(57)【要約】【課題】核酸を簡便かつ効率的に回収することができ、後工程における検査や分析において核酸の反応が阻害され難い、核酸の単離方法を提供する。【解決手段】ｐＫａが６以下のカチオン性固相担体４に核酸を吸着させる工程と、ｐＨが、上記ｐＫａより大きく、８．５以下の水溶液を用いて、カチオン性固相担体４に吸着した核酸を単離する工程と、を備える、核酸の単離方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐＫａが６以下のカチオン性固相担体に核酸を吸着させる工程と、
ｐＨが、上記ｐＫａより大きく、８．５以下の水溶液を用いて、前記カチオン性固相担体に吸着した核酸を単離する工程と、
を備える、核酸の単離方法。
【請求項２】
前記カチオン性固相担体が、アミン系化合物又はイミン系化合物である、請求項１に記載の核酸の単離方法。
【請求項３】
前記カチオン性固相担体が、アルキルアミン系化合物、フェニルアミン系化合物、窒素含有複素環式化合物、及びアミノシラン系化合物からなる群から選択された少なくとも１種である、請求項１又は２に記載の核酸の単離方法。
【請求項４】
ｐＨが６より大きく、８．５以下の水溶液を用いて、前記カチオン性固相担体に吸着した核酸を単離する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の核酸の単離方法。
【請求項５】
流体を送液する流路が設けられたチップを備える、核酸単離用デバイスであって、
前記流路の途中にｐＫａが６以下のカチオン性固相担体が配置されている、核酸単離用デバイス。
【請求項６】
前記カチオン性固相担体が、前記流路の途中に固定化されている、請求項５に記載の核酸単離用デバイス。
【請求項７】
前記カチオン性固相担体が、液体とともに前記流路の途中に滞留している、請求項５に記載の核酸単離用デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸の単離方法及び該核酸の単離方法に用いられる核酸単離用デバイスに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、ウイルスや細胞に含まれるＲＮＡやＤＮＡなどの核酸を分離し、精製する方法として、クロロホルム抽出法、ブーム（Ｂｏｏｍ）法、あるいは陰イオン交換体やカチオン性固相担体を用いた精製方法が知られている。
【０００３】
例えば、下記の特許文献１には、細胞を溶解液で溶解することにより得られた核酸含有水溶液を陰イオン交換体に接触させた後に、水性移動相を用いて陰イオン交換体から核酸を溶離する、核酸の分離及び／又は精製方法が開示されている。特許文献１では、水性移動相を構成する核酸溶離液に、水性移動相のｐＨを約ｐＨ９〜約ｐＨ１３にするような組成物が添加されている。
【０００４】
また、下記の特許文献２には、核酸が含まれる試料にカチオン性固相担体を接触させ、核酸をカチオン性固相担体に捕捉させた後に、核酸を捕捉したカチオン性固相担体を試料から分離させる方法が開示されている。特許文献２では、分離されたカチオン性固相担体をさらにアニオン性物質で処理し、カチオン性固相担体から核酸を分離させることにより、核酸が回収されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２０１０−５０４７３８号公報
【特許文献２】特開２００１−３５２９７９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、特許文献１や特許文献２のように、ｐＨの大きい高塩基性溶液で核酸を単離させて回収した場合、後工程における検査や分析において、酵素反応などの核酸の反応が阻害される場合があることを見出した。
【０００７】
本発明の目的は、核酸を簡便かつ効率的に回収することができ、後工程における検査や分析において、核酸の反応が阻害され難い、核酸の単離方法及び該核酸の単離方法に用いられる核酸単離用デバイスを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明に係る核酸の単離方法は、ｐＫａが６以下のカチオン性固相担体に核酸を吸着させる工程と、ｐＨが、上記ｐＫａより大きく、８．５以下の水溶液を用いて、前記カチオン性固相担体に吸着した核酸を単離する工程と、を備える。
【０００９】
本発明に係る核酸の単離方法のある特定の局面では、前記カチオン性固相担体が、アミン系化合物又はイミン系化合物である。
【００１０】
本発明に係る核酸の単離方法の他の特定の局面では、前記カチオン性固相担体が、アルキルアミン系化合物、フェニルアミン系化合物、窒素含有複素環式化合物、及びアミノシラン系化合物からなる群から選択された少なくとも１種である。
【００１１】
本発明に係る核酸の単離方法のさらに他の特定の局面では、ｐＨが６より大きく、８．５以下の水溶液を用いて、前記カチオン性固相担体に吸着した核酸を単離する。
【００１２】
本発明に係る核酸単離用デバイスは、流体を送液する流路が設けられたチップを備える、核酸単離用デバイスであって、前記流路の途中にｐＫａが６以下のカチオン性固相担体が配置されている。
【００１３】
本発明に係る核酸単離用デバイスのある特定の局面では、前記カチオン性固相担体が、前記流路の途中に固定化されている。
【００１４】
本発明に係る核酸単離用デバイスの他の特定の局面では、前記カチオン性固相担体が、液体とともに前記流路の途中に滞留している。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、核酸を簡便かつ効率的に回収することができ、後工程における検査や分析において、核酸の反応が阻害され難い、核酸の単離方法及び該核酸の単離方法に用いられる核酸単離用デバイスを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、本発明の一実施形態に係る核酸単離用デバイスの要部を示す模式的平面図である。
【図２】図２は、図１中のＡ−Ａ線に沿う部分の模式的断面図である。
【図３】図３（ａ）は、本発明の一実施形態に係る核酸の回収方法において、核酸がカチオン性固相担体に吸着している状態を説明するための模式図であり、図３（ｂ）は、核酸がカチオン性固相担体から単離される状態を説明するための模式図である。
【図４】図４は、実施例３〜５及び比較例３〜５におけるサイクル数と、蛍光強度の関係を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、図面を参照しつつ、本発明の具体的な実施形態を説明することにより、本発明を明らかにする。
【００１８】
［核酸の単離方法］
本発明に係る核酸の単離方法は、ｐＫａが６以下のカチオン性固相担体に吸着された核酸を、ｐＨが、上記ｐＫａより大きく、８．５以下の水溶液を用いて単離する方法に係るものである。
【００１９】
以下、図１及び図２を参照して、本発明の一実施形態に係る核酸の単離方法を説明する。
【００２０】
図１は、本発明の一実施形態に係る核酸単離用デバイスの要部を示す模式的平面図である。また、図２は、図１中のＡ−Ａ線に沿う部分の模式的断面図である。
【００２１】
本実施形態の核酸単離用デバイスは、図１及び図２に示すチップ１を備える。チップ１は、流体が送液される流路２を有する。流路２の途中には、回収部３が設けられている。従って、流路２は、回収部３より上流側に設けられた上流側流路２ａと、回収部３より下流側に設けられた下流側流路２ｂとを有する。
【００２２】
また、回収部３には、核酸を吸着させ、回収するためのカチオン性固相担体４が配置されている。カチオン性固相担体４は、それ自体ではカチオンを形成していないが、中性以下（ｐＨが６以下）においてプロトンの結合により容易にカチオンを形成する官能基を有する化合物である。このような官能基としては、アミノ基、イミノ基等が挙げられる。
【００２３】
カチオン性固相担体４の形態は、特に限定されないが、例えば、膜、フィルター、プレート、粒子状、繊維状、チューブ等の形態で用いることができる。カチオン性固相担体４は、回収部３に固着されていてもよく、液体とともに回収部３に滞留していてもよい。
【００２４】
カチオン性固相担体４のｐＫａは、６以下である。そのため、負に帯電した核酸を吸着させることができる。従って、カチオン性固相担体４は、核酸の担持体として作用する。このようなカチオン性固相担体４としては、特に限定されないが、例えば、アミン系化合物又はイミン系化合物等のカチオン性化合物を用いることができる。アミン系化合物又はイミン系化合物としては、例えば、アルキルアミン系化合物、フェニルアミン系化合物、窒素含有複素環式化合物、アミノシラン系化合物等を用いることができる。より具体的に、このようなカチオン性化合物としては、ヒスチジン、フェニルアミン等を用いることができる。これらのカチオン性化合物は、１種を単独で用いてもよく、複数種を併用してもよい。
【００２５】
なお、カチオン性固相担体４のｐＫａは、好ましくは５．５以下であり、より好ましくは５以下である。この場合、核酸をカチオン性固相担体４により一層確実に吸着させることができる。カチオン性固相担体４のｐＫａの下限値は、例えば、４とすることができる。
【００２６】
また、カチオン性固相担体４は、カチオン性化合物によりシリカ系固相担体等のアニオン性固相担体が修飾されたものであってもよい。また、カチオン性固相担体４とアニオン性固相担体が別々に設けられていてもよい。例えば、カチオン性固相担体４より上流側にアニオン性固相担体がさらに設けられていてもよい。その場合、核酸をより一層精度よく精製することができる。アニオン性固相担体としては、特に限定されないが、例えば、ガラス繊維やヒドロキシアパタイト等が挙げられる。なかでも、アニオン性固相担体は、シリカ繊維であることが好ましい。
【００２７】
本実施形態の核酸の単離方法では、まず、チップ１における注入口７ａから、核酸を含む試料を上流側流路２ａに注入し、回収部３に送液する。このとき、核酸は負に帯電しているため、核酸を含む試料を回収部３に送液すると、図３（ａ）に示すように、核酸とカチオン性固相担体４の間にイオン結合が形成される。それによって、核酸をカチオン性固相担体４に吸着させることができる。
【００２８】
上記核酸を含む試料としては、例えば、核酸抽出後の液体試料を用いることができる。具体的に、核酸抽出後の液体試料としては、ウイルスや細胞などの試料に核酸抽出溶液を添加して核酸を抽出したものを用いることができる。なお、上記核酸を含む試料は、核酸抽出後の液体試料にエタノール等のアルコールを添加して核酸を析出させたものであってもよい。
【００２９】
核酸抽出溶液としては、例えば、タンパク変性剤と、水などの極性溶媒とを含む、溶液を用いることができる。タンパク変性剤としては、例えば、グアニジン誘導体、チオ尿素、尿素、界面活性剤等を用いることができる。また、タンパク変性剤は、グアニジン塩酸塩等の塩であってもよい。これらのタンパク変性剤は、１種単独で用いてもよく、複数種を併用してもよい。
【００３０】
次に、ｐＨが、カチオン性固相担体４のｐＫａより大きく、８．５以下の水溶液を、回収部３に送液する。このとき、上記水溶液のｐＨは、カチオン性固相担体４のｐＫａよりも大きいことから、上記水溶液中においてカチオン性固相担体４は、非電離状態となる。そのため、上記水溶液を回収部３に送液すると、図３（ｂ）に示すように、核酸とカチオン性固相担体４の間のイオン結合が崩壊する。従って、上記水溶液を回収部３に送液すると、核酸をカチオン性固相担体４から単離させ、回収口７ｂから核酸を回収することができる。
【００３１】
本実施形態の核酸の単離方法では、ｐＫａが６以下のカチオン性固相担体４に吸着させた核酸を、ｐＨが、カチオン性固相担体４のｐＫａより大きく、８．５以下の水溶液を用いて、カチオン性固相担体４から単離する。そのため、本実施形態の核酸の単離方法では、ｐＨを調整するだけで、核酸を簡便かつ効率的に回収することができる。特に、本実施形態の核酸の単離方法では、ｐＨが、カチオン性固相担体４のｐＫａより大きく、８．５以下である、中性の水溶液を用いて、核酸を単離させ、回収することができる。そのため、後工程の検査や分析において、酵素反応等の核酸の反応が阻害されることを抑制することもできる。
【００３２】
ｐＨが、カチオン性固相担体４のｐＫａより大きく、８．５以下の水溶液としては、特に限定されない。もっとも、核酸をカチオン性固相担体４からより一層確実に単離させる観点から、上記水溶液のｐＨが、好ましくは６以上、より好ましくは６より大きく、さらに好ましくは７以上である。また、後工程の検査や分析において反応が阻害されることをより一層抑制する観点からは、上記水溶液のｐＨは、好ましくは８以下、より好ましくは７．５以下である。
【００３３】
以下、本実施形態の核酸の単離方法に用いる核酸単離用デバイスの詳細について説明する。
【００３４】
（核酸単離用デバイス）
本実施形態の核酸単離用デバイスは、図１及び図２に示すチップ１を備える。チップ１は、流体が送液される流路２を有する。流路２の途中には、回収部３が設けられている。従って、流路２は、回収部３より上流側に設けられた上流側流路２ａと、回収部３より下流側に設けられた下流側流路２ｂとを有する。回収部３には、核酸を吸着させ、回収するためのカチオン性固相担体４が配置されている。カチオン性固相担体４は、回収部３に固着されていてもよく、液体とともに回収部３に滞留していてもよい。本実施形態の核酸単離用デバイスでは、回収部３にカチオン性固相担体４が配置されているため、核酸を簡便かつ効率的に回収することができ、後工程における検査や分析において、核酸の反応が阻害され難い。
【００３５】
チップ１は、特に限定されないが、本実施形態では、図２に示すように、板状の基板５と、カバー部材６とを有する。基板５は、主面５ａを有する。基板５の主面５ａ側には、凹部５ｂが設けられている。凹部５ｂは、基板５の主面５ａ側に開口するように設けられている。
【００３６】
基板５を構成する材料は、特に限定されず、例えば、合成樹脂、ゴム、金属などを用いることができる。合成樹脂としては、特に限定されないが、熱可塑性樹脂であることが好ましい。なかでも、熱可塑性樹脂としては、例えば、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマー、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート、又はポリプロピレンなどを用いることができる。これらは、１種を単独で用いてもよく、複数種を併用してもよい。
【００３７】
基板５は、上記熱可塑性樹脂の成型体からなることが好ましい。成型方法としては、特に限定されず、公知の成型方法を用いることができる。成型方法としては、例えば、射出成型、射出圧縮成型、ガスアシスト法射出成型、押し出し成型、多層押し出し成型、回転成形、熱プレス成型、ブロー成形、又は発泡成形などの方法が挙げられる。なかでも、射出成型であることが好ましい。
【００３８】
基板５は、複数枚の合成樹脂のシートを積層することにより形成されていてもよい。基板５は、ベースシートと、ベースシート上に設けられた貫通孔を有する基板本体とにより構成されていてもよい。
【００３９】
基板５の主面５ａ上には、カバー部材６が設けられている。カバー部材６は、基板５の凹部５ｂを閉成するように設けられている。カバー部材６が、基板５の凹部５ｂを閉成することにより、回収部３が構成されている。なお、本実施形態では、上流側流路２ａ及び下流側流路２ｂも同様にカバー部材６が基板５の凹部５ｂを閉成することにより構成されている。
【００４０】
カバー部材６は、例えば、樹脂フィルムなどの可撓性を有する材料により構成することができる。樹脂フィルムとしては、例えば、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマー、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート、又はポリプロピレン等の熱可塑性樹脂を用いることができる。
【００４１】
また、カバー部材６は、弾性部材により構成されていてもよい。弾性部材としては、特に限定されないが、エラストマーであることが好ましい。なお、本発明において、基板５とカバー部材６とは、一体的に構成されていてもよい。
【００４２】
カバー部材６を基板５の主面５ａに貼り合わせる方法は、特に限定されず、公知のラミネート方法を用いることができる。ラミネート方法としては、例えば、プレス圧着、ロールラミネートなどの方法が挙げられる。なお、ラミネート条件は、特に限定されないが、例えば、５０℃以下の温度でラミネートすることが好ましい。また、１０ＭＰａ以下の圧力でラミネートすることが好ましい。このような条件でラミネートすることにより、流路２へのカバー部材６の埋め込みをより一層生じ難くすることができる。
【００４３】
基板５内には、流体が送液される上述した流路２が設けられている。ここでは、流路２がマイクロ流路である。流路２は、マイクロ流路ではなく、マイクロ流路よりも断面積の大きな流路であってもよい。もっとも、マイクロ流路であることが好ましい。それによって、微量の試料により、様々な分析を行うことができる。
【００４４】
ところで、マイクロ流路とは、流体の搬送に際し、マイクロ効果が生じるような微細な流路をいう。このようなマイクロ流路では、液体は、表面張力の影響を強く受け、通常の大寸法の流路を流れる液体とは異なる挙動を示す。
【００４５】
マイクロ流路の横断面形状及び大きさは、上記のマイクロ効果が生じる流路であれば特に限定はされない。例えば、マイクロ流路に流体を流す際、ポンプや重力を用いる場合には、流路抵抗を低下させる観点から、マイクロ流路の横断面形状がおおむね長方形（正方形を含む）の場合には、小さい方の辺の寸法で、２０μｍ以上が好ましく、５０μｍ以上がより好ましく、１００μｍ以上がさらに好ましい。チップ１を用いたマイクロ流体デバイスのより一層の小型化の観点より、小さい方の辺の寸法で、５ｍｍ以下が好ましく、１ｍｍ以下がより好ましく、５００μｍ以下がさらに好ましい。
【００４６】
また、マイクロ流路の横断面形状がおおむね円形の場合には、直径（楕円の場合には、短径）が、２０μｍ以上が好ましく、５０μｍ以上がより好ましく、１００μｍ以上がさらに好ましい。上記マイクロ流体デバイスのより一層の小型化の観点より、直径（楕円の場合には、短径）は、５ｍｍ以下が好ましく、１ｍｍ以下がより好ましく、５００μｍ以下がさらに好ましい。
【００４７】
一方、例えば、マイクロ流路に流体を流す際、毛細管現象を有効に活用する場合には、マイクロ流路の横断面形状がおおむね長方形（正方形を含む）の場合には、小さい方の辺の寸法で、５μｍ以上であることが好ましく、１０μｍ以上であることがより好ましく、２０μｍ以上であることがさらに好ましい。また、小さい方の辺の寸法で、２００μｍ以下であることが好ましく、１００μｍ以下であることがさらに好ましい。
【００４８】
本実施形態において、流路２の途中には、上述の回収部３が設けられている。また、流路２は、上流側流路２ａと、下流側流路２ｂとを有する。
【００４９】
上流側流路２ａの一端は、回収部３に接続されている。一方、上流側流路２ａの他端が設けられている入口側から、流体やガスを流入させることができる。なお、複数の流体やガスを回収部３に流入させる場合は、全て同じ入口から流入してもよく、流入する流体やガスごとに個別の入口や上流側流路２ａが設けられていてもよい。
【００５０】
上流側流路２ａから回収部３に送液される流体は、チップ１の内部又は外部に設けられた送液手段により送液することができる。送液手段としては、特に限定されず、例えば、マイクロポンプが挙げられる。具体的には、マイクロポンプを用いて、上流側流路２ａに液体や空気、又は所定のガスを送り込むことにより、回収部３側へ液体を送液する手段が挙げられる。この場合、マイクロポンプは、チップ１の内部に設けられていてもよいし、チップ１の外部に設けられていてもよい。このような手段により、液体が回収部３に送液される。
【００５１】
また、他の送液手段としては、上流側流路２ａより上流側に連結された空間に配置されたガス発生部材が挙げられる。ガス発生部材とは、光や熱等の外力によりガスを発生する部材である。ガス発生部材に所定のタイミングで外力を加えることによりガスを発生させ、上流側流路２ａにガスを送り込むことができる。それによって、上流側流路２ａから回収部３側へ液体を送液することができる。ガス発生部材としては、例えば、ガス発生テープが挙げられる。
【００５２】
下流側流路２ｂの一端は、回収部３に接続されている。下流側流路２ｂの下流側に設けられている他端から、流体やガスを他の部位に送り出すことができる。なお、上流側流路２ａと、下流側流路２ｂ以外に必要に応じてその他の流路が接続されていてもよい。下流側流路２ｂには、目的の検査、反応に合わせて流路、混合・反応部等を配置することができる。
【００５３】
以下、本発明の具体的な実施例及び比較例を挙げることにより、本発明を明らかにする。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００５４】
（実施例１）
実施例１では、以下のようにして図１及び図２に示すチップ１を作製した。
【００５５】
基板２を構成する材料として、シクロオレフィンポリマーを用い、これを射出成形することにより、凹部５ｂを有する基板５を作製した。また、カバー部材６には、封止テープを用い、封止テープで基板５の凹部５ｂを閉成することによりチップ１を作製した。なお、回収部３には、カチオン性固相担体４としてヒスチジン修飾粒子（平均粒径  １μｍ）を配置した。
【００５６】
このようなチップ１を用いて、以下のようにして回収率を測定した。
【００５７】
まず、ウイルス（５００００コピー）を含む試薬（ｐＨ：５、塩酸により調整）を回収部３に送液し、核酸をカチオン性固相担体４としてのヒスチジン修飾粒子に担持させた。
【００５８】
次に、回収液としてのｐＨ７の水溶液を回収部３に送液し、核酸を単離させ、回収した。
【００５９】
次に、回収された核酸（ＲＮＡ）を、逆転写反応（４５℃  ５分）にて、ｃＤＮＡにし、ＰＣＲを行うための複数の温度域（６０℃、９０℃）の間で、加熱及び冷却を行った。それによって、ＰＣＲ反応により、核酸（ＲＮＡ）から得られるｃＤＮＡを増幅した。核酸（ｃＤＮＡ）を増幅させたのち、増幅された核酸をＱプローブを用いた方法により検出し、回収したＲＮＡ量を算出した。そして、回収部３に通液させたウイルス量（５００００コピー）との関係からＲＮＡ回収率を求めたところ、実施例１では８０％であった。
【００６０】
また、ウイルス（５００００コピー）の代わりに、鼻腔ぬぐい液綿棒（積水メディカル社製、キット付属品）を用いて採取した鼻拭い成分が含まれた試薬を用いて、同様にＲＮＡ回収率を求めたところ、実施例１では、４０％であった。
【００６１】
（実施例２）
カチオン性固相担体として、ヒスチジン修飾粒子の代わりに、フェニルアミン修飾粒子（平均粒径  １μｍ）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、ウイルス（核酸溶液）及び鼻拭い成分を含む試薬（実検体含む）それぞれのＲＮＡ回収率を求めた。
【００６２】
（比較例１）
カチオン性固相担体として、ヒスチジン修飾粒子の代わりに、アルキルアミン修飾粒子（平均粒径  １μｍ）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、ウイルス（核酸溶液）及び鼻拭い成分を含む試薬（実検体含む）それぞれのＲＮＡ回収率を求めた。
【００６３】
（比較例２）
カチオン性固相担体として、ヒスチジン修飾粒子の代わりに、キトサン修飾粒子（平均粒径  ５μｍ）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、ウイルス（核酸溶液）及び鼻拭い成分を含む試薬（実検体含む）それぞれのＲＮＡ回収率を求めた。
【００６４】
結果を下記の表１に示す。
【００６５】
【表１】
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【００６６】
（実施例３）
ウイルス（１×１０５コピー）を含む試薬を用いたこと以外は、実施例１と同様にしてＰＣＲを行なった。
【００６７】
（実施例４）
ウイルス（１×１０４コピー）を含む試薬を用いたこと以外は、実施例１と同様にしてＰＣＲを行なった。
【００６８】
（実施例５）
ウイルス（１×１０３コピー）を含む試薬を用いたこと以外は、実施例１と同様にしてＰＣＲを行なった。
【００６９】
（比較例３）
回収液としてｐＨ９の水溶液を用いたこと以外は、実施例３と同様にしてＰＣＲを行なった。
【００７０】
（比較例４）
回収液としてｐＨ９の水溶液を用いたこと以外は、実施例４と同様にしてＰＣＲを行なった。
【００７１】
（比較例５）
回収液としてｐＨ９の水溶液を用いたこと以外は、実施例５と同様にしてＰＣＲを行なった。
【００７２】
実施例３〜５及び比較例３〜５におけるサイクル数と、蛍光強度の関係を図４に示した。
【００７３】
図４より、回収液としてｐＨ７の水溶液を用いた実施例３〜５では、ｐＨ９の水溶液を用いた比較例３〜５よりも蛍光強度が大きく反応効率が高められている（反応の阻害が抑制されている）ことが確認できた。また、回収液としてｐＨ７の水溶液を用いた実施例３〜５では、ｐＨ９の水溶液を用いた比較例３〜５よりもＣｔ値（増幅曲線の立ち上がり始めたサイクル数）が小さく反応効率が高められている（反応の阻害が抑制されている）ことが確認できた。
【符号の説明】
【００７４】
１…チップ
２…流路
２ａ…上流側流路
２ｂ…下流側流路
３…回収部
４…カチオン性固相担体
５…基板
５ａ…主面
５ｂ…凹部
６…カバー部材
７ａ…注入口
７ｂ…回収口
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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