(57)【要約】      （修正有）【課題】癲癇性発作の診断方法を提供する。【解決手段】発作および癲癇を同定するためのバイオマーカー、バイオマーカー濃度を測定しそして評価するためのアッセイ、バイオマーカーに基づく予測モデル、ならびにすべての臨床および医療セッティングにおいて、発作および癲癇と関連する一過性および持続性変化を検出し、評価し、そして診断するためのコンピュータシステムを含み、診断法、キットおよび予測モデルは、患者が直ちに診断および／または治療プロトコルに進むことを可能にし、そして療法治療有効性を評価可能にするために、定量的および／または定性的評価をする工程を含む。【選択図】図１
2020190565.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物被験体において、癲癇を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度を正常対照濃度と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
【請求項２】
哺乳動物被験体において、発作を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度比を正常対照濃度比と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
【請求項３】
哺乳動物被験体において、癲癇を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度を正常対照濃度と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
【請求項４】
哺乳動物被験体において、発作を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度比を正常対照濃度比と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
【請求項５】
診断された発作事象を治療するため、プロラクチンまたは他のバイオマーカー診断試験を組み合わせて用いる、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
診断された発作事象を治療するため、プロラクチンまたは他のバイオマーカー診断試験を組み合わせて用いる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
患者に関する定量的データを生成するためのキットであって：
患者から採取した血漿または血清試料において、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５
）の発現レベルを測定可能な診断試薬；
患者から採取した血漿または血清試料において、ＴＡＲＣの発現レベルを測定可能な診断試薬；
患者から採取した血漿または血清試料において、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定可能な診断試薬；および
ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ、およびＴＮＦ−αの発現レベルを、正常対照の発現レベルと比較するための分析装置
を含む、前記キット。
【請求項８】
試料をスコア付けするためのシステムであって、ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの発現レベルを比較して、正常対照から癲癇を判定する、前記システム。
【請求項９】
ソフトウェアを含むコンピュータであって、前記ソフトウェアがｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの発現レベルを比較して、正常対照から癲癇を判定する、前記コンピュータ。
【請求項１０】
ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ、およびＴＮＦ−α、またはそれらの組み合わせの比の、正常対照に比較して改変された血漿または血清発現レベルを有する患者において、発作障害を治療する方法であって、癲癇の療法を患者に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１１】
患者が性別、年齢、人種およびその組み合わせからなる群より選択される特性を所持し、そして正常対照がその特性に基づいて選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
癲癇の療法が、フェニトイン、フォスフェニトイン、カルバマゼピン、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ジバルプロエックス、酢酸エスリカルバゼピン、エトスクシミド、エゾガビン、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリジン、レベチラセタム、ロラゼパム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、プリミドン、チアガビン、トピラメート、バルプロ酸、ゾニサミドならびにその薬学的に許容されうる塩、プロドラッグ、および誘導体からなる群より選択される抗癲癇化合物の療法的に有効な用量である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
発作障害を有する患者を治療するため、ＥＥＧを組み合わせて用いる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
発作障害を有する患者を治療するため、ＭＲＩまたは他の診断試験を組み合わせて用いる、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対するクロスリファレンス
本出願は、その全体が本明細書に援用される、２０１６年１月４日出願の米国仮出願第６２／２７４，５５１号および２０１６年１月４日出願の米国仮出願第６２／２７４，５７８号の恩典を請求する。
【０００２】
政府の援助
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与された助成金番号第１Ｒ４３ＮＳ０７９０２９−０１Ａ１号のもとに米国政府の援助で行われた。米国政府は、本発明において特定の権利を有しうる。
【０００３】
発明の分野
癲癇性発作は診断が困難であり、そしてしばしば類似の症状を有するいくつかの状態から区別することが困難であり、そしてしたがって発作の診断は、多くの場合、長時間を要し、高価で、そして信頼できないプロセスである。予測モデル（ＥｖｏＳｃｏｒｅＴＭ）は、癲癇を除外することによって、臨床医が患者を迅速にトリアージ可能であるようにする。予測モデルは、有効な治療を生じる可能性が最も高い診断プロトコルに、患者を直ちに進めることを可能にし、かなりの時間および費用を節約し、そして患者が不要な試験を受けるのを回避させる。
【０００４】
本発明の解説は、一般的に、炎症および発作に関連するバイオマーカー、ならびに対象の試料から得られる定量的なデータセットをスコア付けすることによって生物学的状態を特徴付ける方法、ならびに本明細書に記載するような多様な他の態様に向けられる。
【０００５】
本出願は、すべての臨床的セッティングにおける発作（癲癇発作）および癲癇の診断および病因分類に関する血液試験に向けられる。いくつかの態様において、発作または発作を有する傾向の指標となる個々のバイオマーカーおよびバイオマーカーパネル／アレイを提供し、これには発作を検出するための方法、発作の治療の有効性を評価するための方法、発作を有する傾向または発作を生じる任意の根底にある障害の治療、および診断キットが含まれる。他の態様において、予測モデルを提供し、発作および癲癇と関連する一過性（ｐｈａｓｉｃ）および持続性（ｔｏｎｉｃ）変化を予測する定量的および定性的スコアの両方を提供する。このスコアを用いて、数値的な「定量的」、あるいは高い、中程度もしくは低い「定性的」または陽性もしくは陰性の「定性的」結果を提供することによって、一過性および持続性変化をレーティングしそして／または測定し、事象を包含し（ｒｕｌｅ  ｉｎ）または除外し、患者の生活の質および療法的有効性を評価することも可能である。
【背景技術】
【０００６】
発作および癲癇は、重大な罹患率、医療コスト、そしてさらには致死率にも関連する、非常に一般的な神経学的障害である。癲癇は、偏頭痛、脳卒中およびアルツハイマー病に次ぐ、４番目に最も一般的な神経学的障害である。癲癇は、米国では２３０万人を超える患者、そして世界中では６５００万人の患者に影響を及ぼす一般的な神経学的疾患であり、かなりの財政上の重荷を伴う。現在、癲癇は、世界人口のおよそ１％に影響を及ぼしていると概算される。癲癇で現在治療されている活性症例の患者総数は１７８０万であり、インド（７５０万）、中国（４９０万）、および米国（２３０万）が他の国をリードしている。癲癇ケアの財政上の重荷はかなりのものであり、主な出費は、適切な診断に必要な試験に起因する。米国における癲癇および発作は、直接および間接的コストで、１７６億
ドルの概算年間コストを生じると概算される。発作を伴う患者にケアを提供する際の主な限界は、一過性虚血性発作、失神、睡眠障害、および心因性事象などの他の障害とは対照的に、臨床的事象を発作と同定する診断血液試験がないことである。
【０００７】
癲癇は自発的および再発性発作によって定義され、非常に蔓延している公衆衛生上の問題である。「発作障害」としても知られる癲癇は、患者が、既知の医学的状態によって引き起こされたのではない２回の発作を起こすまで診断されない。新規症例の７０％では、原因は明らかでない。非誘発性発作を一度起こした人のおよそ３０〜５０％は、再発性発作（癲癇）を発症する。癲癇患者の３分の１は、彼らに効く利用可能な治療がないため、制御されない発作を抱えて生活している。
【０００８】
新規抗癲癇薬剤（ＡＥＤ）を開発するために多くの研究が行われてきたが、しばしばＥＥＧに頼る「代表的な」診断プロトコルは、一定でそして不適切なままである。患者が発作を呈していると推測される場合、事象が癲癇または別の障害によって引き起こされるかを診断するプロセスは、ほとんどの場合、長くそして高価である。患者は、通常、血液試験、画像研究、ＥＥＧ、および利用可能な場合ビデオＥＥＧを含む長時間の精密検査を経る。多くの場合、診断は、他の医学的状態が「除外される」排除の１つであり；そして癲癇の確定診断は、典型的には、通常、入院癲癇監視設備において、長くそして高価な入院期間中、癲癇性発作「事象」が起きている間に、ＥＥＧがそれを記録した場合に行われる。
【０００９】
保健制度との長期契約に関連する高額なコストに加えて、癲癇診断の現在の状態は、別の重大な問題を提示する：初期診断のための優れたトリアージツールがないため、他の根底にある状態のために発作と推測されるものを経験している患者は、ＡＥＤで誤って過剰にまたは過少に治療されるかいずれかとなる可能性があり、この間、その根底にある状態は実際には治療されないままである一方、望ましくない薬物副作用を経験する。したがって、患者の状態（癲癇であるかどうか）の適時診断は、重大な医学的必要性が満たされていないままである。
【００１０】
癲癇診断方法論
癲癇の正確な診断は、臨床医が実際の発作を稀にしか観察しないことに加えて、異なって提示される、多くの異なるタイプの発作および癲癇症候群があるため、非常に困難であり、そして時間が掛かる。さらに、他の神経学的障害が発作を模倣し、これは、誤った診断、重大な潜在的に不都合な事象を伴う不適切な治療、不正確な予後、および医療資源の重大な浪費につながる。臨床的事象、例えば運動障害、例えば振戦、チック、ジスキネシア、失神発作／気絶、一過性虚血性発作（ＴＩＡ）、睡眠障害／睡眠時異常行動、および身体表現性（ｓｏｍａｔｉｆｏｒｍ）精神障害は、熟練臨床医によってさえ、発作と間違えられる可能性がある。発作の確定診断を与えることは、長期的な患者の健康および転帰に重要であり、こうした診断は、初期治療、続く追跡調査および監視、カウンセリングならびに援助につながるであろう。現在、発作または癲癇の確定診断を得ることは高価でそして患者に不都合であり、これは入院評価および一連の高額な試験を必要としうるためである。癲癇の診断は、何年も、非常に高額で、そしてしばしば厄介な医学的−神経学的評価に頼ってきており、これには以下が含まれる：
・「代表的」試験は脳波記録（ＥＥＧ）である。記録中に発作が捉えられると、ＥＥＧ上に、発作活性が迅速なスパイク波として現れる。脳病変、すなわち腫瘍、脳卒中は、正常な電気的脳リズムの遅滞を引き起こしうる。ＥＥＧへの曝露は、典型的には事後アッセイとして行われるものであり、すなわち臨床事象が終了した後であり、そして実際には、正常でありうる。連続ＥＥＧは、長期のパターンを得て、そして起きている最中に発作を「捉える」ことを試みるため、病院内で行われる２４時間ＥＥＧである。これは高額な入院を必要とし、そして臨床事象が入院中に起こることを確かに知る方法はない。明らかに
、これは外来および救急診療部（ＥＤ）セッティングにおいて、介護人に重大なロジスティックな課題を提供し、これは大部分の患者は、事象が終わった後にＥＤを訪れ、そして病歴情報しか集められないためであり；単一発作の確定診断は、本質的に、不可能であり、そしてよくて経験的である。ＥＥＧは、よくて約３０〜５０％の感度（正しく同定されている陽性の比率を測定する）および５０％の特異度である。
【００１１】
・最初の発作様事象を取り巻く環境を決定する病歴、事象の期間および頻度、ならびに開始の年齢。多くの場合、患者または介護者は、正確な診断に必要なレベルで詳細を提供することができない。失われる情報には、通常、開始の時間および事象の期間が含まれ、これは、介護者が居合わせていなかったか、または正確な記録を付けることに失敗したという事実による。発作様の事象は、患者、介護者、および反応者にとって衝撃的な事象であり、そこでは、最初の反応が患者のためにケアされるべきであり、タイミングまたは診断に必要な他の情報の記録を取るべきではない。
【００１２】
・全血球計算（ＣＢＣ）、化学代謝パネル（ＣＭＰ）、および毒物学スクリーン試験を含む実験室研究。これらは、「発作」自体を診断せず、その代り、神経学的機能不全を説明する手がかりを提供しうる。プロラクチンレベルの測定は信頼性がない。ＥＥＧは、いくつかのタイプの脳障害を評価するために用いられる。
【００１３】
・ＭＲＩは、脳の画像およびスキャンを生成するために用いられる技術である。ＭＲＩスキャンは、個体の脳構造を調べるために使用可能である。ＭＲＩスキャンは、それ自体では、個体が癲癇を有しているかどうかを決定することはできないが、他の情報とともに考慮された場合、癲癇が発作様事象の原因であるかどうかを臨床医が決定するのを補助しうる。
【００１４】
・ＰＥＴスキャンは、臨床医に、体内の細胞がどのように機能しているかに関するさらなる情報を与えるため、発作様事象を引き起こす脳の部分を位置決定するために使用可能である。ＰＥＴスキャンはいくつかの症例では有益であるが、これらはしばしば癲癇とは関連しない異常を示し、そして診断プロセスの一部であることはそれほど頻繁ではない。
【００１５】
・腰椎穿刺は、針吸引を通じて脊髄周囲の液体を抜き取り、そして実験室で分析する処置である。これは、発作様事象の原因として、感染、例えば髄膜炎または脳炎を除外するために行われる。
【００１６】
適時診断：満たされていない必要性
診断プロセスは、臨床事象が発作であると指摘されるまでに数か月を要する可能性もあり、そしてしばしば臨床的ケアは、支持的証拠に基づくが確定的証拠には基づかず、極めて経験的であり、多くの場合、過少または過剰な診断および治療を生じる。したがって、適時のそして正確な発作診断は、満たされていない医学的必要性のままである。診断プロセスが長いだけでなく、医療システムに対する重大な負荷となっており、癲癇診断方法論に関する年間額は米国のみで総額１５０億ドルを上回る。したがって、実質的にすべての臨床セッティングにおける癲癇の臨床的評価における重大なギャップは、脳活性における一過性および持続性変化の両方を同定する、単一または再発性事象のいずれかに使用可能な、発作に関する正確な診断血液試験である。癲癇に関する臨床的診断試験が、患者の臨床的状態を説明するために非常に有益であろう、多くの臨床的シナリオが想定可能である：１）個体が家で卒倒した後、ＥＤに連れてこられる；２）個体が路上で混乱し、そしてさまよっているところを発見される；３）入院患者が無反応性の短時間のエピソードまたは精神状態の変化を有する；４）ＥＥＧ、ＣＴ、またはＭＲＩが容易に利用可能でない第三世界の患者。行動可能な結果を伴って、臨床的事象の即時のそして確定的な説明を提供可能である単純な血液試験は、非常な診断的進歩であり、そして癲癇に向かう（「包含」
）または癲癇から離れる（「除外」）さらなる研究を指示し、資源、時間、および出費を節約する。簡潔には、発作の単純な血液試験は、大きなイノベーションである。
【００１７】
癲癇の正確な診断は、臨床医が発作を稀にしか観察せず、そして異なって提示される、多くの異なるタイプの発作および癲癇症候群があるため、非常に困難であり、そして時間が掛かる。癲癇の診断は、長年、患者の病歴（全血球計算および化学代謝プロファイルを含む）および脳波記録（ＥＥＧ）を含む「代表的」試験に頼ってきた。これらを分析したら、臨床医はまた、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）および利用可能な場合は連続ビデオＥＥＧ（ｖＥＥＧ）を実行することも可能である。さらなる診断技術には、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）スキャンおよび腰椎穿刺（脊髄穿刺）が含まれることも可能である。代表的ＥＥＧを用いた癲癇診断の主な課題は、ＥＥＧが癲癇に関しては、２５〜５６％の間の範囲の低い感度を有するという事実である。特異度はこれより優れているが、やはり７８〜９８％で多様であり、これは特異度がＥＥＧを読み取る医師の技術に依存するためである。さらに、しばしば発作障害の適切な診断に適しているが、ＥＥＧは癲癇を有する患者に関しては持続的に正常に見える可能性もある。実際、ＥＥＧは、発作を診断する際の感度を最大にする試験に関する必要性を検証する、本発明者らの研究において、３７〜５５％の感度、９８〜９９％の特異度、９８％のＰＰＶ、および６４〜６６％のＮＰＶを有することが示された。
【００１８】
重要なことに、患者が上述のように、癲癇に関して、何ヶ月もの診断精密検査を受けている間、患者は、典型的には、あるとすればその発作を制御する薬剤を決定するため、ある期間のＡＥＤ薬剤試行錯誤にさらされる。特に、ＡＥＤの副作用の負荷およびある場合には催奇性の結果を考慮した際、この不要な薬剤のコストは莫大であり、そして長期診断プロセスと組み合わせると、医療システムに対する重大な負荷となっており、癲癇診断方法論に関する年間額は米国のみで総額１５０億ドルを上回る。
【００１９】
癲癇診断を合理化する努力において、発作に続いて、プロラクチンレベルが上昇していることが観察されている。発作診断のためのプロラクチン適用のさらなる臨床的評価によって、プロラクチンは、試料が発作の１０〜２０分の間に収集された場合にのみ、利用可能な発作バイオマーカーであることが示された。さらに、プロラクチンは、原発性または続発性に生成される持続性間代性発作ならびに側頭葉起源の部分的複雑発作を含む発作のサブセットにしか適用可能でない。
【００２０】
したがって、実行可能なウィンドウが短い（数分後）ことと併せて、診断感度、特異度、および正確度が不適切であるため、プロラクチンは現実的な発作バイオマーカーとは見なされず、そして今日では、臨床的セッティングで用いられることがあったとしても稀である。
【００２１】
炎症および発作の間の関連
発作は、発作が始まる脳組織において炎症反応を誘導する。例えば、難治性癲癇患者の切除脳標本において、ロバストな炎症反応が存在する可能性があり、これには非常に重大な炎症促進性サイトカインおよびケモカイン、例えば腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、およびインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）が含まれる。増加したレベルのＴＮＦα、ＩＬ−８、ＩＬ−６、およびＩＦＮγはまた、マウス発作モデルでも検出されてきており、脳における炎症プロセスが発作の病因に、そして慢性癲癇病巣の確立に寄与するというアイディアが強調される。これらのサイトカインの多くは、発作直後の発作患者の脳脊髄液中にも検出されている。いくつかのサイトカイン受容体サブタイプの発現もまた、ニューロンおよび星状細胞上で上方制御されており、活性化された細胞内シグナル伝達の機構が示唆され、脳におけるサイトカインのオートクリンおよびパラクリン作用が強調される。サイトカインお
よび古典的神経伝達物質、例えばグルタミン酸およびＧＡＢＡの間の機能的相互作用は、これらの相互作用がニューロン興奮性におけるサイトカインが仲介する確立された変化の根底にあり、したがって発作を促進する可能性を示唆する。急性発作が血液脳関門浸透性増加を誘導可能であるという明らかな証拠もまたある。この効果が、活性化されたＴ細胞およびマクロファージの脳組織内への通過を促進し、脳における炎症反応を促進して、そして脳特異的炎症性サイトカインおよびケモカインの末梢血内への漏洩を助長することが示されている。
【００２２】
ＩＣＡＭ５は、もっぱら脳において発現されているニューロン性糖タンパク質であり、そしてＴ細胞運動性および走化性の阻害を通じて抗炎症性タンパク質として機能する。ＩＣＡＭ５は、ニューロンにおいて、細胞体および樹状突起に限局され、そして樹状糸状仮足で濃縮され、より成熟した樹状突起では発現がより少ない。ＩＣＡＭ５は９つの外部免疫グロブリンドメインに続いて、膜貫通および細胞質ドメインを持つ、複雑な構造を有する。外部部分は、ベータ１およびベータ２インテグリン、ならびにマトリックスタンパク質ビトロネクチンに結合する一方、膜貫通ドメインはプレセニリンに結合し、そして細胞質部分はアルファ−アクチニンおよび細胞質タンパク質のＥＲＭファミリーに結合する。切断され、そして遊離した際、ＩＣＡＭ５は可溶性型（ｓＩＣＡＭ５）となり、そして細胞外空間および血液内に放出されうる。ｓＩＣＡＭ５は神経突起伸長を強力に刺激する。免疫電子顕微鏡研究において、ＩＣＡＭ５は、錐体細胞樹状突起の後シナプス棘突起の表面膜に局在するが、海馬ＣＡ１領域中の軸索末端のものには局在しないことが見出された。海馬におけるシェーファー側枝ＣＡ１シナプスの長期増強（ＬＴＰ）は、抗ＩＣＡＭ５抗体または組換えｓＩＣＡＭ５タンパク質でＩＣＡＭ５を遮断することによって抑制された。これらの観察は、ｓＩＣＡＭ５が仲介する細胞間相互作用が、ＬＴＰ発展における重要な段階として役割を持つことを示唆する。その後の研究では、ｓＩＣＡＭ５が脳におけるニューロンへの白血球結合のための主要な接着分子として作用しうることが示された。１つの小さいコホートにおいて、ｓＩＣＡＭ５レベルの増加が、側頭葉癲癇患者の脳脊髄液および血清で報告され、多発性硬化症またはアルツハイマー病では変化がないことが報告された。ＮＭＤＡ受容体の活性化は、メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）仲介性ＩＣＡＭ５切断を通じた樹状突起発展を促進し、そしてニューロン興奮性に寄与する。さらに、ｓＩＣＡＭ５がマウス脳炎モデルの脳において、ケモカイン産生を調節する際に重要な役割を果たすことが立証された。ＩＣＡＭ−５外部ドメインは、単細胞記録を用いたＡＭＰＡミニ励起後シナプス電流（ｍＥＰＳＣ）の振動数の増加を刺激することが見出されたが、振幅は増加させなかった。ビオチン化および沈殿アッセイを用いて、ＩＣＡＭ−５外部ドメインが、ＧｌｕＡ１  ＡＭＰＡＲサブユニットの膜レベル増加を引き起こすが、ＧｌｕＡ２のレベルは増加させないことが見出されている。ＧｌｕＡ１リン酸化のＩＣＡＭ−５関連増加が見出された。同時に、ＩＣＡＭ−５は、樹状突起数の増加を引き起こすことなく、樹状突起に沿ってＧｌｕＡ１表面染色の増加を引き起こす。これは、ｓＩＣＡＭ−５がグルタミン酸作動性伝達を増加させ、そして脳ネットワーク活性変化によって影響を受けうることを示唆した。
【００２３】
ＴＡＲＣ（胸腺および活性化制御ケモカイン；ＣＣＬ１７）は、主に、胸腺および血液単核細胞において発現されるケモカイン（すなわち、アレルギーおよび他の炎症状態において、ＴおよびＢリンパ球、単球、好中球、好酸球および好塩基球の運動に関与するサイトカイン）である。ＴＡＲＣは、炎症促進性サイトカインおよびリンパ球化学誘引物質として機能し、Ｔ細胞上のＣＣＲ４受容体に特異的に結合し、そしてＴ細胞株において走化性を誘導する。ＴＡＲＣはＣＣＲ４に結合するため、Ｔｈ２型ケモカインと見なされる。ＴＡＲＣは、樹状細胞、内皮細胞、角化細胞および線維芽細胞を含む、多数の細胞タイプによって産生される。血清ＴＡＲＣレベルは、小児および成人に影響を及ぼす皮膚の炎症性障害であるアトピー性皮膚炎における疾患活性の有用なアッセイであることが示されてきている。実際、ＴＡＲＣは炎症のための確立された全身性の抵抗器である。ＴＡＲＣは
、脳の脈絡叢で低レベルの発現を示すが、ニューロンまたは星状細胞による最低限の発現を有する。しかし、発作の結果としての血漿ＴＡＲＣ発現の変化に関してはほとんど知られていない。
【００２４】
ＴＮＦ−αは、脳卒中、アルツハイマー病、癌および自閉症を含む、ある範囲の神経学的障害に関連付けられている分泌型サイトカインである。多くの研究によって、実験癲癇モデル系ならびにＣＳＦおよび血清を含むヒト試料においての両方で、ＴＮＦαレベルが調べられてきている。ラットにおけるカイニン酸誘導性発作は海馬におけるＴＮＦ−α発現を誘導する。自発性発作を有するイヌにおいて、ＴＮＦ−αレベルはＣＳＦ中で上昇し、そしてマウス発作モデルにおけるＴＮＦ−αシグナル伝達カスケードの操作は発作を減弱することが可能である。ＴＮＦ−αレベルは、側頭葉癲癇を有する患者においてロバストに上昇しており、ＴＮＦ−αが、特に発作のセッティングにおいて、脳における炎症の広いマーカーであることが示唆される。
【００２５】
本明細書に示すように、記載する発明は、分野に欠けているものを改良する。実際、本発明者らの研究において、実験モデルおよび癲癇を有するヒトの両方において、炎症および発作の間の関連に基づいて、患者血漿における最初のプロテオミクススクリーンを用いて、発作に反応した一過性および持続性変化を示すと仮定される炎症性サイトカインに関連するバイオマーカーパネルを探査した。特定の血漿タンパク質レベルの測定可能な変化が発作に関する診断血液試験を生じうると推測された。２０人の癲癇患者のコホートにおいて、ベースライン（発作前）および発作２４時間後（ＥＥＧ記録によって、ＥＭＵにおいて立証される）、多重ＥＬＩＳＡによって血漿試料を分析した。細胞内接着分子５の可溶性型（ｓＩＣＡＭ５またはテレンセファリン）に対する胸腺および活性制御ケモカイン（ＴＡＲＣまたはＣＣＬ１７）の比は、正常対照に比較して、発作患者において、統計的に異なることが見出された。続いて、対照個体に比較して、発作を患う患者において、血漿ＴＮＦαレベルもまた統計的に有意に異なることが見出された。癲癇監視設備に入院した１３１人の神経学患者および３０人の正常対照の別のコホートにおいて、発作前、および発作後１分から７２時間を超えるまでの患者試料の両方を分析し、そして癲癇および非癲癇事象血漿試料の間を区別可能であるＴＮＦα、ＴＡＲＣおよびｓＩＣＡＭ５を伴うアルゴリズムを考案した。
【発明の概要】
【００２６】
１つの態様において、本発明には、患者由来の血漿を有効にスクリーニングして、発作後の選択されたタンパク質の測定可能な変化を同定する、血液に基づく診断試験であるＥｖｏＳｃｏｒｅが含まれる。炎症プロセスと関連する３つのタンパク質、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５、およびＴＮＦ−αを用いて、発作の診断試験に変換可能な、関連スコアを伴う予測アルゴリズム（ＥｖｏＳｃｏｒｅ予測モデルＴＭ）を生成する。タンパク質レベルを患者人口統計特性と組み合わせるアルゴリズムは、強力な診断性能を伴って、発作および癲癇を有する患者における、一過性および持続性変化（急性および慢性）の両方の予測を示し、患者の除外ならびに発作および癲癇を有する患者の包含の両方を行い、治療時間および経過に渡って、患者をモニターする能力を伴う。ＥｖｏＳｃｏｒｅは、すべての臨床的および医療セッティングにおいて使用可能である。
【００２７】
１つの態様において、本発明には、哺乳動物被験体において、癲癇および／または発作を診断するための方法が含まれる。いくつかの態様において、方法には、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、哺乳動物被験体から得た前記血漿または血
清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度を正常対照濃度と比較する工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度比を正常対照濃度比と比較する工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、哺乳動物被験体において癲癇を診断する工程が含まれることも可能である。
【００２８】
１つの態様において、本発明には、哺乳動物被験体において、癲癇および／または発作を診断するための方法であって、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含むことも可能な前記方法が含まれる。いくつかの態様において、方法には、哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度を正常対照濃度と比較する工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度比を正常対照濃度比と比較する工程が含まれることも可能である。いくつかの態様において、方法には、哺乳動物被験体において癲癇を診断する工程が含まれることも可能である。
【００２９】
１つの態様において、本発明には、患者に関する定量的データを生成するためのキットが含まれる。いくつかの態様において、キットには、患者から採取した血漿または血清試料において、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定可能な診断試薬が含まれることも可能である。いくつかの態様において、キットには、患者から採取した血漿または血清試料において、ＴＡＲＣの発現レベルを測定可能な診断試薬が含まれることも可能である。いくつかの態様において、キットには、患者から採取した血漿または血清試料において、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定可能な診断試薬が含まれることも可能である。いくつかの態様において、キットには、ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ、およびＴＮＦ−αの発現レベルを、正常対照の発現レベルと比較するための分析装置が含まれることも可能である。
【００３０】
１つの態様において、本発明には、試料をスコア付けするためのシステムであって、ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの発現レベルを比較して、正常対照から癲癇を判定する、前記システムが含まれる。
【００３１】
１つの態様において、本発明には、ソフトウェアを有するコンピュータであって、前記ソフトウェアがｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの発現レベルを比較して、正常対照から癲癇を判定する、前記コンピュータが含まれる。
【００３２】
１つの態様において、本発明には、ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ、およびＴＮＦ−α、またはそれらの組み合わせの比の、正常対照に比較して改変された血漿または血清発現レベルを有する患者において、発作障害を治療する方法であって、癲癇の療法を患者に投与する工程を含む、前記方法が含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
前述の概要、ならびに本発明の以下の詳細な説明は、付随する図と組み合わせて読んだ際によりよく理解されるであろう。
【図１】図１は、発作の異なるタイプに関する基準を例示する。
【図２】図２は、アルゴリズムの目的および最終的に使用可能な結果を例示する。
【図３】図３は、ロジスティック回帰による個々の事象診断（２４時間）のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【図４】図４は、ロジスティック回帰による患者診断（２４時間）のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【図５】図５は、ロジスティック回帰による患者診断（２４時間）のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【図６】図６は、分類および回帰ツリーアルゴリズムを用いて、分類ツリーアルゴリズムが、対照試料から発作事象を正しく階層化する性能を例示する。
【図７】図７は、分類ツリー分析によって定義されるリスク群を含む多重ロジスティック回帰による個々の事象診断（２４時間）のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【図８】図８は、分類ツリー分析によって定義されるリスク群を含む多重ロジスティック回帰による個々の事象診断（すべての時間）のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【図９】図９は、分類ツリー分析によって定義されるリスク群を含む多重ロジスティック回帰による患者診断（２４時間）のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【図１０】図１０は、分類ツリー分析によって定義されるリスク群を含む多重ロジスティック回帰による患者診断（２４時間）のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【図１１】図１１は、分類ツリー分析によって定義されるリスク群を含む多重ロジスティック回帰による外来結果のモデリングから得られるＲＯＣ曲線を例示する。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
癲癇においては、発作開始領域内で、免疫反応が生じる。いくつかの別個の組織病変タイプ、例えば結節性硬化症（ＴＳＣ）および内側側頭葉硬化症（ＭＴＳ）において、炎症促進性サイトカイン、例えばＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｆａｓ、およびＦａｓリガンドが活性化される。さらに、補体結合および沈着、改変された血液脳関門浸透性、ならびにマクロファージ浸潤がある。炎症は、ＩＬ−１β産生、ＴＬＲ４、ＮＦκＢ、ｍＴＯＲ、およびＭＡＰＫカスケードの活性化、活性化リンパ球、マイクログリアおよびマクロファージの誘引、ならびに星状細胞生理の改変を含む、非常に多様な下流効果を生じうる。さらに、抗炎症サイトカインとの相対バランスもまた調節される可能性もあり、ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３のようなサイトカインレベルの変化を示す。理論によって束縛されることなく、これらの変化は、発作につながり、発作によって引き起こされる疾患プロセスの結果であり、そして／または発作の結果である可能性もある（図１を参照されたい）。
【００３５】
開発される診断試験およびアルゴリズムは、そうでないものから発作を、そして正常から癲癇を区別することが可能である（図２を参照されたい）。本出願は、発作に関連するマーカーに関する当該技術分野における必要性に取り組む。
【００３６】
本明細書において、略語「Ａ１ＡＴ」および「α１ＡＴ」は、アルファ１−アンチトリプシンを指し、これはまた、セルピンペプチダーゼ阻害剤、クレードＡ（アルファ−１アンチプロテイナーゼ、アンチトリプシン）、メンバー１としても知られる。
【００３７】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、別に示されない限り、交換可能に用いられる。
用語「原因不明性」は、本明細書において、未知の起源の発作または癲癇を指す。
【００３８】
用語「一過性」は、本明細書において、即時のまたは突然の事象または発作に直接関連する血液バイオマーカーの変化を指す。血液における変化は短時間であり、そして事象後特定の期間以内に回復する。
【００３９】
用語「持続性」は、本明細書において、患者の全般的な状態に関連する血液バイオマー
カーにおける持続性のまたは一定の変化を指す。レベルは、対照被験体におけるものから区別可能であり、そして患者がその状態の症候性の事象を経験しているかどうかに基づいて、顕著には変動しない。
【００４０】
用語「急性」は、本明細書において、即時のまたは突然の事象または発作に直接関連する血液バイオマーカーの変化を指す。血液における変化は短時間であり、そして事象後特定の期間以内に回復する。
【００４１】
用語「慢性」は、患者の全般的な状態に関連する血液バイオマーカーにおける持続性のまたは一定の変化を指す。レベルは、対照被験体におけるものから区別可能であり、そして患者がその状態の症候性の事象を経験しているかどうかに基づいて、顕著には変動しない。
【００４２】
用語「疾患」、「障害」、または「状態」は、本明細書において、発作につながるか、これを引き起こすか、またはこれに影響を及ぼすと認識されるかまたは診断される任意の徴候、症状、あるいは徴候または症状の組み合わせを指す。該用語には、限定されるわけではないが、外傷、炎症および自己免疫反応、生理学的形成異常、および遺伝的欠損が含まれる。
【００４３】
略語「ＧＭ−ＣＳＦ」は、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子を指す。
略語「ＨＧＦ」は、肝細胞増殖因子を指す。
略語「ＩＣＡＭ−１」は、細胞間接着分子１を指す。
【００４４】
用語「発作性の」は、発作などの生理学的状態または事象を指す。
略語「指標」（または「の指標」）は、予測（傾向を含む）および検出（発作発生に近接した）の両方を含み、そして別に示さない限り、該用語を含む態様は、予測に特異的な、検出に特異的な、そして予測のための、ならびに過去または現在の事象の検出のための態様を定義し、そして含むことが意図される。用語「傾向」と組み合わせた用語、指標の使用は、単に、将来の事象に向かう傾向に対して、過去の事象の証拠を強調することが意図されるが、単に指標の使用は、別に示さない限り、傾向を含むと意図される。
【００４５】
略語「ＢＤＮＦ」は、脳由来神経栄養性因子を指す。
略語「ＭＣＰ−１」は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）としてもまた知られる、単球走化性タンパク質１、またはその変異体を指す。
【００４６】
略語「ＭＤＣ」は、Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２（ＣＣＬ−２２）としてもまた知られる、マクロファージ由来サイトカイン、またはその変異体を指す。
略語「ＭＩＰ−１β」は、ケモカインＣ−Ｃモチーフリガンド４（ＣＣＬ−４）としてもまた知られる、マクロファージ炎症タンパク質−１β、またはその変異体を指す。
【００４７】
略語「ＩＰ−１０」は、インターフェロンガンマ誘導タンパク質１０、小分子誘導性サイトカインＢ１０、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０）、またはその変異体を指す。
【００４８】
エオタキシンは、エオタキシン−１としてもまた知られ、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＣＬ１１）、またはその変異体を指す。
エオタキシン−３は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２６（ＣＣＬ２６）、またはその変異体を指す。
【００４９】
用語「試料」は、本明細書において、別に示さない限り、血漿または血清試料を指す。
本明細書に記載する各態様において、血漿の使用は、血漿または血清の代替物から独立の態様として意図される。本明細書に記載する各態様において、血清の使用は、血漿または血清の代替物から独立の態様として意図される。本明細書に記載する各態様において、限定されるわけではないが、脳脊髄液（ＣＳＦ）、切除によって得られる組織試料、唾液、および尿を含む別の生物学的試料の使用が、試料を得るため、そして試料を分析するため、当該技術分野の慣用技術にしたがって意図される。試料を使用前に処理してもよく、例えば血液から血漿を調製し、粘性液を希釈する等してもよい。処理法は、ろ過、蒸溜、抽出、濃縮、干渉構成要素の不活性化、試薬の添加等を伴うことも可能である。
【００５０】
用語「発作（癲癇発作）」および「癲癇」は、交換可能に用いられ、別に示さない限り、癲癇の臨床診断には、２回の誘発されない発作が必要である。用語、癲癇はまた、本出願の出願時現在で理解されるような発作の理解またはその理論によって定義されることも可能である。癲癇には、癲癇のすべての型が含まれ、そして癲癇はこれらに限定されない。
【００５１】
用語「被験体」、「個体」、および「患者」は、本明細書において交換可能に用いられ、別に示さない限り、試料を採取する哺乳動物を指す。該用語は、ヒトに特異的な態様を含むと意図される。被験体、個体または患者は、発作または発作が症候性である障害に罹患しているか、これらのリスクがあるか、またはこれらを有する傾向があると推測されることも可能である。該用語にはまた、食品のためにまたはペットとして飼育される家畜が含まれ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、および動物園動物が含まれる。治療のために典型的な被験体には、１またはそれより多い発作に感受性であるか、これを患っているか、または患ったことがあるヒトが含まれる。特に、本発明にしたがった治療に適切な被験体は、１またはそれより多い発作に感受性であるかまたはこれを患ったことがあるヒトである。
【００５２】
略語「ＴＡＲＣ」は、「胸腺および活性化制御ケモカイン」を指し、そして本明細書において、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１７（ＣＣＬ１７）と交換可能に用いられる。
【００５３】
用語「テレンセファリン」、「ＴＬＮ」、「ＩＣＡＭ−５」および「ＩＣＡＭ５」は本明細書において交換可能に用いられる。
用語「傾向」、例えば「発作を有する傾向」は、事象、例えば発作が起こるかまたは再発する、合理的な医学的可能性を指すよう意図される。該用語はまた、こうした事象が、治療の前に、後に、または進行中に、起こりうる頻度も含む。
【００５４】
本明細書において、用語「治療する」または「治療すること」は、任意の臨床的セッティングにおいて、特定の状態、例えば発作または発作関連障害の１またはそれより多い症状または特徴を、部分的にまたは完全に軽減するか、改善するか、寛解するか、阻害するか、防止するか、その開始を遅延させるか、その重症度を減少させるか、そして／またはその発生を減少させるために用いられる任意の方法を指す。治療は、状態に関連する病理を発展させるリスクを減少させる目的のため、状態の徴候を示さない、そして／または状態の初期徴候のみを示す被験体に投与されることも可能である。したがって、被験体の状態に応じて、本発明のいくつかの側面において、該用語は、状態を防止することを指すことも可能であり、そして開始の防止、または状態に関連する症状の防止が含まれる。該用語にはまた、状態および／または症状が重度に進行しないように、状態および／または症状を維持することも含まれる。治療は、急性または慢性方式のいずれで実行されることも可能である。該用語はまた、状態の苦痛の前に、状態またはこうした状態と関連する症状の重症度を減少させることも指す。こうした防止または苦痛の前の状態の重症度の減少は、投与時点では状態に苦しんではいない被験体への療法の投与を指す。防止にはまた、状
態の再発、その頻度、あるいはこうした状態に関連する１またはそれより多い症状の再発を防止することもまた含まれる。用語「治療」および「療法的に」は、「治療する」を上に定義するように、治療の行為を指す。介入の目的は、状態と闘うことであり、そしてこれには、症状または合併症の開始を防止するかまたは遅延させるか、あるいは症状または合併症を軽減するか、あるいは状態を取り除くための療法の投与が含まれる。例えば、治療は、障害と関連する症状またはその頻度（例えば発作の傾向）を改善するために用いられることも可能である。
【００５５】
用語「結節性硬化症」、「結節性硬化症症候群」、ならびに略語／頭字語「ＴＳ」および「ＴＳＣ」は、本明細書において、交換可能に用いられる。
略語「ＶＣＡＭ−１」は、血管細胞接着分子１を指す。
【００５６】
略語「ＶＥＧＦ−Ａ」は、血管内皮増殖因子Ａを指す。
ｓＩＣＡＭ５
ＩＣＡＭ−５は、健康な患者に比較して、癲癇患者の血漿または血清において、示差的に分布している、ニューロン由来タンパク質である。可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＭＡ５、ｓＩＣＡＭ−５、またはその変異体としてもまた知られる）は、炎症に反応して、メタロプロテアーゼによってＩＣＡＭ−５から切断される。予期せぬことに、改変されたｓＩＣＡＭ−５発現は、健康な患者に比較して、発作患者の症例において見出されることが見出されている。ｓＩＣＡＭ−および／または組み合わせ、ｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣおよび／またはｓＩＣＡＭ５／ＴＮＦ−α比は、健康な対照から改変されている。
【００５７】
１つの態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清において、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）に結合可能なプローブを含む、ポリペプチド発現パネルまたはアレイを提供し、ここで、健康な対照に比較して、ｓＩＣＡＭ−５の改変された血漿または血清濃度は、発作または発作を有する傾向の指標である。
【００５８】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００５９】
ＴＡＲＣ
ＴＡＲＣもまた、健康な患者に比較して癲癇患者の血漿または血清において示差的に分布している有効なマーカーであり、そして発作患者において上昇していることが示されている。１つの態様において、ＴＡＲＣおよび／または組み合わせ、ｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣおよび／またはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣ比は、健康な対照から改変されている。
【００６０】
別の態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清において、ＴＡＲＣに結合可能なプローブを含む、ポリペプチド発現パネルまたはアレイを提供し、ここで、健康な対照に比較して、ＴＡＲＣの改変された血漿または血清濃度は、発作または発作を有する傾向の指標である。
【００６１】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００６２】
ＴＮＦ−α
ＴＮＦ−αもまた、健康な患者に比較して癲癇患者の血漿または血清において示差的に分布している有効なマーカーであり、そして発作患者において上昇していることが示されている。１つの態様において、ＴＮＦ−αおよび／またはｓＩＣＡＭ−５／ＴＮＦ−αお
よび／またはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣ比は、健康な対照から改変されている。
【００６３】
別の態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清において、ＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチド発現パネルまたはアレイを提供し、ここで、健康な対照に比較して、ＴＮＦ−αの改変された血漿または血清濃度は、発作または発作を有する傾向の指標である。
【００６４】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００６５】
ｓＩＣＡＭ５およびＴＡＲＣ
哺乳動物被験体の血漿または血清においてｓＩＣＡＭ−５に結合可能なプローブ、および血清および血漿においてＴＡＲＣに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイもまた提供し、ここで、健康な対照に比較し、ｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化は、発作または発作を有する傾向の指標である。
【００６６】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００６７】
ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−α
哺乳動物被験体の血漿または血清においてｓＩＣＡＭ−５に結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイもまた提供し、ここで、（健康な対照に比較した）ｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化は、発作または発作を有する傾向の指標である。
【００６８】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００６９】
ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−α
哺乳動物被験体の血漿または血清においてＴＡＲＣに結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイもまた提供し、ここで、（健康な対照に比較した）ＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化は、発作または発作を有する傾向の指標である。濃度は、予測モデルにおいて、数値または対数として取り込まれてもよい。
【００７０】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００７１】
ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−α
哺乳動物被験体の血漿または血清においてｓＩＣＡＭ−５に結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＡＲＣに結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイもまた提供し、ここで、（健康な対照に比較した）ｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化ならびに／
あるいはＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化は、発作または発作を有する傾向の指標である。
【００７２】
別の態様において、発作を予測するかまたは検出するための方法であって、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含み、個々に、組み合わせて（マーカーの任意の２つ）、または３つすべてを総合的にともに、健康な被験体に比較した、ｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化、ならびに／あるいはＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化、ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化が、発作または発作を有する傾向の指標である、前記方法を提供する。
【００７３】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００７４】
ｓＩＣＡＭ５／ＴＡＲＣ比
さらなる態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清においてｓＩＣＡＭ−５に結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＡＲＣに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイであって、対照（健康な非癲癇／非発作）に比較して、試験した被験体におけるｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣの比の変化が健康な対照に比較して改変され、そして発作または発作を有する傾向の指標である、前記ポリペプチドまたはアレイを提供する。
【００７５】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００７６】
ｓＩＣＡＭ５／ＴＮＦ−α比
さらなる態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清においてｓＩＣＡＭ−５に結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイであって、対照（健康な非癲癇／非発作）に比較して、試験した被験体におけるｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはｓＩＣＡＭ−５／ＴＮＦ−αの比の変化が健康な対照に比較して改変され、そして発作または発作を有する傾向の指標である、前記ポリペプチドまたはアレイを提供する。
【００７７】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００７８】
ＴＡＲＣ／ＴＮＦ−α比
さらなる態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清においてＴＡＲＣに結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイであって、対照（健康な非癲癇／非発作）に比較して、試験した被験体におけるＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣの比の変化が健康な対
照に比較して改変され、そして発作または発作を有する傾向の指標である、前記ポリペプチドまたはアレイを提供する。
【００７９】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００８０】
比の組み合わせ
さらなる態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清においてｓＩＣＡＭ−５に結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＡＲＣに結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイであって、対照（健康な非癲癇／非発作）に比較して、試験した被験体におけるｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣおよび／またはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣおよび／またはｓＩＣＡＭ−５／ＴＮＦ−αの比の変化が健康な対照に比較して改変され、そして発作または発作を有する傾向の指標である、前記ポリペプチドまたはアレイを提供する。比は、予測モデルにおいて、線形または対数単位として用いられてもよく、そして／または逆数として用いられてもよい。
【００８１】
個々の測定値および比の組み合わせ
さらなる態様において、哺乳動物被験体の血漿または血清においてｓＩＣＡＭ−５に結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＡＲＣに結合可能なプローブ、および血漿または血清においてＴＮＦ−αに結合可能なプローブを含む、ポリペプチドまたはアレイであって、対照（健康な非癲癇／非発作）に比較して、試験した被験体におけるｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化ならびに／あるいはｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣおよび／またはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣおよび／またはｓＩＣＡＭ−５／ＴＮＦ−αの比の変化が健康な対照に比較して改変され、そして発作または発作を有する傾向の指標である、前記ポリペプチドまたはアレイを提供する。個々の濃度および比の任意の組み合わせが使用可能である。
【００８２】
線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００８３】
患者人口統計学的特性
別の態様において、ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの任意のバイオマーカー濃度ならびに／あるいはｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣおよび／またはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣおよび／またはｓＩＣＡＭ５／ＴＮＦ−αのバイオマーカー濃度の比の任意の組み合わせと組み合わせた際、限定されるわけではないが、年齢、性別および／または人種を含む、患者人口統計学的または患者と関連する他の特性は、正常または健康な対照と比較して、発作が起こったことがあることまたは発作を有する傾向を示しうる。
【００８４】
患者人口統計学的特性と組み合わせた際、線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００８５】
他のバイオマーカー
ＩＣＡＭ−５は、健康な患者に比較して、癲癇患者の血漿または血清において、示差的に分布している、ニューロン由来タンパク質である。可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＭＡ５、ｓＩＣＡＭ−５、またはその変異体としても知られる）は、炎症に反応して、メタロプロテアーゼによってＩＣＡＭ−５から切断される。予期せぬことに、改変されたｓＩＣＡＭ−５発現は、健康な患者に比較して、発作患者の症例において見出されることが見出されている。そして／またはｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣおよび／またはｓＩＣＡＭ５／ＴＮＦ−α比は、健康な対照から改変されている。有用なさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−８、およびＩＦＮ−γが含まれる。有用なさらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、ＴＡＲＣ、ＴＮＦ−α、物質ＰおよびプロスタグランジンＥ２、神経増殖因子（ＮＧＦ）、ＣＣＬ−５（ＲＡＮＴＥＳ）、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）、単球炎症タンパク質（ＭＩＰ−１α）が含まれる。プローブには、単独でまたは組み合わせて、α１ＡＴ、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＨＧＦ、およびＶＥＧＦ−Ａがさらに含まれてもよい。プローブにはまた、補体カスケードの１またはそれより多い構成要素、例えばＣ１ｑ、Ｃ３ｃおよびＣ３ｄも含まれてもよい。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００８６】
ＴＡＲＣもまた、健康な患者に比較して癲癇患者の血漿または血清において示差的に分布している有効なマーカーであり、そして発作患者において上昇していることが示されている。ＴＡＲＣおよび／またはｓＩＣＡＭ−５／ＴＡＲＣおよび／またはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣ比は、健康な対照から改変されている。有用なさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−８、およびＩＦＮ−γが含まれる。有用なさらにさらなるマーカーには、単独でおよび／または組み合わせて、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、およびＴＮＦ−αが含まれる。プローブには、α１ＡＴ、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＨＧＦ、およびＶＥＧＦ−Ａがさらに含まれてもよい。プローブにはまた、補体カスケードの構成要素、例えばＣ１ｑ、Ｃ３ｃおよびＣ３ｄのものも含まれてもよい。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００８７】
ＴＮＦ−αもまた、健康な患者に比較して癲癇患者の血漿または血清において示差的に分布している有効なマーカーであり、そして発作患者において上昇していることが示されている。ＴＮＦ−αおよび／またはｓＩＣＡＭ−５／ＴＮＦ−αおよび／またはＴＮＦ−α／ＴＡＲＣ比は、健康な対照から改変されている。有用なさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−８、およびＩＦＮ−γが含まれる。有用なさらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１０、ＩＬ−
１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、およびＴＡＲＣが含まれる。プローブには、α１ＡＴ、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１、ＨＧＦ、およびＶＥＧＦ−Ａがさらに含まれてもよい。プローブにはまた、補体カスケードの構成要素、例えばＣ１ｑ、Ｃ３ｃおよびＣ３ｄのものも含まれてもよい。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００８８】
本発明のパネルまたはアレイにはまた、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１β、およびＩＦＮ−γの１つまたはそれより多くに結合可能な１またはそれより多いプローブも含まれてもよく、ここで、健康な対照に比較した１またはそれより多くの改変された血漿または血清濃度は、発作または発作を有する傾向の指標である。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００８９】
さらにさらなる態様において、本明細書に記載するポリペプチド発現パネルまたはアレイには、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、およびＴＮＦ−αに結合可能な１またはそれより多いプローブが含まれてもよく、ここで、（健康な個体に比較して）ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの１またはそれより多くの改変された血漿または血清濃度は、発作を有する傾向を示す。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９０】
別の態様において、発作を予測するかまたは検出するための方法であって、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含み、ここで健康な対照と比較したｓＩＣＡＭ−５の血漿または血清濃度の変化、ならびに／あるいはＴＡＲＣの血漿または血清濃度の変化、ならびに健康な対照と比較したＴＮＦ−αの血漿または血清濃度の変化が、発作が起こったことがあることまたは発作を有する傾向を示す、前記方法を提供する。線形または
対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９１】
方法にはまた、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１βおよび／またはＩＦＮ−γの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬と、血漿または血清試料を接触させる工程が含まれてもよく、ここで健康な対照に比較した、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１βおよびＩＦＮ−γの１またはそれより多くの改変された血漿または血清濃度は、発作を有する傾向を示す。さらにさらに、方法には、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と、血漿または血清試料を接触させる工程が含まれてもよく、ここで、健康な個体に比較して、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、およびＴＮＦ−αの１またはそれより多くの改変された血漿または血清濃度は、発作が起こったことがあることまたは発作を有する傾向を示す。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９２】
さらに別の態様において、発作または発作が症候性である障害の治療の有効性を評価するための方法であって、治療前に哺乳動物被験体から得た第一の血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）および／またはＴＡＲＣおよび／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬と接触させ、そして治療に続いて哺乳動物被験体から得た第二の血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）および／またはＴＡＲＣおよび／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含み、ここで、第一の血漿または血清試料に比較した、第二の血漿または血清試料におけるｓＩＣＡＭ−５の改変された血漿または血清レベルおよび／またはＴＡＲＣの改変されたレベル、ならびに／あるいは第三の血漿または血清試料におけるＴＮＦ−αの改変されたレベルが、発作または発作が症候性である障害の治療の有効性を示す、前記方法を提供する。該方法には、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬と、第一の血漿または血清試料および第二の血清または血漿試料を接触させる工程がさらに含まれてもよく、ここで、第一の血漿または血清試料に比較した、第二の血漿または血清試料におけるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの改変された濃度は、発作または発作が症候性である障害の治療の有効性を示す。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ
−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９３】
さらにさらなる態様において、１またはそれより多い発作が炎症から生じるかどうかを判定するための方法であって、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして／または哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含み、ここで、健康な対照に比較したｓＩＣＡＭ−５の改変された血漿または血清濃度ならびに／あるいはＴＡＲＣの改変された血漿または血清濃度が、炎症の基礎または発作の構成要素を示す、前記方法を提供する。該方法には、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬と、血漿または血清試料を接触させる工程がさらに含まれてもよく、ここで、血漿または血清試料におけるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの改変された濃度は、炎症の基礎または発作の構成要素を示す。本発明において有用でありうる、そして抗炎症反応に関する情報を提供しうる、さらにさらなるマーカーには、単独でまたは組み合わせて、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）が含まれる。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９４】
さらに他の態様において、発作が被験体で起こる可能性があるかどうかを判定するための方法であって、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして／または哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含み、ここで、健康な対照に比較したｓＩＣＡＭ−５の改変された血漿または血清濃度ならびに／あるいはＴＡＲＣの改変された血漿または血清濃度が、発作を有する傾向を示す、前記方法を提供する。該方法には、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬と、血漿または血清試料を接触させる工程がさらに含まれてもよく、ここで、血漿または血清試料におけるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの改変された濃度は、発作を有する傾向を示す。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９５】
さらに他の態様において、発作が被験体で起こる可能性があるかどうかを判定するため
の方法であって、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして／または哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含み、ここで、健康な対照に比較したｓＩＣＡＭ−５の改変された血漿または血清濃度ならびに／あるいはＴＮＦ−αの改変された血漿または血清濃度が、発作を有する傾向を示す、前記方法を提供する。該方法には、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬と、血漿または血清試料を接触させる工程がさらに含まれてもよく、ここで、血漿または血清試料におけるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの改変された濃度は、発作を有する傾向を示す。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９６】
さらに他の態様において、発作が被験体で起こる可能性があるかどうかを判定するための方法であって、哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ、そして／または哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させる工程を含み、ここで、健康な対照に比較したＴＡＲＣの改変された血漿または血清濃度ならびに／あるいはＴＮＦ−αの改変された血漿または血清濃度が、発作を有する傾向を示す、前記方法を提供する。該方法には、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な１またはそれより多い診断試薬と、血漿または血清試料を接触させる工程がさらに含まれてもよく、ここで、血漿または血清試料におけるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２  ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン、および／またはＴＮＦ−αの改変された濃度は、発作を有する傾向を示す。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９７】
選択した任意のバイオマーカーに関して、線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【００９８】
上述のさらなる態様において、発作は側頭葉癲癇に関連することも可能である。さらなる態様において、側頭葉癲癇は、内側側頭葉硬化症（ＭＴＳ）であることも可能である。他の態様において、発作は：結節性硬化症（ＴＳＣ）に関連することも可能である。
【００９９】
さらなる態様において、発作は：国際抗てんかん連盟の発作タイプの操作上の分類（Ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｅｉｚｕｒｅ  Ｔｙｐｅｓ）にしたがって分類可能であり、該分類は、以下のウェブアドレス：ｗｗｗ．ｉｌａ
ｅ．ｏｒｇ／ｖｉｓｉｔｏｒｓ／ｃｅｎｔｒｅ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｅｉｚｕｒｅＩＬＡＥ−２０１６．ｐｄｆに位置する。
【０１００】
上記のさらに他の特定のさらなる態様において、発作は、原因不明性であってもよい。さらなる態様において、発作は、病原体に対する免疫反応に関連しない。
本明細書に記載するプローブおよびプローブのパネル／アレイを含む態様を用いて、発作が起こった（または起こった可能性がある）かどうかを検出することも可能である。また、これらを用いて、さらなる発作の可能性を予測することも可能である。さらに、これらを用いて、脳傷害または頭部外傷の後に、発作が起こる可能性があるかどうかを予測することも可能である。これらはまた、発作が炎症プロセスの結果であるかどうかを同定する際にも有用である。さらに、これらを、治療が有効であるかどうかを評価する際に用いることも可能である。
【０１０１】
限定されない例として、以下のポリペプチドパネルまたはアレイが、本出願の態様である（用語、改変された、上昇した、および改変された、は、健康な被験体におけるものに対する、癲癇患者における発現レベルを指す）：
・ｓＩＣＡＭ−５；
・ＴＡＲＣ；
・ＴＮＦ−α；
・ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ；
・ｓＩＣＡＭ−５、ＴＮＦ−α；
・ＴＡＲＣ、ＴＮＦ−α；
・ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ、ＴＮＦ−α。
【０１０２】
他のポリペプチドパネルまたはアレイが、本出願の態様であり、そしてこれには、上記およびさらに以下の１またはそれより多くが含まれることも可能である：
・ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２
ｐ７０、Ｆａｓ、Ｆａｓリガンド、ＭＣＰ−１、ＭＤＣ、ＭＩＰ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−４、ＩＰ−１０、ＢＤＮＦ、エオタキシン−３、エオタキシン；
・ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３、白血病阻害因子、インターフェロン−アルファ、ＩＬ−６およびＴＧＦ−βファミリーメンバー（ＴＧＦ−β１〜β５）。
【０１０３】
慣用的技術によって試料を患者から得ることも可能である。これらの技術には、施設内倫理委員会（ＩＲＢ）に認可されたプロトコルによって含まれるものが含まれることも可能であり、これには血液、尿、唾液およびＣＳＦが含まれる。１つの態様において、クエン酸ナトリウムを用いて、試料を抗凝固剤処理する。さらなる態様において、試料を、例えば５，０００ｇ（ｇ＝引力）、４℃で１５分間遠心分離することによって、血漿を調製する。対照はまた、商業的業者から購入することも可能である。
【０１０４】
血漿中で定量化しようとするポリペプチドのレベル（濃度）を、当該技術分野に知られる多くの方法のいずれによって得ることも可能であり、特定の方法は、本明細書の態様の限定ではない。例えば、ＥＬＩＳＡ、間接的ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、競合的ＥＬＩＳＡ、ならびに多重およびポータブル（Ｍ＆Ｐ）ＥＬＩＳＡが使用可能である。検出しようとする抗原（ポリペプチドまたはマーカー）に特異的なプローブは、当該技術分野に知られる技術によって、商業的に得られうるかまたは設計可能である。ｓＩＣＡＭ−５検出のための１つの態様において、プロテインＧアフィニティ精製マウスモノクローナル抗ヒトＩＣＡＭ−５抗体を捕捉抗体として用いる。単一および多重プローブキットが、商業的供給者、例えばＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙより入手可能である。これらのキットには、本明細書の実施例に言及されるキットが含まれる。線形または対
数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【０１０５】
やはり本明細書に記載するのは、哺乳動物被験体または患者において、発作または発作が症候性である障害を治療または防止する方法であって、ｓＩＣＡＭ−５の送達を含む、前記方法である。さらなる態様において、哺乳動物はヒトである。やはり提供するのは、哺乳動物被験体において、発作または発作が症候性である障害を治療または防止するためのｓＩＣＡＭ−５の使用、ならびにそのための薬剤を調製する際の使用である。ＩＣＡＭ−５が終脳ニューロンの表面上で発現される（すなわち脳に局在する）ならば、望ましくない全身性の影響を伴わずに、治療または防止が達成可能である。
【０１０６】
治療または防止は、当業者に知られる技術によって、静脈内または脳脊髄液内（ＣＳＦ内）を通じて、実行可能である。送達はまた、適切なキャリアーまたは賦形剤と共に、ＣＳＦへの鼻内送達によるものを含めて、任意の他の適切な手段で実行可能である。
【０１０７】
他の適用
本発明のいくつかの態様において、本明細書に記載するような、血液に基づく診断試験、例えばＥｖｏＳｃｏｒｅを形成するバイオマーカーおよびアルゴリズムを、発作予測；抗癲癇薬剤（ＡＥＤ）臨床試験適格性、終点、および有効性；ＥＥＧ、ＭＲＩ、ゲノミクス、遺伝学およびプロテオミクスを含む多重診断組み合わせ、コンパニオン診断；ならびに炎症に基づく療法剤および反応の潜在的な同定のために利用してもよい。いくつかの態様において、本明細書に記載する血液に基づく診断試験を用いて、事象におけるバイオマーカーレベルの絶対変化、ならびに時間に渡る患者におけるバイオマーカーの相対的変化を判定することも可能である。いくつかの態様において、薬剤でよく管理されている既知の癲癇患者における、本明細書に記載する血液に基づく診断試験におけるバイオマーカーおよびアルゴリズムを用いて、対応するスコアを調製することも可能であり、そしてユーザーは、スコアがＡＥＤ反応性に相関するかどうかを判定し、そしてさらに進めて、続く発作および医学的困難のブレイクスルーを予測することも可能である。同様に、本明細書に記載する血液に基づく診断試験を用いて、新規に同定された癲癇患者におけるＡＥＤ反応を予測して、療法反応を迅速に評価することも可能である。いくつかの態様において、癲癇手術後の医学的に難治性である患者において、手術の成功を予測する、本明細書に記載する血液に基づく診断試験を提供することも可能である。いくつかの態様において、本明細書に記載する血液に基づく診断試験を用いて、発作のリスクが増加しているかどうか、判定するため、例えば頭部傷害または脳卒中後、発作のリスクに関して患者を評価することも可能である。さらに、新規薬剤がより早く患者に届くことを可能にする、より迅速で、より小さい試験を生じる、よりロバストな登録基準を確実にするため、ＡＥＤ臨床試験における、重要な潜在的使用がある。いくつかの態様において、本明細書に記載する血液に基づく診断試験を、個別化薬剤診断として用いて、患者の生活の質を改善し、そして医療システムに対する負荷を減少させるため、長期にわたって、定義された間隔で、発作および癲癇の治療および追跡を可能にし、療法に対する個別化反応、有効性、管理、および将来の事象の予測を確立することも可能である。特定の態様において、本発明の前述の血液に基づく診断試験は、ＥｖｏＳｃｏｒｅである。
【０１０８】
試験法
ヒト神経学患者または正常対照から、抗凝血剤としてＫ２ＥＤＴＡを含有するラベンダー・トップ・バキュテナー血液収集試験管（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）内に血液を収集した。血液収集試験管を８回反転させ、そして次いで、遠心分離する前に、４℃で１０〜１５分、湿った氷上においた。血液を１０００ＲＣＦ、４℃で１０分間遠心分離した。血漿上清を滅菌２ｍｌ微量試験管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ、Ｉ型）内にアリコットし、そし
て−７０℃〜−８０℃で凍結させた。
【０１０９】
ヒト血漿中のＴＮＦ−α、ＴＡＲＣおよびＩＣＡＭ５のレベルを、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）（メリーランド州ガイザーズバーグ）のカスタム三重プレートおよびＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００を用いて、電気化学発光検出を用いるサンドイッチＥＬＩＳＡで測定した。本発明者らは、ＭＳＤから、ＭＵＬＴＩ−ＳＰＯＴ  ９６ウェルＣｕｓｔｏｍ  ４  Ｓｐｏｔプレート（ＴＮＦ−α、ＴＡＲＣ、ＩＣＡＭ５、ＢＳＡ）ＭＳＤ  ＥＬＩＳＡプレートならびにＴＮＦ−αおよびＴＡＲＣコーティング／捕捉抗体を購入した。ＩＣＡＭ５コーティング／捕捉抗体をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓより購入した（ＭＡＢ１９５０）。すべてのインキュベーション工程に関して、プレートを接着性プレートシール（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ  Ｂ１２１２−４Ｓ）で密封し、そしてマイクロタイタープレート振盪装置（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ  ２１０Ａ  ＃Ｃ０２１０）上、回転（４００ｒｐｍ）させながら室温（ＲＴ）でインキュベーションを行った。すべての洗浄工程で、ウェルを空にし、そして次いで、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｆｉｓｈｅｒ  ＢＰ  ３３７−５００）を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｄｅｎｖｉｌｌｅ  ＣＰ４３９０−４８）（ＰＢＳＴ）１７５μＬで３回洗浄した。すべての血液産物および混入物質を、最小最終濃度の１０％ブリーチで除染した。アッセイ全体で、逆ピペッティングを使用して、気泡の産生を回避した。
【０１１０】
試料を分析するため、カスタムプレートを４℃から取り除き、そして室温で３０〜６０分間平衡化させた。未結合部位をウェルあたり１５０μｌのブロッキング溶液（ＰＢＳ中の１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  ３５−０１６−ＣＶ））でブロッキングし、２時間インキュベーションし、そして次いで洗浄した。
【０１１１】
ＴＮＦ−αおよびＴＡＲＣタンパク質標準をＭＳＤから購入し、そして組換えヒトＩＣＡＭ−５タンパク質標準をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９５０−Ｍ５−０５０）から購入した。標準物質タンパク質を、ＰＢＳ中の５％ＦＢＳ中の２５％ウマ血漿（ラベンダー・トップ試験管内容物と協調するように、Ｋ２ＥＤＴＡで調製した、Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩＨＲ−Ｎ）中で希釈した。ＴＮＦ−αおよびＴＡＲＣの三重標準曲線出発濃度は２５００ｐｇ／ｍｌであり、ＩＣＡＭ５の出発濃度は５０，０００ｐｇ／ｍｌであり、そしてこれを１：５に希釈した。タンパク質不含２つ組ウェルセットを含めて、標準１００μｌを２つ組でプレーティングした。ヒト血漿試料を、最終濃度２５％試料まで、ＰＢＳ中の５％ＦＢＳ中で、１：４に希釈して、そして１００μｌをプレーティングした。標準および試料を３時間インキュベーションし、そして抗体を添加する前に、プレートを洗浄した。
【０１１２】
ビオチン化抗ヒトＩＣＡＭ５抗体をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＢＡＦ１９５０）より購入した。ストレプトアビジン−ＳＵＬＦＯＴＡＧおよびＳＵＬＦＯＴＡＧ標識抗ヒトＴＮＦ−αおよびＴＡＲＣ抗体をＭＳＤより購入した。一次抗体を１：５０に希釈し、そしてストレプトアビジン−ＳＵＬＦＯＴＡＧをＰＢＳ中の１％ウシ血清アルブミン（Ｆｉｓｈｅｒ  ＢＰ１６０５−１００）中で１：５００に希釈した。一次抗体およびストレプトアビジン−ＳＵＬＦＯＴＡＧを一工程で９０分間インキュベーションした。ＭＳＤアッセイの特異性により、２工程インキュベーションとは対照的に、一工程検出インキュベーションが可能になる。次いで、現像し、そして読み取る前に、プレートを洗浄した。
【０１１３】
４ＸＭＳＤ読み取り緩衝液Ｔを、滅菌逆浸透Ｈ２Ｏで２Ｘに希釈した。各ウェルに１５０μｌのＲＴ  ２Ｘ読み取り緩衝液Ｔを添加することによってプレートを現像し、そして次いでＭＳＤ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ  ４．０ソフトウェアとカップリングさせたＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００上で直ちに読み取った。ＭＳＤ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ  ４．０ソフトウェアを用いて、血漿試
料のタンパク質濃度を決定し、そして１：４血漿試料希釈を考慮して、ｐｇ／ｍｌの結果を４倍した。
【０１１４】
患者登録
臨床試験を行って、発作を有する患者を診断し、そして診断の閾値を確立するために、ＥｖｏＳｃｏｒｅを有効にそして正確に使用可能であるかどうかを決定した。すべての入院および外来被験体は、１８歳またはそれ以上であり、そして認知力を持ってインフォームドコンセントを提出可能であった。１８〜２０歳の被験体は承認を提供し、そして法的に権限を与えられた代理人が彼らの代理としてコンセントを与えた。これらの研究には、民族的または性別の限定はなく、そして選択バイアスがないことを確実にするため、すべての適格な患者を補充した。
【０１１５】
癲癇監視設備（ＥＭＵ）に入院した患者は、毎朝各１５ｍｌの血液の単一試料、および発作または発作様事象後にさらに１５ｍｌの血液試料を提供するように要請された。入院被験体のＥｖｏＳｃｏｒｅ結果を、ＥＭＵ滞在中の個々の事象診断すべて、およびＥＭＵ滞在の終了時の最終的なその患者診断と比較した。
【０１１６】
外来患者は、推測される癲癇の評価のため、外来神経学クリニックの最初の受診を行った場合にのみ研究に適格であった；これらの患者はなお、癲癇または非癲癇いずれかとしてその事象の診断を有していなかった。外来被験体は、研究のため、単一の１５ｍＬの血液試料を提供し、そして研究チームは、患者が研究に参加した後、およそ６ヶ月間、診断精密検査に適切なすべての入手可能な臨床情報を収集した。６か月後、独立の神経学者チームが、関連する病歴を評価し、そして被験体を「診断し」、そしてこの診断をＥｖｏＳｃｏｒｅ結果に比較して、診断の正確度を決定した（２人の癲癇専門医間の同意が十分であった）。
【０１１７】
癲癇センターの予約に患者を伴った、２１歳およびそれより高齢の被験体は、認知力を持ってインフォームドコンセントを提供することが可能であり、癲癇と診断されておらず、そしていかなる理由でも抗癲癇薬剤をいずれも摂取していない場合、正常対照と見なされ、そして研究に参加するために適格とされた。全体で総数４０１人の研究被験体が登録された。２４０人の外来患者、１３１人の入院患者、およびさらに３０人の対照が、入院ＥＭＵおよび外来神経学クリニックの両方から登録された。入院および外来被験体に関しては、平均年齢は３６．５歳（１８〜８２歳の範囲）であり、そして５２％が女性であった（ｎ＝２０９）。
【０１１８】
個々の事象診断（ＩＥＤ）および患者診断（ＰＤ）の説明
入院患者は、ＥＭＵの滞在を開始し、そして終了した。外来患者は、神経学外来クリニックから補充されたが、何人かはＥＭＵでの滞在に戻った。ＥＭＵに滞在したすべての患者に関して、ＥＭＵ報告を調べ、そして血液採取直前に観察されたいかなる神経学的事象の時間も記録した。事象の説明もまた記録し、そして神経学者は、各個々の事象を独立に診断した（個々の事象の診断）。事象を、非癲癇事象（ＩＥＤ０）、癲癇事象（陽性ＥＥＧを伴う）（ＩＥＤ１）、不確かな診断事象（ＩＥＤ２）、または事象記録なし（ＥＭＵ滞在中にＥＭＵ報告にいかなる事象の記録もない場合）（ＩＥＤ３）として特徴付けた。事象診断に関する同意がない場合、ＥＭＵ報告を参考にして、そしてコンセンサスに到達した。コンセンサスに到達できなかった場合、事象を不確かな診断（ＩＥＤ２）にレーティングした。個々の事象診断は、一過性変化の評価と見なされる。個々の事象診断はまた、事象診断とも称されうる。
【０１１９】
ＥＭＵ報告の「癲癇診断」セクションに記録される最終全体患者診断を患者診断（ＰＤ）のため、各患者に用いた。患者は、非癲癇（ＰＤ０）、癲癇（ＰＤ１）、癲癇＋他の非
癲癇状態（ＰＤ２）、または不確かな診断（ＰＤ３）のいずれかの診断を受けた。患者診断は、持続性変化の評価とみなされる。
【０１２０】
予測モデルおよびスコア
本明細書において、「多変数モデル」または単純に「モデル」と同義に使用可能な用語「予測モデル」は、データセットを分類するための単数または複数の統計アルゴリズムを用いて開発された数学的構築物である。予測モデルは、解釈機能を提供することも可能であり；例えば１またはそれより多い統計アルゴリズムまたは方法を利用して、観察されたデータのデータセットを被験体の疾患活性または疾患状態の意味がある決定に変換することによって、予測モデルを生成することも可能である。バイオマーカーの濃度および比に基づいて、およびまたは患者の人口統計学的特性と組み合わせて、本明細書で開発するアルゴリズムは、発作事象と関連する一過性および持続性変化（急性および慢性）を同定する。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。
【０１２１】
以下の目的（ａ）発作を包含するかまたは除外する；（ｃ）いつ発作が起こるかまたは発作が起こり続けるかどうかを予測することによって、患者の生活の質を評価する；および（ｃ）長期間に渡って、発作を制御する療法または療法プロトコルの能力の１またはそれより多くに関して、すべての臨床セッティングにおいて、予測モデルを使用可能である。
【０１２２】
本明細書において、「スコア」は、被験体状態の変数または特性の定量的測定値を提供する、および／または被験体の状態を区別するか、差別化するかまたは別の方式で特徴付けるために選択された値または値のセットである。スコアを含む値（単数または複数）は、例えば、被験体または臨床パラメータまたは臨床評価、あるいはその任意の組み合わせから得られる、１またはそれより多い試料構成要素の測定量に基づくことも可能である。特定の態様において、スコアは、単一の構成要素パラメータまたは評価に由来することも可能である一方、他の態様において、スコアは、多数の構成要素、パラメータおよび／または評価に由来する。スコアは、解釈機能、例えば当該技術分野に知られる多様な統計アルゴリズムのいずれかを用いて、特定の予測モデルから得られる解釈機能に基づくかまたは由来することも可能である。「スコアの変化」は、例えば１つの時点から次の時点へのスコアの絶対変化、またはスコアのパーセント変化、または単位時間あたりのスコアの変化を指すことも可能である。例えば、本明細書に言及されるスコアは、本発明の血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）によって提供されることも可能である。
【０１２３】
スコアを用いて、数値的に「定量的」、あるいは高い、中程度の、または低い「定性的」、あるいは陽性または陰性の「定性的」、あるいは発作および癲癇の同定における一過性および／または持続性変化の結果を伝達する他の型を提供することによって、一過性および持続性変化をレーティングおよび／または測定し、事象を包含または除外し、患者の生活の質および療法有効性を評価することも可能である。
【０１２４】
予測モデルおよびスコアを、ＥＥＧおよびＭＲＩを含む、現在の標準的診断技術のいずれかと組み合わせて用いて、最終的な患者診断を発展させることも可能である。予測スコアは、他の標準診断技術と組み合わされた際、感度、特異度、陽性予測値および陰性予測値に関して、改善された正確性を付加するであろう。
【０１２５】
アルゴリズムの目的、閾値および使用可能な結果
本明細書に記載する血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）に含まれるスコア付けアルゴリズムを、以下の方法論にしたがって開発した：（a）発作かまたはそうで
はないかの個々の事象診断のため：分類ツリー分析によって定義されるリスク群が含まれてもよい、分類ツリーおよび回帰分析ならびに／あるいは多重ロジスティック回帰；ならびに（ｂ）癲癇であるかまたはそうでないかの患者診断のため：分類ツリー分析によって定義されるリスク群を含む、ロジスティック回帰および多重ロジスティック回帰。
【０１２６】
ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αの濃度の測定可能な変化、濃度における自然対数調整濃度変化、バイオマーカーの比、および調整濃度の比の関数であるように、発作またはそうではないかの個々の事象診断、および癲癇またはそうではないかの患者診断の両方に関するＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムおよび方法論を判定して、そしてこれには、年齢、性別および処方情報を含む、患者の身体特性が含まれてもよい。
【０１２７】
これらの方法論および結果はすべて、診断試験の臨床的および市場的性能および正確度目的を満たすアルゴリズムを生じた。感度および真の陽性を最大限にし、そして偽陰性を最小限にし、そして正確度を最大限にし、そして正しく分類されるように、アルゴリズムの予測結果を設計する。特異度および真の陰性もまた、最小限の偽陽性で最大化可能である。
【０１２８】
閾値または定量的境界は、個々の診断値を最大限にし、そしてまたは感度、特異度、ならびに陽性および陰性予測値を含む診断値の組み合わせを最適化するように設定可能である。アルゴリズムの異なる態様を用いて、アルゴリズムのゴールに応じて、異なる閾値を用いることも可能である。閾値は、最終的に、個々の試験スコアを用いて、数値的に「定量的」、あるいは高い、中程度の、または低い「定性的」、あるいは陽性または陰性の「定性的」な値を提供することによって、一過性および持続性変化をレーティングし、そして／または測定し、事象を包含するかまたは除外し、患者の生活の質および療法的有効性を評価することも可能である。閾値の最終的な選択は、性能に関して望ましいように、１またはそれより多い診断正確度特性の最大化および／または最適化によって駆動される。
【０１２９】
図１は、アルゴリズムの目的および最終的に使用可能な結果を定義する。
診断および療法的アプローチの組み合わせ
個々の被験体に関して最大療法利益を達成するため、任意の特定の時点で、被験体の疾患負荷を特異的に定量化し、そして評価し、疾患活性に対する治療の効果を判定し、そして将来の転帰を予測することが可能であることが重要である。本解説の態様は、急性および慢性疾患を有する被験体において、疾患活性の正確な臨床評価のための多数の血清バイオマーカーを同定する。
【０１３０】
癲癇に関する現在の療法アプローチには、フェニトイン、フォスフェニトイン、ミダゾラム、プレガバリン、ブリバラセタム、ペラメパネル、ルフィナミド、ルラシドンＨＣｌ、カルバマゼピン、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ジバルプロエックス、酢酸エスリカルバゼピン、エトスクセミド、エゾガビン、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリジン、レベチラセタム、ロラゼパム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、プリミドン、チアガビン、トピラメート、バルプロ酸、ゾニサミド、カンナビスに基づく薬剤、ならびにその薬学的に許容されうる塩、プロドラッグおよび誘導体からなる群より選択される抗癲癇化合物の療法的有効用量が含まれ、そしてこれらに限定されない。
【０１３１】
新規療法的アプローチは、現在開発中であり、そして診断評価に適用可能であり、そして診断および療法的アプローチの組み合わせでありうる。
いくつかの態様において、本発明の血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）は、薬剤療法でよく管理された既知の癲癇患者を評価して、スコアがＡＥＤ反応性に相関するかどうかを判定し、そしてさらに進めて、ＥｖｏＳｃｏｒｅの変化が、続く発作およ
び医学的困難のブレイクスルーを予測するかどうかを判定することも可能である。いくつかの態様において、本発明の血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）は、新規に同定された癲癇患者におけるＡＥＤ反応を予測して、療法反応を迅速に評価することも可能である。いくつかの態様において、本発明の血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）を用いて、癲癇手術後の医学的に難治性である患者において評価して、スコアが手術の成功を予測するかどうかを判定することも可能である。いくつかの態様において、本発明の血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）を用いて、発作のリスクが増加しているかどうか、判定するため、例えば頭部傷害または脳卒中後、発作のリスクがある患者を評価することも可能である。いくつかの態様において、本発明の血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）を、個別化薬剤診断として用いて、患者の生活の質を改善し、そして医療システムに対する負荷を減少させるため、長期にわたって、定義された間隔で、発作および癲癇の治療および追跡を可能にし、療法に対する個別化反応、有効性、管理、および将来の事象の予測を確立することも可能である。
【０１３２】
いくつかの態様において、本発明の血液に基づく診断試験（例えばＥｖｏＳｃｏｒｅ）を、ＥＥＧ、ＭＲＩおよび本明細書に記載する他の診断アプローチと組み合わせて用いてもよい。
【０１３３】
他の態様において、ＥｖｏＳｃｏｒｅのみ、または本明細書に記載するような他のバイオマーカーおよび／または他の臨床試験との組み合わせを、偏頭痛、外傷性脳傷害、脳卒中、感染および病原体に対する免疫反応、自己免疫反応、免疫反応、腫瘍ならびに炎症構成要素および／または効果を伴う神経学的疾患／徴候を含む、他の神経学的疾患／徴候において利用することも可能である。
【０１３４】
キット
１つの態様において、本発明は、ポリペプチド発現パネルまたはアレイを含む診断キットを提供する。キットはまた、予測的であるか、発作の切迫したリスクまたは発作の再発を判定する際に有用であるか、あるいは再発リスクを評価する際に有用でありうる。キットはまた、血液を抜き取るため、シリンジおよび／またはバイアル（ｖｉｌｅ）を含有してもよい。キットは、パネルまたはアレイのポリペプチドマーカーに対応する１またはそれより多いプローブを含有してもよい。キットはまた、化学発光、発光または同等の技術に基づくＥＬＩＳＡプレートも含有してもよい。態様のキットの一部として、多重およびポータブル（Ｍ＆Ｐ）ＥＬＩＳＡもまた提供可能である。さらに他の適切な構成要素が当業者に知られ、そして本明細書に含まれる。キットには、診断結果を提示するためのソフトウェア、コンピュータおよび装置が含まれてもよい。
【０１３５】
本発明の他の側面は、キットのためのキットであって：（ａ）アッセイ、（ｂ）使用説明書、（ｃ）本発明の方法を実行するためのコンピュータまたはコンピュータシステム、あるいは（ｄ）他の態様において、本発明の方法の一部を形成するアルゴリズムを含むキットを提供する。
【０１３６】
他の態様は、本解説のアッセイのいずれかを行うためのキットの形で一緒にパッケージングされる、バイオマーカー検出試薬を含む。特定の態様において、キットは、バイオマーカー核酸との相同性および／または相補性に基づく１またはそれより多いバイオマーカー核酸を特異的に同定するオリゴヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチド配列は、バイオマーカー核酸の断片に対応しうる。例えば、オリゴヌクレオチドは：長さ２００、１５０、１００、５０、２５、１０、または１０ヌクレオチドより短くてもよい。他の態様において、キットは、バイオマーカー核酸にコードされるタンパク質に対する抗体を含む。本解説のキットはまた、アプタマーも含んでもよい。キットは、別個の容器中に、核酸または抗体、対照配合物（陽性および／または陰性）、および／または検出可能標識を含有
してもよい。場合によってスコアを生成するための使用説明書を含む、アッセイを実施するための使用説明書がキットに含まれていてもよい。アッセイは、当該技術分野に知られるようなＥＬＩＳＡの形であってもよい。
【０１３７】
ソフトウェア、装置およびコンピュータ
こうしたタスクを実行するために操作されるソフトウェアを用いて、予測モデルを手動でまたは自動的に実行してもよい。選択したバイオマーカーの濃度の分析を手動で行ってもよいし、あるいはこうしたタスクを実行するために操作されるソフトウェアを用いて、分析を行うことも可能である。好ましい態様において、アルゴリズムは、本発明の予測法の一部を形成し、選択したバイオマーカーの濃度を分析して、診断結果またはスコアを提示する。アルゴリズムを手動で、または操作されるソフトウェアを通じて自動的に実行可能である。操作されるソフトウェアは、選択したバイオマーカーの濃度を読み取る装置の一部であることも可能であるし、または外部コンピュータの一部であることも可能である。他の態様において、前述のソフトウェアをコンピュータ上に装填する。コンピュータはまた、手動でまたは自動的にのいずれかで装置から直接得られるデータを入力する装置とインターフェース接続されている。線形または対数単位を用いて、あるいは線形または対数単位の比を用いることによって、患者人口統計特性を伴い、そして／または伴わずに、個々の測定値を、個々にまたは任意の組み合わせで、取り込み、そして分析することも可能である。線形または対数単位の比の逆数もまた使用可能である。いくつかの態様において、コンピュータはエンドユーザーに属し、一方、他の態様において、コンピュータまたはプロセッサはキットの一部として提供される。好ましい態様において、操作されるソフトウェアは、コンピュータに（ａ）装置からデータを含有するファイルにアクセスさせ、そして（ｂ）本発明のアルゴリズムを用いて、これらのデータを分析するように指示する。他の態様において、操作されるソフトウェアは、診断結果を解釈するためのユーザーフレンドリーな形式で、結果を提示する。
【０１３８】
いくつかの態様において、本発明の方法およびシステムを、こうした単数または複数のコンピュータ実装プロセスを実行するため、単数または複数のコンピュータ実装プロセスとして具体化することも可能であり、そしてコンピュータプログラムまたは他の機械読み取り可能命令（本明細書において「コンピュータプログラム」）を含有する持続性記憶媒体（すなわち持続性コンピュータ読み取り可能媒体）の形で具体化されてもよく、ここで、コンピュータプログラムがコンピュータまたは他のプロセッサ（本明細書において「コンピュータ」）に装填された場合、そして／またはコンピュータによって実行された場合、該コンピュータは、単数または複数のプロセスを実施するための装置となる。こうしたコンピュータプログラムを含有する記憶媒体には、例えばフロッピーディスクおよびディスケット、コンパクトディスク（ＣＤ）−ＲＯＭ（書き込み可能であってもまたはなくてもよい）、ＤＶＤデジタルディスク、ＲＡＭおよびＲＯＭメモリ、コンピュータハードドライブおよびバックアップドライブ、外付けハードドライブ、半導体ドライブ、「サム」ドライブ、およびコンピュータによって読み取り可能な任意の他の記憶媒体が含まれる。単数または複数のプロセスはまた、コンピュータプログラムの形で具体化可能であり、例えば記憶媒体中に保存されても、または伝送媒体、例えば導電体、光ファイバーまたは他の光伝導体を通じて伝送されるか、あるいは電磁照射によって具体化可能であり、ここで、コンピュータプログラムがコンピュータに装填されており、そして／またはコンピュータによって実行される場合、コンピュータは、単数または複数のプロセスを実施するための装置になる。単数または複数のプロセスは、汎用として、マイクロプロセッサ上に、あるいは単数または複数のプロセスを実施するように特異的に設定されたデジタルプロセッサ上に実装されてもよい。汎用マイクロプロセッサを使用する場合、コンピュータプログラムコードは、マイクロプロセッサの回路が特定の論理回路配置を生じるように設定される。コンピュータによって読み取り可能な記憶媒体には、コンピュータ自体によって、またはコンピュータの命令を読み取り、操作を制御するコンピュータにその命令を提供する
、別の装置によって読み取り可能な媒体が含まれる。
【実施例】
【０１３９】
ここで、上記説明とともに、限定しない方式で本発明の特定の態様を例示する、以下の実施例に言及する。これらの実施例は、例示目的のためにのみ提供され、そして本明細書に含む開示は、いかなる意味でも、これらの実施例に限定されるとは見なされてはならず、むしろ、本明細書に提供する解説の結果として明らかになるあらゆる変形を含むと見なされるべきである。
【０１４０】
実施例１：患者の人口統計学的およびバイオマーカーデータ：入院患者、外来患者、および正常な対照
入院患者、外来患者および正常対照を表１に示す。ＴＡＲＣおよびｓＩＣＡＭ５を含む単独のバイオマーカー、ならびにバイオマーカーＴＮＦα／ＴＡＲＣおよびＴＮＦα／ｓＩＣＡＭ５の比は、正常対照および事象診断の間、正常対照および患者診断１の間、ならびに正常対照および患者診断１＆２の間で、統計的に有意な相違（ｐ＜０．０５）を有することが立証された。発作かまたはそうではないかおよび癲癇かまたはそうではないかの判定のために、これらのバイオマーカーおよびバイオマーカーの比を単独でまたは組み合わせて使用することも可能である。
【０１４１】
表１：患者人口統計学および特性
【０１４２】
【表１】
2020190565.tif 000003
【０１４３】
すべての外来患者
【０１４４】
【表２】
2020190565.tif 000004
【０１４５】
明確な診断を有する外来患者
【０１４６】
【表３】
2020190565.tif 000005
【０１４７】
実施例２：ロジスティック回帰による事象診断２４時間
ロジスティック回帰モデル結果を用いて、発作／癲癇または非事象のいずれかに事象を分類することも可能である。該データは、事象２４時間以内に収集した試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化、ならびに年齢および性別を含む患者の身体的特性の関数であると判定された。
【０１４８】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、事象２４時間以内に抜き取った血液を有する患者に関して、０．７７３９〜０．９６７５の９５％信頼区間で、０．８７０７の受信者動作特性（Ｒ
ＯＣ）ＡＵＣを示し、診断感度は８９．３％（最大であるように設計）、特異度は７５．９％、陽性予測値は７８．１％、陰性予測値は８８％、そして正確度は８２．５％（最大であるように設計）であった。結果を表２および図３に要約する。
【０１４９】
表２．  ロジスティック回帰による事象診断（２４時間）の結果
【０１５０】
【表４】
2020190565.tif 000006
【０１５１】
【化１】
2020190565.tif 000007
【０１５２】
式中
φ＝１．７２９＋１．２９３ｘ年齢３１４０＋０．８８３ｘ年齢４１５０−０．０２１ｘ年齢５１プラス＋０．８２９ｘ女性−３５．８１ｘＴＮＦ：ＴＡＲＣ＋０．０００１４ｘｓＩＣＡＭ５
正しい分類最大値
【０１５３】
【表５】
2020190565.tif 000008
【０１５４】
感度および特異度の最大合計値
【０１５５】
【表６】
2020190565.tif 000009
【０１５６】
実施例３：患者研究：ロジスティック回帰による７２時間以内の事象診断
多変数ロジスティック回帰モデル結果を用いて、発作／癲癇または非事象のいずれかに事象を分類することも可能である。該データは、事象の７２時間以内に収集された試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化、ならびに年齢および性別を含む患者の身体的特性の関数であると判定された。
【０１５７】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、事象７２時間以内に抜き取った血液を有する患者に関して、０．７５５２〜０．９３５３の９５％信頼区間で、０．８４５２のＲＯＣ  ＡＵＣを示
し、診断感度は８４．４％（最大であるように設計）、特異度は７２．４％、陽性予測値は８２．６％、陰性予測値は７５％、そして正確度は７９．７％（最大であるように設計）であった。結果を表３に要約する。
【０１５８】
表３．  ロジスティック回帰による事象診断（２４時間）の結果
【０１５９】
【表７】
2020190565.tif 000010
【０１６０】
実施例４：ロジスティック回帰による患者診断２４時間
ロジスティック回帰モデル結果を用いて、癲癇、癲癇に加えて他の原因および正常対照由来のデータを含め、発作／癲癇または正常のいずれかに患者を分類することも可能である。該データは、事象２４時間以内に収集した試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化、ならびに年齢および性別を含む患者の身体的特性の関数であると判定された。
【０１６１】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作および癲癇に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、事象２４時間以内に抜き取った血液を有する患者に関して、０．７４５６〜０．９２２１の９５％信頼区間で、０．８３３９のＲＯＣ  ＡＵＣを示し、診断感度は９０．９％（最大であるように設計）、特異度は６９％、陽性予測値は９０．９％、陰性予測値は６９％、そして正確度は８５．９％（最大であるように設計）であった。結果を表４および図４に要約する。
【０１６２】
表４．  多変数ロジスティック分析による患者診断（２４時間）の結果
【０１６３】
【表８】
2020190565.tif 000011
【０１６４】
【化２】
2020190565.tif 000012
【０１６５】
式中
φ＝４．５０３−０．４２３ｘ年齢３１４０−０．５５ｘ年齢４１５０−１．１２６ｘ年齢５１プラス＋０．２４５ｘ女性−３３．６７ｘＴＮＦ：ＴＡＲＣ＋０．０００１２ｘｓＩＣＡＭ５
正しい分類最大値
【０１６６】
【表９】
2020190565.tif 000013
【０１６７】
感度および特異度の最大合計値
【０１６８】
【表１０】
2020190565.tif 000014
【０１６９】
実施例５：ロジスティック回帰による患者診断２４時間
多変数ロジスティック回帰モデル結果を用いて、癲癇および正常対照由来のデータを含めて、発作／癲癇または正常のいずれかに患者を分類することも可能である。該データは、事象２４時間以内に収集した試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化、ならびに年齢および性別を含む患者の身体的特性の関数であると判定された。
【０１７０】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作および癲癇に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、事象２４時間以内に抜き取った血液を有する患者に関して、０．７７５４〜０．９４２１の９５％信頼区間で、０．８５８７のＲＯＣ  
ＡＵＣを示し、診断感度は９５．２％（最大であるように設計）、特異度は６２．１％、陽性予測値は８７．８％、陰性予測値は８１．８％、そして正確度は８６．６％（最大であるように設計）であった。結果を表５および図５に要約する。
【０１７１】
表５．  多変数ロジスティック分析による患者診断（２４時間）の結果
【０１７２】
【表１１】
2020190565.tif 000015
【０１７３】
【化３】
2020190565.tif 000016
【０１７４】
式中
φ＝４．７８１−０．００７ｘ年齢３１４０−０．１６４ｘ年齢４１５０−０．８７４ｘ年齢５１プラス＋０．１７３ｘ女性−４２．４９ｘＴＮＦ：ＴＡＲＣ＋０．０００１６ｘｓＩＣＡＭ５
正しい分類最大値
【０１７５】
【表１２】
2020190565.tif 000017
【０１７６】
感度および特異度の最大合計値
【０１７７】
【表１３】
2020190565.tif 000018
【０１７８】
実施例６：ロジスティック回帰による外来患者分析
外来患者に関しては、ＥｖｏＳｃｏｒｅサンプリングに続いて、臨床ケアデータの６ヶ月の再検討に基づく独立のパネルの診断を収集し、そして計算を行った。委員会に認定された３人の独立の癲癇専門医を雇い、ＥＭＵでの診断評価を再検討して、そして発作の診断を確認した。癲癇専門医パネルは、この分析のため、ありうる癲癇またはありうる非癲癇事象の最適な推定を提供し、そしてパネルのうち２人のメンバーの間の合意が十分であり、そしてコンセンサスまたは合意された診断と見なされる。
【０１７９】
本発明者らのパネルの３人の独立のレビュアーのうち少なくとも２人が診断に関して合意した外来患者に関して、ＥｖｏＳｃｏｒｅは、外来患者の８０〜９１％を癲癇と正確に
診断し、この場合、明らかな癲癇診断が示されており；最小限のデータしかなく、そして「不確かな」癲癇または正常である外来患者を含めた、すべての外来患者に適用した際、ＥｖｏＳｃｏｒｅは、症例の８２〜８３％で、癲癇を診断する際のレビュアーのコンセンサスと一致した。これは、試験および予測アルゴリズムが、入院患者データと共に、すべての臨床セッティングで働くことを立証した。
【０１８０】
実施例７：分類ツリー分析による２４時間以内の事象診断
分類および回帰ツリーアルゴリズムを用いて、患者試料および対照試料を層別化し、そして続いて、未知の起源の事象が発作または別の起源の事象であるかの予測値を提供した。情報獲得（エントロピー）または最適適合（ジニ不純度）のいずれかを用いて、分類ツリーを構築可能であった。データは、事象の２４時間以内に収集された試料を含有する。
【０１８１】
０．２のジニ不純度カットオフおよび２レベルの分類ツリー深度の最大値を用いて、分類ツリーは、２６の試料を発作を有した高リスク、１６の試料を不確定（図中では中程度のリスクと分類）、そして１８の試料を発作事象でないと正しく同定した。発作事象であると同定された２６の試料のうち、８４．６％が正しく分類された。対応して、１８の非発作事象のうち、８８．９％が正しく同定された。分類ツリーを図６に示す。
【０１８２】
実施例８：分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含めた、多重ロジスティック回帰による事象診断２４時間
分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰モデル。発作／癲癇または非事象のいずれかとして事象を分類した結果。データは、事象２４時間以内に収集された試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化の関数であると判定された。
【０１８３】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、２４時間以内に抜き取った血液を有する患者に関して、０．８６２〜０．９９３の９５％信頼区間で、０．９２７３のＲＯＣ  ＡＵＣを示し、診断感度は９３．９％（最大であるように設計）、特異度は８３．３％、陽性予測値は８６．１％、陰性予測値は９２．６％であった。結果を表６および図７に要約する。
【０１８４】
表６．  事象診断（２４時間）の結果
【０１８５】
【表１４】
2020190565.tif 000019
【０１８６】
０．５の予測される確率を用いたモデル
【０１８７】
【表１５】
2020190565.tif 000020
【０１８８】
【表１６】
2020190565.tif 000021
【０１８９】
【化４】
2020190565.tif 000022
【０１９０】
式中
【０１９１】
【化５】
2020190565.tif 000023
【０１９２】
実施例９：分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰による、すべての時点での事象診断
分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰モデル。発作／癲癇または非事象のいずれかとして事象を分類した結果。該データは、事象後のすべての時点で収集された試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化の関数であると判定された。
【０１９３】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、事象後、すべての時点で抜き取った血液を有する患者に関して、０．９１１〜０．９９０の９５％信頼区間で、０．９５００のＲＯＣ  ＡＵＣを示し、診断感度は９３．１％（最大であるように設計）、特異度は７３．３％、陽性予測値は８７．１％、陰性予測値は８４．６％、そして正確度は８６．４％（最大であるように設計）であった。結果を表７および図８に要約する。
【０１９４】
表７．  すべての時点の事象診断の結果
【０１９５】
【表１７】
2020190565.tif 000024
【０１９６】
０．５２の予測される確率を用いたモデル
【０１９７】
【表１８】
2020190565.tif 000025
【０１９８】
【表１９】
2020190565.tif 000026
【０１９９】
実施例１０：分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰による、２４時間での患者診断
分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰モデル。癲癇、癲癇に加えて他の原因および正常対照由来のデータを含め、発作／癲癇または正常のいずれかとして患者を分類した結果。該データは、事象の２４時間以内に収集された試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化の関数であると判定された。
【０２００】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作および癲癇に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、事象２４時間以内に抜き取った血液を有する患者に関して、０．７７０〜０．９３３の９５％信頼区間で、０．８５１２のＲＯＣ  ＡＵＣを示し、診断感度は８６．４％（最大であるように設計）、特異度は５６．７％、陽性予測値は８８％、陰性予測値は５３．１％、そして正確度は８０％（最大であるように設計）であった。結果を表８および図９に要約する。
【０２０１】
表８．  患者診断（２４時間）の結果
【０２０２】
【表２０】
2020190565.tif 000027
【０２０３】
０．７の予測される確率を用いたモデル
【０２０４】
【表２１】
2020190565.tif 000028
【０２０５】
【表２２】
2020190565.tif 000029
【０２０６】
実施例１１：分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰による、２４時間での患者診断
分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰モデル。癲癇および正常対照由来のデータを含め、発作／癲癇または正常のいずれかとして患者を分類した結果。該データは、事象の２４時間以内に収集された試料を含有する。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化の関数であると判定された。
【０２０７】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作および癲癇に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、事象２４時間以内に抜き取った血液を有する患者に関して、０．７７６〜０．９３９の９５％信頼区間で、０．８５７４のＲＯＣ  ＡＵＣを示し、診断感度は９１．５％（最大であるように設計）、特異度は５６．７％、陽性予測値は８６．９％、陰性予測値は６８％、そして正確度は８３．１％（最大であるように設計）であった。結果を表９および図１０に要約する。
【０２０８】
表９．  患者診断（２４時間）の結果
【０２０９】
【表２３】
2020190565.tif 000030
【０２１０】
０．６８の予測される確率を用いたモデル
【０２１１】
【表２４】
2020190565.tif 000031
【０２１２】
【表２５】
2020190565.tif 000032
【０２１３】
実施例１２：分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰による、外来患者分析
外来患者に関しては、ＥｖｏＳｃｏｒｅサンプリングに続いて、臨床ケアデータの６ヶ月の再検討に基づく独立のパネルの診断を収集し、そして計算を行った。委員会に認定された３人の独立の癲癇専門医を雇い、ＥＭＵでの診断評価を再検討して、そして発作の診断を確認した。癲癇専門医パネルは、この分析のため、ありうる癲癇またはありうる非癲癇事象の最適な概算を提供し、そしてパネルのうち２人のメンバーの合意が十分であり、そしてコンセンサスまたは合意された診断と見なされる。
【０２１４】
３人の独立のレビュアーのうち少なくとも２人のパネルが診断に関して合意した外来患者に関して、最小限のデータしかなく、そして「不確かな」癲癇または正常である外来患者を含めた、すべての外来患者に適用した際、ＥｖｏＳｃｏｒｅは、症例の７７．７％で、癲癇を診断する際のレビュアーのコンセンサスと一致した。これは、試験および予測アルゴリズムが、入院患者データと共に、すべての臨床セッティングで働くことを立証した。
【０２１５】
実施例１３：分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰による、外来患者モデル
分類ツリー分析によって定義されたリスク群を含む多重ロジスティック回帰モデル。発作／癲癇または正常対照のいずれかとしてコンセンサス再検討患者を分類した結果。ＥｖｏＳｃｏｒｅアルゴリズムは、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５およびＴＮＦ−αに関する濃度の測定可能な変化、ならびに年齢および性別を含む患者人口統計特性の関数であると判定さ
れた。
【０２１６】
ＥｖｏＳｃｏｒｅは、正常対照に対して、発作および癲癇に関して、一過性のおよび測定可能な変化を有する患者を比較した際、抜き取った血液を有する患者に関して、０．７３１〜０．９０９の９５％信頼区間で、０．８２００のＲＯＣ  ＡＵＣを示し、診断感度は８６．４％（最大であるように設計）、特異度は７０％、陽性予測値は９２．３％、そして陰性予測値は５５．３％であった。結果を表１０および図１１に要約する。
【０２１７】
表１０．  外来患者モデル
【０２１８】
【表２６】
2020190565.tif 000033
【０２１９】
【表２７】
2020190565.tif 000034
【０２２０】
【表２８】
2020190565.tif 000035
【０２２１】
実施例１４：  ＥＥＧおよびＥｖｏＳｃｏｒｅ
ＥＥＧは、３７％の感度、９９％の特異度、９８％のＰＰＶ、および６６％のＮＰＶを有することが示された。本発明者らは、ＥＥＧが発作事象を見逃し、有意な偽陰性およびこれに対応して癲癇患者の潜在的な過少治療を生じうることを見出した。本発明者らの結果は、この試験の認識される範囲を反映する（２５〜５６％の感度および７８％〜９８％の特異度）。ＥｖｏＳｃｏｒｅは、ＥＥＧに対して、一過性変化を評価する際、より優れた感度および陰性予測値を示し、そしてほぼ同等の特異度および陽性予測値を示した。患者診断および治療のため、ＥｖｏＳｃｏｒｅをＥＥＧと組み合わせて用いてもよい。さらに、ＥｖｏＳｃｏｒｅを本明細書に定義するような他の診断および試験アプローチと組み合わせて用いてもよい。
【０２２２】
実施例１５：技術的再現性および品質管理
１）血漿試料の反復凍結融解は、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５、およびＴＮＦαレベルに影響を及ぼさない
２）同じ試料に関する試験間の再現性はほぼ１００％である
３）多様な血漿希釈は、相対的なＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５、およびＴＮＦαレベルを改変しない
４）長期保存（最長１年間）は、ＴＡＲＣ、ｓＩＣＡＭ５、およびＴＮＦαレベルを改変しない
５）試験は最適には〜６時間で実行可能であるが、実験室環境において、多様なワーク
フロー用に最適化可能である
６）バッチ間変動は最小限である
７）全方法論は、バッチ間の一定のアッセイ技術を確実にするため、「標準操作法」に最適化されている
ことが確認されている。
【０２２３】
実施例：要約
上記実施例に基づいて：（１）ＴＡＲＣおよびｓＩＣＡＭ５を含む単独のバイオマーカー、ならびにバイオマーカーの比、ＴＮＦα／ＴＡＲＣおよびＴＮＦα／ｓＩＣＡＭ５は、正常対照および事象診断の間、正常対照および患者診断１の間、ならびに正常対照および患者診断１＆２の間で、統計的に有意な相違（ｐ＜０．０５）を有することが示された。これらのバイオマーカーおよびバイオマーカーの比は、発作かまたはそうでないか、そして癲癇かまたはそうでないかの判定のために、単独でまたは組み合わせて使用可能である；（２）２４時間の時点で、ＥｖｏＳｃｏｒｅは、発作および正常対照個体の間の相違を区別可能である（「一過性変化」）；（３）２４時間の時点で、ＥｖｏＳｃｏｒｅは、癲癇患者および正常対照個体の間の相違を区別可能である（「持続性変化」）；（４）ＥｖｏＳｃｏｒｅは、発作および正常対照の間の一過性変化を評価する際に、ＥＥＧと少なくとも同等であるかまたはＥＥＧよりも優れている；（５）ＥｖｏＳｃｏｒｅは、診断および治療評価のため、ＥＥＧおよびまたは他の試験と組み合わせて使用可能である；（６）２４０人の患者の「すべての」外来患者分析において、ＥｖｏＳｃｏｒｅは、症例の８３％で、発作の患者を同定可能である；そして（７）ＥｖｏＳｃｏｒｅは、事象から２４時間より後に採取された試料に関して、発作および正常対照の間の相違（「一過性変化」）、ならびに癲癇患者および正常対照の間の相違（「持続性変化」）を区別可能であり、７２時間またはそれより後に関する潜在性も含む；そして（８）試験は、任意の臨床または医療セッティングならびに実験室条件において実行されるようにロバストである。
【０２２４】
明確にするために、別個の態様の文脈で記載される本発明の特定の特徴はまた、単一の態様において、組み合わせて提供されることも可能である。逆に、簡潔にするために、単一の態様の文脈で記載される本発明の多様な特徴はまた、別個に、または任意の適切な下位組み合わせで提供されることも可能である。
【０２２５】
本明細書に提供する数学的係数およびアルゴリズムは例示的であり、そして典型的であり、そして例示のためにのみ提供される。本明細書に含まれる開示は、いかなる意味でも、係数およびアルゴリズムのこれらの例に限定されると見なされてはならず、むしろ、本明細書に提供する解説の結果として明らかになるあらゆる変形を含むと見なされるべきである。特に、代替係数およびアルゴリズムは、異なる臨床データの使用の結果として明らかになりうる。
【０２２６】
本発明は、特定の態様と組み合わせて記載されてきているが、当業者には、多くの代替物、修飾および変形が明らかとなるであろう。したがって、付随する請求項の精神および広い範囲内に属するすべてのこうした代替物、修飾および変形が含まれると意図される。本明細書に言及するすべての刊行物、特許および特許出願は、各々の個々の刊行物、特許および特許出願が本明細書に援用されると具体的にそして個々に示されるのと同じ度合いまで、その全体が本明細書に援用される。さらに、本出願における任意の参考文献の引用または同定は、こうした参考文献が本発明に対する先行技術として利用可能であることの承認と見なされてはならない。
【０２２７】
本明細書に列挙するいかなる文書（限定されるわけではないが、いかなる特許、特許出願、刊行物、およびウェブサイトも含む）も、その全体が本明細書に援用される。これらの開発は、特定の態様に関連して開示されてきているが、本発明の他の態様および変形が
、開発の真の精神および範囲から逸脱することなく、他の当業者によって考案されることが明らかである。付随する請求項には、こうした態様およびその変形が含まれる。
【図１】
2020190565.tif 000036
【図２】
2020190565.tif 000037
【図３】
2020190565.tif 000038
【図４】
2020190565.tif 000039
【図５】
2020190565.tif 000040
【図６】
2020190565.tif 000041
【図７】
2020190565.tif 000042
【図８】
2020190565.tif 000043
【図９】
2020190565.tif 000044
【図１０】
2020190565.tif 000045
【図１１】
2020190565.tif 000046
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月26日(2020.8.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物被験体において、癲癇を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度を正常対照濃度と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３０】
癲癇に関する現在の療法アプローチには、フェニトイン、フォスフェニトイン、ミダゾラム、プレガバリン、ブリバラセタム、ペランパネル、ルフィナミド、ルラシドンＨＣｌ、カルバマゼピン、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ジバルプロエックス、酢酸エスリカルバゼピン、エトスクセミド、エゾガビン、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリジン、レベチラセタム、ロラゼパム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、プリミドン、チアガビン、トピラメート、バルプロ酸、ゾニサミド、カンナビスに基づく薬剤、ならびにその薬学的に許容されうる塩、プロドラッグおよび誘導体からなる群より選択される抗癲癇化合物の療法的有効用量が含まれ、そしてこれらに限定されない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２７】
本明細書に列挙するいかなる文書（限定されるわけではないが、いかなる特許、特許出願、刊行物、およびウェブサイトも含む）も、その全体が本明細書に援用される。これらの開発は、特定の態様に関連して開示されてきているが、本発明の他の態様および変形が、開発の真の精神および範囲から逸脱することなく、他の当業者によって考案されることが明らかである。付随する請求項には、こうした態様およびその変形が含まれる。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］哺乳動物被験体において、癲癇を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度を正常対照濃度と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
［態様２］哺乳動物被験体において、発作を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度比を正常対照濃度比と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
［態様３］哺乳動物被験体において、癲癇を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度を正常対照濃度と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
［態様４］哺乳動物被験体において、発作を診断するための方法であって：
哺乳動物被験体から得た血漿または血清試料を、ＴＡＲＣの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
哺乳動物被験体から得た前記血漿または血清試料を、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定または検出可能な診断試薬と接触させ；
ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの濃度比を正常対照濃度比と比較し；そして
哺乳動物被験体において癲癇を診断する
工程を含む、前記方法。
［態様５］診断された発作事象を治療するため、プロラクチンまたは他のバイオマーカー診断試験を組み合わせて用いる、態様２に記載の方法。
［態様６］診断された発作事象を治療するため、プロラクチンまたは他のバイオマーカー診断試験を組み合わせて用いる、態様４に記載の方法。
［態様７］患者に関する定量的データを生成するためのキットであって：
患者から採取した血漿または血清試料において、可溶性ＩＣＡＭ−５（ｓＩＣＡＭ−５）の発現レベルを測定可能な診断試薬；
患者から採取した血漿または血清試料において、ＴＡＲＣの発現レベルを測定可能な診断試薬；
患者から採取した血漿または血清試料において、ＴＮＦ−αの発現レベルを測定可能な診断試薬；および
ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ、およびＴＮＦ−αの発現レベルを、正常対照の発現レベルと比較するための分析装置
を含む、前記キット。
［態様８］試料をスコア付けするためのシステムであって、ｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの発現レベルを比較して、正常対照から癲癇を判定する、前記システム。
［態様９］ソフトウェアを含むコンピュータであって、前記ソフトウェアがｓＩＣＡＭ５、ＴＡＲＣおよびＴＮＦ−αの発現レベルを比較して、正常対照から癲癇を判定する、前記コンピュータ。
［態様１０］ｓＩＣＡＭ−５、ＴＡＲＣ、およびＴＮＦ−α、またはそれらの組み合わせの比の、正常対照に比較して改変された血漿または血清発現レベルを有する患者において、発作障害を治療する方法であって、癲癇の療法を患者に投与する工程を含む、前記方法。
［態様１１］患者が性別、年齢、人種およびその組み合わせからなる群より選択される特性を所持し、そして正常対照がその特性に基づいて選択される、態様１０に記載の方法。
［態様１２］癲癇の療法が、フェニトイン、フォスフェニトイン、カルバマゼピン、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ジバルプロエックス、酢酸エスリカルバゼピン、エトスクシミド、エゾガビン、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリジン、レベチラセタム、ロラゼパム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、プリミドン、チアガビン、トピラメート、バルプロ酸、ゾニサミドならびにその薬学的に許容されうる塩、プロドラッグ、および誘導体からなる群より選択される抗癲癇化合物の療法的に有効な用量である、態様１０に記載の方法。
［態様１３］発作障害を有する患者を治療するため、ＥＥＧを組み合わせて用いる、態様１０に記載の方法。
［態様１４］発作障害を有する患者を治療するため、ＭＲＩまたは他の診断試験を組み合わせて用いる、態様１０に記載の方法。
【外国語明細書】
2020190565000001.pdf