(57)【要約】      （修正有）【課題】呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の薬学的組成物の調製のための、ｍＲＮＡ配列、または複数のｍＲＮＡ配列を含んでいる組成物の使用、及びｍＲＮＡワクチンを用いたＲＳＶ感染の処置または予防法の提供。【解決手段】ＲＳＶの融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リンタンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１、または非構造タンパク質ＮＳ２に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでおり、上記コード領域のＧ／Ｃ含有量は、野生型ｍＲＮＡのコード領域のＧＣ含有量と比べて向上されており、好ましくは野生型ｍＲＮＡの、コードされているアミノ酸配列と比べて、変更されていない、ｍＲＮＡ配列。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リンタンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１、または非構造タンパク質ＮＳ２に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでおり、
上記コード領域のＧ／Ｃ含有量は、野生型ｍＲＮＡのコード領域のＧＣ含有量と比べて向上されており、好ましくは、上記ＧＣ富化されたｍＲＮＡの、コードされているアミノ酸配列は、野生型ｍＲＮＡの、コードされているアミノ酸配列と比べて、変更されていない、ｍＲＮＡ配列。
【請求項２】
上記コード領域は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、核タンパク質Ｎまたは糖タンパク質Ｇの全長タンパク質をコードしている、請求項１に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項３】
上記抗原ペプチドまたは抗原タンパク質は、ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇ由来である、請求項１または２に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項４】
ａ）５’キャップ構造
ｂ）ポリ（Ａ）配列、
ｃ）および任意に、ポリ（Ｃ）配列
をさらに含んでいる、請求項１〜３のいずれかに記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項５】
上記ポリ（Ａ）配列は、約２５〜約４００のアデノシンヌクレオチドの配列、好ましくは、約５０〜約４００のアデノシンヌクレオチドの配列、より好ましくは約５０〜３００のアデノシンヌクレオチドの配列、より一層好ましくは約５０〜約２５０のアデノシンヌクレオチドの配列、最も好ましくは約６０〜約２５０のアデノシンヌクレオチドの配列を含んでいる、請求項４に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項６】
少なくとも１つのヒストン  ステム−ループをさらに含んでいる、請求項１〜５のいずれかに記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項７】
上記少なくとも１つのヒストン  ステム−ループは、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：式（Ｉ）（ステム境界エレメントなしのステム−ループ配列）：
【化１】
2020014474.tif 000015
式（ＩＩ）（ステム境界エレメントありのステム−ループ配列）：
【化２】
2020014474.tif 000016
から選択され、
ステム１またはステム２の境界エレメントＮ１−６は、１〜６、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜５、より一層好ましくは３〜５、最も好ましくは４〜５または５のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチド類似物から選択され；
ステム１［Ｎ０−２ＧＮ３−５］は、ステム２のエレメントと逆相補的または部分的に逆相補的であり、かつ５〜７のヌクレオチドの間の連続する配列であり；
Ｎ０−２は、０〜２、好ましくは０〜１、より好ましくは１のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチド類似物から選択され；
Ｎ３−５は、３〜５、好ましくは４〜５、より好ましくは４のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチド類似物から選択され、
Ｇは、グアノシンまたはその類似物であり、ステム２におけるその相補的なシチジンヌクレオチドがグアノシンによって置き換えられている条件のもとに、シチジンまたはその類似物に任意に置き換えられ得；
ループ配列［Ｎ０−４（Ｕ／Ｔ）Ｎ０−４）］は、ステム１およびステム２のエレメントの間に配置されており、３〜５のヌクレオチド、より好ましくは４のヌクレオチドの連続する配列であり；
Ｎ０−４のそれぞれは、他のＮから独立して、０〜４、好ましくは１〜３、より好ましくは１〜２のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチド類似物から選択され；
Ｕ／Ｔは、ウリジン、または任意にチミジンを表しており；
ステム２［Ｎ３−５ＣＮ０−２］は、ステム１のエレメントと逆相補的または部分的に逆相補的であり、５〜７のヌクレオチドの間の連続する配列であり；
Ｎ３−５は、３〜５、好ましくは４〜５、より好ましくは４のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチド類似物から選択され；
Ｎ０−２は、０〜２、好ましくは０〜１、より好ましくは１のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチド類似物から選択され；
Ｃは、シチジンまたはその類似物であり、ステム１におけるその相補的なグアノシンヌクレオチドがシチジンに置き換えられている条件のもとに、グアノシンまたはその類似物に任意に置き換えられ得；
ステム１およびステム２は、互いに塩基対形成可能であり、塩基対形成がステム１およびステム２の間に生じ得る逆相補性配列を形成しているか、または不完全な塩基対形成がステム１およびステム２の間に生じ得る部分的な逆相補性配列を形成している、請求項６に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項８】
上記少なくとも１つのヒストン  ステム−ループは、以下の式（Ｉａ）または（ＩＩａ）：
【化３】
2020014474.tif 000017
式（Ｉａ）（ステム境界エレメントなしのステム−ループ配列）
【化４】
2020014474.tif 000018
式（ＩＩａ）（ステム境界エレメントありのステム−ループ配列）
のうちの少なくとも１つのから選択される、請求項７に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項９】
３’−ＵＴＲエレメントをさらに含んでいる、請求項１〜８のいずれかに記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１０】
上記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントは、安定なｍＲＮＡをもたらす遺伝子の３’−ＵＴＲ、またはその相同物、断片もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる、請求項９に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１１】
上記３’−ＵＴＲエレメントは、アルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、ヒストンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、およびコラーゲンアルファ遺伝子からなる群から選択される遺伝子の３’ＵＴＲ、またはその相同物、断片もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいる、化合物または当該核酸配列からなる、請求項１０に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１２】
上記３’−ＵＴＲエレメントは、好ましくは配列番号２９にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいる、α−グロビン遺伝子の３’−ＵＴＲ、またはその相同物、断片もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる、請求項１１に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１３】
好ましくは５’から３’方向に向かって、
ａ．）５’−キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）好ましくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆに由来する、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているコード領域
ｃ．）好ましくは配列番号２９にしたがう核酸配列に対応するＲＮＡ配列を含んでいる、アルファグロビン遺伝子に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる３’−ＵＴＲエレメント、その相同物、断片またはバリアント
ｄ．）好ましくは６４のアデノシンを含んでいる、ポリ（Ａ）配列；
ｅ．）好ましくは３０のシトシンを含んでいる、ポリ（Ｃ）配列；ならびに
ｆ．）好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列に対応する、ｍＲＮＡ配列を含んでいる、ヒストン−ステム−ループ
を含んでいる、請求項９〜１２のいずれかに記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１４】
上記ｍＲＮＡ配列は、配列番号３１にしたがうＲＮＡ配列を含んでいる、請求項１３に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１５】
上記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントは、脊椎動物のアルブミン遺伝子の３’−ＵＴＲもしくはそのバリアント、好ましくは哺乳類のアルブミン遺伝子の３’−ＵＴＲもしくはそのバリアント、より好ましくはヒトのアルブミン遺伝子の３’−ＵＴＲもしくはそのバリアント、より一層好ましくはGenBank Accession番号NM_000477.5にしたがうヒトのアルブミン遺伝子の３’−ＵＴＲもしくはそのバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる、請求項９に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１６】
上記３’−ＵＴＲエレメントは、配列番号２５にしたがう核酸配列、好ましくは対応するＲＮＡ配列、その相同物、断片またはバリアントに由来する、請求項１５に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１７】
ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲ、好ましくは対応するＲＮＡ配列、またはその相同物、断片もしくはバリアント（好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている）に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる５’−ＵＴＲエレメントを、さらに含んでいる、請求項１〜１６のいずれかに記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１８】
上記５’−ＵＴＲエレメントは、リボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列、好ましくは対応するＲＮＡ配列、またはそれらの相同物、断片もしくはバリアント（好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている）を含んでいるか、または当該核酸配列からなる、請求項１７に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項１９】
上記５’−ＵＴＲエレメントは、リボソーム巨大タンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲ、またはそれらの相同物、断片もしくはバリアント（好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている）に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる、より好ましくは配列番号２３にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいるか、または当該ＲＮＡ配列からなる、請求項１８に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項２０】
好ましくは５’から３’方向に、
ａ．）５’−キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列、その相同物、断片もしくはバリアントを含んでいるか、または当該核酸配列からなる、好ましくは配列番号２３にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいるか、または当該ＲＮＡ配列からなる、５’−ＵＴＲエレメント；
ｃ．）呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質（好ましくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆに由来する）をコードしているコード領域；
ｄ．）安定なｍＲＮＡをもたらす遺伝子に由来する核酸配列、その相同物、断片もしくはバリアントを含んでいるか、または当該核酸配列からなる（好ましくは配列番号１８にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいるか、または当該ＲＮＡ配列からなる）、３’ＵＴＲエレメント；
ｅ．）好ましくは６４のアデノシンを含んでいる、ポリ（Ａ）配列；
ｆ．）好ましくは３０のシトシンを含んでいる、ポリ（Ｃ）配列；ならびに
ｇ．）好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいる、ヒストン−ステム−ループ
を含んでいる、請求項１９に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項２１】
配列番号３２または３３にしたがうＲＮＡ配列を含んでいる、請求項２０に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項２２】
任意に、ｍＲＮＡの、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物、および／または重合体担体に対する約６：１（ｗ／ｗ）〜約０．２５：１（ｗ／ｗ）、より好ましくは約５：１（ｗ／ｗ）〜約０．５：１（ｗ／ｗ）、最も好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）〜約２：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択される重量比において；または任意に、約０．１〜１０の範囲、好ましくは約０．３〜４または０．３〜１の範囲、最も好ましくは約０．５〜１または０．７〜１の範囲、なかでも最も好ましくは約０．３〜０．９または０．５〜０．９の範囲における、ｍＲＮＡの、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体の窒素／リン酸塩の比において、
カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物、または重合体担体と会合しているか、または複合化されている、請求項１〜２１に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項２３】
カチオン性のタンパク質またはペプチド、好ましくはプロタミンと会合しているか、または複合化されている、請求項２２に記載のｍＲＮＡ配列。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれかに記載のそれぞれのｍＲＮＡ配列のうちの複数または２つ以上を含んでいる、組成物。
【請求項２５】
請求項１〜２３のいずれかに規定されているｍＲＮＡ配列または請求項２４に規定されている組成物、ならびに任意に薬学的に許容可能な担体を含んでいる、薬学的組成物。
【請求項２６】
上記ｍＲＮＡは、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体、好ましくは複数のカチオン性のタンパク質もしくはペプチド、最も好ましくはプロタミンと少なくとも部分的に複合化されている、請求項２５に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
複合化されているｍＲＮＡの、遊離ｍＲＮＡに対する比は、約５：１（ｗ／ｗ）〜約１：１０（ｗ／ｗ）、より好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）〜約１：８（ｗ／ｗ）、より一層好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）〜約１：５（ｗ／ｗ）または１：３（ｗ／ｗ）の範囲から選択され、最も好ましくは、複合化されているｍＲＮＡの、遊離ｍＲＮＡに対する比は、１：１（ｗ／ｗ）の比から選択される、請求項２６に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
請求項１〜２３のいずれかに規定されているｍＲＮＡ配列、請求項２４に規定されている組成物、請求項２５〜２７のいずれかに規定されている薬学的組成物の構成要素、ならびに任意に上記構成要素の投与および投与量に関する情報を有している技術的な指示書を含んでいる、キットまたはキットの部分。
【請求項２９】
医薬としての使用のための、請求項１〜２３のいずれかに規定されているｍＲＮＡ配列、請求項２４に規定されている組成物、請求項２５〜２７のいずれかに規定されている薬学的組成物、ならびに請求項２８に規定されているキットまたはキットの部分。
【請求項３０】
ＲＳＶ感染の処置または予防における使用のための、請求項１〜２３のいずれかに規定されているｍＲＮＡ配列、請求項２４に規定されている組成物、請求項２５〜２７のいずれかに規定されている薬学的組成物、ならびに請求項２８に規定されているキットまたはキットの部分。
【請求項３１】
上記処置は、ＲＳＶの免疫グロブリン、特にPalivizumabの投与と組み合わせられる、請求項３０にしたがう使用のための、ｍＲＮＡ配列、組成物、薬学的組成物、ならびにキットまたはキットの部分。
【請求項３２】
ａ）請求項１〜２３のいずれかに規定されているｍＲＮＡ配列、請求項２４に規定されている組成物、請求項２５〜２７のいずれかに規定されている薬学的組成物、または請求項２８に規定されているキットもしくはキットの部分を準備すること；
ｂ）上記ｍＲＮＡ、組成物、薬学的組成物、またはキットもしくはキットの部分を、組織または生体に使用すること、または投与すること；
ｃ）任意に、ＲＳＶ免疫グロブリンを投与することを包含している、ＲＳＶ感染の処置または予防の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくはタンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでいるｍＲＮＡ配列に関する。さらに、本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくはタンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでいる複数のｍＲＮＡ配列を含んでいる組成物に関する。
【０００２】
さらに、本発明はまた、薬学的組成物（特にワクチン（例えばＲＳＶ感染の予防または処置における使用のための））の調製のための、ｍＲＮＡ配列、または複数のｍＲＮＡ配列を含んでいる組成物の使用を開示している。本発明は、ｍＲＮＡワクチンを用いたＲＳＶ感染の処置または予防の方法を、さらに説明している。
【０００３】
ＲＳＶの全世界的な医薬の必要性または経済的な影響力は、非常に高い。ＲＳＶは、乳児または幼児の間における通院という結果を招く、急性の下気道感染（ＡＬＲＩ）の最も重要な原因である。例えば、合衆国では、６０％を超える乳児が、最初のＲＳＶの活動期の間にＲＳＶに感染し、ほぼすべてが２〜３歳までに感染する。５歳未満のおよそ２３０万人の合衆国の子供（入院患者としての３％、救急診療における２５％、および小児診療における７３％）は、毎年、ＲＳＶ疾患の処置を受けている。全世界的に、５歳未満の子供において、ＲＳＶは、毎年、推定で３３８０万人のＡＬＲＩ（すべてのＡＬＲＩの２２％を超える）を引き起こしており、６６０００〜１９９０００人の死者（９９％は発展途上国において発生している）を出している。ＲＳＶはまた、老人において呼吸器疾患の多くみられる原因であり、インフルエンザに強く免疫化されている集団におけるインフルエンザと同程度の入院期間をもたらす。ＲＳＶは、呼吸の飛沫、または感染者もしくは汚染物との密接な接触によって伝播する。温帯気候において、例年の冬季の流行がある。乳児は、最初の６か月において重篤なＲＳＶ疾患について最も高い危険な状態にあり、入院加療のピークは、２〜３か月齢にある。早期出産および心肺疾患は、重篤なＲＳＶ疾患にとっての危険因子である。乳児のＲＳＶ感染は、他の呼吸器ウイルスのほとんどに対する免疫よりも速やかに衰えると思われる防御免疫を部分的に引き出す。生年にＲＳＶに感染したほとんどの子供は、一般により低い重篤度において翌年に再感染する。再感染は、しぱしば上気道の症状、ときに下気道または副鼻腔の併発をともなって生涯にわたって持続する。ＲＳＶ細気管支炎の推奨される処置は、呼吸器の支持および加湿から主になる。特異的な抗ウイルス療法は推奨されていない。中和モノクローナル抗体Palivizumabは、重篤な感染への最も高い危険な状態にある乳児の予防に使用されるが、一般的な使用には高価でありすぎ、実際的ではない。現在、使用許諾されているＲＳＶワクチンがなく、安全かつ有効なＲＳＶワクチンの開発は、世界的な公衆衛生の優先事項である。
【０００４】
１９６０年代のワクチン治験において、乳児および幼児は、ホルマリン不活性化された全ビリオンのＲＳＶ調製物（ＦＩＲＳＶ）または同等のパラミクソウイルス調製物（ＦＩＰＩＶ）を用いて免疫化されていた。ＦＩ−ＰＩＶを用いて免疫化され、かつそれから、次のＲＳＶの活動期の間にＲＳＶに自然に感染した対象の５％は、入院させられ；ＦＩ−ＲＳＶを用いて免疫化され、それからＲＳＶに感染した対象の８０％は、入院させられ；２人の子供は死亡した。ワクチン接種に起因するＲＳＶの増進は、ＲＳＶ感染に対するワクチンの開発に特有の問題点である（Shaw et al. Curr Opin Virol. 2013 Jun;3(3):332-42. doi: 10.1016/j.coviro.2013.05.003. Epub 2013 May 30.)に概括されている）。
【０００５】
したがって、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染は、発展途上国において乳児ワクチンの未解決の必要性を最も強く残しており、全世界的に重要な未解決の乳児ワクチンを必要としている。４０年を超える試みは、ヒト用に使用許諾されたワクチンをいまだにもたらしていない。
【０００６】
まとめると、パラミクソウイルスのウイルス科に属するＲＳＶは、最も伝染性の高い病原体の１つであり、乳児、老人および免疫障害のある患者における気道感染に大きく寄与している。
【０００７】
上述の通り、現在のところ、ウイルスの表面Ｆタンパク質に対するヒト化されたモノクローナル抗体は、高い危険性とみなされている乳児（早期出産の乳児および慢性の肺疾患にかかっている乳児）に推奨されている、市場における予防的な製品のみである（The IMpact-RSV Study Group. 1998. Palivizumab, a Humanized Respiratory Syncytial VirusMonoclonal Antibody, Reduces Hospitalization From Respiratory Syncytial Virus Infection in High-risk Infants. Pediatrics, 102(3), S.531-537., Tablan et al. 2003. Guidelines for preventing health-care--associated pneumonia, 2003: recommendations of CDC and the Healthcare Infection Control Practices Advisory Committee. MMWR. Recommendations and Reports: Morbidity and Mortality Weekly Report. Recommendations and Reports / Centers for Disease Control, 53(RR-3), S.1-36.）。
【０００８】
動物モデルを用いた最近の研究は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質を標的とする十分な量の中和抗体が、ウイルス複製を制限し、疾患の重篤度のより小さい経過を導くことを証明した（Singh, S.R. et al., 2007. Immunogenicity and efficacy of recombinant RSV-F vaccine in a mouse model. Vaccine, 25(33), S.6211-6223.、Zhan, X. et al., 2007. Respiratory syncytial virus (RSV) F protein expressed by recombinant Sendai virus elicits B-cell and T-cell responses in cotton rats and confers protection against RSV subtypes A and B. Vaccine, 25(52), S.8782-8793.、Vaughan, K., et al., 2005. DNA immunization against respiratory syncytial virus (RSV) in infant rhesus monkeys. Vaccine, 23(22), S.2928-2942）。
【０００９】
さらに、平衡の保たれている制御性のエフェクターＴ細胞機能は、ウイルスの排除および疾患の重篤度の低下に必要とされていることが、示されている（Liu, J. et al., 2010. Epitope-specific regulatory CD4 T cells reduce virus-induced illness while preserving CD8 T-cell effector function at the site of infection. Journal of Virology, 84(20), S.10501-10509）。
【００１０】
上述したヒト化されたモノクローナル抗体にもかかわらず、強い免疫応答を引き出すが、特定の標的の群（乳児、子供、老人、および免疫障害のある患者）における使用について推奨されない、弱毒化された生ワクチンが、開発された。また、Ｂ細胞エピトープを担持しているＲＳＶ  Ｆタンパク質を発現するＤＮＡベクターが、中和抗体の産生を誘導するために使用された。これに関して、国際公開第２００８／０７７５２７号および国際公開第９６／４０９４５号は、ワクチンとしての用途ために、ＲＳＶ  Ｆタンパク質をコードしているＤＮＡ配列を含んでいるベクターを開示している。しかし、ワクチンとしてのＤＮＡの使用は、機能的な遺伝子の妨害およびがんもしくは抗ＤＮＡ抗体の形成をおそらく導く、ゲノムへの所望されない挿入のために危険であり得る。
【００１１】
したがって、特に乳児、老人および免疫障害のある患者における、ＲＳＶ感染の予防または処置のためのワクチンとしての使用を目的とする、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているｍＲＮＡ配列を提供することが、根本的な発明の目的である。
【００１２】
これらの目的は、添付の特許請求の範囲の主題によって解決される。特に、本発明の根本をなす目的は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでいる発明のｍＲＮＡによる第１の局面にしたがって解決される。
【００１３】
明確さおよび読みやすさを目的として、以下の科学的な背景の情報および定義づけが示されている。それらによって明らかにされる任意の技術的な特徴点は、本発明の各実施形態およびすべての実施形態の一部であり得る。さらなる定義づけおよび説明は、本開示に鑑みて示され得る。
【００１４】
免疫系：免疫系は、感染から生体を保護し得る。病原体が生体の物理的な障壁を通り抜け、この生体に侵入すると、先天性免疫系は、急速な非特異的応答をもたらす。病原体がこの先天性応答を回避した場合に、脊椎動物は、防御の第２の層である適応免疫系を保有している。ここで、免疫系は、上記病原体の認識を向上させるために、感染の間にその応答を適合させる。この向上された応答は、それから、上記病原体が排除された後に、免疫記憶の形において保持され、適応性の免疫系に遭遇するそれぞれのときにより早く、より強い攻撃を適応免疫系が仕掛けることを可能にする。これによれば、免疫系は、先天性免疫系および適応免疫系を包含している。これらの２つの部分のそれぞれは、いわゆる液性免疫成分および細胞性免疫成分を含んでいる。
【００１５】
免疫応答：免疫応答は、典型的に、特定の抗原に対する適応免疫系の特異的応答（いわゆる特異的免疫応答または適応免疫応答）、または先天性免疫系の非特異的応答（いわゆる非特異的免疫応答または先天的免疫応答）のいずれかであり得る。本発明は、適応免疫系の特異的反応（適応免疫応答）にとっての中心に関する。特に、本発明は、例えばＲＳＶ感染のような、ウイルスによる感染に対する適応免疫反応に関する。しかし、この特異的反応は、追加の非特異的反応（先天性免疫応答）によって補助され得る。したがって、本発明はまた、有効な適応免疫応答を誘起するための、先天性免疫系および適応免疫系の同時刺激のための化合物に関する。
【００１６】
適応免疫系：適応免疫系は、高度に特化された系統細胞、ならびに病因となる増殖を排除するか、または防ぐ過程によって構成されている。適応免疫応答は、特定の病原体を認識し、かつ記憶する能力および病原体と遭遇するそれぞれのときにより強い攻撃を加える能力を、脊椎動物の免疫系にもたらす。上記系は、体性超変異（高頻度の体性変異の過程）、およびＶ（Ｄ）Ｊ組換え（抗原受容体遺伝子部分の不可逆的な遺伝学的組換え）のために、高い適応性を有している。この機序は、少ない数の遺伝子が、個々のリンパ球のそれぞれにおいて後ほど独自に発現される膨大な数の異なる抗原受容体を生成することを可能にする。遺伝子再配列は、各細胞（同じ受容体特異性をコードしている遺伝子を受け継いでいる後代の細胞（子孫）のすべて（長期にわたる特異的免疫にとって重要なメモリＢ細胞およびメモリＴ細胞が挙げられる））のＤＮＡにおける不可逆的な変化を導く。免疫ネットワーク理論は、適応免疫系がどのように機能する（すなわちＴ細胞およびＢ細胞の受容体の可変領域、ならびに可変領域を有しているＴ細胞およびＢ細胞によって作られる分子の間における相互作用に基づいている）かの理論である。
【００１７】
適応免疫応答：適応免疫応答は、抗原特異的であると典型的に理解される。抗原特異性は、特定の抗原、病原体または病原体感染細胞に合わせられている応答の発生を可能にする。合わせられているこれらの応答を行う能力は、「メモリ細胞」によって、身体に維持されている。病原体が２回以上にわたって身体に感染すると、これらの特定メモリ細胞は、病原体を速やかに排除するために使用される。これに関して、適応免疫応答の第１段階は、抗原提示細胞による抗原特異的な免疫応答を誘導可能な、ナイーブな特定のＴ細胞または異なる免疫細胞の活性化である。これは、ナイーブなＴ細胞が常に通過しているリンパ組織および器官において生じる。抗原提示細胞として機能し得る細胞種は、特に、樹状細胞、マクロファージおよびＢ細胞である。これらの細胞のそれぞれは、免疫応答の誘起において特徴的な機能を有している。樹状細胞は、ファゴサイトーシスおよびマクロピノサイトーシスによって抗原を取り込み、例えば外来性の抗原と、接触することによって刺激されて、成熟樹状細胞にそれらが分化する局所のリンパ組織に移動する。マクロファージは、粒状の抗原（例えば細菌）を摂取し、病原性物質または他の適切な刺激剤によって誘導されて、ＭＨＣ分子を発現する。Ｂ細胞受容体を介した可溶性のタンパク質を結合し、かつ当該タンパク質を内部移行させる、Ｂ細胞の固有の能力はまた、Ｔ細胞を誘導するために重要であり得る。ＭＨＣ分子に抗原を提示することは、それらの増殖および武装した（armed）エフェクターＴ細胞への分化を誘導するＴ細胞の活性化を導く。エフェクターＴ細胞の最も重要な機能は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞によって感染細胞を死滅させること、および細胞媒介性免疫をともに形成するＴｈ１細胞によるマクロファージの活性化、ならびに異なるクラスの抗体を産生し、したがって液性免疫応答を促進するための、Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞の両方によるＢ細胞の活性化である。上記細胞は、抗原を直接に認識し、かつ結合しない代わりに、他の細胞の表面にあるＭＨＣ分子に結合されている短いペプチド断片（例えば抗原由来のタンパク質抗原の）を認識するＴ細胞受容体によって抗原を認識する。
【００１８】
細胞性免疫／細胞性免疫応答：細胞性免疫は、典型的に、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、抗原特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球の活性化、および抗原に応じた種々のサイトカインの放出に関する。より一般的に、細胞性免疫は、抗体に関しておらず、免疫系の細胞の活性化に関する。細胞性免疫は、例えば、（１）表面に抗原のエピトープを提示している体細胞（例えば、ウイルス感染細胞、細胞内に細菌を有している細胞、腫瘍抗原を提示しているがん細胞）におけるアポトーシスを誘導可能な、抗原特異的な細胞障害性Ｔリンパ球を活性化すること；（２）マクロファージおよびナチュラルキラー細胞を活性化すること（それらを、病原体を破壊可能にする）；ならびに（３）細胞を刺激して適応免疫応答および先天性免疫応答に関与する他の細胞の機能に影響する、種々のサイトカインを分泌することによって、特徴付けられている。
【００１９】
液性免疫／液性免疫応答：液性免疫は、抗体産生、およびそれに付随し得る補助的な過程に、典型的に関する。液性免疫応答は、例えばＴｈ２活性化およびサイトカイン産生、胚中心形成およびアイソタイプスイッチング、結合性成熟およびメモリ細胞生成によって、典型的に特徴付けられている。液性免疫はまた、抗体のエフェクター機能（病原体および毒素の中和、古典的な補体の活性化、ならびにファゴサイトーシスおよび病原体排除のオプソニン促進）を指し得る。
【００２０】
先天性免疫系：先天性免疫系（非特異的免疫系としても知られている）は、他の生体による感染から、非特異的な様式において宿主を防御する細胞および機序を包含している。これは、適応免疫系と異なり、一般的な方法において、先天性系の細胞が病原体を認識し、応答することを意味し、宿主に対する長期の免疫または防御的な免疫を付与しない。先天性免疫系は、例えば、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）受容体（例えばトル様受容体（ＴＬＲ））のリガンドもしくは他の補助物質（例えば、リポ多糖、ＴＮＦ−アルファ、ＣＤ４０リガンド）、またはサイトカイン、モノカイン、リンフォカイン、インターロイキンもしくはケモカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＬＴ−ベータ、ＴＮＦ−アルファ、成長因子およびｈＧＨ）、ヒトのトル様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０のリガンド、マウスのトル様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２またはＴＬＲ１３のリガンド、ＮＯＤライク受容体のリガンド、ＲＩＧ−１ライク受容体のリガンド、免疫刺激性の核酸分子、免疫刺激性のＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）、ＣｐＧ−ＤＮＡ、抗菌剤、または抗ウイルス剤によって、活性化され得る。先天的免疫系の応答は、化学因子（サイトカインと呼ばれる、特殊化された化学媒介因子が挙げられる）の産生を介して、感染の部位に免疫細胞を補充すること；補体カスケードの活性化；器官、組織、血液およびリンパに存在する外来性物質の、特殊化された白血球による識別および除去；抗原提示として知られている過程を介した適応免疫系の活性化；および／または感染性物質に対する物理的および化学的な障壁として機能することを、典型的に包含している。
【００２１】
アジュバント剤／アジュバント成分：最も広義におけるアジュバント剤またはアジュバント成分は、典型的に、他の作用物質（例えば、薬剤またはワクチン）の有効性を変更（例えば向上）し得る（例えば薬学的または免疫学的な）作用物質または組成物である。通常、上記用語は、本発明に関して、免疫原および／または薬学的に活性な化合物にとっての担体または補助物質として機能する化合物または組成物を指す。上記用語は、広い意味において解釈されるべきであり、問題のアジュバント剤に組み込まれているか、または当該アジュバント剤とともに投与される抗原の免疫原性を向上させ得る広い範囲の物質を指す。本発明に関して、アジュバント剤は、本発明の活性剤の特異的な免疫原性作用を好ましく向上させる。典型的に、「アジュバント剤」または「アジュバント剤成分」は、同じ意味を有しており、相互に使用され得る。アジュバント剤は、免疫増強作用剤、抗原送達系またはその組合せに分類され得る。
【００２２】
「アジュバント剤」という用語は、それら自身によって免疫をもたらす作用物質を包含していないと、典型的に理解される。アジュバント剤は、例えば免疫系に対する抗原の提示または非特異的な先天性免疫応答の誘導を促進することによって、抗原特異的な免疫応答を向上させるために、免疫系を非特異的に補助する。さらに、アジュバント剤は、例えば有意なＴｈ２に基づく抗原特異的な応答を、よりＴｈ１に基づく抗原特異的な応答に、またはその逆に変更することによって、例えば抗原特異的な免疫応答を好ましく調節し得る。したがって、アジュバント剤は、サイトカイン発現／分泌、抗原提示、免疫応答の型などを有利に調節し得る。
【００２３】
本発明に関する免疫刺激性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）は、典型的に、それ自身が先天性免疫応答を誘導可能なＲＮＡであり得る。通常、ｉｓＲＮＡは、オープンリーディングフレームを有しておらず、ペプチド抗原または免疫原をもたらさないが、例えばトル様受容体（ＴＬＲ）または適切な他の受容体のうちの特定の種類に対する結合によって、先天性免疫応答を引き出す。しかし、当然、オープンリーディングフレームを有しており、ペプチド／タンパク質（例えば、抗原機能）をコードしているｍＲＮＡは、先天性免疫応答を誘導し得る。
【００２４】
抗原：本発明によれば、「抗原」という用語は、免疫系によって認識され得、適応免疫応答の一部としての抗体または抗原特異的なＴ細胞の形成によって、抗原特異的な免疫応答を誘起可能であり得る物質を、典型的に指す。抗原は、タンパク質またはペプチドであり得る。これに関連して、適応免疫応答の第１段階は、ナイーブな抗原特異的なＴ細胞の、抗原提示細胞による活性化である。これは、ナイーブＴ細胞が常に通過しているリンパ組織または器官において生じる。抗原提示細胞として機能するこれらの細胞種は、樹状細胞、マクロファージ、およびＢ細胞である。これらの細胞のそれぞれは、誘起する免疫応答において特徴的な機能を有している。組織の樹状細胞は、ファゴサイトーシスおよびマクロピノサイトーシスによって抗原を取り込み、感染によって刺激されて、それらが成熟樹状細胞に分化する局所的なリンパ組織に移動する。マクロファージは、粒状の抗原（例えば細菌）を摂取し、感染性因子によって誘導されて、ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現する。それらの受容体を介して、可溶性タンパク質抗原と結合し、可溶性のタンパク質抗原を内部移行させる、Ｂ細胞の固有の能力は、Ｔ細胞を誘導するために重要であり得る。ＭＨＣ分子上に抗原を提示することによって、それらの増殖および武装したエフェクターＴ細胞への分化を誘導するＴ細胞の活性化を導く。エフェクターＴ細胞の最も重要な能力は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞による感染細胞の殺傷および細胞媒介性免疫をともに作り上げているＴＨ１細胞によるマクロファージの活性化、ならびに異なるクラスの抗体を産生する（したがって液性免疫を起こさせる）ための、ＴＨ２細胞およびＴＨ１細胞の両方によるＢ細胞の活性化である。Ｔ細胞は、直接には抗原を認識せず、抗体と結合しないが、例えば病原体のタンパク質抗原の、短いペプチド断片（他の細胞の表面上にあるＭＨＣ分子に対して結合される）を認識するそれらのＴ細胞受容体によって抗原を認識する。
【００２５】
Ｔ細胞は、異なるエフェクター機能を有している２つの主要なクラスに分類される。２つのクラスは、細胞表面タンパク質ＣＤ４およびＣＤ８の発現によって識別される。身体の組織によってそれらの構造および発現パターンに差異を有しているＭＨＣ分子の２つのクラス−ＭＨＣクラスＩ分子およびＭＨＣクラスＩＩ分子がある。ＭＨＣクラスＩ分子およびＭＨＣクラスＩＩ分子は、それらを認識するＴ細胞の異なるエフェクター機能を反映している、細胞内における異なる分布を有している。ＭＨＣクラスＩ分子は、それらが特異的に認識する任意の細胞を殺傷するために特殊化されている細胞傷害性Ｔ細胞に分化するＣＤ８＋Ｔ細胞に、例えば病原体（一般的にウイルス）からの、細胞質由来および核由来のペプチドを提示する。ほとんどすべての細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子を発現するが、恒常的な発現のレベルは、１つの細胞種から次の細胞種までにおいて異なる。ウイルス由来の病原性ペプチドが、ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるだけでなく、自己抗原様の腫瘍抗原もＭＨＣクラスＩ分子によって提示される。ＭＨＣクラスＩ分子は、細胞質において分解され、小胞体に輸送されたペプチドと結合する。感染細胞の表面におけるＭＨＣクラスＩ：ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞は、外来性ペプチドを提示している任意の細胞を殺傷し、したがってウイルスおよび他の病原体に感染している細胞の集団を駆除することに特化されている。ＭＨＣクラスＩＩ分子を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞）の主要な機能は、免疫系の他のエフェクター細胞を活性化することである。したがって、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、免疫応答に参加する細胞であるＢリンパ球、マクロファージおよび樹状細胞の上に通常に見られるが、他の組織細胞上には見られない。マクロファージは、例えば、それらが内部に含んでいる小胞内の病原体を殺傷するために活性化され、Ｂ細胞は、外来性の分子に対する免疫グロブリンを分泌するために活性化される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、エンドソームにおいて分解されたタンパク質に由来するペプチドを結合する。それらは、マクロファージの小胞系に入っている病原体由来のペプチド、または成熟樹状細胞、Ｂ細胞の免疫グロブリン受容体によって内部移行された病原体由来のペプチドを捕捉し得る。マクロファージおよび樹状細胞の小胞の内部に蓄積している多数の病原体は、ＴＨ１細胞の分化を刺激する傾向にあり、細胞外抗原は、ＴＨ２細胞の生成を刺激する傾向にある。ＴＨ１細胞は、マクロファージの殺菌特性を活性化させ、食作用性細胞による摂食のために細胞外病原体にオプソニンを作用させることに非常に有効なＩｇＧ抗体を生成するためにＢ細胞を誘導し、ＴＨ２細胞は、Ｂ細胞を活性化することによって液性応答を開始させて、ＩｇＧを分泌させ、微弱にオプソニン化させる抗体（例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３（マウス）；およびＩｇＧ２およびＩｇＧ４（ヒト）；ならびにＩｇＡおよびＩｇＥ（マウスおよびヒト））の産生を誘導する。
【００２６】
エピトープ（いわゆる「抗原決定基」）：本発明に関してＴ細胞エピトープまたはそのタンパク質の部分は、約６〜約２０またはそれ以上のアミノ酸の長さを好ましく有している断片（例えば、好ましくは約８〜約１０アミノ酸（例えば８、９または１０（さらに１１または１２アミノ酸））の長さを有している、ＭＨＣクラスＩ分子によって処理され、提示されるような断片、または好ましくは約１３以上のアミノ酸（例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上のアミノ酸）の長さを有している、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって処理され、提示されるような断片）を構成し得る。ここで、これらの断片は、アミノ酸配列の任意の部分から選択され得る。これらの断片は、ペプチド断片およびＭＨＣ分子からなる複合体の形態においてＴ細胞によって典型的に認識される。
【００２７】
Ｂ細胞エピトープは、典型的に、抗体によって認識され得る（すなわちそれらの未変性の形態にある）、好ましくは５〜１５アミノ酸、より好ましくは５〜１２アミノ酸、より一層好ましくは６〜９アミノ酸を有している、本明細書に規定されているような（未変性の）タンパク質またはペプチド抗原の外表面に位置している、断片である。
【００２８】
タンパク質またはペプチドのそのようなエピトープは、当該タンパク質またはペプチドの本明細書に述べられているバリアントのいずれかからさらに選択され得る。これに関連して、抗原決定基は、立体配置的または不連続なエピトープであり得る。本明細書に規定されているようなタンパク質またはペプチドの断片（本明細書に規定されているようなタンパク質またはペプチドのアミノ酸配列において不連続であるが、３次元構造において集合しているか、または単一のポリペプチド鎖によって構成されている連続するエピトープもしくは直鎖状のエピトープである）によって構成されている。
【００２９】
ワクチン：ワクチンは、少なくとも１つの抗原または抗原性機能をもたらす予防的または治療的な材料であると、典型的に理解される。抗原または抗原性機能は、身体の適応性免疫系を刺激して、適応免疫応答をもたらし得る。
【００３０】
抗原をもたらすｍＲＮＡ：本発明に関する抗原をもたらすｍＲＮＡは、当該ｍＲＮＡを備えている細胞または生物によって翻訳され得る少なくとも１つのオープンリーディングフレームを有している、ｍＲＮＡであり得る。この翻訳の産物は、抗原、好ましくは免疫原として機能し得るペプチドまたはタンパク質である。上記産物はまた、２つ以上の免疫原によって構成されている融合タンパク質（例えば、同じか、または異なるウイルスタンパク質に由来する２つ以上のエピトープ、ペプチドまたはタンパク質）であり得る。ここで、当該エピトープ、ペプチドまたはタンパク質は、リンカー配列によって連結され得る。
【００３１】
二機能性／多機能性ｍＲＮＡ：ｍＲＮＡは、２（バイシストロン性）またはそれ以上（多シストロン性）のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有し得る。これに関連して、オープンリーディングフレームは、ペプチドまたはタンパク質に翻訳され得る数個のヌクレオチドトリプレット（コドン）の配列である。そのようなｍＲＮＡの翻訳は、（ＯＲＦが同一ではない条件のもとに）２（バイシストロン性）またはそれ以上（多シストロン性）の別個の翻訳産物を生じさせる。真核生物における発現にとって、そのようなｍＲＮＡは、例えば、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含み得る。
【００３２】
５’キャップ構造：５’キャップ構造は、典型的に、ｍＲＮＡ分子の５’末端に加えられている修飾ヌクレオチド（特にグアニンヌクレオチド）である。好ましくは、５’キャップは、５’−５’−３リン酸結合（ｍ７ＧｐｐｐＮとも呼ばれる）を用いて付加される。５’キャップ構造のさらなる例としては、グリセリン、逆位デオキシ脱塩基残基（部分）、４’，５’メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素管式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環式の３’，４’−セコヌクレオチド、非環式の３，４−ジヒドロブチルヌクレオチド、非環式の３，５ジヒドロキシフェニルヌクレオチド、３’−３’−逆位ヌクレオチド部分、３’−３’−逆位脱塩基ヌクレオチド部分、３’−２’−逆位脱塩基部分、１，４−ブタンジオールホスフェート、３’−ホスホラミダイト、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’−ホスフェート、３’ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、または架橋もしくは非架橋のメチルホスホネート部分が挙げられる。これらの修飾５’キャップ構造は、本発明に関連して、発明のｍＲＮＡ配列を修飾するために使用され得る。本発明に関連して使用され得るさらなる５’キャップ構造は、ＣＡＰ１（ｍＧｐｐｐＮの隣接するヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＣＡＰ２（ｍＧｐｐｐＮから２番目にある下流のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＣＡＰ３（ｍＧｐｐｐＮから３番目にある下流のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＣＡＰ４（ｍＧｐｐｐＮから４番目にある下流のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＡＲＣＡ（アンチリバースキャップアナログ（anti-reverse CAP ananlog）、修飾ＡＲＣＡ（例えば、ホスホチオネート修飾されているＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１−メチルグアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノグアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−アジド−グアノシンである。
【００３３】
タンパク質の断片：本発明に関連するタンパク質の「断片」は、本来（天然）のタンパク質（またはコードされているその核酸分子）のアミノ酸配列と比べて、そのアミノ酸配列（コードされているその核酸分子）について、Ｎ末端および／またはＣ末端がトランケートされている、本明細書に規定されているようなタンパク質またはペプチドの配列を典型的に含み得る。したがって、そのようなトランケーションは、アミノ酸レベルまたはそれに対応する核酸レベルのいずれかにおいて生じ得る。したがって、本明細書に規定されているような当該断片に対する配列同一性は、本明細書に規定されているようなタンパク質もしくはペプチドの全体、または当該タンパク質もしくはペプチドの全体の（コードしている）核酸分子を、好ましく指し得る。
【００３４】
本発明に関連するタンパク質またはペプチドの断片は、少なくとも５アミノ酸の長さ、好ましくは少なくとも６アミノ酸（好ましくは少なくとも７アミノ酸、より好ましくは少なくとも８アミノ酸、より一層好ましくは少なくとも９アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１０アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１１アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１２アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１３アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１４アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１５アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１６アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１７アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１８アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも１９アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも２０アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも２５アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも３０アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも３５アミノ酸；より一層好ましくは少なくとも５０アミノ酸；または最も好ましくは少なくとも１００アミノ酸）の長さを有している、本明細書に規定されているような配列をさらに含み得る。例えば、そのような断片は、約６〜約２０またはそれ以上のアミノ酸の長さを有し得る（例えば、ＭＨＣクラスＩ分子によって処理され、提示されるような断片（好ましくは約８〜約１０アミノ酸（例えば、８、９または１０（または６、７、１１または１２アミノ酸）））、またはＭＨＣクラスＩＩ分子によって処理され、提示されるような断片（好ましくは約１３以上のアミノ酸（例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上のアミノ酸）））。ここで、これらの断片は、アミノ酸配列の任意の部分から選択され得る。これらの断片は、ペプチド断片およびＭＨＣ分子からなる複合体の形態においてＴ細胞によって典型的に認識される（すなわち、当該断片は、それらの本来の形態において典型的に認識されない）。タンパク質またはペプチドの断片は、それらのタンパク質またはペプチドの少なくとも１つのエピトープを含み得る。さらに、タンパク質の、細胞外ドメイン、細胞内ドメインもしくは膜貫通ドメイン、および短縮されているか、もしくはトランケートされている変形物はまた、タンパク質の断片を含んでいると理解され得る。
【００３５】
タンパク質のバリアント：本発明に関して規定されているような、タンパク質またはペプチドの「バリアント」が、１つ以上の変異（例えば、１つ以上の置換されているアミノ酸、１つ以上の挿入されているアミノ酸、および／または１つ以上の欠失されているアミノ酸）において本来の配列と異なるアミノ酸配列を有して、生成され得る。好ましくは、これらの断片および／またはバリアントは、全長の本来のタンパク質と比べて、同じ生物学的な機能または特定の活性（例えば、特異的な抗原性特性）を有している。本発明に関連して規定されているようなタンパク質またはペプチドの「バリアント」は、それらの本来の（すなわち変異されていない生理学的な）配列と比べて、（複数の）保存的なアミノ酸置換を含み得る。特に、これらのアミノ酸配列およびそれらのコードしている核酸配列は、本明細書に規定されているようなバリアントという用語の範囲にある。同じ種類に由来するアミノ酸が互いに交換される置換は、保存的な置換と呼ばれる。特に、脂肪族側鎖、正もしくは負に荷電している側鎖、側鎖もしくはアミノ酸にある芳香族基、水素結合に加わり得る側鎖（例えば、ヒドロキシル官能基を有している側鎖）を有しているアミノ酸がある。これは、極性側鎖を有しているアミノ酸が、同じく極性側鎖を有している他のアミノ酸によって置き換えられるか、または例えば、疎水性側鎖によって特徴付けられているアミノ酸が、同じく疎水性側鎖によって特徴付けられている他のアミノ酸によって置換（例えば、スレオニン（セリン）によるセリン（スレオニン）またはイソロイシン（ロイシン）によるロイシン（イソロイシン））されることを意味する。挿入および置換は、三次元構造に変化を生じさせないか、結合領域に影響しないこれらの配列位置において起こり得る。（複数の）挿入または置換による三次元構造に対する変化は、ＣＤスペクトル（円偏光二色性スペクトル）（Urry, 1985, Absorption, Circular Dichroism and ORD of Polypeptides, in: Modern Physical Methods in Biochemistry, Neuberger et al. (ed.), Elsevier, Amsterdam）を用いて容易に決定され得る。
【００３６】
タンパク質またはペプチドの「バリアント」は、当該タンパク質またはおよびの１０、２０、３０、５０、７５または１００アミノ酸の範囲の全体にわたって、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のアミノ酸同一性を有している。
【００３７】
さらに、核酸分子によってコードされ得る、本明細書に規定されているようなタンパク質またはペプチドのバリアントはまた、コード核酸配列のヌクレオチドが遺伝暗号の縮重にしたがって、タンパク質またはペプチドのそれぞれのアミノ酸配列の変化を導くことなく交換されている（すなわち当該アミノ酸配列またはその少なくとも一部が、上述した意味の範囲において本来の配列から、１つ以上の変異において異なり得ない）これらの配列を包含している。
【００３８】
２つの配列（例えば、本明細書に規定されているような複数の核酸配列またはアミノ酸配列（好ましくは本明細書に規定されているような重合性担体の核酸配列によってコードされているアミノ酸配列、またはアミノ酸配列自身））が同一であるパーセンテージを決定するために、上記配列は、後に互いに比較されるために、整列化され得る。したがって、例えば、第１の配列の位置は、第２の配列の対応する位置と比較され得る。第１の配列における位置が、第２の配列における位置にある同じ成分（残基）によって占められている場合、２つの配列は、この位置において同一である。こうではない場合、配列はこの位置において異なる。挿入が、第１の配列と比べて第２の配列に生じている場合、ギャップが第１の配列に挿入されて、さらなる整列化を可能にする。欠失が、第１の配列に比べて第２の配列に生じている場合、ギャップが第１の配列に挿入されて、さらなる整列化を可能にする。それから、２つの配列が同一であることのパーセンテージは、１つの配列のみに占められているこれらの位置を含んでいる位置の総数によって割った同一の位置の数の相関関係である。２つの配列が同一であるパーセンテージは、数学的アルゴリズムを用いて決定され得る。好ましくは、使用され得る数学的アルゴリズムの例は、これらに限定されないが、好ましくは、Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877またはAltschulet al. (1997), Nucleic Acids Res., 25:3389-3402のアルゴリズムである。本発明の配列と特定の程度まで同一である配列は、このプログラムによって同定され得る。
【００３９】
タンパク質またはペプチドの誘導体：タンパク質またはペプチドの誘導体は、他の分子（例えば、上記タンパク質またはペプチド）に由来する分子であると典型的に理解される。タンパク質またはペプチドの「誘導体」はまた、本発明に使用されるペプチドまたはタンパク質を含んでいる融合物を包含する。例えば、上記融合物は、標識（例えば、エピトープ（例えば、ＦＬＡＧエピトープまたはＶ５エピトープ））を含んでいる。例えば、上記エピトープはＦＬＡＧエピトープである。そのようなタグは、例えば融合タンパク質の精製にとって有用である。
【００４０】
モノシストロン性ｍＲＮＡ：モノシストロン性ｍＲＮＡは、典型的に、１つのオープンリーディングフレームのみをコードしているｍＲＮＡであり得る。これに関連してオープンリーディングフレームは、ペプチドまたはタンパク質に翻訳され得る複数のヌクレオチドトリプレット（コドン）の配列である。
【００４１】
核酸：核酸という用語は、任意のＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を意味し、ポリヌクレオチドと同義に使用される。特定のタンパク質および／またはペプチドをコードしている核酸または核酸配列に言及がなされている場合には、当該核酸または核酸配列のそれぞれはまた、適切な宿主（例えばヒト）におけるその発現（例えば、特定のタンパク質またはペプチドをコードしている上記核酸配列の転写および／または翻訳）を可能にする制御配列を含んでいる。
【００４２】
ペプチド：ペプチドは、アミノ酸単量体の重合体である。通常、そのような単量体は、ペプチド結合によって連結されている。「ペプチド」という用語は、アミノ酸の重合体鎖の長さを限定しない。本発明のいくつかの実施形態において、ペプチドは、例えば、５０未満の単量体ユニットを含んでいる。典型的に５０〜６００の単量体ユニット、より詳細には５０〜３００の単量体ユニットを有しているより長いペプチドは、ポリペプチドとも呼ばれる。
【００４３】
薬学的に有効な量：本発明に関連して薬学的に有効な量は、免疫応答を誘導するために十分な量であると典型的に理解される。
【００４４】
タンパク質：タンパク質は、典型的に、三次元的な形態に折りたたまれ、生物学的な機能を促進する１つ以上のペプチドおよび／またはポリペプチドからなる。
【００４５】
ポリ（Ｃ）配列：ポリ（Ｃ）配列は、典型的に、シトシンヌクレオチド、典型的に約１０〜約２００のシトシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜約１００のシトシンヌクレオチド、より好ましくは約１０〜約７０のシトシンヌクレオチド、より一層好ましくは約２０〜約５０のシトシンヌクレオチドまたはさらには約２０〜約３０のシトシンヌクレオチドの長い配列である。ポリ（Ｃ）配列は、核酸によって構成されているコード領域の３’に好ましく配置され得る。
【００４６】
ポリＡテイル：「３’ポリ（Ａ）テイル」とも呼ばれるポリＡテイルは、典型的に、約４００以下のアデノシンヌクレオチド（例えば、約２５〜約４００、好ましくは約５０〜約４００、より好ましくは約５０〜約３００、より一層好ましくは約５０〜約２５０、最も好ましくは約６０〜約２５０のアデノシンヌクレオチド）の、ＲＮＡの３’末端に付加されているアデノシンヌクレオチドの長い配列である。
【００４７】
安定化された核酸：安定化された核酸は、典型的に、インビボ分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる分解）、および／またはエクスビボ分解（例えば、例えば投与されるワクチン溶液の調製の間における、ワクチン投与の前における製造過程による）に対する耐性を向上させる修飾を示す。ＲＮＡの安定化は、例えば５’キャップ構造、ポリＡテイルまたは他のＵＴＲ修飾を付与することによって、実現され得る。ＲＮＡの安定化はまた、核酸の骨格修飾またはＧ／Ｃ含有量の変更によって実現され得る。種々の他の方法は、当該分野において知られており、本発明に関連して理解される。
【００４８】
担体／重合性担体：本発明に関連する担体は、典型的に、他の化合物の輸送および／または複合体化を促進する化合物であり得る。そのような担体は、上記他の化合物と複合体を形成し得る。重合性担体は、重合体から形成されている担体である。
【００４９】
カチオン性成分：「カチオン性成分」という用語は、典型的に約１〜９のｐＨ値、好ましくは９以下（例えば、５〜９）、８以下（例えば、５〜８）、７以下（例えば、５〜７）のｐＨ値、最も好ましくは生理学的ｐＨ値（例えば、７．３〜７．４）において正に荷電している、帯電分子（カチオン）を、典型的に指す。したがって、本発明に係るカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体は、生理学的な条件下（特にインビボにおける細胞の生理学的な塩の条件）において正に荷電している。カチオン性のペプチドまたはタンパク質は、他のアミノ酸より多数のカチオン性のアミノ酸（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、ＬｙｓまたはＯｒｎ）（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕのようなアニオン性のアミノ酸より多くのカチオン性のアミノ酸）、またはカチオン性のアミノ酸残基によって支配的に形成されているブロックを好ましく含んでいる。「カチオン性」の定義は、「ポリカチオン性」の成分をも指す。
【００５０】
ビヒクル：薬学的組成物またはワクチンの成分を個体に投与することを容易にするために、薬学的組成物内において典型的に使用され得る、作用物質（例えば担体）。
【００５１】
３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）：３’ＵＴＲは、典型的に、ｍＲＮＡの、タンパク質をコードしている領域（すなわちオープンリーディングフレーム）およびポリ（Ａ）配列の間に配置されているｍＲＮＡの一部である。ｍＲＮＡの３’ＵＴＲは、アミノ酸配列に翻訳されない。３’ＵＴＲ配列は、遺伝子発現過程の間に、それぞれのｍＲＮＡに転写される遺伝子によって一般的にコードされている。ゲノム配列は、付加的なイントロンを含んでいる未成熟ｍＲＮＡにまず転写される。未成熟ｍＲＮＡは、それから成熟過程において成熟ｍＲＮＡにさらに処理される。この成熟過程は、５’キャッピング、付加的なイントロンを切除するための未成熟ｍＲＮＡのスプライシング、および３’末端の修飾（例えば、未成熟ｍＲＮＡの３’末端のポリアデニル化）および付加的なエキソヌクレアーゼ切断もしくはエンドヌクレアーゼ切断などを含んでいる。本発明に関連して、３’ＵＴＲは、タンパク質をコードしている領域のストップコドンに対する３’に（好ましくはタンパク質をコードしている領域のストップコドンに対する３’に）配置されており、かつポリ（Ａ）配列の５’側に（好ましくはポリ（Ａ）配列に対するすぐ５’にあるヌクレオチドに）伸びている、成熟ｍＲＮＡの配列に対応する。「対応する」という用語は、３’ＵＴＲ配列が、例えば３’ＵＴＲ配列を規定するために使用されるｍＲＮＡ配列における、ＲＮＡ配列、または当該ＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列であり得ることを意味する。本発明に関連して、「遺伝子の３’ＵＴＲ」（例えば、「アルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ」）は、この遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡ（すなわち上記遺伝子の転写および未成熟ｍＲＮＡの成熟によって得られるｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに対応する配列である。「遺伝子の３’ＵＴＲ」という用語は、３’ＵＴＲのＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列を包含している。
【００５２】
５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）：５’ＵＴＲは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の特定の部分であると典型的に理解される。５’ＵＴＲは、ｍＲＮＡのオープンリーディングフレームの５’に配置されている。典型的に、５’ＵＴＲは、転写開始部位に始まり、オープンリーディングフレームの開始コドンの１ヌクレオチド前で終わる。５’ＵＴＲは、遺伝子発現を制御するためのエレメント（制御エレメントとも呼ばれる）を含み得る。当該制御エレメントは、例えば、リボソーム結合部位または５’末端オリゴピリミジントラクトであり得る。５’ＵＴＲは、例えば５’キャップの付加によって、転写後に修飾され得る。本発明に関連して、５’ＵＴＲは、５’キャップおよび開始コドンの間に配置されている、成熟ｍＲＮＡの配列に対応する。好ましくは、５’ＵＴＲは、５’キャップに対する３’に配置されているヌクレオチド（好ましくは５’キャップに対するすぐ３’に配置されているヌクレオチド）から、タンパク質をコードしている領域の開始コドンに対する５’に配置されているヌクレオチド（好ましくはタンパク質をコードしている開始コドンに対するすぐ５’に配置されているヌクレオチド）まで伸びている配列に対応する。成熟ｍＲＮＡの５’キャップに対するすぐ３’に配置されているヌクレオチドは、転写開始部位に対応する。「対応する」という用語は、５’ＵＴＲ配列が、例えば５’ＵＴＲ配列を規定するために使用されるｍＲＮＡにある、ＲＮＡ配列、または当該ＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列であり得ることを意味する。本発明に関連して、「遺伝子の５’ＵＴＲ」（例えば「ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ」）という用語は、この遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡ（すなわち遺伝子の転写および未成熟ｍＲＮＡの成熟によって得られるｍＲＮＡ）の５’ＵＴＲに対応する配列である。「遺伝子の５’ＵＴＲ」という用語は、５’ＵＴＲのＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列を包含している。
【００５３】
５’末端オリゴピリミジントラクト（ＴＯＰ）：５’末端オリゴピリミジントラクト（ＴＯＰ）は、典型的に、核酸分子の５’末端領域（例えば、あるｍＲＮＡ分子の５’末端領域）、またはある遺伝子の機能的な全体（例えば転写される領域）の５’末端領域に配置されているピリミジンヌクレオチドのストレッチ（stretch）である。上記配列は、転写開始部位に一般的に対応するシチジン始まり、当該配列の後に約３〜３０のピリミジンヌクレオチドのストレッチが続く。例えば、ＴＯＰは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０またはそれ以上のヌクレオチドを含み得る。ピリミジンのストレッチ、およびしたがって５’ＴＯＰは、ＴＯＰの下流に配置されている最初のプリンヌクレオチドに対する５’の１ヌクレオチドで終わる。５’末端オリゴピリミジントラクトを含んでいるメッセンジャーＲＮＡは、ＴＯＰ  ｍＲＮＡとしばしば呼ばれる。したがって、当該メッセンジャーＲＮＡをもたらす遺伝子は、ＴＯＰ遺伝子と呼ばれる。ＴＯＰ配列は、ペプチド伸長因子およびリボソームタンパク質をコードしている遺伝子およびｍＲＮＡに見られる。
【００５４】
ＴＯＰモチーフ：本発明に関連して、ＴＯＰモチーフは、以上に規定されているような５’ＴＯＰに対応する核酸配列である。したがって、本発明に関連するＴＯＰモチーフは、好ましくは、３〜３０ヌクレオチドの長さを有しているピリミジンヌクレオチドのストレッチである。好ましくは、ＴＯＰモチーフは、少なくとも３のピリミジンヌクレオチド、好ましくは少なくとも４のピリミジンヌクレオチド、好ましくは少なくとも５のピリミジンヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６のピリミジンヌクレオチド、より好ましくは少なくとも７のピリミジンヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも８のピリミジンヌクレオチドからなる。ここで、ピリミジンヌクレオチドの上記ストレッチは、シトシンヌクレオチドをともなうその５’に好ましく始まる。ＴＯＰ遺伝子およびＴＯＰ  ｍＲＮＡにおいて、ＴＯＰモチーフは、好ましくは、転写開始部位をともなうその５’末端に始まり、上記遺伝子またはｍＲＮＡにおける最初のプリン残基に対する５’にある１ヌクレオチドで終わる。本発明の意味において、ＴＯＰモチーフは、５’ＵＴＲを表す配列の５’末端、または５’ＵＴＲをコードしている配列の５’末端に好ましく配置されている。したがって、好ましくは、３以上のピリミジンヌクレオチドのストレッチは、当該ストレッチがそれぞれの配列（例えば本発明のｍＲＮＡ）の５’末端に配置されている場合に、本発明の意味において、いわゆる「ＴＯＰモチーフ」、本発明のｍＲＮＡの５’ＵＴＲエレメント、または本明細書に記載されているようなＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列である。言い換えれば、５’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲエレメントの５’末端に配置されておらず、５’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲエレメントの範囲のいずれかにある３以上のピリミジンヌクレオチドのストレッチは、好ましくは、「ＴＯＰモチーフ」と呼ばれない。
【００５５】
ＴＯＰ遺伝子：ＴＯＰ遺伝子は、５’末端オリゴピリミジントラクトによって典型的に特徴付けられる。さらに、ほとんどのＴＯＰ遺伝子は、成長と関連する転写制御によって特徴付けられる。しかし、組織特異的な転写制御をともなうＴＯＰ遺伝子がまた、知られている。以上に規定されている通り、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲは、好ましくは５’キャップに対する３’に配置されているヌクレオチドから、開始コドンに対する５’に配置されているヌクレオチドまで伸びている、ＴＯＰ遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡの５’ＵＴＲの配列に対応する。ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲは、任意の開始コドンを典型的に含んでおらず、好ましくは上流のＡＵＧ（ｕＡＵＧ）または上流のオープンリーディングフレーム（ｕＯＲＦ）がない。これらにおいて、上流のＡＵＧおよび上流のオープンリーディングフレームは、翻訳されるべきオープンリーディングフレームの開始コドン（ＡＵＧ）の５’に存在するＡＵＧおよびオープンリーディングフレームであると典型的に理解される。ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲはむしろ一般的に短い。ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの長さは、２０ヌクレオチド〜５００ヌクレオチドの間において変化し得、典型的に約２００ヌクレオチド未満、好ましくは約１５０ヌクレオチド未満、より好ましくは約１００ヌクレオチド未満である。本発明の意味においてＴＯＰ遺伝子の例示的な５’ＵＴＲは、特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／００２４４８ＷＯ２０１３／１４３７００（参照によって本明細書に組み込まれる）の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２１〜１３６３にしたがう配列、またはその相同物もしくはバリアントにおいて、５位のヌクレオチドから、開始コドン（例えばＡＴＧ）に対してすぐ５’に配置されているヌクレオチドまで伸びている核酸配列である。これに関連して、ＴＯＰ遺伝子の特に好ましい断片は、５’ＴＯＰモチーフを欠いているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲである。「ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ」という用語は、天然に存在するＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲを好ましく指す。
【００５６】
核酸配列（特にｍＲＮＡ）の断片：核酸配列の断片は、当該断片の核酸配列にとっての基準である全長核酸配列におけるヌクレオチドの連続するストレッチに対応する、ヌクレオチドの連続するストレッチからなり、当該全長核酸配列の、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、より一層好ましくは少なくとも６０％、より一層好ましくは少なくとも７０％、より一層好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％を示す。本発明の意味において、好ましくは、当該断片は、全長核酸配列の核酸配列の機能的な断片である。
【００５７】
核酸配列（特にｍＲＮＡ）のバリアント：核酸配列のバリアントは、核酸配列の基準を形成する核酸配列のバリアントを指す。例えば、バリアントの核酸配列は、当該バリアントが由来する核酸配列と比べて、１つ以上のヌクレオチドの欠失、挿入、付加および／または置換を示し得る。好ましくは、核酸配列のバリアントは、当該バリアントが由来する核酸配列に対して、少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より一層好ましくは少なくとも８０％、より一層好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％同一である。好ましくは、バリアントは機能的なバリアントである。核酸配列の「バリアント」は、当該核酸配列の１０、２０、３０、５０、７５または１００ヌクレオチドのストレッチの全体にわたって、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のヌクレオチド同一性を有し得る。
【００５８】
核酸配列の相同物：核酸配列の「相同物」という用語は、特定の配列以外の、他の種の配列を指す。核酸配列は、ヒト由来であることが特に好ましく、したがって、相同物はヒトの核酸配列の相同物であることが好ましい。
【００５９】
ジェットインジェクション：本明細書に使用されるとき「ジェットインジェクション」という用語は、針を使用しない注入方法を指し、ここで、少なくとも１つの本発明のｍＲＮＡ配列および任意にさらなる好適な賦形剤を含んでいる液体が、開口部を押し通され、このようにして哺乳類の皮膚、および注入の設定に依存して皮下組織もしくは筋組織を貫通可能な高圧の超微細な流体流を生成させる。基本的に、流体流は、流体流が標的組織に押し込まれる皮膚に穴を形成する。好ましくは、ジェットインジェクションは、本発明に係るｍＲＮＡ配列の皮内注入、皮下注入または筋肉内注入に使用される。好ましい実施形態において、ジェットインジェクションは、本発明のｍＲＮＡの皮内注入に使用される。
【００６０】
本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているコード領域を含んでいるｍＲＮＡ配列が、抗原特異的な免疫応答を誘導し、したがって呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染を、予防するか、もしくは少なくとも最小化するという、本発明者らの意外な発見に基づく。本発明のｍＲＮＡ配列が、ウイルス全体からなる不活性化ＲＳＶに基づくワクチンと比べて、少なくとも同様の免疫応答を誘導することは、非常に意外であった。より一層意外なことに、ＲＳＶの抗原タンパク質をコードしている本発明のｍＲＮＡ配列は、不活性化ＲＳＶに基づくワクチンと対照的に、抗原特異的なＣＤ８＋−Ｔ細胞を誘導した。さらに、コットンラットのＲＳＶ抗原投与モデルにおいて、ｍＲＮＡをワクチン接種した動物の鼻および肺におけるウイルス力価は、不活性化ＲＳＶウイルスに基づくワクチンを用いてワクチン接種した動物と比べて、非常に低かった。安全性について、本発明者らは、ｍＲＮＡに基づくＲＳＶワクチンがワクチンを介した疾患亢進に関する徴候を、ホルマリン不活性化ウイルスに基づくワクチンと比べて、肺病理に関してまったく示さないことを示し得た。さらに、意外にも、本発明のｍＲＮＡ配列を用いた単独かつ単回のワクチン接種はすでに、投与された（複数の）抗原に対する免疫応答を誘起するために十分であることが、本発明者らによって見出されている。好ましくは皮内注入または筋肉内注入による、本発明のｍＲＮＡの単独かつ単回のワクチン接種は、ＲＳＶウイルスを用いた抗原投与後の肺におけるウイルス力価の低下に非常に有効であることが、見出されている。
【００６１】
まとめると、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードしているコード領域を含んでいる、本発明のｍＲＮＡは、特に乳児、老人および免疫障害のある患者にとって、有効かつ安全なワクチンを提供し得る。
【００６２】
これに関連して、本発明のｍＲＮＡ配列は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼ（large polymerase）Ｌ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１もしくは非構造タンパク質ＮＳ２、またはその断片、バリアントもしくは誘導体に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているコード領域を含んでいることが、特に好ましい。
【００６３】
本発明の第１の局面に係る本発明のｍＲＮＡのコード領域は、モノ、バイまたはマルチ−シストロン性のｍＲＮＡ（すなわち１、２またはそれ以上のタンパク質またはペプチドのコード領域を保有しているｍＲＮＡ）として存在する。モノ、バイまたはマルチ−シストロン性のｍＲＮＡにおいて、そのようなコード領域は、例えば本明細書に記載されているような、少なくとも１つの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、またはいくつかのタンパク質もしくはペプチドを含んでいる結果として生じるポリペプチドを誘導するシグナルペプチドによって分離され得る。
【００６４】
本発明の第１の局面によれば、本発明のｍＲＮＡは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメーラゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１もしくは非構造タンパク質ＮＳ２、またはその断片、バリアントもしくは誘導体に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているコード領域を含んでいる。本発明の第１の局面の特に好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、核タンパク質ＮもしくはＭ２−１タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているコード領域を含んでいる。
【００６５】
これに関連して、少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質のアミノ酸配列は、任意のＲＳＶ単離物の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短いタンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１もしくは非構造タンパク質ＮＳ２に由来する任意のペプチドまたはタンパク質から、または合成的に改変されたＲＳＶペプチドもしくはＲＳＶタンパク質から、またはその断片、バリアントもしくは誘導体から選択され得る。
【００６６】
特定の実施形態において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１または非構造タンパク質ＮＳ２の全長タンパク質は、本発明のｍＲＮＡに含まれているコード領域によってコードされている。
【００６７】
これに関連して、融合タンパク質Ｆおよび核タンパク質Ｎからの全長タンパク質が特に好ましい。さらに、細胞質尾部の欠失を有しているＦタンパク質の変異体が特に好ましい。そのような変異体の例は、Oomens et al. 2006. J. Virol. 80(21):10465-77に係るＲＳＶ−Ｆｄｅｌ  ５５４−５７４  ｌｏｎｇタンパク質である。
【００６８】
特に好ましいさらなる実施形態において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１または非構造タンパク質ＮＳ２の少なくとも１つのエピトープを含んでいる断片は、本発明のｍＲＮＡに含まれているコード領域によってコードされている。
【００６９】
特に好ましいのは、ＮＣＢＩアクセション番号AY911262にしたがう、ＲＳＶ株  ｌｏｎｇ（ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６）のアミノ酸配列である。
【００７０】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの融合タンパク質Ｆ：
配列番号１にしたがうアミノ酸配列：
MELPILKANA ITTILAAVTF CFASSQNITE EFYQSTCSAV SKGYLSALRT GWYTSVITIE LSNIKENKCN GTDAKVKLIN QELDKYKNAV TELQLLMQST TAANNRARRE LPRFMNYTLN NTKKTNVTLS KKRKRRFLGF LLGVGSAIAS GIAVSKVLHL EGEVNKIKSA LLSTNKAVVS LSNGVSVLTS KVLDLKNYID KQLLPIVNKQ SCRISNIETV IEFQQKNNRL LEITREFSVN AGVTTPVSTY MLTNSELLSL INDMPITNDQ KKLMSNNVQI VRQQSYSIMS IIKEEVLAYV VQLPLYGVID TPCWKLHTSP LCTTNTKEGS NICLTRTDRG WYCDNAGSVS FFPQAETCKV QSNRVFCDTM NSLTLPSEVN LCNVDIFNPK YDCKIMTSKT DVSSSVITSL GAIVSCYGKT KCTASNKNRG IIKTFSNGCD YVSNKGVDTV SVGNTLYYVN KQEGKSLYVK GEPIINFYDP LVFPSDEFDA SISQVNEKIN QSLAFIRKSDELLHHVNAGK STTNIMITTI IIVIIVILLS LIAVGLLLYC KARSTPVTLS KDQLSGINNI AFSN。
【００７１】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの糖タンパク質Ｇ：
配列番号２にしたがうアミノ酸配列：
MSKNKDQRTA KTLEKTWDTL NHLLFISSGL YKLNLKSIAQ ITLSILAMII STSLIITAII FIASANHKVT LTTAIIQDAT SQIKNTTPTY LTQDPQLGIS FSNLSEITSQ TTTILASTTP GVKSNLQPTT VKTKNTTTTQ TQPSKPTTKQ RQNKPPNKPN NDFHFEVFNF VPCSICSNNP TCWAICKRIP NKKPGKKTTT KPTKKPTFKT TKKDLKPQTT KPKEVPTTKP TEEPTINTTK TNITTTLLTN NTTGNPKLTS QMETFHSTSS EGNLSPSQVS TTSEHPSQPS SPPNTTRQ。
【００７２】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの短い疎水性タンパク質ＨＳ：
配列番号３にしたがうアミノ酸配列：
MENTSITIEF SSKFWPYFTL IHMITTIISL LIIISIMTAI LNKLCEYNVF HNKTFELPRA RVNT。
【００７３】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのマトリクスタンパク質Ｍ：
配列番号４にしたがうアミノ酸配列：
METYVNKLHE GSTYTAAVQY NVLEKDDDPA SLTIWVPMFQ SSMPADLLIK ELANVNILVK QISTPKGPSL RVMINSRSAL LAQMPSKFTI CANVSLDERS KLAYDVTTPC EIKACSLTCL KSKNMLTTVK DLTMKTLNPT HDIIALCEFE NIVTSKKVII PTYLRSISVR NKDLNTLENI TTTEFKNAIT NAKIIPYSGL LLVITVTDNK GAFKYIKPQS QFIVDLGAYL EKESIYYVTT NWKHTATRFA IKPMED。
【００７４】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの核タンパク質Ｎ：
配列番号５にしたがうアミノ酸配列：
MALSKVKLND TLNKDQLLSS SKYTIQRSTG DSIDTPNYDV QKHINKLCGM LLITEDANHK FTGLIGMLYA MSRLGREDTI KILRDAGYHV KANGVDVTTH RQDINGKEMK FEVLTLASLT TEIQINIEIE SRKSYKKMLK EMGEVAPEYR HDSPDCGMII LCIAALVITK LAAGDRSGLT AVIRRANNVL KNEMKRYKGL LPKDIANSFY EVFEKHPHFI DVFVHFGIAQ SSTRGGSRVE GIFAGLFMNA YGAGQVMLRW GVLAKSVKNI MLGHASVQAE MEQVVEVYEY AQKLGGEAGF YHILNNPKAS LLSLTQFPHF SSVVLGNAAG LGIMGEYRGT PRNQDLYDAA KAYAEQLKEN
GVINYSVLDL TAEELEAIKH QLNPKDNDVE L。
【００７５】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのラージポリメラーゼＬ：
配列番号６にしたがうアミノ酸配列：
MDPIINGNSA NVYLTDSYLK GVISFSECNA LGSYIFNGPY LKNDYTNLIS RQNPLIEHMN LKKLNITQSL ISKYHKGEIK LEEPTYFQSL LMTYKSMTSL EQIATTNLLK KIIRRAIEIS DVKVYAILNK LGLKEKDKIK SNNGQDEDNS VITTIIKDDI LSAVKDNQSH LKADKNHSTK QKDTIKTTLL KKLMCSMQHP PSWLIHWFNL YTKLNNILTQ YRSNEVKNHG FILIDNQTLS GFQFILNQYG CIVYHKELKR ITVTTYNQFL TWKDISLSRL NVCLITWISN CLNTLNKSLG LRCGFNNVIL TQLFLYGDCI LKLFHNEGFY IIKEVEGFIM SLILNITEED QFRKRFYNSM LNNITDAANK AQKNLLSRVC HTLLDKTVSD NIINGRWIIL LSKFLKLIKL AGDNNLNNLS ELYFLFRIFG HPMVDERQAM DAVKVNCNET KFYLLSSLSM LRGAFIYRII KGFVNNYNRW PTLRNAIVLP LRWLTYYKLN TYPSLLELTERDLIVLSGLR FYREFRLPKK VDLEMIINDK AISPPKNLIW TSFPRNYMPS HIQNYIEHEK LKFSESDKSR RVLEYYLRDN KFNECDLYNC VVNQSYLNNP NHVVSLTGKE RELSVGRMFA MQPGMFRQVQ ILAEKMIAEN ILQFFPESLT RYGDLELQKI LELKAGISNK SNRYNDNYNN YISKCSIITD LSKFNQAFRY ETSCICSDVL DELHGVQSLF SWLHLTIPHV TIICTYRHAP PYIRDHIVDL NNVDEQSGLY RYHMGGIEGW CQKLWTIEAI SLLDLISLKG KFSITALING DNQSIDISKP VRLMEGQTHA QADYLLALNS LKLLYKEYAG IGHKLKGTET YISRDMQFMS KTIQHNGVYY PASIKKVLRV GPWINTILDD FKVSLESIGS LTQELEYRGE SLLCSLIFRN VWLYNQIALQ LKNHAL
CNNK LYLDILKVLK HLKTFFNLDN IDTALTLYMN LPMLFGGGDP NLLYRSFYRR TPDFLTEAIV HSVFILSYYT NHDLKDKLQD LSDDRLNKFL TCIITFDKNP NAEFVTLMRD PQALGSERQA KITSEINRLA VTEVLSTAPN KIFSKSAQHY TTTEIDLNDI MQNIEPTYPH GLRVVYESLP FYKAEKIVNL ISGTKSITNI LEKTSAIDLT DIDRATEMMR KNITLLIRIL PLDCNRDKRE ILSMENLSIT ELSKYVRERS WSLSNIVGVT SPSIMYTMDI KYTTSTIASG IIIEKYNVNS LTRGERGPTK PWVGSSTQEK KTMPVYNRQV LTKKQRDQID LLAKLDWVYA SIDNKDEFMEELSIGTLGLT YEKAKKLFPQ YLSVNYLHRL TVSSRPCEFP ASIPAYRTTN YHFDTSPINR ILTEKYGDED IDIVFQNCIS FGLSLMSVVE QFTNVCPNRI ILIPKLNEIH LMKPPIFTGD VDIHKLKQVI QKQHMFLPDK ISLTQYVELF LSNKTLKSGS HVNSNLILAH KISDYFHNTY ILSTNLAGHW ILIIQLMKDS KGIFEKDWGE GYITDHMFIN LKVFFNAYKT YLLCFHKGYG KAKLECDMNT SDLLCVLELI DSSYWKSMSK VFLEQKVIKY ILSQDASLHR VKGCHSFKLW FLKRLNVAEF TVCPWVVNID YHPTHMKAIL TYIDLVRMGL INIDRIHIKN KHKFNDEFYT SNLFYINYNF SDNTHLLTKH IRIANSELEN NYNKLYHPTP ETLENILANP IKSNDKKTLN DYCIGKNVDS IMLPLLSNKK LVKSSAMIRT NYSKQDLYNL FPTVVIDRII DHSGNTAKSN QLYTTTSHQI SLVHNSTSLY CMLPWHHINR FNFVFSSTGC KISIEYILKD LKIKDPNCIA FIGEGAGNLL LRTVVELHPD IRYIYRSLKD CNDHSLPIEF LRLYNGHINI DYGENLTIPA TDATNNIHWS YLHIKFAEPI SLFVCDAELP VTVNWSKIII EWSKHVRKCK YCSSVNKCTL IVKYHAQDDI DFKLDNITIL KTYVCLGSKL KGSEVYLVLT IGPANIFPVF NVVQNAKLIL SRTKNFIMPK KADKESIDAN IKSLIPFLCY PITKKGINTA LSKLKSVVSG DILSYSIAGR NEVFSNKLIN HKHMNILKWFNHVLNFRSTE LNYNHLYMVE STYPYLSELL NSLTTNELKK LIKITGSLLY NFHNE。
【００７６】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのＭ２−１タンパク質：
配列番号７にしたがうアミノ酸配列：
MSRRNPCKFE IRGHCLNGKR CHFSHNYFEW PPHALLVRQN FMLNRILKSM DKSIDTLSEI SGAAELDRTE EYALGVVGVL ESYIGSINNI TKQSACVAMS KLLTELNSDD IKKLRDNEEL NSPKIRVYNT VISYIESNRK NNKQTIHLLK RLPADVLKKT IKNTLDIHKS ITINNPKELT VSDTNDHAKN NDTT。
【００７７】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのＭ２−２タンパク質：
配列番号８にしたがうアミノ酸配列：
MTMPKIMILP DKYPCSITSI LITSRCRVTM YNRKNTLYFN QNNPNNHMYS PNQTFNEIHW TSQDLIDTIQ NFLQHLGVIE DIYTIYILVS。
【００７８】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのリン酸タンパク質Ｐ：
配列番号９にしたがうアミノ酸配列：
MEKFAPEFHG EDANNRATKF LESIKGKFTS PKDPKKKDSI ISVNSIDIEV TKESPITSNS TIINPTNETD DNAGNKPNYQ RKPLVSFKED PIPSDNPFSK LYKETIETFD NNEEESSYSY EEINDQTNDN ITARLDRIDE KLSEILGMLH TLVVASAGPT SARDGIRDAM VGLREEMIEK IRTEALMTND RLEAMARLRN EESEKMAKDT SDEVSLNPTS EKLNNLLEGN DSDNDLSLED F。
【００７９】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの非構造タンパク質ＮＳ−１：
配列番号１０にしたがうアミノ酸配列：
MGSNSLSMIK VRLQNLFDND EVALLKITCY TDKLIHLTNA LAKAVIHTIK LNGIVFVHVI TSSDICPNNN IVVKSNFTTM PVLQNGGYIW EMMELTHCSQ PNGLIDDNCE IKFSKKLSDS TMTNYMNQLS ELLGFDLNP。
【００８０】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの非構造タンパク質ＮＳ−２：
配列番号１１にしたがうアミノ酸配列：
MDTTHNDTTP QRLMITDMRP LSLETTITSL TRDIITHRFI YLINHECIVR KLDERQATFT FLVNYEMKLL HKVGSTKYKK YTEYNTKYGT FPMPIFINHD GFLECIGIKP TKHTPIIYKY DLNP。
【００８１】
本発明に関連して、本明細書に開示されている配列番号１〜１１にしたがうアミノ酸配列に加えて、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の異なる単離物のアミノ酸配列はまた、本発明にしたがって使用され得、本明細書に組み込まれる。呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）のこれらの単離物は、配列番号１〜１１にしたがうアミノ酸配列と、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０５、最も好ましくは少なくとも９０％の同一性を好ましく示す。
【００８２】
さらにこれに関連して、融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１、もしくは非構造タンパク質ＮＳ２、またはその断片、バリアントもしくは誘導体に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているコード領域は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の任意の単離物、またはその断片もしくはバリアントに由来するコード領域を含んでいる核酸配列から選択され得る。
【００８３】
特に好ましいのは、ＮＣＢＩアクセション番号AY911262にしたがう、ＲＳＶ株  ｌｏｎｇ（ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６）のコード領域の野生型ｍＲＮＡ配列である。
【００８４】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの融合タンパク質ＦをコードしているｍＲＮＡ：
配列番１２にしたがうｍＲＮＡ配列：
auggaguugccaauccucaaagcaaaugcaauuaccacaauccucgcugcagucacauuuugcuuugcuucuagucaaaacaucacugaagaauuuuaucaaucaacaugcagugcaguuagcaaaggcuaucuuagugcucuaagaacugguugguauacuaguguuauaacuauagaauuaaguaauaucaaggaaaauaaguguaauggaacagaugcuaagguaaaauugauaaaccaagaauuagauaaauauaaaaaugcuguaacagaauugcaguugcucaugcaaagcacaacagcagcaaacaaucgagccagaagagaacuaccaagguuuaugaauuauacacucaacaauaccaaaaaaaccaauguaacauuaagcaagaaaaggaaaagaagauuucuugguuuuuuguuagguguuggaucugcaaucgccaguggcauugcuguaucuaagguccugcacuuagaaggagaagugaacaagaucaaaagugcucuacuauccacaaacaaggccguagucagcuuaucaaauggaguuagugucuuaaccagcaaaguguuagaccucaaaaacuauauagauaaacaauuguuaccuauugugaauaagcaaagcugcagaauaucaaauauagaaacugugauagaguuccaacaaaagaacaacagacuacuagagauuaccagggaauuuaguguuaaugcagguguaacuacaccuguaagcacuuacauguuaacuaauagugaauuauugucauuaaucaaugauaugccuauaacaaaugaucagaaaaaguuaauguccaacaauguucaaauaguuagacagcaaaguuacucuaucauguccauaauaaaagaggaagucuuagcauauguaguacaauuaccacuauauggugugauagauacaccuuguuggaaauuacacacauccccucuauguacaaccaacacaaaagaagggucaaacaucuguuuaacaagaacugacagaggaugguacugugacaaugcaggaucaguaucuuucuucccacaagcugaaacauguaaaguucaaucgaaucgaguauuuugugacacaaugaacaguuuaacauuaccaagugaaguaaaucucugcaauguugacauauucaaucccaaauaugauuguaaaauuaugacuucaaaaacagauguaagcagcuccguuaucacaucucuaggagccauugugucaugcuauggcaaaacuaaauguacagcauccaauaaaaaucguggaaucauaaagacauuuucuaacgggugugauuauguaucaaauaaagggguggacacugugucuguagguaacacauuauauuauguaaauaagcaagaaggcaaaagucucuauguaaaaggugaaccaauaauaaauuucuaugacccauuaguauuccccucugaugaauuugaugcaucaauaucucaagucaaugagaagauuaaccagaguuuagcauuuauucguaaauccgaugaauuauuacaucauguaaaugcugguaaaucaaccacaaauaucaugauaacuacuauaauuauagugauuauaguaauauuguuaucauuaauugcuguuggacugcuccuauacuguaaggccagaagcacaccagucacacuaagcaaggaucaacugagugguauaaauaauauugcauuuaguaacuga。
【００８５】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの糖タンパク質ＧをコードしているｍＲＮＡ：
配列番号１３にしたがうｍＲＮＡ配列：
auguccaaaaacaaggaccaacgcaccgcuaagacacuagaaaagaccugggacacucucaaucauuuauuauucauaucaucgggcuuauauaaguuaaaucuuaaaucuauagcacaaaucacauuauccauucuggcaaugauaaucucaacuucacuuauaauuacagccaucauauucauagccucggcaaaccacaaagucacacuaacaacugcaaucauacaagaugcaacaagccagaucaagaacacaaccccaacauaccucacucaggauccucagcuuggaaucagcuucuccaaucugucugaaauuacaucacaaaccaccaccauacuagcuucaacaacaccaggagucaagucaaaccugcaacccacaacagucaagacuaaaaacacaacaacaacccaaacacaacccagcaagcccacuacaaaacaacgccaaaacaaaccaccaaacaaacccaauaaugauuuucacuucgaaguguuuaacuuuguacccugcagcauaugcagcaacaauccaaccugcugggcuaucugcaaaagaauaccaaacaaaaaaccaggaaagaaaaccaccaccaagccuacaaaaaaaccaaccuucaagacaaccaaaaaagaucucaaaccucaaaccacuaaaccaaaggaaguacccaccaccaagcccacagaagagccaaccaucaacaccaccaaaacaaacaucacaacuacacugcucaccaacaacaccacaggaaauccaaaacucacaagucaaauggaaaccuuccacucaaccuccuccgaaggcaaucuaagcccuucucaagucuccacaacauccgagcacccaucacaacccucaucuccacccaacacaacacgccaguag。
【００８６】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの短い疎水性タンパク質をコードしているｍＲＮＡ：
配列番号１４にしたがうｍＲＮＡ配列：
auggaaaauacauccauaacaauagaauucucaagcaaauucuggccuuacuuuacacuaauacacaugaucacaacaauaaucucuuugcuaaucauaaucuccaucaugacugcaauacuaaacaaacuuugugaauauaacguauuccauaacaaaaccuuugaguuaccaagagcucgagucaacacauag。
【００８７】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのマトリクスタンパク質ＭをコードしているｍＲＮＡ：
配列番号１５にしたがうｍＲＮＡ配列：
auggaaacauacgugaacaagcuucacgaaggcuccacauacacagcugcuguucaauacaauguccuagaaaaagacgaugacccugcaucacuuacaauaugggugcccauguuccaaucaucuaugccagcagauuuacuuauaaaagaacuagcuaaugucaacauacuagugaaacaaauauccacacccaagggaccuucacuaagagucaugauaaacucaagaagugcauugcuagcacaaaugcccagcaaauuuaccauaugugcuaauguguccuuggaugaaagaagcaaacuggcauaugauguaaccacacccugugaaaucaaggcauguagucuaacaugccuaaaaucaaaaaauauguuaacuacaguuaaagaucucacuaugaagacacucaaccccacacaugauauuauugcuuuaugugaauuugaaaacauaguaacaucaaaaaaagucauaauaccaacauaccuaagauccaucagugucagaaauaaagaucugaacacacuugaaaauauaacaaccacugaauucaaaaaugccaucacaaaugcaaaaaucaucccuuacucaggauuacuauuagucaucacagugacugacaacaaaggagcauucaaauacauaaagccgcaaagucaauucauaguagaucuuggagcuuaccuagaaaaagaaaguauauauuauguuaccacaaauuggaagcacacagcuacacgauuugcaaucaaacccauggaagauuaa。
【００８８】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの核タンパク質ＮをコードしているｍＲＮＡ：
配列番号１６にしたがうｍＲＮＡ配列：
auggcucuuagcaaagucaaguugaaugauacacucaacaaagaucaacuucugucaucuagcaaauacaccauccaacggagcacaggagauaguauugauacuccuaauuaugaugugcagaaacacaucaauaaguuauguggcauguuauuaaucacagaagaugcuaaucauaaauucacuggguuaauagguauguuauaugcuaugucuagguuaggaagagaagacaccauaaaaauacucagagaugcgggauaucauguaaaagcaaauggaguagauguaacaacacaucgucaagacaucaaugggaaagaaaugaaauuugaaguguuaacauuggcaagcuuaacaacugaaauucaaaucaacauugagauagaaucuagaaaauccuacaaaaaaaugcuaaaagaaaugggagagguagcuccagaauacaggcaugauucuccugauugugggaugauaauauuauguauagcagcauuaguaauaaccaaauuggcagcaggggauagaucuggucuuacagccgugauuaggagagcuaauaauguccuaaaaaaugaaaugaaacguuacaaaggcuuacuacccaaggauauagccaacagcuucuaugaaguguuugaaaaacauccccacuuuauagauguuuuuguucauuuugguauagcacaaucuuccaccagagguggcaguagaguugaagggauuuuugcaggauuguuuaugaaugccuauggugcagggcaaguaaugcuacgguggggagucuuagcaaaaucaguuaaaaauauuauguuaggacaugcuagugugcaagcagaaauggaacaaguuguugagguuuaugaauaugcccaaaaauuggguggagaagcaggauucuaccauauauugaacaacccaaaagcaucauuauuaucuuugacucaauuuccucacuuuuccaguguaguauuaggcaaugcugcuggccuaggcauaaugggagaguacagagguacaccgaggaaucaagaucuauaugaugcagcaaaggcauaugcugaacaacucaaagaaaauggugugauuaacuacaguguauuagacuugacagcagaagaacuagaggcuaucaaacaucagcuuaauccaaaagauaaugauguagagcuuuga。
【００８９】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのラージポリメラーゼＬをコードしているｍＲＮＡ：
配列番号１７にしたがうｍＲＮＡ配列：
auggaucccauuauuaauggaaauucugcuaauguuuaucuaaccgauaguuauuuaaaagguguuaucucuuucucagaguguaaugcuuuaggaaguuacauauucaaugguccuuaucucaaaaaugauuauaccaacuuaauuaguagacaaaauccauuaauagaacacaugaaucuaaagaaacuaaauauaacacaguccuuaauaucuaaguaucauaaaggugaaauaaaauuagaagagccuacuuauuuucagucauuacuuaugacauacaagaguaugaccucguuggaacagauugcuaccacuaauuuacuuaaaaagauaauaagaagagcuauagaaauaagugaugucaaagucuaugcuauauugaauaaacuagggcuuaaagaaaaggacaagauuaaauccaacaauggacaggaugaagacaacucaguuauuacgaccauaaucaaagaugauauacuuucagcuguuaaggauaaucaaucucaucuuaaagcagacaaaaaucacucuacaaaacaaaaagacacaaucaaaacaacacucuugaagaaauuaauguguucaaugcagcauccuccaucaugguuaauacauugguuuaauuuauacacaaaauuaaacaacauauuaacacaguaucgaucaaaugagguuaaaaaccauggguuuauauugauagauaaucaaacucuuaguggauuucaauuuauuuugaaucaauaugguuguauaguuuaucauaaggaacucaaaagaauuacugugacaaccuauaaucaauucuugacauggaaagauauuagccuuaguagauuaaauguuuguuuaauuacauggauuaguaacugcuugaacacauuaaauaaaagcuuaggcuuaagaugcggauucaauaauguuaucuugacacaacuauuccuuuauggugauuguauacuaaagcuauuucacaaugagggguucuacauaauaaaagagguagagggauuuauuaugucucuaauuuuaaauauaacagaagaagaucaauucagaaaacgauuuuauaauaguaugcucaacaacaucacagaugcugcuaauaaagcucagaaaaaucugcuaucaagaguaugucauacauuauuagauaagacaguauccgauaauauaauaaauggcagauggauaauucuauuaaguaaguuccuuaaauuaauuaagcuugcaggugacaauaaccuuaacaaucugagugaacuauauuuuuuguucagaauauuuggacacccaaugguagaugaaagacaagccauggaugcuguuaaaguuaauugcaaugagaccaaauuuuacuuguuaagcaguuugaguauguuaagaggugccuuuauauauagaauuauaaaaggguuuguaaauaauuacaacagauggccuacuuuaagaaaugcuauuguuuuacccuuaagaugguuaacuuacuauaaacuaaacacuuauccuucuuuguuggaacuuacagaaagagauuugauuguguuaucaggacuacguuucuaucgugaguuucgguugccuaaaaaaguggaucuugaaaugauuauaaaugauaaagcuauaucacccccuaaaaauuugauauggacuaguuucccuagaaauuauaugccgucacacauacaaaacuauauagaacaugaaaaauuaaaauuuuccgagagugauaaaucaagaagaguauuagaguauuauuuaagagauaacaaauucaaugaaugugauuuauacaacuguguaguuaaucaaaguuaucucaacaacccuaaucaugugguaucauugacaggcaaagaaagagaacucaguguagguagaauguuugcaaugcaaccgggaauguucagacagguucaaauauuggcagagaaaaugauagcugaaaacauuuuacaauucuuuccugaaagucuuacaagauauggugaucuagaacuacaaaaaauauuagaauugaaagcaggaauaaguaacaaaucaaaucgcuacaaugauaauuacaacaauuacauuaguaagugcucuaucaucacagaucucagcaaauucaaucaagcauuucgauaugaaacgucauguauuuguagugaugugcuggaugaacugcaugguguacaaucucuauuuuccugguuacauuuaacuauuccucaugucacaauaauaugcacauauaggcaugcaccccccuauauaagagaucauauuguagaucuuaacaauguagaugaacaaaguggauuauauagauaucacaugggugguauugaaggguggugucaaaaacuauggaccauagaagcuauaucacuauuggaucuaauaucucucaaagggaaauucucaauuacugcuuuaauuaauggugacaaucaaucaauagauauaagcaaaccagucagacucauggaaggucaaacucaugcucaagcagauuauuugcuagcauuaaauagccuuaaauuacuguauaaagaguaugcaggcauaggucacaaauuaaaaggaacugagacuuauauaucacgagauaugcaauuuaugaguaaaacaauucaacauaacgguguauauuacccugcuaguauaaagaaaguccuaagagugggaccguggauaaacacuauacuugaugauuucaaagugagucuagaaucuauagguaguuugacacaagaauuagaauauagaggugaaagucuauuaugcaguuuaauauuuagaaauguaugguuauauaaucaaauugcucuacaauuaaaaaaucaugcguuauguaacaauaaauuauauuuggacauauuaaagguucugaaacacuuaaaaaccuuuuuuaaucuugauaauauugauacagcauuaacauuguauaugaauuuacccauguuauuuggugguggugaucccaacuuguuauaucgaaguuucuauagaagaacuccugauuuccucacagaggcuauaguucacucuguguucauacuuaguuauuauacaaaccaugacuuaaaagauaaacuucaagauuugucagaugauagauugaauaaguucuuaacaugcauaaucacguuugacaaaaacccuaaugcugaauucguaacauugaugagagauccucaagcuuuagggucugagagacaagcuaaaauuacuagugaaaucaauagacuggcaguuacagagguuuugaguacagcuccaaacaaaauauucuccaaaagugcacaacauuauaccacuacagagauagaucuaaaugauauuaugcaaaauauagaaccuacauauccucacgggcuaagaguuguuuaugaaaguuuacccuuuuauaaagcagagaaaauaguaaaucuuauaucagguacaaaaucuauaacuaacauacuggaaaagacuucugccauagacuuaacagauauugauagagccacugagaugaugaggaaaaacauaacuuugcuuauaaggauacuuccauuggauuguaacagagauaaaagagaaauauugaguauggaaaaccuaaguauuacugaauuaagcaaauauguuagggaaagaucuuggucuuuauccaauauaguugguguuacaucacccaguaucauguauacaauggacaucaaauauacaacaagcacuauagcuaguggcauaauuauagagaaauauaauguuaacaguuuaacacguggugagagaggaccaacuaaaccauggguugguucaucuacacaagagaaaaaaacaaugccaguuuauaauagacaaguuuuaaccaaaaaacaaagagaucaaauagaucuauuagcaaaauuggauuggguguaugcaucuauagauaacaaggaugaauucauggaagaacucagcauaggaacccuuggguuaacauaugaaaaggccaaaaaauuauuuccacaauauuuaagugucaacuauuugcaucgccuuacagucaguaguagaccaugugaauucccugcaucaauaccagcuuauagaacaacaaauuaucacuuugacacuagcccuauuaaucgcauauuaacagaaaaguauggugaugaagauauugacauaguauuccaaaacuguauaagcuuuggccuuagcuuaaugucaguaguagaacaauuuacuaauguauguccuaacagaauuauucucauaccuaagcuuaaugagauacauuugaugaaaccucccauauucacaggugauguugauauucacaaguuaaaacaagugauacaaaaacagcauauguuuuuaccagacaaaauaaguuugacucaauauguggaauuauucuuaaguaacaaaacacucaaaucuggaucucauguuaauucuaauuuaauauuggcacauaaaauaucugacuauuuucauaauacuuacauuuuaaguacuaauuuagcuggacauuggauucuaauuauacaacuuaugaaagauucuaaagguauuuuugaaaaagauuggggagagggauauauaacugaucauauguuuauuaauuugaaaguuuucuucaaugcuuauaagaccuaucucuuguguuuucauaaagguuauggcaaagcaaaacuggagugugauaugaacacuucagaucuucuauguguauuggaauuaauagacaguaguuauuggaagucuaugucuaagguauuuuuagaacaaaaaguuaucaaauacauucuuagccaagaugcaaguuuacauagaguaaaaggaugucauagcuucaaauuaugguuucuuaaacgucuuaauguagcagaauuuacaguuugcccuuggguuguuaacauagauuaucauccaacacauaugaaagcaauauuaacuuauauagaucuuguuagaaugggauugauaaauauagauagaauacacauuaaaaauaaacacaaauucaaugaugaauuuuauacuucuaaucucuuuuacauuaauuauaacuucucagauaauacucaucuauuaacuaaacauauaaggauugcuaauucagaauuagaaaauaauuacaacaaauuauaucauccuacaccagaaacccuagagaauauacuagccaauccgauuaaaaguaaugacaaaaagacacugaacgacuauuguauagguaaaaauguugacucaauaauguuaccauuguuaucuaauaagaagcuuguuaaaucgucugcaaugauuagaaccaauuacagcaaacaagaccuguacaaucuauucccuacgguugugaucgauagaauuauagaucauucagguaauacagccaaauccaaccaacuuuacacuacuacuucccaucaaauaucuuuagugcacaauagcacaucacuuuauugcaugcuuccuuggcaucauauuaauagauucaauuuuguauuuaguucuacagguuguaaaauuaguauagaguauauuuuaaaagaccuuaaaauuaaagauccuaauuguauagcauucauaggugaaggagcagggaauuuauuauugcguacagugguggaacuucauccugacauaagauauauuuacagaagucugaaagauugcaaugaucauaguuuaccuauugaguuuuuaaggcuauacaauggacauaucaacauugauuauggugaaaauuugaccauuccugcuacagaugcaaccaacaacauucauuggucuuauuuacauauaaaguuugcugaaccuaucagucuuuuuguaugugaugccgaauugccuguaacagucaacuggaguaaaauuauaauagaauggagcaagcauguaagaaaaugcaaguacuguuccucaguuaauaaauguacguuaauaguaaaauaucaugcucaagaugauauugauuucaaauuagacaauauaacuauauuaaaaacuuauguaugcuuaggcaguaaguuaaagggaucggagguuuacuuaguccuuacaauagguccugcaaauauauuuccaguauuuaauguaguacaaaaugcuaaauugauacuaucaagaaccaaaaauuucaucaugccuaagaaagcugauaaagagucuauugaugcaaauauuaaaaguuugauacccuuucuuuguuacccuauaacaaaaaaaggaauuaauacugcauugucaaaacuaaagaguguuguuaguggagauauacuaucauauucuauagcuggacggaaugaaguuuucagcaauaaacuuauaaaucauaagcauaugaacaucuuaaagugguucaaucauguuuuaaauuucagaucaacagaacuaaacuauaaccauuuauauaugguagaaucuacauauccuuaccuaagugaauuguuaaacagcuugacaacuaaugaacuuaaaaaacugauuaaaaucacagguagucuguuauacaacuuucauaaugaauaa。
【００９０】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのタンパク質Ｍ２−１をコードしているｍＲＮＡ：
配列番号１８にしたがうｍＲＮＡ配列：
Augucacgaaggaauccuugcaaauuugaaauucgaggucauugcuugaaugguaagagaugucauuuuagucauaauuauuuugaauggccaccccaugcacugcucguaagacaaaacuuuauguuaaacagaauacuuaagucuauggauaaaaguauagauaccuuaucagaaauaaguggagcugcagaguuggacagaacagaagaguaugcucuugguguaguuggagugcuagagaguuauauaggaucaauaaauaauauaacuaaacaaucagcauguguugccaugagcaaacuccucacugaacucaauagugaugauaucaaaaaacugagagacaaugaagagcuaaauucacccaagauaagaguguacaauacugucauaucauauauugaaagcaacaggaaaaacaauaaacaaacuauccaucuguuaaaaagauugccagcagacguauugaagaaaaccaucaaaaacacauuggauauccacaagagcauaaccaucaacaacccaaaagaauuaacuguuagugauacaaaugaccaugccaaaaauaaugauacuaccuga。
【００９１】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのタンパク質Ｍ２−２をコードしているｍＲＮＡ：
配列番号１９にしたがうｍＲＮＡ配列：
augaccaugccaaaaauaaugauacuaccugacaaauauccuuguaguauaacuuccauacuaauaacaaguagauguagagucacuauguauaaucgaaagaacacacuauauuucaaucaaaacaacccaaauaaccauauguacucaccgaaucaaacauucaaugaaauccauuggaccucacaagacuugauugacacaauucaaaauuuucuacagcaucuagguguuauugaggauauauauacaauauauauauuagugucauaa。
【００９２】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇのリン酸タンパク質ＰをコードしているｍＲＮＡ：
配列番号２０にしたがうｍＲＮＡ配列：
auggaaaaguuugcuccugaauuccauggagaagaugcaaacaacagggcuacuaaauuccuagaaucaauaaagggcaaauucacaucaccuaaagaucccaagaaaaaagauaguaucauaucugucaacucaauagauauagaaguaaccaaagaaagcccuauaacaucaaauucaaccauuauuaacccaacaaaugagacagaugauaaugcagggaacaagcccaauuaucaaagaaaaccucuaguaaguuucaaagaagacccuauaccaagugauaaucccuuuucaaaacuauacaaagaaaccauagagacauuugauaacaaugaagaagaaucuagcuauucauaugaagaaauaaaugaucagacgaacgauaauauaacugcaagauuagauaggauugaugaaaaauuaagugaaauacuaggaaugcuucacacauuaguaguagcaagugcaggaccuacaucugcuagggaugguauaagagaugccaugguugguuuaagagaagaaaugauagaaaaaaucagaacugaagcauuaaugaccaaugacagauuagaagcuauggcaagacucaggaaugaggaaagugaaaagauggcaaaagacacaucagaugaagugucucucaauccaacaucagagaaauugaacaaccuguuggaagggaaugauagugacaaugaucuaucacuugaagauuucuga。
【００９３】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの非構造タンパク質ＮＳ１をコードしているｍＲＮＡ：
配列番号２１にしたがうｍＲＮＡ配列：
augggcagcaauucguugaguaugauaaaaguuagauuacaaaauuuguuugacaaugaugaaguagcauuguuaaaaauaacaugcuauacugacaaauuaauacauuuaacuaaugcuuuggcuaaggcagugauacauacaaucaaauugaauggcauuguguuugugcauguuauuacaaguagugauauuugcccuaauaauaauauuguaguaaaauccaauuucacaacaaugccagugcuacaaaauggagguuauauaugggaaaugauggaauuaacacauugcucucaaccuaauggucuaauagaugacaauugugaaauuaaauucuccaaaaaacuaagugauucaacaaugaccaauuauaugaaucaauuaucugaauuacuuggauuugaucuuaauccauaa。
【００９４】
ＲＳＶ株ＡＴＣＣ  ＶＲ−２６  ｌｏｎｇの非構造タンパク質ＮＳ２をコードしているｍＲＮＡ：
配列番号２２にしたがうｍＲＮＡ配列：
auggacacaacccacaaugauaccacaccacaaagacugaugaucacagacaugagaccguugucacuugagacuacaauaacaucacuaaccagagacaucauaacacacagauuuauauacuuaauaaaucaugaaugcauagugagaaaacuugaugaaagacaggccacauuuacauuccuggucaacuaugaaaugaaacuauugcacaaaguaggaagcacuaaauauaaaaaauauacugaauacaacacaaaauauggcacuuucccuaugccgauauucaucaaucaugauggguucuuagaaugcauuggcauuaagccuacaaagcauacucccauaauauacaaguaugaucucaauccauag。
【００９５】
本発明に関連して、本明細書に開示されている核酸配列番号に加えて、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の異なる単離物の核酸配列はまた、本明細書に組み込まれる。呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の異なるこれらの単離物は、配列番号１２〜２２にしたがう核酸配列に対する好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、より好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、またはその断片の、同一性を好ましく有している。
【００９６】
好ましい実施形態において、本発明に係るｍＲＮＡ配列は、レポーター遺伝子またはマーカー遺伝子を含んでいない。好ましくは、本発明に係るｍＲＮＡ配列は、例えば、ルシフェラーゼ；緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）およびそのバリアント（例えば、ｅＧＦＰ、ＲＦＰまたはＢＦＰ）；αグロブリン；ヒポキサンチン−グアニンホスホシボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）；βガラクトシダーゼ；ガラクトキナーゼ；アルカリホスファターゼ；分泌型の胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）または耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシンおよびゼオシンに対する耐性遺伝子）を含んでいない。好ましい実施形態において、本発明に係るｍＲＮＡ配列は、ルシフェラーゼをコードしていない。他の実施形態において、本発明に係るｍＲＮＡ配列は、ＧＦＰまたはそのバリアントをコードしていない。
【００９７】
さらなる好ましい実施形態において、本発明に係るｍＲＮＡ配列は、オルソミクソウイルス科に属するウイルスに由来するタンパク質（またはタンパク質の断片）をコードしていない。好ましくは、上記ｍＲＮＡは、インフルエンザウイルス、好ましくはインフルエンザＡウイルスに由来するタンパク質をコードしていない。好ましくは、本発明に係るｍＲＮＡ配列は、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１、ＮＳ２（ＮＥＰ：核搬出タンパク質）、ＰＡ、ＰＢ１（polymerase basic 1）、ＰＢ１−Ｆ２およびＰＢ２からなる群から選択されるインフルエンザＡタンパク質をコードしていない。好ましい他の実施形態において、本発明に係るｍＲＮＡは、オブアルブミン（ＯＶＡ）またはその断片をコードしていない。好ましくは、本発明に係るｍＲＮＡは、インフルエンザＡタンパク質またはオブアルブミンをコードしていない。
【００９８】
さらなる実施形態によって、本発明のｍＲＮＡは、少なくとも１つの以下の構造エレメント：５’非翻訳領域エレメント（ＵＴＲエレメント）および／または３’ＵＴＲ、特にＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲまたはその断片、相同物もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる５’ＵＴＲエレメント、または安定なｍＲＮＡをもたらす遺伝子に由来する５’ＵＴＲエレメントおよび／または３’ＵＴＲエレメントまたはその相同物、断片もしくはバリアント；ヒストン−ステムループ構造、好ましくはその３’非翻訳領域におけるヒストン−ステムループ；５’キャップ構造；ポリＡテイル；またはポリ（Ｃ）配列を含んでいる。
【００９９】
本発明の第１の局面の好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡは、少なくとも５’または３’ＵＴＲエレメントを含んでいる。これに関連して、ＵＴＲエレメントは、天然に存在する任意の遺伝子、または遺伝子の５’もしくは３’ＵＴＲの断片、バリアントもしくは相同物に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。好ましくは、本発明にしたがって使用される５’または３’ＵＴＲは、本発明のｍＲＮＡ配列のコード領域に対して相同である。天然に存在する遺伝子に由来する５’または３’ＵＴＲエレメントが好ましい場合にさえ、合成的に改変されたＵＴＲエレメントが、本発明に関連して使用され得る。本発明の第１の局面の特に好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列は、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ、またはＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの断片、相同物もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる少なくとも５’非翻訳領域エレメント（５’ＵＴＲエレメント）を含んでいる。
【０１００】
本発明の第１の局面の特に好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡは、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ、またはＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの断片、相同物もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる少なくとも１つの５’非翻訳領域エレメント（５’ＵＴＲエレメント）を含んでいる。
【０１０１】
５’ＵＴＲは、以上に規定されているようなＴＯＰモチーフまたは５’ＴＯＰを含んでいないことが、特に好ましい。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する５’ＵＴＲエレメントの核酸配列は、由来する遺伝子またはｍＲＮＡの開始コドン（Ａ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０位上流に配置されているヌクレオチドを有しているその３’末端において終結している。したがって、５’ＵＴＲエレメントは、タンパク質コード領域の任意の部分を含んでいない。したがって、本発明のｍＲＮＡのタンパク質をコードしている領域のみが、コード領域によってもたらされていることが好ましい。
【０１０３】
ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列は、真核生物のＴＯＰ遺伝子、好ましくは植物または動物のＴＯＰ遺伝子、より好ましくは脊索動物のＴＯＰ遺伝子、より一層好ましくは脊椎動物のＴＯＰ遺伝子、最も好ましくは哺乳類のＴＯＰ遺伝子（例えばヒトのＴＯＰ遺伝子）に由来する。
【０１０４】
例えば、５’ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１６／１４３７００（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）の配列番号１４２１および配列番号１４２２、ならびに特許出願ＷＯ２０１６／１４３７００（その開示が参照によって本明細書に組み込まれる）の配列番号１４２１および配列番号１４２２の相同物、そのバリアントからなる群、または好ましくは対応するＲＮＡ配列から選択される核酸配列に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる５’ＵＴＲから好ましく選択される。「特許出願ＷＯ２０１６／１４３７００の配列番号１４２１および配列番号１４２２」という表現は、特許出願ＷＯ２０１６／１４３７００の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２にしたがう配列に対して相同な、ホモサピエンス以外の他の種の配列を指す。
【０１０５】
好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１６／１４３７００の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２、特許出願ＷＯ２０１６／１４３７００の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２の相同物、そのバリアント、または対応するＲＮＡ配列から選択される核酸配列の、５位のヌクレオチド位置（すなわち、配列における５位に配置されているヌクレオチド）から、開始コドン（例えば、配列の３’末端に配置されている）に対するすぐ５’位にあるヌクレオチド（例えば、ＡＴＧ配列に対するすぐ５’にあるヌクレオチド位置）まで伸びている核酸配列に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。５’ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１６／１４３７００の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２の相同物、そのバリアント、または対応するＲＮＡ配列の、５’ＴＯＰに対するすぐ３’にあるヌクレオチド位置から、開始コドン（配列の３’末端に配置されている）に対するすぐ５’にあるヌクレオチド位置（例えば、ＡＴＧ配列に対するすぐ５’にあるヌクレオチド位置）伸びている核酸配列に由来することが、特に好ましい。
【０１０６】
特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、リボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子、またはリボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。例えば、５’ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号６７、１７０、１９３、２４４、２５９、５５４、６５０、６７５、７００、７２１、９１３、１０１６、１０６３、１１２０、１１３８および１２８４〜１３６０のいずれかにしたがう核酸配列の５’ＵＴＲ、対応するＲＮＡ配列、または本明細書に記載されているようなその相同物もしくはバリアント（好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている）に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。上述されている通り、５位からＡＴＧ（配列の３’末端に配置されている）に対するすぐ５’にあるヌクレオチドまで伸びている配列は、上記配列の５’ＵＴＲに対応する。
【０１０７】
好ましくは、５’ＵＴＲエレメントは、リボソーム巨大タンパク質（ＲＬＰ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ、またはリボソーム巨大タンパク質（ＲＬＰ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの相同物もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。例えば、５’ＵＴＲエレメントは、特許出願２０１３／１４３７００の配列番号６７、２５９、１２８４〜１３１８、１３４４、１３４６、１３４８〜１３５４、１３５７、１３５８、１４２１および１４２２のいずれかにしたがう核酸配列の５’ＵＴＲ、対応するＲＮＡ配列、本明細書に記載されているようなその相同物、またはバリアント（好ましくは５’ＴＯＰを欠いている）に由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。
【０１０８】
特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくはヒトのリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子）の５’ＵＴＲ、またはリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくは哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、最も好ましくはヒトのリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子）の５’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。ここで、５’ＵＴＲエレメントは、上記遺伝子の５’ＴＯＰを含んでいないことが好ましい。
【０１０９】
したがって、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、配列番号２３にしたがう核酸配列（５’末端オリゴピリジントラクトを欠いているヒトのリボソームタンパク質ラージ３２の５’ＵＴＲ：GGCGCTGCCTACGGAGGTGGCAGCCATCTCCTTCTCGGCATC；特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３６８にしたがう）または好ましくは対応するＲＮＡに対する、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より一層好ましくは少なくとも約９５％、より一層好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有している核酸配列を含んでいるか、もしくは当該核酸配列からなるか、または少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントは、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より一層好ましくは少なくとも約９５％、より一層好ましくは少なくとも約９９％の、配列番号２３にしたがう核酸配列に対する同一性を有している核酸配列の、断片を含んでいるか、または当該断片からなる。ここで、好ましくは、当該断片は、本明細書に記載されている通りである（すなわち、全長５’ＵＴＲの少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、より一層好ましくは少なくとも６０％、より一層好ましくは少なくとも７０％、より一層好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％に相当するヌクレオチドの連続するストレッチである）。好ましくは、上記断片は、少なくとも約２０またはそれ以上のヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０またはそれ以上のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約４０またはそれ以上のヌクレオチドの長さを示す。好ましくは、上記断片は、本明細書に記載されているような機能的な断片である。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、本発明のｍＲＮＡは、脊椎動物のＴＯＰ遺伝子（例えば、哺乳類（例えばヒト）のＴＯＰ遺伝子）の５’ＵＴＲ、またはその相同物もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる５’ＵＴＲエレメントを含んでいる。当該脊椎動物のＴＯＰ遺伝子は、ＲＰＳＡ、ＲＰＳ２、ＲＰＳ３、ＲＰＳ３Ａ、ＲＰＳ４、ＲＰＳ５、ＲＰＳ６、ＲＰＳ７、ＲＰＳ８、ＲＰＳ９、ＲＰＳ１０、ＲＰＳ１１、ＲＰＳ１２、ＲＰＳ１３、ＲＰＳ１４、ＲＰＳ１５、ＲＰＳ１５Ａ、ＲＰＳ１６、ＲＰＳ１７、ＲＰＳ１８、ＲＰＳ１９、ＲＰＳ２０、ＲＰＳ２１、ＲＰＳ２３、ＲＰＳ２４、ＲＰＳ２５、ＲＰＳ２６、ＲＰＳ２７、ＲＰＳ２７Ａ、ＲＰＳ２８、ＲＰＳ２９、ＲＰＳ３０、ＲＰＬ３、ＲＰＬ４、ＲＰＬ５、ＲＰＬ６、ＲＰＬ７、ＲＰＬ７Ａ、ＲＰＬ８、ＲＰＬ９、ＲＰＬ１０、ＲＰＬ１０Ａ、ＲＰＬ１１、ＲＰＬ１２、ＲＰＬ１３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＰＬ１４、ＲＰＬ１５、ＲＰＬ１７、ＲＰＬ１８、ＲＰＬ１８Ａ、ＲＰＬ１９、ＲＰＬ２１、ＲＰＬ２２、ＲＰＬ２３、ＲＰＬ２３Ａ、ＲＰＬ２４、ＲＰＬ２６、ＲＰＬ２７、ＲＰＬ２７Ａ、ＲＰＬ２８、ＲＰＬ２９、ＲＰＬ３０、ＲＰＬ３１、ＲＰＬ３２、ＲＰＬ３４、ＲＰＬ３５、ＲＰＬ３５Ａ、ＲＰＬ３６、ＲＰＬ３６Ａ、ＲＰＬ３７、ＲＰＬ３７Ａ、ＲＰＬ３８、ＲＰＬ３９、ＲＰＬ４０、ＲＰＬ４１、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＲＰＬＰ３、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＥＦ１Ｇ、ＥＥＦ２、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｆ、ＥＩＦ３Ｈ、ＥＩＦ２Ｓ３、ＥＩＦ３Ｃ、ＥＩＦ３Ｋ、ＥＩＦ３ＥＩＰ、ＥＩＦ４Ａ２、ＰＡＢＰＣ１、ＨＮＲＮＰＡ１、ＴＰＴ１、ＴＵＢＢ１、ＵＢＡ５２、ＮＰＭ１、ＡＴＰ５Ｇ２、ＧＮＢ２Ｌ１、ＮＭＥ２、ＵＱＣＲＢから選択される。ここで、必要に応じて、５’ＵＴＲエレメントは、５’末端オリゴピリミジントラクトの１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０位下流に配置されているヌクレオチドをともなってその５’末端から始まっている。ここで、必要に応じてさらに、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する５’ＵＴＲエレメントは、それが由来する遺伝子の開始コドン（Ａ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０位上流に配置されているヌクレオチドとともにその３’末端において終結する。
【０１１１】
特に好ましいさらなる実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、プロトン輸送するＡＴＰ合成酵素  ミトコンドリアＦ１複合体αサブユニット  心筋（ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial F1 complex, alpha subunit 1, cardiac muscle）（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、アンドロゲン誘導１遺伝子、チトクロームｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）もしくはＮ−アシルスフィンゴシン  アミドヒドロラーゼ（酸セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、好ましくはまたは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、脊椎動物のプロトン輸送するＡＴＰ合成酵素  ミトコンドリアＦ１複合体αサブユニット  心筋（ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial F1 complex, alpha subunit 1, cardiac muscle）（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、脊椎動物のヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、脊椎動物のアンドロゲン誘導１遺伝子、脊椎動物のチトクロームｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）もしくは脊椎動物のＮ−アシルスフィンゴシン  アミドヒドロラーゼ（酸セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）そのバリアント、より好ましくは哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、哺乳類のリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、哺乳類のプロトン輸送するＡＴＰ合成酵素  ミトコンドリアＦ１複合体αサブユニット  心筋（ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial F1 complex, alpha subunit 1, cardiac muscle）（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、哺乳類のヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、哺乳類のアンドロゲン誘導１遺伝子、哺乳類のチトクロームｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）もしくは哺乳類のＮ−アシルスフィンゴシン  アミドヒドロラーゼ（酸セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、最も好ましくはヒトのリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、ヒトのリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、ヒトのリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、ヒトのプロトン輸送するＡＴＰ合成酵素  ミトコンドリアＦ１複合体αサブユニット  心筋（ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial F1 complex, alpha subunit 1, cardiac muscle）（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒトのヒドロキシステロイド（１７−ベータ）脱水素酵素４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、ヒトのアンドロゲン誘導１遺伝子、ヒトのチトクロームｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）もしくはヒトのＮ−アシルスフィンゴシン  アミドヒドロラーゼ（酸セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアントの５’ＵＴＲに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸からなる。ここで、好ましくは、５’ＵＴＲエレメントは、上記遺伝子の５’ＴＯＰを含んでいない。
【０１１２】
したがって、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より一層好ましくは少なくとも約９５％、より一層好ましくは少なくとも約９９％の、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３６８または配列番号１４１２〜１４２０にしたがう核酸配列もしくは対応するＲＮＡ配列に対する同一性を有している核酸配列を含んでいるか、もしくは当該核酸配列からなるか、または少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントは、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約より８０％、よりましくは少なくとも約９０％、より一層好ましくは少なくとも約９５％、より一層好ましくは少なくとも約９９％の、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３６８もしくは配列番号１４１２〜１４２０にしたがう核酸配列に対する同一性を有している核酸配列の、断片を含んでいるか、もしくは当該核酸配列からなる。ここで、上記断片は、上述されている通りである（すなわち、全長５’ＵＴＲの少なくとも約２０％などに相当するヌクレオチドの連続するストレッチである）。好ましくは、上記断片は、少なくとも約２０ヌクレオチドまたはそれ以上、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチドまたはそれ以上、より好ましくは少なくとも約４０ヌクレオチドまたはそれ以上の長さを示す。好ましくは、上記断片は、本明細書に記載されているような機能的な断片である。
【０１１３】
したがって、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より一層好ましくは少なくとも約９５％、より一層好ましくは少なくとも約９９％の、配列番号３６（５’末端オリゴピリジントラクト：GCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCG-GAGTAACTGCAAAGを欠いている、ＡＴＰ５Ａ１の５’ＵＴＲ；特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１４１４に対応する）にしたがう核酸配列もしくは対応するＲＮＡ配列に対する同一性を有している核酸配列を含んでいるか、もしくは当該核酸配列からなるか、または少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントは、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より一層好ましくは少なくとも約９５％、より一層好ましくは少なくとも約９９％の、配列番号２６にしたがう核酸配列もしくはより好ましくは対応するＲＮＡ配列に対する同一性を有している核酸配列を含んでいるか、もしくは当該核酸配列からなる。ここで、好ましくは、上記断片は、上述されている通りである（すなわち、全長５’ＵＴＲの少なくとも２０％などに相当するヌクレオチドの連続するストレッチである）。好ましくは、上記断片は、少なくとも約２０ヌクレオチドまたはそれ以上、より好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチドまたはそれ以上、より好ましくは少なくとも約４０ヌクレオチドまたはそれ以上の長さを示す。上記断片は、本明細書に記載されているような機能的な断片である。
【０１１４】
さらなる好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡは、脊索動物の遺伝子、好ましくは脊椎動物の遺伝子、より好ましくは哺乳類の遺伝子、最も好ましくはヒトの遺伝子の３’ＵＴＲ、または脊索動物の遺伝子、好ましくは脊椎動物の遺伝子、より好ましくは哺乳類の遺伝子、最も好ましくはヒトの遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントをさらに含んでいる。
【０１１５】
「３’ＵＴＲエレメント」という用語は、３’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる核酸配列を指す。本発明の意味において、３’ＵＴＲは、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲに相当し得る。したがって、本発明の意味において、３’ＵＴＲエレメントは、ｍＲＮＡ、好ましくは人工ｍＲＮＡの３’ＵＴＲであり得るか、または３’ＵＴＲエレメントは、ｍＲＮＡｂの３’ＵＴＲにとっての転写テンプレートであり得る。したがって、３’ＵＴＲエレメントは、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲ、好ましくは人工ｍＲＮＡ（例えば、遺伝工学的に生成されるベクターコンストラクトの転写によって得られるｍＲＮＡ）の３’ＵＴＲに対応する核酸配列である。好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、３’ＵＴＲの機能を実現するか、または３’ＵＴＲの機能を実現する配列をコードしている。
【０１１６】
好ましくは、本発明のｍＲＮＡ配列は、向上されている半減期を有している（安定したｍＲＮＡをもたらす）ｍＲＮＡに関連する遺伝子に由来し得る３’ＵＴＲエレメント（例えば、以下に規定されており、記載されているような３’ＵＴＲエレメント）を含んでいる。
【０１１７】
特に好ましい実施形態において、３’ＵＴＲは、アルブミン遺伝子、αグロビン遺伝子、βグロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、およびコラーゲンアルファ遺伝子（例えばコラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子）からなる群から選択される遺伝子に３’ＵＴＲ、または特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００（開示事項は参照によって本明細書に組み込まれる）の配列番号１３６９〜１３９０にしたがうアルブミン遺伝子、αグロビン遺伝子、βグロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、およびコラーゲンアルファ遺伝子（例えばコラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子）からなる群から選択される遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。特に好ましい実施形態において、３’ＵＴＲエレメントは、アルブミン遺伝子、好ましくは脊椎動物のアルブミン遺伝子、より好ましくは哺乳類のアルブミン遺伝子、最も好ましくは配列番号２４にしたがうヒトのアルブミンの３’ＵＴＲに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。ヒトのアルブミンの３’ＵＴＲ  配列番号２４：
CATCACATTT AAAAGCATCT CAGCCTACCA TGAGAATAAG AGAAAGAAAA TGAAGATCAA AAGCTTATTC ATCTGTTTTT CTTTTTCGTT GGTGTAAAGC CAACACCCTG TCTAAAAAAC ATAAATTTCT TTAATCATTT TGCCTCTTTT CTCTGTGCTT CAATTAATAA AAAATGGAAA GAATCT（特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３６９に対応する）。
【０１１８】
これに関連して、本発明のｍＲＮＡは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３６９〜１３９０にしたがう核酸に由来する対応するＲＮＡ配列、またはその断片、相同物もしくはバリアントを含んでいる３’ＵＴＲエレメントを含んでいることが好ましい。
【０１１９】
最も好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、配列番号２５：
アルブミン７の３’ＵＴＲ
CATCACATTTAAAAGCATCTCAGCCTACCATGAGAATAAGAGAAAGAAAATGAAGATCAATAGCTTATTCATCTCTTTTTCTTTTTCGTTGGTGTAAAGCCAACACCCTGTCTAAAAAACATAAATTTCTTTAATCATTTTGCCTCTTTTCTCTGTGCTTCAATTAATAAAAAATGGAAAGAACCT（特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３７６に対応する配列番号２５）
にしたがうヒトのアルブミンの断片に由来する核酸配列を含んでいる。
【０１２０】
これに関連して、本発明のｍＲＮＡの３’ＵＴＲエレメントは、配列番号２５にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡを含んでいるか、または当該ＲＮＡからなることが特に好ましい。
【０１２１】
特に好ましい他の実施形態において、３’ＵＴＲエレメントは、αグロビン、好ましくは脊椎動物のαもしくはβグロビン、より好ましくは哺乳類のαもしくはβグロビン、最も好ましくは配列番号２６〜２８：
ホモサピエンス  ヘモグロビン，α１（ＨＢＡ１）の３’ＵＴＲ
GCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC（特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３７０に対応する、配列番号２６）
ホモサピエンス  ヘモグロビン，α２（ＨＢＡ２）の３’ＵＴＲ
GCTGGAGCCTCGGTAGCCGTTCCTCCTGCCCGCTGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCGGCCCTTCCTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCAG（特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３７１に対応する、配列番号２７）
ホモサピエンス  ヘモグロビン，β（ＨＨＢ）の３’ＵＴＲ
GCTCGCTTTCTTGCTGTCCAATTTCTATTAAAGGTTCCTTTGTTCCCTAAGTCCAACTACTAAACTGGGGGATATTATGAAGGGCCTTGAGCATCTGGATTCTGCCTAATAAAAAACATTTATTTTCATTGC（特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３７２に対応する、配列番号２８）
にしたがうヒトのαもしくはβグロビンに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる。
【０１２２】
例えば、３’ＵＴＲエレメントは、好ましくは配列番号２９：
αグロビン遺伝子の３’ＵＴＲの、中央のα複合体結合部分（本明細書において「ｍｕａｇ」とも呼ばれる）
GCCCGATGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCG（特許出願ＷＯ２１０３／１４３７００の配列番号１３９３に対応する配列番号２９）
にしたがう、αグロビン遺伝子（例えば、ヒトのαグロビン遺伝子）の、中央のα複合体結合部分を含んでいるか、または当該中央のα複合体結合部分からなる。
【０１２３】
これに関連して、本発明のｍＲＮＡの３’ＵＴＲエレメントは、配列番号２９にしたがう核酸配列またはその相同物、断片またはバリアントの対応するＲＮＡ配列を含んでいるか、または当該ＲＮＡ配列からなることが特に好ましい。
【０１２４】
「［・・・］遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列」という用語は、［・・・］遺伝子の３’ＵＴＲ配列に基づくか、またはその部分（例えば、アルブミン遺伝子、αグロビン遺伝子、βグロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、またはコラーゲンアルファ遺伝子（例えばコラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子）、好ましくはアルブミン遺伝子、またはその部分の３’ＵＴＲ）に基づく核酸配列を好ましく指す。この用語は、全体の３’ＵＴＲ配列（すなわち遺伝子の全長３’ＵＴＲ配列）に対応する配列、および遺伝子（例えば、アルブミン遺伝子、αグロビン遺伝子、βグロビン遺伝子、チロシンヒドロキシゲナーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、またはコラーゲンアルファ遺伝子（例えば、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子））、好ましくはアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ配列の断片に対応する配列を包含している。
【０１２５】
「［・・・］遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列」という用語は、遺伝子３’ＵＴＲ配列のバリアント（例えば、アルブミン遺伝子、αグロビン遺伝子、βグロビン遺伝子、チロシンヒドロキシゲナーゼ遺伝子またはコラーゲンアルファ遺伝子（例えば、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子））または上述のようなその断片に基づく核酸配列を指す。この用語は、遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントの全体配列（すなわち遺伝子の全長のバリアント３’ＵＴＲ配列）に対応する配列、および遺伝子のバリアント３’ＵＴＲ配列の断片に対応する配列を包含している。好ましくは、これに関連するバリアントは、全長のバリアント３’ＵＴＲの少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、より一層好ましくは少なくとも６０％、より一層好ましくは少なくとも７０％、より一層好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％に相当する全長のバリアント３’ＵＴＲにおけるヌクレオチドの連続する広がりに対応するヌクレオチドの連続する広がりからなる。本発明の意味において、バリアントのそのような断片は、本明細書に記載のようなバリアントの機能的な断片であることが好ましい。
【０１２６】
好ましくは、少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントおよび少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントは、相乗的に作用して、上述のような本発明のｍＲＮＡからのタンパク質産生を向上させる。
【０１２７】
特に好ましい実施形態において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはそのバリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでいる本発明のｍＲＮＡは、ヒストン  ステム−ループ配列／構造を含んでいる。そのようなヒストン  ステム−ループ配列は、ＷＯ２０１２／０１９７８０（開示事項は参照によって本明細書に組み込まれる）に開示されているようなヒストン  ステム−ループ配列から選択される。
【０１２８】
本発明の範囲において使用されるために好適なヒストン  ステム−ループ配列は、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
式（Ｉ）（ステム境界配列なしのステム−ループ配列）：
【０１２９】
【化１】
2020014474.tif 000002
【０１３０】
式（ＩＩ）（ステム境界配列ありのステム−ループ配列）：
【０１３１】
【化２】
2020014474.tif 000003
【０１３２】
の少なくとも１つのから選択されることが好ましく、
ステム１またはステム２の境界エレメントＮ１−６は、１〜６、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜５、より一層好ましくは３〜５、最も好ましくは４〜５、または５のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣ、またはそのヌクレオチド類似物から選択されるヌクレオチドから選択され；）
ステム１［Ｎ０−２ＧＮ３−５］は、ステム２のエレメントと逆相補的または部分的に逆相補的であり、かつ５〜７ヌクレオチドの間の連続する配列であり；
Ｎ０−２は、０〜２、好ましくは０〜１、より好ましくは１のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣ、またはそのヌクレオチド類似物から選択されるヌクレオチドから選択され；
Ｎ３−５は、３〜５、好ましくは４〜５、より好ましくは４のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣ、またはそのヌクレオチド類似物から選択されるヌクレオチドから選択され；
Ｇは、グアノシンまたはその類似物であり、ステム２におけるその相補的なシチジンヌクレオチドがグアノシンによって置き換えられている条件のもとに、任意にシチジンまたはその類似物に置き換えられ得；
ループ配列［Ｎ０−４（Ｕ／Ｔ）Ｎ０−４］は、ステム１およびステム２のエレメントの間に配置されており、３〜５ヌクレオチド、より好ましくは４ヌクレオチドの連続する配列であり；
Ｎ０−４のそれぞれは、他のＮから独立して、０〜４、好ましくは１〜３、より好ましくは１〜２のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣ、またはそのヌクレオチド類似物から選択されるヌクレオチドから選択され、Ｕ／Ｔは、ウリジンまたは任意にチミジンを表しており；
ステム２［Ｎ３−５ＣＮ０−２］は、ステム１のエレメントと逆相補的または部分的に逆相補的であり、かつ５〜7ヌクレオチドの間の連続する配列であり；
Ｎ３−５は、３〜５、好ましくは４〜５、より好ましくは４のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣ、またはそのヌクレオチド類似物から選択されるヌクレオチドから選択され；
Ｎ０−２は、０〜２、好ましくは０〜１、より好ましくは１のＮの連続する配列であり、Ｎのそれぞれは、他のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣ、またはそのヌクレオチド類似物から選択されるヌクレオチドから選択され；
Ｃは、シチジンまたはその類似物であり、ステム１におけるその相補的なグアノシンヌクレオチドがシチジンに置き換えられている条件のもとに、グアノシンまたはその類似物に任意に置き換えられ得；
ステム１およびステム２は、互いに塩基対形成可能であり、例えばヌクレオチドＡとＵ／Ｔと、またはＧとＣとのワトソン−クリック塩基対形成または非ワトソン−クリック塩基対形成（例えば、ゆらぎ塩基対形成、逆ワトソン−クリック塩基対形成、フーグスティーン塩基対形成、逆フーグスティーン塩基対形成）によって、塩基対形成がステム１およびステム２の間に生じ得る逆相補性配列を形成しているか、またはステム１およびステム２は、互いに塩基対形成可能であり、不完全な塩基対形成がステム１およびステム２の間に、２つのステムにおける１つ以上の塩基が他方のステムの逆相補的な配列において相補的な塩基を有していないことに基づいて、生じ得る部分的な逆相補性配列を形成している。
【０１３３】
本発明の第１の局面のさらなる好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ配列は、以下の特定の式（Ｉａ）または（ＩＩａ）：
式（Ｉａ）（ステム境界エレメントなしのステム−ループ配列）：
【０１３４】
【化３】
2020014474.tif 000004
【０１３５】
式（ＩＩａ）（ステム境界エレメントありのステム−ループ配列）：
【０１３６】
【化４】
2020014474.tif 000005
【０１３７】
の少なくとも１つにしたがうヒストン  ステム−ループ配列の少なくとも１つを含み得る（ここで、Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは以上に規定されている通りである）。
【０１３８】
第１の局面のさらなるより好ましい実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ配列は、以下の特定の式（Ｉｂ）または（ＩＩｂ）：
式（Ｉｂ）（ステム境界エレメントなしのステム−ループ配列）：
【０１３９】
【化５】
2020014474.tif 000006
【０１４０】
式（ＩＩｂ）（ステム境界エレメントありのステム−ループ配列）：
【０１４１】
【化６】
2020014474.tif 000007
【０１４２】
の少なくとも１つにしたがうヒストン  ステム−ループ配列の少なくとも１つを含み得る（ここで、Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは以上に規定されている通りである）。
【０１４３】
特に好ましいヒストン  ステム−ループ配列は、配列番号３０  CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCAにしたがう配列、またはより好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列対応するＲＮＡ配列（CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA  配列番号３７）である。
【０１４４】
本発明の第１の局面の特に好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域に加えて、ポリ（Ａ）配列（ポリＡテイルとも呼ばれる）を、好ましくは本発明のｍＲＮＡの３’末端に、含んでいる。存在する場合、そのようなポリ（Ａ）配列は、約２５〜約４００のアデノシンヌクレオチドの配列、好ましくは約５０〜約４００のアデノシンヌクレオチドの配列、より好ましくは約５０〜３００のアデノシンヌクレオチドの配列、より一層好ましくは約６０〜約２５０のアデノシンヌクレオチドの配列を含んでいる。これに関連して、「約」という用語は、それが付されている（複数の）値の±１０％の偏差を指す。このポリ（Ａ）配列は、本発明の第１の局面に係る本発明のｍＲＮＡに含まれているコード領域の３’に好ましく配置されている。
【０１４５】
さらなる好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡは、少なくとも１０のシトシン、好ましくは少なくとも２０のシトシン、より好ましくは少なくとも３０のシトシンの配列（「ポリ（Ｃ）配列」と呼ばれる）によって修飾され得る。より詳細には、ｍＲＮＡは、典型的に約１０〜２００のシトシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜１００のシトシンヌクレオチド、より好ましくは約１０〜７０のシトシンヌクレオチド、より一層好ましくは約２０〜５０のシトシンヌクレオチドまたは２０〜３０のシトシンヌクレオチドのポリ（Ｃ）配列を含み得る。このポリ（Ｃ）配列は、好ましくはコード領域の３’、より好ましくは本発明の第１の局面に係る本発明のｍＲＮＡに含まれている付加的なポリ（Ａ）配列の３’に、配置されている。
【０１４６】
これに関連して、本発明のｍＲＮＡ配列は、特定の実施形態において、
ａ．）５’キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の、好ましくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆに由来する、少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質をコードしているコード領域；
ｃ．）６４のアデノシンを好ましく含んでいる。ポリ（Ａ）配列；および
ｄ．）任意に、３０のシトシンを好ましく含んでいる、ポリ（Ｃ）配列
を含み得る。
【０１４７】
本発明の第１の局面の特に好ましい実施形態において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでいる本発明のｍＲＮＡは、
好ましくは５’から３’方向に、
ａ．）５’キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）狂犬病ウイルスの、好ましくは狂犬病ウイルスの糖タンパク質Ｇ（ＲＡＶ−Ｇ）に由来する、少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質をコードしているコード領域；
ｃ．）好ましくは６４のアデノシンを含んでいる、ポリ（Ａ）配列；
ｄ．）任意に、好ましくは３０のシトシンを含んでいる、ポリ（Ｃ）配列；ならびに
ｅ．）好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいる、ヒストン  ステム−ループ
を含んでいる。
【０１４８】
本発明の第１の局面の、特に好ましいさらなる実施形態において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体を含んでいる本発明のｍＲＮＡは、
好ましくは５’から３’方向に、
ａ．）５’キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の、好ましくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質に由来する、少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質をコードしているコード領域；
ｃ．）任意に、好ましくは配列番号２９にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいる、アルファグロビン遺伝子に由来する３’ＵＴＲエレメント、その相同物、断片もしくはバリアント；
ｄ．）好ましくは６４のアデノシンを含んでいる、ポリ（Ａ）配列；
ｅ．）任意に、好ましくは３０のシトシンを含んでいる、ポリ（Ｃ）配列；および
ｆ．）好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいる、ヒストン  ステム−ループ
を含んでいる。
【０１４９】
好ましい他の実施形態において、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているコード領域を含んでいる本発明のｍＲＮＡは、
好ましくは５’から３’方向に、
ａ．）５’キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）任意に、ＴＯＰ遺伝子に由来する、好ましくは配列番号２３にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列に由来する、５’ＵＴＲエレメント、またはその断片もしくはバリアント；
ｃ．）呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の、好ましくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆに由来する、少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質をコードしているコード領域；
ｄ．）任意に、安定なｍＲＮＡをもたらす、遺伝子またはその相同物、断片もしくはバリアントに由来する（配列番号２５にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡに由来する）３’ＵＴＲエレメント；
ｅ．）好ましくは６４のアデノシンを含んでいる、ポリ（Ａ）配列；
ｆ．）任意に、好ましくは３０のシトシンを含んでいる、ポリ（Ｃ）配列；ならびに
ｇ．）好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列を含んでいる、ヒストン  ステム−ループ
を含んでいる。
【０１５０】
上記コード領域は、配列番号１〜１１にしたがうアミノ酸配列、またはその断片、バリアントもしくは誘導体の少なくとも１つを部分的にコードし得る。さらに、本発明のｍＲＮＡの上記コード領域は、これらのアミノ酸配列の組合せ、またはその断片、バリアントもしくは誘導体の組合せをコードし得る。これに関連して特に好ましいのは、核タンパク質Ｎとの融合タンパク質Ｆの組合せ、ならびに融合タンパク質ＦおよびＭ２−１タンパク質の組合せである。
【０１５１】
さらに、上記コード領域は、配列番号１２〜配列番号２２にしたがう配列、またはその断片、相同物もしくはバリアントの少なくとも一部であり得るか、または当該一部を含み得る。さらに、上記ｍＲＮＡは、これらの配列の少なくとも２つの組合せ、その断片、相同物もしくはバリアント組合せを含み得る。
【０１５２】
例えばインビボ分解（例えば、エンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼによる）に対する、耐性のさらなる向上のために、本発明のｍＲＮＡは、例えば修飾核酸の形態において、安定化された核酸配列として提供され得る。したがって、本発明のさらなる実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡは、好ましくは骨格修飾、糖修飾および／または塩基修飾によって安定化されていること、より好ましくはＧ／Ｃ含有量の変更によって安定化されていることが好ましい。これらの変更のすべては、翻訳されるｍＲＮＡの機能（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）のペプチドまたはタンパク質に由来する抗原性機能）を妨げることなく、本発明のｍＲＮＡに導入され得る。
【０１５３】
本発明に関連する骨格修飾は、本発明のｍＲＮＡに含まれているヌクレオチドの骨格のリン酸が、化学的に修飾される修飾（例えば、アニオン性のヌクレオチド間結合、Ｎ３’→Ｎ５’修飾、非架橋酸素原子の、水素化ホウ素による置換、中性のヌクレオチド間結合、複数のヌクレオチドのアミド結合、メチレン（メチルアミノ）結合、ホルムアセタールおよびチオホルムアセタール結合、またはスルホニル基の導入など）であることが好ましい。
【０１５４】
本発明に関連する糖修飾は、本発明のｍＲＮＡのヌクレオチドの糖の化学修飾（例えば、リボース残基のメチル化など）であることが好ましい。
【０１５５】
他の実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡは、本発明のｍＲＮＡ（好ましくはそのコード領域）のＧ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含有量を変更することによって、修飾され得、かつ安定化され得る。
【０１５６】
本明細書において、好ましくはコード領域の、本発明のｍＲＮＡのＧ／Ｃ含有量は、その特定の野生型コード領域（すなわち未修飾のｍＲＮＡ）のＧ／Ｃ含有量と比べて、特に向上されている。しかし、本発明のｍＲＮＡのコードされているアミノ酸配列は、特定の野生型／未修飾のｍＲＮＡのコードされているアミノ酸配列と比べて、変更されていないことが好ましい。
【０１５７】
本発明のｍＲＮＡのＧ／Ｃ含有量の変更は、向上したＧ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含有量を有しているＲＮＡ配列が、向上したＡ（アデノシン）／Ｕ（ウラシル）を有しているＲＮＡ配列より安定であることに基づいている。コード配列のコドンまたは全ＲＮＡは、したがって、それらがＧ／Ｃヌクレオチドの向上した量を含んでおり、翻訳されたアミノ酸配列が維持されているように、野生型のコード配列またはｍＲＮＡと比べて変更され得る。いくつかのコドンが１つの同じアミノ酸をコードしていることに関して、安定性に有利なコドンのほとんどが、決定され得る（いわゆる代替的なコドンの利用）。好ましくは、本発明に係る本発明のｍＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量は、野生型ＲＮＡのコードされる領域のＧ／Ｃ含有量と比べて、少なくとも７％、より好ましくは少なくとも１５％、特に好ましくは少なくとも２０％向上されている。特定の実施形態によれば、本明細書に規定されているようなタンパク質もしくはペプチド、またはその断片もしくはバリアントをコードしている領域、または野生型のｍＲＮＡ配列もしくはコード配列の全配列における置換可能なコドンの、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より一層好ましくは８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９５％または１００％が置換されて、それによって、上記配列のＧ／Ｃ配列を向上させている。これに関連して、特にコードにおける、本発明のｍＲＮＡのＧ／Ｃ含有量を最大まで（すなわち置換可能な１００％のコドン）、野生型の配列と比べて向上させることが特に好ましい。
【０１５８】
本発明のさらなる実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡは、翻訳のために最適化されている（例えば、所定のアミノ酸のより低頻度のｔＲＮＡのためのコドンを、それぞれのアミノ酸の、より高頻度に存在するｔＲＮＡのためのコドンによって置換することによって翻訳のために最適化されている）。これは、翻訳効率がまた、細胞におけるｔＲＮＡの存在における異なる頻度によって決定されるという知見に基づいている。したがって、いわゆる「低頻度のコドン」が、向上された程度において本発明のｍＲＮＡに存在する場合、対応する修飾ＲＮＡは、より高頻度のｔＲＮＡをコードしているコドンが存在する場合と比べて顕著に低い程度において翻訳される。好ましくは、本発明のｍＲＮＡのコード領域は、細胞において相対的にまれなｔＲＮＡまたは低頻度のｔＲＮＡをコードしている、野生型配列の少なくとも１つのコドンが、細胞においてより高頻度または最も高頻度にあり、かつ相対的にまれなｔＲＮＡまたは低頻度のｔＲＮＡと同じアミノ酸を運ぶｔＲＮＡをコードしているコドンに交換されるように、野生型ＲＮＡまたはコード配列の対応する領域と比べて変更されている。この変更によって、本発明のｍＲＮＡの配列は、より高頻度に存在するｔＲＮＡが利用可能であるコドンが挿入されるように変更され得る。言い換えると、本発明によれば、この修飾によって、細胞において相対的にまれなｔＲＮＡをコードしている野生型配列のすべてのコドンは、細胞において相対的に高頻度のｔＲＮＡをコードしており、かつ相対的にまれなｔＲＮＡと同じアミノ酸を運ぶコドンにそれぞれについて交換され得る。さらに、本発明のｍＲＮＡのコード領域によってコードされているタンパク質（すなわちコード領域）のアミノ酸配列を変更することなく、本発明のｍＲＮＡにおいて向上されている（特に最大化されている）結果として生じるＧ／Ｃ含有量を、「高頻度の」コドンと結び付けることが特に好ましい。この好ましい実施形態は、特に効率的に翻訳され、安定化される（修飾されている）本発明のｍＲＮＡの提供を可能にする。
【０１５９】
塩基の置換、付加または除去は、よく知られている部位特異的変異生成の手法による核酸分子の調製のためのＤＮＡマトリクスを用いてか、またはオリゴヌクレオチド連結を用いて、好ましく実施される。そのような処理において、本発明に規定されているような本発明の組合せワクチンの少なくとも１つのＲＮＡの調製のために、対応するＤＮＡ分子がインビトロ転写され得る。このＤＮＡマトリクスは、調製される少なくとも１つのＲＮＡのための所望されるヌクレオチド配列が後ろに続く、インビトロ転写にとって好適なプロモータ（例えば、Ｔ７またはＳ６プロモータ）、およびインビトロ転写のための終結シグナルを好ましくは含んでいる。少なくとも１つの所望のＲＮＡのマトリクスを形成するＤＮＡ分子は、発酵性増殖および細菌において複製され得るプラスミドの一部としての続く単離によって調製され得る。本発明にとって好適であると述べられ得るプラスミドは、例えば、プラスミドｐＴ７Ｔ（GenBank accession number U26404; Lai et al., Development 1995, 121: 2349 to 2360）、ｐＧＥＭ（登録商標）（例えば、ｐＧＥＭ（登録商標）−１）（GenBank accession number X65300; from Promega）、およびｐＳＰ６４（GenBank accession number X65327）（Mezei and Storts, Purification of PCR Products, in: Griffin and Griffin (ed.), PCR Technology: Current Innovation, CRC Press, BocaRaton, FL, 2001も参照）。
【０１６０】
特に好ましい実施形態において、本発明の第１の局面に係る本発明のｍＲＮＡ配列は、
好ましくは５’から３’方向に、
ａ）本明細書に規定されているような５’キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ）呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１、または非構造タンパク質ＮＳ２に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしている、好ましくは野生型ｍＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量と比べて、向上しているか、または最大化されているＧ／Ｃ含有量を有している、コード領域；
ｃ）好ましくは安定なｍＲＮＡをもたらす遺伝子、より好ましくは配列番号２９にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ、またはその相同物、断片もしくはバリアントに由来する、本明細書に規定されているような３’ＵＴＲエレメント；
ｄ）好ましくは６４のアデノシンからなる、ポリ（Ａ）配列；
ｅ）任意に、好ましくは３０のシトシンからなる、ポリ（Ｃ）配列；ならびに
ｆ）好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列、少なくとも１つのヒストン  ステム−ループ配列
を含んでいる。
【０１６１】
最も好ましくは、その特定の実施形態の、本発明のｍＲＮＡは、ＲＳＶ  ｌｏｎｇの融合タンパク質Ｆをコードしている本発明のｍＲＮＡの例を用いた、図１（配列番号３１）に示されているような配列修飾を含んでいる。
【０１６２】
特に好ましいさらなる実施形態において、本発明の第１の局面に係る本発明のｍＲＮＡ配列は、
好ましくは５’から３’方向に、
ａ）本明細書に規定されているような５’キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ）本明細書に規定されているような５’ＵＴＲエレメント、好ましくはＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ（好ましくは配列番号２３にしたがう、５’末端オリゴピリミジントラクトを欠いている人のリボソームタンパク質ラージ３２の５’ＵＴＲ）、またはその断片、相同物もしくはバリアントに由来する核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなる５’ＵＴＲエレメント；
ｃ）呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ，短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、非構造タンパク質ＮＳ１もしくは非構造タンパク質ＮＳ２、またはその断片、バリアントもしくは誘導体に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしている、好ましくは野生型ｍＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量と比べて、向上されているか、または最大化されているＧ／Ｃ含有量を有している、コード領域；
ｄ）３’ＵＴＲエレメント、好ましくは配列番号２４にしたがうヒトのアルブミンの３’ＵＴＲもしくは対応するＲＮＡ、またはその相同物、断片もしくはバリアント；
ｅ）好ましくは６４のアデノシンからなる、ポリ（Ａ）配列；
ｆ）任意に、好ましくは２０のシトシンからなる、ポリ（Ｃ）配列。
ｇ）少なくとも１つのヒストン  ステム−ループ、好ましくは配列番号３０にしたがう核酸配列の対応するＲＮＡ配列
を含んでいる。
【０１６３】
最も好ましくは、特定のその実施形態の、本発明のｍＲＮＡは、ＲＳＶ  ｌｏｎｇの融合タンパク質Ｆをコードしている本発明のｍＲＮＡの例を用いて、図２（配列番号３２）に示されているような配列修飾を含んでいる。
【０１６４】
より一層好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列は、配列番号３１および配列番号３５にしたがう図１〜５に示されている配列を含んでいるか、または当該配列からなる。
【０１６５】
さらなる特定の実施形態において、例えば本発明のｍＲＮＡが、２つ以上の抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしている場合に、本発明に係るｍＲＮＡは、いくつかのオープンリーディングフレームを分離し得る内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列またはＩＲＥＳモチーフをさらに含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡがバイシストロン性または多シストロン性のｍＲＮＡである場合に、特に有用である。
【０１６６】
さらに、本発明のｍＲＮＡは、当該分野において知られている任意の方法（固層合成およびインビトロ法（例えばインビトロ転写反応）が挙げられる）を用いて調製され得る。
【０１６７】
本発明の一実施形態によれば、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしているコード領域を含んでいる本発明のｍＲＮＡは、本発明のｍＲＮＡまたはさらに含まれている核酸のトランスフェクション効率および／または免疫刺激特性を向上させるための、さらなる任意のビヒクル、トランスフェクション剤または複合化剤をともなうことなしに、露出させて投与され得る。
【０１６８】
好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡは、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物、および重合体担体とともに調合され得る。したがって、本発明のさらなる実施形態において、本発明のｍＲＮＡ、または本発明の薬学的組成物に含まれている任意の他の核酸は、ｍＲＮＡまたは核酸の、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対する、約６：１（ｗ／ｗ）〜約０．２５：１（ｗ／ｗ）、より好ましくは約５：１〜約０．５：１（ｗ／ｗ）、より一層好ましくは約４：１〜約１：１（ｗ／ｗ）もしくは約３：１（ｗ／ｗ）〜約１：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択される重量比、最も好ましくは約３：１〜約２：１（ｗ／ｗ）の比率；または任意に、約０．１〜１０の範囲、好ましくは０．３〜４もしくは０．３〜１の範囲、最も好ましくは０．５〜１または０．７〜１の範囲、より一層好ましくは０．３〜０．９または０．５〜０．９の範囲における、ｍＲＮＡまたは核酸の、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対する、窒素／リン酸比において、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体をともなっているか、またはこれらと複合化されていることが好ましい。
【０１６９】
したがって、本発明の薬学的組成物に含まれている本発明のｍＲＮＡまたは任意の他の核酸はまた、本発明のｍＲＮＡまたは任意に含まれている、さらに含まれている核酸のトランスフェクション効率および／または免疫刺激特性を向上させるためのビヒクル、トランスフェクション剤または複合化剤をともない得る。
【０１７０】
これに関連して、特に好ましい剤であるカチオン性またはポリカチオン性の化合物としては、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミンもしくはスペルミジン、または他のカチオン性ペプチド（例えば、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ポリアルギニン、塩基性ポリペプチド、細胞浸透性ペプチド（ＣＰＰ）（ＨＩＶ結合ペプチド、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ由来ペプチド、ペネトラチン、ＶＰ２２誘導体ペプチドもしくはＶＰ２２類似ペプチド、ＨＳＶ（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡもしくはタンパク質伝達ドメイン（ＰＴＤ）、ＰｐＴ６２０、プロリンリッチペプチド、アルギニンリッチペプチド、リジンリッチペプチド、ＭＰＧ−ペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトシンペプチド、アンテナペディア由来ペプチド（特にDrosophila antennapediaに由来する）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌ、ＦＧＦ、ラクトフェリン、トランスポータン、ブフォリン−２、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ由来ペプチド、ＳＡＰまたはヒストンが挙げられる））が挙げられる。
【０１７１】
これに関連して、プロタミンが特に好ましい。
【０１７２】
さらに、好ましいカチオン性またはポリカチオン性のタンパク質またはペプチドは、以下の全体の式（ＩＩＩ）を有している以下のタンパク質：
（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ  （式（ＩＩＩ））
（ここで、ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８〜１５、ｌ、ｍ、ｎまたはｏのそれぞれは互いに独立して、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓおよびＯｒｎの全体の含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の５０％に相当する条件において、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５から選択される任意の数字であり；Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＯｒｎ以外の天然の（天然に存在する）、または非天然のアミノ酸から選択される任意のアミノ酸であり得；ｘは、Ｘａａの全体の含有量がオリゴペプチドの全アミノ酸の５０％を超えない条件において０、１、２、３または４から選択される任意の数字であり得る）から選択され得る。これに関連して、特に好ましいカチオン性のペプチドは、例えば、Ａｒｇ７、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ｈ３Ｒ９、Ｒ９Ｈ３、Ｈ３Ｒ９Ｈ３、ＹＳＳＲ９ＳＳＹ、（ＲＫＨ）４、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒなどである。これに関連して、ＷＯ２００９／０３０４８１の開示事項は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１７３】
トランスフェクション剤または複合化剤として使用され得るさらなる好ましいカチオン性またはポリカチオン性の化合物としては、カチオン性の多糖（例えば、キトサン、ポリブレン）、カチオン性の重合体（例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ））、カチオン性の脂質（例えば、ＤＯＴＭＡ：［１−（２，３−シオレイオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメリルアンモニウムクロリド、ＤＭＲＩＥ：ジ−Ｃ１４−アミジン、ＤＯＴＩＭ、ＳＡＩＮＴ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ＢＧＴＣ、ＣＴＡＰ、ＤＯＰＣ、ＤＯＰＡＤ，ＤＯＰＥ：ジオレイルホスファチジルエタノールアミン、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＤＡＢ、ＤＯＩＣ、ＤＭＥＰＣ、ＤＯＧＳ：ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン、ＤＩＭＲＩ：ジミリスト−オキソプロピルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド、ＤＯＴＡＰ：ジオレイロキシル−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン、ＤＣ−６−１４：Ｏ，Ｏ−ジテトラデカノイル−Ｎ−（α−トリメチルアンモニオアセチル）ジエタノールアミンクロリド、ＣＬＯＰ１：ｒａｃ−［（２，３−ジオクタデシルオキシプロピル）（２−ヒドロキシエチル）］−ジメチルアンモニウムクロリド、ＣＬＩＰ６：ｒａｃ−［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピロキシメチロキシ）エチル］−トリメチルアンモニウム、ＣＬＩＰ９：ｒａｃ［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピルオキシスクシニロキシ）エチル］−トリメチルアンモニウム、オリゴフェクタミン）、またはカチオン性もしくはポリカチオン性の重合体（例えば、修飾ポリアミノ酸（例えば、β−アミノ酸重合体または逆重合体））など、修飾ポリエチレン（例えば、ＰＶＰ（ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド）））など、修飾アクリル酸塩（例えば、ｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリル酸塩）））など、修飾アミドアミン（例えば、ｐＡＭＡＭ（ポリ（アミドアミン）））など、修飾ポリベータアミノエステル（ＰＢＡＥ）（例えば、ジアミン末端修飾の１，４ブタンジオールジアクリル酸塩−５−アミノ−１−ペンタノール共重合体）など、デンドリマー（例えば、ポリプロピルアミンデンドリマーまたはｐＡＭＡＭに基づくデンドリマー）など、ポリイミン（例えば、ＰＥＩ：ポリ（エチレンイミン）、ポリ（プロピレンイミン））など、ポリアリルアミン、糖骨格に基づく重合体（例えば、シクロデキストリンに基づく重合体、デキストランに基づく重合体、キトサン）など、シラン骨格に基づく重合体（例えば、ＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳ共重合体）など、１つ以上のカチオン性ブロック（例えば、上述されているようなカチオン性の重合体から選択される）および１つ以上の親水性もしくは疎水性のブロック（例えば、ポリエチレングリコール）の組合せからなるブロック重合体などが挙げられ得る。
【０１７４】
本発明にしたがって使用される重合体担体は、ジスルフィド架橋されたカチオン性の化合物によって形成される重合体担体であり得る。ジスルフィド架橋されたカチオン性の化合物は、互いに同じか、または異なり得る。重合体担体はまた、さらなる成分を含み得る。また、本発明にしたがって使用される重合体担体は、本明細書に記載されているようなジスルフィド結合によって架橋されている、カチオン性のペプチド、タンパク質もしくは重合体、および任意に本明細書に規定されているようなさらなる成分の混合物を含んでいることが好ましい。これに関連して、ＷＯ２０１２／０１３３２６の開示事項は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１７５】
これに関連して、ジスルフィド結合によって、重合体担体のための中心を形成するカチオン性の成分は、この目的に適した任意の好適なカチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体（特に、本発明にしたがって規定されているようなｍＲＮＡまたは核酸を複合体化可能であり、これによってｍＲＮＡまたは核酸を好ましく縮合する、任意のカチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体）から典型的に選択される。カチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体は、直鎖状の分子であることが好ましいが、分枝鎖状のカチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体も使用され得る。
【０１７６】
本発明の薬学的組成物またはワクチンに含まれている本発明のｍＲＮＡまたはさらなる任意の核酸を複合体化するために使用され得る重合体担体の、ジスルフィド架橋されたカチオン性またはポリカチオン性のタンパク質、ペプチドまたは重合体は、本明細書に述べられているような重合体担体のカチオン性成分としての少なくとも１つのさらなるカチオン性またはポリカチオン性のタンパク質、ペプチドまたは重合体との縮合によってジスルフィド結合を形成可能な、少なくとも１つのＳＨ−部分、最も好ましくは少なくとも１つのシステイン残基、またはさらなる任意の化学基を示すＳＨ−部分を含んでいる。
【０１７７】
以上に規定されている通り、本発明の薬学的組成物またはワクチンに含まれている本発明のｍＲＮＡまたはさらなる任意の核酸を複合体化するために使用され得る重合体担体は、ジスルフィド架橋されたカチオン性（ポリカチオン性）の成分によって形成され得る。
【０１７８】
好ましくは、少なくとも１つのＳＨ−部分を含んでいるか、または当該ＳＨ−部分を含めるために付加的に修飾されている、重合体担体のそのようなカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質または重合体は、複合化剤について以上に規定されているようなタンパク質、ペプチドおよび重合体から選択される。
【０１７９】
さらなる特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物またはワクチンに含まれている本発明のｍＲＮＡまたはさらなる核酸を複合体化するために使用され得る重合体担体は、一般式（ＩＶ）：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ  式（ＩＶ）
にしたがう重合体担体分子から選択され、
Ｐ１およびＰ３は、互いに同じか、または異なり、直鎖状または分枝鎖状の疎水性重合体鎖を表しており、Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、成分Ｐ２（または当該成分がＰ１およびＰ２またはＰ３およびＰ２の間におけるリンカーとして使用される場合に、代替的に（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘ、もしくは［（ＡＡ）ｘ］ｚおよび／またはさらなる成分（例えば、（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘ、［（ＡＡ）ｘ］ｚ、またはＬ）との縮合によってジスルフィド結合を形成可能な、少なくとも１つの−ＳＨ部分を示しており、直鎖状または分枝鎖状の疎水性重合体鎖は互いに独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロキシルオキシ）エチルホスホリルクロリン、ポリ（ヒドロキシアルキルＬ−アスパラギン）、ポリ（２−（メタクリロキシルオキシ）エチルホスホリルクロリン）、ヒドロキシエチルスターチまたはポリ（ヒドロキシアルキルＬ−グルタミン）から選択され、疎水性重合体鎖は、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、好ましくは約２ｋＤａ〜約２５ｋＤａ；より好ましくは約２ｋＤａ〜約１０ｋＤａ（例えば、約５ｋＤａ〜約２５ｋＤａまたは５ｋＤａ〜約１０ｋＤａ）の分子量を示し；
Ｐ２は、好ましくは約３〜約１００のアミノ酸の長さ、より好ましくは約３〜約５０のアミノ酸の長さ、より一層好ましくは約３〜２５のアミノ酸（例えば、約３〜１０、５〜１５、１０〜２０または１５〜２５のアミノ酸）の長さ、より好ましくは約５〜２０のアミノ酸の長さ、より一層好ましくは約１０〜約２０の長さを有している、ジスルフィド架橋された成分によって形成されている重合体担体のための、例えば本明細書に規定されているような、カチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質であるか；または
約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量（約１ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、より一層好ましくは約１．５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの分子量）を典型的に有しているか、または約０．５ｋＤａ〜約１００ｋＤａの分子量（約１０ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、より一層好ましくは約１０ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量が挙げられる）を有している、ジスルフィド架橋された成分によって形成されている重合体担体のための、例えば本明細書に規定されているような、カチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質であり；
Ｐ２のそれぞれは、さらなる成分Ｐ２、または（複数の）成分Ｐ１および／またはＰ３、または代替的にさらなる成分（例えば（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘ、または［（ＡＡ）ｘ］ｚ）とジスルフィド結合を形成可能な、少なくとも２つの−ＳＨ部分を示し；
−Ｓ−Ｓ−（大括弧はより読みやすいように省略されている）は、（可逆的な）ジスルフィド結合であり、Ｓは、好ましくは、（可逆的な）ジスルフィド結合を有している硫黄または−ＳＨを担持する部分を表す。（可逆的な）ジスルフィド結合は、いずれかの成分Ｐ１およびＰ２、Ｐ２およびＰ２、またはＰ２およびＰ３、または任意に、本明細書に規定されているようなさらなる成分（例えば、（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘ、または［（ＡＡ）ｘ］ｚなど）の−ＳＨ部分の縮合によって好ましく形成され；−ＳＨ部分は、これらの成分の構造の一部であり得るか、もしくは以下に規定されているような修飾によって加えられ得；
Ｌは、互いに独立して、ＲＧＤ、トランスフェリン、フォレート、シグナルペプチドもしくはシグナル配列、局在化シグナルもしくは局在化配列、核局在化シグナルもしくは核局在化配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞透過性ペプチド（例えば、ＴＡＴまたはＫＡＬＡ）、リガンドもしくは受容体（例えば、サイトカイン、ホルモン、成長因子など）、小分子（例えば、マンノースもしくはガラクトースのような炭水化物、または合成リガンド）、小分子アゴニスト、受容体の阻害剤もしくはアンタゴニスト（例えば、ＲＧＤペプチド模倣類似物）、または本明細書に規定されているようなさらなるタンパク質などから選択され得る、存在し得るか、または存在し得ない選択性のリガンド（ligand）であり；
ｎは、典型的に約１〜５０の範囲、好ましくは約１、２もしくは３〜３０、より好ましくは約１、２、３、４もしくは５〜２５の範囲、または好ましくは約１、２、３、４もしくは５〜２０の範囲、または好ましくは約１、２、３、４もしくは５〜１５の範囲、好ましくは約１、２、３、４もしくは５〜１０の範囲（約４〜９、４〜１０、３〜２０、４〜２０、５〜２０もしくは１０〜２０の範囲、または約３〜１５、４〜１５、５〜１５、１０〜１５の範囲、または約６〜１１もしくは７〜１０の範囲が挙げられる）から選択される整数である。最も好ましくは、ｎは、約１、２、３、４もしくは５〜１０の範囲、より好ましくは１、２、３もしくは４〜９の範囲、１、２、３もしくは４〜８の範囲、または１、２もしくは３〜７の範囲にある。
【０１８０】
これに関連して、ＷＯ２０１１／０２６６４１の開示事項は、参照によって本明細書に組み込まれる。親水性重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、少なくとも１つの−ＳＨ部分を典型的に示し、ここで、少なくとも１つの−ＳＨ部分は、Ｐ１およびＰ２、またはＰ３およびＰ２の間におけるリンカーとして使用される場合に成分Ｐ２または成分（ＡＡ）もしくは（ＡＡ）ｘとの、および２つ以上の−ＳＨ部分が含まれている場合にさらなる成分（例えば、Ｌおよび／または（ＡＡ）もしくは（ＡＡ）ｘ）との反応によってジスルフィド結合を形成可能である。上述の一般式（Ｖ）の範囲にある、以下の下位の式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ３」（大括弧はより読みやすいように省略されており、Ｓ、Ｐ１およびＰ３はいずれも本明細書に規定されている通りである）は、親水性重合体Ｐ１およびＰ３の１つの−ＳＨ部分は上述の一般式（Ｖ）の成分Ｐ２の１つの−ＳＨ部分と縮合された状態を表しており、ここで、これらの−ＳＨ部分の両方の硫黄が、式（Ｖ）において本明細書に規定されている通りジスルフィド結合−Ｓ−Ｓ−を形成している。これらの−ＳＨ部分は、親水性重合体のＰ１およびＰ３いずれかによって、例えば内部システイン、または−ＳＨ部分を有している任意のさらなる（修飾）アミノ酸もしくは化合物を介して、備えられている。したがって、下位の式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ３」はまた、−ＳＨ部分がシステインによってもたらされる場合に「Ｐ１−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ３」とも記載され得、ここで、Ｃｙｓ−Ｃｙｓという用語は、ペプチド結合ではなく、ジスルフィド結合を介して結合されている２つのシステインを表している。この場合に、これらの式における「−Ｓ−Ｓ−」という用語は、「−Ｓ−Ｃｙｓ」、「−Ｃｙｓ−Ｓ」または「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」とも記載され得る。これに関連して、「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」という用語は、ペプチド結合を表しておらず、ジスルフィド結合を形成するためのそれらの−ＳＨ部分を介した２つのシステインの結合を表している。したがって、「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」という用語はまた、「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−（Ｃｙｓ−Ｓ）−」と一般的に理解され得、ここで、特定の場合に、Ｓはシステインの−ＳＨ部分の硫黄を示している。同様に、「Ｓ−Ｃｙｓ」および「−Ｃｙｓ−Ｓ」という用語は、−ＳＨを含んでいる部分およびシステインの間におけるジスルフィド結合を示しており、「−Ｓ−（Ｓ−Ｃｙｓ）−」および「−Ｃｙｓ−Ｓ−Ｓ」とも記載され得る。代替的に、親水性重合体Ｐ１およびＰ３は、好ましくは−ＳＨ部分を保持している化合物との化学反応を介して、親水性重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれが少なくとも１つの当該−ＳＨ部分を保持するように、−ＳＨ部分を用いて修飾され得る。−ＳＨ部分を保持している当該化合物は、（さらなる）システイン、または−ＳＨ部分保持しているさらなる任意の（修飾）アミノ酸であり得る。当該化合物はまた、本明細書に規定されているような親水性重合体Ｐ１およびＰ３に−ＳＨ部分を含んでいるか、または導入可能な任意の非アミノ酸化合物または非アミノ酸部分であり得る。当該非アミノ酸化合物は、例えば、３−チオプロピオン酸もしくはチオイモランの結合、アミド形成（例えば、カルボン酸、スルホン酸、アミンなど）、ミカエル付加（例えば、マレイミド部分、α，β不飽和カルボニルなど）、クリックケミストリー（例えば、アジドまたはアルキン）、アルケン／アルキンメサテシス（methatesis）（例えば、アルケンまたはアルキン）、イミンまたはヒドラゾンの形成（アルデヒドもしくはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、アミン）、錯体形成反応（アビジン、ビオチン、タンパク質Ｇ）またはＳ型置換反応を可能にする構成要素（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）もしくはさらなる構成要素の結合に利用され得る他の化学部分による、化学反応または化合物の結合を介して、本発明に係る重合体担体の、式（Ｖ）の親水性重合体Ｐ１およびＰ３に結合され得る。これに関連して、特に好ましいＰＥＧ誘導体は、アルファメトキシオメガメルカプトポリ（エチレングリコール）である。それぞれの場合に、例えばシステインまたはさらなる任意の（修飾）アミノ酸または化合物の、ＳＨ部分は、親水性重合体Ｐ１およびＰ３の、末端または任意の位置の内部に存在し得る。本明細書に規定されている通り、親水性重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、好ましくは末端おける、少なくとも１つの−ＳＨ部分を典型的に示しているが、本明細書に規定されているようなさらなる構成要素（例えば、リガンド、アミノ酸要素（ＡＡ）もしくは（ＡＡ）ｘ、抗体、細胞透過性ペプチド、またはエンハンサペプチド（例えば、ＴＡＴ、ＫＡＬＡ）など）を付加的に結合するために使用され得る２つ以上の−ＳＨ部分を示し得る。
【０１８１】
これに関連して、本発明のｍＲＮＡは、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体、好ましくはカチオン性またはポリカチオン性のタンパク質またはペプチドと、少なくとも部分的に複合体化されていることが好ましい。これに関連して、ＷＯ２０１０／０３７５３９およびＷＯ２０１２／１１３５１３は、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明のｍＲＮＡの一部のみが、カチオン性の化合物と複合体化されており、本発明のｍＲＮＡの残りが、複合体化されていない形態（「遊離」）にある（本発明の薬学的組成物またはワクチンに含まれている）ことを部分的に意味している。好ましくは、（本発明の薬学的組成物またはワクチンにおける）複合体化されたｍＲＮＡ：遊離ｍＲＮＡの比率は、約５：１（ｗ／ｗ）〜約１：１０（ｗ／ｗ）の範囲、より好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）〜約１：８（ｗ／ｗ）の範囲、より一層好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）〜約１：５または１：３（ｗ／ｗ）の範囲から選択され、最も好ましくは、本発明の薬学的組成物またはワクチンにおける遊離ｍＲＮＡに対する複合体化されたｍＲＮＡの比率は、約１：１（ｗ／ｗ）の比率から選択される。
【０１８２】
本発明の薬学的組成物またはワクチンにおいて複合体化されているｍＲＮＡは、好ましくは本明細書に規定されているような、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体と本発明のｍＲＮＡを、安定な複合体を形成するための特定の割合において、複合体化させる第１のステップにしたがって好ましく調製される。これに関連して、ｍＲＮＡの複合体化後において、構成要素または複合体化されたｍＲＮＡには、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物もしくは重合体担体が残っていないか、または無視できるほどに少量のそれらしか残っていないことが、非常に好ましい。したがって、複合体化されたｍＲＮＡの構成要素における、ｍＲＮＡならびにカチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体の比率は、ｍＲＮＡが全体的に複合体化されており、カチオン性もしくはポリカチオン性の化合物もしくは重合体担体が残っていないか、または無視できるほどに少量のそれらしか残っていない範囲において典型的に選択される。
【０１８３】
好ましくは本明細書に規定されているような、ｍＲＮＡの、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対する比率は、約６：１（ｗ／ｗ）〜約０．２５：１（ｗ／ｗ）の範囲、より好ましくは約５：１（ｗ／ｗ）〜約０．５：１（ｗ／ｗ）の範囲、より一層好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）〜約１：１（ｗ／ｗ）または約３：１（ｗ／ｗ）〜約１：１の範囲、最も好ましくは約３：１〜約２：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択されることが好ましい。代替的に、好ましくは本明細書に規定されているような、ｍＲＮＡの、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対する比率はまた、複合体全体の窒素／リン酸比（Ｎ／Ｐ比）に基づいて算出され得る。本発明の関連において、ｍＲＮＡ：好ましくは本明細書に規定されているような、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体の、複合体における比率について、複合体におけるカチオン性またはポリカチオン性の化合物が、カチオン性またはポリカチオン性のペプチドもしくはタンパク質、および／または本明細書に規定されているような重合体担体である条件のもとに、Ｎ／Ｐ比は、約０．１〜１０の範囲、好ましくは０．３〜４の範囲、最も好ましくは約０．５〜２または０．７〜２の範囲、最も好ましくは約０．７〜１，５、０．５〜１または０．７〜１の範囲、さらに最も好ましくは０．３〜０．９または０．５〜０．９の範囲にあることが好ましい。
【０１８４】
さらなる局面において、本発明は、複数または２を超えて、好ましくは２〜１０、より好ましくは２〜５、最も好ましくは２〜４の、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡを含んでいる組成物を提供する。これらの本発明の組成物は、好ましくは異なる複数の病原性抗原、またはその断片、バリアントもしくは誘導体を含んでいる異なる複数のペプチドまたはタンパク質を好ましくコードしている、２以上の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる。これに関連して、少なくとも１つのｍＲＮＡ配列は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆに由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしていること、ならびに少なくとも１つのｍＲＮＡは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の他の抗原（特に核酸タンパク質ＮまたはＭ２−１タンパク質に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしていることが特に好ましい。
【０１８５】
これに関連して、抗原の特に好ましいさらなる組合せは、
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｍ２−１
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ＋Ｍ２−１
・Ｆ＋Ｍ２−１＋Ｎ
・Ｆ＋Ｍ２−１
・Ｆ＋Ｎ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ＋Ｍ２−１＋Ｐ＋Ｍ−２＋Ｍ＋Ｌ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ＋Ｍ２−１＋Ｐ＋Ｍ２−２＋Ｍ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ＋Ｍ−２＋Ｐ＋Ｍ２−２＋Ｌ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ＋Ｍ−２＋Ｐ＋Ｍ＋Ｌ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ＋Ｍ−２＋Ｍ２−２＋Ｍ＋Ｌ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｎ＋Ｐ＋Ｍ２−２＋Ｍ＋Ｌ
・Ｆ＋Ｇ（血清型Ａ）＋Ｇ（血清型Ｂ）＋Ｍ２−２＋Ｐ＋Ｍ２−２＋Ｌ
である。
【０１８６】
したがって、特に好ましいさらなる局面において、本発明はまた、（１）本明細書に規定されているような少なくとも１つの本発明のｍＲＮＡを含んでいる薬学的組成物、または（２）本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡおよび任意に薬学的に許容可能な担体および／またはビヒクルを含んでいる組成物を提供する。
【０１８７】
第１の成分として、本発明の薬学的組成物は、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列の少なくとも１つを含んでいる。
【０１８８】
第２の成分として、本発明の薬学的組成物は、少なくとも１つの付加的な薬学的に活性な構成要素を任意に含み得る。これに関する薬学的に活性な構成要素は、本明細書に述べられているような特定の徴候または疾患を治癒させるか、寛解させるか、または予防する治療有効性を有している化合物である。当該化合物としては、あらゆる限定を意味することなしに、好ましくは本明細書に規定されているような、ペプチドもしくはタンパク質、好ましくは本明細書に規定されているような、核酸、好ましくは本明細書に規定されているような、（治療に有効な）低分子量の有機化合物もしくは無機化合物（５０００未満、好ましくは１０００未満の分子量）、糖、抗原もしくは抗体、従来公知の治療剤、抗原性の細胞、抗原性の細胞性断片、細胞性画分；細胞壁成分（例えば多糖）、（化学的にか、または放射線照射によって）修飾、弱毒または不活性化されている病原体（例えば、ウイルス、細菌など）、好ましくは本明細書に規定されているような、アジュバントなどが挙げられる。これに関連して、特に好ましいのは、ＲＳＶワクチンまたはＲＳＶ免疫グロブリン（例えばPalivizumab（Synagis）（登録商標））である。
【０１８９】
本発明の薬学的組成物は、経口的に、非経口的に、吸入噴霧によって、局所的に、直腸的に、鼻腔的に、口腔的に、経膣的にか、または埋め込み式のリザーバを介して、投与され得る。本明細書に使用されるとき、非経口という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、皮内、くも膜下腔内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹膜内、心臓内、動脈内、および舌下の注入または導入の手法を包含している。
【０１９０】
特に好ましいのは、皮内注入または筋肉内注入である。本発明の薬学的組成物の滅菌した注入可能な形態は、水性または油性の懸濁物であり得る。これらの懸濁物は、好適な分散剤もしくは湿潤剤、および懸濁剤を用いて、従来公知の手法にしたがって調合され得る。
【０１９１】
特に好ましい実施形態において、本発明の薬学的組成物は、針に基づく従来の注入手法または針なしのシステム（例えばジェットインジェクション）を用いることによって、皮内または筋肉内の注入を介して投与される。好ましいさらなる実施形態において、本発明の薬学的組成物は、本明細書に規定されているようなジェットインジェクションによって投与され得る。好ましくは、本発明の薬学的組成物は、ジェットインジェクションによって筋肉内に投与され得る。他の実施形態によれば、薬学的組成物はジェットインジェクションによって皮内に投与される。
【０１９２】
好ましい実施形態において、薬学的組成物は、好ましくは皮内または筋肉内の注入によって、好ましくはジェットインジェクションによって、１回、２回または３回にわたって投与され得る。一部の実施形態によれば、好ましくは皮内注入または筋肉内注入を介した、好ましくはジェットインジェクションを用いることによる、本発明の薬学的組成物の単回投与は、本発明に係るｍＲＮＡ配列によってコードされている少なくとも１つの抗原に対する免疫応答を誘起するために、十分である。好ましい実施形態において、薬学的組成物の単回投与は、結果としてウイルスの中和を生じる免疫応答を誘起する。これに関連して、薬学的組成物の皮内または筋肉内の単回注入は特に好ましい。好ましくは、薬学的組成物のさらなる投与は、免疫応答を向上させるか、および／または延長させるために任意に実施され得る。
【０１９３】
特定の実施形態によれば、本発明の薬学的組成物は、アジュバントを含み得る。これに関連して、アジュバントは、先天的な免疫系お免疫応答（すなわち非特異的な免疫応答）を開始または向上させるために好適な任意の化合物と理解され得る。言い換えると、投与されるときに、本発明の薬学的組成物は、当該薬学的組成物に任意に含まれているアジュバントに起因して、先天的な免疫応答を好ましく誘起させる。好ましくは、そのようなアジュバントは、この場合（すなわち哺乳類における先天的な免疫応答の誘導を補助する）に好適な、当業者に知られているアジュバント（例えば、本明細書に規定されているようなアジュバントタンパク質または以下に規定されているようなアジュバント）から選択され得る。
【０１９４】
蓄積および送達にとって好適なアジュバントとして特に好ましいのは、本発明のｍＲＮＡ配列のとってのビヒクル、トランスフェクション剤または複合化剤としての、以上に規定されているようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物であり得る。
【０１９５】
さらに、本発明の薬学的組成物は、好ましくは病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合することによって、先天的な免疫系の免疫応答（すなわち非特異的な免疫応答）を開始または向上させるために好適な、１つ以上の付加的なアジュバントを含み得る。言い換えると、投与されるときに、薬学的組成物またはワクチンは、それらに任意に含まれているアジュバントに起因して先天的な免疫応答を誘起する。好ましくは、そのようなアジュバントは、この場合（すなわち哺乳類における先天的な免疫応答の誘導を補助すること）に好適な、当業者に知られているアジュバント（例えば、本明細書に規定されているようなアジュバントタンパク質または以下に規定されているようなアジュバント）から選択され得る。一実施形態によれば、そのようなアジュバントは、本明細書に規定されているようなアジュバントから選択され得る。
【０１９６】
また、そのようなアジュバントは、この場合（すなわち哺乳類における先天的な免疫応答の誘導を補助すること）に好適な、および／または本発明の薬学的組成物またはワクチンの構成要素の蓄積および送達にとって好適な、当業者に知られている任意のアジュバントから選択され得る。蓄積および送達にとって好適なアジュバントして好ましいのは、以上に規定されているようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物である。同様に、アジュバントは、例えば、本明細書に規定されているようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物からなる群、キトサン、ＴＤＭ、ＭＤＰ、ムラミルジペプチド、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、乳酸アルミニウム容器、水酸化アルミニウム、ＡＤＪＵＭＥＲＴＮ（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；藻類に由来するグルカン；プルロニクス；水酸化アルミニウムゲル（ａｌｕｍ）；タンパク質高吸着性の水酸化アルミニウムゲル；低粘度の水酸化アルミニウムゲル；ＡＦもしくはＳＰＴ（スクアラン（５％）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ７．４）；ＡＶＲＩＤＩＮＥＴＭ（プロパンジアミン）；ＢＡＹ  Ｒ１００５ＴＭ（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノブ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシル−アミド  ヒドロ酢酸塩）；ＣＡＬＣＩＴＲＯＬＴＭ（１−アルファ，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＲＴＭ（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラホロトキシン；コレラトキシンのコレラ−トキシン−Ａ１−タンパク質−Ａ−Ｄ−断片融合タンパク質，サブユニットＢ；ＣＲＬ  １００５（ブロック共重合体Ｐ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジメチルホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／ａｌｕｍ複合体（デオキシコリン酸のナトリウム塩）；フロイント完全アジュバント；フロイント不完全アジュバント；ガンマイヌリン；Gerbuアジュバント（ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ３５  グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛−Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８）の混合物）；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ４７  アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；イミキモド（−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）；ＤＲＶ（脱水−再水和ビヒクルから調製された免疫リポソーム）；インターフェロンガンマ；インターロイキン−１ベータ；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳＴＭ；ＩＳＯＣＯＰＲＥＰ７．０．３．ＴＭ；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥＴＭ（７−アリル−８−オキソグアノシン）；ＬＴ  ５  経口アジュバント（E.coliの不安定エンテロトキシン−プロトキシン）；任意の組成の微小球および微小粒子；ＭＦ５９ＴＭ；（スクア���ン水乳液）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ５１ＴＭ（精製されたフロイント不完全アジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ７２０ＴＭ（代謝可能な油状アジュバント）；ＭＰＬＴＭ（３−Ｑ−デサシル−４’−モノホスホリル脂質Ａ）；ＭＴＰ−ＰＥ；およびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ヒドロキシホスホリロキシ））エチルアミド）の１ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＮＥＴＭ（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｎ−ｓｎ−グリセロールジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキシダーゼ）；任意の組成の微小球および微小粒子；ＮＩＳＶ（非イオン性界面活性剤のビヒクル）；ＰＬＥＵＲＡＮＴＭ（β−グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモ共重合体；ミクロスフェア／ナノスフェア）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｌ１２１ＴＭ；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリル酸）；ＰＯＤＤＳＴＭ（プロテノイドミクロスフェア）；ポリエチレンカルバミン酸塩誘導体；ポリｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸の複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）；タンパク質コクリエート（cochleate）（Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL）；ＳＴＩＭＵＬＯＮＴＭ（ＱＳ−２１）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−ｏｔｅｃ−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール）；ＳＡＦ−１ＴＭ（「Syntexアジュバント調製物」）；SendaiプロテオリポソームおよびSendai含有脂質マトリクス；Ｓｐａｎ−８５（ソルビタントリオレイン酸塩）；Ｓｐｅｃｌ（Ｍａｒｃｏｌ５２、Ｓｐａｎ８５およびＴｗｅｅｎ８５の乳液）；スクアレン、すなわちRobane（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Theramid（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏｇＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａジパルミトキシプロピルアミド）；Ｔｈｅｒｏｎｙｌ−ＭＤＰ（TermurtideTM or [thr 1]-MDP；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌスレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰすなわりウイルス様粒子）；Walter-Reedリポソーム（水酸化アルミニウムに吸収されている脂質Ａを含んでいるリポソーム）、およびリポペプチド（特定のアルミニウム塩におけるＰａｍ３Ｃｙｓ（例えば、Ａｄｊｕ−ｐｈｏｓ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、Ｒｅｈｙｄｒｏｇｅｌ）が挙げられる）、乳液（ＣＦＡ、ＳＡＦ、ＩＦＡ、ＭＦ５９、Ｐｒｏｖａｘ、ＴｉｔｅｒＭａｘ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ、Ｖａｘｆｅｃｔｉｎが挙げられる）；共重合体（Ｏｐｔｉｖａｘ（ＣＲＬ１００５）、Ｌ１２１、Ｐｏｌｏａｘｍｅｒ４０１０）などが挙げられる）；リポソーム（Ｓｔｅａｌｔｈが挙げられる）、コクリエート（ＢＩＯＲＡＬ）；植物由来のアジュバント（Ｑ５２１、Ｑｕｉｌ  Ａ、Ｉｓｃｏｍａｔｒｉｘ、ＩＳＣＯＭが挙げられる）；共刺激のための安定なアジュバント（Ｔｏｍａｔｉｎｅが挙げられる）、生体高分子（ＰＬＧ、ＰＭＭ、Ｉｎｕｌｉｎが挙げられる）、微生物由来のアジュバント（Ｒｏｍｕｒｔｉｄｅ、ＤＥＴＯＸ、ＭＰＬ、ＣＷＳ、Ｍａｎｎｏｓｅ、ＣｐＧ核酸配列、ＣｐＧ７９０９、ヒトＴＬＲ１〜１０のリガンド、マウスＴＬＲ１〜１３のリガンド、ＩＳＳ−１０１８、３５  ＩＣ３１、Ｉｍｉｄａｚｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ、Ａｍｐｌｉｇｅｎ、Ｒｉｂｉ５２９、ＩＭＯｘｉｎｅ、ＩＲＩＶ、ＶＬＰ、コレラトキシン、熱不安定性毒素、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、Ｆｋａｇｅｌｌｉｎ、ＧＰＩアンカー、ＬＮＦＰＩＩＩ／Ｌｗｅｉｓ  Ｘ、抗菌ペプチド、ＵＣ−１Ｖ１５０、ＲＳＶ融合タンパク質ｃｄｉＧＭＰが挙げられる）；およびアンタゴニストとして安定なアジュバント（ＣＧＲＰ神経ペプチドが挙げられる）から選択され得る。
【０１９７】
特に好ましいアジュバントは、Ｔｈ１免疫応答またはナイーブＴ細胞の成熟の誘導を補助するアジュバント（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮｇ、以上に規定されているような任意の免疫刺激性核酸（好ましくは、免疫刺激性ＲＮＡ、ＣｐＧ  ＤＮＡなど）から選択され得る。
【０１９８】
さらなる好ましい実施形態において、本発明の薬学的組成物はまた、さらなる抗原もしくはさらなる抗原性をもたらす核酸；さらなる免疫治療剤；１つ以上の補助物質；またはヒトのトル様受容体に対するその結合親和性に起因して（リガンドとして）免疫刺激すると知られているさらなる任意の成分；および／またはアジュバント核酸（好ましくは免疫刺激性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ））からなる群から選択されるさらなる成分を、抗原性をもたらすｍＲＮＡに加えて、含んでいることが見込まれる。
【０１９９】
本発明の薬学的組成物は、所望される場合に、その免疫原性または免疫刺激能を向上させるために、１つ以上の補助物質を付加的に含み得る。本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、および本発明の薬学的組成物に必要に応じて含まれ得る補助物質の相乗作用は、それによって好ましく実現される。補助物質の種々の型に依存して、種々の機序は、この観点において考慮に入れられ得る。例えば、リポ多糖、ＴＮＦ−アルファまたはＣＤ４０リガンドは好適な補助物質の分類を形成している。一般的に、目的の様式において、免疫応答を向上させるか、および／または免疫応答に影響することを可能にする「危険信号」（ＬＰＳ、ＧＰ９６など）またはサイトカイン（例えばＧＭ−ＣＦＳ）の様式において、免疫系に影響する任意の作用物質を補助物質として使用することが見込まれる。特に好ましい補助物質は、先天性の免疫応答をさらに促進するサイトカイン（例えば、モノカイン、リンフォカイン、インターロイキンまたはケモカイン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮ−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＬＴ−ベータ、またはＴＮＦ−アルファ、成長因子（例えばｈＧＨ）））である。
【０２００】
本発明の薬学的組成物に含められ得るさらなる添加剤は、乳剤（例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）など）；湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）；着色剤；味質付加剤、薬学的な担体；タブレット形成剤；安定化剤；抗酸化剤；保存剤である。
【０２０１】
本発明の薬学的組成物はまた、ヒトのトル様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、またはマウスのトル様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２もしくはＴＬＲ１３に対するその結合親和性に起因して（リガンドとして）免疫刺激すると知られている、さらなる任意の化合物を付加的に含み得る。
【０２０２】
これに関連して、必要に応じて含まれているアジュバント成分は、本発明の薬学的組成物に含まれている抗原性をもたらすｍＲＮＡ（例えば、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているｍＲＮＡ）と同じ本発明のｍＲＮＡを含んでいることが、特に好ましい。
【０２０３】
しかし、本発明の薬学的組成物は、薬学的組成物の投与および薬学的組成物の成分の取り込みを促進するためのさらなる成分を含み得る。そのようなさらなる成分は、適切な担体もしくはビヒクル、任意の免疫応答を補助するための付加的なアジュバント、抗菌剤および／または抗ウイルス剤であり得る。
【０２０４】
したがって、さらなる実施形態において、本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体および／またはビヒクルをさらに含んでいる。
【０２０５】
そのような薬学的に許容可能な担体は、本発明の薬学的組成物の成分を含んでいる組成物の脂質または非脂質基剤を典型的に含んでいる。組成物が脂質の形態においてもたらされている場合、担体は、典型的に、発熱物質を含んでいない水、等張性の生理食塩水または緩衝化（水性）溶液（例えば、リン酸、クエン酸などの緩衝化溶液）である。注入バッファーは、特定の基準培地を基準にして高張性、等張性または低張性（すなわちバッファーは、特定の基準培地を基準にしてより高い塩含有量、同一の塩含有量、またはより低い塩含有量を有している）であり得、ここで、好ましくは、浸透圧作用または他の濃度作用に起因する細胞の障害を導かないような、上述の塩の濃度が、使用され得る。基準培地は、例えば、「インビボ法」に見出される液体（例えば、血液、リンパ液、細胞基質液または他の体液）、または例えば、「インビトロ」法において基準培地として使用され得る液体（例えば、通常のバッファーまたは液体）である。そのような通常のバッファーまたは液体は、当業者に知られている。乳酸リンガー溶液は、液体の材料として特に好ましい。
【０２０６】
しかし、処置される患者への投与に好適な、１つ以上の適合性の固体または液体の、充填剤または希釈剤または封入化合物は、本発明に係る薬学的組成物についてと同様に使用され得る。本明細書に使用されるとき、「適合性」という用語は、本発明の薬学的組成物のこれらの成分が、典型的な使用条件における薬学的組成物の薬学的有効性を大きく減ずる相互作用を起こさない様式において、本発明の薬学的組成物の成分と混合可能であることを意味する。
【０２０７】
本発明の薬学的組成物のさらなる成分は、免疫グロブリン、好ましくはＩｇＧ、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、または（複数の）ポリクローナル血清など、最も好ましくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）を対象にしている免疫グロブリン（例えばPalivizumab）から選択され得る免疫治療剤であり得る。好ましくは、そのようなさらなる免疫治療剤は、ペプチド／タンパク質として準備され得るか、または核酸、好ましくはＤＮＡもしくはＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡによってコードされ得る。そのような免疫治療剤は、本発明の抗原性をもたらすｍＲＮＡによって標的化されている能動的なワクチン接種に加えて、受動的なワクチン接種をもたらすことを可能にする。
【０２０８】
さらに、特定の実施形態において、抗原性をもたらすｍＲＮＡに加えて、さらなる抗原は、本発明の薬学的組成物に含められ得、典型的に、細胞、細胞溶解液、ウイルス、弱毒化ウイルス、不活性化ウイルス、タンパク質、ペプチド、核酸、または他の生体分子もしくは他の生体高分子（またはその断片）などの物質である。好ましくは、抗原は、タンパク質およびペプチド（例えば、好ましくは５〜１５、より好ましくは６〜９アミノ酸を有している、これらのタンパク質またはペプチドのエピトープ）、またはその断片であり得る。特に、上記タンパク質、ペプチドまたはエピトープは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１もしくは非構造タンパク質ＮＳ２、またはこれらの断片、バリアントもしくは誘導体に由来し得る。さらに、抗原はまた、任意の他の生体分子（例えば、脂質、炭水化物など）を含み得る。好ましくは、抗原は、タンパク質もしくは（ポリ）ペプチドの抗原、核酸、タンパク質もしくは（ポリ）ペプチドの抗原をコードしている核酸、多糖の抗原、多糖と結合された抗原、脂質の抗原、糖脂質の抗原、細菌、細胞（ワクチン）、または死滅させたウイルスもしくは弱毒化されたウイルスである。
【０２０９】
本明細書に規定されているような本発明の薬学的組成物またはワクチンは、さらなる添加剤または付加的な化合物をさらに含み得る。薬学的組成物に含まれ得るさらなる添加剤は、乳剤（例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）など）；湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウムなど）；着色剤；味質付加剤、薬学的担体；タブレット形成剤；安定化剤：抗酸化剤；保存剤；ＲＮＡ阻害剤および／または抗菌剤もしくは抗ウイルス剤である。さらに、本発明の薬学的組成物は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の遺伝子を対象にする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（例えば、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、リン酸タンパク質Ｐ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、非構造タンパク質ＮＳ１または非構造タンパク質ＮＳ２をコードしている遺伝子を対象にするｓｉＲＮＡ）を包含し得る。本発明の薬学的組成物は、本発明の薬学的組成物の、「安全かつ有効な量の」成分、特に本明細書に規定されているような（複数の）本発明のｍＲＮＡ配列、を典型的に含んでいる。本明細書に使用されるとき、「安全かつ有効な量」は、疾患もしくは障害の改善に向かう変化を大きく誘導するため、または疾患（好ましくは本明細書に規定されているようなＲＳＶ感染）を予防するために十分である、本明細書に規定されているような（複数の）本発明のｍＲＮＡ配列の量を意味する。しかし同時に、「安全かつ有効な量」は、副作用を避けるため、ならびに利点および危険性の目的に即した関係性を可能にするために十分に小さい。これらの境界の決定は、目的に即した医学的判断の範囲内にある。
【０２１０】
本発明の薬学的組成物は、一般的な薬学的組成物またはワクチンとして、ヒトおよび獣医の医療目的（好ましくはヒトの医療目的）に使用され得る。
【０２１１】
好ましい特定の他の局面によれば、本発明の薬学的組成物（すなわち本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物）は、ワクチンとして提供され得るか、または使用され得る。典型的に、そのようなワクチンは、薬学的組成物について、以上に規定されている。さらに、そのようなワクチンは、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物を典型的に含んでいる。
【０２１２】
また、本発明のワクチンは、本発明の薬学的組成物にとっての、本明細書に規定されているような、薬学的に許容可能な担体、アジュバントまたはビヒクルを含み得る。特にこの本発明のワクチンに関連して、薬学的に許容可能な担体は、本発明のワクチンが投与される方法によって原則として決定され得る。本発明のワクチンは、例えば全身的または局所的に、投与され得る。全身投与のための経路としては、一般的に、例えば、経皮、経口、非経口（皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、および腹腔内の注入、および／または鼻腔内投与経路が挙げられる）の経路が挙げられる。局所（local）投与のための経路としては、一般的に、例えば、局所（topical）投与経路だけでなく、皮内、経皮、皮下もしくは筋肉内の注入または病巣内、頭蓋内、肺内、心臓内および舌下の注入が挙げられる。より好ましくは、ワクチンは、皮内、皮下または筋肉内の経路であり得る。したがって、本発明のワクチンは、液体（ときに固体）の形態において好ましく調合され得る。
【０２１３】
好ましい実施形態において、本発明のワクチンは、皮内または筋肉内の注入を介して、好ましくは従来の針に基づく注入手法を用いることによって、または針なしの系（例えば、ジェットインジェクション）を用いることによって、投与され得る。好ましいさらなる実施形態において、本発明のワクチンは、本明細書に規定されているようなジェットインジェクションによって投与され得る。好ましくは、本発明のワクチンは、ジェットインジェクションよって筋肉内に投与される。他の実施形態によれば、ワクチンは、ジェットインジェクションを介して皮内に投与される。
【０２１４】
好ましい実施形態において、ワクチンは、好ましくは皮内または筋肉内の注入によって、１回、２回または３回にわたって投与され得る。一部の実施形態によれば、好ましくはジェットインジェクションを用いる、好ましくは皮内または筋肉内の注入を介した、本発明のワクチンの単回投与は、本発明に係るｍＲＮＡによってコードされている少なくとも１つの抗原に対する免疫応答を誘起するために十分である。好ましい実施形態において、ワクチンの単回投与は、ウイルスの中和を生じる免疫応答を誘起する。これに関連して、ワクチンの単独かつ単回の皮内または筋肉内の注入が特に好ましい。好ましくは、ワクチンのさらなる投与は、免疫応答を向上させるため、および／または延長させるために、任意に実施され得る。
【０２１５】
本発明のワクチンは、必要に応じてその免疫原性または免疫刺激能を向上させるために、１つ以上の補助的な物質を付加的に含み得る。特に好ましいのは、薬学的組成物について規定されているような、補助的な物質または添加剤としてのアジュバントである。
【０２１６】
さらなる局面において、本発明は、本発明のｍＲＮＡ配列の成分、複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物、本発明の薬学的組成物もしくはワクチン、ならびに任意に当該組成物の投与および用量についての情報を有している技術的な取扱説明書を備えているキットまたはキットの部分に関する。
【０２１７】
本発明のｍＲＮＡ配列の成分に加えて、複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物、本発明の薬学的組成物またはワクチン  上記キットは、本明細書に規定されているような薬学的に許容可能なビヒクル、アジュバントおよび少なくとも１つのさらなる成分を付加的に含み得る。本発明のｍＲＮＡの成分、複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物、本発明の薬学的組成物もしくはワクチン、および例えばアジュバントは、凍結乾燥された形態において提供され得る。したがって、好ましい実施形態において、ワクチン接種用のキットの使用前に、備えられているビヒクルは、例えば備えられている技術的な取扱説明書に、記載されているような予め決められている量において、凍結乾燥されている成分に加えられる。本発明のｍＲＮＡ配列をそうすることによって、上述の局面に係る、複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物、本発明の薬学的組成物またはワクチンは、以上に規定されているような方法において、後に使用され得る。
【０２１８】
本発明は、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物、本発明の薬学的組成物、本発明のワクチン（いずれも本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡを含んでいる）、または当該ｍＲＮＡを含んでいるキットのいくつかの用途および使用をさらに提供する。
【０２１９】
さらなる局面において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているｍＲＮＡ配列、組成物、薬学的組成物、ワクチンおよびキット（いずれもＲＳＶ感染の予防処置および治療処置の方法における使用のためのｍＲＮＡ配列を含んでいる）を提供する。したがって、さらなる局面において、本発明は、医薬として規定されているような、本発明のｍＲＮＡ配列、複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物、本発明のワクチン、および本発明のキットの第１の医療用途に関する。特に、本発明は、以上に規定されているような、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているｍＲＮＡ配列の、医薬の調製のための、使用を提供する。
【０２２０】
他の局面によれば、本発明は、本明細書に規定されているような呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているｍＲＮＡ配列（必要に応じて、複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる組成物、薬学的組成物またはワクチン、キットまたはキットの部分の形態における）の、本明細書に規定されているようなＲＳＶ感染の処置のための、第２の医薬用途に関する。特に、上述の通りの方法に使用される、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしているｍＲＮＡは、薬学的組成物、必要に応じて添加されるアジュバントおよび以上に規定されているような必要に応じて添加されるさらなる成分（例えば、さらなる抗原またはＲＳＶ免疫グロブリン）とともに調合されるｍＲＮＡ配列である。これに関連して、特に、乳児、老人および免疫障害のある患者の（予防的な）処置が好ましい。より一層好ましいのは、早期産児および慢性の肺疾患にかかっている乳児の（予防的な）処置である。
【０２２１】
本発明のｍＲＮＡ配列は、数回の用量によってＲＳＶ感染を予防または処置するために投与されるように、代替的に提供され得る。上記用量のそれぞれは、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質、またはその断片、バリアントもしくは誘導体をコードしている本発明のｍＲＮＡを含んでおり、例えば、第１の用量は、融合タンパク質Ｆに由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質（またはその断片、バリアントもしくは誘導体）をコードしている少なくとも１つのｍＲＮＡを含んでおり、第２の用量は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の異なる抗原、好ましくは核タンパク質Ｇ（またはその断片、バリアントもしくは誘導体）、Ｍ２−１または糖タンパク質Ｇ（またはその断片、バリアントもしくは誘導体）に由来する少なくとも１つの抗原ペプチドまたは抗原タンパク質をコードしている少なくとも１つのｍＲＮＡを含んでいる。その実施形態によれば、両方の用量は、両方（例えば、融合タンパク質ＦをコードしているｍＲＮＡおよび核タンパク質ＮをコードしているｍＲＮＡ）を含んでいる１つの単回組成物の投与と同じ免疫学的作用を実現するために、時差的な方法において（すなわち、続いて、一方の直後（例えば、１０分未満、好ましくは２分未満のうち）に他方を）、身体の同じ部位に投与される。
【０２２２】
特定の実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ配列または本発明の薬学的組成物もしくはワクチンは、単回用量として患者に投与され得る。一部の実施形態において、本発明のｍＲＮＡまたは本発明の薬学的組成物もしくはワクチンは、単回用量、それに続く、第２の用量および必要に応じて第３、第４（またはそれ以降）の用量として患者に投与され得る。この実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ配列または本発明の薬学的組成物もしくはワクチンを用いた追加接種は、第２（または第３、第４など）の接種に続いて、好ましくは以下に規定されているように、特定の期間において患者に投与され得る。これに関連して、数回の用量は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の同じ抗原ペプチドまたは抗原タンパク質（例えば、融合タンパク質Ｆ）をコードしている同じｍＲＮＡ配列を含んでいることが特に好ましい。その実施形態において、容量は、特定の期間（例えば、２０〜３０日間）において与えられる。例えば、ばくろ後の予防のために、本発明のｍＲＮＡ配列、または本発明の薬学的組成物もしくはワクチンの少なくとも５回の用量は、２０〜３０日間に投与され得る。
【０２２３】
好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡ、本発明の薬学的組成物またはワクチンは、好ましくは従来の針に基づく注入手法または針なしの系（例えば、ジェットインジェクション）を用いることによって、皮内または筋肉内の注入を介して投与される。好ましいさらなる実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンは、本明細書に規定されているようなジェットインジェクションによって投与され得る。好ましくは、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンは、ジェットインジェクションによって筋肉内に投与される。他の実施形態によれば、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンは、ジェットインジェクションを介して皮内に投与される。
【０２２４】
好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンは、好ましくは皮内または筋肉内の注入によって、好ましくはジェットインジェクションによって、１回、２回または３回にわたって投与され得る。一部の実施形態において、好ましくは皮内または筋肉内の注入を介した、好ましくはジェットインジェクションによる本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンの単回投与は、本発明に係るｍＲＮＡ配列によってコードされている少なくとも１つの抗原に対する免疫応答誘起するために十分である。好ましい実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンの単回投与は、ウイルスの中和を生じる免疫応答を誘起する。これに関連して、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンの、単独かつ単回の皮内または筋肉内の注入は、特に好ましい。好ましくは、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンのさらなる投与は、免疫応答を向上させるか、および／または延長させるために、必要に応じて実施され得る。
【０２２５】
一部の実施形態において、本発明のｍＲＮＡ配列、本発明の薬学的組成物またはワクチンを用いたそのような追加接種は、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列または本発明の薬学的組成物もしくはワクチンのために規定されているような、付加的な化合物または成分を利用し得る。
【０２２６】
また、さらなる局面において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、短い疎水性タンパク質ＳＨ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、ラージポリメラーゼＬ、Ｍ２−１タンパク質、Ｍ２−２タンパク質、リン酸タンパク質Ｐ、非構造タンパク質ＮＳ１または非構造タンパク質ＮＳ２に由来する、コードされている抗原ペプチドまたは抗原タンパク質の発現のための方法を提供する。当該方法は、例えば、ステップａ）本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物を、準備すること、ステップｂ）本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物を、発現系（例えば、無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞または体細胞）、組織または生体）に使用することまたは投与することを包含している。上記方法は、検査室、研究、ペプチドもしくはタンパク質の工業生産および／または治療目的に適用され得る。これに関連して、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる組成物を調製した後に、それは、露出した形態もしくは複合化された形態においてか、または本明細書に規定されているような薬学的組成物もしくはワクチンとして、好ましくはトランスフェクションを介してか、または本明細書に規定されている投与様式のいずれかを用いて、無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞または体細胞）、組織または生体に対して、典型的に使用されるか、または投与される。上記方法は、インビトロ、インビボまたはエクスビボにおいて実施され得る。上記方法は、特定の疾患（特に感染性疾患、好ましくは本明細書に規定されているようなＲＳＶ感染）の処置に関連して、さらに実施され得る。
【０２２７】
これに関連して、インビトロは、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物の、生体外にある培養細胞へのトランスフェクションまたは形質導入であると、本明細書において規定され；インビボは、本発明のｍＲＮＡ配列、または複数の本発明のｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物の、当該本発明のｍＲＮＡ配列または本発明の組成物の使用による、生体の全体または個体への、トランスフェクションまたは形質導入であると、本明細書において規定され；；エクスビボは、本発明のｍＲＮＡ配列、または複数の本発明のｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物の、生体または個体の外にある細胞へのトランスフェクションまたは形質導入、ならびにトランスフェクションされた細胞の生体または個体への、続く使用であると、本明細書において規定される。
【０２２８】
同様に、他の局面によれば、本発明はまた、例えば本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または本明細書に規定されているような複数の本発明のｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物を、例えば無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞または体細胞）、組織または生体に対して、使用すること、または投与することによる、好ましくは診断目的もしくは治療目的、コードされている抗原ペプチドもしくは抗原タンパク質の発現のための、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または本明細書に規定されているような複数のｍＲＮＡ配列を含んでいる本発明の組成物の使用を提供する。上記使用は、検査室、研究、ペプチドもしくはタンパク質の工業生産用の診断、および／または治療目的に適用され得る。これに関連して、本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡ配列、または本明細書に規定されているような複数のｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物を調製した後に、それは、露出した形態もしくは複合化された形態においてか、または本明細書に規定されているような薬学的組成物もしくはワクチンとして、好ましくはトランスフェクションを介してか、または本明細書に規定されている投与様式のいずれかを用いて、無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞または体細胞）、組織または生体に対して、典型的に使用されるか、または投与される。使用は、インビトロ、インビボまたはエクスビボにおいて実施され得る。使用は、特定の疾患（特に感染性疾患、好ましくは本明細書に規定されているようなＲＳＶ感染）の処置に関連して、さらに実施され得る。
【０２２９】
さらなる局面において、本発明は、ＲＳＶ感染の処置または予防の方法を提供する。当該方法は、以下のステップ：
ａ）本発明のｍＲＮＡ配列、複数の本発明のｍＲＮＡ配列を含んでいる組成物、本発明の薬学的組成物、または本明細書に規定されているような本発明のｍＲＮＡを含んでいるキットもしくはキットの部分を準備すること；
ｂ）ｍＲＮＡ配列番号、組成物、薬学的組成物またはキットもしくはキットの部分を、組織または生体に使用すること、または投与すること；
ｃ）必要に応じてＲＮＡ免疫グロブリンを投与すること
を包含している。
【０２３０】
まとめると、本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）の少なくとも１つの抗原ペプチドまたはタンパク質をコードしているコード領域を含んでいるｍＲＮＡ配列を、一部の局面において提供する。本発明のｍＲＮＡ配列は、合胞体ウイルス（ＲＳＶ）によって引き起こされる感染の予防的処置および治療的処置の方法における使用を目的としている。したがって、本発明は、ＲＳＶ感染の予防的処置および／または治療的処置の方法における使用のための、本明細書に規定されているようなｍＲＮＡ配列に関する。
【０２３１】
本発明において、特に明記されていなければ、複数の代替物および実施形態の異なる特徴は、好適な場合に互いに組合せられ得る。さらに、「含んでいる」という用語は、特に言及がなされていない場合、「からなる」のみに限定して、狭く解釈されるべきではない。本発明に関して、「からなる」は、「含んでいる」が本明細書に使用されているいずれの場合にも、「含んでいる」の範囲にあることを、本発明者らによって特に意図されている実施形態である。
【０２３２】
明細書に言及されているすべての刊行物、特許および特許出願は、個々の特許または特許出願のそれぞれが、参照によって本明細書に組み込まれると詳細かつ個々に示されているかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。上述の発明は、例示および理解の容易さを目的として詳細に説明されているが、特定の変更および修正が添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなくなされ得ることは、本発明の教示を考慮した当業者にとって容易に明らかである。
【０２３３】
〔図面の簡単な説明〕
以下に示されている図面は、単なる例証であり、さらなる一面において本発明を説明している。これらの図面は、それらに本発明を限定しているとは解釈されるべきではない。
【０２３４】
図１：ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株のＲＳＶ−Ｆタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ）をコードしているＲ１６９１の、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンに含まれている通りのＧ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３１）。
【０２３５】
図２：ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株のＲＳＶ−Ｆタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ）をコードしているＲ２５１０の、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンに含まれている通りのＧ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３２）。
【０２３６】
図３：ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株（ＨＳＶ−Ｆ−ｌｏｎｇ）のＲＳＶ−Ｆ  ｄｅｌ５５４−５７４変異体タンパク質をコードしているＲ２８２１の、Ｇ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３３）。
【０２３７】
図４：ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株（ＨＳＶ−Ｆ−ｌｏｎｇ）のＲＳＶ−Ｎタンパク質をコードしているＲ２８３１の、Ｇ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３４）。
【０２３８】
図５：ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株（ＨＳＶ−Ｆ−ｌｏｎｇ）のＲＳＶ−Ｍ２−１タンパク質をコードしているＲ２８３３の、Ｇ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３５）。
【０２３９】
図６：ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンが、不活性化ＲＳＶに対する抗体力価に匹敵する、ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対する抗体力価を誘導することを示している。
メスのＢＡＬＢ／ｃマウスの内皮（ｉ．ｄ．）に、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（１６０μｇのＲ１６９１）またはバッファーコントロールとしての乳酸リンゲル液（ＲｉＬａバッファー）を注入した。１群の筋肉内（ｉ．ｍ．）に、１０μｇの不活性化ＲＳＶ  ｌｏｎｇワクチンを注入した。すべての動物は、２１日および３５日に追加注入を受け、血液サンプルを、実施例２に記載の通りに、プールされた抗体力価の決定のために４９日に回収した。
明らかなように、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンは、サブクラスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの抗Ｆタンパク質抗体を誘導する。抗体力価はグラフに示されている（ｎ＝５  マウス／群）。
【０２４０】
図７：ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ１６９１）が、長期にわたる免疫応答をマウスにおいて誘導することを示している。
実験を実施例３に記載の通りに実施し、抗体の総ＩｇＧ力価をＥＬＩＳＡによって決定した。
明らかなように、抗体の力価は、最後の追加ワクチン接種後の少なくとも１１か月にわたって安定である。
【０２４１】
図８：ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ１６９１）が、ＲＳＶ  Ｆｕｓｉｏｎ（Ｆ）タンパク質特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
実験を実施例４に記載の通りに実施し、Ｔ細胞を、細胞内のサイトカイン染色によって、抗原特異的な、サイトカインの誘導について分析した。細胞を、ＲＳＶ−Ｆペプチド（ｓｔｉｍ．Ｆ；KYKNAVTEL）またはコントロールのインフルエンザＨＡペプチド（ｓｔｉｍ．ＨＡ；IYSTVASSL）によって刺激した。グラフにおける線は中央値を表している（ｎ＝５  マウス／群）。
明らかなように、ＲＳＶ  Ｆｕｓｉｏｎ（Ｆ）タンパク質特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導し、対照的に、不活性化ＲＳＶに基づくワクチンは、Ｆタンパク質特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導できない。
【０２４２】
図９：ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３１）が、核タンパク質特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
実験を実施例５に記載の通りに実施し、細胞を、ProMix RSV-M（１５ｍｅｒペプチド）を用いた刺激後におけるサイトカインの抗原特異的な誘導について、細胞内サイトカイン染色によって分析した。グラフにおける線は、中央値を表している（ｎ＝５  マウス／群）。
明らかなように、ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチンは、ＲＳＶ核タンパク質（Ｎ）−特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導し、対照的に不活性化ＲＳＶに基づくワクチンは、Ｎタンパク質特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導できない。
【０２４３】
図１０：ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３１）が、核タンパク質（Ｎ）−特異的な多機能性ＣＤ４＋細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
実験を実施例５に記載の通りに実施し、Ｔ細胞を、ProMix RSV-M（１５ｍｅｒペプチド）を用いた刺激後におけるサイトカインの抗原特異的な誘導について、細胞内サイトカイン染色によって分析した。グラフにおける線は、中央値を表している（ｎ＝５  マウス／群）。
明らかなように、ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチンは、ＲＳＶ核タンパク質（Ｎ）特異的な多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導し、対照的に、不活性化ＲＳＶに基づくワクチンは、Ｎタンパク質特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導しない。
【０２４４】
図１１：ＲＳＶ−Ｍ２−１  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３３）は、Ｍ２−１特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
実験を実施例５に記載の通りに実施し、Ｔ細胞を、Ｍ２−１特異的な９ｍｅｒペプチドを用いた刺激後におけるサイトカインの抗原特異的な誘導について、細胞内サイトカイン染色によって分析した。グラフにおける線は、中央値を表している（ｎ＝５  マウス／群）。
明らかように、ＲＳＶ−Ｍ２−１  ｍＲＮＡワクチンは、ＲＳＶ  ＲＳＶ−Ｍ２−１特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導し、対照的に、不活性化ＲＳＶに基づくワクチンは、Ｍ２−１タンパク質特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞をできない。
【０２４５】
図１２：単独（ＲＳＶ−Ｆ＝Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体＝Ｒ２８３１）または他のＲＳＶタンパク質をコードしているｍＲＮＡとの組合せ（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）のいずれかのＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンは、コットンラットにおいて液性免疫応答を誘導することを示している。
実験を実施例６に記載の通りに実施し、ＲＳＶ−Ｆ特異的な総ＩｇＧ力価を、４９日にＥＬＩＳＡによって決定した。血清を、後に示されている通り、異なる希釈率において分析した。
【０２４６】
図１３：単独（ＲＳＶ−Ｆ、Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体、Ｒ２８２１）または他のＲＳＶタンパク質をコードしているｍＲＮＡとの組合せ（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）のいずれかのＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンが、ウイルス中和抗体力価によって示されている通り、コットンマウスにおいて機能的な抗体の形成を誘導することを示している。
実験を実施例６に記載の通りに実施し、４９日におけるウイルス中和力価を、プラーク形成アッセイによって決定した。
【０２４７】
図１４：単独（ＲＳＶ−Ｆ＝Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体＝Ｒ２８２１）または他のＲＳＶタンパク質をコードしているｍＲＮＡとの組合せ（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）のいずれかのＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンが、ＲＳＶウイルスを用いて抗原投与されたコットンマウスにおいて、肺および鼻腔の力価を低下させることを示している。
実験を実施例６に記載の通りに実施した。
（Ａ）ＲＳＶ抗原投与感染後の５日における肺の力価。ｍＲＮＡワクチンを用いてワクチン接種されたすべての動物群は、実施されたウイルス力価測定の検出レベル以下のウイルス力価を示し、ウイルスの肺の力価についてワクチン接種されたコットンラットの防御を証明している。ｍＲＮＡワクチンと比べて、ホルマリン不活性化ＲＳＶに基づくワクチンは、肺におけるウイルス力価を抑制できなかった。
（Ｂ）ＲＳＶ抗原投与感染後の５日における鼻腔の力価。また、鼻腔組織におけるウイルス力価は、ｍＲＮＡを用いてワクチン接種された群において大きく低下した。ｍＲＮＡと比べて、ホルマリン不活性化ウイルスに基づくワクチンは、鼻腔のウイルス力価を低下させ得なかった。
【０２４８】
図１５：実施例６に記載されているＲＳＶコットンラット抗原投与試験から得られた肺の組織病理分析の結果を示している。
【０２４９】
図１６：ウイルスゲノムのコピー数（ＲＳＶ  ＮＳ−１遺伝子のコピー数を測定することによる）の定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、または実施例６に記載されているＲＳＶコットンラット抗原投与試験のＲＳＶ感染動物（またはコントロール）の肺組織からの、発現されたサイトカインの結果を示している。
【０２５０】
図１７：ＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチン（ＲＳＶ−Ｆ＝ｒ２５１０；ＲＳＶ  Ｆ＊（ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体）Ｒ２８２１）が、ＲＳＶウイルスを用いて抗原投与されたコットンラットにおける肺の力価を低下させることを示している。
実験を実施例７に記載の通りに実施した。
（Ａ）ＲＳＶ抗原投与感染後の５日における肺力価。ｍＲＮＡを用いて皮内にワクチン接種されたすべての動物群は、バッファーコントロール群と比べて低下したウイルス力価を示し、ウイルスの肺の力価についてワクチン接種されたコットンラットの防御を証明している。ＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡ枠地温の前もっての単回用量は、肺におけるウイルス力価を効果的に低下させた。
（Ｂ）―ＲＳＶ抗原投与感染後の５日における肺の力価。また、肺におけるウイルス力価は、ｍＲＮＡを用いて筋肉内にワクチン接種された群において強く低下された。
【０２５１】
〔実施例〕
以下に示されている実施例は、単に例示であり、さらなる様式において本発明を説明している。これらの実施例は、それらに本発明を限定することを意図されていない。
【０２５２】
（実施例１：ｍＲＮＡワクチンの調製）
１．ＤＮＡコンストラクトおよびｍＲＮＡコンストラクトの調製
本実施例のために、ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株のＲＳＶ−Ｆタンパク質（Ｒ１６９１およびＲ２５１０）、ＲＳＶ−Ｆ  ｄｅｌ５５４−５７４（Ｒ２８２１）変異タンパク質、ＲＳＶ
Ｎ−タンパク質（Ｒ２８３１）およびＲＳＶ  Ｍ２−１タンパク質（Ｒ２８３３）をコードしている複数のＤＮＡ配列を準備し、続くインビトロ転写反応に使用した。ＲＳＶ−Ｆ  ｄｅｌ５５４−５７４変異タンパク質は、これまでに説明されている（Oomens et al. 2006. J. Virol. 80(21):10465-77）。
【０２５３】
第１の調製にしたがって、上述のｍＲＮＡをコードしているＤＮＡ配列を調製した。コンストラクトＲ１６９１を、安定化のためのＧＣ最適化配列（その後ろに、アルファ−グロビン−３’−ＵＴＲ（配列番号２９にしたがうｍｕａｇ（変異されたアルファ−グロビン−３’−ＵＴＲ））から得られた安定化配列、６４のアデノシンのストレッチ（ポリ（Ａ）配列）、３０のシトシンのストレッチ、および配列番号３０にしたがうヒストンステムループがある）を導入することによる野生型のコード配列を修飾することによって、調製した。配列番号３１において（図１を参照）、対応するｍＲＮＡの配列が示されている。コンストラクトＲ２５１０、Ｒ２８２１、Ｒ２８３１およびＲ２８３３を、配列番号２３にしたがうリボソームタンパク質３２Ｌから得られた５’−ＴＯＲ−ＵＴＲを導入すること、安定化のためのＧＣ最適化配列（その後ろに、アルブミン−３’−ＵＴＲ（配列番号２５にしたがうアルブミン７）から得られた安定化配列、６４のアデノシンのストレッチ（ポリ（Ａ）配列）、３０のシトシンのストレッチ（ポリ（Ｃ）配列）および配列番号３０にしたがうヒストンステムループ）を導入することによって野生型のコード配列を変更することによって、調製した。配列番号３２〜３５（図２〜５を参照）において、対応するｍＲＮＡの配列が示されている。
【０２５４】
【表１】
2020014474.tif 000008
【０２５５】
２．インビトロ転写
第１段落にしたがって調製したそれぞれのＤＮＡプラスミドを、キャップ類似物（ｍ７ＧｐｐｐＧ）の存在下において、Ｔ７ポリメラーゼを用いて、インビトロにおいて転写させた。続いて、ｍＲＮＡを、PureMessenger（登録商標）（CureVac、Tubingen、Germany；国際公開第２００８／０７５９２号）を用いて精製した。
【０２５６】
３．試薬
複合化試薬：プロタミン。
【０２５７】
４．ワクチンの調製
ｍＲＮＡを、比率（１：２）（ｗ／ｗ）（免疫賦活成分）におけるプロタミンの、ｍＲＮＡに対する添加によって、プロタミンと複合化させた。１０分間のインキュベーション後に、抗原提示するｍＲＮＡとして使用された同量の遊離ｍＲＮＡを加えた。
【０２５８】
例えば：配列番号３１にしたがうＲＳＶ  Ｆタンパク質  ｌｏｎｇ（Ｒ１６９１）をコードしている、２：１の比率（ｗ／ｗ）においてプロタミンと複合化されているｍＲＮＡ、および配列番号３１にしたがうＲＳＶ  Ｆタンパク質  ｌｏｎｇ（Ｒ１６９１）をコードしている、抗原提示する遊離ｍＲＮＡからなる免疫賦活成分（比率１：１；複合化ＲＮＡ：遊離ＲＮＡ）を含んでいるＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇワクチン（Ｒ１６９１）。
【０２５９】
（実施例２：ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンによる、マウスにおける液性免疫応答の誘導）
免疫化
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＲＳＶ−ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（実施例１にしたがうＲ１６９１；２５μｇ／マウス／ワクチン接種日）またはバッファーコントロールとしての乳酸リンゲル液）を皮下に（ｉ．ｄ．）、０日に、表２に示されている通りに注入した。コントロール群に、１０μｇの不活性化ＲＳＶ  ｌｏｎｇワクチンを筋肉内に（ｉ．ｍ．）、注入した。不活性化「呼吸器合胞体ウイルス抗原」（不活性化ＲＳＶ  ｌｏｎｇ）を、INSTITUT VIRION/SERION GmbH-SERION IMMUNDIAGNOSTICA GmbHから購入した。不活性化ウイルスを、０．２μｇ／μＬの最終濃度が達成されるように、滅菌ＰＢＳにおいて希釈した。すべての動物は、１４日および２８日に追加免疫を受けた。血液サンプルを、抗ＲＳＶ  Ｆ抗原の力価の決定のために４２日に回収した。
【０２６０】
【表２】
2020014474.tif 000009
【０２６１】
抗ＲＳＶ  Ｆタンパク質抗体の、ＥＬＩＳＡによる決定
ＥＬＩＳＡプレートを、組換えヒトＲＳＶ融合糖タンパク質（rec.hu F-protein；最終濃度：５μｇ／ｍＬ）（Sino Biological Inc.）を用いて被覆した。被覆されたプレートを、所定の血清希釈物を用いてインキュベートし、Ｆタンパク質に対して特異的に結合することを、ビオチン化アイソトープに特異的な抗マウス抗体を、ＡＢＴＳ基質をともなったストレプトアビジン−ＨＲＰ（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）との組合せにおいて用いて、検出する。
【０２６２】
結果
図６から明らかなように、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンは、不活性化ＲＳＶに対する抗体力価に匹敵する、ＲＳＶ  Ｆタンパク質に対する抗体力価（総ＩｇＧ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ）を含んでいる。
【０２６３】
（実施例３：ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンによる、マウスにおける長期にわたる液性免疫応答の誘導）
免疫化
ＢＡＬＢ／ｃマウスの皮内（ｉ．ｄ．）に、２０μｇのＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ１６９１）または乳酸リンゲル液（ＬｉＬａ）バッファーを、表３に示されているワクチン接種予定にしたがって注入した。
【０２６４】
血液を、最後の免疫化から２週間後、４か月後および１１か月後に採取した。
【０２６５】
【表３】
2020014474.tif 000010
【０２６６】
結果
図７から明らかなように、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンは、最後の追加免疫から１１か月にわたる安定な抗体力価によって証明される通り、長期にわたる免疫応答を誘導した。
【０２６７】
（実施例４：ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンによる、マウスにおける細胞性免疫応答の誘導）
表４に示されているように、ＢＡＬＢ／ｃマウスの皮内（ｉ．ｄ．）に、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン  Ｒ１６９１、またはバッファーコントロールとしての乳酸リンゲル液（ＲｉＬａ）を、０日に注入した。コントロール群の筋肉内（ｉ．ｍ．）に、１０μｇの不活性化ＲＳＶ  ｌｏｎｇワクチンを注入した。不活性化「呼吸器合胞体ウイルス抗原」（不活性化ＲＳＶ）を、INSTITUT VIRION/SERION GmbH-SERION IMMUNDIAGNOSTICA GmbHから購入した。不活性化ウイルスを、０．２μｇ／μＬの最終濃度が達成されるように滅菌ＰＢＳに希釈した。
【０２６８】
すべての動物は、１４日および２８日に追加免疫を受けた。脾臓を、抗原特異的なＴ細胞のために１４日に採取した。
【０２６９】
【表４】
2020014474.tif 000011
【０２７０】
細胞内サイトカイン染色
ワクチン接種されたマウスおよびコントロールのマウスからの脾臓細胞を、標準的なプロトコルにしたがって分離した。簡単に説明すると、分離した脾臓細胞を細胞ろ過器に通してすりつぶし、ＰＢＳ／１％ＦＢＳにおいて洗浄し、赤血球を溶解させた。ＰＢＳ／１％ＦＢＳを用いた十分な洗浄段階の後に、脾臓細胞を、９６ウェルプレート（２×１０６細胞／ウェル）に播いた。翌日に、細胞を、ＲＳＶ−Ｆペプチド（ＫＹＫＮＡＶＴＥＬ；５Ｍｇ／ｍｌ；Ｈ−２ｋｄの再構築されたＴ細胞エピトープ）または無関係なインフルエンザＨＡタンパク質由来のコントロールペプチド（ＩＹＳＴＶＡＳＳＬ；５μｇ／ｍｌ；EMC Microcollectionsから購入した）、ならびに抗ＣＤ２８抗体（BD Biosciences）を用いて、GolgiPlug（商標）/GolgiStop（商標）（ブレフェルディンＡおよびモネンシンを含んでいるタンパク質輸送阻害剤；それぞれBD Biosciences）の混合物の存在下において、３７℃において６時間にわたって刺激した。刺激の後に、細胞を洗浄し、Cytofix/Cytoperm試薬（BD Biosciences）を用いて、製造者のマニュアルにしたがって細胞内サイトカインのために染色した。以下の抗体：ＣＤ８−ＰＥＣｙ７（１：２００）、ＣＤ３−ＦＩＴＣ（１：２００）、ＩＬ２−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（１：１００）、ＴＮＦα−ＰＥ（１：１００）、ＩＦＮγ−ＡＰＣ（１：１００）（eBioscience）、ＣＤ４−ＢＤ  Ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｖ４５０（１：２００）（BD Biosciences）を染色のために使用し、１：１００希釈されたＦｃγ−ブロックとともにインキュベートされた。生細胞／死細胞を区別するために、Aqua Dye（Invitrogen）を使用した。細胞を、Canto IIフローサイトメーター（Beckton Dickinson）を用いて回収した。フローサイトメトリーのデータを、FlowJoソフトウェア（Tree Star, Inc.）を用いて解析した。統計解析を、GraphPad Prismソフトウェア、Version 5.01を用いて実施した。群の間における統計的な差を、マンホイットニー検定によって評価した。
【０２７１】
結果
図８から明らかなように、ＲＳＶ−Ｆｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ１６９１）は、ＲＳＶ  Ｆタンパク質を対象にしている、ＩＦＮγ陽性、ＴＮＦα陽性およびＩＦＮγ／ＴＮＦα二重陽性の多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導した。意外にも、不活性化ＲＳＶウイルスに基づくワクチンは、抗原特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導し得なかった。
【０２７２】
（実施例５：ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチンおよびＲＳＶ−Ｍ２−１ｍＲＮＡワクチンによる、マウスにおける細胞性免疫の誘導）
免疫化
表５に示されているように、ＢＡＬＢ／ｃマウスの皮内（ｉ．ｄ．）に、異なる投与量のＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチン  Ｒ２３８１、ＲＳＶ−Ｍ２−１  ｍＲＮＡワクチン  Ｒ２８３３、またはバッファーコントロールとしての乳酸リンゲル液（ＲｉＬａ）を、０日に注入した。コントロール群の筋肉内（ｉ．ｍ．）に、１０μｇの不活性化ＲＳＶ  ｌｏｎｇワクチンを注入した。不活性化「呼吸器合胞体ウイルス抗原」（不活性化ＲＳＶ  ｌｏｎｇ）を、INSTITUT VIRION/SERION GmbH-SERION IMMUNDIAGNOSTICA GmbHから購入した。不活性化ウイルスを、０．２μｌ／μＬの最終濃度が達成されるように、滅菌ＰＢＳにおいて希釈した。すべての動物は、７日および２１日に追加免疫を受けた。脾臓を、抗原特異的なＴ細胞の分析のために２７日に回収した。
【０２７３】
【表５】
2020014474.tif 000012
【０２７４】
細胞内サイトカイン染色を、細胞を以下の刺激を用いて処理したことを除いて、実施例４に記載の通りに実施した。
上述の通り、群４〜８  Ｍ２−１ペプチド（５μｇ／ｍｌ）；（Proimmuneから提供されているＳＹＩＧＳＩＮＮＩ）；１〜３、群７および８  ProMix N（１μｇ／ｍｌ）；コントロール：培地＋ＤＭＳＯ＋抗ＣＤ２８、群１〜８。
【０２７５】
結果
図９から明らかな通り、ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３１）は、ＲＳＶ  Ｎタンパク質を対象にしている、ＩＦＮγ陽性、ＴＮＦα陽性、およびＩＦＮγ／ＩＦＮα二重陽性の多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導した。
【０２７６】
意外にも、不活性化ＲＳＶウイルスに基づくワクチンは、抗原特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導し得なかった。
【０２７７】
図１０から明らかなように、ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３１）は、ＲＳＶ
Ｎタンパク質を対象にしている、ＩＦＮγ陽性、ＴＮＦα陽性およびＩＦＮγ／ＴＮＦα二重陽性の多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導した。
【０２７８】
意外にも、不活性化ＲＳＶウイルスに基づくワクチンは、抗原特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導し得なかった。
【０２７９】
図１１から明らかなように、ＲＳＶ−Ｍ２−１  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３３）は、ＲＳＶ  Ｍ２−１タンパク質を対象にしている、ＩＦＮγ陽性、ＴＮＦα陽性およびＩＦＮγ／ＴＮＦα二重陽性の多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞を、マウスにおいて誘導した。
【０２８０】
意外にも、不活性化ＲＳＶウイルスに基づくワクチンは、抗原特異的なＣＤ８＋細胞を誘導し得なかった。
【０２８１】
（実施例６：コットンラットのＲＳＶ抗原投与試験Ｉ）
ＲＳＶワクチン開発にとって、コットンラットは、特に抗原投与感染のために、一般に認められている動物モデルである。コットンラットは、強い肺病理をともなってホルマリン不活性化ＲＳＶウイルスワクチンに応答する。これは、強い疾患現象の観点からワクチン接種の安全の評価を可能にする。
【０２８２】
ＲＳＶ特異的な免疫応答を拡張し、かつ最適化するために、異なるＲＳＶタンパク質（ＲＳＶ  Ｆ、変異体ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４、ＮおよびＭ２−１）をコードしているｍＲＮＡワクチンを、実施例にしたがって調製した。単独または組合せのワクチンの作用を評価するために、これらのワクチンを、表５に示されているように、単独または組合せ（カクテルワクチン）のいずれかにおいて投与した。２×５０μｌのワクチン体積を、コットンラットの背中の皮内（ｉ．ｄ．）に注入した。追加の群を、β−プロピオラクトン不活性化ＲＳＶ（INSTITUT VIRION/SERION GmbH-SERION IMMUNDIAGNOSTICA GmbH）、ホルマリン不活性化ＲＳＶ（Sigmovir）または生ＲＳＶ／Ａ２（Sigmovir）（１０５プラーク形成ユニット、ｐｆｕ）を用いて、ｍＲＮＡワクチンに対するそれらの免疫原性を比較するために免疫化した。他の群は、モノクローナル抗ＲＳＶ抗体SYNAGIS（登録商標）（Palivizumab）のｉ．ｍ．注入を、受動免疫として受けた。SYNAGIS（登録商標）を、ＲＳＶ抗原投与の前日に１５ｍｇ／ｋｇの用量を用いて投与した。したがって、動物の体重を測定し、SYNAGIS（登録商標）の適切な量を動物の体重にしたがて算出した。ｉ．ｍ．注入にとっての最大体積は、１００ｇのラットについて２００μｌであった。免疫化後に、コットンラットを、ＲＳＶ／Ａ２ウイルス（１０５ＰＦＵ；Sigmovir）を用いた鼻腔内（ｉ．ｎ．）感染によって抗原投与した。
【０２８３】
【表６】
2020014474.tif 000013
【０２８４】
免疫応答を分析するために以下のアッセイ：ＲＳＶ  Ｆタンパク質血清ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ、ＲＳＶウイルス中和抗体の力価（ＶＮＴ）、ＲＳＶウイルスの力価測定および肺組織病理を、実施した。
【０２８５】
ＲＳＶ  Ｆタンパク質血清ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ
抗ＲＳＶ  Ｆタンパク質抗体の誘導を、実施例２にしたがってＥＬＩＳＡによって決定した。
【０２８６】
ＲＳＶウイルス中和抗体の力価（ＶＮＴ）
血清を、ウイルス中和試験（ＶＮＴ）によって分析した。簡単に説明すると、血清サンプルを、ＥＭＥＭを用いて１：１０に希釈し、熱不活性化し、１：４にさらに段階希釈した。希釈された血清サンプルを、室温において１時間にわたってＲＳＶ（２５〜５０ＰＦＵ）とともにインキュベートし、２４ウェルプレートにおけるＨＥｐ−２のコンフルエントな単層に２組にして播いた。５％  ＣＯ２インキュベータにおける３７℃の１時間にわたるインキュベーション後に、ウェルを、０．７５％のメチルセルロース培地によって覆った。インキュベーションの４日後に、覆いを取り除き、細胞を、０．１％のクリスタルバイオレット染色によって固定し、それからすすぎ洗いし、風乾させた。対応する相互作用性の中和抗体の力価を、ウイルスコントロールの６０％低下の終点において、決定した。
【０２８７】
ＲＳＶウイルスの力価測定および肺組織病理
５４日に、鼻腔組織を、回収し、ウイルスの力価測定のためにホモジナイズした。肺を、ひとまとまりにして回収し、ウイルスの力価測定（左の切片）、組織病理（右の切片）およびＰＣＲ分析（舌葉（lingular lobe））のために３つに切片化した。さらに、ＲＳＶウイルスゲノムのコピー数（ＲＳＶ  ＮＳ−１遺伝子のコピー数を測定することによって）およびサイトカインのｍＲＮＡレベルを、定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ｐＲＴ−ＰＣＲ）によって決定した。
【０２８８】
結果
図１２から明らかなように、単独（ＲＳＶ−Ｆ＝Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４）、または他のＲＳＶタンパク質（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）をコードしているｍＲＮＡとの組合せのいずれかにおけるＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンは、４９日の総合ＩｇＧ抗体によって示されている通り、コットンラットにおいてＲＳＶ  Ｆに特異的な液性免疫応答を誘導する。
【０２８９】
図１３から明らかなように、単独（ＲＳＶ−Ｆ＝Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体＝Ｒ２８２１）、または他のＲＳＶタンパク質（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）をコードしているｍＲＮＡとの組合せにおけるＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンは、ウイルス中和抗体の力価によって示されている通り、コットンラットにおけるＲＳＶに特異的な機能的な抗体の形成を誘導する。
【０２９０】
図１４から明らかなように、単独（ＲＳＶ−Ｆ＝Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４）、または他のＲＳＶタンパク質（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）をコードしているｍＲＮＡとの組合せにおけるＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンは、ＲＳＶウイルスを用いて抗原投与されたコットンラットにおける肺および鼻腔のウイルス力価を低下させる。
【０２９１】
図１４Ａから明らかなように、ｍＲＮＡワクチンを用いてワクチン接種されたすべての動物群は、実施されたウイルス力価測定の検出レベルを下回るウイルス力価を示し、肺のウイルス力価に関してワクチン接種されたラットの保護を証明した。対照的に、ホルマリン不活性化ウイルスワクチンは、ＲｉＬａバッファーコントロール群と比べて、肺のウイルス力価を最小にしか低下させない。β−プロピオラクトン不活性化ＲＳＶワクチンの作用は、より明らかであったが、この群の動物のすべてにおいて検出レベルを下回って肺のウイルス力価を低下させなかった。図１４Ｂから明らかなように、また、鼻腔組織におけるウイルス力価は、ｍＲＮＡを用いてワクチン接種された群において大きく低下した。ホルマリン不活性化ウイルスの鼻腔のウイルス力価は、ＲｉＬａワクチン接種された群におけるウイルス力価に匹敵した。β−プロピオラクトン不活性化ウイルスワクチンは、（少なくとも５匹の動物のうち２匹について）より有効であった。それらと対照的に、ｍＲＮＡワクチン接種された群のすべては、ＲｉＬａワクチン接種された群と比べて、鼻腔のウイルス力価を低下させた。
【０２９２】
図１５から明らかなように、ＲＳＶコットンラットの抗原投与試験からの肺組織の分析は、種々の動物群について異なる病理学的スコアを示している。組織病理から、ｍＲＮＡワクチン接種された群は、ホルマリン不活性化ＲＳＶワクチンを用いてワクチン接種された群のように強い肺病理を示さなかったことが結論付けられ得る。気管支周囲（ＰＢ）、周囲血管炎（ＰＶ）、間質性肺炎（ＩＰ）および肺胞炎（Ａ）についての平均の病理スコアは、ｍＲＮＡを用いてワクチン接種されたすべての群について、群Ｈ（ホルマリン不活性化ＲＳＶ）と比べて非常に低かった。さらに、Ｒ２５１０を用いてワクチン接種されている群（群Ｂ；ＲＳＶ  Ｆ）またはＲ２８２１（群Ｃ；ＲＳＶ  Ｆ変異体）は、ＲｉＬａバッファーワクチン接種され、続いてＲＳＶ感染させた群（Ｇ）と比べて、低い肺病理を示すと思われる。
【０２９３】
図１６から明らかなように、定量的ＲＴ−ＰＣＲは、種々の動物群について異なる発現パターンを示す。ＲＳＶ  ＮＳ−１遺伝子を測定することによる、ＲＳＶゲノムコピー数の定量化は、Ａに示されている。ゲノムコピー数は、ＲｉＬａバッファーコントロール（群Ｇ）と比べてｍＲＮＡワクチンを用いたワクチン接種によって低下される。これは、ホルマリン不活性化ＲＳＶを用いてワクチン接種された群（群Ｈ）についてではない。Ｂに示されているように、ホルマリン不活性化ＲＳＶワクチンを用いたワクチン接種（群Ｈ）は、ＲｉＬａバッファーを用いてワクチン接種されたコントロール群と比べて、ＴＨ２サイトカインＩＬ−４の増進された発現を誘導する。対照的に、ＲＳＶ−Ｆ変異体をコードしているｍＲＮＡ  Ｒ２８２２１を用いたワクチン接種は、ＲＳＶ抗原投与感染後の胚において、ＲｉＬａコントロール群と比べて、ＩＬ−４ｍＲＮＡ発現を顕著に低下させた。Ｃ．ＩＦＮ−γ  ｍＲＮＡの発現。Ｄ．ＩＬ−５  ｍＲＮＡの発現。ＩＬ−５の発現は、Ｒ２５１０またはＲ２８２１を用いてワクチン接種された群において、ＲｉＬａバッファーワクチン接種された動物と比べて顕著に低下される。ウイルスＮＳ−１  ＲＮＡまたは肺組織から分離されたサイトカインｍＲＮＡの発現は、抗原投与の５日に測定される。統計的解析を、ステューデントＴ検定（＊  群Ｇ（ＲｉＬａコントロール）と比べたときにｐ＜０．０５）を用いて実施した。
【０２９４】
（実施例７：ＲＳＶコットンラットの抗原投与試験ＩＩ）
ＲＳＶ  Ｆタンパク質（Ｆ）または変異体ＲＳＶ−Ｆタンパク質（Ｆ＊）（ＲＳＶ  Ｆ
ｄｅｌ５５４−５７４）をコードしているｍＲＮＡワクチンを、実施例１にしたがって調製した。単回ワクチン接種または数回ワクチン接種（初回および追加のワクチン接種）の作用を評価するために、これらのワクチンを、１回、２回または３回（表６に示す通り）にわたって投与した。２×５０μｌのワクチン体積を、コットンラットの背中の皮内（ｉ．ｄ．）に注入した。追加の群の、右後ろ脚の筋肉内（ｉ．ｍ．）に、１×１００μｌのワクチン体積によって免疫化した。コントロールとして、１群の筋肉内に、乳酸リンゲルバッファー（バッファー）を注入した。免疫化後に、コットンラットを、ＲＳＶ／Ａ２ウイルス（１００μｌにおける１０５ＰＦＵ；Sigmovir）を用いた鼻腔内（ｉ．ｎ．）注入によって抗原投与した。コントロールとして、１群を、処理せず、ウイルスを用いて抗原投与しなかった（未処理）。
【０２９５】
【表７】
2020014474.tif 000014
【０２９６】
ＲＳＶウイルスの力価測定
ＲＳＶウイルス力価の決定を、実施例６に記載の通りに実施した。
【０２９７】
結果
図１７Ａに示されているように、ＲＳＶ  Ｆタンパク質（Ｆ）または変異体ＲＳＶ−Ｆタンパク質（Ｆ*）（ＲＳＶ  Ｆ  ｄｅｌ５５４−５７４）をコードしているｍＲＮＡワクチンを用いた、前もっての単回の皮内ワクチン接種は、バッファーコントロール群と比べて、肺におけるウイルス力価の低下に非常に有効であった。２回目および３回目のワクチン接種（「追加のワクチン接種」）は、検出レベルを下回って、ウイルス力価を低下させた。
【０２９８】
図１７Ｂに示されているように、ＲＳＶ  Ｆタンパク質（Ｆ）または変異体ＲＳＶ−Ｆタンパク質（Ｆ*）（ＲＳＶ  Ｆ  ｄｅｌ５５４−５７４）をコードしているｍＲＮＡワクチンを用いた、前もっての２回のワクチン接種は、バッファーコントロール群と比べて、肺におけるウイルス力価を大きく低下させた。
【図面の簡単な説明】
【０２９９】
【図１】ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株のＲＳＶ−Ｆタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ）をコードしているＲ１６９１の、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンに含まれている通りのＧ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３１）を示している。
【図２】ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株のＲＳＶ−Ｆタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ）をコードしているＲ２５１０の、ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンに含まれている通りのＧ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３２）を示している。
【図３】ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株（ＨＳＶ−Ｆ−ｌｏｎｇ）のＲＳＶ−Ｆ  ｄｅｌ５５４−５７４変異体タンパク質をコードしているＲ２８２１の、Ｇ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３３）を示している。
【図４】ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株（ＨＳＶ−Ｆ−ｌｏｎｇ）のＲＳＶ−Ｎタンパク質をｐコードしているＲ２８３１の、Ｇ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３４）を示している。
【図５】ＲＳＶ  ｌｏｎｇ株（ＨＳＶ−Ｆ−ｌｏｎｇ）のＲＳＶ−Ｍ２−１タンパク質をコードしているＲ２８３３の、Ｇ／Ｃ最適化されたｍＲＮＡ配列（配列番号３５）を示している。
【図６】ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチンが、不活性化ＲＳＶに対する抗体力価に匹敵する、ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対する抗体力価を誘導することを示している。
【図７】ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ１６９１）が、長期にわたる免疫応答をマウスにおいて誘導することを示している。
【図８】ＲＳＶ−Ｆ  ｌｏｎｇ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ１６９１）が、ＲＳＶ  Ｆｕｓｉｏｎ（Ｆ）タンパク質特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
【図９】ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３１）が、核タンパク質特異的な多機能性Ｃｄ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
【図１０】ＲＳＶ−Ｎ  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３１）が、核タンパク質（Ｎ）−特異的な多機能性ＣＤ４＋細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
【図１１】ＳＶ−Ｍ２−１  ｍＲＮＡワクチン（Ｒ２８３３）は、Ｍ２−１特異的な多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスにおいて誘導することを示している。
【図１２】単独（ＲＳＶ−Ｆ＝Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体＝Ｒ２８３１）または他のＲＳＶタンパク質をコードしているｍＲＮＡとの組合せ（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）のいずれかのＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンは、コットンラットにおいて液性免疫応答を誘導することを示している。
【図１３】単独（ＲＳＶ−Ｆ、Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体、Ｒ２８２１）または他のＲＳＶタンパク質をコードしているｍＲＮＡとの組合せ（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）のいずれかのＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンが、ウイルス中和抗体力価によって示されている通り、コットンマウスにおいて機能的な抗体の形成を誘導することを示している。
【図１４】単独（ＲＳＶ−Ｆ＝Ｒ２５１０；ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体＝Ｒ２８２１）または他のＲＳＶタンパク質をコードしているｍＲＮＡとの組合せ（ＲＳＶ−Ｎ＝Ｒ２８３１；ＲＳＶ−Ｍ２−１＝Ｒ２８３３）のいずれかのＲＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチンが、ＲＳＶウイルスを用いて抗原投与されたコットンマウスにおいて、肺および鼻腔の力価を低下させることを示している。
【図１５】実施例６に記載されているＲＳＶコットンラット抗原投与試験から得られた肺の組織病理分析の結果を示している。
【図１６】ウイルスゲノムのコピー数（ＲＳＶ  ＮＳ−１遺伝子のコピー数を測定することによる）の定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、または実施例６に記載されているＲＳＶコットンラット抗原投与試験のＲＳＶ感染動物（またはコントロール）の肺組織からの、発現されたサイトカインの結果を示している。
【図１７】ＳＶ−Ｆ  ｍＲＮＡワクチン（ＲＳＶ−Ｆ＝ｒ２５１０；ＲＳＶ  Ｆ*（ＲＳＶ−Ｆｄｅｌ５５４−５７４変異体）Ｒ２８２１）が、ＲＳＶウイルスを用いて抗原投与されたコットンラットにおける肺の力価を低下させることを示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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