(57)【要約】      （修正有）【課題】ｃＧＭＰ／ＰＫＧ媒介経路（例えば、心臓組織における）の混乱または損傷によって特徴付けられる疾患または障害の処置に有用な新規ホスホジエステラーゼ１阻害剤の提供。【解決手段】下式に例示の化合物。2020007357.tif 000023【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離形態または塩形態の、式Ｉ：
【化１】
2020007357.tif 000022
［式中、
（ｉ）  Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル（例えば、メチルまたはエチル）、または−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２は、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニル、例えば４−フルオロフェニルであり；
（ｉｉ）  Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり；
（ｉｉｉ）  Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（例えば、メチル）であるか；またはＲ３はＨであり、Ｒ４およびＲ５は一緒になってトリメチレン架橋を形成し（好ましくは、Ｒ４およびＲ５は一緒にシス配置を有し、例えば、ここで、Ｒ４およびＲ５を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有する）、
（ｉｖ）  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、独立して、
Ｈ、
Ｃ１−４アルキル（例えば、メチル）、
ヒドロキシで置換されているピリド−２−イル、または
−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２
であり；
（ｖ）  ただし、Ｘ、Ｙおよび／またはＺがＮである場合、Ｒ６、Ｒ７および／またはＲ８はそれぞれ存在せず；Ｘ、ＹおよびＺが全てＣである場合、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８の少なくとも１つは、−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２、またはヒドロキシで置換されているピリド−２−イルである］
で示される化合物。
【請求項２】
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキルである、遊離形態または塩形態の、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３およびＲ４が、独立して、Ｃ１−４アルキル（例えば、メチル）であり、Ｒ５がＨである、遊離形態または塩形態の、請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３およびＲ４がどちらもメチルであり、Ｒ５がＨである、遊離形態または塩形態の、請求項１、２または３記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニルである、遊離形態または塩形態の、請求項１〜４いずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されているフェニル、例えば４−フルオロフェニルである、遊離形態または塩形態の、請求項１〜５いずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ、Ｙおよび／またはＺの少なくとも１つがＮであり、対応するＲ６、Ｒ７および／またはＲ８が存在せず、残りのＲ６、Ｒ７および／またはＲ８が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（例えば、メチル）である、遊離形態または塩形態の、請求項１〜６いずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
ＸおよびＺがＮであり、ＹがＣである、遊離形態または塩形態の、請求項１〜７いずれか１項記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ６およびＲ８が存在せず、Ｒ７がＣ１−４アルキル（例えば、メチル）である、遊離形態または塩形態の、請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ６およびＲ８が存在せず、Ｒ７がメチルである、遊離形態または塩形態の、請求項８記載の化合物。
【請求項１１】
（ｉ）  Ｒ１が−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニルであり；
（ｉｉ）  Ｘ、ＹおよびＺの少なくとも１つがＮであり；
（ｉｉｉ）  Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキルであるか；またはＲ３がＨであり、Ｒ４およびＲ５が一緒になってトリメチレン架橋を形成し（好ましくは、Ｒ４およびＲ５が一緒にシス配置を有し、例えば、ここで、Ｒ４およびＲ５を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有する）、
（ｉｖ）  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（例えば、メチル）であり；
（ｖ）  ただし、Ｘ、Ｙおよび／またはＺがＮである場合、Ｒ６、Ｒ７および／またはＲ８はそれぞれ存在せず；Ｘ、ＹおよびＺが全てＣである場合、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８の少なくとも１つは−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２、またはヒドロキシで置換されているピリド−２−イルである、
遊離形態または塩形態の、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３およびＲ４が、独立して、Ｃ１−４アルキルであり、Ｒ５がＨである、遊離形態または塩形態の、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３およびＲ４がどちらもメチルであり、Ｒ５がＨである、遊離形態または塩形態の、請求項１１または１２記載の化合物。
【請求項１４】
ＸおよびＺがＮであり、ＹがＣであり、Ｒ７がＣ１−４アルキル（例えば、メチル）である、遊離形態または塩形態の、請求項１１、１２または１３記載の化合物。
【請求項１５】
遊離形態または塩形態の、
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((２−メチルピリミジン−５−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−３−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−４−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
(６ａＲ,９ａＳ)−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン；
４−(((６ａＲ,９ａＳ)−５−メチル−４−オキソ−３−(フェニルアミノ)−４,５,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−２(６aＨ)−イル)メチル)ベンゼンスルホンアミド；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
４−((３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−４−オキソ−４,５,７,８−テトラヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−２−イル)メチル)ベンゼンスルホンアミド；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−３,５,７,７−テトラメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
３−エチル−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
からなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項１６】
遊離形態または塩形態の、３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((２−メチルピリミジン−５−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項１７】
遊離形態または塩形態の、３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−３−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項１８】
遊離形態または塩形態の、３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−４−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項１９】
遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜１８いずれか１項記載の化合物と、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、心血管障害の処置に有用な他の治療剤（例えば、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ阻害剤）、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰまたはネプリライシン）阻害剤および／またはホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）阻害剤）の１つ以上を含む組合せ剤。
【請求項２０】
遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜１８いずれか１項記載の化合物、または請求項１９記載の組合せ剤を、薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせてまたは合わせて含む、医薬組成物。
【請求項２１】
ｃＧＭＰ／ＰＫＧ依存性シグナル伝達経路（例えば、心臓組織における）の調節（例えば、増強）によって寛解できる疾患または障害の治療または予防方法であって、臥位処置または予防を必要とする患者に、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜１８いずれか１項記載の化合物、請求項１９記載の組合せ剤、または請求項２０記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２２】
疾患または障害が心血管障害である、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
疾患または障害が、肥大（例えば、心肥大）、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、鬱血性心不全、狭心症、 高血圧症、本態性高血圧症、肺高血圧症、肺動脈高血圧症、二次性肺高血圧症、孤立性収縮期高血圧症、糖尿病関連高血圧症、アテローム性動脈硬化症関連高血圧症、腎血管性高血圧症からなる群から選択される、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
疾患または障害が心肥大である、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
さらに、遊離形態または薬学的に許容される塩形態のＰＤＥ５阻害剤を投与することを含む、請求項２１〜２４いずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
疾患または障害が脳卒中である、請求項２１記載の方法。
【請求項２７】
脳卒中が一過性虚血性発作によって特徴付けられる、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
心血管疾患または障害が筋ジストロフィーに伴うものである、請求項２１記載の方法。
【請求項２９】
疾患および障害が、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィーおよびエメリー・ドレイフス型筋ジストロフィーからなる群から選択される筋ジストロフィーによって生じる心血管機能不全である、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
疾患または障害が腎不全、線維症、炎症性疾患または障害、血管リモデリングおよび結合組織疾患または障害（例えば、マルファン症候群）である、請求項２１記載の方法。
【請求項３１】
請求項２１〜２５いずれか１項記載の疾患または障害の処置または予防のための（医薬の製造における）、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜１８いずれか１項記載の化合物、請求項１９記載の組合せ剤、または請求項２０記載の医薬組成物の使用。
【請求項３２】
請求項２１〜３０いずれか１項記載の処置または予防に用いるための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、請求項１〜１８いずれか１項記載の化合物、請求項１９記載の組合せ剤、または請求項２０記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１４年８月７日に出願された米国仮出願第６２／０３４，５６７号（出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）の優先権および該出願の利益を主張する。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、ある種のｃＧＭＰ／ＰＫＧ媒介経路（例えば、心臓組織または血管平滑筋における）の混乱または該経路へのダメージによって特徴付けられる疾患または障害の処置に有用なホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１）の新規阻害剤に関する。本発明は、さらに、該阻害物を含む医薬組成物、ならびに心血管疾患および関連障害、例えば鬱血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞および脳卒中の処置方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
心疾患は、毎年２４０万人を超える米国人を死亡させている慢性かつ進行性の病気である。年間約５００,０００件の新たな心不全ケースが起こっており、米国単独でこの疾患を有する患者は推定５００万人である。早期の治療介入が心機能の維持に最も有効である可能性がある。心疾患に伴う形態学的、細胞的および分子的なリモデリングを予防し、さらに逆転させるのが最も望ましい。心臓リスクの最も重要な指標のいくつかは、年齢、遺伝的要因、体重、喫煙、血圧、運動歴および糖尿病である。心臓リスクの他の指標としては、典型的には血液検査を用いてアッセイされる対象体の脂質プロファイル、または心疾患もしくは高血圧症と関係するあらゆる他のバイオマーカーが挙げられる。心臓リスクをアッセイする他の方法としては、ＥＫＧストレス試験、タリウムストレス試験、ＥＫＧ、コンピューター断層撮影、心エコー図、磁気共鳴画像法試験、非侵襲性および侵襲性動脈造影図、ならびに心臓カテーテル法が挙げられるが、これらに限定されない。
【０００４】
肺高血圧症（ＰＨまたはＰＨＴ）は、肺動脈、肺静脈および／または肺毛細血管における血圧の上昇である。これは、潜在的に息切れ、めまい、失神、運動耐容能低下、心不全、肺浮腫および死に至る極めて重篤な状態である。下記のカテゴリーにおいて世界保健機関により分類された５群のうちの１つであり得る。
【０００５】
ＷＨＯ群Ｉ  −  肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）：
ａ．特発性（ＩＰＡＨ）
ｂ．家族性（ＦＰＡＨ）
ｃ．他の疾患に伴う（ＡＰＡＨ）：膠原病性脈管疾患（例えば、強皮症）、全身循環と肺循環との間の先天的短絡、門脈圧亢進症、ＨＩＶ感染、薬物、毒素または他の疾患もしくは障害。
ｄ．静脈疾患または毛細血管疾患に伴う。
【０００６】
肺動脈高血圧症は、肺に連結している血管および肺内にある血管の血管収縮または締め付け（tightening）を包含する。これにより、水が広いパイプとは対照的に狭いパイプを流れるほうがより困難であるのと同様に、心臓が肺を通って血液をポンプ輸送することが困難になる。経時的に、罹患した血管は、線維化として知られる過程において、より硬く、かつ、より厚くなる。これは、肺内の血圧をさらに上げ、血流を障害する。さらに、心臓の作業負荷増加は右心室の肥厚および拡張をもたらし、心臓が肺を通って血液をポンプ輸送する能力をさらに下げ、右心不全に至る。肺を通る血流が減るに連れて、心臓の左側が受容する血液が減る。この血液はまた正常よりも少ない酸素を運搬する可能性がある。それゆえに、心臓の左側が、特に身体活動中に、体の残部に十分な酸素を供給するためにポンプ輸送することがますます困難となる。
【０００７】
ＷＨＯ群ＩＩ  −  左心疾患に伴う肺高血圧症：
ａ．心房性または心室性疾患
ｂ．弁膜症（例えば、僧帽弁狭窄症）
【０００８】
肺高血圧症ＷＨＯ群ＩＩにおいて、肺の血流に何らの閉塞がない可能性がある。その代わり、左心臓が十分な血液を心臓から体へと効率的にポンプ輸送できず、これにより、肺から左心臓への静脈内の血液の貯留に至る（鬱血性心不全またはＣＨＦ）。これは、肺浮腫および胸水貯留を引き起こす。肺への体液蓄積および損傷は、低酸素症、および、その結果としての肺動脈の血管収縮も生じる可能性があり、そのため、病理は群ＩまたはＩＩＩのものと似たものとなり得る。
【０００９】
ＷＨＯ群ＩＩＩ  −  肺疾患および／または低酸素血症に伴う肺高血圧症：
ａ．慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ）
ｂ．睡眠時呼吸障害、肺胞低換気
ｃ．高所における慢性暴露
ｄ．発達性肺異常
【００１０】
低酸素性肺高血圧症（ＷＨＯ群ＩＩＩ）において、低レベルの酸素により、肺動脈の血管収縮または締め付け（tightening）が生じる可能性がある。これにより、肺動脈高血圧症に類似する病態生理学が引き起こされる。
【００１１】
ＷＨＯ群ＩＶ  −  慢性血栓性および／または塞栓性疾患に起因する肺高血圧症：
ａ．近位または遠位肺動脈における肺塞栓症
ｂ．腫瘍細胞または寄生虫のような他の問題の塞栓形成
【００１２】
慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＷＨＯ群ＩＶ）において、血管は血餅により遮断または狭窄される。この場合もやはり、肺動脈高血圧症と類似の病態生理学が引き起こされる。
【００１３】
ＷＨＯ群Ｖ  −  混合型
【００１４】
肺高血圧症の処置は極めて困難であることが証明されている。末梢動脈の拡張により作用する降圧剤は肺脈管構造にはしばしば無効である。例えば、カルシウムチャネルブロッカーは、ＩＰＡＨの患者の約５％にしか効かない。左心室性機能は、しばしば、利尿剤、ベータブロッカー、ＡＣＥ阻害剤などにより、または僧帽弁もしくは大動脈弁の修復／置換により、改善され得る。肺動脈高血圧症が存在するとき、処置はさらに困難であり、ライフスタイル変更を含み得、ジゴキシン、利尿剤、経口抗凝血剤および酸素療法が一般的であるが、あまり有効ではない。肺動脈を標的とする新しい薬物としては、エンドセリン受容体アンタゴニスト（例えば、ボセンタン、シタクセンタン、アンブリセンタン）、ホスホジエステラーゼ５型阻害剤（例えば、シルデナフィル、タダラフィル）、プロスタサイクリン誘導体（例えば、エポプロステノール、トレプロスチニル（treprostinil）、イロプロスト、ベラプロスト（beraprost））、および可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）アクティベーター（例えば、シナシグアトおよびリオシグアト）が挙げられる。ＰＡＨへの外科的手法としては、右心房と左心房の間の連絡を作り出すことにより心臓の右側の圧を軽減するが血中低酸素レベル（低酸素症）という代償を払う心房中隔裂開術；肺移植；および肺動脈の内膜と一緒に大きな血餅を除去するための肺血栓内膜切除術（ＰＴＥ）が挙げられる。心不全および急性心筋梗塞は、しばしば冠動脈における血栓形成および／またはプラーク蓄積を伴う一般的かつ重篤な状態である。
【００１５】
心血管疾患または機能不全は、また、典型的に骨格筋に影響すると考えられる疾患または障害に伴うこともある。このような疾患の一つは、主に骨格筋発達に影響を及ぼすが心機能不全および心筋症を引き起こすこともあるデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）である。ＤＭＤは、筋ジストロフィーの劣性Ｘ染色体連鎖形態であり、およそ男児３,６００人あたり１人が罹患し、筋変性および最終的に死に至る。この障害はヒトＸ染色体上に位置しているジストロフィン遺伝子の変異により引き起こされ、この遺伝子は細胞膜のジストログリカン複合体（ＤＧＣ）に構造的安定性を提供する筋肉組織内の重要な構造的成分であるジストロフィンタンパク質をコードする。男女ともこの変異を保有し得るが、女性がこの疾患の徴候を示すことは稀である。
【００１６】
ＤＭＤの患者は、Ｘ染色体連鎖ジストロフィン遺伝子の変異の結果として、ジストロフィンタンパク質の発現を欠いている。さらに、ジストロフィン喪失は、重篤な骨格筋病態、ならびに鬱血性心不全および不整脈として現れる心筋症に至る。機能的ジストロフィンタンパク質の不在が、神経型一酸化窒素（ＮＯ）シンターゼ（ｎＮＯＳ）を含むジストロフィン関連タンパク質の発現減少および誤局在をもたらすと考えられる。ｎＮＯＳシグナル伝達の混乱の結果として運動中の筋肉疲労および対立しない交感神経性血管収縮が起こり、それにより、ジストロフィン欠損筋肉の収縮誘発性損傷が増加する。運動中の正常なｎＮＯＳシグナル伝達の喪失は、ＤＭＤにおける重要な発症メカニズムであると提唱されている血管機能不全の中心的な役割を果たす。最終的な心機能喪失は、しばしばＤＭＤ患者に心不全をもたらす。
【００１７】
現在、心血管疾患および障害（例えば、鬱血性心疾患）ならびに結果的に心機能不全または心筋症を引き起こし得る疾患および障害（例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー）の有効な処置方法の必要性はほとんど満たされていない。心臓状態および機能不全の処置のための改善された治療用化合物、組成物および方法が緊急に必要とされている。
【００１８】
ホスホジエステラーゼ類（ＰＤＥ）の１１ファミリーが同定されているが、ファミリーＩにおけるＰＤＥであるＣａ２＋カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ（ＣａＭ−ＰＤＥ）のみがＣａ２＋カルモジュリンにより活性化され、カルシウムおよび環状ヌクレオチド（例えばｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ）シグナル伝達経路を媒介することが示されている。３種類の既知のＣａＭ−ＰＤＥ遺伝子であるＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃは、中枢神経系組織において発現する。ＰＤＥ１Ａは脳の至る所において発現し、海馬のＣＡ１〜ＣＡ３層および小脳で高レベルであり、線条体で低レベルである。ＰＤＥ１Ａは肺および心臓においても発現する。ＰＤＥ１Ｂは主に線条体、歯状回、嗅索および小脳において発現し、その発現は、ドパミン作動性神経支配が高レベルである脳領域と相関する。ＰＤＥ１Ｂは主に中枢神経系においても発現するが、心臓においても検出され、好中球内に存在し、この細胞の炎症応答に関与することが示されている。ＰＤＥ１Ｃは嗅上皮、小脳顆粒細胞、線条体、心臓および血管平滑筋において発現する。ＰＤＥ１Ｃはヒト心筋細胞における主たるホスホジエステラーゼである。
【００１９】
該ＰＤＥファミリー全ての中で、ヒト心室における主たるＰＤＥ活性はＰＤＥ１である。一般に、心筋細胞、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞および運動ニューロンにはＰＤＥ１アイソフォームが多量に存在する。ホスホジエステラーゼ１Ａ発現のアップレギュレーションは、硝酸薬耐性の発生に関連している。非特許文献１。環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ１Ｃは、ヒトの動脈平滑筋細胞増殖を促進する。非特許文献２。心虚血再灌流ラットモデルもまたＰＤＥ１活性の増大を示している。非特許文献３。Ｃａ２＋／ＣａＭ活性化ＰＤＥ１、特にＰＤＥ１Ａは、病的心筋細胞肥大の調節に関与することが示されている。非特許文献４。アンジオテンシンＩＩによって誘発される初期の心肥大は、心不全ラットモデルにおいてＰＤＥ１Ａの１４０％増加を伴う。非特許文献５。ホスホジエステラーゼ１の阻害は、急性肺高血圧症を有する覚醒状態の仔ヒツジにおいて吸入一酸化窒素に対する肺の血管拡張応答を増大させる。非特許文献６。肺動脈平滑筋細胞におけるＰＤＥ１ファミリーの強いアップレギュレーションは、また、ヒト特発性ＰＡＨ肺およびＰＡＨ動物モデルからの肺において認められる。非特許文献７。線維芽細胞に見られるＰＤＥ１Ａおよび１Ｃは、細胞外マトリックスを蓄積させる炎症促進性細胞による疾患心臓組織浸潤と関係がある「合成表現型」への移行においてアップレギュレートされることが知られている。好中球内に存在するＰＤＥ１Ｂ２は、マクロファージの分化の過程でアップレギュレートされる。非特許文献８。単球からマクロファージへの分化は、次に、全心臓性突然死の約８０％の根本原因となる、心疾患（特に、アテローム血栓症）の炎症要素に関与している。非特許文献９。
【００２０】
環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼは、環状ヌクレオチドｃＡＭＰおよびｃＧＭＰをそれぞれの５’モノリン酸塩（５’ＡＭＰおよび５’ＧＭＰ）へ加水分解することによって細胞内ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰシグナル伝達をダウンレギュレートする。ｃＧＭＰは、多数の細胞機能を調節している中心的な細胞内セカンドメッセンジャーである。心筋細胞において、ｃＧＭＰは、一酸化窒素および心房性ナトリウム利尿ペプチドの効果を媒介するが、そのカウンターパートであるｃＡＭＰは、カテコラミンシグナル伝達を媒介する。各環状ヌクレオチドは、対応する１次標的プロテインキナーゼ、ｃＡＭＰについてはＰＫＡ、ｃＧＭＰについてはＰＫＧを有している。ＰＫＡ刺激は、収縮力の増強に関連しており、成長を刺激することができるが、ＰＫＧは、心臓においてブレーキとして作用し、ｃＡＭＰ−ＰＫＡ−収縮性刺激に対抗し、肥大を阻害する能力を有する。重要なことには、これらのシグナル伝達カスケードの期間および大きさは、環状ヌクレオチドの生成だけではなく、それらのホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）により触媒される加水分解によっても決定される。ＰＤＥ調節は、非常に強力であり、しばしば、所定の環状ヌクレオチドにおける急激な上昇を抑えて数秒以内にベースラインに戻す。それは、また、細胞内で区分化されて、特定の標的タンパク質が同じ「一般的な」環状ヌクレオチドによって調節され得る。ＰＤＥ１は、筋細胞におけるそのｃＧＭＰ調節によって肥大調節に関与する。
（非特許文献１０）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】国際公開第２００６／１３３２６１号
【特許文献２】国際公開第２００９／０７５７８４号
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Kim et al., Circulation 104(19:2338-2343 (2001)
【非特許文献２】Rybalkin et al., Circ. Res. 90(2):151-157 (2002)
【非特許文献３】Kakkar et al., can. J. Physiol. Pharmacol. 80(1):59-66 (2002)
【非特許文献４】Millet et al., Circ. Res. 105(10):956-964 (2009)
【非特許文献５】Mokni et al., Plos. One. 5(12):e14227 (2010)
【非特許文献６】Evgenov et al., Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 290(4):L723-L729 (2006)
【非特許文献７】Schermuly et al., Circulation 115(17)2331-2339 (2007)
【非特許文献８】Bender et al., PNAS 102(2):497-502 (2005)
【非特許文献９】Willerson et al., Circulation 109:II-2-II-10 (2004)
【非特許文献１０】Circ Res. 2009, November 6; 105(10):931
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
当該技術分野において現在直面している課題の１つは、ＰＤＥ１特異的阻害剤がないことである。本発明は、ＰＤＥ１特異的阻害剤を提供することによって、当該技術分野におけるこの課題および他の課題を克服しようとするものである。特許文献１および特許文献２はＰＤＥ１特異的阻害剤を提供しているが、これらは、本発明の化合物を開示していない。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
ＰＤＥ１は、アテローム性動脈硬化症、心臓圧負荷ストレスおよび心不全のような慢性疾患状態において、ならびに硝酸薬への長期暴露に対する応答として、アップレギュレートされる。ＰＤＥ１阻害剤は、安静時機能（resting function）に及ぼす影響は比較的少ないが、むしろ、血管作動薬によって刺激された細胞における急な収縮性緊張を強力に調節する能力を維持する。このようなアップレギュレーションは、血管および心臓の病態生理、ならびに硝酸薬療法に対する薬物耐性の一因となる。したがって、理論に縛られないが、ＰＤＥ１阻害剤のようなｃＧＭＰ／ＰＫＧ媒介経路を調節する化合物は、特に心肥大を逆転するのに有用であると考えられる。本明細書に記載のＰＤＥ１阻害剤は、血液脳関門を貫通する限られた能力を有する選択的ＰＤＥ１阻害剤であり、したがって、ＰＤＥ１アイソフォームが優位に配置されている中枢神経系の外側の体の領域、例えば、心臓組織、血管組織および肺組織において顕著な調節活性（例えば、ｃＧＭＰの増強）を有すると考えられる。
【００２５】
したがって、第一の態様において、本発明は、遊離形態または塩形態の、式Ｉ：
【化１】
2020007357.tif 000002
［式中、
（ｉ）  Ｒ１は、Ｃ１−４アルキル（例えば、メチルまたはエチル）、または−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２は、ハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニル、例えば４−フルオロフェニルであり；
（ｉｉ）  Ｘ、ＹおよびＺは、独立して、ＮまたはＣであり；
（ｉｉｉ）  Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（例えば、メチル）であるか；またはＲ３はＨであり、Ｒ４およびＲ５は一緒にトリメチレン架橋を形成し（好ましくは、ここで、Ｒ４およびＲ５は一緒にシス配置を有し、例えば、ここで、Ｒ４およびＲ５を担持している炭素はそれぞれＲ配置およびＳ配置を有する）、
（ｉｖ）  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、独立して、
Ｈ、
Ｃ１−４アルキル（例えば、メチル）、
ヒドロキシで置換されているピリド−２−イル、または
−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２
であり；
（ｖ）  ただし、Ｘ、Ｙおよび／またはＺがＮである場合、Ｒ６、Ｒ７および／またはＲ８はそれぞれ存在せず；Ｘ、ＹおよびＺが全てＣである場合、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８の少なくとも１つは、−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２、またはヒドロキシで置換されているピリド−２−イルである］
で示される化合物を提供する。
【００２６】
特定の実施態様において、本発明は、以下のとおり、遊離形態または塩形態の、式Ｉの化合物（ただし、Ｘ、Ｙおよび／またはＺがＮである場合、Ｒ６、Ｒ７および／またはＲ８がそれぞれ存在せず；Ｘ、ＹおよびＺが全てＣである場合、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８の少なくとも１つが−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２、またはヒドロキシで置換されているピリド−２−イルである）を提供する：
１.１  Ｒ１がＣ１−４アルキル（例えば、メチルまたはエチル）または−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニル、例えば４−フルオロフェニルである、式Ｉの化合物；
１.２  Ｒ１がＣ１−４アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である、式Ｉの化合物；
１.３  Ｒ１が−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニルである、式Ｉの化合物；
１.４  Ｒ１が−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がフェニルである、式Ｉの化合物；
１.５  Ｒ１が−ＮＨ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されているフェニル、例えば４−フルオロフェニルである、式Ｉの化合物；
１.６  Ｘ、ＹおよびＺが、独立して、ＮまたはＣである、式Ｉまたは式１.１〜１.５のいずれかの化合物；
１.７  Ｘ、ＹおよびＺが全てＣである、式Ｉまたは式１.１〜１.５のいずれかの化合物；
１.８  Ｘ、Ｙおよび／またはＺの少なくとも１つがＮである、式Ｉまたは式１.１〜１.５のいずれかの化合物；
１.９  ＸがＮである、式Ｉまたは式１.１〜１.５のいずれかの化合物；
１.１０  ＺがＮである、式Ｉまたは式１.１〜１.５のいずれかの化合物；
１.１１  ＹがＮである、式Ｉまたは式１.１〜１.５のいずれかの化合物；
１.１２  ＸおよびＺがＮであり、ＹがＣである、式Ｉまたは式１.１〜１.５のいずれかの化合物；
１.１３  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、独立して：
Ｈ、
Ｃ１−４アルキル（例えば、メチル）、
ヒドロキシで置換されているピリド−２−イル、または
−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２
である、式Ｉまたは式１.１〜１.１２のいずれかの化合物；
１.１４  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の１つ以上が、独立して、Ｈである、式Ｉまたは式１.１〜１.１２のいずれかの化合物；
１.１５  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、独立して、Ｃ１−４アルキル（例えば、メチル）である、式Ｉまたは式１.１〜１.１２のいずれかの化合物；
１.１６  Ｒ６、Ｒ７および／またはＲ８が、独立して、Ｃ１−４アルキル（例えば、メチル）である場合、Ｘ、Ｙおよび／またはＺが、それぞれ、Ｃである（またはＮではない）ことを条件とする、式１.１５の化合物；
１.１７  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（例えば、メチル）である、式Ｉまたは式１.１〜１.１２のいずれかの化合物；
１.１８  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、独立して、ヒドロキシで置換されているピリド−２−イルである、式Ｉまたは式１.１〜１.１２のいずれかの化合物；
１.１９  Ｒ７が、ヒドロキシで置換されているピリド−２−イル（例えば、６−ヒドロキシピリド−２−イル）である、式Ｉまたは式１.１〜１.１２のいずれかの化合物；
１.２０  Ｒ６、Ｒ７および／またはＲ８が、独立して、ヒドロキシで置換されているピリド−２−イルである場合、Ｘ、Ｙおよび／またはＺが、それぞれ独立して、Ｃである（またはＮではない）ことを条件とする、式１.１８または１.１９；
１.２１  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の１つ以上が、独立して、−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２である、式Ｉまたは式１.１〜１.１２のいずれかの化合物；
１.２２  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８の少なくとも１つが、−Ｓ(Ｏ)２−ＮＨ２、またはヒドロキシで置換されているピリド−２−イルである、式Ｉまたは１.７の化合物；
１.２３  Ｒ６が存在せず、Ｒ７およびＲ８がＨである、式Ｉまたは１.９の化合物；
１.２４  Ｒ８が存在せず、Ｒ６およびＲ７がＨである、式Ｉまたは１.１０の化合物；
１.２５  Ｒ７が存在せず、Ｒ６およびＲ８がＨである、式Ｉまたは１.１１の化合物；
１.２６  Ｒ６およびＲ８が存在せず、Ｒ７がＣ１−４アルキル（例えば、メチル）である、式Ｉまたは１.１２の化合物；
１.２７  Ｒ６およびＲ８が存在せず、Ｒ７がメチルである、式Ｉまたは１.１２の化合物；
１.２８  Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキルであるか；またはＲ３がＨであり、Ｒ４およびＲ５が一緒にトリメチレン架橋を形成する（好ましくは、ここで、Ｒ４およびＲ５が一緒にシス配置を有し、例えば、ここで、Ｒ４およびＲ５を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有する）、式Ｉまたは式１.１−１.２７のいずれかの化合物；
１.２９  Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキルである、式Ｉまたは式１.１−１.２７のいずれかの化合物；
１.３０  Ｒ３およびＲ４が、独立して、Ｃ１−４アルキルであり、Ｒ５がＨである、式Ｉまたは式１.１−１.２７のいずれかの化合物；
１.３１  Ｒ３およびＲ４がどちらもメチルであり、Ｒ５がＨである、式Ｉまたは式１.１−１.２７のいずれかの化合物；
１.３２  Ｒ３がＨであり、Ｒ４およびＲ５が一緒にトリメチレン架橋を形成する（好ましくは、ここで、Ｒ４およびＲ５が一緒にシス配置を有し、例えば、ここで、Ｒ４およびＲ５を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有する）、式Ｉまたは式１.１−１.２７のいずれかの化合物；
１.３３  Ｒ４およびＲ５が一緒に一緒にシス配置を有し、例えば、ここで、Ｒ４およびＲ５を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有する）式１.３２の化合物；
１.３４  （ｉ）  Ｒ１が−Ｎ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニル、例えば４−フルオロフェニルであり；
（ｉｉ）  Ｘ、ＹおよびＺの少なくとも１つがＮであり；
（ｉｉｉ）  Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキルであるか；またはＲ３がＨであり、Ｒ４およびＲ５が一緒にトリメチレン架橋を形成し（好ましくは、ここで、Ｒ４およびＲ５が一緒にシス配置を有し、例えば、ここで、Ｒ４およびＲ５を担持している炭素がそれぞれＲ配置およびＳ配置を有する）、
（ｉｖ）  Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（例えば、メチル）である、
式Ｉの化合物；
１.３５  Ｒ３、Ｒ４およびＲ５が、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル（例えば、メチル）である、式Ｉまたは１.３４の化合物；
１.３６  Ｒ３およびＲ４が、独立して、Ｃ１−４アルキルであり（例えば、Ｒ３およびＲ４がメチルであり）、Ｒ５がＨである、式Ｉまたは１.３４または１.３５の化合物；
１.３７  Ｒ１が−Ｎ(Ｒ２)であり、ここで、Ｒ２がハロ（例えば、フルオロ）で置換されていてもよいフェニル、例えば４−フルオロフェニルであり；
ＸおよびＺがＮであり、ＹがＣであり；
Ｒ７がＣ１−４アルキル（例えば、メチル）であり；
Ｒ３およびＲ４がＣ１−４アルキル（例えば、メチル）であり；
Ｒ５がＨである、
式Ｉの化合物；
１.３８  ３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((２−メチルピリミジン−５−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−３−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−４−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
(６ａＲ,９ａＳ)−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン；
４−(((６ａＲ,９ａＳ)−５−メチル−４−オキソ−３−(フェニルアミノ)−４,５,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−２(６aＨ)−イル)メチル)ベンゼンスルホンアミド；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
４−((３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−４−オキソ−４,５,７,８−テトラヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−２−イル)メチル)ベンゼンスルホンアミド；
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−３,５,７,７−テトラメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン；
３−エチル−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
からなる群から選択される、上記式のいずれかによる化合物；
１.３９  化合物が、ｃＧＭＰのホスホジエステラーゼ媒介（例えば、ＰＤＥ１媒介）加水分解を、例えば実施例１１に記載されるような固定化金属親和性粒子試薬ＰＤＥアッセイにおいて１μＭ未満、好ましくは７５ｎＭ未満、好ましくは１ｎＭ未満のＩＣ５０をもって阻害する、上記式のいずれか。
【００２７】
第２の態様において、本発明は、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記載の式Ｉまたは１.１〜１.３９のいずれかの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と混合して（in admixture）（または組み合わせてもしくは合わせて（in combination or association））含む医薬組成物を提供する。
【００２８】
本明細書に記載の式Ｉまたは１.１〜１.３９のいずれかの化合物は、選択的ＰＤＥ１阻害剤であり、したがって、心肥大においてｃＧＭＰ／ＰＫＧを調節するのに有用である。従前の研究によって、細胞内Ｃａ２＋／ＣａＭ依存性シグナル伝達の増大が、プロテインホスファターゼカルシニューリン、Ｃａ２＋／ＣａＭ依存性キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）のような種々のエフェクターを介して心筋細胞における不適応な肥大遺伝子発現を促進することが明らかになっている。理論に縛られないが、内在性ｃＧＭＰ／ＰＫＧ依存性シグナル伝達の増大は、Ｇｑ／１１活性化の抑制およびＣａ２＋シグナル伝達の正常化によって心肥大を減少させることができる。ＰＤＥ１を活性化することによって、Ｃａ２＋／ＣａＭは、ｃＧＭＰレベルおよびＰＫＧ活性を低下させ得る。次に、このプロセスは、心肥大を誘導し得る。加えて、心肥大の間の神経液性または生体力学ストレスによるＰＤＥ１発現のアップレギュレーションは、さらにＰＤＥ１活性を増強し、ｃＧＭＰ／ＰＫＧシグナル伝達を弱めることができる。したがって、理論に縛られないが、ＰＤＥ１Ａの阻害は、例えば、ｃＧＭＰ／ＰＫＧシグナル伝達の減弱を逆転または予防することができると考えられる。先に検討したように、ＰＤＥ１Ｂは、心疾患の炎症要素に関係づけられる（例えば、ＰＤＥ１Ｂ２は、心疾患進行の間に生じるように、マクロファージの分化の過程でアップレギュレートされる）。同様に、ＰＤＥ１Ｃは、合成増殖表現型のヒト動脈平滑筋細胞において誘導される。したがって、本明細書に記載のＰＤＥ１阻害剤の投与は、心肥大を調節する有望な手段を提供することができ、延長線上で考えると、種々の心血管疾患および障害の処置を提供する。
【００２９】
したがって、第３の態様において、本発明は、ｃＧＭＰ／ＰＫＧ依存性シグナル伝達経路（例えば、心臓組織における）の調節（例えば、増強）によって寛解し得る疾患または障害（例えば、心血管疾患または障害）の処置方法または予防方法であって、該処置または予防を必要とする患者に、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記載の式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物の有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００３０】
心血管疾患または障害は、肥大（例えば、心肥大）、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、鬱血性心不全、狭心症、脳卒中、高血圧症、本態性高血圧症、肺高血圧症、肺動脈高血圧症、二次性肺高血圧症、孤立性収縮期高血圧症、糖尿病関連高血圧症、アテローム性動脈硬化症関連高血圧症、腎血管性高血圧症からなる群から選択され得る。ある種の実施態様において、処置されるべき心血管疾患または障害は、また、ｃＧＭＰ／ＰＫＧ依存性シグナル伝達障害に関連している。特定の実施態様において、本発明は、脳卒中の処置方法または予防方法であって、ＰＤＥ１阻害剤が脳毛細血管の内皮細胞に対するその作用を介して脳血流増加を促進することができる、方法を提供する。
【００３１】
第３の態様のさらなる実施態様において、本発明は、また、筋ジストロフィー（例えば、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィーおよびエメリー・ドレイフス型筋ジストロフィー）に関連する心血管疾患または障害の処置方法または予防方法であって、該承知または予防を必要とする患者に、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記載の式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物の有効量を投与することを含む、方法を提供する。上記のように、ＤＭＤは、神経型一酸化窒素（ＮＯ）合成酵素のようなジストロフィン関連タンパク質の発現減少および誤局在化をもたらす機能的ジストロフィンタンパク質の不在によって引き起こされる。ｎＮＯＳシグナル伝達の混乱の結果として、運動中の筋肉疲労および対立しない交感神経性血管収縮が起こり、それにより、ジストロフィン欠損筋肉の収縮誘発性損傷が増加する。理論に縛られないが、運動中の正常なｎＮＯＳシグナル伝達の喪失は、ＤＭＤにおける重要な発症メカニズムであると提唱されている血管機能不全の中心的な役割を果たし得る。ホスホジエステラーゼ（例えば、ＰＤＥ１）の阻害によって、本明細書に記載の化合物は、ジストロフィーの骨格筋および／または心筋における不完全ｎＮＯＳシグナル伝達を回避し得；それにより、ＤＭＤ患者における心臓予後を改善する可能性があると考えられる。
【００３２】
さらに別の実施態様において、本発明は、腎不全、線維症、炎症性疾患もしくは障害、血管リモデリングおよび結合組織疾患もしくは障害（例えば、マルファン症候群）の処置であって、該処置を必要とする患者に、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記載の式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物の有効量を投与することを含む、処置を提供する。
【００３３】
上記の方法による疾患の処置または予防に有用な本発明のＰＤＥ１化合物は、唯一の治療剤として使用され得るか、または、心血管障害の処置に有用な１種類以上の他の治療剤と組み合わせて使用され得る。このような他の薬剤としては、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰまたはネプリライシン）阻害剤および／またはホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）阻害剤が挙げられる。
【００３４】
したがって、特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、アジルサルタン、カンデサルタン、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、オルメサルタンメドキソミル、サララシン、テルミサルタンおよびバルサルタンから選択されるアンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニストと組み合わせて投与され得る。
【００３５】
さらに別の実施態様において、本発明のＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル（benazepril）、ラミプリル、キナプリル、ペリンドプリル（perindopril）、イミダプリル、トランドラプリルおよびシラザプリルからなる群から選択されるアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤と組み合わせて投与され得る。
【００３６】
さらに別の特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ１阻害剤は、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、アバナフィル、ロデナフィル、ミロデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィルおよびザプリナストから選択されるＰＤＥ５阻害剤と組み合わせて投与され得る。
【００３７】
さらに別の特定の実施態様において、本発明のＰＤＥ１阻害剤は、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰまたはネプリライシン）阻害剤と組み合わせて投与され得る。ネプリライシンまたはＮＥＰ（ＥＣ３.４.２４.１１）としても知られている中性エンドペプチダーゼは、さまざまな短ペプチド基質を切断するＩＩ型膜内在性（integral membrane）亜鉛依存性メタロエンドプロテアーゼである。哺乳動物において、ＮＥＰは、腎臓、肺、内皮細胞、血管平滑筋細胞、心筋細胞、線維芽細胞、脂肪細胞および脳を含む広範囲で発現する。その天然基質には、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、アンジオテンシンＩ（Ａｎｇ−Ｉ）、アンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ−ＩＩ）、ブラジキニン（ＢＫ）およびエンドセリン（ＥＴ）がある。これらのペプチドのＮＥＰによる切断の結果として、該ペプチドの天然の生物学的作用を減衰させるそれらの不活化が生じる。
【００３８】
ＡＮＰ、ＢＮＰおよびＣＮＰは、レニン・アンジオテンシン系とともに哺乳動物血圧恒常性の主要素である全てナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）系の一部である。レニン・アンジオテンシン系は血圧上昇（例えば、血管収縮および水毒（water retention）の促進による）の主な原因であるが、ナトリウム利尿ペプチド系は、血圧低下（例えば、血管拡張およびナトリウム利尿の促進による）の主な原因である。ＡＮＰおよびＢＮＰは、強力な血管拡張薬と、カリウム保持性のナトリウムおよび水の腎再吸収低下の強力なプロモーターとの両方である。これらの二重の効果は強力な血圧低下効果を発揮する。ＢＮＰおよびＣＮＰもまた、心臓の抗線維化効果と抗肥大効果を発揮する。ＣＮＰは、ＡＮＰ／ＢＮＰの血管拡張効果を共有するが、腎効果を有しない。加えて、高血圧症および肥満症はどちらも、ＡＮＰおよびＢＮＰレベルの低下に関連していることが示されており、ＡＮＰレベルを増加させるＡＮＰ（ｒｓ５０６８）の特異的遺伝的変異体は、高血圧症およびメタボリックシンドロームから保護することが示されている。かくして、ＡＮＰ、ＢＮＰおよびＣＮＰは、血圧恒常性および心血管の健康において重要な役割を果たす。
【００３９】
ＮＥＰの阻害の結果として、循環ＡＮＰ、ＢＮＰおよびＣＮＰの半減期が増大する。これは、それらの血圧低下および心臓の健康の改善効果を延長すると予想される。尿中ｃＡＭＰレベルは、ＮＥＰ阻害剤の全身投与後に有意に上昇する。
【００４０】
また、ＮＥＰの阻害の結果として、ブラジキニン、アンジオテンシンＩ、アンジオテンシンＩＩおよびエンドセリンのレベルが高くなる。重要なことに、エンドセリンおよびアンジオテンシンＩＩは、強力な高血圧促進性ペプチド（pro−hypertensive peptide）である。かくして、ＮＥＰ阻害単独の結果として、血管拡張効果（ＮＰによる）および血管収縮効果（Ａｎｇ−ＩＩおよびＥＴの増加による）のどちらも引き起こされる。これらの高血圧促進性ペプチド高血圧促進性ペプチドは全て、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）への結合を介して機能する。この血管収縮効果の主要要因は、Ｇタンパク質共役受容体ＡＴ１およびＡＴ２への結合を介して機能するアンジオテンシン−ＩＩである。これらの受容体は、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）およびプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）シグナル伝達カスケードの活性化を介してそれらの生理学的効果を発揮する。ブラジキニンは、ＡＣＥによってかなりの程度まで不活化され、ＡＣＥ阻害剤は、ＮＥＰ阻害剤については見られない重大な副作用である鬱血を引き起こす。
【００４１】
ＡＮＰ、ＢＮＰおよびＣＮＰは全て、セカンドメッセンジャーｃＧＭＰを介して機能する。ＡＮＰおよびＢＮＰは膜結合型グアニリルシクラーゼＡと結合するが、一方、ＣＮＰはグアニリルシクラーゼＢと結合する。これらの酵素はどちらも、受容体結合に応答して細胞内ｃＧＭＰを増加させる。高濃度のｃＧＭＰは、ナトリウム利尿ペプチドの下流生物学作用効果を発揮する原因となるプロテインキナーゼＧ（ＰＫＧ）を活性化する。
【００４２】
カンドキサトリル、カンドキサトリラト、オマパトリラト（omapatrilat）、ゲムパトリラト（gempatrilat）およびサムパトリラトを含むいくつかのＮＥＰ阻害剤が知られている。カンドキサトリルは、ＡＮＰおよびｃＧＭＰ両血漿中レベルを用量依存的に増加させることが示されており、安全であるが、安定な血圧低下効果を発揮しない。これは、ＮＥＰ阻害のＢＫ、ＥＴおよびＡｎｇ−ＩＩ分解に対する効果に起因すると考えられる。心不全患者におけるカンドキサトリル処置は、エンドセリンのレベルを有意に上昇させ、かくして、ＡＮＰの増加によって引き起こされる血圧効果を相殺することが示されている。
【００４３】
カンドキサトリルおよびカンドキサトリラトとは対照的に、オマパトリラトは、ＮＥＰ阻害剤およびＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤の両方として同程度に機能するので、バソペプチダーゼ阻害剤（ＶＰＩ）であると考えられる。ＡＣＥは、Ａｎｇ−Ｉから、レニン・アンジオテンシン系の主要な高血圧促進性ホルモンであるＡｎｇ−ＩＩへの変換の原因酵素である。ＮＥＰおよびＡＣＥの両方を阻害することによって、ＮＥＰ阻害によって引き起こされたＡｎｇ−ＩＩの増加が打ち消され、その結果、非常に有効な降圧処置をもたらすと考えられた。しかしながら、臨床研究により、オマパトリラトは血管浮腫（ＡＣＥ阻害剤の公知の副作用）の深刻な発生を伴うことが示された。後の研究によって、これは付随して起こるアミノペプチダーゼＰ（ＡＰＰ）阻害に起因し得ることが示された。ＡＣＥ、ＡＰＰおよびＮＥＰは全て、別の降圧ペプチドであるブラジキニンの分解に関与し、その分解経路のうちの３つの経路の同時阻害により生じるブラジキニンの過剰蓄積は、血管浮腫を引き起こす強い要因であり得る。
【００４４】
いずれもの特定の理論に縛られることを意図しないが、ＰＤＥ１阻害剤と選択的ＮＥＰ阻害剤（ＶＰＩではない）との組合せは、ＮＥＰ阻害の十分な陽性効果（ＡＮＰ、ＢＮＰおよびＣＮＰの半減期の増大）を実現し、さらに、効率低下をもたらし得るＮＥＰ阻害の陰性効果を伴わずに、ＰＤＥ１阻害によって引き起こされるＮＰシグナル伝達カスケード（ｃＧＭＰによって媒介される）の相乗効果によって増強される。
【００４５】
したがって、特定の実施態様において、本発明に有用な中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰまたはネプリライシン）阻害剤は、例えばＡＣＥ阻害と比べて少なくとも３００倍のＮＥＰ阻害選択性を有する選択的ＮＥＰ阻害剤である。さらなる実施態様において、本発明に用いるためのＮＥＰ阻害剤は、ＥＣＥ（エンドセリン変換酵素）阻害と比べて少なくとも１００倍のＮＥＰ阻害選択性を有する阻害剤である。さらに別の実施態様において、本発明に用いるためのＮＥＰ阻害剤は、ＡＣＥ阻害と比べて少なくとも３００倍のＮＥＰ阻害選択性およびＥＣＥ阻害と比べて少なくとも１００倍のＮＥＰ阻害選択性を有する阻害剤である。
【００４６】
別の実施態様において、本発明に用いるためのＮＥＰ阻害剤は、下記の刊行物に記載されているＮＥＰ阻害剤である：欧州特許第１０９７７１９号、欧州特許出願公開第５０９４４２号、米国特許第４９２９６４１号、欧州特許第５９９４４４号、米国特許第７９８６８４号、J. Med. Chem. (1993) 3821、欧州特許第１３６８８３号、米国特許第４７２２８１０号、Curr. Pharm. Design (1996) 443、J. Med. Chem. (1993) 87、欧州特許第８３０８６３号、欧州特許第７３３６４２号、国際公開第９６／１４２９３号、国際公開第９４／１５９０８号、国際公開第９３／０９１０１号、国際公開第９１／０９８４０号、欧州特許出願公開第５１９７３８号、欧州特許出願公開第６９００７０号、Bioorg. Med. Chem. Lett. (1996) 65、欧州特許出願公開第０２７４２３４号、Biochem. Biophys. Res. Comm. (1989) 58、Perspect. Med. Chem. (1993) 45、または欧州特許第３５８３９８号。これらの特許および刊行物の記載内容は、出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する。
【００４７】
さらに別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、ＮＥＰ阻害剤ホスホラミドン、チオルファン、カンドキサトリラト、カンドキサトリル、またはChemical Abstract Service（ＣＡＳ）番号１１５４０６−２３−０の化合物である。
【００４８】
さらに別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、米国特許出願公開第２００６／００４１０１４号（その記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されているＮＥＰ阻害剤である。
【００４９】
別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、米国特許第５,２１７,９９６号（その記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されているＮＥＰ阻害剤である。
【００５０】
別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、米国特許第８,５１３,２４４号（その記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されているＮＥＰ阻害剤である。
【００５１】
別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、米国特許第５,２１７,９９６号（その記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されているＮＥＰ阻害剤である。
【００５２】
別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、米国特許出願公開第２０１３／０３３０３６５号（その記載内容は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する）に記載されているＮＥＰ阻害剤である。
【００５３】
別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、遊離形態またはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグの形態の、その好ましい実施態様においてはナトリウム塩形態の、ＡＨＵ−３７７としても知られている３−[{１Ｓ,３Ｒ}−１−ビフェニル−４−イルメチル−３−エトキシカルボニル−１−ブチルカルバモイル]プロピオン酸：
【化２】
2020007357.tif 000003
である。
【００５４】
別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、遊離形態またはその薬学的に許容されるエステル、塩またはプロドラッグの形態の、ＬＢＱ−６５７としても知られている[{１Ｓ,３Ｒ}−１−ビフェニル−４−イルメチル−３−カルボキシ−１−ブチルカルバモイル]プロピオン酸：
【化３】
2020007357.tif 000004
である。
【００５５】
別の実施態様において、本発明に有用なＮＥＰ阻害剤は、遊離形態もしくは薬学的に許容される塩形態またはそのプロドラッグ形態の、下記のものから選択される：サムパトリラト、ファシドトリル、Ｚ１３７５２Ａ、ＭＤＬ１００２４０、ＢＭＳ１８９９２１、ＬＢＱ６５７、ＡＨＵ−３７７またはミキサンプリル。
【００５６】
別の実施態様において、本発明に用いるためのＮＥＰ阻害剤は、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、下記のものから選択される：
ＳＱ２８,６０３；
Ｎ−[Ｎ−[(１Ｓ)−カルボキシ−３−フェニルプロピル]−(Ｓ)−フェニルアラニル]−(Ｓ)−イソセリン；
Ｎ−[Ｎ−[((１Ｓ)−カルボキシ−２−フェニル)エチル]−(Ｓ)−フェニルアラニル]−β−アラニン；
Ｎ−[(２Ｓ)−メルカプトメチル−３−(２−メチルフェニル)−プロピオニル]メチオニン；
(シス−４−[[[１−[２−カルボキシ−３−(２−メトキシエトキシ)プロピル]−シクロペンチル]カルボニル]アミノ]−シクロヘキサンカルボン酸)；
チオルファン；レトロ−チオルファン；ホスホラミドン；ＳＱ２９０７２；
Ｎ−(３−カルボキシ−１−オキソプロピル)−(４Ｓ)−ｐ−フェニルフェニルメチル)−４−アミノ−２Ｒ−メチルブタン酸エチルエステル；
(Ｓ)−シス−４−[１−[２−(５−インダニルオキシカルボニル)−３−(２−メトキシエトキシ)プロピル]−１−シクロペンタンカルボキサミド]−１−シクロヘキサンカルボン酸；
３−(１−[６−endo−ヒドロキシメチル−ビシクロ[２,２,１]ヘプタン−２−exo−カルバモイル]シクロペンチル)−２−(２−メトキシエチル)プロパン酸；
Ｎ−(１−(３−(Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−(Ｓ)−プロリルアミノ)−２(Ｓ)−ｔ−ブトキシ−カルボニルプロピル)シクロペンタンカルボニル)−Ｏ−ベンジル−(Ｓ)−セリンメチルエステル；
４−[[２−(メルカプトメチル)−１−オキソ−３−フェニルプロピル]アミノ]安息香酸；
３−[１−(シス−４−カルボキシカルボニル−シス−３−ブチルシクロヘキシル−ｒ−１−カルバモイル)シクロペンチル]−２Ｓ−(２−メトキシエトキシメチル)プロパン酸；
Ｎ−((２Ｓ)−２−(４−ビフェニルメチル)−４−カルボキシ−５−フェノキシバレリル)グリシン；
Ｎ−(１−(Ｎ−ヒドロキシカルバモイルメチル)−１−シクロペンタンカルボニル)−Ｌ−フェニルアラニン；
(Ｓ)−(２−ビフェニル−４−イル)−１−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)エチルアミノ)メチルホスホン酸；
(Ｓ)−５−(Ｎ−(２−(ホスホノメチルアミノ)−３−(４−ビフェニル)プロピオニル)−２−アミノエチル)テトラゾール；
β−アラニン；
３−[１,１'−ビフェニル]−４−イル−Ｎ−[ジフェノキシホスフィニル)メチル]−Ｌ−アラニル；
Ｎ−(２−カルボキシ−４−チエニル)−３−メルカプト−２−ベンジルプロパンアミド；
２−(２−メルカプトメチル−３−フェニルプロピオンアミド)チアゾール−４−イルカルボン酸；
(Ｌ)−(１−((２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル)−メトキシ)カルボニル)−２−フェニルエチル)−Ｌ−フェニルアラニル)−β−アラニン；
Ｎ−[Ｎ−[(Ｌ)−[１−[(２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル)−メトキシ]カルボニル]−２−フェニルエチル]−Ｌ−フェニルアラニル]−(Ｒ)−アラニン；
Ｎ−[Ｎ−[(Ｌ)−１−カルボキシ−２−フェニルエチル]−Ｌ−フェニルアラニル]−(Ｒ)−アラニン；
Ｎ−[２−アセチルチオメチル−３−(２−メチル−フェニル)プロピオニル]−メチオニンエチルエステル；
Ｎ−[２−メルカプトメチル−３−(２−メチルフェニル)プロピオニル]−メチオニン；
Ｎ−[(２Ｓ)−メルカプトメチル−３−(２−メチルフェニル)プロパノイル]−(Ｓ)−イソセリン；
Ｎ−(Ｓ)−[３−メルカプト−２−(２−メチルフェニル)プロピオニル]−(Ｓ)−２−メトキシ−(Ｒ)−アラニン；
Ｎ−[１−[[(１Ｓ)−ベンジルオキシ−カルボニル−３−フェニルプロピル]アミノ]シクロペンチルカルボニル]−(Ｓ)−イソセリン；
Ｎ−[１−[[(１Ｓ)−カルボニル−３−フェニルプロピル]アミノ]−シクロペンチルカルボニル]−(Ｓ)−イソセリン；
１,１'−[ジチオビス−[(２Ｓ)−(２−メチルベンジル)−１−オキソ−３,１−プロパンジイル]]−ビス−(Ｓ)−イソセリン；
１,１'−[ジチオビス−[(２Ｓ)−(２−メチルベンジル)−１−オキソ−３,１−プロパンジイル]]−ビス−(Ｓ)−メチオニン；
Ｎ−(３−フェニル−２−(メルカプトメチル)−プロピオニル)−(Ｓ)−４−(メチルメルカプト)メチオニン；
Ｎ−[２−アセチルチオメチル−３−フェニル−プロピオニル]−３−アミノ安息香酸；
Ｎ−[２−メルカプトメチル−３−フェニル−プロピオニル]−３−アミノ安息香酸；
Ｎ−[１−(２−カルボキシ−４−フェニルブチル)−シクロペンタン−カルボニル]−(Ｓ)−イソセリン；
Ｎ−[１−(アセチルチオメチル)シクロペンタン−カルボニル]−(Ｓ)−メチオニンエチルエステル；
(３Ｓ)−[２−(アセチルチオメチル)−３−フェニル−プロピオニル]アミノ−ε−カプロラクタム；
Ｎ−(２−アセチルチオメチル−３−(２−メチルフェニル)プロピオニル)−メチオニンエチルエステル。
【００５７】
別の態様において、本発明は、以下のものを提供する：
（ｉ）上記の方法のいずれかまたは上記の疾患もしくは障害の処置または予防に用いるための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記載の式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物、
（ｉｉ）本発明のＰＤＥ１阻害剤、例えば、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記載の式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物と、例えば、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰまたはネプリライシン）阻害剤および／またはホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）阻害剤から選択される心血管障害の処置に有用な第２の治療剤とを含む、上記の組合せ；
（ｉｉｉ）上記のような疾患または状態の処置または予防のための（医薬の製造における）本明細書に記載の遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物、または組合せの使用、
（ｉｖ）上記のような疾患または状態の処置または予防における使用のための、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物、本明細書に記載の組合せ、または上記の本発明の医薬組成物。
【００５８】
発明の詳細な説明
他に特記しない限りまたは文脈から明らかではない限り、本明細書における以下の用語は以下の意味を有する。
（ａ）本明細書で用いる場合、「アルキル」とは、飽和または不飽和の、好ましくは飽和の、好ましくは１〜６個の炭素原子、実施態様によっては１〜４個の炭素原子を有し、直鎖または分枝鎖であり得、例えばハロゲン（例えば、クロロまたはフルオロ）またはヒドロキシで、一、二または三置換されていてもよい、炭化水素基である。
【００５９】
用語「で置換されていてもよい」とは、置換基で置換されているかまたは非置換であることを意図する。一の実施態様において、本発明は、置換されている。別の実施態様において、本発明は非置換である。
【００６０】
本発明の化合物、例えば、本明細書に記載の式Ｉまたは式１.１〜１.３９のいずれかの化合物は、遊離形態または塩形態で、例えば酸付加塩として、存在し得る。本明細書において、他に特記しない限り「本発明の化合物」という語句は、いずれかの形態、例えば遊離形態もしくは酸付加塩形態の化合物、または化合物が酸性置換基を含有する場合には塩基付加塩形態での化合物を包含すると解されるべきである。本発明の化合物は、医薬としての使用が意図されており、したがって、薬学的に許容される塩が好ましい。医薬的使用に適さない塩は、例えば、本発明の遊離化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の単離または精製に有用であり得、したがって包含される。
【００６１】
本発明の化合物は、プロドラッグ形態で存在する場合がある。プロドラッグ形態は、体内で本発明の化合物に変わる化合物である。例えば、本発明の化合物がヒドロキシまたはカルボキシ置換基を含有する場合、これらの置換基は、生理学的に加水分解可能かつ許容されるエステルを形成し得る。本明細書で用いる場合、「生理学的に加水分解可能かつ許容されるエステル」とは、生理学的条件下で加水分解可能であり、投与される投与量で自体が生理学的に耐容性である酸（ヒドロキシ置換基を有する本発明の化合物の場合）またはアルコール（カルボキシ置換基を有する本発明の化合物の場合）を生じる、本発明の化合物のエステルを意味する。したがって、本発明の化合物がヒドロキシ基を含有する場合、例えば化合物−ＯＨの場合、該化合物のアシルエステルプロドラッグ、すなわち、化合物−Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−４アルキルは、体内で加水分解して、一方で生理学的に加水分解可能なアルコール（化合物−ＯＨ）を、他方で酸（例えば、ＨＯＣ(Ｏ)−Ｃ１−４アルキル）を形成することができる。あるいは、本発明の化合物がカルボン酸を含有する場合、例えば化合物−Ｃ(Ｏ)ＯＨの場合、該化合物の酸エステルプロドラッグ、化合物−Ｃ(Ｏ)Ｏ−Ｃ１−４アルキルは、加水分解して、化合物−Ｃ(Ｏ)ＯＨまたはＨＯ−Ｃ１−４アルキルを形成することができる。当然のことではあるが、かくして、該用語は、慣用の医薬プロドラッグ形態を包含する。
【００６２】
本発明の化合物は、それらのエナンチオマー、ジアステレオマーおよびラセミ体、ならびにそれらの多形体、水和物、溶媒和物および複合体を含む。本発明の範囲内のいくつかの個々の化合物は二重結合を含有し得る。本発明における二重結合の表示は、二重結合のＥ異性体およびＺ異性体の両方を含む。加えて、本発明の範囲内のいくつかの化合物は、１つ以上の不斉中心を含有し得る。本発明は、光学的に純粋な立体異性体のいずれか、および立体異性体のあらゆる組み合わせを含む。
【００６３】
本発明の化合物がその安定な同位体および不安定な同位体を含むことも意図される。安定な同位体は、同じ種（すなわち、元素）の豊富な核種と比べてさらなる中性子１個を含む非放射性同位体である。このような同位体を含む化合物の活性は保持され、このような化合物はまた非同位体類似体の薬物動態の測定にも有用性があることが期待される。例えば、本発明の化合物のある位置の水素原子を重水素(非放射性の安定な同位体)と置き換え得る。既知の安定な同位体の例としては、重水素、１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、同じ種（すなわち、元素）の豊富な核種と比べてさらなる中性子を含む放射性同位体である不安定な同位体、例えば、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１１Ｃ、１８Ｆを、Ｉ、ＣおよびＦの対応する豊富な核種と置き換え得る。本発明の化合物の有用な同位体の他の例は、１１Ｃ同位体である。これらの放射性同位体は、本発明の化合物の放射性イメージングおよび／または薬物動態研究に有用である。
【００６４】
融点は未補正であり、（ｄｅｃ）は分解を意味する。温度は摂氏度（℃）で示し、他に特記しない限り、操作は室温または環境温度、すなわち、１８〜２５℃の範囲の温度で行う。クロマトグラフィーはフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーを意味し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はシリカゲルプレートで行う。ＮＭＲデータは、主構造決定的プロトンのデルタ値であり、内部標準としてのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ）で示す。シグナルの形状について慣用の略語を使用する。結合定数（Ｊ）はＨｚで示す。マススペクトル（ＭＳ）について、同位体分裂により複数マススペクトルピークが生じる場合、最低質量主要イオンを、分子について記戴する。溶媒混合物組成は体積パーセンテージまたは体積比で示す。ＮＭＲスペクトルが複雑である場合には構造決定的シグナルのみ示す。
【００６５】
本発明の化合物の使用方法
本発明の化合物は、例えば、ドパミンおよび一酸化窒素（ＮＯ）のような環状ヌクレオチド合成の阻害または誘導物質のレベル減少に起因するＰＤＥ１発現増加またはｃＧＭＰ／ＰＫＧ活性の発現減少の結果としての、ｃＧＭＰ／ＰＫＧ媒介経路の混乱または損傷により特徴付けられる疾患の処置に有用である。ＰＤＥ１ＡまたはＰＤＥ１Ｃの阻害により、例えば、この作用がｃＧＭＰ／ＰＫＧシグナル伝達（例えばｃＧＭＰ増強）の減弱を逆転または予防し、この作用が心肥大を調節すると考えられる。したがって、本明細書に記戴するＰＤＥ１阻害剤、例えば、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記戴の式１.１−１.３９の化合物の投与または使用は、心肥大を制御する（例えば心肥大を予防するおよび／または逆転させる）可能性のある手段を提供し、ある実施態様において、種々の心血管疾患および障害の処置を提供する。
【００６６】
本発明のＰＤＥ１阻害剤は、一般に、ＰＤＥ１に対して選択的（一般に、非特異的な相互作用＞１０倍、より好ましくは＞２５倍、さらにより好ましくは＞１００倍のＰＤＥ１に対する親和性）であり、マウスにおいて血漿中にて優れた経口利用能を示し、脳浸透は極めて少ない。本発明のＰＤＥ１阻害剤を投与したマウスにおける血液／血漿比は、好ましくは、０.４未満、より好ましくは０.２未満、より好ましくは０.１以下である。
【００６７】
本発明のＰＤＥ１阻害剤（すなわち、上記式Ｉ）は、ＰＤＥ１阻害剤が別の活性薬剤と同時に、別々に、または逐次的に投与され得る併用療法で用いられ得る。したがって、この組合せは、自由組合せ（free combination）または固定組合せ（fixed combination）であり得る。
【００６８】
治療的使用に言及している場合、用語「同時に」とは、２種類以上の活性成分を同じ投与経路で同じ時またはほぼ同じ時に投与することを意味する。
【００６９】
治療的使用に言及している場合、用語「別々に」とは、２種類以上の活性成分を異なる投与経路で同じ時またはほぼ同じ頃に投与することを意味する。
【００７０】
別の活性薬剤と組み合わせる本発明の化合物の用量は、該薬物の承認された用量、臨床的もしくは文献記載の試験用量、または単剤療法として該薬物に用いられる用量と同じであり得るか、またはより低い用量であり得る。
【００７１】
例えば本明細書に記載の本発明の化合物を用いて、ｃＧＭＰ／ＰＫＧシグナル伝達の増強によって予防または寛解し得る疾患および障害（例えば、心血管疾患）としては、肥大（例えば、心肥大）、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、鬱血性心不全、狭心症、脳卒中、高血圧症、本態性高血圧症、肺高血圧症、肺動脈高血圧症、二次性肺高血圧症、孤立性収縮期高血圧症、糖尿病関連高血圧症、アテローム性動脈硬化症関連高血圧症、腎血管性高血圧症、腎不全、線維症、炎症性疾患または障害、血管リモデリング、および結合組織疾患または障害（例えば、マルファン症候群）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
一の実施態様において、本明細書に記載の本発明の化合物は、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）の処置または予防により、脳卒中の処置または予防に有用である。いかなる理論にも縛られないが、本発明の化合物は、脳への血流の量および／または濃度を実際増加させることにより一過性脳虚血発作のリスクを予防または処置し得ると考えられる。本明細書に記戴の化合物は、血液脳関門の顕著な通過がなく、脳への血流を増加させ得ることが意図される。
【００７３】
別の実施態様において、本発明は、さらに、以下の疾患または障害の処置または予防のための本発明の化合物の使用を提供する：デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、およびエメリー・ドレイフス型筋ジストロフィー。一の実施態様において、本発明の化合物は、上記の型の筋ジストロフィーに伴う心機能不全の処置に有用である。別の実施態様において、本発明の化合物は、潜在的に、これらの上記の型の筋ジストロフィーに伴う心肥大を軽減または逆転させ得る。
【００７４】
本明細書で用いる場合、「ＰＤＥ１阻害剤」とは、実施例１に記載されているかまたはそれと同様の固定化金属親和性粒子試薬ＰＤＥアッセイにおいて、例えば１μＭ未満、好ましくは７５ｎＭ未満、好ましくは１ｎＭ未満のＩＣ５０をもって、ｃＧＭＰのホスホジエステラーゼ媒介（例えば、ＰＤＥ１媒介、特にＰＤＥ１Ｂ媒介）加水分解を選択的に阻害する式Ｉまたは式１.１−１.３９のいずれかの化合物をいう。
【００７５】
用語「本発明の化合物」もしくは「本発明のＰＤＥ１阻害剤」または類似の用語は、本明細書に記載の化合物の全て、例えば、遊離形態または塩形態の、式Ｉまたは式１.１−１.３９のいずれかの化合物を包含する。
【００７６】
用語「処置」および「処置する」とは、それに合うように、疾患の症状の予防および処置または寛解および疾患原因の処置を含むと理解すべきである。
【００７７】
処置方法について、用語「有効量」とは、特定の疾患または障害を処置することができる治療有効量を含むことを意図する。
【００７８】
用語「患者」はヒトまたは非ヒト（すなわち、動物）患者を含む。特定の実施態様において、本発明は、ヒトおよび非ヒトの両者を含む。別の実施態様において、本発明は非ヒトを含む。他の実施態様において、本用語はヒトを含む。
【００７９】
本明細書で用いる場合、用語「含む」は開放末端であることを意図し、記載されていないさらなる要素または方法工程を除外しない。
【００８０】
本発明の化合物、例えば、遊離形態または薬学的に許容される塩形態の、本明細書に記載の式Ｉまたは式１.１−１.３９のいずれかの化合物は、唯一の治療剤として使用し得るが、他の活性薬剤と組み合わせて、または共投与にも使用し得る。
【００８１】
本発明の実施に際して使用する投与量は、当然、例えば処置する特定の疾患または状態、使用する特定の化合物、投与方法および望む治療に応じて変わる。当該化合物は、経口、非経口、経皮または吸入を含むあらゆる適切な経路で投与され得るが、好ましくは経口投与される。一般に、例えば上記疾患の処置のための、満足のいく結果は、約０.０１〜２.０ｍｇ／ｋｇの程度の投与量での経口投与により得られることが示唆される。したがって、大型哺乳動物、例えばヒトにおいて、指示される経口投与のための日用量は、約０.７５〜３００ｍｇの範囲であり、好都合には１日１回または２〜４回の分割量で、または徐放性形態で投与する。かくして、経口投与のための単位投与形態は、例えば本明細書に記載の化合物約０.２〜７５または１５０ｍｇまたは３００ｍｇ、例えば約０.２または２.０〜１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００または３００ｍｇを薬学的に許容される希釈剤または担体と一緒に含み得る。
【００８２】
本発明の化合物を含む医薬組成物は、慣用の希釈剤または賦形剤および製剤分野で知られる技術を使用して製剤し得る。かくして、経口投与形態としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤および類似のものが挙げられる。
【００８３】
本発明の化合物の製造方法
本発明の化合物およびその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載および例示される方法を使用して、および／またはそれらに類似する方法により、および／または化学分野で知られる方法により、製造され得る。このような方法は下記のものを含むが、これらに限定されない。これらの方法のための出発物質は、市販されていないならば、既知化合物の合成と同様または類似の技術を使用して、化学分野から選択される手順により製造され得る。
【００８４】
種々のＮＥＰ阻害剤およびその出発物質は、米国特許出願公開第２００６−００４１０１４号、欧州特許出願公開第１０９７７１９号、米国特許第８,５１３,２４４号および米国特許出願公開第２０１３−０３３０３６５号に記載の方法を用いて製造され得る。ここに引用する全ての参考文献は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する。
【００８５】
種々の出発物質および／または本発明の化合物は、国際公開第２００６／１３３２６１号および国際公開第２００９／０７５７８４号に記載の方法を用いて製造され得る。ここに引用する全ての参考文献は出典明示によりその全体として本明細書の一部を構成する。
【００８６】
用語および略語：
ＤＭＦ＝Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ＭｅＯＨ＝メタノール、
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン、
ｅｑｕｉｖ．＝当量、
ｈ＝時間、
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー、
ＬｉＨＭＤＳ＝リチウムビス(トリメチルシリル)アミド、
ＮＭＰ＝１−メチル−２−ピロリジノン、
Ｐｄ２(ｄｂａ)３＝トリス[ジベンジリデンアセトン]ジパラジウム(０)、
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、
ＴＦＭＳＡ＝トリフルオロメタンスルホン酸、
キサントホス＝４,５−ビス(ジフェニルホスフィノ)−９,９−ジメチルキサンテン
【実施例】
【００８７】
実施例１：  ３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−４−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
【化４】
2020007357.tif 000005
【００８８】
（ａ）２−(４−ブロモベンジル)−７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン
７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（１６１ｇ、５６２ｍｍｏｌ）、１−ブロモ−４−(ブロモメチル)ベンゼン（１５７ｇ、６２８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（９３.２ｇ、６７４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８００ｍＬ）中懸濁液を、反応が完了するまで室温で撹拌する。該反応混合物を水（５Ｌ）中に注ぐ。濾過後、濾過ケーキを水およびエタノールで連続的に洗浄し、次に、真空乾燥させて、生成物２２６ｇ（収率：８８％）を得る。MS (ESI) m/z 455.1 [M+H]+。
【００８９】
（ｂ）２−(４−ブロモベンジル)−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン
２−(４−ブロモベンジル)−７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（２２６ｇ、４９６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（３２０ｍＬ）中懸濁液にＴＦＡ（５００ｍＬ）をゆっくりと添加し、次に、ＴＦＭＳＡ（１６０ｍＬ）をゆっくりと添加する。該反応混合物を室温で一夜撹拌する。溶媒を減圧除去する。得られた残留物を水（４Ｌ）および酢酸エチル（２Ｌ）で処理し、室温で３０分間撹拌し、次に、濾過する。濾過ケーキを水で完全に洗浄して残留酸を除去した後、酢酸エチルで洗浄する。得られた白色固体を加熱オーブンで乾燥させて生成物１５９ｇ（収率：９６％）を得る。MS (ESI) m/z 335.0 [M+H]+。
【００９０】
（ｃ）６−クロロ−５−メチル−２−(４−ブロモベンジル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
２−(４−ブロモベンジル)−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（１５９ｇ、４７５ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ３（３００ｍＬ）に懸濁し、次に、ゆっくりと加熱還流させる。該混合物を６０時間還流して後、ＰＯＣｌ３を減圧除去する。得られた残留物を塩化メチレン（５Ｌ）に溶解し、０℃に冷却し、次に、飽和重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に調整する。濾過後、得られた固体を水で２回洗浄し、次に、真空乾燥させて、生成物１５７ｇ（収率：９４％）を得る。MS (ESI) m/z 353.0 [M+H]+。
【００９１】
（ｄ）６−(１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イルアミノ)−５−メチル−２−(４−ブロモベンジル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
６−クロロ−５−メチル−２−(４−ブロモベンジル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（１５７ｇ、４４４ｍｍｏｌ）および２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール（２３６ｇ、２.６５ｍｏｌ）のＮＭＰ（１.３Ｌ）中混合物を１２０〜１２５℃で２時間加熱し、次に、冷水中に注ぐ。濾過後、濾過ケーキを水で２回洗浄し、次に、真空乾燥させて、生成物１３４ｇ（収率：７４％）を得る。MS (ESI) m/z 406.1 [M+H]+。
【００９２】
（ｅ）２−(４−ブロモベンジル)−７,８−ジヒドロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
６−(１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イルアミノ)−５−メチル−２−(４−ブロモベンジル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（１３４ｇ、３３０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８００ｍＬ）中溶液に塩化チオニル（６７ｍＬ、９２２ｍｍｏｌ）を滴下する。該反応混合物を、反応が完了するまで室温で撹拌する。該混合物を冷水中に注ぎ、次に、水酸化アンモニウム水溶液でｐＨ８〜９に調整する。濾過後、得られた固体を水で洗浄し、次に、真空乾燥させて、生成物１１８ｇ（収率：９２％）を得る。MS (ESI) 388.1 [M+H]+。
【００９３】
（ｆ）２−(４−フェノキシベンジル)−７,８−ジヒドロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
フェノール（５７ｇ、６０６ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２００ｇ、６１４ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（９００ｍＬ）中懸濁液に２−(４−ブロモベンジル)−７,８−ジヒドロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（１１８ｇ、３０４ｍｍｏｌ）を添加した後、２,２,６,６−テトラメチルヘプタン−３,５−ジオン（７ｍＬ、３３.５ｍｍｏｌ）およびＣｕＣｌ（１５ｇ、１５２ｍｍｏｌ）を添加する。該反応混合物をアルゴン雰囲気下にて１２０℃で１０時間加熱する。反応完了後、該混合物を水（４Ｌ）で希釈し、次に、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機相を蒸発乾固する。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、生成物１０３ｇ（収率：８４％）を得る。MS (ESI) m/z 402.2 [M+H]+。
【００９４】
（ｇ）７,８−ジヒドロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
２−(４−フェノキシベンジル)−７,８−ジヒドロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（１０３ｇ、２５７ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２１０ｍＬ）中懸濁液にＴＦＡ（６００ｍＬ）を添加して褐色（tan）の溶液を得、次に、ＴＦＭＳＡ（１６８ｍＬ）を添加する。該反応混合物を、出発物質が消失するまで室温で撹拌する。該混合物を冷水（３Ｌ）中に注ぐ。濾過後、濾過ケーキを水で２回洗浄し、次に、水酸化アンモニウム水溶液で塩基性化した後、撹拌しながら酢酸エチルを添加する。沈殿した固体を濾過し、水で３回、酢酸エチルで２回、そしてメタノールで１回、連続洗浄し、次に、真空乾燥させて、生成物４５ｇ（収率：８０％）を得る。MS (ESI) m/z 220.2 [M+H]+。
【００９５】
（ｈ）７,８−ジヒドロ−２−(４−メトキシフェニル)−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
７,８−ジヒドロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（３ｇ、１３.６８ｍｍｏｌ）、１−(クロロメチル)−４−メトキシベンゼン（１.９９ｍＬ、１４.３７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３.７８ｇ、２７.３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中懸濁液を、反応が完了するまで室温で撹拌する。溶媒を除去し、残留物を水で３回（３×７０ｍＬ）洗浄し、次に、真空乾燥させて、粗生成物４.３ｇ（収率：９３％）得、さらなる精製を行わずに次工程に用いる。MS (ESI) m/z 340.2 [M+H]+。
【００９６】
（ｉ）７,８−ジヒドロ−２−(４−メトキシフェニル)−３−クロロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
２５℃にて７,８−ジヒドロ−２−(４−メトキシフェニル)−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（４.３ｇ、１２.６７ｍｍｏｌ）およびヘキサクロロエタン（３.３３ｇ、１３.９４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１００ｍＬ）中溶液にＴＨＦ中１.０Ｍ  ＬｉＨＭＤＳ（２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を滴下する。該反応混合物を２５℃で３０分間撹拌し、次に、水（１５０ｍＬ）でクエンチする。塩化メチレン相を分取し、水相を塩化メチレンで２回（２×６０ｍＬ）抽出する。合わせた塩化メチレン相をブラインで３回（３×７０ｍＬ）洗浄し、塩化メチレンを蒸発乾固して粗生成物４.６ｇ（収率：９７％）を得、さらなる精製を行わずに次工程に用いる。MS (ESI) m/z 374.1 [M+H]+。
【００９７】
（ｊ）７,８−ジヒドロ−３−クロロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
７,８−ジヒドロ−２−(４−メトキシフェニル)−３−クロロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（４.６ｇ、１２.３１ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２３ｍＬ）中懸濁液にＴＦＭＳＡ（１.７ｍＬ）をゆっくりと添加する。該反応混合物を室温で一夜撹拌する。溶媒を減圧除去する。得られた残留物を水（１００ｍＬ）で処理し、次に、０℃にて２８％水酸化アンモニウム（１０ｍＬ）でｐＨ８〜９に調整する。濾過後、濾液を約１５ｍＬに濃縮し、次に、塩化メチレン中１０％メタノール（５×６０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機相を蒸発乾固して、粗生成物１.９４ｇ（収率：６２％）を得、さらなる精製を行わずに次工程に用いる。MS (ESI) m/z 254.1 [M+H]+。
【００９８】
（ｋ）７,８−ジヒドロ−２−(ピリジン−４−イル−メチル)−３−クロロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
７,８−ジヒドロ−３−クロロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（２００ｍｇ、０.７８８ｍｍｏｌ）、４−クロロメチルピリジン（１５１ｍｇ、０.９４６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（５４５ｍｇ、３.９４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７ｍＬ）中懸濁液を、反応が完了するまで（約２時間）９５℃で撹拌する。溶媒を除去し、得られた粗生成物を２４ｇ中性酸化アルミニウムカートリッジで精製し、ヘキサン中０〜１００％酢酸エチル勾配液で１５分間にわたって溶離し、次に、酢酸エチルで流速２５ｍｌ／分にて３０分間溶離して、生成物１２８ｍｇ（収率：４７％）を得る。MS (ESI) m/z 345.1 [M+H]+。
【００９９】
（ｌ）７,８−ジヒドロ−２−(ピリジン−４−イル−メチル)−３−(４−フルオロフェニルアミノ)−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
７,８−ジヒドロ−２−(ピリジン−４−イル−メチル)−３−クロロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（１２０ｍｇ、０.３４８ｍｍｏｌ）、４−フルオロ−ベンゼンアミン（３６μＬ、０.３８３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（９６ｍｇ、０.６９６ｍｍｏｌ）のtert−アミルアルコール（２.３ｍＬ）中懸濁液をアルゴンで脱気し、次に、キサントホス（８.１ｍｇ、０.０１３９ｍｍｏｌ）およびＰｄ２(ｄｂａ)３（６.４ｍｇ、０.００６９６ｍｍｏｌ）を添加する。該懸濁液を再度脱気し、次に、１１０℃に加熱する。該反応混合物をアルゴン下にて１１０℃で８時間撹拌する。室温まで冷却した後、該混合物を濾過する。濾液を減圧下にて蒸発乾固する。得られた残留物をＤＭＦで処理し、次に、マイクロフィルターで濾過する。濾液を、０.１％ギ酸を含有する水中０〜２０％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、ギ酸塩として最終生成物８４ｍｇを得る（ＨＰＬＣ純度：９８％；収率：５２％）。1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 8.50 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 8.18 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.97 - 6.93 (m, 2H), 6.90 - 6.76 (m, 4H), 4.84 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.37 (s, 3H), 1.45 (s, 6H). MS (ESI) m/z 420.2 [M+H]+。
【０１００】
実施例２：  ３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((２−メチルピリミジン−５−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
【化５】
2020007357.tif 000006
【０１０１】
（ａ）７,８−ジヒドロ−２−(２−メチル−ピリミジン−５−イル−メチル)−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
７,８−ジヒドロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（２００ｍｇ、０.９２ｍｍｏｌ）、５−(クロロメチル)−２−メチルピリミジン（１３６ｍｇ、０.８４ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３５０ｍｇ、２.５６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）中懸濁液を、反応が完了するまで室温で撹拌する。該反応混合物を濾過し、濾過ケーキをＤＭＦですすぐ。回収した濾液を蒸発乾固して、粗生成物２４２ｍｇ（粗収率：７８％）を得、さらなる精製を行わずに次工程に用いる。MS (ESI) m/z 326.2 [M+H]+。
【０１０２】
（ｂ）７,８−ジヒドロ−２−(２−メチル−ピリミジン−５−イル−メチル)−３−クロロ−５,７,７−トリメチル[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
２５℃で７,８−ジヒドロ−２−(２−メチル−ピリミジン−５−イル−メチル)−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（３７０ｍｇ、１.１４ｍｍｏｌ）およびヘキサクロロエタン（８０７ｍｇ、３.４２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（４ｍＬ）中溶液にＴＨＦ中１.０Ｍ  ＬｉＨＭＤＳ（１.１４ｍＬ、１.１４ｍｍｏｌ）を滴下する。該反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次に、塩化メチレン（１００ｍＬ）で希釈する。該混合物をＮａＨＣＯ３飽和溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で連続洗浄し、次に、蒸発乾固する。得られた粗生成物を２４ｇ塩基性酸化アルミニウムカートリッジで精製し、酢酸エチルで流速２５ｍＬ／分にて溶離して、生成物４０２ｍｇ（収率：９５％）を得る。MS (ESI) m/z 360.1 [M+H]+。
【０１０３】
（ｃ）７,８−ジヒドロ−２−(２−メチル−ピリミジン−５−イル−メチル)−３−(４−フルオロフェニルアミノ)−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
７,８−ジヒドロ−２−(２−メチル−ピリミジン−５−イル−メチル)−３−クロロ−５,７,７−トリメチル−[２Ｈ]−イミダゾ−[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（３５０ｍｇ、０.９７３ｍｍｏｌ）、４−フルオロベンゼンアミン（１１０μＬ、１.１６７ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２６９ｍｇ、１.９４６ｍｍｏｌ）のtert−アミルアルコール（３.０ｍＬ）中懸濁液をアルゴンで脱気し、次に、キサントホス（４５ｍｇ、０.０７７８ｍｍｏｌ）およびＰｄ２(ｄｂａ)３（３６ｍｇ、０.０３９ｍｍｏｌ）を添加する。該懸濁液を再度脱気し、次に、１１０℃に加熱する。該反応混合物をアルゴン下で１１０℃にて２４時間撹拌する。室温に冷却した後、該混合物を濾過する。濾液を減圧下にて蒸発乾固する。得られた残留物をＤＭＦで処理し、次に、マイクロフィルターで濾過する。濾液を、０.１％ギ酸を含有する水中０〜２０％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、ギ酸塩として、最終生成物３５６ｍｇ（ＨＰＬＣ純度：９７％；収率：７４％）を得る。1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 8.34 (s, 2H), 7.17 (s, 1H), 7.05 - 7.01 (m, 2H), 6.97 - 6.94 (m, 2H), 4.84 (s, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 1.48 (s, 6H).  MS (ESI) m/z 435.2 [M+H]+。
【０１０４】
実施例３：  ３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−(ピリジン−３−イルメチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
【化６】
2020007357.tif 000007
合成方法は実施例２と類似しており、工程（ａ）において５−(クロロメチル)−２−メチルピリミジンの代わりに３−クロロメチルピリジンを添加する。ギ酸塩として最終生成物（ＨＰＬＣ純度：９６％；収率：４３％）を得る。1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 8.52 - 8.5 (m, 2H), 8.23 (s, 1H), 7.35 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.22 - 7.19 (m, 1H), 7.01 - 6.936.98 (m, 2H), 6.94 - 6.91 (m, 2H), 4.89 (s, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.42 (s, 3H), 1.50 (s, 6H).  MS (ESI) m/z 420.2 [M+H]+。
【０１０５】
実施例４：  (６ａＲ,９ａＳ)−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オン
【化７】
2020007357.tif 000008
(６ａＲ,９ａＳ)−２−(４−(６−フルオロピリジン−２−イル)ベンジル)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４−(２Ｈ)−オン（２０ｍｇ、０.０３９ｍｍｏｌ）をガラス融点管（glass melting point tube）に入れ、次に、２４０℃で９０分間加熱する。室温に冷却した後、該物質をＤＭＦに溶解し、次に、０.１％ギ酸を含有する水中０〜２４％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、白色固体として標記化合物１２ｍｇ（ＨＰＬＣ純度：９９％；収率：６０％）を得る。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 10.47 (s, 1H), 7.49 - 7.35 (m, 3H), 7.28 - 7.16 (m, 2H), 7.09 - 6.97 (m, 3H), 6.95 (s, 1H), 6.87 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.46 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.35 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.78 - 4.61 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.21 (dd, J = 12.8, 6.1 Hz, 1H), 2.07 - 1.90 (m, 1H), 1.86 - 1.43 (m, 4H).  MS (ESI) m/z 506.2 [M+H]+。
【０１０６】
実施例５：  ４−(((６ａＲ,９ａＳ)−５−メチル−４−オキソ−３−(フェニルアミノ)−４,５,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−２(６aＨ)−イル)メチル)ベンゼンスルホンアミド
【化８】
2020007357.tif 000009
(６ａＲ,９ａＳ)−５−メチル−３−(フェニルアミノ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４−(２Ｈ)−オン（１００ｍｇ、０.３１ｍｍｏｌ）、４−(ブロモメチル)ベンゼンスルホンアミド（９３ｍｇ、０.３７ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（５２ｍｇ、０.３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中懸濁液を、反応が完了するまで室温で撹拌する。該反応混合物を濾過し、回収した濾液を、０.１％ギ酸を含有する水中０〜３５％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、オフホワイト色の固体として標記化合物（３３ｍｇ；ＨＰＬＣ純度：９７％；収率：２２％）を得る。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 7.08 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.93 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.01 - 4.89 (m, 2H), 4.84 (br, 2H), 4.83 - 4.76 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.28 (dd, J = 12.5, 6.1 Hz, 1H), 2.18 - 1.72 (m, 4H), 1.68 - 1.55 (m, 1H). MS (ESI) m/z 492.2 [M+H]+。
【０１０７】
実施例６：  ３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
【化９】
2020007357.tif 000010
（ａ）７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン
７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（６.２８ｇ、２２ｍｍｏｌ）、５−(クロロメチル)−２−メチルピリジン（３.１ｇ、２２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１５ｇ、１１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中懸濁液を、反応が完了するまで室温で撹拌する。該反応混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、次に、ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ×３）で抽出する。合わせた有機相を５％クエン酸（４０ｍＬ×３）およびブライン（４０ｍＬ×２）で洗浄し、次に、減圧下にて蒸発乾固して、薄黄色の固体として生成物９.５ｇを得る。MS (ESI) m/z 392.2 [M+H]+。
【０１０８】
（ｂ）３−クロロ−７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン
室温で７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（７８３ｍｇ、２.０ｍｍｏｌ）およびヘキサクロロエタン（４９５ｍｇ、２.１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５ｍＬ）中溶液にＴＨＦ中１.０Ｍ  ＬｉＨＭＤＳ（８ｍＬ、８ｍｍｏｌ）を滴下する。該反応混合物を室温で１時間撹拌し、次に、水（１００ｍＬ）でクエンチする。塩化メチレン相を分取し、水相を塩化メチレン（２０ｍＬ×３）で抽出する。合わせた塩化メチレン相を蒸発乾固する。残留物を、酢酸エチル中０％〜２０％メタノール勾配液を用いてシリカカラムで精製して、生成物（３７０ｍｇ、収率４３％）を得る。MS (ESI) m/z 426.1 [M+H]+。
【０１０９】
（ｃ）３−(４−フルオロフェニルアミノ)−７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン
３−クロロ−７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（２１０ｍｇ、０.４９ｍｍｏｌ）、４−フルオロ−ベンゼンアミン（１０８ｍｇ、０.９７ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２０２ｍｇ、１.４６ｍｍｏｌ）のtert−アミルアルコール（２.５ｍＬ）中懸濁液をアルゴンで脱気し、次に、キサントホス（１４ｍｇ、０.０２４ｍｍｏｌ）およびＰｄ２(ｄｂａ)３（１２ｍｇ、０.０１３ｍｍｏｌ）を添加する。該懸濁液を再度脱気し、次に、１１０℃に加熱する。該反応混合物をアルゴン下にて１１０℃で２４時間撹拌する。室温に冷却した後、該混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、次に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ×３）で抽出する。合わせた有機相を減圧下にて蒸発乾固して、粗生成物２５０ｍｇを得、さらなる精製を行わずに次工程に用いる。MS (ESI) m/z 501.3 [M+H]+。
【０１１０】
（ｄ）３−(４−フルオロフェニルアミノ)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン
粗３−(４−フルオロフェニルアミノ)−７−(４−メトキシベンジル)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（２５０ｍｇ）の塩化メチレン（６ｍＬ）中懸濁液にＴＦＡ（１ｍＬ）をゆっくりと添加し、次に、ＴＦＭＳＡ（０.５ｍＬ）をゆっくりと添加する。該反応混合物を室温で１時間撹拌する。溶媒を減圧除去する。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に溶解し、次に、冷ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（３０ｍＬ）中にゆっくりと添加した後、ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ×３）で抽出する。合わせた有機相を減圧下にて蒸発乾固し、さらに、真空ポンプで乾燥させて、粗生成物３００ｍｇを得、さらなる精製を行わずに次工程に用いる。MS (ESI) m/z 381.1 [M+H]+。
【０１１１】
（ｅ）６−クロロ−３−(４−フルオロフェニルアミノ)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
粗３−(４−フルオロフェニルアミノ)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４,６(５Ｈ,７Ｈ)−ジオン（１８０ｍｇ）をＰＯＣｌ３（１０ｍＬ）に懸濁させ、次に、マイクロ波反応器にて１８０℃で１時間加熱する。該混合物を室温まで冷却した後、ＰＯＣｌ３を減圧除去する。得られた残留物をヘキサンで洗浄し、次に、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１０：１）に溶解する。該溶液をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、次に、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１０：１）で３回抽出する。合わせた有機相を減圧下にて蒸発乾固し、次に、さらに真空乾燥させて、灰色の固体として粗生成物１２０ｍｇを得、さらなる精製を行わずに次工程に用いる。MS (ESI) m/z 399.1 [M+H]+。
【０１１２】
（ｆ）３−(４−フルオロフェニルアミノ)−６−(１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イルアミノ)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
密閉バイアル中の粗６−クロロ−３−(４−フルオロフェニルアミノ)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（１２０ｍｇ）、ＤＩＰＥＡ（０.６ｍＬ）および２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール（３００ｍｇ、３.４ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（１０ｍＬ）中混合物を１０５℃で２０時間加熱する。室温まで冷却した後、該混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１００ｍＬ）で希釈し、次に、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ×３）で抽出する。合わせた有機相を減圧下にて蒸発乾固する。残留物を、０.１％ギ酸を含有する水中０〜２０％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、生成物２６ｍｇを得る。MS (ESI) m/z 452.2 [M+H]+。
【０１１３】
（ｇ）３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
３−(４−フルオロフェニルアミノ)−６−(１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イルアミノ)−５−メチル−２−((６−メチルピリジン−３−イル)メチル)−２Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（２６ｍｇ、０.０５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０.５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液に塩化チオニル（２滴）を滴下する。該反応混合物を室温で３０分間撹拌する。溶媒を減圧除去した後、残留物を、０.１％ギ酸を含有する水中０〜２０％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、オフホワイト色の固体として生成物１３.９ｍｇ（収率５６％；ＨＰＬＣ純度：９５％）を得る。1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 8.12 (s, 1H), 7.29 - 7.25 (m, 1H), 7.06 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.00 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.97 - 6.89 (m, 2H), 4.83 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 1.47 (s, 6H). MS (ESI) m/z 434.2 [M+H]+。
【０１１４】
実施例７：  ４−((３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−４−オキソ−４,５,７,８−テトラヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−２−イル)メチル)ベンゼンスルホンアミド
【化１０】
2020007357.tif 000011
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（１３２ｍｇ、０.５０ｍｍｏｌ）、４−(ブロモメチル)ベンゼンスルホンアミド（１０１ｍｇ、０.４０ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（４３ｍｇ、０.４１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中懸濁液を室温で一夜撹拌する。該反応混合物を濾過し、回収した濾液を、０.１％ギ酸を含有する水中０〜２０％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、オフホワイト色の固体として標記化合物（８.８ｍｇ；ＨＰＬＣ純度：９７％）を得る。1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 7.81 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.97 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.93 - 6.86 (m, 3H), 4.88 (s, 2H), 4.79 (br, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.36 (s, 3H), 1.43 (s, 6H). MS (ESI) m/z 498.1 [M+H]+。
【０１１５】
実施例８：  ３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
【化１１】
2020007357.tif 000012
３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−２−(４−(６−フルオロピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（３５０ｍｇ、０.６８ｍｍｏｌ）を水（３ｍＬ）に懸濁させた後、濃ＨＣl（３ｍＬ）およびジオキサン（６ｍＬ）を添加する。該混合物を２４時間還流させながら加熱する。溶媒を減圧除去した後、残留物を、１％ギ酸を含有する水中０〜２２％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間精製してオフホワイト色の固体として標記化合物２４０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度：９５％；収率：６９％）を得る。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.59 - 7.46 (m, 3H), 7.10 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.02 - 6.85 (m, 4H), 6.55 (dd, J = 9.1, 1.0 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 7.0, 1.0 Hz, 1H), 4.96 (s, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.37 (s, 3H), 1.50 (s, 6H).  MS (ESI) m/z 512.2 [M+H]+。
【０１１６】
実施例９：  ２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−３,５,７,７−テトラメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
【化１２】
2020007357.tif 000013
合成方法は実施例８と類似しており、出発物質として３−((４−フルオロフェニル)アミノ)−２−(４−(６−フルオロピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オンの代わりに２−(４−(６−フルオロピリジン−２−イル)ベンジル)−３,５,７,７−テトラメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オンを使用する。最終生成物を白色固体として得る（ＨＰＬＣ純度：９８％；収率：６５％）。1H NMR (500 MHz, Chloroform-d) δ 8.13 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.57 (dd, J = 9.1, 7.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.61 (dd, J = 9.2, 1.0 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 7.1, 1.0 Hz, 1H), 5.28 (s, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 1.51 (s, 6H). MS (ESI) m/z 417 [M+H]+。
【０１１７】
実施例１０：  ３−エチル−２−(４−(６−ヒドロキシピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン
【化１３】
2020007357.tif 000014
密閉マイクロ波バイアル中の３−エチル−２−(４−(６−フルオロピリジン−２−イル)ベンジル)−５,７,７−トリメチル−７,８−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(５Ｈ)−オン（８６５ｍｇ、２.０ｍｍｏｌ）の１Ｎ  ＨＣl（３ｍＬ）中溶液をマイクロ波反応器中にて１００℃で１時間加熱する。室温まで冷却した後、該混合物を１Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ５〜６に中和し、ＤＭＦ  ９ｍＬで希釈し、次に、濾過する。濾液を、１％ギ酸を含有する水中０〜１９％アセトニトリル勾配液を用いてセミ分取ＨＰＬＣシステムで１６分間にわたって精製して、オフホワイト色の固体として標記化合物１５０ｍｇ（ＨＰＬＣ純度：９９％；収率：１７％）を得る。MS (ESI) m/z 431 [M+H]+。
【０１１８】
実施例１１：  ＩＭＡＰホスホジエステラーゼアッセイキットを使用するインビトロＰＤＥＩＢ阻害の測定
ホスホジエステラーゼ１（ＰＤＥ１Ａ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃを含む）は、環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）を５'−グアノシン一リン酸（５'−ＧＭＰ）に変換するカルシウム／カルモジュリン依存性ホスホジエステラーゼ酵素である。ＰＤＥＩＢはまた、蛍光分子ｃＧＭＰ−フルオレセインのような修飾ｃＧＭＰ基質を、対応するＧＭＰ−フルオレセインに変換できる。ｃＧＭＰ−フルオレセインからのＧＭＰ−フルオレセインの産生は、例えば、ＩＭＡＰ（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）固定化金属親和性粒子試薬を使用して定量できる。
【０１１９】
簡単にいうと、ＩＭＡＰ試薬は、ＧＭＰ−フルオレセインに見られ、ｃＧＭＰ−フルオレセインに見られない、遊離５'−ホスフェートに高親和性で結合する。得られたＧＭＰ−フルオレセイン−ＩＭＡＰ複合体は、ｃＧＭＰ−フルオレセインに比して大きい。大きく、ゆっくり回転している大きな複合体と密接な関係がある小さなフルオロフォアは、それらが蛍光を発して放出される光子が、蛍光を励起させるのに使用する光子と同じ極性を維持するため、未結合フルオロフォアと区別できる。
【０１２０】
該ホスホジエステラーゼアッセイにおいて、ＩＭＡＰと結合できず、それゆえにわずかな蛍光極性化を維持するｃＧＭＰ−フルオレセインを、ＩＭＡＰと結合したとき、蛍光極性化（Δｍｐ）を大きく増加させるＧＭＰ−フルオレセインに変換させる。したがって、ホスホジエステラーゼの阻害は、Δｍｐの減少として測定される。
【０１２１】
酵素アッセイ
材料：：Molecular Devices（Sunnyvale, CA）から入手可能なＩＭＡＰ試薬（反応緩衝液、結合緩衝液、ＦＬ−ＧＭＰおよびＩＭＡＰビーズ）以外の全ての化学物質はSigma-Aldrich（St. Louis, MO）から入手可能である。
【０１２２】
アッセイ：次のホスホジエステラーゼ酵素を使用し得る。３’,５'−環状−ヌクレオチド−特異的ウシ脳ホスホジエステラーゼ（Sigma, St. Louis, MO）（主にＰＤＥＩＢであるがＰＤＥ１ＡおよびＰＤＥ１Ｃも含有する）、および当業者が例えばＨＥＫまたはＳＦ９細胞において製造し得る組換え全長ヒトＰＤＥｌＡ、ＰＤＥ１ＢおよびＰＤＥ１Ｃ。ＰＤＥｌ酵素を、５０％グリセロールで２.５Ｕ／ｍｌに再構成する。酵素１単位は、ｐＨ７.５、３０℃で１分あたり１.０μｍｏｌの３’,５'−ｃＡＭＰを５'−ＡＭＰに加水分解する。１部の酵素を１９９９部の反応緩衝液（３０μＭ  ＣａＣｌ２、１０Ｕ／ｍｌのカルモジュリン（Ｓｉｇｍａ  Ｐ２２７７）、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７.２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０.１％ＢＳＡ、０.０５％ＮａＮ３）に添加して、最終濃度１.２５ｍＵ／ｍｌとする。希釈酵素溶液９９μｌを平底９６ウェルポリスチレンプレートの各ウェルに添加し、そこに１００％ＤＭＳＯに溶解した試験化合物１μｌを添加する。化合物を酵素と混合し、室温で１０分間プレインキュベートする。４部の酵素および阻害剤混合物と１部の基質溶液（０.２２５μＭ）を３８４ウェルマイクロタイタープレート中で併せることにより、ＦＬ−ＧＭＰ変換反応を開始させる。反応物を、暗所にて室温で１５分間インキュベートする。結合試薬（１：１８００希釈の消泡剤を添加した結合緩衝液中の１：４００希釈のＩＭＡＰビーズ）６０μｌを３８４ウェルプレートの各ウェルに添加して反応停止させる。該プレートを室温で１時間インキュベートして、ＩＭＡＰ結合を完了するまで進行させ、次に、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチモードマイクロプレートリーダー（PerkinElmer, Shelton, CT）に入れて、蛍光極性化（Δｍｐ）を測定する。
【０１２３】
Δｍｐの減少により測定したＧＭＰ濃度減少は、ＰＤＥ活性阻害の指標である。ＩＣ５０値を、０.００３７ｎＭ〜８０,０００ｎＭの範囲の８〜１６種類の濃度の化合物の存在下で酵素活性を測定し、薬物濃度対Δｍｐをプロットし、これにより、ＩＣ５０値を非線形回帰ソフトウェア（ＸＬＦｉｔ；IDBS, Cambridge, MA）を使用して概算することが可能となる。
【０１２４】
本発明の化合物をＰＤＥ１阻害活性について本明細書に記載されているかまたはそれと同様のアッセイで試験し、該化合物は、一般に、７５ｎＭ未満のウシＰＤＥ１に対するＩＣ５０および／または１０ｎＭ未満のＰＤＥ１Ｂ（ＨＥＫ／Ｓｆ９）に対するＩＣ５０ならびに／または１ｎＭ未満のＰＤＥ１Ａ（ＨＥＫ）および／もしくはＰＤＥ１Ｃ（ＨＥＫ）に対するＩＣ５０を有する。
【０１２５】
実施例１２：  本発明の化合物の薬物動態分析
動物：雄性、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（JacksonLabs、体重２５〜３０ｇ）がJackson Laboratoriesから提供される。１つのケージに５匹までのマウスを収容し、食餌および水を自由に摂取可能にして１２時間明／暗サイクル下に維持する。動物の取り扱いおよび使用の手順はすべて、ＮＩＨガイドラインに従って、コロンビア大学の動物実験委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインに従う。８週齢のマウス（Ｎ＝３／投与レベルまたは処置グループ）を実験に用いる。
【０１２６】
実験的処置：化合物：選択した本発明の化合物を本研究において評価する。製剤化／ビヒクル：１Ｎ  ＨＣｌ  ３％、ラブラゾル（Labrasol）５％および０.０５Ｍクエン酸緩衝液（ＣＢ、ｐＨ４.０）中５％ＴＰＧＳ  ９２％。試験化合物をビヒクル中溶液として調製し、８ｍｌ／ｋｇの量で投与する。
【０１２７】
化合物調製：試験化合物の粉末貯蔵物を計量し、１Ｎ  ＨＣｌ  ３％、ラブラゾル５％および０.０５Ｍクエン酸緩衝液（ＣＢ、ｐＨ４.０）中５％ＴＰＧＳ  ９２％に溶解する。混合を促進するために１０ｍｌガラス管の底に３ｍｍガラスビーズを２層または３層に加える。該管をベンチトップボルテックスミキサー（benchtop vortex mixer）を用いて混合し、次に、ＶＷＲソニケーター（モデル７５０）を使用して、薬物の粉末がビヒクル溶液に完全に溶解するまで約５分間超音波処理する。
【０１２８】
動物の処置：マウス（Ｎ＝３匹のマウス／投与／時点）に、０時点に試験化合物１０ｍｇ／ｋｇを経口投与（ＰＯ）させる。薬物投与の０.２５時間後、０.５時間後、１時間後、または２時間後の特定の時点でグループのマウスを屠殺する。脳組織を回収し、分析するまで−８０℃で冷凍する。パスツールピペット（ＶＷＲ、カタログ番号５３２８３−９１１）を使用して後眼窩静脈の穿刺によって該マウスから血液を回収し、次に、０.１０５Ｍクエン酸ナトリウム溶液を含有するシリコン被覆採血管（ＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ、＃３６６３９２、FranklinLakes、NJ）に入れる。血液試料を４℃にて８０００ｇの速度で４０分間遠心分離し（ＴＯＭＹ、冷凍したベンチトップマイクロセントリフュージ、Fremont、ＣＡ ９４５８３）、血漿をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管にデカントし、分析するまで−８０℃で冷凍する。血漿および脳組織試料を処理し、以下に記載するＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を用いて分析グループによって分析する。
【０１２９】
試料調製：以下のとおり、分析のために血漿の試料を調製する：以下のとおり、血漿試料５０μＬを５００μｌポリプロピレンマイクロチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃａｔ＃  ０２２３６３６１１）に移す：
【表１】
2020007357.tif 000015
【０１３０】
各管を渦巻混合し、次に、１５０００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。上清を回収し、次に、質量分光分析のために各１００μＬを９６ウェルポリプロピレンＥｌｉｓａプレートに移す。
【０１３１】
以下のとおり分析のために脳ホモジネートの試料を調製した：脳組織約０.５ｇを計量し、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水１ｍＬと一緒にホモジナイズする。次に、得られたホモジネート６０μＬをきれいな５００μＬポリプロピレンマイクロチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃａｔ＃  ０２２３６３６１１）に移し、以下に示すとおり処理する：
【表２】
2020007357.tif 000016
【０１３２】
各管を渦巻撹拌し、次に、４℃にてＴｏｍｙベンチトップセントリフュージを用いて１５０００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。標準は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ定量化のために用いられる内部標準である。次に、質量分光分析のために各上清１５０μＬを９６ウェルプレートに移す。必要な反復分析まで残りの血漿またはホモジネートを約−２０℃で貯蔵する。各試験試料について、０.５〜５００ｎｇ／ｍＬの範囲をカバーする較正曲線を作成する。
【０１３３】
ＨＰＬＣおよび質量分光分析：以下のパラメータを用いて、逆相ＨＰＬＣの後に質量分光検出を使用して、血漿および脳ホモジネート中の各化合物の濃度を定量化する分析を行う：
【表３】
2020007357.tif 000017
各化合物を検出し、Ｗａｔｅｒｓ  ＱｕａｔｔｒｏＭｉｃｒｏTM質量分光分析システムを有する陽性エレクトロスプレーモードのＭｕｌｔｉｐｌｅ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ（ＭＲＭ）を用いて定量化する。
【０１３４】
結果：血漿および脳分析：試験した試験化合物はすべて、対照血漿に添加した場合に検出され、分析することができた。標準曲線が試料の分析前に確立され、血漿において０.５〜１５００ｎｇ／ｍＬの範囲および脳において０.５〜５００ｎｇ／ｍＬの範囲にわたって線形をもたらす。各化合物の血漿内レベルおよび脳内レベルが測定され、各時点での各化合物について平均＋標準偏差として表される。データの目視検査によって、各化合物の脳および血漿Ｃmax値およびＴmax値を推定する。脳／血漿濃度比（Ｂ／Ｐ）は、また、脳ＡＵＣ（０〜２時間）／血漿ＡＵＣ（０〜２時間）または脳Ｃmax／血漿Ｃmaxを割ることによって各化合物について算出される。
【０１３５】
結果：記載されているかまたはそれと同様の手順を使用して、実施例２〜６および８〜１０の化合物が試験され、相応して低い脳暴露をもって血漿に対して優れた経口バイオアベイラビリティを示す（０.０２〜０.３３の範囲のＢ／Ｐ比）。特に、実施例４〜５および７〜１０の化合物は、Ｂ／Ｐ比が約０.０５未満である。実施例１〜３の化合物は、Ｂ／Ｐ比が約０.１以下である。実施例６の化合物は、Ｂ／Ｐ比が約０.３である。対照的に、(６ａＲ,９ａＳ)−３−(フェニルアミノ)−５,６ａ,７,８,９,９ａ−ヘキサヒドロ−５−メチル−２−(４−(トリフルオロメチル)−ベンジル)−シクロペント[４,５]イミダゾ[１,２−ａ]ピラゾロ[４,３−ｅ]ピリミジン−４(２Ｈ)−オンのＢ／Ｐ比は約４.５〜４.８である。
【０１３６】
実施例１３：  ＰＤＥ１阻害のイソプロテレノール誘発心肥大に対する効果：
マウスがイソプロテレノールで処理されているマウスモデルにおいて、実施例２の化合物を試験する。かかるモデルは、心臓または心臓組織の拡張が関与する疾患または障害、例えば、鬱血性心疾患を推定するのに有用であり得る。
【０１３７】
動物：１２９Ｓ１／ＳｖｌｍＪマウス、２０〜４０ｇ、Jackson Laboratories（Bar Harbor、ME）。
数および性：雄４０匹。
収容および強化（housing and enrichment）：研究の間、動物は、環境が制御された部屋で靴箱スタイルのケージに個別に収容される。
食餌：動物は自由に標準的な食餌が提供される。
水：動物は自由に水道水が提供される。
汚染物質：本研究を妨害する食餌または水における公知の汚染物質はない。
環境条件：動物室の温度は、１８〜２４℃を維持するように設定される。研究手順によって中断されない限り、１２時間暗サイクルは実行される。
動物選別：動物は、健康状態、体重、または必要に応じて他の関連するデータに基づいて当該研究のために選択される。
【０１３８】
実施例２の試験化合物：実施例２の試験化合物は粉末で供給される。試験物質投与溶液は、当日に、２.０ｍｇ／ｍＬ貯蔵／投与溶液の濃度でビヒクル（注射用０.９％塩化ナトリウム、Ｕ.Ｓ.Ｐ.）に試験化合物を溶解することによって調製される。該化合物を、ボルテックスミキサーを用いて撹拌し、超音波処理して化合物を確実に溶液にする。該２.０ｍｇ／ｍＬ溶液をビヒクルで希釈して０.２ｍｇ／ｍＬおよび０.６ｍｇ／ｍＬの投与溶液を得る。投与溶液を毎日の投与の間に冷蔵庫内に貯蔵し、夕方の投与前に室温に戻す。
【０１３９】
イソプロテレノール試験化合物：イソプロテレノール試験化合物は、Sigma（St.Louis、MO）によって粉末として供給される。試験物質投与溶液は、該試験化合物を２.０ｍｇ／ｍＬの濃度でビヒクル（注射用０.９％塩化ナトリウム、Ｕ.Ｓ.Ｐ.）に溶解することによって、投与の当日に調製される。該化合物をボルテックスミキサーで撹拌し、超音波処理して化合物を確実に溶液にする。
【表４】
2020007357.tif 000018
【０１４０】
グループ１および２のマウスには、毎日皮下投与により投与する。
【０１４１】
７、１０および１４日目に、グループ１および２からの動物２匹を計量し、次に、ＣＯ２窒息により安楽死させる。心臓を回収し、氷冷生理食塩水を穏やかに注いできれいにする。心臓全体を計量する。心房を取り出し、左心室（隔壁と一緒に）を右心室から分離する。両心室を別々に計量する。左脛骨を取り出し、軟部組織がら分離する。デジタル式マイクロメータで縦方向の測定値を得る。
【０１４２】
グループ３〜６のマウスには、４〜９日目からイソプロテレノールを１日１回経皮投与し、１〜９日目から腹腔内投与によりビヒクルまたは試験化合物を１日２回投与する。
【０１４３】
グループ３〜６の最終手順
１０日目（グループ１および２から得た結果に基づく）、各グループからの動物を計量し、次に、ＣＯ２窒息により安楽死させる。心臓を回収し、氷冷クレブス−ヘンゼライト緩衝液（Ｓｉｇｍａ  ３７５３）を穏やかに注いできれいにする。心臓全体を計量する。心房を取り出し、左心室（隔壁と一緒に）を右心室から分離する。両心室を別々に計量する。両心室を氷冷クレブス−ヘンゼライト緩衝液中にて約１５分間貯蔵し、次に、将来可能な分析のために可能な輸送（ship）まで、室温で１０％緩衝ホルマリンに移す。
【０１４４】
左頸骨を取り出し、軟部組織から分離する。デジタル式マイクロメータで縦方向の測定値を得る。
【０１４５】
解体した心房および頸骨を残りの屠殺体と一緒に処分する。噴門切除術の前に、血液試料０.５ｍＬを、Ｋ２−ＥＤＴＡ抗凝固剤を入れた採血管に吸引する。該試料を、冷却遠心器でスピンするまで氷上で貯蔵する。血漿を分離し、ドライアイスで冷凍し、次に、フリーザーセットで貯蔵して、将来可能な分析のためのドライアイスによる輸送まで、約−２０℃に維持する。
【０１４６】
上記で記載されているかまたはそれと同様の手順を用いて、本発明の実施例２の化合物を評価し、以下の結果が得られる：
【表５】
2020007357.tif 000019
【０１４７】
マウスにおけるイソプロテレノール処理は、実施例２の化合物で処理されていないマウスにおける心臓のサイズを増大させる（サイズは、心臓の重量（ｇ）／頸骨の長さ（ｍｍ）によって示される）。１０ｍｇ／ｋｇまでの経口投与の結果、イソプロテレノール誘発性心肥大の発生に対して統計学的に有意な効果をもたらす。特に、１ｍｇ／ｋｇでは、ビヒクルと比べて、心臓の重量／頸骨の長さ（ＨＷ／ＴＬ）比が約８％減少するが、一方、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇでは共に、ビヒクルと比べてＨＷ／ＴＬ比が約１２.５％減少する。実施例２の化合物は、また、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのどちらの用量でも心肥大を有意に予防する。イソプロテレノール誘発性心拡大は、（ＬＶ＋ＲＶ）／ＴＬ比（左心室＋右心室の重量／頸骨の長さ）によって測定した場合、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのどちらの用量についてもビヒクルと比べて１０％減少する。
【０１４８】
実施例１４：  大動脈縮窄術（ＴＡＣ）マウスモデルにおけるＰＤＥ１阻害の心肥大に対する効果：
動物：Ｃ５９Ｂｌ／６マウス、２０〜４０ｇ、Charles River（Portage、MI)。
数および性：雄性３５匹。
収容および強化：研究の間、動物は、環境が制御された部屋で靴箱スタイルのケージに個別に収容される。
【０１４９】
食餌：動物は自由に標準的な食餌が提供される。
水：動物は自由に水道水が提供される。
環境条件：動物室の温度は、１８〜２４℃を維持するように設定される。研究手順によって中断されない限り、１２時間暗サイクルは実行される。
動物選別：動物は、健康状態、体重、または必要に応じて他の関連するデータに基づいて当該研究のために選択される。
【０１５０】
実施例２の試験化合物：実施例２の試験化合物は製剤化される。試験物質投与溶液は、遊離塩基を１モル／モルの希（０.０２Ｎ）ＨＣｌと一緒にトリチュレートし、溶解した試験化合物をビヒクル（蒸留水中０.５％メチルセルロース）で、投与溶液１ｍＬあたり０.４５ｍｇおよび１.５ｍｇの最終濃度に希釈することによって調製される。投与の３０日間の製剤の供給が調製される（第１の手術コホートについては１〜６日目）。
【０１５１】
参照試験化合物  −  ロサルタンカリウム：ロサルタンは、CorDynamicsから入手され、投与の当日に、投与溶液１ｍＬあたり４.５ｍｇの濃度でビヒクル（蒸留水中０.５％メチルセルロース）に溶解することによって調製される。該化合物を、ボルテックスミキサーで撹拌し、超音波処理して化合物を確実に溶液にする。
【表６】
2020007357.tif 000020
【０１５２】
大動脈縮窄術：１００％酸素によって駆動される１〜２％イソフルランを送達する気化器に連結したノーズコーンを用いて、動物をイソフルランで麻酔する。イソフルランによる最初の麻酔後、マウスに１ｍｇ／ｋｇ  Ｂｕｐｒｅｎｅｘ  ＳＲ（１ｍｇ／ｍＬ、皮下）および１０ｍｇ／ｋｇのエトミデート（２ｍｇ／ｍＬ、腹腔内）を投与する。人工呼吸器のために動物に挿管する。１〜２％イソフルラン剰余酸素（remainder oxygen）による陽圧換気を提供し、一回呼吸量約２００μＬで呼吸約１２０回／分を維持するように設定した人工呼吸器に気管内チューブを連結する。
【０１５３】
胸腔内の大動脈を暴露するために、胸骨柄から第２または第３肋骨を通って胸骨切開術を行う。該大動脈から周辺組織を取り除き、横行大動脈を２７Ｇニードルと同様の直径のチタン製マイクロクリップでクランプする。グループ１のマウスからの横行大動脈から周辺組織を取り除くが、クランプしない。切開を閉じ、気管内チューブを取り外し、動物を回復させる。
【０１５４】
外科手術手技の完了直後に、マウスを回復室の回復ケージに入れる。機敏になり、歩行可能になったら、該動物を一般的なハウジングに戻す。
【０１５５】
手術前の正常な機能に戻ることによって手術後の処置の長さを決定する。これは、態度、活動レベルおよび食欲によって判断される。毎日の手術後モニターリングを手術後４日間行う。手術後約１０〜１４日目に手術部位が十分に治った時に激痛が除かれる。
【０１５６】
マウスに、手術後１日目から始めて各投与間を約６時間あけてビヒクルまたは実施例２の化合物を１日２回経口投与する。マウスにロサルタンを１日１回経口投与する。用量算出の目的で、体重を、到着後、手術前、投与初日および２日おきに投与の投与前に計量する。
【０１５７】
２８日目に、全ての実験グループに心エコー測定を行う。１００％酸素によって駆動される１〜２％イソフルランを送達する気化器に連結したノーズコーンを用いて、動物をイソフルランで麻酔する。マウスを暖かいプラットフォーム上に仰臥位でおいて、体温を３７±０.５℃に維持する。実験の全体を通して心拍数をモニターリングする。３０−ＭＨｚメカニカルトランスデューサーを装着した高解像度心エコーシステム（ＶｅＶｏ  ７７０、Visual Sonics, Toronto, ON, Canada）によって、経胸壁二次元、Ｂモード、Ｍモードおよびパルスドプラ画像を得る。
【０１５８】
心エコー測定後、動物をＣＯ２窒息によって安楽死させる。心臓および肺を回収し、氷冷クレブス−ヘンゼライト緩衝液（Ｓｉｇｍａ  ３７５３）を穏やかに注いできれいにする。肺を計量し、右肺と左肺を分離する。右肺および左肺を液体窒素ですぐに冷凍し、別々の管に入れる。心臓全体を計量する。心房を取り出し、左心室（隔壁と一緒に）を右心室から分離する。両心室を別々に計量した後、２片に分ける。これらの心室片を液体窒素で冷凍し別々の管に入れる。液体窒素試料をフリーザーセットで貯蔵して、将来可能な分析のためにスポンサーへのドライアイスによる輸送まで約−８０℃に維持する。
【０１５９】
左頸骨を取り出し、軟部組織から分離する。デジタル式マイクロメータで縦方向の測定値を得る。解体した頸骨を残りの屠殺体と一緒に処分する。
【０１６０】
噴門切除術前に、血液試料０.５ｍＬを、クエン酸ナトリウム抗凝固剤を入れた採血管に吸引する。該試料を、冷却遠心器でスピンするまで氷上で貯蔵する。血漿を分離し、ドライアイスで冷凍し、次に、フリーザーセットで貯蔵して、将来可能な分析のためのドライアイスによる輸送まで、約−２０℃に維持する。
【０１６１】
上記で記載されているかまたはそれと同様の手順を用いて、以下の結果が得られる：
【表７】
2020007357.tif 000021
【０１６２】
３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの実施例２の化合物は、ＴＡＣ収縮によって誘発される心肥大を逆転する傾向を示す。肥大は、「ＴＡＣ比」と定義される動物のサイズ（頸骨の長さ（ｍｍ））に対して基準化された心臓のサイズ（左心室＋隔壁の重量（ｍｇ））に基づいて判断される。シャム手術を受けたマウスは、ＴＡＣ比４.６（ｍｇ／ｍｍ）を示すが、一方、３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの実施例２の化合物を受けたマウスは、ＴＡＣ比５.８を示す。対照的に、ビヒクルを受けたマウスは、ＴＡＣ比６.６を示し、ロサルタンを受けたマウスは、ＴＡＣ比６.２を示す。シャムおよびビヒクルＴＡＣグループ間の差異は、統計学的に有意であるが、一方、シャムおよび実施例２の化合物グループ間の差異は、統計学的に有意ではない。ビヒクルグループとロサルタングループの差異は、統計学的に有意ではない。かくして、実施例２の化合物は、ＴＡＣ誘発性肥大を減少させる傾向を示す。
【手続補正書】
【提出日】令和1年10月17日(2019.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願の明細書に記載されている発明。