(57)【要約】      （修正有）【課題】胃腸炎症性腸疾患等を処置するために有用な、ＪＡＫ阻害剤を消化管に送達するためのＪＡＫ阻害剤のプロドラッグの提供。【解決手段】下記式１に代表されるプロドラッグ。2020196742.tif 000048【選択図】図１
2020196742.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、消化管へのＪＡＫ阻害剤の標的送達のためにデザインされた化合物を対象とする。本発明は、そのような化合物を含む薬学的組成物、胃腸炎症性疾患を処置するためにそのような化合物を使用する方法、ならびにそのような化合物の調製に有用なプロセスおよび中間体にも関する。
【背景技術】
【０００２】
技術水準
主に潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患は、消化管の全部または一部の慢性炎症を伴う。潰瘍性大腸炎は、直腸および大腸の粘膜層の炎症および潰瘍化を特徴とし、クローン病は主に回腸を侵すが、腸管に沿ってあらゆる場所で起こり得る。一般的な症候としては、下痢、血便および腹痛が挙げられる。潰瘍性大腸炎の臨床経過は、間欠性であり、悪化と緩解の期間を交互に繰り返すことによって特徴付けられる。発生率は、開発途上国よりも先進国においてより高いと見られる。主要な先進工業国の推定１３０万人が潰瘍性大腸炎に罹患しており、その数は、人口増加に伴って増加すると予想される。潰瘍性大腸炎を有する患者は、直腸結腸がんを発症するリスクが高い（例えば、Ｄａｎｅｓｅら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１１，３６５，１７１３−１７２５）。加えて、先進国では推定１００万人がクローン病を患っている。
【０００３】
患者の潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の緩解を促し、維持する種々の治療法の選択肢が存在するが、いずれも理想的ではない。スルファサラジン関連の処置は、軽度のＵＣに有効であることが多いが、中程度から重度の疾患ではそれほど有効ではない。中程度から重度のＵＣを有する患者において緩解を迅速に誘導するためには、コルチコステロイドが使用されることが多い。しかしながら、緩解を維持するためのステロイドの慢性使用は、長期間の有害作用（例えば、骨粗鬆症および骨折、感染症、白内障、より緩やかな創傷治癒および副腎ホルモン産生の抑制）との関連に起因して、推奨されない。全身免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、シクロスポリンおよびメトトレキサート）は、中程度から重度のＵＣ患者において遅発性の中程度の有効性を有するが、長期使用は、長期間の全身免疫抑制の結果（例えば、感染症およびリンパ腫のリスク増大）に起因して問題になり得る。抗ＴＮＦα抗体（例えば、インフリキシマブおよびアダリムマブ）は、高価であり、皮下投与または静脈内投与が必要であるが、中程度から重度の疾患を有するＵＣ患者のおよそ６０〜７０％において有効である。しかしながら、最大３分の１の患者が適切に反応せず、別の３分の１の最初の反応者は数週間にわたって耐性を示す（Ａｌｌｅｚら、Ｊ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  Ｃｏｌｉｔｉｓ，２０１０，４，３５５−３６６；Ｒｕｔｇｅｅｒｔｓら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２００５，３５３，２４６２−２４７６）。最近承認されたＵＣ治療のベドリズマブという抗α４β７インテグリン抗体は、中程度から重度のＵＣ患者において有効であるが、その非経口経路が最適には及ばず、この機序を介した長期間の免疫抑制の結果は、依然として確定していない。既存の治療法の選択肢があるにもかかわらず、ＵＣ患者の約１０〜２０％は、依然として、診断から１０年以内に結腸切除術が必要になる（Ｔａｒｇｏｗｎｉｋら、Ａｍ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１２，１０７，１２２８−１２３５）。慢性の全身免疫抑制に起因する安全性の懸念なしに、中程度から重度のＵＣの緩解を促進し、維持するための有効な治療に対して未だ対処されていない医学的ニーズが残っていることは明らかである。
【０００４】
潰瘍性大腸炎の根底にある機序は、完全に理解されていないが、遺伝的に感受性の個体
の環境要因が、免疫系による腸の微生物叢に対する不適当な（過剰な）反応を惹起して、結腸の炎症、組織損傷およびこの疾患に特有の関連症候が生じると考えられている。
【０００５】
ＵＣの正確な病原論は、明らかになっていないが、炎症促進性サイトカインが、免疫学的応答において中心的役割を果たしていることは明らかである（Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１１，１４０，１７５６−１７６７）。ＵＣにおいて最も一般的に上昇する炎症促進性サイトカインの多く（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＦＮγおよびレプチン）は、シグナル伝達について、チロシンキナーゼのＪＡＫファミリー（すなわち、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴｙｋ２）に依存する。サイトカインレセプターにリガンドが結合すると、会合したＪＡＫの自己リン酸化が引き起こされ、その後、シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）タンパク質がリン酸化される。種々のＳＴＡＴが、ヘテロ二量体またはホモ二量体を形成し、細胞核においてそれらの標的遺伝子の転写を促進して、細胞の成長、分化および死などの機能を制御する（Ｃｌａｒｋら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１４，５７，５０２３−５０３８）。
【０００６】
ＪＡＫ酵素のファミリーを阻害すると、多くの重要な炎症促進性サイトカインのシグナル伝達が阻害され得る。したがって、ＪＡＫ阻害剤は、潰瘍性大腸炎および他の炎症性疾患（例えば、クローン病、アレルギー性鼻炎、喘息および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））の処置において有用である可能性がある。しかしながら、免疫系に対するＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路の調節作用に起因して、ＪＡＫ阻害剤への全身曝露は、有害な全身性の免疫抑制（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｉｖｅ）作用を及ぼし得る。
【０００７】
トファシチニブクエン酸塩（Ｘｅｌｊａｎｚ（登録商標））（全身的に利用可能な経口用汎ＪＡＫ阻害剤）は、中程度〜重度の活動性関節リウマチを有する成人であって、メトトレキセートに応答が不十分であったか、または不寛容な成人の処置について、米国では２０１２年１１月に承認された。臨床研究では、高用量における優れた有効性が実証されているが、用量制限全身媒介性有害事象（例えば、コレステロール上昇、日和見感染率の増加、好中球減少症、リンパ球減少症、リンパ腫および固形腫瘍）に基づいて、トファシチニブは、５ｍｇの１日２回（ＢＩＤ）用量でのみ承認された。米国では、安全性リスクを詳述した警告欄が薬物に付されており、欧州では、全体的な安全性プロファイルに関する「重大かつ未解決の懸念」に基づいて承認が拒否された。トファシチニブは、ＵＣについて積極的に開発されており、第２相（８週間）ＵＣ試験において（Ｓａｎｄｂｏｒｎら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１１，３６５，１７１３−１７２５）、特に１０ｍｇおよび１５ｍｇのＢＩＤ用量で（Ｐａｎｅｓら、ＢＭＣ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１５，１５，１４も参照のこと）臨床応答を示したが、現在のところ、いかなる適応症についても承認されていない。スポンサーもまた、第３相（８週間）ＵＣ適応症試験では、プラセボと比較して、トファシチニブ１０ｍｇのＢＩＤを受けている患者の大部分が寛解状態にあり、第３相（５２週間）ＵＣ維持試験では、トファシチニブ５ｍｇおよび１０ｍｇのＢＩＤを受けている患者についても同様であったことを報告している。
潰瘍性大腸炎および他の胃腸炎症性疾患の処置のために、消化管において、臨床効果を最適化する一方で、十分に高いトファシチニブ曝露を経口投与で達成して、全身用量制限全身曝露を回避する化合物を提供することが望ましいであろう。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｄａｎｅｓｅら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１１，３６５，１７１３−１７２５
【非特許文献２】Ａｌｌｅｚら、Ｊ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  Ｃｏｌｉｔｉｓ，２０１０，４，３５５−３６６
【非特許文献３】Ｒｕｔｇｅｅｒｔｓら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２００５，３５３，２４６２−２４７６
【非特許文献４】Ｔａｒｇｏｗｎｉｋら、Ａｍ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１２，１０７，１２２８−１２３５
【非特許文献５】Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１１，１４０，１７５６−１７６７
【非特許文献６】Ｃｌａｒｋら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１４，５７，５０２３−５０３８
【非特許文献７】Ｓａｎｄｂｏｒｎら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，２０１１，３６５，１７１３−１７２５
【非特許文献８】Ｐａｎｅｓら、ＢＭＣ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１５，１５，１４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の要旨
１つの態様では、本発明は、ＪＡＫ阻害剤トファシチニブの新規グルクロニド含有プロドラッグを提供する。そのようなプロドラッグは、豊富なβ−グルクロニダーゼ（これは、グルクロニド含有プロドラッグ部分を選択的に切断して、消化管、特に結腸におけるトファシチニブの放出をトリガーする）を含有または産生する腸内微生物叢を利用する。
【００１０】
驚くべきことに、本発明のグルクロニド含有プロドラッグは、単離され、薬学的組成物に製剤化され、処置を必要とする患者に投与されるために十分に安定である。しかしながら、それらはまた、β−グルクロニダーゼによって切断され、さらに分解されてトファシチニブを効率的に放出するほどに十分に不安定である。対照的に、本発明において用いられるグルクロニド含有プロドラッグ部分を、ＵＣの処置に有用であることが公知のまたはその可能性がある特定の他の薬物に結合させた場合、β−グルクロニダーゼとの接触によって薬物は放出されなかった（本明細書中で以下により詳細に記載されるように）。したがって、本発明のグルクロニド含有プロドラッグは、トファシチニブを送達および放出するために特に有用である。
【００１１】
１つの態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2020196742.tif 000003
（式中、
ｎは、０、１または２であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ
、ヒドロキシおよびトリフルオロメチル（ｔｒｉｆｌｕｒｏｍｅｔｈｙｌ）から選択され；
各Ｒ２は、存在する場合には、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシルおよびトリフルオロメチルから独立して選択され；
Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ４は、水素、メチルまたはエチルである）またはその薬学的に許容され得る塩に関する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、式（ＩＩ）の化合物：
【化２】
2020196742.tif 000004
（式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルから選択される）またはその薬学的に許容され得る塩に関する。
【００１３】
１つの実施形態では、本発明は、Ｒ１が水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロおよびクロロから選択される式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、式１の化合物：
【化３】
2020196742.tif 000005
またはその薬学的に許容され得る塩に関する。
【００１５】
式１の化合物は、前臨床種において経口投与した場合に、低い経口バイオアベイラビリティおよびトファシチニブ（２）
【化４】
2020196742.tif 000006
の効果的な放出をインビボで示し、トファシチニブそれ自体の経口投与で得られたものと比べて、結腸曝露対血漿曝露比の顕著な増加をもたらした。
【００１６】
１つの実施形態では、式１の化合物は、β−グルクロニダーゼとの接触により、トファシチニブまたはその塩を生成する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、薬学的に許容され得るキャリアと、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩とを含む薬学的組成物；あるいは本明細書中に記載されるその任意の特定の実施形態に関する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、哺乳動物における胃腸炎症性疾患を処置する方法であって、薬学的に許容され得るキャリアと、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩とを含む薬学的組成物を前記哺乳動物に投与する工程を含む方法；あるいは本明細書中に記載されるその任意の特定の実施形態に関する。
【００１９】
１つの実施形態では、胃腸炎症性疾患は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、胃腸炎症性疾患は、クローン病である。別の実施形態では、胃腸炎症性疾患は、免疫チェックポイント阻害剤療法に関連する大腸炎である。
【００２０】
別の態様では、本発明は、トファシチニブを哺乳動物の消化管、特に結腸に送達する方法であって、トファシチニブのグルクロニド含有プロドラッグを前記哺乳動物に経口投与する工程を含み、前記消化管においてβ−グルクロニダーゼによって前記プロドラッグが切断されて、トファシチニブが放出される方法に関する。
【００２１】
別個の異なる実施形態では、トファシチニブのグルクロニド含有プロドラッグは、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩；あるいは本明細書中に記載されるその任意の特定の実施形態である。
【００２２】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を調製するためのプロセスであって、式（Ｉ−Ａ）の化合物：
【化５】
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（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびｎは、本明細書で定義されるとおりであり；各ＰＧａは独立して、ヒドロキシル保護基であり；ＰＧｂは、カルボキシル保護基である）またはその塩を脱保護して、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する工程を含むプロセスに関する。
【００２３】
このプロセスの１つの実施形態では、Ｒ１はニトロであり；Ｒ３およびＲ４はメチルであり；各ＰＧａはアセチルであり；ＰＧｂはメチルであり；ｎは０である。
【００２４】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ−Ａ）の化合物もしくはその塩；または本明細書中に記載されるその任意の特定の実施形態に関する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、式１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を調製するためのプロセスであって、
（ａ）式１２’の化合物
【化６】
2020196742.tif 000008
（式中、各ＰＧａは独立して、ヒドロキシル保護基である）またはその塩を式１３の化合物
【化７】
2020196742.tif 000009
と反応させて、式１４’の化合物：
【化８】
2020196742.tif 000010
を提供すること
および
（ｂ）式１４’の化合物を脱保護して、式１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供すること
を含むプロセスに関する。
【００２６】
このプロセスの１つの実施形態では、ＰＧａは、アセチルである。
【００２７】
別個の異なる態様では、本発明はまた、式１３の化合物もしくはその塩；および式１４’の化合物もしくはその塩；または本明細書中に記載されるその任意の特定の実施形態に関する。
【００２８】
別個の異なる態様では、本発明はまた、本発明の化合物を調製するために有用な本明細書中に記載される他の合成プロセスおよび中間体に関する。
【００２９】
別個の異なる態様では、本発明はまた、医学療法において使用するための；または医薬もしくは製剤の製造において使用するための、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩；または本明細書中に記載されるその任意の特定の実施形態に関する。１つの実施形態では、医薬または製剤は、哺乳動物における胃腸炎症性疾患を処置するためのものである。
【００３０】
本発明の他の態様および実施形態は、本明細書に開示される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、本発明の化合物（化合物１）ならびに比較化合物Ｃ−１およびＣ−２をラット結腸内容物と共にインキュベートした結果として、活性代謝産物（それぞれトファシチニブならびに化合物Ｃ−１ＭおよびＣ−２Ｍ）の濃度を時間関数として示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明の詳細な説明
他の態様の中でも、本発明は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤トファシチニブのグルクロニドプロドラッグ、その薬学的に許容され得る塩およびその調製のための中間体を提供する。
【００３３】
化学構造は、本明細書中で、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に実装されているようなＩＵＰＡＣの慣例に従って命名される。慣例によれば、式１の化合物は、
【００３４】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸として特定され得、
トファシチニブ（２）は、３−（（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）−３−オキソプロパンニトリルとして特定され得る。
【００３５】
本発明の化合物は、複数のキラル中心を含む。特定の立体異性体の描写または呼称は、別段示されない限り、少量の他の立体異性体も存在し得ることの理解とともに、示されている立体中心が、指定の立体化学を有することを意味しているが、但し、描写されたまたは命名された化合物の有用性は、別の立体異性体の存在によって排除されない。
定義
【００３６】
様々な態様および実施形態を含む本発明を説明する際、以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有する。
【００３７】
単数形の用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、別段、使用文脈上明確な指示が限り、対応する複数形の用語を含む。
【００３８】
用語「アルキル」は、直鎖もしくは分枝鎖またはそれらの組み合わせであり得る一価の飽和炭化水素基を意味する。別段定義されない限り、そのようなアルキル基は、代表的には、１〜１０個の炭素原子を含む。代表的なアルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２，２−ジメチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−エチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２−プロピルペンチルなどが挙げられる。
【００３９】
具体的な数の炭素原子が、特定の用語に対して意図されているとき、炭素原子の数は、その用語の前に示される。例えば、用語「Ｃ１−３アルキル」は、１〜３個の炭素原子を有するアルキル基を意味し、ここで、それらの炭素原子は、直鎖または分枝鎖の配置を含む化学的に許容され得る任意の配置で存在する。
【００４０】
用語「アルコキシ」は、一価の基−Ｏ−アルキルを意味し、ここで、アルキルは、上記のように定義される。代表的なアルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシなどが挙げられる。
【００４１】
用語「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００４２】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与されたとき、処置をもたらすのに十分な量を意味する。
【００４３】
用語「処置」は、本明細書中で使用されるとき、哺乳動物（特にヒト）などの患者における疾患、障害または病状（例えば、胃腸炎症性疾患）の処置を意味し、それには、以下のうちの１つまたはそれを超えるものが含まれる：
（ａ）疾患、障害または病状の発生を予防すること、すなわち、疾患もしくは病状の再発を予防すること、またはその疾患もしくは病状になりやすい患者の予防的処置；
（ｂ）疾患、障害または病状を回復させること、すなわち、患者の疾患、障害もしくは病状を排除するかまたはそれらを後退させること（他の治療剤の効果を相殺することを含む）；
（ｃ）疾患、障害または病状を抑制すること、すなわち、患者の疾患、障害または病状の発症を遅延させるかまたは停止させること；または
（ｄ）患者の疾患、障害または病状の症候を軽減すること。
【００４４】
用語「薬学的に許容され得る塩」は、患者または哺乳動物（例えば、ヒト）への投与が許容され得る塩（例えば、所与の投与レジメンについて許容され得る哺乳動物の安全性を有する塩）を意味する。酸から誘導される、代表的な薬学的に許容され得る塩としては、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸（ｅｄｉｓｙｌｉｃ）、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびキシナホ酸（ｘｉｎａｆｏｉｃ  ａｃｉｄ）などの塩が挙げられる。
【００４５】
薬学的に許容され得る無機塩基から誘導される塩としては、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛などが挙げられる。薬学的に許容され得る有機塩基から誘導される塩としては、アルギニン、コリン、グルカミン、リジン、ベネタミン、ベンザチン、ベタイン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ヒドラバミン、モルホリン、トロメタミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、トリエタノールアミン、１Ｈ−イミダゾール、ピペラジンなどの塩が挙げられる。
【００４６】
本明細書で使用される用語「その塩」は、式（Ｉ）の化合物の形態がイオン性化合物のアニオンまたはカチオンのいずれかであるイオン性化合物を意味する。例えば、イオン性化合物のアニオンは、式（Ｉ）の化合物の脱プロトン化形態であるカルボキシレートアニオンであり得る。カチオンは、プロトン化型の式（Ｉ）の化合物、すなわち、アミノ基が酸によってプロトン化されている形態であり得る。代表的には、塩は、薬学的に許容され得る塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間体化合物の塩には求められない。
【００４７】
式（Ｉ）の中性化合物は、必要に応じて、双性イオンの形態を取り得、用語「双性イオン」は、正電荷および負電荷の両方を有する中性分子を意味する。
【００４８】
用語「ヒドロキシル保護基」は、ヒドロキシル基における望ましくない反応を防止するために好適な保護基を意味する。代表的なヒドロキシル保護基としては、アルキル基、例えばメチル、エチルおよびｔｅｒｔ−ブチル；アリル基；アシル基、例えばアルカノイル基、例えばアセチル；アリールメチル基、例えばベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジ
ル（ＰＭＢ）、９−フルオレニルメチル（Ｆｍ）およびジフェニルメチル（ベンズヒドリル、ＤＰＭ）；シリル基、例えばトリメチルシリル（ＴＭＳ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
用語「カルボキシル保護基」は、カルボキシル基における望ましくない反応を防止するために好適な保護基を意味する。代表的なカルボキシル保護基としては、アルキル基、例えばメチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチルなど；アリールメチル基、例えばベンジル、４−ニトロベンジル、４−メトキシベンジルなど；チオール基、例えば−Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチルなど；シリル基、例えばトリメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルなど；オキサゾリンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
本明細書で使用される他のすべての用語は、それらが属する分野の当業者によって理解される通常の意味を有することを意図する。
【００５１】
代表的な実施形態および下位分類
以下の置換基および値は、本発明の種々の態様および実施形態の代表例を提供することを意図する。これらの代表的な値は、そのような態様および実施形態をさらに定義および例示することを意図し、他の実施形態を排除すること、または本発明の範囲を限定することを意図しない。
【００５２】
１つの実施形態では、Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシまたはトリフルオロメチルである。別の実施形態では、Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロまたはクロロである。別の実施形態では、Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロである。特定の実施形態では、Ｒ１は、水素である。別の特定の実施形態では、Ｒ１は、ニトロである。
【００５３】
１つの実施形態では、ｎは、０である。別の実施形態では、ｎは、１である。別の実施形態では、ｎは、２である。
【００５４】
ｎが１であるとき、１つの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはトリフルオロメチルである。別の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、フルオロまたはクロロである。別の実施形態では、Ｒ２は、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロ、フルオロまたはクロロである。特定の実施形態では、Ｒ２は、フルオロである。
【００５５】
ｎが１であるとき、Ｒ２置換基は、Ｒ２が結合するフェニル環の任意の利用可能な位置にあり得る。１つの実施形態では、Ｒ２は、Ｒ１に対してオルトである。別の実施形態では、Ｒ２は、Ｒ１に対してメタである。別の実施形態では、Ｒ２は、Ｒ１に対してパラである。
【００５６】
ｎが２であるとき、１つの実施形態では、各Ｒ２は独立して、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはトリフルオロメチルである。別の実施形態では、各Ｒ２は独立して、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、フルオロまたはクロロである。別の実施形態では、各Ｒ２は独立して、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロ、フルオロまたはクロロである。特定の実施形態では、各Ｒ２は、フルオロである。
【００５７】
ｎが２であるとき、Ｒ２置換基は、Ｒ２が結合するフェニル環の任意の利用可能な位置にあり得る。１つの実施形態では、Ｒ２置換基は、Ｒ１に対してオルトおよびメタである
。別の実施形態では、Ｒ２置換基は、Ｒ１に対してオルトおよびパラである。別の実施形態では、Ｒ２置換基は、Ｒ１に対してメタおよびパラである。
【００５８】
１つの実施形態では、Ｒ３は、水素である。別の実施形態では、Ｒ３は、メチルである。別の実施形態では、Ｒ３は、エチルである。
【００５９】
１つの実施形態では、Ｒ４は、水素である。別の実施形態では、Ｒ４は、メチルである。別の実施形態では、Ｒ４は、エチルである。
【００６０】
１つの実施形態では、Ｒ３およびＲ４は両方とも、メチルである。別の実施形態では、Ｒ３およびＲ４の一方は水素であり、他方はメチルである。
【００６１】
１つの実施形態では、ｎは、０であり；Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロであり；Ｒ３は、メチルであり；Ｒ４は、メチルである。
【００６２】
別の実施形態では、ｎは、０であり；Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロであり；Ｒ３は、水素であり；Ｒ４は、メチルである。
【００６３】
別の実施形態では、ｎは、０であり；Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロであり；Ｒ３は、メチルであり；Ｒ４は、水素である。
【００６４】
別の実施形態では、ｎは、０であり；Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロであり；Ｒ３は、エチルであり；Ｒ４は、エチルである。
【００６５】
別の実施形態では、ｎは、１であり；Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロであり；Ｒ２は、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロ、フルオロまたはクロロであり；Ｒ３は、メチルであり；Ｒ４は、メチルである。
【００６６】
別の実施形態では、ｎは、１であり；Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロであり；Ｒ２は、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロ、フルオロまたはクロロであり；Ｒ３は、水素であり；Ｒ４は、メチルである。
【００６７】
別の実施形態では、ｎは、１であり；Ｒ１は、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロまたはクロロであり；Ｒ２は、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロ、フルオロまたはクロロであり；Ｒ３は、メチルであり；Ｒ４は、水素である。
【００６８】
合成手順
式（Ｉ）の化合物は、添付の実施例に詳細に記載されている合成アプローチにしたがって調製され得る。式１の化合物の調製について具体的にスキーム１に示されているように、合成の重要な工程は、トファシチニブと保護形態のグルクロニドプロドラッグ部分１２’との間の尿素結合の形成である。スキーム１では、ＰＧａは、ヒドロキシル保護基、好ましくはアリルまたはアセチルを表すが、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルなどのシリル保護基を含む他のヒドロキシル保護基も使用され得る。
スキーム１
【化９】
2020196742.tif 000011
【００６９】
この重要な尿素結合の形成は、最初に、求核剤としてトフィシチニブを使用することに注目した；しかしながら、トファシチニブと種々の異なる求電子剤との反応は、低収率で所望の生成物を形成するに過ぎないので、この結合形成工程は不合理であることが見出された。したがって、２つのパートナーの役割を切り換えて、トファシチニブ誘導体を求電子反応パートナーにし、グルクロニドプロドラッグ部分を求核剤にする必要があると考えられた。多くの試薬を調査した結果、トファシチニブは、カルバメート結合を介して反応性パラ−ニトロフェニルまたはペンタフルオロフェニル部分に結合すると、誘導体化して求電子性になり得ると決定した。例えば、パラ−ニトロフェニルクロロホルメート、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネートまたはビス（ペンタフルオロフェニル）カーボネート試薬は、トファシチニブとの結合形成に影響を与えるために十分に反応性であるが、グルクロニド種との反応前に分解するほどには反応性ではない中間体も提供するという所望のバランスを達成することができた。得られた保護中間体１４’を、後の工程において、例えば、ＰＧａがアセテート基であるとき、水酸化リチウムを用いて脱保護して、式１の化合物を得る。
【００７０】
したがって、１つの態様では、本発明は、化合物１を調製するプロセスであって、（ａ）保護グルクロニドプロドラッグ部分１２’と求電子トファシチニブ誘導体１３とを反応させて、化合物１４’を提供する工程、および（ｂ）化合物１４’を脱保護して、式１の化合物を提供する工程を含むプロセスを提供する。さらなる態様では、本発明は、求電子トファシチニブ化合物１３を提供する。
【００７１】
本発明のプロドラッグに対するβ−グルクロニダーゼ酵素の作用は、式１の化合物について示されている。スキーム２に示されているように、式１の化合物に対するβ−グルクロニダーゼ酵素の作用により、トファシチニブは、多段階プロセスで放出される：
スキーム２
【化１０】
2020196742.tif 000012
【００７２】
最初の工程では、β−グルクロニダーゼ酵素は、式１の化合物のグリコシド結合を切断して、グルクロン酸（ａ）の放出およびアグリコン中間体（ｂ）の形成を引き起こす。アグリコンは自然発生的に分解して、キノンメチド種（ｃ）（これは、水で捕捉され得る）および一過性カルバミン酸（これは、二酸化炭素を失ってジアミン（ｄ）が得られる）が得られる。ジアミンの分子内環化は、イミダゾリジノン誘導体（ｅ）の形成およびトファシチニブの放出をもたらす。
【００７３】
以下の実験の項に記載されているように、精製β−グルクロニダーゼとのインキュベーション（アッセイ２）および新たに調製したラット結腸内容物ホモジネート（アッセイ３）において、スキーム２に示される中間工程を介したトファシチニブへの式１の化合物の変換が観測された。これらの後者の実験では、式１の化合物、アグリコン中間体ｂ、ジアミン中間体ｄおよびトファシチニブの濃度を時間関数としてモニタリングした。式１の化合物の急速な消失は、アグリコンｂの急速かつ一時的な形成と、ジアミンｄおよび最終活性代謝産物トファシチニブのより遅い律速出現とを伴っていた。
【００７４】
本研究者らは、グリコシド結合の細菌β−グルクロニダーゼ酵素切断から始まって、所望の活性部分を結腸の作用部位に有利に直接送達するグルクロニドプロドラッグ化合物の多段階分解が、結合の性質および特定の活性部分に敏感に依存することを決定した。メサラミン（５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ））（化合物Ｃ−１Ｍ）は、軽度〜中程度の潰瘍性大腸炎の処置に長く使用されている昔ながらの作用物質である。しかしながら、本グルクロニドプロドラッグアプローチは、結腸への５−ＡＳＡの直接送達に適用不可能なようである。上記のものと類似の実験において、５−ＡＳＡのグルクロニドプロドラッグ（化合物Ｃ−１）
【化１１】
2020196742.tif 000013
をラット結腸内容物ホモジネートと共にインキュベートした。式１の化合物のものと同様の時間スケールで、スキーム２のアグリコンｂに類似の一過性アグリコンおよびｄに類似のジアミンの出現の遅延が観測されたが、活性代謝産物５−ＡＳＡの証拠を見出すことはできなかった。
【００７５】
最近の公報米国特許出願公開第２０１３／０１０９７２０号には、２−（５−フルオロ−４−メチルピリジン−３−イル）−５−（４−メチル−６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イル）−１Ｈ−インドール（化合物Ｃ−２Ｍ）が、カルシウム放出活性化カルシウムチャネル（ＣＲＡＣ）阻害剤として開示された。ＣＲＡＣ阻害剤もまた、炎症性疾患の処置に有用であると考えられる。しかしながら、本グルクロニドプロドラッグアプローチもまた、このＣＲＡＣ阻害剤の標的送達に適用不可能なようである。ラット結腸内容物ホモジネートにおいて、ＣＲＡＣ阻害剤プロドラッグＣ−２
【化１２】
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の分解も研究されたが、結果は、化合物Ｃ−１について得られたものと同様であった。中間分解生成物が観測されたが、活性ＣＲＡＣ阻害剤Ｃ−２Ｍの放出の証拠を見出すことはできなかった。
【００７６】
本証拠は、細菌β−グルクロニダーゼによって開始される分解機構を利用してトファシチニブを結腸に放出させるために、本発明のプロドラッグが比類なく好適であることを示唆している。
薬学的組成物
【００７７】
本発明の化合物およびそれらの薬学的に許容され得る塩は、通常、薬学的組成物または製剤の形態で使用される。したがって、上記組成物の態様の１つにおいて、本発明は、薬学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤および式（Ｉ）、（ＩＩ）、もしくは１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物に関する。必要に応じて、そのような薬学的組成物は、所望であれば、他の治療剤および／または製剤化剤を含んでもよ
い。
【００７８】
本発明の薬学的組成物は、通常、治療有効量の本発明の化合物を含む。しかしながら、薬学的組成物は、治療有効量より多い、すなわち、大量の組成物または治療有効量より少ない、すなわち、治療有効量を達成するための複数回投与のためにデザインされた個別の単位用量を含むことがあることを当業者は認識する。
【００７９】
代表的には、そのような薬学的組成物は、約０．１〜約９５重量％の式（Ｉ）の化合物（約５〜約７０重量％を含めて；例えば約１０〜約６０重量％の式（Ｉ）の化合物）を含む。
【００８０】
任意の従来のキャリアまたは賦形剤を、本発明の薬学的組成物において使用してもよい。特定のキャリアもしくは賦形剤、またはキャリアもしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を処置するために用いられる投与様式、または病状もしくは疾患状態のタイプに依存する。この点において、特定の投与様式に対して好適な薬学的組成物の調製法は、十分に薬学分野の当業者の技術の範囲内である。さらに、本発明の薬学的組成物において使用されるキャリアまたは賦形剤は、商業的に入手可能である。さらなる例証として、従来の製剤化の手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【００８１】
薬学的に許容され得るキャリアとして機能し得る材料の代表例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：糖（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；セルロース（例えば、微結晶性セルロース）およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤ろう）；油（例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール）；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および薬学的組成物において使用される他の無毒性の適合性物質。
【００８２】
薬学的組成物は、代表的には、本発明の化合物を薬学的に許容され得るキャリアおよび１つまたはそれを超える任意選択の成分と十分かつ完全に混合または混和することによって調製される。次いで、得られた均一に混和された混合物は、従来の手順および器具を用いて、錠剤、カプセル剤、丸剤などに成形または充填され得る。
【００８３】
本発明の薬学的組成物は、好ましくは、単位剤形に包装される。用語「単位剤形」とは、患者への投与に適した物理的に別々の単位のことを指し、すなわち、各単位は、単独でまたは１つもしくはそれを超えるさらなる単位と組み合わさって所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の本発明の化合物を含む。例えば、そのような単位剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤など、または非経口投与に適した単位パッケージであり得る。
【００８４】
１つの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口投与に適している。経口投与に好適な薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、舐剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤の形態であり得るか；または水性もしくは非水性液体における溶液または懸濁液として存在し得るか；または水中油型もしくは油中水型の液体エマルジョンとして存在し得るか；またはエリキシル剤もしくはシロップ剤などとして存在し得；それらの各々は、所定の量の本発明の化合物を活性成分として含んでいる。
【００８５】
固形剤形（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤など）での経口投与が意図されているとき、本発明の薬学的組成物は、通常、本発明の化合物および１つまたはそれを超える薬学的に許容され得るキャリア（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）を含む。必要に応じてまたは代替的に、そのような固形剤形は、充填剤または増量剤（例えば、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、リン酸二カルシウム、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸）；結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア）；保湿剤（例えば、グリセロール）；崩壊剤（例えば、クロスカルメロース（ｃｒｏｓｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）ナトリウム、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび／または炭酸ナトリウム）；溶解遅延剤（例えば、パラフィン）；吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）；湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよび／またはモノステアリン酸グリセロール）；吸収剤（例えば、カオリンおよび／またはベントナイト粘土）；滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよび／またはそれらの混合物）；着色剤；および緩衝剤も含み得る。
【００８６】
離型剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、香味料および香料、保存剤ならびに酸化防止剤も、本発明の薬学的組成物に存在し得る。薬学的に許容され得る酸化防止剤の例としては、水溶性の酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；油溶性の酸化防止剤（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど）；および金属キレート剤（例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）が挙げられる。錠剤、カプセル剤、丸剤などのためのコーティング剤としては、腸溶コーティングのために使用されるもの（例えば、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸、メタクリル酸エステル共重合体、セルロースアセテートトリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなど）が挙げられる。
【００８７】
本発明の薬学的組成物はまた、例えば、様々な比率でヒドロキシプロピルメチルセルロース；または他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／もしくはミクロスフェアを用いて、活性な作用物質の持続放出または制御放出を提供するように製剤化され得る。さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて不透明化剤を含んでもよく、消化管のある特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分だけを放出するようにまたは活性成分を優先的に放出するように製剤化され得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。活性な作用物質は、適切な場合、上に記載された賦形剤の１つまたはそれ超とともに、マイクロカプセル化された形態でも存在し得る。
【００８８】
経口投与に好適な液体剤形としては、例証として、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は、代表的には、活性な作用物質および不活性な希釈剤、例えば、水または他の
溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、オレイン酸、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含む。あるいは、ある特定の液体製剤は、例えば噴霧乾燥によって、粉末に変換され得、その粉末は、従来の手順によって固形剤形を調製するために使用される。
【００８９】
懸濁剤は、活性成分に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにそれらの混合物を含み得る。
【００９０】
以下の非限定的な例は、本発明の代表的な薬学的組成物を例証する。
錠剤経口固形剤形
【００９１】
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、錠剤１つあたり４ｍｇ、１０ｍｇまたは２０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で乾式混合され、錠剤に圧縮される。
【００９２】
錠剤経口固体剤形
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩（４０ｇ）を微結晶性セルロース（４４５ｇ）、二酸化ケイ素ヒュームド（１０ｇ）およびステアリン酸（５ｇ）と十分に混合する。次いで、錠剤プレスで混合物を圧縮して、各１００ｍｇ重量の錠剤を形成する。各錠剤は、経口投与に好適な８ｍｇの活性剤／単位用量を提供する。
【００９３】
錠剤経口固体剤形
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩（１０ｇ）をコーンスターチ（５０ｇ）、クロスカルメロースナトリウム（２５ｇ）、ラクトース（１１０ｍｇ）およびステアリン酸マグネシウム（５ｍｇ）と十分に混合する。次いで、錠剤プレスで混合物を圧縮して、各２００ｍｇ重量の錠剤を形成する。各錠剤は、経口投与に好適な１０ｍｇの活性剤／単位用量を提供する。
【００９４】
カプセル経口固形剤形
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、カプセル１つあたり４ｍｇ、１０ｍｇまたは２０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で湿式造粒によって混和され、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルに充填される。
【００９５】
カプセル内粉末
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩（１〜５０ｍｇ）を空の経口投与用ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセルに充填する。
【００９６】
液体製剤
キャップ付ボトル中で、本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩（５０ｍｇ）を１００ｍＬの低カロリー混合ベリースポーツドリンクと混合し、完全に溶解する。種々の容量のこの溶液を量り分けて、異なる用量レベルを提供する。
液体製剤
【００９７】
本発明の化合物（０．１％）、水（９８．９％）およびアスコルビン酸（１．０％）を含む液体製剤が、本発明の化合物を水とアスコルビン酸との混合物に加えることによって形成される。
腸溶コーティングされた経口剤形
【００９８】
本発明の化合物を、ポリビニルピロリドンを含む水溶液に溶解し、１：５ｗ／ｗという活性な作用物質：ビーズの比で微結晶性セルロース上または糖のビーズ上にスプレーコーティングし、次いで、アクリル共重合体、例えば、商品名Ｅｕｄｒａｇｉｔ−Ｌ（登録商標）およびＥｕｄｒａｇｉｔ−Ｓ（登録商標）として入手可能なアクリル共重合体の組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングのおよそ５％重量増加を適用する。腸溶コーティングされたビーズを、例えば、カプセル１つあたり５ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルの中に充填する。
腸溶コーティングされた経口剤形
【００９９】
Ｅｕｄｒａｇｉｔ−Ｌ（登録商標）とＥｕｄｒａｇｉｔ−Ｓ（登録商標）との組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングを、上に記載された錠剤経口剤形またはカプセル経口剤形に適用する。
有用性
【０１００】
胃腸炎症性疾患の処置のために、特に潰瘍性大腸炎およびクローン病などの炎症性腸疾患の処置のために、本化合物は、臨床的に有効な作用物質を消化管の作用部位に直接送達するようにデザインされている。化合物はまた、免疫チェックポイント阻害剤療法に関連する大腸炎の処置に有用であると予想される。特に、本発明のグルクロニドプロドラッグは、消化管、特に結腸の豊富な細菌β−グルクロニド酵素を利用して、ＪＡＫ阻害剤トファシチニブを主に下部消化管に放出するようにデザインされている。さらに、本発明の例示的な化合物は、全身に吸収されにくいので、免疫抑制のリスクを最小化することが示されている。
【０１０１】
本プロドラッグ化合物は、生物活性を欠くようにデザインされる。例えば、式１の化合物は、消化管（ＧＩ）または全身で発現され得るヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）ファミリーの酵素、非ＪＡＫ酵素または種々のＧタンパク質共役レセプター、イオンチャネルおよびトランスポーターに対して有意な親和性または効力を有しない。本化合物の投与後の生物学的活性は、生成されたトファシチニブに起因する。
【０１０２】
以下の実験の項に記載されているように、本化合物は、１つまたはそれを超える前臨床アッセイにおいて広範にプロファイルされた。化合物は、ラット結腸糞便中に存在するβ−グルクロニダーゼの存在下で分解することが示されている。例えば、ラットの十二指腸、回腸、空腸および結腸から単離した腸管内腔内容物のホモジネートインキュベーションにおいて、式１の化合物の代謝安定性およびトファシチニブの形成を調査した。化合物は、十二指腸および空腸内容物における安定な代謝回転（半減期＞６０分間）から、回腸内容物における中程度の代謝回転（半減期３４分間）、結腸内容物における急速な代謝回転（半減期＜５分間）まで、増加する代謝回転勾配を示し、トファシチニブ形成の証拠が得られた。増加する化合物代謝回転勾配は、上部ＧＩから下部ＧＩへと増加する細菌の存在を反映している。
【０１０３】
マウス、ラットおよびカニクイザルにおいて、経口投与時の本化合物からのトファシチニブの放出を研究した。以下のアッセイ４、５、９および１０に記載されているように、すべての種において、プロドラッグは、血漿中曝露よりも有意に高い結腸中トファシチニ
ブ曝露を示した。特に、ラットおよびサルにおいて、消化管の特定のセグメントにおける式１の化合物からのトファシチニブの放出を研究し、同等用量におけるトファシチニブそれ自体の経口投与から得られた濃度と比較した。化合物１は、消化管全体にわたって血漿中曝露よりも有意に高い曝露を示しただけではなく（例えば、結腸セグメントにおいて、比はラットでは５００超であり、サルでは約６０〜１５０である）、トファシチニブそれ自体の経口投与から得られたものと比べて、ＧＩ組織濃度およびＧＩ組織対血漿濃度比の増加も示した。例えば、サルでは、経口トファシチニブから得られたものと比較して、盲腸、近位結腸組織および遠位結腸組織におけるトファシチニブ濃度の５〜７倍の増加が、プロドラッグの経口投与から観測された。
【０１０４】
また、マウスのオキサゾロン誘発大腸炎モデルにおいて、本発明の特定の化合物の有効性を試験した。マウスのオキサゾロン誘発大腸炎モデルにおいて、式１および４の化合物は、トファシチニブの直接投与によって同等の効果を達成するために必要とされるよりも低い経口用量で活性を示した。加えて、有効用量の式１の化合物は、その有効用量におけるトファシチニブそれ自体の投与から得られる全身曝露と比べて減少したトファシチニブ全身曝露に関連する。マウスの免疫抑制モデルでは、化合物１は、オキサゾロンモデルにおいて同程度の有効性を示すために必要な同じ用量で、最小の免疫抑制効果を示したのに対して（治療指数＞３倍）、トファシチニブは、その有効用量よりも低い用量で免疫抑制性である（治療指数≦０．３）。
【０１０５】
したがって、本発明のトファシチニブのグルクロニドプロドラッグは、炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎の処置に有用であると予想される。本化合物はまた、クローン病の処置、および免疫チェックポイント阻害剤療法に関連する大腸炎（がん免疫療法の潜在的に深刻な転帰）の処置に有用であると予想される。免疫チェックポイント阻害剤療法としては、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）阻害剤、例えばイピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））およびトレメリムマブ；プログラム細胞死１（ＰＤ−１）阻害剤、例えばペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標））およびニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標））；およびプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）阻害剤、例えばアテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標））、デュルバルマブおよびアベルマブが挙げられるが、これらに限定されない。特に、化合物は、ＣＴＬＡ−４阻害剤誘発大腸炎の処置に有用であると予想される。化合物はまた、さらなる症状、例えば移植片対宿主病、セリアック病、顕微鏡的大腸炎、回腸嚢炎および自己免疫性腸疾患における胃腸有害作用の処置に有用であり得る。
【０１０６】
ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の胃腸炎症性疾患を処置する方法であって、その方法が、治療有効量の本発明の化合物または薬学的に許容され得るキャリアおよび本発明の化合物を含む薬学的組成物をその哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１０７】
１つの実施形態では、胃腸炎症性疾患は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、胃腸炎症性疾患は、クローン病である。別の実施形態では、胃腸炎症性疾患は、免疫チェックポイント阻害剤療法に関連する大腸炎である。
【０１０８】
本発明はさらに、哺乳動物の潰瘍性大腸炎を処置する方法であって、その方法が、治療有効量の本発明の化合物または薬学的に許容され得るキャリアおよび本発明の化合物を含む薬学的組成物をその哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１０９】
本発明の化合物は、潰瘍性大腸炎を処置するために使用されるとき、通常、１日１回または１日あたり複数回で経口的に投与され得るが、他の投与形態を使用してもよい。１回に投与される活性な作用物質の量または１日あたりに投与される総量は、通常、処置され
る症状、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびその相対的な活性、個別の患者の年齢、体重および反応、患者の症候の重症度などを含む関連する状況に照らして、医師によって決定される。
【０１１０】
潰瘍性大腸炎および他の胃腸炎症性障害の処置に好適な用量は、平均的な７０ｋｇのヒトの場合、約４〜約５０ｍｇ／日および約４〜約４０ｍｇ／日という活性な作用物質を含む、約２〜約６０ｍｇ／日という式（Ｉ）の化合物の範囲であると予想される。
併用療法
【０１１１】
本発明の化合物はまた、胃腸炎症性障害の処置をもたらすために、同じ機序または異なる機序によって作用する１つまたはそれを超える作用物質と併用して使用され得る。併用療法に有用な作用物質のクラスとしては、アミノサリチレート、ステロイド、全身免疫抑制剤、抗ＴＮＦα抗体、抗α４（抗ＶＬＡ−４）抗体、抗インテグリンα４β７抗体、抗菌薬および止痢薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１２】
本発明の化合物と併用して使用され得るアミノサリチレートとしては、メサラミン、オルサラジンおよびスルファサラジンが挙げられるが、これらに限定されない。ステロイドの例としては、プレドニゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、ベクロメタゾンおよびフルチカゾンが挙げられるが、これらに限定されない。炎症性障害の処置に有用な全身免疫抑制剤としては、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、６−メルカプトプリンおよびタクロリムスが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ（ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）およびセルトリズマブを含むがこれらに限定されない抗ＴＮＦα抗体も、併用療法において使用され得る。他の機序によって作用する有用な化合物としては、抗α４抗体（例えば、ナタリズマブ）、抗インテグリンα４β７抗体（例えば、ベドリズマブ）、抗菌薬（例えば、リファキシミン）および止痢薬（例えば、ロペラミド）が挙げられる。（Ｍｏｚａｆｆａｒｉら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１４，１４，５８３−６００；Ｄａｎｅｓｅ，Ｇｕｔ，２０１２，６１，９１８−９３２；Ｌａｍら、Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１４，６，９６３−９７１．）
【０１１３】
ゆえに、別の態様では、本発明は、胃腸炎症性障害の処置において使用するための治療的組み合わせを提供し、その組み合わせは、本発明の化合物および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤を含む。例えば、本発明は、本発明の化合物、ならびにアミノサリチレート、ステロイド、全身免疫抑制剤、抗ＴＮＦα抗体、抗α４抗体、抗インテグリンα４β７抗体、抗菌薬および止痢薬から選択される１つまたはそれを超える作用物質を含む組み合わせを提供する。第２の作用物質（単数または複数）は、含められるとき、治療有効量で、すなわち、本発明の化合物と共投与されたときに治療的に有益な効果をもたらす任意の量で存在する。
【０１１４】
さらに、方法の態様において、本発明は、胃腸炎症性障害を処置する方法であって、その方法が、本発明の化合物および胃腸炎症性障害の処置に有用な１つまたはそれを超える他の治療剤を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０１１５】
それらの作用物質は、併用療法において使用されるとき、上に開示されたような単一の薬学的組成物として製剤化されてもよいし、それらの作用物質は、同時にまたは別々の時点において同じまたは異なる投与経路によって投与される別個の組成物として提供されてもよい。それらの作用物質は、別々に投与されるとき、所望の治療効果が提供されるように十分に近い時点において投与される。そのような組成物は、別々に包装されてもよいし、キットとして一緒に包装されてもよい。キットの中の２つまたはそれを超える治療剤は、同じ投与経路によって投与されてもよいし、異なる投与経路によって投与されてもよい
。
【実施例】
【０１１６】
以下の合成および生物学の実施例は、本発明を例証するために提供されるのであって、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。下記の実施例では、以下の省略形は、別段示されない限り、以下の意味を有する。下記に定義されない省略形は、それらの一般に認められている意味を有する。
Ａｃ＝アセチル
ＡＣＮ＝アセトニトリル
ａｌｌｏｃ＝アリルオキシカルボニル
ｄ＝日
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン
Ｅｔ３Ｎ＝トリエチルアミン
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ＝エタノール
ｈ＝時間
ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｍｉｎ＝分
ＲＴ＝室温
ｔＢｕ＝ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
【０１１７】
試薬および溶媒は、商業的供給業者（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａなど）から購入し、さらに精製せずに使用した。反応混合物の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（ａｎａｌ．ＨＰＬＣ）および質量分析法によってモニターした。反応混合物は、各反応において具体的に記載されるようにワークアップした；通常、それらは、抽出および他の精製方法（例えば、温度依存性および溶媒依存性の結晶化および沈殿）によって精製した。さらに、反応混合物は、代表的にはＣ１８またはＢＤＳカラムパッキングおよび従来の溶離剤を用いる、カラムクロマトグラフィーまたは分取ＨＰＬＣによって通例のように精製した。代表的な分取ＨＰＬＣ条件は、下記に記載される。
【０１１８】
反応生成物の特徴付けは、質量分析法および解析ＨＰＬＣによって通例のように行った。化合物の質量分析同定は、自動精製システムに連結された、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のモデルＡＰＩ  １５０  ＥＸ装置またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）の３１００装置を用いるエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって行った。
【０１１９】
分取ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８、５μｍ  ２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ  ２１×２５０またはＣ１４、５μｍ  ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流速：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入体積：（１００〜１５００μＬ）
検出器の波長：２１４ｎｍ
【０１２０】
粗化合物を約５０ｍｇ／ｍＬで１：１水：酢酸に溶解した。４分間の分析スケールの試験ランを、２．１×５０ｍｍ  Ｃ１８カラムを用いて行った後、１５または２０分間の分取スケールのランを、分析スケールの試験ランの％Ｂ保持に基づくグラジエントを伴う１００μＬの注入を用いて行った。正確なグラジエントは、サンプル依存的であった。近くを流れる（ｃｌｏｓｅ  ｒｕｎｎｉｎｇ）不純物を含むサンプルは、最善の分離のために２１×２５０ｍｍ  Ｃ１８カラムおよび／または２１×１５０ｍｍ  Ｃ１４カラムを用いて調べた。所望の生成物を含む画分を質量分析によって特定した。
【０１２１】
解析ＨＰＬＣ条件
方法Ａ
機器：Ａｇｉｌｅｎｔ  １２６０  ＨＰＬＣ
カラム：ＬＵＮＡ  Ｃ１８（２）、１５０×４．６０ｍｍ、３ミクロン
カラム温度：３５℃
流速：１．２ｍＬ／分
注入体積：５μＬ
サンプル調製：１：１  ＡＣＮ：水に溶解して約０．５ｍｇ／ｍＬ溶液
移動相：Ａ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（９８：２：０．０５）
Ｂ＝水：ＡＣＮ：ＴＦＡ（３０：７０：０．０５）
検出器の波長：２３０ｎｍ
勾配：合計２８分間（時間（分）／％Ｂ）：０／１０、２０／１００、２２／１００、２３／１０、２８／１０
方法Ｂ
機器：Ａｇｉｌｅｎｔ  １２６０  ＨＰＬＣ
カラム：Ｚｏｒｂａｘ−Ｂｏｎｕｓ  ＲＰ  Ｃ１４、３０×２．１ｍｍ、１．８ミクロンカラム温度：６０℃
流速：１．２ｍＬ／分
注入体積：３μＬ
サンプル調製：１：１  ＡＣＮ：水に溶解して約１．０ｍｇ／ｍＬ溶液
移動相：Ａ＝水：ＴＦＡ（９９．９％：０．１％）
Ｂ＝ＡＣＮ：ＴＦＡ（９９．９％：０．１％）
検出器の波長：２１４ｎｍ
勾配：合計３．０分間（時間（分）／％Ｂ）：０／５、１．５／６５、１．８／９５、２．１／９５、２．５／５、３．０／５
【０１２２】
調製法１（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０）
【化１３】
2020196742.tif 000015
【０１２３】
（ａ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキ
シ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（９）
【０１２４】
メカニカルスターラーを備える２Ｌ三つ口フラスコに、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（８）（５１ｇ、１２８．４ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２０．９８ｇ、１２５．５ｍｍｏｌ）および酸化銀（３７．７ｇ、１６２．７ｍｍｏｌ）を加え、続いて、ＡＣＮ（７５０ｍＬ）を加えた。反応混合物を暗所で１８時間撹拌し、ケイソウ土（Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標））に通して濾過した。固体をＡＣＮ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、濾液を減圧下で１００ｍＬまで蒸留した。濾液にＥｔＯＡｃ（１７５０ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム（１Ｌ）を加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌し、Ｃｅｌｉｔｅに通して濾過し、沈降させた。有機層を飽和重炭酸ナトリウム（１Ｌ）およびブライン（１Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（１００ｇ）で２時間乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸留乾固して、黄色固体として粗化合物９（５５ｇ、９０％収率、９７．４％純度）を得た。ＨＰＬＣ保持時間１５．６１分間。
【０１２５】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０）
【０１２６】
メカニカルスターラーを備える１Ｌ三つ口フラスコに、化合物９（３２．７ｇ、６７．６ｍｍｏｌ）を加え、続いて、ＤＣＭ（３５０ｍＬ）およびＩＰＡ（７０ｍＬ）を加えた。反応混合物を撹拌して固体を溶解し、次いで、０℃に冷却した。温度を５℃未満に維持しながら、この溶液に水素化ホウ素ナトリウム（１．５４ｇ、４０．６ｍｍｏｌ）を３分割して加え、反応混合物を０℃で１時間撹拌し、氷水（４００ｍＬ）に徐々に注いだ。この溶液にＤＣＭ（３５０ｍＬ）を加え、混合物を３０分間撹拌し、３０分間沈降させ、層を分離した。水層をＤＣＭ（１００ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層をブライン（５００ｍＬ）で洗浄した。３０分後、層を分離し、ブライン層をＤＣＭ（１００ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム（５０ｇ）で２時間乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅに通して濾過し、減圧下で蒸留乾固した。得られた固体を９５％変性ＥｔＯＨ（１３０ｍＬ）と共に５０℃で３０分間撹拌し、室温で１２時間撹拌して結晶性固体を形成し、これをＥｔＯＨ（３０ｍＬ）で洗浄し、真空下、室温で１６時間乾燥させて、白色固体として表題化合物（２１ｇ、６６％収率、９８％純度）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ保持時間１３．１８分間。
【０１２７】
調製法２：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２）
【化１４】
2020196742.tif 000016
【０１２８】
磁気スターラーを備える１００ｍＬフラスコに、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−
２−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０）（４．８６ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびカルボニルジイミダゾール（２．１１ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加え、続いて、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌して、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（１Ｈ−イミダゾール−１−カルボニル）オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１１）の溶液を形成した。
【０１２９】
磁気スターラーを備える２５０ｍＬ三つ口フラスコに、Ｎ１，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（３．０９ｇ、３５ｍｍｏｌ、３．７６ｍＬ）を加え、続いて、ＤＣＭ（３０ｍＬ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、酢酸（２．１ｇ、３５ｍｍｏｌ、２ｍＬ）を５℃未満で徐々に加えて、懸濁液を形成した。この懸濁液に中間体１１の溶液を徐々に加えた；反応混合物を０〜５℃で３０分間撹拌し、次いで、室温で３時間撹拌した。ＤＣＭ（３０ｍＬ）および水（６０ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。有機層を水（２×６０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで２時間乾燥させ、濾過して、溶液中の表題化合物を得（約７０％収率）、これを０〜４℃で保存し、精製することなく使用した。ＨＰＬＣ方法Ａ保持時間１１．０４分間。
【０１３０】
調製法３：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４）
【化１５】
2020196742.tif 000017
【０１３１】
磁気スターラーを備える１Ｌ三つ口フラスコに、３−（（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）−３−オキソプロパンニトリル（２）（９．６５ｇ、３１ｍｍｏｌ）、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（１２．２２ｇ、４０ｍｍｏｌ）およびＡＣＮ（２４０ｍＬ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。ＤＩＰＥＡ（５．５９ｇ、４３ｍｍｏｌ）を滴下により添加し、反応混合物を室温で４時間撹拌し、０℃に冷却した。冷却した反応混合物に、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）−カルバモイル）オキシ）メチル）
−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１２）のＤＣＭ溶液（３５０ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を１０℃未満で加え、反応混合物を１５℃で１時間撹拌し、次いで、酢酸（２．５ｇ、４２ｍｍｏｌ）でクエンチした。ＤＣＭ（２００ｍＬ）および水（３００ｍＬ）を加え、層を分離し、有機層を３％炭酸ナトリウム（２×３５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、０．５Ｍ  ＨＣｌ（２×２００ｍＬ）および１０％塩化ナトリウム（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（５０ｇ）で５時間乾燥させ、濾過し、約１００ｍＬに濃縮した。濃縮溶液を、シリカゲルクロマトグラフィー（６００ｇシリカカラム、流速６０ｍＬ／分、勾配：５分間かけてＥｔＯＡｃ中４０％ＤＣＭから１００％ＥｔＯＡｃ、１００％ＥｔＯＡｃで６０分間、３０分間かけてＥｔＯＡｃ中３％ＭｅＯＨから５％ＭｅＯＨ、終了までＥｔＯＡｃ中５％ＭｅＯＨ）によって精製した。純粋な画分を合わせ、真空下で蒸留乾固して、表題化合物（２１．２ｇ、９７％純度、７３％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ保持時間１３．９２分間。
【０１３２】
実施例１：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（１）
【化１６】
2020196742.tif 000018
【０１３３】
磁気スターラーを備える５００ｍＬ三つ口フラスコに、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４）（２０．９ｇ、２２ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（２１０ｍＬ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、１Ｍ  ＬｉＯＨ水溶液（４６ｍＬ、４７ｍｍｏｌ）を２０分間かけて加え、反応混合物を２０分間撹拌した。等量の第２のＬｉＯＨ溶液を３０分間かけて加え、反応混合物を２時間撹拌した。酢酸（５．６ｇ、９３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２Ｌ丸底フラスコに移した。このフラスコにＡＣＮ（５００ｍＬ）を加え、混合物を減圧下で蒸留して、６００ｍＬの溶媒を除去した。このプロセスを２回繰り返し、３回目の蒸留を乾固まで継続した。得られた固体を２％ＡＣＮ水溶液（３５０ｍＬ）に溶解し、逆相クロマトグラフィー（４５０ｇ  Ｃ−１８シリカカラム、流速４０ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．５％酢酸水溶液；溶媒Ｂ：ＡＣＮ、勾配：合計１１０分間（時間（分）／％Ｂ）：０／２、１０／２、１００／２８、１１０／２８、続いて９０％Ｂで洗浄）によって、９０ｍＬバッチで精製した。生成物画分を合わせ、この手順３回繰り返し、合わせた画分を約６００ｍＬに濃縮し、凍結乾燥させて、固体として表題化合物（１１．２ｇ、６０％収率、９９％純度）を得た。ＨＰＬＣ方法Ａ保持時間７．９５分間。
【０１３４】
実施例２（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−アミノ−４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イ
ル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（３）
【化１７】
2020196742.tif 000019
【０１３５】
（ａ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１５）
【０１３６】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１４）（１．５５ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液に、水酸化パラジウム炭素（１１．５７ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を水素雰囲気下、室温で３日間撹拌し、Ｃｅｌｉｔｅのパッドに通して濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、真空中で濃縮した。粗物質を褐色泡状物として単離し、さらに精製することなく使用した。（ｍ／ｚ）：Ｃ４２Ｈ５３Ｎ９Ｏ１４の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値９０８．３７、実測値９０８．８。
【０１３７】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−アミノ−４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（３）
【０１３８】
前の工程の生成物（０．９５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（３．４９ｍＬ）、ＴＨＦ（３．４９ｍＬ）および水（３．４９ｍＬ）の１：１：１混合物中の溶液にＬｉＯＨ（６３ｍｇ、２．６２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。反応溶液を真空中で濃縮し、粗物質を逆相カラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として表題化合物（９６ｍｇ、１２％収率）を得た。ＨＰＬＣ方法Ｂ保持時間０．８５分間。
【０１３９】
調製法４：４−ニトロフェニル４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１３）
【化１８】
2020196742.tif 000020
【０１４０】
３−（（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−３−（メチル（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ）ピペリジン−１−イル）−３−オキソプロパンニトリル（２）（０．７５ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２ｍＬ）中の溶液に、水酸化ナトリウム（０．２９ｇ、７．２０ｍｍｏｌ）水溶液（４．００ｍＬ）および臭化テトラブチルアンモニウム（ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｏｎｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ）（０．０８ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。クロロギ酸４−ニトロフェニル（０．９７ｇ、４．８０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液を徐々に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、ＤＣＭで抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、明黄色固体として表題化合物（０．９４ｇ、８２％）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ２３Ｈ２３Ｎ７Ｏ５の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４７８．１８、実測値４７８．２。
【０１４１】
調製法５：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１８）
【化１９】
2020196742.tif 000021
【０１４２】
（ａ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１７）
【０１４３】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１６）（２７．０ｇ、６１．３ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２５．５ｍＬ、１７．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５０ｍＬ）溶液に、クロロギ酸ｐ−ニトロフェニル（１８．５３ｇ、９１．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液を徐々に加えた。この溶液を室温で１時間撹拌し、水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した
。合わせた有機層を減圧下で濃縮し、粗残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３５％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、表題化合物（３７．０ｇ、５６％収率）を得た。
【０１４４】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１８）
【０１４５】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１７）（０．５０ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８．２６ｍＬ）溶液に、Ｎ１，Ｎ２−ジメチルエタン−１，２−ジアミン（０．４４ｍＬ、４．１３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。１．５時間後、反応溶液を濾過し、ＤＣＭで洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、着色固体として表題化合物（３５４ｍｇ、７７％収率）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ２５Ｈ３４Ｎ２Ｏ１２の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５５５．２１、実測値５５５．６。
【０１４６】
調製法５と類似のプロセスによって、以下の中間体を調製した：
【化２０】
2020196742.tif 000022
【０１４７】
実施例３：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（４）
【化２１】
2020196742.tif 000023
【０１４８】
（ａ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）−（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（２２）
【０１４９】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１８）（０．３５ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニル４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１３）（０．３０ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．０５ｍＬ）溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．１３ｍＬ、０．９５ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を４０℃で撹拌した。１．５時間後、ＬＣ／ＭＳは、クリーンな生成物形成を示した。反応溶液を室温に冷却し、真空中で濃縮した。粗生成物を黄色残渣として単離し、これをさらに精製することなく使用した。（ｍ／ｚ）：Ｃ４２Ｈ５２Ｎ８Ｏ１４の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値８９３．３６、実測値８９３．９。
【０１５０】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（４）
【０１５１】
前の工程の生成物（０．５６ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（２．１０ｍＬ）、ＴＨＦ（２．１０ｍＬ）および水（２．１０ｍＬ）の１：１：１混合物中の溶液に、ＬｉＯＨ（４０ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を室温で撹拌し、真空中で濃縮し、粗残渣を逆相カラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として表題化合物（０．１２ｇ、２７％）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ３５Ｈ４４Ｎ８Ｏ１１の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値７５３．３１、実測値７５３．８．ＨＰＬＣ方法Ｂ保持時間０．９８分間。
【０１５２】
実施例４：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−メチルフェノキシ）−３
，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（５）
【化２２】
2020196742.tif 000024
【０１５３】
（ａ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）−（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−メチルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（２３）
【０１５４】
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（メトキシカルボニル）−６−（２−メチル−４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１９）（０．４６ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８．００ｍＬ）溶液に、４−ニトロフェニル４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１３）（０．３９ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３．００ｍＬ）溶液を徐々に加え、この溶液を室温で１．５時間撹拌し、真空中で濃縮し、黄色固体をさらに精製することなく使用した。（ｍ／ｚ）：Ｃ４３Ｈ５４Ｎ８Ｏ１４の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値９０７．３８、実測値９０７．６。
【０１５５】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−メチルフェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（５）
【０１５６】
前の工程の生成物（０．７３ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２９ｍＬ）氷冷溶液に、ＬｉＯＨ水溶液（４．０４ｍＬ、４．０４ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。０℃で１．５時間撹拌した後、１Ｎ  ＨＣｌを徐々に加えることによって、反応溶液をｐＨ５〜６に調整した。反応溶液を真空中で濃縮し、粗物質を逆相カラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として表題化合物（０．４７ｇ、７６％収率）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ３６Ｈ４６Ｎ８Ｏ１１の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値７６７．３３、実測値７６７．８．ＨＰＬＣ方法Ｂ保持時間１．０２分間。
【０１５７】
実施例５：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−クロロ−４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−
イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（６）
【化２３】
2020196742.tif 000025
【０１５８】
（ａ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−クロロ−４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（２４）
【０１５９】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−クロロ−４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）−カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（２０）（０．３３ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニル４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１３）（０．２７ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．５２ｍＬ）溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．１２ｍＬ、０．８５ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を４０℃で撹拌した。１時間後、溶液を真空中で濃縮した。生成物を黄色残渣として単離し、これをさらに精製することなく使用した。（ｍ／ｚ）：Ｃ４２Ｈ５１ＣｌＮ８Ｏ１４の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値９２７．３２、実測値９２７．７。
【０１６０】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（２−クロロ−４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（６）
【０１６１】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−クロロ−４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（０．５２ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（１．８８ｍＬ）、ＴＨＦ（１．８８ｍＬ）および水（１．８８ｍＬ）の１：１：１混合物中の溶液に、ＬｉＯＨ（４０ｍｇ、１．５
３ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を室温で２時間撹拌した。反応溶液を真空中で濃縮し、粗物質を逆相カラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として最終生成物（０．２２ｇ、４９％）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ３５Ｈ４３ＣｌＮ８Ｏ１１の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値７８７．２７、実測値７８７．８．ＨＰＬＣ方法Ｂ保持時間１．０４分間。
【０１６２】
実施例６：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（７）
【化２４】
2020196742.tif 000026
【０１６３】
（ａ）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（２５）
【０１６４】
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−メトキシ−４−（（（メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（２１）（０．６０ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０．００ｍＬ）溶液に、４−ニトロフェニル４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１３）（０．４９ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３．００ｍＬ）溶液を徐々に加え、得られた混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応溶液を真空中で濃縮し、得られた黄色固体をさらに精製することなく使用した。（ｍ／ｚ）：Ｃ４３Ｈ５４Ｎ８Ｏ１５の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値９２３．３７、実測値９２４．１。
【０１６５】
（ｂ）（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）オキシ）メチル）−２−メトキシフェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸（７）
【０１６６】
前の工程の生成物（０．９４ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３６．８０ｍＬ）氷
冷溶液に、ＬｉＯＨ水溶液（５．１２ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。反応混合物を０℃で２時間撹拌してから、１Ｎ  ＨＣｌを徐々に加えることによって、溶液のｐＨを５〜６に調整した。混合物を真空中で濃縮し、粗残渣を逆相カラムクロマトグラフィーによって精製して、白色固体として表題化合物（０．４６ｇ、５７％収率）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ３６Ｈ４６Ｎ８Ｏ１２の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値７８３．３２、実測値７８３．８．ＨＰＬＣ方法Ｂ保持時間０．９９分間。
【０１６７】
実施例Ｃ−１
【化２５】
2020196742.tif 000027
【０１６８】
（ａ）化合物Ｃ−５
【０１６９】
フラスコに、化合物Ｃ−３のＴＦＡ塩（２８５ｍｇ、０．４９７ｍｍｏｌ）および化合物Ｃ−４（４４５ｍｇ、１．２８９ｍｍｏｌ）を加え、続いて、ＤＭＦ（２．４８５ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．４１６ｍＬ、２．９８ｍｍｏｌ）を加えた。翌日、反応混合物をロータリーエバポレーションによって濃縮し、順相カラムクロマトグラフィー（１５分間でＤＣＭ中０〜１５％ＭｅＯＨ、次いで、５分間にわたって１５％を継続）によって精製して、表題化合物（９０ｍｇ）を得た。
【０１７０】
（ｂ）化合物Ｃ−１
【０１７１】
前の工程の生成物（４５ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３３．８ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（０．８ｍＬ）および水（０．４ｍＬ）に溶解し、室温で撹拌した。２時間後、ＭｅＯＨを加えて水との共沸混合物を形成し、ＤＣＭ（０．４ｍＬ）を加え、続いて、ＴＦＡ（０．４ｍＬ、５．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をロータリーエバポレーションによって濃縮し、１：１水：ＡＣＮに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣによって精製して、灰白色粉末として表題化合物（１７．７ｍｇ、９７％純度）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ２６Ｈ３０Ｎ４Ｏ１５の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値６３９．１７、実測値６３９．２。
【０１７２】
化合物Ｃ−７の調製
【化２６】
2020196742.tif 000028
【０１７３】
ＤＣＭ（３．７４ｍＬ）に溶解した化合物Ｃ−６（３００ｍｇ、０．３７４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１５９μｌ、１．４９５ｍｍｏｌ）を０℃で一度に加えた。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、ＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、水（３×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をブラインで洗浄し、分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して、黄色油状物として表題中間体を得、これをさらに精製することなく使用した。（ｍ／ｚ）：Ｃ３３Ｈ４１Ｎ３Ｏ１７の［Ｍ＋Ｈ］＋計算値７５２．２４、実測値７５２．４。
【０１７４】
化合物Ｃ−８の調製
【化２７】
2020196742.tif 000029
【０１７５】
ＴＨＦ（３．３７２ｍＬ）およびＤＭＦ（１．６８６ｍＬ）の混合物に溶解した水素化ナトリウム（３６．４ｍｇ、０．９１０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（２，４−ジニトロフェニル）カーボネート（２９９ｍｇ、０．７５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで、ＴＨＦ（１．２ｍＬ）に溶解した２−（５−フルオロ−４−メチルピリジン−３−イル）−５−（４−メチル−６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イル）−１Ｈ−インドール（化合物Ｃ−２Ｍ）（２００ｍｇ、０．５０６ｍｍｏｌ）の溶液を徐々に加え、反応混合物を室温に加温した。９時間後、飽和重炭酸ナトリウムを加え、反応混合物をブラインで洗浄した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜８０％ＥｔＯＡｃで溶出）によって精製して、褐色油状物として表題中間体（１０９ｍｇ）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ２８Ｈ２０ＦＮ５Ｏ８Ｓの［Ｍ＋Ｈ］＋計算値６０６．１０、実測値６０６．３。
【０１７６】
実施例Ｃ−２
【化２８】
2020196742.tif 000030
【０１７７】
（ａ）化合物Ｃ−９
【０１７８】
化合物Ｃ−８（２５０ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４．１３ｍＬ）溶液に、化合物Ｃ−９（３１０ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）を加え、続いて、４−ジメチルアミノピリジン（２２ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で１時間撹拌し、室温に冷却し、濃縮して表題中間体を得、これを精製することなく次の工程で直接使用した。（ｍ／ｚ）：Ｃ５５Ｈ５７ＦＮ６Ｏ２０Ｓの［Ｍ＋Ｈ］＋計算値１１７３．３３、実測値１１７３．４。
【０１７９】
（ｂ）化合物Ｃ−２
【０１８０】
ＴＨＦ（４．１３ｍＬ）に溶解した前の工程の生成物（４８５ｍｇ、０．４１３ｍｍｏｌ）の脱気溶液に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４７，７ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）およびモルホリン（３６０μＬ、４．１３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４５分間撹拌し、次いで、水を加え、層を分離した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗残渣を分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥させて、白色粉末として表題化合物（１３６ｍｇ、９９％純度）を得た。（ｍ／ｚ）：Ｃ４０Ｈ４１ＦＮ６Ｏ１４Ｓの［Ｍ＋Ｈ］＋計算値８８１．２４、実測値８８１．２。
【０１８１】
生物学的アッセイ
以下の生物学的アッセイの１つまたはそれよりも多くによって、本発明の化合物を特徴付けた。アッセイの説明では、式１の化合物を化合物１と別称する場合があり、本発明のさらなる化合物についても同様である。
【０１８２】
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
【０１８３】
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎＪＡＫ生化学的アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）を、通常のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ−３５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＥＧＴＡ）に含めた。組換えＧＳＴタグ化ＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ化ＳＴＡＴ１ペプチド基質をＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【０１８４】
段階希釈した化合物を、それらの４つのＪＡＫ酵素の各々および基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において周囲温度で１時間プレインキュベートした。続いて、ＡＴＰを加えて、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積でキナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２に対する最終的な酵素濃度は、それぞれ４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり；使用された対応するＫｍ
ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであり；基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。ＪＡＫ１キナーゼ活性もまた、１ｍＭのＡＴＰ濃度において試験した。キナーゼ反応を周囲温度で１時間進めた後、ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（最終濃度１０ｍＭ）およびＴｂ−抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，最終濃度２ｎＭ）の１０μＬ調製物を加えた。そのプレートを周囲温度で１時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）において読み出した。発光シグナル比（Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｒａｔｉｏ  ｓｉｇｎａｌｓ）（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【０１８５】
用量反応解析の場合、パーセント阻害のデータを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の対数に負号をつけたもの）として表され、続いてＣｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いてｐＫｉ（解離定数Ｋｉの対数に負号をつけたもの）に変換した。表１は、化合物１およびトファシチニブ（化合物２）の結果を要約したものである。
【表１】
2020196742.tif 000031
【０１８６】
アッセイ２：大腸菌由来β−グルクロニダーゼにおける化合物１の代謝安定性
【０１８７】
β−グルクロニダーゼ酵素の存在下における化合物１の中間代謝産物および最終生成物を特徴付けるために、大腸菌由来の精製β−グルクロニダーゼ（０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液中１００単位／ｍＬ）の存在下で、化合物１（ＤＭＳＯ中３０μＭ）を３７℃で０〜９０分間インキュベートした。０分、１分、２分、３分、５分、１０分、１５分、３０分、６０分および９０分の時点で、１００μＬのＡＣＮを加えることによって、インキュベーションをクエンチした。サンプルを水＋１％ギ酸（４×）で希釈し、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ（商標）ＬＣ−ＭＳシステムを使用して解析した。サンプルと同じ希釈を使用して決定した標準曲線との比較によって、化合物１およびトファシチニブの濃度を定量した。
【０１８８】
化合物１の急速な消失（半減期５分間未満）は、アグリコン中間体（スキーム２の化合物ｂ）の急速かつ一時的な形成を伴った。その次のジアミン中間体（化合物ｄ）および最終活性代謝産物（トファシチニブ）へのアグリコン中間体の変換は、より遅い律速段階であることが観測された。トファシチニブの濃度は、９０分間の実験の間に約２０μＭの最終濃度まで徐々に増加することが観測された。
【０１８９】
トファシチニブへの化合物１の観測された変換がグルクロニダーゼ酵素相互作用によるものであることを実証するために、化合物１（３０μＭ）をβ−グルクロニダーゼ（４５単位／ｍＬ）および公知の細菌β−グルクロニダーゼ阻害剤アモキサピン（１００μＭ）と共にインキュベートした。６０分間のインキュベーション後、トファシチニブの最終濃度は、７μＭ（阻害剤なし）と比較して、阻害剤の存在下では１μＭであった。
【０１９０】
アッセイ３：ラット上部腸内容物および下部腸内容物から調製したホモジネートにおける代謝安定性
【０１９１】
新たに屠殺したラットから単離した種々のＧＩセグメントから調製した腸管腔内容物において、トファシチニブへの化合物１の変換を評価した。十二指腸、空腸、回腸および結腸由来の内容物の各セグメントをダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）溶液で１：１０希釈した。化合物１の１０ｍＭ  ＤＭＳＯストックをＤＰＢＳで希釈して、１０μＭの最終基質濃度を得た。インキュベーションを３７℃の水浴中で行い、０分、５分、１０分、２０分、４０分および６０分の時点を採取した。総インキュベーション容量は４００μＬであり、各時点で４０μＬアリコートを採取し、１６０μＬの９７％ＡＣＮ＋３％ギ酸＋内部標準で希釈した。サンプルを２２００ｒｃｆで１０分間遠心分離し、５０μＬの上清を１５０μＬの水＋１％ギ酸で希釈した。化合物１およびトファシチニブについて、ＡＰＩ４０００質量解析計によってサンプルを解析した。化合物１の消失について決定した半減期は、以下に要約されている。
【表２】
2020196742.tif 000032
【０１９２】
アッセイ４：ラットにおける化合物１の経口薬物動態
【０１９３】
この研究の目的は、同時経口投与後の化合物１およびトファシチニブの胃腸粘膜および血漿薬物動態を比較することであった。５％ＤＭＳＯ＋１％ヒドロキシプロピルメチルセルロース水溶液として製剤化した３ｍｇ／ｋｇの化合物１および１．２ｍｇの用量正規化トリジュウテリウム標識トファシチニブ（Ｄ３−トファシチニブ）を雄性Ｓｐｒａｇｕｅ
Ｄａｗｌｅｙラット（ｎ＝３／時点）に経口胃管栄養法によって投与した。各時点（０．５時間、１時間、３時間、６時間、８時間および２４時間）で、心臓穿刺によって血漿サンプルを採取し、以下の組織を収集した：胃、上部消化管（約３等分に切片化［Ｕ−１、Ｕ−２、Ｕ−３］）、盲腸および下部消化管（約半分に切片化［Ｌ−１、Ｌ−２］）。各組織サンプルを水でリンスし、軽く押さえて水気を取り、風袋計量した容器に移し、計量し、酸性水によって組織重量体積比（ｗ／ｖ）で３倍希釈し、６５００ＲＰＭ（３×４５秒間）でホモジナイズし、凍結した。各組織サンプルにおける化合物１から放出されたトファシチニブの濃度およびＤ３−トファシチニブの濃度を以下のように決定した。組織サンプルをボルテックスし、５０μＬアリコートのラット血漿と合わせ、内部標準を含む２００μＬのＡＣＮで抽出し、ＬＣ−ＭＳによって内部標準に対して定量した。血漿では３〜８時間まで、胃および切片Ｕ−１、Ｕ−２およびＵ−３では８時間まで、ならびに盲腸および切片Ｌ−１およびＬ−２では３〜２４時間まで、化合物１から放出されたトファシチニブ（ｔｏｆａｃｔｉｎｉｂ）の濃度は測定可能であった。血漿では０．５〜８時間まで、胃および切片Ｕ−１、Ｕ−２およびＵ−３では８時間まで、ならびに盲腸および切片Ｌ−１およびＬ−２では３〜２４時間まで、Ｄ３−トファシチニブの濃度は測定可能であった。得られた標準薬物動態パラメータＣｍａｘ（最大濃度）およびＡＵＣ（０−ｔ）（濃度対時間の曲線下面積、最後の測定時点まで積分）は、表３に報告されている。
【表３】
2020196742.tif 000033
【０１９４】
アッセイ５：カニクイザルにおける化合物１の経口薬物動態
【０１９５】
この研究の目的は、同時経口投与後の化合物１およびトファシチニブの結腸および血漿薬物動態を比較することであった。９８．５％ｐＨ６のクエン酸緩衝液＋１％ヒドロキシプロピルメチルセルロース＋０．５％Ｔｗｅｅｎ２０の溶液として製剤化した３ｍｇ／ｋｇの化合物１および２．１ｍｇ／ｋｇのトリジュウテリウム標識トファシチニブ（Ｄ３−トファシチニブ）を雄性カニクイザル（ｎ＝１／時点）に経口胃管栄養法によって投与し
た。各時点（０．５時間、１時間、３時間、６時間、９時間および２４時間）で、大腿静脈から血漿サンプルを採取し、以下の組織を収集した：胃、上部消化管（約３等分に切片化［Ｕ−１、Ｕ−２、Ｕ−３］）、盲腸、近位結腸、遠位結腸および直腸。各組織サンプルを水でリンスし、軽く押さえて水気を取り、風袋計量した容器に移し、計量し、急速冷凍し、粉砕し、−７０℃で保存した。約２ｇのアリコートを、コントロールラット血漿水溶液によって組織重量体積比（ｗ／ｖ）で３倍希釈し、ホモジナイズし、−７０℃で保存した。各組織サンプルにおける化合物１から放出されたトファシチニブの濃度およびＤ３−トファシチニブの濃度を以下のように決定した。サンプルをボルテックスし、５０μＬアリコートの血漿または調製組織サンプルを、内部標準を含む２００μＬのＡＣＮで抽出し、ＬＣ−ＭＳによって内部標準に対して定量した。血漿およびすべての組織サンプルにおいて０．５〜２４時間まで、化合物１から放出されたトファシチニブの濃度は測定可能であった。血漿および胃では０．５〜９時間まで、ならびにすべての他の組織切片では０．５〜２４時間まで、Ｄ３−トファシチニブの濃度は測定可能であった。得られた標準薬物動態パラメータＣｍａｘ（最大濃度）およびＡＵＣ（０−ｔ）（濃度対時間の曲線下面積、最後の測定時点まで積分）は、表４に報告されている。
【表４】
2020196742.tif 000034
【０１９６】
アッセイ６：オキサゾロン誘発大腸炎のマウスモデル
【０１９７】
オキサゾロン誘発大腸炎は、ヒト潰瘍性大腸炎との組織学的類似点を有する実験モデルである（Ｈｅｌｌｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１７，６２９−６３８）。アッセイでは、ＢｉｏＮｅｅｄｓ（Ｉｎｄｉａ）の成体ＢＡＬＢ／Ｃマウス（２５〜２８ｇ、９〜１２週齢）を使用した。１日目に、イソフルランで動物を軽麻酔し、肩部間の毛を慎重に除去してから、皮膚感作のためにオキサゾロン（６ｍｇ／マウス、１００μＬ、４：１アセトン：オリーブ油製剤）またはビヒクル溶液を徐々に適用した。皮膚感作の６日後、マウスを一晩絶食させ、ケタミンおよびキシラジンの腹腔内投与で麻酔し、オキサゾロン溶液を充填した１ｍＬシリンジをマウスの結腸に慎重に約３．８ｃｍ挿入した。動物を頭を下にした姿勢に維持し、オキサゾロン（５０％エタノール中０．５ｍｇ／５０μＬ／マウス）または５０％エタノール／生理食塩水を１分間かけて極めて徐々に直腸注入した。マウスを垂直（頭を下）にさらに１分間維持して、全オキサゾロン溶液が結腸内部に確実に残るようにした。オキサゾロンの直腸内（ＩＲ）チャレンジ前に、薬物処置（Ｐ
Ｏ、ＢＩＤまたはＴＩＤ）またはビヒクルを夕方に開始した。オキサゾロンの直腸内チャレンジ後１日目（Ｄａｙ１）および２日目（Ｄａｙ２）の両方に、処置を把握していない実験者が、各マウスについて、以下のサブスコアにしたがって疾患活動指数（ＤＡＩ）を評価した：便の硬さ（０、正常；２、軟便；４、下痢）、交雑潜血試験（０、非存在；２、血染；４、明白な血液の存在）および体重減少（０、なし；１、１％〜５％；２、６％〜１０％；３、１１％〜１５％；４、１５％超）；ＤＡＩ＝（便の硬さ＋血液の存在＋体重減少スコア）の平均。
【０１９８】
総ＤＡＩスコアに基づく曲線下面積（ＡＵＣ）計算を実施して、実験過程中に疾患進行を追跡した。ＡＵＣ＝［（１日目−０日目）×平均（０日目および１日目のＤＡＩスコア）］＋［（２日目−１日目）×平均（１日目および２日目のＤＡＩスコア）］のように、各実験群のＡＵＣを計算した。スチューデントｔ検定により、ビヒクル／ビヒクルおよびビヒクル／オキサゾロン群のＤＡＩ  ＡＵＣスコアを比較して、オキサゾロン処置後に疾患が誘発されたかを評価した。この後、ダネット事後検定による一元ＡＮＯＶＡにより、ビヒクル／オキサゾロンおよび試験化合物／オキサゾロン群のＤＡＩ  ＡＵＣスコアを比較した。ｐ＜０．０５に設定したαレベルによって、統計的有意性を定義した。
【０１９９】
オキサゾロン誘発急性大腸炎モデルでは、式１の化合物（３、１０、３０および６０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＢＩＤ）は、トファシチニブ（３０および６０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＢＩＤ）によって達成されたものと同様の程度で、オキサゾロン誘発大腸炎の有意な回復をもたらした。オキサゾロンモデルにおける別の実験では、式４の化合物（３、１０および３０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＢＩＤ）は、トファシチニブ（３０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＢＩＤ）によって達成されたものと同様の程度で、オキサゾロン誘発大腸炎の有意な回復をもたらした。
【０２００】
アッセイ７：マウス脾臓ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞における免疫抑制効果
【０２０１】
マウス脾臓細胞の枯渇は、免疫抑制の実験モデルである（Ｋｕｄｌａｃｚら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２００４，４，５１−５７）。化合物１を、オキサゾロン誘発大腸炎モデル（アッセイ６）において使用されたものと同じ処置パラダイムに従ってマウス脾臓細胞モデルにおいて評価した。
【０２０２】
Ｈａｒｌａｎから入手した成体雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（１２〜１４週齢）をこの研究に使用した。化合物１（１、３および１０ｍｇ／ｋｇ，ＢＩＤ）およびトファシチニブ（１０、３０、および６０ｍｇ／ｋｇ，ＢＩＤ）を３日間、ナイーブマウスに経口的に投与した。最後の投与の３０分後または３時間後に脾臓を摘出し、細胞サブタイプ染色（ｃｅｌｌ  ｓｕｂｔｙｐｅ  ｓｔａｉｎｉｎｇ）のために直ちに破砕した。フローサイトメーターにおいて同時に複数のサブタイプの％解析を可能にするために、固定の前に、ＣＤ１９（ＦＩＴＣ；Ｂ細胞）、ＣＤ３ｅ（ＰＥ；汎Ｔ細胞）およびＤＸ５（ＡＰＣ；ＮＫ細胞）に対するフルオロフォア標識抗体を、各動物由来の脾細胞サンプルとインキュベートした。各動物の総脾臓細胞数を、ＳｃｅｐｔｅｒＴＭ２．０手持ち型自動細胞計数器によって計測した。
【０２０３】
リンパ球のサブタイプ集団（例えば、脾臓のＢ、ＴおよびＮＫ細胞）の絶対数を、各動物の各サブタイプのパーセンテージに総脾臓細胞を掛けることによって算出した。１元配置ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｎｅｔｔの事後検定を用いて、ビヒクル群および試験化合物群の脾臓リンパ球数を比較した。αレベルをｐ＜０．０５に設定した。データを、各群に対して、平均値±ＳＥＭとして示した。
【０２０４】
トファシチニブ（１０、３０、および６０ｍｇ／ｋｇ；ＰＯ、ＴＩＤ）は、脾臓ＮＫ細
胞数を用量依存的かつ有意に減少させた。同じ研究において、脾臓ＮＫ細胞数は、１０ｍｇ／ｋｇ（試験された最高用量）に至るまで、ＰＯ（ＢＩＤ）投与の化合物１によって影響されなかった。いずれの化合物を用いた場合も、ＢおよびＴ細胞集団に対して処置の効果は観測されなかった。
【０２０５】
オキサゾロン誘発大腸炎のマウスモデル（アッセイ６）における化合物１の抗大腸炎効果と合わせて、このデータから、実施例１の化合物について、表５で下に報告されるように、機能的治療指数の計算が可能である。
【表５】
2020196742.tif 000035
＊オキサゾロンモデルにおいて、そのビヒクルと比較して同程度の薬理学的効果を示す有効用量
【０２０６】
アッセイ８：ラット結腸糞便ホモジネートにおける安定性
【０２０７】
この研究の目的は、ラット結腸糞便ホモジネートにおける本化合物の安定性（すなわち、ラット結腸糞便におけるβ−グルクロニダーゼの存在下の分解半減期）を決定することであった。
【０２０８】
心臓穿刺放血によってナイーブ雄性ラット（約３００ｇ）を屠殺した後、結腸を結紮し、嫌気性チャンバー（ＡＳ−５８０，Ａｎａｅｒｏｂｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に移した。糞便内容物をチャンバー内に取り出し、１：１０希釈し（１ｇ対９ｍＬのリン酸緩衝液）、次いで、ｈａｎｄｈｅｌｄ  Ｏｍｎｉ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｍａｓｔｅｒを使用してホモジナイズした。糞便ホモジネートを２０００ｇで１０分間遠心分離してバルクを除去し、上清を取り出し、インキュベーションに使用した。
【０２０９】
試験品およびポジティブコントロール（スルファサラジン）を１０ｍＭ  ＤＭＳＯストックとして調製した。各アッセイの最終基質濃度は、１０μＭ（化合物５については３０μＭ）であった。５μＬアリコートの希釈試験化合物ストックを３００μＬのラット糞便上清ホモジネートに加えることによって、反応を開始した。反応開始後０分、１５分、３０分、６０分、９０分および１２０分の時点で、５０μＬアリコートを、３％ギ酸および内部標準分子を含む２００μＬのアセトニトリルに移した。すべてのサンプルを２０００ｇで１０分間遠心分離し、その後、ＬＣ−ＭＳシステムによる解析するために、５０μＬの上清を１５０μＬの水で希釈した。プロドラッグの消失に関するインビトロ半減期を以下のように計算した：（Ｔ１／２＝０．６９３／消失速度定数）。
【表６】
2020196742.tif 000036
【０２１０】
アッセイ９：マウスにおける経口薬物動態
【０２１１】
この研究の目的は、マウスへの経口投与後におけるトファシチニブへの本発明のプロドラッグの血漿および結腸変換を評価することであった。
【０２１２】
単回ＰＯ経口胃管栄養用量（５％ＤＭＳＯおよび１％ＨＰＭＣの１：２０混合物中５ｍｇ／ｋｇ）の試験化合物を雄性Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝２／時点）に投与した。投与後２時間および６時間の時点で、心臓穿刺放血によってマウスを屠殺し、得られた血液サンプルを、ＮａＦを含むＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（登録商標）チューブに入れ、次いで、氷上に置いた。約１２，０００ｒｐｍ、４℃で４分間遠心分離（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ，５８０４Ｒ）することによって、血漿を得た。
【０２１３】
放血させたマウスから結腸を取り出し、結腸糞便内容物を穏やかに取り出した。結腸を生理食塩水でフラッシュし、軽く押さえて水気を取った。次いで、３倍量の滅菌水中、約４℃でＰｒｅｃｅｌｌｙｓ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒを使用して、それらをホモジナイズした。後の生物解析のために、すべてのサンプルを−８０℃で保存した。
【０２１４】
各組織サンプルにおけるプロドラッグから放出されたトファシチニブの濃度を以下のように決定した：血漿および結腸ホモジネートサンプルをボルテックスし、５０μＬアリコートのラット血漿と合わせ、内部標準を含む２００μＬのＡＣＮで抽出し、ＬＣ−ＭＳによって内部標準に対して定量した。血漿および結腸試験化合物および遊離トファシチニブについて、濃度曲線下面積（ＡＵＣ０−６ｈｒ）を計算した。適合性を評価するための重要なパラメータは、トファシチニブ結腸／血漿ＡＵＣ比であった。
【表７】
2020196742.tif 000037
【０２１５】
アッセイ１０：ラットにおける経口薬物動態
【０２１６】
この研究の目的は、ラットへの経口投与後におけるトファシチニブ（ｔｏｆａｃｉｎｉｂ）への本発明のプロドラッグの血漿および結腸変換を評価することであった。
【０２１７】
単回ＰＯ経口胃管栄養用量（５％ＤＭＳＯまたは１％ＨＰＭＣの１：２０混合物中５ｍｇ／ｋｇ）の試験化合物を雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（ｎ＝２／時点）に投与した。投与後０．５時間、１時間、３時間、６時間および２４時間の時点で、心臓穿刺放血によってラットを屠殺し、得られた血液サンプルを、ＮａＦを含むＭｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（登録商標）チューブに入れ、次いで、氷上に置いた。約１２，０００ｒｐｍ、４℃で４分間遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ，５８０４Ｒ）することによって、血漿を得た。
【０２１８】
放血させたラットから結腸を取り出し、結腸内容物を穏やかに取り出した。結腸を生理食塩水でフラッシュし、軽く押さえて水気を取った。次いで、３倍重量の滅菌水中、約４℃でＰｒｅｃｅｌｌｙｓ  ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒを使用して、それらをホモジナイズした。後の生物解析のために、すべてのサンプルを−８０℃で保存した。
【０２１９】
各組織サンプルにおけるプロドラッグから放出されたトファシチニブの濃度を以下のように決定した：血漿および結腸サンプルをボルテックスし、５０μＬアリコートのラット血漿と合わせ、内部標準を含む２００μＬのＡＣＮで抽出し、ＬＣ−ＭＳによって内部標準に対して定量した。血漿および結腸試験化合物および遊離トファシチニブについて、濃度曲線下面積（ＡＵＣ０−６ｈｒ）を計算した。適合性を評価するための重要なパラメータは、トファシチニブ結腸／血漿ＡＵＣ比であった。
【表８】
2020196742.tif 000038
【０２２０】
アッセイ１１：ラット結腸内容物における比較化合物の代謝安定性
【０２２１】
ナイーブ雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットから結腸糞便内容物を採取し、１：１０希釈し（１ｇ対９ｍＬのリン酸緩衝液）、次いで、ｈａｎｄｈｅｌｄ  Ｏｍｎｉ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｍａｓｔｅｒを使用してホモジナイズした。試験化合物（比較化合物Ｃ−１およびＣ−２）および本発明の化合物（化合物１）を１０ｍＭ  ＤＭＳＯストック溶液として調製し、リン酸緩衝液で１０μＭの最終基質濃度に希釈した。５μＬアリコートの希釈試験化合物を３００μＬのラット結腸内容物ホモジネートでスパイクして、３７℃で反応を開始させた。以下の時点（０分、１５分、５０分、８５分および１２０分）で、インキュベーションからアリコート（５０μＬ）を取り出し、３％ギ酸および内部標準分子を含む２００μＬのＡＣＮに加えた。サンプルと同じマトリックスおよび希釈手順を使用して、各代謝産物、トファシチニブ、５−ＡＳＡ（化合物Ｃ−１Ｍ）およびＣＲＡＣ阻害剤（化合物Ｃ−２Ｍ）の標準曲線を作成した。すべてのサンプルを２０００×ｇで１０分間遠心分離し、その後、５０μＬの上清を１５０μＬの水で希釈し、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ  ＬＣ−ＭＳシステムを使用して解析した。ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰｒｉｓｍおよびＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌを使用して、データを集計およびプロットした。
【０２２２】
ラット結腸内容物中、１０μＭの基質濃度でインキュベートした後、比較化合物および本発明の化合物はすべて、インキュベーションで親分子の急速な消失を示した（半減期１
５分間未満）。しかしながら、各プロドラッグの活性代謝産物の測定では、化合物１のみが、測定可能なレベルのその活性代謝産物（トファシチニブ）を生成した。１２０分間のインキュベーション後に、８．８μＭのトファシチニブ濃度が測定された。
【０２２３】
対照的に、化合物Ｃ−１およびＣ−２は、いかなる測定可能な量のそれらの活性代謝産物（それぞれ化合物Ｃ−１ＭおよびＣ−２Ｍ）も生成することができなかった。１２０分間にわたる代謝産物産生の時間経過は、図１に示されている。
【０２２４】
その特定の態様または実施形態を参照して本発明を説明したが、当業者であれば、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱せずに種々の変更を行うことができ、または均等物を代わりに用いることができると理解されよう。加えて、適用可能な特許法および特許規則によって許容される程度に、本明細書で引用されるすべての刊行物、特許および特許出願は、各文献が参照により本明細書に個別に援用されているのと同程度に、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０２２５】
本発明の好ましい実施形態によれば、例えば、以下が提供される。
（項１）
式（Ｉ）の化合物：
【化２９】
2020196742.tif 000039
［式中、
ｎは、０、１または２であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシおよびトリフルオロメチル（ｔｒｉｆｌｕｒｏｍｅｔｈｙｌ）から選択され；
各Ｒ２は、存在する場合には、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシルおよびトリフルオロメチルから独立して選択され；
Ｒ３は、水素、メチルまたはエチルであり；
Ｒ４は、水素、メチルまたはエチルである］またはその薬学的に許容され得る塩。
（項２）
Ｒ１が水素である、上記項１に記載の化合物。
（項３）
Ｒ１がニトロである、上記項１に記載の化合物。
（項４）
Ｒ１がアミノである、上記項１に記載の化合物。
（項５）
ｎが０である、上記項１に記載の化合物。
（項６）
ｎが１である、上記項１に記載の化合物。
（項７）
式（ＩＩ）の化合物：
【化３０】
2020196742.tif 000040
［式中、
Ｒ１は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、ニトロ、ハロ、シアノ、ヒドロキシおよびトリフルオロメチルから選択される］またはその薬学的に許容され得る塩。
（項８）
Ｒ１が、水素、メチル、メトキシ、アミノ、ニトロおよびクロロから選択される、上記項７に記載の化合物。
（項９）
Ｒ１が水素である、上記項７に記載の化合物。
（項１０）
Ｒ１がアミノである、上記項７に記載の化合物。
（項１１）
式１の化合物
【化３１】
2020196742.tif 000041
またはその薬学的に許容され得る塩。
（項１２）
前記化合物が（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（（（（２−（４−（（（３Ｒ，４Ｒ）−１−（２−シアノアセチル）−４−メチルピペリジン−３−イル）（メチル）アミノ）−Ｎ−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバモイル）−オキシ）メチル）−２−ニトロフェノキシ）−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−カルボン酸である、上記項１１に記載の化合物。
（項１３）
β−グルクロニダーゼ酵素と接触すると、式２の化合物：
【化３２】
2020196742.tif 000042
またはその塩が生成される、上記項１１に記載の化合物。
（項１４）
薬学的に許容され得るキャリアと、上記項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物とを含む、薬学的組成物。
（項１５）
上記項１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって、式（Ｉ−Ａ）の化合物：
【化３３】
2020196742.tif 000043
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびｎは、上記項１で定義されるとおりであり；各ＰＧａは独立して、ヒドロキシル保護基であり；ＰＧｂは、カルボキシル保護基である］またはその塩を脱保護して、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する工程を含む、プロセス。
（項１６）
Ｒ１がニトロであり；Ｒ３およびＲ４がメチルであり；各ＰＧａがアセチルであり；ＰＧｂがメチルであり；ｎが０である、上記項１５に記載のプロセス。
（項１７）
上記項１１に記載の化合物を調製するためのプロセスであって、
（ａ）式１２’の化合物：
【化３４】
2020196742.tif 000044
［式中、各ＰＧａは独立して、ヒドロキシル保護基である］またはその塩を式１３の化合物：
【化３５】
2020196742.tif 000045
と反応させて、式１４’の化合物：
【化３６】
2020196742.tif 000046
を提供する工程
および
（ｂ）式１４’の化合物を脱保護して、式１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する工程
を含む、プロセス。
（項１８）
式１３の化合物：
【化３７】
2020196742.tif 000047
またはその塩。
（項１９）
哺乳動物における胃腸炎症性疾患の処置において使用するための、上記項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物。
（項２０）
前記胃腸炎症性疾患が潰瘍性大腸炎である、上記項１９に記載の化合物。
（項２１）
前記胃腸炎症性疾患がクローン病である、上記項１９に記載の化合物。
（項２２）
前記胃腸炎症性疾患が、免疫チェックポイント阻害剤療法に関連する大腸炎である、上記項１９に記載の化合物。
（項２３）
哺乳動物における胃腸炎症性疾患の処置のための医薬を製造するための、上記項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
（項２４）
前記胃腸炎症性疾患が潰瘍性大腸炎である、上記項２３に記載の使用。
（項２５）
前記胃腸炎症性疾患がクローン病である、上記項２３に記載の使用。
（項２６）
前記胃腸炎症性疾患が、免疫チェックポイント阻害剤療法に関連する大腸炎である、上記項２３に記載の使用。
（項２７）
哺乳動物における胃腸炎症性疾患を処置する方法であって、薬学的に許容され得るキャリアと、上記項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物とを含む薬学的組成物を前記哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
（項２８）
前記胃腸炎症性疾患が潰瘍性大腸炎である、上記項２７に記載の方法。
（項２９）
前記胃腸炎症性疾患がクローン病である、上記項２７に記載の方法。
（項３０）
前記胃腸炎症性疾患が、免疫チェックポイント阻害剤療法に関連する大腸炎である、上記項２７に記載の方法。
（項３１）
トファシチニブを哺乳動物の結腸に送達する方法であって、トファシチニブのグルクロニド含有プロドラッグを前記哺乳動物に経口投与する工程を含み、前記結腸においてβ−グルクロニダーゼによって前記プロドラッグが切断されて、トファシチニブが放出される、方法。
（項３２）
トファシチニブの前記グルクロニド含有プロドラッグが、上記項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物である、上記項３１に記載の方法。
【図１】
2020196742.tif 000049
【外国語明細書】
2020196742000001.pdf