(57)【要約】【課題】  細胞における皮膚支帯成分のうち、生理老化によりその発現量が減少するタンパク質を増加させ、光老化によりその発現量が増加するタンパク質を減少させる成分が配合された、新規な抗老化方法を提供する。【解決手段】  細胞において、細胞骨格制御因子アクチン関連タンパク質３Ｂ（Ａｃｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｈｏｍｏｌｏｇ  Ｂ、ＡＣＴＲ３Ｂ）、リムドメインキナーゼ−１（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｋｉｎａｓｅ−１、ＬＩＭＫ１）、及びスーパービリン（Ｓｕｒｐｅｒｖｉｌｌｉｎ、ＳＶＩＬ）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させること、及び、光老化関連因子マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３、ＭＭＰ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９、ＭＭＰ９）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させること、を含む、抗老化方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞において、細胞骨格制御因子アクチン関連タンパク質３Ｂ（Ａｃｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｈｏｍｏｌｏｇ  Ｂ、ＡＣＴＲ３Ｂ）、リムドメインキナーゼ−１（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｋｉｎａｓｅ−１、ＬＩＭＫ１）、及びスーパービリン（Ｓｕｒｐｅｒｖｉｌｌｉｎ、ＳＶＩＬ）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させること、及び、光老化関連因子マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３、ＭＭＰ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９、ＭＭＰ９）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させること、を含む、抗老化方法。
【請求項２】
細胞骨格制御因子アクチン関連タンパク質３Ｂ（Ａｃｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｈｏｍｏｌｏｇ  Ｂ、ＡＣＴＲ３Ｂ）、リムドメインキナーゼ−１（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｋｉｎａｓｅ−１、ＬＩＭＫ１）、及びスーパービリン（Ｓｕｒｐｅｒｖｉｌｌｉｎ、ＳＶＩＬ）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させる抗生理老化成分を選択する工程と、光老化関連因子マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３、ＭＭＰ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９、ＭＭＰ９から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させる抗光老化成分を選択する工程と、選択された抗生理老化成分及び抗光老化成分とを組み合わせる工程と、を含む、抗老化剤設計方法。
【請求項３】
前記抗生理老化成分及び前記抗光老化成分が、生物由来抽出物である、請求項２に記載の抗老化剤設計方法。
【請求項４】
前記抗生理老化成分が以下の（ａ）群から少なくともひとつ選ばれる生物由来抽出物であり、前記抗光老化成分が以下の（ｂ）群から少なくともひとつ選ばれる生物由来抽出物である、請求項２又は３に記載の抗老化剤設計方法。
（ａ）バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）サンザシ属（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ）サンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｃｕｎｅａｔａ）、ミソハギ科（Ｌｙｔｈｒａｃｅａｅ）サルスベリ属（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ）オオバナサルスベリ（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ  ｓｐｅｓｉｏｓａ）、クワ科（Ｍｏｒａｓｅａｅ）クワ属（Ｍｏｒｕｓ）マグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ）、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｅｌｓ）オウレン属（Ｃｏｐｔｉｓ）オウレン（Ｃｏｐｔｉｓ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）アジサイ属（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）アマチャ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  ｖａｒ．  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、トクサ科（Ｅｑｕｉｓｅｔａｃｅａｅ）トクサ属（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ）スギナ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ  ａｒｖｅｎｓｅ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）ヤマハッカ属（Ｉｓｏｄｏｎ）ヒキオコシ（Ｉｓｏｄｏｎ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｅｒｅｃｔｕｍ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）マンダリンオレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、マツブサ科（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｅａｅ）マツブサ属（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ）チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、アサ科（Ｃａｎｎａｂａｃｅａｅ）カラハナソウ属（Ｈｕｍｕｌｕｓ）ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）キハダ属（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ）キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ）、センダン科（Ｍｅｌｉａｃｅａｅ）アザディラクタ属（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ）インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ  ｉｎｄｉｃａ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フウロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ヒメフウロ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ  ｒｏｂｅｒｔｉａｎｕｍ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フウロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ゲンノショウコ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、ツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）スノキ属（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ）セイヨウスノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）チョウセンアザミ属（Ｃｙｎａｒａ）チョウセンアザミ（Ｃｙｎａｒａ  ｓｃｏｌｙｍｕｓ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）アスパラトゥス属（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ）ルイボス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ヤグルマギク属（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ）ヤグルマギク（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ｃｙａｎｕｓ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇａ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｓｅ）モモ属（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ）モモ（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａ）、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ  ｂｉｅｎｉｓｓ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）クズ属（Ｐｕｅｒａｒｉａ）クズ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｍｏｎｔａｎａ）、マタタビ科（Ａｃｔｉ��ｉｄｉａｃｅａｅ）マタタビ属（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）キウイフルーツ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｋｅｉｓｋｅｉ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）ツルニンジン属（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ）ヒカゲツルニンジン（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ  ｐｉｌｏｓｕｌａ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）ゴレンシ属（Ａｖｅｒｒｈｏａ）ゴレンシ（Ａｖｅｒｒｈｏａ  ｃａｒａｍｂｏｌａ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ゴボウ属（Ａｒｃｔｉｕｍ）ゴボウ（Ａｒｃｔｉｕｍ  ｌａｐｐａ）、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）インドカリン属（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ）インドキノキ（Ｐｔｅｒｉｃａｒｐｕｓ  ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ニンジン属（Ｄａｕｃｕｓ）ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）、リンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）センブリ属（Ｓｗｅｒｔｉａ）センブリ（Ｓｗｅｒｔｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｊｕｎｏｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｔｉｃａｒｉａ）カモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）シナガワハギ属（Ｍｅｌｉｌｏｔｕｓ）に属する植物種、ツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ）チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）シソ属（Ｐｅｒｉｌｌａ）エゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）、イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）マダケ属（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ）モウソウチク（Ｐｏａｃｅａｅ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）カギカズラ属（Ｕｎｃａｒｉａ）ガンビールノキ（Ｕｎｃａｒｉａ  ｇａｍｂｉｒ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）ヨーロッパキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ  ｉｄａｅｕｓ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）キナノキ属（Ｃｉｎｃｈｏｎａ）に属する植物種、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ウイキョウ属（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ）ウイキョウ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ノイバラ（Ｒｏｓａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）クチナシ属（Ｇａｒｄｅｎｉａ）クチナシ（Ｇａｒｄｅｎｉａ  ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ）、トチノキ科（Ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎａｃｅａｅ）トチノキ属（Ａｅｓｃｕｌｕｓ）セイヨウトチノキ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ）、ローヤルゼリー
（ｂ）クワ科（Ｍｏｒａｓｅａｅ）クワ属（Ｍｏｒｕｓ）マグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）キハダ属（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ）キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ）、ラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）に属する植物種、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）ライム（Ｃｉｔｒｕｓ  ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・コリアナ（Ｒｏｓａ  ×  ｃｏｒｙａｎａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）ワイルドタイム（Ｔｈｙｍｕｓ  ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ）、マタタビ科（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｅａｅ）マタタビ属（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）キウイフルーツ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、マツブサ科（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｅａｅ）マツブサ属（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ）チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）ツルニンジン属（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ）ヒカゲツルニンジン（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ  ｐｉｌｏｓｕｌａ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）ゴレンシ属（Ａｖｅｒｒｈｏａ）ゴレンシ（Ａｖｅｒｒｈｏａ  ｃａｒａｍｂｏｌａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）インドカリン属（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ）インドキノキ（Ｐｔｅｒｉｃａｒｐｕｓ  ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）トチバニンジン属（Ｐａｎａｘ）オタネニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）シソ属（Ｐｅｒｉｌｌａ）エゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）、ツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ）チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）キナノキ属（Ｃｉｎｃｈｏｎａ）に属する植物種、ススキノキ科（Ｘａｎｔｈｏｒｒｈｏｅａｃｅａｅ）アロエ属（Ａｌｏｅ）アロエ（Ａｌｏｅ）、イラクサ科（Ｕｒｔｉｃａｃｅａｅ）イラクサ属（Ｕｒｔｉｃａ）イラクサ（Ｕｒｔｉｃａ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａｎａ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ウイキョウ属（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ）ウイキョウ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、ローヤルゼリー
【請求項５】
細胞骨格制御因子アクチン関連タンパク質３Ｂ（Ａｃｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｈｏｍｏｌｏｇ  Ｂ、ＡＣＴＲ３Ｂ）、リムドメインキナーゼ−１（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｋｉｎａｓｅ−１、ＬＩＭＫ１）、及びスーパービリン（Ｓｕｒｐｅｒｖｉｌｌｉｎ、ＳＶＩＬ）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させる抗生理老化成分、及び、光老化関連因子マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３、ＭＭＰ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９、ＭＭＰ９）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させる抗光老化成分、を含む、抗老化剤。
【請求項６】
前記抗生理老化成分及び前記抗光老化成分が、生物由来抽出物である、請求項５に記載の抗老化剤。
【請求項７】
前記抗生理老化成分が以下の（ａ）群から少なくともひとつ選ばれる生物由来抽出物であり、前記抗光老化成分が以下の（ｂ）群から少なくともひとつ選ばれる生物由来抽出物である、請求項５又は６に記載の抗老化剤。
（ａ）バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）サンザシ属（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ）サンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｃｕｎｅａｔａ）、ミソハギ科（Ｌｙｔｈｒａｃｅａｅ）サルスベリ属（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ）オオバナサルスベリ（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ  ｓｐｅｓｉｏｓａ）、クワ科（Ｍｏｒａｓｅａｅ）クワ属（Ｍｏｒｕｓ）マグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ）、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｅｌｓ）オウレン属（Ｃｏｐｔｉｓ）オウレン（Ｃｏｐｔｉｓ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）アジサイ属（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）アマチャ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  ｖａｒ．  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、トクサ科（Ｅｑｕｉｓｅｔａｃｅａｅ）トクサ属（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ）スギナ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ  ａｒｖｅｎｓｅ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）ヤマハッカ属（Ｉｓｏｄｏｎ）ヒキオコシ（Ｉｓｏｄｏｎ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｅｒｅｃｔｕｍ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）マンダリンオレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、マツブサ科（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｅａｅ）マツブサ属（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ）チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、アサ科（Ｃａｎｎａｂａｃｅａｅ）カラハナソウ属（Ｈｕｍｕｌｕｓ）ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）キハダ属（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ）キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ）、センダン科（Ｍｅｌｉａｃｅａｅ）アザディラクタ属（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ）インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ  ｉｎｄｉｃａ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フウロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ヒメフウロ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ  ｒｏｂｅｒｔｉａｎｕｍ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フウロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ゲンノショウコ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、ツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）スノキ属（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ）セイヨウスノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）チョウセンアザミ属（Ｃｙｎａｒａ）チョウセンアザミ（Ｃｙｎａｒａ  ｓｃｏｌｙｍｕｓ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）アスパラトゥス属（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ）ルイボス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ヤグルマギク属（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ）ヤグルマギク（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ｃｙａｎｕｓ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇａ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｓｅ）モモ属（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ）モモ（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａ）、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ  ｂｉｅｎｉｓｓ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）クズ属（Ｐｕｅｒａｒｉａ）クズ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｍｏｎｔａｎａ）、マタタビ科（Ａｃｔｉ��ｉｄｉａｃｅａｅ）マタタビ属（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）キウイフルーツ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｋｅｉｓｋｅｉ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）ツルニンジン属（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ）ヒカゲツルニンジン（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ  ｐｉｌｏｓｕｌａ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）ゴレンシ属（Ａｖｅｒｒｈｏａ）ゴレンシ（Ａｖｅｒｒｈｏａ  ｃａｒａｍｂｏｌａ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ゴボウ属（Ａｒｃｔｉｕｍ）ゴボウ（Ａｒｃｔｉｕｍ  ｌａｐｐａ）、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）インドカリン属（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ）インドキノキ（Ｐｔｅｒｉｃａｒｐｕｓ  ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ニンジン属（Ｄａｕｃｕｓ）ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）、リンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）センブリ属（Ｓｗｅｒｔｉａ）センブリ（Ｓｗｅｒｔｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｊｕｎｏｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｔｉｃａｒｉａ）カモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）シナガワハギ属（Ｍｅｌｉｌｏｔｕｓ）に属する植物種、ツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ）チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）シソ属（Ｐｅｒｉｌｌａ）エゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）、イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）マダケ属（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ）モウソウチク（Ｐｏａｃｅａｅ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）カギカズラ属（Ｕｎｃａｒｉａ）ガンビールノキ（Ｕｎｃａｒｉａ  ｇａｍｂｉｒ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）ヨーロッパキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ  ｉｄａｅｕｓ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）キナノキ属（Ｃｉｎｃｈｏｎａ）に属する植物種、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ウイキョウ属（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ）ウイキョウ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ノイバラ（Ｒｏｓａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）クチナシ属（Ｇａｒｄｅｎｉａ）クチナシ（Ｇａｒｄｅｎｉａ  ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ）、トチノキ科（Ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎａｃｅａｅ）トチノキ属（Ａｅｓｃｕｌｕｓ）セイヨウトチノキ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ）、ローヤルゼリー
（ｂ）クワ科（Ｍｏｒａｓｅａｅ）クワ属（Ｍｏｒｕｓ）マグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）キハダ属（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ）キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ）、ラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）に属する植物種、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）ライム（Ｃｉｔｒｕｓ  ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・コリアナ（Ｒｏｓａ  ×  ｃｏｒｙａｎａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）ワイルドタイム（Ｔｈｙｍｕｓ  ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ）、マタタビ科（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｅａｅ）マタタビ属（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）キウイフルーツ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、マツブサ科（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｅａｅ）マツブサ属（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ）チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）ツルニンジン属（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ）ヒカゲツルニンジン（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ  ｐｉｌｏｓｕｌａ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）ゴレンシ属（Ａｖｅｒｒｈｏａ）ゴレンシ（Ａｖｅｒｒｈｏａ  ｃａｒａｍｂｏｌａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）インドカリン属（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ）インドキノキ（Ｐｔｅｒｉｃａｒｐｕｓ  ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）トチバニンジン属（Ｐａｎａｘ）オタネニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）シソ属（Ｐｅｒｉｌｌａ）エゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）、ツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ）チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）キナノキ属（Ｃｉｎｃｈｏｎａ）に属する植物種、ススキノキ科（Ｘａｎｔｈｏｒｒｈｏｅａｃｅａｅ）アロエ属（Ａｌｏｅ）アロエ（Ａｌｏｅ）、イラクサ科（Ｕｒｔｉｃａｃｅａｅ）イラクサ属（Ｕｒｔｉｃａ）イラクサ（Ｕｒｔｉｃａ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａｎａ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ウイキョウ属（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ）ウイキョウ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、ローヤルゼリー
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚支帯成分の発現量を増加させ、皮膚支帯の状態を改善する、抗老化方法及び、抗老化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の老化は、その要因に基づき、加齢による生理老化や、紫外線の照射による光老化などの分類がなされている（特許文献１）。生理老化は一般に赤みの減少、黄みの増加、顔のタルミなどの表現形質が特徴であり、光老化は一般に黄みの増加やシワなどの表現形質が特徴である。
【０００３】
ここで、皮膚の老化に関しては、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）と呼ばれる網目状の線維構造の疎密が顔のタルミとの関連性を有することが知られている（非特許文献１）。また、額及び目尻において、深いシワ部位直下の皮下組織では皮膚支帯密度が減少していることが知られている（非特許文献２）。
【０００４】
皮膚支帯を構成するタンパク質として、コラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、バイグリカン（Ｂｉｇｌｙｃａｎ）、ビンキュリン（Ｖｉｎｃｕｌｉｎ）、ミクロフィブリル結合タンパク質４（Ｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４，ＭＦＡＰ４）、などが知られている（特許文献２、特許文献３）。しかし、各構成成分を減少させる原因因子や、その原因因子に作用する抗老化剤については、これまでに報告がない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−０５３７８９号公報
【特許文献２】特開２００６−２５７１０１号公報
【特許文献３】特開２０１７−２１８４２９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｓａｋａｔａ  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  ：”Ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｎ  ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｋｉｎ  ｓａｇｇｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｆｏｃｕｓｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ”，  ２３ｒｄ  ＩＦＳＣＣ，  Ｚｕｒｉｃｈ  （２０１５）
【非特許文献２】Ｔｓｕｋａｈａｒａ  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  （２０１２），  １４８，  ３９−４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで本発明は、細胞における皮膚支帯成分のうち、生理老化によりその発現量が減少するタンパク質、及び、光老化によりその発現量が減少するタンパク質をそれぞれ増加させる新規な抗老化方法、及び、抗老化剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、皮膚支帯において、生理老化により減少するタンパク質がコラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）であり、光老化により減少するタンパク質がミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）及びミクロフィブリル結合タンパク質４（Ｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ−ａｓｓｏｓｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４，ＭＦＡＰ４）であることを見出した。また、コラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）の減少の原因因子が、アクチン関連タンパク質３Ｂ（Ａｃｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｈｏｍｏｌｏｇ  Ｂ，ＡＣＴＲ３Ｂ）、リムドメインキナーゼ１（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  １、ＬＩＭＫ１）、及び、スーパービリン（Ｓｕｐｅｒｖｉｌｌｉｎ、ＳＶＩＬ）であること、及び、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）及びミクロフィブリル結合タンパク質（Ｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ−ａｓｓｏｓｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４，ＭＦＡＰ４）の減少の原因因子が、マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３）及びマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９）であることを特定した。さらに、本発明者は、これらの原因因子の発現量を増加又は減少させる生物由来抽出物のスクリーニングに成功した。
【０００９】
すなわち本発明は、細胞において、細胞骨格制御因子であるアクチン関連タンパク質３Ｂ（Ａｃｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｈｏｍｏｌｏｇ  Ｂ，ＡＣＴＲ３Ｂ）、リムドメインキナーゼ１（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  １、ＬＩＭＫ１）、及び、スーパービリン（Ｓｕｐｅｒｖｉｌｌｉｎ、ＳＶＩＬ）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させること、及び、光老化関連因子マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３）及びマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させること、を含む、抗老化方法である。
本発明によれば、前記細胞骨格制御因子の発現量を増加させ、前記光老化関連因子の発現量を減少させることにより、皮膚支帯の状態を改善することができる。
【００１０】
また本発明は、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、及びＳＶＩＬから選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させる抗生理老化成分を選択する工程と、光老化関連因子ＭＭＰ３及びＭＭＰ９から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させる抗光老化成分を選択する工程と、選択された抗生理老化成分及び抗光老化成分とを組み合わせる工程と、を含む、抗老化剤設計方法である。
本発明によれば、前記細胞骨格制御因子の発現量を増加させ、前記光老化関連因子の発現量を減少させることにより、皮膚支帯の状態を改善することができる抗老化剤を設計することができる。
【００１１】
さらに本発明は、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、及びＳＶＩＬから選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させる抗生理老化成分、及び、光老化関連因子ＭＭＰ３及びＭＭＰ９から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させる抗光老化成分、を含む、抗老化剤である。
本発明によれば、前記細胞骨格制御因子の発現量を増加させ、前記光老化関連因子の発現量を減少させることにより、皮膚支帯の状態を改善することができる。
【００１２】
本発明の好ましい形態では、前記抗生理老化成分及び／又は前記抗光老化成分は、生物由来抽出物である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の抗老化剤は、細胞において、細胞骨格制御因子を増加させ、光老化関連因子を減少させることにより、皮膚支帯成分であるタンパク質の発現量を増加させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】生理老化とコラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）との関連を表す図である。
【図２】生理老化と皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）の本数との関連を表す図である。
【図３】生理老化と細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、ＳＶＩＬの発現量との関連を表す図である。
【図４】細胞骨格制御因子とアクチンの凝集との関連を表す図である（３−１−２）。
【図５】コラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）と細胞骨格制御因子との関連を表す図である（３−２−２）。
【図６】光老化とミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ミクロフィブリル結合タンパク質４（Ｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ−ａｓｓｏｓｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４，ＭＦＡＰ４）との関連を表す図である。
【図７】光老化と皮膚支帯（Ｒｅｒｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）の太さとの関連を表す図である。
【図８】光照射とマトリックスメタロプロテイナーゼとの関連を表す図である。
【図９】ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ＭＦＡＰ４と、マトリックスメタロプロテイナーゼとの関連を表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明の好ましい実施形態について説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施形態に限定されない。
【００１６】
＜１＞抗老化方法
本発明の抗老化方法は、細胞骨格制御因子アクチン関連タンパク質３Ｂ（Ａｃｔｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｈｏｍｏｌｏｇ  Ｂ、ＡＣＴＲ３Ｂ）、リムドメインキナーゼ−１（ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ  ｋｉｎａｓｅ−１、ＬＩＭＫ１）、及びスーパービリン（Ｓｕｒｐｅｒｖｉｌｌｉｎ、ＳＶＩＬ）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させること、及び、光老化関連因子マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３、ＭＭＰ３）、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９、ＭＭＰ９）から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させること、を含む、抗老化方法である。
ここで、本発明の抗老化方法は非治療的方法であり、好ましくは美容方法、さらに好ましくは皮膚の美容方法である。
細胞骨格制御因子と光老化関連因子の両方に作用することにより、より効果的に抗老化することができる。
【００１７】
細胞骨格制御因子を増加させる方法、及び、光老化関連因子を減少させる方法は、例えば、後述する実施列でスクリーニングされた、各因子に作用する成分をそれぞれ１種類以上含む外用剤の塗布、経口剤の摂取、又は、物理的な刺激により各因子を増加及び／又は減少させる方法があるが、これらに限定されない。
各因子に作用する成分は、例えば、植物抽出物、菌類からの抽出物、藻類からの抽出物など、生物由来抽出物が好ましい。
【００１８】
前記生物由来抽出物のうち、植物の抽出物は、日本において自生又は生育された植物、漢方生薬原料などとして販売される日本産のものを用い抽出物を作製することもできるし、丸善株式会社などの植物抽出物を扱う会社より販売されている市販の抽出物を購入し、使用することもできる。
【００１９】
植物抽出物は、植物抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味するものとし、植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却した後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
【００２０】
本発明の抗老化方法では、外用剤を塗布する方法や、経口剤を摂取する方法とすることが好ましい。
外用剤によって抗老化する方法の場合、その方法に使用される外用剤の剤形は特に限定されないが、例えば化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬等の形態が挙げられる。中でも、皮膚支帯成分の発現量を増加させるという用途との関係から、継続的に使用できる化粧料の形態が好ましく、例えば化粧水、乳液、美容液、クリーム、ジェル、サンケア品等の形態が好ましい。
【００２１】
経口剤によって抗老化する方法の場合には、本発明の抗生理老化成分及び抗光老化成分を有効成分として含む食品用組成物を利用する方法が好ましい。具体的には、一般食品、錠剤、顆粒剤、ドリンク剤等の剤形を有するサプリメントの形態とすることが好ましい。
【００２２】
＜２＞抗老化剤の設計方法
本発明の抗老化剤の設計方法は、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１及びＳＶＩＬから選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させる抗生理老化成分を選択する工程と、及び、光老化関連因子ＭＭＰ３及びＭＭＰ９から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させる抗光老化成分を選択する工程と、選択された抗生理老化成分と、抗光老化成分とを組み合わせる工程と、を含む、抗老化剤の設計方法である。
抗生理老化成分と抗光老化成分を組み合わせて設計することで、各々の成分を単独で含む抗老化剤よりも、より効果的な抗老化剤を設計することができる。
【００２３】
抗生理老化成分及び抗光老化成分を選択する工程は、特に限定されない。例えば、単離した皮膚支帯細胞にスクリーニング対象の物質を接触させ皮膚支帯細胞を培養した後、生理老化又は光老化に関与する前記因子の遺伝子の発現量を測定することで、抗生理老化成分及び抗光老化成分を選択することができる。
【００２４】
抗生理老化成分と抗光老化成分は、例えば、後述する実施例でスクリーニングされた成分を、それぞれ１種類ずつを選び組み合わせても、一方の成分を１種類、他方の成分を２種類以上選び組み合わせても、両方の成分を２種類以上選び組み合わせても良い。
【００２５】
前記スクリーニング対象の物質は、例えば、植物抽出物、菌類からの抽出物、微生物からの抽出物など、生物由来抽出物が好ましい。
これらの入手法、製法は、＜１＞で説明した通りである。
【００２６】
本発明の抗老化剤の設計方法では、剤形は特に限定されないが、例えば外用剤または経口剤として設計することができる。
外用剤として設計する場合、例えば化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬等の形態が挙げられる。中でも、皮膚支帯成分の発現量を増加させるという用途との関係から、継続的に使用できる化粧料の形態で設計することが好ましく、例えば化粧水、乳液、美容液、クリーム、ジェル、サンケア品等の形態が好ましい。
各成分の含有量は、その作用効果や毒性を考慮して設計することができるが、抽出物の乾燥質量として０．０００１質量％〜３０質量％を目安とすることができる。
また、後述する任意成分を適宜配合してもよい。
【００２７】
経口剤として設計する場合、本発明の抗生理老化成分及び抗光老化成分を有効成分として含む食品用組成物として設計することが好ましい。具体的には、一般食品、錠剤、顆粒剤、ドリンク剤等の剤形を有するサプリメントの形態とすることが好ましい。
各成分の含有量は、剤形に応じて設計することができるが、１回あたりの摂取量が抽出物の乾燥質量として、１ｍｇ〜１０００ｍｇを目安とすることができる。
また、後述する任意成分を適宜配合してもよい。
【００２８】
＜３＞抗老化剤
本発明の抗老化剤は、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、及びＳＶＩＬから選択される少なくともひとつの因子の発現量を増加させる抗生理老化成分、及び、光老化関連因子ＭＭＰ３、及びＭＭＰ９から選択される少なくともひとつの因子の発現量を減少させる抗光老化成分、を含む、抗老化剤である。
好ましくは、抗生理老化成分と抗光老化成分は、例えば、植物抽出物、菌類からの抽出物、微生物からの抽出物など、生物由来抽出物である。これらの入手法、製法は、＜１＞で述べた通りである。
また、抗生理老化成分と抗光老化成分は、後述する実施例でスクリーニングされた各因子に作用する成分を、１種類ずつ選び組み合わせても、一方の成分を１種類、他方の成分を２種類以上選び組み合わせても、両方の成分を２種類以上選び組み合わせても良い。
【００２９】
本発明の抗老化剤は、製剤化に用いられる任意の成分と適宜組み合わせて、外用剤又は経口剤の形態とすることが好ましい。
外用剤としては、例えば、化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬等の形態が挙げられる。また、それらの剤形は特に制限されない。中でも、皮膚支帯成分の発現を促進させるという用途との関係から、継続的に使用可能な化粧料の形態が好ましく、中でも、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ジェル、サンケア品等の形態が好ましい。
【００３０】
また、経口剤とする場合には、本発明の抗老化剤を有効成分として含む食品用組成物の形態とすることが好ましい。より具体的には、一般食品、錠剤、顆粒剤、ドリンク剤等の剤形を有するサプリメントの形態とすることが好ましい。
【００３１】
外用剤における植物抽出物の含有量（抽出物の場合は乾燥質量）は、通常、０．００００１質量％以上、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上であり、通常８０質量％以下、好ましくは３０質量％以下、より好ましくは１０質量％以下である。上記範囲とすることで、好適にシワ改善、タルミ改善、ハリの低下防止、肌の弾力性の低下防止効果を奏する。
【００３２】
また、経口剤の場合には、剤形に応じて、１回あたりの摂取量が抽出物の乾燥質量として、通常、０．１ｍｇ以上、好ましくは１ｍｇ以上、より好ましくは１０ｍｇ以上であり、通常２０００ｍｇ以下、好ましくは１０００ｍｇ以下、より好ましくは５００ｍｇ以下である。
【００３３】
抗老化剤を化粧料の形態とする場合、通常化粧料に使用される成分を広く配合することが可能であり、また、その剤形や用途についても、何ら限定されない。
以下、化粧料に適用される場合、化粧料中に含有させることができる他の成分について説明する。
【００３４】
化粧料においては、前述した生物由来抽出物に加え、美白成分、他のシワ改善成分、抗炎症成分等を配合することができる。
美白成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３−О−エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、１−トリフェニルメチルピペリジン、１−トリフェニルメチルピロリジン、２−（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２−（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２−（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン及びアミノジフェニルメタン、Ｎ−（ｏ−トルオイル）システイン酸、Ｎ−（ｍ−トルオイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−トルイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−メトキシベンゾイル）システイン酸等が挙げられる。更にその他の美白成分として、Ｎ−ベンゾイル−セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−エチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン、Ｎ−（４−フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  エチルエステル、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−ベンゾイル−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−アセチルセリン、Ｎ−（２−ナフトイル）−Ｏ−メチルセリン等があげられる。
【００３５】
これらの美白成分は、既に市販されているものもあれば、合成により入手することもできる。例えば、３−О−エチルアスコルビン酸は、特開平８−１３４０５５号公報に記載の公知の方法で合成することが出来る。市販品（日本精化製「ＶＣエチル」）もあるので、これらを入手して使用することが可能である。１−トリフェニルメチルピペリジン、１−トリフェニルメチルピロリジン、２−（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２−（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２−（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン、アミノジフェニルメタンは特許文献ＷＯ２０１０―０７４０５２号パンフレットに、Ｎ−（ｏ−トルオイル）システイン酸、Ｎ−（ｍ−トルオイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−トルイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−メトキシベンゾイル）システイン酸、Ｎ−（４−フェニルベンゾイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−トルオイル）ホモシステイン酸、はＷＯ２０１１−０５８７３０号パンフレットに、Ｎ−ベンゾイル−セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−エチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン、Ｎ−（４−フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  エチルエステル、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−ベンゾイル−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−アセチルセリン、Ｎ−（２−ナフトイル）−Ｏ−メチルセリン等はＷＯ２０１１／０７４６４３号パンフレットに、それぞれその合成方法が公開されているので、該開示に従い合成することができる。
化粧料における美白成分の含有量は、通常０．０００１〜３０質量％であり、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。
【００３６】
シワ改善成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。ただし、上記抗生理老化作用及び抗光老化作用とは異なるメカニズムでシワ改善効果を有する成分を用いることが、各成分の作用効果を存分に生かす観点から好ましい。例えば、ビタミンＡ又はその誘導体としてレチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールが挙げられる。また、ウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。化粧料における皮膚支帯の発現促進剤の他のシワ改善成分の含有量は、通常０．０００１〜３０質量％であり、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。
【００３７】
抗炎症成分としては、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、好ましくは、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩が好ましく挙げられる。
化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、１〜５質量％がより好ましい（抽出物の場合は乾燥質量）。
【００３８】
また、一般的に医薬品、化粧料、食品等に用いられている動植物由来の抽出物を用いることが好ましい。例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボガドエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロニアエキス、ウドエキス、エゾウコギエキス、オドリコソウエキス、カキョクエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クマザサエキス、クルミエキス、黒米エキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タンポポエキス、チョウジエキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンニクエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ヘチマエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、マツエキス、ミズバショウエキス、メリッサエキス、モズクエキス、ユーカリエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、リンゴエキス、レイシエキス、レタスエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。
【００３９】
化粧料中における前記任意の動植物由来抽出物の含有量（乾燥質量）は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、０．３〜３質量％がより好ましい。
食品中における前記任意の動植物抽出物の含有量（乾燥質量）は、通常０．０１〜８０質量％であり、０．１〜５０質量％が好ましく、１〜３０質量％がより好ましい。
【００４０】
また、化粧料には、前述した有効成分以外に、通常化粧料で使用される任意成分としては、本発明の効果を損なわない範囲で、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等のポリオール、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類、表面処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面処理されていても良い、酸化コバルト、群青、紺青、酸化亜鉛の無機顔料類、表面処理されていても良い、酸化鉄二酸化チタン焼結体等の複合顔料、表面処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩，ビタミンＢ６トリパルミテート，ビタミンＢ６ジオクタノエート，ビタミンＢ２又はその誘導体，ビタミンＢ１２，ビタミンＢ１５又はその誘導体等のビタミンＢ類、α−トコフェロール，β−トコフェロール，γ−トコフェロール，ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類が挙げられる。
【００４１】
＜試験例１＞生理老化に関与する因子の特定と、抗生理老化成分のスクリーニング
（１）生理老化とコラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）との関連性
以下に記載する方法で、生理老化とコラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）との関連を調べた。
【００４２】
（１−１）実験操作
まず、若齢者（２０−３０代）及び老齢者（６０−９０代）のヒト非露光部組織を、凍結組織包理剤（ＯＣＴコンパウンド）で凍結処理し、組織切片を用意した。
【００４３】
用意した組織切片を１０％中性緩衝ホルマリンにて固定し、その後ＰＢＳで洗浄し、Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅを用い、ブロッキング処理した。
【００４４】
ブロッキング処理した組織切片に一次抗体を添加し、４℃条件下で一晩静置した。
静置後ＰＢＳで洗浄し、ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＡＢＣ−ＡＰ  Ｋｉｔ（ＶＥＣＴＯＲ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  社製）およびＡｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ＫｉｔＩ  ＜ＶＥＣＴＯＲ  Ｒｅｄ＞  （ＶＥＣＴＯＲ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  社製）を用い、処理した。
【００４５】
増感剤による処理後、ＰＢＳで洗浄しマイヤーヘマトキシリン染色溶液で核を染色した。染色後に流水洗水し、１００％エタノールで脱水処理をした。脱水処理後、キシレンで透徹処理をし、非水溶性封入剤を用い封入した。
以上の工程により封入した組織切片について、コラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）の染色度合いの観察を行った。
【００４６】
（１−２）結果及び考察
生理老化の影響が大きい老齢者の非露光部の皮膚支帯では、生理老化の影響が小さい若齢者の非露光部の皮膚支帯に比して、コラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）の量が少ないことがわかった（図１）。
以上より、加齢による影響（生理老化）によって、コラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）が減少することが分かった。
【００４７】
また、図２に示すように、老齢者（生理老化による影響が比較的大きい被験者）では、加齢による影響（生理老化）によって皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）の本数が少なくなっていることがわかった。
【００４８】
（２）生理老化と、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１及びＳＶＩＬとの関連
次に、以下の方法で、生理老化と、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１及びＳＶＩＬとの関連を調べた。
【００４９】
（２−１）実験操作
ヒト正常非露光部皮下組織（若齢  （３０代）、老齢（６０−８０代））を、ＲＮＡｌａｔｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いて固定処理した。
【００５０】
固定したヒト正常非露光部皮下組織から皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）のみを単離した。単離した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）を破砕し、ＲＮｅａｓｙ  Ｆｉｂｒｏｕｓ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いてＲＮＡを回収した。回収したＲＮＡについて、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  社製）を用い、ｃＤＮＡを合成した。
【００５１】
ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ａｓｓａｙ  （ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いて定量的ＲＴ−ＰＣＲを行い、ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１及びＳＶＩＬの遺伝子発現量の遺伝子発現量を測定した。
ここで、遺伝子発現量は、内在性コントロールをβ−Ａｃｔｉｎとし、比較ＣＴ法を用いて算出した。
【００５２】
（２−２）結果及び考察
図３に示した通り、加齢によって、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１及びＳＶＩＬが減少することがわかった。
【００５３】
ここで、（１）における図２では、加齢による影響（生理老化）によって皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）の本数が少なくなっていることが示されている。
すなわち、図２、図３及び観察の結果、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１及びＳＶＩＬの減少によって、皮膚支帯（Ｒｓｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）の本数が少なくなることがわかった。
【００５４】
（３）細胞骨格制御因子とコラーゲンＩ（Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ）の関連
次に、以下の方法で細胞骨格制御因子と、コラーゲンＩの関連を調べた。
【００５５】
（３−１）実験操作
（３−１−１）若齢由来の皮膚支帯細胞における、細胞骨格制御因子をノックダウンした際の細胞変化評価
【００５６】
ヒト正常皮下組織から取得した細胞をＯＧ（アウトグロース）法により培養した。培養した細胞から、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞のみをＣｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ  ＳＨ８００（ＳＯＮＹ  社製）を用い、単離した。
【００５７】
単離した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を４穴チャンバースライドに１．７×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
【００５８】
次に、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）  Ｉ  Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を用い、Ｓｉｌｅｎｃｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｒｅ−ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を調製した。
調製したＳｉｌｅｎｃｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｒｅ−ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｍｉｎ  ＲＮＡｉＭＡＸ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を用い、培養後の皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞に導入した。
【００５９】
ここで、使用したｓｉＲＮＡについて、１９塩基対の配列と３’末端オーバーハング部分の２塩基の配列とを、下記表１、表２、及び表３に示す。
なお、下記表１はＳＶＩＬを標的とするｓｉＲＮＡ、下記表２はＬＩＭＫ１を標的とするｓｉＲＮＡ、下記表３はＡＣＴＲ３Ｂを標的とするｓｉＲＮＡの配列である。
また、各表中の配列番号とは、１９塩基対の配列番号を示す。
【００６０】
【表１】
2020105125.tif 000002
【００６１】
【表２】
2020105125.tif 000003
【００６２】
【表３】
2020105125.tif 000004
【００６３】
Ｓｉｌｅｎｃｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｒｅ−ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を導入した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を２４時間培養した。
【００６４】
培養後の皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞をＰＢＳで洗浄し、４％ＰＦＡを用い、固定した。
【００６５】
固定後、ＰＢＳで洗浄し、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ／ＰＢＳを用い、処理した。
０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ／ＰＢＳによる処理の後、ＰＢＳで洗浄し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）  ５６８  Ｐｈａｌｌｏｄｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を用い、染色した。
【００６６】
染色後の皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を、再度、ＰＢＳで洗浄し、ＤＡＰＩ  Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ−Ｇ  （ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ  社製）を用い、封入した。封入後の皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞について、共焦点顕微鏡による観察を行った。
結果を図４に示す。
【００６７】
（３−１−２）結果及び考察
図４に示した通り、ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、及びＳＶＩＬのノックダウンによって、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞内のアクチンが凝集することがわかった。
【００６８】
（３−２−１）若齢由来の皮膚支帯細胞における、細胞骨格制御因子をノックダウンした際のＣｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ発現量の評価
【００６９】
ヒト正常皮下組織から取得した細胞をＯＧ（アウトグロース）法により培養した。培養した細胞から、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞のみをＣｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ  ＳＨ８００（ＳＯＮＹ  社製）を用い、単離した。
【００７０】
単離した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を２４穴プレートに１．７×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
【００７１】
次に、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）  Ｉ  Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を用い、Ｓｉｌｅｎｃｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｒｅ−ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を調製した。
調製したＳｉｌｅｎｃｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｒｅ−ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｍｉｎ  ＲＮＡｉＭＡＸ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を用い、培養後の皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞に導入した。
なお、各細胞骨格制御因子のノックダウンに使用したｓｉＲＮＡの配列は、上記表１〜３に示した。
【００７２】
Ｓｉｌｅｎｃｅ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｒｅ−ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を導入した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を２４時間培養した。
【００７３】
培養後の皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いてＲＮＡを回収した。回収したＲＮＡについて、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  社製）を用い、ｃＤＮＡを合成した。
【００７４】
ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ａｓｓａｙ  （ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いて定量的ＲＴ−ＰＣＲを行い、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉの遺伝子発現量を測定した。
ここで、遺伝子発現量は、内在性コントロールをβ−Ａｃｔｉｎとし、比較ＣＴ法を用い、算出した。
結果を図５に示す。
【００７５】
（３−２−２）結果及び考察
図５に示した通り、ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、及びＳＶＩＬのノックダウンによって、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉの遺伝子発現量が減少することがわかった。
【００７６】
（４）抗生理老化成分のスクリーニング
上記知見をもとに、細胞骨格制御因子ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、ＳＶＩＬのうちの少なくともひとつの発現量を増加させる、抗生理老化成分のスクリーニングを以下の方法で行った。
【００７７】
（４−１）操作
（４−１−１）準備工程
ヒト正常皮下組織から取得した細胞をＯＧ（アウトグロース）法により培養した。培養した細胞から、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞のみをＣｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ  ＳＨ８００（ＳＯＮＹ  社製）を用い、単離した。
【００７８】
単離した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を２４穴プレートに１．７×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
【００７９】
（４−１−２）適用工程
別途、ヒト正常皮膚の皮下組織を除去し、処理した皮膚に１５ｍｍ径の穴あけを行い、ポピドンヨード（ｐｏｖｉｄｏｎｅ  ｉｏｄｉｎｅ）で洗浄後、ＰＢＳで洗浄した。
【００８０】
洗浄後のヒト正常皮膚をセルカルチャーインサート（スタンディングタイプ：  サーモフィッシャーサイエンティフィック  社製）に載せた。そして、１０ｍｍ径にカットした濾紙にスクリーニング対象となる物質を染み込ませ、ヒト正常皮膚中心部に配置した。
ヒト正常皮膚中心部に配置したセルカルチャーインサート（スタンディングタイプ：  サーモフィッシャーサイエンティフィック  社製）を、（１−１）で用意した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を播種した２４穴プレートに設置し、２４時間培養した。
【００８１】
（４−１−３）測定工程
２４時間培養後、培地を除いた後、ＰＢＳで洗浄した。その後、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いてＲＮＡを回収し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  社製）を用いてｃＤＮＡを合成した。
【００８２】
ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ａｓｓａｙ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いて定量的ＲＴ−ＰＣＲを行い、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）における、ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、及びＳＶＩＬの遺伝子発現量を測定した。
ここで、遺伝子発現量は、内在性コントロールをβ−Ａｃｔｉｎとし、比較ＣＴ法を用いて算出した。
【００８３】
スクリーニング対象物質のうち、ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、及びＳＶＩＬの少なくともひとつの発現量を、コントロールと比して有意に増大させる作用を有するものを、本発明における抗生理老化成分とした。
【００８４】
（５）抗生理老化成分
上記スクリーニングの結果、以下に示す生物由来抽出物に、ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、ＳＶＩＬのうちの少なくともひとつの発現量を増大させる作用が見られた。
【００８５】
バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）サンザシ属（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ）サンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｃｕｎｅａｔａ）、ミソハギ科（Ｌｙｔｈｒａｃｅａｅ）サルスベリ属（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ）オオバナサルスベリ（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ  ｓｐｅｓｉｏｓａ）、クワ科（Ｍｏｒａｓｅａｅ）クワ属（Ｍｏｒｕｓ）マグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ）、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｅｌｓ）オウレン属（Ｃｏｐｔｉｓ）オウレン（Ｃｏｐｔｉｓ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）アジサイ属（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）アマチャ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  ｖａｒ．  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、トクサ科（Ｅｑｕｉｓｅｔａｃｅａｅ）トクサ属（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ）スギナ（Ｅｑｕｉｓｅｔｕｍ  ａｒｖｅｎｓｅ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）ヤマハッカ属（Ｉｓｏｄｏｎ）ヒキオコシ（Ｉｓｏｄｏｎ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）、オトギリソウ科（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ）オトギリソウ属（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｅｒｅｃｔｕｍ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）マンダリンオレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、マツブサ科（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｅａｅ）マツブサ属（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ）チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、アサ科（Ｃａｎｎａｂａｃｅａｅ）カラハナソウ属（Ｈｕｍｕｌｕｓ）ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓｌｕｐｕｌｕｓ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）キハダ属（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ）キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ）、センダン科（Ｍｅｌｉａｃｅａｅ）アザディラクタ属（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ）インドセンダン（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａ  ｉｎｄｉｃａ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フウロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ヒメフウロ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ  ｒｏｂｅｒｔｉａｎｕｍ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フウロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ゲンノショウコ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）、ツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）スノキ属（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ）セイヨウスノキ（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）チョウセンアザミ属（Ｃｙｎａｒａ）チョウセンアザミ（Ｃｙｎａｒａ  ｓｃｏｌｙｍｕｓ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）アスパラトゥス属（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ）ルイボス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ヤグルマギク属（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ）ヤグルマギク（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ｃｙａｎｕｓ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）ユキノシタ属（Ｓａｘｉｆｒａｇａ）ユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇａ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｓｅ）モモ属（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ）モモ（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａ）、アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）マツヨイグサ属（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ）メマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ  ｂｉｅｎｉｓｓ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）クズ属（Ｐｕｅｒａｒｉａ）クズ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｍｏｎｔａｎａ）、マタタビ科（Ａｃｔｉｎｉｄ��ａｃｅａｅ）マタタビ属（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）キウイフルーツ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）シシウド属（Ａｎｇｅｌｉｃａ）アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｋｅｉｓｋｅｉ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）ツルニンジン属（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ）ヒカゲツルニンジン（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ  ｐｉｌｏｓｕｌａ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）ゴレンシ属（Ａｖｅｒｒｈｏａ）ゴレンシ（Ａｖｅｒｒｈｏａ  ｃａｒａｍｂｏｌａ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ゴボウ属（Ａｒｃｔｉｕｍ）ゴボウ（Ａｒｃｔｉｕｍ  ｌａｐｐａ）、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）スイカズラ属（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）スイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）インドカリン属（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ）インドキノキ（Ｐｔｅｒｉｃａｒｐｕｓ  ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ニンジン属（Ｄａｕｃｕｓ）ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）、リンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）センブリ属（Ｓｗｅｒｔｉａ）センブリ（Ｓｗｅｒｔｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｊｕｎｏｓ）、キク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）シカギク属（Ｍａｔｔｉｃａｒｉａ）カモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）シナガワハギ属（Ｍｅｌｉｌｏｔｕｓ）に属する植物種、ツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ）チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）シソ属（Ｐｅｒｉｌｌａ）エゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）、イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）マダケ属（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ）モウソウチク（Ｐｏａｃｅａｅ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）カギカズラ属（Ｕｎｃａｒｉａ）ガンビールノキ（Ｕｎｃａｒｉａ  ｇａｍｂｉｒ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）ヨーロッパキイチゴ（Ｒｕｂｕｓ  ｉｄａｅｕｓ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）キナノキ属（Ｃｉｎｃｈｏｎａ）に属する植物種、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ウイキョウ属（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ）ウイキョウ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ノイバラ（Ｒｏｓａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）クチナシ属（Ｇａｒｄｅｎｉａ）クチナシ（Ｇａｒｄｅｎｉａ  ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ）、トチノキ科（Ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎａｃｅａｅ）トチノキ属（Ａｅｓｃｕｌｕｓ）セイヨウトチノキ（Ａｅｓｃｕｌｕｓ  ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ）、ローヤルゼリー
【００８６】
上記各植物由来物が、細胞において、何れの細胞骨格制御因子の発現量を増大させるかについて、表４に示す。
【００８７】
【表４】
2020105125.tif 000005
【００８８】
上記生物由来抽出物は、単独で用いても、２以上を組み合わせてもよい。
２以上の上記生物由来抽出物を組み合わせる場合、異なるタンパク質の発現量を増大させる作用を有する生物由来抽出物を組み合わせる形態とすることが好ましい。
また、上記生物由来抽出物の中でも、ＡＣＴＲ３Ｂ、ＬＩＭＫ１、ＳＶＩＬ全ての発現量を増大させる作用を有することから、サンザシエキス、オオバナサルスベリエキス、オウレンエキス、ホップエキス、ゲンノショウコエキス、メマツヨイグサ種子エキス、スターフルーツ葉エキス、ゴボウエキス、エイジツエキスのうちの少なくともひとつを含む形態とすることが好ましい。
【００８９】
＜試験例２＞光老化に関与する因子の特定と、抗光老化成分のスクリーニング
（１）光老化と、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ミクロフィブリル結合タンパク質（Ｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ−ａｓｓｏｓｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４，ＭＦＡＰ４）との関連
以下に記載の方法で、光老化と、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ＭＦＡＰ４との関連を調べた。
【００９０】
（１−１）実験操作
まず、老齢者（６０−９０代）のヒト正常皮下組織（非露光部）・皮下組織（露光部）を、凍結組織包理剤（ＯＣＴコンパウンド）で凍結処理し、組織切片を用意した。
【００９１】
用意した組織切片を１０％中性緩衝ホルマリンにて固定し、その後ＰＢＳで洗浄し、Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅを用い、ブロッキング処理した。
【００９２】
ブロッキング処理した組織切片に一次抗体を添加し、４℃条件下で一晩静置した。
静置後ＰＢＳで洗浄し、ＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＡＢＣ−ＡＰ  Ｋｉｔ  （ＶＥＣＴＯＲ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  社製）及び、Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ＫｉｔＩ  ＜ＶＥＣＴＯＲ  Ｒｅｄ＞  （ＶＥＣＴＯＲ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  社製）を用い、処理した。
【００９３】
上記の増感剤による処理後、ＰＢＳで洗浄しマイヤーヘマトキシリン染色溶液で核を染色した。染色後に流水洗水し、１００％エタノールで脱水処理をした。
脱水処理後、キシレンを用い透徹処理をし、非水溶性封入剤を用い封入した。以上の工程により調製した組織切片について、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ＭＦＡＰ４の染色度合いの観察を行った。
【００９４】
（１−２）結果及び考察
老齢者の皮下組織において、皮下組織（露光部）の方が、皮下組織（非露光部）に比して、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ＭＦＡＰ４の量が少ないことがわかった（図６）。
【００９５】
以上より、光の照射による影響（光老化）によって、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）及び、ＭＦＡＰ４の発現量が減少することがわかった。
【００９６】
また、図７に示すように、老齢者の皮下組織では、皮下組織（露光部）のほうが、皮下組織（非露光部）に比して、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）が細くなっていることがわかった。
【００９７】
すなわち、図６、図７及び観察の結果、ミメカン、ＭＦＡＰ４の減少によって、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）が細くなることがわかった。
【００９８】
（２）光老化とマトリックスメタロプロテイナーゼとの関連
次に、以下に記載の方法で、光老化とマトリックスメタロプロテイナーゼとの関連を調べた。
【００９９】
（２−１）実験操作
まず、ヒト正常組織（非露光部）（表皮、真皮、皮下組織）を一晩ｅｘ  ｖｉｖｏ培養し、ＵＶＡ、ＵＶＢ、可視光、ＩＲを図８に示す条件で照射した。
【０１００】
次に、光線照射後のヒト正常組織に対し、ＲＮＡｌａｔｅｒ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）で処理することにより、固定した。固定した組織から皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）のみを単離した。
【０１０１】
単離した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）を破砕し、ＲＮｅａｓｙ  Ｆｉｂｒｏｕｓ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いてＲＮＡを回収した。回収したＲＮＡについて、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  社製）を用い、ｃＤＮＡを合成した。
【０１０２】
ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ａｓｓａｙ  （ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いて定量的ＲＴ−ＰＣＲを行い、マトリックスメタロプロテイナーゼ−３（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−３、ＭＭＰ３）、マトリクッスメタロプロテイナーゼ−９（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９、ＭＭＰ９）の遺伝子発現量を測定した。
ここで、遺伝子発現量は、内在性コントロールをβ−Ａｃｔｉｎとし、比較ＣＴ法を用いて算出した。
【０１０３】
（２−２）結果及び考察
図８に示した通り、光の照射によって、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９の遺伝子発現量が増大することがわかった。
以下、ＭＭＰ３、及びＭＭＰ９を、光老化関連因子とする。
【０１０４】
（３）光老化関連因子と、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ＭＦＡＰ４との関連
次に、以下に記載の方法で、光老化関連因子と、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ＭＦＡＰ４との関連を調べた。
【０１０５】
（３−１）実験操作
まず、キモトリプシンを用い活性化させたマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ３またはＭＭＰ９）と、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）またはミクロフィブリル結合タンパク質４（Ｍｉｃｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒ−ａｓｓｏｓｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４、ＭＦＡＰ４）を、混合し、各酵素・基質反応溶液（図９  参照）を調製した。
【０１０６】
ここで、酵素活性阻害による基質分解の状態変化の確認のため、ＭＭＰ阻害剤（８０ｍＭ  ＮＮＧＨ（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙ−２−［［（４−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｓｕｌｆｏｎｙｌ］（２−ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌ）ａｍｉｎｏ］ａｃｅｔａｍｉｄｅ）（溶媒：ＤＭＳＯ））を添加した系を用意した。なお、ＭＭＰ阻害剤を含むサンプルは、上記の酵素・基質反応溶液に対し、ＮＮＧＨを添加することにより、調製した。
【０１０７】
調製した酵素・基質反応溶液を、３７℃の条件で、２４時間、振とう混和（インキュベート）した。
【０１０８】
Ｌａｎｅ  Ｍａｒｋｅｒ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ  ＳＤＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）をマーカーとし、図９に示す各系のサンプルをＳＤＳ−ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｇｅｌに充填（アプライ）し、電気泳動を行った。
【０１０９】
電気泳動の後、２Ｄ−Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｔａｉｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ＩＩ（Ｃｏｓｍｏ  Ｂｉｏ  社製）を用い銀染色し、タンパクバンドの定量を行った。結果を図９に示す。
【０１１０】
（３−２）結果及び考察
図９に示した通り、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９の存在によって、ミメカン（Ｍｉｍｅｃａｎ）、ＭＦＡＰ４が分解されることがわかった。
【０１１１】
（４）抗光老化成分のスクリーニング
上記の知見をもとに、ＭＭＰ３及びＭＭＰ９のうちの少なくともひとつの発現量を減少させる、抗光老化成分のスクリーニングを、以下の方法で行った。
【０１１２】
（４−１）操作
（４−１−１）準備工程
ヒト正常皮下組織から取得した細胞をＯＧ（アウトグロース）法により培養した。培養した細胞から、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞のみをＣｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ  ＳＨ８００（ＳＯＮＹ  社製）を用い、単離した。
【０１１３】
単離した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を２４穴プレートに１．７×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間培養した。
【０１１４】
（４−１−２）適用工程
別途、ヒト正常皮膚の皮下組織を除去した。処理した皮膚に１５ｍｍ径の穴あけを行い、ポピドンヨード（ｐｏｖｉｄｏｎｅ  ｉｏｄｉｎｅ）で洗浄後、ＰＢＳで洗浄した。
【０１１５】
洗浄後のヒト正常皮膚をセルカルチャーインサート（スタンディングタイプ：  サーモフィッシャーサイエンティフィック  社製）に載せた。そして、１０ｍｍ径にカットした濾紙にスクリーニング対象となる物質を染み込ませ、ヒト正常皮膚中心部に配置した。
ヒト正常皮膚中心部に配置したセルカルチャーインサート（スタンディングタイプ：  サーモフィッシャーサイエンティフィック  社製）を、（１−１）で用意した皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）細胞を播種した２４穴プレートに設置し、２４時間培養した。
【０１１６】
（４−１−３）測定工程
２４時間培養後、培地を除いた後、ＰＢＳで洗浄した。その後、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いてＲＮＡを回収し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  社製）を用いてｃＤＮＡを合成した。
【０１１７】
ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒ  Ａｓｓａｙ（ＱＩＡＧＥＮ  社製）を用いて定量的ＲＴ−ＰＣＲを行い、皮膚支帯（Ｒｅｔｉｎａｃｕｌａ  ｃｕｔｉｓ）における、ＭＭＰ３、及びＭＭＰ９の遺伝子発現量を測定した。
ここで、遺伝子発現量は、内在性コントロールをβ−Ａｃｔｉｎとし、比較ＣＴ法を用い、算出した。
【０１１８】
スクリーニング対象物質のうち、ＭＭＰ３、及びＭＭＰ９の少なくともひとつの発現量を、コントロールと比して有意に減少させる作用を有するものを、本発明における抗光老化成分とした。
【０１１９】
（５）抗光老化成分
上記スクリーニングの結果、以下に示す生物由来抽出物に、ＭＭＰ３、及びＭＭＰ９のうちの少なくともひとつの発現量を減少させる作用が見られた。
【０１２０】
クワ科（Ｍｏｒａｓｅａｅ）クワ属（Ｍｏｒｕｓ）マグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）キハダ属（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ）キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ）、ラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）に属する植物種、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）ミカン属（Ｃｉｔｒｕｓ）ライム（Ｃｉｔｒｕｓ  ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・コリアナ（Ｒｏｓａ  ×  ｃｏｒｙａｎａ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）イブキジャコウソウ属（Ｔｈｙｍｕｓ）ワイルドタイム（Ｔｈｙｍｕｓ  ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ）、マタタビ科（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｅａｅ）マタタビ属（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）キウイフルーツ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ａｒｇｕｔａ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、マツブサ科（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｃｅａｅ）マツブサ属（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ）チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）ツルニンジン属（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ）ヒカゲツルニンジン（Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｓ  ｐｉｌｏｓｕｌａ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ）ゴレンシ属（Ａｖｅｒｒｈｏａ）ゴレンシ（Ａｖｅｒｒｈｏａ  ｃａｒａｍｂｏｌａ）、マメ科（Ｆａｂａｃｅａｅ）インドカリン属（Ｐｔｅｒｏｃａｒｐｕｓ）インドキノキ（Ｐｔｅｒｉｃａｒｐｕｓ  ｍａｒｓｕｐｉｕｍ）、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）トチバニンジン属（Ｐａｎａｘ）オタネニンジン（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ）、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）シソ属（Ｐｅｒｉｌｌａ）エゴマ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ）、ツバキ科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ）チャノキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）バラ属（Ｒｏｓａ）ロサ・ダマスケナ（Ｒｏｓａ  ×  ｄａｍａｓｃｅｎａ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）キナノキ属（Ｃｉｎｃｈｏｎａ）に属する植物種、ススキノキ科（Ｘａｎｔｈｏｒｒｈｏｅａｃｅａｅ）アロエ属（Ａｌｏｅ）アロエ（Ａｌｏｅ）、イラクサ科（Ｕｒｔｉｃａｃｅａｅ）イラクサ属（Ｕｒｔｉｃａ）イラクサ（Ｕｒｔｉｃａ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａｎａ）、セリ科（Ａｐｉａｃｅａｅ）ウイキョウ属（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ）ウイキョウ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）、ローヤルゼリー
【０１２１】
上記生物由来抽出物は、単独で用いても、２以上を組み合わせてもよい。
また、上記生物由来抽出物の中でも、ＭＭＰ３又はＭＭＰ９の発現量の減少作用が特に大きいことから、キハダエキス、キウイエキス、ダマスクバラ花エキス、シソエキス、チャノキエキス、オタネニンジンエキスのうちの少なくともひとつを含む形態とすることが好ましい。
【０１２２】
＜製造例＞
下記表５中の成分（Ａ）および成分（Ｂ）を７５℃で加熱し、溶解した。７５℃で成分（Ｂ）に成分（Ａ）を手撹拌しながら添加して乳化し、ホモジナイザーを用いて均一化した。
その後、手撹拌をしながらサンプルを冷却し、４５℃で成分（Ｃ）を添加し、３０℃で冷却停止をして、抗老化用の皮膚外用剤を得た。
なお、表５中の成分（Ｃ）のエキスＡ、及びエキスＢの有効量はその種類により異なるが、例えば、段落００２６に記載の範囲で添加することができる。
【０１２３】
【表５】
2020105125.tif 000006
【産業上の利用可能性】
【０１２４】
本発明は、抗老化剤として利用できる。
【配列表フリーテキスト】
【０１２５】
配列番号１  オーバーハングｓｉＲＮＡ
配列番号２  オーバーハングｓｉＲＮＡ
配列番号３  オーバーハングｓｉＲＮＡ
配列番号４  オーバーハングｓｉＲＮＡ
配列番号５  オーバーハングｓｉＲＮＡ
配列番号６  オーバーハングｓｉＲＮＡ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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