(57)【要約】      （修正有）【課題】生体安全性及び有効性にすぐれた天然物由来成分からなる新規の皮膚外用の有効成分の提供。【解決手段】アヤメ科(Iridaceae)クロッカス属(Crocus)のサフラン(Crocus sativus)の抽出物を有効成分とする皮膚外用剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アヤメ科（Iridaceae）クロッカス属（Crocus）のサフラン（Crocus sativus）の抽出物を有効成分とする皮膚外用剤。
【請求項２】
請求項１に記載の抽出物がKaempferol 3-O-beta-Sophorosideを含むことを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物を有効成分とする皮膚外用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、紫外線、化学物質、アレルギー物質等は、生体細胞に刺激を与えて、その構成成分の変質や、サイトカインや活性酸素の合成を促すことが知られている。そして、変質した細胞成分、サイトカイン又は活性酸素が、炎症や細胞内のメラニン色素の異常沈着を誘発して、シミ、ソバカス、肝斑等を生じさせることも知られている。
【０００３】
従来、皮膚の健全化や老化を予防及び改善する目的で、従来、種々の紫外線吸収剤、抗酸化剤、抗炎症剤が提案され、それらを配合した化粧品、飲食品及び医薬品が上市されている。例えば、ケイヒ酸誘導体、ベンゾフェノン誘導体等の紫外線吸収剤；ビタミンＣ、ビタミンＥ、カタラーゼ等の抗酸化剤；グリチルリチン酸又はその塩、アラントイン、トラネキサム酸等の抗炎症剤が提案されているものの、天然物由来のより安全性の高い抗酸化剤、抗炎症剤が求められている。
【０００４】
従来、化粧品に配合可能な有効成分として植物抽出物が提案されているものの、有効性及び安全性の点で、課題があった。
【０００５】
【特許文献１】特開昭61-024522号
【特許文献２】特開平04-305519号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を鑑みて、天然物由来の新たな新規有効成分を見出すべく鋭意研究を行った。その結果、アヤメ科（Iridaceae）クロッカス属（Crocus）のサフラン(Crocus sativus)の抽出物が、紫外線等の外部刺激により誘導される炎症性物質（サイトカイン）の産生に寄与する因子の遺伝子発現を抑制する効果を有し、化粧料等の皮膚外用剤の有効成分として有用であることを新たに見出した。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、アヤメ科(Iridaceae)クロッカス属(Crocus)のサフラン(Crocus sativus)の抽出物を有効成分とする皮膚外用剤である。
本発明は、アヤメ科(Iridaceae)クロッカス属(Crocus)のサフラン(Crocus sativus)の抽出物を有効成分とする皮膚外用剤であって、抽出物はKaempferol 3-O-beta-Sophorosideを含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、アヤメ科(Iridaceae)クロッカス属(Crocus)のサフラン(Crocus sativus)の抽出物を有効成分とする皮膚外用剤であって、当該有効成分であるサフランの抽出物が奏する効果に基づき、紫外線等の外部刺激から皮膚を保護する皮膚外用剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明においては、植物抽出物の抽出素材として、アヤメ科（Iridaceae）クロッカス属（Crocus）のサフラン（Crocus sativus）を用いる。抽出部位は、全草、花、葉、茎、雄蕊、雌蕊、根を使用することができるが、全草又は花が好ましい。また、花を使用する場合は、雄蕊及び／又は雌蕊を含んでも良い。
【００１０】
本発明の有効成分を含む植物抽出物の調製は、抽出対象物である植物を、必要ならば予め水洗して異物を除いた後、これをそのままもしくは乾燥し、さらに必要ならば細切或いは粉砕した上、浸漬法、向流抽出法、水蒸気蒸留法等の常法に従って抽出溶媒と接触させることによって行うことができる。また、本発明において、超臨界抽出法を採用してもよい。
【００１１】
抽出物処理に使用する抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独でもしくは二種以上混合して用いられる。
【００１２】
抽出物の調製に当たって、抽出液のｐＨに特に制限はないが、一般にはｐＨ３〜９の範囲とすることが好ましい。ｐＨの調整は、前記した抽出溶媒中に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤や、クエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤等を配合することによって行うことができる。
【００１３】
抽出温度、時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨ、或いは植物素材の大きさ等によっても異なるが、例えばメタノール又はエタノール、或いは水と低級アルコール又は多価アルコールとの混合溶媒を抽出溶媒とする浸漬法の場合であれば、抽出温度は０〜８０℃の範囲である。抽出時間は、４℃の冷温抽出の場合で１時間〜７日間の範囲とするのがよく、また、４０℃付近の中温抽出では、１時間〜３日間の範囲とするのがよく、７０〜８０℃の高温抽出の場合は、１時間〜２４時間の範囲とするのがよい。浸漬法の場合、浴比は重量比で、植物素材に対して溶媒が一般に１〜２００倍量、好ましくは１〜１００倍量の範囲となるようにするのがよい。
【００１４】
また、本発明に係る抽出物は、有効成分として、「Kaempferol 3-O-beta-Sophoroside」を含むことを特徴とする。
【００１５】
一方、本発明に係る抽出物は、活性炭処理、イオン交換樹脂処理、合成吸着剤、シリカゲル、及び再結晶処理のいずれか１種又は２種以上を組み合わせて、Kaempferol 3-O-beta-Sophorosideを高濃度に含む抽出物に調製することが好ましい。活性炭としては、松等の木、竹、椰子殻、胡桃殻等の植物質のほか、石炭質、石油質等を原材料として、それらの原材料に水蒸気や二酸化炭素、空気等のガスを使う高温炭化法等の物理的な方法や塩化亜鉛等の化学薬品を使って処理した上で加熱し、多孔質にする化学的な方法による活性化処理を施して得られる活性炭等何れを用いても良い。また、イオン交換樹脂としては、弱塩基性陰イオン交換樹脂、強酸性陽イオン交換樹脂、強塩基性インイオン交換樹脂、弱酸性陽イオン交換樹脂等が挙げられる。また、合成吸着剤としては、キレート樹脂、強酸性陽イオン吸着樹脂、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、メタクリル酸エステル重合体等の非イオン性樹脂が挙げられる。それらのいずれかの処理より、抽出物において、着色の問題となる化合物（アントシアニン等の色素）及び皮膚刺激の原因となる化合物を除去する。着色及び皮膚刺激等の安全性の問題となる化合物（アントシアニン等の色素）を除去する。以上の処理により、好ましくは、抽出物中に０．０１％〜０．１％の範囲で含まれることが好ましい。
【００１６】
本発明においては、皮膚外用剤とは、化粧料、医薬部外品、外用医薬品を含み、例えば、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、ボディシャンプー、頭皮，頭髪用シャンプー、頭髪用コンディショナー、育毛，養毛用のシャンプー又はトニック、石けん等の清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１７】
皮膚外用剤には、本発明に係る抽出物の他に、皮膚外用剤に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明に係る抽出物、加水分解物又は発酵物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分を組み合わせて配合することも何ら差し支えない。
【００１８】
ここで、油性成分としては、例えば、ハス油、オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米糠油、米胚芽油、ヤシ油、カミツレ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、ベルガモット油、ローズヒップ油、アラビアコーヒーノキ種子油、ランベンダー油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、バニラ油、植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、イソオクタン酸セチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００１９】
また、界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。
【００２０】
また、乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素発酵物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）、サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀等）等を配合することもできる。
【００２１】
また、保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体液等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、チューベロース多糖体、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、加水分解コンキオリン、加水分解シルク、スフィンゴモナス培養物、スフィンゴ糖脂質、セラミド、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００２２】
また、増粘剤としては、例えば、アルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、ローストビーンガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、マスチック樹脂、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００２３】
また、防腐・殺菌剤としては、例えば、尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、ポリリン酸、プロパンジオール、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液、サトウキビ等の植物由来のエタノール又は１，３−ブチレングリコール等がある。
【００２４】
また、粉体成分としては、例えば、セリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、小豆等）のパウダー等がある。
【００２５】
また、紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００２６】
また、消泡剤とは、例えば、エタノール、イソプロパノール、ジシロキサン、ジメチルポリシクロサン、ジメチコンケイ酸シリカ、トリシロキサン、シリル化シリカ、ジメチコン、トリメチルシロキシケイ酸、ＤＰＧイソボルニルエーテル等がある。
【００２７】
また、抗酸化剤としては、例えば、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ムラサキシキブの抽出物、シラン根の抽出物、シャクヤク抽出物、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）等がある。
【００２８】
また、キレート剤としては、例えば、エチレンジアミンヒドロキシエチル三酢酸三ナトリウム、エデト酸又はその塩類、グルコン酸、フィチン酸、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、ヒドロキシエタンジホスホン酸四ナトリウム等がある。
【００２９】
また、ｐＨ調整剤としては、例えば、クエン酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、グリコール酸、コハク酸、塩酸、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等がある。
【００３０】
また、美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。
【００３１】
また、上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレート等のコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシド等のコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド、アスコルビルトコフェリルマレイン酸、アスコルビルトコフェリルリン酸Ｋ、ミリスチル３−グリセリルアスコルビン酸、カプリリル２−グリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基等）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステル等のＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体、Ｌ−アスコルビン酸リン酸アミノプロピル、Ｌ−アスコルビン酸のヒアルロン酸誘導体、３−Ｏ−Ｄラクトース−Ｌ−アスコルビン酸、イソステアリルアスコルビルリン酸塩等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）等が挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００３２】
また、生理活性成分としては、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕抽出物又はそれに含まれるセラミド、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が挙げられる。また、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（ハス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、黒糖抽出物又はその発酵物、ダマスクバラの花の抽出物、イランイラン花抽出物、タケノコの皮の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸等）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、オタネニンジン抽出物又はその発酵物、ツバキ抽出物、紅参抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、モモ抽出物、ウメ抽出物、桃仁抽出物、キウイ抽出物、ヒマワリ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus joazeiro)抽出物、パウダルコ樹皮抽出物、萱草（デイリリー）抽出物または発酵物、ハイビスカスの花抽出物または発酵物、ハゴロモグサ抽出物、チェリモヤ抽出物、マンゴー抽出物、マンゴスチン抽出物、フノリ抽出物、烏龍茶抽出物、紅富貴抽出物、シラン抽出物、サツマイモ抽出物、山椒果皮又は種皮の抽出物または加水分解物、ベニバナ花抽出物、カサブランカ抽出物、甘藷抽出物又はその発酵物、グアバ葉抽出物、オリーブ葉抽出物、セイヨウトチノキ抽出物、ショウガ抽出物、バニラ抽出物、ドクダミ抽出物、晩白柚抽出物、アロエ抽出物、アロエベラ抽出物、イチジク花抽出物、リンゴ抽出物、ホワイトアスパラガス抽出物、アカツメクサ抽出物等がある。
【００３３】
次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００３４】
製造例１．抽出物の調製（１）
サフランの花を乾燥し、乾燥物１００ｇに精製水を２０００ｇ添加し、４０℃で２時間浸漬した。これをろ過し、褐色透明のサフラン花粗抽出液１７５０ｇ得た。サフラン花粗抽出液をスチレン−ジビニルベンゼン共重合体に供し、精製水及び２０ｗ／ｗ％エタノール水溶液で洗浄後、１，３−ブチレングリコールで溶出する。これをろ過、精製水を添加し、黄色透明のサフラン花エキス４７００g得た（固形分濃度：０．１０％）。
【００３５】
試験例１．Kaempferol 3-O-beta-Sophorosideの定量分析
＜定量方法＞
製造例１の抽出物１ｇを精密に量りとり、移動相を加えて正確に１０ｍＬとし、試料溶液とした。この試料溶液１０μＬをとり，次の試験条件で液体クロマトグラフィーにより試験を行う。得られたクロマトグラムのピーク面積を求め、予め作成した検量線よりKaempferol 3-O-beta-Sophoroside濃度(％)を求める。
本品中のKaempferol 3-O-beta-Sophoroside濃度(％)＝Ｃ/試料の採取量(ｇ)×１０
Ｃ：検量線から求められたKaempferol 3-O-beta-Sophoroside濃度（ｗ／ｖ％）
＜検量線の作成＞
Kaempferol 3-O-beta-Sophoroside約５ｍｇを精密に量りとり，移動相を加えて正確に５０ｍＬとし，標準原液とする。標準原液１，５ｍＬを正確にとり，それぞれ移動相を加えて正確に１０ｍＬとし、標準溶液とする。標準原液及び標準溶液１０μＬをとり，前記試験条件で液体クロマトグラフィーにより試験を行う。得られたクロマトグラムのピーク面積を縦軸に、Kaempferol 3-O-beta-Sophoroside濃度（ｗ／ｖ％）を縦軸にとり，検量線を作成した。
＜試験条件＞
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２５４ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ，長さ２５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填する。
カラム温度：３５℃付近の一定温度
移動相：０．０５％リン酸水溶液／アセトニトリル混液（１７：３）
流量：毎分０．８ｍＬ（Kaempferol 3-O-beta-Sophorosideの保持時間約１７分）
【００３６】
試験例１の結果、製造例に係る抽出物中には、0.043％のKaempferol 3-O-beta-Sophorosideが含まれることを確認した。なお、本発明においては、例えば、製造例１の抽出工程を調整することにより、０．０１％〜０．１％のKaempferol 3-O-beta-Sophorosideが含まれることが好ましい。
［表１］
2020189832.tif 000002
【００３７】
試験例２．紫外線による炎症関連遺伝子発現抑制効果の評価試験
正常ヒト表皮細胞を増殖添加剤含有HuMediaKG2［クラボウ社製］にて６×１０４個／ｍＬに調製し、２４穴プレートに１ｍＬを播種して、５％ＣＯ２、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。培養1日後、製造例１の抽出物を含んだ培養液（培養液全量に対して溶液として終濃度が２％となるように製造例１の抽出物を添加したもの）を添加して培養した。また、比較対照として、製造例１の抽出物に代えて、３０％１，３−ブチレングリコール水溶液のみを含んだ培養液（培養液全量に対する３０％１，３−ブチレングリコール（30-BG）の終濃度を２％に調整したもの）を添加した試験区（コントロール区）を設定した。さらに培養1日後、培養器底面からＵＶ−Ｂランプ（Philips社製TL20W/12RS）を用いて約５０ｍＪ／ｃｍ2の紫外線照射を行った２４時間後の試験区の細胞をＴｒｉｚｏｌ試薬（Invitrogen社製）０．５ｍＬで回収した。回収した細胞に対してクロロホルム（和光純薬工業社製）１００μＬ添加して撹拌混合し遠心分離機（TOMY社製/MX-160）で１２，５００rpm、４℃の条件下で１５分間遠心分離した後、水層のみを２００μＬ分取した。回収した水層にイソプロパノール（和光純薬工業社製）２５０μＬを添加して撹拌混合し、１２，５００ｒｐｍ、４℃の条件下で１０分間遠心分離してtotalＲＮＡの沈殿物を得た。totalＲＮＡに７５％エタノールを１ｍＬ添加し撹拌洗浄後、１２，５００ｒｐｍ、４℃条件下で１０分間遠心分離して沈殿を回収した。回収したtotal ＲＮＡを所定のキット［PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)（タカラバイオ社製）］を用いて逆転写反応し、ｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡをサンプルとして、Thermal Cycler Dice（登録商標）Real Time System Single（タカラバイオ社製）、及びＳＹＢＲ（登録商標）Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)［タカラバイオ社製］を用いて、各種遺伝子の発現と、内部標準物質ACTB遺伝子の発現の検出を行った。ここで、ACTB（β−actine）は、ハウスキーピング遺伝子（多くの組織や細胞中に共通して一定量発現する遺伝子であって、常に発現され，細胞の維持，増殖に不可欠な遺伝子である）の一つであり、発現量が常に一定とされていることから、ＰＣＲの実験では内部標準として用いられるものである。試験結果は、ACTB遺伝子の発現量を一定とした場合の、それぞれの試験区での各遺伝子の発現量を比較した。本試験系においては、コントロール区のそれぞれの遺伝子の発現量を１００としたときの他の試験区でのその遺伝子の発現量の相対値を求めた。
【００３８】
試験例２の結果を表２に示す。
［表２］
2020189832.tif 000003
【００３９】
表２に示す通り、本発明は、格段にすぐれた皮膚の炎症に関与する因子［ケモカインCXCL16、インターロイキン−８(IL-8)、インターロイキン−６(IL-6)、インターロイキン−１(IL-1α)、ケモカインCCL2、HMGB1（high mobility group box 1）］の発現を抑制することが確認された。これにより、本発明は、皮膚の炎症を抑える効果を有することが示唆される。
【００４０】
試験例３．ＨＭＧＢ１（High Mobility Group Box 1）抑制効果の評価試験
ＨＭＧＢ１は、炎症の初期に分泌されるNF-kBの転写を促進させる核内因子であって、本試験例３において当該因子産生抑制効果を評価する。
１日目に表皮細胞(NHEK)、線維芽細胞(NB1RGB)を９６ウェルプレートに播種し、２日目にそれぞれの培養系に製造例１の抽出物を含有した培地を加えた。３日目にそれぞれの細胞に底面よりＵＶＢ(５０ｍＪ／ｃｍ２)を照射した。照射２４時間後、培養した細胞上清を回収しＥＬＩＳＡキットにて反応させ吸光度(４５０ｎｍ)を測定し、検量線よりＨＭＧＢ１量（ｎｇ／ｍＬ）を求めた。製造例１の抽出物の代わりに３０％１，３−ブチレングリコールを添加した区をコントロールとして紫外線照射した場合と、紫外線未照射の場合の吸光度を測定し、紫外線未照射時のコントロール区におけるＨＭＧＢ１量を１００としたときの相対値を求めた。
【００４１】
試験例３の表皮細胞における試験結果を表３に示す。
［表３］
2020189832.tif 000004
【００４２】
試験例３における線維芽細胞における試験結果を表４に示す。
［表４］
2020189832.tif 000005
表３及び表４に示す通り、製造例１の抽出物は、表皮細胞及び線維芽細胞において、紫外線により誘導されるＨＭＧＢ１の産生を抑制することが確認された。このことから、NF-kBの転写を抑制することによる初期炎症の抑制効果が示唆される。
【００４３】
試験例４．ＩＣＡＭ−１（Intercellular adhesion molecule-1）抑制効果の評価試験
ＩＣＡＭ−１は、血管内皮細胞に存在し、白血球の遊走に関わる接着因子であり、本試験例３において当該因子の産生抑制効果を評価する。
１日目に線維芽細胞(NB1RGB)を９６ウェルプレートに播種し、２日目に製造例１の抽出物を含有した培地を加えた。３日目に底面よりＵＶＡ（２０ｍＪ）を照射した。照射２４時間後、培養した細胞上清を回収した。血管内皮細胞(HUVEC)を９６ウェルプレートに播種し、翌日、上記回収した線維芽細胞上清を加え培養した。培養６日後、細胞固定およびブロッキングを行い、一次抗体として抗ICAM-1抗体、蛍光ラベルされた二次抗体の順に反応させた。二次抗体を洗浄除去後、蛍光強度（Ｅｘ＝５４４ｎｍ，Ｅｍ＝５９０ｎｍ）を測定した。さらに、hoechst33342によってＤＮＡを蛍光染色してから、蛍光強度(Ｅｘ＝３５５ｎｍ，Ｅｍ＝４６０ｎｍ)を測定し、ＤＮＡあたりのＩＣＡＭ−１量を算出した。製造例１の抽出物の代わりに３０％１，３−ブチレングリコールを添加した区をコントロールとし、紫外線照射した場合と、紫外線未照射の場合の蛍光強度を測定し、紫外線未照射時のコントロールのＩＣＡＭ−１量を１００としたときの相対値を求めた
【００４４】
試験例４の評価結果を表５に示す。
［表５］
2020189832.tif 000006
【００４５】
表５に示す通り、製造例１の抽出物は、紫外線により誘導されるＩＣＡＭ−１の産生を抑制することが確認された。このことから、白血球浸潤による炎症の悪化を抑制する効果が示唆される。
【００４６】
処方例１．化粧水
［成分］                                                        部
オリーブ油                                                    １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール                  ５．０
ブチルパラベン                                                ０．１
製造例１の抽出物                                              ５．０
エタノール                                                    ５．０
グリセリン                                                    ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
水酸化カリウム                                                  適量
精製水                                        全量が１００部となる量
香料                                                            適量
【００４７】
処方例２．乳液
［成分］                                                        部
流動パラフィン                                                ６．０
ヘキサラン                                                    ４．０
ホホバ油                                                      １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート          １．０
親油型ステアリン酸グリセリル                                  １．０
大豆レシチン                                                  １．５
製造例１の抽出物                                              ３．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド                            ２．０
水酸化カリウム                                                ０．５
グリセリン                                                    ３．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
カルボキシメチルセルロース                                    ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム                                        ０．０１
精製水                                        全量が１００部となる量
香料                                                            適量
【００４８】
処方例３．乳液
処方例２の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例３と同様にして乳液を得た。
【００４９】
処方例４．乳液
処方例２の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例３と同様にして乳液を得た。
【００５０】
処方例５．乳液
処方例２の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてニコチン酸アミド３．０部を用いるほかは処方例３と同様にして乳液を得た。
【００５１】
処方例６．ローション
［成分］                                                        部
製造例１の抽出物                                            １０．０
エタノール                                                  １０．０
グリセリン                                                    ３．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
メチルパラベン                                                ０．２
クエン酸                                                      ０．１
クエン酸ナトリウム                                            ０．３
カルボキシビニルポリマー                                      ０．１
キサンタンガム                                                ０．１
香料                                                            適量
水酸化カリウム                                                  適量
精製水                                        全量が１００部となる量
【００５２】
処方例７．エッセンス
［成分］                                                        部
エタノール                                                    ２．０
グリセリン                                                    ５．０
１、３−ブチレングリコール                                    ５．０
メチルパラベン                                                ０．１
ヒアルロン酸                                                  ０．１
製造例１の抽出物                                              ５．０
クエン酸                                                      ０．３
クエン酸ナトリウム                                            ０．６
精製水                                        全量が１００部となる量
【００５３】
実施例８．リキッドファンデーション
［成分］                                                        部
ステアリン酸                                                  ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール                          ２．０
セトステアリルアルコール                                      ０．２
液状ラノリン                                                  ２．０
流動パラフィン                                                ３．０
ミリスチン酸イソプロピル                                      ８．５
プロピルパラベン                                              ０．０５
製造例１の抽出物                                              ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．２
ベントナイト                                                  ０．５
プロピレングリコール                                          ４．０
トリエタノールアミン                                          １．１
メチルパラベン                                                ０．１
精製水                                        全量が１００部となる量
酸化チタン                                                    ８．０
タルク                                                        ４．０
着色顔料                                                        適量
【００５４】
処方例９．ボディシャンプー
［成分］                                                        部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム                      ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）                            ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                                ３．０
メチルパラベン                                                ０．１
製造例１の抽出物                                              ５．０
１，３−ブチレングリコール                                    ２．０
精製水                                        全量が１００部となる量
【００５５】
処方例１０．ヘアシャンプー
［成分］                                                        部
Ｎ−ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                    １０．０
ポリオキシエチレン（３）アルキルエーテル硫酸ナトリウム      ２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン                          １０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                                ４．０
メチルパラベン                                                ０．１
クエン酸                                                      ０．１
製造例１の抽出物                                              ２．０
１、３−ブチレングリコール                                    ２．０
精製水                                        全量が１００部となる量
【００５６】
実施例１１．ヘアコンディショナー
［成分］                                                        部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油                        １．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム                          １．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                          ２．０
２−エチルヘキサン酸グリセリル                                １．０
セタノール                                                    ３．２
ステアリルアルコール                                          １．０
メチルパラベン                                                ０．１
製造例１の抽出物                                              ２．０
１，３−ブチレングリコール                                    ５．０
精製水                                        全量が１００部となる量