(57)【要約】【課題】ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するための方法を提供する。【解決手段】ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するための方法には、以下のステップが含まれる。ガンを有する対象から免疫療法を受ける前または後に末梢血サンプルを得る。ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出する。ガンを有する対象が免疫療法から利益を得るかどうかを指し示すために免疫細胞の数および第一のカットオフ値/または第二のカットオフ値を比較する。第一のカットオフ値/または第二のカットオフ値は次の：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスクの間の相関関係の統計学的解析を実行し、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得る、ステップによって定める。【選択図】図２Ａ
2020187127.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するにあたり、以下の：
ガンを有する対象から免疫療法を受ける前に末梢血サンプルを得ること；
ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出すること；および
ガンを有する対象が免疫療法から利益を得るかどうかを指し示すために免疫細胞の数を第一のカットオフ値と比較すること
を含み、
第一のカットオフ値は以下のステップ：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスクの間の相関関係の統計学的解析を実行すること、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得ることによって定める、方法。
【請求項２】
免疫療法には、抗PD-1/PD-L1免疫療法が含まれる、請求項1の方法。
【請求項３】
免疫細胞は、次の：PD1、CD8、CD4、IFN-γ、TIM3、LAG3、CD25、TGF-βの少なくとも一のマーカーを発現する、請求項1の方法。
【請求項４】
ガンは肝細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる、請求項1の方法。
【請求項５】
ガンは腎細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞、PD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞からなる群より選ばれる、請求項1の方法。
【請求項６】
第一のカットオフ値は、ハザード比のパターンに従って、対象をグループAおよびグループBに分け、そこでグループAに分類される対象は良好な予後を有し、およびグループBに分類される対象はより悪い予後を有する、請求項1の方法。
【請求項７】
ハザード比は、ガンを有する対象のグループにおける生存時間対ガンを有する対象のグループにおける生存確率のコックス回帰モデルによって測る、請求項6の方法。
【請求項８】
ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するにあたり、以下の：
免疫療法を受ける対象から一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間に末梢血サンプルを得ること；
ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出すること；および
ガンを有する対象での免疫療法の処置有効性を得るために免疫細胞の数を第二のカットオフ値と比較すること
を含み、
第二のカットオフ値は以下のステップ：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスクの間の相関関係の統計学的解析を実行すること、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得ることによって定める、方法。
【請求項９】
免疫療法には、抗PD-1/PD-L1免疫療法が含まれる、請求項8の方法。
【請求項１０】
免疫細胞は、次の：PD1、CD8、CD4、IFN-γ、TIM3、LAG3、CD25、TGF-βの少なくとも一のマーカーを発現する、請求項8の方法。
【請求項１１】
ガンは肝細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3-細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる、請求項8の方法。
【請求項１２】
ガンは腎細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞からなる群より選ばれる、請求項8の方法。
【請求項１３】
ガンは尿路上皮ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる、請求項8の方法。
【請求項１４】
第二のカットオフ値は、ハザード比のパターンに従って、対象をグループAおよびグループBに分けた、そこでグループAに分類される対象は良好な予後を有し、およびグループBに分類される対象はより悪い予後を有する、請求項8の方法。
【請求項１５】
ハザード比は、ガンを有する対象のグループにおける生存時間対ガンを有する対象のグループにおける生存確率のコックス回帰モデルによって測る、請求項14の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
本発明は、ガンを有する対象のガン療法応答を予測するための方法、およびより一層詳細には、ガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法応答を予測するための方法に関する。
関連技術の説明
【０００２】
目下、免疫チェックポイントブロッケード（例えば、PD-1/PD-L1インヒビターなどのようなもの、もっともそれらに制限されない）を用いる免疫療法は、ガン患者の免疫系を活性化し、および次いで免疫反応を通して腫瘍細胞をキル（不活化などとも言う）し得る。したがって、化学療法とくらべて、免疫チェックポイントインヒビターに応答するガン患者はより一層長い生存時間およびより一層良好な生活の質を有し得る。しかし、免疫チェックポイントインヒビターを用いる免疫療法はまだ、以下の不利益を有する：処置は高価であり、処置後応答は緩徐であり、および免疫チェックポイントブロッケードはすべてのガン患者について効果的ではない。目下のところ、ガン患者にて免疫チェックポイントブロッケードの処置有効性を施す前に予測することや、ガン患者にて免疫チェックポイントブロッケードの処置有効性を施与後に評価することのための方法はまだ存在しない。
概略
技術上の課題
【０００３】
本発明はガンを有する対象の免疫療法応答を予測するための方法を提供し、それは第一の処置前の処置有効性を予測し得、およびガンを有する対象が免疫療法を受けるか否かを決定するのに効果的に役立ち得る。
【０００４】
本発明は、ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するための別の方法を提供し、それは前処置後および次の処置前の処置有効性を定め得、およびガンを有する対象が免疫療法を継続的に受けるか否かを決定するのに効果的に役立ち得る。
課題に対する解法
【０００５】
本発明のガンを有する対象の免疫療法応答を予測するための方法には、以下のステップが含まれる。ガンを有する対象から末梢血サンプルを免疫療法を受ける前に得る。ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出する。ガンを有する対象が免疫療法から利益を得るかどうかを指し示すために免疫細胞の数を第一のカットオフ値と比較する。第一のカットオフ値は以下の：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスクの間の相関関係の統計学的解析を実行し、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得る、ステップによって定める。
【０００６】
本発明の実施態様において、免疫療法には、免疫チェックポイントブロッケードまたは細胞免疫療法が含まれる。
【０００７】
本発明のある実施態様では、免疫細胞は、次の：PD1、CD8、CD4、IFN-γ、TIM3、LAG3、CD25、TGF-βの少なくとも一のマーカーを発現する。
【０００８】
本発明のある実施態様では、ガンは肝細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる。
【０００９】
本発明のある実施態様では、ガンは腎細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞、PD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞からなる群より選ばれる。
【００１０】
本発明のある実施態様では、第一のカットオフ値は、ハザード比のパターンに従って、対象をグループAおよびグループBに分け、そこでグループAに分類される対象は良好な予後を有し、およびグループBに分類される対象はより悪い予後を有する。
【００１１】
本発明のある実施態様では、ハザード比は、ガンを有する対象のグループにおける生存時間対ガンを有する対象のグループにおける生存確率のコックス回帰モデルによって測る。
【００１２】
ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するための別の方法には、以下のステップが含まれる。免疫療法を受ける対象から一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間に末梢血サンプルを得る。ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出する。ガンを有する対象での免疫療法の処置有効性を得るために免疫細胞の数を第二のカットオフ値と比較する。第二のカットオフ値は以下の：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスクの間の相関関係の統計学的解析を実行し、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得る、ステップによって定める。
【００１３】
本発明のある実施態様では、免疫療法には、抗PD-1/PD-L1免疫療法が含まれる。
【００１４】
本発明のある実施態様では、ガンは肝細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3-細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる。
【００１５】
本発明の実施態様では、ガンは腎細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞からなる群より選ばれる。
【００１６】
本発明のある実施態様では、ガンは尿路上皮ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる。
【００１７】
本発明のある実施態様では、第二のカットオフ値は、ハザード比のパターンに従って、対象をグループAおよびグループBに分けた、そこでグループAに分類される対象は良好な予後を有し、およびグループBに分類される対象はより悪い予後を有する。
発明の効果
【００１８】
上記に基づき、本発明の実施態様のガンを有する対象の免疫療法応答を予測するための簡便な、および正確な方法は、ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出すること、および免疫細胞の数を第一のカットオフ値/第二のカットオフ値と比較することによって提供され、それはガンを有する対象が第一の処置前に免疫療法から利益を得るかどうかを予測し得、および処置後間もなく、および次の処置前にガンを有する対象での免疫療法の処置有効性を取得し得る。さらに、慣習的な技術で、分析のためにガンを有する対象の腫瘍細胞を採取する必要があり、および従ってガンを有する対象により一層大きな苦痛を受けさせるものと比べ、本発明の実施態様から提供される方法は、特定の免疫細胞を採血によって収集し、および免疫細胞の数を計数することが必要とされるだけであり、それはテスト時間を大いに短縮させ得、およびガンを有する対象についてより一層都合がよい。したがって、本発明の実施態様から提供される方法は、免疫療法を受ける対象についてコストおよび時間の削減の利益を有する。
【００１９】
前述の事柄をより一層理解し易くするために、図面を伴ったいくつかの実施態様を以下のように詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
添付図面は、開示のさらなる理解を提供するために含まれ、およびこの明細の一部において組み込み、およびそれを構成する。図面は、開示の模範的な実施態様を例示し、および説明と一緒に、開示の本質を説明するのに役立つ。
【００２１】
【図１Ａ】図1Aないし図1Gは、肝細胞ガンを有する対象の第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前の免疫細胞の数、および無増悪生存（PFS）のハザード比の散布図である。
【図１Ｂ】図1Aの説明と同様である。
【図１Ｃ】図1Aの説明と同様である。
【図１Ｄ】図1Aの説明と同様である。
【図１Ｅ】図1Aの説明と同様である。
【図１Ｆ】図1Aの説明と同様である。
【図１Ｇ】図1Aの説明と同様である。
【図２Ａ】図2Aないし図2Gは、肝細胞ガンを有する対象の第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の無増悪生存および生存確率のCox回帰モデルである。
【図２Ｂ】図2Aの説明と同様である。
【図２Ｃ】図2Aの説明と同様である。
【図２Ｄ】図2Aの説明と同様である。
【図２Ｅ】図2Aの説明と同様である。
【図２Ｆ】図2Aの説明と同様である。
【図２Ｇ】図2Aの説明と同様である。
【図３Ａ】図3Aないし図3Cは、腎細胞ガンを有する対象の第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前の免疫細胞の数、および無増悪生存のハザード比の散布図である。
【図３Ｂ】図3Aの説明と同様である。
【図３Ｃ】図3Aの説明と同様である。
【図４Ａ】図4Aないし図4Cは、腎細胞ガンを有する対象の第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の無増悪生存および生存確率のCox回帰モデルである。
【図４Ｂ】図4Aの説明と同様である。
【図４Ｃ】図4Aの説明と同様である。
【図５Ａ】図5Aないし図5Iは、肝細胞ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の一ラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の免疫細胞の数、および無増悪生存のハザード比の散布図である。
【図５Ｂ】図5Aの説明と同様である。
【図５Ｃ】図5Aの説明と同様である。
【図５Ｄ】図5Aの説明と同様である。
【図５Ｅ】図5Aの説明と同様である。
【図５Ｆ】図5Aの説明と同様である。
【図５Ｇ】図5Aの説明と同様である。
【図５Ｈ】図5Aの説明と同様である。
【図５Ｉ】図5Aの説明と同様である。
【図６Ａ】図6Aないし図6Iは、肝細胞ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の無増悪生存および生存確率のCox回帰モデルである。
【図６Ｂ】図6Aの説明と同様である。
【図６Ｃ】図6Aの説明と同様である。
【図６Ｄ】図6Aの説明と同様である。
【図６Ｅ】図6Aの説明と同様である。
【図６Ｆ】図6Aの説明と同様である。
【図６Ｇ】図6Aの説明と同様である。
【図６Ｈ】図6Aの説明と同様である。
【図６Ｉ】図6Aの説明と同様である。
【図７Ａ】図7A-図7Fは、腎細胞ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の一ラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の免疫細胞の数、および無増悪生存のハザード比の散布図である。
【図７Ｂ】図7Aの説明と同様である。
【図７Ｃ】図7Aの説明と同様である。
【図７Ｄ】図7Aの説明と同様である。
【図７Ｅ】図7Aの説明と同様である。
【図７Ｆ】図7Aの説明と同様である。
【図８Ａ】図8Aないし図8Fは、腎細胞ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の無増悪生存および生存確率のCox回帰モデルである。
【図８Ｂ】図8Aの説明と同様である。
【図８Ｃ】図8Aの説明と同様である。
【図８Ｄ】図8Aの説明と同様である。
【図８Ｅ】図8Aの説明と同様である。
【図８Ｆ】図8Aの説明と同様である。
【図９Ａ】図9Aないし図9Eは、尿路上皮ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の免疫細胞の数、および無増悪生存のハザード比の散布図である。
【図９Ｂ】図9Aの説明と同様である。
【図９Ｃ】図9Aの説明と同様である。
【図９Ｄ】図9Aの説明と同様である。
【図９Ｅ】図9Aの説明と同様である。
【図１０Ａ】図10Aないし図10Eは、尿路上皮ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の無増悪生存および生存確率のCox回帰モデルである。
【図１０Ｂ】図10Aの説明と同様である。
【図１０Ｃ】図10Aの説明と同様である。
【図１０Ｄ】図10Aの説明と同様である。
【図１０Ｅ】図10Aの説明と同様である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本実施態様の説明
［定義］
【００２３】
「免疫療法」という用語は、ガン（cancer）ペイシェント（人間でいうガン患者）の免疫系を活性化することによってガンを処置する方法、例えば：免疫チェックポイントブロッケード（immune checkpoint blockade）および細胞免疫療法などのようなものに言及する。本発明の実施態様によれば、免疫療法は、ガンペイシェントの免疫系を活性化するために、PD-1/PD-L1インヒビターをガンペイシェントに施すことに言及し得、それによってガン細胞をキルするという目的が達成される。PD-1/PD-L1インヒビターは免疫チェックポイントブロッケードに属し、およびPD-1/PD-L1インヒビターには、PD-1/PD-L1抗体が含まれ得るが、それらに制限されない。
【００２４】
「予後」という用語は、疾病の、特にガンの将来の進行（development、発達などとも言う）の経過および結果の予測に言及する。本発明の実施形態によれば、予後はガンペイシェントの無増悪生存期間（progression free survival period）に言及し得る。無増悪生存期間がより一層長い場合、それは、ガンペイシェントが免疫療法についてより一層良好な予後および免疫療法に対してより一層良好な応答を有することを意味する。
【００２５】
例えば、本実施形態では、評価したガンペイシェントの免疫細胞の数を第一のカットオフ値と比較して後、評価したガンペイシェントが良好な予後を有するグループAとして分類される場合、それは、評価したガンペイシェントが免疫療法に対してより一層良好な反応を有し、および免疫療法に適することを意味する。逆に、評価したガンペイシェントが不十分な予後しか有さないグループBとして分類される場合、それは評価したガンペイシェントが免疫療法に対するより悪い反応を有し、および免疫療法について適してないことを意味する。加えて、本実施形態では、評価したガンペイシェントの免疫細胞の数を第二のカットオフ値と比較して後、評価したガンペイシェントが良好な予後を有するグループAとして分類される場合、それは、評価したガンペイシェントが免疫療法に対してより一層良好な反応を有することを意味し、処置の有効性を期待することができ、および免疫療法は続けることができる。逆に、評価したガンペイシェントが不十分な予後しか有さないグループBとして分類される場合、それは、評価したガンペイシェントが免疫療法に対してより悪い反応を有し、および免疫療法を続けるように勧められないことを意味する。
【００２６】
［例1］免疫療法を受けたことがないガンを有する対象の免疫療法反応を予測するための方法
【００２７】
本実施形態では、ガンには、肝細胞ガン（hepatocellular carcinoma）および腎細胞ガン（renal cell carcinoma、腎腺ガンなどとも言う）が含まれ得るが、それらに制限されない。免疫療法には、免疫チェックポイントブロッケードまたは細胞免疫療法が含まれ得るが、それらに制限されない。免疫チェックポイントブロッケードには、抗PD-1/PD-L1免疫療法が含まれ得るが、それらに制限されない。以下は抗PD-1/PD-L1免疫療法を例として用いる。
【００２８】
本実施形態におけるガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法反応を予測するための方法には、以下のステップが含まれ得る。まず、ステップ1を進め：ガンを有する対象から抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前に末梢血サンプルを取得する。本実施形態では、末梢血サンプル（例えば、8mLであるが、それらに制限されない）は、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けたことがないガンを有する対象の前肘部静脈（antecubital veins）から取得する。いくらかの実施形態において、末梢血サンプルはまた、ガンを有する対象の他の末梢部における静脈からも取得し得る。
【００２９】
次に、ステップ2を進め：ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出する。本実施形態では、末梢血サンプルに対して前処理手順（pretreatment procedure）が、免疫細胞の数を検出する前に実行されるべきである。前処理手順には、例えば、以下のステップが含まれるが、それらに制限されず：末梢血サンプルの8mlをPE蛍光色素共役抗PD1抗体（PE fluorescent dye conjugated anti-PD1 antibody）により室温にて20分間染色する。染色した末梢血サンプルは四つの50mlの円錐形遠心管において血液サンプルの四つの2mlに分ける。各円錐形遠心管中にISOTON II Diluent（アイソトンIIダイリューエント）（Beckman Coulter（ベックマン・クールター））の24mlを加えた後、室温にてスイングバケットローター（swinging bucket rotor）により10分間800×gにて遠心分離を実行する。遠心分離後、各円錐形遠心管からの24mlの上清を除去し、および四つの2mlの血液サンプルをそれぞれ8mlの分析サンプル中に混合する。それによって、末梢血サンプルの前処理手順は完了する。
【００３０】
次に、8mlの分析サンプルから取り出した4mlの分析サンプルをまず細胞選別（セルソーティングなどとも言う）にかける。本実施形態では、細胞選別には、例えば、以下のステップが含まれるが、それらに制限されず：SelectChip Dual（セレクトチップ・デュアル）を有するMiSelect R System（ミセレクトRシステム）（MiCareo Taiwan Co., Ltd（ミカリオ台湾社））をPD1 Labeled cells（PD1ラベルド・セル）（PD1+細胞）を収集するために細胞選別について使用する。次いで、固定試薬および抗体混合試薬（antibody mixed reagent）A（例えば、CD8-FITC抗体、IFN-γ-PerCP抗体、TIM3-APC抗体、LAG-3抗体が含まれるが、それらに制限されない）は、PD1およびCD8マーカーを有する細胞（PD1+CD8+細胞）およびPD1、CD8マーカーおよび他のマーカー（例えば、IFN-γ、TIM3、LAG3などのようなもの）を有する細胞をさらに識別するために、収集したPD1+細胞中に自動的に追加され、および次いで細胞の数を算出する。本実施形態では、PE、FITC、PerCpおよびAPCは異なる蛍光色を放出することができる蛍光色素である。
【００３１】
加えて、分析サンプルの8mlの残りの4mlをPD1+細胞を収集するために細胞選別にかけて後、固定試薬および抗体混合性試薬（antibody mixing reagent）B（例えば、CD4-PerCP抗体、TGF-β-APC Antibody（アンチボディ）、CD25-FITC抗体、LAG-3抗体が含まれるが、それらに制限されない）は、PD1およびCD4マーカーを有する細胞（PD1+CD4+細胞）およびPD1、CD4およびその他のマーカー（例えば、LAG3、CD25、TGF-βなどのようなもの）を有する細胞をさらに識別するために、収集したPD1+細胞中に自動的に追加され、および次いで細胞の数が算出される。
【００３２】
したがって、本実施形態では、免疫細胞は、例えば、以下のマーカー：PD1、CD8、CD4、IFN-γ、TIM3、LAG3、CD25、TGF-βの少なくとも一を発現し得る。例えば、免疫細胞には、PD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞、PD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞、PD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞が含まれ得るが、それらに制限されない。
【００３３】
次いで、ステップ3を進め：ガンを有する対象が抗PD-1/PD-L1免疫療法から利益を得るかどうかを指し示すために、免疫細胞の数を第一のカットオフ値と比較する。本実施形態では、第一のカットオフ値は、例えば、以下のステップによって決定され：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスク（expected risk、予測リスクなどとも言う）の間の相関関係の統計学的解析を実行し、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得るが、それらに制限されない。重要な値は第一のカットオフ値として考え得る。具体的には、統計学上重要な値（第一のカットオフ値）は、例えば、統計学的p値が0.1より低いか、またはそれに等しい（0.1以下とも言う）であるときの免疫細胞の対応する数であり得る。したがって、本実施形態では、ガンを有する対象における免疫細胞の数およびガンを有する対象における疾患進行の期待リスクの間の相関関係を規定するために、対応する免疫細胞の数（第一のカットオフ値）を使用し得る。
【００３４】
概して、疾患進行の期待リスクは、無増悪生存（PFS）のハザード比（危険率などとも言う）であり得るが、それらに制限されない。したがって、本実施形態では、抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前のガンを有する対象のグループの免疫細胞の数および無増悪生存のリスク比の散布図（ハザード比のパターン）は、相関関係の統計学的解析を実行して第一のカットオフ値を取得するために使用し得る。
【００３５】
次に、抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前のガンを有する対象のグループの免疫細胞の数を第一のカットオフ値と比較して後、ガンを有する対象のグループをグループAおよびグループBに分け得る。それらの間で、グループAとして分類されるガンを有する対象は良好な予後を有し、即ち、グループAにおいてガンを有する対象は抗PD-1/PD-L1免疫療法に対してより一層良好な反応を有し；グループBとして分類されるガンを有する対象はより悪い予後を有し、即ち、グループBにおいてガンを有する対象はPD-1/PD-L1免疫療法に対してより悪い反応を有する。
【００３６】
免疫細胞の数および第一のカットオフ値の間の関係はガンのタイプに関連する。例えば、本実施形態では、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けたことがない肝細胞ガン/腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が第一のカットオフ値よりも高いか、または等しい（第一のカットオフ値以上とも言う）とき、肝細胞ガン/腎細胞ガンを有する対象は良好な予後を有する。しかし、他のタイプのガンを有する対象はまた、他のタイプのガンを有する対象の免疫細胞の数が第一のカットオフ値未満であるとき、良好な予後を有し得る。
【００３７】
本実施形態では、ハザード比は、例えば、ガンを有する対象のグループにおける生存時間対ガンを有する対象のグループにおける生存確率（survival probability）のコックス回帰モデル（Cox regression model）によって測られる。生存時間は、例えば、無増悪生存であり得るが、それらに制限されない。また、コックス回帰モデルでは、生存確率が50%であるとき、より一層良好な予後を有するグループAの無増悪生存はより悪い予後を有するグループBのものよりも著しく高いことがあり得、およびこの著しい差について統計学的p値は0.1以下であり得ることを見出すことができる。
【００３８】
［例2］免疫療法を受けて後のガンを有する対象の免疫療法反応を予測するための方法
【００３９】
本実施形態では、ガンには、肝細胞ガン、腎細胞ガンおよび尿路上皮ガン（urothelial cancer）が含まれ得るが、それらに制限されない。免疫療法には、免疫チェックポイントブロッケードまたは細胞免疫療法が含まれ得るが、それらに制限されない。免疫チェックポイントブロッケードには、抗PD-1/PD-L1免疫療法が含まれ得るが、それらに制限されない。以下は抗PD-1/PD-L1免疫療法を例として用いる。
【００４０】
まず、ステップ1を進め：末梢血サンプルを、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受ける対象から一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間に取得する。本実施形態では、それは、上記例1のステップ1において示すステップに従って実行することができ、および本実施形態において繰り返さない。本実施形態（例2）および例1の間の主な違いは、本実施形態において得られる末梢血サンプルが抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けている対象（subject receiving the anti-PD-1/PD-L1 immunotherapy）からの末梢血サンプルであることである。加えて、抗PD-1/PD-L1免疫療法は、通常、二または三週間ごとにガンを有する対象に施されるので、例えば、本実施形態では、一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間に二または三週間近くあり、ガンを有する対象での抗PD-1/PD-L1免疫療法の処置有効性を定めるためにタイミングポイントとして使用し得るが、それらに制限されない。
【００４１】
次に、ステップ2を進め：ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出する。本実施形態では、それは上記例1のステップ2において示すステップに従って実行することができ、および本実施形態においては繰り返さない。本実施形態（例2）および例1の間の主な違いは、本実施形態において、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けている対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出することである。
【００４２】
次いで、ステップ3を進め：ガンを有する対象での抗PD-1/PD-L1免疫療法の処置有効性を得るために、免疫細胞の数を第二のカットオフ値と比較する。本実施形態では、第二のカットオフ値は上記例1のステップ3において示すステップに従って測り得、および本実施形態では繰り返さない。
【００４３】
具体的には、本実施形態では、ガンを有する対象の一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の免疫細胞の数を第二のカットオフ値と比較して後、ガンを有する対象をグループA'およびグループB'に分ける。それらの間で、グループA'として分類されるガンを有する対象は良好な予後を有し、即ち、抗PD-1/PD-L1免疫療法は、グループA'においてガンを有する対象でのより一層良好な処置有効性を示し；およびグループB'として分類されるガンを有する対象はより悪い予後を有し、即ち、抗PD-1/PD-L1免疫療法は、グループB'においてガンを有する対象でのより悪い処置有効性を示す。
【００４４】
免疫細胞の数および第二のカットオフ値の間の関係はガンのタイプに関連する。例えば、本発明の一実施形態において、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた肝細胞ガンを有する対象は、免疫細胞の数が第二のカットオフ値未満であるとき良好な予後を有し得る。本発明の別の実施形態では、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた腎細胞ガンを有する対象および尿路上皮ガンを有する対象は、免疫細胞の数が第二のカットオフ値以上のとき良好な予後を有し得る。
【００４５】
［実験］
【００４６】
実験1：抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けたことがない肝細胞ガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法反応の予測
【００４７】
図1Aないし図1Gは、第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前の肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数および無増悪生存（PFS）のハザード比の散布図である。図2Aないし図2Gは、第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存および生存確率のコックス回帰モデルである。
【００４８】
図1Aおよび図2Aを同時に参照して、PD1+CD8+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は353である。加えて、図2Aの結果によれば、生存確率が50%であるとき、353またはそれよりも多く（単に353以上とも言う）のPD1+CD8+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月よりも長く、および353未満のPD1+CD8+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0227であり、およびハザード比の95%信頼区間（CI）は0.117ないし0.851である。
【００４９】
図1Bおよび2Bを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は350である。加えて、図2Bの結果によれば、生存確率が50%であるとき、350以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月より長く、および350未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0343であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.126ないし0.923である。
【００５０】
図1Cおよび2Cを同時に参照して、PD1+CD8+TIM3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は350である。加えて、図2Cの結果によれば、生存確率が50%であるとき、350以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月よりも長く、および350未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0343であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.126ないし0.923である。
【００５１】
図1Dおよび2Dを同時に参照して、PD1+CD8+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は330である。加えて、図2Dの結果によれば、生存確率が50%であるとき、330以上のPD1+CD8+ LAG3-細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は18か月よりも長く、および330未満のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0429であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.085ないし0.961である。
【００５２】
図1Eおよび2Eを同時に参照して、PD1+CD8+LAG3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は80である。また、図2Eの結果によれば、生存確率が50%であるとき、80以上のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する無増悪生存は12か月よりも長く、および80未満のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0925であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.161ないし1.149である。
【００５３】
図1Fおよび2Fを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は80である。さらに、図2Fの結果によれば、生存確率が50%であるとき、80以上のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月よりも長く、および80未満のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0911であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.136ないし1.159である。
【００５４】
図1Gおよび2Gを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は200である。また、図2Gの結果によれば、生存確率が50%であるとき、200以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は9ないし12か月であり、および200未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0353であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.145ないし0.933である。
【００５５】
上記に基づき、図1Aないし1Gおよび図2Aないし2Gの結果によれば、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けたことがない肝細胞ガンを有する対象について、第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前に肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が第一のカットオフ値以上であるとき、肝細胞ガンを有する対象は抗PD-1/PD-L1免疫療法に対するより一層良好な反応を有し、および良好な予後を有することを予測することができる。逆に、抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前に肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が第一のカットオフ値未満であるとき、肝細胞ガンを有する対象は抗PD-1/PD-L1免疫療法に対してより悪い反応を有し、およびより悪い予後を有することを予測することができる。ここで、上記免疫細胞には、PD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞、およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞が含まれるが、それらに制限されない。
【００５６】
実験2：抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けたことがない腎細胞ガンを有する対象の免疫療法反応の予測
【００５７】
図3Aないし図3Cは、第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前の腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数および無増悪生存のハザード比の散布図である。図4Aないし図4Cは、第一の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存および生存確率のコックス回帰モデルである。
【００５８】
図3Aおよび4Aを同時に参照して、PD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は50である。また、図4Aの結果によれば、生存確率が50%であるとき、50以上のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く、および50未満のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0369であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.064ないし0.917である。
【００５９】
図3Bおよび4Bを同時に参照して、PD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は40である。また、図4Bの結果によれば、生存確率が50%であるとき、40以上のPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞をもつ腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く、および40未満のPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞をもつ腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は、2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0369であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.064ないし0.917である。
【００６０】
図3Cおよび4Cを同時に参照して、PD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞の分析結果、第一のカットオフ値は10である。また、図4Cの結果によれば、生存確率が50%であるとき、10以上のPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞をもつ腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く、および10未満のPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞をもつ腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0534であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.063ないし1.021である。
【００６１】
上記に基づき、図3Aないし3Cおよび図4Aないし4Cの結果によれば、第一の抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けたことがない腎細胞ガンを有する対象について、抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前の腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が第一のカットオフ値以上であるとき、それは腎細胞ガンを有する対象が抗PD-1/PD-L1免疫療法に対してより一層良好な反応を有し、および良好な予後を有することを予測することができる。逆に、抗PD1/PD-L1免疫療法を受ける前の腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が第一のカットオフ値未満であるとき、それは腎細胞ガンを有する対象が抗PD-1/PD-L1免疫療法に対してより悪い反応を有し、およびより悪い予後を有することを予測することができる。ここで、上記免疫細胞には、PD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞、PD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞、およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞が含まれるが、それらに制限されない。
【００６２】
実験3：抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けて後の肝細胞ガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法反応の予測
【００６３】
図5Aないし図5Iは、抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数および無増悪生存のハザード比の散布図である。図6Aないし図6Iは、抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存および生存確率のコックス回帰モデルである。
【００６４】
図5Aおよび6Aを同時に参照して、PD1+CD8+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は353であり、および第二のカットオフ値は353である。また、図6Aの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に353以上のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に353未満のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は14か月より長く；処置前に353以上のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に353以上のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に353未満のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に353未満PD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に353未満のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に353以上のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0480であり、およびハザード比の95%の信頼区間は1.013ないし19.012である。
【００６５】
図5Bおよび6Bを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は350であり、および第二のカットオフ値は350である。また、図6Bの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に350以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に350未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は14か月より長く；処置前に350以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後の350以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に350未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後の350未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に350未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に350以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0480であり、およびハザード比の95%の信頼区間は1.013ないし19.012である。
【００６６】
図5Cおよび6Cを同時に参照して、PD1+CD8+TIM3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は350であり、および第二のカットオフ値は350である。また、図6Ｃの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に350以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に350未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は14か月より長く；処置前に350以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に350以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に350未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に350未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に350未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に350以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0480であり、およびハザード比の95%の信頼区間は1.013ないし19.012である。
【００６７】
図5Dおよび6Dを同時に参照すると、PD1+CD8+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は330であり、および第二のカットオフ値は330である。また、図6Dの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に330以上のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に330未満のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は14か月より長く；処置前に330以上のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に330以上のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に330未満のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に330未満のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に330未満のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に330以上のPD1+CD8+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0602であり、およびハザード比の95%の信頼区間は0.946ないし14.350である。
【００６８】
図5Eおよび6Eを同時に参照して、PD1+CD8+LAG3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は80であり、および第二のカットオフ値は40である。また、図6Eの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に80以上のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月より長く；処置前に80以上のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+LAG3+細胞もつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的なp値は0.0454であり、およびハザード比の95%の信頼区間は1.019ないし6.342である。
【００６９】
図5Fおよび6Fを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は80であり、および第二のカットオフ値は40である。また、図6Eの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に80以上のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月よりも長く；処置前に80以上のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンの無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0930であり、およびハザード比の95%の信頼区間は0.872ないし5.899である。
【００７０】
図5Gおよび6Gを同時に参照して、PD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は80であり、および第二のカットオフ値は40である。また、図6Gの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に80以上のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月より長く；処置前に80以上のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0930であり、およびハザード比の95%の信頼区間は0.872ないし5.899である。
【００７１】
図5Hおよび6Hを同時に参照し、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は80であり、および第二のカットオフ値は40である。また、図6Hの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に80以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は12か月よりも長く；処置前に80以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に80未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0930であり、およびハザード比の95%の信頼区間は0.872ないし5.899である。
【００７２】
図5Iおよび6Iを同時に参照すると、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は200であり、および第二のカットオフ値は320である。また、図6Iの結果に従って、生存確率が50%であるとき、処置前に200以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に320未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は14か月より長く；処置前に200以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に320以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に200未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に320未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に200未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に320以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）肝細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0381であり、およびハザード比の95%信頼区間は1.093ないし23.386である。
【００７３】
上記に基づき、図5Aないし5Iおよび図6Aないし6Iの結果によれば、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた肝細胞ガンを有する対象について、肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上（プレ）であり、および処置後に第二のカットオフ値未満（ポスト）であるとき、肝細胞ガンを有する対象は良好な予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は肝細胞ガンを有する対象に対するより一層良好な処置有効性を示す。しかし、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた肝細胞ガンを有する対象について、肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上（プレ）であり、および処置後に第二のカットオフ値以上（ポスト）であるとき、肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値未満（プレ）であり、および処置後に第二のカットオフ値未満（ポスト）であるとき、または肝細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上（プレ）であり、および処置後に第二のカットオフ値未満（ポスト）であるとき、肝細胞ガンを有する対象はより悪い予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は肝細胞ガンを有する対象でのより悪い処置有効性を示す。ここで、上記免疫細胞には、PD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞、PD1+CD8+TIM3+LAG3-細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞、およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞が含まれるが、それらに制限されない。
【００７４】
実験4：抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けて後腎細胞ガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法反応の予測
【００７５】
図7Aないし図7Fは、一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数および無増悪生存のハザード比の散布図である。図8Aないし図8Fは、抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存および生存確率のコックス回帰モデルである。
【００７６】
図7Aおよび8Aを同時に参照すると、PD1+CD8+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は150であり、および第二のカットオフ値は35である。また、図8Aの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に150以上のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に150未満のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月よりも長く；処置前に150以上のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に150未満のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0201であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.034ないし0.760である。
【００７７】
図7Bおよび8Bを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は150であり、および第二のカットオフ値は35である。また、図8Bの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は5ないし6か月であり；処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0123であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.034ないし0.664である。
【００７８】
図7Cおよび8Cを同時に参照して、PD1+CD8+TIM3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は150であり、および第二のカットオフ値は35である。また、図8Cの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に150以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に150未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に150以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は5ないし6か月であり；処置前に150未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月である。ここで、統計学的p値は0.0187であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.038ないし0.743である。
【００７９】
図7Dおよび8Dを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は150であり、および第二のカットオフ値は35である。また、図8Dの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は4ないし5か月であり；処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に35未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0187であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.038ないし0.743である。
【００８０】
図7Eおよび8Eを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は70であり、および第二のカットオフ値は20である。また、図8Eの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に70以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に20以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に70未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に20以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に70以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に20未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に70未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に20未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0381であり、およびハザード比の95%信頼区間は1.093ないし23.386である。
【００８１】
図7Fおよび8Fを同時に参照して、PD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は50であり、および第二のカットオフ値は100である。加えて、図8Fの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に50以上のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（プレ）および処置後に100以上のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に50未満のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（プレ）および処置後に100以上のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に50以上のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（プレ）および処置後に100未満のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は16か月より長く；処置前に50未満のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（プレ）および処置後に100未満のPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞をもつ（ポスト）腎細胞ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0514であり、およびハザード比の95%の信頼区間は0.030ないし1.011である。
【００８２】
上記に基づいて、図7Aないし7Fおよび図8Aないし8Fの結果に従い、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた腎細胞ガンを有する対象について、腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、または腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前の第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、腎細胞ガンを有する対象は良好な予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は腎細胞ガンを有する対象に対してより一層良好な処置有効性を示す。しかし、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた腎細胞ガンを有する対象について、腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、または腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、腎細胞ガンを有する対象はより悪い予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は肝細胞ガンを有する対象に対してより悪い処置有効性を示す。ここで、上記免疫細胞には、PD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞、およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞が含まれるが、それらに制限されない。
【００８３】
実験5：抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けて後尿路上皮ガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法反応の予測
【００８４】
図9Aないし図9Eは、尿路上皮ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の免疫細胞の数および無増悪生存のハザード比の散布図である。図10Aないし図10Eは、尿路上皮ガンを有する対象の抗PD1/PD-L1免疫療法を受けて後の無増悪生存および生存確率のコックス回帰モデルである。
【００８５】
図9Aおよび10Aを同時に参照すると、PD1+CD8+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は200であり、および第二のカットオフ値は55である。また、図10Aの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に200未満のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に200以上のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は7ないし8か月であり；処置前に200未満のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月であり；処置前に200以上のPD1+CD8+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は1ないし2か月である。ここで、統計学的p値は0.0141であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.046ないし0.707である。
【００８６】
図9Bおよび10Bを同時に参照すると、PD1+CD8+IFNγ+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は150であり、および第二のカットオフ値は55である。また、図10Bの結果に従って、生存確率が50%であるとき、処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は6ないし7か月であり；処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は3ないし4か月であり；処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+IFNγ+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は1ないし2か月である。ここで、統計学的p値は0.0063であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.039ないし0.585である。
【００８７】
図9Cおよび10Cを同時に参照して、PD1+CD8+TIM3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は150であり、および第二のカットオフ値は55である。また、図10Cの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に150未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に150以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は6ないし7か月であり；処置前に150未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月であり；処置前に150以上のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は1ないし2か月である。ここで、統計学的p値は0.0085であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.033ないし0.608である。
【００８８】
図9Dおよび10Dを同時に参照して、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は150であり、および第二のカットオフ値は55である。また、図10Dの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は6ないし7か月であり；処置前に150未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月であり；処置前に150以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（プレ）および処置後に55未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は1ないし2か月である。ここで、統計学的p値は0.0085であり、およびハザード比の95%信頼区間は0.033ないし0.608である。
【００８９】
図9Eおよび10Eを同時に参照すると、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は100であり、および第二のカットオフ値は40である。また、図10Eの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に100未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に100以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に100未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月であり；処置前に100以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0274であり、およびハザード比の95%の信頼区間は0.082ないし0.863である。
【００９０】
上記に基づき、図9Aないし9Eおよび図10Aないし10Eの結果によれば、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた尿路上皮ガンを有する対象について、尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、または尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、尿路上皮ガンを有する対象は良好な予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は尿路上皮ガンを有する対象でのより一層良好な処置有効性を示す。しかし、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた尿路上皮ガンを有する対象について、尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処理前に第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処理後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、または尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、尿路上皮ガンを有する対象はより悪い予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は肝細胞ガンを有する対象でのより悪い処置有効性を示す。ここで、上記免疫細胞には、PD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞が含まれるが、それらに制限されない。
【００９１】
上記の概略において、本発明の実施態様のガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法の反応を予測するための方法では、ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出すること、および免疫細胞の数を第一のカットオフ値/第二のカットオフ値と比較することによって、ガンを有する対象が抗PD-1/PD-L1免疫療法から第一の処置の前に利益を得られるかどうかが予測され得、および抗PD-1/PD-L1免疫療法の処置有効性がガンを有する対象にて処置後すぐにおよび次の処置前に得られ得る。さらに、ガンを有する対象の腫瘍細胞を分析するために必要な慣習的技術、および従ってガンを有する対象がより一層大きな痛みを被るものと比較して、本発明の実施態様から提供される方法は採血によって特定の免疫細胞を収集し、および免疫細胞の数を算出するのが必要なだけであり、それは大幅にテスト時間を短くし得、およびガンを有する対象にとってより一層好都合である。したがって、本発明の実施態様から提供される方法は、免疫療法を受ける対象についてコストおよび時間を削減する利益を有する。
【００９２】
本開示の範囲または精神から離れることなく開示された実施態様に対して種々の修飾および変形を行うことができることが本技術において熟練する者には明らかであろう。上述の観点から、本開示が修飾および変形をカバーし、それらが以下の特許請求の範囲およびそれらの等価なものの範囲内に入ることを条件とすることを意図する。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明の方法はガンを有する対象のガン治療応答を予測する際に適用され得る。
【図１Ａ】
2020187127.tif 000003
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
2020187127.tif 000006
【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
2020187127.tif 000009
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
2020187127.tif 000011
【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
2020187127.tif 000013
【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
2020187127.tif 000015
【図２Ｇ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図６Ｈ】
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【図６Ｉ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月29日(2020.7.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するにあたり、以下の：
ガンを有する対象からの免疫療法を受ける前の末梢血サンプルを提供すること；
ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出すること；および
ガンを有する対象が免疫療法から利益を得るかどうかを指し示すために免疫細胞の数を第一のカットオフ値と比較すること
を含み、
第一のカットオフ値は以下のステップ：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスクの間の相関関係の統計学的解析を実行すること、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得ることによって定める、方法。
【請求項２】
免疫療法には、抗PD-1/PD-L1免疫療法が含まれる、請求項1の方法。
【請求項３】
免疫細胞は、次の：PD1、CD8、CD4、IFN-γ、TIM3、LAG3、CD25、TGF-βの少なくとも一のマーカーを発現する、請求項1の方法。
【請求項４】
ガンは肝細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる、請求項1の方法。
【請求項５】
ガンは腎細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞、PD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+LAG3+細胞からなる群より選ばれる、請求項1の方法。
【請求項６】
第一のカットオフ値は、ハザード比のパターンに従って、対象をグループAおよびグループBに分け、そこでグループAに分類される対象は良好な予後を有し、およびグループBに分類される対象はより悪い予後を有する、請求項1の方法。
【請求項７】
ハザード比は、ガンを有する対象のグループにおける生存時間対ガンを有する対象のグループにおける生存確率のコックス回帰モデルによって測る、請求項6の方法。
【請求項８】
ガンを有する対象の免疫療法応答を予測するにあたり、以下の：
免疫療法を受ける対象からの一のラウンドの処置の終わり次のラウンドの処置の開始までの間の末梢血サンプルを提供すること；
ガンを有する対象の末梢血サンプルにおいて免疫細胞の数を検出すること；および
ガンを有する対象での免疫療法の処置有効性を得るために免疫細胞の数を第二のカットオフ値と比較すること
を含み、
第二のカットオフ値は以下のステップ：ガンを有する対象のグループにおける免疫細胞の数およびガンを有する対象のグループにおける疾患進行の期待リスクの間の相関関係の統計学的解析を実行すること、および次いで相関関係を規定するために用いる統計学上重要な値を得ることによって定める、方法。
【請求項９】
免疫療法には、抗PD-1/PD-L1免疫療法が含まれる、請求項8の方法。
【請求項１０】
免疫細胞は、次の：PD1、CD8、CD4、IFN-γ、TIM3、LAG3、CD25、TGF-βの少なくとも一のマーカーを発現する、請求項8の方法。
【請求項１１】
ガンは肝細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+LAG3-細胞、PD1+CD8+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+LAG3-細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる、請求項8の方法。
【請求項１２】
ガンは腎細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞からなる群より選ばれる、請求項8の方法。
【請求項１３】
ガンは尿路上皮ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞からなる群より選ばれる、請求項8の方法。
【請求項１４】
第二のカットオフ値は、ハザード比のパターンに従って、対象をグループAおよびグループBに分け、そこでグループAに分類される対象は良好な予後を有し、およびグループBに分類される対象はより悪い予後を有する、請求項8の方法。
【請求項１５】
ハザード比は、ガンを有する対象のグループにおける生存時間対ガンを有する対象のグループにおける生存確率のコックス回帰モデルによって測る、請求項14の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
背景
本発明は、ガンを有する対象のガン療法応答を予測するための方法、およびより一層詳細には、ガンを有する対象の抗PD-1/PD-L1免疫療法応答を予測するための方法に関する。
関連技術の説明
［背景技術］
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
目下、免疫チェックポイントブロッケード（例えば、PD-1/PD-L1インヒビターなどのようなもの、もっともそれらに制限されない）を用いる免疫療法は、ガン患者の免疫系を活性化し、および次いで免疫反応を通して腫瘍細胞をキル（不活化などとも言う）し得る。したがって、化学療法とくらべて、免疫チェックポイントインヒビターに応答するガン患者はより一層長い生存時間およびより一層良好な生活の質を有し得る。
本出願に記載すべき先行技術文献情報はなく、その理由は特許を受けようとする発明と関連する文献公知発明が知られていないからである。
［発明の概要］
［発明が解決しようとする課題］
しかし、免疫チェックポイントインヒビターを用いる免疫療法はまだ、以下の不利益を有する：処置は高価であり、処置後応答は緩徐であり、および免疫チェックポイントブロッケードはすべてのガン患者について効果的ではない。目下のところ、ガン患者にて免疫チェックポイントブロッケードの処置有効性を施す前に予測することや、ガン患者にて免疫チェックポイントブロッケードの処置有効性を施与後に評価することのための方法はまだ存在しない。
概略
技術上の課題
［課題を解決するための手段］
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明の実施態様では、ガンは腎細胞ガンであり、および免疫細胞はPD1+CD8+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞からなる群より選ばれる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明のある実施態様では、第二のカットオフ値は、ハザード比のパターンに従って、対象をグループAおよびグループBに分け、そこでグループAに分類される対象は良好な予後を有し、およびグループBに分類される対象はより悪い予後を有する。
発明の効果
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
例えば、本実施形態では、評価したガンペイシェントの免疫細胞の数を第一のカットオフ値と比較して後、評価したガンペイシェントが良好な予後を有するグループAとして分類される場合、それは、評価したガンペイシェントが免疫療法に対してより一層良好な反応を有し、および免疫療法に適することを意味する。逆に、評価したガンペイシェントが不十分な予後しか有さないグループBとして分類される場合、それは評価したガンペイシェントが免疫療法に対するより悪い反応を有し、および免疫療法について適してないことを意味する。加えて、本実施形態では、評価したガンペイシェントの免疫細胞の数を第二のカットオフ値と比較して後、評価したガンペイシェントが良好な予後を有するグループAとして分類される場合、それは、評価したガンペイシェントが免疫療法に対してより一層良好な反応を有することを意味し、処置の有効性を期待することができ、および免疫療法は続けることができる。逆に、評価したガンペイシェントが不十分な予後しか有さないグループBとして分類される場合、それは、評価したガンペイシェントが免疫療法に対してより悪い反応を有し、および免疫療法を続けるように勧められないことを意味する。
［実施例］
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
上記に基づいて、図7Aないし7Fおよび図8Aないし8Fの結果に従い、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた腎細胞ガンを有する対象について、腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、または腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前の第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、腎細胞ガンを有する対象は良好な予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は腎細胞ガンを有する対象に対してより一層良好な処置有効性を示す。しかし、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた腎細胞ガンを有する対象について、腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、または腎細胞ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、腎細胞ガンを有する対象はより悪い予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は腎細胞ガンを有する対象に対してより悪い処置有効性を示す。ここで、上記免疫細胞には、PD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞、およびPD1+CD4+TGFβ+CD25+細胞が含まれるが、それらに制限されない。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
図9Eおよび10Eを同時に参照すると、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞の分析結果において、第一のカットオフ値は100であり、および第二のカットオフ値は40である。また、図10Eの結果によれば、生存確率が50%であるとき、処置前に100未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に100以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は8か月より長く；処置前に100未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月であり；処置前に100以上のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（プレ）および処置後に40未満のPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞をもつ（ポスト）尿路上皮ガンを有する対象の無増悪生存は2ないし3か月である。ここで、統計学的p値は0.0274であり、およびハザード比の95%の信頼区間は0.082ないし0.863である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
上記に基づき、図9Aないし9Eおよび図10Aないし10Eの結果によれば、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた尿路上皮ガンを有する対象について、尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、または尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値以上である（ポスト）とき、尿路上皮ガンを有する対象は良好な予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は尿路上皮ガンを有する対象でのより一層良好な処置有効性を示す。しかし、抗PD-1/PD-L1免疫療法を受けた尿路上皮ガンを有する対象について、尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処理前に第一のカットオフ値未満であり（プレ）、および処理後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、または尿路上皮ガンを有する対象の免疫細胞の数が処置前に第一のカットオフ値以上であり（プレ）、および処置後に第二のカットオフ値未満である（ポスト）とき、尿路上皮ガンを有する対象はより悪い予後を有し、および抗PD-1/PD-L1免疫療法は尿路上皮ガンを有する対象でのより悪い処置有効性を示す。ここで、上記免疫細胞には、PD1+CD8+細胞、PD1+CD8+IFNγ+細胞、PD1+CD8+TIM3+細胞、PD1+CD8+IFNγ+TIM3+細胞、およびPD1+CD8+IFNγ+TIM3+LAG3-細胞が含まれるが、それらに制限されない。
【外国語明細書】
2020187127000001.pdf