(57)【要約】【課題】尿酸値を緩やかに低減する血中尿酸値抑制剤および血中尿酸値抑制用食品を提供する。【解決手段】下記式（１）で表される化合物を有効成分として含む、血中尿酸値抑制剤。【化１】2020083845.tif 000020（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）【選択図】図１
2020083845.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される化合物を有効成分として含む、血中尿酸値抑制剤。
【化１】
2020083845.tif 000018
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が、各々独立に、−ＯＲ３基を表す、請求項１に記載の血中尿酸値抑制剤。
【請求項３】
Ｒ３が水素原子を表す、請求項２に記載の血中尿酸値抑制剤。
【請求項４】
尿酸値上昇の予防用である、請求項１〜３の何れか１項に記載の血中尿酸値抑制剤。
【請求項５】
下記式（１）で表される化合物を、尿酸値上昇予防の有効成分として含む、血中尿酸値抑制用食品。
【化２】
2020083845.tif 000019
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血中尿酸値抑制剤および血中尿酸値抑制用食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体内において核酸塩基であるプリン体の代謝は、キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）の働きによって最終的に尿酸へと酸化されることが知られている。尿酸は、血液中に存在する場合には酸化防止剤として機能し、活性酸素の除去に有効に作用する。尿酸が細胞内に取り込まれた場合には、逆に細胞内で活性酸素を発生し、炎症反応を惹起するようになることが知られている。したがって、生体内における尿酸濃度は好ましい範囲に維持される必要がある。
【０００３】
しかしながら、代謝の経路の異常、および腎臓からの尿酸の排泄に異常を来たすこと等により、血中尿酸値が持続的に７ｍｇ／ｄＬを越えるようになると高尿酸血症として診断され、様々な病態の発現に結びつく原因となる。
【０００４】
血中尿酸値を制御するのはキサンチンオキシダーゼによる尿酸の産生と、ＵＲＡＴ１などの輸送体を経由した尿酸の再取り込みとの両方で、健康体においては好ましい濃度範囲に制御されている。したがって、高尿酸血症に対しては、尿酸の産生を抑制するキサンチンオキシダーゼ阻害剤の使用と、ＵＲＡＴ１阻害剤による尿酸の排出促進との両方の手段が基本的には利用可能である。現状では、アロプリノールおよびフェブキソスタット等のキサンチンオキシダーゼ阻害剤が主として高尿酸血症の治療に用いられ、ＵＲＡＴ１阻害剤としてはベンズブロマロンなどが知られているが、後者では尿酸産生が亢進している場合には尿酸結石が生じる恐れがあり、使用には注意が必要とされる。
【０００５】
キサンチンオキシダーゼは、体内でヒポキサンチンをキサンチンに酸化し、さらにキサンチンを尿酸に酸化する過程において活性酸素種を発生するため、キサンチンオキシダーゼ活性が亢進すると、体内で尿酸濃度が増大するのみならず、発生する活性酸素の影響で様々な障害を来たす要因ともなる。さらに、尿酸の過剰な産出および排出の低下は腎不全の要因と密接に相関し、或いは心不全と高尿酸血症との間にも相関が認められている。血中の高尿酸値は、様々な症状を伴うメタボリックシンドロームの発症と密接に結びついていることが明らかとなり、血中尿酸値の上昇を抑制するとともに適度な範囲で維持することは健康を維持する上で極めて重要であることが指摘されている。血中尿酸値が明らかに標準値より上昇しているものの医師の診断を受けることのない潜在的患者が極めて多数存在することは広く知られている事実である。したがって、こうした潜在的患者に対して血中尿酸値の上昇を抑制し、適度なレベルに維持できるような血中尿酸値抑制剤として、医師の処方を必要とせずにサプリメントまたは健康食品として摂取できるような、安全性と有効性の両方を具備した血中尿酸値抑制剤あるいは血中尿酸値抑制用食品が求められている。
【０００６】
生体に対して安全である化合物として、天然に存在する種々の桂皮酸誘導体が挙げられる。これらの生成過程としては、基本的にはフェニルアラニンが酵素により脱アミノ化されて生合成されることが知られている。例えば非特許文献１において示されるように、天然に存在する様々な桂皮酸誘導体には優れた抗酸化作用または消炎作用を示し、糖尿病および高脂血症などに対する好ましい作用も報告されている。こうした桂皮酸誘導体の例として、カフェ酸として知られる３，４−ジヒドロキシ桂皮酸およびフェルラ酸の名称で知られる４−ヒドロキシ−３−メトキシ桂皮酸、クロロゲン酸として知られる３−｛［３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アクリロイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサン−１−カルボン酸などが挙げられるが、これまでこうした桂皮酸誘導体の中に血中尿酸値を低下させる作用を示すものは、カフェ酸フェネチルエステルの例（例えば非特許文献２に示される例）などを除き殆ど見出されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Alam et al. Nutrition & Metabolism 13:27 (2016)
【非特許文献２】吉積ら、「薬学雑誌」125（3）、315-321（2005）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
発明者らは、上述の問題に対して鋭意検討した結果、カモミール（Matricaria recutita）の地上部から抽出することで得られる２−グルコピラノシロキシ−４−メトキシ桂皮酸（(E)-2-β-D-glucopyranosyloxy-4-methoxycinnamic acid）が顕著なキサンチンオキシダーゼ阻害作用を示し、実際のin vivoにおける血中尿酸値抑制効果を見出した。また、発明者らはカモミールから抽出した天然に存在する桂皮酸誘導体が、キサンチンオキシダーゼの働きを阻害することで血中尿酸値の上昇を顕著に抑制することを見出した。
【０００９】
しかしながら、カモミールから上記桂皮酸誘導体を抽出する工程が煩雑であり、また収率良く高純度で製造することが困難であるため、安価にて大量に入手することができないという別の課題が生じていた。
【００１０】
そこで、本発明は上記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、安価で大量に入手することが可能であり、かつ安全性の高い化合物を使用した、尿酸値を緩やかに低減する血中尿酸値抑制剤および血中尿酸値抑制用食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明に係る血中尿酸値抑制剤は、上記課題を解決するために、下記式（１）で表される化合物を有効成分として含む。
【００１２】
【化１】
2020083845.tif 000003
【００１３】
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
本発明に係る血中尿酸値抑制用食品は、上記課題を解決するために、下記式（１）で表される化合物を、尿酸値上昇予防の有効成分として含む。
【００１４】
【化２】
2020083845.tif 000004
【００１５】
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、尿酸値を緩やかに低減する血中尿酸値抑制剤および血中尿酸値抑制用食品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】（ａ）は、アロプリノールの投与の有無による８週齢雄性ＩＣＲマウスの血漿中の尿酸値を示すグラフである。（ｂ）は、各濃度のトランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸の投与による当該血漿中の尿酸値を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明に係る血中尿酸値抑制剤の一実施形態を以下説明する。
【００１９】
＜血中尿酸値抑制剤＞
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、下記式（１）で表される化合物（以下、化合物（１）と称する）を有効成分として含む。
【００２０】
【化３】
2020083845.tif 000005
【００２１】
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、Ｒ１およびＲ２の何れか１つ以上が異なる化合物（１）を複数含んでいてもよい。
【００２２】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、少なくともＲ２が−ＯＲ３基を表すことが好ましく、Ｒ３が水素原子を表すことがより好ましい。つまり、本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、分子内のフェニル基に結合する置換基としてカルボキシル基が結合したトランス二重結合基に対してｐ−位に水酸基またはメトキシ基を有する化合物を含むことが好ましく、水酸基を有する化合物を含むことがより好ましい。
【００２３】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、Ｒ１およびＲ２が、各々独立に、−ＯＲ３基を表すことが好ましく、Ｒ３が水素原子を表すことがより好ましい。
【００２４】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、化合物（１）として、下記式（２）〜（６）から選択される少なくとも１つの化合物を含んでいることが好ましい。
【００２５】
【化４】
2020083845.tif 000006
【００２６】
【化５】
2020083845.tif 000007
【００２７】
【化６】
2020083845.tif 000008
【００２８】
【化７】
2020083845.tif 000009
【００２９】
【化８】
2020083845.tif 000010
【００３０】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、化合物（１）を有効成分として含んでいることにより、尿酸値を緩やかに低減することができる。化合物（１）は、後述する実施例において示すように、経口投与され消化管に至る過程で体内に極めて効率よく吸収され、体循環の流れに乗り高いバイオアベイラビリティを示すことが特徴である。吸収による化学式（１）の化合物の効果は適度に緩和に発現し、例えば高尿酸血症に対する治療薬として用いられるアロプリノールの作用と比較した場合、アロプリノールを投与した場合には、血中の尿酸濃度は正常範囲を大きく下回り顕著に低下する場合があるが、化合物（１）を投与した場合には、その効果は過度に発現することなく、血中尿酸濃度は正常範囲を下回ることが回避できる。体内において尿酸は顕著な還元作用を示し、適度な濃度範囲において血中濃度が維持されることで体内における活性酸素による様々なダメージを防止することが知られている。このため、アロプリノールなどの強力な尿酸値低下作用を示す薬剤を無暗に用いることは厳禁であり、特に血中尿酸値が正常範囲にある場合にこうした薬剤を用いることは好ましくない。本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤に含まれる化合物（１）を用いた場合には、その薬理作用は限定的であることから、通常の使用において正常値を下回る血中尿酸値を来すことがないため、安全に用いることができる。
【００３１】
なお、「緩やかに低減する」とは、正常値と同等レベルに低減することを意図する。また、「正常値と同等レベル」とは、血中尿酸値が大凡２〜７ｍｇ／ｄＬの範囲にあることを意図する。尿酸値を緩やかに低減することにより、活性酸素の発生も緩やかに抑制することができる。それゆえ、体内の様々な臓器において活性酸素の影響による様々な障害を抑制、防止することができる。
【００３２】
高尿酸血症に対する治療薬として用いられるアロプリノールを投与した場合には、血中の尿酸濃度は正常範囲を大きく下回り低尿酸血症に相当する１〜２ｍｇ／ｄＬまたはこれ以下に低下する場合がある。これに対して、本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤を投与した場合には、その効果は過度に発現することなく、血中尿酸濃度が正常範囲を大きく下回ることを回避できる。体内において尿酸は顕著な還元作用を示し、適度な温度範囲において血中濃度が維持されることで体内における活性酸素による様々なダメージを防止することが知られている。このため、アロプリノール等の強力な尿酸値低減作用を示す薬剤を無暗に用いることは厳禁であり、特に血中尿酸値が正常範囲にある場合にこうした薬剤を用いることが好ましくない。本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤を用いた場合には、その薬理効果は限定的であることから、通常の使用において正常値を大きく下回る血中尿酸値を来たすことがないため、安全に用いることができる。
【００３３】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤に含まれる化合物（１）の量は、特に限定されないが、尿酸値抑制剤総量の１質量％以上であることが好ましく、５質量％以上であることがより好ましく、１０質量％以上であることがさらに好ましい。また、上限値は特に限定されないが、尿酸値抑制剤総量の９０質量％以下であることが好ましく、８０質量％以下であることがより好ましく、７０質量％以下であることがさらに好ましい。
【００３４】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、尿酸値上昇の予防用として好適に用いることができる。すなわち、本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、尿酸値を緩やかに低減することができるため、高尿酸血症患者に限らず、尿酸値が正常範囲である使用者が尿酸値上昇の予防のために摂取することができる。
【００３５】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、種々の形態であってよい。形態としては、例えば、固形剤および液剤等が挙げられる。固形剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、およびカプセル剤等が挙げられる。液剤としては、例えば、溶液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、および噴霧剤等が挙げられる。
【００３６】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制剤は、化合物（１）以外のその他の材料を含んでいてもよい。その他の材料としては、例えば、製剤担体、ｐＨ調整剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、滑剤、および等張化剤等が挙げられる。製材担体としては、例えば、グルコース、ショ糖、乳糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、ゼラチン、コラーゲン、ヒアルロン酸、アルブミン、ポリエチレングリコール、アミノ酸、水、および生理食塩水等が挙げられる。ｐＨ調整剤としては、例えば、塩酸、リン酸、クエン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等が挙げられる。安定化剤としては、例えば、アスコルビン酸、アラニン、イノシトール等が挙げられる。湿潤剤としては、例えば、ソルビトール、グリセリン、アラントイン等が挙げられる。乳化剤としては、例えば、グアーガム、エタノール、グリセリン等が挙げられる。滑剤としては、例えば、カカオ脂、結晶セルロース、重質無水ケイ酸等が挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等のイオン性等張化剤、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、マンニトール等の非イオン性等張化剤が挙げられる。
【００３７】
本実施形態に係る血中尿酸値低減剤のヒト等の動物への投与方法は、経口投与であることが好ましい。本実施形態に係る血中尿酸値低減剤は、経口投与され消化官に至る過程で体内に極めて効率よく吸収され、耐循環の流れに乗り高いバイオアベイラビリティを示すことが特徴である。吸収の過程において様々な酵素の作用により、化合物（１）は化学変化を受ける場合がある。
【００３８】
本発明に係る血中尿酸値抑制用食品の一実施形態を以下説明する。
【００３９】
＜血中尿酸値抑制用食品＞
本実施形態に係る血中尿酸値抑制用食品は、上記課題を解決するために、下記式（１）で表される化合物を、尿酸値上昇予防の有効成分として含む。
【００４０】
【化９】
2020083845.tif 000011
【００４１】
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
これにより、尿酸値を緩やかに低減することができる。また、食品として化合物（１）を摂取することは、医薬品として摂取することよりも日常的に取り入れ易く、尿酸値が正常範囲である使用者が尿酸値上昇の予防のために利用することができる。
【００４２】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制用食品に係る説明は、＜血中尿酸値抑制剤＞で行った説明に準じ、同じ説明は繰り返さない。
【００４３】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制用食品に含まれる化合物（１）の量は、特に限定されないが、食品１リットル当たり０．０１〜１００ｍｇであることが好ましい。
【００４４】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制用食品は、種々の形態であってよい。形態としては、例えば、飲料、食肉加工食品、水産加工食品、パン、菓子、サプリメント、および健康補助食品等が挙げられる。飲料としては、例えば、牛乳、炭酸飲料、アルコール飲料、およびヨーグルト等が挙げられる。食肉加工食品としては、例えば、ハム、およびソーセージ等が挙げられる。水産加工食品としては、例えば、ちくわ、およびかまぼこ等が挙げられる。サプリメント、および健康補助食品の形態としては、例えば、固形剤および液剤等が挙げられる。
【００４５】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制用食品は、特に飲料としての利用が好ましい。化合物（１）を好ましい量範囲で体内に摂取することで尿酸の精製を適正な範囲に抑制し、高尿酸血症の発症を未然に防止することができる。高尿酸血症は特に成人男性に特徴的に認められ、加えてアルコール飲料を好む層において尿酸値が高めである場合が多く、成人男性の２０％以上、特に３０〜４０代男性の３０％以上が高尿酸血症を示すという統計データが報告されている。高尿酸血症は放置した場合、痛風発作に至る可能性が高くなり、痛風患者数は２０１６年時点で１００万人を超えている。さらに、痛風予備軍として全国で１０００万人規模の高尿酸血症該当者が存在するとされており、これに対する改善策としての生活指導として、プリン体の摂取制限、アルコールの摂取制限等がガイドラインに挙げられている。しかしながら、現状ではこうした摂取制限の効果には限界があり、医療的介入以外に尿酸値を低減させる有効な手法が無いため、医師により高尿酸血症と診断されるまでは積極的な対応は困難である問題がある。化合物（１）を含む飲料の例として、化合物（１）を含むアルコール飲料は、血中の尿酸値を低減する効果を有するため、こうした高尿酸血症を予防する手段として好適に用いられる。さらに、上述したように、尿酸値を緩やかに低減することにより、活性酸素の発生も緩やかに抑制することができる。それゆえ、体内の様々な臓器において活性酸素の影響による様々な障害を抑制、防止することができる。
【００４６】
本実施形態に係る血中尿酸値抑制用食品は、加熱して摂取することも可能であるが、好ましくは室温以下の温度で保管されることが好ましい。
【００４７】
〔まとめ〕
血中尿酸値抑制剤は、下記式（１）で表される化合物を有効成分として含む。
【００４８】
【化１０】
2020083845.tif 000012
【００４９】
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
血中尿酸値抑制用食品は、下記式（１）で表される化合物を、尿酸値上昇予防の有効成分として含む。
【００５０】
【化１１】
2020083845.tif 000013
【００５１】
（Ｒ１およびＲ２は、各々独立に、水素原子、メチル基、または−ＯＲ３基を表し、Ｒ３は、水素原子またはメチル基を表す。ただし、Ｒ1が水素原子または−ＯＲ３基かつＲ２が水素原子である場合、ならびにＲ1が水素原子、Ｒ２が−ＯＲ３基、かつＲ３がメチル基である場合を除く。）
以下に実施例を示し、本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明する。もちろん、本発明は以下の実施例に限定されるものではなく、細部については様々な態様が可能であることはいうまでもない。さらに、本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、それぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された文献の全てが参考として援用される。
【実施例】
【００５２】
＜試料調製＞
（オキソン酸カリウム懸濁液の調製）
０．５質量％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）溶液４０ｍＬに、オキソン酸カリウム５００ｍｇを懸濁してオキソン酸カリウム懸濁液を得た。
【００５３】
（アロプリノール懸濁液の調製）
０．５質量％ＣＭＣ溶液７５０μＬに、アロプリノール（和光純薬社製）を５ｍｇ／ｍＬになるように懸濁してアロプリノール懸濁液を得た。アロプリノール懸濁液は４つ作製した。
【００５４】
（トランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸溶液および懸濁液の調製）
充分に乾燥したトランス−２，４−ジヒドロ桂皮酸（東京化成社製）を３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇずつ精密に量り取った。それぞれに予め４０℃程度に温めた０．５質量％ＣＭＣ溶液７５０μＬを加えて溶解または懸濁し、低濃度群、中濃度群、および高濃度群の被検試料液とした。各被検試料液は４つずつ作製した。
【００５５】
〔高尿酸モデルマウスの作製〕
本実験で行う動物実験は、文部科学省「研究機関等における動物実験等の実施に関する基本指針」および日本薬理学会の動物実験ガイドラインに基づいて作成された動物実験指針に従い実施した。
【００５６】
調製した各試料を用いて、以下のようにマウスへの経口投与と血中移行性に関する動物実験を実施した。マウスとして日本エスエルシー社から入手した７週齢雄性ＩＣＲマウスを各実施例および比較例に対して４匹ずつ使用した。すなわち、合計で２０匹使用した。７週齢で搬入したマウスを、温度２４±２℃、湿度４０−６５％の条件下で、１２時間明暗サイクルでＡＭ７：００に着灯し、一週間飼育して８週齢雄性ＩＣＲマウスを得た。２０匹の８週齢雄性ＩＣＲマウスの体重はそれぞれ約３０ｇであった。
【００５７】
８週齢雄性ＩＣＲマウスを各群につき４匹ずつ使用した。
【００５８】
〔比較例１〕
８週齢雄性ＩＣＲマウスの尾静脈から６０μＬの血液を採取した。次に、当該マウスの体重１ｋｇに対してオキソン酸カリウムが２５０ｍｇになるように、当該マウスに、オキソン酸カリウム懸濁液を腹腔内投与して高尿酸血症モデルマウスを作製した。オキソン酸カリウム懸濁液を投与してから１時間後に当該マウスの尾静脈から６０μＬの血液を採取した。採血後、ただちに当該マウスの体重１ｋｇに対して０．５質量％ＣＭＣ溶液７５０ｍＬを胃ゾンデで経口投与した。０．５質量％ＣＭＣ溶液を投与してから２時間後に当該マウスの尾静脈から６０μＬの血液を採取した。凝血防止のために、採取した各血液に、０．５ｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡナトリウム溶液（ｐＨ  ８．０）を加え３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離を行い、各血液の血漿を得た。各血漿約３０μＬを採取して、−３０℃で保存した。このように比較例１で得た血漿を陰性対照群の試料とした。
【００５９】
〔比較例２〕
０．５質量％ＣＭＣ溶液の代わりに、マウスの体重１ｋｇに対してアロプリノールが５０ｍｇとなるようにアロプリノール懸濁液を胃ゾンデで経口投与した以外は比較例１と同様にして、各血漿約３０μＬを得て、−３０℃で保存した。このように比較例２で得た血漿を陽性対照群の試料とした。
【００６０】
〔実施例１〕
０．５質量％ＣＭＣ溶液の代わりに、マウスの体重１ｋｇに対してトランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸が１ｍｇ（マウス１匹に対して約３０ｍｇ）となるように低濃度群の被検試料液を胃ゾンデで経口投与した。それ以外は比較例１と同様にして、各血漿約３０μＬを得て、−３０℃で保存した。このように実施例１で得た血漿を低濃度群の試料とした。
【００６１】
〔実施例２〕
０．５質量％ＣＭＣ溶液の代わりに、マウスの体重１ｋｇに対してトランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸が２ｍｇ（マウス１匹に対して約６０ｍｇ）となるように低濃度群の被検試料液を胃ゾンデで経口投与した。それ以外は比較例１と同様にして、各血漿約３０μＬを得て、−３０℃で保存した。このように実施例２で得た血漿を中濃度群の試料とした。
【００６２】
〔実施例３〕
０．５質量％ＣＭＣ溶液の代わりに、マウスの体重１ｋｇに対してトランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸が４ｍｇ（マウス１匹に対して約１２０ｍｇ）となるように低濃度群の被検試料液を胃ゾンデで経口投与した。それ以外は比較例１と同様にして、各血漿約３０μＬを得て、−３０℃で保存した。このように実施例３で得た血漿を高濃度群の試料とした。
【００６３】
＜血漿の前処理および尿酸値の定量＞
各血漿１０μＬをクロロホルム−メタノール法により除タンパク処理した。血漿１０μＬを、Ｃｏｓｍｏｓｐｉｎ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｇスピンフィルター（孔の大きさ：０．２μｍ、ナカライテスク社製）を用いて、メタノール１００μＬ、クロロホルム１００μＬ、および水９０μＬで処理し、超音波処理した。凝集したタンパク質を回収するために、フィルターは１０，０００ｒｐｍ、６０分間遠心分離した。得られたろ液を遠心式加熱デシケーター（Ｍｉｃｒｏ  ｖａｃ  ＭＶ−１００、トミー精工社製）を用いて、９０分間減圧乾燥した。その乾燥残渣に水を加えて混和し、均一化したサンプル水溶液についてＨＰＬＣ−ＵＶ法により尿酸値測定を行った。
【００６４】
ＨＰＬＣ測定は、カラム；Ｎａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ  Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  Ｃ１８  ＡＲ−５，４．６×２５０ｍｍ（Kyoto, Japan）を用い、ポンプ；ＪＡＳＣＯ  ＰＵ−２０８０  Ｐｌｕｓ（Tokyo, Japan）、カラムオーブン；Ｓｕｇａｉ  Ｕ−６２０（Tokyo,Japan）およびＵＶ検出器；ＪＡＳＣＯ  ＰＵ−２０７５  Ｐｌｕｓ（Tokyo, Japan）で構成されるＨＰＬＣシステムで、移動相にはリン酸水溶液（３０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ１．８）を使用した。尿酸の検出波長は２８０ｎｍに設定した。
【００６５】
＜データ解析＞
同一の血漿試料について、ＨＰＬＣ−ＵＶ法による３回の連続測定の後、３回の測定結果の平均を血漿中尿酸値（ｍｇ／ｄＬ）とした。充分な量の血漿が得られなかった試料は解析から除外し、それぞれの投与群ごとに得られたｎ＝４の測定結果から平均と標準偏差を求めた。
【００６６】
有意差検定は一元配置の分散分析およびBonferroniによる修正ｔ検定を行った。
【００６７】
＜結果＞
実施例１〜３、および比較例１、２の結果を図１の（ａ）および（ｂ）に示す。図１の（ａ）の左は、陰性対照群における、オキソン酸投与前、オキソン酸投与後、およびカルボキシメチルセルロース投与後の８週齢雄性ＩＣＲマウスの血漿中の尿酸値を示すグラフである。図１の（ａ）の右は、陽性対照群における、オキソン酸投与前、オキソン酸投与後、およびアロプリノール投与後の当該血漿中の尿酸値を示すグラフである。図１の（ｂ）は、左から順に低濃度群、中濃度群、および高濃度群における、オキソン投与前、オキソン酸投与後、およびトランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸投与後の当該血漿中の尿酸値を示すグラフである。図１の（ａ）および（ｂ）中、「投与前」とはオキソン酸投与前の血漿を示し、「オキソン酸」とはオキソン酸投与後の血漿を示し、「投与後」とはＣＭＣ、アロプリノール、またはトランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸投与後の血漿を示す。
【００６８】
陰性対照群において、有意差は無いものの、オキソン酸投与後からＣＭＣ投与後で尿酸値が少し低減した。これはオキソン酸の効果が時間とともに弱まるためである。陰性対照群ではオキソン酸投与後の尿酸値とＣＭＣ投与後の尿酸値との間で有意差が無いのに対して、低濃度群、中濃度群、および高濃度群では、オキソン酸投与後の尿酸値からトランス−２，４−ジヒドロキシ桂皮酸投与後の尿酸値が有意な差で低減した。また、低濃度群、中濃度群、および高濃度群は、オキソン酸投与前の尿酸値と同等レベルに尿酸値が低減した。すなわち、アロプリノールを投与した陽性対照群よりも尿酸値が緩やかに低減した。
【００６９】
〔実施例４〕ＸＯＤ阻害活性試験（吸光度測定法）
【００７０】
【表１】
2020083845.tif 000014
【００７１】
ＣＡおよびその類縁体のＸＯＤ阻害活性実験は、天然由来の精製品（ＣＡ）、合成品（４Ｈ２Ｍ）ならびに市販の試薬（ＤＨＣＡ、ＤＭＣＡ、ＴＰＣ、および２ＭＣ、いずれも東京化成製）を用いて実施した。加熱検体乾燥器で４０℃、１８時間以上乾燥したそれぞれの試薬粉末を上表のとおり秤量し、実験に供した。秤量した検体は、ｍｉｌｌｉＱ水１００ｍＬで完全に溶解し、この１ｍＬを量り取り、これにｍｉｌｌｉＱ水を加え全量を１００ｍＬとした（用時調製、ｎ＝３）。このもの１．２ｍＬについて、リン酸緩衝液（ナカライテスク社製）１．２ｍＬ（ＸＯＤ添加群は１．１４ｍＬ）、１ｍｇ／ｄＬ濃度のキサンチン（和光純薬社製）溶液を３．６ｍＬ加え、よく混和し、３７℃で１５分間インキュベーションした。続いてＸＯＤ添加群はＸＯＤ溶液（リン酸緩衝液で原液を４倍希釈したもの）を０．０６ｍＬ加え、さらに４０分間インキュベーション後、コスモナイスフィルターＷ（ナカライテスク社製、０．４５μｍ）で濾過して得られた試料液の吸光度（ＸＡｂｓ）を測定した（最終濃度としていずれも３．５１μＭ）。尚、試料液とＸＯＤ液を含まないブランクＡ（ＡＡｂｓ）、試料液のみを含まないブランクＢ（ＢＡｂｓ）、ＸＯＤ液を含まないブランクＮの吸光度（ＮＡｂｓ）も同じく測定し、下式に従い阻害率を求めた。また同実験は、海野らのＸＯＤ阻害活性評価（海野知紀，坂根巌，角田隆巳，日本食品科学工学会誌，47，740-743，2000.）に準じたものであり、今回３．５１μＭ濃度のアロプリノール（ＡＬＯ、和光純薬製）をポジティブコントロールとした。
【００７２】
阻害率（％）:１００−｛（ＸＡｂｓ−ＮＡｂｓ）／（ＢＡｂｓ−ＡＡｂｓ）×１００｝
＜ＣＡ調製＞
摂南大学薬学部付属薬用植物園にて栽培し、２０１７年５月下旬に収穫されたカミツレ（Matricaria chamomilla L.）の新鮮地上部（地上茎および葉部）を材料とした。同地上部を、ＭｅＯＨで室温下抽出ろ過し、得られた抽出液を減圧下乾燥してエキスとし、ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ＝４：２：３（ｖ／ｖ）となるよう各溶媒を最小限添加、分配して得られた上層を減圧乾燥した。このものをさらにＢｕＯＨ：Ｈ２Ｏ＝１：１（ｖ／ｖ）混液で分配し、その下層（水層）を減圧下乾燥し、得られた残渣を「水溶性画分」とした。このものをＤＩＡＩＯＮ（登録商標）ＨＰ−２０カラム（φ４５×２７０ｍｍ）に付し、順次Ｈ２Ｏ（２Ｌ）、５０％ＭｅＯＨ（５Ｌ）、１００％ＭｅＯＨ（１Ｌ）で溶出させ、５０％ＭｅＯＨ溶出画分をＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ＬＨ−２０カラム（φ３０×２７０ｍｍ）に付し、５０％ＭｅＯＨで溶出させ試験管に経時的に取り分け、ＵＶ吸収と、硫酸試薬に対するポジティブスポット（Ｒｆ＝０．４４）を示す成分を乾燥させ、最低限のＭｅＯＨに溶解させ静置し、白色針状結晶（ＣＡ：trans-2-β-D-glucopyranosyloxy-4-methoxy cinnamic acid）を得た。尚、ＣＡの同定は、物理恒数ならびに各種スペクトル（600MHz NMR, HR FAB-MS）を測定して行った。
【００７３】
＜４Ｈ２Ｍの調製＞
４−ヒドロキシ−２−メトキシベンズアルデヒド（東京化成製）５ｇとマロン酸（東京化成製）７．６７ｇを、モレキュラーシーブス４Ａ（シグマアルドリッチ製）で乾燥したピリジン（ナカライテスク製）１６．７ｍＬおよび同様に乾燥したピペリジン（東京化成製）０．３３ｇに混和、溶解し、室温遮光下で３週間静置し、反応混合物とした。
【００７４】
次にビーカー中の氷２００ｍＬに濃塩酸２５ｍＬを加え撹拌しながら、これに上記反応混合物を徐々に加えた。この操作で析出してくる固体をろ取し、これを蒸留水で繰り返し洗浄して、室温で乾燥し、粗4-ヒドロキシ−２−メトキシ桂皮酸を得た（約３．８ｇ）。これをエタノールで結晶化し、再結晶操作により精製して得られる淡黄色針状晶（４Ｈ２Ｍ）を得た。物理恒数（m.p.192−197℃, dec. 210℃）ならびに各種スペクトル（600MHz NMR, HR FAB-MS : m/z:193.0503(C10H9O4)）を測定し、４−ヒドロキシ−２−メトキシ桂皮酸の合成品の同定ならびに純度検定を行った。
【００７５】
＜核磁気共鳴（NMR）スペクトル＞
ＪＥＯＬ  ＪＮＭ−ＥＣＺＳ４００およびＪＮＭ−ＥＣＡ６００  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Tokyo, Japan）を用い、２５℃で測定した。溶媒の重メタノールは和光純薬工業（Osaka, Japan）製を用い、ケミカルシフト値はＮａｃａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ（Kyoto, Japan）製ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ（ＴＭＳ）を内部標準としたδ値（ｐｐｍ）で示し、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表した。
【００７６】
＜質量分析（ＭＳ）＞
ＪＥＯＬ  ＪＭＳ−７００Ｔ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Tokyo, Japan）を用い、（ＨＲ）ＦＡＢ−ＭＳはｃｏｌｌｉｓｉｏｎ  ｇａｓ；Ｘｅ，ｍａｔｒｉｘ；ｔｒｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅで測定した。ＥＩ−ＭＳは加速電圧:３０ｅＶ，チャンバー温度：２２０℃の条件で測定した。
【００７７】
＜結果＞
【００７８】
【表２】
2020083845.tif 000015
【００７９】
表２に示すように、本発明に係る血中尿酸値抑制剤の阻害率は、アロプリノールの阻害率に比べて緩やかであった。
【００８０】
〔比較例３〕ＸＯＤ阻害活性試験（吸光度測定法）
比較例として式（１）の構造異性体または類縁体に相当する９種の特級試薬（ＴＯＣ、ＴＭＣ、Ｔ２Ｍ、３ＭＣ、４ＭＣ、Ｃ２Ｍ、２ＴＣ、２ＡＣおよびＭ２Ｄ、いずれも東京化成製）ならびに天然由来で食品添加物としても知られるコーヒー酸（ＣＯＦＡ、和光純薬製）ならびにクロロゲン酸（ＣＨＬＡ、東京化成製）のＸＯＤ阻害活性実験を実施した。
【００８１】
【化１２】
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【００８２】
加熱検体乾燥器で４０℃、１８時間以上乾燥したそれぞれの試薬粉末を０．１７５ｍｍｏｌ秤量し、実験に供した。それ以外は、実施例４と同様にしてＸＯＤ阻害率を求めた。
【００８３】
＜結果＞
【００８４】
【表３】
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【００８５】
先に示した実施例４の結果から、本活性はＸＯＤの活性部位に存在する一対のフェニルアラニン残基と桂皮酸のフェニル基とのπ相互作用および置換基由来の幾つかの水素結合に起因すると推察される。桂皮酸にはシス／トランス異性体が知られるが、Ｃ２Ｍの結果からシス体には阻害活性が全く認められず、シス体分子の立体的障害により上述の結合がなされず、トランス体（Ｅ体）が必須であることが確認された。また３位に水酸基あるいはメトキシ基が存在すると一切活性が示されず（ＴＭＣ、３ＭＣ、２ＴＣ、Ｍ２Ｄ、ＣＯＦＡ、およびＣＨＬＡ）、むしろ増強する傾向を示し、一般に添加物として利用されるコーヒー酸やクロロゲン酸には本活性が認められないことが同時に確認された。
【産業上の利用可能性】
【００８６】
本発明は、高尿酸血症の予防および治療に利用することができる。
【図１】
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