(57)【要約】      （修正有）【課題】タンパク質の全長機能型の産生低下、あるいは不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を治療するための方法の提供。【解決手段】イントロン保持の是正が、該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列され、そして標準（ステムループ）、非標準（Ｇ４重鎖）ＲＮＡ構造の配座転移；トランス作用因子との相互作用；及びＲＮＡ−タンパク質複合体の形成速度のうち１以上に干渉するように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含む方法。【選択図】図１
2020189849.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における疾患の予防方法又は治療方法であって、成熟遺伝子転写産物中のイントロン保持の是正を含み、該疾患は、該遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因する不完全なタンパク質発現によって誘発される、前記方法。
【請求項２】
イントロン保持の是正が、該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
イントロン保持の是正が、該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列され、そして標準（ステムループ）、非標準（Ｇ４重鎖）ＲＮＡ構造の配座転移；トランス作用因子との相互作用；及びＲＮＡ−タンパク質複合体の形成速度のうち１以上に干渉するように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ポリ核酸ポリマーが、イントロン・スプライシング調節配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対するアンチセンスである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号４６若しくは配列番号４６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対するアンチセンスである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号３若しくは配列番号３と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対するアンチセンスである、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対するアンチセンスである、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号４７〜４３４又はこれらの組合せを含む配列群のいずれかに対して少なくとも９５％の同一性を有する配列に対して相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対するアンチセンスである、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り；そしてウラシルヌクレオチドがチミンヌクレオチドで置換されていてもよい、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号４７〜４３４又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含
むか又はそれから成り；そしてウラシルヌクレオチドがチミンヌクレオチドで置換されていてもよい、請求項１〜４、又は８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
ポリ核酸ポリマーの長さが約１０〜約３０ヌクレオチドである、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
ポリ核酸ポリマーがその安定性を高めるように修飾される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
ポリ核酸ポリマーがタンパク質又はアプタマーに繋がっており、該タンパク質は、スプライシングとイントロン除去を増強、阻害、又は調節するためのスプライシング因子である、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
ポリ核酸ポリマーが、該ポリ核酸ポリマーを細胞又は組織に及び／又はそれらの中に送達するのに適した送達担体にコンジュゲートしているか又は結合している、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
遺伝子転写産物がプロインスリンをコードする、請求項１〜７、９、又は１１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
遺伝子転写産物が、ＡＢＣＤ４；ＡＢＣＦ３；ＡＣＡＤＶＬ；ＡＬＫＢＨ６；ＡＰ１Ｇ２；ＡＰＥＸ１；ＡＲＦＲＰ１；ＡＴＨＬ１；ＡＴＰ１Ａ３；ＡＴＰ５Ｄ；ＡＴＰ１３Ａ１；ＢＡＸ；ＢＤＨ２；ＢＲＤ２；Ｃ１ｏｒｆ６３；Ｃ１ｏｒｆ６３０；Ｃ１ｏｒｆ６３１；Ｃ１ｏｒｆ１２４；Ｃ２ｏｒｆ４９；Ｃ８ｏｒｆ８２；Ｃ１６ｏｒｆ５９；ＣＡＰＲＩＮ２；ＣＡＳＫＩＮ２；ＣＤＣＡ７；ＣＥＰ１６４；ＣＥＰ１７０；ＣＬＣＮ７；ＣＰＮＥ１；ＣＰＳＦ３Ｌ；ＤＣＸＲ；ＤＥＮＮＤ４Ｂ；ＤＦＦＡ；ＤＩＳ３Ｌ２；ＤＮＡＪＢ１２；ＤＰＦ１；ＤＲＧ２；ＤＳＮ１；ＥＭＬ３；ＥＷＳＲ１；ＥＷＳＲ１０；ＦＧＦＲ４；ＦＴＳＪ１；ＧＢＡＰ１；ＧＭＰＰＡ；ＧＭＰＲ２；ＧＮＰＴＧ；ＧＯＲＡＳＰ１；ＧＰＡＴＣＨ４；ＨＧＳ；ＨＭＧ２０Ｂ；ＩＦＦＯ１ＩＳＹＮＡ１；ＫＲＩ１；ＬＯＣ１４８４１３；ＬＺＴＲ１；ＭＡＮ２Ｃ１；ＭＡＰ４Ｋ２；ＭＣＯＬＮ１；ＭＤＰ１；ＭＩＢ２；ＭＩＴＤ１；ＭＯＫ；ＭＯＶ１０；ＭＲＰＬ３５；ＭＴＭＲ１１；ＭＵＳ８１；ＮＡＰＥＰＬＤ；ＮＢＥＡＬ２；ＮＤＲＧ４；ＮＤＵＦＢ１０；ＮＦＡＴＣ４；ＮＦＫＢＩＢ；ＮＩＴ１；ＮＫＴＲ；ＮＰＲＬ２；ＮＳＵＮ５Ｐ１；ＮＵＤＴ２２；ＰＡＮ２；ＰＤＤＣ１；ＰＤＬＩＭ４；ＰＨＦ１；ＰＩＫ３ＣＤ；ＰＩＴＰＮＭ１；ＰＰＩＬ２；ＰＰＰ１Ｒ３５；ＰＰＰ４Ｃ；ＰＱＬＣ２；ＰＲＰＦ３９；ＰＳＭＥ２；ＰＴＰＭＴ１；ＱＡＲＳ；ＲＡＤ５２；ＲＨＯＴ２；ＲＭＮＤ５Ｂ；ＲＮＦ１２３；ＲＰＬ１０Ａ；ＲＰＰ２１；ＲＰＳ６ＫＢ２；ＲＵＳＣ１；ＳＣＲＮ２；ＳＣＹＬ１；ＳＦＲ１；ＳＧＳＭ３；ＳＩＲＴ７；ＳＬＣ２５Ａ３；ＳＬＣ３０Ａ７；ＳＬＣ３７Ａ４；ＳＴＫ１９；ＳＴＸ１０；ＴＣＦ２５；ＴＯＭＭ４０；ＴＰ５３Ｉ３；ＴＲＩＭ４１；ＴＲＰＴ１；ＴＳＴＡ３；ＴＴＣ１４；ＴＴＣ１４０；ＴＵＢＧＣＰ６；Ｕ２ＡＦ１Ｌ４；ＵＣＫ１；ＵＮＣ４５Ａ；ＶＡＭＰ１；ＶＡＭＰ１０；ＶＡＲＳ；ＶＰＳ２８；ＷＤＲ２４；ＷＤＲ９０；ＷＲＡＰ５３；ＹＤＪＣ；ＹＩＰＦ３；ＺＣＣＨＣ８；ＺＣＣＨＣ１８；ＺＦＡＮＤ１；ＺＮＦ１３１；ＺＮＦ３００；ＺＮＦ３１７；ＺＮＦ６９２；ＺＮＦ７１１；ＺＮＲＤ１；ＺＷＩＮＴ；又はこれらの組合せを含む遺伝子又はＯＲＦのいずれかから選択される遺伝子又はＯＲＦより転写される、請求項１〜４、８、又は１０〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
疾患が糖尿病である、請求項１〜７、９、又は１０〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
疾患が癌である、請求項１〜４、８、又は１０〜１４、又は１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
疾患病理が遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因するかどうかを治療に先立って決定する工程をさらに含む、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
細胞内でイントロン・スプライシングを調節する方法であって、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含み、該領域は、配列番号４６又は配列番号４６に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る、前記方法。
【請求項２１】
細胞内でイントロン・スプライシングを調節する方法であって、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含み、該領域は、配列番号３又は配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る、前記方法。
【請求項２２】
細胞内でイントロン・スプライシングを調節する方法であって、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含み、該領域は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも９５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれか成る、前記方法。
【請求項２３】
配列番号４６を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域、あるいは配列番号４６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスである、ポリ核酸ポリマー。
【請求項２４】
配列番号３を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域、あるいは配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスである、ポリ核酸ポリマー。
【請求項２５】
ポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであるポリ核酸ポリマーであって、該領域は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに相補的な配列を含むか又はそれから成るか；あるいは任意選択的に、配列番号４７〜４３４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域である、前記ポリ核酸ポリマー。
【請求項２６】
配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り；ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、ポリ核酸ポリマー。
【請求項２７】
配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り；ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、ポリ核酸ポリマー。
【請求項２８】
ポリ核酸ポリマーを細胞に送達するのに適した送達担体にコンジュゲートしているか又は結合している、請求項２３〜２７のいずれかに記載のポリ核酸ポリマー。
【請求項２９】
請求項２３〜２７のいずれかに記載のポリ核酸ポリマーを含むベクター。
【請求項３０】
請求項２３〜２７のいずれかに記載のポリ核酸ポリマーを含むか又はそれに結合している送達担体。
【請求項３１】
請求項２３〜２８のいずれかに記載のポリ核酸ポリマー、又は請求項２９に記載のベクター、又は請求項３０に記載の送達担体を含む組成物。
【請求項３２】
追加の生物学的に活性な分子をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
治療対象を選択する方法であって、遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因する不完全なタンパク質発現によって誘発される疾患を該対象が有するかどうかを決定し、ここで、対象は、陽性確定時に、請求項２３〜２８のいずれかに記載のポリ核酸ポリマー、又は請求項２９に記載のベクター、又は請求項３０に記載の送達担体、又は請求項３１若しくは３２に記載の組成物による治療のために選択される；そして任意に対象を治療する、ことを含む、前記方法。
【請求項３４】
癌細胞においてイントロン保持を是正することによって遺伝子発現を正常化するための、アンチセンスポリ核酸ポリマーの使用。
【請求項３５】
遺伝子転写産物がイントロン・スプライシング調節配列である、請求項１〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
イントロン・スプライシング調節配列が２つのＧ４重鎖の間にある、請求項１〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
イントロン・スプライシング調節配列が第１のＣＣＣモチーフを含む、請求項１〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
イントロン・スプライシング調節配列が第２のＣＣＣモチーフをさらに含む、請求項３７の方法。
【請求項３９】
イントロン・スプライシング調節配列が、ＣＣＣＡＧモチーフ又はＡＧＧＣＣモチーフをさらに含む、請求項１〜３８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
イントロン・スプライシング調節配列がＧ４重鎖を形成しない、請求項１〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
ポリ核酸ポリマーが遺伝子転写産物と特異的にハイブリダイズする、請求項１〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該標的配列は２つのＧ４重鎖の間にあり、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
【請求項４３】
ポリ核酸ポリマーが、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイン
トロンにハイブリダイズする、請求項４２の医薬組成物。
【請求項４４】
あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズし、該イントロン・スプライシング調節配列は、第１のＣＣＣモチーフを含み、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
【請求項４５】
イントロン・スプライシング調節配列が第２のＣＣＣモチーフをさらに含む、請求項４４の医薬組成物。
【請求項４６】
第１のＣＣＣモチーフが第２のＣＣＣモチーフ由来の約３以上のヌクレオチド塩基である、請求項４５の医薬組成物。
【請求項４７】
ポリ核酸ポリマーが、ＣＣＣＡＧモチーフ又はＡＧＧＣＣモチーフを含むイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズする、請求項４２〜４６のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項４８】
あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフはＧ４重鎖を形成せず、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
【請求項４９】
ポリ核酸ポリマーが、ピリジンヌクレオチドを３’末端位及び／又は５’末端位に含む、請求項４２〜４８のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項５０】
ポリ核酸ポリマーが、２つの連続したピリジン残基を３’末端位及び／又は５’末端位に含む、請求項４２〜４９のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項５１】
あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフはヘアピン構造を形成し、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
【請求項５２】
あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導する；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
【請求項５３】
ポリ核酸ポリマーが、ヘアピン構造を不安定にすることがさらに可能である、請求項５１の医薬組成物。
【請求項５４】
送達担体が、細胞浸透ペプチド又はペプチドベースのナノ粒子を含む、請求項４２〜５３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項５５】
送達担体が、ポリ核酸ポリマーとイオン結合によって複合体を形成している、請求項４２〜５４のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項５６】
ポリ核酸ポリマーの長さが、約１０〜約５０、約１０〜約４５、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２５、又は約１０〜約２０ヌクレオチドである、請求項４２〜５５のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項５７】
ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％相補的である、請求項４２〜５６のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項５８】
ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４以下、３以下、２以下、又は１以下のミスマッチを有する、請求項４２〜５７のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項５９】
ポリ核酸ポリマーが、ヌクレオシド部分又はリン酸部分で修飾される、請求項４２〜５８のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項６０】
ポリ核酸ポリマーが、１以上の人工ヌクレオチド塩基を含む、請求項４２〜５９のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項６１】
１以上の人工ヌクレオチド塩基が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）で修飾された、ロック核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロへキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホネート  ヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、又は２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトを含む、請求項５９又は６０の医薬組成物。
【請求項６２】
ポリ核酸ポリマーが、該ポリ核酸ポリマーのヌクレオシド部分のリボース部分の２’ヒドロキシル基で修飾される、請求項６１の医薬組成物。
【請求項６３】
２’ヒドロキシル基の修飾が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）部分による、請求項６２の医薬組成物
。
【請求項６４】
リボース部分の２’ヒドロキシル基にメチル基を付加して２’−Ｏ−メチルリボース部分を産生する、請求項６３の医薬組成物。
【請求項６５】
リボース部分の２’ヒドロキシル基にメトキシエチル基を付加して２’−Ｏ−メトキシエチルリボース部分を産生する、請求項６３の医薬組成物。
【請求項６６】
２’ヒドロキシル基の修飾が、メチレン基によって４’炭素に連結される、請求項６３の医薬組成物。
【請求項６７】
リボース環を６員モルホリノ環で置換してモルホリノ人工ヌクレオチド類似体を産生する、請求項５９〜６１のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項６８】
リン酸骨格をオリゴグリシン様部分で置換してペプチド核酸（ＰＮＡ）を産生する、請求項５９〜６１のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項６９】
リン酸骨格をチオール基又はメチル基によって修飾する、請求項５９〜６１のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７０】
５’末端、３’末端、又はこれらの組合せが修飾される、請求項５９〜６９のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７１】
修飾によってポリ核酸ポリマーを対象の内因性エンドヌクレアーゼから保護する、請求項５９〜７０のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７２】
修飾されたポリ核酸ポリマーが、ＲＮＡのＲＮアーゼＨ切断を誘導しないか又はその誘導能が低下している、請求項５９〜７１のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７３】
ポリ核酸ポリマーが、その安定性を高めるために修飾される、請求項５９〜７２のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７４】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号４６の少なくとも１３の連続した塩基に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むか又は１００％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、請求項４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７５】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号４６の少なくとも１０の連続した塩基を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、請求項４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７６】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４５、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも６３％、７０％、８０％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、請求項４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７７】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号３に対して少なくとも５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、請求項４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７８】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号４、配列番号５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、及び配列番号４４、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも６３％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％の配列同一性を含み、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、請求項４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項７９】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号１、配列番号２、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％の配列同一性を含み、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、請求項４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項８０】
ポリ核酸ポリマーが、配列番号４７〜４３４、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列の少なくとも１３の連続した塩基に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、請求項４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項８１】
ハイブリダイゼーションが特異的なハイブリダイゼーションである、請求項４２〜８０のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項８２】
ポリ核酸ポリマーが、合成されたポリ核酸ポリマーである、請求項４２〜８１のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項８３】
ポリ核酸ポリマーを含む医薬組成物が、静脈内投与又は皮下投与用である、請求項４２〜８２のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項８４】
請求項４２〜８３の医薬組成物を患者に投与することを含む、それを必要とする患者において疾患又は病態の治療に使用するための組成物。
【請求項８５】
疾患又は病態が、あるタンパク質の産生低下に関連するか又は不完全なスプライシングを特徴とする、請求項８４の使用のための組成物。
【請求項８６】
疾患又は病態が遺伝性疾患である、請求項８４又は８５の使用のための組成物。
【請求項８７】
遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、請求項８６の使用のための組成物。
【請求項８８】
遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、請求項８６の使用のための組成物。
【請求項８９】
遺伝性疾患のある対象が、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能な、遺伝子の欠陥コピーを含むゲノムを有する、請求項８６の使用のための組成物。
【請求項９０】
疾患又は病態が糖尿病である、請求項８４〜８９のいずれか１項の使用のための組成物
。
【請求項９１】
疾患又は病態が癌である、請求項８４〜８９のいずれか１項の使用のための組成物。
【請求項９２】
タンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態の治療対象を選択することをさらに含み、
ａ）該対象が、あるタンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態を有するかどうかを決定し；そして
ｂ）該対象が、該タンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態を有する場合、請求項４２〜８３の医薬組成物を該対象に投与する、
ことを含む、請求項８４〜９１のいずれか１項の使用のための組成物。
【請求項９３】
不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態の治療対象を選択することをさらに含み、
ａ）該対象が、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を有するかどうかを決定し；そして
ｂ）該対象が、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を有する場合、請求項４２〜８３の医薬組成物を該対象に投与する、
ことを含む、請求項８４〜９１のいずれか１項の使用のための組成物。
【請求項９４】
それを必要とする対象において、タンパク質の全長機能型の産生低下を特徴とする疾患又は病態を治療する方法であって：
ａ）部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物中のイントロンのスプライシングアウトの増加を誘導する治療薬剤、並びに医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む医薬組成物を該対象に投与すること、ここで、該対象は、該タンパク質の全長機能型のコピーをコード可能で、そのそれぞれが部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の翻訳を阻害する少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールを有する；及び
ｂ）該対象の標的細胞を治療薬剤と接触させて、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールの一部を誘導し、スプライシングを受けて、該一部中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれから少なくとも１つの保持されたイントロンを除去し、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生すること、ここで、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、翻訳されて該タンパク質の全長機能型のコピーを発現し、それが該疾患又は病態を治療する、
を含む、前記方法。
【請求項９５】
治療薬剤が該細胞内で１以上のスプライシングタンパク質複合体の活性化を引き起こし、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールの一部中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれから少なくとも１つの保持されたイントロンを除去する、請求項９４の方法。
【請求項９６】
治療薬剤が、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を阻害する、請求項９４又は９５の方法。
【請求項９７】
治療薬剤が、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を活性化する、請求項９４〜９６のいずれか１項の方法。
【請求項９８】
治療薬剤が、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質に結合する、請求項９４〜９７のいずれか１項の方法。
【請求項９９】
治療薬剤が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的ポリヌクレオチド配列に結合する、請求項９４〜９８のいずれか１項の方法。
【請求項１００】
治療薬剤がポリ核酸ポリマーである、請求項９４〜９９のいずれか１項の方法。
【請求項１０１】
治療薬剤が低分子である、請求項９４〜１００のいずれか１項の方法。
【請求項１０２】
医薬組成物が請求項４２〜８３の医薬組成物である、請求項９４〜１０１のいずれか１項の方法。
【請求項１０３】
該タンパク質の全長機能型の産生低下が、該タンパク質の全長機能型の正常以下の産生を含む、請求項９４〜１０２のいずれか１項の方法。
【請求項１０４】
該タンパク質の全長機能型の産生低下が、該タンパク質の全長機能型の発現のないことによるか、又は該疾患若しくは病態を引き起こすほどに十分低い該タンパク質の全長機能型の発現レベルによる、請求項９４〜１０３のいずれか１項の方法。
【請求項１０５】
該タンパク質の全長機能型の産生低下が、該タンパク質の産生がないか又は該タンパク質の不完全型の産生を含む、請求項９４〜１０４のいずれか１項の方法。
【請求項１０６】
該タンパク質の不完全型が、該タンパク質の短鎖型、該タンパク質のミスフォールディング型、又は該タンパク質の標的結合異常型である、請求項１０５の方法。
【請求項１０７】
対象を治療することが、該タンパク質の全長機能型の発現増加をもたらす、請求項９４〜１０６のいずれか１項の方法。
【請求項１０８】
部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプロセシングを誘導して、保持されたイントロンを除去し、タンパク質の全長機能型をコードする完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生する方法であって：
ａ）単離されたポリ核酸ポリマーを、該タンパク質の全長機能型をコード可能で、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズさせ；
ｂ）少なくとも１つの保持されたイントロンを、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物から除去し、該タンパク質の全長機能型をコードする、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生し；そして
ｃ）完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物から該タンパク質の全長機能型を翻訳する、
ことを含む、前記方法。
【請求項１０９】
それを必要とする対象に、単離されたポリ核酸ポリマーを含む医薬組成物を投与することをさらに含む、請求項１０８の方法。
【請求項１１０】
該タンパク質の全長機能型の産生低下が、疾患又は病態に相関している、請求項１０８又は１０９の方法。
【請求項１１１】
疾患又は病態が遺伝性疾患である、請求項１０８〜１１０のいずれか１項の方法。
【請求項１１２】
遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、請求項１０８〜１１１のいずれか１項の方法。
【請求項１１３】
遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、請求項１０８〜１１１のいずれか１項の方法。
【請求項１１４】
遺伝性疾患のある対象が、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能な、遺伝子の欠陥コピーを含むゲノムを有する、請求項１０８〜１１１のいずれか１項の方法。
【請求項１１５】
疾患又は病態が糖尿病である、請求項１０８〜１１４のいずれか１項の方法。
【請求項１１６】
疾患又は病態が癌である、請求項１０８〜１１４のいずれか１項の方法。
【請求項１１７】
ポリ核酸ポリマーがアンチセンス配列である、請求項１０８〜１１６のいずれか１項の方法。
【請求項１１８】
アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロンにハイブリダイズする、請求項１０８〜１１７のいずれか１項の方法。
【請求項１１９】
アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズする、請求項１０８〜１１８のいずれか１項の方法。
【請求項１２０】
イントロン・スプライシング調節配列がＣＣＣモチーフを含む、請求項１１９の方法。
【請求項１２１】
アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、Ｇ４重鎖を形成しない、請求項１０８〜１２０のいずれか１項の方法。
【請求項１２２】
アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、２つのＧ４重鎖の間にある、請求項１０８〜１２１のいずれか１項の方法。
【請求項１２３】
アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、第１のＣＣＣモチーフと第２のＣＣＣモチーフを有する、請求項１０８〜１２２のいずれか１項の方法。
【請求項１２４】
第１のＣＣＣモチーフが、第２のＣＣＣモチーフ由来の約３以上のヌクレオチド塩基である、請求項１２３の方法。
【請求項１２５】
ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％相補的である、請求項１０１〜１２４のいずれか１項の方法。
【請求項１２６】
ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４以下、３以下、２以下、又は１以下のミスマッチを有する、請求項１０８〜１２５のいずれか１項の方法。
【請求項１２７】
ポリ核酸ポリマーの長さが、約１０〜約５０、約１０〜約４５、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２５、又は約１０〜約２０ヌクレオチドである、請求項１０８〜１２６のいずれか１項の方法。
【請求項１２８】
対象が真核生物又は原核生物である、請求項１０８〜１２７のいずれか１項の方法。
【請求項１２９】
対象が、ヒト、マウス、ラット、非ヒト霊長動物、又は非霊長類の哺乳動物より選択される真核生物である、請求９４〜１２７のいずれか１項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
[0001]  本願は、その全体が本明細書に援用される英国特許出願第１４１０６９３．４号（２０１４年６月１６日出願）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]  選択的スプライシングは、ヒトのトランスクリプトームにおいて頻発する現象であり得る。イントロン保持は、選択的スプライシングの１例であって、そこでは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡが、部分的スプライシングを受けた後で、少なくとも１つのイントロンを保持する。いくつかの事例では、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡにおける保持されたイントロンの存在は、機能性タンパク質の翻訳を妨害するか又は減少させる可能性がある。
【発明の概要】
【０００３】
[0003]  本発明は、転写産物（例えば、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物）中のイントロン保持を減少させるか又は防止する方法と、不都合なイントロン保持に関連した疾患の治療又は予防の方法に関する。
【０００４】
[0004]  いくつかの側面では、本発明は、遺伝子転写産物中のイントロン保持の発生を減少させることを含む、対象における疾患の予防又は治療の方法を開示するものであり、該疾患は、該遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因する不完全なタンパク質発現によって誘発される。
【０００５】
[0005]  いくつかの側面では、本発明は、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法を開示するものであり、該領域は、配列番号４６、又は配列番号４６に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る。
【０００６】
[0006]  いくつかの側面では、本発明は、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法を開示するものであり、該領域は、配列番号４６、又は配列番号４６に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る。
【０００７】
[0007]  いくつかの側面では、本発明は、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法を開示するものであり、該領域は、配列番号３、又は配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る。
【０００８】
[0008]  いくつかの側面では、本発明は、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法を開示するものであり、該領域は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも９５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る。
【０００９】
[0009]  いくつかの側面では、本発明は、配列番号４６を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域、又は配列番号４６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチ
センスであるポリ核酸ポリマーを開示する。
【００１０】
[0010]  いくつかの側面では、本発明は、配列番号３を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域、又は配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであるポリ核酸ポリマーを開示する。
【００１１】
[0011]  いくつかの側面では、本発明は、ポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであるポリ核酸ポリマーを開示するものであり、該領域は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに相補的な配列を含むか又はそれから成るか、あるいは任意選択的に、配列番号４７〜４３４に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域である。
【００１２】
[0012]  いくつかの側面では、本発明は、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーを開示するものであり；ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい。
【００１３】
[0013]  いくつかの側面では、本発明は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーを開示するものであり；ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい。
【００１４】
[0014]  いくつかの側面では、本発明は、あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該標的配列は２つのＧ４重鎖の間にあり、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能可能である；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む、医薬組成物を開示する。いくつかの事例では、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロンにハイブリダイズする。
【００１５】
[0015]  いくつかの側面では、本発明は、あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズし、該イントロン・スプライシング調節配列は、第１のＣＣＣモチーフを含み、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む、医薬組成物を開示する。
【００１６】
[0016]  いくつかの事例では、イントロン・スプライシング調節配列は、第２のＣＣＣモチーフをさらに含む。いくつかの事例では、第１のＣＣＣモチーフは、第２のＣＣＣモチーフ由来の約３以上のヌクレオチド塩基である。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、ＣＣＣＡＧモチーフ又はＡＧＧＣＣモチーフを含むイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズする。
【００１７】
[0017]  いくつかの側面では、本発明は、あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフはＧ４重鎖を形成せず、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む、医薬組成物を開示する。
【００１８】
[0018]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、ピリジンヌクレオチドを３’末端位及び／又は５’末端位に含む。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、２つの連続したピリジン残基を３’末端位及び／又は５’末端位に含む。
【００１９】
[0019]  いくつかの側面では、本発明は、あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフはヘアピン構造を形成し、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む、医薬組成物を開示する。
【００２０】
[0020]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、ヘアピン構造を不安定にすることがさらに可能である。いくつかの事例では、送達担体は、細胞浸透ペプチド又はペプチドベースのナノ粒子を含む。いくつかの事例では、送達担体は、ポリ核酸ポリマーとイオン結合によって複合体を形成している。
【００２１】
[0021]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーの長さは、約１０〜約５０、約１０〜約４５、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２５、又は約１０〜約２０ヌクレオチドである。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％相補的である。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４以下、３以下、２以下、又は１以下のミスマッチを有する。
【００２２】
[0022]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、ヌクレオシド部分又はリン酸部分で修飾される。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、１以上の人工ヌクレオチド塩基を含む。いくつかの事例では、１以上の人工ヌクレオチド塩基は、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）で修飾された、ロック核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロへキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホネート  ヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、又は２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトを含む。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、該ポリ核酸ポリマーのヌクレオシド部分のリボース部分の２’ヒドロキシル基で修飾される。いくつかの事例では、２’ヒドロキシル基での修飾は、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）部分による。いくつかの事例では、リボース部分の２’ヒドロキシル基にメチル基を付加して、２’−Ｏ−メチルリボース部分を産生する。いくつかの事例では、リボース部分の２’ヒドロキシル基にメトキシエチル基を付加して、２’−Ｏ−メトキシエチルリボース部分を産生する。いくつかの事例では、２’ヒドロキシル基での修飾は、メチレン基によって４’炭素に連結される。いくつかの事例では、リボース環は、６員モルホリノ環で置換されて、モルホリノ人工ヌクレオチド類似体を産生する。いくつかの事例では、リン酸骨格は、オリゴグリシン様部分で置換されて、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を産生する。いくつかの事例では、リン酸骨格は、チオール基又はメチル基によって修飾される。いくつかの事例では、５’末端、３’末端、又はこれらの組合せが修飾される。いくつかの事例では、修飾によってポリ核酸ポリマーを対象の内因性エンドヌクレアーゼから保護する。いくつかの事例では、修飾されたポリ核酸ポリマーは、ＲＮＡのＲＮアーゼＨ切断を誘導しないか又はその誘導能が低下している。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、その安定性を高めるために修飾される。いくつかの事例では、ハイブリダイゼーションは、特異的なハイブリダイゼーションである。
【００２３】
[0023]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６の少なくとも１３の連続した塩基に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％、又は１００％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６の少なくとも１０の連続した塩基を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４５、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも６３％、７０％、８０％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号３に対して少なくとも５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号４、配列番号５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、及び配列番号４４、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも６３％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％の配列同一性を含み、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号１、配列番号２、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％の配列同一性を含み、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列の少なくとも１３の連続した塩基に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする。
【００２４】
[0024]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、合成されたポリ核酸ポリマーである。
[0025]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーを含む医薬組成物は、静脈内投与又は皮下投与用である。
【００２５】
[0026]  いくつかの側面では、本発明は、それを必要とする患者において疾患又は病態の治療に使用するための組成物を開示するものであり、本明細書に開示される医薬組成物を該患者に投与することを含む。いくつかの事例では、疾患又は病態は、あるタンパク質の産生低下に関連するか又は不完全なスプライシングを特徴とする。いくつかの事例では、疾患又は病態は遺伝性疾患である。いくつかの事例では、遺伝性疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する。いくつかの事例では、遺伝性疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する。いくつかの事例では、遺伝性疾患のある対象は、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能な、遺伝子の欠陥コピーを含むゲノムを有する。いくつかの事例では、疾患又は病態は糖尿病である。いくつかの事例では、疾患又は病態は癌である。いくつかの事例では、使用のための組成物は、タンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態の治療対象を選択することをさらに含み、（ａ）対象が、あるタンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態を有するかどうかを決定し；そして（ｂ）該対象が、該タンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態を有する場合、請求項４２〜請求項８３の医薬組成物を該対象に投与することを含む。いくつかの事例では、使用のための組成物は、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態の治療対象を選択することをさらにみ、（ａ）対象が、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を有するかどうかを決定し；そして（ｂ）該対象が、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を有する場合、請求項４２〜請求項８３の医薬組成物を該対象に投与することを含む。
【００２６】
[0027]  いくつかの事例では、本発明は、それを必要とする対象において、あるタンパク質の全長機能型の産生低下を特徴とする疾患又は病態を治療する方法を開示するものであり、該方法は、（ａ）部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物中のイントロンのスプライシングアウトの増加を誘導する治療薬剤；並びに医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む医薬組成物を該対象に投与すること（ここで、該対象は、該タンパク質の全長機能型のコピーをコード可能で、そのそれぞれが部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の翻訳を阻害する少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールを有する）；及び（ｂ）該対象の標的細胞を治療薬剤と接触させて、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールのある部分がスプライシングを受けて、その部分中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれより少なくとも１つの保持されたイントロンを除去することを引き起こして、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生すること（ここで、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、翻訳されて該タンパク質の全長機能型のコピーを発現して、それが該疾患又は病態を治療する）、を含む。
【００２７】
[0028]  いくつかの事例では、治療薬剤は、該細胞において１以上のスプライシングタンパク質複合体の活性化を引き起こして、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールの部分中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれより少なくとも１つの保持されたイントロンを除去する。いくつかの事例では、治療薬剤は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を阻害する。いくつかの事例では、治療薬剤は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を活性化する。いくつかの事例では、治療薬剤は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質に結合する。いくつかの事例では、治療薬剤は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的ポリヌクレオチド配列に結合する。いくつかの事例では、治療薬剤はポリ核酸ポリマーである。いくつかの事例では、治療薬剤は低分子である。
【００２８】
[0029]  いくつかの事例では、医薬組成物は、本明細書に記載される医薬組成物である
。
[0030]  いくつかの事例では、タンパク質の全長機能型の産生低下は、該タンパク質の全長機能型の正常以下の産生を含む。いくつかの事例では、タンパク質の全長機能型の産生低下は、該タンパク質の全長機能型の発現がないか、又は疾患又は病態を引き起こすほどに十分低い、該タンパク質の全長機能型の発現のレベルによる。いくつかの事例では、タンパク質の全長機能型の産生低下は、該タンパク質の産生がないか又は該タンパク質の不完全型の産生を含む。いくつかの事例では、タンパク質の不完全型は、該タンパク質の短鎖型、該タンパク質のミスフォールディング型、又は該タンパク質の標的結合異常型である。いくつかの事例では、対象を治療することがタンパク質の全長機能型の増加した発現をもたらす。
【００２９】
[0031]  いくつかの側面では、本発明は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプロセシングを引き起こして、保持されたイントロンを除去して、タンパク質の全長機能型をコードする完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生する方法を開示し、該方法は、（ａ）単離されたポリ核酸ポリマーを、該タンパク質の全長機能型をコードすることが可能であって、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズさせ；（ｂ）この少なくとも１つの保持されたイントロンを、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物より除去して、該タンパク質の全長機能型をコードする、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生し；そして（ｃ）完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物より該タンパク質の全長機能型を翻訳する、ことを含む。いくつかの事例では、該方法は、単離されたポリ核酸ポリマーを含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。
【００３０】
[0032]  いくつかの事例では、タンパク質の全長機能型の産生低下は、疾患又は病態に相関している。いくつかの事例では、疾患又は病態は遺伝性疾患である。いくつかの事例では、遺伝性疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する。いくつかの事例では、遺伝性疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する。いくつかの事例では、遺伝性疾患のある対象は、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能な、遺伝子の欠陥コピーを含むゲノムを有する。いくつかの事例では、疾患又は病態は糖尿病である。いくつかの事例では、疾患又は病態は癌である。
【００３１】
[0033]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、アンチセンス配列である。いくつかの事例では、アンチセンス配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロンにハイブリダイズする。いくつかの事例では、アンチセンス配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズする。いくつかの事例では、イントロン・スプライシング調節配列は、ＣＣＣモチーフを含む。いくつかの事例では、アンチセンス配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、Ｇ４重鎖を形成しない。いくつかの事例では、アンチセンス配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、２つのＧ４重鎖の間にある。いくつかの事例では、アンチセンス配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、第１のＣＣＣモチーフと第２のＣＣＣモチーフを有する。いくつかの事例では、第１のＣＣＣモチーフは、第２のＣＣＣモチーフ由来の約３以上のヌクレオチド塩基である。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％相補的である。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングさ
れたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４以下、３以下、２以下、又は１以下のミスマッチを有する。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーの長さは、約１０〜約５０、約１０〜約４５、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２５、又は約１０〜約２０ヌクレオチドである。
【００３２】
[0034]  いくつかの事例では、対象は、真核生物である。いくつかの事例では、対象は、ヒト、マウス、ラット、非ヒト霊長動物、又は非霊長類の哺乳動物より選択される真核生物である。
【００３３】
[0035]  いくつかの側面では、記載されるのは、あるタンパク質をコードして、保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー（ここで該ポリ核酸ポリマーは、保持されたイントロンの部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からのスプライシングアウトを誘導する）；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む医薬組成物である。
【００３４】
[0036]  本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲において詳細に説明される。本発明の諸原理が利用される例示の態様について説明する以下の詳細な説明を参照することで、本発明の特徴及び利点についてのより良好な理解が得られ、そして添付の図面は、以下のものである。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】[0037]  ヒトプロインスリン遺伝子中のＳＳＯの位置。（Ａ）ＩＮＳレポーターとそのｍＲＮＡ産物の概略図。エクソン（番号付きのボックス）の下とイントロン１（ライン）の下の黒色の横棒としてＳＳＯを示す；それらの配列は、表２にある。開始コドンと終止コドンを矢印によって示す。標準（カノニカル）（実線）スプライシングとクリプティック（cryptic：隠れた）（点線）スプライシングを１次転写産物の上に示し；クリプティック・スプライス部位の表記は、灰色である。下のパネルには、イントロン１セグメントのｄｅｌ４〜ｄｅｌ７に標的指向するＳＳＯを示す。（Ｂ）ＩＮＳレポーター構築体によって産生されるｍＲＮＡアイソフォーム（番号１〜６）。プロインスリンを産生しないアイソフォームには、＊の印を付ける。
【図２】[0038]  ＩＮＳイントロン１保持のＳＳＯ誘導性の阻害。（Ａ）指定のＳＳＯとＩＮＳレポーター構築体（ＩＣ  Ｄ−Ｆ）のＨＥＫ２９３細胞中へのコトランスフェクション。図１Ｂに記載したスプライス産物を右方に示す。バーは、天然転写産物に対するイントロン１含有アイソフォームの百分率（上パネル）、又は全体に対するイントロン２のクリプティック３’スプライス部位へのスプライシングの百分率（下パネル）を表す。エラーバーは、ＳＤ；ｓｃは、スクランブル対照；ＳＳＯ−は、「ＳＳＯ無し」の対照を意味する。ＳＳＯの最終濃度は、ＳＳＯ６とＳＳＯ８（１０ｎＭと３０ｎＭ）以外は、１、３、１０、及び３０ｎＭであった。（Ｂ）イントロン２のクリプティック３‘ｓｓを欠くクローンにおけるイントロン１スプライシングのＳＳＯ２１媒介性のプロモーション。ＲＮＡ産物を右方に示す。（Ｃ）イントロン２のクリプティック３’ｓｓを含有する転写産物とそれを欠く転写産物における、ＳＳＯ２１誘導性イントロン１保持の倍率変化。ＳＳＯ２１の最終濃度は、２重のトランスフェクションにおいて３０ｎＭであった。レポーター構築体の表記が下にある。
【図３】[0039]  クリプティック３’スプライス部位に標的指向するＩＮＳ  ＳＳＯ。（Ａ）イントロン２（ｃｒ３’ｓｓ＋１２６；図１Ａ）のクリプティック３’ｓｓのＳＳＯ６によるの活性化と、エクソン２スキッピングのＳＳＯ８による促進。それぞれのＳＳＯの濃度は、２、１０、５０、及び２５０ｎＭであった。ＳＳＯを上に、スプライス産物を右方に、レポーターを下に示す。（Ｂ）ＩＮＳイントロン２の真正（authentic）３’ｓｓとクリプティック３’ｓｓの間の予測される安定したヘアピン。ＳＳＯ６の標的となる塩基を星印（＊）によって示して、予測されるスプライシングエンハンサーヘキサマー（右方に収載）を点線によって示す。（Ｃ）ＳＳＯ４は、Ｕ２ＡＦ３５が枯渇した細胞において、その真正の対応物（ｃｒ３’ｓｓ＋８１）の下流にあるクリプティック３’ｓｓ８１塩基対の活性化を妨げないが、エクソン・スキッピングを誘導する。それぞれのＳＳＯのＣＯＳ７細胞中の最終濃度は、５、２０、及び８０ｎＭであった。ｓｉＲＮＡ２重鎖Ｕ２ＡＦ３５ａｂ（７７）の最終濃度は、７０ｎＭであった。レポーターは、パネルＡと同じであった。
【図４】[0040]  １塩基解像法（resolution）でのアンチセンスマイクロウォークによる、イントロン保持標的の最適化。（Ａ）オリゴリボヌクレオチドの位置。ＣＤ／ＮＭＲに使用するマイクロウォークＳＳＯとオリゴを１次転写産物の下と上の黒色の横棒によってそれぞれ表す。ＲＮＡ  Ｇ４重鎖を形成することが予測されるイントロン１配列を灰色で強調する。マイクロウォークの方向を灰色の矢印によって示し；ウィナーオリゴを黒色で強調する。ボックスは、すでに報告された（２０）１塩基多型を示す。（Ｂ）２種の細胞系における、それぞれのマイクロウォークＳＳＯのイントロン保持レベル。エラーバーは、レポーターＩＣ  Ｄ−Ｆでの２回の独立したコトランスフェクションより得られたＳＤを示す。
【図５】[0041]  ＲＮＡ２次構造形成の生物物理学的な特性決定。（Ａ）２６５ｎｍと２７０ｎｍでそれぞれ最大の楕円率を明らかにする、ＣＤ１（１９マー）ＲＮＡとＣＤ２（２０マー）ＲＮＡについての２５℃での遠紫外（far-UV）ＣＤスペクトル。（Ｂ）水素結合した（H-bonded）Ｇ塩基由来の共鳴に特徴的な基を示す、８００ＭＨｚ及び２９８Ｋで記録したＣＤ１とＣＤ２の１Ｈ  ＮＭＲスペクトル。（Ｃ）５６．８±０．２℃と６９．０±０．４５℃でそれぞれ転移中点を示す、上記２種のＲＮＡについてのＳ字状ＣＤ融解曲線。この２つの曲線は、明確にするために、互いに少しずらしてある。（Ｄ）ＣＤ１について提唱された、短いループ配列によって連結した２つの積み重なったＧテトラッドがある並行４重鎖構造（上パネル）。下パネルには、ＣＤ２について予測されたヘアピン構造を示す。Ｇ→Ｃ突然変異を赤色で示す。
【図６】[0042]  アンチセンス標的が関与する配座の４重鎖／ヘアピン転移。（Ａ）オリゴリボヌクレオチドＣＤ３が含まれるＧリッチモチーフ内で形成すると提唱された、ヘアピン（黒色）構造と４重鎖（濃青色）構造間の平衡の概略図。ＣＤ４は、ＣＣ→ＵＵ突然変異（＊によって強調される）を含有する。（Ｂ）９〜１５ｐｐｍ域でのＮＭＲスペクトルは、水素結合した塩基に対応するイミノプロトンシグナルを明らかにする。１０ｐｐｍ〜１２ｐｐｍのシグナルは、Ｇテトラッドの内部でフーグスティーン型の水素結合をしたＧに特有であり（Ｑボックス）、一方１２ｐｐｍより大きなシグナルは、ヘアピン構造内部でのワトソン−クリック型のＡ−Ｕ塩基対とＧ−Ｃ塩基対を示唆する（Ｈボックス）。ＣＤ３では、ヘアピンＨ１が有意に占めているが、ＣＤ４では突然変異がＨ１を不安定にして、Ｈ２を主要な分子種とし、このいずれも４重鎖構造と平衡状態にある。（Ｃ）ＮＭＲデータと一致した、２種の可能なヘアピンのＭフォールド（Mfold）予測。（Ｄ）ＣＣ→ＵＵ突然変異によるヘアピン構造の不安定時のイントロン保持の減少。エラーバーは、レポーターＩＣ  Ｄ−Ｃを用いたデュープリケート実験のＳＤを示す。Ｄｅｌ５は、セグメントｄｅｌ５を欠くＩＣ  Ｄ−Ｃレポーターを示し（図１Ａ）；Ｍ１は、Ｇ４重鎖とステムループをともに不安定にする２つの置換を含有するレポーターである（表１Ａ）。
【図７】[0043]  イントロン保持についてのアンチセンス標的が含まれるプレｍＲＮＡと相互作用するタンパク質の同定。（Ａ）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞中への一過性トランスフェクションに続く、野生型と突然変異型レポーター構築体（ＩＣＤ−Ｃ）のイントロン保持レベル。突然変異を表１Ａに示す。ＲＮＡ産物を右方に示す。予測されたＲＮＡ４重鎖、ヘアピンＨ１／Ｈ２、及び上流と下流のＣ４ランの存在をゲル図面の下に示す。エラーバーは、２回の反復実験より得られたＳＤを示す。（Ｂ）試験したＲＮＡのイントロン保持レベルは、アンチセンス標的域の予測安定性と相関する。（Ｃ）右方に示す抗体を用いたプルダウン・アッセイのウエスタン・ブロット分析。ＮＥ、核内抽出物；Ｂ、ビーズのみの対照；ＡＶ３、シトシンランと３’ｓｓＡＧを含有する対照ＲＮＡオリゴ（７）。ＣＤ５  ＲＮＡの配列は、図４Ａに示す。
【図８】[0044]  ＤＨＸ３６枯渇時の４重鎖リッチ及びプア（poor）ミニ遺伝子のスプライシングパターン。（Ａ）レポーター構築体の概略図。予測される４重鎖を黒色の矩形によって示し；それらの密度を表１に示す。エクソン（ボックス）を番号付けし；斜線は、Ｆ９イントロン３の短縮を示す（２４）。Ｆ９ミニ遺伝子とＴＳＣ２ミニ遺伝子は、スプライシングを妨げる分岐点置換、ｃ．２５３−２５Ｃとｃ．５０６９−１８Ｃをそれぞれ含有する（２４）。Ｃｒ５’ｓｓ−１０４；イントロン２の真正の５’ｓｓの１０４上流にあるクリプティック５’ｓｓ。（Ｂ）ＤＨＸ３６に対する抗体でのイムノブロット。ｓｃ、スクランブルｓｉＲＮＡ；ｃ、未処理細胞。エラーバーは、２回のトランスフェクション実験のＳＤである。（Ｃ〜Ｅ）指定のレポーターのイントロン保持とエクソン・スキッピング。ＤＨＸ３６  ｓｉＲＮＡの最終濃度は、５０ｎＭであった。ＲＮＡ産物を右方に概略的に示す。エラーバーは、２回のトランスフェクション実験のＳＤである。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
[0045]  真核遺伝子のような遺伝子は、タンパク質をコードすることが可能な機能性ｍＲＮＡを創出するために１次転写産物より正確に除去されなければならない、介在配列又はイントロンを含有する（１）。このプロセスは、プレｍＲＮＡにおいて、５種の核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）（例、Ｕ１、Ｕ２、Ｕ４、Ｕ５、及びＵ６）と保存されているが縮重した配列がある多数のタンパク質の相互依存的な相互作用を利用するきわめて動的なやり方で、ｍＲＮＡの組成を変化させる（２）。特に、イントロンは、保存されたＧＵモチーフを含み得る５’スプライス部位（５’ｓｓ）、不変のＡＧモチーフで終結し得る３’スプライス部位（３’ｓｓ）、保存されたアデニン塩基を含み得る分岐点配列、及びポリピリミジン（Ｐｙ）トラクトを含むコアスプライス部位エレメントによって明確にすることができる。スプライシング反応は、５’ｓｓ上の保存されたＧＵモチーフへのＵ１
ｓｎＲＮＰの結合とともに開始され得て、分岐点の保存されたアデニン塩基でのＵ２  ｓｎＲＮＰの結合、そして最終的には、５’スプライス部位と３’スプライス部位の付近でのＵ４、Ｕ５、及びＵ６  ｓｎＲＮＰの相互作用が続く。ｓｎＲＮＰとそれぞれのイントロンによって形成される複合体は、スプライソソームと呼ばれ得る。Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１（Ｕ２ＡＦ３５）、Ｕ２ＡＦ２（Ｕ２ＡＦ６５）及びスプライシング因子１（ＳＦ１）といった追加のスプライシング因子も、スプライソソームの組立てに貢献して、スプライシング事象を促進する可能性がある。
【００３７】
[0046]  一般に、イントロン・スプライシングは、種を越えて、ｍＲＮＡ蓄積とタンパク質発現を促進する（３〜５）。このプロセスは、イントロンの突然変異又は変異体によって改変される可能性があって、これがまた、転写、ｍＲＮＡ輸送、及び翻訳が含まれる、共役した遺伝子発現経路を損なう場合がある。この例になるのは、５’ＵＴＲ中のイントロンであって、ここでは、イントロン保持を変化させる自然変異体又は突然変異が上流オープン・リーディング・フレーム（ｕＯＲＦ）又は他の調節モチーフの付いた転写産物の相対豊富度を変化させて、翻訳に劇的に影響を及ぼす（６、７）。さらに、イントロン保持のような不完全なスプライシングによるタンパク質翻訳障害は、遺伝性の疾患又は病態（例、遺伝病又は癌）のような疾患の発症及び／又は疾患の進行をもたらしてきた。しかしながら、このような状況において遺伝子発現を正常化するための成功裡の配列特異的な戦略は、開発されていない。
【００３８】
[0047]  スプライス・スイッチング・オリゴヌクレオチド（ＳＳＯ）は、スプライス部位認識配列又は調節配列に結合して、その標的についてシス及びトランス作用因子と競合することによってイントロン・スプライシングを調節するアンチセンス試薬である（８）。それらは、異常なスプライシングを修復し、既存のｍＲＮＡの相対的な発現を変化させるか又は通常は発現されない新規のスプライス変異体を産生することが示されてきた（８）。２’−Ｏ−メチル及び２’−Ｏ−メトキシエチルリボースのようないくつかのＳＳＯ修飾による、標的指向されるＳＳＯ−ＲＮＡ２重鎖の安定性の改善は、筋ジストロフィーにおけるＤＭＤ（９、１０）、脊髄性筋萎縮症におけるＳＭＮ２（１１）、毛細血管拡張性運動失調症におけるＡＴＭ（１２）、及びＸ連鎖無γグロブリン血症におけるＢＴＫ（１３）が含まれる、ますます増加するヒト疾患遺伝子へのその治療ポテンシャルを探究する研究を促進した。このようなアプローチは、限定数の疾患に対しては、その臨床ポテンシャルを達成する見込みがある（８）ものの、突然変異誘発性の異常なスプライシングより生じる３００を超えるメンデル遺伝病（１４）と増加する複合形質も、遺伝子発現のＳＳＯ媒介性の是正の適応になるかもしれない。
【００３９】
[0048]  １型糖尿病の病因には、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）といくつかの変化する非ＨＬＡ遺伝子座によって付与される強い遺伝成分がある（１５）。最強の変更遺伝子（modifier）は、第１１染色体上のプロインスリン遺伝子（ＩＮＳ）領域に同定された（ＩＤＤＭ２と呼ばれる）（１５）。この領域のさらなるマッピングによって、ＩＮＳが最も有望なＩＤＤＭ２標的であることが示唆され（１６）、この自己抗原の病態形成における必須の役割と一致した（１７）。この疾患に対するＩＤＤＭ２での遺伝的リスクは、この遺伝子の上流にあるミニサテライトＤＮＡが潜在的に関与する、素因性及び防護性のＩＮＳハプロタイプ由来の差示的な定常状態ＲＮＡレベルに起因するとされてきた（１８、１９）。しかしながら、天然に存在するＩＮＳ多型の体系的な検討は、ＩＶＳ１＋５ｉｎｓ４（ｒｓ３８４２７４０又はＩＮＳ−６９としても知られる）とＩＶＳ１−６Ａ／Ｔ（ｒｓ６８９、ＩＮＳ−２７、又はＨｐｈＩ±）と呼ばれる、イントロン１における２種の変異体（７）より生じる、上記ミニサテライト配列を欠くレポーター構築体において、ハプロタイプ特異的なプロインスリン発現レベルを明らかにした（１６，２０）。前者の変異体は、イントロン１のクリプティック５’スプライス部位を活性化し、一方、３’スプライス部位（３’ｓｓ）の上流に６つのヌクレオチドを収容する後者の変異体では、アデニン（Ａ）がイントロン保持を促進し、５’ＵＴＲが伸長した転写産物の相対豊富度を高める（２１）。チミン（Ｔ）と比べると、ＩＶＳ１−６Ａ／ＴでのＡアレルは、試験管内で（in vitro）ピリミジン結合性タンパク質への親和性を減少させて、Ｕ２核内低分子リボ核タンパク質の補助因子（Ｕ２ＡＦ）（７）である、Ｕ２結合、スプライソソーム組立て、及び３’ｓｓ選択に必要とされるヘテロ２量体に対して３’ｓｓをより依存的にする（２２）。インスリン産生組織より調製したＩＶＳ１−６Ａ由来のｃＤＮＡライブラリーでは、イントロン１含有転写産物が過剰発現されて（２１）、核から輸送されて（２３）、（高等霊長類においてイントロン１の３’ｓｓの弛緩とともに共進化した）ヒト亜科特異的な短いｕＯＲＦを含有する（７）。このＡアレルによって付与されるより低次のプロインスリン発現は、胎児胸腺におけるプロインスリンペプチドの最適以下の提示と自己反応性Ｔ細胞の不十分な負の選択をもたらし、ついには膵臓中のインスリン産生β細胞の自己免疫破壊につながる場合がある（７）。
【００４０】
[0049]  本発明の目的は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプロセシングを引き起こして、保持されたイントロンを除去して、タンパク質の全長機能型をコードする完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生することである。追加の目的は、それを必要とする対象において、あるタンパク質の産生低下を特徴とする疾患又は病態、及び／又は不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を治療することである。
【００４１】
[0050]  本発明の別の目的は、ＩＶＳ１−６Ａ含有プレｍＲＮＡからのＩＮＳイントロン１除去の低効率を是正して、イントロン保持を疾患防護性Ｔアレルで観測されるレベルまで減少させることである。本発明のさらなる目的は、不規則又は異常なイントロン保持を特徴とする（又はそれに関連した）、癌が含まれる遺伝性疾患に対する新たな治療アプローチを提供することである。
【００４２】
[0051]  本発明の第１の側面によれば、成熟遺伝子転写産物中のイントロン保持の是正
を含む、対象における疾患の予防又は治療の方法を提供し、ここで該疾患は、該遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因する不完全なタンパク質発現によって誘発される。
【００４３】
[0052]  保持されたイントロン
[0053]  保持されたイントロンは、エクソン・スキッピング、選択的５’スプライス部位、選択的３’スプライス部位、及び相互排除的エクソンも含まれ得る５種類の選択的スプライシングの１つである。エクソン・スキッピングが起こり得るのは、エクソンが無視されるか又はプロセシングされたｍＲＮＡからスプライトアウトされる場合であって、最も一般的な選択的スプライシングの型であり得る。選択的５’ｓｓと選択的３’ｓｓは、クリプティック・スプライス部位又はシュード（pseudo）スプライス部位のような代替スプライス部位を意味し得る。相互排除的エクソンが生じ得るのは、スプライシング後のプロセシングされたｍＲＮＡにおいて２つのエクソンの一方のみが保持される場合である。イントロン保持は、エクソン・スキッピングより一般的ではあり得ないが、イントロン保持は、これまでに理解されているよりずっと頻繁に生じることが示されてきた。実に、２１，１０６種のヒト遺伝子に関する De Souza グループの研究は、検査した遺伝子の約１５％がイントロン保持を示すことを示している（Galante et al,「Detection and evaluation of intoron retention events in the human transcriptome（ヒトのトランスクリプトームにおけるイントロン保持事象の検出及び評価）」Bioinformatics 10: 757-765 (2004) を参照のこと）。さらに、Moore グループによる研究は、ヒトの５’−ＵＴＲの約３５％と３’−ＵＴＲの約１６％がイントロンを収容していることを示した（Bicknell et al.,「Introns in UTRs: Why we should stop ignoring them（ＵＴＲ中のイントロン：何故無視し得ないのか）」Bioessays 34:1 025-1034 (2012)）。このように、イントロン保持は、コード領域、非コード領域において、５’ＵＴＲで、又は３’ＵＴＲで起こり得る。コード領域において、保持されたイントロンは、アミノ酸をフレームでコードし得るか又は、ミスアライメント（misalignment）状態であり得て、そのことで、終止コドン又はフレームシフトにより短鎖型タンパク質又は非機能性タンパク質を産生する可能性がある。さらに、イントロンは、２つのエクソンの間に、５’ＵＴＲに位置して、又は３’ＵＴＲに位置して存在し得る。
【００４４】
[0054]  保持されなかったイントロンと比べて、保持されたイントロンは、より短い配列長を有することを特徴とし得る。保持されたイントロンの配列長は、５ｋｂ未満、４ｋｂ未満、３ｋｂ未満、２．５ｋｂ未満、２ｋｂ未満、１．５ｋｂ未満、１ｋｂ未満、０．５ｋｂ未満、０．４ｋｂ未満、０．３ｋｂ未満、０．２ｋｂ、又は０．１ｋｂ未満であり得る。
【００４５】
[0055]  さらに、保持されなかったイントロンと比べて、保持されたイントロンは、約４０％〜約６０％のＧ／Ｃ含量を有することを特徴とし得る。保持されたイントロンのＧ／Ｃ含量は、約４０％、４５％、５０％、５５％、又は約６０％であり得る。
【００４６】
[0056]  保持されたイントロンには、弱い５’スプライス部位、弱い３’スプライス部位、又はその両方が隣接する場合がある。弱いスプライス部位とは、イントロン・スプライシング・エンハンサーのような調節タンパク質を機能上必要とし得るスプライス部位に言及し得る。
【００４７】
[0057]  さらに、保持されたイントロンは、保持されなかったイントロンに比して、ＧＧＧモチーフのより低次の存在を含み得る。いくつかの事例では、ＧＧＧモチーフは、イントロン・スプライシング・エンハンサーである。
【００４８】
[0058]  部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物とは、部分的スプライシングを受けて少なくとも１つの保持されたイントロンを含むｍＲＮＡ転写産物である。この少な
くとも１つのイントロンは、５’ＵＴＲの内部、３’ＵＴＲの内部、又は２つのエクソン間の内部位置にあり得る。部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、翻訳されて機能性又は全長タンパク質を産生することが不可能であり得る。
【００４９】
[0059]  部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、短い配列長を特徴とするイントロンを含み得る。部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、３ｋｂ未満、２．５ｋｂ未満、２ｋｂ未満、１．５ｋｂ未満、１ｋｂ未満、０．５ｋｂ未満、０．４ｋｂ未満、０．３ｋｂ未満、０．２ｋｂ、又は０．１ｋｂ未満の配列を特徴とするイントロンを含み得る。
【００５０】
[0060]  部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、約４０％〜約６０％のＧ／Ｃ含量を有することを特徴とするイントロンを含み得る。部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、約４０％、４５％、５０％、５５％、又は約６０％のＧ／Ｃ含量を有することを特徴とするイントロンを含み得る。
【００５１】
[0061]  部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、弱い５’スプライス部位、弱い３’スプライス部位、又はその両方が隣接しているイントロンを含み得る。
[0062]  部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、保持されなかったイントロンに比してＧＧＧモチーフのより低次の存在を含み得るイントロンを含む可能性がある。
【００５２】
[0063]  いくつかの事例では、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物に１以上のイントロンが保持される。部分的にプロセシングされたｍＲＮＡは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の保持されたイントロンを含み得る。
【００５３】
[0064]  完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物とは、スプライシングを受けて保持されたイントロンのようなイントロンを除去して、翻訳されて全長機能性タンパク質のようなタンパク質を産生することが可能であるものである。１以上の保持されたイントロンがある部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡになるようにスプライスされることが可能である。
【００５４】
[0065]  全長機能性タンパク質は、そのタンパク質の野生型の形態と同じ長さ及び機能を有する。全長機能性タンパク質は、該タンパク質の野生型の形態であり得る。全長機能性タンパク質は、野生型タンパク質と同じ長さがある、野生型タンパク質のアイソフォームであり得る。全長機能性タンパク質は、該タンパク質の表現型（例、機能）がその突然変異によって改変しないような、あるアミノ酸の、類似した特性のある代替アミノ酸残基への置換のような突然変異を含み得る。
【００５５】
[0066]  類似した特性のある例示のアミノ酸には、帯電した側鎖があるアミノ酸：陽荷電性であるアルギニン、ヒスチジン、及びリジン；又は陰荷電性であるアスパラギン酸及びグルタミン酸；極性アミノ酸残基：セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、及びメチオニン；非極性アミノ酸：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、及びプロリン；並びに芳香族アミノ酸：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンが含まれ得る。
【００５６】
[0067]  いくつかの事例では、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、タンパク質の産生低下をもたらす。タンパク質の産生低下は、タンパク質の全長機能型の正常以下の産生を含み得る、タンパク質の全長機能型の産生低下であり得る。タンパク質の全長機能型の産生低下は、タンパク質の不完全型の産生を含み得る。タンパク質の不完全型は、タンパク質の短鎖型、タンパク質のミスフォールディング型、又は異常な標的結合部
位を含むタンパク質の形態であり得る。
【００５７】
[0068]  ポリ核酸ポリマー
[0069]  本明細書に記載されるポリ核酸ポリマーを部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズさせることに使用して、保持されたイントロンの除去を開始することができる。いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、アンチセンスポリ核酸ポリマーである。このアンチセンスポリ核酸ポリマーは、約４０％〜約６０％のＧ／Ｃ含量を含む領域のような、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のＧ／Ｃ含量が高い領域にハイブリダイズし得る。アンチセンスポリ核酸ポリマーは、約４０％〜約６０％のような高いＧ／Ｃ含量を含み得る。アンチセンスポリ核酸ポリマーは、弱い５’スプライス部位、又は弱い３’スプライス部位に、その隣に、又はその付近にある、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の領域にハイブリダイズし得る。アンチセンスポリ核酸ポリマーは、ＧＧＧモチーフのより低次の存在を含み得る、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の領域にハイブリダイズし得る。
【００５８】
[0070]  該ポリ核酸ポリマーのアンチセンス配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロンにハイブリダイズし得る。このアンチセンス配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズし得る。このイントロン・スプライシング調節配列には、イントロン・スプライシング・エンハンサー又はイントロン・スプライシング・サイレンサーが含まれ得る。アンチセンス配列は、イントロン・スプライシング・サイレンサーにハイブリダイズし得る。イントロン・スプライシング調節配列は、エクソン明確化の間、又はイントロンスパニング複合体への後続の転移の間に、Ｕ１及びＵ２のｓｎＲＮＰがエクソンを越えてスプライス部位で対合する場合のような、スプライソソームの組立ての初期及び／又は中間工程に影響を及ぼすことによって、スプライシングを調節し得る。例示のイントロン・スプライシング調節配列には、ポリピリミジン−トラクト−結合タンパク質（ＰＴＢ）、Ｕ２ＡＦ６５及び／又はＵ２ＡＦ３５、ｈｎＲＮＰ  Ｌ、及びｈｎＲＮＰ  Ａ１が含まれ得る。
【００５９】
[0071]  ポリ核酸ポリマーは、イントロンの５’スプライス部位、３’スプライス部位、分岐点、ポリピリミジントラクト、又はイントロン・エンハンサーでハイブリダイズし得る。ポリ核酸ポリマーは、５’スプライス部位、３’スプライス部位、分岐点、ポリピリミジントラクト、又はイントロン・エンハンサーから、約３０塩基離れた、２５塩基離れた、２０塩基離れた、１５塩基離れた、１０塩基離れた、又は５塩基離れた所でもハイブリダイズして、スプライシングを促進又は増強する場合がある。ポリ核酸ポリマーのスプライス部位、又はその近くでのハイブリダイゼーションは、スプライシング因子をスプライス部位に向かって動員させることによりスプライシングを始動させることによって、スプライシングを促進又は増強する場合がある。
【００６０】
[0072]  ポリ核酸ポリマーは、イントロン・サイレンサー部位（例、新生（de novo）
イントロン・サイレンサー部位）、クリプティック・イントロン・スプライス部位、又はシュードスプライス部位でハイブリダイズし得る。イントロン・サイレンサー部位は、スプライシング反応を抑制するサイレンサーによって認識され得る。クリプティック・イントロン・スプライス部位は、置換、欠失、又は挿入のような突然変異によって創出され得る。クリプティック・イントロン・スプライス部位は、クリプティック５’スプライス部位又はクリプティック３’スプライス部位であり得る。クリプティック・イントロン・スプライス部位は、クリプティック５’スプライス部位であり得る。シュードスプライス部位は、その活性化が標準スプライス部位の突然変異より生じ得る、弱いスプライス部位であり得る。シュードスプライス部位は、シュード５’スプライス部位又はシュード３’スプライス部位であり得る。イントロン・サイレンサー部位でのハイブリダイゼーションは
、サイレンサーが結合することを立体的に妨げて、スプライソソームの組立て及びプロセシングの破綻を防ぐことに役立つ場合がある。クリプティック・イントロン・スプライス部位でのハイブリダイゼーションは、弱い標準スプライス部位のような標準スプライス部位の方向に相互作用を向け直す場合がある。
[0073]  ポリ核酸ポリマーは、イントロンの内部領域にハイブリダイズし得る。イントロンの内部領域には、５’スプライス部位（例、標準、クリプティック、又はシュード５’スプライス部位）、３’スプライス部位（例、標準、クリプティック、又はシュード３’スプライス部位）、エンハンサー部位、又はサイレンサー部位のようなスプライス部位が含まれ得ない。ポリ核酸ポリマーの内部領域でのハイブリダイゼーションは、スプライシング因子をイントロン・エンハンサー部位のようなスプライス部位に向かって動員させることによって、スプライシングを促進又は増強する場合がある。
【００６１】
[0074]  ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズし得る。イントロン・スプライシング調節配列は、ＣＣＣモチーフを含み得る。このアンチセンス配列は、Ｇ４重鎖を形成しない、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし得る。このアンチセンス配列は、２つのＧ４重鎖の間にある、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし得る。このアンチセンス配列はまた、第１のＣＣＣモチーフと第２のＣＣＣモチーフを有する、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし得る。第１のＣＣＣモチーフは、第２のＣＣＣモチーフ由来の約３以上のヌクレオチド塩基であり得る。
【００６２】
[0075]  ポリ核酸ポリマーは、ヘアピン構造を形成する、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし得る。ポリ核酸ポリマーは、さらに、ヘアピン構造を不安定にすることが可能であり得る。
【００６３】
[0076]  ポリ核酸ポリマーは、ピリジンヌクレオチドを３’末端位及び／又は５’末端位に含み得る。ポリ核酸ポリマーは、２つの連続したピリジンヌクレオチドを３’末端位及び／又は５’末端位にさらに含み得る。
【００６４】
[0077]  いくつかの事例では、ポリ核酸ポリマーは、スプライス・スイッチング・オリゴヌクレオチド（ＳＳＯ）であり得る。スプライス・スイッチング・オリゴヌクレオチドは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロンにハイブリダイズし得る。スプライス・スイッチング・オリゴヌクレオチドは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズし得る。
【００６５】
[0078]  スプライス・スイッチング・オリゴヌクレオチド（ＳＳＯ）は、エクソン使用を阻害するために広く使用されてきたが、イントロン全体の除去を促進してスプライシング媒介性の遺伝子発現を高めるアンチセンス戦略は、開発されたことがない。ヒトプロインスリン遺伝子を含有する一連のスプライシング・レポーターを使用すると、低レベルのプロインスリンを発現するヒトのハプロタイプから導かれる転写産物に結合するＳＳＯによって、ＩＮＳイントロン１保持を減少させることが可能であることが示された。このＳＳＯに支援された、非標準及び標準ＲＮＡ構造と競合することによる、５’ＵＴＲからの弱いイントロン除去の促進は、遺伝子発現を高めるための配列ベースのアンチセンス戦略の開発を容易にする。
【００６６】
[0079]  「イントロン保持の是正」という用語は、不規則又は異常なイントロン保持の是正と理解される。この是正は、完全な是正でも一部の是正でもよい。是正は、イントロン保持の発生を減少させることを含み得る。是正は、異常なイントロン保持を減少させる
ことを含み得る。
【００６７】
[0080]  遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因するタンパク質発現の文脈における「欠陥」への言及は、不十分な、不完全な、又は異常なタンパク質発現を含み得る。
[0081]  イントロン保持の是正は、遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含み得る。イントロン保持の是正は、遺伝子転写産物中の高次構造を変化させるために該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含み得る。イントロン保持の是正は、標準（ステムループ）；非標準（Ｇ４重鎖）ＲＮＡ構造の配座転移；トランス作用因子との相互作用；及び、ＲＮＡ−タンパク質複合体形成の速度の１以上に干渉するために該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含み得る。イントロン保持の是正は、標準（ステムループ）及び／又は非標準（Ｇ４重鎖）ＲＮＡ構造の配座転移に、それを妨げるように干渉するために該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含み得る。このポリ核酸ポリマーは、イントロン・スプライシング調節配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、哺乳動物において保存された、重なりのあるイントロン・スプライシング調節配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、短いペンタ〜ヘプタマーのスプライシング調節モチーフを含有するイントロンセグメントを含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。スプライシング調節モチーフは、ＣＣＣＡＧ又はＡＧＧＣＣを含み得る。スプライシング調節モチーフは、Yeo GW, et al (2007). PLoS Genet 3:e85 及び／又は Voelker RB, & Berglund JA (2007). Genome Res 17:1023-1033（いずれの文献も、参照により本明細書に組み込まれる）によって提供されたモチーフのいずれも含み得る。標的領域は、Ｇ４重鎖形成を回避するためにＣランを含まなくてよい。標的領域は、５’スプライス部位と３’スプライス部位の両方、ポリピリミジントラクト、分岐部位、及び／又は超分岐（suprabranch）領域の近位になくてもよい。
【００６８】
[0082]  ポリ核酸ポリマーは、Ｔｒａ２、ＳＲＳＦ３、又はＵ２ＡＦ３５、又は他のペプチド、センス又はアンチセンス核酸、低分子、又は他の化学品が含まれる、ＩＮＳイントロン１とエクソン２のスプライシングに影響を及ぼすことが示されてきたスプライシング因子への結合プラットフォームを提供して、ポリ核酸ポリマーの送達を促進する、及び／又は該核酸を特定の組織、細胞、又は発生期へ標的指向させることができる。このようなアンチセンス戦略は、癌細胞（特に、骨髄増殖性疾患において、Ｕ２ＡＦ３５のジンクフィンガードメイン中の特異的な置換について最初に示された（７６）ように、スプライシング因子遺伝子の体細胞突然変異を含有するもの）によくあるイントロン保持を減少させるのに役立つかもしれない。こういった突然変異は、多くの腫瘍で生じて、悪性腫瘍増殖に寄与し得るスプライシング障害をもたらす。本発明は、３’スプライス部位認識に関与するスプライシング因子に突然変異を有する有意率（現在１５％強と推定される（７６））の癌患者において、細胞増殖を制御して悪性腫瘍増殖を抑えるのに役立つかもしれない。
【００６９】
[0083]  ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は９９．５％相補的であり得る。ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して１００％相補的であり得る。
【００７０】
[0084]  ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４以下のミスマッチを有し得る。ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的に
プロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して３以下のミスマッチを有し得る。ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して２以下のミスマッチを有し得る。ポリ核酸ポリマーの配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して１以下のミスマッチを有し得る。
【００７１】
[0085]  ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に特異的にハイブリダイズし得る。その特異性は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対するポリ核酸ポリマーの９５％、９８％、９９％、９９．５％、又は１００％の配列相補性であり得る。ハイブリダイゼーションは、高ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下であり得る。
【００７２】
[0086]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも７５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも７０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも６５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも６０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも５５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６と少なくとも５０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。
【００７３】
[0087]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６の少なくとも１３の連続した塩基に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズし得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６の少なくとも１３の連続した塩基に対して１００％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズし得る。
【００７４】
[0088]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号３を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少
なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも８５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも７５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも７０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも６５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも６０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも５５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３と少なくとも５０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであり得る。
【００７５】
[0089]  転写産物の標的領域の少なくとも一部に対するアンチセンスへの言及は、少なくとも５の連続したヌクレオチド、又は少なくとも１０の連続したヌクレオチドを含み得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも５の連続したヌクレオチドに対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも１０の連続したヌクレオチドに対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも１５の連続したヌクレオチドに対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４６を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも２０の連続したヌクレオチドに対してアンチセンスであり得る。
【００７６】
[0090]  あるポリ核酸ポリマーは、配列番号４６の少なくとも１０の連続した塩基を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズし得る。このポリ核酸ポリマーは、配列番号４６の少なくとも１０の連続した塩基から成るｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズし得る。
【００７７】
[0091]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。
【００７８】
[0092]  あるポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す���配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも６３％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。
【００７９】
[0093]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；及び配列番号３６；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；及び配列番号３６；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；及び配列番号３６；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３；配列番号６；配列番号９；及び配列番号３６；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。
【００８０】
[0094]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号３を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号６を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号９を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３６を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。
【００８１】
[0095]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号３に対して少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６３％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、又は少なくとも５０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号６に対して少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６３％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、又は少なくとも５０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号９に対して少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６３％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、又は少なくとも５０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３６に対して少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６３％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、又は少なくとも５０％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対してアンチセンスであり得る。
【００８２】
[0096]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも９９％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対
しても少なくとも９８％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも９５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも９０％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも８５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも８０％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも７５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも７０％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも６５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも６０％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも５５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも５０％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対してアンチセンスであり得る。当業者は、ウラシルヌクレオチドがチミンヌクレオチドで置換され得ることを理解されよう（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。
【００８３】
[0097]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択されるポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【００８４】
[0098]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列���号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配���番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも５５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも５０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【００８５】
[0099]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択されるポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列���号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも５５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号３４；及び配列番号３５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも５０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【００８６】
[00100]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２を含み得るか又はそれから
成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５を含み得るか又はそれから成り得る。
【００８７】
[00101]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも９９％
の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【００８８】
[00102]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも９９％
の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも９
５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３又は配列番号４に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【００８９】
[00103]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも９９％
の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号７又は配列番号８に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【００９０】
[00104]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも９
９％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号３４又は配列番号３５に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【００９１】
[00105]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せ
を含む群のいずれかから選択されるポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む
群のいずれかから選択されるポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。
【００９２】
[00106]  ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せ
を含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも９９％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも９９％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも９８％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも９８％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含み得るか又はそれから成り得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも８５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも８０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも７５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも７０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも６５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれか成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも６０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも５５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。ポリ核酸ポリマーは、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列と少なくとも５０％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り得、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されている（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。
【００９３】
[00107]  有利にも、本発明は、イントロン転写産物（例えば、イントロン１−保持転
写産物）の相対豊富度を減少させるＳＳＯを同定して、１塩基解像法で最適化されるアンチセンス標的を明確にする。
【００９４】
[00108]  ポリ核酸ポリマーは、スプライス・スイッチング・オリゴヌクレオチド（Ｓ
ＳＯ）を含み得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約５０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約４５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約４０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約３５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約３０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約２５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約２０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１９ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１８ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１７ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１６ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１４ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１３ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１２ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１１ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０〜約５０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０〜約４５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０〜約４０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０〜約３５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０〜約３０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０〜約２５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１０〜約２０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１５〜約２５ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１５〜約３０ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーの長さは約１２〜約３０ヌクレオチドであり得る。
【００９５】
[00109]  ＳＳＯのようなポリ核酸ポリマーは、ＲＮＡ又はＤＮＡを含み得る。ＳＳＯ
のようなポリ核酸ポリマーは、ＲＮＡを含み得る。ＳＳＯのようなポリ核酸ポリマーは、ＤＮＡ又はＲＮＡと同等の相補性を有する、天然又は合成又は人工のヌクレオチド類似体又は塩基を含み得る。ＳＳＯのようなポリ核酸ポリマーは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及び／又はヌクレオチド類似体の組合せを含み得る。ヌクレオチド類似体は、ＰＮＡ又はＬＮＡを含み得る。別の態様では、ＳＳＯのような核酸は、ＰＭＯを含み得るか又はそれから成り得る。
【００９６】
[00110]  いくつかの事例では、合成又は人工のヌクレオチド類似体又は塩基は、リボ
ース部分、リン酸部分、ヌクレオシド部分、又はこれらの組合せの１以上での修飾を含むことができる。
【００９７】
[00111]  ヌクレオチド類似体又は人工ヌクレオチド塩基は、リボース部分の２’ヒド
ロキシル基に修飾がある核酸を含み得る。この修飾は、２’−Ｏ−メチル修飾又は２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）修飾であり得る。２’−Ｏ−メチル修飾は、リボース部分の２’ヒドロキシル基にメチル基を付加し得て、一方２’Ｏ−メトキシエチル修飾は、リボース部分の２’ヒドロキシル基にメトキシエチル基を付加し得る。アデノシン分子の２’−Ｏ−メチル修飾とウリジンの２’Ｏ−メトキシエチル修飾の例示の化学構
造を下記に図示する。
【００９８】
【化１】
2020189849.tif 000003
【００９９】
[00112]  ２’ヒドロキシル基での追加の修飾には、２’−Ｏ−アミノプロピル糖配座
を含めることができて、これは、アミン基を２’酸素に結合するプロピルリンカーを含む、延長アミン基を含むことができる。この修飾は、糖１つに付きこのアミン基からの１つの陽電荷を導入することによって、リン酸に由来するオリゴヌクレオチド分子全体の陰電荷を中和することができて、それによってその双性イオン特性による細胞取込特性を改善することができる。２’−Ｏ−アミノプロピルヌクレオシドホスホロアミダイトの例示の化学構造を下記に図示する。
【０１００】
【化２】
2020189849.tif 000004
【０１０１】
[00113]  ２’ヒドロキシル基での別の修飾には、４’リボース位も含め得る、ロック
されたか又は架橋されたリボース配座（例、ロック核酸又はＬＮＡ）を含めることができる。この修飾において、２’炭素で結合した酸素分子は、メチレン基によって４’炭素に連結して、それによって２’−Ｃ，４’−Ｃ−オキシ−メチレン連結性の２環式リボヌクレオチドモノマーを形成することができる。ＬＮＡの化学構造の例示の描図を下記に図示する。左方に示した描図は、ＬＮＡモノマーの化学連結性を強調する。右方に示した描図では、ＬＮＡモノマーのフラノース環のロックされた３’−エンド（３Ｅ）配座を強調する。
【０１０２】
【化３】
2020189849.tif 000005
【０１０３】
[00114]  ２’ヒドロキシル基でのさらなる修飾は、糖配座をＣ３’−エンド糖パッカ
リング（puckering）配座の中にロックする、例えば２’−４’−エチレン−架橋型核酸
のようなエチレン核酸（ＥＮＡ）を含み得る。ＥＮＡは、ＬＮＡも含む、修飾された核酸の架橋型核酸群の一部である。ＥＮＡと架橋型核酸の例示の化学構造を下記に図示する。
【０１０４】
【化４】
2020189849.tif 000006
【０１０５】
[00115]  ２’ヒドロキシル基でのなお他の修飾には、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ
−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）を含めることができる。
【０１０６】
[00116]  ヌクレオチド類似体は、モルホリノ類、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、メチルホ
スホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイト、１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、又はこれらの組合せをさらに含み得る。モルホリノ又はホスホロジアミデートモルホリノオリゴ（ＰＭＯ）は、その構造が、通常の糖及びリン酸の構造からの逸脱によって天然の核酸構造を模倣する合成分子を含む。また、５員リボース環は、４個の炭素、１個の窒素、及び１個の酸素を含有する６員モルホリノ環で置換し得る。リボースモノマーは、リン酸基の代わりにホスホロジアミデート基によって連結することができる。これらの骨格改変は、すべての陽電荷と陰電荷を除去し得て、モルホリノ類を、荷電性オリゴヌクレオチドによって使用されるような細胞送達剤の手助け無しに細胞膜を横断することができる中性分子にすることができる。
【０１０７】
【化５】
2020189849.tif 000007
【０１０８】
[00117]  ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、糖環もリン酸連結も含有しない。その代わり、
塩基は、オリゴグリシン様分子に付いて、それによって適切に配置されるので、骨格電荷を消失させることができる。
【０１０９】
【化６】
2020189849.tif 000008
【０１１０】
[00118]  リン酸骨格の修飾は、メチルホスホネートヌクレオチドのようなメチル又は
チオール修飾も含み得る。例示のチオールホスホネートヌクレオチド（左）とチルホスホネートヌクレオチド（右）を下記に図示する。
【０１１１】
【化７】
2020189849.tif 000009
【０１１２】
[00119]  さらに、例示の２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトを下記の
ように図示する：
【０１１３】
【化８】
2020189849.tif 000010
【０１１４】
[00120]  例示のヘキシトール核酸（又は１’，５’−アンヒドロヘキシトール核酸（
ＨＮＡ））を下記のように図示する：
【０１１５】
【化９】
2020189849.tif 000011
【０１１６】
[00121]  リボース部分、リン酸骨格、及びヌクレオシドの修飾に加えて、ヌクレオチ
ド類似体は、例えば、３’又は５’末端でも修飾することができる。例えば、３’末端には、３’カチオン基を含めることができる、又は３’末端のヌクレオシドを３’−３’連結で逆にすることができる。別の代替態様では、３’末端は、アミノアルキル基（例、３’Ｃ５−アミノアルキルｄＴ）でブロックすることができる。５’末端は、アミノアルキル基（例、５’−Ｏ−アルキルアミノ置換基）でブロックすることができる。他の５’コンジュゲートは、５’−３’エクソヌクレアーゼによる切断を阻害することができる。他の３’コンジュゲートは、３’−５’エクソヌクレアーゼによる切断を阻害することができる。
【０１１７】
[00122]  いくつかの事例では、本明細書に記載される人工ヌクレオチド類似体の１以
上は、天然のポリ核酸ポリマーと比べた場合、例えば、ＲＮアーゼＨのようなリボヌクレアーゼ、ＤＮアーゼのようなデオキシリボヌクレアーゼ、又は５’−３’エクソヌクレアーゼ及び３’−５’エクソヌクレアーゼのようなエクソヌクレアーゼといったヌクレアーゼに対して抵抗性である。いくつかの事例では、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾された、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ＰＮＡ、ＨＮＡ、モルホリノ、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイト、又はこれらの組合せを含む人工ヌクレオチド類似体は、例えば、ＲＮアーゼＨのようなリボヌクレアーゼ、ＤＮアーゼのようなデオキシリボヌクレアーゼ、又は５’−３’エクソヌクレアーゼ及び３’−５’エクソヌクレアーゼのようなエクソヌクレアーゼといったヌクレアーゼに対して抵抗性である。２’−Ｏ−メチル修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’−Ｏ−アミノプロピル修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’−デオキシ修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。ＬＮＡ修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。ＥＮＡ修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。ＨＮＡ修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。モルホリノ類は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。ＰＮＡは、ヌクレアーゼに対して抵抗し得る（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）。メチルホスホネートヌクレオチド修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。チオールホスホネートヌクレオチド修飾されたポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトを含むポリ核酸ポリマーは、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮアーゼＨ、ＤＮアーゼ、５’−３’エクソヌクレアーゼ又は３’−５’エクソヌクレアーゼ抵抗性）であり得る。
【０１１８】
[00123]  いくつかの事例では、本明細書に記載される人工ヌクレオチド類似体の１以
上は、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する。２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２
’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾された、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ＰＮＡ、ＨＮＡ、モルホリノ、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、又は２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトを含む人工ヌクレオチド類似体の１以上は、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−Ｏ−メチル修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−Ｏ−アミノプロピル修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−デオキシ修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。ＬＮＡ修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。ＥＮＡ修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。ＰＮＡ修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。ＨＮＡ修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。モルホリノ修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。メチルホスホネートヌクレオチド修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。チオールホスホネートヌクレオチド修飾されたポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトを含むポリ核酸ポリマーは、同等の天然ポリ核酸ポリマーに比して、そのｍＲＮＡ標的に対して増加した結合親和性を有する可能性がある。増加した親和性は、より低いＫｄ、より高い融点（Ｔｍ）、又はこれらの組合せで例証することができる。
【０１１９】
[00124]  追加の事例では、本明細書に記載されるポリ核酸ポリマーを修飾して、その
安定性を高めてよい。ポリ核酸ポリマーがＲＮＡである態様では、ポリ核酸ポリマーは、その安定性を高めるように修飾し得る。ポリ核酸ポリマーは、上記に記載した修飾の１以
上によって、その安定性を高めるように修飾し得る。ポリ核酸ポリマーは、２’ヒドロキシル位で、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）修飾によるか又はロックされたか又は架橋型のリボース配座（例、ＬＮＡ又はＥＮＡ）によるように修飾し得る。ポリ核酸ポリマーは、２’−Ｏ−メチル及び／又は２’−Ｏ−メトキシエチルリボースによって修飾し得る。ポリ核酸ポリマーは、その安定性を高めるために、モルホリノ類、ＰＮＡ、ＨＮＡ、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、又は２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトも含めてよい。当業者には、送達のために安定性を高めるのに適したＲＮＡへの修飾が明らかであろう。
【０１２０】
[00125]  本明細書に記載されるポリ核酸ポリマーは、当該技術分野で知られた手順を
使用する、化学合成及び／又は酵素ライゲーション反応を使用して、構築することができる。例えば、天然に存在するヌクレオチド、又は分子の生物学的安定性を高めるか又はポリ核酸ポリマーと標的核酸の間で形成される２重鎖の物理学的安定性を高めるように設計された、様々に修飾されたヌクレオチドを使用して、ポリ核酸ポリマーを化学的に合成することができる。例示の方法には、ＵＳ５，１４２，０４７；ＵＳ５，１８５，４４４；ＷＯ２００９０９９９４２；又はＥＰ１５７９０１５に記載されるものを含めることができる。追加の例示の方法には、Griffey et al.,「2’-O-aminopropyl ribonucleotides: a zwitterionic modification that enhances the exonuclease resistance and biological activity of antisense oligonucleotides（２’−Ｏ−アミノプロピルリボヌクレオチド：アンチセンスオリゴヌクレオチドのエクソヌクレアーゼ抵抗性と生物学的活性を高める双性イオン修飾）」J. Med. Chem. 39(26): 5100-5109 (1997))；Obika, et al.「Synthesis of 2’-O, 4’-C-methyleneuridine and -cytidine. Novel bicyclic nucleosides having affixed C3, -endo suger puckering（２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレンウリジン及びシチジンの合成。固定されたＣ３，エンド糖パッカリングを有する新規２環式ヌクレオシド）」Tetrahedron Letters 38(50): 8735 (1997)；Koizumi, M.「ENA oligonucleotides as therapeutics（治療薬としてのＥＮＡオリゴヌクレオチド）」Current opinion in molecular therapeutics 8(2): 144-149(2006)；及び Abramova et al.,「Novel oligonucleotide analogues based on morpholino nucleoside subunits-antisense technologies: new chemical possibilities（モルホリノヌクレオシドサブユニット−アンチセンス技術に基づく新規オリゴヌクレオチド類似体：新しい化学の可能性）」Indian Journal of Chemistry 48B: 1721-1726 (2009) に記載されるものを含めることができる。あるいは、ポリ核酸ポリマーは、あるポリ核酸ポリマーがアンチセンス配向でその中にサブクローン化された（即ち、挿入されたポリ核酸ポリマーから転写されるＲＮＡが目的の標的ポリ核酸ポリマーに対してアンチセンス配向になる）発現ベクターを使用して生物学的に産生することができる。
【０１２１】
[00126]  ポリ核酸ポリマーは、別のアンチセンス分子のようなどの核酸分子にも、ペ
プチドにも、又はポリ核酸ポリマーの送達を促進する、及び／又は該核酸を特定の組織、細胞種、又は細胞の発生期へ標的指向させる他の化学品へも結合し得る。ポリ核酸ポリマーは、タンパク質又はＲＮＡに結合し得る。ポリ核酸ポリマーに繋がったタンパク質は、スプライシングとイントロン除去を増強する、阻害する、又は調節するスプライシング因子を含み得る。ポリ核酸ポリマーに繋がったＲＮＡは、スプライシングとイントロン除去を増強する、阻害する、又は調節するアプタマー又はあらゆる構造を含み得る。ポリ核酸ポリマーは、単離された核酸であり得る。
【０１２２】
[00127]  ポリ核酸ポリマーは、該ポリ核酸ポリマーを細胞に送達するのに適した送達
担体にコンジュゲートさせても、それによって結合してもよい。該細胞は、特定の細胞種、又は特定の発生期であり得る。送達担体は、部位特異的、組織特異的、細胞特異的、又は発生期特異的な送達が可能であり得る。例えば、送達担体は、細胞特異的なウイルス粒子又はその成分であっても、あるいは、送達担体は、細胞特異的な抗体粒子又はその成分であってもよい。ポリ核酸ポリマーは、膵臓中のβ細胞への送達に標的指向され得る。ポリ核酸ポリマーは、胸腺細胞への送達に標的指向され得る。ポリ核酸ポリマーは、悪性細胞への送達に標的指向され得る。ポリ核酸ポリマーは、前悪性細胞（近未来のうちに、プレ白血病や骨髄異形成症候群のような明らかに悪性の表現型、又は組織病理学的に定義される前癌病変又は病態に発達することが知られている）への送達に標的指向され得る。
【０１２３】
[00128]  １つの態様では、ポリ核酸ポリマーは、薬物のような化学分子（例、非ペプ
チド又は核酸ベースの分子）に結合し得る。該薬物は、低分子（例えば、９００Ｄａ未満のＭＷを有する）であり得る。
【０１２４】
[00129]  本発明の１つの態様では、送達担体は、細胞浸透ペプチド（ＣＰＰ）を含み
得る。例えば、ポリ核酸ポリマーは、ＣＰＰに結合又は複合化し得る。当業者は、どの好適なＣＰＰも、ポリ核酸ポリマーとコンジュゲートして、該ポリ核酸ポリマーの細胞へ及び／又は細胞中への送達に役立ち得ることを理解されよう。このようなＣＰＰは、参照により本明細書に組み込まれる、Boisguerin et al. (2015, Advanced Drug Delivery Reviews doi:10.1016/j.addr.2015.02.008) によって記載される、どの好適なＣＰＰ技術でもよい。ポリ核酸ポリマーへのコンジュゲーションに適した送達担体については、参照により本明細書に組み込まれる、Lochmann et al ((European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 58 (2004) 237-251) にも記載されている。
【０１２５】
[00130]  ＣＰＰは、例えば、アルギニン及び／又はリジンリッチのペプチドであり得
る（ここでは、該ペプチド中の残基の大多数がリジン又はアルギニンである）。ＣＰＰは、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）を含み得る。あるいは、ＣＰＰは、ポリアルギニンを含み得る。好適なＣＰＰは、ペネトラチン（Penetratin）；Ｒ６−ペネトラチン；トランスポータン（Transportan）；オリゴ−アルギニン；Ｆ−３；Ｂ−ペプチド；Ｂ−ＭＳＰ；Ｐｉｐ１、Ｐｉｐ２ａ、Ｐｉｐ２ｂ、Ｐｉｐ５ｅ、Ｐｉｐ５ｆ、Ｐｉｐ５ｈ、Ｐｉｐ５ｊ；Ｐｉｐ５ｋ、Ｐｉｐ５ｌ、Ｐｉｐ５ｍ、Ｐｉｐ５ｎ、Ｐｉｐ５ｏ、Ｐｉｐ６ａ、Ｐｉｐ６ｂ、Ｐｉｐ６ｃ、Ｐｉｐ６ｄ、Ｐｉｐ６ｅ、Ｐｉｐ６ｆ、Ｐｉｐ６ｇ、又はＰｉｐ６ｈのようなＰｉｐペプチド；配列ＰＫＫＫＲＫＶのペプチド；ペナトラチン（Penatratin）；Ｌｙｓ４；ＳＰＡＣＥ；Ｔａｔ；Ｔａｔ−ＤＲＢＤ（ｄｓＲＮＡ結合ドメイン）；（ＲＸＲ）４；（ＲＦＦ）３ＲＸＢ；（ＫＦＦ）３Ｋ；ＲｇＦ２；Ｔ細胞由来ＣＰＰ；Ｐｅｐ−３；ＰＥＧｐｅｐ−３；ＭＰＧ−８；ＭＰＧ−８−Ｃｈｏｌ；ＰｅｐＦｅｃｔ６；Ｐ５ＲＨＨ；Ｒ１５；及びＣｈｏｌ−Ｒ９；又はこれらの機能性変異体（例えば、Boisguerin et al. (2015, Advanced Drug Delivery Reviews doi:10.1016/j.addr.2015.02.008) を参照のこと）を含む群より選択され得る。
【０１２６】
[00131]  １つの態様では、ＣＰＰは、Ｐｉｐペプチドを含むか又はそれから成る。Ｐ
ｉｐペプチドは、Ｐｉｐ１、Ｐｉｐ２ａ、Ｐｉｐ２ｂ、Ｐｉｐ５ｅ、Ｐｉｐ５ｆ、Ｐｉｐ５ｈ、Ｐｉｐ５ｊ；Ｐｉｐ５ｋ、Ｐｉｐ５ｌ、Ｐｉｐ５ｍ、Ｐｉｐ５ｎ、Ｐｉｐ５ｏ、Ｐｉｐ６ａ、Ｐｉｐ６ｂ、Ｐｉｐ６ｃ、Ｐｉｐ６ｄ、Ｐｉｐ６ｅ、Ｐｉｐ６ｆ、Ｐｉｐ６ｇ、及びＰｉｐ６ｈを含む群より選択され得る。
【０１２７】
[00132]  本発明の１つの態様では、送達担体は、ペプチドベースのナノ粒子（ＰＢＮ
）を含むことができ、複数のＣＰＰ（例えば、本明細書で考察した１以上の好適なＣＰＰ）が電荷相互作用を介してポリ核酸ポリマーと複合体を形成する。このようなナノ粒子の大きさは約５０ｎｍ〜２５０ｎｍであり得る。１つの態様では、ナノ粒子の大きさは約７０〜２００ｎｍであり得る。別の態様では、ナノ粒子の大きさは、約７０〜１００ｎｍ又は１２５〜２００ｎｍであり得る。
【０１２８】
[00133]  １つの態様では、ポリ核酸ポリマーは、送達担体と、例えばイオン結合によ
って複合化し得る。あるいは、ポリ核酸ポリマーは、送達担体に共有結合し得る。コンジュゲーション／結合の方法については、参照により本明細書に組み込まれる、Lochmann et al ((European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 58 (2004) 237-251) に記載されている。例えば、コンジュゲーション法は、反応基（例、−ＮＨ２又は−ＳＨ２）を含有する好適な繋ぎ（tether）をポリ核酸ポリマーに導入して、合成後に活性中間体としてペプチドのような送達担体に付加し、続いて水系媒体においてカップリング反応を行うことを含み得る。代わりの方法は、単一の固相支持体上でコンジュゲーションを線形モードで行うことを含み得る。
【０１２９】
[00134]  送達担体とポリ核酸ポリマーは、チオール−マレイミド連結のように、チオ
ール及び／又はマレイミドで連結し得る。ポリ核酸ポリマーと送達担体のコンジュゲーションは、コンジュゲートされる各分子上のアジド又は２’−Ｏ−プロパルジル官能基とアルキン基の反応のような、クリックケミストリー（click-chemistry）によってよい。１
つの態様では、送達担体とポリ核酸ポリマーは、チオエーテル架橋によって連結し得る。別の態様では、送達担体とポリ核酸ポリマーは、ジスルフィド架橋によって連結し得る。当業者は、ポリ核酸ポリマーと送達担体（ペプチドのような）のコンジュゲーションに適した連結基又は反応を容易に確認されよう。
【０１３０】
[00135]  遺伝子転写産物は、プロインスリンをコードし得る。遺伝子転写産物は、Ｉ
ＮＳ遺伝子より転写され得る。遺伝子転写産物は、低レベルのプロインスリンを発現する、ヒトのハプロタイプに由来し得る。イントロンは、ＩＮＳイントロン１を含み得る。
【０１３１】
[00136]  遺伝子転写産物は、ＡＢＣＤ４；ＡＢＣＦ３；ＡＣＡＤＶＬ；ＡＬＫＢＨ６
；ＡＰ１Ｇ２；ＡＰＥＸ１；ＡＲＦＲＰ１；ＡＴＨＬ１；ＡＴＰ１Ａ３；ＡＴＰ５Ｄ；ＡＴＰ１３Ａ１；ＢＡＸ；ＢＤＨ２；ＢＲＤ２；Ｃ１ｏｒｆ６３；Ｃ１ｏｒｆ６３０；Ｃ１ｏｒｆ６３１；Ｃ１ｏｒｆ１２４；Ｃ２ｏｒｆ４９；Ｃ８ｏｒｆ８２；Ｃ１６ｏｒｆ５９；ＣＡＰＲＩＮ２；ＣＤＣＡ７；ＣＥＰ１６４；ＣＥＰ１７０；ＣＬＣＮ７；ＣＰＮＥ１；ＣＰＳＦ３Ｌ；ＤＣＸＲ；ＤＥＮＮＤ４Ｂ；ＤＦＦＡ；ＤＩＳ３Ｌ２；ＤＮＡＪＢ１２；ＤＰＦ１；ＤＲＧ２；ＤＳＮ１；ＥＭＬ３；ＥＷＳＲ１；ＥＷＳＲ１０；ＦＧＦＲ４；ＦＴＳＪ１；ＧＢＡＰ１；ＧＭＰＰＡ；ＧＭＰＲ２；ＧＮＰＴＧ；ＧＯＲＡＳＰ１；ＧＰＡＴＣＨ４；ＨＧＳ；ＨＭＧ２０Ｂ；ＩＦＦＯ１；ＩＳＹＮＡ１；ＫＲＩ１；ＬＯＣ１４８４１３；ＬＺＴＲ１；ＭＡＮ２Ｃ１；ＭＡＰ４Ｋ２；ＭＣＯＬＮ１；ＭＤＰ１；ＭＩＢ２；ＭＩＴＤ１；ＭＯＫ；ＭＯＶ１０；ＭＲＰＬ３５；ＭＴＭＲ１１；ＭＵＳ８１；ＮＡＰＥＰＬＤ；ＮＢＥＡＬ２；ＮＤＲＧ４；ＮＤＵＦＢ１０；ＮＦＡＴＣ４；ＮＦＫＢＩＢ；ＮＩＴ１；ＮＫＴＲ；ＮＰＲＬ２；ＮＳＵＮ５Ｐ１；ＮＵＤＴ２２；ＰＡＮ２；ＰＤＤＣ１；ＰＤＬＩＭ４；ＰＨＦ１；ＰＩＫ３ＣＤ；ＰＩＴＰＮＭ１；ＰＰＩＬ２；ＰＰＰ１Ｒ３５；ＰＰＰ４Ｃ；ＰＱＬＣ２；ＰＲＰＦ３９；ＰＳＭＥ２；ＰＴＰＭＴ１；ＱＡＲＳ；ＲＡＤ５２；ＲＨＯＴ２；ＲＭＮＤ５Ｂ；ＲＮＦ１２３；ＲＰＬ１０Ａ；ＲＰＰ２１；ＲＰＳ６ＫＢ２；ＲＵＳＣ１；ＳＣＲＮ２；ＳＣＹＬ１；ＳＦＲ１；ＳＧＳＭ３；ＳＩＲＴ７；ＳＬＣ２５Ａ３；ＳＬＣ２５Ａ３；ＳＬＣ３０Ａ７；ＳＬＣ３７Ａ４；ＳＴＫ１９；ＳＴＸ１０；ＴＣＦ２５；ＴＯＭＭ４０；ＴＰ５３Ｉ３；ＴＲＩＭ４１；ＴＲＰＴ１；ＴＳＴＡ３；ＴＴＣ１４；ＴＴＣ１４０；ＴＵＢＧＣＰ６；Ｕ２ＡＦ１Ｌ４；ＵＣＫ１；ＵＮＣ４５Ａ；ＶＡＭＰ１；ＶＡＭＰ１０；ＶＡＲＳ；ＶＰＳ２８；ＷＤＲ２４；ＷＤＲ９０；ＷＲＡＰ５３；ＹＤＪＣ；ＹＩＰＦ３；ＹＩＰＦ３；ＺＣＣＨＣ８；ＺＣＣＨＣ１８；ＺＦＡＮＤ１；ＺＮＦ１３１；ＺＮＦ３００；ＺＮＦ３１７；ＺＮＦ６９２；ＺＮＦ７１１；ＺＮＲＤ１；ＺＷＩＮＴ；又はこれらの組合せを含む遺伝子又はＯＲＦのいずれかから選択される遺伝子又はＯＲＦより転写され得る。
【０１３２】
[00137]  「ポリ核酸ポリマー」及び「核酸」という用語は、交換可能的に使用し得て
、長さ約１０〜約５０ヌクレオチドのポリ核酸ポリマーに言及し得る。
[00138]  疾患
[00139]  本明細書に記載される方法及び組成物は、タンパク質の産生低下を特徴とす
る疾患又は病態を治療するために使用することができる。本明細書に記載される方法及び組成物はまた、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を治療するために使用することができる。この疾患又は病態は、遺伝子疾患又は病態であり得る。この遺伝子疾患又は病態は、タンパク質の産生低下を特徴とし得る。この遺伝子疾患又は病態はまた、不完全なスプライシングを特徴とし得る。遺伝子疾患又は病態は、ゲノム内の１以上の位置内の遺伝性障害、又は非遺伝性障害であり得る。この遺伝子疾患は、遺伝性疾患であり得る。この遺伝性疾患は、タンパク質の産生低下を特徴とし得る。この遺伝性疾患は、不完全なスプライシングを特徴とし得る。遺伝性疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。遺伝性疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。遺伝性疾患のある対象は、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。
【０１３３】
[00140]  遺伝子疾患又は病態は、ゲノム内の１以上の位置内の非遺伝性障害であり得
る。この非遺伝性障害は、点突然変異、欠失、挿入、又はフレームシフトであり得る。非遺伝性障害に関連した遺伝子疾患又は病態は、タンパク質の産生低下を特徴とし得る。非遺伝性障害に関連した遺伝子疾患又は病態は、不完全なスプライシングを特徴とし得る。非遺伝性障害のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。非遺伝性障害のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。非遺伝性障害のある対象は、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。
【０１３４】
[00141]  遺伝子疾患又は病態は、常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性
疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患であり得る。ときどき、遺伝性疾患は、常染色体優性、常染色体劣性、Ｘ連鎖優性、Ｘ連鎖劣性、Ｙ連鎖、ミトコンドリア、又は多因子若しくは多遺伝子性の遺伝性疾患として特徴づけることが可能である。常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患は、タンパク質の産生低下を特徴とし得る。常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患は、不完全なスプライシングを特徴とし得る。常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患のある対象は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患のある対象は、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得るゲノムを有する可能性がある。
【０１３５】
[00142]  例示の遺伝性疾患には、軟骨発育不全症、遺伝性ヘモクロマトシス、ダウン
症候群、遺伝性球状赤血球症、テイ・サックス症、アッシャー症候群、遺伝性果糖不耐症、血友病、筋ジストロフィー（例、デュシェンヌ型筋ジストロフィー又はＤＭＤ）、多遺伝子疾患、乳癌、卵巣癌、パーキンソン病、バルデー・ビードル症候群、プラダー・ウィリー症候群、糖尿病、心疾患、関節炎、運動ニューロン疾患、色素欠乏症、猫鳴き症候群、嚢胞性線維症、脆弱Ｘ症候群、ガラクトース血症、ハンチントン病、ジャクソン・ワイス症候群、クラインフェルター症候群、クラッベ病、ランガー・ギーディオン症候群、レッシュ・ナイハン症候群、マルファン症候群、筋強直性ジストロフィー、ネイル・パテラ症候群、神経線維腫症、ヌーナン症候群、トリプルＸ症候群、骨形成不全症、パトウ症候群、フェニルケトン尿症、ポルフィリン症、網膜芽細胞腫、レット症候群、鎌状赤血球症、ターナー症候群、アッシャー症候群、フォン・ピッぺル・リンドウ症候群、ワールデンブルグ症候群、ウィルソン病、色素性乾皮症、ＸＸＸＸ症候群、又はＹＹ症候群を含めることができる。
【０１３６】
[00143]  例えば、軟骨発育不全症、遺伝性ヘモクロマトシス、ダウン症候群、遺伝性
球状赤血球症、テイ・サックス症、アッシャー症候群、遺伝性果糖不耐症、血友病、筋ジストロフィー（例、デュシェンヌ型筋ジストロフィー又はＤＭＤ）、多遺伝子疾患、乳癌、卵巣癌、パーキンソン病、バルデー・ビードル症候群、プラダー・ウィリー症候群、糖尿病、心疾患、関節炎、運動ニューロン疾患、色素欠乏症、猫鳴き症候群、嚢胞性線維症、脆弱Ｘ症候群、ガラクトース血症、ハンチントン病、ジャクソン・ワイス症候群、クラインフェルター症候群、クラッベ病、ランガー・ギーディオン症候群、レッシュ・ナイハン症候群、マルファン症候群、筋強直性ジストロフィー、ネイル・パテラ症候群、神経線維腫症、ヌーナン症候群、トリプルＸ症候群、骨形成不全症、パトウ症候群、フェニルケトン尿症、ポルフィリン症、網膜芽細胞腫、レット症候群、鎌状赤血球症、ターナー症候群、アッシャー症候群、フォン・ピッぺル・リンドウ症候群、ワールデンブルグ症候群、ウィルソン病、色素性乾皮症、ＸＸＸＸ症候群、又はＹＹ症候群のような遺伝性疾患は、タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る。例えば、軟骨発育不全症、遺伝性ヘモクロマトシス、ダウン症候群、遺伝性球状赤血球症、テイ・サックス症、アッシャー症候群、遺伝性果糖不耐症、血友病、筋ジストロフィー（例、デュシェンヌ型筋ジストロフィー又はＤＭＤ）、多遺伝子疾患、乳癌、卵巣癌、パーキンソン病、バルデー・ビードル症候群、プラダー・ウィリー症候群、糖尿病、心疾患、関節炎、運動ニューロン疾患、色素欠乏症、猫鳴き症候群、嚢胞性線維症、脆弱Ｘ症候群、ガラクトース血症、ハンチントン病、ジャクソン・ワイス症候群、クラインフェルター症候群、クラッベ病、ランガー・ギーディオン症候群、レッシュ・ナイハン症候群、マルファン症候群、筋強直性ジストロフィー、ネイル・パテラ症候群、神経線維腫症、ヌーナン症候群、トリプルＸ症候群、骨形成不全症、パトウ症候群、フェニルケトン尿症、ポルフィリン症、網膜芽細胞腫、レット症候群、鎌状赤血球症、ターナー症候群、アッシャー症候群、フォン・ピッぺル・リンドウ症候群、ワールデンブルグ症候群、ウィルソン病、色素性乾皮症、ＸＸＸＸ症候群、又はＹＹ症候群のような遺伝性疾患は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１３７】
[00144]  上記に記載したように、遺伝子疾患又は病態は、常染色体優性疾患、常染色
体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患であり得る。遺伝子疾患又は病態は、常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患であり得て、タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とする疾患であり得る。
【０１３８】
[00145]  例示の常染色体優性疾患には、ハンチントン病、神経線維腫症１型、神経線
維腫症２型、マルファン症候群、遺伝性非ポリポーシス結直腸癌、遺伝性多発性外骨腫、結節性硬化症、フォン・ウィルブランド病、又は急性間欠性ポルフィリン症を含めることができる。
【０１３９】
[00146]  ハンチントン病、神経線維腫症１型、神経線維腫症２型、マルファン症候群
、遺伝性非ポリポーシス結直腸癌、遺伝性多発性外骨腫、結節性硬化症、フォン・ウィルブランド病、又は急性間欠性ポルフィリン症のような常染色体優性疾患は、タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る。ハンチントン病、神経線維腫症１型、神経線維腫症２型、マルファン症候群、遺伝性非ポリポーシス結直腸癌、遺伝性多発性外骨腫、結節性硬化症、フォン・ウィルブランド病、又は急性間欠性ポルフィリン症のような常染色体優性疾患は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１４０】
[00147]  例示の常染色体劣性疾患には、色素欠乏症、中鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素欠
損症、嚢胞性線維症、鎌状赤血球症、テイ・サックス症、ニーマン・ピック病、脊髄性筋萎縮症、又はロバーツ症候群を含めることができる。
【０１４１】
[00148]  色素欠乏症、中鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素欠損症、嚢胞性線維症、鎌状赤血
球症、テイ・サックス症、ニーマン・ピック病、脊髄性筋萎縮症、又はロバーツ症候群のような常染色体劣性疾患は、タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る。色素欠乏症、中鎖アシルＣｏＡ脱水素酵素欠損症、嚢胞性線維症、鎌状赤血球症、テイ・サックス症、ニーマン・ピック病、脊髄性筋萎縮症、又はロバーツ症候群のような常染色体劣性疾患は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１４２】
[00149]  例示のＸ連鎖優性疾患には、Ｘ連鎖低リン血症性くる病、レット症候群、色
素失調症２型、アイカルディ症候群、又はクラインフェルター症候群を含めることができる。
【０１４３】
[00150]  Ｘ連鎖低リン血症性くる病、レット症候群、色素失調症２型、アイカルディ
症候群、又はクラインフェルター症候群のようなＸ連鎖優性疾患は、タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る。Ｘ連鎖低リン血症性くる病、レット症候群、色素失調症２型、アイカルディ症候群、又はクラインフェルター症候群のようなＸ連鎖優性疾患は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエ
クソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１４４】
[00151]  例示のＸ連鎖劣性疾患には、血友病Ａ、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、
レッシュ・ナイハン症候群、又はターナー症候群を含めることができる。
[00152]  血友病Ａ、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、レッシュ・ナイハン症候群、
又はターナー症候群のようなＸ連鎖劣性疾患は、タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る。血友病Ａ、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、レッシュ・ナイハン症候群、又はターナー症候群のようなＸ連鎖劣性疾患は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１４５】
[00153]  例示のＹ連鎖疾患には、スワイヤ−症候群又は一種の網膜色素変性症を含め
ることができる。
[00154]  スワイヤ−症候群又は一種の網膜色素変性症のようなＹ連鎖疾患は、タンパ
ク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る。スワイヤ−症候群又は一種の網膜色素変性症のようなＹ連鎖疾患は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１４６】
[00155]  例示のミトコンドリア病には、レーバー遺伝性視神経症を含めることができ
る。
[00156]  レーバー遺伝性視神経症のようなミトコンドリア病は、タンパク質の産生低
下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る。レーバー遺伝性視神経症のようなミトコンドリア病は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１４７】
[00157]  例示の多因子若しくは多遺伝子疾患には、心疾患、糖尿病、多発性硬化症の
ような自己免疫疾患、炎症性腸疾患、又は癌を含めることができる。
[00158]  心疾患、糖尿病、多発性硬化症のような自己免疫疾患、炎症性腸疾患、又は
癌のような多因子若しくは多遺伝子疾患は、タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とし得る心疾患、糖尿病、多発性硬化症のような自己免疫疾患、炎症性腸疾患、又は癌のような多因子若しくは多遺伝子疾患は、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンを含む遺伝子のコピーを含み得る、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるときにタンパク質の全長機能型をコードし得るエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含み得る、又はタンパク質の全長機能型を産生することが不可能であり得る、遺伝子の不完全なコピーを含み得る。
【０１４８】
[00159]  いくつかの事例では、本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、遺
伝性疾患のような遺伝子の疾患又は病態を治療する。本明細書に記載される組成物及び方
法を使用して、タンパク質の産生低下を特徴とする遺伝性疾患のような遺伝子の疾患又は病態を治療することができる。本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、不完全なスプライシングを特徴とする遺伝性疾患のような遺伝子の疾患又は病態を治療することができる。
【０１４９】
[00160]  本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、常染色体優性疾患、常染
色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患のような遺伝子疾患又は病態を治療することもできる。本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、その疾患又は病態がタンパク質の産生低下を特徴とする、常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患を治療することができる。本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、その疾患又は病態が不完全なスプライシングを特徴とする、常染色体優性疾患、常染色体劣性疾患、Ｘ連鎖優性疾患、Ｘ連鎖劣性疾患、Ｙ連鎖疾患、ミトコンドリア病、又は多因子若しくは多遺伝子疾患を治療することもできる。
【０１５０】
[00161]  いくつかの事例では、疾患又は病態には、筋ジストロフィー、脊髄性筋萎縮
症（ＳＭＡ）、毛細血管拡張性運動失調症、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、糖尿病、又は癌が含まれる。
【０１５１】
[00162]  筋ジストロフィーは、筋骨格系を弱め得て移動を妨げ得る、一群の筋疾患で
ある。それは、進行性の骨格筋衰弱、筋タンパク質中の障害、並びに筋細胞及び組織の死を特徴とし得る。筋ジストロフィーの１つの一般的な形態は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）であり得る。筋ジストロフィーの追加の形態には、ベッカー型、肢体型、先天性、顔面肩甲上腕型、筋強直性、眼咽頭型、遠位、及びエメリ・ドレフュス型の筋ジストロフィーを含めることができる。
【０１５２】
[00163]  脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、小児死亡の最も一般的な遺伝子的原因の１つ
である、常染色体劣性疾患である。この疾患の主要な特徴は、脊髄運動ニューロンの進行性の損失であり得て、骨格筋の脱神経をもたらして、随意筋の衰弱、委縮、及び麻痺が後続する。ＳＭＡの遺伝子座は、数個の遺伝子を含有する第５染色体５ｑ１３上にある約５００ｋｂの複合した逆位反復にマッピングされ得る。ＳＭＡの主因は、その逆位反復内に位置する生存運動ニューロン遺伝子（ＳＭＮ１）のテロメアコピーのホモ接合欠失であり得る。逆位反復のセントロメアコピー内の重複遺伝子（ＳＭＮ２）も転写され得るが、ＳＭＮ２遺伝子は、ＳＭＮ１機能の損失を完全には代償しない。
【０１５３】
[00164]  毛細血管拡張性運動失調症（Ａ−Ｔ）又はルイス・バー症候群は、稀な神経
変性の遺伝病である。「運動失調（ataxia）」という用語は、整合不足を意味して、「毛細血管拡張性（telangiectasia）」という用語は、拡張された毛細血管を意味する。いずれの用語も、この疾患の特質を特徴づける。ＡＴは、小脳とさらなる脳の領域を損なう可能性があって、それが運動及び整合の妨害を引き起こす可能性がある。ＡＴはまた、免疫系を弱めることによって感染を高める可能性があって、ＤＮＡ修復を損なうことによって癌のリスクを高める可能性がある。Ａ−Ｔは、多様なストレスに対する細胞応答を管理する役割があるＡＴＭ遺伝子中の障害に関連する可能性がある。
【０１５４】
[00165]  Ｘ連鎖低γグロブリン血症、ＸＬＡ、ブルートン型無γグロブリン血症、ブ
ルートン症候群、又は伴性無γグロブリン血症としても知られるＸ連鎖無γグロブリン血症は、感染と戦う身体能力に影響を及ぼし得るＸ連鎖遺伝子疾患である。ＸＬＡ患者では成熟Ｂ細胞が不足して、結果として、感染と戦うのに必要な抗体が不足する。ブルートンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、Ｂ細胞の発生及び成熟化に媒介することに関連し得て、
ＢＴＫ遺伝子は、ＸＬＡに関連する可能性がある。
【０１５５】
[00166]  真性糖尿病（ＤＭ）（通常、糖尿病として知られる）は、長期間にわたる高
血糖レベルを特徴とする代謝性疾患の群である。糖尿病の症状には、体重損失、多尿症又は排尿増加、多渇症又は渇きの増加、及び過食症又は空腹の増加を含めることができる。糖尿病は、４種のカテゴリー（１型、２型、妊娠糖尿病、及び他の特殊型の糖尿病）に分類することができる。１型糖尿病は、インスリン欠乏をもたらす、膵臓中のランゲルハンス島のインスリン産生β細胞の欠失を特徴とし得る。２型糖尿病は、インスリン抵抗性を特徴とし得て、これはまたインスリン分泌の低下と結び付く可能性がある。妊娠糖尿病は、２型糖尿病に似ている可能性があって、不十分なインスリンの分泌及び応答性の組合せが関与する可能性がある。他の特殊型の糖尿病には、糖尿病前症、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、及び先天性糖尿病を含めることができる。
【０１５６】
[00167]  癌は、固形腫瘍又は血液系腫瘍であり得る。固形腫瘍は、肉腫又は癌腫であ
り得る。肉腫は、骨、軟骨、脂肪筋、血管又は造血組織の癌であり得る。例示の肉腫には、胞巣状横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮腫、血管肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、軟部組織の淡明細胞肉腫、脱分化型脂肪肉腫、デスモイド、線維形成性小円形細胞腫瘍、胎児性横紋筋肉腫、類上皮線維肉腫、類上皮血管内皮腫、類上皮肉腫、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、腎外性ラブドイド腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、巨細胞腫瘍、血管外皮腫、乳児型線維肉腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、カポシ肉腫、骨平滑筋肉腫、脂肪肉腫、骨脂肪肉腫、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、骨悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、悪性間葉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、間葉性軟骨肉腫、粘液線維肉腫、粘液型脂肪肉腫、粘液炎症性線維芽細胞肉腫、血管周囲類上皮細胞分化を伴う新生物（複数）、骨肉腫、傍骨性骨肉腫、血管周囲類上皮細胞分化を伴う新生物、骨膜性骨肉腫、多形型脂肪肉腫、多形型横紋筋肉腫、ＰＮＥＴ／骨外性ユーイング腫瘍、横紋筋肉腫、円形細胞型脂肪肉腫、小細胞型骨肉腫、孤在線維性腫瘍、滑膜肉腫、血管拡張型骨肉腫を含めることができる。
【０１５７】
[00168]  癌腫は、上皮細胞より発生する癌であり得る。例示の癌腫には、腺癌、扁平
細胞癌、腺扁平上皮癌、退形成癌、大細胞癌、小細胞癌、肛門癌、盲腸癌、胆管癌（即ち、胆管細胞癌）、膀胱癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、原発不明癌（ＣＵＰ）、食道癌、眼の癌、卵管癌、消化器系癌、腎癌、肝癌、肺癌、髄芽腫、黒色腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、副甲状腺疾患、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、甲状腺癌、子宮癌、膣癌、又は外陰癌を含めることができる。
【０１５８】
[00169]  血液系腫瘍は、血管系の悪性腫瘍であって、Ｔ細胞ベースの悪性腫瘍とＢ細
胞ベースの悪性腫瘍を含めることができる。例示の血液系腫瘍には、骨髄性白血病、骨髄増殖性腫瘍、非特定型末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）、未分化大細胞型リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）、芽球型ＮＫ細胞リンパ腫、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾γ・δＴ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、鼻性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、治療関連Ｔ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、高リスクＣＬＬ、非ＣＬＬ／ＳＬＬリンパ腫、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、又はリンパ腫様肉芽腫症を含めることができる。
【０１５９】
[00170]  いくつかの事例では、本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、筋
ジストロフィー、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、毛細血管拡張性運動失調症、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、糖尿病、又は癌を治療する。本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、筋ジストロフィー、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、毛細血管拡張性運動失調症、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、糖尿病、又は癌を治療することができて、ここで該疾患又は障害は、タンパク質の産生低下に関連している。本明細書に記載される組成物及び方法を使用して、筋ジストロフィー、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、毛細血管拡張性運動失調症、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、糖尿病、又は癌を治療することができて、ここで該疾患又は障害は、不完全なスプライシングを特徴とする。
【０１６０】
[00171]  上記疾患は、成熟転写産物においてイントロン全体の保持をもたらす突然変
異によって引き起こされる、どんな遺伝子状態であってもよい。該疾患は、糖尿病であり得る。該疾患は、Ｉ型糖尿病であり得る。該疾患は、ＩＩ型糖尿病であり得る。別の態様では、疾患は、癌であり得る。その癌は、骨髄性白血病又は骨髄増殖性腫瘍であり得る。その癌は、３’スプライス部位の認識を促進するスプライソソーム成分のいずれにも突然変異を維持する場合がある。該ポリ核酸ポリマーは、残余のβ細胞活性がある対象において内因性の発現を高めるために使用し得る。該ポリ核酸ポリマーは、移植β細胞を受容した患者が含まれる、他の糖尿病患者においてプロインスリンの発現を高めるために使用し得る。該ポリ核酸ポリマーは、Ｕ２成分をコードする遺伝子に突然変異を含有する悪性腫瘍（例えば、骨髄性白血病の２０％より多い）のアンチセンス療法として使用し得る。
【０１６１】
[00172]  疾患が糖尿病である態様では、イントロン保持の発生を減少させることが対
象の胎児発育の間であってよい。例えば、胎児におけるイントロン保持を減少させるために、妊娠した母親に該ポリ核酸ポリマーを投与してよい。
【０１６２】
[00173]  対象は、真核生物であり得る。対象は、哺乳動物であり得る。対象は、ヒト
であり得る。対象は、非ヒト霊長動物であり得る。対象は、ラット、マウス、フェレット、イヌ、ネコ、又はブタのような非霊長類の哺乳動物であり得る。対象は、ヒト胎児のような、胎児であり得る。
【０１６３】
[00174]  本方法は、疾患病理が遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因するかどう
かを治療に先立って決定することを含み得る。この決定には、当業者に利用可能などの好適なアッセイも遺伝子解析も使用し得る。
【０１６４】
[00175]  いくつかの事例では、in situ ハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲの
ような核酸ベースの技術を用いて核酸レベルで検出を行う。配列決定技術には、Helicos True Single Molecule Sequencing（ｔＳＭＳ）（Harris T.D. et al. (2008) Science 320:106-109)；４５４配列決定法（ロシュ）（Margulies, M. et al. 2005, Nature, 437, 376-380）；ＳＯＬｉＤ技術（アプライド・バイオシステムズ）；ＳＯＬＥＸＡ配列決定法（Illumina）；Pacific Biosciences の単一分子リアルタイム（ＳＭＲＴＴＭ）技術；ナノポア（nanopore）配列決定法（Soni GV and Meller A. (2007) Clin Chem 53: 1996-2001）；半導体配列決定法（Ion Torrent；Personal Genome Machine）；ＤＮＡナノボール（nanoball）配列決定法； Dover Systems（Polonator）由来の技術を使用する配列決定法、及びナノポアベースの戦略（例、Oxford Nanopore、Genia Technologies、及び Nabsys）のような、配列決定に先立って増幅を必要としないし他のやり方でネイティブＤＮＡを形質転換することもない技術（例、Pacific Biosciences 及び Helicos）といった次世代配列決定技術を含めることができる。配列決定技術には、サンガー配列決定法、マキサム・ギルバート配列決定法、ショットガン配列決定法、ブリッジＰＣＲ、質量分析法ベースの配列決定法、微小流路（microfluidic）ベースのサンガー配列決定法、顕微鏡法ベースの配列決定法、ＲＮＡＰ配列決定法、又はハイブリダイゼーションベースの配列決定法も含めることができる。
【０１６５】
[00176]  目的の遺伝子転写産物の配列決定法には、増幅工程も含めてよい。例示の増
幅法には、限定されないが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、核酸配列ベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）、自立配列複製（３ＳＲ）、ループ介在等温増幅（ＬＡＭＰ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、全ゲノム増幅、多重置換増幅、鎖置換増幅、ヘリカーゼ依存性増幅、ニッキング（nicking）酵素増幅反応、組換えポリメラーゼ増幅、逆転写ＰＣＲ、ライゲーション媒介ＰＣＲ、又はメチル化特異的ＰＣＲが含まれる。
【０１６６】
[00177]  核酸配列を入手するために使用し得る追加の方法には、例えば、全ゲノムＲ
ＮＡ発現アレイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ゲノム配列決定法、de novo 配列決定法、Pacific Biosciences ＳＭＲＴ配列決定法、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫細胞化学（ＩＣＣ）、質量分析法、タンデム質量分析法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）、in-situ ハイブリダイゼーション、蛍光 in-situ ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、色素 in-situ ハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）、銀 in situ ハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ）、デジタルＰＣＲ（ｄＰＣＲ）、逆転写ＰＣＲ、定量ＰＣＲ（Ｑ−ＰＣＲ）、単一マーカーｑＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、nCounter Analysis（Nanostring 技術）、ウエスタン・ブロッティング、サザン・ブロッティング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ゲル電気泳動法、及びノーザン・ブロッティングが含まれる。
【０１６７】
[00178]  いくつかの事例では、例えば、ウエスタン・ブロットのような免疫沈降ベー
スのアッセイ、又はＥＬＩＳＡを使用して、タンパク質レベルで検出を行うことができる。付言すると、目的のタンパク質の検出には、電気泳動法や質量分析法の分析のような方法も利用することができる。
【０１６８】
[00179]  本発明の別の側面によれば、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイ
ブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法が提供され、ここで該領域は、配列番号４６、又は任意選択的に、配列番号４６に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る。該領域は、配列番号４６に対して少なくとも９８％又は９９％の同一性を有し得る。
【０１６９】
[00180]  本発明の別の側面によれば、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイ
ブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法が提供され、ここで該領域は、配列番号３、又は任意選択的に、配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る。該領域は、配列番号３に対して少なくとも９８％又は９９％の同一性を有し得る。
【０１７０】
[00181]  本発明の別の側面によれば、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイ
ブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法が提供され、ここで該領域は、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれにも相補的な配列を含むか又はそれから成る。
【０１７１】
[00182]  本発明の別の側面によれば、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイ
ブリダイズさせることを含む、細胞においてイントロン・スプライシングを調節する方法が提供され、ここで該領域は、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれに対しても少なくとも９５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれから成る。該領域は、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれに対しても少なくとも９８％の同一性を有する配列に相補的な
配列を含み得るか又はそれから成り得る。該領域は、配列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれに対しても少なくとも９９％の同一性を有する配列に相補的な配列を含み得るか又はそれから成り得る。
【０１７２】
[00183]  該細胞は、試験管内（in vitro）であり得る。該細胞は、体外（ex vivo）であり得る。該細胞は、真核細胞又は原核細胞であり得る。該細胞は、真核細胞であり得る。該細胞は、ヒト；非ヒト霊長動物；又は、ネコ、ラット、マウス、イヌ、フェレット、又はブタのような非霊長類の哺乳動物由来の哺乳動物細胞であり得る。該細胞は、上皮細胞、結合組織細胞、ホルモン分泌細胞、神経細胞、骨格筋細胞、血液細胞、又は免疫系細胞由来のようなヒト細胞であり得る。該細胞は、固形腫瘍細胞又は血液系腫瘍細胞のような腫瘍細胞であり得る。
【０１７３】
[00184]  本発明の別の側面によれば、配列番号４６を含むか又はそれから成るポリ核
酸ポリマーの領域、又は任意選択的に、配列番号４６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスである、ポリ核酸ポリマーが提供される。該領域は、配列番号４６に対して少なくとも９８％又は９９％の同一性を有し得る。
【０１７４】
[00185]  本発明の別の側面によれば、配列番号３を含むか又はそれから成るポリ核酸
ポリマーの領域、又は任意選択的に、配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスである、ポリ核酸ポリマーが提供される。該領域は、配列番号３に対して少なくとも９８％又は９９％の同一性を有し得る。
【０１７５】
[00186]  本発明の別の側面によれば、ポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対
してアンチセンスであるポリ核酸ポリマーが提供され、該領域は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに相補的な配列を含むか又はそれから成る。
【０１７６】
[00187]  本発明の別の側面によれば、ポリ核酸ポリマーの領域（ここで該領域は、配
列番号４７〜配列番号４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれにも相補的な配列を含むか又はそれから成る）；又は任意選択的に、配列番号４７〜配列番号４３４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスである、ポリ核酸ポリマーが提供される。該領域は、配列番号４７〜配列番号４３４に対して少なくとも９８％又は９９％の同一性を有し得る。
【０１７７】
[00188]  ポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであること
への言及は、少なくとも５の連続したヌクレオチドの領域を意味すると当業者には理解され得る。ポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであることへの言及は、少なくとも１０の連続したヌクレオチドの領域を意味すると当業者には理解され得る。
【０１７８】
[00189]  本発明の別の側面によれば、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番
号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。
【０１７９】
[00190]  本発明の別の側面によれば、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番
号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。本発明の別の側面によれば、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。本発明の別の側面によれば、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。
【０１８０】
[00191]  本発明の別の側面によれば、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを
含む群のいずれかから選択される核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換され得ることが理解される（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。
【０１８１】
[00192]  本発明の別の側面によれば、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを
含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。本発明の別の側面によれば、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。本発明の別の側面によれば、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する核酸配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーが提供される。ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換され得ることが理解される（例えば、そのような配列のＲＮＡのＤＮＡ型）。
【０１８２】
[00193]  ポリ核酸ポリマーは、単離された核酸であり得る。ポリ核酸ポリマーは、該
ポリ核酸ポリマーを細胞に送達するのに適した送達担体にコンジュゲートさせても、それによって結合してもよい。送達担体は、部位特異的、組織特異的、細胞特異的な送達が可能であり得る。例えば、送達担体は、細胞特異的なウイルス粒子又はその成分であっても、あるいは、送達担体は、細胞特異的な抗体粒子又はその成分であってもよい。ポリ核酸ポリマーは、膵臓中のβ細胞への送達に標的指向され得る。ポリ核酸ポリマーは、胸腺細胞への送達に標的指向され得る。ポリ核酸ポリマーは、悪性細胞への送達に標的指向され得る。ポリ核酸ポリマーは、その安定性を高めるために修飾され得る。ポリ核酸ポリマーがＲＮＡである態様では、該ポリ核酸ポリマーは、その安定性を高めるために修飾され得る。ポリ核酸ポリマーは、２’−Ｏ−メチル及び２’−Ｏ−メトキシエチルリボースによって修飾され得る。当業者には、送達のために安定性を高めるのに適したＲＮＡへの修飾が明らかであろう。
【０１８３】
[00194]  ポリ核酸ポリマーは、プラスミドベクターの一部であり得る。ポリ核酸ポリ
マーは、ウイルスベクターの一部であり得る。ポリ核酸ポリマーは、ウイルスベクター上でコードされ得る。
【０１８４】
[00195]  本発明の別の側面によれば、本発明のポリ核酸ポリマーを含むベクターが提
供される。該ベクターは、ウイルスベクターを含み得る。該ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターを含み得る。該ベクターは、ポリ核酸ポリマーを悪性細胞又は特定細胞種へ標的指向させるウイルスも含み得る。
【０１８５】
[00196]  本発明の別の側面によれば、本発明のポリ核酸ポリマーを含むか又はそれへ
結合した送達担体が提供される。該送達担体は、脂質ベースのナノ粒子；カチオン性細胞浸透ペプチド（ＣＰＰ）；又は直鎖若しくは分岐鎖カチオン性ポリマー；又はコレステロール、胆汁酸、脂質、ペプチド、ポリマー、タンパク質、又はアプタマーのようなバイオコンジュゲートを含み得て、これらは、細胞内送達及び／又は安定性改善のためにポリ核酸ポリマーにコンジュゲートされる。該送達担体は、細胞若しくは組織特異的でも、発生期特異的でもよい。該送達担体は、抗体又はその一部を含み得る。該抗体は、該ポリ核酸ポリマーの特定細胞への送達のために、目的の細胞上の細胞表面マーカーに特異的であり得る。例えば、該抗体は、参照により本明細書に組み込まれる、Ji Hoon Jeong et al (Journal of Controlled Release 107 (2005) 562-570) に従って、島β細胞へ標的指向される非ウイルス性ポリ核酸ポリマーの送達用の抗ＧＡＤ抗体を含み得る。例えば、抗ＧＡＤ抗体は、抗ＧＡＤ  Ｆａｂ’断片をＰＥＩにＰＥＧリンカーを介してコンジュゲートする（ＰＥＩ−ＰＥＧ−Ｆａｂ’）。ポリ核酸ポリマーの標的指向される組織送達のためのそのようなコンジュゲーションには、他の特異抗体も使用し得る。
【０１８６】
[00197]  医薬組成物／製剤、投薬、及び治療レジメン
[00198]  本発明の１つの側面によれば、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産
物中のイントロンのスプライシングアウトの増加を誘導する治療薬剤を含む医薬組成物を対象に投与すること（ここで該対象は、該タンパク質の全長機能型のコピーをコードすることが可能であって、そのそれぞれが部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の翻訳を阻害する少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールを有する）、及び該対象の標的細胞を治療薬剤と接触させて、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールのある部分がスプライシングを受けて、その部分中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれより少なくとも１つの保持されたイントロンを除去することを引き起こして、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生すること（ここで、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、翻訳されて該タンパク質の全長機能型のコピーを発現して、それが該疾患又は病態を治療する）を含む、タンパク質の機能型の産生低下を特徴とする疾患又は病態の治療のための治療薬剤が提供される。
【０１８７】
[00199]  治療薬剤は、該細胞において１以上のスプライシングタンパク質複合体の活
性化を引き起こして、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールの部分中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれより少なくとも１つの保持されたイントロンを除去することができる。治療薬剤は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を阻害することができる。治療薬剤は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を活性化することができる。治療薬剤は、イントロン・スプラ
イシング活性を調節するタンパク質と相互作用し得るか又はそれに結合し得る。治療薬剤は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的ポリヌクレオチド配列と相互作用し得るか又はそれに結合し得る。いくつかの態様では、治療薬剤は、本明細書に記載されるポリ核酸ポリマーのような、ポリ核酸ポリマーであり得る。いくつかの態様では、治療薬剤は、低分子であり得る。
【０１８８】
[00200]  該低分子は、９００ダルトン未満の分子であり得て、細胞中の１以上のスプ
ライシングタンパク質複合体を始動させて、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールの部分中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれより少なくとも１つの保持されたイントロンを除去することができる。該低分子は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を阻害することができる。該低分子は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を活性化することができる。該低分子は、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質と相互作用し得るか又はそれに結合し得るか又は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的ポリヌクレオチド配列と相互作用し得るか又はそれに結合し得る。
【０１８９】
[00201]  本発明の別の側面によれば、本発明のポリ核酸ポリマーを含む組成物が提供
される。該組成物は、医薬的に許容される組成物であり得る。該組成物は、医薬的に許容される担体を含み得る。該組成物は、薬物又はプロドラッグのような追加の活性薬剤を含み得る。該組成物は、治療のために、ＳＳＯのような、異なるポリ核酸ポリマーの組合せを含み得る。
【０１９０】
[00202]  該組成物は、ポリ核酸ポリマーに加えて、少なくとも１つの他の生物学的活
性分子を含み得る。該生物学的活性分子は、薬物又はプロドラッグであり得る。該生理活性分子は、核酸又はアミノ酸を含み得る。該生物学的活性分子は、低分子（例、９００ダルトン未満の分子）を含み得る。
【０１９１】
[00203]  本明細書に記載される医薬組成物は、あるタンパク質をコードして、保持さ
れたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー（ここで該標的配列は、２つのＧ４重鎖の間にあり、ここで該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である）；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含み得る。本明細書に記載される医薬組成物はまた、あるタンパク質をコードして、保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー（ここで該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズし、ここで該イントロン・スプライシング調節配列は、第１のＣＣＣモチーフを含み、そしてここで該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である）；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含み得る。加えて、本明細書に記載される医薬組成物は、あるタンパク質をコードして、保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー（ここで該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、ここで該結合モチーフは、Ｇ４重鎖を形成せず、そしてここで該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である）；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含み得る。
【０１９２】
[00204]  本明細書に記載される医薬組成物は、あるタンパク質をコードして、保持さ
れたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイ
ブリダイズするポリ核酸ポリマー（ここで該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、そしてここで該結合モチーフは、ヘアピン構造を形成し、ここで該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である）；及び医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体をさらに含み得る。
【０１９３】
[00205]  本明細書に記載される医薬製剤は、限定されないが、非経口（例、静脈内、
皮下、筋肉内）、経口、鼻腔内、頬内、局所、直腸、又は経皮の投与経路が含まれる多数の投与経路によって対象に投与することができる。いくつかの事例では、本明細書に記載される医薬組成物は、非経口（例、静脈内、皮下、筋肉内）投与用に製剤化される。他の事例において、本明細書に記載される医薬組成物は、経口投与用に製剤化される。なお他の事例において、本明細書に記載される医薬組成物は、鼻腔内投与用に製剤化される。
【０１９４】
[00206]  本明細書に記載される医薬製剤には、限定されないが、水性液体分散液剤、
自己乳化型分散液剤、固体溶液剤、リポソーム分散液剤、エアゾール剤、固体剤形、散剤、即時放出型製剤、制御放出型製剤、速溶解型製剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出型製剤、延長放出型製剤、パルス放出型製剤、多微粒子製剤、並びに即時及び制御複合放出型製剤が含まれ得る。
【０１９５】
[00207]  医薬製剤には、医薬品において一般的に使用されるどの賦形剤も含まれ得て
、本明細書に開示される組成物との適合性と、所望される剤形の放出プロフィール特性を基に選択されるべきである、担体又は担体材料が含まれ得る。例示の担体材料には、例えば、結合剤、懸濁剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、希釈剤、等が含まれる。医薬的に適合可能な担体材料には、限定されないが、アカシア、ゼラチン、コロイド状２酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル類、カゼイン酸ナトリウム、大豆レシチン、タウロコール酸、ホスファチジルコリン、塩化ナトリウム、リン酸３カルシウム、リン酸２カリウム、セルロースとセルロースコンジュゲート、糖類、ステアロイルラクチル酸ナトリウム、カラゲナン、モノグリセリド、ジグリセリド、プレゼラチン化デンプン、等が含まれ得る。例えば、「Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed（レミントン：調剤の科学と実践、第19版）」(ペンシルヴェニア州イーストン：Mack Publishing Company, 1995)；Hoover, John E.「Remington’s Pharmaceutical Sciences（レミントン製剤科学）」（Mack Publishing Co., ペンシルヴェニア州イーストン、1975）；Liberman, H. A. and Lachman, L.（監修）「Pharmaceutical Dosage Forms（医薬剤形）」Marcel Decker, ニューヨーク州ニューヨーク、1980；及び「Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems（医薬剤形と薬物送達システム）」第7版（Lippincott Williams & Wilkins, 1999) を参照のこと。
【０１９６】
[00208]  医薬製剤には、分散剤及び／又は粘度調節剤が含まれ得て、これには、薬物
の液体媒体を通した拡散及び均質性、又は造粒法と混和法を制御する材料が含まれ得る。いくつかの態様では、これらの薬剤はまた、被覆又は腐食マトリックスの有効性を促進する。例示の分散促進剤／分散剤には、例えば、親水性ポリマー、電解質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０又は８０、ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ；Ｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）の商品名で知られる）、及び、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（例、ＨＰＣ、ＨＰＣ−ＳＬ、及びＨＰＣ−Ｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例、ＨＰＭＣ  Ｋ１００、ＨＰＭＣ  Ｋ４Ｍ、ＨＰＭＣ  Ｋ１５Ｍ、及びＨＰＭＣ  Ｋ１００Ｍ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート（ＨＰＭＣＡＳ）、非結晶性セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、２酸化エチレンとホルムアルデヒドを含む４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）−フェノールポリマー（チロキサポールとしても知られる）、ポロキサマー類（例、酸化エチレンと酸化プロピレンのブロック共重合体である、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ  Ｆ６８（登録商標）、Ｆ８８（登録商標）、及びＦ１０８（登録商標））；並びに、ポロキサミン類（例、Ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ  ９０８（登録商標）としても知られる、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ  ９０８（登録商標）、これは、エチレンジアミンへの酸化プロピレンと酸化エチレンの連続付加より誘導される４官能性のブロック共重合体である（BASF Corporation, ニュージャージー州パーシッパニー））、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、又はポリビニルピロリドンＫ３０、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ−６３０）、ポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコールの分子量は、約３００〜約６０００、又は約３３５０〜約４０００、又は約７０００〜約５４００であり得る）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリソルベート−８０、アルギン酸ナトリウム、ゴム類（例えば、トラガカントゴムとアカシアゴム、グアーゴムのような）、キサンタン（キサンタンガムが含まれる）、糖類、セルロース系薬剤（例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースのような）、ポリソルベート−８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドン、カルボマー類、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、アルギン酸塩、キトサン、及びこれらの組合せといった、炭水化物ベースの分散剤が含まれる。セルロース又はトリエチルセルロースのような可塑剤も、分散剤として使用し得る。リポソーム分散液剤及び自己乳化型分散液剤に特に有用な分散剤は、ジミリストイルホスファチジルコリン、卵由来の天然ホスファチジルコリン、卵由来の天然ホスファチジルグリセロール、コ���ステロール、及びミリスチン酸イソプロピルである。
【０１９７】
[00209]  医薬製剤には、ｐＨ調整剤又は緩衝化剤が含まれ得て、これには、酢酸、ホ
ウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、及び塩酸のような酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、及びトリス−ヒドロキシメチルアミノメタンのような塩基；及び、クエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウム、及び塩化アンモニウムのような緩衝剤が含まれ得る。このような酸、塩基、及び緩衝剤は、組成物のｐＨを許容される範囲で維持するのに必要とされる量で含まれる。
【０１９８】
[00210]  医薬製剤には、組成物のモル浸透圧濃度を許容される範囲にするのに必要と
される量で１以上の塩も含まれ得る。そのような塩には、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムカチオンと、塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸、又は重亜硫酸アニオンを有するものが含まれ得て；好適な塩には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、及び硫酸アンモニウムが含まれる。
【０１９９】
[00211]  医薬製剤には、より安定した環境を提供し得るので、化合物を安定化するた
めにも使用され得る、希釈剤がさらに含まれ得る。当該技術分野では、緩衝化溶液に溶けた塩（これはまた、ｐＨの制御又は維持を提供し得る）を希釈剤として利用し得て、これには、限定されないが、リン酸緩衝生理食塩水溶液が含まれる。ある事例では、希釈剤が組成物の嵩を増やして、圧縮を容易にするか又はカプセル充填用の均質混和に十分な嵩を創出する。そのような化合物には、例えば、乳糖、デンプン、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）のような微結晶性セルロース；２塩基性リン酸カルシウム、リン酸２カルシウム２水和物；リン酸３カルシウム、リン酸カルシウム；無水乳糖、スプレー乾燥乳糖；プレゼラチン化デンプン、Ｄｉ−Ｐａｃ（登録商標）
（Amstar）のような圧縮糖；マンニトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、ショ糖ベースの希釈剤、製菓用砂糖；１塩基性硫酸カルシウム１水和物、硫酸カルシウム２水和物；乳酸カルシウム３水和物、デキストレート；加水分解されたシリアル固形物、アミロース；粉末セルロース、炭酸カルシウム；グリシン、カオリン；マンニトール、塩化ナトリウム；イノシトール、ベントナイト、等を含めることができる。
【０２００】
[00212]  医薬製剤には、物質の破壊又は崩壊を促進する、崩壊作用剤（disintegration agents）又は崩壊剤（disintegrants）が含まれ得る。「崩壊する」という用語には、胃腸液と接触するときの、剤形の溶解と分散がともに含まれ得る。崩壊作用剤の例には、デンプン（例、トウモロコシデンプン又はジャガイモデンプンのような天然デンプン、Ｎａｔｉｏｎａｌ  １５５１又はＡｍｉｊｅｌ（登録商標）のようなプレゼラチン化デンプン、又はＰｒｏｍｏｇｅｌ（登録商標）又はＥｘｐｌｏｔａｂ（登録商標）のようなデンプングリコール酸ナトリウム、木産物のメチル結晶性セルロースのようなセルロース（例、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０１、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０２、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０５、Ｅｌｃｅｍａ（登録商標）Ｐ１００、Ｅｍｃｏｃｅｌ（登録商標）、Ｖｉｖａｃｅｌ（登録商標）、Ｍｉｎｇ  Ｔｉａ（登録商標）、及びＳｏｌｋａ−Ｆｌｏｃ（登録商標））、メチルセルロース、クロスカルメロース、又は架橋型カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ（登録商標）、架橋型カルボキシメチルセルロースナトリウム、又は架橋型クロスカルメロースのような架橋型セルロース、デンプングリコール酸ナトリウムのような架橋型デンプン、クロスポビドンのような架橋型ポリマー、架橋型ポリビニルピロリドン、アルギン酸のようなアルギニン酸エステル、又はアルギン酸ナトリウムのようなアルギン酸の塩、Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標）ＨＶ（ケイ酸アルミニウムマグネシウム）のような粘土、寒天、グアー、イナゴマメ、カラヤ（Karaya）、ペクチン、又はトラガカントのようなゴム、デンプングリコール酸ナトリウム、ベントナイト、天然スポンジ、界面活性剤、陽イオン交換樹脂のような樹脂、シトラス（柑橘類）パルプ、ラウリル硫酸ナトリウム、デンプンと組み合わせたラウリル硫酸ナトリウム、等を含めることができる。
【０２０１】
[00213]  医薬製剤には、乳糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、２塩基性リン酸
カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デキストレート、デキストラン、デンプン類、プレゼラチン化デンプン、ショ糖、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコール、等のような充填剤が含まれ得る。
【０２０２】
[00214]  医薬製剤には、例えば、アカシアシロップ、アセスルファームＫ、アリテー
ム、アニス、アップル、アスパルテーム、バナナ、ババリアン（Bavarian）クリーム、ベリー、ブラックカラント、バタースコッチ、クエン酸カルシウム、カンファー、カラメル、チェリー、チェリークリーム、チョコレート、シナモン、バブルガム、シトラス、シトラスパンチ、シトラスクリーム、綿菓子、ココア、コーラ、クールチェリー、クールシトラス、シクラメート、シラメート（cylamate）、デキストロース、ユーカリ、オイゲノール、フルクトース、フルーツパンチ、ジンジャー、グリシルレチネート、カンゾウ（リコリス）シロップ、ブドウ、グレープフルーツ、ハニー、イソマルト、レモン、ライム、レモンクリーム、グリチルリチン酸モノアンモニウム（ＭａｇｎａＳｗｅｅｔ（登録商標））、マルトール、マンニトール、メープル、マシュマロ、メントール、ミントクリーム、ミックスベリー、ネオヘスペリジンＤＣ、ネオテーム、オレンジ、洋ナシ、モモ、ペパーミント、ペパーミントクリーム、Ｐｒｏｓｗｅｅｔ（登録商標）Ｐｏｗｄｅｒ、ラズベリー、ルートビア、ラム、サッカリン、サフロール、ソルビトール、スペアミント、スペアミントクリーム、イチゴ、イチゴクリーム、ステビア、スクラロース、ショ糖、サッカリンナトリウム、サッカリン、アスパルテーム、アセスルファームカリウム、マンニトール、タリン、シリトール、スクラロース、ソルビトール、スイス（Swiss）クリーム、タガロース、タンジェリン、タウマチン、トゥッティ・フルッティ（tutti fruitti）、バニラ、ウォルナット、スイカ、ワイルドチェリー、ウィンターグリーン、キシリトール、又はこれら香味成分のあらゆる組合せ（例、アニス−メントール、チェリー−アニス、シナモン−オレンジ、チェリー−シナモン、チョコレート−ミント、ハニー−レモン、レモン−ライム、レモン−ミント、メントール−ユーカリ、オレンジ−クリーム、バニラ−ミント、及びこれらの混合物）のような香味剤及び／又は甘味剤が含まれ得る。
【０２０３】
[00215]  本明細書に記載される医薬製剤には、滑沢剤と流動促進剤も含めてよく、こ
れらは、材料の付着又は摩擦を予防、抑制、又は阻害することができる。例示の滑沢剤には、例えば、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、フマル酸ステアリルナトリウム、鉱油のような炭化水素、又は水素添加ダイズ油（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標））のような水素添加植物油、高級脂肪酸とその（アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛のような）アルカリ金属塩とアルカリ土類金属塩、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、タルク、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール（例、ＰＥＧ４０００）又はメトキシポリエチレングリコール（ＣａｒｂｏｗａｘＴＭのような）、オレイン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸マグネシウム若しくはナトリウム、コロイド状シリカ（ＳｙｌｏｉｄＴＭ、Ｃａｂ−Ｏ−Ｓｉｌ（登録商標）のような）、トウモロコシデンプンのようなデンプン、シリコーン油、界面活性剤、等を含めることができる。
【０２０４】
[00216]  可塑剤は、マイクロカプセル化材料又はフィルムコーティング剤を柔らかく
して砕けにくくさせるために使用される化合物であり得る。好適な可塑剤には、例えば、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ１４５０、ＰＥＧ３３５０、及びＰＥＧ８００のようなポリエチレングリコール類、ステアリン酸、プロピレングリコール、オレイン酸、トリエチルセルロース、及びトリアセチンが含まれる。可塑剤は、分散剤又は湿潤剤としても機能することができる。
【０２０５】
[00217]  可溶化剤には、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カ
プリル酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムドクサート（doccusate）、ビタ
ミンＥ  ＴＰＧＳ、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ｎ−ブタノール、イソプロピルアルコール、コレステロール、胆汁酸塩、ポリエチレングリコール２００−６００、グリコフロール、トランスクトール、プロピレングリコール、及びジメチルイソソルビド、等のような化合物を含めることができる。
【０２０６】
[00218]  安定化剤には、あらゆる抗酸化剤、緩衝剤、酸、保存剤、等のような化合物
を含めることができる。
[00219]  懸濁剤には、ポリビニルピロリドン（例、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポ
リビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、又はポリビニルピロリドンＫ３０）、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、ポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコールは、約３００〜約６０００、又は約３３５０〜約４０００、又は約７０００〜約５４００の分子量を有し得る）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースアセテートステアレート、ポリソルベート−８０、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゴム類（例えば、トラガカントゴム及びアカシアゴム、グアーゴムのような）、キサンタン（キサンタンガムが含まれる）、糖類、セルロース系薬剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースのような）、ポリソルベート−８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドン、等のような化合物を含めることができる。
【０２０７】
[00220]  界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムドクサート、Ｔｗｅ
ｅｎ６０又は８０、トリアセチン、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポロキサマー、胆汁酸塩、グリセリルモノステアレート、酸化エチレン及び酸化プロピレンの共重合体（例、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（BASF））、等のような化合物を含めることができる。追加の界面活性剤には、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドと植物油（例、ポリオキシエチレン（６０）水素添加ヒマシ油）；及び、ポリオキシエチレンアルキルエーテル類とアルキルフェニルエーテル類（例、オクトキシノール１０、オクトキシノール４０）を含めることができる。時には、物理学的安定性を高めるためか又は他の目的のために、界面活性剤を含めてよい。
【０２０８】
[00221]  粘度増強剤には、例えば、メチルセルロース、キサンタンガム、カルボキシ
メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸塩、アカシア、キトサン類、及びこれらの組合せを含めることができる。
【０２０９】
[00222]  湿潤剤には、オレイン酸、グリセリルモノステアレート、ソルビタンモノオ
レエート、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ナトリウムドクサート、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムドクサート、トリアセチン、Ｔｗｅｅｎ８０、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、アンモニウム塩、等のような化合物を含めることができる。
【０２１０】
[00223]  注射用製剤
[00224]  筋肉内、皮下、又は静脈内注射に適した製剤には、生理学的に許容される無
菌で水性又は非水性の溶液剤、分散液剤、懸濁液剤、又は乳液剤、及び無菌の注射用溶液剤又は分散液剤に復元される無菌散剤が含まれ得る。好適な水性及び非水性担体、希釈剤、溶媒、又は媒体（vehicles）の例には、水、エタノール、ポリオール類（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール、クレモフォール、等）、これらの好適な混合物、植物油（オリーブ油のような）と注射用有機エステル類（オレイン酸エチルのような）が含まれる。例えば、レシチンのようなコーティング剤の使用によって、分散液剤の場合は必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、適正な流動性を維持することができる。皮下注射に適した製剤は、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のような添加剤も含有してよい。パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、等のような様々な抗菌剤及び抗真菌剤によって、微生物の増殖の予防を確実にすることができる。糖類、塩化ナトリウム、等のような等張化剤を含めることが望ましい場合もある。モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンのような、吸収を遅らせる薬剤の使用によって、注射可能な医薬形態の長期化吸収をもたらすことができる。
【０２１１】
[00225]  静脈内注射剤では、水溶液剤において、好ましくは、ハンクス液、リンゲル
液、又は生理食塩水のような生理学的に適合可能な緩衝液剤において、本明細書に記載される化合物を製剤化し得る。経粘膜投与では、透過すべき障壁に適した浸透剤が製剤中に使用される。当該技術分野では、このような浸透剤が一般に知られている。他の非経口注射剤では、適正な製剤に、好ましくは生理学的に適合可能な緩衝剤又は賦形剤とともに、
水性又は非水性溶液剤が含まれ得る。当該技術分野では、このような賦形剤が一般に知られている。
【０２１２】
[00226]  非経口注射は、ボーラス注射又は連続注入を含み得る。注射用製剤は、保存
剤が添加された単位剤形において（例えば、アンプル剤において、又は多用量容器において）提示され得る。本明細書に記載される医薬組成物は、油性又は水性媒体中の無菌の懸濁液剤、溶液剤、又は乳液剤として非経口注射に適した形態であり得て、懸濁剤、安定化剤、及び／又は分散剤のような製剤用薬剤を含有し得る。非経口投与用の医薬製剤には、水溶性形態にある活性化合物の水溶液剤が含まれる。付言すると、活性化合物の懸濁液剤は、適正な油性の注射懸濁液剤として調製し得る。好適な脂溶性溶媒又は媒体には、ゴマ油のような脂肪油、又はオレイン酸エチル又はトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル類、又はリポソームが含まれる。水性注射懸濁液剤は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、又はデキストランのような、懸濁液剤の粘度を高める物質を含有し得る。懸濁液剤は、高濃縮溶液剤の調製を可能にするために化合物の溶解度を高める、好適な安定化剤又は薬剤を含有してもよい。あるいは、有効成分は、使用前は、好適な媒体（例、発熱物質除去滅菌水）での復元用の粉末形態であってよい。
【０２１３】
[00227]  経口製剤
[00228]  経口使用のための医薬調製品は、本明細書に記載される化合物の１以上と１
以上の固体賦形剤を混合し、任意選択的に、生じる混合物を粉砕し、そして（所望により好適な補助剤を添加後）顆粒の混合物を処理して、錠剤又は糖衣錠の芯を入手することによって入手することができる。好適な賦形剤には、例えば、糖類（乳糖、ショ糖、マンニトール、又はソルビトールが含まれる）；セルロース調製物（例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、ラガカントゴム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムのような）；又は、他のもの（ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ又はポビドン）又はリン酸カルシウムのような）といった充填剤を含めることができる。所望により、架橋型クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸又はアルギン酸ナトリウムのようなその塩といった崩壊作用剤を添加してよい。
【０２１４】
[00229]  糖衣錠芯は、好適なコーティング剤で提供することができる。この目的には
、糖濃縮溶液を使用し得て、これは、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は２酸化チタン、ラッカー溶液、及び好適な有機溶媒又は溶媒混合物を含有してもよい。識別のために、又は活性化合物量の異なる組合せを特徴づけるために、錠剤又は糖衣錠コーティング剤に染料又は色素を添加してよい。
【０２１５】
[00230]  固体剤形は、錠剤（懸濁錠、速溶錠、噛み崩壊（bite-disintegration）錠、速崩壊錠、発泡錠、又はカプレットが含まれる）、丸剤、散剤（無菌包装散剤、ディスポーザブル散剤、又は発泡散剤が含まれる）、カプセル剤（軟カプセル剤と硬カプセル剤（例えば、動物由来ゼラチン又は植物由来ＨＰＭＣから作られるカプセル剤、又は「スプリンクルカプセル剤」がともに含まれる）、固体分散剤、固溶体、生体分解可能な剤形、放出制御型製剤、パルス放出型剤形、多微粒子剤形、ペレット剤、顆粒剤、又はエアゾール剤の形態であり得る。他の事例において、医薬製剤は、散剤の形態である。なお他の事例において、医薬製剤は、限定されないが、速溶錠剤が含まれる、錠剤の形態である。付言すると、本明細書に記載される医薬製剤は、単一のカプセル剤として投与しても、多数のカプセル剤形において投与してもよい。いくつかの事例では、医薬製剤は、２、又は３、又は４個のカプセル剤又は錠剤で投与される。
【０２１６】
[00231]  医薬品の固体剤形には、本明細書に記載される組成物と１以上の医薬的に許
容される添加剤（適合可能な担体、結合剤、充填剤、懸濁剤、香味剤、甘味剤、崩壊作用剤、分散剤、界面活性剤、滑沢剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、湿潤剤（moistening agent）、可塑剤、安定化剤、浸透エンハンサー、湿潤剤（wetting agent）、消泡剤、抗酸化剤、保存剤、又はこれらの１以上の組合せのような）を含めることができる。なお他の側面では、「Remington’s Pharmaceutical Sciences（レミントン製剤科学）」第20版（2000）に記載されるような、標準のコーティング手順を使用する。
【０２１７】
[00232]  固体剤形における使用に適した担体には、限定されないが、アカシア、ゼラ
チン、コロイド状２酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、カゼイン酸ナトリウム、大豆レシチン、塩化ナトリウム、リン酸３カルシウム、リン酸２カリウム、ステアロイルラクチル酸ナトリウム、カラゲナン、モノグリセリド、ジグリセリド、プレゼラチン化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、ショ糖、微結晶性セルロース、乳糖、マンニトール、等を含めることができる。
【０２１８】
[00233]  固体剤形における使用に適した充填剤には、限定されないが、乳糖、炭酸カ
ルシウム、リン酸カルシウム、２塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デキストレート、デキストラン、デンプン類、プレゼラチン化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート（ＨＰＭＣＡＳ）、ショ糖、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコール、等を含めることができる。
【０２１９】
[00234]  結合剤は、固体経口剤形製剤に凝集性を付与するので、粉末充填カプセル製
剤に対しては、軟又は硬シェルカプセル剤の中に充填され得るプラグ形成に役立ち、そして錠剤製剤に対しては、錠剤が圧縮後にもインタクトな状態であることを確実にして、圧縮又は充填工程に先立つ混和均質性を保証するのに役立つ。本明細書に記載される固体剤形における結合剤としての使用に適した材料には、限定されないが、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース（例、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例、ヒプロメロース  ＵＳＰ  Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ−６０３、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート（Ａｑｏａｔｅ  ＨＳ−ＬＦ及びＨＳ）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（例、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標））、エチルセルロース（例、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、及び微結晶性セルロース（例、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標））、微結晶性デキストロース、アミロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、多糖酸、ベントナイト、ゼラチン、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体、クロスポビドン、ポビドン、デンプン、プレゼラチン化デンプン、トラガカント、デキストリン、ショ糖（例、Ｄｉｐａｃ（登録商標））、ブドウ糖、デキストロース、糖蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール（例、Ｘｙｌｉｔａｂ（登録商標））、乳糖のような糖、アカシア、トラガカント、ガッティ（ghatti）ゴムのような天然又は合成ゴム、イサポール殻（isapol husks）の粘液、デンプン、ポリビニルピロリドン（例、Ｐｏｖｉｄｏｎｅ（登録商標）ＣＬ、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）ＣＬ、Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）ＸＬ−１０、及びＰｏｖｉｄｏｎｅ（登録商標）Ｋ−１２）、カラマツ・アラボガラクタン（larch arabogalactan）、Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標）、ポリエチレングリコール、ワックス、アルギン酸ナトリウム、等が含まれる。
【０２２０】
[00235]  固体剤形における使用に適した滑沢剤又は流動促進剤には、限定されないが
、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、トウモロコシデンプン、ステアリルフマル
酸ナトリウム、アルカリ金属及びアルカリ土類金属（アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛のような）の塩、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール又はメトキシポリエチレングリコール（ＣａｒｂｏｗａｘＴＭ、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ６０００のような）、プロピレングリコール、オレイン酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリル、安息香酸グリセリル、ラウリル硫酸マグネシウム又はナトリウム、等を含めることができる。
【０２２１】
[00236]  固体剤形における使用に適した希釈剤には、限定されないが、糖類（乳糖、
ショ糖、及びデキストロースが含まれる）、多糖類（デキストレート及びマルトデキストリンが含まれる）、ポリオール類（マンニトール、キシリトール、及びソルビトールが含まれる）、シクロデキストリン類、等を含めることができる。
【０２２２】
[00237]  固体剤形における使用に適した湿潤剤には、例えば、オレイン酸、モノステ
アリン酸グリセリル、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、４級アンモニウム化合物（例、Ｐｏｌｙｑｕａｔ  １０（登録商標））、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムドクサート、トリアセチン、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、等を含めることができる。
【０２２３】
[00238]  固体剤形における使用に適した界面活性剤には、例えば、ラウリル硫酸ナト
リウム、ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポロキサマー、胆汁酸塩、モノステアリン酸グリセリル、酸化エチレンと酸化プロピレンの共重合体（例、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（BASF））、等を含めることができる。
【０２２４】
[00239]  固体剤形における使用に適した懸濁剤には、限定されないが、ポリビニルピ
ロリドン（例、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、又はポリビニルピロリドンＫ３０）、ポリエチレングリコール（例えば、ポリエチレングリコールは、約３００〜約６０００、又は約３３５０〜約４０００、又は約７０００〜約５４００の分子量を有し得る）、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ポリソルベート−８０、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゴム（例えば、トラガカントゴムとアカシアゴム、グアーゴムのような）、キサンタン（キサンタンガムが含まれる）、糖類、セルロース系薬剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースのような）、ポリソルベート−８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドン、等を含めることができる。
【０２２５】
[00240]  固体剤形における使用に適した抗酸化剤には、例えば、ブチル化ヒドロキシ
トルエン（ＢＨＴ）、アスコルビン酸ナトリウム、及びトコフェロールが含まれる。
[00241]  経口投与用の液体製剤の剤形は、限定されないが、医薬的に許容される水性
の経口分散液剤、乳液剤、溶液剤、エリキシル剤、ゲル剤、及びシロップ剤が含まれる群より選択される水性懸濁液剤であり得る。例えば、Singh et al.,「Encyclopedia of Pharmaceutical Technology（製剤技術百科）」、第2版、754-757 頁（2002）を参照のこと。加えて、液体剤形には、（ａ）崩壊作用剤；（ｂ）分散剤；（ｃ）湿潤剤；（ｄ）少なくとも１つの保存剤、（ｅ）粘度増強剤、（ｆ）少なくとも１つの甘味剤、及び（ｇ）少なくとも１つの香味剤のような添加剤が含まれ得る。いくつかの態様では、水性分散液剤には、結晶性の阻害剤をさらに含めることができる。
【０２２６】
[00242]  本明細書に記載される水性の懸濁液剤及び分散液剤は、米国薬局方（USP Pharmacists’Pharmacopeia（2005年版、第905章）に規定されるように、少なくとも４時間は、均質状態に留まることが可能である。この均質性は、組成物全体の均質性を判定することに関して一致した標本抽出法によって判定されるべきである。１つの態様では、１分未満続く物理的撹拌によって、水性懸濁液剤を均質な懸濁液剤に再懸濁させることができる。別の側面では、４５秒未満続く物理的撹拌によって、水性懸濁液剤を均質な懸濁液剤に再懸濁させることができる。なお別の側面では、３０秒未満続く物理的撹拌によって、水性懸濁液剤を均質な懸濁液に再懸濁させることができる。なお別の態様では、均質な水性分散液剤を維持するのに撹拌を必要としない。
【０２２７】
[00243]  別の側面では、剤形には、マイクロカプセル化製剤が含まれ得る。いくつか
の態様では、マイクロカプセル化材料に、１以上の他の適合可能な材料が存在する。例示の材料には、限定されないが、ｐＨ調整剤、浸食促進剤、消泡剤、抗酸化剤、香味剤、並びに、結合剤、懸濁剤、崩壊作用剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、及び希釈剤のような担体材料が含まれる。
【０２２８】
[00244]  本明細書に記載される化合物が含まれる製剤の放出を遅らせるのに有用な例
示のマイクロカプセル化材料には、限定されないが、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標）又はＮｉｓｓｏ  ＨＰＣのようなヒドロキシプロピルセルロースエーテル（ＨＰＣ）、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースエーテル（Ｌ−ＨＰＣ）、Ｓｅｐｐｉｆｉｌｍ−ＬＣ、Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ（登録商標）、Ｍｅｔｏｌｏｓｅ  ＳＲ、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）−Ｅ、Ｏｐａｄｒｙ  ＹＳ、ＰｒｉｍａＦｌｏ、Ｂｅｎｅｃｅｌ  ＭＰ８２４、及びＢｅｎｅｃｅｌ  ＭＰ８４３のようなヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテル（ＨＰＭＣ）、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）−Ａのようなメチルセルロースポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレートのＡｑｏａｔ（ＨＦ−ＬＳ、ＨＦ−ＬＧ、ＨＦ−ＭＳ）及びＭｅｔｏｌｏｓｅ（登録商標）、Ｅ４６１、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標）、Ａｑｕａｌｏｎ（登録商標）−ＥＣ、Ｓｕｒｅｌｅａｓｅ（登録商標）のようなエチルセルロース（ＥＣ）とその混合物、Ｏｐａｄｒｙ  ＡＭＢのようなポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、Ｎａｔｒｏｓｏｌ（登録商標）のようなヒドロキシエチルセルロース、Ａｑｕａｌｏｎ（登録商標）−ＣＭＣのようなカルボキシメチルセルロースとカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の塩、Ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＩＲ（登録商標）のようなポリビニルアルコール及びポリエチレングリコールの共重合体、モノグリセリド（Ｍｙｖｅｒｏｌ）、トリグリセリド（ＫＬＸ）、ポリエチレングリコール、改良食用デンプン、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＥＰＯ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０Ｄ−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＦＳ  ３０Ｄ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＲＤ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｅ１００、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ１２．５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ３０Ｄ、及びＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）ＮＥ４０Ｄのような、アクリル酸ポリマーとセルロースエーテルとアクリル酸ポリマーの混合物、セルロースアセテートフタレート、ＨＰＭＣとステアリン酸の混合物のようなセピフィルム（sepifilm）、シクロデキストリン、及びこれらの材料の混合物が含まれる。
【０２２９】
[00245]  可塑剤には、ポリエチレングリコール類（例、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００
、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ１４５０、ＰＥＧ３３５０、及びＰＥＧ８００）、ステアリン酸、プロピレングリコール、オレイン酸、及びトリアセチンが含まれ得て、マイクロカプセル化材料に取り込まれる。他の態様では、医薬組成物の放出を遅らせるのに有用なマイクロカプセル化材料は、ＵＳＰ又は国民医薬品集（National Formulary（NF））に由来する。なお他の態様では、マイクロカプセル化材料は、Ｋｌｕｃｅｌである。さらに他の態様では、マイクロカプセル化材料は、メトセル（methocel）である。
【０２３０】
[00246]  マイクロカプセル化組成物は、当業者に知られた方法によって製剤化し得る
。そのような既知の方法には、例えば、スプレー乾燥法、スピニングディスク溶媒法、ホットメルト（hot melt）法、スプレー冷却法、流動床、静電蒸着、遠心押出、回転懸濁分離、液体−気体又は固体−気体界面での重合化、加圧押出、又は噴霧溶媒抽出浴が含まれる。これらに加えて、いくつかの化学技術、例えば、複合コアセルベーション、溶媒蒸発、ポリマー−ポリマー非混和性、液体媒体中での界面重合化、in situ 重合化、液体中乾燥、及び液体媒体中での脱溶媒和も使用し得る。さらに、ローラー圧縮、押出／球状化、コアセルベーション、又はナノ粒子コーティングといった他の方法も使用してよい。
【０２３１】
[00247]  鼻腔内製剤
[00248]  当該技術分野では、鼻腔内製剤が知られていて、例えば、米国特許第４，４
７６，１１６号及び６，３９１，４５２号に記載されている。上記の記載や当該技術分野でよく知られた他の技術に従って調製される、本明細書に記載される組成物が含まれる製剤は、ベンジルアルコール又は他の好適な保存剤、フルオロカーボン、及び／又は当該技術分野で知られた他の可溶化剤又は分散剤を利用して、生理食塩水中の溶液剤として調製される。例えば、Ansel, H. C. et al.「Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems（医薬剤形と薬物送達システム）」第6版（1995）を参照のこと。好ましくは、これらの組成物及び製剤は、好適な無害の医薬的に許容される成分とともに調製される。鼻内剤形の調製技術分野の当業者には、これらの成分が知られていて、そのいくつかは、この分野の標準参考書である、「Remington: The Science and Practice of Pharmacy（レミントン：調剤の科学と実践）」第21版（2005）に見出すことができる。好適な担体の選択は、所望される鼻内剤形（例えば、溶液剤、懸濁液剤、軟膏剤、又はゲル剤）の正確な本質にきわめて依存する。一般に、鼻内剤形は、有効成分に加えて、多量の水を含有する。ｐＨ調整剤、乳化剤又は分散剤、保存剤、界面活性剤、ゲル化剤、又は緩衝化剤や他の安定化剤及び可溶化剤といった、微量の他の成分も存在してよい。鼻内剤形は、鼻内分泌液と等張であるべきである。
【０２３２】
[00249]  本明細書に記載される吸入による投与は、エアゾール剤、ミスト剤、又は散
剤としての形態であり得る。本明細書に記載される医薬組成物は、好便にも、好適な推進剤（例、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、２酸化炭素、又は他の好適なガス）の使用を伴った、加圧パック又はネブライザーからのエアゾールスプレー表出の形態で送達される。加圧式エアゾール剤の場合、投与量単位は、目盛量を送達するための栓を提供することによって決定され得る。例示としてのみ挙げると、吸入器又は注入器における使用のためのゼラチンのようなカプセル剤及びカートリッジ剤は、本明細書に記載される化合物と乳糖又はデンプンのような好適な粉末基剤の粉末ミックスを含有して、製剤化し得る。
【０２３３】
[00250]  治療レジメン
[00251]  本組成物は、治療適用のために、又は維持療法（例えば、寛解期の患者用）
として投与され得る。本組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、又はそれ以上投与され得る。本組成物は、１日、毎日、１日おき、週５日、週１回、隔週、月２週、月３週、月１回、月２回、月３回、又はそれ以上投与され得る。該組成物は、少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２年、３年、又はそれ以上の間投与され得る。
【０２３４】
[00252]  患者の状況が実際に改善した場合、医師の判断に基づいて、本化合物の投与
を連続的に施してよく；あるいは、投与されている薬物の用量を一時的に減らしても、一定時間の間、一時的に中断してもよい（即ち、「休薬」）。休薬の長さは、例としてのみ挙げると、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、又は３６５日を含めて、２日と１年の間で変動する可能性がある。休薬期間の用量減少は、例としてのみ挙げると、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％を含めて、１０％〜１００％であり得る。
【０２３５】
[00253]  患者の状態の改善が起きた時点で、必要により、維持用量を投与する。引き
続き、投与量又は投与頻度、又はその両方を、その症状に鑑みて、改善された疾患、障害、又は病態が保持されるレベルまで減少させることができる。しかしながら、患者は、症状のいかなる再発時にも、長期ベースで間欠的な治療を必要とすることが可能である。
【０２３６】
[00254]  そのような量に対応する、所与の薬剤の量は、特別な化合物、疾患の重症度
、治療の必要な対象又は宿主の特性（例、体重）といった因子に依存して変動するものであるが、それでも、該症例をめぐる特別な状況（例えば、投与されている特定の薬剤、投与の経路、及び治療されている対象又は宿主が含まれる）に従って、当該技術分野で知られたやり方で決定することができる。所望される用量は、好便にも、単用量で提示しても、分割量として、同時（又は短い時間にわたって）、又は適正な間隔で（例えば、１日２回、３回、４回以上のサブ用量として）投与してもよい。
【０２３７】
[00255]  本明細書に記載される医薬組成物は、正確な投与量の単回投与に適した単位
剤形中にあり得る。単位剤形において、本製剤は、１以上の化合物の適正量を含有する単位用量に分割される。この単位投与量は、製剤の離散量を含有するパッケージの形態であり得る。非限定的な例は、包装された錠剤又はカプセル剤と、バイアル又はアンプル中の散剤である。水性懸濁組成物は、単用量の再閉鎖不能な容器に包装され得る。あるいは、多用量の再閉鎖可能な容器を使用し得て、この場合は、組成物中に保存剤を含めることが典型的である。例としてのみ挙げると、非経口注射用の製剤は、単位剤形（限定されないが、アンプル剤が含まれる）において提示しても、又は保存剤が添加された多用量容器において提示してもよい。
【０２３８】
[00256]  個々の治療レジメンに関する変数の数が大きくて、上記推奨値からのかなり
の逸脱（excursions）は珍しくないので、上述の範囲は、示唆的なものにすぎない。このような投与量は、限定されないが、使用する化合物の活性、治療される疾患又は病態、投与の形式、個々の対象の要件、治療されている疾患又は病態の重症度、及び医療実施者の判断といったいくつかの変数に依拠して変更してよい。
【０２３９】
[00257]  このような治療レジメンの毒性と治療効果は、限定されないが、ＬＤ５０（
集団の５０％に対して致死的な用量）とＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）の決定が含まれる、細胞培養又は実験動物での標準的な創薬手技によって決定することができる。毒性効果と治療効果の間の用量比が治療係数であって、それは、ＬＤ５０とＥＤ５０の間の比として表現することができる。高い治療係数を明示する化合物が好ましい。細胞培養アッセイと動物試験より得られるデータは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲を明確にするのに使用することができる。このような化合物の投与量は、好ましくは、毒性が最も低いＥＤ５０が含まれる、循環濃度の範囲内に存する。この投与量は、利用される剤形と活用される投与経路に依拠して、この範囲内で変動してよい。
【０２４０】
[00258]  本発明の別の側面によれば、治療対象を選択する方法が提供され、該方法は
、遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因する不完全なタンパク質発現によって誘発される疾患を該対象が有するかどうかを決定すること（ここで陽性確定時に、対象は、治療のために選択される）；及び場合により対象を治療すること、を含む。
【０２４１】
[00259]  該治療は、遺伝子転写産物中のイントロン保持の是正を含み得る。該治療は
、遺伝子転写産物からのイントロン除去を誘導するために、本発明によるポリ核酸ポリマーを遺伝子転写産物にハイブリダイズさせることを含み得る。
【０２４２】
[00260]  本発明の別の側面によれば、癌細胞におけるイントロンの保持の是正によっ
て遺伝子発現を正常化するためのアンチセンスポリ核酸ポリマーの使用が提供される。
[00261]  本発明の別の側面によれば、本発明によるポリ核酸ポリマー、本発明による
組成物、本発明によるベクター、又は本発明による送達担体が疾患の治療又は予防における使用に提供される。
【０２４３】
[00262]  本発明の別の側面によれば、本発明によるポリ核酸ポリマー、本発明による
組成物、本発明によるベクター、又は本発明による送達担体が疾患の治療又は予防用医薬品の製造における使用に提供される。
【０２４４】
[00263]  該疾患は、糖尿病又は癌であり得る。
[00264]  ポリ核酸ポリマー配列への言及がなされる場合、当業者は、標的配列にハイ
ブリダイズする能力が維持される場合、あるいは（その置換が標的配列中である場合は）標的配列として認識される能力が維持される場合、その配列において、１以上の置換が許容され得て、２つの置換が許容されてもよいと理解されよう。配列同一性への参照は、標準／デフォルト変数を使用する、ＢＬＡＳＴ配列アライメント（www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/）によって判定され得る。例えば、配列は、９９％の同一性を有して、それでも本発明に従って機能する場合がある。他の態様では、配列は、９８％の同一性を有して、それでも本発明に従って機能する場合がある。別の態様では、配列は、９５％の同一性を有して、それでも本発明に従って機能する場合がある。
【０２４５】
[00265]  イントロン保持を減少させること又は是正することに言及される場合、その
減少は、完全（例えば、１００％）であっても、一部であってもよい。この減少は、臨床的に有意義であり得る。この減少／是正は、治療無しの対象におけイントロン保持のレベルに対するものであっても、同様の対象の集団におけるでイントロン保持の量に対するものであってもよい。この減少／是正は、平均的な対象、又は治療前の対象に対して少なくとも１０％減のイントロン保持であり得る。この減少は、平均的な対象、又は治療前の対象に対して少なくとも２０％減のイントロン保持であり得る。この減少は、平均的な対象、又は治療前の対象に対して少なくとも４０％減のイントロン保持であり得る。この減少は、平均的な対象、又は治療前の対象に対して少なくとも５０％減のイントロン保持であり得る。この減少は、平均的な対象、又は治療前の対象に対して少なくとも６０％減のイントロン保持であり得る。この減少は、平均的な対象、又は治療前の対象に対して少なくとも８０％減のイントロン保持であり得る。この減少は、平均的な対象、又は治療前の対象に対して少なくとも９０％減のイントロン保持であり得る。
【０２４６】
[00266]  キット／製品
[00267]  本発明では、本明細書に記載される１以上の方法での使用のためにキットと
製品を提供する。該キットは、配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３
２、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、又は配列番号４４として同定されるポリ核酸ポリマーのような、本明細書に記載されるポリ核酸ポリマーの１以上を含有する。該キットはまた、例えば、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４５、配列番号４６、又は配列番号４７〜配列番号４３４のような、本明細書に記載されるポリ核酸ポリマーに対してアンチセンスであるポリ核酸ポリマーの１以上を含有し得る。該キットは、該ポリ核酸ポリマーの作製及び送達に必要な試薬及び緩衝液をさらに含有し得る。
【０２４７】
[00268]  該キットには、バイアル、チューブ、等のような１以上の容器を受容するよ
うに仕切られた、担体、パッケージ、又は容器も含めることができて、その容器（複数）のそれぞれは、本明細書に記載される方法において使用される、ポリ核酸ポリマーと試薬といった、別々の要素の１つを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管が含まれる。容器は、ガラス又はプラスチックのような多様な材料から生成され得る。
【０２４８】
[00269]  本発明で提供される製品は、包装材料を含有する。医薬包装材料の例には、
限定されないが、ボトル、チューブ、バッグ、容器、ボトル、及び選択される製剤と企図される投与及び治療の形式に適したあらゆる包装材料が含まれる。
【０２４９】
[00270]  キットには、典型的には、内容物を収載するラベル、及び／又は使用説明書
、並びに使用説明書付きの添付文書が含まれる。典型的には、説明書のセットも含まれるものである。
【０２５０】
[00271]  当業者は、本発明の１つの態様又は側面の任意選択の特徴が、本発明の他の
態様又は側面に対して、適宜適用可能であり得ることを理解されよう。
[00272]  本発明の態様について、付帯の図面を参照にして、例としてのみ挙げて、以
下により詳しく記載する。
【実施例】
【０２５１】
[00273]  これらの実施例は、例示の目的のためにのみ提供するのであって、本明細書
で提供される特許請求の範囲を制限しない。
[00274]  実施例１
[00275]  ほとんどの真核遺伝子は、タンパク質をコードすることが可能な機能性ｍＲ
ＮＡを創出するために１次転写産物より正確に除去されなければならない、介在配列又はイントロンを含有する（１）。このプロセスは、プレｍＲＮＡにおいて、５種の核内低分子ＲＮＡと保存されているが縮重した配列がある多数のタンパク質の相互依存的な相互作用を利用するきわめて動的なやり方で、ｍＲＮＡの組成を変化させる（２）。一般に、イントロン・スプライシングは、種を越えて、ｍＲＮＡ蓄積とタンパク質発現を促進する（３〜５）。このプロセスは、イントロンの突然変異又は変異体によって改変される可能性があって、これがまた、転写、ｍＲＮＡ輸送、及び翻訳が含まれる、共役した遺伝子発現経路を損なう場合がある。その最良の例示となるのは、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）中のイントロンであって、ここでは、イントロン保持を変化させる自然変異体又は突然変異が上流オープン・リーディング・フレーム（ｕＯＲＦ）又は他の調節モチーフの付いた転写産物の相対豊富度を変化させて、翻訳に劇的に影響を及ぼす（６，７）。しかしながら、このような状況において遺伝子発現を正常化するための成功裡の配列特異的な戦略は、開発されていない。
【０２５２】
[00276]  スプライススイッチングオリゴヌクレオチド（ＳＳＯ）は、スプライス部位
認識配列又は調節配列に結合して、その標的についてシス及びトランス作用因子と競合することによってイントロン・スプライシングを調節するアンチセンス試薬である（８）。それらは、異常なスプライシングを修復し、既存のｍＲＮＡの相対的な発現を変化させるか又は通常は発現されない新規のスプライス変異体を産生することが示されてきた（８）。２’−Ｏ−メチル及び２’−Ｏ−メトキシエチルリボースのようないくつかのＳＳＯ修飾による、標的指向されるＳＳＯ−ＲＮＡ２重鎖の安定性の改善は、筋ジストロフィーにおけるＤＭＤ（９、１０）、脊髄性筋萎縮症におけるＳＭＮ２（１１）、毛細血管拡張性運動失調症におけるＡＴＭ（１２）、及びＸ連鎖無γグロブリン血症におけるＢＴＫ（１３）が含まれる、ますます増加するヒト疾患遺伝子へのその治療ポテンシャルを探究する研究を促進した。このようなアプローチは、限定数の疾患に対しては、その臨床ポテンシャルを達成する見込みがある（８）ものの、突然変異誘発性の異常なスプライシングより生じる３００を超えるメンデル遺伝病（１４）と増加する複合形質も、遺伝子発現のＳＳＯ媒介性の是正の適応になるかもしれない。
【０２５３】
[00277]  １型糖尿病の病因には、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）といくつかの変化する非
ＨＬＡ遺伝子座によって付与される強い遺伝成分がある（１５）。最強の変更遺伝子（modifier）は、第１１染色体上のプロインスリン遺伝子（ＩＮＳ）領域に同定された（ＩＤＤＭ２と呼ばれる）（１５）。この領域のさらなるマッピングによって、ＩＮＳが最も有望なＩＤＤＭ２標的であることが示唆され（１６）、この自己抗原の病態形成における必須の役割と一致した（１７）。この疾患に対するＩＤＤＭ２での遺伝的リスクは、この遺伝子の上流にあるミニサテライトＤＮＡが潜在的に関与する、素因性及び防護性のＩＮＳハプロタイプ由来の差示的な定常状態ＲＮＡレベルに起因するとされてきた（１８，１９）。しかしながら、天然に存在するＩＮＳ多型の体系的な検証は、ＩＶＳ１＋５ｉｎｓ４（ｒｓ３８４２７４０又はＩＮＳ−６９としても知られる）とＩＶＳ１−６Ａ／Ｔ（ｒｓ６８９、ＩＮＳ−２７、又はＨｐｈＩ±）（１６，２０）と呼ばれる、イントロン１における２種の変異体（７）より生じる、ミニサテライト配列を欠くレポーター構築体において、ハプロタイプ特異的なプロインスリン発現レベルを明らかにした。前者の変異体は、イントロン１のクリプティック５’スプライス部位を活性化し、一方、３’スプライス部位（３’ｓｓ）の上流に６つのヌクレオチドを収容する後者の変異体では、アデニン（Ａ）がイントロン保持を促進し、５’ＵＴＲが伸長した転写産物の相対豊富度を増大させる（２１）。チミン（Ｔ）と比べると、ＩＶＳ１−６Ａ／ＴでのＡアレルは、試験管内で（in vitro）ピリミジン結合性タンパク質への親和性を減少させて、Ｕ２核内低分子リボ核タンパク質の補助因子（Ｕ２ＡＦ）（７）である、Ｕ２結合、スプライソソーム組立て、及び３’ｓｓ選択に必要とされるヘテロ２量体に対して３’ｓｓをより依存的にする（２２）。インスリン産生組織より調製したＩＶＳ１−６Ａ由来のｃＤＮＡライブラリーでは、イントロン１含有転写産物が過剰発現され（２１）、核から輸送されて（２３）、（高等霊長類においてイントロン１の３’ｓｓの弛緩とともに共進化した）ヒト亜科特異的な短いｕＯＲＦを含有する（７）。このＡアレルによって付与されるより低次のプロインスリン発現は、胎児胸腺におけるプロインスリンペプチドの最適以下の提示と自己反応性Ｔ細胞の不十分な負の選択をもたらし、ついには膵臓中のインスリン産生β細胞の自己免疫破壊につながる場合がある（７）。しかしながら、ＩＶＳ１−６Ａ含有プレｍＲＮＡからのＩＮＳイントロン１除去の低効率を是正して、イントロン保持を疾患防護性Ｔアレルで観測されるレベルまで減少させるための試みは、なされてこなかった。
【０２５４】
[00278]  本研究は、ＩＮＳイントロン１スプライシングの効率を高めて、プレｍＲＮ
Ａ中のスプライシングサイレンサーを抑制するか又はスプライス部位を誘導して、プロインスリン発現を亢進させるＳＳＯを探索することから始まった。イントロン１を保持している転写産物の相対豊富度を減少させるＳＳＯを同定し、１塩基解像法で最適化されたアンチセンス標的の描図を示して、そのアンチセンス標的配列に隣接した平行Ｇ４重鎖の形成とこの領域に結合するタンパク質の同定についての証拠を示す。
【０２５５】
材料と方法
アンチセンスオリゴヌクレオチド
[00279]  ＳＳＯは、MWG Biotech（ドイツ）より購入した。すべてのＳＳＯとスクランブル対照は、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドが２位のリボース位にある全長ホスホロチオエート骨格を有した。ＩＮＳ  ＳＳＯとそのスクランブルバージョンとは別に、我々は、記載（１３）のように、追加の対照としての他のヒト遺伝子に標的指向するＳＳＯを利用した．それぞれのＳＳＯの位置を図１Ａに示して、それらの配列を表２に示す。
【０２５６】
スプライシングレポーター構築体
[00280]  ＩＣと呼称される、１型糖尿病関連ハプロタイプを担う野生型スプライシン
グレポーターについては先に報告された（７，２１）。各構築体は、すべてのＩＮＳエクソンと完全なイントロンを含有するが、最終エクソンの長さが異なる。このＩＣレポーターを、プライマーのＤ−Ｃ、Ｄ−Ｆ、及びＤ−Ｂを使用してクローン化すると；ＩＣ  Ｄ−Ｂは、イントロン２のクリプティック３’ｓｓを欠失する。この部位にスプライスされるアイソフォームの相対豊富度は、ＩＣ  Ｄ−ＣよりＩＣ  Ｄ−Ｆでより低い（７，２１）。イントロン１のクリプティック５’スプライス部位に標的指向するＳＳＯに付いて検討するために、ＩＣ構築体をｒｓ３８４２７４０での４ｎｔ（ヌクレオチド）挿入によって修飾して、ＩＣＩＶＳ１＋５ｉｎｓ４と呼ぶレポーターを創出した。ＴＳＣ２構築体とＦ９構築体については、先に報告されている（２４）。大腸菌株ＤＨ５αにおいてプラスミドを繁殖させて、Wizard Plus SV Miniprep キット（プロメガ、アメリカ）を使用して、プラスミドＤＮＡを抽出した。その挿入物について完全に配列決定して、１４種の遺伝子内自然変異体のそれぞれの実体（identity）を確認して、望まれない突然変異を排除した。
【０２５７】
細胞培養とトランスフェクション
[00281]  ダルベッコ改良イーグル培地、１０％胎仔ウシ血清、及びペニシリン／スト
レプトマイシン（Life technologies，アメリカ）において、ヒト胚性腎２９３（ＨＥＫ
２９３）細胞、ヒト肝細胞の肝癌（ＨｅｐＧ２）細胞、及びアフリカミドリザルのＣＯＳ７細胞を培養した。製造業者の推奨法に従ってｊｅｔＰＲＩＭＥ（Polyplus，アメリカ）を使用して、一過性トランスフェクションを記載（１３）のように行った。イントロン１のクリプティック３’ｓｓを誘導するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によるＵ２ＡＦ３５の下方調節を既報のように（７、２５）低分子干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）Ｕ２ＡＦ３５ａｂの２回ヒットで実施し；ＤＨＸ３６に標的指向するｓｉＲＮＡ２重鎖は、記載の通りであった（２６）。第２のヒットは、ＳＳＯ及び／又はレポーターの添加２４時間前に適用した。レポーター構築体の添加後２４時間で細胞培養物を採取した。
【０２５８】
スプライス産物の分析
[00282]  ＴＲＩ試薬で全ＲＮＡを抽出して、ＤＮアーゼ（Life technologies，アメリカ）で処理した。オリゴ（ｄＴ）１５プライマーとモロニーマウスウイルス逆転写酵素（プロメガ、ＵＳＡ）を使用して、第１鎖ｃＤＮＡを逆転写した。既報のように（７）、ベクター特異的なプライマーのＰＬ３と３’ＵＴＲに標的指向するプライマーＥの組合せでポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行った。記載のように（２７）、ＰＣＲ産物をポリアクリルアミドゲル上で分離させて、それらのシグナル強度を測定した。サンガー（Sanger）ヌクレオチド配列決定法によって、それぞれのｍＲＮＡアイソフォームの実体を確認した。
【０２５９】
円偏光２色性と核磁気共鳴分光法
[00283]  Thermo Scientific より、円偏光２色性（ＣＤ）と核磁気共鳴（ＮＭＲ）用
のオリゴリボヌクレオチドを購入し、製造業者の説明書に従って脱保護化し、−２０℃で
凍結乾燥させて保存した。この脱塩、凍結乾燥させた試料より、ｍｉｌｌｉＱ 水又はＫ
Ｃｌ緩衝液（１００ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  Ｋ２ＨＰＯ４／ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．０、ｍｉｌｌｉＱ水）に再懸濁させることによって、ストック溶液を２〜４μＭの最終濃度で調製した。ＬＴＤ６Ｇ循環水浴（Grant Instruments，イギリス）と熱電温度コントロ
ーラー（Melcor，アメリカ）が付いたＰｉＳｔａｒ−１８０分光光度計（Applied Photophysics 社、サリー州、イギリス）を使用して、ＣＤスペクトルを獲得した。試料をセル中で９５℃まで全１５分間加熱してから、少なくとも４時間、室温までそのまま冷やすことによって、試料をアニールさせた。１ｃｍ路長の無歪石英セルを使用して、２１５〜３４０ｎｍの波長範囲にわたって、そして指定の温度で、ＣＤスペクトルを記録した。データ点は、１ｎｍ間隔で記録した。３ｎｍの帯域幅を使用して、アダプティブサンプリングが可能である各点で５０００カウントを獲得した。各トレースを３回のスキャンの平均（±ＳＤ）として示す。フォールディングされた４重鎖分子種の最大バンドに対応する２６５ｎｍでＣＤ温度ランプ（ramp）を獲得した。５℃〜９９℃の範囲を使用し、０．５℃の増分間に１２０〜１８０秒の時間ステップがある０．５℃間隔で、データ点を獲得した。１０，０００カウントでデータ点を獲得して、アダプティブサンプリングを可能にした。加熱試験と冷却試験を比較して、ヒステリシスと全体の可逆性を確認した。３重共鳴クライオプローブ（cryoprobe）付きの Bruker Avance III 分光計を使用して、８００ＭＨｚでＮＭＲスペクトル（１Ｈ）を採取した。標準的な Bruker 獲得変数を使用した。Ｔｏｐｓｐｉｎ（ｖ．３．０）を使用してデータを採取して、ＣＣＰＮ  Ａｎａｌｙｉｓｉｓ（ｖ．２．１）において処理した。
【０２６０】
プルダウン・アッセイとウエスタン・ブロッティング
[00284]  ＭＥＧＡｓｈｏｒｔｓｃｒｉｐｔＴＭ  Ｔ７（Life  technologies，アメリ
カ）を使用して試験管内（in vitro）転写を行って、Ｔ７タグ付きＰＣＲ産物を、プライマーの５’−ＡＴＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＴＣＡＧＧＧＴＴＣＣＡＧＧ及び５’−ＴＧＣＡＧＣＡＧＧＧＡＧＧＡＣＧと、鋳型としての指定プラスミドのＤＮＡで増幅した。指定の合成ＲＮＡを Eurofins UK より購入した。各ＲＮＡの５００ピ
コモルを５ｍＭ  ｍ−過ヨウ素酸ナトリウムで処理して、アジピン酸デヒドラジドアガロースビーズ（シグマ、アメリカ）に結合させた。ＲＮＡが結合したビーズを２ｍｌの２Ｍ  ＮａＣｌ中で３回、そして緩衝液Ｄ（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７、６．５％（ｖ／ｖ）グリセロール、１００ｍＭ  ＫＣｌ、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５ｍＭジチオスレイトール）中で３回洗浄し、ＨｅＬａ核内抽出物と０．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度でのヘパリン入り緩衝液Ｄとともにインキュベートした。非結合のタンパク質を緩衝液Ｄで５回洗浄した。結合したタンパク質を１０％ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離させ、クマシーブルーによって染色した、及び／又はニトロセルロース膜にブロットした。
【０２６１】
[00285]  記載（７）のようにウエスタン・ブロッティングを行った。シグマ（ｈｎＲ
ＮＰ  Ｅ１／Ｅ２，製品番号Ｒ４１５５、Ｕ２ＡＦ６５，製品番号Ｕ４７５８、及びＳＦＲＳ２，製品番号Ｓ２３２０）、Abcam（ＤＨＸ３６，製品番号ａｂ７０２６９）、及び
ミリポア（ＳＣ３５，クローン１ＳＣ−４Ｆ１１）より抗体を購入した。ｈｎＲＮＰ  ＦとｈｎＲＮＰ  Ｈに対する抗血清は、ダグラス・ブラック（Douglas Black）教授（UCLA
）の提供による。
【０２６２】
質量分析法の分析
[00286]  トリプシン消化に続いて、試料を凍結乾燥させて、質量分析法（ＭＳ）のた
めに２５μｌの５％  ＡＣＮ／０．１％ギ酸で再懸濁させた。Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＬＣシステムとＬＣＱ  Ｄｅｃａ  ＸＰ  Ｐｌｕｓ（ThermoScientific）を使用するＬＣ／ＭＳ／ＭＳによってペプチドを分析した。この生データファイルは、Mascot 検索アルゴリズ
ム（Matrix Science）への入力のために、Matrix File Conversion Tool（バージョン２
．０；http://www.massmatrix.net）を使用して、マスコット（mascot）一般ファイルに
変換した。
【０２６３】
酵素構造プロービング
[00287]  制限Ｖ１  ＲＮアーゼ（Ambion）、Ｔ１  ＲＮアーゼ（Ambion）、及びＳ１
ヌクレアーゼ（Fermentas）消化の使用でのＲＮＡ２次構造決定法については、他所で詳
しく記載されている（２８）。簡潔に言えば、挿入（ｉｎｓ）プレｍＲＮＡと欠失（ｄｅｌ）プレｍＲＮＡ由来のＲＮＡの１μｇアリコートを１００μｌ中０．００２ＵのＲＮアーゼＶ１、０．０５ＵのＲＮアーゼＴ１、及び１９ＵのＳ１ヌクレアーゼで、３０℃で１０分間消化した。対照（Ｃ）として酵素無しのアリコートを使用した。５’端が［３２Ｐ］−ＡＴＰで標識されたアンチセンスプライマーを使用する標準プロトコールに従って、切断されたＲＮＡを逆転写した。
【０２６４】
結果
５’ＵＴＲ中の弱いイントロンのプレｍＲＮＡスプライシングを促進するアンチセンスオリゴヌクレオチド
[00288]  ＩＮＳイントロン１の保持を減少させることが可能なＳＳＯを同定して、ス
プライシング媒介性の翻訳増強を高めるために、我々は、一連の２’−Ｏ−メチル修飾ホスホロチオエートＳＳＯを設計し、ハプロタイプＩＣを担うスプライシングレポーター構築体とともに各ＳＳＯをＨＥＫ２９３細胞において個別に同時発現させて、外因性ｍＲＮＡ産物の相対豊富度を検証した（図１Ａ及びＢ）。レポーター中のＩＣハプロタイプは、ミニサテライト配列を欠いて、ｒｓ６８９でのＡアレルを含めて、全部で１４の多型部位を含有した（７、２０）。このアレルは、イントロン１スプライシングを阻害して、より一般的なＴアレルと比べて、より低いプロインスリンレベルを産生する（２１）。上記配列についての以前の体系的な欠失分析（７）でエクソン包含又はイントロン保持の最も顕著な変化を示した領域において、イントロン１とエクソン２に標的指向するＳＳＯを選択した。イントロン２の真正の３’ｓｓと１２６ｎｔ下流の強競合性クリプティック３’ｓｓの間にエクソン３でのＳＳＯを定位して、それらの使用を変化させるプレｍＲＮＡモチーフを同定した（図１Ａ）。ＨＥＫ２９３細胞において検査した１５種のＩＮＳ  ＳＳＯの初回セットの中で、１１種のＳＳＯがｍＲＮＡアイソフォームの相対豊富度において再現可能な変化を示した（表２）。単一のオリゴリボヌクレオチド、ＳＳＯ２１によって、イントロン１保持が有意に減少した（Ｐ＜０．０１、マン・ホイットニー順位和検定；図２Ａ）。ＳＳＯ２１は、欠失時にイントロン保持の最大の減少をもたらすことがかつて見出された（７）モチーフ（ｄｅｌ５と呼ばれる）を網羅する、イントロン１の位置：５９〜７４に標的指向した。ＳＳＯ２１によって誘導されるイントロン保持レベルの減少は用量依存的であって（図２Ａ）、ＨｅｐＧ２細胞と Chlorocebus aethiops ＣＯＳ７細胞においても観測されて、補助スプライシング配列を利用するスプライソソーム成分の普遍的な発現と高度の進化保存性に一致した（１、２）。イントロン１保持を減少させることに加えて、ＳＳＯ２１は、イントロン２のクリプティック３’ｓｓを促進した（図２Ａ）。しかしながら、ここ効果は、他のＩＮＳ  ＳＳＯとスクランブル対照でも見られ（図３と表２）、非特異的な相互作用であると示唆された。イントロン１スプライシングのＳＳＯ２１誘導性の増強がイントロン２のクリプティック３’ｓｓによって促進されないことを確かめるために、我々は、この部位を欠落してエクソン３の最初の８９ヌクレオチドだけを保持する、より短いレポーターとこのＳＳＯを同時導入した。図２Ｂは、ＳＳＯ２１が、より長いエクソン３のあるレポーターと同じ程度までイントロン１スプライシングを促進することが可能であったことを示す。対照的に、このＳＳＯ２１誘導性のイントロン保持の減少は、ｄｅｌ５セグメントを欠いたレポーターでは観測されなかった。イントロン保持とは別に、イントロン１のクリプティック３’ｓｓの下流（ｃｒ３’ｓｓ＋８１；図１と図３Ｃ、表２）で結合するＳＳＯ８を含めて、５種のＳＳＯではエクソン２スキッピングの増加が観測された。このクリプティック３’ｓｓは、Ｕ２ＡＦの小サブユニット（Ｕ２ＡＦ３５）のＲＮＡｉ媒介性の枯渇によって誘導されて、Ｕ２ＡＦ３５を欠く細胞では、架橋型オリゴリ���ヌクレオチド（ＳＳＯ４）によって復帰せず；代わりに、エクソン２スキッピングが観測された（図３Ｃ）。Ｕ２ＡＦ３５の枯渇は、イントロン２のクリプティック３’ｓｓも抑制した。まとめると、数種の霊長動物細胞系においてＩＮＳイントロン１保持を減少させる、単一のＳＳＯが同定された。
【０２６５】
イントロン保持標的の１塩基レベルでの最適化
[00289]  興味深いことに、ｄｅｌ５セグメントに標的指向するように設計した他のＳ
ＳＯは、ＳＳＯ２０（図１Ａ及び図２Ａ）のわずかな効果を除くと、イントロン１保持を減少させなかった。ＳＳＯ２１の両側にあるヌクレオチドの重要性を検証して、最適な標的について１塩基解像法でマッピングするために、この領域において詳細なアンチセンスマイクロウォークを行った。ＳＳＯ２１の５’及び３’で１〜９個のヌクレオチドが結合した追加の１８種の１６マーとともにＩＮＳレポーターをＨＥＫ２９３細胞に個別に同時導入して、そのＲＮＡ産物を検証した。イントロン１保持は、ＳＳＯ２１によって最も抑制されて、それぞれの方向に１〜２ヌクレオチドだけシフトさせたＳＳＯによっても抑制された（図４）。最初のスクリーニングと一致して、４つのＣの上流ランにおいて１より多いシトシンに標的指向するＳＳＯ（Ｃ４，ＳＳＯ１とＳＳＯ２を参照のこと、図１Ａ）は、有効でなかった（ＳＳＯ２１−３ｒ乃至ＳＳＯ２１−１０ｒ、図４）。反対の方向において、イントロンスプライシングエンハンサー（２９〜３１）においてしばしば見出される連続したＧに標的指向するＳＳＯは、イントロン保持を増加させた。このように、ＩＮＳイントロン１の保持を減少させるのに最適なアンチセンス標的を、１塩基解像法で、イントロン全体の体系的な欠失分析（７）によって最も抑制的とこれまでに同定された領域にマッピングした。
【０２６６】
イントロン保持へのアンチセンス標的は、平行ＲＮＡ４重鎖に隣接している
[00290]  この標的は、安定したＲＮＡグアニン（Ｇ）４重鎖を形成することが予測さ
れる２つのイントロンセグメント（イントロン１ヌクレオチド３６〜６１と７８〜９３；図４Ａにおいて強調される）の間に挟まれていることが認められた。これらの構造は、環状フーグスティーン型水素結合配置で組織化される４つのＧから成るＧカルテットを重ね合わせることによって産生され（３２）、複製、組換え、転写、翻訳（３３，３４）とＲＮＡプロセシング（３５〜３９）が含まれる重要な細胞プロセスへの関与が示唆されてきた。それらが試験管内で（in vitro）形成されるかどうかを検証するために、この領域に由来する合成リボヌクレオチドを、ＤＮＡ及びＲＮＡの４重鎖構造を試験管内で特性付けるために広く使用されてきたＣＤ分光法（４０〜４３）において利用した。２１５ｎｍ〜３３０ｎｍで、２５℃で記録した、下流の１９マーのＣＤスペクトル（ＣＤ１と呼ぶ）は、強い陽性楕円率を２６５ｎｍで示し、陰性強度を２４０ｎｍ付近で示し、平行４重鎖を示唆した（図５Ａ）。他の安定した２次構造モチーフではない、４重鎖の存在を確かめるために、ＵＶ吸収スペクトルを５℃と９５℃で記録した。この２つの温度（融解転移点の下と上）でのＵＶ吸収差スペクトルは、２９５ｎｍ付近での特徴的な濃色シフトと２４０ｎｍと２８０ｎｍでの２重最大値を示し、安定した平行鎖ＲＮＡ４重鎖の試験管内での形成の証拠を提供した。このことは、Ｇテトラッド構造内のフーグスティーン型Ｈ結合したＧに対応する１０ｐｐｍ〜１２ｐｐｍのシグナルの特徴的なエンベロープを示す、ＣＤ１の１Ｈ  ＮＭＲ試験（図５Ｂ）によって確かめられた。ＣＤによる熱安定性測定値は、Ｔｍ＝５６．８±０．２℃である、高度に可逆的なＳ字状の協同的アンフォールディング転移をもたらした（図５Ｃ）。図５Ｄ（上パネル）は、１〜４ヌクレオチドの比較的短いループ配列によって連結した２つの積み重なったＧテトラッド中への１９マーの可能な配置を示す。
【０２６７】
ＩＮＳイントロン１中のスプライシング阻害配列についての配座転移モデル
[00291]  アンチセンス標的の上流領域に由来する合成２０マーのＣＤ（ＣＤ２と呼ぶ
）も、２７０ｎｍ付近を中心とするより広い吸収エンベロープとＳ字状の熱アンフォールディング転移（Ｔｍ＝６９．０±０．４５℃；図５Ａ）を与えて、安定した構造形成の証拠を示した。下流のオリゴＣＤ１とは異なり、熱示差スペクトルにおいて、ＵＶの濃色シフトを見出せなかった。しかしながら、ＣＤ１のそれとは異なる、１２ｐｐｍ〜１４ｐｐｍの１Ｈ  ＮＭＲスペクトル中の鋭いシグナルの明確なセットは、２本鎖ＲＮＡに特徴的なワトソン・クリック型Ｈ結合塩基対の形成を示した（図５Ｂ）。Ｍフォールドを使用する、重なるイントロンセグメントの２次構造予測は、プレｍＲＮＡが安定した局所ステムループを形成し；その１つがＧ→Ｃ突然変異（Ｇ２と呼ぶ；図５Ｄ、下パネル）によってさらに安定化されて、イントロン１保持を高めることを示唆した（７）。さらに下流に定位されて４重鎖構造を不安定化する別のＧ→Ｃ置換（Ｇ３と呼ぶ）（図５Ｄ、上パネル）も、イントロン・スプライシングを抑制した（７）。最後に、１塩基多型でＡ又はＧのいずれか一方を含有するＣＤ２オリゴヌクレオチド（図４Ａと（２０））は、明確な融解転移とＴｍ値があるごく類似したＣＤスペクトルを明示し、そのＧアレルとＡアレルが同じ構造を形成することを示唆した。
【０２６８】
[00292]  標準構造と非標準構造の間の一時的な平衡のイントロン・スプライシングに
おける重要性についてさらに検証するために、ＣＤ、ＮＭＲ、及び突然変異誘発実験の組合せを使用した（図６）。イントロン保持標的の５’端が含まれるオリゴリボヌクレオチドＣＤ３を合成して、ステムループ／４重鎖を予測した（図４Ａ及び図６Ａ）。ヘアピンを不安定化するが４重鎖の安定性は維持する２つのＣ→Ｕ転移を担う、突然変異バージョンのＣＤ４も合成した。ＨＥＫ２９３細胞中にトランスフェクトされるＩＣレポーター構築体にも、同じ突然変異を導入した。ＣＤ３のＮＭＲスペクトルは、Ｇテトラッドと標準塩基対合ヘアピン構造（Ｈ１及びＨ２と呼ぶ）の両方についてのシグナルの平衡状態での共存を明らかにした（図６Ｂ及び図６Ｃ）。４重鎖とヘアピンの間の配座平衡に対するＭｇ２＋の影響について、１００ｍＭ  ＫＣｌを含有する緩衝液に２ｍＭ、そして次いで６ｍＭのＭｇＣｌ２を添加することによって検討した。Bugaut et al.（５７）によって報
告されるように、ＫＣｌの存在下では、Ｍｇ２＋を添加しても、配座平衡は、有意には乱れなかった。従って、我々は、Ｋ＋イオンとＭｇ２＋イオンがともに高濃度で存在する細胞状況（cellular context）を模倣する環境における、ＲＮＡヘアピン構造と４重鎖構造の形成を観測した。ＣＤ融解曲線は、安定性が異なる多重配座状態に一致した、広い転移（Ｔｍ＝７９．９℃）を示した。ＣＤ４におけるＣＣ→ＵＵ突然変異は、Ｈ１でのＮＭＲシグナルの消失（図６Ｂ）と１３℃のＴｍ低下をもたらし、より安定したヘアピンＨ１の選択的な不安定化と一致して、４重鎖と平衡状態にあるＨ２の集団の増加をもたらした。一過性トランスフェクションは、ＣＣ→ＵＵ突然変異がイントロン１スプライシングを改善する一方で、４重鎖とヘアピンの両方を不安定にすると予測された、Ｍ１と呼ばれる突然変異がごくわずかな影響しか及ぼさないことを示した（図６Ｄ、表１Ａ）。
【０２６９】
[00293]  これらの構造の平衡がいかにイントロン・スプライシングに影響を及ぼすか
をより体系的に探究するために、一連の突然変異構築体を調製して、予測された４重鎖、Ｈ１／Ｈ２構造、及び２つのシトシンランを不安定化／維持した（表１Ａ）。それらの転写産物は、イントロン保持レベルにおいて有意差を示した（図７；Ｐ＝０．０００１、順位に対するクルースカル・ワリス（Kruskal-Wallis）片側ＡＮＯＶＡ）。第１に、Ｇ４重鎖の消去は、イントロン１保持を高めたが、これは、それぞれのシトシンランを除去することによってさらに強められた（野生型と突然変異型４〜６を参照すること、Ｐ＝０．０００４）。これらの突然変異は、イントロン保持に対して相加効果をもたらすように見えた（野生型対突然変異型１又は９；３対２、及び４対５を参照のこと）。第２に、Ｇ４重鎖非存在下でのイントロン保持の増加は、Ｈ１とＨ２を除去することによって変化しなかったが、それらの消去は、エクソン・スキッピングを高めた（アイソフォーム２について突然変異型４対６を参照のこと）。第３に、２つのＣ４ランの一方だけが存在する場合、Ｈ１の除去は、イントロン１スプライシングをいくらか改善し（８対９を参照のこと）、試験したＲＮＡのイントロン保持と予測安定性の間の統計学的に有意な相関性と一致した（図７Ｂ）。このように、イントロン・スプライシングの効率は、平衡状態にある標準構造と非標準構造の間の配座転移によって制御された。
【０２７０】
【表１−１】
2020189849.tif 000012
【０２７１】
【表１−２】
2020189849.tif 000013
【０２７２】
ウィナーＳＳＯによって標的指向される領域中のタンパク質−ＲＮＡ相互作用
[00294]  アンチセンス標的及び／又は関連した標準構造と非標準構造が含まれるＲＮ
Ａと相互作用するタンパク質を同定するために、野生型ＲＮＡとｄｅｌ５  ＲＮＡ（Ｔ７タグ付きＰＣＲ産物より転写される）、標的配列を代表する合成ＲＮＡ（ＣＤ５）、及び３’ｓｓ  ＣＡＧを含有する対照オリゴ（ＡＶ３と呼ばれる）を使用して、プルダウン（pull-down）アッセイを行った。ウエスタン・ブロッティングは、野生型とｄｅｌ５転写
産物がともにｈｎＲＮＰｓ  Ｆ／Ｈに結合するが、この結合がＣＤには無いことを示した（図７Ｃ）。これらのタンパク質は、ビーズだけの対照と比べて、プルダウンゲル由来の断片を野生型とｄｅｌ５  ＲＮＡで差示的に染色したＭＳ／ＭＳ分析によっても検出された。ＳＲＳＦ２に対する２種の抗体は、いくつかのＳＲタンパク質の中で推定される結合活性について最も高いスコアを示したが、特異的な相互作用を検出することができなかった（図７Ｃ）。哺乳動物細胞において主要なポリ（Ｃ）結合活性を構成する（４４）、ｈｎＲＮＰ  Ｅ１／Ｅ２由来のシグナルは、ｄｅｌ５ではバックグラウンドに優った（図７
Ｃ）が、ｈｎＲＮＰ  Ｅ１／Ｅ２を欠いている細胞では、イントロン保持の変化を観測しなかった。
【０２７３】
ＤＨＸ３６枯渇時のＧリッチレポーターとＧプア（poor）レポーターのスプライシングパターン
[00295]  ヒーラ細胞では、ＲＮＡ  Ｇ−４重鎖がヘリカーゼＤＨＸ３６に結合すると
、これが４重鎖ＲＮＡを安定した２重鎖に変換することを可能として、４重鎖解体活性の主源となる（２６、４５）。ＤＨＸ３６は、ＡＴＭ  プレｍＲＮＡ中のイントロンスプライシングエンハンサーに架橋結合して（４６）、ＴＥＲＣの５’領域内の４重鎖構造を巻き戻すことができた（２６）。ＤＨＸ３６枯渇がＩＮＳスプライシングに影響を及ぼすことができるかどうかを検討するために、枯渇させた細胞中にＧ４重鎖のプアレポーターとリッチレポータを一過的にトランスフェクトした（図８Ａ、表１）。ほぼ等量のスプライス産物の提示をもたらす（分岐部位を弱めることによって達成される（２４））対照構築体を選択することで、高感度の体外（ex vivo）スプライシングアッセイを提供した。し
かしながら、効率的なＤＨＸ３６枯渇（図８Ｂ）にもかかわらず、短い構築体と長い構築体のいずれにおいても、ＩＮＳイントロン１保持の統計学的に有意な変化は見られず、Ｇプア対照とＧリッチ対照においても主要な変化を観測しなかった（図８Ｃ〜図８Ｅ）。これらの結果は、ＤＨＸ３６枯渇細胞において下方調節された転写産物には４重鎖配列の有意な濃縮が不足して（４７）、ノックダウンに対するＡＴＭ応答がない（４６）というこれまでの知見に一致している。
【０２７４】
ＩＮＳイントロン１の集団特異的なクリプティック５’スプライス部位のＳＳＯ誘導性の抑制
[00296]  ＩＮＳイントロン１スプライシングは、ｒｓ６８９に加えて、天然の５’ｓ
ｓの近傍に位置するｒｓ３８４２７４０での多型ＴＴＧＣ挿入によって影響を受ける（２１）。この挿入は、全アフリカ人の染色体の１／４に存在するが、白人のＩＣハプロタイプ上には存在しない（２０）。この挿入は、下流のクリプティック５’ｓｓを活性化し（図１Ａ）、生じるｍＲＮＡの５’ＵＴＲをさらに２６ヌクレオチド延長させて、プロインスリン発現を抑制する（７，２１）。この新しい５’ｓｓがＳＳＯによって効率的に阻害され得るかどうかを検証するために、同じ挿入をＩＣ構築体と野生型、そして架橋型オリゴリボヌクレオチド（ＳＳＯ１０と呼ぶ）と同時発現される突然変異レポーターに導入した。クリプティックスプライシングは阻害されたが、イントロン１の標準スプライシングは、高いＳＳＯ１０濃度でも完全には回復されなかった。最もあり得るのは、この挿入によって弱められた真正の５’ｓｓの認識が最善以下だったからだろう。
【０２７５】
[00297]  この挿入の存在時及び非存在時での５’ＵＴＲ配列のフォールディングへの
最初の洞察を得るために、１本鎖及び２本鎖特異的ＲＮアーゼでの部分消化を使用して、酵素構造プロービングを行った。野生型ＲＮＡについて検出された全体の切断位置と強度は、２つの主要ステムループ領域（ＳＬ１とＳＬ２）がいくつかの内部バルジ（bulges）によって中断されている、ｍフォールド予測と概ね一致していた。この構造プロービングもｍフォールド予測も、この領域中でのＴ１切断とＳ１切断の数がＳＬ１とＳＬ２中の残り部分とは対照的に増加したので、ｒｓ３８４２７４０での挿入によりＳＬ１中の中央バルジが拡張されることを示唆した。最後に、試験管内（in vitro）４重鎖形成を示す領域では、転写産物がＲＮアーゼＶ１によって消化されなかった。
【０２７６】
考察
ＩＮＳイントロン１のスプライシングサイレンサー中のアンチセンスイントロン保持標的
[00298]  本明細書では、ＳＳＯを使用して、成熟転写産物中の全イントロンの保持を
減少させて、ハプロタイプ依存性のＩＮＳ発現を変化させるためのアンチセンス技術の初
めての使用が実証された。効率的なＲＮＡプロセシングに対する、ｒｓ６８９にあるＡアレルの悪影響を償うウィナーＳＳＯの同定を、イントロン１の体系的な突然変異誘発（７）によって、そしてマクロ（図１）及びマイクロウォーク（図４）戦略によって容易にした。興味深いことに、この標的配列は、３’ｓｓコンセンサスに類似する、タンデムＣＡＧ（Ｇ／Ｃ）モチーフを含有する（図４）。このような「シュードアクセプター（pseudo-acceptors）は、スプライス部位抑制に関与することが実験的に示唆されて（２７）、スプライシングサイレンサーにおいて過剰に表出されている。例えば、この２つのテトラマーは、高信頼性の１０２のイントロンスプライシングサイレンサーの間でより一般的であって（４９）、ランダムな１０マーの蛍光活性化スクリーニングによって同定された１０９のエンハンサーでは枯渇している（５０）。ＱＵＥＰＡＳＡスプライシングサイレンサーの間では、ＹＡＧモチーフも予測されるより高頻度で存在し（５１）、それらが保持標的の重要な機能性成分であることが示唆された。介在シトシントラクトも、ＱＵＥＰＡＳＡサイレンサーの間でのＣ４ランの頻度が予測されるより約２倍高いので、何らかの重要な役割を担うのかもしれない。これらのモチーフはまた、検査した３’ｓｓに対して−６２／−５１位で挿入した配列の体系的なスクリーニングによって同定されたイントロン・スプライシング調節配列の４％で見出された（５２）。今回の研究では、最適のイントロン保持標的と３’ノナマー（下線）と共有する、ＩＳＳ２２（ＡＡＡＴＡＧＡＧＧＣＣＣＣＡＧ）と呼ばれるエレメントを同定した。しかしながら、ＡＶ３の最適の３’ｓｓ認識配列とは異なり、ウエスタン・ブロッティングと組み合わせた我々のプルダウン・アッセイは、Ｕ２ＡＦ６５に対する、あるとしてもごく弱い結合しか明らかにしなかった（図７Ｃ）。
【０２７７】
ＲＮＡプロセシング制御における４重鎖とヘアピン間の配座転移
[00299]  アンチセンス標的が同定されたのは、その構造がＣＤとＮＭＲ分析によって
引き続き確定された、潜在的なＧ４重鎖形成ＲＮＡのすぐ上流である（図１Ａと図５）。ＲＮＡ４重鎖は、それらのＤＮＡ対応物より安定していて、ＲＮＡ代謝の調節への関与がますます示唆されて（３３、３４、４１、４２）、医薬品開発への独自の道筋を提供する（５３）。２カルテット４重鎖は、それらの３カルテット又は４カルテット対応物より熱力学的に不安定であって、おそらくは動的により変化を受けやすいが、それでもそれらは、顕著な安定性を示して、細胞の環境に対応した、４重鎖構造と非４重鎖構造の間のより即応的（compliant）で動的なスイッチとして役立つ可能性がある（５４〜５６）。ウィナーＳＳＯは、トランス作用因子との相互作用を遮断し、より高次な構造であるＲＮＡ−タンパク質複合体形成の速度を変化させる、又は２カルテット４重鎖とＨ１／Ｈ２の間の配座転移を妨げる可能性がある（図５）。最近、ある４重鎖について、当初から予測されたのではない、同様の転移が記載されて（５７）、Ｇリッチイントロン１中の追加配列が、おそらくは多数の４重鎖モチーフと競合性ステムループが関与する、アンチセンス標的近傍での平衡に参画し得るという可能性が提示された。
【０２７８】
[00300]  ｈｎＲＮＰ  Ｆ／Ｈ枯渇時のイントロン１保持の増加とｈｎＲＮＰ  Ｆ／Ｈ
過剰発現時の反対の効果（７）を示す結合（図７Ｃ）及び機能性実験は、これらのタンパク質がこのイントロン中の重要なスプライシング補助配列と相互作用することを示すものである。ｈｎＲＮＰ  ＦがＲＮＡ４重鎖に直接結合すると結論付けた既報（５８）とは対照的に、ｈｎＲＮＰ  Ｆは、１本鎖のＧトラクトに排他的に結合することによって、ＲＮＡ４重鎖の形成を妨げることが示された（５９）。霊長動物のゲノムに基づいた予測では、推定される４重鎖の大多数が標準構造にフォールドする可能性があると示唆されている（６０）。これらのタンパク質によるプレｍＲＮＡ占有度が減少すると、おそらくは４重鎖形成が促進され（５９）、そして潜在的にスプライシング効率を低下させる。
【０２７９】
スプライシングと翻訳が一体化した遺伝子発現制御におけるＲＮＡ４重鎖
[00301]  ＲＮＡ４重鎖は、５’ＵＴＲの約８．０％にあると予測されて、翻訳の一般
的な阻害剤として作用すると提唱された（６０、６１）。ＩＮＳイントロン１は、弱くスプライスされて、Ｕ２ＡＦ３５依存的であり（７）、イントロン１含有転写産物の有意な割合が核から輸送される（２３）。このことは、ＣＤ１によって形成されるＲＮＡ  Ｇ４重鎖が、Homininae に特異的な３アミノ酸のｕＯＲＦを含有する、これらｍＲＮＡの翻訳に影響する可能性があることを示唆する（７）。このｕＯＲＦは、プロインスリン発現を顕著に阻害し、ごく数塩基対だけ下流に位置するので、ｕＯＲＦを隔離することによってこのＧ４重鎖が翻訳を促進することが可能であるという概念を促すものである。リボソーム内進入部位の活性には、機能性の２カルテット４重鎖が必要とされる（５４）。
【０２８０】
【表２】
2020189849.tif 000014
【０２８１】
スプライス部位選択における依存性のためのアンチセンス戦略
[00302]  インスリン産生組織からのｃＤＮＡライブラリーに由来する発現配列タグデ
ータベースには、標準ｍＲＮＡアイソフォーム４とは別に、アイソフォーム２、３、及び６（図１Ｂ）が見出されている（２１）。このことは、レポーター構築体によって産生されるクリプティック・スプライス部位が生体内で（in vivo）認識されること、そして我
々のハプロタイプ依存性レポーターシステムが培養細胞において、該細胞が内因性インスリンを発現するかどうかにかかわりなく、これらの事象を正確に反復することを示唆する。イントロン１保持転写産物を抑制することとは別に、最適なＳＳＯは、エクソン３のクリプティック３’ｓｓの利用を高めた（図２）。この望まれない効果は、隣接するエクソン及びイントロンのスプライシングの同調によって説明し得るが、これは、個々の遺伝子でも、そして遺伝子全体でもこれまでに観測されてきた（６３〜６７）。また、転写開始部位の下流にあるＧリッチ性は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ休止部位に関連付けられてきた（６８）。この２つの概ね競合するイントロン２の３’ｓｓは、ＲＮＡフォールディングに影響を及ぼす非特異的なシグナルに応答する可能性がある（図３、表２）が、連結したスプライス部位でＳＳＯの組合せを使用すれば、この観測された依存性を軽減してクリプティック３’ｓｓ活性化を抑制すること、そしてミニ遺伝子ではなく全遺伝子構築体の使用から得られる、それらの相乗作用又は拮抗作用を検証することは、可能であろう。
【０２８２】
ＩＮＳイントロン１保持を減少させる多機能性アンチセンスオリゴヌクレオチド
[00303]  ２’−Ｏ−メチル−ホスホロチオエートＳＳＯの初めての使用（６９）以来
、多くの試験管内（in vitro）及び生体内（in vivo）応用にこの種の化学修飾が成功裡
に利用されてきた（９、１０、７０）。ｍＲＮＡアイソフォームの発現をさらに微調整するために、好適なトランス作用性スプライシング因子をその標的配列に繋ぐように最適化されたＳＳＯを設計することができる（１１、７１）。このシステム用の明白な候補物質は、Ｕ２ＡＦ３５である。なぜなら、高等霊長類では、３’ｓｓの弛緩の結果としてイントロン１が弱くて、ｒｓ６８９でのＡアレルによってさらに弱体化され、そのことがこのイントロンをきわめてＵ２ＡＦ３５依存性にする（図３）からである（７）。Ｕ２ＡＦ３５とは別に、将来の２機能性又は多機能性アンチセンス戦略では、Ｔｒａ２β又はＳＲＳＦ３のような、ＩＮＳイントロン１及びエクソン２のスプライシングに影響を及ぼすことがかつて示されたスプライシング因子のための結合プラットフォームを利用することができる（７）。Ｔｒａ２βは、強力なＧＡＡスプライシングエンハンサーが末端ループにある、予測される安定したヘアピン構造を形成するＳＳＯ６標的に結合する可能性がある（図３Ｂ）。ＳＲＳＦ３は、イントロン２のクリプティック３’ｓｓの抑制に必要とされて（７）、コンセンサス（Ａ／Ｕ）Ｃ（Ａ／Ｕ）（Ａ／Ｕ）Ｃのあるピリミジンリッチ配列に結合する（７２）。ＳＲＳＦ３のＲＮＡ認識モチーフ（７３）と相互作用するＣＡＵＣモチーフは、クリプティック３’ｓｓのすぐ上流に存在する。
【０２８３】
ヒトの遺伝性疾患においてイントロン保持レベルを正常化すること
[00304]  上記の結果は、効率性が低いスプライシングを補償して、１型糖尿病の素因
があるハプロタイプからのＩＮＳ発現を低下させるための非遺伝子手段を使用する機会を提供する。
【０２８４】
[00305]  ｒｓ６８９のような一般的な変異体は、自己免疫疾患が含まれる複合形質の
遺伝可能性に大いに貢献する（７４）が、それらの機能上及び構造上の帰結については、ほとんど知られていない。最適化されたＩＮＳ  ＳＳＯを発達中の胸腺の中に安全かつ効率的に導入することができれば、このアプローチは、１型糖尿病における主要な自己抗原に対する耐性を促進するための新規な予防アプローチを提供するかもしれない。このような介入のための最も明白な候補者は、ＨＬＡとＩＮＳ遺伝子座の両方で疾患素因性アレルが同型接合である罹患小児を有した母親である。このような遺伝子型が兄弟のきわめて高い疾患リスクに関連付けられたからである（７５）。１型糖尿病の１次予防とは別に、将来のＳＳＯベースの治療薬は、診断時に有意な残余β細胞活性のある患者、そしてβ細胞移植を受ける資格があって、移植細胞からのプロインスリン発現のイントロン媒介性の増強より利益を受ける可能性がある患者に適用可能であろう。また、多数のスプライシング調節モチーフに多機能性ＳＳＯで標的指向することによる、イントロン・スプライシングとプロインスリン発現のより劇的な増強を介した、この治療モダリティの他の糖尿病患者への使用を想定することも可能である。ＳＳＯは、外因性と内因性の両方のプロインスリン発現に対するその影響を検査するためのより自然なシステムを提供し得る、胸腺上皮細胞及び１３−細胞において有用性であるかもしれない。最後に、類似のアンチセンス戦略は、骨髄増殖性疾患におけるＵ２ＡＦ３５のジンクフィンガードメイン中の特異的な置換（７６）によって例示されるような、スプライシング因子遺伝子の体細胞突然変異より生じる、癌細胞に広がるイントロン保持を減少させるのに役立つ可能性がある。
【０２８５】
悪性細胞においてイントロン保持を減少させること
[00306]  複製されたポリＡ選択試料からのＲＮＡｓｅｑデータを使用して、Ｕ２ＡＦ
欠乏性ＨＥＫ２９３細胞において選好的に保持されている１４６のイントロン配列のセットを選択し、各イントロン保持事象のゲノムブラウザー中での視察を続けた。http://www.repeatmasker.org/cgi-bin/WEBRepeatMasker で利用可能なＲｅｐｅａｔＭａｓｋｅｒの高感度バージョンを使用して、これらの配列を反復的にマスクした（repeat-masked）。
ＩＮＳイントロン１保持を減少させるのに最適なアンチセンス標的［Kralovicova J et al (2014). Nucleic Acids Res doi: 10.1093/nar/gku507，２０１４年６月１７日公表］
が、ＣＣＣＡＧ、ＡＧＧＣＣ（Kralovicova et al .2014 中の図４）が含まれる、哺乳動物に保存されたイントロン・スプライシング調節配列［Yeo GW, et al (2007). PLoS Genet 3:e85］に重なったので、これらの短いペンタマー〜ヘプタマーモチーフとイントロン・スプライシング調節モチーフの独立的に誘導したセット［Voelker RB, & Berglund JA (2007). Genome Res 17:1023-1033］を含有する、イントロンセグメント中のアンチセンス標的を選択し、それによってオリゴヌクレオチドがこれらの標的と相互作用してＲＮＡプロセシングに影響を及ぼす見込みを高めた。この標的配列を、Ｇ４重鎖形成を回避するためのＣラン含有配列の除去が含まれる、定型的なアンチセンスオリゴヌクレオチド設計に処した。５’プライス部位と３’スプライス部位の両方、ポリピリミジントラクト、分岐部位、及び超分岐領域の近接も回避した。この選択により、Ｕ２ＡＦ感受性イントロンの全長の約１５％を網羅して、ヒトの全イントロン配列の約０．００１％を表す、３８８種の化合物のセットを得た（表３）。従って、このオリゴヌクレオチドのセットは、Ｕ２経路において突然変異又は欠失を維持する悪性細胞中の補助因子からの十分な支援を有さない、Ｕ２依存性イントロンのスプライシング阻害配列について濃縮された領域に標的指向する。
【０２８６】
インスリン関連配列
候補ＳＳＯ配列
註：「＊」の印を付けた候補配列は、図４において考察したウィナーオリゴである。
【０２８７】
ＣＤ５
[00307]  ＲＮＡ型−ＣＵＧＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧ（配列番号１）
[00308]  ＤＮＡ型−ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧ（配列番号２）
[00309]  ｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃａｇ（配列番号３）に結合する
ＳＳＯ２１＊
[00310]  ＲＮＡ型−ＵＧＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵ（配列番号４）
[00311]  ＤＮＡ型−ＴＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴ（配列番号５）
[00312]  ａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃａ（配列番号６）に結合する
ＳＳＯ２１−２ｒ＊
[00313]  ＲＮＡ型−ＧＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧ（配列番号７）
[00314]  ＤＮＡ型−ＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧ（配列番号８）
[00315]  ｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃ（配列番号９）に結合する
ＳＳＯ２１−３ｒ
[00316]  ＲＮＡ型−ＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧＧ（配列番号１０）
[00317]  ＤＮＡ型−ＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧ（配列番号１１）
[00318]  ｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇ（配列番号１２）に結合する
ＳＳＯ２１−４ｒ
[00319]  ＲＮＡ型−ＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧＧＧ（配列番号１３）
[00320]  ＤＮＡ型−ＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧ（配列番号１４）
[00321]  ｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕ（配列番号１５）に結合する
ＳＳＯ２１−５ｒ
[00322]  ＲＮＡ型−ＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧＧＧＧ（配列番号１６）
[00323]  ＤＮＡ型−ＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧ（配列番号１７）
[00324]  ｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃ（配列番号１８）に結合する
ＳＳＯ２１−６ｒ
[00325]  ＲＮＡ型−ＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧＧＧＧＵ（配列番号１９）
[00326]  ＤＮＡ型−ＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＴ（配列番号２０）
[00327]  ａｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕ（配列番号２１）に結合する
ＳＳＯ２１−７ｒ
[00328]  ＲＮＡ型−ＧＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧＧＧＧＵＣ（配列番号２２）
[00329]  ＤＮＡ型−ＧＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＴＣ（配列番号２３）
[00330]  ｇａｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃ（配列番号２４）に結合する
ＳＳＯ２１−８ｒ
[00331]  ＲＮＡ型−ＣＵＧＧＧＧＣＣＵＧＧＧＧＵＣＣ（配列番号２５）
[00332]  ＤＮＡ型−ＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＴＣＣ（配列番号２６）
[00333]  ｇｇａｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇ（配列番号２７）に結合する
ＳＳＯ２１−９ｒ
[00334]  ＲＮＡ型−ＵＧＧＧＧＣＣＵＧＧＧＧＵＣＣＡ（配列番号２８）
[00335]  ＤＮＡ型−ＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＴＣＣＡ（配列番号２９）
[00336]  ｕｇｇａｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａ（配列番号３０）に結合する
ＳＳＯ２１−１０ｒ
[00337]  ＲＮＡ型−ＧＧＧＧＣＣＵＧＧＧＧＵＣＣＡＧ（配列番号３１）
[00338]  ＤＮＡ型−ＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＧＴＣＣＡＧ（配列番号３２）
[00339]  ｃｕｇｇａｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｃ（配列番号３３）に結合する
ＳＳＯ２１−１４ｆ＊
[00340]  ＲＮＡ型−ＣＵＧＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣＣ（配列番号３４）
[00341]  ＤＮＡ型−ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣＣ（配列番号３５）
[00342]  ｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃａｇ（配列番号３６）に結合する
ＳＳＯ２１−１５ｆ
[00343]  ＲＮＡ型−ＧＣＵＧＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧＣ（配列番号３７）
[00344]  ＤＮＡ型−ＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧＣ（配列番号３８）
[00345]  ｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃａｇｃ（配列番号３９）に結合する
ＳＳＯ２１−１６ｆ
[00346]  ＲＮＡ型−ＵＧＣＵＧＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧＧ（配列番号４０）
[00347]  ＤＮＡ型−ＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＧ（配列番号４１）
[00348]  ｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃａｇｃａ（配列番号４２）に結合する
ＳＳＯ２１−１７ｆ
[00349]  ＲＮＡ型−ＣＵＧＣＵＧＣＡＧＡＧＣＵＧＧＧ（配列番号４３）
[00350]  ＤＮＡ型−ＣＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧ（配列番号４４）
[00351]  ｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃａｇｃａｇ（配列番号４５）に結合する
プレｍＲＮＡ転写産物の標的領域の配列（例えばＳＳＯに結合するため）
[00352]  ｃｕｇｇａｃｃｃｃａｇｇｃｃｃｃａｇｃｕｃｕｇｃａｇｃａｇ（配列番号
４６）
【０２８８】
【表３】
2020189849.tif 000015
【０２８９】
癌関連配列
[00353]  以下の表（表３）の配列も、ウラシル残基をチミン残基で置換して提供し得
る（例えば、ＤＮＡ型において）。以下の表の各配列は、本発明のポリ核酸ポリマーの態様であり得る。下記の表（表３）において「化合物の名称」として言及されるそれぞれの遺伝子又はＯＲＦは、イントロン保持の是正のための遺伝子標的を含み得る。
【０２９０】
【表４−１】
2020189849.tif 000016
【０２９１】
【表４−２】
2020189849.tif 000017
【０２９２】
【表４−３】
2020189849.tif 000018
【０２９３】
【表４−４】
2020189849.tif 000019
【０２９４】
【表４−５】
2020189849.tif 000020
【０２９５】
【表４−６】
2020189849.tif 000021
【０２９６】
【表４−７】
2020189849.tif 000022
【０２９７】
【表４−８】
2020189849.tif 000023
【０２９８】
【表４−９】
2020189849.tif 000024
【０２９９】
[00354]  本発明の好ましい態様について、本明細書に示して記載してきたが、当業者
には、そのような態様が例示としてのみ提供されることが明らかであろう。今や、当業者には、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、及び置換が発想されよう。本発明を実施する場合には、本明細書に記載した本発明の態様に対する様々な代替態様を利用し得ると理解されたい。以下の特許請求項は、本発明の範囲を明確化して、これらの特許請求項の範囲内の方法及び構造とそれらの均等物がそれに含まれると企図される。
【０３００】
[00355]  記載された特別な方法、組成物、及びキットは、変わる可能性がある。また
、本発明の範囲は、付帯の特許請求項によってのみ規定されるので、本明細書に使用した用語法が特別な態様について記載する目的のためだけのものであって、限定することを企図するものではないことを理解されたい。
【０３０１】
[00356]  数値を提供する場合、それぞれの値は、「約」特別な数値又は範囲として表
され得ると理解され得る。「約」には、正確な量が含まれる可能性もある。例えば、「約５μＬ」は、「約５μＬ」又は「５μＬ」を意味することができる。一般に、「約」という用語には、引用値の上下１０％にあると予測される量を含めることができる。
【０３０２】
[00357]  本明細書に使用したセクション見出しは、構成上の目的のだけのものであって、記載される主題を限定するものと解釈してはならない。
[00358]  他に定義しなければ、本明細書に使用するすべての技術用語及び科学用語は、特許請求される主題が属する技術分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を有し得る。本明細書の記載は、例示的で説明的なものにすぎず、特許請求される主題を制限しない。本出願において、他に具体的に述べなければ、単数形の使用には、複数形が含まれ得る。本明細書と付帯の特許請求項において使用されるように、文脈によって他に明確に指示されなければ、単数形の不定冠詞（「a」、「an」）と定冠詞（「the」）には、複数形の指示物を含めることができる。本出願において、「又は（or）」の使用は、他に述べなければ、「及び／又は（and/or）」を意味し得る。さらに、「〜を含めて（including）」という用語、並びに「〜が含まれる（include）」、「〜が含まれる（includes）」、及び「〜が含まれた（included）」のような他の語形の使用は、範囲を限定するものではない。
本願は以下の発明を包含する。
［項目１］  対象における疾患の予防方法又は治療方法であって、成熟遺伝子転写産物中のイントロン保持の是正を含み、該疾患は、該遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因する不完全なタンパク質発現によって誘発される、前記方法。
［項目２］  イントロン保持の是正が、該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含む、項目１に記載の方法。
［項目３］  イントロン保持の是正が、該遺伝子転写産物とハイブリダイズするように配列され、そして標準（ステムループ）、非標準（Ｇ４重鎖）ＲＮＡ構造の配座転移；トランス作用因子との相互作用；及びＲＮＡ−タンパク質複合体の形成速度のうち１以上に干渉するように配列されたポリ核酸ポリマーを投与することを含む、項目１又は２に記載の方法。
［項目４］  ポリ核酸ポリマーが、イントロン・スプライシング調節配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対するアンチセンスである、項目１〜３のいずれかに記載の方法。
［項目５］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号４６若しくは配列番号４６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対するアンチセンスである、項目１〜４のいずれかに記載の方法。
［項目６］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号３若しくは配列番号３と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域の少なくとも一部に対するアンチセンスである、項目１〜５のいずれかに記載の方法。
［項目７］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号３；配列番号６；配列番号９；配列番号１２；配列番号１５；配列番号１８；配列番号２１；配列番号２４；配列番号２７；配列番号３０；配列番号３３；配列番号３６；配列番号３９；配列番号４２；配列番号４５；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成る転写産物の標的領域に対するアンチセンスである、項目１〜６のいずれかに記載の方法。
［項目８］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号４７〜４３４又はこれらの組合せを含む配列群のいずれかに対して少なくとも９５％の同一性を有する配列に対して相補的な配列を含むか又はそれから成る転写産物の領域に対するアンチセンスである、項目１〜４のいずれかに記載の方法。
［項目９］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り；そしてウラシルヌクレオチドがチミンヌクレオチドで置換されていてもよい、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
［項目１０］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号４７〜４３４又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り；そしてウラシルヌクレオチドがチミンヌクレオチドで置換されていてもよい、項目１〜４、又は８のいずれかに記載の方法。
［項目１１］  ポリ核酸ポリマーの長さが約１０〜約３０ヌクレオチドである、項目１〜１０のいずれかに記載の方法。
［項目１２］  ポリ核酸ポリマーがその安定性を高めるように修飾される、項目１〜１１のいずれかに記載の方法。
［項目１３］  ポリ核酸ポリマーがタンパク質又はアプタマーに繋がっており、該タンパク質は、スプライシングとイントロン除去を増強、阻害、又は調節するためのスプライシング因子である、項目１〜１２のいずれかに記載の方法。
［項目１４］  ポリ核酸ポリマーが、該ポリ核酸ポリマーを細胞又は組織に及び／又はそれらの中に送達するのに適した送達担体にコンジュゲートしているか又は結合している、項目１〜１３のいずれかに記載の方法。
［項目１５］  遺伝子転写産物がプロインスリンをコードする、項目１〜７、９、又は１１〜１４のいずれかに記載の方法。
［項目１６］  遺伝子転写産物が、ＡＢＣＤ４；ＡＢＣＦ３；ＡＣＡＤＶＬ；ＡＬＫＢＨ６；ＡＰ１Ｇ２；ＡＰＥＸ１；ＡＲＦＲＰ１；ＡＴＨＬ１；ＡＴＰ１Ａ３；ＡＴＰ５Ｄ；ＡＴＰ１３Ａ１；ＢＡＸ；ＢＤＨ２；ＢＲＤ２；Ｃ１ｏｒｆ６３；Ｃ１ｏｒｆ６３０；Ｃ１ｏｒｆ６３１；Ｃ１ｏｒｆ１２４；Ｃ２ｏｒｆ４９；Ｃ８ｏｒｆ８２；Ｃ１６ｏｒｆ５９；ＣＡＰＲＩＮ２；ＣＡＳＫＩＮ２；ＣＤＣＡ７；ＣＥＰ１６４；ＣＥＰ１７０；ＣＬＣＮ７；ＣＰＮＥ１；ＣＰＳＦ３Ｌ；ＤＣＸＲ；ＤＥＮＮＤ４Ｂ；ＤＦＦＡ；ＤＩＳ３Ｌ２；ＤＮＡＪＢ１２；ＤＰＦ１；ＤＲＧ２；ＤＳＮ１；ＥＭＬ３；ＥＷＳＲ１；ＥＷＳＲ１０；ＦＧＦＲ４；ＦＴＳＪ１；ＧＢＡＰ１；ＧＭＰＰＡ；ＧＭＰＲ２；ＧＮＰＴＧ；ＧＯＲＡＳＰ１；ＧＰＡＴＣＨ４；ＨＧＳ；ＨＭＧ２０Ｂ；ＩＦＦＯ１ＩＳＹＮＡ１；ＫＲＩ１；ＬＯＣ１４８４１３；ＬＺＴＲ１；ＭＡＮ２Ｃ１；ＭＡＰ４Ｋ２；ＭＣＯＬＮ１；ＭＤＰ１；ＭＩＢ２；ＭＩＴＤ１；ＭＯＫ；ＭＯＶ１０；ＭＲＰＬ３５；ＭＴＭＲ１１；ＭＵＳ８１；ＮＡＰＥＰＬＤ；ＮＢＥＡＬ２；ＮＤＲＧ４；ＮＤＵＦＢ１０；ＮＦＡＴＣ４；ＮＦＫＢＩＢ；ＮＩＴ１；ＮＫＴＲ；ＮＰＲＬ２；ＮＳＵＮ５Ｐ１；ＮＵＤＴ２２；ＰＡＮ２；ＰＤＤＣ１；ＰＤＬＩＭ４；ＰＨＦ１；ＰＩＫ３ＣＤ；ＰＩＴＰＮＭ１；ＰＰＩＬ２；ＰＰＰ１Ｒ３５；ＰＰＰ４Ｃ；ＰＱＬＣ２；ＰＲＰＦ３９；ＰＳＭＥ２；ＰＴＰＭＴ１；ＱＡＲＳ；ＲＡＤ５２；ＲＨＯＴ２；ＲＭＮＤ５Ｂ；ＲＮＦ１２３；ＲＰＬ１０Ａ；ＲＰＰ２１；ＲＰＳ６ＫＢ２；ＲＵＳＣ１；ＳＣＲＮ２；ＳＣＹＬ１；ＳＦＲ１；ＳＧＳＭ３；ＳＩＲＴ７；ＳＬＣ２５Ａ３；ＳＬＣ３０Ａ７；ＳＬＣ３７Ａ４；ＳＴＫ１９；ＳＴＸ１０；ＴＣＦ２５；ＴＯＭＭ４０；ＴＰ５３Ｉ３；ＴＲＩＭ４１；ＴＲＰＴ１；ＴＳＴＡ３；ＴＴＣ１４；ＴＴＣ１４０；ＴＵＢＧＣＰ６；Ｕ２ＡＦ１Ｌ４；ＵＣＫ１；ＵＮＣ４５Ａ；ＶＡＭＰ１；ＶＡＭＰ１０；ＶＡＲＳ；ＶＰＳ２８；ＷＤＲ２４；ＷＤＲ９０；ＷＲＡＰ５３；ＹＤＪＣ；ＹＩＰＦ３；ＺＣＣＨＣ８；ＺＣＣＨＣ１８；ＺＦＡＮＤ１；ＺＮＦ１３１；ＺＮＦ３００；ＺＮＦ３１７；ＺＮＦ６９２；ＺＮＦ７１１；ＺＮＲＤ１；ＺＷＩＮＴ；又はこれらの組合せを含む遺伝子又はＯＲＦのいずれかから選択される遺伝子又はＯＲＦより転写される、項目１〜４、８、又は１０〜１４のいずれかに記載の方法。
［項目１７］  疾患が糖尿病である、項目１〜７、９、又は１０〜１５のいずれかに記載の方法。
［項目１８］  疾患が癌である、項目１〜４、８、又は１０〜１４、又は１６のいずれかに記載の方法。
［項目１９］  疾患病理が遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因するかどうかを治療に先立って決定する工程をさらに含む、項目１〜１８のいずれかに記載の方法。
［項目２０］  細胞内でイントロン・スプライシングを調節する方法であって、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含み、該領域は、配列番号４６又は配列番号４６に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る、前記方法。
［項目２１］  細胞内でイントロン・スプライシングを調節する方法であって、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含み、該領域は、配列番号３又は配列番号３に対して少なくとも９５％の同一性を有する領域を含むか又はそれから成る、前記方法。
［項目２２］  細胞内でイントロン・スプライシングを調節する方法であって、ポリ核酸ポリマーをプレｍＲＮＡの領域にハイブリダイズさせることを含み、該領域は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに対しても少なくとも９５％の同一性を有する配列に相補的な配列を含むか又はそれか成る、前記方法。
［項目２３］  配列番号４６を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域、あるいは配列番号４６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスである、ポリ核酸ポリマー。
［項目２４］  配列番号３を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域、あるいは配列番号３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスである、ポリ核酸ポリマー。
［項目２５］  ポリ核酸ポリマーの領域の少なくとも一部に対してアンチセンスであるポリ核酸ポリマーであって、該領域は、配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む配列の群のいずれかに相補的な配列を含むか又はそれから成るか；あるいは任意選択的に、配列番号４７〜４３４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むか又はそれから成るポリ核酸ポリマーの領域である、前記ポリ核酸ポリマー。
［項目２６］  配列番号１；配列番号２；配列番号４；配列番号５；配列番号７；配列番号８；配列番号１０；配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；配列番号４１；配列番号４３；及び配列番号４４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り；ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、ポリ核酸ポリマー。
［項目２７］  配列番号４７〜４３４；又はこれらの組合せを含む群のいずれかから選択される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリ核酸ポリマー配列を含むか又はそれから成り；ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、ポリ核酸ポリマー。
［項目２８］  ポリ核酸ポリマーを細胞に送達するのに適した送達担体にコンジュゲートしているか又は結合している、項目２３〜２７のいずれかに記載のポリ核酸ポリマー。
［項目２９］  項目２３〜２７のいずれかに記載のポリ核酸ポリマーを含むベクター。
［項目３０］  項目２３〜２７のいずれかに記載のポリ核酸ポリマーを含むか又はそれに結合している送達担体。
［項目３１］  項目２３〜２８のいずれかに記載のポリ核酸ポリマー、又は項目２９に記載のベクター、又は項目３０に記載の送達担体を含む組成物。
［項目３２］  追加の生物学的に活性な分子をさらに含む、項目３１に記載の組成物。
［項目３３］  治療対象を選択する方法であって、遺伝子転写産物中のイントロン保持に起因する不完全なタンパク質発現によって誘発される疾患を該対象が有するかどうかを決定し、ここで、対象は、陽性確定時に、項目２３〜２８のいずれかに記載のポリ核酸ポリマー、又は項目２９に記載のベクター、又は項目３０に記載の送達担体、又は項目３１若しくは３２に記載の組成物による治療のために選択される；そして任意に対象を治療する、ことを含む、前記方法。
［項目３４］  癌細胞においてイントロン保持を是正することによって遺伝子発現を正常化するための、アンチセンスポリ核酸ポリマーの使用。
［項目３５］  遺伝子転写産物がイントロン・スプライシング調節配列である、項目１〜３４のいずれかに記載の方法。
［項目３６］  イントロン・スプライシング調節配列が２つのＧ４重鎖の間にある、項目１〜３５のいずれかに記載の方法。
［項目３７］  イントロン・スプライシング調節配列が第１のＣＣＣモチーフを含む、項目１〜３６のいずれかに記載の方法。
［項目３８］  イントロン・スプライシング調節配列が第２のＣＣＣモチーフをさらに含む、項目３７の方法。
［項目３９］  イントロン・スプライシング調節配列が、ＣＣＣＡＧモチーフ又はＡＧＧＣＣモチーフをさらに含む、項目１〜３８のいずれかに記載の方法。
［項目４０］  イントロン・スプライシング調節配列がＧ４重鎖を形成しない、項目１〜３９のいずれかに記載の方法。
［項目４１］  ポリ核酸ポリマーが遺伝子転写産物と特異的にハイブリダイズする、項目１〜４０のいずれかに記載の方法。
［項目４２］  あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該標的配列は２つのＧ４重鎖の間にあり、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
［項目４３］  ポリ核酸ポリマーが、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロンにハイブリダイズする、項目４２の医薬組成物。
［項目４４］  あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズし、該イントロン・スプライシング調節配列は、第１のＣＣＣモチーフを含み、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
［項目４５］  イントロン・スプライシング調節配列が第２のＣＣＣモチーフをさらに含む、項目４４の医薬組成物。
［項目４６］  第１のＣＣＣモチーフが第２のＣＣＣモチーフ由来の約３以上のヌクレオチド塩基である、項目４５の医薬組成物。
［項目４７］  ポリ核酸ポリマーが、ＣＣＣＡＧモチーフ又はＡＧＧＣＣモチーフを含むイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズする、項目４２〜４６のいずれか１項の医薬組成物。
［項目４８］  あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフはＧ４重鎖を形成せず、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
［項目４９］  ポリ核酸ポリマーが、ピリジンヌクレオチドを３’末端位及び／又は５’末端位に含む、項目４２〜４８のいずれか１項の医薬組成物。
［項目５０］  ポリ核酸ポリマーが、２つの連続したピリジン残基を３’末端位及び／又は５’末端位に含む、項目４２〜４９のいずれか１項の医薬組成物。
［項目５１］  あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフはヘアピン構造を形成し、そして該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導可能である；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
［項目５２］  あるタンパク質をコードしそして保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列にハイブリダイズするポリ核酸ポリマー、ここで、該ポリ核酸ポリマーは、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロンのスプライシングアウトを誘導する；及び
医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体、
を含む、医薬組成物。
［項目５３］  ポリ核酸ポリマーが、ヘアピン構造を不安定にすることがさらに可能である、項目５１の医薬組成物。
［項目５４］  送達担体が、細胞浸透ペプチド又はペプチドベースのナノ粒子を含む、項目４２〜５３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目５５］  送達担体が、ポリ核酸ポリマーとイオン結合によって複合体を形成している、項目４２〜５４のいずれか１項の医薬組成物。
［項目５６］  ポリ核酸ポリマーの長さが、約１０〜約５０、約１０〜約４５、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２５、又は約１０〜約２０ヌクレオチドである、項目４２〜５５のいずれか１項の医薬組成物。
［項目５７］  ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％相補的である、項目４２〜５６のいずれか１項の医薬組成物。
［項目５８］  ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４以下、３以下、２以下、又は１以下のミスマッチを有する、項目４２〜５７のいずれか１項の医薬組成物。
［項目５９］  ポリ核酸ポリマーが、ヌクレオシド部分又はリン酸部分で修飾される、項目４２〜５８のいずれか１項の医薬組成物。
［項目６０］  ポリ核酸ポリマーが、１以上の人工ヌクレオチド塩基を含む、項目４２〜５９のいずれか１項の医薬組成物。
［項目６１］  １以上の人工ヌクレオチド塩基が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）で修飾された、ロック核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、１’，５’−アンヒドロへキシトール核酸（ＨＮＡ）、モルホリノ、メチルホスホネート  ヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、又は２’−フルオロＮ３−Ｐ５’−ホスホロアミダイトを含む、項目５９又は６０の医薬組成物。
［項目６２］  ポリ核酸ポリマーが、該ポリ核酸ポリマーのヌクレオシド部分のリボース部分の２’ヒドロキシル基で修飾される、項目６１の医薬組成物。
［項目６３］  ２’ヒドロキシル基の修飾が、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−デオキシ、Ｔ−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、Ｔ−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、又は２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）部分による、項目６２の医薬組成物。
［項目６４］  リボース部分の２’ヒドロキシル基にメチル基を付加して２’−Ｏ−メチルリボース部分を産生する、項目６３の医薬組成物。
［項目６５］  リボース部分の２’ヒドロキシル基にメトキシエチル基を付加して２’−Ｏ−メトキシエチルリボース部分を産生する、項目６３の医薬組成物。
［項目６６］  ２’ヒドロキシル基の修飾が、メチレン基によって４’炭素に連結される、項目６３の医薬組成物。
［項目６７］  リボース環を６員モルホリノ環で置換してモルホリノ人工ヌクレオチド類似体を産生する、項目５９〜６１のいずれか１項の医薬組成物。
［項目６８］  リン酸骨格をオリゴグリシン様部分で置換してペプチド核酸（ＰＮＡ）を産生する、項目５９〜６１のいずれか１項の医薬組成物。
［項目６９］  リン酸骨格をチオール基又はメチル基によって修飾する、項目５９〜６１のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７０］  ５’末端、３’末端、又はこれらの組合せが修飾される、項目５９〜６９のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７１］  修飾によってポリ核酸ポリマーを対象の内因性エンドヌクレアーゼから保護する、項目５９〜７０のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７２］  修飾されたポリ核酸ポリマーが、ＲＮＡのＲＮアーゼＨ切断を誘導しないか又はその誘導能が低下している、項目５９〜７１のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７３］  ポリ核酸ポリマーが、その安定性を高めるために修飾される、項目５９〜７２のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７４］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号４６の少なくとも１３の連続した塩基に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むか又は１００％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、項目４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７５］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号４６の少なくとも１０の連続した塩基を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、項目４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７６］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４５、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも６３％、７０％、８０％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、項目４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７７］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号３に対して少なくとも５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、項目４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７８］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号４、配列番号５、配列番号７、配列番号８、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、及び配列番号４４、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも６３％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％の配列同一性を含み、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、項目４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目７９］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号１、配列番号２、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列に対して少なくとも５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％の配列同一性を含み、ウラシルヌクレオチドは、チミンヌクレオチドで置換されていてもよい、項目４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目８０］  ポリ核酸ポリマーが、配列番号４７〜４３４、又はこれらの組合せから成る群より選択される配列の少なくとも１３の連続した塩基に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％の配列同一性を含むｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズする、項目４２〜７３のいずれか１項の医薬組成物。
［項目８１］  ハイブリダイゼーションが特異的なハイブリダイゼーションである、項目４２〜８０のいずれか１項の医薬組成物。
［項目８２］  ポリ核酸ポリマーが、合成されたポリ核酸ポリマーである、項目４２〜８１のいずれか１項の医薬組成物。
［項目８３］  ポリ核酸ポリマーを含む医薬組成物が、静脈内投与又は皮下投与用である、項目４２〜８２のいずれか１項の医薬組成物。
［項目８４］  項目４２〜８３の医薬組成物を患者に投与することを含む、それを必要とする患者において疾患又は病態の治療に使用するための組成物。
［項目８５］  疾患又は病態が、あるタンパク質の産生低下に関連するか又は不完全なスプライシングを特徴とする、項目８４の使用のための組成物。
［項目８６］  疾患又は病態が遺伝性疾患である、項目８４又は８５の使用のための組成物。
［項目８７］  遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、項目８６の使用のための組成物。
［項目８８］  遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、項目８６の使用のための組成物。
［項目８９］  遺伝性疾患のある対象が、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能な、遺伝子の欠陥コピーを含むゲノムを有する、項目８６の使用のための組成物。
［項目９０］  疾患又は病態が糖尿病である、項目８４〜８９のいずれか１項の使用のための組成物。
［項目９１］  疾患又は病態が癌である、項目８４〜８９のいずれか１項の使用のための組成物。
［項目９２］  タンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態の治療対象を選択することをさらに含み、
ａ）該対象が、あるタンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態を有するかどうかを決定し；そして
ｂ）該対象が、該タンパク質の産生低下に関連した疾患又は病態を有する場合、項目４２〜８３の医薬組成物を該対象に投与する、
ことを含む、項目８４〜９１のいずれか１項の使用のための組成物。
［項目９３］  不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態の治療対象を選択することをさらに含み、
ａ）該対象が、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を有するかどうかを決定し；そして
ｂ）該対象が、不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を有する場合、項目４２〜８３の医薬組成物を該対象に投与する、
ことを含む、項目８４〜９１のいずれか１項の使用のための組成物。
［項目９４］  それを必要とする対象において、タンパク質の全長機能型の産生低下を特徴とする疾患又は病態を治療する方法であって：
ａ）部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物中のイントロンのスプライシングアウトの増加を誘導する治療薬剤、並びに医薬的に許容される賦形剤及び／又は送達担体を含む医薬組成物を該対象に投与すること、ここで、該対象は、該タンパク質の全長機能型のコピーをコード可能で、そのそれぞれが部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の翻訳を阻害する少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールを有する；及び
ｂ）該対象の標的細胞を治療薬剤と接触させて、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールの一部を誘導し、スプライシングを受けて、該一部中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれから少なくとも１つの保持されたイントロンを除去し、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生すること、ここで、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物は、翻訳されて該タンパク質の全長機能型のコピーを発現し、それが該疾患又は病態を治療する、
を含む、前記方法。
［項目９５］  治療薬剤が該細胞内で１以上のスプライシングタンパク質複合体の活性化を引き起こし、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプールの一部中の部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のそれぞれから少なくとも１つの保持されたイントロンを除去する、項目９４の方法。
［項目９６］  治療薬剤が、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を阻害する、項目９４又は９５の方法。
［項目９７］  治療薬剤が、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質を活性化する、項目９４〜９６のいずれか１項の方法。
［項目９８］  治療薬剤が、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質に結合する、項目９４〜９７のいずれか１項の方法。
［項目９９］  治療薬剤が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的ポリヌクレオチド配列に結合する、項目９４〜９８のいずれか１項の方法。
［項目１００］
治療薬剤がポリ核酸ポリマーである、項目９４〜９９のいずれか１項の方法。
［項目１０１］  治療薬剤が低分子である、項目９４〜１００のいずれか１項の方法。
［項目１０２］  医薬組成物が項目４２〜８３の医薬組成物である、項目９４〜１０１のいずれか１項の方法。
［項目１０３］  該タンパク質の全長機能型の産生低下が、該タンパク質の全長機能型の正常以下の産生を含む、項目９４〜１０２のいずれか１項の方法。
［項目１０４］  該タンパク質の全長機能型の産生低下が、該タンパク質の全長機能型の発現のないことによるか、又は該疾患若しくは病態を引き起こすほどに十分低い該タンパク質の全長機能型の発現レベルによる、項目９４〜１０３のいずれか１項の方法。
［項目１０５］  該タンパク質の全長機能型の産生低下が、該タンパク質の産生がないか又は該タンパク質の不完全型の産生を含む、項目９４〜１０４のいずれか１項の方法。
［項目１０６］  該タンパク質の不完全型が、該タンパク質の短鎖型、該タンパク質のミスフォールディング型、又は該タンパク質の標的結合異常型である、項目１０５の方法。
［項目１０７］  対象を治療することが、該タンパク質の全長機能型の発現増加をもたらす、項目９４〜１０６のいずれか１項の方法。
［項目１０８］  部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のプロセシングを誘導して、保持されたイントロンを除去し、タンパク質の全長機能型をコードする完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生する方法であって：
ａ）単離されたポリ核酸ポリマーを、該タンパク質の全長機能型をコード可能で、少なくとも１つの保持されたイントロンを含む、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物にハイブリダイズさせ；
ｂ）少なくとも１つの保持されたイントロンを、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物から除去し、該タンパク質の全長機能型をコードする、完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を産生し；そして
ｃ）完全にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物から該タンパク質の全長機能型を翻訳する、
ことを含む、前記方法。
［項目１０９］  それを必要とする対象に、単離されたポリ核酸ポリマーを含む医薬組成物を投与することをさらに含む、項目１０８の方法。
［項目１１０］  該タンパク質の全長機能型の産生低下が、疾患又は病態に相関している、項目１０８又は１０９の方法。
［項目１１１］  疾患又は病態が遺伝性疾患である、項目１０８〜１１０のいずれか１項の方法。
［項目１１２］  遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、項目１０８〜１１１のいずれか１項の方法。
［項目１１３］  遺伝性疾患のある対象が、完全にプロセシングされたｍＲＮＡへ適切に転写されるとタンパク質の全長機能型をコードするエクソンのセットを含む遺伝子のコピーを含むゲノムを有する、項目１０８〜１１１のいずれか１項の方法。
［項目１１４］  遺伝性疾患のある対象が、タンパク質の全長機能型を産生することが不可能な、遺伝子の欠陥コピーを含むゲノムを有する、項目１０８〜１１１のいずれか１項の方法。
［項目１１５］  疾患又は病態が糖尿病である、項目１０８〜１１４のいずれか１項の方法。
［項目１１６］  疾患又は病態が癌である、項目１０８〜１１４のいずれか１項の方法。
［項目１１７］  ポリ核酸ポリマーがアンチセンス配列である、項目１０８〜１１６のいずれか１項の方法。
［項目１１８］  アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロンにハイブリダイズする、項目１０８〜１１７のいずれか１項の方法。
［項目１１９］  アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のイントロン・スプライシング調節配列にハイブリダイズする、項目１０８〜１１８のいずれか１項の方法。
［項目１２０］  イントロン・スプライシング調節配列がＣＣＣモチーフを含む、項目１１９の方法。
［項目１２１］  アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、Ｇ４重鎖を形成しない、項目１０８〜１２０のいずれか１項の方法。
［項目１２２］  アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、２つのＧ４重鎖の間にある、項目１０８〜１２１のいずれか１項の方法。
［項目１２３］  アンチセンス配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の結合モチーフにハイブリダイズし、該結合モチーフは、第１のＣＣＣモチーフと第２のＣＣＣモチーフを有する、項目１０８〜１２２のいずれか１項の方法。
［項目１２４］  第１のＣＣＣモチーフが、第２のＣＣＣモチーフ由来の約３以上のヌクレオチド塩基である、項目１２３の方法。
［項目１２５］  ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％、又は１００％相補的である、項目１０１〜１２４のいずれか１項の方法。
［項目１２６］  ポリ核酸ポリマーの配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４以下、３以下、２以下、又は１以下のミスマッチを有する、項目１０８〜１２５のいずれか１項の方法。
［項目１２７］  ポリ核酸ポリマーの長さが、約１０〜約５０、約１０〜約４５、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２５、又は約１０〜約２０ヌクレオチドである、項目１０８〜１２６のいずれか１項の方法。
［項目１２８］  対象が真核生物又は原核生物である、項目１０８〜１２７のいずれか１項の方法。
［項目１２９］  対象が、ヒト、マウス、ラット、非ヒト霊長動物、又は非霊長類の哺乳動物より選択される真核生物である、請求９４〜１２７のいずれか１項の方法。
【０３０３】
援用
[00359]  本明細書において言及したすべての公表文献、特許、及び特許出願は、それ
ぞれ個別の公表文献、特許、及び特許出願が具体的かつ個別的に参照により取り込まれるように示されるのと同じ程度で、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。
1. Smith, C.W. and Valcarcel, J. (2000) Alternative pre-mRNA splicing: the logic
of combinatorial control. Trends Biochem. Sci., 25, 381-388.
2. Wahl, M.C., Will, C.L. and Luhrmann, R. (2009) The spliceosome: design principles of a dynamic RNP machine. Cell, 136, 701-718.
3. Callis, J., Fromm, M. and Walbot, V. (1987) Introns increase gene expression in cultured maize cells. Genes Dev., 1, 1183-1200.
4. Buchman, A.R. and Berg, P. (1988) Comparison of intron-dependent and intron-independent gene expression. Mol. Cell. Biol., 8, 4395-4405.
5. Le Hir, H., Nott, A. and Moore, M.J. (2003) How introns influence and enhance
eukaryotic gene expression. Trends Biochem. Sci., 28, 215-220.
6. Cazzola, M. and Skoda, R.C. (2000) Translational pathophysiology: a novel molecular mechanism of human disease. Blood, 95, 3280-3288.
7. Kralovicova, J. and Vorechovsky, I. (2010) Allele-dependent recognition of the 3’ splice site of INS intron 1. Hum. Genet., 128, 383-400.
8. Kole, R., Krainer, A.R. and Altman, S. (2012) RNA therapeutics: beyond RNA interference and antisense oligonucleotides. Nat. Rev. Drug Discov., 11, 125-140.
9. Aartsma-Rus, A. and van Ommen, G.J. (2007) Antisense-mediated exon skipping: a versatile tool with therapeutic and research applications. RNA, 13, 1609-1624.10. Goyenvalle, A., Seto, J.T., Davies, K.E. and Chamberlain, J. (2012) Therapeutic approaches to muscular dystrophy. Hum. Mol. Genet., 20, R69-78.
11. Hua, Y., Sahashi, K., Hung, G., Rigo, F., Passini, M.A., Bennett, C.F. and Krainer, A.R. (2010) Antisense correction of SMN2 splicing in the CNS rescues necrosis in a type III SMA mouse model. Genes Dev., 24, 1634-1644.
12. Du, L., Pollard, J.M. and Gatti, R.A. (2007) Correction of prototypic ATM splicing mutations and aberrant ATM function with antisense morpholino oligonucleotides. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A., 104, 6007-6012.
13. Kralovicova, J., Hwang, G., Asplund, A.C., Churbanov, A., Smith, C.I. and Vorechovsky, I. (2011) Compensatory signals associated with the activation of human GC 5’ splice sites. Nucleic Acids Res., 39, 7077-7091.
14. Buratti, E., Chivers, M.C., Hwang, G. and Vorechovsky, I. (2011) DBASS3 and DBASS5: databases of aberrant 3’ and 5’ splice sites in human disease genes. Nucleic Acids Res., 39, D86-D91.
15 Davies, J.L., Kawaguchi, Y., Bennett, S.T., Copeman, J.B., Cordell, H.J., Pritchard, L.E., Reed, P.W., Gough, S.C., Jenkins, S.C., Palmer, S.M. et al. (1994)
A genome-wide search for human type 1 diabetes susceptibility genes. Nature, 371, 130-136.
16. Barratt, B.J., Payne, F., Lowe, C.E., Hermann, R., Healy, B.C., Harold, D., Concannon, P., Gharani, N., McCarthy, M.I., Olavesen, M.G. et al. (2004) Remapping the insulin gene/IDDM2 locus in type 1 diabetes. Diabetes, 53, 1884-1889.
17. Zhang, L., Nakayama, M. and Eisenbarth, G.S. (2008) Insulin as an autoantigen in NOD/human diabetes. Curr. Opin. Immunol., 20, 111-118.
18. Vafiadis, P., Bennett, S.T., Todd, J.A., Nadeau, J., Grabs, R., Goodyer, C.G., Wickramasinghe, S., Colle, E. and Polychronakos, C. (1997) Insulin expression
in human thymus is modulated by INS VNTR alleles at the IDDM2 locus. Nat. Genet., 15, 289-292.
19. Pugliese, A., Zeller, M., Fernandez, A. Jr, Zalcberg, L.J., Bartlett, R.J., Ricordi, C., Pietropaolo, M., Eisenbarth, G.S., Bennett, S.T. and Patel, D.D. (1997) The insulin gene is transcribed in the human thymus and transcription levels correlated with allelic variation at the INS VNTR-IDDM2 susceptibility locus for type 1 diabetes. Nat. Genet., 15, 293-297.
20. Stead, J.D., Hurles, M.E. and Jeffreys, A.J. (2003) Global haplotype diversity in the human insulin gene region. Genome Res., 13, 2101-2111.
21. Kralovicova, J., Gaunt, T.R., Rodriguez, S., Wood, P.J., Day, I.N.M. and Vorechovsky, I. (2006) Variants in the human insulin gene that affect pre-mRNA splicing: is -23HphI a functional single nucleotide polymorphism at IDDM2? Diabetes, 55, 260-264.
22. Ruskin, B., Zamore, P.D. and Green, M.R. (1988) A factor, U2AF, is required for U2 snRNP binding and splicing complex assembly. Cell, 52, 207-219.
23. Wang, J., Shen, L., Najafi, H., Kolberg, J., Matschinsky, F.M., Urdea, M. and German,M. (1997) Regulation of insulin preRNA splicing by glucose. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A., 94, 4360-4365.
24. Kralovicova, J., Haixin, L. and Vorechovsky, I. (2006) Phenotypic consequences of branchpoint substitutions. Hum. Mutat., 27, 803-813.
25. Pacheco, T.R., Gomes, A.Q., Barbosa-Morais, N.L., Benes, V., Ansorge, W., Wollerton, M., Smith, C.W., Valcarcel, J. and Carmo-Fonseca, M. (2004) Diversity of vertebrate splicing factor U2AF35: identification of alternatively spliced U2AF1 mRNAS. J. Biol. Chem., 279, 27 039-27 049.
26. Booy, E.P., Meier, M., Okun, N., Novakowski, S.K., Xiong, S., Stetefeld, J. and McKenna, S.A. (2012) The RNA helicase RHAU (DHX36) unwinds a G4-quadruplex in human telomerase RNA and promotes the formation of the P1 helix template boundary. Nucleic Acids Res., 40, 4110-4124.
27. Lei, H. and Vorechovsky, I. (2005) Identification of splicing silencers and enhancers in sense Alus: a role for pseudo-acceptors in splice site repression. 
Mol. Cell. Biol., 25, 6912-6920.
28. Buratti, E., Muro, A.F., Giombi, M., Gherbassi, D., Iaconcig, A. and Baralle, F.E. (2004) RNA folding affects the recruitment of SR proteins by mouse and human polypurinic enhancer elements in the fibronectin EDA exon. Mol. Cell. Biol.,
24, 1387-1400.
29. Nussinov, R. (1988) Conserved quartets near 5’ intron junctions in primate nuclear pre-mRNA. J. Theor. Biol., 133, 73-84.
30. Sirand-Pugnet, P., Durosay, P., Brody, E. and Marie, J. (1995) An intronic (A/U)GGG repeat enhances the splicing of an alternative intron of the chicken beta-tropomyosin pre-mRNA. Nucleic Acids Res., 23, 3501-3507.
31. Kralovicova, J. and Vorechovsky, I. (2006) Position-dependent repression and
promotion of DQB1 intron 3 splicing by GGGG motifs. J. Immunol., 176, 2381-2388.
32. Neidle, S. and Balasubramanian, S. (2006) Quadruplex Nucleic Acids. RSC Biomolecular Sciences, Cambridge, UK.
33. Bugaut, A. and Balasubramanian, S. (2012) 5’-UTR RNA G-quadruplexes: translation regulation and targeting. Nucleic Acids Res., 40, 4727-4741.
34. Millevoi, S., Moine, H. and Vagner, S. (2012) G-quadruplexes in RNA biology.
Wiley Interdiscip. Rev. RNA, 3, 495-507.
35. Gomez, D., Lemarteleur, T., Lacroix, L.,Mailliet, P., Mergny, J.L. and Riou,
J.F. (2004) Telomerase downregulation induced by the G-quadruplex ligand 12459 in A549 cells is mediated by hTERT RNA alternative splicing. Nucleic Acids Res.,
32, 371-379.
36. Didiot, M.C., Tian, Z., Schaeffer, C., Subramanian, M., Mandel, J.L. and Moine, H. (2008) The G-quartet containing FMRP binding site in FMR1 mRNA is a potent exonic splicing enhancer. Nucleic Acids Res., 36, 4902-4912.
37. Hai, Y., Cao, W., Liu, G., Hong, S.P., Elela, S.A., Klinck, R., Chu, J. and Xie, J. (2008) A G-tract element in apoptotic agents-induced alternative splicing. Nucleic Acids Res., 36, 3320-3331.
38. Marcel, V., Tran, P.L., Sagne, C., Martel-Planche, G., Vaslin, L., Teulade-Fichou, M.P., Hall,J., Mergny, J.L., Hainaut, P. and Van Dyck, E. (2011) G-quadruplex structures in TP53 intron 3: role in alternative splicing and in production
of p53 mRNA isoforms. Carcinogenesis, 32, 271-278.
39. Melko, M., Douguet, D., Bensaid, M., Zongaro, S., Verheggen, C., Gecz, J. and Bardoni, B. (2011) Functional characterization of the AFF (AF4/FMR2) family of
RNA-binding proteins: insights into the molecular pathology of FRAXE intellectual disability. Hum. Mol. Genet., 20, 1873-1885.
40. Balagurumoorthy, P., Brahmachari, S.K., Mohanty, D., Bansal, M. and Sasisekharan, V. (1992) Hairpin and parallel quartet structures for telomeric sequences.
Nucleic Acids Res., 20, 4061-4067.
41. Derecka, K., Balkwill, G.D., Garner, T.P., Hodgman, C., Flint, A.P. and Searle, M.S. (2010) Occurrence of a quadruplex motif in a unique insert within exon C of the bovine estrogen receptor alpha gene (ESR1). Biochemistry (Mosc.). 49, 7625-7633.
42. Balkwill, G.D., Derecka, K., Garner, T.P., Hodgman, C., Flint, A.P. and Searle, M.S. (2009) Repression of translation of human estrogen receptor alpha by G-quadruplex formation. Biochemistry (Mosc.). 48, 11487-11495.
43. Garner, T.P., Williams, H.E., Gluszyk, K.I., Roe, S., Oldham, N.J., Stevens,
M.F., Moses, J.E. and Searle, M.S. (2009) Selectivity of small molecule ligands
for parallel and anti-parallel DNA G-quadruplex structures. Org. Biomol. Chem.,
7, 4194-4200.
44. Thisted, T., Lyakhov, D.L. and Liebhaber, S.A. (2001) Optimized RNA targets of two closely related triple KH domain proteins, heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K and alphaCP-2KL, suggest Distinct modes of RNA recognition. J. Biol.
Chem., 276, 17484-17496.
45. Creacy, S.D., Routh, E.D., Iwamoto, F., Nagamine, Y., Akman, S.A. and Vaughn, J.P. (2008) G4 resolvase 1 binds both DNA and RNA tetramolecular quadruplex with high affinity and is the major source of tetramolecular quadruplex G4-DNA and
G4-RNA resolving activity in HeLa cell lysates. J. Biol. Chem., 283, 34626-34634.
46. Pastor, T. and Pagani F. (2011) Interaction of hnRNPA1/A2 and DAZAP1 with an
Alu-derived intronic splicing enhancer regulates ATM aberrant splicing. PLoS One, 6, e23349.
47. Iwamoto, F., Stadler, M., Chalupnikova, K., Oakeley, E. and Nagamine, Y. (2008) Transcription-dependent nucleolar cap localization and possible nuclear function of DExH RNA helicase RHAU. Exp. Cell Res., 314, 1378-1391.
48. Singh, N.N., Hollinger, K., Bhattacharya, D. and Singh, R.N. (2010) An antisense microwalk reveals critical role of an intronic position linked to a unique long-distance interaction in pre-mRNA splicing. RNA, 16, 1167-1181.
49. Wang, Y., Xiao, X., Zhang, J., Choudhury, R., Robertson, A., Li, K., Ma, M.,
Burge, C.B. and Wang, Z. (2012) A complex network of factors with overlapping affinities represses splicing through intronic elements. Nat. Struct. Mol. Biol.,
20, 36-45.
50. Wang, Y., Ma, M., Xiao, X. and Wang, Z. (2012) Intronic splicing enhancers, cognate splicing factors and context-dependent regulation rules. Nat. Struct. Mol. Biol., 19, 1044-1052.
51. Ke, S., Shang, S., Kalachikov, S.M.,Morozova, I., Yu, L., Russo, J.J., Ju, J. and Chasin, L.A. (2011) Quantitative evaluation of all hexamers as exonic splicing elements. Genome Res., 21, doi10.1101/gr.119628.119110.
52. Culler, S.J., Hoff, K.G., Voelker, R.B., Berglund, J.A. and Smolke, C.D. (2010) Functional selection and systematic analysis of intronic splicing elements identify active sequence motifs and associated splicing factors. Nucleic Acids Res., 38, 5152-5165.
53. Collie, G.W. and Parkinson, G.N. (2011) The application of DNA and RNA G-quadruplexes to therapeutic medicines. Chem. Soc. Rev., doi 10.1039/c1cs15067g.
54. Morris, M.J., Negishi, Y., Pazsint, C., Schonhoft, J.D. and Basu, S. (2010) An RNA G-quadruplex is essential for cap-independent translation initiation in human VEGF IRES. J. Am. Chem. Soc., 132, 17831-17839.
55. Wieland, M. and Hartig, J.S. (2007) RNA quadruplex-based modulation of gene expression. Chem. Biol., 14, 757-763.
56. Zhang, A.Y. and Balasubramanian, S. (2012) The kinetics and folding pathways
of intramolecular g-quadruplex nucleic acids. J. Am. Chem. Soc., 134, 19297-19308.
57. Bugaut, A., Murat, P. and Balasubramanian, S. (2012) An RNA hairpin to g-quadruplex conformational transition. J. Am. Chem. Soc., 134, 19953-19956.
58. Decorsiere, A., Cayrel, A., Vagner, S. and Millevoi, S. (2011) Essential role for the interaction between hnRNP H/F and a G quadruplex in maintaining p53 pre-mRNA 3’-end processing and function during DNA damage. Genes Dev., 25, 220- 225.
59. Samatanga, B., Dominguez, C., Jelesarov, I. and Allain , F.H. (2013) The hig
h kinetic stability of a G-quadruplex limits hnRNP F qRRM3 binding to G-tract RNA. Nucleic Acids Res., 41, 2505-2516.
60. Lorenz, R., Bernhart, S.H., Qin, J., Honer, Zu, Siederdissen, C., Tanzer, A., Amman, F., Hofacker, I.L. and Stadler, P.F. (2013) 2D meets 4G: G-quadruplexes
in RNA secondary structure prediction. IEEE/ACM Trans. Comput. Biol. Bioinform.61. Beaudoin, J.D. and Perreault, J.P. (2010) 5’-UTR G-quadruplex structures acting as translational repressors. Nucleic Acids Res., 38, 7022-7036.
62. Fred, R.G., Sandberg, M., Pelletier, J. and Welsh, N. (2011) The human insulin mRNA is partly translated via a cap- and eIF4A-independent mechanism. Biochem. Biophys. Res. Commun., 412, 693-698.
63. Schwarze, U., Starman, B.J. and Byers, P.H. (1999) Redefinition of exon 7 in
the COL1A1 gene of type I collagen by an intron 8 splice-donor-site mutation in
a form of osteogenesis imperfecta: influence of intron splice order on outcome of splice-site mutation. Am. J. Hum. Genet., 65, 336-344.
64. Xing, Y., Resch, A. and Lee, C. (2004) The multiassembly problem: reconstructing multiple transcript isoforms from EST fragment mixtures. Genome Res., 14, 426-441.
65. Fededa, J.P., Petrillo, E., Gelfand, M.S., Neverov, A.D., Kadener, S., Nogues, G., Pelisch, F., Baralle, F.E., Muro, A.F. and Kornblihtt, A.R. (2005) A polar mechanism coordinates different regions of alternative splicing within a single gene. Mol. Cell, 19, 393-404.
66. Emerick, M.C., Parmigiani, G. and Agnew, W.S. (2007) Multivariate analysis and visualization of splicing correlations in single-gene transcriptomes. BMC Bioinformatics, 8, 16.
67. Peng, T., Xue, C., Bi, J., Li, T., Wang, X., Zhang, X. and Li, Y. (2008) Functional importance of different patterns of correlation between adjacent cassette exons in human and mouse. BMC Genomics, 9, 191.
68. Eddy, J., Vallur, A.C., Varma, S., Liu, H., Reinhold, W.C., Pommier, Y. and Maizels, N. (2011) G4 motifs correlate with promoter-proximal transcriptional pausing in human genes. Nucleic Acids Res., 39, 4975-4983.
69. Mayeda, A., Hayase, Y., Inoue, H., Ohtsuka, E. and Ohshima, Y. (1990) Surveying cis-acting sequences of pre-mRNA by adding antisense 2_-O-methyl oligoribonucleotides to a splicing reaction. J. Biochem., 108, 399-405.
70. Dominski, Z. and Kole, R. (1993) Restoration of correct splicing in thalassemic pre-mRNA by antisense oligonucleotides. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A., 90, 8673-8677.
71. Baughan, T.D., Dickson, A., Osman, E.Y. and Lorson, C.L. (2009) Delivery of bifunctional RNAs that target an intronic repressor and increase SMN levels in an animal model of spinal muscular atrophy. Hum. Mol. Genet., 18, 1600-1611.
72. Cavaloc, Y., Bourgeois, C.F., Kister, L. and Stevenin, J. (1999) The splicing factors 9G8 and SRp20 transactivate splicing through different and specific enhancers. RNA, 5, 468-483.
73. Hargous, Y., Hautbergue, G.M., Tintaru, A.M., Skrisovska, L., Golovanov, A.P., Stevenin, J., Lian, L.Y., Wilson, S.A. and Allain, F.H. (2006) Molecular basis of RNA recognition and TAP binding by the SR proteins SRp20 and 9G8. EMBO J., 25, 5126-5137.
74. Hunt, K.A., Mistry, V., Bockett, N.A., Ahmad, T., Ban, M., Barker, J.N., Barrett, J.C., Blackburn, H., Brand, O., Burren, O. et al. (2013) Negligible impact
of rare autoimmune-locus coding-region variants on missing heritability. Nature, 498, 232-235.
75. Aly, T.A., Ide, A., Jahromi, M.M., Barker, J.M., Fernando, M.S., Babu, S.R.,
Yu, L., Miao, D., Erlich, H.A., Fain, P.R. et al. (2006) Extreme genetic risk for type 1A diabetes. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A., 103, 14074-14079.
76. Yoshida, K., Sanada, M., Shiraishi, Y., Nowak, D., Nagata, Y., Yamamoto, R.,
Sato, Y., Sato-Otsubo, A., Kon, A., Nagasaki, M. et al. (2011) Frequent pathway
mutations of splicing machinery in myelodysplasia. Nature, 478, 64-69.
77. Pacheco, T.R., Moita, L.F., Gomes, A.Q., Hacohen, N. and Carmo-Fonseca, M. (2006) RNA interference knockdown of hU2AF35 impairs cell cycle progression and modulates alternative splicing of Cdc25 transcripts. Mol. Biol. Cell, 17, 4187-4199.
78. Kikin, O., D_Antonio, L. and Bagga, P.S. (2006) QGRS Mapper: a web-based server for predicting G-quadruplexes in nucleotide sequences. Nucleic Acids Res., 34, W676-W682.
【図１】
2020189849.tif 000025
【図２】
2020189849.tif 000026
【図３】
2020189849.tif 000027
【図４】
2020189849.tif 000028
【図５】
2020189849.tif 000029
【図６】
2020189849.tif 000030
【図７】
2020189849.tif 000031
【図８】
2020189849.tif 000032
【配列表】
2020189849000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年9月2日(2020.9.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリ核酸配列をコードするウイルスベクターを含む組成物であって、ポリ核酸配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列の少なくとも１０の連続した塩基に相補的な配列を含み、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物はタンパク質をコードしかつ保持されたイントロン全体を含み、ポリ核酸配列は、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物からの保持されたイントロン全体のスプライシングアウトを誘導する、前記組成物。
【請求項２】
ポリ核酸配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の野生型標的配列の少なくとも１０の連続した塩基に相補的な配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
野生型標的配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の保持されたイントロン全体の内部にある、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
野生型標的配列が、突然変異誘発性の異常なスプライス部位を含まない、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
標的配列がスプライス部位を含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
ポリ核酸配列が、少なくとも４５ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ポリ核酸配列が、イントロン・スプライシング活性を調節するタンパク質に結合する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
標的配列がヘアピン構造を形成している、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
ポリ核酸配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物のスプライス部位から約５〜３０塩基離れた配列にハイブリダイズする追加の配列を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
ウイルスベクターが、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を含む細胞を標的指向する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
ウイルスベクターが、特定の細胞を標的指向する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
ポリ核酸配列が、標準及び非標準ＲＮＡ構造の配座転移又はイントロンに結合するトランス作用因子との相互作用の１以上に干渉する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
保持されたイントロン全体を含む部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物が、疾患又は病態を誘発するか、疾患又は病態になりやすい性質を誘発する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
疾患又は病態が、Ｘ連鎖疾患である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ポリ核酸配列が、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の標的配列の少なくとも１３の連続した塩基に相補的な配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
スプライシングがヒト細胞内で生じる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物、及び医薬的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
遺伝子転写産物におけるイントロン保持の是正を含む、機能性タンパク質の産生低下又は不完全なスプライシングを特徴とする疾患又は病態を治療又は予防する方法に使用するための、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物の完全にプロセシングされた転写産物にコードされる全長機能型タンパク質の発現を増加させる、請求項１に記載の組成物。
【外国語明細書】
2020189849000001.pdf