(57)【要約】【課題】エストロゲン受容体の発現を促進する新規なエストロゲン受容体発現促進剤を提供する。【解決手段】地黄抽出物、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかを有効成分として含むエストロゲン受容体発現促進剤、ならびに、本発明のエストロゲン受容体発現促進剤とエストロゲンとを含む細胞増殖促進剤。【選択図】図１
2020050603.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
地黄抽出物、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかを有効成分として含む、エストロゲン受容体発現促進剤。
【請求項２】
前記地黄抽出物が、水、アルコールおよび水とアルコールとの混合物から選ばれるいずれかである抽出溶媒を用いて抽出されたものである、請求項１に記載のエストロゲン受容体発現促進剤。
【請求項３】
前記抽出溶媒が、水と１，３−ブチレングリコールとの混合物である、請求項２に記載のエストロゲン受容体発現促進剤。
【請求項４】
前記地黄抽出物を０．００５〜１．０％（ｗ／ｗ）の固形分濃度で含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のエストロゲン受容体発現促進剤。
【請求項５】
スタキオースを０．００１〜０．１（ｍｇ／ｍＬ）の濃度で含む、請求項１に記載のエストロゲン受容体発現促進剤。
【請求項６】
カタルポールを０．００００１〜０．００１（ｍｇ／ｍＬ）の濃度で含む、請求項１に記載のエストロゲン受容体発現促進剤。
【請求項７】
エストロゲン受容体αおよびエストロゲン受容体βの両方の発現を促進するために用いられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載のエストロゲン受容体発現促進剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のエストロゲン受容体発現促進剤と、エストロゲンとを含む、細胞増殖促進剤。
【請求項９】
前記エストロゲンが、エストロン、エストラジオールおよびエストリオールから選ばれる少なくともいずれかである、請求項８に記載の細胞増殖促進剤。
【請求項１０】
前記エストロゲン受容体発現促進剤が、前記地黄抽出物またはスタキオースを有効成分とするものである、請求項８または９に記載の細胞増殖促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エストロゲン受容体の発現を促進する新規なエストロゲン受容体発現促進剤、およびそれを用いた細胞の増殖を促進する新規な細胞増殖促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エストロゲンは、ステロイドホルモンの一種であり、卵胞ホルモンまたは女性ホルモンとも呼ばれる。エストロゲンとしては、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）、エストリオール（Ｅ３）が知られている。エストロゲンの作用は多岐にわたっており、細胞の増殖促進（非特許文献１を参照）、肌の保湿機能に関与するヒアルロン酸や肌の弾力に関与するコラーゲン産生促進（非特許文献２を参照）、糖代謝促進作用（非特許文献３を参照）、肌のシワやキメを改善する作用（非特許文献４、５などを参照）などが知られている。
【０００３】
エストロゲンがこれらの作用を発現するためには、エストロゲン受容体（Estrogen Receptor：ＥＲ）が重要である。ＥＲには２つのアイソフォームが存在しており、それぞれＥＲαおよびＥＲβと呼ばれる。ＥＲαおよびＥＲβは、独立した遺伝子（ＥＳＲ１、ＥＳＲ２）から産生される。
【０００４】
ＥＲは、エストロゲンなどのリガンドが結合することで活性化され、ホモ（αα、ββ）あるいはヘテロ（αβ）ＥＲの二量体を形成し、核内移行を引き起こすことが知られている。核内移行後、二量体ＥＲタンパク質はＤＮＡ上のＥＲ結合領域であるエストロゲン受容体応答エレメント（ＥＲＥ）と結合し、遺伝子の転写を活性化させ、その作用を発現させる。また、近年の研究では、リガンドの結合を必要としない転写活性化（受容体の活性化）経路も存在することが判明している。
【０００５】
植物中に含まれるイソフラボンなどの植物性エストロゲンなどもＥＲに対して結合能を有し、同様の作用を示すことが知られている（たとえば、特許文献１、２などを参照）。
【０００６】
エストロゲンは加齢とともに分泌量が減少することが知られ、肌の弾力や保湿能の機能低下の一因であると考えられている。このため、エストロゲンなどのステロイドホルモンの分泌やイソフラボンなどの植物性エストロゲンを投与によるエストロゲン様作用、またはエストロゲン受容体発現を促進することで肌の機能低下を抑制する試みがなされている（たとえば、上記特許文献１、２、３、４、５などを参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００４−６７５９０号公報
【特許文献２】特開２００８−２８０３２０号公報
【特許文献３】特開２０１４−５１４５０号公報
【特許文献４】特開２０１８−７６２７１号公報
【特許文献５】特開２０１７−２０３００９号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Rie Urano et al., "Female sex hormone stimulates cultured human keratinocyte proliferation and its RNA- and protein-synthetic activities", Journal of Dermatological Science, 9(1995), 176-184
【非特許文献２】J. Peter Bentley et al., "Increased Hyaluronate and Collagen Biosynthesis and Fibroblast Estrogen Receptors in Macaque Sex Skin", Journal of Investigative Dermatology, 87(5), 668-673, 1986
【非特許文献３】笹岡  利安ら.,「４．エストロゲンと糖代謝」, 糖尿病, 51巻9号, 2008
【非特許文献４】M. Julie Thornton., "Estrogens and aging skin", Dermato endocrinology. 5(2), 264−270, 2013
【非特許文献５】Yuji Masuda et al., "Improvement of skin surface texture by topical estradiol treatment in climacteric women", Journal of Dermatological Treatment. 24, 312-317, 2013
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、エストロゲン受容体の発現を促進する新規なエストロゲン受容体発現促進剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は、地黄抽出物、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかを有効成分として含むことを特徴とする。
【００１１】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤において、前記地黄抽出物が、水、アルコールおよび水とアルコールとの混合物から選ばれるいずれかである抽出溶媒を用いて抽出されたものであることが好ましい。ここにおいて、前記抽出溶媒は水と１，３−ブチレングリコールとの混合物であることがより好ましい。
【００１２】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は、前記地黄抽出物を０．００５〜１．０％（ｗ／ｗ）の固形分濃度で含むことが好ましい。
【００１３】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は、スタキオースを０．００１〜０．１（ｍｇ／ｍＬ）の濃度で含むことが好ましい。
【００１４】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は、カタルポールを０．００００１〜０．００１（ｍｇ／ｍＬ）の濃度で含むことが好ましい。
【００１５】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は、エストロゲン受容体α（ＥＲα）およびエストロゲン受容体β（ＥＲβ）の両方の発現を促進するために用いられることが好ましい。
【００１６】
本発明はまた、上述した本発明のエストロゲン受容体発現促進剤と、エストロゲンとを含む細胞増殖促進剤についても提供する。
【００１７】
本発明の細胞増殖促進剤において、前記エストロゲンは、エストロン、エストラジオールおよびエストリオールから選ばれる少なくともいずれかであることが好ましい。
【００１８】
本発明の細胞増殖促進剤において、前記エストロゲン受容体発現促進剤は、前記地黄抽出物またはスタキオースを有効成分とするものであることが好ましい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、エストロゲン受容体の発現を促進する新規なエストロゲン受容体発現促進剤を提供することができる。また、本発明によれば、このような本発明のエストロゲン受容体発現促進剤を用いた、細胞の増殖を促進する新規な細胞増殖剤についても提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１（ａ）は、実験例１のＥＲαについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲαの相対比）であり、図１（ｂ）は、実験例１のＥＲβについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲβの相対比）である。
【図２】図２（ａ）は、実験例２のＥＲαについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲαの相対比）であり、図２（ｂ）は、実験例２のＥＲβについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲβの相対比）である。
【図３】図３（ａ）は、地黄抽出物とＥ１、Ｅ２またはＥ３を添加した結果を、地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、または、Ｅ３のみ、および、比較例と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）であり、図３（ｂ）は、スタキオースとＥ１、Ｅ２またはＥ３を添加した結果を、地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、または、Ｅ３のみ、および、比較例と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）である。
【図４】図４（ａ）は、地黄抽出物とＥ１、Ｅ２またはＥ３を添加した結果を、地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、または、Ｅ３のみ、および、比較例と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）であり、図４（ｂ）は、スタキオースとＥ１、Ｅ２またはＥ３を添加した結果を、地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、または、Ｅ３のみ、および、比較例と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
〔１〕エストロゲン受容体発現促進剤
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は、地黄抽出物、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかを有効成分として含むことを特徴とする。後述する実験例１、２で実証されるように、地黄抽出物、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかは、エストロゲン受容体（ＥＲαおよびＥＲβ）の発現を有意に向上させたが、このことは従来知られておらず、地黄抽出物、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかを有効成分として含む本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は新規なものである。
【００２２】
地黄（Rehmannia glutinosa）は、ゴマノハグサ科の植物であり、根は太く肉質であり、横に伸び、赤味がかった茶色である。根が生のものを生地黄、乾燥させたものを乾地黄、蒸してから乾かしたものを熟地黄といい、一般的に地黄と呼ばれるものは乾地黄を指すことが多く、漢方では主に根の部分を薬剤として使用する。本発明において抽出素材として用いられる「地黄」は、生地黄、乾地黄、熟地黄のいずれであってもよい。
【００２３】
本発明における地黄抽出物は、地黄を抽出素材として、一般的な抽出方法により得ることができる。たとえば地黄を抽出溶媒とともに浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮することで、地黄抽出物を得ることができる。
【００２４】
地黄抽出物を抽出するために用いられる抽出溶媒としては、一般的に抽出に用いられる溶媒であれば特に制限なく用いることができ、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。具体的には、水、アルコール類（たとえばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなど、さらには、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類も含む）、ケトン類（たとえばアセトン、メチルエチルケトンなど）、エステル類（たとえば酢酸メチル、酢酸エチルなど）、鎖状または環状エーテル類（たとえばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなど）、ポリエーテル類（たとえばポリエチレングリコールなど）、炭化水素（たとえばスクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルなど）、芳香族炭化水素（たとえばトルエンなど）、ハロゲン化炭化水素（たとえばジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタンなど）、超臨界二酸化炭素、有機溶剤（ピリジン類、油脂、ワックスなど、その他オイル類など）、ならびに、これらの混合物が挙げられる。
【００２５】
残留した場合の問題を考慮し、上述した中でも、水、アルコールおよび水とアルコールとの混合物から選ばれるいずれかを抽出溶媒として用いることが好ましく、水とアルコールとの混合物を抽出溶媒として用いることがより好ましく、水と１，３−ブチレングリコールとの混合物（好適には１：１の混合物）を抽出溶媒として用いることが特に好ましい。
【００２６】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤が地黄抽出物を有効成分とする場合、地黄抽出物の固形分濃度は特に制限されないが、より顕著にエストロゲン受容体発現促進作用を奏することから、地黄から水と１，３−ブチレングリコールの１：１を用いて抽出された地黄抽出物である場合には、固形分濃度は０．００５〜１．０％（ｗ／ｗ）の範囲内であることが好ましい。
【００２７】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤において有効成分として含まれる地黄抽出物には、その成分としてスタキオース、カタルポールが含まれると考えられる。
【００２８】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤はまた、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかを有効成分として含んでいてもよい。スタキオースを有効成分として含む場合、その濃度について特に制限されるものではないが、０．００１〜０．１（ｍｇ／ｍＬ）の範囲内であることが好ましい。またカタルポールを有効成分として含む場合も、その濃度については特に制限されるものではないが、０．００００１〜０．００１（ｍｇ／ｍＬ）の範囲内であることが好ましい。
【００２９】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤はエストロゲン受容体α（ＥＲα）およびエストロゲン受容体β（ＥＲβ）のいずれか一方のみの発現を促進するために用いられてもよいが、後述する実験例１、２でも実証されるように、本発明のエストロゲン受容体発現促進剤はエストロゲン受容体α（ＥＲα）およびエストロゲン受容体β（ＥＲβ）の両方の発現を促進し得る作用を示すことから、ＥＲαおよびＥＲβの両方の発現を促進するために用いられることが好ましい。
【００３０】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤によってエストロゲン受容体の発現が促進されることで、コラーゲンの産生促進、乳腺細胞の増殖促進、卵巣排卵制御、脂質代謝制御、インスリン感受性の向上、血液凝固能の促進、中枢神経（意識）の女性化、ＬＤＬの減少とＶＬＤＬ・ＨＤＬの増加のよる動脈硬化抑制、さらには、敏感肌の改善、肌の弾力低下の抑制、潤いの減少の抑制などの作用が期待される。
【００３１】
本発明のエストロゲン受容体発現促進剤は、地黄抽出物、スタキオースおよびカタルポールの少なくともいずれかを有効成分とするのであれば、それ以外の成分については特に制限はなく、本発明の効果を阻害しない範囲で、水、油分、保湿剤、界面活性剤、植物抽出エキス、酸化防止剤、防腐剤、殺菌剤、粉末成分、増粘性高分子、色素、ｐＨ調整剤、香料などの公知の添加剤を含有していても勿論よい。
【００３２】
〔２〕細胞増殖促進剤
本発明はさらに、上述した本発明のエストロゲン受容体促進剤と、エストロゲンとを含む細胞増殖促進剤についても提供する。後述する実験例３、４で実証されるように、本発明のエストロゲン受容体発現促進剤とエストロゲンとを併用することで、細胞の増殖が有意に向上されたが、このことも勿論従来知られておらず、本発明のエストロゲン受容体促進剤と、エストロゲンとを含む、本発明の細胞増殖促進剤も新規なものである。
【００３３】
本発明の細胞増殖促進剤において、エストロゲンは、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）およびエストリオール（Ｅ３）から選ばれる少なくともいずれかであることが好ましい。エストロゲンの濃度については特に制限されないが、エストロンを用いる場合には、１μＭ〜１００μＭの範囲内であることが好ましく、エストラジオールを用いる場合には、１μＭ〜１００μＭの範囲内であることが好ましく、また、エストリオールを用いる場合には、１μＭ〜１００μＭの範囲内であることが好ましい。エストロン、エストラジオールおよびエストリオールの中でも、最も生理活性が高いという理由からは、Ｅ２をエストロゲンとして用いることが好ましい。
【００３４】
本発明の細胞増殖促進剤において用いられるエストロゲン受容体発現促進剤は、前記地黄抽出物またはスタキオースを有効成分とするものであることが好ましい。
【００３５】
本発明の細胞増殖促進剤は、エストロゲン受容体促進剤と、エストロゲンとを含むのであれば、それ以外の成分については特に制限はなく、本発明の効果を阻害しない範囲で、水、油分、保湿剤、界面活性剤、植物抽出エキス、酸化防止剤、防腐剤、殺菌剤、粉末成分、増粘性高分子、色素、ｐＨ調整剤、香料などの公知の添加剤を含有していても勿論よい。
【００３６】
以下に実験例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３７】
＜実験例１＞
ヒト線維芽細胞（倉敷紡績株式会社より入手）を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、２４時間培養した。培養培地（組成：１０％組織培養用ウシ胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地）に、それぞれ表１に記載の濃度で添加した後、抗エストロゲン受容体抗体（Ａｎｔｉ−Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ａｎｔｉｂｏｄｙまたは、Ａｎｔｉ−Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ａｎｔｉｂｏｄｙ、アブカム株式会社社製）とＤＡＰＩ（４’,６−ｄｉａｍｉｄｉｎｏ−２−ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ、富士フイルム和光純薬株式会社社製）を用いてエストロゲン受容体（ＥＲαまたはＥＲβ）の免疫染色を行った。
【００３８】
【表１】
2020050603.tif 000003
【００３９】
ここで、地黄抽出物は、抽出溶媒として水と１，３−ブチレングリコールとの１：１の混合物を用いて抽出したものを用いた。またコントロールとして、抽出溶媒のみを添加したものを比較例とした。
【００４０】
有意水準の検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓのｔ検定を用いて行った。有意水準はｐ＜０．０５とした。
【００４１】
図１（ａ）は、実験例１のＥＲαについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲαの相対比）であり、図１（ｂ）は、実験例１のＥＲβについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲβの相対比）である。図１（ａ），（ｂ）から分かるように、地黄抽出物、地黄水抽出物、地黄ＥｔＯＨ抽出物、スタキオースおよびカタルポールは優れたエストロゲン受容体発現向上効果を有する。この結果は地黄抽出物、地黄水抽出物、地黄ＥｔＯＨ抽出物、スタキオースおよびカタルポールにはヒト線維芽細胞のエストロゲンの応答反応を増強する作用があることを示している。
【００４２】
＜実験例２＞
不死化ヒト表皮正常角化細胞（国立研究開発法人  ＪＣＲＢ細胞バンクより入手）を５．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、１週間培養した。培養後、培養培地（組成：０．００５％ウシ脳下垂体抽出物を含むＭＣＤＢ１５３培地）に、それぞれ上記表１に記載の濃度で添加した後、抗エストロゲン受容体抗体（Ａｎｔｉ−Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ａｎｔｉｂｏｄｙまたは、Ａｎｔｉ−Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）とＤＡＰＩ（４’,６−ｄｉａｍｉｄｉｎｏ−２−ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ）を用いてエストロゲン受容体（ＥＲαまたはＥＲβ）の免疫染色を行った。
【００４３】
ここで、地黄抽出物は、実験例１と同様に、抽出溶媒として水と１，３−ブチレングリコールとの１：１の混合物を用いて抽出したものを用いた。またコントロールとして、抽出溶媒のみを添加したものを比較例とした。
【００４４】
有意水準の検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓのｔ検定を用いて行った。有意水準はｐ＜０．０５とした。
【００４５】
図２（ａ）は、実験例２のＥＲαについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲαの相対比）であり、図２（ｂ）は、実験例２のＥＲβについての結果を示すグラフ（縦軸：ＥＲβの相対比）である。図２（ａ），（ｂ）から分かるように、地黄抽出物、地黄水抽出物、地黄ＥｔＯＨ抽出物、スタキオースおよびカタルポールは優れたエストロゲン受容体発現向上効果を有する。この結果は地黄抽出物、地黄水抽出物、地黄ＥｔＯＨ抽出物、スタキオースおよびカタルポールにはヒト表皮正常角化細胞のエストロゲンの応答反応を増強する作用があることを示している。
【００４６】
＜実験例３＞
実験例１と同様にヒト線維芽細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、２４時間培養した。その後、培地に、それぞれ表２に記載の濃度で添加し、２４時間後に培地を除去し、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（株式会社  同仁化学研究所製）を用いて生存率を測定し、細胞増殖作用を比較した。
【００４７】
【表２】
2020050603.tif 000004
【００４８】
ここで、地黄抽出物は、実験例１と同様に、抽出溶媒として水と１，３−ブチレングリコールとの１：１の混合物を用いて抽出したものを用いた。またコントロールとして、抽出溶媒のみを添加したものを比較例とした。
【００４９】
有意水準の検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓのｔ検定を用いて行った。有意水準はｐ＜０．０５とした。
【００５０】
図３（ａ）は、地黄抽出物をＥ１と共に添加した場合、Ｅ２と共に添加した場合または、Ｅ３と共に添加した場合の結果を、上記表２に記載の地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、Ｅ３のみ、または、比較例（抽出溶媒のみ添加）と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）であり、図３（ｂ）は、スタキオースをＥ１と添加した場合、Ｅ２と添加した場合または、Ｅ３と添加した場合の結果を、上記表２に記載の地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、Ｅ３のみ、または、比較例（抽出溶媒のみ添加）と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）である。図３（ａ），（ｂ）から分かるように、地黄抽出物またはスタキオースとエストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）またはエストリオール（Ｅ３）とを添加したヒト線維芽細胞においては、地黄抽出物またはスタキオースを単独で添加した場合と比較して、細胞増殖作用が向上された。この結果は、地黄抽出物およびスタキオースが線維芽細胞に対して、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）またはエストリオール（Ｅ３）との相乗効果による顕著な細胞増殖作用を発揮することを示している。
【００５１】
＜実験例４＞
実験例２と同様に不死化ヒト表皮正常角化細胞を５．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬで播種し、１週間培養した。その後、培地に、それぞれ上記表２に記載の濃度で添加し、２４時間後に培地を除去し、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（株式会社  同仁化学研究所製）を用いて生存率を測定し、細胞増殖作用を比較した。
【００５２】
ここで、地黄抽出物は、実験例１と同様に、抽出溶媒として水と１，３−ブチレングリコールとの１：１の混合物を用いて抽出したものを用いた。またコントロールとして、抽出溶媒のみを添加したものを比較例とした。
【００５３】
有意水準の検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓのｔ検定を用いて行った。有意水準はｐ＜０．０５とした。
【００５４】
図４（ａ）は、地黄抽出物をＥ１と共に添加した場合、Ｅ２と共に添加した場合または、Ｅ３と共に添加した場合の結果を、上記表２に記載の地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、Ｅ３のみ、または、比較例（抽出溶媒のみ添加）と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）であり、図４（ｂ）は、スタキオースをＥ１と添加した場合、Ｅ２と添加した場合または、Ｅ３と添加した場合の結果を、上記表２に記載の地黄抽出物のみ、Ｅ１のみ、Ｅ２のみ、Ｅ３のみ、または、比較例（抽出溶媒のみ添加）と比較して示すグラフ（縦軸：相対比）である。図４（ａ），（ｂ）から分かるように、地黄抽出物またはスタキオースとエストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）またはエストリオール（Ｅ３）とを添加したヒト表皮正常角化細胞においては、地黄抽出物またはスタキオースを単独で添加した場合と比較して、細胞増殖作用が向上された。この結果は、地黄抽出物およびスタキオースが表皮正常角化細胞に対して、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）またはエストリオール（Ｅ３）との相乗効果による顕著な細胞増殖作用を発揮することを示している。
【図１】
2020050603.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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