(57)【要約】【課題】  植物病害や動物ウイルス感染症に対して優れた効果を有し、安全性の高い薬剤を提供すること【解決手段】  発酵過程を経ない精製により得られるショウガまたはタケの精製物が、様々な植物病害に対して優れた防除効果を示すとともに、動物ウイルスに対する感染防御効果をも有することを見出した。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
発酵過程を経ない精製により得られるショウガまたはタケの精製物を含む、植物病害の防除剤。
【請求項２】
請求項１に記載の防除剤を植物に施用することを含む、植物病害の防除方法。
【請求項３】
発酵過程を経ない精製により得られるショウガまたはタケの精製物を含む、抗動物ウイルス剤。
【請求項４】
請求項３に記載の抗動物ウイルス剤を動物に投与することを含む、動物ウイルス感染症の予防、改善、または治療の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ショウガまたはタケの精製物を含む植物病害の防除剤、および当該防除剤を植物に施用することを含む植物病害の防除方法に関する。また、本発明は、ショウガまたはタケの精製物を含む抗動物ウイルス剤、および当該抗動物ウイルス剤を動物に投与することを含む動物ウイルス感染症の予防、改善、または治療の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
人類は食料や有用物質の生産の多くを植物に依存している。糸状菌病、細菌病、植物ウイルス病などの植物病害は植物の生産力を大きく損なう主要な要因のひとつであり、仮に、植物病害に対する保護を実施せずに栽培を行うと収穫高が70％減収すると予想されている。このように植物病害の防除による作物収量の損失の削減は、作物の大量栽培による増産に匹敵する効果を有している。
【０００３】
このため、植物病害から作物を保護するための、様々な防除剤が開発されてきた。例えば、糸状菌病や細菌病などの植物病原菌の感染による植物病害に対しては、抗生物質であるカスガマイシンやストレプトマイシンを主成分とする防除剤、ストロビルリン系殺菌剤（QoI剤）、コハク酸脱水素酵素阻害剤（SDHI剤）などの防除剤が利用されている。しかしながら、これら防除剤には、数年で耐性菌が発生し、病害防除が困難になるという問題が指摘されている。
【０００４】
また、植物ウイルス病の防除剤としては、日本においてレンテミンが農薬登録されているものの、特効薬となる化学農薬は存在しない（レンテミンは、野田食菌工業（株）の登録商標。農薬登録第15584号、第17774号、第19439号、第19440号）。このため、媒介生物の防除や弱毒ウイルスの接種など時間と手間をかけた耕種的防除を行って、植物ウイルス病の被害を軽減させているのが実情であり、植物ウイルス病に対して優れた効果を示す防除剤の開発が切望されている。植物ウイルス病の防除剤に関しては、例えば、アミノ酸発酵副生物、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、月桃抽出液の発酵により得られるリグニン分解物などが有効であるとの報告がある（特許文献１〜４）。
【０００５】
一方、動物ウイルスによるインフルエンザは、呼吸とともに体内に侵入したインフルエンザウイルスが、のど、気管支、肺へ感染することによって生じる急性炎症であり、高熱、倦怠感、頭痛、筋肉痛、関節痛などの全身症状を伴う。インフルエンザに対しては、ワクチンによる予防が行われているが、インフルエンザウイルスは変異しやすく、抗原性が変化するために、必ずしも効果が期待できない。また、ショック、アナフィラキシー様症状、急性散在性脳脊髄炎、ギラン・バレー症候群などの重大な副反応も報告されている。このため、安全かつ入手が容易な天然物やその抽出液から抗インフルエンザウイルス活性を示す物質の選抜が試みられており、例えば、月桃抽出液の発酵により得られるリグニン分解物が有効であるとの報告がある（特許文献５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第2013/065439号公報
【特許文献２】特開2014-5232号公報
【特許文献３】特許第5574266号公報
【特許文献４】国際公開第2017/125993号公報
【特許文献５】国際公開第2016/024359号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、植物病害や動物ウイルス感染症に対して優れた効果を有し、安全性の高い薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、発酵過程を経ない精製により得られるショウガまたはタケの抽出液の精製物が、様々な植物病害に対して優れた防除効果を示すとともに、抗動物ウイルス効果をも示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
従って、本発明は、ショウガまたはタケの精製物を利用した植物病害の防除および動物ウイルス感染症の予防、改善、治療に関するものであり、より詳しくは、以下を提供するものである。
【００１０】
（１）発酵過程を経ない精製により得られるショウガまたはタケの精製物を含む、植物病害の防除剤。
【００１１】
（２）（１）に記載の防除剤を植物に施用することを含む、植物病害の防除方法。
【００１２】
（３）発酵過程を経ない精製により得られるショウガまたはタケの精製物を含む、抗動物ウイルス剤。
【００１３】
（４）（３）に記載の抗動物ウイルス剤を動物に投与することを含む、動物ウイルス感染症の予防、改善、または治療の方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の植物病害の防除剤を用いれば、植物に含まれる成分によって、葉の萎縮や斑点の発生などの薬害を生じさせることなく植物病害を防除することが可能である。また、副作用なく、動物ウイルス感染症の予防、改善、治療などを行うことが可能である。従って、本発明によれば、高い安全性と優れた効果を兼ね備えた植物病害の防除剤および抗動物ウイルス剤を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ショウガ抽出液のベンサミアーナタバコにおけるトマトモザイクウイルス（ToMV）の感染抑制効果を示すグラフである。年号は、ショウガの産生年度を示す。
【図２】タケ抽出液のベンサミアーナタバコにおけるToMVの感染抑制効果を示すグラフである。
【図３】タケ抽出液およびショウガ抽出液のキュウリにおけるウリ類炭疽病菌の感染抑制効果を示すグラフである。
【図４】タケ抽出液およびショウガ抽出液のトマトにおける斑葉細菌病菌の感染抑制効果を示すグラフである。
【図５】タケ抽出液のチンゲンサイにおけるアブラナ科黒斑細菌病の感染抑制効果を示すグラフである。
【図６】タケ抽出液のチンゲンサイにおけるアブラナ科野菜類炭疽病菌の感染抑制効果を示すグラフである。
【図７】タケ抽出液およびショウガ抽出液のシロイヌナズナにおけるアブラナ科黒斑細菌病菌の感染抑制効果を示すグラフである。
【図８】タケ抽出液のシロイヌナズナにおけるアブラナ科野菜類炭疽病菌の感染抑制効果を示すグラフである。
【図９】タケ抽出液およびショウガ抽出液のイチゴにおけるイチゴ炭疽病菌の感染抑制効果を示すグラフである。
【図１０】タケ抽出液（鉄あり）のイヌ腎尿細管上皮細胞におけるインフルエンザウイルスの感染防御効果を示すグラフである。
【図１１】タケ抽出液（鉄なし）のイヌ腎尿細管上皮細胞におけるインフルエンザウイルスの感染防御効果を示すグラフである。
【図１２】ショウガ抽出液のイヌ腎尿細管上皮細胞におけるインフルエンザウイルスの感染防御効果を示すグラフである。
【図１３】タケ抽出液のマウスにおけるインフルエンザウイルスの感染防御効果を示すグラフである。
【図１４】タケ抽出液とインフルエンザウイルスを投与したマウスの摘出肺を病理学的解析した結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、発酵過程を経ない精製により得られるショウガまたはタケの精製物を含む、植物病害の防除剤および抗動物ウイルス剤に関する。
【００１７】
本発明において「ショウガ」とは、ショウガ科ショウガ属に属する植物を意味し、「タケ」とは、イネ科タケ亜科に属する植物（マダケ属、ナリヒラダケ属、トウチク属、インヨウチク属、オカメザサ属、ササ属、アズマザサ属、ヤダケ属、メダケ属、カンチク属、ホウライチク属、スズタケ属、シホウチク属、スキゾスタキュム属に属する植物）を意味する。
【００１８】
本発明の植物病害の防除剤および抗動物ウイルス剤の活性成分は、発酵過程を経ない精製により得ることができる。活性成分を得るためのショウガにおける精製は、例えば、ショウガの茎葉部分を搾汁機に投入し、得られた搾汁を遠心して夾雑物を除去後、上清を濾過することにより行うことができる。活性成分を得るためのタケにおける精製は、例えば、タケを粉砕して作製したタケ粉に水を添加し、一定時間、振とう・撹拌を行い、得られた液を遠心して夾雑物を除去後、上清を濾過することにより行うことができる。植物病害および動物ウイルス感染症に対して優れた効果を示すタケ由来の活性成分を得るためには、振とう・撹拌を行う際に、鉄を入れることが好ましい。
【００１９】
特許文献４（国際公開第2017/125993号公報）および特許文献５（国際公開第2016/024359号公報）に記載の方法では、活性成分であるリグニン分解物を得るために、精製工程において発酵を行っているが、本発明のショウガおよびタケ由来の活性成分は、発酵過程を経ない精製によって得ることができる。また、上記特許文献の精製工程においては、活性成分であるリグニン分解物を得るために鉄イオンとの接触（鉄製破砕機の利用）を要するが、本発明におけるショウガ由来の活性成分は、その抽出過程において、鉄イオンとの接触は必要ない。本発明におけるタケ由来の活性成分は、その抽出過程において、鉄イオンとの接触が好ましいが、植物病害の防除効果を示す活性成分を得るためには、必ずしも鉄イオンは必要ない。従って、上記特許文献の活性成分（リグニン分解物）と本発明における活性成分は異なると考えられる。
【００２０】
本発明の防除剤を適用する植物病害としては、植物ウイルス、病原性真菌、または病原性細菌により引き起こされる病害が含まれる。
【００２１】
本発明の防除剤を適用する植物ウイルスとしては、例えば、トバモウイルス属ウイルス、ポテックスウイルス属ウイルス、カルラウイルス属ウイルス、ククモウイルス属ウイルス、カルモウイルス属ウイルス、またはベゴモウイルス属ウイルスが挙げられる。
【００２２】
トバモウイルス属ウイルスとしては、例えば、トマトモザイクウイルス（ToMV）、タバコモザイクウイルス（TMV）、キュウリ緑斑モザイクウイルス（KGMMV）、トウガラシマイルドモットルウイルス（PMMoV）、スイカ緑斑モザイクウイルス（CGMMV）などが挙げられ、ポテックスウイルス属ウイルスとしては、例えば、オオバコモザイクウイルス（P1AMV）、ジャガイモXウイルス（PVX）などが挙げられ、カルラウイルス属ウイルスとしては、例えば、ジャガイモモザイクウイルス（PVM）が挙げられ、ククモウイルス属ウイルスとしては、例えば、キュウリモザイクウイルス（CMV）などが挙げられ、カルモウイルス属ウイルスとしては、例えば、メロンえそ斑点ウイルス（MNSV）などが挙げられ、ベゴモウイルス属ウイルスとしては、例えば、トマト黄化葉巻ウイルス（TYLCV）などが挙げられるが、これらに制限されない。
【００２３】
本発明の防除剤を適用する植物病原真菌としては、例えば、Colletotrichum属菌、Phytophthora属菌、Podosphaera属菌、Sphaerotheca属菌、Leveillula属菌、Oidium属菌、Oidiopsis属菌、Erysiphe属菌、Uncinula属菌、Botrytis属菌、Fusarium属菌、Pyricularia属菌、Fulvia属菌、Pseudocercospora属菌、Gibberella属菌、Monographella属菌、Pestalotiopsis属菌、Corynespora属菌、Puccinia属菌、Alternaria属菌、Plasmopara属菌、Bremia属菌、Peronospora属菌、Cochliobolus属菌、Rhizoctonia属菌、Sclerotinia属菌、Verticillium属菌、Venturia属菌、Monilinia属菌、Cercospora属菌、Leptosphaeria属菌が挙げられるが、これらに制限されない。
【００２４】
具体的な植物病原真菌としては、例えば、アブラナ科類炭疽病菌（Colletotrichum  higginsianum）、ウリ類炭疽病菌（Colletotrichum  orbiculare）、イチゴ炭疸病菌（Colletotorichum  acutatum、Colletotrichum  gloeosporioides種複合体；C.  aenigma、C.  fructicola、C.  siamense）、ダイコン炭疽病菌（Colletotrichum  incanum、Colletotrichum  dematium）、ブドウ晩腐病（Colletotrichum  gloeosporioides）、イネ科植物炭疽病菌（Colletotrichum  graminicola）、野菜・他の宿主植物の炭疽病菌（Colletotrichum  spp.）、ジャガイモ・トマト疫病菌（Phytophthora  infestans）、イチゴ疫病菌（Phytophthora  nicotianae、Phytophthora  cactorum、  Phytophthora  sp.）、サトイモ疫病菌（Phytophthora  colocasiae）、野菜・観賞植物・タバコ・他の宿主植物の疫病菌（Phytophthora  spp.）、イチゴうどんこ病菌（Podosphaera  aphanis、Sphaerotheca  aphanis、Sphaerotheca  humuli）、トマトうどんこ病菌（Leveillula  taurica、Oidium  sp.、Oidium  lycopersici、Oidium  neolycopersici）、キュウリうどんこ病菌（Sphaerotheca  fuliginea、Sphaerotheca  cucurbitae、Oidiopsis  sicula、Erysiphe  polygoni、Oidium  sp.）、オオムギ・コムギうどんこ病菌（Erysiphe  graminis）、ブドウうどんこ病菌（Erysiphe  necator、Uncinula  necator）、エンドウうどんこ病菌（Erysiphe  pisi）、カボチャうどんこ病菌（Sphaerotheca  cucurbitae、Oidium  citrulli）、ナスうどんこ病菌（Erysiphe  cichoracearum、Sphaerotheca  fuliginea、Oidiopsis  sicula）、野菜・観賞用植物・他の宿主植物のうどんこ病菌、トマト・イチゴ・キュウリ・野菜・ブドウ・他の宿主植物の灰色かび病菌（Botrytis  cinerea）、イチゴ萎黄病菌（Fusarium  oxysporum  f.sp．fragariae）、イネいもち病菌（Pyricularia  grisea（P.  oryzae））、トマト葉かび病菌（Fulvia  fulva）、トマトすすかび病菌（Pseudocercospora  fuligena）、コムギ赤かび病菌（Gibberella  zeae、Fusarium  avenaceum、Fusarium  culmorum、Fusarium  crookwellense、Monographella  nivalis）、チャ輪斑病菌（Pestalotiopsis  longiseta、Pestalotiopsis  theae）、ダイズ急性枯死症菌（Fusarium  tucumaniae、Fusarium  virguliforme）、キュウリ褐斑病菌（Corynespora  cassiicola）、オオムギ・コムギの黒さび病菌（Puccinia  graminis）、オオムギ・コムギの黄さび病菌（Puccinia  striiformis  Westendorp  var.  striiformis）、オオムギの小さび病菌（Puccinia  hordei  Otth）、コムギの赤さび病菌（Puccinia  recondita  Roberge  ex  Desmazieres）、ネギ類さび病菌（Puccinia  allii）、キク類白さび病菌（Puccinia  horiana  Hennings）、コーヒー・西洋なし・リンゴ・落花生・野菜・観賞用植物・他の宿主植物のさび病菌、ナシ黒斑病菌（Alternaria  alternata）、キャベツ黒すす病菌（Alternaria  brassicicola）、ハクサイ黒斑病菌（Alternaria  brassicae、Alternaria  brassicicola、Alternaria  japonica）、その他の野菜（例えば、キュウリ・アブラナ科野菜）・リンゴ・トマト・他の宿主植物の黒斑病菌（Alternaria  spp.）、ブドウべと病菌（Plasmopara  viticola）、レタスべと病菌（Bremia  lactucae）、キュウリべと病菌（Pseudoperonospora  cubensis）、ハクサイべと病菌（Peronospora  parasitica）、ダイズ・タバコ・タマネギ・他の宿主植物のべと病菌（Peronospora  spp.）、イネごま葉枯病菌（Cochliobolus  miyabeanus）、キュウリつる割病菌（Fusarium  oxysporum  f.  sp.  cucumerinum）、トマト萎ちょう病菌（Fusarium  oxysporum  f.  sp.  lycopersici）、イネばか苗病菌（Gibberella  fujikuroi）、キュウリ・ナスなどリゾクトニア苗立枯病菌（Rhizoctonia  solani）、トマト小粒菌核病菌（Sclerotinia  minor）、ジャガイモ半身萎ち��う病菌（Verticillium  albo-atrum、Verticillium  dahliae、Verticillium  nigrescens、Verticillium  tricorpus）、トマト輪紋病菌（Alternaria  solani）、野菜類菌核病菌（Sclerotinia  sclerotiorum）、リンゴ黒星病菌（Venturia  inaequalis）、モモ灰星病菌（Monilinia  fructicola）、ダイズ紫斑病菌（Cercospora  kikuchii）、テンサイ褐斑病菌（Cercospora  beticola）、コムギふ枯病菌（Leptosphaeria  nodorum）が挙げられるが、これらに制限されない。
【００２５】
本発明の防除剤を適用する植物病原細菌としては、例えばPseudomonas属菌、Erwinia属菌、Xanthomonas属菌、Ralstonia属菌、Streptomyces属菌、Clavibacter属菌、Agrobacterium属菌、Curtobacterium属菌、Acidovorax属菌、Burkholderia属菌が挙げられるが、これらに制限されない。
【００２６】
具体的な植物病原細菌としては、例えば、アブラナ科植物黒斑細菌病菌（Pseudomonas  syringae  pv.  maculicola、Pseudomonas  cannabina  pv.  alisalensis）、トマト斑葉細菌病菌（Pseudomonas  syringae  pv.  tomato）、レタス腐敗病菌（Pseudomonas  cichorii、  Pseudomonas  marginalis、Pseudomonas  viridiflava）、モモせん孔細菌病菌（Xanthomonas  arboricola  pv.  pruni、Pseudomonas  syringae  pv.  syringae、Brenneria  nigrifluens、Erwinia  nigrifluens）、アカクローバ斑点細菌病菌・アズキ褐斑細菌病菌・カンキツ褐斑細菌病菌など（Pseudomonas  syringae  pv.  syringae）、ダイズ斑点細菌病菌（Pseudomonas  savastanoi  pv.  glycinea）、キュウリ斑点細菌病菌（Pseudomonas  syringae  pv.  lachrymans）、タバコ野火病菌（Pseudomonas  syringae  pv.  tabaci）、エンドウつる枯細菌病菌（Pseudomonas  syringae  pv.  pisi）、キウイフルーツかいよう病菌（Pseudomonas  syringae  pv.  actinidiae）、ハクサイ・キャベツ・ダイコン・レタスなど軟腐病菌（Erwinia  carotovora）、イネ白葉枯病菌（Xanthomonas  oryzae  pv.  oryzae）、ダイズ葉焼病菌（Xanthomonas  campestris  pv.  glycinea、Xanthomonas  axonopodis  pv.  glycinea）、キャベツ・ブロッコリーなどアブラナ科植物黒腐病菌（Xanthomonas  campestris  pv.  campestris）、レタス斑点細菌病菌（Xanthomonas  axonopodis  pv.  vitians）、カンキツかいよう病菌（Xanthomonas  citri  subsp.  citri）、トマト・ナス・ピーマン・イチゴ・ショウガ青枯病菌（Ralstonia  solanacearum）、ジャガイモそうか病菌（Streptomyces  spp.）、トマトかいよう病菌（Clavibacter  michiganensis  subsp.  michiganensis）、キク科・バラ科植物など根頭がんしゅ病菌（Agrobacterium  tumefaciens）、メロン毛根病菌（Agrobacterium  rhizogenes）、ブドウ根頭がんしゅ病菌（Agrobacterium  vitis、Rhizobium  radiobacter）、インゲンマメ萎ちょう細菌病菌（Curtobacterium  flaccumfaciens  pv.  flaccumfaciens）、チューリップかいよう病菌（Curtobacterium  flaccumfaciens  pv.  oortii）、スイカ果実汚斑細菌病菌（Acidovorax  avenae  subsp.  citrulli）、イネ褐条病菌・トウモロコシ褐条病菌（Acidovorax  avenae  subsp.  avenae）、イネもみ枯細菌病菌（Burkholderia  glumae）、イネ苗立枯細菌病菌（Burkholderia  plantarii）、ジャガイモ黒あし病菌（Pectobacterium  carotovorum、Pectobacterium  atrosepticum）が挙げられるが、これらに制限されない。
【００２７】
本発明の防除剤を施用する植物は、上記病原が感染するものであれば特に制限はないが、例えば、トマト、タバコ、ナス、ピーマン、トウガラシ、ジャガイモなどのナス科植物、キュウリ、カボチャ、メロンなどのウリ科植物、イチゴ、リンゴ、ナシ、ウメ、モモなどのバラ科植物、チンゲンサイ、シロイヌナズナ、ハクサイ、キャベツ、コマツナなどのアブラナ科植物、ダイズなどのマメ科植物、イネ、コムギなどのイネ科植物、サトイモなどのサトイモ科植物などが挙げられる。このように本発明の防除剤は、ナス科植物、ウリ科植物、バラ科植物、アブラナ科植物、イネ科植物など広範囲に適用することができる。植物ウイルスと宿主植物との関係については、日本植物病名データベース（農業生物資源ジーンバンク）を参照のこと。
【００２８】
本発明の植物病害の防除剤においては、植物病害の防除効果が阻害されない限り、他の有効成分を含有していてもよい。例えば、植物病害に対する防除効果をさらに高めるため、あるいは、適用対象とする植物病害の範囲を広げるため、レンテミンなどの既知の薬剤と組み合わせて用いることができる。また、植物ウイルスは、虫媒感染する例もあることから、既知の殺虫剤、殺ダニ剤、抗菌剤などと組み合わせて用いることもできる。
【００２９】
本発明の植物病害の防除剤においては、植物病害の防除効果が阻害されない限り、他の任意成分を含んでもよい。他の任意成分としては、例えば、展着剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、増量剤などを挙げることができる。
【００３０】
本発明の防除剤の植物への施用方法は特に制限されず、例えば、散布、塗布、浸漬などが挙げられる。また、植物組織培養を行っている場合には、その培地への添加なども考えられる。本発明の防除剤が施用されている領域では非常に高い感染防除効果が認められることから、施用方法としては、散布や塗布などによる植物体の全体や葉への施用、種子や球根などへの浸漬が好ましい。
【００３１】
本発明の防除剤の剤型は、施用方法などに応じて各種の形態を採ることができる。例えば、乳剤、油剤、エアゾール、フロアブル剤などの液剤の他、水和剤、水溶剤、粉剤、粒剤、錠剤などが挙げられる。散布などにより植物体へ施用する場合には、液剤、または施用時に液状にすることができる剤型が好ましい。
【００３２】
施用量は、植物病害に対して防除効果を有する量であれば特に制限はなく、当業者であれば、適宜調整することができる。
【００３３】
本発明の防除剤の植物への施用時期は特に制限されないが、予防的な防除が最も有効である。また、防除剤の施用回数に、特に制限はない。
【００３４】
一方、本発明の抗動物ウイルス剤の対象とする動物ウイルスとしては、例えば、インフルエンザウイルス、鳥インフルエンザウイルス、豚コレラウイルス、ノロウイルス、エイズウイルス（HIV）などが挙げられる。
【００３５】
本発明の抗動物ウイルス剤を投与する動物は、動物ウイルスが感染する動物であれば特に制限はなく、動物ウイルスの種類に応じて、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギ、ニワトリ、ラット、マウスなどが挙げられる。
【００３６】
本発明の抗動物ウイルス剤においては、抗動物ウイルス効果が阻害されない限り、他の有効成分を含有していてもよい。例えば、他の抗動物ウイルス剤、ウイルス感染に伴う細菌感染や炎症に対処するための抗菌剤や抗炎症剤、あるいは痛みを抑制するための鎮痛剤などと組み合わせて用いることができる。
【００３７】
本発明の抗動物ウイルス剤においては、抗動物ウイルス効果が阻害されない限り、他の任意成分を含んでもよい。他の任意成分としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、増量剤などを挙げることができる。
【００３８】
本発明の抗動物ウイルス剤の動物への投与方法は特に制限されず、経口的あるいは非経口的に投与することができる。本発明の抗動物ウイルス剤の剤型は、投与方法などに応じて各種の形態を採ることができる。例えば、錠剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、液剤、注射剤などが挙げられる。
【００３９】
投与量は、抗動物ウイルス効果を有する量であれば特に制限はなく、医師などの当業者であれば、適宜調整することができる。投与量の範囲は、1日当たり、約3μl/kg体重〜約3ml/kg体重、好ましくは、約30μl/kg体重〜約300μl/kg体重である（100%抽出液換算）。希釈する場合や乾燥粉末を用いる場合は、上記100％抽出液の場合と同量の有効成分量となるように調整すればよい。ヒトに投与する場合、好ましくは、1日あたり1回、あるいは2から4回に分けて投与され、適当な間隔で繰り返すのが好ましい。
【００４０】
本発明の抗動物ウイルス剤は、天然成分であり、安全性が高いことから、医薬としての利用の他、飲食品として利用することも可能である。飲食品として用いる場合、当該飲食品は、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、病者用食品、食品添加物、あるいは動物用飼料であり得る。さらに、本発明の抗動物ウイルス剤は、研究目的で動物ウイルスの感染や増殖を抑制するための試薬であり得る。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４２】
［実施例１］ショウガ抽出液の精製
ショウガ科ショウガ属のショウガの茎葉部分を搾汁機に投入し、水を添加することなく、植物から抽出される液を回収し、遠心機（6000rpm、5分間）により夾雑物を除去した。次いで、得られた上清を濾紙および孔径0.22μmのフィルター（TPP社製）によって濾過した。
【００４３】
［実施例２］  ショウガ抽出液のベンサミアーナタバコにおけるトマトモザイクウイルス（ToMV）の感染抑制効果
実施例１で調製した抽出液のToMVに対する感染抑制効果を、ToMV-ベンサミアーナタバコ評価系により評価した。具体的には、ベンサミアーナタバコの葉に対して、終濃度0.01%のマイリノーを添加したショウガ抽出液の噴霧処理を行い、3日後、ToMVウイルスを接種した。
【００４４】
ウイルスの接種においては、ToMV（GFP発現ウイルス）のプラスミド「pTLBN.G3」（2μg）に対して、AmpliCap-MaxTM  T7  High  Yield  Message  Maker  Kitsを用いた転写合成を行い、これにより得られたRNA転写物を40倍に希釈し、本RNA転写物をベンサミアーナタバコ葉の2箇所に点滴(点滴量は、各箇所10μL）して、カーボランダムを用いて葉全体に塗布接種した。
【００４５】
ウイルスの接種から3日後に、GFPの蛍光斑点（ToMVの感染、増殖部位に一致する）をカウントし、ウイルスの感染抑制率を検定して植物抽出液の評価を行った。
【００４６】
その結果、強いウイルス感染抑制効果が認められた（図1）。
【００４７】
なお、感染抑制率は、以下の式から算出した。
感染抑制率（防除価）％＝100-{（処理植物の蛍光斑点数の平均）/（未処理植物の蛍光斑点数の平均）}×100
［実施例３］  タケ抽出液の精製
（１）鉄を添加したタケ抽出液
タケを粉砕して作製したタケ粉100gに対してミリQ水を250ml添加し、鉄塊を加えてタッパーにて24時間振とうした（25℃、120rpm）。抽出される液を回収し、ガーゼで濾した後、遠心機（6000rpm、5分間）により夾雑物を除去し、上清を濾紙および孔径0.22μmのフィルター（TPP社製）によって濾過した。
【００４８】
（２）鉄を添加しないタケ抽出液
タケを粉砕して作製したタケ粉50gに対してミリQ水を125ml添加し、500mlのバッフル付きフラスコに入れて24時間振とうした（25℃、150rpm）。抽出される液を回収し、ガーゼで濾した後、遠心機（6000rpm、5分間）により夾雑物を除去し、上清を濾紙および孔径0.22μmのフィルター（TPP社製）によって濾過した。
【００４９】
［実施例４］  タケ抽出液のベンサミアーナタバコにおけるToMVの感染抑制効果
タケを粉砕して作製したタケ粉に鉄を添加または無添加で抽出した液で処理したベンサミアーナタバコの第3葉に、カーボランダムを用いてToMV-GFPを接種し、3日後に接種葉のGFP蛍光のスポットを測定した。コントロールに対する感染抑制率（防除価）を算出した。
【００５０】
その結果、タケ抽出液はウイルスの感染を抑制したが、鉄を加えた方が抑制効果が高かった（図2）。
【００５１】
［実施例５］  タケ抽出液およびショウガ抽出液のキュウリにおけるウリ類炭疽病菌の感染抑制効果
植物材料として、キュウリ（品種：新北星）を土（くみあいニッピ園芸培土1号）に播種し、24℃で明時間16時間および暗時間8時間として栽培した。播種して14日間栽培したキュウリ苗を用いた。
【００５２】
キュウリ（品種：新北星）に、タケ抽出液（鉄あり）およびショウガ抽出液（0.1%アプローチBI添加）を茎葉散布した。各抽出液の散布から3日後、ウリ類炭疽病菌（5x105個/mL）を噴霧接種した。接種から7日後、接種葉をサンプリングし、qRT-PCR法により、ウリ類炭疽病菌のアクチン遺伝子(Co-ACT)の発現量を測定することでキュウリへの感染量を定量した。
【００５３】
サンプリングした植物体は液体窒素で凍結し、MaxwellTMRSC  simplyRNA  Tissue  Kit（Promega社製）を用いて全RNAを抽出した。続いて、PrimeScript  RT  reagent  Kit（タカラ社製）を用いて全RNAから一本鎖cDNAを合成した。さらに、SsoAdvancedTM  Universal  SYBRTM  Green  Supermix（バイオラッド社製）を用いて定量的RT-PCRを行った。また、定量的RT-PCRは、1×SsoAdvancedTM  Universal  SYBRTM  Green  Supermix、200nMのフォワードプライマーとリバースプライマーの反応液を、95℃で10秒間の変性ステップの後、95℃で5秒、65℃で20秒(CsEF1αについては、60℃で20秒)のステップを1サイクルとし、40サイクル行った。コントロールとして、抽出液を含まない展着剤（0.1%アプローチBI添加）のみを散布し、同様の定量を行った。コントロールの感染量を100としたときの相対感染病原菌量を示した。
【００５４】
各サンプル間の標準化は、キュウリで恒常的に発現しているCsEF1α遺伝子を用い、各サンプルにおける目的遺伝子の発現量をCsEF1α遺伝子の発現量で除することにより行った。
【００５５】
キュウリにおける各遺伝子の定量的RT-PCRに用いたプライマーの配列は以下の通りである。
【００５６】
Co-ACT(フォワードプライマー5'-CTCGTTATCGACAATGGTTC-3'／配列番号：1、リバースプライマー5'-GAGTCCTTCTGGCCCATAC-3'／配列番号：2)。
【００５７】
CsEF1α(フォワードプライマー5'-ACTGTGCTGTCCTCATTATTG-3'／配列番号：3、リバースプライマー5'-AGGGTGAAAGCAAGAAGAGC-3'／配列番号：4)。
【００５８】
その結果、コントロールと比較して、各抽出液に有意な感染抑制効果が認められた（図3）。
【００５９】
［実施例６］  タケ抽出液およびショウガ抽出液のトマトにおける斑葉細菌病菌の感染抑制効果
植物材料として、トマト（品種：レジナ）を土に播種し、24℃で明時間16時間および暗時間8時間として栽培した。土は、スーパーミックスA（サカタのタネ）、ホワイトバーミキュライト（A-2、旭工業株式会社）、および黒曜石パーライト（フヨーライト3号）を2：1：1で混合したものを用いた。
【００６０】
播種して17〜20日間栽培したトマト苗（品種：レジナ）に、タケ抽出液（鉄あり）およびショウガ抽出液（0.1%アプローチBI添加）を茎葉散布した。各抽出液の散布から3日後、Pseudomonas  syringae（1×108cfu/ml）を噴霧接種した。接種から3日後、接種葉をサンプリングし、実施例5と同様の方法で、qRT-PCR法により、Pseudomonas  syringaeのrpoD遺伝子（Ps-rpoD）の発現量を測定することでトマトへの感染量を定量した。ただし、RT-PCRの反応は、95℃で10秒間の変性ステップの後、95℃で5秒、60℃で20秒のステップを1サイクルとし、40サイクル行った。なお、コントロールとして、抽出液を含まない展着剤（0.1%アプローチBI添加）のみを散布し、同様の定量を行った。コントロールの感染量を100としたときの相対感染病原菌量を示した。
【００６１】
各サンプル間の標準化は、トマトで恒常的に発現しているSLTIP41遺伝子を用い、各サンプルにおける目的遺伝子の発現量をSLTIP41遺伝子の発現量で除することにより行った。
【００６２】
トマトにおける各遺伝子の定量的RT-PCRに用いたプライマーの配列は以下の通りである。
【００６３】
SLTIP41(フォワードプライマー5'-ATGGAGTTTTTGAGTCTTCTGC-3'／配列番号：5、リバースプライマー5'-GCTGCGTTTCTGGCTTAGG-3'／配列番号：6)。
その結果、コントロールと比較して、各抽出液において有意に感染抑制効果が認められた（図4）。
【００６４】
［実施例７］  タケ抽出液のチンゲンサイにおけるアブラナ科黒斑細菌病の感染抑制効果
植物材料として、アブラナ科植物のチンゲンサイ（品種：シャオパオ）を土に播種し、24℃で明時間16時間および暗時間8時間として栽培した。播種して10日間栽培したチンゲンサイを用いた。土は、スーパーミックスA（サカタのタネ）、ホワイトバーミキュライト（A-2、旭工業株式会社）、および黒曜石パーライト（フヨーライト3号）を2：1：1で混合したものを用いた。
【００６５】
チンゲンサイに、タケ抽出液（鉄あり、0.1%アプローチBI添加）を茎葉散布した。薬剤散布から2日後、チンゲンサイに黒斑細菌病菌（1×108cfu/ml）を噴霧接種した。接種した植物は湿室下に静置した。接種から3日後、接種葉をサンプリングし、実施例5と同様の方法で、qRT-PCR法により、黒斑細菌病菌のrpoD遺伝子（Psm-rpoD）の発現量を測定することでチンゲンサイへの感染量を定量した。ただし、RT-PCRの反応は、95℃で10秒間の変性ステップの後、95℃で5秒、60℃で20秒(BrACT2については、65℃で20秒)のステップを1サイクルとし、40サイクル行った。なお、コントロールとして、タケ抽出液を含まない展着剤（0.1%アプローチBI添加）のみを散布し、同様の定量を行った。コントロールの感染量を100としたときの相対感染病原菌量を示した。
【００６６】
各サンプル間の標準化は、チンゲンサイで恒常的に発現しているBrACT2遺伝子を用い、各サンプルにおける目的遺伝子の発現量をBrACT2遺伝子の発現量で除することにより行った。
【００６７】
チンゲンサイにおける各遺伝子の定量的RT-PCRに用いたプライマーの配列は以下の通りである。
【００６８】
Psm-rpoD(フォワードプライマー5'-CCGAGATCAAGGACATCAAC-3'／配列番号：7、リバースプライマー5'-GAGATCACCAGACGCAAGTT-3'／配列番号：8)
BrACT2(フォワードプライマー5'-GCCGAGGCTGATGACATT-3'／配列番号：9、リバースプライマー5'-CATGATGTCTTGGCCTACCA-3'／配列番号：10)。
【００６９】
その結果、コントロールと比較して、タケ抽出液において有意に感染抑制効果が認められた（図5）。
【００７０】
［実施例８］  タケ抽出液のチンゲンサイにおけるアブラナ科野菜類炭疽病菌の感染抑制効果
植物材料として、アブラナ科植物のチンゲンサイ（品種：シャオパオ）を土に播種し、24℃で明時間16時間および暗時間8時間として栽培した。播種して10日間栽培したチンゲンサイを用いた。土は、スーパーミックスA（サカタのタネ）、ホワイトバーミキュライト（A-2、旭工業株式会社）、および黒曜石パーライト（フヨーライト3号）を2：1：1で混合したものを用いた。
【００７１】
チンゲンサイに、タケ抽出液（鉄あり、0.1%アプローチBI添加）を茎葉散布した。薬剤散布から2日後、チンゲンサイにアブラナ科野菜類炭疽病菌（5×105胞子/ml）を噴霧接種した。接種した植物は湿室下に静置した。接種から5日後、接種葉をサンプリングし、実施例5と同様の方法で、qRT-PCR法により、アブラナ科野菜類炭疽病菌のアクチン遺伝子（Ch-ACT）の発現量を測ることでチンゲンサイへの感染量を定量した。ただし、RT-PCRの反応は、95℃で10秒間の変性ステップの後、95℃で5秒、65℃で20秒のステップを1サイクルとし、40サイクル行った。なお、コントロールとして、タケ抽出液を含まない展着剤（0.1%アプローチBI添加）のみを散布し、同様の定量を行った。コントロールの感染量を100としたときの相対感染病原菌量を示した。
【００７２】
各サンプル間の標準化は、チンゲンサイで恒常的に発現しているBrACT2遺伝子を用い、各サンプルにおける目的遺伝子の発現量をBrACT2遺伝子の発現量で除することにより行った。
【００７３】
チンゲンサイにおける各遺伝子の定量的RT-PCRに用いたプライマーの配列は以下の通りである。
【００７４】
Ch-ACT(フォワードプライマー5'-CTCGTTATCGACAATGGTTC-3'／配列番号：11、リバースプライマー5'-GAGTCCTTCTGGCCCATAC-3'／配列番号：12)。
その結果、コントロールと比較して、抽出液において有意に感染抑制効果が認められた（図6）。
【００７５】
［実施例９］  タケ抽出液およびショウガ抽出液のシロイヌナズナにおけるアブラナ科黒斑細菌病菌の感染抑制効果
植物材料として、アブラナ科植物シロイヌナズナ（生態型：コロンビア）を土に播種し、22℃で24時間の明暗サイクルを明時間12時間および暗時間12時間として栽培した。土は、スーパーミックスA（サカタのタネ）、ホワイトバーミキュライト（A-2、旭工業株式会社）、および黒曜石パーライト（フヨーライト3号）を2：1：1で混合したものを用いた。播種して1週間後に1鉢当たり5個体になるように植え替えを行い、同条件下でさらに3週間栽培したシロイヌナズナを用いた。
【００７６】
シロイヌナズナに、タケ抽出液（鉄あり）およびショウガ抽出液（0.1%アプローチBI添加）を茎葉散布した。薬剤散布から2日後、シロイヌナズナに黒斑細菌病菌（1×108cfu/ml）を噴霧接種した。接種した植物は湿室下に静置した。接種から3日後、接種葉をサンプリングし、実施例5と同様の方法で、qRT-PCR法により、黒斑細菌病菌のrpoD遺伝子（Psm-rpoD）の発現量を測定することでシロイヌナズナへの感染量を定量した。ただし、RT-PCRの反応は、95℃で10秒間の変性ステップの後、95℃で5秒、60℃で20秒のステップを1サイクルとし、40サイクル行った。なお、コントロールとして、抽出液を含まない展着剤（0.1%アプローチBI添加）のみを散布し、同様の定量を行った。コントロールの感染量を100としたときの相対感染病原菌量を示した。
【００７７】
各サンプル間の標準化は、シロイヌナズナで恒常的に発現しているCBP20遺伝子を用い、各サンプルにおける目的遺伝子の発現量をCBP20遺伝子の発現量で除することにより行った。
【００７８】
シロイヌナズナにおける各遺伝子の定量的RT-PCRに用いたプライマーの配列は以下の通りである。
【００７９】
CBP20(At5g44200;フォワードプライマー5'-TGTTTCGTCCTGTTCTACTC-3'／配列番号：13、リバースプライマー5'-CCCATTGTCTTCCTTCTTG-3'／配列番号：14)。
その結果、コントロールと比較して、各抽出液において有意に感染抑制効果が認められた（図7）。
【００８０】
［実施例１０］  タケ抽出液のシロイヌナズナにおけるアブラナ科野菜類炭疽病菌の感染抑制効果
植物材料として、アブラナ科植物シロイヌナズナ（生態型：コロンビア）を土に播種し、22℃で24時間の明暗サイクルを明時間12時間および暗時間12時間として栽培した。土は、スーパーミックスA（サカタのタネ）、ホワイトバーミキュライト（A-2、旭工業株式会社）、および黒曜石パーライト（フヨーライト3号）を2：1：1で混合したものを用いた。播種して1週間後に1鉢当たり5個体になるように植え替えを行い、同条件下でさらに3週間栽培したシロイヌナズナを用いた。
【００８１】
シロイヌナズナに、タケ抽出液（鉄あり、0.1%アプローチBI添加）を茎葉散布した。薬剤散布から2日後、シロイヌナズナにアブラナ科野菜類炭疽病菌（5×105胞子/ml）を噴霧接種した。接種した植物は湿室下に静置した。接種から5日後、接種葉をサンプリングし、実施例5と同様の方法で、qRT-PCR法により、アブラナ科野菜類炭疽病菌のアクチン遺伝子（Ch-ACT）の発現量を測ることでシロイヌナズナへの感染量を定量した。ただし、RT-PCRの反応は、95℃で10秒間の変性ステップの後、95℃で5秒、65℃で20秒(CBP20については、60℃で20秒)のステップを1サイクルとし、40サイクル行った。なお、コントロールとして、抽出液を含まない展着剤（0.1%アプローチBI添加）のみを散布し、同様の定量を行った。コントロールの感染量を100としたときの相対感染病原菌量を示した。
【００８２】
各サンプル間の標準化は、シロイヌナズナで恒常的に発現しているCBP20遺伝子を用い、各サンプルにおける目的遺伝子の発現量をCBP20遺伝子の発現量で除することにより行った。
【００８３】
その結果、コントロールと比較して、抽出液において有意に感染抑制効果が認められた（図8）。
【００８４】
［実施例１１］  タケ抽出液およびショウガ抽出液のイチゴにおけるイチゴ炭疽病菌の感染抑制効果
イチゴ（品種：女峰）に、タケ抽出液（鉄あり）およびショウガ抽出液（0.1%アプローチBI添加）を茎葉散布した。各抽出液の散布から3日後、イチゴ炭疽病菌（5x105個/mL）を噴霧接種した。接種から6日後、病徴の調査によりイチゴ炭疽病菌（Colletotrichum  fructicola）のイチゴへの感染量を評価した。なお、コントロールとして、抽出液を含まない展着剤（0.1%アプローチBI添加）のみを散布し、同様の評価を行った。
【００８５】
発病度は以下の式で表される。
発病度=｛（1n1+2n2+3n3+4n4+5n5）/（5×調査数）｝×100
発病調査は発病程度を以下の5つに区分して調査した。
0：病徴なし、1：微小斑点、2：葉の25％未満の面積に病斑が認められる、3：葉の25％以上50％未満の面積に病斑が認められる、4：葉の50％以上の面積に病斑が認められるまたは葉柄が折れる、5：枯死
n1からn5は個体数
防除価は以下の図式で表される。
防除価=｛1-処理区の発病度/無処理区の発病度）｝×100
その結果、コントロールと比較して、各抽出液において有意に感染抑制効果が認められた（図9）。
【００８６】
［実施例１２］タケ抽出液およびショウガ抽出液のイヌ腎尿細管上皮細胞におけるインフルエンザウイルスの感染防御効果
実施例１および３と同様に、タケ抽出液およびショウガ抽出液を得た。ヒトインフルエンザウイルスPR8[A/PUERTORICO/8/34（H1N1）]のTCID50=2.81×106/mlのウイルス液と等量の抽出液を室温にて30分反応させた後にMDCK細胞（イヌの腎尿細管上皮細胞）に感染させ、感染48時間後に結果を判定した。判定は目視にて行い、細胞変性効果（cytopathic  effect;  CPE）の有無で判定を行った。抽出液の濃度はタケ抽出液およびショウガ抽出液共に100％、50％、30％、10％、5％とした。
【００８７】
タケ抽出液（鉄あり）は、5%、10％、30％、50％のものでは感染防除効果が認められた（図10上段）。100％の抽出液は、ウイルスの有無に関わらず細胞変性効果が認められ、高濃度の抽出液自体の障害性と考えられた。タケ抽出液（鉄なし）は、感染防除効果が認められなかった（図11）。
【００８８】
ショウガ抽出液は、5%および10%のものでは細胞変性効果が認められたが、30％、50％のものでは感染防除効果が認められた（図12上段）。100％のものはウイルスの有無に関わらず弱い細胞変性が認められ、高濃度の抽出液自体の障害性と考えられた。
【００８９】
［実施例１３］  タケ抽出液のマウスにおけるインフルエンザウイルスの感染防御効果
タケ抽出液（鉄ありおよび鉄なし）を使用した。ヒトインフルエンザウイルスPR8[A/PUERTORICO/8/34（H1N1）]のTCID50=2.4×106/mlのウイルス液と等量の抽出液および対照群としてUltra  Pure  Distilled  Water（UPDW）を等量混合し、室温にて30分反応させた。その後、マウス（C57BL）を準備し、インフルエンザウイルスと抽出液およびUPDWの混合液を1匹あたり30μlずつ、麻酔下に経鼻投与で感染させ、体重、死亡までの期間を測定した。人道的エンドポイントとして体重が20％以上減少した個体は安楽死させ、生存期間を記載し、マウスを解剖し、肺を摘出し、肺炎の状態について評価を行い、病理学的に感染が成立しているか検討した。
【００９０】
タケ抽出液（鉄なし）で濃度20%の群（n=4）、タケ抽出液（鉄あり）で濃度20%の群（n=4）、対照群（n=4）を設定し感染実験を行った。その結果、対照群は4匹中2匹が死亡し、タケ抽出液（鉄なし）群も4匹中2匹が死亡し、タケ抽出液（鉄あり）群は4匹全てが生存していた（図13）。
【００９１】
摘出した肺について病理学的解析を行ったところ、対照群とタケ抽出液（鉄なし）群には高度な肺炎が確認されたが、タケ抽出液（鉄あり）群では肺炎像は認められなかった（図14）。タケ抽出液（鉄あり）がインフルエンザウイルスの感染を抑制し、肺炎の発症を防いだことでマウスの予後が改善したと考えられた。
【産業上の利用可能性】
【００９２】
上記の通り、本発明の防除剤は、植物に含まれる成分を利用して、植物病原菌および動物ウイルスに対して優れた感染抑制効果を示すことができる。このため、安全性と効果を兼ね備えた農薬や医薬などとして貢献しうるものである。
【配列表フリーテキスト】
【００９３】
配列番号：１〜１４
＜２２３＞プライマー配列
【図１】
2020152695.tif 000002
【図２】
2020152695.tif 000003
【図３】
2020152695.tif 000004
【図４】
2020152695.tif 000005
【図５】
2020152695.tif 000006
【図６】
2020152695.tif 000007
【図７】
2020152695.tif 000008
【図８】
2020152695.tif 000009
【図９】
2020152695.tif 000010
【図１０】
2020152695.tif 000011
【図１１】
2020152695.tif 000012
【図１２】
2020152695.tif 000013
【図１３】
2020152695.tif 000014
【図１４】
2020152695.tif 000015
【配列表】
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