(57)【要約】      （修正有）【課題】メチシリン耐性黄色ブドウ球菌やバンコマイシン耐性腸球菌に対する高い活性や、抗真菌活性を有する、天然物由来物又はその合成類縁体による抗菌剤・抗真菌剤及び抗菌・抗真菌製品の提供。【解決手段】下式で表される、2,6-DH8又はそのホモログを有効成分として含有する、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌やバンコマイシン耐性腸球菌に対する抗菌剤、並びに抗真菌剤、及び、抗菌・抗真菌繊維製品。2020152704.tif 000031【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化合物１〜３の少なくとも一つを有効成分として含有する、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌またはバンコマイシン耐性腸球菌に対する抗菌剤。
化合物１
2020152704.tif 000025
2,6-DH8
化合物２
2020152704.tif 000026
2,6-DH10
化合物３
2020152704.tif 000027
2,6-DH12
【請求項２】
上記化合物１〜３のトータルの濃度が、２μg／mL以上である、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
下記の化合物１〜３の少なくとも一つを有効成分として含有する、抗真菌剤。
化合物１
2020152704.tif 000028
2,6-DH8
化合物２
2020152704.tif 000029
2,6-DH10
化合物３
2020152704.tif 000030
2,6-DH12
【請求項４】
請求項１の抗菌剤を吸着または含有する、マスクまたはその他の抗菌用の繊維製品。
【請求項５】
請求項３の抗真菌剤を吸着または含有する、マスクまたはその他の抗真菌用の繊維製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
天然物由来の化合物、及びこの合成類縁体を用いた、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）またはバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する抗菌剤、並びに抗真菌剤、及び抗菌・抗真菌繊維製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗生物質とは「微生物が生産し、他の微生物の生育を抑制する物質」と定義されてきたが、現在では微生物に由来する抗菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤も広義には抗生物質とされている。微生物以外の由来の化合物や合成品は抗菌物質と呼ばれ区別されてきたが、本研究では由来に関わらず細菌の生育を抑制する「抗菌物質」について新規の探索源を求めスクリーニングを行った。
【０００３】
抗生物質の研究は、Streptmyces属を中心とした土壌放線菌を主体として進められてきた.その中にはペニシリンなどをはじめとして医薬品や農薬として実用化されているものも少なくないが、今後さらに土壌から新規骨格の抗菌活性物質を発見することは難しいと言われている。探索されつくしたと言われる土壌においても現在の技術で培養できない微生物が存在するため、新規の抗菌物質探索が不可能であるとは言えないが、有用物質の探索資源として深海の微生物など人間の手つかずの環境中の微生物に注目が集まりつつある。新規の化合物を求める背景として、抗菌物質の研究には常に薬剤耐性菌(特にはメチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA))の問題がある。MRSAは従来の抗菌薬の選択圧のある院内などで優位菌となり、従来の感染制御が効果を示さない(石井、2018)。このような菌の発生を阻害しようとすれば、新しい由来や、作用機序をもつような化合物を見つけ出さなければならない。
【０００４】
全生物の半数以上を占めると言われる昆虫では、生物間相互作用と関連付けられてさまざまな二次代謝物が同定されている。昆虫にとっても微生物は身近な存在であり、共生菌として共に暮らす微生物もあれば、昆虫に感染する外敵となりうる微生物も存在する。昆虫の細菌感染に対する防御機構としてよく知られているのは、抗菌ペプチドである。このペプチドは細菌に感染した際に、体内で一過的に合成され、体液中に分泌される。ミツバチのアピデシン、カメムシのタナチン、カブトムシのカブトムシディフェンシンなどが代表例であり、昆虫の抗菌性ペプチドは、細菌の細胞膜を破壊することがわかっている。カブトムシから単離された43アミノ酸残基からなる昆虫ディフェンシンはグラム陽性菌に抗菌活性を示し、さらにMRSAに対しても活性を示す(古川ら、2004)。昆虫には、抗菌物質を体表に分泌し、細菌の感染を防いでいる例もある。Stephanitis属およびCorythucha属のグンバイの若虫が分泌する1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneは、トマトかいよう病菌Clavibacter michiganenseを含む4種のグラム陽性菌と根頭がんしゅ病菌Agrobacterium tumifaciensを含む5種のグラム陰性菌に対する抗菌活性の検討が行われ、Clavibacter michiganenseに対して抗菌活性を示した（John W. Neal, JR., et al, 1995）。この論文では、構造活性相関研究が行われており、環化した化合物や側鎖末端にphenyl基が置換した化合物で検討されたが、これらの化合物は主にグラム陽性菌に対して活性を示すとされている。一方、この論文では合計9種の真菌に対しても1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneを用いた同様の抗真菌活性の検討が行われたが、いずれの真菌に対しても抗真菌活性は認められなかった。本研究で対象としたシキミグンバイ若虫も1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneを分泌している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】John W. Neal, Jr., James E. Oliver, Raymond H. Fetterer； “In Vitro Antimicrobial and Nematocidal Activity of Acetgenins Identified from Exocrine Secretions of Stephanitis and Corythucha Lace Bugs Numphs (Heteroptera: Tingidae)” (1995) Ann. Entomol. Soc. Am. 88(4), 496-501.
【非特許文献２】日本農芸化学会2018年度大会講演要旨集（2018年3月5日発行）、講演番号：3A18p10  シキミグンバイ若虫分泌物に含まれる抗菌活性物質の探索
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
毒性が低いと推測される天然物由来の化合物、及びこの合成類縁体を用いて、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）またはその他の耐性菌に対する高い抗菌活性を有する抗菌剤、並びに抗真菌剤、及び、これを用いた抗菌繊維製品を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
このような背景のもと、昆虫を探索源とした抗菌活性物質の探索を行った。本研究ではグラム陽性菌の黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureusとグラム陰性菌の大腸菌Escherichia coliに対する抗菌活性評価を行い、シキミグンバイ若虫が分泌する1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneの側鎖長と水酸基の位置に着目した構造活性相関研究を進めた。また、特には、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）及びバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する効果を確かめた。
【０００８】
本発明の好ましい実施形態によると、下記の化合物１〜３の少なくとも一つを有効成分として含有する、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）及びバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する抗菌剤、並びに抗真菌剤である。または、このような抗菌・抗真菌剤を用いた繊維製品である。
化合物１
2020152704.tif 000002
化合物２
2020152704.tif 000003
化合物３
2020152704.tif 000004
【発明を実施するための形態】
【０００９】
１．シキミグンバイ若虫分泌物とその類縁体
シキミグンバイStephanitis svensoniはカメムシ目 Hemipteraグンバイムシ科 Tingidaeの昆虫で、シキミIllicium anisatum.(マツブサ科)の葉を吸汁する害虫である。シキミグンバイ若虫は背面にあるとげから多くの興味深い化合物を分泌している。当研究室で若虫分泌物をヘキサンで抽出しガスクロマトグラフ質量分析計(GC-MS)で分析を行なったところ、decanal、dodecanal、2-undecanone、3-oxododecanal（houttuynin）、2,6-dihydroxyacetophenone、1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-one、5-hydroxy-2-alkylchromanone類、nonaicosaneを検出した (図Ｉ)。これらの中で5-hydroxy-2-alkylchromanone類はトサカグンバイ若虫分泌物にも見られるグンバイムシに特有の化合物である。3-Oxododecanalはドクダミから単離されており、抗菌性・抗ウイルス性・抗炎症作用が報告されている(L. Jinbing et al, 2009)。2,6-Dihydroxyacetophenoneはアリに対し忌避活性を持ち (本研究室で特許出願)、アスピリンより優れたプロスタグランジンH合成酵素阻害活性を持つ（Jurenka, R.A et al, 1989）。1-(2,6-Dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneはグラム陽性菌であるトウモロコシ葉枯細菌病菌  Clavibacter michiganensisに対する著しい抗菌活性と線形動物 に成長阻害作用をもつことが報告されており（John W. Neal, JR., et al, 1995）、アスピリンに匹敵するプロスタグランジンH合成酵素阻害活性を持つ（Jurenka, R.A et al, 1989）。本章では芳香族ケトンとして2,6-dihydroxyacetophenoneおよび1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneを中心にこれら化合物の生物活性の解明の一端として、グラム陽性菌の黄色ブドウ球菌とグラム陰性菌の大腸菌に対する抗菌活性を検証した。1-(2,6-Dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneについては真菌４種について抗真菌活性の検証も行った。
【００１０】
＜図Ｉ シキミグンバイ若虫分泌物のGCクロマトグラム＞
2020152704.tif 000005
【００１１】
１.１ 試験化合物
・シキミ葉の精油およびヘキサン抽出物
・1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneおよび2,6-dihydroxyacetophenoneとその類縁体
・シキミグンバイ若虫分泌物のうち、3-oxododecanalを除く9化合物
【００１２】
以下に試験化合物の構造とその略称を示す(表Ｉ)。以後略称にて記述する.
【００１３】
＜表Ｉ＞
【表１】
2020152704.tif 000006
【００１４】
以下に2,6-DHA位置異性体と類似の化合物の略称を示し以後略称で記述する(表II).
【００１５】
＜表II＞
【表２】
2020152704.tif 000007
【００１６】
以下に試験に供したシキミグンバイ若虫分泌物のマススペクトルを示す(図II-１〜II-３)。
【００１７】
＜図II-１＞
2020152704.tif 000008
【００１８】
＜図II-２＞
2020152704.tif 000009
【００１９】
＜図II-３＞
2020152704.tif 000010
【００２０】
１.２ 合成法
2,6-DH4、2,6-DH6、2,6-DH8、2,6-DH10、2,6-DH14の合成
【００２１】
2020152704.tif 000011
【００２２】
＜中間体Aの合成＞
CH2Cl2 (5 mL)を溶媒とし、1,3-cyclohexanedione 0.56 g (5 mmol)と任意のカルボン酸無水物(5 mmol)、pyridine (0.44 g, 5.57 mmol) を室温で30分間反応させた。溶媒を減圧濃縮し、hexane/diethylether (1 : 1) と冷却した1N塩酸で分液した後、無水Na2SO4で乾燥した。溶媒をエバポレーターで減圧濃縮した後、粗抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー[hexane/EtOAc (3 : 1)]で精製した。
【００２３】
A4 (R=3)
1H-NMR (CDCl3) δ5.91(1H, s), 2.55(2H, m), 2.46(4H, m), 2.07(2H, quin), 1.70(2H, m) 1.00(3H, t)
GC-MS 12.892 min 182(M+), 84, 71, 55, 43
【００２４】
A6 (R=5)
1H-NMR (CDCl3) δ5.91(1H, s), 2.56(2H, t), 2.46(3H, m), 2.07(2H, quin), 1.70(2H, t), 1.33(5H, m), 0.91(3H, t)
GC-MS 15.159 min 210(M+), 99, 84, 71, 55, 43
【００２５】
A8 (R=7)
1H-NMR (CDCl3) データなし
GC-MS 17.189 min, 238(M+), 127, 109, 57, 43
【００２６】
A10 (R=9)
1H-NMR (CDCl3) δ5.92(1H, s), 2.55(2H, m), 2.45(3H, m), 2.08(2H, quin), 1.29(12H, m) , 0.89(3H, t)
GC-MS 19.323 min 266(M+), 155, 113, 95, 85, 71, 57, 43
【００２７】
A14 (R=13)
1H-NMR (CDCl3) δ5.92(1H, s), 2.49(2H, m), 2.39(3H, m), 1.67(2H, quin), 1.28(20H, m) , 0.90(3H, t)
GC-MS 30.815 min 322(M+), 211, 113, 97, 85, 71, 57, 43
【００２８】
＜中間体Bの合成＞
生成物A (3.4 mmol) をCH3CN 15 mLに溶解し、Et3N 1 mLとacetonecyanohydrine 40 μLを加え、室温で12時間反応させた。溶媒を減圧濃縮し、hexane/EtOAc (1 : 1)と純水および希塩酸で分液した。無水Na2SO4で乾燥させた後、エバポレーターで減圧濃縮した。
【００２９】
B4 (R=3)  GC-MS 12.410 min 182(M+), 167, 154, 139, 112, 69, 55, 43
B6 (R=5)  GC-MS 14.830 min, 210(M+), 192, 181, 167, 154, 139
B8 (R=7)  GC-MS 17.046 min 238(M+), 167, 154, 139
B10 (R=9)  GC-MS 19.066 min 266(M+), 248, 167, 154, 139
B14 (R=13)  GC-MS 22.605 min 322(M+), 304, 167, 154, 139
【００３０】
＜目的物Cの合成＞
生成物(2) (1.31 mmol) をAcOH 5 mLに溶解し、Hg(OAc)2 1.26 g (0.39 mmol)およびNaOAc 0.33 gを加え、120-125℃で沈殿が溶解するまで撹拌した (2-3時間)。反応後は室温まで冷却し、1N 塩酸を加え30分撹拌した。混合物をセライト濾過し、hexane/EtOAc ( 3: 1 )で洗浄した。水、飽和NaHCO3aq.、brineで洗浄し、有機層は無水Na2SO4で乾燥させた後、中性アルミナで濾過し、EtOAcで洗浄した。減圧濃縮後,のシリカゲルカラムクロマトグラフィー[hexane/EtOAc (5 : 1)]で精製した。分液した水層は中和した後、Hg廃液として適切に処理した。
【００３１】
C4 (R=3)
1H-NMR (CDCl3) δ9.57(2H, br), 7.22(1H, t), 6.40(2H, d), 3.11(2H, t), 1.76(2H, quin), 1.00(3H, t)
GC-MS 15.107 min 180(M+), 165, 147, 137, 81
【００３２】
C6 (R=5)
1H-NMR (CDCl3)  δ9.62(2H, br), 7.24(1H, t), 6.41(2H, d), 3.15(2H, t), 1.72(2H, quin), 1.38(4H, sext), 0.93(3H, t)
GC-MS 17.200 min 208(M+), 190, 165, 152, 137
【００３３】
C8 (R=7)
1H-NMR (CDCl3) δ10.14(2H, br), 7.22(1H, t), 6.39(2H, d), 3.14(2H, t), 1.71(2H, d), 1.34(10H, sext), 0.93(3H, t)
GC-MS 19.148 min 236(M+), 218, 189, 175, 165, 152, 137
【００３４】
C10 (R=9)
1H-NMR (CDCl3) δ9.47(2H, br), 7.24(1H, t), 6.41(2H, d), 3.14(2H, t), 1.73(2H, quin), 1.34(12H, sext), 0.92(3H, t)
GC-MS 21.005 min, 264(M+), 246, 189, 165, 151, 137
【００３５】
C14 (R=13)
1H-NMR (CDCl3) δ9.46(2H, br), 7.21(1H, t), 6.38(2H, d), 3.11(2H, t), 1.70(2H, quin), 1.28(20H, sext), 0.88(3H, t)
GC-MS 24.194 min 320(M+), 302, 189, 165, 152, 137
【００３６】
＜2,4-DH12の合成＞
2020152704.tif 000012
【００３７】
(i) Resorcinol (220 mg、2 mmol) とlauric anhydride (773 mg、2.02 mmol) をナスフラスコに入れ、BF3・OEt2 (1.5 ml、11.9 mmol) を加えて室温で40時間反応させた。反応液に10% NaOAc (7 ml) を加えて一晩撹拌した。吸引ろ過した後、水でよく洗浄した。目的物はヘキサンに難溶なので、ヘキサンを加えてろ過を数回繰り返した。目的物 (300 mg、51%、Rf 0.23 for Hex:EtOAc (5:1)) が得られた。
【００３８】
1H-NMR (CDCl3) δ 12.85(1H, s), 7.66(1H, d), 6.38(2H, q), 2.89(2H, t), 1.72(3H, t), 1.33(18H, m), 0.88(3H, t)
13C-NMR δ 205.34, 165.28, 162.28, 132.38, 113.95, 107.5, 103.60, 38.07, 31.91, 29.61, 29.49, 29.43, 29.39, 29.34, 24.92, 22.69, 14.12
GC-MS 22.820 min 292(M+), 274, 165, 137
【００３９】
＜2,5-DH12の合成＞
2020152704.tif 000013
【００４０】
上記(i)の方法でhydroquinone (220 mg、2 mmol)を原料として反応を行ったが、モノエステル (156 mg、27%)が得られた。目的物とモノエステルのRf値はほぼ同じである。catecholでも同様に反応が進みモノエステルが得られた。これらのモノエステルを合成中間体4-HP12および2-HP12として試験に供した。2,5-DHP12の合成法を(ii)に変更した。
【００４１】
(ii) Hydroquinone (550 mg、5 mmol) とlauric acid (1.0 g、5 mmol) をナスフラスコに入れ、BF3・OEt2 (1。08 ml、8.5 mmol、d:1.12 g/ml) を80℃で滴下した。その温度で1時間反応させた後、140℃に昇温して2時間反応させた。110℃に冷却した後、5% Na2CO3 aq。(15 ml)を加えて30分間撹拌した。酢酸エチルで抽出した後、水とbrineで洗浄した。無水Na2SO4で乾燥後、溶媒を留去した。シリカゲルカラム（30 g）で精製したが目的物はモノエステルとRf値 (0.29)が同じであった（Hex:EtOAc (4:1)）。淡黄色と黒色の固体が混ざっていたが、目的物は黒色（黒褐色）固体（200 mg）で10% EtOAc/Hexに溶けず、淡黄色固体は溶けたため溶解度の違いで分離した。
【００４２】
1H-NMR (CDCl3) δ11.99(1H, s), 7.28(1H, s), 7.04(1H, q), 6.91(1H, d), 4.73(1H, s), 2.95(2H, t), 1.75(1H, t), 1.66(1H, s), 1.34(18H, m), 0.90(3H, t)
13C-NMR δ206.45, 156.75, 147.3, 136.58, 124.65, 114.90, 38.47, 31.91, 29.62, 29.49, 29.43, 29.34, 29.31, 24.46, 22.69, 14.12
GC-MS 22.512 min 292(M+), 274, 189, 165, 152, 137
【００４３】
＜2,4.6-TH12の合成＞
2020152704.tif 000014
【００４４】
上記(i)の方法でphloroglucinol (252 mg、2.61 mmol)を原料として反応を行ったが、目的物が得られずモノエステルのみが得られた。次に(ii)の方法で行ったが結果は同じであった。そこで合成法を(iii)に変更した。
【００４５】
(iii)  phloroglucinol (329 mg、2.61 mmol) とlauric anhydride (1.0 g、2.61 mmol) を無水THF (4 ml)に溶解し、窒素雰囲気下でBF3・OEt2 (0.82 ml、6.53 mmol) を室温で加えた。48時間反応させた後、酢酸エチルで希釈し、1M HClで3回洗浄した。brineで洗浄した後、無水Na2SO4で乾燥し、溶媒を留去した。シリカゲルカラム（20 g、30% EtOAc/Hex）で精製したが目的物はモノエステルとRf値 (0.45)が同じであった（Hex:EtOAc (1:1)）。この2成分を分離するため、エステルをLiOHで加水分解することにした。
【００４６】
混合物 (400 mg、1.3 mmol) をMeOH:H2O (3:1) に溶解し、0℃でLiOH・H2O (109 mg、2.6 mmol) を加え、室温で一晩反応させた。1M HClを加えておよそpH 2 に調整し、酢酸エチルで抽出し、brineで洗浄後、無水Na2SO4で乾燥した。溶媒を留去後、シリカゲルカラム（10 g、30% EtOAc/Hex）で精製し、目的物が150 mg (19%)得られた。
【００４７】
1H-NMR (CDCl3) δ 5.82(2H, s), 3.04(2H, t), 1.64(5H, m), 1.30(20H, t), 0.91(3H, t)
13C-NMR δ 2.06.10, 164.58, 164.44, 103.98, 94.34, 70.28, 69.96, 48.28, 48.06, 47.85, 47.64, 47.42, 47.21, 47.00, 43.49, 31.71, 29.41, 29.40, 29.34, 29.32, 29.29, 29.13, 26.16, 26.04, 24.85
【００４８】
＜化学分析＞
1Hおよび13C核磁気共鳴(NMR)スペクトルはBruker Biospin AC-400M装置(1H : 400MHz、13C : 100MHz)を用い、重クロロホルム中のテトラメチルシラン(TMS)を内部標準として測定した。
【００４９】
GC-MS分析では、5975 MSD四重極マスフィルター型質量分析計 (Agilent Technologies) に6890 Nガスクロマトグラフ(Agilent Technologies) を接続したものを用い、電子イオン化法 (70 eV) で測定した。キャピラリーカラムはHP-5MS (内径 : 0.25 mm、長さ:30 m、膜厚:0.25 μm、Agilent Technologies) を用い、2 分間60℃に保った後、10 ℃/min で290℃まで上昇させた後、その温度で5 分間保持した。
【００５０】
２．抗菌活性評価
【００５１】
２.１ 予備的な評価用の菌の準備
＜対象菌株＞
黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureus (NBRC 12732)
大腸菌 Escherichia coli (NBRC 3972)
【００５２】
＜培養条件＞
黄色ブドウ球菌  37℃で1日
大腸菌  30℃で1日  (振とう培養時はともに300 rpm)
【００５３】
培地は以下の組成に調製した。
・液体培地
Tryptone  10 g
Yeast extract  2 g
MgSO4  1 g
Distilled water  1 L
・寒天培地
Tryptone  10 g
Yeast extract  2 g
MgSO4  1 g
Distilled water  1 L
Agar  15 g       
【００５４】
＜保存方法＞
グリセロールストックを作成することで、-80℃での長期保存が可能。100 mLメディウム瓶に40%グリセロールを作成し(グリセロール/純水=20 mL/30 mL)、オートクレーブで120℃、15分間滅菌する。滅菌済クライオチューブに40%グリセロールと培養液を各300 μL入れ、グリセロールの終濃度が20％になるように調整する。クライオチューブにはグリセロールを先に入れ、培養液は滅菌済エッペンチューブに量り取ってからデカンテーションで入れる。菌使用時は室温に置いて解凍し、上記寒天培地に植菌した後、各培養温度で静置培養する (1日)。植菌後1週間程度は4℃で冷蔵保存し、使用することが可能だが、条件を均一化するため、出来る限り抗菌活性試験前日にグリセロールストックから起こして用いた。
【００５５】
２.２ ペーパーディスク法による予備的な評価
【００５６】
＜材料＞
ペーパーディスク(Toyo Roshi; 8 mm DIA、Thin)
滅菌シャーレ (アテクト; SLE 直径90mm×15mm)
【００５７】
＜方法＞
阻止円の形成により、抗菌活性の有無を判断する。試験培地は、上記の液体培地で1日振とう培養した前培養を上記の寒天培地に混ぜて作成した。(比率は、寒天培地25 mL/シャーレ1枚に対し前培養0.5 mL.) 試験化合物を処理した8 mmペーパーディスクを試験培地に静置し、培養1日後に判断した。コントロールとしてmethanol、hexane、ethyl acetateのペーパーディスクも試験に供した。ペーパーディスクは溶媒を完全に乾燥させるため、ガラス板上で1時間以上風乾した(図III)。
【００５８】
＜図III＞  ペーパーディスク法による抗菌活性試験
2020152704.tif 000015
【００５９】
＜結果＞
ペーパーディスク法による試験結果は以下の表にまとめた。表には化合物名と試験回数、阻止円サイズ (mm)を記載した。表IIIおよび表IV中、括弧内には試行回数を示し、阻止円が形成されなかった場合には−と表記した。若虫分泌物のうち、阻止円が形成されたものについて試験化合物を組み合わせて試験を行い、単一の場合と比較検討を行った(グラフＩ)。活性のあった1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneおよび2,6-dihydroxyacetophenone類縁体に関しては平均誤差を算出し、平均値のグラフを作成した(グラフII・III)。
【００６０】
＜表III＞  シキミグンバイ若虫分泌物およびシキミ葉抽出物
【表３】
2020152704.tif 000016
【００６１】
＜グラフＩ＞シキミグンバイ若虫の分泌する化合物の阻止円サイズ
2020152704.tif 000017
【００６２】
＜表IV＞2,6-DHP12および2,6-DHAとそれらの類縁体
【表４】
2020152704.tif 000018
【００６３】
＜グラフII＞ 類縁体の阻止円サイズ (対S.aureus)
2020152704.tif 000019
【００６４】
＜グラフIII＞ 類縁体の阻止円サイズ (対E. coli)
2020152704.tif 000020
【００６５】
２.３ 最小発育阻止濃度の検討
【００６６】
＜方法＞
各濃度の試験化合物を添加した液体培地での対象菌の発育を観察し、各化合物の最小発育阻止濃度を決定した(図IV)。試験培地は、液体培地4.5 mL、前培養液100 μL、試験化合物DMSO溶液400 μLの計5 mLとした。前培養は、前述の液体培地で一晩行い、試験培地に添加する前にOD660 nmを測定した。前培養のOD660 nmは0.5程度が望ましい (0.6以上になるとODと菌体数が比例しない)とされるため、適切な培養時間の検討が必要である (初回の実験での前培養OD660 nmは2.498であり、かなり基準を超えている)。コントロールはDMSOのみを400 μL添加した。阻止濃度は24時間後のOD660 nmおよび寒天培地への植菌・観察によって判定する。初回の実験では、試験化合物による試験培地の濁度上昇を考慮しなかったため、菌体数の増加による純粋なOD660 nmを測定することができなかった。各培地のOD660 nmを培養開始前に測定しておく必要がある.
【００６７】
＜図IV  MIC法による抗菌活性試験＞
2020152704.tif 000021
【００６８】
二回目の試験では培養開始前に各培地のOD660 nmを測定した。培養開始前測定用にエッペンチューブに1.5 mLとり、振とう培養は3.5 mLで行った。
【００６９】
＜結果＞
以下の表Ｖに2,6-DHA、2,6-DH6、2,6-DH8、2,6-DH10、2,6-DH12を各濃度添加したS.aureus培養液を寒天培地に植菌した初回の実験結果をまとめた。コントロールでは正常に菌が生育した。
【００７０】
＜表Ｖ＞ 2,6-DH12とその類縁体の最小発育阻止濃度の検討(25〜800 μg/mL)
【表５】
2020152704.tif 000022
【００７１】
以下の表VIでは2,6-DH6、2,6-DH8、2,6-DH10、2,6-DH12のより低濃度での試験結果をまとめた。表内数字はOD660 nm、() 内には振とう培養前の濁度を示した。コントロールの培養後のOD660 nmは1.62 (培養前 0.25)、寒天培地に植菌したところ正常に生育した。
【００７２】
＜表VI＞ 2,6-DH12とその類縁体の最小発育阻止濃度の検討(1〜32 μg/mL)
【表６】
2020152704.tif 000023
【００７３】
＜考察＞
本章では、アセトフェノン類縁体である2,6-dihydroxyacetophenone (2,6-DHA)および1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-one (2,6-DH12) を中心にこれら化合物の生物活性を機能解明する一端として、グラム陽性菌の黄色ブドウ球菌Staphylococcus aureusとグラム陰性菌の大腸菌 Escherichia coliに対する抗菌活性を検討した。手法は定性的試験としてペーパーディスク法、定量的試験として最小発育阻止濃度(MIC法) を採用した。
【００７４】
ペーパーディスク法は、対象菌を混ぜ込んだ寒天培地上で、試験化合物による阻止円の形成によって抗菌活性の有無を判断する方法である。簡易的な抗菌活性評価が可能であるが、阻止円の大きさは化合物の物性に左右されるため抗菌活性の強さを反映するわけではないことに留意する必要がある。シキミグンバイ若虫分泌物を抽出し、ペーパーディスク法による抗菌活性試験を行ったところ、S.aureusに対して活性を示した(2018年は京都学園大学構内などのシキミでのシキミグンバイの発生が少なく、E。coliに対する試験は行えていない)。どの化合物が抗菌活性を示す主要な化合物かを検討するため若虫分泌物9化合物に対し、個別に試験を行ったところ、2,6-DHA、2,6-DH12、5-HCh7で阻止円が形成された。
【００７５】
2,6-DHAは300 μgでS.aureusおよびE.coliに対して活性を示し、2,6-DH12は30 μgで両菌に対して活性を示した。5-HCh7は300 μgの処理量でS.aureusにのみ活性を示した。5-HCh7は芳香族ケトンのフェノール性水酸基と側鎖間で環化したクロマノンであるが、このように環化するによって活性が低くなると推測される。これら3化合物を組み合わせて試験を行ったところ、S.aureusに対する試験では、2,6-DHA+2,6-DH12、2,6-DH12+5-HCh7、2,6-DHA+2,6-DH12 +5-HCh7が30 μgで阻止円を形成し、ほとんど同等の阻止円サイズとなった。2,6-DHA +5-HCh7の阻止円平均値が最も大きいという結果も得られたが、この結果は他の化合物のものと比べてばらつきが大きく、30 μgでは阻止円が形成されなかった。E。coliに対する試験では2,6-DHA+2,6-DH12は2,6-DH12のみとほぼ同等の阻止円サイズとなった。これらの結果から、シキミグンバイ若虫分泌物のうち,抗菌活性を示す主要な物質は、2,6-DH12であると考えられる。
【００７６】
これらの化合物の由来を探るため、シキミグンバイの寄主植物であるシキミの葉についてヘキサン抽出と水蒸気蒸留を行い、得られた両抽出物の抗菌活性を検討した。ペーパーディスク法による抗菌活性試験ではどちらも阻止円を形成しなかった。GC-MS分析も行ったが、若虫分泌物と一致する化合物は検出されず、シキミの葉の成分中には若虫由来の抗菌活性成分が含まれないことが判明した(図Ｖ)。
【００７７】
＜図Ｖ＞シキミ葉の抽出物のGCクロマトグラム
2020152704.tif 000024
【００７８】
抗菌活性のあった2,6-DHAおよび2,6-DH12についてさらに知見を深めるため、これらの類縁体について合成品または標品を用い、ペーパーディスク法による抗菌活性試験を行った。側鎖の炭素鎖を伸長した化合物は、2,6-DHA、2,6-DH4、2,6-DH6、2,6-DH8、2,6-DH10、2,6-DH12、2,6-DH14について検討を行った。30 μgの処理量では、S. aureusおよびE. coliの両菌について2,6-DH 4、6、8、10、12で阻止円が形成された。2,6-DHAおよび2,6-DH14では300 μgの処理で阻止円が形成された。このことから、側鎖の炭素鎖は4〜12で活性が強くなると推測した。
【００７９】
次に 2,6-DH12の位置異性体については、2,5-DH12、2,4-DH12、2,4,6-TH12を用いて検討を行った。ジオール両化合物は300 μgの処理でS. aureusに阻止円を形成し、2,5-DH12のみ300 μgの処理でE. coliに対して阻止円を形成した。30 μgでは阻止円を形成しないことから2,6-DH12より活性が弱いことがわかる。水酸基を追加したトリオール2,4,6-DH12は30 μgの処理でもS. aureusに対して活性を示したが、E. coliに対して活性は示さなかった。これらの結果から、抗菌活性を持つためには、まずは水酸基の位置が重要であると考えられる。さらに、水酸基の数も重要であり、活性を示すはずの2位と6位に水酸基を保持したにも関わらず4位に水酸基を付加した2,4,6-TH12がE. coliに対する活性を失った。2,6-DHAの位置異性体については、2,4-DHA、2,5-DHA、3,5-DHAで検討を行ったが、どの化合物も抗菌活性は見られなかった。水酸基が一つの2-HA、3-HA、4-HA およびtrifluoromethanesulfonateで2つの水酸基を保護した2,6-DHATfについても検討を行ったが、いずれも活性は見られなかった。これらのことから、2,6-DHAタイプの化合物は水酸基の置換位置・水酸基の減少・保護によって活性を示さなくなると考えられる。
【００８０】
顕著な活性を示す2,6-DHA、2,6-DH6、2,6-DH8、2,6-DH10、2,6-DH12についてさらに最小発育阻止濃度の検討を行い、定量的評価を試みた。各試験化合物の添加された液体培地で培養したS. aureusを寒天培地に塗布し、24時間後の生育状況を観察した。その結果、液体培地にDMSOのみを添加したコントロールと2,6-DHAの25、50、100、200 μg/mLで菌の生育が観察された。このことから、2,6-DHAの24時間最小発育阻止濃度は400μg/mLと推測される。その他の化合物については25 μg/mLでも発育が阻止されたことから、より低濃度での検討が必要であると考え、1、2、4 、8、16、32μg/mLの濃度に置ける発育阻止を観察した。前回と同様、寒天培地に植菌したところ、2,6-DH6では1〜32 μg/mL で生育を確認した。2,6-DH8では1〜4 μg/mLで、2,6-DH10では1および2μg/mLで、2,6-DH12では1〜4μg/mLで生育を確認した。2,6-DH6の結果は25 μg/mLで発育が阻害された初回の結果と矛盾するため今後試行回数を重ねる必要があるが、少なくとも50 μg/mLの濃度では発育が阻害された。2,6-DH8は8 μg/mL 、2,6-DH10は4μg/mL、2,6-DH12は8 μg/mLでそれぞれ発育が阻害された。これらの結果をまとめると、2,6-DH10が最も低濃度の4 μg/mL、2,6-DH8および2,6-DH12は同程度の8μg/mL、2,6-DH6は50μg/mL、2,6-DHAは400μg/mLで発育を阻止することが分かった。
【００８１】
MIC試験における吸光度測定については、測定方法に改良の余地がある。初回の試験においてはDMSO溶液によって培地が着色されてしまい、培養後の濁度を測定することが困難であったため、培養前にも測定を行った。今回は培養前の吸光度はどのサンプルを添加した培地においてもほぼ同等でDMSO溶液を添加した際にも目立った着色や濁りは見られず、0.25前後であった。この培養後の測定では、吸光度はかなり低くても植菌すると発育するサンプルが存在したため、この試験でも吸光度を判断基準とせず、寒天培地への植菌によって最小発育阻止濃度を決定した。OD660nmの測定については今後測定方法の検討が必要である。
【００８２】
これらの化合物の作用機序については解明できていない。抗菌薬は、ペニシリン系などに代表される細菌細胞壁合成阻害、ポリミキシンBなどに代表される細菌細胞膜の傷害、アミノグリコシド系やテトラサイクリンなどに代表されるタンパク質の合成阻害、キロノン系などの核酸代謝阻害等、作用機序によって分類することができる(植松ら、シンプル薬理学)。今回対象としたS. aureusおよびE. coliはそれぞれグラム陽性菌とグラム陰性菌である。グラム陰性菌は細胞膜の外側に細胞壁があり、さらにその外側に外膜を持つ。グラム陰性菌の細胞壁は8 nm程度である。それに対し、グラム陽性菌は外膜を持たないかわり、細胞壁が250 nm程と非常に厚い。作用機序の特定については抗菌スペクトラムを検討する必要がある。
【００８３】
２.４ メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）に対する抗菌活性評価
上記の2,6-DH8、2,6-DH10及び2,6-DH12について、日本食品分析センター（一般財団法人）に依頼して、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）に対する抗菌活性評価（最小発育阻止濃度の測定）を行なった（試験報告書 第19014456001-001号 平成31年02月28日  依頼者：京都学園大学）。この結果、非常に高い抗菌活性を有することが確かめられた。以下、試験報告書の内容を下記に記載する。
【００８４】
＜検体＞
2,6-DH8、2,6-DH10及び2,6-DH12の8000μg／mLのエタノール溶液（平成31年02月06日に、発明者らから日本食品分析センターに提出）。
＜試験概要＞
検体を任意濃度添加した液体培地を９６ウェルマイクロプレートに分注後（以下「感受性測定用プレート」という。）、試験菌液を接種した。培養後、菌の発育が阻止された濃度をもって最小発育阻止濃度とした。
【００８５】
＜試験結果＞
最小阻止発育濃度（ＭＩＣ）(μg／mL)
2,6-DH8          ２．５
2,6-DH10         １．２５
2,6-DH12         １．２５
【００８６】
＜試験条件＞
・試験菌液
-試験菌：Staphylococcus aureus IID 1677（メチシリン耐性ブドウ球菌：MRSA）
-前培養：Mueller Hinton Agar (Difco)、35℃±１℃，18〜24時間
菌液調整溶液：生理食塩水
菌数：約１０７ｍＬ
・感受性測定用培地：Mueller Hinton Broth (Difco)
・感受性測定用プレート：検体原液の濃度を8000μg／mLとした。99.5％エタノールを用いて検体を2倍ずつ段階的に希釈した検体希釈溶液を調製した。次に、感受性測定用培地に対して、検体原液及びそれぞれの検体希釈溶液を1／99の量で添加し、96ウェルマイクロプレートに１００μＬずつ分注した。
・試験操作及び判定方法：感受性測定用プレートの各ウェルに試験菌液５μＬを接種し、所定時間培養した後、菌の発育が阻止された最低濃度をもって、最小発育阻止濃度とした。
・感受性測定用プレート培養条件：35℃±１℃，18〜24時間
【００８７】
２.５ 抗菌繊維製品及びその評価
2,6-DH12を溶解させたエタノール溶液（0.1%；質量体積パーセント濃度）に、サージカルマスク布片（1 cm X 1cm、ポリプロピレン不織布；アゼアス(株)のエージークリーン）に浸漬して、乾燥させることにより、抗菌繊維製品を作製した。得られたガーゼ布の乾燥後の重量を精密に測定することで、マスク布片の重量に対して約５．６％吸着されたことを確かめた。これと同様の方法で医療用のガーゼ布片（1 cm X 1cm、綿；川本産業の医療ガーゼ）についても試験した結果、ガーゼ布片の重量に対して約３．６％吸着されたことを確かめた。
【００８８】
このように処理後のサージカルマスク布片、及び、処理しなかった元のサージカルマスク布片を、上記のペーパーディスク法に倣い非耐性の黄色ブドウ球菌を含む培地に静置し、２４時間後の様子を観察したところ、処理後のサージカルマスク布片の周りは、黄色ブドウ球菌の生育が顕著に抑えられていた。上記の医療用のガーゼ布片でも同様に試験したところ、処理後のガーゼ布片の周りは、黄色ブドウ球菌の生育が顕著に抑えられていた。
【００８９】
２.５ バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する抗菌活性評価
上記の2,6-DH8、2,6-DH10及び2,6-DH12について、日本食品分析センター（一般財団法人）に依頼して、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）に対する抗菌活性評価（最小発育阻止濃度の測定）を行なった（試験報告書速報  受付番号19014456  平成31年03月22日  依頼者：京都学園大学）。この結果、非常に高い抗菌活性を有することが確かめられた。
【００９０】
＜検体＞
2,6-DH8、2,6-DH10及び2,6-DH12の8000μg／mLのエタノール溶液（発明者らから日本食品分析センターに提出）。
＜試験概要＞
検体を任意濃度添加した液体培地を９６ウェルマイクロプレートに分注後（以下「感受性測定用プレート」という。）、試験菌液を接種した。培養後、菌の発育が阻止された濃度をもって最小発育阻止濃度とした。
【００９１】
＜試験結果＞
最小阻止発育濃度（ＭＩＣ）(μg／mL)
2,6-DH8          ５．０
2,6-DH10         ２．５
2,6-DH12         ２．５
【００９２】
＜試験条件＞
試験菌をEnterococcus faecium（バンコマイシン耐性腸球菌：VRE）とした他は、上記「２.４ メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）に対する抗菌活性評価」中の試験条件と同様とした。
【００９３】
２.６ 真菌４種に対する抗真菌活性評価
上記の2,6-DH12を含む複数種の化合物について、衛生微生物研究センター（株）に依頼して、４種の真菌（カビ）に対する抗真菌活性（防カビ性）の評価を行なった（試験検査報告書：試験依頼番号2019D-BT-096、2019年3月15日  試験依頼者：京都学園大学バイオ環境学部）。この結果、非常に高い抗真菌活性を有することが確かめられた。以下、試験報告書の内容のうち、2,6-DH12に関する部分を下記に記載する。
【００９４】
＜試験目的＞
検体の抗カビ力を、抗菌製品技術評議会 シェーク法を基に一部試験条件を変更し調べる。
＜検体＞
2,6-DH12
＜試験カビ＞
Aspergillus brasiliensis  NBRC 105649 
Penicillium citrinum   NBRC 6352
Alternaria alternate   NBRC 106339
Fusarium oxysporum  NBRC 31631
【００９５】
＜試験方法＞
・試験胞子液の調製
試験カビはポテトデキストロース寒天培地（PDA）に接種し、25℃で7〜14 日間培養後 0.05％Tween80 添加滅菌水を用いて胞子を収穫し、リン酸緩衝生理食塩水を用いて胞子数が 105CFU/mL になるように調製したものを試験胞子液とした。
・試験試料の調製
検体10mgとジメチルスルホキシド 3mLを混和したものを試験試料とした。
・振とう処理及び生菌数測定
試験胞子液を遠沈管へ10mLずつ分注し、そこへ試験試料を0.2mL接種した。その後、25℃、150rpmで 24時間振とう処理を行った。処理後、振とう液の10倍希釈系列を、生理食塩水を用いて調製し、中和剤添加サブローデキストロース寒天培地（SDLPA）へ接種した。接種した SDLPAは 22.5±2.5℃、3〜5日培養し、形成された集落数を数え、生菌数を算出した。
【００９６】
＜試験結果＞
・Aspergillus brasiliensisに対する抗カビ試験成績（生菌数測定結果（CFU／mL））
平均値      各試験片値
2,6-DH12        1.0×102    2.7×102
1.0×101
3.0×101
コントロール    7.3×104    7.7×104
7.7×104
6.4×104
【００９７】
・Penicillium citrinumに対する抗カビ試験成績（生菌数測定結果（CFU／mL））
平均値      各試験片値
2,6-DH12        1.3×102      −
3.0×101
1.0×101
コントロール    2.5×106    1.6×106
2.4×106
3.4×106
【００９８】
・Alternaria alternataに対する抗カビ試験成績（生菌数測定結果（CFU／mL））
平均値      各試験片値
2,6-DH12        2.0×101    2.0×101
−
4.0×101
コントロール    1.1×104    1.7×104
1.2×104
4.0×104
【００９９】
・Fusarium oxysporumに対する抗カビ試験成績（生菌数測定結果（CFU／mL））
平均値      各試験片値
2,6-DH12        4.3×105    5.0×105
7.0×105
1.0×105
コントロール    3.5×106    3.0×106
2.7×106
4.8×106
【０１００】
３．総合考察（まとめ）
以上のように、シキミグンバイ若虫の外分泌物とその類縁体の抗菌活性について検討を行った。以下にその構造活性相関研究について考察する。
【０１０１】
シキミグンバイStephanitis svensoniはカメムシ目 Hemipteraグンバイムシ科 Tingidaeの昆虫で、シキミIllicium anisatum.の吸汁性害虫である。本昆虫の若虫はdecanal、dodecanal、2-undecanone、3-oxododecanal（houttuynin）、2,6-dihydroxyacetophenone、1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-one、5-hydroxy-2-alkylchromanone類、nonaicosaneを分泌している 。これらの中で5-hydroxy-2-alkylchromanone類はトサカグンバイ若虫分泌物にも見られるグンバイムシに特有の化合物である。3-oxododecanalはドクダミから単離されており、抗菌性・抗ウイルス性・抗炎症作用が報告されている(L. Jinbing et al, 2009)。2,6-Dihydroxyacetophenoneはアリに対し忌避活性を持ち (本研究室で特許出願)、アスピリンより優れたプロスタグランジンH合成酵素阻害活性を持つ（Jurenka, R.A et al, 1989）。1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-oneはグラム陽性菌であるトウモロコシ葉枯細菌病菌  Clavibacter michiganensisに対する抗菌活性と線形動物 に成長阻害作用をもつことが報告されており（John W. Neal, JR., et al, 1995）、アスピリンに匹敵するプロスタグランジンH合成酵素阻害活性を持つ（Jurenka, R.A et al, 1989）。
【０１０２】
アセトフェノン類縁体である2,6-  dihydroxyacetophenone (2,6-DHA) および1-(2,6-dihydroxyphenyl)dodecan-1-one  (2,6-DH12)を中心にこれら化合物の生物活性の機能を解明する一端として、グラム陽性菌の黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureusとグラム陰性菌の大腸菌Escherichia coliに対する抗菌活性を検討した。手法は定性的試験としてペーパーディスク法、定量的試験として最小発育阻止濃度(MIC法)を採用した。若虫分泌物9化合物に対し試験を行ったところ、2,6-DHA、2,6-DH12、5-HCh7で阻止円が形成された。2,6-DHAは300μgでS.aureusおよびE.coliに活性を示し、2,6-DH12は30μgで両菌に対して活性を示した。5-HCh7は300 μgの処理量でS.aureusにのみ活性を示した。5-HCh7はアセトフェノン類が環化したものであるが、このように環化によって活性が低くなると推測される。これら3化合物を組み合わせて試験を行ったところ、シキミグンバイ若虫分泌物のうち抗菌活性を示す主要な物質は、2,6-DHP12であると考えられる。これらの化合物の由来を探るため、シキミグンバイが食草とするシキミの葉についてhexane抽出物と精油の抗菌活性を検討したが、どちらも阻止円を形成せず、 GC-MS分析でも若虫分泌物と一致するピークは検出されないことから、シキミグンバイ若虫はこれらの抗菌活性成分を生合成していると推測する。
【０１０３】
抗菌活性のあった2,6-DHAおよび2,6-DH12についてさらに知見を深めるため、これらの類縁体について抗菌活性試験を行った。2,6-DHAの側鎖の炭素鎖を伸長させた2,6-DHA、2,6-DH4、2,6-DH6、2,6-DH8、2,6-DH10、2,6-DH12、2,6-DH14について検討を行ったところ、炭素鎖が4〜12で活性が強くなると推測した。2,6-DH12の位置異性体は、2,5-DH12、2,4-DH12、2,4,6-THP12について検討を行ったが、2種のジオール体ともに2,6-DH12より活性が弱く、水酸基を追加したトリオール2,4,6-DH12はS。aureusに対しては2,6-DH12と同等の活性を持つものの、E。coliに対しては活性を失った。2,6-DHAの位置異性体では2,4-DHA、2,5-DHA、3,5-DHAを、また水酸基が一つの2-HA、3-HA、4-HAおよびtrifluoromethanesulfonateで水酸基を保護した2,6-DHATfを用いて検討を行ったが、すべての化合物で活性は見られなかった。このことから、2,6-DH12および2,6-DHAは水酸基の置換位置・水酸基の減少・保護によって活性が著しく弱くなることが考えられる。
【０１０４】
最小発育阻止濃度の検討による定量的評価では、試験化合物濃度を25〜800μg/mLに設定した初回の試験において、液体培地にDMSOのみを添加したコントロールと2,6-DHAの25、50、100、200μg/mLで菌の生育が観察された。このことから、2,6-DHAの24時間最小発育阻止濃度は400μg/mLと決定できた。その他の化合物については25μg/mLでも発育が阻止されたことから、より低濃度での検討を行った。この試験によって2,6-DH10が最も低濃度の4 μg/mL、2,6-DH8および2,6-DH12は同程度の8μg/mL、2,6-DH6は少なくとも50μg/mLで発育を阻止することが分かった。ここでMIC値がある程度幅をもった数値であることは念頭に置かなければならない。測定する菌の種類や薬剤機序による発育状態の差が生じるため、種々の要因で変動する可能性を含んでいる数値であることを考慮するべきである(田村ら、MICの測定の制度上の問題点)。これらの化合物の作用機序については解明できていないため、今後、詳細に検討する必要がある.
【０１０５】
本研究により、特には、2,6-DH8、2,6-DH10および2,6-DH12が、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌やバンコマイシン耐性腸球菌に対しても、高い抗菌活性を有することが確かめられた。また2,6-DH12は真菌Aspergillus brasiliensis、Penicillium citrinum、Alternaria alternataに対して抗真菌活性を示した。これにより、皮膚外用剤、化粧料、及び、手や指などに塗布する消毒剤や制菌剤、抗真菌剤、並びに防カビ剤などとしての応用の可能性があり、これらは、いずれも本願発明における抗菌・抗真菌剤ということができる。また、患者や医療従事者などが着用するマスク、エプロン、衣服などとして、さらには、シーツ、布団カバー、枕カバーなどの寝具材として、または、履物の中敷やカーテンなどとしての、抗菌繊維製品及び抗真菌繊維製品を得ることができる。特には、複数種の耐性菌、及び、真菌に対して、いずれも活性を示すことから、有用性及び利便性が非常に高い。
【０１０６】
このように全生物の半数を占めるともいわれる昆虫の分泌物は、抗菌作用ペプチドをはじめ、人間にとって有用な生物活性物質の探索源となりうる。また、新規の抗菌活性物質を求めて、海洋微生物などのこれまで手つかずであった微生物資源の利用が注目されているが、昆虫の生息環境中の微生物も探索資源として十分に利用可能である。例えば昆虫に寄生する菌類としては冬虫夏草が有名であるが、コウモリガの幼虫に寄生するCordyceps sinensisや，チョウ目の幼虫に寄生するサナギタケCodryceps militarisからは抗菌活性物質としてコルジセピンが発見されている(Y.-J.Ahn、2000)。ただし、冬虫夏草においても、創薬資源の一つと認知されたにすぎず、現状は昆虫に関わる微生物はほとんど未利用である(小林ら、2014)。こういった昆虫由来の微生物をターゲットとした有用物質の探索がさらに発展していくことを期待している。
【０１０７】
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