(57)【要約】【課題】２個以上の脂肪酸側鎖を有する、異なる脂質分子間で、量比を算出することができる、脂質プロファイリングシステム、脂質プロファイリング方法、及び脂質プロファイリングプログラムを提供する。【解決手段】脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質の、タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類、及び前記脂肪酸側鎖のイオン強度を、同じ脂質クラスに属する複数種類の脂質についてそれぞれ取得する取得部と、第１種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第２種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比を算出する、脂質量比算出部と、を備える、脂質プロファイリングシステム。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質の、タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類、及び前記脂肪酸側鎖のイオン強度を、同じ脂質クラスに属する複数種類の脂質についてそれぞれ取得する取得部と、
第１種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第２種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比を算出する、脂質量比算出部と、
を備える、脂質プロファイリングシステム。
【請求項２】
前記第１種類の脂質は、前記第１種類の脂肪酸側鎖と第２種類の脂肪酸側鎖とを有し、
前記脂質量比算出部は、
前記第１種類の脂質が有する前記第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、前記第２種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比が示す第１の補正係数と、
前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の前記量比と、
前記第１種類の脂質が有する前記第２種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第３種類の脂質が有する前記第２種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比と、
に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質との間の量比を算出する、
請求項１に記載の脂質プロファイリングシステム。
【請求項３】
前記第２種類の脂質は、前記第１種類の脂肪酸側鎖と第３種類の脂肪酸側鎖とを有し、
前記脂質量比算出部は、更に、
前記第２種類の脂質が有する前記第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、前記第３種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比が示す第２の補正係数と、
前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の前記量比と、
前記第２種類の脂質が有する前記第３種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第４種類の脂質が有する前記第３種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比と、
に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第４種類の脂質との間の量比を算出する、
請求項２に記載の脂質プロファイリングシステム。
【請求項４】
前記脂質量比算出部は、更に、
前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質との間の前記量比と、
前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第４種類の脂質との間の前記量比と、
に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質と前記第４種類の脂質との量比を算出する、
請求項３に記載の脂質プロファイリングシステム。
【請求項５】
前記第１種類の脂質の濃度を取得する濃度取得部と、
前記濃度取得部が取得した前記第１種類の脂質の濃度と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比とに基づいて、前記第２種類の脂質の濃度を算出する脂質濃度算出部と、
を更に備える請求項１に記載の脂質プロファイリングシステム。
【請求項６】
前記脂質濃度算出部は、
前記濃度取得部が取得した前記第１種類の脂質の濃度と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質との間の前記量比とに基づいて、前記第２種類の脂質の濃度及び前記第３種類の脂質の濃度を算出する、
請求項５に記載の脂質プロファイリングシステム。
【請求項７】
前記脂質濃度算出部は、
前記濃度取得部が取得した前記第１種類の脂質の濃度と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第４種類の脂質との間の前記量比とに基づいて、前記第２種類の脂質の濃度及び前記第４種類の脂質の濃度を算出する、
請求項５に記載の脂質プロファイリングシステム。
【請求項８】
前記脂質クラスが、ジアシルグリセロール、トリアシルグリセロール、フォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジン酸、フォスファチジルセリン、フォスファチジルイノシトール、及びフォスファチジルグリセロールからなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の脂質プロファイリングシステム。
【請求項９】
脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質であって、同じ脂質クラスに属する複数種類の脂質を、タンデム質量分析装置により分析するステップと、
前記タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類、及び前記脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度を、前記脂質の種類毎に取得するステップと、
第１種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第２種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比を算出する、ステップと、
を含む、脂質プロファイリング方法。
【請求項１０】
コンピュータに、
脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質であって、同じ脂質クラスに属する複数種類の脂質について、タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類、及び前記脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度を、前記脂質の種類毎に取得するステップと、
第１種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第２種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比を算出する、ステップと、
を実行させるための、脂質プロファイリングプログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂質プロファイリングシステム、脂質プロファイリング方法、及び脂質プロファイリングプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
脂質の脂肪酸側鎖は、主に飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、高度不飽和脂肪酸の３種類に大別でき、各脂質クラスによってある程度メインとなる化合物が決まっている。また、高度不飽和脂肪酸は、各グリセロリン脂質を生合成する前駆体として使用されるジグリセリド（ＤＧ）ではほとんど存在しないにも関わらず、グリセロリン脂質ではその比率が大きく上昇する。このような高度不飽和脂肪酸の比率の上昇は、生体内における脂質の質を考察する上で非常に重要である。近年の質量分析装置の高感度化により、これらグリセロリン脂質の脂肪酸側鎖を定性し、そのイオン強度を測定することが可能になっている。
例えば、特許文献１には、質量スペクトルから脂質を同定する質量分析システムが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−２２６７３０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
脂質分子の定量値は、化学合成標準品による外部検量線を作成して算出するのが一般的である。しかし、全ての脂質分子の標準品を入手することは現実的に難しいため網羅的な脂質分子の定量には至っていない。また、脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質分子はプロダクトイオン強度が脂質分子により異なるため、同じ脂質分子同士で量を比較することはできても、異なる脂質分子同士で量を比較することはできない。
【０００５】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、２個以上の脂肪酸側鎖を有する、異なる脂質分子間で、量比を算出することができる、脂質プロファイリングシステム、脂質プロファイリング方法、及び脂質プロファイリングプログラムを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一実施形態は、脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質の、タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類、及び前記脂肪酸側鎖のイオン強度を、同じ脂質クラスに属する複数種類の脂質についてそれぞれ取得する取得部と、第１種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第２種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比を算出する、脂質量比算出部と、を備える、脂質プロファイリングシステムである。
【０００７】
本発明の一実施形態は、上述の脂質プロファイリングシステムにおいて、前記第１種類の脂質は、第１種類の脂肪酸側鎖と第２種類の脂肪酸側鎖とを有し、前記脂質量比算出部は、前記第１種類の脂質が有する前記第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、前記第２種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比が示す第１の補正係数と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の前記量比と、前記第１種類の脂質が有する前記第２種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第３種類の脂質が有する前記第２種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比と、に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質との間の量比を算出する。
【０００８】
本発明の一実施形態は、上述の脂質プロファイリングシステムにおいて、前記第２種類の脂質は、前記第１種類の脂肪酸側鎖と第３種類の脂肪酸側鎖とを有し、前記脂質量比算出部は、更に、前記第２種類の脂質が有する前記第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、前記第３種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比が示す第２の補正係数と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の前記量比と、前記第２種類の脂質が有する前記第３種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第４種類の脂質が有する前記第３種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比と、に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第４種類の脂質との間の量比を算出する。
【０００９】
本発明の一実施形態は、上述の脂質プロファイリングシステムにおいて、前記脂質量比算出部は、更に、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質との間の前記量比と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第４種類の脂質との間の前記量比と、に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質と前記第４種類の脂質との量比を算出する。
【００１０】
本発明の一実施形態は、上述の脂質プロファイリングシステムにおいて、前記第１種類の脂質の濃度を取得する濃度取得部と、前記濃度取得部が取得した前記第１種類の脂質の濃度と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比とに基づいて、前記第２種類の脂質の濃度を算出する脂質濃度算出部と、を更に備える。
【００１１】
本発明の一実施形態は、上述の脂質プロファイリングシステムにおいて、前記脂質濃度算出部は、前記濃度取得部が取得した前記第１種類の脂質の濃度と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第３種類の脂質との間の前記量比とに基づいて、前記第２種類の脂質の濃度及び前記第３種類の脂質の濃度を算出する。
【００１２】
本発明の一実施形態は、上述の脂質プロファイリングシステムにおいて、前記脂質濃度算出部は、前記濃度取得部が取得した前記第１種類の脂質の濃度と、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質と前記第４種類の脂質との間の前記量比とに基づいて、前記第２種類の脂質の濃度及び前記第４種類の脂質の濃度を算出する。
【００１３】
本発明の一実施形態は、上述の脂質プロファイリングシステムにおいて、前記脂質クラスが、ジアシルグリセロール、トリアシルグリセロール、フォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジン酸、フォスファチジルセリン、フォスファチジルイノシトール、及びフォスファチジルグリセロールからなる群より選択される。
【００１４】
本発明の一実施形態は、脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質であって、同じ脂質クラスに属する複数種類の脂質を、タンデム質量分析装置により分析するステップと、前記タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類、及び前記脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度を、前記脂質の種類毎に取得するステップと、第１種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第２種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比を算出する、ステップと、を含む、脂質プロファイリング方法である。
【００１５】
本発明の一実施形態は、コンピュータに、脂肪酸側鎖を２個以上有する脂質であって、同じ脂質クラスに属する複数種類の脂質について、タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類、及び前記脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度を、前記脂質の種類毎に取得するステップと、第１種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、第２種類の脂質が有する第１種類の脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度と、の比に基づいて、前記第１種類の脂質と前記第２種類の脂質との間の量比を算出する、ステップと、を実行させるための、脂質プロファイリングプログラムである。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、２個以上の脂肪酸側鎖を有する、異なる脂質分子間で、量比を算出することができる、脂質プロファイリングシステム、脂質プロファイリング方法、及び脂質プロファイリングプログラムが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】脂質の分類を説明する図である。
【図２】脂肪酸側鎖の種類を説明する図である。
【図３】タンデム質量分析の概要を説明する図である。（Ａ）は、タンデム質量分析装置の概要を説明する図であり、（Ｂ）は、タンデム質量分析による脂質のフラグメンテーションの模式図である。
【図４】本発明の一実施形態にかかる脂質プロファイリングシステムの構成の一例を示す図である。
【図５】本発明の一実施形態にかかる脂質プロファイリングシステムの動作の一例を示す図である。
【図６】本発明の一実施形態にかかる脂質プロファイリングシステムの動作の一例を示す図である。
【図７】本発明の一実施形態にかかる脂質プロファイリングシステムの動作の具体例を示す図である。
【図８】本発明の一実施形態にかかる脂質プロファイリングシステムの検証結果の一例を示す図である。
【図９】脂質プロファイリングの具体例で用いたＭＲＭ条件を示す。
【図１０】脂質プロファイリングの具体例で算出した、各脂質クラスにおける各脂肪酸側鎖の補正係数を示す。
【図１１】脂質プロファイリングの具体例により、正常肝臓サンプルと非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏ−ｈｅｐａｔｉｔｉｓ：ＮＡＳＨ）サンプルを解析した結果を示す。
【図１２】脂質プロファイリングの具体例により、正常脳サンプルと非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏ−ｈｅｐａｔｉｔｉｓ：ＮＡＳＨ）マウスの脳サンプルを解析した結果を示す。
【図１３】脂質プロファイリングの具体例により、正常肝臓サンプルと脂肪肝サンプルを解析した結果を示す。
【図１４】脂質プロファイリングの具体例により、正常脳サンプルと非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏ−ｈｅｐａｔｉｔｉｓ：ＮＡＳＨ）マウスの脳サンプルを解析した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
［脂質］
図１は、脂質の分類を説明する図である。脂質は、アルコールと脂肪酸のエステルである単純脂質（Ｓｉｍｐｌｅ  Ｌｉｐｉｄ）、分子中にリン酸や糖を含む複合脂質（Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｌｉｐｉｄ）、単純脂質や複合脂質から加水分解によって誘導される誘導脂質（Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｌｉｐｉｄ）に大別される。
単純脂質は、グリセロール骨格、ステロール骨格又はセラミド骨格を有するものに分類される。グリセロール骨格を有する脂質は、モノアシルグリセロール（ＭＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＧ）、及びトリアシルグリセロール（ＴＧ）の脂質クラスに分類される。
複合脂質は、グリセロリン脂質とスフィンゴリン脂質に分類される。グリセロリン脂質は、フォスファチジルコリン（ＰＣ）、フォスファチジルグリセロール（ＰＧ）、フォスファチジルイノシトール（ＰＩ）、フォスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、フォスファチジン酸（ＰＡ）、フォスファチジルセリン（ＰＳ）等の脂質クラスに分類される。
【００１９】
図２は、脂質の脂肪酸側鎖の種類を説明する図である。脂肪酸側鎖は、飽和脂肪酸からなる側鎖と、不飽和脂肪酸からなる側鎖とに分類される。
【００２０】
本発明の実施形態にかかる脂質プロファイリングシステムは、２個以上の脂肪酸側鎖を有する脂質クラス（ＤＧ、ＴＧ、ＰＣ、ＰＧ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＡ、ＰＳなど）に適用可能である。
【００２１】
［タンデム質量分析］
図３は、タンデム質量分析の概要を示す図である。図３（Ａ）は、タンデム質量分析を実現するタンデム質量分析装置の概要を示す図である。質量分析（ＭＳ）法は、試料中の化合物を気体状にイオン化し、ｍ／ｚ（質量電荷比）に従って分離し、各イオンのイオン強度を測定する分析法である。タンデム質量分析装置（ＭＳ／ＭＳ）は、２台の質量分析計が直列に結合され、その間に衝突室を備えた装置である。図３（Ａ）に示すように、イオン化された試料は、第１質量分析部（Ｑ１）で特定のｍ／ｚ値のイオン（プリカーサーイオン）が選択され、衝突室（Ｑ２）でフラグメント化（フラグメンテーション）される。プリカーサーイオンのフラグメント化により生じたフラグメントイオン（プロダクトイオン）は、第２質量分析部（Ｑ３）でｍ／ｚ値に応じて分離されて、検出器で検出される。
【００２２】
図３（Ｂ）は、ジアシルグリセロール（ＤＧ）及びリン脂質（ＰＣ、ＰＥ、ＰＳ、ＰＩ、ＰＧ）におけるフラグメンテーションの模式図を示す。
【００２３】
［実施態様］
以下、図面を参照して本実施形態の脂質プロファイリングシステム１０について説明する。
図４は、本実施形態の脂質プロファイリングシステム１０の機能構成の一例を示す図である。この脂質プロファイリングシステム１０は、試料中の同じ脂質クラスに属する脂質間の量比ＬＲや濃度ＣＯを算出する。
【００２４】
図４では、タンデム質量分析装置２０により、脂質Ｌ１〜Ｌｎを含む試料が分析され、各脂質の各脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度が測定されている。
複数種類の脂質Ｌ１〜Ｌｎは、同じ脂質クラスＬＣに属し、共通のヘッドグループＨＧを有し、脂肪酸側鎖ＦＣを２個以上有する。脂質Ｌ１は、脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１），Ｌ１（ｋ２）として、脂肪酸側鎖α及び脂肪酸側鎖ｘを有している。脂質Ｌ２は、脂肪酸側鎖の種類Ｌ２（ｋ１），Ｌ２（ｋ２）として、脂肪酸側鎖α及び脂肪酸側鎖ｙを有している。脂質Ｌ３は、脂肪酸側鎖の種類Ｌ３（ｋ１），Ｌ３（ｋ２）として、脂肪酸側鎖ｚ及び脂肪酸側鎖ｘを有している。脂質Ｌｎは、脂肪酸側鎖の種類Ｌｎ（ｋ１），Ｌｎ（ｋ２）として、脂肪酸側鎖ｚ及び脂肪酸側鎖ｙを有している。
【００２５】
タンデム質量分析装置２０においては、第１質量分析部（Ｑ１）で、脂質Ｌ１〜Ｌｎのイオン化により生じたプリカーサーイオンがｍ／ｚ値に従って分離され、衝突室（Ｑ２）で分離されたプリカーサーイオンがフラグメント化されて、脂質Ｌ１〜Ｌｎの各脂肪酸側鎖に由来するプロダクトイオンＬ１（ｐ１）〜Ｌ１（ｐ２）がそれぞれ生成される。第２質量分析部（Ｑ３）では、プロダクトイオンＬ１（ｐ１）〜Ｌ１（ｐ２）がｍ／ｚ値に従って分離され、図示しない検出器で各プロダクトイオンのイオン強度Ｌ１（ｉ１）〜Ｌｎ（ｉ２）が検出される。脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１）〜Ｌｎ（ｋ２）は、プロダクトイオンＬ１（ｐ１）〜Ｌ１（ｐ２）の各ｍ／ｚ値に基づいて同定される。すなわち、脂質Ｌ１は、プロダクトイオンＬ１（ｐ１），Ｌ１（ｐ２）の各ｍ／ｚ値に基づいて、脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１），Ｌｎ（ｋ２）として、脂肪酸側鎖α，ｘを有していると同定される（Ｌ１（α）、Ｌ１（ｘ））。脂質Ｌ２〜Ｌｎについても同様に、脂肪酸側鎖の種類が同定される。
【００２６】
前記のように同定された脂質Ｌ１〜Ｌｎの各脂肪酸側鎖の種類及びプロダクトイオン強度Ｌ１（ｋ１，ｉ１）〜Ｌｎ（ｋ２，ｉ２）は、脂質プロファイリングシステム１０に入力され、脂質プロファイリングシステム１０により脂質Ｌ１〜Ｌｎ間の量比ＬＲ、及び脂質Ｌ１〜Ｌｎの濃度ＣＯ１〜ＣＯｎが算出される。
【００２７】
［脂質プロファイリングシステム１０の機能構成及び動作］
脂質プロファイリングシステム１０の具体的な機能構成及び動作について説明する。
脂質プロファイリングシステム１０は、取得部１１０と、脂質量比算出部１２０と、脂質濃度取得部１３０、脂質濃度算出部１４０と、出力部１５０と、記憶部１６０とを備える。なお、この一例においては、脂質プロファイリングシステム１０が記憶部１６０を内蔵するものとして説明するが、これに限られない。例えば、記憶部１６０がクラウドサーバなどによって実現されるなど、脂質プロファイリングシステム１０と記憶部１６０とが別々の装置として構成されてもよい。
【００２８】
図５は、本実施形態の脂質プロファイリングシステム１０の動作の一例を示す図である。以下、図４及び図５を参照しつつ、脂質プロファイリングシステム１０の動作の一例について説明する。なお、以下の例では、３種類の脂質Ｌ１〜Ｌ３の量比を求める場合について記載するが、これに限定されず、脂質Ｌ１〜Ｌｎの任意の脂質について同様に脂質間の量比を求めることができる。
【００２９】
（ステップＳ１０）
取得部１１０は、脂肪酸側鎖ＦＣを２個以上有する脂質Ｌ１〜Ｌ３の、タンデム質量分析により得られた、前記脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１）〜Ｌ３（ｋ２）、及び前記脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉ１）〜Ｌ３（ｉ２）を、同じ脂質クラスＬＣに属する複数種類の脂質Ｌ１〜Ｌ３について、それぞれ取得する。
【００３０】
取得部１１０が取得する脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１）〜Ｌ３（ｋ２）は、プロダクトイオンＬ１（ｐ１）〜Ｌ３（ｐ２）の各ｍ／ｚ値であってもよい。この場合、記憶部１６０は、プロダクトイオンの各ｍ／ｚ値から、脂肪酸の種類Ｌ１（ｋ１）〜Ｌ３（ｋ２）を参照する脂肪酸種類参照テーブルを記憶していてもよい。
【００３１】
取得部１１０が取得する脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１）〜Ｌ３（ｋ２）、及び脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉ１）〜Ｌ３（ｉ２）は、脂質プロファイリングシステム１０に接続された他の装置などから供給される。脂質プロファイリングシステム１０に接続された他の装置には、例えば、タンデム質量分析装置２０や、脂質プロファイリングシステム１０の上位のコンピュータ装置や、脂質プロファイリングシステム１０のキーボードやタッチパネルなどの操作デバイスが含まれる（いずれも不図示）。
取得部１１０は、取得した脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１）〜Ｌ３（ｋ２）、及び脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉ１）〜Ｌ３（ｉ２）を脂質量比算出部１２０に出力する。
【００３２】
（ステップＳ２０）
脂質量比算出部１２０は、第１種類の脂質Ｌ１が有する第１種類の脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉα）と、第２種類の脂質Ｌ２が有する第１種類の脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度Ｌ２（ｉα）と、の比を算出する。
【００３３】
脂質Ｌ１は、脂肪酸側鎖の種類Ｌ１（ｋ１）として、脂肪酸側鎖αを有しており、そのプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉ１）をＬ１（ｉα）とする。脂質Ｌ２は、脂肪酸側鎖の種類Ｌ２（ｋ１）として、脂肪酸側鎖αを有しており、そのプロダクトイオン強度Ｌ２（ｉ１）をＬ２（ｉα）とする。脂質量比算出部１２０は、第１種類の脂肪酸側鎖として脂肪酸側鎖αを有する脂質（脂質Ｌ１，脂質Ｌ２）間で、当該脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度の比（Ｌ２（ｉα）／Ｌ１（ｉα））を算出する。
【００３４】
（ステップＳ３０）
脂質量比算出部１２０は、前記ステップＳ２０で算出した、脂肪酸側鎖αを有する脂質間（Ｌ１，Ｌ２）での脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度の比（Ｌ２（ｉα）／Ｌ１（ｉα））に基づいて、第１種類の脂質Ｌ１と第２種類の脂質Ｌ２との間の量比ＬＲ（α）を算出する。
【００３５】
同じ脂質クラスＬＣに属する脂質Ｌ１，Ｌ２から生じた同じ脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度の比は、脂質Ｌ１，脂質Ｌ２の量比に比例している。そのため、脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度比（Ｌ２（ｉα）／Ｌ１（ｉα））から、脂質Ｌ１，Ｌ２の量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２）を算出することができる。すなわち、ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２）＝Ｌ２（ｉα）／Ｌ１（ｉα）として算出することができる。
【００３６】
（ステップＳ４０）
第１種類の脂質Ｌ１は、第１種類の脂肪酸側鎖Ｌ１（ｋ１）として脂肪酸側鎖αを有しており、そのプロダクトイオン強度度Ｌ１（ｉ１）をＬ１（ｉα）とする。脂質Ｌ１は、さらに、第２種類の脂肪酸側鎖Ｌ１（ｋ２）として脂肪酸側鎖ｘを有しおり、そのプロダクトイオン強度度Ｌ１（ｉ１）をＬ１（ｉｘ）とする。
ステップＳ４０では、脂質量比算出部１２０は、脂質Ｌ１が有する第１種類の脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉα）と、第２種類の脂肪酸側鎖ｘのプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉｘ）と、の比が示す第１の補正係数ＣＦ（α，ｘ）を算出する。
補正係数ＣＦ（α，ｘ）は、脂質Ｌ１における脂肪酸側鎖αのプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉα）に対する脂肪酸側鎖ｘのプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉｘ）の比（Ｌ１（ｉｘ）／Ｌ１（ｉα））により算出される。
【００３７】
（ステップＳ５０）
脂質量比算出部１２０は、ステップＳ４０で算出した補正係数ＣＦ（α，ｘ）と、脂肪酸側鎖αを有する脂質Ｌ１，脂質Ｌ２間の量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２）と、脂質Ｌ１が有する第２種類の脂肪酸側鎖ｘのプロダクトイオン強度Ｌ１（ｉｘ）と第３種類の脂質Ｌ３が有する脂肪酸側鎖ｘのプロダクトイオン強度Ｌ３（ｉｘ）との比（Ｌ３（ｉｘ）／Ｌ１（ｉｘ））と、に基づいて、脂質Ｌ１と脂質Ｌ２と脂質Ｌ３との間の量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３）を算出する。
【００３８】
（ステップＳ５５）
脂質Ｌ２の脂肪酸側鎖Ｌ２（ｋ２）と脂質Ｌ３の脂肪酸側鎖Ｌ３（ｋ１）が同じ種類の脂肪酸側鎖である場合（すなわち、ｙ＝ｚ）、脂質Ｌ２が有する脂肪酸側鎖α，ｙのプロダクトイオン強度Ｌ２（ｉα），Ｌ２（ｉｙ）と、の比が示す補正係数ＣＦ（α，ｙ）を算出し、前記補正係数ＣＦ（α，ｙ）と、量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２）と、プロダクトイン強度の比（Ｌ３（ｉｚ）／Ｌ２（ｉｙ））（ただし、ｙ＝ｚ）と、に基づいて、脂質Ｌ１と脂質Ｌ２と脂質Ｌ３との間の量比ＬＲ’（Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３）を算出してもよい。次いで、ステップ５０で算出した量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３）と、前記量比ＬＲ’（Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３）とを比較し、その差が閾値以下であれば、ステップＳ６０に進み、その差が閾値以上であれば、ステップＳ４０に戻って、補正係数ＣＦ（α，ｘ）、補正係数ＣＦ（α，ｙ）の値を調整してもよい。各補正係数の調整には、最尤法を用いてもよい。
【００３９】
（ステップＳ６０）
ステップＳ６０では、ステップＳ５０で算出した脂質間量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３）を出力部１５０に出力し、処理を終了する。
【００４０】
上記では、脂質Ｌ１，脂質Ｌ２，脂質Ｌ３の３種類の脂質間の量比を算出したが、４種類以上の脂質間で量比を算出する場合には、ステップＳ１０で、脂質Ｌ１〜Ｌｎの脂肪酸側鎖の種類及び各脂肪酸側鎖のプロダクトイオン強度Ｌ１（ｋ１，ｉ１）〜Ｌｎ（ｋ２，ｉ２）を取得し、任意の３種類の脂質間でステップＳ２０〜ステップＳ５０と同様のステップを繰り返し、脂質Ｌ１〜Ｌｎ間での量比を算出すればよい。例えば、脂質Ｌｎが脂肪酸側鎖ｚ，ｙを有する場合には、ステップＳ２０及びステップＳ３０により、脂質Ｌ１，脂質Ｌ２の間の量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２）を算出し、ステップＳ４０で、脂質Ｌ２の脂肪酸側鎖αと脂肪酸側鎖ｙとのプロダクトイン強度の比から、補正係数ＣＦ（α，ｙ）を算出してもよい。次いで、ステップ５０で、補正係数ＣＦ（α，ｙ）と、脂質Ｌ１，脂質Ｌ２の間の量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２）と、脂質Ｌ２の脂肪酸側鎖ｙのプロダクトイオン強度Ｌ２（ｉｙ）と脂質Ｌｎの脂肪酸側鎖ｙのプロダクトイオン強度Ｌｎ（ｉｙ）との比と、に基づいて、脂質Ｌ１，脂質Ｌ２，脂質Ｌｎの３種類の脂質間でステップＳ２０〜ステップＳ５０を行うことにより、脂質間量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２，Ｌｎ）を算出することができる。さらに、脂質Ｌ１及び脂質Ｌ２に対する脂質Ｌ３及び脂質Ｌｎのそれぞれの量比に基づいて、脂質Ｌ１，脂質Ｌ２，脂質Ｌ３，脂質Ｌｎの量比ＬＲ（Ｌ１，Ｌ２，Ｌ３，Ｌｎ）を算出することができる。同様にして、Ｌ１〜Ｌｎの全ての脂質間の量比を算出するまで、ステップＳ２０〜ステップＳ５０を繰り返し、脂質Ｌ１〜Ｌｎの量比を算出してもよい。前記の脂質Ｌ１〜Ｌｎ間の量比の算出には、最尤法を用いてもよい。
【００４１】
本実施形態の脂質プロファイリングシステム１０は、脂質Ｌ１の濃度を取得して、脂質Ｌ２〜Ｌｎの濃度を算出する機能を有していてもよい。
図６は、本実施形態の脂質プロファイリングシステム１０の脂質濃度算出にかかる動作の一例を示す図である。以下、図４及び図６を参照しつつ、脂質プロファイリングシステム１０の脂質濃度算出にかかる動作の一例について説明する。
【００４２】
（ステップＳ１１０）
濃度取得部１３０は、第１種類の脂質Ｌ１の濃度ＣＯ１を取得する。例えば、タンデム質量分析装置２０により分析する試料に、放射線標識された標準試料として既知量の脂質Ｌ１を添加し、当該添加量を脂質Ｌ１の濃度ＣＯ１として用いることができる。
脂質濃度取得部１３０が取得する脂質Ｌ１の濃度ＣＯ１は、脂質プロファイリングシステム１０に接続された他の装置などから供給される。脂質プロファイリングシステム１０に接続された他の装置には、例えば、タンデム質量分析装置２０や、脂質プロファイリングシステム１０の上位のコンピュータ装置や、脂質プロファイリングシステム１０のキーボードやタッチパネルなどの操作デバイスが含まれる（いずれも不図示）。
脂質濃度取得部１３０は、取得した脂質Ｌ１の濃度ＣＯ１を脂質濃度算出部１４０に出力する。
【００４３】
（ステップＳ１２０）
脂質濃度算出部１４０は、脂質量比算出部１２０から、前記ステップＳ３０又はステップ５０により算出された脂質間の量比を取得する。
【００４４】
（ステップＳ１３０）
脂質濃度算出部１４０は、濃度取得部１３０が取得した脂質Ｌ１の濃度ＣＯ１と、脂質Ｌ１と脂質Ｌ２との間の量比ＬＲに基づいて、脂質Ｌ２の濃度ＣＯ２を算出する。あるいは、脂質濃度算出部１４０は、濃度取得部１３０が取得した脂質Ｌ１の濃度ＣＯ１と、脂質Ｌ１と脂質Ｌ２と脂質Ｌ３との間の量比ＬＲとに基づいて、脂質Ｌ２の濃度ＣＯ２及び脂質Ｌ３の濃度ＣＯ３を算出する。他の脂質Ｌ４〜Ｌｎについても同様に、脂質Ｌ１との濃度ＣＯ１と、脂質Ｌ１との量比から、濃度を算出することができる。
【００４５】
（ステップＳ１４０）
ステップＳ１４０では、ステップＳ１３０で算出した脂質Ｌ２〜Ｌｎの濃度を出力部１５０に出力し、処理を終了する。
【００４６】
［脂質プロファイリングシステムの具体的動作例］
以下、本実施形態の脂質プロファイリングシステムの具体的動作例について説明する。
【００４７】
図７は、脂質プロファイリング例における脂質プロファイリングシステム１０の動作の具体例を示す図である。左図のフローチャートに従い、タンデム質量分析によるプロダクトイオン強度から、最尤法等を用いて、Ｑｕａｎｔｉｔｙ  Ｒａｔｉｏ  Ｔａｂｌｅを作成する。（Ａ）は、Ｑｕａｎｔｉｔｙ  Ｒａｔｉｏ  Ｔａｂｌｅの具体例を示す。
次に、Ｑｕａｎｔｉｔｙ  Ｒａｔｉｏ  Ｔａｂｌｅに基づき、仮想的検量線（Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ  Ｃｕｒｖｅ）を作成する。（Ｂ）及び右下のグラフは、仮想的検量線の具体例を示す。右下のグラフは、脂肪酸側鎖（１８：１）のイオン強度を縦軸として、仮想的検量線を作成した図である。ここで、仮想的検量線は、定量値をソルバーで変化させながら、プロダクトイオン強度の実測値との誤差が最小になるように傾きを設定する（最小二乗法）。仮想的検量線の信頼性は、Ｒ２で判定し、Ｒ２が所定の範囲内（例えば、Ｒ２＞０．９４）であれば、左のフローチャートで「Ｃａｌｃｕｌａｔｅ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｒａｔｉｏ」に進み、前記仮想的検量線を利用して、（Ｃ）のように脂質の量比を算出する。
なお、前記仮想的検量線の傾きは、図５で説明した補正係数ＣＦに対応する。
【００４８】
タンデム質量分析による各脂質のプロダクトイオン強度の測定値から、各脂質の量比を算出する方法は、特に限定されないが、例えば、最尤法を利用することができる。以下に最尤法による脂質の量比の算出例を示す。
【００４９】
【数１】
2020139755.tif 000003
【００５０】
【数２】
2020139755.tif 000004
【００５１】
【数３】
2020139755.tif 000005
【００５２】
図８は、仮想的検量線のＲ２による仮想的検量線の検証方法について説明する図である。脂質分子の定量値が脂肪酸側鎖毎のプロダクトイオン強度と正比例の関係にあれば、（Ａ）のようにＲ２は１に収束する。ただし、実際は測定誤差などが存在するものと思われるため、（Ｂ）のような形でＲ２＞０．９４程度を許容ラインとする。（Ｃ）のように正比例していないサンプル（ＰＣ（１８：０）（１８：１））が存在する場合は、すべての検量線が０．９４以内に収束する事はない。（Ｃ）では、（１８：１）ではＲ２＞０．９４で検量線が引けているが、（１８：２）ではＲ２＜０．９４と誤差が大きく、（１８：０）では全く収束しない。
【００５３】
以上、本発明の実施形態を、図面を参照して詳述してきたが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で適宜変更を加えることができる。
【００５４】
なお、上述の各装置は内部にコンピュータを有している。そして、上述した各装置の各処理の過程は、プログラムの形式でコンピュータ読み取り可能な記録媒体に記憶されており、このプログラムをコンピュータが読み出して実行することによって、上記処理が行われる。ここでコンピュータ読み取り可能な記録媒体とは、磁気ディスク、光磁気ディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＯＭ、半導体メモリ等をいう。また、このコンピュータプログラムを通信回線によってコンピュータに配信し、この配信を受けたコンピュータが当該プログラムを実行するようにしてもよい。
【００５５】
また、上記プログラムは、前述した機能の一部を実現するためのものであってもよい。
さらに、前述した機能をコンピュータシステムにすでに記録されているプログラムとの組み合わせで実現できるもの、いわゆる差分ファイル（差分プログラム）であってもよい。
【００５６】
［脂質プロファイリングの具体例］
本実施形態の脂質プロファイリングシステム１０を用いて、脂質プロファイリングを行った具体例を以下に示す。
【００５７】
脂質プロファイリングの具体例に用いた材料及び分析方法等は以下の通りである。
【００５８】
＜化合物及び試薬＞
蒸留水（ＬＣ／ＭＳグレード）及びメタノール（ＬＣ／ＭＳグレード）を関東化学株式会社（東京、日本）から購入した。ＨＰＬＣグレードのクロロホルムをキシダ化学株式会社（大阪、日本）から購入した。全ての主な脂質クラスを含むＳＰＬＡＳＨＴＭ  ＬｉｐｉｄｏｍｉｘＴＭ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃ  Ｓｔａｎｄａｒｄ（１５：０／［Ｄ７］１８：１−ＰＡ（７ｎｇ），１５：０／［Ｄ７］１８：１−ＰＣ（１６０ｎｇ），１５：０／［Ｄ７］１８：１−ＰＥ（５ｎｇ），１５：０／［Ｄ７］１８：１−ＰＧ（３０ｎｇ），１５：０／［Ｄ７］１８：１−ＰＩ（１０ｎｇ）及び１５：０／［Ｄ７］１８：１−ＰＳ（５  ｎｇ）ｐｅｒ１μＬ  Ｍｅｔｈａｎｏｌ）を含む）を、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄ  Ｉｎｃ．（Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ，ＵＳＡ）から購入した。酢酸アンモニウムをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から購入した。二酸化炭素（９９．５％グレード，）を株式会社吉田酸素（福岡、日本）から購入し、ＳＦＣ移動相として使用した。ＤＧ（１８：０／２０：４）、ＰＥ（１８：０／２０：４）、ＰＧ（１６：０／１８：１）、ＰＳ（１８：０／１８：１）、ＰＩ（１８：０／２０：４）、及び１０種のＰＣを、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｉｎｃ．から購入した。
【００５９】
＜動物及び食餌処理＞
すべての動物のケア及び試験プロトコールは、九州大学医学部のＡｎｉｍａｌ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認され、九州大学医学部Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓの推奨されるものに従って行った。
【００６０】
＜ＭＣＤ食餌処理＞
雄Ｃ５７ＢＬ６マウス、５週齢を日本チャールス・リバー株式会社（横浜、日本）から購入し、２４℃、１２ｈ／１２ｈ明暗サイクルで維持した。急性病理モデルを、メチオニン−コリン欠乏（ＭＣＤ）の餌（オリエンタル酵母工業株式会社、東京、日本）をマウスに給餌することにより、生育させた。試験前に、全ての動物を通常の餌で１週間順応させ、水道水と適切な餌（ＭＦ  ｄｉｅｔ，オリエンタル酵母工業株式会社）に自由にアクセスできるようにした。６週齢で、マウスを２グループ（ｎ＝５）に分け、通常の餌又はＭＣＤ  ｄｉｅｔで２週間維持した。
【００６１】
＜マウス肝臓及び脳における脂質の抽出＞
２０ｍｇのマウス肝臓試料を２ｍＬのエッペンドルフチューブにそれぞれ入れた。肝臓及び脳から脂質を抽出するために、１ｍＬの氷冷メタノールを試料に加え、１分間超音波処理して、脂質を抽出した。遠心分離（１６，０００×ｇ、４℃、１分）した後、５００μＬの上清を採取し、Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ抽出法により抽出した。混合溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３：Ｈ２Ｏ＝１０：５：３（ｖ／ｖ／ｖ））を添加し、１分間ボルテックスした後、遠心分離（１６，０００×ｇ、４℃、５分）し、不純物を除去した。その後、３００μＬの下相（クロロホルム相）を他のガラスチューブに採取した。最後に、３００μＬのメタノールを、チューブに添加し、ｓｏｌｕｔｉｏｎＡを添加して、分析するまで−８０℃で保存した。
【００６２】
＜ＳＦＣ／ＱｑＧＭＳ分析＞
ＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．８０（株式会社島津製作所、京都、日本）により制御される、ＬＣＭＳ８０６０  ＱｑＱＭＳを装備したＮｅｘｅｒａ  ＵＣ  ｓｙｓｔｅｍ（ＳＦＣ）（株式会社島津製作所、京都、日本）を脂質の分離に用いた。ＤＥＡ  ｃｏｌｕｍｎ（１００ｘ３．０ｍｍ  ｉ．ｄ．，ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＣ２ＴＭ  Ｔｏｒｕｓ  ｄｉｅｔｈｙｌ  ａｍｉｎｅ，  Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．）を、分離に用いた。ＳＦＣ条件は、以下の通りとした：移動相Ａ，ＳＣＣＯ２；移動相Ｂ，９５％メタノール／５％水  ｗｉｔｈ  ０．１％（ｗ／ｖ）酢酸アンモニウム；背圧，１０ＭＰａ；カラム温度，５０℃；サンプルトレイ温度，５℃。移動相は、流速１．０ｍＬ／分でカラムに送出した。移動相の勾配プログラムは、以下の通りとした：Ａ／Ｂ＝１００／０，  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ａ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｔｏ  Ａ／Ｂ  ＝  ３０／７０  ｆｏｒ  １５  ｍｉｎ  ａｎｄ  ｈｅｌｄ  ｆｏｒ  ３  ｍｉｎ，  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ａ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｔｏ  Ａ／Ｂ  ＝  １００／０  ｆｏｒ  ０．１  ｍｉｎ，  ａｎｄ  ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ  ａｔ  Ａ／Ｂ  ＝  １００／０  ｆｏｒ  １．９  ｍｉｎ。２μＬのサンプルをオートサンプラーでインジェクトした、ＱｑＱＭＳは、最適化後に行った。ＭＲＭ条件は図９に示した。
【００６３】
＜ＭＲＭトランジション設定の最適化＞
６つの脂質クラス（ＤＧ、ＰＣ，ＰＥ、ＰＳ、ＰＧ、ＰＩ）のそれぞれのプリカーサーイオンの同定とフラグメンテーションパターンの分析は、ポジティブ又はネガティブイオンモードにおけるＳＦＣフローインジェクション分析により行った。各脂質のプリカーサーイオンを、酢酸アンモニウムの添加によるポジティブイオンモード（［Ｍ＋Ｈ］＋又は［Ｍ＋ＮＨ４］＋）及び／又はネガティブイオンモード（［Ｍ−Ｈ］−又は［Ｍ＋ＣＨ３ＣＯＯ］−）で観察した。最も豊富な付加イオンに基づいて、ＬＣＭＳ８０６０の各脂質クラスのＭＳ衝突エネルギーを最適化した。図９に、６種の脂質のＭＳ衝突エネルギーの最適化結果と、７種の脂肪酸側鎖のＭＲＭトランジション設定を示す。全てのＭＲＭトランジションを生成した後、モノイソトニックイオンの存在比を算出した。モノイソトニックイオンの存在比は、脂肪酸側鎖によって異なるからである。
【００６４】
＜化合物のアノテーション＞
ＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．８０（株式会社島津製作所、京都、日本）をＭＲＭスペクトルデータの解析のために用いた。さらに、データ（ｌｃｄフォーマット）を、ＰｒｏｔｅｏＷｉｚａｒｄ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３を用いて、ｍｚＭＬフォーマットに変換した。その後、これらのデータを、ＭＲＭＰＲＯＢＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．２６にインプットした。次いで、ＭＲＭスペクトルデータのスムージング（ｓｍｏｏｔｈｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ，ｌｉｎｅａｒ  ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｍｏｖｉｎｇ  ａｖｅｒａｇｅ；ｓｍｏｏｔｈｉｎｇ  ｌｅｖｅｌ，５  ｓｃａｎ；ｍｉｎｉｍｕｍ  ｐｅａｋ  ｗｉｄｔｈ，５  ｓｃａｎ；ｍｉｎｉｍｕｍ  ｐｅａｋ  ｈｅｉｇｈｔ，１００  ａｍｐｌｉｔｕｄｅ）を、ＭＲＭＰＲＯＢＳを用いて行った。
化合物は、基本的に、化合物のＭＲＭトランジションの全てのピークがリテンションタイム（ＲＴ）にあるときに、アノテーションした。これらのデータを用いて、各サンプルの化合物の平均値及び標準偏差を、Ｅｘｃｅｌ  ２０１３を用いて算出した。
【００６５】
＜脂質プロファイリング方法＞
２本の脂肪酸側鎖を有する脂質クラス（ＤＧ，ＰＣ，ＰＥ，ＰＳ，ＰＩ，ＰＧ）の脂質では、それぞれ２８種の化合物うち、２本の脂肪酸側鎖が同じ化合物は７種類、２本の脂肪酸側鎖が違う化合物が２１種類存在する（２８＝７＋２１）。２本の脂肪酸側鎖が違う化合物２１種類には、それぞれ２つのＭＲＭトランジションが存在し、この２つのトランジションは脂肪酸側鎖の種類によってイオン強度が異なるが、１化合物として定量値は同じである。また、２つのトランジションのイオン強度比は質量分析装置のフラグメント効率の差によって決定され、濃度によらず一定である。そのため、求めるべき２１種類の化合物の定量値（未知数）に対して、４２種類のイオン強度で化合物濃度とプロダクトイオン強度は正比例するという前提で連立方程式が組める。図７のフローチャートに従い、連立方程式より、それぞれの脂質クラスについて７種類の脂肪酸側鎖から６点の検量点をもった仮想的検量線を作成した。仮想的検量線の相関係数Ｒ２を算出し、０．９９以上であれば検量線として信頼に値するとして正式な補正係数として採用し、すべての化合物について検量線を使って量比を算出した。
標準物質として、脂質クラス毎に、同位体ラベルした（１８：１）の脂肪酸側鎖を有する化合物（Ｌｉｐｉｄｏｍｉｘ  Ｓｐｌａｓｈ，Ａｖａｎｔｉ  Ｉｎｃ．）を混合し、（１８：１）の脂肪酸側鎖のイオン強度を基準として、７種類の脂肪酸側鎖での検量線を用いて各脂肪酸側鎖の相対定量（ｍｇ／ｍｌ）を行った。図１０の棒グラフは、（１８：１）の脂肪酸側鎖を基準値１として、他の脂肪酸側鎖の補正係数を示している。
【００６６】
＜標準品との比較＞
脂肪酸側鎖が脂質のｓｎ−１，ｓｎ−２のそれぞれの位置にどの程度の割合で結合しているかは不明である。用意できた標品を用いて同様のＭＲＭトランジションで測定した結果を表１に示す。それぞれの標品はｓｎ−１，ｓｎ−２に結合している脂肪酸側鎖があらかじめ分かっているため、脂肪酸側鎖の種類と結合様式があらかじめ分かった状態でイオン強度比を求めることができる。標準品と比較すると、測定されたサンプルの通常のリン脂質はｓｎ−１に飽和脂肪酸、ｓｎ−２に不飽和脂肪酸が配置されている標準品と値が近い。特に位置異性体の標準品を用意できたＰＣ（１８：０／１８：１）、ＰＣ（１６：０／１８：１）に関しては明らかである。
【００６７】
【表１】
2020139755.tif 000006
【００６８】
＜脂質プロファイリング結果＞
脂質プロファイリングの結果を図１１及び図１２に示す。図１１は、正常肝臓とＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪肝炎：ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏ−ｈｅｐａｔｉｔｉｓ）マウスの肝臓で脂質プロファイリングを行った結果を示す。ＮＡＳＨでは、ほとんどの脂質クラスにおいて脂質量が上昇している。また、脂肪酸側鎖が1つしか結合していないリゾフォスファチジルコリン（ＬＰＣ）とリゾフォスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）の定量値も参考として掲載した。ＬＰＣとＬＰＥでは、脂肪酸側鎖はポジティブイオンモードでＭＲＭ測定をしている。注目すべきはＰＧであり、ＰＧ全体として増加しているが、パルミチン酸（１６：０）はまったく増加していない（ゆえに構成比率としては減少している）。ＮＡＳＨが肝臓のミトコンドリア不全である事を考えると、ミトコンドリア内にのみ存在するＰＧの変化はＮＡＳＨを研究する上では重要かもしれない。またＬＰＣとＬＰＥは６種類の脂肪酸側鎖のみの合計値であるが，他のリン脂質は増加しているにもかかわらず減少している。
【００６９】
図１２は、ＮＡＳＨマウスの脳抽出物で脂質プロファイリングを行った結果を示す。肝臓の時ほど顕著ではないが、リン脂質の増加と、ＬＰＣ及びＬＰＥの若干の減少が確認されたが、構成脂肪酸の組成比にはほとんど変化がない。
【００７０】
図１３及び図１４に、化合物毎の詳細な定量値を示す。定量した全ての化合物の量を全て合算したものをトータル量として図の上部に示し、その内訳の割合を図の下部に示した。
【００７１】
＜脂質プロファイリング結果の考察＞
各脂質の脂肪酸側鎖のイオン強度比の補正係数の結果（図１０）から、ＤＧの定量用トランジションにおける飽和脂肪酸（（１６：０），（１８：０））のニュートラルロスと、高度不飽和脂肪酸（（２０：４），（２２：６））のニュートラルロスを比較すると、５〜１０倍以上のイオン強度差となっている。この結果からアラキドン酸、ＤＨＡともに他の脂肪酸側鎖と比較すると非常に脱離しやすい化合物と言える。ＰＳの定量用トランジションにおける飽和脂肪酸のイオン強度と高度不飽和脂肪酸のイオン強度とでは、６〜２０倍以上のイオン強度差が存在する。また、他のグリセロリン脂質においても、ＰＳと同様に脂肪酸側鎖のイオン強度を測定しているが、ＰＣとＰＥは比較的類似の傾向を示しており、ともに（１８：２）が脱離しやすい。グリセロリン脂質の種類によって同じ脂肪酸側鎖であっても、そのイオン強度比がかなり異なる事が分かった。全体的にはグリセロリン脂質のトランジションは、ＤＧのニュートラルロスと逆の傾向となり、高度不飽和脂肪酸のイオン強度は他の脂肪酸と比較すると特にＤＨＡは低くなっている。また、あらかじめｓｎ−１，ｓｎ−２の分かっている標品を測定した結果（表１）から、同じ脂肪酸でもｓｎ−１，ｓｎ−２と位置異性体でイオン強度が逆転していることが伺える。この事実から、脂肪酸側鎖を２本有する脂質に関して、質量分析を用いる場合はｓｎ−２に結合している脂肪酸側鎖は非常に脱離しやすい傾向がある。すなわち、高度不飽和脂肪酸は通常の生体内ではｓｎ−２に結合しているため、脂肪酸側鎖の種類以外の部分でもプロダクトイオン強度が高くなったと考えられる。この事実は、通常、生体内に存在している脂質は飽和脂肪酸がｓｎ−１に、不飽和脂肪酸はｓｎ−２に結合している事実と合致する。実際に（１８：０）／（１８：１）と（１６：０）／（１８：１）を脂肪酸側鎖として結合しているＰＣの標準品のイオン強度比と、生体サンプルのイオン強度比とを比較すると、ｓｎ−１，ｓｎ−２の結合様式が明確に分かる。そのイオン強度比から飽和脂肪酸がｓｎ−１に、不飽和脂肪酸がｓｎ−２に結合していることが証明された。ＰＣ（１６：０／１８：０）に関しては、標準品と生体サンプルのイオン強度比に開きがあることから、生体サンプルのＰＣ（１６：０／１８：０）は必ずしもｓｎ−１が１６：０とはなっておらず、半数程度がｓｎ−１に１８：０が結合しているものと思われる。このように、生体サンプルのみでもｓｎ−１，ｓｎ−２のどちらに脂肪酸側鎖が結合しているかは不明のまま定量を行うことになるが、位置異性体の標準品が存在する場合はそのイオン強度比をつかってｓｎ−１，ｓｎ−２のどちらにどの程度の脂肪酸が結合しているかを求めることも可能である。
【産業上の利用可能性】
【００７２】
本発明によれば、２個以上の脂肪酸側鎖を有する、異なる脂質分子間で、量比を算出することができる、脂質プロファイリングシステム、脂質プロファイリング方法、及び脂質プロファイリングプログラムが提供される。
【符号の説明】
【００７３】
１０…脂質プロファイリングシステム、２０…タンデム質量分析装置、１１０…取得部、１２０…脂質量比算出部、１３０…脂質濃度取得部、１４０…脂質濃度算出部、１５０…出力部、１６０…記憶部、ＨＧ…ヘッドグループ、Ｌ…脂質、ＣＯ…濃度、ＬＲ…脂質量比、ＦＣ…脂肪酸側鎖、ＬＣ…脂質クラス、ｓｎ…ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｎｕｍｂｅｒｅｄ、ＬＰＣ…リゾフォスファチジルコリン、ＬＰＥ…リゾフォスファチジルエタノールアミン
【図１】
2020139755.tif 000007
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2020139755.tif 000013
【図８】
2020139755.tif 000014
【図９】
2020139755.tif 000015
【図１０】
2020139755.tif 000016
【図１１】
2020139755.tif 000017
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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