(57)【要約】【課題】肝癌及び肝臓の近傍に生じた癌を精度よく検出できる核医学的検査を提供する。【解決手段】  放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌のイメージング剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌のイメージング剤。
【請求項２】
前記肝癌が、原発性肝癌である、請求項１に記載のイメージング剤。
【請求項３】
前記肝癌が、転移性肝癌である、請求項１に記載のイメージング剤。
【請求項４】
非絶食下で投与することにより用いられる、請求項１乃至３いずれか一項に記載のイメージング剤。
【請求項５】
前記放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸が放射性フッ素で標識されたものである、請求項１乃至４いずれか一項に記載のイメージング剤。
【請求項６】
ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）に用いられる、請求項１乃至５いずれか一項に記載のイメージング剤。
【請求項７】
放射性フッ素標識トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸又はその薬学的に許容される塩が投与された被検体に対しポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）を行うことにより、前記被検体の肝臓又は肝臓近傍に生じた癌の描出像を含む画像データを生成するステップを含む、癌の撮像方法。
【請求項８】
肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌のイメージング剤を製造するための、放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）又はその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項９】
非絶食下で投与することにより用いられる、放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、癌のイメージング剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）による癌イメージングに関する。
【背景技術】
【０００２】
トランス−１−アミノ−３−［１８Ｆ］フルオロシクロブタンカルボン酸（１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）は、がん細胞のアミノ酸代謝を反映する剤として知られており、がん細胞の亢進した糖代謝を反映する２−［１８Ｆ］−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（１８Ｆ−ＦＤＧ）により描出が困難な前立腺がんを描出できるポジトロン断層撮影（positron emission tomography、ＰＥＴ）用診断剤として知られている（非特許文献１〜４）。
【０００３】
１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅは、がん細胞のアミノ酸代謝を反映するため、前立腺がんの描出以外に、転移性脳腫瘍、癌の早期骨転移のイメージングへの使用が提案されている（特許文献２、３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開ＷＯ９７／１７０９２号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ２０１６／１９４３７２号公報
【特許文献３】国際公開ＷＯ２０１７／０５１５１９号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Shuster D. et al, J. Nucl. Med. (2007), vol. 48, No.1, pp. 56-63
【非特許文献２】Shuster D. et al, Radiology (2011), vol. 259, No. 3, pp. 852-861
【非特許文献３】Oka S. et al, J Nucl Med.. (2007), vol. 48, No. 1, pp. 46-55
【非特許文献４】Inoue Y. et al, Asia Oceania J. Nucl. Med. Biol. (2014), vol. 2, No. 2, pp. 87-94
【非特許文献５】Shuster D. et al, J. Nucl. Med. (2014), vol. 55, No.12, pp. 1986-1992
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、肝臓に関しては、１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅは４時間以上絶食した被検体の正常肝臓及び正常膵臓に他の臓器よりも多く集積する。このため、肝臓及び肝臓の近傍に生じた癌を１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅにより描出することは困難と考えられていた。例えば、非特許文献５では、１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅにより正常な肝臓はホットスポット（放射能が相対的に高い領域）として描画される一方で、良性の肝腫瘍である肝血管腫はコールドスポット（放射能が相対的に低い領域）として描画されることが報告されているに過ぎず、肝臓及びその近傍に生じた悪性腫瘍（癌）を描出できることを示唆する開示はない。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ投与時の被検体の摂食状況に着目することで、放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）により、肝臓及び肝臓の近傍に生じた癌をイメージングできることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
したがって、本発明の一態様は、放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌のイメージング剤を提供するものである。
【０００９】
また、本発明の別の態様は、放射性フッ素標識トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸又はその薬学的に許容される塩が投与された被検体に対しポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）を行うことにより、前記被検体の肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌の描出像を含む画像データを生成するステップを含む、癌の撮像方法を提供するものである。
【００１０】
また、本発明のさらに別の態様は、肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌のイメージング剤を製造するための、放射性トランス−１−３−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）又はその薬学的に許容される塩の使用を提供するものである。
【００１１】
また、本発明のさらに別の態様は、非絶食下で投与することにより用いられる、放射性トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、癌のイメージング剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ投与時の被検体の摂食状況に着目し、正常肝臓に対する癌のコントラストを増強した画像、特に、肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌を描出した画像を提供し得る、新規な癌のイメージング剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例１で得られた担癌ラット（DU145：前立腺癌）モデルを用いたトランス−１−アミノ−３−［１８Ｆ］フルオロシクロブタンカルボン酸（１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）の体内分布を示すグラフである。各臓器において、左側の黒色棒は絶食下の集積量（単位：%ID/g）を示し、右側の白色棒は非絶食下の集積量（単位：%ID/g）を示す。
【図２】実施例２で得られた担癌ヌードマウス（ＧＬ−２６１細胞：脳腫瘍）モデルを用いた絶食下におけるトランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタン−１−［１４Ｃ］カルボン酸（１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）の体内分布を示すオートラジオグラムである。
【図３】実施例２で得られた担癌ヌードマウス（ＧＬ−２６１細胞：脳腫瘍）モデルを用いた非絶食下における１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの体内分布を示すオートラジオグラムである。
【図４】実施例３で得られた担癌ヌードマウス（HepG2細胞：肝癌細胞）モデルを用いた絶食下における１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの体内分布を示すオートラジオグラムである。
【図５】実施例３で得られた担癌ヌードマウス（HepG2細胞：肝癌細胞）モデルを用いた非絶食下における１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの体内分布を示すオートラジオグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明において「イメージング剤」とは、核医学的検査を目的として体内に投与される放射性医薬品を意味するものである。
【００１５】
本発明において核医学的検査としては、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）などが挙げられ、具体的には、イメージング剤を生体内に投与後、体内から放出される放射線をＰＥＴ装置、ＳＰＥＣＴ装置等で検出・画像化することにより、非侵襲的に病態の診断を可能にする検査を意味する。
【００１６】
本発明において「ホットスポット」とは、放射能集積が相対的に高い領域をいう。また、本発明において「コールドスポット」とは、放射能集積が相対的に低い領域をいう。
【００１７】
本発明のイメージング剤は、正常な肝臓に対するコントラストを増強して画像化し得る癌（悪性腫瘍）に用いることができ、肝癌に用いることができる。「肝臓の近傍に生じた癌」としては、例えば、胆道癌が挙げられる。
【００１８】
本発明において「肝癌」とは、肝臓の悪性腫瘍であり、肝細胞や胆管細胞が癌化して生じた肝細胞癌や肝内胆管癌などの原発性肝癌だけでなく、肝臓以外の組織細胞が癌化した癌細胞が肝臓に移動し、着床した転移性肝癌をも包含する。転移性肝癌の原発巣としては、例えば、胃癌、大腸癌、直腸癌、乳癌、腎癌、甲状腺癌、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、前立腺癌、肺小細胞癌、膵癌、脳腫瘍が挙げられる。
また、本発明において「胆道癌」とは、胆嚢癌及び肝外胆管癌を含むものである。
【００１９】
本発明において、「被検体」とは、核医学的検査の対象とされる生体を意味し、ヒト及び動物を包含する。
【００２０】
本発明において「非絶食下」とは、絶食していないことをいい、ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅが投与される被検体の体内にエネルギー源が摂取されている状態をいう。被検体がヒトの場合、たとえば、放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを投与開始前４時間以内に、食事等により栄養源を摂取したり、アミノ酸補助剤などが経口摂取若しくは点滴している状態であればよい。
一方、「絶食下」とは、放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの投与前に通常、摂取している食事（食餌）を摂取していない状態をいい、被検体がヒトの場合、たとえば、放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを投与する４時間以上前から、食事等により栄養源を摂取していないことをいう。
【００２１】
本発明のイメージング剤の有効成分は、放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ又はその薬学的に許容される塩である。放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅとしては、放射性同位元素で標識されたトランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタンカルボン酸（ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）であれば特に制限はないが、代表的には、放射性フッ素で標識された１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ（トランス−１−アミノ−３−［１８Ｆ］フルオロシクロブタンカルボン酸）が挙げられる。
【００２２】
放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅは、公知の方法で合成することができ、例えば、Journal of Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals, （1999）, vol. 42, pp.215-225、WO2008/75522の記載の方法を用いて得ることができる。
【００２３】
本発明において、「塩」とは、医薬として許容されるものであれば限定されない。例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸（グルクロン酸、ガラクツロン酸など）、α‐ヒドロキシ酸（クエン酸、酒石酸など）、アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸など）、芳香族酸（安息香酸、ケイ皮酸など）、スルホン酸（ｐ−トルエンスルホン酸、エタンスルホン酸など）などの有機酸；アミノ酸（グリシン、アルギニンなど）、アンモニア、第一級、第二級及び第三級アミン及び環状アミン（ピペリジン、モルホリン、ピペラジンなど）などの有機塩基；又は、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウム、水酸化マンガン、水酸化鉄、水酸化銅、水酸化亜鉛、水酸化アルミニウム、水酸化リチウムなどの無機塩基から誘導される塩が挙げられる。
【００２４】
本発明のイメージング剤は、非経口的手段によって投与されることが好ましく、剤形としては、注射剤がより好ましい。好ましくは、水溶液であり、適宜、ｐＨ調節剤、製薬学的に許容される可溶化剤、等張化剤、安定剤又は酸化防止剤などの追加成分を含んでいてもよい。
【００２５】
本発明のイメージング剤中の放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの含有量は、使用時に核医学検査が可能となる放射能量を有していれば特に限定されないが、例えば、使用時に５０〜７４０ＭＢｑの放射能量を有していれば、成人に対するＰＥＴ撮像に実用的である。
【００２６】
つづいて、本発明のイメージング剤の一例として、１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有するものを挙げて、その使用方法の一例について、以下に説明する。
まず、絶食下又は非絶食下にある被検体に対し、上記一例のイメージング剤を投与する。次いで、この被検体に対しポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）を行う。ＰＥＴ装置は、放射線検出器を備えており、放射性フッ素から放出された陽電子が崩壊して１８０度方向に生じる２本のγ線を検出し、電気信号に変える。そして、この電気信号から、被検体の肝臓又はその近傍の描出像を含む画像データを生成する。こうすることで、被検体の肝癌又は肝臓の近傍に生じた癌の撮像を行うことができる。得られた画像データに対して必要に応じて画像処理を加えることで、非絶食下の被検体においては肝癌及びその近傍に生じた癌がホットスポットに描出でき、絶食下の被検体においては肝癌及びその近傍に生じた癌がコールドスポットに描出できる。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。
【００２８】
（実施例１）担癌ラット（DU145：前立腺癌）での１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ集積における食事の影響（体内分布）
１．材料
（１）前立腺癌細胞浮遊液の調製
ヒト前立腺癌細胞ＤＵ１４５（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）の培養には、培地として５％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び抗生物質としてペニシリン１００単位／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ（インビトロジェン）を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（インビトロジェン）を用い、庫内ＣＯ２濃度５％、庫内温度３７℃に設定したインキュベーター内にて継代、維持した。培養容器には１７５ｃｍ２細胞培養用フラスコ（日本ベクトン・ディッキンソン）を用い、２回／週の頻度で継代した。移植当日、組織培養用フラスコから培地を除き、０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ・４Ｎａ含有０．２５％トリプシン溶液（３７℃）を入れ、５％ＣＯ２インキュベーター内（３７℃）に約５分間静置した。細胞が組織培養用フラスコより剥がれたら、０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ・４Ｎａ含有０．２５％トリプシン溶液と等量の培地（３７℃）を加えよく混和した。得られた細胞浮遊液を１５ｍＬ遠心チューブ（日本ベクトン・ディッキンソン）に入れ、室温、５００回転／分、５分間の条件で遠心分離した。上清除去後、遠心チューブに培地（３７℃）を入れ、細胞を浮遊した。倒立顕微鏡にて生細胞数を測定した後、任意の細胞濃度で培地に再浮遊した。等量のマトリゲル（日本ベクトン・ディッキンソン）と混和し、移植用細胞浮遊液とした。
【００２９】
（２）疾患モデルラットの作製
ヌードラット（Ｆ３４４／Ｎ  Ｊｃｌ−ｒｎｕ、雄、８週齢）をジエチルエーテルで全身麻酔し、側臥位で寝かせ、移植部位の剃毛及び７０％エタノールによる消毒を行った。ＤＵ１４５（０．１〜１．０×１０７個）を含む移植用細胞浮遊液を、２７Ｇニードルを装着した１ｍＬシリンジに吸引し、皮下接種した。マトリゲルが固形化したら、ニードルを抜き取り、ヌードラットをケージに戻した。これをドナーラットとした。移植８週目において、ドナーラットにケタミン（４０ｍｇ／ｍＬ）／キシラジン（４ｍｇ／ｍＬ）混合液を筋肉内投与（２ｍＬ／ｋｇ）することにより全身麻酔した。皮下腫瘍が形成された部位の剃毛及び７０％エタノールによる皮膚消毒を行った後、皮下腫瘍を摘出した。摘出した皮下腫瘍はクリオスタット用の替刃を用いて腫瘍を適当な大きさに切り出し（４〜５ｍｍ角）、移植用腫瘍ブロックとした。移植用腫瘍ブロックは、氷冷したマトリゲルとＰＢＳを等量混和した溶液に浸し、移植まで氷冷した。レシピエントとなるヌードラット（Ｆ３４４／Ｎ  Ｊｃｌ−ｒｎｕ、雄、８週齢）をジエチルエーテルで全身麻酔し、側臥位で寝かせ、左脇腹の剃毛及び７０％エタノールによる皮膚消毒を行った。外科用鋏を用いて０．５〜１．０ｃｍ皮膚を切開した後、１．０〜１．５ｃｍ皮下組織を剥離し、移植用ポケットを作製した。その移植用ポケットに、移植用腫瘍ブロック２個を各ヌードラットに移植した。切開創を医療用アロンアルファで接着し、ヌードラットをケージに戻した。移植後１５日目で実験に用いた。
【００３０】
（３）トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタン−１−［１８Ｆ］フルオロカルボン酸（１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）投与液の調製
WO2008/75522記載の方法に準じて調製した。投与液は、以下のように調整した。すなわち、１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ（１８５ＭＢｑ／２ｍＬ／バイアル）０．５ｍＬ（４６．２５ＭＢｑ）と生理食塩液１４．５ｍＬを混和し、投与液（３．０８ＭＢｑ／ｍＬ）とした。 
【００３１】
２．方法
ＤＵ１４５を皮下移植したヌードラット（上記１．（２）で作製した疾患モデルラット）は、絶食（１８時間以上、自由給水、Ｎ＝５）及び非絶食（自由給餌、自由給水、Ｎ＝３）とした。１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ投与前１５分前に、２７Ｇニードル付マイジェクターを用いて、ケタミン（４０ｍｇ／ｍＬ）／キシラジン（４ｍｇ／ｍＬ）混合液を筋肉内投与（２ｍＬ／ｋｇ）し、全身麻酔した。１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ投与液（上記１．（３）で調製した投与液）を、ヌードラットの体重１ｋｇ当り１．０ｍＬの用量で、２７Ｇニードル付マイジェクターを用いて尾静脈内投与した。１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ投与後６０分点にて、ヘパリン処理した１８Ｇニードルを装着した１０ｍＬシリンジを用いて腹大動脈より全血採血し、ヌードラットを屠殺した。外科用鋏を用いて解剖し、肝臓、筋肉等の臓器及び皮下腫瘍を摘出した。尾をラットから切り取り、残りを残全身とした。各臓器・組織（膀胱・尿以外）の重量を測定後、シングルチャネルアナライザー（応用光研工業株式会社）で各臓器・組織及び残全身の放射能を測定した。各臓器・組織及び残全身について、任意の時間点にて減衰補正した放射能（% of injected dose（%ID））を算出し、更に各臓器・組織の重量から%ID/gを求め、平均値±標準偏差を算出した。
【００３２】
３．結果
結果を図１に示す。図１より、肝臓への１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの非絶食下における集積は、絶食下における集積の約３７％に低下したのに対し、腫瘍への１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの非絶食下における集積は、絶食下における集積の約６０％に低下するにとどまった。したがって、肝臓に肝癌が存在する場合、非絶食下であれば１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを用いて肝癌をホットスポットとして描出できることが示唆された。
また、絶食下の腫瘍の１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの対肝臓集積比は、０．６であった。したがって、肝臓に肝癌が存在する場合、絶食下であれば１８Ｆ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを用いて肝癌をコールドスポットとして描出できるものと考えられた。
【００３３】
（実施例２）担癌ヌードマウス（ＧＬ−２６１細胞：脳腫瘍）でのトランス−１−アミノ−３−フルオロ−１−シクロブタン−１−［１４Ｃ］カルボン酸（１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）集積における食事の影響（オートラジオグラム）
１．材料
（１）脳腫瘍細胞浮遊液の調製
ウシ胎児血清を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、ｐＨ７．４、シグマアルドリッチ）５ｍＬに、５．０×１０５ｃｅｌｌｓのＧＬ−２６１細胞（ATCCから入手）を浮遊し、７５ｃｍ２組織培養フラスコ（ナルゲヌンク）に播種し、庫内温度３７℃、庫内ＣＯ２濃度５％に設定したインキュベータ内で７日間培養した。移植当日、組織培養用フラスコからＤＭＥＭを除き、０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ・４Ｎａ含有０．２５％トリプシン溶液（３７℃）を入れ、５％ＣＯ２インキュベーター内（３７℃）に約５分間静置した。細胞が組織培養用フラスコより剥がれたら、０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ・４Ｎａ含有０．２５％トリプシン溶液と等量の培地（３７℃）を加えよく混和した。得られた細胞浮遊液を１５ｍＬ遠心チューブ（イワキ）に入れ、遠心分離した。上清除去後、遠心チューブに培地（３７℃）を入れ、細胞を浮遊した。セルカウンターにて生細胞数を測定した後、２．０×１０８個／ｍＬの細胞濃度で培地に再浮遊し、移植用細胞浮遊液とした。
【００３４】
（２）疾患モデルマウスの作製
ヌードマウス（日本エスエルシー、ＫＳＮ−ｓｌｃ、雄、４週齢）に、ＧＬ−２６１細胞を約３．０×１０７個を含む移植用細胞浮遊液１５０μＬを、２１Ｇニードルを装着した１ｍＬシリンジに吸引し、背部に皮下接種し、ヌードマウスをケージに戻した。腫瘍が直径５ｍｍから１０ｍｍの大きさになるまで2週間程度の間、通常の飼育を行った。
【００３５】
（３）１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの調製
Nucl.Med.Biol.39,109-119記載の方法に準じて合成した１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの水溶液（１８．５ＭＢｑ／ｍＬ）を０．９％生理食塩液（大塚製薬）で５倍希釈して１８５ｋＢｑ／５０μＬの投与液とした。
【００３６】
２．方法
ＧＬ−２６１細胞を皮下移植したヌードマウス（上記１．（２）で作製した疾患モデルマウス）は、絶食（２０時間以上、自由給水、Ｎ＝１）及び非絶食（自由給餌、自由給水、Ｎ＝１）とした。１８５ｋＢｑ／５０μＬ／匹の用量で１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ溶液（上記１．（３）で調製した投与液）を尾静脈内投与し、投与後３０分点にて、ジエチルエーテル吸入により深麻酔した状態で、ヘパリン処理した２３Ｇニードルを装着した１ｍＬシリンジを用いて腹大動脈より全血採血し、ヌードマウスを屠殺した。液体窒素で全身凍結後、動物を１．５％カルボキシメチルセルロースで包埋し、フリーザー中のミクロトーム載物台に固定、粗削りの後、皮下腫瘍面、腎臓面、正中面の薄切切片（１５μｍ）を作製し、フリーザー中で約１週間乾燥させた。
乾燥後の切片は乾燥剤を入れた容器に移し常温に戻してから保護膜（４μｍ）を被覆し、イメージングプレート（ＢＵＳ−ＵＲ、富士フイルム製）と密着させ露出を行なった後、画像解析システム バイオイメージングアナライザー（ＢＡＳ５０００、富士フイルム製）を用いてオートラジオグラフィー画像を得た。肝臓と皮下腫瘍について各３か所ずつ関心領域（Region of Interest，ＲＯＩ）を囲み、（ＰＳＬ−ＢＫＧ）／ｍｍ２（１ｍｍ２当たりの光刺激発光、バックグラウンドで補正）を求め平均値±標準偏差を算出した。解析ソフトウェアは、ＴＩＮＡ Ｖｅｒ．２．０９（Ｒａｙｔｅｓｔ）を用いた。
【００３７】
３．結果
結果を表１並びに図２及び図３に示す。
【００３８】
【表１】
2020180049.tif 000002
【００３９】
表１より、ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの肝臓への集積量は絶食下では癌への集積量よりも高かったのに対し、非絶食下では癌への集積量よりも低かった。したがって、非絶食下であればｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを用いて肝癌をホットスポットとして描出できるものと考えられた。また、絶食下であればｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを用いて肝癌をコールドスポットとして描出できるものと考えられた。
【００４０】
（実施例３）担癌ヌードマウス（ＨｅｐＧ２細胞：肝癌細胞）での１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ集積における食事の影響（オートラジオグラム）
１．材料
（１）肝癌細胞浮遊液の調製
組織培養フラスコに１０％のウシ胎児血清とＬ−ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（３．５ｍＭ）を含むＤＭＥＭ（ｐＨ７．４、シグマアルドリッチ）を２０ｍＬ入れ、ＨｅｐＧ２細胞（理化学研究所 バイオリソースセンター細胞材料開発室から入手）を１．８×１０６ｃｅｌｌｓずつ播種し、庫内温度３７℃、ＣＯ２濃度５％に設定したインキュベーターで５日間培養した。移植当日、組織培養フラスコからＤＭＥＭを除き、Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ（−）、シグマアルドリッチ製）で洗浄後、０．０２％ＥＤＴＡを含む０．０５％トリプシン４ｍＬを馴染ませて約２／３量を取り除き、同インキュベーター内に５分置いて細胞を剥離し、ＰＢＳ（−）（シグマアルドリッチ製）１０ｍＬでピペッティングして細胞浮遊液を得た。Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒで細胞数を計測した後（４．４７×１０７ｃｅｌｌｓ）、遠心分離（室温、１５００回転／分、４分間）を行なった後ＰＢＳ（−）を取り除き、ＰＢＳ（−）０．３ｍＬで細胞をほぐし、移植用細胞浮遊液とした（８．９４×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）。
【００４１】
（２）疾患モデルマウスの作製
（１）で調製した肝癌細胞浮遊液を、ヌードマウス（日本ｓｌｃ、ＫＳＮ−ｓｌｃ、雄、４週齢）に、０．１ｍＬ（８．９４×１０６／匹）ずつ背部皮下注射により移植して、５週間、通常の飼育を行った。
【００４２】
（３）トランス−１−アミノ−３−フルオロシクロブタン−１−［１４Ｃ］カルボン酸（１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅ）の調製
Nucl.Med.Biol.39,109-119記載の方法に準じて合成した１４Ｃ−ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの水溶液（１８．５ＭＢｑ／ｍｌ）を０．９％生理食塩液（大塚製薬）で５倍希釈して１８５ｋＢｑ／５０μＬの投与液とした。
【００４３】
２．方法
ＨｅｐＧ２細胞を皮下移植したヌードマウス（上記１．（２）で作製した疾患モデルマウス）を使用した以外は、実施例２の方法と同様に行った。
【００４４】
３．結果
結果を表２並びに図４及び図５に示す。
【００４５】
【表２】
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【００４６】
表２より、ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅの肝臓への集積量は非絶食下では癌への集積量よりも低かった。したがって、非絶食下であればｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを用いて肝癌をホットスポットとして描出できるものと考えられた。
【００４７】
以上の結果から、放射性ｆｌｕｃｉｃｌｏｖｉｎｅを投与することで肝癌を描出できることが示唆された。  
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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