(57)【要約】【課題】病的、外傷性及び複雑骨折を含む骨折の治癒プロセスを助ける、骨折治療方法を提供すること。【解決手段】少なくとも1つの生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む、組成物、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤及びパッチにより、上記課題を解決する。【選択図】図１
2020143096.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも1つの生分解性ポリマー、テストステロン、テストステロンエステル及びジヒドロテストステロンからなる群から選択されるアンドロゲン受容体アゴニスト、並びにアレンドロネート又はその医薬的に許容される塩を含む組成物であって、前記組成物が骨に対する局所投与のための組成物であり、前記アレンドロネート又はその塩の量が2μgから1mgの間であり、前記アンドロゲン受容体アゴニストの量が、20μgから10mgの間である、組成物。
【請求項２】
前記アレンドロネートの塩がアレンドロン酸ナトリウムである、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
前記少なくとも1つの生分解性ポリマーが、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、ポリカーボネート、ポリヒドロキシブチレート、ポリアルキレンオキサレート、ポリ無水物、ポリアミド、ポリエステルアミド、ポリウレタン、ポリアセタール、ポリケタール、ポリオルトカーボネート、ポリホスファゼン、ポリヒドロキシバレレート、ポリアルキレンスクシネート、ポリ(リンゴ酸)、ポリオルトエステル、並びに、コポリマー、ブロックコポリマー、分岐コポリマー及びそれらの混合物、例えば、ポリ-D,L-ラクチド(PDLLA)、ラクチド及びグリコリドのコポリマー(PLGA)、ラクチド及びs-カプロラクトンのコポリマー、ポリ(ラクチド-ε-カプロラクトン)(PLA-ε-CL)コポリエステル、及びポリラクチド-トリメチレンカーボネートコポリマー、並びに、アミノ酸ベースのポリマー、例えば、チロシンベースのポリアリレート及びポリカーボネート、並びにロイシン及び/又はリジンベースのポリエステルウレタン及びポリエステルアミドからなる群から選択される、請求項1または2一項に記載の組成物。
【請求項４】
請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物を含むパッチ。
【請求項５】
請求項1から3のいずれか一項に記載の前記組成物を含む第1の層、並びに前記アンドロゲン受容体アゴニスト、及び前記アレンドロネート又はその医薬的に許容される塩に対して実質的に不透過性である生分解性の第2の層を含む、請求項4に記載のパッチ。
【請求項６】
請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物を含む、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤。
【請求項７】
少なくとも前記アンドロゲン受容体アゴニストを徐々に放出する、請求項6に記載の注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤。
【請求項８】
テストステロン及びアレンドロネート又はアレンドロン酸ナトリウムを含む、請求項4から7のいずれか一項に記載のパッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤。
【請求項９】
請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物を含む骨充填剤。
【請求項１０】
請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物を含む、骨充填剤、医療機器及び/又は骨インプラント用のコーティング。
【請求項１１】
請求項10に記載のコーティングを備えた骨充填剤、医療機器又は骨インプラント。
【請求項１２】
治療における使用のための、請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
骨折又は骨欠損の局所治療の方法における使用のための、請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記方法が、請求項4若しくは5に記載のパッチ、若しくは請求項6若しくは7に記載の注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を、骨折若しくは骨欠損部位に適用する工程を含み、並びに/又は前記方法が、請求項9に記載の骨充填剤、若しくは請求項11に規定の骨充填剤、医療機器若しくは骨インプラントを、骨折若しくは骨欠損部位に若しくはその内部に導入する工程を含む、請求項13に記載の組成物。
【請求項１５】
骨折又は骨欠損の局所治療用の医薬の調製のための、テストステロン、テストステロンエステル及びジヒドロテストステロンからなる群から選択されるアンドロゲン受容体アゴニスト、アレンドロネート又はその医薬的に許容される塩、並びに少なくとも1つの生分解性ポリマーの使用であって、前記アレンドロネート又はその塩の量が2μgから1mgの間であり、前記アンドロゲン受容体アゴニストの量が、20μgから10mgの間である、使用。
【請求項１６】
前記治療が、請求項4若しくは5に記載のパッチ、若しくは請求項6若しくは7に記載の注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を、骨折部位に適用する工程を含み、並びに/又は前記治療が、請求項9に記載の骨充填剤、若しくは請求項11に規定の骨充填剤、医療機器若しくは骨インプラントを、骨折若しくは骨欠損部位に若しくはその内部に導入する工程を含む、請求項15に記載の使用。
【請求項１７】
前記骨折が複雑骨折又は病的骨折である、請求項15又は16に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨折及び/又は骨欠損の治療方法、詳細には骨折治癒を促進する方法、並びにこのような方法において使用するための組成物、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤（in situ depot forming formulations）及びパッチに関する。本発明は、このような方法において使用するための骨充填剤、医療機器及び骨インプラントにも関する。本発明は、詳細には骨折及び骨欠損の短期局所治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
骨折とは、骨の完全又は不完全な切断である。骨折は、強力な衝撃又は応力の結果であることもあれば、又は骨を弱くする特定の医学的状態の結果としての軽微な損傷の結果でもありうる。骨折は、外傷性骨折と称され、これはすなわち、落下、又は交通事故等の事故により引き起こされる骨折等の外傷により引き起こされる骨折である。骨粗しょう症、パジェット病又は骨がん等の骨を弱くする基礎疾患の結果である骨折は、病的骨折と称される。覆っている皮膚が破れておらず、骨が空気に曝露していない場合、骨折は単純(又は閉鎖)と呼ばれる。皮膚が破れ、骨が曝露している場合、骨折は開放(compound)(又は開放(open))骨折と呼ばれる。
【０００３】
骨折治癒は、部分的に重複する3つの期、炎症期、修復期及び再造形期に分けられる。炎症期の間には、骨折後最初の数時間〜数日以内で骨折部位内に血腫が生じる。マクロファージ、単球、リンパ球及び多形核細胞を含む炎症細胞、並びに線維芽細胞が骨に浸潤し、その結果、肉芽組織の形成、血管組織の増殖、及び間葉系細胞の移動が起こる。修復期の間に、血腫が骨折部位から除去され、肉芽組織で置き換えられて、修復部位での軟性仮骨の形成に至る。この期間中に、造骨及び軟骨細胞の分化が起こる。軟性仮骨が硬性仮骨に再造形され、骨形成細胞により新生骨が形成される。骨折治癒は再造形期の間に完了し、ここで、系統的な造骨/破骨活性により骨が元の形状、構造及び機械的強度まで回復される。再造形はゆっくりと起こり、完了するのに数ヶ月から数年を要する。
【０００４】
骨欠損は、例えば事故及び/若しくは骨折等の外傷、又は、例えば悪性骨腫瘍等の、外科手術による骨の一節の除去等の様々な原因の結果でありうる、骨のギャップ又は間隙である。現行の骨欠損の治療は、主として、骨セメント及び脱灰骨基質等の骨充填剤の使用を必要とする。更に骨セメントは、インプラントを既存の骨に接着させるのにも使用される。骨充填剤使用の主な欠点は、新生骨による再造形又は置き換えがなされないか限定されること、及びその結果として、既存の骨に接着することができないことである。骨セメント及び骨インプラントの更に重大な欠点は無菌性の剥離(aseptic loosening)である。無菌性の剥離とは、補綴用の充填剤及び/又はインプラントの周囲に、具体的には骨及びインプラント/充填剤が互いに隣接する部位に、間隙が生じることである。無菌性の剥離は、最初の固定が不十分であった、経時的に固定が失われた、又はインプラント周囲での粒子誘導性の骨溶解により固定が失われた結果でありうる。無菌性の剥離は、骨セメント/インプラント界面の間隙からも生じうる。このような間隙は、インプラント導入後常に存在し、典型的には、主に数個の細胞及び血管のみを含む線維組織により満たされる。動作の間等に繰り返される機械的ストレスが、界面における外傷を誘発し、最終的に骨-インプラント界面を剥離させうる。無菌性の剥離には、インプラントの早期の交換が必要となる場合もある。
【０００５】
現在、骨折治癒を助ける、具体的には骨折が発生した後の初期段階において、外傷性及び/又は複雑骨折の治癒を促進する、限られた有効な治療のみが利用可能である。
【０００６】
ビスホスホネートは、破骨細胞性骨吸収に対し阻害効果を有する。これらは、骨粗しょう症、パジェット病及び骨がん等の、骨吸収の増加を伴う疾患に使用されてきた。ビスホスホネートの活性は、骨量減少を防止し、破骨細胞媒介性の骨吸収を阻害することにより骨強度を改善すると考えられている。しかし、ビスホスホネートは骨折リスクを低下させるが、折れた骨の治癒又は骨組織の発生においては機能を有しないことのみが判明している。実際、骨折治癒中の再造形期において、仮骨を骨に再造形するのには破骨細胞が必要であるため、骨折後の骨の治癒中にビスホスホネートを用いて治療することは、しばしば有害であると考えられている。
【０００７】
複数の動物研究において、ビスホスホネートは、仮骨サイズ及び骨塩量に対しプラスの効果を有することが示されている。しかし、これは、骨強度の増加又は治癒の促進をもたらすことはなく、仮骨再造形における破骨細胞の不可欠な役割を裏付けていた。Einhorn, TA(2010)は、動物モデルにおける骨折の薬理学的治療の概要を提供している。ビスホスホネートは、仮骨サイズの増加だけでなく、骨折の長期治療後の仮骨再造形及び/又は骨形成の低下をもたらすことが報告されている。ビスホスホネートによる全身治療後の、仮骨サイズの増加及び骨塩量の増加について報告する短期研究が記載されている。ビスホスホネートの局所適用によっても、仮骨サイズ及び骨塩量が増加したが、これは仮骨強度の増加にはつながらなかった。著者は、ビスホスホネートの局所適用が骨折治癒プロセスに対して阻害効果を有し、長期的なビスホスホネート治療が有益な治療となりうると結論付けている。
【０００８】
ビスホスホネートは、骨に埋め込まれるネジのコーティングにも使用されている、例えばWermelin Kら(2008)及びAspenberg Pら(2008)を参照のこと。Wermelin Kら(2008)は、骨へのチタンインプラントの固定が、ビスホスホネートコーティングにより改善されることを報告している。Aspenberg Pら(2008)は、ビスホスホネートと、血清カルシウムレベルを増加させる、アミノ酸84個のポリペプチドである副甲状腺ホルモン(PTH)との組み合わせを使用している。継続的なPTH曝露では破骨細胞活性が刺激されるが、断続的な曝露では造骨細胞が刺激され、骨粗しょう症における全体的な効果は、PTHが骨形成に対しプラスの効果を有することである。Aspenberg Pら(2008)は、ステンレス鋼ネジのコーティングとして、PTH及びビスホスホネートが、骨へのネジの固定に対し相加効果を有することを報告している。
【０００９】
最近の、Xueら(2014)によるランダム化比較試験のメタ解析により、動物研究で得られた結果が確認されている。Xueらは、これらのメタ解析により、ビスホスホネートが短期及び長期骨治癒に対して効果を有しないことが明らかになったと報告している。
【００１０】
テストステロンは、造骨細胞の活性に作用し、骨形成を増加させるタンパク質同化剤である。テストステロンレベルが低いヒトにおいて骨粗しょう症が診断された後の、骨粗しょう症を防止するため、又は更なる骨量減少を防止するためのテストステロンの使用について臨床試験が実施され、結果として骨密度のわずかな増加が起こった。しかし、肝臓及び心血管系に対する副作用のため、テストステロンはこのような適用については承認されていない。マウスにおける外傷性骨折に対するテストステロンの効果が、Chengら(2013)により記載されている。スキャホールドにおけるテストステロンの局所適用により、仮骨形成及び仮骨における破骨細胞数の増加が誘導された。仮骨再造形及び生じた骨の強度に対する効果は報告されていない。
【００１１】
ビスホスホネート及びアンドロゲンによる併用療法がWO 98/23274に記載されている。しかし、この文献は、骨折又は骨欠損の治療には取り組んでいない。代わりにこれは、骨粗しょう症及びパジェット病等の、骨吸収を伴う疾患の治療に関し、これらの病理学的なプロセスは、例えば骨折又は骨欠損後の骨損傷及び修復とは大幅に異なる。この文献は更に、骨の局所治療に関していない。
【００１２】
骨治癒プロセス中、患者は活動を深刻に妨げられ、生活の質に対し実質的な影響を被る場合がある。患者は例えば、通常の毎日の活動を行うにあたっての困難、及び仕事をする能力の制限を受け、生産性の制限、自立性の喪失、自尊心の低下、及び場合により慢性的な痛みにつながる。上記の通り、全体の治癒プロセスは完了するのに数ヶ月〜数年を要する。したがって、骨折の治癒を助ける薬物治療が必要とされている。このような薬物治療は、好ましくは、骨折が治癒する合計時間が減少するように、骨折後の骨の治癒を促進する。上記で論じられた骨充填剤及び骨インプラントの使用に伴う欠点に取り組む、改善された骨欠損治療が更に必要とされている。更に、上記で論じられた骨折部位以外の位置における骨代謝の抑制だけでなく、例えば経口投与後の低カルシウム血症及び上部GI副作用等も含むビスホスホネートの副作用、並びに肝臓又はその他の器官、生殖器系、心血管系及び血清脂質プロファイル、及び行動に対する副作用等の、タンパク質同化薬の副作用を回避し、しかし同時に、骨折部位の持続的な治療をもたらす、骨折又は骨欠損の薬物治療が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】WO 98/23274
【特許文献２】WO 2011/161531
【特許文献３】WO 2010/018159
【特許文献４】WO 2005/068533
【特許文献５】WO 2013/015685
【特許文献６】WO 2012/175746
【特許文献７】WO 2012/175748
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Kicman AT, British Journal of Pharmacology (2008) 154、502〜521頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
病的、外傷性及び複雑骨折を含む骨折の治癒プロセスを助ける、骨折治療方法を提供することが本発明の目的である。例えば骨インプラント及び骨充填剤等の既存の骨への付着を改善するため、骨形成を刺激し骨吸収を阻害する、骨欠損治療方法を提供することが、本発明の更なる目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって本発明は、患者、好ましくはヒト患者における骨折又は骨欠損を治療する方法であって、少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩との組み合わせを含む、パッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を、骨折又は骨欠損部位に投与する工程を含み、及び/又は少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート若しくはその医薬的に許容される塩との組み合わせを含む骨充填剤、又は少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート若しくはその医薬的に許容される塩との組み合わせを含むコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくは骨インプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程を含む、方法を提供する。
【００１７】
更なる態様において、本発明は、骨折又は骨欠損の治療方法において使用するための、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む組成物を提供する。前記方法は、好ましくは、少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩との組み合わせを含む、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤又はパッチを、骨折又は骨欠損部位に適用する工程、及び/又は少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート若しくはその医薬的に許容される塩との組み合わせを含む骨充填剤、又は少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート若しくはその医薬的に許容される塩との組み合わせを含むコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくは骨インプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程を含む。
【００１８】
更なる態様において、本発明は、骨折又は骨欠損の治療用の医薬の調製のための、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩の使用を提供する。前記治療は、好ましくは、少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩との組み合わせを含む、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤又はパッチを、骨折又は骨欠損部位に適用する工程、及び/又は少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート若しくはその医薬的に許容される塩との組み合わせを含む骨充填剤、又は少なくとも1つの生分解性ポリマー、及びアンドロゲン受容体アゴニストと、ビスホスホネート若しくはその医薬的に許容される塩との組み合わせを含むコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくは骨インプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程を含む。
【００１９】
更なる態様において、本発明は、少なくとも1つの生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む組成物を提供する。
【００２０】
更なる態様において、本発明は、少なくとも1つの生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む組成物を含む、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤、パッチ、コーティング及び骨充填剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】アレンドロネート、ジヒドロキシテストステロン(スタノロン)及びそれらの組み合わせによる、MC3T3細胞の活性の誘導を示す図である。ALP:アルカリホスファターゼ、AP:酸性ホスファターゼ。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、骨修復、具体的には骨折又は骨欠損の治療、より具体的には骨折又は骨欠損の局所治療に関する。したがって、組成物、パッチ及び製剤は、好ましくは、骨への局所投与及び/又は骨の局所治療用である。「骨折」という語は、本明細書では、完全及び不完全骨折の両方、並びに外傷性骨折及び病的骨折の両方を含む。「完全骨折」は骨全体の径にわたる切断を指し、「不完全切断」は骨全体の径に及ばない部分的な骨折を指す。「外傷性骨折」は、本明細書では、落下又は交通事故等の事故により引き起こされる骨折等の外傷により引き起こされる骨折を指す。「病的骨折」は、本明細書では、骨粗しょう症又は骨がん等の骨を弱くする基礎疾患の結果である骨折を指す。「骨欠損」という語は、骨のギャップ又は間隙を指す。このような間隙又はギャップの発生の根底にありうる因子の例には、落下又は事故により引き起こされる外傷等の外傷、(脊椎)圧迫骨折、骨嚢胞、例えば、原発性骨腫瘍と、例えば乳、前立腺、肺若しくは腎臓がん、又は多発性骨髄腫等のその他のタイプのがんの転移とを両方含めた骨腫瘍等のがん誘導性欠損、及びこのような腫瘍の外科的除去が含まれるが、これに限定されない。このような骨欠損は、典型的には、骨間隙充填剤又は骨インプラントを骨欠損部位に導入することで治療される。
【００２３】
理論に拘束されることを望むものではないが、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩の併用療法の活性は、少なくともある程度、骨折又は骨欠損部位に局所的に投与された際の2つの活性化合物の相乗効果、具体的にはアンドロゲン受容体アゴニストのタンパク質同化効果、及びビスホスホネートの抗異化効果の相乗効果の結果であると考えられている。図1に示す通り、ビスホスホネート及びアンドロゲン受容体アゴニストの組み合わせにより、ビスホスホネート単独と比較して、造骨細胞活性の実質的かつ有意な増大がもたらされる。ビスホスホネートは、細胞内メバロン酸経路を阻害し、その結果破骨細胞シグナル伝達分子グアノシントリホスファターゼの膜局在化を損なうことにより、又はATPの非加水分解性アナログに代謝させることにより、その両方が破骨細胞のアポトーシスを導き、破骨細胞媒介性の骨吸収を阻害する。アンドロゲン受容体アゴニストは、アンドロゲン受容体への結合を介して造骨細胞の増殖及び分化を増強することで、骨の発達に作用する。アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン、及びビスホスホネートの併用局所効果は、具体的には骨折後の初期段階、最大4ヶ月で、骨量減少の防止及び骨強度の改善に相乗的に作用すると考えられている。
【００２４】
本発明の組成物、製剤及びパッチは、2つの活性化合物、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩の組み合わせを含む。「アンドロゲン受容体アゴニスト」は、本明細書では、アンドロゲン受容体(AR)に結合し、これを活性化する任意の天然又は合成化合物を指す。好ましいアンドロゲン受容体アゴニストは、タンパク質同化ステロイドであり、より好ましいものはテストステロン又はその誘導体である。「タンパク質同化ステロイド」という語は、当技術分野で十分に理解されており、テストステロンと類縁のステロイドホルモンのクラスを指す。タンパク質同化ステロイドは、Kicman AT, British Journal of Pharmacology (2008) 154、502〜521頁で概説されている。「テストステロン又はその誘導体」は、本明細書では、テストステロン、テストステロンエステル、テストステロン前駆体、テストステロン代謝物及びテストステロンアナログを指す。本発明の組成物及び方法において有用な適切な誘導体の例は、テストステロンエステルである、シピオン酸テストステロン、デカン酸テストステロン、エナント酸テストステロン、イソカプロン酸テストステロン(testosterone isocaproate)、フェニルプロピオン酸テストステロン、プロピオン酸テストステロン及びウンデカン酸テストステロン;テストステロン前駆体である、アンドロステンジオン、4-アンドロステンジオン、5-アンドロステンジオン、アンドロステンジオール、5-アンドロステンジオール、4-アンドロステンジオール及びデヒドロエピアンドロステロン;テストステロン代謝物である、ジヒドロテストステロン及びエチオコラノロン;テストステロンアナログである、メチルテストステロン、アンドロステロン、エピアンドロステロン、ナンドロロン、17α-エチルテストステロン及びフルオキシメステロンである。したがって、テストステロン又は誘導体は、好ましくは、テストステロン、シピオン酸テストステロン、デカン酸テストステロン、エナント酸テストステロン、イソカプロン酸テストステロン、フェニルプロピオン酸テストステロン、プロピオン酸テストステロン、ウンデカン酸テストステロン、アンドロステンジオン、4-アンドロステンジオン、5-アンドロステン
ジオン、アンドロステンジオール、5-アンドロステンジオール、4-アンドロステンジオール、デヒドロエピアンドロステロン、ナンドロロン、ジヒドロテストステロン、エチオコラノロン、メチルテストステロン、アンドロステロン、エピアンドロステロン、17α-エチルテストステロン及びフルオキシメステロンからなる群から選択される。より好ましくは、テストステロン又は誘導体は、テストステロン、ナンドロロン及びジヒドロテストステロンからなる群から選択される。最も好ましくは、アンドロゲン受容体アゴニストはテストステロンである。
【００２５】
本発明に従って骨折又は骨欠損部位に局所的に適用されるアンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはタンパク質同化ステロイド、より好ましくはテストステロン又はその誘導体の量は、好ましくはアンドロゲン受容体アゴニストの全身的効果が生じず、結果として、肝臓又はその他の器官、生殖器系、心血管系及び血清脂質プロファイルに対する副作用等の、アンドロゲン受容体アゴニストの副作用が回避されるような量である。このことは、アンドロゲン受容体アゴニストの投与量により、好ましくは、ヒトにおける血清テストステロン平均濃度の4倍、好ましくは2倍を上回る血清レベルが生じないことを意味する。したがって、本発明に従って局所的に適用されるテストステロン又は誘導体、好ましくはテストステロンの好ましい量は、1μgから10mgの間、より好ましくは5μgから5mgの間、より好ましくは15μgから2.5mgの間、より好ましくは20μgから1.5mgの間、最も好ましくは約50μgである。この量は、好ましくは本発明によるパッチ又は注射可能なデポ形成製剤に存在する。医療機器又はインプラントのコーティングとして骨折又は骨欠損部位に局所的に適用される、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはタンパク質同化ステロイド、より好ましくはテストステロン又はその誘導体の量は、更に小さくてよい。このようなコーティングとして本発明に従って局所的に適用されるテストステロン又は誘導体の好ましい量は、コーティングされる表面1cm2当たり10ngから2.5μgの間である。
【００２６】
本明細書で定義される別のアンドロゲン受容体アゴニスト又はテストステロン誘導体がテストステロンの代わりに使用される場合、その局所的に適用される量は、好ましくは、上記のテストステロン量と同等である。例えば、アンドロステロンは、テストステロンの効力の約1/7の効力を有するテストステロンアナログである。したがって、アンドロステロンが本発明に従って使用される場合、適用される量は好ましくは、テストステロンについて上記に示された量の7倍である。
【００２７】
「ビスホスホネート」という語は当技術分野で周知であり、2つのリン酸(PO3)基を有する、破骨細胞性骨吸収に対する阻害効果で知られる薬物のクラスを指す。本発明に従って使用される好ましいビスホスホネートは、アレンドロネート、リセドロネート、イバンドロネート、パミドロネート、クロドロネート、ゾレドロネート、エチドロネート、チルドロネート、ミノドロネート、オルパドロネート、ネリドロネート、インカドロネート及びそれらの混合物からなる群から選択される。より好ましいビスホスホネートは、窒素含有ビスホスホネートからなる群、好ましくはアレンドロネート、リセドロネート、イバンドロネート、パミドロネート、ゾレドロネート、ミノドロネート、オルパドロネート、ネリドロネート、インカドロネートからなる群から選択される。特に好ましいビスホスホネート及び塩は、アレンドロネート又はアレンドロネートナトリウムである。「医薬的に許容される塩」という語は、本明細書では、実質的に毒性及びアレルギー反応等の副作用なしに、哺乳類、好ましくはヒトの治療において使用するのに適したビスホスホネート塩を指す。本発明に従って骨折部位に局所的に適用されるビスホスホネート又はその塩、好ましくはアレンドロネート又はアレンドロネートナトリウムの量は、好ましくは、ビスホスホネートの全身的効果が生じず、結果として、骨折部位以外の位置における骨代謝の抑制、低カルシウム血症及び上部GI副作用等の、ビスホスホネートの副作用が回避されるような量である。本発明に従って局所的に適用されるビスホスホネート又はその塩の好ましい量は、0.1μgから1mgの間、より好ましくは0.1μgから500μgの間、より好ましくは1μgから250μgの間、より好ましくは1.5μgから150μgの間、より好ましくは2から100μgの間、最も好ましくは約50μgである。この量は好ましくは、本発明によるパッチ又は注射可能なデポ形成製剤に存在する。医療機器又は骨インプラントのコーティングとして骨折又は骨欠損部位に局所的に適用されるビスホスホネート又はその塩の量は、更に小さくてよい。このようなコーティングとして本発明に従って局所的に適用されるビスホスホネート又はその塩の好ましい量は、コーティングされる表面1cm2当たり20〜500ngから2.5μgの間である。これらの量は好
ましくは、ビスホスホネート又はその塩がアレンドロネート又はアレンドロネートナトリウムである場合に使用される。ゾレドロネート又はその塩が本発明に従って使用される場合、ゾレドロネートはアレンドロネートと比較して約20〜80倍活性が高いため、適用される量は好ましくは、上記に示された量の20〜80分の1である。したがって、ゾレドロネートがパッチ又は注射可能なデポ形成製剤として本発明に従って局所的に適用される場合、その量は好ましくは、1ngから50μgの間、より好ましくは1ngから25μgの間、より好ましくは12.5ngから12.5μgの間、より好ましくは20ngから7.5μgの間、より好ましくは25ngから5μgの間である。コーティングとして本発明に従って局所的に適用されるゾレドロネート又はその塩の好ましい量は、コーティングされる表面1cm2当たり0.25から25ngの間である。
【００２８】
少なくとも1つの生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む本発明による組成物は、固体状又は液体状又は半固体状のいずれかであってよい。組成物は、好ましくは骨、具体的には骨折又は骨欠損に対する局所適用のためのものである。
【００２９】
好ましい実施形態において、本発明による組成物は、室温及びインビボで、すなわち約37℃で固体状である。この場合、本発明の組成物を含む、又は本発明の組成物からなるインプラントが、患者の体内に、例えばパッチの形態で埋め込まれてよい。したがって、本発明による組成物を含むパッチも提供される。「パッチ」は本明細書では、本発明による生分解性ポリマー及び活性化合物の組み合わせを含むシート等の一片の固体、好ましくはフレキシブルな材料を指す。本発明によるパッチは、観血法の必要なしに骨折部位に到達可能であり、及び/又は、折れた骨若しくは周辺組織若しくは脈管構造の補助治療のため、例えば整形外科医が骨折部位に到達する必要がある、開放及び/又は複雑骨折の治癒を刺激するのに特に適している。本発明によるパッチは、好ましくは骨折部位に適用され、より好ましくは骨折部位がパッチで覆われる。或いは、本発明によるパッチは、好ましくは骨欠損部位に適用され、より好ましくは骨欠損部位がパッチで覆われる。このように、活性化合物の段階的な放出が、骨折部位で濃縮される。したがって、パッチは好ましくは骨、具体的には骨折又は骨欠損に対する局所適用のためのものである。
【００３０】
骨折治癒を助けるため、パッチは折れた骨に活性成分を放出するだけでよい、すなわち活性化合物の放出は、骨折部位への一方向だけでよい。同様に、骨充填剤又はインプラントの既存の骨への接着を刺激するために、パッチは骨欠損部位に活性成分を放出するだけでよい、すなわち活性化合物の放出は、骨欠損部位への一方向だけでよい。したがって、本発明による組成物を含むパッチであって、本発明による前記組成物を含む第1の層、並びに前記アンドロゲン受容体アゴニスト、及び前記ビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩に対して実質的に不透過性である生分解性の第2の層を含む、パッチも提供される。前記第2の層は、好ましくは、本発明による組成物、すなわちパッチの第1の層に存在するものと同じ生分解性ポリマーでも、異なる生分解性ポリマーでもよい、少なくとも1つの生分解性ポリマーも含む又はからなる。折れた骨又は骨欠損に適用される際、第1の層は折れた骨又は骨欠損に面するパッチ内層となり、第2の層は折れた骨又は骨欠損に面しないパッチ外層となる。このような層の存在が、骨折又は骨欠損部位以外の患者体内に放出される活性化合物量を防止又は少なくとも減少させる。このことにより、活性化合物の望ましくない効果が減少し、パッチに存在する必要がある活性化合物量が減少しうる。本明細書では、「実質的に不透過性である」は、パッチの第2の層からパッチの第1の層内へ、又はこれを通って経時的に放出される活性化合物量が、パッチの第2の層から折れた又は欠損した骨の方向へ放出される薬物量の、最大で1/5、好ましくは最大で1/10、より好ましくは最大で1/100であることを意味する。
【００３１】
本発明によるパッチは、例えば、両方の活性化合物、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはタンパク質同化ステロイド、より好ましくはテストステロン又はその誘導体、より好ましくはテストステロン、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩、好ましくはアレンドロネートを、少なくとも1つの生分解性ポリマーを含む溶液中に分散又は溶解させることで調製することができる。これにより、組成物を凝固させ、場合により更に加工した後に、両方の活性化合物がパッチ又はパッチの第1の層中にほぼ均一に分布したパッチが生じる。或いは、各活性化合物が、少なくとも1つの同じ又は異なる生分解性ポリマーを含む溶液中に別々に分散又は溶解した、2つの独立した組成物が調製されてもよい。次いで、各組成物が別々に凝固され、場合により更に加工され、その後2つの固体製剤、少なくとも1つの生分解性ポリマー及びアンドロゲン受容体アゴニストを含む第1の製剤、並びに少なくとも1つの生分解性ポリマー及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む第2の製剤を組み合わせることで、パッチが形成される。両方の固体製剤を組み合わせることにより、2つの部分、アンドロゲン受容体アゴニストを含む部分、及びビスホスホネート又はその塩を含む第2の部分を含む単一の組成物又はパッチが生じる。
【００３２】
本発明による組成物を含む注射可能な製剤が更に提供される。このような注射可能な製剤は、保存温度(典型的には2〜8℃)及び/又は室温(典型的には15〜25℃)では液体、ゲル状又は半固体であるが、インサイチュで、すなわち温度約37℃では凝固する。本明細書では、「注射可能な製剤」という語は、注射により折れた骨に適用することができ、凝固してその結果注射部位に留まることを意図された製剤を指す。このような注射可能な製剤は、骨欠損部位にも適用可能である。本明細書では、「インサイチュで凝固する」は、製剤を注射部位に留まらせるのに十分に、患者への投与後に注射可能な製剤の粘度が増大し、例えば固体、半固体、ペースト状又はゲル状になることを指す。本発明の注射可能な製剤は室温で、注射に適した、例えばシリンジを使用して注射可能な粘度を有する。注射可能なインサイチュのデポ製剤の粘度は、好ましくは300から800mPasの間である。このような注射可能な製剤は、例えば液体又はゲル状である。骨折又は骨欠損部位である注射位置で凝固した後、製剤は、少なくともアンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体、より好ましくはテストステロン、ナンドロロン又はジヒドロテストステロンを経時的に徐々に放出するデポ製剤として機能する。ビスホスホネートは放出後に骨に蓄積し、そのため短期間内に放出されたとしてもその活性を長期間発揮しうるため、ビスホスホネートがデポ製剤又はパッチから徐々に放出される必要はない。好ましくは、デポ製剤は、両方の活性化合物、すなわちアンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を徐々に放出する。したがって、本発明による注射可能な製剤は、好ましくは注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤である。したがって、注射可能な製剤は、好ましくは骨、具体的には骨折又は骨欠損に対する局所適用のためのものである。
【００３３】
本発明による注射可能なインサイチュのデポ製剤は、凝固した後に生じるデポ製剤が、骨折部位のかなりの部分、すなわち少なくとも25%、好ましくは少なくとも50%、より好ましくは少なくとも75%を覆うように、例えば、骨折部位全体に製剤を投与することで適用される。最も好ましくは、実質的に骨折部位全体が凝固したデポ製剤で覆われる。注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤は、単回注射又は頻回注射により骨折部位に適用されてよい。
【００３４】
本発明による組成物を含む骨充填剤が更に提供される。「骨充填剤」という語は、本明細書では、当技術分野で周知であり「骨間隙充填剤」とも称される。この語は、骨のギャップ又は間隙を満たすために使用可能な材料を指す。最も一般的な骨充填剤のタイプは、骨セメント及び脱灰骨基質である。脱灰骨基質(DBM)は、コラーゲンのマトリックスが残るように、大部分の細胞だけでなく無機ミネラルも除去された、提供されたヒト組織由来の同種移植骨である。次いで、脱灰骨は生体適合性の担体と組み合わされ、脱灰骨基質が生じる。生体適合性の担体として使用するための適切な材料は、ヒアルロン酸、デキストラン、及びポリエチレンオキシドとポリプロピレンとのプルロニックブロックコポリマーである。「骨セメント」は当技術分野で周知であり、例えばギャップ若しくは間隙を満たすため、骨の中若しくは周囲に、又はインプラント若しくはネジ若しくはプレートを既存の骨に固定するため、骨インプラントと周辺の骨との間に投与可能な材料を指す。最も一般的な骨セメントのタイプは、ポリメチルメタクリレート(PMMA)、若しくはPMMAとMMAとのコポリマーブレンドを含むセメント、並びに、例えばリン酸四カルシウム、リン酸三カルシウム及び/若しくはリン酸二カルシウム無水物を含むリン酸カルシウムセメント、又はそれらの複合材である。骨セメントは一般的に、2成分材料として提供される。PMMA/MMAベースのセメントの2つの成分が混合されると重合が誘導され、その結果、局所的に適用できるようにセメント粘度の変化が生じ、その後適用部位で固体セメントに硬化する。リン酸カルシウムセメントは、典型的には粉末及び液相からなる。水と混合すると、粉末組成物がヒドロキシアパタイトを形成する。
【００３５】
生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体、及びビスホスホネートを含む、本発明による組成物は、例えば、これらが混合され硬化される前に、1つ又は複数の骨セメント成分と混合されるか、又は脱灰骨基質と混合される。本発明の組成物は、例えば、骨欠損又は骨折部位に適用される前、したがって充填剤が硬化する前に、ミクロスフェアの形態の1つ又は複数の骨セメント成分又は脱灰骨基質を構成する成分と混合される。したがって、本発明による組成物を含む骨充填剤が提供される。好ましくは、前記組成物は骨充填剤中にミクロスフェアの形態で存在する。したがって、本発明による組成物を含むミクロスフェアを含む、骨充填剤が提供される。ミクロスフェアは、例えば、平均サイズ1μm〜1000μmを有する。骨充填剤は、好ましくは骨セメント又は脱灰骨基質である。
【００３６】
或いは、本発明による組成物は、コーティングの形態で骨充填剤表面に適用されてもよい。本発明による組成物を含むこのようなコーティングは、医療機器及び骨インプラントとともに使用するのにも適している。したがって、コーティングは好ましくは、骨、具体的には骨折又は骨欠損の部位における局所適用のためのものである。したがって、本発明による少なくとも1つの生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む組成物を含む、好ましくは骨充填剤、骨インプラント及び/又は医療機器用のコーティングが更に提供される。本発明によるコーティングを備えた骨充填剤、医療機器又は骨インプラントも提供される。本発明によるコーティングは、例えば、両方の活性化合物、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはタンパク質同化ステロイド、より好ましくはテストステロン又はその誘導体、より好ましくはテストステロン、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩、好ましくはアレンドロネートを、少なくとも1つの生分解性ポリマーを含む溶液中に分散又は溶解させることで調製することができる。コーティングは、適切な物品に適用され、その後例えば冷却によって凝固可能である。「コーティング」という語は、本明細書では、骨充填剤、医療機器若しくは骨インプラント表面を完全に、又はその部分を覆うコーティングを含む。コーティングは好ましくは、骨充填剤、医療機器又は骨インプラント表面の少なくとも50%を覆う。「医療機器」という語は、本明細書では、ヒト又は動物体内において、好ましくは骨組織内又はその周囲で使用可能な任意のタイプの機器を指し、ネジ、骨プレート、ピン及び脊椎ロッドを含むが、これに限定されない。このような医療機器は、好ましくは、骨組織において使用するための医療機器である。「骨インプラント」という語は、本明細書では、骨に導入又は付着可能な任意のタイプのインプラントを指し、歯科インプラント、脊椎インプラント、並びに膝関節、股関節、足首関節、肩関節、肘関節及び手首関節を含むがこれに限定されない代用関節を含むが、これに限定されない。
【００３７】
本明細書で先に示した通り、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩の併用療法は、少なくともある程度、骨折又は骨欠損部位に局所的に投与された際の2つの活性化合物の相乗効果、具体的には、アンドロゲン受容体アゴニストのタンパク質同化効果、及びビスホスホネートの抗異化効果の相乗効果の結果である。医療機器又は骨インプラントのコーティングとして、及び骨充填剤中又はその表面に使用される場合、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩の組み合わせは、具体的には骨充填剤及び/又はインプラントが骨折又は骨欠損部位に導入された後の初期段階で、新生骨の形成を刺激すると考えられている。その結果として、骨充填剤、ネジ、プレート若しくはピン等の医療機器、及び骨充填剤及び/又はインプラントの既存の骨への付着が改善され、より急速に起こり、もしあれば、骨折治癒が刺激される。
【００３８】
上記の、本発明によるパッチ又は注射可能なデポ形成製剤は、骨間隙充填剤及び/又は骨インプラントが骨欠損部位に導入された骨欠損において、新生骨の形成を刺激するのにも適している。パッチ又は注射可能なデポ形成製剤は、骨と骨充填剤及び/又は骨インプラントとの間の界面を覆うように、上記で説明されたように骨欠損部位に適用される。このようなパッチ又は注射可能なデポ製剤における、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩の併用活性は、骨充填剤及び/又は骨インプラントの既存の骨への付着を刺激する。
【００３９】
本発明によるパッチ、デポ製剤、骨充填剤及びコーティングは、骨折部位に局所的に投与されると、2つの活性化合物のうち少なくとも1つを徐々に放出する。好ましくは少なくともアンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体が、デポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングから徐々に放出される。ビスホスホネートは、放出後に骨に蓄積し、そのため短期間内に放出されたとしてもその活性を長期間発揮しうるため、ビスホスホネートがデポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングから徐々に放出される必要はない。好ましくは、デポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングは、両方の活性化合物、すなわちアンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を徐々に放出する。本明細書では、「徐々に」は好ましくは、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン若しくはその誘導体、又は両方の活性化合物が、骨折又は骨欠損部位への投与又は適用後1日から4ヶ月の間の期間、デポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングから放出されることを意味する。好ましくは、アンドロゲン受容体アゴニスト又は両方の活性化合物が、1日から12週間の間、より好ましくは1日から10週間の間、最も好ましくは2から10週間の間、例えば約4、5、6、7又は8週間の期間、デポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングから放出される。それぞれが活性化合物のうち1つを含む2つの独立した部分を含む、本発明による固体組成物又はパッチにおいて、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその塩の放出特性が同じでないような、各部分における生分解性ポリマーを選択することができる。例えば、アンドロゲン受容体アゴニストと比較して、ビスホスホネート又は塩がより短い期間で放出されるような、ポリマーのタイプ、分子量及び量を選択することができる。
【００４０】
本発明による組成物、注射可能な製剤、パッチ、骨充填剤及びコーティングは、少なくとも1つの生分解性ポリマーを更に含む。好ましくは、組成物、注射可能な製剤、パッチ及びコーティングは、その全体が生分解性である。したがって、本発明に従って、生分解性の組成物、注射可能な製剤、パッチ及びコーティングが提供される。「生分解性」という語は、本明細書では、インビボで徐々に溶解、分解、加水分解及び/又は侵食する材料を指す。概して、「生分解性ポリマー」は、本明細書では、加水分解性の、並びに/又はインビボで加水分解及び/若しくは酵素作用を受けるポリマーである。「生分解性ポリマー」という語は、本明細書では、インビボで使用及び分解可能である、任意の生分解性合成ポリマー及び天然ポリマーを含む。生分解性ポリマーを使用する利点は、本発明による組成物、注射可能な製剤、パッチ及びコーティングを、活性化合物が放出された後、患者体内から除去する必要がないことである。
【００４１】
インビボで活性化合物を徐々に放出させるために使用可能な、当技術分野で既知の任意の生分解性ポリマー又はコポリマーが、本発明の組成物、注射可能な製剤及びパッチに使用されうる。適切な生分解性ポリマー及びコポリマー、並びにそれらに関する方法が、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、WO 2011/161531、WO 2010/018159、WO 2005/068533、WO 2013/015685、WO 2012/175746及びWO 2012/175748に記載されている。適切な生分解性ポリマー及びコポリマーの例には、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、ポリカーボネート、ポリヒドロキシブチレート、ポリアルキレンオキサレート、ポリ無水物、ポリアミド、ポリウレタン、ポリエステルアミド、ポリアセタール、ポリケタール、ポリオルトカーボネート、ポリホスファゼン、ポリヒドロキシバレレート、ポリアルキレンスクシネート、ポリリンゴ酸、ポリオルトエステル、並びに、ポリ-D,L-ラクチド(PDLLA)、ラクチド及びグリコリドのコポリマー(PLGA)、ラクチド及びε-カプロラクトンのコポリマー、ポリ(ラクチド-ε-カプロラクトン)(PLA-ε-CL)コポリエステル、及びポリラクチド-トリメチレンカーボネートコポリマー等の、コポリマー、ブロックコポリマー及びそれらの混合物、並びにチロシンベースのポリアリレート及びポリカーボネート、及びロイシン及び/又はリジンベースのポリエステルウレタン等のアミノ酸ベースのポリマー、並びにポリエステルアミドが含まれるが、これに限定されない。好ましい生分解性ポリマーは、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ(グリコリド-ε-カプロラクトン)、ポリ(グリコリド-D、L-ラクチド)、ポリ(DL-ラクチド)、ポリ(グリコリド-ε-カプロラクトン)、アミノ酸ベースのポリエステルウレタン及びアミノ酸ベースのポリエステルアミドである。
【００４２】
本発明の組成物、製剤、パッチ、骨充填剤及びコーティングのための、生分解性ポリマーの種類、ポリマーのタイプ(単一モノマー又はコポリマー)、生分解性ポリマーの分子量、及び生分解性ポリマーの量の選択は、一般的に、パッチ、デポ製剤、骨充填剤及びコーティングの望ましい特性によって決まる。例えば、生分解性ポリマーのタイプ、分子量及び量は、本明細書で上記に示された通り、活性化合物がパッチ、デポ製剤、骨充填剤及びコーティングから放出される期間に影響を与えうる。活性化合物が放出される期間に加えて、放出の動態が、ポリマー又はポリマーの組み合わせの種類、タイプ、量、分子量等の選択により影響されうる。例えば、本発明による注射可能なインサイチュのパッチ、デポ製剤、骨充填剤及びコーティングを、骨折又は骨欠損部位に適用した後、活性化合物のうち1つ又は両方の初期バースト放出が起こるようなポリマーが選択されうる。この場合、例えば、活性化合物のうち1つ又は両方の活性化合物の1%、5%、10%又は更にそれ以上が、例えば骨折部位への適用から4又は8時間以内に放出される。しかし、このような初期バースト放出が防止され、両方の活性化合物の放出がゼロ次速度過程により起こることが好ましく、これは、パッチ、デポ製剤、骨充填剤及びコーティングからの活性化合物の放出が実質的に、経時的に直線状となることを意味する。したがって、好ましい実施形態において、デポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングは、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはテストステロン又はその誘導体、より好ましくはアンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩、好ましくはアレンドロネート又はアレンドロン酸ナトリウムの両方について、ゼロ次放出速度過程を示す。
【００４３】
更に、望ましい粘度によっても、本発明の組成物、注射可能な製剤、パッチ、骨充填剤及びコーティングに使用される生分解性ポリマーのタイプ、種類及び量が決定される。例えば、本発明による組成物が、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を生成するために使用される場合、室温で注射に適した粘度を有し、温度約37℃で凝固する、生分解性ポリマー又はポリマーの組み合わせが好ましくは選択される。或いは、本発明による組成物が、パッチ又はコーティングを調製するために使用される場合、高温、例えば42℃超、好ましくは50℃超で活性化合物を溶解又は分散させるのに適した粘度を有し、室温及び温度約37℃で固体となる、生分解性ポリマー又はポリマーの組み合わせが好ましくは選択される。
【００４４】
好ましい実施形態において、少なくとも1つの生分解性ポリマーは、アミノ酸ベースの、又はアミノ酸を含むポリマーである。特に好ましいものは、アミノ酸ベースの生分解性ポリエステルウレタン及びアミノ酸ベースの生分解性ポリエステルアミドである。このようなポリマーは、例えば、酵素活性によりインビボで主に分解され、その結果として、活性化合物の放出が主にゼロ次速度過程に従うようなものが選択されうるという利点を有する。特に好ましいアミノ酸ベースのポリマーが、WO 2012/175746及びWO 2012/175748に記載されている。式
【００４５】
【化１】
2020143096.tif 000003
【００４６】
のアミノ酸ベースのポリエステルアミド(PEA)が本明細書に記載される
[式中:
-  mは0.1〜0.9で変動し;pは0.9〜0.1で変動し;nは50〜l50で変動し;
-  各Rlは独立に、(C1〜C20)アルキレンであり;
-  各R2は独立に、水素又は(C6〜C10)アリール(C1〜C6)アルキルであり;
-  各R3は独立に、水素、(C1〜C6)アルキル、(C2〜C6)アルケニル、(C2〜C6)アルキニル又は(C6〜C10)アリール(C1〜C6)アルキルであり;
-  各R4は独立に、(C2〜C20)アルキレンである]。
好ましくは、mは0.01〜0.99で変動し;pは0.2〜3で変動し、qは0.10〜1.00で変動し、それによりnが5〜100となり;R1は-(CH2)8であり;主鎖単位m及びpのR3及びR4はロイシンであり、-R5はヘキサンであり、R6は構造式
【００４７】
【化２】
2020143096.tif 000004
【００４８】
の1,4:3,6-ジアンヒドロヘキシトールの二環式の断片である。
R7は、H又はベンジル基から選択され、R8は-(CH2)4-である。WO2012/175746及びWO 2012/175748に記載されている特に好ましいアミノ酸ベースのPEAコポリマーは、式
【００４９】
【化３】
2020143096.tif 000005
【００５０】
を有する
[式中、
-  m+pは0.9〜0.1で変動し、qは0.1〜0.9で変動し;
-  m+p+q=1、それによりm又はpが0となることがあり;
-  nは5〜300で変動し;
-  R1は独立に、(C2〜C20)アルキレン、(C2〜C20)アルケニレン、-(R9-CO-O-R10-O-CO-R9)-、-CHR11-O-CO-R12-COOCR11-及びそれらの組み合わせからなる群から選択され;
-  単一の主鎖単位m又はpのR3及びR4は、それぞれ独立に、水素、(Cl〜C6)アルキル、(C2〜C6)アルケニル、(C2〜C6)アルキニル、(C6〜C10)アリール、(C1〜C6)アルキル、-(CH2)SH、-(CH2)2S(CH3)、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2)4NH3+、--(CH2)3NHC(=NH2+)NH2、-CH2COOH、-(CH2)COOH、-CH2-CO-NH2、-CH2CH2-CO-NH2、-CH2CH2COOH、CH3-CH2-CH(CH3)-、(CH3)2-CH-CH2-、H2N-(CH2)4-、Ph-CH2-、CH=C-CH2-、HO-p-Ph-CH2-、(CH3)2-CH-、Ph-NH-、
【００５１】
【化４】
2020143096.tif 000006
【００５２】
からなる群から選択され;
-  R5は、(C2〜C20)アルキレン、(C2〜C20)アルケニレン、アルキルオキシ又はオリゴエチレングリコールからなる群から選択され;
-  R6は、式
【００５３】
【化５】
2020143096.tif 000007
【００５４】
の1,4:3,6-ジアンヒドロヘキシトールの二環の断片から選択され;
-  R7は、(C6〜C10)アリール(C1〜C6)アルキルからなる群から選択され;
-  R8は-(CH2)4-であり;
-  R9又はR10は独立に、C2〜C12アルキレン又はC2〜C12アルケニレンから選択され;
-  R11又はR12は独立に、H、メチル、C2〜C12アルキレン又はC2〜C12アルケニレンから選択され、それによりaが少なくとも0.05、bが少なくとも0.05及びa+b=1となる]。
【００５５】
このようなアミノ酸ベースのPEAは、例えばWO 2012/175746及びWO 2012/175748の図式1に記載される、当技術分野で既知の方法を使用して調製することができる。ポリエステルアミドが、パラ-トルエンスルホン酸ジアミン塩と活性化された二酸との溶液重縮合により合成されることが記載されている。典型的にはジメチルスルホキシド又はジメチルホルムアミドが溶媒として使用され、トリエチルアミドが塩基として使用され、反応は、典型的には一定の撹拌下で24〜72時間、60℃の不活性雰囲気下で実施される。次いで、反応混合物を水での沈殿により精製し、その後有機沈殿及び濾過を行い、その後減圧下で乾燥させてポリエステルアミドを得る。
【００５６】
別の好ましい実施形態において、少なくとも1つの生分解性ポリマーは、2つの異なるプレポリマー由来の少なくとも2つの加水分解性セグメントを含む、マルチブロックコポリマーである。特に好ましいものは、グリコリド-ε-カプロラクトンセグメント及びラクチド-グリコリドセグメントを含むマルチブロックコポリエステルである。このようなコポリマーは、例えば、主として表面侵食によりインビボで分解され、その結果として、活性化合物の放出が主にゼロ次速度過程に従うようなものが選択されうるという利点を有する。特に好ましいマルチブロックコポリマーが、WO 2005/068533及びWO 2013/015685に記載されている。
【００５７】
WO 2005/068533は、プレポリマーA及びB由来の少なくとも2つの加水分解性セグメントを含むマルチブロックコポリマーについて記載しており、このセグメントが多官能性鎖伸長剤(multi-functional chain-extender)により結合され、プレポリマーA及びB、並びにトリブロックコポリマーABA及びBABから選択され、マルチブロックコポリマーは生理的(身体)条件でアモルファスである。前記鎖伸長剤は、好ましくは二官能性脂肪族化合物、好ましくは1,4-ブタンジイソシアネート等のジイソシアネート由来である。前記プレポリマー(A)は、好ましくは、ジオール、ジカルボン酸及びヒドロキシカルボン酸の群から選択される少なくとも1つの非環状開始剤との、少なくとも1つの環状モノマーの反応産物を含み、前記環状モノマーは、好ましくは、グリコリド、ラクチド(L、D又はDL)、ε-カプロラクトン、δ-バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、テトラメチレンカーボネート、1,4-ジオキサン-2-オン(パラ-ジオキサノン)、1、5-ジオキセパン-2-オン、及び/又はオキセパン-2,7-ジオン等の環状無水物の群から選択される。前記プレポリマー(B)は、好ましくは、ε-カプロラクトン、δ-バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、パラ-ジオキサノン、DL-ラクチド及び/又はグリコリドを含み、より好ましくは、前記プレポリマー(B)はd,l-ラクチドを含み、好ましくはポリ(d,l-ラクチド)又はポリ(ラクチド-グリコリド(50/50))であり、プレポリマー(B)は好ましくは数平均分子量(Mn)300超を有する。
【００５８】
WO 2013/015685は、準結晶の相分離した熱可塑性マルチブロックコポリマーであって、コポリマーが:
a)少なくとも1つの加水分解性のプレポリマー(A)セグメント及び少なくとも1つの加水分解性のプレポリマー(B)セグメントを含み、
b)前記マルチブロックコポリマーが、生理的条件下でガラス転移温度(Tg)37℃以下及び融点(Tm)110〜250℃を有し;
c)セグメントが多官能性鎖伸長剤により結合され;
d)セグメントがポリマー鎖全体にランダムに分散され;
e)プレポリマー(A)セグメントの少なくとも一部が水溶性ポリマー由来である
ことを特徴とする、コポリマーについて記載している。前記鎖伸長剤は、好ましくは二官能性脂肪族鎖伸長剤、好ましくは1,4-ブタンジイソシアネート等のジイソシアネートである。前記プレポリマー(A)は、好ましくは環状モノマー及び/又は非環状モノマーの反応産物を含み、前記非環状モノマーは、好ましくはコハク酸、グルタル酸、アジピン酸、セバシン酸、乳酸、グリコール酸、ヒドロキシ酪酸、エチレングリコール、ジエチレングリコール、1,4-ブタンジオール及び/又は1,6-ヘキサンジオールからなる群から選択され、前記環状モノマーは、好ましくはグリコリド、ラクチド、ε-カプロラクトン、δ-バレロラクトン、トリメチレンカーボネート、テトラメチレンカーボネート、1,5-ジオキセパン-2-オン、1,4-ジオキサン-2-オン(パラ-ジオキサノン)、及び/又はオキセパン-2,7-ジオン等の環状無水物からからなる群から選択される。前記プレポリマー(B)セグメントは、好ましくは、ヒドロキシアルカノエート、グリコリド、L-ラクチド又はD-ラクチド由来の結晶性ポリマー、好ましくは、L-ラクチド及びD-ラクチド間の立体複合体形成(stereocomplexation)が実現される量及び比での、L-ラクチドプレポリマー及びD-ラクチドプレポリマーを含み、より好ましくは、前記プレポリマー(B)はMn1000g/mol以上のポリ(L-乳酸)である。
【００５９】
このようなコポリマーが、本発明の組成物において使用するのに特に好ましい。このようなマルチブロックコポリマーは、当技術分野で既知の方法を使用して、例えば、WO 2005/068533及びWO 2013/015685に記載される通り、当量の二官能性分子、好ましくは脂肪族分子、例えば1,4-ブタンジイソシアネート等のジイソシアネート等との望ましい比でモノマーを含む、プレポリマーの混合物を鎖伸長させることで調製可能である。
【００６０】
2つの活性化合物、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩は、例えば、ポリマーが液体である温度、好都合には例えば室温で、又は、組成物が室温で固体である場合には高温で、少なくとも1つの生分解性ポリマー溶液中に溶解又は分散される。無菌性の生成又は生成後の滅菌により、無菌の産物が得られる。
【００６１】
場合により、本発明による組成物は、1つ又は複数の賦形剤を含む。単一の賦形剤又は複数の賦形剤が、少なくとも1つの生分解性ポリマー溶液に添加されてよい。例えば、ポリマー及び/又は活性化合物の溶解性を改善し、ポリマー溶液中での活性化合物の分散を改善し、又は本発明によるデポ製剤、パッチ、骨充填剤若しくはコーティングからの活性化合物の放出を調節する等、生分解性ポリマーの物理的及び/又は機械的特性を改変する賦形剤が存在してよい。更に、生分解性ポリマーの溶媒として機能する賦形剤が、本発明の組成物に含まれていてよい。適切な賦形剤の例が当技術分野で周知であり、溶媒、界面活性剤、分散剤及び増粘剤、より具体的にはメタノール、エタノール、プロピレングリコール、Tween、ポリ(エチレングリコール)、ポリビニルアルコール、乳酸、酢酸、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、キトサン、グアーガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、デンプン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルデンプン、メチルセルロース、ペクチン、グリセロール、N,Nジメチルアセトアミド、安息香酸ベンジル、ポリオキシエチル化脂肪酸、レシチン、ダイズ油、植物油及び綿実油を含むがこれに限定されない。賦形剤の濃度は、典型的には組成物の1質量%〜50質量%、好ましくは組成物の1質量%〜30質量%、より好ましくは組成物の1質量%〜20質量%である。
【００６２】
本発明の組成物、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤、パッチ、骨充填剤及びコーティングは、骨折及び/又は骨欠損の治療に適している。具体的には、組成物、製剤、パッチ、骨充填剤及びコーティングは、骨折治癒を促進するのに適している。組成物、製剤、パッチ、骨充填剤及びコーティングは更に、骨充填剤及び/又はインプラントの既存の骨への付着を促進するのに特に適している。したがって、骨折又は骨欠損の治療方法において使用するための、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはタンパク質同化ステロイド、より好ましくはテストステロン又はその誘導体、より好ましくはテストステロン、ナンドロロン又はジヒドロテストステロン、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩、好ましくはアレンドロネート又はアレンドロン酸ナトリウムを含む組成物が提供される。また、骨折治癒方法において使用するための、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはタンパク質同化ステロイド、より好ましくはテストステロン又はその誘導体、より好ましくはテストステロン、ナンドロロン又はジヒドロテストステロン、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩、好ましくはアレンドロネート又はアレンドロン酸ナトリウムを含む組成物も提供される。前記方法は、好ましくは、少なくとも1つの生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又は医薬的に許容される塩を含む本発明による組成物を、骨折又は骨欠損部位に適用する工程、より好ましくは、本発明による注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤又はパッチを、骨折又は骨欠損部位に適用する工程を含む。或いは前記方法は、本発明による組成物を含む骨充填剤、又は本発明によるコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくはインプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程を含む。更に別の実施形態において、前記方法はそれらの組み合わせを含み、そのため、本発明による組成物を含む骨充填剤、又は本発明によるコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくはインプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程、及び、本発明による注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤又はパッチを、骨折又は骨欠損部位に適用する工程を含む。前記デポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングは、最も好ましくはテストステロン、及びアレンドロネート又はその塩を含む。
【００６３】
また、骨折又は骨欠損の治療用の医薬の調製のための、アンドロゲン受容体アゴニスト、好ましくはタンパク質同化ステロイド、より好ましくはテストステロン又はその誘導体、より好ましくはテストステロン、ナンドロロン又はジヒドロテストステロン、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩、好ましくはアレンドロネート又はアレンドロン酸ナトリウムの使用も提供される。前記治療は好ましくは、少なくとも1つの生分解性ポリマー、アンドロゲン受容体アゴニスト、及びビスホスホネート又はその医薬的に許容される塩を含む本発明による組成物を、骨折又は骨欠損部位に適用する工程、より好ましくは、本発明による注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤又はパッチを、骨折又は骨欠損部位に適用する工程を含む。或いは、前記方法は、本発明による組成物を含む骨充填剤、又は本発明によるコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくはインプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程を含む。更に別の実施形態において、前記方法は、それらの組み合わせを含み、そのため、本発明による組成物を含む骨充填剤、又は本発明によるコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくはインプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程、及び、本発明による注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤又はパッチを、骨折又は骨欠損部位に適用する工程を含む。前記デポ製剤、パッチ、骨充填剤又はコーティングは、最も好ましくはテストステロン、及びアレンドロネート又はその塩を含む。
【００６４】
本発明は、患者、好ましくはヒト患者又はその他の哺乳類における骨折又は骨欠損を治療する方法であって、本発明によるパッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を、骨折又は骨欠損部位に投与する工程を含む、方法を更に提供する。本発明によるパッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を、骨折部位に投与する工程を含む骨折治癒方法が更に提供される。前記パッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤は、好ましくは、治療有効量のテストステロン、ナンドロロン又はジヒドロテストステロン、より好ましくはテストステロン、及びアレンドロネート又はアレンドロン酸ナトリウム、最も好ましくはアレンドロン酸ナトリウムを含む。本発明は、患者、好ましくはヒト患者又はその他の哺乳類における骨折又は骨欠損を治療する方法であって、本発明による組成物を含む骨充填剤、又は本発明によるコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくはインプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程を含む、方法を更に提供する。また、患者、好ましくはヒト患者又はその他の哺乳類における骨折又は骨欠損を治療する方法であって、本発明によるパッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を骨折部位に投与する工程、及び本発明による組成物を含む骨充填剤、又は本発明によるコーティングを備えた骨充填剤、医療機器若しくは骨インプラントを、骨折又は骨欠損部位に、又はその内部に導入する工程を含む、方法も提供される。「患者」という語は、本明細書では、骨折又は骨欠損を被る可能性のあるヒト及び任意の非ヒト対象を指す。好ましくは、患者は、本明細書では哺乳類である。患者の好ましい例には、ヒト、イヌ及びその他のイヌ科動物、ネコ及びその他のネコ科動物、ウマ、ウシ及びその他のウシ科動物、マウス、ラット、ウサギ、モルモット及びその他のげっ歯類、サル及びその他の霊長類、ブタ及びブタ科動物等が含まれるが、これに限定されない。特に好ましい患者はヒト患者である。
【００６５】
本発明によるパッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤を、骨折部位に投与する工程を含む、骨折治癒方法が更に提供される。前記パッチ、注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤、骨充填剤又はコーティングは、好ましくは、治療有効量のテストステロン、ナンドロロン又はジヒドロテストステロン、より好ましくはテストステロン、及びアレンドロネート又はアレンドロン酸ナトリウム、最も好ましくはアレンドロン酸ナトリウム含む。
【００６６】
「骨折」という語は、本明細書では、外傷性骨折及び病的骨折、単純及び開放骨折の両方を含む。本発明の使用及び方法は、複雑骨折、好ましくは外傷性複雑骨折の治療に特に適している。本明細書では、「複雑骨折」という語は、神経及び血管等の周辺組織、並びに/又は周辺器官の損傷を伴う骨折を指す。複雑骨折は、必ずではないが、開放(compound)又は開放(open)骨折であることが多い。本発明の使用及び方法は更に、病的骨折の治療に特に適している。本発明に従って治療される好ましい骨折は、整形外科医による治療が必要な骨折である。整形外科医は例えば、例えばネジを使用して骨折を固定する。このような骨折は具体的に、有利には、本発明によるパッチを適用することで治療される。本発明に従って有利に治療される骨折の例は、脊椎、脚及び腕の骨折である。本発明に従って有利に治療される骨折の更なる例は、脊椎圧迫骨折である。このような骨折は、脊椎骨のうち1つ又は複数が折れた又は崩壊した場合、典型的には、例えば、加齢、又は骨粗しょう症、パジェット病若しくは骨がん等の、骨を弱くする疾患の結果として、椎骨が既に弱くなっている場合に発生する。更に別の例は、ギャップが骨の部分又は骨片の間に存在することを特徴とする完全骨折である。通常、このような骨折の自然治癒は、非常にゆっくりと起こる。したがって、このような骨折が具体的に、本発明により提供される治療により利益を得る。したがって、前記骨折が複雑骨折、好ましくは外傷性複雑骨折、又は病的骨折である、本発明による方法又は使用が提供される。本発明に従って治療される患者は、好ましくは、複雑骨折、好ましくは外傷性複雑骨折、又は病的骨折を被る患者である。パッチ又は注射可能なインサイチュ形成のためのデポ製剤により治療される更に好ましい骨折は、脊椎圧迫骨折である。
【００６７】
明瞭性及び簡潔な記載のため、本発明の同じ又は別々の態様又は実施形態の一部として、特性が本明細書に記載されうる。本発明の範囲が、同じ又は別々の実施形態の一部として本明細書に記載される特性の全て又は一部の組み合わせを有する実施形態を含みうることを、当業者は理解するものである。
【００６８】
本発明は以下の実施例で更に説明される。この実施例は本発明の範囲を限定するものではなく、本発明を明確にするのに役立つのみである。
【実施例】
【００６９】
材料及び方法
細胞及び処理
100U/mlペニシリン、100μg/mlストレプトマイシン(Invitrogen社、Carlsbad、CA)及び5%ウシ胎児血清(Hyclone、GE Heathcare社)を添加したα-MEM(Invitrogen社、Carlsbad、CA)中で、MC3T3-E1(ECACC、Acc. No. 99072810)を培養した。細胞を標準的な条件下(37℃、5%CO2及び湿度95%)で増殖させた。MC3T3-E1細胞を密度26000細胞/cm2で播種し、細胞の播種を0日時点とみなした。播種後1日目に、MC3T3-E1細胞の培地を、骨形成培地(50μg/mlアスコルビン酸(Sigma社)を添加した上記培地)、10nMβ-グリセロールリン酸(Sigma社)に交換し、播種後3日目に、ホルモン又はビヒクル(0.1%エタノール)を添加した。
【００７０】
試験した化合物は、アレンドロネートと組み合わせたスタノロン(ジヒドロキシテストステロン(DHT))、又はアレンドロネートのみであった。使用した最終スタノロン濃度は:0.1%エタノール中3nM、15nM、75nM及び375nMスタノロン(TCI Europe N.V.社)、milliQ中2、10、50μMアレンドロネート(TCI Europe N.V.社)であった。培養物の最終エタノール濃度は0.1%であった。培地は2〜3日毎に交換した。
【００７１】
アルカリホスファターゼ及び酸性ホスファターゼ活性アッセイ
溶解緩衝液(100mMリン酸カリウム、0.2% Triton X-100、pH7.8、プロテアーゼ阻害剤カクテル(Roche社)含有)で10分間、細胞を溶解させた。アルカリホスファターゼ活性を決定するため、CDP-star(Roche社)を溶解物に添加し、96ウェルオプチプレート(optiplate)において、暗所で30分間インキュベートした。Filtermax F5(Molecular Devices社)で発光(1秒)を測定した。新しく調製したp-NPP緩衝液(0.1M NaAc+0.1% Triton X-100中4-ニトロフェニルリン酸(Sigma社)、pH5.5)を細胞溶解物に添加し、37℃及び5%CO2で1.5時間インキュベートすることにより、細胞の酸性ホスファターゼ活性を決定した。NaOH 10μlを添加することにより反応を停止させた。Filtermax F5(Molecular Devices社)で、405nmでの吸光度を測定した。
【００７２】
統計解析
全てのデータを平均値±SEMとして提示する。アレンドロネートのみ(0nMスタノロン)と比較して、スチューデントのt検定を使用し、*p<0.05、又は**p<0.01又は***p<0,001でデータを解析した。
【００７３】
結果
アレンドロネート、及びアレンドロネートとDHT(スタノロン)との組み合わせが造骨細胞の活性を誘導することができるかどうかを試験するため、MC3T3細胞を合計10日間、培地+/-化合物中で刺激した。次いで、骨細胞活性についての十分に確立されたマーカーである、ALP酵素量を解析することにより造骨細胞の活性を測定した。次いで、細胞総数を補正するために最終データを酸性ホスファターゼに対して補正した。得られたデータは、アレンドロネートのみ(0nMスタノロン)によるMC3T3細胞の処理により、濃度2及び10μMではALP/AP活性のわずかな増加がもたらされるが、50μMではALP/AP活性が低下することを示している(図1)。対照的に、スタノロン(3、15、75及び375nMスタノロン)と組み合わせたアレンドロネートによる処理では、アレンドロネートのみと比較して、ALP活性の強力かつ有意な増加がもたらされる(図1)。
【００７４】
(参考文献)
2020143096.tif 000008
【図１】
2020143096.tif 000009
【外国語明細書】
2020143096000001.pdf