(57)【要約】【課題】  ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に高い親和性（ＫD）で結合し、ｈＩＬ−４及びｈＩＬ−１３活性を遮断することができる、単離されたヒト抗体又はその抗体フラグメントの提供。【解決手段】  配列番号２７４に示されるアミノ酸配列を含むヒトインターロイキン−４受容体（ｈＩＬ−４Ｒ）に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、上記抗体又は抗原結合フラグメント。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むヒトインターロイキン−４受容体（ｈＩＬ−４Ｒ）（配列番号２７４）に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合フラグメントであって：
（ａ）  約１００ｐＭ若しくはそれ以下のｈＩＬ−４Ｒに対する親和性（ＫD）を特徴
とする、配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ及び配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ；
（ｂ）  約３００ｐＭ若しくはそれ以下のｈＩＬ−４Ｒに対する親和性（ＫD）を特徴
とする、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ及び配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ；又は
（ｃ）  約５０ｐＭ若しくはそれ以下のｈＩＬ−４Ｒに対する親和性（ＫD）を特徴と
する、配列番号２１０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ及び配列番号２１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ
を含む、上記抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項２】
重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）を含む、ヒトインターロイキン−４受容体（ｈＩＬ−４Ｒ）（配列番号２７４）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであって：
（ａ）  配列番号１５２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３及び配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３；
（ｂ）  配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３及び配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３；又は
（ｃ）  配列番号２００に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３及び配列番号２０８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３；
を含む、上記抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項３】
重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、２（ＨＣＤＲ２）、３（ＨＣＤＲ３）及び軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、２（ＬＣＤＲ２）、３（ＬＣＤＲ３）を含む、ヒトＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合フラグメントであって、
ＨＣＤＲ１は、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8（配列番号２６５）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｙ；Ｘ2＝Ｐｈｅ；Ｘ3＝Ｔｈｒ；Ｘ4＝Ｐｈｅ；Ｘ5＝Ａ
ｓｐ又はＡｒｇ；Ｘ6＝Ａｓｐ又はＳｅｒ；Ｘ7＝Ｔｙｒ；そしてＸ8＝Ａｌａ又はＧｌｙ
であり；
ＨＣＤＲ２は、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8（配列番号２６６）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ1＝Ｉｌｅ又はＬｅｕ、Ｘ2＝Ｓｅｒ、Ｘ3＝Ｇｌｙ、Ｔｙｒ又
はＡｒｇ、Ｘ4＝Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＴｈｒ、Ｘ5＝Ｇｌｙ又はＳｅｒ、Ｘ6＝Ｇｌｙ、Ｓ
ｅｒ又はＶａｌ、Ｘ7＝Ｓｅｒ又はＡｓｎ、そしてＸ8＝Ｔｈｒ、Ｌｙｓ又はＩｌｅであり；
ＨＣＤＲ３は、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6-Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11−Ｘ12−Ｘ13−Ｘ14−Ｘ15−Ｘ16−Ｘ17−Ｘ18（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ1＝Ａｌａ、Ｘ2＝Ｌｙｓ、Ｘ3＝Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＴｒｐ、Ｘ4＝Ｇｌｙ又はＡｒｇ、Ｘ5＝Ｌｅｕ、Ｔｈｒ又はＡｒｇ、Ｘ6＝Ｇｌｙ、Ａｒｇ又はＳｅｒ、Ｘ7＝Ｉｌｅ又はＧ
ｌｙ、Ｘ8＝Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＴｙｒ、Ｘ9＝Ｉｌｅ、Ａｓｐ又はＰｈｅ、Ｘ10＝Ａｒｇ、Ｔｙｒ又はＡｓｐ、Ｘ11＝Ｐｒｏ、Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ12＝Ａｒｇであるか又は存在せず、Ｘ13＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ14＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ15＝Ｇｌｙであるか又は存在せず、Ｘ16＝Ｌｅｕであるか又は存在せず、Ｘ17＝Ａｓｐであるか又は存在せず、そしてＸ18＝Ｖａｌであるか又は存在せず；
ＬＣＤＲ１は、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6-Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11 （配列
番号２６８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ1＝Ｇｌｎ、Ｘ2＝Ａｓｐ、Ｓｅｒ又はＶａ
ｌ、Ｘ3＝Ｉｌｅ又はＬｅｕ、Ｘ4＝Ｓｅｒ、Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ5＝Ａｓｎ、Ｔｙｒ又
はＩｌｅ、Ｘ6＝Ｔｒｐ、Ｓｅｒ又はＴｙｒ；Ｘ7＝Ｉｌｅであるか又は存在せず；Ｘ8＝
Ｇｌｙであるか又は存在せず；Ｘ9＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；Ｘ10＝Ａｓｎである
か又は存在せず；そしてＸ11＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；
ＬＣＤＲ２は、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3（配列番号２６９）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ1＝Ｌｅｕ、Ａｌａ又はＶａｌ、Ｘ2＝Ａｌａ又はＧｌｙ、そしてＸ3＝Ｓｅｒであり；そして
ＬＣＤＲ３は、式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6-Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9（配列番号２７０）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘ1＝Ｇｌｎ又はＭｅｔ、Ｘ2＝Ｇｌｎ、Ｘ3＝Ａｌａ又はＴ
ｙｒ、Ｘ4＝Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ5＝Ｇｌｎ又はＳｅｒ、Ｘ6＝Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＨｉ
ｓ、Ｘ7＝Ｐｒｏ、Ｘ8＝Ｔｙｒ、Ｉｌｅ又はＴｒｐ、そしてＸ9＝Ｔｈｒである、
抗体又は抗体の抗原結合フラグメント。
【請求項４】
重鎖及び軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が、以下：
（ａ）  配列番号１４８、１５０、１５２、１５６、１５８、１６０；
（ｂ）  配列番号４、６、８、１２、１４、１６；及び
（ｃ）  配列番号  １９６、１９８、２００、２０４、２０６、２０８
からなる群より選択される、請求項３に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列をコードする核酸配列。
【請求項６】
請求項５に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項７】
請求項６に記載のベクターを含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントの製造のための宿主ベクターシステム。
【請求項８】
ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒ）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法であって、
抗体又はフラグメントが発現する条件下で請求項７に記載の宿主ベクターシステムの細胞を増殖させること、及び発現した抗ｈＩＬ−４抗体を回収することを含む、上記方法。
【請求項９】
宿主細胞が原核細胞又は真核細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
宿主細胞がＥ．ｃｏｌｉ細胞又はＣＨＯ細胞である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
疾患又は障害の処置のための医薬の製造における、請求項１、２、３又は４に定義される抗体又は抗原結合フラグメントの使用であって、ここで疾患又は障害がヒトインターロイキン−４（ｈＩＬ−４）活性の除去、阻害又は低減により改善、軽減又は抑制される、使用。
【請求項１２】
疾患又は障害が、関節炎、疱疹状疾患、慢性特発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕化、ウィップル病、良性前立腺肥大、肺障害、喘息、炎症性障害、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ・ストラウス症候群、グレーブズ病、子癇前症、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、及びネフローゼからなる群より選択される、請求項１１に定義される使用。
【請求項１３】
疾患又は障害が喘息又はアトピー性皮膚炎である、請求項１１に定義される使用。
【請求項１４】
ヒトインターロイキン−４（ｈＩＬ−４）活性の除去、阻害又は低減により改善、軽減又は抑制される、疾患又は障害を処置する方法であって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを、それを必要とする患者に投与することを含む、上記方法。
【請求項１５】
疾患又は障害が、関節炎、疱疹状疾患、慢性特発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕化、ウィップル病、良性前立腺肥大、肺障害、喘息、炎症性障害、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ・ストラウス症候群、グレーブズ病、子癇前症、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、及びネフローゼからなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
疾患又は障害が喘息又はアトピー性皮膚炎である、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
インターロイキン−４（ＩＬ−４、Ｂ細胞刺激因子又はＢＳＦ−１としても知られる）は、表面免疫グロブリンに特異的な低濃度の抗体に応答してＢ細胞の増殖を刺激するその能力でもともと特徴付けられていた。ＩＬ−４は、Ｔ細胞、肥満細胞、顆粒球、巨核球及び赤血球の増殖刺激を含む広範囲の生物学的活性を有することが示されている。ＩＬ−４は、休止Ｂ細胞におけるクラスＩＩ主要組織適合複合体分子の発現を誘導し、そして刺激されたＢ細胞によるＩｇＥ及びＩｇＧ１アイソタイプの分泌を増強する。
【０００２】
ＩＬ−４の生物学的活性は、ＩＬ−４の特異的細胞表面受容体により媒介される。ヒトＩＬ−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒ）（配列番号２７４）は、例えば特許文献１、特許文献２及び特許文献３に記載される。ｈＩＬ−４Ｒに対する抗体は特許文献４及び特許文献５に記載される。
【０００３】
ヒト治療剤として有用な抗体の製造方法には、キメラ抗体及びヒト化抗体を生成することが含まれる（例えば特許文献６を参照のこと）。例えば、ヒト抗体を産生することができる非ヒトトランスジェニックマウスを生成する方法を記載する、特許文献７及び特許文献８を参照のこと。
【０００４】
ｈＩＬ−４Ｒに対する抗体を使用する方法は、特許文献９；特許文献１０；及び特許文献１１に記載される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第５，５９９，９０５号
【特許文献２】米国特許第５，７６７，０６５号
【特許文献３】米国特許第５，８４０，８６９号
【特許文献４】米国特許第５，７１７，０７２号
【特許文献５】米国特許第７，１８６，８０９号
【特許文献６】米国特許第６，９４９，２４５号
【特許文献７】ＷＯ９４／０２６０２
【特許文献８】米国特許第６，５９６，５４１号
【特許文献９】米国特許第５，７１４，１４６号
【特許文献１０】米国特許第５，９８５，２８０号
【特許文献１１】米国特許第６，７１６，５８７号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
第一の局面において、本発明は、ヒトインターロイキン−４受容体（ｈＩＬ−４Ｒ）に特異的に結合するヒト抗体、好ましくは組み換えヒト抗体を提供する。本ヒト抗体は、高い親和性でｈＩＬ−４Ｒに結合すること及びｈＩＬ−４活性を中和する能力を特徴とする。特定の実施態様において、本ヒト抗体は、ｈＩＬ−４ＲへのｈＩＬ−１３／ｈＩＬ−１３Ｒ１複合体の結合を遮断することができ、従ってｈＩＬ−１３によるシグナル伝達を阻害する。本抗体は全長（例えばＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体）であっても、抗原結合部分（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）2又はｓｃＦｖフラグメント）のみを含んでいてもよく、そ
して機能を達成するように、例えば残ったエフェクター機能をなくすように改変され得る（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）。
【０００７】
一般的実施態様において、モノマー又はダイマーアッセイにおいて表面プラズモン共鳴により測定した場合に約３００ｐＭ又はそれ以下のＫDでｈＩＬ−４Ｒ（配列番号２７４
）に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。より特定の実施態様において、抗体又はその抗原結合部分は、約２００ｐＭ若しくはそれ以下、約１５０若しくはそれ以下、約１００ｐＭ若しくはそれ以下、又は約５０ｐＭのＫDを示す。種々の
実施態様において、抗体又は抗原結合フラグメントは、ルシフェラーゼバイオアッセイにより測定した場合に約１００ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50でｈＩＬ−４活性を遮断する。より特定の実施態様において、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＳＴＡＴ６ルシフェラーゼバイオアッセイにより測定した場合に約５０ｐＭ若しくはそれ以下、約３０ｐＭ若しくはそれ以下、又は約２５ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50を示す。種々の実施態様において、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＳＴＡＴ６ルシフェラーゼバイオアッセイにより測定した場合に、約１００ｐＭ若しくはそれ以下、約９０ｐＭ若しくはそれ以下、約５０ｐＭ若しくはそれ以下、又は約２０ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50でｈＩＬ−１３活性を遮断する。
【０００８】
第二の局面において、本発明の抗体は、配列番号２、１８、２２、２６、４２、４６、５０、６６、７０、７４、９０、９４、９８、１１４、１１８、１２２、１３８、１４２、１４６、１６２、１６６、１７０、１８６、１９０、１９４、２１０、２１４、２１８、２３４、２３８、２４２、２５８及び２６２からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、又はそれらと実質的に類似の配列を含む。
【０００９】
第三の局面において、本発明の抗体は、配列番号１０、２０、２４、３４、４４、４８、５８、６８、７２、８２、９２、９６、１０６、１１６、１２０、１３０、１４０、１４４、１５４、１６４、１６８、１７８、１８８、１９２、２０２、２１２、２１６、２２６、２３６、２４０、２５０、２６０及び２６４からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列、又はそれらと実質的に類似の配列を含む。
【００１０】
一実施態様において、本発明の抗体又は抗体フラグメントは、配列番号２／１０、１８／２０、２２／２４、２６／３４、４２／４４、４６／４８、５０／５８、６６／６８、７０／７２、７４／８２、９０／９２、９４／９６、９８／１０６、１１４／１１６、１１８／１２０、１２２／１３０、１３８／１４０、１４２／１４４、１４６／１５４、１６２／１６４、１６６／１６８、１７０／１７８、１８６／１８８、１９０／１９２、１９４／２０２、２１０／２１２、２１４／２１６、２１８／２２６、２３４／２３６、２３８／２４０、２４２／２５０、２５８／２６０及び２６２／２６４からなる群より選択されるＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む。好ましい実施態様において、本抗体又は抗体フラグメントは、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対  配列番号１６２／１６４、２１０／２１２又は１８／２０を含み；これらのＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対を有する典型的な抗体としては、Ｈ４Ｈ０９８Ｐ（配列番号：１６２／１６４）、Ｈ４Ｈ０８３Ｐ（配列番号：２１０／２１２）、及びＨ４Ｈ０９５Ｐ（配列番号：１８／２０）と呼ばれる抗体が挙げられる。
【００１１】
第四の局面において、本発明はＨＣＶＲをコードする核酸分子を提供し、本核酸分子は、配列番号１、１７、２１、２５、４１、４５、４９、６５、６９、７３、８９、９３、９７、１１３、１１７、１２１、１３７、１４１、１４５、１６１、１６５、１６９、１８５、１８９、１９３、２０９、２１３、２１７、２３３、２３７、２４１、２５７及び２６１からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するそれらの実質的に同一な配列である。
【００１２】
第五の実施態様において、本発明は、ＬＣＶＲをコードする核酸分子を提供し、本核酸
分子は、配列番号９、１９、２３、３３、４３、４７、５７、６７、７１、８１、９１、９５、１０５、１１５、１１９、１２９、１３９、１４３、１５３、１６３、１６７、１７７、１８７、１９１、２０１、２１１、２１５、２２５、２３５、２３９、２４９、２５９及び２６３からなる群より選択される配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するそれらの実質的に同一な配列である。
【００１３】
一実施態様において、本発明の抗体は、配列番号１／９、１７／１９、２１／２２、２５／３３、４１／４３、４５／４７、４９／５７、６５／６７、６９／７１、７３／８１、８９／９１、９３／９５、９７／１０５、１１３／１１５、１１７／１１９、１２１／１２９、１３７／１３９、１４１／１４３、１４５／１５３、１６１／１６３、１６５／１６７、１６９／１７７、１８５／１８７、１８９／１９１、１９３／２０１、２０９／２１１、２１３／２１５、２１７／２２５、２３３／２３５、２３７／２３９、２４１／２４９、２５７／２５９及び２６１／２６３からなる群より選択されるヌクレオチド配列対によりコードされるＨＣＶＲ及びＬＣＶＲを含む。好ましい実施態様において、本抗体又は抗体フラグメントは、配列番号１６１／１６３、２０９／２１１及び１７／１９より選択される核酸配列によりコードされるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列を含む。なおさらに好ましい実施態様において、本抗体又は抗体フラグメントは核酸配列  配列番号１６１／１６３によりコードされるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む。
【００１４】
第六の局面において、本発明は、ＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３を含む抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、ここでＨＣＤＲ３ドメインは、配列番号８、３２、５６、８０、１０４、１２８、１５２、１７６、２００、２２４及び２４８からなる群より選択され；そしてＬＣＤＲ３ドメインは、配列番号１６、４０、６４、８８、１１２、１３６、１６０、１８４、２０８、２３２及び２５６からなる群より選択される。好ましい実施態様において、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３配列は、配列番号１５２／１６０、８／１６又は２００／２０８である。なおより好ましい実施態様において、ＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３配列は配列番号１５２及び１６０である。
【００１５】
さらなる実施態様において、抗体又は抗体フラグメントは、配列番号４、２８、５２、７６、１００、１２４、１４８、１７２、１９６、２２０及び２４４からなる群より選択されるＨＣＤＲ１配列、又はその実質的に類似の配列；配列番号６、３０、５４、７８、１０２、１２６、１５０、１７４、１９８、２２２及び２４６からなる群より選択されるＨＣＤＲ２配列、又はその実質的に類似の配列；配列番号８、３２、５６、８０、１０４、１２８、１５２、１７６、２００、２２４及び２４８からなる群より選択されるＨＣＤＲ３配列、又はその実質的に類似の配列；配列番号１２、３６、６０、８４、１０８、１３２、１５６、１８０、２０４、２２８及び２５２からなる群より選択されるＬＣＤＲ１配列、又はその実質的に類似の配列；配列番号１４、３８、６２、８６、１１０、１３４、１５８、１８２、２０６、２３０及び２５２からなる群より選択されるＬＣＤＲ２配列、又はその実質的に類似の配列；並びに配列番号１６、４０、６４、８８、１１２、１３６、１６０、１８４、２０８、２３２及び２５６からなる群より選択されるＬＣＤＲ３配列又はその実質的に類似の配列をさらに含む。好ましい実施態様において、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＨＣＤＲ配列  配列番号１４８、１５０及び１５２並びにＬＣＤＲ配列  配列番号１５６、１５８及び１６０；ＨＣＤＲ配列  配列番号４、６及び８並びにＬＣＤＲ配列  配列番号１２、１４及び１６；並びにＨＣＤＲ配列  配列番号１９６、１９８及び２００並びにＬＣＤＲ配列  配列番号２０４、２０６及び２０８を含む。
【００１６】
特定の実施態様によれば、本発明は、配列番号：１４８／１５０／１５２／１５６／１５８／１６０；４／６／８／１２／１４／１６；及び１９６／１９８／２００／２０４／２０６／２０８からなる群より選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３配列を有する、抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体又はその抗原結合フラ
グメントを提供する。これらのＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３配列を有する典型的な抗体としては、Ｈ４Ｈ０９８Ｐ（配列番号：１４８／１５０／１５２／１５６／１５８／１６０）、Ｈ４Ｈ０８３Ｐ（配列番号：１９６／１９８／２００／２０４／２０６／２０８）、及びＨ４Ｈ０９５Ｐ（配列番号：４／６／８／１２／１４／１６）と呼ばれる抗体が挙げられる。
【００１７】
第七の局面において、本発明は、ＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３を含むヒト抗体又は抗体フラグメントを特徴とし、ここでＨＣＤＲ３は、配列番号７、３１、５５、７９、１０３、１２７、１５１、１７５、１９９、２２３及び２４７からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に同一な配列によりコードされ；そしてＬＣＤＲ３は、配列番号１５、３９、６３、８７、１１１、１３５、１５９、１８３、２０７、２３１及び２５５からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に同一な配列によりコードされる。
【００１８】
さらなる実施態様において、本発明は、配列番号３、２７、５１、７５、９９、１２３、１４７、１７１、１９５、２１９及び２４３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に同一な配列によりコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号５、２９、５３、７７、１０１、１２５、１４９、１７３、１９７、２２１及び２４５からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に同一な配列によりコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号７、３１、５５、７９、１０３、１２７、１５１、１７５、１９９、２２３及び２４７からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に類似の配列によりコードされるＨＣＤＲ３ドメイン；配列番号１１、３５、５９、８３、１０７、１３１、１５５、１７９、２０３、２２７及び２５１からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に類似の配列によりコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；配列番号１３、３７、６１、８５、１０９、１３３、１５７、１８１、２０５、２２９及び２５３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に類似の配列によりコードされるＬＣＤＲ２ドメイン；並びに配列番号１５、３９、６３、８７、１１１、１３５、１５９、１８３、２０７、２３１及び２５５からなる群より選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９５％の相同性を有するその実質的に類似の配列によりコードされるＬＣＤＲ３ドメインを含むヒト抗体又は抗体フラグメントを特徴とする。好ましい実施態様において、抗体又は抗原結合フラグメントは、ヌクレオチド配列  配列番号１４７、１４９、１５１、１５５、１５７及び１５９；１９５、１９７、１９９、２０３、２０５及び２０７；並びに３、５、７、１１、１３及び１５によりコードされるＨＣＤＲ配列及びＬＣＤＲ配列を含む。
【００１９】
特定の実施態様において、本発明の抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１６２で示されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号１６４で示されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含み、かつ２５℃及び３７℃でそれぞれ約１００ｐＭ若しくはそれ以下のＫD（モノマー基質）又は７０ｐＭ若しくはそれ以下のＫD（ダイマー基質）；約１６０ｐＭ若しくはそれ以下（モノマー基質）又は４０ｐＭ若しくはそれ以下のＫD
（ダイマー基質）；及び約１０ｐＭ若しくはそれ以下（２５ｐＭダイマー基質）又は約１００ｐＭ若しくはそれ以下（２００ｐＭモノマー基質）のＩＣ50を特徴とし、これはｈＩＬ−４及びｈＩＬ−１３活性の両方を約３０ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50（バイオアッセイで測定された場合）で遮断することができ、そしてサルＩＬ−４Ｒと交差反応する。
【００２０】
特定の実施態様において、本発明の抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含み、かつ約４５０ｐＭ若しくはそれ以下のＫD（モノマー又は
ダイマー基質）；及び約４０ｐＭ若しくはそれ以下（２５ｐＭダイマー基質）又は約１００ｐＭ若しくはそれ以下（２００ｐＭモノマー基質）のＩＣ50を特徴とし、これはｈＩＬ−４及びｈＩＬ−１３活性の両方を約１００ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50（バイオアッセイで測定された場合）で遮断することができる。
【００２１】
特定の実施態様において、本発明の抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントは、配列番号２１０で示されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ及び配列番号２１２で示されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含み、かつ２５℃及び３７℃でそれぞれ約５０ｐＭ若しくはそれ以下のＫD（モノマー基質）又は３０ｐＭ若しくはそれ以下のＫD（ダイマー基質）；約２００ｐＭ若しくはそれ以下（モノマー基質）のＫD又は４０ｐＭ若しくはそれ以下の
ＫD（ダイマー基質）；並びに約１０ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50（２５ｐＭダイマー
基質）又は約９０ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50（２００ｐＭモノマー基質）を特徴とし、これは、ｈＩＬ−４及びｈＩＬ−１３活性の両方を約２５ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50（バイオアッセイで測定された場合）で遮断することができ、そしてサルＩＬ−４Ｒと交差反応しない。
【００２２】
第八の局面において、本発明は、３つの重鎖相補性決定領域及び３つの軽鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む、ｈＩＬ−４Ｒに特異的に結合する抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを特徴とし、ここでＨＣＤＲ１は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8（配列番号２６５）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｙ；Ｘ2＝Ｐｈｅ；Ｘ3＝Ｔｈｒ；Ｘ4＝Ｐｈｅ；Ｘ5
＝Ａｓｐ又はＡｒｇ；Ｘ6＝Ａｓｐ又はＳｅｒ；Ｘ7＝Ｔｙｒ；そしてＸ8＝Ａｌａ又はＧ
ｌｙであり；ＨＣＤＲ２は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8（配列番号２６６）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｉｌｅ又はＬｅｕ、Ｘ2＝Ｓｅｒ、Ｘ3＝Ｇｌｙ、Ｔ
ｙｒ又はＡｒｇ、Ｘ4＝Ｓｅｒ、Ａｓｐ又はＴｈｒ、Ｘ5＝Ｇｌｙ又はＳｅｒ、Ｘ6＝Ｇｌ
ｙ、Ｓｅｒ又はＶａｌ、Ｘ7＝Ｓｅｒ又はＡｓｎ、そしてＸ8＝Ｔｈｒ、Ｌｙｓ又はＩｌｅであり；ＨＣＤＲ３は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11−
Ｘ12−Ｘ13−Ｘ14−Ｘ15−Ｘ16−Ｘ17−Ｘ18（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ａｌａ、Ｘ2＝Ｌｙｓ、Ｘ3＝Ａｓｐ、Ｇｌｕ又はＴｒｐ、Ｘ4＝Ｇｌｙ又はＡｒｇ、Ｘ5＝Ｌｅｕ、Ｔｈｒ又はＡｒｇ、Ｘ6＝Ｇｌｙ、Ａｒｇ又はＳｅｒ、Ｘ7＝Ｉｌｅ又
はＧｌｙ、Ｘ8＝Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＴｙｒ、Ｘ9＝Ｉｌｅ、Ａｓｐ又はＰｈｅ、Ｘ10＝Ａｒｇ、Ｔｙｒ又はＡｓｐ、Ｘ11＝Ｐｒｏ、Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ12＝Ａｒｇであるか又は存在せず、Ｘ13＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ14＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ15＝Ｇｌｙであるか又は存在せず、Ｘ16＝Ｌｅｕであるか又は存在せず、Ｘ17＝Ａｓｐであるか又は存在せず、そしてＸ18＝Ｖａｌであるか又は存在せず；ＬＣＤＲ１は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11（配列番号２６８）の
アミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｎ、Ｘ2＝Ａｓｐ、Ｓｅｒ又はＶａｌ、Ｘ3＝Ｉｌｅ
又はＬｅｕ、Ｘ4＝Ｓｅｒ、Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ5＝Ａｓｎ、Ｔｙｒ又はＩｌｅ、Ｘ6＝
Ｔｒｐ、Ｓｅｒ又はＴｙｒ；Ｘ7＝Ｉｌｅであるか又は存在せず；Ｘ8＝Ｇｌｙであるか又は存在せず；Ｘ9＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；Ｘ10＝Ａｓｎであるか又は存在せず；
そしてＸ11＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；ＬＣＤＲ２は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3（配列番号２
６９）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｌｅｕ、Ａｌａ又はＶａｌ、Ｘ2＝Ａｌａ又はＧｌｙ、そしてＸ3＝Ｓｅｒであり；そしてＬＣＤＲ３は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6
−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9（配列番号２７０）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｎ又はＭｅｔ、Ｘ2＝Ｇｌｎ、Ｘ3＝Ａｌａ又はＴｙｒ、Ｘ4＝Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ5＝Ｇｌｎ又はＳｅｒ、Ｘ6＝Ｔｈｒ、Ｐｈｅ又はＨｉｓ、Ｘ7＝Ｐｒｏ、Ｘ8＝Ｔｙｒ、Ｉｌｅ又はＴｒｐ、
そしてＸ9＝Ｔｈｒである。
【００２３】
より特定の実施態様において、ＨＣＤＲ１は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−
Ｘ8（配列番号２６５）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｙ；Ｘ2＝Ｐｈｅ；Ｘ3＝Ｔ
ｈｒ；Ｘ4＝Ｐｈｅ；Ｘ5＝Ａｒｇ；Ｘ6＝Ａｓｐ又はＳｅｒ；Ｘ7＝Ｔｙｒ；そしてＸ8＝
Ａｌａ又はＧｌｙであり；ＨＣＤＲ２は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8（配列番号２６６）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｉｌｅ、Ｘ2＝Ｓｅｒ、Ｘ3＝Ｇｌｙ又
はＴｙｒ、Ｘ4＝Ｓｅｒ又はＴｈｒ、Ｘ5＝Ｇｌｙ、Ｘ6＝Ｇｌｙ又はＳｅｒ、Ｘ7＝Ａｓｎ、そしてＸ8＝Ｔｈｒ又はＬｙｓであり；ＨＣＤＲ３は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6
−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11−Ｘ12−Ｘ13−Ｘ14−Ｘ15−Ｘ16−Ｘ17−Ｘ18（配列番号
２６７）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ａｌａ、Ｘ2＝Ｌｙｓ、Ｘ3＝Ａｓｐ又はＧｌ
ｕ、Ｘ4＝Ｇｌｙ又はＡｒｇ、Ｘ5＝Ｌｅｕ又はＡｒｇ、Ｘ6＝Ｇｌｙ又はＳｅｒ、Ｘ7＝Ｉｌｅ又はＧｌｙ、Ｘ8＝Ｔｈｒ又はＰｈｅ、Ｘ9＝Ｉｌｅ又はＡｓｐ、Ｘ10＝Ａｒｇ又はＴｙｒ、Ｘ11＝Ｐｒｏであるか又は存在せず、Ｘ12＝Ａｒｇであるか又は存在せず、Ｘ13＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ14＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ15＝Ｇｌｙであるか又は存在せず、Ｘ16＝Ｌｅｕであるか又は存在せず、Ｘ17＝Ａｓｐであるか又は存在せず、そしてＸ18＝Ｖａｌであるか又は存在せず；ＬＣＤＲ１は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11（配列番号２６８）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｎ、Ｘ2＝Ｓｅｒ又はＶａｌ、Ｘ3＝Ｉｌｅ又はＬｅｕ、Ｘ4＝Ｌｅｕ又はＡｓｎ、
Ｘ5＝Ａｓｎ又はＴｙｒ、Ｘ6＝Ｓｅｒ又はＴｙｒ；Ｘ7＝Ｉｌｅであるか又は存在せず；
Ｘ8＝Ｇｌｙであるか又は存在せず；Ｘ9＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；Ｘ10＝Ａｓｎであるか又は存在せず；そしてＸ11＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；ＬＣＤＲ２は式Ｘ1−
Ｘ2−Ｘ3（配列番号２６９）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｌｅｕ又はＡｌａ、Ｘ2＝Ａｌａ又はＧｌｙ、そしてＸ3＝Ｓｅｒであり；そしてＬＣＤＲ３は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9（配列番号２７０）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌ
ｎ又はＭｅｔ、Ｘ2＝Ｇｌｎ、Ｘ3＝Ａｌａ又はＴｙｒ、Ｘ4＝Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ5＝Ｇｌｎ又はＳｅｒ、Ｘ6＝Ｔｈｒ又はＨｉｓ、Ｘ7＝Ｐｒｏ、Ｘ8＝Ｔｙｒ又はＴｒｐ、そし
てＸ9＝Ｔｈｒである。
【００２４】
別のより特定の実施態様において、ＨＣＤＲ１は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8（配列番号２６５）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｙ；Ｘ2＝Ｐｈｅ；Ｘ3
＝Ｔｈｒ；Ｘ4＝Ｐｈｅ；Ｘ5＝Ａｓｐ又はＡｒｇ；Ｘ6＝Ａｓｐ；Ｘ7＝Ｔｙｒ；そしてＸ8＝Ａｌａであり；ＨＣＤＲ２は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8（配列番号
２６６）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｉｌｅ又はＬｅｕ、Ｘ2＝Ｓｅｒ、Ｘ3＝Ｇｌ
ｙ又はＡｒｇ、Ｘ4＝Ｓｅｒ又はＴｈｒ、Ｘ5＝Ｇｌｙ又はＳｅｒ、Ｘ6＝Ｇｌｙ又はＶａ
ｌ、Ｘ7＝Ｓｅｒ又はＡｓｎ、そしてＸ8＝Ｔｈｒ又はＩｌｅであり；ＨＣＤＲ３は式Ｘ1
−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11−Ｘ12−Ｘ13−Ｘ14−Ｘ15−Ｘ16−Ｘ17−Ｘ18（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ａｌａ、Ｘ2＝Ｌｙｓ、Ｘ3＝Ａｓｐ又はＴｒｐ、Ｘ4＝Ｇｌｙ又はＡｒｇ、Ｘ5＝Ｌｅｕ又はＴｈｒ、Ｘ6＝Ａｒｇ又はＳｅｒ、Ｘ7＝Ｉｌｅ又はＧｌｙ、Ｘ8＝Ｔｈｒ又はＴｙｒ、Ｘ9＝Ｉｌｅ又はＰ
ｈｅ、Ｘ10＝Ａｒｇ又はＡｓｐ、Ｘ11＝Ｐｒｏ、Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ12＝Ａｒｇであるか又は存在せず、Ｘ13＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ14＝Ｔｙｒであるか又は存在せず、Ｘ15＝Ｇｌｙであるか又は存在せず、Ｘ16＝Ｌｅｕであるか又は存在せず、Ｘ17＝Ａｓｐであるか又は存在せず、そしてＸ18＝Ｖａｌであるか又は存在せず；ＬＣＤＲ１は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−Ｘ10−Ｘ11（配列番号２６
８）のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｎ、Ｘ2＝Ａｓｐ又はＳｅｒ、Ｘ3＝Ｉｌｅ又
はＬｅｕ、Ｘ4＝Ｓｅｒ又はＬｅｕ、Ｘ5＝Ｔｙｒ又はＩｌｅ、Ｘ6＝Ｔｒｐ又はＳｅｒ；
Ｘ7＝Ｉｌｅであるか又は存在せず；Ｘ8＝Ｇｌｙであるか又は存在せず；Ｘ9＝Ｔｙｒで
あるか又は存在せず；Ｘ10＝Ａｓｎであるか又は存在せず；そしてＸ11＝Ｔｙｒであるか又は存在せず；ＬＣＤＲ２は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3（配列番号２６９）のアミノ酸配列を含み
、式中Ｘ1＝Ｌｅｕ又はＶａｌ、Ｘ2＝Ａｌａ又はＧｌｙ、そしてＸ3＝Ｓｅｒであり；そ
してＬＣＤＲ３は式Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9（配列番号２７０）
のアミノ酸配列を含み、式中Ｘ1＝Ｇｌｎ又はＭｅｔ、Ｘ2＝Ｇｌｎ、Ｘ3＝Ａｌａ、Ｘ4＝Ｌｅｕ又はＡｓｎ、Ｘ5＝Ｇｌｎ又はＳｅｒ、Ｘ6＝Ｔｈｒ又はＰｈｅ、Ｘ7＝Ｐｒｏ、Ｘ8
＝Ｔｙｒ又はＩｌｅ、そしてＸ9＝Ｔｈｒである。
【００２５】
第九の局面において、本発明は、ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ対からのＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３配列を含む抗体又は抗原結合フラグメントを提供し、ここでＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列は、配列番号１６２／１６４、２１０／２１２及び１８／２０からなる群より選択される。より特定の実施態様において、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列は、ＨＣＶＲ配列番号１６２及びＬＣＶＲ配列番号１６４に含有される配列である。別のより特定の実施態様において、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列は、ＨＣＶＲ配列番号１８及びＬＣＶＲ配列番号２０に含有される配列である。さらに別の特定の実施態様において、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列は、ＨＣＶＲ配列番号２１０及びＬＣＶＲ配列番号２１２に含有される配列である。
【００２６】
本発明は、改変されたグリコシル化パターンを有する抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体を包含する。いくつかの適用では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための改変、又は例えば抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）機能を増大させるためにオリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠失した抗体が有用であるかもしれない（Ｓｈｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３を参照のこと。他の適用では、ガラクトシル化の改変が、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を改変するために行われ得る。
【００２７】
第十の局面において、本発明は、本発明の核酸分子を有する組み換えベクター、及びこのようなベクターが含まれている宿主細胞を提供し、本発明の宿主細胞を培養することにより得られる本発明の抗体又は抗原結合フラグメントを製造する方法も同様である。本宿主細胞は、原核細胞でも真核細胞でもよく、好ましくは宿主細胞はＥ．ｃｏｌｉ細胞又は哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞である。
【００２８】
第十一の局面において、本発明は、ｈＩＬ−４Ｒに特異的に結合する組み換えヒト抗体及び許容しうる担体を含む組成物を特徴とする。
【００２９】
第十二の局面において、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合部分を使用してｈＩＬ−４活性を阻害する方法を特徴とする。特定の実施態様において、本発明の抗体はまた、ｈＩＬ−１３／ｈＩＬ−１３Ｒ１複合体のｈＩＬ−４Ｒへの結合を遮断する。一実施態様において、本方法は、ｈＩＬ−４又はｈＩＬ−４／ｈＩＬ−１３活性が阻害されるようにｈＩＬ−４Ｒを本発明の抗体又はその抗原結合部分と接触させることを含む。別の実施態様において、本方法は、本発明の抗体又はその抗原結合部分を、ｈＩＬ−４又はｈＩＬ−４／ｈＩＬ−１３活性の阻害により軽減される障害に罹患したヒト被験体に投与することを含む。処置される障害は、ｈＩＬ−４又はｈＩＬ−４／ｈＩＬ−１３活性の除去、阻害又は低減により改善、軽減、抑制又は予防されるいずれかの疾患又は状態である。
【００３０】
本発明の抗体又は抗体フラグメントにより処置されるＩＬ−４関連障害としては、例えば関節炎（化膿性関節炎を含む）、疱疹状疾患（ｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ）、慢性特発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕化、ウィップル病、良性前立腺肥大、肺障害、例えば軽度、中程度又は重度の喘息、炎症性障害、例えば炎症性腸疾患、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ・ストラウス症候群、グレーブズ病、子癇前症、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、及びネフローゼが挙げられる。
【００３１】
他の目的及び利点は、次の詳細な説明を検討することから明らかとなるだろう。
【００３２】
詳細な説明
本発明の方法を説明する前に、当然のことながら、本発明は記載される特定の方法及び
実験条件に限定されず、そのようなものとして方法及び条件は変動し得る。また当然のことながら、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用される用語は、特定の実施態様を記載する目的のためのみのものであって、限定することを意図されない。
【００３３】
そうではないと定義されていなければ、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載される方法及び材料と同様か又は等価ないずれの方法及び材料も本発明の実施又は試験において使用することができるが、好ましい方法及び材料をここで記載する。
【００３４】
定義
本明細書で使用される用語「ヒトＩＬ４Ｒ」（ｈＩＬ−４Ｒ）は、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、ＩＬ−４Ｒα（配列番号２７４）に特異的に結合するヒトサイトカイン受容体を指すことを意図される。用語「ヒトインターロイキン−１３」（ｈＩＬ−１３）は、ＩＬ−１３受容体に特異的に結合するサイトカインを指し、そして「ｈＩＬ−１３／ｈＩＬ−１３Ｒ１複合体」は、ｈＩＬ−１３Ｒ１複合体にｈＩＬ−１３が結合することにより形成される複合体を指し、この複合体はｈＩＬ−４受容体に結合して生物学的活性を開始する。
【００３５】
本明細書で使用される用語「抗体」は、ジスルフィド結合で相互連結された、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子を指すことを意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ又はＶＨ）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ又はＶＬ）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域とともに組み込まれている相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分され得る。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。
【００３６】
本明細書で使用される、用語抗体の「抗原結合部分」（又は簡単に「抗体部分」又は「抗体フラグメント」）は、抗原（例えば、ｈＩＬ−４Ｒ）に特異的に結合する能力を保持している、抗体の１つ又はそれ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原に結合する機能は全長抗体のフラグメントにより果たされ得ることが示されている。用語抗体の「抗原結合部分」に包含される結合フラグメントの例には、（ｉ）  Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ１及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント；（ｉｉ）  Ｆ（ａｂ'）2フラグメント、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦ（ａｂ）’フラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）  ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）  抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）  ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ２４１：５４４−５４６）、これはＶＨドメインからなる；並びに（ｖｉ）  ＣＤＲが含まれる。さらに、Ｆｖフラグメント、ＶＬ及びＶＨの２つのドメインは別々の遺伝子でコードされるが、これらは組み換え方法を使用して、ＶＬ及びＶＨ領域対が一価の分子を形成するようにそれらを単一の連続した鎖にすることができる合成リンカーにより結合され得る（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照のこと）。このような単鎖抗体もまた、用語抗体の「抗原結合部分」に包含されることを意図される。単鎖抗体の他の形態（例えば二重特異性抗体）も包含される（
例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８を参照のこと）。
【００３７】
本明細書で使用される「中和」抗体又は「遮断」抗体は、ｈＩＬ−４Ｒへのその結合がｈＩＬ−４及び／又はｈＩＬ−１３の生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すことを意図される。ｈＩＬ−４及び／又はＩＬ−１３の生物学的活性のこの阻害は、ｈＩＬ−４及び／又はＩＬ−１３誘導細胞活性化並びにｈＩＬ−４ＲへのｈＩＬ−４の結合のような、当該分野で公知のｈＩＬ−４及び／又はｈＩＬ−１３生物活性の１つ又はそれ以上の指標を測定することにより評価することができる（以下の実施例を参照のこと）。
【００３８】
「ＣＤＲ」又は相補性決定領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域内に点在する超可変性の領域である。本発明の抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体又はフラグメントの様々な実施態様において、ＦＲはヒト生殖系列配列と同一であってもよいし、天然若しくは人工的に改変されていてもよい。
【００３９】
本明細書で使用される用語「表面プラズモン共鳴」は、例えばＢＩＡＣＯＲＥTMシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより実時間相互作用分析を可能にする光学現象を指す。
【００４０】
用語「エピトープ」は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域における特定の抗原結合部位と相互作用する抗原決定基  である。単一の抗原が１つより多くのエピトープを有していてもよい。エピトープは立体構造的であっても線状でもよい。立体構造的エピトープは、線状ポリペプチド鎖の異なる部分から空間的に並置されたアミノ酸により生成される。線状エピトープはポリペプチド鎖において隣接するアミノ酸残基により生成されるものである。特定の状況では、エピトープは糖類、ホスホリル基、又はスルホニル基の部分を抗原上に含み得る。
【００４１】
核酸又はそのフラグメントに言及する場合の用語「実質的な同一性」又は「実質的に同一」は、適切なヌクレオチド挿入又は欠失を含んで別の核酸（又はその相補鎖）と最適に整列される場合に、以下に考察されるようにいずれかの周知の配列同一性アルゴリズム、例えばＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ又はＧａｐにより測定された場合に少なくとも約９５％、そしてより好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％のヌクレオチド塩基においてヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。
【００４２】
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的な類似性」又は「実質的に類似の」は、２つのペプチド配列が、例えばプログラムＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴによりデフォルトギャップ重みを使用して最適に整列された場合に、少なくとも９５％の配列同一性、なおより好ましくは少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基位置は保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似した化学特性（例えば電荷又は疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換されているものである。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変更しない。２つ又はそれ以上のアミノ酸配列が互いに保存的置換により異なる場合、配列同一性パーセント又は類似性度は、その置換の保存適性質に関して補正するために上方に調整され得る。この調整を行う手段は当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照のこと。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸のグループの例には、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；（２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリン及びトレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、
及びトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及びヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸が含まれ、そして（７）硫黄含有側鎖はシステイン及びメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換グループは：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸及びアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列（ｌｏｇ−ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ  ｍａｔｒｉｘ）において正の値を有するいずれかの変化である。「中程度に保存的な」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負でない値を有するいずれかの変化である。
【００４３】
ポリペプチドについての配列類似性（配列同一性とも呼ばれる）は、典型的には配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、種々の置換欠失及び他の改変（保存的アミノ酸置換を含む）に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似の配列を対応させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアはＧａｐ及びＢｅｓｔｆｉｔのようなプログラムを含み、これらは密接に関連するポリペプチド間（例えば異なる生物種由来の相同ポリペプチド又は野生型タンパク質とその変異体との間）の配列相同性又は配列同一性を決定するためにデフォルトパラメータを用いて使用することができる。例えばＧＣＧバージョン６．１を参照のこと。ポリペプチド配列はまた、デフォルト又は推奨のパラメータを使用するＦＡＳＴＡを使用して比較することができ、ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最高のオーバーラップの領域の整列及び配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）前出）。本発明の配列を様々な生物由来の多数の配列を含むデータベースに対して比較する場合に好ましい別のアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰ又はＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。
【００４４】
ヒト抗体の製造
ヒト抗体を生成する方法としては、例えばＵＳ  ６，５９６，５４１、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１）、ＵＳ  ５，５４５，８０７、ＵＳ  ６，７８７，６３７に記載される方法が挙げられる。
【００４５】
齧歯動物を当該分野で公知のいずれかの方法により免疫することができる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  １９８８  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；Ｍａｌｉｋ  ａｎｄ  Ｌｉｌｌｅｈｏｊ  （１９９４）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＣＡを参照のこと）。本発明の抗体は、好ましくはＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥTM  技術（ＵＳ６，５９６，５４１）を使用して製造される。内因性免疫グロブリン重鎖及び軽鎖可変領域が対応するヒト可変領域で置き換えられているトランスジェニックマウスを、目的の抗原で攻撃し、そして抗体を発現するマウスからリンパ球（例えばＢ細胞）を回収する。リンパ球を骨髄腫細胞株と融合させて不死ハイブリドーマ細胞株を製造し得、そしてこのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニング、そして選択し、目的の抗原に対して特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定する。重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離して、重鎖及び軽鎖の所望のアイソタイプ定常領域に連結し得る。このような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞のような細胞で産生され得る。あるいは、抗原特異的キメラ抗体又は軽鎖及び重鎖の可変領域をコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接単離され得る。
【００４６】
抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離してヒト重鎖及び軽鎖定常領
域をコードするＤＮＡに作動可能に連結する。次いでこのＤＮＡを完全ヒト抗体を発現することができる細胞において発現させる。特定の実施態様において、細胞はＣＨＯ細胞である。
【００４７】
抗体は、補体の結合による細胞の殺傷（補体依存性細胞傷害）（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）への関与よりもむしろ、リガンド−受容体相互作用の遮断又は受容体成分相互作用の阻害において治療的に有用であり得る。抗体の定常領域は、抗体が補体を結合し、そして細胞依存性細胞傷害を媒介する能力において重要である。従って、抗体のアイソタイプは、抗体が細胞傷害を媒介することが望ましいかどうかに基づいて選択され得る。
【００４８】
ヒト免疫グロブリンはヒンジ異質性に関連する２つの形態で存在し得る。１つの形態では、約１５０〜１６０ｋＤａの安定な４つの鎖の構築物を含み、ここではダイマーが鎖間重鎖ジスルフィド結合でつなぎ合わされている。第二の形態では、ダイマーは鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、共有結合で連結された軽鎖及び重鎖から構成される約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体（ｈａｌｆ−ａｎｔｉｂｏｄｙ））。これらの形態は親和性精製後でさえ分離することが非常に困難である。種々のインタクトなＩｇＧアイソタイプにおける第二の形態の出現頻度は、限定されないが、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造的差異に起因する。実際に、ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一のアミノ酸置換は、第二の形態の出現を、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して典型的に観測されるレベルまで有意に減少させ得る（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０：１０５）。本発明は、ヒンジ、ＣＨ２又はＣＨ３領域に１つ又はそれ以上の変異を有する抗体を包含し、これは例えば所望の抗体形態の収率を改善するために製造において望ましいかもしれない。
【００４９】
最初に、ヒト可変領域及びマウス定常領域を有する高親和性キメラ抗体を単離する。以下に記載されるように、これらの抗体は、ｈＩＬ−４Ｒに対する結合親和性、ｈＩＬ−４のｈＩＬ−４Ｒに対する結合を遮断する能力、及び／又はヒトタンパク質に関する選択性を含む望ましい特徴で特徴づけられ、そしてこれらに関して選択される。マウス定常領域は、望ましいヒト定常領域と置き換えられて本発明の完全ヒト抗体、例えば野生型又は改変されたＩｇＧ４又はＩｇＧ１（例えば、配列番号２７１、２７２、２７３）を生成する。選択される定常領域は具体的な用途によって変わり得るが、高親和性抗原結合及び標的特異性の特徴は可変領域に存在する。
【００５０】
エピトープマッピング及び関連技術
特定のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ
Ｌａｎｅ（前出）に記載されるアッセイのような交差遮断（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイを行うことができる。他の方法としては、アラニンスキャニング変異体、ペプチドブロット（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８：４４３−６３）、又はペプチド切断分析が挙げられる。さらに、エピトープ切除、エピトープ抽出及び抗原の化学的改変のような方法を使用することができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ：９：４８７−４９６）。
【００５１】
改変援用プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＭＡＰ）（抗原構造ベースの抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＡＳＡＰ）としても知られる）は、同じ抗原に特異的な多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、化学的に又は酵素により改変された抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性にしたがって分類する方法である（米国特許出願公開第２００４／０１０１９２０号）。各カテゴリは、別のカテゴリで示されるエピトープと明らかに異なるか又は部分的にオーバ
ーラップしている特異エピトープを反映し得る。この技術により遺伝子学的に同一の抗体を迅速に選別することが可能となるので、遺伝子学的に異なる抗体に対して特徴付けを集中させることができる。ハイブリドーマスクリーニングに適用される場合、ＭＡＰは所望の特徴を有する稀なハイブリドーマクローンの同定を容易にし得る。ＭＡＰを使用して、本発明のｈＩＬ−４Ｒ抗体を抗体に結合する様々なエピトープのグループに選別し得る。
【００５２】
固定化抗原の構造を変更するために有用な薬剤は、酵素、例えばタンパク質分解酵素及び化学薬品である。抗原タンパク質は、バイオセンサーチップ表面又はポリスチレンビーズのいずれに固定してもよい。後者は、例えば多重ＬＵＭＩＮＥＸTM検出アッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ．、ＴＸ）のようなアッセイを用いて処理され得る。１００までの様々な型のビーズを用いて多重分析を取り扱うＬＵＭＩＮＥＸTMの能力のために、ＬＵＭＩＮＥＸTMは種々の改変を有するほとんど非限定的な抗原表面を提供し、抗体エピトーププロファイリングにおいて抗体エピトープにおけるバイオセンサーアッセイよりも改善された分解能をもたらす。
【００５３】
二重特異性（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｓ）
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、又は多重特異性であり得る。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的でもよいし、１つより多くの標的ポリペプチドに対して特異的な抗原結合ドメインを含有していてもよい。例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９を参照のこと。ヒト抗ＩＬ−４Ｒ抗体を、別の機能的分子、例えば別のペプチド又はタンパク質に連結しても、又は別の機能的分子と同時発現（ｃｏ−ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ）してもよい。例えば、抗体又はそのフラグメントは、１つ又はそれ以上の他の分子実体、例えば別の抗体又は抗体フラグメントに（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合又はその他により）連結されて、第二の結合特異性を有する二重特異性又は多重特異性抗体を生じ得る。
【００５４】
治療的投与及び製剤
本発明は、本発明の抗ＩＬ−４Ｒ抗体又はその抗原結合フラグメントを含む治療用組成物を提供する。本発明に従う治療用組成物の投与は、適切な担体、添加剤及び改善された輸送、送達、耐性などをもたらすために製剤に組み込まれる他の薬剤と共に投与される。多数の適切な製剤が、全ての薬剤師に知られる処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡにおいて見出され得る。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏、ゼリー、ろう、オイル、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性）含有小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮTM）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油及び油中水乳剤、ｃａｒｂｏｗａｘ（種々の分子量のポチエチレングリコール）乳剤、半固形ゲル、並びにｃａｒｂｏｗａｘを含有する半固形混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」  ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８−３１１も参照のこと。
【００５５】
用量は、投与される被験体の年齢及び大きさ、標的疾患、状態、投与経路などによって変わり得る。本発明の抗体が成人患者においてＩＬ−４Ｒに関連する種々の状態および疾患を処置するために使用される場合、本発明の抗体を通常は約０．０１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、又は約０．０５〜約３ｍｇ／体重ｋｇの単回用量で静脈内投与することが有利である。状態の重症度に依存して、処置の頻度及び期間は調節され得る。
【００５６】
種々の送達系が公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができ
る、例えば、リポソーム中への封入、微小粒子、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することができる組み換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ｅｔ
ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこと）。導入方法としては、限定されないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口の経路が挙げられる。本組成物は、いずれかの都合の良い経路により、例えば注入又はボーラス注射により、上皮又は粘膜内層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸の粘膜など）を通した吸収により投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤とともに投与され得る。投与は全身でも局所的でもよい。
【００５７】
本医薬組成物はまた、小胞で、特にリポソームで送達することもできる（Ｌａｎｇｅｒ
（１９９０）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｌｏｐｅｚ  Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（編）、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．３５３−３６５；Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ、同書、ｐｐ．３１７−３２７を参照のこと；一般的に同書を参照のこと。
【００５８】
特定の状況において、本医薬組成物を制御放出系で送達することができる。一実施態様において、ポンプを使用してもよい（Ｌａｎｇｅｒ、前出；Ｓｅｆｔｏｎ（１９８７）  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照のこと）。別の実施態様において、ポリマー材料を使用することができる（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ
Ｗｉｓｅ  （編）、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ  （１９７４）を参照のこと）。さらに別の実施態様において、制御放出系は、組成物の標的に近接して配置することができ、それ故、全身用量のごく一部しか必要としない  （例えばＧｏｏｄｓｏｎ、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、前出、ｖｏｌ．２、ｐｐ．１１５−１３８、１９８４を参照のこと）。他の制御放出系はＬａｎｇｅｒ（１９９０）による総説Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３において考察されている。
【００５９】
注射用調製物には、静脈内、皮下、皮内及び筋内注射、点滴などのための投薬形態が含まれ得る。これらの注射用調製物は、一般的に知られている方法により製造され得る。例えば、注射用調製物は、例えば上記の抗体又はその塩を滅菌水性媒体又は注射に従来使用される油性媒体中に溶解、懸濁又は乳化させることにより製造され得る。注射用の水性媒体としては、例えば生理食塩水、グルコース及び他の補助剤を含有する等張液などがあり、これらは適切な可溶化剤、例えばアルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ひまし油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などと組み合わせて使用され得る。油性媒体としては、例えばゴマ油、大豆油などが使用され、これらは可溶化剤、例えば安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと組み合わせて使用され得る。このようにして製造された注射剤は好ましくは適切なアンプルに充填される。
【００６０】
有利には、上記の経口又は非経口用途の医薬組成物は、活性成分の用量に適合するように適した単位用量の投薬形態に製造される。このような単位用量の投薬形態としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。含まれる上述の抗体の量は、一般的には単位用量の投薬形態あたり約５〜５００ｍｇ；特に注射剤の形態において、上述の抗体が約５〜１００ｍｇ及び他の投薬形態に関して約１０〜２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
【００６１】
単剤療法及び組み合わせ療法  本発明の抗体及び抗体フラグメントは、ＩＬ−４活性を低減することにより改善、抑制又は軽減される疾患及び障害を処置するために有用である。これらの障害には、ＩＬ−４の異常若しくは過剰な発現、又はＩＬ−４産生に対する異常な宿主応答を特徴とする障害が含まれる。本抗体又は抗体フラグメント（ｏｆ  ｔｈｅ）により処置されるＩＬ−４関連障害としては、例えば、関節炎（化膿性関節炎を含む）、疱疹状疾患、慢性特発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕化、ウィップル病、良性前立腺肥大、肺障害、例えば喘息（軽度、中程度又は重度）、炎症性障害、例えば炎症性腸疾患、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ・ストラウス症候群、グレーブズ病、子癇前症、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、アトピー性皮膚炎（ｄｅｒｍａｔａｔｉｓ）、潰瘍性大腸炎、線維症、及びネフローゼ（Ｕ．Ｓ．７，１８６，８０９を参照のこと）が挙げられる。
【００６２】
本発明は、抗ＩＬ−４Ｒ抗体又は抗体フラグメントを第二の治療剤と組み合わせて投与する組み合わせ療法を包含する。共投与（Ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）及び組み合わせ療法は、同時の投与に限定されないが、少なくとも１つの他の治療剤を患者に投与することを含む処置の過程の間に抗ＩＬ−４Ｒ抗体又は抗体フラグメントを少なくとも１回投与する処置レジメンを含む。第二の治療剤は、別のＩＬ−４アンタゴニスト、例えば別の抗体／抗体フラグメント、又は可溶性サイトカイン受容体、ＩｇＥアンタゴニスト、吸入若しくは他の適切な手段で送達され得る抗喘息治療薬（副腎皮質ステロイド、非ステロイド系薬剤、ベータアゴニスト、ロイコトリエンアンタゴニスト、キサンチン類、フルチカゾン、サルメテロール、アルブテロール）であり得る。特定の実施態様において、本発明の抗ＩＬ−４Ｒ抗体又は抗体フラグメントは、ＩＬ−１アンタゴニスト、例えばリロナセプト、又はＩＬ−１３アンタゴニストと共に投与され得る。第二の薬剤には、アレルギー炎症疾患、例えば喘息及びアレルギーのような障害を処置するための１つ又はそれ以上のロイコトリエン受容体アンタゴニストが含まれ得る。ロイコトリエン受容体アンタゴニストの例としては、限定されないが、モンテルカスト、プランルカスト、及びザフィルルカストが挙げられる。第二の薬剤には、サイトカイン阻害剤、例えばＴＮＦ（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ、ＥＮＢＲＥＬTM）、ＩＬ−９、ＩＬ−５又はＩＬ−１７アンタゴニストのうち１つ又はそれ以上が含まれ得る。
【００６３】
本発明はまた、本明細書に記載されるいずれかの抗ＩＬ−４Ｒ抗体又は抗原結合フラグメントの、疾患又は障害の処置のための医薬の製造における使用も含み、ここで疾患又は障害は、ヒトインターロイキン−４（ｈＩＬ−４）活性の除去、阻害又は低減により改善、軽減又は抑制される。このような疾患又は障害の例としては、例えば、関節炎、疱疹状疾患、慢性特発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕化、ウィップル病、良性前立腺肥大、肺障害、喘息、炎症性障害、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ・ストラウス症候群、グレーブズ病、子癇前症、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、ネフローゼ、アトピー性皮膚炎及び喘息（ａｔｈｓｍａ）が挙げられる。
【実施例】
【００６４】
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物の作り方及び使い方の完全な開示及び記載を当業者に提供するために提示されるものであり、本発明者らが自らの発明と考えるものの範囲を限定することを意図するものではない。使用される数値（例えば量、温度など）に関して正確さを保証するための努力がなされているが、いくらかの割合を実験誤差及び偏差が占めるはずである。別段示されていなければ、部は質量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、そして圧力は大気圧又は大気圧付近である。
【００６５】
実施例１．ヒトＩＬ−４受容体に対するヒト抗体の作成
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥTMマウス（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．；ＵＳ６，５９６，５４１）をヒトＩＬ−４Ｒ（ｈＩＬ−４Ｒ、配列番号２７４）、又はｈＩＬ−４Ｒ及びサル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＩＬ−４Ｒ（ｍｆＩＬ−４Ｒ、配列番号２７５）タンパク質若しくはＤＮＡの組み合わせで免疫した。最適な免疫応答を得るために、続いて動物を３〜４週ごとにブーストし、そして抗抗原応答の進行を評価するために各ブーストの１０日後に採血した。
【００６６】
マウスが最大の免疫応答に達した場合、抗体発現Ｂ細胞を採取し、そしてマウス骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを形成した。あるいは、米国特許出願公開２００７／０２８０９４５Ａ１（参照によりその全体が本明細書に具体的に加入される）において記載されるように、抗原特異的抗体を、骨髄腫細胞への融合なしに直接Ｂ細胞から単離した。安定な組み換え抗体発現ＣＨＯ細胞株を単離された適切な組換え体から樹立した。機能的に望ましいモノクローナル抗体を、ハイブリドーマ又はトランスフェクトした細胞の馴化培地を特異性、抗原結合親和性及びｈＩＬ−４のｈＩＬ−４Ｒへの結合を遮断する効力（以下に記載される）についてスクリーニングすることにより選択した。
【００６７】
いくつかの抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体を前述の方法により得、これらにはＨ４Ｈ０８３Ｐ、Ｈ４Ｈ０９４Ｐ及びＨ４Ｈ０９５Ｐ、Ｈ４Ｈ０９８Ｐ及びＨ４Ｈ０９９Ｐと命名した典型的な抗体が含まれていた。これらの典型的な抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体、及びそれらの生物学的特性を以下の実施例においてより詳細に記載する。
【００６８】
実施例２．抗原結合親和性決定
２５℃又は３７℃のいずれかで、ｈＩＬ−４Ｒに関して選択された抗体の結合親和性（ＫD）を、実時間バイオセンサー表面プラズモン共鳴アッセイ（ＢＩＡＣＯＲＥTM２００
０）を使用して決定した。手短には、抗体を、ＢＩＡＣＯＲＥTMチップへの直接カップリングにより作出したヤギ抗ｈＦｃポリクローナル抗体表面上に捕捉して、捕捉抗体表面を形成した。種々の濃度（５０ｎＭから１２．５ｎＭの範囲）のモノマーｈＩＬ−４Ｒ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）又はダイマーｈＩＬ−４Ｒ−ｍＦｃを、２５℃又は３７℃のいずれかで捕捉抗体表面上に１０μｌ／分で２．５分間注入した。抗体に対する抗原の結合及び結合複合体の解離を実時間でモニタリングした。平行解離定数（ＫD）及び解離速度定
数を、ＢＩＡ評価ソフトウェアを使用して動態解析を行うことにより確認した。ＢＩＡ評価ソフトウェアを、抗原／抗体複合体解離の半減期（Ｔ1/2）を計算するためにも使用し
た。結果を表１に示す。ＮＢ：抗体−抗原結合が実験条件下で観察されなかった。コントロール：完全ヒト抗ＩＬ−４Ｒ抗体（米国特許第７，１８６、８０９号；配列番号：１０及び１２）。
【００６９】
【表１】
2020007378.tif 000002
【００７０】
カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＩＬ−４Ｒ（ｍｆＩＬ−４Ｒ）に関して選択された抗体の２５℃又は３７℃のいずれかでの結合親和性（ＫD）もま
た、種々の濃度（１００ｎＭから２５ｎＭの範囲）のモノマーｍｆＩＬ−４Ｒ−ｍｙｃ−ｍｙｃ−ｈｉｓ（ｍｆＩＬ−４Ｒ−ｍｍｈ）又はダイマーｍｆＩＬ−４Ｒ−ｍＦｃを用いて前記の実時間バイオセンサー表面プラズモン共鳴アッセイを使用して決定した。抗体Ｈ４Ｈ０９８Ｐのみがモノマー及びダイマー両方のｍｆＩＬ−４Ｒに２５℃にてそれぞれ５５２ｎＭ及び９．０８ｎＭのＫDで結合することができた。さらに、抗体Ｈ４Ｈ０９８Ｐ
はまた、ダイマーｍｆＩＬ−４Ｒに３７℃にて２４．３ｎＭのＫDで結合した。Ｈ４Ｈ０
８３ＰはダイマーｍｆＩＬ−４Ｒに対して非常に弱い結合を有していた。
【００７１】
抗体−抗原結合親和性をＥＬＩＳＡベースの溶液競合アッセイを使用することでも評価した。手短には、９６ウェルＭＡＸＩＳＯＲＰTMプレートを最初に５μｇ／ｍｌアビジンで終夜コーティングし、続いてＢＳＡブロッキングを１時間行った。次いでアビジンでコーティングしたプレートを２５０ｎｇ／ｍｌビオチン−ｈＩＬ４とともに２時間インキュベートした。このプレートを使用して、抗体滴定サンプル溶液中の遊離ｈＩＬ−４Ｒ−ｍＦｃ（ダイマーｈＩＬ−４Ｒ）又は遊離ｈＩＬ−４Ｒ−ｍｙｃ−ｍｙｃ−ｈｉｓ（ｈＩＬ４Ｒ−ｍｍｈ、モノマーｈＩＬ４Ｒ）のいずれかを測定した。抗体滴定サンプルを作製するために、一定量２５ｐＭのｈＩＬ−４Ｒ−ｍＦｃ又は２００ｐＭのｈＩＬ−４Ｒ−ｍｍｈのいずれかを０〜約１０ｎＭの範囲の段階希釈で種々の量の抗体と予め混合し、続いて１時間室温でインキュベーションして抗体−抗原結合を平衡に到達させた。次いで平衡化サンプル溶液を、遊離ｈＩＬ−４Ｒ−ｍＦｃ又は遊離ｈＩＬ−４Ｒ−ｍｍｈのいずれかの測定のためにｈＩＬ−４でコーティングしたプレートに移した。１時間の結合の後、プレートを洗浄し、そして結合したｈＩＬ−４Ｒ−ｍＦｃを、ＨＲＰ結合マウス抗ｍＦｃポリクローナル抗体又はＨＲＰ結合ヤギ抗ｍｙｃポリクローナル抗体のいずれかを使用して検出した。ＩＣ50値を決定した（表２）。
【００７２】
【表２】
2020007378.tif 000003
【００７３】
ＥＬＩＳＡベースの溶液競合アッセイを使用して抗体のサルＩＬ−４Ｒに対する交差反応性も決定した。抗体Ｈ４Ｈ０９８Ｐは、ｍｆＩＬ−４Ｒ−ｍＦｃについて３００ｐＭのＩＣ50、そしてｍｆＩＬ−４Ｒ−ｍｍｈについて２０ｎＭのＩＣ50を示した。
【００７４】
実施例３．インビトロでのｈＩＬ−４及びｈＩＬ−１３の生物学的作用の中和
精製した抗ｈＩＬ−４Ｒ抗体のｈＩＬ−４Ｒ仲介細胞機能を中和する能力をインビトロで決定するためにヒトＳＴＡＴ６及びＳＴＡＴ６ルシフェラーゼレポーターを含有するよう操作したＨＫ２９３細胞株を使用するバイオアッセイを開発した。ｈＩＬ−４Ｒ誘導ルシフェラーゼ活性の阻害を以下のように決定した：細胞を９６ウェルプレートに培地中１×１０4細胞／ウェルで播種し、そして終夜３７℃、５％ＣＯ2でインキュベートした。段階希釈で０〜２０ｎＭの範囲の抗体タンパク質を、１０ｐＭのｈＩＬ−４又は４０ｐＭのｈＩＬ−１３のいずれかとともに細胞に加えた。次いで細胞を３７℃、５％ＣＯ2で６時
間インキュベートした。細胞応答の程度をルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で測定した。結果を表３に示す。ＮＢ：ルシフェラーゼ活性が上記の実験条件下で遮断されなかった。さらに、Ｈ４Ｈ０９８ＰはｍｆＩＬ−４Ｒ仲介細胞機能を３６０ｆＭ  ｍｆＩＬ−４の存在下で１５０ｎＭのＩＣ50で遮断することができた。
【００７５】
【表３】
2020007378.tif 000004
【配列表】
2020007378000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年10月21日(2019.10.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギー反応を処置するための、ヒトインターロイキン−４受容体（ｈＩＬ−４Ｒ）（配列番号２７４）に特異的に結合する、ヒト抗体又はその抗原結合フラグメントを含む注射用調製物であって、
ここで、前記抗体又は抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含み、ここで、
ＨＣＶＲとＬＣＶＲのアミノ酸配列が、以下：
配列番号１６２、１６４、又はそれらと少なくとも９５％の配列同一性を有する配列であって、ＨＣＶＲは、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含み、ＬＣＶＲは、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１４８、１５０、１５２で表わされるアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１５６、１５８、１６０で表わされるアミノ酸配列である配列であり、
前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ＳＴＡＴ６ルシフェラーゼバイオアッセイにより測定した場合に、３０ｐＭ若しくはそれ以下のＩＣ50でｈＩＬ−４活性を遮断する、前記注射用調製物。
【請求項２】
静脈内、皮下、皮内又は筋内に投与される、請求項１に記載の注射用調製物。
【請求項３】
滅菌水性媒体、可溶化剤、及び／又は非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項１又は２に記載の注射用調製物。
【請求項４】
油性媒体、及び／又は可溶化剤をさらに含む、請求項１又は２に記載の注射用調製物。