(57)【要約】【課題】静脈栄養療法などによって体内に投与された鉄の利用を促進させることができ、更に種々の臓器や組織での鉄の過剰蓄積を防いで過剰な鉄によってもたらされる酸化ストレスやその他の種々の弊害を回避することのできる製剤の提供。【解決手段】コリン、コリン塩およびコリン誘導体から選ばれる少なくとも１種のコリン化合物を有効成分とするヘプシジン−２５産生抑制剤によって上記課題が解決される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
コリン、コリン塩およびコリン誘導体から選ばれる少なくとも１種のコリン化合物を有効成分とすることを特徴とするヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項２】
コリン化合物が、塩化コリンおよびＣＤＰ−コリンのいずれか一方または両方である請求項１に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項３】
鉄分と共に患者に投与されるものである請求項１または２に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項４】
鉄分を含有する請求項１〜３のいずれか１項に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項５】
アミノ酸を含有する請求項１〜４のいずれか１項に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項６】
糖を含有する請求項１〜５のいずれか１項に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項７】
シリンジ、バイアル、アンプル、ボトルまたはバッグに収容されている請求項１〜６のいずれか１項に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項８】
プレフィルドシリンジ製剤である請求項７に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【請求項９】
成人１日当たりの投与量が、コリンとして０．５〜８．０ｇである請求項１〜８のいずれか１項に記載のヘプシジン−２５産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鉄代謝を負に制御するヘプシジン−２５の産生を抑制することによって血中のヘプシジン−２５の濃度を低下させて、網内系マクロファージからの鉄放出を促進させるヘプシジン−２５産生抑制剤に関する。より詳細には、本発明は、ヘプシジン−２５の産生を抑制してヘプシジン−２５の血中濃度を低下させることによって、静脈栄養療法やその他によって投与される鉄の体内での利用を促進すると共に網内系での鉄の過剰蓄積を防いで鉄の利用を促進させることで、細胞内の自由鉄の濃度を低下させて、ヒドロキシラジカルの産生を抑制し、ＤＮＡの損傷やアポトーシスの誘導などを抑制するヘプシジン−２５産生抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉄は生体内で最も多く存在する微量金属であり、ヘモグロビン合成や全身の細胞の酸化還元反応、分裂や増殖に関与する必須の元素である。しかし、鉄が過剰になると、酸化ストレスの原因となることから、鉄代謝は数多くの関連分子により巧妙に制御されている（非特許文献１）。鉄代謝の特徴は、積極的な排泄経路を持たず、ほとんどの鉄が再利用される半閉鎖的回路を構築していることである。
【０００３】
ヘプシジン−２５は肝臓で合成分泌されるペプチドホルモンであって、ヘプシジン−２５・フェロポルチン系により鉄の負の制御を担っている（非特許文献２）。フェロポルチンは、上部小腸粘膜上皮細胞や網内系マクロファージ、肝細胞などに存在し、血中への鉄供給を担う生体で唯一の鉄輸送膜蛋白である。ヘプシジン−２５は、ヘプシジン−２５の受容体であるフェロポルチンと結合すると細胞内部へ移行し、ライソゾームでフェロポルチンとともに分解されることでフェロポルチンを量的に制御している（非特許文献３）。減少したフェロポルチンが新たに合成されて回復するのには２〜３日を要する。その間は、フェロポルチンの膜分布密度が低下し、細胞からの鉄放出量が減少する（非特許文献４）。
【０００４】
ヘプシジン−２５は、炎症（ＩＬ−６）、小胞体ストレス（ＥＲストレス）、鉄負荷などによって誘導され、骨髄造血機能の亢進により合成が抑制される。血清ヘプシジン−２５が持続的に高値であると、網内系からの鉄の放出が抑制されて鉄の再利用が停滞し、赤血球合成に鉄が利用できない機能性鉄欠乏状態となり、貧血を発現することが知られている。また、利用されない鉄はフェリチンとして過剰に蓄積し、細胞内の自由鉄の濃度が上昇する。細胞内の自由鉄は三価鉄と二価鉄の鉄イオン形態で存在する。二価鉄イオンは、フェントン反応を介してヒドロキシラジカルを産生することで、ＤＮＡの損傷やアポトーシスの誘導を促進させる（非特許文献５）。
【０００５】
血清フェリチンは、組織中のフェリチンの一部が血清中に遊離したものであって、組織内の貯蔵鉄量を反映し、血清フェリチンが高値であると貯蔵鉄が増加した状態であると考えられている。微量元素製剤を混注した高カロリー輸液剤を投与すると血清ヘプシジン−２５の濃度が高値を示す患者が少なからず存在することが、近年報告されている（非特許文献６）。
【０００６】
特許文献１には、ヘプシジン抗体による貧血患者の治療方法が記載されている。しかし、ヘプシジン抗体による抗体療法は、発熱、悪寒、頭痛などの副作用を伴うことが多く、またこれらの全身反応がヘプシジン産生を促進する炎症状態を招く危険性がある。
【０００７】
また、特許文献２には、ヘプシジン吸着剤および装置が記載されているが、体外循環を必要とすることから患者には大きな負担になる。
【０００８】
患者に対して負担にならず、しかも副作用を伴わずに、血清中のヘプシジン−２５の濃度を低下させて、鉄の利用を促進させる解決策はこれまで知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ ２００８／０９７４６１
【特許文献２】ＷＯ ２０１１／００９５５５
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】高後裕ほか、「Iron Overload と鉄キレート療法」、ｐ．２５−３３（２００７）
【非特許文献２】生田克哉ほか、「血液フロンティア」、２１（６）、ｐ．２３−３０（２０１１）
【非特許文献３】友杉直久、「血液フロンティア」、２１（６）、ｐ．３１−３９（２０１１）
【非特許文献４】友杉直久、「金沢大学十全医学会雑誌」、１１８（２）、ｐ．６１−６２（２００９）
【非特許文献５】生田克哉、「血液フロンティア」、１９（２）、ｐ．３１−３９（２００９）
【非特許文献６】加藤治樹、「日本臨床栄養学会雑誌」，３６（１）、ｐ．４０−４５（２０１４）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、静脈栄養療法などによって体内に投与された鉄の利用を促進させることができ、しかも種々の臓器や組織での鉄の過剰蓄積を防いで過剰な鉄によってもたらされる酸化ストレスやその他の種々の弊害を回避することのできる製剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記目的を達成すべく鋭意検討を重ねてきた。その結果、コリン（Ｃｈｏｌｉｎｅ）が、ヘプシジン−２５の産生を抑制して、血中でのヘプシジン−２５の濃度を低下させる作用を有すること、それによって静脈栄養療法などによって投与される鉄の体内での利用を促進し、更に網内系での鉄の過剰蓄積を防いで鉄の利用を促進させることで、細胞内の自由鉄の濃度を低下させてヒドロキシラジカルの産生を抑制して、ＤＮＡの損傷、アポトーシスの誘導などのような、鉄過剰に起因する体内での種々の弊害の回避や抑制に有効であることを見出した。
【００１３】
コリンは、循環器系と脳の機能および細胞膜の構成と補修に不可欠の栄養素であって、コリンおよびその代謝物質は、細胞膜の構造の保全と細胞シグナリングの役割、アセチルコリンへ合成されることによる神経伝達物質としての役割、およびＳ−アデノシルメチオニンを合成する代謝経路に関与する代謝物質であるトリメチルグリシン（ベタイン）を通じたメチル基の主な原料としての役割という生理学上の３つの重要な役割を有することが従来から知られている。
【００１４】
しかし、コリンがヘプシジン−２５の産生を抑制する作用を有することは従来知られていない。かかる点から、コリンがヘプシジン−２５の産生を抑制する作用効果を有することは、従来技術からは想到し得ない新しい知見であり、本発明は当該新しい知見に基づくものである。
【００１５】
したがって、本発明は、
（１）コリン、コリン塩およびコリン誘導体から選ばれる少なくとも１種のコリン化合物を有効成分とすることを特徴とするヘプシジン−２５産生抑制剤である。
【００１６】
そして、本発明は、
（２）コリン化合物が、塩化コリンおよびＣＤＰ−コリンのいずれか一方または両方である前記（１）のヘプシジン−２５産生抑制剤；
（３）鉄分と共に患者に投与されるものである前記（１）または（２）のヘプシジン−２５産生抑制剤；および、
（４）鉄分を含有する前記（１）〜（３）のいずれかのヘプシジン−２５産生抑制剤；
である。
【００１７】
さらに、本発明は、
（５）アミノ酸を含有する前記（１）〜（４）のいずれかのヘプシジン−２５産生抑制剤；
（６）糖を含有する前記（１）〜（５）のいずれかのヘプシジン−２５産生抑制剤；
（７）シリンジ、バイアル、ボトル、アンプルまたはバッグに収容されている前記（１）〜（６）のヘプシジン−２５産生抑制剤；
（８）プレフィルドシリンジ製剤である前記（７）のヘプシジン−２５産生抑制剤；および、
（９）成人１日当たりの投与量が、コリンとして０．５〜８．０ｇである前記した（１）〜（８）のいずれかのヘプシジン−２５産生抑制剤；
である。
【発明の効果】
【００１８】
コリン、コリン塩およびコリン誘導体から選ばれる少なくとも１種のコリン（Ｃｈｏｌｉｎｅ）化合物を有効成分とする本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、ヘプシジン−２５の産生を抑制して、血中のヘプシジン−２５の濃度を低下させることで、静脈栄養療法やその他によって投与される鉄の体内での利用を促進する作用効果を有し、しかも網内系に鉄を過剰蓄積させることなく鉄の利用を促進させることで、細胞内の自由鉄の濃度を低下させ、ヒドロキシラジカルの産生を抑制して、ＤＮＡの損傷、アポトーシスの誘導などのような、鉄の過剰蓄積に起因する種々の弊害を抑制することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下に、本発明について詳細に説明する。
【００２０】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、コリン、コリン塩およびコリン誘導体から選ばれる少なくとも１種のコリン化合物を有効成分とする。
【００２１】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤の有効成分をなすコリン化合物としては、コリン、塩化コリン、重炭酸コリン、コリンリン酸塩などのコリンの無機塩、重酒石酸コリン、クエン酸二水素コリン、グルコン酸コリンなどのコリンの有機酸塩、ＣＤＰ−コリン［体系名：Ｏ−［（５’−シチジリルオキシ）（オキシラト）ホスフィニル］コリン］、ホスファチジルコリンなどのコリン誘導体などを挙げることができ、これらの１種または２種以上を用いることができる。そのうちでも、コリン化合物としては、塩化コリンおよびＣＤＰ−コリンの一方または両方が、入手容易性などの点から好ましく用いられる。
【００２２】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、液状物または固体状物のいずれであってもよい。液状物である場合は、コリン化合物を水などの液体に溶解して溶液の形態にするのがよく、コリン化合物は水に溶けやすいので水溶液の形態であることが好ましい。固体状物である場合は、粉末、錠剤などの形態であることができ、粉末の形態が好ましい。
【００２３】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、シリンジ、バイアル、アンプル、ボトル、バッグなどの容器に収容しておくことができる。ヘプシジン−２５産生抑制剤を収容する前記した容器は、容器の種類、形状、構造などに応じて、ガラス、合成樹脂、熱可塑性エラストマーなどから形成されていることができる。容器を形成し得る合成樹脂としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（４−メチルペンテン）などのポリオレフィン、環状ポリオレフィン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレートなどのポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリカーボネートなどを挙げることができる。また、容器を形成し得る熱可塑性エラストマーとしては、例えば、ポリスチレン系熱可塑性エラストマー、ポリオレフィン系熱可塑性エラストマー、ポリジオレフィン系熱可塑性エラストマー、塩化ビニル系熱可塑性エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、ポリアミド系熱可塑性エラストマー、シリコーン系熱可塑性エラストマーなどを挙げることができる。
【００２４】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤をシリンジに収容する場合は、コリン化合物の溶液（好ましくは水溶液）をシリンジに予め収容したプレフィルドシリンジ溶液製剤とするか、または粉末状のコリン化合物をシリンジに予め収容したプレフィルドシリンジ粉末製剤とすることができる。
【００２５】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤が、コリン化合物の溶液（特にコリン化合物の水溶液）をシリンジに予め収容したプレフィルドシリンジ溶液製剤である場合は、シリンジ中のコリン化合物溶液の濃度は、コリンとして、０．１〜０．５ｇ／ｍＬであることが好ましく、０．２〜０．４ｇ／ｍＬであることがより好ましい。コリン化合物の濃度が低すぎると、必要な量のコリン化合物を患者に投与することが困難になり、一方コリン化合物の濃度が高すぎると、コリン化合物溶液の調製の際に溶解に長い時間を要したり、保存・移送の際にコリン化合物が析出する恐れがある。
【００２６】
また、プレフィルドシリンジ溶液製剤におけるシリンジの内容積は、取り扱い性、保管性などの点から、０．５〜２０．０ｍＬであることが好ましく、２．０〜５．０ｍＬであることがより好ましい。
【００２７】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤が、コリン化合物粉末をシリンジに予め収容したプレフィルドシリンジ粉末製剤である場合は、患者への投与時に、必要な量の溶媒（水など）を針先からシリンジ内に吸入してシリンジ内のコリン化合物粉末を溶解してコリン化合物溶液にして用いる。
【００２８】
プレフィルドシリンジ製剤（溶液製剤および粉末製剤）の形態をなす本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、患者に輸液剤を投与する際に、シリンジ中のコリン化合物溶液を輸液中に注入混合することで、輸液と一緒に患者に投与することができる。
【００２９】
プレフィルドシリンジ製剤の形態をなす本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、コリン化合物と共に、必要に応じて鉄、銅、マンガン、亜鉛、ヨウ素、セレンなどの微量元素の１種または２種以上を含有することができ、また必要に応じてビタミン類、電解質類などの１種または２種以上を含有することができる。
【００３０】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤が、コリン化合物溶液をバイアルまたはアンプルに収容した製剤である場合は、注射器などによってバイアルまたはアンプル中のコリン化合物溶液を吸い出し、それを輸液中に注入混合することで、輸液と一緒に患者に投与することができる。この場合に、バイアルまたはアンプル中のコリン化合物溶液の濃度は、コリンとして、０．１〜０．５ｇ／ｍＬであることが好ましく、０．２〜０．４ｇ／ｍＬであることがより好ましい。コリン化合物の濃度が低すぎると、必要な量のコリン化合物を患者に投与することが困難になり、一方コリン化合物の濃度が高すぎると、コリン化合物溶液の調製の際に溶解に長い時間を要したり、保存・移送の際にコリン化合物が析出する恐れがある。また、バイアルまたはアンプルの内容積は、取り扱い性、保管性などの点から、０．５〜２０．０ｍＬであることが好ましく、２．０〜５．０ｍＬであることがより好ましい。
【００３１】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤が、粉末、錠剤などの固体状のコリン化合物をバイアルまたはアンプルに収容したものである場合は、バイアルまたはアンプルに必要量の溶媒（水など）を加えてコリン化合物溶液にした後に、バイアルまたはアンプル中のコリン化合物溶液を注射器などで吸い出し、それを輸液中に注入混合することで、輸液と一緒に患者に投与することができる。バイアルまたはアンプル中の固体状のコリン化合物の量は、バイアルまたはアンプルの内容積や必要投与量などに応じて決めればよい。
【００３２】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤が、コリン化合物溶液または固体状のコリン化合物をバイアルまたはアンプル中に収容したものである場合は、コリン化合物と共に、必要に応じて、鉄、銅、マンガン、亜鉛、ヨウ素、セレンなどの微量元素の１種または２種以上を含有することができ、また必要に応じてビタミン類や、電解質類などの１種または２種以上を含有することができる。
【００３３】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤が、コリン化合物溶液をボトルやバッグに収容したものである場合は、水溶液などの溶液形態にして収容することが好ましい。ボトルまたはバッグに収容したコリン化合物溶液には、必要に応じて、アミノ酸、糖類、鉄、銅、マンガン、亜鉛、ヨウ素、セレンなどの微量元素、ビタミン類、電解質類などの１種または２種以上を含有させることができる。
【００３４】
本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤が、コリン化合物の溶液をボトルまたはバッグに収容した形態である場合に、ボトルまたはバッグ内のコリン化合物溶液を輸液剤の処方にコリン化合物を配合したものとすると、このコリン化合物溶液は、ヘプシジン−２５産生抑制剤としての機能と併せて輸液剤としての機能を有するようになる。
【００３５】
コリン化合物を配合する輸液剤の処方としては、糖、電解質、アミノ酸、ビタミン、微量元素などが挙げられ、これらの成分は、別々の容器に分けて収容されていてもよいし、１室型の１つの容器に一緒に収容されていてもよいし、用時連通可能な隔壁によって複数
の室に区分された複数室型の容器のいずれかの室に分けて収容されていてもよく、コリン化合物は、前記した成分が収容されているいずれか１つの容器または複数の容器、或いはいずれか１つの室または複数の室に配合することができる。
【００３６】
コリン化合物を輸液剤中に含有させる場合は、輸液剤中のコリン化合物の濃度は、コリンとして、０．３〜６ｇ／Ｌであることが好ましく、０．５〜３．０ｇ／Ｌであることがより好ましい。
【００３７】
本発明で採用し得る、コリン化合物を配合する輸液剤の例としては、例えば、
《１》糖と電解質が、１つの容器（１つの室）に一緒に収容されているか、異なる容器に別々に収容されているか、または用時連通可能な隔壁によって２つの室に区分された２室型容器のそれぞれの室に収容されている高カロリー輸液用基本液；
《２》糖とアミノ酸と電解質が、１つの容器（１つの室）に一緒に収容されているか、異なる２つまたは３つの容器に収容されているか、或いは用時連通可能な隔壁によって２つまたは３つの室に区分された２室型または３室型の容器のいずれかの室に収容されている「糖・アミノ酸・電解液」型の高カロリー輸液剤；
《３》糖とアミノ酸と電解質とビタミン類が、１つの容器（１つの室）に一緒に収容されているか、異なる２つ、３つまたは４つの容器に収容されているか、或いは用時連通可能な隔壁によって２つ、３つまたは４つの室に区分された複数室型の容器のいずれかの室に収容されている「糖・アミノ酸・電解液・ビタミン液」型の高カロリー輸液剤；
《４》糖とアミノ酸と電解質とビタミン類と微量元素が、１つの容器（１つの室）に一緒に収容されているか、異なる２つ、３つ、４つまたは５つの容器に収容されているか、或いは用時連通可能な隔壁によって２つ、３つ、４つまたは５つの室に区分された複数室型の容器のいずれかの室に収容されている「糖・アミノ酸・電解液・ビタミン・微量元素液」型の高カロリー輸液剤；
などを挙げることができる。
【００３８】
上記《３》の高カロリー輸液剤において、水溶性ビタミンは、糖および／またはアミノ酸が収容されている容器または室に含有させ、脂溶性ビタミンは専用の容器または専用の室に収容することが望ましい。
【００３９】
また、上記《４》の高カロリー輸液において、微量元素は専用の容器または専用の室に収容することが望ましいが、場合によってはヨウ素を糖液を収容した容器または室に配合してもよい。
【００４０】
前記《１》〜《４》の輸液剤において、コリン化合物は、いずれか１つまたは２つ以上の容器或いはいずれか１つまたは２つ以上の室に収容された液に配合することができる。
【００４１】
輸液剤の処方で用いる糖の種類としては、グルコース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マルトース、グリセロールなどを挙げることができ、これらの１種または２種以上を含有させることができる。溶液中の糖の濃度は、十分な熱量を投与するために、７０〜２５０ｇ／Ｌであることが好ましく、１２０〜２５０ｇ／Ｌであることがより好ましい。
【００４２】
輸液剤の処方で用いるアミノ酸の種類としては、例えば、イソロイシン、ロイシン、バリン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、グリシン、アラニン、アルギニン、ヒスチジン。プロリン、セリン、チロジン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸を挙げることができ、特に前記したアミノ酸の全てを含有させると、輸液用のアミノ酸溶液製剤として十分な機能を有するようになる。
【００４３】
輸液剤中のアミノ酸の濃度は、十分な窒素量（アミノ酸）を投与するために、２０〜７０ｇ／Ｌであることが好ましく、３０〜６０ｇ／Ｌであることがより好ましい。
【００４４】
また、輸液剤中にコリン化合物を配合する代わりに、本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤（コリン化合物）を輸液剤を収容した容器とは別の容器に収容し、輸液剤とセットにして流通、販売、使用することができる。
【００４５】
その具体例としては、上記した《１》〜《４》のいずれかの輸液剤とヘプシジン−２５産生抑制剤（コリン化合物）を収容したプレフィルドシリンジ製剤とからなるセットなどを挙げることができる。
【００４６】
また、本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、必要に応じて、緩衝剤、等張化剤、ｐＨ調整剤などの１種または２種以上を含有することができる。
【実施例】
【００４７】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４８】
《実施例１》［プレフィルドシリンジ溶液製剤の形態のヘプシジン−２５産生抑制剤］
（１）塩化コリン３．７７０ｇを注射用水８ｍＬに溶解して塩化コリン水溶液を調製した後、注射用水を加えて全量１０ｍＬの塩化コリン水溶液とした。
（２）上記（１）で得られた塩化コリン水溶液の４ｍＬ（塩化コリン含量１．５０９ｇ／４ｍＬ）を、内容積１０ｍＬのポリプロピレン製シリンジ本体に充填し、シリンジ本体の後部開口端をゴム製ガスケットで密封した後、常法により高圧蒸気滅菌処理して、プレフィルドシリンジ溶液製剤の形態をなす、ヘプシジン−２５産生抑制剤を製造した。
【００４９】
《製造例１》［静脈栄養用輸液剤の調製］
下記の表１に示す成分組成を有する静脈栄養用輸液剤（全溶液量１５０５ｍＬ）を調製した。
【００５０】
【表１】
2020050674.tif 000002
【００５１】
《試験例１》
（１）ラット１０匹（平均体重３５８ｇ／匹）を準備して５匹ずつ、２つの区に分けた。
（２）（ｉ）実施例１で製造したプレフィルドシリンジ溶液製剤の形態をなすヘプシジン−２５産生抑制剤の全量（４ｍＬ）を、製造例１で調製した静脈栄養用輸液剤（全量１５０５ｍＬ）に添加して均一に混合して、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を含有する静脈栄養用輸液剤（全量１５０９ｍＬ）を調製した。
（ｉｉ）第１区の５匹のラットに、無蛋白食を２週間摂取させた後、それぞれのラットの右外頸静脈にカテーテルを留置して、無拘束下で、上記（ｉ）で調製した、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を含有する静脈栄養用輸液剤を３日間持続投与した。輸液投与量は１匹当たり４０６ｍＬ／ｋｇ／ｄａｙとした。
（ｉｉｉ）３日間の輸液投与終了後、それぞれのラットからイソフルラン麻酔下で腹大動脈より採血し、血清を分離して、血清中のヘプシジン−２５の量を液体クロマトグラフ−タンデム型質量分析計を用いて測定（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法）し、血清中のフェリチンの量をＥＬＩＳＡ法（Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏ−Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ）によって測定して、５匹のラットの平均値を採った。その結果を、下記の表２に示す。
（３）（ｉ）製造例１で製造した静脈栄養用輸液剤（全溶液量１５０５ｍＬ）に、塩化コリンを含有しない注射用水４ｍＬを添加・混合して、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を含有しない静脈栄養用輸液剤（全量１５０９ｍＬ）を調製した。
（ｉｉ）第２区の５匹のラットに、無蛋白食を２週間摂取させた後、それぞれのラットの右外頸静脈にカテーテルを留置して、無拘束下で、上記（ｉ）で調製した、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を含有しない静脈栄養用輸液剤を３日間持続投与した。輸液投与量は１匹当たり４０６ｍＬ／ｋｇ／ｄａｙとした。
（ｉｉｉ）３日間の輸液投与終了後、それぞれのラットからイソフルラン麻酔下で腹大動脈より採血し、血清を分離して、血清中のヘプシジン−２５の量および血清中のフェリチンの量を、上記（２）の（ｉｉ）と同様にして測定して、５匹のラットの平均値を採った。その結果を、下記の表２に示す。
【００５２】
【表２】
2020050674.tif 000003
【００５３】
上記の表２に見るように、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を添加した静脈栄養用輸液剤を投与した第１区のラットの血清中のヘプシジン−２５の量は、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を添加しない静脈栄養用輸液剤を投与した第２区のラットの血清中のヘプシジン−２５の量に比べて有意に低値であった。
【００５４】
さらに、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を添加した静脈栄養用輸液剤を投与した第１区のラットの血清中のフェリチンの量は、ヘプシジン−２５産生抑制剤（塩化コリン）を添加しない静脈栄養用輸液剤を投与した第２区のラットの血清中のフェリチンの量に比べて有意に低値であった。
【００５５】
このように、コリン化合物を有効成分とするヘプシジン−２５産生抑制剤を添加した輸液を投与することによって、輸液剤中に配合された鉄の利用が促進され、長期に投与すれば貧血の改善等の効果が得られた。
【００５６】
《実施例２》［静脈栄養用輸液剤の形態のヘプシジン−２５産生抑制剤］
製造例１で調製した静脈栄養用輸液剤（液量１５０５ｍＬ）に、塩化コリンを１．５０９ｇの量で含有する塩化コリン水溶液の４ｍＬを混合し（全量１５０９ｍＬ）、その全量をバッグに収容して、ヘプシジン−２５産生抑制剤と静脈栄養用輸液剤を兼ねる製剤を調製した。
【００５７】
《実施例３》
（１）用時に剥離可能な隔壁によって３つの室に区分した３室型のプラスチックバッグを準備し、その第１室に下記の表３に示す配合組成を有する糖／電解質／ビタミン液を充填し、第２室に下記の表４に示す配合組成を有するアミノ酸／ビタミン液を充填し、第３室に下記の表５に示す配合組成を有するビタミン液を充填して、３室型バッグ入り静脈栄養用輸液剤を製造した。
（２）上記（１）とは別に、下記の表６に示す配合組成を有する微量元素溶液を調製し、それを内容積が２．５ｍＬのシリンジに充填して、微量元素のプレフィルドシリンジ溶液製剤を製造した。
（３）上記（１）および（２）とは別に、塩化コリン１．５０９ｇを含有する塩化コリン水溶液４ｍＬを調製して、内容積が５．０ｍＬのシリンジに充填して、プレフィルドシリンジ型のヘプシジン−２５産生抑制剤を製造した。
（４）上記（１）で製造した３室型バッグ入り静脈栄養用輸液剤、上記（２）で製造した微量元素のプレフィルドシリンジ溶液製剤および上記（３）で製造したプレフィルドシリンジ型のヘプシジン−２５産生抑制剤を組み合わせて、ヘプシジン−２５産生抑制剤と静脈栄養用輸液剤を兼ねるセット製剤とした。
【００５８】
【表３】
2020050674.tif 000004
【００５９】
【表４】
2020050674.tif 000005
【００６０】
【表５】
2020050674.tif 000006
【００６１】
【表６】
2020050674.tif 000007
【産業上の利用可能性】
【００６２】
コリン化合物を有効成分とする本発明のヘプシジン−２５産生抑制剤は、ヘプシジン−２５の産生を抑制して、血中のヘプシジン−２５の濃度を低下させることで、静脈栄養療法やその他によって投与される鉄の体内での利用を促進し、更に網内系に鉄を過剰蓄積させることなく鉄の利用を促進させることで、細胞内の自由鉄の濃度を低下させ、ヒドロキシラジカルの産生を抑制して、ＤＮＡの損傷、アポトーシスの誘導などのような鉄の過剰蓄積に起因する種々の弊害を抑制するための剤として有効である。
【手続補正書】
【提出日】令和2年1月24日(2020.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
鉄分と共に、コリン、コリン塩およびコリン誘導体から選ばれる少なくとも１種のコリン化合物を含有することを特徴とする輸液剤。
【請求項２】
コリン化合物が、塩化コリンおよびＣＤＰ−コリンのいずれか一方または両方である請求項１に記載の輸液剤。
【請求項３】
コリン化合物が、ヘプシジン−２５産生抑制剤である請求項１または２に記載の輸液剤。
【請求項４】
アミノ酸を含有する請求項１〜３のいずれか１項に記載の輸液剤。
【請求項５】
糖を含有する請求項１〜４のいずれか１項に記載の輸液剤。
【請求項６】
輸液剤中のコリン化合物の濃度が、コリンとして、０．３〜６ｇ／Ｌである請求項１〜５のいずれか１項に記載の輸液剤。
【請求項７】
コリン化合物によりヘプシジン−２５の産生を抑制してヘプシジン−２５の血中濃度を低下させて、投与される鉄の体内での利用を促進すると共に網内系での鉄の過剰蓄積を防止するための輸液剤である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の輸液剤。