(57)【要約】【課題】桂皮酸又はその誘導体と他成分とを結合した新成分であって、桂皮酸又はその誘導体の活性を維持しながら、新たな機能が付加されたものを提供することを課題とする。【解決手段】  下記一般式（１）【化１】2020029433.tif 000010（式（１）中、ｐは芳香環上の置換基の数であって０〜５の整数を表す。Ｒは、それぞれ独立して、水素原子、又は炭素数１〜３の炭化水素基を表す。）で示される桂皮酸又はその誘導体とアミノ酸残基２〜１０個からなるオリゴペプチドとがアミド結合又はエステル結合を介して結合した桂皮酸類修飾オリゴペプチド。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）
【化１】
2020029433.tif 000009
（式（１）中、ｐは芳香環上の置換基の数であって０〜５の整数を表す。Ｒは、それぞれ独立して、水素原子、又は炭素数１〜３の炭化水素基を表す。）
で示される桂皮酸又はその誘導体とアミノ酸残基２〜１０個からなるオリゴペプチドとがアミド結合又はエステル結合を介して結合した桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
【請求項２】
一般式（１）で示される桂皮酸又はその誘導体が、フェルラ酸、イソフェルラ酸、カフェ酸、シナピン酸、ｐ−クマル酸、及び／又は桂皮酸である請求項１に記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
【請求項３】
オリゴペプチドが、側鎖にアミノ基、水酸基又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基を含むものであり、一般式（１）で示される桂皮酸又はその誘導体が、オリゴペプチドの側鎖のアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基とアミド結合又はエステル結合を形成している請求項１又は２に記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
【請求項４】
オリゴペプチドが、さらに、２０℃における水溶解度が５ｇ／１００ｍＬ以上であるアミノ酸の残基と、主鎖２級アミンを有するアミノ酸残基を含む請求項３に記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
【請求項５】
オリゴペプチドが、３アミノ酸残基ごとに１個のグリシン残基を含む請求項１〜４の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
【請求項６】
請求項１〜５の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドを重合させるか、又は請求項１〜５の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、アミノ酸、オリゴペプチド、及び／又はポリペプチドとを重合させる工程を含む桂皮酸類修飾ポリペプチドの製造方法。
【請求項７】
請求項１〜５の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、下記式（３）〜（１２）
Ｈ − （Ｘ − Ｙ − Ｇｌｙ）ｎ− ＯＨ          （３）
Ｈ − （Ｇｌｙ − Ｘ − Ｙ）ｎ− ＯＨ          （４）
Ｈ − （Ｙ − Ｇｌｙ − Ｘ）ｎ− ＯＨ          （５）
（式（３）〜（５）中、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、Ｈｙｐ又はＰｒｏを表し、ｎは１〜１０の整数である。）
Ｈ − （ Ｚ１ ） − ＯＨ          （６）
（式（６）中、Ｚ１は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｈｙｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ、及びε-ポリリジンからなる群より選択されるアミノ酸残基、オリゴペプチド残基、又はポリペプチド残基を表す。）
Ｈ − （ Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ ）ｐ− ＯＨ          （７）
Ｈ − （ Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ ）ｐ− ＯＨ          （８）
Ｈ − （ Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ ）ｐ− ＯＨ          （９）
（式（７）〜（９）中、ｐは１〜１０の整数である。）
Ｈ − （ Ｚ２−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ ）ｒ− ＯＨ            （１０）
Ｈ − （ Ｇｌｙ−Ｚ２−Ｈｙｐ ）ｒ− ＯＨ            （１１）
Ｈ − （ Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｚ２ ）ｒ− ＯＨ            （１２）
（式（１０）〜（１２）中、Ｚ２は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸残基を表し、ｒは１〜１０の整数である。）
の何れかで示されるアミノ酸、オリゴペプチド、又はポリペプチドの１種以上を重合させる工程を含む請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
請求項１〜５の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドの１ｍｏｌに対して、アミノ酸、オリゴペプチド、及び／又はポリペプチドの使用量が１〜１００ｍｏｌである請求項６又は７に記載の製造方法。
【請求項９】
請求項６〜８の何れかに記載の製造方法で得られる桂皮酸類修飾ポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、桂皮酸又はその誘導体で修飾されたオリゴペプチド、桂皮酸又はその誘導体で修飾されたポリペプチドの製造方法、及びこの方法により得られる、桂皮酸又はその誘導体で修飾されたポリペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
桂皮酸及びその誘導体は、抗酸化作用、抗菌作用、チロシナーゼ活性抑制作用（美白作用）、紫外線吸収作用などの有用な作用を有することから、化粧品や食品に幅広く使用されている。また、桂皮酸及びその誘導体は、抗酸化活性などに基づき、がん細胞の増殖抑制作用、動脈硬化改善作用、血糖値低下作用、血圧降下作用、脳機能改善作用などの多様な薬理作用を示すことから、医薬への応用も期待されている。
【０００３】
ここで、生理活性成分に他の有用な機能を付加した新素材を得れば、化粧品、食品、医薬の成分として新たな使い方をすることができるようになる。桂皮酸及びその誘導体についても、その生理活性を損なわずに、他成分と結合して新たな機能を付加することが求められている。
【０００４】
例えば、桂皮酸及びその誘導体は水に溶け難いものが多い。例えば、フェルラ酸、イソフェルラ酸、シナピン酸、桂皮酸などは水難溶性であり、また、カフェイン酸は熱水には溶解するが常温の水には余り溶けない。このような水難溶性の桂皮酸類は、化粧品、食品、医薬に、十分な量を配合することができない場合がある。従って、桂皮酸類の水溶解性が向上した誘導体が求められている。
【０００５】
桂皮酸類の水溶性を向上させるための試みとして、特許文献１は、フェルラ酸を、グリセロール、フラクトース、又はトレハロースとのエステルにすることを教えている。しかし、特許文献１からは、フェルラ酸を上記エステルにすることにより、どの程度水溶解性が向上するかが不明である。
【０００６】
また、特許文献２は、水性媒体の存在下、フェルラ酸などの水難溶性のヒドロキシ桂皮酸に、乳清タンパク質、大豆タンパク質、ゼラチンのようなタンパク質を加えて、特定の温度範囲で加熱処理した後に噴霧乾燥又は凍結乾燥するか、又は水難溶性ヒドロキシ桂皮酸を特定の温度範囲で加熱処理した後に、上記タンパク質を加えて噴霧乾燥又は凍結乾燥することにより、ヒドロキシ桂皮酸の溶解性が向上した組成物が得られることを教えている。しかし、特許文献２は、フェルラ酸を上記タンパク質と複合化して組成物とすることを教えているだけであり、フェルラ酸を含む新成分を提供していない。また、特許文献２の製造方法は、加熱工程及び乾燥工程を要して煩雑である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００５−２２４１７７号公報
【特許文献２】特開２０１４−２１７３６９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、桂皮酸又はその誘導体と他成分とを結合した新成分であって、桂皮酸又はその誘導体の活性を維持しながら、新たな機能が付加されたものを提供することを主な課題とする。
中でも、本発明は、桂皮酸又はその誘導体と他成分とを結合した新成分であって、桂皮酸又はその誘導体に比べて水溶解性が向上したものを提供することを主な課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するために本発明者は研究を重ね、以下の知見を得た。
(i)  一般式（１）
【化１】
2020029433.tif 000002
（式（１）中、ｐは芳香環上の置換基の数であって０〜５の整数を表す。Ｒは、それぞれ独立して、水素原子、又は炭素数１〜３の炭化水素基を表す。）
で示される桂皮酸又はその誘導体（以下、「桂皮酸類」ということもある。）を、アミノ酸残基２〜１０個からなるオリゴペプチドと、アミド結合又はエステル結合を介して結合させることにより、一般式（１）で示される桂皮酸類の活性を損なうことなく、その水溶解性を向上させることができる。
(ii)  (i)の桂皮酸類修飾オリゴペプチドを、それ自体重合させるか、又はアミノ酸、オリゴペプチド、及び／若しくはポリペプチドと重合させることにより、桂皮酸類の導入位置や導入量を容易に制御でき、所望の桂皮酸類修飾ポリペプチドを再現性良く製造することができる。
【００１０】
本発明は、この知見に基づき完成されたものであり、以下の〔１〕〜〔９〕の桂皮酸類修飾オリゴペプチド、桂皮酸類修飾ポリペプチドの製造方法、及び桂皮酸類修飾ポリペプチドを提供する。
〔１〕  下記一般式（１）
【化２】
2020029433.tif 000003
（式（１）中、ｐは芳香環上の置換基の数であって０〜５の整数を表す。Ｒは、それぞれ独立して、水素原子、又は炭素数１〜３の炭化水素基を表す。）
で示される桂皮酸又はその誘導体とアミノ酸残基２〜１０個からなるオリゴペプチドとがアミド結合又はエステル結合を介して結合した桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
〔２〕  一般式（１）で示される桂皮酸又はその誘導体が、フェルラ酸、イソフェルラ酸、カフェ酸、シナピン酸、ｐ−クマル酸、及び／又は桂皮酸である〔１〕に記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
〔３〕  オリゴペプチドが、側鎖にアミノ基、水酸基又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基を含むものであり、一般式（１）で示される桂皮酸又はその誘導体が、オリゴペプチドの側鎖のアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基とアミド結合又はエステル結合を形成している〔１〕又は〔２〕に記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
〔４〕  オリゴペプチドが、さらに、２０℃における水溶解度が５ｇ／１００ｍＬ以上であるアミノ酸の残基と、主鎖２級アミンを有するアミノ酸残基を含む〔３〕に記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
〔５〕  オリゴペプチドが、３アミノ酸残基ごとに１個のグリシン残基を含む〔１〕〜〔４〕の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチド。
〔６〕  〔１〕〜〔５〕の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドを重合させるか、又は〔１〕〜〔５〕の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、アミノ酸、オリゴペプチド、及び／又はポリペプチドとを重合させる工程を含む桂皮酸類修飾ポリペプチドの製造方法。
〔７〕  〔１〕〜〔５〕の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、下記式（３）〜（１２）
Ｈ − （Ｘ − Ｙ − Ｇｌｙ）ｎ− ＯＨ          （３）
Ｈ − （Ｇｌｙ − Ｘ − Ｙ）ｎ− ＯＨ          （４）
Ｈ − （Ｙ − Ｇｌｙ − Ｘ）ｎ− ＯＨ          （５）
（式（３）〜（５）中、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、Ｈｙｐ又はＰｒｏを表し、ｎは１〜１０の整数である。）
Ｈ − （ Ｚ１ ） − ＯＨ          （６）
（式（６）中、Ｚ１は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｈｙｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ、及びε-ポリリジンからなる群より選択されるアミノ酸残基、オリゴペプチド残基、又はポリペプチド残基を表す。）
Ｈ − （ Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ ）ｐ− ＯＨ          （７）
Ｈ − （ Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ ）ｐ− ＯＨ          （８）
Ｈ − （ Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ ）ｐ− ＯＨ          （９）
（式（７）〜（９）中、ｐは１〜１０の整数である。）
Ｈ − （ Ｚ２−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ ）ｒ− ＯＨ            （１０）
Ｈ − （ Ｇｌｙ−Ｚ２−Ｈｙｐ ）ｒ− ＯＨ            （１１）
Ｈ − （ Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｚ２ ）ｒ− ＯＨ            （１２）
（式（１０）〜（１２）中、Ｚ２は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸残基を表し、ｒは１〜１０の整数である。）
の何れかで示されるアミノ酸、オリゴペプチド、又はポリペプチドの１種以上を重合させる工程を含む〔６〕に記載の製造方法。
〔８〕  〔１〕〜〔５〕の何れかに記載の桂皮酸類修飾オリゴペプチドの１ｍｏｌに対して、アミノ酸、オリゴペプチド、及び／又はポリペプチドの使用量が１〜１００ｍｏｌである〔６〕又は〔７〕に記載の製造方法。
〔９〕  〔６〕〜〔８〕の何れかに記載の製造方法で得られる桂皮酸類修飾ポリペプチド。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の桂皮酸類修飾オリゴペプチドは、一般式（１）で示される桂皮酸類が有する活性を有しながら、オリゴペプチドを結合する前の桂皮酸類に比べて水溶性が向上する等の新たな機能を有している。本発明の桂皮酸類修飾オリゴペプチドの水溶性が向上している場合は、化粧品、食品、医薬などの組成物に配合し易いものとなる。また、十分な活性が得られる量を、化粧品、食品、医薬などに配合することができる。
【００１２】
また、本発明の桂皮酸類修飾オリゴペプチドを用いれば、一般式（１）で示される桂皮酸類を結合したポリペプチドの製造が容易になる。
詳述すれば、ポリペプチドに桂皮酸類を直接導入しようとしても、目的のアミノ酸残基に桂皮酸類を結合させることが難しく、また、ポリペプチドへの桂皮酸類の導入量ないしは桂皮酸類によるポリペプチドの修飾率を所望の値にすることが難しい。
この点、本発明の桂皮酸類修飾オリゴペプチドは、保護基を用いることで、目的のアミノ酸残基に容易に桂皮酸類を結合させることができるため、桂皮酸類修飾オリゴペプチド中の桂皮酸類の導入位置、及び桂皮酸類の導入率ないしは修飾率を容易に制御できる。従って、この桂皮酸類修飾オリゴペプチドを重合させることにより、目的とする桂皮酸類修飾ポリペプチドを得ることができる。さらに、この桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、アミノ酸、オリゴペプチド、及び／又はポリペプチドとを重合させ、それらの重合比を調整することにより、目的のアミノ酸残基に桂皮酸又はその誘導体が結合したポリペプチドが得られる。即ち、再現性良く所望の桂皮酸類修飾ポリペプチドが得られる。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明を詳細に説明する。
（１）桂皮酸類修飾オリゴペプチド
本発明の桂皮酸類修飾オリゴペプチドは、下記一般式（１）
【化３】
2020029433.tif 000004
（式（１）中、ｐは芳香環上の置換基の数であって０〜５の整数を表す。Ｒは、それぞれ独立して、水素原子、又は炭素数１〜３の炭化水素基を表す。）
で示される桂皮酸又はその誘導体とアミノ酸残基２〜１０個からなるオリゴペプチドとがアミド結合又はエステル結合を介して結合した化合物である。
【００１４】
一般式（１）で示される桂皮酸又はその誘導体
一般式（１）において、ｐは、０〜３が好ましく、１〜２がより好ましく、２がさらにより好ましい。
また、ｐが１〜５の整数である場合、中でも１〜３である場合、中でも１〜２である場合、Ｒの１個以上が水素原子であることが好ましく、１個が水素原子であることがより好ましい。
また、ｐが１〜５の整数である場合、中でも１〜３である場合、中でも１〜２である場合、Ｒの１個以上が炭化水素基であることが好ましく、１〜２個が炭化水素基であることがより好ましく、１個が炭化水素基であることがさらにより好ましい。
Ｒにおける炭素数１〜３の炭化水素基は、メチル基、エチル基、プロピル基、又はイソプロピル基を含み、中でもメチル基が好ましい。
【００１５】
一般式（１）において、ｐが１〜５の場合、下記式（２）
【化４】
2020029433.tif 000005
で表される官能基に対してｐ位、又は１〜２個のｍ位（中でも１個のｍ位）に水酸基が存在することが好ましい。また、ｐ位、及び１〜２個のｍ位（中でも１個のｍ位）に水酸基が存在することも好ましい。
また、上記式（２）で表される官能基に対して、少なくとも１個のｍ位に炭素数１〜３のアルコキシ基、中でもメトキシ基が存在することが好ましく、１個のｍ位に炭素数１〜３のアルコキシ基、中でもメトキシ基が存在することがより好ましい。また、ｐ位に炭素数１〜３のアルコキシ基、中でもメトキシ基が存在することも好ましい。
また、上記式（２）で表される官能基に対してｐ位に水酸基が存在し、かつ１〜２個のｍ位（中でも１個のｍ位）に炭素数１〜３のアルコキシ基、中でもメトキシ基が存在することが好ましい。
また、上記式（２）で表される官能基に対して、ｐ位に炭素数１〜３のアルコキシ基、中でもメトキシ基が存在し、かつ少なくとも１〜２個のｍ位（中でも１個のｍ位）に水酸基が存在することも好ましい。
【００１６】
一般式（１）で示される桂皮酸類（以下、「一般式（１）で示される化合物」ということもある。）には、トランス体とシス体が存在し、何れでも良いが、より安定なトランス体が好ましい。
【００１７】
一般式（１）で示される桂皮酸類の好ましい具体例としては、フェルラ酸、イソフェルラ酸、カフェ酸、シナピン酸、ｐ−クマル酸、桂皮酸などが挙げられる。
【００１８】
フェルラ酸（３−メトキシ−４−ヒドロキシ桂皮酸）は、イネ科植物の細胞壁に多く含まれる成分である。フェルラ酸の生理活性は多数報告されており、例えば、フリーラジカルや活性酸素の消去による抗酸化作用（Milchwissenschaf 34, 205(1979)、Plant. Med. 57,8(1991)）、食品の退色又は変色の防止作用（月刊フードケミカル 8, 76-79(1999)、J. Oleo Sci. 57, 133-137 (2008)）、チロシナーゼ阻害による美白作用（フレグランスジャーナル No.45, 92(1980)、フレグランスジャーナル No.9, 19(1997)）、紫外線吸収作用（フレグランスジャーナル No.129, 41(1991)、J. Am. Acad. Dermatol. 59 418-425(2008)）、成長ホルモンであるソマトトロピンの合成促進による成長促進作用（J. Dairy Sci. 66, 624-629(1983)）、がん細胞の増殖を抑制する作用（Anticancer Res. 19, 3775-3778(1999)、Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 9, 1163-1170(2000)）、インスリン分泌促進による糖尿病の改善作用（J. Agric. Food Chem. 55, 9800-9804(2007)、平成13年度和歌山県工業技術センター「研究報告」p17-19(2001)）、アンジオテンシン変換酵素活性の低下に基づく血圧降下作用（J. Agric. Food Chem. 56, 2825-2830(2008)）、血中総コレステロール濃度及びトリグリセリド濃度の低下による脂質異常の改善作用（J. Agric. Food Chem. 56, 2825-2830(2008)）、酸化ストレス関連アポトーシスから脳神経を保護する作用（Brain Res. 13, 136-150(2008)）、β-アミロイドペプチドから脳を保護することにより学習記憶能力を向上させる作用（Biochem. Biophys. Acta. 1741, 140-148(2005)、Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry 29, 901-907(2005)、Acta. Pharmacol. Sin. 26, 943-951(2005)、J. Neurosci. Res. 84, 418-426(2006)、Br. J. Pharmacol. 133, 89-96(2001)）、抗炎症作用及び鎮痛作用（薬学雑誌 97, 911(1977)）などが知られている。
【００１９】
イソフェルラ酸（３−ヒドロキシ−４−メトキシ桂皮酸）は、植物に広く含まれる成分である。イソフェルラ酸の生理活性は多数報告されており、例えば、抗炎症作用及び鎮痛作用（薬学雑誌 97, 911(1977)）、チロシナーゼ阻害による美白作用（「機能性配糖体の合成と応用」,第2編第4章 シーエムシー出版, 2013年6月28日）、活性酸素消去による抗酸化作用（「機能性配糖体の合成と応用」,第2編第4章 シーエムシー出版, 2013年6月28日）などが知られている。
【００２０】
カフェ酸（３，４−ジヒドロキシ桂皮酸）は、コーヒーに含まれており、コーヒーの香りや色のもととなっている。また、ハーブや果実の皮などにも含まれている。カフェ酸の生理活性は多数報告されており、例えば、抗菌作用（生物機能開発研究所紀要 6:1-19(2006)）、グルタチオン枯渇抑制や脂質過酸化抑制のような抗酸化作用（日本食品科学工学会誌 58(1), 16-20）、がん細胞の増殖や浸潤を抑制する作用（Cancer Lett. 2011 Sep 1, 308(1), 43-53）、ＬＤＬ酸化を抑制することにより動脈硬化を抑制する作用（Free Radic.Med.1998 Dec, 25(9), 1098-1105）、抗炎症作用（薬学雑誌 97, 911(1977)）などが知られている。
【００２１】
シナピン酸（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシ桂皮酸）は、樹木の成分であるリグニンやリグナンの前駆体として植物に広く存在する。シナピン酸の生理活性は多数報告されており、例えば、抗菌活性（特開平7-194356号）、げっ歯類の脳保護効果および認知改善効果（金沢大学十全医学会雑誌 117(1)、2-9（2008））、脳機能改善活性（特開平7-179338号）、抗ラジカル活性、抗変異原活性（「食品機能性の科学」343頁、食品機能性の科学編集委員会）などが知られている。
【００２２】
ｐ−クマル酸（４−ヒドロキシ桂皮酸）は、様々な食用植物に含まれている、ｐ−クマル酸の生理活性は多数知られており、例えば、骨粗しょう症改善作用、糖尿病改善作用、脂肪細胞形成抑制作用、がん細胞増殖抑制作用などが知られている（食品資材研究会,1959, 4(1)）。
【００２３】
桂皮酸は、植物に広く存在する成分であり、樹皮の香りの香油として用いられている。また、桂皮酸は、抗菌活性を有することが知られている（生物機能開発研究所紀要 6:1-19(2006)）。
【００２４】
桂皮酸類修飾オリゴペプチド中に含まれる一般式（１）で示される桂皮酸類は、通常は１種とすればよいが、２種以上であってもよい。
【００２５】
オリゴペプチド
本発明では、オリゴペプチドを構成するアミノ酸残基数は２〜１０個である。この範囲であれば、水溶性が高い桂皮酸類修飾オリゴペプチドが得られる。オリゴペプチドを構成するアミノ酸残基数は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個の何れでも良い。中でも、２〜５個が好ましく、２〜４個がより好ましく、３個がさらにより好ましい。
【００２６】
一般式（１）で示される化合物とオリゴペプチドとは、アミド結合又はエステル結合により結合している。アミド結合又はエステル結合としては、一般式（１）で示される化合物のカルボキシル基とオリゴペプチドの側鎖アミノ基又はＮ末端アミノ基とのアミド結合、一般式（１）で示される化合物のカルボキシル基とオリゴペプチドの側鎖水酸基とのエステル結合、一般式（１）で示される化合物が芳香環上に水酸基を有する場合のその水酸基とオリゴペプチドの側鎖カルボキシル基又はＣ末端カルボキシル基とのエステル結合が挙げられる。
【００２７】
オリゴペプチドは、水溶性が高いアミノ酸の残基を含むことが好ましい。水溶性が高いアミノ酸としては、２０℃における水溶解度が５ｇ／１００ｍＬ以上であるＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ｈｙｐが挙げられ、中でも、２０℃における水溶解度が１０ｇ／１００ｍＬ以上であるＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｈｙｐが好ましく、２０℃における水溶解度が２０ｇ／１００ｍＬ以上であるＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｈｙｐがより好ましく、Ｇｌｙがさらにより好ましい。
また、オリゴペプチドがＧｌｙ残基を有する場合、桂皮酸類修飾ポリペプチドの製造に供することでコラーゲン様ポリペプチドが得易くなる点で、３アミノ酸残基ごとに１個のＧｌｙ残基が存在していることが好ましい。３アミノ酸残基ごとに１個のＧｌｙ残基が存在する合計３、６、又は９アミノ酸残基からなるオリゴペプチドであれば、より効率よく桂皮酸類修飾コラーゲン様ポリペプチドを製造することができる。
【００２８】
このような水溶性が高いアミノ酸残基には、一般式（１）で示される化合物が結合していても良く、結合していなくても良いが、桂皮酸類修飾オリゴペプチドの水溶性が高くなる点で、結合していないことが好ましい。
【００２９】
このような水溶性が高いアミノ酸残基のオリゴペプチド中の位置は限定されないが、重縮合によるポリペプチドの合成が容易になる点で、オリゴペプチドのＮ末端又はＣ末端に存在することが好ましく、Ｃ末端に存在することがより好ましい。
また、このような水溶性が高いアミノ酸残基（特に、グリシン残基）を含む場合、その数は、２アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１個、３アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも１個、４アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも１個、５アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも１個、６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも２個、７アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２個、８アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２個、９アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも３個、１０アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜４個、中でも３個が好ましい。
【００３０】
また、オリゴペプチドは、Ｐｒｏ、Ｈｙｐといった主鎖２級アミンを有するアミノ酸残基を有することが好ましい。本発明において、アミノ酸の主鎖２級アミンは、アミノ酸の重合の際に主鎖アミド結合を形成する２級アミンをいう。ＰｒｏとＨｙｐは、コラーゲン中に多く存在する点で共通しているため、Ｐｒｏ残基及び／又はＨｙｐ残基を有することにより、桂皮酸類修飾オリゴペプチドを含む材料を重合させて桂皮酸類修飾コラーゲン様ポリペプチドを製造し易くなる。
また、オリゴペプチドが、３アミノ酸残基ごとに１個のＧｌｙ残基を有する場合、さらに、Ｐｒｏ残基及び／又はＨｙｐ残基を有することにより、一層効率よく桂皮酸類修飾コラーゲン様ペプチドを製造することができる。
【００３１】
主鎖２級アミンを有するアミノ酸残基には、一般式（１）で示される化合物が結合していても良く、結合していなくても良いが、縮重合によりポリペプチドを合成できる点で、結合していないことが好ましい。また、２級アミンはアミノ基より反応性が悪く、一般式（１）で示される化合物のカルボキシル基とアミド結合を形成し難いため、主鎖２級アミンは一般式（１）で示される化合物との結合に使われないことが好ましい。
【００３２】
主鎖２級アミンを有するアミノ酸残基のオリゴペプチド中の位置は限定されないが、重縮合によりポリペプチドを合成する場合の反応性が高くなる点で、オリゴペプチドのＮ末端又はＣ末端に存在することが好ましく、Ｎ末端に存在することがより好ましい。
また、主鎖２級アミンを有するアミノ酸残基を含む場合、その数は、２アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１個、３アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも１個、４アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも２個、５アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも２個、６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２〜３個、７アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２〜３個、８アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２〜３個、９アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２〜３個、１０アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜４個、中でも３〜４個が好ましい。
【００３３】
オリゴペプチドは、側鎖にアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基を含むことが好ましい。これにより、一般式（１）で示される化合物が、これらの官能基を用いて結合を形成することができる。一般式（１）で示される化合物がオリゴペプチドの側鎖官能基を用いて結合を形成している場合、桂皮酸類修飾オリゴペプチドは、主鎖のカルボキシル基又はアミノ基を有するため、桂皮酸類修飾ポリペプチドの製造に供することができる。
側鎖にアミノ基を有するアミノ酸としては、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、オルニチン、シトルリン、ヒドロキシリジンなどが挙げられる。側鎖に水酸基を有するアミノ酸としては、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｈｙｐ、ヒドロキシリジン、Ｏ−ホスホセリンなどが挙げられる。側鎖にカルボキシル基を有するアミノ酸としては、Ａｓｐ、Ｇｌｕなどが挙げられる。
中でも、一般式（１）で示される化合物との反応性が良い点で、側鎖にアミノ基又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基が好ましく、側鎖にアミノ基を有するアミノ酸残基がより好ましい。具体的には、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、オルニチンが好ましく、Ｌｙｓが特に好ましい。
【００３４】
側鎖にアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基のオリゴペプチド中の位置は限定されないが、桂皮酸類修飾ポリペプチドを合成しやすい点で、オリゴペプチドのＮ末端又はＣ末端以外のオリゴペプチド内部に存在することが好ましい。
また、側鎖にアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基を有するアミノ酸残基を含む場合、その数は、２アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１個、３アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも１個、４アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも１個、５アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも１個、６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜２個、中でも２個、７アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２個、８アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも２個、９アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜３個、中でも３個、１０アミノ酸残基からなるオリゴペプチドでは１〜４個、中でも３個が好ましい。
【００３５】
一般式（１）で示される化合物は、オリゴペプチドのＣ末端又はＮ末端のアミノ酸残基を含む何れのアミノ酸残基に結合していてもよいが、桂皮酸類修飾ポリペプチドを合成し易く、縮重合時の立体障害を緩和できる点で、オリゴペプチドのＣ末端アミノ酸残基及びＮ末端アミノ酸残基以外のオリゴペプチド内部のアミノ酸残基に結合していることが好ましい。この場合、一般式（１）で示される化合物は、オリゴペプチドの側鎖のアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基とアミド結合又はエステル結合を形成している。
【００３６】
桂皮酸類修飾オリゴペプチド自体を化粧品、食品、医薬などに配合する場合は、桂皮酸類修飾オリゴペプチドは、主鎖アミノ基及び主鎖カルボキシル基を有していても良く、有していなくてもよい。従って、一般式（１）で示される化合物は、何れかのアミノ酸残基の側鎖のアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基と結合を形成していてもよく、或いは、オリゴペプチドの主鎖カルボキシル基又は主鎖アミノ基と結合を形成していてもよい。しかし、桂皮酸類修飾オリゴペプチドを、桂皮酸類修飾ポリペプチドの製造に用いる場合は、桂皮酸類修飾オリゴペプチドは主鎖アミノ基及び主鎖カルボキシル基を有している必要があり、この場合、一般式（１）で示される化合物は、オリゴペプチドの側鎖のアミノ基、水酸基、又はカルボキシル基と結合していていればよい。
【００３７】
オリゴペプチド１個に結合している一般式（１）で示される化合物の数は、特に限定されない。アミノ酸残基数に対して一般式（１）の化合物の数が少ない方が桂皮酸類修飾オリゴペプチドの水溶性は高くなるが、少なすぎると、桂皮酸類修飾オリゴペプチドの一般式（１）の化合物に由来する生理活性が不十分になる場合がある。一方、アミノ酸残基数に対して一般式（１）の化合物の数が多い方が桂皮酸類修飾オリゴペプチドの一般式（１）の化合物に由来する生理活性が高くなるが、多すぎると、桂皮酸類修飾オリゴペプチドの水溶性を十分に向上させ難く、また、桂皮酸類修飾オリゴペプチドを用いて桂皮酸類修飾ポリペプチドを製造する場合に重合させ難くなる。
従って、２アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１個が好ましい。３アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１個が好ましい。４アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１〜２個が好ましく、１個がより好ましい。５アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１〜２個が好ましく、１個がより好ましい。６アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１〜３個が好ましく、１〜２個がより好ましい。７アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１〜３個が好ましく、１〜２個がより好ましい。８アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１〜３個が好ましく、１〜２個がより好ましい。９アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１〜３個が好ましく、１〜２個がより好ましい。１０アミノ酸残基からなるオリゴペプチドに結合している一般式（１）で示される化合物の数は１〜３個が好ましく、１〜２個がより好ましい。
【００３８】
オリゴペプチドの好ましい例として、Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ、オルニチン−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−オルニチン等の側鎖にアミノ基を有するアミノ酸とグリシンからなるジペプチド；Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ、Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、Ｈｙｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ、Ｈｙｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−オルニチン−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−オルニチン、オルニチン−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ、オルニチン−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−オルニチン、Ｇｌｙ−オルニチン−Ｐｒｏ、Ｈｙｐ−オルニチン−Ｇｌｙ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−オルニチン、オルニチン−Ｇｌｙ−Ｈｙｐ、オルニチン−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｈｙｐ−オルニチン、Ｇｌｙ−オルニチン−Ｈｙｐ等の主鎖２級アミンを有するアミノ酸と側鎖にアミノ基を有するアミノ酸とグリシンからなるトリペプチド（中でも、Ｎ末端から順に、主鎖２級アミンを有するアミノ酸、側鎖にアミノ基を有するアミノ酸、及びグリシンからなるトリペプチド）が挙げられる。
一般式（１）で示される化合物は、上記例示したジペプチド又はトリペプチドの何れのアミノ酸残基に結合していても良い。中でも、一般式（１）で示される化合物は、上記例示したジペプチド又はトリペプチドの側鎖にアミノ基を有するアミノ酸に結合していることができる。
【００３９】
桂皮酸類修飾オリゴペプチドの製造方法
オリゴペプチドは、一般的な脱水縮合反応によるペプチド合成法により合成することができる。
また、オリゴペプチドに一般式（１）で示される化合物を結合させるに当たっては、オリゴペプチド中の同種の結合が生じ得る官能基（特に、主鎖の官能基）を保護した上で、一般的な脱水縮合反応により、一般式（１）で示される化合物をオリゴペプチドの目的とする官能基にアミド結合又はエステル結合させた後、脱保護すればよい。
【００４０】
オリゴペプチドのアミノ基を一般式（１）で示される化合物との結合に用いる場合は、他のアミノ基又は２級アミン（特に、主鎖のアミノ基又は２級アミン）を、ｔｅｒｔ−ブトキシ基（−Ｂｏｃ）で保護し、トリフルオロ酢酸や塩酸−酢酸エチル溶液で脱保護する方法、ベンジルオキシカルボニル基（−Ｃｂｚ）で保護し、パラジウム触媒を用いて水素添加反応で脱保護する方法などが挙げられる。オリゴペプチドの水酸基を一般式（１）で示される化合物との結合に用いる場合は、他の水酸基を、メチル基で保護し、三臭化ホウ素で脱保護する方法、ベンジル基で保護し、パラジウム触媒を用いて水素添加反応で脱保護する方法などが挙げられる。オリゴペプチドのカルボキシル基を一般式（１）で示される化合物との結合に用いる場合は、他のカルボキシル基（特に、主鎖のカルボキシル基）を、メチルエステルやエチルエステルなどとしておき、水酸化ナトリウムなどで脱保護する方法などが挙げられる。
【００４１】
一般式（１）で示される化合物の使用量は、オリゴペプチドの合計量の１ｍｏｌに対して、１ｍｏｌ以上が好ましく、２ｍｏｌ以上がより好ましく、３ｍｏｌ以上がさらにより好ましい。この範囲であれば、オリゴペプチド中の目的とする官能基に一般式（１）で示される化合物を十分に結合させることができる。また、一般式（１）で示される化合物の使用量は、オリゴペプチドの合計量の１ｍｏｌに対して、２０ｍｏｌ以下が好ましく、１５ｍｏｌ以下がより好ましく、１０ｍｏｌ以下がさらにより好ましい。この範囲であれば、一般式（１）で示される化合物を無駄に使用しない。
【００４２】
脱水縮合反応は、溶媒中で行えばよい。溶媒は、一般式（１）で示される化合物の溶解性により適宜選択できる。例えば、フェルラ酸のように水難溶性の化合物であれば、有機溶媒や有機溶媒と水との混液中で行えばよく、ｐ−クマル酸のように水に溶解し易い化合物であれば、水や水と有機溶媒との混液中で行えばよい。水と有機溶媒との混液を用いる場合は、混合比率は、一般式（１）で示される化合物の溶解性により適宜選択できる。
有機溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド、ジエチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、テトラメチルウレア、ヘキサメチルホスホロアミドのようなアミド系溶媒；エチレングリコール、プロピレングリコール、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリンのような多価アルコール系溶媒；ジメチルスルホキシドのようなスルホキシド系溶媒；Ｎ−メチルピロリドン、ピリジンのような窒素含有環状化合物系溶媒、アセトニトリル、プロピオニトリルのようなニトリル系溶媒；ジオキサン、テトラヒドロフランのようなエーテル系溶媒；メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールのようなアルコール系溶媒；ギ酸、酢酸のようなカルボン酸系溶媒などが挙げられる。
【００４３】
脱水縮合反応は、通常、縮合剤の存在下、又は縮合剤と縮合助剤の存在下で行えばよい。
縮合剤としては、例えば、１-［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド（ＷＳＣＤ（ＥＤＣ））、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣＤ・ＨＣｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホン酸塩（ＣＭＥ-カルボジイミド）のようなカルボジイミド系縮合剤；Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾールのようなイミダゾール系縮合剤；４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホニウム・クロリドｎ水和物（ＤＭＴ−ＭＭ）、トリフルオロメタンスルホン酸（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）-(２−オクトキシ−２−オキソエチル）ジメチルアンモニウム（ＤＭＴ-ＭＭ）のようなトリアジン系縮合剤；{{[（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデン）アミノ]オキシ}−４−モルホリノメチレン}ジメチルアンモニウムヘキサフルオロホスフェート（ＣＯＭＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、クロロトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＣｌｏＰ）のようなフルオロホスフェート系縮合剤；Ｏ−（７−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＳＴＵ）、Ｏ−（３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン−３−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＤＢＴＵ）のようなフルオロホウ酸塩系縮合剤；ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）などが挙げられる。
中でも、カルボジイミド系縮合剤が好ましく、ＷＳＣＤ、ＷＳＣＤ・ＨＣｌ、ＤＣＣ、ＤＩＣがより好ましい。
縮合剤は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
縮合剤の使用量は、オリゴペプチドの１ｍｏｌに対して、１〜５ｍｏｌとすることができる。この範囲であれば、効率よく反応が進行する。
【００４４】
縮合助剤は、縮合反応を促進するものであればよく、例えば、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＮＳｕ）、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボン酸イミド（ＨＯＮＢ）のようなＮ−ヒドロキシジカルボン酸イミド（Ｎ−ヒドロキシ多価カルボン酸イミド類）系縮合助剤；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）のようなＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール系縮合助剤；３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯｂｔ）のようなトリアジン系縮合助剤；２−ヒドロキシイミノ−２−シアノ酢酸エチルエステルなどが挙げられる。
中でも、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール系縮合助剤が好ましく、ＨＯＢｔがより好ましい。
縮合助剤は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
縮合助剤の使用量は、オリゴペプチドの１ｍｏｌに対して、１〜５ｍｏｌとすることができる。この範囲であれば、溶媒に均一に溶解させて、助剤として機能させることができる。
【００４５】
縮合反応を行う溶媒（原料に縮合剤又はさらに縮合助剤を添加する前の反応液）のｐＨは、例えば有機アミン（好ましくは、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリンのような３級アミン）を用いて、約７〜９に調整すればよい。
反応温度は、４〜５０℃とすることができる。この範囲であれば、縮合反応が効率よく進行する。反応時間は、例えば８〜２４時間とすることができる。
【００４６】
（２）桂皮酸類修飾ポリペプチド
上記説明した本発明の桂皮酸類修飾オリゴペプチドを重合させることや、本発明の桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、アミノ酸、オリゴペプチド（ペプチドオリゴマーの場合もある）、及び／又はポリペプチドとを重合させることにより、桂皮酸類修飾ポリペプチドが得られる。
桂皮酸類修飾オリゴペプチドは１種又は２種以上を用いることができ、アミノ酸、オリゴペプチド、及びポリペプチドも１種又は２種以上を用いることができる。アミノ酸、オリゴペプチド、及びポリペプチドは、特に限定されず、目的に応じたものを制限なく使用できる。
【００４７】
桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、オリゴペプチドとを重合させる場合、オリゴペプチドとして、下記式（３）〜（５）
Ｈ − （Ｘ − Ｙ − Ｇｌｙ）ｎ− ＯＨ          （３）
Ｈ − （Ｇｌｙ − Ｘ − Ｙ）ｎ− ＯＨ          （４）
Ｈ − （Ｙ − Ｇｌｙ − Ｘ）ｎ− ＯＨ          （５）
（式（３）〜（５）中、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、Ｈｙｐ又はＰｒｏを表し、ｎは１〜１０の整数である。）
の何れかで表されるオリゴペプチドの１種以上を用いることが好ましい。
【００４８】
中でも、３アミノ酸残基ごとに１個のＧｌｙ残基を有する３、６、又は９個のアミノ酸残基からなるオリゴペプチドを有する桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、上記式（３）〜（５）の何れかで表されるオリゴペプチドとを重合させることにより、桂皮酸類で修飾されたコラーゲン様ポリペプチドが得られる。
【００４９】
式（３）〜（５）中のＸとＹの組み合わせとしては、一方がＨｙｐで他方がＰｒｏである組み合わせ、双方がＨｙｐである組み合わせ、双方がＰｒｏである組み合わせがある。少なくとも一方がＨｙｐであれば、得られる桂皮酸類修飾ポリペプチドの親水性が向上し、例えば、保水性が求められるバイオマテリアル、例えば、化粧品原料などに好適に応用できる。双方がＨｙｐであってもよい。
【００５０】
式（３）〜（５）において、ｎは、１〜５が好ましく、１〜３がより好ましい。また、ｎは、１、又は２であってもよい。
式（３）〜（５）で表されるオリゴペプチドは、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
【００５１】
また、桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、下記式（６）〜（１２）で表されるアミノ酸、オリゴペプチド、又はポリペプチドの１種以上を重合させることもできる。
Ｈ − （ Ｚ１ ） − ＯＨ          （６）
（式（６）中、Ｚ１は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｈｙｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ、及びε-ポリリジンからなる群より選択されるアミノ酸残基、オリゴペプチド残基、又はポリペプチド残基を表す。）
Ｈ − （ Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ ）ｐ− ＯＨ          （７）
Ｈ − （ Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ ）ｐ− ＯＨ          （８）
Ｈ − （ Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ ）ｐ− ＯＨ          （９）
（式（７）〜（９）中、ｐは１〜１０の整数である。）
Ｈ − （ Ｚ２−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ ）ｒ− ＯＨ            （１０）
Ｈ − （ Ｇｌｙ−Ｚ２−Ｈｙｐ ）ｒ− ＯＨ            （１１）
Ｈ − （ Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｚ２ ）ｒ− ＯＨ            （１２）
（式（１０）〜（１２）中、Ｚ２は、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＶａｌからなる群より選択されるアミノ酸残基を表し、ｒは１〜１０の整数である。）
【００５２】
式（６）〜（１２）で表されるアミノ酸、オリゴペプチド、又はポリペプチドのうち、得られる桂皮酸類修飾ポリペプチドの極性や親水性・疎水性のバランスを調節できる点で、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸が好ましく、酸性の極性アミノ酸又は塩基性の極性アミノ酸がより好ましく、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓがさらにより好ましい。
また、ポリペプチドの疎水性を調整できる点で、式（１０）〜（１２）においてＺ２がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、又はＩｌｅであるオリゴペプチドが好ましい。
また、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐは細胞接着活性配列であるＲＧＤモチーフであるため、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐを用いることにより、得られるポリペプチドに細胞の接着生存促進作用などを付与できることが期待される。
式（６）中のε-ポリリジンは、特に限定されないが、例えば、約２５〜３０個のＬ−Ｌｙｓからなり、食品防腐剤などとして市販されているε-ポリリジンを用いることができる。
【００５３】
桂皮酸類修飾オリゴペプチドと、式（３）〜（５）、（７）〜（１２）で表されるオリゴペプチドとは、それらの合計量に対して、Ｇｌｙの位置が同じであるオリゴペプチドを３５〜１００ｍｏｌ％、中でも５０〜１００ｍｏｌ％、中でも７０〜１００ｍｏｌ％、中でも８０〜１００ｍｏｌ％、中でも９０〜１００ｍｏｌ％、特に１００ｍｏｌ％用いることが好ましい。この比率が１００ｍｏｌ％である場合、重合により得られるポリペプチドは３アミノ酸残基ごとに１個グリシンを有するものとなる。例えば、Ｃ末端にＧｌｙを有する３アミノ酸残基からなる桂皮酸類修飾オリゴペプチドと式（３）で表されるオリゴペプチドは、Ｇｌｙの位置が同じであるオリゴペプチドである。
Ｇｌｙの位置が同じであるオリゴペプチドの使用比率が上記範囲であれば、得られるポリペプチドが３重らせん構造を採り易くなるか、又は得られるポリペプチド中の３重らせん構造の部分が長くなる。
【００５４】
アミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド（中でも、式（３）〜（１２）で表されるアミノ酸、オリゴペプチド、ポリペプチド）の使用量は、総量で、桂皮酸類修飾オリゴペプチドの１ｍｏｌに対して、１ｍｏｌ以上が好ましく、３ｍｏｌ以上がより好ましく、５ｍｏｌ以上がさらにより好ましい。この範囲であれば、重合反応を進行させ易い。また、１００ｍｏｌ以下が好ましく、５０ｍｏｌ以下がより好ましく、２０ｍｏｌ以下がさらにより好ましい。この範囲であれば、桂皮酸類が有する活性が十分に発揮される桂皮酸類修飾ポリペプチドとなる。
【００５５】
式（６）〜（１２）で表されるアミノ酸、オリゴペプチド、又はポリペプチドの１種以上を用いるときは、さらに式（３）〜（５）で表されるオリゴペプチドの１種以上も用いることが好ましい。この場合、式（６）〜（１２）で表されるアミノ酸、オリゴペプチド、又はポリペプチドの合計使用量は、式（３）〜（５）で表されるオリゴペプチドの合計量の１ｍｏｌに対して、０．００１ｍｏｌ以上、０．００２ｍｏｌ以上、０．０１ｍｏｌ以上、０．０２ｍｏｌ以上、又は０．０５ｍｏｌ以上とすることができる。この範囲であれば、用途に応じて得られる桂皮酸類修飾ポリペプチドの反応性を調整する等の分子設計を行うことができる。
また、５ｍｏｌ以下、３ｍｏｌ以下、２ｍｏｌ以下、又は１ｍｏｌ以下とすることができる。この範囲であれば、得られる桂皮酸類修飾ポリペプチドが三重らせんを形成し易くなる。
【００５６】
桂皮酸類修飾オリゴペプチド、式（３）〜（１２）で表されるアミノ酸、オリゴペプチド、又はポリペプチドは、塩の形態で縮合反応に供することができ、これにより、反応が一層円滑に進行する。塩は、有機酸塩が好ましく、塩酸塩、トリフルオロ酢酸塩がさらにより好ましく、トリフルオロ酢酸塩がさらにより好ましい。
【００５７】
重合は、原料化合物を水系溶媒中で脱水縮合反応させる一般的な方法で行える。
【００５８】
水系溶媒としては、水、又は水を５０容量％以上含む水と有機溶媒との混液を用いることができる。有機溶媒としては、例えば、桂皮酸類修飾オリゴペプチドの合成について例示した、水と混和する有機溶媒を用いることができる。
【００５９】
脱水縮合反応は、通常、縮合剤の存在下、又は縮合剤と縮合助剤の存在下で行えばよい。縮合助剤を使用することにより、縮合反応が促進され、かつ、ラセミ化が抑制される。
縮合剤は、水系溶媒中で脱水縮合を行えるものであればよく、例えば、桂皮酸類修飾オリゴペプチドの合成について例示したものを使用できる。中でも、カルボジイミド系縮合剤が好ましく、ＷＳＣＤ、ＷＳＣＤ・ＨＣｌ、ＤＣＣ、ＤＩＣがより好ましい。
縮合剤は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
縮合剤の使用量は、原料化合物の合計（桂皮酸類修飾オリゴペプチドの合計、又は桂皮酸類修飾オリゴペプチドとアミノ酸、オリゴペプチド、及び／若しくはポリペプチドとの合計）の１ｍｏｌに対して、０．１〜２０ｍｏｌとすることができる。
【００６０】
縮合助剤は、例えば、桂皮酸類修飾オリゴペプチドの合成について例示したものを使用できる。中でも、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール系縮合助剤が好ましく、ＨＯＢｔがより好ましい。
縮合助剤は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて使用できる。
縮合助剤の使用量は、原料化合物の合計（桂皮酸類修飾オリゴペプチドの合計、又は桂皮酸類修飾オリゴペプチドとアミノ酸、オリゴペプチド、及び／若しくはポリペプチドとの合計）の１ｍｏｌに対して、０．００１〜１０ｍｏｌとすることができる。この範囲であれば、水系溶媒に均一に溶解させて、助剤として機能させることができる。
【００６１】
縮合反応を行う水系溶媒（原料に縮合剤又はさらに縮合助剤を添加する前の反応液）のｐＨは、約３〜１０に調整すればよい。反応温度は、−１０〜８０℃とすることができる。この範囲であれば、縮合反応が効率よく進行する。反応時間は、例えば１〜１００時間とすることができる。
【００６２】
このようにして得られる桂皮酸類修飾ポリペプチドは、下記一般式（１）
【化５】
2020029433.tif 000006
（式（１）中、ｐは芳香環上の置換基の数であって０〜５の整数を表す。Ｒは、それぞれ独立して、水素原子、又は炭素数１〜３の炭化水素基を表す。）
で示される桂皮酸類とポリペプチドとがアミド結合又はエステル結合を介して結合した化合物である。
本発明の桂皮酸類修飾ポリペプチドは、一般式（１）で示される桂皮酸類が結合しているため、桂皮酸類に由来する種々の活性が付与されたものとなる。
【００６３】
桂皮酸類修飾ポリペプチドの重量平均分子量は、例えば、３，０００以上、５，０００以上、又は１万以上で、１５０万以下、１３０万以下、１２０万以下、１１０万以下、１００万以下、８０万以下、６０万以下、３０万以下、２０万以下、又は１０万以下であり得る。
本発明において、重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により測定した値であり、具体的には、実施例に記載の方法で測定した値である。ＧＰＣにより測定した重量平均分子量は、測定装置や測定条件によりほとんど変化しない値である。
桂皮酸類修飾ポリペプチドの長さ又は重量平均分子量は、原料の種類や使用量、反応条件など、特に、縮合剤、縮合助剤の使用量を調整することにより制御できる。
【００６４】
本明細書において、アミノ酸又はアミノ酸残基は以下の略称で表記している。
Ａｌａ：Ｌ−アラニン（残基）
Ａｒｇ：Ｌ−アルギニン（残基）
Ａｓｎ：Ｌ−アスパラギン（残基）
Ａｓｐ：Ｌ−アスパラギン酸（残基）
Ｃｙｓ：Ｌ−システイン（残基）
Ｇｌｎ：Ｌ−グルタミン（残基）
Ｇｌｕ：Ｌ−グルタミン酸（残基）
Ｇｌｙ：グリシン（残基）
Ｈｉｓ：Ｌ−ヒスチジン（残基）
Ｈｙｐ：Ｌ−ヒドロキシプロリン（残基）
Ｉｌｅ：Ｌ−イソロイシン（残基）
Ｌｅｕ：Ｌ−ロイシン（残基）
Ｌｙｓ：Ｌ−リジン（残基）
Ｍｅｔ：Ｌ−メチオニン（残基）
Ｐｈｅ：Ｌ−フェニルアラニン（残基）
Ｐｒｏ：Ｌ−プロリン（残基）
Ｓｅｒ：Ｌ−セリン（残基）
Ｔｈｒ：Ｌ−スレオニン（残基）
Ｔｒｐ：Ｌ−トリプトファン（残基）
Ｔｙｒ：Ｌ−チロシン（残基）
Ｖａｌ：Ｌ−バリン（残基）
【実施例】
【００６５】
以下、実施例を挙げて、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００６６】
（１）フェルロイル基含有オリゴペプチドの合成
下記スキームに従い、フェルロイル基を有するトリペプチドを合成した。
【数１】
2020029433.tif 000007
【００６７】
化合物（ａ）の合成
Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−ＯＨ（化合物（ａ））は、一般的な脱水縮合反応によるペプチド合成により得た。
【００６８】
化合物（ｂ）の合成
四つ口ナスフラスコ中で化合物（ａ）（20g, 50mmol）、trans-フェルラ酸（64g, 330mmol）、トリエチルアミン（8ml ,55mmol）、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドを（11g, 55mmol）テトラヒドロキシフラン（200ml）中で攪拌、溶解し、室温で16時間反応させた。反応終了後、ろ過し、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣物をテトラヒドロキシフランに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（ｂ）を白色固体として20g得た（収率69%）。
この化合物の構造は下記のLC-MSスペクトルから確認した。
LC-MS(ES)：Calcd for C28H41N4O9 577.7 [M+H]+, Found.:577.8
【００６９】
化合物（ｃ）の合成
ナスフラスコ中で化合物（ｂ）（12g, 21mmol）、トリフルオロ酢酸（13ml, 168mmol）をクロロホルム（60ml）中で攪拌、溶解し、室温で16時間反応させた。反応終了後、減圧下で溶媒を留去した。得られた残渣物にヘプタン（60ml）を加え攪拌し、減圧下で溶媒を留去し、得られた残渣物にジエチルエーテル（180ml）を加え、析出した白色固体を吸引ろ過した。固体を室温で真空乾燥することで化合物（ｃ）を得た（収率）。
この化合物の構造は下記のLC-MSスペクトルから確認した。
LC-MS(ES)：Calcd for C23H34N4O7 477.5 [M+H]+, Found.:477.7
【００７０】
（２）フェルロイル基含有ポリペプチドの合成
原料として、L-（4-ヒドロキシプロリル）-L-（4-ヒドロキシプロリル）-グリシン  トリフルオロ酢酸塩 （5g, 13mmol）と化合物（ｃ）（0.6g,1mmol）を22mlの蒸留水に溶解し、トリエチルアミンでpHを4に調整した後、4℃に冷却した。その後、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（0.4g, 3mmol）と１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（5g, 28mmol）を添加して1時間攪拌した後、20℃に昇温し終夜攪拌した。得られた反応溶液を限外ろ過し、凍結乾燥することによって白色粉末2.5g（収率45%, 重量平均分子量39,000）を得た。
【００７１】
（重量平均分子量測定）
フェルロイル基含有ポリペプチドの重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により決定した。測定条件は、以下の通りである。
装置：（株）島津製作所製LC-20Aシステム
カラム：TSKgel GMPWxl
温度：４０℃
流速：1.0 mL/min
溶離液：0.2N  硝酸ナトリウム水溶液
分子量標準：Showdex製STD Pシリーズ
【００７２】
（３）物性の評価
抗酸化力試験
抗酸化力試験としてフリーラジカル補足除去作用を評価した。フリーラジカルのモデルとしては、安定なフリーラジカルである2,2-ジフェニル-1-ピクリルヒドラジル（以下、「DPPH」という）を用い、被験試料と一定の割合で一定時間反応させ、減少するラジカル量を波長562nmの吸光度の減少を指標に測定した。
被験試料として、フェルラ酸、化合物（ｃ）、及び上記のフェルロイル基含有ポリペプチドを用いた。フェルラ酸及び化合物（ｃ）は、1000μMのエタノール溶液とし、フェルロイル基含有ポリペプチドは、20mg/ml水溶液とし、これらを被験試料液とした。各被験試料液20μlを96穴マイクロプレートに添加し、0.1M トリス塩酸緩衝液（ｐH7.4）80μlと500μM DPPHエタノール溶液100μlを加えて混合した。その後、暗所で20分反応させ、マイクロプレートリーダー（バイオ  ラッド  ラボラトリーズ（株）製iMarkマイクロプレートリーダー）で吸光度（I）を測定した。
また、被験試料液の代わりにエタノールを20μl用いた他は上記と同様にして吸光度（II）を測定した。
また、ブランクとして、DPPHエタノール溶液の代わりにDPPHを含まないエタノール100μLに、前記被験試料液作製に使用した溶媒（フェルラ酸及び化合物（ｃ）についてはエタノール、フェルロイル基含有ポリペプチドについては水）100μlを加えた溶液の吸光度（III）を測定した。
【００７３】
フリーラジカル補足除去率は、以下の式より算出した。
フリーラジカル補足除去率（％）＝｛１−（I−III）／(II-III）｝×１００
【００７４】
結果を表１に示す。
【表１】
2020029433.tif 000008
フェルラ酸をトリペプチドやポリペプチドと結合させても、抗酸化力はほぼ維持されていた。
【００７５】
水溶性の評価
フェルロイル基含有トリペプチド（化合物（ｃ））の、25℃における水溶解度は3.3mg/mLであった。また、フェルラ酸の25℃における水溶解度は1.27mg/mlであることが知られている（株式会社シクロケムバイオＨＰ  最新研究成果  第57回αシクロデキストリンによるフェルラ酸の水溶化）。
フェルラ酸をトリペプチドに結合させることにより、水溶性が向上した。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明により、桂皮酸類の抗酸化作用、抗菌作用、チロシナーゼ活性抑制作用（美白作用）、紫外線吸収作用などの有用な作用を有する桂皮酸類修飾オリゴペプチド及び桂皮酸類修飾ポリペプチドが提供された。桂皮酸類をオリゴペプチドと結合することにより、水溶性が向上する等の新たな機能を有するため、化粧品、食品、医薬などに配合し易いものとなる。また、ポリペプチドとして化粧品、食品、医薬などに使用される有用なものを使用すれば、桂皮酸類の作用を併せ持つ桂皮酸類修飾ポリペプチドとなる。