(57)【要約】【課題】本発明が解決しようとする課題は、持効型インスリン誘導体の新規製剤を提供することである。【解決手段】本発明は、Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル（Ｅｉｃｏｓａｎｅｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；（化合物１）と；Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−ヘキサデカンジオイル（Ｈｅｘａｄｅｃａｎｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物２）と；Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物３）と、Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，ｄｅｓＢ２７，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−オクタデカンジオイル（Ｏｃｔａｄｅｃａｎｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物４）とからなる群から選択されるインスリン誘導体を含み、約１から約２％（重量／重量）のグリセリンと；約４５から約７５ｍＭのフェノールと；約０から約１９ｍＭのｍ−クレゾールと；前記インスリン誘導体６モル当たり約１．５から約２．５モルの亜鉛イオンと；約７５ｍＭ以下の塩化ナトリウムとをさらに含み、かつ、約７．２から８．０の範囲のｐＨ値である、医薬組成物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）であるインスリン誘導体とセマグルチドとを含み、
１から２％（重量／重量）のグリセリンと；４５から７５ｍＭのフェノールと；０から１９ｍＭのｍ−クレゾールと；前記インスリン誘導体６モル当たり１．５から２．５モルの亜鉛イオンと；７５ｍＭ以下の塩化ナトリウムとをさらに含み、かつ、７．２から８．０の範囲のｐＨ値を有する、医薬組成物。
【請求項２】
前記セマグルチドの量は、０．３０から０．７０ｍＭの範囲内である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
４．２ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）と、
０．４９ｍＭのセマグルチドと、
１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
６０ｍＭのフェノールと、
１０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体の６モル当たり２．２モルの亜鉛イオンと、
２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
７．４のｐＨ値を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
４．２ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）と、
０．３ｍＭのセマグルチドと、
１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
６０ｍＭのフェノールと、
１０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体の６モル当たり２．２モルの亜鉛イオンと、
２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
７．４のｐＨ値を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、異脂肪血症、肥満症又は代謝症候群（代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性症候群）に関連する疾患、障害又は症状の治療又は緩和のための医薬として使用するための、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病に関連する病状の治療のための医薬組成物の分野のものである。より詳細には、本発明は、持効型のヒトインスリンアナログアシル化誘導体を含む医薬組成物と、基礎（ｂａｓａｌ）インスリン投与療法のためのかかる組成物の医学的使用とを提供する。
【背景技術】
【０００２】
代謝疾患の治療におけるインスリン療法の主目的は、食後のみならず食間及び終夜、できる限り生理的な様式で、内因性インスリン分泌と置き換わる又はそれを補うことによって、持続性の正常に近い血糖を生じさせることである。基礎インスリン必要量と食事関連（追加（ｂｏｌｕｓ））インスリン必要量とを分けることが、皮下インスリン療法への体系的アプローチを代表している。
【０００３】
作用の発現、ピーク効果プロファイル、作用持続時間等、任意の所与のインスリンの最も関連する薬理学的特徴は、皮下注射部位から体循環に入る、その吸収動態によって大きく左右される。
【０００４】
非共有結合性の亜鉛介在性のオリゴマー化は、詳細に説明されているインスリン産物の性質である。生理的ｐＨ下で、ヒトインスリンは溶解するが、二つの亜鉛イオン（Ｚｎ＋＋）が高親和性（Ｂ１０Ｈｉｓ）の結合部位に配位することによって、明確に定義されている六量体（すなわち、インスリン６分子のユニット）に自己会合する傾向がある。特にフェノールであるフェノール類配位子が、インスリン六量体に対して特異的に結合してＲ状態の六量体構造を促進することもまた周知である。注射すると、フェノール類配位子は注射部位から素早く拡散する。注射部位においてフェノールが存在しない状態では、インスリンオリゴマーのコンホメーション及びサイズは変化し得るが、同様に、インスリン含有溶液の粘度も変化し得、持続性作用プロファイルに寄与する。
【０００５】
Ｊｏｎａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２０１２  ２９  ２１０４−２１１４には、インスリンデグルデク（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｄｅｇｌｕｄｅｃ）である、一日一回投与用のアシル化脂肪二酸鎖（ａｃｙｌａｔｅｄ  ｆａｔｔｙ  ｄｉ−ａｃｉｄ  ｃｈａｉｎ）をもつインスリン誘導体の遅効型機序が記載されており、また高亜鉛濃度と遅効性との相関性が記載されている。国際公開第２００９／１１５４６９号には、アシル化脂肪二酸鎖をもつ種々の持効型インスリン誘導体が記載されている。国際公開第２０１３／１５３０００号には、高濃度の亜鉛（インスリン誘導体６モル当たり３．５Ｚｎ＋＋以上の）を含有する、皮下投与用の上記持効型インスリン誘導体の製剤が記載されている。それは、週一回の投与プロファイルと均衡のとれた長い作用持続時間を得るために設計された。国際公開第２００９／１１５４６９号に記載の製剤においてＺｎ＋＋が高含有量であることが、持続性ＰＫプロファイルにつながる。
【０００６】
国際公開第２００９／０６３０７２号には、基礎インスリン誘導体（例えば、デグルデク）とＧＬＰ−１誘導体（例えば、リラグルチド）とを含む、非経口投与用の医薬組成物が開示されている。リラグルチド単量体は亜鉛と結合してダイヘプタマーを形成することから、複合製剤においては、匹敵するデグルデクのＰＫプロファイルを達成して、許容できる物理的安定性を達成するために、デグルデクの単一製剤よりも高い濃度の亜鉛が必要になる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００９／１１５４６９号
【特許文献２】国際公開第２０１３／１５３０００号
【特許文献３】国際公開第２００９／０６３０７２号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｊｏｎａｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２０１２  ２９  ２１０４−２１１４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によれば、持効型インスリン誘導体の新規製剤が開発されたが、それは、ヒトインスリンの立体構造、すなわち六量体、特にＲ６ヘキサマーにより類似している立体構造及びオリゴマー形成パターンを促進することができる。
【００１０】
別の態様では、本発明は、週一回投与に適したＰＫ／ＰＤ特性も示しながら、注射部位におけるオリゴマー形成を抑えるために慎重に調合された固有の配合の賦形剤中に、選択された持効型インスリン誘導体を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、注射すると粘度が低下し、従って注射によるあらゆる不快感を生じる傾向を軽減する医薬組成物を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、改善された安定性をもつ医薬組成物を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、代謝疾患の治療用の医薬として使用する医薬組成物を提供する。
【００１４】
本発明の他の目的は、以下に記載する発明を実施するための形態及び実施例から、当業者に明らかになることとなる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、その第一の態様において、
Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル（Ｅｉｃｏｓａｎｅｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；（化合物１）と；
Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−ヘキサデカンジオイル（Ｈｅｘａｄｅｃａｎｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物２）と；
Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物３）と、
Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，ｄｅｓＢ２７，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−オクタデカンジオイル（Ｏｃｔａｄｅｃａｎｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物４）とからなる群から選択されるインスリン誘導体を含み、約１から約２％（重量／重量）のグリセリンと；約４５から約７５ｍＭのフェノールと；約０から約１９ｍＭのｍ−クレゾールと；前記インスリン誘導体６モル当たり約１．５から約２．５モルの亜鉛イオンと；約７５ｍＭ以下の塩化ナトリウムとをさらに含み、かつ、約７．２から８．０の範囲のｐＨ値である、医薬組成物を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、インスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物であって、特にセマグルチドとして知られるインスリン分泌性ＧＬＰ−１化合物をさらに含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
セマグルチドは、Ａｉｂ８，Ｌｙｓ２６（ＯＥＧ−ＯＥＧ−ガンマ−Ｇｌｕ−Ｃ１８−二酸（ｄｉａｃｉｄ）），Ａｒｇ３４）ＧＬＰ−１  Ｈ（７−３７）−ＯＨの構造で記載され得、それは（Ｎ−イプシロン２６−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［（Ｓ）−４−カルボキシ−４−（１７−カルボキシヘプタデカノイルアミノ）ブチリルアミノ］エトキシ｝エトキシ）アセチルアミノ］エトキシ｝エトキシ）−アセチル］［Ａｉｂ８，Ａｒｇ３４］ＧＬＰ−１−（７−３７）としても示すことができ、国際公開第２００６／０９７５３７号の開示を参照されたい。
【００１８】
本発明は、以下の特徴又は実施形態の一つ又は複数を参照することによってさらに特徴付けられ得る。
【００１９】
１．  Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル（Ｅｉｃｏｓａｎｅｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）であるインスリン誘導体を含む、本発明の医薬組成物。
【００２０】
２．  Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−ヘキサデカンジオイル（Ｈｅｘａｄｅｃａｎｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物２）であるインスリン誘導体を含む、本発明の医薬組成物。
【００２１】
３．  Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物３）であるインスリン誘導体を含む、本発明の医薬組成物。
【００２２】
４．  Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，ｄｅｓＢ２７，Ｂ２９Ｋ（Ｎε−オクタデカンジオイル（Ｏｃｔａｄｅｃａｎｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物４）であるインスリン誘導体を含む、本発明の医薬組成物。
【００２３】
５．  インスリン誘導体は、約３．５から約５．０ｍＭの範囲内である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００２４】
６．  インスリン誘導体は、約４．０から約４．５ｍＭの範囲内である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００２５】
７．  インスリン誘導体は、約４．２ｍＭである、前述の実施形態の医薬組成物。
【００２６】
８．  約１から約２％（重量／重量）のグリセリンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００２７】
９．  約１．４から約１．８％（重量／重量）のグリセリンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００２８】
１０．  約１．５％又は１．６％（重量／重量）のグリセリンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００２９】
１１．  約４５から約７５ｍＭのフェノールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３０】
１２．  約５０から約７０ｍＭのフェノールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３１】
１３．  約５５から約６５ｍＭのフェノールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３２】
１４．  約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９又は７０ｍＭのフェノールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３３】
１５．  約０から約１９ｍＭのｍ−クレゾールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３４】
１６．  ０ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭのｍ−クレゾールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３５】
１７．  約０から約１５ｍＭのｍ−クレゾールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３６】
１８．  約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ又は１９ｍＭのｍ−クレゾールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３７】
１９．  インスリン誘導体６モル当たり約１．５から約２．５モルの亜鉛イオンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３８】
２０．  インスリン誘導体６モル当たり約２．０から約２．４モルの亜鉛イオンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００３９】
２１．  インスリン誘導体６モル当たり約２．０から約２．１モルの亜鉛イオンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４０】
２２．  インスリン誘導体６モル当たり約２．２又は２．３モルの亜鉛イオンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４１】
２３．  インスリン誘導体６モル当たり約２．４又は２．５モルの亜鉛イオンを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４２】
２４．  約７５ｍＭ未満の塩化ナトリウムを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４３】
２５．  約５から約５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４４】
２６．  約１０から約２５ｍＭの塩化ナトリウムを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４５】
２７．  約１５から約２５ｍＭの塩化ナトリウムを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４６】
２８．  約２０ｍＭ、５０ｍＭ又は７５ｍＭの塩化ナトリウムを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４７】
２９．  ７．２から８．０の範囲のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４８】
３０．  ７．２から７．６の範囲のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００４９】
３１．  約７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８又は７．９のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５０】
３２．  約４．０から約４．５ｍＭのインスリン誘導体と、
約１から約２％（重量／重量）のグリセリンと、
約５０から約７０ｍＭのフェノールと、
約０から約１５ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体６モル当たり約２．０から約２．５モルの亜鉛イオンと、
約５０ｍＭ未満の塩化ナトリウムとを含み、かつ、
７．２から７．６の範囲のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５１】
３３．  約４．２ｍＭのインスリン誘導体と、
約１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
約６０ｍＭのフェノールと、
約０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体６モル当たり約２．０モルの亜鉛イオンと、
約２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
約７．４のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５２】
３４．  約４．２ｍＭのインスリン誘導体と、
約１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
約６０ｍＭのフェノールと、
約１０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体６モル当たり約２．０モルの亜鉛イオンと、
約２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
約７．４のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５３】
３５．  約４．２ｍＭのインスリン誘導体と、
約１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
約６０ｍＭのフェノールと、
約０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体６モル当たり約２．２モルの亜鉛イオンと、
約２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
約７．４のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５４】
３６．  約４．２ｍＭのインスリン誘導体と、
約１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
約６０ｍＭのフェノールと、
約１０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体の６モル当たり約２．２モルの亜鉛イオンと、
約２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
約７．４のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５５】
３７．  約４．２ｍＭのインスリン誘導体と、
約１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
約６０ｍＭのフェノールと、
約０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体６モル当たり約２．４モルの亜鉛イオンと、
約２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
約７．４のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５６】
３８．  約４．２ｍＭのインスリン誘導体と、
約１．５％（重量／重量）のグリセリンと、
約６０ｍＭのフェノールと、
約１０ｍＭのｍ−クレゾールと、
インスリン誘導体６モル当たり約２．４モルの亜鉛イオンと、
約２０ｍＭの塩化ナトリウムとを含み、かつ、
約７．４のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５７】
３９．  約４．２ｍＭのインスリン誘導体と、約１から約２％（重量／重量）のグリセリンと；約４５から約７５ｍＭのフェノールと；約０から約１５ｍＭのｍ−クレゾールと；前記インスリン誘導体６モル当たり約１．５から約２．５モルの亜鉛イオンと；約５０ｍＭ以下の塩化ナトリウムとを含み、かつ、約７．２から８．０の範囲のｐＨ値である、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５８】
４０．  約０ｍＭのｍ−クレゾールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００５９】
４１．  約５から約１０ｍＭのｍ−クレゾールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００６０】
４２．  約１０ｍＭのｍ−クレゾールを含む、前述の実施形態の医薬組成物。
【００６１】
４３．  セマグルチドをさらに含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００６２】
４４．  Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル（Ｅｉｃｏｓａｎｅｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）と；セマグルチドとを含み、約１から約２％（重量／重量）のグリセリンと；約４５から約７５ｍＭのフェノールと；０から１５ｍＭのｍ−クレゾールと；前記インスリン誘導体６モル当たり約１．５から約２．５モルの亜鉛イオンと；約２５ｍＭ以下の塩化ナトリウムとをさらに含み、かつ、７．２から８．０の範囲のｐＨ値である、医薬組成物。
【００６３】
４５．  約０．２０から約０．７０ｍＭのセマグルチドを含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００６４】
４６．  約０．３０から約０．７０ｍＭのセマグルチドを含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００６５】
４７．  約３．５ｍＭから約５．０ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）を含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００６６】
４８．  約０．３０から約０．７０ｍＭのセマグルチドと、約３．５ｍＭから約５．０ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）とを含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００６７】
４９．  約０．３０ｍＭのセマグルチドと、約３．５ｍＭから約５．０ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）とを含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００６８】
５０．  約０．４０ｍＭのセマグルチドと、４．２ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）とを含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００６９】
５１．  約０．４９ｍＭ又は０．５０ｍＭのセマグルチドと、４．２ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）とを含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００７０】
５２．  ３５．  約０．６０ｍＭのセマグルチドと、４．２ｍＭのＡ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）とを含む、前述の実施形態に記載の医薬組成物。
【００７１】
５３．  Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）と；セマグルチドとを含み、約１．５％（重量／重量）のグリセリンと；約６０ｍＭのフェノールと；約０ｍＭのｍ−クレゾールと；前記インスリン誘導体６モル当たり約２．２モルの亜鉛イオンと；約２０ｍＭの塩化ナトリウムとをさらに含み、かつ、約７．４のｐＨ値である、医薬（合剤）組成物。
【００７２】
５４．  Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）と；セマグルチドとを含み、約１．５％（重量／重量）のグリセリンと；約６０ｍＭのフェノールと；１０ｍＭのｍ−クレゾールと；前記インスリン誘導体６モル当たり約２．２モルの亜鉛イオンと；約２０ｍＭの塩化ナトリウムとをさらに含み、かつ、約７．４のｐＨ値である、医薬（合剤）組成物。
【００７３】
５５．  一日一回よりも少ない頻度の時間間隔で（すなわち、２４時間より長い時間間隔で）、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月又は少なくとも１年の期間の間、それを必要としている対象に対して投与するための、前述の実施形態の医薬組成物。
【００７４】
５６．  対象であって、平均で１日おきから１０日おきまでの範囲の頻度での対象への投与が必要な当該対象に投与するための、前述の実施形態の医薬組成物。
【００７５】
５７．  対象であって、平均で２日おきから９日おきまでの範囲の頻度での対象への投与が必要な当該対象に投与するための、前述の実施形態の医薬組成物。
【００７６】
５８．  対象であって、平均で３日おきから８日おきまでの範囲の頻度での対象への投与が必要な当該対象に投与するための、前述の実施形態の医薬組成物。
【００７７】
５９．  対象であって、平均で４日おきから７日おきまでの範囲の頻度での対象への投与が必要な当該対象に投与するための、前述の実施形態の医薬組成物。
【００７８】
６０．  対象であって、平均で５日おきから６日おきまでの範囲の頻度での対象への投与が必要な当該対象に投与するための、前述の実施形態の医薬組成物。
【００７９】
６１．  対象であって、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月又は少なくとも１年の期間の間、平均で週一回、すなわち６日おきに対象への投与が必要な当該対象に投与するための、前述の実施形態の医薬組成物。
【００８０】
６２．  （ｉ）Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを水に溶解することによって溶液を調製することと、
（ｉｉ）防腐剤及び等張化剤を水に溶解することによって溶液を調製することと、
（ｉｉｉ）亜鉛イオンを水に溶解することによって溶液を調製することと、
（ｉｖ）溶液ａ）及び溶液ｂ）を混合することと、
（ｖ）溶液ａ＋ｂに溶液ｃ）を添加することと、
（ｖｉ）混合した溶液ａ＋ｂ＋ｃにセマグルチドを溶解することと、
（ｖｉｉ）混合液ｆ）のｐＨを所望のｐＨに調節して、次いで無菌ろ過を行うこととを含む、注射用医薬組成物を作製する方法。
【００８１】
本明細書に記載した実施形態のうちの二つ以上を任意に組み合わせることは、本発明の範囲内であるとみなされる。
【００８２】
生物活性
別の態様においては、本発明は、代謝疾患、障害又は症状、特に糖尿病に関連する疾患、障害又は症状の治療用の医薬として有用である医薬組成物を提供する。
【００８３】
一実施形態においては、本発明の医薬組成物は、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、異脂肪血症、肥満症もしくは低代謝性症候群（代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性症候群）に関連する疾患、障害もしくは症状の治療又は緩和に使用するためのものである。
【００８４】
一実施形態においては、本発明の医薬組成物は、糖尿病、特に１型糖尿病もしくは２型糖尿病に関連する疾患、障害もしくは症状の治療又は緩和に使用するためのものである。
【００８５】
実際の剤形は、治療対象の疾患の性質及び重症度に左右され、医師の裁量に任せるものであり、また所望の治療効果を生じさせるために本発明の特定の状況に対する剤形の漸増によって変化し得る。
【００８６】
本発明は、以下に説明する添付の図面を参照することによってさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】図１は、模擬的な注射部位条件における化合物１の単一製剤Ａ、Ｂ及びＣのオリゴマー化を示しており、図１Ａは、ＤＬＳで測定した、見掛けの平均流体力学半径（ｒＨ）［ｎｍ］であり、図１Ｂは、ＣＧ−ＭＡＬＳで測定した、見掛けの平均分子量であり、図１Ｃは、ＡＵＣで測定した、見掛けの平均沈降係数（Ｓ）であり、白色の棒グラフは、化合物１の、６インスリン当たり２．２Ｚｎ＋＋（モル：モル）を含む製剤Ｃであり、灰色の棒グラフは、化合物１の、６インスリン当たり２．４Ｚｎ＋＋（モル：モル）を含む製剤Ｂであり、黒色の棒グラフは、化合物１の、６インスリン当たり４．５Ｚｎ＋＋（モル：モル）を含む製剤Ａである。
【図２】図２は、模擬的な注射部位条件における化合物１の単一製剤０１〜０６のオリゴマー化を示しており、図２Ａは、ＤＬＳで測定した、見掛けの平均流体力学半径（Ｒｈ，平均）［ｎｍ］であり、図２Ｂは、ＡＵＣで測定した、見掛けの平均沈降係数（Ｓ＊）である。
【図３】図３は、化合物１のバッファー交換した様々な製剤及び間質液バッファー（ＩＳＦ）についての、温度［℃］の関数としての見掛けの動的粘度［ｃＰ］（図３Ａ及び図３Ｃ）及び比粘度［ηｓｐｅｃ］（図３Ｂ、図３Ｄ）を示しており、図３Ａ及び図３Ｂは、製剤Ａ、製剤Ｂ、製剤Ｃ、ＩＳＦバッファーであり、図３Ｃ及び図３Ｄは、製剤０２、製剤０３、製剤０４、ＩＳＦバッファーである。
【図４】図４は、製剤中の化合物１の立体構造の状態を示しており、図４Ａは、製剤０１〜０６に関する、６インスリン当たりのＺｎ＋＋（モル：モル）の関数としての、立体構造変化（Ｔ状態、混合ＴＲ状態、Ｒ状態）を示す近紫外ＣＤ（ｎｅａｒ−ＵＶ  ＣＤ）［Δε２５１ｎｍ（Ｍ−１  ｃｍ−１）］であり、図４Ｂは、種々の亜鉛濃度である、製剤Ｂ１〜Ｂ６、Ｄ１−Ｄ７及びヒトインスリン製剤に関する、６インスリン当たりのＺｎ＋＋（モル：モル）の関数としての、立体構造変化（Ｔ状態、混合ＴＲ状態、Ｒ状態）を示す近紫外ＣＤ［Δε２５１ｎｍ（Ｍ−１  ｃｍ−１）］であり、白円は、ヒトインスリン（６００ｎｍｏｌ／ｍｌのヒトインスリン、３０ｍＭのフェノール、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）であり、黒四角は、２５ｍＭのフェノール、２５ｍＭのｍ−クレゾール及び２０ｍＭのＮａＣｌを含んで調合された化合物１であり、灰円は、６０ｍＭのフェノール、１０ｍＭのｍ−クレゾール及び２０ｍＭのＮａＣｌを含んで調合された化合物１である。
【図５Ａ】図５は、ＳＥＣによって、製剤中における化合物１のオリゴマー分布を示しており、図５Ａは、製剤０１、０２、０３、０４、０５及び０６のネイティブＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図５Ｂ】図５Ｂは、製剤Ａ及びＢ１〜Ｂ６のネイティブＳＥＣクロマトグラムを示している。
【図６】図６は、調合状態における化合物１及びヒトインスリンのＳＡＸＳの散乱データ［強度（ａ．ｕ．）対ｓ（Å−１）］を示しており、図６Ａは、黒色が化合物１の製剤Ａの散乱曲線を示し、灰色がヒトインスリンの散乱曲線を示しており（化合物１、４．２ｍＭ、４．５Ｚｎ／ヘキサマー；ヒトインスリン０．６ｍＭ、２．２Ｚｎ／ヘキサマー）、図６Ｂは、黒色が化合物１の製剤Ｃの散乱曲線を示し、灰色がヒトインスリンの散乱曲線を示している（化合物１、４．２ｍＭ、２．２Ｚｎ／ヘキサマー；ヒトインスリン０．６ｍＭ、２．２Ｚｎ／ヘキサマー（Ｒ６ヘキサマー））。
【図７Ａ】図７は、製剤中の化合物１の純度を示しており、図７Ａは、化合物１の製剤Ａ（黒色線）、製剤Ｂ（灰色線）及び製剤Ｃ（破線）に関する、３０℃での保存［時点（月）］における純度（全ペプチドのうちの％）を示している。
【図７Ｂ】図７Ｂは、化合物１の製剤０１、０４、０５及び０６に関する、３７℃での保存［時点（週）］における純度（全ペプチドのうちの％）を示している。白色円が製剤０１であり、黒色円が製剤０４であり、白色四角が製剤０５であり、黒色四角が製剤０６である。
【図８】図８は、セマグルチドを含む複合製剤における３７℃での保存［時点（週）］における化合物１の純度（全化合物１のうちの％）を示しており、白色円が複合製剤Ｉであり、黒色円が複合製剤ＩＩであり、白色三角が複合製剤ＩＩＩであり、黒色三角が複合製剤ＩＶであり、白色四角が複合製剤Ｖであり、黒色四角は複合製剤ＶＩである。
【図９】図９は、模擬的な注射部位条件における化合物１の複合製剤のオリゴマー化を示しており、図９Ａは、ＤＬＳで測定した、見掛けの平均流体力学半径（ｒＨ）［ｎｍ］であり、図９Ｂは、ＡＵＣ（Ｓ＊）で観察された、バッファー交換後の複合製剤のオリゴマーサイズを示している。
【実施例】
【００８８】
本発明について、以下の実施例を参照しながらさらに説明するが、決して本願発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００８９】
［実施例１］
［模擬的な注射部位条件における改良された生物物理学的特性］
プロトコル
製剤のＡＰＩは、Ａ１４Ｅ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｋ（（Ｎε−エイコサンジオイル（Ｅｉｃｏｓａｎｅｄｉｏｙｌ）−γＧｌｕ−［２−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］アセチルアミノ｝エトキシ）エトキシ］アセチル）），ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（化合物１）であり、例えば国際公開第２００９／１１５４６９号、実施例３３参照に記載されているとおり得られる。
【００９０】
化合物１のオリゴマー化は、模擬的な注射部位条件において決定した。模擬的な注射部位条件は、フェノール及び／又はメタクレゾールそれぞれを減少させることと、模擬間質液バッファーへのバッファー交換とによって達成した。この手順により、すべてのフェノール類配位子が事実上除去されたが、親製剤の亜鉛／インスリン比は維持された。
【００９１】
製剤は、ＰＤ−ＭｉｄｉＴｒａｐ  Ｇ−２５カラムにより、メーカーのプロトコルに従って、間質液（ＩＳＦ−）バッファーにバッファー交換した。
【００９２】
十分な量のターゲットバッファーによりカラムを洗浄することによって、当該カラムをターゲットバッファーで平衡化し、そして好適な量の製剤を加えて、当該ターゲットバッファーで溶離した。ＩＳＦバッファーは、１４０ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＳＯ４、２ｍＭのＣａＣｌ２、１０ｍＭのヘペス（Ｈｅｐｅｓ）、ｐＨ７．４からなる。
【００９３】
特に明記しない限り、手順は以下のとおりとした：
２２℃でバッファー交換すること、
次いで３７℃で１４〜１８時間インキュベーションすること、及び、
次いで２２℃で測定すること（特に明記した場合を除く）。
【００９４】
通常、測定は、３７℃でのインキュベーション終了の約１時間後に行った。これが可能でなければ、サンプルは測定まで２２℃で保存する。
【００９５】
特に明記しない限り、サンプルは無希釈で測定する。なお、記載したフェノールの減少手順の結果得られるオリゴマーのサイズはプロセスに依存し、所与の製剤について、時間、温度、カラムのバッチ等の因子により変化し得る。したがって、製剤の所与のセットに関する測定値は、同一の実験内で比較するものとし、実験間での比較はしないものとすることが望ましい。したがって、本発明の種々の製剤と一緒に、様々な実験で同一の参照製剤が試験された。例えば、製剤Ａ  対  製剤Ｂ及びＣ、製剤０１  対  製剤０２〜０６である。
【００９６】
動的光散乱法（ＤＬＳ）によって見掛けの平均流体力学半径（ｒＨ）を測定したが、ＤｙｎａＰｒｏ  ＰＲ（商標）（Ｗｙａｔｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、米国カリフォルニア州サンタバーバラ）を用いた。サンプルは、分析の前に１２００ｒｐｍで５分間遠心分離して、溶液中のあらゆる塵粒を除去した。測定は、４０収集及び２秒の収集時間として２５℃で行った。
【００９７】
Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社（ＷＴＣ）のＣａｌｙｐｓｏ  ＩＩ滴定装置ユニットと、それを接続したＷＴＣ  ＤＡＷＮ８＋光散乱検出器（６６４ｎｍで作動）及びＷＴＣ  Ｏｐｔｉｌａｂ  Ｔ−ｒＥＸ屈折計（６６０ｎｍで作動）とからなるシステムを用いて、組成勾配多角度静的光散乱（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ−Ｇｒａｄｉｅｎｔ，Ｍｕｌｔｉ−Ａｎｇｌｅ  Ｓｔａｔｉｃ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ）（ＣＧ−ＭＡＬＳ）によって、２５℃で、見掛けの平均分子量（ｋＤａ）を測定した。サンプルは、０．４５μｍフィルターでろ過して、次いで測定前に０．２２μｍフィルターでろ過した。
【００９８】
沈降速度（ＳＶ）実験は、サファイア窓でキャップした１２−ｍｍ又は３−ｍｍのダブルセクターのセンターピース中で、ＸＬ−Ｉ超遠心分析装置（ＸＬ−Ｉ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）（ベックマンコールター社、カリフォルニア州ブレア）で行った。サンプルは、沈降が完了するまで４００００ｒｐｍで２０℃で回転させ、機器の干渉顕微鏡で監視した。沈降係数分布（ＳＣＤ）は、ｒｍｓｄ及び残差ランパターンで判断されるとおりに、すべての沈降物質を描写するのに十分な範囲を網羅する、１００個のｓ値によるグリッドを伴うｃ（ｓ）モデルを用いて、ＳｅｄＦｉｔバージョン１１．８（ｗｗｗ．ａｎａｌｙｔｉｃａｌｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ．ｃｏｍ）で算出した。摩擦係数比（ｆｒｉｃｔｉｏｎａｌ  ｒａｔｉｏ）ｆ／ｆｏを、フィッティング中に最適化されることとなる変数として扱った（Ｐ  Ｓｃｈｕｃｋ，ＭＡ  Ｐｅｒｕｇｉｎｉ，ＮＲ  Ｇｏｎｚａｌｅｓ，ＧＪ  Ｈｏｗｌｅｔｔ  ａｎｄ  Ｄ  Ｓｃｈｕｂｅｒｔ：Ｓｉｚｅ−ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｂｙ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ：ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｍｏｄｅｌ  ｓｙｓｔｅｍｓ；（Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．２００２  ８２：１０９６））。平均沈降係数の値は、得られたｃ（ｓ）−分布の積分を経て取得した。
【００９９】
温度依存性の動的粘度を、Ｌｏｖｉｓ２０００転落球式（ｒｏｌｌｉｎｇ−ｂａｌｌ  ｔｙｐｅ）粘度計（アントンパール社、オーストリア共和国グラーツ）で測定した。温度は、４０℃から４℃まで２℃ずつのステップで低下させて、各ステップ間は、５分間温度平衡させた。バッファーの密度は、これもアントンパール社のＤＭＡ５０００濃度計で同時に測定した。
【０１００】
３種の単一製剤、すなわち従来技術（例えば、国際公開第２０１３／１５３０００号を参照）を表す製剤Ａ、本発明を表す製剤Ｂ、Ｃ（６０ｍＭのフェノール／１０ｍＭのｍ−クレゾール）を調製した。
【０１０１】
【表１】
2020105227.tif 000002
【０１０２】
他の６種の単一製剤、すなわち製剤０１（製剤Ａと同一）ならびに本発明を表す製剤０２、０３、０４、０５及び０６を作製した（表１Ｂ）。亜鉛含有量は、４．５Ｚｎ＋＋／６インスリンから、２．４、２．２及び２．０Ｚｎ＋＋／６インスリンに変化させた。さらに、２５／２５ｍＭのフェノール／ｍ−クレゾール又は６０／０ｍＭのフェノール／ｍ−クレゾールのいずれかによる防腐系も試験した。
【０１０３】
【表２】
2020105227.tif 000003
【０１０４】
＜６０ｍＭのフェノール及び１０のｍ−クレゾールを有するバッファー交換した単一製剤の改良されたオリゴマーサイズ（表２Ａ；図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃ）＞
【表３】
2020105227.tif 000004
【０１０５】
＜６０ｍＭのフェノール及び０のｍ−クレゾールを有するバッファー交換した単一製剤の改良されたオリゴマーサイズ（表２Ｂ；図２Ａ及び２Ｂ）＞
【表４】
2020105227.tif 000005
【０１０６】
結論
亜鉛含有量は、製剤Ａにおける４．５Ｚｎ＋＋／６インスリンから、製剤Ｂ及びＣそれぞれにおける２．４及び２．２Ｚｎ＋＋／６インスリンに減少させた（フェノールは増加させ、メタクレゾールは減少させながら）。この亜鉛の減少に伴い、上記に記載の方法による模擬的な注射部位条件において求めた場合に、オリゴマーサイズが縮小した（図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃ参照）。
【０１０７】
製剤０１〜０６での結果からも、亜鉛（Ｚｎ）を４．５Ｚｎ＋＋／６インスリンから２．２±０．２Ｚｎ＋＋／６インスリンに減少させると、オリゴマーサイズが縮小されることがさらに確認された。２．２±０．２Ｚｎ＋＋／６インスリンでは、フェノール／クレゾールを２５ｍＭ／２５ｍＭから６０ｍＭ／０ｍＭに減少させると、オリゴマーサイズがさらに縮小する。図２Ａ及び２Ｂを参照されたい。
【０１０８】
＜６０ｍＭのフェノール及び１０ｍＭのｍ−クレゾールを有するバッファー交換した単一製剤の改良された粘度（表３Ａ；図３Ａ及び３Ｂ）＞
【表５】
2020105227.tif 000006
【０１０９】
＜６０ｍＭのフェノール及び０のｍ−クレゾールを有するバッファー交換した単一製剤の改良された粘度（表３Ｂ；図３Ｃ及び３Ｄ参照）＞
【表６】
2020105227.tif 000007
【０１１０】
結論
これら実験は、この方法に係る模擬的な注射部位条件における製剤の粘度が、亜鉛含有量に大きく依存するために、亜鉛の割合を減らすことが密度の低下につながるということを示している。
【０１１１】
［実施例２］
［ｔｍａｘ及び消失ｔ１／２］
ｔｍａｘは、最高濃度（最高血中濃度）までの時間を表し、ｔ１／２は、投与後に化合物の半分が血漿から消える消失半減期を表す。
【０１１２】
実施例１において記載した変化する生物物理学的特性は、ブタにおいてより早くｔｍａｘを示すＰＫプロファイルと一致している（表３を参照）。このことは、本発明に従って調合されると、従来技術に係る製剤で提供されている同一の化合物と対照的に、皮下組織内での化合物１の滞留時間が低減するものであるということを示している。
【０１１３】
驚くべきことに、亜鉛濃度を減少させることは、作用持続時間にほぼ影響がないが（すなわち、消失ｔ１／２が影響を受けない）、それが本発明に係る製剤と従来技術に係る製剤とを、週一回投与用に平等に適したものにさせる。
【０１１４】
【表７】
2020105227.tif 000008
【０１１５】
結論
これら実験は、Ｚｎ＋＋／ヘキサマーを減少させた結果として、皮下組織内での化合物１の滞留時間（ｔｍａｘ）が有意に低減するということを示している。この知見は、実施例１で表したデータと一致しており、模擬的な注射部位条件において形成されるオリゴマーのサイズが縮小することを示している。
【０１１６】
そのため、本発明に従って調合されると、化合物１は、注射の部位においてより小さいオリゴマーを形成し、皮下組織内でより短い滞留時間（低減したｔｍａｘ）となるＰＫ／ＰＤプロファイルを結果としてもたらす。
【０１１７】
しかし驚くべきことに、皮下組織内での化合物１の滞留時間（ｔｍａｘ）は有意に低減したが、本発明の製剤は、同じ消失半減期を維持した（消失ｔ１／２は影響を受けない）。このことは、本発明の製剤が、より長い持続時間の最高濃度も維持しながら、持効型インスリン誘導体を循環中でより素早く最高濃度に達するように促進できるということを意味している。
【０１１８】
この予期せぬ知見はまた、週一回投与プロファイルに見合う長い作用持続時間も保持しながら、注射部位において大きいオリゴマーの形成を制限することも可能にしている。注射部位で高い粘度となる大きいオリゴマーの形成は、注射すると不快感をもたらし得る。
【０１１９】
［実施例３］
［製剤中における改良された立体構造状態］
亜鉛の存在下で、ヒトインスリンは製剤中で六量体（ヘキサマー）として存在する。ヒトインスリンヘキサマーは、そのモノマーの立体構造に依存して、２種類の立体構造を採用することが可能である。インスリンモノマーＢ鎖の８つのＮ−末端アミノ酸残基が、伸長した立体構造（Ｔ状態）又はα−ヘリカル立体構造（Ｒ状態）のいずれかをとることが可能であることによる。フェノール及びＮａＣｌの存在下では、ヒトインスリンは、物理的及び化学的安定性に有利な立体構造であるＲ立体構造をとる（Ｄｕｎｎ  ＭＦ．Ｚｉｎｃ−ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｈｅｘａｍｅｒ：Ａ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｂｉｏｍｅｔａｌｓ  ２００５；１８；２９５−３０３）。
【０１２０】
プロトコル
インスリンヘキサマーの立体構造的変化は、２５１ｎｍのＣＤ−シグネチャで追跡した（Ｋｒｕｇｅｒ  Ｐ，Ｇｉｌｇｅ  Ｇ，Ｃａｂｕｋ  Ｙ  ａｎｄ  Ｗｏｌｌｍｅｒ  Ａ；Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ  １９９０  ３７１  ６６９−６７３）。サンプルは、Ｊａｓｃｏ  ８１５機器を用いて経路長０．０２ｃｍで測定した。空滴定を減算して、得られたΔε  ２５１ｎｍを、Ｚｎ／６インスリン（モル／モル）に対してプロットした。
【０１２１】
＜６０ｍＭのフェノール／０のｍ−クレゾールを有する単一製剤の立体構造状態＞
製剤０１〜０６の立体構造状態を表５Ａ及び図４Ａに示している。
【０１２２】
【表８】
2020105227.tif 000009
【０１２３】
図４Ａは、製剤０１〜０６に関して、６インスリン当たりのＺｎ＋＋（モル：モル）の関数としての立体構造変化（Ｔ状態、混合ＴＲ状態、Ｒ状態）を示している。
【０１２４】
＜６０ｍＭのフェノール及び１０ｍＭのｍ−クレゾールを有する単一製剤の立体構造状態＞
二つのシリーズの製剤を調製した。すべての製剤が、４．２ｍＭの化合物１、１６ｍｇ／ｍｌ（１．６％）のグリセリン、２０ｍＭのＮａＣｌを含み、ｐＨを７．４とした。Ｂ製剤シリーズは、６０ｍＭのフェノール及び１０ｍＭのｍ−クレゾールを含み、亜鉛濃度を６インスリン当たり１．５（Ｂ１）、２．０（Ｂ２）、２．３（Ｂ３）、２．５（Ｂ４）、３．０（Ｂ５）及び４．０（Ｂ６）として多様化させた。Ｄ製剤シリーズは、２５ｍＭのフェノール及び２５ｍＭのｍ−クレゾールを含み、亜鉛濃度を６インスリン当たり１．５、２．０、２．３、２．５、３．０、４．０及び４．５として多様化させた。ヒトインスリン製剤のシリーズもまた、種々の亜鉛濃度として調製した。立体構造状態を表５Ｂ及び図４Ｂに示している。
【０１２５】
【表９】
2020105227.tif 000010
【０１２６】
図４Ｂは、Ｂ製剤シリーズ及びＤ製剤シリーズならびにヒトインスリン製剤に関して、６インスリン当たりのＺｎ＋＋（モル：モル）の関数としての立体構造変化（Ｔ状態、混合ＴＲ状態、Ｒ状態）を示している。
【０１２７】
結論
近紫外ＣＤ（Ｎｅａｒ−ＵＶ  ＣＤ）データが、化合物１のＴ／Ｒ立体構造が、亜鉛濃度に依存していたことを示している。亜鉛を減少させることに伴い、混合Ｔ／Ｒ状態からＲ状態に製剤中の化合物１の立体構造状態が変化したが、これにはまた、製剤中でより高濃度のヘキサマーの形成も伴った（以下の実施例４を参照）。Ｒ状態及びヘキサマーの濃度は、２５／２５ｍＭから６０／１０ｍＭへとフェノール／メタ−クレゾールの比を変化させることによってさらに増加した（図４Ｂ）。
【０１２８】
製剤０１〜０６のデータは、製剤中の化合物１のＲ状態が、亜鉛（Ｚｎ）を４．５から２．２Ｚｎ±０．２Ｚｎ／６化合物１に減少させることと、ｍ−クレゾールをなくすこととによってさらに増加することを示している（図４Ａ）。
【０１２９】
［実施例４］
［製剤中の改良されたオリゴマーの分布］
プロトコル
サイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ  Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）は、インスリン製剤の非共有結合性オリゴマーの分布を定量化する高感度な方法である。ＳＥＣは、１．７μｍ  ４．６ｘ１５０ｍｍのＢＥＨ２００カラムを用いて、８．０ｍＭのフェノール、１４０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４からなるランニングバッファーで行った。クロマトグラフィーは、２２℃で、注入量２μＬ及び流量０．３ｍｌ／ｍｉｎで行った。分子量標準として、アルブミン、共有結合性インスリン六量体及び  単量体インスリンを用いた。積分によってクロマトグラムを分析して、六量体より大きい種（３．０〜３．８分）、六量体（３．８〜４．３分）及び六量体より小さい種（４．３〜５．５分）を表した。各データセットに対する厳密な積分限界は、カラム性能のバリエーションに起因してわずかに変動することとなるということに留意されたい。
【０１３０】
フローセルを備えたＢｉｏＳＡＸＳ−２０００機器と０．００８〜０．６６１Å−１のｑレンジをカバーするＤｅｃｔｒｉｓ  １００Ｋ検出器とを用いて、Ｘ線小角散乱（ＳＡＸＳ）データを収集した。サンプルの測定値からバッファーの測定値を減算し、タンパク質の散乱プロファイルを得た。同じ手順に従って、０．６ｍＭのヒトインスリン、３Ｚｎ＋＋／６インスリン、１６ｍＭのフェノール、２０ｍＭのＮａＣｌ及び７ｍＭのリン酸バッファーｐＨ７．４のサンプルから、Ｒ立体構造をもつ六量体状態のヒトインスリンの参照サンプルからのデータを収集した。
【０１３１】
＜６０ｍＭのフェノール及び０のｍ−クレゾールを含む製剤に関するオリゴマー分布＞
製剤０１、０２、０３、０４、０５及び０６を含むネイティブＳＥＣクロマトグラムを生成した（表６及び図５Ａを参照）。
【０１３２】
【表１０】
2020105227.tif 000011
【０１３３】
＜６０ｍＭのフェノール及び１０ｍＭのｍ−クレゾールを含む製剤に関するオリゴマー分布＞
製剤Ｂ１〜Ｂ６と製剤Ａとを比較するネイティブＳＥＣクロマトグラムを生成した（表６及び図５Ｂを参照）。曲線の下の面積は、すべてのクロマトグラムに関して類似している。積分によってクロマトグラムを分析して、六量体より大きい種（３．０〜３．８分）、六量体（３．８〜４．３分）及び六量体より小さい種（４．３〜５．５分）を表した。各データセットに対する厳密な積分限界は、カラム性能のバリエーションに起因してわずかに変動することとなるということに留意されたい。
【０１３４】
【表１１】
2020105227.tif 000012
【０１３５】
結論
製剤０１〜０６のＳＥＣデータ（表６、図５Ａ）が、化合物１の製剤０１のオリゴマー分布は、明らかに大多数を占めるオリゴマー種が存在しないブロードな波形を特徴とすることを示している。製剤０３〜０６の化合物１のオリゴマー分布は、製剤０１及び０２と比べて幅が狭い。製剤０３〜０６のメインピークの保持時間は、六量体と一致しており、保持時間５分にある小さいピークは、単量体又は２量体と一致している。
【０１３６】
製剤Ｂ１〜Ｂ６及びＡのＳＥＣデータ（表７、図５Ｂ）はまた、２．０〜２．５亜鉛／６インスリンでは、４．０又は４．５Ｚｎのものと比較して、六量体ピークが増すということも示している。
【０１３７】
したがって、六量体ピークは、亜鉛濃度が高い場合（例えば、４．０又は４．５Ｚｎ）と比較して、亜鉛濃度が低い場合（例えば、２．０Ｚｎ〜２．５Ｚｎ）で増える。４．５Ｚｎ及び２．２Ｚｎの両方に関して、六量体は、２５／２５ｍＭのフェノール／ｍ−クレゾールと比べて、６０ｍＭ／０又は１０ｍＭのフェノール／ｍ−クレゾールで増える。本発明に従って調合すると、六量体含有量が増加し、オリゴマー化がより明確になる。
【０１３８】
ＳＡＸＳデータにより、４．５Ｚｎ＋＋／六量体を含む化合物１の製剤Ａのオリゴマー化パターンは、従来のヒトインスリン六量体と類似していないが、一方で、化合物１の六量体ベースの構造は、製剤Ｃにおいて大多数を占めるということも確認された（図６）。本発明に従って調合すると（製剤Ｃ）、オリゴマー化パターンは、より明確に定義されるようになり、またヒトインスリンに類似する六量体ベースの構造と一致する。
【０１３９】
［実施例５］
［改良された化学的安定性及び物理的安定性］
この実施例における実験結果により、化合物１の化学的安定性及び物理的安定性の両方が、参照製剤Ａと比べて、新規製剤で改善していることが示された。特に、高濃度のフェノール及び低濃度のｍ−クレゾールで、亜鉛濃度が減少すると、化合物１の化学的安定性及び物理的安定性の両方が増加する。
【０１４０】
プロトコル
逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＵＨＰＬＣ）によって純度を決定したが、１３０Å、１．７μｍ、２．１ｘ１５０ｍｍのＡｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  Ｆｌｕｏｒｏ  Ｐｈｅｎｙｌカラムを用いて、アセトニトリル及びリン酸バッファーの水溶液である移動相中でアセトニトリルによってグラジエント溶離し、次いでＵＶ検出（２１５ｎｍ）することによって、流量０．３０ｍｌ／ｍｉｎ下、サンプル注入量２〜３μｌでサンプルを分析した。純度は、すべてのピーク面積でメインピークの面積を除算して、１００％を乗算することで評価した。
【０１４１】
＜６０ｍＭのフェノール及び１０ｍＭのｍ−クレゾールを含む化合物１製剤の化学的安定性＞
ＲＰ−ＵＨＰＬＣにより全ペプチドのうちの純度％として測定した安定性により、２５ｍＭのフェノール及び２５ｍＭのｍ−クレゾールを含んだ化合物１の製剤Ａと比較して、６０ｍＭのフェノール及び１０ｍＭのｍ−クレゾールを含んだ製剤Ｂ及び製剤Ｃ中で化合物１の安定性が有意に増加したことが示された。表８及び図７Ａを参照されたい。
【０１４２】
【表１２】
2020105227.tif 000013
【０１４３】
＜６０ｍＭのフェノール及び０のｍ−クレゾールを含む化合物１製剤の化学的安定性＞
ＲＰ−ＵＨＰＬＣを用いて全ペプチドのうちの純度％として測定した、表９に示す製剤の安定性により、それぞれ高濃度のフェノール及び低濃度のｍ−クレゾールを含む製剤中での亜鉛濃度の関数として、化合物１の化学的安定性が増加するということがさらに確認された。この結果は、製剤中で、２５／２５ｍＭのフェノール／ｍ−クレゾールを６０ｍＭのフェノール及び０のｍ−クレゾールにさせる防腐系における変化と共に、亜鉛を４．５Ｚｎ＋＋／６インスリンから２．４、２．２及び２．０Ｚｎ＋＋／６インスリンに減少させたときに、化合物１の安定性が増加することを示している。表９及び図７Ｂを参照されたい。
【０１４４】
【表１３】
2020105227.tif 000014
【０１４５】
結論
本発明（製剤Ｂ、Ｃ、０４、０５及び０６；表８及び９ならびに図７Ａ及び図７Ｂを参照）に従って調合すると、従来技術（製剤Ａ及び製剤０１）と比べて化学的安定性が増す。
【０１４６】
［物理的安定性］
プロトコル：
化合物１の製剤は、２００μｌの４つの複製とともに、９６ウェルマイクロタイタープレート中で試験した。各製剤からの１．０ｍｌに対して、ＴｈＴ（チオフラビンＴ）を１μＭまで添加した。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎを用いて、アミロイド線維を形成する傾向に関するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）アッセイを、９６０ｒｐｍで振とうしながら、３７℃で４５時間行った。アッセイ前及びアッセイ後のＴｈＴ発光をスキャンした。ＴｈＴ蛍光発光が開始するまでのラグタイムが、物理的安定性の測定値となる。ラグタイムは、４つの複製に対して平均をとった蛍光曲線より決定した。ラグタイムが長いほど、物理的安定性が高いことを示す。
【０１４７】
記載したプロトコルより得られたＴｈＴの結果は、実験間で変動することがあるということに留意されたい。したがって、製剤の所与のセットに関する測定値は、同一の実験内で比較するものとし、実験間での比較はしないものとすることが望ましい。この実施例においては、本発明の種々の製剤と一緒に、様々な実験で同一の参照製剤が試験された。例えば、製剤Ａ対製剤Ｃ、製剤０１対製剤０４〜０６である。
【０１４８】
上記ラグタイムを以下の表１０に示している。製剤Ａ又は製剤０１は、比較用の参照製剤としてである。
【０１４９】
結果を、表１０Ａ及び表１０Ｂに示している。
【０１５０】
＜６０ｍＭのフェノール及び１０のｍ−クレゾールを含む製剤中の化合物１の物理的安定性＞
【表１４】
2020105227.tif 000015
【表１５】
2020105227.tif 000016
【０１５１】
結論
ＴｈＴアッセイで得られたラグタイムにより、化合物１の物理的安定性は、低濃度の亜鉛、高濃度のフェノール及び低濃度のｍ−クレゾールを含む製剤において向上することが示唆されている。このデータは、亜鉛を４．５Ｚｎ／６インスリンから２．２±０．２Ｚｎ／６インスリンに減少させて、同時にフェノールを２５ｍＭから６０ｍＭに増加させてｍ−クレゾールを２５ｍＭから１０ｍＭに減少させると、ラグタイムがより長くなり、ゆえに物理的安定性が向上するということを示した。ｍ−クレゾールを除去すると、低濃度の亜鉛を含む製剤において、化合物１の物理的安定性がさらに向上した（表１０Ｂを参照）。
【０１５２】
［実施例６］
［複合製剤とその化学的安定性及び物理的安定性］
化合物１は、固定比の配合で、週一回のＧＬＰ−１アナログ、セマグルチドと一緒に複合製剤化することができる。
【０１５３】
化合物１とセマグルチドとの以下の複合製剤１から６を調製した。化合物１の単一製剤もまた、参照単一製剤１として調製した。意図した目標値を以下の表１１に示している。
【０１５４】
【表１６】
2020105227.tif 000017
生成した製剤中の化合物１及びセマグルチドの濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣ及び基準物質を用いて測定した。これら濃度を、以下の表１２Ａ及び１２Ｂに記載している。
【０１５５】
【表１７】
2020105227.tif 000018
【表１８】
2020105227.tif 000019
【０１５６】
測定した濃度は、意図した目標値から３％未満の逸脱であった。
【０１５７】
化合物１とセマグルチドとの以下の複合製剤Ｉ〜ＶＩもまた、後に調製した。化合物１の単一製剤は、参照単一製剤２として調製した。意図した目標値を以下の表１３に示している。
【０１５８】
【表１９】
2020105227.tif 000020
【０１５９】
＜物理的安定性＞
プロトコル：
製剤は、２００μｌの８つの複製とともに、９６ウェルマイクロタイタープレート中で試験した。各製剤からの１．０ｍｌに対して、ＴｈＴ（チオフラビンＴ）を１μＭまで添加した。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎを用いて、アミロイド線維を形成する傾向に関するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）アッセイを、９６０ｒｐｍで振とうしながら、３７℃で４５時間行った。アッセイ前及びアッセイ後のＴｈＴ発光をスキャンした。ＴｈＴ蛍光発光が開始する（アミロイド線維の形成）までのラグタイムが、物理的安定性の測定値となる。ラグタイムは、８つの複製に対して平均をとった蛍光曲線より決定した。ラグタイムは、複合製剤１〜４と、複合製剤５及び６とのそれぞれについて二回試験したが、それぞれ、単一製剤を参照として試験し、結果を比較できるようにした。ラグタイムが長いほど、物理的安定性が高いことを示す。
【０１６０】
化合物１の参照単一製剤と、複合製剤とを、９６ウェルマイクロタイタープレート中で、アミロイド線維を形成する傾向に関するチオフラビンＴ（ＴｈＴ）アッセイを試験した。
【０１６１】
そのラグタイムを以下の表１４Ａ、１４Ｂ、１４Ｃに示している。
【０１６２】
【表２０】
2020105227.tif 000021
【表２１】
2020105227.tif 000022
【表２２】
2020105227.tif 000023
【０１６３】
結論：
ＴｈＴアッセイにより、亜鉛濃度を増加させない場合、化合物１及びセマグルチドの複合製剤は、化合物１の単一製剤の物理的安定性と比べて、化合物１の物理的安定性を損なわなかったということが示唆された。実際に、複合製剤のラグタイムは、化合物１の単一製剤のラグタイムよりずっと長かったが、これは、実際にセマグルチドを用いて化合物１を複合製剤にすることが、望ましくないアミロイド線維形成に向かう製剤を安定化させるということを示している。他の持効型インスリン誘導体とＧＬＰ−１誘導体との複合製剤（例えば、デグルデクとリラグルチド）と比較すると、この知見は予想されなかったことであり驚くべきことである。
【０１６４】
表１４Ｃの結果は、ｍ−クレゾールの濃度を低下させることにより、化合物１とセマグルチドとの複合製剤の物理的安定性をさらに向上させることが可能であり、またフェノールの濃度を増加させることがまた、化合物１とセマグルチドとの複合製剤の物理的安定性を向上させるということを示している。
【０１６５】
表１４Ｃの結果もまた、本発明に係る製剤中で化合物１をセマグルチドと複合製剤化すると、化合物１とセマグルチドとの複合製剤化に従来技術の製剤（製剤Ｉ）を用いた場合と比較して、化合物１の物理的安定性を高めるということも示している。
【０１６６】
＜化学的安定性＞
プロトコル
逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＵＨＰＬＣ）によって純度を決定したが、１３０Å、１．７ｕｍ、２．１ｘ１５０ｍｍのＡｃｑｕｉｔｙ  ＣＳＨ  Ｆｌｕｏｒｏ  Ｐｈｅｎｙｌカラムを用いて、アセトニトリル及びリン酸バッファーの水溶液である移動相中でアセトニトリルによってグラジエント溶離し、次いでＵＶ検出（２１５  ｎｍ）することによって、流量０．３０ｍｌ／ｍｉｎ下、サンプル注入量２〜３μｌでサンプルを分析した。純度は、すべてのピーク面積でメインピークの面積を除算して、１００％を乗算することで評価した。
【０１６７】
表１５に示す製剤の安定性は、ＲＰ−ＵＨＰＬＣにより、全化合物１のうちの純度％として測定した。
【０１６８】
亜鉛を４．５Ｚｎ＋＋／６インスリンから２．４、２．２及び２．０Ｚｎ＋＋／６インスリンに減少させると、複合製剤中の化合物１の化学的安定性が増すことが、結果から確認される。２５／２５ｍＭのフェノール／ｍ−クレゾールから６０ｍＭのフェノール及び０のｍ−クレゾールへと防腐系を変化させることで、結果として複合製剤中の化合物１の化学的安定性のさらなる向上が得られた。
【０１６９】
【表２３】
2020105227.tif 000024
【０１７０】
結論
本発明に係る製剤中で化合物１をセマグルチドと複合製剤化すると、化合物１とセマグルチドとの複合製剤化に従来技術の製剤（製剤Ｉ）を用いた場合と比較して、化合物１の化学的安定性が高まる。
【０１７１】
［実施例７］
［ＬＹＤブタＰＫモデルにおけるセマグルチドとの合剤のＰＫ特性］
実施例６で生成した製剤のうち、化合物１の参照単一製剤と複合製剤１及び複合製剤２とを、ＬＹＤブタＰＫ動物モデルにおいて特性決定した。化合物１のＰＫパラメータであるｔｍａｘ及びｔ１／２ならびに化合物１の平均滞留時間（ＭＲＴ）は、セマグルチドと合剤化することによって有意に変化しなかった。
【０１７２】
１６例の動物（各製剤についてｎ＝８）によるクロスオーバー試験を行った。
【０１７３】
【表２４】
2020105227.tif 000025
【０１７４】
化合物１のＰＫパラメータは、複合製剤１及び複合製剤２中でセマグルチドと合剤化した場合、単一製剤として投与した化合物１と比較して、有意に変化しなかった。ｔｍａｘ値は、当該合剤に関してわずかに低下したが、参照である化合物１についての標準偏差についての値が重複している。ｔ１／２及びＭＲＴは、参照単一製剤と比較して、合剤中の化合物１に非常に類似していた。結論として、化合物１のＰＫ特性は、セマグルチドとの合剤化によって有意な影響を受けなかった。
【０１７５】
［実施例８］
［６０／０バッファー交換した複合製剤６０／０の改良されたオリゴマーサイズ］
化合物１の模擬的な注射部位条件において形成される複合製剤Ｉ〜ＶＩのオリゴマー化を、実施例１に記載のプロトコルに従って決定した。この結果を表１７及び図９Ａ及び図９Ｂに示している。
【０１７６】
【表２５】
2020105227.tif 000026
【０１７７】
結論
これらの実験により、模擬的な注射部位条件において形成されるオリゴマーのサイズが、亜鉛含有量に大きく依存するということが示されている。
【０１７８】
模擬的な注射部位条件において複合製剤から形成されるオリゴマーの平均サイズは、高濃度の亜鉛（例えば、４．５Ｚｎ＋＋／６インスリン）を含む製剤と比較して、低濃度の亜鉛（例えば２．４及び２．２Ｚｎ＋＋／６インスリン）を含む製剤中では著しく縮小する。フェノールの濃度を増加させて、かつ、ｍ−クレゾールの濃度を減少させると、模擬的な注射部位条件において複合製剤から形成されるオリゴマーの平均サイズはさらに縮小する。
【図１】
2020105227.tif 000027
【図２】
2020105227.tif 000028
【図３】
2020105227.tif 000029
【図４】
2020105227.tif 000030
【図５Ａ】
2020105227.tif 000031
【図５Ｂ】
2020105227.tif 000032
【図６】
2020105227.tif 000033
【図７Ａ】
2020105227.tif 000034
【図７Ｂ】
2020105227.tif 000035
【図８】
2020105227.tif 000036
【図９】
2020105227.tif 000037
【外国語明細書】
2020105227000001.pdf