(57)【要約】【課題】本発明の課題は、ホスファチジルイノシトールについて新たな生理作用を見出し、新たな用途を提供することである。【解決手段】ホスファチジルイノシトールは、美白作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、細胞内活性酸素消去作用、刺激緩和作用、紫外線による細胞死抑制作用、表皮細胞増殖促進作用、シワ改善作用等の優れた生理活性作用を有する。したがって、ホスファチジルイノシトールを有効成分とする美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤として好ましく利用できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスファチジルイノシトールを有効成分とする美白剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラーゲン産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、又は、シワ改善剤。
【請求項２】
有効成分が、ホスファチジルイノシトールを５〜９５重量％含有する組成物であることを特徴とする請求項１に記載の剤。
【請求項３】
有効成分が、ホスファチジルイノシトールを５〜３５重量％、及び、ホスファチジルコリンを５０〜９０重量％含有する組成物であることを特徴とする請求項１に記載の剤。
【請求項４】
有効成分が、ホスファチジルイノシトールを５〜３０重量％、ホスファチジルコリンを１０〜３５重量％、ホスファチジルエタノールアミンを１５〜３５重量％、及び、ホスファチジン酸を５〜２０重量％含有する組成物であることを特徴とする請求項１に記載の剤。
【請求項５】
組成物中にさらにステロール類又はトリテルペン類を含有することを特徴とする請求項２〜４の何れかに記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスファチジルイノシトールを有効成分とする美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
レシチンは動物又は植物から得られるグリセロリン脂質の総称であり、天然の乳化剤として食品、化粧品、医薬品などに幅広く使用されている。レシチンの構成成分は、リン酸基に結合した極性基の構造により分類され、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）などが主要な成分であることが知られている。近年においては、これら各々の機能・効能に着目した研究がなされており、この中でＰＩは細胞内外の情報伝達機能に深く関わっていることが知られ、また、ＰＩ摂取による血中のトリグリセリド濃度減少やＨＤＬコレステロール増加といった生理作用が報告されている。また、肌のヒアルロン酸増量（特許文献１）やＮｒｆ２活性増強（特許文献２）といった生理作用も報告されている。しかしながらＰＩの生理作用については、未だ十分に研究されているとは言えない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２００９／１１０２０５号
【特許文献２】特開２０１１−１６８５４１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、ホスファチジルイノシトールについて新たな生理作用を見出し、新たな用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、ホスファチジルイノシトールにに、様々な生理活性作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
【発明の効果】
【０００６】
ホスファチジルイノシトールは、美白作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、細胞内活性酸素消去作用、刺激緩和作用、紫外線による細胞死抑制作用、表皮細胞増殖促進作用、シワ改善作用等の優れた生理活性作用を有する。したがって、ホスファチジルイノシトールを有効成分とする美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤として好ましく利用できる。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明は、ホスファチジルイノシトールを有効成分とする美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤に関するものである。有効成分であるホスファチジルイノシトールは、高純度のものをそのまま使用してもよいが、一般的に、高純度のホスファチジルイノシトールを工業的に安価に入手することは困難である。本発明では、ホスファチジルイノシトールを５〜９５重量％含有する組成物を有効成分として使用することができる。
【０００８】
ホスファチジルイノシトール（以下ＰＩとも表記する）は、自然界において大豆、菜種、ヒマワリ、トウモロコシ、パーム等の植物に存在するリン脂質の１種であり、これらの植物から抽出されるレシチンに含まれる。本発明ではこのようなＰＩ含有組成物をそのまま使用することもできるし、或いは、このようなレシチンから溶剤分別やカラム精製又は後述する酵素を用いた方法によりＰＩ含量を高めた組成物を使用することもできる。酵素を用いた方法としてはＰＩ以外のリン脂質に特異的に作用するホスホリパーゼＢを用い、ＰＣ、ＰＥ、ＰＡ等のＰＩ以外のリン脂質を選択的に加水分解した後、残存したＰＩを溶剤で抽出してＰＩ含量を高める方法が挙げられる。本発明で使用できるＰＩ含有組成物としては、ホスファチジルイノシトールを５〜９５重量％含有する組成物であればよく、特に制限はないが、前述した酵素を用いて得られるＰＩを５０〜６０重量％程度含有する組成物や、ホスファチジルイノシトールを５〜３５重量％及びホスファチジルコリンを５０〜９０重量％含有する組成物、ホスファチジルイノシトールを５〜３０重量％、ホスファチジルコリンを１０〜３５重量％、ホスファチジルエタノールアミンを１５〜３５重量％及びホスファチジン酸を５〜２０重量％含有する組成物などが挙げられる。
【０００９】
ホスファチジルイノシトール含有組成物を有効成分として使用する場合において、組成物中にさらにステロール類又はトリテルペン類を含有させることが好ましい。ステロール類又はトリテルペン類の具体例としては、コレステロール、ジヒドロコレステロール、ラノステロール、ジヒドロラノステロール、デスモステロール等の動物由来のステロール；スチグマステロール、シトステロール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの混合物であるフィトステロール等の植物由来のステロール；エルゴステロール等の微生物由来のステロール；γ-オリザノール；ウルソール酸；グリチルレチン酸；並びにこれらのエステル化物等が挙げられる。これらは単独で用いてもよいし、２種類以上を混合して用いてもよい。これらのうちコレステロール、フィトステロール、γ-オリザノールが好ましいものとして挙げられる。このような成分を併用することにより、生理作用を増強するとともに製剤中での安定性を高めることができる。
【００１０】
ホスファチジルイノシトールは、美白作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、細胞内活性酸素消去作用、刺激緩和作用、紫外線による細胞死抑制作用、表皮細胞増殖促進作用、シワ改善作用等の優れた生理活性作用を有するものである。したがってこれらの作用に基づき、美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤の有効成分として利用することができる。ホスファチジルイノシトールの美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤への配合量としては、特に制限はなく、０．０１〜９９重量％好ましくは、０．１〜９０重量％程度配合するとよい。
【００１１】
ホスファチジルイノシトールを有効成分とする美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤の生体への投与方法としては、経口投与、注射による投与、経皮投与等が挙げられる。投与量としては、本発明の効果が得られる量であればよく、特に制限はなく、製剤の剤型、適用部位、年齢、性別などに応じて適宜調整するとよい。ホスファチジルイノシトール又はホスファチジルイノシトールを含有する組成物は、そのまま用いてもよいが、一般的な基剤、例えば、水、ゲル、多価アルコール、ワセリン、パラフィン、植物油、シリコーン油等に溶解、分散又は混合して使用するとよい。また、必要に応じて各種添加剤を併用することができる。使用できる添加剤としては、所望の剤型を得るために通常用いられるものであれば特に制限はなく、賦形剤、着色剤、増粘剤、結合剤、崩壊剤、分散剤、安定化剤、ゲル化剤、酸化防止剤、界面活性剤、保存剤、保湿剤、ｐＨ調整剤等の公知のものを適宜選択して使用すればよい。或いは、所望の効果を発揮させる有効成分として、医薬品や化粧品の一成分として配合して投与してもよい。医薬品の場合は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤等の経口剤；外皮用剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤、口腔剤、坐剤等の外用剤；点滴剤、注射剤等の非経口剤に配合することできる。化粧品の場合は、化粧水、ローション、ジェル、乳液、美容液、クリーム、パック、洗顔料、ボディ洗浄料等の皮膚化粧料；ファンデーション、口紅、リップグロス、マスカラ等のメイクアップ化粧料；シャンプー、リンス、トリートメント、ヘアミスト、ヘアワックス、セットローション、カラーローション、ヘアマニキュア、育毛剤等の毛髪化粧料に配合することができる。
【００１２】
本発明の美白剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、細胞内活性酸素消去剤、刺激緩和剤、紫外線による細胞死抑制剤、表皮細胞増殖促進剤、シワ改善剤には、さらに同様の生理活性を有する成分や、血行促進等の効能を有する成分を併用することができる。このような成分を併用することで、本発明の効果を相乗的に発揮させることが可能である。
【００１３】
併用しうる美白剤としては、具体的には、β−アルブチン、α−アルブチン等のヒドロキノン配糖体及びそのエステル類；アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム塩及びアスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩等のアスコルビン酸リン酸エステル塩；アスコルビン酸モノステアリン酸エステル、アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル等のアスコルビン酸脂肪酸エステル類；３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、２−Ｏ−エチルアスコルビン酸、セチルアスコルビン酸、グリセリルアスコルビン酸、ヘキシルグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸エーテル類；アスコルビン酸−２−グルコシド等のアスコルビン酸グルコシドおよびその脂肪酸エステル類；アスコルビン酸硫酸エステル、リン酸トコフェリルアスコルビル等のアスコルビン酸誘導体；トラネキサム酸、トラネキサム酸セチル、トラネキサム酸アミド等のトラネキサム酸誘導体；フロロタンニン、クルクミン、アントシアニン、プロアントシアニン、カテキン、エラグ酸、リンゴポリフェノール等のポリフェノール類；ニコチン酸アミド、コウジ酸、エラグ酸、４−メトキシサリチル酸、リノール酸、フェルラ酸、プラセンタエキス、グルタチオン、オリザノール、ブチルレゾルシノール、グラブリジン、レスベラトール、リポ酸、グルコシルセラミド、エルゴチオネイン、フィトール、ヒノキチオール、システイン、ゲンチシン酸、メバロン酸、没食子酸、オルチニン、グルコシルルチン；並びに、カミツレ、カンゾウ、ユキノシタ、クワ、トウキ、ワレモコウ、シャクヤク、オウゴン、オトギリソウ、イタドリ、チャ、シソ、モモ葉、ユキミソウ、ササユリ葉、アロエ、セイヨノコギリソウ、フジバカマ、カッコン、アルニカ、ウワウルシ、ウスバサイシン、エイジツ、アスパラガス、キキョウ、ワイルドタイム、マロエニ、スイカズラ、ヨモギ、ヤマモモ、キイチゴ、スターフルーツ葉、アーティチョーク葉、アンズ種子、ライチ種子、ブロッコリースプラウト、キナ、コンフリー、キョウニン、クチナシ、クララ、トウヒ、バクモンドウ、シモツケ、アセロラ、チョウジ、イノバラ、ヨクイニン、セイヨウシナノキ、ゴマ、センブリ、ジオウ、セイヨウハッカ、ゲンチアナ、ゴレンシ、サイシン、ショウガ、アルテア、ロート、ローズマリー、ブドウ種子、バイビスカス、ツキミソウ種子、キウイ種子等の美白作用を有する植物抽出物が例示できる。
【００１４】
併用しうるコラーゲン産生促進剤としては、具体的には、アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム塩及びアスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩等のアスコルビン酸リン酸エステル塩；アスコルビン酸モノステアリン酸エステル、アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル等のアスコルビン酸脂肪酸エステル類；３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、２−Ｏ−エチルアスコルビン酸、セチルアスコルビン酸、グリセリルアスコルビン酸、ヘキシルグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸エーテル類；アスコルビン酸−２−グルコシド等のアスコルビン酸グルコシドおよびその脂肪酸エステル類；アスコルビン酸硫酸エステル、リン酸トコフェリルアスコルビル等のアスコルビン酸誘導体；レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、水素添加レチノール等のビタミンＡ類；ニコチン酸アミド、グルタチオン、システイン、クロセチン、セリシン、ゲラニオール、グリセリングルコシド、ラクトフェリン、プロアントシアニン、パントテン酸、パンテノール、大豆サポニン、レベラストール、イソフラボン、コエンザイムＱ１０、コンドロイチン硫酸、アセチルグルコサミン、グリセロフォスファチジルコリン、加水分解ヒアルロン酸、コラーゲンペプチド、コンキオリン加水分解物、アデノシン5'一リン酸、プロリン、グリシン、アルギニン、アスパラギン酸、アラニン；並びに、ハイビスイカス、カンゾウ葉、ローマカミツレ、アマチャ、サンザシ、ホウセンカ、ハス葉、カッコン、ハナビラタケ、クロレラ、クマザサ、ゴボウ、クジン、サイシン、ビワ葉、シソ、エンドウ、クワ葉、タイム、トウヒ、オドリコソウ、ツユクサ、ハクシジン、ケツメイシ、カロニン、ワレモコウ、クララ、カキ、シャクヤク、シソ、チンピ、ゼニアオイ、ショウキョウ、カミツレ、イチゴ種子、センブリ、ダイズ、コムギ、ニンジン、ハチムギ、ボタンボウフウ、カルダモン、ローズマリー、セージ等のコラーゲン産生促進作用を有する植物抽出物が例示できる。
【００１５】
併用しうるヒアルロン酸産生促進剤としては、具体的には、アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム塩及びアスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩等のアスコルビン酸リン酸エステル塩；アスコルビン酸モノステアリン酸エステル、アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル等のアスコルビン酸脂肪酸エステル類；３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、２−Ｏ−エチルアスコルビン酸、セチルアスコルビン酸、グリセリルアスコルビン酸、ヘキシルグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸エーテル類；アスコルビン酸−２−グルコシド等のアスコルビン酸グルコシドおよびその脂肪酸エステル類；アスコルビン酸硫酸エステル、リン酸トコフェリルアスコルビル等のアスコルビン酸誘導体；レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、水素添加レチノール等のビタミンＡ類；ニコチン酸アミド、カロテン、トコフェロール、トコトリエノール、コンドロイチン硫酸、アセチルグルコサミン、グリセロフォスファチジルコリン、グリセリングルコシド、加水分解ヒアルロン酸、コラーゲンペプチド、シトステロール、カルノシン、クレアチン、フィチン酸、Ｎ−メチルセリン、３−メチルシクロペンタデカノン、サポニン、ゲニステイン、ダイゼイン、フィトール；並びに、マジョラム、セイヨウハッカ、アップルミント、シソ、エゴマ、レモン、モウコグワ、ロウソ、パンノキ、コウゾ、カジノキ、イチジク、アオサ、ウスベニアオイ、ツユキソウ、オウバク、ドクダミ、セイヨウノコギリソウ、アーモンド、サンザシ、アマニ、クチナシ、イラクサ、イチゴ種子、スターフルーツ、パッションフルーツ、ウミブドウ、サフラン、ツバキ、カボチャ、ヘチマ、アスパラガス、アマチャズル、クララ、ケイヒ、シャクヤク、カキ、タンジン、ツボクサ、プーアル、マイタケ、ジュンサイ、トクサ、カリン、カミツレ等のヒアルロン酸産生促進作用を有する植物抽出物が例示できる。
【００１６】
併用しうる細胞内活性酸素消去剤としては、具体的には、アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム塩及びアスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩等のアスコルビン酸リン酸エステル塩；アスコルビン酸モノステアリン酸エステル、アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル等のアスコルビン酸脂肪酸エステル類；３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、２−Ｏ−エチルアスコルビン酸、セチルアスコルビン酸、グリセリルアスコルビン酸、ヘキシルグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸エーテル類；アスコルビン酸−２−グルコシド等のアスコルビン酸グルコシドおよびその脂肪酸エステル類；アスコルビン酸硫酸エステル、リン酸トコフェリルアスコルビル等のアスコルビン酸誘導体；レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、水素添加レチノール等のビタミンＡ類；トコフェロール、酢酸トコフェロール、トコトリエノール等のビタミンＥ類；カロテン、リコピン、アスタキサンチン、ルテイン等のカロテノイド類；フロロタンニン、クルクミン、アントシアニン、プロアントシアニン、カテキン、エラグ酸、リンゴポリフェノール等のポリフェノール類；コエンザイムＱ１０、リポ酸、ラクトフェリン、セサミン、リグナン、クロロゲン酸、ルチン；並びに、オウゴン、ローズマリー、ビワ、ホップ、ノバラ、ルイボス、ハマメリス、タイム、ゲンチアナ、ボタン、コンキオリン、ワレモコウ、キクカ、キャロット、サルビア、レンギョウ、ソウハクヒ、ペパーミント、カキョク、レモン、オリーブ葉、オトギリソウ、ブドウ葉、アシタバ、アセンヤク、イチョウ、イラクサ、カワラヨモギ、ゼニアオイ、ウーロン茶、エイジツ、ヒキオコシ、ヨモギ、カミツレ、カンゾウ、キンギンカ、クララ、ゲンノショウコ、紅茶、コンフリー、サボンソウ、セージ、サンザシ、シナノキ、シャクヤク、ドクダミ、シラカバ、セイヨウキズタ、セイヨウネズ、ツボクサ、チャ、チョウジ、チンピ、テンチャ、トウキンセンカ、セイヨウニワトコ、ゴレンシ、サイシン、ニンドウ、セイヨウハッカ、メリッサ、モモ葉、ヤグルマギク、ユキノシタ、ユズ、クワ等の細胞内活性酸素消去作用を有する植物抽出物が例示できる。
【００１７】
併用しうる刺激緩和剤としては、具体的には、マンノシルエリスリトールリピッド、ダイマージリノール酸ジエチレングリコールオリゴマーエステル、リンゴ酸ジイソステアリル、Ｎ−アシル−Ｌ−グルタミン酸、トレハロースモノ脂肪酸エステル、脂肪酸アミドアミンオキシド、アルキルジメチルアミンオキシド、フェニルエチルグルコシド、ラウリルグルコシド、フェルラ酸グルコシド、サリシン、セドロール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール；並びに、ベニフウキ、メキシカーナ、ペパーミント、アセニヤク、オリーブ等の刺激緩和作用を有する植物抽出物が例示できる。
【００１８】
併用しうるシワ改善剤としては、具体的には、三フッ化イソプロピルオキソプロピルアミノカルボニルピロリジンカルボニルメチルプロピルアミノカルボニルベンゾイルアミノ酢酸Na、レチノール、ニコチン酸アミド、トラネキサム酸、３−Ｏ-エチルアスコルビン酸等が例示できる。血行促進剤としては、カプサイシン、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、ニコチン酸トコフェロール、トコフェロール、酢酸トコフェロール、オリザノール、dl-カンフル、ニンジンエキス、イチョウ葉エキス、トウキエキス、シラカバエキス、ケイヒエキス、ボタンエキス、サフランエキス、コムギ胚芽エキス、ショウガ根茎エキス、トウガラシエキス、カロットエキス、セージエキス、ヨモギエキス、アシタバエキス等が例示できる。
【実施例】
【００１９】
以下の実施例により、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、これらに何ら限定されるものではない。
【００２０】
ホスファチジルイノシトールについて、美白作用、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、細胞内活性酸素消去作用、刺激緩和作用、紫外線による細胞死抑制作用、表皮細胞増殖促進作用、シワ改善作用を下記の試験にて確認した。
【００２１】
＜メラニン生成抑制効果＞
表１に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、正常ヒト表皮色素細胞を6日間培養した。添加培養終了後、回収した細胞に１０％ジメチルスルホキシドを含有した２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加し、６０℃に加温して細胞溶解液とした。得られた細胞溶解液について４５０ｎｍの吸光度を測定することで色素細胞中のメラニン量を測定した。また細胞溶解液のタンパク質濃度を牛血清由来アルブミン（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を標準としてＰｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｄｙｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ（ＢＩＯ−ＲＡＤ社）を用いて定量し、単位タンパク質量当たりのメラニン量を算出した。コントロールとして被験試料が無添加の培地におけるメラニン量を同様に測定した。結果はコントロールのメラニン量を１００％とした相対値として表１に示した。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
表１の結果より、ホスファチジルイノシトールは無添加と比較してメラニン量が減少しており、優れたメラニン生成抑制作用（美白作用）があることが分かった。
【００２４】
＜コラーゲン産生促進評価＞
表２に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、正常ヒト真皮線維芽細胞を７２時間培養した後、培地上清中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により定量した。コントロールとして被験試料が無添加の培地におけるＩ型コラーゲン量を同様に定量した。結果はコントロールのＩ型コラーゲン量を１００％とした相対値として表２に示した。
【００２５】
【表２】
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【００２６】
表２の結果より、ホスファチジルイノシトールは無添加と比較してＩ型コラーゲン量が増加しており、優れたＩ型コラーゲン産生促進作用があることが分かった。
【００２７】
＜ヒアルロン酸産生促進評価＞
表３に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、正常ヒト表皮細胞を７２時間培養した後、培地上清中のヒアルロン酸量をＥＬＩＳＡ法により定量した。コントロールとして被験試料が無添加の培地におけるヒアルロン酸量を同様に定量した。結果はコントロールのヒアルロン酸量を１００％とした相対値として表３に示した。
【００２８】
【表３】
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【００２９】
表３の結果より、ホスファチジルイノシトールは無添加と比較してヒアルロン酸量が増加しており、優れたヒアルロン酸産生促進作用があることが分かった。
【００３０】
＜細胞内活性酸素消去評価＞
表４に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、正常ヒト表皮細胞を２４時間培養した後、Ｈａｎｋ’ｓ平衡塩溶液（−）（ＨＢＳＳ（−））で洗浄し、活性酸素を検出する蛍光プローブである２’−７’−Ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ（ＳＩＧＭＡ社）を２０μＭ濃度で含んだＨＢＳＳ（−）に３０分間暴露して蛍光プローブを細胞に取込ませた。その後、活性酸素として５００μＭの過酸化水素を含むＨＢＳＳ（−）に暴露して１時間後の細胞内活性酸素量を蛍光プレートリーダー（ＥＸ／ＥＭ４８５／５３５ｎｍ）にて定量した。コントロールとして被験試料が無添加の培地における細胞内活性酸素量を同様に定量した。結果はコントロールの細胞内活性酸素量を１００％とした相対値として表４に示した。
【００３１】
【表４】
2020189826.tif 000006
【００３２】
表４の結果より、ホスファチジルイノシトールは無添加と比較して細胞内活性酸素量が減少しており、優れた細胞内活性酸素消去作用があることが分かった。
【００３３】
＜ＳＬＳ誘発性細胞内活性酸素の抑制評価＞
ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）１０μｇ／ｍＬと表５に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、正常ヒト表皮細胞を２４時間培養した後、Ｈａｎｋ’ｓ平衡塩溶液（−）（ＨＢＳＳ（−））で洗浄し、活性酸素を検出する蛍光プローブである２’−７’−Ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ（ＳＩＧＭＡ社）を２０μＭ濃度で含んだＨＢＳＳ（−）に４５分間暴露して蛍光プローブを細胞に取込ませ、細胞内活性酸素量を蛍光プレートリーダー（ＥＸ／ＥＭ４８５／５３５ｎｍ）にて定量した。コントロールとして被験試料が無添加（ＳＬＳのみ）の培地における細胞内活性酸素量を同様に定量した。結果はコントロールの細胞内活性酸素量を１００％とした相対値として表５に示した。
【００３４】
【表５】
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【００３５】
＜ＳＬＳによる細胞毒性の抑制評価＞
ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）２５μｇ／ｍＬと表６に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、正常ヒト表皮細胞を２４時間培養した後、ＷＳＴ−８(同仁化学研究所)による染色及び吸光度（４５０ｎｍ）測定により細胞生存率を算出した。結果はコントロール（ＳＬＳおよび被験試料が無添加）の細胞生存率を１００％とした相対値として表６に示した。
【００３６】
【表６】
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【００３７】
ＳＬＳの暴露は細胞膜への相互作用を介して細胞内活性酸素の上昇を惹き起こし、荒れ肌の誘発に繋がることが示唆されている。また、ＳＬＳ暴露による細胞生存率の低下（細胞毒性）は、刺激につながると考えられている。ホスファチジルイノシトールは、表５の結果よりＳＬＳによる細胞内活性酸素の上昇を抑制し、また、表６の結果よりＳＬＳによる細胞毒性を緩和させており、このことからホスファチジルイノシトールは刺激緩和作用を有すると推測された。
【００３８】
＜紫外線による細胞死の抑制評価＞
表７に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、ヒト正常表皮細胞を２４時間培養した後、紫外線ＵＶＢ波を５０ｍＪ／ｃｍ２照射した。ホスファチジルイノシトールを含まない培地中でさらに２４時間培養後、ＷＳＴ−８(同仁化学研究所)による染色及び吸光度（４５０ｎｍ）測定により細胞生存率を算出した。結果はコントロール（被験試料添加なし及び紫外線照射なし）の細胞生存率を１００％とした相対値として表７に示した。
【００３９】
【表７】
2020189826.tif 000009
【００４０】
表７の結果より、ホスファチジルイノシトールは紫外線照射による細胞死を抑制しており、優れた紫外線による細胞死抑制作用を有することが分かった。
【００４１】
＜細胞増殖促進評価＞
表８に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、ヒト正常表皮細胞を４８時間培養した後、ＷＳＴ−８(同仁化学研究所)による染色及び吸光度（４５０ｎｍ）測定により細胞増殖率を算出した。結果はコントロール（被験試料添加なし）の細胞生存率を１００％とした相対値として表８に示した。
【００４２】
【表８】
2020189826.tif 000010
【００４３】
＜ミトコンドリア膜電位評価＞
表９に記載の濃度でホスファチジルイノシトールを添加した培地において、ヒト正常表皮角化細胞を２４時間培養後、Ｈａｎｋ’ｓ平衡塩溶液（−）［ＨＢＳＳ（−）］で洗浄し、ミトコンドリア膜電位を検出する蛍光プローブであるＪＣ−１（同人化学）を２０μＭの濃度で含んだＫＧ２培地に３０分間暴露して蛍光プローブを細胞に取込ませた。その後、ＨＢＳＳ（−）で洗浄して蛍光顕微鏡にて蛍光強度を測定した。コントロールとして被験試料が無添加の培地における蛍光強度を同様に測定した。結果はコントロールの蛍光強度（ミトコンドリア膜電位）を１００％とした相対値として表９に示した。
【００４４】
【表９】
2020189826.tif 000011
【００４５】
表８の結果より、ホスファチジルイノシトールは無添加と比較して表皮細胞の増殖を促進させており、優れた表皮細胞増殖促進作用を有することが分かった。また、ＡＴＰ産生の場であるミトコンドリアにおいて、膜電位はミトコンドリア内外の電位差を意味し、膜電位が高いほどミトコンドリアの活力が高い状態であることを意味する。表９の結果より、ホスファチジルイノシトールは無添加と比較してミトコンドリア膜電位を上昇させており、前述の表皮細胞増殖促進作用と相関する結果であった。
【００４６】
＜シワ改善評価＞
日本香粧品学会により策定された「新規効能取得のための抗シワ製品評価ガイドライン」に準じた方法にてシワ改善作用を確認した。健常成人女性１８名（３５〜５８歳、平均４６．３歳）を被験者とし、半顔に表１０に記載のホスファチジルイノシトール含有化粧水を朝夜の１日２回塗布し、他方の半顔は無塗布とした。試験初日（０週目）、２週目、及び、４週目に、目尻の写真撮影を行い、得られた画像からシワ評価に熟練した専門家によりシワグレードを判定した（０点：シワは無い、１点：不明瞭な浅いシワが僅かに認められる、２点：明瞭な浅いシワが僅かに認められる、３点：明瞭な浅いシワが認められる）。結果をシワグレードの変化値として図１に示した。
【００４７】
【表１０】
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【００４８】
図１の結果より、無塗布部位はシワグレードに大きな変化が見られなかったのに対して、ホスファチジルイノシトール含有化粧水を塗布した部位では、シワグレードが有意に低下しており、ホスファチジルイノシトールが優れたシワ改善作用を有することが分かった。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ホスファチジルイノシトールのシワ改善作用を示す図である
【図１】
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