(57)【要約】【課題】粘膜免疫原性が高く且つ安全性が高い粘膜ワクチンの調製に有用な粘膜アジュバント、及びそれを含む粘膜ワクチン組成物を提供する。【解決手段】ＴＧＤＫからなる粘膜アジュバント。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＧＤＫからなる粘膜アジュバント。
【請求項２】
ＴＧＤＫ及び薬学的に許容される担体を含有する粘膜アジュバント組成物。
【請求項３】
請求項１記載の粘膜アジュバント及び免疫原を含有する粘膜ワクチン組成物。
【請求項４】
免疫原がインフルエンザウイルスの全粒子又はスプリット抗原である、請求項３記載の粘膜ワクチン組成物。
【請求項５】
ＴＧＤＫと免疫原を混合することを特徴とする請求項３又は４記載の粘膜ワクチン組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗原の粘膜免疫誘導を増強する、粘膜アジュバントに関する。
【背景技術】
【０００２】
粘膜ワクチンは、抗原を経鼻等の経粘膜で投与することにより粘膜局所の免疫と全身性の免疫応答をいずれも惹起し、これにより病原体に対して２重の防衛線を構築できる。一方で、粘膜ワクチンとして実用されているものは感染性を有する生ワクチン若しくは粘膜親和性を有する特殊な毒素を抗原としたワクチンであり、その他の不活化抗原は単独の投与では十分な免疫を誘導することができず、アジュバント等の組み合わせが必要となる。
【０００３】
粘膜ワクチンで十分な免疫を惹起するための方法として、従来は感染性を有する弱毒化した病原体が用いられてきた。しかし、弱毒生ワクチンは感染性を有するため、副反応が強く、例えば経口生ポリオワクチンのポリオワクチン関連性麻痺は稀だが不可避の副反応であり、ワクチン株の神経毒性復帰により発症するといわれている。したがって、粘膜ワクチンにおいても安全性の高い不活化抗原を使用するべきであるが、特殊な毒素等の抗原を除いては、経粘膜の投与で十分な免疫を付与することが難しい。これを改善するために粘膜アジュバントの添加が考えられ、コレラ毒素や毒素原性大腸菌の易熱性毒素（ＬＴ）が代表的な粘膜アジュバントとして知られている（非特許文献１−２）。
【０００４】
しかし、過去の臨床試験においてＬＴの経鼻投与により顔面神経麻痺（ベル麻痺）が起き、毒素そのものをアジュバントとして使用することは安全性の面で問題があると認識されている。また、その他にも二本鎖ＲＮＡ（ｐｏｌｙＩ：Ｃ）（特許文献１）も粘膜アジュバント活性を有するが、炎症やサイトカイン血症の誘発のため未だ実用に至っていない。
【０００５】
最近の我が国における経鼻投与インフルエンザワクチンの開発では、市販されるインフルエンザＨＡワクチンの抗原であるスプリット抗原ではなく、より免疫原性の高い不活化全粒子を抗原として臨床試験が行われている（非特許文献３）。これはスプリット抗原では経粘膜投与で十分な免疫応答を誘導できないためであるが、不活化全粒子抗原では皮下投与において特に小児で副反応の問題（投与部位の局所反応及び発熱）があり現在は市場に流通していない。したがって、安全性の高いスプリット抗原で不活化全粒子抗原と同程度の免疫誘導を達成することが望まれている。
【０００６】
Ｔｅｔｒａｇａｌｌｏｙｌ‐Ｄ‐Ｌｙｓｉｎｅ  Ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ（ＴＧＤＫ）は、粘膜に存在する抗原取り込み細胞であるＭｉｃｒｏｆｏｌｄ  ｃｅｌｌ（Ｍ細胞）に特異的に結合する分子である（非特許文献４）。したがって、ＴＧＤＫを抗原等に化学結合させることで、ワクチン抗原をＭ細胞へ効率的にデリバリーすることが可能となり、免疫応答を向上させることができる。例えば特許文献２には、ＴＧＤＫ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２が、ペプチド結合又はシッフベース等を介して、ペプチド、タンパク質、脂質、ポリエチレングリコール類又は糖と結合することにより、腸管免疫賦活剤として使用できることが開示されている。また、特許文献３には、Ｈｕｂ抗原とＴＧＤＫとフェツインとの共有結合体がＨＩＶ／ＡＩＤＳの分子擬態粘膜ワクチンとなり得ることが開示されている。
【０００７】
しかしながら、ＴＧＤＫ分子自体が、粘膜アジュバント活性を有することは全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００５−９７２６７号公報
【特許文献２】国際公開第２００７／０５２６４１号
【特許文献３】国際公開第２０１３／０２４８５９号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Xu-Amano, J., H. Kiyono, R. J. Jackson, H. F. Staats, K. Fujihashi, P. D. Burrows, C. O. Elson, S. Pillai, J. R. McGhee. 1993. Helper T cell subsets for immunoglobulin A responses: oral immunization with tetanus toxoid and cholera toxin as adjuvant selectively induces Th2 cells in mucosa associated tissues. J. Exp. Med. 1993;178(4): 1309-20
【非特許文献２】Takahashi, I., M. Marinaro, H. Kiyono, R. J. Jackson, I. Nakagawa, K. Fujihashi, S. Hamada, J. D. Clements, K. L. Bost, J. R. McGhee. 1996. Mechanisms for mucosal immunogenicity and adjuvancy of Escherichia coli labile enterotoxin. J. Infect. Dis. 1996;173(3): 627-35
【非特許文献３】Ainai A, Tamura S, Suzuki T, van Riet E, Ito R, Odagiri T, et al. Intranasal vaccination with an inactivated whole influenza virus vaccine induces strong antibody responses in serum and nasal mucus of healthy adults. Human vaccines & immunotherapeutics. 2013;9(9):1962-70.
【非特許文献４】Misumi S, Masuyama M, Takamune N, et al. Targeted Delivery of Immunogen to Primate M Cells with Tetragalloyl Lysine Dendrimer Journal of Immunology, 2009;182(10):6061-6070
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、粘膜免疫原性が高く且つ安全性が高い粘膜ワクチンの調製に有用な粘膜アジュバント、及びそれを含む粘膜ワクチン組成物を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題に鑑み検討したところ、従来、ワクチン抗原に化学結合させ当該抗原をＭ細胞へデリバリーするために使用されていたＴＧＤＫが、意外にもそれ自体でアジュバント活性を有し、抗原の粘膜免疫誘導能を増強できることを見出した。
【００１２】
すなわち、本発明は以下の１）〜５）に係るものである。
１）ＴＧＤＫからなる粘膜アジュバント。
２）ＴＧＤＫ及び薬学的に許容される担体を含有する粘膜アジュバント組成物。
３）１）の粘膜アジュバント及び免疫原を含有する粘膜ワクチン組成物。
４）免疫原がインフルエンザウイルスの全粒子又はスプリット抗原である、３）の粘膜ワクチン組成物。
５）ＴＧＤＫと免疫原を混合することを特徴とする３）又は４）の粘膜ワクチン組成物の調製方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の粘膜アジュバントによれば、安全な不活化抗原を用いた粘膜ワクチンの調製が可能となる。例えば、現在流通するインフルエンザＨＡワクチンのように、より安全性の高いスプリット抗原を用いた粘膜ワクチンを提供することができ、予防薬として医薬品産業に大きく貢献できる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】スプリット抗原投与群のＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株特異的ＩｇＧ抗体価。
【図２】スプリット抗原投与群のＢ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株特異的ＩｇＧ抗体価。
【図３】不活化全粒子抗原投与群のＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株特異的ＩｇＧ抗体価。
【図４】不活化全粒子抗原投与群のＢ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株特異的ＩｇＧ抗体価。
【図５】Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株特異的ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａ抗体価の各群における幾何平均値。
【図６】Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株特異的ＩｇＧ抗体価。
【図７】Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株特異的ＩｇＧ抗体価。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明において、「ＴＧＤＫ」とは、Ｔｅｔｒａｇａｌｌｏｙｌ‐Ｄ‐Ｌｙｓｉｎｅ  Ｄｅｎｄｒｉｍｅｒの略語であり、Ｎ２，Ｎ６−ビス［Ｎ２，Ｎ６−ビス（３，４，５−トリヒドロキシベンゾイル）−リシル］−Ｎ−（２−アミノエチル）−リジンアミドを指す。ＴＧＤＫは、粘膜に存在する抗原取り込み細胞であるＭ細胞の標的分子として知られている。
ＴＧＤＫは、例えば、Ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄとＤ−Ｌｙｓｉｎｅを用いてｔｅｔｒａｇａｌｌｏｙｌ−Ｄ−ｔｒｉｌｙｓｉｎｙｌ  ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ固層法を用いて製造することができる（前記非特許文献４参照）。
【００１６】
後記実施例に示すように、インフルエンザワクチン株（スプリット抗原／不活化全粒子抗原）とＴＧＤＫを混合して調製したワクチン組成物をマウスに粘膜投与した場合に誘導される、当該抗原に特異的に結合するＩｇＧの力価は、ＴＧＤＫ非添加群に対して有意に高くなる。またスプリット抗原にＴＧＤＫを添加して免疫誘導した場合、不活化全粒子抗原のみを用いて免疫誘導した場合と同程度のＩｇＧ力価が得られる。そして、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａの幾何平均抗体価（ＧＭＴ）をみると、インフルエンザウイルスに対する感染防御能に優れるＩｇＧ２ａが顕著に上昇する。
【００１７】
すなわち、ＴＧＤＫには、免疫原（抗原）を粘膜投与する場合において、抗体誘導能を高める粘膜アジュバント活性があり、よって、ＴＧＤＫは粘膜アジュバントとなり、またＴＧＤＫと薬学上許容される担体を含む組成物は粘膜アジュバント組成物になり得る。また、ＴＧＤＫは粘膜アジュバント又は粘膜アジュバント組成物を製造するために使用できる。
【００１８】
本発明において、「粘膜アジュバント」とは、免疫原を粘膜投与する場合において、免疫原に対する免疫応答を増加させる物質を意味する。
ここで、「粘膜投与」とは、粘膜を経由する投与形態をいい、「粘膜」とは、脊椎動物において、消化器、呼吸器、泌尿生殖器、眼等、特に外通性の中腔器官の内壁をいう。従って、そのような粘膜投与としては、例えば、鼻腔投与（経鼻投与）、口腔投与、膣内投与、上気道投与、肺胞投与、点眼投与等が挙げられるがそれらに限定されない。
【００１９】
本発明の粘膜アジュバント又は粘膜アジュバント組成物は、免疫原と組み合わせて粘膜投与することができ、投与は免疫原の投与と同時であっても、免疫原の投与の前又は後であっても良い。
本発明の粘膜アジュバント又は粘膜アジュバント組成物の投与量は、投与対象、投与方法、投与形態、抗原物質の種類に応じて適宜決定することができる。
【００２０】
本発明の粘膜アジュバントは、免疫原と組み合わせて、粘膜ワクチン組成物とすることができる。本発明の粘膜ワクチン組成物は、免疫原とＴＧＤＫを混合することにより調製でき、さらに薬学的に許容される担体を適宜添加して適当な製剤にすることができる。本発明の粘膜ワクチン組成物において、ＴＧＤＫは、免疫原その他の成分と化学的結合状態にあることはなく、遊離の分子状態で存在する。
【００２１】
「免疫原」（抗原）としては、経粘膜感染病原体（例えば、ウイルス又は病原細菌等）又は当該病原体から精製された天然の産生物、又は遺伝子組換等の手法により人為的に作製されたタンパク質、ペプチド、多糖類、具体的には、完全ウイルス粒子であるビリオン、不完全ウイルス粒子、ビリオン構成粒子、ウイルス非構造タンパク質、病原菌由来のタンパク質もしくは糖タンパク質、感染防御抗原、中和反応のエピトープ等が挙げられ、感染能を有するものと感染能を喪失させた（不活化抗原）ものとが含まれる。不活化抗原としては、例えば、物理的（例えば、Ｘ線照射、熱、超音波）、化学的（ホルマリン、水銀、アルコール、塩素）等の操作により不活化されたものが挙げられるがそれらに限定されない。経粘膜感染病原体由来の免疫原は、安全性の観点から、上記ウイルス又は病原菌由来の不活化抗原であることが望ましい。
【００２２】
ウイルスとしては、例えば水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス、風疹ウイルス等が挙げられ、好ましくはインフルエンザウイルス又はヒト免疫不全ウイルスであり、より好ましくはインフルエンザウイルスである。インフルエンザウイルスは、全粒子ウイルスを使用することもできるが、本発明においては、ウイルスの粒子を解裂し、エンベロープ中の脂質を除去したスプリット抗原を用いることができる。
【００２３】
病原菌としては、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎球菌、結核菌、コレラ菌、ジフテリア菌等が挙げられる。
【００２４】
粘膜ワクチン組成物の剤型としては、例えば、液剤、懸濁剤、粉末剤等が挙げられる。
液剤としては、精製水、緩衝液等に溶解したもの等が挙げられる。懸濁剤としては、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、カゼイン等と共に精製水、緩衝液等に懸濁させたもの等が挙げられる。粉末剤としては、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等とともによく混合したもの等が挙げられる。
これらの製剤には、通常使用されている吸収促進剤、界面活性剤、保存剤、安定化剤、防湿剤、保湿剤、溶解剤等を必要に応じて添加することができる。
【００２５】
なお、本発明の粘膜ワクチン組成物には、当該ワクチンの免疫原性及び安全性を害さない限りにおいて、ＴＧＤＫ以外のアジュバントを含有することもできる。
【００２６】
本発明の粘膜ワクチン組成物に含まれる免疫原の量は、抗原特異的IgＧを産生するのに十分な量であれば特に限定されるものではなく、併用するＴＧＤＫとの比率も勘案して適宜設定することができる。例えば、抗原としてインフルエンザウイルスのスプリット抗原を用いた場合、１回の投与用量である１〜６０μｇ  ＨＡ（ＨＡ換算）の範囲内で含有すればよく、９〜１５μｇ  ＨＡ（ＨＡ換算）がより好ましい。前記濃度は、ＨＡタンパク質の濃度を一元放射免疫拡散試験法やＨＡ含量法等の、ＷＨＯや国の基準で定められた試験法で測定することにより得られる値である。
【００２７】
また、粘膜ワクチン組成物におけるＴＧＤＫの含有量は、抗体力価を考慮して適宜調整可能であるが、例えば１回の投与用量である０．０３〜３０μｇの範囲内で含有すればよく、０．０３〜０．３μｇがより好ましい。
【００２８】
本発明のワクチン組成物の投与経路は特に限定されず、経口投与でも非経口投与（例えば鼻腔投与、点眼投与）でもよく、例えば、鼻腔内又は口腔内に滴下、噴霧又はスプレーすることにより投与される。
【００２９】
本発明のアジュバンド組成物又はワクチン組成物の投与対象は、ヒト及びヒトを除く哺乳動物が挙げられるが、ヒトが好ましい。ヒトを除く哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、サル、オランウータン、チンパンジー等が挙げられる。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。
【００３１】
実施例１
（１）インフルエンザＨＡワクチン「生研」のＡ／Ｈ１Ｎ１亜型（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株）及びＢ／Ｙａｍａｇａｔａ系統（Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株）の各原液をスプリット抗原とし、１０μＬ当りに各株のヘムアグルチニンが１μｇとなるよう各スプリット抗原を混合し、併せてＴＧＤＫを終濃度で０．０３〜３０μｇ／１０μＬとなるよう添加した。また、対照としてアジュバント非添加の投与液及びＴＧＤＫは３分子のリジンで形成される骨格の一級アミンに没食子酸（Ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄ）を４分子結合したものであるため、ＴＧＤＫの対照としてＧａｌｌｉｃ  ａｃｉｄを３０μｇ／１０μＬとなるよう添加した投与液も併せて調製した（表１）。また、スプリット抗原と同様にＡ／Ｈ１Ｎ１亜型（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株）及びＢ／Ｙａｍａｇａｔａ系統（Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株）の不活化全粒子抗原を１０μＬ当りに各株のヘムアグルチニンが１μｇとなるよう混合し、併せてＴＧＤＫが０．０３若しくは０．３μｇ、Ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄが３０μｇとなるように各不活化全粒子抗原の投与液を調製した（表１）。
【００３２】
本実施例で使用した不活化全粒子抗原の調製は以下に記す通りである。１２日齢の発育鶏卵のしょう尿膜腔内に接種して、２日間培養後にしょう尿液を採取した。採取したしょう尿液をフィルターろ過で清澄化した後、硫酸バリウム塩に吸着させ、１２％クエン酸ナトリウム溶液で溶出してインフルエンザウイルスを回収した。回収したウイルスは、更に限外ろ過で６．７ｍＭリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．２）に置換し、バッファー置換後にしょ糖密度勾配遠心でインフルエンザウイルスを含む画分を回収することによって精製した。この精製インフルエンザウイルスに終濃度０．０５％となるように不活化剤であるベータプロピオラクトンを添加して、４℃、２４時間の反応でインフルエンザウイルスの感染性を不活化させた。この不活化反応後に限外ろ過（ＭＷＣＯ：１００，０００）でバッファーを１ｗ／ｗ％しょ糖含有６．７ｍＭリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．２）に置換し、これを不活化全粒子ワクチンとした。
【００３３】
（２）上記の通りに調製した投与液（表１）を、３週間隔で２回、ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、５週齢）へ片鼻５μＬ（合計１０μＬ）投与し（各群８匹）、２回目投与から２週間後に全採血した。遠心分離により血清を調製し、血清のＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株及びＢ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株に特異的に結合するＩｇＧ（Ｔｏｔａｌ  ＩｇＧ）力価を測定した。また、ＩｇＧサブクラスであるＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａの各力価は、スプリット抗原及び不活化全粒子抗原のアジュバント非添加群及びＴＧＤＫ０．３μｇ添加群の血清についてＢ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株に特異的な抗体価を測定した。
【００３４】
【表１】
2020050605.tif 000002
【００３５】
（３）スプリット抗原投与群（Ａ〜Ｆ）及びアジュバント非添加の不活化全粒子抗原投与群（Ｇ）のＩｇＧ力価は図１及び２に示す通りである。スプリット抗原にＴＧＤＫを投与当り０．０３〜３０μｇ添加することで血中の抗原特異的なＩｇＧ力価は、いずれの株においてもアジュバント非添加に対して高くなり、不活化全粒子抗原と同程度となった。特に、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株に対するＩｇＧ力価はＴＧＤＫを０．０３〜０．３μｇ添加した群、Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株に対するＩｇＧ力価はＴＧＤＫを０．０３〜３μｇ添加した群においては、アジュバント非添加に対して有意に高いＩｇＧ力価を示した（マン・ホイットニーのＵ検定、ｐ＜０．０５）。また、スプリット抗原にＧａｌｌｉｃ  ａｃｉｄを添加した場合、Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株に対するＩｇＧ力価はアジュバント非添加と同程度であり、Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株に対するＩｇＧ力価はアジュバント非添加に対して有意に低下した。ポリフェノールは抗酸化作用や免疫を賦活する効果を有しているといわれているが、本実施例においては単分子の没食子酸に抗体誘導を高めるアジュバント活性は無く、３分子のリジンで形成される骨格の一級アミンにＧａｌｌｉｃ  ａｃｉｄを４分子結合したＴＧＤＫの構造がアジュバント活性発揮に重要であると考えられた。
【００３６】
次に、不活化全粒子抗原投与群（Ｈ〜Ｊ）の結果を図３及び４に示すが、スプリット抗原と同様に、不活化全粒子抗原へＴＧＤＫを投与当たり０．０３若しくは０．３μｇ添加することによりいずれの株に対するＩｇＧ力価も向上し、Ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄの添加ではＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株に対するＩｇＧ力価はアジュバント非添加群と同程度、Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株に対するＩｇＧ力価は低下することがわかった。したがって、スプリット抗原と同様の結果が不活化全粒子抗原でも得られたが、不活化全粒子抗原ではＴＧＤＫの添加によるＩｇＧ力価向上の効果がスプリット抗原に比べて小さい。これは、不活化全粒子抗原自体の免疫原性が高いためであるが、免疫原性の異なる２種類の抗原（スプリット抗原及び不活化全粒子抗原）のいずれにおいてもＴＧＤＫは経鼻投与におけるアジュバント活性を発揮することが確認できた。
【００３７】
また、図５に各群のＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａの幾何平均抗体価（ＧＭＴ）を示すが、スプリット抗原及び不活化全粒子抗原のいずれにおいてもＩｇＧ２ａがＴＧＤＫの添加により顕著に上昇していることがわかる。Ｔｈ１型の応答によって誘導されるＩｇＧ２ａは、Ｔｈ２型の応答によって誘導されるＩｇＧ１よりもインフルエンザウイルスに対する感染防御能に優れているため、ＴＧＤＫの添加によって有効性が更に向上することが期待される。
【００３８】
参考例１
（１）実施例１と同様の抗原を用いて、表２の試験群で皮下投与におけるＴＧＤＫのアジュバント活性を評価した。本評価では皮下投与のアジュバントとして実績のあるＡｌｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、Ｉｍｊｅｃｔ  Ａｌｕｍ）を対照として加えた。
【００３９】
【表２】
2020050605.tif 000003
【００４０】
（２）Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９株に対するＩｇＧ力価を図６、Ｂ／Ｔｅｘａｓ／２／２０１３株に対するＩｇＧ力価を図７に示すが、いずれの株に対してもスプリット抗原の単独投与に対してＴＧＤＫを添加した群は同程度のＩｇＧ力価であり、アジュバント活性は確認されなかった。一方で、Ａｌｍ及び不活化全粒子投与群（ＷＶ）では、スプリット抗原の単独投与よりも高いＩｇＧ力価を示した。なお、皮下投与においてはＧａｌｌｉｃ  ａｃｉｄの添加群はいずれの株においてもスプリット抗原の単独投与群と同程度のＩｇＧ力価であり、Ｇａｌｌｉｃ  ａｃｉｄ誘導体のＴＧＤＫ及びＧａｌｌｉｃ  ａｃｉｄのいずれも皮下投与においてアジュバント活性を有していなかった。
【図１】
2020050605.tif 000004
【図２】
2020050605.tif 000005
【図３】
2020050605.tif 000006
【図４】
2020050605.tif 000007
【図５】
2020050605.tif 000008
【図６】
2020050605.tif 000009
【図７】
2020050605.tif 000010