(57)【要約】      （修正有）【課題】低分子Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、および低分子Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の提供。【解決手段】リンカーによって抗体に連結されている薬物を含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、薬物が、構造式（ＩＩａ）であるＡＤＣを提供する。該ＡＤＣは、調節不全のアポトーシス経路を伴う疾患の処置に対する治療的手法として、抗アポトーシスＢｃｌ  ｘＬタンパク質を阻害するのに有用である。2020152726.tif 000116【選択図】図１Ａ
2020152726.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンカーによって抗体に連結されている薬物を含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、薬物が、構造式（ＩＩａ）：
【化１】
2020152726.tif 000098
によるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤または医薬として許容されるこの塩（式中、
Ａｒは、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよい
【化２】
2020152726.tif 000099
から選択され、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨおよびＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）およびＳ（Ｏ２）から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４  Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびＣ１−４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３およびＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃは、それぞれ、水素、ハロ、Ｃ１−６アルカニル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよびＣ１−６ハロアルキルから相互に独立して選択され、
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、それぞれ、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮおよびＳＣＨ３から相互に独立して選択され、
ｎは、０、１、２または３であり、
＃は、リンカーＬへの結合点を表す。）である、抗体薬物コンジュゲート。
【請求項２】
１−１０の薬物対抗体比を有する、請求項１に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項３】
リンカーが、リソソーム酵素によって切断可能である、請求項１に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項４】
リソソーム酵素がカテプシンＢである、請求項３に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項５】
リンカーが、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）または（ＩＶｃ）によるセグメント：
【化３】
2020152726.tif 000100
またはこれらの塩を含み、式中、
ペプチドは、リソソーム酵素により切断可能なペプチド（Ｎ→Ｃで表示されており、この場合、ペプチドは、アミノおよびカルボキシ「末端」を含む。）を表し、
Ｔは、１つ以上のエチレングリコール単位を含むポリマー、もしくはアルキレン鎖、またはこれらの組合せを表し、
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびスルホン酸メチルから選択され、
ｐは、０から５の範囲の整数であり、
ｑは、０または１であり、
ｘは、０または１であり、
ｙは、０または１であり、
【化４】
2020152726.tif 000101
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤へのリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残りへの結合点を表す、
請求項３に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項６】
ペプチドが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ａｓｎ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｓｎ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｖａｌ、Ｓｅｒ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｓｅｒ、Ｌｙｓ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｌｙｓ、Ａｓｐ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｓｐ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｉｌｅ、Ｐｈｅ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｃｉｔ−ＴｒｐおよびＴｒｐ−Ｃｉｔ、またはこれらの塩からなる群から選択される、請求項５に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項７】
リソソーム酵素がβ−グルクロニダーゼまたはβ−ガラクトシダーゼである、請求項３に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項８】
リンカーが、構造式（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（Ｖｃ）または（Ｖｄ）によるセグメント：
【化５】
2020152726.tif 000102
2020152726.tif 000103
またはこれらの塩を含み、式中、
ｑは、０または１であり、
ｒは、０または１であり、
Ｘ１は、ＯまたはＮＨであり、
【化６】
2020152726.tif 000104
は、薬物へのリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残りへの結合点を表す、
請求項７に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項９】
リンカーが、１から６つのエチレングリコール単位を有するポリエチレングリコールセグメントを含む、請求項１に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項１０】
抗体が、腫瘍細胞に発現する細胞表面受容体または腫瘍関連抗原に結合する、請求項１に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項１１】
抗体が、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭおよびＮＣＡＭ１から選択される細胞表面受容体または腫瘍関連抗原の１つに結合する、請求項１０に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項１２】
抗体が、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭまたはＮＣＡＭ１に結合する、請求項１１に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項１３】
抗体がＥｐＣＡＭに結合する、請求項１１に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項１４】
構造式（Ｉ）による化合物：、
【化７】
2020152726.tif 000105
またはこの塩（式中、
Ｄは薬物であり、
Ｌはリンカーであり、
Ａｂは抗体であり、
ＬＫは、リンカーＬを抗体Ａｂに連結する共有結合性連結基を表し、
ｍは、１から２０の範囲の整数である。）である、請求項１に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項１５】
ｍが１−８の範囲の整数である、請求項１４に記載のＡＤＣ、または医薬として許容されるこの塩。
【請求項１６】
ｍが、２、３または４である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項１７】
Ａｒが、
【化８】
2020152726.tif 000106
から選択され、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよい、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項１８】
Ａｒが、
【化９】
2020152726.tif 000107
である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項１９】
Ｚ１が、Ｎである、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２０】
Ｚ１が、ＣＨである、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２１】
Ｚ２が、Ｏである、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２２】
Ｒ１が、メチルおよびクロロから選択される、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２３】
Ｒ２が、水素およびメチルから選択される、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２４】
Ｒ２が、水素である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２５】
Ｒ１０ａがハロであり、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃが、それぞれ水素である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２６】
Ｒ１０ａがフルオロであり、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃが、それぞれ水素である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２７】
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃが、それぞれ水素である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２８】
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂが、同一である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項２９】
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂがそれぞれメチルである、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項３０】
ｎが、０または１である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項３１】
Ｄが、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７およびＷ１．０８、ならびに医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択される、請求項１４に記載のＡＤＣ。
【請求項３２】
リンカーＬが、ＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３、および医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択される、請求項１４に記載のＡＤＣ。
【請求項３３】
ＬＫが、抗体Ａｂのアミノ基と形成される連結基である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項３４】
ＬＫが、アミドまたはチオウレアである、請求項３３に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項３５】
ＬＫが、抗体Ａｂのスルフヒドリル基と形成される連結基である、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項３６】
ＬＫが、チオエーテルである、請求項３５に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項３７】
抗体Ａｂが、ＥＧＦＲまたはＮＣＡＭ１に結合する、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項３８】
抗体Ａｂが、ＥＧＦＲに結合する、請求項１４に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項３９】
Ｄが、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７およびＷ１．０８、ならびに医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択され、
Ｌが、リンカーＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３、およびこれらの塩からなる群から選択され、
ＬＫが、アミド、チオウレアおよびチオエーテルからなる群から選択され、
ｍが、１から８の範囲の整数である、
請求項１４に記載のＡＤＣ。
【請求項４０】
Ａｂが、ＥＧＦＲまたはＮＣＡＭ１に結合する、請求項３９に記載のＡＤＣまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項４１】
請求項１から４０のいずれか一項に記載のＡＤＣ、ならびに担体、賦形剤および／または希釈剤を含む組成物。
【請求項４２】
ヒトにおいて医薬として使用するために製剤化されている、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
単位剤形である、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
構造式Ｄ−Ｌ−Ｒｘによるシントンまたは医薬として許容されるこの塩（式中、
Ｄが薬物であり、
Ｌが、リンカーであり、
Ｒｘが、シントンを抗体に共有結合により連結することが可能な官能基を含む部分であり、
さらに、薬物Ｄが、構造式：
【化１０】
2020152726.tif 000108
によるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤または医薬として許容されるこれらの塩であり、
式中、
Ａｒは、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよい
【化１１】
2020152726.tif 000109
から選択され、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨおよびＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）およびＳ（Ｏ２）から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４  Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびＣ１−４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３およびＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃは、それぞれ、水素、ハロ、Ｃ１−６アルカニル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよびＣ１−６ハロアルキルから相互に独立して選択され、
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、それぞれ、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮおよびＳＣＨ３から相互に独立して選択され、
ｎは、０、１、２または３であり、
＃は、リンカーＬへの結合点を表す。）。
【請求項４５】
リンカーが、リソソーム酵素によって切断可能である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項４６】
リソソーム酵素がカテプシンＢである、請求項４５に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項４７】
リンカーが、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）または（ＩＶｃ）によるセグメント：
【化１２】
2020152726.tif 000110
を含み、
式中、
ペプチドが、リソソーム酵素により切断可能なペプチド（Ｎ→Ｃで表示されており、この場合、ペプチドはアミノおよびカルボキシ「末端」を含む。）を表し、
Ｔは、１つ以上のエチレングリコール単位を含むポリマー、もしくアルキレン鎖、またはこれらの組合せを表し、
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびスルホン酸メチルから選択され、
ｐは、０から５の範囲の整数であり、
ｑは、０または１であり、
ｘは、０または１であり、
ｙは、０または１であり、
【化１３】
2020152726.tif 000111
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤へのリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残りへの結合点を表す、
請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項４８】
ペプチドが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ａｓｎ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｓｎ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｖａｌ、Ｓｅｒ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｓｅｒ、Ｌｙｓ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｌｙｓ、Ａｓｐ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｓｐ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｉｌｅ、Ｐｈｅ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｃｉｔ−ＴｒｐおよびＴｒｐ−Ｃｉｔからなる群から選択される、請求項４７に記載のシントンまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項４９】
リソソーム酵素がβ−グルクロニダーゼまたはβ−ガラクトシダーゼである、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項５０】
リンカーが、構造式（Ｖａ）、（Ｖｂ）または（Ｖｃ）によるセグメント：
【化１４】
2020152726.tif 000112
または医薬として許容されるこれらの塩を含み、式中、
ｑは、０または１であり、
ｒは、０または１であり、
Ｘ１は、ＯまたはＮＨであり、
【化１５】
2020152726.tif 000113
は、薬物へのリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残りへの結合点を表す、
請求項４９に記載のシントン。
【請求項５１】
リンカーが、１から６つのエチレングリコール単位を有するポリエチレングリコールセグメントを含む、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項５２】
Ａｒが、
【化１６】
2020152726.tif 000114
から選択され、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよい、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項５３】
Ａｒが、
【化１７】
2020152726.tif 000115
である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項５４】
Ｚ１がＮである、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項５５】
Ｚ１がＣＨである、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項５６】
Ｚ２がＯである、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項５７】
Ｒ１が、メチルおよびクロロから選択される、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項５８】
Ｒ２が、水素およびメチルから選択される、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項５９】
Ｒ２が水素である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項６０】
Ｒ１０ａがハロであり、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃが、それぞれ水素である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項６１】
Ｒ１０ａがフルオロであり、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃが、それぞれ水素である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項６２】
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃが、それぞれ水素である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項６３】
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂが、同一である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項６４】
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂが、それぞれメチルである、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項６５】
ｎが、０または１である、請求項４４に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項６６】
Ｄが、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７およびＷ１．０８、ならびに医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択される、請求項４４に記載のシントン。
【請求項６７】
リンカーＬが、リンカーＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３および医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択される、請求項４４に記載のシントンおよび医薬として許容されるこの塩。
【請求項６８】
Ｒｘが、シントンを抗体のアミノ基に連結することが可能な官能基を含む、請求項４４に記載のシントンおよび医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項６９】
Ｒｘが、ＮＨＳ−エステルまたはイソチオシアネートを含む、請求項６８に記載のシントンおよび医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項７０】
Ｒｘが、シントンを抗体のスルフィドリル基に連結することが可能な官能基を含む、請求項６６に記載のシントンおよび医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項７１】
Ｒｘが、ハロアセチルまたはマレイミドを含む、請求項７０に記載のシントンおよび医薬として許容されるこれらの塩。
【請求項７２】
Ｄが、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７およびＷ１．０８、ならびに医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択され、
Ｌが、リンカーＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３、およびこれらの塩からなる群から選択され、
Ｒｘが、ＮＨＳ−エステル、イソチオシアネート、ハロアセチルおよびマレイミドからなる群から選択される官能基を含む、請求項６６に記載のシントンまたは医薬として許容されるこの塩。
【請求項７３】
請求項４４から７２のいずれか一項に記載のシントンが抗体に共有結合により連結する条件下において、腫瘍細胞に発現する細胞表面受容体または腫瘍関連抗原に結合する抗体をシントンに接触させるステップにより形成されるＡＤＣ。
【請求項７４】
接触させるステップが、ＡＤＣが２、３または４のＤＡＲを有するような条件下において行われる、請求項７３に記載のＡＤＣ。
【請求項７５】
請求項７３または７４に記載のＡＤＣ、ならびに賦形剤、担体および／または希釈剤を含む、組成物。
【請求項７６】
ヒトにおいて医薬として使用するために製剤化されている、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
単位剤形である、請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
ＡＤＣを作製する方法であって、請求項６３から６９のいずれか一項に記載のシントンが抗体に共有結合により連結する条件下において、シントンを抗体に接触させるステップを含む方法。
【請求項７９】
Ｂｃｌ−ｘＬを発現する細胞におけるＢｃｌ−ｘＬ活性を阻害する方法であって、細胞に結合することが可能な、請求項１から４０および７３から７４のいずれか一項に記載のＡＤＣが細胞に結合する条件下において、細胞をＡＤＣに接触させるステップを含む方法。
【請求項８０】
Ｂｃｌ−ｘＬを発現する細胞におけるアポトーシスを誘導する方法であって、細胞に結合することが可能な、請求項１から４０および７３から７４のいずれか一項に記載のＡＤＣが細胞に結合する条件下において、細胞をＡＤＣに接触させるステップを含む方法。
【請求項８１】
調節不全の内因性アポトーシスを伴う疾患を処置する方法であって、調節不全のアポトーシスを伴う疾患を有する対象に、治療的利益をもたらすのに有効な量の請求項１から４０および７３から７４のいずれか一項に記載のＡＤＣを投与するステップを含む、内因性アポトーシスが調節不全となっている細胞の細胞表面受容体に、ＡＤＣの抗体が結合する、方法。
【請求項８２】
がんを処置する方法であって、がんを有する対象に、治療的利益をもたらすのに有効な量の、がん細胞の表面に発現する細胞表面受容体または腫瘍関連抗原に結合することが可能な、請求項１から４０および７３から７４のいずれか一項に記載のＡＤＣを投与するステップを含む方法。
【請求項８３】
ＡＤＣが単剤療法として投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項８４】
処置されているがんが、腫瘍形成性がんである、請求項７４に記載の方法。
【請求項８５】
ＡＤＣが、別の化学治療剤放射線療法の補助として投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項８６】
ＡＤＣが、化学療法および／または放射線療法の開始と同時に投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ＡＤＣが、化学療法および／または放射線療法の開始前に投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
ＡＤＣが、腫瘍細胞が標準的化学療法および／または放射線療法に対して感作するのに有効な量で投与される、請求項８５から８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
標準的な細胞毒性剤および／または放射線に対して腫瘍を感作する方法であって、この腫瘍に結合することが可能な、請求項１から４０および７３から７４のいずれか一項に記載のＡＤＣを、標準的な細胞毒性剤および／または放射線に対して腫瘍細胞を感作するのに有効な量で腫瘍に接触させるステップを含む方法。
【請求項９０】
腫瘍が標準的な細胞毒性剤および／または放射線による処置に抵抗性となった、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
腫瘍が標準的な細胞毒性剤および／または放射線療法にこれまで曝露されてこなかった、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
シントンの実施例２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．１０、２．１２、２．１７、２．１８、２．２１、２．２２、２．２３、２．２４、２．２５、２．２６、２．２７、２．２８、２．２９、２．３０、２．３１、２．３２、２．３３、２．３４、２．３５、２．３６、２．３７、２．３８、２．３９、２．４０、２．４１、２．４２、２．４３、２．４４、２．４５、２．４６、２．４７、２．４８、２．４９、２．５０、２．５１、２．５２、２．５３からなる群および医薬として許容されるこれらの塩から選択される、シントン。
【請求項９３】
抗体にコンジュゲートされている請求項９２に記載のシントンを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）または医薬として許容されるこれらの塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、Ｂｃｌ−ｘＬ抗アポトーシスタンパク質の活性を阻害する化合物、これらの阻害剤を含む抗体薬物コンジュゲート、これらの阻害剤および抗体薬物コンジュゲートの合成に有用な方法、阻害剤を含む組成物、ならびに抗体薬物コンジュゲート、ならびに抗アポトーシス性Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質が発現される疾患を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスは、すべての生存種の組織ホメオスタシスにとって、必須の生物学的過程として認識されている。哺乳動物において、特に、アポトーシスは、胚の初期発達を調節することが示された。生命の後半において、細胞死は、潜在的に危険な細胞（例えば、がん性欠損を有する細胞）が除去される、既定の機構である。いくつかのアポトーシス経路は明らかにされており、最も重要なものの１つは、タンパク質のＢｃｌ−２ファミリーを伴い、このファミリーは、アポトーシスのミトコンドリア（「内因性」とも呼ばれる。）経路の重要な調節因子である。ＤａｎｉａｌおよびＫｏｒｓｍｅｙｅｒ、２００４年、Ｃｅｌｌ  １１６巻：２０５−２１９頁を参照されたい。
【０００３】
調節不全のアポトーシス経路は、例えばアルツハイマー病のような神経変性状態（下方調節されたアポトーシス）；ならびに例えば、がん、自己免疫疾患および血栓形成促進性状態のような増殖性疾患（上方調節されたアポトーシス）のような、多数の深刻な疾患の病理に関与している。
【０００４】
一面において、下方調節されたアポトーシス（およびより特に、タンパク質のＢｃｌ−２ファミリー）ががん性悪性腫瘍の発生に関与しているという示唆が、この依然として捉えどころがない疾患を標的とする新規方法となることを明らかにした。例えば、抗アポトーシスタンパク質であるＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘＬは、多くのタイプのがん細胞において、過剰発現されるという研究が示されている。Ｚｈａｎｇ、２００２年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ／Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １巻：１０１頁；Ｋｉｒｋｉｎら、２００４年、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １６４４巻：２２９−２４９頁；およびＡｍｕｎｄｓｏｎら、２０００年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０巻：６１０１−６１１０頁を参照されたい。この調節解除の影響は、それがなかったなら正常状態においてアポトーシスを受けたはずの変質細胞が生存してしまうことである。調節不全の増殖に伴うこれらの欠陥の繰り返しが、がんの発生の開始点であると考えられている。
【０００５】
これらの、および多数の他の知見は、がんを標的とするための薬物発見における新規な戦略の出現を可能にした。低分子が細胞に侵入し、抗アポトーシスタンパク質の過剰発現に打ち勝つことができれば、アポトーシス過程を解除することが可能になると思われる。この戦略は、これが、通常、アポトーシスによる調節解除（異常な生存）の結果である薬物抵抗性の問題を緩和することができるという利点を有することができる。
【０００６】
研究者らは、血小板も、内因性アポトーシス経路によってプログラム細胞死を実行するために必要なアポトーシス機構（例えば、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−２、シトクロムｃ、カスパーゼ−９、カスパーゼ−３およびＡＰＡＦ−１）を含むことも実証した。血小板産生物の血液循環は、正常な生理学的過程であるが、いくつかの疾患は、血小板の過剰、もしくは血小板の望ましくない活性化によって引き起こされる、または悪化する。上記のことは、哺乳動物における、血小板中の抗アポトーシスタンパク質を阻害すること、および血小板の数を低下させることができる治療剤は、血小板の過剰、もしくは血小板の望ましくない活性化を特徴とする、血栓形成状態および疾患を処置するのに有用となり得ることを示唆する。
【０００７】
多数のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が、調節不全のアポトーシス経路を伴う疾患（例えば、がん）の処置のために開発されてきた。しかし、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、標的細胞（例えば、がん細胞）以外の細胞に作用する恐れがある。例えば、前臨床研究は、Ｂｃｌ−ｘＬの薬理学的不活性化は、血小板の半減期を低下させて、血小板減少症を引き起こすことを示した（Ｍａｓｏｎら、２００７年、Ｃｅｌｌ  １２８巻：１１７３−１１８６頁を参照されたい。）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】ＤａｎｉａｌおよびＫｏｒｓｍｅｙｅｒ、２００４年、Ｃｅｌｌ  １１６巻：２０５−２１９頁
【非特許文献２】Ｚｈａｎｇ、２００２年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ／Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １巻：１０１頁；
【非特許文献３】Ｋｉｒｋｉｎら、２００４年、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １６４４巻：２２９−２４９頁
【非特許文献４】Ａｍｕｎｄｓｏｎら、２０００年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０巻：６１０１−６１１０頁
【非特許文献５】Ｍａｓｏｎら、２００７年、Ｃｅｌｌ  １２８巻：１１７３−１１８６頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
アポトーシスを調節する際にＢｃｌ−ｘＬが重要であることを考慮すると、Ｂｃｌ−ｘＬのような抗アポトーシス性Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質の発現または過剰発現によりアポトーシスが調節不全となっている疾患の処置に対する手法として、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を選択的または非選択的のどちらか一方により阻害する薬剤が当分野において依然として必要とされている。したがって、用量が制限される毒性を軽減した新規Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤が必要とされている。
【００１０】
さらに、毒性を制限する、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を送達する新規方法が必要とされている。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤について、探索されていない、細胞に薬物を送達する可能性のある手段の１つは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の使用による送達である。ＡＤＣは、リンカーによって細胞毒性薬物をモノクローナル抗体に化学的に連結することにより形成される。ＡＤＣのモノクローナル抗体は、細胞（例えば、がん細胞）の標的抗原に選択的に結合して、該薬物を細胞に放出する。ＡＤＣは抗体の特異性と薬物の潜在的な毒性とを合わせ持つので、ＡＤＣは治療可能性を有する。それにもかかわらず、治療剤としてＡＤＣを開発することは、不都合な毒性プロファイル、低い有効性および不十分な薬理学的パラメータのような様々な因子のために、これまで限定的にしか成功していない。したがって、これらの問題を克服して、がん細胞を標的とするよう、Ｂｃｌ−ｘＬを選択的に送達することができる新規ＡＤＣの開発は、重要な発見になると思われる。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
Ｂｃｌ−ｘＬの阻害、およびこの結果として起こるアポトーシスの誘導が有益と思われる場合、Ｂｃｌ−ｘＬの低分子阻害剤は、細胞表面に発現される抗原に結合する抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ；イムノコンジュゲートとも呼ばれる。）の形態で投与されると効果的であることが、今や発見された。この発見は、所望の治療的利益を実現するために必要な血清レベルを潜在的に低下させる、ならびに／または低分子Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤それ自体の全身的投与に伴う潜在的な副作用を回避および／もしくは改善する、対象とする特定の細胞および／または組織への、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤による治療を目標とすることを初めて可能にするものである。
【００１２】
したがって、一態様において、本開示は、とりわけ、調節不全のアポトーシス経路を伴う疾患の処置に対する治療的手法として、抗アポトーシス性Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質を阻害するのに有用な、Ｂｃｌ−ｘＬの阻害剤を含むＡＤＣを提供する。ＡＤＣは、一般に、リンカーによって、対象とする標的細胞に発現される抗原に特異的に結合する抗体に連結されている、Ｂｃｌ−ｘＬの低分子阻害剤を含む。
【００１３】
ＡＤＣの抗体は、対象とする標的細胞の表面上で発現される抗原に結合する任意の抗体とすることができるが、通常、必ずしも特異的ではない任意の抗原とすることができる。対象とする標的細胞は、例として非限定的に、Ｂｃｌ−ｘＬを発現または過剰発現する腫瘍細胞を含めた、抗アポトーシス性Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質の阻害によるアポトーシスの誘導が望ましい細胞を一般に含む。標的抗原は、対象とする標的細胞に発現される、任意のタンパク質であってもよいが、通常、正常細胞もしくは健全細胞と比べて、正常細胞もしくは健全細胞ではなく標的細胞において独自に発現される、または標的細胞において過剰発現されるかのどちらかである、タンパク質であり、したがって、ＡＤＣは、例えば、腫瘍細胞のような、対象とする特定の細胞を選択的に標的とする。当分野において周知の通り、結合しているＡＤＣを内部移行させる、細胞表面のある種の抗原に結合しているＡＤＣは、ある種の利点を有する。したがって、一部の実施形態において、抗体によって標的とされる抗原は、これに結合しているＡＤＣを内部以降させる能力を有する抗原である。しかし、ＡＤＣによって標的とされる抗原は、結合しているＡＤＣを内部移行させるものである必要はない。標的細胞または組織の外部において放出されるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、受動拡散または他の機構により細胞に侵入してＢｃｌ−ｘＬを阻害することができる。
【００１４】
当業者によって認識される通り、選択される特異抗原、したがって抗体は、対象とする所望の標的細胞がいかなるものであるかに依存する。ある種の特定の治療の実施形態において、ＡＤＣの抗体に対する標的抗原は、公知の正常細胞または健全細胞には発現しない、または生存のためにＢｃｌ−ｘＬに少なくとも一部が関係していることが疑われている抗原である。他のある種の具体的な治療の実施形態において、ＡＤＣの抗体は、ヒトへの投与に適した抗体である。
【００１５】
治療的標的として有用な大多数の細胞特異抗原、およびこれらの抗原に結合する抗体は、当分野において公知であり、同様に公知の細胞特異抗原または後に発見される細胞特異抗原を標的とするのに好適なさらなる抗体を取得するための技法となる。これらの様々な異なる抗体のうちのいずれも、本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る。
【００１６】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤をＡＤＣの抗体に連結するリンカーは、長くても、短くても、フレキシブルでも、剛直でも、親水的もしくは疎水性の性質であってもよく、またはフレキシブルなセグメント、剛直なセグメントなどのような異なる特徴を有するセグメントを含んでもよい。これらのリンカーは、細胞外環境に対して化学的に安定であってもよい、例えば、血流中において化学的に安定であってもよく、または細胞外ミリュー（ｍｉｌｌｉｅｕ）において安定でなく、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を放出する連結基を含んでもよい。一部の実施形態において、リンカーは、細胞へのＡＤＣの内部移行時に、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を放出するよう設計されている連結基を含む。一部の具体的な実施形態において、リンカーは、細胞内部において、特異的にもしくは非特異的に、切断される、および／または破壊される、またはそうでない場合、分解するよう設計されている連結基を含む。ＡＤＣの文脈において、薬物を抗体に連結するのに有用な幅広いリンカーが、当分野において公知である。これらのリンカーのいずれも、および他のリンカーが、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を本明細書に記載されているＡＤＣの抗体に連結するために使用され得る。
【００１７】
ＡＤＣの抗体に連結されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の数は、様々となり得（「薬物対抗体比」または「ＤＡＲ」と呼ばれる。）、抗体上の利用可能な結合部位の数および単一リンカーに連結される阻害剤の数によってしか制限されない。通常、リンカーは、単一のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤をＡＤＣの抗体に連結する。ＡＤＣが使用および／または保管条件下において許容できないレベルの凝集を示さない限り、ＤＡＲが２０、またはそれより高いことさえあるＡＤＣが企図される。一部の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣは、約１−１０、１−８、１−６または１−４の範囲のＤＡＲを有することができる。ある種の具体的な実施形態において、ＡＤＣは、２、３または４のＤＡＲを有することができる。一部の実施形態において、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、リンカーおよびＤＡＲの組合せは、得られたＡＤＣが、使用および／または保管条件下において、過度に凝集することがないように選択される。
【００１８】
本明細書に記載されているＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、一般に、以下の構造式（ＩＩａ）による化合物、および／または医薬として許容されるこの塩であり、様々な置換基Ａｒ、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂおよびｎは、発明を実施するための形態に定義されている通りである：
【００１９】
【化１】
2020152726.tif 000003
【００２０】
式（ＩＩａ）において、＃は、リンカーへの結合点を表す。ＡＤＣの一部でない阻害剤において、＃は、水素原子を表す。
【００２１】
一部の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣは、一般に、構造式（Ｉ）による化合物：
【００２２】
【化２】
2020152726.tif 000004
（式中、Ａｂは抗体を表し、Ｄは薬物（ここでは、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤）を表し、Ｌは薬物Ｄを抗体Ａｂに連結させるリンカーを表し、ＬＫは、リンカーＬ上の官能基と抗体Ａｂ上の相補的な官能基との間に形成される連結基を表し、ｍは、抗体に連結されているリンカー−薬物の単位数を表す。）である。
【００２３】
ある種の具体的な実施形態において、ＡＤＣは、以下の構造式（Ｉａ）による化合物であり、様々な置換基Ａｒ、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂおよびｎは、それぞれ、式（ＩＩａ）に関して既に定義されている通りであり、ＡｂおよびＬは、構造式（Ｉ）に関して定義されている通りであり、ｍは１から２０の範囲の整数であり、一部の実施形態において、２から８の範囲の整数であり、一部の実施形態において、１から８の範囲の整数であり、一部の実施形態において、２、３または４の整数である：
【００２４】
【化３】
2020152726.tif 000005
【００２５】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載されているＡＤＣを合成するために有用な中間シントン、およびＡＤＣを合成するための方法を提供する。中間シントンは、一般に、このシントンを抗体に連結することが可能な官能基を含む、リンカー部分に連結されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を含む。これらのシントンは、一般に、以下の構造式（ＩＩＩ）による化合物、またはこの塩であり、Ｄは、既に本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、Ｌは、既に記載されているリンカーであり、Ｒｘは、シントンを抗体上の相補的な官能基にコンジュゲートすることが可能な官能基を含む：
【００２６】
【化４】
2020152726.tif 000006
【００２７】
ある種の具体的な実施形態において、中間シントンは、以下の構造式（ＩＩＩａ）による化合物、またはこれらの塩であり、様々な置換基Ａｒ、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂおよびｎは、構造式（ＩＩａ）に関して既に定義されている通りであり、Ｒｘは、上記の官能基を含む：
【００２８】
【化５】
2020152726.tif 000007
【００２９】
ＡＤＣを合成するために、構造式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＩＩａ）による中間シントン、またはこれらの塩は、官能基Ｒｘが、抗体上の相補的な官能基と反応して、共有結合性連結基を形成する条件下において、対象とする抗体と接触される。どの基Ｒｘを用いるかは、所望のカップリング化学、およびシントンが結合される抗体上の相補的な基に依存する。分子を抗体にコンジュゲートするのに適した様々な基が、当分野において公知である。これらの基のいずれも、Ｒｘに好適となり得る。非限定的な例示的な官能基（Ｒｘ）は、ＮＨＳ−エステル、マレイミド、ハロアセチル、イソチオシアネート、ビニルスルホンおよびビニルスルホンアミドを含む。
【００３０】
別の態様において、本開示は、本明細書に記載されているＡＤＣを含む組成物を提供する。本組成物は、一般に、本明細書に記載されている、１つ以上のＡＤＣ、および／またはこれらの塩、ならびに１つ以上の賦形剤、担体もしくは希釈剤を含む。本組成物は、医薬としての使用のため、または他の使用のために製剤化され得る。特定の実施形態において、本組成物は、医薬として使用するために製剤化され、構造式（Ｉａ）によるＡＤＣ、または医薬として許容されるこれらの塩、および医薬として許容される１つ以上の賦形剤、担体もしくは希釈剤を含む。
【００３１】
医薬として使用するために製剤化された組成物は、多回投与に好適なバルク形態で包装されてもよく、または、単回投与に好適な、単位用量の形態で包装されてもよい。バルクでまたは単位用量の形態で包装されるかに関わらず、本組成物は、凍結乾燥物のような乾燥組成物または液状組成物であってもよい。単位投与量の液状組成物は、単回投与に好適な量のＡＤＣが予め充填されているシリンジの形態で好都合に包装され得る。
【００３２】
さらに別の態様において、本開示は、抗アポトーシス性Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質を阻害する方法を提供する。本方法は、抗体が標的細胞の抗原に結合する条件下において、本明細書に記載されているＡＤＣ、例えば、構造式（Ｉａ）によるＡＤＣを、Ｂｃｌ−ｘＬ、およびＡＤＣの抗体に対する抗原を発現するまたは過剰発現する標的細胞に接触させるステップを一般に含む。抗原に応じて、ＡＤＣは、標的細胞に内部移行することができるようになる。本方法は、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害する細胞アッセイにおいてインビトロで、またはＢｃｌ−ｘＬ活性の阻害が望ましい疾患の処置に対する治療的手法として、インビボで実施することができる。
【００３３】
さらに別の態様において、本開示は、細胞におけるアポトーシスを誘導する方法を提供する。本方法は、抗体が標的細胞の抗原に結合する条件下において、本明細書に記載されているＡＤＣ、例えば、構造式（Ｉａ）によるＡＤＣを、Ｂｃｌ−ｘＬ、およびＡＤＣの抗体に対する抗原を発現するまたは過剰発現する標的細胞に接触させるステップを一般に含む。抗原に応じて、ＡＤＣは、標的細胞に内部移行することができるようになる。本方法は、アポトーシスを誘導する細胞アッセイにおいてインビトロで実施することができ、または特定の細胞におけるアポトーシスの誘導が有益と思われる、疾患の処置に対する治療的手法として、インビボで実施することができる。一実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、腫瘍細胞に発現する細胞表面受容体または腫瘍関連抗原に結合する。別の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭおよびＮＣＡＭ１から選択される細胞表面受容体または腫瘍関連抗原の１つに結合する。別の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭまたはＮＣＡＭ１に結合する。別の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、ＥｐＣＡＭまたはＮＣＡＭ１に結合する。別の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、ＥｐＣＡＭに結合する。別の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、ＮＣＡＭ１に結合する。別の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、ＥＧＦＲに結合する。
【００３４】
さらに別の態様において、本開示は、Ｂｃｌ−ｘＬの阻害および／またはアポトーシスの誘導が望ましいと思われる疾患を処置する方法を提供する。本発明を実施するための形態において一層完全に議論される通り、幅広い疾患が、調節不全のアポトーシスを抑制することによって少なくとも一部、抗アポトーシス性Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質の発現および／または過剰発現によって少なくとも一部、媒介される。これらの疾患のいずれも、本明細書に記載されているＡＤＣにより処置または改善され得る。
【００３５】
本方法は、一般に、Ｂｃｌ−ｘＬの発現または過剰発現によって少なくとも一部、媒介される疾患に罹患している対象に、治療的利益をもたらすのに有効な量のＡＤＣを投与するステップを含む。投与されるＡＤＣの抗体としていかなるものを用いるかは、処置される疾患に依存する。本明細書に記載されているＡＤＣを用いて実現される治療的利益は、処理されている疾患にも依存する。ある例において、ＡＤＣは、単剤療法として投与された場合に、特定の疾患を処置または改善することができる。他の例において、ＡＤＣは、ＡＤＣと一緒になって、疾患を処置または改善する他の薬剤を含めた、総合的な処置レジメンの一部となり得る。
【００３６】
例えば、Ｂｃｌ−ｘＬの発現レベルの向上は、がんにおける化学療法および放射線療法に対する抵抗性に関連している（Ｄａｔｔａら、１９９５年、Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ  ６巻：３６３−３７０頁；Ａｍｕｎｄｓｏｎら、２０００年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６０巻：６１０１−６１１０頁；Ｈａｕｒａら、２００４年、Ｃｌｉｎ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ６巻：１１３−１２２頁）。がんを処置する文脈において、本明細書において開示されているデータは、ＡＤＣが単剤療法として有効となり得ること、または他の標的化されたもしくは標的化されていない化学治療剤および／または放射線療法への補助として、またはこれらと共に投与されると有効となり得る。操作のいかなる理論によっても拘泥されることを意図するものではないが、標的化されたまたは標的化されていない化学療法および／または放射療法に対して抵抗性となった腫瘍において、本明細書に記載されているＡＤＣによるＢｃｌ−ｘＬ活性の阻害は、該腫瘍を「感作し」、こうして、これらの腫瘍は、再び、化学治療剤および／または放射線処置に対して感受性となる。
【００３７】
したがって、がんを処置する文脈において、「治療的利益」は、化学的治療レジメンおよび／もしくは放射線治療レジメンをまだ開始していない患者、または化学的治療レジメンおよび／もしくは放射線治療レジメンに対して抵抗性を示した（または、抵抗性が疑われる、もしくは抵抗性となっている。）患者のどちらかにおいて、化学的療法および／または放射線療法に対して腫瘍を感作する手段として、標的化されたもしくは標的化されていない化学治療剤および／または放射線療法への補助として、またはこれらと共に、本明細書に記載されているＡＤＣを投与するステップを含む。一実施形態は、標準的な細胞毒性剤および／または放射線に対して腫瘍を感作する方法であって、この腫瘍に結合することが可能な本明細書に記載されているＡＤＣを、標準的な細胞毒性剤および／または放射線に腫瘍細胞を感作するのに有効な量で腫瘍に接触させるステップを含む方法に関する。別の実施形態は、標準的な細胞毒性剤および／または放射線を用いる処置に抵抗性となった腫瘍を、標準的な細胞毒性剤および／または放射線に対して感作する方法であって、この腫瘍に結合することが可能な本明細書に記載されているＡＤＣを、標準的な細胞毒性剤および／または放射線に腫瘍細胞を感作するのに有効な量で腫瘍に接触させるステップを含む方法に関する。別の実施形態は、標準的な細胞毒性剤および／または放射線療法にこれまで曝露されてこなかった腫瘍を、標準的な細胞毒性剤および／または放射線に対して感作する方法であって、この腫瘍に結合することが可能な本明細書に記載されているＡＤＣを、標準的な細胞毒性剤および／または放射線に腫瘍細胞を感作するのに有効な量で腫瘍に接触させるステップを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１Ａ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣを単剤として、またはドセタキセル（ＤＴＸ）と組み合わせて処置した後の、Ｈ１６５０異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図１Ｂ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣを単剤として、またはドセタキセル（ＤＴＸ）と組み合わせて処置した後の、Ｈ１６５０異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図２Ａ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣによる処置後の、Ｈ１６５０異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図２Ｂ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣよる処置後の、Ｈ１６５０異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図２Ｃ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣによる処置後の、Ｈ１６５０異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図３Ａ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣを単剤として用いて、またはドセタキセル（ＤＴＸ）と組み合わせて処置した後の、ＥＢＣ−１異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図３Ｂ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣを単剤として用いて、またはドセタキセル（ＤＴＸ）と組み合わせて処置した後の、ＥＢＣ−１異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図３Ｃ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣを単剤として用いて、またはドセタキセル（ＤＴＸ）と組み合わせて処置した後の、ＥＢＣ−１異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図３Ｄ】ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣを単剤として用いて、またはドセタキセル（ＤＴＸ）と組み合わせて処置した後の、ＥＢＣ−１異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図４】α−ＮＣＡＭ１を標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣを単剤として、または選択的Ｂｃｌ−２で阻害剤であるＡＢＴ−１９９と組み合わせて投与して処置した後の、Ｈ１４６異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図５】α−ＮＣＡＭ１を標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣを単剤として、または選択的Ｂｃｌ−２で阻害剤であるＡＢＴ−１９９と組み合わせて投与して処置した後の、Ｈ１９６３．ＦＰ５異種移植片の腫瘍成長の阻害を図示しているグラフである。
【図６】循環血小板の数に及ぼす、細胞透過性Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤によるＢｃｌ−ｘｌ  ＡＤＣの影響を図示しているグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本開示は、ＡＤＣ、該ＡＤＣの合成に有用なシントン、該ＡＤＣを含む組成物、およびＡＤＣを使用する様々な方法に関する。
【００４０】
当業者により認識される通り、本明細書において開示されているＡＤＣは、「モジュラー（ｍｏｄｕｌａｒ）」の性質がある。本開示の全体にわたり、ＡＤＣを含む様々な「モジュール」、およびＡＤＣを合成するのに有用なシントンの様々な具体的な実施形態が記載されている。特定の非限定例として、ＡＤＣおよびシントンを含むことができる抗体、リンカーおよびＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の具体的な実施形態が記載されている。記載されている具体的な実施形態のすべてが、あたかも特定の組合せのそれぞれが、個々に明示的に記載されているかのごとく、互いに組み合わされていてもよいことが意図されている。
【００４１】
本明細書に記載されている、様々なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤、ＡＤＣおよび／またはＡＤＣシントンは、塩の形態であってもよく、ある種の実施形態において、特に、医薬として許容される塩の形態であってもよいことが当業者によってやはり理解される。十分に酸性な官能基、十分に塩基性な官能基、またはこれらの両方の官能基を有する本開示の化合物は、いくつかの無機塩基、ならびに無機酸および有機酸のいずれかと反応して、塩を形成することができる。代替として、四級窒素を有するもののような本来、帯電している化合物は、適切な対イオン、例えば、臭化物イオン、塩化物イオンまたはフッ素イオンのようなハロゲン化物イオンと塩を形成することができる。
【００４２】
酸付加塩を形成するために一般に使用される酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などのような無機酸、およびｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニル−スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸などのような有機酸である。塩基付加塩は、アンモニウム、およびアルカリまたはアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩などのような無機塩基に由来するものを含む。
【００４３】
以下の開示において、構造図と名称の両方が含まれている場合、および名称が構造図と矛盾する場合、構造図が優先する。
【００４４】
５．１．  定義
本明細書において特に定義されていない場合、本開示に関連して使用されている科学的および技術的用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。
【００４５】
様々な化学的な置換基が、以下に定義されている。一部の例において、置換基（例えば、アルキル、アルカニル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリールおよびアリール）中の炭素原子数は、接頭語の「Ｃｘ−Ｃｙ」によって示され、ｘは炭素原子の最小数であり、ｙは炭素原子の最大数である。したがって、例えば、「Ｃ１−Ｃ６アルキル」とは、１個から６個の炭素原子を含有するアルキルを指す。さらに「Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル」の例示は、３から８個の炭素環原子を含有する飽和ヒドロカルビル環を意味する。置換基が「置換されている」として記載されている場合、炭素または窒素上の水素原子が、非水素基により置きかえられている。例えば、置換アルキル置換基は、アルキル上の少なくとも１個の水素原子が非水素基により置きかえられるアルキル置換基である。例示するために、モノフルオロアルキルは、フルオロ基により置換されているアルキルであり、ジフルオロアルキルは、２個のフルオロ基により置換されているアルキルである。１つの置換基上に２つ以上の置換が存在する場合、各置換は、同一であってもよく、または異なっていてもよい（特に明記されていない限り）ことを認識すべきである。置換基が「置換されていてもよい」と記載されている場合、この置換基は、（１）非置換である、または（２）置換されているかのどちらかとすることができる。可能な置換基は、以下に限定されないが、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６ハロアルキル、オキソ、−ＣＮ、ＮＯ２、−ＯＲｘａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒｚ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−ＳＲｘａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘａ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒｘａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｘａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒｚ）、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−ＣＮ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−ＯＲｘａ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−ＯＣ（Ｏ）Ｒｚ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−ＳＲｘａ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｓ（Ｏ）２Ｒｘａ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）Ｒｘａ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）ＯＲｘａ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）２、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｒｚ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｚ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｒｚ）、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｘａ）２、または−（Ｃ１−Ｃ６アルキレニル）−Ｎ（Ｒｘａ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｘａ）２を含み、Ｒｘａは、出現毎に独立して、水素、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであり、Ｒｚは、出現毎に独立して、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである。
【００４６】
一部の実施形態において、様々なＡＤＣ、シントン、ならびにＡＤＣおよび／またはシントンを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、以下の置換基、例えば、置換基Ａｒ、Ｚ１、Ｚ２、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｌ、Ｒｘ、Ｆｘ、ＬＫ、Ａｂ、ｎおよび／またはｍを含めた、構造式を参照することにより、本明細書において記載されている。置換基を含む様々な基は、価数および安定性が許す通り、組み合わされ得ることを理解すべきである。本開示によって想定される置換基および変数の組合せは、安定化合物の形成をもたらすものに過ぎない。本明細書において使用する場合、用語「安定な」とは、製造を可能にするほど十分な安定性を有する化合物であって、本明細書において詳述されている目的に有用となるのに十分な時間、化合物の完全性を維持する化合物を指す。
【００４７】
本明細書において使用する場合、以下の用語は、以下の意味を有するよう意図されている。
【００４８】
用語「アルコキシ」とは、式−ＯＲａの基を指し、Ｒａはアルキル基である。代表的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどを含む。
【００４９】
用語「アルコキシアルキル」は、アルコキシ基により置換されているアルキル基を指し、一般式−ＲｂＯＲａにより表されることができ、Ｒｂは、アルキレン基であり、Ｒａはアルキル基である。
【００５０】
用語「アルキル」は単独で、または別の置換基の一部として、親となるアルカン、アルケンまたはアルキンの１個の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって誘導される、飽和または不飽和の分岐状、直鎖状または環式一価炭化水素基を指す。典型的なアルキル基は、以下に限定されないが、メチル；エタニル、エテニル、エチニルのようなエチル類、プロパン−１−イル、プロパン−２−イル、シクロプロパン−１−イル、プロパ−１−エン−１−イル、プロパ−１−エン−２−イル、プロパ−２−エン−１−イル，シクロプロパ−１−エン−１−イル；シクロプロパ−２−エン−１−イル、プロパ−１−イン−１−イル、プロパ−２−イン−１−イルなどのようなプロピル類、ブタン−１−イル、ブタン−２−イル、２−メチル−プロパン−１−イル、２−メチル−プロパン−２−イル、シクロブタン−１−イル、ブタ−１−エン−１−イル、ブタ−１−エン−２−イル、２−メチル−プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−２−エン−１−イル、ブタ−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブタ−１−エン−１−イル、シクロブタ−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１−イン−１−イル、ブタ−１−イン−３−イル、ブタ−３−イン−１−イルなどのようなブチル類を含む。飽和の特定のレベルが意図される場合、名称の「アルカニル」、「アルケニル」および／または「アルキニル」は、以下に定義されている通り使用される。用語「低級アルキル」は、１個から６個の炭素を有するアルキル基を指す。
【００５１】
用語「アルカニル」は単独で、または別の置換基の一部として、親となるアルカンの１個の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって誘導される、飽和の分岐状、直鎖状または環式アルキルを指す。典型的なアルカニル基は、以下に限定されないが、メチル；エタニル；プロパン−１−イル、プロパン−２−イル（イソプロピル）、シクロプロパン−１−イルなどのようなプロパニル類；ブタン−１−イル、ブタン−２−イル（ｓｅｃ−ブチル）、２−メチルプロパン−１−イル（イソブチル）、２−メチル−プロパン−２−イル（ｔ−ブチル）、シクロブタン−１−イルなどのようなブタニル類などを含む。
【００５２】
用語「アルケニル」は単独で、または別の置換基の一部として、親となるアルケンの１個の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって誘導される、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する、不飽和の分岐状、直鎖状または環式アルキルを指す。典型的なアルケニル基は、以下に限定されないが、エテニル；プロパ−１−エン−１−イル、プロパ−１−エン−２−イル、プロパ−２−エン−１−イル、プロパ−２−エン−２−イル、シクロプロパ−１−エン−１−イル、シクロプロパ−２−エン−１−イルのようなプロペニル類；ブタ−１−エン−１−イル、ブタ−１−エン−２−イル、２−メチル−プロパ−１−エン−１−イル、ブタ−２−エン−１−イル、ブタ−２−エン−２−イル、ブタ−１，３−ジエン−１−イル、ブタ−１，３−ジエン−２−イル、シクロブタ−１−エン−１−イル、シクロブタ−１−エン−３−イル、シクロブタ−１，３−ジエン−１−イルなどのようなブテニル類などを含む。
【００５３】
用語「アルキニル」は単独で、または別の置換基の一部として、親となるアルキンの１個の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって誘導される、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する、不飽和の分岐状、直鎖状または環式アルキルを指す。典型的なアルキニル基は、以下に限定されないが、エチニル；プロパ−１−イン−１−イル、プロパ−２−イン−１−イルなどのようなプロピニル類；ブタ−１−イン−１−イル、ブタ−１−イン−３−イル、ブタ−３−イン−１−イルなどのようなブチニル類などを含む。
【００５４】
用語「アルキルアミン」とは、式−ＮＨＲａの基を指し、「ジアルキルアミン」は、式−ＮＲａＲａの基を指し、Ｒａはそれぞれ、互いに独立して、アルキル基である。
【００５５】
用語「アルキレン」とは、２個の末端炭素原子のそれぞれから１個の水素原子を除去することにより誘導される、末端が一価のラジカル中心を２個、有するアルカン基、アルケン基またはアルキン基を指す。典型的なアルキレン基は、以下に限定されないが、メチレン、および飽和または不飽和エチレン、プロピレン、ブチレンなどを含む。用語「低級アルキレン」は、１個から６個の炭素を有するアルキレン基を指す。
【００５６】
用語「アリール」は、６個から１４個の炭素環原子を含有する芳香族カルボシクリルを意味する。アリールは、単環式または多環式とすることができる（すなわち、２つ以上の環を含有してもよい。）。多環式芳香族環の場合、多環式系の１つの環だけが、芳香族であることを必要とする一方、残りの環は、飽和であってもよく、部分飽和であってもよく、または不飽和であってもよい。アリールの例は、フェニル、ナフタレニル、インデニル、インダニルおよびテトラヒドロナフチルを含む。
【００５７】
接頭語「ハロ」は、接頭語を含む置換基が、１個以上の独立して選択されるハロゲン基により置換されていることを示す。例えば、ハロアルキルは、少なくとも１個の水素基がハロゲン基により置きかえられているアルキル置換基を意味する。典型的なハロゲン基は、クロロ、フルオロ、ブロモおよびヨードを含む。ハロアルキルの例は、クロロメチル、１−ブロモエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルおよび１，１，１−トリフルオロエチルを含む。置換基が、２個以上のハロゲン基により置換されている場合、これらのハロゲン基は、同一であってもよく、または異なっていてもよい（特に明記されていない限り）ことを認識すべきである。
【００５８】
用語「ハロアルコキシ」とは、式−ＯＲｃの基を指し、Ｒｃはハロアルキルである。
【００５９】
用語「ヘテロアルキル」、「ヘテロアルカニル」、「ヘテロアルケニル」、「ヘテロアルキニル」および「ヘテロアルキレン」は、それぞれ、アルキル基、アルカニル基、アルケニル基、アルキニル基およびアルキレン基を指し、１個以上の炭素原子、例えば、１個、２個または３個の炭素原子が、それぞれ独立して、同一もしくは異なるヘテロ原子（ｈｅｔｅｒｏｔｏｍ）またはヘテロ原子群により置きかえられている。炭素原子を置きかえることができる典型的なヘテロ原子および／またはヘテロ原子群は、以下に限定されないが、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＮＲｃ、ＰＨ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）ＮＲｃ、Ｓ（Ｏ）２ＮＲｃなど（これらの組合せを含む。）を含み、Ｒｃはそれぞれ独立して、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００６０】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクリル」とは、それぞれ、「アルキル」基および「ヘテロアルキル」基の環式型を指す。ヘテロシクリル基の場合、ヘテロ原子は、分子の残りに結合している位置を占有することができる。シクロアルキル環またはヘテロシクリル環は、単一環（単環式）であってもよく、または２つ以上の環（二環式または多環式）を有していてもよい。
【００６１】
単環式シクロアルキル基およびヘテロシクリル基は、典型的に、３個から７個の環原子、より典型的に３個から６個の環原子、さらにより典型的に、５個から６個の環原子を含有する。シクロアルキル基の例は、以下に限定されないが、シクロプロピル；シクロブタニルおよびシクロブテニルのようなシクロブチル類；シクロペンタニルおよびシクロペンテニルのようなシクロペンチル類；シクロヘキサニルおよびシクロヘキセニルのようなシクロヘキシル類などを含む。単環式ヘテロシクリルの例は、以下に限定されないが、オキセタン、フラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、チオフェニル（チオフラニル）、ジヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアゾリニル、イソチアゾリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、チオジアゾリル、オキサジアゾリル（１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル（フラザニル）または１，３，４−オキサジアゾリルを含む。）、オキサトリアゾリル（１，２，３，４−オキサトリアゾリルまたは１，２，３，５−オキサトリアゾリルを含む。）、ジオキサゾリル（１，２，３−ジオキサゾリル、１，２，４−ジオキサゾリル、１，３，２−ジオキサゾリルまたは１，３，４−ジオキサゾリルを含む。）、１，４−ジオキサニル、ジオキソチオモルホリニル、オキサチアゾリル、オキサチオリル、オキサチオラニル、ピラニル、ジヒドロピラニル、チオピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピリジニル（アジニル）、ピペリジニル、ジアジニル（ピリダジニル（１，２−ジアジニル）、ピリミジニル（１，３−ジアジニル）またはピラジニル（１，４−ジアジニル）を含む。）、ピペラジニル、トリアジニル（１，３，５−トリアジニル、１，２，４−トリアジニルおよび１，２，３−トリアジニルを含む。）、オキサジニル（１，２−オキサジニル、１，３−オキサジニルまたは１，４−オキサジニルを含む。）、オキサチアジニル（１，２，３−オキサチアジニル、１，２，４−オキサチアジニル、１，２，５−オキサチアジニルまたは１，２，６−オキサチアジニルを含む。）、オキサジアジニル（１，２，３−オキサジアジニル、１，２，４−オキサジアジニル、１，４，２−オキサジアジニルまたは１，３，５−オキサジアジニルを含む。）、モルホリニル、アゼピニル、オキセピニル、チエピニル、ジアゼピニル、ピリドニル（ピリド−２（１Ｈ）−オニルおよびピリド−４（１Ｈ）−オニルを含む。）、フラン−２（５Ｈ）−オニル、ピリミドニル（ピラミド−２（１Ｈ）−オニルおよびピラミド−４（３Ｈ）−オニルを含む。）、オキサゾール−２（３Ｈ）−オニル、１Ｈ−イミダゾール−２（３Ｈ）−オニル、ピリダジン−３（２Ｈ）−オニルおよびピラジン−２（１Ｈ）−オニルを含む。
【００６２】
多環式シクロアルキル基およびヘテロシクリル基は２環以上の環を含有し、二環式シクロアルキル基およびヘテロシクリル基は２つの環を含有している。これらの環は、架橋配向していてもよく、縮合配向していてもよく、またはスピロ配向していてもよい。多環式シクロアルキル基およびヘテロシクリル基は、架橋環、縮合環および／またはスピロ環の組合せを含んでもよい。スピロ環式シクロアルキルまたはヘテロシクリルにおいて、１個の原子は、２つの異なる環に共通している。スピロシクロアルキルの一例は、スピロ［４．５］デカンであり、スピロヘテロシクリルの一例は、スピロピラゾリンである。
【００６３】
架橋シクロアルキルまたはヘテロシクリルにおいて、環は、少なくとも２個の共通する非隣接原子を共有する。架橋シクロアルキルの例は、以下に限定されないが、アダマンチルおよびノルボルナニル環を含む。架橋ヘテロシクリルの例は、以下に限定されないが、２−オキサトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカニルを含む。
【００６４】
縮合環のシクロアルキルまたはヘテロシクリルにおいて、２つ以上の環は、一緒に縮合し、この結果、２つの環が、１つの共通結合を共有する。縮合環のシクロアルキルの例は、デカリン、ナフチレン、テトラリンおよびアントラセンを含む。２つまたは３つの環を含有する縮合環のヘテロシクリルの例は、イミダゾピラジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニルを含む。）、イミダゾピリジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニルを含む。）、イミダゾピリダジニル（イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジニルを含む。）、チアゾロピリジニル（チアゾロ［５，４−ｃ］ピリジニル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジニル、チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニルおよびチアゾロ［４，５−ｃ］ピリジニルを含む。）、インドリジニル、ピラノピロリル、４Ｈ−キノリジニル、プリニル、ナフチリジニル、ピリドピリジニル（ピリド［３，４−ｂ］−ピリジニル、ピリド［３，２−ｂ］−ピリジニルまたはピリド［４，３−ｂ］−ピリジニルを含む。）およびプテリジニルを含む。縮合環のヘテロシクリルの他の例は、ジヒドロクロメニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、イソインドリル（イソベンゾアゾリル、シュードイソインドリル）、インドレニニル（シュードインドリル）、イソインダゾリル（ベンゾピラゾリル）、ベンゾアジニル（キノリニル（１−ベンゾアジニル）またはイソキノリニル（２−ベンゾアジニル）を含む。）、フタラジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、ベンゾジアジニル（シンノリニル（１，２−ベンゾジアジニル）またはキナゾリニル（１，３−ベンゾジアジニル）を含む。）、ベンゾピラニル（クロマニルまたはイソクロマニルを含む。）、ベンゾオキサジニル（１，３，２−ベンゾオキサジニル、１，４，２−ベンゾオキサジニル、２，３，１−ベンゾオキサジニルまたは３，１，４−ベンゾオキサジニルを含む。）、ベンゾ［ｄ］チアゾリルおよびベンゾイソオキサジニル（１，２−ゼンゾイソオキサジニルまたは１，４−ベンゾイソオキサジニルを含む。）のようなベンゾ縮合ヘテロシクリルを含む。
【００６５】
用語「ヘテロアリール」は、５個から１４個の環原子を含有する芳香族ヘテロシクリルを指す。ヘテロアリールは、単環または２縮合環または３縮合環とすることができる。ヘテロアリールの例は、ピリジル、ピラジル、ピリミジニル、ピリダジニルおよび１，３，５−、１，２，４−または１，２，３−トリアジニルのような６員環；トリアゾリル、ピロリル、イミダジル、フラニル、チオフェニル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、１，２，３−、１，２，４−、１，２，５−または１，３，４−オキサジアゾリルおよびイソチアゾリルのような５員環の置換基；イミダゾピラジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニルを含む。）、イミダゾピリジニル（イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニルを含む。）、イミダゾピリダジニル（イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジニルを含む。）、チアゾロピリジニル（チアゾロ［５，４−ｃ］ピリジニル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジニル、チアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニルおよびチアゾロ［４，５−ｃ］ピリジニルを含む。）、ベンゾ［ｄ］チアゾリル、ベンゾチオフラニル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、プリニルおよびアントラニリルのような６／５員の縮合環置換基；およびベンゾピラニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キナゾリニルおよびベンゾオキサジニルのような６／６員の縮合環を含む。ヘテロアリールはまた、ピリドニル（ピリド−２（１Ｈ）−オニルおよびピリド−４（１Ｈ）−オニルを含む。）、ピリミドニル（ピラミド−２（１Ｈ）−オニルおよびピラミド−４（３Ｈ）−オニルを含む。）、ピリダジン−３（２Ｈ）−オニルおよびピラジン−２（１Ｈ）−オニルのような、芳香族（４Ｎ＋２個のパイ電子）共鳴寄与体を有する複素環とすることもできる。
【００６６】
用語「スルホネート」は、本明細書において使用する場合、スルホン酸の塩またはエステルを意味する。
【００６７】
用語「スルホン酸メチル」は、本明細書において使用する場合、スルホン酸基のメチルエステルを意味する。
【００６８】
用語「カルボキシレート」は、本明細書において使用する場合、カルボン酸の塩またはエステルを意味する。
【００６９】
リンカーの文脈において、用語「糖」は、本明細書で使用する場合、モノサッカライドのクラスのＯ−グリコシドまたはＮ−グリコシド炭水化物誘導体を意味し、天然源に由来してもよく、または合成由来であってもよい。例えば「糖」は、以下に限定されないが、ベータ−グルクロン酸およびベータ−ガラクトースに由来するもののような誘導体を含む。適切な糖の置換は、以下に限定されないが、ヒドロキシル、アミン、カルボン酸、エステルおよびエーテルを含む。
【００７０】
用語「ＮＨＳエステル」は、カルボン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル誘導体を意味する。
【００７１】
塩と言う用語は、「またはこの塩」の文脈において使用される場合、アルカリ金属塩を形成するよう、および遊離酸または遊離塩基の付加塩を形成するよう一般に使用される塩を含む。一般に、これらの塩は、通常、例えば、適切な酸または塩基を本発明の化合物と反応させることによる従来的な手段によって調製され得る。
【００７２】
塩が患者に投与されることが意図される場合（例えば、インビトロの文脈における使用におけるものとは対照的に）、この塩は、好ましくは、医薬として許容される、および／または生理学的に適合される。用語「医薬として許容される」とは、本特許出願において、修飾される名詞が、医薬製品として、または医薬製品の一部としての使用に適していることを意味するよう、形容詞として使用されている。用語「医薬として許容される塩」は、アルカリ金属塩を形成するよう、および遊離酸または遊離塩基の付加塩を形成するよう一般に使用される塩を含む。一般に、これらの塩は、通常、例えば、適切な酸または塩基を本発明の化合物と反応させることによる従来的な手段によって調製され得る。
５．２  例示的な実施形態
課題を解決するための手段に明記されている通り、本開示の一態様は、リンカーによって抗体に連結されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を含むＡＤＣに関する。具体的な実施形態において、ＡＤＣは、以下の構造式（Ｉ）による化合物またはこの塩であり、式中、Ａｂは抗体を表し、ＤはＢｃｌ−ｘＬ阻害剤（薬物）を表し、Ｌはリンカーを表し、ＬＫはリンカーＬの反応性官能基と抗体Ａｂ上の相補的な官能基との間に形成されている連結基を表し、ｍは、抗体に連結しているＤ−ＬーＬＫ単位の数を表す：
【００７３】
【化６】
2020152726.tif 000008
【００７４】
本明細書に記載されているＡＤＣを含むことができる、様々なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤（Ｄ）、リンカー（Ｌ）および抗体（Ａｂ）、ならびにＡＤＣに連結されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の数の具体的な実施形態は、以下により詳細に記載されている。
５．２．１  Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤
ＡＤＣは、１種以上のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を含み、この阻害剤は、同一であってもよく、または異なっていてもよいが、通常、同一である。一部の実施形態において、ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤、およびある種の具体的な実施形態において、上記の構造式（Ｉ）のＤは、構造式（ＩＩａ）による化合物：
【００７５】
【化７】
2020152726.tif 000009
またはこの塩であり、式中、
Ａｒは、
【００７６】
【化８】
2020152726.tif 000010
から選択され、これらは、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよく、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨおよびＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）およびＳ（Ｏ２）から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４  Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびＣ１−４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３およびＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃは、それぞれ、水素、ハロ、Ｃ１−６アルカニル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよびＣ１−６ハロアルキルから相互に独立して選択され、
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂはそれぞれ、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮおよびＳＣＨ３から相互に独立して選択され、
ｎは、０、１、２または３であり、
＃は、リンカーＬへの結合点を表す。
【００７７】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のＡｒは、
【００７８】
【化９】
2020152726.tif 000011
から選択され、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよい。特定の実施形態において、Ａｒは、
【００７９】
【化１０】
2020152726.tif 000012
である。
【００８０】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のＺ１はＮである。
【００８１】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のＺ１はＣＨである。
【００８２】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のＺ２はＯである。
【００８３】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のＲ１は、メチルおよびクロロから選択される。
【００８４】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のＲ２は、水素およびメチルから選択される。特定の実施形態において、Ｒ２は水素である。
【００８５】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１はメチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｚ１はＮである。
【００８６】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ａはハロであり、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃはそれぞれ水素である。特定の実施形態において、Ｒ１０ａはフルオロである。
【００８７】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ｂはハロであり、Ｒ１０ａおよびＲ１０ｃはそれぞれ水素である。特定の実施形態において、Ｒ１０ｂはフルオロである。
【００８８】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ｃはハロであり、Ｒ１０ａおよびＲ１０ｂはそれぞれ水素である。特定の実施形態において、Ｒ１０ｃはフルオロである。
【００８９】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）中のＲ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃはそれぞれ水素である。
【００９０】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のＲ１１ａおよびＲ１１ｂは、同じである。特定の実施形態において、Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂはそれぞれ、メチルである。
【００９１】
ある種の実施形態において、式（ＩＩａ）のｎは、０または１である。
【００９２】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはこの塩は、それぞれ、実施例１．１−１．８に記載されている、化合物Ｗ１．０１−Ｗ１．０８を含む。
【００９３】
ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、ＡＤＣに含まれない場合、抗アポトーシスＢｃｌ−ｘＬタンパク質に結合してこのタンパク質を阻害し、アポトーシスを誘導する。構造式（ＩＩａ）による特定のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤（すなわち、構造式（ＩＩａ）による化合物または塩であり、この場合、＃は水素原子を表す。）が、ＡＤＣに含まれない場合に、Ｂｃｌ−ｘＬ活性に結合して、この活性を阻害する能力は、例えば、Ｔａｏら、２０１４年、ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、５巻：１０８８−１０９３頁において記載されているＴＲ−ＦＲＥＴ  Ｂｃｌ−ｘＬ結合アッセイを含めた、標準的な結合アッセイおよび活性アッセイにおいて確認され得る。Ｂｃｌ−ｘＬ結合を確認するために使用され得る具体的なＴＲ−ＦＲＥＴ  Ｂｃｌ−ｘＬ結合アッセイは、以下の実施例４において提供されている。通常、本明細書に記載されているＡＤＣ中の有用なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、実施例４の結合アッセイが約１０ｎＭ未満となるＫｉを示すが、かなり一層小さなＫｉ、例えば、約１、０．１または０．０１ｎＭ未満にさえなるＫｉを示すことがある。
【００９４】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害活性はまた、Ｔａｏら、２０１４年、ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、５巻：１０８８−１０９３頁に記載されているＦＬ５．１２細胞毒性アッセイおよびＭｏｌｔ−４細胞毒性アッセイのような、標準的な細胞をベースとする細胞毒性アッセイにおいて確認され得る。特定のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤のＢｃｌ−ｘＬ阻害活性を確認するために使用され得る、特定のＭｏｌｔ−４細胞の細胞毒性アッセイは、以下の実施例５に提示されている。通常、本明細書に記載されているＡＤＣに有用なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、実施例５のＭｏｌｔ−４細胞毒性アッセイにおいて、約５００ｎＭ未満のＥＣ５０を示すが、かなりより小さなＥＣ５０、例えば約２５０、１００、５０、２０、１０または５ｎＭ未満にもなるＥＣ５０を示すことがある。
【００９５】
構造式（ＩＩａ）によって定義されたＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、ＡＤＣに含まれない場合、細胞透過性であり、細胞に浸透することが予期されるが、細胞膜を自由に通過しない化合物のＢｃｌ−ｘＬ阻害活性は、透過化細胞を用いた細胞アッセイにおいて確認され得る。背景技術において議論されている通り、ミトコンドリア外膜透過化（ＭＯＭＰ）の過程は、Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質によって制御される。具体的には、ＭＯＭＰは、アポトーシス促進性Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質であるＢａｘおよびＢａｋによって促進され、これらのファミリータンパク質は、活性化されると、ミトコンドリア外膜において重合して細孔を形成し、シトクロムｃ（ｃｙｔ  ｃ）の放出に至る。ｃｙｔ  ｃの放出は、アポトソームの製剤化の引き金となり、ひいてはカスパーゼの活性化、および細胞にプログラム細胞死をもたらす他の事象をもたらす（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら、２００５年、Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ、１２巻：４５３−４６２頁を参照されたい。）。ＢａｘおよびＢａｋのオリゴマー化作用は、Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘＬを含む、抗アポトーシス性Ｂｃｌ−２ファミリーメンバーによって拮抗される。生存するためにＢｃｌ−ｘＬに依存している細胞中のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、Ｂａｘおよび／またはＢａｋ、ＭＯＭＰ、ｃｙｔ  ｃの放出、および下流の事象の活性化を引き起こし、これらによりアポトーシスがもたらされる。ｃｙｔ  ｃ放出の過程は、細胞におけるシトクロムｃのミトコンドリア画分およびサイトゾル画分の両方のウェスタンブロットにより評価され得、細胞におけるアポトーシスの代替測定として使用され得る。
【００９６】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害活性、およびこの後に起こる低細胞透過性を有する分子に対するｃｙｔ  ｃの放出を検出する手段として、細胞は、ミトコンドリアの膜ではなく、形質膜において選択的な細孔形成を引き起すが、ミトコンドリア膜においては細孔形成を引き起こさない薬剤により処置され得る。具体的には、コレステロール／リン脂質の比は、ミトコンドリア膜よりも形質膜においてはるかに高い。この結果、コレステロールに由来する洗剤であるジギトニンを低濃度用いた短いインキュベートは、ミトコンドリア膜に著しく影響を及ぼすことなく、形質膜を選択的に透過化する。この薬剤は、コレステロールと不溶性複合体を形成して、この正常なリン脂質の結合部位からコレステロールを分離する。この作用は、ひいては、脂質二重層内に、約４０−５０Å幅の穴の形成をもたらす。形質膜が、一旦、透過化されると、アポトーシス細胞においてミトコンドリアからサイトゾルに放出されるシトクロムＣを含めた、ジギトニンにより形成される穴を通過することが可能なサイトゾル構成成分が洗い流され得る（Ｃａｍｐｏｓ、２００６年、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ａ  ６９巻（６号）：５１５−５２３頁）。
【００９７】
通常、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、実施例５のＭｏｌｔ−４の細胞透過化ｃｙｔ  ｃアッセイにおいて、約１０ｎＭ未満のＥＣ５０をもたらすが、これらの化合物は、例えば約５、１、または０．５ｎＭ未満にもなる、かなり一層小さなＥＣ５０を示すことがある。
【００９８】
構造式（ＩＩａ）のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の多数が、他の抗アポトーシス性Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質よりも選択的または特異的にＢｃｌ−ｘＬを阻害するが、Ｂｃｌ−ｘＬの選択的および／または特異的阻害は必要ではない。ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤はまた、Ｂｃｌ−ｘＬの阻害に加えて、例えばＢｃｌ−２のような、１種以上の他の抗アポトーシスＢｃｌ−２ファミリータンパク質を阻害し得る。一部の実施形態において、ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、Ｂｃｌ−ｘＬに対して選択的および／または特異的である。特異的または選択的とは、特定のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が、等価なアッセイ条件下において、Ｂｃｌ−２よりも大きな程度にＢｃｌ−ｘＬに結合する、またはこれを阻害することを意味する。具体的な実施形態において、ＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、Ｂｃｌ−ｘＬ結合アッセイにおいて、Ｂｃｌ−２よりもＢｃｌ−ｘＬに対して、１０倍、１００倍、またはこれより一層大きな範囲の特異性を示す。
【００９９】
５．２．２  リンカー
本明細書に記載されているＡＤＣにおいて、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、リンカーによって抗体に連結されている。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤をＡＤＣの抗体に連結するリンカーは、短くても、長くても、疎水性でも、親水性でも、フレキシブルでも、または剛直でもよく、または上記の特性の１つ以上をそれぞれ独立して有するセグメントからなることができ、したがって、このリンカーは、異なる特性を有するセグメントを含むことができる。リンカーは、多価であってもよく、この結果、このリンカーは、２つ以上のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体の単一部位に共有結合により連結し、またはリンカーは一価であってもよく、この結果、このリンカーは、１つのＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体の単一部位に共有結合により連結する。
【０１００】
当業者によって理解される通り、リンカーは、１つの場所においてＢｃｌ−ｘＬ阻害剤への共有結合性連結基を、および別の場所において抗体への共有結合性連結を形成することによって、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体に連結する。この共有結合性連結基は、リンカー上の官能基と、阻害剤および抗体上の官能基との間の反応によって形成される。本明細書において使用する場合、「リンカー」という表現は、（ｉ）リンカーをＢｃｌ−ｘＬ阻害剤に共有結合により連結することが可能な官能基、およびこのリンカーを抗体に共有結合により連結することが可能な官能基を含むリンカーの非コンジュゲート形態、（ｉｉ）リンカーを抗体に共有結合により連結することが可能な官能基を含み、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤に共有結合により連結している、またはこの反対となるリンカーの部分的なコンジュゲート形態、および（ｉｉｉ）Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤と抗体の両方に共有結合により連結されているリンカーの完全なコンジュゲート形態を含むことが意図されている。本明細書に記載されている中間シントンおよびＡＤＣの、一部の具体的な実施形態において、リンカー上の官能基、およびリンカーと抗体との間に形成される共有結合性連結基を含む部分は、それぞれＲｘおよびＬＫとして具体的に例示される。一実施形態は、本明細書に記載されているシントンが抗体に共有結合により連結する条件下において、腫瘍細胞に発現する細胞表面受容体または腫瘍関連抗原に結合する抗体を該シントンに接触させるステップにより形成されるＡＤＣに関する。一実施形態は、本明細書に記載されているシントンが抗体に共有結合により連結する条件下において、該シントンに接触させることによる、ＡＤＣを作製する方法に関する。一実施形態は、Ｂｃｌ−ｘＬを発現する細胞におけるＢｃｌ−ｘＬ活性を阻害する方法であって、細胞に結合することが可能な、本明細書に記載されているＡＤＣが細胞に結合する条件下において、細胞をＡＤＣに接触させるステップを含む方法に関する。
【０１０１】
リンカーは、細胞外の条件に対して化学的に安定であることが好ましいが、必要ではなく、細胞内において、切断されるよう、破壊されるよう、および／またはそうでない場合、特異的に分解するよう設計され得る。代替として、細胞内において、特異的に切断されるまたは分解するよう設計されていないリンカーが使用されてもよい。ＡＤＣの文脈において、薬物を抗体に連結するのに有用な幅広いリンカーが、当分野において公知である。これらのリンカーのいずれも、および他のリンカーが、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を本明細書に記載されているＡＤＣの抗体に連結するために使用され得る。多数のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体に連結するために使用され得る例示的な多価リンカーが、例えば、これらの内容の全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第８，３９９，５１２号、米国出願公開第２０１０／０１５２７２５号、米国特許第８，５２４，２１４号、米国特許第８，３４９，３０８号、米国出願公開第２０１３／１８９２１８号、米国出願公開第２０１４／０１７２６５号、ＷＯ２０１４／０９３３７９、ＷＯ２０１４／０９３３９４、ＷＯ２０１４／０９３６４０に記載されている。例えば、Ｍｅｒｓａｎａらによって開発されたＦｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカー技法は、良好な物理化学特性を有する、高いＤＡＲのＡＤＣを可能にする可能性を有する。以下に示されている通り、Ｆｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカー技法は、エステル結合の配列により、薬物分子を可溶性ポリアセタール主鎖に取り込ませることに基づくものである。この方法は、良好な物理化学特性を維持しながら、高負荷ＡＤＣ（最大２０のＤＡＲ）をもたらす。この方法は、以下のスキームに示されている通り、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を用いて利用され得る。
【０１０２】
【化１１】
2020152726.tif 000013
【０１０３】
上のスキーム中に図示されているＦｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカー技法を利用するため、脂肪族アルコールが存在し、またはＢｃｌ−ｘＬ阻害剤に導入されなければならない。次に、このアルコール部分がアラニン部分にコンジュゲートされ、次に、このアラニン部分がＦｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）リンカーに合成的に取り込まれる。ＡＤＣのリポソーム処理は、親アルコール含有薬物をインビトロにおいて放出する。
【０１０４】
デンドリマータイプのリンカーの追加例は、ＵＳ２００６／１１６４２２、ＵＳ２００５／２７１６１５；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら、（２００３年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４２巻：４４９０−４４９４頁；Ａｍｉｒら、（２００３年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４２巻：４４９４−４４９９頁；Ｓｈａｍｉｓら、（２００４年）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６巻：１７２６−１７３１頁；Ｓｕｎら、（２００２年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２巻：２２１３−２２１５頁；Ｓｕｎら、（２００３年）  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１巻：１７６１−１７６８頁；およびＫｉｎｇら、（２００２年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４３巻：１９８７−１９９０頁に見いだされ得る。
【０１０５】
使用され得る例示的な一価リンカーは、例えば、それぞれの内容の全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｎｏｌｔｉｎｇ、２０１３年、Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １０４５巻：７１−１００頁；Ｋｉｔｓｏｎら、２０１３年、ＣＲＯｓ／ＣＭＯｓ−Ｃｈｅｍｉｃａ  Ｏｇｇｉ−Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ３１巻（４号）：３０−３６頁；Ｄｕｃｒｙら、２０１０年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２１巻：５−１３頁；Ｚｈａｏら、２０１１年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５４巻：３６０６−３６２３頁、米国特許第７，２２３，８３７号、米国特許第８，５６８，７２８号、米国特許第８，５３５，６７８号およびＷＯ２００４０１０９５７に記載されている。
【０１０６】
例として非限定的に、本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る一部の切断可能なリンカーおよび切断不能なリンカーが以下に記載されている。
【０１０７】
５．２．２．１．切断可能なリンカー
ある種の実施形態において、選択されるリンカーは、インビトロおよびインビボにおいて切断可能である。切断可能なリンカーは、化学的もしくは酵素的に不安定な連結基または分解性連結基を含むことができる。切断可能なリンカーは、一般に、細胞質における還元、リソソームにおける酸性条件への曝露、または細胞内の特定のプロテアーゼもしくは他の酵素による切断のような薬物を遊離させるための細胞内過程に依存する。切断可能なリンカーは、一般に、化学的または酵素的のどちらかにより切断可能な１つ以上の化学結合を組み込んでいる一方、このリンカーの残りは切断不能である。
【０１０８】
ある種の実施形態において、リンカーは、ヒドラゾン基および／またはジスルフィド基のような化学的に不安定な基を含む。化学的に不安定な基を含むリンカーは、血漿と一部の細胞質コンパートメントとの間の特性差を利用する。ヒドラゾン含有リンカーにとって、薬物放出を促進させる細胞内条件は、エンドソームおよびリソソームの酸性環境である一方、ジスルフィド含有リンカーは、高濃度のチオール、例えばグルタチオンを含有するサイトゾルにおいて還元される。ある種の実施形態において、化学的に不安定な基を含むリンカーの血漿安定性は、化学的に不安定な基の近傍に置換基を使用する、立体障害を導入することにより向上され得る。
【０１０９】
ヒドラゾンのような酸に不安定な基は、血液の中性ｐＨ環境（ｐＨ７．３−７．５）における全身の血液循環の間は無傷のままであり、ＡＤＣが、一旦、穏やかに酸性な細胞のエンドソームコンパートメント（ｐＨ５．０−６．５）およびリソソームコンパートメント（ｐＨ４．５−５．０）に内部移行されると、加水分解を受けて薬物を放出する。このｐＨ依存性の放出機構は、薬物の非特異的放出に関連する。リンカーのヒドラゾン基の安定性を向上させるために、リンカーは、化学的修飾、例えば置換によって変化されることができ、これにより、血液循環中の喪失を最小限にしながら、リソソームにおけるより効率的な放出の実現を調節することが可能となる。
【０１１０】
ヒドラゾン含有リンカーは、追加の、酸に不安定な切断部位および／または酵素に不安定な切断部位のような、追加の切断部位を含有することができる。例示的なヒドラゾン含有リンカーを含むＡＤＣは、以下の構造：
【０１１１】
【化１２】
2020152726.tif 000014
（式中、ＤおよびＡｂは薬物およびＡｂをそれぞれ表し、ｎは、抗体に連結されている薬物−リンカーの数を表す。）を含む。リンカー（Ｉｄ）のようなある種のリンカーにおいて、リンカーは、２つの切断可能な基、すなわちジスルフィド部分およびヒドラゾン部分を含む。このようなリンカーの場合、未修飾の遊離薬物の効率的な放出は、酸性ｐＨ、またはジスルフィドの還元と酸性ｐＨを必要とする。（Ｉｅ）および（Ｉｆ）のようなリンカーは、単一のヒドラゾン切断部位により有効であることが示されている。
【０１１２】
リンカーに含まれ得る他の酸不安定基は、シス−アコニチル含有リンカーを含む。シスアコニチルの化学は、酸性条件下、アミド加水分解を促進するために、アミド結合に並置されているカルボン酸を使用する。
【０１１３】
切断可能なリンカーはまた、ジスルフィド基を含んでもよい。ジスルフィドは、生理学的ｐＨにおいて熱力学的に安定であり、細胞内に内部移行すると、薬物を放出するよう設計されており、この場合、サイトゾルが、細胞外環境と比べて、かなり強い還元的環境をもたらす。ジスルフィド結合の切断は、一般に、（還元型）グルタチオン（ＧＳＨ）のような細胞質チオール補因子の存在を必要とし、したがって、ジスルフィド含有リンカーは、血液循環中、妥当な安定性があり、サイトゾル内において薬物を選択的に放出する。ジスルフィド結合を切断することが可能な、細胞内の酵素タンパク質であるジスルフィドイソメラーゼまたは類似の酵素もまた、細胞内部のジスルフィド結合の優先的切断に寄与し得る。ＧＳＨまたはシステインがかなり一層低い濃度であることに比べて、ＧＳＨは、０．５−１０ｍＭの濃度範囲で細胞中に存在することが報告されており、血液循環において、最多量の低分子量チオールは約５μＭである。不規則な血流により低酸素状態に至る腫瘍細胞は、還元的酵素の活性を高め、したがって、一層高いグルタチオン濃度をもたらす。ある種の実施形態において、ジスルフィド含有リンカーのインビボ安定性は、リンカーの化学的修飾、例えば、ジスルフィド結合に隣接した立体障害の使用により増強され得る。
【０１１４】
例示的なスルフィド含有リンカーを含むＡＤＣは、以下の構造：
【０１１５】
【化１３】
2020152726.tif 000015
（式中、ＤおよびＡｂは薬物および抗体をそれぞれ表し、ｎは、抗体に連結されている薬物−リンカーの数を表し、Ｒは、例えば、水素またはアルキルから独立して出現毎に選択される。）を含む。ある種の実施形態において、ジスルフィド結合に隣接する立体障害を高めると、リンカーの安定性が増大する。（Ｉｇ）および（Ｉｉ）のような構造は、１つ以上のＲ基がメチルのような低級アルキルから選択される場合、インビボにおける安定性の向上を示す。
【０１１６】
使用され得る別のタイプのリンカーは、酵素によって特異的に切断されるリンカーである。一実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能である。このようなリンカーは、通常、ペプチドをベースとする、または酵素に対する基質として働くペプチド領域を含む。ペプチドをベースとするリンカーは、血漿および細胞外ミリューにおいて、化学的に不安定なリンカーよりも安定となる傾向がある。リソソームタンパク質分解性酵素は、内在性阻害剤、およびリソソームと比べて血液のｐＨの値が不都合にも高いため、血液中における活性は非常に低いので、ペプチド結合は、一般に、良好な血清安定性を有している。抗体からの薬物の放出は、リソソームプロテアーゼ、例えば、カプテシンおよびプラスミンの作用により特異的に起こる。これらのプロテアーゼは、ある種の腫瘍組織において、高いレベルで存在することがある。一実施形態において、リンカーは、リソソーム酵素によって切断可能であり、このリソソーム酵素とはカテプシンＢである。ある種の実施形態において、リンカーはリソソーム酵素によって切断可能であり、このリソソーム酵素とはβ−グルクロニダーゼまたはβ−ガラクトシダーゼである。ある種の実施形態において、リンカーはリソソーム酵素によって切断可能であり、このリソソーム酵素とはβ−グルクロニダーゼである。ある種の実施形態において、リンカーはリソソーム酵素によって切断可能であり、このリソソーム酵素とはβ−ガラクトシダーゼである。
【０１１７】
例示的な実施形態において、切断可能なペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕのようなテトラペプチド、またはＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＰｈｅ−Ｌｙｓのようなジペプチドから選択される。ある種の実施形態において、より長いペプチドが疎水性であるために、より長いペプチドよりもジペプチドの方が好ましい。
【０１１８】
ドキソルビシン、マイトマイシン、カンプトテシン、タリソマイシンおよびオーリスタチン／オーリスタチンファミリーメンバーのような薬物を抗体に連結するのに有用な、ジペプチドをベースとする様々な切断可能なリンカーが記載されている（それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれている、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９８年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７巻：１８６６−１８７２頁；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９８年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８巻：３３４１−３３４６頁；Ｗａｌｋｅｒら、２００２年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２巻：２１７−２１９頁；Ｗａｌｋｅｒら、２００４年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４巻：４３２３−４３２７頁；およびＦｒａｎｃｉｓｃｏら、２００３年、Ｂｌｏｏｄ  １０２巻：１４５８−１４６５頁を参照されたい。）。これらのジペプチドリンカー、またはこれらのジペプチドリンカーの修飾型のすべてが、本明細書に記載されているＡＤＣに使用され得る。使用され得る他のジペプチドリンカーは、Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓのブレンツキシマブベンドチン（Ｖｅｎｄｏｔｉｎ）ＳＧＮ−３５（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、Ｓｅａｔｔｌｅ  ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ−７５（抗ＣＤ−７０、ＭＣ−モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのグレムバツムマブ（ＣＤＸ−０１１）（抗ＮＭＢ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）およびＣｙｔｏｇｅｎのＰＳＭＡ−ＡＤＣ（ＰＳＭＡ−ＡＤＣ−１３０１）（抗ＰＳＭＡ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＭＭＡＥ）のようなＡＤＣに見いだされるものを含む。
【０１１９】
酵素により切断可能なリンカーは、酵素による切断部位から薬物を空間的に分離する自己破壊型スペーサーを含んでもよい。薬物のペプチドリンカーへの直接的な結合は、薬物のアミノ酸付加物のタンパク質分解による放出をもたらす恐れがあり、これは、この活性を害する。自己破壊型スペーサーの使用により、アミド結合の加水分解時に、化学的に修飾されていない、完全に活性な薬物を排除することが可能となる。
【０１２０】
自己破壊型スペーサーの１つは、二官能性パラ−アミノベンジルアルコール基であり、この基は、アミノ基を介してペプチドに連結されて、アミド結合を形成する一方、アミン含有薬物は、カルバメート官能基を介して、リンカーのベンジル型ヒドロキシル基に結合され得る（ｐ−アミドベンジルカルバメートであるＰＡＢＣを与える。）。得られたプロドラッグは、プロテアーゼ媒介性切断時に活性化され、１，６−脱離反応をもたらし、未修飾薬物、二酸化炭素およびリンカー基の残りの部分を放出する。以下のスキームは、ｐ−アミドベンジルカルバメートの断片化、および薬物の放出を図示している：
【０１２１】
【化１４】
2020152726.tif 000016
（式中、Ｘ−Ｄは、未修飾薬物を表す。）。
【０１２２】
この自己破壊基の複素環式変形体も記載されている。米国特許第７，９８９，４３４号を参照されたい。
【０１２３】
ある種の実施形態において、酵素による切断可能なリンカーは、β−グルクロン酸をベースとするリンカーである。薬物の容易な放出は、リソソーム酵素であるβ−グルクロニダーゼによるβ−グルクロニドのグリコシド結合の切断によって実現され得る。この酵素は、リソソーム内に豊富に存在しており、一部の腫瘍タイプにおいて過剰発現される一方、細胞外の酵素活性は低い。β−グルクロン酸をベースとするリンカーは、β−グルクロニドの親水性性質により、ＡＤＣが凝集する傾向を回避するために使用され得る。ある種の実施形態において、β−グルクロン酸をベースとするリンカーは、疎水性薬物に連結されているＡＤＣ用のリンカーとして好ましい。以下のスキームは、β−グルクロン酸をベースとするリンカーを含有するＡＤＣから薬物が放出されるのを図示している：
【０１２４】
【化１５】
2020152726.tif 000017
【０１２５】
オーリスタチン、カンプトテシンおよびドキソルビシンアナログ、ＣＢＩ小溝結合剤およびプシムベリンのような薬物を抗体に連結するのに有用な、切断可能な様々なβ−グルクロン酸をベースとするリンカーが記載されている（それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれている、Ｊｅｆｆｒｅｙら．、２００６年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１７巻：８３１−８４０頁；Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１７巻：２２７８−２２８０頁；およびＪｉａｎｇら、２００５年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２７巻：１１２５４−１１２５５頁を参照されたい。）。これらのβ−グルクロン酸をベースとするリンカーはすべて、本明細書に記載されているＡＤＣにおいて使用され得る。ある種の実施形態において、酵素による切断可能なリンカーは、β−ガラクトシドをベースとするリンカーである。β−ガラクトシドは、リソソーム内に豊富に存在する一方、細胞外での酵素活性は低い。
【０１２６】
さらに、フェノール基を含有するＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、フェノール性酸素を介してリンカーに共有結合され得る。米国出願公開第２００９／０３１８６６８号に記載されているこのようなリンカーの１つは、ジアミノ−エタン「ＳｐａｃｅＬｉｎｋ」が、従来的な「ＰＡＢＯ」をベースとする自己破壊型基と組み合わされて使用され、フェノールを送達する方法に依存するものである。リンカーの切断は、本開示のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を使用して、以下に概略されている。
【０１２７】
【化１６】
2020152726.tif 000018
【０１２８】
切断可能なリンカーは、切断不能な一部もしくはセグメントを含んでもよく、および／または切断可能なセグメントもしくは一部は、他の切断不能なリンカーにおいて含まれ、このリンカーを切断可能にし得る。単なる例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および関連ポリマーは、ポリマー主鎖中に切断可能な基を含むことができる。例えば、ポリエチレングリコールまたはポリマーリンカーは、ジスルフィド、ヒドラゾンまたはジペプチドのような、１つ以上の切断可能な基を含むことができる。
【０１２９】
リンカーに含まれ得る他の分解可能な連結基は、ＰＥＧカルボン酸または活性化ＰＥＧカルボン酸と生物活性剤上のアルコール基との反応によって形成されるエステル連結基を含み、この場合、このようなエステル基は一般に、生理的条件下で加水分解し、生物活性剤を放出する。加水分解により分解可能な連結基は、以下に限定されないが、カーボネート連結基、アミンとアルデヒドとの反応に由来するイミン連結基、アルコールとリン酸エステル基との反応より形成されるリン酸エステル連結基、アルデヒドとアルコールの反応生成物であるアセタール連結基、ギ酸エステルとアルコールの反応生成物であるオルトエステル連結基、および以下に限定されないが、ポリマーの末端位およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基を含めた、ホスホロアミダイト基により形成されるオリゴヌクレオチド連結基を含む。
【０１３０】
ある種の実施形態において、リンカーは、酵素により切断可能なペプチド部分を含み、例えば、リンカーは、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）もしくは（ＩＶｃ）：
【０１３１】
【化１７】
2020152726.tif 000019
またはこれらの塩を含み、式中、
ペプチドは、リソソーム酵素により切断可能なペプチド（Ｎ→Ｃで表示されており、この場合、ペプチドは、アミノおよびカルボキシ「末端」を含む。）を表し、
Ｔは、１つ以上のエチレングリコール単位を含むポリマー、もしくはアルキレン鎖、またはこれらの組合せを表し、
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびスルホン酸メチルから選択され、
ｐは、０から５の範囲の整数であり、
ｑは、０または１であり、
ｘは、０または１であり、
ｙは、０または１であり、
【０１３２】
【化１８】
2020152726.tif 000020
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤へのリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残りへの結合点を表す。
【０１３３】
ある種の実施形態において、リンカーは、酵素により切断可能なペプチド部分を含み、例えば、リンカーは、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）もしくは（ＩＶｃ）またはこれらの塩を含む。
【０１３４】
ある種の実施形態において、ペプチドは、トリペプチドまたはジペプチドから選択される。ある特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｌａ、Ａｓｎ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｓｎ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｇｌｕ、Ｇｌｕ−Ｖａｌ、Ｓｅｒ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｓｅｒ、Ｌｙｓ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｌｙｓ、Ａｓｐ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ａｓｐ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｃｉｔ−Ｉｌｅ、Ｐｈｅ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ、Ｃｉｔ−ＴｒｐおよびＴｒｐ−Ｃｉｔ、またはこれらの塩から選択される。
【０１３５】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶａ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下に例示されているリンカーを含む（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含む。）：
【０１３６】
【化１９】
2020152726.tif 000021
2020152726.tif 000022
【０１３７】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶｂ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下に例示されているリンカーを含む（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含む。）：
【０１３８】
【化２０】
2020152726.tif 000023
2020152726.tif 000024
2020152726.tif 000025
2020152726.tif 000026
2020152726.tif 000027
【０１３９】
ある種の実施形態において、リンカーは、酵素により切断可能な糖部分を含み、例えば、リンカーは、構造式（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（Ｖｃ）、もしくは（Ｖｄ）：
【０１４０】
【化２１】
2020152726.tif 000028
2020152726.tif 000029
またはこれらの塩を含み、式中、
ｑは、０または１であり、
ｒは、０または１であり、
Ｘ１は、ＯまたはＮＨであり、
【０１４１】
【化２２】
2020152726.tif 000030
は、薬物へのリンカーの結合点を表し、
＊は、リンカーの残りへの結合点を表す。
【０１４２】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖａ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下に例示されているリンカーを含む（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含む。）：
【０１４３】
【化２３】
2020152726.tif 000031
2020152726.tif 000032
2020152726.tif 000033
2020152726.tif 000034
【０１４４】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖｂ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下に例示されているリンカーを含む（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含む。）：
【０１４５】
【化２４】
2020152726.tif 000035
2020152726.tif 000036
【０１４６】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖｃ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下に例示されているリンカーを含む（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含む。）：
【０１４７】
【化２５】
2020152726.tif 000037
2020152726.tif 000038
2020152726.tif 000039
2020152726.tif 000040
【０１４８】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（Ｖｄ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下に例示されているリンカーを含む（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含む。）：
【０１４９】
【化２６】
2020152726.tif 000041
【０１５０】
５．２．２．２切断不能なリンカー
切断可能なリンカーは、ある種の利点を実現することができるが、本明細書に記載されているＡＤＣを含むリンカーは、切断可能である必要はない。切断不能なリンカーの場合、薬物放出は、血漿と一部の細胞質コンパートメントとの間の特性差に依存しない。薬物の放出は、抗原媒介性のエンドサイトーシスによるＡＤＣの内部移行、およびリソソームコンパートメントへの送達の後に起こると仮定され、、ここで抗体は、細胞内タンパク質分解により、アミノ酸のレベルにまで分解される。この過程は、薬物、リンカー、およびリンカーが共有結合していたアミノ酸残基によって形成される薬物誘導体を放出する。切断不能なリンカーを有するコンジュゲートに由来するアミノ酸薬物代謝産物は、より親水性であり、一般に、膜透過性に乏しく、これにより、切断可能なリンカーを有するコンジュゲートと比べて、より小さなバイスタンダー効果およびより低い非特異的毒性しかもたらさない。一般に、切断不能なリンカーを有するＡＤＣは、切断可能なリンカーを有するＡＤＣよりも、血液循環中に大きな安定性を有する。切断不能なリンカーは、アルキレン鎖であってもよく、または例えば、ポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーに基づくもののようなポリマーの性質があってもよく、またはアルキレン鎖、ポリアルキレングリコールおよび／またはアミドポリマーのセグメントを含んでもよい。ある種の実施形態において、リンカーは、１から６つのエチレングリコール単位を有するポリエチレングリコールセグメントを含む。
【０１５１】
薬物を抗体に連結するために使用される様々な切断不能なリンカーが、記載されてきた。（これらの内容が参照により本明細書に組み込まれている、Ｊｅｆｆｒｅｙら．、２００６年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１７巻；８３１−８４０頁、Ｊｅｆｆｒｅｙら．、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１７巻：２２７８−２２８０頁；およびＪｉａｎｇら、２００５年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２７巻：１１２５４−１１２５５頁を参照されたい。）。これらのリンカーのすべてが、本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る。
【０１５２】
ある種の実施形態において、リンカーは、インビボにおいて非切断可能であり、例えば、構造式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）または（ＶＩｄ）によるリンカー（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含む。）は、
【０１５３】
【化２７】
2020152726.tif 000042
2020152726.tif 000043
またはこの塩を含み、式中、
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネートおよびスルホン酸メチルから選択され、
Ｒｘは、リンカーを抗体に共有結合により連結することが可能な官能基を含む部分であり、
【０１５４】
【化２８】
2020152726.tif 000044
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤へのリンカーの結合点を表す。
【０１５５】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＶＩａ）−（ＶＩｄ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下に例示されているリンカーを含む（例示されている通り、これらのリンカーは、該リンカーを抗体に共有結合により連結するのに適した基を含み、
【０１５６】
【化２９】
2020152726.tif 000045
は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤への結合点を表す。）：
【０１５７】
【化３０】
2020152726.tif 000046
2020152726.tif 000047
【０１５８】
５．２．２．３．リンカーを抗体に結合するために使用される基
結合基は、性質として求電子性とすることができ、マレイミド基、活性化ジスルフィド、ＮＨＳエステルおよびＨＯＢｔエステルような活性エステル、ハロギ酸エステル、酸ハロゲン化物、ハロアセトアミドのようなハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジルを含む。以下において議論されている通り、本開示により使用され得る、「自己安定型」マレイミドおよび「架橋型ジスルフィド」に関連する技術も出現している。
【０１５９】
ＡＤＣからの薬物−リンカーの喪失が、アルブミン、システインまたはグルタチオンとのマレイミド交換の結果として観察された（Ａｌｌｅｙら、２００８年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９巻：７５９−７６９頁）。これは、コンジュゲート化の部位に溶媒が非常に接近し易いため特によく起きる一方、部分的に接近可能であり、正に帯電している環境を有する部位は、マレイミド環の加水分解を促進する（Ｊｕｎｕｔｕｌａら、２００８年、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６巻：９２５−９３２頁）。認識されている解決策は、コンジュケート化から形成されるスクシンイミドを加水分解することであり、なぜなら、これは、抗体からの脱コンジュゲート化に対して抵抗性を示し、これにより、血清中においてＡＤＣが安定となるからである。スクシンイミド環が、アルカリ条件下において加水分解を受けることが既に報告されている（Ｋａｌｉａら、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１７巻：６２８６−６２８９頁）。抗体のコンジュゲート化条件下において自発的に加水分解して、安定性の改善されたＡＤＣ種を与える、「自己安定型」マレイミド基の例の１つが、以下の概略図中に図示されている。米国出願公開第２０１３／０３０９２５６号を参照されたい。
【０１６０】
【化３１】
2020152726.tif 000048
【０１６１】
Ｐｏｌｙｔｈｅｒｉｃｓは、ネイティブヒンジ（ｎａｔｉｖｅ  ｈｉｎｇｅ）ジスルフィド結合の還元に由来する、一対のスルフィドリル基を架橋するための方法を開示している。Ｂａｄｅｓｃｕら、２０１４年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２５巻：１１２４−１１３６頁を参照されたい。この反応は、以下の概略図に図示されている。この方法の利点は、ＩｇＧの完全な還元によって均一なＤＡＲ４となるＡＤＣを合成し（四対のスルフィドリルを与える。）、次いで４当量のアルキル化剤と反応することが可能である点である。「架橋型ジスルフィド」を含有するＡＤＣもまた、安定性が改善されていることが主張されている。
【０１６２】
【化３２】
2020152726.tif 000049
【０１６３】
同様に、以下に図示されている通り、一対のスルフィドリル基を架橋することが可能なマレイミド誘導体が開発された。米国出願公開第２０１３／０２２４２２８号を参照されたい。
【０１６４】
【化３３】
2020152726.tif 000050
【０１６５】
５．２．２．４．リンカー選択の考慮点
当業者によって公知の通り、特定のＡＤＣのために選択されるリンカーは、以下に限定されないが、抗体への結合部位（例えば、ｌｙｓ、ｃｙｓまたは他のアミノ酸残基）、薬物ファーマコフォアおよび薬物の脂溶性という構造的な制約を含めた、様々な因子によって影響を受け得る。ＡＤＣのために選択される特定のリンカーは、特異的抗体／薬物の組合せに対する、これらの様々な因子のバランスを追求するべきである。ＡＤＣにおけるリンカーの選択によって影響を受ける因子の総説に関して、Ｎｏｌｔｉｎｇ、第５章「Ｌｉｎｋｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１０４５巻、７１−１００頁、Ｌａｕｒｅｎｔ  Ｄｕｃｒｙ（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉｃａ、ＬＬＣ、２０１３年を参照されたい。
【０１６６】
例えば、ＡＤＣは、抗原−陽性腫瘍細胞の周辺に存在しているバイスタンダー抗原陰性細胞を死滅させることが観察されている。ＡＤＣによってバイスタンダー細胞を死滅させる機構は、ＡＤＣの細胞内プロセシングの間に形成される代謝産物が役割を果たし得ることを示している。抗原陽性細胞におけるＡＤＣの代謝によって産生する中性な細胞毒性代謝産物は、バイスタンダー細胞の死滅において役割を果たしているように思われる一方、電荷を帯びた代謝産物は、膜を通過して媒体中に拡散するのが阻止され得、したがって、バイスタンダーの死滅に影響を及ぼすはずがない。ある種の実施形態において、リンカーは、ＡＤＣの細胞代謝産物によって引き起こされるバイスタンダー死滅効果を弱めるよう選択される。ある種の実施形態において、リンカーは、バイスタンダー死滅効果を高めるよう選択される。
【０１６７】
リンカーの特性は、使用および／または保管の条件下、ＡＤＣの凝集にやはり影響を及ぼし得る。通常、文献に報告されているＡＤＣは、抗体分子あたり、３ー４つ以下の薬物分子を含有する（例えば、Ｃｈａｒｉ、２００８年、Ａｃｃ  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  ４１巻：９８−１０７頁を参照されたい。）。特に、薬物とリンカーの両方が疎水性である場合、ＡＤＣの凝集のために、より高い薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）を得ようとする試みは失敗に終わることが多かった（Ｋｉｎｇら、２００２年、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４５巻：４３３６−４３４３頁；Ｈｏｌｌａｎｄｅｒら、２００８年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １９巻：３５８−３６１頁；Ｂｕｒｋｅら、２００９年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  ２０巻：１２４２−１２５０頁。）。多数の例において、ＤＡＲが３−４より大きくなれば、有効性を増大させる手段として有益となり得る。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤が性質として疎水性である場合、ＡＤＣ凝集を低減する手段として、比較的親水性のリンカーを選択することが望ましくなり得、とりわけ、ＤＡＲが３−４より大きい場合に望ましい。したがって、ある種の実施形態において、リンカーは、保管中および／または使用中に、ＡＤＣの凝集を低減する化学部分を組み込む。リンカーは、帯電基、または生理学的ｐＨ下において帯電する基のような極性基または親水性基を取り込んで、ＡＤＣの凝集を低減することができる。例えば、リンカーは、塩、または生理学的ｐＨにおいて、脱プロトン化する基（例えば、カルボン酸イオン）またはプロトン化する基（例えば、アミン）を取り込むことができる。
【０１６８】
多数のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を抗体に連結するために使用され得る、２０もの高いＤＡＲをもたらすことが報告されている、例示的な多価リンカーは、これらの内容の全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第８，３９９，５１２号、米国出願公開第２０１０／０１５２７２５号、米国特許第８，５２４，２１４号、米国特許第８，３４９，３０８号、米国出願公開第２０１３／１８９２１８号、米国出願公開第２０１４／０１７２６５号、ＷＯ２０１４／０９３３７９、ＷＯ２０１４／０９３３９４、ＷＯ２０１４／０９３６４０に記載されている。
【０１６９】
特定の実施形態において、保管中または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定すると、約４０％未満である。特定の実施形態において、保管中または使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定すると、約３０％未満のような、約２５％未満のような、約２０％未満のような、約１５％未満のような、約１０％未満のような、約５％未満のような、約４％未満のような３５％未満である、または一層低い。
【０１７０】
一実施形態は、リンカーＬが、リンカーＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３、およびこれらの塩からなる群から選択される、ＡＤＣまたはシントンに関する。
【０１７１】
５．３  抗体
ＡＤＣの抗体は、対象とする標的細胞の表面上で発現される抗原に結合するが、通常、必ずしも特異的に結合しない、任意の抗体とすることができる。抗原は必要ではないが、一部の実施形態において、これに結合したＡＤＣを細胞に内部移行することができる。対象とする標的細胞は、例として非限定的に、Ｂｃｌ−ｘＬを発現または過剰発現する腫瘍細胞を含めた、抗アポトーシス性Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質の阻害によるアポトーシスの誘導が望ましい細胞を一般に含む。標的抗原は、対象とする標的細胞に発現される、任意のタンパク質、グリコタンパク質、ポリサッカライド、リポタンパク質などであってもよいが、通常、正常細胞もしくは健全細胞と比べて、正常細胞もしくは健全細胞ではなく標的細胞において独自に発現される、または標的細胞において過剰発現されるかのどちらかであるタンパク質であり、したがって、ＡＤＣは、例えば、腫瘍細胞のような、対象とする特定の細胞を選択的に標的とする。当業者によって認識される通り、選択される特異抗原、従って抗体は、対象とする所望の標的細胞がいかなるものであるかに依存する。具体的な実施形態において、ＡＤＣの抗体は、ヒトへの投与に適した抗体である。
【０１７２】
抗体（Ａｂ）および免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造上の特徴を有するグリコタンパク質である。抗体は、特定の標的に対して結合特異性を示すが、免疫グロブリンは、抗体と、標的特異性がない他の抗体様分子の両方を含む。自然抗体および免疫グロブリンは、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体グリコタンパク質である。重鎖はそれぞれ、一端に可変ドメイン（ＶＨ）、この後にいくつかの定常ドメインを有する。軽鎖はそれぞれ、一端（ＶＬ）に１つの可変ドメイン、およびこのもう一方の端に１つの定常ドメインを有する。
【０１７３】
「ＶＨ」を言う場合、Ｆｖ、ｓｃＦｖまたはＦａｂの重鎖を含めた、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」を言う場合、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖまたはＦａｂの軽鎖を含めた、免疫グロブリンの軽鎖の可変領域を指す。
【０１７４】
用語「抗体」は、本明細書において、最も広い意味で使用され、特定の抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子、または特定の抗原に免疫学的に反応性を示す免疫グロブリン分子を指し、抗体のポリクローナル形態、モノクローナル形態、遺伝子操作形態、および他には、以下に限定されないが、ネズミ抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディおよびテトラボディ）、および抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧおよびｓｃＦｖ断片を含む。）を含めた、修飾形態を含む。用語「ｓｃＦｖ」とは、従来の抗体に由来する重鎖および軽鎖の可変ドメインが結合して１つの鎖を形成した、単一鎖Ｆｖ抗体を指す。
【０１７５】
抗体は、ネズミ、ヒト、ヒト化、キメラであってもよく、他の種に由来してもよい。抗体は、特定の抗原を認識することおよびこれに結合することが可能な免疫系により産生するタンパク質である（Ｊａｎｅｗａｙ、Ｃ．、Ｔｒａｖｅｒｓ、Ｐ．、Ｗａｌｐｏｒｔ、Ｍ．、Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１年）  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。標的抗原は、一般に、多重抗体上のＣＤＲによって認識されるエピトープとも呼ばれる、多数の結合部位を有する。様々なエピトープに特異的に結合する抗体はそれぞれ、異なる構造を有する。したがって、１つの抗原は２つ以上の対応する抗体を有することができる。抗体は、完全長免疫グロブリン分子、または完全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、対象とする標的の抗原またはこの一部に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を含み、このような標的は、以下に限定されないが、がん細胞、または自己免疫疾患に伴う自己免疫抗体を産生する細胞を含む。本明細書において開示されている免疫グロブリンは、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＡ）、免疫グロブリン分子のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または部分クラスとすることができる。免疫グロブリンは、任意の種に由来することができる。しかし、一態様において、免疫グロブリンは、ヒト、ネズミまたはウサギを起源とする。
【０１７６】
用語「抗体断片」とは、完全長抗体の一部分、一般に、標的結合領域または可変領域を指す。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片を含む。「Ｆｖ」断片は、完全な標的認識および結合部位を含有する最小抗体断片である。この領域は、剛直な非共有結合性会合にある、１つの重鎖の可変ドメインおよび１つの軽鎖の可変ドメインの二量体からなる（ＶＨ−ＶＬ二量体）。各可変ドメインの３つのＣＤＲは、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の標的結合部位を規定するよう相互作用するのが、この配置においてである。多くの場合、６つのＣＤＲは、抗体に標的結合特異性を付与する。しかし、いくつかの場合、単一可変ドメインでさえも（または、標的に対して特異的なＣＤＲをたった３つしか含まない、Ｆｖの半分）、標的を認識し、これに結合する能力を有することができる。「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一ポリペプチド鎖中の抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一般に、Ｆｖポリペプチドは、標的結合のために、ｓｃＦｖが所望の構造を形成するのを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。「単一ドメイン抗体」は、標的に十分な親和性を示す、単一ＶＨドメインまたはＶＬドメインからなる。特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ化抗体である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、１９９９年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１巻：２５−３８頁を参照されたい。）。
【０１７７】
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含有している。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステインを含めた、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端において、数個の残基が追加していることにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆ（ａｂ’）断片は、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化産物のヒンジシステインにおいて、ジスルフィド結合の切断によって生成する。抗体断片の追加の化学的カップリングが、当業者に公知である。
【０１７８】
軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方が、超可変領域としても知られている、相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。可変ドメインのより高度に保存されている部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。当分野において公知の通り、抗体の超可変領域を規定するアミノ酸／境界は、文脈、および当分野において公知の様々な定義に応じて変わり得る。可変ドメイン内のいくつかの位置は、これらの位置が一連の基準下における超可変領域内にあると見なされ得る一方、異なる一連の基準下において、超可変領域の外側にあると見なされるという点で、ハイブリッド超可変位置として見なされ得る。これらの位置の１つ以上が、拡張される超可変領域にも見いだされ得る。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって近接して一緒に保持され、他の鎖に由来するＣＤＲと共に、抗体の標的結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．１９８７年）を参照されたい。）。本明細書において使用する場合、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、特に示さない限り、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基番号付けシステムに準拠して行われる。
【０１７９】
ある種の実施形態において、本開示中のＡＤＣの抗体は、モノクローナル抗体である。用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）とは、例えば、真核生物クローン、原核生物クローンまたはファージクローンを含む単一コピーまたはクローンに由来する抗体を指し、産生される方法を指すわけではない。好ましくは、本開示のモノクローナル抗体は、均一集団または実質的に均一な集団で存在する。モノクローナル抗体は、無傷分子、およびタンパク質に特異的に結合することが可能な抗体断片（例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片のような）の両方を含む。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、無傷抗体のＦｃ断片に欠いており、動物の血液循環から一層迅速に排出され、無傷抗体ほど非特異的組織結合を有し得ない（Ｗａｈｌら、１９８３年、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４巻：３１６頁）。本開示の場合に有用なモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え体およびファージディスプレー技法、またはこれらを組合せて使用することを含めた、当分野において公知の幅広い技法を使用して調製することができる。本開示の抗体は、キメラ抗体、霊長類化抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体を含む。
【０１８０】
ほとんどの場合、抗体は、遺伝子学的にコードされていたアミノ酸からしか構成されていないが、一部の実施形態において、コードされていないアミノ酸が特定の位置に組み込まれて、抗体に連結されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の数、およびこれらの位置が制御され得る。化学量論および結合位置の制御において使用するために、抗体に組み込まれ得るコードされていないアミノ酸、およびこのような修飾抗体を作製する方法の例が、これらの全内容が参照により本明細書に組み込まれている、Ｔｉａｎら、２０１４、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １１１巻（５号）：１７６６−１７７１頁およびＡｘｕｐら、２０１２年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０９巻（４０号）：１６１０１−１６１０６頁に議論されている。ある種の実施形態において、コードされていないアミノ酸は、抗体あたりのＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の数を約１−８または約２−４に制限する。
【０１８１】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体はキメラ抗体である。用語「キメラ」抗体は、本明細書で使用する場合、ラット抗体またはマウス抗体のような非ヒト免疫グロブリンに由来する可変配列、および通常、ヒト免疫グロブリンテンプレートから選択されるヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体を指す。キメラ抗体を生成するための方法は、当分野において公知である。例えば、これらの全体が参照により本明細書において組み込まれている、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻（４７１９号）：１２０２−７頁；Ｏｉら、１９８６年、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４巻：２１４−２２１頁；Ｇｉｌｌｉｅｓら、１９８５年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５巻：１９１−２０２頁、米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号および同第４，８１６３９７号を参照されたい。
【０１８２】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体はヒト化抗体である。非ヒト（例えば、ネズミ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン鎖、免疫グロブリン鎖またはこれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の標的結合サブドメインのような）である。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常、２つの可変ドメインのすべてを実質的に含み、この場合、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンの領域に相当し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列の領域である。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、通常、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の一部分を含むことができる。抗体のヒト化法は、当分野において公知である。例えば、これらのすべての全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８年、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３−７頁；Ｑｕｅｅｎらへの米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号；ＥＰ２３９４００；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；ＥＰ５９２１０６；ＥＰ５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ、１９９１年、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８巻：４８９−４９８頁；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．７巻：８０５−８１４頁；Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１巻：９６９−９７３頁；および米国特許５，５６５，３３２号を参照されたい。
【０１８３】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体はヒト抗体である。完全な「ヒト」抗体は、ヒト患者の治療処置にとって望ましいものとなり得る。本明細書において使用する場合、「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーからまたは１つ以上のヒト免疫グロブリンに対してトランスジェニックな動物から単離された抗体であって、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体である。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用して、ファージディスプレー法を含めた、当分野において公知の様々な方法によって作製され得る。参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，２０７，４１８号、同第６，２３５，８８３号、同第７，２２７，００２号、同第８，８０９，１５１号および米国出願公開第２０１３／１８９２１８号を参照されたい。ヒト抗体はまた、機能的な内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して生成され得る。例えば、それぞれの内容の全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；同第５，９３９，５９８号；同第７，７２３，２７０号；同第８，８０９，０５１号、および米国出願公開第２０１３／１１７８７１号を参照されたい。さらに、Ｍｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）、Ａｓｔｅｌｌａｓ  Ｐｈａｒｍａ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）およびＲｅｇｅｎｅｒｏｎ（Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹ）のような会社が、上記の技法に類似した技法を使用して、選択された抗原を対象とするヒト抗体を提供することに取り組んでいる。選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「誘導選択」と称される技法を使用して生成され得る。この手法において、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体が使用されて、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導する（Ｊｅｓｐｅｒｓら、１９８８年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２巻：８９９−９０３頁）。
【０１８４】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は霊長類化抗体である。用語「霊長類化抗体」は、サルの可変領域およびヒト定常領域を含む抗体を指す。霊長類化抗体を生成するための方法は、当分野において公知である。例えば、これらの全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，６５８，５７０号；同第５，６８１，７２２号；および同第５，６９３，７８０号を参照されたい。
【０１８５】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、二特異性抗体または二重可変ドメイン抗体（ＤＶＤ）である。二特異性およびＤＶＤ抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する、モノクローナル抗体、多くの場合、ヒト抗体またはヒト化抗体である。ＤＶＤは、例えば、この開示が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第７，６１２，１８１号に記載されている。
【０１８６】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は霊長類化抗体である。例えば、限定するものではないが、誘導体化抗体は、通常、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解による切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結基などにより修飾される。多数の化学的修飾のいずれも、以下に限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成を含めた、公知の技法により実施され得る。さらに、これらの誘導体は、例えば、Ａｍｂｒｘ技法を使用して、１つ以上の非天然アミノ酸を含有することができる（例えば、Ｗｏｌｆｓｏｎ、２００６年、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３巻（１０号）：１０１１−２頁を参照されたい。）。
【０１８７】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、対応する野生型配列に対して、定常領域が媒介する少なくとも１つの生物学的エフェクター機能を改変するよう修飾された配列を有する。例えば、一部の実施形態において、抗体は、非修飾抗体に対して、定常領域が媒介する少なくとも１つの生物学的エフェクター機能を低下させるよう修飾されて、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への結合が低下され得る。ＦｃＲ結合は、ＦｃＲ相互作用にとって必要な特定の領域において、抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを変異させることにより低下され得る（例えば、ＣａｎｆｉｅｌｄおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ、１９９１年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３巻：１４８３−１４９１頁；およびＬｕｎｄら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７巻：２６５７−２６６２頁を参照されたい。）。
【０１８８】
ある種の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は修飾されて、未修飾抗体に比べて、定常領域が媒介する少なくとも１つの生物学的エフェクター機能を獲得または改善して、例えば、ＦｃγＲ相互作用を増強する（例えば、ＵＳ２００６／０１３４７０９を参照されたい。）。例えば、対応する野生型定常領域よりも大きな親和性を伴って、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＦｃγＲＩＩＩＡに結合する定常領域を有する抗体は、本明細書に記載されている方法によって生成され得る。
【０１８９】
ある種の特定の実施形態において、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体は、細胞表面受容体または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体のような腫瘍細胞に結合する抗体である。がん診断および治療のための有効な細胞標的を発見しようとする試みにおいて、研究者らは、膜貫通ポリペプチド、または他には、１つ以上の正常な非がん細胞と比べて、１つ以上の特定のタイプのがん細胞の表面に特異的に発現する腫瘍関連ポリペプチドを特定しようと探求してきた。多くの場合、このような腫瘍関連ポリペプチドは、非がん細胞の表面と比べて、がん細胞の表面に一層多量に発現される。このような細胞表面受容体および腫瘍関連抗原は当分野において公知であり、当分野における周知の方法および情報を使用して、抗体の生成に使用するために調製され得る。
５．３．１．例示的な細胞表面受容体およびＴＡＡ
本明細書に記載されているＡＤＣの抗体が標的とされ得る、細胞表面受容体およびＴＡＡの例は、以下に限定されないが、以下に一覧表示されている様々な受容体およびＴＡＡを含む。便宜上、これらの抗原に関連する情報は、このすべてが当分野において公知であるが、以下に一覧表示されており、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）の核酸およびタンパク質配列特定規定に従う、名称、代替名称、ジーンバンク受託番号および主要参照を含む。一覧表示されている細胞表面受容体およびＴＡＡに対応する核酸およびタンパク質配列は、ジーンバンクのような公的データベースにおいて入手可能である。
【０１９０】
４−１ＢＢ
５ＡＣ
５Ｔ４
アルファ−フェトプロテイン
アンジオポエチン２
ＡＳＬＧ６５９
ＴＣＬ１
ＢＭＰＲ１Ｂ
ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ）
Ｃ２４２抗原
Ｃ５
ＣＡ−１２５
Ｃａ−１２５（模倣）
ＣＡ−ＩＸ（カルボニックアンヒドラーゼ９）
ＣＣＲ４
ＣＤ１４０ａ
ＣＤ１５２
ＣＤ１９
ＣＤ２０
ＣＤ２００
ＣＤ２１（Ｃ３ＤＲ）１）
ＣＤ２２（Ｂ−細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）
ＣＤ２２１
ＣＤ２３（ｇＥ受容体）
ＣＤ２８
ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）
ＣＤ３３
ＣＤ３７
ＣＤ３８（環式ＡＤＰリボースヒドロラーゼ）
ＣＤ４
ＣＤ４０
ＣＤ４４  ｖ６
ＣＤ５１
ＣＤ５２
ＣＤ５６
ＣＤ７０
ＣＤ７２（Ｌｙｂ−２、Ｂ−細胞分化抗原ＣＤ７２）
ＣＤ７４
ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン関連アルファ）ジーンバンク受託番号ＮＰ＿００１７７４．１０）
ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、Ｂ２９）
ＣＤ８０
ＣＥＡ
ＣＥＡ関連抗原
ｃｈ４Ｄ５
ＣＬＤＮ１８．２
ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＴＤＧＦ１  奇形癌腫由来の増殖因子）
ＣＴＬＡ−４
ＣＸＣＲ５
ＤＬＬ４
ＤＲ５
Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）  ＥＧＦＬ７
ＥＧＦＲ
ＥｐＣＡＭ
ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５）
エピシアリン
ＥＲＢＢ３
ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢ受容体）
ＦＣＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）
ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質
フィブロネクチンエクストラドメイン−Ｂ
葉酸受容体１
フリズルド受容体
ＧＤ２
ＧＤ３ガングリオシド
ＧＥＤＡ
ＧＰＮＭＢ
ＨＥＲ１
ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）
ＨＥＲ２／ｎｅｕ
ＨＥＲ３
ＨＧＦ
ＨＬＡ−ＤＯＢ
ＨＬＡ−ＤＲ
ヒト分散因子受容体キナーゼ
ＩＧＦ−１受容体
ＩｇＧ４
ＩＬ−１３
ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７）
ＩＬ−６
ＩＬＧＦ２
ＩＬＦＲ１Ｒ
インテグリンα
インテグリンα５β１
インテグリンαｖβ３
ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２、遺伝子染色体１ｑ２１）
ルイスＹ抗原
ＬＹ６４（ＲＰ１０５）
ＭＣＰ−１
ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１）
ＭＰＦ（ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、メソテリン、巨核球可能因子）
ＭＳ４Ａ１
ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）
ＭＵＣ１
ムチンＣａｎＡｇ
Ｎａｐｉ３（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、タイプＩＩ  ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）
ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６）
Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５）
ＰＤ−１
ＰＤＣＤ１
ＰＤＧＦ−Ｒ  α
前立腺特定的膜抗原
ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体）
ＰＳＣＡ  ｈｌｇ
ＲＡＮＫＬ
ＲＯＮ
ＳＤＣ１
Ｓｅｍａ  ５ｂ
ＳＬＡＭＦ７（ＣＳ−１）
ＳＴＥＡＰ１
ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺がん関連遺伝子１）
ＴＡＧ−７２
ＴＥＭ１
テネイシンＣ
ＴＥＮＢ２、（ＴＭＥＦＦ２、トモレグリン、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ）
ＴＧＦ−β
ＴＲＡＩＬ−Ｅ２
ＴＲＡＩＬ−Ｒ１
ＴＲＡＩＬ−Ｒ２
ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位陽イオンチャネルサブファミリーＭ、メンバー４）
ＴＡ  ＣＴＡＡ１６．８８
ＴＷＥＡＫ−Ｒ
ＴＹＲＰ１（グリコタンパク質７５）
ＶＥＧＦ
ＶＥＧＦ−Ａ
ＥＧＦＲ−１
ＶＥＧＦＲ−２
ビメンチン
【０１９１】
５．３．２．例示的な抗体
本開示のＡＤＣにより使用されることになる例示的な抗体は、以下に限定されないが、３Ｆ８（ＧＤ２）、アバゴボマブ（ＣＡ−１２５（模倣））、アデカツムマブ（ＥｐＣＡＭ）、アフツズマブ（ＣＤ２０）、アラシズマブペゴル（ＶＥＧＦＲ２）、ＡＬＤ５１８（ＩＬ−６）、アレムツズマブ（ＣＤ５２）、アルツモマブペンテート（ＣＥＡ）、アマツキシマブ（メソテリン）、アナツモマブマフェナトキス（ＴＡＧ−７２）、アポリズマブ（ＨＬＡ−ＤＲ）、アルシツモマブ（ＣＥＡ）、バビツキシマブ（ホスファチジルセリン）、ベクツモマブ（ＣＤ２２）、ベリムバブ（ＢＡＦＦ）、ベシレソマブ（ＣＥＡ関連抗原）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ−Ａ）、ビバツズマブメルタンシン（ＣＤ４４  ｖ６）、ブリナツモマブ（ＣＤ１９）、ブレンツキシマブベドチン（（ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８））、カンツズマブメルタンシン（Ｍｕｃｉｎ  ＣａｎＡｇ）、カンツズマブラブタンシン（ＭＵＣ１）、カプロマブペンデチド（前立腺癌細胞）、カルルマブ（ＭＣＰ−１）、カツマキソマブ（ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３）、ＣＣ４９（Ｔａｇ−７２）、ｃＢＲ９６−ＤＯＸ  ＡＤＣ（ルイスＹ抗原）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、シタツズマブボガトクス（ＥｐＣＡＭ）、シクスツムマブ（ＩＧＦ−１受容体）、クリバツズマブテトラキセタン（ＭＵＣ１）、コナツムマブ（ＴＲＡＩＬ−Ｅ２）、ダセツズマブ（ＣＤ４０）、ダロツズマブ（インスリン様成長因子Ｉ受容体）、ダラツズマブ（（ＣＤ３８（環式ＡＤＰリボースヒドロラーゼ））、デムシズマブ（ＤＬＬ４）、デノスマブ（ＲＡＮＫＬ）、デツモマブ（Ｂ−リンパ腫細胞）、ドロジツマブ（ＤＲ５）、ドゥシギツマブ（ＩＬＧＦ２）、エクロメキシマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、エクリズマブ（Ｃ５）、エドレコロマブ（ＥｐＣＡＭ）、エロツズマブ（ＳＬＡＭＦ７）、エルシリモマブ（ＩＬ−６）、エナバツズマブ（ＴＷＥＡＫ受容体）、エノチクマブ（ＤＬＬ４）、エンシツキシマブ（５ＡＣ）、エピツモマブシツキセタン（エピシアリン）、エプラツズマブ（ＣＤ２２）、エルツマキソマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＣＤ３）、エタラシズマブ（インテグリンαｖβ３）、ファルレツズマブ（葉酸受容体１）、ＦＢＴＡ０５（ＣＤ２０）、フィクラツズマブ（ＨＧＦ）、フィギツムマブ（ＩＧＦ−１受容体）、フランボツマブ（（ＴＹＲＰ１（グリコタンパク質７５））、フレソリムマブ（ＴＧＦ−β）、ガリキシマブ（ＣＤ８０）、ガニツマブ（ＩＧＦ−Ｉ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ギレンツキシズマブ（カルボニックアンヒドラーゼ９（ＣＡ−ＩＸ））、グレムバツムマブベドチン（ＧＰＮＭＢ）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ２０）、イクルクマブ（ＶＥＧＦＲ−１）、イゴモマブ（ＣＡ−１２５）、ＩＭＡＢ３６２（ＣＬＤＮ１８．２）、イムガツムマブ（ＥＧＦＲ）、インダツキシマブラブタンシン（ＳＤＣ１）、インテツムマブ（ＣＤ５１）、イノツズマブオゾガマイシン（ＣＤ２２）、イピリムマブ（ＣＤ１５２）、イラツムマブ（（ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８））、ラベツズマブ（ＣＥＡ）、ランブロリズマブ（ＰＤＣＤ１）、レクサツムマブ（ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、リンツズマブ（ＣＤ３３）、ロルボツズマブメルタンシン（ＣＤ５６）、ルカツムマブ（ＣＤ４０）、ルミリキシマブ（ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体））、マパツムマブ（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）、マルジェツキシマブ（ｃｈ４Ｄ５）、マツズマブ（ＥＧＦＲ）、ミラツズマブ（ＣＤ７４）、ミツモマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、モガムリズマブ（ＣＣＲ４）、モキセツモマブシュードトクス（ＣＤ２２）、ナコロマブタフェナトクス（Ｃ２４２抗原）、ナプツモマブエスタフェナトックス（５Ｔ４）、ナルナツマブ（ＲＯＮ）、ナタリズマブ（インテグリンα４）、ネシツムマブ（ＥＧＦＲ）、ネスバクマブ（アンジオポエチン２）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ニボルマブ（ＩｇＧ４）、オナルツズマブ（ＣＤ２０）、オファツムマブ（ＣＤ２０）、オララツマブ（ＰＤＧＦ−Ｒα）、オナルツズマブ（ヒト分散因子受容体キナーゼ）、オンツキシズマブ（ＴＥＭ１）、オポルツズマブモナト（ＥｐＣＡＭ）、オレゴボマブ（ＣＡ−１２５）、オトレルツズマブ（ＣＤ３７）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、パンコマブ（ＭＵＣ１の腫瘍特異的グリコシル化）、パルサツズマブ（ＥＧＦＬ７）、パトリツマブ（ＨＥＲ３）、ペムツモマブ（ＭＵＣ１）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ピジリズマブ（ＰＤ−１）、ピナツズマブベドチン（ＣＤ２２）、プリツムマブ（ビメンチン）、ラコツモマブ（Ｎ−グリコリルノイラミン酸）、ラドレツマブ（フィブロネクチンエクストラドメイン−Ｂ）、ラムシルマブ（ＶＥＧＦＲ２）、リロツムマブ（ＨＧＦ）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、ロバツムマブ（ＩＧＦ−１受容体）、サマリズマブ（ＣＤ２００）、サツモマブペンデチド（ＴＡＧ−７２）、セリバンツマブ（ＥＲＢＢ３）、シブロツヅマブ（ＦＡＰ）、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ（ＣＤ１９）、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ（ＣＤ３３）、シルツキシマブ（ＩＬ−６）、ソリトマブ（ＥｐＣＡＭ）、ソネプシズマブ（スフィンゴシン−１−ホスフェート）、タバルマブ（ＢＡＦＦ）、タカツズマブテトラキセタン（アルファ−フェトプロテイン）、タプリツモマブパプトクス（ＣＤ１９）、テナツモバブ（テネイシンＣ）、テプロツムマブ（ＣＤ２２１）、ＴＧＮ１４１２（ＣＤ２８）、チシリムマブ（ＣＴＬＡ−４）、チガツズマブ（ＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＴＮＸ−６５０（ＩＬ−１３）、トベツマブ（ＣＤ１４０ａ）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＴＲＢＳ０７（ＧＤ２）、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ−４）、ツコツズマブセルモロイキン（ＥｐＣＡＭ）、ウブリツキシマブ（ＭＳ４Ａ１）、ウレルマブ（４−１ＢＢ）、バンデタニブ（ＶＥＧＦ）、バンチクツマブ（フリズルド受容体）、ボロシキシマブ（インテグリンα５β１）、ボルセツズマブマホドチン（ＣＤ７０）、ボツムマブ（腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、ザノリムマブ（ＣＤ４）およびザツキシマブ（ＨＥＲ１）を含む。
【０１９２】
ある種の実施形態において、ＡＤＣの抗体は、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ１またはＥｐＣＡＭに結合する。
【０１９３】
５．４．抗体を作製する方法
ＡＤＣの抗体は、宿主細胞における免疫グロブリン軽鎖および重鎖遺伝子の組換え発現によって調製され得る。例えば、抗体を組換えにより発現するために、宿主細胞は、抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖が宿主細胞において発現され、宿主細胞が培養される培地に任意選択的に分泌されるよう、上記の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡ断片を有する１つ以上の組換え発現ベクターをトランスフェクトされ、上記の培地から抗体が回収され得る。標準的な組換えＤＮＡ法が使用され、抗体の重鎖および軽鎖の遺伝子を得て、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに取り込ませ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（編）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｆ．Ｍ．ら（編）、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、１９８９年）および米国特許第４，８１６，３９７号に記載されているもののような宿主細胞にベクターを導入する。
【０１９４】
一実施形態において、Ｆｃ変異抗体は、この野生型の等価体と類似しているが、このＦｃドメインが変化している。このようなＦｃ変異抗体をコードする核酸を生成するために、Ｆｃドメインまたは野生型の抗体のＦｃドメイン（「野生型Ｆｃドメイン」と称される。）の一部をコードするＤＮＡ断片が合成され、決まった手順の突然変異誘導技法を使用し、突然変異誘導のためのテンプレートとして使用して、本明細書に記載されている抗体が生成され得る。代替として、抗体をコードするＤＮＡ断片が直接、合成されることができる。
【０１９５】
一旦、野生型ＦｃドメインをコードするＤＮＡ断片が得られると、これらのＤＮＡ断片は、標準的な組換えＤＮＡ技法によってさらに操作され、例えば、定常領域遺伝子が完全長抗体鎖遺伝子に変換され得る。これらの操作において、ＣＨをコードするＤＮＡ断片は、抗体可変領域またはフレキシブルリンカーのような、別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に効果的に連結される。用語「効果的に連結された」とは、本文脈において使用される場合、２つのＤＮＡ断片が結合され、２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列が、依然として、インフレームの状態にあることを意味するよう意図されている。
【０１９６】
Ｆｃ変異抗体を発現するために、遺伝子が転写制御配列および翻訳制御配列に効果的に連結されるよう、上記の通り得られた部分長または完全長軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡが、発現ベクターに挿入される。この文脈において、用語「効果的に連結された」は、ベクター内の転写制御配列および翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するという所期の機能を果たすよう、抗体遺伝子がベクターにライゲーションされることを意味することが意図されている。発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合するよう選択される。変異抗体の軽鎖遺伝子およびこの抗体の重鎖遺伝子は、個別のベクターの挿入されることができ、またはより典型的に、両方の遺伝子が、同一発現ベクターに挿入される。
【０１９７】
抗体遺伝子は、標準法（例えば、抗体遺伝子断片およびベクター上の相補的制限部位のライゲーション、または制限部位が存在しない場合、平滑末端ライゲーション）によって発現ベクターに挿入される。変異Ｆｃドメイン配列の挿入前に、発現ベクターは、抗体可変領域配列を既に有することができる。さらにまたは代替として、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。この抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるよう、ベクターにクローニングされ得る。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは非相同シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質に由来するシグナルペプチド）とすることができる。
【０１９８】
組換え発現ベクターは、抗体鎖遺伝子に加えて、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を制御する、調節配列を有する。用語「調節配列」は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御する、プロモーター、エンヘンサー、および他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図されている。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９０年）に記載されている。調節配列の選択を含めた、発現ベクターの設計は、形質変換されることになる宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルなどのような因子に依存し得ることが当業者により理解されている。哺乳動物の宿主細胞の発現に好適な調節配列は、サイトメガウイルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶプロモーター／エンヘンサーのような）、サルウイルス４０（ＳＶ４０）（ＳＶ４０プロモーター／エンヘンサーのような）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））およびポリオーマに由来するプロモーターおよび／またはエンヘンサーのような、哺乳動物細胞におけるタンパク質発現の高いレベルに向かわせるウイルス要素を含む。ウイルス調節要素およびこの配列のさらなる説明に関して、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号を参照されたい。
【０１９９】
組換え発現ベクターは抗体鎖遺伝子および調節配列に加えて、宿主細胞におけるベクターの複製（例えば、複製の源）および選択可能なマーカー遺伝子を調節する配列のような追加の配列を有することができる。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入される宿主細胞の選択を促進する（例えば、全部がＡｘｅｌらによる、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号および同第５，１７９，０１７号）。例えば、通常、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞上に、Ｇ４１８、ピューロマイシン、ブラストサイジン、ハイグロマイシンまたはメトトレキセートのような薬物に抵抗性を付与する。好適な選択可能なマーカー遺伝子は、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅によるＤＨＦＲ宿主細胞において使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）を含む。軽鎖および重鎖の発現に関すると、重鎖および軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的技法によって宿主細胞にトランスフェクトされる。用語「トランスフェクト」の様々な形態は、原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入のために一般に使用される幅広い技法、例えば、電気穿孔法、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿法、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図されている。
【０２００】
原核生物または真核生物の宿主細胞のどちらかにおいて、抗体を発現することが可能である。ある種の実施形態において、適切にフォールドされた、免疫学的に活性な抗体の最適分泌のために、抗体の発現は、真核細胞、例えば哺乳動物の宿主細胞において行われる。組換え抗体を発現するための例示的な哺乳動物の宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、ＫａｕｆｍａｎおよびＳｈａｒｐ、１９８２年、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９巻：６０１−６２１頁に記載されているＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、ＵｒｌａｕｂおよびＣｈａｓｉｎ、１９８０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７巻：４２１６−４２２０頁において記載されているＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含む。）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、２９３細胞およびＳＰ２／０細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物の宿主細胞に導入される場合、この抗体は、宿主細胞における抗体の発現、または宿主細胞が増殖する培養培地への抗体の分泌が可能になるのに十分な時間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製方法を使用して、培養培地から回収されることができる。宿主細胞はまた、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子のような、無傷の抗体の一部を産生するために使用され得る。
【０２０１】
一部の実施形態において、ＡＤＣの抗体は、二機能性抗体とすることができる。１つの重鎖および１つの軽鎖が１つの抗原に特異的であり、他の重鎖および軽鎖が第２の抗原に特異的である、このような抗体は、標準的な化学クロスリンク法によって、ある抗体を第２の抗体にクロスリンクすることにより生成され得る。二機能性抗体はまた、二機能性抗体をコードするよう遺伝子操作されている核酸を発現することにより作製することもできる。
【０２０２】
ある種の実施形態において、二重特異的抗体、すなわち、同じ結合部位を使用して１つの抗原および第２の無関係な抗原に結合する抗体は、軽鎖および／または重鎖ＣＤＲにおける、アミノ酸残基を変異させることにより生成され得る。例示的な第２の抗原は、炎症性サイトカイン（例えば、リンホトキシン、インターフェロン−γまたはインターロイキン−１のような）を含む。二重特異的抗体は、例えば、抗原結合部位の周辺におけるアミノ酸残基を変異させることによって生成され得る（例えば、Ｂｏｓｔｒｏｍら、２００９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２３巻：１６１０−１６１４頁を参照されたい。）。二重機能性抗体は、二重特異的抗体をコードするよう遺伝子操作されている核酸を発現することにより作製され得る。
【０２０３】
抗体はまた、化学合成（例えば、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、１９８４年、Ｔｈｅ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ．に記載されている方法によって）によって生成され得る。抗体はまた、細胞不含プラットフォームを使用して生成され得る（例えば、Ｃｈｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉａ  ２巻、２００１年（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を参照されたい。）。
【０２０４】
Ｆｃ融合タンパク質の組換え発現の方法は、Ｆｌａｎａｇａｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、３７８巻：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓにおいて記載されている。
【０２０５】
抗体が組換え発現によって、一端、生成されると、この抗体は、免疫グロブリン分子を精製するための当分野において公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、特にプロテインＡまたはプロテインＧの選択後の抗原に対するアフィニティー、およびサイジングカラムクロマトグラフィー（ｓｉｚｉｎｇ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ））、遠心分離、溶解度差により、またはタンパク質を精製するための任意の他の標準的技法によって、精製され得る。
【０２０６】
抗体は、一端、単離されると、所望の場合、例えば、高速液体クロマトグラフィー（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｏｒｋ  ａｎｄ  Ｂｕｒｄｏｎ（編）、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８０年）を参照されたい。）により、またはＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）７５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）上のゲルろ過クロマトグラフィーによりさらに精製され得る。
【０２０７】
５．５．抗体−薬物コンジュゲートシントン
抗体−薬物コンジュゲートシントンは、ＡＤＣを形成するために使用される合成中間体である。シントンは、一般に、構造式（ＩＩＩ）による化合物：
（ＩＩＩ）  Ｄ−Ｌ−Ｒｘ
またはこの塩であり、式中、Ｄは、既に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤であり、Ｌは、既に記載されているリンカーであり、Ｒｘは、シントンを抗体に共有結合により連結させるのに好適な官能基を含む部分である。具体的な実施形態において、シントンは、構造式（ＩＩＩａ）による化合物またはこの塩であり、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１０ｃ、Ｒ１１ａ、Ｒ１１ｂ、Ｚ１、Ｚ２およびｎは、構造式（ＩＩａ）に関して既に定義されている通りであり、ＬおよびＲｘは、構造式（ＩＩＩ）に関して定義されている通りである：
【０２０８】
【化３４】
2020152726.tif 000051
【０２０９】
ＡＤＣを合成するために、構造式（ＩＩＩ）による中間シントンまたはこの塩は、官能基Ｒｘが、抗体上の「相補的な」官能基と反応して、共有結合性連結基を形成する条件下において、対象となる抗体と接触させる。
【０２１０】
【化３５】
2020152726.tif 000052
【０２１１】
基ＲｘおよびＦｘが同一となるかは、シントンを抗体に連結するために使用される化学に依存する。一般に、使用される化学は、抗体の完全性、例えば、この抗体が標的に結合する能力を改変すべきではない。好ましくは、コンジュゲートされた抗体の結合特性は、非コンジュゲート抗体の結合特性に非常に似ている。分子を抗体のような生物分子にコンジュゲートするための様々な化学および技法が、当分野において公知であり、特に抗体へのコンジュゲートは周知である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら（編）、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、１９８５年におけるＡｍｏｎらの「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら（編）、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、第２版、１９８７年におけるＨｅｌｌｓｔｒｏｍらの「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら（編）、１９８５年におけるＴｈｏｒｐｅの「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年における「Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｒｅｓｕｌｔｓ，  ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；およびＴｈｏｒｐｅら、１９８２年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２巻：１１９−５８頁；およびＷＯ８９／１２６２４を参照されたい。これらの化学のうちのいずれも、シントンを抗体に連結するために使用され得る。
【０２１２】
一実施形態において、Ｒｘは、シントンを抗体のアミノ基に連結することが可能な官能基を含む。別の実施形態において、Ｒｘは、ＮＨＳ−エステルまたはイソチオシアネートを含む。別の実施形態において、Ｒｘは、シントンを抗体のスルフィドリル基に連結することが可能な官能基を含む。別の実施形態において、Ｒｘは、ハロアセチルまたはマレイミドを含む。
【０２１３】
通常、シントンは、例えば、利用可能なリシン残基の一級アミノ基、または利用可能なシステイン残基のスルフィドリル基を含めた、抗体のアミノ酸残基の側鎖に連結される。遊離スルフィドリル基は、ジスルフィド結合の鎖間を還元することにより得られる。
【０２１４】
一実施形態において、ＬＫは、抗体Ａｂのアミノ基と形成される連結基である。別の実施形態において、ＬＫは、アミドまたはチオウレアである。別の実施形態において、ＬＫは、抗体Ａｂのスルフィドリル基と形成される連結基である。別の実施形態において、ＬＫは、チオエーテルである。
【０２１５】
一実施形態において、Ｄは、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７およびＷ１．０８およびこれらの塩からなる群から選択される。Ｌは、リンカーＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３、およびこれらの塩からなる群から選択される。ＬＫは、アミド、チオウレアおよびチオエーテルからなる群から選択され、ｍは１から８の範囲の整数である。
【０２１６】
シントンを利用可能なリシン残基に連結するのに有用ないくつかの官能基Ｒｘおよび化学は、公知であり、例として非限定的に、ＮＨＳ−エステルおよびイソチオシアネートを含む。
【０２１７】
シントンをシステイン残基の利用可能な遊離スルフィドリルに連結するのに有用ないくつかの官能基Ｒｘおよび化学は公知であり、例として非限定的に、ハロアセチルおよびマレイミドを含む。
【０２１８】
一実施形態において、Ｄは、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７およびＷ１．０８、ならびにこれらの塩からなる群から選択される。Ｌは、リンカーＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３、およびこれらの塩からなる群から選択される。Ｒｘは、ＮＨＳ−エステル、イソチオシアネート、ハロアセチルおよびマレイミドからなる群から選択される官能基を含む。
【０２１９】
しかし、コンジュゲート化化学は、利用可能な側鎖基に制限されない。アミンのような側鎖は、適切な低分子をアミンに連結することにより、ヒドロキシルのような他の有用な基に変換され得る。この戦略は、多官能性低分子を抗体の利用可能なアミノ酸残基の側鎖にコンジュゲートすることにより、抗体上の利用可能な連結部位の数を増加するために使用され得る。
【０２２０】
抗体はまた、コンジュゲートするためのアミノ酸残基を含むよう、遺伝子工学操作されてもよい。ＡＤＣの文脈における、薬物をコンジュゲートするために有用な非遺伝子学的にコードされたアミノ酸残基を含ませるための抗体を遺伝子工学操作する手法は、Ａｘｕｐら、２００３年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １０９巻：１６１０１−１６１０６頁およびＴｉａｎら、２０１４年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １１１巻：１７７６−１７７１頁に記載されている。
【０２２１】
本明細書に記載されているＡＤＣを作製するのに有用な例示的なシントンは、以下に限定されないが、以下のシントンを含む：
【０２２２】
【表１】
2020152726.tif 000053
2020152726.tif 000054
2020152726.tif 000055
2020152726.tif 000056
2020152726.tif 000057
2020152726.tif 000058
2020152726.tif 000059
2020152726.tif 000060
2020152726.tif 000061
【０２２３】
５．６．抗体薬物コンジュゲート
本明細書に記載されているＡＤＣのＢｃｌ−ｘＬ阻害活性は、適切な標的細胞および／またはインビボアッセイを用いる細胞アッセイにおいて確認され得る。ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭまたはＮＣＡＭ１を標的とするＡＤＣの活性を確認するために使用され得る特異的アッセイは、実施例７および８に提示されている。一般に、ＡＤＣは、このような細胞アッセイにおいて、約５０００ｎＭ未満のＥＣ５０を示すが、ＡＤＣは、例えば約５００、３００または１００ｎＭ未満にもなる、かなり一層小さなＥＣ５０を示すことがある。特定の標的抗原を発現する細胞を用いる同様の細胞アッセイを使用して、他の抗原を標的とするＡＤＣのＢｃｌ−ｘＬ阻害活性を確認することができる。
【０２２４】
５．７．合成方法
本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤およびシントンは、標準的な有機化学の公知技法を使用して合成され得る。このまま使用され得る、または本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤およびシントンの全範囲を合成するために修飾され得るＢｃｌ−ｘＬ阻害剤およびシントンを合成するための一般的なスキームが、以下に提示されている。指針のために有用となり得る例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤およびシントンを合成するための具体的な方法は、実施例の項目に提示されている。
【０２２５】
ＡＤＣは、同様に、Ｈａｍｂｌｅｔｔら、２００４年、「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０巻：７０６３−７０７０頁；Ｄｏｒｏｎｉｎａら、２００３年、「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ」Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１巻（７号）：７７８−７８４頁；およびＦｒａｎｃｉｓｃｏら、２００３年、「ｃＡＣｌＯ−ｖｃＭＭＡＥ、ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０−ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌａｕｒｉｓｔａｔｉｎ  Ｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ」Ｂｌｏｏｄ  １０２巻：１４５８−１４６５頁において記載されているものと類似の方法のような標準法によって調製され得る。例えば、抗体あたり４つの薬物を有するＡＤＣは、ＤＴＴまたはＴＣＥＰのような還元試薬を過剰量用いて、３７℃で３０分間、抗体を部分還元し、次に、ＤＰＢＳ中の１ｍＭ  ＤＴＰＡを用いるＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）Ｇ−２５樹脂により溶出させることによる緩衝液交換によって調製され得る。この溶離液をさらなるＤＰＢＳにより希釈し、抗体のチオール濃度が５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）［Ｅｌｌｍａｎ試薬］を使用して測定され得る。過剰量のリンカー−薬物シントン、例えば５倍量を４℃において１時間、加え、実質的に過剰量のシステイン、例えば２０倍量を添加することによって、コンジュゲート反応物をクエンチすることができる。得られたＡＤＣ混合物は、ＰＢＳにおいて平衡にしたＳＥＰＨＡＤＥＸ  Ｇ−２５で精製し、未反応シントンを除去し、所望の場合、脱塩し、サイズ排除クロマトグラフィーにより精製することができる。次に、得られたＡＤＣを、例えば０．２μｍのフィルターにより滅菌ろ過し、所望の場合、保管するために凍結乾燥してもよい。ある種の実施形態において、鎖間のシステインジスルフィド結合はすべて、リンカー−薬物コンジュゲートによって置きかえられる。
【０２２６】
本明細書に記載されているＡＤＣの全範囲を合成するために使用され得る例示的なＡＤＣを合成するための具体的な方法は、実施例の項目において提示されている。
【０２２７】
５．７．１．Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を合成するための一般的方法
５．７．１．１．化合物（９）の合成
【０２２８】
【化３６】
2020152726.tif 000062
【０２２９】
ピラゾール中間体である式（９）の合成が、スキーム１に記載されている。３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンカルボン酸（１）を、ＢＨ３・ＴＨＦにより処理すると、３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンメタノール（２）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフランのような溶媒中、周囲温度において行われる。１−（（３−ブロモ−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール（３）は、シアノメチレントリブチルホスホランの存在下、３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンメタノール（２）を１Ｈ−ピラゾールにより処理することによって調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、トルエンのような溶媒中、高温において行われる。１−（（３−ブロモ−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール（３）を、以下に限定されないが、トリエチルアミンのような塩基の存在下、エタン−１，２−ジオールにより処理すると、２−｛［３，５−ジメチル−７−（１Ｈ−ピラゾール−１−イルメチル）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］オキシ｝エタノール（４）を得ることができる。この反応は、通常、高温において行われ、この反応は、マイクロ波条件下において行われてもよい。２−｛［３，５−ジメチル−７−（１Ｈ−ピラゾール−１−イルメチル）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］オキシ｝エタノール（４）を、以下に限定されないが、ｎ−ブチルリチウムのような強塩基により処理し、次いでヨードメタンを加えると、２−（｛３，５−ジメチル−７−［（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エタノール（５）を得ることができる。添加および反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフランのような溶媒中、低温で行った後、後処理のために周囲温度まで温める。２−（｛３，５−ジメチル−７−［（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エタノール（５）をＮ−ヨードスクシンイミドにより処理することにより、１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール（６）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。式（７）の化合物は、以下に限定されないが、トリエチルアミンのような塩基の存在下、１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール（６）を塩化メタンスルホニルと反応させて、次にアミンであるＨ２ＮＲ４を添加することにより調製することができる。塩化メタンスルホニルによる反応は、通常、低温において行われた後、アミンとの反応のために昇温し、この反応は、通常、以下に限定されないがテトラヒドロフランのような溶媒において行われる。式（７）の化合物を、４−ジメチルアミノピリジンの存在下、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートと反応させると式（８）の化合物を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフランのような溶媒中、周囲温度において行われる。式（８）の化合物をホウ素化して式（９）の化合物を得るのは、本明細書に記載されているおよび文献において容易に入手可能な条件下において行うことができる。
【０２３０】
５．７．１．２．化合物（１４）の合成
【０２３１】
【化３７】
2020152726.tif 000063
【０２３２】
中間体である式（１４）の合成が、スキーム２に記載されている。式（１２）の化合物は、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンまたはトリエチルアミンのような塩基の存在下、式（１０）の化合物をｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−６−フルオロピコリン酸（１１）と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、不活性雰囲気下、以下に限定されないが、ジメチルスルホキシドのような溶媒中、高温において行われる。式（１２）の化合物を、本明細書または文献に記載されているホウ素化条件下、４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（１３）と反応させると、式（１４）の化合物を得ることができる。
【０２３３】
５．７．１．３．化合物（２４）の合成
【０２３４】
【化３８】
2020152726.tif 000064
【０２３５】
スキーム３は、アダマンタンおよびｔ−ブチルエステルとして保護されているピコリン酸エステルに繋がれた−Ｎｕ（求核剤）を含有する中間体を作製する方法を記載している。メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１４）を、本明細書中または文献中に記載されているＳｕｚｕｋｉカップリング条件下、１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール（６）と反応させると、メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−ヒドロキシエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１７）を得ることができる。メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−ヒドロキシエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１７）を、以下に限定されないがトリエチルアミンのような塩基、次いで塩化メタンスルホニルにより処理すると、メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３，５−ジメチル−７−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１８）を得ることができる。この添加は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中、低温で行った後、周囲温度まで温められる。メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３，５−ジメチル−７−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート（１８）を、式（１９）の求核剤（Ｎｕ）と反応させると、式（２０）の化合物を得ることができる。求核剤の例は、以下に限定されないが、アジ化ナトリウム、メチルアミン、アンモニアおよびジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミノジカーボネートを含む。式（２０）の化合物を水酸化リチウムと反応させることによって、式（２１）の化合物を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフラン、メタノール、水またはこれらの混合物のような溶媒中、周囲温度において行われる。式（２１）の化合物を、本明細書に記載されている、または文献において容易に入手可能なアミド化条件下、式（２２）の化合物（式中、Ａｒは本明細書に記載されている通りである。）と反応させると、式（２３）の化合物を得ることができる。式（２３）の化合物を、以下に限定されないが、ジクロロメタンまたはジオキサンのような溶媒において、トリフルオロ酢酸またはＨＣｌのような酸により処理することによって、式（２４）の化合物を得ることができる。
【０２３６】
５．７．１．４．化合物（３４）の合成
【０２３７】
【化３９】
2020152726.tif 000065
【０２３８】
化合物（３４）の合成が、スキーム４に記載されている。式（２５）の化合物を、本明細書に記載されている、または文献において容易に入手可能なアミド化条件下、式（２６）の化合物（式中、Ａｒは本明細書に記載されている通りである。）と反応させると、式（２７）の化合物を得ることができる。式（２７）の化合物を、以下に限定されないが、炭酸セシウムのような塩基の存在下、ｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−６−フルオロピコリン酸（１１）と反応させると、式（２８）の化合物を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドのような溶媒中、高温において行われる。式（３０）の化合物を、本明細書中または文献中に記載されているＳｕｚｕｋｉカップリング条件下、式（２８）の化合物を式（２９）のボロン酸エステル（または、等価なボロン酸）と反応させることにより調製することができる。式（３１）の化合物は、式（３０）の化合物をトリフルオロ酢酸により処理することによって調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中、周囲温度において行われる。式（３１）の化合物を、２−メトキシアセトアルデヒド（３２）、次いで、以下に限定されないが、水素化ホウ素ナトリウムのような還元剤と反応させることにより、式（３３）の化合物を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタン、メタノールまたはこれらの混合物のような溶媒中、周囲温度において行われる。式（３３）の化合物を、以下に限定されないが、ジクロロメタンまたはジオキサンのような溶媒において、トリフルオロ酢酸またはＨＣｌのような酸により処理することによって、式（３４）の化合物を得ることができる。
【０２３９】
５．７．２．シントンを合成するための一般的方法
以下のスキームにおいて、Ａｒ２は、
式（ＩＩａ）の化合物における、
【０２４０】
【化４０】
2020152726.tif 000066
を表し、可変基Ａｒ１は、式（ｉｉａ）の化合物において
【０２４１】
【化４１】
2020152726.tif 000067
を表す。
【０２４２】
５．７．２．１．化合物（８９）の合成
【０２４３】
【化４２】
2020152726.tif 000068
【０２４４】
スキーム５に示されている通り、式（７７）の化合物（式中、ＰＧは、塩基に不安定な適切な保護基であり、ＡＡ（２）は、Ｃｉｔ、ＡｌａまたはＬｙｓである。）を、本明細書に記載されているまたは文献において容易に入手することができるアミド化条件下、４−（アミノフェニル）メタノール（７８）と反応させると、化合物（７９）を得ることができる。化合物（８０）は、化合物（７９）を、以下に限定されないが、ジエチルアミンのような塩基と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（８１）（式中、ＰＧは、塩基または酸に不安定な適切な保護基であり、ＡＡ（１）は、ＶａｌまたはＰｈｅである。）を、本明細書に記載されている、または文献において容易に入手することができるアミド化条件下、化合物（８０）と反応させると、化合物（８２）が得られる。化合物（８３）は、化合物（８２）を適宜、ジエチルアミンまたはトリフルオロ酢酸により処理することによって調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（８４）（式中、Ｓｐはスペーサーである。）を、化合物（８３）と反応させることによって、化合物（８５）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（８５）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネート（８６）と反応させると、化合物（８７）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（８７）は、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物（８８）と反応させると、化合物（８９）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。
【０２４５】
５．７．２．２．化合物（９４）および化合物（９６）の合成
【０２４６】
【化４３】
2020152726.tif 000069
【０２４７】
スキーム６は、ジペプチドシントンへの代替ｍＡｂ−リンカーの結合の導入を記載している。化合物（８８）を、以下に限定されないがＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物（９０）と反応させると、化合物（９１）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（９２）は、化合物（９１）をジエチルアミンと反応させることによって調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（９３）（式中、Ｘ１は、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。）を、本明細書に記載されている、または文献において容易に入手可能なアミド化条件下、化合物（９２）と反応させると、化合物（９４）を得ることができる。化合物（９２）を、本明細書に記載されている、または文献において容易に入手可能なアミド化条件下、式（９５）の化合物と反応させると、化合物（９６）を得ることができる。
【０２４８】
５．７．２．３．化合物（１０６）の合成
【０２４９】
【化４４】
2020152726.tif 000070
【０２５０】
スキーム７は、ビニルグルクロニドリンカー中間体およびシントンの合成を記載している。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（９７）を、酸化銀、次いで、４−ブロモ−２−ニトロフェノール（９８）により処理すると、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（９９）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、アセトニトリルのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（９９）を、以下に限定されないが、炭酸ナトリウムのような塩基および以下に限定されないが、トリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）のような触媒の存在下、（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチル（（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アリル）オキシ）シラン（１００）と反応させると、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（Ｅ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０１）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフランのような溶媒中、高温において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０２）は、以下に限定されないが、塩酸のような酸の存在下、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（Ｅ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０１）を亜鉛と反応させることによって調製することができる。この添加は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフラン、水、またはこれらの混合物のような溶媒中、低温で行った後、周囲温度まで温められる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０２）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート（１０３）と反応させると、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０４）を得ることができる。この添加は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中、低温で行った後、周囲温度まで温められる。化合物（８８）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０４）を反応させて、次いで、後処理し、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、式（１０５）の化合物と反応させると、化合物（１０６）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。
【０２５１】
５．７．２．４．化合物（１１５）の合成
【０２５２】
【化４５】
2020152726.tif 000071
【０２５３】
スキーム８は、代表的な２−エーテルグルクロニドリンカー中間体およびシントンの合成を記載している。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（９７）を、炭酸銀の存在下、２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１０７）と反応させると、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０８）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、アセトニトリルのような溶媒中、高温において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０８）を、水素化ホウ素ナトリウムと処理すると、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０９）を得ることができる。この添加は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフラン、メタノールまたはこれらの混合物のような溶媒中、低温で行った後、周囲温度まで温められる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１０）は、イミダゾールの存在下、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１０９）を塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルと反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中、低温において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１１）は、トリフェニルホスフィン、および以下に限定されないが、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジアゼン−１，２−ジカルボキシレートのようなアゾジカルボキシレートの存在下、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１０）を（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバメートと反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、トルエンのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１１）を酢酸と処理することにより、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１２）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、水、テトラヒドロフランまたはこれらの混合物のような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１３）は、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１２）をビス（４−ニトロフェニル）カーボネートと反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１１３）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物（８８）と処理し、次に、水酸化リチウムにより処理すると、化合物（１１４）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、メタノールまたはこれらの混合物のような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（１１５）は、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物（１１４）を化合物（８４）と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。
【０２５４】
５．７．２．５．化合物（１１９）の合成
【０２５５】
【化４６】
2020152726.tif 000072
【０２５６】
スキーム９は、糖リンカーへの第２の可溶化基の導入を記載している。化合物（１１６）を、本明細書に記載されている、または文献において容易に入手可能なアミド化条件下、（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸（１１７）と反応させて、次いで以下に限定されないが、ジエチルアミンのような塩基により処理すると、化合物（１１８）を得ることができる。化合物（１１８）を、本明細書に記載されている、または文献において容易に入手可能なアミド化条件下、化合物（８４）（式中、Ｓｐはスペーサーである。）と反応させると、化合物（１１９）を得ることができる。
【０２５７】
５．７．２．６．化合物（１２９）の合成
【０２５８】
【化４７】
2020152726.tif 000073
【０２５９】
スキーム１０は、４−エーテルグルクロニドリンカー中間体およびシントンの合成を記載している。４−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２２）は、以下に限定されないが、炭酸カリウムのような塩基の存在下、２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１２０）を１−ブロモ−２−（２−ブロモエトキシ）エタン（１２１）と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、アセトニトリルのような溶媒中、高温において行われる。４−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２２）をアジ化ナトリウムにより処理することにより、４−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２３）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１２５）は、酸化銀の存在下、４−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２３）を（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１２４）と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、アセトニトリルのような溶媒中、周囲温度において行われる。Ｐｄ／Ｃの存在下における、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１２５）の水素化により、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１２６）が得られる。この反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフランのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１２７）は、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１２６）を（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボノクロリデートにより処理することにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中、低温において行われる。化合物（８８）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１２７）と反応させて、次に、水酸化リチウムにより処理すると、化合物（１２８）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、低温において行われる。化合物（１２９）は、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物（１２８）を化合物（８４）と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。
【０２６０】
５．７．２．７．化合物（１３９）の合成
【０２６１】
【化４８】
2020152726.tif 000074
【０２６２】
スキーム１１は、カルバメートグルクロニド中間体およびシントンの合成を記載している。２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）フェノール（１３０）を、水素化ナトリウムにより処理され、次に、２−（２−アジドエトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート（１３１）と反応させて、（４−アミノ−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）フェニル）メタノール（１３２）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、高温において行われる。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）アニリン（１３３）は、イミダゾールの存在下、（４−アミノ−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）フェニル）メタノール（１３２）をｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシランと反応させることによって調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフランのような溶媒中、周囲温度において行われる。２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）アニリン（１３３）を、以下に限定されないがトリエチルアミンのような塩基の存在下、ホスゲンにより処理し、次いで、以下に限定されないがトリエチルアミンのような塩基の存在下において、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３４）と反応させると、２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３５）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、トルエンのような溶媒中で行われ、添加は、通常、低温で行った後、ホスゲンを添加した後に周囲温度まで温め、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３４）の添加後に高温に加熱する。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３６）は、２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３５）をｐ−トルエンスルホン酸一水和物と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、メタノールのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３６）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネートと反応させることにより、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３７）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１３７）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物と反応させて、次に、水性水酸化リチウムにより処理すると、化合物（１３８）を得ることができる。第１工程は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度で行われ、第２の工程は、通常、以下に限定されないが、メタノールのような溶媒中、低温において行われる。化合物（１３８）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、トリス（２−カルボキシエチル））ホスフィン塩酸塩により処理し、次いで化合物（８４）と反応させると、化合物（１３９）を得ることができる。トリス（２−カルボキシエチル））ホスフィン塩酸塩との反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフラン、水またはこれらの混合物のような溶媒中、周囲温度において行われ、Ｎ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエートとの反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。
【０２６３】
５．７．２．８．化合物（１４９）の合成
【０２６４】
【化４９】
2020152726.tif 000075
【０２６５】
スキーム２０は、ガラクトシドリンカー中間体およびシントンの合成を記載している。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトライルテトラアセテート（１４０）を、酢酸中のＨＢｒにより処理することにより、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−ブロモテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４１）を得ることができる。この反応は、通常、窒素雰囲気下、周囲温度において行われる。（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４３）は、４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（１４２）の存在下、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−ブロモテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４１）を酸化銀（Ｉ）により処理することにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、アセトニトリルのような溶媒中、周囲温度において行われる。（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４３）を、水素化ホウ素ナトリウムと処理することにより、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４４）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、テトラヒドロフラン、メタノールまたはこれらの混合物のような溶媒中、低温において行われる。（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４５）は、塩酸の存在下、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４４）を亜鉛により処理することによって調製することができる。この反応は、通常、窒素雰囲気下、以下に限定されないが、テトラヒドロフランのような溶媒中、低温において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４６）は、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４５）を（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート（１０３）と反応させることにより調製することができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、ジクロロメタンのような溶媒中、低温において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４６）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、ビス（４−ニトロフェニル）カーボネートと反応させることにより、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４７）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、低温において行われる。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリルトリアセテート（１４７）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物（８８）と反応させて、次に、水酸化リチウムにより処理すると、化合物（１４８）を得ることができる。第１工程は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、低温で行われ、第２の工程は、通常、以下に限定されないが、メタノールのような溶媒中、周囲温度において行われる。化合物（１４８）を、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのような塩基の存在下、化合物（８４）（式中、Ｓｐはスペーサーである。）により処理すると、化合物（１４９）を得ることができる。この反応は、通常、以下に限定されないが、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中、周囲温度において行われる。
【０２６６】
５．８．組成物
本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣは、阻害剤またはＡＤＣ、および１つ以上の担体、賦形剤および／または希釈剤を含む組成物の形態とすることができる。本組成物は、獣医学的使用またはヒトにおける医薬品使用のような、特定の使用のために製剤化され得る。使用される、組成物の形態（例えば、乾燥散剤、液状製剤など）、ならびに賦形剤、希釈剤および／または担体は、阻害剤および／またはＡＤＣの所期の使用、ならびに療的使用では投与形式に依存する。
【０２６７】
治療的使用の場合、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣ組成物は、医薬として許容される担体を含む、滅菌医薬組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、任意の好適な形態（患者にこの組成物を投与する所望の方法に応じて）とすることができる。本医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻内、静脈内、経筋肉、鞘内、局所的または局部のような、様々な経路により患者に投与され得る。任意の所定の場合における投与に最も好適な経路は、具体的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤またはＡＤＣ、対象、ならびに疾患の性質および重症度、ならびに対象の身体的状態に依存する。通常、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤は、経口または非経口により投与され、ＡＤＣ医薬組成物は、静脈内または皮下に投与される。
【０２６８】
医薬組成物は、用量あたり、所定量の本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤またはＡＤＣを含有する単位剤形において都合良く提供され得る。当分野において周知の通り、単位用量中に含まれる阻害剤またはＡＤＣの量は、処置される疾患、および他の因子に依存する。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤の場合、このような単位投与量は、単回投与に好適な、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤の量を含有する、錠剤、カプセル剤、ロセンジ剤などの形態にあってもよい。ＡＤＣの場合、このような単位投与量は、単回投与に好適な量のＡＤＣを含有する凍結乾燥散剤の形態、または液剤の形態であってもよい。乾燥散剤の単位剤形は、投与に有用な、シリンジ、好適な量の希釈剤および／または他の構成成分を含むキット中に包装され得る。液状形態の単位投与量は、単回投与に好適な量のＡＤＣを予め充填したシリンジの形態で都合良く供給され得る。
【０２６９】
本医薬組成物はまた、多回投与に好適な量のＡＤＣを含有するバルク形態として供給されてもよい。
【０２７０】
ＡＤＣの医薬組成物は、凍結乾燥製剤または水溶剤として保管するために、所望の純度を有するＡＤＣと、任意選択的な医薬として許容される、通常、当分野において使用される、担体、賦形剤または安定剤（これらはすべて、本明細書において、「担体」と呼ばれる。）、すなわち、緩衝化剤、安定化剤、保存剤、等張剤、非イオン性洗剤、抗酸化剤、および他の種々の添加剤を混合物することにより調製され得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版（Ｏｓｏｌ編、１９８０年）を参照されたい。このような添加剤は、使用される投与量および濃度において、レシピエントに無毒であるべきである。
【０２７１】
緩衝化剤は、生理的条件に近づく範囲のｐＨを維持する一助となる。これらの緩衝化剤は、約２ｍＭから約５０ｍＭの範囲の濃度において存在することができる。本開示により使用するのに好適な緩衝化剤は、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム−クエン酸二ナトリウムの混合物、クエン酸−クエン酸三ナトリウムの混合物、クエン酸−クエン酸一ナトリウムの混合物など）、コハク酸塩緩衝液（例えば、コハク酸−コハク酸一ナトリウムの混合物、コハク酸−水酸化ナトリウムの混合物、コハク酸−コハク酸二ナトリウムの混合物など）、酒石酸塩緩衝液（例えば、酒石酸−酒石酸ナトリウムの混合物、酒石酸−酒石酸カリウムの混合物、酒石酸−水酸化ナトリウムの混合物など）、フマル酸塩緩衝液（例えば、フマル酸−フマル酸一ナトリウムの混合物、フマル酸−フマル酸二ナトリウムの混合物、フマル酸一ナトリウム−フマル酸二ナトリウムの混合物など）、グルコン酸塩緩衝液（例えば、グルコン酸−グルコン酸ナトリウムの混合物、グルコン酸−水酸化ナトリウムの混合物、グルコン酸−グルコン酸カリウムの混合物など）、シュウ酸塩緩衝液（例えば、シュウ酸−シュウ酸ナトリウムの混合物、シュウ酸−水酸化ナトリウムの混合物、シュウ酸−シュウ酸カリウムの混合物など）、乳酸塩緩衝液（例えば、乳酸−乳酸ナトリウムの混合物、乳酸−水酸化ナトリウムの混合物、乳酸−乳酸カリウムの混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸−酢酸ナトリウムの混合物、酢酸−水酸化ナトリウムの混合物など）のような有機酸および無機酸とこれらの塩の両方を含む。さらに、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液およびトリスのようなトリメチルアミン塩が使用され得る。
【０２７２】
保存剤は、微生物の増殖を遅延させるために加えられることができ、約０．２％−１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で加えられ得る。本開示による使用に好適な保存剤は、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、およびメチルまたはプロピルパラベンのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノールおよび３−ペンタノールを含む。「安定剤」として公知の等張剤は、時として、本開示の液状組成物の等張性を確実とするために添加されることができ、多価糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールのような三価またはそれ超の糖アルコールを含む。安定剤は、治療剤を溶解する、または変性もしくは容器の壁への付着を防止する一助となる、充填剤から添加剤までの機能に及ぶことができる、幅広い分類の賦形剤を指す。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上に列挙されたもの）；アルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなどのようなアミノ酸、ラクトース、トレハロース，スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール、ガラクチトールのような有機糖または糖アルコール、グリセロール（イノシトールのようなシクリトールを含む。）など；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；ウレア、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウムのような、硫黄含有還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０以下の残基のペプチド）；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性（ｈｙｄｒｏｐｈｙｌｉｃ）ポリマー、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースのようなモノサッカライド、ラクトース、マルトース、スクロースのようなジサッカライド；およびラフィノーゼのようなトリサッカライド；およびデキストランのようなポリサッカライドとすることができる。
【０２７３】
非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても知られている。）は、グリコタンパク質を溶解する一助とするため、およびグリコタンパク質を撹拌により誘発される凝集から保護するために加えられてもよく、これらにより、やはり、製剤が、タンパク質の変性を引き起こすことなく、応力を受けたせん断表面に曝露されることを可能にする。好適な非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート（２０、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、プルロニックポリオール、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）を含む。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌから約１．０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．０７ｍｇ／ｍｌから約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲において存在し得る。
【０２７４】
さらなる種々の賦形剤は、充填剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒を含む。
【０２７５】
５．９  使用方法
ＡＤＣに含まれるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤、およびＡＤＣにより送達されるシントンは、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害し、Ｂｃｌ−ｘＬを発現する細胞においてアポトーシスを誘導する。したがって、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣは、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害する、および／または細胞におけるアポトーシスを誘導する方法において使用され得る。
【０２７６】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤の場合、本方法は、一般に、その生存がＢｃｌ−ｘＬ発現に少なくとも一部依存する細胞に、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害するおよび／またはアポトーシスを誘導するのに十分な量のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を接触させるステップを含む。ＡＤＣの場合、本方法は、一般に、細胞であって、この生存がＢｃｌ−ｘＬ発現に少なくとも一部依存し、ＡＤＣの抗体に対する細胞表面の抗原を発現する、細胞に、ＡＤＣが抗原に結合する条件において、ＡＤＣを接触させるステップを含む。
【０２７７】
ある種の実施形態において、とりわけＡＤＣを含むＢｃｌ−ｘＬ阻害剤が低いまたは非常に低い細胞透過性を有するものにおいて、ＡＤＣの抗体は、ＡＤＣを細胞に内部移行させることが可能な標的に結合し、この場合、ＡＤＣは、このＢｃｌ−ｘＬ阻害性シントンを送達することができる。本方法は、Ｂｃｌ−ｘＬ活性を阻害する、および／もしくはアポトーシスを阻害する細胞アッセイにおいてインビトロで実施することができ、またはアポトーシスの阻害および／もしくはアポトーシスの誘導が望ましいと考えられる、疾患の処置に対する治療的手法として、インビボで実施することができる。
【０２７８】
調節不全のアポトーシスは、例えば、自己免疫性障害（例えば、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、移植片対宿主病、重症筋無力症またはシェーグレン症候群）、慢性炎症状態（例えば、乾癬、喘息またはクローン病）、過剰増殖性障害（例えば、乳がん、肺がん）、ウイルス感染（例えば、ヘルペス、パピローマまたはＨＩＶ）、ならびに骨関節炎およびアテローム性動脈硬化のような他の状態を含めた様々な疾患に関連している。本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤またはＡＤＣは、これらの疾患のいずれかを処置または改善するために使用され得る。このような処置は、一般に、疾患に罹患している対象に、治療的利益をもたらすのに十分な量の本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤またはＡＤＣを投与するステップを含む。ＡＤＣに関すると、投与されるＡＤＣの抗体としていかなるものを用いるかは、処置されている疾患に依存し、したがって抗体は、Ｂｃｌ−ｘＬ活性の阻害が有益と思われる、細胞タイプにおいて発現する細胞表面抗原に結合すべきである。実現される治療的利益はまた、処置されている具体的な疾患に依存する。ある種の場合、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤またはＡＤＣは、単剤療法として投与された場合に、疾患自体、または該疾患の症状を処置または改善することができる。他の例において、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤またはＡＤＣは、該阻害剤またはＡＤＣと一緒になって、処置されている疾患、または該疾患の症状を処置または改善する他の薬剤を含めた、総合的な処置レジメンの一部となり得る。本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣへの補助として、またはこれらと共に投与され得る、特定の疾患を処置または改善するのに有用な薬剤は、当業者に明らかである。
【０２７９】
絶対的な治癒は任意の治療レジメンにおいて常に望ましいが、治療的利益をもたらすのに、治癒の達成は必要ではない。治療的利益は、疾患の進行を停止または遅延させる、治癒することなく疾患を退行させる、および／または疾患の症状を改善するもしくはこの進行を遅延させることを含むことができる。クオリティーオブライフの統計的平均および／または改善と比べて、生存の延長も治療的利益と見なされ得る。
【０２８０】
調節不全のアポトーシスを伴い、世界的に深刻な健康負荷となっている、疾患の特定のクラスの１つはがんである。特定の実施形態において、本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣは、がんを処置するために使用され得る。がんは、例えば、固形腫瘍または血液腫瘍とすることができる。本明細書に記載されているＡＤＣを用いて処置され得るがんは、以下に限定されないが、膀胱がん、脳がん、乳がん、骨髄がん、子宮頚がん、慢性リンパ球性白血病、大腸がん、食道がん、肝細胞がん、リンパ芽球性白血病、濾胞性リンパ腫、Ｔ−細胞またはＢ−細胞由来のリンパ球悪性腫瘍、黒色腫、骨髄性白血病、骨髄腫、口腔がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、慢性リンパ球性白血病、骨髄腫、前立腺がん、小細胞肺がんおよび脾臓がんを含む。抗体は、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害性シントンを特異的に腫瘍細胞を標的とさせるために使用され得るので、ＡＤＣは、とりわけがんの処置において有益となり得、これにより、非コンジュゲート阻害剤の全身投与に伴い得る、望ましくない副作用および／または毒性を回避または改善することができる可能性がある。一実施形態は、調節不全のアポトーシスを伴う疾患を有する対象に、治療的利益をもたらすのに有効な量の本明細書に記載されているＡＤＣを投与するステップを含む、調節不全の内因性アポトーシスを伴う疾患を処置する方法であって、内因性アポトーシスが調節不全となっている細胞の細胞表面受容体にＡＤＣの抗体が結合する方法に関する。一実施形態は、がんを処置する方法であって、がんを有する対象に、治療的利益をもたらすのに有効な量の、がん細胞の表面に発現する細胞表面受容体または腫瘍関連抗原に結合することが可能な、本明細書に記載されているＡＤＣを投与するステップを含む方法に関する。
【０２８１】
腫瘍形成性がんの文脈において、治療的利益はまた、上記において議論された効果を含むことに加え、処置されているがんのタイプおよびステージに関する統計的平均と比べると、腫瘍成長の進行を停止または遅延させる、腫瘍成長を退行させる、１つ以上の腫瘍を根絶する、および／または患者の生存率を向上させることを具体的に含むことができる。一実施形態において、処置されるがんは、腫瘍形成性がんである。
【０２８２】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣは、単剤療法として投与されて、治療的利益をもたらすことができ、または他の化学治療剤および／もしくは放射線療法への補助として、またはこれらと共に投与されてもよい。本明細書に記載されている阻害剤および／またはＡＤＣが補助療法として利用され得る化学治療剤は、標的化されてもよく（例えば、他のＢｃｌ−ｘＬ阻害剤またはＡＤＣ、タンパク質キナーゼ阻害剤など）、または標的化されていなくてもよい（例えば、ラジオヌクレオチド、アルキル化剤および挿入剤のような非特異的細胞毒性剤）。本明細書に記載されている阻害剤および／またはＡＤＣが、補助的に投与され得る、標的化されていない化学治療剤は、以下に限定されないが、メトトレキセート、タキソール、Ｌ−アスパラギナーゼ、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルビジン、トポテカン、ナイトロジェンマスタード、シトキサン、エトポシド、５−フルオロウラシル、ＢＣＮＵ、イリノテカン、カンプトテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル、カリケアマイシンおよびドセタキセルを含む。
【０２８３】
Ｂｃｌ−ｘＬ発現の向上は、化学療法および放射線療法に対する抵抗性と関連することが示されている。本明細書におけるデータは、がんを処置するには、単剤療法として有効となり得ないＢｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣは、化学治療剤または放射線療法への補助として、またはこれらと共に投与されると、治療的利益がもたらされ得ることを実証している。操作のいかなる治療法によっても拘泥されることを意図するものではないが、標準治療である化学治療剤および／または放射線療法に対して抵抗性になった腫瘍に、本明細書に記載されているＢｃｌ−ｘＬ阻害剤および／またはＡＤＣを投与すると、該腫瘍を感作し、この結果、これらの腫瘍が、化学療法および／または放射線療法に再び応答すると考えられる。一実施形態は、本明細書に記載されているＡＤＣが、腫瘍細胞が標準的化学療法および／または放射線療法に感作するのに有効な量で投与される方法に関する。したがって、がんを処置するという文脈において、「治療的利益」は、腫瘍を化学的療法および／または放射線療法に対して感作する手段として、化学治療剤および／または放射線療法をまだ開始していない患者、もしくは抵抗性の徴候をまだ示していない患者、または抵抗性の徴候を示し始めた患者のいずれかにおいて、このような治療法への補助として、またはこれらと共に、本明細書に記載されている阻害剤および／またはＡＤＣを投与するステップを含む。
【０２８４】
５．１０．投与量および投与レジメン
投与されるＡＤＣの量は、以下に限定されないが、処置されている特定の疾患、投与形式、所望の治療的利益、疾患のステージまたは重症度、患者の年齢、体重および他の特徴などを含めた、様々な因子に依存する。有効な投与量の決定は、当業者の能力の範囲内にある。
【０２８５】
有効な投与量は、細胞アッセイから最初に推定され得る。例えば、ヒトにおいて使用するための初期用量は、細胞アッセイにおいて測定された、特定の阻害性分子のＩＣ５０またはＥＤ５０以上となる、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤の細胞濃度を達成すると予想されるＡＤＣの循環血液濃度または血清濃度を達成するよう製剤化され得る。
【０２８６】
ヒトにおいて使用される初期投与量は、インビボでの動物モデルからも推定され得る。幅広い疾患に好適な動物モデルは、当分野において公知である。
【０２８７】
他の化学治療剤のような他の薬剤への補助として、またはこれらと共に、ＡＤＣが投与された場合、これは、他の薬剤と同じスケジュールにおいて、または異なるスケジュールにおいて投与されてもよい。同じスケジュールにおいて投与される場合、ＡＤＣは、この他の薬剤の前、後または同時に投与され得る。ＡＤＣが、標準的な化学療法および／または放射線療法への補助として、またはこれらと共に投与される、一部の実施形態において、ＡＤＣは、上記の標準的治療法の開始に先立って、例えば、標準的化学療法および／または放射線療法の開始の、１日前、数日前、１週間前、数週間前、１か月前、または数か月も前でさえも開始されてもよい。
【０２８８】
例えば、他の薬剤が標準的な化学治療剤のような他の薬剤への補助として、またはこれらと共に、投与された場合、経路、投与量および頻度に関する、上記薬剤の標準的な投与スケジュールに従って、通常、投与される。しかし、一部の場合、ＡＤＣ療法への補助として投与された場合、有効となるのに、標準量未満しか必要としないことがある。
【実施例】
【０２８９】
［実施例１］
例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の合成
この実施例は、例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤化合物Ｗ１．０１−Ｗ１．０８の合成方法を提供する。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤（Ｗ１．０１−Ｗ１．０８）およびシントン（実施例２．１−２．５３）は、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ２０１２発売（Ｂｕｉｌｄ  ５６０８４、２０１２年４月５日、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｏｎｔａｒｉｏ）を使用して命名した。Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤およびシントン中間体は、ＡＣＤ／Ｎａｍｅ２０１２発売（Ｂｕｉｌｄ  ５６０８４、２０１２年４月５日、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｏｎｔａｒｉｏ）、またはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）バージョン９．０．７（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）、またはＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）Ｕｌｔｒａバージョン１２．０（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）を使用して命名した。
【０２９０】
１．１．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０１）の合成
１．１．１．  ３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンカルボン酸
５０ｍＬの丸底フラスコ中に、０℃で臭素（１６ｍＬ）を加えた。鉄粉（７ｇ）をその後加え、反応物を０℃で３０分間撹拌した。３，５−ジメチルアダマンタン−１−カルボン酸（１２ｇ）をその後加えた。混合物を室温に加温し、３日間撹拌した。氷および濃ＨＣｌの混合物を、反応混合物中に注ぎ入れた。得られた懸濁液をＮａ２ＳＯ３（水２００ｍＬ中５０ｇ）で２回処理して、臭素を分解し、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせた有機物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗標題化合物を得た。
【０２９１】
１．１．２．  ３−ブロモ−５，７−ジメチルアダマンタンメタノール
実施例１．１．１（１５．４ｇ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中溶液に、ＢＨ３（テトラヒドロフラン中１Ｍ、１５０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。次いで反応混合物を、メタノールを滴下添加することにより注意深くクエンチした。次いで混合物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）と２Ｎ  ＨＣｌ水溶液（１００ｍＬ）との間で平衡させた。水性層を酢酸エチルで更に２回抽出し、合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過した。溶媒を蒸発させて、標題化合物を得た。
【０２９２】
１．１．３．  １−（（３−ブロモ−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．２（８．０ｇ）のトルエン（６０ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−ピラゾール（１．５５ｇ）およびシアノメチレントリブチルホスホラン（２．０ｇ）を加えた。混合物を９０℃で終夜撹拌した。反応混合物をその後濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０：１ヘプタン：酢酸エチル）により精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３２４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９３】
１．１．４．  ２−｛［３，５−ジメチル−７−（１Ｈ−ピラゾール−１−イルメチル）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］オキシ｝エタノール
実施例１．１．３（４．０ｇ）のエタン−１，２−ジオール（１２ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（３ｍＬ）を加えた。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１５０℃で４５分間撹拌した。混合物を水（１００ｍＬ）中に注ぎ入れ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過した。溶媒を蒸発させて粗生成物を得、これをヘプタン中２０％酢酸エチルで、続いてジクロロメタン中５％メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３０５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９４】
１．１．５．  ２−（｛３，５−ジメチル−７−［（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エタノール
実施例１．１．４（６．０５ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中冷却（−７８℃）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（４０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ）を加えた。混合物を−７８℃で１．５時間撹拌した。ヨードメタン（１０ｍＬ）を注射器に通して加え、混合物を−７８℃で３時間撹拌した。次いで反応混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、酢酸エチルで２回抽出し、合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をジクロロメタン中５％メタノールで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３１９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９５】
１．１．６．  １−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（ヒドロキシ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．５（３．５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（３．２ｇ）を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（６００ｍＬ）でその後希釈し、ＮａＨＳＯ３水溶液、水およびブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中２０％酢酸エチル）により精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４４５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９６】
１．１．７．  ２−（｛３−［（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチルメタンスルホネート
実施例１．１．６（６．１６ｇ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中冷却溶液に、トリエチルアミン（４．２１ｇ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（１．６ｇ）を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌した。次いで反応混合物を酢酸エチル（６００ｍＬ）で希釈し、水およびブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣を更には精製せずに次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５２３．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９７】
１．１．８．  １−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．７（２．５ｇ）のメタノール中２Ｍメチルアミン（１５ｍＬ）中溶液を、マイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１００℃で２０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。次いで残渣を酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、水およびブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で脱水した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣を更には精製せずに次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４５８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９８】
１．１．９．  ｔｅｒｔ−ブチル［２−（｛３−［（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］メチルカルバメート
実施例１．１．８（２．２ｇ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１．２６ｇ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジンを加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌し、酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈した。溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、水（６０ｍＬ）およびブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をジクロロメタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５５８．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２９９】
１．１．１０．  ６−フルオロ−３−ブロモピコリン酸
６−アミノ−３−ブロモピコリン酸（２５ｇ）の１：１ジクロロメタン／クロロホルム４００ｍＬ中スラリー液を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）中のニトロソニウムテトラフルオロボレート（１８．２ｇ）に５℃で１時間かけて加えた。そして得られた混合物を更に３０分間撹拌し、次いで３５℃に加温し、終夜撹拌した。反応物を室温に冷却し、次いでＮａＨ２ＰＯ４水溶液でｐＨを４に調整した。得られた溶液をジクロロメタンで３回抽出し、合わせた抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０３００】
１．１．１１．  ｔｅｒｔ−ブチル３−ブロモ−６−フルオロピコリネート
パラ−トルエンスルホニルクロリド（２７．６ｇ）を、０℃で実施例１．１．１０（１４．５ｇ）およびピリジン（２６．７ｍＬ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）およびｔｅｒｔ−ブタノール（８０ｍＬ）中溶液に加えた。反応物を１５分間撹拌し、室温に加温し、終夜撹拌した。溶液を濃縮し、酢酸エチルとＮａ２ＣＯ３水溶液との間で分配した。層を分離し、水性層を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＣＯ３水溶液およびブラインですすぎ、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０３０１】
１．１．１２．  メチル２−（５−ブロモ−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
メチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩（１２．３７ｇ）および実施例１．１．１１（１５ｇ）のジメチルスルホキシド（１００ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２ｍＬ）を加えた。混合物を５０℃で２４時間撹拌した。次いで混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて残渣を得、これをヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４４８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０２】
１．１．１３．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１２（２．２５ｇ）および［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（２０５ｍｇ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（３ｍＬ）およびピナコールボラン（２ｍＬ）を加えた。混合物を還流状態で３時間撹拌した。混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出）により、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４９５．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０３】
１．１．１４．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１３（４．９４ｇ）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）中溶液に、実施例１．１．９（５．５７ｇ）、１，３，５，７−テトラメチル−８−テトラデシル−２，４，６−トリオキサ−８−ホスファアダマンタン（４１２ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４５７ｍｇ）およびＫ３ＰＯ４（１１ｇ）を加えた。混合物を還流状態で２４時間撹拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて残渣を得、これをヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７９９．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０４】
１．１．１５．  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１４（１０ｇ）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）、メタノール（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム１水和物（１．２ｇ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を２％ＨＣｌ水溶液で中和し、真空下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（８００ｍＬ）で希釈し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７８５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０５】
１．１．１６．  ｔｅｒｔ−ブチル６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボキシレート
実施例１．１．１５（１０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中溶液に、ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（３．２４ｇ）、フルオロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート（５．６９ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．５７ｇ）を加えた。混合物を６０℃で３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（８００ｍＬ）で希釈し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、溶媒を蒸発させて残渣を得、これをジクロロメタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９１５．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０６】
１．１．１７．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−［１−（｛３，５−ジメチル−７−［２−（メチルアミノ）エトキシ］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１６（５ｇ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をジメチルスルホキシド／メタノール（１：１、１０ｍＬ）に溶解し、１０−８５％アセトニトリルおよび水中０．１％トリフルオロ酢酸で溶出するＡｎａｌｏｇｉｘシステムおよびＣ１８カートリッジ（３００ｇ）を用いる逆相によりクロマトグラフィーにかけて、標題化合物をＴＦＡ塩として得た。1H  NMR  (300  MHz,  ジメチルスルホキシド  d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.13-8.30  (m,  2H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.32-7.54  (m,  3H),  7.28  (d,  1H),  6.96  (d,  1H),  4.96  (dd,  1H),  3.80-3.92  (m,  4H),  3.48-3.59  (m,  1H),  2.91-3.11  (m,  2H),  2.51-2.59  (m,  4H),  2.03-2.16  (m,  2H),  1.21-1.49  (m,  6H),  0.97-1.20  (m,  4H),  0.87  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  760.4  (M+H)+.
【０３０７】
１．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［（１ｒ，３Ｒ，５Ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０２）の合成
１．２．１．  ２−（２−（２−（（（３−（（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．１．３（２．６５ｇ）の２，２’−（エタン−１，２−ジイルビス（オキシ））ジエタノール（１５ｇ）中溶液に、トリエチルアミン（３ｍＬ）を加えた。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１８０℃で１２０分間撹拌した。混合物を水およびアセトニトリル（１：１、４０ｍＬ）で希釈した。粗製物を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０−１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３９３．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０８】
１．２．２．  ２−（２−（２−（（３，５−ジメチル−７−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．１（２．６９ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（１０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ）を加えた。混合物を０℃で１．５時間撹拌した。ヨードメタン（１ｍＬ）を注射器に通して加え、混合物を０℃で１．５時間撹拌した。反応混合物をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）でクエンチした。溶媒を蒸発させた後、残渣を次のステップに直接使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４０７．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３０９】
１．２．３．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．２（２．７８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（１．６５ｇ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。粗生成物を逆相カラム（Ｃ−１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中１０−１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５３３．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１０】
１．２．４．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）−Ｎ−メチルエタンアミン
実施例１．２．３（２．４５ｇ）のテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、トリエチルアミン（１ｍＬ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（０．５８８ｇ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。メタンアミン（１０ｍＬ、メタノール中２Ｍ）を反応混合物に加え、２０ｍＬのマイクロ波管に移した。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１００℃で６０分間加熱した。室温に冷却した後、溶媒を真空下で除去した。残渣を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ４０−３００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中４０−１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５４６．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１１】
１．２．５．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバメート
実施例１．２．４（１．４１ｇ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１ｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（０．６ｇ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、溶媒を真空により除去した。残渣をヘキサン中１０−１００％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６４５．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１２】
１．２．６．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（３，５−ジメチル−７−（（５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバメート
実施例１．２．５（１．２５ｇ）、ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニル（０．０９ｇ）、ピナコールボラン（１．５ｍＬ）およびトリエチルアミン（１．５ｍＬ）のジオキサン（２０ｍＬ）中溶液に、ビス（ベンゾニトリル）パラジウム（ＩＩ）クロリド（０．０４２ｇ）を加えた。脱気した後、混合物を９０℃で終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、シリカゲルカラム精製（ヘキサン中２０−１００％酢酸エチルで溶出）により、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６４６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１３】
１．２．７．  ｔｅｒｔ−ブチル８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−カルボキシレート
２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸（６．８ｇ）およびベンゾ［ｄ］チアゾール−２−アミン（５．５２ｇ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）中溶液に、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（９．４ｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（６ｇ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（４００ｍＬ）で希釈し、５％ＨＣｌ水溶液、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。
【０３１４】
１．２．８．  Ｎ−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキサミド二塩酸塩
実施例１．２．７（８．５ｇ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）中溶液に、ジエチルエーテル中２Ｎ  ＨＣｌ（８０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。
【０３１５】
１．２．９．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−ブロモピコリネート
実施例１．１．１１（０．７３６ｇ）、実施例１．２．８（１．６２ｇ）およびＣｓ２ＣＯ３（４．１ｇ）を、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド１２ｍＬ中１２０℃で１２時間撹拌した。次いで冷却した反応混合物を酢酸エチルおよび１０％クエン酸で希釈した。有機相をクエン酸で３回、水およびブラインで１回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。濾過し、濃縮して粗製物を得、これを、ヘキサン中０−４０％酢酸エチルを用いシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけて、標題化合物を得た。
【０３１６】
１．２．１０．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（（１ｓ，７ｓ）−３，５−ジメチル−７−（（２，２，５−トリメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル）オキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．２．６（０．１３５ｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）中溶液に、実施例１．２．９（０．１２ｇ）、１，３，５，７−テトラメチル−８−テトラデシル−２，４，６−トリオキサ−８−ホスファアダマンタン（０．０２３ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．０１５ｇ）およびＫ３ＰＯ４（０．２ｇ）を加えた。混合物をマイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１４０℃で５分間撹拌した。反応混合物をトルエン（５ｍＬ）で希釈し、濾過した。溶媒を蒸発させ、シリカゲル精製（ヘプタン中２０−１００％酢酸エチル）により、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１００４．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３１７】
１．２．１１．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３，５−ジメチル−７−（２−｛２−［２−（メチルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の実施例１．２．１０（１．４２ｇ）をトリフルオロ酢酸（６ｍＬ）で処理し、反応物を室温で２４時間撹拌した。揮発物を減圧下で除去した。残渣を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中３０−１００％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステム（Ｃ１８、ＳＦ４０−３００ｇ）を用いる逆相クロマトグラフィーにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物をＴＦＡ塩として得た。1H  NMR  (300  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (br.s,  1H),  8.33  (br.s,  2H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.41-7.54  (m,  3H),  7.32-7.40  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  6.95  (d,  1H),  4.95  (s,  2H),  3.85-3.93  (m,  2H),  3.81  (s,  2H),  3.60-3.66  (m,  2H),  3.52-3.58  (m,  4H),  3.45  (s,  3H),  2.97-3.12  (m,  4H),  2.56  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.34-1.41  (m,  2H),  1.18-1.31  (m,  4H),  0.95-1.18  (m,  6H),  0.85  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  848.2  (M+H)+.
【０３１８】
１．３．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０３）の合成
１．３．１．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−ヒドロキシエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１３（２．２５ｇ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中溶液に、実施例１．１．６（２．０ｇ）、１，３，５，７−テトラメチル−６−フェニル−２，４，８−トリオキサ−６−ホスファアダマント（３２９ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２０６ｍｇ）および三塩基性リン酸カリウム（４．７８ｇ）を加えた。混合物を終夜還流し、冷却し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を水およびブラインで洗浄し、有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中２０％酢酸エチルで、次いでジクロロメタン中５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０３１９】
１．３．２．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３，５−ジメチル−７−（２−（（メチルスルホニル）オキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．３．１（３．３２ｇ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中冷却溶液に、氷浴中でトリエチルアミン（３ｍＬ）およびメタンスルホニルクロリド（１．１ｇ）を順次加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０３２０】
１．３．３．  メチル２−（５−（１−（（３−（２−アジドエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．３．２（１６．５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（４．２２ｇ）を加えた。混合物を８０℃で３時間加熱し、冷却し、酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０３２１】
１．３．４．  ２−（５−（１−（（３−（２−アジドエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．３．３（１０ｇ）のテトラヒドロフラン（６０ｍＬ）、メタノール（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）の混合物中溶液に、水酸化リチウム１水和物（１．２ｇ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、２％ＨＣｌ水溶液で中和した。得られた混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル（８００ｍＬ）に溶解し、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０３２２】
１．３．５．  ｔｅｒｔ−ブチル３−（１−（（３−（２−アジドエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリネート
実施例１．１．１５の代わりに実施例１．３．４を用い、１．１．１６に記載した手順に従うことにより、標題化合物を調製した。
【０３２３】
１．３．６．  ｔｅｒｔ−ブチル３−（１−（（３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリネート
実施例１．３．５（２．０ｇ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１０％、２００ｍｇ）を加えた。混合物を水素雰囲気下終夜撹拌した。反応物を濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物を得た。
【０３２４】
１．３．７．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の実施例１．３．６（３００ｍｇ）をトリフルオロ酢酸（３ｍＬ）で終夜処理した。反応混合物を濃縮し、残渣を０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中の１０−７０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム３００ｇ）により精製して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.59-7.73  (m,  4H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.32-7.40  (m,  2H)  7.29  (s,  1H)  6.96  (d,  1H)  4.96  (s,  2H)  3.89  (t,  2H)  3.83  (s,  2H)  3.50  (t,  2H)  3.02  (t,  2H)  2.84-2.94  (m,  2H)  2.11  (s,  3H)  1.41  (s,  2H)  1.21-1.36  (m,  4H)  1.08-1.19  (m,  4H)  0.96-1.09  (m,  2H)  0.87  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  744.3  (M-H)-.
【０３２５】
１．４．  ３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０４）の合成
１．４．１．  ２−（２−（（３−（（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタノール
エタン−１，２−ジオールの代わりに２，２’−オキシジエタノールを用いることにより、実施例１．１．４に記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３４９．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３２６】
１．４．２．  ２−（２−（（３，５−ジメチル−７−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．１．４の代わりに実施例１．４．１を用いることにより、実施例１．１．５において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３６３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
１．４．３．  ２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．１．５の代わりに実施例１．４．２を用いることにより、実施例１．１．６において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４８９．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３２７】
１．４．４．  ２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エチルメタンスルホネート
実施例１．１．６の代わりに実施例１．４．３を用いることにより、実施例１．１．７において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５６７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３２８】
１．４．５．  ２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エタンアミン
実施例１．１．７の代わりに実施例１．４．４およびメタノール中２Ｎメチルアミンの代わりにメタノール中７Ｎアンモニアを用いることにより、実施例１．１．８において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３２９】
１．４．６．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
実施例１．１．８の代わりに実施例１．４．５を用いることにより、実施例１．１．９において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３０】
１．４．７．  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．９の代わりに実施例１．４．６を用いることにより、実施例１．１．１４において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ８２８．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３１】
１．４．８．  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１４の代わりに実施例１．４．７を用いることにより、実施例１．１．１５において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ８１４．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３２】
１．４．９．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．１．１５の代わりに実施例１．４．８を用いることにより、実施例１．１．１６において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９４６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３３】
１．４．１０．  ３−［１−（｛３−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１６の代わりに実施例１．４．９を用いることにより、実施例１．１．１７において記載した通りに標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  7.99-8.08  (m,  1H),  7.60-7.82  (m,  4H),  7.20-7.52  (m,  5H),  6.93-6.99  (m,  1H),  4.96  (s,  2H),  3.45-3.60  (m,  6H),  2.09-2.14  (m,  4H),  0.95-1.47  (m,  19H),  0.81-0.91  (m,  6H).    MS  (ESI)  m/e  790.2  (M+H)+.
【０３３４】
１．５．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０５）の合成
１．５．１．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（（１ｒ，３ｒ）−３−（２−（（２−メトキシエチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．３．６（０．０５０ｇ）および２−メトキシアセトアルデヒド（６．９３ｍｇ）の溶液を、ジクロロメタン（０．５ｍＬ）中室温で１時間共に撹拌した。反応物に水素化ホウ素ナトリウム（２ｍｇ）のメタノール（０．２ｍＬ）中懸濁液を加えた。３０分間撹拌した後、反応物をジクロロメタン（２ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ８６０．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３５】
１．５．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（２−メトキシエチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．５．１のジクロロメタン（１ｍＬ）中溶液を、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）で処理した。終夜撹拌した後、反応物を濃縮し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）に溶解し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物をＴＦＡ塩として得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  2H),  8.39  (s,  2H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.53-7.42  (m,  3H),  7.40-7.33  (m,  2H),  7.29  (s,  1H),  6.96  (d,  1H),  4.96  (s,  2H),  3.89  (t,  2H),  3.83  (s,  2H),  3.61-3.53  (m,  10H),  3.29  (s,  3H),  3.17-3.09  (m,  2H),  3.09-2.97  (m,  4H),  2.10  (s,  3H),  1.41  (s,  2H),  1.35-1.23  (m,  4H),  1.20-1.10  (m,  4H),  1.10-0.98  (m,  2H).    MS  (ESI)  m/e  804.3  (M+H)  +.
【０３３６】
１．６．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸（化合物Ｗ１．０６）の合成
【０３３７】
１．６．１．  ３−シアノメチル−４−フルオロ安息香酸メチルエステル
トリメチルシランカルボニトリル（１．４９ｍＬ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）中溶液に、１Ｍテトラブチルアンモニウムフルオリド（１１．１３ｍＬ）を２０分かけて滴下添加した。次いで溶液を室温で３０分間撹拌した。メチル４−フルオロ−３−（ブロモメチル）ベンゾエート（２．５０ｇ）をアセトニトリル（１２ｍＬ）に溶解し、最初の溶液に１０分かけて滴下添加した。次いで溶液を８０℃に６０分間加熱し、冷却した。溶液を減圧下で濃縮し、ヘプタン中２０−３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０３３８】
１．６．２．  ３−（２−アミノエチル）−４−フルオロ安息香酸メチルエステル
実施例１．６．１（１．８４ｇ）をテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）に溶解し、１Ｍボラン（テトラヒドロフラン中、１１．９ｍＬ）を加えた。溶液を室温で１６時間撹拌し、メタノールでゆっくりクエンチした。４Ｍ塩酸水溶液（３５ｍＬ）を加え、溶液を室温で１６時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、固体の炭酸カリウムを用いてｐＨを１１と１２の間に調整した。次いで溶液をジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、物質をジクロロメタン中１０−２０％メタノールで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３３９】
１．６．３．  ４−フルオロ−３−［２−（２，２，２−トリフルオロアセチルアミノ）エチル］安息香酸メチルエステル
実施例１．６．２（１．２０７ｇ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．３ｍＬ）を加えた。次いでトリフルオロ酢酸無水物（１．０ｍＬ）を滴下添加した。溶液を１５分間撹拌した。水（４０ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。１Ｍ塩酸水溶液（５０ｍＬ）を加え、有機層を分離し、１Ｍ塩酸水溶液で洗浄し、その後ブラインで洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで脱水した。濾過後、溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０３４０】
１．６．４．  ５−フルオロ−２−（２，２，２−トリフルオロアセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．３（１．７９５ｇ）およびパラホルムアルデヒド（０．９１９ｇ）をフラスコに入れ、濃硫酸（１５ｍＬ）を加えた。溶液を室温で１時間撹拌した。冷水（６０ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。抽出物を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、物質をヘプタン中１０−２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３２３（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０３４１】
１．６．５．  ５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．４（６８５ｍｇ）をメタノール（６ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（６ｍＬ）に溶解した。水（３ｍＬ）を、続いて炭酸カリウム（３７２ｍｇ）を加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ２１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４２】
１．６．６．  ２−（５−ブロモ−６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピリジン−２−イル）−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
１．１．１２において実施例１．６．５をメチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４６５、４６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４３】
１．６．７．  ２−［６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ピリジン−２−イル］−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１３において実施例１．６．６を実施例１．１．１２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４４】
１．６．８．  ２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エタンアミン
実施例１．１．７（４．５ｇ）のメタノール中７Ｎアンモニア（１５ｍＬ）中溶液を、マイクロ波条件（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ）下１００℃で２０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、水（６０ｍＬ）およびブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣を更には精製せずに次の反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４５】
１．６．９．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）オキシ）エチル）カルバメート
実施例１．６．８（４．４ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中溶液に、ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（２．６ｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（１００ｍｇ）を加えた。混合物を１．５時間撹拌した。次いで反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３水溶液、水（６０ｍＬ）およびブライン（６０ｍＬ）で洗浄した。脱水（無水Ｎａ２ＳＯ４）した後、溶液を濾過し、濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中２０％酢酸エチル）により精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４６】
１．６．１０．  ２−（６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−｛１−［５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルメチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−ピリジン−２−イル）−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１４において実施例１．６．７を実施例１．１．１３および実施例１．６．９を実施例１．１．９の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ８０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４７】
１．６．１１．  ２−（６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−｛１−［５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルメチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−ピリジン−２−イル）−５−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１５において実施例１．６．１０を実施例１．１．１４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４８】
１．６．１２．  ６−［８−（ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル］−３−｛１−［５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エトキシ）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルメチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−ピリジン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
実施例１．１．１６において実施例１．６．１１を実施例１．１．１５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９２０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３４９】
１．６．１３．  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７において実施例１．６．１２を実施例１．１．１６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.88  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.73  (m,  1H),  7.63  (m,  2H),  7.52  (d,  1H),  7.48  (t,  1H),  7.36  (t,  1H),  7.28  (dd,  2H),  7.04  (d,  1H),  5.02  (s,  2H),  3.95  (t,  2H),  3.83  (s,  2H),  3.49  (t,  2H),  2.90  (m,  4H),  2.11  (s,  3H),  1.41  (s,  2H),  1.35-1.23  (m,  4H),  1.19-0.99  (m,  6H),  0.87  (bs,  6H).  MS  (ESI)  m/e  764  (M+H)+.
【０３５０】
１．７  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸の合成
１．７．１  （３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−アセトニトリル
実施例１．６．１において１−ブロモ−３−（ブロモメチル）−５−フルオロベンゼンをメチル４−フルオロ−３−（ブロモメチル）ベンゾエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３５１】
１．７．２  ２−（３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−エチルアミン
実施例１．６．２において実施例１．７．１を実施例１．６．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３５２】
１．７．３  ［２−（３−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
実施例１．７．２（１．４０ｇ）およびＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（０．０７８ｇ）をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（１．５４ｇ）を加えた。溶液を室温で３０分間撹拌した。溶液をジエチルエーテル（１５０ｍＬ）で希釈し、０．１Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２５ｍＬ）で２回洗浄し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で脱水した。溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、粗製物をヘプタン中５−１０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０３５３】
１．７．４  ３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−５−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．３（７７５ｍｇ）およびジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）（３６ｍｇ）を５０ｍＬの圧力ボトルに加えた。メタノール（１０ｍＬ）およびトリメチルアミン（４９３ｍｇ）を加えた。溶液を脱気し、アルゴンで３回フラッシュし、続いて脱気し、一酸化炭素でフラッシュした。反応物を６０ｐｓｉの一酸化炭素下１００℃に１６時間加熱した。更にジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）（３６ｍｇ）を加え、脱気およびフラッシュ手順を繰り返した。反応物を６０ｐｓｉの一酸化炭素下１００℃に更に１６時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をヘプタン中２０−３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。
【０３５４】
１．７５  ３−（２−アミノ−エチル）−５−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．４（２９２ｍｇ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解した。２，２，２−トリフルオロ酢酸（１６８０ｍｇ）を加え、溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
【０３５５】
１．７．６  ３−フルオロ−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エチル］−安息香酸メチルエステル
実施例１．６．３において実施例１．７．５を実施例１．６．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３５６】
１．７．７  ６−フルオロ−２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．４において実施例１．７．６を実施例１．６．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３５７】
１．７．８  ６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．５において実施例１．７．７を実施例１．６．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３５８】
１．７．９  ２−（５−ブロモ−６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピリジン−２−イル）−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１２において実施例１．７．８をメチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４６４、４６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３５９】
１．７．１０  ２−［６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ピリジン−２−イル］−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１３において実施例１．７．９を実施例１．１．１２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５１３（Ｍ＋Ｈ）＋、５４３（Ｍ＋ＭｅＯＨ−Ｈ）−。
【０３６０】
１．７．１１  ｛２−［５−（４−ヨード−５−メチル−ピラゾール−１−イルメチル）−３，７−ジメチル−アダマンタン−１−イルオキシ］−エチル｝−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミノジカルボキシレート
実施例１．１．６（５．０００ｇ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１．５４３ｇ）を加え、溶液を氷浴上で冷却した。メタンスルホニルクロリド（１．６９１ｇ）を滴下添加した。溶液を室温に加温し、３０分間撹拌した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加えた。層を分離し、有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。次いで水性部分を合わせ、ジクロロメタン（５０ｍＬ）で逆抽出した。有機部分を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をアセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミノジカルボキシレート（２．６８９ｇ）および炭酸セシウム（７．３３２ｇ）を加え、溶液を１６時間還流した。溶液を冷却し、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）に加えた。層を分離した。有機部分をブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。次いで水性部分を合わせ、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）で逆抽出した。有機部分を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。物質をヘプタン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を減圧下で蒸発させて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６６６（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０３６１】
１．７．１２  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１４において実施例１．７．１０を実施例１．１．１３および実施例１．７．１１を実施例１．１．９の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９０２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３６２】
１．７．１３  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−６−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１５において実施例１．７．１２を実施例１．１．１４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ８８８（Ｍ＋Ｈ）＋、８８６（Ｍ−Ｈ）−。
【０３６３】
１．７．１４  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．１．１６において実施例１．７．１３を実施例１．１．１５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３６４】
１．７．１５  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−６−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７において実施例１．７．１４を実施例１．１．１６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.04  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.65  (bs,  3H),  7.50  (m,  2H),  7.40-7.29  (m,  3H),  6.98  (d,  1H),  4.91  (d,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.83  (s,  2H),  3.02  (t,  2H),  2.89  (t,  4H),  2.10  (s,  3H),  1.44-1.20  (m,  6H),  1.19-1.00  (m,  6H),  0.86  (bs,  6  H).    MS  (ESI)  m/e  764  (M+H)+,  762  (M-H)-.
【０３６５】
１．８  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸の合成
１．８．１  ［２−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
実施例１．７．３において２−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）エタンアミン塩酸塩を実施例１．７．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３６６】
１．８．２  ５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−２−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．４において実施例１．８．１を実施例１．７．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３１５（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０３６７】
１．８．３  ５−（２−アミノ−エチル）−２−フルオロ−安息香酸メチルエステル
実施例１．７．５において実施例１．８．２を実施例１．７．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３６８】
１．８．４  ２−フルオロ−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチルアミノ）−エチル］−安息香酸メチルエステル
実施例１．６．３において実施例１．８．３を実施例１．６．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３６９】
１．８．５  ７−フルオロ−２−（２，２，２−トリフルオロ−アセチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．４において実施例１．８．４を実施例１．６．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３２３（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０３７０】
１．８．６  ７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．６．５において実施例１．８．５を実施例１．６．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ２１０（Ｍ＋Ｈ）＋、２０８（Ｍ−Ｈ）−。
【０３７１】
１．８．７  ２−（５−ブロモ−６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ピリジン−２−イル）−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
実施例１．１．１２において実施例１．８．６をメチル１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート塩酸塩の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４６５，４６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３７２】
１．８．８  ２−［６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ピリジン−２−イル］−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−８−カルボン酸メチルエステル
【０３７３】
実施例１．１．１３において実施例１．８．７を実施例１．１．１２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５１３（Ｍ＋Ｈ）＋、５４３（Ｍ＋ＭｅＯＨ−Ｈ）−。
【０３７４】
１．８．９  メチル２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボキシレート
実施例１．１．１４において実施例１．８．８を実施例１．１．１３および実施例１．７．１１を実施例１．１．９の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９０２（Ｍ＋Ｈ）＋、９００（Ｍ−Ｈ）−。
【０３７５】
１．８．１０  ２−（６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−イル）−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−８−カルボン酸
実施例１．１．１５において実施例１．８．９を実施例１．１．１４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７８８（Ｍ＋Ｈ）＋、７８６（Ｍ−Ｈ）−。
【０３７６】
１．８．１１  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（ジ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．１．１６において実施例１．８．１０を実施例１．１．１５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３７７】
１．８．１２  ３−（１−｛［３−（２−アミノエトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−７−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７において実施例１．８．１１を実施例１．１．１６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  13.08  (bs,  1H),  11.41  (bs,  1H),  8.05  (d,  1H),  7.81  (d,  1H),  7.63  (m,  4H),  7.55-7.22  (m,  6H),  6.95  (d,  1H),  4.78  (s,  2H),  3.86  (m,  4H),  3.50  (m,  2H),  2.97  (m,  2H),  2.90  (m,  2H),  2.09  (s,  3H),  1.48-1.40  (m,  2H),  1.38-1.23  (m,  4H),  1.20-1.01  (m,  6H),  0.88  (bs,  6H).    MS  (ESI)  m/e  764  (M+H)+,  762  (M-H)-.
【０３７８】
［実施例２］
例示的なシントンの合成
この実施例は、ＡＤＣｓを作製するために使用できる例示的なシントンのための合成方法を提供する。
【０３７９】
２．１．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＥ）の合成
【０３８０】
２．１．１．  （Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）カルバメート
（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−ウレイドペンタン酸（４０ｇ）をジクロロメタン（１．３Ｌ）に溶解した。（４−アミノフェニル）メタノール（１３．０１ｇ）、２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（４２．１ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０３５Ｌ）を溶液に加え、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。生成物を濾取し、ジクロロメタンですすいだ。合わせた固体を真空乾燥して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５０３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３８１】
２．１．２．  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．１（４４ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３００ｍＬ）に溶解した。溶液をジエチルアミン（３７．２ｍＬ）で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、溶媒を減圧下で濃縮した。粗生成物を酢酸エチル中０−３０％メタノールの濃度勾配で溶出する塩基性アルミナクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ２８１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３８２】
２．１．３．  ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタン酸（９．６９ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に溶解した。溶液に２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（１８．６５ｇ）を加え、反応物を室温で１時間撹拌した。実施例２．１．２（１２．５ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５．５８ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン中１０％メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４８０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３８３】
２．１．４．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．４（３１．８ｇ）をジクロロメタン（６５０ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（４．８５ｍＬ）を溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮して、粗製の標題化合物および４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル２，２，２−トリフルオロアセテートの混合物を得た。粗製物を１：１ジオキサン／水溶液（３００ｍＬ）に溶解し、溶液に水酸化ナトリウム（５．５５ｇ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮し、粗生成物を０．０５容量／容量％水酸化アンモニウムを含有する水中５−６０％アセトニトリルの濃度勾配で溶出するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３８０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３８４】
２．１．５．  １−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−アミド
実施例２．１．４（１．５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（２．０３ｇ）を加えた。混合物を室温で３日間撹拌した。粗製物を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中２０−１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７７８．３（Ｍ＋１）＋。
【０３８５】
２．１．６．  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−２５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−４，７，２３−トリオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−３，６，２２−トリアザペンタコサンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．１．５（２．６０５ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１．８ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中溶液に、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１．２３ｇ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。粗製物を逆相カラム（Ｃ１８、ＳＦ６５−８００ｇ）に加え、０．１％トリフルオロ酢酸を含む水中２０−１００％アセトニトリルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９４３．２（Ｍ＋１）＋。
【０３８６】
２．１．７．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．１．６（４９．６ｍｇ）および実施例１．１．１７（３０ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中混合物に、０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１８ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、ジメチルスルホキシドで希釈し、０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中の２０−７０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いるＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１５６３．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３８７】
２．２．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＤ）の合成
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−ニトロフェニルカルボネート（Ｓｙｎｃｈｅｍから購入、５７ｍｇ）および実施例１．１．１７（５７ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、次いで真空下で濃縮した。残渣をメタノール（３ｍＬ）および酢酸（０．３ｍＬ）で希釈し、０．１％トリフルオロ酢酸を含有する水中３０−７０％アセトニトリルで溶出するＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎシステム、Ｃ１８カラム）により精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (300  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (d,  1H),  9.98  (s,  1H),  7.96-8.10  (m,  2H),  7.74-7.83  (m,  2H),  7.54-7.64  (m,  3H),  7.31-7.52  (m,  6H),  7.24-7.29  (m,  3H),  6.99  (s,  2H),  6.94  (d,  1H),  4.96  (d,  4H),  4.33-4.43  (m,  2H),  4.12-4.24  (m,  2H),  3.22-3.42  (m,  7H),  2.77-3.07  (m,  7H),  1.86-2.32  (m,  7H),  0.92-1.70  (m,  22H),  0.72-0.89  (m,  13H).    MS  (ESI)  m/e  1358.2  (M+H)+.
【０３８８】
２．３．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＪ）の合成
２．３．１．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）プロパン酸
（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパノエート（５ｇ）のジメトキシエタン４０ｍＬ中溶液を、Ｌ−アラニン（１．１４５ｇ）および重炭酸ナトリウム（１．０８ｇ）の水（４０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。クエン酸水溶液（１５容量／容量％、７５ｍＬ）を反応物に加えた。沈殿物を濾過し、水（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥した。固体をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で更に摩砕し、濾過し、硫酸ナトリウムで脱水して生成物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３８３．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３８９】
２．３．２．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）（６．２１ｇ）を、実施例２．３．１（３．２ｇ）および４−アミノベンジルアルコール（１．５４６ｇ）の２：１ジクロロメタン：メタノール５０ｍＬ中溶液に加えた。反応物を室温で２日間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮した。残渣を酢酸エチル７５ｍＬで摩砕し、固体を濾取し、真空乾燥して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４８８．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３９０】
２．３．３．  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
ジエチルアミン（１１．７５ｍＬ）を、実施例２．３．２（１．５８ｇ）のＮ，Ｎジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に加え、反応物を室温で１６時間静置した。溶媒を真空下で蒸発させた。残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）で摩砕し、生成物を濾取し、真空乾燥して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ２６６．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３９１】
２．３．４．  １−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−アミド
実施例２．３．３（１．０３３ｇ）を、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（２ｇ）と１％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１９．５ｍＬ）中で１６時間混合した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６６４．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３９２】
２．３．５．  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−２５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２，５−ジメチル−４，７，２３−トリオキソ−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−３，６，２２−トリアザペンタコサンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．３．４（１．５ｇ）を、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１．３８ｇ）と１％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１．３ｍＬ）中で混合した。反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ８２９．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３９３】
２．３．６．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例１．１．１７のトリフルオロ酢酸塩（１５ｍｇ）を、実施例２．３．５（２１．３ｍｇ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．００６ｍＬ）中で混合した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１４５０．７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３９４】
２．４．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＫ）の合成
２．４．１．  ６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）ヘキサンアミド
実施例２．３．４においてＮ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６４０．８（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０３９５】
２．４．２．  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．３．５において実施例２．４．１を実施例２．３．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３９６】
２．４．３．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．３．６において実施例２．４．２を実施例２．３．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.56  (s,  1H),  7.98  (d,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.71-7.52  (m,  3H),  7.51-7.21  (m,  4H),  6.97-6.84  (m,  1H),  4.98  (d,  2H),  4.42  (p,  1H),  4.27  (p,  1H),  3.89  (t,  1H),  3.80  (s,  2H),  3.43  (d,  19H),  3.03  (t,  7H),  2.87  (s,  2H),  2.32  (s,  1H),  2.11  (d,  3H),  1.52  (h,  2H),  1.41-0.94  (m,  12H),  0.84  (s,  3H).    MS  (ESI)  m/e  1244.2  (M+H)+.
【０３９７】
２．５．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛（１ｓ，３ｓ）−３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＬ）の合成
【０３９８】
２．５．１．  （３−ブロモアダマンタン−１−イル）メタノール
実施例１．１．２において３−ブロモアダマンタン−１−カルボン酸を実施例１．１．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０３９９】
２．５．２．  １−（（３−ブロモアダマンタン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール
実施例１．１．３において実施例２．５．１を実施例１．１．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ２９５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４００】
２．５．３．  ２−（２−（２−（（３−（（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．１において実施例２．５．２を実施例１．１．３の代わりに、硫酸銀をトリエチルアミンの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３６５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０１】
２．５．４．  ２−（２−（２−（（３−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．２において実施例２．５．３を実施例１．２．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３７９．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０２】
２．５．５．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール
実施例１．２．３において実施例２．５．４を実施例１．２．２の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５０４．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０３】
２．５．６．  ２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）−Ｎ−メチルエタンアミン
実施例１．２．４において実施例２．５．５を実施例１．２．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５１８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０４】
２．５．７．  ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（（３−（（４−ヨード−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバメート
【０４０５】
実施例１．２．５において実施例２．５．６を実施例１．２．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６１７．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０６】
２．５．８．  ｔｅｒｔ−ブチルメチル（２−（２−（２−（（３−（（５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル）アダマンタン−１−イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート
実施例１．２．６において実施例２．５．７を実施例１．２．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６１８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０７】
２．５．９．  ｔｅｒｔ−ブチル６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（５−メチル−１−（（３−（（２，２，５−トリメチル−４−オキソ−３，８，１１−トリオキサ−５−アザトリデカン−１３−イル）オキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリネート
実施例１．２．１０において実施例２．５．８を実施例１．２．６の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９７６．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０８】
２．５．１０．  ６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（５−メチル−１−（（（１ｓ，３ｓ）−３−（２−（２−（２−（メチルアミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）アダマンタン−１−イル）メチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリン酸
実施例１．２．１１において実施例２．５．９を実施例１．２．１０の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ８２０．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４０９】
２．５．１１．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．２において実施例２．５．１０を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.96  (br.s,  1H),  7.96-8.12  (m,  2H),  7.73-7.83  (m,  2H),  7.29-7.66  (m,  9H),  7.17-7.30  (m,  3H),  6.89-7.01  (m,  2H),  4.86-5.01  (m,  4H),  4.28-4.45  (m,  1H),  4.12-4.21  (m,  1H),  3.69-3.92  (m,  3H),  3.27-3.62  (m,  9H),  2.78-3.06  (m,  7H),  2.01-2.23  (m,  7H),  1.87-2.01  (m,  1H),  1.54-1.72  (m,  4H),  1.01-1.54  (m,  22H),  0.72-0.89  (m,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1418.4  (M+H)+.
【０４１０】
２．６．  Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＭ）の合成
実施例２．１．７において実施例２．５．１０を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.97  (s,  1H),  8.07-8.13  (m,  1H),  7.97-8.05  (m,  2H),  7.86  (d,  1H),  7.78  (d,  1H),  7.55-7.63  (m,  3H),  7.40-7.51  (m,  3H),  7.32-7.38  (m,  2H),  7.25-7.30  (m,  2H),  6.98  (s,  1H),  6.93  (d,  1H),  4.91-5.01  (m,  4H),  4.31-4.41  (m,  1H),  4.17-4.24  (m,  1H),  3.83-3.91  (m,  2H),  3.76  (s,  2H),  3.30-3.62  (m,  21H),  3.10-3.17  (m,  1H),  2.89-3.05  (m,  4H),  2.81-2.88  (m,  3H),  2.42-2.47  (m,  1H),  2.27-2.40  (m,  3H),  2.04-2.15  (m,  5H),  1.91-2.00  (m,  1H),  1.30-1.72  (m,  16H),  0.76-0.88  (m,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1623.3  (M+H)+.
【０４１１】
２．７．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＶ）の合成
実施例２．２において実施例１．２．１１を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.61  (s,  1H),  7.97  (d,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.67  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.51-7.57  (m,  2H),  7.38-7.48  (m,  4H),  7.29-7.36  (m,  2H),  7.23-7.28  (m,  3H),  6.86-6.94  (m,  2H),  4.97  (d,  4H),  4.38-4.45  (m,  1H),  4.12-4.19  (m,  1H),  3.89  (t,  2H),  3.80  (s,  2H),  3.47-3.54  (m,  5H),  3.44  (s,  3H),  3.33-3.41  (m,  6H),  2.93-3.06  (m,  6H),  2.87  (s,  2H),  2.11-2.22  (m,  2H),  2.08  (s,  3H),  1.97-2.05  (m,  1H),  1.70-1.81  (m,  2H),  1.33-1.68  (m,  10H),  0.95-1.32  (m,  14H),  0.80-0.91  (m,  13H).    MS  (+ESI)  m/e  1446.3  (M+H)+.
【０４１２】
２．８．  Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＤＳ）の合成２．８．１．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）アセトアミド）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．５において２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）アセテートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０４１３】
２．８．２．  ４−（（２Ｓ，５Ｓ）−１４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５−イソプロピル−４，７−ジオキソ−２−（３−ウレイドプロピル）−９，１２−ジオキサ−３，６−ジアザテトラデカンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．３．５において実施例２．８．１を実施例２．３．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０４１４】
２．８．３．  Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．２において実施例１．２．１１を実施例１．１．１７および実施例２．８．２を４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル４−ニトロフェニルカルボネートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.64  (s,  1H),  7.97  (d,  1H),  7.92  (d,  1H),  7.75  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.54  (d,  2H),  7.45  (d,  2H),  7.38-7.43  (m,  1H),  7.29-7.36  (m,  2H),  7.22-7.28  (m,  4H),  6.88-6.93  (m,  2H),  4.98  (d,  4H),  4.39-4.46  (m,  1H),  4.24-4.31  (m,  1H),  3.86-3.93  (m,  4H),  3.80  (s,  2H),  3.46-3.61  (m,  15H),  3.43-3.45  (m,  5H),  3.33-3.38  (m,  4H),  2.87  (s,  3H),  1.99-2.11  (m,  4H),  1.56-1.80  (m,  2H),  1.34-1.50  (m,  4H),  0.94-1.32  (m,  11H),  0.80-0.91  (m,  13H).    MS  (+ESI)  m/e  1478.3  (M+H).
【０４１５】
２．９．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４１６】
２．１０．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＢＧ）の合成
２．１０．１．  （Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−５−ウレイドペンタンアミド
実施例２．１．４（３ｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（１．７８９ｇ）をメタノール（３０ｍＬ）に溶解し、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン中５−３０％メタノールの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５３１．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４１７】
２．１０．２．  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（２．２９３ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．３１７ｍＬ）および実施例２．１０．１（２ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解し、室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン中０−１０％メタノールの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６９６．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４１８】
２．１０．３．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．９．５において実施例２．１０．２を実施例２．９．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (bs,  1H),  9.95  (s,  1H),  8.10  (d,  1H),  8.01  (dd,  2H),  7.79  (d,  1H),  7.65-7.56  (m,  3H),  7.55-7.40  (m,  3H),  7.40-7.33  (m,  2H),  7.35-7.24  (m,  3H),  6.99  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  4.42-4.28  (m,  1H),  4.15  (dd,  1H),  3.92-3.85  (m,  2H),  3.83-3.77  (m,  2H),  3.77-3.52  (m,  2H),  3.45-3.38  (m,  2H),  3.30-3.23  (m,  2H),  3.08-2.90  (m,  4H),  2.90-2.81  (m,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.02-1.86  (m,  1H),  1.79-1.52  (m,  2H),  1.52-0.92  (m,  15H),  0.91-0.75  (m,  13H).    MS  (ESI)  m/e  1316.1  (M+H)+.
【０４１９】
２．１１．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４２０】
２．１２．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＢＩ）の合成
２．１２．１．  ３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）プロパンアミド
実施例２．３．３（９ｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（９．０３ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水で希釈した。水性層を塩化メチレン（３×１００ｍＬ）で逆抽出した。有機溶媒を真空下で濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲル上に吸着し、５０：１ジクロロメタン／メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４３９．１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４２１】
２．１２．２．  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）プロパンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２．１０．２において実施例２．１２．１を実施例２．１０．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。生成物を２５％テトラヒドロフラン／ジクロロメタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーシリカにより精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６０４．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４２２】
２．１２．３．  Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−Ｌ−アラニル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．９．５において実施例２．１２．２を実施例２．９．４の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  9.51  (s,  1H),  7.97  (dd,  1H),  7.90-7.83  (m,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.72-7.66  (m,  1H),  7.64-7.57  (m,  1H),  7.60-7.55  (m,  1H),  7.55  (s,  1H),  7.48-7.37  (m,  3H),  7.37-7.29  (m,  2H),  7.29-7.22  (m,  3H),  6.91  (d,  1H),  6.88  (s,  1H),  4.98  (s,  2H),  4.96  (bs,  2H),  4.40  (p,  1H),  4.24  (p,  1H),  3.89  (t,  2H),  3.79  (s,  2H),  3.64  (t,  2H),  3.44  (t,  2H),  3.29-3.14  (m,  2H),  3.02  (t,  2H),  2.86  (s,  3H),  2.08  (s,  3H),  1.36  (bs,  2H),  1.31  (d,  3H),  1.29-0.94  (m,  14H),  0.83  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1202.1  (M+H)+.
【０４２３】
２．１３．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４２４】
２．１４．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４２５】
２．１５．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４２６】
２．１６．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４２７】
２．１７．  Ｎ−［（２Ｒ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＢＯ）の合成
２．１７．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３．６において（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメートを実施例２．３．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１３８７．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４２８】
２．１７．２．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．１７．１（１５ｍｇ）を、３０％ジエチルアミンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液と混合し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。粗製の反応混合物をＣ１８カラムおよび０．１％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−１００％アセトニトリルの濃度勾配を用いる逆相ＨＰＬＣにより直接精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１１６５．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４２９】
２．１７．３．  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−１−オキソブタン−２−スルホネート
窒素でスパージした１００ｍＬのフラスコ中、１−カルボキシ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン−１−スルホネートをジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液にＮ−ヒドロキシスクシンイミド（４４０ｍｇ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１０００ｍｇ）を加え、反応物を窒素雰囲気下室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、残渣を０．１容量／容量％酢酸を含有するジクロロメタン中１−２％メタノールの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を約８０％活性化エステルおよび２０％酸の混合物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３６０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４３０】
２．１７．４．  Ｎ−［（２Ｒ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド
実施例２．１７．２のトリフルオロ酢酸塩（６ｍｇ）を、実施例２．１７．３（１６．８５ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２５ｍＬ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５００ｍＬ）中で混合し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、ラセミ体の実施例２．１７．３に由来する新規に加えられた位置での立体化学が異なる２種のジアステレオマーを得た。この中心での２種の生成物の立体化学はランダムに割り当てられた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１４０８．５（Ｍ−Ｈ）−。
【０４３１】
２．１８．  Ｎ−［（２Ｓ）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｎ５−カルバモイル−Ｌ−オルニチンアミド（シントンＢＰ）の合成
標題化合物は、実施例２．１７．４に記載した通りに、実施例２．１７．４の調製の間に単離した２番目のジアステレオマーである。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１４０８．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０４３２】
２．１９．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４３３】
２．２０．  この段落は意図的に空白のままにする。
【０４３４】
２．２１．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド（シントンＩＱ）の合成
２．２１．１．  （Ｓ）−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート
（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（５０ｇ）のメタノール（４００ｍＬ）およびジクロロメタン（４００ｍＬ）中溶液に、（４−アミノフェニル）メタノール（２３．７３ｇ）およびエチル２−エトキシキノリン−１（２Ｈ）−カルボキシレート（７９ｇ）を加え、反応物を室温で終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンにより洗浄して、標題化合物を得た。
【０４３５】
２．２１．２．  （Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）プロパンアミド
実施例２．２１．１（１０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（４０ｍＬ）を加え、反応物を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をメタノールに溶解した。固体を濾別し、濾液を濃縮して、粗生成物を得た。
【０４３６】
２．２１．３．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
【０４３７】
実施例２．２１．２（５ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（１０．４８ｇ）および２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（１４．６４ｇ）を加え、反応物を終夜撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をジクロロメタンで洗浄し、固体を濾過して、粗生成物を得た。
【０４３８】
２．２１．４．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
実施例２．１０．２において実施例２．２１．３を実施例２．１０．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０４３９】
２．２１．５．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．３．７（０．１０２ｇ）、実施例２．２１．４（０．０８９ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１０４ｍＬ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中室温で共に撹拌した。終夜撹拌した後、ジエチルアミン（０．０６２ｍＬ）を加え、反応物を更に２時間撹拌した。反応物を水（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸でクエンチし、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。
【０４４０】
２．２１．６．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸（０．０２８ｇ）および２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（０．０２７ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４２ｍＬ）を加え、反応物を５分間撹拌した。混合物を実施例２．２１．５（０．０５０ｇ）に加え、混合物を１時間撹拌した。次いでジエチルアミン（０．０４９ｍＬ）を反応物に加え、更に１時間撹拌を続けた。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸でクエンチし、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８８％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１２１４．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０４４１】
２．２１．７．  Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．２１．６（０．０３０ｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（８．３４ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０２０ｍＬ）を加え、反応物を１時間撹拌した。反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.84  (s,  1H),  9.41  (s,  1H),  8.26  (d,  1H),  8.11-7.95  (m,  3H),  7.79  (d,  1H),  7.68  (d,  2H),  7.61  (d,  1H),  7.57-7.27  (m,  6H),  7.24  (d,  2H),  7.12  (t,  1H),  7.02-6.90  (m,  3H),  4.94  (d,  4H),  4.67  (td,  2H),  4.34-4.22  (m,  2H),  4.04-3.94  (m,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.82  (s,  2H),  3.42-3.27  (m,  4H),  3.11-2.96  (m,  5H),  2.84  (dd,  1H),  2.30-1.98  (m,  6H),  1.56-1.41  (m,  4H),  1.41-0.79  (m,  28H).    MS  (ESI)  m/e  1409.1  (M+H)+.
【０４４２】
２．２２．  ４−［（１Ｅ）−３−（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）プロパ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＢ）の合成
２．２２．１．  （Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチル（（３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アリル）オキシ）シラン
フラスコにｔｅｒｔ−ブチルジメチル（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）シラン（５ｇ）およびジクロロメタン（１４．７ｍＬ）を仕込み、窒素雰囲気下４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（３．９４ｇ）を滴下添加した。混合物を室温で１分間撹拌し、次いで窒素でスパージしたＣｐ２ＺｒＣｌＨ（クロリドビス（η５−シクロペンタジエニル）ヒドリドジルコニウム、シュワルツ試薬）（３７９ｍｇ）を含むフラスコにカヌーレにより移した。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を水（１５ｍＬ）で注意深くクエンチし、次いでジエチルエーテル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水（１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、ヘプタン中の０−８％酢酸エチルからの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３１６．０（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４４３】
２．２２．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ブロモ−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（５ｇ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解した。Ａｇ２Ｏ（２．９２ｇ）を溶液に加え、反応物を室温で５分間撹拌した。４−ブロモ−２−ニトロフェノール（２．７４ｇ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌した。銀塩残渣を珪藻土に通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中１０−７０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ５５０．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４４４】
２．２２．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（Ｅ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
【０４４５】
実施例２．２２．２（１ｇ）、炭酸ナトリウム（０．５９５ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０．０８６ｇ）および１，３，５，７−テトラメチル−６−フェニル−２，４，８−トリオキサ−６−ホスファアダマンタン（０．０５５ｇ）を、還流冷却器を装着した５０−ｍＬの３ッ口丸底フラスコ中で合わせ、システムを窒素で脱気した。別途、実施例２．２２．１（０．７２６ｇ）のテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中溶液を、窒素で３０分間脱気した。後者の溶液を、固体試薬を含むフラスコ中にカヌーレにより移し、続いて脱気した水（３ｍＬ）を注射器により加えた。反応物を６０℃に２時間加熱した。反応混合物を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）との間で分配した。合わせた有機相を脱水（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中０−３５％酢酸エチルからの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ６４３．１（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４４６】
２．２２．４．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
圧力均等添加漏斗を装着した５００−ｍＬの３ッ口フラスコを窒素でフラッシュし、亜鉛末（８．７７ｇ）を仕込んだ。脱気した実施例２．２２．３（８．３９ｇ）のテトラヒドロフラン（６７ｍＬ）中溶液をカヌーレにより加えた。得られた懸濁液を氷浴中で冷却し、反応物の内温が３５℃を超えない速度で、添加漏斗により６Ｎ  ＨＣｌ（２２．３ｍＬ）を滴下添加した。添加完了後、反応物を室温で２時間撹拌し、珪藻土のパッドに通して濾過し、水および酢酸エチルですすいだ。水層がもはや酸性でなくなるまで、濾液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で処理し、混合物を濾過して、得られた固体を除去した。濾液を分液漏斗に移し、層を分離した。水性層を酢酸エチル（３×７５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をジエチルエーテルで摩砕し、固体を濾取して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ４８２．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４４７】
２．２２．５．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート
３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（５．０ｇ）のジクロロメタン（５３．５ｍＬ）中溶液に、亜硫酸ジクロリド（０．７０３ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で１時間撹拌した。混合物を冷却し、濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
【０４４８】
２．２２．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−ヒドロキシプロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．４（６．７８ｇ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、溶液を氷浴中で０℃に冷却した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．６４ｇ）を加え、続いて実施例２．２２．５（４．８８ｇ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応物を１６時間撹拌し、氷浴を室温にした。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）を加え、層を分離した。水性層をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で更に抽出した。抽出物をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、５−９５％酢酸エチル／ヘプタンの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、出発物のアニリンと所望の生成物との分離出来ない混合物を得た。混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（４０ｍＬ）とジエチルエーテルおよび酢酸エチルの１：１混合物（４０ｍＬ）との間で分配し、次いで水性相を酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で更に抽出した。有機相を合わせ、水（２×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ７７４．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４４９】
２．２２．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（Ｅ）−３−（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）プロパ−１−エン−１−イル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．６（３．５７ｇ）をジクロロメタン（４５ｍＬ）に溶解し、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（２．８０ｇ）を加え、続いてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．８９６ｇ）を滴下添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。シリカゲル（２０ｇ）を反応溶液に加え、浴温を２５℃以下に維持しながら、混合物を減圧下で濃縮乾固した。シリカ残渣をカラムの頂点に加え、生成物を０−１００％酢酸エチル−ヘプタンからの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、部分的に精製された生成物を得、これはニトロフェノールを不純物として含んでいた。物質をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２５０ｍＬ）で摩砕し、得られたスラリー液を１時間静置した。生成物を濾取した。連続した３回のクロップを同様の方法で集めて、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ９３９．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４５０】
２．２２．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（（Ｅ）−３−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）アリル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７のトリフルオロ酢酸塩（７７ｍｇ）および実施例２．２２．７（８３ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０７４ｍＬ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、１６時間撹拌した。反応物を水および酢酸エチルの添加によりクエンチした。層を分離し、水溶液を更に酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに引き続くステップに使用した。
【０４５１】
２．２２．９．  ３−（１−（（３−（２−（（（（（Ｅ）−３−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）アリル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．８（１３７ｍｇ）のメタノール（３ｍＬ）中周囲温度溶液に、２Ｍ水酸化リチウム溶液（０．６６ｍＬ）を加えた。反応混合物を３５℃で２時間撹拌し、酢酸（０．１８ｍＬ）の添加によりクエンチした。反応物を濃縮乾固し、残渣をメタノールで希釈した。粗生成物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中２０−７５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１２２０．３（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４５２】
２．２２．１０．  ４−［（１Ｅ）−３−（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）プロパ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２２．９のトリフルオロ酢酸塩（４１．９ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエート（９．８４ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (bs,  2H),  9.03  (s,  1H),  8.25  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.97-7.85  (m,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.64-7.59  (m,  1H),  7.56-7.39  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.14-7.06  (m,  1H),  7.04  (d,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.60-6.52  (m,  1H),  6.22-6.12  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  4.90-4.75  (m,  1H),  4.63  (d,  2H),  4.24-4.05  (m,  1H),  4.08-3.62  (m,  8H),  3.50-3.24  (m,  10H),  3.04-2.97  (m,  2H),  2.92-2.82  (m,  3H),  2.11-2.06  (m,  3H),  2.03  (t,  J  =  7.4  Hz,  2H),  1.53-1.39  (m,  4H),  1.41-0.73  (m,  23H).    MS  (ESI)  m/e  1413.3  (M+Na)+.
【０４５３】
２．２３．  ４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＭ）の合成
２．２３．１．  ３−（１−（（３−（２−（２−（（（（（Ｅ）−３−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）アリル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．７（９４ｍｇ）および実施例１．４．１０（９０ｍｇ）の冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５４ｍＬ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、終夜撹拌した。反応物を水および酢酸エチルの添加によりクエンチした。層を分離し、水性層を更に酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製物をテトラヒドロフラン／メタノール／Ｈ２Ｏ（２：１：１、８ｍＬ）に溶解し、これに水酸化リチウム１水和物（４０ｍｇ）を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、トリフルオロ酢酸で酸性化し、ジメチルスルホキシド／メタノールに溶解した。溶液を水中０．１％トリフルオロ酢酸中の１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１２２８．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４５４】
２．２３．２．  ４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２３．１（２０ｍｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（５．５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５４ｍＬ）を加えた。反応物を終夜撹拌した。反応混合物をメタノール（２ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸で酸性化した。溶液を水中０．１％トリフルオロ酢酸中の１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  9.03  (s,  1H),  8.24  (s,  1H),  7.95-8.11  (m,  2H),  7.79  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.32-7.52  (m,  5H),  7.28  (s,  1H),  7.02-7.23  (m,  3H),  6.91-6.96  (m,  3H),  6.57  (d,  1H),  6.05-6.24  (m,  1H),  4.95  (s,  2H),  4.87  (d,  1H),  4.59  (d,  2H),  3.78-3.95  (m,  4H),  3.13  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.51-2.57  (m,  2H),  2.27-2.39  (m,  3H),  2.11  (s,  3H),  0.92-1.43  (m,  16H),  0.83  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1379.2  (M+H)+.
【０４５５】
２．２４．  ４−｛（１Ｅ）−３−［（｛２−［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エトキシ］エチル｝カルバモイル）オキシ］プロパ−１−エン−１−イル｝−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＬ）の合成
実施例２．２３．１（２０ｍｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（６．５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５４ｍＬ）を加えた。反応混合物を終夜撹拌した。反応混合物をメタノール（２ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸で酸性化した。混合物を水中０．１％トリフルオロ酢酸中の１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  9.03  (s,  1H),  8.24  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.87  (t,  1H),  7.78  (s,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.32-7.55  (m,  5H),  6.90-7.19  (m,  5H),  6.56  (d,  1H),  6.08-6.24  (m,  1H),  4.91-4.93  (m,  1H),  4.86  (s,  1H),  4.59  (d,  2H),  3.27-3.46  (m,  14H),  3.13  (q,  3H),  2.96-3.02  (m,  2H),  2.50-2.59  (m,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.00-2.05  (m,  3H),  0.94-1.54  (m,  20H),  0.83  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1421.2  (M+H)+.
【０４５６】
２．２５．  ４−［（１Ｅ）−１４−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−６−メチル−５−オキソ−４，９，１２−トリオキサ−６−アザテトラデカ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＲ）の合成
２．２５．１．  ３−（１−（（３−（（（Ｅ）−１４−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）−９−メチル−１０−オキソ−３，６，１１−トリオキサ−９−アザテトラデカ−１３−エン−１−イル）オキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．７（９０ｍｇ）および実施例１．２．１１（９２ｍｇ）の冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５０ｍＬ）を加えた。氷浴を除去し、反応物を終夜撹拌した。反応物を水および酢酸エチルの添加によりクエンチした。層を分離し、水溶液を更に酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに引き続くステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１６４８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４５７】
２．２５．２．  ３−（１−（（３−（（（Ｅ）−１４−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）−９−メチル−１０−オキソ−３，６，１１−トリオキサ−９−アザテトラデカ−１３−エン−１−イル）オキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２５．１（１５８ｍｇ）のメタノール（２．０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、２Ｍ水酸化リチウム水溶液（０．７８３ｍＬ）を加えた。反応物を４時間撹拌し、酢酸（０．１ｍＬ）の添加によりクエンチした。反応物を濃縮乾固し、残渣を水中０．１％トリフルオロ酢酸中の１０−８５％アセトニトリルで溶出するＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａ  Ｏｎｅシステムおよび逆相Ｃ１８カラム４０ｇを用いてクロマトグラフィーにかけた。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を固体として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１２８６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４５８】
２．２５．３．  ４−［（１Ｅ）−１４−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−６−メチル−５−オキソ−４，９，１２−トリオキサ−６−アザテトラデカ−１−エン−１−イル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２５．２（９．０３ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中周囲温度溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（４ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２０ｍＬ）を加え、反応物を終夜撹拌した。反応物をジメチルスルホキシドおよびメタノールで希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０から７５％アセトニトリルの濃度勾配で溶出するＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｓｏｌｅｒａクロマトグラフィーユニット（Ｃ１８カラム４０ｇ）上でのＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥により濃縮して、標題化合物を固体として得た。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.04  (d,  1H),  7.99  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  6.99  (s,  2H),  6.98-6.92  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  3.92-3.85  (m,  1H),  3.81  (s,  2H),  3.63-3.55  (m,  4H),  3.55-3.31  (m,  28H),  3.18-3.10  (m,  2H),  3.05-2.98  (m,  2H),  2.97  (s,  2H),  2.80  (s,  2H),  2.59-2.50  (m,  1H),  2.32  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.39-1.34  (m,  2H),  1.31-1.18  (m,  4H),  1.20-0.92  (m,  6H),  0.84  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1479.3  (M+H)+.
【０４５９】
２．２６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＤＺ）の合成
２．２６．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１５ｇ）および（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０ｇ）のアセトニトリル中溶液に、炭酸銀（１０ｇ）を加え、反応物を４０℃に加熱した。４時間撹拌した後、反応物を冷却し、濾過し、濃縮した。粗生成物をジクロロメタンに懸濁し、珪藻土に通して濾過し、濃縮した。残渣をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０４６０】
２．２６．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２６．１（１６．１２ｇ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）およびメタノール（２００ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１．４７６ｇ）を少しずつ加えた。反応物を２０分間撹拌し、次いで水：飽和重炭酸ナトリウム溶液の１：１混合物（４００ｍＬ）でクエンチした。得られた固体を濾別し、酢酸エチルですすいだ。相を分離し、水性層を酢酸エチルで４回抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４７３．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４６１】
２．２６．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
ジクロロメタン（１６８ｍＬ）中の実施例２．２６．２（７．６６ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２．７８ｇ）に、−５℃でイミダゾール（２．６３ｇ）を加え、反応混合物を終夜撹拌すると、反応物の内温は１２℃に加温した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで４回抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５９３．０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４６２】
２．２６．４．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
トルエン（８８ｍＬ）中の実施例２．２６．３（５．０３ｇ）およびトリフェニルホスフィン（４．６２ｇ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−アゾジカルボキシレート（４．０６ｇ）を加え、反応混合物を３０分間撹拌した。（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバメートを加え、反応物を更に１．５時間撹拌した。反応物をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲル上に直接ロードして、標題化合物を得た。
【０４６３】
２．２６．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２６．４（４．２９ｇ）を、酢酸：水：テトラヒドロフランの３：１：１溶液（１００ｍＬ）中で終夜撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０４６４】
２．２６．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２６．５（０．５９５ｇ）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．４９２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．２１２ｍＬ）を加えた。１．５時間後、反応物を高真空下で濃縮した。残渣をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９２２．９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４６５】
２．２６．７．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．１０６ｇ）および実施例２．２６．６（０．１３０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０４９ｍＬ）を加えた。６時間後、更にＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２５ｍＬ）を加え、反応物を終夜撹拌した。反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ）で、続いてブライン（１５ｍＬ）で４回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
【０４６６】
２．２６．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２６．７（０．２１５ｇ）のメタノール（２ｍＬ）中懸濁液を、２．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（１ｍＬ）で処理した。１時間撹拌した後、反応物を酢酸（０．１１９ｍＬ）の添加によりクエンチした。得られた懸濁液をジメチルスルホキシド（１ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。
【０４６７】
２．２６．９．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２６．８（０．０５０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０３７ｍＬ）を、続いて２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（０．０１７ｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物を水で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.82-7.77  (m,  2H),  7.62  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.33  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.66  (s,  1H),  6.60  (d,  1H),  5.06  (t,  1H),  5.00-4.93  (m,  4H),  4.18-4.04  (m,  2H),  3.95-3.85  (m,  2H),  3.85-3.77  (m,  2H),  3.71  (t,  2H),  3.41-3.30  (m,  4H),  3.30-3.23  (m,  4H),  3.19  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.85  (d,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.02  (t,  2H),  1.53-1.40  (m,  4H),  1.40-0.78  (m,  24H).    MS  (ESI)  m/e  1380.5  (M-H)-.
【０４６８】
２．２７．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＥＡ）の合成
実施例２．２６．８（０．０３１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２３ｍＬ）を、続いて２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（９ｍｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物を水で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.84  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  8.00  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.54-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.66  (s,  1H),  6.60  (d,  1H),  5.11-5.02  (m,  1H),  4.96  (s,  4H),  4.18-4.02  (m,  2H),  3.96-3.84  (m,  2H),  3.80  (s,  2H),  3.71  (t,  2H),  3.43-3.22  (m,  12H),  3.17  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.85  (d,  3H),  2.33  (t,  2H),  2.09  (s,  3H),  1.44-0.76  (m,  18H).    MS  (ESI)  m/e  1338.5  (M-H)-.    
【０４６９】
２．２８．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（｛［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル］オキシ｝カルボニル）（メチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＥＯ）の合成
２．２８．１．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−ブロモテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコを窒素でスパージし、これに（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，３，４，５−テトライルテトラアセテート（５ｇ）を仕込み、窒素雰囲気下ゴム製セプタムで密栓した。氷酢酸中の臭化水素溶液（３３重量％、１１．０６ｍＬ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（７５ｍＬ）で希釈し、氷冷水２５０ｍＬ中に注ぎ入れた。層を分離し、有機層を氷冷水（３×１００ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で更に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残った酢酸をトルエン（３×５０ｍＬ）からこれを共沸することにより除去した。溶媒を減圧下で濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４２９．８（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４７０】
２．２８．２．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２８．１（５．１３ｇ）をアセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解した。酸化銀（Ｉ）（２．８９ｇ）を加え、反応物を２０分間撹拌した。４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（２．０８５ｇ）を加え、反応混合物を室温で４時間撹拌し、次いでＭｉｌｌｉｐｏｒｅ０．２２μｍフィルターに通して真空濾過して、銀塩を除去した。溶媒を減圧下で濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５１４．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４７１】
２．２８．３．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
窒素でスパージした乾燥１Ｌの丸底フラスコに、実施例２．２８．２（５．０ｇ）の細粒粉を仕込み、窒素雰囲気下で維持した。テトラヒドロフラン（７０ｍＬ）を加え、溶液を２分間超音波処理して、懸濁液を得た。メタノール（１４０ｍＬ）を加え、懸濁液を更に３分間超音波処理した。懸濁液を氷浴上に置き、窒素雰囲気下２０分間撹拌して、平衡に達した（０℃）。水素化ホウ素ナトリウム（０．３８０ｇ）を２０分かけて少しずつ加え、冷却（０℃）した反応物を３０分間撹拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を反応混合物に加え、反応物を氷上で飽和塩化アンモニウム溶液３００ｍＬを、続いて水２００ｍＬを加えてクエンチした。反応混合物を酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出し、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５１６．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４７２】
２．２８．４．  （２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−６−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．３において実施例２．２８．３を実施例２．２２．２の代わりに用い、摩砕ステップを省略することにより、標題化合物を調製した。生成物を更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４６９．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４７３】
２．２８．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２２．５において実施例２．２８．４を実施例２．２２．３の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。反応物をジクロロメタンと水との間で分配することによりクエンチした。層を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を１Ｎ塩酸水溶液およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。生成物をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７６２．９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４７４】
２．２８．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２８．５（３．２ｇ）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１．９１４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中周囲温度溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．１０ｍＬ）を滴下添加した。反応物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮した。粗生成物をヘプタン中１０−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９２７．８（Ｍ＋Ｈ）、９５０．１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４７５】
２．２８．７．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（アセトキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．８において実施例２．２８．６を実施例２．２２．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１５４８．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４７６】
２．２８．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４，５−トリヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２２．８において実施例２．２８．７を実施例２．２２．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１１５８．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４７７】
２．２８．９．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［（｛［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル］オキシ｝カルボニル）（メチル）アミノ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸
実施例２．２２．９において実施例２．２８．８を実施例２．２２．８の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (bs,  1H),  9.13  (bs,  1H),  8.19  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.88  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.55-7.39  (m,  3H),  7.41-7.30  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.14  (d,  1H),  7.05-6.88  (m,  4H),  4.96  (bs,  4H),  3.57-3.48  (m,  1H),  3.49-3.09  (m,  11H),  3.08-2.57  (m,  7H),  2.33  (d,  1H),  2.14-1.97  (m,  6H),  1.55-0.90  (m,  20H),  0.86-0.79  (m,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1351.3  (M+H)+.    
【０４７８】
２．２９．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＦＢ）の合成
２．２９．１．  ４−（２−（２−ブロモエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ）、１−ブロモ−２−（２−ブロモエトキシ）エタン（３．４ｇ）および炭酸カリウム（１．０ｇ）のアセトニトリル（３０ｍＬ）中溶液を、７５℃に２日間加熱した。反応物を冷却し、酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５−３０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ２９０．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４７９】
２．２９．２．  ４−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ヒドロキシベンズアルデヒド
実施例２．２９．１（１．２６ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中溶液に、アジ化ナトリウム（０．４３ｇ）を加え、反応物を室温で終夜撹拌した。反応物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５−３０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ２５１．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４８０】
２．２９．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２９．２（０．８４ｇ）、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１．９９ｇ）および酸化銀（Ｉ）（１．１６ｇ）の溶液を、アセトニトリル（１５ｍＬ）中で共に撹拌した。終夜撹拌した後、反応物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈した。珪藻土を加え、反応物を濾過し、濃縮した。ヘプタン中５−７５％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。
【０４８１】
２．２９．４．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．９．３（０．６９５ｇ）のメタノール（５ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２ｍＬ）中溶液を０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（０．０２３ｇ）を加え、反応物を室温に加温した。合計１時間撹拌した後、反応物を酢酸エチル（７５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）の混合物中に注ぎ入れ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５−８５％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ５５１．８（Ｍ−Ｈ２Ｏ）−。
【０４８２】
２．２９．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中の実施例２．２９．４（０．４６５ｇ）に、５０ｍＬの圧力ボトル中で５％Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ）を加え、混合物を水素３０ｐｓｉ下１６時間振盪した。反応物を濾過し、濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ５４４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４８３】
２．２９．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２９．５（０．４４３ｇ）のジクロロメタン（８ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、次いでＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．２１４ｍＬ）および（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボノクロリデート（０．１９０ｇ）を加えた。１時間後、反応物を濃縮した。ヘプタン中５−９５％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＬＳＤ）ｍ／ｅ７４８．１５（Ｍ−ＯＨ）−。
【０４８４】
２．２９．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（５−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．２９．６（０．４４４ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．１５２ｍＬ）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．３５３ｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。５時間後、反応物を濃縮した。ヘプタン中５−９０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。
【０４８５】
２．２９．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．１１７ｇ）および実施例２．２９．７（０．１４３ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．１３４ｍＬ）を加え、反応物を終夜撹拌した。反応物を酢酸エチル（７５ｍＬ）で希釈し、次いで水（２０ｍＬ）で、続いてブライン（４×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに使用した。
【０４８６】
２．２９．９．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２９．８（０．２０５ｇ）のメタノール（２ｍＬ）中懸濁液を、水酸化リチウム水和物（０．０８３ｇ）の水（１ｍＬ）中溶液で処理した。１時間撹拌した後、反応物を酢酸（０．１１３ｍＬ）の添加によりクエンチし、ジメチルスルホキシドで希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。
【０４８７】
２．２９．１０．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２９．９（０．０８０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５４ｍＬ）を、続いて２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（０．０２５ｇ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物を水（０．５ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出する分取ＨＰＬＣ（Ｇｉｌｓｏｎシステム）により精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.86-7.81  (m,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.52-7.41  (m,  3H),  7.39-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.99  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.68  (d,  1H),  6.59  (d,  1H),  5.09-4.99  (m,  3H),  4.96  (s,  2H),  4.05  (s,  2H),  3.94  (d,  1H),  3.88  (t,  2H),  3.81  (d,  2H),  3.47-3.24  (m,  15H),  3.19  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.86  (d,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.03  (t,  2H),  1.51-1.41  (m,  4H),  1.41-0.78  (m,  18H),  MS  (ESI)  m/e  1382.2  (M+H)+.
【０４８８】
２．３０．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＫＸ）の合成
２．３０．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．３．７（０．０７１ｇ）および実施例２．２９．７（０．０７７ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０７２ｍＬ）を加え、反応物を３時間撹拌した。反応物を濃縮し、得られた油状物をテトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）およびメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム１水和物（０．０５２ｇ）の水（０．５ｍＬ）中溶液で処理した。１時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ｌｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−７５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１１７５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４８９】
２．３０．２．  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３０．１（０．０５５ｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（０．０１２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２２ｍＬ）を加え、反応物を室温で撹拌した。１時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび水の１：１溶液（２ｍＬ）で希釈し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.07  -  8.00  (m,  2H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.55  -  7.41  (m,  3H),  7.40  -  7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.20  (d,  1H),  7.11  (t,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.66  (s,  1H),  6.60  (dd,  1H),  5.04  (d,  1H),  5.00  (s,  2H),  4.96  (s,  2H),  4.10  -  4.03  (m,  2H),  3.95  (d,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.70  (t,  2H),  3.59  (t,  2H),  3.46  -  3.38  (m,  4H),  3.36  -  3.25  (m,  4H),  3.17  (q,  2H),  3.08  -  2.98  (m,  4H),  2.33  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.37  (s,  2H),  1.25  (q,  4H),  1.18  -  0.93  (m,  6H),  0.84  (s,  6H),  MS  (ESI)  m/e  1325.9  (M+H)+.
【０４９０】
２．３１．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（３−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝プロポキシ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＦＦ）の合成
２．３１．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−ホルミルフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−ヒドロキシプロピル）カルバメート（０．２４５ｇ）およびトリフェニルホスフィン（０．２１６ｇ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）中溶液に、０℃でジイソプロピルアゾジカルボキシレート（０．１６０ｍＬ）を滴下添加した。１５分間撹拌した後、実施例２．２６．１（０．２５０ｇ）を加え、氷浴を除去し、反応物を室温に加温した。２時間後、反応物を濃縮した。ヘプタン中５−７０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＡＰＣＩ）ｍ／ｅ５１２．０（Ｍ−ＦＭＯＣ）−。
【０４９１】
２．３１．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３１．１（０．２３３ｇ）のメタノール（３ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中懸濁液に、水素化ホウ素ナトリウム（６ｍｇ）を加えた。３０分後、反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）および水（２５ｍＬ）中に注ぎ入れ、続いて飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。ヘプタン中５−８０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＡＰＣＩ）ｍ／ｅ７１８．１（Ｍ−ＯＨ）−。
【０４９２】
２．３１．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３１．２（０．１４０ｇ）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．１１６ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０５０ｍＬ）を加えた。１．５時間後、反応物を高真空下で濃縮した。ヘプタン中１０−７０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を得た。
【０４９３】
２．３１．４．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロポキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（０．０６５ｇ）および実施例２．３１．３（０．０６７ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．７５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０６５ｍＬ）を加えた。６時間後、更にＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０２５ｍＬ）を加え、反応混合物を終夜撹拌した。反応物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）で、続いてブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
【０４９４】
２．３１．５．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（３−アミノプロポキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３１．４（０．０６４ｇ）をメタノール（０．７５ｍＬ）に溶解し、水酸化リチウム１水和物（０．０３１ｇ）で水（０．７５ｍＬ）中溶液として処理した。２時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸（０．０５７ｍＬ）でクエンチした。溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。
【０４９５】
２．３１．６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−（３−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝プロポキシ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３１．５（０．０２０ｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（５．８ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０１４ｍＬ）を加えた。２時間撹拌した後、反応物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）で希釈した。溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−７５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.83  (s,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.83  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.54-7.42  (m,  3H),  7.37  (d,  1H),  7.34  (d,  1H),  7.28  (s,  1H),  7.19  (d,  1H),  6.98  (s,  2H),  6.95  (d,  1H),  6.64  (d,  1H),  6.59  (d,  1H),  5.05  (t,  1H),  4.96  (d,  4H),  4.02-3.94  (m,  2H),  3.88  (t,  2H),  3.46-3.22  (m,  14H),  3.18  (q,  2H),  3.01  (t,  2H),  2.85  (d,  3H),  2.09  (s,  3H),  2.02  (t,  2H),  1.81  (p,  2H),  1.54-1.41  (m,  4H),  1.41-0.78  (m,  18H).    MS  (ESI)  m/e  1350.5  (M-H)-.
【０４９６】
２．３２．  １−Ｏ−（｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝カルバモイル）−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸（シントンＦＵ）の合成
２．３２．１．  ２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）フェノール
水素化ジイソブチルアルミニウム（ジクロロメタン中１Ｍ、１２０ｍＬ）を、−７８℃でジクロロメタン５０ｍＬ中のメチル４−アミノ−３−ヒドロキシベンゾエート（１０ｇ）に５分かけて加え、溶液を０℃に加温した。反応混合物を２時間撹拌した。更に水素化ジイソブチルアルミニウム６０ｍＬ（ジクロロメタン中１Ｍ）を加え、反応物を０℃で更に１時間撹拌した。メタノール（４０ｍＬ）を注意深く加えた。飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液（１００ｍＬ）を加え、混合物を終夜撹拌した。混合物を酢酸エチルで２回抽出し、合わせた抽出物を濃縮して、容量をおよそ１００ｍＬにし、混合物を濾過した。固体を集め、溶液を濃縮して極めて少量にし、濾過した。合わせた固体を乾燥して、標題化合物を得た。
【０４９７】
２．３２．２．  ２−（２−アジドエトキシ）エチル４−メチルベンゼンスルホネート
２−（２−アジドエトキシ）エタノール（４．８５ｇ）、トリエチルアミン（５．１６ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（０．２２６ｇ）のジクロロメタン（１２３ｍＬ）中周囲温度溶液に、４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（７．０５ｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、ジクロロメタンおよび飽和塩化アンモニウム水溶液の添加によりクエンチした。層を分離し、有機層をブラインで２回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに引き続く反応に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３０２．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０４９８】
２．３２．３．  （４−アミノ−３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）フェニル）メタノール
実施例２．３２．１（０．４８８ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１．６８ｍＬ）中周囲温度溶液に、水素化ナトリウム（０．１４０ｇ）を加えた。混合物を０．５時間撹拌し、実施例２．３２．２（１．０ｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）中の溶液として加えた。反応物を５０℃に終夜加熱した。反応混合物を水および酢酸エチルの添加によりクエンチした。層を分離し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を２５−１００％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ２５３．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０４９９】
２．３２．４．  ２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）アニリン
実施例２．３２．３（４４０ｍｇ）およびイミダゾール（１７８ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１０．６ｍＬ）中周囲温度溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（２８９ｍｇ）を加えた。反応混合物を１６時間撹拌し、酢酸エチル（３０ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）の添加によりクエンチした。層を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中０から５０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３６６．９（Ｍ＋Ｈ）。
【０５００】
２．３２．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３２．４（４１０ｍｇ）を、５０ｍＬの乾燥丸底フラスコ中高真空下で終夜乾燥した。実施例２．３２．４（４１０ｍｇ）およびトリエチルアミン（０．２３４ｍＬ）のトルエン（１８ｍＬ）中冷却（浴温０℃）溶液に、ホスゲン（０．７９８ｍＬ、ジクロロメタン中１Ｍ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、１時間撹拌した。反応物を冷却（０℃浴温）し、（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ヒドロキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（４１１ｍｇ）およびトリエチルアミン（０．３５ｍＬ）のトルエン（５ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温に加温し、５０℃に２時間加熱した。反応物を飽和重炭酸塩水溶液および酢酸エチルの添加によりクエンチした。層を分離し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中０−４０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７４３．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０５０１】
２．３２．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３２．５（７００ｍｇ）のメタノール（５ｍＬ）中溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（１８．３２ｍｇ）のメタノール（２ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。反応物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液およびジクロロメタンの添加によりクエンチした。層を分離し、水性層を更にジクロロメタンで抽出した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて標題化合物を得、これを更には精製せずに引き続くステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６２９．８（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０５０２】
２．３２．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（（（２−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）カルバモイル）オキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２２７ｍＬ）を、実施例２．３２．６（５３０ｍｇ）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（３９５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．３ｍＬ）中周囲温度溶液に滴下添加した。反応混合物を周囲温度で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン中０−５０％酢酸エチルの濃度勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ７９４．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０５０３】
２．３２．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７のトリフルオロ酢酸塩（１１１ｍｇ）および実施例２．３２．７（９８．５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．５ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６６ｍＬ）を加えた。反応物を室温にゆっくり加温し、１６時間撹拌した。反応物を水および酢酸エチルの添加によりクエンチした。層を分離し、水性層を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに引き続くステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１３９８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５０４】
２．３２．９．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（２−（２−アジドエトキシ）エトキシ）−４−（（（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３２．８（１５０ｍｇ）のメタノール（３．０ｍＬ）中冷却（０℃）溶液に、２Ｍ水酸化リチウム溶液（０．８０４ｍＬ）を加えた。反応物を１時間撹拌し、酢酸（０．１２３ｍＬ）を加えることによりクエンチし、その間０℃のままであった。粗製の反応溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−１００％アセトニトリルの濃度勾配で溶出するＣ１８カラムを有するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含むフラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１２５８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５０５】
２．３２．１０．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）カルボニル）アミノ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
２：１テトラヒドロフラン：水（０．３ｍＬ）に溶解した実施例２．３２．９（４５ｍｇ）の溶液に、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩の溶液（水０．２ｍＬ中５１．３ｍｇ）を加えた。反応物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で部分的に濃縮して、ほとんどのテトラヒドロフランを除去した。粗製の反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１２３２．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５０６】
２．３２．１１．  １−Ｏ−（｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニル｝カルバモイル）−β−Ｄ−グルコピラヌロン酸
実施例２．３２．１０のトリフルオロ酢酸塩（１５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｍＬ中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（４．１２ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１０ｍＬ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δppm  12.84  (s,  1H),8.58  (d,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (t,  2H),7.68  (s,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.40-7.54  (m,  3H),  7.36  (q,  2H),7.27  (s,  1H),  7.05  (s,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.93  (t,  2H),  5.41(d,  Hz,  1H),  5.38  (d,  1H),  5.27  (d,  1H),4.85-5.07  (m,  4H),  4.11  (t,  2H),  3.87  (t,  2H),  3.80(s,  2H),  3.71-3.77  (m,  3H),  3.46  (s,  3H),  3.22  (d,  2H),  3.00(t,  2H),  2.86  (d,  3H),  2.08  (s,  3H),  2.01  (t,  2H),  1.44  (dd,  4H),  1.34  (d,  2H),  0.89-1.29(m,  16H),  0.82  (d,  7H),  3.51-3.66  (m,  3H).    MS  (ESI)  m/e  1447.2  (M+Na)+.
【０５０７】
２．３３．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［（｛３−［（Ｎ−｛［２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−３−スルホ−Ｄ−アラニル｝アミノ）エトキシ］アセチル｝−β−アラニル）アミノ］−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル｝オキシ）カルボニル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸（シントンＧＨ）の合成
２．３３．１．  （Ｒ）−２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−７，１０，２６−トリオキソ−８−（スルホメチル）−３，１３，１６，１９，２２−ペンタオキサ−６，９，２５−トリアザオクタコサン−１−酸
本明細書に記載した通りに固相ペプチド合成を用いて、標題化合物を合成した。２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）酢酸（１５４３ｍｇ）をジオキサン１０ｍＬに溶解し、溶媒を減圧下で濃縮した。（手順を２回繰り返した。）。物質を終夜凍結乾燥した。ジオキサンで乾燥したアミノ酸をシーブ乾燥したジクロロメタン２０ｍＬに溶解し、これにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．０７ｍＬ）を加えた。溶液を２−クロロトリチル固体担持樹脂（８０００ｍｇ）に加え、これをシーブ乾燥したジクロロメタンで（２回）予め洗浄した。樹脂およびアミノ酸の混合物を周囲温度で４時間振盪し、水分を切り、１７：２：１ジクロロメタン：メタノール：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンで洗浄し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで３回洗浄した。次いでシーブ乾燥したジクロロメタンとメタノールとを交互に用いて混合物を更に３回洗浄した。担持済の樹脂を真空乾燥機中４０℃で乾燥した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中２０％ピペリジンで処理することにより既知量の樹脂を脱保護化することにより得られた溶液を、３０１ｎｍにて吸光度を測定する定量的Ｆｍｏｃ−担持試験により樹脂への担持量を決定した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中にて樹脂を２０％ピペリジンで２０分間処理し、続いてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを用いる洗浄ステップにより、全てのＦｍｏｃ脱保護化ステップを行った。アミノ酸（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸、引き続き１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−酸のカップリングを、４当量のアミノ酸を４当量の（（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）オキシ）トリ（ピロリジン−１−イル）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）および８当量のＮ，Ｎ−ジイドプロピルエチルアミンでＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中にて１分間活性化し、続いて樹脂と１時間インキュベートさせることにより行った。標題化合物を、ジクロロメタン中５％トリフルオロ酢酸で３０分間処理することにより樹脂から脱離させた。樹脂を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ６６９．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５０８】
２．３３．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［（｛３−［（Ｎ−｛［２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−３−スルホ−Ｄ−アラニル｝アミノ）エトキシ］アセチル｝−β−アラニル）アミノ］−４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）ベンジル｝オキシ）カルボニル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸
実施例２．３３．１（５．０９ｍｇ）を、２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（２．６３ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．００４ｍＬ）とＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｍＬ中で混合し、２分間撹拌した。実施例２．２８．８（８．８ｍｇ）を加え、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１８０６．５（Ｍ−Ｈ）−。
【０５０９】
２．３４．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＦＸ）の合成
２．３４．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（３−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）プロポキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−スルホプロパン酸（０．０１９ｇ）および２−（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（０．０１９ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（７．８２μｌ）を加えた。２分間撹拌した後、反応物を室温で実施例２．３１．５（０．０５７ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０３１ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に加え、３時間撹拌した。ジエチルアミン（０．０２３ｍＬ）を反応物に加え、更に２時間撹拌を続けた。反応物を水（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸（０．０３４ｍＬ）でクエンチし、溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１３１０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５１０】
２．３４．２．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３４．１（０．０２７７ｇ）および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（７．８２ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（０．０１８ｍＬ）を加え、反応物を室温で撹拌した。反応物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中１０−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる分取ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.81  (s,  1H),  8.02  (d,  1H),  7.89-7.81  (m,  2H),  7.78  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.53-7.40  (m,  3H),  7.39-7.31  (m,  2H),  7.29  (s,  1H),  7.16  (d,  1H),  6.98-6.92  (m,  3H),  6.63  (s,  1H),  6.56  (d,  1H),  5.08-4.99  (m,  1H),  4.95  (s,  4H),  4.28  (q,  2H),  3.90-3.85  (m,  4H),  3.48-3.06  (m,  12H),  3.00  (t,  2H),  2.88-2.64  (m,  8H),  2.08  (s,  3H),  2.04  (t,  2H),  1.80  (p,  2H),  1.51-1.39  (m,  4H),  1.39-0.75  (m,  18H).    MS  (ESI)  m/e  1501.4  (M-H)-.
【０５１１】
２．３５．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＨ）の合成
２．３５．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（４ｇ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中溶液に、酸化銀（Ｉ）（１０．０４ｇ）および４−ヒドロキシ−３−ニトロベンズアルデヒド（１．６８３ｇ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、濾過した。濾液を濃縮し、残渣をヘプタン中５−５０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ（Ｍ＋１８）＋。
【０５１２】
２．３５．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（ヒドロキシメチル）−２−ニトロフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．１（６ｇ）のクロロホルム（７５ｍＬ）およびイソプロパノール（１８．７５ｍＬ）の混合物中溶液に、シリカゲル０．８７ｇを加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、ＮａＢＨ４（０．４７０ｇ）を加え、得られた懸濁液を０℃で４５分間撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、珪藻土に通して濾過した。濾液を水およびブラインで洗浄し、濃縮して粗生成物を得、これを更には精製せずに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ（Ｍ＋ＮＨ４）＋
【０５１３】
２．３５．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−アミノ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．２（７ｇ）の酢酸エチル（８１ｍＬ）中撹拌溶液を、触媒として１０％Ｐｄ／Ｃ（１．５３５ｇ）を用い１気圧のＨ２下２０℃で１２時間水素化した。反応混合物を珪藻土に通して濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣を９５／５のジクロロ−ジクロロメタン／メタノールで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０５１４】
２．３５．４．  ３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸
３−アミノプロパン酸（４．９９ｇ）を、５００ｍＬのフラスコ中１０％Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１２０ｍＬ）に溶解し、氷浴で冷却した。得られた溶液に、１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）中の（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルカルボノクロリデート（１４．５ｇ）を徐々に加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、次いで水（８００ｍＬ）を加えた。水性相層を反応混合物から分離し、ジエチルエーテル（３×７５０ｍＬ）で洗浄した。水性層を２Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ値を２に酸性化し、酢酸エチル（３×７５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル：ヘキサン１：２の混合溶媒（３００ｍＬ）中で再結晶化して、標題化合物を得た。
【０５１５】
２．３５．５．  （９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（３−クロロ−３−オキソプロピル）カルバメート
実施例２．３５．４のジクロロメタン（１６０ｍＬ）中溶液に、亜硫酸ジクロリド（５０ｍＬ）を加えた。混合物を６０℃で１時間撹拌した。混合物を冷却し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０５１６】
２．３５．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．３（６ｇ）のジクロロメタン（４８０ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．６０ｍＬ）を加えた。実施例２．３５．５（５．３４ｇ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。濾過し、濃縮して残渣を得、これを移動相として石油エーテル中の０−１００％酢酸エチルを用いるラジアルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０５１７】
２．３５．７．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（２−（３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．３５．６（５．１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中混合物に、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（４．１４ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．７８４ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、減圧下で濃縮した。粗製物をジクロロメタンに溶解し、１ｍｍのラジアルＣｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎプレート上に直接吸引し、ヘキサン中５０−１００％酢酸エチルで溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５１８】
２．３５．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（３２５ｍｇ）および実施例２．３５．７（３８２ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９ｍＬ）中溶液に、０℃でＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（４９．１ｍｇ）を加えた。反応混合物を０℃で５時間撹拌し、酢酸（２２．８ｍｇ）を加えた。得られた混合物を酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残渣をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）およびメタノール（５ｍＬ）の混合物に溶解した。この溶液に０℃で１Ｍ水酸化リチウム水溶液（３．８ｍＬ）を加えた。得られた混合物を０℃で１時間撹拌し、酢酸で酸性化し、濃縮した。濃縮物を凍結乾燥して、粉体を得た。粉体をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却し、０℃でピペリジン（１ｍＬ）を加えた。混合物を０℃で１５分間撹拌し、酢酸１．５ｍＬを加えた。溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中３０−８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１１７２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５１９】
２．３５．９．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の実施例２．３５．８（２００ｍｇ）に、０℃で２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（１０５ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１２ｍＬ）を加えた。混合物を０℃で１５分間撹拌し、室温に加温し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中３０−８０％アセトニトリルで溶出する１００ｇのＣ１８カラムを用いるＧｉｌｓｏｎシステム上での逆相ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  2H)  9.07  (s,  1H)  8.18  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.87  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.36  (q,  2H)  7.28  (s,  1H)  7.03-7.09  (m,  1H)  6.96-7.03  (m,  3H)  6.94  (d,  1H)  4.95  (s,  4H)  4.82  (t,  1H)  3.88  (t,  3H)  3.80  (d,  2H)  3.01  (t,  2H)  2.86  (d,  3H)  2.54  (t,  2H)  2.08  (s,  3H)  2.03  (t,  2H)  1.40-1.53  (m,  4H)  1.34  (d,  2H)  0.90-1.28  (m,  12H)  0.82  (d,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１３６５．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５２０】
２．３６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［１９−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザノナデカン−１−オイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＩ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートを用い、実施例２．３５．９における手順を用いて標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.95  (s,  1H)  8.16  (s,  1H)  7.99  (d,  1H)  7.57-7.81  (m,  4H)  7.38-7.50  (m,  3H)  7.34  (q,  2H)  7.27  (s,  1H)  7.10  (d,  1H)  7.00  (d,  1H)  6.88-6.95  (m,  2H)  4.97  (d,  4H)  4.76  (d,  2H)  3.89  (t,  2H)  3.84  (d,  2H)  3.80  (s,  2H)  3.57-3.63  (m,  4H)  3.44-3.50  (m,  4H)  3.32-3.43  (m,  6H)  3.29  (t,  2H)  3.16  (q,  2H)  3.02  (t,  2H)  2.87  (s,  3H)  2.52-2.60  (m,  2H)  2.29-2.39  (m,  3H)  2.09  (s,  3H)  1.37  (s,  2H)  1.20-1.29  (m,  4H)  1.06-1.18  (m,  4H)  0.92-1.05  (m,  2H)  0.83  (s,  6H).ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１５６８．６（Ｍ−Ｈ）−。
【０５２１】
２．３７．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブタノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＫＱ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブタノエートを用い、実施例２．３５．９における手順を用いて標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.86  (s,  3H)  9.08  (s,  2H)  8.17  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.89  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.46-7.53  (m,  1H)  7.41-7.46  (m,  1H)  7.31-7.40  (m,  1H)  7.28  (s,  1H)  7.03-7.10  (m,  1H)  6.91-7.03  (m,  2H)  4.69-5.08  (m,  4H)  3.83-3.95  (m,  2H)  3.74-3.83  (m,  2H)  3.21-3.47  (m,  12H)  2.95-3.08  (m,  1H)  2.86  (d,  2H)  1.98-2.12  (m,  3H)  1.62-1.79  (m,  2H)  0.90-1.43  (m,  8H)  0.82  (d,  3H).    MS  (ESI)  m/e  1337.2  (M+H)+.
【０５２２】
２．３８．  ４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］−２−｛［Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−β−アラニル］アミノ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＫＰ）の合成
２．３８．１．  ３−（１−（（−（（１−（３−（３−アミノプロパンアミド）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）フェニル）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカン−１２−イル）オキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３５．８において実施例１．２．１１を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０５２３】
２．３８．２．  ４−［１２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）−４−メチル−３−オキソ−２，７，１０−トリオキサ−４−アザドデカ−１−イル］−２−｛［Ｎ−（｛２−［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ］エトキシ｝アセチル）−β−アラニル］アミノ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３５．９において実施例２．３８．１を実施例２．３５．８および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）アセテートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.92  (s,  1H),  8.12-8.15  (m,  1H),  7.97  (d,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.61  (d,  1H),  7.28-7.49  (m,  6H),  7.25  (s,  1H),  7.09  (d,  1H),  6.97-7.02  (m,  1H),  6.88-6.94  (m,  2H),  4.97  (d,  4H),  4.75  (d,  1H),  3.76-3.93  (m,  9H),  3.47-3.60  (m,  16H),  3.32-3.47  (m,  15H),  2.88  (s,  3H),  2.59  (t,  2H),  2.08  (s,  3H),  1.38  (s,  2H),  0.93-1.32  (m,  11H),  0.84  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1485.2  (M+H)+.
【０５２４】
２．３９．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［（Ｎ−｛６−［（エテニルスルホニル）アミノ］ヘキサノイル｝−β−アラニル）アミノ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＨＡ）の合成
２．３９．１．  メチル６−（ビニルスルホンアミド）ヘキサノエート
６−メトキシ−６−オキソヘキサン−１−アミニウムクロリド（０．３ｇ）およびトリエチルアミン（１．１５ｍＬ）のジクロロメタン中溶液に、０℃でエテンスルホニルクロリド（０．２０９ｇ）を滴下添加した。反応混合物を室温に加温し、１時間撹拌した。混合物をジクロロメタンで希釈し、ブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４７１．０（２Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５２５】
２．３９．２．  ６−（ビニルスルホンアミド）ヘキサン酸
実施例２．３９．１（８０ｍｇ）および水酸化リチウム１水和物（８１ｍｇ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）の混合物中溶液を、２時間撹拌し、次いで水（２０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）で洗浄した。水性層を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ４に酸性化し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０５２６】
２．３９．３．  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（ビニルスルホンアミド）ヘキサノエート
実施例２．３９．２（２５ｍｇ）、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−カルボジイミド塩酸塩（４３．３ｍｇ）および１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（１５．６ｍｇ）のジクロロメタン（８ｍＬ）中混合物を終夜撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで洗浄し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０５２７】
２．３９．４．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−［（Ｎ−｛６−［（エテニルスルホニル）アミノ］ヘキサノイル｝−β−アラニル）アミノ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに実施例２．３９．３を用い、実施例２．３５．９における手順を用いて標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  2H)  9.07  (s,  1H)  8.18  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.87  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.33-7.39  (m,  2H)  7.28  (s,  1H)  7.17  (t,  1H)  7.04-7.08  (m,  1H)  6.98-7.03  (m,  1H)  6.95  (d,  1H)  6.65  (dd,  1H)  5.91-6.04  (m,  2H)  4.96  (s,  4H)  4.82  (s,  1H)  3.22-3.48  (m,  11H)  3.01  (t,  2H)  2.86  (d,  3H)  2.73-2.80  (m,  2H)  2.51-2.57  (m,  2H)  1.99-2.12  (m,  5H)  1.29-1.52  (m,  6H)  0.90-1.29  (m,  12H)  0.82  (d,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1375.3  (M+H)+.
【０５２８】
２．４０．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（エテニルスルホニル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＨＢ）の合成
２．４０．１．  エチル６−（（２−ヒドロキシエチル）チオ）ヘキサノエート
エチル６−ブロモヘキサノエート（３ｇ）、２−メルカプトエタノール（０．９４７ｍＬ）およびＫ２ＣＯ３（１２ｇ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合物を終夜撹拌し、濾過した。濾液を濃縮した。残渣をジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、水およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０５２９】
２．４０．２．  ６−（（２−ヒドロキシエチル）チオ）ヘキサン酸
実施例２．３９．２の代わりに実施例２．４０．１を用い、実施例２．３９．２における手順を用いて標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１７５．１（Ｍ−Ｈ２Ｏ）−。
【０５３０】
２．４０．３．  ６−（（２−ヒドロキシエチル）スルホニル）ヘキサン酸
実施例２．４０．２（４ｇ）の水（４０ｍＬ）および１，４−ジオキサン（１６０ｍＬ）の混合物中撹拌溶液に、Ｏｘｏｎｅ（登録商標）（３８．４ｇ）を加えた。混合物を終夜撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残った水性層をジクロロメタンで抽出した。抽出物を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０５３１】
２．４０．４．  ６−（ビニルスルホニル）ヘキサン酸
実施例２．４０．３（１ｇ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中撹拌溶液に、アルゴン下０℃でトリエチルアミン（２．８ｍＬ）を加え、続いてメタンスルホニルクロリド（１．１ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、水およびブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。
【０５３２】
２．４０．５．  ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（ビニルスルホニル）ヘキサノエート
実施例２．４０．４（０．８８ｇ）のジクロロメタン（１０ｍｌ）中撹拌溶液に、１−ヒドロキシピロリジン−２，５−ジオン（０．５４ｇ）およびＮ，Ｎ’−メタンジイリデンジシクロヘキサンアミン（０．９２ｇ）を加えた。混合物を終夜撹拌し、濾過した。濾液を濃縮し、石油中１０−２５％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３０４．１（Ｍ＋１）＋。
【０５３３】
２．４０．６．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−２−（｛Ｎ−［６−（エテニルスルホニル）ヘキサノイル］−β−アラニル｝アミノ）フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに実施例２．４０．５を用い、実施例２．３５．９における手順を用いて標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.84  (s,  2H)  9.07  (s,  1H)  8.18  (s,  1H)  8.03  (d,  1H)  7.89  (t,  1H)  7.79  (d,  1H)  7.61  (d,  1H)  7.41-7.53  (m,  3H)  7.32-7.40  (m,  2H)  7.28  (s,  1H)  7.04-7.11  (m,  1H)  6.98-7.03  (m,  1H)  6.88-6.97  (m,  2H)  6.17-6.26  (m,  2H)  4.95  (s,  4H)  4.82  (s,  1H)  3.74-3.99  (m,  8H)  3.41-3.46  (m,  8H)  3.24-3.41  (m,  8H)  2.97-3.08  (m,  4H)  2.86  (d,  3H)  2.54  (t,  2H)  2.00-2.13  (m,  5H)  1.43-1.64  (m,  4H)  0.89-1.40  (m,  15H)  0.82  (d,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1360.2  (M+H)+.    
【０５３４】
２．４１．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＬＢ）の合成
２．４１．１．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−３，４，５−トリアセトキシ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２６．７において実施例１．６．１３を実施例１．１．１７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。
【０５３５】
２．４１．２．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．２６．８において実施例２．４１．１を実施例２．２６．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１１９３（Ｍ＋Ｈ）＋、１１９１（Ｍ−Ｈ）−。
【０５３６】
２．４１．３．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−５−フルオロ−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．２７において実施例２．４１．２を実施例２．２６．８の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.88  (bs,  1H),  8.03  (d,  1H),  8.02  (t,  1H),  7.78  (d,  1H),  7.73  (1H),  7.53  (d,  1H),  7.47  (td,  1H),  7.35  (td,  1H),  7.29  (s,  1H),  7.26  (t,  1H),  7.26  (t,  1H),  7.19  (d,  1H),  7.02  (d,  1H),  6.98  (s,  1H),  6.65  (d,  1H),  6.59  (dd,  1H),  5.07  (d,  1H),  5.01  (s,  1H),  4.92  (1H),  4.08  (m,  2H),  3.94  (t,  2H),  3.90  (d,  2H),  3.87  (s,  2H),  3.70  (m,  6H),  3.60  (m,  6H),  3.44  (t,  2H),  3.39  (t,  2H),  3.32  (t,  1H),  3.28  (dd,  1H),  3.17  (q,  2H),  3.03  (q,  2H),  2.92  (t,  2H),  2.33  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.37  (s,  2H),  1.25  (q,  4H),  1.11  (q,  4H),  1.00  (dd,  2H),  0.83  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1366  (M+Na)+,  1342  (M-H)-.
【０５３７】
２．４２．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＮＦ）の合成
【０５３８】
２．４２．１．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−ホルミル−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
２，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（１５ｇ）および（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−ブロモ−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート（１０ｇ）をアセトニトリルに溶解し、続いて炭酸銀（１０ｇ）を加え、反応物を４９℃に加熱した。４時間撹拌した後、反応物を冷却し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物をジクロロメタン中で懸濁し、珪藻土に通して濾過し、濃縮した。残渣を１−１００％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０５３９】
２．４２．２．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−ヒドロキシ−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．４２．１（１６．１２ｇ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）およびメタノール（２００ｍＬ）中溶液を０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（１．４７６ｇ）を少しずつ加えた。反応物を２０分間撹拌し、水：飽和重炭酸ナトリウム水溶液の１：１混合物（４００ｍＬ）でクエンチした。得られた固体を濾別し、酢酸エチルですすいだ。相を分離し、水性層を酢酸エチルで４回抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物を１−１００％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ４７３．９（Ｍ＋ＮＨ４）＋。
【０５４０】
２．４２．３．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−ヒドロキシフェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
ジクロロメタン（１６８ｍＬ）中の実施例２．４２．２（７．６６ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（２．７８ｇ）に、−５℃でイミダゾール（２．６３ｇ）を加え、反応物を終夜撹拌して反応物の内温を１２℃に加温した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液中に注ぎ入れ、ジクロロメタンで４回抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物を１−５０％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ５９３．０（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５４１】
２．４２．４．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
トルエン（８８ｍＬ）中の実施例２．４２．３（５．０３ｇ）およびトリフェニルホスフィン（４．６２ｇ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−アゾジカルボキシレート（４．０６ｇ）を加え、反応物を３０分間撹拌した。（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）カルバメートを加え、反応物を更に１．５時間撹拌した。反応物をシリカゲル上に直接ロードし、１−５０％酢酸エチル／ヘプタンで溶出して、標題化合物を得た。
【０５４２】
２．４２．５．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．４２．４（４．２９ｇ）を、酢酸：水：テトラヒドロフランの３：１：１溶液（１００ｍＬ）中で終夜撹拌した。反応物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗製の標題化合物を１−５０％酢酸エチル／ヘプタンで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。
【０５４３】
２．４２．６．  （２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−２−（３−（２−（２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）エトキシ）−４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェノキシ）−６−（メトキシカルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３，４，５−トリイルトリアセテート
実施例２．４２．５（０．５９５ｇ）およびビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（０．４９２ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．２１２ｍＬ）を加えた。１．５時間後、反応物を高真空下で濃縮した。反応物をシリカゲル上に直接ロードし、１−５０％酢酸エチル／ヘプタンを用いて溶出して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９２２．９（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０５４４】
２．４２．７．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．１．１７（９２ｍｇ）をジメチルホルムアミド（０．６ｍＬ）に溶解した。実施例２．４２．６（１２９ｍｇ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．１８ｍＬ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した。次いで反応物を濃縮し、残渣をテトラヒドロフラン（０．６ｍＬ）およびメタノール（０．６ｍＬ）に溶解した。ＬｉＯＨ水溶液（１．９４Ｎ、０．５５ｍＬ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。０．１％ＴＦＡ水中の１０−９０％アセトニトリルで溶出する逆相クロマトグラフィー（Ｃ１８カラム）により精製して、標題化合物をトリフルオロ酢酸塩として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１１８７．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０５４５】
２．４２．８．  ３−（１−（（３−（２−（（（（２−（２−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）エトキシ）エトキシ）−４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３４．１において実施例２．２６．８を実施例２．３１．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１３３８．４（Ｍ−Ｈ）−。
【０５４６】
２．４２．９．  ６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−２−（２−（２−（（Ｒ）−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）−３−スルホプロパンアミド）エトキシ）エトキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリン酸
実施例２．３４．２において実施例２．４２．２を実施例２．３４．１および２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートの代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.06  (d,  1H),  8.02  (d,  1H),  7.80  (m,  2H),  7.61  (d,1H),  7.52  (d,  1H),  7.45  (m,  2H),  7.36  (m,  2H),  7.30  (s,  1H),  7.18  (d,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.96  (m,2H),  6.66  (d,  1H),  6.58  (dd,  1H),  5.06  (br  m,  1H),  4.96  (s,  4H),  4.31  (m,  1H),  4.09  (m,  2H),  3.88  (m,  3H),  3.80  (m,  2H),  3.71  (m,  2H),  3.59  (t,  2H),  3.44  (m,  6H),  3.28  (m,  4H),  3.19  (m,  2H),  3.01  (m,  2H),  2.82  (br  m,  3H),  2.72  (m,  1H),  2.33  (m,  2H),  2.09  (s,  3H),  1.33  (br  m,  2H),  1.28-0.90  (m,  10H),  0.84,  0.81  (ともにs,  計6H).    MS  (ESI-)  m/e  1489.5  (M-1).
【０５４７】
２．４３．  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸（シントンＮＧ）の合成
実施例２．３４．２において実施例２．４２．１を実施例２．３４．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.02  (d,  1H),  7.87  (d,  1H),  7.80  (m,  2H),  7.61  (d,1H),  7.52  (d,  1H),  7.45  (m,  2H),  7.36  (m,  2H),  7.30  (s,  1H),  7.18  (d,  1H),  6.97  (s,  2H),  6.96  (m,2H),  6.66  (d,  1H),  6.58  (dd,  1H),  5.06  (br  m,  1H),  4.96  (s,  4H),  4.31  (m,  1H),  4.09  (m,  2H),  3.88  (m,  3H),  3.80  (m,  2H),  3.71  (m,  2H),  3.59  (t,  2H),  3.44  (m,  6H),  3.28  (m,  4H),  3.19  (m,  2H),  3.01  (m,  2H),  2.82  (br  m,  3H),  2.72  (m,  1H),  2.09  (s,  3H),  2.05  (t,  2H),  1.46  (br  m,  4H),  1.33  (br  m,  2H),  1.28-0.90  (m,  12H),  0.84,  0.81  (ともにs,  計6H).    MS  (ESI-)  m/e  1531.5  (M-1).
【０５４８】
２．４４．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２０−ジオキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−３，１９−ジアザドコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＡＳ）の合成
実施例１．１．１７（５６．９ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０６５ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（５０ｍｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、溶液を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中２０−８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.08-7.95  (m,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.55-7.40  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.01-6.89  (m,  3H),  4.95  (s,  2H),  3.89  (s,  2H),  3.81  (s,  2H),  3.55-3.25  (m,  23H),  3.14  (d,  2H),  2.97  (t,  4H),  2.76  (d,  2H),  2.57  (s,  1H),  2.31  (d,  1H),  2.09  (s,  3H),  1.35  (s,  2H),  1.30-0.93  (m,  12H),  0.85  (d,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1180.3  (M+Na)+.
【０５４９】
２．４５．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−９−メチル−１０，２６−ジオキソ−３，６，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−９，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＡＴ）の合成
実施例１．２．１１（５０ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５１ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエート（３９ｍｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中２０−８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.85  (s,  1H),  8.04  (d,  1H),  7.99  (t,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.60  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  6.99  (s,  2H),  6.98-6.92  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  3.92-3.85  (m,  1H),  3.81  (s,  2H),  3.63-3.55  (m,  4H),  3.55-3.31  (m,  28H),  3.18-3.10  (m,  2H),  3.05-2.98  (m,  2H),  2.97  (s,  2H),  2.80  (s,  2H),  2.59-2.50  (m,  1H),  2.32  (t,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.39-1.34  (m,  2H),  1.31-1.18  (m,  4H),  1.20-0.92  (m,  6H),  0.84  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1268.4  (M+Na)+.    
【０５５０】
２．４６．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛２−［２−（２−｛［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）エトキシ］エトキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＡＵ）の合成
実施例１．２．１１（５０ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０５１ｍＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中溶液に、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（１８ｍｇ）を加えた。反応物を終夜撹拌し、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中２０−８０％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。所望のフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.92-12.82  (m,  1H),  8.03  (d,  1H),  7.79  (d,  1H),  7.62  (d,  1H),  7.53-7.41  (m,  3H),  7.40-7.32  (m,  2H),  7.28  (s,  1H),  7.01-6.97  (m,  2H),  6.98-6.92  (m,  1H),  4.95  (bs,  2H),  4.04-3.84  (m,  3H),  3.86-3.75  (m,  3H),  3.49-3.32  (m,  10H),  3.01  (s,  2H),  2.95  (s,  2H),  2.79  (s,  2H),  2.31-2.19  (m,  2H),  2.10  (s,  3H),  1.52-1.40  (m,  4H),  1.36  (s,  2H),  1.31-0.94  (m,  14H),  0.84  (s,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1041.3  (M+H)+.
【０５５１】
２．４７．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸（シントンＢＫ）の合成
２．４７．１．  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−１−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−１−オキソブタン−２−スルホネート
窒素でスパージした１００ｍＬのフラスコ中、１−カルボキシ−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパン−１−スルホネートを、ジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液にＮ−ヒドロキシスクシンイミド（４４０ｍｇ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１０００ｍｇ）を加え、反応物を窒素雰囲気下室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下で濃縮し、溶媒中に含有された０．１容量／容量％酢酸を含むジクロロメタン中１−２％メタノールの濃度勾配で実行するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、標題化合物を約８０％活性化エステルおよび２０％酸の混合物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ３６０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５５２】
２．４７．２．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−（１−｛［３−（２−｛［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−２−スルホブタノイル］（メチル）アミノ｝エトキシ）−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル］メチル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピリジン−２−カルボン酸
実施例１．１．１７（５ｍｇ）および実施例２．４７．１（２０．５５ｍｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．２５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．００２ｍＬ）を加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。粗製の反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８  ２５×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  8.01-7.95  (m,  1H),  7.76  (d,  1H),  7.60  (dd,  1H),  7.49-7.37  (m,  3H),  7.37-7.29  (m,  2H),  7.28-7.22  (m,  1H),  6.92  (d,  1H),  6.85  (s,  1H),  4.96  (bs,  2H),  3.89  (t,  2H),  3.80  (s,  2H),  3.35  (bs,  5H),  3.08-2.96  (m,  3H),  2.97-2.74  (m,  2H),  2.21  (bs,  1H),  2.08  (s,  4H),  1.42-1.38  (m,  2H),  1.31-1.23  (m,  4H),  1.23-1.01  (m,  6H),  0.97  (d,  1H),  0.89-0.79  (m,  6H).    MS  (ESI)  m/e  1005.2  (M+H)+.
【０５５３】
２．４８．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［３４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，３２−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−３，３１−ジアザテトラトリアコンタ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＢＱ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートの代わりに２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８−オクタオキサ−４−アザヘントリアコンタン−３１−オエート（ＭＡＬ−ｄＰＥＧ８−ＮＨＳ−Ｅｓｔｅｒ）を用いることにより、
実施例２．４４において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１３３４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５５４】
２．４９．  ６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−３−｛１−［（３−｛［２８−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−メチル−４，２６−ジオキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−３，２５−ジアザオクタコサ−１−イル］オキシ｝−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル）メチル］−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝ピリジン−２−カルボン酸（シントンＢＲ）の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６−テトラオキサ−４−アザノナデカン−１９−オエートの代わりに２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２−ヘキサオキサ−４−アザペンタコサン−２５−オエート（ＭＡＬ−ｄＰＥＧ６−ＮＨＳ−エステル）を用いることにより、実施例２．４４において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１２４６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５５５】
２．５０  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸の合成
２．５０．１  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３０．１において実施例１．１．１７を実施例１．３．７の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１１８９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５５６】
２．５０．２  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（２−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−３−スルホプロパンアミド）エトキシ）エトキシ）−２−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）−６−カルボキシ−３，４，５−トリヒドロキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．３４．１において実施例２．５０．１を実施例２．３１．５の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１３３９．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５５７】
２．５０．３  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−｛２−［２−（｛Ｎ−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸
実施例２．３４．２において実施例２．５０．２を実施例２．３４．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.83  (s,  2H);  8.01  (dd,  1H),  7.86  (d,  1H),  7.80  -  7.71  (m,  2H),  7.60  (dd,  1H),  7.52  -  7.26  (m,  7H),  7.16  (d,  1H),  6.94  (d,  3H),  6.69  (d,  1H),  6.61  -  6.53  (m,  1H),  5.09  -  4.91  (m,  5H),  3.46  -  3.08  (m,  14H),  2.99  (t,  2H),  2.88  -  2.63  (m,  5H),  2.13  -  1.94  (m,  5H),  1.52  -  0.73  (m,  27H).    MS  (ESI)  m/e  1531.4  (M-H)-.
【０５５８】
２．５１  Ｎ２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｎ６−（３７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−イル）−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミドの合成
２．５１．１  （Ｓ）−６−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸
（Ｓ）−６−アミノ−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（８．５ｇ）の５％ＮａＨＣＯ３水溶液（３００ｍＬ）および１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）の混合物中冷却（氷浴）溶液に、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチルピロリジン−１−イルカルボネート（１１．７ｇ）の１，４−ジオキサン（４０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応混合物を室温に加温し、２４時間撹拌した。更に３つのバイアルを上記した通りに準備した。反応が完了した後、４つの反応混合物を合わせ、有機溶媒を真空下で除去した。水性層を塩酸水溶液（１Ｎ）でｐＨ３に酸性化し、次いで酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、真空下で濃縮して粗製の化合物を得、これをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから再結晶化して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  クロロホルム-d)  δ  11.05  (br.  s.,  1H),  7.76  (d,  2H),  7.59  (d,  2H),  7.45  -  7.27  (m,  4H),  6.52  -  6.17  (m,  1H),  5.16  -  4.87  (m,  1H),  4.54  -  4.17  (m,  4H),  3.26  -  2.98  (m,  2H),  1.76  -  1.64  (m,  1H),  1.62  -  1.31  (m,  14H).
【０５５９】
２．５１．２  ｔｅｒｔ−ブチル１７−ヒドロキシ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−オエート
３，６，９，１２−テトラオキサテトラデカン−１，１４−ジオール（４０ｇ）のトルエン（８００ｍＬ）中溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２０．７ｇ）を少しずつ加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモアセテート（３６ｇ）を混合物に滴下添加した。反応物を室温で１６時間撹拌した。更に２つのバイアルを上記した通りに準備した。反応が完了した後、３つの反応混合物を合わせた。水（５００ｍＬ）を合わせた混合物に加え、容量を濃縮して、１リットルにした。混合物をジクロロメタンで抽出し、１Ｎカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド水溶液（１Ｌ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン：メタノール５０：１で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  クロロホルム-d)  δ  4.01  (s,  2H),  3.75  -  3.58  (m,  21H),  1.46  (s,  9H).
【０５６０】
２．５１．３  ｔｅｒｔ−ブチル１７−（トシルオキシ）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン−１−オエート
実施例２．５１．２（３０ｇ）のジクロロメタン（５００ｍＬ）中溶液に、窒素雰囲気下０℃で４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（１９．５ｇ）およびトリエチルアミン（１０．３ｇ）のジクロロメタン（５００ｍＬ）中溶液を滴下添加した。混合物を室温で１８時間撹拌し、水（１００ｍＬ）中に注ぎ入れた。溶液をジクロロメタン（３×１５０ｍＬ）で抽出し、有機層を塩酸（６Ｎ、１５ｍＬ）、次いでＮａＨＣＯ３（５％水溶液、１５ｍＬ）、続いて水（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して残渣を得、これを石油エーテル：酢酸エチル１０：１からジクロロメタン：メタノール５：１で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  クロロホルム-d)  δ  7.79  (d,  2H),  7.34  (d,  2H),  4.18  -  4.13  (m,  2H),  4.01  (s,  2H),  3.72  -  3.56  (m,  18H),  2.44  (s,  3H),  1.47  (s,  9H).
【０５６１】
２．５１．４  ２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−酸
実施例２．５１．３（１６ｇ）のテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中溶液に、０℃で水素化ナトリウム（１．６ｇ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した。２，５，８，１１，１４，１７−ヘキサオキサノナデカン−１９−オール（３２．８ｇ）のテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中溶液を、室温で反応混合物に滴下添加した。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌し、水（２０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で更に３時間撹拌して、ｔｅｒｔ−ブチルエステル加水分解を完了させた。最後の反応混合物を減圧下で濃縮して、有機溶媒を除去した。水性残渣をジクロロメタン（２×１５０ｍＬ）で抽出した。水性層をｐＨ３に酸性化し、次いで酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。最後に、水性層を濃縮して粗生成物を得、これを石油エーテル：酢酸エチル１：１からジクロロメタン：メタノール５：１の濃度勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  クロロホルム-d)  δ  4.19  (s,  2H),  3.80  -  3.75  (m,  2H),  3.73  -  3.62  (m,  40H),  3.57  (dd,  2H),  3.40  (s,  3H)
【０５６２】
２．５１．５  （４３Ｓ，４６Ｓ）−４３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４６−メチル−３７，４４−ジオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３８，４５−ジアザヘプタテトラコンタン−４７−酸
標準のＦｍｏｃ固相ペプチド合成手順および２−クロロトリチル樹脂を用いて、実施例２．５１．５を合成した。具体的には、シーブ乾燥した無水ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の２−クロロトリチル樹脂（１２ｇ）、（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（１０ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４４．９ｍＬ）を１４℃で２４時間振盪した。混合物を濾過し、ケーキをジクロロメタン（３×５００ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２×２５０ｍＬ）およびメタノール（２×２５０ｍＬ）（各ステップ５分）で洗浄した。上記樹脂に２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加えて、Ｆｍｏｃ基を除去した。混合物に窒素ガスを１５分間吹き込み、濾過した。樹脂を２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）で更に５回（各洗浄ステップ５分）洗浄し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５×１００ｍＬ）で洗浄して、脱保護化したＬ−Ａｌａ担持樹脂を得た。
【０５６３】
実施例２．５１．１（９．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．５ｇ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスフェート（９．３ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．４ｍＬ）を加えた。混合物を２０℃で３０分間撹拌した。上記混合物をＬ−Ａｌａ担持樹脂に加え、窒素ガスを室温で９０分間吹き込むことにより混合した。混合物を濾過し、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（各ステップ５分）で洗浄した。上記樹脂に約２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加えて、Ｆｍｏｃ基を除去した。混合物に窒素ガスを１５分間吹き込み、濾過した。樹脂を２０％ピペリジン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ×５）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ×５）（各洗浄ステップ５分）で洗浄した。
【０５６４】
実施例２．５１．４（１１．０ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中溶液に、ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．５ｇ）、２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスフェート（９．３ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．４ｍＬ）を加え、混合物を樹脂に加え、窒素ガスを室温で３時間吹き込むことにより混合した。混合物を濾過し、残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５×１００ｍＬ）、ジクロロメタン（８×１００ｍＬ）（各ステップ５分）で洗浄した。
【０５６５】
最終の樹脂に１％トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、窒素ガスを５分間吹き込むことにより混合した。混合物を濾過し、濾液を集めた。開裂操作を４回繰り返した。合わせた濾液をＮａＨＣＯ３でｐＨ７にし、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400MHz,  メタノール-d4)  δ  4.44  -  4.33  (m,  1H),  4.08  -  4.00  (m,  1H),  3.98  (s,  2H),  3.77  -  3.57  (m,  42H),  3.57  -  3.51  (m,  2H),  3.36  (s,  3H),  3.25  (t,  2H),  1.77  (br.  s.,  1H),  1.70  -  1.51  (m,  4H),  1.44  (s,  9H),  1.42  -  1.39  (m,  3H).
【０５６６】
２．５１．６  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例１．３．７のトリフルオロ酢酸塩（０．１０２ｇ）、実施例２．２１．４（０．０８９ｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１０４ｍＬ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中室温で１６時間撹拌した。ジエチルアミン（０．０６２ｍＬ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物を水（１ｍＬ）で希釈し、トリフルオロ酢酸（０．０５０ｍＬ）でクエンチし、０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＬＣ−ＭＳ）ｍ／ｅ１０６６．５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５６７】
２．５１．７  ６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）−３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（４３Ｓ，４６Ｓ，４９Ｓ，５２Ｓ）−４３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−４９−イソプロピル−４６，５２−ジメチル−３７，４４，４７，５０−テトラオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３８，４５，４８，５１−テトラアザトリペンタコンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ピコリン酸
実施例２．５１．５（１６．６８ｍｇ）を、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（７．２５ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１５ｍＬ）とＮ−メチルピロリドン（１ｍＬ）中で１０分間混合し、実施例２．５１．６（２５ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０１５ｍＬ）のＮ−メチルピロリジノン（１．５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９６１．３３（２Ｍ＋Ｈ）２＋。
【０５６８】
２．５１．８  ３−（１−（（３−（２−（（（（４−（（４３Ｓ，４６Ｓ，４９Ｓ，５２Ｓ）−４３−アミノ−４９−イソプロピル−４６，５２−ジメチル−３７，４４，４７，５０−テトラオキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサ−３８，４５，４８，５１−テトラアザトリペンタコンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）−５，７−ジメチルアダマンタン−１−イル）メチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（８−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル）ピコリン酸
実施例２．５１．７（２５ｍｇ）をトリフルオロ酢酸１ｍＬで５分間処理した。窒素を穏やかに流すことにより溶媒を除去した。残渣を１：１アセトニトリル：水から凍結乾燥して標題化合物を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。ＭＳ（ＬＣ−ＭＳ）ｍ／ｅ１８２２．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５６９】
２．５１．９  Ｎ２−［６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノイル］−Ｎ６−（３７−オキソ−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５−ドデカオキサヘプタトリアコンタン−３７−イル）−Ｌ−リシル−Ｌ−アラニル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］カルバモイル｝オキシ）メチル］フェニル｝−Ｌ−アラニンアミド
実施例２．５１．８（２３ｍｇ）、Ｎ−スクシンイミジル６−マレイミドヘキサノエート（４．４０ｍｇ）およびヒドロキシベンゾトリアゾール（０．３２１ｍｇ）のＮ−メチルピロリドン（１．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．２８μＬ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を０．１容量／容量％トリフルオロ酢酸を含有する水中５−８５％アセトニトリルで溶出するＧｉｌｓｏｎシステムおよびＣ１８カラムを用いる逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物フラクションを凍結乾燥して、標題化合物を得た。1H  NMR  (400  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  7.76  (dq,  3H),  7.64  -  7.51  (m,  5H),  7.45  (dd,  4H),  7.35  (td,  Hz,  3H),  4.97  (d,  5H),  3.95  -  3.79  (m,  8H),  3.57  (d,  46H),  3.50  -  3.30  (m,  14H),  1.58  -  0.82  (m,  59H).    MS  (LC-MS)  m/e  1007.8  (2M+H)2+.
【０５７０】
２．５２  ２−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−５−［２−（２−｛［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸の合成
実施例２．３０．２において実施例２．５０．１を実施例２．３０．１の代わりに用いることにより、標題化合物を調製した。1H  NMR  (500  MHz,  ジメチルスルホキシド-d6)  δ  ppm  12.87  (s,  2H);  8.06  -  7.98  (m,  1H),  7.78  (d,  1H),  7.61  (dd,  1H),  7.52  -  7.41  (m,  2H),  7.39  -  7.26  (m,  2H),  7.18  (d,  1H),  7.01  -  6.91  (m,  2H),  6.68  (d,  1H),  6.59  (d,  1H),  5.08  -  4.98  (m,  2H),  4.95  (s,  1H),  3.59  (t,  1H),  3.46  -  3.36  (m,  3H),  3.34  -  3.22  (m,  2H),  3.16  (q,  1H),  3.01  (t,  1H),  2.85  (d,  2H),  2.32  (t,  1H),  2.09  (s,  2H),  1.44  -  0.71  (m,  10H).    MS  (ESI)  m/e  1338.4  (M-H)-.
【０５７１】
２．５３  ４−［（｛［２−（｛３−［（４−｛６−［８−（１，３−ベンゾチアゾール−２−イルカルバモイル）−３，４−ジヒドロイソキノリン−２（１Ｈ）−イル］−２−カルボキシピリジン−３−イル｝−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）メチル］−５，７−ジメチルトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカ−１−イル｝オキシ）エチル］（メチル）カルバモイル｝オキシ）メチル］−３−［３−（｛Ｎ−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノイル］−３−スルホ−Ｌ−アラニル｝アミノ）プロポキシ］フェニルβ−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸の合成
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエートを２，５−ジオキソピロリジン−１−イル６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエートおよびＮ−メチル−２−ピロリドンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの代わりに用いることにより、実施例２．３４．２において記載した通りに標題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ１４５８．０（Ｍ−Ｈ）−。
【０５７２】
［実施例３］
例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣの合成
例示的なＡＤＣは、以下に記載されている４つの例示的な方法の１つを使用して合成した。表１は、例示的なＡＤＣのそれぞれを合成するためにどの方法を使用したかを関係づけたものである。
【０５７３】
方法Ａ．３７℃に予め加熱した抗体（１０ｍｇ／ｍＬ、１ｍＬ）の溶液にＴＣＥＰ（１０ｍＭ、０．０１７ｍＬ）の溶液を加えた。この反応混合物を３７℃において１時間、維持した。リンカー−ウォーヘッドペイロード（ｗａｒｈｅａｄ  ｐａｙｌｏａｄ）の溶液（３．３ｍＭ、ＤＭＳＯ中の０．１６０ｍＬ）に還元した抗体の溶液を加え、３０分間、穏やかに混合した。脱塩カラム（使用前にＤＰＢＳにより３回、洗浄したＰＤ１０）、次いでＤＰＢＳ（１．６ｍＬ）に、この反応溶液をロードし、追加のＤＰＢＳ（３ｍＬ）を用いて溶出した。精製されたＡＤＣ溶液を０．２ミクロンの低タンパク質結合１３ｍｍシリンジフィルターによりろ過し、４℃において保管した。
【０５７４】
方法Ｂ．３７℃に予め加熱した抗体（１０ｍｇ／ｍＬ、１ｍＬ）の溶液にＴＣＥＰ（１０ｍＭ、０．０１７ｍＬ）の溶液を加えた。この反応混合物を３７℃において１時間、維持した。ホウ酸緩衝液（０．０５ｍＬ、０．５Ｍ、ｐＨ８）を添加することにより、還元した抗体の溶液をｐＨ＝８に調節し、リンカー−ウォーヘッドペイロードの溶液（３．３ｍＭ、ＤＭＳＯ中の０．１６０ｍＬ）に加え、４時間、穏やかに混合した。この反応溶液を脱塩カラム（使用前にＤＰＢＳにより３回、洗浄したＰＤ１０）にロードし、次いでＤＰＢＳ（１．６ｍＬ）をロードし、追加のＤＰＢＳ（３ｍＬ）を用いて溶出した。精製したＡＤＣ溶液を０．２ミクロンの低タンパク質結合１３ｍｍシリンジフィルターによりろ過し、４℃において保管した。
【０５７５】
方法Ｃ．拡張デッキ上に、Ｉ２３５／９６チップモジュラーディスペンステクノロジー（ＭＤＴ）、グリッパーアーム（部品７４００３５８）を含有する使い捨てヘッド（部品７０２４３５４０）および８−チップＶａｒｉｓｐａｎピペッティングアーム（部品７００２３５７）を備えた、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｊａｎｕｓ（部品ＡＪＬ８Ｍ０１）ロボット型液体取り扱いシステムを使用して、コンジュゲートを行った。このＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｊａｎｕｓシステムは、ＷｉｎＰＲＥＰバージョン４．８．３．３１５ソフトウェアを使用して制御した。
【０５７６】
Ｐａｌｌフィルタープレート５０５２は、ＭＤＴを使用して１００μＬ  １×ＤＰＢＳにより予め湿らせた。真空を１０秒間、このフィルタープレートに適用し、この後に、５秒間、排気し、フィルタープレートからＤＰＢＳを除去した。ＤＰＢＳ中のプロテインＡ樹脂（ＧＥ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅ）の５０％スラリーを、磁気ボールを備えた８ウェルレザーバーに注ぎ入れ、このレザーバープレートの下にある移動式磁石を通過させることによって樹脂を混合した。導電性チップ１ｍＬを備えた８チップＶａｒｉｓｐａｎアームを使用して、樹脂を吸引（２５０μＬ）し、９６ウェルフィルタープレートに移した。真空を２サイクル適用して、緩衝液の大部分を除去した。ＭＤＴを使用して、１５０μＬの１×ＰＢＳを吸引し、樹脂を保持している９６ウェルフィルタープレートに分注した。真空を適用して、樹脂からの緩衝液を除去した。洗浄／真空サイクルを３回、繰り返した。２ｍＬの９６ウェルコレクションプレートをＪａｎｕｓデッキに装着し、後ほど使用するために、ＭＤＴにより、５×ＤＰＢＳを４５０μＬ、上記のコレクションプレートに移した。ＤＰＢＳ（２００μＬ）中の溶液としての還元抗体（２ｍｇ）を、条件Ａに関して上記の通り、調製し、９６ウェルプレートに予めロードした。樹脂を含有するフィルタープレートウェルに還元抗体の溶液を移し、この混合物を、ＭＤＴを用いて、１サイクルあたり４５秒間、ウェル内の１００μＬの量を繰り返し吸引／分注することによって混合した。吸引／分注サイクルを５分間の過程にわたり、合計で５回、繰り返した。真空を２サイクルの間、フィルタープレートに適用し、これにより、過剰量の抗体を除去した。ＭＤＴチップを５サイクル、水により洗浄した（２００μＬ、合計量１ｍＬ）。ＭＤＴを吸引し、樹脂に結合されている抗体を含有するフィルタープレートウェルにＤＰＢＳ１５０μＬを分注し、真空を２サイクル、適用した。洗浄および真空という順序をさらに２回、繰り返した。最後の真空サイクルの後、１×ＤＰＢＳの１００μＬを樹脂結合抗体を含有するウェルに分注した。次に、ＭＤＴにより、９６ウェルフォーマット中にプレート培養されているシントンの３．３ｍＭジメチルスルホキシド溶液３０μＬの各々を採集し、この溶液を、ＤＰＢＳ中の樹脂結合抗体を含有するフィルタープレートに分注した。コンジュゲート混合物を含有するウェルを、ＭＤＴを用いて、１サイクルあたり４５秒間、ウェル内の１００μＬの量を繰り返し吸引／分注することによって混合した。吸引／分注という順序を５分間の過程にわたり、合計で５回、繰り返した。真空を２サイクル適用して、過剰量のシントンを除去して廃棄した。ＭＤＴチップを５サイクル、水により洗浄した（２００μＬ、合計量１ｍＬ）。ＭＤＴによりＤＰＢＳ（１５０μＬ）を吸引して、コンジュゲート混合物に分注し、真空を２サイクル、適用した。洗浄および真空という順序をさらに２回、繰り返した。次に、ＭＤＴのグリッパーをフィルタープレートに移動し、保持ステーションに巻き付けた。ＭＤＴにより、真空マニホールド内部に、１０×ＤＰＢＳの４５０μＬを含有する２ｍＬコレクションプレートを置いた。ＭＤＴにより、フィルタープレートおよび巻き付け���を配置することによって、真空マニホールドを再度、組み立てた。ＭＤＴチップを５サイクル、水により洗浄した（２００μＬ、合計量１ｍＬ）。ＭＤＴにより吸引して、ＩｇＧ  Ｅｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ３．７５（Ｐｉｅｒｃｅ）１００μＬをコンジュゲート混合物に分注した。１分後、真空を２サイクル、適用し、この溶離液を、４５０μＬの５×ＤＰＢＳを含有する受け用プレート中に捕捉した。吸引／分注という順序を３回、さらに繰り返し、ＤＰＢＳ中、ｐＨ７．４において、１．５−２．５ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度を有するＡＤＣ試料がもたらされた。
【０５７７】
方法Ｄ．拡張デッキ上に、Ｉ２３５／９６チップモジュラーディスペンステクノロジー（ＭＤＴ）、グリッパーアーム（部品７４００３５８）を含有する使い捨てヘッド（部品７０２４３５４０）および８−チップＶａｒｉｓｐａｎピペッティングアーム（部品７００２３５７）を備えた、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｊａｎｕｓ（部品ＡＪＬ８Ｍ０１）ロボット型液体取り扱いシステムを使用して、コンジュゲートを行った。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｊａｎｕｓシステムは、ＷｉｎＰＲＥＰバージョン４．８．３．３１５ソフトウェアを使用して制御した。
【０５７８】
Ｐａｌｌフィルタープレート５０５２は、ＭＤＴを使用して１００μＬ  １×ＤＰＢＳにより予め湿らせた。真空を１０秒間、このフィルタープレートに適用し、この後に、５秒間、排気し、フィルタープレートからＤＰＢＳを除去した。ＤＰＢＳ中のプロテインＡ樹脂（ＧＥ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  Ｓｕｒｅ）の５０％スラリーを、磁気ボールを備えた８ウェルレザーバーに注ぎ入れ、このレザーバープレートの下にある移動式磁石を通過させることによって樹脂を混合した。導電性チップ１ｍＬを備えた８チップＶａｒｉｓｐａｎアームを使用して、樹脂を吸引（２５０μＬ）し、９６ウェルフィルタープレートに移した。真空をフィルタープレートに２サイクル適用して、緩衝液の大部分を除去した。ＭＤＴにより吸引して、樹脂を含有するフィルタープレートウェルにＤＰＢＳ１５０μＬを分注した。洗浄および真空という順序をさらに２回、繰り返した。２ｍＬの９６ウェルコレクションプレートをＪａｎｕｓデッキに装着し、後ほど使用するために、ＭＤＴにより、５×ＤＰＢＳを４５０μＬ、上記のコレクションプレートに移した。ＤＰＢＳ（２００μＬ）中の溶液としての還元抗体（２ｍｇ）を、条件Ａに関して上記の通り、調製し、９６ウェルプレートに分注した。次に、ＭＤＴにより、９６ウェルフォーマット中にプレート培養されているシントンの３．３ｍＭジメチルスルホキシド溶液３０μＬをそれぞれ採集し、この溶液を、ＤＰＢＳ中の還元抗体をロードしたプレートに分注した。ＭＤＴを用いて、ウェル内において１００μＬの量の吸引／分注を２回、繰り返すことにより、この混合物を混合した。５分後、コンジュゲートした反応混合物（２３０μＬ）を、樹脂を含有する９６ウェルフィルタープレートに移した。コンジュゲート混合物および樹脂を含有するウェルを、ＭＤＴを用いて、１サイクルあたり４５秒間、ウェル内の１００μＬの量を繰り返し吸引／分注することによって混合した。吸引／分注という順序を５分間の過程にわたり、合計で５回、繰り返した。真空を２サイクル適用して、過剰量のシントンおよびタンパク質を除去して廃棄した。ＭＤＴチップを５サイクル、水により洗浄した（２００μＬ、合計量１ｍＬ）。ＭＤＴによりＤＰＢＳ（１５０μＬ）を吸引して、コンジュゲート混合物に分注し、真空を２サイクル、適用した。洗浄および真空という順序をさらに２回、繰り返した。次に、ＭＤＴのグリッパーをフィルタープレートに移動し、保持ステーションに巻き付けた。ＭＤＴにより、真空マニホールド内部に、１０×ＤＰＢＳの４５０μＬを含有する２ｍＬコレクションプレートを置いた。ＭＤＴにより、フィルタープレートおよび巻き付け体を配置することによって、真空マニホールドを再度、組み立てた。ＭＤＴチップを５サイクル、水により洗浄した（２００μＬ、合計量１ｍＬ）。ＭＤＴにより吸引して、ＩｇＧ  Ｅｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ３．７５（Ｐ）１００μＬをコンジュゲート混合物に分注した。１分後、真空を２サイクル、適用し、この溶離液を、４５０μＬの５×ＤＰＢＳを含有する受け用プレート中に捕捉した。吸引／分注の順序を３回、さらに繰り返し、ＤＰＢＳ中、ｐＨ７．４において１．５−２．５ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度を有するＡＤＣ試料がも���らされた。
【０５７９】
方法Ｅ．室温において、抗体（１０ｍｇ／ｍＬ、１ｍＬ）の溶液にＴＣＥＰ（１０ｍＭ、０．０１７ｍＬ）の溶液を加えた。この反応混合物を７５分間、３７℃まで加熱した。還元抗体の溶液を室温まで冷却し、シントン（１０ｍＭ、ＤＭＳＯ中の０．０４０ｍＬ）溶液に加え、次いで、ホウ酸緩衝液（０．１ｍＬ、１Ｍ、ｐＨ８）を添加した。この反応溶液を室温において３日間、静置し、脱塩カラム（使用前に、ＤＰＢＳにより３×５ｍＬにより洗浄したＰＤ１０）にロードし、次いでＤＰＢＳ（１．６ｍＬ）をロードし、追加のＤＰＢＳ（３ｍＬ）を用いて溶出した。精製されたＡＤＣ溶液を０．２ミクロンの低タンパク質結合１３ｍｍシリンジフィルターによりろ過し、４Ｃにおいて保管した。
【０５８０】
以下の表１は、どの例示的な方法により、例示的なＡＤＣを合成したかを示している。ＥｐＣＡＭ（ＩＮＧ−１）と称されるＥｐＣＡＭに対するモノクローナル抗体は、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７巻：８０５−８１４頁およびＡｍｍｏｎｓら、２００３年、Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ５巻：１４６−１５４頁に記載されている。Ｎ９０１と称されるＮＣＡＭ−１抗体は、Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９１巻：９６９−９７３頁に記載された。ＡＢ０３３と称されるＥＧＦＲ抗体は、ＷＯ２００９／１３４７７６に記載されている（１２０頁を参照されたい。）。
【０５８１】
【表２】
2020152726.tif 000076
2020152726.tif 000077
2020152726.tif 000078
【０５８２】
［実施例４］
例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤はＢｃｌ−ｘＬに結合する
実施例１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、および１．８（それぞれ、化合物Ｗ１．０１−Ｗ１．０８）の例示的なＢｃｌｘＬ阻害剤がＢｃｌ−ｘＬに結合する能力を、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイを使用して実証した。Ｔｂ−抗ＧＳＴ抗体は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カタログ番号ＰＶ４２１６）から購入した。
【０５８３】
４．１  プローブ合成
４．１．１．  試薬
試薬はすべて、別段の指定がない限り、供給業者から得たままで使用した。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびピペリジンを含むペプチド合成試薬は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（ＡＢＩ）、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡまたはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡから得た。
【０５８４】
予めロードされた９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）アミノ酸カートリッジ（Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｒ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ）は、ＡＢＩまたはＡｎａｓｐｅｃ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡから得た。
【０５８５】
ペプチド合成用樹脂（Ｆｍｏｃ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂）およびＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨは、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから得た。
【０５８６】
単一異性体の６−カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（６−ＦＡＭ−ＮＨＳ）はＡｎａｓｐｅｃから得た。
【０５８７】
トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）は、Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｗｅｓｔ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＳＣから得た。
【０５８８】
チオアニソール、フェノール、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）、３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオール（ＤＯＤＴ）およびイソプロパノールは、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩから得た。
【０５８９】
マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量スペクトル（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ）は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｖｏｙａｇｅｒ  ＤＥ−ＰＲＯ  ＭＳで記録した。
【０５９０】
エレクトロスプレー質量スペクトル（ＥＳＩ−ＭＳ）は、陽イオンモードおよび陰イオンモードのどちらも、Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＳＳＱ７０００（Ｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で記録した。
【０５９１】
４．１．２．  固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）の一般手順
ペプチドは、２５０μｍｏｌスケールのＦａｓｔｍｏｃ（商標）カップリングサイクルを使用する、ＡＢＩ  ４３３Ａペプチド合成装置において、２５０μｍｏｌ以下の予め充填されているＷａｎｇ樹脂／容器を用いて合成した。フルオロフォアの結合位を除いて、標準Ｆｍｏｃ−アミノ酸１ｍｍｏｌを含有する事前充填カートリッジ（１ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨがカートリッジに入っている。）を、コンダクティビティフィードバックモニタリング（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）と共に使用した。Ｎ末端基アセチル化は、標準カップリング条件下、カートリッジ中、１ｍｍｏｌの酢酸を使用することにより行った。
【０５９２】
４．１．３．  リシンから４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）の除去
合成装置からの樹脂を、ジクロロメタンにより３回洗浄して、濡れたまま維持した。９５：４：１のジクロロメタン：トリイソプロピルシラン：トリフルオロ酢酸１５０ｍＬを３０分間かけて、上記の樹脂床に流した。この混合物は深黄色になり、次に、退色して淡黄色になった。ＤＭＦ１００ｍＬを１５分間かけて、上記の床に流した。次に、この樹脂をＤＭＦにより３回、洗浄し、ろ過した。ニンヒドリン試験は、一級アミンの強いシグナルを示した。
【０５９３】
４．１．４．  ６−カルボキシフルオレセイン−ＮＨＳ（６−ＦＡＭ−ＮＨＳ）により標識した樹脂
樹脂を１％  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ中の２当量の６−ＦＡＭ−ＮＨＳにより処理し、一晩、周囲温度において撹拌または振盪した。完了すると、この樹脂から液を廃棄し、ＤＭＦにより３回、（１×ジクロロメタンおよび１×メタノール）により３回、洗浄して乾燥すると、ニンヒドリン試験に陰性のオレンジ色樹脂が得られた。
【０５９４】
４．１．５．  樹脂結合ペプチドの切断および脱保護の一般手順
ペプチドは、８０％のＴＦＡ、５％の水、５％のチオアニソール、５％のフェノール、２．５％のＴＩＳおよび２．５％のＥＤＴ（１ｍＬ／０．１ｇ樹脂）からなる切断カクテル中、周囲温度において３時間、振盪することにより樹脂から切断した。この樹脂をろ過により除去し、ＴＦＡにより２回、すすいだ。ＴＦＡをろ液から蒸発させて、エーテル（１０ｍＬ／０．１ｇ樹脂）を用いて生成物を沈殿させて、遠心分離により回収し、エーテル（１０ｍＬ／０．１ｇ樹脂）により２回、洗浄して乾燥すると、粗製ペプチドが得られた。
【０５９５】
４．１．６．  ペプチドを精製する一般手順
粗製ペプチドは、１００Åの細孔サイズを有する、Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ（商標）Ｃ１８  １５μｍ粒子を充填した、２つの２５×１００ｍｍ区画を含有する放射状圧縮カラムにおいて、Ｕｎｉｐｏｉｎｔ（登録商標）分析ソフトウェア（Ｇｉｌｓｏｎ、Ｉｎｃ．、Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ、ＷＩ）を操作するＧｉｌｓｏｎ分取ＨＰＬＣシステムにおいて精製し、一覧表示されているグラジエント法の１つを用いて溶出した。１回の注射あたり、１から２ミリリットルの粗製ペプチド溶液（９０％ＤＭＳＯ／水中１０ｍｇ／ｍＬ）を精製した。各実施からの生成物を含有するピークをプールしておき、凍結乾燥した。すべての分取操作は、緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ−水および緩衝液Ｂ：アセトニトリルとしての溶離液を用いて、２０ｍＬ／分において実施した。
【０５９６】
４．１．７．  分析用ＨＰＬＣの一般手順
分析用ＨＰＬＣは、１２０Åの細孔サイズを有するＯＤＳ−ＡＱ  ５μｍ粒子を充填した４．６×２５０ｍｍＹＭＣカラム上、ＨＰＬＣ  ３Ｄ  ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアバージョンＡ．０３．０４（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ．Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）を操作する、ダイオードアレー検出器およびＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ１０４６Ａ蛍光検出器を備えた、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ１２００シリーズシステムにおいて行い、７分間、開始条件において予め平衡にした後、以下に一覧表示されているグラジエント法の１つを用いて溶出した。溶離液は、緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡ−水および緩衝液Ｂ：アセトニトリルであった。すべてのグラジエントの流速は１ｍＬ／分とした。
【０５９７】
４．１．８．  Ｆ−Ｂａｋプローブの合成
Ｂｃｌ−ｘＬに結合するペプチドプローブＦ−ｂａｋは、以下に記載されている通り合成した。プローブであるＦ−Ｂａｋは、Ｎ末端においてアセチル化され、Ｃ末端においてアミド化されており、アミノ酸配列ＧＱＶＧＲＱＬＡＩＩＧＤＫＩＮＲを有する。これは、６−ＦＡＭによりリシン残基（Ｋ）においてフルオレセイン化されている。プローブＦ−Ｂａｋは、以下の通り略すことができる。アセチル−ＧＱＶＧＲＱＬＡＩＩＧＤＫ（６−ＦＡＭ）ＩＮＲ−ＮＨ２。
【０５９８】
プローブＦ−Ｂａｋを作製するため、Ｆｍｏｃ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂を一般的なペプチド合成手順を使用して伸長し、保護されている樹脂結合ペプチド（１．０２０ｇ）を得た。Ｍｔｔ基を除去し、６−ＦＡＭ−ＮＨＳにより標識し、切断し、本明細書の上に記載されている通り脱保護すると、粗生成物がオレンジ色固体（０．３７ｇ）として得られた。この生成物を、ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。主要ピークにかかるフラクションを分析用ＲＰ−ＨＰＬＣによって試験し、純粋なフラクションを単離して凍結乾燥し、この主要ピークは、黄色固体としての表題化合物（０．０８０２ｇ）が得られた。ＭＡＬＤＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２１３７．１［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【０５９９】
４．１．９．  ペプチドプローブＦ−Ｂａｋの代替合成
代替方法において、保護ペプチドは、フルオレセイン（６−ＦＡＭ）標識リシン（１ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（４−メチルトリチル）をカートリッジに秤量した。）を除いて、事前充填されている１ｍｍｏｌのアミノ酸カートリッジを使用して、Ｆａｓｔｍｏｃ（商標）カップリングサイクルを操作するＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａ自動ペプチド合成装置において、０．２５ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）上で構築した。Ｎ末端アセチル基は、本明細書の上に記載されているカートリッジおよびカップリングにおいて、１ｍｍｏｌの酢酸を投入することにより組み込んだ。４−メチルトリチル基の選択的除去は、樹脂に１５分間かけて流した９５：４：１のＤＣＭ：ＴＩＳ：ＴＦＡ（ｖ／ｖ／ｖ）の溶液を用い、次いで、ジメチルホルムアミドを流してクエンチすることによって行った。単一異性体の６−カルボキシフルオレセイン−ＮＨＳをＤＭＦ中の１％ＤＩＥＡ中のリシン側鎖と反応させて、ニンヒドリン試験により完了していることを確認した。このペプチドは、８０：５：５：５：２．５：２．５のＴＦＡ／水／フェノール／チオアニソール／トリイソプロピルシラン：３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオール（ｖ／ｖ／ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）を用いて処理することにより樹脂から切断し、側鎖を脱保護し、粗製ペプチドをジエチルエーテルにより沈殿させることによって回収した。粗製ペプチドは、逆相高速液体クロマトグラフィーによって精製し、この純度および同一性は、分析用の逆相高速液体クロマトグラフィーおよびマトリックス支援レーザー脱離質量分析法（ｍ／ｚ＝２１３７．１．（Ｍ＋Ｈ）＋））により確認した。
【０６００】
４．２．時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイ
例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤Ｗ１．０１−Ｗ１．０８がＢｃｌ−ｘＬに結合するためのプローブＦ−Ｂａｋと競合する能力を、時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）結合アッセイを使用して実証した。
【０６０１】
４．２．１  方法
アッセイに関して、試験化合物を５０μＭ（２×の開始濃度、１０％ＤＭＳＯ）から始めて、ＤＭＳＯに段階希釈し、１０μＬを３８４ウェルプレートに移した。次に、タンパク質／プローブ／抗体のミックス１０μＬを、以下に一覧表示されている最終濃度において、各ウェルに加えた。
【０６０２】
【表３】
2020152726.tif 000079
【０６０３】
次に、試料を１分間、振盪器において混合し、さらに２時間、室温においてインキュベートした。各アッセイプレートに関すると、プローブ／抗体およびタンパク質／抗体／プローブ混合物は、それぞれ、ネガティブ対照およびポジティブ対照として含ませた。蛍光は、３４０／３５ｎｍの励起フィルターと５２０／５２５（Ｆ−Ｂａｋ）および４９５／５１０ｎｍ（Ｔｂ標識抗ｈｉｓ抗体）発光フィルターを使用して、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）において測定した。解離定数（Ｋｉ）は、Ｗａｎｇの式（Ｗａｎｇ、１９９５年、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３６０巻：１１１−１１４頁）を使用して決定した。ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイは、ヒト血清（ＨＳ）またはウシ胎児血清（ＦＢＳ）の様々な濃度の存在下において行うことができる。化合物は、ＨＳなしに、および１％ＨＳの存在下の両方において試験した。
【０６０４】
４．２．２．  結果
結合アッセイ（ナノモル濃度でのＫｉ）の結果は、以下の表２に提示されている。
【０６０５】
【表４】
2020152726.tif 000080
【０６０６】
［実施例５］
Ｍｏｌｔ−４細胞の生存アッセイにおいて、例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、Ｂｃｌ−ｘＬを阻害する
例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の能力は、様々な細胞株およびマウス腫瘍モデルを使用して、細胞に基づく死滅アッセイにおいて決定することができる。例えば、細胞生存率に及ぼすこれらの活性は、培養した腫瘍形成性細胞株および非腫瘍形成性細胞株、ならびに一次マウスまたはヒト細胞集団のパネルに関して評価することができる。例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤のＢｃｌ−ｘＬ阻害活性は、Ｍｏｌｔ−４細胞を用いる細胞生存アッセイにおいて確認した。
【０６０７】
５．１．  方法
一連の例示的な条件において、Ｍｏｌｔ−４（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞は、３８４ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）中の、１０％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を補給した組織培養培地の全量２５μＬ中、ウェルあたり１２，５００個の細胞をプレート培養し、対象とする化合物の１０μＭから０．０００５μＭまでの３倍段階希釈液を用いて処理した。濃度はそれぞれ、二連で、少なくとも個別に３回、試験した。化合物の処理の４８時間後の生存細胞数は、製造業者の推奨（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）蛍光細胞生存アッセイを使用して決定した。化合物は、１０％ＨＳの存在下において試験した。
【０６０８】
５．２．  結果
実施例１．１−１．６（それぞれ、化合物Ｗ１．０１−Ｗ１．０８）の例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤について、１０％ＨＳの存在下において実施したＭｏｌｔ−４細胞生存アッセイ（ナノモル濃度のＥＣ５０）の結果が以下の表３に提示されている。
【０６０９】
【表５】
2020152726.tif 000081
【０６１０】
［実施例６］
例示的なＡＤＣのＤＡＲおよび凝集
上記の実施例３に記載されている通り合成した例示的なＡＤＣのＤＡＲおよび凝集率は、ＬＣ−ＭＳおよびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によってそれぞれ決定した。
【０６１１】
６．１．  ＬＣ−ＭＳの一般方法
ＬＣ−ＭＳ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＬＣ／ＭＳＤ  ＴＯＦ６２２０  ＥＳＩ質量分析計に接続したＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムを使用して行った。５ｍＭ（最終濃度）Ｂｏｎｄ−Ｂｒｅａｋｅｒ（登録商標）ＴＣＥＰ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）によりＡＤＣを還元し、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｉｃｒｏｔｒａｐ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  Ｂｉｏｒｅｓｏｒｃｅｓ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）脱塩カートリッジにロードし、周囲温度において、０．２分間で１０％のＢから７５％のＢまでのグラジエントにより溶出した。移動相Ａは、０．１％ギ酸（ＦＡ）含むＨ２Ｏであり、移動相Ｂは、０．１％ＦＡを含むアセトニトリルであり、流速は０．２ｍＬ／分であった。共溶出した軽鎖および重鎖のエレクトロスプレー飛行時間型質量スペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ（商標）収集ソフトウェアを使用して得た。抽出強度対ｍ／ｚスペクトルは、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒソフトウェアの最大エントロピーフィーチャ（Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｅｎｔｒｏｐｙ  ｆｅａｔｕｒｅ）を使用してデコンボリューション（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｅ）し、各還元抗体断片の質量を決定した。ＤＡＲは、軽鎖および重鎖に対する生のピークおよび補正ピークの強度を合計することにより、デコンボリューションしたスペクトルから算出され、強度を結合させた薬物の数と乗算することにより、正規化した。合計した、正規化強度を、強度の合計により除算し、２本の軽鎖および２本の重鎖の合計した結果により、全ＡＤＣに対する最終的な平均ＤＡＲ値が求まる。
【０６１２】
６．２．  サイズ排除クロマトグラフィーの一般方法
サイズ排除クロマトグラフィーは、０．７５ｍｌ／分の流速において、０．２５ｍＭ塩化カリウムおよび１５％ＩＰＡを含む０．２Ｍリン酸カリウム（ｐＨ６．２）中、Ｓｈｏｄｅｘ  ＫＷ８０２．５カラムを使用して行った。２８０ｎｍにおけるピーク面積吸光度は、曲線下面積の積分によって、高分子量およびモノマーの溶離液のそれぞれについて決定した。コンジュゲート試料の％凝集率は、高分子量の溶離液に関する２８０ｎＭにおけるピーク面積吸光度を、高分子量およびモノマーの溶離液の２８０ｎＭにおけるピーク面積吸光度の合計により除算し、１００％を乗算することにより決定した。
【０６１３】
６．３．  結果
例示的なＡＤＣに関する上のＬＣ−ＭＡ法により決定された平均ＤＡＲ値および％凝集率を表４に報告する。ＥｐＣＡＭを標的とする、モノクローナル抗体ＩＮＧ−１を含むＡＤＣ（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７巻：８０５−８１４頁およびＡｍｍｏｎｓら、２００３年、Ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ５巻：１４６−１５４頁）をアッセイにおいて評価した。ＥＧＦＲを標的とする抗体ＡＢ０３３は、ＷＯ２００９／１３４７７６に記載されている。モノクローナル抗体Ｎ９０１（ＮＣＡＭ−１を標的とする。）は、Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９１巻：９６９−９７３頁に記載されている。
【０６１４】
【表６】
2020152726.tif 000082
2020152726.tif 000083
【０６１５】
［実施例７］
ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣは、がん細胞の増殖をインビトロにおいて阻害する
抗体ＡＢ０３３を含む、ある種の例示的なＡＤＣを評価した。抗体ＡＢ０３３はヒトＥＧＦＲを標的とする。抗体ＡＢ０３３の可変重鎖および可変軽鎖の配列は、ＷＯ２００９／１３４７７６に記載されている（１２０頁を参照されたい。）。抗体ＡＢ０３３が、がん細胞の増殖を阻害する能力は、ｍｃｌ−１−／−マウスの胚線維芽（ＭＥＦ）細胞を用いて実証した。ｍｃｌ−１−／−ＭＥＦは、生存するために、Ｂｃｌ−ｘＬに依存する（Ｌｅｓｓｅｎｅら、２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９巻：３９０−３９７頁）。例示的なＡＢ０３３を標的とするＢｃｌ−ｘＬ−ＡＤＣの有効性を評価するため、ｍｃｌ−１−／−ＭＥＦにおいて、ヒトＥＧＦＲを過剰発現させた。
【０６１６】
７．１．  方法
レトロウイルス上澄み液は、ｈｕＥＧＦＲ配列を含有するレトロウイルス構築体ｐＬＶＣ−ＩＲＥＳ−Ｈｙｇｒｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、またはＦｕＧＥＮＥ６トランスフェクト試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）を利用する空ベクターによるＧＰ２−２９３パッキング細胞株（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のトランスフェクトによって生成した。培養の４８時間後、ウイルス含有上澄み液を収穫し、ポリブレン（８μｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）の存在下、さらに４８時間、７５ｃｍ２の培養用フラスコ中、ｍｃｌ−１−／−ＭＥＦに適用（フラスコあたり０．５×１０６）した。３日後、ｍｃｌ−１−／−ＭＥＦを洗浄し、培地の全補給物中の２５０μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により選択した。ｈｕＥＧＦＲの発現はフローサイトメトリーにより確認し、親細胞株、または空ベクターをトランスフェクトした細胞株と比較した。
【０６１７】
ｈｕＥＧＦＲを発現するｍｃｌ−１−／−ＭＥＦまたはｐＬＶＸ空ベクター（Ｖｃｔ  Ｃｔｒｌ）を、ＡＢ０３３を標的とするＢｃｌ−ｘＬ−ＡＤＣ、ＡＢ０３３単独またはＭＳＬ１０９を標的とするＢｃｌ−ｘＬ−ＡＤＣにより、１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ中、９６時間、処理した。アッセイに関すると、これらの細胞を、アッセイ培地（ＤＭＥＭおよび１０％  ＨＩ  ＦＢＳ）２５μＬの全量中、３８４ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）において、ウェルあたり２５０個細胞でプレート培養した。プレート培養した細胞を、Ｅｃｈｏ５５０  Ａｃｏｕｓｔｉｃ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｈａｎｄｌｅｒ（Ｌａｂｃｙｔｅ）により分注した、１μＭから１ｐＭの対象とする抗体薬物コンジュゲートの４倍段階希釈液により処理した。濃度はそれぞれ、Ｍｃｌ−１−／−ＭＥＦ  ｈｕＥＧＦＲ細胞株の場合、十二連で、およびＭｃｌ−１−／−ＭＥＦベクター細胞株の場合、六連で試験した。３７℃および５％ＣＯ２における、抗体薬物コンジュゲート処理の９６時間後の生存細胞の割合は、製造業者の推奨（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）に従い、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）蛍光細胞生存アッセイを使用して決定した。プレートを、０．５秒間の積分時間による蛍光プロトコルを使用して、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎにおいて読み取った。各希釈点に関する反復値を平均し、抗体薬物コンジュゲートのＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、Ｉｎｃ．）を用い、線形回帰を使用するシグモイド曲線モデルである、Ｙ＝（（Ｂｏｔｔｏｍ−Ｔｏｐ）／（１＋（（ｘ／Ｋ）ｎ）））＋Ｔｏｐ（式中、Ｙは測定された応答値であり、ｘは化合物濃度であり、ｎはＨｉｌｌ傾きであり、ＫはＥＣ５０であり、ＢｏｔｔｏｍおよびＴｏｐは、それぞれ、一番下の漸近線および一番上の漸近線である。）にデータの当てはめを行うことにより生成した。曲線の目視検査を使用して、曲線当てはめの結果を確認した。ｍｃｌ−１−／−ＭＥＦは、ＷａｌｔｅｒおよびＥｌｉｚａ  Ｈａｌｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＲｅｓｅａｒｃｈのＤａｖｉｄ  Ｃ．Ｓ．Ｈｕａｎｇから得た。
【０６１８】
７．２．  結果
代表的な実施例に関する細胞生存アッセイ結果（ナノモル濃度のＥＣ５０）が、以下の表５に提示されている。
【０６１９】
【表７】
2020152726.tif 000084
2020152726.tif 000085
【０６２０】
ｍｃｌ−１−／−ＭＥＦベクター細胞株に対する、代表的な実施例３．２８、３．２９および３．３５に関する細胞生存アッセイ結果（ナノモル濃度のＥＣ５０）は、それぞれ、６７ｎＭ、６９ｎＭおよび２４９ｎＭである。
【０６２１】
［実施例８］
ＥｐＣＡＭ−およびＮＣＡＭ１を標的とする抗体薬物コンジュゲートは、がん細胞の成長をインビトロにおいて阻害する
ヒト細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）を標的としＢｃｌ−ｘＬを阻害するおよびアポトーシスを誘導する抗体を含む、ある種の例示的なＡＤＣの能力は、内因性ＥｐＣＡＭタンパク質を発現するヒト乳がん細胞株であるＮＣＣ３８細胞を用いて実証した。ヒト中性細胞接着分子であるＮＣＡＭ−１を標的とする、ある種の例示的なＡＤＣの細胞毒性は、内因性ＮＣＡＭ−１を発現するヒト小細胞肺がん系である、ＮＣＩ−Ｈ１４６細胞において実証した。
【０６２２】
８．１．  方法
アッセイに関して、１０％ＦＢＳを含有する、ＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃１１９９５）において、ＨＣＣ３８とＮＣＩ−Ｈ１４６の両方の細胞株を培養した。アッセイに先立って、細胞を培養培地に４×１０４細胞／ｍｌに再懸濁し、次に、最終濃度３，０００個細胞／ウェルとなるよう、７５μＬ細胞／ウェルで９６ウェル細胞培養プレートに加えた。次に、このアッセイプレートを３７℃および５％ＣＯ２において、一晩、インキュベートした。翌日、ＥｐＣＡＭ、ＮＣＡＭ−１またはネガティブ対照（ＭＳＬ１０９）のＡＤＣを培養培地において段階希釈し、２５μｌ／ウェルにおいて、アッセイプレートに加えた。次に、このアッセイプレートを３７℃および５％ＣＯ２において、７２時間、インキュベートした。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）蛍光細胞生存アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ７５７３）によって測定した。
【０６２３】
８．２．  結果
データは、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して分析した。ＩＣ５０値（細胞の最大成長阻害の５０％を達成するためのＡＤＣの濃度）は、表６および７にそれぞれ報告されている。
【０６２４】
表６に示されている通り、ＥｐＣＡＭを標的とするＡＤＣは、ＨＣＣ３８乳がん細胞を強力に死滅させる（ＩＣ５０≦０．４ｎＭ）一方、ネガティブ対照であるＡＤＣ  ＭＳＬ１０９−ＤＢは、弱い活性を示した。表７において分かる通り、ＮＣＡＭ１−ＤＢおよびＮＣＡＭ１−Ｈ  ＡＤＣもまた、ＮＣＩ−１４６小細胞肺がん細胞（ＩＣ５０は約２０ｎＭ）に対して特異的な活性を示した。
【０６２５】
【表８】
2020152726.tif 000086
【０６２６】
【表９】
2020152726.tif 000087
【０６２７】
［実施例９］
ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬ阻害性抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、単独でおよびドセタキセルと組み合わされて、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の異種移植片の成長をインビボにおいて阻害する。
【０６２８】
ＥＧＦＲなどの腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を標的とする、例示的なＢｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣ（本明細書において、Ｂｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣとも称される。）の有効性および選択性は、２種のＮＳＣＬＣ異種移植片モデルであるＮＣＩ−Ｈ１６５０およびＥＢＣ−１において実証される。免疫組織化学によって明らかにされている通り、異種移植した腫瘍における抗原の膜発現が、以下の表８に例示されている。
【０６２９】
【表１０】
2020152726.tif 000088
【０６３０】
［実施例１０］
ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬ抗体薬物コンジュゲートは、ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞の成長をインビボにおいて阻害する
ある種の例示的なＥＧＦＲを標的とするＡＤＣが、マウスにおいて、ＥＧＦＲを発現する腫瘍細胞の成長を選択的に阻害する能力は、ヒトＮＳＣＬＣ細胞株であるＮＣＩ−Ｈ１６５０およびＥＢＣ−１に由来する異種移植片モデルにおいて実証された。
【０６３１】
１０．１．  方法
ＮＳＣＬＣ細胞株であるＮＣＩ−Ｈ１６５０は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。細胞は、ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を補給したＲＰＭＩ１６４０培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）において、単層として培養した。扁平上皮肺癌の細胞株であるＥＢＣ−１は、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅｓ（ＪＣＲＢ、大阪、日本）から得た。細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を補給したＭＥＭ培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）において、単層として培養した。異種移植片を生成するため、５×１０６個の生存細胞を、免疫不全雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）の右脇腹に皮下接種した。注入量は０．２ｍｌであり、Ｓ−ＭＥＭとＭａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）との１：１混合物からなった。腫瘍は、約２００ｍｍ３に一致するサイズであった。抗体およびコンジュゲートは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）において製剤化し、腹腔内に注射した。注入量は４００μｌを超過しなかった。治療は、腫瘍のサイズが一致した後、２４時間以内に開始した。治療の開始時に、マウスは約２５ｇと秤量された。腫瘍体積は、１週間に２回から３回、見積もった。腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）の測定は、電子ノギスによって行い、容積は、以下の式：Ｖ＝Ｌ×Ｗ２／２に従って算出した。腫瘍体積が３，０００ｍｍ３に到達する、または皮膚潰瘍形成が起った場合、マウスを安楽死させた。１ケージあたり、８匹から１０匹のマウスを収容した。餌および水は、自由摂取可能であった。マウスは、実験の開始に先立って、少なくとも１週間、動物施設に順応させた。動物は、１２時間の明：１２時間の暗スケジュール（６：００時に明かりをオンにする。）の光相において試験した。実験はすべて、実験動物管理評価認定協会によって認定されている施設において、ＡｂｂＶｉｅの動物実験委員会および国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関する指針を順守して実施した。
【０６３２】
１０．２．結果の説明および解析
治療剤の有効性を参照するため、治療応答の振幅（ＴＧＩｍａｘ）、持続性（ＴＧＤ）および応答度数（ＣＲ、ＰＲ、ＯＲ）を使用する。
【０６３３】
ＴＧＩｍａｘは、実験中の最大腫瘍成長阻害である。腫瘍成長阻害は１００×（１−Ｔｖ／Ｃｖ）により算出され、式中、ＴｖおよびＣｖは、それぞれ、処置群および対照群の平均腫瘍体積である。
【０６３４】
ＴＧＤ、すなわち腫瘍成長の遅延は、対照群に対して、処置を受けた腫瘍が１ｃｍ３の体積に到達するのに必要な時間が延長されることである。ＴＧＤは、１００×（Ｔｔ／Ｃｔ−１）によって算出され、式中、ＴｔおよびＣｔは、それぞれ、処置群および対照群が１ｃｍ３に到達するまでの中央値時間である。
【０６３５】
特定の群における応答振幅の分布は、完全応答者（ＣＲ）、部分応答者（ＰＲ）および総合的応答者（ＯＲ）の度数によって与えられる。ＣＲは、少なくとも３回の測定に対する、２５ｍｍ３の腫瘍負荷を有する群内のマウスの割合である。ＰＲは、少なくとも３回の測定に対する、２５ｍｍ３より大きな腫瘍負荷であるが、処置の開始時の半分未満の体積を有する群内のマウスの割合である。ＯＲは、ＣＲとＰＲの合計である。
【０６３６】
両側スチューデント検定およびカプラン−マイアーログランク検定を使用して、それぞれ、ＴＧＩｍａｘおよびＴＧＤの差の有意性を決定した。
【０６３７】
１０．３．肺腺癌モデルＮＣＩ−Ｈ１６５０（これ以降、Ｈ１６５０と呼ぶ）の成長阻害
１０．３．１．ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣ
ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣの場合、実施例２．２（シントンＤ）、実施例２．３５（シントンＨ）および実施例２．３６（シントンＩ）のシントンを、それぞれ、実施例３．２、３．３５および３．３６に記載されている、ＥＧＦＲを標的とする抗体ＡＢ０３３にコンジュゲートし、それぞれ、ＡＤＣ  ＡＢ０３３−Ｄ、ＡＢ０３３−ＨおよびＡＢ０３３−Ｉが得られた。シントンＨ、ＤＢまたはＩのコンジュゲート、およびサイトメガウイルス（ＣＭＶ）を標的とする抗体ＭＳＬ１０９（ＭＳＬ１０９−Ｈ、ＭＳＬ１０９−ＤＢまたはＭＳＬ−１０９−Ｉ）を、受動的標的化対照として使用した。これらのコンジュゲートは、この担体抗体が、腫瘍関連抗原を認識しないので、これ以降、「標的化しないＡＤＣ」とも称される。ＭＳＬ１０９は、Ｄｒｏｂｙｓｋｉら、１９９１年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５１巻：１１９０−１１９６頁および米国特許第５，７５０，１０６号に記載されている。破傷風トキソイド（抗体ＡＢ０９５）を標的とする抗体は、ＩｇＧの投与効果に対する対照として使用した。Ｌａｒｒｉｃｋら、１９９２年、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６９−８５頁を参照されたい。
【０６３８】
１０．３．２．ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣを用いた結果
ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣによるＨ１６５０異種移植片の成長阻害の有効性および選択性は、以下の図１および表９によって例示されている。図１において、１回の投与あたりに投与された量は、凡例に明記されている。処置は、腫瘍細胞の接種後、１６日目に開始した。処置における平均腫瘍サイズは、２１０ｍｍ３であった。ＡＢ０９５、ＡＢ０３３−Ｈ、ＡＢ０３３−Ｉ、ＭＳＬ１０９−ＨおよびＭＳＬ１０９−Ｉのレジメンは、Ｑ４Ｄｘ６であった。標準治療である化学治療剤のドセタキセル（ＤＴＸ）を、単剤としてまたはＡＤＣとの組合せのどちらかにおいて、７．５ｍｇ／ｋｇ（ＱＤｘ１）の用量で使用した。抗体およびコンジュゲートは、腹腔内に注射した。ＤＴＸは、静脈内投与した。曲線の各点は、５個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは、標準誤差を図示している。
【０６３９】
Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤Ａ−１３３１８５２（Ｌｅｖｅｒｓｏｎら、２０１５年、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７巻：２７９ｒａ４０）を低分子として投与すると、異種移植片の成長が、５７％のＴＧＩｍａｘおよび７８％のＴＧＤによって実証される通り、かなり阻害された（表９）。ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣ（３０ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄｘ６）は、単剤として投与されると、標的化されていないＡＤＣ  ＭＳＬ１０９Ｈおよび裸の抗ＥＧＦＲ抗体ＡＢ０３３よりも約１．５倍、腫瘍成長（ＴＧＩｍａｘ）を阻害した。ＤＴＸ処置の成長阻害および応答の持続性は、標的化しないＡＤＣ  ＭＳＬ１０９−ＨおよびＭＳＬ１０９−Ｉによって増強された。ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣ  ＡＢ０３３−ＨおよびＡＢ０３３−Ｉは、ＤＴＸに加えられると、標的化しないＡＤＣの添加よりも持続性の腫瘍退縮を引き起こした（表９および図１）。
【０６４０】
【表１１】
2020152726.tif 000089
【０６４１】
以前の実験により、Ｈ１６５０の成長は、ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣによって著しく阻害されたことが示された。したがって、これらのコンジュゲートの最小有効用量をさらに探索するため、およびさらに有効なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤を特定するため、このモデルを適合させた。表１０および図２は、ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣである、ＡＢ０３３−ＨおよびＡＢ０３３−ＤＢの用量−応答関係を例示している。処置は、腫瘍細胞の接種後、１２日目に開始した。処置における平均腫瘍サイズは、２１５ｍｍ３であった。抗体およびコンジュゲートに関するレジメンは、Ｑ４Ｄｘ６とした。１回の投与あたりの投与量は、凡例に明記されている。抗体およびコンジュゲートは、腹腔内に注射した。図２における曲線の各点は、１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは、標準誤差を図示している。
【０６４２】
担体抗体ＡＢ０３３は、腫瘍成長を阻害するが、ＡＤＣのＢｃｌ−ｘＬ阻害剤−リンカーの部分は、主に、コンジュゲートの有効性の一因となる。ＡＢ０３３による阻害の持続性は、用量応答性であり、Ｑ４Ｄｘ６レジメンにおいて、３および３０ｍｇ／ｋｇの用量において４４％と８０％のＴＧＤの間にある。この有効性は、ＡＢ０３３−ＨおよびＡＢ０３３−ＤＢの有効性と比較して、かなり低い。これらのコンジュゲート（ＡＢ０３３−ＤＢ）の最小のＴＧＤは、３ｍｇ／ｋｇにおいて１６０％であった。さらに、ＡＢ０３３による処置は、測定可能な応答率をもたらさない一方、Ｂｃｌ−ｘＬ  ＡＤＣは、３ｍｇ／ｋｇでさえも、最低でも９０％の総合的な応答率を誘発する。ＥＧＦＲを標的とするコンジュゲートの有効性はまた、ＭＳＬ１０９の担体抗体としての使用は、いかなる応答率の存在もなしに、無視できる程の成長阻害しかもたらさなかったので、受動的標的化の作用によって引き起こされる可能性は低い。
【０６４３】
【表１２】
2020152726.tif 000090
【０６４４】
ＡＢ０３３に連結されている様々なＢｃｌ−ｘＬ阻害剤の単回用量によるＨ１６５０異種移植片の成長の阻害が、表１１にまとめられている。処置は、腫瘍細胞の接種後、１１日目に開始した。処置における平均腫瘍サイズは、２１６ｍｍ３であった。抗体およびコンジュゲートに関するレジメンは、ＱＤｘ１とした。１０ｍｇ／ｋｇを単回用量として投与した。抗体およびコンジュゲートは、腹腔内に投与した。処置群はそれぞれ、８匹のマウスからなった。
【０６４５】
ＥＧＦＲを標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣは、対照のコンジュゲートよりも、一貫して有効であった。単回用量の投与にもかかわらず、標的ＡＤＣは、１３３から５０７％超の範囲のＴＧＤによって示される通り、持続性応答を誘発した。
【０６４６】
【表１３】
2020152726.tif 000091
【０６４７】
ＡＢ０３３に連結されている２種のさらなるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤によるＨ１６５０異種移植片の成長の阻害を個別の実験において評価した（表１２）。処置は、腫瘍細胞の接種後、１２日目に開始した。処置における平均腫瘍サイズは、２１３ｍｍ３であった。抗体およびコンジュゲートに関するレジメンは、１０ｍｇ／ｋｇの用量において投与した、ＱＤｘ１とした。抗体およびコンジュゲートは、腹腔内に投与した。処置群はそれぞれ、８匹のマウスからなった。
【０６４８】
【表１４】
2020152726.tif 000092
【０６４９】
１０．４．扁平ＮＳＣＬＣモデルであるＥＢＣ−１の成長阻害
１０．４．１．ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣの方法
異種移植片の生成の一般的な方法、腫瘍成長のモニタリングおよびデータ解析は、実施例２に提示されている。ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣの場合、実施例２．２（シントンＤ）、実施例２．３５（シントンＨ）および実施例２．３６（シントンＩ）のシントンを、それぞれ、実施例３．２、３．３５および３．３６に記載されている、ＥＧＦＲを標的とする抗体ＡＢ０３３にコンジュゲートし、それぞれ、ＡＤＣｓ  ＡＢ０３３、ＡＢ０３３およびＡＢ０３３−Ｉが得られた。シントンＨおよびＣＭＶを標的とする抗体であるＭＳＬ１０９（ＭＳＬ１０９−Ｈ）からなるコンジュゲートは、受動的標的化対照として使用した。破傷風トキソイド（抗体ＡＢ０９５）を標的とする抗体は、ＩｇＧの投与効果に対する対照として使用した。
【０６５０】
１０．４．２．ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣを用いた結果
扁平上皮癌ＥＢＣ−１の異種移植片モデルを処置した場合、ＥＧＦＲを標的とするＡＤＣの治療有効性も観察した。ＥＧＦＲに標的とするＡＤＣを用いたこの実験の結果は、以下の図３および表１３に示されている。図３において、１回の投与あたりの用量は、凡例に明記されている。曲線の各点は、５個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは、標準誤差を図示している。処置は、腫瘍細胞の接種後、９日目に開始した。処置における平均腫瘍サイズは、２１５ｍｍ３であった。ＡＢ０９５、ＡＢ０３３、ＡＢ０３３−Ｄ、ＡＢ０３３−Ｈ、ＡＢ０３３−ＩおよびＭＳＬ１０９−Ｈのレジメンは、Ｑ４Ｄｘ６とした。ＤＴＸは、ＱＤｘ１で投与した。抗体およびコンジュゲートは、腹腔内に注射した。ＤＴＸは、静脈内投与した。
【０６５１】
３０ｍｇ／ｋｇの用量における、ＣＭＶを標的とするＡＤＣ  ＭＳＬ１０９−Ｈは、腫瘍成長を４３％、阻害し、したがってこれは、受動的標的化に関連する抗腫瘍活性を示している。標準治療である化学治療剤のドセタキセル（ＤＴＸ）を、この実験全体を通じて、単剤としてまたはＡＤＣとの組合せのどちらかにおいて、７．５ｍｇ／ｋｇの用量で使用した。単剤として、ＤＴＸは、７６％のＴＧＩを引き起こした。ＭＳＬ１０９−Ｈ（３０ｍｇ／ｋｇ）は、ＤＴＸと組み合わせると、ＴＧＩを７６から８３％、およびＴＧＤを４４から８９％、向上させた（表１３、図３Ａ）。受動的標的化により達成された有効性は、ＥＧＦＲを標的とする抗体であるＡＢ０３３を使用するＡＤＣの場合に見られる有効性に劣る。３０ｍｇ／ｋｇのＥＧＦＲを標的とするＡＤＣ  ＡＢ０３３−ＨのＴＧＩｍａｘは、６４％である（図３Ｃ）。ＡＢ０３３−Ｈ（３０ｍｇ／ｋｇ）をＤＴＸに添加すると、ＴＧＩｍａｘを７６から９８％およびＴＧＤを４４から１７８％向上させた。ＡＢ０３３−Ｉの投与は、６６％の最大腫瘍成長阻害を引き起こした（図３Ｄ）。このコンジュゲートは、組み合わせて投与されると、ＤＴＸのＴＧＩｍａｘおよびＴＧＤをそれぞれ、９８％および１７８％、高めた。ＡＢ０３３−Ｄは、単剤として投与されると、かろうじて有効性となった（ＴＧＩｍａｘ＝４９％）。それにもかかわらず、このコンジュゲートをＤＴＸに加えると、ＤＴＸのＴＧＩｍａｘおよびＴＧＤを、それぞれ９４％および１５６％に向上させた（表１３、図３Ｂ）。留意すべきことには、１０ｍｇ／ｋｇで投与されたＥＧＦＲを標的とするコンジュゲートも、ＤＴＸの有効性を高めた（表１３）。標的化ＢＣｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣをＤＴＸに添加する治療的利益は、応答の増幅の増強よりもむしろ、持続性の向上である。
【０６５２】
【表１５】
2020152726.tif 000093
2020152726.tif 000094
【０６５３】
［実施例１１］
ＮＣＡＭ−１を標的とするＢｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣは、単独でおよびＢｃｌ−２−選択的阻害剤と組み合わされて、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）の腫瘍の成長をインビボにおいて阻害する。
【０６５４】
２種の小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）異種移植片モデル；ＮＣＩ−Ｈ１４６およびＮＣＩ−Ｈ１９６３．ＦＰ５にあるような腫瘍細胞の成長の阻害における、ＮＣＡＭ１を標的とする例示的なＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣの、単独およびＢｃｌ−２の低分子選択的阻害剤である化合物ＡＢＴ−１９９との組合せの両方における有効性
【０６５５】
１１．１．  方法
ＳＣＬＣ細胞株であるＮＣＩ−Ｈ１４６（これ以降、Ｈ１４６と呼ぶ）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を補給したＲＰＭＩ−１６４０培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）において、単層として培養した。ＳＣＬＣ癌細胞株であるＮＣＩ−Ｈ１９６３．ＦＰ５（これ以降、Ｈ１９６３．ＦＰ５と呼ぶ）は、免疫無防備マウスの脇腹における、５代連続の継代後のＮＣＩ−Ｈ１９６３（ＡＴＣＣ）に由来した。細胞は、ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）を補給したＲＰＭＩ−１６４０培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）において、単層として培養した。異種移植片を生成するため、５＊１０６個の生存細胞を、免疫不全雌ＳＣＩＤ／ｂｇマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）の右脇腹に皮下接種した。注射量は０．２ｍｌであり、Ｓ−ＭＥＭとＭａｔｒｉｇｅｌとの１：１混合物（ＢＤ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）からなった。腫瘍は、約２００ｍｍ３に一致するサイズであった。抗体およびコンジュゲートは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）において製剤化し、腹腔内に注射した。注射量は４００μｌを超過しなかった。治療は、腫瘍のサイズが一致した後、２４時間以内に開始した。治療の開始時に、マウスは約２５ｇと秤量された。腫瘍体積の決定および動物の管理は、実施例１０に記載されている通り実施した。
【０６５６】
アッセイに関して、ＮＣＡＭ１を標的とするＡＤＣ  α−ＮＣＡＭ１−Ｈ（Ｎ９０１−Ｈとも称される。）を使用した。評価したＡＤＣは、モノクローナル抗体ＮＣＡＭ−１（Ｎ９０１）を含んだ（Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９１巻：９６９−９７３頁を参照されたい。）。標的化腫瘍に関連する抗原ＮＣＡＭ１は、Ｈ１４６およびＨ１９６３．ＦＰ５細胞の表面上に発現される。以前の実験と同様に、抗体Ａｂ０９５をネガティブ対照として使用した。Ｂｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣは、単剤として、およびＡＢＴ−１９９と組み合わせて投与した。
【０６５７】
１１．２．  結果
１１．２．１．  Ｈ１４６  ＳＣＬＣ異種移植片の成長に対するＮＣＡＭ−１標的ＡＤＣの有効性
処置は、腫瘍細胞の接種後、１０日目に開始した。処置における平均腫瘍サイズは、２１６ｍｍ３であった。ＡＢ０９５およびα−ＮＣＡＭ−１−Ｈのレジメンは、Ｑ４Ｄｘ６とし、ＡＢＴ−１９９のレジメンは、ＱＤｘ２１とした。この実験の結果が図４および表１４に示されている。Ｂｃｌ−ｘＬ  ＡＤＣは、単剤として、およびＡＢＴ−１９９と組み合わせて投与した。抗体およびコンジュゲートは、腹腔内に注射した。ＡＢＴ−１９９は経口投与した。図４において、１回の投与あたりの投与量は、凡例に明記されている。曲線の各点は、７匹のマウスを含んだＭＳＬ１０９−Ｈにより処置した群を除き、１０個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは、標準誤差を図示している。
【０６５８】
ＮＣＡＭ１を標的とするＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣは、単剤として投与されると、腫瘍成長を阻害した。標的化されたＡＤＣ  α−ＮＣＡＭ１−Ｈは、腫瘍成長を８８％、阻害し、１ｃｍ３の体積に到達する時間を１４４％、増加した（図４、表１４）。ＮＣＡＭ１−Ｈ  ＡＤＣの有効性は、裸の抗体α−ＮＣＡＭ１または標的化されていない対照であるＭＳＬ１０９−Ｈの有効性よりもかなり高いので、選択的であった（表１４）。さらに、α−ＮＣＡＭ１−Ｈによる処置が、選択的Ｂｃｌ−２阻害剤であるＡＢＴ−１９９の投与と組み合わされると、著しい添加剤効果が認められた。ＴＧＩ、ＴＧＤおよび完全応答率は、それぞれ、８８％、１４４％および０％から、９８％、２０４％および８０％に向上した。
【０６５９】
【表１６】
2020152726.tif 000095
【０６６０】
１１．２．２．Ｈ１９６３．ＦＰ５  ＳＣＬＣ異種移植片の成長に対するＮＣＡＭ−１標的ＡＤＣの有効性
さらなる異種移植片実験を、Ｈ１９６３異種移植片を用いて行った。これらの異種移植片は、ＮＣＡＭ１を発現する。処置は、腫瘍細胞の接種後、１５日目に開始した。処置における平均腫瘍サイズは、２３３ｍｍ３であった。ＡＢ０９５およびα−ＮＣＡＭ１−Ｈのレジメンは、Ｑ４Ｄｘ６とし、ＡＢＴ−１９９のレジメンは、ＱＤｘ２１とした。この実験の結果が図５および表１５に示されている。Ｂｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣは、単剤として、およびＡＢＴ−１９９と組み合わせて投与した。抗体およびコンジュゲートは、腹腔内に注射した。ＡＢＴ−１９９は経口投与した。図５において、１回の投与あたりの用量は、凡例に明記されている。曲線の各点は、５匹のマウスを含んだα  ＭＳＬ１０９−Ｈにより処置した群を除き、９個の腫瘍の平均を表す。エラーバーは、標準誤差を図示している。
【０６６１】
１１．２．３．  結果
Ｈ１９６３．ＦＰ５異種移植片の実験の結果が、以下の表１５に提示されている。ＮＣＡＭ１を標的とするコンジュゲートは、単剤として投与された場合、腫瘍成長の阻害を引き起こした。α−ＮＣＡＭ１−Ｈ（Ｎ９０１−Ｈ）は、腫瘍成長を７４％、阻害した（図５、表１５）。α−ＮＣＡＭ１−Ｈ（Ｎ９０１−Ｈとも称される。）の有効性は、裸の抗体または標的化されていない対照であるＭＳＬ１０９−Ｈの有効性のどちらかよりもかなり高いので、選択的であった（表１５）。Ｈ１４６異種移植片において観察された有効性と同様に、α−ＮＣＡＭ１−Ｈによる処置が、選択的Ｂｃｌ−２阻害剤であるＡＢＴ−１９９の投与と組み合わされると、著しい添加剤効果が認められた。
【０６６２】
【表１７】
2020152726.tif 000096
【０６６３】
［実施例１２］
Ｂｃｌ−ｘＬｉ抗体−薬物コンジュゲートは全身性毒性を軽減する
１２．１  血小板減少症の回避
抗体薬物コンジュゲートとしてのＢｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣの投与は、腫瘍を選択的に標的とすることにより、低分子の全身性毒性をおそらく回避することができる。この方法において、ＡＤＣは、全身性毒性を回避することができ、２つの可能な機構により、腫瘍に特異的な有効性を可能にする。第１に、細胞膜透過性Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤を有するＡＤＣの場合、担体抗体への結合は、低分子への全身性曝露を制限することができる。第２に、ＡＤＣは、非透過性Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤の内部移行を推進することができ、こうして、標的とされる抗原を有する腫瘍細胞に選択的に影響を及ぼす。第１の機構の証拠は、図６に示されている。
【０６６４】
１２．１．１．  方法および結果
マウスにおける、循環血小板数に及ぼす２種のＢｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣ（Ｂｃｌ−ｘＬｉ  ＡＤＣ）の影響を、単回腹腔内注射後に試験した（阻害性ＡＤＣは、抗ＥＧＦＲの抗体ＡＢ０３３を含み、ＡＢ０３３−ＨおよびＡＢ０３３−Ｉと呼ばれる。）。抗破傷風トキソイド抗体ＡＢ０９５をネガティブ対照として使用した。ナビトクラックス（ＡＢＴ−２６３、二重Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘＬ阻害剤）、Ａ−１３３１８５２（選択的Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、Ｌｅｖｅｒｓｏｎら、２０１５年、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．７：２７９ｒａ４０）および非コンジュゲートＢｃｌ−ｘＬ阻害剤は、血小板減少症を引き起こし、これは、本化合物の注射の６時間後に極大となった。３０ｍｇ／ｋｇでのＢｃｌ−ｘＬ  ＡＤＣにおいて見いだされるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤と等量となる、０．６１ｍｇ／ｋｇの用量により、約６＊１０５／ｍｍ３の正常数から６＊１０３／ｍｍ３へと血小板数が１００分の１に低下した。
【０６６５】
対照的に、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害性ＡＤＣのいずれも、投与の６時間後（表１６）、または１４日間の間の観察中のどの時間点においても、血小板の有意な減少を引き起こさなかった。後者の観察により、ＡＤＣからの阻害剤のゆっくりとした放出により引き起こされる血小板減少症が誘発される可能性はほとんどない。
【０６６６】
【表１８】
2020152726.tif 000097
【０６６７】
様々な具体的な実施形態が例示されて、記載されてきたが、本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解される。
【図１Ａ】
2020152726.tif 000117
【図１Ｂ】
2020152726.tif 000118
【図２Ａ】
2020152726.tif 000119
【図２Ｂ】
2020152726.tif 000120
【図２Ｃ】
2020152726.tif 000121
【図３Ａ】
2020152726.tif 000122
【図３Ｂ】
2020152726.tif 000123
【図３Ｃ】
2020152726.tif 000124
【図３Ｄ】
2020152726.tif 000125
【図４】
2020152726.tif 000126
【図５】
2020152726.tif 000127
【図６】
2020152726.tif 000128
【配列表】
2020152726000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年5月27日(2020.5.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンカーによって抗体に連結されている薬物を含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、薬物が、構造式（ＩＩａ）：
【化１】
2020152726.tif 000129
によるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤または医薬として許容されるこの塩（式中、
Ａｒは、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよい
【化２】
2020152726.tif 000130
から選択され、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨおよびＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）およびＳ（Ｏ２）から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４  Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびＣ１−４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３およびＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃは、それぞれ、水素、ハロ、Ｃ１−６アルカニル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよびＣ１−６ハロアルキルから相互に独立して選択され、
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、それぞれ、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮおよびＳＣＨ３から相互に独立して選択され、
ｎは、０、１、２または３であり、
＃は、リンカーＬへの結合点を表す。）である、抗体薬物コンジュゲート。
【手続補正書】
【提出日】令和2年5月28日(2020.5.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＤＣを作製する方法であって、構造式Ｄ−Ｌ−Ｒｘによるシントンが抗体に共有結合により連結する条件下において、シントンまたは医薬として許容されるこの塩を抗体に接触させるステップを含む方法であって、式中、
Ｄが薬物であり、
Ｌが、リンカーであり、および
Ｒｘが、シントンを抗体に共有結合により連結することが可能な官能基を含む部分であり、
さらに、薬物Ｄが、構造式：
【化１】
2020152726.tif 000131
によるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤または医薬として許容されるこれらの塩であり、
式中、
Ａｒは、ハロ、シアノ、メチルおよびハロメチルから独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよい
【化２】
2020152726.tif 000132
から選択され、
Ｚ１は、Ｎ、ＣＨおよびＣ−ＣＮから選択され、
Ｚ２は、ＮＨ、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）およびＳ（Ｏ２）から選択され、
Ｒ１は、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ２は、水素、メチル、クロロおよびシアノから選択され、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−４ヒドロキシアルキルであり、Ｒ４  Ｃ１−４アルカニル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４ハロアルキルおよびＣ１−４ヒドロキシアルキルは、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３およびＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３から独立して選択される１つ以上の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１０ａ、Ｒ１０ｂおよびＲ１０ｃは、それぞれ、水素、ハロ、Ｃ１−６アルカニル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルおよびＣ１−６ハロアルキルから相互に独立して選択され、
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、それぞれ、水素、メチル、エチル、ハロメチル、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、ＣＮおよびＳＣＨ３から相互に独立して選択され、
ｎは、０、１、２または３であり、
＃は、リンカーＬへの結合点を表し、
ここで、Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂが同一である、方法。
【請求項２】
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂがそれぞれメチルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｎが、０または１である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｄが、Ｗ１．０１、Ｗ１．０２、Ｗ１．０３、Ｗ１．０４、Ｗ１．０５、Ｗ１．０６、Ｗ１．０７およびＷ１．０８、ならびに医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
リンカーＬが、リンカーＩＶａ．１−ＩＶａ．７、ＩＶｂ．１−ＩＶｂ．１５、ＩＶｃ．１−ＩＶｃ．２、Ｖａ．１−Ｖａ．１２、Ｖｂ．１−Ｖｂ．４、Ｖｃ．１−Ｖｃ．９、Ｖｄ．１−Ｖｄ．２、ＶＩａ．１、Ｖ１ｃ．１−Ｖ１ｃ．２、Ｖ１ｄ．１−Ｖ１ｄ．３、および医薬として許容されるこれらの塩からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
Ｒｘが、シントンを抗体のアミノ基に連結することが可能な官能基を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
Ｒｘが、ＮＨＳ−エステルまたはイソチオシアネートを含む、請求項６に記載の方法。
【外国語明細書】
2020152726000001.pdf