスリン処置（ｏｖｅｒ−ｉｎｓｕｌｉｎｉｚａｔｉｏ
ｎ）を修復することが焦点ではなかったためである。結果として、低血糖は、患者への大
きな負担を伴う重要な医的リスクのままであり、これが有意な罹患率および死亡率の原因
となっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、インスリン分子二量体を形成するよう共有結合した２個のインスリン分子を
含む化合物であって、通常のインスリン様効力を有するが、最大活性が減少したインスリ
ン受容体を活性化し得る化合物を提供する。これらの化合物はインスリン受容体部分アゴ
ニスト（ＩＰＲＡ）であり：これらは他のインスリンアナログ様の挙動を示し、グルコー
スを有効に低下させるものの、低血糖のリスクは低い。
【０００７】
現在の標準治療（ＳＯＣ）基礎インスリンに対して改善した治療指数（ＴＩ）を示す新
規かつ変革的な基礎インスリン（１日１回投与）として製剤化されるインスリン受容体部
分アゴニスト共有結合インスリン二量体が提供される。一実施形態では、本発明のＩＰＲ
Ａが、糖尿病ミニブタにおいて、低血糖のリスクを低下させつつ、グルコースを有効に低
下させることができ、１日１回（ＱＤ）基礎インスリン特性を有する。改善したＴＩは、
開業医が本発明のＩＲＰＡをより積極的に投与して空腹時グルコース管理の最終目標の達
成を可能にし得る。ＩＲＰＡによる空腹時グルコースとＨｂＡｌｃとの厳格な管理によっ
て、これが１）Ｔ２ＤＭにおける有効性および安全性プロファイルが増強した独立型の長
時間作用性インスリン、および２）さらなる食事の速効型インスリンアナログ（ＲＡＡ）
用量と共に使用するためのＴ１ＤＭ（および一部のＴ２ＤＭ）における改善した基本的な
基礎インスリンとして働くことが可能になり得る。よって、本発明は以下の実施形態を提
供する。
【０００８】
本発明は、インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体を提供し、これら
は第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含み、各ヘテロ二量体はＡ鎖ポリペプチドとＢ鎖ポリ
ペプチドとを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合に
よって連結しており；第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量
体は、２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのアミノ酸側
鎖を連結する連結部分を介して一緒に共有結合しており；Ａ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポ
リペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と共有結合しており、但し、連結部分
はジスルフィド結合を含まない。特定の態様では、第１のインスリンまたはインスリンア
ナログの少なくともＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドのアミノ末端が置換基と共
有結合している。
【０００９】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、各Ａ鎖ポ
リペプチドおよび各Ｂ鎖ポリペプチドのアミノ末端が置換基と共有結合している。特定の
態様では、第１のインスリンまたはインスリンアナログのＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポ
リペプチドのアミノ末端ならびに第２のインスリンまたはインスリンアナログのＡ鎖ポリ
ペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドのアミノ末端はそれぞれ、置換基と共有結合している。
第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログのアミノ末端が置換基と共有結合
している実施形態では、第１のインスリンまたはインスリンアナログのＡ鎖およびＢ鎖ポ
リペプチドのアミノ末端上の置換基が、第２のインスリンまたはインスリンアナログのＡ
鎖およびＢ鎖ポリペプチドのアミノ末端上の置換基と同じであってもよい。第１および第
２のインスリンまたはインスリンアナログのアミノ末端が置換基と共有結合している実施
形態では、第１のインスリンまたはインスリンアナログのＡ鎖およびＢ鎖ポリペプチドの
アミノ末端上の置換基が、第２のインスリンまたはインスリンアナログのＡ鎖およびＢ鎖
ポリペプチドのアミノ末端上の置換基とが異なっていてもよい。
【００１０】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、第１お
よび第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が同じであるか、または第
１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異なる。
【００１１】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、連
結部分が、それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのリジン残基の
εアミノ基を介して第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のイ
ンスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体を共有結合している。
【００１２】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、置
換基が一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直
鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ＰＥＧ、糖類であり得る）を有し、特定の態様では
、ＲＣ（Ｏ）−がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイ
ルまたはアルコキシカルボニルであり得る。特定の態様では、置換基がアセチル、フェニ
ルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル、メトキシアセチル
、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、ＰＥＧ１、ＰＥＧ２、
Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される。
【００１３】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、各Ａ鎖ポ
リペプチドが独立に、アミノ酸配列
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）を含
み、各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）を含み、Ｘ２がイソロイシンまたはスレ
オニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシンであり；Ｘ８がスレオニンまたは
ヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタミンであり；Ｘ１９がチロシン、
４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−アミノフェニルアラニンであり；
Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２がフェニルアラニンまたはデスアミ
ノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまたはスレオニンであり；Ｘ２６がロ
イシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニンまたはアスパラギン酸であり；
Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３０がヒスチジン、アスパラギン酸
、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸であり；Ｘ３１がアスパラギン酸
、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたはプロリンであり；Ｘ３３がスレオ
ニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニンまたは非存在であり；Ｘ３５が
アルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ３２の少なくとも１つがリジンで
ある。
【００１４】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、第１およ
び第２のインスリンまたはインスリンアナログが独立に、天然ヒトインスリン、インスリ
ンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０インスリンまたはインスリングラルギン
である。
【００１５】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、連結部分
がアシル、脂肪族、複素脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から
選択される置換されていてもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン
単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ
）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、
−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基
によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル
部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複
素脂肪族部分である、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていて
もよいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖であり得る。
【００１６】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、連
結部分がアシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレングリコ
ール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シクロオク
チン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）である
。
【００１７】
さらなる態様では、連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−
（式中、ｎ＝０〜４５であり、それだけに限らないが、オキサリル（Ｃ２）部分、スクシ
ニル（Ｃ４）部分、アジポイル（Ｃ６）部分、スベリオル（ｓｕｂｅｒｙｏｌ）（Ｃ８）
部分、デカンジオイル（Ｃ１０）部分、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分、テトラデカン
ジオイル（Ｃ１４）部分またはヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分を含む）である。
【００１８】
本発明はさらに、式
Ｄ１−Ｌ−Ｄ２
（式中、Ｄ１およびＤ２はそれぞれ独立に、インスリンまたはインスリンアナログポリ
ペプチドであり、各インスリンポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結してい
るＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体であり；Ｌはリンカー部
分の一端がＤ１のカルボキシル基またはその近くのアミノ酸残基と結合しており、リンカ
ー部分の他端がＤ２のカルボキシル末端またはその近くのアミノ酸残基と結合している連
結部分であり、但し、Ｌはジスルフィド結合を含まず；第１および第２のインスリンまた
はインスリンアナログポリペプチドはＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドのアミノ
末端と結合した置換基を含む）
を含むインスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体を提供する。
【００１９】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、Ｄ１お
よびＤ２が同じであるか、またはＤ１およびＤ２が異なる。
【００２０】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、連結部
分がＤ１およびＤ２のカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介して
Ｄ１とＤ２を共有結合している。
【００２１】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、置
換基が一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直
鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ＰＥＧ、糖類であり得る）を有し、特定の態様では
、ＲＣ（Ｏ）−がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイ
ルまたはアルコキシカルボニルであり得る。特定の態様では、置換基がアセチル、フェニ
ルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル、メトキシアセチル
、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、ＰＥＧ１、ＰＥＧ２、
Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される。
【００２２】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、各Ａ鎖ポ
リペプチドが独立に、アミノ酸配列
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）を含
み、各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）を含み、Ｘ２がイソロイシンまたはスレ
オニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシンであり；Ｘ８がスレオニンまたは
ヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタミンであり；Ｘ１９がチロシン、
４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−アミノフェニルアラニンであり；
Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２がフェニルアラニンまたはデスアミ
ノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまたはスレオニンであり；Ｘ２６がロ
イシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニンまたはアスパラギン酸であり；
Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３０がヒスチジン、アスパラギン酸
、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸であり；Ｘ３１がアスパラギン酸
、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたはプロリンであり；Ｘ３３がスレオ
ニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニンまたは非存在であり；Ｘ３５が
アルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ３２の少なくとも１つがリジンで
ある。
【００２３】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、Ｄ１お
よびＤ２が独立に、天然ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、
デスＢ３０インスリンまたはインスリングラルギンである。
【００２４】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、連結部分
がアシル、脂肪族、複素脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から
選択される置換されていてもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン
単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ
）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、
−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基
によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル
部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複
素脂肪族部分である、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていて
もよいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖であり得る。
【００２５】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、連
結部分がアシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレングリコ
ール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シクロオク
チン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）である
。
【００２６】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、連結部
分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝０〜４５であり
、それだけに限らないが、オキサリル（Ｃ２）部分、スクシニル（Ｃ４）部分、アジポイ
ル（Ｃ６）部分、スベリオル（ｓｕｂｅｒｙｏｌ）（Ｃ８）部分、デカンジオイル（Ｃ１
０）部分、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分、テトラデカンジオイル（Ｃ１４）部分また
はヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分を含む）である。
【００２７】
上記インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のいずれか１つと、薬学
的に許容される担体とを含む組成物がさらに提供される。
【００２８】
本発明はさらに、第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のイ
ンスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニス
トまたはインスリン二量体であって、各ヘテロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリ
ペプチドを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通
して連結しており；第１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体
は２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖
を連結する連結部分を通して一緒に共有結合しており；第１のインスリンポリペプチドま
たは第２のインスリンポリペプチドのＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドの少なく
とも１つのアミノ末端は置換基と共有結合していてもよく、但し、（１）連結部分はジス
ルフィド結合を含まず、（２）インスリンまたはインスリンアナログがヒトインスリンま
たはインスリンアナログでなく、Ａ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドのアミノ末端
が置換基を含まない場合、連結部分がオキサリル（Ｃ２）部分でも、スベリオル（Ｃ８）
部分でも、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分でもない、インスリン受容体部分アゴニスト
またはインスリン二量体を提供する。
【００２９】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、第１お
よび第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が同じであるか、または第
１および第２のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異なる。
【００３０】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、連結部
分が、それぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεア
ミノ基を介して第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインス
リンまたはインスリンアナログヘテロ二量体を共有結合している。
【００３１】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、置
換基が一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直
鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ＰＥＧ、糖類であり得る）を有し、特定の態様では
、ＲＣ（Ｏ）−がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイ
ルまたはアルコキシカルボニルであり得る。特定の態様では、置換基がアセチル、フェニ
ルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル、メトキシアセチル
、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、ＰＥＧ１、ＰＥＧ２、
Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される。
【００３２】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、第１お
よび第２のインスリンまたはインスリンアナログが独立に、天然ヒトインスリン、インス
リンリスプロ、インスリンアスパルト、デスＢ３０インスリンまたはインスリングラルギ
ンである。
【００３３】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、各Ａ鎖ポ
リペプチドが独立に、アミノ酸配列
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）を含
み、各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）を含み、Ｘ２がイソロイシンまたはスレ
オニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシンであり；Ｘ８がスレオニンまたは
ヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタミンであり；Ｘ１９がチロシン、
４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−アミノフェニルアラニンであり；
Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２がフェニルアラニンまたはデスアミ
ノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまたはスレオニンであり；Ｘ２６がロ
イシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニンまたはアスパラギン酸であり；
Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３０がヒスチジン、アスパラギン酸
、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸であり；Ｘ３１がアスパラギン酸
、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたはプロリンであり；Ｘ３３がスレオ
ニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニンまたは非存在であり；Ｘ３５が
アルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ３２の少なくとも１つがリジンで
ある。
【００３４】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、連結部分
がアシル、脂肪族、複素脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から
選択される置換されていてもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン
単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ
）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、
−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基
によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル
部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複
素脂肪族部分である、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていて
もよいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖であり得る。
【００３５】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、連
結部分がアシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレングリコ
ール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シクロオク
チン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）である
。
【００３６】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、連結部
分がＣ２〜Ｃ２０アシル部分である。
【００３７】
特定の態様では、連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（
式中、ｎ＝０〜４５であり、それだけに限らないが、オキサリル（Ｃ２）部分、スクシニ
ル（Ｃ４）部分、アジポイル（Ｃ６）部分、スベリオル（Ｃ８）部分、デカンジオイル（
Ｃ１０）部分、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分、テトラデカンジオイル（Ｃ１４）部分
またはヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分を含む）である。
【００３８】
上記インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のいずれか１つと、薬学
的に許容される担体とを含む組成物がさらに提供される。
【００３９】
本発明はさらに、式
Ｄ１−Ｌ−Ｄ２
（式中、Ｄ１およびＤ２はそれぞれ独立に、インスリンまたはインスリンアナログポリ
ペプチドであり、各インスリンポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結してい
るＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体であり；Ｌはリンカー部
分の一端がＤ１のカルボキシル基またはその近くのアミノ酸残基と結合しており、リンカ
ー部分の他端がＤ２のカルボキシル末端またはその近くのアミノ酸残基と結合している連
結部分であり、但し、Ｌはジスルフィド結合を含まず、Ｄ１またはＤ２の少なくとも１つ
はＤ１またはＤ２のＡ鎖ポリペプチドまたはＢ鎖ポリペプチドのアミノ末端と結合した置
換基を含んでいてもよく、但し、（１）連結部分はジスルフィド結合を含まず、（２）Ａ
鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドのアミノ末端が置換基を含まない場合、連結部分
はオキサリル（Ｃ２）部分でも、スベリオル（Ｃ８）部分でも、ドデカンジオイル（Ｃ１
２）部分でもない）
を含むインスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体を提供する。
【００４０】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、Ｄ１お
よびＤ２が同じであるか、またはＤ１およびＤ２が異なる。
【００４１】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、連結部
分がＤ１およびＤ２のカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介して
Ｄ１とＤ２を共有結合している。
【００４２】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、置
換基が一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直
鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ＰＥＧ、糖類であり得る）を有し、特定の態様では
、ＲＣ（Ｏ）−がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイ
ルまたはアルコキシカルボニルであり得る。特定の態様では、置換基がアセチル、フェニ
ルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル、メトキシアセチル
、グリシン、アミノエチルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、ＰＥＧ１、ＰＥＧ２、
Ｎ−ジメチルおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される。
【００４３】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、Ｄ１お
よびＤ２が独立に、天然ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、
デスＢ３０インスリンまたはインスリングラルギンである。
【００４４】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、各Ａ鎖ポ
リペプチドが独立に、アミノ酸配列
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）を含
み、各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）を含み、Ｘ２がイソロイシンまたはスレ
オニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシンであり；Ｘ８がスレオニンまたは
ヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタミンであり；Ｘ１９がチロシン、
４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−アミノフェニルアラニンであり；
Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２がフェニルアラニンまたはデスアミ
ノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまたはスレオニンであり；Ｘ２６がロ
イシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニンまたはアスパラギン酸であり；
Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３０がヒスチジン、アスパラギン酸
、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸であり；Ｘ３１がアスパラギン酸
、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたはプロリンであり；Ｘ３３がスレオ
ニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニンまたは非存在であり；Ｘ３５が
アルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ３２の少なくとも１つがリジンで
ある。
【００４５】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体の特定の態様では、連結部分
がアシル、脂肪族、複素脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から
選択される置換されていてもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン
単位が独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ
）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、
−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基
によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル
部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複
素脂肪族部分である、二価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていて
もよいＣ１〜Ｃ２０炭化水素鎖であり得る。
【００４６】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のなおさらなる態様では、連
結部分がアシル部分、−Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレングリコ
ール）（ＰＥＧ）鎖、アミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シクロオク
チン含有部分、置換アシル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）である
。
【００４７】
インスリン受容体部分アゴニストまたはインスリン二量体のさらなる態様では、連結部
分がＣ２〜Ｃ２０アシル部分である。
【００４８】
特定の態様では、連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（
式中、ｎ＝０〜４５であり、それだけに限らないが、オキサリル（Ｃ２）部分、スクシニ
ル（Ｃ４）部分、アジポイル（Ｃ６）部分、スベリオル（Ｃ８）部分、デカンジオイル（
Ｃ１０）部分、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分、テトラデカンジオイル（Ｃ１４）部分
またはヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分を含む）である。
【００４９】
本発明はさらに、第１のインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリンアナログ二量体であって、各ヘテロ二
量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポ
リペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結しており；第１および第２のインスリン
またはインスリンアナログヘテロ二量体は２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカルボキ
シ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結する連結部分を通して一緒に共有結合して
おり；インスリンアナログはインスリンリスプロ、インスリンアスパルトおよびインスリ
ングラルギンから選択され；第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリ
ペプチドのＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置
換基と共有結合していてもよく、但し、連結部分はジスルフィド結合を含まない、インス
リンアナログ二量体を提供する。
【００５０】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、第１および第２のインスリンま
たはインスリンアナログヘテロ二量体が同じであるか、または第１および第２のインスリ
ンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異なる。
【００５１】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、連結部分が、それぞれのＢ鎖ポ
リペプチドのカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介して第１のイ
ンスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはインスリンア
ナログヘテロ二量体を共有結合している。
【００５２】
インスリン受容体部分アゴニストのなおさらなる態様では、置換基が一般式ＲＣ（Ｏ）
−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸
、ペプチド、ＰＥＧ、糖類であり得る）を有し、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−がアセチ
ル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコキシカル
ボニルであり得る。特定の態様では、置換基がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイ
ル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチ
ルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、ＰＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアル
コキシカルボニルからなる群から選択される。
【００５３】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、第１および第２のインスリンま
たはインスリンアナログの少なくとも１つがポリエチレングリコール、糖部分または複素
環とさらに結合している。
【００５４】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、連結部分がアシル、脂肪族、複素
脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されてい
てもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、
−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、Ｓ
Ｏ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられて
いてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル
部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分である、二
価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ２０炭化
水素鎖であり得る。
【００５５】
インスリン受容体部分アゴニストのなおさらなる態様では、連結部分がアシル部分、−
Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖、ア
ミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シクロオクチン含有部分、置換アシ
ル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）である。
【００５６】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、連結部分がＣ２〜Ｃ２０アシル
部分である。
【００５７】
特定の態様では、連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（
式中、ｎ＝０〜４５であり、それだけに限らないが、オキサリル（Ｃ２）部分、スクシニ
ル（Ｃ４）部分、アジポイル（Ｃ６）部分、スベリオル（Ｃ８）部分、デカンジオイル（
Ｃ１０）部分、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分、テトラデカンジオイル（Ｃ１４）部分
またはヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分を含む）である。
【００５８】
本発明はさらに、式
Ｄ１−Ｌ−Ｄ２
（式中、Ｄ１およびＤ２はそれぞれ独立に、インスリンまたはインスリンアナログポリ
ペプチドであり、各インスリンポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結してい
るＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体であり；Ｌはリンカー部
分の一端がＤ１のカルボキシル基またはその近くのアミノ酸残基と結合しており、リンカ
ー部分の他端がＤ２のカルボキシル末端またはその近くのアミノ酸残基と結合している連
結部分であり、但し、Ｌはジスルフィド結合を含まず；インスリンアナログはインスリン
リスプロ、インスリンアスパルトおよびインスリングラルギンから選択され；Ｄ１または
Ｄ２の少なくとも１つはＤ１またはＤ２のＡ鎖ポリペプチドまたはＢ鎖ポリペプチドのア
ミノ末端と結合した置換基を含んでいてもよく；但し、連結部分はジスルフィド結合を含
まない）
を含むインスリンアナログ二量体を提供する。
【００５９】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、Ｄ１およびＤ２が同じであるか
、またはＤ１およびＤ２が異なる。
【００６０】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、連結部分がＤ１およびＤ２のカ
ルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介してＤ１とＤ２を共有結合し
ている。
【００６１】
インスリン受容体部分アゴニストのなおさらなる態様では、置換基が一般式ＲＣ（Ｏ）
−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸
、ペプチド、ＰＥＧ、糖類であり得る）を有し、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−がアセチ
ル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコキシカル
ボニルであり得る。特定の態様では、置換基がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイ
ル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチ
ルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、ＰＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアル
コキシカルボニルからなる群から選択される。
【００６２】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、連結部分がアシル、脂肪族、複素
脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されてい
てもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、
−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、Ｓ
Ｏ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられて
いてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル
部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分である、二
価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ２０炭化
水素鎖であり得る。
【００６３】
インスリン受容体部分アゴニストのなおさらなる態様では、連結部分がアシル部分、−
Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖、ア
ミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シクロオクチン含有部分、置換アシ
ル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）である。
【００６４】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、連結部分がＣ２〜Ｃ２０アシル
部分である。
【００６５】
特定の態様では、連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（
式中、ｎ＝０〜４５であり、それだけに限らないが、オキサリル（Ｃ２）部分、スクシニ
ル（Ｃ４）部分、アジポイル（Ｃ６）部分、スベリオル（Ｃ８）部分、デカンジオイル（
Ｃ１０）部分、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分、テトラデカンジオイル（Ｃ１４）部分
またはヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分を含む）である。
【００６６】
本発明は、
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、各ヘ
テロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよび
Ｂ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結しており；第１および第２のイン
スリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカ
ルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結する連結部分を通して一緒に共有結
合しており；第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドのＡ鎖
ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と共有結合
していてもよく；インスリン受容体部分アゴニストは、機能的リン酸化アッセイによって
測定される、ヒトインスリン受容体（ＩＲ）に対する天然ヒトインスリンの最大応答の約
２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％ま
たは７０％のＩＲに対する最大応答を有する、インスリン受容体部分アゴニスト；または
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、各ヘ
テロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよび
Ｂ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結しており；第１および第２のイン
スリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカ
ルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結する連結部分を通して一緒に共有結
合しており；第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドのＡ鎖
ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と共有結合
していてもよく；インスリン受容体部分アゴニストは、機能的リン酸化アッセイによって
測定される、ヒトインスリン受容体（ＩＲ）に対する天然ヒトインスリンの最大応答の２
０％〜７０％の間、４０％〜７０％の間、５０％〜７０％の間、４０％〜６０％の間また
は２０％〜４０％の間のＩＲに対する最大応答を有する、インスリン受容体部分アゴニス
ト；または
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、各ヘ
テロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよび
Ｂ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結しており；第１および第２のイン
スリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカ
ルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結する連結部分を通して一緒に共有結
合しており；第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドのＡ鎖
ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と共有結合
していてもよく；インスリン受容体部分アゴニストは、機能的リン酸化アッセイによって
測定される、ヒトインスリン受容体（ＩＲ）に対する天然ヒトインスリンの最大応答の少
なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、
６５％または７０％のＩＲに対する最大応答を有する、インスリン受容体部分アゴニスト
；または
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、各ヘ
テロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよび
Ｂ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結しており；第１および第２のイン
スリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカ
ルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結する連結部分を通して一緒に共有結
合しており；第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドのＡ鎖
ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と共有結合
していてもよく；インスリン受容体部分アゴニストは、機能的リン酸化アッセイによって
測定される、ヒトインスリン受容体（ＩＲ）に対する天然ヒトインスリンの最大応答の７
０％未満のＩＲに対する最大応答を有する、インスリン受容体部分アゴニスト；または
第１のインスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはイ
ンスリンアナログヘテロ二量体とを含むインスリン受容体部分アゴニストであって、各ヘ
テロ二量体はＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドを含み、Ａ鎖ポリペプチドおよび
Ｂ鎖ポリペプチドは鎖間ジスルフィド結合を通して連結しており；第１および第２のイン
スリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体は２個のそれぞれのＢ鎖ポリペプチドのカ
ルボキシ末端またはその近くのアミノ酸の側鎖を連結する連結部分を通して一緒に共有結
合しており；第１のインスリンポリペプチドまたは第２のインスリンポリペプチドのＡ鎖
ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つのアミノ末端は置換基と共有結合
していてもよく；インスリン受容体部分アゴニストは、機能的リン酸化アッセイによって
測定される、ヒトインスリン受容体（ＩＲ）に対する天然ヒトインスリンの最大応答の約
２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％ま
たは７０％のＩＲに対する最大応答を有する、インスリン受容体部分アゴニスト
を提供する。
【００６７】
上記実施形態では、機能的リン酸化アッセイが、インスリン受容体（ＩＲ）ＡＫＴ−リ
ン酸化アッセイであり得る。
【００６８】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、連結部分がジスルフィド結合を
含まず、Ａ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドのアミノ末端が置換基を含まない場合
、連結部分がオキサリル（Ｃ２）部分でも、スベリオル（Ｃ８）部分でも、ドデカンジオ
イル（Ｃ１２）部分でもない。
【００６９】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、第１および第２のインスリンま
たはインスリンアナログヘテロ二量体が同じであるか、または第１および第２のインスリ
ンまたはインスリンアナログヘテロ二量体が異なる。
【００７０】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、連結部分が、それぞれのＢ鎖ポ
リペプチドのカルボキシ末端またはその近くのリジン残基のεアミノ基を介して第１のイ
ンスリンまたはインスリンアナログヘテロ二量体と第２のインスリンまたはインスリンア
ナログヘテロ二量体を共有結合している。
【００７１】
インスリン受容体部分アゴニストのなおさらなる態様では、置換基が一般式ＲＣ（Ｏ）
−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸
、ペプチド、ＰＥＧ、糖類であり得る）を有し、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−がアセチ
ル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコキシカル
ボニルであり得る。特定の態様では、置換基がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイ
ル、Ｎ−アルキルカルバモイル、イソブチル、メトキシアセチル、グリシン、アミノエチ
ルグルコース（ＡＥＧ）、ＡＥＧ−Ｃ６、ＰＥＧ１、ＰＥＧ２、Ｎ−ジメチルおよびアル
コキシカルボニルからなる群から選択される。
【００７２】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、第１および第２のインスリンま
たはインスリンアナログが独立に、天然ヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリ
ンアスパルト、デスＢ３０インスリンまたはインスリングラルギンである。
【００７３】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、各Ａ鎖ポリペプチドが独立に、ア
ミノ酸配列
ＧＸ２Ｘ３ＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬＹＱＬＸ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）を含
み、各Ｂ鎖ポリペプチドが独立に、アミノ酸配列
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴＸ３１Ｘ３２（配
列番号４）または
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５Ｘ２６ＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＸ２７ＹＴ
Ｘ３１Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）を含み、Ｘ２がイソロイシンまたはスレ
オニンであり；Ｘ３がバリン、グリシンまたはロイシンであり；Ｘ８がスレオニンまたは
ヒスチジンであり；Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタミンであり；Ｘ１９がチロシン、
４−メトキシ−フェニルアラニン、アラニンまたは４−アミノフェニルアラニンであり；
Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；Ｘ２２がフェニルアラニンまたはデスアミ
ノ−フェニルアラニンであり；Ｘ２５がヒスチジンまたはスレオニンであり；Ｘ２６がロ
イシンまたはグリシンであり；Ｘ２７がフェニルアラニンまたはアスパラギン酸であり；
Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；Ｘ３０がヒスチジン、アスパラギン酸
、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステイン酸であり；Ｘ３１がアスパラギン酸
、プロリンまたはリジンであり；Ｘ３２がリジンまたはプロリンであり；Ｘ３３がスレオ
ニン、アラニンまたは非存在であり；Ｘ３４がアルギニンまたは非存在であり；Ｘ３５が
アルギニンまたは非存在であり；但し、Ｘ３１またはＸ３２の少なくとも１つがリジンで
ある。
【００７４】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、連結部分がアシル、脂肪族、複素
脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されてい
てもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、
−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、Ｓ
Ｏ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられて
いてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル
部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分である、二
価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていてもよいＣ１〜２０炭化水
素鎖であり得る。
【００７５】
インスリン受容体部分アゴニストのなおさらなる態様では、連結部分がアシル部分、−
Ｃ（Ｏ）ＲＣ（Ｏ）−（Ｒはアルキル鎖、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖、ア
ミド含有鎖、（１又は複数の）トリアゾール含有鎖、シクロオクチン含有部分、置換アシ
ル鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖である）である。
【００７６】
インスリン受容体部分アゴニストのさらなる態様では、連結部分がＣ２〜Ｃ２０アシル
部分である。
【００７７】
特定の態様では、連結部分がアルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（
式中、ｎ＝０〜４５であり、それだけに限らないが、オキサリル（Ｃ２）部分、スクシニ
ル（Ｃ４）部分、アジポイル（Ｃ６）部分、スベリオル（Ｃ８）部分、デカンジオイル（
Ｃ１０）部分、ドデカンジオイル（Ｃ１２）部分、テトラデカンジオイル（Ｃ１４）部分
またはヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分を含む）である。
【００７８】
本発明はさらに、リンカー１、リンカー２、リンカー３、リンカー１０、リンカー１１
、リンカー１２、リンカー１３、リンカー１４、リンカー１５、リンカー１６、リンカー
１７、リンカー１８、リンカー１９、リンカー２０、リンカー２１、リンカー２２、リン
カー２３、リンカー２４、リンカー２５、リンカー２６、リンカー２７、リンカー２８、
リンカー２９、リンカー３０、リンカー３１、リンカー３２、リンカー３３、リンカー３
４、リンカー３５、リンカー３６、リンカー３７、リンカー３８、リンカー３９、リンカ
ー４０、リンカー４１、リンカー４２、リンカー４３、リンカー４４、リンカー４５、リ
ンカー４６、リンカー４７、リンカー４８、リンカー４９およびリンカー５０からなる群
から選択される二官能性リンカーによって結合された、第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第
１のＢ鎖ポリペプチドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９または
Ｂ２８  Ｌｙｓと、第２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２
のインスリンヘテロ二量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓとを含むインスリン二量
体であって、但し、二官能性リンカーがリンカー１０、リンカー１１、リンカー１２、リ
ンカー１３またはリンカー１４である場合、第１または第２のＡ鎖またはＢ鎖ポリペプチ
ドの少なくとも１つがそのＮ末端アミノ酸で置換基と結合している、あるいは少なくとも
第１のインスリンヘテロ二量体分子のＮ末端アミノ酸が置換基と結合している、あるいは
第１のインスリンヘテロ二量体と第２のインスリンヘテロ二量体の両方のＮ末端アミノ酸
が置換基と結合している、インスリン二量体を提供する。
【００７９】
特定の実施形態では、置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ
’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステルを含む。特定の実施形態では、置換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、
メチル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ
６アルキル基またはＰＥＧ２基である。
【００８０】
本発明はさらに、第１のリンカーおよび第２のリンカーを介して結合した、リンカー５
およびリンカー７からなる群から選択される第１のリンカーと結合した第１のＡ鎖ポリペ
プチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１
のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと、リンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカー
９からなる群から選択される第２のリンカーと結合した第２のＡ鎖ポリペプチドおよび第
２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２のインスリンヘテロ二量体の第２のＢ２９またはＢ２
８  Ｌｙｓとを含むインスリン二量体を提供する。
【００８１】
さらなる実施形態では、本発明は、リンカー５およびリンカー７からなる群から選択さ
れる第１のリンカーと結合した第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチドを
有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと、リン
カー５およびリンカー７からなる群から選択される第２のリンカーと結合した第２のＡ鎖
ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２のインスリンヘテロ二量体の第
２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓとを含むインスリンアナログ二量体であって、第１およ
び第２のリンカーが構造
【化１】
2020097572.tif 000003
【００８２】
（Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複素脂肪
族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても
よい基である）
を有する架橋リンカーを介して結合しているインスリンアナログ二量体を提供する。特
定の態様では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシル基
またはＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、ＰＥ
Ｇ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である。
【００８３】
特定の実施形態では、置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ
’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステルを含む。特定の実施形態では、置換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、
メチル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ
６アルキル基またはＰＥＧ２基である。
【００８４】
さらなる実施形態では、本発明は、リンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカ
ー９からなる群から選択される第１のリンカーと結合した第１のＡ鎖ポリペプチドおよび
第１のＢ鎖ポリペプチドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９また
はＢ２８  Ｌｙｓと、リンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカー９からなる群
から選択される第２のリンカーと結合した第２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリ
ペプチドを有する第２のインスリンヘテロ二量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと
を含むインスリンアナログ二量体であって、第１および第２のリンカーが構造
【化２】
2020097572.tif 000004
【００８５】
（Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複素脂肪
族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても
よい基である）
を有する架橋リンカーを介して結合しているインスリンアナログ二量体を提供する。特
定の態様では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシル基
またはＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、ＰＥ
Ｇ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である。
【００８６】
特定の実施形態では、置換基が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ
’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステルを含む。特定の実施形態では、置換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、
メチル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ
６アルキル基またはＰＥＧ２基である。
【００８７】
本発明はさらに、本明細書で開示されるインスリン受容体部分アゴニストのいずれか１
つと、薬学的に許容される塩とを含む組成物を提供する。
【００８８】
本発明は、糖尿病を治療する方法であって、治療上有効量の上記インスリン受容体部分
アゴニストのいずれか１つを含む組成物を糖尿病の個体に投与するステップを含む方法を
提供する。特定の態様では、糖尿病が１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である。
【００８９】
本発明は、上記インスリン受容体部分アゴニストのいずれか１つを含む糖尿病を治療す
るための組成物の使用を提供する。特定の態様では、糖尿病が１型糖尿病、２型糖尿病ま
たは妊娠糖尿病である。
【００９０】
本発明は、糖尿病を治療するための医薬品を製造するための本明細書で開示されるイン
スリン受容体部分アゴニストのいずれか１つの使用を提供する。特定の態様では、糖尿病
が１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である。
【００９１】
定義
インスリン−本明細書で使用される場合、この用語は、動物の体内の炭水化物の代謝に
影響を及ぼし、糖尿病の治療において価値がある膵臓の活性成分を意味する。この用語は
、構造、使用および意図した効果が天然インスリンと同じまたは類似であり、糖尿病の治
療において価値がある合成および生物工学由来産物を含む。この用語は、配列番号１に示
されるアミノ酸配列を有するＡ鎖ペプチドおよび配列番号２に示されるアミノ酸配列を有
するＢ鎖ペプチドを含む５１アミノ酸ヘテロ二量体であって、Ａ鎖の６位および１１位の
システイン残基がジスルフィド結合で連結しており、Ａ鎖の７位およびＢ鎖の７位のシス
テイン残基がジスルフィド結合で連結しており、Ａ鎖の２０位およびＢ鎖の１９位のシス
テイン残基がジスルフィド結合で連結している５１アミノ酸ヘテロ二量体を示す総称であ
る。
【００９２】
インスリンアナログ（ａｎａｌｏｇまたはａｎａｌｏｇｕｅ）−本明細書で使用される
この用語は、天然Ａ鎖ペプチドおよび／またはＢ鎖ペプチドの（１又は複数の）修飾を含
む任意のヘテロ二量体アナログまたは単鎖アナログを含む。修飾は、それだけに限らない
が、Ａ４、Ａ５、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１２、Ａ１３、Ａ１４、Ａ１５、Ａ１６、Ａ１
７、Ａ１８、Ａ１９、Ａ２１、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１３、
Ｂ１４、Ｂ１５、Ｂ１６、Ｂ１７、Ｂ１８、Ｂ２０、Ｂ２１、Ｂ２２、Ｂ２３、Ｂ２６、
Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９およびＢ３０から選択される位置の天然アミノ酸をあるアミノ酸
で置換すること；位置Ｂ１〜４およびＢ２６〜３０のいずれかまたは全てを欠失すること
；あるいは直接またはポリマーもしくは非ポリマーリンカーによって１個または複数のア
シル、ポリエチルグリシン（ＰＥＧ）または（１又は複数の）糖類部分を結合すること；
あるいはこれらの任意の組み合わせを含む。本明細書で開示されるＮ結合型グリコシル化
インスリンアナログによって例示されるように、この用語はさらに、少なくとも１つのＮ
結合型グリコシル化部位を有するよう修飾された任意のインスリンヘテロ二量体および単
鎖アナログおよび、特に、Ｎ結合型グリコシル化部位がＮ−グリカンと連結しているまた
はＮ−グリカンによって占められている実施形態を含む。インスリンアナログの例として
は、それだけに限らないが、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、公開国際出
願である国際公開第２０１０００８０６０６号、国際公開第２００９／０９９７６３号お
よび国際公開第２０１００８０６０９号に開示されているヘテロ二量体および単鎖アナロ
グが挙げられる。単鎖インスリンアナログの例としては、それだけに限らないが、その開
示がそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる、公開国際
出願である国際公開第９６３４８８２号、国際公開第９５５１６７０８号、国際公開２
００５０５４２９１号、国際公開第２００６０９７５２１号、国際公開第２００７１０４
７３４号、国際公開第２００７１０４７３６号、国際公開第２００７１０４７３７号、国
際公開第２００７１０４７３８号、国際公開第２００７０９６３３２号、国際公開第２０
０９１３２１２９号；米国特許第５３０４４７３号および第６６３０３４８号；ならびに
Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０５：９８１〜９８６（１９９５）に
開示されているものも挙げられる。
【００９３】
この用語はさらに、インスリン受容体でほとんどまたは全く検出可能な活性を有さない
が、天然インスリンと比べてインスリン受容体での少なくとも１％、１０％、５０％、７
５％または９０％の活性を有するインスリン受容体での活性を有するように１つまたは複
数のアミノ酸修飾または置換を含むよう修飾されており、少なくとも１つのＮ結合型グリ
コシル化部位をさらに含む単鎖およびヘテロ二量体ポリペプチド分子を含む。特定の態様
では、インスリンアナログは、天然インスリンが有するインスリン受容体での８０％（ま
たは７０％）未満の活性を有する部分アゴニストである。これらのインスリンアナログは
、インスリン成長ホルモン受容体での減少した活性およびインスリン受容体での増加した
活性を有しており、ヘテロ二量体と単鎖アナログの両方を含む。
【００９４】
単鎖インスリンまたは単鎖インスリンアナログ−本明細書で使用される場合、この用語
は、Ａ鎖ペプチドまたは機能的アナログおよびＢ鎖ペプチドまたは機能的アナログが、２
〜３５個のアミノ酸のペプチドもしくはポリペプチドまたは非ペプチドポリマーもしくは
非ポリマーリンカーによって共有結合しており、天然インスリンと比べてインスリン受容
体で少なくとも１％、１０％、５０％、７５％または９０％のインスリン活性を有する構
造的に関連するタンパク質の群を包含する。単鎖インスリンまたはインスリンアナログは
さらに、３つのジスルフィド結合を含む：第１のジスルフィド結合はＡ鎖またはその機能
的アナログの６位のシステイン残基と１１位のシステイン残基との間にあり、第２のジス
ルフィド結合はＡ鎖またはその機能的アナログの７位のシステイン残基とＢ鎖またはその
機能的アナログの７位のシステイン残基との間にあり、第３のジスルフィド結合はＡ鎖ま
たはその機能的アナログの２０位のシステイン残基とＢ鎖またはその機能的アナログの１
９位のシステイン残基との間にある。
【００９５】
連結ペプチドまたはＣ−ペプチド−本明細書で使用される場合、この用語は、単鎖プレ
プロインスリン様分子のＢ−Ｃ−Ａポリペプチド配列の連結部分「Ｃ」を指す。具体的に
は、天然インスリン鎖では、Ｃ−ペプチドはＢ鎖の３０位のアミノ酸とＡ鎖の１位のアミ
ノ酸を連結する。この用語は、天然インスリンＣ−ペプチド、サルＣ−ペプチド、および
Ｂ鎖とＡ鎖を連結する３〜３５個のアミノ酸の任意の他のペプチドを共に指し得るので、
単鎖インスリンアナログ（例えば、米国公開出願第２００９０１７０７５０号および第２
００８００５７００４号ならびに国際公開第９６３４８８２号参照）ならびに国際公開第
９５１６７０８号および米国特許第７１０５３１４号に開示されているようなインスリン
前駆体分子においてＢ鎖ペプチドとＡ鎖ペプチドを連結する任意のペプチドを包含するこ
とを意図している。
【００９６】
アミノ酸修飾−本明細書で使用される場合、この用語は、アミノ酸の置換、または化学
基の付加および／もしくは除去によるアミノ酸への／からのアミノ酸の誘導を指し、ヒト
タンパク質に一般的に見られる２０個のアミノ酸、ならびに非定型または非天然アミノ酸
のいずれかによる置換を含む。
【００９７】
非定型アミノ酸の商業的な供給源には、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋ
ｅｅ、ＷＩ）、ＣｈｅｍＰｅｐ  Ｉｎｃ．（Ｍｉａｍｉ、ＦＬ）およびＧｅｎｚｙｍｅ  
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）が含まれる。非定型アミ
ノ酸は、商業的な供給業者から購入しても、新規に合成しても、または天然アミノ酸から
化学修飾もしくは誘導体化してもよい。
【００９８】
アミノ酸置換−本明細書で使用される場合は、１個のアミノ酸残基の異なるアミノ酸残
基による置き換えを指す。
【００９９】
保存的アミノ酸置換−本明細書で使用される場合、この用語は、本明細書において、以
下の５つのグループの１つの中の交換と定義される：
Ｉ．小型の脂肪族の非極性またはわずかに極性の残基：
Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
ＩＩ．極性の、負に帯電した残基およびそのアミド：
Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、システイン酸およびホモシステイン酸；
ＩＩＩ．極性の正に帯電した残基：
Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；オルニチン（Ｏｒｎ）
ＩＶ．大型の脂肪族の非極性残基：
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン
Ｖ．大型の芳香族残基：
Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、アセチルフェニルアラニン
治療する−本明細書で使用される場合、「治療する」（または「治療すること」、「治
療される」、「治療」等）という用語は、状態（例えば、糖尿病）、状態の（１又は複数
の）症状（例えば、高血糖）または状態への素因を緩和する、軽減する、変化させる、寛
解させる、改善するまたは影響を及ぼす目的で、本開示のＩＲＰＡをそれを必要とする対
象に投与することを指す。例えば、本明細書で使用される場合、「糖尿病を治療する」と
いう用語は、一般的に、グルコース血中レベルを正常レベル近くに維持することを指し、
所与の状況に応じて血中グルコースレベルを上昇または低下させることを含み得る。
【０１００】
薬学的に許容される担体−本明細書で使用される場合、この用語は、標準的な医薬担体
（リン酸緩衝食塩水溶液、水など）、エマルジョン（油／水型または水／油型エマルジョ
ンなど）、および必要とする個体へのまたは必要とする個体による投与に適した種々の型
の湿潤剤のいずれかを含む。この用語はまた、ヒトを含む動物での使用について、米国連
邦政府の規制当局によって承認されたまたは米国薬局方に列挙された薬剤のいずれかも包
含する。
【０１０１】
薬学的に許容される塩−本明細書で使用される場合、この用語は、親化合物の生物学的
活性を保持し、生物学的にもその他の点でも好ましくなくない化合物の塩を指す。本明細
書で開示される化合物の多くが、アミノおよび／またはカルボキシル基またはこれらに類
似の基の存在によって、酸および／または塩基塩を形成することができる。
【０１０２】
薬学的に許容される塩基付加塩は、無機および有機塩基から調製することができる。無
機塩基に由来する塩には、単なる例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニ
ウム、カルシウム、亜鉛およびマグネシウム塩が含まれる。有機塩基に由来する塩には、
それだけに限らないが、一級、二級および三級アミンの塩が含まれる。
【０１０３】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機および有機酸から調製することができる。無機酸
に由来する塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが含まれる。有機酸に由
来する塩には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、
マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マ
ンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸
などが含まれる。
【０１０４】
有効量または治療上有効量−本明細書で使用される場合は、非毒性であるが、所望の効
果を提供するのに十分な量のインスリンアナログを指す。例えば、１つの所望の効果は高
血糖の予防または治療であるだろう。「有効」である量は、個体の年齢および全身状態、
投与様式などに応じて、対象によって異なる。よって、正確な「有効量」を指定すること
がいつも可能であるとは限らない。それを必要とする個体へのまたは必要とする個体によ
る投与の前に最適な有効量を決定することがいつも可能であるとは限らない。しかしなが
ら、任意の個々のケースでの適切な「有効」量は、日常的な実験を用いて当業者によって
決定され得る。
【０１０５】
非経口−本明細書で使用される場合、この用語は、消化管を通さず、鼻腔内、吸入、皮
下、筋肉内、髄腔内または静脈内などのある他の経路によることを意味する。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体２４、１８および４０のグルコース低下効果を示す図である。
【図２Ａ】化合物ＡをＲＨＩ（Ｈｕｍｕｌｉｎ）と比較する、マウスにおけるインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の結果を示す図である。化合物Ａを７２Ｕ／ｋｇの用量および３００Ｕ／ｋｇの用量で投与し、Ｈｕｍｕｌｉｎを１８Ｕ／ｋｇの用量および７２Ｕ／ｋｇの用量で投与した。
【図２Ｂ】化合物ＢをＲＨＩ（Ｈｕｍｕｌｉｎ）と比較する、マウスにおけるインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の結果を示す図である。化合物Ｂを７２Ｕ／ｋｇの用量および３００Ｕ／ｋｇの用量で投与し、Ｈｕｍｕｌｉｎを１８Ｕ／ｋｇの用量および７２Ｕ／ｋｇの用量で投与した。
【図２Ｃ】二量体２４をＲＨＩ（Ｈｕｍｕｌｉｎ）と比較する、マウスにおけるインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の結果を示す図である。二量体２４を７２Ｕ／ｋｇの用量および３００Ｕ／ｋｇの用量で投与し、Ｈｕｍｕｌｉｎを１８Ｕ／ｋｇの用量および７２Ｕ／ｋｇの用量で投与した。
【図２Ｄ】マウスにおけるインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の二量体５５の結果を示す図である。二量体５５を１２０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量および３００ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で投与した。
【図２Ｅ】マウスにおけるインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の二量体５８の結果を示す図である。二量体５８を６０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量および３００ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で投与した。
【図２Ｆ】マウスにおけるインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の二量体６０の結果を示す図である。二量体６０を７２ｎｍｏｌ／ｋｇの用量および３００ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で投与した。
【図２Ｇ】マウスにおけるインスリン負荷試験（ＩＴＴ）の二量体６７の結果を示す図である。二量体６７を１２０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量および３００ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で投与した。
【図３】化合物Ａインスリン二量体が、グルタチオン（ＧＳＨ）を用いないラット腎細胞膜（ＲＫＣＭ）との２時間のインキュベーションによってインスリン単量体に分解していたことを示す図である。％値の％はイオン化効率の潜在的な差のために半定量的なものに過ぎない。
【図４】化合物Ａインスリン二量体が、グルタチオン（ＧＳＨ）を用いるラット腎細胞膜（ＲＫＣＭ）との２時間のインキュベーションによってインスリン単量体に分解していたことを示す図である。％値の％はイオン化効率の潜在的な差のために半定量的なものに過ぎない。
【図５】二量体２４が、グルタチオン（ＧＳＨ）を用いないラット腎細胞膜（ＲＫＣＭ）との２時間のインキュベーションによって一部のＡ鎖ポリペプチドを失ったが、モノマーには分解しなかったことを示す図である。％値の％はイオン化効率の潜在的な差のために半定量的なものに過ぎない。
【図６】二量体２４が、グルタチオン（ＧＳＨ）を用いるラット腎細胞膜（ＲＫＣＭ）との２時間のインキュベーションによって一部のＡ鎖ポリペプチドを失ったが、モノマーには分解しなかったことを示す図である。％値の％はイオン化効率の潜在的な差のために半定量的なものに過ぎない。
【図７Ａ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体４、５、７、８および９のグルコース低下効果を示す図である。
【図７Ｂ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体１８、１９、２０、２１および２２のグルコース低下効果を示す図である。
【図７Ｃ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体２３、２４、２６、２７および２８のグルコース低下効果を示す図である。
【図７Ｄ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体２９、３２、３７、３８および３９のグルコース低下効果を示す図である。
【図７Ｅ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体４０、４１、４３、４４および４８のグルコース低下効果を示す図である。
【図７Ｆ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体５５、５７、５８、６０および６１のグルコース低下効果を示す図である。
【図７Ｇ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体６２、６４、６７、６９および７１のグルコース低下効果を示す図である。
【図７Ｈ】０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇで糖尿病ミニブタに投与した場合の、ＲＨＩと比べた二量体７２、７７および７８のグルコース低下効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１０７】
本発明は、通常のインスリン様効力を有し、最大活性が減少したインスリン受容体を活
性化し得る共有結合インスリン二量体を形成するよう共有結合した２個のインスリン分子
を含む化合物を提供する。これらの化合物はインスリン受容体部分アゴニスト（ＩＲＰＡ
）であり：これらは他のインスリンアナログのようにふるまって、グルコースを有効に低
下させるが、低血糖のリスクが低い。
【０１０８】
インスリン二量体は、Ｂｒａｎｄｅｎｂｕｒｇら、米国特許第３９０７７６３号（１９
７３）；Ｔａｔｎｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２１６：６８７〜６９４（１９８３）
；ＳｈｕｔｔｌｅｒおよびＢｒａｎｄｅｎｂｕｒｇ、Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ’ｓ  Ｚ
．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、３６３、３１７〜３３０、１９８２；Ｗｅｉｌａｎｄら、
Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（米国）８７：１１５４〜１１５８（１９９０
）；Ｄｅｐｐｅら、Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ  Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ（１９９４）３５０：２１３〜２１７；ＢｒａｎｄｅｎｂｕｒｇおよびＨａｖ
ｅｎｉｔｈ、米国特許第６９０８８９７号（Ｂ２）（２００５）；Ｋｎｕｄｓｅｎら、Ｐ
ＬＯＳ  ＯＮＥ  ７：ｅ５１９７２（２０１２）；ＤｉＭａｒｃｈｉら、国際公開第２０
１１／１５９８９５号；ＤｉＭａｒｃｈｉら、国際公開第２０１４／０５２４５１号；な
らびにＨｅｒｒｅｒａら、国際公開第２０１４１４１１６５号に開示されている。より最
近では、インスリン二量体が、Ｂｒａｎｔ−Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃ
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｐａｒｔｉａｌ  Ａ
ｇｏｎｉｓｔｓ  ａｓ  ａ  Ｒｏｕｔｅ  ｔｏ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  
Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｐｈ．Ｄ．Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａ  Ｕｎｉｖｅｒ
ｓｉｔｙ（２０１５年４月）ならびにＺａｙｋｏｖおよびＤｉＭａｒｃｈｉ、Ｐｏｓｔｅ
ｒ  Ｐ２１２−Ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ
ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｔｉａｌ  ａｇｏｎｉｓｍ  ｏ
ｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｍｐｏｓ
ｉｕｍ、Ｏｒｌａｎｄｏ  ＦＬ（６月２０〜２５日（２０１５））に記載されている。し
かしながら、本発明の発明者らは、二量体のインスリン活性および部分アゴニスト活性の
レベルが二量体構造、インスリンアナログの配列、二量体形成リンカーの長さおよび２個
のインスリンポリペプチドを連結する二量体形成の部位の関数であることを発見した。本
発明者らは、本発明のインスリン二量体が、高用量で投与した場合の天然インスリンまた
は他のインスリンアナログよりも、高用量で投与した場合に低血糖を促進するリスクが低
いことを発見した。
【０１０９】
本発明は、現在の標準治療（ＳＯＣ）基礎インスリンに対して改善した治療指数（ＴＩ
）を示す新規で変化をもたらす基礎インスリン（１日１回投与）として製剤化される部分
アゴニスト共有結合インスリン二量体を提供する。これらの分子は、糖尿病ミニブタにお
いて低下した低血糖のリスクでグルコースを有効に低下させることができ、１日１回（Ｑ
Ｄ）基礎インスリン特性を有し得る。改善したＴＩは、開業医がＩＲＰＡ二量体をより積
極的に投与して空腹時グルコースの管理の最終目標を達成することを可能にし得る。空腹
時グルコースおよびＨｂＡｌｃの厳格な管理によって、これらの分子が１）２型糖尿病（
Ｔ２ＤＭ）における有効性および安全性プロファイルが増強した独立型の長時間作用性イ
ンスリン、および２）さらなる食事の速効型インスリンアナログ（ＲＡＡ）用量と使用す
るための１型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）（および一部のＴ２ＤＭ）における改善した基礎的な基
礎インスリンとして働くことが可能になり得る。
【０１１０】
理想的な長時間作用性インスリンは、高度に安定で再現性のあるＰＫ／ＰＤで糖尿病に
おける空腹時グルコースの連続的な管理を提供する。しかしながら、現在利用可能な基礎
インスリンは、改善した安定性およびＰＫ／ＰＤの再現性を有するものでさえ、狭い治療
指数を有し続け、グルコースレベルが正常血糖標的に近づくにつれて低血糖事象が増加す
る。これはしばしば、低血糖を回避するための過少量投与につながり得る。本発明のＩＲ
ＰＡによる治療は、投与が増加するにつれてグルコース低下の変化率を減衰させることに
よって、この有効性：低血糖の関係を変化させると予想される。
【０１１１】
インスリンＡ鎖およびＢ鎖
インスリン受容体アゴニスト活性を有するインスリンまたはインスリンアナログ二量体
が本明細書で開示される。二量体のインスリン活性のレベルは、二量体構造、インスリン
アナログの配列、二量体形成リンカーの長さおよび２個のインスリンポリペプチドを連結
する二量体形成の部位の関数である。本発明のインスリンポリペプチドは、ヘテロ二本鎖
で互いに連結するとインスリンアゴニスト活性を示すヒトインスリンの天然ＢおよびＡ鎖
配列（それぞれ、配列番号１および２）またはその既知のアナログもしくは誘導体のいず
れかを含み得る。このようなアナログは、例えば、インスリンアナログのインスリン活性
を破壊しない１つもしくは複数のアミノ酸欠失、１つもしくは複数のアミノ酸置換、およ
び／または１つもしくは複数のアミノ酸挿入を有することによって、ヒトインスリンのＡ
鎖およびＢ鎖とは異なるＡ鎖およびＢ鎖を有するタンパク質を含む。
【０１１２】
インスリンアナログの１つの型、「単量体インスリンアナログ」が当技術分野で周知で
ある。これらは、例えば、
（ａ）Ｂ２８位のアミノアシル残基がＡｓｐ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、ＶａｌまたはＡｌａで
置換されており、Ｂ２９位のアミノアシル残基がＬｙｓまたはＰｒｏであり；
（ｂ）Ｂ２７位およびＢ３０位のいずれかのアミノアシル残基が欠失しているまたは非
天然アミノ酸で置換されている、
インスリンアナログを含むヒトインスリンの速効型アナログである。
【０１１３】
一実施形態では、Ｂ２８位の置換されたＡｓｐ（例えば、インスリンアスパルト（ＮＯ
ＶＯＬＯＧ）；配列番号９参照）または２８位の置換されたＬｙｓおよびＢ２９位の置換
されたプロリン（例えば、インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ）；配列番号６参照）を
含むインスリンアナログが提供される。さらなる単量体インスリンアナログは、Ｃｈａｎ
ｃｅら、米国特許第５５１４６４６号；Ｃｈａｎｃｅら、米国特許出願第０８／２５５２
９７号；Ｂｒｅｍｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、５：５２７〜５３３
（１９９２）；Ｂｒａｎｇｅら、ＥＰＯ公開第２１４８２６号（１９８７年３月１８日公
開）；およびＢｒａｎｇｅら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕ
ｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１：９３４〜９４０（１９９１）に開示されている。これらの
開示は、単量体インスリンアナログを説明するために参照により本明細書に明示的に組み
込まれる。
【０１１４】
インスリンアナログはまた、アミド化アミノ酸の酸性型による置き換えを有してもよい
。例えば、ＡｓｎはＡｓｐまたはＧｌｕで置き換えられていてもよい。同様に、Ｇｌｎは
ＡｓｐまたはＧｌｕで置き換えられていてもよい。特に、Ａｓｎ（Ａ１８）、Ａｓｎ（Ａ
２１）もしくはＡｓｐ（Ｂ３）、またはこれらの残基の任意の組み合わせがＡｓｐまたは
Ｇｌｕによって置き換えられていてもよい。また、Ｇｌｎ（Ａ１５）もしくはＧｌｎ（Ｂ
４）または両方がＡｓｐまたはＧｌｕのいずれかによって置き換えられていてもよい。
【０１１５】
本明細書で開示されるように、ヒトインスリンのＢ鎖およびＡ鎖、またはそのアナログ
もしくは誘導体を含むインスリン単鎖アナログであって、Ｂ鎖のカルボキシ末端が連結部
分を介してＡ鎖のアミノ末端と連結しているインスリン単鎖アナログが提供される。一実
施形態では、Ａ鎖がアミノ酸配列ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ（配列番
号１）であり、Ｂ鎖がアミノ酸配列ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦ
ＦＹＴＰＫＴ（配列番号２）またはＢ３０欠失を有するそのカルボキシ短縮配列を含み、
各配列がＡ５、Ａ８、Ａ９、Ａ１０、Ａ１４、Ａ１５、Ａ１７、Ａ１８、Ａ２１、Ｂ１、
Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ９、Ｂ１０、Ｂ１３、Ｂ１４、Ｂ２０、Ｂ２２、Ｂ２３、Ｂ
２６、Ｂ２７、Ｂ２８、Ｂ２９およびＢ３０から選択される天然インスリン位置に相当す
る位置に１〜５個のアミノ酸置換を含むよう修飾されたこれらの配列のアナログ、但し、
Ｂ２８またはＢ２９の少なくとも１つはリジンである。一実施形態では、アミノ酸置換が
保存的アミノ酸置換である。インスリンの所望の活性に悪影響を及ぼさないこれらの位置
における適切なアミノ酸置換は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれる
、Ｍａｙｅｒら、Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ、Ｂ
ｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ．２００７；８８（５）：６８７〜７１３に示されるように、当業
者に知られている。
【０１１６】
一実施形態によると、インスリンアナログペプチドが、インスリンＡ鎖およびインスリ
ンＢ鎖またはこれらのアナログを含んでよく、Ａ鎖がＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬ
ＥＮＹＣＮ（配列番号１）と、天然ペプチドの長さにわたって少なくとも７０％の配列同
一性（例えば、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％）を共有するアミノ酸
配列を含み、Ｂ鎖がＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ（
配列番号２）またはＢ３０欠失を有するそのカルボキシ短縮配列と、天然ペプチドの長さ
にわたって少なくとも６０％の配列同一性（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、
８０％、８５％、９０％、９５％）を共有するアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
さらなるアミノ酸配列を本発明のインスリンポリペプチドのＢ鎖のアミノ末端またはＡ
鎖のカルボキシ末端に付加することができる。例えば、一連の負に帯電したアミノ酸（例
えば、長さが１〜１２、１〜１０、１〜８または１〜６個のアミノ酸であり、例えば、グ
ルタミン酸およびアスパラギン酸を含む１個または複数の負に帯電したアミノ酸を含むペ
プチドを含む）をＢ鎖のアミノ末端に付加することができる。一実施形態では、Ｂ鎖アミ
ノ末端伸長が１〜６個の帯電したアミノ酸を含む。一実施形態によると、開示されるイン
スリンポリペプチドは、Ａ鎖上のＣ末端カルボキシレートの代わりにＣ末端アミドまたは
エステルを含む。
【０１１８】
種々の実施形態では、インスリンアナログが、ヒトインスリンに対してずれた等電点を
有する。いくつかの実施形態では、等電点のずれが、１個または複数のアルギニン、リジ
ンまたはヒスチジン残基をインスリンＡ鎖ペプチドのＮ末端および／またはインスリンＢ
鎖ペプチドのＣ末端に付加することによって達成される。このようなインスリンポリペプ
チドの例としては、ＡｒｇＡ０−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトイン
スリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＡ０ＡｒｇＢ
３１ＡｒｇＢ３２−ヒトインスリンおよびＡｒｇＡ０ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１ＡｒｇＢ
３２−ヒトインスリンが挙げられる。さらなる例として、インスリングラルギン（ＬＡＮ
ＴＵＳ；配列番号７および８参照）は、ＡｓｎＡ２１がグリシンによって置き換えられ、
２個のアルギニン残基がＢペプチドのＣ末端と共有結合している代表的な長時間作用性イ
ンスリンアナログである。これらのアミノ酸変化の効果は、分子の等電点をずらし、それ
によって、酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ４〜６．５）で可溶性であるが、生理的ｐＨで不溶性
の分子を生成するというものであった。インスリングラルギンの溶液を筋肉に注射すると
、溶液のｐＨが中和され、インスリングラルギンが微小沈殿（ｍｉｃｒｏｐｒｅｃｉｐｉ
ｔａｔｅ）を形成し、これが著しいインスリンのピークなしに、よって、低血糖を誘発す
る低下したリスクで注射後２４時間の期間にわたってインスリングラルギンをゆっくり放
出する。このプロファイルは、１日１回投与が患者の基礎インスリンを提供することを可
能にする。よって、いくつかの実施形態では、インスリンアナログが、Ａ２１位のアミノ
酸がグリシンであるＡ鎖ペプチドと、Ｂ３１位およびＢ３２位のアミノ酸がアルギニンで
あるＢ鎖ペプチドとを含む。本開示は、本明細書に記載されるこれらの突然変異および任
意の他の突然変異の全ての単一のおよび複数の組み合わせを包含する（例えば、ＧｌｙＡ
２１−ヒトインスリン、ＧｌｙＡ２１ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１Ａｒ
ｇＢ３２−ヒトインスリン、ＡｒｇＢ３１−ヒトインスリン）。
【０１１９】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、インスリンアナログの１個または
複数のアミド化アミノ酸が、酸性アミノ酸または別のアミノ酸で置き換えられている。例
えば、アスパラギンがアスパラギン酸もしくはグルタミン酸、または別の残基で置き換え
られていてもよい。同様に、グルタミンがアスパラギン酸もしくはグルタミン酸、または
別の残基で置き換えられていてもよい。特に、ＡｓｎＡ１８、ＡｓｎＡ２１もしくはＡｓ
ｎＢ３、またはこれらの残基の任意の組み合わせが、アスパラギン酸もしくはグルタミン
酸、または別の残基によって置き換えられていてもよい。ＧｌｎＡ１５もしくはＧｌｎＢ
４、または両方がアスパラギン酸もしくはグルタミン酸、または別の残基によって置き換
えられていてもよい。インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、インスリンア
ナログが、Ａ２１位のアスパラギン酸もしくは別の残基、またはＢ３位のアスパラギン酸
もしくは別の残基、または両方を有する。
【０１２０】
当業者であれば、分子の生物学的活性を保持しながら、インスリンアナログのさらに他
のアミノ酸を他のアミノ酸で置き換えることが可能であることを認識するだろう。例えば
、限定されないが、以下の修飾も当技術分野で広く受け入れられている：Ｂ１０位のヒス
チジン残基のアスパラギン酸による置換（ＨｉｓＢ１０からＡｓｐＢ１０）；Ｂ１位のフ
ェニルアラニン残基のアスパラギン酸による置換（ＰｈｅＢ１からＡｓｐＢ１）；Ｂ３０
位のスレオニン残基のアラニンによる置換（ＴｈｒＢ３０からＡｌａＢ３０）；Ｂ２６位
のチロシン残基のアラニンによる置換（ＴｙｒＢ２６からＡｌａＢ２６）；およびＢ９位
のセリン残基のアスパラギン酸による置換（ＳｅｒＢ９からＡｓｐＢ９）。
【０１２１】
種々の実施形態では、インスリンアナログが遅延性の作用プロファイルを有する。よっ
て、一定の実施形態では、インスリンアナログが脂肪酸でアシル化され得る。すなわち、
インスリンアナログのアミノ基と脂肪酸のカルボン酸基との間にアミド結合が形成される
。アミノ基はインスリンアナログのＮ末端アミノ酸のα−アミノ基であってもよいし、ま
たはインスリンアナログのリジン残基のεアミノ基であってもよい。インスリンアナログ
は、野生型ヒトインスリン中に存在する３個のアミノ基の１個または複数でアシル化され
ても、野生型ヒトインスリン配列に導入されたリジン残基上でアシル化されてもよい。イ
ンスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、インスリンアナログがＡ１位、Ｂ１位
またはＡ１位とＢ１位の両方でアシル化され得る。一定の実施形態では、脂肪酸がミリス
チン酸（Ｃ１４）、ペンタデシル酸（Ｃ１５）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ヘプタデシル
酸（Ｃ１７）およびステアリン酸（Ｃ１８）から選択される。
【０１２２】
インスリンアナログの例は、例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、
公開国際出願の国際公開第９６３４８８２号、国際公開第９５５１６７０８号；国際公開
第２０１０００８０６０６号、国際公開第２００９／０９９７６３号および国際公開第２
０１００８０６０９号、米国特許第６６３０３４８号およびＫｒｉｓｔｅｎｓｅｎら、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０５：９８１〜９８６（１９９５）に見出すことができる。さらな
る実施形態では、インビトログリコシル化またはインビボＮ−グリコシル化インスリンア
ナログがアセチル化および／またはペグ化され得る。
【０１２３】
一実施形態によると、インスリンペプチドのＡ鎖が配列ＧＩＶＥＱＣＣＸ８ＳＩＣＳＬ
ＹＱＬＸＴ１７ＮＸ１９ＣＸ２３（配列番号３）を含み、Ｂ鎖が配列
Ｘ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＸ３１Ｘ３２（配列番
号４）を含み、
Ｘ８がスレオニンまたはヒスチジンであり；
Ｘ１７がグルタミン酸またはグルタミンであり；
Ｘ１９がチロシン、４−メトキシ−フェニルアラニンまたは４−アミノフェニルアラニ
ンであり；
Ｘ２３がアスパラギンまたはグリシンであり；
Ｘ２５がヒスチジンまたはスレオニンであり；
Ｘ２９がアラニン、グリシンまたはセリンであり；
Ｘ３０がヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステ
イン酸であり；
Ｘ３１がプロリンまたはリジンであり；
Ｘ３２がプロリンまたはリジンであり、但し、Ｘ３１またはＸ３２の少なくとも１つが
リジンである、
インスリンアナログが提供される。
【０１２４】
さらなる実施形態では、Ｂ鎖が配列
Ｘ２２ＶＮＱＸ２５ＬＣＧＸ２９Ｘ３０ＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴ−Ｘ３１
Ｘ３２Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５（配列番号５）
（Ｘ２２はフェニルアラニンまたはデスアミノ−フェニルアラニンであり；
Ｘ２５はヒスチジンまたはスレオニンであり；
Ｘ２９はアラニン、グリシンまたはセリンであり；
Ｘ３０はヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモシステイン酸またはシステ
イン酸であり；
Ｘ３１はアスパラギン酸、プロリンまたはリジンであり；
Ｘ３２はリジンまたはプロリンであり；
Ｘ３３はスレオニン、アラニンまたは非存在であり；
Ｘ３４はアルギニンまたは非存在であり；
Ｘ３５はアルギニンまたは非存在であり；
但し、Ｘ３１またはＸ３２の少なくとも１つはリジンである）
を含む。
【０１２５】
連結部分
本明細書で開示されるインスリン二量体は、各インスリンポリペプチドがＡ鎖およびＢ
鎖を含む第１のインスリンポリペプチドと第２のインスリンポリペプチドとの間で形成さ
れる。第１および第２のインスリンポリペプチドは二本鎖インスリンアナログ（すなわち
、Ａ鎖およびＢ鎖が内部システイン残基間の鎖内ジスルフィド結合を介してのみ連結して
いる）であり得、第１および第２のインスリンポリペプチドは、共有結合、二官能性リン
カーによってまたは銅（Ｉ）触媒アルキン−アジド環化付加（ＣｕＡＡＣ）クリックケミ
ストリーもしくは銅フリークリックケミストリーを用いてそれぞれのＢ鎖上の連結部分を
連結することによって互いに連結して二量体を形成する。一実施形態によると、第１およ
び第２のインスリンポリペプチドが、第１のインスリンポリペプチドのＢ鎖のＢ２８また
はＢ２９リジンの側鎖を第２のインスリンポリペプチドのＢ鎖のＢ２８またはＢ２９アミ
ノ酸の側鎖と連結する二官能性リンカーによって互いに連結される。
【０１２６】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、連結部分がアシル、脂肪族、複素
脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されてい
てもよい基であり得る。連結部分は、１個または複数のメチレン単位が独立に、−Ｏ−、
−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、Ｓ
Ｏ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き換えられて
いてもよく、Ｒの各出現が独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル
部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分である、二
価の、直鎖または分岐の、飽和または不飽和の、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ２０炭化
水素鎖であり得る。
【０１２７】
一実施形態では、連結部分が、ＰＥＧリンカー、約２〜２５個のエチレングリコール単
位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６
もしくは２５個のエチレングリコール単位、および場合により１個または複数のアミノ酸
の短い直鎖ポリマーを含む。インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、ＰＥＧ
リンカーが構造（ＰＥＧ）２、（ＰＥＧ）３、（ＰＥＧ）４、（ＰＥＧ）５、（ＰＥＧ）
６、（ＰＥＧ）７、（ＰＥＧ）８、（ＰＥＧ）９、（ＰＥＧ）１０、（ＰＥＧ）１１、（
ＰＥＧ）１２、（ＰＥＧ）１３、（ＰＥＧ）１４、（ＰＥＧ）１５、（ＰＥＧ）１６また
は（ＰＥＧ）２５を含む。ＰＥＧリンカーは、第１および第２のインスリンポリペプチド
のＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得る二官能性
リンカーであり得る。第１および第２のインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８
位のリジン基のεアミノ基と結合した二官能性ＰＥＧリンカーの構造は、以下の一般式
【化３】
2020097572.tif 000005
【０１２８】
（式中、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、
１５、１６または２５であり、波線はリンカーとεアミノ基との間の結合を示す）
によって表され得る。ＰＥＧをリジンのεアミノ基と結合する方法は当技術分野で周知
であり、例えば、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２２：４０５〜４１７
（２００１）を参照されたい。
【０１２９】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、第１のインスリンポリペプチドの
Ｂ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基と第２のインスリンポリペプチドのＢ２９
位またはＢ２８位のリジンのεアミノ酸を結合するＰＥＧ連結部分が、
【化４】
2020097572.tif 000006
2020097572.tif 000007
【０１３０】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
である。
【０１３１】
別の実施形態では、連結部分が、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、１５または１６個の炭素を含むアシル部分を含む。インスリン受容体部分アゴニス
トの特定の態様では、アシル部分がスクシニル（４）、アジポイル（Ｃ６）、スベリオル
（Ｃ８）またはヘキサデカンジオイル（Ｃ１６）部分である、アシル部分は、第１および
第２のインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有
結合または連結し得る二官能性リンカーを含み得る。第１および第２のインスリンポリペ
プチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン基のεアミノ基と結合した二官能性アシルリン
カーの構造は、以下の一般式
【化５】
2020097572.tif 000008
【０１３２】
（式中、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２であり
、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミ
ノ基との間の結合を示す）
によって表され得る。
【０１３３】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、第１のインスリンポリペプチドの
Ｂ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基と第２のインスリンポリペプチドのＢ２９
位またはＢ２８位のリジンのεアミノ酸を結合するアシル連結部分が、
【化６】
2020097572.tif 000009
2020097572.tif 000010
【０１３４】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
である。
【０１３５】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、二官能性アシルリンカーが、アシ
ルリンカーの一末端または両末端に１個または２個のアミノ酸をさらに含み得る。例えば
、インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、リンカーの一末端または両末端の
アミノ酸が、以下の一般式
【化７】
2020097572.tif 000011
【０１３６】
（式中、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２であり
、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミ
ノ基との間の結合を示す）
によって表され得るγグルタミン酸（γＥ）である。
【０１３７】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化８】
2020097572.tif 000012
【０１３８】
（式中、ｎ＝１または２であり、ｏ＝１、２、３、４または５であり、波線はリンカー
とインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合
を示す）
によって表され得る、第１および第２のインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２
８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得るアミド含有アルキル鎖二官能性
リンカーを含む。特定の実施形態では、連結部分が、構造
【化９】
2020097572.tif 000013
【０１３９】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
を有し得る。
【０１４０】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１０】
2020097572.tif 000014
【０１４１】
（式中、ｎ＝１、２、３、４または５であり、ｏ＝１または２であり、ｐ＝１、２、３
、４または５であり、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８
位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
によって表され得る、第１および第２のインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２
８位リジン残基のεアミノ基と共有結合し得るアミド含有アルキル鎖二官能性リンカーを
含む。特定の実施形態では、連結部分が、構造
【化１１】
2020097572.tif 000015
【０１４２】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
である。
【０１４３】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１２】
2020097572.tif 000016
【０１４４】
（式中、ｎ＝１または２であり、ｏ＝１、２または３であり、ｐ＝１または２であり、
波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ
基との間の結合を示す）
によって表され得る、第１および第２のインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２
８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得るアミド含有アルキル鎖二官能性
リンカーを含む。特定の実施形態では、連結部分が、構造
【化１３】
2020097572.tif 000017
【０１４５】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
である。
【０１４６】
特定の実施形態では、連結部分が、連結部分に剛性を与える環構造を含む。特定の実施
形態では、環構造がベンジル基または３、４、５、６、７もしくは８個の炭素を有する飽
和もしくは不飽和脂環式基を含む。特定の実施形態では、脂環式基がシクロプロピル、シ
クロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチルまたはシクロオクチルを
含む。特定の実施形態では、不飽和脂環式基（シクロアルカン）がシクロプロペニル、シ
クロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルまたはシクロオ
クテニル基を含む。特定の実施形態では、環構造が、１個または複数の飽和または不飽和
脂肪族側鎖をさらに含んでもよい。特定の実施形態では、環構造が、１個または複数のヘ
テロ原子を含む１個または複数の脂肪族側鎖をさらに含んでもよい。特定の実施形態では
、ヘテロ原子がＯ、ＳまたはＮである。
【０１４７】
特定の実施形態では、環構造がヘテロ原子を含む。特定の実施形態では、ヘテロ原子が
Ｏ、ＳまたはＮであり得る。特定の実施形態では、環構造が、１個または複数の炭素がＮ
、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子で置換されている、ベンジル基または３、４、５
、６、７もしくは８個の炭素を有する飽和もしくは不飽和脂環式基を含む。ヘテロ原子を
含む環構造の例としては、それだけに限らないが、エチレンオキシド、エチレンイミン、
トリメチルオキシド、フラン、テトラヒドロフラン（ｔｅｔｒｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）、
チオフェン（ｔｈｉｐｈｅｎｅ）、ピロリジン、ピラン、ピペリジン、イミダゾール、チ
アゾール、ジオキサン、モルホリン、ピリミジン、トリアゾール、チエタン、１，３−ジ
アゼチン、２，３−ジヒドロアゼト（２，３−ｄｉｈｙｄｒｏａｚｅｔｅ）、１，２−オ
キサチオラン、イソオキサゾール、オキサゾール、シロール、オキセパン、チエピン、３
，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−アゼピン、１，４−チアゼピン、アゾカンおよびチ
オカンが挙げられる。
【０１４８】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１４】
2020097572.tif 000018
【０１４９】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同じであっても異なっていてもよく、Ｒ１およびＲ２は独立
に、結合、飽和もしくは不飽和Ｃ１〜Ｃ２０またはＣ１〜Ｃ６アルキル鎖であり、１個ま
たは複数のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（
Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−
、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基また
はヘテロアリール基によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現は独立に、水素、適
切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロア
リール部分または複素脂肪族部分、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖（ＰＥＧ）
２、（ＰＥＧ）３、（ＰＥＧ）４、（ＰＥＧ）５、（ＰＥＧ）６、（ＰＥＧ）７、（ＰＥ
Ｇ）８、（ＰＥＧ）９、（ＰＥＧ）１０、（ＰＥＧ）１１、（ＰＥＧ）１２、（ＰＥＧ）
１３、（ＰＥＧ）１４、（ＰＥＧ）１５、（ＰＥＧ）１６または（ＰＥＧ）２であり、波
線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基
との間の結合を示す）
を有するベンゼン−１，１ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１５０】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１５】
2020097572.tif 000019
【０１５１】
（式中、ｎおよびｏは独立に、０、１、２、３、４または５であり、波線はリンカーと
インスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を
示す）
を有するベンゼン−１，１ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１５２】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１６】
2020097572.tif 000020
【０１５３】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同じであっても異なっていてもよく、Ｒ１およびＲ２は独立
に、結合、飽和もしくは不飽和Ｃ１〜Ｃ２０またはＣ１〜Ｃ６アルキル鎖であり、１個ま
たは複数のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（
Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−
、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基また
はヘテロアリール基によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現は独立に、水素、適
切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロア
リール部分または複素脂肪族部分、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖（ＰＥＧ）
２、（ＰＥＧ）３、（ＰＥＧ）４、（ＰＥＧ）５、（ＰＥＧ）６、（ＰＥＧ）７、（ＰＥ
Ｇ）８、（ＰＥＧ）９、（ＰＥＧ）１０、（ＰＥＧ）１１、（ＰＥＧ）１２、（ＰＥＧ）
１３、（ＰＥＧ）１４、（ＰＥＧ）１５、（ＰＥＧ）１６または（ＰＥＧ）２であり、波
線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基
との間の結合を示す）
を有するベンゼン−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１５４】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１７】
2020097572.tif 000021
【０１５５】
（式中、ｎおよびｏは独立に、０、１、２、３、４または５であり、波線はリンカーと
インスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を
示す）
を有するベンゼン−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１５６】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１８】
2020097572.tif 000022
【０１５７】
（式中、Ｒ１およびＲ２は同じであっても異なっていてもよく、Ｒ１およびＲ２は独立
に、結合、飽和もしくは不飽和Ｃ１〜Ｃ２０またはＣ１〜Ｃ６アルキル鎖であり、１個ま
たは複数のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（
Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−
、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基また
はヘテロアリール基によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現は独立に、水素、適
切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロア
リール部分または複素脂肪族部分、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖（ＰＥＧ）
２、（ＰＥＧ）３、（ＰＥＧ）４、（ＰＥＧ）５、（ＰＥＧ）６、（ＰＥＧ）７、（ＰＥ
Ｇ）８、（ＰＥＧ）９、（ＰＥＧ）１０、（ＰＥＧ）１１、（ＰＥＧ）１２、（ＰＥＧ）
１３、（ＰＥＧ）１４、（ＰＥＧ）１５、（ＰＥＧ）１６または（ＰＥＧ）２であり、波
線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基
との間の結合を示す）
を有するベンゼン−１，４ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１５８】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化１９】
2020097572.tif 000023
【０１５９】
（式中、ｎおよびｏは独立に、０、１、２、３、４または５であり、波線はリンカーと
インスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を
示す）
を有するベンゼン−１，４ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１６０】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２０】
2020097572.tif 000024
【０１６１】
（式中、ｍ、ｎおよびｏはそれぞれ独立に、１または２であり；Ｒ１およびＲ２は同じ
であっても異なっていてもよく、Ｒ１およびＲ２は独立に、結合、飽和もしくは不飽和Ｃ
１〜Ｃ２０またはＣ１〜Ｃ６アルキル鎖であり、１個または複数のメチレン単位は独立に
、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（
Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）Ｓ
Ｏ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基によって置き
換えられていてもよく、Ｒの各出現は独立に、水素、適切な保護基、アシル部分、アリー
ルアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分または複素脂肪族部分
、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖（ＰＥＧ）２、（ＰＥＧ）３、（ＰＥＧ）４
、（ＰＥＧ）５、（ＰＥＧ）６、（ＰＥＧ）７、（ＰＥＧ）８、（ＰＥＧ）９、（ＰＥＧ
）１０、（ＰＥＧ）１１、（ＰＥＧ）１２、（ＰＥＧ）１３、（ＰＥＧ）１４、（ＰＥＧ
）１５、（ＰＥＧ）１６または（ＰＥＧ）２であり、波線はリンカーとインスリンポリペ
プチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
を有するベンゼン−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１６２】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２１】
2020097572.tif 000025
【０１６３】
（式中、ｍ、ｎおよびｏはそれぞれ独立に、１または２であり；ｐおよびｑは独立に、
０、１、２、３、４または５であり、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９
位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
を有するベンゼン−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１６４】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２２】
2020097572.tif 000026
【０１６５】
（式中、ｍ、ｎおよびｏはそれぞれ独立に、１または２であり；波線はリンカーとイン
スリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す
）
を有するベンゼン−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１６６】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２３】
2020097572.tif 000027
【０１６７】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
を有するシクロヘキサン−１，４ジアシルによって表され得る第１および第２のインス
リンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連
結し得る二官能性リンカーを含む。
【０１６８】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２４】
2020097572.tif 000028
【０１６９】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
を有するシクロヘキサン−１，４ジアシルによって表され得る第１および第２のインス
リンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連
結し得る二官能性リンカーを含む。
【０１７０】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２５】
2020097572.tif 000029
【０１７１】
（式中、ｍおよびｎはそれぞれ独立に、０、１または２であり、但し、ｍとｎの両方が
０ではなく；Ｒ１およびＲ２は同じであっても異なっていてもよく、Ｒ１およびＲ２は独
立に、結合、飽和もしくは不飽和Ｃ１〜Ｃ２０またはＣ１〜Ｃ６アルキル鎖であり、１個
または複数のメチレン単位は独立に、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ
（Ｏ）Ｏ−、ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｓ（Ｏ）
−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、複素環基、アリール基ま
たはヘテロアリール基によって置き換えられていてもよく、Ｒの各出現は独立に、水素、
適切な保護基、アシル部分、アリールアルキル部分、脂肪族部分、アリール部分、ヘテロ
アリール部分または複素脂肪族部分、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）鎖（ＰＥＧ
）２、（ＰＥＧ）３、（ＰＥＧ）４、（ＰＥＧ）５、（ＰＥＧ）６、（ＰＥＧ）７、（Ｐ
ＥＧ）８、（ＰＥＧ）９、（ＰＥＧ）１０、（ＰＥＧ）１１、（ＰＥＧ）１２、（ＰＥＧ
）１３、（ＰＥＧ）１４、（ＰＥＧ）１５、（ＰＥＧ）１６または（ＰＥＧ）２であり、
波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ
基との間の結合を示す）
を有するベンゼン−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１７２】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２６】
2020097572.tif 000030
【０１７３】
（式中、ｍおよびｎはそれぞれ独立に、１または２であり；ｐおよびｑは独立に、０、
１、２、３、４または５であり、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位ま
たはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
を有するベンゼン−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポ
リペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得
る二官能性リンカーを含む。
【０１７４】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２７】
2020097572.tif 000031
【０１７５】
（式中、ｎは１、２、３または４であり、波線はリンカーとインスリンポリペプチドの
Ｂ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
を有する１，１ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポリペプチド
のＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得る二官能性
リンカーを含む。具体的な実施形態では、１，１ジアシルが
【化２８】
2020097572.tif 000032
【０１７６】
（それぞれ、１，１−ジアシル−Ｃ３；１，２−ジアシル−Ｃ４；１，１−ジアシル−
Ｃ５；および１，１−ジアシル−Ｃ６）（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチ
ドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
から選択される構造を有し得る。
【０１７７】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化２９】
2020097572.tif 000033
【０１７８】
（式中、ｎは１、２、３または４であり、波線はリンカーとインスリンポリペプチドの
Ｂ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
を有する１，２ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポリペプチド
のＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得る二官能性
リンカーを含む。具体的な実施形態では、１，２ジアシルが
【化３０】
2020097572.tif 000034
【０１７９】
（それぞれ、１，２−ジアシル−Ｃ３；１，２−ジアシル−Ｃ４；１，２−ジアシル−
Ｃ５；および１，２−ジアシル−Ｃ６）（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチ
ドのＢ２９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
から選択される構造を有し得る。
【０１８０】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化３１】
2020097572.tif 000035
【０１８１】
（式中、ｎは１、２または３であり、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２
９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
を有する１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポリペプチド
のＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得る二官能性
リンカーを含む。具体的な実施形態では、１，３ジアシルが
【化３２】
2020097572.tif 000036
【０１８２】
（それぞれ、１，３−ジアシル−Ｃ４；１，３−ジアシル−Ｃ５；および１，３−ジア
シル−Ｃ６）（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８
位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
から選択される構造を有し得る。
【０１８３】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化３３】
2020097572.tif 000037
【０１８４】
（１，４−ジアシル−Ｃ６）（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２
９位またはＢ２８位のリジンのεアミノ基との間の結合を示す）
を有する１，４ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリンポリペプチド
のＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結し得る二官能性
リンカーを含む。
【０１８５】
別の実施形態では、連結部分が、以下の一般式
【化３４】
2020097572.tif 000038
【０１８６】
（式中、波線はリンカーとインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン
のεアミノ基との間の結合を示す）
を有するシクロブチル−１，３ジアシルによって表され得る第１および第２のインスリ
ンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位リジン残基のεアミノ基と共有結合または連結
し得る二官能性リンカーを含む。
【０１８７】
本発明のさらなる態様では、第１および第２のインスリンポリペプチドが、銅触媒アジ
ド−アルキンＨｕｉｓｇｅｎ環化付加（ＣｕＡＡｃ）、特にＣｕＡＡＣクリックケミスト
リーを用いて結合され得る。この態様では、第１のインスリンポリペプチドのＢ２９位ま
たはＢ２８位のεアミノ基を近位端および遠位端を有するリンカー部分と結合し、リンカ
ー部分の近位端はεアミノ基と結合しており、遠位端はアジド基を含む。この態様では、
第２のインスリンポリペプチドのＢ２９位またはＢ２８位のεアミノ基を近位端および遠
位端を有するリンカー部分と結合し、リンカー部分の近位端はεアミノ基と結合しており
、遠位端はアルキン基を含む。Ｃｕ２＋および還元剤の存在下では、アジドおよびアルキ
ン基が、トリアゾール部分を含む隣接連結部分を形成する。ＣｕＡＡＣクリックケミスト
リーの説明については、全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８１２９５４２号を
参照されたい。
【０１８８】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、第１のインスリンポリペプチドが
、式
【化３５】
2020097572.tif 000039
【０１８９】
を有するリンカーを介して、Ｂ２９またはＢ２８リジンのεアミノ基と結合していても
よく、
第２のインスリンポリペプチドが、式
【化３６】
2020097572.tif 000040
【０１９０】
を有するリンカーを介して、Ｂ２９またはＢ２８リジンのεアミノ基と結合していても
よい。
【０１９１】
Ｃｕ２＋および還元剤の存在下では、リンカーが組み合わさって構造
【化３７】
2020097572.tif 000041
【０１９２】
を有する連結部分を提供する。
【０１９３】
インスリン受容体部分アゴニストの特定の態様では、第１のインスリンポリペプチドが
、式
【化３８】
2020097572.tif 000042
【０１９４】
（式中、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である）
を有するリンカーを介して、Ｂ２９またはＢ２８リジンのεアミノ基と結合していても
よく、
第２のインスリンポリペプチドが、式
【化３９】
2020097572.tif 000043
【０１９５】
（式中、ｎ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である）
を有するリンカーを介して、Ｂ２９またはＢ２８リジンのεアミノ基と結合していても
よい。Ｃｕ２＋および還元剤の存在下では、リンカーが組み合わさって構造
【化４０】
2020097572.tif 000044
【０１９６】
（式中、各ｎは独立に、１、２、３、４、５，６、７、８、９または１０である）
を有する連結部分を提供する。
【０１９７】
さらなる態様では、第１のインスリンポリペプチドと第２のインスリンポリペプチドの
両方が、式
【化４１】
2020097572.tif 000045
【０１９８】
（式中、各ｎは独立に、１、２、３、４、５，６、７、８、９または１０である）
を有するリンカーを介してＢ２９またはＢ２８リジンのそれぞれのεアミノ基と結合し
ていてもよい。リンカーが結合して連結部分を形成することは、構造
【化４２】
2020097572.tif 000046
【０１９９】
（式中、Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複
素脂肪族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されて
いてもよい基である）
を有する分子（中間体または架橋リンカー）を提供することによって達成され得る。特
定の態様では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシル基
またはＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、ＰＥ
Ｇ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である。
【０２００】
さらなる態様では、第１のインスリンポリペプチドと第２のインスリンポリペプチドの
両方が、式
【化４３】
2020097572.tif 000047
【０２０１】
（式中、各ｎは独立に、１、２、３、４、５，６、７、８、９または１０である）
を有するリンカーを介してＢ２９またはＢ２８リジンのそれぞれのεアミノ基と結合し
ていてもよい。リンカーが結合して連結部分を形成することは、構造
【化４４】
2020097572.tif 000048
【０２０２】
（Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複素脂肪
族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても
よい基である）
を有する分子（中間体または架橋リンカー）を提供することによって達成され得る。特
定の態様では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシル基
またはＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、ＰＥ
Ｇ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である。
【０２０３】
特定の態様では、第１のインスリンポリマーがＢ２９またはＢ２８リジンのεアミノ基
で上記のアジド末端リンカーと結合しており、第２のインスリンポリペプチドがＢ２９ま
たはＢ２８リジンのεアミノ基でシクロオクチン部分で終結したリンカーと結合しており
、リンカーが銅フリー環化付加クリックケミストリーを用いて結合してリンカー部分を形
成する。例えば、全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７８０７６１９号を参照さ
れたい。
【０２０４】
以下の表は、本発明の二量体を構築するために使用され得る代表的なリンカーを示す。
示される二量体は、Ｂ２９またはＢ２９リジンのεアミノ基と結合するための２，５−ジ
オキソピロリジン−イル基を含む。
【表１】
2020097572.tif 000049
2020097572.tif 000050
2020097572.tif 000051
2020097572.tif 000052
2020097572.tif 000053
2020097572.tif 000054
2020097572.tif 000055
2020097572.tif 000056
2020097572.tif 000057
2020097572.tif 000058
【０２０５】
ニ官能性リンカーと２個のインスリンまたはインスリンアナログ分子のＢ鎖ポリペプチ
ドのＢ２９位またはＢ２８位のリジン残基のεアミノ基が結合して連結部分によって連結
されたインスリン二量体を形成することは、
【化４５】
2020097572.tif 000059
【０２０６】
（式中、インスリン１およびインスリン２分子は同じであっても異なっていてもよく、
二官能性リンカーおよび結合後に得られる連結部分は本明細書で開示される任意のリンカ
ーおよび得られる連結部分の構造を有し得る）
として模式的に示され得る。
【０２０７】
インスリンポリペプチドの修飾
いくつかの実施形態では、インスリン受容体部分アゴニストのＡ鎖ポリペプチドまたは
Ｂ鎖ポリペプチドの少なくとも１つが、アシル基を含むよう修飾される。アシル基をイン
スリンポリペプチドのアミノ酸に直接またはスペーサー（スペーサーはインスリンポリペ
プチドのアミノ酸とアシル基との間に位置する）を介してインスリンポリペプチドのアミ
ノ酸に間接的に共有結合することができる。インスリンポリペプチドは、親水性部分が連
結している同じアミノ酸位置でアシル化されても、または異なるアミノ酸位置でアシル化
されてもよい。例えば、非アシル化インスリンポリペプチドによって示される活性がアシ
ル化で保持される限り、アシル化は、ＡまたはＢ鎖ポリペプチドの任意のアミノ酸を含む
任意の位置ならびに連結部分中の位置で生じることができる。限定的でない例としては、
Ａ鎖のＡ１位およびＢ鎖のＢ１位でのアシル化が挙げられる。
【０２０８】
本発明の１つの具体的な態様では、第１および／または第２のインスリンポリペプチド
（またはその誘導体もしくは複合体）が、インスリンポリペプチドのアミノ酸の側鎖のア
ミン、ヒドロキシルまたはチオールの直接アシル化によってアシル基を含むよう修飾され
る。いくつかの実施形態では、第１および／または第２のインスリンポリペプチドが、ア
ミノ酸の側鎖アミン、ヒドロキシルまたはチオールを通して直接アシル化される。この点
については、側鎖アミン、ヒドロキシルまたはチオールを含むアミノ酸による、例えば、
Ａ１位、Ａ１４位、Ａ１５位、Ｂ１位、Ｂ１０位もしくはＢ２２位または連結部分の任意
の位置を含む、ＡまたはＢ鎖ポリペプチド配列中の１個または複数のアミノ酸置換によっ
て修飾されたインスリンポリペプチドが提供され得る。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２のインスリンポリペプチドとアシル
基との間のスペーサーが側鎖アミン、ヒドロキシルまたはチオールを含むアミノ酸（ある
いは側鎖アミン、ヒドロキシルもしくはチオールを含むアミノ酸を含むジペプチドまたは
トリペプチド）である。いくつかの実施形態では、スペーサーが親水性二官能性スペーサ
ーを含む。具体的な実施形態では、スペーサーがアミノポリ（アルキルオキシ）カルボキ
シレートを含む。この点については、スペーサーが、例えば、ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）
ｎ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ（式中、ｍは１〜６の任意の整数であり、ｎは２〜１２の任意の
整数である）、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｌ
ｏｕｉｓｖｉｌｌｅ、ＫＹ）から商業的に入手可能な８−アミノ−３，６−ジオキサオク
タン酸を含むことができる。一実施形態では、親水性二官能性スペーサーが２個以上の反
応性基、例えば、アミン、ヒドロキシル、チオールおよびカルボキシル基、またはこれら
の任意の組み合わせを含む。一定の実施形態では、親水性二官能性スペーサーが水酸基お
よびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、親水性二官能性スペーサーがアミン基
およびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、親水性二官能性スペーサーがチオー
ル基およびカルボキシレートを含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２のインスリンポリペプチドとアシル
基との間のスペーサーが疎水性二官能性スペーサーである。疎水性二官能性スペーサーは
当技術分野で既知である。例えば、全体が参照により組み込まれる、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ
ａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒ
ｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９６）を参照されたい。一定の実施形態では、
疎水性二官能性スペーサーが２個以上の反応性基、例えば、アミン、ヒドロキシル、チオ
ールおよびカルボキシル基、またはこれらの任意の組み合わせを含む。一定の実施形態で
は、疎水性二官能性スペーサーが水酸基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態で
は、疎水性二官能性スペーサーがアミン基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態
では、疎水性二官能性スペーサーがチオール基およびカルボキシレートを含む。カルボキ
シレートおよび水酸基またはチオール基を含む適切な疎水性二官能性スペーサーは当技術
分野で既知であり、これには、例えば、８−ヒドロキシオクタン酸および８−メルカプト
オクタン酸が含まれる。
【０２１１】
一定の実施形態によると、二官能性スペーサーは、長さが３〜１０個の原子であるアミ
ノ酸骨格を含む合成または天然アミノ酸（例えば、６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉
草酸、７−アミノヘプタン酸および８−アミノオクタン酸）であり得る。あるいは、スペ
ーサーは、長さが３〜１０個の原子（例えば、６〜１０個の原子）であるペプチド骨格を
有するジペプチドまたはトリペプチドスペーサーであり得る。インスリンポリペプチドに
結合しているジペプチドまたはトリペプチドスペーサーの各アミノ酸は独立に、例えば、
天然アミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌ
ｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔ
ｙｒ）のＤもしくはＬ異性体のいずれか、またはβ−アラニン（β−Ａｌａ）、Ｎ−α−
メチル−アラニン（Ｍｅ−Ａｌａ）、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、α−アミノ酪酸（γ−Ａｂ
ｕ）、アミノヘキサン酸（ε−Ａｈｘ）、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、アミノメチルピロ
ールカルボン酸、アミノピペリジンカルボン酸、アミノセリン（Ａｍｓ）、
アミノテトラヒドロピラン−４−カルボン酸、アルギニンＮ−メトキシ−Ｎ−メチルア
ミド、β−アスパラギン酸（β−Ａｓｐ）、アゼチジンカルボン酸、３−（２−ベンゾチ
アゾリル）アラニン、α−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、２−アミノ−５−ウレイド−ｎ−
吉草酸（シトルリン、Ｃｉｔ）、β−シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、アセトアミド
メチル−システイン、ジアミノブタン酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、
ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）、ジメチルチアゾリジン（ＤＭＴＡ）、γ−
グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）、ホモセリン（Ｈｓｅ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、
イソロイシンＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド、メチル−イソロイシン（ＭｅＩｌｅ）、
イソニペコチン酸（Ｉｓｎ）、メチル−ロイシン（ＭｅＬｅｕ）、メチル−リジン、ジメ
チル−リジン、トリメチル−リジン、メタノプロリン、メチオニン−スルホキシド（Ｍｅ
ｔ（Ｏ））、メチオニン−スルホン（Ｍｅｔ（Ｏ２））、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチ
ル−ノルロイシン（Ｍｅ−Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、パ
ラ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、ペニシラミン（Ｐｅｎ）、メチルフェニルアラニン（
ＭｅＰｈｅ）、４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））、４−フルオロフェ
ニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））、
４−ニトロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−ＮＯ２））、４−シアノフェニルアラニン
（（Ｐｈｅ（４−ＣＮ））、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、ピペリジニルアラニン、ピペ
リジニルグリシン、３，４−デヒドロプロリン、ピロリジニルアラニン、サルコシン（Ｓ
ａｒ）、セレノシステイン（Ｓｅｃ）、Ｕ−ベンジル−ホスホセリン、４−アミノ−３−
ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸（Ｓｔａ）、４−アミノ−５−シクロヘキシル−３−
ヒドロキシペンタン酸（ＡＣＨＰＡ）、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペン
タン酸（ＡＨＰＰＡ）、１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボン酸
（Ｔｉｃ）、テトラヒドロピラングリシン、チエニルアラニン（Ｔｈｉ）、Ｕ−ベンジル
−ホスホチロシン、Ｏ−ホスホチロシン、メトキシチロシン、エトキシチロシン、Ｏ−（
ビス−ジメチルアミノ−ホスホノ）−チロシン、硫酸化チロシンテトラブチルアミン、
メチル−バリン（ＭｅＶａｌ）、１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａｃｘ
）、アミノ吉草酸、β−シクロプロピル−アラニン（Ｃｐａ）、プロパルギルグリシン（
Ｐｒｇ）、アリルグリシン（Ａｌｇ）、２−アミノ−２−シクロヘキシル−プロパン酸（
２−Ｃｈａ）、ｔｅｒｔブチルグリシン（Ｔｂｇ）、ビニルグリシン（Ｖｇ）、１−アミ
ノ−１−シクロプロパンカルボン酸（Ａｃｐ）、１−アミノ−１−シクロペンタンカルボ
ン酸（Ａｃｐｅ）、アルキル化３−メルカプトプロピオン酸、１−アミノ−１−シクロブ
タンカルボン酸（Ａｃｂ）からなる群から選択される非天然アミノ酸の任意のＤもしくは
Ｌ異性体を含む天然および／または非天然アミノ酸からなる群から選択され得る。いくつ
かの実施形態では、ジペプチドスペーサーが、Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ
、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、γ−アミノ酪酸−γ−アミノ酪酸およびγ−Ｇｌｕ
−γ−Ｇｌｕからなる群から選択される。
【０２１２】
第１および／または第２のインスリンポリペプチドは、長鎖アルカンのアシル化により
アシル基を含むよう修飾され得る。具体的な態様では、長鎖アルカンが、インスリンポリ
ペプチドのカルボキシル基またはその活性化型と反応するアミン、ヒドロキシルまたはチ
オール基を含む（例えば、オクタデシルアミン、テトラデカノールおよびヘキサデカンチ
オール）。インスリンポリペプチドのカルボキシル基またはその活性化型は、インスリン
ポリペプチドのアミノ酸（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）の側鎖の一部であっ
ても、またはペプチド骨格の一部であってもよい。
【０２１３】
一定の実施形態では、第１および／または第２のインスリンポリペプチドが、インスリ
ンポリペプチドと結合しているスペーサーによる長鎖アルカンのアシル化によってアシル
基を含むよう修飾される。具体的な態様では、長鎖アルカンが、スペーサーのカルボキシ
ル基またはその活性化型と反応するアミン、ヒドロキシルまたはチオール基を含む。カル
ボキシル基またはその活性化型を含む適切なスペーサーは本明細書に記載されており、こ
れには、例えば、二官能性スペーサー、例えば、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、
親水性二官能性スペーサーおよび疎水性二官能性スペーサーが含まれる。本明細書で使用
される場合、「カルボキシル基の活性化型」という用語は、一般式Ｒ（Ｃ＝Ｏ）Ｘ（式中
、Ｘは脱離基であり、Ｒはインスリンポリペプチドまたはスペーサーである）を有するカ
ルボキシル基を指す。例えば、カルボキシル基の活性化型には、それだけに限らないが、
塩化アシル、無水物およびエステルが含まれ得る。いくつかの実施形態では、活性化カル
ボキシル基が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）脱離基を有するエステルである
。
【０２１４】
長鎖アルカンがペプチド、インスリンポリペプチドまたはスペーサーによってアシル化
された本発明のこれらの態様に関して、長鎖アルカンは任意のサイズであってよく、任意
の長さの炭素鎖を含むことができる。長鎖アルカンは直鎖であっても分岐であってもよい
。一定の態様では、長鎖アルカンがＣ４〜Ｃ３０アルカンである。例えば、長鎖アルカン
は、Ｃ４アルカン、Ｃ６アルカン、Ｃ８アルカン、Ｃ１０アルカン、Ｃ１２アルカン、Ｃ
１４アルカン、Ｃ１６アルカン、Ｃ１８アルカン、Ｃ２０アルカン、Ｃ２２アルカン、Ｃ
２４アルカン、Ｃ２６アルカン、Ｃ２８アルカンまたはＣ３０アルカンのいずれかであり
得る。いくつかの実施形態では、長鎖アルカンがＣ８〜Ｃ２０アルカン、例えば、Ｃ１４
アルカン、Ｃ１６アルカンまたはＣ１８アルカンを含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２のインスリンポリペプチドのアミン
、ヒドロキシルまたはチオール基がコレステロール酸によってアシル化される。具体的な
実施形態では、ペプチドが、アルキル化デス−アミノＣｙｓスペーサー、すなわち、アル
キル化３−メルカプトプロピオン酸スペーサーを通してコレステロール酸と結合する。ア
ミン、ヒドロキシルおよびチオールを介したペプチドアシル化の適切な方法は当技術分野
で既知である。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏ
ｍｍｕｎ  ２１８：３７７〜３８２（１９９６）；ＳｈｉｍｏｈｉｇａｓｈｉおよびＳｔ
ａｍｍｅｒ、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ  １９：５４〜６２（１９
８２）；ならびにＰｒｅｖｉｅｒｏら、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ２
６３：７〜１３（１９７２）（ヒドロキシルを通したアシル化の方法について）；ならび
にＳａｎおよびＳｉｌｖｉｕｓ、Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｒｅｓ  ６６：１６９〜１８０（２００
５）（チオールを通したアシル化の方法について）；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅ
ｍ．「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｈｉ
ｓｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」１、２〜１２頁（１９９０）；Ｈａｓ
ｈｉｍｏｔｏら、Ｐｈａｒｍａｃｕｅｔｉｃａｌ  Ｒｅｓ．「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ
Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｔｈ
ｅｉｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」第６巻、第２号、１７１〜１７６頁
（１９８９）を参照されたい。
【０２１６】
アシル化ペプチド、第１および／または第２のインスリンポリペプチドのアシル基は、
任意のサイズ、例えば、任意の長さの炭素鎖であってよく、直鎖であっても分岐であって
もよい。本発明のいくつかの具体的な実施形態では、アシル基がＣ４〜Ｃ３０脂肪酸であ
る。例えば、アシル基は、Ｃ４脂肪酸、Ｃ６脂肪酸、Ｃ８脂肪酸、Ｃ１０脂肪酸、Ｃ１２
脂肪酸、Ｃ１４脂肪酸、Ｃ１６脂肪酸、Ｃ１８脂肪酸、Ｃ２０脂肪酸、Ｃ２２脂肪酸、Ｃ
２４脂肪酸、Ｃ２６脂肪酸、Ｃ２８脂肪酸またはＣ３０脂肪酸のいずれかであり得る。い
くつかの実施形態では、アシル基がＣ８〜Ｃ２０脂肪酸、例えば、Ｃ１４脂肪酸またはＣ
１６脂肪酸である。いくつかの実施形態では、アシル基が尿素である。
【０２１７】
代替実施形態では、アシル基が胆汁酸である。胆汁酸は、それだけに限らないが、コー
ル酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、リトコール酸、タウロコール酸、グリ
ココール酸およびコレステロール酸を含む任意の適切な胆汁酸であり得る。
【０２１８】
本明細書に記載されるアシル化第１および／または第２のインスリンポリペプチドを、
親水性部分を含むようさらに修飾することができる。いくつかの具体的な実施形態では、
親水性部分がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含むことができる。親水性部分の組
み込みは、本明細書に記載される方法のいずれかなどの任意の適切な手段を通して達成す
ることができる。いくつかの実施形態では、アシル化単鎖アナログが、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、
Ｏｒｎ、ホモ−ＣｙｓまたはＡｃ−Ｐｈｅからなる群から選択されるアミノ酸を含み、ア
ミノ酸の側鎖が親水性部分（例えば、ＰＥＧ）と共有結合している。一実施形態では、ア
シル基が、場合によりＣｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモ−ＣｙｓまたはＡｃ−Ｐｈｅを含む
スペーサーを介して、Ａ１、Ａ１４、Ａ１５、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ１０またはＢ２２位（天然
インスリンのＡ鎖およびＢ鎖のアミノ酸ナンバリングによる）と結合している。
【０２１９】
あるいは、アシル化第１および／または第２のインスリンポリペプチドが、アシル化さ
れており、かつ親水性部分を含むよう修飾もされているスペーサーを含む。適切なスペー
サーの限定的でない例としては、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモ−ＣｙｓおよびＡｃ−Ｐ
ｈｅからなる群から選択される１個または複数のアミノ酸を含むスペーサーが挙げられる
。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、インスリン受容体部分アゴニストのＡ鎖ポリペプチドおよび
Ｂ鎖ポリペプチドの少なくとも１つの少なくとも１個のＮ末端アミノ酸のアミノ末端が、
置換基を含むよう修飾される。置換基をＮ末端アミノ酸のアミノ基に直接またはスペーサ
ー（スペーサーはインスリンポリペプチドのＮ末端アミノ酸のアミノ基と置換基との間に
位置する）を介してアミノ基に間接的に共有結合することができる。置換基は上に論じら
れるアシル部分であり得る。置換基は一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、
Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコ
ール（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有し、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−がアセチル、
フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコキシカルボニ
ルであり得る。特定の態様では、置換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、メチ
ル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基またはＰＥＧ２基である（置
換基の構造については本明細書の実施例を参照）。インスリンのカルバモイル化はＯｉｍ
ｏｎｉら、Ｎｅｐｈｒｏｎ  ４６：６３〜６６（１９８７）によって開示されており、Ｎ
末端のカルバモイル基を含むインスリン二量体はＰＣＴ出願番号国際公開第２０１４０５
２４５１号（例えば、ＭＩＵ−９０）に開示されている。
【０２２１】
特定の実施形態では、少なくとも１個のＮ末端アミノ酸が、一般式ＲＣ（Ｏ）−（Ｒは
Ｒ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチ
ド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有し、特定の態様では、Ｒ
Ｃ（Ｏ）−がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルま
たはアルコキシカルボニルであり得る基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ルを含む置換基とＮ２窒素を介して結合している。特定の態様では、置換基がカルバモイ
ル基、アセチル基、グリシン、メチル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥ
Ｇ１基またはＰＥＧ２基である。
【０２２２】
特定の実施形態では、第１および第２のインスリンポリペプチドの１個または複数のア
ミノ末端と共有結合した糖類が単糖であり得る（例えば、二量体５１参照）。いくつかの
実施形態では、糖類が１個または複数のアミン基を含む。一定の実施形態では、糖類およ
びアミン基がＣ１〜Ｃ６アルキル基、例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基によって分離されて
いる。いくつかの実施形態では、糖類がアミノエチルグルコース（ＡＥＧ）である。一定
の実施形態では、糖類リガンドが「Ｄ」配置である。他の実施形態では、糖類リガンドが
「Ｌ」配置である。以下で、本発明者らは、これらの代表的な糖類の構造を示す。他の代
表的な糖類は当業者によって認識されるだろう。
【化４６】
2020097572.tif 000060
【０２２３】
一般的に、糖類は直接またはリンカーを介して間接的に第１および第２のインスリンポ
リペプチドの１つまたは複数のアミノ末端と結合し得る。特定の態様では、リンカーがア
ルキルジオイル、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）−（式中、ｎ＝０〜４５、０〜２０、
０〜１０または０〜５である）である。
【０２２４】
Ｎ末端アミノ基と結合した代表的な置換基は、
【化４７】
2020097572.tif 000061
2020097572.tif 000062
【０２２５】
であり得、波線は置換基とＮ末端アミノ基との間の結合を示す。置換基が
【化４８】
2020097572.tif 000063
【０２２６】
（Ｍｅ２；Ｎ−ジメチル）（式中、波線はＭｅ２とＮ末端アミノ酸のα炭素との間の結
合を示す）であってもよい。
【０２２７】
代表的なインスリン二量体
特定の実施形態では、本発明は、第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチ
ドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓと第
２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２のインスリンヘテロ二
量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓが、リンカー１、リンカー２、リンカー３、リ
ンカー１０、リンカー１１、リンカー１２、リンカー１３、リンカー１４、リンカー１５
、リンカー１６、リンカー１７、リンカー１８、リンカー１９、リンカー２０、リンカー
２１、リンカー２２、リンカー２３、リンカー２４、リンカー２５、リンカー２６、リン
カー２７、リンカー２８、リンカー２９、リンカー３０、リンカー３１、リンカー３２、
リンカー３３、リンカー３４、リンカー３５、リンカー３６、リンカー３７、リンカー３
８、リンカー３９、リンカー４０、リンカー４１、リンカー４２、リンカー４３、リンカ
ー４４、リンカー４５、リンカー４６、リンカー４７、リンカー４８、リンカー４９およ
びリンカー５０からなる群から選択される二官能性リンカーによって結合されており、但
し、二官能性リンカーがリンカー１０、リンカー１１、リンカー１２、リンカー１３また
はリンカー１４である場合、第１または第２のＡ鎖またはＢ鎖ポリペプチドの少なくとも
１つがそのＮ末端アミノ酸で本明細書で開示される置換基と結合している、あるいは少な
くとも第１のインスリンヘテロ二量体分子のＮ末端アミノ酸が本明細書で開示される置換
基と結合している、あるいは第１のインスリンヘテロ二量体と第２のインスリンヘテロ二
量体の両方のＮ末端アミノ酸が置換基と結合している、インスリン二量体を提供する。特
定の実施形態では、置換基が一般式ＲＣ（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏで
あり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（Ｐ
ＥＧ）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
を含み、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、
Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコキシカルボニルであり得る。特定の態様では、置
換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、メチル基、メトキシ基、ジメチル基、イ
ソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ６アルキル基またはＰＥＧ２基である。
【０２２８】
特定の実施形態では、本発明は、第１のリンカーおよび第２のリンカーを介して結合し
ている、第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチドを有する第１のインスリ
ンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓがリンカー５およびリンカー７
からなる群から選択される第１のリンカーと結合しており、第２のＡ鎖ポリペプチドおよ
び第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２のインスリンヘテロ二量体の第２のＢ２９または
Ｂ２８  Ｌｙｓがリンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカー９からなる群から
選択される第２のリンカーと結合しているインスリン二量体を提供する。特定の実施形態
では、第１または第２のＡ鎖またはＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つがそのＮ末端アミ
ノ酸で本明細書で開示される置換基と結合している、あるいは少なくとも第１のインスリ
ンヘテロ二量体分子のＮ末端アミノ酸が本明細書で開示される置換基と結合している、あ
るいは第１のインスリンヘテロ二量体と第２のインスリンヘテロ二量体の両方のＮ末端ア
ミノ酸が置換基と結合している。特定の実施形態では、置換基が一般式ＲＣ（Ｏ）−（Ｒ
はＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、ペプ
チド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有する基と連結したＮ−
ヒドロキシスクシンイミドエステルを含み、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−がアセチル、
フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコキシカルボニ
ルであり得る。特定の態様では、置換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、メチ
ル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ６ア
ルキル基またはＰＥＧ２基である。
【０２２９】
特定の実施形態では、本発明は、第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチ
ドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓがリ
ンカー５およびリンカー７からなる群から選択される第１のリンカーと結合しており、第
２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する第２のインスリンヘテロ二
量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓがリンカー５およびリンカー７からなる群から
選択される第２のリンカーと結合しているインスリン二量体であって、第１および第２の
リンカーが構造
【化４９】
2020097572.tif 000064
【０２３０】
（Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複素脂肪
族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても
よい基である）
を有する架橋リンカーを介して結合しているインスリン二量体を提供する。特定の態様
では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシル基またはＰ
ＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、ＰＥＧ９、Ｐ
ＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である。特定の実施
形態では、第１または第２のＡ鎖またはＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つがそのＮ末端
アミノ酸で本明細書で開示される置換基と結合している、あるいは少なくとも第１のイン
スリンヘテロ二量体分子のＮ末端アミノ酸が本明細書で開示される置換基と結合している
、あるいは第１のインスリンヘテロ二量体と第２のインスリンヘテロ二量体の両方のＮ末
端アミノ酸が置換基と結合している。特定の実施形態では、置換基が一般式ＲＣ（Ｏ）−
（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、アミノ酸、
ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有する基と連結した
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含み、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−がアセチ
ル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコキシカル
ボニルであり得る。特定の態様では、置換基がカルバモイル基、アセチル基、グリシン、
メチル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、ＡＥＧ−Ｃ
６アルキル基またはＰＥＧ２基である。
【０２３１】
特定の実施形態では、本発明は、第１のＡ鎖ポリペプチドおよび第１のＢ鎖ポリペプチ
ドを有する第１のインスリンヘテロ二量体分子の第１のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓがリ
ンカー４、リンカー６、リンカー８およびリンカー９からなる群から選択される第１のリ
ンカーと結合しており、第２のＡ鎖ポリペプチドおよび第２のＢ鎖ポリペプチドを有する
第２のインスリンヘテロ二量体の第２のＢ２９またはＢ２８  Ｌｙｓがリンカー４、リン
カー６、リンカー８およびリンカー９からなる群から選択される第２のリンカーと結合し
ているインスリン二量体であって、第１および第２のリンカーが構造
【化５０】
2020097572.tif 000065
【０２３２】
（Ｒは共有結合、炭素原子、フェニル、ヘテロ原子、またはアシル、脂肪族、複素脂肪
族、アリール、ヘテロアリールおよび複素環からなる群から選択される置換されていても
よい基である）
を有する架橋リンカーを介して結合しているインスリンアナログ二量体を提供する。特
定の態様では、ＲがＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９もしくはＣ１０アシル基
またはＰＥＧ２、ＰＥＧ３、ＰＥＧ４、ＰＥＧ５、ＰＥＧ６、ＰＥＧ７、ＰＥＧ８、ＰＥ
Ｇ９、ＰＥＧ１０、ＰＥＧ１１、ＰＥＧ１２、ＰＥＧ１３、またはＰＥＧ２５である。特
定の実施形態では、第１または第２のＡ鎖またはＢ鎖ポリペプチドの少なくとも１つがそ
のＮ末端アミノ酸で本明細書で開示される置換基と結合している、あるいは少なくとも第
１のインスリンヘテロ二量体分子のＮ末端アミノ酸が本明細書で開示される置換基と結合
している、あるいは第１のインスリンヘテロ二量体と第２のインスリンヘテロ二量体の両
方のＮ末端アミノ酸が置換基と結合している。特定の実施形態では、置換基が一般式ＲＣ
（Ｏ）−（ＲはＲ’ＣＨ２、Ｒ’ＮＨ、Ｒ’Ｏであり得、Ｒ’はＨ、直鎖アルキル鎖、ア
ミノ酸、ペプチド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、糖類であり得る）を有する基と
連結したＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含み、特定の態様では、ＲＣ（Ｏ）−
がアセチル、フェニルアセチル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイルまたはアルコ
キシカルボニルであり得る。特定の態様では、置換基がカルバモイル基、アセチル基、グ
リシン、メチル基、メトキシ基、ジメチル基、イソブチル基、ＰＥＧ１基、ＡＥＧ基、Ａ
ＥＧ−Ｃ６アルキル基またはＰＥＧ２基である。
【０２３３】
さらなる実施形態では、第１および第２のインスリンヘテロ二量体が本明細書で開示さ
れるインスリンまたはインスリンアナログのいずれかを含み得る。
【０２３４】
本発明はまた、
【化５１】
2020097572.tif 000066
2020097572.tif 000067
2020097572.tif 000068
2020097572.tif 000069
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2020097572.tif 000074
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2020097572.tif 000080
2020097572.tif 000081
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2020097572.tif 000083
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2020097572.tif 000085
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2020097572.tif 000087
2020097572.tif 000088
2020097572.tif 000089
2020097572.tif 000090
2020097572.tif 000091
2020097572.tif 000092
2020097572.tif 000093
2020097572.tif 000094
2020097572.tif 000095
2020097572.tif 000096
2020097572.tif 000097
2020097572.tif 000098
2020097572.tif 000099
2020097572.tif 000100
2020097572.tif 000101
2020097572.tif 000102
2020097572.tif 000103
2020097572.tif 000104
2020097572.tif 000105
2020097572.tif 000106
2020097572.tif 000107
から選択されるインスリン二量体を提供する。
【０２３５】
Ａ鎖ポリペプチドのＣｙｓ６残基とＣｙｓ１１残基との間のジスルフィド結合ならびに
それぞれＡ鎖のＣｙｓ７およびＣｙｓ２０とＢ鎖ポリペプチドのＣｙｓ７およびＣｙｓ１
９との間のジスルフィド結合はその間の実線によって表され；連結部分は示されるリジン
残基のεアミノ酸と共有結合しており、二量体１〜４０、４２〜５２、５４〜８６および
８８〜９４についてのＡ鎖ポリペプチドは配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し；二
量体５６についてのＡ鎖ポリペプチドは配列番号１１について示されるアミノ酸配列を有
し；二量体１〜１７、２１〜２７、３６、３７、３９〜４０および４２〜５２、５４〜８
２、８４〜８６および８８〜９４についてのＢ鎖ポリペプチドは配列番号２に示されるア
ミノ酸配列を有し；二量体１８および３２〜３５についてのＢ鎖ポリペプチドは配列番号
６に示されるアミノ酸配列を有し；二量体１９および８３についてのＢ鎖ポリペプチドは
配列番号９に示されるアミノ酸配列を有し；二量体２０、２８〜３１および３８について
のＢ鎖ポリペプチドは配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有し；二量体５３および８
７についてのＡ鎖ポリペプチドおよびＢ鎖ポリペプチドはそれぞれ、配列番号７および配
列番号８である。
【０２３６】
医薬組成物
一実施形態によると、好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の純度レベルの本明細書で開示される新
規なインスリン二量体のいずれかと、薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤とを
含む医薬組成物が提供される。このような組成物は、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍ
ｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、
７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍ
ｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍ
ｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２１ｍｇ／ｍｌ、２２ｍ
ｇ／ｍｌ、２３ｍｇ／ｍｌ、２４ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、またはそれ以上の濃度で
本明細書で開示されるインスリン二量体を含有し得る。一実施形態では、医薬組成物が、
滅菌され、種々の包装容器に含まれて保管されてもよい水溶液を含む。他の実施形態では
、医薬組成物が凍結乾燥粉末を含む。医薬組成物を、組成物を患者に投与するための使い
捨て装置を含むキットの一部としてさらに包装することができる。容器またはキットは、
周囲温度または冷蔵温度で保管するためにラベル付けされ得る。
【０２３７】
開示されるインスリン二量体は、インスリンペプチドについて前に記載されてきたいず
れの使用にも適していると考えられる。したがって、本明細書で開示されるインスリン二
量体を使用して高血糖を治療する、または高血中グルコースレベルから生じる他の代謝疾
患を治療することができる。したがって、本発明は、高血中グルコースレベルを患ってい
る患者の治療に使用するための、本明細書で開示されるインスリン二量体と、薬学的に許
容される担体とを含む医薬組成物を包含する。一実施形態によると、本明細書で開示され
るインスリン二量体を用いて治療される患者が家畜化動物であり、別の実施形態では、治
療される患者がヒトである。
【０２３８】
本開示による高血糖を治療する１つの方法は、非経口、例えば、静脈内、腹腔内、皮下
または筋肉内、くも膜下腔内、経皮的、直腸、経口、経鼻または吸入を含む任意の標準的
な投与経路を用いて、本開示インスリン二量体を患者に投与するステップを含む。一実施
形態では、組成物が皮下または筋肉内投与される。一実施形態では、組成物が非経口投与
され、インスリンポリペプチドまたはそのプロドラッグ誘導体が注射器に事前包装される
。
【０２３９】
本明細書で開示されるインスリン二量体は、単独で投与されても、または他の抗糖尿病
薬と組み合わせて投与されてもよい。当技術分野で既知のまたは調査中の抗糖尿病薬には
、天然インスリン、天然グルカゴンおよびその機能的アナログ、スルホニル尿素、例えば
、トルブタミド（Ｏｒｉｎａｓｅ）、アセトヘキサンアミド（Ｄｙｍｅｌｏｒ）、トラザ
ミド（Ｔｏｌｉｎａｓｅ）、クロルプロパミド（Ｄｉａｂｉｎｅｓｅ）、グリピジド（Ｇ
ｌｕｃｏｔｒｏｌ）、グリブリド（Ｄｉａｂｅｔａ、Ｍｉｃｒｏｎａｓｅ、Ｇｌｙｎａｓ
ｅ）、グリメピリド（Ａｍａｒｙｌ）またはグリクラジド（Ｄｉａｍｉｃｒｏｎ）；メグ
リチニド、例えば、レパグリニド（Ｐｒａｎｄｉｎ）またはナテグリニド（Ｓｔａｒｌｉ
ｘ）；ビグアナイド、例えば、メトホルミン（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ）またはフェンホル
ミン；チアゾリジンジオン、例えば、ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）、ピオグリタゾ
ン（Ａｃｔｏｓ）またはトログリタゾン（Ｒｅｚｕｌｉｎ）または他のＰＰＡＲγ阻害薬
；炭水化物消化を阻害するαグルコシダーゼ阻害薬、例えば、ミグリトール（Ｇｌｙｓｅ
ｔ）、アカルボース（Ｐｒｅｃｏｓｅ／Ｇｌｕｃｏｂａｙ）；エキセナチド（Ｂｙｅｔｔ
ａ）またはプラムリンチド；ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）阻害薬、例え
ば、ビルダグリプチンまたはシタグリプチン；ＳＧＬＴ（ナトリウム依存性グルコース輸
送体１）阻害薬；あるいはＦＢＰａｓｅ（フルクトース１，６−ビスホスファターゼ）阻
害薬が含まれる。
【０２４０】
本明細書で開示されるインスリン二量体を含む医薬組成物は、標準的な薬学的に許容さ
れる担体および当業者に既知の投与経路を用いて製剤化し、患者に投与することができる
。したがって、本開示はまた、本明細書で開示されるインスリン二量体またはその薬学的
に許容される塩の１つまたは複数を、薬学的に許容される担体と組み合わせて含む医薬組
成物を包含する。例えば、本明細書で開示されるインスリン二量体を含む医薬組成物は、
亜鉛イオン、保存剤（例えば、フェノール、クレゾール、パラベン）、等張化剤（ｉｓｏ
ｔｏｎｉｃｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、マンニトール、ソルビトール、ラクトー
ス、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、グリセロール）、緩衝物質、塩、
酸およびアルカリならびにさらなる賦形剤を含有してもよい。これらの物質は、各場合で
、個別に、あるいは混合物として存在することができる。グリセロール、デキストロース
、ラクトース、ソルビトールおよびマンニトールは慣用的に１００〜２５０ｍＭの濃度で
医薬製剤中に存在し、ＮａＣｌは最大１５０ｍＭの濃度で存在する。例えば、リン酸塩、
酢酸塩、クエン酸塩、アルギニン、グリシルグリシンまたはＴＲＩＳ（すなわち、２−ア
ミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）緩衝液および対応する塩など
の緩衝物質は、５〜２５０ｍＭ、一般的に約１０〜１００ｍＭの濃度で存在する。さらな
る賦形剤は、特に、塩またはアルギニンであり得る。
【０２４１】
一実施形態では、医薬組成物が、リン酸緩衝系中約４．０〜約７．０のｐＨで１ｍｇ／
ｍＬ濃度のインスリン二量体を含む。医薬組成物が唯一の医薬品有効成分としてインスリ
ン二量体を含んでもよいし、またはインスリン二量体を１種または複数のさらなる活性剤
と組み合わせてもよい。
【０２４２】
本明細書で開示される全ての治療方法、医薬組成物、キットおよび他の同様の実施形態
は、インスリン二量体がその全ての薬学的に許容される塩を含むことを考慮している。
【０２４３】
一実施形態では、キットがインスリン二量体組成物を患者に投与するための装置を備え
る。キットは、種々の容器、例えば、バイアル、チューブ、瓶などをさらに含んでもよい
。好ましくは、キットは取扱説明書も含む。一実施形態によると、キットの装置がエアロ
ゾル分配装置であり、組成物がエアロゾル装置内に事前包装されている。別の実施形態で
は、キットが注射器および針を含み、一実施形態では、インスリン二量体組成物が注射器
内に事前包装されている。
【０２４４】
本発明の化合物は、標準的な合成方法、組換えＤＮＡ技術、またはペプチドおよび融合
タンパク質を調製する任意の他の方法によって調製され得る。一定の非天然アミノ酸は標
準的な組換えＤＮＡ技術によって発現することができないが、その調製技術は当技術分野
で既知である。非ペプチド部分を包含する本発明の化合物は、該当する場合、標準的なペ
プチド化学反応に加えて、標準的な有機化学反応によって合成され得る。
【０２４５】
以下の実施例は、本発明のさらなる理解を促進することを意図している。
【０２４６】
［実施例］
一般的手順
全ての化学物質は特に注記しない限り、商業的供給業者から購入した。反応は特に注記
しない限り、通常は周囲温度または室温で行った。湿気または空気に敏感な反応は、無水
溶媒および試薬を用いて、窒素またはアルゴン下で行った。反応の進行は、分析薄層クロ
マトグラフィー（ＴＬＣ）および超高性能液体クロマトグラフィー−質量分析（ＵＰＬＣ
−ＭＳ）によって監視した。ＴＬＣはシリカゲル６０Ｆ−２５４、層厚０．２５ｍｍでプ
レコーティングしたＥ．Ｍｅｒｃｋ  ＴＬＣプレートで行った。プレートは、２５４ｎｍ
ＵＶを用いておよび／またはモリブデン酸アンモニウムセリウム溶液（ＣＡＭ）もしく
はｐ−アニスアルデヒド染色液への暴露、引き続く炭化によって可視化した。超高性能液
体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）はＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（
登録商標）システムで行った。
【０２４７】
ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ａ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（登録商標）
ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  １．０×５０ｍｍカラム  ２．０分にわたって１０：９０
〜９５：５ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡの勾配を用いる；流量０．
３ｍＬ／分、ＵＶ波長２１５ｎｍ；ＵＰＬＣ−ＭＳ；
方法Ｂ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｃ１８
１．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム  ４．０分にわたって６０：４０〜１００：０
ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡおよび４０秒にわたって１００：０〜
９５：５ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡの勾配を用いる；流量０．３
ｍＬ／分、ＵＶ波長２００〜３００ｎｍ；ＵＰＬＣ−ＭＳ；
方法Ｃ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｃ１８
１．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム４．０分にわたって２０：８０〜９０：１０ｖ
／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡおよび０．５分にわたって９０：１０〜
９５：５ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡの勾配を用いる；流量０．３
ｍＬ／分、ＵＶ波長２００〜３００ｎｍ；ＵＰＬＣ−ＭＳ；
方法Ｄ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｃ８  
１．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム  ４．０分にわたって１０：９０〜５５：４５ｖ
／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡおよび４０秒にわたって５５：４５〜９
５：５ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡの勾配を用いる；流量０．３ｍ
Ｌ／分、ＵＶ波長２００〜３００ｎｍ；ＵＰＬＣ−ＭＳ；
方法Ｅ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ３００  
Ｃ４  １．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム  ４．３分にわたって１０：９０〜５０：
５０ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡおよび０．５分にわたって５０：
５０〜７０：３０ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡの勾配を用いる；流
量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００〜３００ｎｍ；ＵＰＬＣ−ＭＳ；
方法Ｆ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｃ８  
１．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム  ４．３分にわたって２０：８０〜７２．５：２
７．５ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡおよび０．５分にわたって７２
．５：２７．５〜９５：５ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．０５％ＴＦＡの勾配を用
いる；流量０．３ｍＬ／分、ＵＶ波長２００〜３００ｎｍおよびＵＰＬＣ−ＭＳ；
方法Ｇ：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ（商標）ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ  Ｃ８  
１．７μｍ  ２．１×１００ｍｍカラム４．０分にわたって２０：８０〜９０：１０ｖ／
ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．１％ＴＦＡおよび０．４分にわたって９０：１０〜９５
：５ｖ／ｖのＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋ｖ０．１％ＴＦＡの勾配を用いる；流量０．３ｍＬ／
分、ＵＶ波長２００〜３００ｎｍ。
【０２４８】
質量分析を、正イオン検出モードのエレクトロスプレーイオン化によりＷａｔｅｒｓ  
ＳＱ検出器で行い、質量対電荷比のスキャン範囲を１７０〜９００とした、または正イオ
ン検出モードのエレクトロスプレーイオン化によりＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ（
登録商標）ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（商標）ＸＥで行い、質量対電荷比のスキャン範囲を
３００〜２０００とした。生成インスリン複合体またはＩＲＰＡの同定は、理論分子量と
ＵＰＬＣ−ＭＳを用いて測定した実験値を比較することによって確認した。結合位置を決
定するために、具体的には、インスリン二量体をＤＴＴ処置（ａ／ｂ鎖について）または
Ｇｌｕ−Ｃ消化（還元およびアルキル化を用いるもしくは用いない）に供し、次いで、得
られたペプチドをＬＣ−ＭＳによって分析した。測定した質量に基づいて、結合位置を推
定した。
【０２４９】
Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ装置（Ｄｙａｘ  Ｃｏｒ
ｐ．）またはＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ機器（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ
）のいずれかを用いてフラッシュクロマトグラフィーを行った。順相クロマトグラフィー
は注記されるサイズの充填済カートリッジ中シリカゲル（２０〜７０μｍ、６０Å孔径）
で行った。イオン交換クロマトグラフィーは親水性陰アニオン性ポリ（２−スルホエチル
アスパルトアミド）の結合コーティングを含むシリカ系材料で行った（ＰｏｌｙＳＵＬＦ
ＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１００
０Å孔径）。逆相クロマトグラフィーは注記されるサイズの充填済カートリッジ中Ｃ１８
結合シリカゲル（２０〜６０μｍ、６０〜１００Å孔径）で行った。分取スケールＨＰＬ
Ｃは、Ｗａｔｅｒｓ  ＤＥＬＴＡ  ＰＡＫ  Ｃ４  １５μｍ、３００Å、５０×２５０ｍ
ｍカラムまたはＫＲＯＭＡＳＩＬ（登録商標）Ｃ８  １０μｍ、１００Å、５０×２５０
ｍｍカラム、流量８５ｍＬ／分、注記される勾配を用いてＧｉｌｓｏｎ  ３３３〜３３４
バイナリーシステムで行った。溶液の濃縮は減圧下ロータリーエバポレーターで行った、
またはＶｉｒＴｉｓ  Ｆｒｅｅｚｅｍｏｂｉｌｅ  Ｆｒｅｅｚｅ  Ｄｒｙｅｒ（ＳＰ  Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で凍結乾燥した。
【０２５０】
略語：アセトニトリル（ＡｃＣＮ）、水性（ａｑ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルア
ミンまたはヒューニッヒ塩基（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）
、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、Ｎ−（３−ジメチル
アミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、（１又は複数の）グ
ラム（ｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ）、（１又は複数の）
時間（ｈまたはｈｒ）、質量スペクトル（ｍｓまたはＭＳ）、（１又は複数の）マイクロ
グラム（μｇ）、（１又は複数の）マイクロリットル（μＬ）、マイクロモル（μｍｏｌ
）、（１又は複数の）ミリグラム（ｍｇ）、（１又は複数の）ミリリットル（ｍＬ）、ミ
リモル（ｍｍｏｌ）、（１又は複数の）分（分）、保持時間（Ｒｔ）、室温（ｒｔ）、飽
和（ｓａｔ．またはｓａｔ’ｄ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（食塩水）、トリエチルア
ミン（ＴＥＡ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）およびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル
−Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）ウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）。
【０２５１】
「ＲＨＩ」という用語は組換えヒトインスリンを指し、インスリンが天然の野生型ヒト
インスリン特有のアミノ酸配列を有することを示すために使用される。表において本明細
書で使用される場合、この用語は、二量体を構成するインスリンのアミノ酸配列が天然の
野生型ヒトインスリンのものであることを示す。
【０２５２】
［実施例１］
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（（６−（（２，５−ジオキソピロリジン
−１−イル）オキシ）−６−オキソヘキシル）アミノ）−６−オキソヘキサノエート（リ
ンカー１；Ｃ６＋ＮＣ６）の合成を説明する。
【化５２】
2020097572.tif 000108
【０２５３】
ステップ１  ベンジル６−（（６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル）アミノ
）−６−オキソヘキサノエート
アジピン酸モノベンジルエステル（６００ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）および６−（ベン
ジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム４−メチルベンゼンスルホネート（
１．０ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１２．７１ｍＬ）中混合物に、ＨＯＢｔ（５８
４ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（８８８μＬ、５．０８ｍｍｏｌ）およ
びＥＤＣ（７３１ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を添加した。一晩攪拌した後、反応混合物を
飽和ＮａＨＣＯ３とＥｔＯＡｃに分配した。有機相を分離し、１．０Ｍ  ＨＣｌおよび食
塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、標記化合物が半固体として得ら
れ、これをさらに精製することなく次のステップに使用した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ａ：Ｒ
ｔ＝１．２６分、ｍ／ｚ＝４４０．３［Ｍ＋１］
ステップ２  ６−（（５−カルボキシペンチル）アミノ）−６−オキソヘキサン酸
ステップ１の生成物（１．０８ｇ、２．４５７ｍｍｏｌ）およびパールマン触媒（炭素
上２０％ｗｔ、１７３ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中懸濁液を５
０ｐｓｉ  Ｈ２下で一晩攪拌した。触媒を濾別し、濾液をＣ８相での逆相クロマトグラフ
ィーに供した（Ｋｒｏｍａｓｉｌ、Ｃ８  １０μｍ  １００Å、２５０×５０ｍｍ；溶媒
Ａ＝水／０．０５％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＡｃＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）、流量＝８５ｍＬ／
分、勾配３０分でＡ中Ｂ５〜３０％、ＵＰＬＣ−ＭＳ  方法Ａ：Ｒｔ＝０．４０分、ｍ／
ｚ＝２６０．１５［Ｍ＋１］
ステップ３  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（（６−（（２，５−ジオキ
ソピロリジン−１−イル）オキシ）−６−オキソヘキシル）アミノ）−６−オキソヘキサ
ノエート
ステップ２の生成物（５０ｍｇ、０．１９３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（９６４μＬ）中溶液
に、ＴＳＴＵ（１１６ｍｇ、０．３８６ｍｍｏｌ）を添加した。０℃に冷却した後、混合
物にトリエチルアミン（５３．８μＬ、０．３８６ｍｍｏｌ）を添加した。４５分間攪拌
した後、所望の化合物の形成が観察された：ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ａ：Ｒｔ＝０．７１分、
ｍ／ｚ＝４５３．４［Ｍ＋１］得られた２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（（
６−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−６−オキソヘキシル）アミ
ノ）−６−オキソヘキサノエートを、精製することなくＤＭＦ中０．２Ｍ溶液として使用
した。
【０２５４】
［実施例２］
ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）６，６’−（アジポイルビス（アザン
ジイル））ジヘキサノエート（リンカー２；Ｃ６Ｎ＋Ｃ６＋ＮＣ６）の合成を説明する。
【化５３】
2020097572.tif 000109
【０２５５】
ステップ１  ジベンジル６，６’−（アジポイルビス（アザンジイル））ジヘキサノエ
ート
６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム４−メチルベンゼンス
ルホネート（２．６９３ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）およびアジピン酸（５００ｍｇ、３．４
２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１７．１ｍＬ）中溶液に、ヒューニッヒ塩基（１．７９３ｍＬ、
１０．２６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．５７２ｇ、１０．２６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（
１．９６８ｇ、１０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。一晩攪拌した後、反応混合物を水（５
００ｍＬ）に注ぎ入れ、３０分間攪拌した。標記化合物を、濾過を通して固体として回収
し、空気吸込によって乾燥させた。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ａ：Ｒｔ＝１．２３分、ｍ／ｚ＝
５５３．５［Ｍ＋１］
ステップ２  ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）６，６’−（アジポイル
ビス（アザンジイル））ジヘキサノエート
ステップ２でベンジル６−（（６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキシル）アミノ
）−６−オキソヘキサノエートをジベンジル６，６’−（アジポイルビス（アザンジイル
））ジヘキサノエートに代えて、実施例１について記載されるのと同様の手順を用いて標
記化合物を調製した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ａ：Ｒｔ＝０．７４分、ｍ／ｚ＝５６７．４［
Ｍ＋１］
［実施例３］
（２Ｓ’，２’Ｓ）−２，２’−（オクタンジオイルビス（アザンジイル））ビス（５
−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−５−オキソペンタン酸）（リ
ンカー３；γ−Ｇｌｕ−スベリン−γ−Ｇｌｕ）の合成を説明する。
【化５４】
2020097572.tif 000110
【０２５６】
ステップ１  （Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−（８−（（（Ｓ）−１−（ベンジ
ルオキシ）−４−カルボキシ−１−オキソブタン−２−イル）アミノ−８−オキソオクタ
ンアミド）−５−オキソペンタン酸
Ｈ−ＧＬＵ−ＯＢＺＬ（１．００ｇ、４．２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０．５ｍＬ）中
溶液に、トリエチルアミン（５．８７５ｍＬ、４２．１ｍｍｏｌ）、引き続いてスベリン
酸ジスクシンイミジル（７７６ｍｇ、２．１０７ｍｍｏｌ）を添加した。１時間攪拌した
後、反応混合物を濃縮し、得られた残渣をＣ１８カラム（ＩＳＣＯ４４ｇ）、流量＝３７
ｍＬ／分；勾配２０分で０．０５％ＴＦＡを含む水中ＡｃＣＮ：２％〜２０％、引き続い
て保持で精製した。凍結乾燥後、中間体ビス−カルボン酸が得られた。ＵＰＬＣ−ＭＳ方
法Ｂ：Ｒｔ＝２．６６分、ｍ／ｚ＝６１３．３［Ｍ＋１］
ステップ２  （Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−（８−（（（Ｓ）−１−（ベンジ
ルオキシ）−４−カルボキシ−１−オキソブタン−２−イル）アミノ−８−オキソオクタ
ンアミド）−５−オキソペンタン酸のビス−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル
ステップ１の生成物（４５５ｍｇ、０．７４３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７．４ｍ
Ｌ）中懸濁液に、固体としてのＴＳＴＵ（４９２ｍｇ、１．６３４ｍｍｏｌ）、引き続い
てトリエチルアミン（２２８μＬ、１．６３４ｍｍｏｌ）を添加し、この時点で懸濁液が
溶解した。反応混合物を１．５時間攪拌し、室温においてロータリーエバポレーターで濃
縮した。生成物をＣ８相での逆相クロマトグラフィーによって精製した（カラムＫｒｏｍ
ａｓｉｌ、Ｃ８  １０μｍ  １００Ａ、サイズ２５０×５０ｍｍ；溶媒Ａ＝水／０．０５
％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＡｃＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）、流量＝８５ｍＬ／分、勾配３０分で
Ａ中Ｂ１０〜８０％。分画を凍結乾燥した後、ビスＮＨＳエステルが得られた。ＵＰＬＣ
−ＭＳ方法Ｂ：Ｒｔ＝２．７７分、ｍ／ｚ＝８０７［Ｍ＋１］
ステップ３．（２Ｓ，２’Ｓ）−２，２’−（オクタンジオイルビス（アザンジイル）
）ビス（５−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−５−オキソペンタ
ン酸）
ステップ２の生成物（２５０ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）を、触媒としてパラジウム炭
素（６６．０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）および溶媒として０．１％ＴＦＡを含有するア
セトン（６．２ｍＬ）を用いて１ａｔｍの水素で一晩水素化した。触媒を濾別し、濾液を
濃縮すると標記化合物が得られた。高真空で一晩ポンピングした。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｃ
：Ｒｔ＝３．６１分、ｍ／ｚ＝６２７．３［Ｍ＋１］
［実施例４］
一般的方法Ａ：Ｎ６，Ｂ２９インスリン複合体（アナログ）の合成
適切な大きさの容器で、インスリンまたはインスリンアナログを室温で穏やかに攪拌し
ながら、混合溶媒：２：３ｖ／ｖ０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３：ＡｃＣＮに溶解した。混合物
が透明になった後、アルカリ性溶液、例えば、０．１Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨを１０．
５〜１０．８の値に調整した。別のバイアルで、活性化エステル中間体（連結部分）を室
温で有機溶媒、例えば、ＤＭＳＯに溶解した。活性化エステル（リンカー）の溶液の分割
量を、ＵＰＬＣクロマトグラムが未修飾インスリンのほとんどが反応したことおよび反応
混合物の相当部分がＢ２９−結合インスリンに変換されたことを示すまで、インスリンを
含有する溶液に一定期間にわたって添加した。アミン求核試薬、例えば、２−アミノエタ
ノールを添加することによって反応物をクエンチした。反応溶液を室温で３０分間攪拌し
た。得られた溶液を０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０×）により慎重に希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ（およ
び必要な場合には０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いてそのｐＨを２．５の最終ｐＨに調整した
。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムを通してまたは１Ｋ、３Ｋもしくは１０
Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｕ
ｎｉｔｓを用いて、限界濾過によって濃縮した。濃縮溶液を通常は最初に、イオン交換ク
ロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．
、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／
２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ
ＮａＣｌ）に供した。所望の純度のＢ２９−複合体を含有する分画を合わせ、ＴＦＦシ
ステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮した。次いで、得られた溶液
を逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００Å
カラムまたはＫｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；
緩衝液Ａ：水中０．０５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０．０５〜０．１％Ｔ
ＦＡ）によってさらに精製した。標記複合体を含有する分画を合わせ、凍結乾燥あるいは
ＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換する
と標記生成物が得られた。
【０２５７】
［実施例５］
Ｎ６，２９Ｂ−５−アジド−ペンタノイルデスＢ３０インスリン（Ａ：Ｙ１９Ａ）（ア
ナログ１）の合成を説明する。
【０２５８】
２０ｍＬシンチレーションバイアルで、デスＢ３０  Ａ：Ｙ１９Ａインスリン（１１２
ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）を、室温で穏やかに攪拌しながら、混合溶媒（２ｍＬ、２：
３ｖ／ｖ  ０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３：ＡｃＣＮ）に溶解した。混合物が透明になった後、
アルカリ性溶液、例えば、０．１Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨを１０．５〜１０．８の値に
調整した。別の８ｍＬシンチレーションバイアルで、２，５−ジオキソピロリジン−１−
イル５−アジドペンタノエート（リンカー５；実施例６参照）（４．７９ｍｇ、０．０２
０ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＳＯ（５００μＬ）に溶解した。活性化エステルの溶液の分割
量を、ＵＰＬＣクロマトグラムが未修飾インスリンのほとんどが反応したことおよび反応
混合物の相当部分がＢ２９−結合インスリンに変換されたことを示すまで、インスリンを
含有する溶液に一定期間にわたって添加した。アミン求核試薬、例えば、２−アミノエタ
ノールを添加することによって反応物をクエンチした。反応溶液を室温で３０分間攪拌し
た。得られた溶液を０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０×）により慎重に希釈し、１．０Ｎ  ＨＣｌ（
および必要な場合には０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いてそのｐＨを２．５の最終ｐＨに調整
した。溶液を最初に、３Ｋまたは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ
−１５  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｕｎｉｔｓを用いて限界濾過によって濃縮した。濃縮
溶液を逆相ＨＰＬＣ（ＫＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Å
カラム、２０分にわたって緩衝液Ａ中２５〜３５％緩衝液Ｂ；緩衝液Ａ：水中０．０５％
ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０．０５％ＴＦＡ）に供した。
【０２５９】
アナログ１を含有する分画を合わせ、次いで、凍結乾燥した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｄ：
Ｒｔ＝３．９１分、ｍ／ｚ＝１４３５．８６［（Ｍ＋４）／４］
［実施例６］
Ｎ６，２９Ｂ−アシル化ＲＨＩアナログ２、アナログ３およびアナログ４を、「クリッ
ク」ケミストリーを用いて二量体を構築するのに使用するために調製し、一般的方法Ａ、
あるいは実施例４について記載されるのと同様であるが、アナログ２、アナログ３または
アナログ４をそれぞれ生成するために組換えヒトインスリンと
【化５５】
2020097572.tif 000111
【０２６０】
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルペンタ−４−イノエート；リンカー４）；
【化５６】
2020097572.tif 000112
【０２６１】
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−アジドペンタノエート；リンカー５）；ま
たは
【化５７】
2020097572.tif 000113
【０２６２】
（ペルフルオロフェニル１−（ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル）−
３−オキソ−２，７，１０，１３，１６−ペンタオキサ−４−アザノナデカン−１９−オ
エート）（リンカー６）
を交換する手順を用いて調製した。アナログを、アナログ５（これはＵＰＬＣ−ＭＳ方
法Ｆを用いて特徴付けた）を除いて、ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｄを用いて特徴付けた。
【表２】
2020097572.tif 000114
【０２６３】
［実施例７］
Ｎ２，１Ａ，Ｎ２，１Ｂ−ビス（カルバモイル）ヒトインスリン（アナログ５）の合成
を説明する。
【０２６４】
ＲＨＩ（１ｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）中懸濁液に、リン酸二カリウム
（０．２４９ｇ、１．４２９ｍｍｏｌ）の水（５．０ｍＬ）中溶液を添加した。室温で３
０分間攪拌した後、得られた混合物にシアン酸カリウム（０．２７９ｇ、３．４４ｍｍｏ
ｌ）を添加した。反応混合物を１６時間攪拌させた。反応を停止するために、ＭＷＣＯ  
３Ｋ透析濾過装置を用いてＴＦＦによって未反応シアン酸カリウムを除去し、生成物を凍
結乾燥により固体として単離した。生成物は約１０〜３５％のＡ１／Ｂ１／Ｂ２９−トリ
ス−尿素−ＲＨＩを含有しており、これはＣ８相での逆相クロマトグラフィーによって除
去してもよかった（カラムＫＲＯＭＡＳＩＬ、Ｃ８  １０μｍ  １００Å、２５０×５０
ｍｍ；溶媒Ａ＝水／０．０５％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＡｃＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）、流量＝
８５ｍＬ／分、勾配３０分にわたってＡ中Ｂ２６〜３４％）。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｄ：Ｒ
ｔ＝４．２９分、ｍ／ｚ＝１４７４．６（ｚ＝４）。Ｎ末端置換基は構造
【化５８】
2020097572.tif 000115
【０２６５】
（カルバモイル）（式中、波線はＮ末端アミノ酸の置換基とＮ２窒素との間の結合を示
す）を有する。
【０２６６】
［実施例８］
Ｎ２，１Ａ，Ｎ２，１Ｂ−ビス（カルバモイル）デスＢ３０ヒトインスリン（アナログ
６）の合成を説明する。
【０２６７】
ＲＨＩをデスＢ３０インスリンに代えて、実施例７について記載されるのと同様の手順
を用いて標記化合物を調製した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｄ：Ｒｔ＝４．１０分、ｍ／ｚ＝１
４４８．９（ｚ＝４）。Ｎ末端置換基は構造
【化５９】
2020097572.tif 000116
【０２６８】
（カルバモイル）（式中、波線はＮ末端アミノ酸の置換基とＮ２窒素との間の結合を示
す）を有する。
【０２６９】
［実施例９］
Ｎ２，１Ａ，Ｎ２，１Ｂ−ビス（カルバモイル）インスリンリスプロ（アナログ７）の
合成を説明する。
【０２７０】
ＲＨＩをインスリンリスプロに代えて、実施例７について記載されるのと同様の手順を
用いて標記化合物を調製した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｄ：Ｒｔ＝４．０７分、ｍ／ｚ＝１４
７３．６（ｚ＝４）。Ｎ末端置換基は構造
【化６０】
2020097572.tif 000117
【０２７１】
（カルバモイル）（式中、波線はＮ末端アミノ酸の置換基とＮ２窒素との間の結合を示
す）を有する。
【０２７２】
［実施例１０］
Ｎ２，１Ａ−アセチルヒトインスリン（アナログ８）の合成を説明する。
【０２７３】
ＲＨＩ（４００ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（４．６ｍＬ）中溶液に、２，
５−ジオキソピロリジン−１−イルアセテート
【化６１】
2020097572.tif 000118
【０２７４】
（１０．８２ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ１００μＬ中溶液を滴加した。３
時間攪拌した後、反応混合物を水（９５ｍＬ）で希釈し、約ｐＨ３まで酸性化し、次いで
、３または１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅｎｔｒｉ
ｆｕｇａｌ  Ｕｎｉｔｓを通して透析濾過してＤＭＳＯのほとんどを除去した。得られた
溶液を最初に、２４分間にわたって勾配緩衝液Ａ中１０〜４０％の緩衝液Ｂを用いるイオ
ン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  
Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å、流量１５ｍＬ／分；緩衝液Ａ：０．
１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４
／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）に供した。所望のＮ２，１Ａ−アセチル−ＲＨ
Ｉを含有する分画を合わせ、濃縮し、次いで、逆相クロマトグラフィー（ＫＲＯＭＡＳＩ
Ｌ、Ｃ８  １０μｍ  １００Å、２５０×５０ｍｍ；溶媒Ａ＝水／０．０５％ＴＦＡ、溶
媒Ｂ＝ＡｃＣＮ／０．０５％ＴＦＡ、勾配Ａ中２６〜３０％のＢ）に供した。ＤＴＴ分析
を用いて修飾位置を確認した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｄ：Ｒｔ＝３．５分およびｍ／ｚ＝１
４６３．５（ｚ＝４）。Ｎ末端置換基は構造
【化６２】
2020097572.tif 000119
【０２７５】
（アセチル）（式中、波線はＮ末端アミノ酸の置換基とＮ２窒素との間の結合を示す）
を有する。
【０２７６】
［実施例１１］
Ｎ２，１Ａ，Ｎ２，１Ｂ−ビス（カルバモイル）Ｎ６，２９Ｂ−アシル化ＲＨＩの合成
を説明する。
【０２７７】
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−アジドペンタノエート（リンカー５）と結合
してアナログ９を構築するまたは２，５−ジオキソピロリジン−１−イルペンタ−４−イ
ノエート（リンカー４）と結合してアナログ１０を構築するアナログ５を、一般的方法Ａ
または実施例４について記載されるのと同様の手順を用いて調製した。
【０２７８】
［実施例１２］
以下のＮ６，２９Ｂ−アシル化ＲＨＩアナログ（アナログ１１、アナログ１２およびア
ナログ１３）を、「クリック」ケミストリーを用いて二量体を構成するのに使用するため
に調製した。アナログを一般的方法Ａまたは実施例４について記載されるのと同様である
が、アナログ１１、アナログ１２またはアナログ１３をそれぞれ生成するために組換えヒ
トインスリン（ＲＨＩ）と
【化６３】
2020097572.tif 000120
【０２７９】
から選択される適切な連結部分を交換する手順を用いて調製した。アナログを、アナロ
グ１２（これはＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｆを用いて特徴付けた）を除いて、ＵＰＬＣ−ＭＳ方
法Ｄを用いて特徴付けた。
【表３】
2020097572.tif 000121
【０２８０】
［実施例１３］
一般的方法Ｂ：有機塩基条件を用いたＮ６，２９Ｂ，Ｎ６，２９Ｂ’−インスリン二量
体の合成
適切な大きさの容器で、インスリンまたはインスリンアナログを室温で塩基、例えば、
ＴＥＡの存在下、有機溶媒または混合水性（ａｑ）／有機溶媒、例えば、ＤＭＳＯに懸濁
する。インスリンが完全に溶解するまで、混合物を穏やかに攪拌させる。得られた溶液に
、有機溶媒（ＤＭＳＯまたはＤＭＦなど）の溶液中活性化エステル中間体（リンカー）を
添加する。ＵＰＬＣ後、クロマトグラムは、反応混合物の相当部分がＮ６，２９Ｂ，Ｎ６
，Ｂ２９Ｂ’−インスリン二量体（またはＮ６，２８Ｂ，Ｎ６，２８Ｂ’ｖ−インスリン
リスプロ二量体）に変換したことを示す。反応混合物を直接逆相ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅ
ｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫＲＯＭＡＳ
ＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：脱イオン水中０
．０５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０．０５〜０．１％ＴＦＡ）に供しても
よいし、または反応物を０℃で冷酸性Ｈ２Ｏ（２０×、ｐＨ約３．０）で慎重に希釈する
ことによってクエンチしてもよく、１Ｎ  ＨＣｌ（および必要な場合には０．１Ｎ  Ｎａ
ＯＨ）を用いてそのｐＨを２．５の最終ｐＨに調整する。溶液を最初に、接線流濾過（Ｔ
ＦＦ）システムを通してまたは１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃ
ｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｕｎｉｔｓを用いて、限界濾過によ
って濃縮することができる。濃縮溶液を通常は最初に、イオン交換クロマトグラフィー（
ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ
、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩
衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）に供す
る。所望の純度のＢ２９−複合体を含有する分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉ
ｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。次いで、濃縮溶液を逆相ＨＰＬＣ精製（Ｗ
ａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫＲＯ
ＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：脱イオン
水中０．０５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０．０５〜０．１％ＴＦＡ）に供
する。所望のインスリン二量体を含有する分画を合わせ、凍結乾燥あるいはＴＦＦシステ
ムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換するとＮ６，２９
Ｂ，Ｎ６，２９Ｂ’−インスリン二量体が得られる。
【０２８１】
［実施例１４］
一般的方法Ｃ：水性塩基条件を用いたＮ６，２９Ｂ，Ｎ６，２９Ｂ’−インスリン二量
体の合成
適切な大きさの容器で、インスリンまたはインスリンアナログを室温で穏やかに攪拌し
ながら、混合溶媒：２：３ｖ／ｖ０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３：ＡｃＣＮに溶解する。混合物
が透明になった後、アルカリ性溶液、例えば、０．１Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨを１０．
５〜１０．８の値に調整する。別のバイアルで、活性化エステル中間体（リンカー）を室
温で有機溶媒、例えば、ＤＭＳＯに溶解する。活性化エステルの溶液の分割量を、ＵＰＬ
Ｃクロマトグラムが未修飾インスリンのほとんどが反応したことおよび反応混合物の相当
部分がＮ６，Ｂ２９，Ｎ６，Ｂ２９’−インスリン二量体（またはＮ６，２８Ｂ，Ｎ６，
２８Ｂ−インスリンリスプロ二量体）に変換されたことを示すまで、インスリンを含有す
る溶液に一定期間にわたって添加する。アミン求核試薬、例えば、２−アミノエタノール
を添加することによって反応物をクエンチする。反応溶液を室温で３０分間攪拌する。得
られた溶液を０℃で冷Ｈ２Ｏ（２０×）により慎重に希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ（および必要
な場合には０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いてそのｐＨを２．５の最終ｐＨに調整する。溶液
を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムを通してまたは１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  Ｍ
ＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｕｎｉｔ
ｓを用いて、限界濾過によって濃縮する。濃縮溶液を通常は最初に、イオン交換クロマト
グラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５
０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％
ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  Ｎａ
Ｃｌ）に供する。
【０２８２】
所望の純度のＢ２９−複合体を含有する分画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃ
ｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。次いで、得られた溶液を逆相ＨＰＬＣ（Ｗａ
ｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫＲＯＭ
ＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：水中０．０
５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０．０５〜０．１％ＴＦＡ）によってさらに
精製する。標記インスリン二量体を含有する分画を合わせ、凍結乾燥あるいはＴＦＦシス
テムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換するとＮ６，２
９Ｂ，Ｎ６，２９Ｂ’−インスリン二量体が得られる。
【０２８３】
［実施例１５］
この実施例はＮ６，Ｂ２９，Ｎ６，Ｂ２９’−（２，２’−（エタン−１，２−ジイル
ビス（オキシ））ジアセチル）ビス［インスリンヒト］（二量体１）の合成を例示する。
【０２８４】
ＲＨＩ（２．６ｇ、０．４４８ｍｍｏｌ）をＮａ２ＣＯ３（０．１Ｍ）（１５．８ｍＬ
）とＡｃＣＮ（１０．５ｍＬ）の混合物に溶解し、ビス（２，５−ジオキソピロリジン−
１−イル）２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジアセテート（リンカ
ー８）の０．２Ｍ  ＤＭＦ溶液０．８９５ｍＬ（０．１７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応
混合物を３０分間攪拌し、追加分のビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）２，
２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジアセテートの０．２Ｍ  ＤＭＦ溶液
０．８９５ｍＬ（０．１７９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をさらに３０分間攪拌した
。反応混合物を２０％ＡｃＣＮ／０．１％ＴＦＡ／水６０ｍＬに注ぎ入れ、ｐＨを２．５
に調整し、得られた体積が約１０ｍＬになるまで、１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃ
ｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて透析濾過して濃縮した。得られた溶液をイオン交換クロ
マトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、２５０×２１ｍｍ、５μｍ
、１０００Å；勾配３０分にわたって緩衝液Ａ中１０〜８０％の緩衝液Ｂ；緩衝液Ａ：０
．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ
４／２５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）に供した。
【０２８５】
標記化合物を含有する分画を合わせ、濃縮した。次いで、得られた溶液を逆相クロマト
グラフィー（ＫＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；
勾配０．０５％ＴＦＡを含む水中２７〜３５％の０．０５％ＴＦＡを含むＡｃＣＮ）に供
した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝２．７５分、ｍ／ｚ＝１９６０．４（ｚ＝６）、１
６８０．４（ｚ＝７）。
【表４】
2020097572.tif 000122
【０２８６】
［実施例１６］
この実施例はＮ２，１Ａ，Ｎ２，１Ａ’，Ｎ２，１Ｂ，Ｎ２，１Ｂ’−テトラキス（カ
ルバモイル）−Ｎ６，Ｂ２９，Ｎ６，Ｂ２９’−（ヘキサンジオイル）ビス［インスリン
ヒト］（二量体２）の合成を例示する。
【０２８７】
Ｎ２，１Ａ，Ｎ２，１Ｂ−ビス（カルバモイル）ＲＨＩ（１５０ｍｇ、０．０２５ｍｍ
ｏｌ）をＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（０．１０６ｍＬ、０．７６４
ｍｍｏｌ）を添加し、引き続いてＤＭＳＯ１００に溶解したジ（Ｎ−スクシンイミジル）
アジペート（リンカー１２）（４．３３ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を滴加した。
【０２８８】
１時間攪拌し、反応混合物を水２０ｍＬに注ぎ入れた。ｐＨ＝２に酸性化し、１０Ｋ  
Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  １５を用いて透析濾過した。生成物を、勾配２４分で溶媒Ａ
中１０〜４０％の溶媒Ｂを用いるイオン交換クロマトグラフィーによって精製し、Ｃ８相
、勾配３０分でＡ中Ｂ２６〜３６％の逆相クロマトグラフィーによって再精製した。ＵＰ
ＬＣ−ＭＳ方法Ｅ：Ｒｔ＝３．７５分、ｍ／ｚ＝１９８３．９（ｚ＝６）。
【表５】
2020097572.tif 000123
【０２８９】
［実施例１７］
表３は、ＲＨＩ、デスＢ３０  ＲＨＩ、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、
インスリングラルギンまたは適切なアナログを用いて注記されるように一般的方法Ｂまた
は一般的方法Ｃのいずれかにしたがって、適切な中間体（リンカー）を用いて調製した二
量体を示している。例えば、カルバモイル化Ｎ末端を有する二量体については、アナログ
５またはアナログ６（デスＢ３０）を使用し；アセチル化Ａ１  Ｎ末端を有する二量体に
ついては、アナログ８を使用した。一定の保持時間（Ｒｔ）で親化合物の６荷電、すなわ
ち、［（Ｍ＋６）／６］（または７荷電、すなわち、［（Ｍ＋７）／７］）種を示す、Ｕ
ＰＬＣ−ＭＳ方法ＤまたはＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｅを用いて二量体を特徴付けた。連結部分
によって連結されたインスリンおよびインスリンの分子は、表３に示される二量体の各々
について同じである。
【表６】
2020097572.tif 000124
2020097572.tif 000125
2020097572.tif 000126
2020097572.tif 000127
2020097572.tif 000128
2020097572.tif 000129
2020097572.tif 000130
2020097572.tif 000131
2020097572.tif 000132
2020097572.tif 000133
【０２９０】
［実施例１８］
一般的方法Ｄ：Ｃｕ２＋触媒クリックケミストリーを用いたＮ６，２９Ｂ，Ｎ６，２９
Ｂ’−インスリン二量体の合成
適切な大きさの容器で、インスリン中間体（アナログ）を含有する適切なアセチレンを
、室温で穏やかに攪拌しながら、ＤＭＳＯと水性トリエチルアンモニウムアセテート緩衝
液（ｐＨ７．０、最終濃度０．２ｍＭ）の混合溶媒に溶解した。別の適切な大きさの容器
で、インスリン中間体（アナログ）を含有する適切なアジドを、室温で穏やかに攪拌しな
がら、ＤＭＳＯと水の混合溶媒に溶解した。両溶液を合わせ、徹底的に混合し、Ｎ２を穏
やかに通して泡立たせることによって脱気した。得られた溶液に、新たに調製したアスコ
ルビン酸ナトリウムまたはアスコルビン酸溶液（最終濃度は０．５ｍＭである）および、
徹底的に混合した後、１０ｍＭ  ＣｕＳＯ４およびトリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，
２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン（すなわち、ＴＢＴＡリガンド）の５
５％ＤＭＳＯ中溶液を添加した。Ｎ２を穏やかに通して泡立たせることによって脱気し、
徹底的に混合した後、混合物を一晩、時々混合しながら、室温で保管した。反応混合物を
０℃において混合溶媒（ｖ／ｖ７：３ＡｃＣＮ／水＋０．０５％ＴＦＡ）で慎重に希釈し
、０．１、１．０Ｎ  ＨＣｌ（および必要な場合には０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いてｐＨ
を２．５０に調整した。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムを通してまたは１
Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅｎ
ｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｕｎｉｔｓを用いて、限界濾過によって濃縮した。濃縮溶液を通常は
最初に、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、Ｐ
ｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（
ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５
％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）に供した。所望の純度の所望の生成物を含有する分画
を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮した。次
いで、得られた溶液を逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１
０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ
、１００Åカラム；緩衝液Ａ：水中０．０５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０
．０５〜０．１％ＴＦＡ）によってさらに精製した。所望の純度の所望の生成物を含有す
る分画を合わせ、凍結乾燥あるいはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔ
ｒａ−１５を用いて緩衝液交換するとインスリン二量体が得られた。
【０２９１】
表４は、一般的方法Ｄにしたがって適切な中間体を用いて調製した二量体４０、４１、
４５、４６、４７、５９、５７、７９、８０、８２および８４を列挙している。一定の保
持時間（Ｒｔ）で親化合物の６荷電、すなわち、［（Ｍ＋６）／６］（または７荷電、す
なわち、［（Ｍ＋７）／７］）種を示す、ＵＰＬＣ−ＭＳ方法ＤまたはＵＰＬＣ−ＭＳ方
法ＥまたはＵＰＬＣ−方法Ｇを用いてこれらの二量体を特徴付けた。
【表７】
2020097572.tif 000134
2020097572.tif 000135
2020097572.tif 000136
【０２９２】
［実施例１９］
一般的方法Ｅ：Ｃｕ２＋触媒ダブルクリックケミストリーを用いたＮ６，２９Ｂ，Ｎ６
，２９Ｂ’−インスリン二量体の合成
適切な大きさの容器で、インスリン中間体（アナログ）を含有する適切なアジドを、室
温で穏やかに攪拌しながら、ＤＭＳＯと水性トリエチルアンモニウムアセテート緩衝液（
ｐＨ７．０、最終濃度０．２ｍＭ）の混合溶媒に溶解した。別の適切な大きさの容器で、
架橋または中間体リンカーを含有する適切なビス−アセチレンを、室温で穏やかに攪拌し
ながら、ＤＭＳＯと水の混合溶媒に溶解した。両溶液を合わせ、徹底的に混合し、Ｎ２を
穏やかに通して泡立たせることによって脱気した。得られた溶液に、新たに調製したアス
コルビン酸ナトリウムまたはアスコルビン酸溶液（最終濃度は０．５ｍＭである）および
、徹底的に混合した後、１０ｍＭ  ＣｕＳＯ４およびトリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１
，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン（すなわち、ＴＢＴＡリガンド）の
５５％ＤＭＳＯ中溶液を添加した。Ｎ２を穏やかに通して泡立たせることによって脱気し
、徹底的に混合した後、混合物を一晩、時々混合しながら、室温で保管した。反応混合物
を０℃において混合溶媒（ｖ／ｖ７：３ＡｃＣＮ／水＋０．０５％ＴＦＡ）で慎重に希釈
し、０．１、１．０Ｎ  ＨＣｌ（および必要な場合には０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いてｐ
Ｈを２．５０に調整した。溶液を最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムを通してまたは
１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅ
ｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｕｎｉｔｓを用いて、限界濾過によって濃縮した。濃縮溶液を通常
は最初に、イオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、
ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％
（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２
５％ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）に供した。所望の純度の所望の生成物を含有する分
画を合わせ、ＴＦＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮した。
次いで、得られた溶液を逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、
１０μｍ、１０００ÅカラムまたはＫＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μ
ｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：水中０．０５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中
０．０５〜０．１％ＴＦＡ）によってさらに精製した。所望の純度の所望の生成物を含有
する分画を合わせ、凍結乾燥あるいはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌ
ｔｒａ−１５を用いて緩衝液交換するとインスリン二量体が得られた。
【０２９３】
表５は、一般的方法Ｅにしたがって適切な中間体を用いて調製した二量体４２〜４４お
よび５４を列挙している。ビスアセチレン架橋または中間体リンカーは、
【化６４】
2020097572.tif 000137
【０２９４】
であった。
【０２９５】
一定の保持時間（Ｒｔ）で親化合物の６荷電、すなわち、［（Ｍ＋６）／６］（または
７荷電、すなわち、［（Ｍ＋７）／７］）種を示す、ＵＰＬＣ−ＭＳ方法ＤまたはＵＰＬ
Ｃ−ＭＳ方法Ｅを用いてこれらの二量体を特徴付けた。
【表８】
2020097572.tif 000138
2020097572.tif 000139
【０２９６】
［実施例２０］
この実施例はＮ２，１Ａ，Ｎ２，１Ａ’，Ｎ２，１Ｂ，Ｎ２，１Ｂ’−テトラキス（ア
セチルまたはＰＥＧ１またはメトキシアセチル）−二量体（二量体４８、５５、５６、６
９および７０）の合成を例示している。
【０２９７】
室温の二量体４０、１９または４（２１ｍｇ、１．７７７μｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２ｍ
Ｌ）中溶液に、ＴＥＡ（３．９６μＬ、０．０２８ｍｍｏｌ）、次いで、２，５−ジオキ
ソピロリジン−１−イルアセテート（２．２３ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（
１００μＬ）中溶液または他の適切なＮ−ヒドロキシスクシンイミド活性化エステル（２
，５−ジオキソピロリジン−１−イルメトキシアセテートもしくは２，５−ジオキソピロ
リジン−１−イルＰＥＧ１アセテート）のＤＭＳＯ（１００μＬ）中溶液を添加した。３
時間後、反応混合物を０．１％ＴＦＡを含む水／ＡｃＣＮ＝７／３の混合物１２ｍＬで希
釈し、ｐＨを２．５まで調整した。得られた透明な溶液を１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡ
ｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ  １５  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  Ｆｉｌｔｅｒｓによって濃縮し
た。得られた溶液を最初にイオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹ
Ｌ  Ａ、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å、１５ｍＬ／分、勾配３０分で５％〜４
５％；緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／水中２５％アセトニトリル；緩衝液Ｂ
：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％アセトニトリル／水中０．５Ｍ  ＮａＣｌ）に
供した。所望の純度の所望の生成物を含有する分画を合わせ、１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用い
るＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮した。次いで、得られた溶液を逆相ＨＰ
ＬＣ（ＫＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液
Ａ：ＡｃＣＮ中０．０５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ；緩衝液Ｂ：０．０５％ＡｃＣＮ；流量８５ｍ
Ｌ／分）に供した。所望の分画を合わせ、凍結乾燥すると、表６に示される二量体４８、
５５、５６、６９または７０が得られた。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法ＦまたはＧを使用した。
【０２９８】
Ｎ末端置換基は構造
【化６５】
2020097572.tif 000140
【０２９９】
（式中、波線はＮ末端アミノ酸の置換基とＮ２窒素との間の結合を示す）を有する。
【表９】
2020097572.tif 000141
2020097572.tif 000142
【０３００】
［実施例２１］
表７は二量体４９、５０および５１を示しており、Ｎ２，Ａ１、Ｎ２，Ｂ１、Ｎ２，Ａ
１’およびＮ２，Ｂ１’のアミノ基と連結したアシル基を示している。これらの二量体を
、二量体４８を生成するために記載されるのと同様であるが、二量体４９、５０および５
１を製造するために２，５−ジオキソピロリジン−１−イルアセテートを適切なＮ−ヒド
ロキシスクシンイミド活性化エステルに代えた手順を用いて二量体４０から調製した。活
性化エステルは２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＦｍｏｃ−グリシンアセテート、
【化６６】
2020097572.tif 000143
【０３０１】
２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＰＥＧ２アセテート、
【化６７】
2020097572.tif 000144
【０３０２】
および２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＡＥＧ−Ｃ６アセテート（式中、ＡＥＧ
はアミノエチルグルコースである）
【化６８】
2020097572.tif 000145
【０３０３】
であった。
【０３０４】
一定の保持時間（Ｒｔ）で親化合物の６荷電、すなわち、［（Ｍ＋６）／６］（または
７荷電、すなわち、［（Ｍ＋７）／７］）種を示す、ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｆ（二量体５０
および５１）またはＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｇ（二量体４９）のいずれかを用いてこれらの二
量体を特徴付けた。二量体を表７に示す。
【０３０５】
Ｎ末端置換基は構造
【化６９】
2020097572.tif 000146
【０３０６】
を有する。
【表１０】
2020097572.tif 000147
【０３０７】
［実施例２２］
この実施例は銅フリークリックケミストリーを用いた二量体５２の合成を例示する。
【０３０８】
室温のアナログ３（１０ｍｇ、１．６８６μｍｏｌ）の３：２ｖ／ｖＨ２Ｏ／ＡｃＣＮ
１．０ｍＬ中溶液に、アナログ４（１０．５ｍｇ、１．６８６μｍｏｌ）の３：２ｖ／ｖ
Ｈ２Ｏ／ＡｃＣＮ１．０ｍＬ中溶液を添加した。室温で２時間攪拌した後、反応混合物を
最初にイオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａ、２５０×２
１ｍｍ、５μｍ、１０００Å、１５ｍＬ／分、勾配３０分で５％〜４５％；緩衝液Ａ：０
．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／水中２５％アセトニトリル；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ
）Ｈ３ＰＯ４／２５％アセトニトリル／水中０．５Ｍ  ＮａＣｌ）に供した。所望の純度
の所望の生成物を含有する分画を合わせ、３Ｋまたは１０Ｋ  ＭＷＣＯ膜を用いるＡｍｉ
ｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮した。次いで、得られた溶液を逆相ＨＰＬＣ（Ｋ
ＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩衝液Ａ：Ａｃ
ＣＮ中０．０５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ；緩衝液Ｂ：０．０５％ＡｃＣＮ；流量８５ｍＬ／分）
に供した。所望の分画を合わせ、凍結乾燥すると、二量体５２が得られた。ＵＰＬＣ−Ｍ
Ｓ方法Ｆ：Ｒｔ＝３．７３分、ｍ／ｚ＝１７３８．５９［（Ｍ＋７）／７＋１］結果を表
８に示す。
【表１１】
2020097572.tif 000148
【０３０９】
［実施例２３］
この実施例はＮ２，１Ａ，Ｎ２，１Ａ’，Ｎ２，１Ｂ，Ｎ２，１Ｂ’−テトラキス（ジ
メチルまたはイソブチル）−二量体（二量体６０、５８、６５および６７）の合成を例示
している。
【０３１０】
二量体４０、１９または４（１００ｍｇ、８．４６μｍｏｌ）を水（１０ｍｌ）に溶解
（懸濁）し、酢酸溶液によってｐＨ＝４．０に調整し、次いで、ホルムアルデヒド（０．
０１３ｍｌ、０．１６９ｍｍｏｌ）またはイソブチルアルデヒド（０．０２５ｍｌ、０．
２７２ｍｍｏｌ）を添加し、引き続いて新たに調製したシアノ水素化ホウ素ナトリウム（
１０．６３ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）の水（５００μＬ）中溶液を添加した。沈殿が形
成した。混合物を穏やかに攪拌する。約１時間の反応の完了後、１Ｎ  ＨＣｌを滴加して
、混合物を慎重にｐＨ２．９に酸化する。懸濁液が透明な溶液になった。混合物を逆相分
取ＨＰＬＣ（Ｃ−８カラム、５０×２５０ｃｍ、８５ｍｌ／分、勾配２５分で２９％から
３６％）（０．１％ＴＦＡを含む水および０．０５％ＴＦＡを含むＭｅＣＮ）によって精
製した。所望の分画を凍結乾燥すると二量体（１９．９ｍｇ、１．５０６μｍｏｌ、１７
．８０％収率）が得られた。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｄ：Ｒｔ＝３．３１分、ｍ／ｚ＝１９８
９．４４［（Ｍ＋６）／６＋１］
Ｎ末端置換基は構造
【化７０】
2020097572.tif 000149
【０３１１】
（イソブチル）（式中、波線はＮ末端アミノ酸の置換基とＮ２窒素との間の結合を示す
）、または
【化７１】
2020097572.tif 000150
【０３１２】
（Ｎ−ジメチル；Ｍｅ２）（式中、波線はＮ末端アミノ酸のＮ２窒素とＣ２炭素の間の
結合を示す）を有する。
【０３１３】
二量体を表９に示す。
【表１２】
2020097572.tif 000151
2020097572.tif 000152
【０３１４】
［実施例２４］
二量体６１、６２、６３、６４および６６の合成は以下の通りであった。
【０３１５】
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（（２−（（２，５−ジオキソピロリジン
−１−イル）オキシ）−２−オキソエチル）アミノ）−６−オキソヘキサノエート（Ｃ６
−グリシンリンカー；リンカー２４）の合成を説明する。
【化７２】
2020097572.tif 000153
【０３１６】
ステップ１  ベンジル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）アジペート
０℃の６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン酸（５ｇ、２１．１６ｍｍｏｌ）
のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（
４．４４ｍＬ、２５．４ｍｍｏｌ）、引き続いてＴＳＴＵ（７．０１ｇ、２３．２８ｍｍ
ｏｌ）を添加した。反応物を０℃で１時間および室温で１時間攪拌した。混合物を氷水／
エチルエーテル混合物（１／１、１００ｍＬ）に注ぎ入れた。混合物をエチルエーテル（
３×５０ｍＬ）で抽出し、水（２×１０ｍＬ）および食塩水（１０ｍＬ）で洗浄した。有
機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ｃｅｌｉｔｅパッドを通して濾過し、濃縮すると、標記
化合物が無色シロップ（５．２ｇ、１５．６ｍｍｏｌ、７４％）として得られた。ＬＣ−
ＭＳ  ２分：Ｒｔ＝１．０５分、ｍ／ｚ＝３３４．１［Ｍ＋１］
ステップ２  ２−（（カルボキシメチル）アミノ）−６−オキソヘキサン酸
グリシン（２２５ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５ｍＬ）中溶液に、ＤＭＦ（
２．５ｍＬ）中ステップ１の生成物（１．０ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を滴加し、引き続いて
ＴＥＡ（４１８μＬ、３．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１８時間攪拌した。
ＤＭＦを減圧下で除去した。粗生成物をＣ１８逆相クロマトグラフィー（１６カラム体積
（ＣＶ）の０〜４０％ＡｃＣＮ／水で溶出）によって精製した。所望の生成物を含有する
分画を合わせ、濃縮し、凍結乾燥すると中間体（６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘ
キサノイル）グリシンが得られた。水（３ｍＬ）中の上記中間体に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、
１６０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を水素バルーン下室温で１８時間攪
拌した。混合物をｃｅｌｉｔｅパッドを通して濾過し、ＭｅＯＨ／水（１／１、１０ｍｌ
）で洗浄した。濾液を濃縮し、凍結乾燥すると標記化合物（４００ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ
、６６％）が得られた。ＬＣ−ＭＳ  ２分：Ｒｔ＝０．２８分、ｍ／ｚ＝２０４．０３［
Ｍ＋１］
ステップ３．２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（（２−（（２，５−ジオキ
ソピロリジン−１−イル）オキシ）−２−オキソエチル）アミノ）−６−オキソヘキサノ
エート
０℃のＤＭＦ（０．５ｍＬ）中ステップ２の生成物（１０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）
に、ＴＥＡ（０．０１５ｍＬ、０．１０８ｍｍｏｌ）、引き続いてＴＳＴＵ（３１．１ｍ
ｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温に加温し、その温度で１時間攪拌し
た。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／水／ＡｃＣＮ：２：１：１：１（ｖ：ｖ：ｖ：ｖ）
）は、所望の生成物（Ｒｆ：０．２５）の形成および出発材料が残っていないことを示し
た。粗物質を精製することなく二量体を構築するために使用した。
【０３１７】
Ｃ６−アミノ酸リンカーを構成するアミノ酸がそれぞれアラニン、イソロイシン、ロイ
シンおよびバリンであるリンカー２５（Ｃ６−アラニン）、リンカー２６（Ｃ６−イソロ
イシン）、リンカー２７（Ｃ６−ロイシン）およびリンカー２８（Ｃ６−バリン）を上に
示される方法と同様に合成した。調製方法Ｄを用いて上記リンカーを用いて二量体を構築
した。結果を表１０に示す。
【表１３】
2020097572.tif 000154
2020097572.tif 000155
【０３１８】
［実施例２５］
二量体７３、８９、９０、９１、９２および９３の合成は以下の通りであった。
【０３１９】
ビス２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３，３’−（１，３−フェニレン）ジプロ
ピオネート（ジプロピルフェニル；リンカー２９）の合成を説明する。
【化７３】
2020097572.tif 000156
【０３２０】
ステップ１．ビス２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３，３’−（１，３−フェニ
レン）ジプロピオネート
０℃の３，３’−（１，３−フェニレン）ジプロピオン酸（２１．８ｍｇ、０．０９８
ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．６ｍＬ）中溶液に、ＴＥＡ（２９ｍＬ、０．２０６ｍｍｏｌ）
、引き続いてＴＳＴＵ（６２．０ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温
に加温し、その温度で１時間攪拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／水／ＡｃＣＮ：
２／１／１／１）は、所望の生成物（Ｒｆ：０．２５）の形成および出発材料が残ってい
ないことを示した。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｂ：Ｒｔ＝３．４７分、ｍ／ｚ＝４１７．１９［
Ｍ＋１］生成物をさらに精製することなく使用して、方法Ｄを用いてアナログ５を用いて
二量体７３を構築した。
【０３２１】
ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ベンゼン−１，３−ジカルボキシレー
ト（テレフタレート；リンカー３４）の合成を説明する。
【化７４】
2020097572.tif 000157
【０３２２】
ステップ１．ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ベンゼン−１，３−ジカ
ルボキシレート
０℃で、テレフタル酸（１００ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍｌ）中溶液
に、２−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイ
ソウロニウムテトラフルオロボレート（３７１ｍｇ、１．２３４ｍｍｏｌ）、引き続いて
Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．２２２ｍｌ、１．２３４ｍｍ
ｏｌ）を添加した。３０分後、氷浴を除去した。溶液を室温で１時間攪拌した。ＴＨＦを
さらに２５ｍＬ添加し、反応物を室温で一晩放置した。生成物を約５ｍＬまで濃縮し、一
部をそのままさらに精製することなく使用して、方法Ｄを用いてＲＨＩを用いて二量体８
９を構築した。残っている物質を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、食塩水（１０ｍＬ
）で洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。
【０３２３】
ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）イソフタレート（イソフタレート；リ
ンカー３５）の合成を説明する。
【化７５】
2020097572.tif 000158
【０３２４】
ステップ１．ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）イソフタレート
ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中イソフタル酸（５４ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）に、ＴＳＴＵ（
２１５ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ）、引き続いてＴＥＡ（０．１３７ｍＬ、０．９７５ｍ
ｍｏｌ）を添加した。ＬＣ−ＭＳ  ２分：Ｒｔ＝０．７９分、ｍ／ｚ＝７２１．２８［２
Ｍ＋１］生成物を精製することなく使用して、方法Ｅでアナログ５を用いて二量体９０お
よびＲＨＩを用いて二量体９１を構築した。
【０３２５】
ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニ
ル）アミノ）ヘプタンジオエート（ヘプタンジオエート；リンカー３６）の合成を説明す
る。
【化７６】
2020097572.tif 000159
【０３２６】
ステップ１．ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）４−（（ｔｅｒｔ−ブト
キシカルボニル）アミノ）ヘプタンジオエート
ＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）中４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘプタン
二酸（１６．５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）に、ＴＳＴＵ（３９．７ｍｇ、０．１３２ｍｍ
ｏｌ）、引き続いてＴＥＡ（０．０２５ｍＬ、０．１８０ｍｍｏｌ）を添加した。ＬＣ−
ＭＳ  ２分：Ｒｔ＝０．９０分、ｍ／ｚ＝４７０．３４［Ｍ＋１］。生成物を精製するこ
となく使用して、方法Ｅでアナログ５を用いて二量体９２およびＲＨＩを用いて二量体９
３を構築した。
【０３２７】
結果を表１１に示す。
【表１４】
2020097572.tif 000160
2020097572.tif 000161
【０３２８】
［実施例２６］
二量体７１、７２、７７、７８、８１および８７の合成は以下の通りであった。ビス（
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）（１Ｓ，４Ｓ）−シクロヘキサン−１，４−ジ
カルボキシレート（リンカー３０；トランス−シクロヘキサン１，４−二酸）の合成を説
明する。
【化７７】
2020097572.tif 000162
【０３２９】
０℃の（１Ｓ，４Ｓ）−シクロヘキサン−１，４−ジカルボン酸（２００ｍｇ、１．１
６２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１１ｍＬ）中溶液に、ＴＳＴＵ（７３４ｍｇ、２．４３９ｍｍ
ｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、２．８６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混
合物を室温で１時間攪拌した。生成物を白色固体として反応溶液中に押しつぶし、濾過し
、ＤＣＭ（２×５ｍｌ）で洗浄し、真空中で乾燥させると、標記化合物が得られた。ＵＰ
ＬＣ−ＭＳ  Ｃ１６Ｈ１８Ｎ２Ｏ８について計算値３６６．１１、実測値ｍ＼ｅ：３６７
．１６（Ｍ＋Ｈ）＋、（Ｒｔ：３．２０／５．００分）。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ａ。１Ｈ  
ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ２．８１−２．８９（ｍ；２Ｈ）；２．８０（ｓ
；８Ｈ）；２．０２−２．１０（ｍ；  ４Ｈ）；１．５７−１．６３（ｍ；４Ｈ）．
ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）（１Ｒ，４Ｒ）−シクロヘキサン−１
，４−ジカルボキシレート（リンカー３１；シス−シクロヘキサン１，４−二酸）の合成
を説明する。
【化７８】
2020097572.tif 000163
【０３３０】
０℃の（１Ｒ，４Ｒ）−シクロヘキサン−１，４−ジカルボン酸（２００ｍｇ、１．１
６２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１１ｍＬ）中溶液に、ＴＳＴＵ（７３４ｍｇ、２．４３９ｍｍ
ｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、２．８６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混
合物を室温で１時間攪拌した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（０〜１００％Ｅｔ
ＯＡｃ／ヘキサン）によって精製すると標記化合物が得られた。ＵＰＬＣ−ＭＳ  Ｃ１６
Ｈ１８Ｎ２Ｏ８について計算値３６６．１１、実測値ｍ／ｚ：３６７．１７（Ｍ＋Ｈ）＋
、（Ｒｔ：３．１７／５．００分）。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ａ。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨ
ｚ，ＤＭＳＯ）：δ３．０２−３．０８（ｍ；２Ｈ）；２．８０（ｓ；８Ｈ）；１．８０
−１．９０（ｍ；８Ｈ）．
１−（ｔｅｒｔ−ブチル）３，５−ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）（
３Ｒ，５Ｓ）−ピペリジン−１，３，５−トリカルボキシレート（リンカー３２）の合成
を説明する。
【化７９】
2020097572.tif 000164
【０３３１】
０℃の（３Ｒ，５Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３，５−
ジカルボン酸（２００ｍｇ、０．７３４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７ｍＬ）中溶液に、ＴＳＴ
Ｕ（４８５ｍｇ、１．６１１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．３ｍＬ、１．７１８ｍｍ
ｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を室温で２時間攪拌した。残渣をシリカクロマト
グラフィー（０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製すると標記化合物が得ら
れた。ＵＰＬＣ−ＭＳ  Ｃ２０Ｈ２５Ｎ３Ｏ１０について計算値４６７．１５、実測値ｍ
＼ｅ：４６８．３０（Ｍ＋Ｈ）＋、（Ｒｔ：０．９８／２．００分）。ＵＰＬＣ−ＭＳ方
法Ａ。
【０３３２】
一般的方法Ｆ：有機塩基条件を用いたＮ６，２９Ｂ，Ｎ６，２９Ｂ’−インスリン二量
体の合成
適切な大きさの容器で、インスリンまたはインスリンアナログを室温で塩基、例えば、
ＴＥＡまたは１，１，３，３−テトラメチルグアニジン（ＴＭＧ）の存在下、有機溶媒ま
たは混合水性／有機溶媒、例えば、ＤＭＳＯに懸濁する。インスリンが完全に溶解するま
で、混合物を穏やかに攪拌させる。得られた溶液に、有機溶媒（ＤＭＳＯまたはＤＭＦな
ど）の溶液中活性化エステル中間体を添加する。ＵＰＬＣ後、クロマトグラムは、反応混
合物の相当部分がＮ６，２９Ｂ，Ｎ６，２９Ｂ’−インスリン二量体（またはＮ６，２８
Ｂ，Ｎ６，２８Ｂ’−インスリンリスプロ二量体）に変換したことを示す。反応溶液を、
自動ピペットを介して、ＩＰＡｃ／ＭＴＢＥ（ｖ／ｖ４：１）（４５ｍＬ）を含有する５
０ｍＬ遠心管に移した。滴加を行った。得られた白色懸濁液を遠心分離（３０００ｒｐｍ
、１５分、４Ｃ）すると、透明な上清および白色ペレットが生成した。上清を引き抜き、
白色ペレットを真空中で乾燥させた。次いで、粗中間体を含有する白色ペレットを０℃で
ＴＦＡ２ｍＬに溶解し、同温度で１０分間攪拌した。脱ｂｏｃ反応の完了後、反応溶液を
、自動ピペットを介して、ＭＴＢＥ（４５ｍＬ）を含有する５０ｍＬ遠心管に移した。滴
加を行った。得られた白色懸濁液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５分、４℃）すると、
透明な上清および白色ペレットが生成した。上清を引き抜き、白色ペレットを真空中で乾
燥させ、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（ｖ／ｖ１：４）溶液に再溶解した。反応混合物を直接逆相
ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１０００Åカ
ラムまたはＫＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラム；緩
衝液Ａ：脱イオン水中０．０５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０．０５〜０．
１％ＴＦＡ）に供してもよいし、または反応物を０℃で冷酸性Ｈ２Ｏ（２０×、ｐＨ約３
．０）で慎重に希釈することによってクエンチしてもよく、１Ｎ  ＨＣｌ（および必要な
場合には０．１Ｎ  ＮａＯＨ）を用いてそのｐＨを２．５の最終ｐＨに調整する。溶液を
最初に、接線流濾過（ＴＦＦ）システムを通してまたは１Ｋ、３Ｋもしくは１０Ｋ  ＭＷ
ＣＯ膜を用いるＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｕｎｉｔｓ
を用いて、限界濾過によって濃縮することができる。濃縮溶液を通常は最初に、イオン交
換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、ＰｏｌｙＬＣ  Ｉｎ
ｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ
４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ／０．
５Ｍ  ＮａＣｌ）に供する。所望の純度のＢ２９−複合体を含有する分画を合わせ、ＴＦ
ＦシステムまたはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて濃縮する。次いで、濃縮溶液
を逆相ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ４  ２５０×５０ｍｍカラム、１０μｍ、１００
０ÅカラムまたはＫＲＯＭＡＳＩＬ  Ｃ８  ２５０×５０ｍｍ、１０μｍ、１００Åカラ
ム；緩衝液Ａ：脱イオン水中０．０５〜０．１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：ＡｃＣＮ中０．０５
〜０．１％ＴＦＡ）に供する。所望のインスリン二量体を含有する分画を合わせ、凍結乾
燥あるいはＴＦＦシステムおよび／またはＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５を用いて緩衝
液交換するとＮ６，２９Ｂ，Ｎ６，２９Ｂ’−インスリン二量体が得られる。
【０３３３】
表１２は、一般的方法Ｂ（二量体７７および７８）、一般的方法Ｃ（二量体７１および
７２）、または一般的方法Ｆ（二量体８１および８７）のいずれかにしたがって適切なリ
ンカーを用いて調製した二量体７１、７２、７７、７８、８１および８７を列挙している
。一定の保持時間（Ｒｔ）で親化合物の６荷電、すなわち、［（Ｍ＋６）／６］（または
７荷電、すなわち、［（Ｍ＋７）／７］）種を示す、ＵＰＬＣ−ＭＳ方法ＤまたはＵＰＬ
Ｃ−ＭＳ方法Ｅを用いてこれらの二量体を特徴付けた。
【表１５】
2020097572.tif 000165
【０３３４】
［実施例２６］
二量体６８および二量体７４の合成は以下の通りであった。
【０３３５】
ビス（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）６，６’−（（６−クロロ−１，３，
５−トリアジン−２，４−ジイル）ビス（アザンジイル））ジヘキサノエート（リンカー
３３；Ｃ６Ｎ−クロロ−１，３，５−トリアジン−ＮＣ６）の合成を説明する。
【化８０】
2020097572.tif 000166
【０３３６】
２，４，６−トリクロロ−１，３，５−トリアジン（８０ｍｇ、０．４３４ｍｍｏｌ）
およびメチル６−アミノヘキサノエート（１２９ｍｇ、０．８８９ｍｍｏｌ）ＨＣｌ塩の
ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液を−３０℃に冷却した。ＤＩＰＥＡ（０．３７９ｍＬ、２
．１６９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液を滴加した。混合物を−３０℃〜室
温で５時間攪拌した。次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）を添加し、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ
）（２×１０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３（１０ｍｌ）および食塩水（１０ｍｌ）で洗浄した。
有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空によって濃縮すると、ジメチル６，
６’−（（６−クロロ−１，３，５−トリアジン−２，４−ジイル）ビス（アザンジイル
））ジヘキサノエート（１３５ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）が得られた。
【０３３７】
ジメチル６，６’−（（６−クロロ−１，３，５−トリアジン−２，４−ジイル）ビス
（アザンジイル））ジヘキサノエート（１３５ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０
．５ｍｌ）およびメタノール（０．５ｍＬ）中溶液に、（２Ｍ）ＬｉＯＨ水溶液（５０４
μｌ、１．００８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間攪拌し、次いで、真空中
で濃縮すると所望の残渣が得られた。残渣を水に溶解し、ＨＣｌ水溶液で中和した。沈殿
を濾過によって回収し、これを水で洗浄した。固体を真空中で乾燥させると、６，６’−
（（６−クロロ−１，３，５−トリアジン−２，４−ジイル）ビス（アザンジイル））ジ
ヘキサン酸が得られた。
【０３３８】
６，６’−（（６−クロロ−１，３，５−トリアジン−２，４−ジイル）ビス（アザン
ジイル））ジヘキサン酸（１０８ｍｇ、０．２８９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２８８９μｌ）
中溶液に、ＴＳＴＵ（１７４ｍｇ、０．５７８ｍｍｏｌ）、引き続いてトリエチルアミン
（８１μｌ、０．５７８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を１時間攪拌した。ＵＰＬＣは、
所望の物質の形成を示す。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｃ：Ｒｔ＝０．９９分、ｍ／ｚ＝５６８．
２［Ｍ＋１］。この試薬（０．１Ｍ／ＤＭＦ）をさらに精製することなく使用した。
【０３３９】
一般的方法Ｂ（二量体７４）または一般的方法Ｃ（二量体６８）のいずれかを用いて二
量体を調製した。一定の保持時間（Ｒｔ）で親化合物の６荷電、すなわち、［（Ｍ＋６）
／６］（または７荷電、すなわち、［（Ｍ＋７）／７］）種を示す、ＵＰＬＣ−ＭＳ方法
ＤまたはＵＰＬＣ−ＭＳ方法Ｅを用いてこれらの二量体を特徴付けた。リンカー３３およ
びＲＨＬを用いて二量体６８を構築し、リンカー３３およびアナログ５を用いて二量体７
４を構築した。結果を表１３に示す。
【表１６】
2020097572.tif 000167
【０３４０】
［実施例２７］
二量体５４の合成は以下の通りであった。
【０３４１】
Ａ１−ＴＦＡ−ＲＨＩ（Ｄ．Ｌｉｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃ
ｉ．、２０１２、１８、３３６〜３４１）（１００ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、水（
５ｍＬ）およびリン酸二カリウム（２４．４９ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を含有する予
備混合物に溶解した（得られた溶液のｐＨは約４である）。シアン酸カリウム（２７．５
ｍｇ、０．３３９ｍｍｏｌ）を添加し、一晩攪拌した。生成物をＣ８相での逆相クロマト
グラフィーによって精製した（カラムＫＲＯＭＡＳＩＬ、Ｃ８  １０μＭ  １００Ａ、サ
イズ２５０×５０ｍｍ；溶媒Ａ＝水／０．０５％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＡｃＣＮ／０．０５％
ＴＦＡ）、流量＝８５ｍＬ／分、勾配３０分でＡ中Ｂ２６〜３４％。ＵＰＬＣ−ＭＳ方法
Ｆ：Ｒｔ＝４．４８分、ｍ／ｚ＝１４８６．９［（Ｍ＋４）／４＋１］
上記生成物（６０ｍｇ、１０．０９μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５９４μｌ）に溶解し、ト
リエチルアミン（２８．１μｌ、０．２０２ｍｍｏｌ）、引き続いてＤＭＳＯ１００μｌ
に溶解したリンカースベリン酸ジスクシンイミジル（１．８５８ｍｇ、５．０４μｍｏｌ
）の溶液を添加した。３時間攪拌した。ＵＰＬＣは反応が完了したことを示す。全反応混
合物を水酸化アンモニウム（２１０５μｌ、１５．１３ｍｍｏｌ）に添加した（滴加、発
熱が予想される）。２時間穏やかに攪拌し、ＴＦＡ基の脱保護を確認した。混合物を水２
０ｍＬによって希釈し、１０Ｋ  Ａｍｉｃｏｎ管を用いた透析濾過によって水酸化アンモ
ニウムのほとんどを除去した。ｐＨを約３に調整し、透析濾過によって塩を除去した。生
成物をイオン交換クロマトグラフィー（ＰｏｌｙＳＵＬＦＯＥＴＨＹＬ  Ａカラム、Ｐｏ
ｌｙＬＣ  Ｉｎｃ．、２５０×２１ｍｍ、５μｍ、１０００Å；緩衝液Ａ：０．１％（ｖ
／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％ＡｃＣＮ；緩衝液Ｂ：０．１％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４／２５％
ＡｃＣＮ／０．５Ｍ  ＮａＣｌ）によって精製した。生成物をＣ８相での逆相クロマトグ
ラフィーによって再精製した（カラムＫＲＯＭＡＳＩＬ、Ｃ８  １０μＭ  １００Ａ、サ
イズ２５０×５０ｍｍ；溶媒Ａ＝水／０．０５％ＴＦＡ、溶媒Ｂ＝ＡｃＣＮ／０．０５％
ＴＦＡ）。結果を以下に示す。結果を表１４に示す。
【表１７】
2020097572.tif 000168
【０３４２】
［実施例２８］
インスリン受容体結合アッセイを以下の通り行った。
【０３４３】
ＩＲ結合アッセイを、１０％ＦＢＳおよび抗生物質（Ｇ４１８、ペニシリン／ストレプ
トアビジン）を含有するＦ１２培地で増殖したヒトＩＲ（Ｂ）を過剰発現しているＣＨＯ
細胞から調製した細胞膜を用いて、３８４ウェルフォーマットのシンチレーション近接ア
ッセイ（ＳＰＡ）で実行した。細胞膜を、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭトリス
緩衝液、ｐＨ７．８中で調製した。アッセイ緩衝液は５０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ７．５
、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１％ＢＳＡお
よびプロテアーゼ阻害剤（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ−Ｍｉｎｉ−Ｒｏｃｈｅ）を含有していた。
細胞膜をＷＧＡ  ＰＶＴ  ＰＥＩ  ＳＰＡビーズに添加し（５ｍｇ／ｍＬ最終濃度）、引
き続いてインスリン二量体分子を適切な濃度で添加した。室温で５〜１５分のインキュベ
ーション後、１２５［Ｉ］−インスリンを５０μＬの最終総体積について０．０１５ｎＭ
最終濃度で添加した。混合物を室温で１〜１２時間振盪しながらインキュベートし、引き
続いてシンチレーション測定して１２５［Ｉ］−インスリンとＩＲの結合およびこの相互
作用に対するインスリン二量体分子の滴定効果を決定した。
【０３４４】
［実施例２９］
インスリン受容体（ＩＲ）ＡＫＴ−リン酸化アッセイを以下の通り行った。ＩＲ  ＡＫ
Ｔ−リン酸化アッセイ：Ａｋｔタンパク質のリン酸化、インスリン受容体シグナル伝達カ
スケードの重要なステップを測定することによって、インスリン受容体活性化を評価する
ことができる。ヒトＩＲを過剰発現しているＣＨＯ細胞系を、ＨＴＲＦサンドイッチＥＬ
ＩＳＡアッセイキット（Ｃｉｓｂｉｏ「Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）および
Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＫＴ（Ｔｈｒ３０８）細胞アッセイキット」）に利用した。細胞を、
１０％ＦＢＳ、４００μｇ／ｍＬ  Ｇ４１８および１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補足したＦ１
２培地で増殖した。アッセイの前に、細胞を無血清培地で２〜４時間インキュベートした
。
【０３４５】
あるいは、細胞を凍結乾燥し、２０％ＤＭＳＯを含有する培地に前もって分割し、解凍
、遠心沈殿および再懸濁してアッセイに使用することもできた。細胞を、３８４ウェルプ
レート中無血清Ｆ１２培地２０μＬに１００００個細胞／ウェルで蒔いた。Ｈｕｍｕｌｉ
ｎおよびインスリングラルギン対照を試験化合物の各プレートで実行した。滴定化合物を
細胞に添加し（２μＬ／ウェル、最終濃度＝１：５倍希釈で１０００ｎＭから０．５１２
ｐＭまで滴定）、３７℃で３０分間インキュベートした。細胞を、ＣｉｓＢｉｏキットに
用意した調製済溶解緩衝液８μＬで溶解し、２５℃で１時間インキュベートした。希釈し
た抗体試薬（抗ＡＫＴ−ｄ２および抗ｐＡＫＴ−Ｅｕ３／クリプテート）をキット説明書
にしたがって調製し、次いで、１０μＬを細胞溶解物の各ウェルに添加し、引き続いて２
５℃で３．５〜５時間インキュベートした。プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダ
ー（励起＝３２０ｎｍ；発光＝６６５ｎｍ）で読み取って、各化合物についての効力と最
大応答の両方に関するＩＲ  ｐＡｋｔアゴニスト活性を決定した。あるいは、化合物を１
．６ｎＭのＨｕｍｕｌｉｎの存在下で同様に試験して、どのように各化合物がインスリン
の全アゴニスト活性と競合することができるかを決定した。
【０３４６】
［実施例３０］
表１５は、インスリン受容体（ＩＲ）に対するインスリン二量体のインビトロ生物学的
活性を示している。実施例２８に記載されるリガンド競合アッセイまたは実施例２９に記
載される機能的Ａｋｔ−リン酸化アッセイのいずれかによって活性を測定した。
【表１８】
2020097572.tif 000169
【０３４７】
［実施例３１］
この実施例では、本発明のいくつかのインスリン受容体部分アゴニストのインビボ効果
を、化合物Ａ（公開ＰＣＴ出願番号国際公開第２０１４０５２４５１号に開示されている
インスリン二量体ＭＩＵ−９０）およびＤｅｐｐｅら、Ｎａｕｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂ
ｅｒｇ’ｓ  Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３５０：２１３〜２１７（１９９４）に開
示されている化合物Ｂ（Ｂ２９，Ｂ２９’−スベロイル−（インスリン）２）と比較した
が、腹腔内インスリン負荷試験（ＩＰ−ＩＴＴ）アッセイでウシインスリンの代わりにＲ
ＨＩを用いて、成体雄、痩せたＣ５７ＢＬ／６ＮＴａｃマウスで行った。
【０３４８】
１群当たりＮ＝６〜８匹の動物の群を体重（平均約３０ｇ）によってランダム化した。
試験の２日前に、マウスを、５ｍｌ／ｋｇの投与体積の０．９％塩化ナトリウム溶液の腹
腔内注射による投与に慣らした。試験の日の朝、試験の２または４時間前に餌を除去した
。血中グルコース濃度を、血糖値測定器を用いてＴ＝０分（ベースライン）で測定した。
次いで、マウスに、腹腔内注射を介して５ｍＬ／ｋｇでビヒクル、二量体２４、二量体５
５、二量体５８、二量体６０、二量体６７、化合物Ａ、化合物ＢまたはＨｕｍｕｌｉｎ（
ＲＨＩ）を投与した（使用した用量については表１６参照）。投与３０〜３６０分後の間
に採取した尾出血から血中グルコースレベルを決定した。
【表１９】
2020097572.tif 000170
【０３４９】
結果を図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、図２Ｄ、図２Ｅ、図２Ｆおよび図２Ｇに示す。結果は
、二量体２４、二量体５５、二量体５８、二量体６０および二量体６７についてのグルコ
ースプロファイルが試験した両用量で実質的に同じであった一方で、化合物Ａおよび化合
物Ｂの投与量の増加がグルコース低下効力の増加を引き起こしたことを示しており、ＲＨ
Ｉまたは化合物Ａおよび化合物Ｂと比べて二量体についての高血糖リスクの可能性が低い
ことを示している。
【０３５０】
［実施例３２］
以下の通り、糖尿病ユカタン系ミニブタ（Ｄミニブタ）で、二量体２４、１８および４
０のグルコース低下効果をＲＨＩと比較した。
【０３５１】
ユカタン系ミニブタを、Ｓｉｎｃｌａｉｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ａｕｘ
ｖａｓｓｅ、ＭＯ）によって開発された専売プロトコルにしたがってアロキサン注射によ
って１型糖尿病にした。基礎グルコースレベルが１５０ｍｇ／ｄＬを超えたら、誘発が成
功したとみなす。血漿グルコースレベルが約３００ｍｇ／ｄｌのＤミニブタをこれらの実
験に利用した。
【０３５２】
２つの頚静脈血管アクセスポート（ＶＡＰ）を装着した雄ユカタン系ミニブタをこれら
の試験に使用した。一晩の絶食後の試験日に、ミニブタをスリングに入れ、ＶＡＰを注入
およびサンプリングのために利用可能にした。ｔ＝０分ならびに血漿グルコース測定のた
めに２つのベースライン血液試料を回収した（ｔ＝−３０分およびｔ＝０分）後、ミニブ
タにＨｕｍｕｌｉｎ（組換えヒトインスリン、ＲＨＩ）またはＩＲＰＡを０．６９ｎｍｏ
ｌ／ｋｇで単回ボーラスＩＶとして投与した。ＨｕｍｕｌｉｎおよびＩＲＰＡを、グリセ
リン、１６ｍｇ／ｍＬ；メタクレゾール、１．６ｍｇ／ｍＬ；フェノール、０．６５ｍｇ
／ｍＬ；無水リン酸二ナトリウム、３．８ｍｇ／ｍＬを含有する緩衝液；ＨＣｌで７．４
にｐＨを調整に６９ｎｍｏｌ／ｍｌで製剤化した。投与後、サンプリングを４８０分間続
けた；試料回収の時点は、−３０分、０分、８分、１５分、３０分、４５分、６０分、９
０分、１２０分、１５０分、１８０分、２１０分、２４０分、２７０分、３００分、３３
０分、３６０分、４２０分、４８０分とした。血液を、１０μｇ／ｍＬアプロチニンを補
足したＫ３−ＥＤＴＡ管に回収し、回収の３０分以内に行われる処理まで、氷上に保った
。３０００ｒｐｍ、４℃で８分間の遠心分離後、血漿を回収し、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕ
ｌｔｅｒ  ＡＵ４８０  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ分析装置を用いたグルコース測定および化合
物レベル測定のために分割した。
【０３５３】
図１は、０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ濃度で、ＲＨＩが血清グルコースレベルを５０ｍｇ／
ｄＬ未満に低下させた一方で、インスリン二量体は低下させなかったことを示している。
この結果は、インスリン二量体が、ＲＨＩよりも低血糖を促進するリスクが低いことを示
している。
【０３５４】
［実施例３３］
以下の通り、糖尿病ユカタン系ミニブタ（Ｄミニブタ）で、二量体４、５、７、８、９
、１８〜２９、３２、３７〜４１、４３、４４、４８、５５、５７、５８、６０、６１、
６２、６４、６７、６９、７１、７２、７７および７８のグルコース低下効果をＲＨＩと
比較した。
【０３５５】
ユカタン系ミニブタを、Ｓｉｎｃｌａｉｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ａｕｘ
ｖａｓｓｅ、ＭＯ）によって開発された専売プロトコルにしたがってアロキサン注射によ
って１型糖尿病にした。基礎グルコースレベルが１５０ｍｇ／ｄｌを超えたら、誘発が成
功したとみなす。血漿グルコースレベルが約３００〜４００ｍｇ／ｄｌであり、２つの頚
静脈血管アクセスポート（ＶＡＰ）を装着したＤミニブタをこれらの試験に使用した。
【０３５６】
一晩の絶食後の試験日に、ミニブタをスリングに入れ、ＶＡＰを注入およびサンプリン
グのために利用可能にした。ｔ＝０分ならびに血漿グルコース測定のために２つのベース
ライン血液試料を回収した（ｔ＝−３０分およびｔ＝０分）後、ミニブタにＨｕｍｕｌｉ
ｎ（組換えヒトインスリン、ＲＨＩ）または他の二量体を０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ（化合
物番号７８については０．３５ｎｍｏｌ／ｋｇ）で単回ボーラスＩＶとして投与した。Ｈ
ｕｍｕｌｉｎおよび二量体を、グリセリン、１６ｍｇ／ｍＬ；メタクレゾール、１．６ｍ
ｇ／ｍＬ；フェノール、０．６５ｍｇ／ｍＬ；無水リン酸二ナトリウム、３．８ｍｇ／ｍ
Ｌを含有する緩衝液；ＨＣｌで７．４にｐＨを調整に６９ｎｍｏｌ／ｍｌで製剤化した。
投与後、サンプリングを４８０分間続けた；試料回収の時点は、−３０分、０分、８分、
１５分、３０分、４５分、６０分、９０分、１２０分、１５０分、１８０分、２１０分、
２４０分、２７０分、３００分、３３０分、３６０分、４２０分および４８０分とした。
血液を、１０μｇ／ｍＬアプロチニンを補足したＫ３−ＥＤＴＡ管に回収し、回収の３０
分以内に行われる処理まで、氷上に保った。３０００ｒｐｍ、４℃で８分間の遠心分離後
、血漿を回収し、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＡＵ４８０  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ分
析装置を用いたグルコース測定のために分割した。結果を図７Ａ〜図７Ｈに示す。図は、
０．６９ｎｍｏｌ／ｋｇ濃度で、ＲＨＩが血清グルコースレベルを５０ｍｇ／ｄＬ未満に
低下させた一方で、インスリン二量体は低下させなかったことを示している。この結果は
、インスリン二量体が、ＲＨＩよりも低血糖を促進するリスクが低いことを示している。
【０３５７】
［実施例３４］
この実験は、化合物Ａのジスルフィド連結部分と二量体２４のスベリオル（Ｃ８）連結
部分の安定性を比較した。
【０３５８】
１μＭの化合物Ａおよび二量体２４をそれぞれ別々に、５ｍＭグルタチオン（ＧＳＨ）
を含むまたは含まないラット腎細胞膜（ＲＫＣＭ）でインキュベートした。時間０および
時間２時間の試料を得て、反応物を１体積の０．１％ギ酸を含むＡｃＣＮ中１０％ＭｅＯ
Ｈでクエンチした。次いで、クエンチした試料を遠心分離し、分析前に凍結した。次いで
、試料を解凍し、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｏｒｂｉ  Ｖｅｌｏｓシステムを用いて分析した。１０
ｐｐｍ窓で２電荷状態から３つの同位体を用いて抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）で
標的化ＭｅｔＩＤ分析を行った。
【０３５９】
化合物Ａ代謝産物は、ＧＳＨを含むＲＫＣＭとＧＳＨを含まないＲＫＣＭの両方で検出
された。図３に示されるように、単量体は２時間のインキュベーションにより親（化合物
Ａのストック溶液）の約１％であった。図４に示されるように、単量体は２時間のインキ
ュベーションにより親（化合物Ａのストック溶液）の約６．５％であった。結果は、ジス
ルフィド結合が徐々に壊れていったことを示している。化合物Ａについての０時間対照で
もストック溶液でも代謝産物は観察されなかった。
【０３６０】
二量体２４はＲＫＣＭ中に検出される代謝産物を産生したが、Ａ鎖ポリペプチドとＢ鎖
ポリペプチドとの間のジスルフィド結合の破壊によるＡ鎖ポリペプチドの損失が観察され
た一方で、単量体は検出されなかった。図５は、ＧＳＨを含まない場合、Ａ鎖ポリペプチ
ドの損失が親（二量体２４のストック溶液）の１％未満であったことを示している。図６
は、ＧＳＨを含む場合、Ａ鎖ポリペプチドの損失が親（二量体２４のストック溶液）の１
％未満であったことを示している。二量体２４についての０時間対照でもストック溶液で
も代謝産物は観察されなかった。酸性条件での新たなクエンチ手順は、ジスルフィド交換
を適切に停止した。
【表２０】
2020097572.tif 000171
2020097572.tif 000172
【０３６１】
例示実施形態を参照して、本発明を本明細書において説明しているが、本発明はこれに
限定されないことが理解されるべきである。当業者および本明細書中の教示を入手できる
者であれば、その範囲内のさらなる修飾および実施形態を認識するだろう。そのため、本
発明は本明細書に添付される特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図１】
2020097572.tif 000219
【図２Ａ】
2020097572.tif 000220
【図２Ｂ】
2020097572.tif 000221
【図２Ｃ】
2020097572.tif 000222
【図２Ｄ】
2020097572.tif 000223
【図２Ｅ】
2020097572.tif 000224
【図２Ｆ】
2020097572.tif 000225
【図２Ｇ】
2020097572.tif 000226
【図３】
2020097572.tif 000227
【図４】
2020097572.tif 000228
【図５】
2020097572.tif 000229
【図６】
2020097572.tif 000230
【図７Ａ】
2020097572.tif 000231
【図７Ｂ】
2020097572.tif 000232
【図７Ｃ】
2020097572.tif 000233
【図７Ｄ】
2020097572.tif 000234
【図７Ｅ】
2020097572.tif 000235
【図７Ｆ】
2020097572.tif 000236
【図７Ｇ】
2020097572.tif 000237
【図７Ｈ】
2020097572.tif 000238
【配列表】
2020097572000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月12日(2019.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式：
【化１】
2020097572.tif 000239
を有する化合物であって、
Ａ鎖ポリペプチドのＣｙｓ６残基とＣｙｓ１１残基との間のジスルフィド結合ならびにＡ鎖のＣｙｓ７およびＣｙｓ２０とＢ鎖ポリペプチドのＣｙｓ７およびＣｙｓ１９との間のジスルフィド結合は、それぞれ、その間の実線によって表され；
連結部分は示されるリジン残基のεアミノ酸と共有結合しており、
二量体２４のＡ鎖ポリペプチドは配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し；
二量体２４のＢ鎖ポリペプチドは配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する、化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項３】
糖尿病を治療するための医薬品を製造するための、請求項２に記載の組成物の使用。
【請求項４】
前記糖尿病が１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
下記式：
【化２】
2020097572.tif 000240
を有する化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項７】
糖尿病を治療するための医薬品を製造するための、請求項６に記載の組成物の使用。
【請求項８】
前記糖尿病が１型糖尿病、２型糖尿病または妊娠糖尿病である、請求項７に記載の使用。
【外国語明細書】
2020097572000001.pdf