(57)【要約】      （修正有）【課題】選択された細胞集団を標的としてメイタンシノイドを向かわせるための方法の提供。【解決手段】選択された細胞集団を含有すると推測される細胞集団または組織を、細胞結合物質メイタンシノイド複合体と接触させることを包含し、その場合１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは非開裂リンカー（例えば、下記式（Ｉ）で示されるＳＭＣＣ）を介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が選択された細胞集団の細胞に結合する方法。2020189854.tif 000086【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
選択された細胞集団を標的としてメイタンシノイドを向かわせるための方法であって、当該方法は選択された細胞集団を含有すると推測される細胞集団または組織を、細胞結合物質メイタンシノイド複合体と接触させることを包含し、ここで１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が選択された細胞集団の細胞に結合する、前記方法。
【請求項２】
非開裂リンカーが、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、またはジスルフィド結合の開裂に対して実質的に耐性がある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非開裂リンカーがイオウ原子を有していない、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
リンカーがジカルボン酸を基本とする部分から誘導される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
リンカーがα、ω−ジカルボン酸を基本とする部分から誘導され、ここで当該α、ω−ジカルボン酸は一般式ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨを有しており、式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
α、ω−ジカルボン酸が、アジピン酸、グルタル酸、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、またはシクロヘキセン−二酸である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
非開裂リンカーがイオウ原子を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
非開裂リンカーがマレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マ
レイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）から成る群より選択される、マレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
非開裂リンカーがＳＭＣＣから誘導される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
非開裂リンカーがハロアセチルを基本とする部分から誘導される、請求項７に記載の方
法。
【請求項１２】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトア
ミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）から成る群より選択される、ハロアセチルを基本とす
る部分から誘導される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
非開裂リンカーがＳＩＡＢから誘導される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
リンカーが、少なくとも１つのメイタンシノイドのＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルの基のいずれか１つにある、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニンを含有するエステルである、請求項１に記載の方法。  
【請求項１６】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−システインを含有するエステルである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ’−Ｌ）、（ＩＩ’−Ｄ）または（ＩＩ’−Ｄ，Ｌ）：
【化１】
2020189854.tif 000017
［式中：
Ｙ１’は
【化２】
2020189854.tif 000018
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが
双方ともゼロではない；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ−Ｌ）、（ＩＩ−Ｄ）、または（ＩＩ−Ｄ，Ｌ）：
【化３】
2020189854.tif 000019
［式中：
Ｙ１は
【化４】
2020189854.tif 000020
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができる；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１’：
【化５】
2020189854.tif 000021
［式中：
Ｙ１’は
【化６】
2020189854.tif 000022
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；そして
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない］
により表わされる請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１：
【化７】
2020189854.tif 000023
［式中：
Ｙ１は
【化８】
2020189854.tif 000024
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルまたはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；そして
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができる］
により表される、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ１である、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ３である、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ４である、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式５の化合物：
【化９】
2020189854.tif 000025
［式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式６の化合物：
【化１０】
2020189854.tif 000026
［式中、ｎは３から２４の整数を表し、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式７の化合物：
【化１１】
2020189854.tif 000027
［式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である］
を与える、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
細胞結合物質が、腫瘍細胞；ウイルスに感染した細胞、微生物に感染した細胞、寄生体に感染した細胞、自己免疫細胞、活性化細胞、骨髄細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはメラノサイト；ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡ、もしくはＨｅｒ−２抗原を発現する細胞；またはインスリン増殖因子受容体、表皮増殖因子受容体、もしくは葉酸受容体を発現する細胞に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
細胞結合物質が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、卵巣癌細胞、結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、扁平上皮癌細胞、小細胞肺癌細胞、精巣癌細胞、および神経芽腫細胞から成る群より選択される細胞に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、もしくはモノクローナル抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体、ドメイン抗体フラグメント、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、増殖因子、コロニー刺激因子、または栄養素を輸送する分子である、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
細胞結合物質が、インターフェロン、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ６、インスリン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、ステロイドホルモン、ソマトスタチン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、葉酸、トランスフェリン、エストロゲン、エストロゲン類似体、アンドロゲン、またはアンドロゲン類似体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、または抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾した（resurfaced）抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または表面再修飾した抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナ
ル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４４】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４６】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４７】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４８】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項４９】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項５０】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項５１】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項５２】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項５３】
細胞結合物質が、乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項５４】
細胞結合物質が、乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項５５】
細胞結合物質が、抗ＣａｎＡｇ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＡＬＬＡ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体、または抗Ｈｅｒ２抗体である、請求項１から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
細胞結合物質が、表面再修飾した抗体であるＭｙ９−６、ＫＳ７７、またはＮ９０１である、請求項１から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
細胞結合物質が、トラスツツマブ抗体、Ｂ４抗体、ｈｕＣ２４２抗体である、請求項１から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
細胞結合物質がｈｕＣ２４２抗体である、請求項１から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
細胞結合物質がトラスツツマブ抗体である、請求項１から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体より毒性が低い、請求項１に記載の方法。
【請求項６１】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、抗体単独の血漿クリアランスとほぼ等しい値を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６２】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の最大耐薬用量が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項１に記載の方法。
【請求項６３】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の生物学的活性の持続性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項１に記載の方法。
【請求項６４】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の抗原陰性細胞に対する活性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より低い、請求項１に記載の方法。
【請求項６５】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が最小のバイスタンダー活性を示す、請求項１に記載の方法。
【請求項６６】
細胞を排除する方法であって、当該方法は細胞を、細胞結合物質メイタンシノイド複合体と接触させることを包含し、ここで、１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が細胞に結合する、前記方法。
【請求項６７】
非開裂リンカーが、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、またはジスルフィド結合の開裂に対して実質的に耐性がある、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
非開裂リンカーがイオウ原子を有していない、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
リンカーがジカルボン酸を基本とする部分から誘導される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
リンカーがα、ω−ジカルボン酸を基本とする部分から誘導され、ここで当該α、ω−ジカルボン酸は一般式ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨを有しており、式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
α、ω−ジカルボン酸が、アジピン酸、グルタル酸、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、またはシクロヘキセン−二酸である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
非開裂リンカーがイオウ原子を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項７３】
非開裂リンカーがマレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マ
レイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）から成る群より選択される、マレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
非開裂リンカーがＳＭＣＣから誘導される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
非開裂リンカーがハロアセチルを基本とする部分から誘導される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトア
ミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）から成る群より選択される、ハロアセチルを基本とす
る部分から誘導される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
非開裂リンカーがＳＩＡＢから誘導される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
リンカーが、少なくとも１つのメイタンシノイドのＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルの基のいずれか１つにある、請求項６６に記載の方法。
【請求項８０】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニンを含有するエステルである、請求項６６に記載の方法。  
【請求項８１】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−システインを含有するエステルである、請求項６６に記載の方法。
【請求項８２】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ’−Ｌ）、（ＩＩ’−Ｄ）または（ＩＩ’−Ｄ，Ｌ）：
【化１２】
2020189854.tif 000028
［式中：
Ｙ１’は
【化１３】
2020189854.tif 000029
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項６６に記載の方法。
【請求項８３】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ−Ｌ）、（ＩＩ−Ｄ）、または（ＩＩ−Ｄ，Ｌ）：
【化１４】
2020189854.tif 000030
［式中：
Ｙ１は
【化１５】
2020189854.tif 000031
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができる；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項６６に記載の方法。
【請求項８６】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１’：
【化１６】
2020189854.tif 000032
［式中：
Ｙ１’は
【化１７】
2020189854.tif 000033
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；そして
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない］
により表される、請求項６６に記載の方法。
【請求項８９】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１：
【化１８】
2020189854.tif 000034
［式中：
Ｙ１は
【化１９】
2020189854.tif 000035
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルまたはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；そして
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができる］
により表される、請求項６６に記載の方法。
【請求項９２】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ１である、請求項６６に記載の方法。
【請求項９５】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ３である、請求項６６に記載の方法。
【請求項９６】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ４である、請求項６６に記載の方法。
【請求項９７】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式５の化合物：
【化２０】
2020189854.tif 000036
［式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項６６に記載の方法。
【請求項９８】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式６の化合物：
【化２１】
2020189854.tif 000037
［式中、ｎは３から２４の整数を表し、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項６６に記載の方法。
【請求項９９】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式７の化合物：
【化２２】
2020189854.tif 000038
［式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である］を与える、請求項６６に記載の方法。細胞結合物質が、腫瘍細胞；ウイルスに感染した細胞、微生物に感染した細胞、寄生体に感染した細胞、自己免疫細胞、活性化細胞、骨髄細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはメラノサイト；ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡ、もしくはＨｅｒ−２抗原を発現する細胞；またはインスリン増殖因子受容体、表皮増殖因子受容体、もしくは葉酸受容体を発現する細胞に結合する、請求項６３に記載の方法。
【請求項１００】
細胞結合物質が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、卵巣癌細胞、結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、扁平上皮癌細胞、小細胞肺癌細胞、精巣癌細胞、および神経芽腫細胞から成る群より選択される細胞に結合する、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０１】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、モノクローナル抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体、もしくはドメイン抗体フラグメント、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、増殖因子、コロニー刺激因子、または栄養素を輸送する分子である、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０２】
細胞結合物質が、インターフェロン、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ６、インスリン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、ステロイドホルモン、ソマトスタチン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、葉酸、トランスフェリン、エストロゲン、エストロゲン類似体、アンドロゲン、またはアンドロゲン類似体である、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０３】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、または抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０４】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾した抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または表面再修飾した抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０５】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０６】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０７】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表
面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０８】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１０９】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１０】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１１】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１２】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１３】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１４】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１５】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１６】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１７】
細胞結合物質が、乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１８】
細胞結合物質が、乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項６６に記載の方法。
【請求項１１９】
細胞結合物質が、抗ＣａｎＡｇ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＡＬＬＡ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体、または抗Ｈｅｒ２抗体である、請求項６６から９９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２０】
細胞結合物質が、表面再修飾した抗体であるＭｙ９−６、ＫＳ７７、またはＮ９０１である、請求項６６から９９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２１】
細胞結合物質が、トラスツツマブ抗体、Ｂ４抗体、ｈｕＣ２４２抗体である、請求項６６から９９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２２】
細胞結合物質がｈｕＣ２４２抗体である、請求項６６から９９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２３】
細胞結合物質が表面再修飾したＣ２４２抗体である、請求項６６から９９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２４】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体より毒性が低い、請求項６６に記載の方法。
【請求項１２５】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、抗体単独の血漿クリアランスとほぼ等しい値を有する、請求項６６に記載の方法。
【請求項１２６】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の最大耐薬用量が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項６６に記載の方法。
【請求項１２７】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の生物学的活性の持続性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項６６に記載の方法。
【請求項１２８】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の抗原陰性細胞に対する活性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より低い、請求項６６に記載の方法。
【請求項１２９】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が最小のバイスタンダー活性を示す、請求項６６に記載の方法。
【請求項１３０】
腫瘍、自己免疫疾患、移植片拒絶、移植片対宿主病、ウイルス感染、および寄生体感染から成る群より選択される病気の治療法であって、当該方法は細胞結合物質メイタンシノイド複合体の有効量を、治療を必要とする被験者に投与することを包含し、ここで１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が病気の罹患した細胞または感染した細胞に結合する、前記方法。
【請求項１３１】
腫瘍が、肺、乳房、結腸、前立腺、腎臓、膵臓、卵巣、およびリンパ系器官の癌から成る群より選択される、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
自己免疫疾患が、全身性狼瘡、慢性関節リウマチ、および多発性硬化症から成る群より選択される、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３３】
移植片拒絶が、腎移植拒絶、心移植拒絶、および骨髄移植拒絶から成る群より選択される、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３４】
ウイルス感染が、ＣＭＶ、ＨＩＶ、ＡＩＤＳから成る群より選択される、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３５】
寄生体感染が、ランブル鞭毛虫症、アメーバ症、住血吸虫症から成る群より選択される、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３６】
非開裂リンカーが、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、またはジスルフィド結合の開裂に対して実質的に耐性がある、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３７】
非開裂リンカーがイオウ原子を有していない、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３８】
リンカーがジカルボン酸を基本とする部分から誘導される、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
リンカーがα、ω−ジカルボン酸を基本とする部分から誘導され、ここで当該α、ω−ジカルボン酸は一般式ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨを有しており、式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
α、ω−ジカルボン酸が、アジピン酸、グルタル酸、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、またはシクロヘキセン−二酸である、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
非開裂リンカーがイオウ原子を有する、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４２】
非開裂リンカーがマレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マ
レイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）から成る群より選択される、マレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
非開裂リンカーがＳＭＣＣから誘導される、請求項１４３に記載の方法。
【請求項１４５】
非開裂リンカーがハロアセチルを基本とする部分から誘導される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４６】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトア
ミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）から成る群より選択される、ハロアセチルを基本とす
る部分から誘導される、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
非開裂リンカーがＳＩＡＢから誘導される、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
リンカーが、少なくとも１つのメイタンシノイドのＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルの基のいずれか１つにある、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４９】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニンを含有するエステルである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。  
【請求項１５０】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−システインを含有するエステルである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５１】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ’−Ｌ）、（ＩＩ’−Ｄ）または（ＩＩ’−Ｄ，Ｌ）：
【化２３】
2020189854.tif 000039
［式中：
Ｙ１’は
【化２４】
2020189854.tif 000040
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５２】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５４】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ−Ｌ）、（ＩＩ−Ｄ）、または（ＩＩ−Ｄ，Ｌ）：
【化２５】
2020189854.tif 000041
［式中：
Ｙ１は
【化２６】
2020189854.tif 000042
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができる；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５５】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり
、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５７】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１’：
【化２７】
2020189854.tif 000043
［式中：
Ｙ１’は
【化２８】
2020189854.tif 000044
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；そして
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない］
により表される、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５８】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６０】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１：
【化２９】
2020189854.tif 000045
［式中：
Ｙ１は
【化３０】
2020189854.tif 000046
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルまたはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；そして
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎは０であることができる］
により表される、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６１】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６２】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６３】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ１である、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６４】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ３である、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６５】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ４である請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６６】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式５の化合物：
【化３１】
2020189854.tif 000047
［式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６７】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式６の化合物：
【化３２】
2020189854.tif 000048
［式中、ｎは３から２４の整数を表し、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６８】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式７の化合物：
【化３３】
2020189854.tif 000049
［式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である］
を与える、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６９】
細胞結合物質が、罹患したまたは感染した病気の細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、または抗体フラグメントである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７０】
細胞結合物質が、罹患したまたは感染した病気の細胞に特異的に結合する表面再修飾した抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または表面再修飾した抗体フラグメントである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７１】
細胞結合物質が、罹患したまたは感染した病気の細胞に特異的に結合するヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメントである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７２】
細胞結合物質が、罹患したまたは感染した病気の細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７３】
細胞結合物質が、罹患したまたは感染した病気の細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７４】
細胞結合物質が、罹患したまたは感染した病気の細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項１３０から１３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７５】
細胞結合物質が、抗ＣａｎＡｇ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＡＬＬＡ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体、または抗Ｈｅｒ２抗体である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１７６】
細胞結合物質が、表面再修飾した抗体であるＭｙ９−６、ＫＳ７７、またはＮ９０１である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１７７】
細胞結合物質が、トラスツツマブ抗体、Ｂ４抗体、ｈｕＣ２４２抗体である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１７８】
細胞結合物質がｈｕＣ２４２抗体である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１７９】
細胞結合物質が表面再修飾したｈｕＣ２４２抗体である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１８０】
自己由来骨髄細胞を同一患者への移植前に、罹患した細胞もしくは腫瘍細胞を排除する目的で処理する；骨髄細胞を移植前に、コンピテントＴ細胞を排除し、そして移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防する目的で処理する；標的抗原を発現しない所望のバリアント以外のすべての細胞を排除する目的で細胞培養物を処理する；または所望でない抗原を発現するバリアントの細胞を排除する目的で細胞培養物を処理する；ためのin vitroで使用する方法であって、当該方法は細胞結合物質メイタンシノイド複合体の有効量で細胞を処理することを包含し、ここで１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が排除すべき細胞に結合する、前記方法。
【請求項１８１】
非開裂リンカーが、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、またはジスルフィド結合の開裂に対して実質的に耐性がある、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
非開裂リンカーがイオウ原子を有していない、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８３】
リンカーがジカルボン酸を基本とする部分から誘導される、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８４】
リンカーがα、ω−ジカルボン酸を基本とする部分から誘導され、ここで当該α、ω−ジカルボン酸が一般式ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨを有しており、式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、請求項１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
α、ω−ジカルボン酸が、アジピン酸、ピメリックグルタル酸(pimelicglutaric acid)、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、またはシクロヘキセン−二酸である、請求項１８４に記載の方法。
【請求項１８６】
非開裂リンカーがイオウ原子を有する、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８７】
非開裂リンカーがマレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マ
レイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノ
エート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）から成る群より選択される、マレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項１８７に記載の方法。
【請求項１８９】
非開裂リンカーがＳＭＣＣから誘導される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１９０】
非開裂リンカーがハロアセチルを基本とする部分から誘導される、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１９１】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトア
ミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）から成る群より選択される、ハロアセチルを基本とす
る部分から誘導される、請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９２】
非開裂リンカーがＳＩＡＢから誘導される、請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９３】
リンカーが、少なくとも１つのメイタンシノイドのＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルの基のいずれか１つにある、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１９４】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニンを含有するエステルである、請求項１８０に記載の方法。  
【請求項１９５】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−システインを含有するエステルである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１９６】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ’−Ｌ）、（ＩＩ’−Ｄ）または（ＩＩ’−Ｄ，Ｌ）：
【化３４】
2020189854.tif 000050
［式中：
Ｙ１’は
【化３５】
2020189854.tif 000051
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしく
はアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１９７】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９８】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９９】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ−Ｌ）、（ＩＩ−Ｄ）、または（ＩＩ−Ｄ，Ｌ）：
【化３６】
2020189854.tif 000052
［式中：
Ｙ１は
【化３７】
2020189854.tif 000053
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎは０であることができる；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２００】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項１９９に記載の方法。
【請求項２０１】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項１９９に記載の方法。
【請求項２０２】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１’：
【化３８】
2020189854.tif 000054
［式中：
Ｙ１’は
【化３９】
2020189854.tif 000055
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；そして
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない］
により表される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２０３】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０４】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０５】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１：
【化４０】
2020189854.tif 000056
［式中：
Ｙ１は
【化４１】
2020189854.tif 000057
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルまたはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる； 
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎは０であることができる；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２０６】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２０５に記載の方法。
【請求項２０７】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２０５に記載の方法。
【請求項２０８】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ１である、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２０９】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ３である、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１０】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ４である、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１１】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式５の化合物：
【化４２】
2020189854.tif 000058
［式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１２】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式６の化合物：
【化４３】
2020189854.tif 000059
［式中、ｎは３から２４の整数を表し、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１３】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式７の化合物：
【化４４】
2020189854.tif 000060
［式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である］
を与える、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１４】
細胞結合物質が、排除される細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、または抗体フラグメントである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１５】
細胞結合物質が、排除される細胞に特異的に結合する表面再修飾した抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または表面再修飾した抗体フラグメントである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１６】
細胞結合物質が、排除される細胞に特異的に結合するヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメントである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１７】
細胞結合物質が、排除される細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１８】
細胞結合物質が、排除される細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２１９】
細胞結合物質が、排除される細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２２０】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体より毒性が低い、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２２１】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、抗体単独の血漿クリアランスとほぼ等しい値を有する、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２２２】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の最大耐薬用量が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２２３】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の生物学的活性の持続性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２２４】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の抗原陰性細胞に対する活性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より低い、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２２５】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が最小のバイスタンダー活性を示す、請求項１８０に記載の方法。
【請求項２２６】
非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを有する細胞結合物質メイタンシノイド複合体、ただし細胞結合物質が抗体である場合、リンカーは以下から成る群：スクシンイミジル４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、およびＮ−スクシンイミジル−ヨードアセテート（ＳＩＡ）より選択される架橋物質からは誘導されない、前記複合体。
【請求項２２７】
非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを有する細胞結合物質メイタンシノイド複合体、ただし細胞結合物質が抗体ではない、前記複合体。
【請求項２２８】
非開裂リンカーが、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、またはジスルフィド結合の開裂に対して実質的に耐性がある、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２２９】
非開裂リンカーがイオウ原子を有していない、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３０】
リンカーがジカルボン酸を基本とする部分から誘導される、請求項２２９に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３１】
リンカーがα、ω−ジカルボン酸を基本とする部分から誘導され、ここで当該α、ω−ジカルボン酸は一般式ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨを有しており、式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、請求項２３０に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３２】
α、ω−ジカルボン酸が、アジピン酸、ピメリックグルタル酸、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、またはシクロヘキセン−二酸である、請求項２３１に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３３】
非開裂リンカーがイオウ原子を有する、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３４】
非開裂リンカーがマレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項２３３に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３５】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マ
レイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）から成る群より選択される、マレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項２３４に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３６】
非開裂リンカーがＳＭＣＣから誘導される、請求項２３５に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３７】
非開裂リンカーがハロアセチルを基本とする部分から誘導される、請求項２３３に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３８】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトア
ミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）から成る群より選択される、ハロアセチルを基本とす
る部分から誘導される、請求項２３７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２３９】
非開裂リンカーがＳＩＡＢから誘導される、請求項２３８に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４０】
リンカーが、少なくとも１つのメイタンシノイドのＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルの基のいずれか１つにある、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４１】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニンを含有するエステルである、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。  
【請求項２４２】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−システインを含有するエステルである、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４３】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ’−Ｌ）、（ＩＩ’−Ｄ）または（ＩＩ’−Ｄ，Ｌ）：
【化４５】
2020189854.tif 000061
［式中：
Ｙ１’は
【化４６】
2020189854.tif 000062
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４４】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２４３に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４５】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２４３に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４６】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ−Ｌ）、（ＩＩ−Ｄ）、または（ＩＩ−Ｄ，Ｌ）：
【化４７】
2020189854.tif 000063
［式中：
Ｙ１は
【化４８】
2020189854.tif 000064
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができる；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４７】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２４６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４８】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２４６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２４９】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１’：
【化４９】
2020189854.tif 000065
［式中：
Ｙ１’は
【化５０】
2020189854.tif 000066
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである； 
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５０】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２４９に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５１】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２４９に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５２】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１：
【化５１】
2020189854.tif 000067
［式中：
Ｙ１は
【化５２】
2020189854.tif 000068
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルまたはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；そして
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎは０であることができる］
により表される、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５３】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項２５２に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５４】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項２５２に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５５】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ１である、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５６】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ３である、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５７】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ４である、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５８】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式５の化合物：
【化５３】
2020189854.tif 000069
［式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２５９】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式６の化合物：
【化５４】
2020189854.tif 000070
［式中、ｎは３から２４の整数を表し、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６０】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式７の化合物：
【化５５】
2020189854.tif 000071
［式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である］
を与える、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６１】
細胞結合物質が、腫瘍細胞；ウイルスに感染した細胞、微生物に感染した細胞、寄生体に感染した細胞、自己免疫細胞、活性化細胞、骨髄細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはメラノサイト；ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡ、もしくはＨｅｒ−２抗原を発現する細胞；またはインスリン増殖因子受容体、表皮増殖因子受容体、もしくは葉酸受容体を発現する細胞に結合する、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６２】
細胞結合物質が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、卵巣癌細胞、結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、扁平上皮癌細胞、小細胞肺癌細胞、精巣癌細胞、および神経芽腫細胞から成る群より選択される細胞に結合する、請求項２６１に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６３】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、モノクローナル抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体、ドメイン抗体フラグメント、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、増殖因子、コロニー刺激因子、または栄養素を輸送する分子である、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６４】
細胞結合物質が、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、増殖因子、コロニー刺激因子、または栄養素を輸送する分子である、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６５】
細胞結合物質が、インターフェロン、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ６、インスリン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、ステロイドホルモン、ソマトスタチン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、葉酸、トランスフェリン、エストロゲン、エストロゲン類似体、アンドロゲン、またはアンドロゲン類似体である、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６６】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、または抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６７】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾した抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または表面再修飾した抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合
物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６８】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２６９】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７０】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７１】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体法。
【請求項２７２】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７３】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７４】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の方法。
【請求項２７５】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７６】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７７】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７８】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２７９】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８０】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８１】
細胞結合物質が、乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８２】
細胞結合物質が、抗ＣａｎＡｇ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＡＬＬＡ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体、または抗Ｈｅｒ２抗体である、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８３】
メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ２、またはＤＭ３である、請求項２８２に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８４】
細胞結合物質が、表面再修飾した抗体であるＭｙ９−６、ＫＳ７７、またはＮ９０１である、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８５】
メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ２、またはＤＭ３である、請求項２８４に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８６】
細胞結合物質が、トラスツツマブ抗体、Ｂ４抗体、ｈｕＣ２４２抗体である、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８７】
メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ２、またはＤＭ３である、請求項２８６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８８】
細胞結合物質がｈｕＣ２４２抗体である、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２８９】
細胞結合物質が表面再修飾したＣ２４２抗体である、請求項２２６に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２９０】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体より毒性が低い、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２９１】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、抗体単独の血漿クリアランスとほぼ等しい値を有する、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２９２】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の最大耐薬用量が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２９３】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の生物学的活性の持続性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシ
ノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２９４】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の抗原陰性細胞に対する活性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より低い、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２９５】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が最小のバイスタンダー活性を示す、請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項２９６】
請求項２２６の細胞結合物質メイタンシノイド複合体、および担体を包含する組成物。
【請求項２９７】
請求項２２７の細胞結合物質メイタンシノイド複合体、および担体を包含する組成物。
【請求項２９８】
非開裂リンカーが、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、またはジスルフィド結合の開裂に対して実質的に耐性がある、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項２９９】
非開裂リンカーがイオウ原子を有していない、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３００】
リンカーがジカルボン酸を基本とする部分から誘導される、請求項２９９に記載の組成物。
【請求項３０１】
リンカーがα、ω−ジカルボン酸を基本とする部分から誘導され、ここで当該α、ω−ジカルボン酸は一般式ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨを有しており、式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、請求項３００に記載の組成物。
【請求項３０２】
α、ω−ジカルボン酸が、アジピン酸、ピメリックグルタル酸、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、またはシクロヘキセン−二酸である、請求項３０１に記載の組成物。
【請求項３０３】
非開裂リンカーがイオウ原子を有する、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３０４】
非開裂リンカーがマレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項３０３に記載の組成物。
【請求項３０５】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マ
レイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエス
テル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）から成る群より選択される、マレイミドを基本とする部分から誘導される、請求項３０４に記載の組成物。
【請求項３０６】
非開裂リンカーがＳＭＣＣから誘導される、請求項３０５に記載の組成物。
【請求項３０７】
非開裂リンカーがハロアセチルを基本とする部分から誘導される、請求項３０３に記載の組成物。
【請求項３０８】
非開裂リンカーが、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトア
ミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）から成る群より選択される、ハロアセチルを基本とす
る部分から誘導される、請求項３０７に記載の組成物。
【請求項３０９】
非開裂リンカーがＳＩＡＢから誘導される、請求項３０８に記載の組成物。
【請求項３１０】
リンカーが、少なくとも１つのメイタンシノイドのＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルの基のいずれか１つにある、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３１１】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニンを含有するエステルである、請求項２９６または２９７に記載の組成物。  
【請求項３１２】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、メイタンシノールのＮ−メチル−システインを含有するエステルである、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３１３】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ’−Ｌ）、（ＩＩ’−Ｄ）または（ＩＩ’−Ｄ，Ｌ）：
【化５６】
2020189854.tif 000072
［式中：
Ｙ１’は
【化５７】
2020189854.tif 000073
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３１４】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項３１３に記載の組成物。
【請求項３１５】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項３１３に記載の組成物。
【請求項３１６】
少なくとも１つのメイタンシノイドが、式（ＩＩ−Ｌ）、（ＩＩ−Ｄ）、または（ＩＩ−Ｄ，Ｌ）：
【化５８】
2020189854.tif 000074
［式中：
Ｙ１は
【化５９】
2020189854.tif 000075
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎは０であることができる；そして
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す］
により表される、請求項２９６または２９９に記載の組成物。
【請求項３１７】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項３１６に記載の組成物。
【請求項３１８】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項３１６に記載の組成物。
【請求項３１９】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１’：
【化６０】
2020189854.tif 000076
［式中：
Ｙ１’は
【化６１】
2020189854.tif 000077
を表し、
式中：
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる；
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである；そして
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない］
により表わされる請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３２０】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項３１９に記載の組成物。
【請求項３２１】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０で
ある、請求項３１９に記載の組成物。
【請求項３２２】
少なくとも１つのメイタンシノイドが式４１：
【化６２】
2020189854.tif 000078
［式中：
Ｙ１は
【化６３】
2020189854.tif 000079
を表し、式中：
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルまたはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる；そして
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎは０であることができる］
により表される、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３２３】
Ｒ１がメチルでありＲ２がＨである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、請求項３２３に記載の組成物。
【請求項３２４】
Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；またはＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、請求項３２３に記載の組成物。
【請求項３２５】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ１である、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３２６】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ３である、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３２７】
少なくとも１つのメイタンシノイドがＤＭ４である、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３２８】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式５の化合物：
【化６４】
2020189854.tif 000080
［式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３２９】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式６の化合物：
【化６５】
2020189854.tif 000081
［式中、ｎは３から２４の整数を表し、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する］
を与える、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３３０】
メイタンシノイドが、イオウを含有しない架橋物質で修飾され、式７の化合物：
【化６６】
2020189854.tif 000082
［式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である］
を与える、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３３１】
細胞結合物質が、腫瘍細胞；ウイルスに感染した細胞、微生物に感染した細胞、寄生体に感染した細胞、自己免疫細胞、活性化細胞、骨髄細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはメラノサイト；ＣＤ３３、ＣＤ１９、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡ、もしくはＨｅｒ−２抗原を発現する細胞；またはインスリン増殖因子受容体、表皮増殖因子受容体、もしくは葉酸受容体を発現する細胞に結合する、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３３２】
細胞結合物質が、乳癌細胞、前立腺癌細胞、卵巣癌細胞、結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、扁平上皮癌細胞、小細胞肺癌細胞、精巣癌細胞、および神経芽腫細胞から成る群より選択される細胞に結合する、請求項３３１に記載の組成物。
【請求項３３３】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、モノクローナル抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体、ドメイン抗体フラグメント、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、増殖因子、コロニー刺激因子、または栄養素を輸送する分子である、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３３４】
細胞結合物質が、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、増殖因子、コロニー刺激因子、または栄養素を輸送する分子である、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３３５】
細胞結合物質が、インターフェロン、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ６、インスリン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、ステロイドホルモン、ソマトスタチン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、葉酸、トランスフェリン、エストロゲン、エストロゲン類似体、アンドロゲン、またはアンドロゲン類似体である、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３３６】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する抗体、単鎖抗体、または抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３３７】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾した抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または表面再修飾した抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３３８】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３３９】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４０】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４１】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４２】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４３】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４４】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４５】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４６】
細胞結合物質が、腫瘍細胞に特異的に結合するキメラ抗体、キメラ抗体フラグメント、ドメイン抗体、またはドメイン抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４７】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４８】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３４９】
細胞結合物質が、結腸直腸癌細胞または乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３５０】
細胞結合物質が、乳癌細胞に特異的に結合する表面再修飾したモノクローナル抗体、表面再修飾した単鎖モノクローナル抗体、または表面再修飾したモノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３５１】
細胞結合物質が、乳癌細胞に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体、ヒト化単鎖モノクローナル抗体、またはヒト化モノクローナル抗体フラグメントである、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３５２】
細胞結合物質が、抗ＣａｎＡｇ抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＡＬＬＡ
抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体、または抗Ｈｅｒ２抗体である、請求項２９６項に記載の組成物。
【請求項３５３】
メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ２、またはＤＭ３である、請求項３５２に記載の組成物。
【請求項３５４】
細胞結合物質が、表面再修飾した抗体であるＭｙ９−６、ＫＳ７７、またはＮ９０１である、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３５５】
メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ２、またはＤＭ３である、請求項３５４に記載の組成物。
【請求項３５６】
細胞結合物質が、トラスツツマブ抗体、Ｂ４抗体、ｈｕＣ２４２抗体である、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３５７】
メイタンシノイドがＤＭ１、ＤＭ２、またはＤＭ３である、請求項３５６に記載の組成物。
【請求項３５８】
細胞結合物質がｈｕＣ２４２抗体である、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３５９】
細胞結合物質が表面再修飾したｈｕＣ２４２抗体である、請求項２９６に記載の組成物。
【請求項３６０】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体より毒性が低い、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３６１】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が、抗体単独の血漿クリアランスとほぼ等しい値を有する、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３６２】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の最大耐薬用量が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３６３】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の生物学的活性の持続性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より大きい、請求項２９６または２９７に記載の組成物。
【請求項３６４】
非開裂リンカーを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の抗原陰性細胞に対する活性が、開裂可能なリンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを包含する細胞結合物質メイタンシノイド複合体の値より低い、請求項２９６または２９７に記載の方法。
【請求項３６５】
細胞結合物質メイタンシノイド複合体が最小のバイスタンダー活性を示す、請求項２９６または２９７に記載の方法。
【請求項３６６】
請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体を製造する方
法であって、当該方法は以下：
（ａ）細胞結合物質を提供する
（ｂ）細胞結合物質を架橋物質で修飾する、そして
（ｃ）修飾された細胞結合物質を、メイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドと複合体化させ、それにより細胞結合物質、およびメイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドの間に非開裂リンカーを提供して、複合体を生成するを包含する前記方法。
【請求項３６７】
請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体を製造する方法であって、当該方法は以下：
（ａ）メイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドを提供する
（ｂ）メイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドを架橋物質で修飾し、それにより非開裂リンカーを形成する、そして
（ｃ）修飾されたメイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドを、細胞結合物質と複合体化させ、それにより細胞結合物質、およびメイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドの間に非開裂リンカーを提供して、複合体を生成するを包含する前記方法。
【請求項３６８】
請求項２２６または２２７に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体を製造する方法であって、当該方法は以下：
（ａ）メイタンシノイドを提供する、
（ｂ）メイタンシノイドを、イオウを含有しない架橋物質で修飾して、メイタンシノイドエステルを得る、そして
（ｃ）メイタンシノイドエステルを細胞結合物質と複合体化させ、それにより細胞結合物質およびメイタンシノイド間に非開裂リンカーを提供して、複合体を生成する
を包含する前記方法。
【請求項３６９】
式５：
【化６７】
2020189854.tif 000083
の化合物であって、
式中Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そしてｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カ
ルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する、前記化合物。
【請求項３７０】
式６：
【化６８】
2020189854.tif 000084
の化合物であって、
式中、ｎは３から２４の整数を表し、そしてＥはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルおよびスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ならびにスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する、前記化合物。
【請求項３７１】
式７の化合物：
【化６９】
2020189854.tif 000085
式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である、前記化合物。
【請求項３７２】
以下の式：
トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−メイタンシノイド
の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項３７３】
以下の式：
トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１
の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。  
【請求項３７４】
以下の式：
ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−メイタンシノイド
の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項３７５】
以下の式：
ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１
の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[01]本出願は、２００３年１０月１０日に提出された米国仮特許出願第６０/５０９，
９０１号の利益を主張し、その全開示を参照として援用する。
【０００２】
（発明の技術分野）
[02]本発明に即した方法は、非開裂(non-cleavable)リンカーを介して連結した細胞結
合物質(cell-binding agent)メイタンシノイド複合体を用いて特定の細胞集団を標的とすることに関する。本発明に即したもう１つの方法は、複合体を製造する方法である。本発明に即した組成物は、メイタンシノイドが非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結される、新規の細胞結合物質メイタンシノイド複合体に関する。本発明に即したもう１つの組成物は、新規メイタンシノイドエステルに関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
[03]メイタンシノイドは高い細胞毒性のある薬剤である。メイタンシンは、Kupchan らにより東部アフリカの低木、メイテナス  セラタ(Maytenus serrata)より最初に単離され、メトトレキサート、ダウノルビシン、およびビンクリスチンのような従来の癌の化学療法薬より１００倍から１０００倍高い細胞毒性があることが示された（米国特許第３，８６９，１１１号）。その後、いくつかの微生物もまたメイタンシノイド、例えばメイタンシノール(maytansinol)およびメイタンシノールのＣ−３エステルを産生することが発見
された（米国特許第４，１５１，０４２号）。メイタンシノールの合成Ｃ−３エステルおよびメイタンシノールの類似体についても報告された（Kupchan et al., 21 J. Med. Chem. 31-37 (1978); Hiashide et al. 270 Nature 721-722 (1977); Kawai et al., 32 Chem. Pharm. Bull. 3441-3451 (1984)）。Ｃ−３エステルが調製されたメイタンシノールの類似体の例は、芳香環上（例えばデクロロ）またはＣ−９、Ｃ−１４（例えばヒドロキシル化したメチル基）、Ｃ−１５、Ｃ−１８、Ｃ−２０およびＣ−４，５に修飾を伴うメイタンシノールを含む。
【０００４】
[04]天然に生成されるＣ−３エステルおよび合成Ｃ−３エステルは以下の２つの群に分類することができる：
（ａ）シンプルなカルボン酸を用いてのＣ−３エステル（米国特許第４，２４８，８７０号；４，２６５，８１４号；４，３０８，２６８号；４，３０８，２６９号；４，３０９，４２８号；４，３１７，８２１号；４，３２２，３４８号；および４，３３１，５９８号）、ならびに
（ｂ）Ｎ−メチル−Ｌ−アラニンの誘導体を用いてのＣ−３エステル（米国特許第４，１３７，２３０号および４，２６０，６０８号；およびKawai et al., 32 Chem. Pharm. Bull. 3441-3451 (1984)）。
【０００５】
[05]（ｂ）群のエステルは、（ａ）のエステルよりずっと強い細胞毒性があることが発見された。
[06]メイタンシンは有糸分裂の阻害薬である。in vivo でのＬ１２１０細胞のメイタンシンによる処置は、細胞の６７％を有糸分裂状態に蓄積させることになることが報告された。未処置のコントロール細胞は３．２から５．８％の間の範囲の分裂係数を示すことが報告された（Sieber et al., 43 Bibl. Haematol. 495-500 (1976)）。ウニの卵およびカイ類の卵による実験は、メイタンシンが微小管タンパク質であるチューブリンの重合を阻害することを通して微小管の形成を妨げることにより、有糸分裂を阻害することを示唆し
た（Remillard et al., 189 Science 1002-1005 (1975)）。
【０００６】
[07]in vitro では、Ｐ３８８、Ｌ１２１０、およびＬＹ５１７８のネズミ白血病細胞
の懸濁液が、最も感受性の高いＰ３８８株にてメイタンシンにより１０−３から１０−１μｇ/ｍｌの用量で阻害されることが発見された。メイタンシンはまた、ヒト鼻咽腔癌細
胞のin vitro での成長の活性な阻害薬であることも示され、またヒト急性リンパ芽球性
白血病株Ｃ．Ｅ．Ｍ．が、１０−７μｇ/ｍｌという低濃度により阻害されると報告され
た（Wolpert-DeFillippes et a., 24 Biochem. Pharmacol. 1735-1738 (1975)）。
【０００７】
[08]メイタンシンはまたin vivoで活性であることも示された。Ｐ３８８リンパ性白血
病系における腫瘍の成長が５０から１００倍の投与量の範囲にわたり阻害されることが示され、、このことは高い治療係数を示唆した；また有意な阻害活性を、Ｌ１２１０マウス白血病系、ヒトルイス肺癌系、およびヒトＢ−１６黒色癌系にて示すことができた（Kupchan, 33 Ped. Proc 2288-2295 (1974)）。
【０００８】
[09]メイタンシノイドは高い細胞毒性があるため、多くの疾患、例えば癌の治療における使用が期待された。この期待にはなお証明がなされなければならない。メイタンシンを用いての臨床的試みは、いくつかの副作用のために好ましいとは言えなかった（Issel et
al., 5 Cancer Teat. Rev. 199-207 (1978)）。中枢神経系および胃腸症状への副作用が、一部の患者のさらなる治療を断念する原因であり(Issel 204にて)、蓄積性であると思
われる末梢性ニューロパチーにメイタンシンが関与するようであった (Issel 207にて)。
【０００９】
[10]そのため標的細胞に選択的に薬剤を送達する標的技術が利用された。開裂可能なリンカーおよび非開裂リンカーの双方が、数種の薬剤について調査されたが、メイタンシノイドの場合を含むほとんどの場合、in vitro の細胞毒性検査により、抗体−薬剤複合体
がフリーの複合体化していない薬剤と同程度の細胞毒性の効能をほとんど達成できないことが明らかになった。したがってメイタンシノイドの標的への送達が有効であるには、メイタンシノイドおよび細胞結合物質間の結合は開裂可能でなければならないことが、一般に受け入れられることとなった。
【００１０】
[11]さらに免疫毒性の分野において、モノクローナル抗体および触媒的に活性なタンパク質の毒素間にジスルフィドの架橋によるリンカーを含有する複合体は、他のリンカーを含有する複合体に比してより細胞毒性があることが示された。Lambert et al., 260 J. Biol. Chem. 12035-12041 (1985); Lambert et al., Immunotoxins 175-209 (A. Frankel
編、1988)、およびGhetie et al., 48 Cancer Res. 2610-2617 (1988)を参照のこと。こ
のことは、抗体分子および毒素間のジスルフィド結合の効率的な開裂に寄与するグルタチオンの高い細胞内濃度によるものであった。より最近、非開裂リンカーＳＭＣＣを介して抗Ｈｅｒ２乳癌抗体ＴＡ．１に連結したメイタンシノイドの複合体は、開裂可能なジスルフィド結合を有するリンカーを介してＴＡ．１を連結したメイタンシノイドの複合体に比して２００分の１の効能であることが示された（Chari et al., 52 Cancer Res. 127-133
(1992)）。
【００１１】
[12]したがってジスルフィドを含有する開裂可能なリンカーを介して連結した細胞毒性の複合体が探求されてきた。Shenらは、メトキサレートのメルカプトエチルアミド誘導体への変換に続いて、ジスルフィド結合を介してのポリ−Ｄ−リジンと複合体化させることについて記載した（260 J. Biol. Chem. 10905-10908 (1985)）。トリスルフィドを含有
する毒性薬剤であるカリケアマイシンの、抗体との複合体の調製についても記載された（Menendez et al., Fourth International Conference on Monoclonal Antibody Immunoconjugates for Cancer, San Diego, Abstract 81 (1989)）。
【００１２】
[13]米国特許第５，２０８，０２０号および５，４１６，０６４号（その全開示を特に本明細書において参照として援用する）は、開裂可能なリンカー、例えばジスルフィド基を含有するリンカー、酸に不安定な基を含有するリンカー、光に不安定な基を含有するリンカー、ペプチダーゼに不安定な基を含有するリンカー、およびエステラーゼに不安定な基を含有するリンカーを介して特定のメイタンシノイド誘導体に連結した、細胞結合物質を包含する細胞毒性複合体を開示している。
【００１３】
[14]米国特許第６，３３３，４１０  Ｂ１号（その全開示を特に本明細書において参照として援用する）は、細胞結合物質に連結するための、チオールを含有するメイタンシノイドを調製および精製するための方法を開示しており、米国特許第６，４４１，１６３  Ｂ１号（その全開示を特に本明細書において参照として援用する）は、リンカーがジスルフィドを含有する開裂可能なリンカーである、メイタンシノイドおよび細胞結合物質の細胞毒性複合体を調製するための１段階での方法を開示している。
【００１４】
[15]さらに米国特許第５，２０８，０２０号は、リンカーがマレイミド基を包含する非開裂リンカーを用いての抗体−メイタンシノイド複合体について示している。しかし、この参考文献はそのような複合体が疾患の治療に有効であることを立証する実験データを含有していない。
【００１５】
[16]今回意外にも、非開裂リンカーを介して連結したメイタンシノイドおよび細胞結合物質の細胞毒性複合体が極めて効能があり、多くの場合において、開裂可能なリンカーを用いたメイタンシノイドおよび細胞結合物質の複合体を上回る予想外の有利な点を有することを発見した。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の概要）
[17]以下に記載する本発明の説明のための非限定的な態様は、上の不都合な点および上に記載していないその他の不都合な点を克服するものである。その上本発明は上に記載した不都合な点を克服する必要がなく、以下に記載する本発明の説明のための非限定的な態様は、上に記載したいずれの問題点も克服していなくてよい。
【００１７】
[18]本発明の１つの側面は、選択された細胞集団由来の細胞を含有すると推測される細胞集団または組織を、細胞結合物質メイタンシノイド複合体と接触させることを包含する、前記の選択された細胞集団を標的としてメイタンシノイドを向かわせるための方法であり、その場合１つまたはそれより多くのメイタンシノイドが非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結されている。
【００１８】
[19]本発明のもう１つの側面は、標的に向かう物質が細胞結合物質である標的療法により治療することのできる、腫瘍、自己免疫疾患、移植片拒絶、移植片対宿主病、ウイルス感染、寄生体感染、およびその他の疾患の治療のための方法であって、当該方法は１つまたはそれより多くのメイタンシノイドが細胞結合物質に連結されている細胞結合物質メイタンシノイド複合体、または医薬的に受容可能な前記複合体の製剤もしくは溶媒和物の有効量を、治療を必要とする被験者に投与することを包含する、前記方法である。
【００１９】
[20]本発明のもう１つの側面は、１つまたはそれより多くのメイタンシノイドが非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結されている、細胞結合物質メイタンシノイド複合体である。
【００２０】
[21]本発明のもう１つの側面は、上記記載の複合体を包含する組成物である。
[22]本発明のもう１つの側面は、上記記載の複合体を製造する方法である。
[23]本発明のもう１つの側面は、新規メイタンシノイドエステルである。
【００２１】
（発明の例としての態様の詳細な説明）
[54]当該技術分野は、現存する薬剤をそれらの細胞毒性の効能を低下させずに修飾することが極めて困難であることを露呈している。しかし米国特許第６，４４１，１６３  Ｂ１号、６，３３３，４１０  Ｂ１号、５，４１６，０６４号および５，２０８，０２０号は、開裂可能なリンカー、特にジスルフィド基を含有する開裂可能なリンカーを介して、メイタンシノイドを適当な細胞結合物質に連結することにより、効能ある細胞毒性物質を生成することができることを立証している。細胞結合物質メイタンシノイド複合体は、望ましくない細胞のみ標的とする形で適用して、それにより標的ではない健康な細胞に損傷を与えることによる副作用を避けるための、メイタンシノイドの十分な細胞毒性の作用を可能にする。
【００２２】
[55]本発明者らは非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結したメイタンシノイドが、いくつかの重要な点において開裂可能なリンカーを介して連結したメイタンシノイドより優れていることを、意外にも発見した。特に開裂可能なリンカーを含有する複合体と比較した場合、非開裂リンカーを用いた複合体は、in vitro およびin vivoの双方において等しい抗腫瘍活性を示すが、血漿クリアランスの速度および毒性においては著明な低減が立証されている。
【００２３】
[56]このように本発明は、副作用を最小限に抑えながら、標的とする細胞、特に破壊すべき細胞、例えば腫瘍細胞（特に固形腫瘍細胞）、ウイルスに感染した細胞、微生物に感染した細胞、寄生体に感染した細胞、自己免疫細胞（自己抗体を産生する細胞）、活性化細胞（移植片拒絶または移植片対宿主病に伴うもの）、または他のあらゆるタイプの罹患した細胞または異常な細胞に関する、改善された方法を提供する。
【００２４】
[57]本発明の方法において使用する複合体は、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結した１つまたはそれより多くのメイタンシノイドを有する。複合体を製造する１つの方法において、細胞結合物質  例えば抗体を、細胞結合物質  例えばＳＭＣＣで初めに修飾する。第２のステップでチオール基を有する反応性のメイタンシノイド  例えばＤＭ１を、修飾した抗体と反応させて、抗体−メイタンシノイド複合体を生成する。あるいはメイタンシノイドを架橋試薬で修飾した後、細胞結合物質と反応させることもできる。例えば米国特許第６，４４１，１６３  Ｂ１号を参照のこと。
【００２５】
（適切なメイタンシノイド）
[58]本発明における使用に適するメイタンシノイドは当該技術分野で周知であり、公知の方法に従って天然素材から単離する、遺伝子工学技術を用いて産生する（Yu et al., 99 PNAS 7968-7973 (2002)を参照のこと）、または公知の方法に従って合成により調製す
ることができる。
【００２６】
[59]適切なメイタンシノイドの例は、メイタンシノールおよびメイタンシノール類似体を含む。適切なメイタンシノール類似体の例は、修飾された芳香環を有するもの、および他の位置に修飾を有するものを含む。
【００２７】
[60]修飾された芳香環を有する適切なメイタンシノール類似体の具体的な例は以下を含む：
（１）Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４，２５６，７４６号）（アンサマイトシンＰ２のＬＡＨ還元により調製）；
（２）Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋/−Ｃ−１９−デクロロ
（米国特許第４，３６１，６５０号および４，３０７，０１６号）（ストレプトマイセス(Streptomyces)もしくはアクチノマイセス(Actinomyces)を用いての脱メチル化またはＬ
ＡＨを用いての脱クロロ化により調製）；ならびに
（３）Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋/−デクロ
ロ（米国特許第４，２９４，７５７号）（塩化アシルを用いてのアシル化により調製）。
【００２８】
[61]他の位置の修飾を有する適切なメイタンシノール類似体の具体的な例は以下を含む：
（１）Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４，４２４，２１９号）（メイタンシノールのＨ２ＳまたはＰ２Ｓ５との反応により調製）；
（２）Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ/ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４，３３
１，５９８号）；
（３）Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４，４５０，２５４号）（ノカディア(Nocardia)より調製）；
（４）Ｃ−１５−ヒドロキシ/アシルオキシ（米国特許第４，３６４，８６６号）（ス
トレプトマイセスによるメイタンシノールの変換により調製）；
（５）Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４，３１３，９４６号および４，３１５，９２９号）（トレウィアヌドルフローラ(Trewia nudlflora)より単離）；
（６）Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４，３６２，６６３号および４，３２２，３４８号）（ストレプトマイセスによるメイタンシノールの脱メチル化により調製）；ならびに
（７）４，５−デオキシ（米国特許第４，３７１，５３３号）（メイタンシノールの三塩化チタン/ＬＡＨ還元により調製）。
【００２９】
[62]連結のタイプに依存して、メイタンシノールの多くの位置が結合位置として有用であることが知られている。例えばエステル結合を形成するためには、ヒドロキシル基を有するＣ−３の位置、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４の位置、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５の位置、およびヒドロキシル基を有するＣ−２０の位置が、すべて適する。しかしＣ−３の位置が好ましく、メイタンシノールのＣ−３の位置が特に好ましい。
【００３０】
[63]本発明に従って、好ましいメイタンシノイドはフリーのチオール基を有する。フリーのチオール基を包含する特に好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノールのＣ−３エステルおよびその類似体である、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニンを含有するエステル、Ｎ−メチル−システインを含有するエステルを含む。好ましいエステルは、メイタンシノールのＮ−メチル−アラニン−を含有するエステル、およびＮ−メチル−システイン−を含有するエステルを含む。フリーのチオール基を有するメイタンシノールのエステルの合成は、以前に、例えば米国特許第５，２０８，０２０号、Chari et al., 52 Cancer Res., 127-131 (1992)、およびLiu et al., 93 Proc Natl. Acad. Sci., 8618-8623 (1996)に記載されている。さらに米国特許第６，３３３，４１０、Ｂ１号（その全開示を本明細書により参照として援用する）は、細胞結合物質への連結に適するチオールを含有するメイタンシノイドの調製および精製に関する改善された方法を提供している。
【００３１】
[64]以下に例示する本発明の複合体の多くは、化学式ではＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−(３−メルカプト−１−オキソプロピル)−メイタンシンと表す、チオールを含有するメイタンシノイドＤＭ１を利用する。ＤＭ１は以下の構造式：
【００３２】
【化１】
2020189854.tif 000002
【００３３】
で表される。
[65]チオールを含有するメイタンシノイドＤＭ１の合成は以前に記載されている（米国特許第５，２０８，０２０号）。
【００３４】
[66]米国特許出願１０/８４９，１３６（その全開示を本明細書により参照として援用
する）は、チオール官能基(funationality)を持つα−炭素上に１つまたは２つのアルキ
ル置換基を持つ、立体障害のチオールを含有するメイタンシノイドについて記載している。加えてスルフヒドリル基を持つメイタンシノイドのアシル化されたアミノ酸側鎖のアシル基は、アミドのカルボニル基とイオウ原子との間に少なくとも３つの炭素原子の直鎖を保有する。これらの新規メイタンシノイドは、本発明における使用に適する。
【００３５】
[67]立体障害のチオール基を有するメイタンシノイドの合成は、米国特許出願１０/８
４９，１３６号、特に同文献の図３を参照として記載することができる。
[68]本発明の１つの側面において、メイタンシノイドは立体障害のチオール基を含有し、式（ＩＩ’−Ｌ）、（ＩＩ’−Ｄ）、または（ＩＩ’−Ｄ，Ｌ）：
【００３６】
【化２】
2020189854.tif 000003
【００３７】
により表される。式（ＩＩ’）において、
Ｙ１’は
【００３８】
【化３】
2020189854.tif 000004
【００３９】
を表す。
Ａ、Ｂ、およびＤは各々独立して、３から１０の炭素原子を有する環式アルキルもしくは環式アルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである。
【００４０】
Ｒ１からＲ１２は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ１２はＨであることができる。
【００４１】
ｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは各々独立して、０または１から５の整数である、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つが双方ともゼロではない。
【００４２】
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す。
[69]本発明に有用なもう１つのメイタンシノイドは、式（ＩＩ−Ｌ）、（ＩＩ−Ｄ）、または（ＩＩ−Ｄ，Ｌ）：
【００４３】
【化４】
2020189854.tif 000005
【００４４】
により表される。式（ＩＩ）において、
Ｙ１は
【００４５】
【化５】
2020189854.tif 000006
【００４６】
を表す。
Ｒ１からＲ８は各々独立して、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルまたはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖または環式のアルキルまたはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、複素環式芳香族またはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして加えてＲ２からＲ８はＨであることができる。
【００４７】
ｌ、ｍ、およびｎは各々独立して、１から５の整数であり、そして加えてｎは０であることができる。
ＭａｙはＣ−３ヒドロキシル、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシルまたはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノールを表す。
【００４８】
[70]もう１つの有用なメイタンシノイドを式４１’：
【００４９】
【化６】
2020189854.tif 000007
【００５０】
により表す。式中、置換基は上の式（ＩＩ’）について定義したとおりである。
[71]もう１つの有用なメイタンシノイドを式４１：
【００５１】
【化７】
2020189854.tif 000008
【００５２】
により表す。式中、置換基は上の式（ＩＩ）について定義したとおりである。
[72]好ましくは、式中Ｒ１がＨでありＲ２がメチルである、またはＲ１およびＲ２がメチルである、上に記載した化合物のいずれかである。
【００５３】
[73]特に好ましくは、式中Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、そしてｎが０である；ならびにＲ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、そしてｎが０である、上に記載した化合物のいずれかである。
【００５４】
[74]さらにＬ−アミノアシル立体異性体が好ましい。
[75]１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルまたはアルケニルの例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、プロペニル、ブテニルおよびヘキセニルを含むがこれに限定されない。
【００５５】
[76]３から１０の炭素原子を有する分枝鎖のアルキルまたはアルケニルの例は、イソプ
ロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、１−エチル−プロピル、イソブテニルおよびイソペンテニルを含むがこれに限定されない。
【００５６】
[77]３から１０の炭素原子を有する環式のアルキルまたはアルケニルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルを含むがこれに限定されない。
【００５７】
[78]シンプルなアリールは６から１０の炭素原子を有するアリールを含み、置換されたアリールは、１から４の炭素原子を含有する少なくとも１つのアルキル置換基、またはアルコキシ置換基  例えばメトキシ、エトキシ、またはハロゲン置換基またはニトロ置換基を有する６から１０の炭素原子を有するアリールを含む。
【００５８】
[79]６から１０の炭素原子を含有するシンプルなアリールの例は、フェニルおよびナフチルを含むがこれに限定されない。
[80]置換されたアリールの例はニトロフェニル、ジニトロフェニルを含むがこれに限定されない。
【００５９】
[81]複素環式芳香族ラジカルは、Ｎ、ＯまたはＳより選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含有する３から１０員環を有する基を含む。
[82]複素環式芳香族ラジカルの例は、ピリジル、ニトロ−ピリジル、ピロリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、およびフリルを含むがこれに限定されない。
【００６０】
[83]ヘテロシクロアルキルラジカルは、Ｎ、ＯまたはＳより選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含有する３から１０員環系を包含する環式化合物を含む。
[84]ヘテロシクロアルキルラジカルの例は、ジヒドロフリル、テトラヒドロフリル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、およびモルホリノを含むがこれに限定されない。
【００６１】
[85]立体障害のチオール結合を含有する側鎖を包含する特に好ましいメイタンシノイドは、以下のメイタンシノイド、すなわちＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−(４−メルカプト
−１−オキソペンチル)−メイタンシン（ＤＭ３と呼ぶ）およびＮ２’−デアセチル−Ｎ
２’−(４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル)−メイタンシン（ＤＭ４と呼ぶ）である。ＤＭ３およびＤＭ４は以下の構造式：
【００６２】
【化８】
2020189854.tif 000009
【００６３】
により表される。
【００６４】
（細胞結合物質）
[86]治療薬としての本発明の化合物の有効性は、適当な細胞結合物質の注意深い選択に依存する。細胞結合物質は、現在知られている、または知られるようになるあらゆる種類の物質でよく、ペプチドおよび非ペプチドを含む。一般にこれらは抗体（特にモノクローナル抗体）、リンホカイン、ホルモン、増殖因子、ビタミン、栄養素を輸送する分子（例えばトランスフェリン）、または標的に特異的に結合するあらゆるそれ以外の細胞に結合する分子もしくは物質であることができる。
【００６５】
[87]使用することのできる細胞結合物質のより具体的な例は以下を含むことができる：
完全なヒトの抗体を含む、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体；
単鎖の抗体（ポリクローナルおよびモノクローナル）；
抗体のフラグメント（ポリクローナルおよびモノクローナル）、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ（Parham, 131 J. Immunol. 2895-2902 (1983); Spring
et al., 113 J. Immunol. 470-478 (1974); Nisonoff et al., 89 Arch. Biochem. Biophys. 230-244 (1960)）;
キメラ抗体および抗原に結合するそのフラグメント；
ラクダの抗体を含む、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）および抗原に結合するそのフラグメント（Desmyter et al., 3 Nature Struct. Biol, 752, 1996）；
新たな抗原受容体と言われるサメの抗体（ＩｇＮＡＲ）（Greenberg et al., 374 Nature, 168, 1995; Stanfield et al. 305 Science 1770-1773, 2004）；
インターフェロン（例えばアルファ、ベータ、ガンマ）；
リンホカイン  例えばＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６；
ホルモン  例えばインスリン、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）、ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン）、ステロイドホルモン  例えばアンドロゲンおよびエストロゲン；
増殖因子およびコロニー刺激因子  例えばＥＧＦ、ＴＧＦ−アルファ、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ（Burgess, 5 Immunology Today 155-158 (1984)）；
トランスフェリン（O’Keefe et al., 260 J. Biol. Chem. 932-937 (1985)）；および
ビタミン、例えばフォレート。
【００６６】
[88]モノクローナル抗体の技術により、特異的なモノクローナル抗体の形で極めて特異的な細胞結合物質を産生することができる。当該技術分野において特に周知なのは、対象の抗原  例えば標的細胞そのもの、標的細胞から単離した抗原、ウイルス全体、弱毒化ウイルス全体、およびウイルスのタンパク質  例えばウイルスのコートタンパク質を用いて、マウス、ラット、ハムスターまたはその他のあらゆる哺乳動物を免疫することにより産生されるモノクローナル抗体を作成するための技術である。感作されたヒトの細胞もまた使用することができる。モノクローナル抗体を作成するもう１つの方法は、ｓｃＦｖ（一本鎖可変部断片）、具体的にはヒトｓｃＦｖのファージライブラリ（例えばGriffiths et
al., 米国特許第５，８８５，７９３号および５，９６９，１０８号；McCafferty et al., ＷＯ  ９２/０１０４７；Liming et al., ＷＯ  ９９/０６５８７を参照のこと）を使用することである。加えて、米国特許第５，６３９，６４１号に開示された表面再修飾した（resurfaced）抗体もまた、ヒト化抗体として使用してよい。
【００６７】
[89]適当な細胞結合物質の選択は、標的とすべき特定の細胞集団に依存する選択の問題であるが、一般的なヒトのモノクローナル抗体で、適当な１つが利用できれば好ましい。
[90]例えばモノクローナル抗体Ｊ５は、共通急性リンパ芽球性白血病抗原（Common Acute Lymphoblastic Leukemia Antigen）（ＣＡＬＬＡ）に対して特異的であるネズミＩｇ
Ｇ２ａ抗体（Ritz et al, 283 Nature 583-585 (1980)）であるが、標的細胞がＣＡＬＬ
Ａを発現する場合、例えば急性リンパ芽球性白血病の疾患において使用することができる。
【００６８】
[91]モノクローナル抗体ＭＹ９は、ＣＤ３３抗原に特異的に結合するネズミＩｇＧ１抗体（J.D. Griffin et al 8 Leukemia Res., 521 (1984)）であるが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の疾患におけるように標的細胞がＣＤ３３を発現する場合に使用することができる。
【００６９】
[92]同様に、互換性をもってＢ４とも言われるモノクローナル抗体抗Ｂ４は、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原に結合するネズミＩｇＧ１（Nadler et al, 131 J. Immunol. 244-250 (1983)）であるが、標的細胞がＢ細胞、またはこの抗原を発現する罹患した細胞である場合、例えば非ホジキンリンパ腫または慢性リンパ芽球性白血病において使用することができる。
【００７０】
[93]加えてＣａｎＡｇ抗原に結合するモノクローナル抗体Ｃ２４２（米国特許第５，５５２，２９３号）を使用して、ＣａｎＡｇを発現する腫瘍、例えば結腸直腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、および胃癌を治療することができる。ｈｕＣ２４２は、米国特許第５，５５２，２９３号に記載されているヒト化モノクローナル抗体Ｃ２４２であり、これに関してはハイブリドーマがＥＣＡＣＣ同定番号９００１２６０１にて保管されている。ヒト化は、ＣＤＲグラフティング法（米国特許第５，５８５，０８９号；５，６９３，７６１号；および５，６９３，７６２号）、または表面再修飾する（resurfacing）方法（米国特
許第５，６３９，６４１号）のいずれかを適用することにより調製することができる。ｈｕＣ２４２を使用してもまた、ＣａｎＡｇを発現する腫瘍、例えば結腸直腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、および胃癌を治療することができる。
【００７１】
[94]さらに抗体のトラスツツマブ(trastuzumab)を使用して、乳癌ならびにＨｅｒ２抗
原を発現する前立腺癌および卵巣癌のようなその他の癌、を治療することができる。
[95]インスリン増殖因子受容体に結合する抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体もまた有用である。
【００７２】
[96]卵巣癌および前立腺癌を、例えば各々抗ＭＵＣ１抗体、例えば抗ＨＭＦＧ−２（Taylor-Papadimitriou et al., 28. Int. J. Cancer 17-21, 1981）またはｈＣＴＭ０１（56 Cancer Res. 5179-5185, 1996）、および抗ＰＳＭＡ（前立腺に特異的な膜抗原）、例
えばＪ５９１（Liu et al. 57 Cancer Res. 3629-3634, 1997）を用いて、それぞれうま
く標的とすることができる。
【００７３】
[97]抗体でない分子を使用してもまた特異的な細胞集団を標的とすることができる。例えば骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦを細胞結合物質として使用して、急性骨髄性白血病由来の罹患した細胞を標的とすることができる。加えて活性化Ｔ細胞に結合するＩＬ−２を、移植片拒絶の予防、移植片対宿主病の治療および予防、および急性Ｔ細胞白血病の治療用に使用することができる。メラノサイトに結合するＭＳＨは、黒色腫の治療用に使用することができる。葉酸を使用して、卵巣腫瘍およびその他の腫瘍上に発現される葉酸受容体を標的とすることができる。表皮増殖因子（ＥＧＦ）を使用して、扁平上皮細胞癌、例えば肺癌ならびに頭部および頸部の癌を標的とすることができる。ソマトスタチンを使用して、神経芽腫およびその他の腫瘍のタイプを標的とすることができる。乳癌および精巣癌は、各々細胞結合物質としてエストロゲン（もしくはエストロゲン類似体）またはアンドロゲン（もしくはアンドロゲン類似体）を用いて、うまく標的とすることができる。
【００７４】
（架橋試薬）
[98]メイタンシノイドは、反応させた時にメイタンシノイドおよび細胞結合物質の間に非開裂リンカーを形成する架橋試薬を使って、細胞結合物質に連結される。
【００７５】
[99]本明細書において使用する場合“リンカー”は、細胞結合物質を共役結合によりメ
イタンシノイドに連結するあらゆる化学的部分である。一部の場合には、リンカー部分はメイタンシノイドにより提供される。例えばチオールを含有するメイタンシノイドであるＤＭ１（図２）は、天然のメイタンシノイドであるメイタンシンの誘導体であるが、リンカー部分を提供する。メイタンシンのＣ−３ヒドロキシル基での側鎖は末端が−ＣＯ−ＣＨ３であり、ＤＭ１の側鎖は末端が−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＳＨである。したがって最終的なリンカーは２つの部分、すなわち細胞結合物質に導入された架橋試薬およびＤＭ１由来の側鎖から組み立てられる。
【００７６】
[100]開裂可能なリンカーはマイルドな条件下、すなわちメイタンシノイド薬剤の活性
に影響を及ぼさない条件下、で開裂することのできるリンカーである。多くの公知のリンカーがこのカテゴリーに含まれ、そしてこれらを以下に記載する。
【００７７】
[101]ジスルフィドを含有するリンカーは、生理学的条件下で起こり得るジスルフィド
交換を通して開裂可能なリンカーである。
[102]酸に不安定なリンカーは、酸性のｐＨで開裂可能なリンカーである。例えばある
種の細胞内の一区画、例えばエンドソームおよびリソソームは、酸性のｐＨ（ｐＨ４−５）を有しており、酸に不安定なリンカーを開裂するのに適する条件を提供する。
【００７８】
[103]光に不安定なリンカーは、体表面でおよび光の届き得る多くの体腔において有用
である。さらに赤外光は組織を透過することができる。
[104]いくつかのリンカーはペプチダーゼにより開裂することができる。ある種のペプ
チドのみしか細胞内部または外部で容易に開裂されない。例えばTrouet et al., 79 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 626-629 (1982)およびUmemoto et al. 43 Int. J. Cancer, 677-684 (1989)を参照のこと。さらにペプチドはα−アミノ酸およびペプチド結合から成り、ペプチド結合は化学的には１つのアミノ酸のカルボキシレートおよび第２のアミノ酸のα−アミノ基間のアミド結合である。その他のアミド結合、例えばカルボキシレートおよびリジンのε−アミノ基間の結合は、ペプチド結合ではないと理解されており、開裂可能でないと考えられている。
【００７９】
[105]いくつかのリンカーはエステラーゼにより開裂することができる。やはりある種
のエステルのみしか、細胞内部または外部に存在するエステラーゼにより開裂することはできない。エステルはカルボン酸およびアルコールの縮合により形成される。シンプルなエステルは、シンプルなアルコール、例えば脂肪族アルコール、ならびに小さな環式アルコールおよび小さな芳香族アルコールにより生成されるエステルである。例えば本発明では、エステルのアルコール成分であるメイタンシノールが非常に大きく複雑であるため、メイタンシンのＣ−３のエステルを開裂するエステラーゼを発見することはできなかった。
【００８０】
[106]非開裂リンカーは、安定な共有結合の様式でメイタンシノイドを細胞結合物質に
連結することができ、開裂可能なリンカーとして上に列記したカテゴリーに含まれないあらゆる化学的な部分である。したがって非開裂リンカーは、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、およびジスルフィド結合の開裂に対して実質的に耐性がある。
【００８１】
[107]開裂に対して“実質的に耐性がある”ことは、細胞結合物質メイタンシノイド複
合体母集団の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、なおより好ましくは少なくとも９５％、そして最も好ましくは少なくとも９９％のリンカーの化学的結合またはリンカーに隣接する化学的結合が、酸、光感受性(photolabile)開裂物質、ペプチダーゼ、エステラーゼ、または開裂可能なリンカーの化学的結
合（例えばジスルフィド結合）を開裂する化学的化合物もしくは生理学的化合物によって
、上に記載した物質のいずれかによる処理の数時間から数日間の範囲内で、非開裂を維持することを意味する。
【００８２】
[108]さらに“非開裂”は、メイタンシノイドまたは細胞結合物質がその活性を失わな
い条件で、酸、光感受性開裂物質、ペプチダーゼ、エステラーゼ、またはジスルフィド結合を開裂する化学的化合物もしくは生理学的化合物により誘発される開裂に耐える、リンカーの化学的結合またはリンカーに隣接する化学的結合の能力を言う。
【００８３】
[109]当業者は、開裂可能なリンカーから非開裂リンカーを容易に識別することだろう
。
[110]リンカーが開裂に対して実質的に耐性があるかどうかを検査するための適当なコ
ントロールの一例は、上に記載した物質のいずれかにより開裂されやすい化学的結合、例えばジスルフィド結合を含むリンカーである。リンカーが開裂に対して実質的に耐性があるかどうかは、ＥＬＩＳＡ、ＨＰＬＣ、またはその他の適切な手段により、数時間から数日間、典型的には４時間から５日間に及ぶ時間にわたり複合体の安定性を測定することにより、検査することができる。ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、血漿濃度における安定な複合体のレベルを測定することができる。
【００８４】
[111]非開裂リンカーはまた、非開裂リンカーを包含する複合体のin vivoの半減期が開裂可能なリンカーを包含する複合体の値より、一般に約２０％高いという特徴がある。マウスにおいて、非開裂リンカーを介して連結したＩｇＧ−メイタンシノイド複合体のin vivoの半減期は、少なくとも４日である。
【００８５】
[112]メイタンシノイドおよび細胞結合物質の間に、非開裂リンカーを形成する適切な
架橋試薬は当業界において周知であり、イオウ原子を包含する（例えばＳＭＣＣ）またはイオウ原子を含まない非開裂リンカーを形成することができる。
【００８６】
[113]メイタンシノイドおよび細胞結合物質の間に非開裂リンカーを形成する好ましい
架橋試薬は、マレイミドまたはハロアセチルを基本とする部分を包含する。本発明に従って、そのような非開裂リンカーはマレイミドまたはハロアセチルを基本とする部分から誘導されると言う。マレイミドを基本とする部分を包含する架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ＳＭＣＣの“長鎖”類似体であるＮ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミ
ドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル[
ＡＭＡＳ]、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート
（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）を含む（マレイミドを基本とする架橋試薬の代表的な構造については図１５を参照のこと）。これらの架橋試薬はマレイミドを基本とする部分から誘導される非開裂リンカーを形成する。
【００８７】
[114]ハロアセチルを基本とする部分を包含する架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル−
４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトアミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）を含む（ハロアセチルを基本とする架橋物質の代表的な構造については図１６を参照のこと）。 これら
の架橋試薬はハロアセチルを基本とする部分から誘導される非開裂リンカーを形成する。
【００８８】
[115]図１５および図１６に記載した活性なエステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ
ジルおよびスルホスクシンイミジルのエステルから成るが、他の活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、およびスルホニルテトラフルオロフェニルエステルもまた使用することができる。
【００８９】
[116]特に好ましい架橋試薬は、イオウ原子を含有しない非開裂リンカーを形成する。
図２１は、α、ω−ジカルボン酸（アルカンまたはアルケンが３−２４の炭素原子を有するアルカン二酸またはアルケン二酸）から誘導される、架橋物質を用いて誘導体化したメイタンシノイド分子を示す。細胞結合物質と反応させると、架橋試薬はイオウを含まない非開裂リンカー（Ｓを含有しない非開裂リンカー）を形成することになる。
【００９０】
[117]図２１のメイタンシノイド分子は、以下のように製造する。最初にアジピン酸（
ヘキサン二酸または１，６−ヘキサンジカルボン酸としても知られる）のモノエステルを、ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下で、１当量の２−トリメチルシリルエタノールを用いて処理することにより調製する。イソブチルクロロホルメートを用いて残っているカルボン酸基を活性化し、続いてＮ−メチル−Ｌ−アラニンと反応させ、アシル化したＮ−メチル−Ｌ−アラニンを提供する。ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび塩化亜鉛の存在下でメイタンシノールと反応させ、続いてテトラブチルアンモニウムフルオリドを用いてトリメチルシリル保護基を除去し、フリーのカルボキシ基を持つメイタンシノイドエステルを提供する。ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下でのスルホＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの反応による、カルボキシル基のエステル化により、細胞結合物質と反応することのできるメイタンシノールの活性なエステルを提供し、イオウ原子を含有しない非開裂複合体を得る。
【００９１】
[118]イオウ原子を含有しない非開裂リンカーはまた、上に記載した方法を用いて他の
ジカルボン酸を基本とする部分から誘導することもできる。他の適切なジカルボン酸を基本とする部分として、一般式（ＩＶ）のα、ω−ジカルボン酸：
【００９２】
【化９】
2020189854.tif 000010
【００９３】
を含むがこれに限定されない。
[119]式（ＩＶ）においてＸは、２から２０の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のア
ルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり、Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり、そして式中ｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない。
【００９４】
[120]Ｓを含有しない非開裂リンカーを有する複合体を形成するために、細胞結合物質
と直接反応させることのできる活性なエステルを含有する誘導体化したメイタンシノイドは、式５：
【００９５】
【化１０】
2020189854.tif 000011
【００９６】
により表すことができ、
式中Ｘ、Ｙ、Ｚ、ｌ、ｍおよびｎはすべて上の式（ＩＶ）について定義したとおりであり、さらに式中Ｅはカルボニル基と共に活性なエステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジルおよびスルホスクシンイミジルのエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、およびスルホニルテトラフルオロフェニルエステルを形成する。
【００９７】
[121]好ましくは式６により表される誘導体化したメイタンシノイド：
【００９８】
【化１１】
2020189854.tif 000012
【００９９】
であり、式中ｎは３から２４の整数を表し、Ｅは式５のメイタンシノイドについてと同様の定義を有する。
[122]より好ましい態様は、式７により表される誘導体化したメイタンシノイド：
【０１００】
【化１２】
2020189854.tif 000013
【０１０１】
であり、
式中ＲはＨまたはＳＯ３−Ｎａ＋である。
[123]式５、６、および７の化合物は、新規メイタンシノイドである。
【０１０２】
[124]２から２０の炭素原子を有する直鎖のアルキル基、アルケニル基、またはアルキ
ニル基の例は、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、プロペニル、ブテニルおよびヘキセニルを含むがこれに限定されない。
【０１０３】
[125]２から２０の炭素原子を有する分枝鎖のアルキル基、アルケニル基、またはアル
キニル基の例は、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、１−エチル−プロピル、イソブテニル、イソペンテニル、エチニル、プロピニル（プロパルギル）、１−ブチニル、２−ブチニル、および１−ヘキシニルを含むがこれに限定されない。
【０１０４】
[126]３から１０の炭素原子を有するシクロアルキル基またはシクロアルケニル基の例
は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、およびシクロヘプタジエニルを含むがこれに限定されない。
【０１０５】
[127]６から１０の炭素原子を含有する芳香族の基の例は、フェニルおよびナフチルを
含むがこれに限定されない。
[128]置換された芳香族の基の例は、ニトロフェニルおよびジニトロフェニルを含むが
これに限定されない。
【０１０６】
[129]複素環式芳香族の基は、Ｎ、ＯまたはＳより選択される１つまたは２つのヘテロ
原子を含有する、３から１０員環を有する基を含むがこれに限定されない。
[130]置換されたおよび置換されていない複素環式芳香族の基の例は、ピリジル、ニト
ロ−ピリジル、ピロリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、およびフリルを含むがこれに限定されない。
【０１０７】
[131]ヘテロシクロアルキルラジカルは、Ｎ、ＯまたはＳより選択される１つまたは２
つのヘテロ原子を含有する、３から１０員環系を包含する環式化合物を含むがこれに限定されない。
【０１０８】
[132]ヘテロシクロアルキルラジカルの例は、ジヒドロフリル、テトラヒドロフリル、
テトラヒドロピロリル、ピペリジニル、ピペラジニル、およびモルホリノを含むがこれに限定されない。
【０１０９】
[133]一般式ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨのα、ω−ジカルボン酸の例は、アジピン酸、グルタル酸、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、およびシクロヘキセン−二酸を含むがこれに限定されない。
【０１１０】
（細胞毒性の複合体の合成）
[134]細胞結合物質およびメイタンシノイドの複合体は、現在公知のまたは今後開発さ
れるあらゆる技術を用いて形成することができる。
【０１１１】
[135]細胞結合物質をメイタンシノイドと複合体化する方法は、一般に２段階の反応ス
テップを伴う。米国特許第５，２０８，０２０号に記載されている１つの方法において、細胞結合物質、例えば抗体を、架橋試薬を用いて修飾して、１つまたはそれより多く、通常１−１０の反応基を導入することができる。次に修飾された細胞結合物質を１つまたはそれより多くのチオールを含有するメイタンシノイドと反応させて、複合体を生成する。
【０１１２】
[136]あるいは米国特許第６，４４１，１６３  Ｂ１号に開示されているように、チオ
ールを含有するメイタンシノイドを初めに架橋試薬で修飾し、続いて修飾されたメイタンシノイドを細胞結合物質と反応させることができる。例えばチオールを含有するメイタンシノイドを、図１５に記載したマレイミド化合物と、または図１６に記載したハロアセチル化合物と反応させ、活性なスクシンイミジルエステルまたはスルホスクシンイミジルエステルを持つメイタンシノイドチオエーテルを得ることができる。活性化されたリンカー部分を含有するこれらのメイタンシノイドを、細胞結合物質と反応させることにより、非開裂の細胞結合物質メイタンシノイド複合体を生成するもう１つの方法を提供する。
【０１１３】
[137]本発明のもう１つの側面において、上に開示したように、イオウ原子を含有しな
いメイタンシノイドを、ジカルボン酸を基本とする架橋試薬により初めに誘導体とし、続いて細胞結合物質と反応させて、Ｓを含有しない非開裂リンカーを介してメイタンシノイドが細胞結合物質に連結されている複合体を形成することができる。
【０１１４】
[138]典型的には１抗体当たり平均して１−１０のメイタンシノイドが連結される。複
合体はSephadex G-25カラムを通して精製することができる。
[139]米国特許第５，２０８，０２０号および６，４４１，１６３  Ｂ１号の全開示を
特に本明細書において参照として援用する。
【０１１５】
[140]本発明の代表的な複合体は、抗体−メイタンシノイド誘導体、抗体フラグメント
−メイタンシノイド誘導体、増殖因子−メイタンシノイド複合体  例えば表皮増殖因子（ＥＧＥ）−メイタンシノイド誘導体、ホルモン−メイタンシノイド複合体  例えばメラノサイト刺激ホルモン（ＭＳＨ）−メイタンシノイド誘導体、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）−メイタンシノイド誘導体、エストロゲン−メイタンシノイド誘導体、エストロゲン類似体−メイタンシノイド誘導体、アンドロゲン−メイタンシノイド誘導体、アンドロゲン類似体メイタンシノイド誘導体、およびビタミン−メイタンシノイド複合体  例えば葉酸エステル（folate）メイタンシノイドである。
【０１１６】
[141]抗体、抗体フラグメント、タンパク質のホルモン、タンパク質の増殖因子および
その他のタンパク質のメイタンシノイド複合体も、同様の方法で作成する。例えばペプチドおよび抗体は、上述の非開裂架橋試薬で修飾することができる。文献に記載されているように、バッファー水溶液中の抗体の溶液を過剰モルの抗体を修飾する架橋試薬、例えばスクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、スクシンイミジル−ヨードアセテート、またはＮ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ
）、ＳＭＣＣの“長鎖”類似体であるＮ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチ
ル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート) （ＬＣ−ＳＭＣＣ）、スルホ−ＬＣ−ＳＭＣＣ、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、スルホ−ＫＭＵＡ、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、スルホ−ＧＭＢＳ、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、スルホ−ＥＭＣＳ、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スルホ−ＡＭＡＳ、スクシンイミジル−６−(β−マレ
イミドプロピオンアミド)ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、スルホ−ＳＭＰＨ、Ｎ−スクシ
ンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、スルホ−ＳＭＰＨ、Ｎ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトアミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）と共にインキュベーションしてよい。Yoshitake et al., 101 Eur. J. Biochem. 395-399 (1979); Hashida et al., J. Applied Biochem. 56-63 (1984); およびLiu et al., 18 690-697 (1979); Uto et al., 138 J. Immunol. Meth. 87-94 (1991); Rich et al. 18 J. Med. Chem.
1004-1010 (1975); Kitagawa and Aikawa, 79 J. Biochem. (Tohyo) 233-236 (1976); Tanimori et al., 62 J. Immunol. Meth. 123-128 (1983); Higashida et al., 6 J. Appl. Biochem. 56-63 (1984); Thorpe et al., 140 Eur. J. Biochem. 63-71 (1984), Chrisey et al. 24 Nucl. Acid Res. 3031-3039 (1996), Annunziato et al., 4 Bioconjugate
Chem. 212-218 (1993), Rector et al., 24 J. Immunol. Meth. 321-336 (1978)、およ
びInman et al. 2 Bioconjugate. Chem. 458-463 (1991)を参照のこと。
【０１１７】
[142]次に修飾された抗体を、チオールを含有するメイタンシノイド（１．２５モル等
量/マレイミド基またはヨードアセチル基）で処理して、複合体を生成する。混合液を一
晩、約４℃でインキュベーションする。抗体−メイタンシノイド複合体を、Sephadex G-25カラムを通してのゲル濾過により精製する。１抗体分子当たりに結合したメイタンシノ
イド分子の数は、分光光度計で２５２ｎｍおよび２８０ｎｍの吸光度の比率を測定することにより決定することができる。典型的には１抗体当たり平均して１−１０のメイタンシノイドが連結される。
【０１１８】
[143]好ましい方法は、スクシンイミジル４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサ
ン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）で抗体を修飾してマレイミド基を導入し、続いて修飾された抗体の、チオールを含有するメイタンシノイドとの反応により、チオエーテルで連結した複合体を得ることである。やはり１抗体分子当たり１から１０の薬剤分子を伴う複合体が得られる。抗体−メイタンシノイド複合体の例を図１７−２０に示す。
【０１１９】
[144]同様に例えば、エストロゲンおよびアンドロゲンの細胞結合物質  例えばエスト
ラジオールおよびアンドロステンジオールは、適当に保護されたチオール基を含有するカルボン酸クロリド  例えば３−Ｓ−アセチルプロパノイルクロリドと反応させることにより、Ｃ−１７ヒドロキシ基でエステル化することができる。エステル化のその他の方法についても、文献（Haslam, 36 Tetrahedron 2400-2433 (1980)）に記載されている様に利
用することができる。次に保護されたまたはフリーのチオールを含有するアンドロゲンまたはエストロゲンを、チオールを含有するメイタンシノイドと反応させて、複合体を生成することができる。複合体はシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーまたはＨＰＬＣにより精製することができる。
【０１２０】
[145]特定の好ましい方法は、いかなるイオウ原子も含有しない結合を結果的に得られ
る架橋試薬でメイタンシノールを修飾し、続いて修飾されたメイタンシノイドを抗体と反応させることにより複合体を生成するものである。
【０１２１】
（本発明の細胞毒性複合体の治療効能）
[146]本発明の細胞結合物質メイタンシノイド複合体を、in vitro で多様な細胞株の増殖を抑制するそれらの能力について評価することができる。例えば、細胞株  例えばヒト結腸癌株ＣＯＬＯ２０５、ヒト黒色腫細胞株Ａ３７５、ヒト骨髄性白血病細胞株ＨＬ６０、ヒト乳癌株ＳＫＢＲ３、またはヒト表皮癌細胞株ＫＢを、これらの複合体の細胞毒性の評定のために使用することができる。評価する細胞を、２４時間化合物に暴露させ、生存している細胞の分画を公知の方法による直接的なアッセイで測定することができる。（例えば、Goldmacher et al., 135 J. Immunol. 3648-3651 (1985)、およびGoldmacher et al., 102 J. Cell Biol. 1312-1319 (1986)を参照のこと。）次にＩＣ５０値をアッセイの結果から算出することができる。
【０１２２】
[147]高い細胞毒性は、in vitroでＳＫＢＲ３細胞を用いて薬剤への２４時間暴露で測
定したときに、約１０−８Ｍまたはそれ未満のＩＣ５０（０．５の生存している分画が残る毒性物質の阻害濃度）を有する毒性を示すものとして定義することができる。
【０１２３】
[148]本発明の抗体−メイタンシノイド複合体のin vitroの効能および標的特異性を図
４に示す。架橋試薬ＳＭＣＣを用いてのｈｕＣ２４２のＤＭ１との複合体は、３．５×１０−１２ＭのＩＣ５０値を有する、抗原陽性のＳＫＢＲ３細胞を破壊する高い効能がある。反対に抗原陰性のＡ３７５細胞には８００分の１未満の感受性であり、本発明のメイタンシノイド複合体が高い効能および特異性があることを立証している。
【０１２４】
[149]ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体は、クローン原性アッセイ（図６Ａ−Ｃ
）および間接的な細胞毒性アッセイ（図７）において、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較した場合、等しいかまたはそれより高い効能があった。ＳＭＣＣを介してメイタンシノイドに複合体化した抗Ｈｅｒ２抗体が特異的な活性を示さなかったことを立証する以前に公開されたデータ（Chari et al., 52 Cancer Res. 127-133
(1992)）に基づけば、これらの結果は予想外であった。
【０１２５】
[150]ＳＭＣＣという非開裂リンカーを用いて調製された複合体の活性は、ｈｕＣ２４
２の複合体に限定されない。in vitroの特異的な活性はまた、抗Ｈｅｒ２抗体のトラスツツマブ；抗ＣＤ３３抗体のＭｙ９−６；抗ＥＧＦＲ抗体のＫＳ７７；および抗ＣＤ５６抗体のＮ９０１の、ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体でも観察された（図８Ａ−Ｄおよび２５）。
【０１２６】
[151]加えてin vitroで特異的な活性を示す非開裂リンカーを用いた複合体は、ＳＭＣ
Ｃリンカーに限定されない。非開裂リンカーＳＩＡＢを用いて合成したＤＭ１のｈｕＣ２４２複合体は、in vitroのクローン原性アッセイにおいて効能および抗原特異的な細胞毒性を示した（図９）。さらにＳＩＡＢを用いて合成したＤＭ１のトラスツツマブ複合体もまた、クローン原性アッセイにおいて細胞毒性があった（図２８）。さらにｈｕＣ２４２−Ｓを含有しない非開裂リンカー−ＤＭ１複合体もまた、in vitroのクローン原性アッセイにおいて効能および抗原特異的細胞毒性が立証された（図２２）。
【０１２７】
[152]ＳＭＣＣリンカーを用いてのＤＭ１との抗体の複合体は、マウスにおいて、ヒト
腫瘍の異種移植片に対する抗腫瘍効能を示す（図１０Ａ−Ｃ）。ＳＮＵ１６胃腫瘍の異種移植片の、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１による治療での、腫瘍の成長の顕著な阻害が観察された（図１０Ａ）。この抗腫瘍活性は、薬剤の毒性の基準であるマウスの体重に影響を及ぼさない複合体の用量で観察されている。ＣＯＬＯ２０５結腸癌腫瘍の異種移植片を有するマウスの、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体による治療は、腫瘍の完全な緩解をもたらし、何頭かのマウスは治療後２ヶ月にわたり検出可能な腫瘍が認められないままであった（図１０Ｂ）。やはりこの活性も、マウスの体重に影響を示さない複合体の
濃度で観察された。トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体もまた、ＭＣＦ−７乳癌細胞株を用いたマウスの腫瘍異種移植片モデルにおいて、有意な腫瘍の緩解を示した（図１０Ｃ）。
【０１２８】
[153]非開裂リンカーＳＭＣＣを用いて合成した抗体−メイタンシノイド複合体の血漿
クリアランスは非常に遅く、抗体単独のクリアランスに匹敵する。このことは、相対的に変化しやすいジスルフィド結合を用いて調製した複合体、例えばｈｕＣ２４２−ＳＰＰ−ＤＭ１の血漿クリアランスと明確な対比をなす。例えばＳＭＣＣ複合体のクリアランスの半減期はおよそ３２０時間であり、一方ＳＰＰ複合体の半減期は４０−５０時間の範囲内である（図１１）。しかし各タイプの複合体に関する抗体成分のクリアランスは一致しており、測定された複合体のクリアランス速度の差異が、ＳＰＰ−ＤＭ１複合体の場合、抗体複合体からのメイタンシノイドの喪失によるものであることを示唆する。したがって非開裂ＳＭＣＣの結合はＳＰＰ−ＤＭ１複合体に比して、in vivo に存在するメイタンシノイド−リンカー開裂活性に対して、はるかに大きな耐性がある。さらにＳＰＰ−ＤＭ１複合体に比してＳＭＣＣで連結した複合体の低下したクリアランス速度は、薬物濃度曲線下面積（ＡＵＣ）により測定した場合、動物のメイタンシノイドへの暴露全体においてほぼ５倍の増加をもたらすことになる。この増加された暴露が、一部の場合には薬剤の効能への実質的なインパクトを有することができるだろう。
【０１２９】
[154]非開裂リンカー  例えばＳＭＣＣを用いて調製したメイタンシノイド複合体は、
開裂可能なジスルフィドリンカーを用いて調製した複合体と比較して、マウスにおいて予想外の増加した許容性を示す。１回の静脈内投与による急性毒性検査を、メスＣＤ−１マウスにて行った。ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体（非開裂）の、開裂可能なジスルフィド結合を含有するリンカーを用いて調製したｈｕＣ２４２複合体との許容性の比較を、各複合体の一連の４段階の用量増加にわたる、マウスの死亡（図１２ＡおよびＢ）および毒性の兆候（図１２ＣおよびＤ）をモニターすることにより行った。ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体に関する最大耐用量（ＭＴＤ）は、検査した最大用量（１５０ｍｇ/ｋｇ）より
高かったが、ジスルフィドで連結した複合体であるＳＰＰ−ＤＭ１に関するＭＴＤは、４５−９０ｍｇ/ｋｇの範囲内であった。１５０ｍｇ/ｋｇでＳＭＣＣ−ＤＭ１治療群のすべてのマウスは生存していたが、ＳＰＰ−ＤＭ１治療群のすべてのマウスに関しては治療後９６時間までに致死的毒性であることが観察された。
【０１３０】
[155]メイタンシノイド複合体は、微小管の重合の阻害を通してそれらの細胞を破壊す
る活性を及ぼすと考えられている。この微小管の重合の阻害は、細胞周期を主としてＧ２/Ｍで停止させることになる。抗体−メイタンシノイド複合体による細胞の抗原依存性の
Ｇ２/Ｍ２での停止は、フローサイトメトリーの分析によりモニターすることができる（
図１３）。ｈｕＣ２４２−ＳＰＰ−ＤＭ１複合体またはｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体によるＣＯＬＯ２０５細胞の処理は、６−１０時間までにＧ２/Ｍでの完全な停止
をもたらす。しかし処理後３０時間までに、ジスルフィドで連結したｈｕＣ２４２−ＳＰＰ−ＤＭ１複合体での処理により停止された細胞の一部は、細胞周期の停止から脱して細胞分裂を再開している。驚くことに非開裂複合体で処理した細胞は、この後者のタイムポイントで細胞周期の阻止から脱していない。これら２つの複合体の活性の持続性の差異はまた、トリパンブルーを用いての色素排除アッセイにより判定した場合の、３０時間のタイムポイントで死滅した細胞の比率にも反映されている。これらの結果は、非開裂ＳＭＣＣリンカー複合体での処理により導入される分子レベルの事象の予想外の持続性を立証している。
【０１３１】
[156]開裂可能なジスルフィドリンカーを有する複合体と比較しての、非開裂リンカー
を用いて調製した複合体の付加的な側面は、本明細書でバイスタンダー効果と言う、抗原陽性細胞に近接している場合に抗原陰性細胞に対する活性、を示さないことである。すな
わち非開裂リンカーを用いて調製した複合体は、最小のバイスタンダー活性を有する。ｈｕＣ２４２−ＳＰＰ−ＤＭ１（開裂可能）複合体およびｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（非開裂）複合体の双方とも、別々に培養した場合には、抗原陽性ＣＯＬＯ２０５細胞株に対して効能のある細胞破壊活性を示し、抗原陰性細胞株であるNamalwaに対しては活性
を有していない。しかしＣＯＬＯ２０５細胞およびNamalwa細胞の共培養での、ｈｕＣ２
４２−ＳＰＰ−ＤＭ１による処置は、抗原陰性Namalwa細胞に対してさえも複合体の劇的
な細胞破壊活性を現した。反対にｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体は、これらの条件下でそのようないかなるバイスタンダー活性も示されていない。Namalwa細胞に対して
細胞破壊活性を示さないことが、抗原陽性ＣＯＬＯ２０５細胞と共溶媒した場合でさえも、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体で観察されている。このin vitroアッセイで測定した際の、非開裂複合体のこの最小のバイスタンダー活性が、急性毒性試験で観察された非開裂リンカーを用いた複合体の増加した許容性に寄与しているのかもしれない。
【０１３２】
[157]上の実験の結果は、本発明の非開裂リンカーを用いたメイタンシノイド複合体が
、以前に記載された細胞結合物質メイタンシノイド複合体と比較して、大幅に改善された抗腫瘍活性を保有することを立証している。  
【０１３３】
（使用方法）
[158]上に記載した複合体は、選択された細胞集団を標的としてメイタンシノイドを向
かわせるための方法であって、当該方法は選択された細胞集団を含有すると推測される細胞集団または組織を、細胞結合物質メイタンシノイド複合体と接触させることを包含し、その場合１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が選択された細胞集団の細胞に結合する、前記方法において使用することができる。
【０１３４】
[159]上に記載した複合体はまた、細胞を破壊する方法であって、当該方法は細胞を、
細胞結合物質メイタンシノイド複合体と接触させることを包含し、その場合１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が細胞に結合する、前記方法において使用することができる。
【０１３５】
[160]上に記載した複合体はまた、悪性腫瘍、自己免疫疾患、移植片拒絶、移植片対宿
主病、ウイルス感染、微生物感染、および寄生体感染を含むがこれに限定されない病気の治療法であって、当該方法は治療を必要とする被験者に、細胞結合物質メイタンシノイド複合体の有効量を投与することを包含し、その場合１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が病気の罹患した細胞または感染した細胞に結合する、前記方法において使用することができる。
【０１３６】
[161]本発明の方法に従って治療することのできる医学的な状態の例は、例えば肺、乳
房、結腸、前立腺、腎臓、膵臓、卵巣、およびリンパ系器官の癌；自己免疫疾患、例えば全身性狼瘡、慢性関節リウマチ、および多発性硬化症；移植片拒絶、例えば腎移植拒絶、肝移植拒絶、肺移植拒絶、心移植拒絶、および骨髄移植拒絶；移植片対宿主病；ウイルス感染、例えばＣＭＶ感染、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳ等；ならびに寄生体感染、例えばランブル鞭毛虫症、アメーバ症、住血吸虫症、および当業者により決定されるようなその他の疾患を含むあらゆるタイプの悪性疾患を含むがこれに限定されない。
【０１３７】
[162]本方法は、in vitroまたは in vivoで行うことができる。
[163]上に記載した複合体は、例えば自己由来骨髄細胞を同一患者への移植前に、罹患
した細胞もしくは悪性細胞を破壊する目的で処理する；骨髄細胞もしくはその他の組織を
移植前に、Ｔ細胞およびその他のリンパ細胞を破壊し、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防する目的で処理する；標的抗原を発現しない、所望のバリアント以外のすべての細胞を破壊する目的で細胞培養物を処理する；または所望でない抗原を発現するバリアントの細胞を破壊する目的で細胞培養物を処理する；ためのin vitroで使用する方法であって、当該方法は細胞結合物質メイタンシノイド複合体の有効量で細胞を処置することを包含し、その場合１つまたはそれより多くのメイタンシノイドは、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に共有結合で連結され、そして当該細胞結合物質が破壊すべき細胞に結合する、前記方法において使用することができる。
【０１３８】
[164]in vitroで臨床的および非臨床的に使用する状態は、当業者により容易に決定さ
れる。
[165]例えば処置は以下のように実行することができる。骨髄を患者または他の個体か
ら採取した後、本発明の細胞毒性物質を約１０ｐＭから１ｎＭの濃度範囲で添加した血清を含有する培地中で、約３０分から約４８時間の間、約３７℃でインキュベーションする。インキュベーションの濃度および時間の正確な条件、すなわち用量は、当業者により容易に決定することができる。インキュベーション後、骨髄細胞を血清を含有する培地で洗浄し、公知の方法に従って静脈より患者に戻すことができる。骨髄採取時および処置した細胞の再注入時の間に、患者が他の治療、例えば破壊的化学療法（ablative chemotherapy）または全身照射のコースを受ける状況では、処置した骨髄細胞を、標準的な医学装置
を用いて液体窒素中に凍結保存することができる。
【０１３９】
[166]臨床的なin vivoの使用のため、細胞毒性物質は、無菌性およびエンドドキシンレベルについて検査された溶液または凍結乾燥粉末として提供することができる。複合体の投与の適切なプロトコルの例は以下の通りである。複合体は、毎週の静脈内への一括投与として１週１回、４週の間与えることができる。一括投与の用量は、５から１０ｍｌのヒト血清アルブミンを添加することのできる５０から５００ｍｌの通常の生理生理食塩水中にて与えることができる。投与量は、静脈内への１回の投与当たり１０ｍｇから２０００ｍｇ（１日当たり１００ｎｇから２０ｍｇ/ｋｇ）とする。４週の治療後、患者は１週に
１回を基本として治療を継続して受けることができる。
【０１４０】
[167]投与経路、賦形剤、希釈剤、投与量、時間などに関する具体的なin vivoの臨床プロトコルは、臨床的状況が許す範囲で当業者により決定することができる。
[168]所望であれば、他の活性物質、例えば他の抗腫瘍薬を複合体と共に併用してもよ
い。
【０１４１】
（新規複合体、組成物および複合体の製造法）
[169]非開裂リンカーにより連結された抗体およびメイタンシノイドのいくつかの複合
体は公知であるが、それ以外は新規である。したがって、非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを有する細胞結合物質メイタンシノイド複合体を提供する、ただし細胞結合物質が抗体である場合、リンカーは以下から成る群：スクシンイミジル４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、およびスクシンイミジル−ヨードアセテート、より選択される架橋物質から誘導される基を包含しない。
【０１４２】
[170]新規複合体は上に記載したように製造、使用することができる。
[171]組成物は、細胞結合物質メイタンシノイド複合体および担体を包含する。
[172]担体は、医薬的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤であってよい。
【０１４３】
[173]適切な医薬的に受容可能な担体、希釈剤、および賦形剤は周知であり、臨床的状
況が許す範囲で当業者により決定することができる。
[174]適切な担体、希釈剤および/または賦形剤の例は以下を含む：（１）約１ｍｇ/ｍ
ｌから２５ｍｇ/ｍｌ  ヒト血清アルブミンを含有するまたは含有しない、ダルベッコリ
ン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ約７．４、（２）０．９％  生理食塩水（０．９％ｗ/ｖ  
ＮａＣｌ）、および（３）５％（ｗ/ｖ）デキストロース；そしてまた抗酸化剤  例えば
トリプタミン、および安定剤  例えばTween20を含有してもよい。
【０１４４】
[175]これらの新規複合体について、合成法もまた提供する。
[176]細胞結合物質メイタンシノイド複合体を製造する方法の１つは、以下を包含する
：
（ａ）細胞結合物質を提供する、
（ｂ）細胞結合物質を架橋物質で修飾する、そして
（ｃ）修飾された細胞結合物質を、メイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドと複合体化させ、それにより細胞結合物質、およびメイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドの間に非開裂リンカーを提供して、複合体を生成する。
【０１４５】
[177]細胞結合物質メイタンシノイド複合体を製造するもう１つの方法は、以下を包含
する：
（ａ）メイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドを提供する、
（ｂ）メイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドを架橋物質で修飾し、それにより非開裂リンカーを形成する、そして
（ｃ）修飾されたメイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドを、細胞結合物質と複合体化させ、それにより細胞結合物質、およびメイタンシノイドまたはチオールを含有するメイタンシノイドの間に非開裂リンカーを提供して、複合体を生成する。
【０１４６】
[178]細胞結合物質メイタンシノイド複合体を製造する付加的な方法は、以下を包含す
る：
（ａ）メイタンシノイドを提供する、
（ｂ）メイタンシノイドを修飾して、活性なエステルを有する、イオウを含有しないメイタンシノールを提供する、そして
[179]（ｃ）修飾されたメイタンシノイドを細胞結合物質と複合体化させ、それにより
細胞結合物質およびメイタンシノールの間に、Ｓを含有しない非開裂リンカーを提供して、複合体を生成する。これらの方法は詳細に上にそして、本明細書に引用した米国特許に記載されており、同文献を特に本明細書において参照として援用する。
【実施例】
【０１４７】
実施例
[180]本発明を今度は非限定的な実施例を参照として説明することにする。他に記述が
なければ、すべてのパーセント、比率、部、等は重量による。
【０１４８】
[181]以下の実施例で使用するバッファーは以下の通りである：５０ｍＭ  リン酸カリ
ウム（ＫＰｉ）/５０ｍＭ  塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）/２ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ６．５（バッファーＡ）；１×リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ６．５（バッファーＢ）；および０．１Ｍ  ＫＰｉバッファー/２ｍＭ  ＥＤＴＡ
ｐＨ７．５（アッセイバッファー）。
【０１４９】
[182]ＳＭＣＣ（製品番号２２３６０、Ｍ．Ｗ．３３４．３３ｇ/モル）およびＳＩＡＢ（製品番号２２３２９、Ｍ．Ｗ．４０２．１５ｇ/モル）をPierceより購入した。ｈｕＣ
２４２抗体は、米国特許第５，５５２，２９３号に記載されているヒト化モノクローナル抗体Ｃ２４２であるが、これに関してはハイブリドーマがＥＣＡＣＣ同定番号９００１２６０１にて保管されている。トラスツツマブ抗体はGenentechより入手した。ＤＭ１（フ
リーのチオールの形；Ｍ．Ｗ．７３７．５ｇ/モル）は、米国特許第５，２０８，０２０
号および６，３３３，４１０  Ｂ１号に以前に記載されたように調製した。
【０１５０】
[183]クロマトグラフィーはAmersham Biosciencesより購入したクロマトグラフィーカ
ラム（Sephadex G25 NAP-25 プレパックカラム（Amersham 17-0852-02））； HiPrep 26/10 脱塩カラム、Sephadex G25微細樹脂(fine rein)、３本連結したもの (3connected in series) （Amersham1 17-5087-01））を用いて行った。 TSK-GEL G3000SWXLクロマトグラフィーカラム（TOSOH Bioscience,０８５４１）もまた、TSK Colume Guard SWx1 (TOSOH Bioscience 08543)とともに使用した。
【０１５１】
[184]以下の実施例に使用した溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチル
アセトアミド（ＤＭＡ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、およびＤＭＳＯ中の１００ｍＭ  エルマン試薬（ＤＴＮＢ、Cayman Chemicalより入手可能）であった。
【０１５２】
実施例１Ａ
（ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の調製）
ａ．ｈｕＣ２４２抗体の調製および測定
[185]抗体の濃度は、２８０ｎｍの吸光係数  １．４８（ｍｇ/ｍＬ）−１および分子量
１４７，０００ｇ/モルを用いて測定した。
【０１５３】
ｂ．ＳＭＣＣストック溶液の調製および測定
[186]ＳＭＣＣの２０ｍＭ溶液（６．６９ｍｇ/ｍＬ）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に調製した。この溶液をアッセイバッファー中に１/４０希釈し、サンプルの吸光
度を３０２ｎｍで測定した。ストック溶液の濃度は、吸光係数  ６０２Ｍ−１ｃｍ−１を用いて算出した。
【０１５４】
ｃ．ＤＭ１ストック溶液の調製および測定
[187]ＤＭ１（フリーのチオールの形）の１０ｍＭ溶液をジメチルアセトアミド（ＤＭ
Ａ）中に調製した（７．３７ｍｇ/ｍＬ）（図２）。エタノール（ＥｔＯＨ）中でのスト
ック溶液の希釈溶液の吸光度を２８０ｎｍで測定した。ストックＤＭ１の濃度を、２８０ｎｍの吸光係数  ５７００Ｍ−１を用いて算出した。ストックＤＭ１調製液中のフリーのスルフヒドリル基またはチオール基（−ＳＨ）の濃度は、エルマン試薬（ＤＴＮＢ）を用いて測定した。ストック溶液の希釈液を、３％（ｖ/ｖ）ＤＭＡとしたアッセイバッファ
ー中に調製した後、ＤＭＳＯ中の１００ｍＭ  ＤＴＮＢ（１/１００倍の容積）を加えた
。４１２ｎｍの吸光度の増加を試薬のブランクに対して測定し、吸光係数  １４１５０Ｍ−１ｃｍ−１を用いて算出した。エルマンアッセイから得られる−ＳＨの濃度を使用して、複合状態に関する計算上のＤＭ１ストック濃度を表した。
【０１５５】
ｄ．ＳＭＣＣ架橋リンカーを用いてのｈｕＣ２４２の修飾
[188]抗体を２つのサンプルに分けた；一方は７．５倍モルの過剰のＳＭＣＣ架橋リン
カーを用いて、他方は８．５倍モルの過剰のＳＭＣＣ架橋リンカーを用いて修飾した。サンプルを８ｍｇ/ｍＬの抗体濃度で反応させた。反応はＤＭＳＯ（５％ｖ/ｖ）を含むバッファーＡ（９５％ｖ/ｖ）中で、２時間室温で撹拌しながら行った。
【０１５６】
ｅ．過剰のＳＭＣＣを除去するためのＧ２５クロマトグラフィー
[189]ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ反応混合液を、バッファーＡ中に平衡化したSephadex G25 樹脂の１．５×４．９ｃｍプレパックカラムを通してゲル濾過した。カラムにかける容
量および溶出容量は、製品の説明書に従った。修飾された抗体の溶出液をアッセイして、上に記載した吸光係数を用いて抗体の濃度を決定した。修飾された抗体の収率は、７．５倍モルの過剰のＳＭＣＣの反応では７４．６％、そして８．５倍モルの過剰のＳＭＣＣの反応では８１．６％であった。
【０１５７】
ｆ．ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣのＤＭ１との複合体化
[190]修飾された抗体サンプルを、リンカーに対して１．７倍の過剰のＤＭ１と反応さ
せた（１抗体当たり５リンカーと仮定する）。反応は、ＤＭＡ（３％ｖ/ｖ）を含むバッ
ファーＡ（９７％ｖ/ｖ）中の２．５ｍｇ/ｍＬの抗体濃度で行った。ＤＭ１の添加後、反応液を室温で約２０時間撹拌しながらインキュベーションした。
【０１５８】
ｇ．Ｇ２５クロマトグラフィーによる複合体の精製
[191]複合反応混合液を、バッファーＢ中に平衡化したSephadex G25 樹脂の１．５×４．９ｃｍプレパックカラムを通してゲル濾過した。カラムにかける容量および溶出容量は、製品の説明書に従った。ｈｕＣ２４２  １モル当たりに連結したＤＭ１分子の数を、溶出された材料の吸光度を２５２ｎｍおよび２８０ｎｍの双方で測定することにより決定した。７．５倍モルの過剰のＳＭＣＣサンプルのＤＭ１／抗体の比率は３．５４であることが見出され、８．５倍モルの過剰のＳＭＣＣサンプルの比率は３．６５であることが見出された。複合体化ステップの収率は、各々８３．７％および７５．４％であった。双方の複合体を合わせてプールし、滅菌濾過し、薬剤および抗体の濃度について再度アッセイした。プールしたサンプルは、Ｌｏｔ＃１７１３−１４６Ｃと指定し、結合、細胞毒性、特異性、凝集の程度 (extent)およびフリーの薬剤の含有量について分析した。
【０１５９】
【表１】
2020189854.tif 000014
【０１６０】
実施例１Ｂ
（ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１のin vitroの検査）
ａ．結合
[192]ｈｕＣ２４２抗体およびｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の結合のアフィニティ
ーをＣＯＬＯ２０５細胞における間接的な方法を用いて比較した。結果を図３に示す。裸の抗体はＫＤ  ５．１×１０−１０Ｍで結合し、複合体化したバージョンはＫＤ  ５．５２×１０−１０Ｍで結合した。したがってＤＭ１との複合が、ｈｕＣ２４２の結合アフィニティーを変化させることはないようである。
【０１６１】
ｂ．細胞毒性および特異性
[193]ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体のin vitroの細胞毒性および特異性を、
継続的暴露でのクローン原性アッセイを用いて評価した。結果を図４に示す。ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、抗原陽性のＳＫＢＲ３細胞を破壊する上で有効であった（ＩＣ５０＝３．５×１０−１２Ｍ）。特異性は、標的のＳＫＢＲ３細胞のＩＣ５０値を、抗原陰性細胞株であるＡ３７５の値（Ａ３７５において複合体のＩＣ５０値は３．０×１０−９Ｍより高かった）と比較することにより示した。
【０１６２】
ｃ．サイズ排除カラムクロマトグラフィーの分析
[194]複合体をＴＳＫ３００サイズ排除カラムを用いて分析し、９６．０％がモノマー
であることを見出した（図５）。
【０１６３】
ｄ．フリーの薬剤
[195]フリーの薬剤の比率をＥＬＩＳＡにより測定し、４．４％であることを見出した
。
【０１６４】
実施例２Ａ
（トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の調製）
[196]トラスツツマブ抗体は、非開裂のヘテロの２官能基の架橋試薬ＳＭＣＣを用いて
ＤＭ１と複合体化させるため、Genentechより入手した。この抗体は、５０ｍＭ  リン酸
カリウム/２ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ６．０から、５０ｍＭ  リン酸カリウム/５０ｍＭ  塩化ナトリウム/２ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ６．５（バッファーＡ）にバッファーを交換した
。次に抗体を７．５倍モルの過剰のＳＭＣＣリンカーと反応させ、Sephadex G25 樹脂に
より精製し、ＤＭ１と複合体化させた。最終的な複合体をSephadex G25 樹脂により再度
精製した。得られる複合体は、抗体１モル当たり３．１モルのＤＭ１を含有していた。
【０１６５】
ａ．トラスツツマブ抗体の調製および測定
[197]５０ｍＭ  リン酸カリウム/２ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ６．０バッファー中のトラスツツマブ抗体を、バッファーＡで平衡化したSephadex G25カラムに通し、バッファーＡ中に溶出した。この実施例で使用するすべてのバッファーは、色素生産性リムルス変形細胞溶解物（ＬＡＬ）試験法(Camgrex)を用いて、エンドトキシンを含まないことを検査した
。抗体の濃度は、２８０ｎｍの吸光係数  １．４５ｍＬｍｇ−１ｃｍ−１および分子量１４５．４２３ｇを用いて測定した。
【０１６６】
ｂ．ＳＭＣＣストック溶液の調製および測定
[198]ＳＭＣＣ  ２０ｍＭ溶液（６．６９ｍｇ/ｍＬ）をＤＭＳＯ中に調製した。この溶液をアッセイバッファー中で１/４０に希釈し、サンプルの吸光度を３０２ｎｍで測定し
た。ストック溶液の濃度は、モル吸光係数  ６０２Ｍ−１ｃｍ−１を用いて算出した。
【０１６７】
ｃ．ＤＭ１ストック溶液の調製および測定
[199]ＤＭ１（フリーのチオールの形）の１０ｍＭ溶液をＤＭＡ中に調製した（７．３
７ｍｇ/ｍＬ）（図２）。ＥｔＯＨ中でのストック溶液の希釈液の吸光度を２８０ｎｍで
測定した。ストックＤＭ１の濃度を、２８０ｎｍのモル吸光係数  ５７００Ｍ−１ｃｍ−１を用いて算出した。ストックＤＭ１調製液中のフリーの−ＳＨの濃度を、エルマン試薬（ＤＴＮＢ）を用いて測定した。ストック溶液の希釈液は、３％（ｖ/ｖ）ＤＭＡとした
アッセイバッファー中に調製した後、ＤＭＳＯ中の１００ｍＭ  ＤＴＮＢ（１/１００倍
の容積）を加えた。４１２ｎｍの吸光度の増加を試薬のブランクに対して測定し、吸光係数  １４１５０Ｍ−１ｃｍ−１を用いて濃度を算出した。エルマンアッセイから得られる−ＳＨの濃度を使用して、複合状態に関する計算上のＤＭ１ストック濃度を表した。
【０１６８】
ｄ．ＳＭＣＣ架橋リンカーを用いてのトラスツツマブの修飾
[200]抗体を、２０ｍｇ/ｍＬの抗体濃度で７．５倍モルの過剰のＳＭＣＣを用いて修飾した。反応はＤＭＳＯ（５％ｖ/ｖ）を含むバッファーＡ（９５％ｖ/ｖ）中で、２時間室温で撹拌しながら行った。
【０１６９】
ｅ．過剰のＳＭＣＣを除去するためのＧ２５クロマトグラフィー
[201]トラスツツマブ−ＳＭＣＣの反応混合液を、バッファーＡ中に平衡化したSephadex G25 樹脂の１．５×４．９ｃｍプレパックカラムを通してゲル濾過した。カラムにかけ
る容量および溶出容量は、製品の説明書（Amersham Biosciences）に従った。修飾された抗体溶液の濃度を、分光光度計の測定により上に記載した吸光係数を用いてアッセイした。修飾された抗体の収率は、タンパク質濃度に基づき８８％であった。
【０１７０】
ｆ．トラスツツマブ−ＳＭＣＣのＤＭ１との複合体化
[202]修飾された抗体は、リンカーに対して１．７倍の過剰のＤＭ１と反応させた（１
抗体当たり５リンカーと仮定する）。反応は、ＤＭＡ（６％ｖ/ｖ）を含むバッファーＡ
（９４％ｖ/ｖ）中の１０ｍｇ/ｍＬの抗体濃度で行った。ＤＭ１の添加後、反応液を室温で約１６．５時間撹拌しながらインキュベーションした。
【０１７１】
ｇ．Ｇ２５カラムクロマトグラフィーによる複合体の精製
[203]複合反応混合液を、バッファーＢ中に平衡化したSephadex G25 樹脂の１．５×４．９ｃｍプレパックカラムを通してゲル濾過した。カラムにかける容量および溶出容量は、製品の説明書（Amersham Biosciences）に従った。トラスツツマブ  １モル当たりに連結したＤＭ１分子の数を、溶出された材料の２５２ｎｍおよび２８０ｎｍの双方での吸光度測定することにより決定した。ＤＭ１／抗体の比率は３．１３であることが見出され、複合ステップの収率は、９５．７％であった。複合体化したトラスツツマブの全体の収率は出発時の抗体に基づき８４％であった。得られる複合体を、結合、細胞毒性、特異性、凝集の程度およびフリーの薬剤の含有量について分析した。
【０１７２】
【表２】
2020189854.tif 000015
【０１７３】
実施例２Ｂ
（トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１のin vitroの検査）
[204]結合の試験は、ＤＭ１への抗体の複合が見かけのＫＤに影響を与えないことを示
した；裸のトラスツツマブ抗体およびトラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の双方ともＥＣＤプレートへの同じ結合アフィニティー（５．５×１０−１１Ｍ）を有していた。サンプルのin vitroの細胞毒性の評価は、トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体が、毒性（抗原陽性細胞株においてＩＣ５０  ３．６×１０−１２Ｍ）および特異性（抗原陰性細胞株においてＩＣ５０  は３．０×１０−９Ｍより高い）の双方とも高いことを示した。
【０１７４】
ａ．結合
[205]トラスツツマブ抗体およびトラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の結合アフィニテ
ィーを、Genentechにより提供されたＨＥＲ２  ＥＣＤプレート結合アッセイを用いて比
較した。結果を図２４に示す。裸の抗体および複合体化したバージョンの双方とも、５．５×１０−１１Ｍの見かけのＫＤで結合する。したがってＤＭ１との複合体化は、トラスツツマブの結合アフィニティーを変化させない。
【０１７５】
ｂ．細胞毒性および特異性
[206]トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体のin vitroの細胞毒性および特異性を
、継続的暴露でのクローン原性アッセイを用いて評価した。結果を図２５に示す。トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、抗原陽性のＳＫＢＲ３細胞を破壊する上で有効であった（ＩＣ５０＝３．６×１０−１２Ｍ）。特異性は、標的のＳＫＢＲ３細胞のＩＣ５０値を、抗原陰性細胞株であるＡ３７５の値（この複合体においてＩＣ５０値は３．０×１０−９Ｍより高かった）と比較することで示された。
【０１７６】
ｃ．サイズ排除カラムクロマトグラフィーの分析
[207]複合体をＴＳＫサイズ排除カラムを用いて分析し、９５．３％がモノマーである
ことを見出した（図２６）。
【０１７７】
ｄ．フリーの薬剤の分析
[208]フリーの薬剤の比率をＥＬＩＳＡにより測定し、３．４％であることを見出した
。
【０１７８】
ｅ．エンドトキシンレベル
[209]複合体をクロマトグラフィーによるＬＡＬ検査を用いて検査し、０．０３ＥＵ/ｍｇを含有することを見出した。
【０１７９】
実施例３Ａ
（トラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１複合体の調製）
[210]トラスツツマブ抗体は、非開裂のヘテロの２官能基の架橋リンカーであるＳＩＡ
Ｂを用いてＤＭ１と複合体化させるため、Genentechより入手した。この抗体を、７．０
倍モルの過剰のＳＩＡＢリンカーとｐＨ６．５で反応させ、Sephadex G25 樹脂により精
製した。抗体を含有する分画をプールし、ＤＭ１と一晩、ｐＨ６．５の標準的な複合条件で室温で、ただし暗所で反応させた。反応容器からアリコートを取り出し、ＤＭ１の組み込みを決定するため分析した。ＮＡＰ５濾過後にアリコートを測定したところ、わずか１．４薬剤/抗体しか有していなかった。さらなる８倍の過剰のＳＩＡＢを反応液に加えて
２時間の後、ｐＨを８に上げ、直ちにさらなる１．５倍の過剰なＤＭ１/ＳＩＡＢを添加
した。反応液を放置して反応を進行させ、Sephadex G25F 樹脂を用いて精製した。得られる複合体は、抗体１モル当たり３．４２モルのＤＭ１を含有していた。
【０１８０】
ａ．トラスツツマブ抗体の測定
[211]抗体の濃度は、２８０ｎｍの吸光係数  １．４５ｍＬｍｇ−１ｃｍ−１、および
分子量１４５．４２３ｇを用いて測定した。
【０１８１】
ｂ．ＳＭＣＣストック溶液の調製および測定
[212]ＳＩＡＢ  １８ｍＭ溶液をＤＭＳＯ中に調製した（７．２ｍｇ/ｍＬ）。ｐＨ４バッファー中に希釈したこの溶液の波長スキャンを情報目的用にのみ記録した。
【０１８２】
ｃ．ＤＭ１ストック溶液の調製および測定
[213]ＤＭ１（フリーのチオールの形）の約３０ｍＭ溶液をＤＭＡ中に調製した。スト
ックＤＭ１調製液中のフリーの−ＳＨの濃度を、エルマン試薬（ＤＴＮＢ）を用いて測定した。ストック溶液の希釈液は、３％（ｖ/ｖ）ＤＭＡとしたアッセイバッファー中に調
製した後、ＤＭＳＯ中の１００ｍＭ  ＤＴＮＢ（１/１００倍の容積）を加えた。４１２
ｎｍの吸光度の増加を試薬のブランクに対して測定し、モル吸光係数  １４１５０Ｍ−１ｃｍ−１を用いて濃度を算出した。エルマンアッセイから得られる−ＳＨの濃度を使用して、複合状態に関する計算上のＤＭ１ストック濃度を表した。
【０１８３】
ｄ．ＳＩＡＢ架橋リンカーを用いてのトラスツツマブの修飾
[214]抗体を、２０ｍｇ/ｍＬの抗体濃度で７．０倍モルの過剰のＳＩＡＢを用いて修飾
した。反応はＤＭＳＯ（５％ｖ/ｖ）を含むバッファーＡ（９５％ｖ/ｖ）中で、２時間室温で暗所で撹拌しながら行った。
【０１８４】
ｅ．過剰のＳＩＡＢを除去するためのＧ２５クロマトグラフィー
[215]トラスツツマブ−ＳＩＡＢ反応混合液を、バッファーＡ中に平衡化したHiPrep 26/10 脱塩カラムを通してゲル濾過した。２８０ｎｍにＳＩＡＢ試薬からの干渉があるようなので、修飾された抗体の収率を１００％であると仮定し、複合反応におけるＤＭ１の量の決定に関しては５リンカー/抗体の修飾と仮定した。
【０１８５】
ｆ．トラスツツマブ−ＳＩＡＢのＤＭ１との複合体化
[216]修飾された抗体を、上記のように１００％収率および５架橋リンカー/抗体と仮定するリンカーに対して１．７倍の過剰のＤＭ１と反応させた。反応における抗体の濃度を１２．５ｍｇ/ｍＬであると推定し、反応を、ＤＭＡ（３％ｖ/ｖ）を含むバッファーＡ（９７％ｖ/ｖ）中で行った。ＤＭ１を添加後、反応液を室温、暗所で、約１６．５時間撹
拌しながらインキュベーションした。
【０１８６】
ｇ．複合反応の分析
[217]反応混合液の０．２５ｍＬアリコートを取り出し、バッファーＢ中に平衡化したG25 Sephadexのプレパックカラムでゲル濾過した。トラスツツマブ  １モル当たりに連結
したＤＭ１分子の数は、溶出された材料の２５２ｎｍおよび２８０ｎｍの双方の吸光度を測定することにより決定した。ＤＭ１／抗体の比率はわずか１．４であった。
【０１８７】
ｈ．付加的な修飾/複合反応
[218]さらなる８倍モルの過剰のＳＩＡＢを加え、２時間室温で放置してインキュベー
ションした。ＳＩＡＢに対して１．５倍モルの過剰のＤＭ１を加え、１Ｎ  ＮａＯＨを加えて反応液のｐＨを８に上げた。反応液を室温、暗所でインキュベーションし、バッファーＢ中に平衡化したＧ２５Ｆ樹脂カラムでゲル濾過した。
【０１８８】
ｉ．複合体のプールおよび特徴づけ
[219]タンパク質を含有する分画をプールし、濾過し、２５２および２８０ｎｍの吸光
度により測定した。複合体のサンプルを、エンドトキシンレベル、結合、特異的および非特異的な細胞毒性、モノマーの％、およびフリーの薬剤のレベルについて検査した。
【０１８９】
【表３】
2020189854.tif 000016
【０１９０】
実施例３Ｂ
（トラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１のin vitroの検査）
[220]結合の試験は、ＤＭ１への抗体の複合が見かけのＫＤに影響を与えないことを示
した；裸のトラスツツマブ抗体およびトラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の双方とも類似する結合アフィニティー（見かけのＫＤ  抗体  １．２×１０−１０Ｍ、および複合体  １．９×１０−１０Ｍ）を有していた。サンプルのin vitroの細胞毒性の評価は、トラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１複合体が、毒性（抗原陽性細胞株のＳＫＢＲ３におい
てＩＣ５０  ５×１０−１２Ｍ）および特異性（抗原陰性細胞株のＡ３７５においてＩＣ５０  は３．０×１０−９Ｍより高い）の双方とも高いことを示した。
【０１９１】
ａ．結合
[221]トラスツツマブ抗体およびトラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１の結合のアフィニ
ティーを、Genentechにより提供されたＨＥＲ２  ＥＣＤプレート結合アッセイを用いて
比較した。結果を図２７に示す。裸のトラスツツマブおよびトラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１は、類似する結合アフィニティー（見かけのＫＤ  抗体は１．２×１０−１０Ｍ、および複合体は１．９×１０−１０Ｍ）を有していた。
【０１９２】
ｂ．細胞毒性および特異性
[222]サンプルのin vitroの細胞毒性の評価は、トラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１複
合体が、毒性（抗原陽性細胞株のＳＫＢＲ３においてＩＣ５０＝５×１０−１２Ｍ）および特異性（抗原陰性細胞株のＡ３７５においてＩＣ５０  は３．０×１０−９Ｍより高い）の双方とも高いことを示した。図２８を参照のこと。
【０１９３】
ｃ．サイズ排除カラムクロマトグラフィーの分析
[223]複合体をＴＳＫサイズ排除カラムを用いて分析し、９６．４％がモノマーである
ことを見出した（図２９）。
【０１９４】
ｄ．フリーの薬剤
[224]フリーの薬剤の比率をＥＬＩＳＡにより測定し、０．３５％であることを見出し
た。
【０１９５】
ｅ．エンドトキシンレベル
[225]複合体をクロマトグラフィーによるＬＡＬ検査を用いて検査し、＜０．０４ＥＵ/ｍｇを含有することを見出した。
【０１９６】
実施例４
（Ｓを含有しない非開裂リンカーを形成する架橋試薬によるｈｕＣ２４２の複合体化）
ａ．合成
[226]架橋試薬（構造に関しては図２１を参照のこと）のストック溶液をＤＭＡ中に作
成し、不溶性沈殿物を遠心して除き、残っている溶液の濃度を、２８０ｎｍの波長でのＤＭ１の吸光である吸光係数  ε２８０＝５７００Ｍ−１ｃｍ−１を用いて決定した。この材料に関する真の吸光係数は測定されていないため、この値は濃度の推定値に過ぎない。ＤＭ１に関するε２５２/ε２８０比が４．７（ＥｔＯＨ中）であるのに対して、この架
橋試薬溶液（ｐＨ７．５バッファー中）に関するε２５２/ε２８０は１．４２と測定さ
れ、異なる吸光または不純物のいずれかであることを示唆するたことに注目しなければならない。
【０１９７】
[227]複合体化反応は、バッファーＥ、ｐＨ７．５（バッファーＥ＝５０ｍＭ  リン酸
ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ）中の１６％  ＤＭＡにおける２．８ｍｇ/ｍｌのｈｕＣ２４２抗体を用いて、２ｍｇのスケールで行った。ストック溶
液の推定される架橋試薬濃度に基づいて、３０等量の架橋リンカー/抗体を使用した（１
０等量の架橋リンカー/抗体を使用した初期の実験では、わずか０．９  ＤＭ１/抗体のみを含む複合体しか生成できなかった）。反応液を放置して３時間反応を進行させた後、複合体をＮａｐ  １０（Ｇ２５）カラムに通すことにより精製した。濾過（Millex GV フィルター、０．２ｕｍポアサイズ）後、複合体は２．５６  ＤＭ１/抗体を有していた（Ｌ
ｏｔ＃  １７４９−１１９Ａ、抗体回収率＝７８％）。複合体のアリコートをＨＰＬＣ（HiPrep カラム）によりフリーのＤＭ１について調べ、かなり大きなＤＭ１のピークが１
２．０９’に観察された。そのためサンプルをバッファーＢ中に透析してこのピークを除去した後、再度アッセイした。最終的な複合体サンプル（Ｌｏｔ＃  １７４９−１２４Ａ）はＨＰＬＣにより、フリーのＤＭ１を含んでおらず、１．８４  ＤＭ１/抗体を有して
いた。ＳＥＣ  ＨＰＬＣをこの複合体について行い、９７％がモノマーの抗体であることを示した。
【０１９８】
ｂ．細胞毒性および結合
[228]本発明では、ｈｕＣ２４２−Ｓを含有しない非開裂リンカー−ＤＭ１複合体にお
ける細胞毒性および結合の試験を行った。この複合体は、フリーの抗体より約２倍高い見かけの解離定数（図２３を参照のこと）、およびｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１に匹敵するin vitroの細胞毒性（Ｓを含有しない非開裂リンカーの複合体のＩＣ５０＝７．０×１０−１２Ｍ  ）（図２２を参照のこと）を有していた。
【０１９９】
[229]本発明を、詳細にそしてその具体的な態様を参照として記載してきたが、多様な
変更および修飾を、本発明の精神および領域から離れずにそれらにおいて行うことができることは、当業者には明らかであろう。
【０２００】
[230]本明細書に引用したすべての特許、公開、およびその他の参考文献を、特にそれ
らの全内容において参照として援用する。
【図面の簡単な説明】
【０２０１】
【図１】図１は、ＳＭＣＣの構造を示す。
【図２】図２は、ＤＭ１の構造を示す。
【図３】図３は、ｈｕＣ２４２抗体を、抗体−メイタンシノイド複合体であるｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１と比較する、ＦＡＣＳ結合アッセイの結果をグラフで示す。
【図４】図４は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の細胞毒性をグラフで示す。
【図５】図５は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１のサイズ排除クロマトグラフィーを示す。
【図６Ａ】図６Ａ−Ｃおよび図７は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の細胞毒性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図６Ｂ】図６Ａ−Ｃおよび図７は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の細胞毒性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図６Ｃ】図６Ａ−Ｃおよび図７は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の細胞毒性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図７】図６Ａ−Ｃおよび図７は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の細胞毒性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図８Ａ】図８Ａ−Ｄは、様々な細胞結合物質に連結したＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の細胞毒性をグラフで示す。
【図８Ｂ】図８Ａ−Ｄは、様々な細胞結合物質に連結したＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の細胞毒性をグラフで示す。
【図８Ｃ】図８Ａ−Ｄは、様々な細胞結合物質に連結したＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の細胞毒性をグラフで示す。
【図８Ｄ】図８Ａ−Ｄは、様々な細胞結合物質に連結したＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の細胞毒性をグラフで示す。
【図９】図９は、抗体−メイタンシノイド複合体であるｈｕＣ２４２−ＳＩＡＢ−ＤＭ１の細胞毒性をグラフで示す。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＳＣＩＤマウスにおけるＣＯＬＯ２０５ヒト結腸癌の異種移植片に対するｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の抗腫瘍活性をグラフで示す。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ＳＣＩＤマウスにおけるＳＮＵ１６ヒト胃腫瘍の異種移植片に対するｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の抗腫瘍活性をグラフで示す。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、ＳＣＩＤマウスにおけるヒトＭＣＦ７腫瘍の異種移植片に対するトラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の抗腫瘍活性をグラフで示す。
【図１１】図１１は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の血漿クリアランス速度を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図１２Ａ】図１２Ａ−Ｄは、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の急性毒性試験を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図１２Ｂ】図１２Ａ−Ｄは、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の急性毒性試験を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図１２Ｃ】図１２Ａ−Ｄは、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の急性毒性試験を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図１２Ｄ】図１２Ａ−Ｄは、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の急性毒性試験を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して、グラフで示す。
【図１３】図１３は、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１により立証された細胞周期停止の持続性および細胞破壊活性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して示す。
【図１４Ａ】図１４Ａ−Ｄは、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の最小のバイスタンダー効果の活性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａ−Ｄは、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の最小のバイスタンダー効果の活性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して示す。
【図１４Ｃ】図１４Ａ−Ｄは、ｈｕＣ２４２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の最小のバイスタンダー効果の活性を、ジスルフィドを含有するリンカーを用いて調製した複合体と比較して示す。
【図１５】図１５は、マレイミドを基本とする架橋物質の代表的な構造を示す。
【図１６】図１６は、ハロアセチルを基本とする架橋物質の代表的な構造を示す。
【図１７】図１７は、抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体の構造を示す。
【図１８】図１８は、抗体−ＳＩＡＢ−ＤＭ１複合体の構造を示す。
【図１９】図１９は、抗体−ＳＭＣＣ−ＤＭ４複合体の構造を示す。
【図２０】図２０は、抗体−ＳＩＡＢ−ＤＭ４複合体の構造を示す。
【図２１】図２１は、Ｓを含有しない非開裂リンカーを介して連結したメイタンシノイド細胞結合物質複合体の合成を示す。
【図２２】図２２は、ｈｕＣ２４２−Ｓを含有しない非開裂リンカー−ＤＭ１の細胞毒性を、グラフで示す。
【図２３】図２３は、ｈｕＣ２４２−Ｓを含有しない非開裂リンカー−ＤＭ１のＦＡＣＳ結合アッセイを、グラフで示す。
【図２４】図２４は、トラスツツマブ抗体を、抗体−メイタンシノイド複合体であるトラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１と比較する、ＨＥＲ２  ＥＣＤプレート結合アッセイの結果をグラフで示す。
【図２５】図２５は、トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の細胞毒性および特異性をグラフで示す。
【図２６】図２６は、トラスツツマブ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１のサイズ排除クロマトグラフィーを示す。
【図２７】図２７は、トラスツツマブ抗体を、抗体−メイタンシノイド複合体であるトラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１と比較する、ＨＥＲ２  ＥＣＤプレート結合アッセイの結果をグラフで示す。
【図２８】図２８は、トラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１の細胞毒性および特異性をグラフで示す。
【図２９】図２９は、トラスツツマブ−ＳＩＡＢ−ＤＭ１のサイズ排除クロマトグラフィーを示す。
【図１】
2020189854.tif 000087
【図２】
2020189854.tif 000088
【図３】
2020189854.tif 000089
【図４】
2020189854.tif 000090
【図５】
2020189854.tif 000091
【図６Ａ】
2020189854.tif 000092
【図６Ｂ】
2020189854.tif 000093
【図６Ｃ】
2020189854.tif 000094
【図７】
2020189854.tif 000095
【図８Ａ】
2020189854.tif 000096
【図８Ｂ】
2020189854.tif 000097
【図８Ｃ】
2020189854.tif 000098
【図８Ｄ】
2020189854.tif 000099
【図９】
2020189854.tif 000100
【図１０Ａ】
2020189854.tif 000101
【図１０Ｂ】
2020189854.tif 000102
【図１０Ｃ】
2020189854.tif 000103
【図１１】
2020189854.tif 000104
【図１２Ａ】
2020189854.tif 000105
【図１２Ｂ】
2020189854.tif 000106
【図１２Ｃ】
2020189854.tif 000107
【図１２Ｄ】
2020189854.tif 000108
【図１３】
2020189854.tif 000109
【図１４Ａ】
2020189854.tif 000110
【図１４Ｂ】
2020189854.tif 000111
【図１４Ｃ】
2020189854.tif 000112
【図１５】
2020189854.tif 000113
【図１６】
2020189854.tif 000114
【図１７】
2020189854.tif 000115
【図１８】
2020189854.tif 000116
【図１９】
2020189854.tif 000117
【図２０】
2020189854.tif 000118
【図２１】
2020189854.tif 000119
【図２２】
2020189854.tif 000120
【図２３】
2020189854.tif 000121
【図２４】
2020189854.tif 000122
【図２５】
2020189854.tif 000123
【図２６】
2020189854.tif 000124
【図２７】
2020189854.tif 000125
【図２８】
2020189854.tif 000126
【図２９】
2020189854.tif 000127
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月31日(2020.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非開裂リンカーを介して細胞結合物質に連結した少なくとも１つのメイタンシノイドを有する細胞結合物質メイタンシノイド複合体であって、
ここにおいて、細胞結合物質は、ヒト化抗体、表面再修飾した抗体、完全なヒトの抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体フラグメント、表面再修飾した抗体フラグメント、完全なヒトの抗体フラグメント、キメラ抗体フラグメント、ヒト化単鎖抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または、完全なヒトの単鎖抗体であり；そして、
非開裂リンカーがイオウ原子を有していない、
前記複合体。
【請求項２】
リンカーがジカルボン酸を基本とする部分から誘導される、請求項１に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項３】
リンカーがα、ω−ジカルボン酸を基本とする部分から誘導され、ここで当該α、ω−ジカルボン酸は一般式：
ＨＯＯＣ−Ｘｌ−Ｙｎ−Ｚｍ−ＣＯＯＨ
［式中、Ｘは、２から２０の炭素原子を持つ直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基であり；
Ｙは３から１０の炭素原子を持つシクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり；
Ｚは６から１０の炭素原子を持つ置換されたもしくは置換されていない芳香族の基であるか、または、ヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式の基であり；そして
ｌ、ｍおよびｎは各々０または１であるが、ただしそれらすべてが同時に０ではない］
を有する、
請求項２に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項４】
α、ω−ジカルボン酸が、アジピン酸、グルタル酸、ピメリン酸、ヘキセン−１，６−二酸、ペンテン−１，５−二酸、シクロヘキサン−二酸、またはシクロヘキセン−二酸である、請求項３に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項５】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する、表面再修飾した抗体、表面再修飾した単鎖抗体、または表面再修飾した抗体フラグメントである、請求項１に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項６】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する、ヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメントである、請求項１に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項７】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する、完全なヒトの抗体、完全なヒトの単鎖抗体、または完全なヒトの抗体フラグメントである、請求項１に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項８】
細胞結合物質が、標的細胞に特異的に結合する、キメラ抗体、またはキメラ抗体フラグメントである、請求項１に記載の細胞結合物質メイタンシノイド複合体。
【請求項９】
式６：
【化１】
2020189854.tif 000128
［式中、ｎは３から２４の整数を表し、そして
Ｅはカルボニル基と共に活性なエステルを形成する］
の化合物。
【請求項１０】
活性なエステルが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジルエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホフタルイミジルエステル、オルト−ニトロフェニルエステル、パラ−ニトロフェニルエステル、２，４−ジニトロフェニルエステル、３−スルホニル−４−ニトロフェニルエステル、３−カルボキシ−４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、およびスルホニルテトラフルオロフェニルエステルからなる群から選択される、請求項９の化合物。
【請求項１１】
式７：
【化２】
2020189854.tif 000129
［式中、ＲはＨまたはＳＯ３Ｎａ＋である］の化合物。