(57)【要約】【課題】疾患の制御および治療において有用な製剤を提供する。【解決手段】５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールおよびその置換誘導体の新規多形体、カルボキシアミドトリアゾールのオロチン酸塩、１：１〜１：４（塩基：酸）の比のトリアゾールおよびオロチン酸の製剤、ならびにそれらの調製のより安全な方法が開示される。化合物は、固形癌、黄斑変性症、網膜症、慢性骨髄性白血病、ＡＩＤＳ、および異常なシグナル伝達に依存する疾患を含むが、これらに限定されない疾患の制御および治療において有用である。オロチン酸塩製剤を調製する改良された方法は、カルボキシアミドトリアゾールの新規多形体の合成において、安定した効果的でより安全な出発アジド中間体物質を使用する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オロチン酸と結合した、５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドの１型多形体であって、
図３に示されるＸ線回折パターンにより特徴付けられ、
塩基：酸比が、１：１〜１：４の範囲である、多形体。
図３
【化１】
2020105178.tif 000019
【請求項２】
オロチン酸と結合した、５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドの２型多形体であって、
図４に示されるＸ線回折パターンにより特徴付けられ、
塩基：酸比が、１：１〜１：４の範囲である、多形体。
図４
【化２】
2020105178.tif 000020
【請求項３】
塩基：酸比が１：１である、請求項１又は２に記載の多形体。
【請求項４】
塩基：酸比が０．７：１．３である、請求項１又は２に記載の多形体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の多形体を含む、医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の多形体を含む、固形癌、黄斑変性症、網膜症、慢性骨髄性白血病又はＡＩＤＳを治療するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００９年９月４日に出願された米国特許出願シリアル番号１２／５８４，４４８号の一部継続出願であり、その全体は参照として本明細書に援用される。
【０００２】
技術分野
本発明は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体（カルボキシアミドトリアゾールまたはＣＡＩと本明細書において称される）の新規化学化合物、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールオロチン酸塩に加えてその置換誘導体（定義された塩基：酸比で、ＣＴＯ）の製剤、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールオロチン酸塩に加えてその置換誘導体およびオロチン酸（定義された塩基：酸比で、ＣＡＯ）の製剤に関し、ＣＡＩおよびオロチン酸塩製剤（ＣＴＯおよびＣＡＯ）のための合成経路において必要な中間体アジド物質を合成するために、安定したより効果的でより安全な出発物質を使用することによる、それらの調製のより安全な方法に関する。より詳細には、本発明は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体の新規多形体に関する。さらにより詳細には、本発明は、新規の５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールオロチン酸塩（範囲１：１〜１：４の最適の塩基：酸比のＣＴＯ）に加えて、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体および１：１〜１：４の最適の塩基：酸比のオロチン酸（ＣＡＯ）の製剤に関し、固形癌、黄斑変性症、網膜症、慢性骨髄性白血病、ＡＩＤＳ、ならびに異常なシグナル伝達および増殖に依存する疾患を含むが、これらに限定されない疾患の制御および治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾール（ＣＡＩ）に加えてその置換誘導体の新規多形体、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールのオロチン酸塩に加えてその置換誘導体、ならびに５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体およびオロチン酸（塩基：酸の最適比で）の製剤の開発の分野である。本発明の目的は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体の新規多形体を開発して、化学的、生物学的、薬物動態学的、および毒素動態学的な特性を改良すること、ならびに抗癌活性、抗転移作用、カルシウム媒介性シグナル伝達、抗血管新生、抗ＰＩ３、抗ＣＯＸ２、アポトーシス、慢性骨髄性白血病におけるＢＣＲ−ＡＢＬタンパク質のダウンレギュレーション、ＨＩＶ  ＬＴＲ転写の調節または抗ＶＥＧＦ１の特性を含むが、これらに限定されない治療的性質を改良することである。
【０００４】
１９８６年に、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾール化合物に加えてその置換誘導体は、抗コクシジウム活性を有することが示された。R.J. Bochis et el., 1986に帰属する米国特許第４，５９０，２０１号は、経路における１つの重要な中間体（３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアジド）を合成するために、アジ化ナトリウムの使用を含む、５−アミノ−１−（４−［４−クロロベンゾイル］−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４カルボキサミド（Ｌ６５１５８２またはＣＡＩ）を調製する方法を記載する。続いて、Ｌ６５１５８２またはＣＡＩは、カルシウム流入、アラキドン酸の放出およびイノシトールリン酸の生成を含む経路を含む、選択されたシグナル伝達経路を阻害することが示された。E. C. Kohn et al, 1994に帰属する米国特許５，３５９，０７８。「Ｌ６５１５８２」は、本明細書において使用される時、Ｌ６５１５１８２、ＣＡＩ、カルボキシアミドトリアゾール、ＮＳＣ  ６０９９７４、または先行技術において記載された９９５１９−８４−３を表わす。
【０００５】
次いで、F. Wehrmann, 1999に帰属する米国特許第５，９１２，３４６号は、Ｌ６５１５８２の無機塩および有機塩を記載し、特にＬ６５１５８２のオロチン酸塩を調製する方法を記載した。Ｌ６５１５８２は米国特許第４，５９０，２０１号において記載された方法によって調製された。プロトンＮＭＲによって特徴づけられるように、Ｌ６５１５８２：オロチン酸塩は２：１（塩基：酸）の比であり、融点は２３４〜２３５℃であった。上記のように、中間体３−（４−クロロベンゾイル）−４−コロルベンゾイル（ｃｈｏｌｏｒｂｅｎｚｙｌ）アジドの合成は、エタノール中の中間体３−（４−クロロベンゾイル）−４−クロロベンゾイルブロミドおよびアジ化ナトリウムを使用して実行された。米国特許第５，９１２，３４６号は、ラットのアンドロゲン非依存性ダニングＲ−３２２７−ＡＴ−１前立腺癌モデルにおいて、Ｌ６５１５８２の相当用量の抗腫瘍活性と比較して、Ｌ６５１５８２オロチン酸塩（ＣＡＩオロチン酸塩、塩基：酸、２：１）の抗腫瘍活性が改良されたことを記載した。
【０００６】
カルシウム媒介性シグナル伝達の阻害剤である、カルボキシアミドトリアゾール、Ｌ６５１５８２、ＣＡＩ、ＮＳＣ  ６０９９７４または９９５１９−８４−３は、最初に見出された細胞静止性のシグナル阻害性抗癌薬の１つである。この薬物を、National Cancer Instituteで、フェーズＩ、フェーズＩＩおよびフェーズＩＩＩの治験において固形癌を患う患者で試験した。しかしながら、ヒト試験における有効性の実証に失敗し、ならびに／または低生体利用率、重篤な胃腸毒性、神経毒性、および治療的効果を達成する至適投薬を妨げる耐容性の問題が起こったので、ＮＣＩはＬ６５１５８２の開発を中止した。ＰＥＧ−４００中のＬ６５１５８２の微粉化製剤のカプセル剤は、薬の生体利用率を改良するために臨床試験において使用された。Kohn EC et al., Clinical Cancer Res 7:1600-1609 (2001); Bauer KS et al., Clinical Cancer Res 5: 2324-2329 (1999); Berlin J et al., J Clin Onc 15: 781-789 (1997); Berlin J et al., Clinical Cancer res 8: 86-94 (2002); Yasui H et al., J Biol Chem 45:28762-28770 (1997); Alessandro R et al., J Cell Physiol 215: 111-121 (2008)。
【０００７】
それゆえ、米国特許第５，９１２，３４６号中で記載されるＬ６５１５８２オロチン酸塩（塩基：酸２：１）は、前臨床試験に基づいて、その有効性を改良することによって、この有望な薬（Ｌ６５１５８２）を救う可能性のある方法を示した。しかしながら、米国特許第５，９１２，３４６号中で記載される方法に従ってバルク量でＬ６５１５８２オロチン酸塩（２：１比）を調製する方法は、スケールアップで問題が起こった。
【化１】
2020105178.tif 000002
【０００８】
薬の鎮痛効果の強化におけるオロチン酸の使用に関して、Wawretschek W et al, 1977に帰属する米国特許第４，０６１，７４１号は、オロチン酸コリンと組み合わせた、デキストロプロポキシフェン−ＨＣｌ、レボプロポキシフェン−ＨＣｌまたはサリチル酸ナトリウムの使用を記載し、オロチン酸コリンと組み合わせた製剤が最も優れた効果を生じたと結論した。明らかに、先行技術は、化学化合物とオロチン酸結合の比率および化学的性質について矛盾する教示を提示する。
【０００９】
Ｌ６５１５８２オロチン酸塩のための先行技術中で記載された合成スキームは、上記の反応スキームＩにおいて示される。８５８は生産物識別子であり、例えば８５８Ａ〜８５８Ｄは中間体を示す。８５８Ｅはカルボキシアミドトリアゾール（ＣＡＩ）を示す。８５８Ｆは、カルボキシアミドトリアゾール：オロチン酸もしくはカルボキシアミドトリアゾール：オロチン酸塩、または本明細書において定義されるようなＣＴＯを示す。
【００１０】
先行技術教示は、好ましい実施形態である、薬物と組み合わせたオロチン酸コリンの使用を示唆した。残念なことに、これは、臨床開発のためのＣＴＯの生産をスケールアップするという、本発明における問題を扱わなかった。Ｌ６５１５８２オロチン酸塩（２：１）における塩基：酸比が薬物に至適の化学構造であるかどうかは明らかではなかった。さらに、大量に製造するためにＬ６５１５８２オロチン酸塩（２：１）の生産をスケールアップする場合に問題が生じた。バルク量のアジ化ナトリウムを扱うのに必要とされる装置および施設を有する製造業者はほとんどおらず、施設を有する請負者は高い手数料を請求した。
【００１１】
ＴＢＤＭＳエーテル工程（工程１）として、３，５−ジクロロベンジルアルコール中のアルコール基の保護の後に、エーテルを４−クロロベンゾイルクロライドと反応させて置換ベンゾフェン（ｂｅｎｚｏｐｈｅｎｅ）を形成する（工程２）。ベンゾフェンを塩化チオニルで処理し（工程３）、次いでアジ化ナトリウムで処理し（工程４）、３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアジドを形成した。このアジドのシアノアセトアミドとの反応はＬ６５１５８２を生産する（工程５）。Ｌ６５１５８２のオロチン酸との反応はＬ６５１５８２オロチン酸塩（２：１）を形成する（工程６）。
【００１２】
工程４における上記の方法におけるアジ化ナトリウムの使用は、大量のＬ６５１５１８２オロチン酸塩の生産のスケールアップにとっての深刻な短所であった。アジ化ナトリウムは高エネルギー含有危険物質があるので、大量のアジ化ナトリウムの取り扱いは特別の感圧性の反応器中で行わなければならない。方法を薬物のバルク量へとスケールアップする能力を有する薬物製造業者はほとんどないので、アジ化ナトリウムを扱うのに必要とされる特別の封じ込め施設は製造コストを概して増加させた。これは、アジ化ナトリウムは、無臭の白色固体として存在し、急速に作用して致命的な可能性のある化学物質だからである。アジ化ナトリウムは水または酸と混合した場合に刺激臭を持つ有毒ガスへ急速に変化する。アジ化ナトリウムは、固体金属に接した場合も有毒ガスへと変化する。深刻なアジ化ナトリウム中毒の生存者は心臓および脳の損傷を受ける可能性があるので、犠牲者は疾病対策予防センターのホットラインへ直ちに連絡することが推奨される。（CDC - Facts About Sodium Azide, 2009）。明らかに、アジ化ナトリウムを使用せずにＬ６５１５８２オロチン酸塩を調製する、より安全で新しい手頃で効果的な方法を開発する必要性があった。上で示されるように、アジ化ナトリウム（工程４）が、Ｌ６５１５８２オロチン酸塩のための合成経路における３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアジド（中間体）の調製において必要とされたので、手頃な費用で競争入札は不可能だった。それゆえ、至適の化学的立体配置および塩基：酸比を持つオロチン酸薬物を調製する代替のより安全でより効果的な方法を開発することが必要であった。本発明は、これらの欠点を克服しようとするものである。
【００１３】
Ｌ６５１５８２オロチン酸塩（orotate）が前立腺癌ラットモデルにおいて有意に高い抗腫瘍活性を有することが実証されたにもかかわらず（米国特許第５，９１２，３４６号）、２：１の塩基：酸比でのＬ６５１５８２オロチン酸塩の化学的、薬理学的および生物学的特性が至適だったかどうかに関する教示または示唆はなかった。明らかに、臨床開発を正当なものとするために、至適の化学的、生物学的、薬理学的、治療的、および毒素動態学的な特徴を提供する、ＣＡＩおよびＣＡＩのオロチン酸化合物（orotate compound）の新規多形体を開発する必要性がある。
【００１４】
従って、本発明の主要な目的は、生体利用率に関連しそして人体体液中での可溶性に依存する実効性を改良したＣＡＩのオロチン酸製剤（塩基：酸比は１：１〜１：４の範囲である）を開発することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、バルク量のＣＡＩ、ＣＴＯ（ＣＡＩのオロチン酸塩として）およびＣＡＯ（オロチン酸と混合したＣＡＩの製剤として）を生産するためにより安全でよりコスト効率の良い方法を開発することである。
【００１６】
本発明の重要な目的は、中間体を生産するために、非常に低い濃度で高毒性のアジ化ナトリウムまたはアジ化カリウムを使用する代わりに、より安全でより毒性の低い成分を使用することによってより安全なＣＡＩを製造することである。先行技術中で記載された方法によって生産されたＣＡＩは、患者において深刻な神経毒性および胃毒性を引き起こすことが見出されている。それゆえ、より安全な成分の使用は重要であり、生産のための改良された方法はＣＡＩおよびそのオロチン酸製剤の新規多形体の生産ももたらした。
【００１７】
上記の参照文献に属する内容は、それらの全体の参照として本明細書に特に援用される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体（カルボキシアミドトリアゾールまたはＣＡＩとして本明細書において称される）の新規多形体の組成物；５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールオロチン酸塩に加えてその置換誘導体（定義された塩基：酸比で、ＣＴＯ）の製剤；ならびに５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールオロチン酸塩に加えてその置換誘導体およびオロチン酸（定義された塩基：酸比で、ＣＡＯ）の製剤の提供によって、先行技術に固有の欠点の克服を求める。
【００１９】
本発明は、ＣＡＩおよびオロチン酸塩製剤（ＣＴＯおよびＣＡＯ）のための合成経路において必要な中間体アジド物質を合成するために、安定したより効果的でより安全な出発物質を使用することによる、それらの調製のより安全な方法を提供する。
【００２０】
より詳細には、本発明は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾール（ＣＡＩ）に加えてその置換誘導体の新規多形体に関する。ＣＡＩは、１型または２型を含むが、これらに限定されない複数の多形型で存在する。
【００２１】
本発明は、さらにより詳細には、新規の５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールオロチン酸塩（範囲１：１〜１：４の至適塩基：酸比でのＣＴＯ）に加えて、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体および至適塩基：酸比でのオロチン酸（ＣＡＯ）、オロチン酸塩（ＣＴＯ）に加えてその置換誘導体の製剤に関する。
【００２２】
別の態様において、本発明は、アジ化ナトリウムまたはアジ化カリウムの代わりに、ジフェニルホスホルイルアジドまたはトリメチルシリルアジド（ＴＭＳＮ3）を含むが、これらに限定されない、安定したより安全で手頃な出発物質の使用によって、合成経路において必要な中間体アジド物質を調製する方法に関する。
【００２３】
より詳細には、本発明は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体、それらのオロチン酸誘導体（ＣＴＯ）（１：１〜１：４の範囲の塩基：酸比）の新規の多形体に関し、固形癌、黄斑変性症、網膜症、慢性骨髄性白血病、ＡＩＤＳ、ならびに電位非依存性カルシウムチャネルブロッカー、ＰＩ３、ＣＯＸ２、ＢＣＲ−ＡＢＬ、アポトーシス、ＨＩＶ  ＬＴＲ転写またはＶＥＧＦ１等の異常なシグナル伝達および増殖経路に依存する疾患を含むが、これらに限定されない疾患の治療におけるそれらの使用に関する。
【００２４】
前述の最先端技術の見解において、本発明は、生体利用率の増加、標的への送達、抗腫瘍効果、および毒性の減少を行う化学的有機モイエティをその中に含む、新規の５−アミノもしくは置換アミノ１，２，３−トリアゾールのオロチン酸塩誘導体、またはカルボキシアミドトリアゾールオロチン酸塩（ＣＴＯ）を提供する。具体的には、約１：１〜１：４（トリアゾール：オロチン酸）の範囲の比でイオン結合を有する１つのクラスのカルボキシアミドトリアゾールオロチン酸塩（ＣＴＯ）は、本発明の新規化合物を構成する。
【００２５】
５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾール（ＣＡＩ）に加えてその置換誘導体およびオロチン酸（定義された塩基：酸比、１：１〜１：４で、ＣＡＯ）の製剤
【００２６】
別の態様において、本発明は、アジ化ナトリウムを使用しないが、その代りにジフェニルホスホルイルアジド（ＤＰＰＡ）もしくはＴＭＮ3、またはより安全なアジド同等物を使用する、アジド中間体３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアジドの調製のための方法を提供する。ＤＰＰＡはアジ化ナトリウムよりも有意に安全であり、アルコールを直接アジドに転換するのに使われており、それゆえＣＴＯのための合成経路における工程（上で略述したスキームにおける工程３）を除去する。
【００２７】
本発明の別の目的は、ヒトおよび他の哺乳類において経口的にまたは他の経路によって与えられた場合のＣＴＯの生体利用率を増加させること、ならびに例えば組織、血液脳関門および脈絡膜網膜複合体を介する吸収、送達および輸送を改良することによって、標的へのＣＴＯの送達を改良することである。
【００２８】
本発明のなお別の目的は、血液、組織および器官からの薬物のクリアランスを増加させることによって、オロチン酸塩として投与された場合にＣＴＯおよび関連化合物の毒性を減少させることである。
【００２９】
本発明は、ＣＴＯまたはオロチン酸（ＣＡＯ）と組み合わせたＣＡＩが製剤として投与される場合に薬物相互作用および副作用を減少させるためにさらに使用することができる。
【００３０】
本発明の別の目的は、ヒト新生物、ならびに特に、原発性腫瘍または転移性腫瘍、黄斑変性症等の血管新生を含む疾患、網膜症、糖尿病性網膜症、慢性骨髄性白血病、ＡＩＤＳおよび電位非依存性カルシウムチャネル遮断剤、ＰＩ３、ＣＯＸ２、ＢＣＲ−ＡＢＬ、アポトーシス、ＨＩＶ  ＬＴＲ転写またはＶＥＧＦ１等の異常なシグナル伝達および増殖経路に依存する疾患を治療するために、ならびに薬物毒性の敏感な標的である非癌組織の薬物のレベルを低下させることによる薬物の毒性の副次的効果を、Ｌ６５１５８２またはＣＡＩを与えることと比較した場合、１０％〜１００％まで減少させるために、ＣＴＯの組成物を提供することである。
【００３１】
本発明の好ましい実施形態は１：１（塩基：酸）の比で、より好ましい実施形態は比１：２でＣＴＯを含み、本発明の最も好ましい実施形態は、本発明の新規方法によって調製されたＣＴＯの組成物を（約０．７：１．３の比で）、固形癌、黄斑変性症、網膜症、慢性骨髄性白血病を含むが、これらに限定されない疾患の治療、およびＰＩ３、ＣＯＸ２、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＳＴＡＴＳ、ＣｒｋＬ、アポトーシス、ＨＩＶ  ＬＴＲ転写、ＶＥＧＦ１または他のもの等のシグナル伝達経路の修飾のために含む。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】１型またはパターン１のＣＡＩの多形体を有するＣＴＯサンプルＪ０２６４２の、ＣＡＩ：オロト酸またはＣＡＩ：オロチン酸塩としてのＮＭＲによるＣＴＯの構造を示した図である。
【図２】２型またはパターン２のＣＡＩの多形体を有するＣＴＯサンプルＪ０２６４３の、ＣＡＩ：オロト酸またはＣＡＩ：オロチン酸塩としてのＮＭＲによるＣＴＯの構造を示した図である。
【図３】１型またはパターン１のＣＡＩの多形体を有するＣＴＯサンプルＪ０２６４２の高分解能ディフラクトグラムを示した図である。
【図４】２型またはパターン２のＣＡＩの多形体を有するＣＴＯサンプルＪ０２６４３の高分解能ディフラクトグラムを示した図である。
【図５】１型またはパターン１のＣＡＩの多形体を有するＣＴＯサンプルＪ０２６４２のＦＴ−ＩＲを示した図である。
【図６】２型またはパターン２のＣＡＩの多形体を有するＣＴＯサンプルＪ０２６４３のＦＴ−ＩＲを示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明は、５−アミノもしくは置換アミノ１，２，３−トリアゾールの新規の多形体または新規の方法によって調製されたそれらの置換アミノ１，２，３−トリアゾール（ＣＡＩ）を提供し、式Ｉの化合物のクラスを含む。ＣＡＩの新規の多形体は、ＮＭＲ、ＤＳＣ、ＦＴ−ＩＲおよびＸＲＤＰ等の技法によって特徴づけられるような１型または２型を含むが、これらに限定されない。
式Ｉ
【化２】
2020105178.tif 000003
［式中、Ｒ1は式ＩＩを有し、ここで、
Ｒ1は
【化３】
2020105178.tif 000004
であり、
式中、ｐは０〜２であり；ｍは０〜４であり；ｎは０〜５であり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＣＯ、ＣＨＣＮ、ＣＨ2、またはＣ＝ＮＲ6（式中、Ｒ6は、水素、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ低級アルキルアミノまたはシアノである）であり；ならびに、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ）、シアノ、トリフルオロメチル、低級アルカノイル、ニトロ、低級アルキル、低級アルコキシ、カルボキシ、低級カルバルコキシ（ｃａｒｂａｌｋｏｘｙ）、トリフロロメトキシ（ｔｒｉｆｕｌｏｒｏｍｅｔｈｏｘｙ）、アセトアミド、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、トリクロロビニル、トリフルオロメチルチオ、トリフルオロメチルスルフィニル、またはトリフルオロメチルスルホニルであり；Ｒ2は、アミノ、モノ低級アルキルアミノもしくはジ低級アルキルアミノ、アセトアミド、アセトイミド、ウレイド、ホルムアミド、ホルムイミドまたはグアニジノであり；ならびにＲ3は、カルバモイル、シアノ、カルバゾイル、アミジノまたはＮ−ヒドロキシカルバモイルであり；低級アルキル、  を含む低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルカノイル基は１〜３の炭素原子を含む。］
【００３４】
５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾール化合物をオロチン酸と反応させて、本発明の方法に記載の使用のためのＣＴＯを形成する本発明の改良されたより安全な方法によって、１：１〜１：４（塩基：酸）の範囲の比で５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾール化合物のオロチン酸塩化合物を形成する。
【００３５】
ＣＡＩの新規の多形体をオロチン酸とさらに反応させて、式ＩＩ：
式ＩＩ
【化４】
2020105178.tif 000005
［式中、オロチン酸はＲ2にイオン結合され、
Ｒ1は、
【化５】
2020105178.tif 000006
であり、
式中、ｐは０〜２であり；ｍは０〜４であり；ｎは０〜５であり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＣＯ、ＣＨＣＮ、ＣＨ2、またはＣ＝ＮＲ6（式中、Ｒ6は、水素、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ低級アルキルアミノまたはシアノである）であり；ならびに、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ）、シアノ、トリフルオロメチル、低級アルカノイル、ニトロ、低級アルキル、低級アルコキシ、カルボキシ、低級カルバルコキシ（ｃａｒｂａｌｋｏｘｙ）、トリフロロメトキシ（ｔｒｉｆｕｌｏｒｏｍｅｔｈｏｘｙ）、アセトアミド、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、トリクロロビニル、トリフルオロメチルチオ、トリフルオロメチルスルフィニル、またはトリフルオロメチルスルホニルであり；Ｒ2は、アミノ、モノ低級アルキルアミノもしくはジ低級アルキルアミノ、アセトアミド、アセトイミド、ウレイド、ホルムアミド、ホルムイミドまたはグアニジノであり；ならびにＲ3は、カルバモイル、シアノ、カルバゾイル、アミジノまたはＮ−ヒドロキシカルバモイルであり；低級アルキル、  を含む低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルカノイル基は１〜３の炭素原子を含む。］の化合物のクラスのオロチン酸塩化合物を形成する。
【００３６】
本明細書において定義される「ＣＴＯ」の好ましい実施形態は、Ｃ22Ｈ16Ｃｌ3Ｎ7Ｏ6（分子量５８０．７６）の実験式を有し、２０１℃および２３６℃の２つの転位融点がある。ＣＴＯは、オロチン酸をイオン結合したＣＡＩの新規多形体を含む。ＣＡＩは、１型（パターン１）または２型（パターン２）を含むが、これらに限定されない多くの多形体を有する。ＣＴＯの２つの実施形態は異なる転位融点を有し、例えば、ＣＴＯ（１型、パターン１）は約１３６℃、１９４℃および２３５℃の融点を有し；ＣＴＯ（２型、パターン２）は約１３７℃および２３４℃の融点を有する。ＣＴＯの２つの実施形態は、構造ＣＡＩ：オロチン酸と一致する1Ｈ  ＮＭＲスペクトル（それぞれ図１および図２）、および１型および２型と一致するＦＴ−ＩＲパターン（それぞれ図３および図４）を有する。１型および２型のＸ線粉末回折パターンによって示されるようにＣＴＯは結晶である（それぞれ図５および図６）。
【００３７】
ＣＴＯの好ましい実施形態の化学名は、５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド  （オロチン酸との化合物）；５−アミノ−１−（３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（オロチン酸との化合物）；および５−アミノ−１−｛［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル｝−１Ｈ，１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（オロチン酸との化合物）を含む。
【００３８】
より詳細には、ＣＴＯの多形体の化学構造は、
【化６】
2020105178.tif 000007
【００３９】
追加の実施形態は、ＣＡＩおよびオロチン酸（ＣＡＯ）の異なる多形体の製剤を含む。
５−アミノもしくは置換アミノ１，２，３−トリアゾール（ＣＡＩ）、または５−アミノ１，２，３−トリアゾールもしくは置換アミノ１，２，３−トリアゾールの新規多形体を、１：１〜１：４（塩基：酸）の範囲でオロチン酸と混合して、本発明の方法に記載のＣＡＯ使用の製剤を提供する。
【００４０】
新規方法：
本発明の化合物を調製できる、本発明の新規の方法は、５工程の以下の反応スキームＩＩで示される。より具体的には、新規の方法はジフェニルホスホルイルアジドを使用して、工程３において、アジ化ナトリウムと反応させる代わりに、中間体８５８．Ｂと反応させる。これは、中間体８５８．Ｃを形成する先行技術における工程３を除去する。上記のスキームＩ（６工程）を参照されたい。詳細な方法は実施例中で記載される。８５８．Ａ〜８５８．Ｆは以下に要約される中間生産物およびＣＴＯを表わす。
８５８．Ａはｔ−ブチルジメチルシリル−３，５−ジクロロベンジルエーテルを表わす。
８５８．Ｂは３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアルコールを表わす。
８５８．Ｃは３，５−ジクロロ−４−（４’−クロロベンゾイル）ベンジルクロライドを表わす。
８５８．Ｄは３，５−ジクロロ−４−（４’−クロロベンゾイル）ベンジルアジドを表わす。
８５８．Ｅは５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドを表わす。
８５８．Ｆは５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（オロチン酸との化合物）（ＣＡＩ：オロチン酸）（ＣＡＩ：オロチン酸塩）（ＣＴＯ）を表わす。
【化７】
2020105178.tif 000008
【００４１】
重要なことには、先行技術中で記載された手順によって合成されたＣＡＩと比較した場合、上記の方法によって製造したＣＡＩ、ＣＴＯおよびＣＡＯの異なる多形体は、げっ歯類においてより少ない胃病変および毒性を示すことが観察された。これは、アジ化ナトリウムまたはアジ化カリウム等の毒性の成分の使用が無いことに関連する可能性がある。
【００４２】
新規方法は、ＣＡＩ、ＣＴＯおよびＣＡＯの新規多形体の生産ももたらした。従って、本発明の化合物は、１つの以上の異なる結晶構造に結晶化し、ＮＭＲ、ＤＳＣ、ＦＴ−ＩＲおよびＸＲＤＰ等の技法によって特徴づけられるような、ＣＡＩの異なる多形体の異なる化学的特性を示す分子を含む（図１〜６）。
【００４３】
投薬量および製剤
５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体を、先行技術中で記載された手順によって生産されたＣＡＩの短所を克服する、化学的および生物学的特性を有する異なる多形体へ製造した。
【００４４】
加えて、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えて置換誘導体をオロチン酸と化学的に反応させて、に独特な生体利用率、薬物動態学的特性、安全性および実効性を有する、比１：１〜１：４（塩基：酸）でオロチン酸塩（ＣＴＯ）を形成する。
【００４５】
代替の実施形態は、５−アミノまたは置換アミノ１，２，３−トリアゾールに加えてその置換誘導体の多形体を、比１：１〜１：４（塩基：酸）でオロチン酸と混合して、ＣＡＩおよびオロチン酸（ＣＡＯ）の製剤を形成することを含む。
【００４６】
上記の医薬組成物および製剤は、原発性新生物および転移性新生物、慢性骨髄性白血病、黄斑変性症、網膜症ならびに他の細胞増殖性疾患の防止および治療のために哺乳類へ投与する医薬調製物へ製剤化することができる。トリアゾールオロチン酸塩化合物の多くは、有機酸塩として直接または薬学的に適合性のあるカウンターイオンと共に提供することができ、それらは単に水溶性の形態である。塩は、対応する遊離塩基形態よりも、水性溶媒または他のプロトン性溶媒中で可溶性である傾向がある。治療的化合物または医薬組成物は、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鞘内、経口的、経直腸的、局所的、またはエアロゾルによって投与することができる。
【００４７】
経口投与に好適な製剤は、固体粉末製剤、生理食塩水、水またはＰＥＧ  ４００等の希釈剤中に溶解した活性化合物の溶液；カプセル剤または錠剤（各々は固体、粉末、粒剤またはゼラチンとして所定の量の活性薬剤を含む）；近似の培地中の懸濁物；および乳化物を含む。
【００４８】
非経口投与に好適な製剤は、バッファー、抗酸化剤および防腐剤を含む水性および非水性の等張の滅菌溶液を含む。製剤は単位用量または多重用量の密封した容器中に入れることができる。
【００４９】
ＣＴＯの経口投与のための患者への投薬量は、０．２５〜５００ｍｇ／日、一般的には２５〜１００ｍｇ／日、および典型的には５０〜４００ｍｇ／日の範囲である。患者体重に関して言えば、通常の投薬量は、０．００５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、一般的には０．５〜２．０ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には１．０〜８．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。患者体表面積に関して言えば、通常の投薬量は０．１〜３００ｍｇ／ｍ2／日、一般的には２０〜２５０ｍｇ／ｍ2／日、典型的には２５〜５０ｍｇ／ｍ2／日の範囲である。投薬量および間隔を個々に調節して、異常なシグナル伝達および増殖に依存する疾患において、抗増殖性効果、抗転移性効果、抗血管新生効果または他の治療的効果を維持するのに十分な活性モイエティの血漿レベルを提供する。
【００５０】
用量は、投与経路（例えば静脈内、吸入／エアロゾル、直接腹腔内もしくは皮下、局所、または脊髄内投与）に依存して調節できる。
【００５１】
薬理化合物のための様々な送達システムは、リポソーム、ナノ粒子、懸濁物および乳化物を含むが、これらに限定されず、用いることができる。医薬組成物は、好適な固相もしくはゲル相の担体または賦形剤も含むことができる。かかる担体または賦形剤の例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコール等のポリマーを含むが、これらに限定されない。
【００５２】
さらに、標的化薬物送達システムで、例えば、ナノ粒子および他の形態として腫瘍特異的抗体によりコーティングされたリポソームで、薬物を投与することができる。リポソームまたはナノ粒子は、腫瘍または他の疾患標的に対して標的化され、それらによって選択的に取り込まれ得る。
【００５３】
新しく見出されたリード分子の構築に最も難しい特性の１つは、特に経口投薬された化合物のケースにおける、望ましい薬物動態プロファイルである。「経験を積んだ医薬化学者の多くは、標的受容体に対して低い有効性を示すが、本質的に優れた薬物動態学的特性を有する構造シリーズで開始し、次いで他の方向で作業するのではなく、標的に対する有効性の改良について着手することを好む」「薬物探索における有機化学、薬物探索（Organic Chemistry in Drug Discovery, Drug Discovery）」、Science 303: 1810-1813 (2004)。
【００５４】
経口投与されたＣＴＯの生体利用率の改良。
本発明は、概して、ＣＴＯ（比１：１〜１：４（塩基：酸）のＬ６５１５８２の独特なオロチン酸塩）の経口生体利用率、送達およびクリアランスを増加させる方法に関する。本発明は、薬物の経口生体利用率、毒性学プロファイルおよび有効性の改良するために、イオン化中心を有する非水溶性薬物のオロチン酸塩を調製するために方法を提供する。好ましくはＣＴＯは比１：１であり、より好ましくは比１：２であり、最も好ましくは比０．７：１．３である。
【００５５】
優れた生体利用率は、薬物を口にすることによって全身循環に達することを意味するので、経口経路経由の薬物の吸収は医薬産業界における熱心な研究対象である。経口吸収は、投薬形態からの薬物溶解、薬物が水性環境および膜と相互作用する様式、膜を横切る透過、ならびに腸、肝臓および肺等の初回通過器官による不可逆的除去を含む、薬物の特性および胃腸管の生理的機能の両方によって影響を受ける。低可溶性を示すいくつかの医薬薬剤は、低生体利用率または不規則な吸収を示し、不規則性の程度は、用量レベル、患者の摂食状態および薬物の物理化学的性質等の因子により影響を受ける。
【００５６】
絨毛および微絨毛の存在が吸収力のある多面的な面積を増加させるので、大部分の薬物吸収が大きな表面積がある小腸で起こる。腸の循環は、腸が肝臓への基質の流動を調節する前方組織または門脈組織であるという点で独特である。腸の静脈血は、肝臓への血液供給の約７５％を構成する。それゆえ、腸によって高度に取り除かれる薬物については、薬物代謝に対する肝臓、腎臓または肺の寄与は低下するようになる。反対に、腸によってあまり抽出されない薬物については、基質は、除去のための次の器官（肝臓および肺）に達することができる。それゆえ、腸に入る薬物の濃度および腸の流量は、薬物送達率を変化させて、肝臓の初回通過代謝を介して腸の割合およびクリアランスに影響を与える。
【００５７】
「薬物生体利用率」は、全身的に経時的利用可能な薬物の量として本明細書において定義される。本発明は、医薬剤をオロチン酸塩に転換することによって医薬剤の薬物生体利用率を増加させる。これは、薬物が壁膜に浸透し、血液潅流率が吸収のための全体的な律速工程になるように、薬物の親水性および親油性を変化させることによって、もしくは腸における薬物生体変換の阻害によって、および／または血流の中への腸膜を横切る薬物の正味輸送を減少させる、腸における能動的逆輸送システムの阻害によって、達成することができる。いずれのケースも、増加した薬物生体利用率に関与する組成物は医薬剤のオロチン酸塩である。すぐに明らかになる理由ではないが、非水溶性Ｌ６５１５８２のＣＴＯ（塩基：酸、０．５：１〜１：２）への転換は、治療を必要とする哺乳類へ経口投与した医薬剤の生体利用率を増加させる方法を提供することが見出されている。
【００５８】
統合された全身濃度における経時的な変化は、曲線下面積（ＡＵＣ）またはＣmax（両者とも当該技術分野において周知のパラメータ）によって示される。
【００５９】
本発明は、医薬剤の投薬と比較して少なくとも２５％〜１００％のＡＵＣによって測定されるような、医薬剤のオロチン酸塩の生体利用率の増加を、組成物が提供する方法を提供する。
【００６０】
本発明は、少なくとも５０％〜１００％のＣmaxによって測定されるように、医薬剤のオロチン酸塩の生体利用率を増加させる組成物を提供する。
【００６１】
化学療法剤の「副作用」または「毒性」または「副作用」は、化学療法投与の急性期、および準臨床的組織損傷を持つ癌が治癒した患者で観察される。かなり重篤で障害を与え不可逆的な薬物関連の組織副作用については、高く認識されている。臨床医は、化学療法剤について可能性のある組織／器官合併症に承知していなければならず、必要に応じて、治療法の開始前に基本的組織検査を実行しなければならない。
【００６２】
薬物の「クリアランス」は、抽出器官への血液の灌流によって生じる。「抽出」とは、不可逆的に除去（排泄）または異なる化学形態へ変化（代謝）される、器官へ提示された薬物の比率を指す。
【００６３】
本発明は、医薬剤の投薬と比較して少なくとも２５％〜１００％の薬理学的試験によって測定されるような、非癌性組織または正常組織からのＣＴＯのオロチン酸誘導体のクリアランスを増加させる方法を提供する。
【００６４】
薬物の経口投薬後の「生体利用率」とは、薬物または代謝物質の活性モイエティが全身循環に入り、それによって作用部位へ接近できる程度または率である。薬物の生理化学的な特性は、その吸収能および血清タンパク質へ結合を決定する。薬物の有効性は、分子標的との相互作用に依存する。それゆえ、投薬形態の特性は、その化学的特徴およびバルク量での薬物の製造のための方法に部分的に依存する。規定の薬物の化学的製剤の中の生体利用率、有効性、輸送およびクリアランスにおける差には臨床的有意性があり得る。
【００６５】
薬物が完全に吸収される場合でさえ、あまりにも緩慢に吸収されるのならば、治療的血中レベルを十分迅速に生ずることができなかったり、非常に急速に吸収されるのならば、各用量後に治療的レベルを達成するように与えられた高い薬物濃度から毒性が生じたりするので、「吸収」率は重要である。吸収は、３つの方法（受動拡散、能動輸送または促進能動輸送のいずれか）のうちの１つによって生じる。受動拡散は、分子の濃度が膜の両側の浸透バランスに達するまで、分子が粘膜バリアを横切る単純な通過である。能動輸送では、分子は、粘膜を横切って能動的にポンプで送り込まれる。促進輸送では、担体（一般的にはタンパク質）が、吸収のために膜を横切る分子の運搬に必要とされる。本発明は、薬物が異なる組織および器官にうまく送られ、脳に達する血液脳関門でさえ通過することを可能にする化学的立体配置でＣＴＯ化合物を提供する。
【００６６】
オロチン酸、遊離ピリミジンはウリジル酸（ＵＰＰ）（主要なピリミジンヌクレオチド）の合成において重要である。ピリミジンは細胞の調節および代謝で中心的な役割を果たす。ピリミジンは、ＤＮＡ／ＲＮＡ合成のための基質、いくつかのアミノ酸の生合成のレギュレーター、ならびにリン脂質、糖脂質、糖およびポリサッカライドの生合成におけるコファクターである。古典的なデノボピリミジン生合成経路はＵＭＰの合成により終了する。Biochemistry、Lubert Stryer編、W.H. Freeman & Co、ニューヨーク、第４版、７39-762(1995)。本発明は、溶解して帯電した分子および遊離オロチン酸として薬物を放出し、タンパク質へ薬物の結合を妨げ、標的への輸送および迅速なクリアランスを促進できる、ＣＴＯのクラスを提供する。
【００６７】
本発明は、１）ＣＡＩ＋オロチン酸の相当用量の製剤と比較したＣＴＯの有効性、２）ＰＥＧ−４００中のＣＴＯと比較した、カプセル化固体ＣＴＯとして与えられた場合のＣＴＯの生体利用率およびクリアランス、３）経口投与したＣＴＯの血液脳関門を介する脳への輸送、４）イヌにおける脈絡膜網膜複合体および硝子体液を含む異なる眼組織への経口投与したＣＴＯの輸送、における改良によって測定されるような、ＣＴＯの実効性における増加を示す実施形態を提供する。
【００６８】
重要なことには、ＣＴＯの前臨床毒性は、１７５および３５０、１０２５ｍｇ／ｋｇ／日で経口経路によってイヌで決定され、２８日後に死亡は起こらなかった。
【実施例】
【００６９】
実施例１
４−クロロベンゾイルクロライド
３，５−ジクロロベンジルアルコール（１モル）を、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（１．０５モル）、９９％イミダゾール（２．４４モル）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の４−ジメチルアミノピリジンで低温で処理して、抽出操作でｔ−ブチルジメチルシリル−３，５−ジクロロベンジルエーテル（８５８．Ａ１）を生産する。
【００７０】
実施例２
３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアルコール
ｔ−ブチルジメチルシリル−３，５−ジクロロベンジルエーテル（８５８．Ａ１）（１モル）を、ヘキサン中のｎ−ブチルリチウム１．６Ｍ溶液、続いてテトラヒドロフラン中の４−クロロベンゾイルクロライド（１．０１モル）と低温で反応させ、塩酸水溶液で中間体を処理して３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアルコール（８５８．Ｂ）を得た。
【００７１】
実施例３
３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアジド
３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジルアルコール（８５８．Ｂ）（１モル）を、トルエン中のジフェニルホスホリルアジド（ジフェニルホスホニックアジド）（ＤＰＰＡ）（１．２モル、および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（異名：ＤＢＵ）（１．２モル））と低温で反応させ、続いて水性の操作およびアルコール滴定を行い、３，５−ジクロロ−４−（４’−クロロベンゾイル）ベンジルアジド（８５８．Ｄ）を得た。ＤＰＰＡは、他の有機化合物の合成において使用される有機化合物である。Aust. J. Chem 26:1591-1593 (1973)。加熱に対するＤＰＰＡの安定性は、１５７℃での蒸留、および１７５℃の温度が到達するまで窒素の激しい発生が観察されないという事実によって示される。
【００７２】
実施例４
５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（ＣＡＩ）
３，５−ジクロロ−４−（４’−クロロベンゾイル）ベンジルアジド（８５８．Ｄ）（１モル）を、熱アセトニトリル中のシアノアセトアミド（１．６９モル）、および炭酸カリウム（６．２モル）と反応させて、５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（８５８．Ｅ）を得た。
【００７３】
実施例５
５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（オロチン酸との化合物）、（ＣＡＩ：オロチン酸）
５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（８５８．Ｅ）（１モル）を、オロチン酸（１．０３モル）およびメタノール／水混合物と反応させて、５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド（オロチン酸との固体化合物）（ＣＡＩ：オロチン酸；１：１）、（ＣＴＯ）（８５８．Ｆ）を得た。これは分子量５８０．７６ｇであり、示差走査熱量測定法によって測定された約１５１℃、２３８℃および３３２℃の転移融点を有する。ＸＲＰＤパターンは、ＣＴＯが結晶性および非晶性の（多形）材料からなることを示す。
【００７４】
実施例６
ＣＡＩ＋オロチン酸（１：１）とＣＴＯ（８５８．Ｆ）の抗癌活性の比較
ＣＴＯ（分子量５８０．８）およびＣＡＩ（分子量４２４．６）＋オロチン酸（分子量１５６．１）の効果を、オスの無胸腺のＮＣｒ−ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に移植されたＨＴ２９ヒト結腸腫瘍異種移植において研究した。６週間齢のマウスにＨＴ２９断片を移植し、１３日後に１０匹の３群に分類した。次の１４日間（１３〜２６日目）、群１対照（Ｃ）に媒質；群２＝３４３ｍｇ／ｋｇ／用量；群３＝２４０ｍｇ／ｋｇ／日のＣＡＩ＋１０３ｍｇ／ｋｇ／日のオロチン酸を投与した。４１日目に、以下に示されるように、平均腫瘍体積（ｍｍ3）が測定された。
群１（対照）＝１４３６ｍｍ3
グループ２（ＣＴＯ  ３４３ｍｇ／ｋｇ／日）＝８６４  ｍｍ3（ｐ＝０．００５０、群２ｖｓ群１）
群３（ＣＡＩ  ２５０ｍｇ／ｋｇ／日＋オロチン酸１０３ｍｇ／ｋｇ／日）＝１２６８  ｍｍ3（ｐ＝０．２７０６、群３ｖｓ群１）。これらの結果は、ＣＴＯは、化学的に反応させないＣＡＩおよびオロチン酸の同等量よりも、腫瘍増殖の阻止により効果的であることを示唆する。しかしながら、ＣＡＩ＋オロチン酸製剤はある程度の腫瘍阻止を示した。
【００７５】
実施例７
カプセルの固体またはＰＥＧ−４００の液体として経口的に与えられたＣＴＯの比較
ＣＴＯ（塩基：酸、０．７：１．３）の生体利用率を、カプセル（群１）で、またはＰＥＧ４００（群２）の経口強制投与で、単回用量６８５ｍｇ／ｋｇを投与することによって決定した。２匹のイヌ（１匹メス／１匹オス）を各群で使用した。血液サンプルを、０、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２および９２時間で収集した。ＣＡＩはＨＰＬＣ／ＭＳによって測定した。
【００７６】
カプセルを投与した群１。１時間後の血漿濃度は、オスおよびメスのイヌについて１５５および１７４ｎｇ／ｍｌであった。Ｃｍａｘは、オスについて１２時間では５８００ｎｇ／ｍｌ、およびメスについて２４時間では７９５０ｎｇ／ｍｌであった。オスおよびメスについてそれぞれ、半減期は１８時間および２２．７時間であり、ＡＵＣ値は３２６および２７７μｇ／ｍＬであった。
【００７７】
ＰＥＧ４００を強制投与した群２。１時間後の血漿濃度は、オスおよびメスのおイヌについて５１１および５７０ｎｇ／ｍｌであった。Ｃｍａｘは、オスについて２４時間では６６３４ｎｇ／ｍｌ、およびメスについて２４時間では５３５０ｎｇ／ｍｌであった。生体利用率は群１（１００％）の生体利用率の８１．８％であった。
【００７８】
これらの結果は、カプセルで固体として与えられたＣＴＯは、ＰＥＧ４００中のＣＴＯよりも優れた吸収パターンおよび生体利用率を有することを示す。これらおよび追加の結果に基づいて、ＣＴＯは患者に対してカプセルで固体として投与されるだろう。
【００７９】
実施例８
マウスに経口的に与えたＣＴＯは血液脳関門を通過する。
６匹の２群に分類した６週齢のマウスにＣＴＯを経口的に（ＰＥＧ４００中で）与えた。
２用量（群１＝５１３ｍｇ／ｋｇ；群２＝３４２ｍｇ／ｋｇ）で投与した。ＣＴＯによる処理の８時間後に、脳組織中のＣＴＯ濃度（ＣＡＩとして）の測定のために、マウスを安楽死させた。
【００８０】
得られた結果は次のとおりだった。群１のＣＡＩレベルは１５１６７±２３７２ｎｇ／ｇ組織であり、群２レベルのＣＡＩは１０９５０±１７０４ｎｇ／ｇの組織であり、両者とも治療的範囲（６０００ｎｇ／ｍＬ）であった。ＣＴＯが経口投与されたので、これらの結果は、ＣＴＯが血液脳関門を通過し標的器官（脳）に達することを示す。
【００８１】
本発明は、本発明の１つの態様の例証として意図される実施例において開示された実施形態による範囲で限定されるべきではなく、機能的同等の任意の方法も本発明の範囲内である。実際、本明細書において示され記載されたものの他にも、本発明の様々な修飾は前述の記載から当業者には明らかであろう。かかる修飾は、添付の請求項の範囲内に分類されることが意図される。
【００８２】
当業者は、本明細書において記載された本発明の具体的な実施形態に対する任意の同等物を、わずかなルーチンの実験を使用して、認識または確認することができる。かかる同等物は本請求項によって包含されることが意図される。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕式
【化８】
2020105178.tif 000009
［式中、
Ｒ1は、
【化９】
2020105178.tif 000010
であり、
式中、ｐは０〜２であり；ｍは０〜４であり；ｎは０〜５であり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＣＯ、ＣＨＣＮ、ＣＨ2、またはＣ＝ＮＲ6（式中、Ｒ6は、水素、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ低級アルキルアミノまたはシアノである）であり；ならびに、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ハロゲン（Ｆ、Ｂｒ、ＣＬ）、シアノ、トリフルオロメチル、低級アルカノイル、ニトロ、低級アルキル、低級アルコキシ、カルボキシ、低級カルバルコキシ、トリフルオロメトキシ、アセトアミド、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、トリクロロビニル、トリフルオロメチルチオ、トリフルオロメチルスルフィニル、またはトリフルオロメチルスルホニルであり；Ｒ2は、アミノ、モノ低級アルキルアミノもしくはジ低級アルキルアミノ、アセトアミド、アセトイミド、ウレイド、ホルムアミド、ホルムイミドまたはグアニジノであり；ならびにＲ3は、カルバモイル、シアノ、カルバゾイル、アミジノまたはＮ−ヒドロキシカルバモイルであり；低級アルキル、を含む低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルカノイル基は１〜３の炭素原子を含む。］
を有する塩基の多形型を含む、化合物。
〔２〕５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１〕に記載の化合物。
〔３〕５−アミノ−１−｛［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル｝−１Ｈ，１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１〕に記載の化合物。
〔４〕５−アミノ−１−（３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１〕に記載の化合物。
〔５〕前記多形型が１型または２型を含む、前記〔１〕に記載の化合物。
〔６〕式
【化１０】
2020105178.tif 000011
［式中、オロチン酸は１：１〜１：４の範囲でＲ2にイオン結合され、式中、
Ｒ1は、
【化１１】
2020105178.tif 000012
であり、
式中、ｐは０〜２であり；ｍは０〜４であり；ｎは０〜５であり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＣＯ、ＣＨＣＮ、ＣＨ2、またはＣ＝ＮＲ6（式中、Ｒ6は、水素、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ低級アルキルアミノまたはシアノである）であり；ならびに、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ハロゲン（Ｆ、Ｂｒ、Ｃｌ）、シアノ、トリフルオロメチル、低級アルカノイル、ニトロ、低級アルキル、低級アルコキシ、カルボキシ、低級カルバルコキシ、トリフルオロメトキシ、アセトアミド、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、トリクロロビニル、トリフルオロメチルチオ、トリフルオロメチルスルフィニル、またはトリフルオロメチルスルホニルであり；Ｒ2は、アミノ、モノ低級アルキルアミノもしくはジ低級アルキルアミノ、アセトアミド、アセトイミド、ウレイド、ホルムアミド、ホルムイミドまたはグアニジノであり；ならびにＲ3は、カルバモイル、シアノ、カルバゾイル、アミジノまたはＮ−ヒドロキシカルバモイルであり；低級アルキル、を含む低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルカノイル基は１〜３の炭素原子を含む。］
を有する塩基の多形型を含む、オロチン酸化合物。
〔７〕オロチン酸と結合された５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔６〕に記載の化合物。
〔８〕オロチン酸と結合された５−アミノ−１−｛［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル｝−１Ｈ，１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔６〕に記載の化合物。
〔９〕オロチン酸と結合された５−アミノ−１−（３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔６〕に記載の化合物。
〔１０〕前記塩基：酸比が、１：１〜１：４の範囲である、好ましくは１：１および最も好ましくは０．７：１．３である、前記〔６〕に記載の化合物。
〔１１〕前記多形型が１型または２型を含む、前記〔６〕に記載の化合物。
〔１２〕式
【化１２】
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を有する化合物。
〔１３〕式、
【化１３】
2020105178.tif 000014
［式中、オロチン酸は１：１〜１：４の範囲でＲ2にイオン結合され、式中、
Ｒ1は、
【化１４】
2020105178.tif 000015
であり、
式中、ｐは０〜２であり；ｍは０〜４であり；ｎは０〜５であり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＣＯ、ＣＨＣＮ、ＣＨ2、またはＣ＝ＮＲ6（式中、Ｒ6は、水素、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ低級アルキルアミノまたはシアノである）であり；ならびに、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、低級アルカノイル、ニトロ、低級アルキル、低級アルコキシ、カルボキシ、低級カルバルコキシ、トリフルオロメトキシ、アセトアミド、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、トリクロロビニル、トリフルオロメチルチオ、トリフルオロメチルスルフィニル、またはトリフルオロメチルスルホニルであり；Ｒ2は、アミノ、モノ低級アルキルアミノもしくはジ低級アルキルアミノ、アセトアミド、アセトイミド、ウレイド、ホルムアミド、ホルムイミドまたはグアニジノであり；ならびにＲ．3は、カルバモイル、シアノ、カルバゾイル、アミジノまたはＮ−ヒドロキシカルバモイルであり；低級アルキル、を含む低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルカノイル基は１〜３の炭素原子を含む。］
を有する塩基を含むオロチン酸塩化合物の調製のための、塩基の存在下における３，５−ジクロロ−４−（４’−クロロベンゾイル）ベンジルアジドとのアセトニトリルの反応を含む、新規方法。
〔１４〕前記オロチン酸化合物が、オロチン酸と結合される５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１３〕に記載の新規方法。
〔１５〕前記オロチン酸化合物が、オロチン酸と結合される５−アミノ−１−｛［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル｝−１Ｈ，１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１３〕に記載の新規方法。
〔１６〕前記オロチン酸化合物が、オロチン酸と結合される５−アミノ−１−（３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１３〕に記載の新規方法。
〔１７〕前記オロチン酸化合物が、０．５：１〜１：２、好ましくは１：１、および最も好ましくは０．７：１．３の範囲の塩基：酸比を有する、前記〔１３〕に記載の新規方法。
〔１８〕前記オロチン酸化合物が、０．７：１．３の塩基：酸比、および式、
【化１５】
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を有する、前記〔１３〕に記載の新規方法。
〔１９〕式、
【化１６】
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［式中、
Ｒ1は、
【化１７】
2020105178.tif 000018
であり、
式中、ｐは０〜２であり；ｍは０〜４であり；ｎは０〜５であり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＣＯ、ＣＨＣＮ、ＣＨ2、またはＣ＝ＮＲ6（式中、Ｒ6は、水素、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ低級アルキルアミノまたはシアノである）であり；ならびに、Ｒ4およびＲ5は、独立して、ハロゲン（Ｆｌ、Ｂｒ、Ｃｌ）、シアノ、トリフルオロメチル、低級アルカノイル、ニトロ、低級アルキル、低級アルコキシ、カルボキシ、低級カルバルコキシ、トリフルオロメトキシ、アセトアミド、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル、低級アルキルスルホニル、トリクロロビニル、トリフルオロメチルチオ、トリフルオロメチルスルフィニル、またはトリフルオロメチルスルホニルであり；Ｒ2は、アミノ、モノ低級アルキルアミノもしくはジ低級アルキルアミノ、アセトアミド、アセトイミド、ウレイド、ホルムアミド、ホルムイミドまたはグアニジノであり；ならびにＲ．3は、カルバモイル、シアノ、カルバゾイル、アミジノまたはＮ−ヒドロキシカルバモイルであり；低級アルキル、を含む低級アルキル、低級アルコキシおよび低級アルカノイル基は１〜３の炭素原子を含む。］
を有する塩基の多形体の調製のための、塩基の存在下における３，５−ジクロロ−４−（４’−クロロベンゾイル）ベンジルアジドとのアセトニトリルの反応を含む、新規方法。
〔２０〕前記化合物が、５−アミノ−１−（４−（４−クロロベンゾイル）−３，５−ジクロロベンジル）−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１９〕に記載の新規方法。
〔２１〕前記化合物が、５−アミノ−１−｛［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル｝−１Ｈ，１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１９〕に記載の新規方法。
〔２２〕前記化合物が、５−アミノ−１−（３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）ベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミドである、前記〔１９〕に記載の新規方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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