(57)【要約】      （修正有）【課題】遺伝性血管性浮腫を治療する方法を提供する。【解決手段】活性血漿カリクレインに結合する抗体などの血漿カリクレイン結合タンパク質と、当該タンパク質を使用する方法とを提供する。【選択図】図１１
2020002171.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を治療する方法であって、
その必要のある対象に、活性血漿カリクレインを結合する抗体を、前記対象の前記抗体の血漿中濃度が約８０ｎＭ超であるような有効量で投与すること
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１４年１月２１日出願の米国特許仮出願第６１／９２９，７１６号、２０１４年２月２５日出願の米国特許仮出願第６１／９４４，３６１号、および２０１４年７月７日出願の米国特許仮出願第６２／０２１，３９７号の出願日の優先権を主張するものである。これら参照となる各出願の内容全体は、本明細書中参照として援用される。
【背景技術】
【０００２】
血漿カリクレインは、接触相のセリンプロテアーゼの一種であり、異なる炎症性疾患、心血管性疾患、感染性疾患（敗血症）および腫瘍の疾患の薬剤標的となる可能性がある（Ｓａｉｎｚ  Ｉ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  ９８，  ７７−８３，  ２００７）。接触相は、外来性のもしくは陰性に荷電した表面への曝露の際の第ＸＩＩ因子により、または内皮細胞表面上でのプロリルカルボキシペプチダーゼ（ｐｒｏｌｙｌｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ）のいずれかにより、活性化される（Ｓａｉｎｚ  Ｉ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  ９８，  ７７−８３，  ２００７）。血漿カリクレインの活性化は、第ＸＩＩ因子のフィードバック活性を介して内在性の凝固を増幅し、炎症誘発性ノナペプチドのブラジキニンの産生を介して炎症を高める。循環における主要なキニノゲナーゼとして、血漿カリクレインは、脈管構造でのブラジキニンの産生に大きな役割を果たしている。血漿カリクレインの主な天然の阻害剤である、Ｃ１インヒビタータンパク質（Ｃ１−ＩＮＨ）の遺伝的欠損は、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）をもたらす。ＨＡＥ患者は、多くの場合、知られていないトリガーにより誘発される有痛性の浮腫の発作に苦しんでいる（Ｚｕｒａｗ  Ｂ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５９，  １０２７−１０３６，  ２００８）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本開示は、８０ｎＭ超の抗体の血漿中濃度を維持する、ヒトの血漿カリクレインの活性形態に結合する抗体の用量（たとえば約１００ｍｇ〜３００ｍｇ）が、遺伝性血管浮腫の治療において有益な（たとえば予防的な）効果を示すために十分であることを示す、薬物動態試験および薬物動態的なモデリングからもたらされる予期しない結果に、部分的に基づく。さらに、２週間ごとに１００ｍｇの量で、または４週間ごとに３００ｍｇの量でＤＸ−２９３０を投与することが、８０ｎＭ超の一定した状態の血漿中薬剤濃度を維持し、２週間ごとに３００ｍｇの量でＤＸ−２９３０を投与することが、２００ｎＭ超の一定した血漿中薬剤濃度を維持する。
【０００４】
また本開示は、ヒトの血漿カリクレインの活性形態に結合する抗体が、最大３．０ｍｇ／ｋｇでの単回用量で用量を限定する毒性の所見がなく、様々な用量（０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇ）で遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）の治療において優れた治療上の効果を呈したとの予期しない発見に、部分的に基づく。薬物動態的な結果は、ＤＸ−２９３０が、健常な対象に単回注射を行った後、用量グループを通して線形の用量依存的な曝露および平均１７〜２０日の排泄半減期を有することを示した。２つの異なる探索性のバイオマーカーアッセイからの薬力学的な結果から、用量および時間依存的な様式でｅｘ  ｖｉｖｏでの血漿カリクレイン阻害を確認した。
【０００５】
よって、本開示の一態様は、ＨＡＥ（たとえばＩ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型）を治療する方法であって、対象における抗体の血漿中濃度が約８０ｎＭ超となるような有効量（たとえば１００ｍｇ〜４００ｍｇ、または１００〜３００ｍｇ）で、ｐＫａｌの活性形態を結合する抗体をその必要のある対象に投与することを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、抗体（たとえばＤＸ−２９３０）を、２週間ごとに１００ｍｇで投与する。いくつかの実施形態では、抗体（たとえばＤＸ−２９３０）を、２週間ごとまたは４週間ごとに３００ｍｇで投与する。
【０００６】
本開示の別の態様は、ＨＡＥ（たとえばＩ型、ＩＩ型、またはＩＩ型）を治療する方法であって、（ａ）第１の用量で活性血漿カリクレインを結合する抗体（たとえば完全長の抗体またはその抗原結合性フラグメント）を、その必要のある対象に投与することと、（ｂ）上記対象における抗体の血漿中濃度を測定することと、（ｃ）上記抗体の血漿中濃度が約８０ｎＭ未満である場合に第２の用量で上記抗体を上記対象に投与することとを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、第１の用量、第２の用量、またはその両方が、１００ｍｇ〜４００ｍｇまたは１００ｍｇ〜３００ｍｇ（たとえば１００ｍｇまたは３００ｍｇのＤＸ−２９３０）である。いくつかの実施形態では、第２の用量は第１の用量よりも多い。
【０００７】
よって、本開示の一態様は、ＨＡＥ（たとえばＩ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型）を治療する方法であって、単回用量の単離した抗体をその必要がある対象に投与することを含み、上記抗体（たとえば完全長の抗体またはその抗原結合性フラグメント）が活性血漿カリクレインを結合する（たとえばプレカリクレインと結合しない）、方法を特徴とする。任意に、本方法は、治療の前および後に、対象におけるクレアチンホスホキナーゼのレベルをモニタリングすることをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載されるいずれかの抗体の単回用量は、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ（たとえば０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇ）である。
【０００８】
別の態様では、本開示は、遺伝性ＨＡＥを治療する方法であって、活性血漿カリクレインを結合する単離した抗体（たとえば完全長の抗体またはその抗原結合性フラグメント）（たとえば、ヒトの活性血漿カリクレインを結合するがヒトのプレカリクレインを結合しない抗体）の複数の用量を、その必要のある対象に投与することを含み、２つの連続した投与のそれぞれが、少なくとも２週間（たとえば３週間、４週間、５週間、または６週間）離れている、方法を提供する。いくつかの実施形態では、複数の用量のうち少なくとも１つの用量は、０．１〜３ｍｇ／ｋｇである。たとえば、複数の用量のうち各用量は３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、抗体は、月単位で（たとえば２８日ごとに）たとえば６ヶ月の間投与される。
【０００９】
さらなる別の態様では、本開示は、ＨＡＥを治療する方法であって、（ｉ）活性血漿カリクレインを結合する１つまたは複数の用量の単離した抗体（たとえば完全長の抗体またはその抗原結合性フラグメント）（たとえば、ヒトの活性血漿カリクレインを結合するがヒトのプレカリクレインを結合しない抗体）を、その必要がある対象に投与することと、（ｉｉ）最後の投与の後に、上記対象中の抗体による血漿カリクレインの阻害レベルを測定することと、（ｉｉｉ）上記阻害レベルが最小治療レベルよりも低い場合に、さらなる用量の上記抗体を上記対象に投与することとを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の用量は、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ（たとえば各用量で、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇ）である。一例では、最小治療レベルは、約８０ｎＭ未満の抗体の血清中濃度または血漿中濃度を表す。
【００１０】
本明細書中記載のいずれかの方法では、抗パリクレイン（ｐａｌｌｉｋｒｅｉｎ）抗体は、完全長の抗体またはその抗原結合性フラグメントであってよい。いくつかの実施形態では、抗体は、活性血漿カリクレインを結合し、プレカリクレインを結合しない。
【００１１】
本明細書中記載のいずれか１つの方法の一部の実施形態では、抗体は、ＤＸ−２９３０と同一のエピトープに結合する、または活性血漿カリクレインへの結合に関してＤＸ−２９３０と競合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＤＸ−２９３０と同一の重鎖ＣＤＲ、ＤＸ−２９３０と同一の軽鎖ＣＤＲ、またはその両方を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書中記載される完全長のＩｇＧ抗体であるＤＸ−２９３０、またはその抗原結合性フラグメントである。
【００１２】
本明細書中記載のいずれか１つの方法のいくつかの実施形態では、抗体を皮下投与により投与できる。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＡＥの発作に苦しんでいる、ＨＡＥの発作を有する疑いのある、またはＨＡＥの発作のリスクがあるヒトの患者である。たとえば、本明細書中に記載の方法は、ＨＡＥの予防治療のためのものである。
【００１３】
本明細書中記載のいずれか１つの方法のいくつかの実施形態では、本方法は、治療の前および後、または治療過程の最中に、対象におけるクレアチンホスホキナーゼのレベルをモニタリングすることをさらに含む。クレアチンホスホキナーゼの上昇が観察される場合、抗体（たとえばＤＸ−２９３０）の用量を減少させてよく、または治療を終了してもよい。
【００１４】
さらなる別の態様では、本開示は、対象中の遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を治療する最適な用量（たとえば最適な予防上の用量）を決定する方法であって、（ａ）初期の用量で、活性血漿カリクレインを結合する本明細書中に記載のいずれかの抗体（たとえばＤＸ−２９３０またはその抗原結合性フラグメント）を、その必要のある対象に投与すること（たとえば皮下投与）と、（ｂ）上記対象における抗体の血漿中濃度を測定することと、（ｃ）上記抗体の血漿中濃度が約８０ｎＭ未満である場合に、上記抗体の用量を増加させることとを含み、抗体の血漿中濃度を約８０ｎＭ超に維持する用量が上記対象に最適な予防用量として選択される、方法を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、抗体を投与する時点で、ＨＡＥの症状を呈していないヒトの患者である。いくつかの実施形態では、初期の用量は、約１００ｍｇ〜４００ｍｇまたは１００ｍｇ〜３００ｍｇ（たとえば１００ｍｇまたは３００ｍｇのＤＸ−２９３０）である。
【００１５】
上述の方法は、治療の前および後、または治療過程の最中に、対象中のクレアチンホスホキナーゼのレベルをモニタリングすることをさらに含んでもよい。さらに、本方法は、クレアチンホスホキナーゼの上昇が観察される場合に、抗体の用量を減少させること、または治療を終了することをさらに含んでもよい。
【００１６】
本明細書中に記載のいずれかの方法では、抗体の血漿中濃度を、血漿カリクレイン活性のアッセイまたは免疫アッセイにより測定できる。
【００１７】
また、（ａ）ＨＡＥの治療、またはＨＡＥを治療するための薬剤の最適な用量の決定に使用するための医薬組成物であって、本明細書中に記載の抗カリクレイン抗体のいずれかおよび薬学的に許容可能なキャリアーを含む、医薬組成物と、（ｂ）ＨＡＥの治療のための薬物を製造するための医薬組成物の使用も、本開示の範囲内にある。意図する目的のための抗体の使用は、本明細書中に記載される投与条件下で行うことができる。
【００１８】
本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細を、以下の説明に記載する。本発明の他の特徴または利点は、以下の図面およびいくつかの実施形態の詳細な説明、および添付の特許請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】健常な対象への皮下（ＳＣ）投与の後のＤＸ−２９３０の平均濃度を示すグラフである。各用量のコホートに関する濃度‐時間のプロットを対数尺度で表している。エラーバーは標準偏差である。このプロファイルは、線形で用量依存的な曝露を示した。用量グループにわたる並列排出相は、すべての用量が均一に作用する用量非依存的な動態を伴い正常に作用する抗体と一致する。
【図２】健常な対象における、２８日ごとの皮下投与を介して３ｍｇ／ｋｇのＤＸ−２９３０を用いた反復投与後に予測される血漿中濃度を表すグラフである。
【図３】疾患状態の予防のための薬物の使用の一般的な原則を表すグラフである。
【図４】ＨＡＥの予防のためのＤＸ−２９３０の使用の一般的な原則を表すグラフである。
【図５】ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるｐＫａｌに対するＤＸ−２９３０およびエカランチドの比較阻害活性を表すグラフである。
【図６】ＨＡＥの治療および／または予防のための８０ｎＭ以上でＤＸ−２９３０の血漿中濃度を継続的に維持するのに必要な条件に関する代替的な仮説を表すグラフである。あるいは、ＨＡＥの治療および／または予防のために必要とされるＤＸ−２９３０の血漿中濃度は、８０ｎＭよりも低く、または高くてもよい。
【図７】単回用量３ｍｇ／ｋｇのＤＸ−２９３０の投与の後に、８０ｎＭ以上での血漿中の薬剤レベルが得られることを表すグラフである。
【図８】健常な対象において、２８日ごとに３ｍｇ／ｋｇで皮下送達する慢性的なＤＸ−２９３０投与の薬物動態的（ＰＫ）モデリングを表すグラフである。
【図９】健常な対象において、２８日ごとに３ｍｇ／ｋｇのＳＣでのＤＸ−２９３０の薬力学的（ＰＤ）効果を表すグラフである。
【図１０】ＤＸ−２９３０の単回投与（３ｍｇ／ｋｇ）後の薬力学的（ＰＤ）および薬物動態学的（ＰＫ）データを表すグラフである。ＰＤのデータは、経時的なｐＫａｌ活性の相対的な％阻害としてプロットした。ＰＫのデータは、経時的な血漿中ＤＸ−２９３０の濃度（ｎＭ）としてプロットした。※Ｐ値＜０．０５（５日目、３ｍｇ／ｋｇ対プラセボ）。
【図１１】天然の生物学的基質に対するＤＸ−２９３０の薬力学的（ＰＤ）活性を表すグラフである（ＨＭＷＫ切断を、２鎖のＨＭＷＫの生成として測定した）。
【図１２】３ｍｇ／ｋｇのＤＸ−２９３０の単回投与の後の経時的な、持続したＤＸ−２９３０の生理活性を表すグラフである。※Ｐ値＜０．０５（３ｍｇ／ｋｇおよび２８日目対予防投薬）
【発明を実施するための形態】
【００２０】
定義
本発明をさらに説明する前に、簡便のため、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲で使用される特定の用語を個々に定義する。他の用語は、本明細書中で明らかとなるように定義されている。
【００２１】
単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特段他の明確な記載がない限り複数形を含む。
【００２２】
用語「抗体」は、少なくとも１つのイムノグロブリンの可変ドメイン（可変領域）またはイムノグロブリンの可変ドメイン（可変領域）配列を含むタンパク質を指す。たとえば、抗体は、重鎖（Ｈ）可変領域（本明細書中ＶＨまたはＨＶと略記）、および軽鎖（Ｌ）可変領域（本明細書中ＶＬまたはＬＶと略記）を含んでよい。別の例では、抗体は、２つの重鎖（Ｈ）可変領域および２つの軽鎖（Ｌ）可変領域を含む。用語「抗体」は、抗体の抗原結合性フラグメント（たとえば単鎖抗体、ＦａｂおよびｓＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、およびドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント（ｄｅ  Ｗｉｌｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９６；  ２６（３）：６２９−３９））ならびに完全な抗体を含む。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにそれらのサブタイプ）の構造的な特徴を有してよい。抗体は、任意の供給源由来であってよいが、霊長類（ヒトおよび非ヒトの霊長類）の抗体および霊長類化抗体が好ましい。
【００２３】
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域（ＦＲ）」と呼ばれるより保存された領域が分散している、「相補性決定領域（ＣＤＲ）」と呼ばれる超可変性の領域にさらに分けることができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの程度は定義されている（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２，  ａｎｄ  Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７参照）。カバト（ｋａｂａｔ）の定義が、本明細書中で使用されている。各ＶＨおよびＶＬは、概して、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成されており、以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で、アミノ末端からカルボキシ末端へと配置されている。
【００２４】
本明細書中使用されるように、「イムノグロブリン可変ドメイン配列」は、１つまたは複数のＣＤＲ領域が、抗原結合部位に適した立体構造に配置されるように、イムノグロブリン可変ドメインの構造を形成できるアミノ酸配列を指す。たとえば配列は、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列のすべてまたは一部を含んでよい。たとえば配列は、１つ、２つまたはそれより多いＮ−またはＣ―末端アミノ酸、内部アミノ酸を除外してもよく、１つまたは複数の挿入または追加的な末端のアミノ酸を含んでもよく、または他の変更を含んでもよい。一実施形態では、イムノグロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは別のイムノグロブリン可変ドメイン配列と結合して抗原結合部位、たとえば血漿カリクレインと優先的に相互作用する構造を形成できる。
【００２５】
抗体のＶＨ鎖またはＶＬ鎖は、重鎖または軽鎖の定常領域のすべてまたは一部をさらに含むことにより、それぞれ重鎖または軽鎖イムノグロブリンを形成できる。一実施形態では、抗体は、２つの重鎖イムノグロブリンおよび２つの軽鎖イムノグロブリンのテトラマーであって、上記重鎖および軽鎖イムノグロブリンは、たとえばジスルフィド結合により内部で結合されている。ＩｇＧでは、重鎖定常領域は、３つのイムノグロブリンのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。軽鎖定常領域はＣＬドメインを含む。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、概して、免疫系の様々な細胞（たとえばエフェクター細胞）および古典的な補体経路の第１の補体（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子に対する抗体の結合を媒介する。イムノグロブリンの軽鎖は、カッパ型またはラムダ型であってよい。一実施形態では、抗体はグリコシル化されている。抗体は、抗体依存的な細胞傷害性および／または補体媒介性細胞傷害性に関して機能的であってよい。
【００２６】
抗体の１つまたは複数の領域は、ヒト型または事実上ヒト型であってよい。たとえば１つまたは複数の可変領域は、ヒト型または事実上ヒト型であってよい。たとえば、１つまたは複数のＣＤＲはヒト型、たとえばＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、および／またはＬＣ  ＣＤＲ３であってよい。各軽鎖（ＬＣ）および／または重鎖（ＨＣ）のＣＤＲはヒト型であってよい。ＨＣ  ＣＤＲ３はヒト型であってよい。１つまたは複数のフレームワーク領域は、ヒト型、たとえばＨＣおよび／またはＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４であってよい。たとえば、Ｆｃ領域はヒト型であってよい。一実施形態では、すべてのフレームワーク領域はヒト型であり、たとえばイムノグロブリンを産生する造血細胞または非造血細胞など、ヒトの体細胞由来である。一実施形態では、ヒトの配列は生殖系列の配列であり、たとえば生殖系列の核酸によりコードされている。一実施形態では、選択されたＦａｂのフレームワーク（ＦＲ）残基は、最も類似する霊長類の生殖系列遺伝子中、特にはヒトの生殖系列遺伝子中で、対応する残基のアミノ酸種に変換できる。１つまたは複数の定常領域は、ヒト型または事実上ヒト型であってよい。たとえば、イムノグロブリンの可変ドメイン、定常領域、および定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および／もしくはＣＬ１）、または抗体全体の少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９８、または１００％が、ヒト型または事実上ヒト型であってよい。
【００２７】
抗体のすべてまたは一部は、イムノグロブリンの遺伝子またはそのセグメントによりコードされ得る。例示的なヒトのイムノグロブリンの遺伝子は、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロンおよびミューの定常領域の遺伝子、ならびに多くのイムノグロブリン可変領域の遺伝子を含む。完全長のイムノグロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤａまたは約２１４個のアミノ酸）は、ＮＨ２末端での可変領域（約１１０個のアミノ酸）の遺伝子およびＣＯＯＨ末端でのカッパまたはラムダの定常領域の遺伝子によりコードされている。完全長のイムノグロブリン「重鎖」（約５０ｋＤａまたは約４４６個のアミノ酸）も同様に、可変領域（約１１６のアミノ酸）遺伝子および他の上述の定常領域遺伝子のうちの１つ、たとえばガンマ（約３３０のアミノ酸をコードする）によりコードされている。ＨＣ  ＣＤＲ３は、約３つのアミノ酸残基から３５超のアミノ酸残基まで変動するため、ヒトＨＣの長さは、相当程度変動する。
【００２８】
完全長の抗体の「抗原結合性フラグメント」という用語は、対象の標的に特異的に結合する特性を保持する完全長の抗体の１つまたは複数のフラグメントを指す。完全長抗体の「抗原結合性フラグメント」という用語中に含まれており、かつ機能性を保持する結合性フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合する２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントである、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインのＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされているが、ＶＬおよびＶＨ領域の対が単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一価の分子を形成する、単一のタンパク質鎖として作製し得る合成リンカーにより、組み換え方法を使用して、これらを結合できる。たとえば米国特許第５，２６０，２０３号、第４，９４６，７７８号、および第４，８８１，１７５号；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい。
【００２９】
抗体フラグメントは、当業者に知られている従来技術を含む任意の適切な技術を使用して入手できる。「単一特異性抗体」という用語は、特定の標的、たとえばエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を呈する抗体を指す。この用語は、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」を含み、本明細書中で使用されるように、抗体がどのように作製されたかに関わらず、単一の分子組成物の抗体またはそのフラグメントの調製物を指す。
【００３０】
抗体は、結合特性が実質的に保持される限り、フレームワーク領域中の１つまたは複数の非生殖系列アミノ酸を対応する抗体の生殖系列アミノ酸に戻すことにより「生殖系列化」される。
【００３１】
阻害定数（Ｋｉ）は、阻害剤の効力の測定値を提供し、この定数は、酵素活性を半分減少させるために必要とされる阻害剤の濃度であり、酵素または基質の濃度に依存しない。見かけ上のＫｉ（Ｋｉ，ａｐｐ）は、反応（たとえば酵素活性）の程度に関する阻害剤（たとえば阻害性結合タンパク質）の異なる濃度の阻害効果を測定することにより異なる基質濃度で得られ、阻害剤濃度の関数として擬１次速度定数の変化を、Ｍｏｒｒｉｓｏｎの式（式１）の収量に適合して見かけ上のＫｉ値の推定値を得る。Ｋｉは、Ｋｉ，ａｐｐ対基質濃度のプロットの線形回帰解析から抽出したｙ−切片から得られる。
【数１】
2020002171.tif 000003
式１
式中、ｖ＝測定した速度；ｖ０＝阻害剤の非存在下での速度；Ｋｉ，ａｐｐ＝見かけ上の阻害定数：Ｉ＝総阻害剤濃度；およびＥ＝総酵素濃度。
【００３２】
本明細書中で使用されるように、「結合親和性」は、見かけ上の結合定数またはＫＡを指す。ＫＡは、解離定数（ＫＤ）の逆数である。結合抗体は、たとえば、特定の標的分子、たとえば血漿カリクレインに関して、少なくとも１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０および１０１１Ｍ−１の結合親和性を有し得る。第２の標的と比較して、第１の標的に対する結合抗体のより高い親和結合性は、第２の標的の結合のＫＡ（または数値ＫＤ）よりも高い第１の標的の結合のＫＡ（またはより小さな数値ＫＤ）により表すことができる。このような場合、結合抗体は、第２の標的（たとえば第２の立体構造の同一のタンパク質、もしくはその模倣物；または第２のタンパク質）と比較して、第１の標的（たとえば第１の立体構造のタンパク質またはその模倣物）に対する特異性を有する。結合親和性の差異（たとえば特異性または他の比較に関して）は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１０，０００または１０５倍であってよい。
【００３３】
結合親和性は、平衡透析、平衡結合、ゲルろ過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法（たとえば蛍光アッセイを使用する）を含む様々な方法により決定できる。結合親和性を評価する例示的な条件は、ＨＢＳ−Ｐバッファー（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）中である。これらの技術は、結合タンパク質（または標的）の濃度の関数として結合した結合タンパク質および遊離の結合タンパク質の濃度を測定するために使用できる。以下の式により、結合した結合タンパク質の濃度（「Ｂｏｕｎｄ」）は、遊離の結合タンパク質（「Ｆｒｅｅ」）の濃度および標的上の結合タンパク質に関する結合部位の濃度に関連しており、
【数２】
2020002171.tif 000004
式中、（Ｎ）は、標的分子あたりの結合部位の数である。
【００３４】
しかし、正確なＫＡの決定を行うことは必ずしも必要ではなく、これは、場合によっては、ＫＡと比例する、たとえばＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ解析などの方法を使用して決定される親和性の定量的測定値を入手することで十分なためであり、よってそれを比較のために用いて、より高い親和性がたとえば２倍高いかどうかを決定するなど、たとえばｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイなどの機能的アッセイでの活性により、親和性の定量的な測定値を入手、または親和性の推論を入手できる。
【００３５】
用語「結合抗体」（または本明細書中互換可能に使用される「結合タンパク質」）は、標的分子と相互作用できる抗体を指す。この用語は、「リガンド」と互換可能に使用される。「血漿カリクレイン結合タンパク質」は、血漿カリクレインと相互作用（たとえば結合）できる抗体を指し、特に、優先的または特異的に血漿カリクレインと相互作用および／または血漿カリクレインを阻害する抗体を含む。抗体は、この抗体の非存在下および同一条件での血漿カリクレインの活性と比較して血漿カリクレインの活性を減少させる場合、血漿カリクレインを阻害する。
【００３６】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似する側鎖を有するアミノ酸残基と置換されているものを指す。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当業者により定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（たとえばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（たとえばアスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷の極性側鎖（たとえばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（たとえばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分鎖状側鎖（たとえばスレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（たとえばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
【００３７】
結合タンパク質の１つまたは複数のフレームワークおよび／またはＣＤＲアミノ酸残基が、本明細書中に記載される結合タンパク質と比較して１つまたは複数の変異（たとえば置換（たとえば非必須アミノ酸の保存的置換または置換）、挿入、または欠失）を含んでもよい。血漿カリクレイン結合タンパク質は、たとえばタンパク質の機能に関して実質的な効果を有さない変異など、本明細書中に記載されるタンパク質に対する変異（たとえば置換（たとえば非必須アミノ酸の保存的置換または置換）、挿入、または欠失）（たとえば少なくとも１つ、２つ、３つ、もしくは４つ、および／または１５未満、１２未満、１０未満、９未満、８未満、７未満、６未満、５未満、４未満、３未満、もしくは２未満の変異）を有してもよい。この変異は、フレームワーク領域、ＣＤＲ、および／または定常領域に存在してよい。いくつかの実施形態では、変異はフレームワーク領域に存在する。いくつかの実施形態では、変異はＣＤＲに存在する。いくつかの実施形態では、変異は定常領域に存在する。特定の置換が認容可能であるか、すなわち結合活性などの生物学的な特性に不利な影響を与えないかどうかは、たとえば変異が保存されているかどうかを評価することにより、またはＢｏｗｉｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９０）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１３１０の方法により予測できる。
【００３８】
「事実上ヒト型の」イムノグロブリン可変領域は、正常なヒトでの免疫原性応答を誘発しないよう十分な数のヒトのフレームワークアミノ酸の位置を含むイムノグロブリン可変領域である。「事実上ヒト型の」抗体は、抗体が、正常なヒト中での免疫原性応答を誘発しないよう十分な数のヒトのアミノ酸位置を含む抗体である。
【００３９】
「エピトープ」は、結合タンパク質（たとえばＦａｂまたは完全長の抗体などの抗体）により結合されている標的化合物上の部位を指す。標的化合物がタンパク質である場合、この部位は全体的にアミノ酸の構成要素から構成でき、全体的にタンパク質のアミノ酸の化学的修飾物（たとえばグリコシル部位）から構成でき、またはそれらの組み合わせから構成できる。重複するエピトープは、少なくとも１つの共通のアミノ酸残基、グリコシル基、リン酸基、硫酸基、または他の分子学的な特徴を含む。
【００４０】
第１の結合抗体は、この第１の結合抗体が、第２の結合抗体が結合する標的化合物上の同一の部位に結合する、または第２の結合抗体が結合する部位と重複する（たとえばアミノ酸配列または他の分子学的な特徴（たとえばグリコシル基、リン酸基、または硫酸基）の観点から、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％重複する）部位に結合する場合、第２の結合抗体と「同一のエピトープに結合する」。
【００４１】
第１の結合抗体のエピトープに対する第１の結合抗体の結合性が、第２の結合抗体のエピトープと結合する第２の結合抗体の量を減少させる（たとえば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、またはそれを超えて減少させる）場合、第１の結合抗体は、第２の結合抗体と「結合に関して競合する」。この競合は、直接的（たとえば第１の結合抗体は、第２の結合抗体により結合したエピトープと同一、または重複するエピトープに結合する）、または間接的（たとえば、第１の結合抗体のエピトープに対する第１の結合抗体の結合性が、第２の結合抗体のエピトープに結合する第２の結合抗体の特性を減少させる標的化合物の立体的な変化を引き起こす）であり得る。
【００４２】
２つの配列の間の「相同性」または「配列同一性」（これらの用語は本明細書中互換可能に使用される）の計算は、以下のように行われる。これらの配列は、比較を最適にするためにアライメントされる（たとえばギャップを、最適なアライメントのため第１および第２のアミノ酸または核酸配列のうち１つまたは両方に導入でき、非相同的な配列は、比較のために無視できる）。この最適なアライメントは、１２のギャップペナルティ、４のギャップ伸長ペナルティ、および５のフレームシフトギャップペナルティを伴うＢｌｏｓｕｍ６２スコアマトリックスを用いて、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して、最良のスコアとして決定される。次に、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドにより占められている場合、分子はその位置で同一である（本明細書中で使用されるように、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と均等である）。２つの配列間のパーセント同一性は、これらの配列で共有されている同一の位置の数の関数である。
【００４３】
好ましい実施形態では、比較のためにアライメントされる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、およびさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または１００％である。たとえば、参照配列は、イムノグロブリン可変ドメイン配列の長さであってよい。
【００４４】
「ヒト化」イムノグロブリン可変領域は、イムノグロブリン可変領域が正常なヒトでの免疫原性応答を誘発しないよう十分な数のヒトのフレームワークのアミノ酸位置を含むよう改変されているイムノグロブリン可変領域である。「ヒト化」イムノグロブリンの記載として、たとえば米国特許第６，４０７，２１３号および米国特許第５，６９３，７６２号が挙げられる。
【００４５】
「単離した」抗体は、単離した抗体を入手できる天然の試料の少なくとも１つの成分の少なくとも９０％から除去されている抗体を指す。抗体は、対象の種または種の集合が少なくとも５、１０、２５、５０、７５、８０、９０、９２、９５、９８、または９９重量％純粋である場合、「少なくとも」特定の度合いの純度であり得る。
【００４６】
本対象の方法により治療される「患者」、「対象」または「宿主」（これらの用語は互換可能に使用される）は、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかを意味し得る。
【００４７】
用語「プレカリクレイン」および「プレ血漿カリクレイン」は、本明細書中互換可能に使用され、プレカリクレインとしても知られている活性血漿カリクレインの酵素前駆体の形態を指す。
【００４８】
本明細書中使用されるように、「実質的に同一」（または「実質的に相同」）は、第１および第２のアミノ酸または核酸配列が類似の活性、たとえば結合活性、結合の優先度、または生物学的な活性を有する（または類似の活性を有するタンパク質をコードする）ように、第２のアミノ酸または核酸配列に同一または均等な（たとえば類似する側鎖を有する、たとえば保存的アミノ酸の置換を有する）十分な数のアミノ酸残基またはヌクレオチドを含む第１のアミノ酸または核酸配列を指すために本明細書中で使用される。抗体の場合、第２の抗体は、同一の抗原と比較して同一の特異性を有し、親和性の少なくとも５０％、少なくとも２５％、または少なくとも１０％を有する。
【００４９】
本明細書中に開示される配列に類似のまたは相同的な（たとえば少なくとも約８５％の配列同一性を有する）配列もまた、本願の一部である。いくつかの実施形態では、配列同一性は、約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超えてよい。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、本明細書中に記載される抗体に対し、約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える配列同一性を有してよい。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、本明細書中に記載される抗体（たとえばＤＸ−２９３０）に対し、ＨＣおよび／またはＬＣフレームワーク領域（たとえばＨＣおよび／またはＬＣ  ＦＲ１、２、３、および／または４）において、約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有してよい。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、本明細書中に記載される抗体（たとえばＤＸ−２９３０）に対し、定常領域（たとえばＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、および／またはＣＬ１）において、約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える配列同一性を有してよい。
【００５０】
さらに、核酸セグメントが選択的なハイブリダイゼーション条件（たとえば非常に厳密なハイブリダイゼーション条件）下でハイブリダイズする場合、相補の鎖に対する実質的な同一性が存在する。核酸は、細胞全体に、細胞ライセートに、または部分的に精製もしくは実質的に精製した形態で存在してもよい。
【００５１】
統計学的有意性は、当業者に知られている任意の方法により決定できる。例示的な統計検定として、スチューデントｔ検定、非パラメトリックなマン・ホイットニーのＵ検定、非パラメトリックなウィルコクソンの統計検定が挙げられる。いくつかの統計的に有意な関係は、０．０５または０．０２未満のＰ値を有する。特定の結合タンパク質は、たとえば統計的に有意である（たとえばＰ値＜０．０５または０．０２）特異性または結合性における差異を示してもよい。たとえば、２つの状態の間での区別可能な定性的または定量的な差異を示す、用語「誘導する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇する」、「増加する」、「減少する」などは差異、たとえば、２つの状態の間での統計的に有意な差異を指してもよい。
【００５２】
「治療上有効な用量」は、無処置の対象と比較して、統計的に有意な度合いだけ、または少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、およびさらにより好ましくは少なくとも約８０％だけ、測定可能なパラメータ、たとえば血漿カリクレイン活性を好ましく調節する。測定可能なパラメータ、たとえば疾患関連パラメータを調節する化合物の特性は、ヒトの障害および病態における効果を予測する動物モデルシステムで評価できる。あるいは、組成物のこの特性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでパラメータを調節する化合物の特性を試験することにより評価できる。
【００５３】
本明細書中で使用される用語「治療する」は、疾患、疾患の症状、または疾患の素因を治療（ｃｕｒｅ）、治癒、軽減、緩和、変質、治療（ｒｅｍｅｄｙ）、寛解、改善、または影響する目的で、アレルギー性疾患、アレルギー性疾患の症状、またはアレルギー性疾患の素因を有する対象への、１つまたは複数の活性剤を含む組成物の適用または投与を指す。「予防治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｔｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、「予防的治療（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，”）」としても知られており、患者が曝露している、または曝露し得る疾患から保護する、またはその疾患のリスクを低下させることを目的とする治療を指す。
【００５４】
対象中の疾患を「予防する」という用語は、たとえば、疾患の少なくとも１つが予防されるような薬剤の投与、すなわち宿主が望ましくない病態を発症しないように望ましくない病態（たとえばは宿主動物の疾患また他の望ましくない状態）の臨床症状の前に投与されるといった対象へ薬学的な処置を行うことを指す。疾患を「予防する」ことは、「予防薬」または「予防治療」を指してもよい。
【００５５】
「予防的に有効な量」は、望ましい予防的な結果を達成するために、必要な用量でおよび期間の間、有効な量を指す。概して、予防的な用量は疾患の初期段階より前または初期段階で対象に使用されるため、予防的に有効な量は、治療的に有効な量よりも少ない。
【００５６】
血漿カリクレイン結合抗体
本明細書中に記載される方法で使用される血漿カリクレイン結合抗体は、完全長（たとえばＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（たとえばＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）であってよく、または抗原結合性フラグメント（たとえばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖフラグメント）のみを含んでよい。結合抗体は、２つの重鎖イムノグロブリンおよび２つの軽鎖イムノグロブリンを含んでよく、または単一鎖の抗体であってよい。血漿カリクレイン結合抗体は、ヒト化抗体、ＣＤＲグラフト抗体、キメラ抗体、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで作製した抗体などの組み換えタンパク質であってよく、ヒト生殖系列イムノグロブリン配列由来の定常領域を任意に含んでもよい。一実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、モノクローナル抗体である。
【００５７】
一態様では、本開示は、血漿カリクレイン（たとえばヒト血漿カリクレインおよび／またはマウスカリクレイン）に結合し、かつ少なくとも１つのイムノグロブリン可変領域を含む抗体（たとえば単離した抗体）を特徴とする。たとえば抗体は、重鎖（ＨＣ）イムノグロブリン可変ドメイン配列および／または軽鎖（ＬＣ）イムノグロブリン可変ドメイン配列を含む。一実施形態では、抗体は血漿カリクレイン、たとえばヒトの血漿カリクレインおよび／またはマウスのカリクレインに結合し、これを阻害する。
【００５８】
抗体は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含んでよい：（ａ）ヒトのＣＤＲまたはヒトのフレームワーク領域；（ｂ）ＨＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載のＨＣ可変ドメインのＣＤＲに少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一である１つまたは複数の（たとえば１、２、または３つの）ＣＤＲを含む；（ｃ）ＬＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載のＬＣ可変ドメインのＣＤＲに少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一である１つまたは複数の（たとえば１、２、または３つの）ＣＤＲを含む；（ｄ）ＬＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載されるＬＣ可変ドメインに少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一である（たとえば全体またはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）；（ｅ）ＨＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は本明細書中に記載されるＨＣ可変ドメインに少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％同一である、（たとえば全体またはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）；（ｆ）抗体は、本明細書中に記載される抗体により結合されるエピトープを結合する、または本明細書中に記載される抗体と結合に関して競合する；（ｇ）霊長類のＣＤＲまたは霊長類のフレームワーク領域；（ｈ）ＨＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載されるＨＣ可変ドメインのＣＤＲ１と、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２または３以下のアミノ酸だけ異なるＣＤＲ１を含む；（ｉ）ＨＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載されるＨＣ可変ドメインのＣＤＲ２と、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２、３、４、５、６、７、または８以下のアミノ酸だけ異なるＣＤＲ２を含む；（ｊ）ＨＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載されるＨＣ可変ドメインのＣＤＲ３と、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２、３、４、５、または６以下のアミノ酸だけ異なるＣＤＲ３を含む；（ｋ）ＬＣイムノグロブリン可変ドメイン配列が、本明細書中に記載されるＬＣ可変ドメインのＣＤＲ１と、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２、３、４、または５以下のアミノ酸だけ異なるＣＤＲ１を含む；（ｌ）ＬＣイムノグロブリン可変配列が、本明細書中に記載されるＬＣ可変ドメインのＣＤＲ２と、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２、３、または４以下のアミノ酸だけ異なるＣＤＲ２を含む；（ｍ）ＬＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載されるＬＣ可変ドメインのＣＤＲ３と、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２、３、４、または５以下のアミノ酸だけ異なるＣＤＲ３を含む；（ｎ）ＬＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載されるＬＣ可変ドメインと、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以下のアミノ酸だけ異なる（たとえば全体またはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）；および（ｏ）ＨＣイムノグロブリン可変ドメイン配列は、本明細書中に記載されるＨＣ可変ドメインと、少なくとも１つのアミノ酸だけ異なり２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以下のアミノ酸だけ異なる（たとえば全体またはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）。
【００５９】
血漿カリクレイン結合タンパク質は、単離した抗体（たとえば少なくとも７０、８０、９０、９５、または９９％他のタンパク質を含まない）であってよい。いくつかの実施形態では、血漿リクレイン結合抗体またはその組成物は、血漿カリクレイン結合抗体と比較して未活性または部分的に活性である（たとえば５０００ｎＭ以上のＫｉ，ａｐｐで血漿カリクレインを結合する）抗体切断フラグメント（たとえばＤＸ−２９３０）から単離されている。たとえば、血漿カリクレイン結合抗体は、少なくとも７０％そのような抗体切断フラグメントを含まず、他の実施形態では、不活性または部分的に活性である抗体切断フラグメントを、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％またさらには１００％含まない。
【００６０】
血漿カリクレイン結合抗体は血漿カリクレイン、たとえばヒトの血漿カリクレインをさらに阻害してもよい。
【００６１】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、プレカリクレイン（たとえばヒトのプレカリクレインおよび／またはマウスのプレカリクレイン）を結合しないが、血漿カリクレイン（たとえばヒトの血漿カリクレインおよび／またはマウスのカリクレイン）の活性形態に結合する。
【００６２】
特定の実施形態では、抗体は、血漿カリクレインの触媒ドメインもしくはそのフラグメントの活性部位もしくは活性部位付近で結合し、または血漿カリクレインの活性部位と重複するエピトープを結合する。
【００６３】
いくつかの態様では、抗体は本明細書中に記載される抗体と、同一のエピトープを結合する、または結合に関して競合する。
【００６４】
抗体は、少なくとも１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、および１０１１Ｍ−１の結合親和性で、血漿カリクレイン、たとえばヒトの血漿カリクレインに結合できる。一実施形態では、抗体は、１×１０−３、５×１０−４ｓ−１、または１×１０−４ｓ−１より遅いＫｏｆｆでヒトの血漿カリクレインに結合する。一実施形態では、抗体は、１×１０２、１×１０３、または５×１０３Ｍ−１ｓ−１より早いＫｏｎで、ヒトの血漿カリクレインに結合する。一実施形態では、抗体は、血漿カリクレインに結合するが、血漿カリクレインへの結合ほどは組織のカリクレインおよび／または血漿プレカリクレインに結合しない（たとえば抗体は、弱い効果（たとえば陰性対照と比較して５倍、１０倍、５０倍、１００倍、または１００倍少ない、または効果が全くない）で組織のカリクレインおよび／または血漿プレカリクレインに結合する）。
【００６５】
一実施形態では、抗体は、たとえば１０−５、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、および１０−１０Ｍ未満のＫｉで、ヒトの血漿カリクレイン活性を阻害する。抗体は、たとえば１００ｎＭ、１０ｎＭ、１、０．５、または０．２ｎＭ未満のＩＣ５０を有し得る。たとえば抗体は、血漿カリクレインの活性、および第ＸＩＩａ因子（たとえば第ＸＩＩ因子由来）および／またはブラジキニン（たとえば高分子量のキニノーゲン（ＨＭＷＫ）由来）の産生を調節してもよい。抗体は、血漿カリクレインの活性、ならびに／または第ＸＩＩａ因子（たとえば第ＸＩＩ因子由来）および／もしくはブラジキニン（たとえば高分子量のキニノーゲン（ＨＭＷＫ）由来）の産生を阻害してもよい。ヒトの血漿カリクレインに対する抗体の親和性は、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満のＫＤを特徴とすることができる。一実施形態では、抗体は、血漿カリクレインを阻害するが、血漿カリクレインを阻害するほどは組織カリクレインを阻害しない（たとえば抗体は、弱い効果（たとえば陰性対照と比較して５倍、１０倍、５０倍、１００倍、もしくは１０００倍少ない、または効果が全くない）で組織カリクレインを阻害する）。
【００６６】
いくつかの実施形態では、抗体は、１０００、５００、１００、５、１、０．５、または０．２ｎＭ未満の見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）を有する。
【００６７】
血漿カリクレイン結合抗体は、単一のポリペプチドに含まれるそれらのＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列（たとえばｓｃＦｖ）、または異なるポリペプチド上にそれらのＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列（たとえばＩｇＧまたはＦａｂ）を有していてよい。
【００６８】
一実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は、同一のポリペプチド鎖の成分である。別の実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列は、異なるポリペプチド鎖の成分である。たとえば、抗体は、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４などのＩｇＧである。抗体は、可溶性Ｆａｂであってよい。他の実装では、抗体は、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、ミニボディ、ｓｃＦｖ：：Ｆｃ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ融合物、ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、Ｆａｂ：：ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合物、または本明細書中の結合タンパク質の１つの抗原結合部位を含む他の分子を含む。これらのＦａｂのＶＨおよびＶＬ領域は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、ペグ化Ｆａｂ、ペグ化ｓｃＦｖ、ペグ化Ｆａｂ２、ＶＨ：：ＣＨ１：：ＨＳＡ＋ＬＣ、ＨＳＡ：：ＶＨ：：ＣＨ１＋ＬＣ、ＬＣ：：ＨＳＡ＋ＶＨ：：ＣＨ１、ＨＳＡ：：ＬＣ＋ＶＨ：：ＣＨ１、または他の適切な構築物として提供できる。
【００６９】
一実施形態では、抗体は、ヒトの抗体もしくはヒト化抗体であり、またはヒトで非免疫原性である。たとえば抗体は、１つまたは複数のヒト抗体フレームワーク領域、たとえば、すべてのヒトのフレームワーク領域、またはヒトのフレームワーク領域に少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一のフレームワーク領域を含む。一実施形態では、抗体は、ヒトＦｃドメイン、またはヒトＦｃドメインに少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一のＦｃドメインを含む。
【００７０】
一実施形態では、抗体は、霊長類の抗体もしくは霊長類化抗体であり、またはヒトで非免疫原性である。たとえば抗体は、１つまたは複数の霊長類のフレームワーク領域、たとえばすべての霊長類のフレームワーク領域、または霊長類のフレームワーク領域に少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一であるフレームワーク領域を含む。一実施形態では、抗体は、霊長類のＦｃドメイン、または霊長類のＦｃドメインに少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるＦｃドメインを含む。「霊長類」は、ヒト（ホモサピエンス）、チンパンジー（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓおよびＰａｎ  ｐａｎｉｓｃｕ（ボノボ））、ゴリラ（Ｇｏｒｉｌｌａ  ｇｏｒｉｌｌａ）、テナガザル（ｇｉｂｏｎｓ）、サル、キツネザル、アイアイ（Ｄａｕｂｅｎｔｏｎｉａ  ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）、ならびにメガネザルを含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、ヒト血漿カリクレインに関する霊長類の抗体の親和性は、１０００ｎＭ未満、５００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満のＫＤ、たとえば１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、または０．５ｎＭ未満を特徴とする。
【００７２】
特定の実施形態では、抗体は、マウスまたはウサギ由来の配列を含まない（たとえばマウスまたはウサギの抗体ではない）。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される方法で使用される抗体は、本明細書中に記載されるＤＸ−２９３０もしくはその機能的な変異体であってよく、またはＤＸ２９３０と同一のエピトープを結合する、もしくは活性血漿カリクレインへの結合に関してＤＸ−２９３０と競合する抗体であってよい。
【００７４】
一例では、ＤＸ−２９３０の機能的変異体は、ＤＸ−２９３０と同一の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。別の例では、ＤＸ−２９３０の機能的変異体は、ＤＸ−２９３０のＶＨおよびＶＬのＦＲと比較して、ＶＨまたはＶＬのいずれかのＦＲにおいて１つまたは複数の変異（たとえば保存的置換）を含み得る。好ましくは、このような変異は、１つまたは複数のＣＤＲと相互作用することが予測される残基で起こらず、これはルーチン的技術により決定できる。他の実施形態では、本明細書中に記載される機能的変異体は、ＤＸ−２９３０の１つまたは複数のＣＤＲ領域内に１つまたは複数の変異（たとえば１、２、または３つ）を含む。好ましくは、このような機能的変異体は、抗原結合に貢献する親と同一の領域／残基を保持する。さらなる他の実施形態では、ＤＸ−２９３０の機能的変異体は、ＤＸ−２９３０のＶＨに少なくとも８５％（たとえば９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨ鎖、および／または、ＤＸ−２９３０のＶＬに少なくとも８５％（たとえば９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）同一のアミノ酸配列を有するＶＬ鎖を含んでもよい。これらの変異体は、血漿カリクレインの活性形態に結合でき、好ましくはプレカリクレインに結合しない。
【００７５】
２つのアミノ酸配列の「パーセント同一性」は、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：５８７３−７７，  １９９３のように改変した、Ｋａｒｌｉｎ  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：２２６４−６８，  １９９０のアルゴリズムを使用して決定する。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−１０，  １９９０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。ＢＬＡＳＴタンパク質の検索は、対象のタンパク質分子に相同的なアミノ酸配列を入手するために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて行うことができる。ギャップが２つの配列間に存在する場合、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５（１７）：３３８９−３４０２，  １９９７に記載するように利用できる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各プログラム（たとえばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを使用できる。
【００７６】
抗体の調製
本明細書中に記載されるＰＫａｌを結合できる抗体は、当業者に知られている任意の方法により作製できる。たとえば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【００７７】
いくつかの実施形態では、標的抗原（たとえばヒトのＰＫａｌまたはその触媒ドメイン）に特異的な抗体は、従来のハイブリドーマ技術により作製できる。任意にＫＬＨなどのキャリアータンパク質に結合している完全長の標的抗原またはそのフラグメントは、その抗原に結合する抗体を作製するために、宿主動物を免疫化するために使用できる。宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは一般的に、本明細書中にさらに記載されるように、抗体の刺激および産生の確立された従来技術を踏まえたものである。マウスの抗体、ヒト化抗体、およびヒトの抗体の産生のための一般的な技術は当業者に知られており、本明細書中に記載されている。ヒトを含むいずれかの哺乳類の対象、またはそれらから細胞を産生する抗体を、ヒトのハイブリドーマ細胞株を含む、哺乳類の細胞株の産生のための基礎として作用するよう操作できる。概して、宿主動物に、腹腔内、筋肉内、経口的、皮下的、足底に、および／または皮内に、本明細書中に記載されるものを含むある量の免疫原を播種する。
【００７８】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，  Ｂ．  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，  Ｃ．  （１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７の一般的な体細胞のハイブリダイゼーション技術を使用して、またはＢｕｃｋ，  Ｄ．  Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，  １８：３７７−３８１  （１９８２）により改変されたように、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製できる。限定するものではないが、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、およびＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａｌｉｆ．，  ＵＳＡ由来のものを含む入手可能な骨髄腫系統を、ハイブリダイゼーションに使用してもよい。一般的に、この技術は、ポリエチレングリコールなどのフソゲン（ｆｕｓｏｇｅｎ）を使用して、または当業者によく知られている電気的な手段により、骨髄腫細胞およびリンパ系細胞を融合することを含む。融合の後、細胞を融合培地から分離し、ヒポキサンチン‐アミノプテリン‐チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的な増殖培地で増殖させて、ハイブリダイズしていない親細胞を除去する。血清を補充または補充していない本明細書中に記載されるいずれかの培地を、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために使用できる。細胞融合技術とは別の代替物として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を、本明細書中に記載される抗ＰＫａｌモノクローナル抗体を産生するために使用してもよい。必要に応じて、ハイブリドーマを拡大およびサブクローニングし、上清を、従来のイムノアッセイの手法（たとえばラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、または蛍光イムノアッセイ）により抗免疫原の活性に関してアッセイする。
【００７９】
抗体の供給源として使用し得るハイブリドーマは、ＰＫａｌの活性と干渉できるモノクローナル抗体を産生する親のハイブリドーマのすべての誘導体、後代細胞を含む。そのような抗体を産生するハイブリドーマは、既知の手法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで増殖してもよい。モノクローナル抗体は、必要に応じて、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などの従来のイムノグロブリン精製工程により培養培地または体液から単離してもよい。望ましくない活性が存在する場合、たとえば、調製物を、固相に結合した免疫原から作製された吸着剤を通し、免疫原から望ましい抗体を溶出または放出することにより、望ましくない活性を除去できる。二機能化剤または誘導体化剤、たとえばマレイミドベンゾイルスルホンスクシンイミドエステル（システイン残基を介して結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１が、異なるアルキル基である）を使用して、たとえばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤などの、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質に結合した、標的抗原または標的アミノ酸配列を含むフラグメントでの宿主動物の免疫化により、抗体（たとえばモノクローナル抗体）の集合を回収できる。
【００８０】
必要に応じて、対象の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）（たとえばハイブリドーマにより産生される）をシークエンシングしてもよく、次にポリヌクレオチド配列を発現または増殖用のベクターにクローニングしてもよい。対象の抗体をコードする配列は、宿主細胞中のベクターに維持してもよく、次に宿主細胞を拡大して将来の使用のために凍結できる。あるいは、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化」するためまたは抗体の親和性（親和性の成熟化）もしくは他の特徴を改善するための遺伝的な操作に使用してもよい。たとえば、定常領域は、抗体をヒトの臨床試験および治療で使用する場合に免疫応答を回避するために、ヒトの定常領域により類似するように操作されてもよい。標的抗原に対するより高い親和性およびＰＫａｌの活性の阻害に関してより高い有効性を入手するために、抗体の配列を遺伝的に操作することが好ましい可能性がある。抗体に対して１つまたは複数のポリヌクレオチドを変化させ、かつ標的抗原に対するその結合特異性をなお維持できることは当業者にとって明らかである。
【００８１】
他の実施形態では、完全なヒト抗体は、特異的なヒトのイムノグロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを使用することにより入手できる。より望ましく（たとえば完全にヒトの抗体）またはより強力な免疫応答を生成するよう設計されているトランスジェニックマウスもまた、ヒト化抗体またはヒトの抗体の作製に使用してよい。このような技術の例は、Ａｍｇｅｎ，  Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，  Ｃａｌｉｆ．）製のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）ならびにＭｅｄａｒｅｘ，  Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，  Ｎ．Ｊ．）製のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）である。別の代替例では、抗体は、ファージディスプレイまたは酵母技術により組み換えを行って作製してもよい。たとえば米国特許第５，５６５，３３２号；第５，５８０，７１７号；第５，７３３，７４３号；および第６，２６５，１５０号；およびＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：４３３−４５５を参照されたい。あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３）を使用して、免疫化していないドナー由来のイムノグロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒトの抗体および抗体フラグメントを作製できる。
【００８２】
無処置の抗体（完全長の抗体）の抗原結合性フラグメントを、ルーチンの方法を介して調製できる。たとえばＦ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体分子のペプシン消化により産生でき、Ｆａｂフラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより作製できる。
【００８３】
ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、および二重特異性抗体などの遺伝的に操作した抗体は、たとえば従来の組み換え技術を介して生成できる。一例では、標的抗原に特異的なモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手法を使用して（たとえばモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離し、シークエンシングできる。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として働く。単離した後、ＤＮＡを１つまたは複数の発現ベクターに入れ、次に大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはイムノグロブリンタンパク質を生成しない骨髄腫細胞などの宿主細胞中にトランスフェクトして、組み換え宿主細胞中でのモノクローナル抗体の合成を得てもよい。たとえば、国際特許公開公報第８７／０４４６２号を参照されたい。次に、たとえば、相同的なマウスの配列の代わりにヒトの重鎖および軽鎖の定常ドメインでコード配列を置換することにより（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅ  ｔ  ａｌ．，（１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ８１：６８５１）、または非イムノグロブリンポリペプチドのコード配列のすべてまたは一部をイムノグロブリンコード配列に共有結合することにより、ＤＮＡを改変できる。この方法では、標的抗原の結合特異性を有する「キメラ」抗体または「ハイブリッド」抗体などの遺伝子操作した抗体を調製できる。
【００８４】
「キメラ抗体」の産生のために開発された技術は、当業者に良く知られている。たとえばＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１，  ６８５１；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１２，  ６０４；  ａｎｄ  Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２を参照されたい。
【００８５】
ヒト化抗体を構築するための方法もまた、当業者に良く知られている。たとえば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）を参照されたい。一例では、親の非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬの可変領域を、当業者に知られた方法に従い３次元分子モデリング解析に供する。次に、正確なＣＤＲ構造の形成に重要であると予測されるフレームワークアミノ酸の残基を、同一の分子モデリング解析を使用して同定する。並行して、親非ヒト抗体と相同的なアミノ酸配列を有するヒトのＶＨ及びＶＬ鎖を、検索クエリとして親ＶＨおよびＶｌ配列を使用して任意の抗体遺伝子データベースから同定する。次にヒトのＶＨ及びＶＬアクセプター遺伝子を選択する。
【００８６】
選択したヒトアクセプター遺伝子内のＣＤＲ領域は、親の非ヒト抗体またはその機能的な変異体由来のＣＤＲ領域と置換できる。必要に応じて、ＣＤＲ領域との相互作用に重要であると予測される親鎖のフレームワーク領域内の残基（上述参照）を使用して、ヒトのアクセプター遺伝子において対応する残基と置換できる。
【００８７】
単鎖抗体は、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を結合することによる組み換え技術を介して、調製できる。好ましくは、柔軟性のあるリンカーが、２つの可変領域の間に組み込まれる。あるいは、単鎖抗体の産生に関して記載される技術（米国特許第４，９４６，７７８号および第４，７０４，６９２号）を適合してファージまたは酵母のｓｃＦｖライブラリーを産生し、ＰＫａｌに特異的なｓｃＦｖクローンをルーチン的な手法に従いライブラリーから同定できる。陽性のクローンをさらにスクリーニングして、ＰＫａｌ活性を阻害するものを同定できる。
【００８８】
当業者に知られている方法および本明細書中に記載される方法に従い入手した抗体を、当業者に良く知られた方法を使用して特徴付けることができる。たとえば１つの方法は、抗体が結合するエピトープを同定すること、または「エピトープマッピング」である。タンパク質上のエピトープの位置をマッピングし特徴付けるための当業者に知られた多くの方法があり、抗体‐抗原複合体の結晶構造を解析すること、競合アッセイ、遺伝子フラグメント発現アッセイ、および合成ペプチドベースのアッセイを含み、たとえばＣｈａｐｔｅｒ  １１  ｏｆ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９９９に記載されている。さらなる例では、エピトープマッピングを使用して、抗体が結合する配列を決定できる。エピトープは、直線状のエピトープであってよく、すなわちアミノ酸の単一の区画に含まれ、または単一の区画（一次構造の直線状の配列）に必ずしも含まれなくてよい、アミノ酸の３次元の相互作用により形成される立体構造エピトープであってよい。様々な長さのペプチド（たとえば少なくとも４〜６つの長さのアミノ酸）を単離または合成（たとえば組み換えを行って）でき、かつ抗体との結合アッセイに使用できる。別の例では、抗体が結合するエピトープを、標的抗原配列由来の重複するペプチドを使用し抗体により結合性を決定することにより、系統的なスクリーニングで決定できる。遺伝子フラグメント発現アッセイにより、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームを無作為に、または特異的な遺伝的構築によりフラグメント化し、試験される抗体と抗原の発現フラグメントの反応性を決定する。遺伝子のフラグメントは、たとえば、放射性アミノ酸の存在下で、ＰＣＲにより産生され次にｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写されタンパク質に翻訳されてもよい。次に、放射活性標識した抗原フラグメントに対する抗体の結合を、免疫沈降およびゲル電気泳動により決定する。また、特定のエピトープを、ファージ粒子の表面に提示されるランダムなペプチド配列の大きなライブラリー（ファージライブラリー）を使用することにより、同定することもできる。あるいは、重複するペプチドフラグメントの定義されたライブラリーを、単純な結合アッセイにおける試験抗体への結合性に関して試験することができる。さらなる例では、抗原結合ドメインの変異誘発、ドメイン交換実験およびアラニンスキャン変異誘発を行って、エピトープ結合に必要とされ、エピトープ結合に十分であり、かつ／またはエピトープ結合に必要な残基を同定できる。たとえば、ＰＫａｌポリペプチドの様々なフラグメントが、密接に関連するが抗原的には異なるタンパク質（ニューロトロフィンタンパク質ファミリーの別のメンバーなど）由来の配列と置換（交換）されている、標的抗原の変異体を使用して、ドメイン交換実験を行うことができる。変異ＰＫａｌ（たとえば以下の実施例２に記載の変異体）に対する抗体の結合性を評価することにより、抗体の結合性に対する特定の抗原フラグメントの重要性を評価できる。
【００８９】
あるいは、ある抗体が他の抗体と同一のエピトープに結合するかどうかを決定するために、同一の抗原に対して結合することが知られている他の抗体を使用して、競合アッセイを行うことができる。競合アッセイは、当業者に良く知られている。
【００９０】
たとえば、本明細書中に記載されるエピトープマッピング方法など、当業者に知られている適切な方法のいずれかを使用して、抗ＰＫａｌ抗体が、本明細書中に記載されるＰＫａｌにおいて特異的な残基／セグメントの１つまたは複数を結合するかどうかを決定できる。さらに、ＰＫａｌで定義された残基の１つまたは複数と抗体との相互作用を、ルーチン的な技術により決定できる。たとえば結晶構造を、以下の実施例１に開示の方法に従い決定でき、よって、ＰＫａｌにおける残基と、抗体における１つまたは複数の残基との間の距離を決定できる。このような距離に基づき、ＰＫａｌにおける特定の残基が、抗体における１つまたは複数の残基と相互作用するかどうかを決定できる。さらに、競合アッセイおよび標的変異アッセイなどの適切な方法を使用して、変異ＰＫａｌなどの別の標的と比較して、ＰＫａｌに対する候補の抗ＰＫａｌ抗体の優先的な結合を決定できる。
【００９１】
あるいは、抗ＰＫａｌ抗体を、当業者に知られている方法に従い、ディスプレイライブラリーなどの抗体ライブラリーから同定できる。
【００９２】
抗ＰＫａｌ抗体が、当業者に知られているいずれかの方法を使用して同定され、本明細書中に記載される治療での使用に適した抗体であると確認された後、そのような抗体を、標準的な組み換え核酸方法により生成してもよい。
【００９３】
一般的に、タンパク質をコードする核酸配列を、核酸発現ベクターにクローニングする。当然、タンパク質が複数のポリペプチド鎖を含む場合、各鎖を発現ベクター、たとえば同じまたは異なるベクター中にクローン化でき、それらが同じまたは異なる細胞で発現される。
【００９４】
たとえば、Ｆａｂなどのいくつかの抗体を、細菌細胞、たとえば大腸菌細胞中で産生させることができる（たとえば、Ｎａｄｋａｒｎｉ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ  ５２（１）：２１９−２９参照）。たとえば、Ｆａｂが、ディスプレイの実体とバクテリオファージのタンパク質（またはそのフラグメント）との間に抑制可能なストップコドンを含むファージディスプレイベクター中の配列によりコードされている場合、ベクターの核酸を、ストップコドンを抑制できない細菌細胞中に導入できる。この場合、Ｆａｂは遺伝子ＩＩＩタンパク質に融合されず、ペリプラズムおよび／または培地へと分泌される。
【００９５】
また、抗体を、真核細胞で産生させることもできる。一実施形態では、抗体（たとえばｓｃＦｖ’ｓ）は、Ｐｉｃｈｉａ（たとえばＰｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ２５１：１２３−３５；  Ｓｃｈｏｏｎｏｏｇｈｅ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９  ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ９：７０；  Ａｂｄｅｌ−Ｓａｌａｍ，  ＨＡ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ５６（１−２）：１５７−６４；  Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００  Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６４（１０）：２１３８−４４；  Ｅｄｑｖｉｓｔ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１  Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０（３）：２９１−３００参照）、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞で発現される。当業者であれば、たとえば、酸素条件（たとえばＢａｕｍａｎｎ  Ｋ．，  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０  ＢＭＣ  Ｓｙｓｔ．  Ｂｉｏｌ．  ４：１４１参照）、モル浸透圧濃度（たとえばＤｒａｇｏｓｉｔｓ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １１：２０７参照）、温度（たとえばＤｒａｇｏｓｉｔｓ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９  Ｊ  Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．  ８（３）：１３８０−９２参照）、発酵条件（たとえばＮｉｎｇ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  ２００５  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ａｎｄ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３８（３）：  ２９４−２９９参照）、酵母株（たとえばＫｏｚｙｒ，  ＡＶ  ｅｔ  ａｌ．  ２００４  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （Ｍｏｓｋ）  ３８（６）：１０６７−７５；  Ｈｏｒｗｉｔｚ，  ＡＨ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ８５（２２）：８６７８−８２；  Ｂｏｗｄｉｓｈ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  １９９１  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６６（１８）：１１９０１−８参照）、抗体産生を高めるためのタンパク質の過剰発現（たとえばＧａｓｓｅｒ，  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６  Ｂｉｏｔｅｃｈｏｌ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ９４（２）：３５３−６１参照）、培養物の酸性レベル（たとえばＫｏｂａｙａｓｈｉ  Ｈ．，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７  ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １５２（２）：２３５−４２参照）、物質および／またはイオンの濃度（たとえばＫｏ  ＪＨ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２９９６  Ａｐｐｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ６０（１）：４１−８参照）に関して最適化することにより、酵母における抗体産生を最適化できる。さらに、酵母系を使用して、半減期が延びた抗体を産生させることができる（たとえばＳｍｉｔｈ，  ＢＪ．  ｅｔ  ａｌ．  ２００１  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １２（５）：７５０−７５６参照）。
【００９６】
１つの好ましい実施形態では、抗体は哺乳類細胞で産生される。クローン抗体またはその抗原結合性フラグメントを発現するために好ましい哺乳類の宿主細胞として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（ｄｈｆｒ−ＣＨＯを含み、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，  １９８０，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載され、たとえばＫａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，  １９８２，  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １５９：６０１  ６２１に記載されるようにＤＨＦＲ選択可能なマーカーと共に使用される）、リンパ球細胞株、たとえばＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  （２００４）  ２８９（１−２）：６５−８０）、ならびにトランスジェニック動物由来、たとえばトランスジェニック哺乳動物由来の細胞が挙げられる。たとえば、細胞は、哺乳類の上皮細胞である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、植物または無細胞系システムで産生される（たとえばＧａｌｅｆｆｉ，  Ｐ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６  Ｊ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ４：３９参照）。
【００９８】
多様化したイムノグロブリンドメインをコードする核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、宿主細胞中のベクターの複製を制御する配列（たとえば複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子などの追加的な配列を含んでもよい。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（たとえば米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、および第５，１７９，０１７号参照）。たとえば、概して選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキサートなどの薬剤に対する耐性を与える。好ましい選択可能なマーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサートの選択／増幅でｄｈｆｒ−宿主細胞において使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８の選択のため）を含む。
【００９９】
抗体、またはその抗原結合タンパク質の組み換え発現のための例示的なシステムでは、抗体の重鎖および抗体の軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターを、リン酸カルシウム媒介型トランスフェクションによりｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入する。組み換え発現ベクター中で、抗体の重鎖および軽鎖の遺伝子は、高レベルの遺伝子の転写を駆動するために、エンハンサー／プロモーター制御部（たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター制御部、またはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター制御部など）にそれぞれ動作可能に結合されている。また組み換え発現ベクターはＤＨＦＲ遺伝子を担持しており、これは、メトトレキサートの選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にする。選択した形質転換体宿主細胞を培養して抗体の重鎖および軽鎖を発現させ、無傷の抗体を培養培地から回収する。標準的な分子生物学の技術を使用して、組み換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収する。たとえば、いくつかの抗体は、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇ結合マトリックスでのアフィニティクロマトグラフィーにより単離できる。
【０１００】
Ｆｃドメインを含む抗体では、抗体産生システムは、Ｆｃ領域がグリコシル化されている抗体を産生してもよい。たとえば、ＩｇＧ分子のＦｃドメインは、ＣＨ２ドメインのアスパラギン２９７でグリコシル化されている。このアスパラギンは、二分岐型のオリゴ糖による修飾部位である。このグリコシル化は、Ｆｃｇ受容体および補体Ｃ１ｑにより媒介されるエフェクター機能に必要であることが示されている（Ｂｕｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｗｏｏｆ，  １９９２，  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５１：１−８４；  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １６３：５９−７６）。一実施形態では、Ｆｃドメインは、アスパラギン２９７に対応する残基を適宜グリコシル化する哺乳類の発現システムで産生される。また、Ｆｃドメインは、他の真核生物の翻訳後修飾を含む。
【０１０１】
また抗体は、トランスジェニック動物により産生できる。たとえば米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳動物の乳腺で抗体を発現する方法を記載する。乳に特異的なプロモーターと、対象の抗体をコードする核酸と、分泌のためのシグナル配列とを含む導入遺伝子が構築される。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌性により生成される乳は、その中に分泌された対象の抗体を含む。抗体は、乳から精製でき、またはいくつかの用途のために直接使用できる。
【０１０２】
医薬組成物
本明細書中に記載される１つまたは複数の抗体は、たとえば薬学的に許容可能な組成物または薬学的な組成物などの組成物中に存在してよい。血漿カリクレイン結合抗体は、薬学的に許容可能なキャリアーと共に製剤化できる。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の抗体１００ｍｇ〜３００ｍｇ（たとえば１００ｍｇまたは３００ｍｇの用量のＤＸ−２９３０）が、たとえば薬学的に許容可能な組成物または薬学的な組成物などの、任意に薬学的に許容可能なキャリアーを含む組成物に存在する。
【０１０３】
薬学的に許容可能なキャリアーは、薬理学的に適合可能である、ありとあらゆる溶媒、分散培地、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などを含む。好ましくは、キャリアーは静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、非経口投与、脊髄投与、または上皮投与（たとえば注射または点滴による）に適しているが、吸入および鼻腔内投与に適したキャリアーも考慮されている。
【０１０４】
薬学的に許容可能な塩は、化合物の望ましい生物学的な活性を保持し望ましくない毒性作用を供与しない塩である（たとえばＢｅｒｇｅ，  Ｓ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  １９７７，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６：１−１９参照）。このような塩の例として、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩として、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの無毒性無機酸由来の塩、ならびに脂肪性のモノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪性および芳香族のスルホン酸などの無毒性有機酸由来の塩などが挙げられる。塩基付加塩として、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属由来の塩、ならびにＮ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの無毒性有機アミン由来の塩などが挙げられる。
【０１０５】
本組成物は様々な形態であってよい。これらは、たとえば、液剤（たとえば注射可能および点滴可能な液剤）、分散剤または懸濁剤、錠剤、ピル、散剤、リポソーム、および坐剤などの液体、半固体および固体の剤形を含む。この形態は、意図される投与形式および治療用途に依存し得る。多くの組成物は、抗体を用いたヒトの投与に使用されるものに類似の組成物など、注射可能または点滴可能な液剤の形態である。例示的な投与形式は、非経口（たとえば静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。一実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、静脈内の点滴または注射により投与される。別の好ましい実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、筋肉内注射または皮下注射により投与される。別の好ましい実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、腹腔内注射により投与される。
【０１０６】
本明細書中使用される「非経口投与」および「非経口的に投与した」という文言は、通常注射による、経腸投与および局所投与以外の投与形式を意味し、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内の注射ならびに点滴が挙げられる。
【０１０７】
本組成物は、液剤、マイクロエマルジョン、分散剤、リポソーム、または濃度の高い薬剤に適した他の指示された構造として製剤化できる。滅菌性の注射可能な液剤は、上述の成分のうちの１つまたはそれらの組み合わせを含む適切な溶媒中に必要とされる量で結合タンパク質を組み込み、必要に応じて次に滅菌ろ過することより、調製できる。一般的に、分散剤は、基本的な分散媒体および上に列挙したもの由来の必要とされる他の成分を含む無菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことにより、調製できる。無菌の注射可能な液剤の調製のための無菌散剤の場合、好ましい調製方法は、あらかじめ滅菌ろ過したそれらの溶液から活性成分および任意の追加的な望ましい成分の粉末を収集する真空乾燥および凍結乾燥である。液剤の適切な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散の場合に必要とされる粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、維持することができる。注射可能な組成物の長期間の吸収は、たとえばモノステアリン酸塩およびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を組成物に含めることにより、もたらすことができる。
【０１０８】
血漿カリクレイン結合抗体は、静脈内注射または点滴を含む様々な方法により投与できる。たとえば、いくつかの治療で使用するために、血漿カリクレイン結合タンパク質は、約１〜１００ｍｇ／ｍ２または７〜２５ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、３０、２０、１０、５、または１ｍｇ／分未満の速度で静脈内点滴により投与できる。投与の経路および／または形式は、望ましい結果に応じて変動する。特定の実施形態では、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む、徐放製剤などの、迅速な放出から化合物を保護するキャリアーと共に調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用できる。このような製剤の調製のための多くの方法が利用可能である。たとえばＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  １９７８，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【０１０９】
医薬組成物は、医療機器を用いて投与できる。たとえば、一実施形態では、本明細書中に開示される医薬組成物は、たとえば、針のない皮下注射デバイス、ポンプ、またはインプラントなどの装置を用いて投与できる。
【０１１０】
特定の実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの適切な分布を保つように製剤化できる。たとえば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの親水性の高い化合物を排除する。本明細書中に開示される治療上化合物がＢＢＢを通ることを確実にするために（必要に応じて）、たとえば、リポソームにこれらの化合物を製剤化できる。リポソームを製造する方法では、たとえば、米国特許第４，５２２，８１１号；第５，３７４，５４８号；および第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特異的な細胞または臓器中に選択的に輸送される１つまたは複数の部分を含んでよく、よって、標的化した薬剤送達を高める（たとえばＶ．Ｖ．  Ｒａｎａｄｅ，  １９８９，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２９：６８５参照）。
【０１１１】
投与レジメンは、最適な望ましい応答（たとえば治療応答）提供するように調節される。たとえば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかに分けた用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の要件により示唆されるように用量を比例して減らしてもよく、もしくは増加させてもよい。特に、投与の簡易性および用量の均一性のために、単位剤形に非経口組成物を製剤化することが有益である。本明細書中に示される単位剤形は、治療される対象に対する単位用量として適した物理的に別々の単位を指し；各単位は、必要な薬学的キャリアーと関連した望ましい治療上の効果を生成するように計算された、活性化合物の所定の量を含む。単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成されるべき特定の治療上の効果、ならびに（ｂ）治療のためのこのような活性化合物を化合物化する技術に固有の、個体における感受性の限界、により決定され、かつこれらに直接依存することがある。
【０１１２】
本明細書中に記載される抗体の治療的にまたは予防的に有効な量についての例示的で非限定的な範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。抗血漿カリクレイン抗体は、１〜１００ｍｇ／ｍ２または約５〜３０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、たとえば３０、２０、１０、５、または１ｍｇ／分未満の速度で、たとえば静脈内点滴により投与できる。用量の値は、軽減すべき病態の種類および重症度に伴い変動し得る。特定の対象では、特定の用量レジメンは、個々の要求ならびに本組成物を投与する人物または投与を監督する人物の専門的な判断により、経時的に調節できる。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される抗体（たとえばＤＸ−２９３０）の治療上または予防上の有効量は、３０〜４００ｍｇ、３０〜３００ｍｇ、３０〜２５０ｍｇ、３０〜２００ｍｇ、３０〜１５０ｍｇ、３０〜１００ｍｇ、３０〜５０ｍｇ、５０〜４００ｍｇ、５０〜３００ｍｇ、５０〜２５０ｍｇ、５０〜２００ｍｇ、５０〜１５０ｍｇ、５０〜１００ｍｇ、１００〜４００ｍｇ、１００〜３００ｍｇ、１００〜２５０ｍｇ、１００〜２００ｍｇ、１００〜１５０ｍｇ、１５０〜４００ｍｇ、１５０〜３００ｍｇ、１５０〜２５０ｍｇ、１５０〜２００ｍｇ、２００〜４００ｍｇ、２００〜３００ｍｇ、２００〜２５０ｍｇ、２５０〜４００ｍｇ、２５０〜３００ｍｇ、または３００〜４００ｍｇ、またはそれらの間のいずれかの整数である。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、３０〜３００ｍｇである。一部の実施形態では、治療上または予防上の有効量は、３００ｍｇ以上である。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、４００ｍｇ以上である。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、１００〜３００ｍｇ（１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、または３００ｍｇ）である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される抗体（たとえばＤＸ−２９３０）の治療上または予防上の有効量は、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、３７０ｍｇ、３８０ｍｇ、３９０ｍｇ、または４００ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、３０ｍｇ、１００ｍｇ、または３００ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、１００ｍｇまたは３００ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は３００ｍｇである。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、またはそれより多く投与される。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、毎日、１日おき、３日おき、４日おき、５日おき、６日おき、毎週、１週間おき、３週間おき、４週間おき、５週間おき、６週間おき、７週間おき、８週間おき、またはそれを超えて投与される。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は１００ｍｇまたは３００ｍｇであり、この量は２週間おきまたは４週間おきに投与される。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は１００ｍｇであり、この抗体の量は２週間おきに投与される。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は３００ｍｇであり、この抗体の量は２週間おきまたは４週間おきに投与される。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は３００ｍｇであり、この抗体の量は２週間おきに投与される。いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は３００ｍｇであり、この量は４週間ごとに投与される。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、治療上または予防上の有効量は、約８０ｎＭ超（たとえば１００ｎＭ超、１５０ｎＭ超、または約２００ｎＭ）の抗体の血漿または血清中濃度を維持する量である。いくつかの実施形態では、抗体の量は、約８０〜３００ｎＭ、たとえば８０〜１００ｎＭ、８０〜１２０ｎＭ、８０〜１５０ｎＭ、１００〜１５０ｎＭ、１００〜２００ｎＭ、１５０〜２００ｎＭ、または２００〜３００ｎＭの範囲で抗体の血漿または血清中濃度を維持するのに有効である。たとえば、本明細書中に記載されるアッセイなどの血漿カリクレインアッセイ、本明細書中に記載される切断されたキニノーゲンを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイまたはウェスタンブロットアッセイなどのイムノベースアッセイなどの適切なアッセイを使用して、または質量分析により、血漿または血清中濃度を測定できる。
【０１１７】
本明細書中に開示される医薬組成物は、「治療上有効な量」または「予防上有効な量」の本明細書中に開示される血漿カリクレイン結合タンパク質を含んでもよい。
【０１１８】
キット
本明細書中に記載される血漿カリクレイン結合抗体のうち１つまたは複数をキット中で、たとえばキットの成分として提供できる。たとえば、キットは、（ａ）血漿カリクレイン結合抗体、たとえば、血漿カリクレイン結合抗体を含む組成物（たとえば医薬組成物）と、任意に（ｂ）情報材料とを含む。情報材料は、本明細書中に記載される方法および／または血漿カリクレイン結合抗体、たとえば本明細書中に記載される方法のための血漿カリクレイン結合抗体の使用に関連する、記述的、指示的な、市販されている、または他の材料であってよい。いくつかの実施形態では、キットは、血漿カリクレイン結合抗体、たとえばＤＸ−２９３０の１つまたは複数の用量を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の用量は、１００ｍｇまたは３００ｍｇである。
【０１１９】
キットの情報材料はこの形態に限定されるものではない。一実施形態では、情報材料は、化合物の生成、化合物の分子量、濃度、失効日、バッチまたは生成場所の情報などについての情報を含んでよい。一実施形態では、情報材料は、障害および病態、たとえば血漿カリクレインに関連する疾患または病態を治療、予防、または診断するために抗体を使用することに関する。
【０１２０】
一実施形態では、情報材料は、たとえば適切な用量、剤形、投与形式、または投与スケジュール（たとえば本明細書中に記載される用量、剤形、投与スケジュール、または投与形式）で、本明細書中に記載される方法を行うための適切な方法で血漿カリクレイン結合抗体を投与するための説明を含んでよい。別の実施形態では、情報材料は、たとえば、血漿カリクレイン関連の疾患または病態を有するヒト、またはこれらのリスクのあるヒトなどの適切な対象に、血漿カリクレイン結合抗体を投与するための説明を含んでよい。たとえば、この材料は、たとえば本明細書中に記載される投与スケジュールにしたがって、本明細書中に記載される障害または病態、たとえば血漿カリクレイン関連疾患を有する患者に血漿カリクレイン結合タンパク質を投与するための説明を含んでよい。キットの情報材料は、この形態に限定されない。多くの場合、情報材料、たとえば説明は、印刷されて提供されるが、コンピュータ可読媒体などの他のフォーマットであってもよい。
【０１２１】
血漿カリクレイン結合抗体は、たとえば液体の形態、乾燥した形態、または凍結乾燥した形態など任意の形態で提供できる。血漿カリクレイン結合抗体は、実質的に純粋および／または無菌であることが好ましい。血漿カリクレイン結合抗体が液剤で提供される場合、液剤は、好ましくは水溶液であり、無菌液剤が好ましい。血漿カリクレイン結合抗体が乾燥した形態で提供される場合、一般的に、適切な溶媒を添加することにより再構成される。たとえば滅菌水またはバッファーなどの溶媒を、任意にキット中に提供できる。
【０１２２】
キットは、血漿カリクレイン結合抗体を含む組成物用の１つまたは複数のコンテナを含んでよい。いくつかの実施形態では、キットは、組成物および情報材料のための別々のコンテナ、しきり（ｄｉｖｉｄｅｒ）または区画を含む。たとえば、本組成物をビン、バイアル、またはシリンジ中に含めることができ、情報材料をコンテナに関連して含めることができる。他の実施形態では、キットの別々の成分は、単一の分割されていないコンテナの中に含まれる。たとえば組成物は、ラベルの形態の情報材料が添付されているビン、バイアル、またはシリンジに含まれる。いくつかの実施形態では、キットは複数の（たとえば一パックの）個々のコンテナを含み、それぞれが血漿カリクレイン結合抗体の１つまたは複数の単位剤形（たとえば本明細書中に記載される剤形）を含んでいる。たとえば、キットは複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット（ｆｏｉｌ  ｐａｃｋｅｔ）、またはブリスターパックを含み、それぞれが単一の単位用量の血漿カリクレイン結合抗体を含んでいる。キットのコンテナは、気密性、耐水性（たとえば湿気または蒸発の変化に対して不浸透性）、および／または遮光性であってよい。
【０１２３】
キットは、たとえばシリンジ、または任意のこのような送達デバイスなどの、本組成物の投与に適したデバイスを任意に含む。一実施形態では、このデバイスは、計測した用量の抗体を分散する移植可能なデバイスである。また本開示は、たとえば本明細書中に記載される成分を組み込むことにより、キットを提供する方法を特徴とする。
【０１２４】
治療
いくつかの態様では、本開示は、ＨＡＥを治療する際の、活性血漿カリクレイン（たとえばヒト活性血漿カリクレイン）に結合する抗体の使用を提供する。本明細書中に記載される治療での使用に適した抗体は、本明細書中に記載されるＤＸ−２９３０またはその機能的変異体、ＤＸ−２９３０と同一のエピトープを結合する抗体、またはヒト活性血漿カリクレインへの結合に関してＤＸ−２９３０と競合する抗体を含む。
【０１２５】
遺伝性血管性浮腫
遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）は、「クインケ浮腫」としても知られており、Ｃ１エステラーゼインヒビター欠乏性、Ｃ１インヒビター欠乏性であり、遺伝性血管神経性浮腫（ＨＡＮＥ）である。ＨＡＥは、再発する重篤な腫脹（浮腫）の発症を特徴とし、これは、たとえば肢、顔、性器、消化管、および気道に影響し得る。ＨＡＥの症状として、たとえば腕、足、唇、眼、舌、および／もしくは喉の腫脹；喉の腫脹および突然の嗄声を含み得る気道の阻害；再発性の明確な原因のない異常な腹部疝痛の発症；ならびに／または重篤な場合があり腹部疝痛、嘔吐、脱水、下痢、疼痛、および／もしくはショックを引き起こし得る、腸の腫脹が挙げられる。このＨＡＥを有する個体のおよそ１／３が、発作の間に輪状紅斑と呼ばれるかゆみのない発疹を発症する。
【０１２６】
気道の腫脹は生命の危険にかかわる場合があり、一部の患者は死亡する。死亡率は、１５〜３３％と推定されている。ＨＡＥは、１年あたりおよそ１５，０００〜３０，０００件の緊急外来をもたらしている。
【０１２７】
外傷またはストレス、たとえば歯科的処置、疾病（たとえば風邪およびインフルエンザなどのウイルス性の疾病）、月経、および外科手術が、浮腫の発作の引き金となり得る。ＨＡＥの急性発作を防止するために、患者は、以前に発作を引き起こした特定の刺激を回避しようと試みることができる。しかしながら、多くの場合では、既知の引き金を伴うことなく発作が起こる。概して、ＨＡＥの症状はまず小児で現れ、思春期の間に悪化する。平均して、未処置の個体は１〜２週間ごとに発作を起こし、大部分の発症は約３〜４日間続く（ｇｈｒ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ／ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ−ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ）。発作の頻度および持続期間は、遺伝性血管性浮腫を有する人々の間で、さらには同一のファミリー中の人々の間で大きく変動する。
【０１２８】
Ｉ型、ＩＩ型、およびＩＩ型として知られている３種類のＨＡＥが存在し、それらのすべてを、本明細書中に記載される方法により治療できる。ＨＡＥは、５０，０００人に１人が発症し、Ｉ型がＨＡＥの事例の約８０％を占めており、ＩＩ型がＨＡＥの事例の約１５％を占めており、ＩＩＩ型は非常にまれであると推定されている。ＩＩＩ型は最も新規に説明された形態であり、女性にのみ起こると本来は考えられていたが、男性が罹患した家族が同定されている。
【０１２９】
ＨＡＥは、常染色体優性パターンで遺伝し、これにより、罹患した人は、１人の罹患した親から変異を受け継ぐ場合がある。遺伝子における新規の変異もまた起こり得、よってＨＡＥは、家族に疾患歴がない人にも起こる可能性がある。事例の２０〜２５％が、新規の自発的な変異からもたらされていると推定されている。
【０１３０】
ＳＥＲＰＩＮＧ１遺伝子における変異は、遺伝性血管性浮腫Ｉ型およびＩＩ型を引き起こす。ＳＥＲＰＩＮＧ１遺伝子は、炎症の制御に重要なＣ１インヒビタータンパク質を作製するための指示を提供する。Ｃ１インヒビターは、炎症を促進する特定のタンパク質の活性を阻害する。遺伝性血管性浮腫Ｉ型を引き起こす変異は、血液中のＣ１インヒビターのレベルを低下させる。対照的に、ＩＩ型をもたらす変異は、異常に機能するＣ１インヒビターの産生をもたらす。適切なレベルの機能的なＣ１インヒビターがないと、過剰な量のブラジキニンが生成される。ブラジキニンは、血管壁を介して身体の組織へと流体の漏出を増大させることにより炎症を促進する。身体組織中の過剰な流体の集積は、遺伝性血管性浮腫Ｉ型およびＩＩ型の個体で見られる腫脹の発症を引き起こす。
【０１３１】
Ｆ１２遺伝子における変異は、遺伝性血管性浮腫ＩＩＩ型のいくつかの事例に関連している。Ｆ１２遺伝子は、凝固第ＸＩＩ因子を作製するための指示を提供する。凝血（凝固）に重要な役割を果たすことに加えて、第ＸＩＩ因子は重要な炎症の刺激因子でもあり、ブラジキニンの産生に関与している。Ｆ１２における特定の変異は、活性が増大した第ＸＩＩ因子の産生をもたらす。結果として、より多くのブラジキニンが生成され血管壁がより漏出性になり、これが腫脹の発症をもたらす。遺伝性血管性浮腫ＩＩＩ型の他の事例の原因はまだ知られていない。１つまたは複数の未だ同定されていない遺伝子での変異が、これら事例における障害の原因である可能性がある。
【０１３２】
ＨＡＥは、アレルギーまたは他の医学的病態に起因する他の形態の浮腫と類似して存在し得るが、これは原因および治療が著しく異なっている。遺伝性血管性浮腫がアレルギーと誤って診断される場合、最も一般的には、抗ヒスタミン薬、ステロイド、および／またはエピネフリンで治療されるが、これらは概してＨＡＥに無効である。しかしながらエピネフリンは、生命が危険となる反応で使用される場合がある。また、誤診断により、腹部の腫脹を伴う患者で不必要な探索のための外科手術がもたらされ、一部のＨＡＥ患者では、腹部の疼痛は、心身性であると不適切に診断されてきた。
【０１３３】
Ｃ１インヒビターの治療、およびＨＡＥのための他の治療は、Ｋａｐｌａｎ，  Ａ．Ｐ．，  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２０１０，  １２６（５）：９１８−９２５に記載されている。
【０１３４】
ＨＡＥの発作の急性的な治療は、可能な限り早く浮腫の進行を停止するために提供される。静脈内に投与されるドナーの血液からのＣ１インヒビターの濃縮物は、１つの急性的な治療である。しかしながらこの治療は、多くの国では利用することができない。Ｃ１インヒビター濃縮物が利用可能ではない緊急の状況では、新鮮凍結血漿（ＦＦＰ）を、それもＣ１インヒビターを含むため、代替物として使用できる。
【０１３５】
ヒトの血液から精製したＣ１インヒビターは、１９７９年からヨーロッパで使用されている。いくつかのＣ１インヒビター治療が米国で現在利用可能であり、２つのＣ１インヒビター製品がカナダで現在入手可能である。Ｂｅｒｉｎｅｒｔ  Ｐ（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）は、低温殺菌されており、急性発作に関して２００９年にＦＤＡにより承認された。Ｃｉｎｒｙｚｅ（ＶｉｒｏＰｈａｒｍａ）は、ナノフィルターによりろ過されており、予防に関して２００８年にＦＤＡにより承認された。Ｒｈｕｃｉｎ（Ｐｈａｒｍｉｎｇ）は、ヒトの血液由来の病原体による感染性疾患の伝染のリスクを有さない、開発中の組み換えＣ１インヒビターである。
【０１３６】
急性のＨＡＥの発作の治療はまた、疼痛の緩和および／または静脈内注入液のための薬物療法を含んでよい。
【０１３７】
他の治療の様式は、Ｃ１インヒビターの合成を刺激でき、またはＣ１インヒビターの消費を低減できる。ダナゾールなどのアンドロゲン薬物療法は、Ｃ１インヒビターの産生を刺激することにより、発作の頻度および重症度を低減できる。
【０１３８】
ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）は、腹部の発作の引き金となる可能性がある。ヘリコバクター・ピロリを治療するための抗生剤は、腹部の発作を減少させる。
【０１３９】
より新しい治療は、接触するカスケードを攻撃する。エカランチド（ＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標），  ＤＸ−８８，  Ｄｙａｘ）は血漿カリクレインを阻害し、米国で承認されている。Ｉｃａｔｉｂａｎｔ（ＦＩＲＡＺＹＲ（登録商標），  Ｓｈｉｒｅ）は、ブラジキニンＢ２受容体を阻害し、欧州および米国で承認されている。
【０１４０】
ＨＡＥの診断は、たとえば家族の病歴および血液試験に依存し得る。ＨＡＥのＩ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型に関連する研究の知見は、たとえばＫａｐｌａｎ，  Ａ．Ｐ．，  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２０１０，  １２６（５）：９１８−９２５に記載されている。Ｉ型のＨＡＥでは、Ｃ１インヒビターのレベルは減少しており、Ｃ４のレベルも減少しているが、Ｃ１ｑのレベルは正常である。ＩＩ型のＨＡＥでは、Ｃ１インヒビターのレベルは正常または増加しているが、Ｃ１インヒビターの機能は異常である。Ｃ４レベルは減少しており、Ｃ１ｑのレベルは正常である。ＩＩＩ型では、Ｃ１インヒビター、Ｃ４、およびＣ１ｑのレベルはすべて正常である。
【０１４１】
たとえば、ＨＡＥの症状はアンケート、たとえば患者、臨床医、または家族のメンバーにより記入されるアンケートを使用して評価できる。このようなアンケートは当業者に知られており、たとえば、ＶＡＳ（ビジュアルアナログスケール）を含む。たとえばＭｃＭｉｌｌａｎ，  Ｃ．Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｐａｔｉｅｎｔ．  ２０１２；５（２）：１１３−２６を参照されたい。
【０１４２】
抗ＰＫａｌ抗体でのＨＡＥの治療
本開示は、本明細書中に記載される抗体（たとえば本明細書中に記載される抗体の治療上の有効量）を、ＨＡＥを有する、または有する疑いのある対象に、たとえば本明細書中に記載される投与スケジュールにしたがって投与することにより、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を治療する（たとえばこのうちの１つまたは複数の症状を緩和する、安定化する、または排除する）方法を提供する。さらに、たとえば本明細書中に記載される投与スケジュールにしたがって、またはたとえば本明細書中に記載される１つの他の薬剤などの第２の治療と併用して、本明細書中に記載される抗体（たとえば本明細書中に記載される抗体の治療上の有効量）を投与することにより、ＨＡＥを治療する方法を提供する。また本開示は、たとえば本明細書中に記載される投与スケジュールにしたがって、ＨＡＥを発症するリスクのある対象（たとえばＨＡＥを有する家族を有する対象またはＨＡＥに対する遺伝的な素因のある対象）に、本明細書中に記載される抗体（たとえば本明細書中に記載される抗体の予防上の有効量）を投与することにより、ＨＡＥまたはその症状を予防する方法を提供する。いくつかの例では、対象は、治療時にＨＡＥの症状を有していないヒトの患者であってもよい。
【０１４３】
たとえば本明細書中に記載されるように、血漿カリクレインに結合する抗体は、特にヒトの対象での治療上および予防上の有用性を有する。これらの抗体は、たとえば血漿カリクレイン関連疾患を含む様々な障害および病態を治療、予防、および／もしくは診断するために対象へ、またはさらには、たとえばｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏの培養物中の細胞へ、投与される。たとえば、これらの結合タンパク質を使用して、培養物中の細胞から放出された血漿カリクレインの効果を改変できる（Ｌｉｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２８４（２０）：１３７９２−１３８０３（２００９））。治療は、障害、障害の症状または障害に対する素因を軽減、緩和、変質、治療、寛解、改善、または影響するために有効な量を投与することを含む。また治療は、発症を遅らせてもよく、たとえば、疾患または病態の発症を予防、または悪化を予防してもよい。
【０１４４】
カリクレイン結合抗体および他の薬剤を投与する方法もまた、「医薬組成物」に記載されている。使用される分子の適切な用量は、対象の年齢および重量、ならびに使用される特定の薬剤に依存し得る。たとえば血漿カリクレインとその基質（たとえば第ＸＩＩ因子またはＨＭＷＫ）との間での、望ましくない相互作用を阻害、低減するための競合剤として抗体を使用できる。抗体の用量は、患者の、特に疾患部位で、血漿カリクレインの活性の９０％、９５％、９９％、または９９％を阻害するために十分な量であってよい。これは、０．１、１．０、３．０、６．０、または１０．０ｍｇ／Ｋｇを必要とし得る。１５０，０００ｇ／モルの分子量を有するＩｇＧ（２つの結合部位）では、これらの用量は、５Ｌの血液体積に対しておよそ１８ｎＭ、１８０ｎＭ、５４０ｎＭ、１．０８μＭ、および１．８μＭの結合部位に対応する。
【０１４５】
一実施形態では、抗体は、たとえばｉｎ  ｖｉｖｏで血漿カリクレインの活性を阻害する（たとえば、血漿カリクレインの少なくとも１つを阻害する、たとえば第ＸＩＩａ因子および／またはブラジキニンの産生を阻害する）ために使用される。結合タンパク質は、それ自体で使用でき、または細胞傷害性薬物、細胞毒の酵素、またはラジオアイソトープなどの薬剤に結合できる。
【０１４６】
抗体は、天然の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して抗原発現する細胞を除外するためにｉｎ  ｖｉｖｏで直接使用できる。本明細書中に記載される抗体は、補体と結合するＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３由来のＦｃ部または対応するＩｇＭの一部などの、補体結合エフェクタードメインを含んでよい。一実施形態では、標的細胞の集合は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、本明細書中に記載される抗体および適切なエフェクター細胞を用いて処理される。処理は、補体または補体を含む血清を添加することにより、補充される。さらに、本明細書中に記載される抗体でコーティングされた標的細胞の食作用は、補体タンパク質の結合により改善できる。別の実施形態では、補体結合エフェクタードメインを含む抗体でコーティングした標的細胞は、補体により溶解される。
【０１４７】
血漿カリクレイン結合抗体を投与する方法は、「医薬組成物」に記載されている。使用される分子の適切な用量は、対象の年齢および重量、ならびに使用される特定の薬剤に依存する。抗体は、たとえば天然または病理学的な薬剤と血漿カリクレインとの間での望ましくない相互作用を阻害または低減するための競合薬として使用できる。
【０１４８】
本明細書中に記載される抗体の治療上の有効量を、ＨＡＥを有する、または有する疑いのある、またはＨＡＥのリスクがある対象に投与することにより、障害を治療する（たとえば障害の症状または特徴を緩和または改善する、疾患の進行を遅延、安定化、および／または停止する）ことができる。
【０１４９】
本明細書中に記載される抗体は、治療上の有効量で投与できる。抗体の治療上の有効量は、たとえばそのような治療の非存在下で予測される度合いを超える度合いまで対象での障害のうちの少なくとも１つの症状を治癒、緩和、軽減、または改善するなど、対象を治療することにおいて、対象への単回または複数回の用量の投与時に、有効な量である。
【０１５０】
用量レジメンは、最適な望ましい応答（たとえば治療上の応答）を提供するよう調節できる。たとえば、単回ボーラスを投与してもよく、数回に分けた用量を経時的に投与してもよく、または、治療状況の要件により示されるように、用量を比例的に減少または増加してもよい。投与の簡易性および用量の均一性のために、単位剤形で非経口組成物を製剤化することが特に好ましい。本明細書中で使用される単位剤形は、治療されるべき対象に対する単位剤形として適した物理的に別々の単位を指し；各単位は、必要とされる薬学的なキャリアーと関連して望ましい治療上の効果を生じるよう計算された、所定の量の活性化合物を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、抗体（たとえばＤＸ−２９３０）を単回用量として、たとえば０．１〜３ｍｇ／ｋｇで投与する。他の実施形態では、１〜４週間に１度などの複数回の用量により、たとえば２週間ごとまたは毎月（たとえば２８日ごと）の投与で投与される。複数回の用量は、それぞれ０．１〜３ｍｇ／ｋｇの範囲であってよい。いくつかの例では、患者に、適切な期間の間、たとえば２週間ごとまたは毎月など、１〜４週間ごとに一度複数用量の投与を行い、それに続いて同一またはより低い用量で毎月または２ヶ月に一度、維持療法を行う。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、治療の前後または治療過程の最中に、副作用（たとえばクレアチンホスファターゼのレベルの上昇）および／または抗体によるｐＫａｌの阻害レベル（たとえば抗体の血清もしくは血漿中濃度、またはｐＫａｌ活性レベル）に関して患者をモニタリングできる。有害作用が観察される場合、抗体の用量を減らしてもよく、または治療を終了してもよい。阻害レベルが最小治療レベル未満である場合、さらなる用量の抗体を患者に投与してもよい。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、抗体（たとえばＤＸ−２９３０）の血漿または血清中濃度を、治療の効果を評価するために治療過程の最中（たとえば初期用量の後）に測定してもよい。抗体の血漿または血清中濃度が８０ｎＭ未満である場合、経過観察の投与が必要とされ、これは初期の用量と同一またはそれよりも高くてよい。抗体の血漿または血清中濃度は、たとえば免疫アッセイまたはＭＳアッセイにより、対象から入手した血漿または血清の試料中の抗体のタンパク質レベルを決定することにより測定してもよい。また、抗体の血漿または血清中濃度は、抗体で処置した対象から入手した血漿または血清の試料のｐＫａｌの阻害レベルを決定することにより測定してもよい。このようなアッセイは、本明細書中に記載されるように切断されたキニノーゲンを測定するための合成基質アッセイまたはウェスタンブロットアッセイを含んでもよい。
【０１５４】
あるいはまたはさらに、クレアチンキナーゼの血漿または血清中のレベルを、治療過程の最中にモニタリングできる。クレアチンキナーゼの血漿または血清中のレベルが、治療の最中に上昇することが見出された場合、抗体の用量を減らしてよく、または治療を終了してもよい。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の抗ｐＫａｌ抗体（たとえばＤＸ−２９３０またはその抗原結合性フラグメント）の最適な用量（たとえば最適な予防上の用量または最適な治療上の用量）は、以下のように決定できる。初期用量の抗体を、治療の必要な対象に投与する。対象における抗体の血漿中濃度を測定する。血漿中濃度が８０ｎＭ未満である場合、抗体の用量を、その後の投与で増加させる。約８０ｎＭ超の抗体の血漿中濃度を維持する抗体の用量を、対象にとって最適な用量として選択できる。対象のクレアチンホスホキナーゼのレベルを治療過程の最中にモニタリングでき、さらに対象にとって最適な用量を、クレアチンホスホキナーゼに基づき調節することができ、たとえば、クレアチンホスホキナーゼの増加が治療の最中に観察される場合は、抗体の用量を減少し得る。
【０１５６】
併用療法
本明細書中に記載される抗血漿カリクレイン抗体は、たとえば本明細書中に記載される疾患または病態など、血漿カリクレイン活性に関連する疾患または病態を治療するための他の治療の１つまたは複数と併用して投与できる。たとえば、血漿カリクレイン結合抗体は、外科手術、別の抗血漿カリクレインＦａｂまたはＩｇＧ（たとえば本明細書中に記載の別のＦａｂまたはＩｇＧ）、別の血漿カリクレイン阻害剤、ペプチド阻害剤、または小分子阻害剤と共に、治療的または予防的に使用できる。本明細書中に記載される血漿カリクレイン結合抗体との併用療法で使用できる血漿カリクレイン阻害剤の例として、たとえば国際特許公開公報第９５／２１６０１号または第２００３／１０３４７５号に記載される血漿カリクレイン阻害剤が挙げられる。
【０１５７】
１つまたは複数の血漿カリクレイン阻害剤を、本明細書中に記載される１つまたは複数の血漿カリクレイン結合抗体と併用して使用できる。たとえば、併用により必要とされる阻害剤の用量をより低くし、これにより副作用が低減され得る。
【０１５８】
本明細書中に記載される血漿カリクレイン結合抗体は、ＨＡＥを治療するための１つまたは複数の現在の治療と併用して投与できる。たとえば、本明細書中に記載されるＤＸ−２９３０またはその機能的変異体は、エカランチド、Ｃ１エステラーゼ阻害剤（たとえばＣＩＮＲＹＺＥ（商標））、アプロチニン（ＴＲＡＳＹＬＯＬ（登録商標））、および／またはブラジキニンＢ２受容体阻害剤（たとえばイカチバント（ＦＩＲＡＺＹＲ（登録商標）））などの第２の抗ＨＡＥ治療剤と共投与できる。
【０１５９】
用語「併用」は、同一の患者を治療するための２つ以上の薬剤または治療の使用を指し、ここで薬剤または治療の使用または作用は、時間内で重複する。薬剤または治療は、同時に（たとえば患者に投与される単一の製剤として、または同時に投与される２つの別々の製剤として）または任意の順序で逐次投与できる。逐次投与は、異なる時間に投与する投与である。１つの薬剤の投与と別の薬剤の投与との間の時間は、分単位、時間単位、日単位、または週単位であってよい。本明細書中に記載される血漿カリクレイン結合抗体の使用はまた、たとえば投与される別の薬剤と関連した副作用を低減させるために、別の治療の用量を低減するために使用することもできる。よって、併用は、血漿カリクレイン結合抗体の非存在下で使用するよりも、少なくとも１０、２０、３０、または５０％低い用量で第２の薬剤を投与することを含んでもよい。
【０１６０】
併用療法は、他の治療の副作用を低減する薬剤を投与することを含んでもよい。この薬剤は、血漿カリクレイン関連疾患の治療の副作用を低減する薬剤であってよい。
【０１６１】
さらに詳述することなく、当業者であれば、上記の説明に基づき、本発明を完全な度合いで利用できると考えられる。よって以下の特定の実施形態は、単なる例示として構築されており、いずれかの方法で本開示の残りを限定するものではない。本明細書中に記載される公報は、本明細書中の目的または対象のため参照として援用されている。
【０１６２】
実施例
実施例１：健常なボランティアにおけるＤＸ−２９３０の単回の上昇する用量の試験
健常なボランティアにおける単回の上昇する用量を、以下の用量のＤＸ−２９３０：０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇを使用して行った。各ボランティアのデータを入手し、各用量の安全性を決定するために解析した。ＤＸ−２９３０の重鎖および軽鎖の完全配列および可変配列を以下に提供する。ここでは、シグナル配列はイタリック体である。ＣＤＲは太字でかつ下線が引かれている。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【化４】
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【表１】
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【０１６３】
フェーズ１ａの試験設計
この試験は、ランダム化された二重盲検であり、プラセボ制御されている。単回および上昇する用量のＤＸ−２９３０を、健常な対象に皮下投与した。参加者を、それぞれが単回の用量（０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇ）に対応する１〜４名の対象コホートに無作為に割り当てた。各コホートは、６名の活性薬剤で処置した対象、および２名のプラセボ処置した対象を含んだ。用量スケジュールが完了した後、すべての対象を１６週間モニタリングした。
【０１６４】
安全性の結果
ＤＸ−２９３０は、用量を限定する毒性が現れることなく、最大３．０ｍｇ／ｋｇの単回用量で認容性が良好であった。よって、この試験は、ＤＸ−２９３０に関連したいずれかの臨床的に有意な安全性シグナルの証拠を収集しなかった。
【０１６５】
臨床研究結果は、何等かの有害事象に関するＤＸ−２９３０とプラセボとの間の臨床的な不均衡を示さなった。最も一般的に報告された有害事象は、頭痛（ＤＸ−２９３０で処置した対象の２５％およびプラセボで処置した対象の２５％）を含む。重篤な有害事象はなく、すべての有害事象が解決した。
【０１６６】
バイタルサイン、身体的な試験、および心電図（ＥＣＧ）の解析は、０．１ｍｇ／ｋｇの用量を投与した１名の対象で上気道感染症を示した。しかしながら、研究者は、この感染症は中程度であり、治療に関連するものではないと報告した。それ以外には、試験対象のバイタルサイン、身体的な試験、および心電図（ＥＣＧ）での異常は観察されなかった。
【０１６７】
抗薬剤抗体の試験は、抗体陽転の証拠を収集しなかった。
【０１６８】
重篤なＡＥを有する２名の対象のみが、盲検の研究者により治療に関連すると報告された。９０２Ｕ／Ｌのクレアチンホスホキナーゼの上昇（参照範囲：２１〜２１５Ｕ／Ｌ）が、０．１ｍｇ／ｋｇのＤＸ−２９３０を投与した対象で観察された（すべてのＤＸ−２９３０で処置した対象の４．２％）。１９６７Ｕ／Ｌのクレアチンホスホキナーゼの上昇（参照範囲：３２〜２９４Ｕ／Ｌ）が、プラセボを投与した対象で観察された（プラセボで処置した対象の１２．５％）。結果は、いずれか他のＡＥと関連したｌａｂの異常性または臨床的な重要性を示唆し得る知見を示さなかった。いずれの対象にも注射部位反応はなかった。
【表２】
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※治療に関連したＡＥ：試験薬剤に対するＡＥの関連性を、盲検した研究者により評価した。
注：ここで、用語「有害事象」（ＡＥ）は、特に、治療により現れる有害事象を指す。有害事象は、発症時間が、試験薬剤の投与の後から１１２日での投与後の最終的な再診までである場合、または発症時間が試験薬剤投与に先行する事象では、ＡＥが１１２日の投与後再診期間の間に重症度を増す場合、治療に由来すると考えた。
【０１６９】
薬力学的（ＰＤ）および薬物動態医学的（ＰＫ）結果
表３は、各用量のコホートに関しての薬物動態学的パラメータの評価を提供する。平均値ＣｍａｘおよびＡＵＣｌａｓｔ値は、良好な性質の抗体と一致する正確な線形用量依存性を呈する。長い半減期を伴う薬剤は、安定で、一定した状態の血液レベルを達成するための低頻度の投与スケジュールを可能にする。ＤＸ−２９３０は、すべての用量グループを通してほぼ３週間の一定した半減期の延長を示した。
【０１７０】
ＨＡＥの予防に関する治療候補物質は、低頻度の投与および論理的な技術的投与原理を可能にするための長い半減期および予測可能な薬物動態学的プロファイルを有するべきである。ＤＸ−２９３０は、一定した薬物動態プロファイルを提供し、これによりＨＡＥ患者に有意な治療上の利益を提供する投与レジメンを決定できる。
【表３】
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【０１７１】
ＤＸ−２９３０の薬物動態学的（ＰＫ）パラメータを、健常な対象における単回投与の後に評価した。３ｍｇ／ｋｇの単回投与の後、８０ｎＭの標的レベルを超える血漿中の薬剤濃度を得た。８０ｎＭ前後または８０ｎＭ超の薬剤レベルが、およそ１０日間維持された（図７）。薬剤レベルは、定常状態に達するまで薬剤の反復投与により蓄積し続けた。ＤＸ−２９３０の単回投与のみの後でさえ、目的の８０ｎＭを超える薬剤レベルが得られ、長期間維持された。この試験からのＰＫデータは、目的とした８０ｎＭを超える血漿中薬剤濃度を入手し、次にその濃度を継続して維持するための投与戦略の実現可能性を裏付けるものである。さらに、ＨＡＥの予防に関連した十分な血漿カリクレイン阻害を得るために、必要に応じて８０ｎＭより高い薬剤レベルを達成してもよい。
【０１７２】
ＤＸ−２９３０の薬力学的（ＰＤ）評価を行った。ＤＸ−２９３０をさらに特徴付けるために、対象の血漿試料について探索性バイオマーカーアッセイをｅｘ  ｖｉｖｏで行って分子の薬力学的プロファイルを評価した。２つの独立したアッセイ‐そこからブラジキニンが生じる血漿カリクレインの天然の基質であるキニノーゲンの切断を測定する、人工的な蛍光発生物質を使用する血漿カリクレイン活性アッセイおよびウェスタンブロットアッセイを行った。
【０１７３】
これらのアッセイは半定量的である。よって、データ点は、実験内の他のデータ点と比較して解釈されるべきであり、アッセイを通してまたは他のアッセイシステムと比較されるものではない。これらのアッセイは、Ｃ１インヒビターの正常なレベルを有する正常な対象の血漿で行う。結果として、これらのバイオマーカーアッセイで使用される健常な対象は、ＨＡＥの発作を発症しない。これらのバイオマーカーの評価の目的は、投与した対象由来の血漿中のＤＸ−２９３０が、血漿カリクレインに対する阻害活性を有することを確認することであった。同様に重要なことに、これらの試験は、薬力学的な結果が、観察したＰＫプロファイルを裏付けるかどうかを評価するために行った。
【０１７４】
図９は、ＤＸ−２９３０の薬力学的な効果を表す。試験薬剤で処置した対象由来の血漿をｅｘ  ｖｉｖｏで活性化して接触相経路を誘導し、これにより血漿カリクレインの産生および活性を刺激した。ｐＫａｌ活性を、蛍光発生アッセイを介して測定した。１および３ｍｇ／ｋｇのグループ由来のデータを表す。血漿カリクレインの阻害は、特に１および３ｍｇ／ｋｇの用量グループで明確であった。０．１ｍｇ／ｋｇまたはプラセボのグループでは、認識可能な阻害は観察されなかった。観察された阻害は、用量および時間の両方に依存しており、かつＤＸ−２９３０の阻害活性を確認する。ＤＸ−２９３０のＰＤ作用は、ＤＸ−２９３０のＰＫデータを裏付けるものである。
【０１７５】
ＤＸ−２９３０の治療用途
有効な予防のための、有効性の必要条件は、関連する薬剤標的が連続的に、必要とされる最小値の量を超えるレベルで阻害されることである。阻害範囲のギャップは最小限であるか完全に回避されるべきである。阻害レベルが必要とされる最小値レベルを下回る場合、個体は病理過程の活性化に対して生物学的に不安定であり、疾患事象に関する臨床的なリスクがある可能性がある。
【０１７６】
ＨＡＥには、広く確立された予防の原則がない。ＨＡＥでは、血漿カリクレインが、浮腫の発作の原因に重要である有効な薬剤標的を表す。ＨＡＥの発作を予防することには、血漿カリクレインの阻害を、最小治療レベルを超えて継続的に維持することが必要であり得る。経時的な範囲のギャップは、脆弱な期間を回避するように最小限であるべきである。この必要性は、ＨＡＥの発作に重要な役割をはたすと仮説づけられた陽性フィードバックループの現象によりさらに強調される。このカスケードが開始すると、血漿カリクレインの活性化が、次により多くの血漿カリクレインの産生を駆動する第ＸＩＩ因子の活性化をもたらす。
【０１７７】
ＤＸ−２９３０と、ＨＡＥの発作の急性的な治療に関して米国で承認された既知の治療剤である、エカランチドとによる血漿カリクレインの阻害を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのアッセイで比較した。この系では、ヒトの血漿を、接触相を開始しかつプレカリクレインを活性血漿カリクレインに変換する薬剤に曝露した。
【０１７８】
患者に投与後の血漿中のエカランチドのピーク濃度は８０ｎＭであり、血漿カリクレイン活性の部分的な阻害のみを提供する。８０ｎＭのこの濃度範囲周辺では、これらのアッセイの結果は、ＤＸ−２９３０がエカランチドと同等な効力を有することを示す（図５）。８０ｎＭがＨＡＥの発作に適した血漿カリクレインレベルであるように見え、かつこの濃度範囲での血漿カリクレインの阻害において、ＤＸ−２９３０の効力がエカランチドと同等であるならば、８０ｎＭの血漿中薬剤濃度を継続的に超えてＤＸ−２９３０を維持することは、ＨＡＥの発作を予防すると仮定できる（図６）。ＤＸ−２９３０の血漿中薬剤レベルの目的となる８０ｎＭは、現在入手可能なデータおよび疾患生物学の理解に基づき、確実であると思われる。８０ｎＭは初期の目的であるが、より低いまたは高い薬剤レベルのＤＸ−２９３０が、治療上の用量を得るために必要である可能性がある。
【０１７９】
実施例２  ＨＡＥの患者におけるＤＸ−２９３０の複数回の上昇する用量試験
複数回の用量のＤＸ−２９３０を、以下の用量：０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇでＨＡＥ患者に投与する。図２は、用量３ｍｇ／ｋｇのＤＸ−２９３０を反復して投与した後に達成されると予測される血漿中濃度を提供する。初期の濃度プロファイルは、健常な対象での単回用量投与で観察されたプロファイルと一致する。
【０１８０】
ＰＫモデリングを行って、慢性的な投与の後のＤＸ−２９３０の薬力学的および薬物動態学的な性質を予測できる。図８は、ＤＸ−２９３０が健常な対象において２８日ごとに３ｍｇ／ｋｇで投与される仮定のシナリオを表す。このモデリングの結果は、定常状態が得られた後に、反復投与が、初期に標的とした８０ｎＭのレベルの周辺または８０ｎＭを超える薬剤濃度を継続的に維持することを示唆する（この閾値の論述に関しては実施例２を参照）。
【０１８１】
ＨＡＥ患者におけるＤＸ−２９３０の安全性および効力は、１週間あけてＤＸ−２９３０を２回投与した後に評価される。バイオマーカーのデータ（薬物動態と共に）を評価して、ＨＡＥの発作を防止するＤＸ−２９３０の効力（異なる用量で）を評価するための経過観察の試験にどの用量を使用するかを決定した。
【０１８２】
実施例３  遺伝性血管浮腫の長期間の予防を調査するための投与レジメンの薬理学的なモデリング
方法
エカランチドおよびＤＸ−２９３０によるｐＫａｌのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を、合成基質アッセイを使用して評価した。モデリングを、健常な対象におけるＤＸ−２９３０の単回の上昇する用量での皮下投与試験からの薬物動態学的（ＰＫ）データを使用して行った。
【０１８３】
結果
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのｐＫａｌアッセイでは、ＤＸ−２９３０およびエカランチドは、８０ｎＭの濃度で同等な薬力学的（ＰＤ）活性を呈した。８０ｎＭ未満のｐＫａｌ阻害剤の血漿中濃度は、部分的な予防効果のみを提示し、低用量仮説よりも中度用量および高用量の仮説に対するさらなる証拠をもたらした。よって、約８０ｎＭを超えるＤＸ−２９３０の薬剤レベルを継続的に維持することは、中度の用量の仮説により説明されるｐＫａｌの阻害レベルに達するはずである。ＰＫモデリングは、慢性ＤＸ−２９３０投与が、２週間ごとに１００ｍｇ（または４週間ごとに３００ｍｇ）を用いて８０ｎＭ超、および２週間ごとに３００ｍｇを用いて２００ｎＭ超の安定した状態の血漿中薬剤濃度をもたらすことを示す。
【０１８４】
他の実施形態
本明細書に開示されるすべての特性は、任意の組み合わせで組み合わせてもよい。本明細書に開示される各特性は、同一、均等、または類似の目的を果たす代替的な特性により交換されてもよい。よって、特段他の記載が明確にない限り、開示されている各特性は、単なる、一般的な形式の均等または類似の特性の例である。
【０１８５】
上述の記載から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確定することができ、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、様々な用途および条件に適合するよう本発明の様々な変化および改変を作製することができる。よって、他の実施形態もまた特許請求の範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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