(57)【要約】      （修正有）【課題】ろ過滅菌に適し、ドラッグデリバリーシステムナノ粒子に適用するのに最適な粒子径を有するナノ粒子の提供。【解決手段】難水溶性生理活性化合物と、添加物質とを少なくとも含有し、Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｎ  Ｆａｃｔｏｒ（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が次式、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０、を充たし、平均体積基準粒子径が２００ｎｍ以下であり、前記難水溶性生理活性化合物が、前記添加物質により被覆されているナノ粒子である。前記平均体積基準粒子径が５ｎｍ以上１５０ｎｍ以下である態様が好ましく、前記（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦０．６、を充たす態様がより好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
難水溶性生理活性化合物と、添加物質とを少なくとも含有し、
Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｎ  Ｆａｃｔｏｒ（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が次式、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０、を充たし、
平均体積基準粒子径が２００ｎｍ以下であり、前記難水溶性生理活性化合物が、前記添加物質により被覆されていることを特徴とするナノ粒子。
【請求項２】
前記平均体積基準粒子径が５ｎｍ以上１５０ｎｍ以下である、請求項１に記載のナノ粒子。
【請求項３】
前記（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦０．６、を充たす、請求項１から２のいずれかに記載のナノ粒子。
【請求項４】
前記難水溶性生理活性化合物が、キナーゼ阻害剤及びポリペプチドから選択される、請求項１から３のいずれかに記載のナノ粒子。
【請求項５】
前記添加物質が、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、及び脂肪酸から選択される、請求項１から４のいずれかに記載のナノ粒子。
【請求項６】
前記添加物質が、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリソルベート８０、及びステアリン酸から選択される、請求項１から５のいずれかに記載のナノ粒子。
【請求項７】
前記難水溶性生理活性化合物が、医薬化合物である、請求項１から６のいずれかに記載のナノ粒子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載のナノ粒子を含むことを特徴とする医薬。
【請求項９】
請求項１から７のいずれかに記載のナノ粒子を製造する方法であって、
前記難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する溶液を、内径が１．０ｍｍ以下である孔を１以上有する吐出孔から、前記添加物質を含有する前記難水溶性生理活性化合物に対する貧溶媒中に吐出する工程を含むことを特徴とするナノ粒子の製造方法。
【請求項１０】
前記溶液に振動を付与して前記溶液を前記吐出孔から吐出する、請求項９に記載のナノ粒子の製造方法。
【請求項１１】
前記吐出孔から吐出される前記難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する液が流動されている、請求項９から１０のいずれかに記載のナノ粒子の製造方法。
【請求項１２】
前記難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する液の流動の速度が０．３ｍ／ｓ以上である、請求項１１に記載のナノ粒子の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナノ粒子及びナノ粒子の製造方法、並びに医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、疾患部位への効率的で安全に薬効成分を投与する技術として、ドラッグデリバリーシステムに関する研究が盛んにおこなわれている。その中でも、薬効成分を血管内へ送達するために、薬効成分を粒子径が数百ｎｍ以下のナノ粒子の需要が高まっている。
さらに、通常、医薬品は滅菌処理が必要となる場合が多く、複数の滅菌処理方法があるが、孔径０．２２μｍフィルターによるフィルタリング滅菌処理が簡便であるとされているため、ナノ粒子を２００ｎｍ以下の粒子径にすることが求められている。
【０００３】
また、最近は、ポリペプチドや分子標的薬であるキナーゼ阻害剤に対する研究が盛んに行われている。
例えば、ポリペプチドやキナーゼ化合物は難水溶性であることが多く、ナノ粒子化させることで効率良く体内に届けるために、ポリペプチドやキナーゼ化合物を界面活性剤などの表面安定化剤を用いて製造する方法が提案されている（例えば、特許文献１及び２参照）。
さらに、単純にナノ粒子化させるだけではなく、特定の粒子径である事で、効率良く疾患に効く事も知られている。例えば、ＥＰＲ効果のように、がん組織の炎症部位の新生血管は不完全であることから、その周囲の血管内皮細胞間には数百ｎｍ程度の隙間が空いており、１００ｎｍ程度のサイズに制御されたナノ粒子ががん組織に選択的に集積されることが知られている。つまり、ドラッグデリバリーシステムには、滅菌フィルターを通過し、かつ、特定の粒子径に制御されたナノ粒子が必要となる。
【０００４】
また、ナノ粒子の製造方法としては、例えば、特定の粒度分布の粒子を得るために、液柱共鳴法を用いた方法が提案されている（例えば、特許文献３参照）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ろ過滅菌に適し、ドラッグデリバリーシステムナノ粒子に適用するのに最適な粒子径を有するナノ粒子を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明のナノ粒子は、難水溶性生理活性化合物と、添加物質とを少なくとも含有し、Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｎ  Ｆａｃｔｏｒ（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が次式、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０、を充たし、平均体積基準粒子径が２００ｎｍ以下であり、前記難水溶性生理活性化合物が、前記添加物質により被覆されている。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によると、ろ過滅菌に適し、ドラッグデリバリーシステムナノ粒子に適用するのに最適な粒子径を有するナノ粒子を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、液柱共鳴液滴吐出手段の一例を示す断面図である。
【図２】図２は、ナノ粒子の製造装置の一例の概略図である。
【図３】図３は、ナノ粒子の製造装置の他の一例の概略図である。
【図４Ａ】図４Ａは、ナノ粒子の製造装置の他の一例の概略図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、図４Ａのナノ粒子の製造装置の溶液吐出手段付近の拡大図である。
【図５】図５は、ナノ粒子の製造装置の他の一例の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
（ナノ粒子）
本発明のナノ粒子は、難水溶性生理活性化合物と、添加物質とを少なくとも含有し、Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｎ  Ｆａｃｔｏｒ（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が次式、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０、を充たし、平均体積基準粒子径が２００ｎｍ以下であり、前記難水溶性生理活性化合物が、前記添加物質により被覆されており、更に必要に応じてその他成分を有する。
【００１０】
本発明者らは、ろ過滅菌に適し、ドラッグデリバリーシステムナノ粒子に適用するのに最適な粒子径を有するナノ粒子について検討したところ、以下の知見を得た。
従来技術では、ポリ乳酸グリコール酸のような材料のナノ粒子は、ナノ粒子化後の粒子径が安定（均一）な場合が多いが、難水溶性の前記ポリペプチドや前記キナーゼ阻害剤の場合、ナノ粒子を安定（均一）化させた粒子とすることが難しいという問題がある。
【００１１】
本発明者らは、検討を重ねた結果、特定の添加物質を用いることにより、難水溶性生理活性化合物においても特定の粒子径及び粒度分布を持つ粒子とすることができることを見出した。
【００１２】
＜ナノ粒子の特性＞
＜＜平均体積基準粒子径＞＞
前記ナノ粒子の平均体積基準粒子径は、２００ｎｍ以下であり、５ｎｍ以上１５０ｎｍ以下が好ましく、１０ｎｍ以上１１０ｎｍ以下がより好ましく、１０ｎｍ以上１００ｎｍ以下がさらに好ましい。前記ナノ粒子の平均体積基準粒子径が２００ｎｍ以下であると、ろ過滅菌フィルターを用いても詰まることなく、簡便にろ過滅菌を行うことができる。
【００１３】
前記ろ過滅菌とは、被滅菌物に存在する微生物などの菌をろ過によって除去する方法で、通常０．２２μｍ径を有するメンブレンフィルターを用いる。そのため、少なくともナノ粒子であることが必要である。ナノ粒子とは、具体的には、例えば、５ｎｍ以上１０００ｎｍ未満の粒子のことを意味する。さらに、滅菌効率を上げるためには、２００ｎｍ以下のナノ粒子を作製する必要がある。さらに好ましくは１５０ｎｍ以下である。
【００１４】
前記ナノ粒子の平均体積基準粒子径は、動的光散乱法による濃厚系アナライザー（「ＦＰＡＲ−１０００」、大塚電子株式会社製）を用いて測定することができる。
【００１５】
＜＜Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｎ  Ｆａｃｔｏｒ（Ｒ．Ｓ．Ｆ）＞＞
前記ナノ粒子は、Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｎ  Ｆａｃｔｏｒ（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が、下記式（１）を満たす。
０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０    ・・式（１）
ここで、（Ｒ．Ｓ．Ｆ）は、（Ｄ９０−Ｄ１０）／Ｄ５０で定義される。
Ｄ９０は、累積粒度分布の小粒子側からの累積９０体積％を表し、Ｄ５０は、累積粒度分布の小粒子側からの累積５０体積％を表し、Ｄ１０は、累積粒度分布の小粒子側からの累積１０体積％を表す。
【００１６】
前記（Ｒ．Ｓ．Ｆ）としては、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０であり、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦０．６が好ましい。前記（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が、１．０よりも大きいと、滅菌フィルターを通らない大粒子が増えて滅菌率が低下する。
【００１７】
（Ｒ．Ｓ．Ｆ）は、動的光散乱法による濃厚系アナライザー（「ＦＰＡＲ−１０００」、大塚電子株式会社製）を用いて測定することができる。
【００１８】
−難水溶性生理活性化合物−
前記難水溶性生理活性化合物は、水／オクタノール分配係数（ｌｏｇＰ値）が３以上である化合物を意味する。
水／オクタノール分配係数（ｌｏｇＰ値）とは、水とオクタノールの２相系において、ある化合物が水相に溶解している濃度とオクタノール相に溶解している濃度との比率を意味し、通常Ｌｏｇ１０（オクタノール相の濃度／水相の濃度）で表される。
前記水／オクタノール分配係数（ｌｏｇＰ値）の測定方法としては、当該技術分野において公知の任意の方法を用いることができ、例えば、ＪＩＳ  Ｚ  ７２６０−１０７に記載された方法などが挙げられる。
【００１９】
前記難水溶性生理活性化合物としては、水／オクタノール分配係数（ｌｏｇＰ値）が３以上であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬化合物などが挙げられる。医薬化合物としては、例えば、キナーゼ阻害剤、ポリペプチドなどが挙げられる。
前記キナーゼ阻害剤としては、例えば、ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、ボスニチブ、バンデタニブ、アレクチニブ、ロルラチニブ、アベマシクリブ、チロホスチンＡＧ４９４、ソラフェニブ、ダサチニブ、ラパチニブ、イマチニブ、モテサニブ、レスタウルチニブ、タンズチニブドルソモルヒン、アキシチニブ、４−ベンジル−２−メチル−１，２，４−チアジアゾリジン−３，５−ジオンなどが挙げられる。
前記ポリペプチドとしては、例えば、シクロスポリン、バンコマイシン、テイコプラニン、ダプトマイシンなどが挙げられる。
その他の難水溶性生理活性化合物としては、例えば、ケルセチン、テストステロン、インドメタシン、トラニラスト、タクロリムス等があげられる。これらの中でも、キナーゼ阻害剤又はポリペプチドであることが好ましい。
【００２０】
前記難水溶性生理活性化合物の含有量としては、ナノ粒子の質量に対して、０．００１質量％以上７５質量％以下が好ましく、０．１質量％以上５０質量％以下がより好ましい。
【００２１】
−添加物質−
前記添加物質としては、前記ナノ粒子が凝集したり結晶成長することを抑制することができれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、４級アンモニウム塩、レシチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、グリセリド、脂肪酸、ステロイド等が挙げられる。これらの中でも、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、グリセリド、脂肪酸、ステロイド、リン脂質が好ましい。さらには、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステルと脂肪酸がより好ましい。具体的には、ステアリン酸ポリオキシル４０とポリソルベート８０とステアリン酸が好ましい。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
前記添加物質を含有することにより、前記添加物質は前記難水溶性生理活性化合物の表面を被覆し、難水溶性生理活性化合物が水溶性化して生体内に取り込まれやすくすることができる。前記被覆は、難水溶性生理活性化合物が水溶性化して生体内に取り込まれやすく程度の被覆であればよく、完全被覆であっても、部分被覆であってもよい。また、前記添加物質を含有することにより、ナノ粒子同士の凝集を防止すること、及び難水溶性化合物の結晶成長を抑制すること、ができる。
【００２２】
前記添加物質の局在としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記難水溶性生理活性物質の表面などが挙げられる。
さらに、前記添加物質としては、前記難水溶性生理活性物質の表面を被覆するように存在することが好ましい。
【００２３】
前記添加物質の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ナノ粒子全量に対して５０質量％以下が好ましく、より好ましくは１０質量％以下であり、さらに好ましくは、５質量％以下である。
【００２４】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２５】
（医薬）
前記医薬は、前記ナノ粒子を含有し、更に必要に応じて、分散剤などのその他の成分を含有する。
【００２６】
前記医薬としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、カプセル剤、坐剤、他の固形の剤形等；鼻内用乃至肺投与用のエアロゾル等；注射用剤、眼内用剤、耳内用剤、経口用剤等の液剤などが挙げられる。
また、前記ナノ粒子においては、例えば、分散剤、添加剤等を含有することにより、機能性を付与した機能性微粒子を含む医薬組成物として製造することができる。
【００２７】
前記機能性微粒子としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、即時放出性微粒子、徐放性微粒子、ｐＨ依存放出性微粒子、ｐＨ非依存放出性微粒子、腸溶性コーティング微粒子、放出制御コーティング微粒子、ナノ結晶含有微粒子などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００２８】
前記医薬組成物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、大腸デリバリー製剤、リピッドマイクロスフェア製剤、ドライエマルション製剤、自己乳化型製剤、ドライシロップ、経鼻投与用粉末製剤、経肺投与用粉末製剤、ワックスマトリックス製剤、ハイドロゲル製剤、高分子ミセル製剤、粘膜付着型製剤、胃内浮遊製剤、リポソーム製剤、固体分散体製剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
なお、前記医薬としては、医薬組成物であってもよいし、原薬であってもよい。
【００２９】
＜分散剤＞
前記分散剤としては、ナノ粒子における添加物質と同様のものを用いることができる。前記分散剤は、前記難水溶性生理活性化合物の分散に好適に用いることができる。
前記分散剤としては、低分子量の分散剤であってもよいし、高分子量の分散剤ポリマーであってもよい。
前記低分子量の分散剤とは、重量平均分子量が１５，０００未満の化合物を意味し、高分子量の分散剤ポリマーとは、１つ以上のモノマーの間に繰り返しの共有結合を含み、重量平均分子量が１５，０００以上の化合物を意味する。
【００３０】
前記低分子量の分散剤としては、医薬等の生理活性物質として許容されるものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、脂質類、糖類、シクロデキストリン類、アミノ酸類、有機酸類などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３１】
前記脂質類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、中鎖又は長鎖のモノグリセリド、ジグリセリド又はトリグリセリド、リン脂質、植物油（例えば、大豆油、アボカド油、スクアレン油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、ナタネ油、サフラワー油、ヒマワリ油等）、魚油、調味油、水不溶性ビタミン、脂肪酸、及びこれらの混合物を含み、これらの誘導体などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３２】
前記糖類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グルコース、マンノース、イドース、ガラクトース、フコース、リボース、キシロース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、ツラノース、ラフィノース、マルトトリオース、アカルボース、水溶性セルロース、合成セルロース、又は糖アルコール、例えば、グリセリン、ソルビトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、若しくはポリオール、又はこれらの誘導体などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３３】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、従来、医薬に使用できるものが好ましい。
前記その他の成分としては、例えば、賦形剤、矯味剤、崩壊剤、流動化剤、吸着剤、滑沢剤、矯臭剤、香料、着色剤、抗酸化剤、隠蔽剤、静電気防止剤、湿潤剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３４】
（ナノ粒子の製造方法）
本発明のナノ粒子の製造方法は、本発明のナノ粒子の製造方法であって、前記難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する溶液を、内径が１．０ｍｍ以下である孔を１以上有する吐出孔から、前記添加物質を含有する前記難水溶性生理活性化合物に対する貧溶媒中に吐出する工程を含み、更に必要に応じてその他の工程を含む。
本発明のナノ粒子の製造方法は、本発明のナノ粒子を製造する方法として専ら適している。
【００３５】
本発明者らは、検討を重ねた結果、難水溶性生理活性化合物を含有する溶液を添加物質を含有する前記難水溶性生理活性化合物に対する貧溶媒に吐出することによって、得られる粒子の「粒子径」及び「粒度分布」を高精度に制御することができることを見出した。
【００３６】
本発明のナノ粒子の製造方法は、晶析法を用いることが好ましい。
前記晶析法とは、粒子化させたい難水溶性生理活性化合物を良溶媒にて溶解させた溶液を貧溶媒と混合する事によって、前記難水溶性生理活性化合物が過飽和状態となり、溶解しきれなくなった成分を析出させ、粒子化する方法である。
【００３７】
−溶液−
前記溶液としては、前記難水溶性生理活性化合物が当該難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する溶液であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記難水溶性生理活性化合物を当該難水溶性生理活性化合物の良溶媒に溶解させた溶液等が挙げられる。
【００３８】
−−難水溶性生理活性化合物−−
前記難水溶性生理活性化合物としては、本発明のナノ粒子に用いることができるものと同様であるため、説明を省略する。
【００３９】
−−良溶媒−−
前記良溶媒としては、前記難水溶性生理活性化合物の良溶媒であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エタノール、メタノール、アセトン、アセトニトリル、ジオキサン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、酢酸メチル、酢酸エチル等が挙げられる。特に、エタノールが好ましい。これらは、種類単独で使用してもよいし、２種類以上を併用してもよい。
【００４０】
ここで、本発明において、「良溶媒」とは、難水溶性生理活性化合物の溶解度が大きい溶媒を意味する。「貧溶媒」とは、難水溶性生理活性化合物の溶解度が小さい溶媒又は難水溶性生理活性化合物を溶解しない溶媒を意味する。
例えば「良溶媒」及び「貧溶媒」は、温度２５℃における溶媒１００ｇに溶解し得る難水溶性生理活性化合物の質量で規定することができる。本発明においては、「良溶媒」は、難水溶性生理活性化合物を０．１ｇ以上溶解し得る溶媒であることが好ましい。一方、「貧溶媒」は、難水溶性生理活性化合物を０．０５ｇ以下しか溶解し得ない溶媒であることが好ましい。
【００４１】
前記難水溶性生理活性化合物を当該難水溶性生理活性化合物に対する良溶媒に溶解させる方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記難水溶性生理活性化合物を当該難水溶性生理活性化合物に対する良溶媒に投入してもよく、当該難水溶性生理活性化合物に対する良溶媒を前記難水溶性生理活性化合物に投入してもよい。
【００４２】
前記難水溶性生理活性化合物を当該難水溶性生理活性化合物に対する良溶媒に溶解させる際に、補助手段を用いることもできる。前記補助手段としては特に制限はなく、撹拌手段、振とう手段、超音波処理手段などが挙げられる。
【００４３】
前記溶液中の難水溶性生理活性化合物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、アセトンとエタノールとの混合溶媒を用いた時の濃度（含有量）として、５．０質量％以下が好ましく、０．１質量％以上５．０質量％以下がより好ましい。濃度が、５．０質量％以下であると、凝集が生じて粒度分布が悪くなることを防ぐことができる。
なお、溶液中の難水溶性生理活性化合物の含有量を調整することによって、製造されるナノ粒子の粒子径をある程度制御することができる。
【００４４】
−−貧溶媒−−
前記貧溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水が好ましい。本願の貧溶媒には、添加物質が分散されている。これにより難水溶性生理活性化合物を貧溶媒中に滴下した際に、難水溶性生理活性化合物の微粒子の周囲に、添加物質がシェル上に被覆されることとなる。
【００４５】
−−添加物質−−
前記添加物質としては、本発明のナノ粒子における添加物質と同様であるため、説明を省略する。
前記添加物質を前記良溶媒及び前記貧溶媒に添加する時期としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。晶析法を用いて、粒子を作製する場合、前記貧溶媒中だけでなく、前記良溶媒中に溶解させておいてもよい。
【００４６】
＜＜吐出孔＞＞
前記吐出孔としては、１，０００μｍ未満の内径の孔を有すれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記内径は、１．０μｍ以上１，０００μｍ未満が好ましく、１．０μｍ以上５００μｍ以下がより好ましく、１．０μｍ以上５０μｍ以下がさらに好ましい。
前記孔が真円でない場合には、孔は、直径１，０００μｍ未満の真円に相当する面積を有していればよい。なお、吐出孔の内径としては、面積円相当径にて算出される値である。
【００４７】
前記吐出孔は、貧溶媒中に入っていてもよいし、入っていなくてもよいが、入っていることが、吐出孔における溶液の乾燥を防止し、吐出孔における溶液の乾燥による吐出不良を防止できる点で好ましい。言い換えれば、吐出孔は、貧溶媒と接触していることが好ましい。
貧溶媒中に、吐出孔を入れる距離としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１．０ｍｍ以上１０ｍｍ以下が好ましく、２．０ｍｍ以上５．０ｍｍ以下がより好ましい。言い換えれば、吐出孔を、貧溶媒に１．０ｍｍ以上１０ｍｍ以下没入させることが好ましく、２．０ｍｍ以上５．０ｍｍ以下没入させることがより好ましい。
【００４８】
＜＜＜溶液吐出手段＞＞＞
前記吐出孔は、例えば、溶液吐出手段に形成されている。
前記溶液吐出手段としては、例えば、以下の手段などが挙げられる。
（ｉ）インクジェットノズルのような、平面板上に空いている孔から溶液に圧力をかけて吐出する平面板ノズル吐出手段
（ｉｉ）ＳＰＧ膜のような不定形な形状に空いている孔から溶液に圧力をかけて吐出させる吐出手段
（ｉｉｉ）溶液に振動を付与して、液滴として孔から吐出する吐出手段
【００４９】
上記（ｉｉｉ）の吐出手段としては、例えば、膜振動タイプ吐出手段、レイリー分裂タイプ吐出手段、液振動タイプ吐出手段、液柱共鳴タイプ吐出手段などが挙げられる。さらに、同時に溶液に圧力をかけて吐出しても良く、これらの手段を組み合わせてもよい。
膜振動タイプ吐出手段としては、例えば、特開２００８−２９２９７６号公報に記載の吐出手段が挙げられる。
レイリー分裂タイプ吐出手段としては、例えば、特許第４６４７５０６号公報に記載の吐出手段が挙げられる。
液振動タイプ吐出手段としては、例えば、特開２０１０−１０２１９５号公報に記載の吐出手段が挙げられる。
その中でも、液柱共鳴法を利用した液柱共鳴タイプ吐出手段に圧力を加える手段がより好ましい。
【００５０】
前記液柱共鳴法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液柱共鳴液室内に収容された溶液に振動を付与して液柱共鳴による定在波を形成し、定在波の腹となる領域に定在波の振幅方向に形成された吐出孔から溶液を吐出することなどが挙げられる。
液柱共鳴法としては、後述する液柱共鳴液滴吐出手段により好適に行うことができる。
【００５１】
＜＜液流動処理＞＞
前記液流動処理としては、溶液が貧溶媒である液中に吐出される際に、液を流動させる処理であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、液の流速は、０．３ｍ／ｓ以上が好ましく、１．０ｍ／ｓがより好ましい。
前記液流動処理を行うことにより、ナノ粒子の合着を抑制することができる。
【００５２】
液を流動させる液流動手段としては、例えば、液を撹拌する撹拌部材などが挙げられる。撹拌部材としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、撹拌翼などが挙げられる。
【００５３】
＜＜液循環処理＞＞
前記溶液を吐出する工程においては、循環されている液中に、溶液を、吐出孔から液中に吐出することが、ナノ粒子同士の合着を防止する点で好ましい。
そのために、液を循環させる液循環処理をすることが好ましい。
前記液循環処理では、例えば、液について、循環部材としてのポンプを用いて、循環経路を有する貧溶媒収容部材内を循環させる。
【００５４】
＜＜＜良溶媒除去処理＞＞＞
液を循環させる場合には、液に難水溶性生理活性化合物の良溶媒が蓄積される。液において良溶媒が蓄積されると、ナノ粒子同士の合着が発生しやすくなる。その点において、循環されている液に含まれる良溶媒を液から除去する良溶媒除去処理を行うことが好ましい。
前記良溶媒除去処理としては、液からは良溶媒を除去することができれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液を加熱すること及び液を減圧させることの少なくともいずれかにより、良溶媒を蒸発させて液から除去する方法などが挙げられる。
【００５５】
＜その他の工程＞
前記その他の工程としては、例えば、良溶媒除去工程、ろ過滅菌工程、貧溶媒除去工程などが挙げられる。
【００５６】
＜＜良溶媒除去工程＞＞
前記良溶媒除去工程は、作製したナノ粒子から良溶媒を取り出す工程であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ナノ粒子を含んだ液を減圧処理にかけることで、難水溶性生理活性化合物の良溶媒のみを揮発させて、ナノ粒子を含んだ懸濁液を得る方法などが挙げられる。
【００５７】
＜＜ろ過滅菌工程＞＞
前記ろ過滅菌工程としては、良溶媒除去工程後のナノ粒子懸濁液を、滅菌フィルターにてろ過を行う工程であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記ろ過に供されるナノ粒子懸濁液は、前記貧溶媒により希釈してもよいし、希釈しなくてもよい。
前記ろ過を行う前には、前記ナノ粒子懸濁液に超音波を印加することが好ましい。そうすることで、懸濁液中のナノ粒子の凝集が解消され、ナノ粒子がフィルターを通過しやすくなる。
【００５８】
前記滅菌フィルターとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ナイロンメンブレンフィルターなどが挙げられる。
前記滅菌フィルターのろ過精度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、０．１μｍ以上０．４５μｍ以下が好ましい。
前記滅菌フィルターは市販品を使用してもよい。市販品としては、例えば、ＬｉｆｅＡＳＳＵＲＴＭ  ナイロンメンブレンフィルターカートリッジ（ろ過精度、０．１μｍ）などが挙げられる。
なお、貧溶媒を除去する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ろ過工程により貧溶媒を除去する方法などが挙げられる。貧溶媒を除去した粒子を乾燥することにより、本発明のナノ粒子を得ることができる。
【００５９】
（ナノ粒子の製造装置）
本発明のナノ粒子の製造装置は、難水溶性生理活性化合物が溶解している溶液を収容する溶液収容容器と、溶液収容容器と接続され、１，０００μｍ未満の内径の孔を有する１つ以上の吐出孔を有する溶液吐出手段と、を有し、更に必要に応じて、前記難水溶性生理活性化合物の貧溶媒である液を収容する貧溶媒収容部材、液流動手段、及びその他の部材を有する。
【００６０】
ナノ粒子の製造装置について以下に説明するが、本発明のナノ粒子の製造方法において説明した用語と同じ用語は、以下において詳細な説明がない場合、本発明のナノ粒子の製造方法において説明した用語と同じ意味を有し、その用語の例示、及び好ましい態様は、ナノ粒子の製造方法において説明した例示、及び好ましい態様がそれぞれ挙げられる。
【００６１】
＜溶液収容容器＞
前記溶液収容容器としては、溶液を収容する容器である限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、可とう性があってもよいし、可とう性がなくてもよい。
前記溶液収容容器の材質としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、溶液収容容器は、樹脂製であってもよいし、金属製であってもよい。
前記溶液収容容器の構造としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記溶液収容容器は、密閉容器であってもよいし、非密閉容器であってもよい。
【００６２】
前記溶液において、前記難水溶性生理活性化合物は、当該難水溶性生理活性化合物の良溶媒に溶解している。
【００６３】
＜溶液吐出手段＞
前記溶液吐出手段としては、１，０００μｍ未満の内径の孔を有する１つ以上の吐出孔を有する限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記溶液吐出手段は、溶液収容容器と接続されている。溶液吐出手段と、溶液収容容器とを接続する方法としては、溶液収容容器から溶液吐出手段に溶液を供給しうる限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、管（パイプ、チューブ等）などが挙げられる。
【００６４】
前記溶液吐出手段は、溶液に振動を付与する振動付与部材を有することが好ましい。
振動としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、周波数としては１ｋＨｚ以上が好ましく、１５０ｋＨｚ以上がより好ましく、３００ｋＨｚ以上５００ｋＨｚ以下がさらに好ましい。振動が１ｋＨｚ以上であると、吐出孔から噴射された液柱を再現よく液滴化することができ、１５０ｋＨｚ以上であると生産効率を向上させることができる。
【００６５】
前記振動付与部材を有する溶液吐出手段としては、例えば、インクジェットなどが挙げられる。インクジェットとしては、例えば、液柱共鳴法、膜振動法、液振動法、レイリー分裂法、サーマル法などを用いた手段などが挙げられる。
【００６６】
＜貧溶媒収容部材＞
前記貧溶媒収容部材としては、難水溶性生理活性化合物の貧溶媒である液を収容する部材であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、可とう性があってもよいし、可とう性がなくてもよい。
前記貧溶媒収容部材の材質としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、貧溶媒収容部材は、樹脂製であってもよいし、金属製であってもよい。
【００６７】
前記貧溶媒収容部材中の貧溶媒は、ナノ粒子を製造する際には、撹拌されていてもよいし、撹拌されていなくてもよいが、撹拌されていることが好ましい。
【００６８】
前記溶液吐出手段の吐出孔は、貧溶媒収容部材中の貧溶媒中に入っていてもよいし、入っていなくてもよいが、入っていることが、吐出孔における溶液の乾燥を防止し、吐出孔における溶液の乾燥による吐出不良を防止できる点で好ましい。言い換えれば、溶液吐出手段の吐出孔は、貧溶媒収容部材中の貧溶媒と接触していることが好ましい。
前記貧溶媒収容部材中の貧溶媒中に、溶液吐出手段の吐出孔を入れる距離としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１．０ｍｍ以上１０ｍｍ以下が好ましく、２．０ｍｍ以上５．０ｍｍ以下がより好ましい。言い換えれば、溶液吐出手段の吐出孔を、貧溶媒収容部材中の貧溶媒に１．０ｍｍ以上１０ｍｍ以下没入させることが好ましく、２．０ｍｍ以上５．０ｍｍ以下没入させることがより好ましい。
【００６９】
前記貧溶媒収容部材は、液を循環可能な循環経路を有することが好ましい。液を循環可能な循環経路としては、例えば、配管のみから構成される循環経路であってもよいし、配管と、タンクとを有する循環経路であってもよい。
【００７０】
＜＜良溶媒除去部材＞＞
液を循環させる場合には、液に難水溶性生理活性化合物の良溶媒が蓄積される。液において良溶媒が蓄積されると、ナノ粒子同士の合着が発生しやすくなる。その点において、循環されている液に含まれる良溶媒を液から除去する良溶媒除去部材を有することが好ましい。
前記良溶媒除去部材としては、前記液から良溶媒を除去することができれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液を加熱する加熱部、液を減圧する減圧部などが挙げられる。加熱部及び減圧部の少なくともいずれかを用いると、良溶媒を蒸発させて液から除去することができる。
【００７１】
＜液流動手段＞
前記液流動手段としては、貧溶媒収容部材内の貧溶媒である液を流動させる手段であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液を撹拌する撹拌部材などが挙げられる。
【００７２】
前記液流動手段を用いることにより、ナノ粒子の合着を抑制することができる。
【００７３】
本発明のナノ粒子、並びに本発明のナノ粒子の製造方法、及びナノ粒子の製造装置により得られた粒子は、ろ過滅菌に適した粒子である。前記ろ過滅菌とは、被滅菌物に存在する微生物などの菌をろ過によって除去する方法で、通常０．２２μｍ径のメンブレンフィルターを用いる。そのため、２００ｎｍ以上の粒子径を有する医薬品化合物ナノ粒子は、ろ過滅菌用フィルターを十分に通過することが困難である。
【００７４】
前記溶液吐出手段の一態様である液柱共鳴液滴吐出手段について以下に説明する。
図１は、液柱共鳴液滴吐出手段１１の概略断面図である。前記液柱共鳴液滴吐出手段１１は、液共通供給路１７及び液柱共鳴液室１８を有する。前記液柱共鳴液室１８は、長手方向の両端の壁面のうち一方の壁面に設けられた前記液共通供給路１７と連通されている。また、前記液柱共鳴液室１８は、両端の壁面と連結する壁面のうち一つの壁面に液滴２１を吐出する吐出孔１９と、吐出孔１９と対向する壁面に設けられ、かつ液柱共鳴定在波を形成するために高周波振動を発生する振動発生手段２０とを有する。なお、振動発生手段２０には、図示していない高周波電源が接続している。また、液柱共鳴吐出手段１１から吐出した液滴２１を搬送する気流を供給する気流通路１２を設けていてもよい。
【００７５】
溶液１４は、図示されない液循環ポンプにより液供給管を通って、液柱共鳴液滴形成ユニットの前記液共通供給路１７内に流入し、前記液柱共鳴液滴吐出手段１１の前記液柱共鳴液室１８に供給される。そして、前記溶液１４が充填されている前記液柱共鳴液室１８内には、前記振動発生手段２０によって発生する液柱共鳴定在波により圧力分布が形成される。そして、液柱共鳴定在波において振幅の大きな部分であって圧力変動が大きい、定在波の腹となる領域に配置されている吐出孔１９から液滴２１が吐出される。この液柱共鳴による定在波の腹となる領域は、定在波の節以外の領域であり、定在波の圧力変動が液を吐出するのに十分な大きさの振幅を有する領域が好ましく、圧力定在波の振幅が極大になる位置（速度定在波としての節）から極小になる位置に向かって±１／４波長の領域がより好ましい。
【００７６】
定在波の腹になる領域であれば、吐出孔が複数で開口されていても、それぞれからほぼ均一な液滴を形成することができ、更には効率的に液滴の吐出を行うことができ、吐出孔の詰まりも生じ難くなる。なお、前記液共通供給路１７を通過した前記溶液１４は図示されない液戻り管を流れて前記溶液１４に戻される。液滴２１の吐出によって前記液柱共鳴液室１８内の前記溶液１４の量が減少すると前記、液柱共鳴液室１８内の液柱共鳴定在波の作用による吸引力が作用し、前記液共通供給路１７から供給される前記溶液１４の流量が増加する。そして、前記液柱共鳴液室１８内に前記溶液１４が補充される。そして、前記液柱共鳴液室１８内に前記溶液１４が補充されると、前記液共通供給路１７を通過する前記溶液１４の流量が元に戻る。
【００７７】
前記液柱共鳴液滴吐出手段１１における前記液柱共鳴液室１８は、金属、セラミックス、シリコーンなどの駆動周波数において液体の共鳴周波数に影響を与えない程度の高い剛性を持つ材質により形成されるフレームがそれぞれ接合されて形成されている。また、図１に示すように、前記液柱共鳴液室１８の長手方向の両端の壁面間の長さＬは、液柱共鳴原理に基づいて決定される。更に、前記液柱共鳴液室１８は、生産性を飛躍的に向上させるために１つの液滴形成ユニットに対して複数配置されていることが好ましい。前記液柱共鳴液室１８の数としては、特に制限はなく、１個以上２，０００個以下が好ましい。また、前記液柱共鳴液室毎に、液供給のための流路が前記液共通供給路１７から連通接続されており、前記液共通供給路１７には複数の前記液柱共鳴液室１８と連通している。
【００７８】
また、前記液柱共鳴液滴吐出手段１１における前記振動発生手段２０は所定の周波数で駆動できるものであれば特に制限はないが、圧電体を弾性板９に貼りあわせた形態が好ましい。周波数としては、生産性の点から、１５０ｋＨｚ以上がより好ましく、３００ｋＨｚ以上５００ｋＨｚ以下がさらに好ましい。前記弾性板は、圧電体が接液しないように液柱共鳴液室の壁の一部を構成している。前記圧電体は、例えば、チタン酸ジルコン酸鉛（ＰＺＴ）等の圧電セラミックスなどが挙げられ、一般に変位量が小さいため積層して使用されることが多い。この他にも、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）等の圧電ポリマーや、水晶、ＬｉＮｂＯ３、ＬｉＴａＯ３、ＫＮｂＯ３等の単結晶などが挙げられる。更に、前記振動発生手段２０は、１つの前記液柱共鳴液室毎に個別に制御できるように配置されていることが好ましい。また、上記の１つの材質のブロック状の振動部材を前記液柱共鳴液室の配置にあわせて、一部切断し、前記弾性板を介してそれぞれの液柱共鳴液室を個別制御できるような構成が好ましい。
【００７９】
さらに、吐出孔１９の開口を多数設けることができ、生産効率が高くなる点から、前記吐出孔１９を前記液柱共鳴液室１８内の幅方向に設ける構成を採用することが好ましい。また、前記吐出孔１９の開口配置によって液柱共鳴周波数が変動するため、液柱共鳴周波数は液滴の吐出を確認して適宜決定することが望ましい。
【００８０】
液柱共鳴における液滴形成のメカニズムについては、例えば、特開２０１１−１９４６７５号公報の段落〔００１１〕〜〔００２０〕を参照されたい。
【００８１】
次に、本発明のナノ粒子の製造装置の一例を、図を用いて説明する。
図２は、ナノ粒子の製造装置の一例を示す概略図である。ナノ粒子の製造装置１は、主に、溶液収容容器１３、溶液吐出手段２、及び貧溶媒収容部材６１を有する。前記溶液吐出手段２には、前記溶液１４を収容する前記溶液収容容器１３と、前記溶液収容容器１３に収容されている前記溶液１４を液供給管１６を通して前記溶液吐出手段２に供給し、更に液戻り管２２を通って前記溶液収容容器１３に戻すために前記液供給管１６内の前記溶液１４を圧送する前記液循環ポンプ１５とが連結されており、前記溶液１４を随時、前記溶液吐出手段２に供給できる。
溶液吐出手段２は、例えば、図１に示す液柱共鳴液滴吐出手段１１を備えている。
【００８２】
前記溶液１４は、前記溶液吐出手段２から、前記貧溶媒収容部材６１に収容された貧溶媒６２中に液滴２１として吐出される。
液滴２１が前記貧溶媒６２と接することにより、溶液が拡散され、難溶性生理活性物質が貧溶媒と接触することによって、溶解度が低下し、結晶化してナノ粒子が得られる。
【００８３】
次に、本発明のナノ粒子の製造装置の他の一例を、図を用いて説明する。
図３は、撹拌部材を備えるナノ粒子の製造装置の一例である。
図３のナノ粒子の製造装置１は、ガラス容器である貧溶媒収容部材６１内の貧溶媒６２に溶液を吐出する場合の概略図である。溶液吐出手段２の吐出部は、貧溶媒６２に浸漬された状態で、貧溶媒６２に溶液を吐出する。
図３のナノ粒子の製造装置１は、撹拌翼５１を有する撹拌部材５０を備える。撹拌翼５１は、貧溶媒収容部材６１内の貧溶媒６２に浸っている。
溶液吐出手段２により貧溶媒６２に溶液を吐出する際に、撹拌翼５１を回転させ、貧溶媒６１を撹拌することにより、液滴２１から形成されるナノ粒子同士の合着を防ぐことができる。
【００８４】
次に、本発明のナノ粒子の製造装置の更に他の一例を、図を用いて説明する。
溶液が貧溶媒に接することで形成されるナノ粒子同士の合着を防ぐ方法としては、溶液吐出手段の吐出部に貧溶媒の流れを付与することが最も好ましい。その点において、図４Ａ及び図４Ｂの態様が好ましい。
図４Ａは、溶液吐出手段の吐出部に貧溶媒の流れを付与できるナノ粒子の製造装置の一例の模式図である。
図４Ａのナノ粒子の製造装置は、溶液吐出手段２と、貧溶媒収容部材６１と、撹拌部材５０と、ポンプ３１とを有する。
貧溶媒収容部材６１は、液を循環可能な循環経路を有し、循環経路の途中には、前記貧溶媒収容部材６１の一部としてのタンク６３を備える。
図４Ｂは、図４Ａにおける溶液吐出手段２付近（破線部）の拡大図である。
タンク６３内部に投入された貧溶媒６２は、ポンプ３１によって溶液吐出手段２を通り貧溶媒収容部材６１内を循環する。その際、前記溶液吐出手段２の吐出孔から溶液が貧溶媒６２中に吐出される。前記貧溶媒６２である液に流れが付与されることにより液滴２１により形成されるナノ粒子の合着が抑制される。前記溶液吐出手段２の吐出孔における前記貧溶媒６２の流速は０．３ｍ／ｓ以上が好ましく、１．０ｍ／ｓがより好ましい。
前記タンク６３には撹拌翼５１を有する撹拌部材５０が備えられており、前記撹拌翼５１により貧溶媒６２である液を撹拌させることで、ナノ粒子の合着をより抑制できる。
【００８５】
次に、本発明のナノ粒子の製造装置の更に他の一例を、図を用いて説明する。
液中の良溶媒の量が増加すると、ナノ粒子の合着が増え粒子径は粗大化しやすくなる。これを防止するには、液から良溶媒を除去し、液中の良溶媒の量を少なく維持することが好ましい。
図５は、良溶媒を除去する良溶媒除去部材を備えるナノ粒子の製造装置の一例の概略図である。
図５のナノ粒子の製造装置は、溶液吐出手段２と、貧溶媒収容部材６１と、撹拌部材５０と、ポンプ３１と、良溶媒除去部材としての加熱部３３及び減圧部３６（真空ポンプ）とを有する。
溶液吐出手段２付近の構成は、図４Ａ及び図４Ｂと同じである。
貧溶媒収容部材６１は、液を循環可能な循環経路を有し、循環経路の途中には、貧溶媒収容部材６１の一部としてのタンク６３を備える。
タンク６３内部に投入された貧溶媒６２は、ポンプ３１によって溶液吐出手段２を通り貧溶媒収容部材６１内を循環される。その際、溶液吐出手段２の吐出孔から溶液が貧溶媒６２中に吐出される。貧溶媒６２である液に流れが付与されることにより液滴２１により形成されるナノ粒子の合着が抑制される。
更に、タンク６３に加熱部３３及び減圧部３６を備えることで、貧溶媒６２である液中に含まれる良溶媒を除去できる。例えば、加熱部３３により貧溶媒６２である液を加熱しながら、減圧部３６により液を減圧する。そうすると、貧溶媒よりも沸点が低い良溶媒は、蒸発する。蒸発した良溶媒は、凝縮器３５により恐縮され、回収管３７を通じて回収される。
【００８６】
本発明のナノ粒子の製造方法及び製造装置により製造されるナノ粒子としては、以下の特性を有する。
【００８７】
＜ナノ粒子の特性＞
＜＜平均体積基準粒子径＞＞
ナノ粒子の平均体積基準粒子径は、１００ｎｍ以下であり、１０ｎｍ以上５０ｎｍ以下が好ましく、１０ｎｍ以上４０ｎｍ以下がより好ましく、１０ｎｍ以上３０ｎｍ以下が特に好ましい。
【００８８】
ナノ粒子の平均体積基準粒子径は、動的光散乱法による濃厚系アナライザー（「ＦＰＡＲ−１０００」、大塚電子株式会社製）を用いて測定することができる。
【実施例】
【００８９】
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００９０】
（実施例１）
＜溶液の調製＞
良溶媒のエタノール（富士フィルム和光純薬工業社製）に対して、難水溶性生理活性化合物としてシクロスポリンＡ（東京化成工業社製）が３質量％、ステアリン酸（東京化成工業社製）が０．０６質量％となるように溶解させ、シクロスポリンＡ溶液を調製した。
【００９１】
＜ナノ粒子の造粒＞
調製したシクロスポリンＡ溶液５ｇを、図１に示す液柱共鳴手段を有する図３に示す撹拌部材を備えるナノ粒子の製造装置を用いて、撹拌部材の回転速度を２００ｒｐｍとし、以下の吐出条件でシクロスポリンＡ溶液を吐出し、シクロスポリンＡの粒子を造粒した液を得た。なお、イオン交換水１００ｇを図３に示すガラス製の貧溶媒収容部材２４内に投入した。
【００９２】
−吐出条件−
・ノズル径：５．０μｍ
・送液圧力：０．０５ＭＰａ
・溶液吐出手段：液柱共鳴
・駆動周波数：３９０ｋＨｚ
・圧電体への印加電圧：５．０Ｖ
【００９３】
＜良溶媒除去＞
次に、得られた液を２００ｒｐｍで撹拌しながら、−５０ｋＰａ、２４時間減圧処理によって良溶媒（エタノール）を除去して、シクロスポリンＡの粒子の懸濁液を得た。
【００９４】
＜粒度分布評価＞
得られたシクロスポリンＡの粒子懸濁液について、濃厚系アナライザー（「ＦＰＡＲ−１０００」、大塚電子株式会社製）による動的光散乱法を用いて平均体積基準粒子径と（Ｒ．Ｓ．Ｆ）を測定した。結果を、表１に示す。測定に供するシクロスポリンＡの粒子懸濁液におけるナノ粒子の固形分濃度を０．１質量％に調整した。１回あたりの積算時間は１８０秒とし、Ｃｏｎｔｉｎ法での平均体積基準粒子径（ｎｍ）を求めた。３回測定した値の平均値を本発明における平均体積基準粒子径（ｎｍ）とした。なお、測定した平均体積基準粒子径と（Ｒ．Ｓ．Ｆ）とを、下記評価基準に基づき評価した。
【００９５】
［評価基準：平均体積基準粒子径］
◎：平均体積基準粒子径が５ｎｍ以上、１５０ｎｍ以下   
○：平均体積基準粒子径が１５０ｎｍより大きく、２００ｎｍ以下   
×：平均体積基準粒子径が２００ｎｍより大きい
【００９６】
［評価基準：（Ｒ．Ｓ．Ｆ）］
◎：０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦０．６
○：０．６＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０
×：１．０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）
【００９７】
＜滅菌率評価＞
調製したシクロスポリンＡのナノ粒子懸濁液を孔径０．２μｍ滅菌用ナイロンメンブレンフィルター（商品名ＰＳＡ、３Ｍ社製）を用いて、ろ過滅菌を行った。また、ろ過滅菌後のろ液を５０℃の乾燥炉で十分に乾燥させたのち、残ったシクロスポリンＡの粒子の重量を測定し、滅菌率を算出した。結果を表１に示す。なお、滅菌率は下記の式で算出し、評価の基準とした。
滅菌率（％）＝［（ろ過後乾燥させたシクロスポリンＡのナノ粒子の重量）／（ろ過前の懸濁液中へ添加したシクロスポリンＡの固形分の重量）］×１００
【００９８】
［評価基準：滅菌率（％）］
◎：滅菌率が９０％以上
○：滅菌率が７０％以上９０％未満
×：滅菌率が７０％未満
【００９９】
（実施例２）
実施例１において、難水溶性生理活性化合物をシクロスポリンＡからアレクチニブ（Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）に、ステアリン酸をジオレオイルホスファチジルコリン（商品名：ＤＯＰＣ、富士フイルム和光純薬社製）に変更し、良溶媒をエタノールからジメチルスルホキシド（商品名：ＤＭＳＯ、富士フイルム和光純薬社製）に変更した。
また、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ−Ｋ３０，東京化成工業社製）０．２質量％をイオン交換水９９．８質量％に溶解させた液を、図３に示すガラス製の貧溶媒収容部材２４内に投入した。それ以外は、実施例１と同様にして、アレクチニブの粒子を得た。実施例１と同様の方法により、平均体積基準粒子径、（Ｒ．Ｓ．Ｆ）を測定し、滅菌率を評価した。条件を表１に、結果を表２に示す。
【０１００】
（実施例３）
実施例１において、難水溶性生理活性化合物をシクロスポリンＡからトラニラスト（東京化成工業社製）に変更した以外は実施例１と同様にして、トラニラストの粒子を得た。実施例１と同様の方法により、平均体積基準粒子径、（Ｒ．Ｓ．Ｆ）を測定し、滅菌率を評価した。条件を表１に、結果を表２に示す。
【０１０１】
（実施例４）
実施例１において、ステアリン酸をレシチン（東京化成工業社製）に変更し、溶液吐出手段を液柱共鳴から、平面板ノズルから振動を付与せずに溶液を吐出させる方式（吐出速度：１８ｇ／分間、駆動方式：送液圧力による押し出し）に変更した以外は、実施例１と同様にして、シクロスポリンＡの粒子を得た。実施例１と同様の方法により、平均体積基準粒子径、（Ｒ．Ｓ．Ｆ）を測定し、滅菌率を評価した。条件を表１に、結果を表２に示す。
【０１０２】
（実施例５）
実施例２において、ジオレオイルホスファチジルコリンをポリソルベート８０（日光ケミカルズ株式会社製）に変更し、ポリビニルピロリドンをポリビニルアルコール（ＰＶＡ，フイルム和光純薬社製）に変更した。また、溶液吐出手段を液柱共鳴から内径１．０ｍｍのテフロンチューブ（吐出速度：３００ｇ／分間、駆動方式：送液圧力による押し出し）に変更した以外は、実施例２と同様にして、アレクチニブの粒子を得た。実施例１と同様の方法により、平均体積基準粒子径、（Ｒ．Ｓ．Ｆ）を測定し、滅菌率を評価した。条件を表１に、結果を表２に示す。
【０１０３】
（比較例１）
実施例１において、ステアリン酸を添加しない処方に変更した以外は、実施例１と同様にして、シクロスポリンＡの粒子を得た。実施例１と同様の方法により、平均体積基準粒子径、（Ｒ．Ｓ．Ｆ）を測定し、滅菌率を評価した。条件を表１に、結果を表２に示す。
【０１０４】
（比較例２）
実施例５において、ポリソルベート８０とポリビニルアルコールを添加しない処方に変更した以外は、実施例５と同様にして、アレクチニブの粒子を得た。実施例１と同様の方法により、平均体積基準粒子径、（Ｒ．Ｓ．Ｆ）を測定し、滅菌率を評価した。条件を表１に、結果を表２に示す。
【０１０５】
【表１】
2020152673.tif 000002
【０１０６】
【表２】
2020152673.tif 000003
【０１０７】
本発明の態様は、例えば、以下の通りである。
＜１＞難水溶性生理活性化合物と、添加物質とを少なくとも含有し、
Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｓｐａｎ  Ｆａｃｔｏｒ（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が次式、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦１．０、を充たし、
平均体積基準粒子径が２００ｎｍ以下であり、前記難水溶性生理活性化合物が、前記添加物質により被覆されていることを特徴とするナノ粒子である。
＜２＞  前記平均体積基準粒子径が５ｎｍ以上１５０ｎｍ以下である、前記＜１＞に記載のナノ粒子である。
＜３＞  前記（Ｒ．Ｓ．Ｆ）が、０＜（Ｒ．Ｓ．Ｆ）≦０．６、を充たす、前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のナノ粒子である。
＜４＞  前記難水溶性生理活性化合物が、キナーゼ阻害剤及びポリペプチドから選択される、前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載のナノ粒子である。
＜５＞  前記添加物質が、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、及び脂肪酸から選択される、前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載のナノ粒子である。
＜６＞  前記添加物質が、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリソルベート８０、及びステアリン酸から選択される、前記＜１＞から＜５＞のいずれかに記載のナノ粒子である。
＜７＞  前記難水溶性生理活性化合物が、医薬化合物である、前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載のナノ粒子である。
＜８＞  前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載のナノ粒子を含むことを特徴とする医薬である。
＜９＞  前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載のナノ粒子を製造する方法であって、
前記難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する溶液を、内径が１．０ｍｍ以下である孔を１以上有する吐出孔から、前記添加物質を含有する前記難水溶性生理活性化合物に対する貧溶媒中に吐出する工程を含むことを特徴とするナノ粒子の製造方法である。
＜１０＞  前記溶液に振動を付与して前記溶液を前記吐出孔から吐出する、前記＜９＞に記載のナノ粒子の製造方法である。
＜１１＞  前記吐出孔から吐出される前記難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する液が流動されている、前記＜９＞から＜１０＞のいずれかに記載のナノ粒子の製造方法である。
＜１２＞  前記難水溶性生理活性化合物を少なくとも含有する液の流動の速度が０．３ｍ／ｓ以上である、前記＜１１＞に記載のナノ粒子の製造方法である。
【０１０８】
前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載のナノ粒子、及び前記＜８＞に記載の医薬、及び前記＜９＞から＜１２＞のいずれかに記載のナノ粒子の製造方法によれば、従来における諸問題を解決し、本発明の目的を達成することができる。
【符号の説明】
【０１０９】
１    ナノ粒子の製造装置
２    溶液吐出手段
１１  液柱共鳴液滴吐出手段
１３  溶液収容容器
１４  溶液
１９  吐出孔
２０  振動発生手段
２１  液滴
６１  貧溶媒収容部材
６２  貧溶媒
【先行技術文献】
【特許文献】
【０１１０】
【特許文献１】特許第４６１１６４１号公報
【特許文献２】特許第４０７２０５７号公報
【特許文献３】特開２０１８−０５２９２２号公報
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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