(57)【要約】【課題】天然物由来の新規な肝機能障害抑制剤、飲食品、医薬品及び肝機能障害抑制剤の製造方法を提供する。【解決手段】本発明の肝機能障害抑制剤は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類による大豆発酵物を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ（リゾプス・ストロニファー）及びＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ（リゾプス・オリゼ）のうちの少なくとも１種類を含む菌類による大豆発酵物を含む、肝機能障害抑制剤。
【請求項２】
上記大豆発酵物は、常圧下で発酵させたものである、請求項１に記載の肝機能障害抑制剤。
【請求項３】
上記肝機能障害が非アルコール性肝機能障害である、請求項１又は２に記載の肝機能障害抑制剤。
【請求項４】
上記非アルコール性肝機能障害が高脂肪食に起因するものである、請求項１〜３の何れか一項に記載の肝機能障害抑制剤。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか一項に記載の肝機能障害抑制剤を含む、飲食品。
【請求項６】
請求項１〜４の何れか一項に記載の肝機能障害抑制剤を含む、医薬品。
【請求項７】
肝機能障害抑制剤の製造方法であって、
上記肝機能障害抑制剤は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類を用いて大豆を発酵させることにより大豆発酵物を製造する工程を包含する、肝機能障害抑制剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は肝機能障害抑制剤、飲食品、医薬品及び肝機能障害抑制剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝機能障害を呈する肝臓疾患は、ウィルス感染、薬剤、生活習慣病等に起因して発症する。これらの肝臓疾患は、慢性化して症状が進行すると、最終的に肝硬変、肝癌等の重篤な疾患を発症することが知られている。例えば、生活習慣病に起因する肝疾患として、アルコール性又は非アルコール性の脂肪肝が知られている。脂肪肝は、肝細胞に脂肪が過剰に蓄積する疾患である。近年、食生活の欧米化等に伴い、脂肪摂取量が増加し、高脂肪食に起因する非アルコール性脂肪肝の患者が増加している。非アルコール性脂肪肝は、酸化ストレス等が加わることで肝細胞組織に損傷が起こることにより病態が進行すると、非アルコール性脂肪性肝炎となり、さらに末期には肝硬変又は肝癌を発症する場合があることが知られている。以上の状況から、肝機能障害の早期の抑制が重要であり、肝機能障害抑制のための有効性の高い肝機能障害抑制剤の開発が望まれている。
【０００３】
特許文献１には、大豆を含む原料を麹菌を用いて発酵させた発酵分解物から得られる水溶性高分子物質を有効成分とする肝機能障害抑制剤が記載されている。また、特許文献２には、蒸大豆と麹とを加圧加温下で発酵させる、無塩味噌を有効成分として含有する肝機能改善剤が記載されている。また、非特許文献１では、テンペ粉末と未発酵大豆粉末を、２群の白ネズミに投与したところ、テンペ粉末を投与した群に比べ、未発酵大豆粉末を投与した群は、肝臓や腎臓に病的変化が多く見られたことが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−８８１５１号（２００８年４月１７日公開）（特許第４８０９７８５号）
【特許文献２】特開２０１５−１５９４１号（２０１５年１月１５日公開）
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】日本醸造協会誌Ｖｏｌ．８１，Ｎｏ．８（１９８６），５２６−５３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従来技術において、特許文献１、特許文献２及び非特許文献１には、何れも大豆由来物質が肝機能障害を改善させることが記載されている。このうち、特許文献１の肝機能障害抑制剤は、鉄により誘発される脂肪肝の抑制や四塩化炭素の薬物によりもたらされる急性の肝機能障害の抑制に特に効果があることが記載されており、醤油から得られた高分子物質を主成分とするものである。また、特許文献２の肝機能改善剤は、加圧加温下で発酵させる必要があり、加圧加温が可能な設備が必要となる。非特許文献１で用いられているテンペは、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ（リゾプス・ミクロスポラス（以下、「Ｒ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ」のように略記する））により大豆を発酵させた大豆発酵物である。上述の健康問題を解決すべく、より有効性の高く且つ製造容易な、新規な肝機能障害抑制剤を提供することが求められている。特に、天然物由来の新規な肝機能障害抑制剤を提供することは有用である。
【０００７】
本発明の主たる目的は、天然物由来の新規な肝機能障害抑制剤、飲食品、医薬品及び肝機能障害抑制剤の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意検討の結果、驚くべきことに、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ（リゾプス・ストロニファー（以下、「Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ」のように略記する））及びＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ（リゾプス・オリゼ（以下、「Ｒ．ｏｒｙｚａｅ」のように略記する））のうちの少なくとも１種類を含む菌類による大豆発酵物が、肝機能障害抑制効果を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、上記の課題を解決するために、本発明は以下の何れかの一態様を包含する。
【００１０】
本発明の一態様に係る肝機能障害抑制剤は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類による大豆発酵物を含む。
【００１１】
本発明の別の態様に係る肝機能障害抑制剤の製造方法は、肝機能障害抑制剤の製造方法であって、上記肝機能障害抑制剤は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類を用いて大豆を発酵させることにより大豆発酵物を製造する工程を包含する、肝機能障害抑制剤の製造方法である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、天然物由来の新規な肝機能障害抑制剤、飲食品、医薬品及び肝機能障害抑制剤の製造方法を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の実施の形態について、詳細に説明する。
【００１４】
〔１．肝機能障害抑制剤〕
本発明の一実施形態に係る肝機能障害抑制剤は、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲ．ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類による大豆発酵物を含んでいる。
【００１５】
（大豆発酵物）
本発明に係る肝機能障害抑制剤の有効成分は、大豆発酵物中に含まれるものである。大豆発酵物について以下に説明する。本実施形態に係る大豆発酵物は、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲ．ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類による大豆発酵物である。換言すれば、本実施形態に係る大豆発酵物はＲ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲ．ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類を用いて大豆を発酵させることによって得られたものであり得る。
【００１６】
本実施形態に係る大豆発酵物の材料及び製造の方法及び条件等について、以下に詳細に記載する。
【００１７】
（菌類）
本実施形態において用いられる大豆を発酵させる菌類は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属（リゾプス属）の菌類を含む。
【００１８】
本実施形態で大豆の発酵に用いられるのは、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲ．ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類である。好ましくは、Ｒ．ｏｒｙｚａｅ、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ  ｖａｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ（リゾプス・ストロニファー  ストロニファー）及びＲ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ  ｖａｒ．ｌｙｏｃｏｃｃｕｓ（リゾプス・ストロニファー  リオコッカス）のうちの少なくとも１種類を含む菌類である。なお、菌の原産地は特に限定されない。上記の菌の他に、Ｒ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ  ｖａｒ．ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ（リゾプス・ミクロスポラス  オリゴスポラス）、Ｒ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ  ｖａｒ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ（リゾプス・ミクロスポラス  ミクロスポラス）、Ｒ．ｄｅｌｍａｒ（リゾプス・デルマ）等のＲｈｉｚｏｐｕｓ属の菌類、市販のテンペに含まれる菌類、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ（ラクトバチルス）等の他の属の菌を含んでいてもよい。つまり、大豆の発酵に用いるのは上述の菌の２種類以上の混合であってもよい。上述の菌を含む菌類を大豆に添加することにより、大豆を発酵させる。添加される菌の形態としては、栄養菌糸若しくは胞子、又はこれらの混合物であればよく、特に限定されないが、保存の容易性及び菌の性状の安定性の観点からは、胞子形態の菌を用いることが好ましい。
【００１９】
ここで、菌を複数種類の異なる菌の組み合わせにおいて用いる場合、大豆に添加する菌の胞子全体の個数あたりのＲ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒの胞子の個数の割合が、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、特に好ましくは少なくとも６０％の割合である。又は、大豆に添加する菌の胞子全体の個数あたりのＲ．ｏｒｙｚａｅの胞子の個数の割合が、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、さらに好ましくは少なくとも５０％、特に好ましくは少なくとも６０％である。
【００２０】
Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒとＲ．ｏｒｙｚａｅとの混合である場合は、例えば大豆に添加するＲｈｉｚｏｐｕｓ属の菌の胞子全体の個数としてのＲ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲ．ｏｒｙｚａｅの割合として、それぞれの菌を等量ずつ含んでいてもよい。
【００２１】
上述の割合の菌を大豆に添加することによって、得られる大豆発酵物には、本発明の肝機能障害抑制剤に用いるのに十分な量の有効成分を含有する。
【００２２】
（大豆）
本実施形態において用いられる大豆の形態としては、丸大豆であっても加工大豆であってもよく、大豆胚軸等を用いてもよい。
【００２３】
（大豆の発酵条件）
一実施形態において、大豆の発酵は、蒸煮した大豆に上述した菌類を植菌し、固体培養することによって行われる。以下に発酵における各工程及び条件について記載する。
【００２４】
（大豆の前処理及び蒸煮）
大豆は、蒸煮前に液体に浸漬したものを用いることが好ましい。また、浸漬するための好ましい液体としては、水又は食用の有機酸、これらの有機酸を含む食品を含む水溶液（食酢、醸造酢等）等が挙げられる。中でも食用の有機酸としては、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸及びフマル酸から選択される少なくとも１つの有機酸であることが好ましい。また、有機酸水溶液中の有機酸の濃度は、特に限定されないが、大豆に添加する菌の生育を阻害しない程度であることが好ましく、例えば、０．１〜０．５％（ｗ/ｗ）程度が好ましい。また、大豆は、液体への浸漬前、浸漬後又は蒸煮後に脱皮するのが好ましく、植菌時に大豆の外皮が残存しないことがより好ましい。蒸煮の温度及び蒸煮時間は、特に限定されないが、例えば大豆の浸漬後、５〜９０分間程度水煮蒸煮、又は１０５〜１２０℃で２〜３０分間程度圧力蒸煮することが好ましい。蒸煮後に大豆を冷却し、前記菌を植菌する。
【００２５】
＜菌の植菌及び培養＞
蒸煮大豆への植菌には、好ましくは胞子懸濁液、胞子粉末等を用い、蒸煮大豆１００ｇ（湿重量）に対して好ましくは１×１０３〜１×１０９個、より好ましくは１×１０４〜１×１０８個の胞子を添加する。
【００２６】
ここで、複数の菌種を用いる場合、胞子はあらかじめ混合したものであってもよく、菌の種類ごとに別個に蒸煮大豆に添加してもよい。
【００２７】
＜培養条件＞
植菌後、混合し、例えば１つ以上穴をあけたポリ袋に充填する、ステンレストレーに静置する等して、通常の方法で固体培養する。好ましくは酸素存在下で好気的に培養する。
【００２８】
培養条件として、培養温度は、好ましくは２０〜４２℃、より好ましくは２５〜３７℃、さらに好ましくは２８〜３４℃である。培養時間は、温度及び植菌量等により異なるが、好ましくは１０〜６０時間、より好ましくは１５〜５０時間、さらに好ましくは２０〜４０時間である。なお、培養は常圧（大気圧）下で実施する。なお、培養は例えば０.１ＭＰａ〜１００ＭＰａの加圧下で実施することも可能である。
【００２９】
以上のような条件で菌を培養することにより、大豆発酵物中の肝機能障害抑制成分を増加させることができる。
【００３０】
上述の条件で、発酵を行うことにより本発明の大豆発酵物を得ることができる。また、上述の条件で大豆を発酵させて得られる大豆発酵物は、本発明の肝機能障害抑制剤における肝機能障害抑制活性の有効成分を高い濃度で含有するものである。
【００３１】
得られた大豆発酵物は、凍結保存しておくことも可能である。また、乾燥させてもよく、エアードライ、スプレードライ、真空乾燥、凍結乾燥又はこれらの方法の組み合わせの方法によって乾燥すればよい。さらに、乾燥前又は乾燥後に、滅菌又は殺菌してもよい。得られた大豆発酵物を、湿熱加熱、乾熱加熱、電磁波処理、高圧処理等の方法で滅菌又は殺菌すればよく、例えば、６０〜１２１℃、１分〜６時間の加熱処理が例示できる。滅菌又は殺菌により、雑菌の繁殖を抑え、安全衛生性を確保することが可能である。さらには、任意の方法で脱色及び／又は脱臭処理を行ってもよい。乾燥させることにより、乾燥品を粉砕することによって粉末化することが容易となる。脱色工程、脱臭工程等を行うことによって得られた組成物は、汎用度が高く、後述の飲食品用、医薬品用等の種々の用途に好適に用いることができる。
【００３２】
（肝機能障害抑制剤のその他の成分）
大豆又は大豆発酵物にはさらに、タンパク質、食物繊維、アミノ酸、ビタミン類（例えば、ビタミンＥ及びビタミンＢ群）、鉄等のミネラル類、レシチン、サポニン、イソフラボン類等が豊富に含まれており、栄養価に富み、各種機能性成分を含む。したがって、一実施形態において、肝機能障害抑制剤は、肝機能障害抑制活性を有する成分のみならず、大豆又は大豆発酵物由来の各種機能性成分の少なくとも１つを有している。そのため、肝機能障害抑制剤は、肝機能障害抑制効果だけではなく、大豆又は大豆発酵物に含まれる公知又は新規の、１つ以上の成分による健康増進効果を併せ持つものであり得る。
【００３３】
（肝機能障害）
本明細書において、「肝機能障害」は、肝臓の機能に異常が見られる状態を意味している。また、肝機能の異常が見られる状態とは、正常な肝臓の機能と比較して機能が低下している状態を指す。一実施形態では肝機能の低下は、後述する肝機能障害の指標の数値によって判定されるものである。本明細書において「肝機能障害」は、肝臓疾患を発症していないが、肝機能に異常がみられる状態と肝機能障害を呈する肝臓疾患とを包含する。肝機能障害には、アルコール誘発性の肝機能障害、非アルコール誘発性の肝機能障害、薬物（ハロゲン系化合物、ガラクトサミン等）誘発性肝機能障害等が挙げられる。
【００３４】
一実施形態において、肝機能障害抑制剤は、上述した様々な肝臓機能障害の予防又は治療に有効に用いることができる。本明細書において「予防」とは、疾病、疾患又は障害に罹患することを防ぐことを指す。また、「治療」とは、すでに罹患している疾病、疾患若しくは障害、又はそれに伴う症状を、緩和又は除去することを指す。
【００３５】
本発明の肝機能障害抑制剤は、特に、非アルコール誘発性の肝機能障害に対して用いることが好ましく、高脂肪食によって誘発される肝機能障害に対して用いられることがより好ましい。ここで高脂肪食とは脂肪過多な食事を意味しており、例えば、厚生労働省が定める「日本人の食事摂取基準（２０１５年度版）」における１日当たりの脂質の摂取基準では、成人したヒトにおいて、男性で約８０ｇ／日、女性で約７０ｇ／日と定められているが、この摂取基準以上の脂質を摂取する食事である場合を意味している。
【００３６】
一実施形態において、肝機能障害抑制剤を適用する肝機能障害としては、好ましくは非アルコール性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎等の非アルコール性肝機能障害であり、より好ましくは非アルコール性脂肪肝である。また、これらの非アルコール性の肝機能障害は、高脂肪食によって誘発されるものであり得る。
【００３７】
また、肝機能障害抑制剤は、肝臓自体の機能異常の抑制のみならず、肝機能異常に付随して生じる合併症の予防又は治療効果も有する。合併症としては、脱水、肝性脳症、肝性糖尿病、食道静脈瘤、胃潰瘍等が挙げられる。さらに肝機能障害抑制剤を適用して上述の肝機能障害の発症を予防することは、早期の段階で肝機能障害を抑制して、肝硬変、肝臓癌等への症状の重篤化を防ぐという臨床的に重要な意義を有する。
【００３８】
＜肝機能障害抑制効果の評価＞
本発明の肝機能障害抑制剤の肝機能障害抑制効果は、一般的に肝機能検査において用いられている様々な肝機能障害の指標によって評価することができる。
【００３９】
肝機能障害の指標としては、まず、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（Aspartate transaminase、ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（Alanine Aminotransferase、ＡＬＴ）が挙げられる。また肝機能障害のその他の指標として、乳酸脱水素酵素（lactate dehydrogenase、ＬＤＨ）が挙げられる。さらに、その他の肝機能の状態を表す代表的な指標として、総ビリルビン及びアンモニアが挙げられる。
【００４０】
肝機能障害は、上述した指標のいずれか１以上における測定値が、正常値（基準値）の範囲から逸脱しているか否かで判定することができる。判定は、例えば基準値との有意差の有無で判定される。基準値は、予め検査機関等で決定された所定の基準値を用いてもよく、例えば肝機能障害を有していない正常なヒト又は動物から得られる値であってもよい。
【００４１】
（肝機能障害抑制剤の形態）
一実施形態において、肝機能障害抑制剤は、上述した通り、大豆発酵物を有効成分としており、一実施形態における肝機能障害抑制剤は、大豆発酵物そのもの又は大豆発酵物中の全成分を含有するものであってもよく、又は、大豆発酵物の乾燥物そのもの又は大豆発酵物の乾燥物中の全成分を含有するものであってもよい。また、医薬品、飲食品等の各用途に応じて、好適な形態に製剤化して用いることも出来る。さらに、公知の飲食品及び医薬品に配合することも可能である。医薬品及び飲食品の用途の場合の添加剤等の詳細については、以下の項目に記載する。さらに、肝機能障害抑制剤の被験体への投与方法、投与形態、投与量等についても、以下の項目で詳述する。
【００４２】
〔２．肝機能障害抑制剤を含む医薬品〕
本発明の一実施形態に係る医薬品は、肝機能障害抑制剤を含んでいる。医薬品に含まれる肝機能障害抑制剤は、〔１．肝機能障害抑制剤〕の項目において上述した通りのものである。
【００４３】
本実施形態の肝機能障害抑制剤は、顕著な肝機能障害抑制活性を有するので、これを含んでなる医薬品を被験体に投与することにより、肝機能障害を予防又は治療することができる。よって、本実施形態の医薬品を用いれば、例えば、生体において肝機能障害を呈する疾病、疾患又は障害を有する患者の治療に有用である。具体的な肝機能障害の例については、上述の〔１．肝機能障害抑制剤〕に記載した通りである。また、本発明の医薬品は、肝機能障害を発症する危険性が高くなっている動物、ヒト等の被験体を治療的又は予防的に処置するために用いることができる。
【００４４】
一実施形態として、本発明の医薬組成物は、好適な溶媒、担体、賦形剤、補助剤等から選択される少なくとも１つの物質をさらに含んでいる。以下に医薬品を構成する各成分について記載する。また、本発明に係る医薬品の有効成分の効果を阻害しない限りにおいて、公知の他の肝機能障害抑制剤又は他の効果を有する有効成分を含有していてもよい。
【００４５】
（溶媒）
本発明の医薬品の溶媒の例としては、水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液としては、生理食塩水、リン酸緩衝液、リンゲル液等が挙げられる。また、組成物に用いられる溶媒は上述の溶媒の２種類以上の混合物であってもよい。
【００４６】
（担体）
本発明に係る医薬品に用いられる担体としては特に限定されず、製剤用の材料として公知の各種の所望の担体物質を使用することができる。上記担体物質としては特に限定されず、例えば、固形製剤においては、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等を挙げることができる。上記担体物質に加えて、さらに、防腐剤、着色剤、天然色素、甘味剤等の製剤添加物も必要に応じて用いることができる。
【００４７】
（剤型）
本発明の医薬品の剤型は特に限定されず、液体、固体又は半固体若しくは半液体とすることができる。これらの剤型は、当業者に公知の方法に基づき、容易に製造することができる。剤型が液体の場合は、例えば、実質的に水性の溶媒に本発明に係る肝機能障害抑制剤を分散、懸濁又は溶解して含有させた製剤、シロップ剤等が挙げられる。ここで、実質的に水性である製剤又は調製物とは、ある実施形態においては、一定の割合で１以上の非水性成分又は１以上の薬学的に許容される他の成分を含むものであることを意図している。剤型が固体の場合は、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセル及びマイクロカプセル）等が挙げられる。また、剤型が半固体又は半液体の場合は、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、懸濁剤、乳剤等が挙げられる。
【００４８】
以上の医薬品は、製剤技術分野における慣用の方法を用いて製造することができる。
【００４９】
別の実施形態において、医薬品は、本発明の肝機能障害抑制剤を公知の各種医薬品に添加することによっても製造することができる。
【００５０】
（投与経路）
医薬品の投与経路としては、経口、局所、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、経皮等が挙げられるが、これらに限定されない。中でも投与の容易性の観点から経口であることが好ましい。
【００５１】
（投与方法）
本発明の医薬品の被験体への投与は、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内等への直接注射、鼻腔内、口腔内、肺内、膣内、直腸内等の粘膜への噴霧、及び経口投与、血管内投与等の、公知の方法に基づいて行われる。
【００５２】
（投与量及び投与期間）
医薬品の投与量（治療有効量）は、投与の対象となる生体の年齢、体重、性別、投与する剤型、目的とする肝機能障害抑制効果の程度等によって適宜選択可能である。また、医薬品の投与期間についても、目的とする肝機能障害抑制効果が得られるように適宜選択することができる。投与期間は、例えば、１日〜９０日間であることが好ましく、３日〜３０日間であることがより好ましい。また、投与回数は、１日当たり１〜３回が好ましく、１〜２回がより好ましい。投与期間中、毎日連続で投与してもよく、２〜４日に１回投与してもよい。
【００５３】
また、例えば、肝機能障害抑制剤の肝機能障害抑制効果を損なわない限り、別の肝機能障害抑制効果を有する医薬品又は別の効果を有する医薬品と併用投与されてもよい。
【００５４】
（使用用途）
本発明の医薬品の具体的な使用用途は、例えば、上述の肝機能障害を呈する疾病、疾患又は障害の治療又は予防である。〔１．肝機能障害抑制剤〕の項目において上述した通りのものである。
【００５５】
（投与の対象）
本発明に係る医薬品の投与対象となる被験体としては、あらゆる動物が挙げられ、哺乳類、鳥類等の脊椎動物が好ましく、哺乳類であることがより好ましい。さらに、哺乳類の前記被験体はヒトであることが好ましいが、家畜、実験動物又はペット動物が被験体となる場合もあり得る。具体的にはニワトリ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ウシ等の家畜類、ネコ、イヌ、ハムスター、ウサギ、モルモット等のペット動物、マウス、サル、魚類、鳥類等が挙げられる。
【００５６】
本発明の医薬品は、肝機能障害抑制の有効成分が天然由来であって、安全性が高いため、長期間にわたる服用に好適に用いられる。したがって、例えば、高脂肪食又は生活習慣病に起因する脂肪肝の予防又は治療のために、長期的に服用することも可能である。
【００５７】
〔３．肝機能障害の治療方法〕
（投与方法・用量）
本発明は、上述の肝機能障害抑制剤を含む医薬品を、被験体に対して、治療有効量投与する工程を含む肝機能障害の治療方法も包含する。一実施形態において、投与対象となる被験体は、肝機能障害を有している。ここで、肝機能障害抑制剤は、当該肝機能障害抑制剤のみを単独で投与してもよく、又は、投与の目的に適した薬学的組成物の一構成成分として投与してもよい。投与方法、投与量、投与期間等は〔２．肝機能障害抑制剤を含む医薬品〕に記載した通りである。なお、健常な被験体に対して、肝機能障害を発症する前に該医薬品を投与する工程を包含する、予防投与の形態も、本発明の治療方法の範疇に含まれる。すなわち、被験体に該肝機能障害抑制剤が治療有効量以上生体中に投与された状態にし、あらかじめ肝機能障害を予防するという態様である。
【００５８】
（併用療法）
本発明に係る肝機能障害の治療方法において、本発明の肝機能障害抑制剤以外の肝機能障害抑制剤（例えば公知の肝機能障害抑制）と組み合わせて投与し、併用療法をおこなってもよい。併用療法を行うことにより、併用剤の治療効果と相乗的な治療効果が期待できる。
【００５９】
〔４．肝機能障害抑制剤を含む飲食品〕
本発明の一実施形態に係る飲食品は、本発明に係る肝機能障害抑制剤を含んでいる。本明細書において「飲食品」とは、ヒトが摂取する飲料、食物及び健康食品のみならず、家畜、愛玩動物等の動物に給餌される飼料又は食餌も含む。また、飲食品は、肝機能障害抑制剤以外の添加剤をさらに含んでいてもよい。飲食品に含まれる肝機能障害抑制剤は、〔１．肝機能障害抑制剤〕の項目において上述した通りのものである。飲食物中に含まれる肝機能障害抑制剤の量は、飲食品の種類、形態等によって異なるものであり、特に限定されない。
【００６０】
飲食品に含まれるその他の成分としては、肝機能障害抑制剤の肝機能障害抑制効果を損なわない限り、任意の所望する添加剤であればよく、例えば、ｐＨ調整剤、有機酸、糖アルコール、甘味料、香料、ビタミン類、骨代謝ビタミン類、抗酸化剤、賦形剤、可溶化剤、結合剤、滑沢剤、懸濁剤、湿潤剤、皮膜形成物質、矯味剤、矯臭剤、着色料、保存剤、抗菌剤、殺菌剤、抗炎症剤等の、組成物において通常用いられている添加剤が挙げられる。
【００６１】
（飲食品の形態）
飲食品組成物である場合の形態は、特に限定されず、例えば、製剤形態、加工食品及び各種飲料とすることができる。製剤形態としては、健康食品、機能性食品、特定保健用食品等が挙げられる。なお、特定保健用食品（条件付き特定保健用食品を含む）は、その包装容器等に、日本国厚生労働省が承認又は認可した機能表示又は保健用途の表示をすることが可能な食品である。本発明の「飲食品」を、製剤形態とする場合は医薬品に準じた構成にすることができる。すなわち、飲食品中の肝機能障害抑制剤の含有量を医薬品に準じた含有量とし、剤形を医薬品に準じた、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、粉剤等の剤形とすることができる。
【００６２】
本発明に係る飲食品は、生体に経口摂取させることによって、当該生体内において肝機能障害を抑制する。したがって、当該飲食品は、経口摂取が容易な形態であることが好ましい。例えば、茶、コーヒー、紅茶、豆乳等の公知の飲料、粉末ジュース、チューインガム、ビスケット、キャンディ、グミキャンディ等の菓子、又はトローチ、タブレット、カプセル、打錠、顆粒等の製剤化された形態が挙げられる。
【００６３】
一実施形態において、上述した公知の各種飲食品に添加することにより、飲食品を製造することができる。
【００６４】
〔５．肝機能障害抑制剤の製造方法〕
本発明はさらに、肝機能障害抑制剤の製造方法であって、当該肝機能障害抑制剤は、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲ．ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類を用いて大豆を発酵させることにより大豆発酵物を製造する工程を包含する、肝機能障害抑制剤の製造方法を提供する。
【００６５】
一実施形態において、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ及びＲ．ｏｒｙｚａｅのうちの少なくとも１種類を含む菌類を用いて大豆を発酵させることにより大豆発酵物を製造する工程（大豆発酵物生成工程）及び上記大豆発酵物を他の成分と混合すること等によって、肝機能障害抑制剤を調製する工程（肝機能障害抑制剤調製工程）を包含する。
【００６６】
また、さらに別の実施形態において、肝機能障害抑制剤の製造方法は、上述の大豆発酵工程で得られた大豆発酵物を乾燥させる工程（乾燥工程）をさらに包含していてもよい。製造方法におけるその他のさらなる工程として、上述の大豆発酵物生成工程の後に、加熱工程及び殺菌工程のうちの少なくとも１つを行ってもよい。
【００６７】
本発明に係る肝機能障害抑制剤の製造方法によれば、肝機能障害抑制効果の高い有効成分を含む、種々の広範な用途に使用可能な肝機能障害抑制剤が製造可能である。
【００６８】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【実施例】
【００６９】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例によって限定されるものではない。
【００７０】
〔実施例１：菌種Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒの大豆発酵物粉末の調製〕
脱皮大豆１００ｇに対して、５倍量の重量の３％醸造酢水溶液を加え、室温で一晩、浸漬処理を行った。浸漬処理後、水切りすることにより、浸漬大豆１６０ｇを得た。浸漬大豆１６０ｇに水道水３２０ｇを加え、圧力鍋を使用して、１００℃にて１０分間蒸煮処理を行った。蒸煮処理後、水切りすることにより、蒸煮大豆２００ｇを得た。４０℃以下まで冷却した蒸煮大豆１００ｇに対して、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ  ＮＢＲＣ３０８１６の胞子懸濁液を１×１０６個の胞子数になるように添加し、十分に混合することにより種付処理を行った。これを穴開き袋に充填し、３２℃に設定した恒温槽内で、４０時間発酵処理を行った。発酵処理後、９０℃、３０分間の殺菌を行い、さらに凍結乾燥を行い、大豆発酵物粉末を得た（実施品１）。
【００７１】
〔実施例２：菌種Ｒ．ｏｒｙｚａｅの大豆発酵物粉末の調製〕
実施例1における胞子懸濁液の代わりにＲ．ｏｒｙｚａｅ  ＮＢＲＣ４７１６の胞子懸濁液を使用すること以外は実施例１と同様の操作によって、大豆発酵物粉末を得た（実施品２）。
【００７２】
〔比較例１：菌種Ｒ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓの大豆発酵物粉末の調製〕
実施例1における胞子懸濁液の代わりにＲ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ  ＮＢＲＣ３２００２の胞子懸濁液を以外は実施例１と同様の操作によって、大豆発酵物粉末（テンペ粉末）を得た（比較品１）。
【００７３】
〔実施例１：大豆発酵物粉末の投与による高脂肪食誘発性肝機能障害抑制効果の評価試験〕
（試験方法）
平均体重１０９ｇの４週齢Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ雄ラットを、各群１０匹ずつ４群に分け、１週間の予備飼育（通常の市販の飼料を与えた）後に、実施品１、２及び比較品１の大豆発酵物粉末をそれぞれ飼料重量あたり２０重量％含む高脂肪食（脂肪３０重量％）を２１日間毎日継続摂取させた。なお、大豆発酵物粉末の代わりに、カゼインをタンパク質含有量（２０重量％）が等しくなるように添加したものを対照とした（比較品２）。飼育終了後、肝機能障害検査項目である血清中のＡＳＴ、ＡＬＴ、総ビリルビン、アンモニア及びＬＤＨを測定した。測定結果を表１に示した。また、カッコ内に、比較品２の測定値に対する実施品１、２及び比較品１の測定値の増減率を示した。
【００７４】
（試験結果）
Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒを使用して得られた大豆発酵物粉末である実施品１は、ＡＳＴ、総ビリルビン及びアンモニアにおいて、対照のカゼイン摂取群である比較品２と比較し、統計学的に有意に肝機能障害を抑制していた。なお、本試験では、何れの指標についても有意差の検定にはテューキーの範囲検定を用いた。さらにＡＬＴ及びＬＤＨにおいても、実施品１は、比較品２に比べて低値となっており、肝機能障害抑制傾向にあった。
【００７５】
また、Ｒ．ｏｒｙｚａｅを使用して得られた大豆発酵物粉末である実施品２は、アンモニアにおいて統計学的に有意に肝機能障害を改善し、また、ＡＳＴ、ＡＬＴ、総ビリルビン及びＬＤＨにおいて、対照のカゼイン摂取群である比較品２と比較し、低値となっており改善傾向にあった。
【００７６】
一方、Ｒ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓを使用して得られたテンペ粉末である比較品１は、対照のカゼイン摂取群である比較品２と比較し、アンモニアにおいて低値となっている以外、他の肝機能障害検査項目において改善が認められなかった。以上の結果を表１にまとめた。なお、表中、括弧内の％は、比較品２に対する増減の割合を示す。
【００７７】
【表１】
2020029401.tif 000002
【００７８】
〔参考例：実施品及び比較品の大豆発酵物抽出液のエタノール不溶性物質含量評価試験〕
（試験方法）
１．抽出液の調製
５０ｍＬ容量の遠心管に実施品１、実施品２及び比較品１の各大豆発酵物粉末２ｇ及び２５％エタノール２０ｍＬを加え、室温で２時間振盪抽出を行った後に、遠心分離（３，５００ｒｐｍ、１０分間）し、上清について、孔径０．４５μｍフィルターを透過させることで各大豆発酵物抽出液を得た。
２．限外濾過による分画処理
調製した抽出液１０ｍＬを分画分子量５，０００の限外濾過膜を使用して遠心分離による分画処理を行った。非透過液を１０ｍＬ容量のメスフラスコに回収し、２５％エタノールを用いて定容することで、各大豆発酵物抽出液分画品（分子量５，０００以上）を得た。
３．エタノール可溶性物質の除去
予め風袋重量を秤量した５０ｍＬ容量の遠心管に、大豆発酵物抽出液分画品（分子量５，０００以上）１０ｍＬ全量を移し、そこにエタノール２０ｍＬを加え、３０秒間ボルテックスし、室温で３０分間静置した後に遠心分離（３，５００ｒｐｍ、１０分間）による固液分離を行った。上清を取り除いた後に、８０℃の恒温槽内で加温することにより遠心管内に残留したエタノールを除去後、凍結乾燥させ、乾燥後の遠心管の重量を測定することで、分子量５，０００以上のエタノール不溶性物質の重量を算出した。
【００７９】
【表２】
2020029401.tif 000003
【００８０】
（結果）
Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ又はＲ．ｏｒｙｚａｅを使用して得られた大豆発酵物粉末に含まれる分子量５，０００以上のエタノール不溶性物質（実施品１及び２）は、比較品である従来の大豆発酵物に使用されていたＲ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓによる大豆発酵物粉末に含まれる分子量５，０００以上のエタノール不溶性物質（比較品１）に比べて含量が少なかった。これに対し実施例の結果では、肝機能障害抑制効果は、Ｒ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒを使用して得られた大豆発酵物粉末である実施品１で最も優れた効果があり、次いでＲ．ｏｒｙｚａｅを使用して得られた大豆発酵物粉末である実施品２で効果が認められ、Ｒ．ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ使用して得られた大豆発酵物粉末である比較品１には効果が認められなかった。
【００８１】
以上のことから、分子量５，０００以上のエタノール不溶性物質重量と肝機能障害抑制効果に相関関係はなく、本発明に係る大豆発酵物における肝機能障害抑制の有効成分は、特許文献１に記載のエタノール不溶性高分子物質ではないと推察した。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明に係る肝機能障害抑制剤は肝機障害の抑制効果を有しており、飲食品及び医薬品用途のみならず、試験研究用等の広範な分野で利用することができる。