(57)【要約】【課題】  α-ガラクトシルセラミドの免疫賦活活性を改良する手段を提供する。【解決手段】  下記の一般式(I)2020083876.tif 000011〔式中、Arはフェニル基など置換基で置換されていてもよいアリール基又は置換基で置換されていてもよいヘテロアリール基を表し、nは4〜12の整数を表す。〕で表される化合物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式(I)
【化１】
2020083876.tif 000009
〔式中、Arは置換基で置換されていてもよいアリール基又は置換基で置換されていてもよいヘテロアリール基を表し、nは4〜12の整数を表す。〕
で表される化合物。
【請求項２】
一般式(I)においてArが、置換基で置換されていてもよいフェニル基又は置換基で置換されていてもよいナフタレン-2-イル基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
一般式(I)においてArが、下記の式(i)〜(iv)
【化２】
2020083876.tif 000010
〔式中、*は結合手を表し、Xは水素原子又は置換基を表し、Yは水素原子又は置換基を表し、mは1〜10の整数を表す。〕
で表される基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
一般式(I)においてnが、6、8、又は10であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とするナチュラルキラーT細胞活性化剤。
【請求項６】
請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光で免疫活性を制御できる糖脂質、並びにそれを利用したナチュラルキラーT細胞活性化剤及び医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、一般的に行われているがん治療は、外科治療、化学療法、放射線治療の3つであり、これらを総称して三大がん治療といわれている。局所的な治療法である外科治療や放射線治療では、進行したがんや転移がある場合に対処が困難である。また、抗がん剤を用いる化学療法では、正常細胞にもダメージを与えることで発症する副作用が問題となっている。その一方で、第4のがん治療として注目されている「がん免疫療法」（T. Nakatsura, Jpn. J. Clin. Immunol., 2016, 39 (3), pp 164-171）は、免疫という体内に備わっている異物を排除する力を用いるため、副作用リスクの低減や長時間の効果が期待できる。がん免疫療法には、免疫応答を亢進する細胞を増強させる手法(1)と、免疫応答を抑える分子の働きを妨げる手法(2)の2種類に大きく分類される。(1)の代表例として、がんの目印となる抗原を細胞に加えることで、がんへの攻撃を教育させる活性化リンパ球療法や樹状細胞ワクチン療法が挙げられる。(2)の代表例として、がん細胞を攻撃するTリンパ球にブレーキをかける分子の働きを阻害する免疫チェックポイント阻害剤が挙げられる。特に後者においては、2014年に本庶佑氏と小野薬品工業株式会社が開発した抗PD-1抗体（オプジーボ）が登場したことで、画期的ながん免疫療法として脚光を浴びるなど、免疫力を用いたがん治療の研究が世界中で日々進められている。
【０００３】
活性化リンパ球療法のようながん免疫療法では、T細胞、B細胞、NK細胞等の抗腫瘍性免疫細胞が標的となる。このような抗腫瘍性免疫細胞の中で、T細胞、B細胞、NK細胞に続く第4のリンパ球と呼ばれているのがナチュラルキラーT細胞（NKT細胞）である。NKT細胞は、他の免疫細胞を活性化することにより、長期にわたり抗腫瘍効果や抗アレルギー効果を発揮する（T. Nakatsura, Jpn. J. Clin. Immunol., 2016, 39 (3), pp 164-171）。1995年にキリンビール株式会社の研究者らによって発見されたKRN7000（Morita, M. et al., J. Med. Chem., 1995, 38 (12), pp 2176-2187）は、α-ガラクトシルセラミド（α-GalCer）構造を有し、NKT細胞を特異的に活性化してIFN-γやIL-10等のサイトカイン産生を誘導する。
【０００４】
当初、KRN7000は抗腫瘍活性剤として開発されていた。しかしながら、治験段階において、頻回投与により、免疫賦活活性を誘導するサイトカイン（IFN-γ）の産生量が減少し、免疫抑制活性を誘導するサイトカイン（IL-10）を過剰に産生してしまうため、アナジー誘導（免疫不応答）が起こり、免疫賦活活性が消失するという問題が生じた（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】T. Tashiro, Mori K, Trend in Glycosci and Glycotech, 2010, 22 (128), pp 280-295
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述したように、α-GalCerは頻回投与によりアナジー誘導が起こし、免疫賦活活性が消失してしまう。本発明は、α-GalCerの免疫賦活活性を改良し、抗がん剤として開発することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、α-GalCerの脂質部位に光異性化を起こすアゾベンゼン基を導入することにより、光照射部位に局所的にかつ時間限定的にα-GalCerの免疫賦活活性を発現でき、これによりアナジー誘導を回避できることを見出し、この知見に基づき、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、以下の（１）〜（６）を提供する。
（１）下記の一般式(I)
【化１】
2020083876.tif 000002
〔式中、Arは置換基で置換されていてもよいアリール基又は置換基で置換されていてもよいヘテロアリール基を表し、nは4〜12の整数を表す。〕
で表される化合物。
【０００９】
（２）一般式(I)においてArが、置換基で置換されていてもよいフェニル基又は置換基で置換されていてもよいナフタレン-2-イル基であることを特徴とする（１）に記載の化合物。
【００１０】
（３）一般式(I)においてArが、下記の式(i)〜(iv)
【化２】
2020083876.tif 000003
〔式中、*は結合手を表し、Xは水素原子又は置換基を表し、Yは水素原子又は置換基を表し、mは1〜10の整数を表す。〕
で表される基であることを特徴とする（１）に記載の化合物。
【００１１】
（４）一般式(I)においてnが、6、8、又は10であることを特徴とする（１）乃至（３）のいずれかに記載の化合物。
【００１２】
（５）（１）乃至（４）のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とするナチュラルキラーT細胞活性化剤。
【００１３】
（６）（１）乃至（４）のいずれかに記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、光で免疫活性を制御できる新規な糖脂質を提供する。この糖脂質は、がんの治療薬などの医薬に利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】アシル鎖の長さが異なるα-GalCerAzoPhの構造。
【図２】炭素鎖の異なるアゾフェノール直鎖カルボン酸（1-3a〜d）の合成。
【図３】α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）の合成。
【図４】α-GalCerAzoPh（1-1c）のHPLCチャート。
【図５】LED（365nm）照射によるAzoPhC10の光異性化反応の1HNMRスペクトルの経時変化（(a) 光照射前, (b) 光照射7時間後）。
【図６】(a)LED（365, 455nm）照射によるAzoPhC10の光異性化反応の経時変化、(b)遮光・室温放置によるAzoPhC10(Z)の異性化の経時変化。
【図７】(a) APCに含まれる蛍光物質フィコシアノビリンの構造、(b) 蛍光物質FITCの構造。
【図８】(a) APC−抗IgG1抗体、CD1d dimer、糖脂質の複合体作製図、(b) WTB6、Traj18-/-の胸腺細胞と脾臓細胞、(c) (a)の複合体、FITC−抗TCRβ抗体、iNKT細胞の複合体作製図。
【図９】WTB6とTraj 18-/-の胸腺細胞を用いた光異性化前後のα-GalCerAzoPhによるiNKT細胞拘束性のFACS分析（各ヒストグラムの右上の数字は、全リンパ球に対する糖脂質−CD1dの複合体によって拘束されたiNKT細胞の割合を表す）。
【図１０】WTB6とTraj 18-/-の脾臓細胞を用いた光異性化前後のα-GalCerAzoPhによるiNKT細胞拘束性のFACS分析（各ヒストグラムの右上の数字は、全リンパ球に対する糖脂質−CD1dの複合体によって拘束されたiNKT細胞の割合を表す）。
【図１１】α-GalCerAzoPh（C4〜C10）のE-Z異性体とiNKT細胞拘束率の変化。
【図１２】α-GalCerAzoPh(1-1a〜d)のE-Z異性体とCD1d分子のドッキング（α-GalCerは緑色で表した）。
【図１３】α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）のE-Z異性体とCD1d分子のドッキングスコア。
【図１４】脂質末端に嵩高い芳香環を導入したα-GalCerAzoPhの構造。
【図１５】AzoPhC10（1-2d）の検量線。
【図１６】α-GalCerAzoPh（1-1d）のHPLCチャート。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において「アリール基」とは、例えば、フェニル基、ナフタレン-1-イル基、ナフタレン-2-イル基である。
【００１７】
本発明において「ヘテロアリール基」とは、例えば、ピリジニル基（ピリジン-2-イル基、ピリジン-3-イル基、ピリジン-4-イル基）、ピリミジニル基（ピリミジン-2-イル基、ピリミジン-4-イル基、ピリミジン-5-イル基）、フラニル基（フラン-2-イル基、フラン-3-イル基）、チエニル基（チオフェン-2-イル基、チオフェン-3-イル基）、キノリニル基（キノリン-2-イル基、キノリン-3-イル基、キノリン-4-イル基、キノリン-5-イル基、キノリン-6-イル基）である。
【００１８】
本発明において「炭素数1〜10のアルキル基」とは、炭素数が1以上10以下の直鎖又は分枝鎖アルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、iso-プロピル基、n-ブチル基、iso-ブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、iso-ペンチル基、neo-ペンチル基、ヘキシル基、iso-ヘキシル基、ヘプチル基、iso-ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などである。
【００１９】
本発明において「炭素数1〜10のアルコキシ基」とは、炭素数が1以上10以下の直鎖又は分枝鎖アルコキシ基であり、例えば、メトキシ基、エトキシ基、n-プロポキシ基、iso-プロポキシ基、n-ブトキシ基、iso-ブトキシ基、sec-ブトキシ基、tert-ブトキシ基、ペンチルオキシ基、iso-ペンチルオキシ基、neo-ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、iso-ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、iso-ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基などである。
【００２０】
本発明において「ハロゲン原子」とは、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子である。
【００２１】
本発明の化合物は、下記の一般式(I)
【化３】
2020083876.tif 000004
で表される。
【００２２】
式中、Arは置換基で置換されていてもよいアリール基又は置換基で置換されていてもよいヘテロアリール基を表す。
【００２３】
アリール基又はヘテロアリール基の置換基は特に限定されず、疎水性の置換基であっても、親水性の置換基であってもよい。また、置換基は、後述する(iv)で表される基のように、別のアゾベンゼン基を含むものであってもよい。置換基の具体例としては、アルキル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、ハロゲン原子、フェニル基などを挙げることができる。アルキル基及びアルコキシ基の炭素数は特に限定されないが、炭素数1〜10のアルキル基及び炭素数1〜10のアルコキシ基が好ましい。
【００２４】
置換基の数は特に限定されず、置換基は一つだけであってもよく、二つ以上であってもよい。置換基の位置も特に限定されず、例えば、アリール基がフェニル基である場合、2位、3位、4位、5位、6位のいずれに置換基が導入されていてもよい。但し、置換基が一つだけである場合は、4位に置換基が導入されていることが好ましい。
【００２５】
一般式(I)においてArは置換基で置換されていてもよいアリール基又は置換基で置換されていてもよいヘテロアリール基であればよいが、好ましくは、置換基で置換されていてもよいフェニル基又は置換基で置換されていてもよいナフタレン-2-イル基であり、より好ましくは、下記の式(i)〜(iv)
【化４】
2020083876.tif 000005
で表される基である。
【００２６】
式(i)〜(iv)において、*は結合手を表し、Xは水素原子又は置換基を表し、Yは水素原子又は置換基を表し、mは1〜10の整数を表す。X及びYの置換基としては、アルキル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、ハロゲン原子、フェニル基などを挙げることができる。アルキル基及びアルコキシ基の炭素数は特に限定されないが、炭素数1〜10のアルキル基及び炭素数1〜10のアルコキシ基が好ましい。mは1〜10の整数であればよいが、好ましくは、2〜6の整数である。
【００２７】
一般式(I)においてnは4〜12の整数であればよいが、好ましくは、6、8、又は10である。
【００２８】
一般式(I)で表される化合物は、実施例に記載した1-1a〜dの化合物の製造方法に、必要に応じて改変や修正を加えた方法に従って製造できる。例えば、1-1a〜dの化合物の製造には、5-[4-（2-フェニルジアゼニル）-フェノキシ]-カルボン酸（1-3a〜dの化合物）を原料として使用するが、この化合物の代わりに、この化合物のフェニル基をフェニル基以外のアリール基やヘテロアリール基に置き換えた化合物を使うことにより、1-1a〜dの化合物以外の一般式(I)で表される化合物を製造することができる。
【００２９】
光照射により、一般式(I)で表される化合物の分子中に含まれるアゾベンゼンは、E体からZ体に変化する。Z体アゾベンゼンを含む一般式(I)で表される化合物は、NKT細胞を活性化させることができる。従って、一般式(I)で表される化合物は、NKT細胞活性化剤の有効成分として用いることができる。また、NKT細胞の活性化によって免疫賦活作用又は免疫抑制作用が得られるので、一般式(I)で表される化合物は、医薬組成物の有効成分として用いることができる。具体的には、免疫賦活作用を利用する場合はがんの治療のための医薬組成物の有効成分、免疫抑制作用を利用する場合はアレルギー疾患や自己免疫疾患の治療のための医薬組成物の有効成分として用いることができる。免疫賦活作用と免疫抑制作用のいずれを誘導するかは、光の照射する時間や頻度によって調節する。即ち、光の照射時間が短い場合や光の照射頻度が少ない場合は免疫賦活作用の誘導が優勢となり、光の照射時間が長い場合や光の照射頻度が多い場合は免疫抑制作用の誘導が優勢となる。
【００３０】
一般式(I)で表される化合物の代わりに、一般式(I)で表される化合物の薬学的に許容される塩を使用することもできる。このような塩としては、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩）、硫酸塩、塩酸塩、硝酸塩などを挙げることができる。
【００３１】
本発明のNKT細胞活性化剤の投与方法は、一般式(I)で表される化合物を治療したい部位に送達できれば、その方法は特に限定されない。例えば、静脈注射、点滴、動脈注射、発布、添鼻、膀注、浣腸、舌下等の投与方法を挙げることができる。
【００３２】
本発明のNKT細胞活性化剤には、必要に応じて薬効成分、栄養剤、賦形剤等の他の成分を加えることができる。本発明におけるNKT細胞活性化剤の剤型としては、注射剤、点滴剤、膀胱内注入剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、発布剤、座薬等を例示することができる。これらは溶剤、分散媒、増量剤、賦形剤等を適宜用い、常法に従って製剤することができる。
【００３３】
本発明のNKT細胞活性化剤の投与量は特に限定されないが、NKT細胞活性化剤中に含まれる一般式(I)で表される化合物が成人1人当たり、1〜1000mgとするのが好ましく、10〜100mgとするのがより好ましい。
【００３４】
本発明のNKT細胞活性化剤を用いた疾患の治療では、NKT細胞活性化剤を投与後、NKT細胞活性化剤が患部に存在するタイミングで光を照射する。照射する光の波長は、一般式(I)で表される化合物の分子中のアゾベンゼンをE体からZ体に変化させることができる波長であれば特に限定されず、例えば、300〜400nmとすることができる。照射する光の時間や頻度は治療対象とする疾患に応じて決めることができる。例えば、がんを治療する場合は、照射時間は短く、照射頻度は少なくし、アレルギー疾患や自己免疫疾患を治療する場合は、照射時間は長く、照射頻度は多くする。
【実施例】
【００３５】
以下に、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３６】
〔実施例〕  免疫活性を制御できる光異性化α-GalCer誘導体の開発
（１）緒言
本実施例では、光照射で構造が変化するアゾベンゼン（AzoPh）をアシル鎖の末端に結合させた光異性化α-GalCer誘導体（α-GalCerAzoPh）を合成し、光照射により局所的かつ時間限定的に免疫活性を制御できる手法の開発を目指した。アゾベンゼンの位置の違いによるα-GalCerAzoPhの構造活性相関の知見を得るため、アシル鎖の長さが異なる誘導体を種々合成した。また、光照射前後でのα-GalCerAzoPhによるiNKT細胞への拘束性の変化を、フローサイトメトリーを用いて検証した。さらに、CD1d分子とα-GalCerAzoPhのE-Z異性体のドッキングシミュレーションを行った。計算学的手法によるα-GalCerAzoPhのE-Z異性体とCD1d分子の結合性と、in vitroによる結合性の結果により、α-GalCerAzoPhのE-Z異性体及びアゾベンゼンの位置の違いによる構造活性相関の知見を得たので、その結果とその考察について報告する。
【００３７】
（２）光異性化α-GalCer誘導体の構造設計
本実施例で用いる化合物は、図１に示したアシル鎖の長さが異なるα-GalCerAzoPh（1-1a〜d）である。既往研究から、α-GalCerのアシル鎖の長さの違いによって、CD1d分子との安定性や、サイトカイン産生タイプが異なることが分かっている（Andre S., et al., J. Mol. Biol., 2009, 394 (1), pp 71-82、Corinna M., et al., J Exp. Med., 2007, 204 (5), pp 1131-1144、Dirk M Zajonc, et al., Nature Immunology, 2005, 6 (8), pp 810-818）。したがって、本研究においても、アゾベンゼンの位置の違いによるα-GalCerAzoPhの構造活性相関の知見を得るため、図１に示す化合物を設計した。
【００３８】
（３）光異性化α-GalCer誘導体の合成
α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）を全13ステップで合成した（図２及び３）。p-フェニルアゾフェノール、9-ブロモノナン酸メチル、化合物1-2a, 1-3b, 1-3c, 1-4, 1-5, 1-6は既知化合物である。
【００３９】
アニリンを原料にし、亜硝酸ナトリウムと塩酸を用いることでジアゾニウム塩を生成し、その後フェノールと水酸化ナトリウムを用いてジアゾカップリング反応を行い、収率73%でp-フェニルアゾフェノール（Long Yang, et al., New Journal of Chemistry, 2016, 40 (8), pp 6825-6833）を得た。また9-ブロモノナン酸を原料にし、硫酸とメタノールを用いて、収率98%で9-ブロモノナン酸メチルを得た。次に、末端にブロモ基が付加したメチレン鎖の異なる直鎖飽和脂肪酸エステルを原料にし、アセトン溶媒中、p-フェニルアゾフェノールと炭酸カリウムを用いて、p-フェニルアゾフェノールのアルキル化を行い、図３に示す収率で目的物（1-2a〜d）を得た。続いて、テトラヒドロフランと水の混合溶媒中、水酸化ナトリウムを用いて、エステルの加水分解反応を行い、図３に示す収率で目的物（1-3a〜d）を得た（図２）。
【００４０】
アセトニトリル溶媒中、アジ化ナトリウムとトリフルオロメタンスルホン酸無水物を用いて、トリフリルアジド溶液を先に調整した。その後、フィトスフィンゴシンを原料にし、メタノール/水混合溶媒中、調整したトリフリルアジド溶液と硫酸銅とトリエチルアミンを用いて、アミノ基のアジド基変換反応を行い、収率96%で目的物1-4（Ri-Bai Yan, et al., Tetrahedron Letters, 2005, 46 (52), pp 8993-8995）を得た。次に、アセトン溶媒中、硫酸を用いて、3,4-ジオールのイソプロピリデン化を行い、収率81%で目的物1-5（Qiu-Hua Fan, et al., Organic Letters, 2006, 8 (5), pp.1007-1009）を得た。続いて、D-ガラクトースを原料にし、ジメチルホルムアミド溶媒中、クロロトリメチルシランとトリエチルアミンを用いて、TMS保護を行い、収率99%で目的物1-6（Charlotte M. S., et al., Org. Biomol. Chem., 2013, 11 (27), pp 4479-4487）を得た。次に、ジクロロメタン溶媒中、トリメチルシリルヨージドを用いて、１位のヨード化を行った。続けて1-5とジイソプロピルエチルアミンを用いて、α選択的グリコシル化反応を行い、メタノール溶媒中Dowex 50H+を用いて、TMSの脱保護を行い、2ステップにて収率27%で目的物1-7（Matthew S., et al., J. Org. Chem., 2010, 75 (15), pp 4891-4898）を得た。次に、酢酸水溶液を用いて、イソプロピリデンの脱保護を行い、収率65%で目的物1-8を得た。続いて、メタノールと水の混合溶媒中、パラジウム炭素と水素を用いて、アジドの還元反応を行い、目的物2-10を得た。その後精製は行わずに、テトラヒドロフラン溶媒中、炭素鎖の異なるアゾフェノール直鎖カルボン酸（1-3a〜d）、HATU、トリエチルアミン、N-メチルモルホリンを用いて、アミド縮合反応を行い、2ステップにて下記の収率で目的物1-1a〜d（Md. Imran Hossain, et al., Bioorg. Med. Chem., 2016, 24(16), pp 3687-3695）を得た（図３）。
【００４１】
目的物1-1a〜dをHPLCによって精製した。1-1cのHPLCチャートを図４に示す。移動相をメタノールとテトラヒドロフランの混合溶媒（MeOH : THF = 10 : 1）を用いて展開し、1-1cをメタノールに溶解させ、インジェクションした。保持時間4分で現れたピークを回収し、濃縮した。
【００４２】
（４）モデル化合物AzoPhの光異性化反応の追跡
合成したα-GalCerAzoPh（1-1a〜d）を用いて、E-Z異性化によるCD1d分子への結合性の変化を検証する前に、光照射装置を用いて光異性化反応が進行するかどうかを1HNMR測定を行うことで確かめた。AzoPhC10（1-2d）を重クロロホルムに溶解させ、1.0 cm  1.0 cmのセルに入れ、365 nmのLED光を照射した。照射前と7時間後の1HNMRの測定結果を図５に示す。365 nmのLED光の照射により、7時間でE体からZ体への異性化反応が100%進行した。また、365 nmのLED光を7時間照射したAzoPhC10(Z)を1.0 cm  1.0 cmのセルに入れ、455 nmのLED光を照射した。結果を図６(a)に示す。455 nmのLED光の照射により、7時間でZ体からE体への異性化反応が75%進行した。また、AzoPhC10(Z)を、遮光して室温で静置することでZ体の熱安定性を評価した。結果を図６(b)に示す。遮光・室温静置により、37時間でZ体からE体への異性化反応が98%進行した。この結果は、Z体が室温でも24時間で80%程E体に戻ってしまうことを明らかにしたものであり、以後のアッセイの方法について重大な意味をもつ。
【００４３】
（５）光異性化α-GalCer誘導体のE-Z異性化によるiNKT細胞への拘束性の変化
HPLC精製後のα-GalCerAzoPh（1-1a〜d）を用いて、光照射有無や、アゾベンゼンの位置の違いによるCD1d分子への結合性、つまりiNKT細胞への拘束性の変化をフローサイトメトリーにより検証した。サンプルは、1-1a〜dに光を照射した1-1a’〜d’と、α-GalCerの計9サンプルを用いた。これから用いる生体物質について、以下のように略称を定義する。
・WTB6 : 正常マウス
・Traj 18-/- : iNKT細胞をノックアウトしたマウス
・CD1d dimer : マウスCD1d（mCD1d）を、マウス免疫グロブリンG1抗体（IgG1）のFab領域2ヵ所で融合して作製されたキメラタンパク質
・APC−抗IgG1抗体 : CD1d dimerの抗体のFc領域を認識する抗マウスIgG1抗体と蛍光物質（APC, 図７(a)）の複合体
・FITC−抗TCRβ抗体 : マウスのiNKT細胞上に発現しているTCRのβ鎖を認識する抗マウスTCRβ抗体と蛍光物質（FITC, 図７(b)）複合体
・IgG1抗体：抗マウスIgG1抗体に結合する抗体
【００４４】
検量線を基に、重量を算出した1-1a〜dを終濃度200 μg/mLになるように、1-1a〜dをDMSOとPBSに溶かし、その溶液から一部取って、365 nmのLEDを24時間照射し、1-1a’〜d’を作成した。各Z体の溶液に関して、1-1a’は72時間、1-1b’は48時間、1-1c’は24時間−80℃の冷凍庫で保存し、さらに1a’〜d’は0℃で2〜3時間保存したため、E体をある程度含むと考えられる。この点に関して、改良した実験手法を現在計画中である。その後、CD1d dimerとAPC−抗IgG1抗体を各サンプルに添加し、37℃で19時間暗所でインキュベートすることで、CD1d dimerと糖脂質の複合体を作製した（図８ (a)）。この間にも、熱によるZ体からE体への異性化が進行すると考えられ、最大で80%のZ体はE体に戻ってしまうと考えられる。その後、未反応のAPC−抗IgG1抗体をクエンチするために、IgG1抗体を添加し、30分間室温で遮光して静置した。そして、WTB6とTraj18-/-から抽出した胸腺（Thymus）と脾臓（Spleen）の細胞（1.0 x 106個, 図８(b)）をCD1d dimerと糖脂質の複合体に添加し、そこにFITC−抗TCRβ抗体を加えた（図８(c)）。その後、細胞をフローサイトメトリーに流し、光異性化前後のα-GalCerAzoPh（1-1a〜d）のiNKT細胞拘束活性を検証した（図９、図１０）。また、全リンパ球に対する糖脂質−CD1dの複合体によって拘束されたiNKT細胞数を図１１に示した。炭素数C6以上の誘導体で、iNKT細胞への拘束性を示し、さらにE体より光照射で生成したZ体の方がiNKT細胞への拘束性を強く示している。C6以上の誘導体のE体に比べた時のZ体のiNKT細胞拘束増加倍率と平均増加倍率を表１に示した。
【表１】
2020083876.tif 000006
【００４５】
平均増加倍率より、E体より光照射で生成したZ体の方がiNKT細胞への拘束率が1.2倍程度であることが分かる。しかし、上記のようにZ体は、インキュベートの際にE体に戻っていることが予想され、光照射の条件を最適化することでE-Z間の活性差をさらに大きくできる可能性がある。今後、Z体がE体に異性化しない条件でCD1d dimerとα-GalCerAzoPhをインキュベートする手法を開発する。
【００４６】
（６）光異性化α-GalCer誘導体のE-Z異性体とCD1d分子のドッキング
（５）節で、α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）の光照射前後でのCD1d分子への結合性、つまりiNKT細胞への拘束性の変化をin vitroで検証した。今節では、計算学的手法によるα-GalCerAzoPhのE-Z異性体とCD1d分子の結合性の変化を検証するため、α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）のE-Z異性体とCD1d分子とのドッキングシミュレーションを行った。手順を以下に示す。
1)AzoPh-O-C2H5（E体, Z体）をAvogadroを用いて構造最適化を行った。
2)1)をさらにGaussian16（cam-B3LYP/631G(d)）を用いて構造最適化を行った。
3)AzoPh-O-C2H5（E体, Z体）とα-GalCer誘導体を結合させたα-GalCerAzoPh（1-1a〜d）をPymolを用いて作成し、4)の初期構造として用いた。
4)AutoDock Toolsを用いて、リガンドのアシル鎖部分であるAzoPh-O-(CH2)n-NHCOの-O-(CH2)n-部分の単結合のみ回転可能とし、他のアルキル鎖や糖部の単結合は初期構造から動かないように拘束をかけ、pdbqtファイルを作成した。また、CD1d分子（PDB : 1ZT4）のpdbqtファイルを作成した。
5)AutoDock Vinaを用いて、4)で作成したリガンドとCD1d分子のドッキングシミュレーションを行った。
【００４７】
α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）のE-Z異性体とCD1d分子との結合様式を図１２に示す。C6以上のZ体は、α-GalCerと同じようにCD1d分子のA’ポケットにカールして収まっていることが確認された。また、AutoDockによるドッキングシミュレーションからドッキングスコアを計算した。ドッキングスコアとは力場に基づいたスコア関数（ΔG）であり、ΔGは式◆によって導かれる値である。
【数１】
2020083876.tif 000007
【００４８】
式中のΔEvdwはファンデルワールス相互作用の項、ΔEelectrostaticは静電相互作用の項、ΔEH-bondは水素結合による相互作用の項、ΔEdesolvationは脱溶媒効果の項、ΔSconfはリガンドのエントロピー変化の項を表す。計算されたα-GalCerAzoPh（1-1a〜d）のE-Z異性体とCD1d分子のドッキングスコアを図１３に示す。α-GalCerAzoPhのいずれにおいても、E体よりZ体の方が、CD1d分子との結合性を示し、アシル鎖の炭素数が長くなるほど、E-Z間の結合差が大きくなるという結果を得た。したがって、計算学的手法においても、in vitroと同様にして、α-GalCerAzoPhはE体よりZ体でCD1d分子への結合性を示した。
【００４９】
（７）結言
本実施例では、光照射で構造が変化するアゾベンゼン（AzoPh）をアシル鎖の末端に結合させたα-GalCer誘導体（α-GalCerAzoPh）を合成し、光照射により局所的かつ時間限定的に免疫活性を制御できる手法の開発を目指した。（３）節では、アシル鎖の長さがC4〜C10のα-GalCerAzoPh（1-1a〜d）を全13ステップで合成した。（４）節では、光照射装置を用いて光異性化反応が進行するかどうかを1HNMR測定を行うことで確かめた。モデル化合物AzoPhC10は、365 nmのLED照射により7時間でE体からZ体への異性化反応が100%進行し、455 nmのLED照射により、7時間でZ体からE体への異性化反応が75%進行した。（５）節では、α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）を用いて、光照射有無や、アゾベンゼンの位置の違いによるiNKT細胞への拘束性の変化をフローサイトメトリーを用いて検証した。検証した結果、炭素数C6以上の誘導体で、CD1d分子への結合性を示した。さらに、E体より光照射で生成したZ体の方がiNKT細胞への拘束性を1.2倍程強く示した。CD1d分子に結合したα-GalCerAzoPh誘導体は、胸腺細胞、脾臓細胞のいずれともTCRを介して結合することがフローサイトメトリーで確認された。（６）節では、α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）のE-Z異性体とCD1d分子のドッキングシミュレーションを行い、ドッキングスコアを計算した。計算した結果、α-GalCerAzoPhのいずれにおいても、E体よりZ体の方が、CD1d分子との結合性を示し、アシル鎖の炭素数が長くなるほど、E-Z間の結合差が大きくなるいう結果を得た。以上より、計算学的手法においても、in vitroと同様にして、α-GalCerAzoPhはE体よりZ体でCD1d分子への結合性を示した。
【００５０】
in vitroと計算学的手法から、E体より光照射で生成したZ体の方がCD1d分子への結合性があることが分かったが、E-Z間の活性差は1.2倍程しか確認されなかった。今後は実験の条件検討や構造最適化を行い、α-GalCerAzoPhのE-Z間の活性差をさらに大きく必要がある。実験条件に関して、α-GalCerAzoPhとCD1d dimerの複合体を作製する際に、37℃で終夜インキュベートしているので、Z体のサンプルの多くはE体に異性化している可能性がある。今後、Z体がE体に異性化しない条件でインキュベートする手法を検討していく。また、α-GalCerAzoPhの構造活性相関に関して、ドッキングスコア結果から、アシル鎖の長さが長くなるほどE-Z間の安定性の差が大きくなるという結果を得た。よって、今後はC10以上のα-GalCerAzoPhを合成し、長い炭素鎖での結合性を調査していく。また、E-Z間の活性差をさらに大きくするため、より嵩高い芳香環（ナフタレンやビフェニル等）を脂質部位の末端に導入した誘導体を合成していく（図１４）。
【００５１】
〔実験項〕
1H NMR
OXFORD NMR AS500 (500 MHz)で測定した。CDCl3中ではテトラメチルシラン (δ = 0 ppm) を内部標準として測定した。CD3OD中では、テトラメチルシラン (δ = 0 ppm)、もしくは溶媒ピーク (δ = 3.31 ppm) を内部標準として測定した。DMSO-d6中では溶媒ピーク (δ = 2.50 ppm) を内部標準として測定した。
【００５２】
13C NMR
OXFORD NMR AS500 (126 MHz) で測定した。CDCl3中では、テトラメチルシラン (δ = 0 ppm) 、もしくは溶媒ピーク (δ = 77.16 ppm)を内部標準として測定した。CD3OD中では溶媒ピーク (δ = 49.00 ppm) を内部標準として測定した。
【００５３】
シリカゲル薄層クロマトグラフィー
Silica gel 60 F254 (Merck)を用いた。反応の追跡、確認のために、UV (254 nm)吸収、または発色試薬として1% Ce(SO4)2-1.5%(NH4)6Mo7O24-4H2O-10% H2SO4水溶液をつけ、電熱器で発色させることで検出した。
【００５４】
シリカゲルクロマトグラフィー
Silica Gel C-60, Silica Gel C-300, Silica Gel 60Nを用いて単離精製した。
【００５５】
有機合成試薬
和光純薬工業株式会社、東京化成工業株式会社、Sigma-Aldrich社、有限会社高橋藤吉商店、関東化学株式会社、米山薬品工業株式会社、上野化学工業株式会社、小宋化学薬品株式会社より購入したものを使用した。
【００５６】
吸光度測定
UV-2600（島津製作所）を用い、光路長1 cmのセルにて測定した。和光純薬工業株式会社から購入した分光分析用メタノールを用いた。
【００５７】
ドッキングシミュレーション
レセプターであるCD1dは、ヒトのCD1dタンパク質（PDB : 1ZT4）の結晶構造を用いた。α-GalCerは、ヒトのCD1dタンパク質（PDB : 1ZT4）との共結晶構造のものを抽出して用いた。ドッキングの詳細は手順は（６）節に示した。
【００５８】
検量線の作成
α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）の正確な重量を決定するために、AzoPhC10（1-2d）を用いて、検量線を作成した（図１５）。検量線を基に、α-GalCerAzoPh（1-1a〜d）の重量を算出した。
【００５９】
光異性化実験
LED光源であるLEDD1B - T-Cube LEDドライバー（THORLABS社）、LEDレーザーであるM365FP1（THORLABS社）とM455F1（THORLABS社）、光フィイバーチューブ（Ocean Optics社）を用いた。光源の出力は5.13 mWで固定して、光路長1 cmのセルに溶液を入れ照射した。
【００６０】
（４）節で行った光異性化実験の詳細を以下に述べる。モデル化合物1-2d（24.2 mg）を重クロロホルム（2.7 mL）に溶解させ、1.0 cm  1.0 cmのセルに入れ、365 nmのLEDレーザーを照射した。7時間後の溶液から、0.6 mLをNMR管に入れて遮光して室温で静置して熱安定性を評価した。また残りの溶液は、1.0 cm  1.0 cmのセルに入れ、455 nmのLEDレーザーを照射した。365 nmのLEDレーザーを照射する前と、照射7時間後の1HNMRの結果を以下に示す。
【００６１】
照射前（E体）
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.30 (brs, 10H, H-3, H-4, H-5, H-6, H-7), 1.48 (m, 2H, H-8), 1.62 (m, 2H, H-2), 1.82 (m, 2H, H-9), 2.31 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.67 (s, 3H, CH3), 4.04 (t, J10-9=6.5Hz, 2H, H-10), 7.00 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.43 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.50 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.89 (d, J=7Hz, 4H, =N-Ar x2)
【００６２】
照射7時間後（Z体）
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.29 (brs, 10H, H-3, H-4, H-5, H-6, H-7), 1.41 (m, 2H, H-8), 1.60 (m, 2H, H-2), 1.74 (m, 2H, H-9), 2.30 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.66 (s, 3H, CH3), 3.90 (t, J10-9=6.5Hz, 2H, H-10), 6.74 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 6.89 (d, J=7Hz, 4H, =N-Ar x2) 7.16 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.29 (t, J=7Hz, 2H, Ar)
【００６３】
HPLC精製
LC-20AR（島津製作所）を用い、中性シリカで精製した合成糖脂質（1-1a〜d, 2-1）を高純度精製を行った。測定条件を表２に示す。
用いたカラム・・・C18 5μm, 4.6x150 mm Column（XBrige社）
RI検出器・・・RID-10A（島津製作所）
流速・・・1 mL/min
展開溶媒・・・HPLC用メタノール（和光純薬工業株式会社）、HPLC用テトラヒドロフラン（Sigma-Aldrich社）
その他・・・各化合物をメタノールもしくはピリジンに溶解させ、フィルターをかけた後、インジェクションした。RI検出器でピークが出現したところのフラクションを濃縮した。1-1dのHPLCチャートを図１６に示した。また表２に各合成糖脂質のHPLC条件を示した。
【表２】
2020083876.tif 000008
【００６４】
FACS (Fluorescence Activated Cell Sorter)分析
糖脂質を溶かしたPBSは、0.5%w/vになるようにのTween20（東京化成工業株式会社）と5.6%w/vになるようにのスクロース（和光純薬工業株式会社）、0.75%w/vになるようにL-ヒスチジン（和光純薬工業株式会社）を溶解させ、滅菌フィルターでろ過したものを使用した。細胞実験で用いたPBSは、2%w/vになるようにFBS（Fetal Bovine Serum, From USDA Approved Countries Hybridoma tested）を加えたものを使用した。D-PBS(−)は和光純薬工業株式会社から、α-GalCer (KRN7000)（200 μg/mL）はキリンビール株式会社から、Trypan Blue Stainはgibco社から、CD1d dimer（DimerX I : Recombinant Soluble, Dimeric Mouse CD1d Ig Fusion Protein）、APC−抗IgG1抗体（APC Rat Anti-Mouse IgG1 Clone）、IgG1抗体（Purified Mouse IgG1 λ Isotype Control）はBD biosciences社から、FBS、溶血バッファー（Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max）はSigma-Aldrich社から、FITC−抗TCRβ抗体（Anti-Mouse TCR β FITC）はTONBO biosciences社から購入したものを使用した。フローサイトメトリーはベクトン・ディッキンソン社のものを用いた。
【００６５】
1-1b〜d（200 μg）に分光分析用DMSO（200 μL）を加え溶解させ、滅菌フィルターに通した上記の成分が溶けたPBS溶液を800 μL加え、終濃度200 μg/mLとした。（1-1a（163 μg）のみ、分光分析用DMSO（163 μL）を加え溶解させ、PBS溶液を652 μL加え、終濃度200 μg/mLとした。）調整した溶液から30 μLを取り、マイクロチューブに入れ、光照射しないサンプルとした。残りの溶液を1.0cm x 0.5cmのセルに入れ、遮光して365nmのLED光を24時間照射した。各Z体の溶液に関して、1-1a’は72時間、1-1b’は48時間、1-1c’は24時間、−80℃の冷凍庫で保存し、さらに1a’〜d’は0℃で2〜3時間保存した。光照射有無の1-1a〜d計8サンプルと、KRN7000（0.46 μL）にCD1d dimer（1 μL）を加え、37℃の恒温槽で19時間遮光してインキュベートした。その後、APC−抗IgG1抗体（2.5 μL）を加え、1時間室温で遮光して静置した。そして、IgG1抗体（0.5 μL）を加え、30分間室温で遮光して静置し、CD1dと糖脂質の複合体を作成した。WTB6とTraj18-/-から胸腺と脾臓を採取し、シャーレに臓器とPBSを入れ、スライドガラスで臓器をすりつぶした。その後、ファルコンチューブにろ過し、遠心（4oC, 200rpm, 2min）し、上清を捨てた。そこに赤血球を取り除くために溶血バッファーを（1 mL）を加え、1分後にPBS（10 mL）を加え、溶血を止め、遠心（4oC, 200rpm, 2min）し、上清を捨てた。PBS（10 mL）を加え、そこから5 μL取り、そこにTrypan Blue Stain（45 μL）を加え、スライドガラスに入れ、顕微鏡で細胞数を数えた。結果は、WT-Thymus = 8.7 x 107/mL、WT-Spleen = 5.0 x 107/mL、KO-Thymus = 2.4 x 107/mL、KO-Spleen = 8.7 x 107/mLであった。96wellプレートの各wellに1 x 106個の細胞数となるように各細胞を加え、遠心（4oC, 200rpm, 2min）し、上清を捨てた。その後、CD1dと糖脂質の複合体の計9サンプル（1 μL）と0.1% FITC−抗TCRβ抗体のPBS溶液（5 μL）を各細胞にそれぞれ加え、遮光し2時間静置させた。各wellにPBS（200 μL）を加え、遠心（4oC, 200rpm, 2min）し、上清を捨てる洗浄操作を計2回行った後、PBS（250 μL）を加え、FACS用チューブにろ過し、FACS分析を行った。
【００６６】
CBA (Cytometric Bead Array)分析
CBA分析で用いた培地は、Sigma-Aldrich社から購入した10%FCS（fetal calf serum）を含むRPMI-1640を用いた。溶血バッファーはLonza社から購入したACK lysing bufferを用いた。CBAは、ベクトン・ディッキンソン社から購入したBDTM CBAを用いた。
【００６７】
HPLC精製後の合成糖脂質2-1とKRN7000にDMSOを加え、80℃で20分間湯浴に浸し溶解させた。その後、FACS分析で用いたPBSを加え、終濃度200 μg/mLとした。そして、培地で1,10,100ng/mLになるように希釈し、糖脂質の培地溶液を作成した。ワイルドタイプマウス（C57BL/6J）から脾臓を採取し、シャーレに臓器とPBSを入れ、スライドガラスで臓器をすりつぶした。その後、ファルコンチューブにろ過し、遠心し、上清を捨てた。そこに赤血球を取り除くために溶血バッファーを加え、1分後にPBSを加え、溶血を止め、遠心し、上清を捨てた。細胞数を数えた後、培地を加え、96wellプレートの各wellに4 x 105個になるように、細胞が入った培地を入れた。その後、各濃度の糖脂質の培地溶液を加え、72時間37oCでインキュベートした。3日後、上清を回収しCBAを用いてIFN-γ, IL-4, IL-10の産生量を定量した。
【００６８】
光異性化α-GalCer誘導体（1-1a〜d）の合成
4-(2-phenyldiazenyl)-phenol
35%塩酸水溶液（4.3 mL, 49 mmol, 4.6 eq.）と水（3.2 mL）に、アニリン（0.980 μL, 1.00 g, 10.7 mmol, 1 eq.）と亜硝酸ナトリウム（860 mg, 11.6 mmol, 1.1 eq.）水溶液（4 mL）を氷冷下で加え、20分間0℃で撹拌させた。その後、フェノール（1.00g, 10.6 mmol, 1 eq.）と水酸化ナトリウム（1.40 g, 36 mmol, 3.4 eq.）が溶けた水溶液（10 mL）を加え、45分間0℃で撹拌させた。反応終了後、溶液をろ過し、得られたろ物にエタノールを加え、再結晶により精製し、目的物（1.88g, 89%）を茶色粉末で得た。これ以上の精製は行わず、次の反応に進んだ。
【００６９】
Methyl 9-bromononanoate
9-ブロモノナン酸（300 mg, 1.27 mmol, 1 eq.）をメタノール（5 mL）に溶かし、硫酸（540 μL, 10.1 mol, 8 eq.）を氷冷下で加え、5時間80℃で撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、炭酸水素ナトリウムを加え、反応溶液を中和し、溶媒を減圧留去し、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。洗浄した水を酢酸エチルで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、目的物（312 mg, 98%）を白色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.32 (s, 6H, H-3, H-4, H-5), 1.42 (m, 2H, H-6), 1.62 (m, 2H, H-2), 1.85 (m, 2H, H-7), 2.31 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.40 (t, J8-7=6.5Hz, 2H, H-8), 3.67 (s, 3H, CH3)
【００７０】
Methyl 5-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-valerate (1-2a)
1-2（42.5 mg, 0.215 mmol, 1 eq.）をアセトン（10 mL）に溶解させ、炭酸カリウム（143 mg, 1.03 mmol, 5 eq.）と5-ブロモペンタン酸メチル（150 μL, 206 mg, 0.769 mmol, 3.8 eq.）を加え、50℃で加熱還流させながら、20時間窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、溶液をろ過し、溶媒を減圧留去し、ジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。洗浄した水をジクロロメタンで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60, ヘキサン : 酢酸エチル = 50 : 3）で単離し、目的物（53.4 mg, 80%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.79 (m, 4H, H-2, H-3), 2.35 (t, J=6Hz, 2H, H-1), 3.62 (s, 3H, CH3), 3.99 (t, J=5Hz, 2H, H-4), 6.92 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.36 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.43 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.80 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.84 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
【００７１】
Ethyl 7-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-heptanoate (1-2b)
1-2（42.3 mg, 0.213 mmol, 1 eq.）をアセトン（10 mL）に溶解させ、炭酸カリウム（139 mg, 1.01 mmol, 5 eq.）と7-ブロモヘプタン酸エチル（138 μL, 168 mg, 0.741 mmol, 3.7 eq.）を加え、50℃で加熱還流させながら、20時間窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、溶液をろ過し、溶媒を減圧留去し、ジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。洗浄した水をジクロロメタンで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60, ヘキサン : 酢酸エチル = 10 : 1）で単離し、目的物（41.0 mg, 57%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.26 (t, J=7.5Hz, 3H, CH2-CH3), 1.42 (m, 2H, H-3), 1.51 (m, 2H, H-4), 1.66 (m, 2H, H-2), 1.83 (m, 2H, H-5), 2.32 (t, J=7.5Hz, 2H, H-1), 4.04 (t, J=6.5Hz, 2H, H-6), 4.13 (q, 2H, CH2-CH3), 7.00 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.43 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.50 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.87 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.91 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
【００７２】
Methyl 9-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-nonanoate (1-2c)
1-2（246 mg, 1.24 mmol, 1 eq.）をアセトン（10 mL）に溶解させ、炭酸カリウム（858 mg, 6.21 mmol, 5 eq.）と9-ブロモノナン酸メチル（312 mg, 1.24 mmol, 1 eq.）を加え、50℃で加熱還流させながら、10時間窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、溶液をろ過し、溶媒を減圧留去し、ジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。洗浄した水をジクロロメタンで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60, ヘキサン : 酢酸エチル = 25 : 1）で単離し、目的物（294 mg, 64%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.36 (brs, 6H, H-3, H-4, H-5), 1.48 (m, 2H, H-6), 1.64 (m, 2H, H-2), 1.82 (m, 2H, H-7), 2.32 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.67 (s, 3H, CH3), 4.04 (t, J8-7=6.5Hz, 2H, H-8), 7.00 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.43 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.50 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.87 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.91 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ (ppm) 25.1, 26.1, 29.2, 29.3, 34.2, 51.6, 68.5, 114.8, 122.7, 124.9, 129.1, 130.4
【００７３】
Methyl 11-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-undecanoate (1-2d)
1-2（500 mg, 2.53 mmol, 1 eq.）をアセトン（15 mL）に溶解させ、炭酸カリウム（1.75 g, 12.7 mmol, 5 eq.）と11-ブロモウンデカン酸メチル（1.84 mL, 2.12 g, 7.58 mmol, 3 eq.）を加え、50℃で加熱還流させながら、14時間窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、溶液をろ過し、溶媒を減圧留去し、ジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。洗浄した水をジクロロメタンで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60, ヘキサン : 酢酸エチル = 25 : 1）で単離し、目的物（684 mg, 68%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.30 (brs, 10H, H-3, H-4, H-5, H-6, H-7), 1.48 (m, 2H, H-8), 1.62 (m, 2H, H-2), 1.82 (m, 2H, H-9), 2.31 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.67 (s, 3H, CH3), 4.04 (t, J10-9=6.5Hz, 2H, H-10), 7.00 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.43 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.50 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.87 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.91 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
13C NMR (126 MHz, CDCl3): δ (ppm) 25.1, 26.1, 29.3, 29.3, 29.5, 29.6, 34.2, 51.5, 68.5, 114.9, 122.7, 124.9, 129.1, 130.4
【００７４】
5-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-valeric acid (1-3a)
1-2a（48.1 mg, 0.154 mmol, 1 eq.）をテトラヒドロフラン（3.4 mL）に溶解させ、水酸化ナトリウム（12.3 mg, 0.308 mmol, 2 eq.）水溶液（1.7 mL）を加え、80℃で加熱還流させながら、5時間撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、4M塩酸水溶液（2 mL）を加え、反応溶液を中和し、溶媒を減圧留去した。水を少量加え、ろ過し、乾燥させ、目的物（25.0 mg, 52%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 1.85 (m, 4H, H-2, H-3), 2.25 (t, J=6Hz, 2H, H-1), 4.10 (t, J=5Hz, 2H, H-4), 7.07 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.45 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.52 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.85 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.89 (d, J=9Hz, 2H, Ar-N=)
【００７５】
7-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-heptanoic acid (1-3b)
1-2b（35.0 mg, 0.098 mmol, 1 eq.）をテトラヒドロフラン（3.4 mL）に溶解させ、水酸化ナトリウム（7.84 mg, 0.196 mmol, 2 eq.）水溶液（1.7 mL）を加え、80℃で加熱還流させながら、5時間撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、4M塩酸水溶液（2 mL）を加え、反応溶液を中和し、溶媒を減圧留去した。水を少量加え、ろ過し、乾燥させ、目的物（17.2 mg, 49%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 1.26 (t, J=7.5Hz, 3H, CH2-CH3), 1.44 (m, 2H, H-3), 1.52 (m, 2H, H-4), 1.65 (m, 2H, H-2), 1.83 (m, 2H, H-5), 2.19 (t, J=7.5Hz, 2H, H-1), 4.08 (t, J=6.5Hz, 2H, H-6), 7.06 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.45 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.52 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.85 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.90 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
【００７６】
9-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-nonanoic acid (1-3c)
1-2c（184 mg, 0.498 mmol, 1 eq.）をテトラヒドロフラン（6.6 mL）に溶解させ、水酸化ナトリウム（40 mg, 1.00 mmol, 2 eq.）水溶液（3.3 mL）を加え、80℃で加熱還流させながら、5時間撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、4M塩酸水溶液（2 mL）を加え、反応溶液を中和し、溶媒を減圧留去した。水を少量加え、ろ過し、乾燥させ、目的物（143 mg, 83%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 1.39 (brs, 6H, H-3, H-4, H-5), 1.51 (m, 2H, H-6), 1.62 (m, 2H, H-2), 1.82 (m, 2H, H-7), 2.17 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 4.08 (t, J8-7=6.5Hz, 2H, H-8), 7.06 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.46 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.52 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.85 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.89 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
13C NMR (126 MHz, CD3OD): δ (ppm) 27.1, 27.8, 30.3, 30.4, 30.5, 30.9, 39.3, 69.5, 115.9, 123.4, 125.7, 130.1, 131.5
【００７７】
11-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-undecanoic acid (1-3d)
1-2d（200 mg, 0.504 mmol, 1 eq.）をテトラヒドロフラン（6.6 mL）に溶解させ、水酸化ナトリウム（40 mg, 1.00 mmol, 2 eq.）水溶液（3.3 mL）を加え、80℃で加熱還流させながら、5時間撹拌させた。反応終了後、室温に戻し、4M塩酸水溶液（2 mL）を加え、反応溶液を中和し、溶媒を減圧留去し、ジクロロメタンで希釈し、水で洗浄した。洗浄した水をジクロロメタンで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、目的物（103 mg, 54%）を黄色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 1.32 (brs, 10H, H-3, H-4, H-5, H-6, H-7), 1.47 (m, 2H, H-8), 1.64 (m, 2H, H-2), 1.82 (m, 2H, H-9), 2.35 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 4.04 (t, J10-9=6.5Hz, 2H, H-10), 7.01 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.43 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.50 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.87 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.91 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
【００７８】
2-Azido-1,3,4-octadecanetriol (1-4)
アジ化ナトリウム（79.8 mg, 1.23 mmol, 3.9 eq.）に、ドライアセトニトリル（1.5 mL）を加え、氷冷下でトリフルオロメタンスルホン酸無水物（0.160 mL, 268 mg, 0.945 mmol, 3 eq.）を加え、2時間0℃窒素雰囲気下で撹拌させた。フィトスフィンゴシン（100 mg, 0.315 mmol, 1 eq.）、硫酸銅（0.5 mg, 3.15 μmol）水溶液（水 1.5 mL）、トリエチルアミン（87.8 μmL, 63.7 mg, 0.63 mmol, 2 eq.）、メタノール（5 mL）に、トリフリルアジド溶液を氷冷下で加え、0℃から室温にゆっくり戻しながら5時間窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、水を過剰量加え目的物を析出させ、ろ過し、乾燥させ、目的物（109 mg, 96%）を水色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 0.90 (t, J=6.5Hz, 3H, CH3), 1.29 (s, 24H, C12H24), 1.55-1.67 (m, 2H, CH2), 3.52 (m, 2H, CH(OH)-CH(OH)-CH2), 3.60 (m, 1H, CH2-CH(N3)-CH(OH)), 3.75 (dd, J=12Hz, J=7.5Hz, 1H, HO-CH2-CH(N3)), 3.91 (dd, J=3.5Hz, 1H, HO-CH2-CH(N3))
【００７９】
2-Azido-3,4-O-isopropylidene-1,3,4-octadecanetriol (1-5)
1-5（563 mg, 1.64 mmol, 1 eq.）にドライアセトンを加え、氷冷下で硫酸（0.270 mL, 4.92 mmol, 3 eq.）を加え、3時間0℃窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、炭酸水素ナトリウム（8 g）を加え、反応溶液を中和し、溶媒を減圧留去した。酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。洗浄した水を酢酸エチルで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60, ヘキサン : 酢酸エチル = 10 : 1）で単離し、目的物（562 mg, 89%）を白色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 0.88 (t, J=6.5Hz, 3H, CH3), 1.26 (s, 24H, C12H24), 1.34 (s, 3H, isop CH3), 1.43 (s, 3H, isop CH3), 1.60 (m, 2H, CH2), 2.08 (t, J=6Hz, 1H, OH), 3.47 (ddd, J=4.5Hz, J=5.5Hz, J=10Hz, 1H, CH2-CH(N3)-CH(isop)), 3.87 (ddd, J=6Hz, J=12Hz, 1H, HO-CH2-CH(N3)), 3.96 (dd, J=6Hz, 1H, CH(N3)-CH(isop)), 4.01 (dd, 1H, HO-CH2-CH(N3)), 4.17 (m, 1H, CH(isop)-CH(isop))
【００８０】
1,2,3,4,6-pentakis-O-(trimethylsilyl)-α-D-galactopyranose (1-6)
D-ガラクトース（900 mg, 5.00 mmol, 1 eq.）にドライジメチルホルムアミド（50 mL）とトリエチルアミン（3.8 mL, 2.78 g, 27.5 mmol, 5.5 eq.）を加え、氷冷下でクロロトリメチルシラン（3.49 mL, 2.99 g, 27.5 mmol, 5.5 eq.）を加え、3時間室温窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、ヘキサンで希釈し、氷水を加え反応を止めた。水で洗浄し、洗浄した水をヘキサンで1回抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後、溶媒を減圧留去し、目的物（2.67 g, 99%）を無色シラップで得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 0.15 (m, 45H, -OTMS CH3 x 15) , 3.53 (dd, J6-5=10Hz, J6-6’=6Hz, 1H, H6), 3.63(dd, 1H, H6’), 3.82 (m, 2H, H2, H3), 3.39 (m, 2H, H4, H5), 5.05 (d, J1-2=2Hz, H1)
【００８１】
2-Azido-1-O-(α-D-galactopyranosyl)-3,4-O-isopropylidene-1,3,4-octadecanetriol (1-7)
1-6（463 mg, 0.860 mmol, 3 eq.）をドライトルエンで２回共沸した後、ドライジクロロメタン（5 mL）に溶かし、氷冷下でトリメチルシリルヨージド（140 μL, 198 mg, 0.946 mmol, 3.3 eq.) を加え、20分間0℃窒素雰囲気下で撹拌させた。1-5（110 mg, 0.287 mmol, 1 eq.）をドライトルエンで２回共沸し、活性化したモレキュラーシーブス4A、N,N’-ジイソプロピルエチルアミン（225 μL, 167 mg, 1.29 mmol, 4.5 eq.）、ドライジクロロメタン（5 mL）を加え、その後1-6とトリメチルシリルヨージドを反応させた溶液を加え、6日間室温窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、溶液をろ過し、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をメタノール（15 mL）に溶かし、活性化したDowex 50H+（240 mg）を加え、1時間室温で撹拌させた。反応終了後、 溶液をろ過し、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60 N, ジクロロメタン : メタノール = 25 : 2）で単離し、目的物（42 mg, 27%）を無色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 0.88 (t, J=7Hz, 3H, CH3), 1.26 (s, 26H, C13H26), 1.33 (s, 3H, isop CH3), 1.41 (s, 3H, isop CH3), 3.20 (m, 3H), 3.54 (m, 1H), 3.80 (m, 5H), 3.90 (m, 3H), 3.96 (m, 2H), 4.18 (m, 4H), 5.03 (d, J=3.5Hz, 1H, H1)
ESI-HRMS: m/z calcd for C27H51O8N3Na+: 568.3573, found 568.3562
【００８２】
2-Azido-1-O-(α-D-galactopyranosyl)-1,3,4-octadecanetriol (1-8)
1-7（35 mg, 64.0 μmol, 1 eq.）に80%酢酸水溶液（10 mL）を加え、3時間50℃で撹拌させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60 N, ジクロロメタン : メタノール = 10 : 1）で単離し、目的物（21 mg, 65%）を無色個体で得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) 0.90 (t, J=7Hz, 3H, CH3), 1.27 (s, 24H, C13H24), 1.57 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 3.57 (t, J=11Hz, 1H, CH2-CH(N3)), 3.62 (t, 1H), 3.69-3.80 (m, 7H), 3.89 (m, 2H,), 4.13 (dd, J=11Hz, 3.5Hz, 1H)
ESI-HRMS: m/z calcd for C24H47O8N3Na+: 528.3260, found 528.3253
帰属のため、アセチル化を行った。1-8（3.8 mg）にピリジン（1 mL）と無水酢酸（1 mL）を加え、1時間室温で撹拌させた。反応終了後、溶媒を減圧留去した。
1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 0.88 (t, J=7Hz, 3H, CH3), 1.27 (s, 24H, C13H24), 1.61 (m, 2H, CH2), 1.99-2.15 (s, 18H, COCH3 x6), 3.50 (dd, J=11Hz, 1H, CH2-CH(N3)), 3.73 (m, 1H, -CH2-CH(N3)), 4.00 (dd, 1H, CH2-CH(N3)), 4.11 (d, J6-5=6.5Hz, 2H, H6), 4.21 (t, 1H, H5), 5.09-5.12 (m, 3H, CH(N3)-CH(OAc), CH(OAc)-CH(OAc), H1), 5.15 (dd, J2-1=3.5Hz, J2-3=10.5Hz, 1H, H2), 5.34 (dd, J3-4=3.5Hz, 1H, H3), 5.48 (d, 1H, H4)
【００８３】
2-Amino-1-O-(α-D-galactopyranosyl)-1,3,4-octadecanetriol (1-9)
1-8（45 mg, 88.6 μmol, 1 eq.）をメタノールと水の混合溶媒（30 mL, 19:1(v/v)）に溶解させ、パラジウム-炭素（Pd 10% 13 mg, 30 wt%）を加え、24時間室温水素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、溶液をセライトろ過し、溶媒を減圧留去し、目的物（48 mg, crude）を無色個体で得た。これ以上の精製は行わず、次の反応に進んだ。
【００８４】
1-O-α-D-Galactopyranosyl-2-amino-N-[5-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-valenoyl]-3,4-octadecanediol (1-1a)
1-3a（8.4 mg, 28.3 μmol, 1.2 eq.）、HATU（10.7 mg, 28.3 μmol, 1.2 eq.）、N-メチルモルホリン（3 μL, 28.3 μmol, 1.2 eq.）、トリエチルアミン（4 μL, 28.3 μmol, 1.2 eq.）をドライテトラヒドロフラン（2 mL）に溶解させ、1-9（11.3 mg, crude）のドライテトラヒドロフラン（3 mL）の懸濁液を加え、15時間室温窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60 N, ジクロロメタン : メタノール =20 : 3）で単離し、目的物（12.6 mg, 2工程70%）を黄色個体で得た。（E : Z = 88 : 12）
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) E : 0.88 (t, J=6.5Hz, 3H, CH3), 1.26-1.34 (brs, 26H, C13H26), 1.85 (m, 4H, H-2, H-3), 2.34 (t, J=6Hz, 2H, H-1), 3.55 (m, 1H), 3.62 (m ,2H), 3.69 (m, 3H), 3.72 (m, 1H), 3.78 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.89 (m, 2H), 4.11 (m, 2H, H-4), 4.23 (m, 1H), 6.96 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.36 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.42 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.75 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.79 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
ESI-HRMS: m/z calcd for C41H65N3O10Na+: 782.4567, found 782.4549
【００８５】
1-O-α-D-Galactopyranosyl-2-amino-N-[7-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-heptanoyl]-3,4-octadecanediol (1-1b)
1-3b（9.2 mg, 28.3 μmol, 1.2 eq.）、HATU（10.7 mg, 28.3 μmol, 1.2 eq.）、N-メチルモルホリン（3 μL, 28.3 μmol, 1.2 eq.）、トリエチルアミン（4 μL, 28.3 μmol, 1.2 eq.）をドライテトラヒドロフラン（2 mL）に溶解させ、1-9（11.3 mg, crude）のドライテトラヒドロフラン（3 mL）の懸濁液を加え、15時間室温窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60 N, ジクロロメタン : メタノール =20 : 3）で単離し、目的物（12.3 mg, 2工程66%）を黄色個体で得た。（E : Z = 88 : 12）
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) E : 0.88 (t, J=6.5Hz, 3H, CH3), 1.26-1.34 (brs, 26H, C13H26), 1.34 (m, 2H, H-3), 1.45 (m, 2H, H-4), 1.57 (m, 2H, H-2), 1.74 (m, 2H, H-5), 2.16 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.45 (m, 1H), 3.52 (m ,2H), 3.60 (m, 3H), 3.65 (m, 1H), 3.68 (m, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.99 (t, J8-7=6.5Hz, 2H, H-6), 4.12 (m, 1H,), 6.96 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.36 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.42 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.75 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.79 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
ESI-HRMS: m/z calcd for C43H69N3O10Na+: 810.4880, found 810.4854
【００８６】
1-O-α-D-Galactopyranosyl-2-amino-N-[9-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-nonanoyl]-3,4-octadecanediol (1-1c) 
1-3c（11.3 mg, 31.8 μmol, 1.2 eq.）、HATU（12.1 mg, 31.8 μmol, 1.2 eq.）、N-メチルモルホリン（3.5 μL, 31.8 μmol, 1.2 eq.）、トリエチルアミン（4.5 μL, 31.8 μmol, 1.2 eq.）をドライテトラヒドロフラン（3 mL）に溶解させ、1-9（12.7 mg, crude）のドライテトラヒドロフラン（3 mL）の懸濁液を加え、24時間室温窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60 N, ジクロロメタン : メタノール =100 : 11）で単離し、目的物（11.8 mg, 2工程61%）を黄色個体で得た。（E : Z = 91 : 9）
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) E : 0.88 (t, J=6.5Hz, 3H, CH3), 1.26-1.34 (brs, 26H, C13H26), 1.39 (brs, 6H, H-3, H-4, H-5), 1.52 (m, 2H, H-6), 1.63 (m, 2H, H-2), 1.83 (m, 2H, H-7), 2.23 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.55 (m, 1H), 3.61 (m, 1H), 3.68-3.78 (m, 5H), 3.82 (m, 1H), 3.88 (m, 2H), 4.08 (t, J8-7=6.5Hz, 2H, H-8), 4.19 (m, 1H), 7.06 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.46 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.52 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.85 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.89 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
ESI-HRMS: m/z calcd for C45H73N3O10Na+: 838.5193, found 838.5191
【００８７】
1-O-α-D-Galactopyranosyl-2-amino-N-[11-[4-(2-phenyldiazenyl)-phenoxy]-undecanoyl]-3,4-octadecanediol (1-1d) 
1-3d（16.0 mg, 41.5 μmol, 1.2 eq.）、HATU（15.9 mg, 41.5 μmol, 1.2 eq.）、N-メチルモルホリン（4.6 μL, 41.5 μmol, 1.2 eq.）、トリエチルアミン（5.8 μL, 41.5 μmol, 1.2 eq.）をドライテトラヒドロフラン（3 mL）に溶解させ、1-9（16.6 mg, crude）のドライテトラヒドロフラン（4 mL）の懸濁液を加え、21時間室温窒素雰囲気下で撹拌させた。反応終了後、溶媒を減圧留去し、シリカゲルクロマトグラフィー（C-60 N, ジクロロメタン : メタノール =100 : 11）で単離し、目的物（13.1 mg, 2工程52%）を黄色個体で得た。（E : Z = 90 : 10）
1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ (ppm) E : 0.88 (t, J=6.5Hz, 3H, CH3), 1.27-1.35 (m, 36H, C13H26, H-3, H-4, H-5, H-6, H-7), 1.51 (m, 2H, H-8), 1.62 (m, 2H, H-2), 1.82 (m, 2H, H-9), 2.23 (t, J1-2=7.5Hz, 2H, H-1), 3.55 (m, 1H), 3.63 (m, 2H), 3.69-3.73 (m, 4H), 3.77 (m, 1H), 3.83 (m, 1H), 3.89 (m, 2H), 4.07 (t, J8-7=6.5Hz, 2H, H-10), 4.18 (m, 1H), 7.05 (d, J=8.5Hz, 2H, -O-Ar), 7.46 (t, J=7Hz, 1H, Ar), 7.52 (t, J=7Hz, 2H, Ar), 7.85 (d, J=7Hz, 2H, =N-Ar), 7.89 (d, J=8.5Hz, 2H, Ar-N=)
ESI-HRMS: m/z calcd for C47H77N3O10Na+: 866.5506, found 866.5490
【産業上の利用可能性】
【００８８】
本発明の糖脂質は医薬として利用できる可能性があるので、本発明は、医薬に関連する産業分野において利用可能である。
【図１】
2020083876.tif 000012
【図２】
2020083876.tif 000013
【図３】
2020083876.tif 000014
【図４】
2020083876.tif 000015
【図５】
2020083876.tif 000016
【図６】
2020083876.tif 000017
【図７】
2020083876.tif 000018
【図８】
2020083876.tif 000019
【図９】
2020083876.tif 000020
【図１０】
2020083876.tif 000021
【図１１】
2020083876.tif 000022
【図１２】
2020083876.tif 000023
【図１３】
2020083876.tif 000024
【図１４】
2020083876.tif 000025
【図１５】
2020083876.tif 000026
【図１６】
2020083876.tif 000027