(57)【要約】【課題】ＡＧＥｓの生成を効率的に抑制する蛋白質糖化反応阻害剤を提供すること。【解決手段】ガロイル化フラボノール配糖体を有効成分として含有することを特徴とする、蛋白質糖化反応阻害剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガロイル化フラボノール配糖体を有効成分として含有することを特徴とする蛋白質糖化反応阻害剤。
【請求項２】
ガロイル化フラボノール配糖体が、ケルセチン−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド及びケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシドからなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１に記載の蛋白質糖化反応阻害剤。
【請求項３】
飲食品に、請求項１又は２に記載の蛋白質糖化反応阻害剤を添加することを特徴とする、ＡＧＥｓの生成を抑制する方法。
【請求項４】
化粧料に、請求項１又は２に記載の蛋白質糖化反応阻害剤を添加することを特徴とする、ＡＧＥｓの生成を抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛋白質糖化反応による最終生成物（Advanced Glycation End Products：「ＡＧＥｓ」と略称され、「終末糖化産物」とも呼ばれる）の生成を阻害する、蛋白質糖化反応阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖化反応（Glycation）とは、グルコース等の還元糖とアミノ酸や蛋白質とのアミノ・カルボニル反応のことを指し、１９１２年にL.C.Maillardが発見したことから、メイラード反応とも呼ばれる。この糖化反応は、かつては生体外、すなわち食品での研究が主に進められてきたが、１９６０年代頃からヒトを始めとする動物の生体内でも同様の反応が起こることが明らかとなった。
さらに、生体内で糖化反応によって生成される糖化蛋白は、老化現象や糖尿病合併症、アルツハイマーなどに関係することが近年明らかとなっていることから、この糖化反応を阻害する研究が盛んに行われている。
ヒトの体内に蓄積されるＡＧＥｓは、飲食品の摂取や化粧料の適用により、それらに含まれるＡＧＥｓが体内に入る場合と、体内で糖化反応が生じて蓄積される場合とがある。従って、老化現象や種々の疾患を有効に予防するためには、これら二つのルートによるＡＧＥｓの蓄積を防止することが重要である。
【０００３】
糖化反応には大別すると、前期糖化反応と後期糖化反応がある。
前期糖化反応では、還元糖とアミノ酸や蛋白質のアミノ基との反応からシッフ塩基が生成後、エナミノールを経て、アマドリ転位によって安定なアマドリ化合物が生成する。
後期糖化反応においては、前期糖化反応により生成したアマドリ化合物が脱水、酸化、縮合、環状化などを経て、糖化反応最終生成物であるＡＧＥｓに変化する。ＡＧＥｓとは、あくまでも糖化反応最終生成物の総称であり、一定の構造を示すものではない。これまでにＡＧＥｓとして、ペントシジン、ピロピリジン、クロスリン、カルボキシメチルリジンなどが同定されている。
【０００４】
ＡＧＥｓには物理化学的な特徴として蛍光性を示すものが複数あり、例えばピロピリジン（Pyrropyridine）、クロスリン（Crossline）などが挙げられ、これらはヒト血清アルブミンとグルコースより生成される。
そのうち、ピロピリジンとクロスリンは、励起波長３７０ｎｍ、蛍光波長４４０ｎｍの蛍光を示すことが知られている（以下この波長の蛍光を持つＡＧＥｓを「蛍光性ＡＧＥｓ」と記載することとする）。
【０００５】
ＡＧＥｓ産生阻害剤としてアミノグアニジン（Aminoguanidine）が知られている。この化合物は、もともと糖尿病合併症の治療薬として開発が進められ、糖尿病合併症である網膜症、腎障害、神経障害に有効であることがモデル動物で確認されている。しかし、アミノグアニジンの服用により種々の副作用が報告されている。
従って、重篤な副作用をもたらさない安全で効果の高いＡＧＥｓの産生を抑制する物質の研究が重要となっている。より高い安全性を図るためには、化学合成物よりも天然物、特に植物由来の成分である方が有利である。
【０００６】
そこで、植物に由来するＡＧＥｓ産生阻害剤の検討が従来からなされている。
例えば、特許文献１において、ボタン属植物抽出物、タツナミソウ属植物抽出物、セイヨウヤマハッカ属植物抽出物、ヒマワリ属植物抽出物、アロエ属植物抽出物、アマドコロ属植物抽出物、アマ属植物抽出物、バラ属植物抽出物、シナノキ属植物抽出物、カンアオ
イ属植物抽出物、ドクダミ属植物抽出物、カントウ属植物抽出物、ワレモコウ属植物抽出物、ハッカ属植物抽出物、ニワトコ属植物抽出物から選ばれるＡＧＥｓ生成抑制剤が提案されている。
【０００７】
また、特許文献２において、西洋バラ、ハイブリッドローズ、エイジツ、ブドウ葉、カキ葉、リンゴ葉、マリーゴールド花、モクレン葉の抽出物を有効成分とするメイラード反応阻害剤が提案されている。
【０００８】
また、特許文献３において、以下から選ばれる植物抽出物を含有するグリケーション阻害剤が提案されている。
アグリモニー、アシュワガンダ、アニス、アマチャヅル、甘葉懸鈎子、銀杏、ウイキョウ、ウイッチヘーゼル、ウコン、エキナセア、エゾウコギ、エルダー、エルバ・マテ、オリーブ、オレガノ、オレンジ、柿、カキドオシ、カミツレ、ガラナ、含羞草、菊、ギムネマ、キャッツクロー、キャットニップ、キラウェイ、キンギンカ、グァバ、クコヨウ、くまざさ、クミクスチン、黒大豆、くわ、シナモン、ケツメイシ、ゴーヤ、
【０００９】
コーラナッツ、ゴカヒ、ゴツコラ、コリアンダー、コンフリー、サキシマスオウ、サフラワー、サラシア・オブロンガ、サンザシ、サンシチニンジン、しそ、ジュウヤク、ジュニパーベリー、ジンジャー、杉、スギナ、ステビア、スペアミント、セイジ、セイボリー、セイヨウサンザシ、仙査、タイム、タヒボ、ダンデライオン、チャービル、チャノキ、チャボトケイソウ、チョウジ、デイジー、ディル、トチュウ、ニクズク、南姜、ネトル、白猪母邱、白花蛇舌草、ハゴロモソウ、バジル、ハス、半枝連、ヒース、ピーチ、ヒソップ、びわ、フィーバーフュー、フクギ、藤、プランタゴ・サイリュウム、ブルーベリー、ブルーマロウ、ペニーロイヤル、ベニバナ、ペパーミント、ホップ、ポリジ、
【００１０】
ポンドアップル、マシュマロー、マジョラム、マリーゴールド、マレイン、マロウスモール、マロウブルー、ミフクラギ、ミルクシスル、メデゥスイート、モッカ、ヤエヤマ  アオキ、ヤクルマギク、ヤローフラワー、ユーカリ、ヨクイニン、ヨモギ、ラズベリー、ラベンダー、リンデン、ルイボス、レモングラス、レモンタイム、レモンバーベナ、レモンバーム、ローズヒップ、ローズピンクバッツ、ローズマリー、ローズレッド、ローレル、羅布麻、ワイルドストロベリー。
【００１１】
また、特許文献４において、ヒシ科植物に由来する２，６−ジ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３−トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，６−トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、２，３，６−トリ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，４，６−テトラ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース、ルゴシンＤ、コルヌシインＧ、テリマグランジンII及びエラグ酸より選択される１又は複数の化合物を有効成分とし含有することを特徴とする終末糖化産物生成抑制剤が提案されている。
しかし、上記の抑制剤や阻害剤はいずれも、終末糖化産物生成に対する効果が十分ではないという課題を残していた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２００３−２１２７４９号公報
【特許文献２】特開２００６−２７３８１１号公報
【特許文献３】特開２０１０−２４８２１２号公報
【特許文献４】特開２０１８−８９２６号公報
【特許文献５】韓国公開特許第１０−２０１７−００１８１７０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、ＡＧＥｓ、特に蛍光性ＡＧＥｓの生成を効果的に抑制しうる有効成分を含む蛋白質糖化反応阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
上記課題を解決するために、本発明者らは、種々の天然由来成分について、蛋白質糖化反応阻害作用の有無、またその程度について鋭意検討した。
その結果、ガロイル化フラボノール配糖体が蛋白質糖化反応に対する優れた阻害作用を示し、その結果、ＡＧＥｓの生成を抑制することを見出した。さらに、ガロイル化フラボノール配糖体の中でも、ケルセチン−３−Ｏ−（２''−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド及びケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシドに優れた蛍光性ＡＧＥｓ生成抑制作用があることを見出した。
【００１５】
すなわち、本発明は以下の通りである。
〔１〕ガロイル化フラボノール配糖体を有効成分として含有することを特徴とする、蛋白質糖化反応阻害剤。
〔２〕ガロイル化フラボノール配糖体が、ケルセチン−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド及びケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシドよりなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする前記〔１〕に記載の蛋白質糖化反応阻害剤。
〔３〕飲食品に、前記〔１〕、〔２〕のいずれかに記載の蛋白質糖化反応阻害剤を添加することを特徴とする、ＡＧＥｓの生成を抑制する方法。
〔４〕化粧料に、前記〔１〕、〔２〕のいずれかに記載の蛋白質糖化反応阻害剤を添加することを特徴とする、ＡＧＥｓの生成を抑制する方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明により、生体内で生成する糖化反応最終生成物であるＡＧＥｓ、特に蛍光性ＡＧＥｓを効果的に抑制する蛋白質糖化反応阻害剤を提供することが可能となる。
さらに本発明の蛋白質糖化反応阻害剤は、製剤化が容易で種々の形態の製剤に適用でき、主に老化現象に対する医薬品、医薬部外品、食品、栄養補助食品（サプリメント）や化粧品などに幅広く応用することが期待される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】実施例１におけるハマナスの抽出及び分画工程を示すフローチャートである。
【図２】実施例１におけるハマナスの抽出及び分画工程（図１の続き）を示すフローチャートである。この段階で化合物１、２が得られる。
【図３】比較例１におけるハマナスの抽出及び分画工程を示すフローチャートである。この工程によって化合物３が得られる。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
〔１〕ガロイル化フラボノール配糖体
ガロイル化フラボノール配糖体は、通常のフラボノール配糖体の糖部分の水酸基のうち少なくとも一つが没食子酸とエステル結合した構造を有する。
本発明で用いるガロイル化フラボノイド配糖体を構成するフラボノール及び糖の種類、ガロイル基の数及び結合位置は特に限定されるものではないが、ガロイル化フラボノイド配糖体の中でも、下記の式（Ｉ）で表される、
化合物１：ケルセチン−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド
〔Quercetin-3-O-(2"-O-galloyl)-β-D-glucopyranoside〕、及び
化合物２：ケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド〔Kaempferol-3-O-(2"-O-galloyl)-β-D-glucopyranoside〕、
が特に好ましい。
【化１】
2020152672.tif 000002
【００１９】
ここで、特許文献５には、柿の葉の抽出物から得られるガロイル化フラボノール配糖体であるであるケルセチン−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド又はケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシドを有効成分として含有する血中グルコース抑制剤が記載されている。しかしながら、特許文献５には、当該ガロイル化フラボノール配糖体が蛋白質糖化反応を阻害する効果については何ら記載が無く示唆もされておらず、本発明を示唆する記載は無い。
本発明の蛋白質糖化反応阻害剤の対象となる終末糖化産物は、任意のタンパク質及び任意の糖より誘導される終末糖化産物であり、具体例としては、アルブミン、グロブリン等の血清タンパク質、コラーゲン、エラスチン等の細胞外マトリックスタンパク質、Ｇタンパク質等の膜タンパク質及び細胞内タンパク質の糖化により形成される終末糖化産物等が挙げられる。糖の典型例としては、血液及び体液中に高濃度で存在するグルコース及びフルクトースが挙げられる。
【００２０】
本発明の有効成分であるガロイル化フラボノール配糖体は、研究用試薬などの市販品を適宜購入して本発明の蛋白質糖化反応阻害剤の有効成分として使用することができる。
他の入手方法として、ガロイル化フラボノール配糖体を含有する植物から抽出・精製して有効成分として使用することもできる。
以下、ガロイル化フラボノール配糖体を植物から抽出し分離し、精製する場合について説明する。
【００２１】
〔２〕植物からガロイル化フラボノール配糖体を抽出する方法
（１）抽出する原材料
本発明で使用するガロイル化フラボノール配糖体は、これらを含むことが知られている植物を適宜選び、抽出、分離することにより調製することができる。
使用する植物は、ガロイル化フラボノール配糖体を含み、入手しやすく、有害物質や夾雑物が少ないといった理由で、抽出し易い植物であれば良く、特定の種類の植物に限定されない。
抽出効率等を考慮すると、ケルセチン−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド及びケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコ
ピラノシドの双方を含有する、バラ科バラ属のハマナス（Rosa rugosa）、コウシンバラ（R. chinensis）、カキノキ科カキノキ属のカキノキ（Diospyros kaki）などが好ましい。抽出対象の植物部位は、葉、茎、根、花、種子あるいは全草を抽出対象として使用することができる。
【００２２】
（２）抽出溶媒
ガロイル化フラボノール配糖体を含む植物の抽出処理に使用する抽出溶媒は、水、アルコール類（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなどの炭素数１〜３の低級アルコール、あるいは１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、１，２−ペンタンジオール、１，３−プロパンジオールなどの多価アルコール）などを、単独あるいは２種類以上の任意の比率の混液として使用することができる。
抽出溶媒の中でも、本発明では、水又はエタノール水溶液を用いることが、安全面から見て好ましく、効果の点からはエタノール水溶液を用いることが好ましく、通常は１０〜９５質量％エタノール水溶液、より好ましくは３０〜９５質量％エタノール水溶液、さらに好ましくは３０〜７０質量％エタノール水溶液が用いられる。
【００２３】
抽出溶媒としては、当該植物の乾燥体を基準として、通常は１〜５００倍量、好ましくは２〜２００倍量、より好ましくは４〜１００倍量、最も好ましくは５〜５０倍量用いられる。
用いる溶媒量が植物乾燥体の１倍量未満の場合は、抽出後の固液分離が困難になる場合があり、溶媒量が５００倍量を超えた場合は、使用目的に応じては濃縮する工程が別途必要となる場合がある。
抽出温度は、通常は０〜２００℃、好ましくは３０〜１５０℃、より好ましくは４０〜１００℃、さらに好ましくは５０〜９０℃で行われる。抽出溶媒が水又はエタノール水溶液の場合は、その沸騰温度で抽出することが好適である。
【００２４】
抽出時間は、抽出する温度にも依存するが、通常は０．１〜８時間、好ましくは０．２〜４時間、より好ましくは０．５〜２時間で行われる。
抽出時間が０．１時間未満の場合は抽出が十分行われていない可能性があり、抽出時間が８時間を超える場合は、経済的でない場合がある。好適な例として、０．５〜２時間程度かけて５０〜９０℃で加熱還流抽出した後、濾紙などを用いて固液分離して、ガロイル化フラボノール配糖体を含む抽出液を得る。
【００２５】
（３）単離・精製
前記ガロイル化フラボノール配糖体を含む抽出液は、そのままでも本発明の蛋白質糖化反応阻害剤として使用できるが、純度が低いため力価が低い。
そこで、吸着剤等を使用して、精製・単離して使用することが好ましい。
吸着剤としては、本発明の有効成分であるガロイル化フラボノール配糖体を吸着することが出来る吸着剤であれば特に限定されないが、合成吸着剤、アルミナ、シリカゲル、アルミニウムオキシド、アルキルシリル化シリカゲル、ゼオライトなどが例示される。アルコール水溶液、又はアルコール類で抽出した抽出液を吸着剤に吸着させる場合は、アルコールを除去した後、吸着剤に接触させることが好ましい。
【００２６】
本発明で使用する合成吸着剤としては、疎水性を示す多孔質の芳香族系合成樹脂吸着剤であって実質的にイオン交換能を有しないものあれば、特に限定されることはない。
好ましくは、その母体がスチレン系重合体、具体的にはスチレン・ジビニルベンゼン共重合体、例えば「アンバーライト（登録商標）XAD-4」（オルガノ株式会社製）、「ダイヤイオン（登録商標）HP-20」（三菱ケミカル株式会社製）、「セパビーズ（登録商標）SP-700」（三菱ケミカル株式会社製）、メタクリル系、例えば「ダイヤイオン（登録商標
）HP-2MG」（三菱ケミカル株式会社製）、デキストラン系、例えば「セファデックス（登録商標）G-25」（ＧＥ ヘルスケア・ジャパン株式会社製）などを使用することができる。
【００２７】
抽出液を吸着剤に吸着させる方法としては、抽出液に合成吸着剤を添加、撹拌し吸着後、濾過操作により合成吸着剤を回収するバッチ法、あるいは合成吸着剤を充填したカラムを用いて連続処理により吸着処理を行うカラム方式が採用されるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
合成吸着剤の使用量は、抽出液中に含まれる蛋白質糖化反応阻害成分の濃度にもよるが、抽出液に対して、０．１〜５０体積％であることが好ましい。抽出液を、合成吸着剤を充填したカラムに通液する条件としては、ＳＶ（空間速度）＝０．５〜５［ｈ-1］、好ましくは１〜３［ｈ-1］の通液速度で、合成吸着剤に対する通液倍数（ＢＶ）＝１〜１０［ｖ／ｖ］で通液するのが、効率的に蛋白質糖化反応阻害成分を吸着できるので好ましい。
【００２８】
（４）水洗浄処理
抽出液中に含まれる蛋白質糖化反応阻害成分を吸着処理した後、そのまま溶出液を用いて、蛋白質糖化反応阻害成分を回収しても良いが、合成吸着樹脂に吸着されない成分は、蛋白質糖化反応阻害活性が弱いため、水洗浄処理により除去することが好ましい。
抽出液中の蛋白質糖化反応阻害成分は、合成吸着剤と良好な吸着性を呈する。したがって、水を通液しても蛋白質糖化反応阻害成分は溶出されないため、水洗浄工程の条件は特に制限されないが、ＳＶ（空間速度）＝０．５〜５［ｈ-1］、好ましくは１〜３［ｈ-1］の通液速度で、合成吸着剤に対する通液倍数（ＢＶ）＝１〜１０［ｖ／ｖ］で通液するのが、効率的に水洗浄処理できるので好ましい。
【００２９】
（５）溶出処理
上記のようにして抽出液を合成吸着剤の吸着、水洗浄処理したのち、アルコール水溶液を通液させ、抽出物中の蛋白質糖化反応阻害成分を選択的に合成吸着剤から溶出させる。
アルコール水溶液は、水とアルコール類（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなどの炭素数１〜３の低級アルコール、あるいは１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、１，２−ペンタンジオール、１，３−プロパンジオールなどの多価アルコール）などを、単独あるいは２種類以上の任意の比率の混液として使用することができる。
【００３０】
アルコール水溶液としては、水とエタノールの混合物が好ましく、１０〜９９質量％エタノール水溶液が好ましく、２０〜７０質量％エタノールがさらに好ましい。溶出工程の条件は特に制限されないが、ＳＶ（空間速度）＝０．５〜５［ｈ-1］、好ましくは１〜３［ｈ-1］の通液速度で、合成吸着剤に対する通液倍数（ＢＶ）＝１〜１０［ｖ／ｖ］で通液するのが、効率的に蛋白質糖化反応阻害成分を溶出できるので好ましい。
【００３１】
（６）製剤化
ガロイル化フラボノール配糖体は、そのままでも蛋白質糖化反応阻害剤として十分に使用できるが、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において、付加的成分を添加する、あるいは他の有効成分と組み合わせて合剤にする等、種々変形して実施可能である。
例えば、ガロイル化フラボノール配糖体を公知の各種天然香料や合成香料と組み合わせて香料組成物にすることが例示される。
【００３２】
また、化粧品類などで通常使用される基剤、添加剤等を併用して、化粧品、医薬部外品用の製剤として使用できるほか、酸化防止剤（ビタミンＣ、ビタミンＥなど）や、糖類、甘味料、増粘安定剤、ｐＨ調整剤などと組み合わせて飲食品、健康食品、食品添加物、医薬品用の組成物としても使用できる。さらに、本蛋白質糖化反応阻害剤は、液剤以外の形
状、例えば乳液状、ベースト状、ゲル状、パウダー状（粉末状）、顆粒状、ペレット状、スティック状、固形状等の何れの形態として提供されてもよい。
【００３３】
〔３〕蛋白質糖化反応阻害剤の適用
背景技術の項で述べた通り、糖化反応は、食品等の生体外のみならずヒトを始めとする動物の生体内でも起こる。
本発明の蛋白質糖化反応阻害剤は、飲食品や化粧料などにおける蛋白質糖化反応を阻害するだけでなく、当該阻害剤をヒトが摂取することにより体内の蛋白質糖化反応を阻害することができ、医薬品や栄養補助食品、健康食品として幅広く適用することができる。
【００３４】
本発明の蛋白質糖化反応阻害剤を飲食品又は化粧料に添加することによって、飲食品や化粧料の中で生成されるＡＧＥｓ、特に蛍光性ＡＧＥｓの生成を抑制することができる。
飲食品の例としては、例えば、コーヒー、紅茶、清涼飲料、乳酸菌飲料、無果汁飲料、果汁入り飲料、栄養ドリンクなどの飲料類、リキュール、果実酒などの酒類、アイスクリーム、シャーベットなどの冷菓類、スナック類、栄養食品、ゼリー、プリン、羊かんなどのデザート類、クッキー、ケーキ、チョコレート、チューイングガム、饅頭などの菓子類、菓子パン、食パンなどのパン類、ラムネ菓子、タブレットなどの錠菓類、ハム、ソーセージ等の畜肉食品、ちくわ、かまぼこ等の魚肉食品、魚介類食品、ドレッシング、醤油、ジャム、ふりかけ等の調味料等を挙げることができる。
これら飲食品への本発明の蛋白質糖化反応阻害剤の添加量は、０．１ｐｐｍ〜１％、好ましくは１ｐｐｍ〜１０００ｐｐｍである。
【００３５】
また、化粧料の例としては、化粧水（ローション）、乳液、クリーム、オイル、軟膏、パック、リップ、口紅、ファンデーション、アイライナー、頬紅、マスカラ、アイシャドウー、マニキュア・ペディキュア、爪被覆剤、爪被覆除去剤、ひげ剃り用剤、シャンプー、リンス、ヘアトリートメント、ヘアトニック、ヘアスプレー、ヘアクリーム、ヘアローション、整髪料、育毛料、パーマネント液、染毛料、ハンドソープ、ボディーソープ、歯磨き剤、洗口料、洗顔料・石鹸類、香水、防臭制汗剤を挙げることができる。
これら化粧料への本発明の蛋白質糖化反応阻害剤の添加量は、０．１ｐｐｍ〜１％、好ましくは１ｐｐｍ〜１０００ｐｐｍである。
【実施例】
【００３６】
次に、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
〔実施例１〕（ガロイル化フラボノール配糖体の調製）
図１及び図２に示すフローチャートに従いガロイル化フラボノール配糖体を調製した。
市販の乾燥したハマナスの花蕾（生薬名マイカイカ）３６２gに７０％含水アセトンを２Ｌ加え還流抽出した。濾過後、残渣に対して前記と同じ条件で含水アセトンによる還流抽出を２回行った。得られた含水アセトン抽出液をエバポレーターで１Ｌになるまで濃縮した。更にこれにジエチルエーテルを加え分液し、水層に酢酸エチルを加え分液した。これらの操作から得られた水層、酢酸エチル層、ジエチルエーテル層をそれぞれ濃縮、乾燥することにより、水層からＷ画分１０９．７ｇ、酢酸エチル層からはＳ画分２６．９ｇ、ジエチルエーテル層からＥ画分５．５ｇを得た。
【００３７】
得られたＳ画分をＭＣＩ―ＧＥＬカラムクロマトグラフィーに付し、８つの画分に粗分けし、１０％メタノール溶出部からａ（８９３ｍｇ）、３０％メタノール溶出部からｂ（６．７８ｇ）、５０％メタノール溶出部からｃ（２３３ｇ）、ｄ（８．５０ｇ）、７０％メタノール溶出部からｅ（２．５７ｇ）、ｆ（１２９ｍｇ）、１００％メタノール溶出部からｇ（２．２５ｇ）、ｈ（５９７ｍｇ）を得た。
【００３８】
ｅ画分をトヨパール  ＨＷ＝４０Ｆ（φ２．６ｃｍ×４６ｃｍ）に付し、水：メタノール＝１：１、水：アセトン＝１：１で順次溶出し、水：メタノール＝１：１溶出部からｅ−１（３３．６ｍｇ）、ｅ−２（１９．１ｍｇ）、ｅ−３（３１．６ｍｇ）、ｅ−４（１７.０ｍｇ）、ｅ−５（５５．９ｍｇ）、ｅ−６（１９２ｍｇ）、ｅ−７（１９９ｍｇ）、ｅ−８（７９．７ｍｇ）、ｅ−９（２５．６ｍｇ）、ｅ−１０（１７４ｍｇ）、ｅ−１１（１．８０ｍｇ）、水：アセトン＝１：１溶出部からｅ−１２（１４８ｍｇ）を得た。
【００３９】
ｅ−７画分（１９９ｍｇ）をＨＰＬＣ（カラム:カプセルパック  Ｃ１８  ＭＧ３  ５μｍ、φ１０ｍｍ×１５０ｍｍ、ｓｏｌｖｅｎｔ  A：０．１％ＴＦＡ、ｓｏｌｖｅｎｔ
Ｂ：アセトニトリル、イソクラティック：２２％  ｓｏｌｖｅｎｔ Ｂ（０−３０ｍｉｎ）、流速:２．５ｍＬ／ｍｉｎ、検出器：ＵＶ２５４ｎｍ）により分取し、ｅ−７−１（５．６ｍｇ）、ｅ−７−２（４．７ｍｇ）を得た。
【００４０】
ｅ−８画分（７９．７ｍｇ）をＨＰＬＣ（カラム：カプセルパック  Ｃ１８  ＭＧ３  ５μｍ、φ１０ｍｍ×１５０ｍｍ、ｓｏｌｖｅｎｔ Ａ：０．１％ＴＦＡ、ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｂ：アセトニトリル、グラジュエント：２０−４０％  ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｂ（０−３０ｍｉｎ）、流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ、検出器：ＵＶ２５４ｎｍ）により分取し、ケルセチン−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１、２４．７ｍｇ）及びケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２、２６．８ｍｇ）を得た。
得られた各化合物１、２は、ＮＭＲを用いて同定を行った。以下に同定資料を示す。
【００４１】
ケルセチン−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１）
収量２４．７ｍｇ、黄色粉末、ＥＳＩ−ＭＳ（positive）：ｍ／ｚ＝６３９［Ｍ＋Ｎａ］+、比旋光度 [α]D＝−７６．０°（ｃ＝１．０、ＭｅＯＨ）（文献値−８７．３°、ｃ＝１．０、ＭｅＯＨ）。1Ｈ及び13Ｃ−ＮＭＲデータ（５００、１２５ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）ならびに文献値を表１と表２に示す。
参照文献：S. Ochir, T. Yuki, T. Kanazawa, M. Nishizawa, T. Yamagishi, Chemistry of Natural Componds, 49, 940-942 (2013)。
【００４２】
【表１】
2020152672.tif 000003
【００４３】
【表２】
2020152672.tif 000004
【００４４】
ケンフェロール−３−Ｏ−（２”−Ｏ−ガロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２）
収量２６．８ｍｇ、黄色粉末、ＥＳＩ−ＭＳ（positive）：ｍ／ｚ＝６２３［Ｍ＋Ｎａ］+、比旋光度 [α]D＝−９１．２°（ｃ＝１．０、ＭｅＯＨ）（文献値−７８．６、ｃ＝１．０、ＭｅＯＨ）。1Ｈ及び13Ｃ−ＮＭＲデータ（５００、１２５ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）ならびに文献値を表３と表４に示す。
参照文献： S. Ochir, T. Yuki, T. Kanazawa, M. Nishizawa, T. Yamagishi, Chemistry
of Natural Componds, 49, 940-942 (2013)。
【００４５】
【表３】
2020152672.tif 000005
【００４６】
【表４】
2020152672.tif 000006
【００４７】
〔比較例１〕（テリマグランジンIIの調製）
比較例として既知の蛋白質糖化反応阻害剤であるテリマグランジンII（前記特許文献４）を図３に示すフローチャートに従い調製した。
ハマナスから調製した前記S画分（３ｇ）をウルトラパック（２６φ×３００ｍｍ）に付し、ｓｏｌｖｅｎｔ  Ａ：０．１％ＴＦＡ、ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｂ：アセトニトリル、グラジュエント：ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｂ＝０％（０−１０ｍｉｎ）、０−３０％（１０−６０ｍｉｎ）、  ３０％（６０−７０ｍｉｎ）、３０−８０％（７０−９０ｍｉｎ）、８０％（９０−１００ｍｉｎ）、流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎで順次溶出し、ｓ−１（１５４ｍｇ）、ｓ−２（２６６ｍｇ）、ｓ−３（２．５６ｇ）、ｓ−４（３５９ｍｇ）、ｓ−５（２６．３ｍｇ）を得た。
【００４８】
ｓ−３画分（２．５６  ｇ）をＨＰＬＣ（カラム：カプセルパック  Ｃ１８  ＭＧ３  ５μｍ、φ１０ｍｍ×１５０ｍｍ、ｓｏｌｖｅｎｔ  Ａ：０．１％ＴＦＡ、ｓｏｌｖｅｎ
ｔ  Ｂ：アセトニトリル、グラジュエント：ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｂ＝１５−８５％（０ｍｉｎ―６０ｍｉｎ）、８５−１００％（６０ｍｉｎ―７０ｍｉｎ）、流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ）により分取し、テリマグランジンII（化合物３、３８．８ｍｇ）を得た。得られた化合物３は、ＮＭＲを用いて同定を行った。以下に同定資料を示す。
【００４９】
テリマグランジンII（化合物３）
収量３８．８ｍｇ、淡褐色粉末、ＥＳＩ−ＭＳ（positive）：ｍ／ｚ＝９３８［Ｍ＋Ｎａ］+、比旋光度 [α]D＝−５７．１°（ｃ＝１．０、ａｃｅｔｏｎｅ）（文献値−５７．１°、ａｃｅｔｏｎｅ）。1Ｈ及び13Ｃ−ＮＭＲデータ（４００、１２５ＭＨｚ、ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6）ならびに文献値を表５に示す。
参照文献： T. Yoshida, T. Hatano, T. Okuda, M. U. Memon, T. Shingu, K. Inoue, Chem. Pharm. Bull., 32, 1790-1799 (1984）。G. Nonaka, M. Harada, I. Nishioka, Chem. Pharm. Bull., 28, 685-687 (1980）。
【００５０】
【表５】
2020152672.tif 000007
【００５１】
〔試験例１〕（蛍光性ＡＧＥｓ生成抑制作用の測定）
実施例１で得られた化合物１、化合物２及び比較例で得られた化合物３について、以下の通り、蛍光性ＡＧＥｓ生成抑制作用の測定を行った。
対照品として化学合成品のＡＧＥｓ産生阻害剤であるアミノグアニジン（和光純薬社製
の試薬、塩酸アミノグアニジン）を使用した。
【００５２】
〔検体の調製〕
化合物１〜３及びアミノグアニジンをリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）（以下「ＰＢＳ」と省略する。）に溶解して５ｍＭ溶液（最終濃度５００μＭ）を作製した。
なお、ＰＢＳは、リン酸二水素カリウム、塩化カリウム、リン酸水素ナトリウム・１２水和物、塩化ナトリウム及び精製水から調製した。
【００５３】
〔試験の手順〕
ヒト血清アルブミン (ＨＳＡ)（SIGMA社製「A1653」）をＰＢＳで溶解して５ｍｇ／ｍＬに調製し、次にメチルグリオキサール（ＭＧＯ）（MP Biomedicals,LLC 155558）をＨＳＡ水溶液に加えて5 ｍＭに調製した (ＨＳＡ−ＭＧＯ水溶液) 。ＰＢＳ６００μＬ、ＨＳＡ−ＭＧＯ水溶液３００μＬ、検体１００μＬを混合し、６０℃のインキュベータ中にて２４時間反応させた。
【００５４】
反応後、蛍光マイクロプレートリーダー（励起波長３７０ｎｍ、蛍光波長４４０ｎｍ）にて蛍光強度を測定した（以下、ＭＧＯ（＋）・サンプルという）。
対照として、ＨＳＡ−ＭＧＯ水溶液を添加せず、代わりにＨＳＡ水溶液を添加したものを測定した（以下、ＭＧＯ（−）・サンプルという）。
コントロールとして、検体を含有しないもの（以下、ＭＧＯ（＋）・コントロールという）、検体及びＭＧＯを含有しないもの（以下、ＭＧＯ（−）・コントロールという）を測定した。蛍光性ＡＧＥｓ生成率は、以下の式により算出した。
【００５５】
【数１】
2020152672.tif 000008
【００５６】
〔結果及び実施例の効果〕
得られた結果を表６に示す。
表６の結果から、実施例１のガロイル化フラボノール配糖体（化合物１，２）は比較例１のテリマグランジンII（化合物３）及び対照品であるアミノグアニジンよりも強い活性を示すことが明らかとなった。
【００５７】
【表６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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