(57)【要約】【課題】  ＰＤＥ５阻害用医薬組成物及びＰＤＥ５阻害用食品組成物の提供。【解決手段】  本発明は５−アセチル−１ベンジルピロリジン−２−オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物及びＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５インヒビター。
【請求項２】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物。
【請求項３】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用食品組成物。
【請求項４】
「ＥＤの予防又は改善のために用いられる」旨の表示を付した請求項３記載のＰＤＥ５阻害用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ：Phosphodiesterase）５のインヒビターに関する。
【背景技術】
【０００２】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オン（５-Acetyl-１-benzylpyrrolidin-２-one）は、ピロリジンの５位に位置する炭素にアセチル基がついており、１位に位置する窒素にベンジル基がついており、２位に位置する炭素に酸素の二重結合がついている化合物である。
【０００３】
従来、下記非特許文献１に示すように、この５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンが合成化合物の一例として示唆されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】DESKUS、外2名、「SYNTHESIS OF 5S-(1-OXOALKYL AND ARYL)-2-PYRROLIDINONE DERIVATIVES」、SYNTHETIC COMMUNICATIONS、アメリカ合衆国、Marcel Dekker,Inc.、1998年5月、第28巻、第9号、p.1649-1659
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上記非特許文献１においては、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンの存在が示唆されているにすぎず、具体的な属性については何らの開示も示唆もなされていない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、鋭意研究の結果、ＰＤＥ５の働き、つまりサイクリックＧＭＰ（ｃＧＭＰ）をＧＭＰに分解する働きを阻害して、平滑筋を有効に弛緩させて陰茎に血液流入を促す作用を５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンが有していることを見出し、本発明を完成するに至ったものである。
【０００７】
すなわち、本発明は、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５インヒビター、ＰＤＥ５阻害用医薬組成物又はＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のＰＤＥ５インヒビター、ＰＤＥ５阻害用医薬組成物又はＰＤＥ５阻害用食品組成物は、ＰＤＥ５の働きによりｃＧＭＰが過度に分解される状態の予防及び／又は治療に貢献することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有するＰＤＥ５インヒビターに関する。
【００１０】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンは、ピロリジンの５位に位置する炭素にアセチル基がついており、１位に位置する窒素にベンジル基がついており、２位に位置する炭素に酸素の二重結合がついている化合物であり、構造式は下記化１のとおりである。また、分子式はＣ１３Ｈ１５ＮＯ２である。
【００１１】
【化１】
2020029421.tif 000002
【００１２】
ＰＤＥ５は、既述の如く、ｃＧＭＰを加水分解する酵素であり、陰茎海綿体の血管平滑筋等に偏在する。ＰＤＥ５インヒビターは、ＰＤＥ５が偏在する部位においてｃＧＭＰの分解を抑え、当該局所の血流量を増大させ、男性機能障害（ＥＤ）の治療薬として特に有効であることが知られる。すなわち、本発明に係るＰＤＥ５インヒビターは、ＰＤＥ５の働きによりｃＧＭＰが過度に分解される状態の予防及び／又は治療に貢献し、最終的に男性機能障害の予防及び／又は治療に貢献する。
【００１３】
また、本発明は、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有する、ＰＤＥ５により仲介される状態の予防及び／又は治療のためのＰＤＥ５阻害用医薬組成物に関する。
【００１４】
ＰＤＥ５により仲介される状態としては、ＰＤＥ５が関与する状態であればよいが、特に男性機能障害があげられる。
【００１５】
本発明に係る医薬組成物は、医薬品又は医薬部外品として使用することができ、各種の形態とすることができる。これら医薬品又は医薬部外品は、例えば、散剤、丸剤、錠剤（例えば、コーティング錠、糖衣錠、チュワブル錠等）、カプセル剤（例えば、硬若しくは軟ゼラチンカプセル剤等）、顆粒剤、内服液剤（例えば、乳濁剤、懸濁剤、シロップ等）等の経口投与に適した剤形とすることができる。
【００１６】
その他、例えば、坐剤等の直腸内投与に適した剤形、例えば、注射剤、輸液等の血管内投与、筋肉内投与、皮下又は皮肉投与等に適した剤形、例えば軟膏、クリーム剤、ゲル剤、又は液剤（点眼液、洗眼液等を含む。）等の局部的又は経皮的投与に適した剤形、すなわち非経口的投与に適した剤形とすることもできるが、好ましくは経口投与である。
【００１７】
本発明の医薬組成物を錠剤、顆粒剤，カプセル剤、チュワブル錠の形態で用いる場合には、打錠加工助剤、顆粒加工助剤、カプセル加工助剤等をはじめとして既知の担体が用いられ得る。
【００１８】
打錠加工助剤としては、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリン等あらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガム、おから等の食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウム等の食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類、ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤、粉末油脂類、グリセリン、脂肪酸エステル等の油脂類、又はチュワブル錠に使用する各種甘味料、各種酸味料、各種香料等の味付け素材、コーティング素材としてのシェラック、トウモロコシタンパク、酵母細胞壁、デンプン、還元麦芽糖水飴、シュガーレス糖衣、マルチトール、グリセリン、ソルビトール、ＨＰＭＣ、ＨＰＣ等が例示される。ただし、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はない。
【００１９】
また、顆粒加工助剤としても、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はないが、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリン等あらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガム等の食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウム等の食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類等が例示される。
【００２０】
また、カプセル加工助剤としても、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はないが、ハードカプセルタイプのカプセルを調製するための、グラニュー糖、上白糖、粉糖、還元麦芽糖水飴粉末、乳糖、ブドウ糖、プルラン、エリスリトール、デンプン、デキストリン等あらゆる糖類、結晶セルロース、アラビアガム等の食物繊維類、トウモロコシタンパク、リン酸カルシウム等の食品カルシウム、食品エキス類、食品乾燥粉末類、天然果汁末類等が、ソフトカプセルタイプのカプセルを調製するための、食品油脂、ミツロウ、グリセリン脂肪酸エステル等の内容物粘度調整剤等が、それぞれ例示される。
【００２１】
錠剤は、通常、打錠機を使用して調製され得るが、錠剤に味付け素材をブレンドしてチュワブル錠にしたり、錠剤表面を、自動コーティング機、噴霧顆粒機、又は手掛けパンを用いてコーティングしたりしてもよい。顆粒剤の成形には、噴霧顆粒機タイプ、練りだし（押し出し）タイプ、又は高速撹拌顆粒機タイプの各種顆粒機が使用され得る。カプセル剤の調製には、カプセル助剤を混合してカプセル充填機（ハードタイプ及びソフトタイプ）が使用され得る。
【００２２】
また、本発明は、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなる、ＰＤＥ５により仲介される状態の予防及び／又は改善のためのＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。
【００２３】
本発明のＰＤＥ５阻害用食品組成物は、食品、飲料又は動物用飼料として、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、美容食品又は栄養補助食品（サプリメント）として使用することができる。これら食品、飲料及び動物用飼料は、例えば、アイスクリーム、ゼリー、あめ、チョコレート、及びチューインガム等の既知の食品形態、お茶及びジュース等の飲料水としての形態であってもよい。また、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤又は錠剤等の形態であってもよい。
【００２４】
なお、本発明のＰＤＥ５阻害用食品組成物は、特に男性機能障害が気になるかたにすすめられる。
【００２５】
本発明に係るＰＤＥ５インヒビター、ＰＤＥ５阻害用医薬組成物、ＰＤＥ５阻害用食品組成物の摂取量は、特に制限されないが、使用者若しくは患者等の摂取者又は摂取動物の年齢、体重又は症状等や剤形に応じて適宜選択することができる。また、摂取期間は、摂取者又は摂取動物の年齢、症状に応じて任意に定めることができる。
【実施例】
【００２６】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り以下の実施例に限定されるものではない。
【００２７】
ホスホジエステラーゼアッセイ
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンのＰＤＥ５阻害活性を評価するため、蛍光偏光法によるＰＤＥ５阻害アッセイを実施した。アッセイには、ＩＭＡＰ（商標）アッセイキット（モレキュラーデバイス社製、カタログ番号Ｒ８１２７）を使用した。評価はすべて二重検定で実施した。ナノ粒子上に固定した金属配位錯体によるリン酸塩の高親和性結合にもとづいて、アッセイした。ＩＭＡＰ結合試薬は、ホスホジエステラーゼによりｃＧＭＰから生じたヌクレオチド一リン酸のリン酸基と複合体を形成する。蛍光偏光の検出により、結合すると、リン酸含有分子の分子運動速度に変化が生じ、結果として基質にラベルした蛍光の偏光が増大する。
【００２８】
（試薬の調製）
１）基質溶液
２．５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．０１％  ＮａＮ３、０．０２％  ＢＳＡを含むＩＭＡＰ反応緩衝液中でフルオレセイン標識ｃＧＭＰ（１００ｎＭ）を調製した。
２）酵素溶液
バキュロウイルスを用いて昆虫細胞で発現・精製させたヒトＰＤＥ５触媒ドメインをＩＭＡＰ反応緩衝液中に調製した。
３）ＩＭＡＰ結合溶液
ＩＭＡＰ結合試薬をＩＭＡＰ反応緩衝液中で調製した。
【００２９】
（被験化合物溶液の調製）
被験化合物をジメチルスルホキシドに溶解した。
（試験方法及び測定方法）
１）９６ウェルブラックプレートに被験化合物溶液、基質溶液、酵素溶液を１ウェルあたり各１０μＬずつ添加した（ジメチルスルホキシドの最終濃度は３％）。
２）遮光かつ３７℃で４０分間インキュベートした。
３）ＩＭＡＰ結合溶液を１ウェルあたり６０μＬずつ添加した。
４）マルチラベルリーダー（パーキンエルマ一社製、Ｖｉｃｔｏｒ３）で各ウェルの４８５ｎｍ／５３０ｎｍ  ｅｘ／ｅｍで蛍光偏光を測定した。
５）被験化合物に代えてジメチルスルホキシドを添加し、他は前記と同じ操作を実施して、その結果をコントロールとした。
６）酵素溶液に代えてＩＭＡＰ反応緩衝液を添加し、他は前記と同じ操作を実施して、その結果をバックグラウンドとした。
【００３０】
（ＰＤＥ５阻害率の計算式）
ＰＤＥ５限害率（％）は下記の式により算出した。結果は二重検定の平均とした。
ＰＤＥ５阻害率（％）＝｛１−（被験化合物の蛍光偏光値−バックグラウンドの蛍光偏光値）／（コントロールの蛍光偏光値−バックグラウンドの蛍光偏光値）｝×１００
【００３１】
（ＩＣ５０値の計算）
統計解析ソフトＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いてデータ解析した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値は、０．００１〜１００ｍｇ／ｍＬの化合物濃度の存在下で酵素活性を測定し、その後、蛍光偏光値に対する化合物濃度をプロットした用量反応曲線から求めた。
【００３２】
（評価結果）
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンのＩＣ５０値は３３．７ｍｇ／ｍＬであった。
【００３３】
（アッセイの妥当性の確認）
ＰＤＥ５阻害剤として知られるシルデナフィルを参照被験化合物として、他は本願化合物と同じ条件で同じ操作を実施して得られたＩＣ５０値は２０．６ｎＭであった。本試験方法における適正範囲は約５〜５０ｎＭであることから、アッセイの妥当性が示された。
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月4日(2019.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物。
【請求項２】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用食品組成物。
【請求項３】
「ＥＤの予防又は改善のために用いられる」旨の表示を付した請求項２記載のＰＤＥ５阻害用食品組成物。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ：Phosphodiesterase）５阻害用の医薬組成物及び食品組成物に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
すなわち、本発明は、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物又はＰＤＥ５阻害用食品組成物に関する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明のＰＤＥ５阻害用医薬組成物又はＰＤＥ５阻害用食品組成物は、ＰＤＥ５の働きによりｃＧＭＰが過度に分解される状態の予防及び／又は治療に貢献することができる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明は、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有するＰＤＥ５阻害用の医薬組成物に関する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
ＰＤＥ５は、既述の如く、ｃＧＭＰを加水分解する酵素であり、陰茎海綿体の血管平滑筋等に偏在する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明は、５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有する、ＰＤＥ５により仲介される状態の予防及び／又は治療のためのＰＤＥ５阻害用医薬組成物に関する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明に係るＰＤＥ５阻害用医薬組成物、ＰＤＥ５阻害用食品組成物の摂取量は、特に制限されないが、使用者若しくは患者等の摂取者又は摂取動物の年齢、体重又は症状等や剤形に応じて適宜選択することができる。また、摂取期間は、摂取者又は摂取動物の年齢、症状に応じて任意に定めることができる。
【手続補正書】
【提出日】令和1年7月25日(2019.7.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用医薬組成物。
【請求項２】
５-アセチル-１-ベンジルピロリジン-２-オンを有効成分として含有してなるＰＤＥ５阻害用食品組成物。