(57)【要約】      （修正有）【課題】様々な実施形態において、内在化していると共に、マクロピノサイトーシス経路を介して腫瘍細胞に入る、ヒト抗ＣＤ４６抗体を提供する。同様に、ＣＤ４６−過剰発現腫瘍の診断上及び／又は治療上の標的化のためにこれら抗体から開発された、抗体−薬物の結合体（ＡＤＣ）も提供する。【解決手段】ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、単離されたヒト化抗体であって、ここで、該抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合する抗体を開示する。【選択図】図１３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、分離されたヒト抗体であって、ここで、
該抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合する抗体であり、この抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択された１以上の抗体により結合されたエピトープに特異的に結合し；及び
前記抗体は、マクロピノサイトーシスを介して前記細胞に内在化される
ことを特徴とする抗体。
【請求項２】
前記抗体は、ＣＤ４６のドメイン１及び／又はドメイン２に結合する、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体は、ＣＤ４６のドメイン３及び／又はドメイン４に結合しない、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項４】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は癌細胞である、ことを特徴とする請求項１乃至３の何れか１つに記載の抗体。
【請求項５】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は前立腺癌細胞である、ことを特徴とする請求項１乃至４の何れか１つに記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体は、ＤＵ１４５細胞、ＰＣ３細胞、及びＬｎＣａＰ細胞から成る群から選択された細胞株の細胞に結合する、ことを特徴とする請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定された時に、少なくとも約５−１０ｎＭの親和性（ＫＤ）を持つ前立腺腫瘍細胞に結合する、ことを特徴とする請求項１乃至６の何れか１つに記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定された時に、少なくとも約３ｎＭの親和性（ＫＤ）を持つ前立腺腫瘍細胞に結合する、ことを特徴とする請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体は実質的に無傷の免疫グロブリンである、ことを特徴とする請求項１乃至８の何れか１つに記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体はＩｇＡ、ＩｇＥ、又はＩｇＧを含む、ことを特徴とする請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体はＩｇＧ１を含む、ことを特徴とする請求項９に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合する抗体フラグメントである、ことを特徴とする請求項１乃至８の何れか１つに記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体は、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、（Ｆａｂ’）３、ＩｇＧΔＣＨ２、及びミニボディから選択された抗体フラグメントである、ことを特徴とする請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体は単鎖抗体である、ことを特徴とする請求項１乃至８の何れか１つに記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体は、ＣＤ４６での結合のために、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの何れか１以上と競合する、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択される抗体の、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択される抗体の、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択された抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む、ことを特徴とする請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択される抗体の、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む、ことを特徴とする請求項１乃至１８の何れか１つに記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択された抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む、ことを特徴とする請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、
ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１２抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
３Ｇ７ＲＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と３Ｇ７ＲＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ６抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ６抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ３抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ３抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ４抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ４抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ８抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ８抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ７抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ７抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ９抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ９抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１０抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１０抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１１抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１１抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
３Ｇ７ＨＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と３Ｇ７ＨＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
３Ｇ７ＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と３Ｇ７ＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
３Ｇ７抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と３Ｇ７抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＳＢ２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＳＢ２抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
２Ｃ８抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と２Ｃ８抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＵＡ８ｋａｐｐａ抗体の可変重（ＶＨ）鎖
を含む、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の抗体。
【請求項２２】
前記抗体はヒトｓｃＦｖである、ことを特徴とする請求項１乃至２１の何れか１つに記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体はヒトＩｇＧである、ことを特徴とする請求項１乃至２１の何れか１つに記載の抗体。
【請求項２４】
エフェクターに結合される、請求項１乃至２３の何れか１つに記載の抗体を含む免疫結合体であって、前記エフェクターは、第２抗体、検出可能なラベル、細胞毒素又は細胞分裂阻害剤、薬物を含有するリポソーム、放射性核種、薬物、プロドラッグ、ウィルス粒子、サイトカイン、及びキレートから成る群から選択される、ことを特徴とする免疫結合体。
【請求項２５】
前記抗体は細胞毒素に結合される、ことを特徴とする請求項２４に記載の免疫結合体。
【請求項２６】
前記抗体は、ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素、リシン、アブリン、サポリン、及びチミジンキナーゼから成る群から選択された細胞毒素に結合される、ことを特徴とする請求項２５に記載の免疫結合体。
【請求項２７】
前記抗体は細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬に結合される、ことを特徴とする請求項２４に記載の免疫結合体。
【請求項２８】
前記抗体は、
前記薬物；
前記薬物を含有する脂質又はリポソーム；
前記薬物を含む高分子医薬担体；及び
前記薬物を含むナノ粒子薬物担体
の１以上に直接、又はリンカーを介して結合される、ことを特徴とする請求項２５に記載の免疫結合体。
【請求項２９】
前記薬物は抗癌剤である、ことを特徴とする請求項２７又は２８に記載の免疫結合体。
【請求項３０】
前記薬物は、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、及びポリメラーゼ阻害剤から成る群から選択される、ことを特徴とする請求項２７又は２８に記載の免疫結合体。
【請求項３１】
前記薬物はチューブリン阻害剤を含む、ことを特徴とする請求項３０に記載の免疫結合体。
【請求項３２】
前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン−１０、天然物ドラスタチン−１０合成誘導体、及びメイタンシン或いはメイタンシン誘導体から成る群から選択された薬物を含む、ことを特徴とする請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３３】
前記薬物は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ｖｃＭＭＡＥ、及びｖｃＭＭＡＦから成る群から選択された薬物を含む、ことを特徴とする請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３４】
前記薬物は、メルタシン（ＤＭ１）、ＤＭ３、及びＤＭ４から成る群から選択されたメイタンシンを含む、ことを特徴とする請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３５】
前記薬物はＤＮＡ損傷剤を含む、ことを特徴とする請求項３０に記載の免疫結合体。
【請求項３６】
前記薬物は、カリチアマイシン、ズオカルマイシン、及びピロロベンゾジアゼピンから成る群から選択された薬物を含む、ことを特徴とする請求項３５に記載の免疫結合体。
【請求項３７】
前記薬物はカリチアマイシン又はカリチアマイシンアナログを含む、ことを特徴とする請求項３６に記載の免疫結合体。
【請求項３８】
前記薬物はズオカルマイシンを含む、ことを特徴とする請求項３６に記載の免疫結合体。
【請求項３９】
前記薬物は、ズオカルマイシンＡ、ズオカルマイシンＢ１、ズオカルマイシンＢ２、ズオカルマイシンＣ１、ズオカルマイシンＣ２、ズオカルマイシンＤ、ズオカルマイシンＳＡ、シクロプロピルベンゾインドールズオカルマイシン（ＣＣ−１０６５）、Ｃｅｎｔａｎａｍｙｃｉｎ、ラシェルマイシン、アドゼレシン、ビセレシン、及びカルゼルシンから成る群から選択された、ズオカルマイシンを含む、ことを特徴とする請求項３８に記載の免疫結合体。
【請求項４０】
前記薬物はピロロベンゾジアゼピン又はピロロベンゾジアゼピン二量体を含む、ことを特徴とする請求項３６に記載の免疫結合体。
【請求項４１】
前記薬物は、アントラマイシン（及びその二量体）、マゼトラマイシン（及びその二量体）、トマイマイシン（及びその二量体）、プロトラカルシン（及びその二量体）、チカマイシン（及びその二量体）、ネオトラマイシンＡ（及びその二量体）、ネオトラマイシンＢ（及びその二量体）、ＤＣ−８１（及びその二量体）、シビロマイシン（及びその二量体）、ポロトラマイシンＡ（及びその二量体）、ポロトラマイシンＢ（及びその二量体）、シバノマイシン（及びその二量体）、アブベマイシン（及びその二量体）、ＳＧ２０００、及びＳＧ２２８５から成る群から選択された薬物を含む、ことを特徴とする請求項４０に記載の免疫結合体。
【請求項４２】
前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、及びｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤から成る群から選択される、ことを特徴とする請求項２７又は２８に記載の免疫結合体。
【請求項４３】
前記薬物は、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、メトトレキサートナトリウム、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、サイトシンアラビノサイド、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、フロクスウリジン（５−フルオロ−２）、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害剤（ＲＮＲ）、シクロホスファミド、ｎｅｏｓａｒ、イホスファミド、チオテパ、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）、１，−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−リンニトロソウレア、メチル（ＣＣＮＵ）、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、プロカルバジンＨＣＬ、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、クロラムブシル、メルファラン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベンダムスチン、カルムスチン、クロロメチン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ホテムスチン、ロムスチン、マンノスルファン、ネダプラチン、ニムスチン、プレドニマスチン、ラニムスチン、サトラプラチン、セムスチン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、トレオスルファン、トリアジクオン、トリエチレンメラミン、チオＴＥＰＡ、四硝酸トリプラチン、トホスファミド、ウラムスチン、ドキソルビシン、クエン酸ダウノルビシン、ミトキサントロン、アクチノマイシンＤ、エトポシド、トポテカンＨＣＬ、テニポシド（ＶＭ−２６）、イリノテカンＨＣＬ（ＣＰＴ−１１）、カンプトテシン、ベロテカン、ルビテカン、ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ナノ粒子パクリタキセル、アブラキサン、イクサベピロン、ラロタキセル、オルタタキセル、テセタキセル、ビンフルニン、レチノイン酸、レチノイン酸誘導体、ドキソルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、シスプラチン、５−フルオロウラシル、カンプトテシン誘導体、インターフェロン、タモキシフェン、及びタキソールから成る群から選択され、抗癌化合物は、アブラキサン、ドキソルビシン、パミドロン酸二ナトリウム、アナストロゾール、エキセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、トレミフェン、レトロゾール、トラスツズマブ、メゲストロールタモキシフェン、パクリタキセル、ドセタキセル、カペシタビン、酢酸ゴセレリン、及びゾレドロン酸から成る群から選択される、ことを特徴とする請求項２７又は２８に記載の免疫結合体。
【請求項４４】
前記抗体は、９９Ｔｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４１Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２Ｍｎ、５１Ｃｒ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、及び１１１Ａｇから成る群から選択される同位体を含むキレートに結合される、ことを特徴とする請求項２４に記載の免疫結合体。
【請求項４５】
前記抗体は、抗癌剤と複合するか或いはそれを含有する、脂質又はリポソームに結合される、ことを特徴とする請求項２４に記載の免疫結合体。
【請求項４６】
前記抗体は検出可能なラベルに結合される、ことを特徴とする請求項２４に記載の免疫結合体。
【請求項４７】
医薬製剤であって、該医薬製剤は：
薬学的に許容可能な賦形剤、並びに請求項１乃至２３の何れか１つに記載の抗体；及び／又は
薬学的に許容可能な賦形剤、並びに請求項２４乃至４６の何れか１つに記載の免疫結合体
を含む、医薬製剤。
【請求項４８】
前記医薬製剤は単位投与量の製剤である、ことを特徴とする請求項４７に記載の医薬製剤。
【請求項４９】
前記医薬製剤は、経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、及び筋肉内注射から成る群から選択された経路を介した投与のために処方される、ことを特徴とする請求項４７又は４８に記載の医薬製剤。
【請求項５０】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞の成長及び／又は増殖を阻害する方法であって、該方法は、
前記細胞を請求項１乃至２３の何れか１つに記載の抗体に接触させる工程；及び／又は
前記癌細胞を、細胞分裂阻害活性及び／又は細胞毒性活性を持つエフェクターに結合された請求項１乃至４６の何れか１つに記載の抗体を含む免疫結合体と接触させる工程
を含む、方法。
【請求項５１】
前記細胞は癌細胞である、ことを特徴とする請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞はＣＤ４６を過剰発現する癌細胞である、ことを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記癌細胞は、卵巣癌、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌、中皮腫、リンパ腫、肝臓癌、尿路上皮癌、胃癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、神経膠腫、神経芽腫、及び子宮頚癌から成る群から選択される、ことを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記癌細胞は前立腺癌細胞である、ことを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記癌細胞は去勢抵抗性前立腺癌の細胞である、ことを特徴とする請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞は転移細胞である、ことを特徴とする請求項５１乃至５５の何れか１つに記載の方法。
【請求項５７】
前記転移細胞は、骨転移、肝転移、膀胱転移、及び／又はリンパ節転移である、ことを特徴とする請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記細胞は固形腫瘍細胞である、ことを特徴とする請求項５１乃至５６の何れか１つに記載の方法。
【請求項５９】
前記エフェクターは放射性核種及び／又は細胞分裂阻害薬を含む、ことを特徴とする請求項５０乃至５８の何れか１つに記載の方法。
【請求項６０】
前記エフェクターは、
細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬；
細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬を含有する脂質又はリポソーム；
細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬を含む高分子薬物担体；並びに
細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬を含むナノ粒子薬物担体
の１以上を含む、ことを特徴とする請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記薬物は抗癌剤である、ことを特徴とする請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、及びｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤から成る群から選択される、ことを特徴とする請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記薬物はモノメチルオーリスタチンＦである、ことを特徴とする請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記薬物は、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、メトトレキサートナトリウム、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、サイトシンアラビノサイド、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、フロクスウリジン（５−フルオロ−２）、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害剤（ＲＮＲ）、シクロホスファミド、ｎｅｏｓａｒ、イホスファミド、チオテパ、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）、１，−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−リンニトロソウレア、メチル（ＣＣＮＵ）、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、プロカルバジンＨＣＬ、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、クロラムブシル、メルファラン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベンダムスチン、カルムスチン、クロロメチン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ホテムスチン、ロムスチン、マンノスルファン、ネダプラチン、ニムスチン、プレドニマスチン、ラニムスチン、サトラプラチン、セムスチン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、トレオスルファン、トリアジクオン、トリエチレンメラミン、チオＴＥＰＡ、四硝酸トリプラチン、トホスファミド、ウラムスチン、ドキソルビシン、クエン酸ダウノルビシン、ミトキサントロン、アクチノマイシンＤ、エトポシド、トポテカンＨＣＬ、テニポシド（ＶＭ−２６）、イリノテカンＨＣＬ（ＣＰＴ−１１）、カンプトテシン、ベロテカン、ルビテカン、ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ナノ粒子パクリタキセル、アブラキサン、イクサベピロン、ラロタキセル、オルタタキセル、テセタキセル、ビンフルニン、レチノイン酸、レチノイン酸誘導体、ドキソルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、シスプラチン、５−フルオロウラシル、カンプトテシン誘導体、インターフェロン、タモキシフェン、及びタキソールから成る群から選択され、抗癌化合物は、アブラキサン、ドキソルビシン、パミドロン酸二ナトリウム、アナストロゾール、エキセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、トレミフェン、レトロゾール、トラスツズマブ、メゲストロールタモキシフェン、パクリタキセル、ドセタキセル、カペシタビン、酢酸ゴセレリン、及びゾレドロン酸から成る群から選択される、ことを特徴とする請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記薬物は、前記抗体に直接抱合され；又は
前記薬物は、前記抗体に結合される脂質又はリポソームに含有され；又は
前駆薬物は、前記抗体に結合される高分子担体及び／又はナノ粒子担体に含有される
ことを特徴とする請求項６０乃至６４の何れか１つに記載の方法。
【請求項６６】
前記エフェクターは細胞毒素を含む、ことを特徴とする請求項５０乃至５８の何れか１つに記載の方法。
【請求項６７】
前記エフェクターは放射性核種を含む、ことを特徴とする請求項５０に記載の方法。
【請求項６８】
前記免疫結合体又は抗体は、薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物中で投与される、ことを特徴とする請求項５０乃至６７の何れか１つに記載の方法。
【請求項６９】
前記投与はヒト又は非ヒト哺乳動物への投与を含む、ことを特徴とする請求項５０乃至６８の何れか１つに記載の方法。
【請求項７０】
前記投与する工程は、
非経口的投与；及び／又は
腫瘍或いは外科的部位への投与
を含む、ことを特徴とする請求項５０乃至６９の何れか１つに記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体及び／又は免疫結合体は、手術及び／又は放射線療法のための補助療法として投与される、ことを特徴とする請求項５０乃至７０の何れか１つに記載の方法。
【請求項７２】
前記抗体及び／又は免疫結合体は、別の抗癌剤及び／又はホルモンと共に投与される、ことを特徴とする請求項５０乃至７１の何れか１つに記載の方法。
【請求項７３】
前記抗体及び／又は免疫結合体は、アビラテロン及び／又はエンザルタミドと共に投与される、ことを特徴とする請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記細胞は前立腺癌細胞を含む、ことを特徴とする請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記前立腺癌細胞は、神経内分泌前立腺癌（ＮＥＰＣ）細胞である、ことを特徴とする請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記前立腺癌細胞は、アビラテロン（Ａｂｉ）又はエンザルタミド（Ｅｎｚ）に耐性のある転移性の去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）細胞を含む、ことを特徴とする請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する癌の癌細胞を検出する方法であって、該方法は、
前記細胞を、検出可能なラベルに結合された請求項１乃至２３の何れか１つに記載の抗体を含む免疫結合体に接触させる工程；及び
前記検出可能なラベルの存在及び／又は位置を検出する工程
を含み、
存在及び／又は位置は、癌細胞の存在及び／又は位置の指標である
ことを特徴とする方法。
【請求項７８】
前記ラベルは、放射性ラベル、放射線不透過性ラベル、ＭＲＩラベル、ＰＥＴラベル、及びＳＰＥＣＴラベルから成る群から選択されたラベルを含む、ことを特徴とする請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記癌細胞は、卵巣癌、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌、中皮腫、リンパ腫、肝臓癌、尿路上皮癌、胃癌、多発性骨髄腫、神経膠腫、神経芽腫、及び子宮頚癌から成る群から選択される、ことを特徴とする請求項７７又は７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記接触は、非ヒト哺乳動物又はヒトへの前記免疫結合体の投与を含む、ことを特徴とする請求項７７乃至７９の何れか１つに記載の方法。
【請求項８１】
前記検出は、インビボでの前記ラベルの検出を含む、ことを特徴とする請求項７７乃至８０の何れか１つに記載の方法。
【請求項８２】
前記検出は、Ｘ線、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、ＭＲＩ、及びＣＡＴから成る群から選択された検出方法の使用を含む、ことを特徴とする請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記検出は、生検又は生検由来のサンプルにおけるエキソビボでの前記ラベルの検出を含む、ことを特徴とする請求項７７乃至８０の何れか１つに記載の方法。
【請求項８４】
請求項１乃至２３の何れか１つに記載の抗体又は該抗体のフラグメントをコード化する、核酸。
【請求項８５】
請求項８４に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項８６】
請求項８５に記載の発現ベクターを含む、細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願への相互参照＞
本出願は、２０１４年９月１２日出願のＵＳＳＮ６２／０４９，９７３の利益と優先権を請求するものであり、これは全ての目的のための全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
＜連邦政府によって委託された研究及び開発の下で作られた発明に対する権利に関する声明＞
この研究は、国立衛生研究所からの認可番号Ｒ０１  ＣＡ１１８９１９、Ｒ０１  ＣＡ１２９４９１、及びＲ０１  ＣＡ１７１３１５により部分的に支援されていた。政府は本発明に一定の権利を有している。
【背景技術】
【０００３】
利用可能性の容易さにより、腫瘍細胞表面抗原は、治療の発展に貴重な標的である。細胞表面にあるエピトープ空間は非常に複雑である。関連する抗原は、遺伝子のコピー数又はｍＲＮＡ発現レベルの研究から容易に予測されないかもしれない、糖化タンパク質及び他の翻訳後に修飾された生成物を含み得る（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：  ７０４−７１０；  Ｋｏｂａｔａ  ａｎｄ  Ａｍａｎｏ  （２００５）  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ８３：  ４２９−４３９；  Ｂｉｒｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ  （Ｐａｒｉｓ）  ８５：  ４５５−４６３；  Ｈａｋｏｍｏｒｉ  （２００１）  Ａｄｖ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．  ４９１：  ３６９−４０２；  Ｈａｎｉｓｃｈ，  Ｆ．  Ｇ．  （２００１）  Ｏ−Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｕｃｉｎ  ｔｙｐｅ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ３８２，  １４３−１  ４９；  Ｕｇｏｒｓｋｉ  ａｎｄ  Ｌａｓｋｏｗｓｋａ  （２００２）  Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｐｏｌ．  ４９：  ３０３−３１１）。
【０００４】
腫瘍細胞表面エピトープの同定は、抗体の産生が、腫瘍細胞への特異的な結合、即ち、抗体依存性細胞毒性の誘導（例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ６：  ４４３−４４６を参照）、又は、腫瘍細胞の移動、増殖、及び生存に関係するシグナル伝達経路の阻害（例えば、ＭｃＷｈｉｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ，  １０３：  １０４１−１  ０４６；  Ｆｕｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８１：  ６６２５−  ６６３１を参照）などの用途において利用され得る能力を達成するのを可能にする。加えて、内在化する腫瘍エピトープを標的とする抗体は、細胞毒素、細胞分裂阻害剤、化学療法薬、及び／又は他の腫瘍修飾薬の効果的且つ特異的な細胞内輸送を達成するために利用され得る（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：  ７０４−７１０；  Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  １５９１：  １０９−１１８；  Ｐｉｒｏｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １７：  １１７−１２４；  Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３：７０９−７１７；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３１５：  １０６３−１０７３を参照）。
【０００５】
ファージ抗体の表示が、癌特異抗体を開発するために広く使用されてきた（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：  ７０４−７１０；  Ｌｉｕ  ａｎｄ  Ｍａｒｋｓ  （２０００）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２８６：  １１９−１２８；  １５．  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  （Ｎ．  Ｙ．）  １０：  ７７９−７８３；  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：  ５８１−５９７；  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６７：  １６００７−１６０１０；  Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ９６：  ３０５−３１３；  Ｓｉｌａｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ５：  ２３４０  −２３５０；  Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２７４：  １８５−１９７；  Ｌｅｋｋｅｒｋｅｒｋｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｇｔｅｎｂｅｒｇ  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．，  ２３１：  ５３−６３；  ｄｅ  Ｋｒｕｉｆ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ，  ９２：  ３９３８−３９４２；  Ｐｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７３：  ２１  ７６９−２１  ７７６を参照）。組み合わせのファージ抗体ライブラリは、癌細胞の表面上の腫瘍性の変異を調べるために使用され得る、ランダム形状のレパートリーの源として機能する（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：  ７０４−７１０；  Ｇｅｕｉｊｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ４１：  １７８−１８７；  Ｐｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０１：  １１４９−１１６１；  Ｃａｉ  ａｎｄ  Ｇａｒｅｎ  （１９９５）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ，  ９２：  ６５３７−６５４１を参照）。癌細胞株上に直接、ファージ抗体ライブラリを選択することにより、標的抗原の予備的知識無しに、腫瘍標的抗体の確認が可能となる（例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：  ７０４−７１０；  Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２７４：  １８５−１９７；  Ｇｅｕｉｊｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ４１：  １７８−１８７；  Ｐｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０１：  １１４９−１１６１を参照）。
【０００６】
多数の抗体がこの方法により見出されたが、細胞株に対するスクリーニングプロセスは、これら抗体が患者集団における実際の癌細胞に対してどのくらい特異的であるかに関する、理想的な写真を提供しない。同様に、抗体がインビボで内在化するかどうかの兆候も、必ずしも提供しない。
【発明の概要】
【０００７】
様々な実施形態において、内在化していると共に、マクロピノサイトーシス経路を介して腫瘍細胞に入る、ヒト抗ＣＤ４６抗体が提供され、同様に、ＣＤ４６−過剰発現腫瘍の診断上及び／又は治療上の標的化のためにこれら抗体から開発された、抗体−薬物の複合体（ＡＤＣ）も提供される。
【０００８】
本明細書で考慮される様々な実施形態は、限定されないが、以下の１以上を含み得る：
【０００９】
実施形態１：ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、単離されたヒト化抗体であって、ここで、該抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合する抗体であり、この抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択された１以上の抗体により結合されたエピトープに特異的に結合し；前記抗体は、マクロピノサイトーシスを介して前記細胞に内在化される。
【００１０】
実施形態２：実施形態１の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６のドメイン１及び／又はドメイン２に結合する。
【００１１】
実施形態３：実施形態１又は２の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６のドメイン３及び／又はドメイン４に結合しない。
【００１２】
実施形態４：実施形態１−３の何れか１つに記載の抗体であって、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は癌細胞である。
【００１３】
実施形態５：実施形態１−４の何れか１つに記載の抗体であって、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は前立腺癌細胞である。
【００１４】
実施形態６：実施形態５の抗体であって、該抗体は、ＤＵ１４５細胞、ＰＣ３細胞、及びＬｎＣａＰ細胞から成る群から選択された細胞株の細胞に結合する。
【００１５】
実施形態７：実施形態１−６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定された時に、少なくとも約５−１０ｎＭの親和性（ＫＤ）を持つ前立腺腫瘍細胞に結合する。
【００１６】
実施形態８：実施形態７に記載の抗体であって、該抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定された時に、少なくとも約３ｎＭの親和性（ＫＤ）を持つ前立腺腫瘍細胞に結合する。
【００１７】
実施形態９：実施形態１−８の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は実質的に無傷の免疫グロブリンである。
【００１８】
実施形態１０：実施形態９の抗体であって、該抗体はＩｇＡ、ＩｇＥ、又はＩｇＧを含む。
【００１９】
実施形態１１：実施形態９の抗体であって、該抗体はＩｇＧ１を含む。
【００２０】
実施形態１２：実施形態１−８の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合する抗体フラグメントである。
【００２１】
実施形態１３：実施形態１２の抗体であって、該抗体は、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、（Ｆａｂ’）３、ＩｇＧΔＣＨ２、及びミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）から選択された抗体フラグメントである。
【００２２】
実施形態１４：実施形態１−８の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は単鎖抗体である。
【００２３】
実施形態１５：実施形態１４の抗体であって、該抗体のＶＬ領域は、約３から約１５までのアミノ酸の長さの範囲に及ぶアミノ酸リンカーにより、前記抗体のＶＨ領域に結合される。
【００２４】
実施形態１６：実施形態１４の抗体であって、該抗体のＶＬ領域は、ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）、ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）、ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）、ＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）、ＳＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１）、ＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）、ＶＰＧＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、ＶＰＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）、ＧＶＰＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５）、ＧＶＧ  ＶＰ  ＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６）、ＶＰ  ＧＶＧ  ＶＰ  ＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）、ＧＧＳＳＲＳＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８）、及びＧＧＳＳＲＳＳＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）から成る群から選択されるアミノ酸リンカーにより前記抗体のＶＨ領域に結合される。
【００２５】
実施形態１７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ５と競合する。
【００２６】
実施形態１８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ５Ｆと競合する。
【００２７】
実施形態１９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ５ｖ１Ｄと競合する。
【００２８】
実施形態２０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＳＢ１ＨＧＮＹと競合する。
【００２９】
実施形態２１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ１２と競合する。
【００３０】
実施形態２２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するために３Ｇ７ＲＹと競合する。
【００３１】
実施形態２３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ６と競合する。
【００３２】
実施形態２４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ１と競合する。
【００３３】
実施形態２５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ３と競合する。
【００３４】
実施形態２６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ４と競合する。
【００３５】
実施形態２７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ８と競合する。
【００３６】
実施形態２８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ７と競合する。
【００３７】
実施形態２９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ９と競合する。
【００３８】
実施形態３０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ１０と競合する。
【００３９】
実施形態３１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＹＳ１１と競合する。
【００４０】
実施形態３２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するために３Ｇ７ＨＹと競合する。
【００４１】
実施形態３３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するために３Ｇ７ＮＹと競合する。
【００４２】
実施形態３４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するために３Ｇ７と競合する。
【００４３】
実施形態３５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＳＢ２と競合する。
【００４４】
実施形態３６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するために２Ｃ８と競合する。
【００４５】
実施形態３７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＣＤ４６にて結合するためにＵＡ８ｋａｐｐａと競合する。
【００４６】
実施形態３８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａから成る群から選択される抗体の、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００４７】
実施形態３９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００４８】
実施形態４０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００４９】
実施形態４１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００５０】
実施形態４２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【００５１】
実施形態４３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００５２】
実施形態４４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００５３】
実施形態４５：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５  ｓｃＦｖである。
【００５４】
実施形態４６：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５  ＩｇＧである。
【００５５】
実施形態４７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００５６】
実施形態４８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００５７】
実施形態４９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００５８】
実施形態５０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【００５９】
実施形態５１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００６０】
実施形態５２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００６１】
実施形態５３：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５Ｆ  ｓｃＦｖである。
【００６２】
実施形態５４：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５Ｆ  ＩｇＧである。
【００６３】
実施形態５５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００６４】
実施形態５６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００６５】
実施形態５７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００６６】
実施形態５８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【００６７】
実施形態５９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００６８】
実施形態６０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００６９】
実施形態６１：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５Ｆ  ｓｃＦｖである。
【００７０】
実施形態６２：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５Ｆ  ＩｇＧである。
【００７１】
実施形態６３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｖ１Ｄ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００７２】
実施形態６４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｖ１Ｄ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００７３】
実施形態６５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｖ１Ｄ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００７４】
実施形態６６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｖ１Ｄ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【００７５】
実施形態６７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｖ１Ｄ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００７６】
実施形態６８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ５Ｖ１Ｄ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ５Ｖ１Ｄ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００７７】
実施形態６９：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５Ｖ１Ｄ  ｓｃＦｖである。
【００７８】
実施形態７０：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ５Ｖ１Ｄ  ＩｇＧである。
【００７９】
実施形態７１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００８０】
実施形態７２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００８１】
実施形態７３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００８２】
実施形態７４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【００８３】
実施形態７５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００８４】
実施形態７６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００８５】
実施形態７７：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＳＢ１ＨＧＮＹ  ｓｃＦｖである。
【００８６】
実施形態７８：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＳＢ１ＨＧＮＹ  ＩｇＧである。
【００８７】
実施形態７９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１２抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００８８】
実施形態８０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１２抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００８９】
実施形態８１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１２抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００９０】
実施形態８２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【００９１】
実施形態８３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１２抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００９２】
実施形態８４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ１２抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【００９３】
実施形態８５：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１２  ｓｃＦｖである。
【００９４】
実施形態８６：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１２  ＩｇＧである。
【００９５】
実施形態８７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＲＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【００９６】
実施形態８８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＲＹ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００９７】
実施形態８９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＲＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００９８】
実施形態９０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＲＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【００９９】
実施形態９１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＲＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１００】
実施形態９２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＲＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、３Ｇ７ＲＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１０１】
実施形態９３：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７ＲＹ  ｓｃＦｖである。
【０１０２】
実施形態９４：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７ＲＹ  ＩｇＧである。
【０１０３】
実施形態９５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ６抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１０４】
実施形態９６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ６抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１０５】
実施形態９７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ６抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１０６】
実施形態９８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ６抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１０７】
実施形態９９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ６抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１０８】
実施形態１００：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ６抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ６抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１０９】
実施形態１０１：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ６  ｓｃＦｖである。
【０１１０】
実施形態１０２：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ６  ＩｇＧである。
【０１１１】
実施形態１０３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１１２】
実施形態１０４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１１３】
実施形態１０５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１１４】
実施形態１０６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１１５】
実施形態１０７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１１６】
実施形態１０８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ１抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１１７】
実施形態１０９：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１  ｓｃＦｖである。
【０１１８】
実施形態１１０：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１  ＩｇＧである。
【０１１９】
実施形態１１１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ３抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２０】
実施形態１１２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ３抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２１】
実施形態１１３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ３抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２２】
実施形態１１４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ３抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１２３】
実施形態１１５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ３抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１２４】
実施形態１１６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ３抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ３抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１２５】
実施形態１１７：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ３  ｓｃＦｖである。
【０１２６】
実施形態１１８：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ３  ＩｇＧである。
【０１２７】
実施形態１１９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ４抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２８】
実施形態１２０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ４抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１２９】
実施形態１２１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ４抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３０】
実施形態１２２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ４抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１３１】
実施形態１２３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ４抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１３２】
実施形態１２４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ４抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ４抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１３３】
実施形態１２５：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ４  ｓｃＦｖである。
【０１３４】
実施形態１２６：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ４  ＩｇＧである。
【０１３５】
実施形態１２７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ８抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３６】
実施形態１２８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ８抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３７】
実施形態１２９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ８抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１３８】
実施形態１３０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ８抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１３９】
実施形態１３１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ８抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１４０】
実施形態１３２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ８抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ８抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１４１】
実施形態１３３：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ８  ｓｃＦｖである。
【０１４２】
実施形態１３４：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ８  ＩｇＧである。
【０１４３】
実施形態１３５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１４４】
実施形態１３６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ７抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１４５】
実施形態１３７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１４６】
実施形態１３８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ７抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１４７】
実施形態１３９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ７抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１４８】
実施形態１４０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ７抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ７抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１４９】
実施形態１４１：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ７  ｓｃＦｖである。
【０１５０】
実施形態１４２：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ７  ＩｇＧである。
【０１５１】
実施形態１４３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ９抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１５２】
実施形態１４４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ９抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１５３】
実施形態１４５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ９抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１５４】
実施形態１４６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ９抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１５５】
実施形態１４７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ９抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１５６】
実施形態１４８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ９抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ９抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１５７】
実施形態１４９：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ９  ｓｃＦｖである。
【０１５８】
実施形態１５０：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ９  ＩｇＧである。
【０１５９】
実施形態１５１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１０抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６０】
実施形態１５２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１０抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６１】
実施形態１５３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１０抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６２】
実施形態１５４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１０抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１６３】
実施形態１５５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１０抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１６４】
実施形態１５６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１０抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ１０抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１６５】
実施形態１５７：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１０  ｓｃＦｖである。
【０１６６】
実施形態１５８：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１０  ＩｇＧである。
【０１６７】
実施形態１５９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１１抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６８】
実施形態１６０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１１抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６９】
実施形態１６１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１１抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７０】
実施形態１６２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１１抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１７１】
実施形態１６３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１１抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１７２】
実施形態１６４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＹＳ１１抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＹＳ１１抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１７３】
実施形態１６５：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１１  ｓｃＦｖである。
【０１７４】
実施形態１６６：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＹＳ１１  ＩｇＧである。
【０１７５】
実施形態１６７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＨＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７６】
実施形態１６８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＨＹ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７７】
実施形態１６９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＨＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１７８】
実施形態１７０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＨＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１７９】
実施形態１７１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＨＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１８０】
実施形態１７２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＨＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、３Ｇ７ＨＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１８１】
実施形態１７３：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７ＨＹ  ｓｃＦｖである。
【０１８２】
実施形態１７４：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７ＨＹ  ＩｇＧである。
【０１８３】
実施形態１７５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＮＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８４】
実施形態１７６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＮＹ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８５】
実施形態１７７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＮＹ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１８６】
実施形態１７８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１８７】
実施形態１７９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１８８】
実施形態１８０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７ＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、３Ｇ７ＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１８９】
実施形態１８１：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７ＮＹ  ｓｃＦｖである。
【０１９０】
実施形態１８２：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７ＮＹ  ＩｇＧである。
【０１９１】
実施形態１８３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１９２】
実施形態１８４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１９３】
実施形態１８５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１９４】
実施形態１８６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０１９５】
実施形態１８７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１９６】
実施形態１８８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、３Ｇ７抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、３Ｇ７抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０１９７】
実施形態１８９：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７  ｓｃＦｖである。
【０１９８】
実施形態１９０：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト３Ｇ７  ＩｇＧである。
【０１９９】
実施形態１９１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ２抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０２００】
実施形態１９２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ２抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２０１】
実施形態１９３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ２抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２０２】
実施形態１９４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０２０３】
実施形態１９５：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ２抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０２０４】
実施形態１９６：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＳＢ２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＳＢ２抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０２０５】
実施形態１９７：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＳＢ２  ｓｃＦｖである。
【０２０６】
実施形態１９８：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＳＢ２  ＩｇＧである。
【０２０７】
実施形態１９９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、２Ｃ８抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０２０８】
実施形態２００：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、２Ｃ８抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２０９】
実施形態２０１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、２Ｃ８抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２１０】
実施形態２０２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、２Ｃ８抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０２１１】
実施形態２０３：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、２Ｃ８抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０２１２】
実施形態２０４：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、２Ｃ８抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、２Ｃ８抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０２１３】
実施形態２０５：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト２Ｃ８  ｓｃＦｖである。
【０２１４】
実施形態２０６：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒト２Ｃ８  ＩｇＧである。
【０２１５】
実施形態２０７：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０２１６】
実施形態２０８：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２１７】
実施形態２０９：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２１８】
実施形態２１０：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含む。
【０２１９】
実施形態２１１：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０２２０】
実施形態２１２：実施形態１−１６の何れか１つに記載の抗体であって、該抗体は、ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖と、ＵＡ８ｋａｐｐａ抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含む。
【０２２１】
実施形態２１３：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＵＡ８ｋａｐｐａ  ｓｃＦｖである。
【０２２２】
実施形態２１４：実施形態１の抗体であって、該抗体はヒトＵＡ８ｋａｐｐａ  ＩｇＧである。
【０２２３】
実施形態２１５：エフェクターに結合される、実施形態１−２１４の何れか１つに記載の抗体を含む免疫結合体であって、前記エフェクターは、第２抗体、検出可能なラベル、細胞毒素又は細胞分裂阻害剤、薬物を含有するリポソーム、放射性核種、薬物、プロドラッグ、ウィルス粒子、サイトカイン、及びキレートから成る群からが選択される。
【０２２４】
実施形態２１６：実施形態２１５の免疫結合体であって、該免疫結合体は細胞毒素に結合される。
【０２２５】
実施形態２１７：実施形態２１６の免疫結合体であって、前記抗体は、ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素、リシン、アブリン、サポリン、及びチミジンキナーゼから成る群から選択された細胞毒素に結合される。
【０２２６】
実施形態２１８：実施形態２１５の免疫結合体であって、前記抗体は細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬に結合される。
【０２２７】
実施形態２１９：実施形態２１６の免疫結合体であって、前記抗体は、前記薬物を含む脂質又はリポソーム；前記薬物を含む高分子薬物担体；及び前記薬物を含むナノ粒子薬物担体の１以上に直接、又はリンカーを介して結合される。
【０２２８】
実施形態２２０：実施形態２１８−２１９の何れか１つに記載の免疫結合体であって、前記薬物は抗癌剤である。
【０２２９】
実施形態２２１：実施形態２１８−２１９の何れか１つに記載の免疫結合体であって、前記薬物は、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、及びポリメラーゼ阻害剤から成る群から選択される。
【０２３０】
実施形態２２２：実施形態２２１の免疫結合体であって、前記薬物はチューブリン阻害剤を含む。
【０２３１】
実施形態２２３：実施形態２２２の免疫結合体であって、前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン−１０、天然物ドラスタチン−１０合成誘導体、及びメイタンシン或いはメイタンシン誘導体から成る群から選択された薬物を含む。
【０２３２】
実施形態２２４：実施形態２２２の免疫結合体であって、前記薬物は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ｖｃＭＭＡＥ、及びｖｃＭＭＡＦから成る群から選択された薬物を含む。
【０２３３】
実施形態２２５：実施形態２２２の免疫結合体であって、前記薬物は、メルタシン（Ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）（ＤＭ１）、ＤＭ３、及びＤＭ４から成る群から選択されたメイタンシンを含む。
【０２３４】
実施形態２２６：実施形態２２１の免疫結合体であって、前記薬物はＤＮＡ損傷剤を含む。
【０２３５】
実施形態２２７：実施形態２２６の免疫結合体であって、前記薬物は、カリチアマイシン、ズオカルマイシン、及びピロロベンゾジアゼピンから成る群から選択された薬物を含む。
【０２３６】
実施形態２２８：実施形態２２７の免疫結合体であって、前記薬物はカリチアマイシン又はカリチアマイシンアナログを含む。
【０２３７】
実施形態２２９：実施形態２２７の免疫結合体であって、前記薬物はズオカルマイシンを含む。
【０２３８】
実施形態２３０：実施形態２２９の免疫結合体であって、前記薬物は、ズオカルマイシンＡ、ズオカルマイシンＢ１、ズオカルマイシンＢ２、ズオカルマイシンＣ１、ズオカルマイシンＣ２、ズオカルマイシンＤ、ズオカルマイシンＳＡ、シクロプロピルベンゾインドールズオカルマイシン（ＣＣ−１０６５）、Ｃｅｎｔａｎａｍｙｃｉｎ、ラシェルマイシン、アドゼレシン、ビセレシン、及びカルゼルシンから成る群から選択された、ズオカルマイシンを含む。
【０２３９】
実施形態２３１：実施形態２２７の免疫結合体であって、前記薬物はピロロベンゾジアゼピン又はピロロベンゾジアゼピン二量体を含む。
【０２４０】
実施形態２３２：実施形態２３１の免疫結合体であって、前記薬物は、アントラマイシン（及びその二量体）、マゼトラマイシン（及びその二量体）、トマイマイシン（及びその二量体）、プロトラカルシン（及びその二量体）、チカマイシン（及びその二量体）、ネオトラマイシンＡ（及びその二量体）、ネオトラマイシンＢ（及びその二量体）、ＤＣ−８１（及びその二量体）、シビロマイシン（及びその二量体）、ポロトラマイシンＡ（及びその二量体）、ポロトラマイシンＢ（及びその二量体）、シバノマイシン（及びその二量体）、アブベマイシン（及びその二量体）、ＳＧ２０００、及びＳＧ２２８５から成る群から選択された薬物を含む。
【０２４１】
実施形態２３３：実施形態２２１の免疫結合体であって、前記薬物はポリメラーゼ阻害剤を含む。
【０２４２】
実施形態２３４：実施形態２３３の免疫結合体であって、前記薬物は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を含む。
【０２４３】
実施形態２３５：実施形態２３４の免疫結合体であって、前記薬物は、イニパリブ（ＢＳＩ  ２０１）、タラゾパリブ（ＢＭＮ−６７３）、オラパリブ（ＡＺＤ−２２８１）、オラパリブ、ルカパリブ（ＡＧ０１４６９９、ＰＦ−０１３６７３３８）、ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８）、ＣＥＰ  ９７２２、ＭＫ  ４８２７、ＢＧＢ−２９０、及び３−アミノベンズアミドから成る群から選択された、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を含む。
【０２４４】
実施形態２３６：実施形態２１８−２１９の何れか１つに記載の免疫結合体であって、前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、及びｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤から成る群から選択される。
【０２４５】
実施形態２３７：実施形態２１８−２１９の何れか１つに記載の免疫結合体であって、前記薬物は、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、メトトレキサートナトリウム、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、サイトシンアラビノサイド、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、フロクスウリジン（５−フルオロ−２）、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害剤（ＲＮＲ）、シクロホスファミド、ｎｅｏｓａｒ、イホスファミド、チオテパ、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア（ｎｉｔｏｓｏｕｒｅａ）（ＢＣＮＵ）、１，−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−リンニトロソウレア（ｌｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ）、メチル（ＣＣＮＵ）、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、プロカルバジンＨＣＬ、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、クロラムブシル、メルファラン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベンダムスチン、カルムスチン、クロロメチン（ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｉｎｅ）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ホテムスチン、ロムスチン、マンノスルファン、ネダプラチン、ニムスチン、プレドニマスチン、ラニムスチン、サトラプラチン、セムスチン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、トレオスルファン、トリアジクオン、トリエチレンメラミン、チオＴＥＰＡ、四硝酸トリプラチン、トホスファミド、ウラムスチン、ドキソルビシン、クエン酸ダウノルビシン、ミトキサントロン、アクチノマイシンＤ、エトポシド、トポテカンＨＣＬ、テニポシド（ＶＭ−２６）、イリノテカンＨＣＬ（ＣＰＴ−１１）、カンプトテシン、ベロテカン、ルビテカン、ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ナノ粒子パクリタキセル、アブラキサン、イクサベピロン、ラロタキセル、オルタタキセル、テセタキセル、及びビンフルニンから成る群から選択される。
【０２４６】
実施形態２３８：実施形態２１８−２１９の何れか１つに記載の免疫結合体であって、前記薬物は、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エルロチニブ、エトポシド、ゲムシタビン、メシル酸イマチニブ、イリノテカン、メトトレキサート、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｉｎｉｂ）、スニチニブ、トポテカン、ビンブラスチン、及びビンクリスチンから成る群から選択される。
【０２４７】
実施形態２３９：実施形態２１８−２１９の何れか１つに記載の免疫結合体であって、前記薬物は、レチノイン酸、レチノイン酸誘導体、ドキソルビシン（ｄｏｘｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、シスプラチン、５−フルオロウラシル、カンプトテシン誘導体、インターフェロン、タモキシフェン、及びタキソールから成る群から選択される。特定の実施形態において、抗癌化合物は、アブラキサン、ドキソルビシン、パミドロン酸二ナトリウム、アナストロゾール、エキセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、トレミフェン、レトロゾール、トラスツズマブ、メゲストロールタモキシフェン（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、パクリタキセル、ドセタキセル、カペシタビン、酢酸ゴセレリン、及びゾレドロン酸から成る群から選択される。
【０２４８】
実施形態２４０：実施形態２１５の免疫結合体であって、前記抗体は、９９Ｔｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４１Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２Ｍｎ、５１Ｃｒ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、及び１１１Ａｇから成る群から選択される同位体を含む、キレートに結合される。
【０２４９】
実施形態２４１：実施形態２１５の免疫結合体であって、該免疫結合体はα放射体に結合される。
【０２５０】
実施形態２４２：実施形態２４１の免疫結合体であって、前記α放射体はビスマス２１３である。
【０２５１】
実施形態２４３：実施形態２１５の免疫結合体であって、前記抗体は、抗癌剤と複合するか或いはそれを含有する、脂質又はリポソームに結合される。
【０２５２】
実施形態２４４：実施形態２１５の免疫結合体であって、該免疫結合体は検出可能なラベルに付けられる。
【０２５３】
実施形態２４５：実施形態２４４の免疫結合体であって、前記抗体は、放射性ラベル、放射線不透過性ラベル、ＭＲＩラベル、及びＰＥＴラベルから成る群から選択された、検出可能なラベルに付けられる。
【０２５４】
実施形態２４６：医薬製剤であって、該医薬製剤は、薬学的に許容可能な賦形剤、並びに実施形態１−２１４の何れか１つに記載の抗体；及び／又は、薬学的に許容可能な賦形剤、並びに実施形態２１５−２４５の何れか１つに記載の免疫結合体を含む。
【０２５５】
実施形態２４７：実施形態２４６の医薬製剤であって、該医薬製剤は単位投与量の製剤である。
【０２５６】
実施形態２４８：実施形態２４６−２４７の何れか１つに記載の医薬製剤であって、該医薬製剤は、経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、及び筋肉内注射から成る群から選択された経路を介した投与のために処方される。
【０２５７】
実施形態２４９：ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞の成長及び／又は増殖を阻害する方法であって、該方法は、前記細胞を実施形態１−２１４の何れか１つに記載の抗体に接触させる工程；及び／又は、前記癌細胞を、細胞分裂阻止活性及び／又は細胞毒性活性を持つエフェクターに結合された実施形態１−２１４の何れか１つに記載の抗体を含む免疫結合体と接触させる工程を含む。
【０２５８】
実施形態２５０：実施形態２４９の方法であって、該方法は、前記癌細胞を、実施形態１−２１４の何れか１つに記載の接触させる工程を含む。
【０２５９】
実施形態２５１：実施形態２４９の方法であって、該方法は、前記癌細胞を、細胞分裂阻止活性及び／又は細胞毒性活性を持つエフェクターに結合された実施形態１−２１４の何れか１つに記載の抗体を含む免疫結合体と接触させる工程を含む。
【０２６０】
実施形態２５２：実施形態２４９−２５１の方法であって、前記細胞は癌細胞である。
【０２６１】
実施形態２５３：実施形態２５２の方法であって、前記細胞はＣＤ４６を過剰発現する癌細胞である。
【０２６２】
実施形態２５４：実施形態２５２の方法であって、前記癌細胞は、卵巣癌、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌、中皮腫、リンパ腫、肝臓癌、尿路上皮癌、胃癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、神経膠腫、神経芽腫、及び子宮頚癌から成る群から選択される。
【０２６３】
実施形態２５５：実施形態２５２の方法であって、前記癌細胞は前立腺癌細胞である。
【０２６４】
実施形態２５６：実施形態２５５の方法であって、前記癌細胞は去勢抵抗性前立腺癌の細胞である。
【０２６５】
実施形態２５７：実施形態２５２の方法であって、前記癌細胞は多発性骨髄腫の細胞である。
【０２６６】
実施形態２５８：実施形態２５２−２５７の何れか１つに記載の方法であって、前記細胞は転移細胞である。
【０２６７】
実施形態２５９：実施形態２５８の方法であって、前記転移細胞は、骨転移、肝転移、膀胱転移、及び／又はリンパ節転移である。
【０２６８】
実施形態２６０：実施形態２５２−２５８の何れか１つに記載の方法であって、該細胞は固形腫瘍細胞である。
【０２６９】
実施形態２６１：実施形態２４９、及び２５１−２６０の何れか１つに記載の方法であって、前記エフェクターは放射性核種薬及び／又は抗悪性腫瘍薬を含む。
【０２７０】
実施形態２６２：実施形態２６１の方法であって、前記エフェクターは、細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬；細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬を含有する脂質又はリポソーム；細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬を含む高分子薬物担体；並びに、細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬を含むナノ粒子薬物担体の１以上を含む。
【０２７１】
実施形態２６３：実施形態２６２の方法であって、前記薬物は抗癌剤である。
【０２７２】
実施形態２６４：実施形態２６３の方法であって、前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、及びｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤から成る群から選択される。
【０２７３】
実施形態２６５：実施形態２６３の方法であって、前記薬物はモノメチルオーリスタチンＦである。
【０２７４】
実施形態２６６：実施形態２６３の方法であって、前記薬物は、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、メトトレキサートナトリウム、ラルチトレキセド、ペメトレキセド、サイトシンアラビノサイド、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、フロクスウリジン（５−フルオロ−２）、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害剤（ＲＮＲ）、シクロホスファミド、ｎｅｏｓａｒ、イホスファミド、チオテパ、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア（ｎｉｔｏｓｏｕｒｅａ）（ＢＣＮＵ）、１，−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−リンニトロソウレア（ｌｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ）、メチル（ＣＣＮＵ）、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、プロカルバジンＨＣＬ、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、クロラムブシル、メルファラン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ベンダムスチン、カルムスチン、クロロメチン（ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｉｎｅ）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ホテムスチン、ロムスチン、マンノスルファン、ネダプラチン、ニムスチン、プレドニマスチン、ラニムスチン、サトラプラチン、セムスチン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、トレオスルファン、トリアジクオン、トリエチレンメラミン、チオＴＥＰＡ、四硝酸トリプラチン、トホスファミド、ウラムスチン、ドキソルビシン、クエン酸ダウノルビシン、ミトキサントロン、アクチノマイシンＤ、エトポシド、トポテカンＨＣＬ、テニポシド（ＶＭ−２６）、イリノテカンＨＣＬ（ＣＰＴ−１１）、カンプトテシン、ベロテカン、ルビテカン、ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ナノ粒子パクリタキセル、アブラキサン、イクサベピロン、ラロタキセル、オルタタキセル、テセタキセル、及びビンフルニンから成る群から選択される。
【０２７５】
実施形態２６７：実施形態２６３の方法であって、前記薬物は、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エルロチニブ、エトポシド、ゲムシタビン、メシル酸イマチニブ、イリノテカン、メトトレキサート、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｉｎｉｂ）、スニチニブ、トポテカン、ビンブラスチン、及びビンクリスチンから成る群から選択される。
【０２７６】
実施形態２６８：実施形態２６３の方法であって、前記薬物は、レチノイン酸、レチノイン酸誘導体、ドキソルビシン（ｄｏｘｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、シスプラチン、５−フルオロウラシル、カンプトテシン誘導体、インターフェロン、タモキシフェン、及びタキソールから成る群から選択される。特定の実施形態において、抗癌化合物は、アブラキサン、ドキソルビシン、パミドロン酸二ナトリウム、アナストロゾール、エキセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、トレミフェン、レトロゾール、トラスツズマブ、メゲストロールタモキシフェン（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、パクリタキセル、ドセタキセル、カペシタビン、酢酸ゴセレリン、及びゾレドロン酸から成る群から選択される。
【０２７７】
実施形態２６９：実施形態２６２−２６８の何れか１つに記載の方法であって、前記薬物は前記抗体に抱合される。
【０２７８】
実施形態２７０：実施形態２６２−２６８の何れか１つに記載の方法であって、前記薬物は、前記抗体に結合された脂質又はリポソーム中に含有される。
【０２７９】
実施形態２７１：実施形態２６２−２６８の何れか１つに記載の方法であって、前記薬物は、前記抗体に結合された高分子担体及び／又はナノ粒子担体中に含有される。
【０２８０】
実施形態２７２：実施形態２４９、及び２５１−２６０の方法であって、前記エフェクターは細胞毒素を含む。
【０２８１】
実施形態２７３：実施形態２７２の方法であって、前記細胞毒素は、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、リシン、アブリン、サポリン、及びチミジンキナーゼから成る群から選択される。
【０２８２】
実施形態２７４：実施形態２４９の方法であって、前記エフェクターは放射性核種を含む。
【０２８３】
実施形態２７５：実施形態２４９−２７４の何れか１つに記載の方法であって、前記免疫結合体又は抗体は、薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物中で投与される。
【０２８４】
実施形態２７６：実施形態２４９−２７５の何れか１つに記載の方法であって、前記投与はヒトへの投与を含む。
【０２８５】
実施形態２７７：実施形態２４９−２７５の何れか１つに記載の方法であって、前記投与は非ヒト哺乳動物への投与を含む。
【０２８６】
実施形態２７８：実施形態２４９−２７７の何れか１つに記載の方法であって、前記投与は非経口投与を含む。
【０２８７】
実施形態２７９：実施形態２４９−２７７の何れか１つに記載の方法であって、前記投与は腫瘍又は手術部位への投与を含む。
【０２８８】
実施形態２８０：実施形態２４９−２７９の何れか１つに記載の方法であって、前記免疫結合体は、手術及び／又は放射線療法のための補助療法として投与される。
【０２８９】
実施形態２８１：実施形態２４９−２７９の何れか１つに記載の方法であって、前記抗体及び／又は免疫結合体は、別の抗癌剤及び／又はホルモンと共に投与される。
【０２９０】
実施形態２８２：実施形態２８１の方法であって、前記抗体及び／又は免疫結合体は、アビラテロン及び／又はエンザルタミドと共に投与される。
【０２９１】
実施形態２８３：実施形態２８２の方法であって、前記細胞は前立腺癌細胞を含む。
【０２９２】
実施形態２８４：実施形態２８３の方法であって、前記前立腺癌細胞は、神経内分泌前立腺癌（ＮＥＰＣ）細胞である。
【０２９３】
実施形態２８５：実施形態２８３の方法であって、前記前立腺癌細胞は、アビラテロン（Ａｂｉ）又はエンザルタミド（Ｅｎｚ）に耐性のある転移性の去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）細胞を含む。
【０２９４】
実施形態２８６：ＣＤ４６を発現又は過剰発現する癌の癌細胞を検出する方法であって、該方法は、前記細胞を、検出可能なラベルに付けられた実施形態１−２１４の何れか１つに記載の抗体を含む免疫結合体に接触させる工程；及び、前記検出可能なラベルの存在及び／又は位置を検出する工程を含み、存在及び／又は位置は、癌細胞の存在及び／又は位置の指標である。
【０２９５】
実施形態２８７：実施形態２８６の方法であって、前記ラベルは、放射性ラベル、放射線不透過性ラベル、ＭＲＩラベル、ＰＥＴラベル、及びＳＰＥＣＴラベルから成る群から選択されたラベルを含む。
【０２９６】
実施形態２８８：実施形態２８６の方法であって、前記検出可能なラベルは、γ放射体、陽電子放射体、Ｘ線放射体、α放射体、及び蛍光放射体から成る群から選択される。
【０２９７】
実施形態２８９：実施形態２８６−２８８の何れか１つに記載の方法であって、前記癌細胞は、卵巣癌、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌、中皮腫、リンパ腫、肝臓癌、尿路上皮癌、胃癌、多発性骨髄腫、神経膠腫、神経芽腫、及び子宮頚癌から成る群から選択される。
【０２９８】
実施形態２９０：実施形態２８９の方法であって、前記癌細胞は前立腺癌細胞である。
【０２９９】
実施形態２９１：実施形態２９０の方法であって、前記癌細胞は去勢抵抗性前立腺癌の細胞である。
【０３００】
実施形態２９２：実施形態２８９の方法であって、前記癌細胞は多発性骨髄腫の細胞である。
【０３０１】
実施形態２９３：実施形態２８６−２９２の何れか１つに記載の方法であって、前記接触は、非ヒト哺乳動物への前記免疫結合体の投与を含む。
【０３０２】
実施形態２９４：実施形態２８６−２９２の何れか１つに記載の方法であって、前記接触は、ヒトへの前記免疫結合体の投与を含む。
【０３０３】
実施形態２９５：実施形態２８６−２９４の何れか１つに記載の方法であって、前記検出は、インビボでの前記ラベルの検出を含む。
【０３０４】
実施形態２９６：実施形態２９５の方法であって、前記検出は、Ｘ線、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、ＭＲＩ、及びＣＡＴから成る群から選択された検出方法の使用を含む。
【０３０５】
実施形態２９７：実施形態２８６−２９４の何れか１つに記載の方法であって、前記検出は、生検又は生検由来のサンプルにおけるエキソビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）での前記ラベルの検出を含む。
【０３０６】
実施形態２９８：実施形態１−２１４の何れか１つに記載の抗体又は該抗体のフラグメントをコード化する核酸。
【０３０７】
実施形態２９９：実施形態２９８の核酸を含む発現ベクター。
【０３０８】
実施形態３００：実施形態２９９の発現ベクターを含む細胞。
【０３０９】
＜定義＞
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すように、本明細書において互換的に使用される。この用語は、１以上のアミノ酸残基が、自然発生のアミノ酸ポリマーと同様に、対応する自然発生のアミノ酸の人工の化学アナログである、アミノ酸ポリマーに適用される。前記用語はまた、ポリペプチドを作成するアミノ酸を接合する、従来のペプチド結合上の変異体を含む。
【０３１０】
用語「核酸」、「オリゴヌクレオチド」、又は本明細書における文法上の同等物は、一緒に共有結合された少なくとも２つのヌクレオチドを指す。本発明の核酸は、単鎖又は二重鎖であることが好ましく、通常はリン酸ジエステル結合を含むが、場合によっては、以下に概説されるように、代替的なバックボーンを有し得る核酸アナログが含まれ、該バックボーンは例えば、ホスホルアミド（Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９（１０）：１９２５）及びその中の参考文献；Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  （１９７０）  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ３５：３８００；  Ｓｐｒｉｎｚｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７７）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ８１：  ５７９；  Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １４：  ３４８７；  Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  ８０５，  Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１０：  ４４７０；及びＰａｕｗｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｃｈｅｍｉｃａ  Ｓｃｒｉｐｔａ  ２６：  １４１９）、ホスホロチオエート（Ｍａｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １９：１４３７；及び米国特許第５，６４４，０４８号）、ジチオリン酸（Ｂｒｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１１  ：２３２１）、Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｐｈｏｐｈｏｒｏａｍｉｄｉｔｅ結合（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓを参照）、及びペプチド核酸のバックボーン並びに結合（Ｅｇｈｏｌｍ  （１９９２）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１４：１８９５；  Ｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．  ３１：  １００８；  Ｎｉｅｌｓｅｎ  （１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３６５：  ５６６；  Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３８０：  ２０７を参照）を含む。他のアナログ核酸は、陽性のバックボーン（Ｄｅｎｐｃｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９２：  ６０９７）、非イオン性のバックボーン（米国特許第５，３８６，０２３号、５，６３７，６８４号、５，６０２，２４０号、５，２１６，１４１号、及び４，４６９，８６３号；  Ａｎｇｅｗ．  （１９９１）  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔｌ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌｉｓｈ  ３０：  ４２３；  Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１０：４４７０；  Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  １３：１５９７；  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ２  ａｎｄ  ３，  ＡＳＣ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０，  “Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ”，  Ｅｄ．  Ｙ．Ｓ．  Ｓａｎｇｈｕｉ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｄａｎ  Ｃｏｏｋ；  Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４），  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．  ４：  ３９５；  Ｊｅｆｆｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＮＭＲ  ３４：１７；  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ３７：７４３  （１９９６））  、及び非リボースバックボーン（米国特許第５，２３５，０３３号及び５，０３４，５０６号、及びＣｈａｐｔｅｒｓ  ６  ａｎｄ  ７，  ＡＳＣ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０，  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｅｄ．  Ｙ．Ｓ．  Ｓａｎｇｈｕｉ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｄａｎ  Ｃｏｏｋに記載されるものを含む）を伴うものを含む。１以上の炭素環式の糖を含有する核酸も、核酸の定義内に含まれている（Ｊｅｎｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５），  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｒｅｖ．  ｐｐ１６９−１７６を参照）。様々な核酸アナログが、Ｒａｗｌｓ，  Ｃ  ＆  Ｅ  Ｎｅｗｓ  Ｊｕｎｅ  ２，  １９９７の３５ページに記載されている。リボース−リン酸塩のバックボーンのこのような修飾は、ラベルなど付加的な部分の付加を促進するために、又は、生理的環境におけるそのような分子の安定性と半減期を増大させるために、行われ得る。
【０３１１】
本明細書で使用されるように、用語「残基」は、天然のアミノ酸、合成アミノ酸、又は修飾されたアミノ酸を指す。
【０３１２】
本明細書で使用されるように、「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントにより実質的にコード化された、１以上のポリペプチドから成るタンパク質を指す。認識された免疫グロブリン遺伝子は、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子と同様に、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、及びミューの定常域遺伝子を含む。軽鎖は、カッパ又はラムダの何れかとして分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロンとして分類され、これらは次に、それぞれ免疫グロブリンの分類、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥを定義する。
【０３１３】
典型的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含むと知られている。各四量体は、同一の２組のポリペプチド鎖で構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０−７０ｋＤ）を有している。各鎖のＮ末端は、抗原認識の主な要因である約１００から１１０以上のアミノ酸の可変領域を定義する。用語、可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれこれら軽鎖及び重鎖を指す。
【０３１４】
抗体は、無傷の免疫グロブリンとして、又は、様々なペプチダーゼによる消化により生成された、多数の十分に特徴付けられたフラグメントとして存在する。故に、例えば、Ｆ（ａｂ）’２、それ自体がジスフィルド結合によりＶＨ−ＣＨ１に接合された軽鎖であるＦａｂの二量体を生成するために、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合の下で、ペプシンは抗体を消化する。Ｆ（ａｂ）’２は、ヒンジ領域におけるジスフィルド結合を壊して、それにより（Ｆａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に変換するように、穏やかな条件下で還元され得る。Ｆａｂ’単量体は根本的に、ヒンジ部の一部を備えたＦａｂである（他の抗体フラグメントのより詳細な記載については、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｗ．Ｅ．  Ｐａｕｌ，  ｅｄ．  ，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９３）を参照）。様々な抗体フラグメントが無傷の抗体の消化に関して定義される一方、当業者は、そのようなＦａｂ’フラグメントが、化学的に、又は組み換えＤＮＡ方法の利用により、新規に（ｄｅ  ｎｏｖｏ）合成され得ることを認識する。故に、本明細書で使用されるように、用語「抗体」はまた、全体の抗体の修飾により生成された抗体フラグメント、又は組み換えＤＮＡ方法を使用して新規に合成された抗体フラグメントの何れかを含む。特定の好ましい抗体は、単鎖抗体（単一のポリペプチド鎖として存在する抗体）、より好ましくは、連続的なポリペプチドを形成するために可変重鎖と可変軽鎖が一緒に（直接、又はペプチドリンカーを介して）接合される、単鎖Ｆｖ抗体（ｓＦｖ又はｓｃＦｖ）を含む。単鎖Ｆｖ抗体は、直接接合されるか又はペプチドコードリンカーにより接合される、ＶＨ及びＶＬのコード配列を含む核酸から発現され得る、共有結合されたＶＨ−ＶＬヘテロ二量体である。Ｈｕｓｔｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８５：  ５８７９−５８８３。ＶＨとＶＬは単一のポリペプチド鎖として各々に接続される一方で、ＶＨとＶＬのドメインは非共有結合的に付随する。繊維状ファージの表面上に発現される、第１の機能的抗体分子は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）であるが、代替的な発現の戦略も成功した。例えば、鎖（重鎖又は軽鎖）の１つがｇ３カプシドタンパク質に融合され、相補鎖が可溶性分子として周辺質に搬出される場合、Ｆａｂ分子はファージ上に表示され得る。２つの鎖は、同じ又は異なるレプリコンの上でコード化され得；重要な点は、各Ｆａｂ分子における２つの抗体鎖が翻訳後に集まり、二量体が、例えばｇ３ｐへの鎖の１つの結合を介してファージ粒子に組み込まれるということである（例えば、米国特許第５７３３７４３号を参照）。ｓｃＦｖ抗体、及び、自然に凝集されるが、抗体Ｖ領域から化学的に分離される軽ポリペプチド鎖及び重ポリペプチド鎖を、抗原結合部位の構造と実質的に同様である３次元に折り重なる分子に変換する、多くの他の構造は、当業者に既知である（例えば、米国特許第５，０９１，５１３号、５，１３２，４０５号、及び４，９５６，７７８号を参照）。特に好ましい抗体は、ファージ上に表示される全てを含む（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、及びジスルフィド結合Ｆｖ（��ｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８：  １３２３−１３３１）。
【０３１５】
本明細書で使用されるように、用語「特異的に結合する」は、生体分子（例えば、タンパク質、核酸、抗体など）を指す場合、分子（例えばタンパク質及び他の生物学的製剤）の不均一集団における生体分子の存在の決定因である結合反応を指す。故に、指定条件下で（例えば、抗体の場合にはイムノアッセイ条件、又は核酸の場合には厳重なハイブリダイゼーション条件）、指定されたリガンド又は抗体は、その特定の「標的」分子と結合すると共に、サンプル中の他の分子と大量に結合しない。
【０３１６】
本明細書に使用されるように、句「ＣＤ４６を発現する細胞の増殖の阻害」は、好ましくは抗体又は免疫結合体の不在下で増殖に関連してＣＤ４６を発現する細胞の増殖を減少、好ましくは統計的に著しく減少させる、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体又は免疫結合体の能力を指す。１つの実施形態において、ＣＤ４６を発現する細胞（例えば癌細胞）の増殖は、抗体、又はその抗原結合部分、或いは免疫結合体（対照）の不在下で測定された増殖に関連して、本明細書に記載される抗体、又はその抗原結合部分、或いは免疫結合体に細胞が接触させられる場合に、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は１００％減少され得る。細胞増殖は、当該技術分野で認識された技術を用いて分析され得、該技術は、（例えば、細胞タイターグローアッセイ（ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏｗ  ａｓｓａｙ）又はチミジン取込み反応を使用して）細胞分裂の割合、細胞分裂を受ける細胞集団内の細胞の画分、及び／又は末端の分化或いは細胞死による細胞集団からの細胞喪失の割合を測定する。
【０３１７】
本明細書に使用されるように、句「ＣＤ４６を発現する細胞の移動の阻害」は、好ましくは抗体の不在下で細胞の移動に関連してＣＤ４６を発現する細胞の移動を減少、好ましくは統計的に著しく減少させる、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体、又はその抗原結合部位、或いは免疫結合体の能力を指す。１つの実施形態において、ＣＤ４６を発現する細胞（例えば癌細胞）の移動は、抗体、又はその抗原結合部分、或いはその免疫結合体（対照）の不在下で測定された細胞移動に関連して、本明細書に記載される抗体、又はその抗原結合部分、或いはその免疫結合体に細胞が接触させられる場合に、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は１００％減少され得る。細胞移動は、当該技術分野で認識された技術を使用して分析され得る。様々な実施形態において、本明細書に記載される抗体及び／又はその免疫結合体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞（例えば、本明細書に記載されるような癌細胞）の移動を阻害することができることが考慮される。
【０３１８】
本明細書に使用されるように、抗体の「抗原結合部分」という用語（又は単に「抗体部分」）は、抗原（例えば、ＣＤ４６ドメイン１及び／又はドメイン２）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長の抗体のフラグメントによって実行され得ることが示されてきた。抗体の「抗原結合部分」という用語の中に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１のドメインから成る一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により結合される２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）；（ｉｉｉ）ＶＨとＣＨ１のドメインから成るＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬ及びＶＨのドメインから成るＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨ及びＶＬのドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインから成るｄＡｂフラグメント（例えば、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：  ５４４−５４６を参照）；（ｖｉｉ）ＶＨ又はＶＬのドメインから成るｄＡｂ；及び（ｖｉｉｉ）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）又は（ｉｘ）合成リンカーにより随意に接合され得る２以上の分離されたＣＤＲの組み合わせを含む。更に、Ｆｖフラグメント、ＶＬ及びＶＨの２つのドメインは、別個の遺伝子によりコード化され得るが、組み換え法を用いて、一価分子を形成するためにそれらをＶＬ及びＶの領域が対となる単一タンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：  ４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：  ５８７９−５８８３を参照）として作成することができる合成リンカーにより接合され得る。そのような単一鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」との用語の中に包含されるように意図される。これら抗体フラグメントは、当業者に既知の従来技術を使用して得られるものであり、フラグメントは、無傷の抗体であるのと同じ方法で、有用性のためにスクリーンされる。抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術、又は無傷の免疫グロブリンの酵素或いは化学開裂により生成され得る。
【０３１９】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用されるように、実質的に均質な抗体の集まりから得られる抗体を指し、即ち、個々の抗体は、少量で存在し得る可能な自然発生の変異体を除いては、同一である集まりを含む。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に向けられる。更に、異なる決定因子（エピトープ）に向けられる異なる抗体を典型的に含む、従来の（多クローン性）抗体の調製物とは対照的に、モノクローナル抗体は各々、抗原上にある単一の決定因子に向けられる。モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：  ４９５に記載されるようなハイブリドーマ方法、例えばＬｏｎｂｅｒｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：  ８５６−８５９に記載されるようなトランスジェニック動物、組み換えＤＮＡ方法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号を参照）、又は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：  ６２４−６２８，  ａｎｄ  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２２：  ５８１−５９７に記載される技術を用いたファージ抗体ライブラリの使用などの、当該技術分野で認識された任意の技術、及び本明細書に記載される技術を用いて調製することができる。モノクローナル抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、及びヒト化抗体を含むと共に、自然に生じるか又は組み換えにより生成され得る。
【０３２０】
用語「組み換え型抗体」は、（ａ）免疫グロブリン遺伝子（例えばヒト免疫グロブリン遺伝子）又はそこから調製されるハイブリドーマに関してトランスジェニックであるか又はトランス染色体（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）である動物（例えばマウス）から分離された抗体、（ｂ）例えばトランスフェクトーマから抗体を発現するために形質転換された宿主細胞から分離された抗体、（ｃ）組み換え型であり組み合わせ型のヒト抗体ライブラリ（例えば、ヒト抗体配列を含有する）から分離された抗体、及び（ｄ）他のＤＮＡ配列への免疫グロブリン遺伝子配列（例えばヒト免疫グロブリン遺伝子）のスプライシングに関与する任意の他の手段により調製、発現、作成、又は分離された抗体などの、組み換え手段により調製、発現、作成、又は分離される抗体を指す。そのような組み換え型抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する、可変領域及び定常領域を有し得る。しかし、特定の実施形態において、そのような組み換え型ヒト抗体は、インビトロでの突然変異誘発にさらすことができ、故に、組み換え型抗体のＶＨ及びＶＬの領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列Ｖ及びＶＬの配列に由来並びに関連する一方で、インビボでのヒト抗体生殖系列レパートリー内に自然には存在し得ない配列である。
【０３２１】
用語「キメラ免疫グロブリン」又は抗体は、その可変領域が第１の種に由来し、その定常領域が第２の種に由来する、免疫グロブリン又は抗体を指す。キメラ免疫グロブリン又は抗体は、異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントから、例えば遺伝子工学により構築され得る。
【０３２２】
用語「ヒト抗体」は、フレームワークとＣＤＲの両方の領域が、例えばＫａｂａｔらにより記載されるようなヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有している抗体を含むことが意図されている（Ｋａｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２を参照）。更に、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域はまた、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列（例えば、インビトロのランダム突然変異又は部位突然変異、或いは、インビボの体細胞突然変異により導入された突然変異）によってコード化されないアミノ酸残基を含み得る。しかし、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むようには意図されない。
【０３２３】
ヒト抗体は、アミノ酸残基、例えば、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコード化されない、活性を増強するアミノ酸残基で置き換えられた、少なくとも１以上のアミノ酸を有し得る。典型的には、ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の一部ではないアミノ酸残基で置き換えられた、２０までの位置を有し得る。特定の実施形態において、このような置換は、以下に詳しく説明されるようなＣＤＲ領域内にある。
【０３２４】
用語「ヒト化免疫グロブリン」又は「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリン又は抗体の鎖（即ち、少なくとも１つのヒト化軽鎖又は重鎖）を含む、免疫グロブリン又は抗体を指す。用語「ヒト化免疫グロブリン鎖」又は「ヒト化抗体鎖」（即ち、「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」又は「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）は、ヒト免疫グロブリン又は抗体から実質的に可変フレームワーク領域、及び非ヒト免疫グロブリン又は抗体から実質的に相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、より好ましくは３つのＣＤＲ）を含むと共に、更に定常領域（例えば、軽鎖の場合には少なくとも１つの定常領域又はその一部、及び好ましくは重鎖の場合には３つの定常領域）を含む、可変領域を有している、免疫グロブリン又は抗体の鎖（即ち、それぞれ軽鎖又は重鎖）を指す。用語「ヒト化可変領域」（例えば「ヒト化軽鎖可変領域」又は「ヒト化重鎖可変領域」）は、非ヒト免疫グロブリン又は抗体から実質的に、ヒト免疫グロブリン又は抗体、及び相補性決定領域（ＣＤＲ）から可変フレームワーク領域を実質的に含む、可変領域を指す。
【０３２５】
本明細書で使用されるように、「異種抗体」は、そのような抗体を生成するトランスジェニックな非ヒト生体又は植物に関連して定義される。
【０３２６】
「分離された抗体」は、本明細書で使用されるように、異なる抗原特異性を有している他の抗体を実質的に含まない抗体を指すように意図される（例えば、ＣＤ４６に特異的に結合する、分離された抗体は、ＣＤ４６以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。加えて、分離された抗体は典型的に、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない。１つの実施形態において、異なるＣＤ４６結合特異性を有している「分離された」モノクローナル抗体の組み合わせは、十分に定義された粗製物において組み合わされる。
【０３２７】
本明細書で使用されるように、「アイソタイプ」は、重鎖定常域遺伝子によりコード化される抗体の分類（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。１つの実施形態において、抗体又はその抗原結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤ、又はＩｇＥの抗体アイソタイプから選択されたアイソタイプである。幾つかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。他の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体はＩｇＧ２アイソタイプである。
【０３２８】
「抗原」は、抗体又はその抗原結合部分が結合する実体（例えば、タンパク様の実体又はペプチド）である。本発明の様々な実施形態において、抗原は、例えば細胞（例えばＣＤ４６陽性癌細胞）上に提示されるように、ＣＤ４６である。
【０３２９】
用語「エピトープ」又は「抗原決定基」は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する、抗原上の部位を指す。エピトープは、タンパク質のターシャリフォールディング（ｔｅｒｔｉａｒｙ  ｆｏｌｄｉｎｇ）によって並置される、接触アミノ酸又は非接触アミノ酸の両方から形成され得る。接触アミノ酸から形成されたエピトープは典型的に、変性溶媒にさらされた後に保持され、一方でターシャリフォールディングによって形成されたエピトープは典型的に、変性溶媒による処置後に無くなる。エピトープは典型的に、固有の空間構造において少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５のアミノ酸を含む。エピトープの空間構造を判定する方法は、例えば、Ｘ線結晶構造解析及び２次元核磁気共鳴法といった、当該技術分野における技術、及び本明細書に記載される技術を含む（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ６６，  Ｇ．  Ｅ．  Ｍｏｒｒｉｓ，  Ｅｄ．  （１９９６）を参照）。
【０３３０】
本明細書にはまた、本明細書に記載される、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ抗体として、同じ又は重複するエピトープに結合する抗体である。同じエピトープを認識する抗体は、例えば、標的抗原への別の抗体の結合を防ぐ１つの抗体の能力を示すことにより、イムノアッセイなどのルーチン技術、即ち競合結合アッセイを用いて確認され得る。競合的結合は、試験下の免疫グロブリンがＣＤ４６ドメイン１及び／又はドメイン２などの共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて、判定される。例えば、多数のタイプの競合結合測定法が知られ、例えば：固相直接的又は間接的放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接的又は間接的酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ，  ９：  ２４２を参照）；固相直接的ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８６）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３７：  ３６１４を参照）；固相直接的標識化アッセイ、固相直接的標識化サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）；例えば１２５Ｉラベルを用いた固相直接的標識ＲＩＡ（例えばＭｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８８）  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２５（１）：  ７を参照）；固相直接的ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：  ５４６）；及び直接的標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｓｃａｎｄ  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３２：  ７７）が知られている。典型的に、そのようなアッセイは、これら標識化されていない試験免疫グロブリン及び標識化された参照免疫グロブリンの何れかを有している、固体表面又は細胞に結合された精製抗原（例えばＣＤ４６ドメイン１及び／又はドメイン２）の使用を含む。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面又は細胞に結合されるラベルの量を判定することにより、測定され得る。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在している。通常、競合する抗体は、過剰に存在している場合、少なくとも５０−５５％、５５−６０％、６０−６５％、６５−７０％、７０−７５％以上、共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害する。
【０３３１】
本明細書で使用されるように、用語「特異的結合」、「特異的に結合する」、「選択的結合」、及び「選択的に結合する」は、抗体又はその抗原結合部分が、特定の抗原又はエピトープについて明らかな親和性を示すが、通常は他の抗原及びエピトープとの著しい交差反応性を示さないことを意味する。「明らかな」又は好ましい結合は、少なくとも（ＫＤ以下）１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、又は１０−１１Ｍの親和性による結合を含む。１０−９Ｍより大きな、好ましくは１０−１０Ｍより大きな親和性が、より好ましい。本明細書に明記されるものの値の中間も、本発明の範囲内にあるように意図され、好ましい結合親和性は、例えば１０−６Ｍから１０−１１Ｍ、好ましくは１０−７Ｍ又は１０−８Ｍから１０−１０Ｍといった範囲の親和性として示され得る。「著しい交差反応性を示さない」抗体は、望ましくない実体（例えば、望ましくないタンパク様の実体）に明らかに結合しない抗体である。例えば、１つの実施形態において、抗体又はその抗原結合部分は、ＣＤ４６（例えばドメイン１及び／又はドメイン２）タンパク質に特異的に結合するが、他の分子及び非ＣＤ４６タンパク質又はペプチドには著しく反応しない。特異的又は選択的結合は、例えば、スキャチャード解析及び／又は競合結合アッセイを含む、そのような結合を判定するための当該技術分野で認識された任意の手段に従って判定され得る。
【０３３２】
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用されるように、特定の抗体−抗原の相互作用、又は抗原に対する抗体の親和性の、解離平衡定数を指すように意図される。１つの実施形態において、本発明に係る抗体又はその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイを用いて測定されるように、５ｎＭ又はそれより優れた（即ち、それ以下）の親和性（ＫＤ）（例えば、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、又は１０ｎＭ以下）により、抗原（例えば、ＣＤ４６ドメイン１及び／又はドメイン２）に結合する。特定の実施形態において、本発明に係る抗体又はその抗原結合部分は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイを用いて測定されるように、５ｎＭ又はそれより優れた親和性（ＫＤ）（例えば４ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１ｎＭ以下）により、ＣＤ４６に結合する。他の実施形態において、抗体又はその抗原結合部分は、ＦＡＣＳにより生きた前立腺腫瘍細胞を用いて、約１０−１０Ｍ、又は１００×１０−１１Ｍ、又は１０×１０−１１Ｍ未満の親和性（ＫＤ）により抗原（例えばＣＤ４６）に結合する。
【０３３３】
用語「Ｋｏｆｆ」は、本明細書で使用されるように、抗体／抗原の複合体からの抗体の分離のためのオフレート定数を指すように意図される。
【０３３４】
用語「ＥＣ５０」は、本明細書で使用されるように、本明細書に記載される抗体、又はその抗原結合部分、或いは免疫結合体の濃度を指し、これは、最大反応の５０％、即ち最大反応と基線の間の中間である、インビトロ又はインビボのアッセイにおいて反応を誘導する。
【０３３５】
本明細書で使用されるように、対照に適用される用語「自然発生の」は、対照が自然に見出され得るという事実を指す。例えば、自然のソースから分離され得ると共に、研究所において人により意図的に修飾されていない、（ウィルスを含む）生体に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチドの配列は、自然発生である。
【０３３６】
用語「修飾すること（ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ）」又は「修飾（ｍｏｄｉｇｉｃａｔｉｏｎ）」は、本明細書で使用されるように、抗体又はその抗原結合部分において１以上のアミノ酸を変化させることを指すように意図される。変化は、１以上の位置にてアミノ酸を加える、置換する、又は削除することにより生じさせられ得る。変化は、ＰＣＲ突然変異誘発など既知の技術を使用して生じさせられ得る。例えば、幾つかの実施形態において、本発明の方法を用いて確認された抗体又はその抗原結合部分は、修飾され、それによりＣＤ４６に対する抗体又はその抗原結合部分の結合親和性が修飾され得る。
【０３３７】
特定の実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体の配列における「保存的なアミノ酸置換」、即ち、ヌクレオチド配列によりコード化されるか又はアミノ酸配列を含有している抗体の、抗原（例えばＣＤ４６）への結合を抑止しない、ヌクレオチド及びアミノ酸の配列の修飾が、考慮される。保存的なアミノ酸置換は、同じ分類のアミノ酸による１つの分類におけるアミノ酸の置換を含み、ここで、分類は、例えば標準のＤａｙｈｏｆｆ頻度交換マトリックス又はＢＬＯＳＵＭマトリックスにより判定されるように、自然に見出される相同タンパク質における、一般の物理化学的なアミノ酸側鎖特性及び高い置換頻度により定められる。アミノ酸側鎖は一般的に６つの分類に分けられ、以下を含む：分類Ｉ（Ｃｙｓ）；分類ＩＩ（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ）；分類ＩＩＩ（Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ）；分類ＩＶ（Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）；分類Ｖ（Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ）；及び分類ＶＩ（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）。例えば、Ａｓｎ、Ａｌｎ、又はＧｌｕなどの別の分類ＩＩＩの残基に関するＡｓｐの置換は、保存的置換である。故に、抗ＣＤ４６抗体において予測された非必須アミノ酸残基は、同じ分類からの別のアミノ酸残基で好ましくは置換される。抗原結合を排除しない、ヌクレオチドとアミノ酸の保存的置換を確認する方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３２：  １１８０−１１８７；  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  １２（１０）：  ８７９−８８４；及びＢｕｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９４：  ４１２−４１７を参照）。
【０３３８】
用語「非保存的なアミノ酸置換」は、別の分類からのアミノ酸による１つの分類におけるアミノ酸の置換を指し；例えば、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、又はＧｌｎなどの分類ＩＩＩの残基による、分類ＩＩの残基であるＡｌａの置換である。
【０３３９】
別の実施形態において、突然変異（保存的又は非保存的）が、飽和突然変異誘発などにより抗ＣＤ４６抗体コード配列の全て又は一部に沿って無作為に導入され得、結果として生じる修飾抗体は結合活性についてスクリーニングされ得る。
【０３４０】
「共通配列」は、関連配列のファミリーにおいて最も頻繁に生じるアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成される配列である（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，  Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ  （Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，  Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，  Ｇｅｒｍａｎｙ  １９８７）を参照）。タンパク質のファミリーにおいて、共通配列における各位置は、ファミリーにおいてその位置で最も頻繁に生じるアミノ酸により占領される。２つのアミノ酸が等しく頻繁に生じる場合、何れかが共通配列に含まれ得る。免疫グロブリンの「共通フレームワーク」は、共通免疫グロブリン配列におけるフレームワーク領域を指す。
【０３４１】
同様に、ＣＤＲのための共通配列は、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体のＣＤＲアミノ酸配列の最適な位置合わせにより導き出され得る。
【０３４２】
核酸について、用語「実質的に同族」は、２つの核酸、又はその指定された配列が、最適に位置合わせされ且つ比較された場合に、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、通常は少なくとも約９０％から９５％、より好ましくはヌクレオチドの少なくとも約９８％から９９．５％で、適切なヌクレオチドの挿入又は欠失と、同一であるということを指す。代替的に、セグメントが選択的なハイブリダイゼーション条件下で鎖の補体にハイブリダイズする場合、実質的な同族性が存在する。
【０３４３】
２つの配列間の百分率同一性は、２つの配列の最適な位置合わせのために導入の必要がある、ギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮して、配列により共有される同一の位置の数の関数である（即ち、％同族性＝同一の位置の＃／位置．時間．１００の総合の＃）。配列の比較、及び２つの配列間の百分率同一性の判定は、限定されない以下の例に記載されるように、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。
【０３４４】
２つのヌクレオチド配列間の百分率同一性は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、４０、５０、６０、７０、又は８０のギャップ重量、及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重量を用いた、ＧＣＧソフトウェアにおけるＧＡＰプログラムを使用して判定され得る。２つのヌクレオチド又はアミノ酸の配列の間の百分率同一性も、Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ  （１９８９）  ＣＡＢＩＯＳ，  ４：  １１−１７のアルゴリズムを使用して判定され得、それは、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長さのペナルティ、及び４のギャップペナルティを用いた、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。加えて、２つのアミノ酸配列間の百分率同一性は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ  （１９７０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８：  ４４４−４５３を用いて判定され得、それは、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス、１６、１４、１２、１０、８、又は４のギャップ重量、及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重量を用いた、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるギャッププログラムに組み込まれる。
【０３４５】
本明細書で考慮される核酸及びタンパク質の配列は更に、例えば関連する配列を確認するために公のデータベースに対して検索を行なうための、「クエリ配列」として使用され得る。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴとＸＢＬＡＳＴのプログラム（バージョン２．０）を使用して行なわれ得る。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子に相同するヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて行なわれ得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同するアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて行なわれ得る。比較目的のために間隔を空けた（ｇａｐｐｅｄ）位置合わせを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されているようにＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴとＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴのプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴとＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。
【０３４６】
頻繁に天然の配列（修飾された制限部位などを除く）に頻繁に存在する一方、ｃＤＮＡ、ゲノム、又はそれらの混合物の何れかに由来する、本明細書に記載される核酸組成物（例えば、抗ＣＤ４６抗体又は免疫結合体の全て或いは一部をコード化する核酸）は、異なる配列をもたらすように、標準技術に従って突然変異させられ得る。コード配列について、このような突然変異は、所望されるようにアミノ酸配列に影響を及ぼし得る。特に、天然のＶ、Ｄ、Ｊ、定数、スイッチ（ｓｗｉｔｃｈｅｓ）、及び本明細書に記載される他のそのような配列に実質的に相同する、又はそれらに由来するＤＮＡ配列が考慮される（「由来する（ｄｅｒｉｖｅｄ）」は、配列が別の配列と同一であるか又はそこから修飾されることを示す）。
【０３４７】
用語「操作自在に結合される」は、別の核酸配列との機能的な関係に入れられる核酸配列を指す。例えば、プレ配列又は分泌リーダーに関するＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのためにＤＮＡに操作自在に結合され；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に操作自在に結合され；又は、リボソーム結合部位は、翻訳を促進するように位置付けられる場合、コード配列に操作自在に結合される。通常、「操作自在に結合される」は、結合されるＤＮＡ配列が隣接し、分泌リーダーの場合には、隣接するとともに読み取りフェーズに存在していることを意味する。しかし、エンハンサーは隣接していなくてもよい。好都合な制限部位でのライゲーションにより結合が達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドのアダプター又はリンカーが、従来の実施に従って使用される。核酸は、別の核酸配列を持つ機能的な関係に入れられる場合に、「操作自在に結合される」。例えば、プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に操作自在に結合される。転写調節配列に関して、操作自在に結合されるとは、結合されるＤＮＡ配列が隣接し、２つのタンパク質コード領域を接合する必要がある場合には、リーディングフレームにおいて隣接していることを意味する。切り換え配列について、操作自在に結合されるとは、配列が切り換えによる組み換えを達成することができることを示す。
【０３４８】
用語「ベクター」は、本明細書に使用されるように、結合された別の核酸を運ぶことができる核酸分子を指すように意図される。１つのタイプのベクターは「プラスミド」であり、それは、付加的なＤＮＡセグメントがライゲートされ得る、環状の二本鎖ＤＮＡのループを指す。別のタイプのベクターはウィルスベクターであり、ここで、付加的なＤＮＡセグメントはウィルスゲノムへライゲートされ得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞の中で自律増殖が可能である（例えば、複製及びエピゾームの哺乳動物ベクターの細菌起源を有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、非エピゾームの哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入に際して宿主細胞のゲノムへ統合することができ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。更に、特定のベクターは、それらが操作自在に結合される遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、「組み換え型発現ベクター」（又は単に「組み換え型ベクター」）として本明細書で称されている。一般的に、組み換えＤＮＡ技術における有用性の発現ベクターは大抵、プラスミドの形態である。用語「プラスミド」及び「ベクター」は、互換的に使用され得る。しかし、本発明は、同等の機能を果たす、ウィルスベクター（例えば、複製欠損性レトロウィルス、アデノウィルス、及びアデノ随伴ウィルス）などの発現ベクターの、そのような他の形態を含むように意図される。
【０３４９】
本明細書で使用されるように、用語「組み換え型宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）は、発現ベクターが導入された細胞を指すように意図される。そのような用語は、特定の被験細胞だけでなく、そのような細胞の後代も指すように意図されることを、理解されたい。特定の修飾が、突然変異又は環境的な影響の何れかにより後世に生じ得るので、そのような後代は実際に、親細胞と同一ではないが、本明細書に使用されるような用語「宿主細胞」の範囲内には今なお含まれている。
【０３５０】
用語は「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、本明細書で使用されるように、本明細書に記載される治療手段又は予防手段を指す。「処置」の方法は、被験体（例えば、必要とする被験体）への、抗ＣＤ４６抗体、又は抗原結合部分、或いは本明細書に記載される抗体又は抗原結合の部分を含む免疫結合体の投与を利用する。特定の実施形態において、被験体は、疾患又は障害の重症度を予防、治癒、遅延、低減するために、疾患又は障害の１以上の症状或いは疾患又は障害の再発を改善するために、或いは、そのような処置が無い状態で予測される被験体の生存をかなり延ばすために、ＣＤ４６陽性の癌（例えば前立腺癌）と診断された及び／又はその処置を受けている被験体である。
【０３５１】
用語「癌」及び「癌性」は、典型的に未調節の細胞成長により特徴化される、哺乳動物における生理学的疾病を指すか、又はそれを説明するものである。ＣＤ４６陽性の癌は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞により特徴付けられた癌を指す。例示的なＣＤ４６の癌は、限定されないが、卵巣癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌、腎臓癌、及び膵臓癌を含む。
【０３５２】
用語「有効な量」は、本明細書で使用されるように、被験体への投与時に、本明細書に記載されるように、抗ＣＤ４６抗体又はその抗原結合部分或いはそれらの免疫結合体の量が、ＣＤ４６陽性細胞の成長及び／又は増殖に関連した疾患（例えば、ＣＤ４６陽性の癌）の処置、予後、又は診断を達成するのに十分であることを指す。治療上有効な量は、被験体、及び処置される疾患の状態、被験体の体重と年齢、疾患の状態の重症度、投与方法等に依存して変動し、それは当業者により容易に決定され得る。投与のための投与量は、例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体、及び／又はその抗原結合部分、及び／又は本明細書に記載されるそれらの免疫結合体の、約１ｎｇから約１０，０００ｍｇ、約５ｎｇから約９，５００ｍｇ、約１０ｎｇから約９，０００ｍｇ、約２０ｎｇから約８，５００ｍｇ、約３０ｎｇから約７，５００ｍｇ、約４０ｎｇから約７，０００ｍｇ、約５０ｎｇから約６，５００ｍｇ、約１００ｎｇから約６，０００ｍｇ、約２００ｎｇから約５，５００ｍｇ、約３００ｎｇから約５，０００ｍｇ、約４００ｎｇから約４，５００ｍｇ、約５００ｎｇから約４，０００ｍｇ、約１μｇから約３，５００ｍｇ、約５μｇから約３，０００ｍｇ、約１０μｇから約２，６００ｍｇ、約２０μｇから約２，５７５ｍｇ、約３０μｇから約２，５５０ｍｇ、約４０μｇから約２，５００ｍｇ、約５０μｇから約２，４７５ｍｇ、約１００μｇから約２，４５０ｍｇ、約２００μｇから約２，４２５ｍｇ、約３００μｇから約２，０００、約４００μｇから約１，１７５ｍｇ、約５００μｇから約１，１５０ｍｇ、約０．５μｇから約１，１２５ｍｇ、約１μｇから約１，１００ｍｇ、約１．２５μｇから約１，０７５ｍｇ、約１．５ｍｇから約１，０５０ｍｇ、約２．０ｍｇから約１，０２５ｍｇ、約２．５ｍｇから約１，０００ｍｇ、約３．０μｇから約９７５ｍｇ、約３．５μｇから約９５０ｍｇ、約４．０μｇから約９２５ｍｇ、約４．５μｇから約９００ｍｇ、約５μｇから約８７５ｍｇ、約１０μｇから約８５０ｍｇ、約２０μｇから約８２５ｍｇ、約３０μｇから約８００ｍｇ、約４０ｍｇから約７７５ｍｇ、約５０ｍｇから約７５０ｍｇ、約１００ｍｇから約７２５ｍｇ、約２００ｍｇから約７００ｍｇ、約３００ｍｇから約６７５ｍｇ、約４００ｍｇから約６５０ｍｇ、約５００ｍｇから約５２５ｍｇに及び得る投与量レジメンが、最適な治療応答をもたらすために調整され得る。有効な量はまた、抗体又はその抗原結合部分の任意の有毒又は不利益な効果（即ち、副作用）が、有益な効果により最小化され及び／又はそれらを上回るものである。
【０３５３】
用語「患者」は、予防的又は治療的な処置を受ける、ヒト及び他の哺乳動物の被験体を含む。
【０３５４】
本明細書で使用されるように、用語「被験体」は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。例えば、本発明の方法及び組成物は、癌を有する被験体を処置するために使用され得る。特定の実施形態において、被験体はヒトである。用語「非ヒト動物」は、脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、カウ、ニワトリ、両生類、爬虫類等の、哺乳動物及び非哺乳動物を全て含む。
【０３５５】
「エフェクター」は、その活性が細胞への送達及び／又は細胞での局在化に所望される、任意の分子又はその組み合わせを指す。エフェクターは、限定されないが、ラベル、細胞毒素、酵素、成長因子、転写因子、抗体、薬物などを含む。
【０３５６】
例えば癌細胞の「成長及び／又は増殖を阻害する」という句は、とりわけ、細胞のアポトーシス又は他の細胞致死機構を誘導すること、細胞の侵入を減少させること、細胞周期における特定の時点で細胞を止めることなどを含む。
【０３５７】
用語「免疫結合体」は、１以上のエフェクターに結合された１つの抗体、又は１以上のエフェクターに結合される複数の抗体を指す。用語「免疫結合体」は、抗体に化学的に抱合されたエフェクターを含むように意図され、同様に、抗体は、抗体（又はその一部）が、ペプチドエフェクター又はペプチドを含むエフェクターに直接、或いはリンカーを介して結合される、融合タンパク質として発現する。
【図面の簡単な説明】
【０３５８】
【図１Ａ】ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）、ＹＳ６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７）、ＹＳ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＹＳ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）、ＹＳ４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）、ＹＳ８（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、ＹＳ７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、ＹＳ９（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）、ＹＳ１０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）、ＹＳ１１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）、３Ｇ７ＨＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６）、３Ｇ７ＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）、３Ｇ７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）、ＳＢ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）、２Ｃ８（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）、及びＵＡ８ｋａｐｐａ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）に関するＶＨフレームワーク及びＣＤＲ領域を示す。
【図１Ｂ】ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２）、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３）、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４）、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５）、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ３Ｇ８）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）、ＹＳ６（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）、ＹＳ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）、ＹＳ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）、ＹＳ４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１）、ＹＳ８（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２）、ＹＳ７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３）、ＹＳ９（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４）、ＹＳ１０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５）、ＹＳ１１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）、３Ｇ７ＨＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）、３Ｇ７ＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）、３Ｇ７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）、ＳＢ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０）、２Ｃ８（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１）、及びＵＡ８ｋａｐｐａ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２）に関するＶＬフレームワーク及びＣＤＲ領域を示す。
【図２】Ｄｕ−１４５細胞上でＹＳ５  ＩｇＧ１  ＫＤの測定。ＹＳ５を４℃で一晩、Ｄｕ−１４５細胞によりインキュベートし、結合をＦＡＣＳにより分析した。Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を曲線適合し（ｃｕｒｖｅ−ｆｉｔ）、２．１９＋／−０．７３ｎＭの推定ＫＤ値を生成した。
【図３】Ｄｕ−１４５細胞上のＹＳ１２  ＩｇＧ１  ＫＤの測定。ＹＳ１２を４℃で一晩、Ｄｕ−１４５細胞によりインキュベートし、結合をＦＡＣＳにより分析した。Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用してＭＦＩ値を曲線適合し、０．０４３＋／−０．０１９ｎＭの推定ＫＤ値を生成した。
【図４】我々の抗ＣＤ４６抗体が、ヒト及びカニクイザル両方のＣＤ４６に結合する。ＦＡＣＳ分析を、ヒトＣＤ４６（左のパネル）及びカニクイザルＣＤ４６（右のパネル）の何れかでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞上で行った。ＹＳ５についての結果を示すが、我々の抗体は全て、ヒト及びカニクイザル両方のＣＤ４６に結合する。Ｃｔｒ  ＩｇＧ：非結合ヒトＩｇＧ１。Ｃｔｒ：二次抗体のみで染色したＣＨＯ。
【図５】ヒトＣＤ４６でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞上でのＹＳ５  ＫＤの測定。ＹＳ５を４℃で一晩、ＣＨＯ−ｈｕＣＤ４６細胞によりインキュベートし、結合をＦＡＣＳにより分析した。Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用してＭＦＩ値を曲線適合し、０．８６７＋／−０．２９９ｎＭの推定ＫＤ値を生成した。
【図６】カニクイザルＣＤ４６でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞上でのＹＳ５  ＫＤの測定。ＹＳ５を４℃で一晩、ＣＨＯ−ｃｙｎｏＣＤ４６細胞によりインキュベートし、結合をＦＡＣＳにより分析した。Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用してＭＦＩ値を曲線適合し、１．９５２＋／−０．５０８ｎＭの推定ＫＤ値を生成した。
【図７】競合アッセイによるエピトープのマッピング。競合体としてＵＡ２０Ｆｃを含む又は含まない、Ｄｕ１４５細胞に対するＦＡＣＳ結合。ＵＡ２０Ｆｃ対ＵＡ２０Ｆｃは、完全競合のための対照として機能する。ＹＳ５、ＹＳ１２、及び３Ｇ８（即ち、３Ｇ７  ａｋａ  ３Ｇ８）は、ＳＢ１ＨＧＮＹのものとは異なる競合パターンを示し、故に、重複しないエピトープを持つ２つの群を画定した。
【図８】Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ株麻疹ウィルスＨタンパク質との競合。過剰な組み換え型Ｈタンパク質−Ｆｃ融合の存在下又は不在下のＤｕ−１４５細胞に結合する抗体を、ＦＡＣＳにより測定した。Ｈタンパク質−Ｆｃ対Ｈタンパク質−Ｆｃを、正の調節（合計の競合）として行い、それに対してＭＦＩ値を標準化し、標準化された競合指標を生成した。負の対照（競合の欠如）として、非ＣＤ４６結合、Ｄｕ−１４５細胞結合抗体を使用した。
【図９】マクロピノサイトーシスによる内在化。ＹＳ５  ＩｇＧ１を、それぞれ４時間及び２４時間、マクロピノサイトーシス指標ＮＤ７０−ＴＲＩＴＣ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と共に転移性の去勢抵抗性前立腺癌細胞株Ｄｕ−１４５によりインキュベートした。共局在化を、Ｏｌｙｍｐｕｓ蛍光共焦点顕微鏡により分析した。
【図１０】治療抗体の評価のための、凍結組織のＦＤＡ標準パネル上での抗ＣＤ４６抗体の免疫組織化学研究。陰影は、最も強力な胎盤栄養膜細胞による陽性染色のレベルを示す。陰影の無いものにおけるシグナルは、弱い、又は検出できない、の何れかである。
【図１１】抗ＣＤ４６抗体薬物抱合体のＨＰＬＣ分析。ＹＳ５  ＩｇＧ１を、ｍｃ−ｖｃ−ｐａｂリンカーを介してモノメチルオーリスタチン（ＭＭＡＦ）に抱合し、ＨＩＣにより分析した。ピークより上の数字は、薬物分子の数を示す。平均で、約３つの薬物分子がＩｇＧ分子に抱合された。
【図１２】前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ−Ｃ４−２ｂに関する殺菌曲線（Ｋｉｌｌ  ｃｕｒｖｅ）。
【図１３】転移性の去勢抵抗性前立腺癌細胞株Ｄｕ−１４５上での抗ＣＤ４６  ＡＤＣ（ＹＳ５）の殺菌曲線。
【図１４】皮下の前立腺癌異種移植片モデルを用いた、抗ＣＤ４６（ＹＳ５）ＡＤＣによるインビボでの腫瘍の死滅。ＬＮＣａＰ−Ｃ４−２Ｂ細胞を、ＳＣＩＤマウスの皮下に注入した。５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣで１２日目に注射を開始し、４回の注射を施した（４−５日ごと）。抗ＣＤ４６  ＡＤＣの群におけるマウスを、処置後長期間にわたりモニタリングする。Ｎ＝６。
【図１５】ＣＤ４６は、多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ８２２６の上で高度に発現される。抗ＣＤ４６抗体は、前立腺癌（ＬＮＣａＰ）及び多発性骨髄腫細胞の両方に結合する一方、抗ＰＳＭＡ抗体Ｊ５９１は前立腺癌細胞にのみ結合する。
【図１６】抗ＣＤ４６  ＡＤＣ（ＹＳ５）はインビトロでＲＰＭＩ８２２６細胞を死滅させる。Ｃｔｒ  ＡＤＣ：ＭＭＡＦに抱合された非結合ヒトＩｇＧ１。
【図１７】インビボでの抗ＣＤ４６（ＹＳ５）ＡＤＣの活性。ＲＰＭＩ８２２６−Ｌｕｃ細胞を、ＮＳＧマウスにｉ．ｖ．注入して、播種性の腫瘍異種移植片を作成した。ＣＤ４６−ＭＭＡＦ：ＹＳ５  ＡＤＣ；ＩｇＧ−ＭＭＡＦ：対照ＡＤＣ。合計４回の注射を４日ごとに与えた。処置を１０日目に開始した。ボルテゾミブ処置群において３匹のマウスが、３１日目まで持ちこたえることが出来なかった。
【図１８】ＹＳ５  ＡＤＣ処置後の、ＲＰＭＩ８２２６異種移植片を伴うマウスに関する生存データのカプラン・マイヤー分析。
【図１９】大腸癌細胞株ＨＴ２９上での抗ＣＤ４６（ＹＳ５）ＡＤＣの殺菌曲線。
【図２０】ＭＭ１Ｓ異種移植片上での抗ＣＤ４６  ＡＤＣ（ＹＳ５）。
【図２１】ＡＤＣ処置後のオルト転移（ｏｒｔｈｏｍｅｔａｓｔａｔｉｃ）ＭＭ１．Ｓ異種移植片を有するマウスのカプラン・マイヤー分析。４ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ４６  ＡＤＣで処置したマウスの１００％が、実験の終わり（２１２日目）まで生存した。注射を移植後１０日目に開始した。抗ＣＤ４６を、４ｍｇ／ｋｇの１回量で、又は２つの投薬レベルで４回（０．８ｍｇ／ｋｇ及び４ｍｇ／ｋｇ）、注入した。対照ＡＤＣ（Ｃｔｒ  ＡＤＣ）を４ｍｇ／ｋｇで４回注入した。
【図２２】大腸癌細胞株ＨＴ２９上での抗ＣＤ４６（ＹＳ１２）ＡＤＣの殺菌曲線。
【図２３】大腸癌細胞株ＨＴ２９上での抗ＣＤ４６（ＳＢ１ＨＧＮＹ）ＡＤＣの殺菌曲線。
【図２４】膵癌細胞株ＭｉａＣａＰａ２上での抗ＣＤ４６  ＹＳ５  ＡＤＣの殺菌曲線。
【図２５】中皮種細胞株Ｍ２８上での抗ＣＤ４６  ＹＳ５  ＡＤＣの殺菌曲線。
【図２６】卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ３上での抗ＣＤ４６  ＹＳ５  ＡＤＣの殺菌曲線。
【図２７】抗ＣＤ４６  ＡＤＣはＢＰＨ−１細胞に対して効果が無い。ＢＰＨ−１細胞は、非常に低レベルのＣＤ４６を発現し、ＹＳ５  ＡＤＣによる影響を受けない。
【図２８】ＨＳ２７細胞上での抗ＣＤ４６（ＹＳ５）ＡＤＣ。Ｈｓ２７細胞を、１つのウェルにつき３，０００の細胞で蒔いた。
【図２９】抗ＣＤ４６  ＡＤＣ（ＹＳ５）は、標準のＣＤ３＋Ｔ細胞上で毒性をほとんど示さない。１０，０００のＣＤ３＋Ｔ細胞を、９６ウェルのプレートに蒔き、３７℃で９６時間、異なる濃度のＹＳ５  ＡＤＣでインキュベートした。細胞の生存率を、ＣＣＫ−８（Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８）  （Ｄｏｊｉｎｄｏ）により評価した。
【図３０】抗ＣＤ４６  ＡＤＣは、標準のＣＤ１４が枯渇したＰＢＭＣに対して効果が無い。１０，０００の細胞を、９６ウェルのプレートに蒔き、３７℃で９８時間、異なる濃度のＡＤＣでインキュベートした。細胞の生存率を、ＣＣＫ８計数キットにより判定した。
【図３１】ヒトＣＤ４６を発現するトランスジェニックマウスにおける抗ＣＤ４６  ＡＤＣの毒性の評価。６ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ４６及び対照ＡＤＣのｉ．ｖ．注射後、マウスを１４日目に、屠殺し、腫瘍臓器を組織学的検査のために採取した。
【図３２】ＣＤ４６  ＡＤＣが、大腿内部の前立腺癌異種移植片モデルにおいて有効であることを示す。ホタルルシフェラーゼレポーターを運ぶ、ｍＣＲＰＣ細胞株ＬｎＣａＰ−Ｃ４−２Ｂを、マウスの大腿骨に注入した。ＣＤ４６  ＡＤＣ（ＹＳ５−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦ）を、７日目に、４日毎に、合計４回注入した。マウスを処置後６５日目までモニタリングした。Ｃｔｒ  ＡＤＣ：ＭＭＡＦ（ｃｔｒ  ＩｇＧ−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦ）に抱合された非結合ＩｇＧ１。
【図３３】去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）におけるＣＤ４６発現を示す。前立腺組織試料を、ホルモン遮断に耐性をもつようになった患者から得た。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。
【図３４】ｍＣＲＰＣの骨転移を示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。
【図３５】ｍＣＲＰＣのリンパ節転移を示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。
【図３６】ｍＣＲＰＣの膀胱転移を示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。
【図３７】ＣＤ４６が、前立腺癌神経内分泌細胞株Ｈ６６０により高度に発現されることを示す。左のパネル：ＦＡＣＳ分析。Ｃｔｒ：非結合ｍＡｂ。右のパネル：ウエスタンブロット分析が、ＣＤ４６発現、及びＨ６６０細胞による神経内分泌マーカーＮＳＥの発現を確認する。
【図３８】前立腺癌神経内分泌細胞株Ｈ６６０による抗ＣＤ４６抗体の内在化を示す。ＹＳ５  ＩｇＧ１を一晩、Ｈ６６０細胞によりしインキュベートした。細胞を固定し、浸透させ、染色し、共焦点顕微鏡により画像化した。単一の共焦点の切片を示す。抗ＣＤ４６抗体を内在化すると共に、ＬＡＭＰ１、リソソームマーカーと共局在化させる。
【図３９】ＣＤ４６  ＡＤＣがＨ６６０細胞を死滅させることを示す。異なる濃度のＣＤ４６  ＡＤＣ（ＹＳ５−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦ）を、３７℃で７日間、神経内分泌細胞株Ｈ６６０によりインキュベートした。カルセインＡＭアッセイを使用し、生存率を評価した。Ｃｔｒ  ＡＤＣ：非結合ＩｇＧ１−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦ。
【図４０】７日間の１０μＭのアビラテロン（ａｂｉ）による転移性の去勢抵抗性前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ−Ｃ４−２Ｂの処置が、ＦＡＣＳにより測定されるように細胞表面ＣＤ４６発現のアップレギュレーションを引き起こしたことを示す。ＭＦＩ：平均蛍光強度。
【図４１】アビラテロン（Ａｂｉ）で処置したＬＮＣａＰ  Ｃ４−２Ｂ細胞がＣＤ４６  ＡＤＣに対してより敏感であることを示す。ＬＮＣａＰ−Ｃ４−２Ｂ細胞を７日間、アビラテロンでインキュベートし、洗浄し、更に９６時間、アビラテロンを含んでいない培地においてＣＤ４６  ＡＤＣでインキュベートし続けた。Ｃ４−２Ｂ＿ＣＤ４６  ＡＤＣ：ＬＮＣａＰ  Ｃ４−２Ｂ細胞を、アビラテロン（ＥＣ５０＝１６９ｐＭ）へ事前に暴露することなく、ＣＤ４６  ＡＤＣ（ＹＳ５−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦ）でインキュベートした。Ｃ４−２Ｂ  ＡＢＩ＿ＣＤ４６  ＡＤＣ：アビラテロンへ事前に暴露させたＬＮＣａＰ  Ｃ４−２Ｂ細胞を、ＣＤ４６  ＡＤＣ（ＥＣ５０＝２１ｐＭ）でインキュベートした。Ｃｔｒ  ＡＤＣ：ＭＭＡＦに抱合された非結合ＩｇＧ１。
【図４２】エンザルタミド（ＥＮＺ）による処置後の神経内分泌細胞株Ｈ６６０上での細胞表面ＣＤ４６のアップレギュレーションを示す。Ｈ６６０細胞を７日間、１０μＭのエンザルタミドで処置し、細胞表面抗原発現のためにＦＡＣＳにより分析した。ＣＤ４６はＨ６６０により高度に発現される一方、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）はかろうじて検出可能である。更に、エンザルタミドへの曝露は、腫瘍細胞表面上でのＣＤ４６発現のアップレギュレーションを引き起こした。ＭＦＩ：中間の蛍光強度。
【図４３】ＣＤ４６が原発性大腸癌において高度に発現されることを示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。２つのレベルの拡大（４倍及び２０倍）でデジタル顕微鏡を使用して画像を撮影した。
【図４４】ＣＤ４６が、肝臓に転移した原発性大腸癌において高度に発現されることを示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。２つのレベルの拡大（４倍及び２０倍）でデジタル顕微鏡を使用して画像を撮影した。
【図４５】ＣＤ４６が、リンパ節に転移した原発性大腸癌において高度に発現されることを示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。２つのレベルの拡大（４倍及び２０倍）でデジタル顕微鏡を使用して画像を撮影した。
【図４６】ＣＤ４６が、膀胱に転移した原発性大腸癌において高度に発現されることを示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。２つのレベルの拡大（４倍及び２０倍）でデジタル顕微鏡を使用して画像を撮影した。
【図４７】ＣＤ４６が、中皮腫におけるＣＤ４６染色の免疫組織化学分析により実証されるように、中皮腫において高度に発現されることを示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。
【図４８】ＣＤ４６が膵臓癌において高度に発現されることを示す。矢印は、腫瘍細胞を示す（選択的な腫瘍領域のみを示す）。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。
【図４９】ＣＤ４６が、ＧＢＭ及び正常脳におけるＣＤ４６染色の免疫組織化学分析により示されるように、多形性膠芽腫（ＧＢＭ）により過剰発現されることを示す。ＣＤ４６染色は正常ヒト脳において観察されなかったが、強力な染色はＧＢＭ試料中で観察された。Ｈ−２９４ウサギ抗ヒトＣＤ４６抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を、染色、そしてその後のＥｎｖｉｓｉｏｎ＋システム（Ｄａｋｏ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）による検出のために使用した。
【図５０】ＣＤ４６  ＡＤＣによる中皮腫（Ｍ２８）異種移植片成長のインビボでの阻害を示す。ＹＳ５−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦを、合計５回、５ｍｇ／ｋｇで３−４日ごとに注入した（矢印により示される）。腫瘍容量をキャリパにより測定した。ＹＳＣ１０は、対照非結合ヒトＩｇＧ１である。
【発明を実施するための形態】
【０３５９】
様々な実施形態において、多くの新たな抗ＣＤ４６抗体が提供される。本明細書に記載される原型の抗体は、ファージ及び酵母菌両方の表示技術を用いて、細胞表面と組み換え型ＣＤ４６上での選択の組み合わせにより確認された。これら抗体は、架橋を必要とすることなく、腫瘍選択的なマクロピノサイトーシス経路により内在化されると共に、リソソームに局在化して、抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）、及び細胞内のペイロード放出を利用する他の標的治療医薬の発達にとってそれらを十分に適したものとする。
【０３６０】
本明細書に記載される抗体は、ＣＤ４６分子のドメイン１及び２に結合するが、主な補体結合ドメイン３及び４には結合せず、故に標準の補体カスケードを直接遮断することはない。
【０３６１】
細かいエピトープのマッピングはまた、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体と、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７６７０４、及び同時係争中の米国出願ＵＳ１４／２０５，１０１それぞれに記載されるＵＡ２０及び２Ｂ１０の抗体との間の抗原接触部位における差異を示した。カニクイザルＣＤ４６  ｃＤＮＡでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞に対する試験を行い、我々の抗ＣＤ４６抗体が、ヒトとカニクイザルの間に保存されたエピトープに結合することが見出され、それにより、規制上の毒性研究に適切な種を確認した。
【０３６２】
ＦＤＡに承認された凍結ヒト組織パネルを治療抗体評価のために用いて、本明細書に記載される抗体により結合されるＣＤ４６エピトープが、胎盤栄養膜細胞及びより劣った程度で前立腺上皮細胞を除いて、組織が事実上無い状態で、低レベルで発現されることが見出された。反対に、ＣＤ４６は、前立腺癌、多発性骨髄腫、大腸癌、膵臓癌、中皮腫、肺癌、乳癌、卵巣癌、肝臓癌、神経膠腫、神経芽腫などを含むがこれらに限定されない様々な腫瘍により過剰発現されることが、判定された。
【０３６３】
ＣＤ４６が染色体１ｑ３２．２上に位置し、１ｑの利得がヒトの癌の広域スペクトルにおいて観察されたとすれば、それは、様々な悪性腫瘍の抗体療法の発達に優れた標的となる可能性がある。本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体を利用する抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）が構築され、それらは、転移性の去勢抵抗性前立腺癌、多発性骨髄腫、大腸癌、中皮腫、卵巣癌などを含むがこれらに限定されない、インビトロでのＣＤ４６過剰発現癌細胞株を死滅させることが見出された。最も重要なことに、本明細書に記載される抗ＣＤ４６  ＡＤＣは、強力なインビボの抗腫瘍活性を示し、去勢抵抗性前立腺癌及び多発性骨髄腫の異種移植片モデルにおいて腫瘍負荷を大いに低減した。この強力な抗腫瘍活性は、同様に他のＣＤ４６過剰発現腫瘍モデルにも適用可能であると考えられる。故に、本明細書に記載される研究は、標的治療の発達に有用な腫瘍細胞表面抗原としてＣＤ４６を検証する。加えて、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体は、患者の層別化及び処置成果のモニタリングのためのコンパニオン診断薬に使用され得る。
【０３６４】
これらの発見を考慮して、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合するとともに、この細胞へと内在化されると考えられる。ＣＤ４６が、卵巣癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、結腸癌、腎臓癌、膵臓癌、中皮腫、リンパ腫、肝臓癌、尿路上皮癌、胃癌、及び子宮頚癌を含むがこれらに限定されない多くの癌により発現／過剰発現されると、これら抗体は、これら及び他のＣＤ４６陽性の癌細胞を標的とすると共に、この癌細胞へと内在化するために使用され得る。
【０３６５】
特定の実施形態において、これら抗体は、細胞（特に癌細胞）に対するそれらの内的な細胞毒性及び／又は細胞分裂阻害性及び／又は抗増殖性の活性のために結合されたエフェクターを必要とすること無く、使用され得る。特定の実施形態において、これら抗体は、１以上のエフェクター（例えば、第２抗体、検出可能なラベル、細胞毒素、薬物を含有するリポソーム、放射性核種、薬物、プロドラッグ、ウィルス粒子、サイトカイン、キレートなど）に結合することができ、それにより、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する癌細胞に特異的に結合するとともにこの癌細胞へと内在化する免疫結合体を形成する。特定の実施形態において、複数のエフェクターが単一の抗体に結合され、又は特定の実施形態において、複数の抗体は単一のエフェクターに結合され、或いは特定の実施形態において、単一の抗体は単一の抗体に結合される。
【０３６６】
様々な実施形態において、これら抗体及び／又は免疫結合体の使用の方法が提供される。特定の実施形態において、前記方法は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞（例えば、卵巣癌細胞、乳癌細胞、肺癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、腎臓癌細胞、膵癌細胞などの癌細胞）を、構築物に接触させる工程であって、その結果として細胞への構築物（又はその一部）の内在化をもたらし、それにより標的細胞にエフェクターを送達する、工程を含む。特定の実施形態において、「接触させる工程」は、必要とする被験体（例えば、ヒト又は非ヒト哺乳動物）に抗体又は構築物を投与する工程を含む。
【０３６７】
＜ＣＤ４６を結合する抗体＞
抗体は、ＣＤ４６、特にドメイン１及び／又は２に特異的に結合するとともに、例えば癌細胞が組織微小環境に存在する場合にインサイツで前立腺（及び他のＣＤ４６陽性の癌細胞）により内在化されることを発見された。上記に示されるように、そのような抗体は、単独での使用時に、又は「標的エフェクター」を形成するためにエフェクターに結合された時に、癌を標的とするのに有用である。
【０３６８】
従って、特定の実施形態において、ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、マクロピノサイトーシスを介してＣＤ４６（例えば、前立腺癌細胞）を発現又は過剰発現する細胞に内在化される、分離された抗体が提供される。様々な実施形態において、抗体は、ＣＤ４６のドメイン１及び／又はドメイン２に結合する。様々な実施形態において、抗体は、ＣＤ４６のドメイン３及び／又はドメイン４に結合しない。
【０３６９】
ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａ（例えば表１を参照）として本明細書で指定される抗体は、例示的な原型の抗体である。特定の実施形態において、抗体の１以上のＶＬ  ＣＤＲ１及び／又はＶＬ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＬ  ＣＤＲ３、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ１及び／又はＶＨ  ＣＤＲ２、及び／又はＶＨ  ＣＤＲ３を含む抗体が、熟考される。特定の実施形態において、抗体の１以上のＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインを含む抗体が、熟考される。
【０３７０】
また、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上とＣＤ４６にて結合するために競合する抗体も熟考される。
【０３７１】
ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列を、表１に示す（実施例１を参照）。
【０３７２】
【表１−１】
2020178700.tif 000003
【０３７３】
【表１−２】
2020178700.tif 000004
【０３７４】
【表１−３】
2020178700.tif 000005
【０３７５】
様々な実施形態において、本明細書で考慮される抗体は、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７６７０４（ＷＯ２００９／０３９１９２）に記載される抗体３０５１．１、Ｇ１２ＦＣ３、Ｍ６ｃ４２ｂ、４Ｆ３ＹＷ、Ｍ４０ｐｒ１４６、ＵＡ２０、ＵＡ８、５８５ＩＩ４１、５８５ＩＩ４１．１、５８５ＩＩ５６、３０７６、３０５１、Ｍ４９Ｒ、ＲＣＩ−１４、ＩＩ７９＿４、ＩＩ７９＿３、Ｔ５ＩＩ−４Ｂ．１、Ｔ５ＩＩ−４Ｂ．２、ＲＣＩ−１１、ＲＣＩ−２０、ＣＩ−１１Ａ、ＣＩ−１４Ａ、Ｓ９５−２、及び／又はｍＰＡ７抗体の、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び／又は３つのＶＬ  ＣＤＲで構成される抗体を明確に除外する。これら抗体のＶＨ及びＶＬの鎖のアミノ酸配列、及びこれらドメインを含むＣＤＲは、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７６７０４に示され、これらドメインのアミノ酸配列を以下の表２に複製する。
【０３７６】
【表２−１】
2020178700.tif 000006
【０３７７】
【表２−２】
2020178700.tif 000007
【０３７８】
【表２−３】
2020178700.tif 000008
【０３７９】
ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａの抗体について提供されるアミノ酸配列を用いて、多数の抗体形態が、例えば以下に記載されるように調製され得る。そのような形態は、限定されないが、実質的に無傷の（例えば、完全長の）免疫グロブリン（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧなど）、抗体フラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、（Ｆａｂ’）３、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディなど）、単鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、ユニボディ（ｕｎｉｂｏｄｙ）、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）などを含む。
【０３８０】
抗体が単鎖抗体である場合、そのような抗体を含むＶＨ及びＶＬのドメインは、直接一緒に、又はペプチドリンカーにより接合され得る。例示的なペプチドリンカーは、限定されないが、ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７）、ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）、ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９）、ＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０）、ＳＧＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１）、ＧＧＧＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）、ＶＰＧＶ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３）、ＶＰＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４）、ＧＶＰＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５）、ＧＶＧ  ＶＰ  ＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６）、ＶＰ  ＧＶＧ  ＶＰ  ＧＶＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７７）、ＧＧＳＳＲＳＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８）、及びＧＧＳＳＲＳＳＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９）などを含む。
【０３８１】
上記に示されるように、様々な実施形態において、抗体は、例えばＣＤ４６（例えば、ドメイン１及び／又は２）に特異的に結合する。典型的に、本明細書で考慮される抗体は、ＤＵ１４５細胞、ＰＣ３細胞、及びＬｎＣａＰ細胞から成る群から選択された細胞株の細胞を含むがこれらに限定されない、前立腺癌細胞に特異的に結合する。特定の実施形態において、抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定された時に、約５ｎＭより大きな親和性（ＫＤ未満）を持つ前立腺腫瘍細胞に結合する。特定の実施形態において、親和性は、約１ｎＭ、又は約１００ｐＭ、又は約５０ｐＭ、又は約１０ｐＭ、又は約１ｐＭよりも大きい（ＫＤ未満）。
【０３８２】
本明細書で提供される配列情報を用いて、例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａを含むＣＤＲの１以上を含む抗体、又はこれら抗体のＶＨ及び／又はＶＬのドメインを含む抗体は、以下に記載されるように、当業者に周知の標準方法（例えば化学合成方法及び／又は組み換え発現方法）を使用して容易に調製され得る。
【０３８３】
加えて、他の「関連する」前立腺癌特異抗体は、同じエピトープ（例えば、ＣＤ４４６、及び／又はＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞、例えば前立腺癌細胞に結合するために、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体の１以上と競合する）に結合する抗体についてスクリーニングすることにより、及び／又は、本明細書で確認されるＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体を修飾して、修飾した抗体のライブラリを生成し、次いで、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞、例えば前立腺癌細胞への結合及び／又は内在化の改善のためにライブラリにおける抗体を再スクリーニングすることにより、確認され得る。
【０３８４】
＜ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａと同じＣＤ４６エピトープに結合する他の抗体の確認＞
有用な抗体標的としてＣＤ４６、具体的にドメイン１及び／又は２を確認し、且つ有用な原型の抗体としてＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及びＵＡ８ｋａｐｐａの抗体を確認すると、ＣＤ４６に結合し、好ましくはマクロピノサイトーシスを介して内在化される、他の「関連する」抗体は、ＣＤ４６のドメイン１及び／又は２に結合する抗体についてスクリーニングすることにより、例えばＣＤ４６のドメイン１及び／又は２に特異的に結合する抗体（例えばモノクローナル抗体）を上昇させる（ｒａｉｓｉｎｇ）ことにより、容易に確認され得る。付加的に又は代替的に、ＣＤ４６に結合すると共にマクロピノサイトーシスにより内在化される他の抗体は、例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａに結合されるエピトープにて、抗体ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上と交差反応する抗体について、及び／又は、前立腺癌細胞（例えばＣａＰ細胞、ＰＣ３細胞など）への結合のためにＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上と、及び／又はＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体に対して上昇されたイディオタイプの抗体と交差反応する抗体について、スクリーニングすることにより確認され得る。
【０３８５】
＜モノクローナル抗体＞
ＣＤ４６のドメイン１及び／又は２に結合し、好ましくはＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合されるエピトープに結合する、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  （１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：  ４９５に記載される標準体細胞ハイブリダイゼーション技術、Ｂリンパ球のウィルス又は腫瘍化転換、或いはヒト抗体遺伝子のライブラリを用いるファージディスプレイ技術等の、様々な既知の技術を用いて生成され得る。特定の実施形態において、抗体は完全なヒトモノクローナル抗体である。
【０３８６】
従って、１つの実施形態において、ハイブリドーマ方法が、ＣＤ４６に結合する、好ましくはＣＤ４６のドメイン１及び／又はドメイン２に結合する抗体の生成のために使用される。この方法において、マウス又は他の適切な宿主動物が、免疫化に使用される抗原に特異的に結合する工程を生成する又はその生成が可能であるリンパ球を誘発するために、適切な抗原で免疫化され得る。代替的に、リンパ球はインビトロで免疫化され得る。その後、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコールなどの適切な融着剤を用いて、骨髄腫細胞に融合され得る。ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地を、抗原に向けられたモノクローナル抗体の産生のために分析する。所望の特異性、親和性、及び／又は活性を持つ抗体を生成するハイブリドーマ細胞を確認した後、クローンを、限界希釈手順によりサブクローン化し、標準方法により成長させてもよい（同文献（Ｉｄ．））。この目的に適切な培養培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物の腹水腫瘍のようにインビボで成長し得る。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡセファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、又は親和クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製法によって、場用培地、腹水、又は血清から分離され得る。
【０３８７】
別の実施形態において、ＣＤ４６のドメイン１及び／又は２に結合する抗体及び抗体部分は、例えば次のものに記載される技術を用いて生成される抗体ファージライブラリから分離され得る：ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４８：５５２−５５４，  Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：６２４−６２８，  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１−５９７，  Ｈｏｅｔ  ｅｔ  ａｌ  （２００５）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ２３：３４４−３４８；Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，２２３，４０９号；第５，４０３，４８４号；及び第５，５７１，６９８号；Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許出願第５，４２７，９０８号及び第５，５８０，７１７号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許出願第５，９６９，１０８号及び第６，１７２，１９７号；及びＧｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許出願第５，８８５，７９３号；第６，５２１，４０４号；第６，５４４，７３１号；第６，５５５，３１３号；第６，５８２，９１５号及び第６，５９３，０８１号。加えて、チェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １０：７７９−７８３）、同様に、非常に大きなファージライブラリを構築するための戦略としての組み合わせの感染及びインビボでの組み換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ．  Ｒｅｓ．，  ２１：  ２２６５−２２６６）による、高親和性（ｎＭ範囲）ヒト化抗体の生成も、使用され得る。
【０３８８】
特定の実施形態において、ＣＤ４６に結合し、好ましくはＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合されるエピトープに結合する、モノクローナル抗体又はその抗原結合部分は、上述のＨｏｅｔ  ｅｔ  ａｌ．に記載されるファージディスプレイ技術を用いて生成される。この技術は、ヒトドナーから分離された免疫グロブリン配列の特有の組み合わせを有するとともに、重鎖ＣＤＲに合成多様性を有している、ヒトＦａｂライブラリの生成に関与する。ライブラリは後に、ＣＤ４６に結合する、好ましくはＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合するために競合する、Ｆａｂについてスクリーニングされる。
【０３８９】
また別の実施形態において、ＣＤ４６に向けられ、好ましくはＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合されるエピトープを含む、ヒトモノクローナル抗体は、マウスの免疫系よりもヒトの免疫系の部分を保因する、トランスジェニック又はトランス染色（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍｉｃ）マウスを用いて、生成され得る（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：  ８５６−８５９；  Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，  （１９９５）  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３：  ６５−９３，  Ｈａｒｄｉｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ  （１９９５）  Ａｎｎ．  ＮＹ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ７６４：  ５３６−５４６、及び、全てＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｋａｙによる米国特許第５，５４５，８０６号；第５，５６９，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；第５，７８９，６５０号；第５，８７７，３９７号；第５，６６１，０１６号；第５，８１４，３１８号；第５，８７４，２９９号；及び第５，７７０，４２９号；Ｓｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，５４５，８０７号；全てＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  ＫａｙによるＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０３９１８、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９７／１３８５２、ＷＯ９８／２４８８４、及びＷＯ９９／４５９６２；及びＫｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４を参照）。
【０３９０】
別の実施形態において、ＣＤ４６に向けられ、好ましくはＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合されるエピトープに結合する、ヒト抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖トランスクロモソーム（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）を保因するマウスなどの、導入遺伝子及びトランスクロモソーム上にヒト免疫グロブリン配列を保因するマウスを用いて、上昇され得る（例えば、Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ公開ＷＯ０２／４３４７８を参照）。
【０３９１】
ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的なトランスジェニック動物系は、当該技術分野で利用可能であり、本発明の抗ＣＤ４６抗体を上昇させるために使用され得る。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，  Ｉｎｃ．）と称される代替的なトランスジェニックシステムが使用され得；そのようなマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌによる米国特許第５，９３９，５９８号；第６，０７５，１８１号；第６，１１４，５９８号；第６，１５０，５８４号、及び第６，１６２，９６３号に記載される。
【０３９２】
ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的なトランスクロモソーム動物系は、当該技術分野で利用可能であり、本明細書で考慮される抗ＣＤ４６抗体を上昇させるために使用され得る。例えば、ヒト重鎖トランスクロモソーム及びヒト軽鎖トランスクロモソームの両方を保因するマウスが、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７：  ７２２−７２７に記載されるように使用され得る。更に、ヒト重鎖及び軽鎖のトランスクロモソームを保因するカウが、当該技術分野で説明され（例えば、Ｋｕｒｏｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０：  ８８９−８９４）、抗ＣＤ４６  ＣＣＰ１抗体を上昇させるために使用され得る。
【０３９３】
また別の実施形態において、ＣＤ４６に特異的に結合し、好ましくはＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合されるエピトープに結合する抗体が、遺伝子導入植物及び／又は培養された植物細胞（例えばタバコ、トウモロコシ、及びウキクサなど）を用いて調製され得る。例えば、抗体又はその抗原結合部分を発現するトランスジェニックなタバコの葉が、例えば誘導プロモーターを用いることによりそのような抗体を生成するために使用され得る（例えば、Ｃｒａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｃｕｒｒ．  Ｔｏｐ．  Ｍｉｃｒｏｂｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４０：  ９５−１１８を参照）。また、トランスジェニックなトウモロコシが、そのような抗体及びその抗原結合部分を発現するために使用され得る（例えば、Ｈｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ａｄｖ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．  ４６４：  １２７−１４７を参照）。抗体はまた、例えばタバコの種子及びジャガイモの塊茎を用いて、単鎖抗体（ｓｃＦｖ’ｓ）などの抗体部分を含む遺伝子導入植物種子から、大量に生成され得る（例えば、Ｃｏｎｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３８：  １０１−１０９を参照）。植物中に抗体又は抗原結合部分を生成する方法はまた、例えばＦｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｐｐｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３０：  ９９−１０８，  Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １３：  ５２２−５２７，  Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １０９：  ３４１−３４６；  Ｗｈｉｔｅｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓ．  ２２：  ９４０−９４４，  及び米国特許第６，０４０，４９８号並びに第６，８１５，１８４号に見出すことができる。
【０３９４】
ＣＤ４６に結合する、好ましくは本明細書に開示されるものを含む任意の技術を用いて調製されたＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合されるエピトープに結合する、モノクローナル抗体又はその一部の結合特異性は、免疫沈降、又は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）或いは酵素標識免疫定量法（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロの結合分析により、判定され得る。モノクローナル抗体又はその一部の結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  １０７：２２０のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により判定され得る。
【０３９５】
＜抗イディオタイプの抗体との交差反応性＞
イディオタイプは、抗体の高度に可変性の抗原結合部位を表わすとともに、それ自体が免疫原である。抗体を媒介とする免疫応答の生成中、個体は、抗原、同様に抗イディオタイプ抗体に対して抗体を発達させ、その免疫原の結合部位（イディオタイプ）は抗原を模倣する。
【０３９６】
抗イディオタイプ抗体は、当業者に周知の標準方法を使用して、本明細書で確認された抗体の可変領域（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）に対して上昇され得る。簡潔に、抗イディオタイプ抗体は、本発明の抗体、又はそのフラグメント（例えばＣＤＲ）を動物に注入し、それにより、イディオタイプ領域における決定因子を含む抗体上の様々な抗原決定基に対して抗血清を誘発することにより、作られ得る。
【０３９７】
抗分析物（ａｎｔｉ−ａｎａｌｙｔｅ）抗体の生成方法は、当該技術分野で周知である。高分子量の抗原（約５０００ダルルトンより多い）が、動物に直接注入され得、一方で低分子量の化合物（約５０００ダルトン未満）は、それらに免疫原性を付与するために、高分子量の免疫原性担体（通常はタンパク質）に繋がれることが好ましい。免疫化に応じて生成された抗体は、血清、腹水、免疫グロブリン（Ｉｇ）画分、ＩｇＧ画分、又は親和性を精製した単特異性材料として利用され得る。
【０３９８】
ポリクローナル抗イディオタイプ抗体は、上述のように調製された本発明の抗体で動物を免疫化することにより、調製され得る。一般に、抗体（例えば、ファージディスプレイライブラリ）が由来する動物と、種及びアロタイプが一致している動物を免疫化することが望ましい。これは、非イディオタイプ決定基に向けられる抗体の生成を最小限にする。後に、そうして得られた抗血清は通常、ファージディスプレイライブラリが由来する同じ種からの正常血清に対して広く吸収され、それにより、非イディオタイプ決定基に向けられた抗体を排除する。吸収度は、正常（非免疫）血清タンパク質のグルタルアルデヒドとの架橋結合により形成されたゲル上に抗血清を通すことにより、達成され得る。抗イディオタイプの特異性を持つ抗体は、直接ゲルを通過し、一方で非イディオタイプ決定基についての特異性を持つ抗体は、ゲルに結合する。不溶性多糖類の支持体（例えばセファロース）上での非免疫血清タンパク質の固定により、吸収に適切なマトリックスも提供される。
【０３９９】
モノクローナル抗イディオタイプ抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：  ４９５の方法を使用して生成され得る。特に、モノクローナル抗イディオタイプ抗体は、ハイブリドーマ技術を使用して調製され得、該技術は、（１）対象の抗原又はハプテン担体抱合体（即ち、本発明の抗体又はそのサブ配列）で免疫化されたマウスからの脾臓細胞を、（２）薬物耐性のために選択されたマウス骨髄腫細胞株（例えば８−アザグアニン）に融合することを含む。一般に、免疫グロブリンを分泌しない骨髄腫細胞株を使用することが望ましい。そのような様々な細胞株は、当該技術分野で既知である。通常好ましい１つの細胞株はＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３である。この細胞株はＣＲＬ−１５８０としてＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに保管されている。
【０４００】
確立された方法に従い、ポリエチレングリコールの存在下で、融合を行うことができる（例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｒ．  Ｋｅｎｎｅｔｔ，  Ｊ．  ＭｃＫｅａｒｎ  ＆  Ｋ．  Ｂｅｃｈｔｏｌ，  ｅｄｓ．  Ｎ．Ｙ．，  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８０，  ａｎｄ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ８１，  Ｆ．  Ｍｅｌｃｈｅｒｓ，  Ｍ．  Ｐｏｔｔｅｒ  ＆  Ｎ．  Ｌ．  Ｗａｒｎｅｒ，  ｅｄｓ．，  Ｎ．Ｙ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  １９７８を参照）。融合された細胞及び融合されていない細胞の結果として生ずる混合物は、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）選択培地に播種される。これらの条件下で、ハイブリッド細胞のみが成長する。
【０４０１】
十分な細胞増殖が生じた場合（典型的に融合の１０−１４日後）、培地を採取し、固相ＲＩＡ及び酵素結合抗体免疫吸着アッセイを含む多くの方法の何れか１つにより、モノクローナルの、イディオタイプの、抗分析物抗体の存在についてスクリーニングする。その後、所望特異性の抗体を含んでいる培養物ウェルから細胞は拡張し、再度クローンを作った。その後、対象の抗体に対して陽性のままである培養物からの細胞は通常、敏感で、組織適合性であり、プリスタンで刺激したマウスにおいて腹水腫瘍として通過する。
【０４０２】
腹水を、腹膜腔を軽くたたくことにより採取し、抗体について再試験し、上述のように精製する。分泌しない骨髄腫の株が融合に使用される場合、モノクローナル抗体の親和性精製は通常、抗体がその抗原結合特徴に関して既に均質であるので、必要とされない。必要なことは、腹水中の夾雑タンパク質からそれを分離すること、即ち免疫グロブリン画分を生成することである。
【０４０３】
代替的に、対象のハイブリッド細胞株は、血清を含まない組織培養、及び培養培地から採取された抗体において成長し得る。一般に、このことは、収率が低いため、大量の抗体を得るにはあまり望ましくない方法である。また、細胞をマウスの静脈内に通し、血清から抗体を採取することも可能である。この方法は通常、１つの出血につき得られる血清が少量であり、且つ他の血清成分からの広範囲の精製を必要とするため、好ましいものではない。しかし、幾つかのハイブリドーマは、腹水腫瘍として成長せず、それ故、抗体を得るためのこのような代替方法の１つが使用されねばならない。
【０４０４】
＜ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａとの交差反応性＞
別の方法において、ＣＤ４６に結合する抗体は、本発明の「原型の」抗体（例えば、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）として同じエピトープに結合するという事実により、確認され得る。そのような抗体を確認するために、被験体のエピトープを分離する必要はない。特定の実施形態において、例えば、前立腺癌細胞（例えばＣａｐ細胞、ＰＣ３細胞など）に結合する及び／又は前立腺癌細胞へと内在化するために、及び／又はＣＤ４６に結合するために、本発明の原型の抗体と競合する抗体について、抗体ライブラリをスクリーニングすることができる。
【０４０５】
エピトープ結合及び／又は細胞結合及び／又は内在化についてライブラリをスクリーニングする方法は、当業者に周知である。特定の実施形態において、交差反応性の前立腺抗体は、本明細書に記載されるＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体の１以上との、少なくとも６０％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％、最も好ましくは少なくとも９５％又は少なくとも９９％の交差反応性を示す。
【０４０６】
＜他の「関連する」抗ＣＤ４６抗体を選択するためのファージディスプレイ方法＞
ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ、及び／又は他の前立腺特異抗体について既知の配列を用いて、様々なファージディスプレイ（又はイーストディスプレイ）方法が、ＣＤ４６に特異的に結合する、好ましくは同じ又はより大きな親和性でＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａに結合されるエピトープに結合する、他の抗体を生成するために使用され得る。
【０４０７】
＜チェーンシャッフリング方法＞
抗体変異体を作成する１つの方法は、ファージディスプレイ又はイーストディスプレイのライブラリにおいて新たなパートナー（チェーンシャッフリング）（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ．  ３５２：  ６２４−６２８）を作成するために、本来のＶＨ又はＶＬ遺伝子をＶ遺伝子のレパートリーに置き換えることであった。チェーンシャッフリング及びファージディスプレイを用いて、ハプテンフェニルオキサゾロン（ｐｈＯｘ）に結合するヒトｓｃＦｖ抗体フラグメントの親和性は、３００ｎＭから１ｎＭ（３００倍）に増大した（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：  ７７９−７８３）。
【０４０８】
故に、例えば、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体の親和性を変えるために、突然変異型ｓｃＦｖ遺伝子レパートリーは、原型のＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体（例えば、図２に示されるように）及びヒトＶＬ遺伝子レパートリー（軽鎖シャフリング）のＶＨ遺伝子を含む状態で、作成され得る。ｓｃＦｖ遺伝子レパートリーは、ファージディスプレイベクター、例えばｐＨＥＮ−１（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９：  ４１３３  ４１３７）、又は他のベクターへとクローン化され得、形質転換後、形質転換体のライブラリが得られる。
【０４０９】
同様に、重鎖シャッフリングについて、突然変異型ｓｃＦｖ遺伝子レパートリーは、原型のＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体（例えば、図２に示されるように）及びヒトＶＨ遺伝子レパートリー（重鎖シャッフリング）のＶＬ遺伝子を含む状態で、作成され得る。ｓｃＦｖ遺伝子レパートリーは、ファージディスプレイベクター、例えばｐＨＥＮ−１（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９：  ４１３３  ４１３７）、又は他のベクターへとクローン化され得、形質転換後、形質転換体のライブラリが得られる。
【０４１０】
結果として生じるライブラリは、関連する標的（例えばＣＤ４６）に対して、及び／又は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａとの交差反応性について、スクリーニングされ得る。
【０４１１】
＜結合親和性を改善する部位特異的突然変異誘発＞
アミノ酸側鎖に接触する抗原の多くは典型的に相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置し、ＶＨ（ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）に３つ、及びＶＬ（ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）に３つが位置する（Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，１９６：  ９０１  ９１７；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３３：  ７５５  ８；  Ｎｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１７：  １３３  １５１）。これら残基は、抗原のための抗体親和性の原因となる、多くの結合エネルギーに起因する。他の分子において、リガンドに接触するアミノ酸の突然変異は、その結合パートナーのために１つのタンパク質の親和性を増大させるのに有効な手段であると示された（Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２３４：  ５６４  ５７８；  Ｗｅｌｌｓ  （１９９０）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２９：  ８５０９  ８５１６）。例えば本明細書の実施例に記載されるように、特にＣＤ４６に結合するための、ＣＤＲの部位特異的突然変異誘発、及び前立腺癌細胞に対するスクリーニングは、結合親和性が改善された抗体を生成することができる。
【０４１２】
＜より高い親和性を持つヒトｓｃＦｖを生成するためのＣＤＲ無作為化＞
単純な部位特異的突然変異誘発の拡張において、突然変異型抗体ライブラリが作成され得、そこでは、部分的又は全体のＣＤＲが無作為化される（ＶＬ  ＣＤＲｌ  ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３及び／又はＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３）。１つの実施形態において、ＣＤＲはそれぞれ、テンプレートとして既知の抗体（例えば、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）を用いて、別個のライブラリにおいて無作為化される。各ＣＤＲライブラリからの最も高い親和性突然変異体のＣＤＲ配列は、付加的な親和性の増加を得るために組み合わされる。同様の方法が、３．４×１０−１０から９．０×１０−１３Ｍまで１５００倍以上に、成長ホルモン受容体のためにヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の親和性を増大させるために使用された（Ｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２３４：  ５６４  ５７８）。
【０４１３】
ＶＨ  ＣＤＲ３は頻繁に、結合ポケットの中心を占領し、故に、この領域における突然変異は、親和性の増大を結果としてもたらす（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２６７：  ３８３−３８６）。１つの実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ３残基が無作為化される（例えば、Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｇｅｎｅ，  １６９：  １４７−１５５；  Ｓｃｈｉｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｋｓ  （１９９６）  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ．  ７：  ９７  １０５，  １９９６；及びＳｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２６３：  ５５１  ５６７を参照）。
【０４１４】
＜他の抗体修飾＞
１つの実施形態において、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体に由来する部分的な抗体配列が、構造的及び機能的に関連する抗体を生成するために使用され得る。例えば、抗体は、優位に６つの重鎖及び軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を介して、標的抗原と相互に作用する。この理由により、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列よりも、個々の抗体の間において多様である。ＣＤＲ配列が大抵の抗体抗原相互作用に起因するので、異なる特性を持つ異なる抗体からフレームワーク配列上に移植された特定の自然に生じる抗体からのＣＤＲ配列を含む、発現ベクターを構築することにより、特定の自然に生じる抗体の特性を模倣する組み換え型抗体を発現することが、可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：  ３２３−３２７；  Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：  ５２２−５２５；及びＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８６：  １００２９−１００３３を参照）。そのようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータベースから得ることができる。
【０４１５】
故に、ＣＤＲなどの、本発明の抗ＣＤ４６抗体の１以上の構造上の特徴は、例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体の少なくとも１つの機能特性（例えば、前立腺癌細胞に結合及び内在化すること）を保持する、構造上関連する抗ＣＤ４６抗体を作成するために使用され得る。
【０４１６】
特定の実施形態において、１以上のＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａのＣＤＲ領域（例えば、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／又はＣＤＲ２、及び／又はＣＤＲ３）が、付加的な、組み換えにより操作された抗ＣＤ４６抗体を作成するために、既知のヒトフレームワーク領域及びＣＤＲと組み換えにより組み合わされる。重鎖及び軽鎖の可変フレームワーク領域は、同じ又は異なる抗体配列に由来し得る。
【０４１７】
抗原のための抗体の結合特異性／親和性において、抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ３ドメインが特に重要な役割を果たすことは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ，  １４９：  １６０５−１６１２；  Ｐｏｌｙｍｅｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １５２：  ５３１８−５３２９；  Ｊａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．，  １９３：４００−４１９；  Ｋｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｂｒｉｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ，  ８３：  ２５２−２６０；  Ｂｅｉｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ，  ２９６：  ８３３−８４９；  Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９５：  ８９１０−８９１５；  Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １１６：  ２１６１−２１６２；  Ｄｉｔｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １５７：  ７３９−７４９を参照）。従って、特定の実施形態において、本明細書に記載される特定の抗体（例えば、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）の重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ３を含む抗体が、精製される。従って、特定の実施形態において、本明細書に記載される特定の抗体（例えば、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）の重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲ１を含む抗体が、精製される。抗体は更に、本発明の抗体（例えば、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）の他の重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲを含み得る。
【０４１８】
特定の実施形態において、上述の操作された抗体のＣＤＲ１、２、及び／又は３の領域は、本明細書に開示されるもの（例えば、ＣＤＲｓＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）のような正確なアミノ酸配列を含み得る。しかし、当業者は、正確なＣＤＲ配列からの偏向の幾つかが可能である一方、ＣＤ４６に効果的に結合する抗体の能力（例えば、保存的なアミノ酸置換）を今なお保持していることを認識する。従って、別の実施形態において、操作された抗体は、例えば、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの抗体の１以上に、９０％、９５％、９８％、９９％、又は９９．５％同一である１以上のＣＤＲで構成され得る。
【０４１９】
別の実施形態において、ＣＤＲの１以上の残基は、より好ましいオンレートの（ｏｎ−ｒａｔｅ）の結合を達成するために結合を修飾するように変更され得る。この戦略を用いて、例えば１０１０Ｍ−１以上の極めて高い結合親和性を持つ抗体が達成され得る。当該技術分野で周知であり且つ本明細書に記載される、親和性成熟技術は、ＣＤＲ領域を変更し、その後、結合における所望の変化について結果として生ずる結合分子をスクリーニングするために、使用され得る。従って、ＣＤＲが変更されると、免疫原性と同様に、結合親和性の変化がモニタリングされ、最良の組み合わされた結合及び低い免疫原性のために最適化された抗体を達成するように採点され得る。
【０４２０】
ＣＤＲの内の修飾に加えて、又はそれに代わって、修飾はまた、このような修飾が抗体の結合親和性を排除しない限り、抗体の重鎖及び／又は軽鎖の可変領域のフレームワーク領域、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４の１以上の中で行われ得る。
【０４２１】
別の実施形態において、抗体は、例えば、癌を処置する際に抗体の効果を増強するように、エフェクター機能に関して更に修飾される。例えば、システイン残基は、Ｆｃ領域において導入され、それにより、この領域における鎖間のジスルフィド結合形成が可能となり得る。故に生成されたホモ二量体抗体は、内在化の能力が改善し、及び／又は、補体媒介の細胞死滅及び抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を増大させ得る（例えば、Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｊ．  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７６：  １１９１−１１９５；  Ｓｈｏｐｅｓ  （１９９２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８：  ２９１８−２９２２を参照）。抗腫瘍活性が増強されたホモ二量体抗体はまた、ヘテロ二官能性クロスリンカーを用いて調製され得る（例えば、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５３：２５６０−２５６５を参照）。代替的に、二重のＦｃ領域を有しており、それにより補体溶解及びＡＤＣＣ能力が増強される抗体が、操作され得る（例えば、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：  ２１９−２３０を参照）。
【０４２２】
＜抗体の生成＞
様々な実施形態において、本明細書に記載される抗体は、化学合成により生成され得るか、又は組み換えにより発現され得る。
【０４２３】
＜化学合成＞
本明細書に提供される配列情報を用いて、本明細書に記載されるＣＤ４６特異抗体（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）、又はその変異体が、ペプチド合成の周知の方法を用いて化学的に合成され得る。配列のＣ末端アミノ酸が不溶性支持体に結合され、その後配列の中の残りのアミノ酸が連続的に付加される、固相合成は、単鎖抗体の化学合成に好ましい１つの方法である。固相合成のための技術は、Ｂａｒａｎｙ  ａｎｄ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；  ｐｐ．  ３−２８４  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｂｉｏｌｏｇｙ．  Ｖｏｌ．  ２：  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｐａｒｔ  Ａ．，  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９６３）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ８５：  ２１４９−２１５６，  及びＳｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌに記載される。
【０４２４】
＜前立腺癌特異抗体の組み換え発現＞
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＣＤ４６特異抗体（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）、又はその変異体が、当業者に周知の方法を用いて組み換え発現される。例えば、本明細書に提供されるＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの配列情報を用いて、所望の抗体をコード化する核酸が、当業者に既知の多くの標準方法に従って調製され得る。核酸は、後に所望の抗体又はその鎖を発現する宿主細胞にトランスフェクトされる。
【０４２５】
これらの目的を達成するための分子クローニング技術は、当該技術分野で既知である。種々様々なクローン化及びインビトロでの増幅方法が、組み換え型核酸の構築に適している。多くのクローン化運動（ｅｘｅｒｃｉｓｅｓ）を介して当業者に向けるのに十分なこのような技術及び指示の例は、Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ，  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌｕｍｅ  １５２  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ  （Ｂｅｒｇｅｒ）；  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （２ｎｄ  ｅｄ．）  Ｖｏｌ．  １−３，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  ＮＹ，  （Ｓａｍｂｒｏｏｋ）；及びＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  ａ  ｊｏｉｎｔ  ｖｅｎｔｕｒｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  Ｉｎｃ．  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．，  （１９９４  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）  （Ａｕｓｕｂｅｌ）に見出される。組み換え型免疫グロブリンを生成する方法は、当該技術分野で既知である。Ｃａｂｉｌｌｙ，  米国特許第４，８１６，５６７号；及びＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：  １００２９−１００３３を参照。加えて、抗体の発現に関する詳細なプロトコルも、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４：  ７０４−７１０，  Ｐｏｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０１：  １１４９−１１６１などに提供される。
【０４２６】
＜他の抗体形態の生成＞
本明細書で提供される単鎖抗体の既知の及び／又は確認された配列（例えばＶＨ及び／又はＶＬ配列）を用いて、他の抗体形態が容易に作成され得る。そのような形態は、限定されないが、多価抗体、完全な抗体、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ’）２、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、キメラ抗体などを含む。
【０４２７】
＜ホモ二量体の作成＞
例えば、（ｓｃＦｖ’）２抗体を作成するために、２つの抗ＣＤ４６抗体が、リンカー（例えば、炭素リンカー、ペプチドなど）を介して、又は、例えば２つのシステイン間のジスルフィド結合を介して、接合される。故に、例えば、ジスルフィドが結合したｓｃＦｖを作成するために、システイン残基が、本明細書に記載される抗体のカルボキシ末端での部位定方向突然変異により導入され得る。
【０４２８】
ｓｃＦｖはこの構築物から発現され、ＩＭＡＣにより精製され、ゲル濾過により分析され得る。（ｓｃＦｖ’）２二量体を生成するために、システインは、１ｍＭの３−メルカプトエタノールでのインキュベーションにより還元され、ｓｃＦｖの半分はＤＴＮＢの付加により遮断される。遮断された及び遮断されないｓｃＦｖは一緒にインキュベートされることで（ｓｃＦｖ’）２を形成し、結果として生じる材料はゲル濾過により分析され得る。結果として生じる二量体の親和性は、例えばＢＩＡｃｏｒｅによる標準方法を使用して判定され得る。
【０４２９】
１つの例示的な実施形態において、（ｓｃＦｖ’）２二量体は、リンカー、例えばペプチドリンカーを介してｓｃＦｖ’フラグメントを接合することにより作成される。これは、当業者に周知の種々様々な手段により達成され得る。例えば、１つの方法が、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：  ６４４４−６４４８（ＷＯ９４／１３８０４も参照）に記載されている。
【０４３０】
本明細書に提供されるＶＨ及び／又はＶＬの配列を用いて、Ｆａｂ及び（Ｆａｂ’）２の二量体も容易に調製され得ることに、注意されたい。Ｆａｂは、ジスルフィド結合によりＶＨ−ＣＨ１に接合された軽鎖であり、当業者に既知の標準方法を使用して容易に作成され得る。Ｆ（ａｂ）’２は、例えば（ｓｃＦｖ’）２二量体について上述されるように、Ｆａｂを二量化することにより生成され得る。
【０４３１】
＜キメラ抗体＞
本明細書で考慮される抗体はまた、「キメラ」抗体を含み、そこでは、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、所望の生物活性を提示する限り、特定の種に由来するか又は特定の抗体の分類又はサブ分類に属している抗体における、対応する配列と同一であるか又は該配列に相同しており、一方で鎖の残りは、別の種に由来するか又は別の抗体の分類又はサブ分類に属している抗体、同様にそのような抗体のフラグメントにおける、対応する配列と同一であるか又は該配列に相同しているが、それらが所望の生物活性を示す場合に限る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ８１：  ６８５１−６８５５などを参照）。
【０４３２】
本明細書に提供される原型の抗体（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）が完全なヒト抗体である一方、キメラ抗体は、特にそのような抗体がヒト以外の種に使用される場合に（例えば、獣医学的適用）、考慮される。キメラ抗体は、２つの異なる種からの部分（例えば、ヒト及び非ヒトの部分）を含む抗体である。典型的に、キメラ抗体の抗原を組み合わせた領域（又は可変領域）は、１つの種のソースに由来し、（免疫グロブリンに生物学的エフェクター機能を付与する）キメラ抗体の定常領域は、別のソースに由来する。キメラ抗体を生成する多くの方法は、当業者に周知である（例えば、米国特許第５，５０２，１６７号、５，５００，３６２号、５，４９１，０８８号、５，４８２，８５６号、５，４７２，６９３号、５，３５４，８４７号、５，２９２，８６７号、５，２３１，０２６号、５，２０４，２４４号、５，２０２，２３８号、５，１６９，９３９号、５，０８１，２３５号、４，９７５，３６９号、及びＰＣＴ出願ＷＯ９１／０９９６を参照）。
【０４３３】
一般に、キメラ抗体を生成するために使用される手順は、以下の工程から成る（幾つかの工程の順序が抗体されてもよい）：（ａ）抗体分子の抗原結合部分をコード化する正確な遺伝子フラグメントを確認且つクローン化する工程；この遺伝子フラグメント（重鎖についてＶＤＪ、可変、多様性、及び結合の領域、又は軽鎖についてＶＪ、可変、結合の領域、又は端に、Ｖ又は可変領域、或いはＶＨ及びＶＬ領域として知られている）は、ｃＤＮＡ又は遺伝子の形態の何れかであり得る；（ｂ）ヒト定常領域又はその所望の部分をコード化する遺伝子フラグメントをクローン化する工程；（ｃ）完全なキメラ抗体が転写可能且つ翻訳可能な形態でコード化されるように、定常領域へ可変領域をライゲートする工程；（ｄ）プロモーター、エンハンサー、及びポリ（Ａ）付加シグナルなどの、選択可能なマーカー及び遺伝子制御領域を含有するベクターへこの構築物をライゲートする工程；（ｅ）宿主細胞（例えば細菌）においてこの構築物を増幅する工程；（ｆ）真核細胞、最も頻繁には哺乳動物リンパ球にＤＮＡを導入する工程（トランスフェクション）；及び、キメラ抗体の発現に適している条件下で宿主細胞を培養する工程。
【０４３４】
様々な別個の抗原結合特異性を持つ抗体は、キメラタンパク質（例えば、抗ＴＮＰ：Ｂｏｕｌｉａｎｎｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ，  ３１２：  ６４３）及び抗腫瘍抗原を生成するために、これらのプロトコルにより取り扱われた（例えば、Ｓａｈａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １３７：  １０６６）。同様に、様々な異なるエフェクター機能が、新たな配列を、抗原結合領域をコード化する配列に結合することにより達成された。これらの幾つかは、酵素（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：  ６０４）、別の種からの免疫グロブリン定常領域、及び別の免疫グロブリン鎖の定常領域を含む（Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３０９：  ３６４；  Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８５）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３５：  ３５６５−３５６７）。
【０４３５】
特定の実施形態において、組み換え型ＤＮＡベクターが、抗ＣＤ４６（例えば、前立腺癌特異）抗体を生成する細胞株をトランスフェクトするために使用される。新規な組み換え型ＤＮＡベクターは、細胞株において免疫グロブリン定常領域をコード化する遺伝子の全て又は一部を置換するための「置換遺伝子」（例えば、置換遺伝子は、薬物、毒素、又は他の分子などへの抱合を促進するために、ヒト免疫グロブリン、特異的免疫グロブリン分類、又は酵素、毒素、生物学的に活性なペプチド、成長因子、阻害剤、又はリンカーペプチドの定常領域の全て又は一部をコード化し得る）、及び、抗体を生成する細胞内の免疫グロブリン配列に相同する、標的とされた組み換えを可能にする「標的配列」を包含する。
【０４３６】
別の実施形態において、組み換え型ＤＮＡベクターは、所望のエフェクター機能を持つ抗体（例えば、ヒト免疫グロブリンの定常領域）を生成する細胞株をトランスフェクトするために使用され、その場合、組み換え型ベクターに含有される置換遺伝子は、本発明の前立腺癌特異抗体の領域の全て又は一部をコード化し、組み換え型ベクターに含有される標的配列は、抗体を生成する細胞内での相同遺伝子の組み換え及び標的遺伝子修飾を可能にする。何れかの実施形態において、可変又は定常領域の一部のみが置換されると、結果として生じるキメラ抗体は、同じ抗原を画定することができ、及び／又は、変更され又は改善された同じエフェクター機能を有しており、それにより、キメラ抗体は、がより大きな抗原特異性、より大きな親和結合定数、エフェクター機能の増大、又はトランスフェクトされた抗体を生成する細胞株による分泌及び生成の増大を実証し得る。
【０４３７】
実施された実施形態にかかわらず、（選択可能なマーカーを介して）統合されたＤＮＡのための選択のプロセス、キメラ抗体生成についてのスクリーニング、及び細胞のクローン化は、キメラ抗体を生成する細胞のクローンを得るために使用され得る。
【０４３８】
故に、モノクローナル抗体のための修飾をコード化する１片のＤＮＡは、Ｂ細胞又はハイブリドーマ細胞株内に発現された免疫グロブリン遺伝子の部位に直接標的とされ得る。任意の特定の修飾のためのＤＮＡ構築物は、任意のモノクローナル細胞株又はハイブリドーマのタンパク質生成を変更するために作られ得る。遺伝子がランダムな位置ではなくその天然の染色体位置に存在する場合、キメラ抗体の発現レベルはより高くなくてはならない。キメラ（ヒト化）抗体の調製のための詳細な方法は、米国特許第５，４８２，８５６号に見出すことができる。
【０４３９】
＜無傷のヒト抗体＞
別の実施形態において、本発明は、無傷の、完全なヒト抗ＣＤ４６（例えば、前立腺癌特異）抗体を提供する。そのような抗体は、キメラ・ヒト化抗体の作成と同様の方法で容易に生成され得る。この例において、例えばマウスに由来する認識機能を使用する代わりに、本明細書に記載される抗体の完全なヒト認識機能（例えば、ＶＨ及びＶＬ）が利用される。
【０４４０】
＜ダイアボディ＞
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＶＨ及びＶＬのドメインの１以上を含むダイアボディが考慮される。用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を典型的に有する抗体フラグメントを指す。該フラグメントは典型的に、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間で対にすることを可能にするには短すぎるリンカーの使用によって、ドメインは、別の鎖の相補的なドメインと対になり、且つ２つの抗原結合部位を生成することを強いられる。ダイアボディは、例えばＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１、及びＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：  ６４４４−６４４８においてより詳細に記載される。
【０４４１】
＜ユニボディ＞
特定の実施形態において、本明細書で提供される配列情報を用いて、抗ＣＤ４６抗体はユニボディとして構築され得る。ユニボディは、特定の小さな抗体のフォーマットよりも長い治療濃度域が予測される、安定した、より小さな抗体のフォーマットを生成する抗体技術である。特定の実施形態において、ユニボディは、抗体のヒンジ領域の排除によりＩｇＧ４抗体から生成される。完全な大きさのＩｇＧ４抗体とは異なり、分子フラグメントの半分は、非常に安定しており、ユニボディと称される。ＩｇＧ４分子を半分にすることで、ユニボディ上に、標的に結合することができる領域が１つだけ残る。ユニボディを生成する方法は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００７／０５９７８２において詳細に記載され、これはその全体において参照により本明細書に組み込まれる（例えば、Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１７：  １５５４−１５５７も参照）。
【０４４２】
＜アフィボディ＞
特定の実施形態において、本明細書で提供される配列情報は、ＣＤ４６に結合するアフィボディ分子を構築するために使用される。アフィボディ分子はブドウ球菌Ａタンパク質のＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する、５８−アミノ酸残基タンパク質ドメインに基づく、親和性タンパク質の分類である。この３つのヘリックス束のドメインは、組み合わせのファージミドライブラリの構築のための足場として使用され、前記ライブラリからは、所望の分子を標的とするアフィボディ変異体が、ファージディスプレイ技術を用いて選択され得る（例えば、Ｎｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １５：  ７７２−７７７；  Ｒｏｎｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２６９：  ２６４７−２６５５．を参照）。アフィボディの詳細及び製造方法は、当業者に既知である（例えば、全体において参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８３１，０１２号を参照）。
【０４４３】
上述の抗体は、当業者に周知の方法を用いて、全体の無傷の抗体（例えばＩｇＧ）、抗体フラグメント、又は単鎖抗体として提供され得ることが、認識される。加えて、抗体は、免疫原性を減少させるために根本的に任意の哺乳動物種由来であり得るが、抗体及び／又は免疫結合体が使用される種に由来する抗体を使用することが望ましい。言い換えれば、ヒトに使用するために、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ・ヒト抗体を使用することが望ましい。
【０４４４】
＜抗体／ポリペプチドの結合親和性の測定＞
上述のように、結合活性の増大のための選択は、標的抗原のための抗体（例えば、ＣＤ４６、特に、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａの１以上に結合されるエピトープ）の親和性の測定を含み得る。そのような測定を行う方法は、当業者に周知である。簡潔に、例えば、抗体のＫｄは、例えばＢＩＡｃｏｒｅ、即ち表面プラズモン共鳴に基づくバイオセンサーにおいて標的細胞に結合する動態（ｋｉｎｅｔｉｃｓ）から判定される。この技術のために、抗原又は細胞は、質量変化を検出することができる、誘導体化されたセンサチップに繋がれる。抗体がセンサチップ上を通過すると、抗体は、定量化可能な質量の増加を結果としてもたらす抗原に結合する。抗体の濃度に応じた会合の速度の測定を用いて、会合速度定数（ｋｏｎ）を計算することができる。会合フェーズの後、緩衝液がチップの上を通過し、抗体の解離の速度（Ｋｏｆｆ）が判定される。Ｋｏｎは典型的に１．０×１０２から５．０×１０６の範囲で、Ｋｏｆｆは１．０×１０−１から１．０×１０−６の範囲で測定される。平衡定数Ｋｄは頻繁に、Ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算され、故に１０−５から１０−１２の範囲で典型的に測定される。この方法で測定される親和性は、蛍光消光滴定（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｑｕｅｎｃｈ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）により溶液中で測定される親和性と、十分に相関する。
【０４４５】
＜ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ、或いは他の抗ＣＤ４６抗体を含む、免疫結合体＞
本明細書にされる原型の抗抗ＣＤ４６抗体（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）は、前立腺癌細胞及び他のＣＤ４６溶性の癌細胞に特定気に結合するとともに、それらにより内在化される。前記抗体は、（例えば、前立腺癌細胞の成長及び／又は増殖を阻害するための）治療として単独で使用することができ、又は、ＣＤ４６を発現する様々な癌細胞（例えば、分離細胞、転移細胞、固形腫瘍細胞など）へのエフェクター（例えば、細胞毒素、ラベル、放射性核種、リガンド、抗体、薬物、リポソーム、ナノ粒子、ウィルス粒子、サイトカインなど）の効果的且つ特異的な送達をもたらす、エフェクター形成免疫結合体に結合され得る。
【０４４６】
抗ＣＤ４６免疫結合体は、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合部分を、エフェクター（例えば、検出可能なラベル、別の治療剤など）に抱合することにより、形成され得る。適切な薬剤は、例えば、細胞毒性剤又は細胞分裂阻害剤（例えば、化学療法剤）、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物の器官、或いはそれらのフラグメントの酵素学的に活性な毒素）、及び／又は放射性同位体（即ち、放射抱合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））を含む。
【０４４７】
特定の実施形態において、エフェクターは検出可能なラベルを含む。適切な検出可能なラベルは、限定されないが、放射線不透過性ラベル、ナノ粒子、ＰＥＴラベル、ＭＲＩラベル、放射性ラベルなどを含む。放射性核種の中で、及び本発明の様々な実施形態において有用な、γ放射体、陽電子放射体、Ｘ線放射体、及び蛍光放射体は、局在化、診断、及び／又は段階分け、及び／又は治療に適しているが、β及びα放射体、電子、並びに、ホウ素及びウラニウムなどの中性子捕捉剤も、治療のために使用され得る。
【０４４８】
検出可能なラベルは、外部検出器及び／又は内部検出器と共に使用することができ、前立腺癌細胞を効果的に局在化及び／又は視覚化する手段を提供する。そのような検出／視覚化は、手術前及び手術時の設定を含むがこれらに限定されない、様々な情況に有用であり得る。故に、特定の実施形態において、本発明は、哺乳動物の身体における前立腺癌細を手術中に検出する方法に関連する。これら方法は典型的に、検出器（例えば、γ検出プローブ）による検出に十分な質量で、検出可能なラベルで標識化した前立腺癌特異抗体（例えば、放射性同位体、１６１Ｔｂ、１２３Ｉ、１２５Ｉなどで標識化された本発明の抗体）を含む組成物を哺乳動物に投与する工程、その後、標的組織により活性物質が摂取されるのを可能にする工程、及び好ましくはラベルの血液クリアランスの後に、例えばγ検出プローブを用いて身体の関連領域において放射免疫検出法技術に哺乳動物をさらす工程を含む。
【０４４９】
特定の実施形態において、ラベルに結合された抗体は、放射ガイドされた（ｒａｄｉｏｇｕｉｄｅｄ）手術の技術に使用され得、ここで、被験体の身体における関連する組織は、検出器、例えばγ検出プローブにより手術時に検出され且つ位置付けられ得る。外科医は、放射性同位体、つまり、例えば低エネルギーγ光子放射体で標識化された化合物の取り込みが行われる組織を見出すために、このプローブを手術時に使用することができる。特定の実施形態において、そのような方法は、原発腫瘍から転移細胞により生成された二次癌を局在化且つ取り除くのに、特に有用である。
【０４５０】
検出可能なラベルに加えて、特定の好ましいエフェクターは、限定されないが、細胞毒素（例えば、緑膿菌外毒素、リシン、アブリン、ジフテリア毒素など）、細胞毒性薬、又はプロドラッグを含み、その場合、キメラ分子は、前立腺癌細胞へと細胞毒素を特異的に標的とする、強力な細胞殺滅剤として作用し得る。
【０４５１】
また他の実施形態において、エフェクターは、薬物（例えばアブラキサン、ドキソルビシン、パミドロン酸二ナトリウム、アナストロゾール、エキセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、トレミフェン、レトロゾール、トラスツズマブ、メゲストロールタモキシフェン、パクリタキセル、ドセタキセル、カペシタビン、酢酸ゴセレリン、ゾレドロン酸、ビンブラスチンなどの抗癌剤）、免疫系の構成成分により結合された細胞の認識を刺激する抗原、免疫系の構成成分に特異的に結合するとともにそれらを前立腺癌に向ける抗体などを包んだリポソームを含み得る。
【０４５２】
＜例示的なエフェクター＞
＜組成物の撮像＞
特定の実施形態において、抗ＣＤ４６免疫結合体は、腫瘍部位へと検出可能なラベルを向けるために使用され得る。これにより、腫瘍の検出及び／又は局在化を促進することができる。それは、原発腫瘍、又は特定の実施形態において、例えば例えば前立腺転移細胞により生成される二次腫瘍の検出に、有効であり得る。特定の実施形態において、免疫結合体のエフェクター成分は、「放射線不透過性」ラベル、例えば、Ｘ線を使用して容易に視覚化することができるラベルを含む。放射線不透性物質は、当業者に周知である。最も一般的な放射線不透性物質は、ヨウ化物、臭化物、又はバリウム塩を含む。他の放射線不透性物質も知られており、これは限定されないが、有機ビスマス誘導体（例えば米国特許第５，９３９，０４５号を参照）、放射線不透性ポリウレタン（例えば米国特許第５，３４６，９８１号を参照）、有機ビスマス粗製物（例えば米国特許第５，２５６，３３４号を参照）、放射線不透性バリウムポリマー複合体（例えば米国特許第４，８６６，１３２号を参照）などを含む。
【０４５３】
本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体は、放射線不透性部分に直接結合され得、又は、例えば以下に記載されるように、放射線不透性物質を運ぶ、含有する、又は含む「パッケージ」（例えば、キレート、リポソーム、ポリマーマイクロビーズ、ナノ粒子など）に結合され得る。
【０４５４】
放射線不透性ラベルに加えて、他のラベルも使用に適している。免疫結合体に使用するのに適している検出可能なラベルは、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的、又は化学的な手段により検出可能な任意の組成物を含む。有用なラベルは、磁気ビーズ（例えばＤＹＮＡＢＥＡＤＳＴＭ）、蛍光色素（例えばイソチオシアン酸フルオレセイン、ｔｅｘａｓ  ｒｅｄ、ローダミン、緑色蛍光タンパク質など）、放射性同位体（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、又は３２Ｐ）、酵素（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びその他共通してＥＬＩＳＡに使用されるもの）、及びコロイド金又は着色ガラス或いはプラスチック（例えばポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどの比色定量ラベル、ナノ粒子、量子ドットなどを含む。
【０４５５】
特定の実施形態において、適切な放射標識は、限定されないが、９９Ｔｃ、２０３Ｐｂ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、９７Ｒｕ、６２Ｃｕ、６４１Ｃｕ、５２Ｆｅ、５２ｍＭｎ、５１Ｃｒ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、７７Ａｓ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１６９Ｅｒ、１２１Ｓｎ、１２７Ｔｅ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１６１Ｔｂ、１０９Ｐｄ、１６５Ｄｙ、１４９Ｐｍ、１５１Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５７Ｇｄ、１５９Ｇｄ、１６６Ｈｏ、１７２Ｔｍ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１０５Ｒｈ、及び１１１Ａｇを含む。
【０４５６】
そのようなラベルを検出する手段は、当業者に周知である。故に、例えば、特定の放射標識は、写真フィルム、シンチレーション検出器、ＰＥＴ撮像、ＭＲＩなどを使用して検出され得る。蛍光マーカーは、放射された照明を検出するための光検出器を使用して検出され得る。酵素ラベルは典型的に、酵素に基質をもたらし、且つ、基質上の酵素の作用により生成された反応生成物の検出により検出され、比色定量ラベルは、単に着色ラベルを視覚化することにより検出される。
【０４５７】
＜放射線増感剤＞
別の実施形態において、エフェクターは、細胞上で放射線の細胞毒性効果を増強する、放射線増感剤を含み得るイオン化する細胞毒性効果を増強する、放射線増感剤を含み得る（例えば、６０Ｃｏ又はＸ線ソースにより生成されるものなど）。多数の放射線増感剤が既知であり、限定されないが、ベンゾポルフィリン誘導体化合物（例えば米国特許第５，９４５，４３９号を参照）、１，２，４−ベンゾトリアジンオキシド（例えば米国特許第５，８４９，７３８号を参照）、特定のジアミンを含有する化合物（例えば米国特許第５，７００，８２５号を参照）、ＢＣＮＴ（例えば米国特許第５，８７２，１０７号を参照）、放射線増感性ニトロ安息香酸アミド誘導体（例えば米国特許第４，４７４，８１４号を参照）、様々な複素環誘導体（例えば米国特許第５，０６４，８４９号を参照）、白金錯体（例えば米国特許第４，９２１，９６３号を参照）などを含む。
【０４５８】
＜α放射体＞
特定の実施形態において、エフェクターは、α放射体、即ち、α粒子を放出する放射性同位体を含み得る。α放射体は、癌の処置に有効であると、近年において示された（例えば、ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９４：１５３７−１５４０；  Ｂａｌｌａｎｇｒｕｄ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６１：  ２００８−２０１４；  Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６３：  ５０８４−５０を参照）。適切なα放射体は、限定されないが、Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔなどを含む。
【０４５９】
＜キレート＞
本明細書に記載される医薬及び／又は放射標識の多くは、キレートとして提供され得る。キレート分子は典型的に、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体（例えば、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）に結合されるエピトープタグに特異的に結合する、分子（例えば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンなど）に結合される。
【０４６０】
キレート基は、当業者に周知である。特定の実施形態において、キレート基は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレン−トリアミン−ペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、シクロヘキシル１，２−ジアミン・テトラ酢酸（ＣＤＴＡ）、エチレングリコールＯ，Ｏ’−ビス（２−アミノエチル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ−酢酸（ＥＧＴＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシベンジル）−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸（ＨＢＥＤ）、トリエチレン・テトラミン・ヘキサ−酢酸（ＴＴＨＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’−，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ−酢酸（ＤＯＴＡ）、ヒドロキシエチルジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、１，４，８，１１−テトラ−アザシクロテトラデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ−酢酸（ＴＥＴＡ）、置換ＤＴＰＡ、置換ＥＤＴＡなどに由来する。
【０４６１】
特定の好ましいキレート化剤の例は、非置換又は置換の２−イミノチオラン、及び２−イミノチアシクロヘキサン、特に２−イミノ−４−メルカプトメチルチオランを含む。
【０４６２】
１つのキレート化剤、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）は、放射性核種及び放射標識などの、多くの診断上及び治療上重要な金属をキレート化する能力のため、特に関心を持たれるものである。
【０４６３】
ＤＯＴＡ、及び抗体などのタンパク質の抱合体が記載されてきた。例えば、米国特許第５，４２８，１５６号は、抗体及び抗体フラグメントへのＤＯＴＡの抱合の方法を教示している。このような抱合体を作るために、ＤＯＴＡの１つのカルボン酸基が、抗体又は抗体フラグメント上でアミン又はスルフヒドリル基に反応することができる活性エステルに変換される。Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ５：  ５６５−５７６にも同様の方法が記載されており、ここでは、ＤＯＴＡの１つのカルボキシル基が活性エステルに変換され、活性化されたＤＯＴＡは抗体と混合され、抗体のリジン残基のイプシロン−アミノ基を介して抗体をＤＯＴＡに結合し、それによりＤＯＴＡの１つのカルボキシル基をアミド部分に変換する。
【０４６４】
特定の実施形態において、キレート化剤は、エピトープタグ、又はエピトープタグに結合する部分に直接、又はリンカーを介して結合され得る。ＤＯＴＡ及びビオチンの抱合体が記載され（例えば、Ｓｕ  （１９９５）  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，  ３６  （５  Ｓｕｐｐｌ）：１５４Ｐを参照し、それは、ＤＯＴＡ−ＬＣ−ビオチン又はＤＯＴＡ−ベンジル−４−（６−アミノ−カプロアミド）−ビオチンなどの、利用可能なアミノ側鎖ビオチン誘導体を介した、ＤＯＴＡのビオチンへの結合を開示している。Ｙａｕ  ｅｔ  ａｌ．のＷＯ９５／１５３３５はビオチンに抱合され得るニトロ−ベンジル−ＤＯＴＡ化合物を生成する方法を開示している。前記方法は、ヒドロキシ基の一時的な投影を介した環化反応；アミンのトシル化；一時的に保護されたヒドロキシ基の脱保護；脱保護されたヒドロキシ基のトシル化；及び分子内のトシラート環化を含む。Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．，  １９（２）：  ２３９−２４４には、１１１Ｉｎ及び９０Ｙでタンパク質を放射標識化するための大環状の（ｍａｃｒｏｃｙｌｉｃ）キレート化剤の合成が開示される。Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．は、アビジン、即ち研究のためのモデルタンパク質との抱合体の安定性及び生体内分布を研究するために、標識化されたＤＯＴＡ０ビオチン抱合体を作成した。この抱合体は、インサイツで生成された活性化ＤＯＴＡ誘導体に反応させるために、遊離アミノ基を含有していたビオチンヒドラジドを使用して作られた。
【０４６５】
＜細胞毒素／細胞分裂阻害剤＞
本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）は、治療薬、放射線を放出する化合物、植物、真菌、又は細菌起源の細胞傷害分子、生体タンパク質、及びそれらの混合物を含む、様々な細胞毒性薬及び／又は細胞分裂阻害薬を送達するために使用され得る。特定の実施形態において、細胞毒性薬は、例えば、小さな有機分子、細胞毒性タンパク質又はペプチド、放射線放射体（例えば、上述のような短距離で高エネルギーのα放射体）である、細胞内で作用する細胞毒性薬を含み得る。
【０４６６】
従って、特定の実施形態において、抗ＣＤ４６抗体は、細胞毒性薬／細胞分裂阻害薬に結合される。様々な実施形態において、ＡＤＣを構築するために使用される薬物は、限定されないが、微小管阻害剤及びＤＮＡ損傷剤、ポリメラーゼ阻害剤（例えば、ポリメラーゼＩＩ阻害剤、α−アマニチン）などを含む。特定の実施形態において、抗体は薬物に直接、又はリンカーを介して抱合され、一方で他の実施形態において、抗体は、薬物担体（例えば、薬物を含有するリポソーム、高分子医薬担体、ナノ粒子薬物担体、脂質薬物担体、樹枝状（ｄｅｎｄｒｉｍｅｒｉｃ）薬物担体など）に抱合される。特定の実施形態において、前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン−１０、天然物ドラスタチン−１０の合成誘導体、及びメイタンシン或いはメイタンシン誘導体を含むがこれらに限定されないチューブリン阻害剤を含む。
【０４６７】
特定の実施形態において、薬物はオーリスタチンを含む。特定の実施形態において、オーリスタチンは、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ｖｃＭＭＡＥ、及びｖｃＭＭＡＦから成る群から選択される。
【０４６８】
特定の実施形態において、前記薬物はメイタンシンを含む。例示的なメイタンシンは、限定されないが、Ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ（ＤＭ１）；及びＤＭ３又はＤＭ４などメイタンシンのアナログを含む。
【０４６９】
特定の実施形態において、前記薬物はＤＮＡ相互作用性薬剤を含む。特定の実施形態において、ＤＮＡ相互作用性薬剤は、限定されないが、カリチアマイシン、ズオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）などを含む。
【０４７０】
１つの例示的であるが限定されない実施形態において、前記薬物はカリチアマイシンを含む。カリチアマイシンはＤＮＡを標的とし、鎖の分裂を引き起こす。特定の実施形態において、前記薬物は、カリチアマイシン又はカリチアマイシンアナログを含む。カリチアマイシンアナログは、米国特許第５，２６４，５８６号に記載されており、これは、その中に記載されるカリチアマイシンアナログについて参照により本明細書に組み込まれる。
【０４７１】
別の例示的であるが限定されない実施形態において、前記薬物はズオカルマイシンを含む。ズオカルマイシンは、細胞の周期における任意の段階で、それ自体の作用様式を行うことができるＤＮＡ損傷剤である。ズオカルマイシンのこの分類の一部である薬剤は典型的に、低ピコモル範囲で効力を持つ。本明細書で考慮されるキメラ構築物においてエフェクターとして使用され得る、例示的なズオルカマイシン（例えばズオカルマイシンアナログ）は、限定されないが、ズオカルマイシンＡ、ズオカルマイシンＢ１、ズオカルマイシンＢ２、ズオカルマイシンＣ１、ズオカルマイシンＣ２、ズオカルマイシンＤ、ズオカルマイシンＳＡ、シクロプロピルベンゾインドールズオカルマイシン（ＣＣ−１０６５）、Ｃｅｎｔａｎａｍｙｃｉｎ、ラシェルマイシン、アドゼレシン、ビセレシン、カルゼルシンなどを含む。
【０４７２】
別の例示的であるが限定されない実施形態において、前記薬物はピロロベンゾジアゼピンを含む。特定の実施形態において、前記薬物は、柔軟なポリメチレンテザーにより結合される２つのピロロベンゾジアゼピンの合成誘導体を含む。ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）及びＰＢＤ二量体は、米国特許第７，５２８，１２６Ｂ２号に記載されており、これは、その中にピロロベンゾジアゼピン及びＰＢＤ二量体について参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態において、ピロロベンゾジアゼピンは以下のものから成る群から選択される：アントラマイシン（及びその二量体）、マゼトラマイシン（及びその二量体）、トマイマイシン（及びその二量体）、プロトラカルシン（及びその二量体）、チカマイシン（及びその二量体）、ネオトラマイシンＡ（及びその二量体）、ネオトラマイシンＢ（及びその二量体）、ＤＣ−８１（及びその二量体）、シビロマイシン（及びその二量体）、ポロトラマイシンＡ（及びその二量体）、ポロトラマイシンＢ（及びその二量体）、シバノマイシン（及びその二量体）、アブベマイシン（及びその二量体）、ＳＧ２０００、及びＳＧ２２８５。
【０４７３】
特定の実施形態において、前記薬物は、α−アマニチン、及びポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤などのポリメラーゼＩＩ阻害剤を含むがこれに限定されない、ポリメラーゼ阻害剤を含む。例示的なＰＡＲＰ阻害剤は、限定されないが、イニパリブ（ＢＳＩ  ２０１）、タラゾパリブ（ＢＭＮ−６７３）、オラパリブ（ＡＺＤ−２２８１）、オラパリブ、ルカパリブ（ＡＧ０１４６９９、ＰＦ−０１３６７３３８）、ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８）、ＣＥＰ  ９７２２、ＭＫ  ４８２７、ＢＧＢ−２９０、３−アミノベンズアミドなどを含む。
【０４７４】
特定の実施形態において、細胞毒性剤／細胞分裂阻害剤は、タンパク質又はペプチド毒素或いはそれらのフラグメントを含む。酵素学的に活性な毒素又はそのフラグメントは、例えば、ジフテリア毒素Ａフラグメント、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａからの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、特定のシナアブラギリタンパク質、特定のＤｉａｎｔｈｉｎタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトギリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓにより例示される。様々な放射性核種が、放射抱合された抗体の産生に利用可能である。例は、限定されないが、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、１８６Ｒｅなどを含む。
【０４７５】
特定の実施形態において、細胞毒素は、限定されないが、緑膿菌外毒素、ジフテリア毒素、リシン、アブリン、及びそれらの誘導体を含み得る。緑膿菌外毒素Ａ（ＰＥ）は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａにより分泌される、非常に活性なモノマータンパク質（分子量６６ｋＤ）であり、それは、そのＡＤＰ−リボシル化を触媒（ＥＦ−２上の酸化されたＮＡＤのＡＤＰリボシル部分の移動を触媒）することにより、伸長因子２（ＥＦ−２）の不活性化を介して、真核細胞におけるタンパク質合成を阻害する。
【０４７６】
前記毒素は、細胞毒性を引き起こすように共同する、３つの構造ドメインを含有する。ドメインＩａ（アミノ酸１−２５２）は細胞結合を媒介する。ドメインＩＩ（アミノ酸２５３−３６４）は、サイトゾルへの転位に起因し、ドメインＩＩＩ（アミノ酸４００−６１３）は、タンパク質を不活性化するとともに細胞死を引き起こす、伸長因子２のＡＤＰリボシル化を媒介する。ドメインＩｂ（アミノ酸３６５−３９９）の機能は不確定のままであるが、その大部分であるアミノ酸３６５−３８０は、細胞毒性を損失することなく除去され得る。Ｓｉｅｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６４：  １４２５６−１４２６１を参照。
【０４７７】
特定の実施形態において、前記抗体は、ドメインＩａ（アミノ酸１から２５２）が除去されるとともにアミノ酸３６５から３８０がドメインＩｂから除去された、好ましい分子に結合される。特定の実施形態において、ドメインＩｂの全て、及びドメインＩＩ（アミノ酸３５０から３９４）の一部は、特に除去された配列が結合ペプチドで置換される場合に、除去され得る。
【０４７８】
加えて、ＰＥ及び他の細胞毒性タンパク質は更に、部位特異的突然変異誘発、又は、当該技術分野で既知の他の技術を用いて修飾されることで、特定の所望用途のために分子を変更し得る。例えば、本明細書に記載されるＰＥ分子により提供される機能的な利点に実質的に影響を及ぼさない方法でＰＥ分子を変更する手段も使用することができ、そのような結果として生じる分子は、本明細書内に包含されるように意図される。
【０４７９】
様々なリガンドへのＰＥ融合をコード化する遺伝子をクローン化する方法は、当業者に周知である（例えば、Ｓｉｅｇａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，  ３：  ２６４７−２６５２；及びＣｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８４：  ４５３８−４５４２を参照）。
【０４８０】
ＰＥのように、ジフテリア毒素（ＤＴ）は、ＡＤＰ−リボシル化伸長因子２により細胞を死滅させ、それによりタンパク質合成を阻害する。しかし、ジフテリア毒素はジスルフィド架橋により結合された２つの鎖、ＡとＢに分けられる。ＰＥとは対照的に、カルボキシル末端上に位置するＤＴの鎖Ｂは、受容体結合に起因し、アミノ末端上に位置する鎖Ａは酵素活性を含んでいる（Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．（１９７２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １７５：  ９０１−９０３；  Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７３）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２４８：  ３８３８−３８４４）。
【０４８１】
特定の実施形態において、本発明の抗体−ジフテリア毒素免疫結合体は、ジフテリア毒素Ｂ鎖のトランケーションにより天然受容体−結合ドメインを除去する。１つの例示的な修飾されたジフテリア毒素はＤＴ３８８であり、そこでは、残基３８９にて始まるカルボキシル末端配列が除去される（例えば、Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｂｉｏｃｈ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍ．，  １８０：  ５４５−５５１を参照）。ＰＥキメラ細胞毒素のように、ＤＴ分子は、前立腺癌特異抗体に化学的に抱合され得るが、特定の好ましい実施形態において、抗体は、組み換え手段によりジフテリア毒素に融合される（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６５：  １１８８５−１１８８９を参照）。
【０４８２】
＜ウィルス粒子＞
特定の実施形態において、前記エフェクターは、ウィルス粒子（例えば、繊維状ファージ、アデノ随伴ウィルス（ＡＡＶ）、レンチウイルスなど）を含む。前記抗体は、ウィルス粒子に抱合され得、及び／又は、ウィルス粒子（例えば繊維状ファージ）の表面上に発現され得る。ウィルス粒子は、標的（例えば前立腺癌）細胞に送達されることになっている核酸を更に含み得る。細胞に核酸を送達するためのウィルス粒子の使用は、ＷＯ９９／５５７２０、米国特許第ＵＳ６，６７０，１８８号、ＵＳ６，６４２，０５１号、及びＵＳ６，６６９，９３６号にて詳細に記載されている。
【０４８３】
＜他の治療成分＞
他の適切なエフェクター分子は、薬物（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ）、又は様々な薬物を含有する封入システムを含む。故に、様々な実施形態において、標的分子（例えば標的抗体）は、腫瘍に直接送達される薬物に直接、又はリンカーを介して結合され得ることが、認識される。
【０４８４】
そのような薬物は、当業者に周知のものであり、限定されないが、抗癌抗体（例えばＨＥＲＣＥＰＴＩＮＲ）、抗代謝物、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管、標的化剤、キナーゼ阻害剤、タンパク合成阻害薬、ソマトスタチンアナログ、グルココルチコイド、アロマターゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、タンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ）阻害剤、ホスファチジルイノシトール、３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、抗ＴＲＡＩＬ分子、ＭＥＫ阻害剤などを含む。特定の実施形態において、抗癌化合物は、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン／ＸＥＬＯＤＡ、５−トリフルオロメチル−２’−デオキシウリジン、メトトレキサートナトリウム、ラルチトレキセド／トムデックス、ペメトレキセド／Ａｌｉｍｔａ（登録商標）、サイトシンアラビノサイド（シタラビン、Ａｒａ−Ｃ）／チオグアニン、６−メルカプトプリン（メルカプトプリン、６−ＭＰ）、アザチオプリン／Ａｚａｓａｎ、６−チオグアニン（６−ＴＧ）／Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（ＴＥＶＡ）、ペントスタチン／Ｎｉｐｅｎｔ、リン酸フルダラビン／Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、クラドリビン（２−ＣｄＡ、２−クロロデオキシアデノシン）／Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ、フロクスウリジン（５−フルオロ−２）／ＦＵＤＲ（Ｈｏｓｐｉｒａ，  Ｉｎｃ．）、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害剤（ＲＮＲ）、シクロホスファミド／シトキサン（ＢＭＳ）、ｎｅｏｓａｒ、イホスファミド／Ｍｉｔｏｘａｎａ、チオテパ、ＢＣＮＵ−−１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア、１，−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−ニトロソウレア、メチルＣＣＮＵ、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン／Ｍｙｌｅｒａｎ、プロカルバジンＨＣＬ／Ｍａｔｕｌａｎｅ、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、クロラムブシル／Ｌｅｕｋａｒａｎ（登録商標）、メルファラン／アルケラン、シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｍ、ＣＤＤＴＰ）／Ｐｌａｔｉｎｏｌ、カルボプラチン／パラプラチン、オキサリプラチン／Ｅｌｏｘｉｔａｎ、ベンダムスチン、カルムスチン、クロロメチン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ホテムスチン、ロムスチン、マンノスルファン、ネダプラチン、ニムスチン、プレドニマスチン、ラニムスチン、サトラプラチン、セムスチン、ストレプトゾシン、テモゾロミド、トレオスルファン、トリアジクオン、トリエチレンメラミン、チオＴＥＰＡ、四硝酸トリプラチン、トホスファミド、ウラムスチン、ドキソルビシンＨＣＬ／Ｄｏｘｉｌ、クエン酸ダウノルビシン／Ｄａｕｎｏｘｏｍｅ（登録商標）、ミトキサントロンＨＣＬ／Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ、アクチノマイシンＤ、エトポシド／Ｖｅｐｅｓｉｄ、トポテカンＨＣＬ／Ｈｙｃａｍｔｉｎ、テニポシド（ＶＭ−２６）、イリノテカンＨＣＬ（ＣＰＴ−１１）／、ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）、カンプトテシン、ベロテカン、ルビテカン、ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル／Ｔａｘｏｌ、ドセタキセル／Ｔａｘｏｔｅｒｅ、ナノ粒子パクリタキセル、アブラキサン、イクサベピロン、ラロタキセル、オルタタキセル、テセタキセル、ビンフルニンなどを含む。特定���実施形態において、抗癌剤は、カルボプラチン（例えばＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標））、シスプラチン（例えばＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標）、ＰＬＡＴＩＮＯＬ−ＡＱ（登録商標））、シクロホスファミド（例えばＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））、ドセタキセル（例えばＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、ドキソルビシン（例えばＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、エルロチニブ（例えばＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、エトポシド（例えばＶＥＰＥＳＩＤ（登録商標））、フルオロウラシル（例えば５−ＦＵ（登録商標））、ゲムシタビン（例えばＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、メシル酸イマチニブ（例えばＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））、イリノテカン（例えばＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、メトトレキサート（例えばＦＯＬＥＸ（登録商標）、ＭＥＸＡＴＥ（登録商標）、ＡＭＥＴＨＯＰＴＥＲＩＮ（登録商標））、パクリタキセル（例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））、ソラフェニブ（例えばＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、スニチニブ（例えばＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、トポテカン（例えばＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ビンブラスチン（例えばＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（例えばＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標）、ＶＩＮＣＡＳＡＲ  ＰＦＳ（登録商標））から成る群から選択される、１以上の薬物を含む。特定の実施形態において、抗癌剤は、レチノイン酸、レチノイン酸誘導体、ドキソルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、シスプラチン、５−フルオロウラシル、カンプトテシン誘導体、インターフェロン、タモキシフェン、及びタキソールから成る群から選択される、１以上の薬物を含む。特定の実施形態において、抗癌化合物は、アブラキサン、ドキソルビシン、パミドロン酸二ナトリウム、アナストロゾール、エキセメスタン、シクロホスファミド、エピルビシン、トレミフェン、レトロゾール、トラスツズマブ、メゲストロールタモキシフェン、パクリタキセル、ドセタキセル、カペシタビン、酢酸ゴセレリン、ゾレドロン酸、ビンブラスチン、アンチセンス分子、ＳｉＲＮＡなどから成る群から選択される。
【０４８５】
代替的に、エフェクター分子は、薬物、核酸（例えば細胞に送達されるアンチセンス核酸又は別の核酸）、又は好ましくは循環器系への直接暴露から遮蔽される別の治療成分などの治療用組成物を含んでいる、ウィルスカプシド、リポソーム、又はミセルなどの、封入システムを含み得る。抗体に結合されるリポソームを調製する手段は、当業者に周知である（例えば、米国特許第４，９５７，７３５号、Ｃｏｎｎｏｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８５）  Ｐｈａｒｍ．  Ｔｈｅｒ．，  ２８：  ３４１−３６５などを参照）。
【０４８６】
＜Ｂ）エフェクターへの抗体の結合＞
本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）及びエフェクター分子が、任意の順で一緒に結合され得ることを、当業者は認識する。故に、抗体が単鎖ポリペプチドである場合、エフェクター分子は、標的分子のアミノ末端又はカルボキシ末端に結合され得る。前記抗体はまた、エフェクター分子の内部領域に結合され得、又は反対に、エフェクター分子は、結合が分子のそれぞれの活性に干渉しない限り、抗体の内部位置に結合され得る。
【０４８７】
抗体及びエフェクターは、当業者に周知の多くの手段の何れかにより結合され得る。典型的に、エフェクターは、抗体に直接、又はリンカー（スペーサー）を介して抱合される。しかし、特定の実施形態において、両方のエフェクター分子がポリペプチドであるか又はポリペプチドを含む場合、単鎖融合タンパク質としてキメラ分子を組み換えで発現することが好ましい。
【０４８８】
＜抗体へのエフェクター分子の抱合＞
１つの実施形態において、ＣＤ４６特異抗体は、エフェクター分子（例えば、細胞毒素、ラベル、リガンド、薬物、リポソームなど）に化学的に抱合される。化学的に分子を抱合させる手段は、当業者に周知である。
【０４８９】
抗体にエフェクターを結合するための手順は、エフェクター及び／又は抗体の化学構造によって変動する。ポリペプチドは典型的に、様々な官能基；例えば、カルボン酸（ＣＯＯＨ）又は遊離アミン（−ＮＨ２）基を含み、これらは、エフェクターを結合させるためにエフェクター分子上での適切な官能基との反応に利用可能である。
【０４９０】
代替的に、抗体及び／又はエフェクターは、付加的な反応性官能基への曝露又は結合を誘導され得る。誘導体化は、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  Ｉｌｌｉｎｏｉｓから入手可能なものなどの、多くのリンカー分子の何れかの結合を含み得る。
【０４９１】
本明細書で使用されるように「リンカー」は、エフェクター分子に標的分子を結合するために使用される分子である。リンカーは、標的分子及びエフェクター分子の両方への共有結合を形成することができる。当業者に周知の適切なリンカーは、限定されないが、直鎖又は分枝鎖の炭素リンカー、複素環炭素リンカー、又はペプチドリンカーを含む。標的分子とエフェクター分子がポリペプチドである場合、リンカーは、それらの側鎖基を介して（例えば、システインへのジスフィルド結合を介して）構成アミノ酸に結合され得る。しかし、好ましい実施形態において、リンカーは、末端アミノ酸のアルファ炭素のアミノ基又はカルボキシル基に結合される。
【０４９２】
免疫結合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性の誘導体（アジプイミド酸ジメチルなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアナート（トルエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアナートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの、様々な二官能性タンパク質結合剤を使用して作ることができる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：  １０９８  （１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素−１４で標識化した１−イソチオシアナートベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、例示的なものとして、例えば抗体への放射ヌクレオチドの抱合のためのキレート化剤であるが、これに限定されない（例えば、ＷＯ１９９４／０１１０２６（ＰＣＴ／ＵＳ１９９３／０１０９５３）を参照）。
【０４９３】
特定の実施形態において、エフェクター（例えば薬物、リポソームなど）、又はエフェクター、抗体に結合されたリンカーの抱合は、抗体における鎖間ジスルフィド結合の還元から誘導され得るリジン又はシステインなどの、溶媒のアクセス可能な反応性アミノ酸において生じる。特定の実施形態で、システイン抱合は、４つの鎖間ジスルフィド結合の還元後に生じ得る。
【０４９４】
特定の実施形態において、リンカー薬物の既知の数が一貫して抗体において定められた部位に抱合される、部位特異的な抱合が、高度に均質な構築物を生成するために行われ得る。薬物対抗体の比率（ＤＡＲ）が正確に制御されるとともに、様々なリンカー−薬物に合うように仕立てられて（ｔａｉｌｏｒｅｄ）、例えば２−ＤＡＲ又は４−ＤＡＲの部位特異的ＡＤＣを生成することができる。
【０４９５】
部位特異的な抱合を達成するための多くの方法が知られている。例えば、アミノ酸システインは、多くのタンパク質の構造及び機能において不可欠な役割を果たす、反応的なチオール基を含む。システイン残基を介したタンパク質へのチオ反応性プローブの抱合は長い間、タンパク質の標識化の方法であるとともに、抗体薬物抱合体（ＡＤＣ）の生成にも適用された。特定の例示的であるが限定されない実施形態において、このプロセスは、既存のジスルフィド結合（例えば鎖間のジスルフィド結合）の部分還元を含む。
【０４９６】
ジスルフィド結合を維持するための特定の実施形態において、システイン残基はタンパク質へと操作され得る。部位特異的な共役のために導入されたシステイン残基の使用の成功は、システイン置換がタンパク質の構造又は機能を変更しない適切な部位を選択する能力に依存する。これを達成するために、反応性チオールの選択のためのＰｈａｇｅ  Ｅｌｉｓａ（ＰＨＥＳＥＬＥＣＴＯＲ）が、抗体−Ｆａｂ（トラスツズマブ−Ｆａｂ４Ｄ５）への反応性システイン残基の導入、ファージ上でのＦａｂの表示、及び抗原結合に干渉しない反応性システインを確認するためのスクリーニングにより、発達された（例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．  ３３２：  ４１−５２を参照）。
【０４９７】
ＰＨＥＳＥＬＥＣＴＯＲ方法は、特に従来のシステイン抱合と比較した場合に、効果的且つ特異的であると実証された。例えば抗体フラグメント（例えばＦａｂ）及びＰＨＥＳＥＬＥＣＴＯＲ方法を用いて見出されたシステインに最適な部位はまた、完全長の抗体にも適用されることが実証され、データは、他のｍＡｂｓへの部位特異的な抱合のためにこれら部位が十分に作用することを示している（例えば、Ｂｏｓｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１１）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２２：  １９９４−２００４；  Ｂｏｓｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｓｏｃ．  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄ．  ５３：  １４５４−１４６１；  Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１２）  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ３０：１８４−１８９を参照）。
【０４９８】
部位特異的な抱合のための、別の例示的であるが限定されない戦略は、アミノ酸セレノシステイン及び非天然アミノ酸、アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＰｈｅ）などのバイオ直交型の反応性ハンドルを持つアミノ酸の挿入に集中する。このようなアミノ酸を利用するための２つの方法が発達し、共に停止コドンを利用している。しかし、１つの方法は、ｏｐａｌ停止コドンであるＵＧＡをＳｅｃ挿入配列と対にすることによりセレノシステイン（Ｓｅｃ）を組み込み、他の方法は、ｔＲＮＡ／アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼの対を用いてａｍｉｂｅｒ停止コドンにおいてアセチルフェニルアラニンを組み込む。第１の方法に利用されるセレノシステインは、アミノ酸、システインに非常に類似しているが、硫黄原子のセレン原子を適所に含有する。セレノラート基は、チオラート相当物よりも反応的な求核基であり、それをセレノシステインが選択的に活性化される条件下で求電子性化合物との抱合に適用可能なものにする。哺乳動物中には、グルタチオンペルオキシダーゼ及びチオレダクターゼなどのタンパク質を含む、約２５の既知のセレニウム含有タンパク質が存在している（Ｋｒｙｕｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．  ９２００３）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ３００：  １４３９−１４４３）。標準条件下で、ＵＧＡは転写の終端をコード化し；しかし、Ｓｅｃ含有タンパク質の３’ＵＴＲの中に位置するＳｅｃ挿入配列（ＳＥＣＩＳ）の存在下で、終端は、ｍＲＮＡ二次構造の形成により妨げられ、Ｓｅｃは、ＵＧＡコドンに挿入される（Ｃａｂａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｐｅｌａｎｄ  （２００６）  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．  ６３：  ７３−８１）。Ｓｅｃ挿入は、遺伝子の３’端部でのＵＧＡコドン及びＳＥＣＩＳの挿入により、非Ｓｅｃコーディング遺伝子へと操作され得る。この技術は、とりわけ、Ｓｅｃ標識化及び後のｍＡｂの部位特異的な抱合に使用された（例えば、Ｈｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ４８：  １２０４７−１２０５７を参照）。
【０４９９】
部位特異的な抱合のためのまた別の例示的な方法は、非天然アミノ酸、ｐ−アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＰｈｅ）を利用する。ｐＡｃＰｈｅは、オキシムのライゲーションを介して、アルコキシアミンを含有する薬物へ選択的に抱合され得るケト基を含んでいる。抗体にｐＡｃＰｈｅを組み込むために、ａｍｂｅｒ停止コドンが所望の位置で抗体へと置換される。その後、抗体ｃＤＮＡは、アンバーサプレッサーｔＲＮＡ、及び適切に対となった突然変異体ｔＲＮＡシンセターゼにより共発現される。ｔＲＮＡシンセターゼは、ａｍｂｅｒｔＲＮＡにｐＡｃＰｈｅを載せ、故にｐＡｃＰｈｅは、ａｍｂｅｒ部位ＵＡＧにて抗体へ組み込まれる（例えば、ｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  ９２００７）  Ｎａｔ．  Ｍｅｔｈ．  ４：  ２３９−２４４；  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １００：  ５６−６１；  Ａｘｕｐ  （２０１２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １０９：  １６１０１−１６１１６を参照）。
【０５００】
ｐＡｃＰｈｅに加えて、他の非天然アミノ酸は、ｔＲＮＡ／アミノアシル‐ｔＲＮＡシンセターゼの対を一致させることを含む、同様のプロセスを用いて、部位特異的な抱合における使用のために利用される（例えば、Ｙｏｕｎｇ  （２００２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３９５：  ３６１−３７４；  Ｋｉｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ；  ９９：  １９−２４を参照）。
【０５０１】
様々な実施形態において、結合形成を触媒する酵素の使用は、部位特異的な抱合における使用のために利用され得る。例えば、グリコトランスフェラーゼ（ｇｌｙｃｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）のプラットフォームは、抗体上での糖鎖付加部位に化学的に活性な糖部分を結合するために、突然変異体グリコトランスフェラーゼを使用する。その後、選択された分子は、糖部分上で化学的ハンドルに抱合され得る。別の例示的であるが限定されない方法において、トランスグルタミナーゼが、リンカー／薬物上のアミン基と、抗体上の操作されたグルタミン残基との間に結合を形成するために使用される。
【０５０２】
グリコトランスフェラーゼは、オリゴ糖の合成に関与するタンパク質の大きなファミリーであり、活性化された糖ヌクレオチドからの糖残基の、糖アクセプター又は糖タンパク質／脂質への移動に起因する。様々なグリコトランスフェラーゼの構造が知られており、触媒ポケットにおける少数のアミノ酸により糖ドナー特異性が判定されることを明らかにする（Ｑａｓｂａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｃｉ．  ３０：  ５３−６２）。この知識を用いて、残基は、グリコトランスフェラーゼ、例えばＢ４Ｇａｌ−Ｔ１のポケットの中で突然変異させられて、ドナー特異性を広げると共に、化学的に反応性の糖残基である２−ケト−Ｇａｌの移動を可能にした（例えば、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７：  ２０８３３−２０８３９を参照）。この技術は、糖鎖付加部位を含有する任意の脂質又はタンパク質へ、化学的に反応性の糖を移す能力を可能にする。ヒトＩｇＧ抗体は、Ｆｃフラグメントの保存されたＡｓｎ−２９７にてＮ−糖鎖付加部位を含んでいる。この部位に結合された多糖類は通常、複雑なものであるが、Ｇ０にまで脱ガラクトシル化され得、そこでは、突然変異体グリコトランスフェラーゼは高効率でＣ２−ケト−Ｇａｌを移動させることができる（例えば、Ｂｏｅｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２０：  １２２８−１２３６を参照）。その後、Ｃ２−ケト−Ｇａｌの活性な化学的ハンドルが、直交の反応性の基を持つ生体分子に繋げられ得る。この方法は、抗Ｈｅｒ２抗体であるトラスツズマブのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８アミノオキシアセトアミドとの部位特異的な抱合のために上手く使用されるとともに、部位特異的ＡＤＣ生成のために実行可能な技術である（同文献）。
【０５０３】
第２のプラットフォームは、遊離アミン基及びグルタミン側鎖との間の共有結合の形成を触媒するために、トランスグルタミナーゼを利用する。Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ（ｍＴＧ）からのトランスグルタミナーゼは市販で入手可能であり、タンパク質架橋剤として広く使用されている（例えば、Ｙｏｋｏｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ６４：  ４４７−４５４を参照）。ｍＴＧは、グリコシル化された抗体のＦｃ領域において自然に生じるグルタミン残基の何れも認識しないが、抗体へと操作され得る「グルタミンタグ」を認識する（例えば、Ｊｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１０）  Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．  ４９：  ９９９５−９９９７を参照）。例示的に、グルタミンタグであるＬＬＱＧは、上皮成長因子受容体を標的とする抗体の定常領域において異なる部位へと操作される。その後、ｍＴＧを使用して、これらの部位を、蛍光団又はモノメチルドラスタチン１０（ＭＭＡＤ）、及び、優れた生物物理的特性と高度の抱合を有すると見出された様々な部位と、抱合させる。ｍＴＧはまた、抗Ｈｅｒ２及び抗Ｍ１Ｓ１抗体上でグルタミンタグに抱合することが可能である。抗Ｍ１Ｓ１−ｖｃ−ＭＭＡＤ抱合体は、強力なインビトロ及びインビボの活性を表示し、この方法を用いた抱合が抗体結合又は親和性を変更せず、ＡＤＣの部位特異的な抱合におけるこの方法の有用性を実証したことを示している（例えば、Ｓｔｒｏｐ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  ２０：  １６１−１６７を参照）。
【０５０４】
グリコトランスフェラーゼ及びトランスグルタミナーゼに加えて、他の酵素が、タンパク質の標識化における使用のために調べられた（Ｓｕｎｂｕｌ  ａｎｄ  Ｙｉｎ  （２００９）  Ｏｒｇ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ７：  ３３６１−３３７１）。１つのそのような酵素であるホルミルグリシン生成酵素は、配列ＣｘＰｘＲを認識すると共に、ホルミルグリシンを形成するためにシステイン残基を酸化させ、それによりアルデヒドタグを持つタンパク質を生成する。その後、アルデヒド基は、例えばｈｙｄｒｏｚｉｎｏ−Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙにより、選択された分子に抱合され得る。
【０５０５】
抗体などのタンパク質への、放射性核種金属キレート、毒素、及び薬物を含む様々な化合物の結合のための、他の多くの手順及びリンカー分子が知られている（例えば、欧州特許出願第１８８，２５６号；米国特許第４，６７１，９５８号、４，６５９，８３９号、４，４１４，１４８号、４，６９９，７８４号；４，６８０，３３８号；４，５６９，７８９号；及び４，５８９，０７１号；並びにＢｏｒｌｉｎｇｈａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４７：  ４０７１−４０７５を参照）。特に、様々な免疫毒素の生成は、当該技術分野内で周知であり、例えば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：  Ａｉｍｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｇｉｃ  Ｂｕｌｌｅｔ，”  Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  ｐｐ．  １６８−１９０  （１９８２），  Ｗａｌｄｍａｎｎ  （１９９１）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２５２：  １６５７，  米国特許第４，５４５，９８５号及び４，８９４，４４３号の中で見出すことができる。
【０５０６】
幾つかの状況において、免疫結合体がその標的部位に到達した場合に、抗体からエフェクターを放つことが望ましい。それ故、エフェクターが標的部位にて放たれる場合、標的部位の付近で開裂可能な結合を含む免疫結合体が使用され得る。抗体から薬剤を放つための結合の開裂は、免疫結合体が標的細胞の内部に又は標的部位の付近にさらされる酵素の活性又は状態により、促進され得る。標的部位が腫瘍である場合、腫瘍部位に存在する条件下（例えば、腫瘍関連の酵素又は酸性ｐＨにさらされた場合）で開裂可能なリンカーが、使用され得る。
【０５０７】
多くの異なる開裂可能なリンカーが、当業者に周知である。米国特許第４，６１８，４９２号；第４，５４２，２２５号、及び第４，６２５，０１４号を参照。例示的な開裂可能なリンカーは、限定されないが、酸不安定性リンカー、プロテアーゼ開裂可能なリンカー、ジスルフィドリンカーなどを含む。酸不安定性リンカーは、血液中で遭遇されるｐＨレベルで安定するように設計されるが、リソソーム中の低ｐＨ環境に遭遇する場合には不安定となり且つ劣化する。プロテアーゼ開裂可能なリンカーも、血液／血漿中で安定するように設計されるが、リソソーム酵素による開裂後、癌細胞中のリソソームの内部で急速に遊離（ｆｒｅｅ）薬物を放つ。それらは、リソソームの内部の高レベルのプロテアーゼ活性を利用し、典型的には、例えば、カテプシンにより急速に加水分解されるジペプチドＶａｌ−Ｃｉｔ結合により生じるように、これらプロテアーゼにより認識され且つ開裂されるペプチド配列を含む。ジスルフィドリンカーは、細胞の内部で遊離薬物を放つために高レベルの細胞内の還元グルタチオンを利用する。
【０５０８】
様々な放射線診断化合物、放射線治療化合物、薬物、毒素、及び他の薬剤を抗体に結合するために報告された、数多くの方法に照らして、当業者は、与えられた薬剤を抗体又は他のポリペプチドに結合するのに適切な方法を決定することができる。
【０５０９】
＜キレートの抱合＞
特定の実施形態において、前記エフェクターは、抗体又はエピトープタグに結合されるキレートを含む。抗ＣＤ４６抗体は、対応するエピトープタグ又は抗体を有しており、それにより、抗体のキレートへの単純な接触の結果、抗体のエフェクターとの結合がもたらされる。その部分を使用する前に組み合わせの工程が行われるか（標的化戦略）、又は、キレートを送達する前に標的組織を抗体に結合することができる。様々な標的部分に結合するのに適切なキレートを生成する方法は、当業者に周知である（例えば、米国特許第６，１９０，９２３号、６，１８７，２８５号、６，１８３，７２１号、６，１７７，５６２号、６，１５９，４４５号、６，１５３，７７５号、６，１４９，８９０号、６，１４３，２７６号、６，１４３，２７４号、６，１３９，８１９号、６，１３２，７６４号、６，１２３，９２３号、６，１２３，９２１号、６，１２０，７６８号、６，１２０，７５１号、６，１１７，４１２号、６，１０６，８６６号、６，０９６，２９０号、６，０９３，３８２号、６，０９０，８００号、６，０９０，４０８号、６，０８８，６１３号、６，０７７，４９９号、６，０７５，０１０号、６，０７１，４９４号、６，０７１，４９０号、６，０６０，０４０号、６，０５６，９３９号、６，０５１，２０７号、６，０４８，９７９号、６，０４５，８２１号、６，０４５，７７５号、６，０３０，８４０号、６，０２８，０６６号、６，０２２，９６６号、６，０２２，５２３号、６，０２２，５２２号、６，０１７，５２２号、６，０１５，８９７号、６，０１０，６８２号、６，０１０，６８１号、６，００４，５３３号、及び６，００１，３２９号を参照）。
【０５１０】
＜融合タンパク質の生成＞
抗体及び／又は、エフェクターは、比較的短い（例えば約５０未満のアミノ酸）である場合に、標準の化学的ペプチド合成技術を用いて合成され得る。両方の分子が比較的短い場合、キメラ分子は単一の隣接するポリペプチドとして合成され得る。代替的に、標的分子及びエフェクター分子は別々に合成され、その後、一方の分子のアミノ末端を他方の分子のカルボキシル末端で縮合し、それによりペプチド結合を形成することにより融合され得る。代替的に、標的分子及びエフェクター分子は各々、ペプチドスペーサー分子の一端で縮合され、それにより隣接する融合タンパク質を形成することができる。
【０５１１】
配列のＣ末端アミノ酸が不溶性支持体に結合され、その後配列の中の残りのアミノ酸が連続的に付加される、固相合成は、本発明のポリペプチドの化学合成に好ましい方法である。固相合成のための技術は、Ｂａｒａｎｙ  ａｎｄ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；  ｐｐ．  ３  ２８４  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｂｉｏｌｏｇｙ．  Ｖｏｌ．  ２：  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｐａｒｔ  Ａ．，  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ８５：  ２１４９  ２１５６  （１９６３），  及びＳｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌ．  （１９８４）によって説明されている。
【０５１２】
特定の実施形態において、本発明のキメラ融合タンパク質は、組み換えＤＮＡ方法を用いて合成される。通常、この方法は、融合タンパク質をコード化するＤＮＡ配列を作成する工程、特定のプロモーターの制御下で発現カセットにＤＮＡを配する工程、宿主中にタンパク質を発現する工程、発現したタンパク質を分離する工程、及び、必要な場合にタンパク質を復元する工程を含む。
【０５１３】
本発明の融合タンパク質をコード化するＤＮＡは、任意の適切な方法、例えば、適切な配列のクローン化及び制限、又は、Ｎａｒａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ６８：  ９０−９９のリン酸トリエステル方法；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７９）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ６８：  １０９  １５１のホスホジエステル方法；  ｔｈｅ  ｄｉｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８１）  Ｔｅｔｒａ．  Ｌｅｔｔ．，  ２２：  １８５９  １８６２のジエチルホスホロアミダイト方法；及び米国特許第４，４５８，０６６号の固形支持体方法などの方法による直接化学合成を含む方法により、調製され得る。
【０５１４】
化学合成は、単鎖のオリゴヌクレオチドを生成する。これは、相補的配列によるハイブリダイゼーション、又は、テンプレートとして一本鎖を用いたＤＮＡポリメラーゼによる重合により、二本鎖ＤＮＡに変換され得る。当業者は、ＤＮＡの化学合成が約１００の塩基の配列に限定されるが、より長い配列が、より短い配列のライゲーションにより獲得され得ることを認識する。
【０５１５】
代替的に、特定の実施形態において、サブ配列がクローン化され、適切なサブ配列は適切な制限酵素を用いて開裂される。その後、フラグメントは所望のＤＮＡ配列を生成するためにライゲートされ得る。
【０５１６】
特定の実施形態において、本発明の融合タンパク質をコード化するＤＮＡは、ＰＣＲクローニング法を使用してクローン化され得る。
【０５１７】
抗体及びエフェクターが、特定の実施形態において、実質的に直接一緒に結合される一方で、当業者は、前記分子がスペーサー、例えば１以上のアミノ酸（例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８０）から成るペプチドスペーサーにより分離され得ることを認識する。一般的に、スペーサーは、タンパク質を結合するため、又は、幾つかの最小距離又はそれらの他の空間的関係を維持するため以外に、特異的な生物活性を有していない。しかし、スペーサーの構成アミノ酸は、フォールディング、正味電荷、又は疎水性などの分子の幾つかの特性に影響を及ぼすように選択され得る。
【０５１８】
融合タンパク質をコード化する核酸配列は、Ｅ．  ｃｏｌｉ、他の細菌宿主、酵母菌、及び、ＣＯＳ、ＣＨＯ、並びにＨｅＬａ細胞ライン及び骨髄腫細胞株などの様々な高等真核細胞を含む、様々な宿主細胞において発現され得る。組み換え型タンパク質遺伝子は、各宿主に適切な発現制御配列に操作可能に結合される。
【０５１９】
本発明のプラスミドは、Ｅ．ｃｏｌｉ及びリン酸カルシウムによる処置のための塩化カルシウム形質転換、又は哺乳動物細胞のための電気穿孔などの、周知の方法により選択された宿主細胞に移動され得る。プラスミドにより変形した細胞は、ａｍｐ、ｇｐｔ、ｎｅｏ、及びｈｙｇの遺伝子などの、プラスミド上に含まれる遺伝子により付与された抗生物質耐性により選択され得る。
【０５２０】
一旦発現されると、組み換え型融合タンパク質は、硫酸アンモニウム沈殿法、アフィニティカラム、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動法などの、当該技術分野の表十の手順に従って生成され得る（通常、Ｒ．  Ｓｃｏｐｅｓ  （１９８２）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎ．Ｙ．；  Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ  （１９９０）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．  １８２：  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．  Ｎ．Ｙ．を参照）。少なくとも約９０から９５％の均質性の実質的に純粋な組成物が好ましく、９８から９９％以上の均質性が、薬学的な用途に最も好ましい。一旦、所望されるように部分的に、又は均質性となるように精製されると、後にポリペプチドが治療に使用され得る。
【０５２１】
当業者は、化学合成、生物学的発現、又は精製の後に、融合タンパク質が構成要素のポリペプチドの固有の立体構造とは実質的に異なる構造を有し得ることを認識する。この場合、ポリペプチドを変性させ且つ還元させて、次いでポリペプチドを好ましい構造にリフォールディングさせることが必要な場合もある。タンパク質を還元且つ変性させるとともに、リフォールディングを誘導する方法は、当業者に周知である（例えば、Ｄｅｂｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２６８：  １４０６５−１４０７０；  Ｋｒｅｉｔｍａｎ  ａｎｄ  Ｐａｓｔａｎ  （１９９３）  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．  Ｃｈｅｍ．，  ４：  ５８１−５８５；及びＢｕｃｈｎｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２０５：  ２６３−２７０を参照）。
【０５２２】
当業者は、融合タンパク質の生物活性を減らすことなく、融合タンパク質に対して修飾を行うことができることを認識する。幾つかの修飾は、標的分子のクローン化、発現、又は融合タンパク質への組み込みを促進するために行われ得る。そのような修飾は当業者に周知であり、例えば、開始部位をもたらすためにアミノ末端に付加されるメチオニン、又は、都合良く位置付けられた制限部位或いは終結コドンを作成するために何れかの末端に配される付加的なアミノ酸を含む。
【０５２３】
＜医薬組成物＞
本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体（例えばＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２、３Ｇ７ＲＹ（ａｋａ  ３Ｇ８）、ＹＳ６、ＹＳ１、ＹＳ３、ＹＳ４、ＹＳ８、ＹＳ７、ＹＳ９、ＹＳ１０、ＹＳ１１、３Ｇ７ＨＹ、３Ｇ７ＮＹ、３Ｇ７、ＳＢ２、２Ｃ８、及び／又はＵＡ８ｋａｐｐａ）、及びその免疫結合体は、予防処置のためであるが主に治療処置のために、非経口、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）、経口、或いは局所（ｌｏｃａｌ）の投与（例えば、腫瘍部位に注入される）、エアロゾル投与、又は経皮投与に有用である。医薬組成物は、投与方法に依存して、様々な単位剤形で投与され得る。例えば、経口投与に適している単位剤形は、粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、及びトローチ剤を含む。本明細書に記載される抗体及び／又はその免疫結合体、並びに本明細書に記載される抗体及び／又はその免疫結合体を含む医薬組成物は、経口投与時に、消化から保護されるのが好ましいことが、認識される。このことは、当業者に既知の多くの手段、例えば、タンパク質を組成物と複合してタンパク質に酸加水分解及び酵素加水分解に対する耐性を付与することにより、又は、リポソームなどの適切な耐性を持つ担体中にタンパク質を包むことにより、達成され得る。消化からタンパク質を保護する手段は、当該技術分野で周知である。
【０５２４】
様々な実施形態において、薬学的に許容可能な担体と一緒に処方される組成物、例えば、抗ＣＤ４６抗体、或いはその抗原結合部分、或いはそれらの免疫結合体の１つ又は組み合わせを含有している医薬組成物が、提供される。
【０５２５】
本明細書で使用されるように「薬学的に許容可能な担体」は、生理学的に適合可能な、任意の及び全ての溶媒、分散液媒体、コーティング、抗菌性且つ抗真菌性の薬剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。好ましくは、前記担体は、（例えば注射又は注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊椎、又は上皮の投与に適している。投与経路に依存して、活性化合物、即ち抗体、免疫結合体は、酸の作用、及び化合物を不活性化し得る他の自然条件から化合物を保護するための物質中でコーティングされ得る。
【０５２６】
特定の実施形態において、抗体及び／又は免疫結合体は、「天然の」形態、又は、所望される場合、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、誘導体などの形態で投与され得、ここで、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、又は誘導体は、薬理学的に適切であり、即ち、本件方法に有効である。活性剤の塩、エステル、アミド、プロドラッグ、及び他の誘導体は、有機合成化学における当業者に既知の、及び、例えばＭａｒｃｈ  （１９９２）  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ４ｔｈ  Ｅｄ．  Ｎ．Ｙ．  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅに記載される、並びに上述のような標準の手順を用いて調製され得る。
【０５２７】
例示的に、薬学的に許容可能な塩は、塩を形成することができる官能性を持つ、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体の何れかのために調製され得る。薬学的に許容可能な塩は、親化合物の活性を保持して、投与される被験体に対し、及び投与される状況において任意の有毒又は有害作用をもたらすことのない任意の塩である。
【０５２８】
様々な実施形態において、薬学的に許容可能な塩は、有機塩基又は無機塩基に由来し得る。前記塩は、一価又は多価イオンであり得る。特に対象となるものは、無機イオン、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウムである。有機塩は、アミン、特に、モノアルキルアミン、ジアルキルアミン、及びトリアルキルアミン或いはエタノールアミンなどのアンモニウム塩で作られ得る。塩はまた、カフェイン、トロメタミン、及び同様の分子で形成され得る。
【０５２９】
塩、エステル、アミド、プロドラッグなどとして薬学的に活性剤を処方する方法は、当業者に周知である。例えば、塩は、典型的に適切な酸との反応に関与する従来の方法を用いて、遊離塩基から調製され得る。通常、薬物の塩基形態は、メタノール又はエタノールなど極性有機溶媒の中で溶かされ、酸がそれに加えられる。結果として生じる塩は、沈殿するか、又は、あまり極性でない溶媒の添加により溶媒から運ばれ得る。酸付加塩の調製に適切な酸は、限定されないが、有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸など、同様に、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などを含む。酸付加塩は、適切な塩基による処置により遊離塩基へと再変換され得る。本明細書中の活性剤の特定の特に好ましい酸付加塩は、塩酸又は臭化水素酸を使用するので調製され得るハロゲン塩を含む。反対に、本発明の活性剤の塩基性塩の調製物は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンなどの薬学的に許容可能な塩基を用いて、同様の方法で調製される。特に好ましい塩基性塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、及び銅塩を含む。
【０５３０】
塩基性薬物の塩形態の調製のために、カウンターイオンのｐＫａは、薬物のｐＫａよりも低い、少なくとも約２のｐＨ単位であることが好ましい。同様に、酸性薬物の塩形態の調製のために、カウンターイオンのｐＫａは、薬物のｐＫａよりも高い、少なくとも約２のｐＨ単位であることが好ましい。これは、カウンターイオンが、塩の安定水準に達するように溶液のｐＨをｐＨｍａｘよりも低いレベルにすることを可能にし、そこでは、塩の可溶性が、遊離酸又は遊離塩基の可溶性よりも優先される。活性医薬成分（ＡＰＩ）、及び酸又は塩基におけるイオン化可能な基のｐＫａ単位における差異の一般化された規則は、プロトン移動を精力的に好ましいものにすることを目的としている。ＡＰＩ及びカウンターイオンのｐＫａが著しく異なるものではない場合、固形錯体が生じ得るが、水性環境において急速に不釣合となり得る（即ち、薬物及びカウンターイオンの個々の実体に分かれる）。
【０５３１】
好ましくは、カウンターイオンは薬学的に許容可能なカウンターイオンである。適切な陰イオン塩形態は、限定されないが、酢酸塩、安息香酸塩、ベンジル酸塩、酒石酸水素塩、臭化物、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化物、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、臭化メチル、硫酸メチル、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモエート（ｅｍｂｏｎａｔｅ）、リン酸塩及び二リン酸塩、サリチル酸塩及び二サリチル酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシラート、トリエチオダイト、吉草酸塩などを含み、一方で適切な陽イオン塩形態は、限定されないが、アルミニウム、ベンザチン、カルシウム、エチレンジアミン、リジン、マグネシウム、メグルミン、カリウム、プロカイン、ナトリウム、トロメタミン、亜鉛などを含む。
【０５３２】
エステルの調製は典型的に、抗体及び／又は免疫結合体の分子構造内に存在するヒドロキシル基及び／又はカルボキシル基の官能基化を含む。特定の実施形態において、エステルは典型的に、遊離アルコール基のアシル置換誘導体、即ち、Ｒがアルキル、好ましくは低級アルキルである式ＲＣＯＯＨのカルボン酸に由来する部分である。エステルは、所望される場合、従来の水素化分解又は加水分解の手順の使用により、遊離酸に再変換され得る。
【０５３３】
アミドはまた、当業者に既知の、又は関連する文献に記載されている技術を使用して調製され得る。例えば、アミドは、適切なアミン反応物を使用してエステルから調製され得、或いは、アンモニア又は低級アルキルアミンとの反応により無水物又は酸塩化物から調製され得る。
【０５３４】
本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体を含む医薬組成物は、単独で、又は併用療法、即ち、他の薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、併用療法は、以下に記載される抗癌剤などの少なくとも１以上の付加的な治療剤を含む抗体又は免疫結合体を含んでいる。医薬組成物はまた、放射線治療及び／又は手術と合わせて投与され得る。
【０５３５】
本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体を含む組成物は、当該技術分野で既知の様々な方法により投与され得る。当業者により認識されるように、投与の経路及び／又は形態は、所望の結果に依存して変動する。活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達系を含む、制御放出製剤などの、急速な放出に対して化合物を保護する担体で調製され得る。生物分解性で生体適合性のポリマーが使用され、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、及びポリ乳酸などがある。そのような製剤の調製のための多くの方法が、特許化され、或いは、一般的に当業者に知られている（例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．  Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９７８を参照）。
【０５３６】
特定の実施形態において、抗ＣＤ４６抗体又は免疫結合体の投与は、抗体又は免疫結合体の組成物をコーティングすることにより、又は、抗体又は免疫結合体、即ちその不活性化を妨げる物質を同時投与することにより促進され得る。例えば、前記化合物は、適切な担体、例えばリポソーム又は希釈剤の中で被験体に投与され得る。薬学的に許容可能な賦形剤は、限定されないが生理食塩水及び水性緩衝液溶液を含む。リポソームは、限定されないが、従来のリポソームと同様に、水中油中水型ＣＧＦ乳剤も含む。
【０５３７】
薬学的に許容可能な担体は、滅菌注入可能な溶液又は分散液の即席の調製のために、滅菌水溶液又は分散液、及び滅菌粉末剤を含む。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で既知である。任意の従来の媒体又は薬剤が活性化合物に適合しない限りは、医薬組成物におけるそれらの使用が熟考される。補足の活性化合物も組成物に組み込まれ得る。
【０５３８】
様々な実施形態において、治療用組成物は典型的に、製造及び保存の条件の下で滅菌され且つ安定している。組成物は、脂質又はリポソーム、或いは高薬物濃度を含有するのに適切な他の規則構造において、溶液、即ちマイクロエマルジョンとして処方され得る。特定の実施形態において、担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、並びにそれらの適切な混合物を含有する、溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合に必要とされた粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって、維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトール、又ル塩化ナトリウムなどの多価アルコールを含むことが望ましい。注入可能な組成物の持続的吸収は、組成物中に、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩及びゼラチンを含ませることにより、引き起こされ得る。
【０５３９】
滅菌注入可能な溶液は、殺菌精密ろ過後に、必要とされるように、上記で列挙された成分の１つ又は組み合わせを含む適切な溶媒に必要とされる量で、活性化合物（例えば、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体）を組み込むことにより、調製され得る。通常、分散液は、上記で列挙されたものから、塩基性分散媒及び他の必要な成分を含む、滅菌ビヒクルへと活性化合物を組み込むことにより調製される。無菌注入可能な溶液の調製のための滅菌粉末剤の場合、例示的な調製方法は、活性成分の粉末に加えて、以前に滅菌濾過されたその溶液から任意の付加的な所望の成分をもたらす、真空乾燥及び冷凍乾燥（凍結乾燥）を含む。
【０５４０】
投与レジメンは、最適な所望の反応（例えば治療効果）をもたらすように調整される。例えば、単一のボーラスが投与され、又は幾つかの分割量が経時的に投与され、或いはその用量は、治療状況の緊急事態により示されるように比例して減少又は増大され得る。例えば、特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体は、皮下注射により１日１回又は２回、週に１回又は２回、或いは月に１回又は２回、投与され得る。
【０５４１】
投与のしやすさ及び投与量の均一性のために、単位剤形で非経口組成物を処方することが、特に都合が良い。本明細書で使用されるような単位剤形は、処置される被験体のための単一の投与量として適切な、物理的に別個の単位を指す。各単位は、必要とされた医薬担体に関連した所望の治療効果を生み出すように計算された、活性化合物の予め定められた量を含んでいる。単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性並びに達成される特定の治療効果、及び（ｂ）個体の処置のためのそのような活性化合物を調合する当該技術分野における固有の制限により、及びそれらに直接依存して指示される。
【０５４２】
特定の実施形態において、製剤は医薬抗酸化剤を含む。薬学的に許容可能な抗酸化剤の例は、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、プロピルガレート、αトコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン、四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート化剤を含む。
【０５４３】
治療用組成物について、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体の製剤は、経口、経鼻、局所的（バッカル及び舌下を含む）、直腸、膣内、及び／又は非経口の投与に適しているものを含む。製剤は、単位剤形で都合良く提示され得、薬学の技術分野で既知の任意の方法により調製され得る。単一の剤形を生成するために担体物質と組み合わされ得る活性成分の量は、処置される被験体及び投与の特定の形態に依存して変動する。単一の剤形を生成するために担体物質と組み合わされ得る活性成分の量は通常、治療効果を生み出す組成物の量である。通常、１００パーセントの中から、この量は、活性成分の約０．００１パーセントから約９０パーセント、好ましくは約０．００５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約０．０１パーセントから約３０パーセントまでの範囲に及ぶ。
【０５４４】
膣内投与に適している、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体の製剤は、当該技術分野で適切であると知られるそのような担体を含有している、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、又は噴霧の製剤も含む。本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体の局所又は経皮投与のための剤形は、粉末剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶液、パッチ、及び吸入薬を含む。特定の実施形態において、活性化合物は、無菌条件下で、薬学的に許容可能な担体、及び必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝液、又は噴射剤と混合され得る。
【０５４５】
句「非経口投与」及び「非経口投与される」は、本明細書で使用されるように、通常は注射による、腸内及び局所の投与以外の投与の形態を表わし、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、脊髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、蜘蛛膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内の注射、並びに注入を含む。
【０５４６】
本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体を含む医薬組成物中で利用され得る、適切な水性及び非水性の担体の例は、限定されないが、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適切な混合物、オリーブ油などの植物油、及び、オレイン酸エチル及びなどの注入可能な有機エステルなどを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散の場合に必要とされる粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって、維持され得る。
【０５４７】
様々な実施形態において、このような組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントを含み得る。当該技術分野で周知のアジュバントの特定の例は、例えば、無機アジュバント（アルミニウム塩、例えばリン酸アルミニウム、水酸化アルミニウムなど）、有機アジュバント（例えばスクワレン）、油ベースのアジュバント、ビロソーム（例えばインフルエンザウィルス由来の膜結合型のヘマグルチニン及びノイラミニダーゼを含んでいるビロソーム）を含む。
【０５４８】
製剤における微生物の存在の予防は、避妊手術、及び／又は、様々な抗菌性且つ抗真菌性の薬剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノールなどの包含の両方により、確実とされ得る。糖や塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含ませることが望ましい場合もある。加えて、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの、吸収を遅延させる薬剤を含ませることによって、注入可能な医薬形態の持続的吸収が引き起こされ得る。
【０５４９】
本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体は、ヒト及び動物に医薬として投与される場合、単独で、又は、薬学的に許容可能な担体と組み合わせて活性成分の例えば０．００１から９０％（より好ましくは０．０１から３０％などの、０．００５から７０％）を含んでいる医薬組成物として与えられ得る。
【０５５０】
選択された投与経路にかかわらず、適切な水和形態で使用され得る、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体、及び／又は医薬組成物は、当業者に知られる従来の方法により、薬学的に許容可能な剤形へと処方される。
【０５５１】
本発明の医薬組成物中の活性成分（例えば本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体）の実際の投与量レベルは、患者に対して有毒となることなく、特定の患者、組成物、及び投与の形態のために所望される治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るように、変動され得る。選択された投与量レベルは、利用される本発明の特定の組成物、又はそのエステル、塩、或いはアミドの活性、投与経路、投与の時間、利用される特定の化合物の排出の速度、処置の持続時間、他の薬物、利用される特定の組成物と組み合わせて使用される化合物及び／又は物質、処置される患者の年齢、性別、体重、疾病、健康状態、及び以前の病歴、及び医学の分野で周知の要因を含む、様々な薬物動態学的要因に依存する。当該技術分野において通常の技術を有している医師又は獣医は、必要とされる医薬組成物の有効な量を容易に判定し且つ処方することができる。例えば、医師又は獣医は、所望の治療効果を達成し、且つ所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増大させるのに必要とされるよりも下のレベルで、医薬組成物中に利用される本発明の化合物の用量を開始することができる。一般に、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体の適切な一日量は、治療効果を生み出すのに有効な最低の用量である化合物の量である。そのような有効量は通常、上述の要因に依存する。特定の実施形態において、静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下の投与、好ましくは標的の部位の付近への投与が好ましい。所望される場合、治療用組成物の有効な一日量は、単一の投与量として、又は、随意に単位剤形において一日にわたって適切な間隔で別個に投与される２、３、４、５、６以上のサブ用量として、投与され得る。本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体を単独で投与することが可能であるが、典型的には医薬製剤（組成物）として化合物を投与することが好ましい。
【０５５２】
特定の実施形態において、治療用組成物は、当該技術分野で既知の医療器具により投与され得る。例えば、例示的な実施形態において、本明細書に記載される抗体及び／又は免疫結合体は、米国特許第５，３９９，１６３号、５，３８３，８５１号、５，３１２，３３５号、５，０６４，４１３号、４，９４１，８８０号、４，７９０，８２４号、又は４，５９６，５５６号に開示される器具などの、針がない皮下注射装置により投与され得る。有用な周知のインプラント及びモジュールの例は、例えば、制御された速度で薬物を分配するための移植可能な微小注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号、皮膚を介して薬物を投与するための治療装置を開示する米国特許第４，４８６，１９４号、正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号、連続的な薬物送達のための流量を変更することが可能である移植可能な注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号、複数のチャンバの区画を有している浸透薬物送達システムを開示する米国特許第４，４３９，１９６号、及び浸透薬物送達システムを開示する米国特許第４，４７５，１９６号に記載される。他の多くのそのようなインプラント、送達システム、及びモジュールが、当業者に知られている。
【０５５３】
特定の実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体及び／又は免疫結合体は、インビボでの適切な分布を確実にするために処方され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を除外する。本発明の治療用化合物がＢＢＢを渡るのを確実にするために（所望される場合）、それらを例えばリポソームにおいて処方することができる。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；第５，３７４，５４８号；及び第５，３９９，３３１号を参照。リポソームは、特異的な細胞又は器官へと選択的に運ばれる１以上の部分を含み得、故に標的とされた薬物送達を増強する（例えば、Ｒａｎａｄｅ  （１９８９）  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２９：  ６８５）。例示的な標的部分は、限定されないが、葉酸塩又はビオチン（例えば米国特許第５，４１６，０１６号を参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８８）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １５３：  １０３８）；抗体（Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３５７：１４０；  Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ３９：１８０）；サーファクタントタンパク質Ａ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １２３３：１３４）を含む。
【０５５４】
＜キット＞
放射性又は他のエフェクターが診断用及び／又は治療用の薬剤として使用される場合、放射標識化された化合物の頻繁に不十分な保存期間、及び／又は使用される放射性核種の短い半減期により、組成物をユーザーが自由に使える状態にするのは、高頻度で不可能である。そのような場合、ユーザーは、臨床病院、医師のオフィス、又は実験室において、放射性核種との標識化反応を行なうことができる。この目的、又は他の目的のために、様々な反応成分が後に、いわゆる「キット」の形でユーザーに提供され得る。所望の反応を行うのに必要な操作が、自由に使用できる施設を使用することによりユーザーが所望の組成物をキットから調製することができるほど可能な限り単純となるように、キットが好ましくは設計される。それ故、本発明はまた、本発明に従って組成物を調製するためのキットにも関連する。
【０５５５】
特定の実施形態において、そのようなキットは、本明細書に記載される１以上の抗体又は免疫結合体を含む。抗体又は免疫結合体は、所望される場合、不活性な薬学的に許容可能な担体及び／又は配合剤及び／又はアジュバントを加えて、提供され得る。加えて、キットは随意に、適切な放射性核種（又は他の活性剤）の塩或いはキレートの溶液、（ｉｉｉ）キットに提示される成分を投与及び／又は反応させるための処方箋を含む使用説明書を含んでいる。
【０５５６】
ユーザーに供給されるキットはまた、使用説明書と一緒に、上記に定義される成分を含み得る一方で、制限された保存期間を有する、上記（ｉｉ）で定義される放射性核種の塩又はキレートの溶液が、別々にユーザーが自由に使用できるようにされる場合がある。
【０５５７】
キットは随意に、そして付加的に、還元剤、及び／又は、所望される場合、キレート化剤、及び／又は、所望の生成物を形成するためにキットの成分を反応させるための組成物及び／又は処方箋の使用説明書を含み得る。所望される場合、キットの成分は、適合可能である場合に組み合わされ得る。
【０５５８】
特定の実施形態において、免疫結合体は、中性の媒体における成分を組み合わせて、それらを反応させることにより単純に生成され得る。その目的のために、エフェクターは、例えばキレートの形態で抗体に提供され得る。
【０５５９】
キットの要素は、医薬の投与のための構成成分として（例えば、噴射液体として）使用される場合、滅菌されることが好ましい。キットの要素が乾燥状態で提供される場合、ユーザーは好ましくは、溶媒として滅菌生理食塩液を使用しなければならない。所望される場合、キットの要素は、適切な安定剤、例えばアスコルビン酸、ゲンチシン酸、又はこれらの酸の塩を伴う従来の方法で安定させられ、又は、他の助剤、例えばグルコース、ラクトース、マンニトールなどの充填剤を含み得る。
【０５６０】
存在する場合に、教材は、典型的に資料又は印刷物を含む一方で、そのようなものに限定されない。そのような説明書を保存すると共にそれらをエンドユーザに伝える任意の媒体が、本発明により熟考される。そのような媒体は、限定されないが、電子記憶装置媒体（例えば磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えばＣＤ  ＲＯＭ）などを含む。そのような媒体は、前記教材を提供するインターネットサイトへのアドレスを含み得る。
【実施例】
【０５６１】
以下の実施例は、例証するために提供され、請求される本発明を限定するようには提供されない。
【０５６２】
＜実施例１＞
＜新規の抗ＣＤ４６抗体およびその使用＞
新規の抗ヒトＣＤ４６抗体を特定するために、ヒトＣＤ４６のＳｕｓｈｉドメイン１および２から構成される組み換えＦｃ融合タンパク質を作成した。補体要素（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｅｌｅｍｅｎｔｓ）が、ドメイン３および４に優位に結合するために、ドメイン１および２の選択は、正常な補体機能に強力に干渉し得る抗体の選択を最小限にする。このＣＤ４６−Ｆｃ融合は、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーによってトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞から生成される且つ精製される。ヒト抗体の選択に関して、５×１０９メンバーのファージミドのディスプレイライブラリ（ｍｅｍｂｅｒ ｐｈａｇｅｍｉｄ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｙ）を、４２６人の健全なヒトドナーの末梢血単核細胞からプールされたｃＤＮＡを使用して作成し、ライブラリから、組み換えＣＤ４６−Ｆｃ融合タンパク質を選択した。３ラウンドの選択後に、結合するファージミドを、ＦＡＣＳによってスクリーニングし、配列決定した。平行して、最初に、生きた腫瘍細胞上のライブラリを選択し、続いて、ラウンド１のファージミド選択からのアウトプット（ｏｕｔｐｕｔ）を酵母表面ディスプレイベクターへと移し、その後、組み換えＣＤ４６−Ｆｃ融合タンパク質に対する高親和性結合剤を豊富にするために低濃度のリガンドを使用してＦＡＣＳベースの選択を行うことを含む、代替的な方策を利用した。結果として生じる抗体は、高親和性を有して、生きた腫瘍細胞および組み換えヒトＣＤ４６タンパク質の両方に結合する。すべての結合するクローンを配列決定し、ユニーク配列を表１にリストする。
【０５６３】
ｓｃＦｖｓを完全ヒトＩｇＧ１ｓへと変換し、結合親和性を生きた腫瘍細胞上で測定した。ＦＡＣＳ結合データを曲線適合して、ＫＤ値を作成した（Ｄｕ−１４５上のＹＳ５に関しては図２、およびＤｕ−１４５上のＹＳ１２に関しては図３）。親和性は、研究される抗体に対して低ナノモル（ｎＭ）からナノモル以下まで及ぶ。
【０５６４】
ヒトＣＤ４６に加えて、本明細書に記載される抗体は、同様の親和性を有して、カニクイザルＣＤ４６（図４）に結合し（ＣＨＯ−ｈｕＣＤ４６上のＹＳ５に関しては図５およびＣＨＯ−ｃｙｎｏＣＤ４６上のＹＳ５に関しては図６）、したがって、規制上の毒性研究のための適切な種が特定される。
【０５６５】
抗ＣＤ４６抗体はすべて、以前に特定されたＵＡ２０および２Ｂ１０とともに、ＣＤ４６のＳｕｓｈｉドメイン１および２に結合する。エピトープの差を明らかにするために、この領域をさらに分析した。最初に、生きた腫瘍細胞上でＦＡＣＳベースの競合実験を行い、我々の抗体がＵＡ２０−Ｆｃと競合するか又は競合しないかのいずれかであることが分かった：群１はＹＳ５および他の抗体から成り、群１はＳＢ１ＨＧＮＹから成る（図７）。群１の抗体に関して、様々なＣＤ４６突然変異体への抗体結合の選択的効果によって証拠づけられるような更なるエピトープの差がある（表３）。例えば、位置３９での突然変異が、その結合に一意的に影響するために（表３）、ＹＳ５は他の抗体とは異なり、これは、位置３９が、すべての抗体に対する結合に影響を与える位置４０とともに、ＣＤ４６へのＹＳ５結合のためのエピトープの一部であることを示唆している。
【０５６６】
【表３】
2020178700.tif 000009
【０５６７】
すべての抗体は、実験室株（Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ）麻疹ウイルスＨタンパク質と競合する。麻疹ウイルスは、マクロピノサイトーシスによって標的細胞に進入する（Ｃｒｉｍｅｅｎ−Ｉｒｗｉｎ ｅｔ ａｌ． （２００３） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７８： ４６９２７−４６９３７）。Ｈタンパク質は細胞表面ＣＤ４６の結合および架橋に反応し（ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ）、これは、ウイルス侵入に必要とされる（同文献）。我々の抗体が、ＣＤ４６に結合するＨタンパク質と競合するかどうかを判断するために、組み換えＨタンパク質−Ｆｃ融合を作り出し、抗ＣＤ４６抗体との競合のためにＦＡＣＳによって試験した。試験される抗体がＨタンパク質と競合することが分かり（図８）、これは重なる結合部位を示唆している。
【０５６８】
麻疹ウイルスがマクロピノサイトーシスによって標的細胞に進入すると、次に、抗ＣＤ４６抗体が、マクロピノサイトーシスを介して腫瘍細胞によって内在化されるかどうかを判定した。マクロピノサイトーシスに対する指標として７０ｋＤａの中性濃度のデキストラン（ＮＤ７０）を使用して（Ｈａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ． １３（１２）： ３３２０−３３３１）、抗ＣＤ４６抗体がマクロピノサイトーシス経路によって実際に内在化されることが分かった（図９）。マクロピノサイトーシスは本質的に腫瘍選択的であり（Ｃｏｍｍｉｓｓｏ ｅｔ ａｌ． （２０１３） Ｎａｔｕｒｅ， ４９７： ６３３−６３７； Ｈａ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ． １３（１２）： ３３２０−３３３１； Ｒｅｙｅｓ−Ｒｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ７０： ８６１７−８６２９）、それ故、腫瘍細胞に対する更なる選択性を抗ＣＤ４６抗体に与えている。
【０５６９】
標的とされた治療薬の開発のための標的としてＣＤ４６を確証するために、ＣＤ４６エピトープの組織特異性を免疫組織化学的検査によって判定した。腫瘍中のＣＤ４６エピトープ発現を最初に研究した。免疫組織化学研究を、凍結およびホルマリン固定したパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）前立腺癌組織上で行った。凍結組織上において、１８／１８の事例（１００％）が強力な染色信号を示し、これは、すべての事例における過剰発現を示唆している。ＦＦＰＥ組織上において、６３／８７の事例で強力なＣＤ４６染色が見られ、２３／８７の事例で中程度の染色、および１／８７の事例で弱い染色が見られ、これは、ＣＤ４６が前立腺腫瘍の大半によって過剰発現されるという結論を支持している。免疫組織化学的検査の概要は、表４および図１０に示される。
【０５７０】
【表４】
2020178700.tif 000010
【０５７１】
前述の研究は、ヒト癌に対するＣＤ４６標的のモノクローナル抗体の治療薬の開発を強く支持している。この目的のために、新規の抗ＣＤ４６抗体のパネルを使用して、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を開発した。モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）を、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢリンカーを介してＹＳ５ ＩｇＧ１に抱合した（ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｍｏｌ． Ｃａｎｃ． Ｔｈｅｒａｐ． ７： ２９１３−２９２３； Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２８１： １０５４０−１０５４７）。疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって、抗体分子当たり平均で約３つの薬物が抱合されたと決定された（図１１）。その後、インビトロでの腫瘍死滅活性を、転移性の去勢抵抗性前立腺癌の細胞株（ＬＮＣａ−Ｃ４−２ＢおよびＤｕ１４５）のパネルを使用して試験した。強力な腫瘍細胞死滅が、低いｎＭからｎＭ以下までの範囲のＥＣ５０値とともに観察された（図１２および１３）。
【０５７２】
抗ＣＤ４６ ＡＤＣのインビボでの抗腫瘍活性を、ＬＮＣａＰ−Ｃ４−２Ｂの皮下の異種移植片モデルを使用して試験した。腫瘍の増殖および生存の強力な阻害が観察され、腫瘍容積が５ｍｇ／ｋｇでの５回の投薬後に検出できないレベルにまで減少した（図１４）。ＡＤＣ注入後の示された期間の間に腫瘍は再発しなかった（図１４）。
【０５７３】
前立腺癌に加えて、抗ＣＤ４６ ＡＤＣが、ＣＤ４６を発現する様々な他の癌を強力に死滅させることが分かった。例えば、ＣＤ４６がまた、前立腺癌に加えて、多発性骨髄腫の細胞表面上で高度に発現されることが分かった（図１５）。さらに、抗ＣＤ４６ ＡＤＣは、ｎＭ以下の範囲でＥＣ５０を有する多発性骨髄腫の細胞株ＲＰＭＩ８２２６を強力に死滅させる（図１６）。最終的に、抗ＣＤ４６ ＡＤＣは、インビボで多発性骨髄腫の負荷を大幅に減少させたことが示された。レポーターを発現する株（ホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現したＲＰＭＩ８２２６−Ｌｕｃ）を、尾静脈を介して免疫力が低下したマウスに注入し、播種性腫瘍細胞を骨および関節中に確立させた。その後、抗ＣＤ４６ ＡＤＣを５ｍｇ／ｋｇで４回注入し（４日ごと）、腫瘍状態を生物発光によってモニタリングした。抗ＣＤ４６ ＡＤＣが、インビボで腫瘍負荷を減少させるのに非常に有効であることが分かった（図１７）。ＡＤＣ処置後に生存率データを収集し（図１８）、実験の期間にわたって、処置したマウスの６０％が「治癒」を示し、残りの４０％が非常に遅れた死亡を示した。
【０５７４】
適応範囲を広げるために、抗ＣＤ４６ ＡＤＣを、ルシフェラーゼレポーターを発現する第２の多発性骨髄腫の細胞株ＭＭ１．Ｓを使用して研究した。抗ＣＤ４６ ＡＤＣの強力な腫瘍死滅活性がインビボで観察された。４ｍｇ／ｋｇでの４回の投薬は、ＭＭ１．Ｓ腫瘍細胞を完全に除去した（図２０）。対照的に、対照ＡＤＣ（非結合抗体に抱合されたＭＭＡＦ）は、同じ投薬量および投薬頻度では全く効果がなかった。さらに、４ｍｇ／ｋｇでの抗ＣＤ４６ ＡＤＣの単回投与でさえ、腫瘍負荷を大幅に減少させ、腫瘍形成の大きな阻害を引き起こした（図２０）。抗ＣＤ４６ ＡＤＣの０．８ｍｇ／ｋｇでの４回の投与はまた、ＭＭ１．Ｓ異種移植片形成の持続的阻害を引き起こした（図２０）。最終的に、裸の抗体（ＹＳ５ ＩｇＧ１）でさえ、この異種移植片モデルにおいて著しい腫瘍阻害を引き起こし（図２０）、これは、多発性骨髄腫の特定のサブタイプ用の潜在的な裸の抗体ベースの治療薬の興味深い可能性を示唆している。
【０５７５】
処置後の生存率を判定するために、カプラン・マイヤー分析を行った。ＣＤ４６ ＡＤＣ処置した群は、対照群よりも著しい生存率の利点を示した（図２１）。４ｍｇ／ｋｇのＣＤ４６ ＡＤＣの４回の投薬を受けたマウスはすべて、実験の終了まで生存した（２１２日目）。
【０５７６】
前述の前立腺癌および多発性骨髄腫に加えて、限定されないが、大腸癌、膵癌、中皮腫、肺癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、神経膠腫、および神経芽腫を含む、癌細胞株の広いパネルにおいて、ＣＤ４６が高度に発現されることが分かった。さらに、抗ＣＤ４６ ＡＤＣは、これらの細胞をインビトロで強力に死滅させた。例えば、抗ＣＤ４６ ＡＤＣは、大腸癌細胞（ＹＳ５に関しては図１９、ＨＴ２９上のＹＳ１２に関しては図２２、およびＨＴ２９上のＳＢ１ＨＧＮＹに関しては図２３）、膵癌細胞（図２４）、中皮腫細胞（図２５）、および卵巣癌細胞（図２６）を死滅させるのに非常に有効である。
【０５７７】
潜在的な毒性を評価するために、ＣＤ４６（ＢＰＨ−１）を発現しない又は適度なレベルでそれを発現する対照細胞（例えばＨＳ２７）のパネル上で、ＹＳ５ ＡＤＣを試験した。これらの細胞上で大きく減少された細胞毒性が観察され（ＢＰＨ−１上のＹＳ５ ＡＤＣに関しては図２７、ＨＳ２７上のＹＳ５ ＡＤＣに関しては図２８、正常なＴ細胞上のＹＳ５ ＡＤＣに関しては図２９、およびＣＤ１４枯渇末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）上のＹＳ５ ＡＤＣに関しては図３０）、これは、それらがＡＤＣを容易に取り込まないことを示唆している。マクロピノサイトーシスを介する差次的な内在化（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）は、抗ＣＤ４６ ＡＤＣの選択性を増強する有望な機構である。
【０５７８】
ヒトＣＤ４６を発現するトランスジェニックマウスを使用して、ＡＤＣ毒性をインビボで研究した。ヒトＣＤ４６に対する真のネズミのオルソログはなく、ネズミＣＤ４６は、ヒトＣＤ４６とはかなり異なる生理学的役割を実行する。抗体はネズミＣＤ４６に結合しなかった。したがって、トランスジェニックモデルを除いて潜在的な抗ＣＤ４６ ＡＤＣ毒性の評価のための優れた小動物モデルはない。抗ＣＤ４６ ＡＤＣを、６ｍｇ／ｋｇでヒトＣＤ４６発現のトランスジェニックマウスに注入し、毒性の顕在的徴候のために毎日動物をモニタリングした。動物を１４日目で屠殺し、重要臓器を組織損傷の組織学的検査のために採取した。図３１に示されるように、抗ＣＤ４６ ＡＤＣ処置したマウスと対照ＡＤＣ処置したマウスとの間に顕著な差はない。この実験の期間の間に、試験されるＡＤＣのこの投薬量で毒性の顕在的徴候は観察されなかった。ＣＤ４６が上に示されるような抗ＣＤ４６抗体によって認識されるカニクイザルなどのヒト以外の霊長類において、規制上の毒物学研究が行われる必要があることが理解される。
【０５７９】
ヒトＣＤ４６遺伝子がクロモソーム１（１ｑ３２．２）の短腕に位置すること、および様々な癌、特に予後不良を有する癌で、１ｑ利得（ｇａｉｎ）が頻繁に観察されていることを考慮すると、限定されないがＡＤＣを含む、抗ＣＤ４６抗体の治療薬が、治療薬を緊急に必要とする進行したステージで広範囲の悪性腫瘍に適用可能であることが十分に考えられる。例えば、前立腺癌では、広がる（ｓｐａｎｎｉｎｇ）領域１ｑ３２．２は、現在の治療薬が効果を発揮することがない疾患の播種性の転移形態を増加させる（ｇａｉｎ ｉｎ）ことが示されており（Ｈａｎａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ． （２００６） Ｂｌｏｏｄ， １０８： １７２４−１７３２）、これは、転移性の去勢抵抗性前立腺癌を我々の抗ＣＤ４６ ＡＤＣ処置のための優れた候補にしている。多発性骨髄腫では、１ｑ利得はまた、再発性患者において頻繁に観察され（同文献）、それ故、我々の抗ＣＤ４６ ＡＤＣが潜在的に助けることができる重要な患者集団が特定される。１ｑ利得（および特に１ｑ３２．２）と予後不良との間の相関性は他の癌でも見られ、これは、１ｑを、患者の層別化およびこれらの悪性腫瘍をモニタリングする結果のための我々の抗ＣＤ４６ ＡＤＣに対する潜在的なバイオマーカーにしている。１ｑの状態を評価するために、１ｑ３２．２を検出するＦＩＳＨプローブが使用され得る。予後不良を有するＣＤ４６発現の癌に対する最小に侵襲性のバイオマーカー（Ｆａｎ ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０５： １６２６６−１６２７１）として１ｑ利得を検出するために、循環ＤＮＡも使用され得る。
【０５８０】
本明細書に記載される抗ＣＤ４６抗体は、スタンドアロンの造影剤（ｓｔａｎｄａｌｏｎｅ ｉｍａｇｉｎｇ ａｇｅｎｔ）または抗ＣＤ４６ ＡＤＣに対するコンパニオン診断薬として、インビボで腫瘍状態をモニタリングするために、イメージングプローブにおいて使用され得る。我々の元の抗ＣＤ４６抗体ＵＡ２０を以前に標識化し、前立腺癌を標的とするためのインビボでのその優れたイメージング特性を実証した（Ｈｅ ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ５１： ４２７−４３２）。イメージングに加えて、抗ＣＤ４６抗体は、生検および保管された患者サンプルにおいてＣＤ４６発現を評価するための免疫組織化学的検査ベースのバイオマーカーにおいて、血清ＣＤ４６レベルを評価するための捕捉ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、および播種性の及び／又は循環する腫瘍細胞においてＣＤ４６細胞表面の発現を評価するためのＦＡＣＳまたはチップベースのアッセイにおいて使用され得る。
【０５８１】
＜実施例２＞
＜ＣＤ４６ ＡＤＣは、大腿骨内ｍＣＲＰＣ異種移植片モデルにおいて非常に活性である。＞
前立腺癌転移の９５％以上が骨の部位に対するものであるため、骨異種移植片モデル中の我々の抗ＣＤ４６ ＡＤＣの効能をさらに研究した。ホタルルシフェラーゼレポーターを運ぶ転移性の去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）細胞株ＬＮＣａＰ Ｃ４−２ＢをＮＳＧマウスの大腿骨へと注入して、骨内の異種移植片モデルを作成した。移植の７日後に４日ごとに合計で４回、ＣＤ４６ ＡＤＣ（ＹＳ５−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦ）を注入した。処置の間および後に、生物発光イメージングによって腫瘍状態をモニタリングした。図３２に示されるように、ＣＤ４６ ＡＤＣで処置したマウスは、実験の終了（６５日目）まで処置後の期間にわたって持続する大きな腫瘍阻害を示し、これは、我々のＣＤ４６ ＡＤＣが、この大腿骨内ｍＣＲＰＣ異種移植片モデルにおいて非常に効果的であることを示唆している。
【０５８２】
＜ＣＤ４６は、ＣＲＰＣとｍＣＲＰＣの組織において高度に発現される。＞
一次腫瘍に加えて、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）および転移性の去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）からの組織試料に関する免疫組織化学研究を行った。図３３に示されるように、ＣＤ４６はＣＲＰＣ試料において高度に発現される。ｍＣＲＰＣ試料をさらに研究し、骨転移（図３４）、リンパ節転移（図３５）、および膀胱転移（図３６）におけるＣＤ４６の広範囲（研究された事例の１００％、または１２／１２）且つ強力な発現が見られた。
【０５８３】
＜ＣＤ４６は、前立腺癌の神経内分泌のサブタイプによって過剰発現される。＞
約３０％の患者は、アビラテロンおよびエンザルタミドによる処置に耐性がある。前立腺癌の小細胞／神経内分泌タイプの出現は頻繁な事象であり得る（事例の〜３０−４０％）。腺癌とは異なり、神経内分泌の前立腺癌は、しばしば、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）および前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）などの一般的なマーカーを発現しない。それ故、神経内分泌の前立腺癌細胞株Ｈ６６０によるＦＡＣＳ ＣＤ４６発現によって研究に努めた。図３７に示されるように、左のパネル、ＣＤ４６は、Ｈ６６０細胞によって高度に発現される。ウエスタンブロット分析は、Ｈ６６０細胞が、ＣＤ４６および神経内分泌マーカーの神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）を発現することを確証した（図３７、右のパネル）。我々の抗ＣＤ４６抗体（ＹＳ５）は、Ｈ６６０細胞によって内在化され、リソソームマーカーＬＡＭＰ１と共局在化される（図３８）。我々の抗ＣＤ４６ ＡＤＣは、Ｈ６６０細胞でインキュベートされるとき、ＥＣ５０＜１ｎＭを有する強力な細胞毒性活性をインビトロで示した（図３９）。
【０５８４】
＜ＣＤ４６は、アビラテロンまたはエンザルタミドでの処置後に前立腺癌細胞によってさらにアップレギュレートされ、これによって、前立腺癌細胞はＣＤ４６ ＡＤＣに敏感となる。＞
７日間１０μＭのアビラテロンでｍＣＲＰＣ株ＬＮＣａＰ−Ｃ４−２Ｂを処置することによって、表面のＣＤ４６発現の著しいアップレギュレーションが引き起されることが分かった（図４０）。興味深いことに、このアップレギュレーションは、腫瘍細胞の死滅効果の増強に相関し（図４１）、ＥＣ５０値は１６９ｐＭから２１ｐＭに低下する。同様に、神経内分泌の前立腺癌細胞株Ｈ６６０が、７日間１０μＭのエンザルタミドでインキュベートされるときに、細胞表面ＣＤ４６の著しいアップレギュレーションが観察された（図４２）。ＬＮＣａＰ−Ｃ４−２Ｂ細胞で観察されたもののように、Ｈ６６０細胞は、エンザルタミド処置後にＣＤ４６ ＡＤＣにより敏感となり、ＥＣ５０は４−５倍低下する。
【０５８５】
＜更なる腫瘍上のＣＤ４６発現。＞
前立腺癌および多発性骨髄腫に加えて、広範囲のヒト癌においてＣＤ４６が過剰発現されることが分かった。免疫組織化学分析によって、８２％の大腸癌（８１／９９の事例）において陽性ＣＤ４６染色を発見し、７０／９９は強力な染色を示していた（７１％）（図４３）。興味深いことに、転移性の大腸癌のほぼ１００％が、ＣＤ４６を発現する（図４４において肝転移、図４５においてリンパ節転移、および図４６において膀胱転移）。
【０５８６】
陽性ＣＤ４６染色は、中皮腫の４１／５０の事例（８２％）に対しても観察され、３１／５０が強力な染色を示していた（６２％）（図４７）。膵癌において、陽性ＣＤ４６染色が２８／５０の事例（５６％）で観察された（図４８）。多形性膠芽腫（ＧＢＭ）において、３０／４０（７５％）の事例で陽性染色が観察された（図４９）。
【０５８７】
限定されないが、膀胱癌、卵巣癌、胃癌、肺癌、肝臓癌、乳癌、およびリンパ腫を含む他の腫瘍においても、陽性染色が観察された。
【０５８８】
＜ＣＤ４６ ＡＤＣは他の腫瘍に対しても有効である。＞
インビトロの研究に加えて、ＮＳＧマウス中で運ばれた中皮腫の異種移植片に関するＣＤ４６ ＡＤＣのインビボの研究も行った。図５０に示されるように、ＹＳ５−ｍｃｖｃｐａｂ−ＭＭＡＦは、腫瘍の異種移植片形成を阻害するのに非常に有効である。
【０５８９】
本明細書に記載される実施例および実施形態が例示目的のみにあり、その観点から様々な修正または変更が、当業者に示唆され、本出願の精神および範囲並びに添付の請求項の範囲内に含まれることが理解される。本明細書に引用されるすべての公報、特許、および特許出願は、あらゆる目的のためにそれら全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ−１】
2020178700.tif 000011
【図１Ａ−２】
2020178700.tif 000012
【図１Ａ−３】
2020178700.tif 000013
【図１Ｂ−１】
2020178700.tif 000014
【図１Ｂ−２】
2020178700.tif 000015
【図１Ｂ−３】
2020178700.tif 000016
【図２】
2020178700.tif 000017
【図３】
2020178700.tif 000018
【図４】
2020178700.tif 000019
【図５】
2020178700.tif 000020
【図６】
2020178700.tif 000021
【図７】
2020178700.tif 000022
【図８】
2020178700.tif 000023
【図９】
2020178700.tif 000024
【図１０】
2020178700.tif 000025
【図１１】
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【図１２】
2020178700.tif 000027
【図１３】
2020178700.tif 000028
【図１４】
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【図１５】
2020178700.tif 000030
【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
2020178700.tif 000039
【図２５】
2020178700.tif 000040
【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
2020178700.tif 000057
【図４３】
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【図４４】
2020178700.tif 000059
【図４５】
2020178700.tif 000060
【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月22日(2020.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、分離されたヒト抗体であって、ここで、
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合し、前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及び２３により表わされる）、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及び２４により表わされる）、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び２５により表わされる）、及び、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５及び２６により表わされる）からなる群から選択された抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、分離されたヒト抗体。
【請求項２】
前記分離されたヒト抗体が、
ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１２抗体の可変重（ＶＨ）鎖；
を含むことを特徴とする、請求項１に記載の分離されたヒト抗体。
【請求項３】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の分離されたヒト抗体。
【請求項４】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及び２３により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１つに記載の分離されたヒト抗体。
【請求項５】
ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、分離されたヒト抗体を含む免疫結合体であって、前記抗体はエフェクターに結合され、前記エフェクターは、第２抗体、検出可能なラベル、細胞毒素又は細胞分裂阻害剤、薬物を含有するリポソーム、放射性核種、薬物、プロドラッグ、ウィルス粒子、サイトカイン、及びキレートから成る群から選択されることを特徴とする、免疫結合体。
【請求項６】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及び２３により表わされる）、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及び２４により表わされる）、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び２５により表わされる）、及び、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５及び２６により表わされる）からなる群から選択された抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、請求項５に記載の免疫結合体。
【請求項７】
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６のドメイン１及び／又はドメイン２に結合することを特徴とする、請求項５又は６に記載の免疫結合体。
【請求項８】
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６のドメイン３及び／又はドメイン４に結合しないことを特徴とする、請求項５〜７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項９】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は癌細胞であることを特徴とする、請求項５〜８のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１０】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は前立腺癌細胞であることを特徴とする、請求項５〜９のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１１】
前記分離されたヒト抗体は、ＤＵ１４５細胞、ＰＣ３細胞、及びＬｎＣａＰ細胞から成る群から選択された細胞株の細胞に結合することを特徴とする、請求項５〜１０のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１２】
前記分離されたヒト抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定されたときに、少なくとも約５−１０ｎＭの親和性（ＫＤ）を有する前立腺腫瘍細胞に結合することを特徴とする、請求項５〜１１のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１３】
前記分離されたヒト抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定されたときに、少なくとも約３ｎＭの親和性（ＫＤ）を有する前立腺腫瘍細胞に結合することを特徴とする、請求項５〜１２のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１４】
前記分離されたヒト抗体は実質的に無傷の免疫グロブリンであることを特徴とする、請求項５〜１３のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１５】
前記分離されたヒト抗体はＩｇＡ、ＩｇＥ、又はＩｇＧを含むことを特徴とする、請求項５〜１４のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１６】
前記分離されたヒト抗体はＩｇＧ１を含むことを特徴とする、請求項５〜１５のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１７】
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合する抗体フラグメントであることを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１８】
前記分離されたヒト抗体は、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、（Ｆａｂ’）３、ＩｇＧΔＣＨ２、及びミニボディからなる群から選択された抗体フラグメントであることを特徴とする、請求項５〜１７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１９】
前記分離されたヒト抗体は単鎖抗体であることを特徴とする、請求項５〜１８のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２０】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、およびＹＳ１２から成る群から選択された抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２１】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２から成る群から選択された抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２２】
前記分離されたヒト抗体が、
ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１２抗体の可変重（ＶＨ）鎖；
を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２３】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２４】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５及び２６により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２５】
前記分離されたヒト抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び２５により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２６】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及び２３により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２７】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及び２４により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２８】
前記分離されたヒト抗体は細胞毒素に結合されることを特徴とする、請求項５〜２７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２９】
前記エフェクターは放射性核種及び／又は細胞分裂阻害薬を含むことを特徴とする、請求項５〜２７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３０】
前記分離されたヒト抗体は、
前記薬物；
前記薬物を含有する脂質又はリポソーム；
前記薬物を含む高分子医薬担体；及び
前記薬物を含むナノ粒子薬物担体
の１つ以上に直接、又はリンカーを介して結合されることを特徴とする、請求項５〜２７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３１】
前記薬物は抗癌剤であることを特徴とする、請求項３０に記載の免疫結合体。
【請求項３２】
前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、及びｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤から成る群から選択されることを特徴とする、請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３３】
前記薬物は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ｖｃＭＭＡＥ、及びｖｃＭＭＡＦから成る群から選択された薬物を含むことを特徴とする、請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３４】
前記薬物はモノメチルオーリスタチンＦであることを特徴とする、請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３５】
前記リンカーはＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢリンカーである、請求項３０〜３４のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３６】
複数のエフェクターが前記分離されたヒト抗体に結合体化されている、請求項３０〜３５のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３７】
医薬製剤であって、該医薬製剤は：
薬学的に許容可能な賦形剤、並びに請求項１〜４のいずれか１つに記載の分離されたヒト抗体；及び／又は、
薬学的に許容可能な賦形剤、並びに請求項５〜３６のいずれか１つに記載の免疫結合体
を含む、医薬製剤。
【請求項３８】
前記医薬製剤は単位投与量の製剤であることを特徴とする、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
前記医薬製剤は、経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、及び筋肉内注射から成る群から選択された経路を介した投与のために処方されることを特徴とする、請求項３７に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
癌の処置のための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか１つに記載の分離されたヒト抗体の使用。
【請求項４１】
癌の処置のための薬剤の製造における、請求項５〜３６のいずれか１つに記載の免疫結合体の使用。
【請求項４２】
前記癌細胞は、卵巣癌、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌、中皮腫、リンパ腫、肝臓癌、尿路上皮癌、胃癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、神経膠腫、神経芽腫、及び子宮頸癌から成る群から選択されることを特徴とする、請求項４０又は４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記癌細胞は前立腺癌細胞であることを特徴とする、請求項４０又は４１に記載の使用。
【請求項４４】
前記癌は去勢抵抗性前立腺癌であることを特徴とする、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
前記癌は転移細胞を含むことを特徴とする、請求項４０又は４１に記載の使用。
【請求項４６】
前記転移細胞は、骨転移、肝転移、膀胱転移、及び／又はリンパ節転移であることを特徴とする、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記癌は固形腫瘍を含むことを特徴とする、請求項４０又は４１に記載の使用。
【請求項４８】
前記薬剤は、非経口投与のため、及び／又は腫瘍若しくは手術部位への投与のために製剤化されることを特徴とする、請求項４０〜４７のいずれか１つに記載の使用。
【請求項４９】
前記薬剤は、外科手術及び／又は放射線療法のための補助療法として投与されることを特徴とする、請求項４０〜４７のいずれか１つに記載の使用。
【請求項５０】
前記薬剤は、別の抗癌剤及び／又はホルモンと共に投与されることを特徴とする、請求項４０〜４７のいずれか１つに記載の使用。
【請求項５１】
前記薬剤は、アビラテロン及び／又はエンザルタミドと共に投与されることを特徴とする、請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
癌の処置における使用のための、請求項１〜４のいずれか１つに記載の抗体と、請求項５〜３６のいずれか１つに記載の免疫結合体とを含む、組成物。
【請求項５３】
請求項１−４のいずれか１つに記載の抗体又は抗体のフラグメントをコードする、核酸。
【請求項５４】
請求項５３に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月12日(2020.8.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、分離されたヒト抗体であって、ここで、
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合し、前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及び２３により表わされる）、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及び２４により表わされる）、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び２５により表わされる）、及び、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５及び２６により表わされる）からなる群から選択された抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、分離されたヒト抗体。
【請求項２】
前記分離されたヒト抗体が、
ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１２抗体の可変重（ＶＨ）鎖；
を含むことを特徴とする、請求項１に記載の分離されたヒト抗体。
【請求項３】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の分離されたヒト抗体。
【請求項４】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１つに記載の分離されたヒト抗体。
【請求項５】
ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、分離されたヒト抗体を含む免疫結合体であって、前記抗体はエフェクターに結合され、前記エフェクターは、第２抗体、検出可能なラベル、細胞毒素又は細胞分裂阻害剤、薬物を含有するリポソーム、放射性核種、薬物、プロドラッグ、ウィルス粒子、サイトカイン、及びキレートから成る群から選択されることを特徴とする、免疫結合体。
【請求項６】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及び２３により表わされる）、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及び２４により表わされる）、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び２５により表わされる）、及び、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５及び２６により表わされる）からなる群から選択された抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、請求項５に記載の免疫結合体。
【請求項７】
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６のドメイン１及び／又はドメイン２に結合することを特徴とする、請求項５又は６に記載の免疫結合体。
【請求項８】
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６のドメイン３及び／又はドメイン４に結合しないことを特徴とする、請求項５〜７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項９】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は癌細胞であることを特徴とする、請求項５〜８のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１０】
ＣＤ４６を発現又は過剰発現する前記細胞は前立腺癌細胞であることを特徴とする、請求項５〜９のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１１】
前記分離されたヒト抗体は、ＤＵ１４５細胞、ＰＣ３細胞、及びＬｎＣａＰ細胞から成る群から選択された細胞株の細胞に結合することを特徴とする、請求項５〜１０のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１２】
前記分離されたヒト抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定されたときに、少なくとも約５−１０ｎＭの親和性（ＫＤ）を有する前立腺腫瘍細胞に結合することを特徴とする、請求項５〜１１のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１３】
前記分離されたヒト抗体は、ＦＡＣＳにより生きている前立腺腫瘍細胞上で測定されたときに、少なくとも約３ｎＭの親和性（ＫＤ）を有する前立腺腫瘍細胞に結合することを特徴とする、請求項５〜１２のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１４】
前記分離されたヒト抗体は実質的に無傷の免疫グロブリンであることを特徴とする、請求項５〜１３のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１５】
前記分離されたヒト抗体はＩｇＡ、ＩｇＥ、又はＩｇＧを含むことを特徴とする、請求項５〜１４のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１６】
前記分離されたヒト抗体はＩｇＧ１を含むことを特徴とする、請求項５〜１５のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１７】
前記分離されたヒト抗体は、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞に特異的に結合する抗体フラグメントであることを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１８】
前記分離されたヒト抗体は、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、（Ｆａｂ’）３、ＩｇＧΔＣＨ２、及びミニボディからなる群から選択された抗体フラグメントであることを特徴とする、請求項５〜１７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項１９】
前記分離されたヒト抗体は単鎖抗体であることを特徴とする、請求項５〜１８のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２０】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、およびＹＳ１２から成る群から選択された抗体の可変軽（ＶＬ）鎖を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２１】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５、ＹＳ５Ｆ、ＹＳ５ｖｌＤ、ＳＢ１ＨＧＮＹ、ＹＳ１２から成る群から選択された抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２２】
前記分離されたヒト抗体が、
ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５Ｆ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５Ｆ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５ｖｌＤ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＳＢ１ＨＧＮＹ抗体の可変重（ＶＨ）鎖；又は
ＹＳ１２抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ１２抗体の可変重（ＶＨ）鎖；
を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２３】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２４】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ１２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５及び２６により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２５】
前記分離されたヒト抗体は、ＳＢ１ＨＧＮＹ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び２５により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２６】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５Ｆ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２及び２３により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２７】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５ｖｌＤ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３及び２４により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項５〜１６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２８】
前記分離されたヒト抗体は細胞毒素に結合されることを特徴とする、請求項５〜２７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項２９】
前記エフェクターは放射性核種及び／又は細胞分裂阻害薬を含むことを特徴とする、請求項５〜２７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３０】
前記分離されたヒト抗体は、
前記薬物；
前記薬物を含有する脂質又はリポソーム；
前記薬物を含む高分子医薬担体；及び
前記薬物を含むナノ粒子薬物担体
の１つ以上に直接、又はリンカーを介して結合されることを特徴とする、請求項５〜２７のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３１】
前記薬物は抗癌剤であることを特徴とする、請求項３０に記載の免疫結合体。
【請求項３２】
前記薬物は、オーリスタチン、ドラスタチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、及びｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤から成る群から選択されることを特徴とする、請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３３】
前記薬物は、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、オーリスタチンＥ（ＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ｖｃＭＭＡＥ、及びｖｃＭＭＡＦから成る群から選択された薬物を含むことを特徴とする、請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３４】
前記薬物はモノメチルオーリスタチンＦであることを特徴とする、請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３５】
前記薬物はモノメチルオーリスタチンＥであることを特徴とする、請求項３１に記載の免疫結合体。
【請求項３６】
前記リンカーはＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢリンカーであることを特徴とする、請求項３０〜３５のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３７】
複数のエフェクターが前記分離されたヒト抗体に結合体化されていることを特徴とする、請求項３０〜３６のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項３８】
２つのエフェクターが前記分離されたヒト抗体に結合体化されていることを特徴とする、請求項３７に記載の免疫結合体。
【請求項３９】
４つのエフェクターが前記分離されたヒト抗体に結合体化されていることを特徴とする、請求項３７に記載の免疫結合体。
【請求項４０】
ＣＤ４６に特異的に結合すると共に、ＣＤ４６を発現又は過剰発現する細胞へと内在化される、分離されたヒト抗体を含む免疫結合体であって、モノメチルオーリスタチンＥエフェクターが、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢリンカーを介して抗体に結合されていることを特徴とする、免疫結合体。
【請求項４１】
２つのエフェクターが前記分離されたヒト抗体に結合体化されていることを特徴とする、請求項４０に記載の免疫結合体。
【請求項４２】
４つのエフェクターが前記分離されたヒト抗体に結合体化されていることを特徴とする、請求項４０に記載の免疫結合体。
【請求項４３】
前記分離されたヒト抗体がＩｇＧ１を含む、請求項４０〜４２のいずれか１つに記載の免疫結合体
【請求項４４】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及び２２により表わされる）のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むことを特徴とする、請求項４０〜４３のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項４５】
前記分離されたヒト抗体は、ＹＳ５抗体の可変軽（ＶＬ）鎖とＹＳ５抗体の可変重（ＶＨ）鎖を含むことを特徴とする、請求項４０〜４４のいずれか１つに記載の免疫結合体。
【請求項４６】
医薬製剤であって、該医薬製剤は：
薬学的に許容可能な賦形剤、並びに請求項１〜４のいずれか１つに記載の分離されたヒト抗体；及び／又は、
薬学的に許容可能な賦形剤、並びに請求項５〜４５のいずれか１つに記載の免疫結合体
を含む、医薬製剤。
【請求項４７】
前記医薬製剤は単位投与量の製剤であることを特徴とする、請求項４６に記載の医薬製剤。
【請求項４８】
前記医薬製剤は、経口投与、経鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、血管内注射、皮下注射、経皮投与、及び筋肉内注射から成る群から選択された経路を介した投与のために処方されることを特徴とする、請求項４６に記載の医薬製剤。
【請求項４９】
癌の処置のための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか１つに記載の分離されたヒト抗体の使用。
【請求項５０】
癌の処置のための薬剤の製造における、請求項５〜４５のいずれか１つに記載の免疫結合体の使用。
【請求項５１】
前記癌細胞は、卵巣癌、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌、中皮腫、リンパ腫、肝臓癌、尿路上皮癌、胃癌、多発性骨髄腫、多形性膠芽腫、神経膠腫、神経芽腫、及び子宮頸癌から成る群から選択されることを特徴とする、請求項４９又は５０に記載の使用。
【請求項５２】
前記癌細胞は前立腺癌細胞であることを特徴とする、請求項４９又は５０に記載の使用。
【請求項５３】
前記癌は去勢抵抗性前立腺癌であることを特徴とする、請求項５２に記載の使用。
【請求項５４】
前記癌は転移細胞を含むことを特徴とする、請求項４９又は５０に記載の使用。
【請求項５５】
前記転移細胞は、骨転移、肝転移、膀胱転移、及び／又はリンパ節転移であることを特徴とする、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
前記癌は固形腫瘍を含むことを特徴とする、請求項４９又は５０に記載の使用。
【請求項５７】
前記薬剤は、非経口投与のため、及び／又は腫瘍若しくは手術部位への投与のために製剤化されることを特徴とする、請求項４９〜５６のいずれか１つに記載の使用。
【請求項５８】
前記薬剤は、外科手術及び／又は放射線療法のための補助療法として投与されることを特徴とする、請求項４９〜５６のいずれか１つに記載の使用。
【請求項５９】
前記薬剤は、別の抗癌剤及び／又はホルモンと共に投与されることを特徴とする、請求項４９〜５６のいずれか１つに記載の使用。
【請求項６０】
前記薬剤は、アビラテロン及び／又はエンザルタミドと共に投与されることを特徴とする、請求項５９に記載の使用。
【請求項６１】
癌の処置における使用のための、請求項１〜４のいずれか１つに記載の抗体、または請求項５〜４５のいずれか１つに記載の免疫結合体を含む、組成物。
【請求項６２】
請求項１−４のいずれか１つに記載の抗体又は抗体のフラグメントをコードする、核酸。
【請求項６３】
請求項６２に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【外国語明細書】
2020178700000001.pdf