(57)【要約】      （修正有）【課題】免疫応答を増強、又は抑制することを含む、免疫応答を調節することができるアジュバント組成物の提供。【解決手段】下記(a)〜(d)を含み、さらに抗原を含むことができる組成物。（ａ）からし油及びグレープシードオイルから選択される植物油、（ｂ）ビタミンＤ、（ｃ）ビタミンＡ、ビタミンＥ、又はこれらの組み合わせ、（ｄ）エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）【選択図】図２０
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＡ、ビタミンＥおよびその混合物からなる群から選択されるビタミン、からし油、トウモロコシ油、オリーブオイル、グレープシードオイル、スクアレンおよびオレイン酸からなる群から選択される薬学的に許容可能な油担体、ならびにフラボノイドを含有する組成物。
【請求項２】
前記ビタミンがビタミンＡおよびビタミンＥを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
さらにビタミンＤを含有する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記フラボノイドがカテキンである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記カテキンがエピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）である、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、約１０％〜約７５％ｖ／ｖのからし油を含有する、請求項１、２または５に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が、１０ｖ／ｖのからし油を含有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、５０％ｖ／ｖのからし油を含有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、７５％ｖ／ｖのからし油を含有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、さらに少なくとも一つの抗原を含有する、請求項１、２または５に記載の組成物。
【請求項１１】
ビタミンＡ、ビタミンＥおよびその混合物からなる群から選択されるビタミン、水酸化アルミニウムおよびフラボノイドを含有する組成物。
【請求項１２】
前記フラボノイドが、カテキンである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記カテキンが、ＥＧＣＧである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ビタミンＤ、ビタミンＥ、フラボノイドおよび１０％からし油を含有する組成物。
【請求項１５】
前記フラボノイドが、カテキンである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記カテキンが、ＥＧＣＧである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
ビタミンＤ、ビタミンＥ、フラボノイドおよび水酸化アルミニウムを含有する組成物。
【請求項１８】
前記フラボノイドが、カテキンである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記カテキンが、ＥＧＣＧである、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
約２．５％〜５０％ｖ／ｖの水酸化アルミニウムを含有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２１】
２．５％ｖ／ｖの水酸化アルミニウムを含有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
５０％ｖ／ｖの水酸化アルミニウムを含有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
ビタミンＡおよびオレイン酸を含有する組成物。
【請求項２４】
さらにフラボノイドを含有する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記フラボノイドがカテキンである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記カテキンがＥＧＣＧである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
約１０％〜約５０％オレイン酸を含有する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２８】
４０％オレイン酸を含有する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
ビタミンＡ、タンニンおよびからし油を含有する組成物。
【請求項３０】
前記タンニンが没食子酸である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
５０％からし油を含有する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
抗原をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
ビタミンＡ、ビタミンＥおよびその混合物からなる群から選択されるビタミン、リポソームおよびオレイン酸、並びにフラボノイドを含有する、組成物。
【請求項３４】
請求項１、１１、１４、２３、２９および３３に記載の前記組成物を、哺乳類の対象に投与することを含む、前記対象における免疫応答を調節する方法。
【請求項３５】
前記調節が、増強である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記調節が、抑制である、請求項３４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、アジュバント組成物およびそれを使用するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ワクチンは、非常に費用対効果の良い医学的介入である。しかしながら、多くの疾患がワクチン接種により予防されているにもかかわらず、予防および／または治療されずにいる疾患が未だ多くある。さらに、すでにワクチンがある多くの疾患に関しても、改良ワクチンが必要とされている。効果的なワクチン製造の大きな障害は、ワクチンの免疫原性の欠如または低さにある。ワクチンの有効性は、アジュバントおよびデリバリーシステムを使用することにより、増強することができる。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、免疫応答を増強または抑制することを含む、対象における免疫応答を調節することができるアジュバント組成物を提示する。これらのアジュバント組成物はまた、抗原提示活性を増強もしくは抑制することにより、たとえばナチュラルキラー細胞等の活性化もしくは抑制を介した自然免疫応答の増強もしくは抑制により、ならびに／または、Ｂ細胞および／もしくはＴ細胞のサブセットもしくは他の細胞を直接活性化することにより、抗原の免疫原性を増強または抑制するために用いてもよい。また、アジュバント組成物の製造方法ならびに当該アジュバント組成物の使用方法もまた、提示される。
【０００４】
ある実施態様において、組成物は、薬学的に許容可能な担体、少なくとも一つのフラボノイドおよび／または少なくとも一つのタンニンおよび少なくとも一つのビタミンを含む。
【０００５】
ある例において、薬学的に許容可能な担体は、有機担体または無機担体であってもよい。無機担体の例としては、アルミニウム塩（たとえば、水酸化アルミニウムまたはリン酸化アルミニウム）が含まれる。有機担体の例としては、リポソーム、油等が含まれる。ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、たとえば動物油、植物油、化石油、合成油等の油であってもよい。動物油の例としては、魚油、サメ肝油等が含まれる。植物油の例としては、からし油、ココナツ油、サフラワー油等が含まれる。
【０００６】
ある実施態様において、フラボノイドは、その誘導体および／またはその塩である。本発明の非限定的なフラボノイドの例示としては、カテキン、フラボノイド誘導体およびフラボノイド誘導体塩が含まれる。ある例において、フラボノイドは、カテキンまたはその誘導体もしくはその塩である。
【０００７】
ある実施態様において、タンニンは、その誘導体および／またはその塩である。本発明の非限定的なタンニンの例示としては、没食子酸、没食子酸誘導体および没食子酸誘導体塩が含まれる。ある例において、タンニンは没食子酸またはその誘導体もしくはその塩である。
【０００８】
ある実施態様において、ビタミンはその誘導体および／またはその塩である。ビタミンは、たとえばビタミンＢおよびビタミンＣ等の水溶性ビタミンであってもよく、または、たとえばビタミンＡ、Ｄ、ＫおよびＥ等の脂溶性ビタミンであってもよい。
【０００９】
ある実施態様において、組成物は、薬学的に許容可能な担体、カテキンまたはその誘導
体またはその塩、没食子酸またはその誘導体、およびビタミンＡまたはその誘導体またはその塩を含む。ある実施態様において、組成物は、薬学的に許容可能な担体、カテキンまたはその誘導体またはその塩、およびビタミンＥまたはその誘導体またはその塩を含む。
【００１０】
本発明の組成物は、特に、投与経路が粘膜、または皮膚からの経上皮である場合には、イソチオシアン酸アリルをさらに含有してもよい。その結果、ある実施態様において、組成物は薬学的に許容可能な担体、たとえばカテキン等のフラボノイド、たとえばビタミンＡ等のビタミン、およびイソチオシアン酸アリルを含む。
【００１１】
ある実施態様において、粘膜経路（たとえば、経口、舌下、経鼻等）からのフラボノイド、および薬学的に許容可能な担体との混合物への対象の抗原の任意の手段による物理的結合は、たとえば経口免疫寛容等の形式で、免疫抑制（すなわち、後続する宿主の抗原接触への全身性免疫の、および／または、粘膜免疫の不応）を誘導してもよい。もし薬学的に許容可能な担体が脂質または脂肪酸であった場合、フラボノイドへの抗原の任意の手段による物理的結合に加え、またはフラボノイドへの抗原の任意の手段による物理的結合の代わりに、対象の抗原を、当該脂質または脂肪酸に物理的に結合することができる。
【００１２】
他のある態様において、組成物は、抗原を含む。ある実施態様において、抗原は、組成物の薬学的に許容可能な担体、フラボノイドまたはビタミンに結合されてもよい。ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、たとえばオレイン酸、リノール酸、αリノレン酸、または任意の手段により抗原が結合または物理的に結び付けられる脂質等の脂肪酸の一つ以上を含有してもよい。
【００１３】
組成物は、たとえば経鼻、経肺、経舌下、経口、口腔内、膣内、直腸内、眼内、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、皮下、静脈内、および筋肉内等の多くの経路により、たとえば哺乳類等の対象に投与されうる。
【００１４】
また、組成物を製造する方法が開示され、当該方法には、組成物を製造するために薬学的に許容可能な担体とフラボノイド、およびビタミンを混合することが含まれる。
【００１５】
組成物を使用する方法もまた、本明細書に提示される。当該方法には、対象における免疫応答を調整するために、対象に組成物を投与することが含まれる。
【００１６】
本発明および本発明の具体的な例示の実施態様を記述する前に、本発明が記述される具体的な実施態様（それらはもちろん、変化しうる）に限定されるものではないことが理解される。また、本明細書に使用される専門用語は具体的な実施態様を記述することのみを目的としていることが理解される。
【００１７】
また、本明細書に記述されるものと類似または同等の任意の方法および物質が、本発明の実施または試行に用いることができるが、ある好ましい方法および物質がこれから記述される。本明細書に言及される全ての公表文献は、当該公表文献が引用されている部分に関連する方法および／または物質を開示および記述するために、参照により本明細書に援用される。
【００１８】
本明細書において使用されるように、「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」という単数形は、当該文脈が他で明確に記述されない限り、複数の対象を含むことに注記しなければならない。ゆえに、たとえば、「組成物（ａ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」または「アジュバント組成物（ａｎ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」という言及には、そのような組成物の一つおよび／または複数が含まれ、「ビタミン（ａ  ｖｉｔａｍｉｎｅ）」という言及には、一つ、二つまたはそれ以上のビタ
ミンが含まれ、および「フラボノイド（ａ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄ）」または「タンニン（ａ  ｔａｎｎｉｎ）」という言及には、一つ、二つまたはそれ以上のフラボノイドまたはタンニン等が含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明およびその利点のより完全な理解のために、そして非制限的な例示の目的で、以下の記述が作られ、以下の添付の説明図と併せて解釈される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１Ａ】図１Ａは、ＬＰＳの存在下、または非存在下で、様々な成分（ＭＯ：からし油、ＲＡ：レチノイン酸、ＶＤ３：ビタミンＤ３、ＲＰ：レチニル・パルミテート、ＣＨ：カテキン水和物、ＥＧＣＧ：エピガロカテキン没食子酸塩、ＶＥ：ビタミンＥ（α−トコフェロール））、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、ａｌｕｍ（ｉｍｊｅｃｔ）と共に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで４日間、活性化させた後の、または活性化無しでの、マウス脾臓細胞によるインターロイキン６（ＩＬ−６）産生を示す棒グラフである。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＬＰＳの存在下、または非存在下で、様々な成分（ＭＯ：からし油、ＲＡ：レチノイン酸、ＶＤ３：ビタミンＤ３、ＲＰ：レチニル・パルミテート、ＣＨ：カテキン水和物、ＥＧＣＧ：エピガロカテキン没食子酸塩、ＶＥ：ビタミンＥ（α−トコフェロール））、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、ａｌｕｍ（Ｉｍｊｅｃｔ）と共に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで４日間、活性化させた後の、または活性化無しでの、マウス脾臓細胞によるインターロイキン１−α産生を示す棒グラフである。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ＬＰＳの存在下、または非存在下で、様々な成分（ＭＯ：からし油、ＲＡ：レチノイン酸、ＶＤ３：ビタミンＤ３、ＲＰ：レチニル・パルミテート、ＣＨ：カテキン水和物、ＥＧＣＧ：エピガロカテキン没食子酸塩、ＶＥ：ビタミンＥ（α−トコフェロール））、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、ａｌｕｍ（Ｉｍｊｅｃｔ）と共に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで４日間、活性化させた後の、または活性化無しでの、マウス脾臓細胞によるＴＮＦ−α産生を示す棒グラフである。
【図２Ａ】図２Ａは、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１、ＣＣＬ２としてもまた知られる）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン１２ｐ７０（ＩＬ−１２ｐ７０）の増強に対する、フラボノイド（ＥＧＣＧ）、ビタミンＥ（ＶＥ）およびからし油（ＭＯ）の相乗効果を示す棒グラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、単回筋肉内（ＩＭ）ワクチネーション後のビタミンＡ（ＶＡ；レチノイン酸）またはカテキン（カテキン水和物）が増加した血清抗インフルエンザＨＡ  ＩｇＧ１応答に対するワクチンデリバリーシステムとしてのからし油（ＭＯ）を示す棒グラフである（応答は、１回のＩＭワクチネーションの３週後で測定された血清ＩｇＧ１  ＥＬＩＳＡ力価として示され、ｐ値もまた示されている）。
【図３】ＰＢＳおよびｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）（ＴＬＲ３アゴニスト、ｄｓＲＮＡホモログ）と比較した、からし油（ＭＯ）に溶解した様々な成分（すなわち、ビタミンＥ（ＶＥ；α−トコフェロール）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）、レチニル・パルミテート（ＲＰ；ビタミンＡ））中に処方されたＨＩＶｇｐ１２０ＢａＬを用いて行った２回の粘膜ワクチネーション（鼻内および舌下の組み合わせ（ＩＮ／ＳＬ））の２週間後（２ＷＰ２）、または２回の粘膜ワクチネーション後に１回の全身（筋肉内）ワクチネーションの２週間後（２ＷＰ３）での、血清ＩｇＧ１抗ＨＩＶｇｐ１２０ＢａＬ力価を示す棒グラフである。
【図４】Ｉｍｊｅｃｔの「Ａｌｕｍ」を用いて行った３回のＩＭワクチネーションと比較した、栄養免疫増強デリバリーシステム（Ｎｕｔｒｉｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｅ−ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＮＩＤＳ）、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ＥＧＣＧおよびＭＯを含有する）およびｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を用いて行った、２回の粘膜ワクチネーション（ＩＮ／ＳＬ）および１回の全身ブースターワクチネーション（ＩＭ）の後の、腸骨リンパ節における局所ＴＨ１およびＴＨ２サイトカイン応答を示す棒グラフである。
【図５Ａ】ＮＩＤＳ中に溶解したｇｐ１２０ＣＮ５４、またはｇｐ１２０ＣＮ５４を単独で用いて行った、２回の粘膜ワクチネーション（左）、および２回の粘膜ワクチネーションと２回の全身ワクチネーション（右）の後の、血清抗体応答を示す棒グラフである。
【図５Ｂ】同上。
【図６】ＮＩＤＳ中に溶解したｇｐ１２０ＣＮ５４、またはｇｐ１２０ＣＮ５４を単独で用いて行った、２回の粘膜ワクチネーションおよび２回の全身ワクチネーションの１週後の、膣内洗浄液中の抗ｇｐ１２０ＣＮ５４ＩｇＧ１およびＩｇＡ応答を示す棒グラフである。
【図７】ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）ＴＬＲ３アゴニスト、およびＩｍｊｅｃｔのＡｌｕｍと比較した、ＮＩＤＳ（からし油中に溶解したビタミンＡおよびＥおよびカテキンを含有）の空気嚢肌注入後の、有意に低い炎症誘発性サイトカインおよびケモカインを示す棒グラフである。値は、注入６時間後に採取した嚢中の液の、マウス３匹／群（ｐｇ／ｍｌ、Ｙ軸）の平均である。
【図８】ＮＩＤＳ（５０％からし油中に溶解したビタミンＡおよびＥおよびＥＧＣＧを含有）を用いたマウスの筋肉内ワクチネーション６時間後の、血清ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６を示す棒グラフである。値は、マウス６匹／群の平均ｐｇ／ｍｌとして示されている。
【図９】ＡｌｕｍとビタミンＡ、Ｅおよびフラボノイドの組み合わせでのＩＭワクチネーションは、Ａｌｕｍ単独でのワクチネーションと比較し、血清応答を増強することを示す棒グラフである。
【図１０】１０％ＭＯでの抗原特異的免疫抑制、およびＡｌｕｍを用いた免疫増強を示す棒グラフである。
【図１１】オレイン酸単独またはビタミンＡを用いたＩＭワクチネーションの後の抗原特異的免疫増強、および、オレイン酸中に溶解したエピガロカテキン没食子酸塩およびビタミンＡの組み合わせによる相乗的な免疫抑制を示す棒グラフである。
【図１２】オレイン酸単独、オレイン酸＋ＥＧＣＧ、オレイン酸＋ＶＡ、オレイン酸＋ｃａｔ、およびオレイン酸＋ＶＡ＋ｃａｔでのワクチネーションの後の抗原特異的ＴＨ１増強およびＴＨ２抑制を示す棒グラフである。
【図１３】ＶＡおよびＥＧＣＧと組み合わせたオレイン酸と比較した、オレイン酸単独でのワクチネーションの後の相乗的な抗原非特異的免疫抑制を示す棒グラフである。
【図１４】Ａｌｕｍ、および油分の無いＮＩＤＳ＋Ａｌｕｍと比較した、ＮＩＤＳ（レチニル・パルミテート、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）、α−トコフェロール、５０％からし油）でのＩＭワクチネーションの後の免疫増強を示す棒グラフである。
【図１５】ＶＥ、ＥＧＣＧ、水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）を用いた単回筋肉内注射の６時間後の血清ＩＬ−５応答の抗原非特異的増強を示す棒グラフである。
【図１６】タンニン（没食子酸）、ビタミンＡおよびＭＯの相乗効果を介した抗原特異的免疫増強を示す棒グラフである。
【図１７】図１７ＡおよびＢは、１０％からし油、５０％からし油、または７５％からし油中に溶解したカテキンと共に、ビタミンＡおよびＥを用いたワクチネーションの後のＴＨ２抑制およびＴＨ１サイトカイン応答の増強を示す棒グラフである。
【図１８】ＶＡおよびＥＧＣＧによる、リポソーム中のＨＩＶ−１ｇｐ１２０タンパク質に対する血清抗体応答の相乗的増強を示す棒グラフである。
【図１９】ＶＡ、ＶＥ、ＥＧＣＧおよびスクアレン油ベースの担体を用いたワクチネーションの後の相乗的な免疫増強を示す棒グラフである。
【図２０】様々な油ベースの担体を用いたＶＡ、ＶＥおよびＥＧＣＧによる相乗的な免疫増強（Ｙ軸に血清ＩｇＧ１抗体力価）を示す棒グラフである。
【図２１】ＶＡ、ＥＧＣＧおよびＭＯを用いた単回ＩＭ注射の６時間後の、血清ＩＬ−１５サイトカイン応答の抗原非特異的増強を示す棒グラフである。
【図２２】ＶＥ、ＥＧＣＧおよびＭＯを用いた単回ＩＭ注射の６時間後の、血清ＩＬ−５およびＩＬ−１２ｐ７０サイトカイン応答（Ｙ軸でｐｇ／ｍｌ）の抗原非特異的増強を示す棒グラフである。
【００２１】
例示的な実施態様の詳細な説明
本開示は、対象における免疫応答を調整することができるアジュバント組成物を提示する。これらのアジュバント組成物はまた、抗原提示を増強することによる、たとえばナチュラルキラーＴ細胞の活性化を介した自然免疫応答を増強による、および／または、Ｂ細胞またはＴ細胞（または他の細胞）の直接的な活性化による、抗原の免疫原性増強に用いてもよい。また、当該アジュバント組成物の製造方法ならびに当該アジュバント組成物の使用方法も提示される。
【００２２】
定義
「アジュバント組成物」（複数含む）という言葉は、対象に投与された際に、対象における免疫応答を誘導することができる組成物を指す。抗原との組み合わせで投与された場合、「アジュバント組成物」は、抗原特異的免疫応答を引き起こすことができる。
【００２３】
抗原または組成物に対する「免疫応答」は、対象の抗原または組成物中に存在する分子に対する自然免疫応答、液性免疫応答および／または細胞性免疫応答の、対象における発現である。自然免疫応答は、免疫システムの任意の細胞および、または上皮細胞、内皮細胞等による早期（数時間、数日以内）の免疫応答である。「液性免疫応答」とは、主に抗体分子により調節される免疫応答を指し、一方、「細胞性免疫応答」とは、主にＴリンパ球および／または他の白血球により調節される免疫応答である。
【００２４】
「薬学的に許容可能な」という言葉は、ほとんどの場合において安全であり、対象がヒトではない場合に獣医学的な薬学利用が許容可能であり、ヒトの場合においてはヒトの薬学利用が許容可能である物質を指す。
【００２５】
「抗原成分」とは、適切な条件下で、免疫システム（たとえば、抗体による結合、またはたとえばＴ細胞による細胞性免疫応答を引き起こすためのプロセス等）により認識することができる任意の物質を指す。抗原成分には、一つ以上のエピトープが含まれる。Ｂ細胞エピトープには、少なくとも約３〜５アミノ酸（たとえば、４以上のアミノ酸）が含まれる。ハプテンまたは多糖もまた、Ｂ細胞エピトープとしての役割を果たしうる。Ｔ細胞エピトープ（たとえば、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）エピトープ）は、少なくとも約７〜９アミノ酸（たとえば、８以上のアミノ酸）を含み得る。ヘルパーＴ細胞エピトープは、少なくとも約１２〜２０アミノ酸を含む。「抗原成分」という用語は、サブユニット抗原（すなわち、抗原が本来関連する生物本体から分離されている抗原）、ならびに殺処理された、弱毒化された、もしくは不活化された細菌、ウイルス、真菌、寄生虫もしくは他の微生物、プリオン、アレルゲンまたは任意の他の疾患誘発性因子の両方を意味する。抗原成分は、野生型のタンパク質配列に対し、たとえば欠失、付加および置換（通常、本質的に保存的である）等の改変を含む、改変タンパク質であってもよい。抗原成分という用語はまた、タンパク質抗原またはペプチド抗原をコードする核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）も意味する。
【００２６】
本明細書で用いられる「浸透促進（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」または「透過促進（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」とは、抗原が、肌または粘膜を通過してリンパ節または血流に入る比率を増加させるために、肌または粘膜の抗原に対する透過性を増加させることを指す。
【００２７】
「治療有効量」または「有効量」とは、疾患の予防または治療のために哺乳類または他
の対象に投与された際に、その疾患に対するそのような予防または治療に作用するのに十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患およびその重篤度、治療される対象の年齢、体重等により変化する。
【００２８】
概要
本発明は、免疫応答を調節することができるアジュバント組成物を提示する。これらのアジュバント組成物は、抗原が無い中で免疫応答を誘導するために用いてもよく、または、抗原提示を増強することによる、たとえばナチュラルキラー細胞等の活性化を通じて自然免疫応答を増強することによる、ならびに／もしくは、ＢおよびＴ細胞もしくは他の細胞（たとえば、上皮、内皮細胞等）の直接的な活性化による、抗原の免疫原性増強のために用いてもよい。アジュバント組成物はまた、免疫応答の抑制のために求められてもよい。また、アジュバント組成物の製造方法ならびに当該アジュバント組成物の使用方法も提示される。
【００２９】
組成物
本明細書に提示されるアジュバント組成物は、薬学的に許容可能な担体、フラボノイド、タンニン、およびビタミンを含んでもよい。ビタミンは、脂溶性ビタミン（たとえば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、およびビタミンＤ）、もしくは水溶性ビタミン（たとえば、ビタミンＣおよびビタミンＢ）、および／またはそのようなビタミンの誘導体もしくは塩であってもよい。組成物は、２つ以上のビタミンを含んでもよい。ある実施態様において、アジュバント組成物は、２つ以上のフラボノイドおよび／または２つ以上のビタミンを含んでもよい。特に好ましい実施態様において、ビタミンはビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＤおよびそれらの組み合わせである。
【００３０】
ある場合において、薬学的に許容可能な担体は、有機担体または無機担体でありうる。無機担体の例としては、ミョウバンおよび他のアルミニウム塩（たとえば、水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）またはリン酸アルミニウム）を含む。有機担体の例としては、リポソーム、油等を含む。ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、たとえば動物油、植物油、化石油、合成油等の油であってもよい。動物油の例としては、魚油、サメ肝油、スクアレン油、スクアレン等が含まれる。植物油の例としては、からし油、トウモロコシ油、オリーブオイル、グレープシードオイル、ココナツ油、サフラワー油等が含まれる。特に好ましい実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、たとえば魚スクアレン油またはスクアレン等の魚油である。
【００３１】
他の実施態様において、本明細書に提示される組成物は、イソチオシアン酸アリル（からしの精油）を含む、または含まない薬学的に許容可能な油、ならびに少なくとも一つのフラボノイド、少なくとも一つのタンニン、少なくとも一つのビタミンを含む。
【００３２】
一部の実施態様において、組成物は水エマルションに溶解した油を含有する。水エマルションに溶解した油は、高圧均質化工程の使用により製造されてもよく、その工程は、狭いノズルにエマルションを通過させるために５００〜３００００ｐｓｉの加圧を行い、均質化エマルションを得るものである。ある実施態様において、均質化エマルションは、３０〜１００ｎｍサイズの液滴／粒子を含有する。
【００３３】
一部の実施態様において、抗原が組成物に含まれる場合、抗原はエマルションの作製中に添加され、一方、他の実施態様においては、抗原はエマルションが作製された後に添加され、すでに形成されたエマルションと単に混合される。また、抗原は組成物とは別に投与されてもよい。
【００３４】
ある実施態様において、本明細書に提示されるアジュバント組成物は、薬学的に許容可
能な油、少なくとも一つのフラボノイドおよび／またはタンニン、ならびに少なくとも一つのビタミンを含む。ある実施態様において、油はたとえば魚油等の動物油、またはたとえばからし油等の植物油であってもよい。
【００３５】
他の実施態様において、本明細書に提示される組成物は、イソチオシアン酸アリル（からしの精油）を含む、または含まないからし油、少なくとも一つのフラボノイド、および少なくとも一つのビタミンを含む。
【００３６】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は油体を含まない。薬学的に許容可能な油は、油体（または油体様構造）を含む任意の細胞（植物細胞、動物細胞、真菌細胞および細菌細胞を含む）から単離されてもよい。ある実施態様において、薬学的に許容可能な油は、植物油である。
【００３７】
たとえば大豆、菜種、ヒマワリおよびヤシ等の経済的に重要な作物を含む油糧種子作物の種の中の、当分野で油体、脂肪体（ｏｌｅｏｓｏｍｅｓ）、脂肪体（ｌｉｐｉｄ  ｂｏｄｉｅｓ）またはスフェロソーム（ｓｐｈｅｒｏｓｏｍｅｓ）として知られる個々の細胞内構造中に、水に不溶性の油分画が貯蔵されている（Huang 1992, Ann. Rev. Plant Mol.
Biol. 43: 177-200）。脂肪酸のグリセロールエステルとして化学的に定義される油の混合物（トリアシルグリセリド）に加え、油体は、リン脂質および集団的に油体タンパク質と名付けられる多くの関連タンパク質を含有する。構造的な観点から、油体は、油体タンパク質が組み込まれている単層リン脂質により包埋されているトリアシルグリセリド基質であるとみなされている（Huang, 1992, Ann. Rev. Plant Mol. Biol. 43: 177-200）。
植物種の油体分画に存在する種子油は、様々なトリアシルグリセリドの混合物であり、正確な組成は油が抽出された植物の種類に依存する。
【００３８】
ある実施態様において、本発明の薬学的に許容可能な油は、実質的に生の油体を含まない。本明細書における「実質的に生の油体」という用語は、油体は、遊離油の形態で総種子油含有量の５０％（ｖ／ｖ）を超えて放出していないことを意味する。ある実施態様において、薬学的に許容可能な油は、油体が破裂したものから放出された遊離油である。ある実施態様において、薬学的に許容可能な油は遊離油であり、遊離油で存在する油体は、遊離油の形態で、総種子油含有量の５０％（ｖ／ｖ）を超えて放出している。
【００３９】
ある実施態様において、本明細書に記述される組成物中の薬学的に許容可能な油は、遊離油が生の油体を実質的なレベルで含まないような、油体の破裂をもたらす工程により作製される遊離油である。ある実施態様において、薬学的に許容可能な油は、細胞中に存在する油の４０％〜９５％（たとえば、約４５％〜９０％、約５０％〜９０％、約６０％〜９０％、約７０％〜９０％、たとえば、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％）が遊離油の形態で放出される工程により作製することができ、ここで遊離油は、油体の形態では存在しない油である。他の言葉でいえば、たとえばオレオシンまたは単層リン脂質を含有する油体タンパク質により囲まれていない、または包埋されていない脂肪酸またはトリアシルグリセリドの形態の遊離油である。ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、単層リン脂質により囲まれていない、または包埋されていない遊離油である。
【００４０】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、たとえば、油体において見いだされるタンパク質（たとえば、オレオシン等の油体タンパク質）等の植物タンパク質を高濃度で含まない遊離油である。ある実施態様において、本明細書に提示される組成物は、植物タンパク質を０．００１％〜５０％重量／体積（ｗ／ｖ）を超える量（たとえば、植物タンパク質を約０．００１％ｗ／ｖ超、約０．０１％ｗ／ｖ超、約０．１％ｗ／ｖ超、約１％ｗ／ｖ超、約１０％ｗ／ｖ超、約２０％ｗ／ｖ超、約３０％ｗ／ｖ超、約４０％ｗ／
ｖ超、約５０ｗ％／ｖ超）で、含まない。
【００４１】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、植物油であってもよい。植物油は、たとえば植物の種等の植物から単離されてもよい。植物油は、植物の種に存在する油が、高濃度の油体を含まない遊離油の形態で放出される工程により調製されてもよい。
【００４２】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、上述の遊離油であってもよい。遊離油は、油体を高濃度で含まない。ある実施態様において、遊離油は、油体を０．００００００１％重量／体積〜５０％重量／体積超、含まない。ある場合において、油体は、本明細書に記述される組成物中に存在する遊離油中で、５０％重量／体積未満、４０％重量／体積未満、３０％重量／体積未満、２０％重量／体積未満、１０％重量／体積未満、５％重量／体積未満、１％重量／体積未満、０．５％重量／体積未満、０．１％重量／体積未満で存在する。
【００４３】
ある実施態様において、本明細書に提示される組成物中に存在する遊離油は、植物タンパク質（たとえば、油体タンパク質）を０．００１％〜５０％重量／体積（ｗ／ｖ）を超える量（たとえば、植物タンパク質を約０．００１％ｗ／ｖ超、約０．０１％ｗ／ｖ超、約０．１％ｗ／ｖ超、約１％ｗ／ｖ超、約１０％ｗ／ｖ超、約２０％ｗ／ｖ超、約３０％ｗ／ｖ超、約４０％ｗ／ｖ超、約５０％ｗ／ｖ超）で、含まない。
【００４４】
フラボノイドは、フラボノイド誘導体、塩、および誘導体の塩を含有する。ある実施態様において、フラボノイドはフラボン、フラボノール、フラボノン、カテキン、アントシアニド、もしくはイソフラボン、またはその誘導体、その塩、もしくはその誘導体の塩である。ある実施態様において、フラボノイドは、たとえばカテキン水和物等のカテキンである。
【００４５】
ビタミンは、ビタミン誘導体、塩、および誘導体の塩を含む。ある実施態様において、ビタミンは、たとえばビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＤ、ビタミンＣおよびビタミンＢ、ならびにその誘導体、その塩、その誘導体の塩等の一つ以上のビタミンを含む。ある好ましい実施態様において、ビタミンはビタミンＡである。他の好ましい実施態様において、ビタミンはビタミンＥである。
【００４６】
アジュバント組成物はさらに、他の添加物（たとえば、保存剤、着色剤、フレーバー剤等）を含んでもよい。アジュバント組成物はさらに、抗原を含んでもよい。
【００４７】
薬学的に許容可能な有機担体
本明細書において使用される「薬学的に許容可能な植物油担体」とは、所望される経路（たとえば、経口および局所経路のデリバリーを含む、全身または粘膜経路）によるヒトまたは非ヒト動物への投与に適した植物油を指す。食用アジュバント組成物も、本開示により予期される。
【００４８】
「植物油」は、植物または植物製品から得られる油を指し、種（堅果、穀物を含む）、果実、根、花、幹等から得られる油を包含する。例としては、トウモロコシ油、からし油、オリーブオイル、グレープシードオイル、ココナッツ油、サフラワー油、大豆油、スクアレン油またはスクアレン等が挙げられる。本開示の植物油は、非遺伝子組み換え植物、および遺伝子組み換え植物から得られる。植物油は、発赤剤の能力を有する植物油（すなわち、たとえば肌に局所適用した際に、毛細血管の拡張および血液循環の増加を促進する）を含有する。植物油は、植物または植物製品（たとえば、非遺伝子組み換え植物もしくは遺伝子組み換え植物もしくは植物製品）から抽出されてもよく、または、植物油中に存在する個々の成分（個々の成分は、たとえば植物、植物製品、動物、動物製品、化石油等
の任意の源から抽出されてもよく、または合成的に製造されてもよい）を混合することにより、合成的に製造されてもよい。植物油または個々の脂肪酸の供給源となる植物は、遺伝子組み換えであってもよい。
【００４９】
ある実施態様において、植物油はからし油である。本明細書において使用される「からし油」とは、アブラナ科のカラシナの種から得ることができる油を指し、当該油は、抽出中に加熱することなくカラシナから得る（たとえば、冷圧抽出法により得ることができる）。加熱することなくカラシナの種から得たからし油は、同じ種から加熱を基礎とする抽出法（たとえば、蒸気応用）を用いて得た油よりも、より低い量のイソチオシアン酸アリル（たとえば、有意ではない、または検出されない）を有する。本開示の組成物中の担体として有用なからし油を得ることができるアブラナ科のカラシナとしては、限定されないが、Brassica rapa（食用菜）、Brassica nigra（黒カラシ）、Brassica juncea (茶カラシ), Brassica hirta (白カラシ、または黄カラシ), Brassica carinata (エチオピアガ
ラシ), Brassica oleracea (野生ガラシ), Brassica campestris (ナタネ（Brassica napus L.（セイヨウアブラナ）およびB. campestris L.（ナタネ）を含む)、およびBrassica
napus（アブラナ）が挙げられる。「からし油」から予期される油には、アブラナ種子から得られる油が含まれる。
【００５０】
前項で述べたように、植物油は、好ましくは遊離油であり、それ自体は実質的に生の油体を高濃度で含有しない。ある実施態様において、植物油は菜種油である。そのような菜種油は、以下の組成を有してもよい。６〜８％飽和脂肪酸（３．５パルミチン酸を伴う）、１４．４％一価不飽和脂肪酸（６０％オレイン酸を伴う）、および６９．３％多価不飽和脂肪酸（２０％リノール酸、１０％αリノレン酸を伴う）。
【００５１】
ある実施態様において、本明細書に記述される組成物に用いられる植物油は、約１４％〜７０％の一価不飽和脂肪酸、約１８％〜２２％の多価不飽和脂肪酸、および約５％〜１２％の飽和脂肪酸を含有してもよい。一価不飽和脂肪酸は、約１８％〜５１％のエルカ酸および約７％〜２２％のオレイン酸を有してもよく、多価不飽和脂肪酸は、約９％〜１５％のリノレン酸および約６％〜２４％のリノール酸を有してもよく、飽和脂肪酸は、約３〜４％のパルミチン酸を有してもよい。
【００５２】
ある実施態様において、本明細書に記述される組成物に用いられる植物油は、約１４％〜７０％の一価不飽和脂肪酸、１８％〜２２％の多価不飽和脂肪酸、および５％〜１２％の飽和脂肪酸を含有してもよい。
【００５３】
ある実施態様において、本明細書に記述される組成物に用いられる植物油は、約１４％〜２０％の一価不飽和脂肪酸、１８％〜２０％の多価不飽和脂肪酸、および５％〜６％の飽和脂肪酸を含有してもよい。
【００５４】
ある実施態様において、本明細書に記述される組成物に用いられる植物油は、約６０％〜７０％の一価不飽和脂肪酸、約１８％〜２２％の多価不飽和脂肪酸、および約５％〜６％の飽和脂肪酸を含有してもよい。
【００５５】
植物油がからし油であった場合、ある実施態様において、からし油は、以下の組成を有してもよい。一価不飽和脂肪酸（エルカ酸（１８〜５１％）、オレイン酸（７〜２２％））、多価不飽和脂肪酸（リノレン酸（９〜１５％）およびリノール酸（６〜２４％））、および５％飽和脂肪酸。からし油はさらに、たとえばタンパク質（３０％）、フェノール類、フィチンおよびジチオールチオン類等の他の成分もまた含んでもよい。からし油はまた、４９０ｍｇ／１００ｇｍのカルシウムを含有してもよい。からし油はまた、９〜１５％のω３脂肪酸を含有してもよい。
【００５６】
一部の実施態様において、からし油は、Brassica rapaから得られたものである。Brassica rapaから得られるからし油は、以下の組成を有する油を含む。５．４％飽和脂肪酸（２．７％パルミチン酸、１．０％ステアリン酸、０．６％ベヘン酸、および１．１％の他の飽和脂肪酸を伴う）、６７．３％一価不飽和脂肪酸（２３．３％オレイン酸、１０．０％ガドレイン酸、３３．８％エルカ酸を伴う）、および２０．６％多価不飽和脂肪酸（９．４％リノール酸、９．９％αリノレン酸）。
【００５７】
ある実施態様において、植物油担体は、たとえば、からし油（ＡＩＴ添加の有無にかかわらず）およびトウモロコシ油、からし油（ＡＩＴ添加の有無にかかわらず）および大豆油、からし油（ＡＩＴの有無にかかわらず）およびココナッツ油等の一つ以上の植物油の混合物であってもよい。また、本開示により、それ自身が発赤剤、および／または発赤油との組み合わせである植物油担体を有する組成物が、予期される。発赤油の例示としては、イチヤクソウ（Ｗｉｎｔｅｒｇｒｅｅｎ）の油（サリチル酸メチル）、からし油、ローズマリーオイル（Rosmarinus officinalis）が挙げられる。
【００５８】
他の実施態様において、油担体は単一の脂肪酸（たとえば、オレイン酸）または二つ以上の脂肪酸の組み合わせであってもよい。
【００５９】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、脂肪酸（たとえば、ω３（たとえば、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ））、またはω６脂肪酸（たとえばリノール酸））の形態をとっている油であってもよく、たとえば１：１等の様々な比率で、植物油もしくは動物油もしくは遺伝子組み換え微生物から単離され、または化学合成により製造されてもよい。
【００６０】
ある実施態様において、植物油は、植物（限定されないが、アマランサスの種、米ぬか、小麦胚芽およびオリーブを含む）由来のスクアレンを含有するか、またはスクアレン単独であってもよい。
【００６１】
薬学的に許容可能な動物油担体
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、たとえば動物油等の油であってもよい。動物油には、動物源由来の油、または個々の脂肪酸から合成され、動物油と類似の油を製造するために混合された油が含まれる。動物油の例としては、魚油、サメ肝油、鱈油（ｃｏｄ  ｏｉｌ）、動物スクアレン、バター、鶏脂、ラード、牛乳脂肪、またはそれらの組み合わせ等が挙げられる。好ましい実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、魚油を含有する。
【００６２】
薬学的に許容可能な化石油担体
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、たとえば化石油等の油であってもよい。ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、鉱物油であってもよい。鉱物油または液化石油は、原油からガソリンおよび他の石油ベースの製品を製造するための石油精製における副産物である。鉱物油は、主にアルカン（典型的には１５〜４０炭素）および、ワセリンと関連する環状パラフィン（「白色ワセリン」としてもまた知られる）で構成される。密度は約０．８ｇ／ｃｍ３である。鉱物油は、軽グレードおよび重グレードで入手可能であり、通常、薬局で入手可能である。精製鉱物油には３つの基礎分類がある：ｎ−アルカンに基づくパラフィン系オイル、シクロアルカンに基づくナフテン油、および芳香族炭化水素に基づく芳香オイルである。
【００６３】
他の薬学的に許容可能な担体
本発明の担体は、薬学的に許容可能な任意の適した担体でありうることが予期される。
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体は、ウイロゾーム、リポソーム、またはＩＳＣＯＭＳであってもよい。
【００６４】
薬学的に許容可能な無機担体
ある実施態様において、本明細書に記述されるアジュバント組成物は、たとえばミネラルベースのアジュバント（たとえば、カルシウム塩（たとえば、リン酸カルシウム）、アルミニウム塩（たとえば、水酸化アルミニウム、またはリン酸アルミニウム等のａｌｕｍ））等の薬学的に許容可能な無機担体を含んでもよい。
【００６５】
水酸化アルミニウム（４５ｍｇ／ｍｌ）および水酸化マグネシウム（４０ｍｇ／ｍｌ）に不活性な安定剤を加えた水溶液からなる、Ｉｍｊｅｃｔ（Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌ．）の名称で販売されている適切なａｌｕｍアジュバントを、本明細書に開示される組成物中の無機担体として使用してもよい。
【００６６】
水酸化アルミニウムは、水酸化アルミニウム塩であってもよく、通常、それは少なくとも部分的に結晶質である。オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯ（ＯＨ）の化学式で表される）は、他のアルミニウム成分（たとえば、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３））とは、赤外線（ＩＲ）分光法により区別される。
【００６７】
リン酸アルミニウムは、ヒドロキシホスフェートアルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｐｈａｔｅｓ）であってもよく、多くの場合、少量の硫酸もまた含有する（すなわち、硫酸ヒドロキシホスフェートアルミニウム）。それらは沈殿により得てもよく、沈殿の間の反応条件および濃度は、塩中の水酸基のリン酸塩による置換の程度に影響を与える。ヒドロキシホスフェートは、通常、０．３〜１．２の間のＰＯ４／Ａｌのモル比を有する。ヒドロキシホスフェートは、ヒドロキシル基の存在により、厳密な（ｓｔｒｉｃｔ）ＡｌＰＯ４から区別することができる。リン酸アルミニウムは、通常、特にヒドロキシホスフェート塩に対して非晶質である。典型的なアジュバントは、０．８４〜０．９２の間のＰＯ４／Ａｌのモル比を有する非晶質ヒドロキシホスフェートアルミニウムである。リン酸アルミニウムは通常、微粒子状である（たとえば、透過型電子顕微鏡写真において見られるように、板状の形態である）。任意の抗原吸着後の典型的な粒子の直径は、０．５〜２０μｍの範囲である（たとえば、５〜１０μｍ）。
【００６８】
本明細書に記述されるアジュバント組成物のアルミニウム塩の濃度は、１０ｍｇ／ｍｌ超（たとえば、５ｍｇ／ｍｌ超、４ｍｇ／ｍｌ超、３ｍｇ／ｍｌ超、２ｍｇ／ｍｌ超、１ｍｇ／ｍｌ超など）であってもよい。ある実施態様において、アルミニウム塩の濃度は、０．３〜１ｍｇ／ｍｌの間の範囲であってもよい。
【００６９】
ある実施態様において、水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムの両方の混合物、またはリン酸マグネシウムが用いられてもよい。ある場合において、水酸化アルミニウムよりリン酸アルミニウムのほうがより多くてもよく、たとえば、重量比で少なくとも２：１であり、たとえば５：１超、６：１超、７：１超、８：１超、９：１超（逆もまた同様）である。
【００７０】
フラボノイド
アジュバント組成物は、一つ以上のフラボノイドまたはその誘導体、その塩もしくはその誘導体の塩を含んでもよい。フラボノイド（バイオフラボノイドとしてもまた知られる）は、果実および植物において見いだされる植物化学物質である。フラボノイドには以下の種類がある。フラボン（たとえば、アピゲニン、ルテオリン）、フラボノール（たとえば、ケルセチン、ミリセチン）、フラバノン（たとえば、ナリンゲニン、ヘスペリジン）、カテキン（たとえば、エピカテキン、カテキン、たとえばエピガロカテキン、ガロカテ
キン、エピカテキン没食子酸塩およびエピガロカテキン没食子酸塩等の没食子酸塩）、アントシアニジン／アントシアニン（たとえば、シアニジン、ペラルゴニジン）、およびイソフラボン（たとえば、ゲニステイン、ダイゼイン）。
【００７１】
好ましい実施態様において、フラボノイドはカテキンである。ある実施態様において、アジュバント組成物は、カテキン（ポリフェノール）の一種である、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）を含んでもよい。一部の実施態様において、アジュバント組成物は、たとえばカテキン水和物等のカテキンを含んでもよい。一部の実施態様において、カテキンは、カテキンの多重結合形態ではない。
【００７２】
ある場合において、アジュバント組成物は、たとえば米国特許第７，５４４，８１６号に記載されている、ＥＧＣＧ誘導体を含んでもよい。
【００７３】
ある実施態様において、アジュバント組成物は、たとえば、フラボノイド、およびそのアナログ（たとえば米国特許第７，６０１，７５４号に記載される）等の植物化学物質を含んでもよい。
【００７４】
タンニン
タンニンは、植物由来のポリフェノールのサブクラスであり、タンパク質に対し強い結合アフィニティを有する。「タンニン」は、革をなめす、または溶液からゼラチンを沈殿させることができる（収斂性として知られる性質）、重合フェノール物質の群に対する一般的な分類名である。その分子量は、５００〜３，０００の範囲であり、植物のほぼ全ての部分（樹皮、木材、葉、果実、および根）において見いだされる。それらは、加水分解性タンニンと縮合型タンニンの二つの群に分けられる。加水分解性タンニンは没食子酸に基づいており、通常、Ｄ−グルコースを有する多価エステルである一方で、より多くの縮合型タンニン（多くの場合、プロアントシアニジンと呼ばれる）は、フラボノイド単量体から抽出される。タンニンは、植物の木質組織に輸送されたフラバン誘導体の縮合により形成されてもよい。あるいは、タンニンは、キノン単位の重合により形成されてもよい。タンニンの分子作用の一つは、たとえば水素結合および疎水効果等のいわゆる非特異的な力を通じた、ならびに共有結合の形成による、タンパク質との複合体形成である。ゆえに、それらの抗菌性作用の方法は、微生物の付着因子、酵素、細胞エンベロープ輸送タンパク質等を不活化する能力と関連しうる。また、多糖とも複合体を形成する。この固有活性の抗菌的な重要性はまだ究明されていない（Clinical Microbiology Reviews; Oct. 1999, vol. 12; p. 564-582）。タンニンに対する様々な免疫応答により、これらの植物代謝
物の特性に関する研究が阻まれている。多くの研究成果により、部分的に、免疫学的機能における食い違いを明らかにする、個々のタンニン種の選択結合アフィニティが示されている。γδＴＣＲ＋Ｔ細胞は、プロシアニジンと呼ばれる（縮合タンニンともまた呼ばれる）タンニンの選択群により活性化される（Crit Rev Immunol. 2008;28(5):377-402. Response of gammadelta T Cells to plant-derived tannins. Holderness J, Hedges JF, Daughenbaugh K, Kimmel E, Graff J, Freedman B, Jutila MA）。構造的に、タンニンはガロタンニン、エラジタンニン、タンニン複合体、および縮合タンニンに分類される。（１）ガロタンニンは、ガロイル単位またはそのメタ−デプシド誘導体が多種多様なポリオール単位、カテキン単位、またはトリペルテノイド単位に結合するすべてのタンニンである。（２）エラジタンニンは、少なくとも２つのガロイル単位がお互いにＣ−Ｃ結合するが、グリコシド結合したカテキン単位を含有しないタンニンである。（３）複合タンニンは、カテキン単位がガロタンニンまたはエラジタンニン単位にグリコシド結合しているタンニンである。（４）縮合タンニンは、一つのカテキンのＣ−４が隣の単量体カテキンのＣ−８またはＣ−６と結合することにより形成されるすべてのオリゴマーのプロアントシアニジンまたはポリマーのプロアントシアニジンである。タンニンの例として、限定されないが、タンニン酸、没食子酸、（−）‐エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）、（
−）‐エピカテキン没食子酸塩（ＥＣＧ）、レスベラトロール、ピセタノール、ゲラニイン、ペドゥンクラジン（ｐｅｄｕｎｃｕｌａｇｉｎ）およびコリラジンが挙げられる。エイサータンニン（Acertannin）、ハマメリタンニン（Hamamelitannin）（Nat. Prod. Rep., 2001, 18, 641-649）。
【００７５】
ビタミン
アジュバント組成物は、一つ以上のビタミン、プロビタミン、またはビタミン誘導体、塩もしくはその誘導体の塩もまた含む。一つ以上のビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＤ、ビタミンＣおよびビタミンＢ、ビタミンＫ、ならびにその誘導体および塩のうちの一つ以上であってもよい。
【００７６】
ビタミンＡは、２つの供給源（プリフォームのレチノイドおよびプロビタミンのカロテノイド）から誘導される脂溶性ビタミンである。たとえばレチナールおよびレチノイン酸等のレチノイドは、肝臓、腎臓、卵、および乳製品のような動物源に見いだされる。β−カロテン（最も高いビタミンＡ活性を有する）のようなカロテノイドは、たとえば緑色野菜または黄色野菜およびニンジン等の植物において見いだされる。ビタミンＡはまた、レチノール、レチノイン酸、アキセロフトール、ビタミンＡアルコール、ビタミンＡ１、ａｌｌ−トランス−３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン−１−イル）−２，４，６，８−ノナテトラエン−１−オールとしても知られる。ある場合において、ビタミンＡの酸性派生物である全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）が、アジュバント組成物に含まれていてもよい。ある場合において、アジュバント組成物は、たとえばイソトレチノイン（Ｒｏ  ４−３７８０）、エトレチネート（ＲＯ  １０−９３５９、合成レチノイド）、レチニル・パルミテート、またはモトレチニド（Ｒｏ  １１−１４３０）等のレチノイドを含んでもよい。ある場合において、パルミチン酸ビタミンＡ（ＶＡ）が、アジュバント組成物に含まれてもよい。
【００７７】
ビタミンＥもまた脂溶性ビタミンである。ビタミンＥの活性を発揮する８つの天然物質（α、β、δおよびγトコフェロールならびにα、β、δおよびγトコトリエノール）のうち、αトコフェロール（α−Ｔ）は、動物モデル系で評価した際に、全てのビタミンのうち最も高い生物活性を発揮するため、従来より、最も重要なビタミンであると認識されてきた。ビタミンＥはまた、（±）−α−トコフェロールおよびＤＬ−ａｌｌ−ｒａｃ−α−トコフェロール、５，７，８−トリメチルトコール、Ｄ−α−トコフェロール、２，５，７，８−テトラメチル−２−（４´、８´、１２´−トリメチルトリデシル）−６−クロマノール、ならびに非酸化型である（＋）−α−酢酸トコフェロール、および関連するａｌｌ−ｒａｃ−α−酢酸トコフェリルと同義である。関連分子は、Ｄ−α−コハク酸トコフェロール、コハク酸ビタミンＥである。
【００７８】
ある実施態様において、アジュバント組成物中に含まれるビタミンＥは、α−トコフェロール（α−Ｔ）であってもよい。他の場合において、ビタミンＥアナログ（たとえば、コハク酸α−トコフェリル（α−ＴＯＳ）等）が、アジュバント組成物中に含まれてもよい。
【００７９】
ビタミンＤは脂溶性のホルモン前駆体の群であり、ビタミンＤ２（またはエルゴカルシフェロール）とビタミンＤ３（またはコレカルシフェロール）の２つの主要な形態がある。日光への暴露、食物およびサプリメントから得られるビタミンＤは、生物学的に不活性であり、身体内で活性化されるために２度のヒドロキシル化反応を経なければならない。カルシトリオール（１，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール）は、身体内で見いだされるビタミンＤの活性型である。ビタミンＤという用語は、これら代謝物および他のこれら物質のアナログを指す。ある実施態様において、アジュバント組成物は、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ＤＨＶＤ３）を含んでもよい。
【００８０】
ビタミンＣは、水溶性ビタミンである。ビタミンＣまたはＬ−アスコルビン酸は、ヒトの必須栄養素である。アスコルビン酸塩（アスコルビン酸のイオン）は、すべての動物および植物において様々な必須の代謝反応に必要とされる。ビタミンＣのファーマコフォアは、アスコルビン酸イオンである。アスコルビン酸塩は、酸化ストレスから身体を防御し、数種の生命維持に必須の酵素反応における補因子であり、生体内における抗酸化物質である。ビタミンＣは純粋にアスコルビン酸塩のＬ−光学異性体であり、対をなすＤ−光学異性体は生理学的な意味を有しない。
【００８１】
ビタミンＢは水溶性ビタミン複合体である。ある実施態様において、ビタミンＢはビタミンＢ９（葉酸）である。
【００８２】
添加物
ある実施態様において、アジュバント組成物の植物油担体は、最終投与量の０１〜２％の好ましい投与量での添加物として、イソチオシアン酸アリル（ＡＩＴ）を含んでもよい。イソチオシサン酸アリル（ＡＩＴ）は、からしの揮発性油、またはからしの精油、またはからし油ともまた呼ばれる。ＡＩＴは、化学式ＣＨ２ＣＨＣＨ２ＮＣＳの有機硫黄化合物である。ＡＩＴはからし、セイヨウワサビおよびワサビの辛味の原因である。水に若干溶解するが、ほとんどの有機溶媒で良く溶解する。イソチオシアン酸アリルは黒カラシナまたは茶カラシナの種に由来する。これらのカラシの種が壊れた際、ミロシナーゼ酵素が放出され、シニグリンとして知られるグルコシノレートに作用し、イソチオシアン酸アリルを産生する。イソチオシアン酸アリルは、それ自身、植物に対して有害であるため、グルコシノレートの無害な形態でミロシナーゼ酵素から分離されて貯蔵され、草食動物に対する防御として植物に役立っている。動物がその植物を噛んだ時、イソチオシアン酸アリルは放出され、動物を不快にさせる。イソチオシアン酸アリルは、塩化アリルとチオシアン酸カリウムの反応により商業的に製造されている。ＣＨ２＝ＣＨＣＨ２Ｃｌ＋ＫＳＣＮ→ＣＨ２＝ＣＨＣＨ２ＮＣＳ＋ＫＣｌ。この方法で得られた製品は合成からし油として知られることもある。イソチオシアン酸アリルは種の乾留により遊離させることもできる。この方法で得られた製品は、揮発性からし油として知られ、通常、約９２％の純度である。主に、食物中の香味剤として用いられる。合成イソチオシアン酸アリルは殺虫剤、殺菌剤および抗線虫剤として用いられ、ある場合においては作物保護に用いられる。
【００８３】
ある場合において、特に所望される投与経路が粘膜である場合、アジュバント組成物は、薬学的に許容可能な担体、ＡＩＴ、少なくとも一つのフラボノイド、および少なくとも一つのビタミンを含有してもよい。
【００８４】
アジュバント組成物は、サポニンおよびその誘導体ＱＳ−２１を含んでもよい。
【００８５】
食餌性のジテルペンアルコールであり、天然型イソプレン系アジュバントに構造が類似するフィトールの誘導体は、すべての主要なＩｇＧサブクラス、特にＩｇＧ２ａの抗体価増強および細胞傷害性エフェクターＴ細胞応答を誘導する。従って、アジュバント組成物はフィトールおよびその誘導体を含んでもよい。しかしながら、ある実施態様においては、フィトールを含まないほうが好ましい。
【００８６】
アジュバント組成物は、たとえばゼラチン、抗生物質、ソルビトール、スクロース、ラクトース、他の糖類、生体接着物、粘膜接着物（たとえば、ヒアルロン酸またはその誘導体（たとえば、ＨＹＡＦＦ）等）、親水性ポリマーおよびヒドロゲル、ポリエチレン酸化物ホモポリマー、キトサン、蜜ろう等の他の添加物または担体を含んでもよい。
【００８７】
アジュバント組成物は、免疫原性増強剤（たとえば、リポ多糖類、エンテロトキシン（
たとえば、大腸菌由来の易熱性毒素、コレラ菌由来のコレラ毒素等）、トール様受容体アゴニスト（たとえば、ＣｐＧまたはＣｐＧオリゴヌクレオチド））をさらに含んでもよい。
【００８８】
アジュバント組成物は、たとえばａｌｕｍ、リポソーム、ウイロゾーム、水中油型エマルション等の他のデリバリーシステムと組み合わされてもよい。
【００８９】
アジュバント組成物は、たとえばタンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および不活化ウイルス粒子等の、大きく、ゆっくりと代謝される高分子と処方されてもよい。粒子状担体の例としては、ポリメチルメタクリル酸エステル重合体由来のもの、ならびにポリ（ラクチド）、およびＰＬＧとして知られるポリ（ラクチドコグリコリド）由来の微粒子が挙げられる。
【００９０】
アジュバント組成物は、たとえば大腸菌由来の完全毒素の変異体（変異ＡサブユニットおよびＢサブユニットを含む。野生型完全毒素において見られるようなオリゴマーであってもよい）を含んでもよい。Ｂサブユニットは、変異を受けていないほうが好ましい。しかしながら、変異Ａサブユニットは、本質的に純粋な形態、または他の剤との複合のいずれかにあるＢサブユニットからの単離に用いられてもよく、Ｂサブユニットおよび／またはその機能的寄与を取って代わることが予期される。組成物での使用のためのＬＴ変異は、以下の変異の一つ以上を有する変異を含む。Ａサブユニットの６３位のセリンにおける変異（たとえば、６３位のセリンがリジンと置換される）、およびＡサブユニットの７２位のアラニンにおける変異（たとえば、７２位のアラニンがアルギニンと置換される）。
【００９１】
アジュバント組成物は、コレラ毒素（ＣＴ）またはその無毒化変異体、および、生分解性であり、非毒性の物質（たとえば、ポリ（．α．−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトン等）から形成された微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、およびさらにより好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）を含んでもよい。
【００９２】
本明細書に開示されるアジュバント組成物は、特にポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、Ｄ、Ｌ−ラクチドおよびグリコリドもしくはグリコール酸のコポリマー（たとえば、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」））、またはＤ，Ｌ−ラクチドおよびカプロラクトンのコポリマーに由来する、ポリ（α−ヒドロキシ酸）を用いた微粒子として処方されてもよい。微粒子は、様々な分子量を有する様々な任意のポリマー開始物質から得てもよく、たとえばＰＬＧ等のコポリマーの場合には、様々なラクチド：グリコリドの比率があり、その選択は、部分的には共に投与される抗原に依存する選択の問題によるところが大きい。組成物が抗原を含む場合、抗原は微粒子内に封入、またはその表面上に吸着されていてもよい。
【００９３】
ある実施態様において、本明細書に開示される組成物は、免疫調節因子（たとえば、免疫応答を調節することができるタンパク質）を含む。非限定的な免疫調節因子の例としては、たとえば、ＩＬ−６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３等のリンホカイン（サイトカインとしてもまた知られる）、およびケモカイン（たとえば、マクロファージ阻害因子、ＲＡＮＴＥＳ、マクロファージ炎症性１α（ＭＩＰ−α）等の分泌タンパク質）が挙げられる。たとえば、ＴＲＡＮＣＥ、ｆｌｔ−３ＬおよびＣＤ４０Ｌの分泌型などのあるサイトカインは、ＡＰＣの免疫刺激能を増強することができる。本明細書に開示される組成物と組み合わせて、または単独で用いられうるサイトカインの非限定的な例としては、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）
、Ｇ−ＣＳＦ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、ＭＩＰ−１γ、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、ｃ−ｋｉｔリガンド、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、腫瘍壊死因子関連活性化誘導性サイトカイン（ＴＲＡＮＣＥ）およびｆｌｔ３リガンド（ｆｌｔ−３Ｌ）が挙げられる。
【００９４】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な担体が油ベースである場合、組成物は油ベースのエマルションを含有する。そのような実施態様において、油ベースのエマルションは、たとえばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で用いられるような有機リン酸塩を含まなくともよい。
【００９５】
ある実施態様において、油ベースのエマルションは、エタノールまたは他のアルコールを含まなくともよく、および、たとえばアルキルジメチルベンジル塩化アンモニウム、ジアルキルジメチル塩化アンモニウム、ｎ−アルキルジメチルベンジル塩化アンモニウム、およびｎ−アルキルジメチルエチルベンジル塩化アンモニウムからなる群から選択されるような第４級アンモニウム化合物を含まなくともよい。
【００９６】
ある実施態様において、油ベースのエマルションは、セチルピリジニウムハロゲン化物、セチルトリメチルアンモニウムハロゲン化物、セチルジメチルエチルアンモニウムハロゲン化物、セチルジメチルベンジルアンモニウムハロゲン化物、セチルトリブチルホスホニウムハロゲン化物、ドデシルトリメチルアンモニウムハロゲン化物、およびテトラデシルトリメチルアンモニウムハロゲン化物からなる群から選択される化合物を含むカチオン性ハロゲンを含まなくてもよい。
【００９７】
アジュバント組成物は、たとえばレシチン等の、たとえば、両親媒性でありヒトおよび／または獣医学的に利用できるリン脂質および／または界面活性剤等の乳化剤をさらに含んでもよい。
【００９８】
界面活性剤は当業者に公知であり、特に、イオン性界面活性剤（たとえば、Ｔｗｅｅｎ８０）、カチオン性界面活性剤（たとえば、ＣＴＡＢ）または両性イオン界面活性剤（たとえば、ＣＨＡＰＳ）を含む。ヒトおよび／または獣医学的な利用のための界面活性剤の受容性は、当業者により決定されてもよい。界面活性剤は、界面活性剤分子の一部分が疎水性であり、一部分が親水性である場合、両親媒性である。本明細書に開示されるアジュバント組成物に有用な界面活性剤の例としては、限定されないが、Ｔｗｅｅｎ界面活性剤およびＳｐａｎ界面活性剤が挙げられる。ＴｗｅｅｎおよびＳｐａｎ界面活性剤は、限定されないが、モノラウレート（Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ２１、Ｓｐａｎ２０）、モノパルミテート（Ｔｗｅｅｎ４０、Ｓｐａｎ４０）、モノステアレート（Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ６１、Ｓｐａｎ６０）、トリステアレート（Ｔｗｅｅｎ６５、Ｓｐａｎ６５）、モノオレアート（Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ８１、Ｓｐａｎ８０）およびトリオレアート（Ｔｗｅｅｎ８５、Ｓｐａｎ８５）を含む。
【００９９】
アジュバント組成物は、たとえばｐＨ調整剤および緩衝剤等の生理学的な条件に近似させるために要求される薬学的に許容可能な補助物質（たとえば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、リン酸緩衝生理食塩水等）を含んでもよい。
【０１００】
アジュバント組成物は、たとえばカプサイシン（トウガラシ、Capsicum minimumから由来する）、サリチル酸塩（たとえば、イチヤクソウ、Methyl Salicylateの油等）、ニコ
チン酸エステル、消毒用アルコール、一般的なハーブの発赤剤（クローブ（Eugenia caryphyllus)、ニンニク(Allium sativum)、生姜(Zingiber officinale)、セイヨウワサビ(Co
chlearia armoracia)、からし(たとえば、Brassica alba（シロガラシ）、またはB. nigra（クロガラシ）)、イラクサ(Urtica dioica)、ローズマリーオイル(Rosmarinus officinalis)、ルー(Ruta graveolens)）等の薬用発赤剤を含んでもよい。
【０１０１】
抗原
本明細書に開示されるアジュバント組成物は、一つ以上の抗原成分と組み合わせて投与されてもよい。免疫応答の誘導が所望される任意の抗原が用いられてもよい。そのような抗原成分は、ウイルス、真菌もしくは細菌、または他のヒトおよび／もしくは動物病原体、または癌細胞から得てもよい。抗原成分は、アレルゲンでありうる。全長タンパク質またはその断片、ならびに修飾または非修飾タンパク質が抗原成分として用いられてもよい。抗原成分はまた、多糖を含む。一部の例において、抗原成分は、抗原をコードするＤＮＡまたはＲＮＡ（たとえば、病原体または癌細胞から誘導されたＤＮＡまたはＲＮＡ）であってもよい。
【０１０２】
多くのヒトの癌は、癌細胞に特異的な細胞表面分子（すなわち正常なヒト体細胞では検出可能なレベルまたは有意なレベルで発現していない）を発現している。そのような抗原の例としては、限定されないが、以下が含まれる。様々な糖脂質および多糖、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）および癌抗原ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、およびＣＡ１９−９。
【０１０３】
ＡＦＰ：血清ＡＦＰの異常な高値上昇が、いくつかの悪性疾患（非セミノーム性精巣癌および原発性肝細胞癌を含む）および一部の良性疾患（肝炎および肝硬変を含む）に発生する。
【０１０４】
ＣＡ１２５：癌抗原１２５（ＣＡ１２５）は上皮性卵巣癌に関連する表面抗原であり、現在のところＣＡ１２５は、残留上皮性卵巣癌に対する最も感受性の高いマーカーである。ＣＡ１２５はまた、肺癌、子宮頸癌、卵管癌、および子宮癌および子宮内膜症を有する患者で上昇しうる。
【０１０５】
ＣＡ１５−３：癌抗原１５−３（ＣＡ１５−３）は、乳癌患者の術後再発、特に転移疾患をモニターするのに有用である。ＣＡ１５−３は、卵巣癌の再発の早期検出に有用であることが示されている。ＣＡ１５−３レベルは、大腸腫瘍、肺腫瘍および肝臓腫瘍でもまた上昇する。
【０１０６】
ＣＡ１９−９：血清ＣＡ１９−９レベルは、胃腸悪性疾患（たとえば、膵臓がん、大腸癌、胃癌、および肝臓癌）を有する患者において頻繁に上昇する。血清ＣＡ１９−９値の持続的な上昇は、進行性の悪性疾患および治療への不応に関連しうる。ＣＡ１９−９値の減少は、良好な予後および良い治療応答を暗示しうる。
【０１０７】
伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）は、（認知機能および／または協調運動における）急速な進行性の悪化により特徴付けられる神経変性疾患の一群であり、常に死への転帰をとる。ＴＳＥはヒトおよび動物で発生する。ＴＳＥの最も可能性の高い原因は、ＰｒＰＳｃと示されるプリオンタンパク質形態であり、ヒツジおよびヤギに由来する、最も古くから知られるプリオン疾患の形態であるスクレイピーにちなんで名付けられている。現在のところ、どのようにプリオンが脳に障害を引き起こすのかは不明であるが、仮説のすべてが、ＰｒＰＳｃによる天然型プリオンタンパク質（ＰｒＰＣ）の翻訳後修飾により、アミロイド原線維が形成されることが発症機序における中心的な事象であると、提案している。
【０１０８】
ヒトにおいて、クロイツフェルトヤコブ病（ＣＪＤ）は最も蔓延しているＴＳＥである（発生率は１／百万人／年）。臨床的には、患者は、可能性がある、または推定でＣＪＤ患者として診断されるが、確定診断を得るためには神経病理学的な適合が必要である。神
経病理学的な検討は、組織学的な病変部位の三つ組み（海綿状変化、ニューロン消失および反応性アストログリア増殖症）に基づいている。
【０１０９】
プリオンタンパク質（ＰｒＰ）は、当初、伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）の原因である感染性因子の主要成分として記述されていた。ＴＳＥは、ヒトにおけるクロイツフェルトヤコブ病およびクール―、ウシ海綿状脳症、ヒツジスクレイピーならびに、シカおよびエルクにおける慢性消耗性疾患を含む神経変性疾患の一群である。ＴＳＥの病態生理学はほとんど解明されていないが、ほぼ変わらない特性は、病気に侵された個々の感染組織における、ＰｒＰの異常なアイソフォーム（スクレイピーＰｒＰ、ＰｒＰＳｃと示される）の蓄積である。ＰｒＰは、宿主特有の遺伝子、Ｐｒｎｐ（ヒトではＰＲＮＰ）によりコードされ、その構造は種間で高度に保存されていることが解明された。その生理学的な産物は、様々なレベルで多くの組織において、細胞性ＰｒＰ（ＰｒＰＣ）と呼ばれるＧＰＩアンカー型の膜タンパク質として発現される。
【０１１０】
本明細書に記述されるアジュバント組成物と組み合わせて用いるための抗原成分は、任意の病原体（ウイルス、細菌もしくは真菌、または癌）から誘導された抗原成分を含む。そのような抗原成分には、たとえば、病原体の構造タンパク質ならびに非構造タンパク質（たとえば、天然型、または免疫原性増強に最適化された形態での、ＨＩＶのＥｎｖ、ＧａｇおよびＰｏｌ、またはＲＳＶのＦタンパク質、またはインフルエンザのＨＡ）が挙げられる。
【０１１１】
アジュバント組成物に含まれうる他の抗原成分には以下のものがある。N. meningitidis血清群Ｂ由来のタンパク質抗原（たとえば、国際特許出願公開ＷＯ９９／２４５７８；
ＷＯ９９／３６５４４；ＷＯ９９／５７２８０；ＷＯ００／２２４３０；およびＷＯ９６／２９４１２に記述）、たとえば、N. meningitidis血清群Ｂから調製される外膜小胞（
ＯＭＶ）（国際特許出願公開ＷＯ０１５２８８５に記載）、N. meningitidis血清群Ａ、
Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来のオリゴ糖抗原、肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae）由来の糖抗原、Ａ型肝炎ウイルス由来の抗原（たとえば不活化ウイルス）、Ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原（たとえば表面抗原および／またはコア抗原）、Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原、百日咳菌（Bordetella pertussis）（たとえば、百日咳完全毒素（ＰＴ））、および、任意選択的にパータクチンおよび／または凝集原２とも組み合わせた百日咳菌由来の糸状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、ジフテリア抗原（たとえばジフテリアトキソイド）、たとえば破傷風トキソイド等の破傷風抗原、インフルエンザ菌Ｂ由来の糖抗原、淋菌由来の抗原（たとえば、国際特許出願公開ＷＯ９９／２４５７８；ＷＯ９９／３６５４４；ＷＯ９９／５７２８０に記載）。他の対象抗原としては、クラミジア肺炎病原体（Chlamydia pneumoniae）（たとえば、国際特許出願公開ＷＯ０２０２６０６、国際特許出願公開ＷＯ９９／２７１０５；ＷＯ００／２７９９４；ＷＯ００／３７４９４に記載）、トラコーマクラミジア（Chlamydia trachomatis）（たとえば、国際特許出願公開ＷＯ９９／
２８４７５に記載）、ポルフィロモナスジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）、たとえばＩＰＶまたはＯＰＶ等のポリオ抗原、たとえば凍結乾燥不活化ウイルス（たとえば、７７，ＲａｂＡｖｅｒｔ．ＴＭ）等の狂犬病抗原、はしか、おたふくかぜ、および／または風疹抗原、たとえばヘマグルチニンおよび／またはノイラミニダーゼ表面タンパク質等のインフルエンザ抗原、たとえばＦまたはＧタンパク質等のＲＳウイルス（Respiratory syncytial virus）、カリシウイルス科のウイルス（たとえばノロウイルス、サポウイ
ルス）、レオウイルス科（たとえばロタウイルス等）、単純ヘルペスウイルス、プリオン、サルモネラ菌、大腸菌、ビブリオコレラ菌、モラクセラカタラーリス（Moraxella catarrhalis）、ストレプトコッカス・アガラクチア（Streptococcus agalactiae）（Ｂ群連
鎖球菌）［たとえば、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ０１／０４７８９］、化膿性連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）（Ａ群連鎖球菌）［たとえば、国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ０１／０４７８９］、黄色ブドウ球菌（Staphlylococcus aureus）、たとえばＦまたはＧタン
パク質等のＲＳウイルス（Respiratory syncytial virus）、カリシウイルス科のウイル
ス（たとえばノロウイルス、サポウイルス）、レオウイルス科（たとえばロタウイルス等）、単純ヘルペスウイルス、サルモネラ菌由来の抗原が含まれる。
【０１１２】
多糖または炭水化物抗原の成分は、担体タンパク質に結合されていてもよい。例示的な担体タンパク質は、たとえば、細菌毒素またはトキソイド（たとえば、ジフテリア、コレラ、大腸菌易熱性、または破傷風トキソイド、ＣＲＭ．ｓｕｂ．１９７ジフテリアトキソイド、髄膜炎菌（N. meninigitidis）外膜タンパク質［欧州特許出願０３７２５０１］、合成ペプチド［欧州特許出願０３７８８８１＆０４２７３４７］、ヒートショックタンパク質［国際特許出願公開ＷＯ９３／１７７１２］、百日咳タンパク質［国際特許出願公開ＷＯ９８／５８６６８、またはＥＰ０４７１１７７１を参照］、インフルエンザ菌（H. influenzae）由来のタンパク質Ｄ［国際特許出願公開ＷＯ００／５６３６０］、Ｃ．ディ
フィシル（C. difficile）由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［国際特許出願公開ＷＯ００／６１７６１］等）である。必要に応じて、任意の適切なリンカーと共に、任意の適切な結合反応を用いることができる。
【０１１３】
開示される免疫調節／アジュバント組成物は、上述のポリペプチド抗原またはタンパク質抗原をコードする核酸である抗原成分を含んでもよい。ＤＮＡまたはＲＮＡベースのワクチン、およびベクターワクチンとして提供されうる核酸抗原成分の例としては、ＨＩＶ、ヘルペス、肝炎およびインフルエンザに対するワクチンが挙げられる。
【０１１４】
組成物の例
以下の表１に、例示的な組成物を提示する。
【表１】
2020002158.tif 000003
【０１１５】
上述のアジュバント組成物１〜２６は例示であり、追加の成分（たとえば、追加の油担体（たとえば、ヒマワリ種油、ココナッツ油、大豆油等））を含んでもよい。他の実施態様において、上述の組成物１〜２６は、追加の油担体（たとえば、ヒマワリ油、ココナッツ油、大豆油等）を含まない。
【０１１６】
表１に記載のアジュバント組成物１〜２６、ならびに本明細書に記載される他のアジュバント組成物は、たとえば添加物（たとえば、抗原、保存剤、着色剤、フレーバー剤、緩衝剤、塩等）等の追加の成分を含んでもよい。
【０１１７】
アジュバント組成物の成分、およびその相対量
本明細書に記述されるアジュバント組成物は、たとえばＴｈ−１応答等の免疫反応を誘導するために用いられてもよい。Ｔｈ−１応答にはＣＴＬを活性化するＩＬ−２およびＩＦＮ−αが含まれるため、特にウイルス感染、細胞内病原体および腫瘍細胞に対する応答に適している。
【０１１８】
本明細書に記述されるアジュバント組成物は、たとえばＴｈ−２応答等の免疫反応を誘導するために用いられてもよい。ＩＬ−４およびＩＬ−５はＩｇＥ産生および好酸球活性化を誘導することが知られており、Ｔｈ−２応答は細胞外細菌および蠕虫性寄生虫に対する応答により適しており、また、アレルギー反応を調節しうる。
【０１１９】
より強力なＴｈ−２応答が所望される場合、ビタミンＡ（たとえば、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）、ビタミンＡの酸派生物）がアジュバント組成物に含まれてもよい。ある場合においては、Ｔｈ−１型免疫応答を引き起こすことが所望されうる。そのような場合には、アジュバント組成物は薬学的に許容可能な担体、ビタミンＣ（たとえば、アスコルビン酸塩）および／またはビタミンＤおよび／またはビタミンＥおよびフラボノイド、および／またはタンニン（たとえば、没食子酸）を含んでもよい。
【０１２０】
アジュバント組成物は、薬学的に許容可能な担体、および：フラボノイドおよびビタミンＡ；またはフラボノイド、ビタミンＣおよびビタミンＡ；またはフラボノイド、ビタミンＤおよびビタミンＡ；またはフラボノイド、ビタミンＥおよびビタミンＡ；またはフラボノイド、ビタミンＣおよびＥおよびビタミンＡ；またはフラボノイド、ビタミンＣおよびＤおよびビタミンＡ；またはフラボノイド、ビタミンＤおよびＥおよびビタミンＡをアジュバント組成物中に含んでもよい。前述の各組成物は、指名されたビタミンまたはその塩またはその誘導体を含みうることが理解される。同様に、フラボノイドは、フラボノイドまたはその塩またはその誘導体であってもよい。
【０１２１】
ある実施態様において、アジュバント組成物中の薬学的に許容可能な担体（たとえば魚油またはからし油）、フラボノイド、およびビタミン（たとえば、ビタミンＡ、Ｃ、Ｄおよび／またはＥ）の含有は、薬学的に許容可能な担体（たとえば、からし油）およびフラボノイドを含むアジュバント組成物、または薬学的に許容可能な担体（たとえば、からし油）およびビタミン（たとえば、ビタミンＡ、Ｃ、Ｄおよび／またはＥ）を含むアジュバント組成物の効果と比較して、免疫応答の増強（たとえば、相乗効果）をもたらしうる。
【０１２２】
本明細書に開示されるアジュバント組成物は、魚油またはからし油または他の薬学的に許容可能な油担体を含んでもよい。発赤効果を有する薬学的に許容可能な油担体（たとえばからし油）は、粘膜または肌の上皮細胞を介した、またはたとえば筋肉内もしくは皮内投与による直接注入を介した投与のためのアジュバント組成物の調製に適している。投与経路が粘膜経路である場合、イソチオシアン酸アリルを含有する組成物が特に好ましいと思われる。
【０１２３】
本明細書に記述されるアジュバント組成物中において液体で用いられる薬学的に許容可能な油担体（たとえば、魚油、オレイン酸および／またはからし油）の量は、アジュバント組成物の総量の１〜９５％の範囲であってもよい。ゆえに、ある場合において、薬学的に許容可能な油担体は、主題のアジュバント組成物の総体積の、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の量を構成してもよい。ある実施態様において、薬学的に許容可能な油（たとえばＭＯ）は、本発明の組成物の約１％〜約９５％ｖ／ｖを構成し、より好ましくは組成物の約５％〜９０％、１０％〜７５
％、１０％〜５０％、５０％〜７５％、５０％〜９０％ｖ／ｖを構成する。特に好ましい実施態様において、組成物は免疫応答を増強する能力を有し、約５０％〜７５％ＭＯを含有し、より好ましくは５０％または７５％ＭＯを含有する。さらに好ましい実施態様において、組成物は免疫応答を抑制する能力を有し、約１０％ＭＯを含有する。さらに好ましい実施態様において組成物は約１０％〜約５０％のオレイン酸を含有し、より好ましくは約４０％のオレイン酸を含有する。
【０１２４】
薬学的に許容可能な担体（たとえばＡｌｕｍ）の量は、アジュバント組成物の総量の約１％〜約７５％の範囲であってもよく、より好ましくは総量の約２．５％〜約５０％の範囲であってもよい。特に好ましい実施態様において、組成物は２．５％または５０％のＡｌｕｍを含有する。
【０１２５】
主題のアジュバント組成物中に含まれうるビタミン（またはその塩もしくは誘導体）の量は、対象の体重に基づいて決定されてもよい。一般的には、推奨される１日当たりの許容量が、主題のアジュバント組成物中に存在しうるビタミンの量を確定するために用いられてもよい。
【０１２６】
たとえば、主題のアジュバント組成物中に含まれうるビタミンＡの量は、１〜２５０μｇ／ｋｇ体重の範囲であってもよい（たとえば、１μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、２０μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、７０μｇ／ｋｇ、９０μｇ／ｋｇ、１１０μｇ／ｋｇ、１３０μｇ／ｋｇ、１５０μｇ／ｋｇ、１７０μｇ／ｋｇ、１９０μｇ／ｋｇ、２１０μｇ／ｋｇ、２３０μｇ／ｋｇ、または２５０μｇ／ｋｇ体重）。
【０１２７】
たとえば、主題のアジュバント組成部中に含まれうるビタミンＣの量は、１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であってもよい（たとえば、１、５、１０、１５、３０、５０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇ体重）。
【０１２８】
たとえば、主題のアジュバント組成部中に含まれうるビタミンＤの量は、０．０１〜１０μｇ／ｋｇ体重の範囲であってもよい（たとえば、０．０１、０．５、１、２、５、７、８、９または１０μｇ／ｋｇ体重）。
【０１２９】
たとえば、主題のアジュバント組成部中に含まれうるビタミンＥの量は、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であってもよい（たとえば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、５、７、８、９または１０ｍｇ／ｋｇ体重）。
【０１３０】
主題のアジュバント組成部中に含まれうるフラボノイド（またはその塩もしくは誘導体）の量は、対象の体重に基づき決定されてもよい。フラボノイド（たとえばカテキン水和物）の量は、対象の１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であってもよい（たとえば、１、５、１０、１５、３０、５０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇ体重）。
【０１３１】
主題のアジュバント組成部中に含まれうるタンニン（またはその塩もしくは誘導体）の量は、対象の体重に基づき決定されてもよい。フラボノイド（たとえばカテキン水和物）の量は、対象の１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であってもよい（たとえば、１、５、１０、１５、３０、５０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇ体重）。
【０１３２】
アジュバント組成物は懸濁液、錠剤（飲み込む、または噛むためのもの）、速溶性錠剤もしくはゲル、または細片、カプセル、粉末、ゲル、クリーム、ローション、軟膏、エアロゾル等の形態であってもよい。
【０１３３】
ヒト対象への投与のためのアジュバント組成物の例としては、３〜８０％ｖｏｌ／ｖｏｌの油（たとえば、少なくとも約３％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、または少なくとも約８０％ｖｏｌ／ｖｏｌの油）を含んでもよい。
【０１３４】
ヒト対象への投与のためのアジュバント組成物の例としては、０．１〜１００ｍｇのビタミンＡ（たとえば、０．１、０．５、１、５、１０、１５、３０、５０、７０、８０、９０または１００ｍｇのビタミンＡ）を含んでもよい。
【０１３５】
ヒト対象への投与のためのアジュバント組成物の例としては、０．１〜４００ｍｇのビタミンＥ（たとえば、０．１、０．５、１、５、１０、１５、３０、５０、７０、８０、９０、１００、２００、３００または４００ｍｇのビタミンＥ）を含んでもよい。
【０１３６】
ヒト対象への投与のためのアジュバント組成物の例としては、０．１〜２０００ｍｇのビタミンＣ（たとえば、０．１、０．５、１、１０、３０、１００、１３０、２００、３００、６００、９００、１０００、１３００、１５００、１８００または２０００ｍｇのビタミンＣ）を含んでもよい。
【０１３７】
ヒト対象への投与のためのアジュバント組成物の例としては、０．１〜２０００ｍｇのビタミンＢ９（たとえば、０．１、０．５、１、１０、３０、１００、１３０、２００、３００、６００、９００、１０００、１３００、１５００、１８００または２０００ｍｇのビタミンＢ９）を含んでもよい。
【０１３８】
ヒト対象への投与のためのアジュバント組成物の例としては、０．１〜２０００ｍｇのカテキン水和物またはエピガロカテキン没食子酸塩（たとえば、０．１、０．５、１、１０、３０、１００、１３０、２００、３００、６００、９００、１０００、１３００、１５００、１８００または２０００ｍｇのカテキン水和物またはエピガロカテキン没食酸塩）を含んでもよい。
【０１３９】
ヒト対象への投与のためのアジュバント組成物の例としては、０．００１〜１０ｍｇのＡＩＴ（たとえば、０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、５、７、８、９または１０ｍｇのビタミンＡＩＴ）を含んでもよい。
【０１４０】
本明細書で使用されるｖｏｌ／ｖｏｌは、アジュバント組成物の総量における成分の量を指す。
【０１４１】
Ｔｈ１型免疫応答は、哺乳類において、ある免疫調節性のポリヌクレオチドにより誘導することができる。免疫調節性のポリヌクレオチドには、免疫刺激性配列（ＩＳＳ、多くの場合、ＣＧジヌクレオチドを含む）と呼ばれる配列を含む。たとえば、国際特許出願公開公報ＷＯ９８／５５４９５、ＷＯ９７／２８２５９、米国特許第６，１９４，３８８および６，２０７，６４６を参照のこと。ゆえに、ある実施態様において、主題のアジュバント組成物はＩＳＳを含んでもよい。
【０１４２】
ある実施態様において、主題のアジュバント組成物は、上述の乳化剤（たとえば、レシチン、または洗剤等の界面活性剤）を含んでもよい。アジュバント組成物中の乳化剤の濃度は、様々な要素に依存する。たとえば、アジュバント組成物中に薬学的に許容可能な油が高い濃度で含まれている場合には、より多くの乳化剤が必要となる。一般的に、主題のアジュバント組成物中の界面活性剤または他の乳化剤の濃度は、１．５％〜５％ｖ／ｖ、または１．５％〜３％ｖ／ｖ、または１．５％〜２．５％ｖ／ｖ、または２％ｖ／ｖであ
る。また、一つ以上の界面活性剤が用いられる場合、アジュバント組成物中に用いられる全ての界面活性剤の合計は、１．５％〜５％、または１．５％〜３％、１．５％〜２．５％、または２％ｖ／ｖである。
【０１４３】
本明細書に開示されるアジュバント組成物は、抗原成分を含まなくてもよい。抗原成分を含まないアジュバント組成物は、たとえば、日々摂取するための一般的な免疫賦活剤または免疫抑制剤としての役割を果たすために、通常に、免疫応答を非特異的に増強または抑制するために用いられてもよい。あるいは、抗原を含まないアジュバント組成物は、抗原と併せて（すなわち、同時またはワクチネーションの後に）、投与することができる。
【０１４４】
抗原成分を含むアジュバント組成物
ある実施態様において、主題のアジュバント組成物は、一つ以上の抗原成分を含んでもよい。
【０１４５】
アジュバント組成物中の抗原成分の濃度は、広範に変化することができ、選択された投与の具体的な方法および対象の要求に従い、主に液体量、粘度、体重等に基づき選択される。製剤処方中の抗原成分の濃度は、広範に、すなわち、重量／体積で、約０．１％未満から、通常、少なくとも約２％から２０％〜３０％以上にまで変化することができ、選択された投与の具体的な方法に従い、抗原の性質、液体量、粘度等により主に選択される。ある実施態様において、抗原は、アジュバント組成物の０．１％〜３０％ｗ／ｖであってもよく、たとえば、０．１％〜２５％、０．５％〜２０％、１％〜１５％、２％〜１０％、３％〜８％、または５％〜６％ｗ／ｖであってもよい。
【０１４６】
アジュバント組成物の製造方法
また、本明細書において、アジュバント組成物を作製する方法が提示される。当該方法には、当該組成物を製造するために、薬学的に許容可能な担体、フラボノイドおよび／またはタンニン、ならびにビタミンを混合することが含まれる。
【０１４７】
主題のアジュバント組成物の成分は、多くの方法を用いて、様々な源から得てもよい。あるいは、当該成分は化学的に合成されてもよい。ある場合において、当該成分は、天然源から単離されてもよく、さらなる修飾（たとえば化学修飾）を受けてもよい。たとえば、からし油は、からし植物の種から抽出されてもよい。あるいは、薬学的に許容可能な植物油または動物油の担体は、業者から購入してもよい。ビタミンＡ、Ｃ、ＤおよびＥはＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ化学会社から購入し、標準的な生化学的手法により調製および製造してもよい。たとえばカテキン等のフラボノイド（たとえばカテキン水和物）は、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ化学会社より購入し、標準的な生化学的手法により調製および製造してもよい。
【０１４８】
一般に、カテキンは緑茶から抽出されるか、または化学的に合成される。韓国緑茶および中国緑茶、およびプーアール茶、インディアンブラックティー、竜井茶、鉄観音茶、竹茶、ジャスミン茶、ウーロン茶、花茶、紅茶を用いて、たとえばエピガロカテキン、カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン没食子酸塩およびエピカテキン没食酸塩等のカテキンを抽出してもよい。中国緑茶はカテキン成分に富んでいる。緑茶は、他の茶のタイプと比較して、より良いカテキン源である。
【０１４９】
ビタミンＡ（たとえば、レチノイン酸）、ビタミンＤ（たとえば、カルシトリオール（１，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール））、ビタミンＥ（たとえば、α−トコフェロール）、およびカテキン水和物はエタノール（たとえば、２００ｐｒｏｏｆエタノール）中に溶解してもよい。ビタミンＣおよびビタミンＢは、たとえば炭酸水素ナトリウム緩衝液等のアルカリ水溶液中に溶解してもよい。抗原は、水、緩衝液（たとえば、ＰＢＳ
）または生理食塩水溶液中に溶解してもよい。アジュバント組成物の個々の成分のストック溶液が作製されてもよく、次いで、当該成分の適切な量が共に混合され、主題のアジュバント組成物を得てもよい。主題のアジュバント組成物の総量は、ＰＢＳまたは生理食塩水で調整されてもよい。
【０１５０】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な油およびフラボノイドおよび／またはタンニン、ならびに任意選択的にビタミンは、たとえばＴｗｅｅｎ（登録商標）−８０等の界面活性剤と共に、上述の量で共に混合されてもよい。投与の前に、アジュバント組成物は、薬学的に許容可能な油、界面活性剤（複数含む）および他の成分（複数含む）の混合物を繰り返し吸引および排出することにより、乳化してもよい。
【０１５１】
ある実施態様において、薬学的に許容可能な有機担体または無機担体は、水溶性のフラボノイド、タンニンおよびビタミン誘導体と混合されてもよい。
【０１５２】
アジュバント組成物の成分は、混合の前に、またはアジュバント組成物を形成した後に、滅菌されてもよい。アジュバント組成物は、投与の前に、ゲルと混合されてもよく、または微粒子内等に処方されてもよい。
【０１５３】
本明細書に開示されるアジュバント組成物は、スプレー（たとえば、鼻腔用スプレー）、ドロップ（たとえば、鼻腔用ドロップ）、ゲル、粉末、錠剤またはカプセル、パッチ等に処方されてもよい。特に興味深いのは、吸入を介した投与に適したアジュバント組成物であり、限定されないが、エアロゾルを形成するための液体懸濁液、ならびに乾燥粉末吸入デリバリーシステムのための粉末形態を含む。主題のアジュバント組成物の吸入による投与に適したデバイスは、限定されないが、噴霧器、吸入器、ネブライザーおよび乾燥粉末吸入デリバリーシステムが含まれる。
【０１５４】
本明細書に開示されるアジュバント組成物は、液体またはエマルションに処方されてもよい。処方プロセス中において、限定されないが、水中油型エマルション、油中水型エマルション、多重エマルション（たとえば、二重、三重、四重等）、および逆相エマルションを含む、任意のエマルションのタイプが形成されてもよい。本発明の組成物は２相の状態であってもよく、１つの相は均一に他の相中に分散され、均質な肉眼的外観をもたらす。２つ以上の不均一な分散相を含有する組成物が形成される場合、当該相は、エマルションの使用の前に、振動され、または攪拌されてもよい。ある実施態様において、上述のように、高圧均質化工程を用いることにより水中油型エマルションが製造されてもよく、狭いノズルにエマルションを押し通すために５００〜３００００ｐｓｉの圧力をかけ、３０〜１００ｎｍの滴／粒子サイズの均質なエマルションを得る。
【０１５５】
ある実施態様において、本明細書に提示される組成物は、米国特許出願第２００８０２５４１８８号に記載されるような可溶化剤を含まない。ある実施態様において、本明細書に記述される組成物は、水溶性の剤型ではなく、むしろたとえばエマルション等の水に不溶性の剤型である。水溶性という用語は、水性媒体（たとえば水）に添加した場合に、その剤型が水性媒体に溶解し、本質的に透明な溶液をもたらすことを意味する。一つの例において、剤型は、反応混合物を気温（たとえば、２５℃）以上に加熱することなく水性媒体に溶解する。本質的に透明とは、組成物が透き通っており、眼に見える粒子および／または沈殿が無い（たとえば、眼に見えるほどに濁ったり、かすんでいたり、または他の非均質な状態ではない）ことを意味する。
【０１５６】
アジュバント組成物の使用方法
本開示は、対象における免疫応答を調節する（たとえば、自然免疫応答、細胞性免疫応答および／または液性免疫応答を刺激または抑制する）方法を提示する。本明細書に開示
されるアジュバント組成物は、様々な感染性疾患および腫瘍性疾患の予防、防御および／または治療に有用である。
【０１５７】
条件
ある実施態様において、本明細書に開示されるアジュバント組成物は、たとえばワクチン等の、抗原の投与との関連における使用が見出されうる。ワクチンは、予防的／防御的なワクチンまたは治療的なワクチンであってもよい。予防的／防御的なワクチンは、感染の前に投与され、疾患を予防または防御する一方で、治療的なワクチンは、感染または疾患の発生の後で投与される。
【０１５８】
予防的／防御的なワクチンは、対象が危険にさらされている疾患に関連する一つ以上のエピトープ（たとえば、結核予防のワクチンとして、結核菌の抗原）を含有する。
【０１５９】
治療的なワクチンは、たとえば、結核患者における結核菌またはＭ．ｂｏｖｉｓの表面抗原、アレルギーを起こしている各対象内で個々がアレルギーを起こす抗原（すなわち、アレルギー減感作療法）、癌を罹患している個体由来の腫瘍細胞（たとえば、米国特許第５，４８４，５９６号に記載される）、または癌患者における腫瘍関連抗原等の、個々が罹患した特定の疾患に関連するエピトープの一つ以上を含有する。
【０１６０】
アジュバント組成物は、抗原との関連で（たとえば、同じ組成物中で、または別々の組成物を用いて同時に）投与されてもよく、またはアジュバント組成物は別々に（たとえば、少なくとも１２時間の抗原の投与前後）投与されてもよい。ある実施態様において、抗原（複数含む）は、アジュバント組成物と混合される。
【０１６１】
主題のアジュバント組成物および抗原の投与は、当該ワクチンが治療を意図している疾患の一つ以上の症状を改善、または一つ以上の症状発現の遅延をもたらす。当業者には明らかなように、正確な症状および改善の様式は、治療を試みられた疾患に依存する。たとえば、治療的なワクチンが結核のためのものである場合、抗原を有するアジュバント組成物の投与により、咳嗽、胸膜痛または胸壁痛、発熱、および／または当分野に公知の他の症状の発現の減少または遅延をもたらしうる。ワクチンが、アレルギー減感作療法に用いられるアレルゲンである場合、抗原を有するアジュバント組成物の投与により、アレルギーの症状の発現の減少または遅延（たとえば、鼻炎、アレルギー性結膜炎、循環ＩｇＥのレベルおよび／または循環ヒスタミンレベルの減少）をもたらしうる。
【０１６２】
主題のアジュバント組成物はまた、広範な細菌またはウイルス病原体（野生型または生物兵器またはバイオテロの病原体として使用される遺伝子改変生物を含む）による感染に対する抵抗性を増加させるために予防的に用いられてもよい。
【０１６３】
他の実施態様は、たとえば癌または感染性疾患等の従前から存在する疾患または障害を有する対象の免疫調節的な治療に関する。ほとんどの癌は、身体の他の細胞には見いだされない腫瘍関連抗原および／または腫瘍特異的抗原を発現しているため、癌は、免疫調節にとって魅力的な標的である。Ｔｈ１型免疫応答を刺激すると、細胞性免疫系細胞（たとえば、ＣＴＬ）の直接的な活性または液性免疫系の成分のいずれかにより、またはマクロファージおよびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）を含む免疫系により標的化された細胞の近傍にある細胞へのバイスタンダー効果により、腫瘍細胞の死がもたらされる。
【０１６４】
本明細書に開示されるアジュバント組成物はまた、細胞外病原体（たとえば、細菌または原生動物）、または細胞内病原体（たとえば、ウイルス）により引き起こされた感染性疾患を有する対象に投与することができる。
【０１６５】
ある実施態様において、本明細書に記述されるアジュバント組成物を投与することにより、Ｔｈ２型免疫応答に関連する疾患（たとえば、限定されないが、アレルギー、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性食道炎およびアレルギー性気管支肺アスペルギルス症）に罹患する対象を治療してもよい。たとえば、薬学的に許容可能な油担体、フラボノイドおよび少なくとも一つのビタミンＣ、ＤおよびＥを含有するアジュバント組成物は、Ｔｈ２型の免疫応答に関連する疾患に罹患する対象に投与されてもよく、一つ以上のＴｈ１型反応関連サイトカインのレベルを上昇させ、対象のアレルゲンへの応答に関連するＴｈ２型応答の特性の減少をもたらしうる。Ｔｈ２型反応関連疾患を有する患者の免疫調節は、その疾患の症状の一つ以上の発現の減少または改善または遅延をもたらす。疾患がアレルギーまたはアレルギー性喘息である場合、症状の一つ以上の改善には、以下の一つ以上の減少が含まれる。咳嗽、アレルギー性結膜炎、循環ＩｇＥレベル、循環ヒスタミンレベルおよび／または吸入療法を「レスキューする」ために必要とされるもの（たとえば、定量吸入器またはネブライザーにより投与される吸入アルブテロール）。
【０１６６】
投与経路
本明細書に記述されるアジュバント組成物は、多くの投与経路を介して投与されうる。投与の例示的な経路は、粘膜（たとえば、口腔、舌下、鼻腔内、吸入、眼内、膣内、直腸内）、および全身（たとえば、筋肉内、真皮内、経真皮、腹腔内、皮下、経皮）が挙げられる。ある実施態様において、免疫応答を誘導するために少なくとも２つの投与経路の組み合わせを用いてもよい。たとえば、投与の粘膜経路と全身経路の組み合わせを用いてもよい。
【０１６７】
投与経路は個々の対象および疾患の段階、および当業者に明らかな他の因子に基づき変化しうる。
【０１６８】
投与経路が粘膜または経上皮（肌を通じて）の経路である場合、イソチオシアン酸アリルを含有する組成物が好ましい。
【０１６９】
ある実施態様において、本明細書に記述されるアジュバント組成物は、粘膜表面を壊すことなく、粘膜表面を通じて投与されうる。
【０１７０】
主題のアジュバント組成物は、抗原（複数含む）と伴に、または抗原を伴わずに用いられてもよい。抗原と伴に用いられる場合、アジュバント組成物および抗原は、同時に投与されてもよく、またはアジュバント組成物は抗原の投与前後に投与されてもよい。抗原と伴に用いられる場合、抗原はアジュバント組成物と混合されてもよい。
【０１７１】
本明細書に記述されるアジュバント組成物は、ゲルまたは錠剤（たとえば、速溶性の）の剤型中に、マイクロサイズの粒子、またはナノサイズの粒子として与えられてもよい。そのような剤型は、たとえば、口腔または舌下経路を介して投与されてもよい。鼻腔内投与に対しては、アジュバント組成物は、たとえば、エマルションの形態で鼻腔用スプレーとして、またはドロップとして処方されてもよい。経皮投与に対しては、アジュバント組成物はゲル、ローションまたは軟膏の形態で投与されてもよい。全身注入に対しては、アジュバント組成物は、エマルションおよび／またはマイクロ／ナノ粒子として処方され投与されてもよい。直腸投与に対しては、アジュバント組成物は、たとえば座薬またはゲルとして処方されてもよい。膣内投与に対しては、アジュバント組成物は、たとえばゲル、エマルション、軟膏として処方された。
【０１７２】
ある実施態様において、本明細書に記述されるアジュバント組成物は、以下に示される順で、異なる経路の組み合わせを介して対象に投与されてもよい。
たとえば、
ｉ．    全身、粘膜
ｉｉ．  全身、全身、粘膜、粘膜
ｉｉｉ．全身、粘膜、全身
ｉｖ．  粘膜、粘膜、全身、全身
ｖ．    粘膜、全身、全身、
ｖｉ．  粘膜、全身、粘膜
【０１７３】
アジュバント組成物が１回以上、全身投与または粘膜投与される場合、２つ以上の全身投与または粘膜投与が、同じ全身経路（たとえば、２回の筋肉内注射）または同じ粘膜経路（２回の鼻腔内（ＩＮ）／舌下（ＳＬ）投与）または異なる経路（たとえば、１回の筋肉内注射および１回の静脈内注射。１回のＩＮ投与および１回のＳＬ投与）によるものであってもよい。
【０１７４】
投与量
本明細書に記述される、対象に投与されるアジュバント組成物の投与量は、投与経路および体重に基づき決定されてもよく、体重の０．００１ｍｌ／ｋｇ〜１ｍｌ／ｋｇの範囲であってもよい。アジュバント組成物が投与される回数は変化してもよく、多くの因子に基づき決定されてもよい。これらの因子は当業者には明らかであり、予防または治療される疾患、病原体または癌のタイプ、抗原の天然構造、投与経路、対象に誘導される免疫応答のレベル、免疫応答の型等を含みうる。
【０１７５】
対象
本明細書に記述されるアジュバント組成物は、免疫応答を開始することができる様々な対象に免疫応答を引き起こすために用いられてもよい。ある場合において、本明細書に記述されるアジュバント組成物は、哺乳類（ヒト、他の非ヒト霊長類、家畜動物（たとえば家畜））、鳥類、魚類、またなそれを必要とする他の任意の動物を含む脊索動物亜門の任意のメンバーに投与してもよい。ある場合において、アジュバント組成物は、ヒトに投与してもよい。ある場合において、アジュバント組成物は、ウシに投与してもよい。ある場合において、アジュバント組成物は、ニワトリ、ウマ、ヒツジ、ヤギに投与してもよい。ある場合において、アジュバント組成物は、ブタに投与してもよい。ある場合において、アジュバント組成物は、ネコおよびイヌに投与してもよい。
【０１７６】
免疫応答の検出
免疫応答の調節は、液性および／または細胞性であってもよく、当分野に標準的な技法を用いて測定されうる。対象における免疫応答は、抗原特異的抗体、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２２および他のサイトカインの発現レベルを測定すること、ならびに、たとえばＴ細胞増殖、たとえばＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＣＴＬ等のリンパ球の特定の群の活性化、ならびに樹状細胞およびマクロファージの成熟および活性化等の応答を検出することを含む、多くの方法で検出することができる。
【０１７７】
特異抗体応答の測定方法には、酵素免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）が含まれ、当分野に公知である。たとえばＣＤ４＋Ｔ細胞等の特定のタイプのリンパ球数の測定は、たとえば、蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）を用いて得ることができる。細胞傷害性およびＣＴＬアッセイは、たとえば、Raz et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9519-9523に記載されるようなものでありうる。サイトカイン濃度は、たとえば、ＥＬＩＳＡによ
り測定することができる。免疫原に対する免疫応答を評価するための、これら、および他のアッセイは、当分野に公知である。たとえば、SELECTED METHODS IN CELLULAR IMMUNOL
OGY (1980) Mishell and Shiigi, eds., W. H. Freeman and Coを参照のこと。
【０１７８】
キット
本明細書に記述されるアジュバント組成物の成分の滅菌容器を含むキットがまた提示される。個々の成分が別々の滅菌容器中に存在してもよく、または２つ以上の成分が１つの容器中に存在してもよい。任意選択的に、キットは所望される抗原（複数含む）を含有する容器もまた含んでもよい。
【０１７９】
一部の実施態様において、滅菌容器は、任意選択的に、特定の体積／量の成分を引き出すためのアクセスポート（複数含む）（たとえば、薬学的に許容可能な担体のある量を引き出すためのシリンジを導入するためのポート等）を有してもよい。
【０１８０】
一部の実施態様において、本明細書に記述されるアジュバント組成物の成分の容器は、滅菌されていなくてもよいが、合理的な程度に清潔である。
【０１８１】
キットはさらに、適切な取扱説明書のセット（主には、免疫調節（たとえば、感染性疾患の改善症状、ＩＦＮ−γレベルの上昇、ＩＦＮ−αレベルの上昇またはＩｇＥ関連疾患の改善）のためのアジュバント組成物の使用に関する書面）を含む。
【０１８２】
キットは、任意の便利で適切な包装中にパッケージされたアジュバント組成物の成分を含有してもよい。たとえば、成分が乾燥剤型（たとえば、フリーズドライまたは乾燥粉末）である場合、弾力性のあるストッパーを通じて注入液により成分が容易に再懸濁されうるように、弾力性のあるストッパーを有するバイアルが用いられてもよい。弾力性が無いアンプル、取り外し可能な閉鎖物（たとえば、シールされたガラス）または弾力性のあるストッパーが、アジュバント組成物の液体成分（複数含む）に用いられてもよい。特定のデバイス、粘膜投与デバイス（たとえば吸入器、鼻腔投与デバイス（たとえば、アトマイザー）または点眼薬等）との組み合わせで用いるためのパッケージもまた、予期される。
【０１８３】
アジュバント組成物の使用に関する取扱説明書は、主に、免疫調節のための投与量、投与スケジュール、および投与経路についての情報を含む。アジュバント組成物、または従前に混合されたアジュバント組成物の成分を含有する容器は、単位用量、大量パッケージ（たとえば、複数回投与パッケージ）または副次的な用量であってもよい。本明細書に記述されるキット中に供される取扱説明書は、典型的にはラベルに記載されている書面または添付文書（たとえば、キットに含まれる紙シート）であるが、機械で読み取り可能な取扱説明書（たとえば、磁気保管ディスクまたは光学保管ディスクで実行できる取扱説明書）もまた含まれうる。
【実施例】
【０１８４】
実施例１
リポ多糖を用いた真核細胞の活性化後のビタミンＡおよびフラボノイドの相乗的な免疫調節効果
【０１８５】
フラボノイド、カテキン水和物（ＣＨ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）、ならびにビタミン類、ビタミンＤ３（ＶＤ３）、ビタミンＥ（α−トコフェロール、ＶＥ）、レチノイン酸（ＲＡ、ビタミンＡ誘導体））およびレチニル・パルミテート（ＲＰ、ビタミンＡ誘導体）の単独または組み合わせの、リポ多糖（ＬＰＳ）の存在下または非存在下での免疫調節的な役割を測定するために、マウス脾臓細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで４日間、活性化させ、培養上清をＩＬ−６の存在に対して、ＥＬＩＳＡにより分析した。ＲＡおよびＣＨの組み合わせは、ＩＬ−６産生の減少、およびＬＰＳ存在下でのＩＬ−１α産生の減少に対し、驚くべき相乗効果を発揮した（図１Ａおよび１Ｂ）。さらに、ＬＰＳ
活性化が無い中で、ＲＡおよびＣＨの組み合わせは、相乗的にＴＮＦα産生を減少させた（図１Ｃ）。
【０１８６】
実施例２
フラボノイドとビタミンの組み合わせの、メスＢＡＬＢ／ｃマウス（６〜８週齢）のｉｎ  ｖｉｖｏ早期免疫応答に対する相乗効果を、ＥＧＣＧ、α−トコフェロール（ビタミンＥ、ＶＥ）と組み合わせたＨＩＶ−１ＢａＬ由来ｇｐ１２０（それぞれ、またはからし油（ＭＯ）との組み合わせで）の単回筋肉内注射で誘導し、アジュバントなし（生理食塩水）でのワクチネーションと比較した。注射の１６時間後、ＭＣＰ１、ＩＬ−１２ｐ７０およびＩＬ−１３の血清レベルは、ＥＧＣＧ，ＶＥおよびＭＯで相乗的に増強されていた（図２Ａ）。
【０１８７】
季節性インフルエンザ系統（Ｈ１Ｎ１、０．５μｇ）由来のヘマグルチニン（ＨＡ）を用いた、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける最初のｉｎ  ｖｉｖｏ実験において、ビタミンＡ（ＶＡ、３０μｇ）とからし油（ＭＯ）の組み合わせ、またはカテキン水和物（ｃａｔ、１２０μｇ）とからし油（ＭＯ）の組み合わせは、ＭＯ無しでのワクチネーションと比較して、単回筋肉内（ＩＭ）ワクチネーション後の血清抗ＨＡ  ＩｇＧ１応答を増強した（図２Ｂ）。
からし油とカテキンおよびビタミンＡの組み合わせは、粘膜ワクチネーションおよび全身ワクチネーション後の局所および全身性のＢ細胞およびＴ細胞応答を相乗的に増強した。
【０１８８】
５０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＭＯと、ＶＡ（レチニル・パルミテート、ＲＰ、３０μｇ）、ＶＥ（２ｍｇ）およびｃａｔ（１２０μｇ）の組み合わせは、粘膜および全身ワクチネーション後の血清ＩｇＧ応答を有意に上昇させる結果をもたらすことが測定された。ＶＡ＋ｃａｔ＋ＭＯまたはＶＡ＋ＶＥ＋ｃａｔ＋ＭＯの組み合わせは、２回の粘膜、次いで２回のＩＭワクチネーション後に最も高い血清ＩｇＧ応答を誘導した（図３）。さらに、膣粘膜が排出される腸骨リンパ節におけるＴＨ１（ＩＬ−２およびＴＮＦα）およびＴＨ２（ＩＬ−５）応答の有意な上昇が検出された（図４）。この実験において、ＮＩＤＳ（ＶＡ＋Ｅ＋ＥＧＣＧ＋ＭＯ）と、ＴＬＲ３アゴニストｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の比較が行われ、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）よりも、ＮＩＤＳのほうが粘膜および全身性ワクチネーション後の抗体応答がより高く誘導されたことが示された。
【０１８９】
粘膜ワクチネーションに続く全身性ワクチネーションにおける、ＶＡ＋ｃａｔ＋ＭＯを用いた実験が行われ、サブタイプＣｇｐ１２０ＣＮ５４を用いて、アジュバントなしと比較し、ＶＡ＋ｃａｔ＋ＭＯでのワクチネーション後の血清ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＡが有意に上昇したこと（図５）、ならびに膣洗浄液ＩｇＧ１およびＩｇＡが増強したこと（図６）が示された。興味深いことに、相同ＣＮ５４サブタイプＢ／Ｃから誘導されたｇｐ１２０に対する血清ＩｇＧ１抗体価のみならず、数種の非相同サブタイプＢ  ＨＩＶ系統（すなわち、ＢａＬ、ＣＭ、ＳＦ１６２およびＩＩＩＢ）に対する血清ＩｇＧ１抗体価も有意に上昇した。これらのデータは公表されている（Yu M, Vajdy M. A novel retinoic acid, catechin hydrate and mustard oil-based emulsion for enhanced cytokine and antibody responses against multiple strains of HIV-1 following mucosal and
systemic vaccinations. Vaccine. 2011 Mar 16;29(13):2429-36. Epub 2011 Jan 25）
。
【０１９０】
実施例３
細胞傷害性のマウス空気嚢モデルにおいて、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）およびＩｍｊｅｃｔ  Ａｌｕｍと比較し、ＮＩＤＳは、劇的に低い早期炎症誘導性サイトカイン産生およびケモカイン産生を誘導した。
【０１９１】
局所細胞傷害性試験を、マウス空気嚢モデルを使用して行った。このモデルはまた、ＮＩＤＳのｉｎ  ｖｉｖｏにおける免疫増強効果が、早期局所サイトカイン産生およびケモカイン産生により説明できるかどうかを証明した。ＮＩＤＳ（各投与量は、３０μｇのレチニル・パルミテート、２ｍｇのビタミンＥ（α−トコフェロール）、１２０μｇのエピガロカテキン没食子酸塩、および５０％ｖｏｌ／ｖｏｌのからし油を含有する）、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）およびＩｍｊｅｃｔ  Ａｌｕｍのマウスワクチンの等量投与量が７回、空気嚢に注射され、上清を６時間後に収集し、複数の固有サイトカインおよびケモカインを測定するｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを行った。ＮＩＤＳ注射と比較して、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）およびＩｍｊｅｃｔ  Ａｌｕｍの注射後に、ＴＮＦα、ＩＬ−６、ＩＰ−１０、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ１−ａ、ＭＩＰ−１ｂ、ＭＩＰ−２、ＲＡＮＴＥＳおよびＧ−ＣＳＦは有意に高いことが判明した（図７）。
【０１９２】
上述の空気嚢モデルの結果をさらに支持するｉｎ  ｖｉｖｏ結果を得るために、早期炎症誘発性サイトカインＴＮＦαおよびＩＬ−６のｉｎ  ｖｉｖｏでの産生を、ＮＩＤＳ単回ＩＭ注射の６時間後のマウス血清で測定し、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）およびアジュバント無と比較した。血清ＴＮＦαおよびＩＬ−６は、ＮＩＤＳまたはアジュバント無と比較し、ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）のＩＭワクチネーション後に有意に上昇していたことが判明した（図８）。
【０１９３】
他の実験において、ビタミンＡおよびＥおよびフラボノイドの組み合わせの免疫調節効果を測定し、この効果がからし油の存在に依存するかどうか、または他の薬学的な担体でもまた効果が得られるかどうかを評価した。この目的に対し、メスＢＡＬＣ／ｃマウスを、ビタミンＡ＋ＥおよびＥＧＣＧの組み合わせの存在下、または非存在下で、Ａｌｕｍ（水酸化アルミニウム２．５％、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともに、ＨＩＶ−１系統ＢａＬ由来のｇｐ１２０で、１回または２回、筋肉内（ＩＭ）注射でワクチン化した。単回ＩＭワクチネーションの後、ビタミンＡ＋ＥおよびＥＧＣＧをＡｌｕｍに添加したものは、血清抗体（Ｉｇ（Ｈ＋Ｌ））応答が有意に増加した（図９）。さらに、ビタミンＡ＋ＥおよびＥＧＣＧをＡｌｕｍに添加したものは、抗原特異的血清ＩｇＥ（明白なＴＨ２応答の指標）が減少した一方で、２回のＩＭワクチネーション後には抗原特異的血清ＩｇＧ２ａ応答が上昇した（図９）。
【０１９４】
実施例４
ＭＯの減少による免疫抑制および無機担体Ａｌｕｍを用いた免疫増強
【０１９５】
４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチン組成（ＨＩＶ−１のＢａＬ系統由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で、３週の間隔で２回、筋肉内注射でワクチン化した。血清ｇｐ１２０特異的ＩｇＧ１抗体価を、２回目のワクチネーションの２週間後（２ＷＰ２）、ＥＬＩＳＡで測定した。２つのマウス群を、５０％からし油（ＭＯ）または１０％ＭＯのいずれかに溶解したレチニル・パルミテート（ＲＰ、５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）の組み合わせでワクチン化した。他の２群のマウスは、５０％ＭＯまたは１０％ＭＯのいずれかに溶解したビタミンＤ３（ＶＤ３、２０ＩＵ）、ビタミンＥ（ＶＥ、２ｍｇ）およびＥＧＣＧの組み合わせでワクチン化した。他の２群のマウスは、２．５％リン酸アルミニウム（Ａｌｕｍ）単独、またはビタミンＤ３（ＶＤ３）、ビタミンＥ（ＶＥ）およびＥＧＣＧの組み合わせと共に混合されたＡｌｕｍでワクチン化した。一つのマウス群は、生理食塩水に溶解したｇｐ１２０でワクチン化した。
【０１９６】
図１０に関して、レチニル・パルミテート（ＲＰ）およびエピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）の存在下で、からし油（ＭＯ）を５０％から１０％に減少させると、血清Ｉ
ｇＧ１抗原特異的応答が有意に抑制された。ＶＤ３、ＶＥおよびＥＧＣＧの存在下で、ＭＯを５０％から１０％に減少させると、血清ＩｇＧ１抗原特異的応答が有意に抑制された。さらに、ＶＤ３、ＶＥおよびＥＧＣＧをＡｌｕｍに添加すると、Ａｌｕｍ単独でのワクチネーションと比較して、血清ＩｇＧ１抗原特異的応答が有意に増強された。
【０１９７】
実施例５
オレイン酸（脂肪酸、４０％ｖｏｌ／ｖｏｌ）単独、またはビタミンＡとの組み合わせでのワクチネーション後の、抗原特異的な免疫増強、およびオレイン酸に溶解したエピガロカテキン没食子酸塩およびビタミンＡの組み合わせによる相乗的な免疫抑制
【０１９８】
４匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチン組成（ＨＩＶ１のＢａＬクレード由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で、３週の間隔で２回、筋肉内注射でワクチン化した。血清ｇｐ１２０特異的ＩｇＧ１抗体価を、２回目のワクチネーションの２週間後（２ＷＰ２）、ＥＬＩＳＡで測定した。マウスを、４０％オレイン酸に溶解したレチニル・パルミテート（ＲＰ、５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）の組み合わせ、それぞれ単独、または様々な組み合わせでワクチン化した。図１１に示されるように、ただ一つの脂肪酸、オレイン酸の単独、またはＲＰとの組み合わせは、オレイン酸＋ＥＧＣＧ、ＶＡ＋ＥＧＣＧ単独、またはアジュバント無と比較して、血清ＩｇＧ１抗原特異的応答を増強した。さらに、図１１において、ＥＧＣＧをＲＰおよびオレイン酸に添加すると、オレイン酸単独またはアジュバント無と比較して、血清ＩｇＧ１抗原特異的応答を相乗的に抑制したことが示されている。
【０１９９】
オレイン酸（脂肪酸、４０％ｖｏｌ／ｖｏｌ）単独でのワクチネーション後の相乗的な抗原非特異的な免疫抑制を、ビタミンＡおよびカテキンと組み合わせたオレイン酸と比較した。
【０２００】
４匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチンの処方（ＨＩＶ−１のＢａＬ系統由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で、１回、筋肉内注射でワクチン化した。血清サイトカインおよびケモカインを、ワクチネーションの６時間後に、ＥＬＩＳＡで測定した。マウスは、４０％オレイン酸に溶解した、それぞれ単独、または様々な組み合わせのいずれかで、ビタミンＡ（ＶＡ、レチニル・パルミテート  ５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）の組み合わせで、ワクチン化した。
【０２０１】
図１２は、ビタミンＡおよびカテキンと組み合わせたオレイン酸（脂肪酸、４０％ｖｏｌ／ｖｏｌ）の単回注射後の、オレイン酸単独、オレイン酸＋ビタミンＡ、またはＥＧＣＧと組み合わせたオレイン酸と比較した、相乗的な抗原非特異的免疫抑制を示す。
【０２０２】
実施例７
オレイン酸（脂肪酸、４０％ｖｏｌ／ｖｏｌ）単独でのワクチネーション後の、ビタミンＡおよびカテキンと組み合わせたオレイン酸と比較した、相乗的な抗原非特異的な免疫抑制
【０２０３】
４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチン処方（ＨＩＶ−１のＢａＬ系統由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で１回、筋肉内注射でワクチン化した。血清サイトカインおよびケモカインを、ワクチネーションの６時間後、ＥＬＩＳＡで測定した。マウスは、４０％オレイン酸に溶解した、それぞれ単独、または様々な組み合わせのいずれかで、ビタミンＡ（ＶＡ、レチニル・パルミテート  ５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）の組み合わせでワクチン化した。
【０２０４】
図１３は、オレイン酸単独、オレイン酸＋ビタミンＡ、またはＥＧＣＧと組み合わせた
オレイン酸と比較した、ビタミンＡおよびカテキンと組み合わせたオレイン酸（脂肪酸、４０％ｖｏｌ／ｖｏｌ）の単回注射後の、相乗的な抗原非特異的免疫抑制を実証する本実験から得られた結果を示す。
【０２０５】
実施例８
ＮＩＤＳ、またはＡｌｕｍ、または油分の無いＮＩＤＳ＆Ａｌｕｍを用いた、ＩｇＥ応答の減少を伴う抗ＨＩＶ−ｇｐ１２０  Ｉｇ応答およびＩｇＧ２ａ応答の増強
【０２０６】
４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、１回（３ＷＰ１）、２回（２ＷＰ２）ＩＭワクチネーションの後の、ＨＩＶ−ｇｐ１２０ＢａＬ（２．５μｇ／１回投与量）に対する、ＴＨ１抗体応答の誘導に対するＴＨ２抗体応答の誘導に関して、ＮＩＤＳ（５０％ＭＯに溶解した５４ＩＵ  レチニル・パルミテート＋エピガロカテキン没食子酸塩１２０μｇ＋α−トコフェロール２ｍｇ）と、Ａｌｕｍ，またはＡｌｕｍ＋油分の無いＮＩＤＳとの比較のために、１回または２回、筋肉内注射でワクチン化した。
【０２０７】
図１４において、ビタミンＡおよびＥおよびカテキンの添加により、ＮＩＤＳ対Ａｌｕｍ対Ａｌｕｍ＋油分の無いＮＩＤＳで比較して、単回ＩＭワクチネーションの後の血清総抗ｅｎｖ  Ｉｇ応答が有意に増強したこと、および血清ＩｇＧ２ａが有意に増強したこと、一方でＩｇＥ応答が減少したことを示す。
【０２０８】
実施例９
ＶＥ、ＥＧＣＧおよびＡｌｕｍを用いた単回筋肉内注射の６時間後での、抗原非特異的な血清ＩＬ−５応答の増強
【０２０９】
３匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々な処方（レチニル・パルミテート（ＲＰ、ビタミンＡ、５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）、および／または２．５％Ａｌｕｍ（５０％ｖｏｌ／ｖｏｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ＳａｎＤｉｅｇｏ、Ｃａ）より購入）を含有）で１回、筋肉内注射を行った。注射の６時間後に血清を採取し、ＩＬ−５サイトカイン応答を、ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ｌｕｍｉｎｅｘアッセイにより測定した。
【０２１０】
ビタミンＡおよびＥＧＣＧの組み合わせにより、Ａｌｕｍを用いた単回筋肉内注射の６時間後で、血清ＩＬ−５の抗原非特異的な相乗的増強が誘導される（図１５）。
【０２１１】
実施例１０
没食子酸（ポリフェノール性タンニン）、ビタミンＡおよびからし油（ＭＯ）の相乗効果を介した、抗原特異的免疫増強
【０２１２】
３〜４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチン処方（ＨＩＶ−１のＢａＬ系統由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で、３週の間隔で２回、筋肉内注射でワクチン化した。血清ｇｐ１２０特異的ＩｇＧ１抗体価を、２回目のワクチネーションの２週間後（２ＷＰ２）で、ＥＬＩＳＡにより測定した。ワクチンは、１回投与量当たり、５０％ＭＯに溶解したビタミンＡ（ＶＡ、レチニル・パルミテート、５４ＩＵ）、没食子酸塩（１２０μｇ）をそれぞれ単独、または様々な組み合わせで含有した。
【０２１３】
これらの実験データより、没食子酸（ポリフェノール性タンニン）、ビタミンＡおよびからし油（ＭＯ）の相乗効果を介して、抗原特異的免疫増強が相乗的に血清特異的ＩｇＧ１（ＴＨ２）抗体応答およびＩｇＧ２ａ（ＴＨ１）抗体応答を増強したことが示された（図１６）。
【０２１４】
実施例１１
１０％からし油（ＭＯ）または５０％ＭＯまたは７５％ＭＯに溶解したカテキンを有するビタミンＡおよびＥでのワクチネーション後の、ＴＨ２サイトカイン応答の抑制およびＴＨ１サイトカイン応答の増強
【０２１５】
４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチン処方（ＨＩＶ−１のＢａＬ系統由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で、３週の間隔で２回、筋肉内注射でワクチン化した。血清ｇｐ１２０特異的ＩｇＧ１抗体価を、２回目のワクチネーションの２週後（２ＷＰ２）に、ＥＬＩＳＡにより測定した。２ＷＰ２での単一細胞懸濁液を、脾臓から調製し、ｅｘ  ｖｉｖｏで２μｇ／ｍｌのｇｐ１２０を用いて一晩、活性化し、上清をその翌日に収集し、ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイにより様々なサイトカインを測定した。マウス群は、１０％、５０％または７５％のからし油（ＭＯ）のいずれかに溶解したレチニル・パルミテート（ＲＰ、５４ＩＵ）、ビタミンＥ（ＶＥ、２ｍｇ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）の組み合わせでワクチン化した。他の２群のマウスは、５０％ＭＯまたは１０％ＭＯのいずれかに溶解したビタミンＤ３（ＶＤ３、２０ＩＵ）、ビタミンＥ（ＶＥ）およびＥＧＣＧの組み合わせでワクチン化した。他の２群のマウスは、２．５％リン酸アルミニウム（Ａｌｕｍ）単独、または、ＲＰを伴う、もしくは伴わないビタミンＣ（ＶＣ）、ＶＥおよびＥＧＣＧの組み合わせとの混合でワクチン化した。１群のマウスを、生理食塩水に溶解したｇｐ１２０、またはスクアレンオイルベースの担体（ＡｄｊｕＭＦ５９、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＳａｎＤｉｅｇｏ、Ｃａ）に溶解したｇｐ１２０でワクチン化した。
【０２１６】
７５％ＭＯに溶解したＲＰ（５４ＩＵ）＋ＶＥ（２ｍｇ）＋ＥＧＣＧ（１２０μｇ）は、生理食塩水でのワクチネーションと比較して、血清ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ（ＴＨ１）および脾臓ＩＦＮγ（ＴＨ１）を有意に増強した一方で、ＩＬ−５応答（ＴＨ２）を減少させた（図１７Ａおよび１７Ｂ）。７５％ＭＯに溶解したＲＰ＋ＶＥ＋ＥＧＣＧは、１０％ＭＯに溶解したＲＰ＋ＶＥ＋ＥＧＣＧでのワクチネーションと比較して、血清ＩｇＧ２ａ（ＴＨ１）応答および脾臓ＩＦＮγ（ＴＨ１）応答を有意に増強した（図１７Ａおよび１７Ｂ）。
【０２１７】
実施例１２
ビタミンＡおよびカテキンは、ＨＩＶ−１（ＢａＬ系統）ｇｐ１２０タンパク質に対する血清抗体応答を有意に増強した。
【０２１８】
４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、直径１５０ｎｍのリポソーム（ジミリストイルホスホチジルコリン（２％Ｗ／Ｖ）、ジミルストイルホスホチジルグリセロール（０．６％Ｗ／Ｖ）、コレステロール（０．４％Ｗ／Ｖ）、スクロース（９％Ｗ／Ｖ）、コハク酸２ナトリウム６水和物（０．２７％Ｗ／Ｖ）で構成される）中に単独、またはビタミンＡ（ＶＡ、レチニル・パルミテート、５４ＩＵ）、またはエピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）、またはＶＡとＥＧＣＧの組み合わせと共に封入した２．５μｇのｇｐ１２０で、２．５週の間隔で２回、筋肉内注射でワクチン化した。総血清イムノグロブリン（Ｉｇ重鎖および軽鎖）を、最後のワクチネーションの２週後に、ＥＬＩＳＡにより測定した。
【０２１９】
図１８において、リポソームに混合されたＶＡおよびＥＧＣＧの組み合わせが血清抗体応答を相乗的に増強することが示す。
【０２２０】
実施例１３
ビタミンＡおよびＥおよびカテキンスクアレンオイルベースの担体の相乗的な免疫増強効果
【０２２１】
４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチン処方（ＨＩＶ−１のＢａＬ系統由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で、３週の間隔で２回、筋肉内注射でワクチン化した。血清ｇｐ１２０特異的ＩｇＧ１抗体価を２回目のワクチネーションの２週後（２ＷＰ２）に、ＥＬＩＳＡにより測定した。２群のマウスは、５％ｖｏｌ／ｖｏｌのスクアレンオイルに溶解したレチニル・パルミテート（ＲＰ，５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）の組み合わせでワクチン化した。
【０２２２】
図１９は、スクアレンオイルベースの担体にＶＡおよびＥＧＣＧを添加することにより、血清ＩｇＧ１応答を相乗的に増強したことを示す。
【０２２３】
実施例１４
様々なオイルベースの担体との、ビタミンＡおよびＥおよびカテキンの相乗的な免疫増強効果
【０２２４】
４匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々なワクチン処方（ＨＩＶ−１のＢａＬ系統由来のｇｐ１２０を２．５μｇ含有）で、３週の間隔で２回、筋肉内注射でワクチン化した。血清ｇｐ１２０特異的ＩｇＧ１抗体価を、２回目のワクチネーションの２週後（２ＷＰ２）に、ＥＬＩＳＡにより測定した。２群のマウスは、５０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）トウモロコシ油、または５０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）オリーブオイル、または５０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）グレープシードオイル、または５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）スクアレンオイル、または４０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）鉱物油のいずれかに溶解したレチニル・パルミテート（ＲＰ，５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）の組み合わせでワクチン化した。
【０２２５】
この実験結果により、鉱物油を除く任意の油担体へのＶＡ、ＶＥおよびＥＧＣＧの添加により、各油担体単独でのワクチネーションと比較して、血清ＩｇＧ１抗原特異的応答が有意に増強されたことが示される（図２０）。
【０２２６】
実施例１５
ＶＡ、ＥＧＣＧおよびＭＯでの単回筋肉内注射の６時間後での血清ＩＬ−１５サイトカイン応答の抗原非特異的な増強
【０２２７】
３匹のメスＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々な処方（レチニル・パルミテート（ＲＰ、５４ＩＵ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）、および／または５０％ｖｏｌ／ｖｏｌからし油（ＭＯ）を含有）で、１回、筋肉内注射を行った。注射の６時間後に血清を採取し、ＩＬ−１５のサイトカイン応答をｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイにより測定した。
【０２２８】
図２１に、ＲＰ、ＥＧＣＧ、ＭＯの組み合わせによる、単回筋肉内注射の６時間後での抗原非特異的な血清ＩＬ−１５の相乗的増強を示す。
【０２２９】
実施例１６
ビタミンＥ、エピガロカテキン没食子酸塩、からし油（ＭＯ）での単回筋肉内注射の６時間後での、血清ＩＬ−５およびＩＬ−１２ｐ７０サイトカイン応答の抗原非特異的な増強
【０２３０】
３匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの群を、様々な処方（α−トコフェロール（ビタミンＥ、２ｍｇ）、エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ、１２０μｇ）、および／または５０％ｖｏｌ／ｖｏｌからし油（ＭＯ）を含有）で、１回、筋肉内注射を行った。注射の６時間
後に血清を採取し、ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  ＬｕｍｉｎｅｘアッセイによりＩＬ−１３およびＩＬ−１２ｐ７０サイトカイン応答を測定した。
【０２３１】
図２２は、ビタミンＥ、ＥＧＣＧ、ＭＯの組み合わせにより、単回筋肉内注射の６時間後に、血清ＩＬ−１３およびＩＬ−１２ｐ７０の抗原非特異的な相乗的増強が誘導されることを示す。
【図１Ａ】
2020002158.tif 000004
【図１Ｂ】
2020002158.tif 000005
【図１Ｃ】
2020002158.tif 000006
【図２Ａ】
2020002158.tif 000007
【図２Ｂ】
2020002158.tif 000008
【図３】
2020002158.tif 000009
【図４】
2020002158.tif 000010
【図５Ａ】
2020002158.tif 000011
【図５Ｂ】
2020002158.tif 000012
【図６】
2020002158.tif 000013
【図７】
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【図８】
2020002158.tif 000015
【図９】
2020002158.tif 000016
【図１０】
2020002158.tif 000017
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
2020002158.tif 000025
【図１９】
2020002158.tif 000026
【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
2020002158.tif 000029
【手続補正書】
【提出日】令和1年9月5日(2019.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）からし油及びグレープシードオイルから選択される植物油、
（ｂ）ビタミンＤ、
（ｃ）ビタミンＡ、ビタミンＥ、又はこれらの組み合わせ、及び
（ｄ）エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）
を含む、哺乳類の対象における免疫応答を調節するための組成物。
【請求項２】
約５％〜約９０％の植物油を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
約１０％〜約７５％の植物油を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
約５０％の植物油を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
約１０％の植物油を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
植物油が、からし油である、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
（ａ）からし油及びグレープシードオイルから選択される植物油、
（ｂ）ビタミンＡ、及び
（ｃ）エピガロカテキン没食子酸塩（ＥＧＣＧ）
を含む、哺乳類の対象における免疫応答を調節するための組成物。
【請求項８】
約５％〜約９０％の植物油を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
約１０％〜約７５％の植物油を含む、請求項７又は８に記載の組成物。
【請求項１０】
約５０％の植物油を含む、請求項７〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
約１０％の植物油を含む、請求項７〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
植物油が、からし油である、請求項７〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記調節が、増強または抑制である、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
更に抗原を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【外国語明細書】
2020002158000001.pdf
2020002158000002.pdf
2020002158000003.pdf
2020002158000004.pdf