(57)【要約】【課題】新たな腸内フローラ改善剤の提供。【解決手段】式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩を含有する腸内フローラ改善剤。2020083807.tif 000023（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、それぞれ同じまたは異なって１〜６の整数を意味する。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩を含有する腸内フローラ改善剤。
【化１】
2020083807.tif 000021
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、それぞれ同じまたは異なって１〜６の整数を意味する。）
【請求項２】
式（Ｉ）において、ｍ1およびｍ2がそれぞれ１の整数であり、ｎ1およびｎ2はそれぞれ３の整数である請求項１記載の腸内フローラ改善剤。
【請求項３】
塩がリシン塩である請求項１または２記載の腸内フローラ改善剤。
【請求項４】
式（ＩＡ）で示される光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物またはそれらの塩を含有する腸内フローラ改善剤。
【化２】
2020083807.tif 000022
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、同じまたは異なって１〜６の整数を意味する。）
【請求項５】
式（ＩＡ）において、ｍ1およびｍ2がそれぞれ１の整数であり、ｎ1およびｎ2がそれぞれ３の整数である請求項４記載の腸内フローラ改善剤。
【請求項６】
式（ＩＡ）で示される光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体に対応する光学活性シス−アスタキサンチン誘導体およびその塩を実質的に含有しない、請求項４または５記載の腸内フローラ改善剤。
【請求項７】
塩がリシン塩である請求項４〜６のいずれか１項記載の高純度の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体の塩を含有する腸内フローラ改善剤。
【請求項８】
腸内フローラ改善が、酪酸産生菌、乳酸菌およびＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａから選ばれる１種以上の腸内細菌の増殖促進である請求項４〜７のいずれか１項記載の腸内フローラ改善剤
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸内細菌叢（腸内フローラ）改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの腸管内では多種・多様な細菌が絶えず増殖を続けている。これらは腸内細菌と呼ばれ、個々の菌が集まって複雑な微生物生態系を構築している。この微生物群集は「腸内フローラ」または「腸内細菌叢」と呼称される。腸内細菌の数は一人あたりおよそ１００兆個といわれ、その種類は一人あたり数百種にのぼり、その構成は食習慣や年齢などによって個人ごとに異なっている。
この腸内フローラは、ヒトに対する様々な生理作用を有している。有用な作用として、病原菌の定着阻害、免疫系の調節や活性化、ビタミンの産生などが挙げられ、有害な作用として、腐敗産物や発がん物質の産生、各種腸疾患への関与が挙げられる。
このように、腸内フローラはヒトの健康と密接な関係があり、ヒトに有用な働きをする菌を優勢に、一方でヒトに有害な働きをする菌を劣勢にというバランスを保つことが、健康管理の上で重要と言える。特に、有用な働きをする菌（いわゆる善玉菌）を優勢にすることは、病的状態に陥った腸内を改善する上では極めて重要であり、善玉菌を着実且つ短時間内に優勢にする薬剤が強く望まれている。
【０００３】
一方、アスタキサンチンは、優れた抗酸化活性を有し、光障害疾患領域、眼科疾患領域、皮膚科疾患領域、炎症性疾患領域、免疫疾患領域、心臓疾患領域、悪性腫瘍疾患領域、肝臓疾患領域、腎臓疾患領域、神経変性疾患領域、中毒性疾患領域、アレルギー性疾患領域、インスリン抵抗性疾患領域、糖尿病疾患領域、高脂血症疾患領域、心機能疾患領域、血管系疾患領域や腸内フローラに有用であることが知られている（非特許文献１および２並びに特許文献１）。そのアスタキサンチンと同等以上の抗酸化活性を保持しつつ同化合物の水溶性および経口吸収性を改善した化合物として下記式（Ｉ）の化合物が知られている（特許文献２）。
【０００４】
【化１】
2020083807.tif 000002
【０００５】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、それぞれ同じまたは異なって１〜６の整数を意味する）
【０００６】
特許文献２においては、式（Ｉ）の化合物が効果を示し得る疾患として炎症性腸炎の例示があるものの、腸内フローラ改善効果や特定の腸内細菌の増加作用については、全く開示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１４／２０８５１１号
【特許文献２】国際公開第２０１５／１７８４０４号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Alternative Medicine Review, 2000, 16(4), 355−364
【非特許文献２】Trends in Biotechnology, 2003, 21(5), 210−216
【非特許文献３】A. Hakansson, N. Tormo-Badia, A. Baridi, J. Xu, G. Molin, M.-L. Hagslatt, C. Karlsson, B. Jeppsson, C. M. Cilio, and S. Ahrne, Immunological alteration and changes of gut microbiota after dextran sulfate sodium (DSS) administration in mice. Clin Exp Med. 2015;15(1):107-20
【非特許文献４】Melissa Barman, David Unold, Kathleen Shifley, Elad Amir, Kueichun Hung, Nicolaas Bos, and Nita Salzman, Enteric Salmonellosis Disrupts the Microbial Ecology of the Murine Gastrointestinal Tract, Infect Immun. 2008; 76(3): 907-915.
【非特許文献５】Yong Zhang, Xiao Guo, Jianlin Guo, Qiuwen He, He Li,Yuqin Song and Heping Zhang, Lactobacillus casei reduces susceptibility to type 2 diabetes via microbiota-mediated body chloride ion influx, Sci Rep. 2014; 4: 5654.
【非特許文献６】Hermann-Bank ML, Skovgaard K, Stockmarr A, Larsen N, Molbak L. The Gut Microbiotassay: a high-throughput qPCR approach combinable with next generation sequencing to study gut microbial diversity, BMC Genomics. 2013; 14: 788
【非特許文献７】Amandine Everard, Clara Belzer, Lucie Geurts, Janneke P. Ouwerkerk, Celine Druart, Laure B. Bindels, Yves Guiot, Muriel Derrien, Giulio G. Muccioli, Nathalie M. Delzenne, Willem M. de Vos and Patrice D. Cania, Cross-talk between Akkermansia muciniphila and intestinal epithelium controls diet-induced obesity, Proc Natl Acad Sci USA. 2013; 110(22): 9066-9071.
【非特許文献８】Chil-sung Kang, Mingi Ban, Eun-Jeong Choi, Hyung-Geun Moon, Jun-Sung Jeon, Dae-Kyum Kim, Soo-Kyung Park, Seong Gyu Jeon, Tae-Young Roh, 1Seung-Jae Myung, Yong Song Gho, Jae Gyu Kim and Yoon-Keun Kim, Extracellular Vesicles Derived from Gut Microbiota, Especially Akkermansia muciniphila, Protect the Progression of Dextran Sulfate Sodium-Induced Colitis, PLoS One. 2013; 8(10): e76520.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の主な目的は、腸内フローラ改善効果や特定の腸内細菌、特にいわゆる善玉菌の増殖作用を有する薬剤の提供である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、腸内フローラ改善効果やいわゆる善玉菌の増殖作用を有する薬剤を見出すべく鋭意検討した結果、式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩が、腸内フローラ改善効果や善玉菌の増殖作用を有することを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明は、次の発明〔１〕〜〔４〕を提供するものである。
【００１２】
〔１〕式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩を含有する腸内フローラ改善剤。
【００１３】
【化２】
2020083807.tif 000003
【００１４】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、それぞれ同じまたは異なって１〜６の整数を意味する。）
【００１５】
〔２〕腸内フローラ改善剤製造のための、前記式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩の使用。
〔３〕腸内フローラを改善するための、前記式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩。
〔４〕前記式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩の有効量を投与することを特徴とする腸内フローラ改善のための方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩は、ヒト、犬、猫、馬などの各種動物全般の腸内フローラに対し優れた改善効果を有するものである。それゆえ、式（Ｉ）で示されるアスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩を含有する医薬組成物は腸内フローラ改善剤として優れたものである。
本発明の改善対象である腸内フローラについては、前述のごとく、健康な腸内細菌叢のバランスが崩れた状態、即ち、細菌叢バランスの崩れた状態が腸内の全体或いは一部に存在することにより、腸内全体としての細菌叢バランスの崩れた状態が改善対象となる。同バランスの崩れた原因、例えば善玉菌数の減少や悪玉菌の異常増殖等によって症状は多少異なる場合が存在し、その改善方法としては、基本的には善玉菌数の増殖が重要である。式（Ｉ）で示されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩は、いわゆる腸内の善玉菌として著名な酪酸産生菌、乳酸菌やAkkermansia muciniphilaの増殖を促進する効果を有するものであり、バランスの崩れた腸内フローラの改善効果を有するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】実施例における各種善玉菌の増殖効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の腸内フローラ改善剤は、前記式（Ｉ）で表されるトランス−アスタキサンチン誘導体、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩を有効成分として含有する。
本発明によって処置し得る改善対象の動物については、ヒトを含む恒温動物、たとえばイヌ、ネコ、ウマ、サル、ウサギ、ラットまたはマウスが含まれるが、これらに限定されない。
【００１９】
【化３】
2020083807.tif 000004
【００２０】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、それぞれ同じまたは異なって１〜６の整数を示す。）
【００２１】
上記式（Ｉ）の化合物の中では、ｍ1およびｍ2がそれぞれ１の整数であり、ｎ1およびｎ2がそれぞれ３の整数を示す場合が好ましい。
【００２２】
式（Ｉ）にかかる化合物、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物およびそれらの光学異性体は、分子内にカルボキシル基を有することから望まれる塩基物質或いは塩基化合物と通常の塩形成反応をさせることにより薬学上許容される塩を形成することができる。そのような塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；リシン塩、オルニチン塩、アルギニン塩のようなアミノ酸塩を挙げることができ、中でもナトリウム塩、リシン塩を好ましいものとして挙げることができる。
【００２３】
式（Ｉ）の化学構造式において、アスタキサンチン基本骨格中の中鎖炭素鎖部分における二重結合部分は化学構造上トランスおよびシスの幾何異性体の構造を取り得る。本発明にかかる有効成分については、式（Ｉ）のトランス体のみならず、以下の式（Ｉａ）や式（Ｉｂ）に代表されるシス体も本発明にかかる腸内フローラ改善剤の有効成分として挙げることができる。また、本発明の腸内フローラ改善剤については、式（Ｉ）のトランス体やその幾何異性体であるシス体の各種混合比での混合物も有効成分として含むものである。
【００２４】
【化４】
2020083807.tif 000005
【００２５】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、前記と同じ意味を有する。）
【００２６】
【化５】
2020083807.tif 000006
【００２７】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、前記と同じ意味を有する。）
【００２８】
また、式（Ｉ）の化合物、その幾何異性体およびそれら幾何異性体の混合物は、以下に代表される光学異性体（ＩＡ）を包含し得るものであり、その対掌体やそれらの混合物、ジアステレオマーも全て本発明にかかる腸内フローラ改善剤の有効成分として包含する。
【００２９】
【化６】
2020083807.tif 000007
【００３０】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、前記と同じ意味を有する。）
【００３１】
式（Ｉ）の化合物、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物およびそれらの光学異性体の中では、上記の式（ＩＡ）のトランス体の化合物が好ましい。
また、上記式（ＩＡ）のトランス体の化合物中でも、ｍ1およびｍ2はそれぞれ１の整数を意味し、ｎ1およびｎ2はそれぞれ３の整数を意味する化合物が好ましい。
【００３２】
前記のように、式（ＩＡ）で示される光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体またはその塩がより好ましく、さらに式（ＩＡ）で示される光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体に対応する光学活性シス−アスタキサンチン誘導体およびその塩を実質的に含有しない高純度の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体またはその塩がさらに好ましい。ここで、本発明にかかる腸内フローラ改善剤の有効成分を「高純度」で含有するとは、当該有効成分中の純度が少なくとも９５％以上、好ましくは９８％以上である場合をいう。
【００３３】
本発明にかかる式（Ｉ）の化合物、その幾何異性体、それらの光学異性体およびそれらの塩は、国際公開第２０１５／１７８４０４号明細書に記載の製造方法や同方法と公知の方法を適宜組み合わせることにより製造することができる。それらの製造方法の中で、式（Ｉ）の化合物の幾何異性体、それらの光学異性体の製造方法について上記式（ＩＡ）の光学異性体の製造方法を代表として以下に説明する。
【００３４】
（１Ａ）  脱保護反応
【００３５】
【化７】
2020083807.tif 000008
【００３６】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、前記と同じ意味を有し、Ｒは保護基を意味する。）
【００３７】
原料化合物である式（II）の化合物の保護基を脱離することにより、目的とする式（ＩＡ）の光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体を製造することができる。
【００３８】
当該脱離反応は、保護基の通常の脱離反応が使用でき、具体的には、酸による脱離反応をあげることができる。
保護基としては、第三級ブチル基、トリメチルシリル基、テトラヒドロピラニル基等をあげることができ、好適なものとしては第三級ブチル基、トリメチルシリル基等をあげることができる。
【００３９】
酸による脱離反応の場合には、式（II）の化合物を不活性な溶媒中、酸を加え反応させることにより、目的とする式（ＩＡ）の化合物を製造することができる。
使用される溶媒は、本反応に不活性なものであれば特に限定はなく、例えば、ヘキサン、ヘプタン、リグロイン、石油エーテルのような脂肪族炭化水素類；ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素類；クロロホルム、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、四塩化炭素のようなハロゲン化炭化水素類；アセトニトリル、プロピオニトリルのようなニトリル類；ギ酸エチル、ギ酸イソプロピル、ギ酸イソブチル、酢酸エチル、酢酸イソブチル、酢酸ブチルのような有機酸エステル類；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ヘキサメチルリン酸トリアミドのようなアミド類；メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールのようなアルコール類；トリフルオロ酢酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸のような有機酸類；水；またはこれらの溶媒の混合溶媒をあげることができ、好適には、ハロゲン化炭化水素類、ニトリル類、エーテル類、アルコール類、有機酸類、アミド類、水、またはこれらの溶媒の混合溶媒であり、更に好適には、ハロゲン化炭化水素類、ニトリル類、アルコール類、有機酸類、エーテル類、水またはこれらの溶媒の混合溶媒であり、最も好適には、ハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ギ酸、ジオキサン、テトラヒドロフラン、または水とこれらの有機溶媒の混合溶媒（保護基がＣ１−Ｃ６アルキル基である場合）をあげることができる。
使用され得る酸は、通常の反応において、酸として使用されるものであれば特に限定はなく、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸、燐酸のような無機酸；酢酸、ギ酸、蓚酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸のような有機酸；塩化亜鉛、四塩化スズ、ボロントリクロリド、ボロントリフルオリド、ボロントリブロミドのようなルイス酸；または酸性イオン交換樹脂であり得、好適には、無機酸または有機酸であり、最も好適には、塩酸、酢酸、ギ酸およびトリフルオロ酢酸をあげることができる。
反応温度は、反応させる原料化合物や使用する酸、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１５０℃であり、好適には、０℃乃至１００℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、３０分間乃至１０日間であり、好適には、３０分間乃至５日間である。溶媒の使用量は、通常式（II）の化合物の使用重量に対し１０倍乃至５０倍容量を使用すればよく、好適には３０倍容量使用すればよい。酸の使用量は、原料である式（II）の化合物に対し、無機酸であれば、通常５倍乃至５０倍モル量、好適には１０倍乃至３０倍モル量使用すればよく、有機酸であれば、通常１００倍乃至１０００倍モル量、好適には２００倍乃至６００倍モル量使用すればよい。
【００４０】
以上の脱保護反応により得られる生成物は、前記の９−シス体や１３−シス体等の幾何異性体を含有し得るので、カラムクロマトグラフィー、再沈殿や結晶化等の分離、精製手段を目的に応じて適宜組み合わせることにより、同幾何異性体を分離、除去し、目的とする式（ＩＡ）の光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体を高純度で単離、製造することができる。
また、分離した前記シス体は、上記の如き精製、分離方法を適宜組み合わせることにより単離取得することができる。
【００４１】
（１Ｂ）  シス体からトランス体への変換方法
【００４２】
【化８】
2020083807.tif 000009
【００４３】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、前記と同じ意味を有する。）
【００４４】
本製造法で使用される代表的シス体は上記のごとき式（ＩＡａ）および（ＩＡｂ）の化合物であり、これらは、単独の原料化合物として、或いはシス体の混合物として、或いはシス体を過剰に含むトランス体との混合物として不活性な溶媒に溶解後、ヨウ素等の転換試薬を用いて反応させることにより目的とする式（ＩＡ）の高純度の光学活性トランス−アスタキサンチン誘導体を製造することができる。
【００４５】
使用される溶媒は、本反応に不活性なものであれば特に限定はされず、例えばテトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、水等をあげることができる。
上記転換試薬として好適に使用されるものとしては、ヨウ素をあげることができる。
反応温度は、反応させる原料化合物や使用する転換試薬、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１５０℃であり、好適には、１０℃乃至１００℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、３０分間乃至１０日間であり、好適には、３０分間乃至５日間である。溶媒の使用量は、通常式（ＩＡａ）または式（ＩＡｂ）の化合物の使用重量に対し通常１０倍乃至５０倍容量を使用すればよく、好適には３０倍容量使用すればよい。転換試薬の使用量は、原料である式（ＩＡａ）または式（ＩＡｂ）の化合物に対し通常０．０１倍モル量以上、好適には０．１倍モル量以上使用すればよい。
【００４６】
以上の転換反応により得られる生成物において、前記９−シス体や１３−シス体等の幾何異性体を分離する方法としては、カラムクロマトグラフィー、再沈殿や結晶化等の方法をあげることができ、目的に応じてこれらの方法を適宜組み合わせることにより、同幾何異性体を分離し、目的とする式（ＩＡ）の光学活性のトランス−アスタキサンチン誘導体を高純度で単離、製造することができる。
また、分離されたシス体も上記の分離手段を適宜組み合わせて用いることにより、夫々のシス体として単離、製造することができる。
【００４７】
次に上記の原料化合物（II）の代表的製造方法を以下に説明する。
【００４８】
（２Ａ）  ３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンに側鎖部分全体を直接結合させる方法
【００４９】
【化９】
2020083807.tif 000010
【００５０】
（式中、ｍ1およびn1は、前記と同じ意味を有し、Ｒは保護基（例えば、第三級ブチル基）を意味する。）
【００５１】
３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンを不活性な溶媒に溶解後、縮合試薬存在下、式（Ｉ）の化合物における側鎖部分にあたる式（III）の化合物を反応させることにより、式（II）の化合物を製造することができる。
【００５２】
溶媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素等の有機溶媒をあげることができる。
縮合試薬としては、通常の縮合反応に使用されるものを使用することができ、具体例としては水溶性カルボジイミド塩酸塩（例えば、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド、カルボニルジイミダゾール、ジシクロヘキシルカルボジイミド等をあげることができる。縮合試薬の使用量は、原料である３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンに対し通常２倍モル量以上、好適には２．５倍モル量〜２０倍モル量使用すればよい。
側鎖部分にあたる式（III）の化合物については、３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンに対し通常２倍モル量以上、好適には２．５倍モル〜２０倍モル量使用すればよい。
反応温度は、反応させる原料化合物や使用する縮合試薬、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１５０℃であり、好適には、−１０℃乃至１００℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、３０分間乃至１０日間であり、好適には、３０分間乃至５日間である。溶媒の使用量は、３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンの使用重量に対し通常１０倍乃至５０倍容量を使用すればよく、好適には３０倍容量使用すればよい。
【００５３】
得られる式（II）の化合物は、通常、カラムクロマトグラフィー、再沈殿、再結晶等の精製手段を適宜組み合わせることにより精製、単離することができる。
なお、側鎖部分全体は、以下の方法により製造することができる。
【００５４】
（２Ａ−１）
【００５５】
【化１０】
2020083807.tif 000011
【００５６】
（式中、ｍ1、およびｎ1は、前記と同じ意味を有し、Ｒは保護基（例えば、第三級ブチル基）を意味する。）
【００５７】
式（IV）の化合物にカルボニルジイミダゾール（Ｖ）および式（VII）の化合物を順次反応することにより目的とする式（III）の化合物を製造することができる。
具体的には、式（IV）の化合物を不活性な溶媒中、カルボニルジイミダゾール（Ｖ）を塩基等の試薬の存在下或いは非存在下反応させることにより、中間物である式（VI）の化合物を得ることができる。さらに、式（VII）の化合物を塩基等の試薬の存在下トリメチルシリルクロリドと反応させ、次いで式（VI）の化合物と反応させることにより、目的とする式（III）の化合物を製造することができる。
【００５８】
式（VI）の化合物を得る工程では、溶媒としては、クロロホルム、塩化メチレン等の有機溶媒をあげることができ、これら有機溶媒の使用量は式（IV）の化合物の使用重量に対し通常５倍乃至３０倍容量、好適には１５倍容量を使用すればよい。
塩基試薬としては、通常の縮合反応に使用されるものを使用することができ、具体例としては、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン等をあげることができる。
反応温度は、反応させる原料化合物や使用する試薬、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１５０℃であり、好適には、０℃乃至３０℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、１５分間乃至１０日間であり、好適には、３０分間乃至２日間をあげることができる。
目的とする式（III）の化合物を得る工程では、トリメチルシリルクロリドと式（VII）の化合物を反応させる溶媒としては、クロロホルム、塩化メチレン、ピリジン等の有機溶媒をあげることができ、これら有機溶媒の使用量は式（VII）の化合物の使用重量に対し通常５倍乃至５０倍容量、好適には２０倍容量を使用すればよい。
塩基としては、通常の縮合反応に使用されるものを使用することができ、具体例としては、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン等をあげることができる。塩基、試薬の使用量は、原料である式（VI）の化合物に対し通常２倍モル以上、好適には２．５倍モル乃至５．０倍モル使用すればよい。
反応温度は、反応させる原料化合物や使用する試薬、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１００℃であり、好適には、０℃乃至３０℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、１５分間乃至５日間であり、好適には、３０分間乃至２日間をあげることができる。次いで式（VI）の化合物を加え、反応させるときの反応温度は、反応させる原料化合物や使用する試薬、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１５０℃であり、好適には、１０℃乃至６０℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、３０分間乃至１０日間であり、好適には、３０分間乃至４日間をあげることができる。
【００５９】
（２Ｂ）  ３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンに側鎖部分のパーツを順次結合させる方法
【００６０】
【化１１】
2020083807.tif 000012
【００６１】
（式中、ｍ1、ｍ2、ｎ1およびｎ2は、前記と同じ意味を有し、Ｒは保護基（例えば、第三級ブチル基或いはトリメチルシリル基）を意味する。）
【００６２】
本製造方法については、基本、一般式（VII）で示される化合物とカルボニルジイミダゾール（Ｖ）を反応させて得られる側鎖部分のパーツ（VIII）を３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンに結合させ、次に、得られた生成物（IX）に側鎖部分のパーツ（XI）を結合させることにより達成できる。
【００６３】
カルボニルジイミダゾール（Ｖ）を使用した工程では上記（２Ａ−１）の製造法に示した各種反応条件を同様に使用すればよい。
溶媒としては、クロロホルム、塩化メチレン等の有機溶媒をあげることができ、これら有機溶媒の使用量は式（VII）の化合物の使用重量に対し通常２倍乃至３０倍容量を使用すればよく、好適には７倍容量使用すればよい。
反応温度は、反応させる原料化合物や使用する試薬、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１５０℃であり、好適には、−１０℃乃至１００℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、３０分間乃至１０日間であり、好適には、３０分間乃至５日間をあげることができる。塩基はトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン等をあげることができる。
得られる側鎖部分のパーツ（VIII）と３Ｓ，３’Ｓ−アスタキサンチンとの結合反応については、上記の２Ａの反応と同様に反応させることにより、式（IX）の化合物を製造することができる。
【００６４】
目的とする一般式（II）を得る工程は、上記で得られた一般式（IX）を有する化合物に一般式（XI）を反応させることにより達成できる。本反応は上記一般式（VIII）を製造する方法に準じて行われる。
反応温度は、反応させる原料化合物や使用する試薬、溶媒等により異なるが、通常、−２０℃乃至１００℃であり、好適には、０℃乃至４０℃である。反応時間は、原料化合物、溶媒、反応温度等により異なるが、通常、３０分間乃至１０日間であり、好適には、３０分間乃至３０時間をあげることができる。
なお、一般式（XI）を有する化合物を製造する方法は、（１）Ｒがｔ―ブチル基の場合は一般的に知られたアミノ酸のｔ−ブチルエステルを合成する方法に準じて達成でき、（２）Ｒがトリメチルシリル基の場合は、一般式（X）を有する化合物とトリメチルシリルクロリドを不活性溶媒中、塩基の存在下に反応させることにより達成できる（前記一般式（III）の化合物を作る方法に準じて達成できる）。（２）の反応は一般的に知られたヒドロキシル基やカルボキシル基をシリル化する方法に準じて達成できる。なお、一般式（XI）におけるＲがトリメチルシリル基の場合は一般式（II）を生成する反応の後処理に水或いは弱酸性水を使用することにより、トリメチルシリル基を容易に脱離させることが出来る。
【００６５】
得られた生成物を、通常のカラムクロマトグラフィー、再沈殿、再結晶等の精製手段を適宜組わせて使用することにより、目的とする式（II）の化合物を製造することができる。
【００６６】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩は、経口剤、注射剤、坐剤あるいは肛門から直接薬剤を注入する注腸剤として投与可能である。
ドリンク剤、注射剤、注腸剤などの液剤は、有効成分を必要に応じてｐＨ調製剤、緩衝剤、溶解剤、懸濁剤等、等張化剤、安定化剤、防腐剤などの存在下、通常の製剤化技術を使用して製造すればよい。ｐＨ調製剤としては、例えば、塩酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエタノールアミンなどを挙げることができる。緩衝材としては、例えば、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、アスパラギン酸ナトリウムなどを挙げることができる。懸濁剤としては、例えば、ポリソルベート８０、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、アラビアガム、粉末トラガント、ポリビニルピロリドン、モノステアリン酸グリセリンなどを挙げることができる。溶解剤としては、例えば、ポリソルベート８０、水添ポリオキシエチレンヒマシ油、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステル、ワセリン、グリセリン、プロピレングリコールなどを挙げることができる。安定化剤としては、例えば亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、モノエタノールアミンなどを挙げることができる。防腐剤としては、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾール、塩化ベンザルコニウム、パラベンなどを挙げることができる。
固形の経口剤については錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等いずれの形態で投与されてもよく、有効成分を、薬学的に許容される賦形剤、崩壊剤、結合剤等の医薬添加剤と適宜混合し、通常の製剤化技術を用いることにより製造することができる。
坐剤については、有効成分をワセリン等の汎用される坐剤基剤と組み合わせて通常の製剤化技術を用いることにより製造することができる。
【００６７】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩を投与する場合には、症状、患者の年齢、体重、性別もしくは一般的な健康状態に応じて、投与方法および投与製剤を適宜選択すればよい。例えば体重約７０ｋｇの温血動物に経口あるいは肛門から投与するとき１日当たり０．０１〜１００００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇ、より好ましくは５〜２００ｍｇを１日１回またはそれ以上、例えば、１〜６回で投与すればよい。
本発明に係る式（Ｉ）の化合物、その幾何異性体、それら幾何異性体の混合物、それらの光学異性体またはそれらの塩は、上記の投与量の範囲においては、安全性においても特に問題はない。
【実施例】
【００６８】
以下、本発明の実施例について説明する。
ただし、本発明の範囲は下記実施例に何ら限定されるものではない。
【００６９】
本実施例においては、式（Ｉ）の化合物の代表として以下の化合物を使用した。以下、本実施例では化合物Ｘとして表記する。
化合物Ｘ：
４−（３−｛４（Ｓ）−[１８−（４（Ｓ）−{３−（３−カルボキシプロピル）ウレイドアセトキシ}−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸二リシン塩
【００７０】
（実施例１）
＜デキストラン硫酸ナトリウム誘発性大腸炎における化合物Ｘの腸内細菌叢の影響の評価＞
デキストラン硫酸ナトリウム（以下ＤＳＳ）による大腸炎では、腸内細菌叢へ大きな影響を与え、腸内のＤｙｓｂｉｏｓｉｓにつながることが腸炎発症に関連することが報告されている（非特許文献３）。
（１）モデル作製および処置
ＤＳＳによる大腸炎を次のとおり惹起させた。すなわち、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、雄性マウスを日本チャールスリバー（株）から購入し、検疫・馴化期間中の一般状態に異常の認められなかった５週齢のマウスを実験に使用した。馴化後、各動物を１ケージに１匹になるように分けた。大腸炎惹起の為に水道水にＤＳＳ（分子量３６，０００〜５０，０００、ＭＰ  Ｂｉｏ  Ｊａｐａｎ）を３％になる様に加え、懸濁させた。これを３日に１回調製して、飲水として５日間自由摂取させた。これにより、大腸炎を惹起させた。なお、非病態のコントロール群として、水道水を飲水として与えた。５日間のＤＳＳ飲水投与後、下痢の症状を確認し、血便をスコアリング（表２）して均等に表１に示す通りに各群に分けた。群分け後、化合物Ｘは１００ｍｇ／ｋｇになるように０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム（以下ＣＭＣ、ナカライテスク製）で懸濁し、それ以外の２群はＣＭＣを１日１回経口投与で与えた。ＤＳＳ処置を行わず、さらに化合物Ｘの投与を行わないものを対照群Ｓｈａｍ群とし、ＤＳＳ処理のみ行い化合物Ｘの投与を行わないものをＤＳＳ群とした。これら対照群の群１および群２は媒体として使用した０．５％ＣＭＣ溶液を被験物質として経口投与した。なお、群分け後の飲水は通常の飲用水とした。各群５〜６匹から、投与１０日目の新鮮便数個を滅菌チューブに採取し、直ちに液体窒素で凍結を行い。−８０℃で保存した。
【００７１】
【表１】
2020083807.tif 000013
【００７２】
【表２】
2020083807.tif 000014
【００７３】
（２）糞便中の細菌叢の解析
前項で採取した凍結糞便は、ＱＩＡａｍｐ  ＰｏｗｅｒＦｅｃａｌ  ＤＮＡ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用い糞中ＤＮＡを抽出した。得られたＤＮＡのうち４０ｎｇを以下の表３に示す細菌群特異的プライマーを用いた各種非特許文献記載のリアルタイムＰＣＲにより、それぞれの細菌群の検出を行った。リアルタイムＰＣＲの条件としてＳＹＢＲTM  Ｐｒｅｍｉｘ  Ｅｘ  ＴａｑTM（Ｔｌｉ  ＲＮａｓｅＨ  Ｐｌｕｓ）（Ｔａｋａｒａ）を用い、「９５℃３０秒（１Ｃｙｃｌｅ）→９５℃５秒・６０℃４５秒（４０ｃｙｃｌｅ）」の条件で増幅させ、インターカレーター法で検出した。得られた結果について、全バクテリア１６ｓ  ｒＤＮＡに対するΔΔｃｔ法による相対定量を行った。
【００７４】
【表３】
2020083807.tif 000015
【００７５】
（３）結果および考察
リアルタイムＰＣＲの結果を図１に示した。まず、Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｒａｕｓｎｉｔｚｉｉなどを含んだ酪酸産生能をもつＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｕｂｃｌｕｓｔｅｒの解析を行った。予想に反してＤＳＳ処置により、Ｓｈａｍ群と比較して、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｕｂｃｌｕｓｔｅｒ  XIVaを除く酪酸産生菌群の検出量増加が認められた。また、化合物Ｘの処理により、ＤＳＳ群やＳｈａｍ群と比較し何れの酪酸産生菌群も同等もしくは高い検出が認められた。それぞれＳｈａｍ群に対して、Ｆａｍｉｌｙ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｌｕｓｔｅｒ  Ｉは６０倍、Ｆａｍｉｌｙ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｌｕｓｔｅｒ  IVは４５倍、Ｆａｍｉｌｙ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｌｕｓｔｅｒ  XIVaは０．９倍であった。また、乳酸菌は、腸管にとって有益であり、ＤＳＳ大腸炎でも有益であることが知られている（非特許文献３）乳酸菌としてＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の検出を行った。その結果、既報（非特許文献３）と同様にＳｈａｍ群に対してＤＳＳ群で検出低下が認められ、ＤＳＳ群に対して化合物Ｘの処理により約３．６倍の検出増加が認められた。Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａは腸管でのムチン分解細菌として知られ粘膜層の維持に有用である。この細菌はＤＳＳ大腸炎で増加する事、また、Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ由来の細胞外小胞の投与はＤＳＳ大腸炎に対する有用性が報告されている（非特許文献８）。本実施例においてもＤＳＳ処置によりＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａの検出がＳｈａｍ群より高く、Ｓｈａｍ群に比べて化合物Ｘの処理によって更に約８０倍に上昇し、ＤＳＳ群よりも高値であった。以上の結果より、ＤＳＳ大腸炎モデルにおいて化合物Ｘの投与により有益な細菌叢の改善が認められた。
【００７６】
＜化合物Ｘの製造例＞
以下の記載における化学構造式中のアスタキサンチン骨格中鎖炭素鎖部分における幾何異性体は便宜的に全トランス体の化学構造式で示す。
【００７７】
（３．１）４−（イミダゾール−１−イルカルボニルアミノ）酪酸ｔ−ブチル（本化学名中、ｔは第三級を意味する。以下、同様とする。）の合成：
【００７８】
【化１２】
2020083807.tif 000016
【００７９】
カルボニルジイミダゾール（９．９５ｋｇ）に塩化メチレン（７９．６ｋｇ）を加えて、撹拌し、４−アミノ酪酸ｔ−ブチル塩酸塩（８．０ｋｇ）の塩化メチレン（５３．１ｋｇ）溶液を−５〜５℃で加え、反応混合物を同温度で３０分間撹拌した。１５〜２５℃に加温し、同温度で１時間撹拌した。反応混合物に、水（４０ｋｇ）を加えて、撹拌し、有機層を分離した。得られた溶液を５％食塩水（４２．１ｋｇ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、標記粗生成物（濃縮残分、１０．４ｋｇ）を得た。
ＮＭＲスペクトル（δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：８．２２（１Ｈ、ｓ）、７．９２（１Ｈ、ｂｒ）、７．２８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝０．８Ｈｚ）７．０５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝０．８Ｈｚ）、３．４５（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝６．０、６．０Ｈｚ）、２．４０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４）、１．９２（２Ｈ、ｔｔ、Ｊ＝６．４、６．４Ｈｚ）、１．４４（９Ｈ、ｓ）。
マススペクトル（＋ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：２５４．００（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８０】
（３．２）４−（３−カルボキシメチルウレイド）酪酸ｔ−ブチルの合成：
【００８１】
【化１３】
2020083807.tif 000017
【００８２】
４−（イミダゾール−１−イルカルボニルアミノ）酪酸ｔ−ブチル（上記（３．１）の化合物）（１０．４ｋｇ）に塩化メチレン（１８５．７ｋｇ）、グリシン（７．４ｋｇ）、トリエチルアミン（８．３ｋｇ）を加えて、撹拌し、−５〜５℃でクロロトリメチルシラン（８．９ｋｇ）を加え、該反応混合物を１５〜３０℃で６０時間撹拌した。反応混合物を減圧で濃縮し、酢酸エチル（２０８ｋｇ）、塩酸（５．６６ｋｇ）と２０％食塩水（１０６ｋｇ）の混合液を加えて、撹拌し、有機層を分離した。得られた溶液を塩酸（５．６６ｋｇ）と２０％食塩水（１０６ｋｇ）の混合液で洗浄した。水層を酢酸エチル（５７．４ｋｇ）で抽出し、有機層と抽出液を合わせた。得られた溶液を２０％食塩水（１００ｋｇ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。酢酸エチル（１４．４ｋｇ）を加えて、撹拌し、４５〜５５℃で均一溶液とした。該溶液を２０〜３０℃に冷却し、ｎ−ヘプタン（１０８．７ｋｇ）を滴下し、結晶の析出を確認後、１時間撹拌した。析出した結晶を濾取し、標記化合物（７．９８ｋｇ、純度９９．２％）を白色結晶として得た。
なお、生成物の純度は、高速液体クロマトグラフィー（カラム：株式会社ワイエムシィ製  ＹＭＣ−Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８  ＥｘＲＳ  および移動相：アセトニトリル／ｐＨ８のリン酸塩緩衝液＝３／７、流速：１ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：２１０ｎｍ）を用いて、決定した。
ＮＭＲスペクトル（δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：６．１６（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、６．０１（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、３．６７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、２．９７（２Ｈ、ｄｔ、Ｊ＝６．４、６．４Ｈｚ）、２．１７（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．５６（２Ｈ、ｔｔ、Ｊ＝７．２、７．２Ｈｚ）、１．３９（９Ｈ、ｓ）。
マススペクトル（＋ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：２６０．９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８３】
（３．３）４−（３−｛４−[１８−（４（Ｓ）−［３−（３−ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）ウレイドアセトキシ]−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸ｔ−ブチルの合成：
【００８４】
【化１４】
2020083807.tif 000018
【００８５】
３（Ｓ），３’（Ｓ）−アスタキサンチン（１．８ｋｇ）、４−（３−カルボキシメチルウレイド）酪酸ｔ−ブチル（上記（３．２）の化合物）（２．７５ｋｇ）に、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（２．９５ｋｇ）および塩化メチレン（７１．６ｋｇ）を加えて、撹拌し、溶液とした。該溶液に−５〜５℃で１−（３-ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（４．６３ｋｇ）を加え、同温度で４時間撹拌した。反応混合物に水（３．６ｋｇ）を加えて、撹拌し、更に、酢酸エチル（４８．４ｋｇ）を加えて、撹拌し、減圧下にて濃縮した。濃縮残渣に酢酸エチル（４８．４ｋｇ）、水（４５ｋｇ）を加えて、撹拌し、有機層を分離した。得られた溶液を塩酸水（０．３Ｍ、４６．４ｋｇ）で３回、１０％食塩水（４５．９ｋｇ）、炭酸水素ナトリウム水溶液（約７％、４８．２ｋｇ）、２０％食塩水（４５ｋｇ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下にて濃縮乾固し、標記化合物（濃縮残渣、３．２６ｋｇ、純度９８．１％）を得た。
なお、生成物の純度は、高速液体クロマトグラフィー（カラム：株式会社ワイエムシィ製  ＹＭＣ−ＴｒｉａｒｔＣ１８  ＥｘＲＳ  および移動相：０．０２５％トリフルオロ酢酸入りアセトニトリル／０．０２５％トリフルオロ酢酸水＝３０〜９８／７０〜２、流速：１ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：４７４ｎｍ）を用いて、決定した。
ＮＭＲスペクトル（δｐｐｍ、ＣＤＣｌ３）：６．１８−６．７２（１４Ｈ、ｍ）、５．５６（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝６．４、１３．２Ｈｚ）、５．０４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．３Ｈｚ）、４．８１（２Ｈ、ｔ、５．７Ｈｚ）、４．２５（２Ｈ、ｄｄ、J＝１８．１、６．６Ｈｚ）、４．０３（２Ｈ、ｄｄ、J=１８．３、４．６Ｈｚ）、３．１９−３．２６（４Ｈ、ｍ）、２．２９（４Ｈ、ｔ、J=７．３Ｈｚ）、２．０２−２．１３（４Ｈ、ｍ）、１．９９（１２Ｈ、ｓ）、１．９０（３Ｈ、ｓ）、１．７６−１．８３（４Ｈ、ｍ）、１．４４（１８Ｈ、ｓ）、１．３４（６Ｈ、ｓ）、１．２３（６Ｈ、ｓ）。
マススペクトル（＋ＥＳＩ、ｍ／ｚ）：１０８１．８８（Ｍ＋Ｈ）＋、１１０３．６７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【００８６】
（３．４）４−（３−｛４−[１８−（４（Ｓ）−{３−（３−カルボキシプロピル）ウレイドアセトキシ}−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸の合成：
【００８７】
【化１５】
2020083807.tif 000019
【００８８】
４−（３−｛４−[１８−（４（Ｓ）−［３−（３−ｔ−ブトキシカルボニルプロピル）ウレイドアセトキシ]−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸ｔ−ブチル（上記（３．３）の化合物）（１８．１２ｇ）にギ酸（２７２ｍＬ）を加えて、２５〜３５℃で１時間撹拌した。反応混合物を水（１０８７ｍＬ）に加えて、撹拌し、酢酸エチル（１０８７ｍＬ）を加えて、撹拌し、有機層を分離した。有機層を水（５４３ｍＬ）で２回、１０％食塩水（５４３．４ｇ）で２回、順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下に濃縮した。濃縮残渣をテトラヒドロフラン（８１．１ｍＬ）、水（８．１１ｍＬ）で溶解し、該溶液にアセトニトリル（４８６．８ｍＬ）を滴下し、固体の析出を確認した後、１時間撹拌した。析出した固体を濾取、乾燥し、標記化合物（４．４８ｇ、純度９０．７％）を暗紫〜暗赤色固体として得た。
なお、生成物の純度は、高速液体クロマトグラフィー（カラム：株式会社ワイエムシィ製  ＹＭＣ−ＴｒｉａｒｔＣ１８  ＥｘＲＳ  および移動相：０．０２５％トリフルオロ酢酸入りアセトニトリル／０．０２５％トリフルオロ酢酸水＝３０〜９８／７０〜２、流速：１ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：４７４ｎｍ）を用いて、決定した。
【００８９】
（３．５）４−（３−｛４−[１８−（４（Ｓ）−{３−（３−カルボキシプロピル）ウレイドアセトキシ}−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸の合成：
【００９０】
【化１６】
2020083807.tif 000020
【００９１】
４−（３−｛４−[１８−（４（Ｓ）−{３−（３−カルボキシプロピル）ウレイドアセトキシ}−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸（上記（３．４）の粗生成物）（４．０ｇ）に、テトラヒドロフラン（１８．４ｍＬ）、水（２．０ｍＬ）を加え、撹拌し、溶解した。該溶液にアセトニトリル（６０ｍＬ）を滴下し、固体の析出を確認した後、１時間撹拌した。析出した固体を濾取、乾燥し、暗紫〜暗赤色固体を得た（３．３１ｇ、純度９６．９％）。得られた固体（３．２６ｇ）に、テトラヒドロフラン（１５．０ｍＬ）、水（１．６ｍＬ）を加え、撹拌し、溶解した。該溶液にアセトニトリル（４９ｍＬ）を滴下し、固体の析出を確認した後、１時間撹拌した。析出した固体を濾取、乾燥し、暗紫〜暗赤色固体を得た（２．９３ｇ、純度９８．９％）。得られた固体（２．３８ｇ）に、テトラヒドロフラン（１０．９ｍＬ）、水（１．２ｍＬ）を加え、撹拌し、溶解した。該溶液にアセトニトリル（３６ｍＬ）を滴下し、固体の析出を確認した後、１時間撹拌した。析出した固体を濾取、乾燥し、標記化合物（２．１８ｇ、純度９９．３％）を暗紫〜暗赤色固体として得た。
なお、生成物の純度は、高速液体クロマトグラフィー（カラム：株式会社ワイエムシィ製  ＹＭＣ−ＴｒｉａｒｔＣ１８  ＥｘＲＳ  および移動相：０．０２５％トリフルオロ酢酸入りアセトニトリル／０．０２５％トリフルオロ酢酸水＝３０〜９８／７０〜２、流速：１ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：４７４ｎｍ）を用いて、決定した。
【００９２】
（３．６）４−（３−｛４−[１８−（４（Ｓ）−{３−（３−カルボキシプロピル）ウレイドアセトキシ}−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸二リシン塩；化合物Ｘの合成：
４−（３−｛４−[１８−（４（Ｓ）−{３−（３−カルボキシプロピル）ウレイドアセトキシ}−２，６，６−トリメチル−３−オキソシクロヘキサ−１−エニル）−３，７，１２，１６−テトラメチルオクタデカ−１（Ｅ），３（Ｅ），５（Ｅ），７（Ｅ），９（Ｅ），１１（Ｅ），１３（Ｅ），１５（Ｅ），１７（Ｅ）−ノナニエル］−３，５，５−トリメチル−２−オキソシクロヘキサ−３−エニル−１（Ｓ）−オキシカルボニルメチル｝ウレイド）酪酸（上記（３．５）の化合物）（０．５０ｇ）に、エタノール（１０ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）を加えて撹拌した。該懸濁溶液にＬ−リシン１水和物（０．１７４ｇ）の水（２ｍＬ）溶液を室温で加えた。該反応混合物に水（７．５ｍＬ）を加えて、撹拌し、溶解した。該反応混合物にエタノール（３２ｍＬ）を室温で滴下し、固体の析出を確認した後、１時間撹拌した。析出した固体を濾取、乾燥し、標記化合物（０．４７ｇ、純度９８．６％、光学純度９９．０％ｄｅ)を暗紫〜暗赤色固体として得た。
なお、生成物の純度は、上記同様に高速液体クロマトグラフィーを用いて決定した。光学純度は高速液体クロマトグラフィー（カラム：株式会社ワイエムシィ製  ＹＭＣ ＣＨＩＲＡＬ ＡＲＴ Ａｍｙｌｏｓｅ・ＳＡ （５μｍ, ４．６ｍｍＩ.Ｄ.ｘ２５０ｍｍ）、カラム温度：２５℃および移動相：ＴＨＦ／水／ＴＦＡ （４０：６０：０．１）、流速：１ｍＬ/ｍｉｎ、検出波長：４７４ｎｍ、カラム保持時間：１５．４分（Ｓ、Ｓ）、１７．６分（ｍｅｓｏ）、２０．６分（Ｒ、Ｒ））を用いて、決定した。
【図１】
2020083807.tif 000024
【配列表】
2020083807000001.app