(57)【要約】      （修正有）【課題】抗ＣＤ７０抗体、及び少なくとも１つの天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる抗体薬物複合体の提供。【解決手段】抗ＣＤ７０（αＣＤ７０）抗体を含み、αＣＤ７０抗体は、少なくとも１、かつ１０以下の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、特定の構造を有する化合物、及び化合物と、薬学的に許容される担体、賦形剤または結合剤とを含む、薬学的組成物、並びに、ドラスタチンアナログを誘導体化するための方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＶＩＩＩ）または（ＩＸ）を構成する化合物、またはその化合物の、活性代謝物、薬学的に許容されるプロドラッグ、もしくは溶媒和物。
【化１】
2020143151.tif 000201
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または３である）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよく、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化２】
2020143151.tif 000202
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌは、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、および、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレンからなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化３】
2020143151.tif 000203
Ｕは、以下の構造を有し、
【化４】
2020143151.tif 000204
ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、および、ｎ’’’’は、それぞれ独立して、１以上の整数である。）
【請求項２】
Ｒ１は、ポリペプチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記抗体は、抗ＣＤ７０（αＣＤ７０）抗体である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記αＣＤ７０抗体は、１以上の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記αＣＤ７０抗体は、少なくとも１、かつ１０以下の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２は、ポリペプチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記αＣＤ７０抗体は、１以上の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記αＣＤ７０抗体は、少なくとも１、かつ１０以下の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）を構成する化合物またはその塩。
【化５】
2020143151.tif 000205
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または３である）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよく、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化６】
2020143151.tif 000206
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化７】
2020143151.tif 000207
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【化８】
2020143151.tif 000208
各ｎおよびｎ’は、独立して、１以上の整数である。）
【請求項１３】
Ｒ１は、ポリペプチドである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２は、ポリペプチドである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１７】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）を構成するドラスタチンアナログを誘導体化するための方法であって、
該方法は、該ドラスタチンアナログを、式（ＸＸＸＶＩＩ）の試薬に接触させる工程を含み、
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）は、以下に対応し、
【化９】
2020143151.tif 000209
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化１０】
2020143151.tif 000210
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨ、または、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｙは、ＮＨ２−Ｏ−、または、メチルであり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、および−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化１１】
2020143151.tif 000211
Ｕは、以下の構造を有し、
【化１２】
2020143151.tif 000212
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【化１３】
2020143151.tif 000213
または、Ｌは存在せず、Ｙはメチルであり、Ｒ５はＣＯＲ８であり、Ｒ８は−ＮＨ（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、および、ｎ’’’’は、それぞれ独立して、１以上の整数である。）
式（ＸＸＸＶＩＩ）は、以下に対応する、方法。
【化１４】
2020143151.tif 000214
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または、置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または、３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルであり、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｋは、
【化１５】
2020143151.tif 000215
であり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは、置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよい。）
【請求項２０】
前記誘導体化されたドラスタチンアナログは、式（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）の構造を有する、少なくとも１つのオキシムを含有するアミノ酸である、請求項１９に記載の方法。
【化１６】
2020143151.tif 000216
【請求項２１】
前記ドラスタチンアナログを、式（ＸＸＸＶＩＩ）の前記試薬に、水溶液中、弱酸性条件下において接触させる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）を構成する、化合物。
【化１７】
2020143151.tif 000217
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化１８】
2020143151.tif 000218
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または、置換低級アルキルであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化１９】
2020143151.tif 000219
Ｕは、以下の構造を有し、
【化２０】
2020143151.tif 000220
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【化２１】
2020143151.tif 000221
ｎおよびｎ’は、それぞれ独立して、１以上の整数であり、
各Ｒ１６は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ＮＯ２、ＣＮ、および、置換アルキルからなる群より選択される。）
【請求項２３】
Ｒ１は、ポリペプチドである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ２は、ポリペプチドである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２７】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）を構成する、化合物。
【化２２】
2020143151.tif 000222
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化２３】
2020143151.tif 000223
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または、置換低級アルキルであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
【化２４】
2020143151.tif 000224
Ｕは、以下の構造を有し、
【化２５】
2020143151.tif 000225
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【化２６】
2020143151.tif 000226
ｎおよびｎ’は、それぞれ独立して、１以上の整数であり、
Ｄは、以下の構造を有し、
【化２７】
2020143151.tif 000227
各Ｒ１７は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルキルアルコキシ、置換アルキルアルコキシ、ポリアルキレンオキサイド、置換ポリアルキレンオキサイド、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルカリル、置換アルカリル、アラルキル、置換アラルキル、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−ＯＮ（Ｒ”）２、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−Ｃ（Ｏ）ＳＲ”、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−Ｓ−Ｓ−（アリール、もしくは、置換アリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ”、または、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２からなる群より選択され（なお、各Ｒ”は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、アルカリル、置換アルカリル、アラルキル、または、置換アラルキルである）、
各Ｚ１は、結合、ＣＲ１７Ｒ１７、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ１７Ｒ１７−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−Ｏ、Ｏ−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−Ｓ、Ｓ−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−ＮＲ’、または、ＮＲ’−ＣＲ１７Ｒ１７であり、
各Ｒ’は、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルであり、
各Ｚ２は、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、任意に置換された炭素数１〜３のアルキレン、任意に置換された炭素数１〜３のアルケニレン、および、任意に置換されたヘテロアルキルからなる群より選択され、
各Ｚ３は、結合、任意に置換された炭素数１〜４のアルキレン、任意に置換された炭素数１〜４のアルケニレン、任意に置換されたヘテロアルキル、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、および、−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択され、
各Ｔ３は、結合、Ｃ（Ｒ”）（Ｒ”）、Ｏ、または、Ｓであり（ただし、Ｔ３が、Ｏ、または、Ｓであるとき、Ｒ”は、ハロゲンではない）、
各Ｒ”は、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
ｍおよびｐは、０、１、２、または、３であり（ただし、ｍまたはｐのうち少なくとも１つは０でない）、
Ｍ２は、
【化２８】
2020143151.tif 000228
であり（なお、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
Ｍ３は、
【化２９】
2020143151.tif 000229
であり（なお、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
Ｍ４は、
【化３０】
2020143151.tif 000230
であり（ここで、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
各Ｒ１９は、独立して、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、エステル、エーテル、チオエーテル、アミノアルキル、ハロゲン、アルキルエステル、アリールエステル、アミド、アリールアミド、ハロゲン化アルキル、アルキルアミン、アルキルスルホン酸、アルキルニトロ、チオエステル、スルホニルエステル、ハロスルホニル、ニトリル、アルキルニトリル、および、ニトロからなる群より選択され、
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または、１１であり、
各Ｒ１６は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ＮＯ２、ＣＮ、および、置換アルキルからなる群より選択される。）
【請求項３０】
Ｒ１は、ポリペプチドである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ２は、ポリペプチドである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３４】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３５】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項３４に記載の化合物。
【請求項３６】
式（ＸＸＸＩ−Ａ）を構成する、請求項２９に記載の化合物。
【化３１】
2020143151.tif 000231
【請求項３７】
請求項１〜１８および２２〜３６のいずれか１項に記載の化合物と、
薬学的に許容される担体、賦形剤または結合剤と、を含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は抗ＣＤ７０抗体、および少なくとも１つの天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる抗体薬物複合体に関する。本明細書には、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有しているαＣＤ７０抗体が開示されており、さらに、本発明のαＣＤ７０抗体が１つ以上の毒素と結合した抗体薬物複合体が開示されている。さらに、治療上、診断上および他のバイオテクノロジー上の使用を含む、非天然アミノ酸抗体薬物複合体の使用方法が開示されている。
【０００２】
〔発明の背景〕
ＣＤ７０は、様々な正常細胞種および悪性細胞種によって発現される、細胞膜−結合型の及び分泌型の分子の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の一員である。ＣＤ７０の１級アミノ酸（ＡＡ）配列は、膜貫通タイプＩＩタンパク質を予想する。該膜貫通タイプＩＩタンパク質は、カルボキシル末端が細胞の外に露出しており、アミノ末端が細胞膜の細胞基質側でみられる(Bowman et al., 1994, J Immunol 152:1756-61; Goodwin et al., 1993, Cell 73:447-56)。ヒトＣＤ７０は、２０ＡＡ細胞質領域、１８ＡＡ膜貫通領域、および２つの潜在的Ｎ−結合グリコシル化部位を有する１５５ＡＡ細胞質外領域から構成される(Bowman et al., supra; Goodwin et al., supra)。抗ＣＤ７０抗体による、放射性同位体標識されたＣＤ７０発現細胞の特異的免疫沈澱により、２９ｋＤａおよび５０ｋＤａのポリペプチドが確認される(Goodwin et al., supra; Hintzen et al., 1994, J Immunol 152:1762-73)。ＴＮＦ−アルファおよびＴＮＦ−ベータ（特に構造鎖Ｃ、Ｄ、Ｈ、およびＩの中）に対する、その相同性に基づき、三量体構造がＣＤ７０に対して予想される（Petsch et al., 1995, Mol Immunol 32:761-72）。
【０００３】
当初の免疫組織学的研究は、扁桃腺、皮膚、および消化管中の胚中心Ｂ細胞及び稀Ｔ細胞にてＣＤ７０が発現することを明らかにした(Hintzen et al., 1994, Int Immunol 6:477-80)。その後、ＣＤ７０は、近時に抗原活性化されたＴおよびＢリンパ球の細胞表面で発現し、抗原刺激の除去後その発現は弱くなると報告された(Lens et al., 1996, Eur J Immunol 26:2964-71; Lens et al., 1997, Immunology 90:38-45)。リンパ組織系の中で、ナチュラルキラー細胞(Orengo et al., 1997, Clin Exp Immunol 107:608-13)およびマウス成熟末梢樹状細胞(Akiba et al., 2000, J Exp Med 191:375-80)もまたＣＤ７０を発現する。非リンパ組織系において、ＣＤ７０は胸腺髄質上皮細胞上で発見されている(Hintzen et al., 1994, supra; Hishima et al., 2000, Am J Surg Pathol 24:742-46)。
【０００４】
正常細胞上での発現に加えて、リンパ腫瘍、癌腫、および神経起源の腫瘍を含む種々のタイプの癌におけるＣＤ７０の発現が報告されている。悪性Ｂ細胞において、びまん性ラージＢ細胞リンパ腫の７１％、濾胞中心リンパ腫の３３％、大脳皮質リンパ腫の２５％、およびＢ−ＣＬＬの５０％が、ＣＤ７０を発現すると報告されている(Lens et al., 1999, Br J Haematol 106:491-503)。ＣＤ７０は、ホジキンス病における、悪性ホジキン細胞およびリード−ステルンベルク細胞上にて、他のリンパ活性化マーカーとともに、高い頻度で発現する(Gruss and Kadin, 1996, Bailieres Clin Haematol 9:417-46)。ある報告は、胸腺の癌腫の８８％（８例中７例）、および異常性胸腺腫の２０％（５例中１例）におけるＣＤ７０発現を実証した(Hishima et al., 2000, supra)。ＣＤ７０が検出された癌腫の２つ目のタイプは、上咽頭の癌腫である。ある研究は、未分化型の上咽頭の癌腫から得られた、急速凍結腫瘍生検の８０％（２０例中１６例）におけるＣＤ７０の存在を報告した(Agathanggelou et al., 1995, Am J Path 147:1152-60)。ＣＤ７０は、脳腫瘍細胞（特に、神経膠腫細胞株、固体ヒト神経膠腫、および髄膜腫）においても検出された(Held-Feindt and Mentlein, 2002, Int J Cancer 98:352-56; Wischlusen et al., 2002, Can Res 62:2592-99)。
【０００５】
エプスタイン−バールウイルス（ＥＢＶ）およびヒトＴ白血病ウイルス−１（ＨＴＬＶ−１）を含む形質転換ウイルスは、上皮細胞のような正常ではＣＤ７０を発現しない細胞上で、ＣＤ７０を誘導することができると提唱されている(Agathanggelou et al., supra; Stein et al., 1989, Oxford University Press, p. 446)。したがって、悪性Ｂ細胞上のＣＤ７０の発現は、腫瘍形成の形質変換を反映しうる(Lens et al., 1999, supra)。また、ＣＤ７０発現は、抗原接触後のＢ細胞上で誘導される(Maurer et al., 1990, Eur J Immunol 20:2679-84; Lens et al., 1996, supra)ため、ＣＤ７０の安定な発現は、長期の抗原性刺激を反映している可能性がある(Bahler et al., 1992, Proc Natl Acad Sci USA 89:6770-74; Bahler et al., 1992, Cancer Res 52:suppl. 5547S-51S)。
【０００６】
ＣＤ７０の受容体は、ＣＤ２７である。ＣＤ２７は、約５５ｋＤａのグリコシル化されたタイプＩ膜貫通タンパク質である(Goodwin et al., 1993, Cell 73:447-56; Hintzen et al., 1994, supra)。ＣＤ７０は、ＣＤ２７Ｌと称されることがある。ＣＤ２７は、細胞表面上でホモ二量体として存在する(Gravestein et al., 1993, Eur J Immunol 23:943-50)。該ＣＤ２７は、細胞外領域における約４０個のアミノ酸のシステインリッチの繰り返し単位によって定義されるＴＮＦ受容体スーパーファミリーの一員である(Smith et al., 1990, Science 248:1019-23; Locksley et al., 2001, Cell 104:487-501)。ＣＤ２７は典型的に、胸腺細胞、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞によって発現される(Hintzen et al., 1994, Immunol Today 15:307-11; Lens et al., 1998, Semin Immunol 10:491-99)。休止Ｔ細胞上で、ＣＤ２７は構成的に発現され、さらに抗原誘発はＣＤ２７発現を一層上方制御する(de Jong et al., 1991, J Immunol 146:2488-94; Hintzen et al., 1993, J Immunol. 151:2426-35)。さらに、Ｔ細胞抗原受容体複合体のみ、または付属分子ＣＤ２８と結合したＴ細胞抗原受容体複合体を介したＴ細胞の誘発は、活性化Ｔ細胞から溶解性ＣＤ２７を放出する(Hintzen et al., 1991, J Immunol 147:29-35)。未処置Ｂ細胞はＣＤ２７を発現しないが、Ｂ細胞の抗原誘発後、ＣＤ２７発現は誘導され、そのＣＤ２７発現はＣＤ７０に比べて持続する(Jacquot S et al., 1997 J Immunol 159:2652-57; Kobata T et al., 1995, Proc Natl Acad Sci USA 92:11249-53)。
【０００７】
正常Ｂ系統細胞におけるＣＤ２７およびＣＤ７０の制限された発現とは顕著に異なり、ＣＤ２７およびＣＤ７０の両者は、高い頻度で、多くのＢ細胞非ホジキンスリンパ腫および白血病において共発現する。このことは、ＣＤ２７およびＣＤ７０細胞上の、自己分泌ループ型の機能的ＣＤ２７−ＣＤ７０相互作用を潜在的に導き、この相互作用は、結果として、ＣＤ２７シグナル伝達とＣＤ７０誘導増殖をもたらし、その結果、悪性細胞に対して増殖における優位性を与える(Lens et al., 1999, supra)。
【０００８】
利用可能なデータは、ＣＤ７０による活性化リンパ球上でのＣＤ２７の連結反応がシグナル（Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞における共刺激性のシグナルを含む）をＣＤ２７発現細胞に送達するというモデルを支持する(例えば、Goodwin et al.,既出; Hintzen etal., 1995, J Immunol 154:2612-23; Oshina et al., 1998, Int Immunol 10:517-26; Smith et al.,既出; Van Lier et al., 1987, J Immunol 139:1589-96; Gravestein et al., 1995, Int Immunol 7:551-7; Tesselaar et al., 1997, J Immunol 159:4959-65; Jacquot et al.,既出; Agematsu et al., 1998, Blood 91:173-80; Kobata et al.,既出; Agematsu et al., 1997, Eur J Immunol 27:2073-79; Sugita et al., 1992, J Immunol 149:1199-1203; Orengo et al., 1997, Clin Exp Immunol 107:608-13). Antibodies against both murine and human CD70 have been demonstrated to inhibit such activities,presumably by blocking the CD70/CD27 interaction (Hintzen et al., 1994,既出; Hintzen et al., 1995, supra; Oshima et al., 既出、を参照するとよい)。
【０００９】
ＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用のＣＤ７０シグナル伝達、すなわち「逆シグナル伝達」を通じて、細胞機能の調整についての制限的情報が利用可能である。いくつかのＣＤ７０抗体は、２つ目の抗体と架橋結合された、または組織培養プレートに固定化されたＣＤ７０発現Ｔ細胞に与えられると、Ｔ細胞増殖を亢進する能力を有する(Bowman et al., 1994, J Immunol 152:1756-61; Brugnoni, 1997, Immunol Lett 55:99-104)。当該「逆シグナル伝達」は、また、Ｂ慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）細胞の一部として表される。そして、ＣＤ７０は、ＰＭＡ刺激された精製されたＢ−ＣＬＬ細胞の増殖を助長するシグナルを伝達するための受容体として、機能することができる(Lens et al., 1999, supra)。これらの知見は、ＣＤ２７とＣＤ７０との結合が、ＣＤ２７発現細胞およびＣＤ７０発現細胞の両方への反発的シグナルの伝達という結果になる状況を示唆する。
【００１０】
細胞仲介性の自己免疫疾患におけるＣＤ７０／ＣＤ２７共刺激の役割は、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のモデルにおいて調査された(Nakajima et al., 2000, J Neuroimmunol109:188-96)。特定の抗マウスＣＤ７０ｍＡｂ（クローンＦＲ−７０）のインビボ投与は、Ｔ細胞初回刺激、Ｉｇ生成、またはＴＨ１／ＴＨ２細胞バランスに影響を与えることなく、抗原誘導ＴＮＦ−アルファ生成を阻害することによってＥＡＥの発症を顕著に抑制した。しかしながら、そのような処置は、確立した疾病には効果が小さい。Ｔ細胞上のＣＤ７０の発現は、ＴＮＦ−アルファおよびＩＬ−１２によって亢進され、ＩＬ４によって下方制御されると報告された（Lens et al., 1998,既出）。このように、ＣＤ７０／ＣＤ２７仲介Ｔ細胞−Ｔ細胞相互作用は、ＴＨ２仲介反応よりもＴＨ１仲介免疫反応を亢進する役割を果たすかもしれない。抗マウスＣＤ７０ｍＡｂ  ＦＲ−７０は、また、ＴＨ１仲介コラーゲン誘導関節炎の抑制に効果があることから、この仮説は支持される(Nakajima etal., 2000,既出)。対して、同一の抗マウスＣＤ７０ｍＡｂは、ＮＺＢ／ＮＺＷ  Ｆ１マウスにおける変調狼瘡、および、敏感ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける実験的リーシュマニア主要感染症（両者は主にＴＨ２仲介自己免疫反応である）において、全く効果を示さない(Nakajima et al., 1997, J Immunol 158, 1466-72; Akiba et al., 2000, J Exp Med 191:375-380)。
【００１１】
別のＴＨ１仲介自己免疫反応である、急性の移植片対宿主病（ａＧＶＨＤ）における、ＣＤ７０の役割はまだ調査されていない。ＧＶＨＤは、同種骨髄移植（ＢＭＴ）治療の、よくある主な致死的な結果である。ＧＶＨＤは、骨髄ドナーと移植患者との間の組織適合性抗原差が存在したときに、引き起こされる(den Haan et al., 1995, Science 268:1476)。ＧＶＨＤは、他のマイナーな細胞集団だけでなく、移植された骨髄中の成熟Ｔ細胞の存在によって引き起こされる(Giralt and Champlin, 1994, Blood 84:3603)。同種反応によって、重症複合型の免疫不全患者における母性Ｔ細胞の移植の場合のように、特徴づけられた条件下で、インビボにてＣＤ４＋細胞上でＣＤ７０が検出されていることは、注目に値する(Brugnoni et al., Immunol Lett 55:99-104)。ＧＶＨＤの予防は、サイクロスポリン、コルチコステロイド、またはメトトレキサートのような汎Ｔ細胞免疫抑制剤によって達成されている。特異性の不足に加えて、これらの汎Ｔ細胞免疫抑制剤は、また、深刻かつ有害な副作用と結び付く。これらの望ましくない効果および正常Ｔ細胞機能の破壊を抑えるために、同種認識および拒絶反応に直接関係するＴ細胞の選択的標的化に基づく、他の治療的処置が強く要求されている。
【００１２】
ＣＤ７０は、抗体指示免疫療法のための、潜在的に有用なターゲットである。上述のように、ＣＤ７０は正常細胞において、制限された発現パターンを有する。ＣＤ７０発現は、生理学的条件下において、近時に抗原活性化されたＴ細胞およびＢ細胞に大部分が制限されている。そして、ＣＤ７０発現は、抗原性刺激が停止すると、下方制御される。ＣＤ７０の重要な役割は、形質細胞分化を促進すること、および長期Ｔ細胞記憶の産生と維持とを助長することであると考えられている。さらに、動物モデルからの証拠は、無秩序なＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用が免疫学的疾患を導き得ることを示唆している。そして、ヒトにおいて、実験データは、また、例えば、リウマチ様関節炎、乾癬、および多発性硬化症のようなＴＨ１仲介免疫障害におけるＣＤ７０／ＣＤ２７経路の潜在的な異常制御を指摘している。ＣＤ７０が、リンパ腫Ｂ細胞、ホジキンおよびリード−ステルンベルク細胞、神経起源の悪性細胞、および多くの癌腫を含む、種々の形質転換細胞上で発現することは、格別興味深い。
【００１３】
いくつかのグループは、リンパ球活性化のインビトロモデルおよびＴＨ１仲介反応の動物モデルの両者における、抗ＣＤ７０ｍＡｂの抑制効果を実証した。焦点は、治療的効果を得るための、ＣＤ７０／ＣＤ２７共刺激経路を阻害するための抗体の使用であった。しかしながら、そのようなアプローチの１つの主要な欠点は、免疫学的疾患に関与すると知られる、例えばＣＤ２８／ＣＤ８０／ＣＤ８６共刺激経路のようなシグナル受容体の数の多さであった。結果として、１つの特定のシグナル経路を阻害することは、疾病の展開に微小な影響を持つのみでありうる。このことは、抗ＣＤ７０ｍＡｂは、異質遺伝子型の刺激細胞によって誘導されたインビトロＴ細胞活性化を部分的に阻害することができるのみである(Hintzen et al., 1995, supra)という知見、および、抗ＣＤ７０ｍＡｂは、ひとたび疾病が確立したＥＡＥに治療的効果を示さない(Nakajima et al., 2000, supra)という知見によって支持される。
【００１４】
このように、ＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を阻害すること以外の方法、またはＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を阻害することに加えた方法による、癌腫および／または免疫学的疾患中に含まれるＣＤ７０発現細胞の成長を劣化または抑制するためのアプローチを開拓するという要求が当分野にある。ＣＤ７０は、成熟抗原存在樹状細胞、活性化Ｔ細胞、および活性化Ｂ細胞の表面上で発現するため、ＣＤ７０＋細胞を、ターゲットにし、抑制または劣化できる薬剤は、ＣＤ７０発現腫瘍細胞だけでなく、自己抗原を提示する抗原提示細胞、および、障害性自己反応性の活性化ＴまたはＢ細胞の除去に効果的と判明するかもしれない。
【００１５】
抗体の治療的効果を増大させるために用いられてきたアプローチは、放射標識、および化学療法との結合である。しかしながら、これらのアプローチは、望ましくない副作用との結び付きを含む。例えば、同位元素療法は骨髄抑制と結び付き(Witzig, 2001, Cancer Chemother Pharmacol 48 (Suppl 1):S91-5)、抗体と化学療法との結合療法は、免疫抑制と結び付く。さらに、同位体標識された物質は、製造することが難しく、そして患者は、同位体標識された物質による初期治療の後に再発を経験することが多い。
【００１６】
したがって、ＣＤ７０発現細胞への、臨床的に有用な細胞毒性の、細胞増殖抑制性の、または免疫抑制性の効果を及ぼすことができるように構成され、特に、非ＣＤ７０発現細胞へ望ましくない効果を及ぼさないように構成された抗ＣＤ７０ＡＤＣｓが要求されている。そのような化合物は、ＣＤ７０を発現する癌、または、ＣＤ７０発現細胞によって仲介される免疫疾患に対する有用な治療薬となるだろう。さらに最近、２Ｈ５等のＭＡｂが同定された。したがって、イメージング、診断上、および／または治療上の利用のために用いられ得る抗ＣＤ７０抗体−薬物複合体が必要とされている。本願発明は免疫学および癌の研究における使用のためのかかる抗体−薬物複合体を提供する。
【００１７】
〔発明の概要〕
本明細書に開示されているのは、１つ以上のリンカーを有する１つ以上の非天然アミノ酸を通じて毒性部分に連結した抗ＣＤ７０抗体、ならびに当該非天然アミノ酸およびポリペプチドを作製する方法である。
【００１８】
本発明のある実施形態では、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を含む抗ＣＤ７０抗体が記載されている。ある実施形態において、抗ＣＤ７０抗体は１つの天然にコードされていないアミノ酸を含む。ある実施形態において、抗ＣＤ７０抗体は、２つの天然にコードされていないアミノ酸を含む。ある実施形態において、抗ＣＤ７０抗体は、３、４、５、または６つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を含む。または更なる翻訳後修飾。ある実施形態において、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号１で与えられる重鎖配列を含む。本発明のある実施形態において、抗ＣＤ７０抗体は配列番号１および配列番号２を含む。ある実施形態において、抗ＣＤ７０抗体は、リンカー、ポリマー、または生物学的に活性な分子と連結している。ある実施形態において、抗ＣＤ７０抗体は、抗ＣＤ７０抗体中の天然にコードされていないアミノ酸を介して、リンカー、ポリマー、または生物学的に活性な分子と結合している。
【００１９】
本発明のいくつかの実施形態では、式（Ｉ）を含む、毒性部分、またはその塩が記載されている。
【００２０】
【化１】
2020143151.tif 000002
【００２１】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【００２２】
【化２】
2020143151.tif 000003
【００２３】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨ、または、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｙは、ヒドロキシルアミン、メチル、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、アジド、ケトアミン、ケトアルキン、アルキン、シクロアルキン、および、エンジオンからなる群より選択され、
Ｌは、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、および、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレンからなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【００２４】
【化３】
2020143151.tif 000004
【００２５】
Ｕは、以下の構造を有し、
【００２６】
【化４】
2020143151.tif 000005
【００２７】
または、Ｌは存在せず、Ｙはメチルであり、Ｒ５はＣＯＲ８であり、Ｒ８は−ＮＨ（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、および、ｎ’’’’は、それぞれ独立して、１以上の整数である）。
【００２８】
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、チアゾールである。他の実施形態では、Ｒ６は、Ｈである。ある実施形態では、Ａｒは、フェニルである。さらなる、もしくは、追加の実施形態では、Ｒ７は、メチルである。いくつかの実施形態では、ｎは、０〜２０、０〜１０、または０〜５の整数である。
【００２９】
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）を構成する化合物が記載されている。
【００３０】
【化５】
2020143151.tif 000006
【００３１】
ある実施形態では、Ｌは、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−である。特定の実施形態では、前記各アルキレンは、−ＣＨ２ＣＨ２−であり、ｎ＝３であり、Ｒ７は、メチルである。他の実施形態では、Ｌは、−アルキレン−である。特定の実施形態では、前記各アルキレンは、−ＣＨ２ＣＨ２−であり、Ｒ７は、メチル、または、水素である。ある実施形態では、Ｌは、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）である。特定の実施形態では、各アルキレンは、−ＣＨ２ＣＨ２−であり、ｎ＝４であり、Ｒ７は、メチルである。さらなる、もしくは、追加の実施形態では、Ｌは、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレンである。特定の実施形態では、各アルキレンは、−ＣＨ２ＣＨ２−であり、ｎは１であり、ｎ’は２であり、ｎ’’は１であり、ｎ’’’は２であり、ｎ’’’’は４であり、Ｒ７は、メチルである。
【００３２】
いくつかの実施形態では、Ｙは、アジドである。他の実施形態では、Ｙは、シクロオクチンである。特定の実施形態では、前記シクロオクチンは、以下の構造を有する。
【００３３】
【化６】
2020143151.tif 000007
【００３４】
（式中、
各Ｒ１９は、独立して、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、エステル、エーテル、チオエーテル、アミノアルキル、ハロゲン、アルキルエステル、アリールエステル、アミド、アリールアミド、ハロゲン化アルキル、アルキルアミン、アルキルスルホン酸、アルキルニトロ、チオエステル、スルホニルエステル、ハロスルホニル、ニトリル、アルキルニトリル、および、ニトロからなる群より選択され、
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または、１１である）。
【００３５】
本発明のいくつかの実施形態では、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）を構成する、化合物、またはその塩が記載されている。
【００３６】
【化７】
2020143151.tif 000008
【００３７】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【００３８】
【化８】
2020143151.tif 000009
【００３９】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
ＹおよびＶは、それぞれ、ヒドロキシルアミン、メチル、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、アジド、ケトアミン、ケトアルキン、アルキン、シクロアルキン、および、エンジオンからなる群より選択され、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−，および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【００４０】
【化９】
2020143151.tif 000010
【００４１】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【００４２】
【化１０】
2020143151.tif 000011
【００４３】
各ｎおよびｎ’は、独立して、１以上の整数である）。
【００４４】
ある実施形態では、式（ＶＩＩ）を構成する化合物が記載されている。
【００４５】
【化１１】
2020143151.tif 000012
【００４６】
特定の実施形態では、Ｌ１は−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−であり、Ｌ２は  −アルキレン’−Ｊ’−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−、Ｌ３は、−Ｊ’’−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’−アルキレン−であり、アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−であり、アルキレン’は−（ＣＨ２）４−であり、ｎは１であり、
ｎ’およびｎ’’は３であり、
Ｊは、以下の構造を有し、
【００４７】
【化１２】
2020143151.tif 000013
【００４８】
Ｊ’およびＪ’’は、以下の構造を有し、
【００４９】
【化１３】
2020143151.tif 000014
【００５０】
Ｒ７は、メチルである。別の実施形態では、Ｌ１は、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−であり、Ｌ２は−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−アルキレン’−であり、Ｌ３は−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’−アルキレン−Ｊ’’−であり、アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−であり、アルキレン’は−（ＣＨ２）４−であり、ｎは１であり、ｎ’およびｎ’’は４であり、Ｊ、Ｊ’、およびＪ’’は、以下の構造を有する。
【００５１】
【化１４】
2020143151.tif 000015
【００５２】
ある実施形態では、Ｙはアジドである。別の実施形態では、Ｙはシクロオクチンである。特定の実施形態では、シクロオクチンは以下の構造を有する。
【００５３】
【化１５】
2020143151.tif 000016
【００５４】
（式中、
各Ｒ１９は、独立して、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、エステル、エーテル、チオエーテル、アミノアルキル、ハロゲン、アルキルエステル、アリールエステル、アミド、アリールアミド、ハロゲン化アルキル、アルキルアミン、アルキルスルホン酸、アルキルニトロ、チオエステル、スルホニルエステル、ハロスルホニル、ニトリル、アルキルニトリル、および、ニトロからなる群より選択され、
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または、１１である）。
【００５５】
本発明の特定の実施形態では、式（ＶＩＩＩ）または（ＩＸ）を構成する、化合物、またはその、活性代謝物、薬学的に許容されるプロドラッグ、もしくは溶媒和物が記述される。
【００５６】
【化１６】
2020143151.tif 000017
【００５７】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または３である）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよく、
Ｚは、以下の構造を有し、
【００５８】
【化１７】
2020143151.tif 000018
【００５９】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌは、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、および、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレンからなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【００６０】
【化１８】
2020143151.tif 000019
【００６１】
Ｕは、以下の構造を有し、
【００６２】
【化１９】
2020143151.tif 000020
【００６３】
ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、および、ｎ’’’’は、それぞれ独立して、１以上の整数である）。
【００６４】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。ある特定の実施形態では、前記抗体は、抗ＣＤ７０である。ほかの実施形態では、Ｒ２は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは抗ＣＤ７０抗体である。ある特定の実施形態では、前記抗体はＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１である。
【００６５】
本願発明のいくつかの実施形態は、式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）を構成する化合物またはその塩を記載している。
【００６６】
【化２０】
2020143151.tif 000021
【００６７】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または３である）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよく、
Ｚは、以下の構造を有し、
【００６８】
【化２１】
2020143151.tif 000022
【００６９】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【００７０】
【化２２】
2020143151.tif 000023
【００７１】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【００７２】
【化２３】
2020143151.tif 000024
【００７３】
各ｎおよびｎ’は、独立して、１以上の整数である）。
【００７４】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。ある特定の実施形態では、前記抗体は、ハーセプチンである。他の実施形態では、Ｒ２は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。いくつかの実施形態では、前記抗体はαＣＤ７０抗体である。いくつかの実施形態では、前記抗体は公知のαＣＤ７０抗体由来である。特定の実施形態では、前記抗体はＡＲＸ−αＣＤ７０抗体である。
【００７５】
ある実施形態では、式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）を構成するドラスタチンアナログを誘導体化するための方法であって、該方法は、該ドラスタチンアナログを、式（ＸＸＸＶＩＩ）の試薬に接触させることを含む方法が本明細書に記載されている。ここでは、式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）は、以下に対応し
【００７６】
【化２４】
2020143151.tif 000025
【００７７】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【００７８】
【化２５】
2020143151.tif 000026
【００７９】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨ、または、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｙは、ＮＨ２−Ｏ−、または、メチルであり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−，−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−，−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、および−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−，および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【００８０】
【化２６】
2020143151.tif 000027
【００８１】
Ｕは、以下の構造を有し、
【００８２】
【化２７】
2020143151.tif 000028
【００８３】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【００８４】
【化２８】
2020143151.tif 000029
【００８５】
または、Ｌは存在せず、Ｙはメチルであり、Ｒ５はＣＯＲ８であり、Ｒ８は−ＮＨ（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、および、ｎ’’’’は、それぞれ独立して、１以上の整数である）、
式（ＸＸＸＶＩＩ）は、以下に対応する。
【００８６】
【化２９】
2020143151.tif 000030
【００８７】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または、置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または、３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルであり、
Ｋは、
【００８８】
【化３０】
2020143151.tif 000031
【００８９】
であり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは、置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよい）。
【００９０】
いくつかの実施形態では、前記誘導体化されたドラスタチンアナログは、式（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）の構造を有する、少なくとも一つのオキシムを含有するアミノ酸である。
【００９１】
【化３１】
2020143151.tif 000032
【００９２】
特定の実施形態では、前記ドラスタチンアナログを、式（ＸＸＸＶＩＩ）の前記試薬に、水溶液中、弱酸性条件下において接触させる。
【００９３】
本発明のある実施形態では、式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）を構成する、化合物が記載されている。
【００９４】
【化３２】
2020143151.tif 000033
【００９５】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【００９６】
【化３３】
2020143151.tif 000034
【００９７】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または、置換低級アルキルであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−，および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【００９８】
【化３４】
2020143151.tif 000035
【００９９】
Ｕは、以下の構造を有し、
【０１００】
【化３５】
2020143151.tif 000036
【０１０１】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【０１０２】
【化３６】
2020143151.tif 000037
【０１０３】
ｎおよびｎ’は、それぞれ独立して、１以上の整数であり、
各Ｒ１６は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ＮＯ２、ＣＮ、および、置換アルキルからなる群より選択される）。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。ある特定の実施形態では、前記抗体は、αＣＤ７０である。他の実施形態では、Ｒ２は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。ある特定の実施形態では、前記抗体は、αＣＤ７０である。
【０１０５】
本発明のいくつかの実施形態では、式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）を構成する、化合物が記載されている。
【０１０６】
【化３７】
2020143151.tif 000038
【０１０７】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【０１０８】
【化３８】
2020143151.tif 000039
【０１０９】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または、置換低級アルキルであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−，および  −アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【０１１０】
【化３９】
2020143151.tif 000040
【０１１１】
Ｕは、以下の構造を有し、
【０１１２】
【化４０】
2020143151.tif 000041
【０１１３】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【０１１４】
【化４１】
2020143151.tif 000042
【０１１５】
ｎおよびｎ’は、それぞれ独立して、１以上の整数であり、
Ｄは、以下の構造を有し、
【０１１６】
【化４２】
2020143151.tif 000043
【０１１７】
各Ｒ１７は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルキルアルコキシ、置換アルキルアルコキシ、ポリアルキレンオキサイド、置換ポリアルキレンオキサイド、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルカリル、置換アルカリル、アラルキル、置換アラルキル、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−ＯＮ（Ｒ”）２、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−Ｃ（Ｏ）ＳＲ”、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−Ｓ−Ｓ−（アリール、もしくは、置換アリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ”、または、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２からなる群より選択され（なお、各Ｒ”は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、アルカリル、置換アルカリル、アラルキル、または、置換アラルキルである）、
各Ｚ１は、結合、ＣＲ１７Ｒ１７、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ１７Ｒ１７−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−Ｏ、Ｏ−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−Ｓ、Ｓ−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−ＮＲ’、または、ＮＲ’−ＣＲ１７Ｒ１７であり、
各Ｒ’は、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルであり、
各Ｚ２は、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、任意に置換された炭素数１〜３のアルキレン、任意に置換された炭素数１〜３のアルケニレン、および、任意に置換されたヘテロアルキルからなる群より選択され、
各Ｚ３は、結合、任意に置換された炭素数１〜４のアルキレン、任意に置換された炭素数１〜４のアルケニレン、任意に置換されたヘテロアルキル、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、および、−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択され、
各Ｔ３は、結合、Ｃ（Ｒ”）（Ｒ”）、Ｏ、または、Ｓであり（ただし、Ｔ３が、Ｏ、または、Ｓであるとき、Ｒ”は、ハロゲンではない）、
各Ｒ”は、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
ｍおよびｐは、０、１、２、または、３であり（ただし、ｍまたはｐのうち少なくとも１つは０でない）、
Ｍ２は、
【０１１８】
【化４３】
2020143151.tif 000044
【０１１９】
であり（なお、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
Ｍ３は、
【０１２０】
【化４４】
2020143151.tif 000045
【０１２１】
であり（なお、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
Ｍ４は、
【０１２２】
【化４５】
2020143151.tif 000046
【０１２３】
であり（ここで、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
各Ｒ１９は、独立して、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、エステル、エーテル、チオエーテル、アミノアルキル、ハロゲン、アルキルエステル、アリールエステル、アミド、アリールアミド、ハロゲン化アルキル、アルキルアミン、アルキルスルホン酸、アルキルニトロ、チオエステル、スルホニルエステル、ハロスルホニル、ニトリル、アルキルニトリル、および、ニトロからなる群より選択され、
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または、１１であり、
各Ｒ１６は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ＮＯ２、ＣＮ、および、置換アルキルからなる群より選択される）。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。特定の実施形態では、前記抗体はαＣＤ７０である。他の実施形態では、Ｒ２は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、前記ポリペプチドは、抗体である。ある特定の実施形態では、前記抗体はαＣＤ７０である。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、式（ＸＸＸＩ−Ａ）を構成する化合物が記載されている。
【０１２６】
【化４６】
2020143151.tif 000047
【０１２７】
ある実施形態では、上記いずれかの化合物と、薬学的に許容される担体、賦形剤、または、結合剤と、を含む、薬学的組成物が記載されている。
【０１２８】
さらなる、もしくは、代替的な実施形態では、患者におけるポリペプチドの存在を検出するための方法であって、少なくとも１つの複素環含有非天然アミノ酸を含むポリペプチドを投与することを含み、当該複素環含有非天然アミノ酸ポリペプチドは、当該ポリペプチドの免疫原性を同種の天然アミノ酸に比して変化させるものである、方法である。
【０１２９】
本明細書に記載の方法および組成物は、本明細書に記載の方法論、プロトコル、細胞系統、構成、および試薬に限定されず、変化させてもよいことが理解される。また、本明細書で使用した用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのみであり、添付の請求の範囲によってのみ限定される、本明細書に記載の方法および組成物の範囲を限定するものではないことが理解される。
【０１３０】
本明細書および添付の特許請求の範囲に使用されるように、単数形（“ａ”“ａｎ”および“ｔｈｅ”）で記載される用語は、初出または既出を問わず、複数形で記載される場合の範囲も含む。
【０１３１】
特に規定のない限り、本明細書に使用する技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通常に理解されるものと同一の意味を有するものとする。本明細書に記載の発明の実施または試験を行う場合に使用する方法、装置、および材料については、本明細書に記載の方法、装置、および材料に類似または均等の任意の方法、装置、および材料を使用することができるが、以下に好適な方法、装置、および材料を説明する。
【０１３２】
本明細書に引用する刊行物および特許文献は、例えば、本発明と関連して使用し得る構成概念および方法論を記載している。これら構成概念および方法論の説明を行うことを目的として、上記刊行物および特許文献を参照することにより、その内容全体を本願に援用する。なお、本明細書で検討する上記刊行物は、本願出願日前の開示内容についてのみ示すものである。本明細書中の如何なる記載も、本明細書に記載の発明者が先行発明の効力による、または他の理由のために、それらの開示に先行する権利を与えられないということを承認するものでない。
【０１３３】
用語「アルドールに基づく結合」または「混合アルドールに基づく結合」は、あるカルボニル化合物をこれに同一または異なっていてもよい他のカルボニル化合物のエノラート／エノールと酸触媒縮合または塩基触媒縮合させてβ−ヒドロキシカルボニル化合物（すなわち、アルドール）を生じることを指す。
【０１３４】
本明細書に使用されるように、用語「アフィニティーラベル」は、他の分子に可逆的または不可逆的に結合してこれを修飾または破壊するか、またはこれと化合物を形成する標識を指す。一例として、アフィニティーラベルは、酵素およびその基質、または抗体およびその抗原を含む。
【０１３５】
用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」、および「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ）は従来の意味で使用され、酸素原子、アミノ基、または硫黄原子を介して分子と連結しているアルキル基をそれぞれ指す。
【０１３６】
特に明記しない限り、用語「アルキル」は単独または他の分子の一部として、完全飽和、単不飽和、または多価不飽和状態であってもよく、指定の炭素原子数（すなわち、Ｃ１〜Ｃ１０は炭素１個〜１０個を意味する）を有する二価基および多価基を含むことのできる直鎖状、分鎖状、または環状の炭化水素基、またはこれらの組み合わせを指す。飽和炭化水素ラジカルの例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、およびシクロプロピルメチル、並びに例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、およびｎ−オクチルなどの同族体および異性体などの基を含むが、これらに限定されない。不飽和アルキル基は、１つ以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例は、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−プロピニル、３−プロピニル、３−ブチニル、高級同族体、および高級異性体を含むが、これらに限定されない。用語「アルキル」はまた、特に明記しない限り、本明細書により詳細に説明するアルキル基の誘導体（「ヘテロアルキル」、「ハロアルキル」、および「ホモアルキル」など）を含むよう意図されている。
【０１３７】
用語「アルキレン」は単独または他の分子の一部として、（−ＣＨ２−）ｎ（ｎは１〜約２４までの数であってもよい）に例示されるようなアルカンから誘導される二価ラジカルを意味する。一例として、このような基は、−ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−などの構造のような炭素原子数が１０個以下の基を含むが、これに限定されない。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、通常は炭素原子数が８個以下のより短鎖のアルキル基またはアルキレン基である。用語「アルキレン」はまた、特に明記しない限り、本明細書に「ヘテロアルキレン」として記載されている基を含むよう意図される。
【０１３８】
用語「アミノ酸」は、天然および非天然アミノ酸、並びに、天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸ミメティックを指す。天然にエンコードされるアミノ酸は、一般的な２０種類のアミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）、ピロリジン、およびセレノシステインである。アミノ酸アナログは、基本的な化学構造が天然アミノ酸と同一の化合物を指す。一例として、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合しているα炭素が挙げられる。このようなアミノ酸アナログは、基本的な化学構造が天然アミノ酸と同一である一方で、Ｒ基が修飾されているもの（一例としてノルロイシン）またはペプチド骨格が修飾されているものであってもよい。アミノ酸アナログの非限定例は、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを含む。
【０１３９】
本明細書では、アミノ酸はその名称によって示されることがある。または、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生物化学命名委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）が推奨する、３文字表記または１文字表記によって示されることもある。また、ヌクレオチドは、一般的に是認されている１文字の符号によって示されることがある。
【０１４０】
「アミノ末端修飾基」は末端アミン基に結合することが可能な任意の分子を指す。一例として、このような末端アミン基は、高分子（ポリペプチド、ポリヌクレオチド、およびポリサッカリドを含むが、これらに限定されない）の端部に位置してもよい。末端修飾基は、多様な水溶性ポリマー、ペプチド、またはタンパク質を含むが、これらに限定されない。一例として、末端修飾基はポリエチレングリコールまたは血清アルブミンを含む。末端修飾基を用いて高分子の治療特性の修飾を行ってもよい。このような修飾は、ペプチドの血中半減期を増大させることを含むが、これに限定されない。
【０１４１】
本明細書の「抗体」は、抗体の遺伝子のすべてまたは部分によって実質的にコードされている、１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を意味している。免疫グロブリン遺伝子としては、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域の遺伝子ならびに無数の免疫グロブリン可変領域の遺伝子が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書における抗体は全長の抗体および抗体断片を含むことを意味し、任意の生物に天然に存在するか、改変された（例えば、バリアントである）抗体を含んでいる。
【０１４２】
「抗体」という用語は、無処理（intact)の抗体、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を指している。また、「抗体」という用語は、二重特異性抗体などの多重特異性抗体を包含している。ヒト抗体は、通常、それぞれ可変領域と定常領域とを含む、２つの軽鎖と２つの重鎖とからなる。軽鎖可変領域はフレームワーク領域によって配置されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３として本明細書に同定されている、３つのＣＤＲを含んでいる。
【０１４３】
当技術分野で公知の抗ＣＤ７０抗体は、本発明での使用に好適である。モノクローナル抗体２Ｈ５、１０Ｂ４、８Ｂ５、１８Ｅ７、６９Ａ７、６９Ａ７Ｙ、およびＩＦ４を含む抗体の、並びに、アミノ酸配列の非制限例は、公開された米国特許出願２０１００１５０９５０において得られ、参照によって本明細書に援用される。２Ｈ５、１０Ｂ４、８Ｂ５、１８Ｅ７、６９Ａ７、６９Ａ７Ｙ、およびＩＦ４のＶＨアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１、２、３、４、５、７３、および６に示されている。２Ｈ５、１０Ｂ４、８Ｂ５、１８Ｅ７、６９Ａ７、６９Ａ７Ｙ、およびＩＦ４のＶＬアミノ酸配列は、それぞれ、公開された米国特許出願２０１００１５０９５０の配列番号７、８、９、１０、１１、１１、および１２に示されている（６９Ａ７および６９Ａ７Ｙは配列番号１１のＶＬアミノ酸配列を有している）。既知の重鎖配列は、軽鎖配列と結合することができ、本発明のいくつかの実施形態では、抗体の定常領域に、天然にコードされていないアミノ酸が存在する。本発明のいくつかの実施形態において、抗体の定常領域には、２つ以上の天然にコードされていないアミノ酸が存在する。従って、ある態様では、本開示は孤立したモノクローナル抗体または抗原を提供し、それらの結合部分は以下を含む。
（ａ）配列番号１、２、３、４、５、６、および７３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、
（ｃ）抗体が特異的にＣＤ７０と結合する、天然にコードされていないアミノ酸。
【０１４４】
当技術分野で公知の抗ＣＤ７０（αＣＤ７０）抗体は、本発明における使用に好適である。例えば、２Ｈ５抗体に対する配列は米国特許第８，１２４，７３８号において得られ、参照によって本明細書に援用される。
【０１４５】
本明細書に用いられるとき、「抗原結合断片」という用語は、抗原に結合する能力を保持している抗体の１つ以上の断片を指している。抗体の抗原結合能は無処理の抗体の断片によって生じている。抗体の「抗原結合断片」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価断片である、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋構造によって連結されている２つのＦａｂ断片を含んでいる２価断片である、（Ｆａｂ’）２、；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., (1989) Nature 341:544-546）、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、付加的な配列（リンカー、フレームワーク領域など）を含んでいるか、含んでいない、ＶＨのＣＤＲ３、および（ｖ）付加的な配列（リンカー、フレームワーク領域など）を含んでいるか、含んでいない、２〜６つの単離されたＣＤＲの組み合わせ、が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインである、ＶＬおよびＶＨは、分離した遺伝子によってコードされているが、ＶＬおよびＶＨの領域の組が（単鎖のＦｖ（ｓｃＦｖ）として知られている）１価の分子を形成するように単一のペプチド鎖としてそれらが生成されることを可能にする合成リンカーによって、組み換え法を用いてそれらは結合されている（例えばBird et al. (1988) Science 242:423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883を参照)。このような単鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合断片」という用語に包含されている。さらに、抗原結合断片は、（ｉ）免疫グロブリンのヒンジ領域のポリペプチドに融合されている、結合ドメインポリペプチド（重鎖可変領域、軽鎖可変領域またはリンカーペプチドを介して軽鎖可変領域に融合された重鎖可変領域など）、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合されている、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合されている、免疫グロブリンの重鎖のＣＨ３定常領域、を含んでいる。ヒンジ領域は、２量体化を妨げるための、１つ以上のシステイン残基のセリン残基への置換によって改変されている。このような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、米国特許第２００３／０１１８５９２号および米国特許第２００３／０１３３９３９号においてさらに開示されている。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来技術を用いて得られ、当該断片は、無処理の抗体として同一の方法において、実用のためにスクリーニングされる。
【０１４６】
典型的な抗原結合部位は軽鎖免疫グロブリンおよび重鎖免疫グロブリンの対合によって形成される可変領域からなる。抗体の可変領域の構造は非常に均一であり、非常に類似した構造を示す。これらの可変領域は一般的に相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と呼ばれる３つの超可変領域の間に配置している比較的相同なフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。抗原結合断片の全体の結合活性は、しばしばＣＤＲの配列によって定められている。ＦＲは最適な抗原結合のためのＣＤＲの３次元における適切な配置および整列における役割をしばしば担っている。
【０１４７】
実際、ＣＤＲ配列はもっとも抗体抗原相互作用の原因となるため、異なる機能を有する異なる抗体から得たフレームワーク配列上に融合された特定の天然に生じる抗体から得たＣＤＲ配列を含む発現ベクターの構築によって、特定の天然に生じる抗体の機能を示す組み換え抗体を発現させることが可能である（例えばRiechmann, L. et al., 1998, Nature332:323-327; Jones, P. et al., 1986, Nature 321:522-525; and Queen, C. et al., 1989, Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86:10029-10033を参照のこと)。このようなフレームワークの配列は、生殖細胞系の抗体遺伝子配列を含む、公知のＤＮＡデータベースから得られ得る。これらの生殖細胞系の配列は成熟抗体遺伝子配列は、それらがＢ細胞の成熟の間のＶ（Ｄ）Ｊ結合によって形成される完全に会合したバリアブル遺伝子を含んでいないため、成熟した抗体遺伝子配列とは異なる。また生殖細胞系遺伝子配列は、バリアバブル遺伝子全体にわたる変異を含むがＣＤＲ中に一般的に集まっている、高親和性の２次レパートリーの抗体の配列とは異なっている。例えば、体細胞突然変異はフレームワーク領域１のアミノ末端部分およびフレームワーク領域４のカルボキシ末端部分に比較的まれに存在する。さらに、多くの体細胞変異は抗体の結合特性をそれほど変化させない。この理由のために、元の抗体のものと類似した結合特性を有する無処理の組み換え抗体を再現するために、特定の抗体の完全なＤＮＡ配列を得ることは必要ではない。ＣＤＲ領域をまたぐ部分的な重鎖および軽鎖の配列であれば、この目的のためには十分である。部分的な配列は、組み替えられた抗体バリアブル遺伝子に寄与する生殖細胞可変部分および結合遺伝子部分を決定するために用いられる。生殖細胞系の配列は、続いて可変領域の欠けている部分に充填するために用いられる。重鎖および軽鎖のリーダー配列はタンパク質変異の間に切断され、最終的な抗体の特性には寄与しない。欠けている配列を付加するために、クローン化したｃＤＮＡ配列がライゲーションまたはＰＣＲ増幅によって合成オリゴヌクレオチドと結合され得る。あるいは、完全な可変領域が合成されて、完全な合成可変領域のクローンを生成する。この過程は、特定の制限酵素部位の削除または包含または特定のコドンの最適化などの特定の利点を有する。
【０１４８】
もちろん、本明細書に記載された抗体の全体または部分のフレームワーク領域は抗体の親和性、特異性、または任意の他の好適な特性を最適化するために、ＣＤＲとの結合に用いられ得る。本明細書における「抗体」は、抗体遺伝子の全体または部分によって実質的にコードされる一つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を意味している。免疫グロブリン遺伝子としては、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）、デルタ、イプシロン、およびミュー定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域の遺伝子が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書における抗体は全長の抗体および抗体断片を含むことを意味し、任意の生物に天然に存在するか、改変された（例えば、バリアントである）抗体を含んでいる。
【０１４９】
「抗体断片」は、全長形態以外の任意の形態の抗体を意味する。本明細書の抗体断片は、全長の抗体内に存在するより小さい要素である抗体と、改変を行った抗体とを含む。抗体断片は、Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジアボディ、トリアボディ、テトラボディ、二官能性ハイブリッド抗体、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組み合わせ、可変領域、フレームワーク領域、定常領域、重鎖、軽鎖、可変領域、選択的な骨格非抗体分子、および二重特異性抗体などを含むが、これらに限定されない（Maynard & Georgiou, 2000, Annu. Rev. Biomed. Eng. 2:339-76; Hudson, 1998, Curr. Opin. Biotechnol. 9:395-402）。他の機能性基礎構造は、ペプチドリンカーによって共有結合されている免疫グロブリン重鎖および軽鎖の可変領域から構成される単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である（S-z Hu et al., 1996, Cancer Research, 56, 3055-3061）。通常、これらの低分子（Ｍｒ ２５，０００）タンパク質は、単一のポリペプチドにおいて抗原への特異性および親和性を維持しているので、より巨大な抗原特異性の分子を構築するための有用な構築用ブロックを提供することができる。特に明記されている場合を除いて、用語「抗原」（単数形または複数形）を使用する記載または請求項は、「抗原断片」（単数形および複数形）を特に含むものとする。
【０１５０】
本明細書に使用されるように、「抗体−薬剤複合体」または「ＡＤＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」は、１つ以上の生物活性分子に共有結合されている抗体分子またはその断片を指す。生物活性分子は、リンカー、ポリマー、または他の共有結合を介して抗体に複合化されていてもよい。
【０１５１】
本明細書に使用されるように、用語「芳香族」または「アリール」は、共役π電子系を備える少なくとも１つの環を有する閉環構造を指し、炭素環アリール基およびヘテロ環アリール基（または「ヘテロアリール基」または「ヘテロ芳香族基」）の両方を含んでいる。炭素環の芳香族基またはヘテロ環の芳香族基は約５個〜約２０個の環原子を含んでいてもよい。上記用語は、共有結合されている単環の環または多環の縮合環（すなわち、隣接する対の炭素原子を共有する環）基を含む。芳香族基は置換されていなくても、置換されていてもよい。または、芳香族基を置換することもできる。「芳香族」基または「アリール」基の例は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、アントラセニル、およびフェナントラセニルが挙げられるがこれらに限定されない。上述のアリール環系およびヘテロアリール環系の各々の置換基は、本明細書に記載の許容可能な置換基からなる群より選択される。
【０１５２】
簡単に説明すると、用語「アリール」は、他の用語（アリールオキシ、アリールチオキシ、アラルキルを含むが、これらに限定されない）と組み合わされて使用される場合では、先に定義したようなアリール環およびヘテロアリール環の両方を含んでいる。したがって、用語「アラルキル」または「アルカリル」は、アルキル基（ベンジル、フェネチル、およびピリジルメチルなどを含むが、これらに限定されない）に対してアリール基が結合しているラジカルを含むように意図されている。なお、上記アルキル基は、炭素原子（メチレン基を含むが、これに限定されない）がヘテロ原子（一例として酸素原子）によって置換されたアルキル基を含む。このようなアリール基の例は、フェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、および３−（１−ナフチルオキシ）プロピルなどを含むが、これに限定されない。
【０１５３】
本明細書に使用されるように、用語「アリーレン」は二価アリールラジカルを指す。「アリーレン」のこれらに限定されない例としては、フェニレン、ピリジニレン、ピリミジニレン、およびチオフェニレンが挙げられる。アリーレン基の置換基は、本明細書に記載の許容可能な置換基からなる群より選択される。
【０１５４】
「二官能性ポリマー」は、「二官能性リンカー」とも称され、他の部分と特異的に反応して共有結合または非共有結合を形成可能な２つの官能基を含むポリマーを指す。このような部分は、天然または非天然アミノ酸の側鎖基、または、天然または非天然アミノ酸を含むペプチドの側鎖基が挙げられるが、これらに限定されない。二官能性リンカーまたは二官能性ポリマーと結合し得る上記他の部分は、同一または異なる部分であってもよい。一例として、二官能性リンカーは、第１のペプチドの基に反応性を示す官能基と、第２のペプチドの基に反応性を示す他の官能基と、を有し、これにより、前記第１のペプチド、前記二官能性リンカー、および前記第２のペプチドを含む複合体を形成する。多様な化合物をペプチドに結合させるための多数の手法および結合分子が公知である。例えば、欧州特許出願第１８８，２５６号、米国特許第４，６７１，９５８号、米国特許第４，６５９，８３９号、米国特許第４，４１４，１４８号、米国特許第４，６９９，７８４号、米国特許第４，６８０，３３８号、および米国特許第４，５６９，７８９号を参照のこと。上記特許出願および特許を参照することにより、その内容全体を本願に援用する。「多官能性ポリマー」は、「多官能性リンカー」とも称され、他の部分と反応可能な２つ以上の官能基を含んでいるポリマーを指す。このような部分としては、共有結合または非共有結合を形成する、天然または非天然アミノ酸の側鎖基または天然または非天然アミノ酸を含むペプチドの側鎖基が挙げられるが、これらに限定されない。（アミノ酸の側鎖基を含むが、これに限定されない）二官能性ポリマーまたは多官能性ポリマーは、長さまたは分子量が所望のものであってもよく、化合物に結合する１つ以上の分子と、この分子が結合する分子または前記化合物との間に、特定の所望の間隙または立体構造を提供するよう選択されてもよい。
【０１５５】
本明細書に使用するように、用語「バイオアベイラビリティー」は、物質またはその活性部分が薬剤の剤形から送達されて作用点または全身循環において利用可能となる速度および程度を指す。バイオアベイラビリティーの増大は、物質またはその活性部分が薬剤の剤形から送達されて作用点または全身循環において利用可能となる速度および程度の増大を示す。一例として、バイオアベイラビリティーの増大は、他の物質または他の活性部分と比較して、物質またはその活性部分の血中濃度が増大していることにより示され得る。バイオアベイラビリティーの増大の評価を行う方法については、その非限定例を実施例２１〜２５に示す。当該方法を使用して任意のポリペプチドのバイオアベイラビリティーの評価を行ってもよい。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、用語「生物活性分子」、「生物活性部分」、または「生物活性剤」は、有機体（ウイルス、細菌、バクテリオファージ、トランスポゾン、プリオン、昆虫、菌、植物、動物、およびヒトが挙げられるが、これらに限定されない）に関する生物学的な系、経路、分子、または相互作用の物性または生化学的特性に作用を及ぼすことが可能な任意の物質を意味する。特に、本明細書で使用されるように、生物活性分子としては、ヒトまたは他の動物の疾病の診断、治癒、緩和、治療、または予防を目的とするか、またはヒトまたは動物の身体上または精神上の健康を向上させる任意の物質が挙げられるが、これらに限定されない。生物活性分子の例は、ペプチド、タンパク質、酵素、小分子薬剤、ハードドラッグ、ソフトドラッグ、プロドラッグ、炭水化物、無機原子または分子、染料、脂質、ヌクレオシド、放射性核種、オリゴヌクレオチド、毒素、細胞、ウイルス、リポソーム、微小粒子、およびミセルが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法および組成物と併用するために好適な生物活性分子の種類は、薬剤、プロドラッグ、放射性核種、造影剤、ポリマー、抗生物質、殺菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗腫瘍剤、心血管作動剤、抗不安剤、ホルモン、増殖因子、ステロイド剤、および細菌由来の毒素などを含むが、これらに限定されない。
【０１５７】
「生物活性の調節」を行うことは、ポリペプチドの反応度を増大または低下させること、ポリペプチドの選択性を改変させること、またはポリペプチドの基質選択性を向上または低下させることを意味する。修飾した生物活性の分析は、非天然ポリペプチドの生物活性を天然ポリペプチドの生物活性と比較することにより実施することができる。
【０１５８】
本明細書に使用されるとき、用語「生体材料」は、生物学的に誘導された材料を指す。上記生物学的に誘導された材料としては、生物反応器および／または組み換え方法および技術から得られる材料が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５９】
本明細書に使用されるように、用語「生物物理学的プローブ」は、分子の構造上の変化を検出または観測することが可能なプローブを含む。このような分子としてはタンパク質が挙げられるが、これに限定されない。「生物物理学的プローブ」を使用して、タンパク質と他の巨大分子との相互作用を検出または観測してもよい。生物物理学的プローブの例としては、スピン標識、蛍光プローブ、および光活性化可能な基が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６０】
本明細書に使用されるように、用語「生合成的」は、翻訳系（細胞または非細胞の翻訳系）を利用する任意の方法であって、ポリヌクレオチド、コドン、ｔＲＮＡ、およびリボソームといった要素の少なくとも１つを使用することを含む方法を指す。一例として、本明細書および非限定性の実施例２０に記載の方法および技術（「非天然アミノ酸を含むポリペプチドのインビボ産生法」）を使用して、非天然アミノ酸ポリペプチドへの非天然アミノ酸の「生合成的な組み入れ」を行ってもよい。さらに、非天然アミノ酸ポリペプチドへの「生合成的に組み入れ」を行い得る有用な非天然アミノ酸の選択方法は、非限定性の実施例２０に記載されている。
【０１６１】
本明細書に使用されるように、用語「ビオチンアナログ」（または「ビオチンミメティック」とも称される）は、アビジンおよび／またはストレプトアビジンと親和性高く結合する、ビオチン以外の任意の分子である。
【０１６２】
本明細書に使用されるように、用語「カルボニル」は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、および−Ｃ（Ｓ）−からなる群より選択される部分を含んでいる基を指し、これらに限定するものではないが、１つのケトン基、少なくとも１つのアルデヒド基、少なくとも１つのエステル基、少なくとも１つのカルボン酸基、および／または少なくとも１つのチオエステル基を含有する基が挙げられる。このようなカルボニル基は、ケトン、アルデヒド、カルボン酸、エステル、およびチオエステルを包摂する。さらに、このような基は、直鎖状、分鎖状、または環状の分子の一部であってもよい。
【０１６３】
用語「カルボキシ末端修飾基」は、末端カルボキシ基に結合することができる任意の分子を指す。一例として、このような末端カルボキシ基としては、高分子（ポリペプチド、ポリヌクレオチド、およびポリサッカリドが挙げられるが、これらに限定されない）の端部に位置していてもよい。末端修飾基は、多様な水溶性のポリマー、ペプチド、またはタンパク質を含むが、これらに限定されない。一例として、末端修飾基は、ポリエチレングリコールまたは血清アルブミンを含む。末端修飾基を使用して高分子の治療特性の修飾を行ってもよい。上記修飾としては、ペプチドの血中半減期の拡大が挙げられるが、これに限定されない。
【０１６４】
本明細書に使用されるように、用語「化学的に切断可能な基」は、「化学的に不安定」であるとも称され、酸、塩基、酸化剤、還元剤、化学的開始剤、またはラジカル開始剤に曝されると崩壊または切断される基を指す。
【０１６５】
本明細書に使用されるように、用語「化学発光基」は、加熱を伴わない化学反応の結果として発光する基を指す。一例として、ルミノール（５−アミノ−２，３−ジヒドロ−１，４−フタルアジンジオン）は、塩基および金属触媒の存在下で過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）のような酸化剤と反応して励起状態の反応生成物（３−アミノフタラート（３−ＡＰＡ：３−ａｍｉｎｏｐｈｔｈａｌａｔｅ））を生成する。
【０１６６】
本明細書に使用されるように、用語「発色団」は、可視波長、ＵＶ波長、またはＩＲ波長の光を吸収する分子を指す。
【０１６７】
本明細書に使用されるように、用語「補因子」は、巨大分子の作用に必須の原子または分子を指す。補因子としては、無機イオン、補酵素、タンパク質、または酵素活性に必要な他の因子が挙げられるが、これらに限定されない。例としては、ヘモグロビンにおけるヘム、クロロフィルにおけるマグネシウム、およびタンパク質に対する金属イオンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「コフォールディング（cofolding）」は、互いに相互作用する少なくとも２つの分子を用い、未フォールディングの、または、不適切にフォールディングされた分子を、適切にフォールディングされた分子へと変換するリフォールディングのプロセス、反応または方法を指す。一例として、「コフォールディング」は、互いに相互作用する少なくとも２つのポリペプチドを用い、未フォールディングの、または、不適切にフォールディングされたポリペプチドを、未変性の、適切にフォールディングされたポリペプチドに変換する。このようなポリペプチドは、天然アミノ酸および／または少なくとも１つの非天然アミノ酸を含んでいてもよい。
【０１６９】
本明細書に使用されるように、「比較ウィンドウ」は、二つの配列が最適にアライメントされた後に、配列を、同じ数の連続位置からなる参照配列と比較するために用いられる任意の連続位置からなるセグメントを指す。このような連続位置は、約２０個〜約６００個の連続単位（約５０個〜約２００個の配列単位および、約１００〜約１５０個の配列単位が挙げられる）から構成される群が挙げられるが、これらに限定されない。一例として、このような配列は、ポリペプチドおよび非天然アミノ酸を含むポリペプチドが挙げられ、連続単位は、天然および非天然アミノ酸を含むものであるが、これらに限定されない。さらに、一例として、このような配列は、連続単位に対応するヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを含む。比較のための配列のアライメント方法は当該技術分野において周知である。比較のための配列の最適なアライメントは、局所相同アルゴリズム（Smith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c）、相同位置合わせアルゴリズム（Needlemanand Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443）、類似探索方法（Pearson and Lipman (1988) Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444）、コンピュータによるこれらアルゴリズムの実行（GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI）、または、手動位置合わせおよび目視検査（例えばAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology(1995 supplement)を参照）により実施することが可能であるが、これら手法のみに限定されない。
【０１７０】
一例として、パーセント配列同一性およびパーセント配列類似性を決定するために使用し得るアルゴリズムは、Altschul et al. (1997) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402およびAltschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410にそれぞれ記載のＢＬＡＳＴアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、全米バイオテクノロジー情報センター（ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を介して公衆が利用可能である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムの変数Ｗ，Ｔ、およびＸにより、アライメントの感度および速度が決定される。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、初期設定として、ワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両ストランドの比較を使用する。アミノ酸配列に関しては、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、初期設定として、ワード長（Ｗ）３、期待値（Ｅ）１０、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクス（Henikoff and Henikoff (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915参照）アライメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両ストランドの比較を使用する。上記ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、一般的には、「低複雑度」のフィルターをオフにして実施される。
【０１７１】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似度の統計的分析を行う（例えばKarlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787を参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似度の１つの測定は、２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列間のマッチングが偶然に生じる確率の判定の目安となる最小和確率（Ｐ（Ｎ））である。例えば、検定核酸を参照核酸と比較した場合の最小和確率が約０．２未満、約０．０１未満、または約０．００１未満である場合では、核酸は参照配列に類似していると考えられる。
【０１７２】
用語「保存的に改変された変異体」は、天然および非天然アミノ酸の両方、天然および非天然核酸配列、およびこれらの組み合わせに適用される。特定の核酸配列については、「保存的に改変された変異体」は、同一または本質的に同一の天然および非天然アミノ酸配列をコードする天然および非天然核酸を指す。または、天然および非天然核酸が天然および非天然アミノ酸配列をコードしない場合では、「保存的に改変された変異体」は本質的に同一の配列を指す。一例として、遺伝子コードの縮重のため、同一の機能を有する多数の核酸によって任意の特定タンパク質がコードされる。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵは全てアミノ酸アラニンをコードする。したがって、コドンによってアラニンが特定される全位置において、コードされるポリペプチドを改変させることなく前記コドンを記載の対応コドンの何れかに改変させることができる。このような核酸変異体は、保存的に改変された変異体の一種である「サイレント変異体」である。したがって、一例として、本明細書における全ての天然または非天然ポリペプチドをコードする天然または非天然核酸配列は、天然または非天然核酸における全ての可能なサイレント変異についても記述している。当業者であれば、天然または非天然核酸の各コドン（ＡＵＧおよびＴＧＧは除くものであり、ＡＵＧは通常ではメチオニンをコードする唯一のコドンであり、ＴＧＧは通常ではトリプトファンをコードする唯一のコドンである）を修飾して、機能的に同一の分子を産出することが可能であることを認めるであろう。したがって、天然および非天然ポリペプチドをコードする天然および非天然核酸の各サイレント変異は、記載の各配列中に潜在するものである。
【０１７３】
アミノ酸配列に関して言えば、コードされる配列における単一の天然および非天然のアミノ酸または数％のの天然および非天然のアミノ酸の改変、付加、または欠失を生じさせる核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列に対する個々の置換、欠失、または付加は、こうした改変が、アミノ酸の欠失、付加、または、天然および非天然アミノ酸の化学的に類似のアミノ酸との置換になるとき、「保存的に改変された変異体」となる。機能的に類似の天然アミノ酸を提供する保存的な置換表は当該技術分野において周知である。このような保存的に改変された変異体は、本明細書に記載の方法および組成物の多型変異体、種間ホモログ、および対立遺伝子に追加して含まれるものであり、これらを除外するものではない。
【０１７４】
機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的な置換表は当該技術分野の当業者に周知である。以下に示す８つのグループは、互いに保存的な置換となる各アミノ酸を含んでいる。
【０１７５】
（１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）
（２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）
（３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）
（４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）
（５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）
（６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）
（７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、および
（８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）
（例えば、Creighton, Proteins:Structures and Molecular Properties (W H Freeman& Co.; 2nd edition (December 1993))参照）。
【０１７６】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、単独または他の用語と併せて使用される場合では、特に明記しない限り、「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状型をそれぞれ意味する。したがって、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、飽和、部分飽和、および完全飽和状態の環結合を含む。さらに、ヘテロシクロアルキルに関しては、ヘテロ原子は、ヘテロ環は分子の残存部に結合する位置を占めることができる。ヘテロ原子としては、酸素、窒素、または硫黄が挙げられ得るが、これらに限定されない。シクロアルキルの例は、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、およびシクロヘプチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例は、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、および２−ピペラジニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、上記用語は、多環状構造（二環または三環の環構造が挙げられるが、これらに限定されない）を含む。同様に、用語「ヘテロシクロアルキレン」は、単独または他の分子の一部として、ヘテロシクロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味する。用語「シクロアルキレン」は、単独または他の分子の一部として、シクロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味する。
【０１７７】
本明細書に使用されるとき、用語「シクロデキストリン」は、環形成された少なくとも６〜８個のグルコース分子から構成される環状の炭水化物を指す。環の外側部分は水溶性の基を含んでいる。上記環の中央部分は、小分子を受け入れることが可能な比較的非極性の窪みである。
【０１７８】
本明細書に使用されるとき、用語「細胞毒性の」は、細胞に害を与える化合物を指す。
【０１７９】
本明細書に使用されるとき、「変性剤」は、ポリマーの可逆的な展開を引き起こす任意の化合物または材料を指す。一例として、「変性剤（denaturing agentまたはdenaturant）」はタンパク質の可逆的なアンフォールディングを引き起こしてもよい。変性剤の効果は、特定の変性剤の特徴および濃度の両方によって決定されることになる。一例として、変性剤としては、カオトロープ、界面活性剤、有機物、水混和性溶媒、リン脂質、またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。カオトロープの非限定的な例としては、尿素、グアニジン、およびチオシアン酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。界面活性剤の非限定的な例としては、ドデシル硫酸ナトリウムまたはポリオキシエチレンエーテル（例えば、ＴｗｅｅｎまたはＴｒｉｔｏｎ界面活性界面活性剤）などの強力な界面活性界面活性剤、Ｓａｒｋｏｓｙｌ、弱性の非イオン系界面活性界面活性剤（例えば、ジギトニン）、Ｎ−２，３−（ジオレイオキシ）−プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムなどの弱性の陽イオン性界面活性剤、弱性のイオン性界面活性剤（例えば、コール酸ナトリウムまたはデオキシコール酸ナトリウム）、または両性イオン性界面活性剤（スルホベタイン（両性界面活性剤）、３−（３−クロロアミドプロピル）ジメチルアンモニオ−１−プロパンサルフェート（ＣＨＡＰＳ）、および３−（３−クロロアミドプロピル）ジメチルアンモニオ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳＯ）を含むが、これらに限定されない）が挙げらるが、これらに限定されない。有機水混和性溶媒の非限定的な例としては、アセトニトリル、下級アルカノール（特に、エタノールまたはイソプロパノールなどのＣ２〜Ｃ４アルカノール）、または下級アルカンジオール（エチレングリコールなどのＣ２〜Ｃ４アルカンジオール）が挙げられルが、これらに限定されない。また、上記有機水混和性溶媒の非限定的な例を変性剤として使用してもよい。リン脂質の非限定例としては、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、およびホスファチジルイノシトールなどの天然のリン脂質、またはジヘキサノイルホスファチジルコリンまたはジへプタノイルホスファチジルコリンなどの合成リン脂質誘導体または合成リン脂質変異体が挙げらるが、これらに限定されない。
【０１８０】
本明細書に使用されるとき、用語「所望の官能基」は、以下に掲げるものから選択される任意の基を指す。すなわち、標識；染料；ポリマー；水溶性ポリマー；ポリエチレングリコール誘導体；光架橋剤；細胞毒性化合物；薬剤；アフィニティーラベル；光アフィニティーラベル；光アフィニティーラベル；反応性化合物；樹脂；第２のタンパク質アナログ、ポリペプチドアナログ、またはポリペプチドアナログ；抗体もしくは抗体断片；金属キレート剤；補助因子；脂肪酸；炭水化物；ポリヌクレオチド；ＤＮＡ；ＲＮＡ；アンチセンスポリヌクレオチド；多糖類；水溶性デンドリマー；シクロデキストリン；生体適合物質；ナノ粒子；スピン標識；蛍光プローブ；金属含有部分；放射性部分；新規な官能基；他の分子と共有的もしくは非共有的に相互作用する基；光ケージド部分；化学線励起部分；リガンド；光異性体化可能な部分；ビオチン；ビオチン類似物；重元素を組み込んでいる部分；化学的に切断可能な基；光切断可能な基；延長された側鎖；炭素結合型の糖；酸化還元活性物質；アミノチオ酸；毒性部分；同位体標識部分；生物物理学的プローブ；燐光基；化学発光基；高電子密度基；磁性基；挿入基；発色団；エネルギー転移剤；生物学的活性物質（この場合、生物学的活性物質としては、治療活性を有する剤が挙げられ、非天然アミノ酸ポリペプチドまたは修飾非天然アミノ酸は、治療剤に付随している共治療剤として、または治療剤を有機体の所望位置に送達する手段として作用することができる）；検出可能な標識；小分子；抑制性リボ核酸；放射性ヌクレオチド；中性子捕獲物質；ビオチン誘導体；量子ドット；ナノ伝達物質；放射性伝達物質；抗体酵素；活性化させた複合活性剤；ウイルス；アジュバント；アグリカン；アレルガン；アンギオスタチン；抗ホルモン；抗酸化剤；アプタマー；誘導ＲＮＡ；サポニン；シャトルベクター；巨大分子；ミモトープ；受容体；逆ミセル；およびこれらの任意の組み合わせ、から選択される。
【０１８１】
本明細書に使用されるとき、用語「ジアミン」は、少なくとも２つのアミン官能基を含む基／分子を指す。上記基／分子は、ヒドラジン基、アミジン基、イミン基、１，１−ジアミン基、１，２−ジアミン基、１，３−ジアミン基、および１，４−ジアミン基が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、このような基は、直鎖状、分鎖状、または環状の分子の一部であってもよい。
【０１８２】
本明細書に使用されるとき、用語「検出可能標識」は、分析技術（蛍光方法、化学発光方法、電子スピン共鳴方法、紫外・可視吸光度分光学的方法、質量分析方法、核磁気共鳴方法、磁気共鳴方法、および電気化学的方法を含むが、これらに限定されない）を使用して観察可能な標識を指す。
【０１８３】
用語「ジカルボニル」は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、および−Ｃ（Ｓ）−からなる群より選択される少なくとも２つの部分を含む基を指す。上記基は、１，２−ジカルボニル基、１，３−ジカルボニル基、１，４−ジカルボニル基、および、少なくとも１つのケトン基、少なくとも１つのアルデヒド基、少なくとも１つのエステル基、少なくとも１つのカルボン酸基、および／または少なくとも１つのチオエステル基を含む基を包摂するが、これらに限定されない。このようなジカルボニル基は、ジケトン、ケトアルデヒド、ケト酸、ケトエステル、およびケトチオエステル基を包摂する。さらに、このような基は、直鎖状、分鎖状、または環状の分子の一部であってもよい。上記ジカルボニル基の２つの部分は互いに同一または異なるものでもよく、何れか一方が、一例としてエステル、ケトン、アルデヒド、チオエステル、またはアミドを生成する置換基を含んでいてもよい。
【０１８４】
本明細書に使用されるとき、用語「薬剤」は、疾病または病態の抑制、診断、緩和、治療、または治癒に使用される任意の物質を指す。
【０１８５】
本明細書に使用されるように、用語「染料」は、発色団を含む可溶性の発色剤を指す。
【０１８６】
本明細書に使用される場合、用語「有効量」は、治療対象の疾病または病態の１つ以上の症状をある程度緩和するために十分な投与薬剤または投与化合物の量を指す。この結果、疾病の兆候、症状、または原因、または生体系のその他の所望の変化を低減および／または緩和させることができる。一例として、投与薬剤または投与化合物としては、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、改変された天然アミノ酸ポリペプチド、または改変された非アミノ酸ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。このような天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾非天然アミノ酸ポリペプチドを含む組成物を予防的治療、増強的治療、および／または治療上の処置のために投与することができる。個々の場合の適当な「有効」量は、投与量増加研究法などの技術を使用して決定してもよい。
【０１８７】
本明細書に使用されるとき、用語「高電子密度基」は、電子ビームを照射された場合に電子の散乱を起こす基を指す。このような基としては、モリブデン酸アンモニウム、次硝酸ビスマスヨウ化カドミウム、９９％、カルボヒドラジド、塩化第二鉄六水和物、ヘキサメチレンテトラミン、９８．５％、三塩化インジウム無水物、硝酸ランタン、酢酸鉛三水塩、クエン酸鉛三水塩、硝酸鉛、過ヨウ素酸、リンモリブデン酸、リンタングステン酸、フェリシアン化カリウム、フェロシアン化カリウム、ルテニウムレッド、硝酸銀、タンパク銀（Ａｇアッセイ：８．０〜８．５％）「ストロング（Strong）」、テトラフェニルポルフィリン銀（silver tetraphenylprophin）（Ｓ−ＴＰＰＳ）、塩化金酸ナトリウム、タングステン酸ナトリウム、硝酸タリウム、チオセミカルバジド（ＴＳＣ）、酢酸ウラニル、硝酸ウラニル、および硫酸バナジルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８８】
本明細書に使用されるとき、用語「エネルギー転移剤」は、他の分子にエネルギーを供与するか、または他の分子からエネルギーを受け取る分子を指す。一例として、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）は、蛍光供与分子の励起状態のエネルギーが非励起受容分子に非放射的に伝達されて、その後、この非励起受容分子が供与エネルギーをより長波長で蛍光発光する双極子間カップリングの過程である。
【０１８９】
用語「向上させる」または「向上」は、所望の効果の有効性または持続期間を増大または延長させることを意味する。一例として、治療薬の効果を「向上させる」とは、疾病、疾患、または病態の処置中に作用する治療薬の効果の有効性または持続期間を増大または延長させる能力を指す。本明細書に使用するとき、「向上有効量」は、疾病、疾患、または病態の処置における治療薬の効果を向上させるために適当な量を指す。患者に使用する場合では、上記用途に有効な量は、疾病、疾患、または病態の重症度および経過、以前の治療、患者の健康状態および薬剤への反応、および治療医師の判断に応じて決定されることになる。
【０１９０】
本明細書において用いられるとき、用語「真核生物」は系統発生学上の真核生物ドメインに属する有機体を指す。真核生物ドメインに属する有機体は、動物（哺乳類、昆虫、爬虫類、鳥類などが挙げられるが、これらに限定されない）、繊毛虫類、植物（単子葉植物、双子葉植物、および藻類が挙げられるが、これらに限定されない）、菌類、酵母、鞭毛虫、微胞子虫、および原生生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
本明細書に使用されるとき、用語「脂肪酸」は、炭化水素側鎖が約Ｃ６またはそれより長鎖のカルボン酸を指す。
【０１９２】
本明細書に使用されるように、用語「蛍光団」は、励起された場合に光子を放出する蛍光性の分子を指す。
【０１９３】
本明細書で使用されるように、用語「官能基」、「活性部分」、「活性化基」、「離脱基」、「反応部位」、「化学反応基」、および「化学反応部分」は、化学反応が発生する分子の一部または単位を指す。これら用語は、化学分野においては幾らかの同義性を示す用語である。また本明細書においては、ある機能または活性をもたらし、他の分子と反応する分子の一部を示す用語として使用される。
【０１９４】
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、ヨウ素、および臭素を包摂する。
【０１９５】
本明細書に使用されるとき、用語「ハロアシル」は、ハロゲン部分（−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３などが挙げられるが、これらに限定されない）を含むアシル基を指す。
【０１９６】
本明細書に使用されるとき、用語「ハロアルキル」は、ハロゲン部分（−ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＦ３などが挙げられるが、これらに限定されない）を含むアルキル基を指す。
【０１９７】
本明細書に使用されるように、用語「ヘテロアルキル」は、アルキル基とＯ、Ｎ、Ｓｉ、およびＳからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子とから構成され、窒素原子および硫黄原子が適宜酸化されてもよく、窒素ヘテロ原子が適宜四級化されてもよい直鎖状、分鎖状、または環状の炭化水素ラジカル、またはこれらの組み合わせを指す。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｓ、およびＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置またはアルキル基が分子の残余部分に結合する位置に配置されてもよい。一例として、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、最大で２つまでのヘテロ原子（一例として、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３および−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３など）が連続していてもよい。
【０１９８】
用語「ヘテロ環に基づく結合」または「ヘテロ環結合」は、ジカルボニル基がジアミン基と反応することで形成される部分を指す。この結果得られる反応生成物は、ヘテロアリール基またはヘテロシクロアルキル基を含むヘテロ環である。この結果得られるヘテロ環基は、非天然アミノ酸または非天然アミノ酸ポリペプチドと他の官能基との間の化学結合として働く。一実施形態では、上記ヘテロ環結合としては、窒素含有ヘテロ環結合（一例として、ピラゾール結合、ピロール結合、インドール結合、ベンゾジアゼピン結合、およびピラゾロン（pyrazalone）結合を含む）が挙げられるが。
【０１９９】
同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、ヘテロアルキル（−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−および−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−に例示されるが、これらに限定されない）から誘導される二価ラジカルを指す。ヘテロアルキレン基に関しては、同一または異なるヘテロ原子（アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノ、およびアミノオキシアルキレンなどを含むが、これらに限定されない）が片側または両側の鎖末端を占めてもよい。さらに、アルキレン結合基およびヘテロアルキレン結合基に関しては、結合基の方向性は、結合基を示す式の記載方向によって示唆されることはない。一例として、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−および−Ｒ’Ｃ（Ｏ）２−の両方を示す。
【０２００】
本明細書に使用されるように、用語「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」は、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含むアリール基を指す。なお、上記アリール基は、窒素原子および硫黄原子は適宜酸化されてもよく、また、当該窒素原子は適宜四級化されてもよい。ヘテロアリール基は、置換されてもよいが、非置換であってもよい。また、ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して分子の残余部分と結合されていてもよい。上記ヘテロアリール基の非限定的な例としては、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンゾイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、および６−キノリルが挙げられる。
【０２０１】
本明細書に使用されるとき、用語「ホモアルキル」は、炭化水素基であるアルキル基を指す。
【０２０２】
本明細書に使用されるとき、用語「同一性の」は、２つ以上の同一の配列またはサブ配列を指す。さらに、本明細書に使用するように、用語「実質的に同一性の」は、比較アルゴリズムの使用または手動アライメントおよび目視検査による計測により、比較され、比較ウィンドウまたは指定領域において最大限対応するようにアライメントされたときに、同一の連続単位のパーセンテージがある程度になる２つ以上の配列を指す。一例として、特定の領域全体における連続単位の同一性が約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％である場合では、２つ以上の配列は「実質的に同一」であり得る。このような同一性のパーセンテージによって、２つ以上の配列の「パーセント同一性」を記述する。配列の同一性は、少なくとも約７５〜１００個の連続単位の長さの領域全体、約５０個の連続単位の長さ領域全体、または特定されていない場合では配列全域にわたって存在し得る。この定義はまた、試験配列の相補鎖も指す。一例として、２つ以上のポリペプチド配列について、アミノ酸残基が同一である場合にはポリペプチド配列は同一である。一方、特定領域全体におけるアミノ酸残基の同一性が約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％の場合には上記２つ以上のポリペプチド配列は「実質的に同一」である。上記同一性は、少なくとも約７５〜約１００個のアミノ酸の長さの領域全体、約５０個のアミノ酸の長さ領域全体、または特定の無い場合ではポリペプチド配列全域において存在し得る。さらに、一例として、２つ以上のポリヌクレオチド配列について、核酸残基が同一の場合にはこれらポリヌクレオチド配列は同一である。一方、特定領域全体における核酸残基の同一性が約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％である場合には上記２つ以上のリヌクレオチド配列は「実質的に同一」である。上記同一性は、少なくとも約７５個〜約１００個の核酸の長さの領域全体、約５０個の核酸の長さの領域全体、または特定のない場合ではリヌクレオチド配列の全配列において存在することができる。
【０２０３】
配列比較では、通常は１つの配列が、試験配列を比較する参照配列として働く。配列比較アルゴリズムを使用する場合では、試験配列および参照配列をコンピュータに入力し、必要であればサブ配列の配位を指定し、配列アルゴリズムプログラムの変数を指定する。なお、配列アルゴリズムプログラムの初期設定変数を使用することもできる。または、代替変数を指定することもできる。その後、上記配列比較アルゴリズムにより、上記参照配列に対する上記試験配列のパーセント配列同一性を上記プログラム変数に基づいて算出する。
【０２０４】
本明細書に使用されるように、用語「免疫原性」は、治療薬剤の投与に対する抗体応答を指す。生物学的な液体中の抗非天然アミノ酸ポリペプチド抗体を検出するための定量分析法および定性分析法を使用して、治療用の非天然アミノ酸ポリペプチドに対する免疫原性を得ることができる。これらの分析法は、放射免疫測定（ＲＩＡ）、酵素免疫測定吸着法（ＥＬＩＳＡ）、発光免疫測定法（ＬＩＡ）、および蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。治療用の非天然アミノ酸ポリペプチドに対する免疫原性の検出としては、治療用の非天然アミノ酸ポリペプチドの投与後の抗体応答を治療用の天然アミノ酸ポリペプチド投与後の抗体応答と比較することが挙げられる。
【０２０５】
本明細書に使用されるように、用語「挿入剤」は、「挿入基」とも称され、分子内空間または分子間スペースに挿入可能な化学物質を指す。一例として、２重鎖ＤＮＡのスタックされた塩基間に挿入する分子であってもよい。
【０２０６】
本明細書に使用されるように、用語「単離化」は、対象の要素を対象以外の要素から分離して取り除くことを指す。単離物質は、乾燥または半乾燥状態とすることもできるが、溶液（水溶液を含むが、これに限定されない）中とすることもできる。単離要素は、同質の状態とすることもできる。または、薬学的に許容可能な追加の担体および／または賦形剤を備える医薬組成物の一部とすることもできる。純度および均質性は、分析化学技術（ポリアクリルアミドゲル電気泳動法または高速液体クロマトグラフィー法が挙げられるが、これらに限定されない）を使用して決定してもよい。さらに、対象の要素を単離し、これが調製物中に存在する優勢種である場合では、本明細書において前記要素は実質的に精製されていると記載する。本明細書に使用されるように、用語「精製された」は、少なくとも純度８５％、少なくとも純度９０％、少なくとも純度９５％、または少なくとも純度９９％以上の対象要素を指し得る。一例として、核酸またはタンパク質は、天然の状態では付随している細胞要素の少なくとも一部を含んでいない場合、「単離」されたことになる。または、インビトロ生成またはインビボ生成で得られる濃度よりも高いレベルに凝縮された場合、上記核酸またはタンパク質は「単離」された状態となる。さらに、一例として、遺伝子は、遺伝子を配置し、対象遺伝子以外のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームから分離された場合に単離される。
【０２０７】
本明細書に使用されるように、用語「標識」は、化合物に取り込まれ、容易に検出される物質を指す。これによって、上記物質の物理的分布を検出および／または監視してもよい。
【０２０８】
本明細書に使用されるように、用語「結合」は、リンカーの官能基と他の分子との間の化学反応により発生する結合または化学的部分を指す。このような結合としては共有結合および非共有結合を含んでもよいが、これらに限定されない。また、このような化学的部分は、エステル、炭酸塩、イミンホスフェートエステル、ヒドラゾン、アセタール、オルトエステル、ペプチド結合、およびオリゴヌクレオチド結合が挙げられるが、これらに限定されない。加水分解に安定な結合は、水中で実質的な安定性を示し、且つ有用なｐＨ値（生理条件下で長期間または無期限）では水と反応しない結合を示す。加水分解に不安定または分解性の結合とは、結合が水または水溶液中（例えば血液が挙げられる）において分解可能であることを意味する。酵素的に不安定または分解可能な結合とは、結合が１つ以上の酵素によって分解可能であることを意味する。一例として、ＰＥＧおよびこれに関連するポリマーは、高分子骨格内または高分子骨格と高分子の末端官能基の１つ以上との間の結合基内に分解性結合を含んでいてもよい。このような分解性結合は、ＰＥＧカルボン酸または活性ＰＥＧカルボン酸が生理活性剤上のアルコール基と反応することにより形成されるエステル結合を含むが、これに限定されない。なお、このようなエステル基は、一般的に、生理的条件下で加水分解して生理活性剤を放出する。他の加水分解により分解可能な結合は、カーボネート結合、アミンおよびアルデヒドの反応から形成されるイミン結合、アルコールをリン酸基と反応させることで形成されるリン酸エステル結合、ヒドラジドおよびアルデヒドの反応生成物であるヒドラゾン結合、アルデヒドおよびアルコールの反応生成物であるアセタール結合、ギ酸塩およびアルコールの反応生成物であるオルトエステル結合、アミン基（ＰＥＧなどのポリマーの端部に位置するアミン基を含むが、これに限定されない）およびペプチドのカルボキシル基により形成されるペプチド結合、およびホスホルアミジテ基（ポリマーの端部のホスホルアミジテ基を含むが、これに限定されない）およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基から形成されるオリゴヌクレオチド結合が挙げられるが、これに限定されない。
【０２０９】
本明細書に使用されるとき、「培地」または「培養液」という用語は、細胞の成長および回収、および／またはそのような細胞による生成物の発現および／または分泌に使用される任意の培養培地を指す。そのような「培地」または「培養液」としては、任意の宿主細胞（例えば、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞、植物宿主細胞、真核生物宿主細胞、哺乳類宿主細胞、ＣＨＯ細胞、原核生物宿主細胞、Ｅ． ｃｏｌｉ宿主細胞、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ宿主細胞）、および細胞内容物を保持し得るか、または含有し得る溶液、固体、半固体、または固定担体が挙げられるが、これらに限定されない。そのような「培地」または「培養液」としては、宿主細胞が培養され、ポリペプチドが分泌されている培地または培養液（増殖段階の前または後のいずれかにおける培地）が挙げられるが、これらに限定されない。また、そのような「培地」または「培養液」としては、一例として、ポリペプチドが細胞内において生成され、宿主細胞が溶解されるかまたは崩壊させられてポリペプチドを放出する、宿主細胞溶解液を含有している緩衝液または試薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１０】
本明細書に使用されるとき、「代謝産物」という用語は、一例として、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドなどの化合物の誘導体を指し、一例として、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドなどの化合物が代謝されるときに生成される。「薬学的に活性な代謝産物」または「活性な代謝産物」という用語は、一例として、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドなどの化合物の生物学的に活性な誘導体を指し、一例として、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドなどの化合物が代謝されるときに生成される。
【０２１１】
本明細書に使用されるとき、「代謝される」という用語は、特定の物質が生物によって変化するプロセス全体を指す。そのようなプロセスとしては、加水分解反応や酵素を触媒にした反応が挙げられるが、これらに限定されない。代謝に関する更なる詳細は、The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill (1996)を参照。一例として、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドの代謝産物は、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドの宿主への投与および宿主からの組織試料の分析によって、または、天然アミノ酸ポリペプチド、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された天然アミノ酸ポリペプチド、または修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドのインビトロにおける肝細胞を用いたインキュベーションおよび得られた化合物の分析によって、特定することができる。
【０２１２】
本明細書に使用されるとき、「金属キレート剤」という用語は、金属イオンによって金属錯体を生成する分子を指す。一例として、そのような分子は中心金属イオンによる２つ以上の配位結合を形成し、環構造を形成し得る。
【０２１３】
本明細書に使用されるとき、「金属を含有する部分」という用語は、金属イオン、原子、または粒子を含有する基を指す。そのような部分としては、シスプラチン、キレートされた金属イオン（ニッケル、鉄、白金など）、および金属ナノ粒子（ニッケル、鉄、白金など）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１４】
本明細書に使用されるとき、「重原子を組み込みこんでいる部分」という用語は、通常炭素よりも重い原子のイオンを組み込む基を指す。そのようなイオンまたは原子としては、ケイ素、タングステン、金、鉛、およびウランが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１５】
本明細書に使用されるとき、「修飾された」という用語は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、天然アミノ酸ポリペプチド、または非天然アミノ酸ポリペプチドへの変化の存在を指す。そのような変化または修飾は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、天然アミノ酸ポリペプチド、または非天然アミノ酸ポリペプチドの合成後修飾によって、または天然アミノ酸、非天然アミノ酸、天然アミノ酸ポリペプチド、または非天然アミノ酸ポリペプチドの翻訳同時または翻訳後修飾によって得られる。「修飾されたまたは非修飾の」形態とは、述べられている天然アミノ酸、非天然アミノ酸、天然アミノ酸ポリペプチド、または非天然アミノ酸ポリペプチドが任意に修飾されており、すなわち、述べられている天然アミノ酸、非天然アミノ酸、天然アミノ酸ポリペプチド、または非天然アミノ酸ポリペプチドが修飾され得るか、または修飾され得ないことを意味する。
【０２１６】
本明細書に使用されるとき、「調節された血中半減期」という用語は、その非修飾形態に比べて、修飾された生物学的に活性な分子の循環半減期における正または負の変化を指す。一例として、修飾された生物学的に活性な分子としては、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、天然アミノ酸ポリペプチド、または非天然アミノ酸ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。一例として、血中半減期は、生物学的に活性な分子または修飾された生物学的に活性な分子の投与後における種々の時点において血液試料を採取すること、および試料のそれぞれにおける分子の濃度を判定することによって測定される。時間と血清濃度との相関関係によって、血中半減期の算出が可能である。調節された血中半減期の一例として、血中半減期を増強させた場合、投与計画の改善を可能にするか、または毒作用を避けることができる。そのような血清の増強は少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍、または少なくとも約１０倍である。血中半減期の増強の評価方法の例は、実施例３３に挙げられているが、これに限定されない。この方法は、任意のポリペプチドの血中半減期の評価に使用することができる。
【０２１７】
本明細書に使用されるとき、「調節された治療半減期」という用語は、その非修飾形態に比べて、修飾された生物学的に活性な分子の治療有効量の半減期における正または負の変化を意味する。一例として、修飾された生物学的に活性な分子としては、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、天然アミノ酸ポリペプチド、または非天然アミノ酸ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。一例として、治療半減期は、投与後における種々の時点において分子の薬物動態特性および／または薬理学的特性を測定することによって測定される。増強された治療半減期は、特に利益をもたらす投与計画または特に利益をもたらす総投与量を可能にするか、または好ましくない影響を回避する。一例として、増強された治療半減期は、増強された有効性、修飾された分子のその標的に対する増強されたかもしくは低減された結合、非修飾分子の作用の他の要素もしくは機序の増強もしくは減弱、または、一例として、プロテアーゼなどの酵素による分子崩壊の増加または減少、によって生じる。治療半減期の増強の評価方法は、当技術分野において公知であり、抗体の治療半減期および本願発明の抗体薬物複合体の評価に使用することができる。
【０２１８】
本明細書に使用されるとき、「ナノ粒子」という用語は、粒子サイズが約５００ｎｍから約１ｎｍの粒子を指す。
【０２１９】
本明細書に使用されるとき、「ほぼ化学量論的」という用語は、化学反応に用いられている化合物のモル比が約０．７５から約１．５であることを指す。
【０２２０】
本明細書に使用されるとき、「非真核生物」という用語は非真核生物の生体を指す。一例として、非真核生物の生体は、真正細菌（Escherichia coli、Thermus Thermophilus、またはBacillus stearothermophilus、Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas aeruginosa、Pseudomonas putidaなどが挙げられるが、これらに限定されない）（系統学的なドメイン）、または古細菌（Methanococcus jannaschii、Methanobacterium thermoautotrophicum、Archaeoglobus fulgidus、Pyrococcus furiosus、Pyrococcus horikoshii、Aeuropyrum pernix、またはHalobacterium（例えば、Haloferax volcaniiおよびHalobacterium種のNRC-1）などが挙げられるが、これらに限定されない）（または系統学的な領域）に属することができる。
【０２２１】
「非天然アミノ酸」とは、通常の２０のアミノ酸の１つではなく、ピロールリジンまたはセレノシステインでもないアミノ酸を指す。「非天然アミノ酸」という用語と同義的に用いられ得る別の用語としては、「天然にコードされていないアミノ酸」、「天然でないアミノ酸」、「天然に存在しないアミノ酸」、ならびにそれらの種々のハイフンでつなげられた形態およびハイフンでつなげられていない形態がある。用語「非天然アミノ酸」は、天然にコードされたアミノ酸（通常の２０のアミノ酸またはピロリジンおよびセレノシステインが挙げられるが、これらに限定されない）の修飾によって自然に生じ、その翻訳複合物によって成長中のポリペプチド鎖に組み込まれないアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。天然にコードされたアミノ酸ではない天然に存在するアミノ酸の例としては、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｌ−スレオニン、およびＯ−ホスホチロシンが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、用語「非天然アミノ酸」としては、自然に生じないアミノ酸であって、合成的に得られるアミノ酸または非天然アミノ酸の修飾によって得られるアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２２】
本明細書に使用されるとき、「核酸」という用語は、デオキシリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド、またはリボヌクレオチド、およびそれらの１本鎖または２本鎖の形態のポリマーを指す。一例として、そのような核酸や核酸ポリマーとしては、（ｉ）基準の核酸と同様の結合特性を有しており、天然に存在するヌクレオチドと同様の様式において代謝される天然ヌクレオチドのアナログ、（ｉｉ）オリゴヌクレオチドのアナログ（ＰＮＡ（ペプチド核酸））、アンチセンス技術に使用されるＤＮＡのアナログ（ホスホロチオエートおよびホスホロアミダートなど）が挙げられるが、これらに限定されない、（ｉｉｉ）これらの保存的に改変された変異体（変性コドン置換が挙げられるが、これに限定されない）および相補的な配列および明確に示されている配列、が挙げられるが、これらに限定されない。一例として、変性コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基に置換される配列を生成することによって達成され得る（Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)）。
【０２２３】
本明細書に使用されるとき、「酸化剤」は、酸化される化合物から電子を除去できる化合物または物質を指す。一例として、酸化剤としては、酸化グルタチオン、シスチン、シスタミン、酸化ジチオスレイトール、酸化エリスレイトールおよび酸素が挙げられるが、これらに限定されない。広範な酸化剤が本明細書に記載の方法および組成における使用に好適である。
【０２２４】
本明細書に使用されるとき、「薬学的に許容可能」という用語は、化合物の生物学的な活性または特性を阻害せず、比較的毒性のない塩、担体、または希釈剤などを指すが、これらに限定されない。すなわち、望ましくない生物学的効果を起こさずに、またはそれが含まれる組成物の任意の成分を劣化させるような相互作用を起こさずに、個体に投与される物質を指す。
【０２２５】
本明細書に使用されるとき、「光アフィニティーラベル」という用語は、光が当てられると、その標識が親和性を有する分子との結合を形成する基による標識を指す。一例として、そのような結合は共有結合または非共有結合である。
【０２２６】
本明細書に使用されるとき、「光ケージド部分」という用語は特定の波長の照明によって、他のイオンまたは分子を共有結合または非共有結合する基を指す。
【０２２７】
本明細書に使用されるとき、「光切断可能な基」という用語は光に当てられると分断される基を指す。
【０２２８】
本明細書に使用されるとき、「光架橋剤」という用語は、光が当てられると反応して２つ以上の単量体分子または高分子との共有または非共有結合を形成する２つ以上の官能基を含む化合物を指す。
【０２２９】
本明細書に使用されるとき、「光異性化可能な部分」という用語は、光が当たるとある異性体型から別の異性体型に変化する基を指す。
【０２３０】
本明細書に使用されるとき、「ポリアルキレングリコール」という用語は、直鎖状または分枝鎖状の高分子ポリエーテルポリオールを指す。そのようなポリアルキレングリコールとしては、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコールおよびこれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的な実施形態は、例えば、株式会社Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒのカタログ“Polyethylene Glycol and Derivatives for Biomedical Applications”（２００１）といった商業的な供給業者のカタログに挙げられている。一例として、そのような高分子ポリエーテルポリオールは約０．１ｋＤａから約１００ｋＤａの間の平均分子量を有している。一例として、そのような高分子ポリエーテルポリオールとしては、約１００Ｄａから約１０００００Ｄａ以上の間が挙げられるが、これらに限定されない。ポリマーの分子量としては、約１００Ｄａから約１０００００Ｄａの間、例えば、約１０００００Ｄａ、約９５０００Ｄａ、約９００００Ｄａ、約８５０００Ｄａ、約８００００Ｄａ、約７５０００Ｄａ、約７００００Ｄａ、約６５０００Ｄａ、約６００００Ｄａ、約５５０００Ｄａ、約５００００Ｄａ、約４５０００Ｄａ、約４００００Ｄａ、約３５０００Ｄａ、約３００００Ｄａ、約２５０００Ｄａ、約２００００Ｄａ、約１５０００Ｄａ、約１００００Ｄａ、約９０００Ｄａ、約８０００Ｄａ、約７０００Ｄａ、約６０００Ｄａ、約５０００Ｄａ、約４０００Ｄａ、約３０００Ｄａ、約２０００Ｄａ、約１０００Ｄａ、約９００Ｄａ、約８００Ｄａ、約７００Ｄａ、約６００Ｄａ、約５００Ｄａ、４００Ｄａ、約３００Ｄａ、約２００Ｄａ、および約１００Ｄａが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ポリマーの分子量は約１００Ｄａから約５００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、ポリマーの分子量は約１００Ｄａから約４００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、ポリマーの分子量は約１０００Ｄａから約４００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、ポリマーの分子量は約２０００Ｄａから約５００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、ポリマーの分子量は約５０００Ｄａから約４００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、ポリマーの分子量は約１００００Ｄａから約４００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、ポリ（エチレングリコール）分子は分枝鎖状のポリマーである。分枝鎖状のＰＥＧの分子量は、約１０００Ｄａから約１０００００Ｄａの間、約１０００００Ｄａ、約９５０００Ｄａ、約９００００Ｄａ、約８５０００Ｄａ、約８００００Ｄａ、約７５０００Ｄａ、約７００００Ｄａ、約６５０００Ｄａ、約６００００Ｄａ、約５５０００Ｄａ、約５００００Ｄａ、約４５０００Ｄａ、約４００００Ｄａ、約３５０００Ｄａ、約３００００Ｄａ、約２５０００Ｄａ、約２００００Ｄａ、約１５０００Ｄａ、約１００００Ｄａ、約９０００Ｄａ、約８０００Ｄａ、約７０００Ｄａ、約６０００Ｄａ、約５０００Ｄａ、約４０００Ｄａ、約３０００Ｄａ、約２０００Ｄａ、および約１０００Ｄａが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、分枝鎖状のＰＥＧの分子量は約１０００Ｄａから約５００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、分枝鎖状のＰＥＧの分子量は約１０００Ｄａから約４００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、分枝鎖状のＰＥＧの分子量は約５０００Ｄａから約４００００Ｄａの間である。いくつかの実施形態において、分枝鎖状のＰＥＧの分子量は約５０００Ｄａから約２００００Ｄａの間である。他の実施形態において、分枝鎖状のＰＥＧの分子量は約２０００Ｄａから約５００００Ｄａの間である。
【０２３１】
本明細書に使用されるとき、「ポリマー」という用語はサブユニットの繰り返しから成る分子を指す。そのような分子としては、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または多糖、またはポリアルキレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３２】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書において交換可能に使用されて、アミノ酸残基のポリマーを指す。すなわち、ポリペプチドを対象とする記載は、ペプチドの記載およびタンパク質の記載に等しく適用され、逆の場合も同様である。当該用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび１つ以上のアミノ酸残基が非天然アミノ酸であるアミノ酸ポリマーに適用される。さらに、そのような「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、任意の長さ（全長のタンパク質が挙げられる）のアミノ酸鎖を包含し、ここでアミノ酸残基は共有的なペプチド結合によって結合されている。
【０２３３】
「翻訳後修飾」という用語は、翻訳的にポリペプチド鎖に組み込まれた後に当該アミノ酸に生じる、天然または非天然のアミノ酸の任意の修飾を指す。当該修飾は、インビボにおける翻訳同時修飾、インビトロにおける翻訳同時修飾（例えば、無細胞翻訳系）、インビボにおける翻訳後修飾、およびインビトロにおける翻訳後修飾を包含しているが、それらに限定されない。
【０２３４】
本明細書に使用されるとき、「プロドラッグ」または「薬学的に許容可能なプロドラッグ」という用語は、インビボまたはインビトロにおいて親薬物に変換される物質を指し、薬物の生物学的な活性または特性を阻害せず、比較的毒性のない物質を指し、すなわち、望ましくない生物学的効果を起こさずに、またはそれが含まれる組成物の任意の成分を劣化させるような相互作用を起こさずに、個体に投与される物質を指す。一般的に、プロドラッグとは薬物前駆体であり、対象への投与およびその後の吸収に続いて、任意のプロセス（代謝経路による変換など）を通じて、活性な、または、より活性な種に変換される。いくつかのプロドラッグは、その活性を減じるおよび／または薬物に溶解性またはその他の特性を与えるプロドラッグに存在する化学基を有している。その化学基が開裂するおよび／またはプロドラッグから修飾されると、活性な薬物が生成される。プロドラッグは、体内における酵素的または非酵素的反応によって活性な薬物に変換される。プロドラッグは、溶解性の向上、特定の細胞、組織、器官、またはリガンドなどを特に標的とした輸送特性の向上などの生理化学的性質の向上をもたらし、薬剤の治癒的価値も向上させる。そのようなプロドラッグの利点としては、（ｉ）親薬物と比較して投与しやすい、（ｉｉ）親薬物とは違い、プロドラッグは口径投与によって体内に吸収され利用され得る、および（ｉｉｉ）親薬物と比較して、プロドラッグは薬学的組成物における溶解性も高い、という点が挙げられるが、これらに限定されない。プロドラッグは、活性な薬物の薬理的に不活性なまたは低活性な誘導体を含む。プロドラッグは、生理化学的性質、生物薬剤的性質、または薬物動態的性質などの薬物の性質を操作することで、作用すべき部位に到達する薬物または生物学的に活性な分子の量を調節することを目的としている。プロドラッグの例としては、エステル（「プロドラッグ」）として、水溶解性が移動性に悪影響を及ぼす細胞膜を通じた伝送を促進するために投与され、その後、代謝的に加水分解されてカルボン酸（活性物）になり、細胞内において水溶解性が有益に作用する非天然アミノ酸ポリペプチドが挙げられるが、これに限定されない。プロドラッグは、部位特異的な組織への薬剤の輸送を向上させる調節剤として使用される可逆性薬物誘導体として設計される。
【０２３５】
本明細書に使用されるとき、「予防的な有効量」という用語は、疾患の１つ以上の症状、治療される症状または不調をある程度受けるであろう患者に予防的に投与される少なくとも１つの非天然アミノ酸ポリペプチドまたは少なくとも１つの修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドを含む組成物の量を指す。そのような予防的な用途において、その量は患者の健康状態および体重などに依存する。日常的な実験（例えば、用量の段階的増大の臨床試験が挙げられるがこれに限定されない）による当該予防的な有効量の決定は、当業者の範囲内にあると十分にみなされる。
【０２３６】
本明細書に使用されるとき「保護」という用語は、ある反応条件における化学的に反応性の官能基の反応を防止する「保護基」または保護部分の存在を指す。保護基は、保護される化学的に反応性の基の種類に依存して変わる。一例として、（ｉ）化学的に反応性を示す基がアミンまたはヒドラジドである場合に、保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）からなる群から選択され、（ｉｉ）化学的に反応性を示す基がチオールである場合に、保護基はオルトピリジルジスルフィドであり、（ｉｉｉ）化学的に反応性を示す基がブタン酸もしくはプロピオン酸といったカルボン酸、またはヒドロキシル基である場合に、保護基は、ベンジル基またはメチル、エチルもしくはｔｅｒｔ−ブチルといったアルキル基であり得る。
【０２３７】
一例として、ブロック基／保護基は、
【０２３８】
【化４７】
2020143151.tif 000048
【０２３９】
から選択され得る。
【０２４０】
さらに、保護基としては、ＮｖｏｃおよびＭｅＶｏｃといった感光性基や、当該分野に公知の他の保護基が挙げられるが、これらに限定されない。他の保護基は、参照によってその全体が本明細書に援用されるGreene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, NY, 1999に記載されている。
【０２４１】
本明細書に使用されるとき、「放射性部分」という用語は、アルファ粒子、ベータ粒子、またはガンマ粒子などの放射線を自発的に発する原子核を有する基を指し、アルファ粒子はヘリウムの核、ベータ粒子は電子、ガンマ粒子は高エネルギー光子である。
【０２４２】
本明細書に使用されるとき、「反応性化合物」という用語は、適切な条件下で別の原子、分子、または化合物に対して反応する化合物を指す。
【０２４３】
「組み換え宿主細胞」という用語は、「宿主細胞」とも称され、挿入に使用される方法（例えば、直接的な取り込み、形質導入、ｆ−交配（f-mating）、または組み換え宿主細胞を作り出すために使用される他の公知の方法）にかかわらず、外来性のポリヌクレオチドを含んでいる細胞を指す。一例として、外来性のポリヌクレオチドは、宿主のゲノムに組み込まれないベクター（例えばプラスミド）であり、または宿主のゲノムに組み込まれ得る。
【０２４４】
本明細書に使用されるとき、「酸化還元活性のある物質」という用語は、別の分子を酸化または還元する分子を指し、それによって酸化還元活性のある物質は還元または酸化される。酸化還元活性のある物質の例としては、フェロセン、キノン、Ｒｕ２＋／３＋複合体、Ｃｏ２＋／３＋複合体、およびＯｓ２＋／３＋複合体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４５】
本明細書に使用されるとき、「還元剤」という用語は、還元状態の化合物に電子を添加することができる、化合物または物質を指す。一例として、還元剤としてはジチオスレイトール（ＤＴＴ）、２−メルカプトエタノール、ジチオエリスリトール、システイン、システアミン（２−アミノエタンチオール）および還元グルタチオンが挙げられるが、これらに限定されない。一例として、当該還元剤は還元状態においてスルフィドリル基を維持し、分子内または分子間のジスルフィド結合を還元するために用いられる。
【０２４６】
本明細書に使用されるとき、「リフォールディング」は、不適切にフォールディングされた状態または展開された状態から、本来の立体構造または適切にフォールディングされた立体構造に変形させる任意の過程、反応または方法を指す。一例として、リフォールディングによって、ジスルフィド結合を含んでいるポリペプチドを、不適切にフォールディングされた状態または展開された状態から、ジスルフィド結合に関して本来の立体構造または適切にフォールディングされた立体構造に変形させる。そのようなジスルフィド結合を含んでいるポリペプチドとしては、天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドが挙げられる。
【０２４７】
本明細書に使用されるとき、「樹脂」という用語は、高分子量の不溶性ポリマービーズを指す。一例として、それらのビーズは固相ペプチド合成用の担体として使用されるか、または精製前に分子が付着する場として使用される。
【０２４８】
本明細書に使用されるとき、「単糖類」という用語は、一連の炭水化物を指し、糖、単糖、オリゴ糖、および多糖が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４９】
本明細書に使用されるとき、「安全」または「安全性」という用語は、薬物を投与した回数に対する、薬剤の投与に関係する可能性のある副作用を指す。一例として、投与回数が多くても、少しの副作用しか生じないまたは副作用を生じない薬物は、優れた安全性を有していると言える。安全性の評価方法の例は、実施例２６に挙げられているが、これに限定されない。この方法は、任意のポリペプチドの安全性の評価に使用することができる。
【０２５０】
本明細書に使用されるとき、「〜に対して選択的にハイブリダイズする」または「〜に対して特異的にハイブリダイズする」という表現は、配列が複合混合物（全体の細胞またはライブラリのＤＮＡまたはＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない）に存在している場合に、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件における特定のヌクレオチド配列との、分子の結合、分子の２重鎖化、または分子のハイブリダイズを指す。
【０２５１】
本明細書に使用されるとき、「スピン標識」という用語は、電子スピン共鳴スペクトロスコピーによって検知され、別の分子に付着可能な不対電子スピンを示す原子または原子群（すなわち、安定した常磁性基）を含む分子を指す。そのようなスピン標識分子としては、ニトリルラジカルおよびニトロキシド、および単一スピン標識または二重スピン標識が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５２】
本明細書に使用されるとき、「化学量論的」という用語は、化学反応に用いられている化合物のモル比が約０．９から約１．１であることを指す。
【０２５３】
本明細書に使用されるとき、「化学量論様」という用語は、反応条件の変化または添加物の有無に応じて化学量論的またはほぼ化学量論的になる化学反応を指す。当該反応条件の変化としては、温度の上昇またはｐＨの変化が挙げられるが、これらに限定されない。当該添加物としては促進剤が挙げられるが、これに限定されない。
【０２５４】
「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という表現は、低イオン強度および高温度の条件下における、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ、または他の核酸ミメティック、あるいはそれらの組み合わせの配列のハイブリダイゼーションをいう。一例として、ストリンジェントな条件下において、プローブは、核酸の複合混合物（限定されないが、全細胞、ＤＮＡライブラリ、またはＲＮＡライブラリが挙げられる）中のプローブが標的とするサブ配列とハイブリダイズするが、この複合混合物中の他の配列とはハイブリダイズしない。ストリンジェントな条件は配列に依存し、また、環境が異なれば、ストリンジェントな条件も異なる。一例として、配列が長くなるほど、特異的にハイブリダイズするための温度は高くなる。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件は、（ｉ）規定のイオン強度およびｐＨにおける、特異的な配列の熱融解温度（Ｔｍ）よりも約５〜１０℃低いこと、（ｉｉ）約ｐＨ７．０〜約ｐＨ８．３において、塩濃度が約０．０１Ｍ〜約１．０Ｍであり、温度が、短いプローブ（限定されないが、約１０〜約５０ヌクレオチドのプローブが挙げられる）については少なくとも約３０℃であり、長いプローブ（限定されないが、５０ヌクレオチドよりも長いプローブが挙げられる）については少なくとも約６０℃であること、（ｉｉｉ）限定されないが、ホルムアミドなどの不安定化剤を添加すること、（ｉｖ）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、および１％ＳＤＳにおいて４２℃でインキュベーションするか、または５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳにおいて６５℃にてインキュベーションし、０．２×ＳＳＣおよび約０．１％ＳＤＳにおいて６５℃にて約５分間から約１２０分間の洗浄をすること、が挙げられるが、これらに限定されない。一例として、選択的または特異的ハイブリダイゼーションの検出としては、ポジティブなシグナルは、バックグラウンドのハイブリダイゼーションの少なくとも２倍であることが挙げられるが、これらに限定されない。核酸のハイブリダイゼーションの豊富な指針は、Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes, 「Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays」(1993)に示されている。
【０２５５】
本明細書に使用されるとき、「対象」という用語は、処置、観察または実験の対象である動物を指す。一例として、対象としてはヒトなどの哺乳類が挙げられるが、これに限定されない。
【０２５６】
本明細書に使用されるとき、「実質的に精製された」という用語は、精製の前に、対象となる要素と付随するか、または相互作用する別の要素を実質的にか、またはほとんど含まない、対象となる要素を指す。一例として、対象となる要素の調製物が、（乾燥重量として）約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満の混入要素を含んでいる場合に、対象となる要素が「実質的に精製された」ことになる。このように、「実質的に精製された」対象となる要素は、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上の純度を有している。一例として、天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドは、天然の細胞または天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドが組み換え的に生成される場合における宿主細胞から精製される。一例として、調製物が（乾燥重量として）約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満の混入物質を含んでいる場合に、天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドの調製物が「実質的に精製された」ことになる。一例として、天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドが宿主細胞によって組み換え的に生成される場合、天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドは細胞の乾燥重量で約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％、またはそれ以下の割合で存在する。一例として、天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドが宿主細胞によって組み換え的に生成される場合、天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドは細胞の乾燥重量で約５ｇ／Ｌ、約４ｇ／Ｌ、約３ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ、約７５０ｍｇ／Ｌ、約５００ｍｇ／Ｌ、約２５０ｍｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ、または約１ｍｇ／Ｌまたはそれ以下の割合で培養培地に存在する。一例として、「実質的に精製された」天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然アミノ酸ポリペプチドは、適切な方法（例えば、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＳＥＣおよびキャピラリー電気泳動が挙げられるが、これらに限定されない）によって判定されるときに、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、またはそれ以上の純度を有している。
【０２５７】
「置換基」という用語は、「非干渉性の置換基」とも称され、分子において別の基に置換するために使用される基を指す。それらの基としては、ハロ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、Ｃ２〜１０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ、Ｃ５〜Ｃ１２アラルキル、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、Ｃ４〜Ｃ１２シクロアルケニル、フェニル、置換フェニル、トルオイル（toluolyl）、キシレニル、ビフェニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルコキシアルキル、Ｃ５〜Ｃ１２アルコキシアリール、Ｃ５〜Ｃ１２アリールオキシアルキル、Ｃ７〜Ｃ１２オキシアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキルスルフィニル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルスルフォニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ１０アルキル）（ここで、ｍは１から８である）、アリール、置換アリール、置換アルコキシ、フルオロアルキル、ヘテロ環ラジカル、置換ヘテロ環ラジカル、ニトロアルキル、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＲＣ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ１０アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ１０アルキル）、Ｃ２〜Ｃ１０アルキルチオアルキル（alkthioalkyl）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ１０アルキル）、−ＯＨ、−ＳＯ２、＝Ｓ、−ＣＯＯＨ、−ＮＲ２、カルボニル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ１０アルキル）−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、−（Ｃ１〜Ｃ１０アリール）−Ｓ−（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ６〜Ｃ１０アリール）、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ１０アルキル）（ここで、ｍのそれぞれは１から８である）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ２、−ＳＯ２ＮＲ２、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲＣ（Ｓ）ＮＲ２、これらの塩などが挙げられるが、これらに限定されない。上述したリスト中のＲ基のそれぞれとしては、Ｈ、アルキルもしくは置換アルキル、アリールもしくは置換アリール、またはアルカリルが挙げられるが、これらに限定されない。左から右に書かれる従来の化学式によって、置換基が特定される場合に、それらは、右から左に構造を記載することによって生じる化学的に同一な置換基を等しく包含している（例えば、−ＣＨ２Ｏ−は−ＯＣＨ２−と等価である）。
【０２５８】
一例として、アルキルラジカルおよびヘテロアルキルラジカル（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニルおよびヘテロシクロアルケニルと呼ばれるこれらの基が挙げられる）にとっての置換基は、−ＯＲ、＝Ｏ、＝ＮＲ、＝Ｎ−ＯＲ、−ＮＲ２、−ＳＲ、−ハロゲン、−ＳｉＲ３、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯＮＲ２、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ（Ｏ）２Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ２）＝ＮＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２、−ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＣＮおよび−ＮＯ２が挙げられるが、これらに限定されない。上述したリスト中のＲ基のそれぞれとしては、水素、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のアリール（１〜３のハロゲンに置換されたアリールが挙げられるが、これに限定されない）、置換もしくは非置換のアルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、またはアラルキル基が挙げられるが、これらに限定されない。２つのＲ基が同じ窒素原子に結合される場合に、それらは、５−、６−、７−員環を形成するために窒素原子と組み合せられ得る。例えば、−ＮＲ２は、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを包含していることを意図されているが、これらに限定されない。
【０２５９】
一例として、アリール基およびヘテロアリール基にとっての置換基は、０から芳香族環系における空いている原子価の総数の範囲の数において、−ＯＲ、＝Ｏ、＝ＮＲ、＝Ｎ−ＯＲ、−ＮＲ２、−ＳＲ、−ハロゲン、−ＳｉＲ３、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯＮＲ２、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ（Ｏ）２Ｒ、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ２）＝ＮＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２、−ＮＲＳＯ２Ｒ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｒ、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、ならびにフルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルが挙げられるが、これらに限定されない。ここで、上述したリスト中のＲ基それぞれとしては、水素、アルキル、ヘテロアルキル、アリールおよびヘテロアリールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６０】
本明細書に使用されるとき、「治療有効量」という用語は、すでに疾患、病気、または不調になっている患者に対して、処置されるべき疾患、不調、または病気の症状の１つ以上を治療する、または少なくとも部分的に進行を押さえる、またはいくらか軽減するために投与される少なくとも１つの非天然アミノ酸ポリペプチドおよび／または少なくとも１つの修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドを含む組成物の量を指す。そのような組成物の有効性は、状態（疾患、障害もしくは状態の重篤度および経過、以前の治療、患者の健康状態および薬物に対する応答、ならびに処置する医師の判断が挙げられるが、これらに限定されない）に依存する。一例として、治療有効量は日常的な実験（用量の段階的増大の臨床試験が挙げられるが、これに限定されない）によって決定される。
【０２６１】
本明細書に使用されるとき、「チオアルコキシ」という用語は、酸素原子を介して分子に結合する硫黄含有アルキル基を指す。
【０２６２】
「熱融解温度」またはＴｍという用語は、（規定のイオン強度、ｐＨおよび核酸の濃度において）標的に相補的なプローブの５０％が、平衡状態で標的配列にハイブリダイズする温度である。
【０２６３】
本明細書に使用されるとき、「毒性部分」または「毒性基」という用語は、損害、障害、または死を引き起こし得る化合物を指す。毒性部分としては、ＮＣＡ、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合物質、ＤＮＡ副溝アルキル化物質、エンジイン、レキシトロプシン、ズオカルマイシン、タキサン、ピューロマイシン、ドラスタチン、マイタンシノイド、ビンカアルカロイド、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、オーリスタチンＥ、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノドキソルビシン、ドラスタチン−１０、エキノマイシン、コンブレタットスタチン（combretatstatin）、カリケアマイシン（chalicheamicin）、メイタンシン、ＤＭ−１、ネトロプシン、ポドフィロトキシン（例えば、エトポシド、テニポシドなど）、バカチンおよびその誘導体、抗チューブリン物質、クリプトフィシン（cryptophysin）、コンブレタスタチン、オーリスタチンＥ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン（vinorelbine）、ＶＰ−１６、カンプトテシン、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ノコダゾール、コルヒチン、コルシミド（colcimid）、エストラムスチン、セマドチン、ディスコデルモリド、メイタンシン、エレウテロビン、メクロレタミン、シクロフォスファミド、メルファラン、カルマスティン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、クロロゾトシン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、ダカルバジン、およびテモゾロマイド、イタラビン（ytarabine）、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、フロクシウリジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリン、ペントスタチン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、１０−プロパルギル−５，８−ジデアザ葉酸、５，８−ジデアザテトラヒドロ葉酸、ロイコボリン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン（pentostatine）、ゲムシタビン、Ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル、ドセタキセル、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、ブレキナール、抗生物質（例えば、アントラサイクリン、ゲンタマイシン、セファロチン、バンコマイシン、テラバンシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、エリスロマイシン、ロシスロマイシン（rocithromycin）、フラゾリドン、アモキシシリン、アンピシリン、カルベニシリン、フルクロキサシリン、メチシリン、ペニシリン、シプロフロキサシン、モキシフロキサシン、オフロキサシン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、リファブチン、エタンブトール、リファキシミン、など）、抗ウイルス薬（例えば、アバカビル、アシクロビル、アンプリゲン、シドフォビル、デラビルジン、ディダノシン、エファビレンツ、エンテカビル、フォスフォネット、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル、イドクスウリジン、イノシン、ロピナビル、メチサゾン、ネキサビル、ネビラピン、オセルタミビル、ペンシクロビル、スタブジン、トリフルリジン、ツルバダ、バラシクロビル、ザ��ミビル、など）、塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン、ルビドマイシン、セルビジン、イダルビシン、ドキソルビシン、エピルビシンおよびモルホリノ誘導体、フェノキシゾンビスシクロペプチド（例えば、ダクチノマイシン）、塩基性糖ペプチド（例えば、ブレオマイシン）、アントラキノン配糖体（例えば、プリカマイシン、ミトラマイシン）、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）、アジリノピロロインドールジオン（例えば、マイトマイシン）、大環状の免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、ＦＫ−５０６、タクロリムス、プログラフ、ラパマイシンなど）、ナベルベン、ＣＰＴ−１１、アナストラゾール、レトラゾール（letrazole）、カペシタビン、レロキサフィン、シクロフォスファミド、イホスアミド（ifosamide）、ドロロキサフィン、アロコルチシン、ハリコンドリンＢ、コルヒチン、コルヒチン誘導体、メイタンシン、リゾキシン、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、ドセタキセル、チオコルヒチン、トリチルシステリン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、Ｎ−メチルヒドラジン、エピドフィロトキシン、プロカルバジン、ミトキサントロン、ロイコボリン、およびテガフールが挙げられるが、これらに限定されない。「タキサン」としては、任意の活性タキサン誘導体またはプロドラッグに加えて、パクリタキセルが挙げられる。化学療法剤（エルロチニブ（TARCEVA.RTM., Genentech/OSI Pharm.）、ボルテゾミブ（VELCADE.RTM., Millenium Pharm.)、フルベストラント（FASLODEX.RTM., AstraZeneca)、ステント（SU11248, Pfizer)、レトロゾール(FEMARA.RTM., Novartis)、イマチニブメシレート(GLEEVEC.RTM., Novartis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、オキサリプラチン(Eloxatin.RTM., Sanofi)、5-FU（5-fluorouracil)、ロイコボリン、ラパマイシン(Sirolimus, RAPAMUNE.RTM., Wyeth)、ラパチニブ（TYKERB.RTM., GSK572016, GlaxoSmithKline)、ロナファルニブ(SCH 66336)、ソラフェニブ(BAY43-9006, Bayer Labs.)、およびゲフィチニブ(IRESSA.RTM., AstraZeneca)、AG1478、AG1571（SU 5271; Sugen)など）、アルキル化剤（チオテーパおよびCYTOXAN.RTM.  シクロホスファミドなど）；アルキルスルホネート（ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；抗葉酸剤、抗新生物薬（ペメトレキセート(ALIMTA.RTM.Eli Lilly)、アジリジン（ベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ、およびウレドーパナド）； エチレンイミンおよびメチラメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチルホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロメラミンが挙げられる）；アセトゲニン(特にブラタシンおよびブラタシノン)；カンプトテニン（合成のアナログトポテカンが挙げられる)； ブリオスタチン； カリスタチン； CC-1065（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシンの合成アナログが挙げられる)；クリプトフィシン(特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８)；ドラスタチン；ズオカルマイシン(合成アナログである、KW-2189およびCB1-TM1が挙げられる)； エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチイン（sarcodictyin）；スポンギスタチン； ナイトロジェンマスタード（クロラムブシル、クロロナファジン（chlornaphazin）、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタードなど）；ニトロソウレア（カルムスチン、クロロゾトシンフォテムタシン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチンなど）；抗生物質（エンジイン抗生物質、カリケアマイシン、カリケアマイシンガンマＩＩおよびカリケアマイシンオメガＩＩなど）；ダイネマイシン（ダイネマイシンＡ；ビスホスホネート（クロドロネートなど）；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ADRIAMYCIN.RTM.  ドキソルビシン（モルフォリノ−ドキソルビシン、シアノモルフォリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン（2-pyrrolino-doxorubicin）およびデオキシドキソルビシンが挙げられる）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセトルビシン、マイトマイシン（マイトマイシンＣなど）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、プロマイシン、クエラマイシン、ロボルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス（ubenimex）、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝剤（メトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）など）；葉酸アナログ（デノプテリン、メトトレキセート、トリメトレキセートなど）；プリンアナログ（フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど）；ピリミジンアナログ（アンシタビン、アザシタビン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなど）；アンドロゲン（カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど）；抗副腎剤（anti-adrenals）（アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど）；葉酸補液（フロリン酸（frolinic acid）など）；アセグラトン；アルドフォスファミド  グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド（マイタンシンおよびアンサミトシンなど）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；PSK.RTM.多糖複合体（JHS Natural Products, Eugene, Oreg.）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピノゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；デカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（“Ａｒａ−Ｃ”）；シクロホスファミド；チオテーパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル（TAXOL.RTM., Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.）、ABRAXANE.TM.  クレモフォア−フリー、アルブミン、パクリタキセルのナノ粒子調合物（American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.）, および TAXOTERE.RTM.  ドセタキセル（Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France）；クロランブシル；GEMZAR.RTM. ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；プラチナのアナログ（シスプラチンおよびカルボプラチンなど）；ビンブラシン；ブラチナ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；NAVELBINE.RTM.  ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤  ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（レチノン酸など）；カペシタビン；および上記の何れかの薬学的に許容される、塩、酸または誘導体が挙げられる。
【０２６４】
本明細書に使用されるとき、「処置する」、「処置すること」、または「処置」という用語には、疾患もしくは状態の症状を緩和する、和らげる、または改善すること、追加の症状を防ぐこと、症状の根本的な代謝的原因を改善するまたは防ぐこと、疾患もしくは病気を抑えること、例えば、疾患もしくは病気の発達の進行を抑えること、疾患もしくは病気を和らげること、疾患もしくは病気を退行させること、疾患もしくは病気による異常を和らげること、または疾患もしくは病気の症状を止めること、が含まれる。「処置する」、「処置すること」、または「処置」という用語としては、予防的および／または治療的処置が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６５】
本明細書に使用されるとき、「水溶性ポリマー」という用語は水性溶媒に可溶性を示す任意のポリマーを指す。そのような水溶性ポリマーとしては、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、モノＣ１〜Ｃ１０アルコキシ誘導体もしくはモノＣ１〜Ｃ１０アリールオキシ誘導体（参照によって本明細書に援用される米国特許第５，２５２，７１４号に記載されている）、モノメトキシポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアミノ酸、ジビニルエーテルマレイン酸無水物、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）−メタクリルアミド、デキストラン、デキストラン誘導体（硫化デキストランが挙げられる）、ポリプロピレングリコール、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、ヘパリン、ヘパリン断片、多糖、オリゴ糖、グリカン、セルロースおよびセルロース誘導体（メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースが挙げられるが、これらに限定されない）、血清アルブミン、スターチおよびスターチ誘導体、ポリペプチド、ポリアルキレングリコールおよびこれらの誘導体、ポリアルキレングリコールのコポリマーおよびその誘導体、ポリビニルエチルエーテル、ならびにアルファ−ベータ−ポリ［（２−ヒドロキシエチル）−ＤＬ−アスパルトアミド］など、またはこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一例として、そのような水溶性ポリマーと天然アミノ酸ポリペプチドまたは非天然ポリペプチドとの結合は変化をもたらし、当該変化には、向上した水溶解性、延長または調節された血中半減期、非修飾形態と比べて延長されたかもしくは調節された治療半減期、向上したバイオアベイラビリティー、調節された生物学的な活性、延長された循環時間、調節された免疫原性、調節された物理的な会合特性（例えば、凝集および多量体形成が挙げられるがこれらに限定されない）、変更された受容体結合、１つ以上の結合パートナーとの変更された結合、ならびに変更された受容体の二量体化もしくは多量体化が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、当該水溶性ポリマーは、自身の生物学的な活性を有していても、有していなくてもよい。
【０２６６】
指定がない限り、当該技術の範囲内の質量分析、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学、生化学、組み換えＤＮＡ技術、薬理学といった従来の方法が用いられる。
【０２６７】
本明細書に記載の化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述した化合物を生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）は、同位体標識された化合物を含む。同位体標識された化合物は、本明細書に記載の様々な式や構造によって示したものと同じ化合物であるが、１つ以上の原子が、天然に見られる原子量または質量とは異なる原子量または質量を有している原子と置き換えられているものである。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、フッ素および塩素の同位体（例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ）が挙げられる。本明細書に記載の特定の同位体標識された化合物、例えば放射性同位体（例えば、３Ｈおよび１４Ｃ）が組み込まれる同位体標識された化合物は、薬物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。さらに、重水素（すなわち、２Ｈ）などの同位体との置換は、より高い代謝安定性（例えば、延長されたインビボにおける半減期または低減された投与必要量）によってもたらされる所定の治療上の利点を提供し得る。
【０２６８】
本明細書に記載のいくつかの化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述の化合物を生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）は、不斉炭素原子を有しており、従ってエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在し得る。ジアステレオマー（Diasteromeric）混合物は、その物理化学的な違いに基づき、例えば、クロマトグラフィーおよび／またはフラクタル結晶化として知られる方法によって、個々のジアステレオマーに分割することができる。エナンチオマーは、適当な光学活性化合物（例えば、アルコール）との反応によってエナンチオマー混合物をジアステレオマー混合物に変換することによって分割することができ、その場合、ジアステレオマーを分割し、個々のジアステレオマーを対応する純エナンチオマーに変換（例えば、加水分解）する。ジアステレオマー、エナンチオマー、およびそれらの混合物を含むすべてのそのような異性体は、本明細書に記載の組成物の一部とみなされる。
【０２６９】
付加的な実施形態またはさらなる実施形態において、本明細書に記載の化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述の化合物を生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）はプロドラッグの形態で使用される。付加的な実施形態またはさらなる実施形態において、本明細書に記載の化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述の化合物を生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）は代謝産物を生成する必要がある生物に投与されると代謝され、その後、生成された代謝産物が利用されて、所望の効果（所望の治療的な効果が挙げられる）がもたらされる。さらなる実施形態または付加的な実施形態において、非天然アミノ酸および「修飾されたまたは非修飾の」非天然アミノ酸ポリペプチドの活性な代謝産物である。
【０２７０】
本明細書に記載の方法および調合は、非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、および修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドのＮ−酸化物、結晶形（多形体としても知られる）、または薬学的に許容可能な塩の使用を含む。特定の実施形態において、非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、および修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドは互変異性体として存在し得る。全ての互変異性体は、本明細書に記載の非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、および修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドの範囲内に含まれる。さらに、本明細書に記載の非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、および修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドは薬学的に許容可能な溶媒（例えば、水およびエタノールなど）と、溶媒和されていない形態および溶媒和されている形態において存在し得る。本明細書に記載の非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、および修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドの溶媒和されている形態も、本明細書に記載されているとみなされる。
【０２７１】
本明細書に記載のいくつかの化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述の化合物を生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）は、いくつかの互変異性体の形態において存在し得る。そのような全ての互変異性体の形態は、本明細書に記載の組成物の一部とみなされる。また、例えば、本明細書に記載の任意の化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述の化合物を生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）の全てのエノール−ケトの形態は、本明細書に記載の組成物の一部とみなされる。
【０２７２】
本明細書に記載のいくつかの化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述の化合物のいずれかを生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）は酸性であり、薬学的に許容可能なカチオンによって塩を生成し得る。本明細書に記載のいくつかの化合物（非天然アミノ酸、非天然アミノ酸ポリペプチド、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチド、および上述の化合物を生成するための試薬が挙げられるが、これらに限定されない）は塩基性であり、したがって、薬学的に許容可能なアニオンによって塩を生成し得る。二塩を含むそのような全ての塩は、本明細書に記載の組成物の範囲に含まれ、従来の方法によって調製することができる。例えば、塩は、水性の培地、非水性の培地、または部分的に水性の培地において、酸性物質および塩基性物質を接触させることで調製することができる。塩は、下記の技術の内の少なくとも１つを用いて回収される：濾過、非溶媒を用いた沈殿およびそれに続く濾過、溶媒の蒸発、または、水溶液の場合、凍結乾燥。
【０２７３】
本明細書に記載の非天然アミノ酸ポリペプチドの薬学的に許容可能な塩は、親非天然アミノ酸ポリペプチドに存在する酸性プロトンが金属イオン（一例として、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、アルミニウムイオン、または有機塩基の同等物（coordinates）のいずれか）に置き換えられたときに生成され得る。さらに、塩形態の本明細書に記載の非天然アミノ酸ポリペプチドは、出発原料または中間体の塩を用いて調製することができる。本明細書に記載の非天然アミノ酸ポリペプチドは、遊離塩基形態の本明細書に記載の非天然アミノ酸ポリペプチドを薬学的に許容可能な無機酸または有機酸と反応させることによって、薬学的に許容可能な酸添加塩（薬学的に許容可能な塩の一種）として調製することができる。または、本明細書に記載の非天然アミノ酸ポリペプチドは、遊離酸形態の本明細書に記載の非天然アミノ酸ポリペプチドを薬学的に許容可能な無機塩基または有機塩基と反応させることによって、薬学的に許容可能な塩基添加塩（薬学的に許容可能な塩の一種）として調製することができる。
【０２７４】
薬学的に許容可能な塩の種類としては、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、などの無機酸によって生成された酸添加塩；または、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−メチルビシクロ−［２．２．２］オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトニック酸、４，４’−メチレンビス−（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、などの有機酸によって生成された酸添加塩；（２）親化合物に存在する酸性プロトンが金属イオン（例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、アルミニウムイオン、または有機塩基の同等物（coordinates）のいずれか）に置き換えられたときに生成される塩が挙げられるが、これらに限定されない。許容可能な有機塩基としては、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、およびＮ−メチルグルカミン、などが挙げられる。許容可能な無機塩基としては、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、などが挙げられる。
【０２７５】
非天然アミノ酸ポリペプチドの薬学的に許容可能な塩の対応する対イオンは、様々な方法（イオン交換クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動、誘導結合プラズマ、原子吸光分光、質量分析法、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない）を用いて分析および特定することができる。さらに、そのような非天然アミノ酸ポリペプチドの薬学的に許容可能な塩の治療活性は、実施例８７〜９１に記載の技術および方法を用いて検査することができる。
【０２７６】
当然ながら、塩に対する言及は、溶媒添加の形態またはその結晶形、特に、溶媒和物または多形体を含む。溶媒和物は、化学量論的な量または非化学量論的な量の溶媒を含み、水およびエタノールなどの薬学的に許容可能な溶媒による結晶化の工程中にしばしば生成される。溶媒が水の場合には水和物が生成され、溶媒がアルコールの場合にはアルコラートが生成される。多形体は、化合物の同じ成分組成の異なる結晶充填配列を含む。通常、多形体は異なるＸ線回折パターン、赤外線スペクトル、融点、密度、硬度、結晶形状、光学特性および電気特性、安定性、および溶解性を有している。再結晶溶媒、晶析速度、および保存温度などの様々な要因によって、中心となる１つの結晶形がもたらされる。
【０２７７】
非天然アミノ酸ポリペプチドの薬学的に許容可能な塩の多形体および／または溶媒和物は、様々な技術（熱分析、Ｘ線回折、分光法、蒸気収着、および顕微鏡法が挙げられるがこれらに限定されない）を用いてスクリーニングおよび特徴づけすることができる。熱分析方法では、熱化学分解または熱物理処理（多形転移が挙げられるがこれに限定されない）を扱い、そのような方法は、多形相間の関係の分析、減量の測定、ガラス転移温度の検出、または賦形剤適合性研究に使用される。そのような方法としては、示差走査熱分析（ＤＳＣ）、変調示差走査熱分析（ＭＤＣＳ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、および熱重量赤外分析（ＴＧ／ＩＲ）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｘ線回折方法としては、単結晶粉末回折計およびシンクロトロン放射源が挙げられるが、これらに限定されない。使用される様々な分光技術としては、ラマン、ＦＴＩＲ、ＵＶＩＳ、およびＮＭＲ（液体状および固体状）が挙げられるが、これらに限定されない。様々な顕微鏡法技術としては、偏光顕微鏡法、エネルギー分散Ｘ線分析（ＥＤＸ）を用いた走査型電子顕微鏡法（ＳＥＭ）、（気体または水蒸気雰囲気における）ＥＤＸを用いた環境制御型走査電子顕微鏡法、ＩＲ顕微鏡法、およびラマン顕微鏡法が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７８】
〔参照による援用〕
本明細書において記載されているすべての文献および特許明細書は、各文献および特許明細書が具体的かつ個別に参照によって援用されることが示されている場合、参照によって本明細書に同程度に援用される。
【０２７９】
〔図面の簡単な説明〕
本発明の新規の特徴は、添付の請求の範囲で詳細に記載されている。本発明の特徴および利点は、本発明の原理を利用した例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明を参照することによって、より良く理解されるであろう。添付の図面は、以下の通りである。
【０２８０】
図１は、７８６−Ｏ腫瘍の断片の移植から７日目のメスのヌードマウスに、非抱合型ＡＲＸ−αＣＤ７０抗体ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９を単回投与（３ｍｇ／ｋｇ）したときの、コントロールビヒクルに対する非抱合型ＡＲＸ−αＣＤ７０抗体ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９の抗腫瘍効果のグラフ図を示している。
【０２８１】
図２は、図１と同条件において、腎細胞癌異種移植モデルにおける抗体薬物複合体ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇ）を投与処理した、メスのヌードマウスの被験群における腫瘍容量のグラフ図を示している。
【０２８２】
図３Ａは、７８６−Ｏ細胞における、３つのＡＲＸ−抗体薬物複合体（ＣＤ７０−２Ｈ５−ＮＣＡ１、ＣＤ７０−６９Ａ７−ＮＣＡ１、およびＣＤ７０ｈＩＦ６−ＮＣＡ１）の細胞毒性アッセイから得た結果のグラフ図を示している。
【０２８３】
図３Ｂは、Ｃａｋｉ−１細胞における、３つのＡＲＸ−抗体薬物複合体（ＣＤ７０−２Ｈ５−ＮＣＡ１、ＣＤ７０−６９Ａ７−ＮＣＡ１、およびＣＤ７０ｈＩＦ６−ＮＣＡ１）の細胞毒性アッセイから得た結果のグラフ図を示している。
【０２８４】
図４は、ＡＳ２６９（本明細書においてＮＣＡ１とも称する）と抱合するαＣＤ７０抗体ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９（図４Ａ）、ＡＳ２６９と抱合するαＣＤ７０抗体ＣＤ７０−８Ａ１−ＨＡ１２２（図４Ｂ）、およびαＣＤ７０抗体ＣＤ７０−７Ｆ２−ＨＡ１１９複合体（図４Ｃ）についての、１２日目の単回投与後の時間経過における腫瘍容量のグラフ図を示している。抗体薬物複合体を、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ投与し、ビヒクルと比較した。
【０２８５】
図５は、種々の試験群の、７８６−Ｏ腫瘍の断片の移植から４９日経過後に測定された腫瘍容量のドットプロットを示している。
【０２８６】
図６Ａは、７８６−Ｏ腫瘍の断片の移植から１２日後に、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＡＳ２６９を３ｍｇ／ｋｇ、ＣＤ７０−８Ａ１−ＡＳ２６９（３ｍｇ／ｋｇ）、およびＣＤ７０−７Ｆ２−ＡＳ２６９（３ｍｇ／ｋｇ）にて投与処理したメスのヌードマウス被験群の腫瘍容量のグラフ図を示している。
【０２８７】
図６Ｂは、ビヒクルと比較した、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＡＳ２６９（１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）にて処理したメスのヌードマウス被験群の腫瘍容量のグラフ図を示しており、抗体薬物複合体を、７８６−Ｏ腫瘍の断片の移植から１２日後に投与した。
【０２８８】
図６Ｃは、ビヒクルと比較した、８Ａ１−ｐＡＦ１−ＡＳ２６９（１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）にて処理したメスのヌードマウス被験群の腫瘍容量のグラフ図を示しており、抗体薬物複合体を、７８６−Ｏ腫瘍の断片の移植から１２日後に投与した。
【０２８９】
〔発明の詳細な説明〕
本明細書では、本発明の好ましい実施形態を示し、記載してきたが、これらの実施形態は、あくまでも例として提供されていることが当業者にとって明らかであろう。当業者は、本発明から逸脱することなく、数々の変化、変更、置換を着想するであろう。本発明を実施する際に、本明細書に記載の本発明の実施形態の種々の代替を採用してもよいことが理解されるべきである。特許請求の範囲は、本発明の範囲を定め、これら請求項の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの同等物は、これによりカバーされることが意図される。
【０２９０】
（Ｉ．はじめに）
近年、タンパク質の部位特異的修飾に関連する多くの制限の克服を可能にする、タンパク質科学における全く新たな技術が報告されている。具体的には、新たな構成要素が、原核生物の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（Ｅ． ｃｏｌｉ）（例えば、L. Wang, et al. , (2001), Science 292:498-500）、および真核生物の酵母（Sacchromycescerevisiae）（S. cerevisiae）（例えば、J. Chin et al.、Science 301:964-7 (2003)）のタンパク質生合成機構に対して加えられている。これらの構成要素は、インビボにおけるタンパク質に対する遺伝的にコードされないアミノ酸の組み込みを可能にしている。新規な化学的、物理的または生物学的特性を有する多くの新たなアミノ酸（光アフィニティーラベルによって標識されたアミノ酸、光異性化可能なアミノ酸、ケトアミノ酸、および糖鎖付加アミノ酸が挙げられる）が、この方法論を用いて、アンバーコドンＴＡＧに応じてＥ． ｃｏｌｉおよび酵母内にて、タンパク質に対して効率的かつ高い忠実度を有して組み込まれている。例えば、J. W. Chin et al. , (2002) , Journal of the AmericanChemical Society 124:9026-9027(その全体を参照することにより組み込まれる); J. W.Chin、& P. G. Schultz, (2002) , ChemBioChem 3(11):1135-1137(その全体を参照することにより組み込まれる); J. W. Chin, et al., (2002) , PNAS United States of America 99(17):11020-11024 (incorporated by reference in its entirety); および, L. Wang, & P. G. Schultz, (2002) , Chem. Comm. , 1-11(その全体を参照することにより組み込まれる)。これらの研究は、遺伝的にコードされる通常の２０のアミノ酸に見出される官能基のすべてに対して化学的に不活性であり、効率的にかつ選択的に反応して安定な共有結合を形成するために使用され得る、タンパク質に見出されない化学官能基を、選択的かつ日常的に導入することが可能であることを証明している。
【０２９１】
（ＩＩ．概要）
本発明は薬物（例えば、薬物、毒素、マーカー分子への抗体の複合を促進する、天然にコードされていないアミノ酸を有するαＣＤ７０抗体を提供する。一実施形態において、ＡＤＣは薬物に複合されているαＣＤ７０抗体を含んでおり、当該複合は抗体における天然にコードされていないアミノ酸を介して生じている。一実施形態において、ＡＤＣは薬物に複合されているαＣＤ７０抗体を含んでおり、当該複合は抗体の重鎖における天然にコードされていないアミノ酸を介して生じている。一実施形態において、ＡＤＣは薬物に複合されているαＣＤ７０抗体を含んでおり、当該複合は抗体の軽鎖における天然にコードされていないアミノ酸を介して生じている。一実施形態において、ＡＤＣは薬物に複合されている全長の抗体を含んでおり、当該複合は抗体における天然にコードされていないアミノ酸を介して生じている。一実施形態において、ＡＤＣは薬物に複合されている全長の抗体を含んでおり、当該複合は抗体の重鎖における天然にコードされていないアミノ酸を介して生じている。一実施形態において、ＡＤＣは薬物に複合されている全長の抗体を含んでおり、当該複合は抗体の軽鎖における天然にコードされていないアミノ酸を介して生じている。
【０２９２】
ある実施形態において、ＡＤＣの薬物は細胞毒性薬物である。本発明のある態様において、細胞毒性薬物は、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合物質、ＤＮＡ副溝アルキル化物質、エンジイン、レキシトロプシン、ズオカルマイシン、タキサン、ピューロマイシン、ドラスタチン、マイタンシノイド、およびビンカアルカロイドからなる群から選択される。本発明のある態様において、前記細胞毒性薬物は、以下のものである。
【０２９３】
【化４８】
2020143151.tif 000049
【０２９４】
本発明の他の実施形態において、前記細胞毒性薬物は、以下を含む群から選択される。
【０２９５】
【化４９】
2020143151.tif 000050
【０２９６】
本発明のある実施形態において、前記細胞毒性薬物は、以下からなる群から選択される。
【０２９７】
【化５０】
2020143151.tif 000051
【０２９８】
本発明の他の態様において、前記細胞毒性薬物は、以下からなる群から選択される。
【０２９９】
【化５１】
2020143151.tif 000052
【０３００】
本発明の他の態様において、前記細胞毒性薬物は、以下からなる群から選択される。
【０３０１】
【化５２】
2020143151.tif 000053
【０３０２】
本発明の他の態様において、前記細胞毒性薬物は、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、オーリスタチンＥ、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノドキソルビシン、ドラスタチン−１０、エキノマイシン、コンブレタットスタチン（combretatstatin）、カリケアマイシン（chalicheamicin）、メイタンシン、ＤＭ−１またはネトロプシンからなる群から選択される。
【０３０３】
本発明のある態様において、細胞毒性薬物は、抗チューブリン剤である。ある実施形態において、抗チューブリン剤は、オーリスタチン、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシン、タキサン、バカチン誘導体、クリプトフィシン（cryptophysin）、メイタンシン、コンブレタットスタチン（combretatstatin）、またはドラスタチンである。ある実施形態において、抗チューブリン剤は、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、オーリスタチンＥ、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン（vinorelbine）、ＶＰ−１６、カンプトテシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ノコダゾール、コルヒチン、コルシミド（colcimid）、エストラムスチン、セマドチン、ディスコデルモリド、メイタンシン、ＤＭ−１またはエレウテロビンである。
【０３０４】
本発明の他の態様において、ＡＤＣの細胞毒性薬物は、ガンシクロビル、エタネルセプト、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、シクロフォスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、メトトレキセート、コルチゾール、アルドステロン、デキサメタゾン、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−イポキシゲナーゼ阻害剤またはロイコトリエン受容体またはアンタゴニストである。
【０３０５】
ある実施形態において、ＡＤＣの抗体は、(ａ）ＣＤ７０に結合し、（ｂ）細胞毒性薬物または免疫抑制剤と複合化している全長の抗体を含んでおり、当該抗体−薬物複合体は、(ａ）ＣＤ７０発現癌細胞株において、細胞毒性もしくは細胞増殖抑制性の効果、または（ｂ）ＣＤ７０発現免疫細胞において、細胞毒性、細胞増殖抑制性、もしくは免疫抑制性の効果を発揮し、当該複合は抗体における天然にコードされていないアミノ酸において生じている。
【０３０６】
一レベルにおいて、少なくとも１つのカルボニル、ジカルボニル、オキシム、ヒドロキシルアミン、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アジド、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、アルキン、シクロアルキン、またはエンジオンを含むドラスタチンリンカー誘導体またはアナログを製造し、使用するためのツール（方法、組成物、技術）が本明細書に記載されている。別のレベルにおいて、少なくとも１つの非天然アミノ酸、または、オキシム、芳香族アミン、複素環（例えば、インドール、キノキサリン、フェナジン、ピラゾール、トリアゾール等）で修飾された非天然アミノ酸を含むドラスタチンリンカー誘導体またはアナログを製造し、使用するためのツール（方法、組成物、技術）が本明細書に記載されている。
【０３０７】
非天然アミノ酸を含むそのようなドラスタチンリンカー誘導体は、さらなる機能性を含有してもよい。機能性としては、ポリマー、水溶性ポリマー、ポリエチレングリコールの誘導体、第２のタンパク質、ポリペプチドまたはポリペプチドアナログ、抗体または抗体フラグメント、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。なお、種々の上記機能性は、ある機能性のメンバーが別の機能性のメンバーとして分類できないことを示唆することを意図するものではない。実際、特定の状況よっては重複が存在する。ほんの一例として、水溶性ポリマーは、範囲が、ポリエチレングリコールの誘導体と重複しているが、この重複は、完全ではないため、両機能性が上に挙げられている。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、カルボニル、ジカルボニル、オキシム、ヒドロキシルアミン、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アジド、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、アルキン、シクロアルキン、またはエンジオンを含む毒性基リンカー誘導体が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態では、前記毒性基誘導体は、本明細書に開示されたリンカーのいずれかを含む。他の実施形態では、少なくとも１つの非天然アミノ酸、または、オキシム、芳香族アミン、複素環（例えば、インドール、キノキサリン、フェナジン、ピラゾール、トリアゾール等）で修飾された非天然アミノ酸を含む毒性基誘導体またはアナログを製造し、使用するためのツール（方法、組成物、技術）が本明細書に記載されている。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸を含むそのような毒性基誘導体は、さらなる機能性を含有してもよい。機能性としては、ポリマー、水溶性ポリマー、ポリエチレングリコールの誘導体、第２のタンパク質、ポリペプチドまたはポリペプチドアナログ、抗体または抗体フラグメント、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、前記毒性基誘導体は、チューブリン阻害剤である。特定の実施形態では、前記毒性基誘導体は、ドラスタチン、または、オーリスタチンである。特定の実施形態では、前記毒性基誘導体は、ドラスタチン、または、オーリスタチンの誘導体である。なお、種々の上記機能性は、ある機能性のメンバーが別の機能性のメンバーとして分類できないことを示唆することを意図するものではない。実際、特定の状況よっては重複が存在する。ほんの一例として、水溶性ポリマーは、範囲が、ポリエチレングリコールの誘導体と重複しているが、この重複は、完全ではないため、両機能性が上に挙げられている。
【０３１０】
本発明のある実施形態では、リンカーを持つある毒性部分の調製が記載されており、これらのリンカーは、生体内で当該部分の毒性を減らすが、毒性部分は薬理活性を保持する。いくつかの実施形態では、結合した毒性基の毒性は、動物またはヒトに投与した場合、不安定な結合を含む自由毒性基または毒性基誘導体に比べて、薬理活性を保持しながら、減少または除去される。いくつかの実施形態では、結合した毒性基（例えば、ドラスタチンリンカー誘導体、非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体）の投与量を増やしても、動物またはヒトに極めて安全に投与することができる。ある実施形態では、毒性部分に結合した非天然アミノ酸ポリペプチド（例えば、ドラスタチン誘導体）は、インビボおよびインビトロにおいて安定性を提供する。いくつかの実施形態では、毒性部分に結合した非天然アミノ酸ポリペプチド（例えば、チューブリン阻害剤誘導体、ドラスタチン−１０誘導体）は、効果があり、かつ、自由毒性基（例えば、チューブリン阻害剤ドラスタチン−１０）に比べて毒性が低い。
【０３１１】
（ＩＩＩ．ドラスタチンリンカー誘導体）
一レベルにおいて、少なくとも１つの非天然アミノ酸、または、カルボニル、ジカルボニル、オキシム、または、ヒドロキシルアミン基で修飾された非天然アミノ酸を含むドラスタチンリンカー誘導体またはアナログを製造し、使用するためのツール（方法、組成物、技術）が本明細書に記載されている。非天然アミノ酸を含むそのようなドラスタチンリンカー誘導体は、さらなる機能性を含有してもよい。機能性としては、ポリマー、水溶性ポリマー、ポリエチレングリコールの誘導体、ポリペプチドまたはポリペプチドアナログの第２タンパク質、抗体または抗体フラグメント、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。なお、種々の上記機能性は、ある機能性のメンバーが別の機能性のメンバーとして分類できないことを示唆することを意図するものではない。実際、特定の状況よっては重複が存在する。ほんの一例として、水溶性ポリマーは、範囲が、ポリエチレングリコールの誘導体と重複しているが、この重複は、完全ではないため、両機能性が上に挙げられている。
【０３１２】
ある態様では、これらの方法、組成物、および技術を用いて修飾されるドラスタチンリンカー誘導体を選択および設計するための方法が本明細書に記載されている。新規なドラスタチンリンカー誘導体は、ほんの一例として、ハイスループット・スクリーニング法の一部として（この場合、多数のポリペプチドを設計、合成、特徴づけ、および／または検査してもよい）、または、研究者の関心に基づいて、新たに設計してもよい。また、新規なドラスタチンリンカー誘導体は、既知の、または、部分的に特徴づけられたポリペプチドに基づいて設計してもよい。ほんの一例として、ドラスタチンは、科学界において大きな研究の対象であり、ドラスタチンの構造に基づいて新規な化合物を設計してもよい。どのアミノ酸を置換および／または修飾するかを選択する原則は、それぞれ本明細書に記載されている。どの修飾を採用するかの選択についても、本明細書に記載されており、実験者またはエンドユーザのニーズに応じて用いることができる。そのようなニーズとしては、ポリペプチドの治療効果を操作すること、ポリペプチドの安全性プロフィールを改善すること、ポリペプチドの薬物動態、薬効薬理、および／または薬物力を調整することが挙げられるが、これらに限定されず、薬効薬理、および／または薬物力を調整することしては、ほんの一例として、水溶性を向上させること、バイオアベイラビリティーを向上させること、血中半減期を上昇させること、治療半減期を上昇させること、免疫原性を調節すること、生物学的な活性を調節すること、または循環時間を延長させることが挙げられる。加えて、そのような修飾は、ほんの一例として、ポリペプチドにさらなる機能性を提供すること、抗体を組み入れること、および上述の修飾の任意の組み合わせが挙げられる。
【０３１３】
また、オキシム、カルボニル、または、ヒドロキシルアミン基を有する、または、含有するように修飾することができるドラスタチンリンカー誘導体が本明細書に記載されている。この態様には、そのようなドラスタチンリンカー誘導体を製造、精製、特徴づけ、使用する方法も含まれる。
【０３１４】
ドラスタチンリンカー誘導体は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、または１０以上のカルボニルまたはジカルボニル基、オキシム基、ヒドロキシルアミン基、またはその保護された形態を含有してもよい。ドラスタチンリンカー誘導体は、同じであっても異なっていてもよい。例えば、誘導体中に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の異なる反応基を含む１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の異なる部位があってもよい。
【０３１５】
＜Ａ．ドラスタチンリンカー誘導体の構造および合成：求電子基および求核基＞
ヒドロキシルアミン基（アミノオキシ基とも呼ばれる）を有するリンカーを備えたドラスタチン誘導体は、多様な求電子基と反応して抱合体（ＰＥＧまたは他の水溶性ポリマーを有するものが挙げられるがこれらに限定されない）の形成を可能にする。ヒドラジン、ヒドラジド、およびセミカルバジドのように、アミノオキシ基の強化された求核性により、カルボニル基またはジカルボニル基を含んでいる多様な分子（ケトン、アルデヒド類、または類似した化学反応性を有する他の官能基が挙げられるがこれらに限定されない）との効率的および選択的な反応が可能になる。例えば、Shao,J. and Tam,J.,J.Am.Chem.Soc.117:3893-3899(1995);H.Hang and C.Bertozzi,Acc.Chem.Res.34(9):727-736(2001)を参照するとよい。ヒドラジン基との反応の結果としてヒドラゾンが生じるのに対して、アミノオキシ基と、カルボニルまたはジカルボニルを備えた基（例えばケトン、アルデヒド類または類似した化学反応性を有する他の官能基等）との反応からは、一般にオキシムが生じる。いくつかの実施形態では、アジド、アルキンまたはシクロアルキンを有するリンカーを備えるドラスタチン誘導体は、環化付加反応（例えば、１,３−双極子環付加、アジド−アルキン・ヒュスゲン環化付加、等）を通じて、分子の結合を可能にする（このことは、この反応に関する範囲を言及することで本明細書に組み込まれている米国特許第７８０７６１９に開示されている）。
【０３１６】
そのため、本明細書では特定の実施形態に、ヒドロキシルアミン、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エルテル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、およびエンジオンヒドロキシルアミン基、ヒドロキシルアミン類似基（ヒドロキシルアミン基と類似した反応性および類似した構造を有する）、マスキングされたヒドロキシルアミン基（ヒドロキシルアミン基に容易に転換され得る）、または保護されたヒドロキシルアミン基（脱保護に際し、ヒドロキシルアミン基と類似した反応性を有する）を有するリンカーを備えるドラスタチン誘導体が開示される。いくつかの実施形態では、リンカーを備えるドラスタチン誘導体は、アジド、アルミン誘導体、シクロアルミンを有する。該ドラスタチンリンカー誘導体は、式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（ＶＩ）の構造を有する化合物を含む。
【０３１７】
【化５３】
2020143151.tif 000054
【０３１８】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有しており、
【０３１９】
【化５４】
2020143151.tif 000055
【０３２０】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはチアゾ−ルであり、
Ｒ８は、ＯＨ、または−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
Ｒ６は、ＯＨまたはＨであり、
Ａｒは、フェニルまたはピリジンであり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは水素であり、
ＹおよびＶは、ヒドロキシルアミン、メチル、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アジド、アミジン、イミン、ジアミン、ケトンのアミン、ケトアルキン、アルキン、シクロアルキン、およびエンジオンからなる群からそれぞれ選択され、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−、からなる群から独立して選択される各リンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有しており、
【０３２１】
【化５５】
2020143151.tif 000056
【０３２２】
Ｕは、以下の構造を有しており、
【０３２３】
【化５６】
2020143151.tif 000057
【０３２４】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有しており、
【０３２５】
【化５７】
2020143151.tif 000058
【０３２６】
各ｎ、ｎ’ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は、独立して、１より大きいまたは１と等しい整数である。および、
または、Ｌは存在せず、Ｙはメチル、Ｒ５はＣＯＲ８、およびＲ８は−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２である）。
【０３２７】
このようなドラスタチンリンカー誘導体は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類、あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０３２８】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、チアゾールまたはカルボン酸である。式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は水素である。式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはヘキシルである。式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、アルキレンは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＩＶ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、Ｙはアジドである。他の実施形態では、Ｙはシクロアルキンである。特定の実施形態でシクロオクチンは、
【０３３０】
【化５８】
2020143151.tif 000059
【０３３１】
の構造を有しており、
各Ｒ１９は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、エステル、エーテル、チオエーテル、アミノアルキル、ハロゲン、アルキルエステル、アリールエステル、アミド、アリールアミド、ハロゲン化アルキル、アルキルアミン、アルキルスルフォン酸、アルキルニトロ、チオエステル、スルフォニルエステル、ハロスルホニル、ニトリル、アルキルニトリル、およびニトロから成る群から選択され、かつ、
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１である。
【０３３２】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ６はＨである。式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ６はヒドロキシである。
【０３３３】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ａｒはフェニルである。
【０３３４】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（ＩＶ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル・イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはヘキシルである。式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は水素である。
【０３３５】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｙはヒドロキシルアミン、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、またはエンジオンである。
【０３３６】
式（ＩＶ）および（ＩＶ）の化合物の特定の実施形態では、Ｖは、ヒドロキシルアミン、メチル、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、およびエンジオンのうちの一つである。
【０３３７】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して、切断（開裂）可能なリンカー、または切断可能な（非開裂）リンカーである。式（Ｉ）（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０３３８】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、各アルキレン、アルキレン’、アルキレン’’、およびアルキレン’’’は、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）、（ＸＶＩＩ）、および（ＸＶＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、各ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０３３９】
＜Ｂ．ドラスタチンリンカー誘導体の構造および合成：ヒドロキシルアミン基＞
したがって、本明細書での特定の実施形態に、ヒドロキシルアミン基、ヒドロキシルアミン類似基（ヒドロキシルアミン基と類似した反応性および類似した構造を有する）、マスキングされたヒドロキシルアミン基（ヒドロキシルアミン基に容易に転換され得る）、または保護されたヒドロキシルアミン基（脱保護に際し、ヒドロキシルアミン基と類似した反応性を有する）を有するリンカーを備えるドラスタチン誘導体が開示される。該ドラスタチンリンカー誘導体は、式（Ｉ）の構造を有する化合物を含む。
【０３４０】
【化５９】
2020143151.tif 000060
【０３４１】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有しており、
【０３４２】
【化６０】
2020143151.tif 000061
【０３４３】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはチアゾ−ルであり、
Ｒ８は、ＯＨ、または−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
Ｒ６は、ＯＨまたはＨであり、
Ａｒは、フェニルまたはピリジンであり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは水素であり、
Ｙは、ＮＨ２−Ｏ−またはメチルであり、
Ｌは、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、および−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−からなる群から選択されるリンカーである。
【０３４４】
Ｗは、以下の構造を有しており、
【０３４５】
【化６１】
2020143151.tif 000062
【０３４６】
Ｕは、以下の構造を有しており、
【０３４７】
【化６２】
2020143151.tif 000063
【０３４８】
または、Ｌは存在せず、Ｙはメチル、Ｒ５はＣＯＲ８、およびＲ８は−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、かつ、
各ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は、独立して、１より大きいまたは１と等しい整数である）。このようなドラスタチンリンカー誘導体は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類、あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０３４９】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５はチアゾ−ルである。式（ＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は水素である。式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはヘキシルである。式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、アルキレンは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０３５０】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ６はＨである。式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ６はヒドロキシである。
【０３５１】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ａｒはフェニルである。
【０３５２】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル・イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはヘキシルである。式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は水素である。
【０３５３】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｙは、ヒドロキシルアミン、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、またはエンジオンである。式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、Ｖは、ヒドロキシルアミン、メチル、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、およびエンジオンのうちの一つである。
【０３５４】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌは独立して、切断可能なリンカーまたは切断不可能なリンカーである。式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌは独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０３５５】
式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、アルキレンは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（Ｉ）の化合物の特定の実施形態では、各ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０３５６】
特定の実施形態では、ドラスタチンリンカー誘導体は、式（ＩＩ）の構造を有する化合物を含む。
【０３５７】
【化６３】
2020143151.tif 000064
【０３５８】
式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｌは−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−である。いくつかの実施形態では、各アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−であり、ｎは３と等しく、およびＲ７はメチルである。いくつかの実施形態では、Ｌは−アルキレン−である。式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、各アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−であり、およびＲ７はメチルまたは水素である。式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｌは−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−である。式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、各アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−であり、ｎは４と等しく、およびＲ７はメチルである。式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｌは−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−である。式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、各アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−であり、ｎは１と等しく、ｎ’は２と等しく、ｎ’’は１と等しく、ｎ’’’は２と等しく、ｎ’’’’は４と等しく、およびＲ７はメチルである。このようなドラスタチンリンカー誘導体は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類、あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０３５９】
式（ＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌは、独立して、切断可能なリンカーまたは切断不可能なリンカーである。式（ＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌは、独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０３６０】
式（ＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル・イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、あるいはヘキシルである。式（ＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は水素である。
【０３６１】
式（ＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、アルキレンは−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、各ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０３６２】
このようなドラスタチンリンカー誘導体は、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）の構造を有する化合物を含む。
【０３６３】
【化６４】
2020143151.tif 000065
【０３６４】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有しており、
【０３６５】
【化６５】
2020143151.tif 000066
【０３６６】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはチアゾ−ルであり、
Ｒ８は、ＯＨであり、
Ｒ６は、ＯＨまたはＨであり、
Ａｒは、フェニル、またはピリジンであり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、または水素であり、
Ｙは、ＮＨ２−Ｏ−であり、
Ｖは、−Ｏ−ＮＨ２であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、結合、−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群から独立して選択される各リンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有しており、
【０３６７】
【化６６】
2020143151.tif 000067
【０３６８】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有しており、
【０３６９】
【化６７】
2020143151.tif 000068
【０３７０】
各ｎおよびｎ’は、独立して、１より大きいまたは１と等しい整数である）。
【０３７１】
このようなドラスタチンリンカー誘導体は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類、あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０３７２】
式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５はチアゾ−ルである。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ６はＨである。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ａｒはフェニルである。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７はメチルである。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、ｎおよびｎ’は、０から２０の整数である。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、ｎおよびｎ’は、０から１０の整数である。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、ｎおよびｎ’は、０から５の整数である。
【０３７３】
式（ＩＩＩ）および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、チアゾ−ルまたはカルボン酸である。式（ＩＩＩ）および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は水素である。式（ＩＩＩ）および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはヘキシルである。式（ＩＩＩ）および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、アルキレンは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＩＩＩ）および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０３７４】
式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ６はＨである。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ６はヒドロキシである。
【０３７５】
式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ａｒはフェニルである。
【０３７６】
式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル・イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはヘキシルである。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ７は水素である。
【０３７７】
式（ＩＩＩ）および（Ｖ）の化合物の特定の実施形態では、Ｙは、ヒドロキシルアミン、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、またはエンジオンである。式（ＩＶ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｖは、ヒドロキシルアミン、メチル、アルデヒド、保護されたアルデヒド、ケトン、保護されたケトン、チオエステル、エステル、ジカルボニル、ヒドラジン、アミジン、イミン、ジアミン、ケトアミン、ケトアルキン、およびエンジオンのうちの一つである。
【０３７８】
式（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）、（ＸＶＩＩ）、および（ＸＶＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して切断可能なリンカー、または切断不可能なリンカーである。式（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）、（ＸＶＩＩ）、および（ＸＶＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、各Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０３７９】
式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、各アルキレン、アルキレン’、アルキレン’’、およびアルキレン’’’は、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０３８０】
式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）の化合物の特定の実施形態では、各ｎおよびｎ’は、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０３８１】
特定の実施形態では、ドラスタチンリンカー誘導体は、式（ＶＩＩ）、つまり、
【０３８２】
【化６８】
2020143151.tif 000069
【０３８３】
の構造を有する。
【０３８４】
式（ＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｌ１は−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、Ｌ２は−アルキレン’−Ｊ’−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−、Ｌ３は−Ｊ’’−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’−アルキレン−、アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−、アルキレン’は−（ＣＨ２）４−、ｎは１、ｎ’およびｎ’’は３、Ｊは、
【０３８５】
【化６９】
2020143151.tif 000070
【０３８６】
の構造を有し、Ｊ’およびＪ’’は、
【０３８７】
【化７０】
2020143151.tif 000071
【０３８８】
の構造を有し、およびＲ７はメチルである。式（ＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｌ１は−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、Ｌ２は−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−アルキレン’−、Ｌ３は−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’−アルキレン−Ｊ’’−、アルキレンは−ＣＨ２ＣＨ２−、アルキレン’は−（ＣＨ２）４−、ｎは１、ｎ’およびｎ’’は４、およびＪ、Ｊ’およびＪ’’は、
【０３８９】
【化７１】
2020143151.tif 000072
【０３９０】
の構造を有する。このようなドラスタチンリンカー誘導体は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類、あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０３９１】
特定の実施形態では、式（Ｉ）−（ＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも１か月間、水溶性の溶液内で安定している。特定の実施形態では、式（Ｉ）−（ＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも２週間安定している。特定の実施形態では、式（Ｉ）−（ＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも５日間安定している。特定の実施形態で、そのような弱酸性条件はｐＨ２から８である。
【０３９２】
本明細書において提供および記載されている方法および組成は、少なくとも１つのカルボニル基またはジカルボニル基、オキシム基、ヒドロキシルアミン基、またはこれらの保護された形態またはマスキングされた形態であるものを有する、ドラスタチンリンカー誘導体を備えるポリペプチドを含む。ドラスタチンリンカー誘導体に少なくとも１つの反応基を導入することにより、特定の化学反応を含む化学物質同士の結合の応用が可能になり、この反応は、１以上のドラスタチンリンカー誘導体との反応（一方で、一般に生じるアミノ酸とは反応しない）を含むが、これには限定はされない。一度組み込まれると、ドラスタチンリンカー誘導体側鎖は、ドラスタチンリンカー誘導体内に存在する特定の官能基または置換基に適している、または本明細書に記載されている、化学方法論を利用することによって修飾することもできる。
【０３９３】
本明細書において記載されているドラスタチンリンカー誘導体の方法および組成は、多様な種類の官能基を、置換基を、または部分を有する物質と、他の物質（ポリマー、水溶性ポリマー、ポリエチレングリコールの誘導体、第２のタンパク質またはポリペプチドまたはポリペプチド類似物、抗体または抗体フラグメント、およびこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）との結合体を提供する。
【０３９４】
特定の実施形態では、本明細書において記載されている式（Ｉ）−（ＶＩＩ）の化合物を含むドラスタチンリンカー誘導体、リンカー、および試薬は、弱酸性条件下（ｐＨ２から８を有するものが挙げられるが、これらに限定されない）水溶液内で安定している。他の実施形態では、このような化合物は、弱酸性条件下で少なくとも１か月間、水溶性の溶液内で安定している。他の実施形態では、このような化合物は、弱酸性条件下で少なくとも２週間安定している。他の実施形態では、このような化合物は、弱酸性条件下で少なくとも５日間安定している。
【０３９５】
本明細書において記載されている組成、方法、技術および計画の別の態様には、前述された「修飾されたまたは未修飾の」非天然アミノ酸ドラスタチンリンカー誘導体のいずれかを研究または使用するための方法がある。この態様には、「修飾されたまたは未修飾の」非天然アミノ酸ポリペプチドまたはプロテインを含むドラスタチンリンカー誘導体から利益を得る利用が含まれる。この利用とは、単なる例示であるが、治療上の、診断上の、アッセイに基づく、産業上の、化粧品用の、植物生物学上の、環境上の、エネルギー生産用の、消費者製品用の、および／または軍事用の、利用である。
【０３９６】
ドラスタチンリンカー誘導体の例としては、
【０３９７】
【化７２】
2020143151.tif 000073
2020143151.tif 000074
2020143151.tif 000075
2020143151.tif 000076
2020143151.tif 000077
2020143151.tif 000078
【０３９８】
が挙げられるが、これらに限定はされない。
【０３９９】
本発明の別の態様において、抗ＣＤ７０抗体と抱合（複合）する薬物は、デキサメタゾンである。本発明の別の態様において、抗ＣＤ７０抗体と抱合する薬物は、ダサチニブである。本発明の別の態様において、抗ＣＤ７０抗体と抱合する薬物は、ＦＫ５０６である。本発明の別の態様において、抗ＣＤ７０抗体と抱合する薬物は、デキサメタゾン誘導体である。本発明の別の態様において、抗ＣＤ７０抗体と抱合する薬物は、ダサチニブ誘導体である。本発明の別の態様において、抗ＣＤ７０抗体と抱合する薬物は、ＦＫ５０６誘導体である。
【０４００】
【化７３】
2020143151.tif 000079
【０４０１】
本発明の別の態様において、抗ＣＤ７０抗体薬物複合体のリンカー−薬物部分は、以下の非制限例のうちの１つから選ばれる。
【０４０２】
【化７４】
2020143151.tif 000080
【０４０３】
（ＩＶ．非天然アミノ酸誘導体）
本明細書において記載されている方法および組成で使用される非天然アミノ酸は、次の４つの特性のうち少なくとも１つを有する。（１）非天然アミノ酸の側鎖に存在する少なくとも１つの官能基は、２０の通常の遺伝的にコードされたアミノ酸（例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）の化学反応性と直交性のある、または少なくとも非天然アミノ酸を含むポリペプチド内に存在する天然アミノ酸の化学反応性と直交性のある、少なくとも１つの特徴および／または活性および／または反応性を有する。（２）導入された非天然アミノ酸は、２０の通常の遺伝的にコ−ドされたアミノ酸に対して実質上化学的に不活性である。（３）非天然アミノ酸は、好ましくは天然アミノ酸と同等の安定性にて、または典型的な生理的条件下で、安定してポリペプチドに組み込まれることが可能であり、さらに好ましくは、この様な結合はインビボシステムを通して起こり得る。および（４）非天然アミノ酸は、オキシム官能基、または次の条件下で試薬と反応することによってオキシム基へ転換され得る官能基を有している。条件とは、好ましくは非天然アミノ酸を含むポリペプチドの生物学的性質を破壊しないという条件、またはｐＨが約４から約８の間の水溶液条件下で形質転換が起こり得るという条件、または非天然アミノ酸の反応部位が求電子部位であるという条件、である。任意の数の非天然アミノ酸がポリペプチドへ導入され得る。非天然アミノ酸はまた、保護またはマスキングされたオキシム、または、脱保護後かアンマスキング後にオキシム基に形質転換できる保護された基かマスキングされた基を含んでいてもよい。非天然アミノ酸はまた、脱保護後かアンマスキング後にカルボニル基かジカルボニル基に形質転換することができ、これにより、ヒドロキシルアミンまたはオキシムと反応してオキシム基を形成することが可能な、保護またはマスキングされたカルボニル基あるいは保護またはマスキングされたジカルボニル基をさらに含んでいてもよい。
【０４０４】
本明細書において記載されている方法および組成で使用されることが可能な非天然アミノ酸は、新たな官能基を有するアミノ酸を構成するアミノ酸、共有結合的にまたは非共有結合的に他の分子と相互作用するアミノ酸、糖置換セリン等のグリコシル化されたアミノ酸、他の炭水化物修飾アミノ酸、ケト含有アミノ酸、アルデヒド含有アミノ酸、ポリエチレングリコールまたは他のポリエーテル含有アミノ酸、重原子置換アミノ酸、化学的に切断可能および／または光分解性アミノ酸、天然アミノ酸と比べ延伸された側鎖を有するアミノ酸、炭素結合糖含有アミノ酸、レドックス活性アミノ酸、アミノ・チオ酸含有アミノ酸、および１つまたはそれ以上の有毒部分を有するアミノ酸が挙げられるがこれらに限定されない。なお、天然アミノ酸と比べ延伸された側鎖を有するアミノ酸には、ポリエーテルあるいは長連鎖炭化水素（炭素が約５個あるいは約１０個よりも大きいもの）、を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４０５】
いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸は糖類部分を含む。それらのアミノ酸の例として、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−スレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ型アスパラギンおよびＯ−マンノサミニル（mannosaminyl）−Ｌ−セリンが挙げられる。それらのアミノ酸の例はまた、アミノ酸と糖との間に天然に存在するＮ−またはＯ−結合が、通常天然では発見されない共有結合によって置換される場合の例を含み、アルケン、オキシム、チオエーテル、アミドおよびその他同種のものが挙げられるが、これらに限定されない。それらのアミノ酸の例はまた、２−デオキシ−グルコース、２−デオキシガラクトースおよびその他同種等の天然タンパク質のなかでは通常発見されない糖を含む。
【０４０６】
そのようなポリペプチド内への非天然アミノ酸の結合を通じてポリペプチドに組み込まれる化学部分は、ポリペプチドの多様な利点および操作を提供する。例えば、カルボニルまたはジカルボニルの官能基（ケト−またはアルデヒド−官能基を含む）のユニークな反応性は、インビボおよびインビトロでの任意の数のヒドラジン−またはヒドロキシルアミン−含有試薬によるタンパク質の選択的な修飾を可能にする。例えば重原子非天然アミノ酸は、Ｘ線構造データを調整するのに役立てることができる。非天然アミノ酸を利用した重原子の部位に特異的な導入はまた、重原子の位置を選択する際の選択性および柔軟性を提供する。光反応性非天然アミノ酸（ベンゾフェノンおよびアリールアジド（フェニルアジドを有するものが挙げられるが、これらに限定されない）側鎖を備えたアミノ酸が挙げられるが、これには限定されない）は、例えば、インビボまたはインビトロにおいてポリペプチドの効率的な光架橋を可能にする。光反応性のアミノ酸の例はｐ−アジド−フェニルアラニンおよびｐ−ベンゾイル−フェニルアラニン有するものが挙げられるが、これらに限定されない。光反応性の非天然アミノ酸を備えたポリペプチドは、一時的な制御を提供する光反応性基の励起によって、随意に架橋される可能性がある。非限定例では非天然アミノ酸のメチル基は、核磁気共鳴および振動分光法（これらには限定されない）を用いた局所構造および力学（これらには限定されない）のプローブとしてのメチル基（これには限定されない）を用いて、標識された同位体に置換され得る。
【０４０７】
＜Ａ．非天然アミノ酸誘導体の構造および合成：カルボニル基、カルボニル類似基、マスキングされたカルボニル基、および保護されたカルボニル基＞
求電子反応基を備えたアミノ酸は、多様な化学反応（求核付加反応が挙げられるがこれに限定されない）を通じて、分子を結合するための多様な反応を可能にする。このような求電子反応基は、カルボニル−またはジカルボニル−基（ケト−またはアルデヒド基を含む）、カルボニル類似−またはジカルボニル類似−基（カルボニル−またはジカルボニル−基に類似した反応性、およびカルボニル−またはジカルボニル−基に類似した構造を有する）、マスキングされたカルボニル−またはマスキングされたジカルボニル−基（容易にカルボニルに変換することができるカルボニル−またはジカルボニル−基）、または保護されたカルボニル−または保護されたジカルボニル−基（脱保護においてカルボニル−またはジカルボニル−基に類似した反応性を有する）を含む。このようなアミノ酸としては、式（ＸＸＸＶＩＩ）の構造を有するアミノ酸が挙げられる。
【０４０８】
【化７５】
2020143151.tif 000081
【０４０９】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は独立したＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｋは、
【０４１０】
【化７６】
2020143151.tif 000082
【０４１１】
であり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
各Ｒ”は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、または保護基であり、あるいは２以上のＲ”基が存在した時、２つのＲ”は任意にヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４、または２つのＲ３基が、任意にシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
または、−Ａ−Ｂ−Ｋ−Ｒ基は共同で、少なくとも１つの、カルボニル基（ジカルボニル基を含む）、保護されたカルボニル基（保護されたジカルボニル基を含む）、またはマスキングされたカルボニル基（マスキングされたジカルボニル基を含む）、を有する二環性または三環性のシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
または、−Ｋ−Ｒ基は共同で、少なくとも１つの、カルボニル基（ジカルボニル基を含む）、保護されたカルボニル基（保護されたジカルボニル基を含む）、またはマスキングされたカルボニル基（マスキングされたジカルボニル基を含む）、単環性または二環性シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
条件として、Ａがフェニレン基および各Ｒ３がＨの場合、Ｂは存在し、Ａが−（ＣＨ２）４−および各Ｒ３がＨの場合、Ｂは−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２）−ではなく、並びに、ＡおよびＢが存在せず、各Ｒ３がＨの場合、Ｒはメチルではない）。このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４１２】
特定の実施形態において、式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも１か月間水溶液内で安定している。特定の実施形態において、式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも２週間水溶液内で安定している。特定の実施形態において、式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも５日間水溶液内で安定している。特定の実施形態において、このような酸性条件はｐＨ２から８である。
【０４１３】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）（アルキレンまたは置換アルキレン）−、または−Ｓ（Ｏ）２（アルキレンまたは置換アルキレン）−である。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｂは、−Ｏ（ＣＨ２）−、−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）−、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）−、−ＳＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ２−である。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒは、Ｃ１−６アルキルまたはシクロアルキルである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒは−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、またはシクロプロピルである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、三級−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、Ｎ−アセチル、テトラフルオロアセチル（ＴＦＡ）、またはベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ１は樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、抗体、またはポリヌクレオチドである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ２は、ＯＨ、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、またはＯ−ｔ−ブチルである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ２は、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、抗体、またはポリヌクレオチドである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ２は、ポリヌクレオチドである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ２は、リボ核酸（ＲＮＡ）である。
【０４１４】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、
【０４１５】
【化７７】
2020143151.tif 000083
【０４１６】
は、以下の群から選択される。
（ｉ）
Ａは、置換低級アルキレン、Ｃ４−アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−から成る群から選択される二価リンカーである。
（ｉｉ）
Ａは、任意であり、存在する場合、置換低級アルキレン、Ｃ４−アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンｏｒ置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンｏｒ置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−から成る群から選択される二価リンカーである。（ｉｉｉ）
Ａは、低級アルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−から成る群から選択される二価リンカーである。および、
（ｉｖ）
Ａは、フェニレン基であり、
Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−から成る群から選択される二価リンカーである。
Ｋは、
【０４１７】
【化７８】
2020143151.tif 000084
【０４１８】
であり、
各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルであり、
Ｒ１は、任意であり、存在する場合は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、任意であり、存在する場合は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルである。
【０４１９】
さらに、式（ＸＸＸＶＩＩＩ）の構造を有するアミノ酸が含まれる。
【０４２０】
【化７９】
2020143151.tif 000085
【０４２１】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は独立してＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
ただし、Ａがフェニレン基の場合、Ｂは存在し、Ａが（ＣＨ２）４−の場合、Ｂは−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２）−ではなく、およびＡおよびＢが存在しない場合、Ｒはメチルではないという条件である）。このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４２２】
さらに、式（ＸＸＸＩＸ）の構造を有するアミノ酸が含まれる。
【０４２３】
【化８０】
2020143151.tif 000086
【０４２４】
（式中、
Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’（ｋは１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は独立してＨ、アルキル、又は置換アルキルである）から選択される）。このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４２５】
さらに、以下のアミノ酸が含まれる。
【０４２６】
【化８１】
2020143151.tif 000087
【０４２７】
このような非天然アミノ酸は、任意に、保護化アミノ基、保護化カルボキシルであってもよく、および／または塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４２８】
さらに、式（ＸＸＸＸ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４２９】
【化８２】
2020143151.tif 000088
【０４３０】
（式中、
−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−は、任意であり、存在する場合、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’（ｋは１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、およびｎは０から８であり、
ただし、Ａが−（ＣＨ２）４−である場合、Ｂは−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２）−ではない、という条件である）。このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４３１】
さらに、以下のアミノ酸が含まれる。
【０４３２】
【化８３】
2020143151.tif 000089
【０４３３】
このような化合物は、任意の保護化アミノ、任意の保護化カルボキシル、任意の保護化アミノおよび保護化カルボキシル、またはこれらの塩であり、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類またはポリヌクレオチドに組み込まれてもよく、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４３４】
さらに、式（ＸＸＸＸＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４３５】
【化８４】
2020143151.tif 000090
【０４３６】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである）。
【０４３７】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４３８】
さらに、式（ＸＸＸＸＩＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４３９】
【化８５】
2020143151.tif 000091
【０４４０】
（式中、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は独立してＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、ａｎアミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’（ｋは１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択される）。
【０４４１】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４４２】
さらに、以下のアミノ酸が含まれる。
【０４４３】
【化８６】
2020143151.tif 000092
【０４４４】
これらの化合物は、任意の保護化アミノ、任意の保護化カルボキシル、任意の保護化アミノおよび保護化カルボキシル、またはこれらの塩であり、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類またはポリヌクレオチドに組み込まれてもよく、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４４５】
さらに、式（ＸＸＸＸＩＶ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４４６】
【化８７】
2020143151.tif 000093
【０４４７】
（式中、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒは、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、ａｎアミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ（各ｋは１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、およびｎは０から８である）。
【０４４８】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４４９】
さらに、以下のアミノ酸が含まれる。
【０４５０】
【化８８】
2020143151.tif 000094
【０４５１】
このような化合物は、任意の保護化アミノ、任意の保護化カルボキシル、任意の保護化アミノおよび保護化カルボキシル、またはこれらの塩であり、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類またはポリヌクレオチドに組み込まれてもよく、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４５２】
モノカルボニル構造に加えて、本明細書において記載されている非天然アミノ酸は、ジカルボニル基、ジカルボニル類似基、マスキングされたジカルボニル基および保護されたジカルボニル基等の基を含んでいてもよい。
【０４５３】
例えば、式（ＸＸＸＸＶ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４５４】
【化８９】
2020143151.tif 000095
【０４５５】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである）。
【０４５６】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４５７】
さらに、式（ＸＸＸＸＶＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４５８】
【化９０】
2020143151.tif 000096
【０４５９】
（式中、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２はＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ（ｋは１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択される）。
【０４６０】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４６１】
さらに、以下のアミノ酸が含まれる。
【０４６２】
【化９１】
2020143151.tif 000097
【０４６３】
これらの化合物は、任意の保護化アミノおよび保護化カルボキシル、またはこれらの塩である。このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４６４】
さらに、式（ＸＸＸＸＶＩＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４６５】
【化９２】
2020143151.tif 000098
【０４６６】
（式中、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は独立したＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’（ｋは、１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、および、ｎは０から８である）。
【０４６７】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４６８】
さらに、以下のアミノ酸が含まれる。
【０４６９】
【化９３】
2020143151.tif 000099
【０４７０】
これらの化合物は、任意の保護化アミノおよび保護化カルボキシル、またはこれらの塩であり、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類またはポリヌクレオチドに組み込まれてもよく、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４７１】
さらに、式（ＸＸＸＸＶＩＩＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４７２】
【化９４】
2020143151.tif 000100
【０４７３】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンあり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｘ１は、Ｃ、Ｓ、またはＳ（Ｏ）、および、Ｌは、アルキレン、置換アルキレン、Ｎ（Ｒ’）（アルキレン）またはＮ（Ｒ’）（置換アルキレン）（Ｒ’は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキル）である）。
【０４７４】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４７５】
さらに、式（ＸＸＸＸＩＸ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４７６】
【化９５】
2020143151.tif 000101
【０４７７】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンとして存在している時、任意であり、
ＲはＨ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、Ｒ１はＨ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｌは、アルキレン、置換アルキレン、Ｎ（Ｒ’）（アルキレン）またはＮ（Ｒ’）（置換アルキレン）（Ｒ’はＨ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキル）である）。
【０４７８】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４７９】
さらに、式（ＸＸＸＸＸ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４８０】
【化９６】
2020143151.tif 000102
【０４８１】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｌは、アルキレン、置換アルキレン、Ｎ（Ｒ’）（アルキレン）またはＮ（Ｒ’）（置換アルキレン）（Ｒ’はＨ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキル）である）。
【０４８２】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４８３】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４８４】
【化９７】
2020143151.tif 000103
【０４８５】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、ａｎアミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｘ１は、Ｃ、Ｓ、またはＳ（Ｏ）であり、およびｎは０、１、２、３、４、または５であり、および、各ＣＲ８Ｒ９基上の各Ｒ８およびＲ９は、独立して、Ｈ、アルコキシ、アルキルアミン、ハロゲン、アルキル、アリールからなる群から選択される、または任意のＲ８およびＲ９は共同で、＝Ｏまたはシクロアルキルを形成することが可能である、またはＲ８基に隣接した任意の基は共同で、シクロアルキルを形成することが可能である）。
【０４８６】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４８７】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＩＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４８８】
【化９８】
2020143151.tif 000104
【０４８９】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
ｎは、０、１、２、３、４、または５であり、および、各ＣＲ８Ｒ９基上の各Ｒ８およびＲ９は、独立して、Ｈ、アルコキシ、アルキルアミン、ハロゲン、アルキル、アリールからなる群から選択される、または任意のＲ８およびＲ９は共同で、＝Ｏまたはシクロアルキルを形成可能である、またはＲ８基に隣接した任意の基は共同で、シクロアルキルを形成可能である）。
【０４９０】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４９１】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＩＩＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４９２】
【化９９】
2020143151.tif 000105
【０４９３】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
ｎは、０、１、２、３、４、または５であり、および、各ＣＲ８Ｒ９基上の各Ｒ８およびＲ９は、独立して、Ｈ、アルコキシ、アルキルアミン、ハロゲン、アルキル、アリールからなる群から選択される、または任意のＲ８およびＲ９は共同で、＝Ｏまたはシクロアルキルを形成可能である、またはＲ８基に隣接した任意の基は共同で、シクロアルキルを形成可能である）。
【０４９４】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４９５】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＩＶ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０４９６】
【化１００】
2020143151.tif 000106
【０４９７】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｘ１は、Ｃ、Ｓ、またはＳ（Ｏ）であり、およびＬは、アルキレン、置換アルキレン、Ｎ（Ｒ’）（アルキレン）またはＮ（Ｒ’）（置換アルキレン）（Ｒ’は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキル）である）。
【０４９８】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０４９９】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＶ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０５００】
【化１０１】
2020143151.tif 000107
【０５０１】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｌは、アルキレン、置換アルキレン、Ｎ（Ｒ’）（アルキレン）またはＮ（Ｒ’）（置換アルキレン）（Ｒ’はＨ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキル）である）。
【０５０２】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５０３】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＶＩ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０５０４】
【化１０２】
2020143151.tif 000108
【０５０５】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｌは、アルキレン、置換アルキレン、Ｎ（Ｒ’）（アルキレン）またはＮ（Ｒ’）（置換アルキレン）（Ｒ’は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキル）である）。
【０５０６】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５０７】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＶＩＩ）の構造を有するアミノ酸が含まれる。
【０５０８】
【化１０３】
2020143151.tif 000109
【０５０９】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｍは、
【０５１０】
【化１０４】
2020143151.tif 000110
【０５１１】
であり、ここで（ａ）はＡ基への結合を示しており、および（ｂ）各自のカルボニル基への結合を示しており、Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルから選択され、あるいは、Ｒ３およびＲ４または２つのＲ３基または２つのＲ４基は、任意にシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｒは、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、 
Ｔ３は、結合、Ｃ（Ｒ）（Ｒ）、Ｏ、またはＳ、およびＲは、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである）。
【０５１２】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５１３】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＶＩＩＩ）の構造を有するアミノ酸が含まれる。
【０５１４】
【化１０５】
2020143151.tif 000111
【０５１５】
（式中、
Ｍは、
【０５１６】
【化１０６】
2020143151.tif 000112
【０５１７】
であり、ここで（ａ）は、Ａ基への結合を示しており、および（ｂ）は各自のカルボニル基への結合を示しており、Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルから選択され、あるいは、Ｒ３およびＲ４または２つのＲ３基または２つのＲ４基は、任意にシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｒは、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｔ３は、結合、Ｃ（Ｒ）（Ｒ）、Ｏ、またはＳ、およびＲはＨ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１はＨ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’（ｋは１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択される）。
【０５１８】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５１９】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＩＸ）の構造を有するアミノ酸が含まれる。
【０５２０】
【化１０７】
2020143151.tif 000113
【０５２１】
（式中、
Ｒは、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、および、
Ｔ３は、Ｏ、またはＳである）。
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５２２】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＸ）の構造を有するアミノ酸が含まれる。
【０５２３】
【化１０８】
2020143151.tif 000114
【０５２４】
（式中、
Ｒは、Ｈ，ハロゲン，アルキル，置換アルキル，シクロアルキル，または置換シクロアルキルである）。
【０５２５】
さらに、式（ＸＸＸＸＸＸ）の構造を有する以下のアミノ酸が含まれる。
【０５２６】
【化１０９】
2020143151.tif 000115
【０５２７】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５２８】
カルボニルまたはジカルボニルの官能性により、水溶液内で穏やかな条件下でヒドロキシルアミン含有試薬と選択的に反応することができ、生理学的条件下で安定したオキシム連結と一致するものを形成する。例えば、Jencks, W. P., J. Am. Chem. Soc. 81, 475-481 (1959); Shao, J. and Tam, J. P., J. Am. Chem. Soc. 117(14):3893-3899 (1995)を参考するとよい。さらに、カルボニルまたはジカルボニル基のユニークな反応性は、他のアミノ酸側鎖の存在下で選択修飾を可能にする。例えば、Cornはh, V. W., et al., J. Am. Chem. Soc. 118:8150-8151 (1996); Geoghegan, K. F. & Stroh, J. G., Bioconjug. Chem. 3:138-146 (1992); Mahal, L. K., et al., Science 276:1125-1128 (1997)を参照するとよい。
【０５２９】
ｐ−アセチル−（＋／−）−フェニルアラニン、およびｍ−アセチル−（＋／−）−フェニルアラニンの合成は、参考することによって本明細書に組み入れられる、Zhang, Z.,et al., Biochemはtry 42: 6735-6746 (2003)内に記載されている。他のカルボニル−またはジカルボニル含有アミノ酸は、同様に調整され得る。
【０５３０】
いくつかの実施形態において、非天然アミノ酸を含むポリペプチドは、反応カルボニルまたはジカルボニル官能基を発生させるために、化学的に修飾される。例えば、抱合反応に有利なアルデヒドの官能性は、隣接したアミノおよびヒドロキシル基を有する官能性から発生させることが可能である。生物学的な活性分子がポリペプチドである場合、例えば、Ｎ−末端セリンまたはトレオニン（化学または酵素消化を通じて暴露される可能性がある、または通常は存在する可能性がある）は、過ヨウ素酸塩を使用した弱い酸化的開裂条件下でアルデヒドの官能性を発生させるために使用され得る。例えば、Gaertner, et. al., Bioconjug. Chem. 3: 262-268 (1992); Geoghegan, K. & Stroh, J., Bioconjug. Chem. 3:138-146 (1992); Gaertner et al., J. Biol. Chem. 269:7224-7230 (1994)を参照するとよい。しかしながら、当分野における公知の方法は、ペプチドまたはプロテインのＮ−末端におけるアミノ酸に限られている。
【０５３１】
さらに、例として、隣接したヒドロキシルおよびアミノ基を含んだ非天然アミノ酸は、「マスキングされた」アルデヒドの官能性としてポリペプチド内へ取り込まれ得る。例えば、５−ヒドロキシリジンはエプシロンアミンと隣接したヒドロキシル基を含む。アルデヒドを発生させるための反応条件は、一般に、他の部位のポリペプチド内での酸化を避けるために、穏やかな条件下で過剰なモル濃度のナトリウム・メタ過ヨウ素酸塩の追加を含む。酸化反応のｐＨは一般に約７．０である。一般的な反応は、ポリペプチドの緩衝液に対して約１．５モルの過剰なナトリウム・メタ過ヨウ素酸塩の追加、これに続く、暗闇での約１０分間のインキュベーションを必要とする。例えば、米国特許公開第６，４２３，６８５号を参照するとよい。
【０５３２】
＜Ｂ．非天然アミノ酸の構造および合成：ジカルボニル基、ジカルボニル類似基、マスキングされたジカルボニル基、および保護されたジカルボニル基＞
求電子反応基を備えたアミノ酸は、他との求核付加反応を通じて、分子を結合するための多様な反応を可能にする。このような求電子反応基は、ジカルボニル基（ジケトン基、ケトルアルデヒド基、ケト酸基、ケトエステル基、およびケトチオエステル基を含む）、ジカルボニル類似基（ジカルボニル基と類似した反応性を有するおよびジカルボニル基と類似した構造を有する）、マスキングされたジカルボニル基（ジカルボニル基に容易に転換され得る）、または保護されたジカルボニル基（脱保護に際しジカルボニル基と類似した反応性を有する）を含む。このようなアミノ酸は、式（ＸＸＸＶＩＩ）の構造を有するアミノ酸を含んでいる。
【０５３３】
【化１１０】
2020143151.tif 000116
【０５３４】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、一端にてジアミン含有部分に結合されたリンカーであり、このリンカーは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”−、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、ｋは１、２、または３、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＮＲ”−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＯＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、および−Ｎ（Ｒ”）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−からなる群（各Ｒ”は独立したＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、
Ｋは、
【０５３５】
【化１１１】
2020143151.tif 000117
【０５３６】
であり、（式中、
Ｔ１は、結合、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルキレン、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルケニレン、または任意の置換ヘテロアルキルであり、
式中、各任意の置換基は、独立して、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンから選択され）、
Ｔ２は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、
Ｔ３は、
【０５３７】
【化１１２】
2020143151.tif 000118
【０５３８】
であり、（式中、各Ｘ１は、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｈ）−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ａｃ）−、および−Ｎ（ＯＭｅ）−からなる群から選択され、、Ｘ２は、−ＯＲ、−ＯＡｃ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）（Ａｃ）、−Ｎ（Ｒ）（ＯＭｅ）、またはＮ３、であり、および各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルであり））、
Ｒは、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり）、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
または、−Ａ−Ｂ−Ｋ−Ｒ基は、少なくとも１つのカルボニル基（ジカルボニル基を含む）、保護されたカルボニル基（保護されたジカルボニル基を含む）、またはマスキングされたカルボニル基（マスキングされたジカルボニル基を含む）、を有する二環性または三環性シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを共同で形成し、
または、−Ｋ−Ｒ基は、少なくとも１つのカルボニル基（ジカルボニル基を含む）、保護されたカルボニル基（保護されたジカルボニル基を含む）、またはマスキングされたカルボニル基（マスキングされたジカルボニル基を含む）、を有する単環性または二環性シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを共同で形成する）。
【０５３９】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の構造を有するジカルボニルアミノ酸の非制限例には、次のものが含まれる。
【０５４０】
【化１１３】
2020143151.tif 000119
【０５４１】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の構造を有する以下のアミノ酸もまた含まれる。
【０５４２】
【化１１４】
2020143151.tif 000120
【０５４３】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５４４】
＜Ｃ．非天然アミノ酸の構造および合成：ケトアルキン基、ケトアルキン類似基、マスキングされたケトアルキン基、保護されたケトアルキン基、アルキン基、およびシクロアルキン基＞
ジカルボニル類似反応性を有する反応基を含むアミノ酸は、求核付加反応を通じて分子の結合を可能にする。このような求電子反応基は、ケトアルキン基、ケトアルキン類似物基（ケトアルキン基と類似した反応性を有するおよびケトアルキン基と類似した構造を有する）、マスキングされたケトアルキン基（ケトアルキン基に容易に転換され得る）、または保護されたケトアルキン基（脱保護に際しケトアルキン基と類似した反応性を有する）を含む。いくつかの実施形態では、末端アルキン、内部アルキンまたはシクロアルキンを有する反応基を含むアミノ酸が、環状付加反応（例えば、１，３−双極性環化付加、アジド−アルキン・ヒュスゲン環化反応、等）を通じて分子の結合を可能にする。このようなアミノ酸としては、式（ＸＸＸＸＸＸＩ−Ａ）または（ＸＸＸＸＸＸＩ−Ｂ）の構造を有するアミノ酸が挙げられる。
【０５４５】
【化１１５】
2020143151.tif 000121
【０５４６】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、一端にてジアミン含有部分に結合されたリンカーであり、このリンカーは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”−、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、ｋは１、２、または３、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＮＲ”−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＯＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、および−Ｎ（Ｒ”）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−からなる群（各Ｒ”は独立したＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、
Ｇは、任意であり、存在する場合は、
【０５４７】
【化１１６】
2020143151.tif 000122
【０５４８】
であり、
Ｔ４は、カルボニル保護基であり、
【０５４９】
【化１１７】
2020143151.tif 000123
【０５５０】
を含むがこれらには限定はされず、各Ｘ１は、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｈ）−、−Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ａｃ）−、および−Ｎ（ＯＭｅ）−からなる群から選択され、Ｘ２は−ＯＲ、−ＯＡｃ、−ＳＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）（Ａｃ）、−Ｎ（Ｒ）（ＯＭｅ）、またはＮ３であり、および各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルであり、
Ｒは、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４または２つのＲ３基は、任意にシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
各Ｒ１９は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、エステル、エーテル、チオエーテル、アミノアルキル、ハロゲン、アルキルエステル、アリールエステル、アミド、アリールアミド、ハロゲン化アルキル、アルキルアミン、アルキルスルフォン酸、アルキルニトロ、チオエステル、スルオニルエステル、ハロスルホニル、ニトリル、アルキルニトリル、およびニトロからなる群から選択され、および、
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１である）。
【０５５１】
＜Ｄ．非天然アミノ酸の構造および合成：ケトアミン基、ケトアミン類似基、マスキングされたケトアミン基、および保護されたケトアミン基＞
ジカルボニル類似反応性を有する反応基を含むアミノ酸は、求核付加反応を通じて分子の結合を可能にする。このような反応基は、ケトアミン基、ケトアミン類似基（ケトアミン基と類似した反応性を有するおよびケトアミン基と類似した構造を有する）、マスキングされたケトアミン基（ケトアミン基に容易に転換され得る）、または保護されたケトアミン基（脱保護に際しケトアミン基と類似した反応性を有する）を含む。このようなアミノ酸は、式（ＸＸＸＸＸＸＩＩ）の構造を有するアミノ酸を含む。
【０５５２】
【化１１８】
2020143151.tif 000124
【０５５３】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、一端がジアミン含有部分に結合されたリンカーであり、このリンカーは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”−、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、ｋは１、２、または３、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−，−ＮＲ”−（アルキレンまたは置換アルキレン）−，−ＣＯＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−，−ＣＳＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−，および−Ｎ（Ｒ”）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−からなる群（各Ｒ”は独立したＨ，アルキル，または置換アルキルである）から選択され、
Ｇは、
【０５５４】
【化１１９】
2020143151.tif 000125
【０５５５】
であり、
Ｔ１は、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルキレン、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルケニレン、または任意の置換ヘテロアルキルであり、
Ｔ４は、カルボニル保護基であり、
【０５５６】
【化１２０】
2020143151.tif 000126
【０５５７】
を含むがこれらには限定はされず、各Ｘ１は、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｈ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ａｃ）−、および−Ｎ（ＯＭｅ）−からなる群から選択され、、Ｘ２は、−ＯＲ、−ＯＡｃ、−ＳＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｎ（Ｒ’）（Ａｃ）、−Ｎ（Ｒ’）（ＯＭｅ）、またはＮ３であり、および各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルであり、
Ｒは、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４または２つのＲ３基は、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを任意に形成する）。
【０５５８】
式（ＸＸＸＸＸＸＩＩ）の構造を有するアミノ酸は、式（ＸＸＸＸＸＸＩＩＩ）、および式（ＸＸＸＸＸＸＩＶ）の構造を有するアミノ酸を含む。
【０５５９】
【化１２１】
2020143151.tif 000127
【０５６０】
（式中、各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’（ｋは１、２、または３）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択される）。
【０５６１】
＜Ｅ．非天然アミノ酸の構造および合成：ジアミン、ジアミン−類似物、マスキングされたジアミン、保護されたアミンおよびアジド＞
求核反応基を有するアミノ酸は、他との求電子付加反応を通じて、分子の結合のための多様な反応を可能にする。このような求核反応基は、ジアミン基（ヒドラジン基、アミジン基、イミン基、１，１−ジアミン基、１，２−ジアミン基、１，３−ジアミン基、および１，４−ジアミン基を含む）、ジアミン類似物基（ジアミン基と類似した反応性を有するおよびジアミン基と類似した構造を有する）、マスキングされたジアミン基（ジアミン基に容易に転換され得る）、または保護されたジアミン基（脱保護に際しジアミン基と類似した反応性を有する）を含む。いくつかの実施形態では、アジドを備えた反応基を含有するアミノ酸は、環状付加反応（例えば、１，３−双極性環化付加、アジド−アルキン・ヒュスゲン環化反応等）を通じて、分子の結合を可能にする。
【０５６２】
別の態様として、カルボニル−置換ドラスタチン誘導体の誘導体化のためのヒドラジン−置換分子の化学合成の方法がある。１つの実施形態では、ヒドラジン−置換分子は、ドラスタチンに結合した誘導体を可能にする。１つの実施形態では、カルボニル−含有非天然アミノ酸ポリペプチド（単なる例であるが、ケトン−、またはアルデヒド−含有非天然アミノ酸ポリペプチドが挙げられる）の誘導体化に適した、ヒドラジン−置換分子の調整の方法がある。さらなる、または追加の実施形態では、非天然アミノ酸は、タンパク質のインビボでの翻訳の間に部位特異的に組み込まれる。さらなる、または追加の実施形態では、ヒドラジン−置換ドラスタチン誘導体は、部位特異的様式によって窒素−含有ヘテロ環−誘導体化ポリペプチドを含むヘテロ環−誘導体化ポリペプチドを形成するために、各カルボニル基の求核攻撃を通じて、カルボニル−含有非天然アミノ酸の部位特異的誘導体化を可能にする。さらなる、または追加の実施形態では、ヒドラジン−置換ドラスタチン誘導体の調整の方法により、幅広い多様な部位特異的誘導体化ポリペプチドを入手できる。さらなる、または追加の実施形態では、ヒドラジン−官能化ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）結合ドラスタチン誘導体の合成の方法がある。
【０５６３】
このようなアミノ酸は、式（ＸＸＸＶＩＩ−Ａ）または（ＸＸＸＶＩＩ−Ｂ）の構造を有するアミノ酸を含む。
【０５６４】
【化１２２】
2020143151.tif 000128
【０５６５】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、一端がジアミン含有部分に結合されたリンカーであり、このリンカーは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”−、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、ｋは１、２、または３、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＮＲ”−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＯＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、および−Ｎ（Ｒ”）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−からなる群（各Ｒ”は独立したＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、
Ｋは、
【０５６６】
【化１２３】
2020143151.tif 000129
【０５６７】
であり、（式中、
Ｒ８およびＲ９は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、またはアミン保護基から選択され、
Ｔ１は、結合、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルキレン、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルケニレン、または任意の置換ヘテロアルキルであり、
Ｔ２は、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルキレン、任意の置換Ｃ１−Ｃ４アルケニレン、任意の置換ヘテロアルキル、任意の置換アリール、または任意の置換ヘテロアリールであり、
式中、各任意の置換基は、独立して、低級アルキル、置換低級アルキル、低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アルキニル、低級ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、低級ヘテロシクロアルキル、置換低級ヘテロシクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルカリール、置換アルカリール、アラルキル、または置換アラルキルから選択され）、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４または２つのＲ３基は、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを任意に形成し、
または、−Ａ−Ｂ−Ｋ−Ｒ基は、少なくとも１つのジアミン基、保護されたジアミン基またはマスキングされたジアミン基、を含む二環性または三環性シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを共同で形成し、
または、−Ｂ−Ｋ−Ｒ基は、少なくとも１つのジアミン基、保護されたジアミン基またはマスキングされたジアミン基、を含む二環性または三環性シクロアルキルまたはシクロアリールまたはヘテロシクロアルキルを共同で形成し、
または、−Ｋ−Ｒ基は、少なくとも１つのジアミン基、保護されたジアミン基またはマスキングされたジアミン基、を含む単環性または二環性シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを共同で形成し、
式中、−Ａ−Ｂ−Ｋ−Ｒ上の少なくとも１つのアミン基は、任意の保護されたアミンである）。
【０５６８】
１つの態様において、以下の構造１または２を有する化合物がある。
【０５６９】
【化１２４】
2020143151.tif 000130
【０５７０】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、一端がジアミン含有部分に結合されたリンカーであり、このリンカーは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”−、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、ｋは１、２、または３、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＮＲ”−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＯＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ”）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、および−Ｎ（Ｒ”）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−からなる群（各Ｒ”は独立したＨ、アルキル、または置換アルキルである）から選択され、
Ｔ１は、結合またはＣＨ２であり、およびＴ２はＣＨであり、
式中、各任意の置換基は、独立して、低級アルキル、置換低級アルキル、低級シクロアルキル、置換低級シクロアルキル、低級アルケニル、置換低級アルケニル、アルキニル、低級ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、低級ヘテロシクロアルキル、置換低級ヘテロシクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルカリール、置換アルカリール、アラルキル、または置換アラルキルから選択され、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４または２つのＲ３基は、任意にシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
または、−Ａ−Ｂ−ジアミン含有部分は、少なくとも１つのジアミン基、保護されたジアミン基またはマスキングされたジアミン基、を含む二環性シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを共同で形成し、
または、−Ｂ−ジアミン含有部分は、少なくとも１つのジアミン基、保護されたジアミン基またはマスキングされたジアミン基、を含む二環性または三環性シクロアルキルまたはシクロアリールまたはヘテロシクロアルキルを共同で形成し、
ここで、−Ａ−Ｂ−ジアミン含有部分上の少なくとも１つのアミン基が任意に保護されたアミンである）。
または活性代謝物、塩または薬学的に許容可能なプロドラッグ、またはこれらの溶媒物である。
【０５７１】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の構造を有するアミノ酸の以下の無制限例には、
【０５７２】
【化１２５】
2020143151.tif 000131
【０５７３】
が含まれる。
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０５７４】
特定の実施形態において、式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも１か月間、水溶性の溶液内で安定している。特定の実施形態では、式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも２週間安定している。特定の実施形態では、式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも５日間安定している。特定の実施形態で、そのような弱酸性条件は、ｐＨ約２から約８である。
【０５７５】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、Ｃ（Ｒ’）＝ＮＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−、Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、ＣＯＮ（Ｒ’）（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）（アルキレンまたは置換アルキレン）−、または−Ｓ（Ｏ）２（アルキレンまたは置換アルキレン）−である。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｂは、−Ｏ（ＣＨ２）−、−ＣＨ＝Ｎ−、ＣＨ＝ＮＮＨ−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＯ−、Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）−、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）−、−ＳＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ２−である。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒは、Ｃ１−６アルキルまたはシクロアルキルである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒは−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、またはシクロプロピルである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、Ｎ−アセチル、テトラフルオロアセチル（ＴＦＡ）、またはベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ１は、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ１は、抗体、抗体断片またはモノクローナル抗体である。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ２は、ＯＨ、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、またはＯ−ｔ−ブチルである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ２は、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである。式（ＸＸＸＶＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｒ２は、抗体、抗体断片またはモノクローナル抗体である。
【０５７６】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の構造を有するアミノ酸の無制限例にはまた、
【０５７７】
【化１２６】
2020143151.tif 000132
【０５７８】
が含まれる。
【０５７９】
式（ＸＸＸＶＩＩ）の構造を有するアミノ酸の以下の無制限例にはまた、
【０５８０】
【化１２７】
2020143151.tif 000133
【０５８１】
が含まれる。
【０５８２】
＜Ｆ．非天然アミノ酸の構造および合成：芳香族アミン＞
単なる例示あるが、芳香族アミン基（第２級および第３級アミン基を含む）、マスキングされた芳香族アミン基（芳香族アミン基に容易に転換され得る）、または保護された芳香族アミン基（脱保護の際、芳香族アミン基と類似した反応性を有する）等の求核反応基を備えた非天然アミノ酸は、多様な反応（アルデヒド含有ドラスタチンリンカー誘導体との還元アルキル化反応が挙げられるがそれには限定されない）を通して、分子を結合する多様な反応を可能にする。このような芳香族アミン含有非天然アミノ酸は、式（ＸＸＸＸＸＸＶ）の構造を有するアミノ酸を含む。
【０５８３】
【化１２８】
2020143151.tif 000134
【０５８４】
（式中、
【０５８５】
【化１２９】
2020143151.tif 000135
【０５８６】
は、単環性アリール環、二環性アリール環、多環式アリール環、単環性ヘテロアリール環、二環性ヘテロアリール環、および多環式ヘテロアリール環から成る群から選択され、
Ａは、独立して、ＣＲａ、またはＮであり、
Ｂは、独立して、ＣＲａ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、−ＮＯ２、−ＣＮ、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’からなる群から選択され、ここでｋは、１、２、または３、およびｎは、０、１、２、３、４、５、または６であり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、および、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４または２つのＲ３基は、任意にシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを形成し、
Ｍは、Ｈまたは−ＣＨ２Ｒ５であり、またはＭ−Ｎ−Ｃ（Ｒ５）部分は４から７員環化構造を形成してもよく、
Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルキルアルコキシ、置換アルキルアルコキシ、ポリアルキレンオキシド、置換ポリアルキレンオキシド、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、アルカリール、置換アルカリール、アラルキル、置換アラルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（Ｒ”）２、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−Ｎ（Ｒ”）２、−（アルケニレンまたは置換アルケニレン）−Ｎ（Ｒ”）２、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−（アリールまたは置換アリール）、−（アルケニレンまたは置換アルケニレン）−（アリールまたは置換アリール）、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−ＯＮ（Ｒ”）２、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−Ｃ（Ｏ）ＳＲ”、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−Ｓ−Ｓ−（アリールまたは置換アリール）、各Ｒ”は独立した水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、アルカリール、置換アルカリール、アラルキル、置換アラルキル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、
または、２つのＲ５基は、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを任意に形成し、または、Ｒ５および任意のＲａは、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを任意に形成し、および、
各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）。
【０５８７】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に還元アルキル化されてもよい。
【０５８８】
以下の構造、
【０５８９】
【化１３０】
2020143151.tif 000136
【０５９０】
（本明細書での全ての実施例に記載されているもの）は、「Ａ」、「Ｂ」、「ＮＨ−Ｍ」および「Ｒａ」の相対的な配向を示しておらず、正しくは、本明細書の実施例として示されているように、本構造のこれらの４つの構成は任意の化学的に確実な方法（本構造の他の特徴に加えて）にて配向されている可能性がある。
【０５９１】
式（Ａ）の構造を有する芳香族アミン部分を含有する非天然アミノ酸は、以下の構造の非天然アミノ酸を含む。
【０５９２】
【化１３１】
2020143151.tif 000137
【０５９３】
（式中、各Ａ’は、独立して、ＣＲａ、Ｎ、または、
【０５９４】
【化１３２】
2020143151.tif 000138
【０５９５】
から選択され、および、Ａ’は２つまでが、
【０５９６】
【化１３３】
2020143151.tif 000139
【０５９７】
であり、残りのＡ’は、ＣＲａ、またはＮから選択されてもよい）。
【０５９８】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に還元アルキル化されてもよい。
【０５９９】
式（ＸＸＸＸＸＸＶ）の構造を有する芳香族アミン部分を含む非天然アミノ酸の非制限例は、式（ＸＸＸＸＸＸＶＩ）、および式（ＸＸＸＸＸＸＶＩＩ）の構造を有する非天然アミノ酸を含む。
【０６００】
【化１３４】
2020143151.tif 000140
【０６０１】
（式中、Ｇはアミン保護基であり、
【０６０２】
【化１３５】
2020143151.tif 000141
【０６０３】
の構造を有するものが挙げられるがこれらに限定されない）。
【０６０４】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に還元アルキル化されてもよい。
【０６０５】
芳香族アミン部分を含む非天然アミノ酸は、以下の構造を有する。
【０６０６】
【化１３６】
2020143151.tif 000142
【０６０７】
（式中、各Ｒａは、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、−ＮＯ２、−ＣＮ、置換アルキル、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ｋＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＯＲ’、および−Ｓ（Ｏ）ｋＲ’（ｋは１、２、または３である）から成る群から独立して選択され、
Ｍは、Ｈまたは−ＣＨ２Ｒ５であり、または、Ｍ−Ｎ−Ｃ（Ｒ５）部分は、４から７員環化構造を形成してもよく、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルキルアルコキシ、置換アルキルアルコキシ、ポリアルキレンオキシド、置換ポリアルキレンオキシド、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、アルカリール、置換アルカリール、アラルキル、置換アラルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ”、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（Ｒ”）２、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−Ｎ（Ｒ”）２、−（アルケニレンまたは置換アルケニレン）−Ｎ（Ｒ”）２、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−（アリールまたは置換アリール）、−（アルケニレンｏｒ置換アルケニレン）−（アリールまたは置換アリール）、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−ＯＮ（Ｒ”）２、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−Ｃ（Ｏ）ＳＲ”、−（アルキレンまたは置換アルキレン）−Ｓ−Ｓ−（アリールまたは置換アリール）、各Ｒ”は独立した水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環、置換ヘテロ環、アルカリール、置換アルカリール、アラルキル、置換アラルキル、または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、
または、Ｒ５および任意のＲａは、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを任意に形成し、および、
各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）。このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれてもよい。
【０６０８】
式（ＸＸＸＸＸＸＶ）のこのような非天然アミノ酸は、非天然アミノ酸の芳香族部分における保護されたまたはマスキングされたアミン部分の還元によって形成されてもよい。このような保護されたまたはマスキングされたアミン部分は、イミン、ヒドラジン、ニトロ、またはアジド置換基を含むものが挙げられるが、これらに限定されない。このような保護されたまたはマスキングされたアミン部分を還元するために使用される還元剤は、ＴＣＥＰ、Ｎａ２Ｓ、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４、ＬｉＡｌＨ４、ＮａＢＨ４またはＮａＢＣＮＨ３が挙げられるがこれらに限定されない。
【０６０９】
（Ｖ．非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体）
本明細書において記載されている別の態様は、非天然アミノ酸内にこのようなドラスタチンリンカー誘導体を少なくとも１つ組み込むための方法、計画および技術である。また、本態様において、少なくとも１つのこのような非天然アミノ酸を含んでいるこのようなドラスタチンリンカー誘導体の生産、精製、特徴付けおよび使用のための方法が含まれている。また本態様において、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むドラスタチンリンカー誘導体の少なくとも１部分を製造するために使用され得るオリゴヌクレオチド（ＤＮＡとＲＮＡを含む）の生産、精製、特徴付けおよび使用のための構成および方法が含まれている。また、本態様において、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むドラスタチンリンカー誘導体の少なくとも１部分を製造するために使用され得るオリゴヌクレオチドを発現し得る細胞の生産、精製、特徴付けおよび使用のための構成および方法が含まれている。
【０６１０】
そのため、カルボニル、ジカルボニル、アルキン、シクロアルキン、アジド、オキシム、または、ヒドロキシルアミン基を有する、少なくとも１つの非天然アミノ酸または修飾された非天然アミノ酸を有するドラスタチンリンカー誘導体が、本明細書に、提供され、かつ、記載される。特定の実施形態において、カルボニル、ジカルボニル、アルキン、シクロアルキン、アジド、オキシム、または、ヒドロキシルアミン基を有する、少なくとも１つの非天然アミノ酸または修飾された非天然アミノ酸を有するドラスタチンリンカー誘導体は、ポリペプチドのいくつかの位置にて、少なくとも１つの翻訳後修飾がなされている。いくつかの実施形態において、翻訳時修飾または翻訳後修飾は、細胞機構（例えば、グリコシル化、アセチル化、アシル化、脂質−修飾、パルミトイル化、パルミチン酸付加、リン酸エステル化、糖脂質−結合修飾、および類似物）を通して起こり、多くの場合、このような細胞機構ベースの翻訳時修飾または翻訳後修飾は、ポリペプチドにおける天然アミノ酸部位で起こるが、しかし特定の実施例においては、細胞機構ベースの翻訳時修飾または翻訳後修飾は、ポリペプチドにおける非天然アミノ酸部位で起こる。
【０６１１】
他の実施形態において、翻訳後修飾は細胞機構を利用しないが、該官能性は、代わりに、第２反応基を有する分子（ポリマー、水溶性ポリマー、ポリエチレングリコールの誘導体、第二プロテインまたはポリペプチドまたはポリペプチド類似物、抗体または抗体断片、およびこれらの任意の組み合わせ）を、本明細書において記載されている化学方法論、または特定の反応基のための他の好適なものを利用して、第１反応基を有する少なくとも１つの非天然アミノ酸（ケトン、アルデヒド、アセタール、ヘミアセタール、アルキン、シクロアルキン、アジド、オキシム、またはヒドロキシルアミン官能基を含む非天然アミノ酸が挙げられるが、これらに限定はされない）に結合させることによって供される。特定の実施形態では、翻訳時修飾または翻訳後修飾は、真核細胞または非真核細胞のインビボで行われる。特定の実施形態では、翻訳後修飾は、細胞機構を利用せずにインビトロで行われる。また、本態様に含まれるのは、少なくとも１つのこのような翻訳時修飾または翻訳後修飾された非天然アミノ酸を含むこのようなドラスタチンリンカー誘導体を、生産、精製、特徴付けおよび使用するための方法である。
【０６１２】
本明細書において記載されている方法、組成、計画および技術の範囲内には、任意の前述の翻訳後修飾を引き起こすためにポリペプチドの一部のドラスタチンリンカー誘導体（カルボニルまたはジカルボニル基、オキシム基、アルキン、シクロアルキン、アジド、ヒドロキシルアミン基、またはマスキングされたまたは保護された上記の形態を含む）と反応することが可能な試薬も含まれる。特定の実施形態では、結果として生じる翻訳後修飾ドラスタチンリンカー誘導体は、少なくとも１つのオキシム基を有している可能性があり、結果として生じる修飾オキシム−含有ドラスタチンリンカー誘導体は、後の修飾反応を経てもよい。本態様には、このようなドラスタチンリンカー誘導体の任意のこのような翻訳後修飾を可能にするこのような試薬を、生産、精製、特徴付けおよび利用するための方法も含まれる。
【０６１３】
特定の実施形態では、上記ポリペプチドまたは非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体は、１つの宿主細胞によってインビボで行われた少なくとも１つの翻訳時修飾または翻訳後修飾を含み、この翻訳後修飾は、通常、別タイプの宿主細胞によっては行われない。特定の実施形態では、ポリペプチドは、真核細胞によってインビボで行われる少なくとも１つの同時翻訳修飾または翻訳後修飾を含み、この翻訳時修飾または翻訳後修飾は、通常、非真核細胞によっては行われない。このような翻訳時修飾または翻訳後修飾の例は、グリコシル化、アセチル化、アシル化、脂質−修飾、パルミトイル化、パルミチン酸付加、リン酸エステル化、糖脂質−結合修飾、およびその類似物が挙げられるが、これらに限定されない。１つの実施形態として、翻訳時修飾または翻訳後修飾は、ＧｌｃＮＡｃ−アスパラギン結合（オリゴ糖は（ＧｌｃＮＡｃ−Ｍａｎ）２−Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ、および類似物を有するが、これらに限定されない）によるアスパラギンへのオリゴ糖の結合を含む。別の実施形態では、翻訳時修飾または翻訳後修飾は、ＧａｌＮＡｃ−セリン、ＧａｌＮＡｃ−トレオニン、ＧｌｃＮＡｃ−セリン、またはＧｌｃＮＡｃ−トレオニン結合による、セリンまたはトレオニンへのオリゴ糖（Ｇａｌ−ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ、等を含むものが挙げられるが、これらに限定されない）の結合を含む。特定の実施形態では、プロテインまたはポリペプチドは、分泌または局在配列，エピトープタグ、ＦＬＡＧタグ、ポリヒスチジンタグ、ＧＳＴ融合、および／またはその類似物を含み得る。また本態様に含まれるのは、少なくとも１つのこのような翻訳時修飾または翻訳後修飾を含むこのようなポリペプチドを生産、精製、特徴付けおよび使用する方法である。他の実施形態では、グリコシル化された非天然アミノ酸ポリペプチドは、非グリコシル化された形態で製造される。このようなグリコシル化された非天然アミノ酸の非グリコシル化された形態は、単離されたまたは実質上精製されたまたは精製の、グリコシル化された非天然アミノ酸ポリペプチドからオリゴ糖基の化学的なまたは酵素的な除去を含む方法によって製造されてもよい。すなわち、非天然アミノ酸ポリペプチドをグリコシル化することのない宿主（このような宿主は、このようなポリペプチドをグリコシル化しないように作り出されたまたは変異した原核生物または真核生物を含む）内での非天然アミノ酸の製造、上記の非天然アミノ酸ポリペプチドが上記のポリペプチドを通常グリコシル化する真核生物によって製造される細胞培地への、グリコシル化阻害物質の導入、またはこのような方法の任意の組み合わせ、によって製造されてもよい。また本明細書において記載されているのは、通常グリコシル化された非天然アミノ酸ポリペプチド（通常グリコシル化されたとは、天然ポリペプチドがグリコシル化された状態下で製造される際、グリコシル化されるであろうポリペプチドを意味する）のこのような非グリコシル化された形態である。もちろん、このような通常グリコシル化された非天然アミノ酸ポリペプチド（または実際に本明細書において記載されている任意のポリペプチド）の非グリコシル化された形態は、非精製形態、実質上精製された形態，または単離した形態であってもよい。
【０６１４】
特定の実施形態において、非天然アミノ酸ポリペプチドは、促進剤の存在下でなされる少なくとも１つの翻訳後修飾を含み、この翻訳後修飾は、化学量論的な、化学量論的に類似な、またはほぼ化学量論的なものである。他の実施形態では、ポリペプチドは促進剤の存在下で式（ＸＩＸ）の試薬と接触させられる。他の実施形態では、促進剤は
【０６１５】
【化１３７】
2020143151.tif 000143
【０６１６】
からなる群から選択される。
【０６１７】
＜Ａ．非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体の化学合成：オキシム含有結合ドラスタチン誘導体＞
オキシム基を備えた非天然アミノ酸ドラスタチン結合誘導体は、特定の反応性カルボニル−またはジカルボニル−基（ケトン、アルデヒド、または類似した反応性を備えた他の基を含むものが挙げられるがこれらに限定されない）を含む多様な試薬を用いた反応を可能にし、新しいオキシム基を有する新しい非天然アミノ酸を形成する。このようなオキシム交換反応は、ドラスタチン結合誘導体のさらなる機能化を可能にする。さらに、オキシム基を備えた原型ドラスタチン結合誘導体は、ポリペプチド内にアミノ酸を組み込むために必要な条件下でオキシム結合が安定している限り（例えば、インビボ、インビロト、および本明細書において記載されている化学的合成方法）、それ自体が有用となる可能性がある。
【０６１８】
そのため、本明細書において記載されている特定の実施形態には、オキシム基、オキシム−類似物基（オキシム基と類似した反応性を有しおよびオキシム基と構造的に類似している）、マスキングされたオキシム基（オキシム基に容易に転換され得る）、または保護されたオキシム基（脱保護に際し、オキシム基と類似した反応性を有する）を含む側鎖を備えた非天然アミノ酸ドラスタチン結合誘導体が記載されている。
【０６１９】
このような非天然アミノ酸ドラスタチン結合誘導体は、式（ＶＩＩＩ）または（ＩＸ）の構造を有するドラスタチン結合誘導体を含む。
【０６２０】
【化１３８】
2020143151.tif 000144
【０６２１】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｒ２はＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４または２つのＲ３基は、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを任意に形成し、
Ｚは、以下の構造を有しており、
【０６２２】
【化１３９】
2020143151.tif 000145
【０６２３】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはチアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨ
Ｒ６は、ＯＨまたはＨであり、
Ａｒは、フェニルまたはピリジンであり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは水素であり、
Ｌは、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、および−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−からなる群から選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有しており、
【０６２４】
【化１４０】
2020143151.tif 000146
【０６２５】
Ｕは、以下の構造を有しており、
【０６２６】
【化１４１】
2020143151.tif 000147
【０６２７】
各ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’およびｎ’’’’は、独立して、１より大きいまたは１と等しい整数である）、
または、活性代謝物、または薬学的に許容可能なプロドラッグ、またはこれらの溶媒物である。
【０６２８】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５はチアゾールである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はＨである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ａｒはフェニルである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７はメチルである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、ｎは０から２０の整数である。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、ｎは０から１０の整数である。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、ｎは０から５の整数である。
【０６２９】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５はチアゾールである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は水素である。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはへキシルである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２、アルキレンは−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０６３０】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０６３１】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はＨである。
【０６３２】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ａｒはフェニルである。
【０６３３】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル・イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはへキシルである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７は水素である。
【０６３４】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、各Ｌは、独立して、切断可能なリンカーまたは切断不可能なリンカーである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、各Ｌは独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０６３５】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、各アルキレン、アルキレン’、アルキレン’’、およびアルキレン’’’は、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０６３６】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、各ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０６３７】
式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ１はポリペプチドである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ２はポリペプチドである。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、ポリペプチドは抗体である。式（ＶＩＩＩ）および（ＩＸ）の化合物の特定の実施形態において、抗体はハーセプチンである。
【０６３８】
このような非天然アミノ酸ドラスタチン結合誘導体は、式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）の構造を有するドラスタチン結合誘導体が挙げられる。
【０６３９】
【化１４２】
2020143151.tif 000148
【０６４０】
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリルエン、置換アルカリルエン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ｋは１、２、または３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群（各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルである）から選択されるリンカーであり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、あるいはＲ３およびＲ４または２つのＲ３基は、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルを任意に形成し、
Ｚは、以下の構造を有しており、
【０６４１】
【化１４３】
2020143151.tif 000149
【０６４２】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはチアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨまたはＨであり、
Ａｒは、フェニルまたはピリジンであり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは水素であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、結合、−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群から独立して選択される各リンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有しており、
【０６４３】
【化１４４】
2020143151.tif 000150
【０６４４】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有しており、
【０６４５】
【化１４５】
2020143151.tif 000151
【０６４６】
各ｎおよびｎ’は、独立して、１より大きいまたは１と等しい整数である）。
【０６４７】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５はチアゾールまたはカルボン酸である。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はＨである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ａｒはフェニルである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７はメチルである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、ｎおよびｎ’は、０から２０の整数である。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、ｎおよびｎ’は、１から１０の整数である。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、ｎおよびｎ’は、０から５の整数である。
【０６４８】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５はチアゾールである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は水素である。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはへキシルである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２、アルキレンは−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０６４９】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０６５０】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はＨである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態において、Ｒ６はヒドロオキシである。
【０６５１】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ａｒはフェニルである。
【０６５２】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）またの化合物の特定の実施形態において、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル・イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはへキシルである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７は水素である。
【０６５３】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、各Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して、切断可能なリンカーまたは切断不可能なリンカーである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、各Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０６５４】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、各アルキレン、アルキレン’、アルキレン’’、およびアルキレン’’’は、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０６５５】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、各ｎおよびｎ’は、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０６５６】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ１はポリペプチドである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ２はポリペプチドである。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、ポリペプチドは抗体である。式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、抗体はハーセプチンである。
【０６５７】
特定の実施形態では、式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも１か月間、水溶性の溶液内で安定している。特定の実施形態では、式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも２週間安定している。特定の実施形態では、式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）または（ＸＩＩＩ）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも５日間安定している。特定の実施形態で、そのような弱酸性条件は、ｐＨ２から８である。そのような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に翻訳後修飾されてもよい。
【０６５８】
オキシム系の非天然アミノ酸は、本明細書において記載されている方法または従来技術内ですでに述べられている方法によって合成されてもよい。そのような方法として、（ａ）、ヒドロキシルアミン−含有非天然アミノ酸と、カルボニル−またはジカルボニル−含有試薬との反応、（ｂ）カルボニル−またはジカルボニル−含有非天然アミノ酸と、ヒドロキシルアミン含有試薬との反応、または（ｃ）オキシム−含有非天然アミノ酸と、特定のカルボニル−またはジカルボニル−含有試薬との反応、が含まれる。
【０６５９】
＜Ｂ．非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体の化学構造および合成：アルキル化芳香族アミン結合ドラスタチン誘導体＞
１つの態様として、芳香族アミン基の反応性に基づいた、非天然アミノ酸の化学的誘導体化のためのドラスタチンリンカー誘導体がある。さらなる、または、追加の実施形態では、少なくとも１つの前述の非天然アミノ酸がドラスタチンリンカー誘導体に組み込まれ、そして、このような実施形態が非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体である。さらなる、または、追加の実施形態では、ドラスタチンリンカー誘導体は、酸誘導体化非天然アミノとのその反応がアミン結合を発生させるよう、側鎖において官能性を有するようにされている。さらなる、または、追加の実施形態では、芳香族アミン側鎖を有するドラスタチンリンカー誘導体から、ドラスタチンリンカー誘導体は選択される。さらなる、または、追加の実施形態では、ドラスタチンリンカー誘導体は、マスキングされた芳香族アミン基を含むマスキングされた側鎖を有する。さらなる、または、追加の実施形態では、非天然アミノ酸は、芳香族アミン側鎖を有するアミノ酸から選択される。さらなる、または、追加の実施形態では、非天然アミノ酸は、マスキングされた芳香族アミン基を含むマスキングされた側鎖を有する。
【０６６０】
別の態様では、アミン結合に基づいた誘導体化非天然アミノ酸ポリペプチドの製造のための、例えば、アルデヒドおよびケトン等の、カルボニル−置換ドラスタチンリンカー誘導体がある。さらなる実施形態では、誘導体化ドラスタチンリンカーと芳香族アミン−含有非天然アミノ酸ポリペプチドとの間のアミン結合の形成を通して、芳香族アミン−含有非天然アミノ酸ポリペプチドを誘導体化するために使用される、アルデヒド−置換ドラスタチンリンカー誘導体がある。
【０６６１】
さらなる、または、追加の実施形態では、非天然アミノ酸は、アリールアミンまたはヘテロアリールアミンから選択される芳香族アミンの芳香族アミン側鎖を有する。さらなる、または、追加の実施形態では、非天然アミノ酸は、天然アミノ酸に構造上類似しているが、芳香族アミン基を含んでいる。別の、または、さらなる実施形態では、非天然アミノ酸は、フェニルアラニンまたはチロシン（芳香族アミノ酸）に類似している。１つの実施形態では、非天然アミノ酸は、天然アミノ酸のものとは別個の特性を有している。１つの実施形態では、このような別個の特性は側鎖の化学反応性であり、さらなる実施形態では、この別個の化学反応性により、同じポリペプチド内の天然アミノ酸部分の側鎖が反応経ないにもかかわらず、非天然アミノ酸の側鎖が、一部であっても反応を経ることが可能になる。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、該非天然アミノ酸と直交性の化学的性質を有する。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、求電子剤−含有部分を有しており、さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖上の求核子剤−含有部分は、アミン−結合誘導体化ドラスタチンを発生させるための反応を経ることが可能である。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は求電子剤−含有部分を有しており、さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖上の求電子剤−含有部分は、アミン−結合誘導体化ドラスタチンを発生させるために求核攻撃を受け得る。本段落における任意の前述の実施形態では、非天然アミノ酸は、別個の分子として存在してもよいし、または任意の長さのポリペプチドに組み込まれてもよい。後者の場合は、該ポリペプチドは天然または非天然アミノ酸をさらに組み込んでもよい。
【０６６２】
本明細書において記載されている、還元アルキル化反応または還元アミノ化反応を利用した非天然アミノ酸の修飾は、以下の任意または全ての利点を有している。第１に、芳香族アミンは、アルデヒドおよびケトンを含むカルボニル−含有化合物によって、ｐＨの範囲が約４から約１０（および特定の実施形態内ではｐＨの範囲が約４から約７）にて、還元的にアルキル化され、第２級および第３級アミン結合を含む置換アミンを発生させるの。第２に、これらの反応条件下において、化学反応は、天然アミノ酸の側鎖が非反応的であるように、非天然アミノ酸に対して選択的である。このことは、芳香族アミン部分または保護されたアルデヒド部分を含有する非天然アミノ酸（例えば、組み換えプロテインを含む）を組み込んだポリペプチドの、部位特異的な誘導体化を可能にする。このような誘導体化ポリペプチドおよびプロテインは、それによって規定の均質な生成物として調整され得る。第３に、ポリペプチド内に組み込まれたアミノ酸上の芳香族アミン部分の、アルデヒド−含有試薬を用いた反応をもたらすのに必要な穏やかな条件は、一般に、ポリペプチドの第３構造を不可逆的に破壊することはない（もちろん、このような三次構造を破壊するのが目的の反応の場合を除く）。同じように、ポリペプチド内に組み込まれ脱保護されたアミノ酸上のアルデヒド部分の、芳香族アミン−含有試薬を用いた反応をもたらすのに必要な穏やかな条件は、一般に、ポリペプチドの第３構造を不可逆的に破壊することはない（もちろん、このような三次構造を破壊するのが目的の反応の場合を除く）。第４に、反応は、室温で迅速に起こり、高温においてさもなければ不安定となってしまう多種のポリペプチドまたは試薬の使用を可能にする。第５に、反応は水溶液条件において容易に起こり、非水溶液条件下では不適合（任意の範囲において）のポリペプチドまたは試薬を使用することもできる。第６に、反応は、試薬に対するポリペプチドまたはアミノ酸の比率が、化学量論的である場合、化学量論的に類似している場合、またはほぼ−化学量論的である場合でさえも、容易に起こり、従って有益な量の反応生成物を得るために、超過の試薬またはポリペプチドを加える必要はない。第７に、結果として生じるアミンは、反応物のアミンおよびカルボニル部分のデザインによって、位置選択的および／または位置特位的に製造され得る。最後に、アルデヒド−含有試薬を用いた芳香族アミンの還元アルキル化、および芳香族アミン含有試薬を用いたアルデヒドの還元アミノ化は、アミン（第２および第３アミンを含む）の生物学的状態下で安定した結合を生じる。
【０６６３】
単なる例示であるが、芳香族アミン基（第２級および第３級アミン基を含む）、マスキングされた芳香族アミン基（芳香族アミン基に容易に転換され得る）、または保護された芳香族アミン基（脱保護の際、芳香族アミン基に類似した反応性を有する）等の求核反応基を備えた非天然アミノ酸は、多様な反応（アルデヒド含有ドラスタチン結合誘導体を備えた還元アルキル化反応を有するものが挙げられるが、これらに限定されない）を通して、分子を結合するための多様な反応を可能にする。このようなアルキル化非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体は、式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の構造を有するアミノ酸を含む。
【０６６４】
【化１４６】
2020143151.tif 000152
【０６６５】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有しており、
【０６６６】
【化１４７】
2020143151.tif 000153
【０６６７】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、またはチアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨまたはＨであり、
Ａｒは、フェニルまたはピリジンであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは水素であり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、およびＪ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−、−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群から独立して選択される各リンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有しており、
【０６６８】
【化１４８】
2020143151.tif 000154
【０６６９】
Ｕは、
【０６７０】
【化１４９】
2020143151.tif 000155
【０６７１】
の構造を有しており、
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有しており、
【０６７２】
【化１５０】
2020143151.tif 000156
【０６７３】
各ｎおよびｎ’は、独立して、１より大きいまたは１と等い整数であり、および、
各Ｒ１６は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ＮＯ２、ＣＮ、および置換アルキルからなる群から選択される）。
【０６７４】
このような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、多糖類あるいはポリヌクレオチドに組み込まれ、さらに、任意に還元アルキル化されてもよい。
【０６７５】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５はチアゾールまたはカルボン酸である。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の特定の化合物の実施形態において、Ｒ６はＨである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ａｒはフェニルである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７はメチルである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、ｎは０から２０の整数である。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、ｎは０から１０の整数である。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）または（ＸＸＩＶ）の化合物の特定の実施形態において、ｎは０から５の整数である。
【０６７６】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５はチアゾールまたはカルボン酸である。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は水素である。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはへキシルである。式（（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２、アルキレンは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０６７７】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０６７８】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はＨである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はヒドロオキシである。
【０６７９】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ａｒはフェニルである。
【０６８０】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル・イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、またはへキシルである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ７は水素である
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、各Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して、切断可能なリンカーまたは切断不可能なリンカーである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、各Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０６８１】
式式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、各アルキレン、アルキレン’、アルキレン’’、およびアルキレン’’’は、独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＸＩＸ）、（ＸＸ）、（ＸＸＩ）、（ＸＸＩＩ）、（ＸＸＩＩＩ）または（ＸＸＩＶ）の化合物の特定の実施形態において、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０６８２】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、各ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００である。
【０６８３】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ１はポリペプチドである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、Ｒ２はポリペプチドである。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、ポリペプチドは抗体である。式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物の特定の実施形態において、抗体はハ−セプチンである。
【０６８４】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の化合物は、例としてケトン、エステル、チオエステル、およびアルデヒド等のカルボニル含有試薬を用いた、芳香族アミン化合物の還元アルキル化によって形成される。
【０６８５】
いくつかの実施形態において、ポリペプチドに含まれた非天然アミノ酸のマスキングされたアミン部分は、非天然アミノ酸ポリペプチド内に組み込まれた有芳香族アミン部分含有非天然アミノ酸を供するために、初めに還元される。このような芳香族アミン部分は、式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）の非天然アミノ酸含有ポリペプチドを供するために、上記に記載されたカルボニル−含有試薬を用いて、還元アルキル化される。このような反応はまた、合成ポリマー、多糖類、またはポリヌクレオチド内に組み込まれた非天然アミノ酸に適用され得る。加えて、このような反応は、組み込みの無い非天然アミノ酸に応用されてもよい。マスキングされたアミン部分を還元するために使用される還元剤の例として、ＴＣＥＰ、Ｎａ２Ｓ、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４、ＬｉＡｌＨ４、Ｂ２Ｈ６、およびＮａＢＨ４が挙げられるが、これらに限定されない。単なる例示であるが、還元アルキル化が、約４から約７のｐＨを有する水溶性緩衝液内で、および単なる一例であるシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＣＮＨ３）等の弱い還元剤を用いて、起こり得る。さらに、還元アルキル化のために使用される可能性のある他の還元剤には、ＴＣＥＰ、Ｎａ２Ｓ、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４、ＬｉＡｌＨ４、Ｂ２Ｈ６、およびＮａＢＨ４を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０６８６】
上記に記載されたカルボニル−含有試薬を用いた、非天然アミノ酸内に含まれる第２級芳香族アミン部分を還元アルキル化が、式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）のアミノ酸を含んでいる非天然アミノ酸ポリペプチドの合成の典型的非制限例である。このような還元アルキル化は、第３級芳香族アミン部分を備えた非天然アミノ酸を含んだポリペプチドを供する。このような反応はまた、合成ポリマー、多糖類、またはポリヌクレオチド内に組み込まれた非天然アミノ酸へ適用されてもよい。加えて、このような反応は、組み込みの無い非天然アミノ酸へ適用されてもよい。単なる例示であるが、還元アルキル化は、単なる一例として挙げられるシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＣＮＨ３）等の弱い還元剤を使用し、かつｐＨ約４から約７の水溶性緩衝液内にて起こる可能性がある。加えて、還元アルキル化のために使用される可能性のある他の還元剤としては、ＴＣＥＰ、Ｎａ２Ｓ、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４、ＬｉＡｌＨ４、Ｂ２Ｈ６、およびＮａＢＨ４を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０６８７】
＜Ｃ．非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体の化学合成：ヘテロアリール含有結合ドラスタチン誘導体＞
一態様では、上記非天然アミノ酸は、少なくとも１つのケトン基、および／または少なくとも１つのアルデヒド基、および／または少なくとも１つのエステル基、および／または少なくとも１つのカルボン酸、および／または少なくとも１つのチオエステル基を含有する基を含む、ジカルボニル基の反応性に基づくドラスタチン結合誘導体の化学的誘導体化のための非天然アミノ酸であり、上記ジカルボニル基は、１，２−ジカルボニル基、１，３−ジカルボニル基、または１，４−ジカルボニル基であり得る。さらなる態様または付加的な態様では、上記非天然アミノ酸は、ヒドラジン基、アミジン基、イミン基、１，１−ジアミン基、１，２−ジアミン基、１，３−ジアミン基、および１，４−ジアミン基を含む、ジアミン基の反応性に基づくドラスタチン結合誘導体の化学的誘導体化のための非天然アミノ酸である。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上述した非天然アミノ酸のうち少なくとも１つが、ドラスタチン結合誘導体に組み込まれる。つまり、そのような実施形態は、非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体である。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸が誘導体化分子と反応することにより、窒素含有複素環を含む複素環に基づく結合および／またはアルドールに基づく結合を含む結合が生成されるように、上記非天然アミノ酸はその側鎖が官能化されている。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸は、窒素含有複素環を含む複素環に基づく結合および／またはアルドールに基づく結合を含む結合を生成するために、誘導体化ドラスタチンリンカーと反応し得る非天然アミノ酸ポリペプチドである。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸は、ジカルボニルおよび／または側鎖ジアミンを有するアミノ酸より選択される。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸は、マスキングされたジアミン基および／またはマスキングされたジカルボニル基を含む、マスキングされた側鎖基を含む。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸は、ケトアミン（すなわち、ケトンおよびアミンの両方を含有する基）、ケトアルキン（すなわち、ケトンおよびアルキンの両方を含有する基）、およびエンジオン（すなわち、ジカルボニル基およびアルケンの両方を含有する基）より選択される基を含む。
【０６８８】
さらなる実施形態または付加的な実施形態では、非天然アミノ酸は、カルボニルが、ケトン、アルデヒド、カルボン酸、またはチオエステルを含むエステルより選択されるジカルボニル側鎖を含む。別の実施形態では、非天然アミノ酸は、適切に官能化試薬で処理することにより窒素含有複素環を含む複素環を形成しうる官能基を含む非天然アミノ酸である。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、非天然アミノ酸は、構造が天然アミノ酸に似ているが、上記の官能基のいずれか１つが含まれている。別の実施形態または付加的な実施形態では、非天然アミノ酸は、フェニルアラニンまたはチロシン（芳香族アミノ酸）に似ているが、別の実施形態では、非天然アミノ酸は、アラニンおよびロイシン（疎水性アミノ酸）に似ている。一実施形態では、上記非天然アミノ酸は、天然のアミノ酸の特性とは異なる特性を有する。一実施形態では、この異なる性質とは側鎖の化学反応性であり、さらなる実施形態では、この異なる化学反応性により、非天然アミノ酸の側鎖には反応がなされる一方、同一のポリペプチドにおける天然アミノ酸ユニットの側鎖には反応がなされない。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、天然に存在するアミノ酸の側鎖に対して直交性の化学的性質を有する。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、求電子含有部分を含む。つまり、さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖上の求電子含有部分は、求核攻撃を受けて、窒素含有複素環誘導体化タンパク質を含む、誘導体化タンパク質を生成することができる。本段落で記載した実施形態のいずれかの実施形態では、非天然アミノ酸は、別の分子として存在する場合があり、あるいは任意の長さのポリペプチドに組み込まれる場合もある。後者の場合、ポリペプチドはさらに、天然に存在するアミノ酸、または非天然アミノ酸を組み込む場合がある。
【０６８９】
別の態様では、ジアミン基が、ヒドラジン、アミジン、イミン、１，１−ジアミン、１，２−ジアミン、１，３−ジアミン、および１，４−ジアミン基より選択されるジアミンで置換された、ジアミン置換された分子であり、窒素含有複素環を含む複素環結合に基づいた誘導体化非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体を産生するための、ジアミン置換された分子である。さらなる実施形態では、ジアミン置換されたドラスタチン誘導体を使用して、誘導体化分子とジカルボニル含有非天然アミノ酸ポリペプチドとの間に窒素含有複素環を含む複素環結合を形成して、ジカルボニル含有非天然アミノ酸ポリペプチドを誘導体化する。さらなる実施形態では、上述したジカルボニル含有非天然アミノ酸ポリペプチドは、ジケトン含有非天然アミノ酸ポリペプチドである。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、ジカルボニル含有非天然アミノ酸は、カルボニルが、ケトン、アルデヒド、カルボン酸、またはチオエステルを含むエステルより選択される側鎖を含む。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、ジアミン置換された分子は、所望の機能から選択される基を含む。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、非天然アミノ酸が、ジアミン置換された分子と選択的に反応することが可能となる、天然に存在するアミノ酸の側鎖に対して直交性の化学的性質を有する。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、ジアミン含有分子と選択的に反応する求電子含有部分を含む。つまり、さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖上の求電子含有部分は、求核攻撃を受けて、窒素含有複素環誘導体化タンパク質を含む、複素環誘導体化タンパク質を生成することができる。本段落で記載した実施形態に関するさらなる態様では、上記非天然アミノ酸ポリペプチドは、誘導体化分子が上記非天然アミノ酸ポリペプチドと反応することによって生じる、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドである。さらなる実施形態には、既に修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドのさらなる修飾が含まれる。
【０６９０】
別の態様では、窒素含有複素環を含む複素環の結合に基づいた誘導体化非天然アミノ酸ポリペプチドの産生のためのジカルボニル置換された分子である。さらなる実施形態では、窒素含有複素環基を含む複素環の形成を介してジアミン含有非天然アミノ酸ポリペプチドを誘導体化するために使用されるジカルボニル置換された分子である。さらなる実施形態では、約４〜約８の間のｐＨ範囲におけるジアミン含有非天然アミノ酸ポリペプチドを用いて、窒素含有複素環基を含むそのような複素環を形成することができるジカルボニル置換された分子である。さらなる実施形態では、誘導体化分子とジアミン含有非天然アミノ酸ポリペプチドとの間に、窒素含有複素環を含む複素環の形成を介してジアミン含有非天然アミノ酸ポリペプチドを誘導体化するために用いられるジカルボニル置換された分子である。さらなる実施形態では、上記ジカルボニル置換された分子は、ジケトン置換された分子であり、他の態様では、ケトンアルデヒド置換された分子であり、他の態様では、ケトアシド置換された分子であり、他の態様では、ケトチオエステル置換分子を含むケトエステル置換分子である。さらなる実施形態では、上記ジカルボニル置換された分子は、所望の機能から選択される基を含む。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、アルデヒド置換された分子は、アルデヒド置換されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子である。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、非天然アミノ酸が、カルボニル置換された分子と選択的に反応することが可能となる、天然に存在するアミノ酸の側鎖に対して直交性の化学的性質を有する。さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖は、ジカルボニル含有分子と選択的に反応する部分（例えば、ジアミン基）を含む。つまり、さらなる実施形態では、非天然アミノ酸の側鎖上の求核部分は、求電子攻撃を受けて、窒素含有複素環誘導体化タンパク質を含む、複素環誘導体化タンパク質を生成することができる。本段落で記載した実施形態に関するさらなる態様では、上記非天然アミノ酸ポリペプチドは、誘導体化分子が上記非天然アミノ酸ポリペプチドと反応することによって生じる、修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドである。さらなる実施形態には、既に修飾された非天然アミノ酸ポリペプチドのさらなる修飾が含まれる。
【０６９１】
一態様では、カルボニル反応物とヒドラジン反応物との反応を介してタンパク質を誘導体化して、窒素含有複素環誘導体化ドラスタチン含む、複素環誘導体化タンパク質を生成するための方法である。この態様に包含される方法として、カルボニル含有反応物およびヒドラジン含有反応物の縮合に基づくドラスタチンリンカー誘導体を誘導体化して、窒素含有複素環誘導体化ドラスタチンを含む複素環誘導体化ドラスタチンを生成するための方法がある。付加的な実施形態またはさらなる実施形態では、ケトン含有ドラスタチン誘導体もしくはアルデヒド含有ドラスタチン誘導体を、ヒドラジン官能化非天然アミノ酸を用いて誘導体化するための方法がある。さらに付加的な態様またはさらなる態様では、上記ヒドラジン置換された分子として、タンパク質、他のポリマー、および小分子が含まれる場合がある。
【０６９２】
別の態様では、カルボニル置換されたドラスタチン誘導体を誘導体化するためにヒドラジン置換された分子を化学合成するための方法である。一実施形態では、上記ヒドラジン置換された分子は、単なる一例として、ケトン含有非天然アミノ酸ポリペプチドもしくはアルデヒド含有非天然アミノ酸ポリペプチドが挙げられる、カルボニル含有非天然アミノ酸ポリペプチドの誘導体化に好適なドラスタチン結合誘導体である。
【０６９３】
一態様では、キノキサリン結合またはフェナジン結合に基づいたドラスタチンアナログの化学的誘導体化のための非天然アミノ酸である。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸は、当該非天然アミノ酸と誘導体化ドラスタチンリンカーとの反応によってキノキサリン結合もしくはフェナジン結合が生成されるように、当該非天然アミノ酸の側鎖が官能化される。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸は、１，２−ジカルボニル側鎖もしくは１，２−アリールジアミン側鎖を有するアミノ酸より選択される。さらなる実施形態または付加的な実施形態では、上記非天然アミノ酸は、保護またはマスキングされた１，２−ジカルボニル側鎖もしくは保護またはマスキングされた１，２−アリールジアミン側鎖を有するアミノ酸より選択される。また、１，２−ジカルボニル側鎖の同等物、あるいは１，２−ジカルボニル側鎖の保護またはマスキングされた同等物がさらに含まれる。
【０６９４】
別の態様では、キノキサリン結合もしくはフェナジン結合に基づいた誘導体化された非天然アミノ酸ポリペプチドの産生のための誘導体化分子である。一実施形態では、１，２−アリールジアミンを含有する非天然アミノ酸ポリペプチドを誘導体化してキノキサリン結合もしくはフェナジン結合を形成するために用いられる、１，２−ジカルボニル置換されたドラスタチンリンカー誘導体である。別の実施形態では、１，２−ジカルボニルを含有する非天然アミノ酸ポリペプチドを誘導体化してキノキサリン結合もしくはフェナジン結合を形成するために用いられる、１，２−アリールジアミン置換されたドラスタチンリンカー誘導体である。上記の実施形態に関連するさらなる態様では、誘導体化ドラスタチンリンカーと非天然アミノ酸ポリペプチドとの反応によって生じる修飾非天然アミノ酸ポリペプチドである。一実施形態では、キノキサリン結合もしくはフェナジン結合を形成するために１，２−ジカルボニル置換されたドラスタチンリンカー誘導体を用いて誘導体化された、１，２−アリールジアミンを含有する非天然アミノ酸ポリペプチドである。別の実施形態では、キノキサリン結合もしくはフェナジン結合を形成するために１，２−アリールジアミン置換されたドラスタチンリンカー誘導体を用いて誘導体化された、１，２−ジカルボニルを含有する非天然アミノ酸ポリペプチドである。
【０６９５】
本明細書中のある実施形態では、トリアゾール結合に基づいた非天然アミノ酸ポリペプチドを含む毒性化合物の産生のための誘導体化分子が提供される。いくつかの実施形態では、第１の反応性基および第２の反応性基間の反応は、親双極子反応を介して進めることができる。ある実施形態では、第１の反応性基はアジドとすることができ、第２の反応性基は、アルキンとすることができる。さらなる実施形態または代替的な実施形態では、第１の反応性基はアルキンとすることができ、第２の反応性基はアジドとすることができる。いくつかの実施形態では、ヒュイゲン付加環化反応（例えば、Huisgen, in 1,3-DIPOLAR CYCLOADDITION CHEMISTRY, (ed. Padwa, A., 1984), p. 1-176を参照すればよい）によって、アジド含有側鎖およびアルキン含有側鎖を有している天然にコードされていないアミノ酸が組み込まれ、生じるポリペプチドが極めて高い選択率で修飾されることが可能になる。ある実施形態では、アジド官能基およびアルキン官能基の両方は、天然に存在するポリペプチドに見られる通常の２０のアミノ酸に対して不活性である。しかし、非常に近づくと、アジド基およびアルキン基の「ばね荷重」性質が現れ、それらは、ヒュイゲン［３  ２］付加環化反応を介して選択的かつ効率的に反応して対応するトリアゾールを生成する。例えば、Chin et al., Science 301 :964-7 (2003); Wang et al., J. Am. Chem. Soc, 125, 3192-3193 (2003); Chin et al., J. Am. Chem. Soc, 124:9026-9027 (2002)を参照すればよい。アジド含有ポリペプチドまたはアルキン含有ポリペプチドに関する付加環化反応は、室温における水性条件の下に、Ｃｕ（ＩＩ）（例えば、触媒量のＣｕＳＯ４の形態が挙げられる）の付加によって、原位置（in situ）においてＣｕ（ＩＩ）をＣｕ（Ｉ）に還元する触媒量の還元物質の存在下において、達成され得る。例えば、Wang et al., J. Am. Chem. Soc. 125, 3192-3193 (2003); Tornoe et al., J. Org. Chem. 67:3057-3064 (2002); Rostovtsev, Angew. Chem. Int. Ed. 41 :2596-2599 (2002)を参照すればよい。好適な還元物質としては、アスコルビン酸塩、金属銅、キニーネ、ヒドロキノン、ビタミンＫ、グルタチオン、システイン、Ｆｅ２、Ｃｏ２および印加された電位が挙げられる。
【０６９６】
このような非天然アミノ酸ヘテロアリール結合ドラスタチン誘導体は、式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の構造を有するアミノ酸を含む。
【０６９７】
【化１５１】
2020143151.tif 000157
【０６９８】
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【０６９９】
【化１５２】
2020143151.tif 000158
【０７００】
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または、置換低級アルキルであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−J−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−(アルキレン−Ｏ)n−J−、−(アルキレン−Ｏ)n−J−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−(アルキレン−Ｏ)n−アルキレン−J−、−アルキレン'−J−(アルキレン−Ｏ)n−アルキレン−、−(アルキレン−Ｏ)n−アルキレン−J−アルキレン'−、−J−(アルキレン−Ｏ)n−アルキレン−、−(アルキレン−Ｏ)n−アルキレン−J−(アルキレン−Ｏ)n'−アルキレン−J'−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン'−J−(アルキレン−ＮＭｅ)n−アルキレン−Ｗ−、−J−(アルキレン−ＮＭｅ)n−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−；−J−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン'−ＮＭｅ−アルキレン''−Ｗ−、および −アルキレン−J−アルキレン'−ＮＭｅ−アルキレン''−ＮＭｅ−アルキレン'''−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【０７０１】
【化１５３】
2020143151.tif 000159
【０７０２】
Ｕは、以下の構造を有し、
【０７０３】
【化１５４】
2020143151.tif 000160
【０７０４】
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【０７０５】
【化１５５】
2020143151.tif 000161
【０７０６】
ｎおよび、ｎ’は、それぞれ独立して、１以上の整数であり、
Ｄは、以下の構造を有し、
【０７０７】
【化１５６】
2020143151.tif 000162
【０７０８】
各Ｒ１７は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルキルアルコキシ、置換アルキルアルコキシ、ポリアルキレンオキサイド、置換ポリアルキレンオキサイド、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルカリル、置換アルカリル、アラルキル、置換アラルキル、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−ＯＮ（Ｒ”）２、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−Ｃ（Ｏ）ＳＲ”、−（アルキレン、もしくは、置換アルキレン）−Ｓ−Ｓ−（アリール、もしくは、置換アリール）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）２Ｒ”、または、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ”）２からなる群より選択され（なお、各Ｒ”は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、アルカリル、置換アルカリル、アラルキル、または、置換アラルキルである）、
各Ｚ１は、結合、ＣＲ１７Ｒ１７、Ｏ、Ｓ、ＮＲ’、ＣＲ１７Ｒ１７−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−Ｏ、Ｏ−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−Ｓ、Ｓ−ＣＲ１７Ｒ１７、ＣＲ１７Ｒ１７−ＮＲ’、または、ＮＲ’−ＣＲ１７Ｒ１７であり、
各Ｒ’は、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルであり、
各Ｚ２は、結合、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、任意に置換された炭素数１〜３のアルキレン、任意に置換された炭素数１〜３のアルケニレン、および、任意に置換されたヘテロアルキルからなる群より選択され、
各Ｚ３は、結合、任意に置換された炭素数１〜４のアルキレン、任意に置換された炭素数１〜４のアルケニレン、任意に置換されたヘテロアルキル、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、および、−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より独立して選択され、
各Ｔ３は、結合、Ｃ（Ｒ”）（Ｒ”）、Ｏ、または、Ｓであり（ただし、Ｔ３が、Ｏ、または、Ｓであるとき、Ｒ”は、ハロゲンではない）、
各Ｒ”は、Ｈ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
ｍおよびｐは、０、１、２、または、３であり（ただし、ｍまたはｐのうち少なくとも１つは０でない）、
Ｍ２は、
【０７０９】
【化１５７】
2020143151.tif 000163
【０７１０】
であり（なお、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
Ｍ３は、
【０７１１】
【化１５８】
2020143151.tif 000164
【０７１２】
であり（なお、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
Ｍ４は、
【０７１３】
【化１５９】
2020143151.tif 000165
【０７１４】
であり（ここで、（ａ）は、Ｂ基への結合を示し、（ｂ）は、複素環基における、それぞれの位置への結合を示す）、
各Ｒ１９は、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜６のアルコキシ、エステル、エーテル、チオエーテル、アミノアルキル、ハロゲン、アルキルエステル、アリールエステル、アミド、アリールアミド、ハロゲン化アルキル、アルキルアミン、アルキルスルホン酸、アルキルニトロ、チオエステル、スルホニルエステル、ハロスルホニル、ニトリル、アルキルニトリル、および、ニトロからなる群より独立して選択され、
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または、１１であり、
各Ｒ１６は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ＮＯ２、ＣＮ、および、置換アルキルからなる群より選択される）。
【０７１５】
いくつかの実施形態では、式（ＸＸＸＩ）の化合物は、式（ＸＸＸＩ−Ａ）の構造を有する化合物を含む。
【０７１６】
【化１６０】
2020143151.tif 000166
【０７１７】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ５は、チアゾールまたはカルボン酸である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ６は、Ｈである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ａｒは、フェニルである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ７は、メチルである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、ｎは０から２０までの整数である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、ｎは０から１０までの整数である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、ｎは０から５までの整数である。
【０７１８】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ５は、チアゾールまたはカルボン酸である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ５は、水素である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ５は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、もしくはヘキシルである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、前記アルキレンは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、前記アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、またはヘプチレンである。
【０７１９】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、Ｒ５は、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または、１００である。
【０７２０】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、Ｒ６は、Ｈである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ６は、ヒドロキシである。
【０７２１】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、Ａｒは、フェニルである。
【０７２２】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、Ｒ７は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、もしくはヘキシルである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ７は、水素である。
【０７２３】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、切断可能リンカーまたは非切断可能リンカーである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、オリゴ（エチレングリコール）誘導体化リンカーである。
【０７２４】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態において、アルキレン、アルキレン’、アルキレン’’、およびアルキレン’’’は、それぞれ独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、アルキレンは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、へキシレン、もしくはへプチレンである。
【０７２５】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、およびｎ’’’’は、それぞれ独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは１００である。
【０７２６】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ１は、ポリペプチドである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、Ｒ２は、ポリペプチドである。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、ポリペプチドは抗体である。式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物のある実施形態では、抗体はαＣＤ７０である。
【０７２７】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の化合物は、一例として、ケトン、エステル、チオエステル、アルデヒド等のカルボニル含有試薬を用いて、芳香族アミン化合物を還元アルキル化することによって形成されてもよい。
【０７２８】
式（ＸＸＸＩ）、（ＸＸＸＩＩ）、（ＸＸＸＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＶ）、（ＸＸＸＶ）、または（ＸＸＸＶＩ）の構造を有するこのような非天然アミノ酸複素環結合ドラスタチン誘導体の形成には、（ｉ）ジアミン含有非天然アミノ酸とジカルボニル含有ドラスタチン結合誘導体との反応、またはジアミン含有非天然アミノ酸とケトアルキン含有ドラスタチン結合誘導体との反応、（ｉｉ）ジカルボニル含有非天然アミノ酸とジアミン含有ドラスタチン結合誘導体のいずれかとの反応、またはジカルボニル含有非天然アミノ酸とケトアミン含有ドラスタチン結合誘導体との反応、（ｉｉｉ）ケトアルキン含有非天然アミノ酸とジアミン含有ドラスタチン結合誘導体との反応、あるいは（ｉｖ）ケトアミン含有非天然アミノ酸とジカルボニル含有ｖとの反応が含まれるが、これらに限定されない。
【０７２９】
このような反応を用いた本明細書に記載のドラスタチン結合誘導体の修飾には、以下のうちの任意のまたは全ての利点がある。第１に、ジアミンは、約５〜８の範囲のｐＨ（さらなる実施形態では約４〜１０の範囲のｐＨ、他の実施形態では約３〜８の範囲のｐＨ、さらに他の実施形態では約４〜９の範囲のｐＨ、またさらに他の実施形態では約４〜９の範囲のｐＨ、他の実施形態では約４のｐＨ、およびさらに別の実施形態では約８のｐＨ）においてジカルボニル含有化合物と縮合し、窒素含有複素環を含む、複素環の結合を生成する。これらの条件下で、天然に存在するアミノ酸の側鎖は、非反応性である。第２に、このような選択的な化学反応により、組み換えタンパク質を部位特異的に誘導体化することできる。これにより、誘導体化タンパク質は、現在定義された均質な生成物として調整することができる。第３に、本明細書に記載のジアミンと本明細書に記載のジカルボニル含有ポリペプチドとの反応を生じさせるために必要な穏やかな環境は、一般に、上記ポリペプチドの三次構造を不可逆的に破壊するものではない（ただし、上記反応の目的がそのような三次構造を破壊することである場合は、当然この限りではない）。第４に、上記反応は室温で急速に起こり、これにより、高温では不安定な多くの種類のポリペプチドまたは試薬を使用することができる。第５に、上記反応は水性条件で直ちに起こり、これにより、やはり、非水性溶液とは（いかなる程度でも）不適合なポリペプチドおよび試薬を使用することができる。第６に、上記反応は、試薬に対するポリペプチドまたはアミノ酸の比率が化学式通り、化学式通りに近い、または略化学式通りの場合であっても、直ちに起こる。その結果、有用な量の反応生成物を得るために過剰な試薬またはポリペプチドを加える必要がない。第７に、結果として得られる上記複素環は、上記反応物における上記ジアミンおよびジカルボニル部分のデザインによって、位置選択的に、および／または、位置特異的に産生され得る。最後に、ジカルボニル含有分子を用いたジアミンの縮合によって、窒素含有複素環を含む複素環の結合が生成され、この結合は、生物学的条件下で安定している。
【０７３０】
（ＶＩ．非天然アミノ酸のドラスタチン結合誘導体における位置）
本明細書に記載の方法および組成は、１つ以上の非天然アミノ酸のドラスタチン結合誘導体に対する組み込みを含むものである。１つ以上の非天然アミノ酸は、ドラスタチン結合誘導体の活性を破壊しない、１以上の特定の位置に組み込まれ得る。これは、「保存的な」置換（疎水性アミノ酸の非天然または天然の疎水性アミノ酸への置換、かさ高いアミノ酸の非天然または天然のかさ高いアミノ酸への置換、親水性アミノ酸の非天然または天然の親水性アミノ酸への置換が挙げられるが、これらに限定されない）、および／または活性に必要のない位置における非天然アミノ酸の挿入によって実現され得る。
【０７３１】
種々の生化学的手法および構造的手法が、ドラスタチン結合誘導体内における非天然アミノ酸を用いた置換に所望される部位を選択するために使用され得る。いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸はドラスタチン誘導体のＣ−末端に結合される。他の実施形態では、非天然アミノ酸はドラスタチン誘導体のＮ−末端に結合される。ドラスタチン結合誘導体の任意の位置が非天然アミノ酸を組み込むための選択に好適であり、また、選択が合理的な設計、または任意の目的もしくは特に所望されていない目的のための任意の選択に基づき得る。所望の部位の選択は、所望される任意の特性もしくは活性（これらに限定されないが、受容体結合調節因子、受容体活性調節因子、結合相手への結合の調節因子、結合相手の活性の調節因子、結合相手の立体構造の調節因子、二量体または多量体の形成、天然の分子に比べて何ら活性および特性に変化をもたらさない、または、例えば可溶性、凝集もしくは安定性のようなポリペプチドの物理的もしくは化学的な特定の操作が挙げられる。）を有している（さらに修飾されるか、もしくは修飾されないままの状態の）非天然アミノ酸ポリペプチドの製造に基づき得る。また代替的に、生物学的な活性にとって重要であると同定された部位は、ポリペプチドに求められている所望の活性に応じた、非天然アミノ酸を用いた置換にとって良好な候補であり得る。他の代替法は、非天然アミノ酸を用いたポリペプチド上の各位置における一連の置換を単に生成すること、およびポリペプチドの活性に対する影響を観察することである。任意のポリペプチドに対する非天然アミノ酸を用いた置換のための部位を選択する任意の手法、技術または方法が、本明細書に記載の方法、技術、および組成における使用にとって好適である。
【０７３２】
また、天然に存在しており、欠失を含んでいるポリペプチド変異体の構造および活性が試験されて、非天然アミノ酸を用いた置換を許容すると思われるタンパク質の領域を決定し得る。非天然アミノ酸を用いた置換を許容できないと思われる他の残基が排除されていると、残りの位置のそれぞれにおける提案されている置換の影響が、関連ポリペプチド、ならびに任意の会合するリガンドまたは任意の結合タンパク質の三次元構造を含む方法が挙げられるが、これに限定されない方法を用いて試験され得る。多くのポリペプチドのＸ線結晶構造およびＮＭＲ構造は、タンパク質や核酸の大きな分子の三次元構造のデータを含む集中化データベースであって、非天然アミノ酸を用いて置換され得るアミノ酸位置を同定するために当業者が使用できる、Protein Data Bank（PDB、www.rcsb.org）において入手可能である。加えて、三次元構造のデータが利用可能ではない場合、ポリペプチドの二次元構造および三次元構造を調査するモデルが作成される。したがって、非天然アミノ酸を用いて置換され得るアミノ酸位置の同定が容易に可能となる。
【０７３３】
非天然アミノ酸の例示的な組み込み部位は、受容体結合領域として見込みのある領域または結合タンパク質または結合リガンドに結合する領域から除外される部位であり、完全または部分的に溶媒に露出され得る部位、近傍の残基との水素結合相互作用を最小に有しているか、もしくは有していない部位、近傍の反応性残基に対して最小に露出され得る部位、および／または特定のポリペプチドが、関連する受容体、リガンドまたは結合タンパク質を伴う三次元結晶構造によって予測される柔軟性の高い領域であり得るが、これらに限定されない。
【０７３４】
種々の非天然アミノ酸は、ポリペプチドにおける所定の位置のアミノ酸と置換され得るか、この所定の位置に組み込まれ得る。一例として、特定の非天然アミノ酸は、ポリペプチドの会合するリガンド、受容体および／または結合タンパク質をともなうポリペプチドの三次元結晶構造の調査、ならびに保存的置換の優先に基づいて、組み込むために選択され得る。
【０７３５】
一実施形態では、本明細書に記載の方法は、第１の反応性基を含んでいるドラスタチン結合誘導体を組み込むこと；およびタンパク質を第２の反応性基を含んでいる分子（第２のタンパク質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド類似物；抗体もしくは抗体断片；およびこれらのうちいずれかの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）と接触させること、を包含している。ある実施形態では、上記第１の反応性基はヒドロキシルアミン部分であり、上記第２の反応性基はカルボニル部分またはジカルボニル部分であり、これによってオキシム結合が形成される。ある実施形態では、上記第１の反応性基はカルボニル部分またはジカルボニル部分であり、上記第２の反応性基はヒドロキシルアミン部分であり、これによってオキシム結合が形成される。ある実施形態では、上記第１の反応性基はカルボニル部分またはジカルボニル部分であり、上記第２の反応性基はオキシム部分であり、これによってオキシム交換反応が起こる。ある実施形態では、上記第１の反応性基はオキシム部分であり、上記第２の反応性基はカルボニル部分またはジカルボニル部分であり、これによってオキシム交換反応が起こる。
【０７３６】
いくつかの場合に、ドラスタチン結合誘導体の（複数の）組み込みは、化学的、物理的、薬理学的および／または生物学的な他の性質に影響するポリペプチド内の他の付加、置換または欠失と組み合わせられる。いくつかの場合に、上記他の付加、置換または欠失はポリペプチドの安定性（タンパク質分解性の分解に対する耐性が挙げられるが、これに限定されない）を増大させ得るか、またはポリペプチドに該当する受容体、リガンド、および／または結合タンパク質に対するポリペプチドの親和性を増大させ得る。いくつかの場合に、他の付加、置換または欠失は、ポリペプチドの可溶性（E. coliまたは他の宿主細胞において発現される場合が挙げられるが、これらに限定されない）を増強し得る。いくつかの実施形態では、E. coliまたは他の宿主細胞における発現の後におけるポリペプチドの可溶性を増強させる目的で行う非天然アミノ酸の組み込みのための他の部位に加えて、天然にコードされたアミノ酸または非天然アミノ酸を用いた置換のための部位が選択される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、会合する受容体、結合タンパク質、および／または受容体に対する親和性を調節するか、受容体の二量体化を調節する（増加または低下するが、これらに限定されない）か、受容体二量体を安定化するか、循環半減期を調節するか、精製を容易にするか、特定の投与経路を改善するか、を行うための他の付加、置換または欠失を含んでいる。同様に、非天然アミノ酸ポリペプチドは、化学的または酵素的な切断配列、プロテアーゼ切断配列、反応性基、抗体結合ドメイン（ＦＬＡＧまたはポリ−Ｈｉｓが挙げられるが、これらに限定されない）もしくは他の親和性に基づく配列（ＦＬＡＧ、ポリ−Ｈｉｓ、ＧＳＴなど挙げられるが、これらに限定されない）、または結合分子（ビオチンが挙げられるが、これに限定されない）を含み得る。当該結合分子は、検出を向上させる分子（ＧＦＰが挙げられるが、これに限定されない）、精製、組織もしくは細胞膜を介した輸送、プロドラッグの放出もしくは活性化、サイズの低下またはポリペプチドの他の特色を向上させる分子である。
【０７３７】
（ＶＩＩ．典型例としての抗ＣＤ７０発現、およびリガンド相互作用）
本明細書に記載の方法、組成物、戦略および技術は、ポリペプチドまたはタンパク質の特定のタイプ、クラス、もしくはファミリーに限定されるものではない。実際のところ、実質的に任意のポリペプチドが、本明細書に記載のドラスタチン結合誘導体を含有する少なくとも１つの「修飾または非修飾された」非天然アミノ酸を含むように、設計または変更され得る。単なる一例として、上記ポリペプチドは、次に示すものからなる群より選択される治療用タンパク質と相同であり得る。：α−１アンチトリプシン、アンギオスタチン、抗溶血性因子、抗体、抗体断片、モノクローナル抗体（例えば、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、オマリズマブ、ウステキヌマブ、エタネルセプト、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ、トラスツズマブ、ニモツズマブ、パリビズマブ、およびアブシキシマブ）、アポリポタンパク質、アポ蛋白、心房性ナトリウム利尿因子、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド、心房性ペプチド、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン、Ｔ３９７６５、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ｇｒｏ−ａ、ｇｒｏ−ｂ、ｇｒｏ−ｃ、ＩＰ−１０、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−４、ＳＤＦ−１、ＰＦ４、ＭＩＧ、カルシトニン、ｃ−ｋｉｔリガンド、サイトカイン、ＣＣケモカイン、単球走化性タンパク質−１、単球走化性タンパク質−２、単球走化性タンパク質−３、単球の炎症性タンパク質−１α、単球の炎症性タンパク質−ｉβ、ランテス（ＲＡＮＴＥＳ）、１３０９、Ｒ８３９１５、Ｒ９１７３３、ＨＣＣ１、Ｔ５８８４７、Ｄ３１０６５、Ｔ６４２６２、ＣＤ４０、ＣＤ４０リガンド、ｃ−ｋｉｔリガンド、コラーゲン、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、補体因子５ａ、補体阻害剤、補体受容体１、サイトカイン、活性化上皮好中球ペプチド−７８、ＭＩＰ−１６、ＭＣＰ−１、上皮成長因子（ＥＧＦ）、上皮好中球活性化ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、剥離性毒素、第ＩＸ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、フィブリノーゲン、フィブロネクチン、四螺旋束タンパク質、Ｇ−ＣＳＦ、ｇｌｐ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、グルコセレブロシダーゼ、性腺刺激ホルモン、成長因子、成長因子受容体、ｇｒｆ、ヘッジホッグタンパク質、ヘモグロビン、肝細胞増殖因子（ｈＧＦ）、ヒルジン、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト血清アルブミン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１受容体、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−１受容体、インスリン、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、インターフェロン（ＩＦＮ）、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、インターロイキン（ＩＬ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、ラクトフェリン、白血病抑制因子、ルシフェラーゼ、ノルトリン、白血球阻害因子（ＮＩＦ）、オンコスタチンＭ、骨形成タンパク質、癌遺伝子産物、パラシトニン（ｐａｒａｃｉｔｏｎｉｎ）、副甲状腺ホルモン、ＰＤ−ＥＣＳＦ、ＰＤＧＦ、ペプチドホルモン、プレイオトロピン（ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｎ）、プロテインＡ、プロテインＧ、ｐｔｈ、発熱性外毒素Ａ、発熱性外毒素Ｂ、発熱性外毒素Ｃ、ｐｙｙ、リラキシン、レニン、ＳＣＦ、生合成低分子タンパク質、可溶性補体受容体Ｉ、可溶性Ｉ−ＣＡＭ１、可溶性インターロイキン受容体、可溶性ＴＮＦ受容体、ソマトメジン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ストレプトキナーゼ、超抗原、ブドウ球菌エンテロトキシン、ＳＥＡ、ＳＥＢ、ＳＥＣ１、ＳＥＣ２、ＳＥＣ３、ＳＥＤ、ＳＥＥ、ステロイドホルモン受容体、スーパーオキシドジスムターゼ、毒素性ショック症候群毒素、チモシンα１、組織プラスミノーゲン活性化因子、腫瘍増殖因子（ＴＧＦ）、腫瘍壊死因子、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊死因子β、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）、ＶＬＡ−４タンパク質、ＶＣＡＭ−１タンパク質、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ウロキナーゼ、ｍｏｓ、ｒａｓ、ｒａｆ、ｍｅｔ、ｐ５３、ｔａｔ、ｆｏｓ、ｍｙｃ、ｊｕｎ、ｍｙｂ、ｒｅｌ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、テストステロン受容体、アルドステロン受容体、ＬＤＬ受容体、およびコルチコステロン。
【０７３８】
したがって、例示を目的として、また本明細書に記載の方法、組成物、戦略および技術の範囲の非制限例として、ＡＲＸ−抗ＣＤ７０  ＡＤＣ、抗ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ、および抗ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１について以下に説明する。
【０７３９】
ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡは、ＣＤ２７リガンドと相互作用するヒトモノクローナル抗体薬物複合体である。ＣＤ２７リガンドは、非制限例によって、また、細胞生存の増進および抗原刺激ＣＤ８Ｔ細胞の増殖によって、記憶Ｔ細胞の形成およびＢ細胞の増殖機能をする。ＣＤ７０受容体は、癌組織において高密度に検出されており、例えば、細胞（Ｃａｋｉ−１、７８６−Ｏ、Ｌ−４２８、ＵＭＲＣ３、ＬＰ−１、ＤＢＴＲＧ−０５  ＭＧ）あたり３４０００〜１８９００のコピー(Engineered anti-CD70 antibody-drug conjugate with increased therapeutic index, Molecular Cancer Therapeutics, 2008)が検出されている。そして、非癌組織および／または正常組織において、前記受容体は活性化Ｔ細胞の５％〜１５％を占め、活性化Ｂ細胞の１０％〜２５％を占める。ＣＤ７０の発現は、多発性骨髄腫アイソレートの４０％以下で検出された(Preclinical Characterization of SGN-70, a Humanized Antibody Directed against CD70, Cancer Therapy:Preclinical, 2008)。そして、例えば、ホジキンリンパ腫リード−スタンバーグ細胞、非ホジキンリンパ腫、および腎細胞癌腫瘍の高いパーセンテージで、ＣＤ７０の発現が確認された。ＣＤ７０は、ＴＮＦファミリーのタイプＩＩ一体膜タンパク質である。本発明の目的のため、αＣＤ７０抗体は、１つの天然にコードされていないアミノ酸を有する、既知のいずれかのＣＤ７０抗体とすることができる。例示を目的として、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１抗体を表１に記載する。
【０７４０】
本発明の一実施形態では、抗体は、１つの天然にコードされていないアミノ酸を有する配列番号３を含む抗ＣＤ７０定常領域を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号４を含む抗ＣＤ７０定常領域を含む。本発明の一実施形態では、抗体は、１つのアミノ酸が天然にコードされていないアミノ酸である配列番号３を含む抗ＣＤ７０定常領域を含む。本発明の一実施形態では、抗体は、第１のアミノ酸が天然にコードされていないアミノ酸である配列番号３を含む抗ＣＤ７０定常領域を含む。本発明の一実施形態では、抗体は、１つのアミノ酸が天然にコードされていないアミノ酸である配列番号４を含む抗ＣＤ７０定常領域を含む。本発明の一実施形態では、抗体は、第１のアミノ酸が天然にコードされていないアミノ酸である配列番号４を含む抗ＣＤ７０定常領域を含む。本発明の一実施形態では、抗体は、種々の配列番号１の重鎖を有するαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、種々の配列番号１０の重鎖を有するαＣＤ７０抗体を含む。本発明の一実施形態では、抗体は、種々の配列番号２の軽鎖を有するαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、種々の配列番号１１の軽鎖を有するαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の重鎖と配列番号２の軽鎖とを含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１０の重鎖と配列番号１１の軽鎖とを含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の重鎖と配列番号２の軽鎖と定常領域とを含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１０の重鎖と配列番号１１の軽鎖と定常領域とを含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１０の重鎖と、配列番号１１の軽鎖と、配列番号３を含む定常領域とを含む。本発明の別の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体配列には、１つの天然にコードされていないアミノ酸が存在する。本発明の別の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体配列には、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸が存在する。本発明の別の実施形態では、配列番号１のアミノ酸１１９は、天然にコードされていないアミノ酸に置換されている。本発明の別の実施形態では、配列番号１０のアミノ酸１２２は、天然にコードされていないアミノ酸に置換されている。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の重鎖と、配列番号２の軽鎖と、配列番号３を含む定常領域とを含む。本発明の他の実施形態では、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸が、抗ＣＤ７０抗体に置換されている。本発明の他の実施形態では、αＣＤ７０抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の天然にコードされていないアミノ酸を有する重鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、配列番号４、および公開された米国特許出願２０１００１５０９５０にて提供される抗ＣＤ７０定常領域を含む。
【０７４１】
本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号１と９０％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号２と９０％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号３と９０％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号１と９５％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号２と９５％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号３と９５％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号１と９６％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号２と９６％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号３と９６％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号１と９７％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号２と９７％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号３と９７％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号１と９８％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号２と９８％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号１と９９％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号２と９９％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。本発明の他の実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するアミノ酸配列であり、かつ配列番号３と９９％相同するアミノ酸配列を含むαＣＤ７０抗体である。天然にコードされていないアミノ酸サイトの選択は、本明細書に記載されている。サイトは、αＣＤ７０抗体と特異的に関係しているため、サイトは、表面への露出／抗体の接近性に基づき選択され、抗体の電荷を保つために、疎水性／中性のアミノ酸サイトが選択される。
【０７４２】
【表１】
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【０７４３】
一実施形態では、本発明は、αＣＤ７０抗体薬物複合体（ＡＤＣまたはαＣＤ７０−ＡＤＣ）であって、当該抗体が、軽鎖および重鎖を含むαＣＤ７０である。本発明の他の実施形態では、重鎖（配列番号１）を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。本発明の別の実施形態では、軽鎖（配列番号２）を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。本発明の別の実施形態では、重鎖（配列番号１０）を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。本発明の別の実施形態では、軽鎖（配列番号１１）を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。本発明の別の実施形態では、軽鎖（配列番号２）および重鎖（配列番号１）を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。本発明の別の実施形態では、軽鎖（配列番号１１）および重鎖（配列番号１０）を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。本発明のいくつかの実施形態では、定常領域、配列番号３、または配列番号４は、１１５、１１６、１１７群から選択される変異したアミノ酸位置のいずれかを有する。本発明のいくつかの実施形態では、変異はＡＤＣＣ機能を阻害するための抗体になる。本発明のいくつかの実施形態では、抗体は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有するαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の１つ以上の位置において１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の１か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号２の１つ以上の位置において１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号２の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号２の１か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号２の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。
【０７４４】
本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号３の１つ以上の位置において１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号３の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号３の１か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号３の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。
【０７４５】
本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１０の１つ以上の位置において１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１０の１か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。
【０７４６】
本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１１の１つ以上の位置において１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１１の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１１の１か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１１の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。
【０７４７】
本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号４の１つ以上の位置において１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号４の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号４の１か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号４の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所を、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換したαＣＤ７０抗体を含む。
【０７４８】
本発明の別の実施形態では、抗体は、配列番号１の１、２、３、４、または５か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１の１、２または３か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１の１または２か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１の２か所において、２つの天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１の１か所において、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号３のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号４のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号５のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号６のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号７のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号８のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の重鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１のαＣＤ７０抗体、および配列番号２のαＣＤ７０抗体の重鎖を含み、当該重鎖は、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１のαＣＤ７０抗体、および配列番号２のαＣＤ７０抗体の重鎖を含み、当該重鎖は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１のαＣＤ７０抗体、および配列番号２のαＣＤ７０抗体の重鎖を含み、当該重鎖は、１、２、３、４、または５個の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１のαＣＤ７０抗体、および配列番号２のαＣＤ７０抗体の重鎖を含み、当該重鎖は、１、２、または３個の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１のαＣＤ７０抗体、および配列番号２のαＣＤ７０抗体の重鎖を含み、当該重鎖は、２つの天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１のαＣＤ７０抗体、および配列番号２のαＣＤ７０抗体の重鎖を含み、当該重鎖は、１つの天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる。他の実施形態では、本発明は、配列番号１および配列番号９を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。他の実施形態では、本発明は、配列番号１および配列番号１０を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。他の実施形態では、本発明は、配列番号１および配列番号１１を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。他の実施形態では、本発明は、配列番号１および配列番号１２を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。他の実施形態では、本発明は、配列番号１��よび配列番号１３を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。他の実施形態では、本発明は、配列番号１および配列番号１４を含むαＣＤ７０−ＡＤＣを提供する。
【０７４９】
本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２の１か所以上において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２の１、２、３、４、または５か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２の１、２、または３か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２の１、または２か所において、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２の２か所において、２つの天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２の１か所において、１つの天然にコードされていないアミノ酸で置換されたαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号９のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１０のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１１のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１２のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１３のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１４のαＣＤ７０抗体を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号２のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の軽鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号９のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の軽鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１０のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の軽鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１１のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の軽鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１２のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の軽鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１３のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の軽鎖を含む。本発明の他の実施形態では、抗体は、配列番号１４のαＣＤ７０抗体、およびαＣＤ７０抗体の軽鎖を含む。
【０７５０】
追加の、非限定例として、例示を目的として、また単なる一例として、ＨＥＲ２抗体トラスツズマブについて以下に説明するが、本明細書に記載の方法、組成物、戦略および技術の範囲を限定するものではない。さらに、本願におけるトラスツズマブに対する言及は、任意の抗体の一例としての一般的な用語を使用することを意図されている。したがって、トラスツズマブを参照して本明細書に記載されている修飾および化学的性質は、任意の抗体またはモノクローナル抗体（本明細書に特に挙げられている抗体が挙げられる）に対して等しく適用され得ることが理解される。
【０７５１】
トラスツズマブは、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体の細胞外セグメントの領域ＩＶに結合するヒトモノクローナル抗体である。ＨＥＲ２遺伝子（ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子やＥｒｂＢ２遺伝子としても知られる）は、ＨＥＲ２遺伝子を過剰に発現させる早期乳癌の２０〜３０％において増幅される。また、癌において、ＨＥＲ２は、任意の受容体に到着して結合するマイトジェンを介さずにシグナルを送ることができ、これによりＨＥＲ２が過剰に活動する。
【０７５２】
ＨＥＲ２は、細胞膜を通って延び、そして細胞の外側から内側へシグナルを伝達する。健康な人では、マイトジェンと呼ばれるシグナル伝達化合物が、細胞膜に到達して、受容体であるＨＥＲファミリーの他のメンバーの外側の部分に結合する。それらの結合した受容体は、ＨＥＲ２と結合（二量体化）し、ＨＥＲ２を活性化させる。次いで、ＨＥＲ２は、細胞の内部にシグナルを送る。上記シグナルは異なる生化学的経路を通過する。この経路には、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路とＭＡＰＫ経路とが含まれる。これらのシグナルによって、細胞の血管（血管形成）の浸潤、生存および成長が促進される。
【０７５３】
トラスツズマブで処理された細胞は、細胞周期のＧ１フェーズ中に停止を受けて、増殖が低減される。なお、トラスツズマブは、ＨＥＲ２／ｎｅｕのダウンレギュレーションによって、トラスツズマブの効果の一部を誘導し、ダウンレギュレーションにより受容体の二量体化の破壊に至るとともに、下流のＰＩ３Ｋカスケードを介したシグナル伝達を行うことが示唆されている。次いで、Ｐ２７Ｋｉｐｌがリン酸化され、細胞核に入ってｃｄｋ２の活性を阻害することができ、これにより細胞周期の停止を引き起こす。また、トラスツズマブは、抗血管新生因子の誘導と血管新生促進因子の抑圧とを両方行い、血管新生を抑制する。癌において観察される無秩序な成長に寄与する原因が、細胞外ドメインの解放をもたらすＨＥＲ２／ｎｅｕのタンパク質分解的切断にある可能性が考えられている。トラスツズマブは、乳癌細胞におけるＨＥＲ２／ｎｅｕのエクトドメイン切断を阻害することが証明されている。
【０７５４】
（ＶＩＩＩ．非天然アミノ酸の細胞の取り込み）
真核細胞による非天然アミノ酸の取り込みは、タンパク質への組み込みを目的として（限定されないが、これが挙げられる）、非天然アミノ酸を設計および選択するときに典型的に考慮される１つの課題である。例えば、α−アミノ酸の高い電荷密度はこれらの化合物が細胞透過性ではあり得ないことを意味する。天然アミノ酸はタンパク質に基づく輸送系の収集を介して真核細胞に取り込まれる。非天然アミノ酸が少しでも細胞によって取り込まれるならば、これを評価する急速なふるいが行われ得る（本明細書の実施例１５および１６において、非天然アミノ酸に対して行われる試験の非限定的な例を例示している）。例えば、参照によって本明細書に組み込まれる「Protein Arrays」と題された米国特許公報第２００４／１９８６３７号、ならびにLiu, D.R. & Schultz, P.G. (1999) Progress toward the evolution of an organism with an expanded genetic code. PNAS UnitedStates 96:4780-4785 における、例えば、毒性アッセイを参照すればよい。取り込みは、多様なアッセイを用いて容易に分析されるが、細胞の取り込み経路に受け容れられる非天然アミノ酸の設計ための代替案は、インビボにおいてアミノ酸を作り出す生合成経路を提供することである。
【０７５５】
典型的に、本明細書に記載されるような細胞の取り込みを介して生成される非天然アミノ酸は、タンパク質の効率的な生合成に十分な濃度（天然の細胞における量が挙げられるが、これに限定されない）において生成されるが、他のアミノ酸の濃度に影響するか、または細胞性の資源を枯渇させない。この方法で生成される典型的な濃度は、約１０ｍＭから０．０５ｍＭである。
【０７５６】
（ＩＸ．非天然アミノ酸の生合成）
多くの生合成経路が、アミノ酸および他の化合物を生成するために、細胞内にすでに存在している。特定の非天然アミノ酸のための生合成方法は、天然（細胞内が挙げられるが、これに限定されない）に存在し得ない一方で、本明細書に記載される方法および組成物はそのような方法を提供する。例えば、非天然アミノ酸のための生合成経路は、新しい酵素の添加、または既存の宿主細胞の経路の改変によって、宿主細胞内において形成され得る。追加の新しい酵素には、天然に存在する酵素または人工的に開発された酵素が含まれる。例えば、ｐ−アミノフェニルアラニンの生合成（国際公開第２００２／０８５９２３号（名称：「In vivo incorporation of unnatural amino acids」）における一例に示されるように）は、他の生物に由来する公知の酵素の組み合わせの添加に基づいている。これらの酵素の遺伝子は、当該遺伝子を含んでいるプラスミドを用いた真核細胞の形質転換によって、当該真核細胞に導入され得る。細胞内で発現されると、当該遺伝子は、所望の化合物を合成する酵素経路を形成する。必要に応じて添加されるこの種の酵素の例は、本明細書に示されている。追加の酵素の配列は、例えばジーンバンクに見出される。また、人工的に開発した酵素は、同様の方法によって細胞の中に加えられ得る。この方法では、細胞性機構および細胞資源が非天然アミノ酸を生成するために操作される。
【０７５７】
種々の方法が、生合成経路に使用するための新規な酵素の生成、または既存の経路の改変に利用可能である。例えば、Maxygen, Inc（www.maxigen.comのワールドワイドウェブ上において利用可能である）によって開発されたような反復的な組み換えは（限定されないが、これが挙げられる）、新規の酵素および経路の開発に使用され得る。例えば、Stemmer (1994), Rapid evolution of a protein in vitro by DNA shuffling, Nature 370(4):389- 391、および、Stemmer, (1994), DNA shuffling by random fragmentation and reassembly: In vitro recombination for molecular evolution, Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 91:10747-10751を参照すればよい。同様に、Genencor（genencor.comのワールドワイドウェブ上において利用可能である）によって開発されたDesignPath（登録商標）は、代謝経路の操作（細胞内で非天然アミノ酸を作り出す経路の操作が挙げられるが、これに限定されない）に任意に使用される。この技術は、新しい遺伝子（機能的なゲノミクスを介して同定された遺伝子が挙げられるが、これに限定されない）、ならびに分子進化および設計の組み合わせを用いて、宿主生物に存在する経路を再構築する。また、Diversa Corporation（diversa.comのワールドワイドウェブ上において利用可能である）は、非天然アミノ酸を生合成するための新しい経路を作り出すための（限定されないが、これが挙げられる）、遺伝子および遺伝子経路のライブラリを迅速にスクリーニングする技術を提供している。
【０７５８】
典型的に、本明細書に記載される設計された生合成経路を用いて生成された非天然アミノ酸は、タンパク質の効率的な生合成に十分な濃度（天然の細胞における量が挙げられるが、これに限定されない）にて生成されるが、他のアミノ酸の濃度に影響を与えることはなく、または細胞性の資源を枯渇させることもない。この方法にてインビボで生成される典型的な濃度は、約１０ｍＭから約０．０５ｍＭである。ひとたび、特定の経路に関して所望される酵素の生成に使用される遺伝子を含んでいるプラスミドを用いて細胞が形質転換され、非天然アミノ酸が生成されると、リボソームタンパク質の合成および細胞増殖の両方に対して、非天然アミノ酸の生成をさらに最適化するために、必要に応じてインビボセレクションが使用される。
【０７５９】
（Ｘ．追加の合成方法論）
本明細書に記載される非天然アミノ酸は、従来技術の方法論を用いて、または本明細書に記載されている技術を用いて、またはそれらの組み合わせにより、合成されてもよい。その助けとして、以下の表に、所望の官能基を作り出すために組み合わせることができる、種々の出発求電子剤および求核剤を示す。以下に示す情報は単なる例示であり、本明細書に記載される合成技術を限定するものではない。
【０７６０】
（表２：共有結合およびその前駆体の例）
【０７６１】
【表２】
2020143151.tif 000172
【０７６２】
一般的に、炭素求電子剤は、炭素求核剤を含む相補的な求核剤による攻撃の影響を受けやすく、攻撃する求核剤は、求核剤と炭素求電子剤の間に新たな結合を形成するために、電子対を炭素求電子剤に運ぶ。
【０７６３】
炭素求核剤の例としては、アルキル、アルケニル、アリールおよびアルキニルグリニャール、有機リチウム、有機亜鉛、アルキル−、アルケニル−、アリール−およびアルキニル−スズ試薬（有機スタンナン）、アルキル−、アルケニル−、アリール−およびアルキニル−ボラン試薬（有機ボランまたは有機ボロネート）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらの炭素求核剤は、水中や極性有機溶媒中で動力学的に安定であるという利点を有している。炭素求核剤の他の例としては、リンイリド、エノール、エノラート試薬が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらの炭素求核剤は、有機合成化学の当業者に周知の前駆体から生成することが比較的容易であるという利点を有する。炭素求核剤は、炭素求電子剤と併せて用いると、炭素求核剤と炭素求電子剤との間に新たな炭素−炭素結合を発生させる。
【０７６４】
炭素求電子剤との結合に適した非炭素求核剤の例としては、１級アミンおよび２級アミン、チオール、チオラート、およびチオエーテル、アルコール、アルコキシド、アジド、セミカルバジドなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらの非炭素求核剤は、炭素求電子剤と併せて用いると、通常、ヘテロ原子結合（Ｃ−Ｘ−Ｃ）（Ｘは、酸素、硫黄、窒素を含む（ただしこれらに限定されない）ヘテロ原子である）を生成する。
【０７６５】
〔実施例〕
[実施例１：化合物１の合成]
【０７６６】
【化１６１】
2020143151.tif 000173
【０７６７】
化合物１−３：テトラ(エチレングリコール)１−１(１０ｇ、５１.５ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド１−２(８.４ｇ、５１.１５ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(１７.６ｇ、６７ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン３００ｍＬに溶解し、続いて０℃でＤＩＡＤ(１２.８ｍＬ、６１.７８ｍｍｏｌ)を加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、乾燥し濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、５.４７g(３１％)の化合物１−３を得た。
【０７６８】
化合物１−４:化合物１〜３(２００ｍｇ、０.５９ｍｍｏｌ)のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液にデス−マーチン  ペルヨージナン(３００ｍｇ、０.７１ｍｍｏｌ)を加えた。反応混合物を一晩常温で攪拌した。反応を、１５ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム溶液に溶解した重硫酸ナトリウムにより停止させた。混合物を分離し、有機層を飽和重炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１５０ｍｇ（７５％）の化合物１−４を得た。
【０７６９】
化合物１−６：モノメチルドラスタチン塩酸塩１−５(５０ｍｇ、０.０６２ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に化合物１−４(６３ｍｇ、０.１８６ｍｍｏｌ)および７０μLの酢酸を加え、さらに８ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。結果として得られた混合物を常温で２時間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＨＰＬＣで精製し、６０ｍｇ(８０％)の化合物１−６を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５４７［Ｍ＋２Ｈ］,１０９２［Ｍ＋Ｈ］。
１d.
化合物１：化合物１−６(６０ｍｇ、０.０５ｍｍｏｌ)を１ｍＬのＤＭＦに溶解した。３２μＬのヒドラジンを加え、結果として得られた溶液を常温で１時間攪拌した。１Ｎの塩酸塩溶液により反応を停止した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、３３ｍｇ(５５％)の化合物１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４８２［Ｍ＋２Ｈ］,９６２［Ｍ＋Ｈ］。
【０７７０】
[実施例２：化合物２の合成]
【０７７１】
【化１６２】
2020143151.tif 000174
【０７７２】
化合物２は、実施例１に記載のものと同様の合成経路により合成される。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４６０［Ｍ＋２Ｈ］,９１８［Ｍ＋Ｈ］。
【０７７３】
[実施例３：化合物３の合成]
【０７７４】
【化１６３】
2020143151.tif 000175
【０７７５】
化合物３は、実施例１と同様の合成経路により合成される。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４３８［Ｍ＋２Ｈ］,９７４［Ｍ＋Ｈ］。
【０７７６】
[実施例４：化合物４の合成］
化合物４−２：Ｖａｌ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ.ＨＣｌ４−１(１ｇ、４.７７ｍｍｏｌ)およびブロモエタノール(３０４.７μＬ,４.３ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、１．６８ｍＬのＤＩＥＡを加えた。反応混合物を室温で２日間攪拌した。４.８ｍｍｏｌのＢｏｃ２Ｏを反応混合物に加え、次いで０．８４ｍＬのＤＩＥＡを加えた。反応混合物を室温で２日間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチルで抽出し、水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、０.６６gの化合物４−２を得た。
【０７７７】
【化１６４】
2020143151.tif 000176
【０７７８】
化合物４−３：化合物４−２(５００ｍｇ、１.５８ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド(２６１ｍｇ、１.６ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(５３８ｍｇ、２.０５ｍｍｏｌ)のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に、ＤＩＡＤ(３９４μL,１.９ｍｍｏｌ)を０℃で加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０．６８ｇの化合物４−３を得た。
【０７７９】
化合物４−４：化合物４−３を１５ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解した。反応混合物を室温で２日間攪拌し、真空中で濃縮した。残渣をＤＭＦに溶解し、Ｂｏｃ２Ｏ(２３０μＬ,１ｍｍｏｌ)およびＤＩＥＡ(３５２μＬ,２ｍｍｏｌ)で処理した。反応混合物を室温で２日間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、１００ｍｇの化合物４−４を得た。
【０７８０】
化合物４−５：化合物Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−メチルＤａｐ−ＯＨのＤＭＦの溶液に、ｐｈｅ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ.ＨＣｌ、ＨＡＴＵおよびＮ−メチルモルフォリンを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル(１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２)で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した。結果として得られた化合物をＨＣｌ／ＥｔＯＡＣで処理し、化合物４−５を得た。
【０７８１】
化合物４−６：化合物４−５のＤＭＦ溶液に化合物４−４、ＨＡＴＵおよびＤＩＥＡを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物４−６を得た。
【０７８２】
化合物４−７：化合物４−６を４Ｎ  ＨＣＬ／ジオキサン（１５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、化合物４−７を得た。
【０７８３】
化合物４−８：化合物４−７のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液にホルミルアルデヒドおよび酢酸を加え、次いでシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。結果として得られた混合物を常温で２時間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＨＰＬＣで精製し、化合物４−８を得た。
【０７８４】
化合物４：化合物４−８をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を常温で１時間攪拌した。１Ｎの塩酸塩溶液により反応を停止した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物４を得た。
【０７８５】
[実施例５：化合物５の合成］
化合物４−７をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を常温で１時間攪拌した。反応は１Ｎの塩酸塩溶液により停止した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物５を得た。
【０７８６】
[実施例６：化合物６の合成］
【０７８７】
【化１６５】
2020143151.tif 000177
【０７８８】
化合物６−２：化合物６−１(５００ｍｇ、０.８７５ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に２８３ｍｇのフェニルアラニン塩酸塩、４３３ｍｇのＨＡＴＵ、５８１μＬのＮ−メチルモルフォリンを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、５６０ｍｇ（７６％）の化合物６−２を得た。
【０７８９】
化合物６−３：化合物６−２を４Ｎ  ＨＣＬ／ジオキサン（１５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、５１１ｍｇの化合物６−３を得た。
【０７９０】
化合物６−４：化合物６−３(３６８ｍｇ、０.５５ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液に、２５５ｍｇのＢｏｃ−Ｎ−メチルバリン、３１４ｍｇのＨＡＴＵおよび３０３μＬのＮ−メチルモルフォリンを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、３７０ｍｇ（７９％）の化合物６−４を得た。
【０７９１】
化合物６−５：化合物６−４（１７０ｍｇ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、５ｅｑの１Ｎ  ＬｉＯＨを加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌを用いて酸性化し、酢酸エチルで抽出し、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮し、１５０ｍｇ（９０％）の化合物６−５を得た。
【０７９２】
化合物６−６：化合物６−５を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、ＨＰＬＣで精製し、化合物６−６を１５０ｍｇ得た。
【０７９３】
化合物６−７：化合物６−６(５０ｍｇ、０.０６２ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、化合物１−４(６３ｍｇ、０.１８６ｍｍｏｌ)および７０μＬの酢酸を加え、次いで８ｍｇのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。結果として得られた溶液を常温で２時間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＨＰＬＣで精製し、化合物６−７を６０ｍｇ（８０％）得た。
【０７９４】
化合物６：化合物６−７(６０ｍｇ、０.０５ｍｍｏｌ)をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、３２μＬのヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を常温で１時間攪拌した。反応は１Ｎの塩酸塩溶液で停止した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物６を３３ｍｇ（５５％）得た。
【０７９５】
[実施例７：化合物７の合成]
【０７９６】
【化１６６】
2020143151.tif 000178
【０７９７】
化合物７は化合物１と同様の合成経路により合成される。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４４０［Ｍ＋２Ｈ］,８７９［Ｍ＋Ｈ］。
【０７９８】
[実施例８：化合物８の合成]
【０７９９】
【化１６７】
2020143151.tif 000179
【０８００】
化合物８は化合物１と同様の合成経路により合成される。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４１８［Ｍ＋２Ｈ］,８３５［Ｍ＋Ｈ］。
【０８０１】
[実施例９：化合物９の合成]
【０８０２】
【化１６８】
2020143151.tif 000180
【０８０３】
化合物９−１：Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−メチルＤａｐ−ＯＨのＤＭＦ溶液に、４−(２−アミノエチル)ピリジン、ＨＡＴＵおよびＮ−メチルモルフォリンを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製した。結果として得られた化合物をＨＣｌ／ＥｔＯＡＣで処理し、化合物９−１を得た。
【０８０４】
化合物９−２：化合物９−１のＤＭＦ溶液に、化合物４−４、ＨＡＴＵおよびＤＩＥＡを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物９−２を得た。
【０８０５】
化合物９−３：化合物９−２を４Ｎ  ＨＣＬ／ジオキサン（１５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、化合物９−３を得た。
【０８０６】
化合物９−４：化合物９−３のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液にホルミルアルデヒドおよび酢酸を加え、次いでシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。結果として得られた混合物を常温で２時間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＨＰＬＣで精製し、化合物９−４を得た。
【０８０７】
化合物９：化合物９−４をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を常温で１時間攪拌した。反応は１Ｎの塩酸塩溶液により停止した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物９を得た。
【０８０８】
[実施例１０：化合物１０の合成]
【０８０９】
【化１６９】
2020143151.tif 000181
【０８１０】
化合物１０：化合物９−３をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を常温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、実施例１０を得た。
【０８１１】
[実施例１１：化合物１１の合成]
【０８１２】
【化１７０】
2020143151.tif 000182
【０８１３】
化合物１１−３：テトラ(エチレングリコール)１１−１(４０.６ｍＬ、２３５ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に、４７ｍｇのナトリウムを加えた。ナトリウムが溶解した後、アクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルを加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、１Ｎ  ＨＣＬ（２ｍＬ）で反応を停止した。残渣を食塩水に懸濁し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）を用いて抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮し、化合物１１−３を６．４ｇ（２３％）得た。
【０８１４】
化合物１１−５：化合物１１−３(１.０ｇ、３.１２ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド１１−４(６１１ｍｇ、３.７４４ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(１.２３ｇ、４.６８ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解し、次いでＤＩＡＤ(０.８４ｍＬ、４.０６ｍｍｏｌ)を０℃で加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、濃縮し、乾燥させた。残渣をＳｉｌｉａＳｅｐ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ(８０g)を使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０−１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶出し、化合物１１−５を１．０ｇ（１００％）得た。
【０８１５】
化合物１１−６：化合物１１−５を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（１５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、化合物１１−６を１．０ｇ得た。
【０８１６】
化合物１１−８：モノメチルドラスタチン塩酸塩を３０ｍｇ（０．０３７２ｍｍｏｌ）、化合物１１−６を３１ｍｇ(０.０７４４ｍｍｏｌ)、およびＰｙＢｒｏＰを３８.２ｍｇ(０.０８２ｍｍｏｌ)含むＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、３３μＬ(０.１８６ｍｍｏｌ)のジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物１１−８を２８ｍｇ(６５％)得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ７８５［Ｍ＋２Ｈ］,１１６４［Ｍ＋Ｈ］。
【０８１７】
化合物１１：化合物１１−８（２８ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、２３μＬ（０．７２ｍｍｏｌ）の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を、２０−７０％のＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出して、分取ＨＰＬＣで精製し、２０ｍｇ(６６％)の化合物１１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１８［Ｍ＋２Ｈ］,１０３４［Ｍ＋Ｈ］。
【０８１８】
[実施例１２：化合物１２の合成]
【０８１９】
【化１７１】
2020143151.tif 000183
【０８２０】
化合物１２−２：化合物１２−１(５００ｍｇ、０.８７５ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液に、２８３ｍｇのフェニルアラニン塩酸塩、４３３ｍｇのＨＡＴＵおよび５８１μＬのＮ−メチルモルフォリンを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物１２−２を５６０ｍｇ（７６％）得た。
【０８２１】
化合物１２−３：化合物１２−２を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（１５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、化合物１２−３を５１１ｍｇ得た。
【０８２２】
化合物１２−４：化合物１２−３(３６８ｍｇ、０.５５ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（３ｍＬ）の溶液に、２５５ｍｇのＢｏｃ−Ｎ−メチルバリン、３１４ｍｇのＨＡＴＵおよび３０３μＬのＮ−メチルモルフォリンを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物１２−４を３７０ｍｇ（７９％）得た。
【０８２３】
化合物１２−５：化合物１２−４（１７０ｍｇ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に、５ｅｑの１Ｎ  ＬｉＯＨを加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌにより酸性化し、酢酸エチルで抽出し、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮し、化合物１２−５を１５０ｍｇ（９０％）得た。
【０８２４】
化合物１２−６：化合物１２−５を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、ＨＰＬＣで精製し、化合物１２−６を１５０ｍｇ得た。
【０８２５】
化合物１２−７：化合物１２−６のＤＭＦ溶液にホルミルアルデヒド（３ｅｑ）および酢酸（２０ｅｑ）を加え、次いで２ｅｑのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。結果として得られた混合物を常温で２時間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＨＰＬＣで精製し、化合物１２−７を得た。
【０８２６】
化合物１２−１０：ｔｅｒｔ−ブチル２−(２−ヒドロキシエトキシ)エチルカルバメート(２.０５ｇ、１０ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド(１.８ｇ、１１ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(３.６７ｇ、１４ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン１００ｍＬに溶解し、次いでＤＩＡＤ(２.４８ｍＬ、１２ｍｍｏｌ)を０℃で加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、濃縮し乾燥させた。残渣を５０ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンで処理した。混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣をエーテルで処理し、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、化合物１２−１０を２．６ｇ（９１％）得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５１［Ｍ＋Ｈ］。
【０８２７】
化合物１２−１１：化合物１２−１０(２０ｍｇ、０.０２６ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、１１．２ｍｇの化合物１２−１０、１５ｍｇのＨＡＴＵ、および２３μＬのＤＩＥＡを加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物１２−４を２０ｍｇ（７０％）得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４９０［Ｍ＋２Ｈ］,９７８［Ｍ＋Ｈ］。
【０８２８】
化合物１２：化合物１２−１１（２０ｍｇ、０．０１８３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、１８μＬ（０．５６ｍｍｏｌ）の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏを用いて２０分、２５４ｎｍで溶出し、化合物１２を１４ｍｇ（７２％）得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４２５［Ｍ＋２Ｈ］,８４８［Ｍ＋Ｈ］.
[実施例１３：化合物１３の合成]
【０８２９】
【化１７２】
2020143151.tif 000184
【０８３０】
化合物１３−２：ｔｅｒｔ−ブチル６−ヒドロキシヘキサン酸１３−１(１.５g、１.９７ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド(１.４２ｇ、８.７６ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(２.８２g,１０.７６ｍｍｏｌ)を５０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、次いでＤＩＡＤ(２mL、９.５６４ｍｍｏｌ)を０℃で加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、濃縮し乾燥した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物１３−２を２．５ｇ（９５％）得た。
【０８３１】
化合物１３−３：上記化合物１３−２を、ジオキサンに含まれる４Ｎ  ＨＣｌ（１５ｍＬ）で処理した。反応混合物を常温で１２時間攪拌し、真空中で濃縮し、乾燥させ、化合物１３−３を９００ｍｇ（１００％）得た。
【０８３２】
化合物１３−４：化合物１３−３（９００ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に３９７ｍｇのＮ−ヒドロキシスクシンイミドを加え、次いで６６９ｍｇのＤＣＣを加えた。反応混合物を常温で一晩攪拌し、ろ過した。ろ液を濃縮し、１０ｍＬのＤＣＭにて処理した。ＤＣＭ溶液を、常温で１時間静置し、ろ過した。ろ液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物１３−４を８００ｍｇ（７１％）得た。
【０８３３】
化合物１３−６：１２ｍＬのＤＭＦ溶液に溶解した化合物１３−４(４３５ｍｇ、１.１６ｍｍｏｌ)およびＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＯＨ１３−５(４００ｍｇ、１.０５４ｍｍｏｌ)の混合物を、常温で２４時間攪拌した。真空中で溶媒を除いた。残渣をエーテルにて処理し、ろ過し、エーテルにて洗浄した。真空中で固体を乾燥させ、化合物１３−６を６６０ｍｇ（９８％）得た。
【０８３４】
化合物１３−７：化合物１３−６(２００ｍｇ、０.３１３ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（６ｍＬ）溶液にビス(ｐ−ニトロフェニル)炭酸塩(２８６ｍｇ、０.９４ｍｍｏｌ)を加え、次いで１１０．２μＬのＤＩＥＡを加えた。反応混合物を常温で５時間攪拌し、濃縮した。残渣をエーテルで処理し、ろ過した。集められた固体をエーテル、５％クエン酸、水、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、化合物１３−７を２１０ｍｇ(８３％)得た。
【０８３５】
化合物１３−９：モノメチルオーリスタチン塩酸塩１３−８(１００ｍｇ、０.１３２５ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（２ｍＬ）の溶液に、化合物１３−７(１５９ｍｇ、０.２ｍｍｏｌ）および１０ｍｇのＨＯＢｔを加え、次いで３５.２μＬのＤＩＥＡを加えた。結果として得られた混合物を常温で２日間攪拌した。反応混合物を水で希釈し、ＨＰＬＣで精製し、化合物１３−９を９３ｍｇ(５１％)得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６９２［Ｍ＋２Ｈ］,１３８２［Ｍ＋Ｈ］。
【０８３６】
化合物１３：化合物１３−９(５０ｍｇ、０.０３６ｍｍｏｌ)をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。２３μＬのヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を常温で３時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物１３を３２ｍｇ(６５％)得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６３８.５［Ｍ＋Ｎａ＋２Ｈ］,１２５３.３［Ｍ＋Ｈ］,１２７５.８［Ｍ＋Ｎａ]。
【０８３７】
[実施例１４：化合物１４の合成]
【０８３８】
【化１７３】
2020143151.tif 000185
【０８３９】
化合物１４−３：テトラ(エチレングリコール)１４−１(４０.６ｍＬ、２３５ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液に、４７ｍｇのナトリウムを加えた。ナトリウムが溶解した後、１２ｍＬのアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルを加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、２ｍＬの１Ｎ  ＨＣＬで反応を停止した。残渣を食塩水に懸濁し、酢酸エチル（１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮し、化合物１４−３を６.４g(２３％)得た。
【０８４０】
化合物１４−５：化合物１４−３(１.０ｇ、３.１２ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド１４−４(６１１ｍｇ、３.７４４ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(１.２３ｇ、４.６８ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）に溶解し、次いでＤＩＡＤ(０.８４ｍＬ、４.０６ｍｍｏｌ)を０℃で加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、次いで濃縮し、乾燥した。残渣を、ＳｉｌｉａＳｅｐ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ(８０g)を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０−１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶出し、化合物１４−５を１.０ｇ(１００％)得た。
【０８４１】
化合物１４−６：化合物１４−５を１５ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、化合物１４−６を１．０ｇ得た。
【０８４２】
化合物１４−７：化合物６(１.９３ｇ、４.６８ｍｍｏｌ)およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド(６４６ｍｇ、５.６１６ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液に、１.０６２ｇ(５.１４８ｍｍｏｌ)のＤＣＣを加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌し、ろ過した。ろ液を濃縮し、ＳｉｌｉａＳｅｐ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ(８０g)を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０−１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶出し、２.３７g(１００％)の化合物１４−７を得た。
【０８４３】
化合物１４−８：化合物１４−８を文献(BioconjugatChem.２００２,１３(４)、８５５−８６９)に従い作製した。
【０８４４】
化合物１４−９：化合物１４−８(２００ｍｇ、０.５２７ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、２９５ｍｇ(０.５８ｍｍｏｌ)の化合物１４−７を加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌し、真空中で濃縮した。残渣をエーテルで処理し、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、４０２ｍｇ（９８％）の化合物１４−９を得た。
【０８４５】
化合物１４−１０：化合物１４−９(４０６ｍｇ、０.５２７ｍｍｏｌ)およびビス(ｐ−ニトロフェノール)炭酸塩(４８１ｍｇ、１.５８ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、０.１８６ｍＬ(１.０５４ｍｍｏｌ)のジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣をエーテルで処理し、ろ過し、エーテル、５％クエン酸、水、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、３５０ｍｇ（７２％）の化合物１４−１０を得た。
【０８４６】
化合物１４−１１：５０ｍｇ(０.０６２ｍｍｏｌ)のモノメチルドラスタチン塩酸塩、８７.２ｍｇ(０.０９３ｍｍｏｌ)の化合物１４−１０および４.７ｍｇ(０.０３１ｍｍｏｌ)のＨＯＢｔのＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、２２μＬ(０.１２４ｍｍｏｌ)のジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、４１ｍｇ(４２％)の化合物１４−１１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ７８５［Ｍ＋２Ｈ］。
【０８４７】
化合物１４：化合物１４−１１(４１ｍｇ、０.０２６ｍｍｏｌ)を１ｍＬのＤＭＦに溶解した。１７μＬ(０.５２ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物は分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、２２ｍｇ(５８％)の化合物１４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ７２０［Ｍ＋２Ｈ］。
【０８４８】
[実施例１５：化合物１５の合成]
【０８４９】
【化１７４】
2020143151.tif 000186
【０８５０】
化合物１５−２：５０ｍｇ(０.０６２ｍｍｏｌ)のモノメチルドラスタチン塩酸塩、７５ｍｇ(０.０９３ｍｍｏｌ)の化合物１３−７および４.７ｍｇ(０.０３１ｍｍｏｌ)のＨＯＢｔのＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、２２μＬ(０.１２４ｍｍｏｌ)のジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、４１ｍｇ(４２％)の化合物１５−２を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ７１８［Ｍ＋２Ｈ］,１４３５［Ｍ＋Ｈ］。
【０８５１】
化合物１５−２：化合物１５−２(４１ｍｇ、０.０２６ｍｍｏｌ)を１ｍＬのＤＭＦに溶解した。１７μＬ(０.５２ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、２２ｍｇ(５８％)の実施例１５を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６５３［Ｍ＋２Ｈ］,１３０５［Ｍ＋Ｈ］。
【０８５２】
[実施例１６：化合物１６の合成]
【０８５３】
【化１７５】
2020143151.tif 000187
【０８５４】
化合物１６−３：エチレングリコール１６−１(１３.１ｍＬ、２３５ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液に、４７ｍｇのナトリウムを加えた。ナトリウムが溶解した後、１２ｍＬのアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルを加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、反応を１ＮのＨＣｌ（２ｍＬ）で停止した。残渣を食塩水に懸濁し、酢酸エチル(１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２)で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、５.２ｇ(２４％)の化合物１６−３を得た。
【０８５５】
化合物１６−５：化合物１６−３(２.０ｇ、１０.５ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド(２.０５ｇ、１２.６ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(３.５８ｇ、１３.６５ｍｍｏｌ)を５０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、次いでＤＩＡＤ(３.２６ｍＬ、１５.７５ｍｍｏｌ)を０℃で加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、濃縮し乾燥した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物１６−５を得た。
【０８５６】
化合物１６−６：化合物１６−５を１５ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、化合物１６−６を得た。
【０８５７】
化合物１６−７：化合物１６−６(５.１６ｍｍｏｌ)およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド(７２２ｍｇ、６.７ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）の溶液に、１.２８ｇ(６.２ｍｍｏｌ)のＤＣＣを加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌し、ろ過した。ろ液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、５００ｍｇの化合物１６−７を得た。
【０８５８】
化合物１６−８：化合物１６−８を文献(BioconjugatChem.２００２,１３(４)、８５５−８６９)に従い作製した。
【０８５９】
化合物１６−９：化合物１６−８(５.０ｇ、８.３ｍｍｏｌ)およびビス(ｐ−ニトロフェノール)炭酸塩(７.６ｇ、２５ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（１００ｍＬ）の溶液に、２.９２ｍＬ(１６.６ｍｍｏｌ)のジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣をエーテルで処理し、ろ過し、エーテル、５％クエン酸、水、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、５．０ｇ（８１％）の化合物１６−９を得た。
【０８６０】
化合物１６−１０：１.０ｇ(１.２４ｍｍｏｌ)のモノメチルドラスタチン塩酸塩、１.４２ｇ(１.８５７５ｍｍｏｌ)の化合物１６−９および９５ｍｇ(０.６２ｍｍｏｌ)のＨＯＢｔのＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、４３７μＬ(２.４８ｍｍｏｌ)のジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、１.０ｇ(５８％)の化合物１６−１０を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ７００［Ｍ＋２Ｈ］,１３９８［Ｍ＋Ｈ］。
【０８６１】
化合物１６−１１：化合物１６−１０(１.０ｇ、０.７１５ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）溶液に、５ｍＬ(４８ｍｍｏｌ)のジエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で１．５時間攪拌し、真空中で濃縮した。残渣を２０ｍＬのＤＣＭに溶解し、２００ｍＬのエーテルで処理し、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、８６０ｍｇの化合物１６−１１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５８９［Ｍ＋２Ｈ］,１１７６［Ｍ＋Ｈ］。
【０８６２】
化合物１６：５０ｍｇ(０.０４２５ｍｍｏｌ)の化合物１６−１１のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、３２ｍｇ(０.０８５ｍｍｏｌ)の化合物１６−７を加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。ＨＰＬＣおよびＭＳにより反応の完了を確認した。２７.２μＬ(０.８５ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを反応混合物に加えた。反応は２時間で完了した。反応混合物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ＨＰＬＣで精製し、４０ｍｇ（６６％）の化合物１６を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６５４［Ｍ＋２Ｈ］,１３０７［Ｍ＋Ｈ］。
【０８６３】
[実施例１７：化合物１７の合成]
【０８６４】
【化１７６】
2020143151.tif 000188
【０８６５】
化合物１７−２：化合物１７−１(１.０ｇ、４.５２ｍｍｏｌ)およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド(５７２ｍｇ、４.９７ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶液に、１.１２g(５.４２４ｍｍｏｌ)のＤＣＣを加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌し、ろ過した。ろ液を濃縮し、化合物１７−２を得た。
【０８６６】
化合物１７：化合物１６−１１（５０ｍｇ、０.０４２５ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、４１ｍｇ(０.１２７５ｍｍｏｌ)の化合物１７−２を加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。ＨＰＬＣおよびＭＳにより反応の完了を確認した。２０μＬ(０.６２５ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを反応混合物に加えた。反応は２時間で完了した。反応混合物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、ＨＰＬＣで精製し、３５ｍｇ(６０％)の化合物１７を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６２５［Ｍ＋２Ｈ］,１２４９［Ｍ＋Ｈ］。
【０８６７】
[実施例１８：化合物１８の合成]
【０８６８】
【化１７７】
2020143151.tif 000189
【０８６９】
化合物１８−１：化合物６−６、化合物１４−１０(ｍｇ、０.０６２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔのＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、ジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、化合物１８−１を得た。
【０８７０】
化合物１８：化合物１８−１を１ｍＬのＤＭＦに溶解し、無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、化合物１８を得た。
【０８７１】
[実施例１９：化合物１９の合成]
【０８７２】
【化１７８】
2020143151.tif 000190
【０８７３】
化合物１９−２：ｔｅｒｔ−ブチル２−(２−ヒドロキシエトキシ)エチルカルバメート１３(２.０５ｇ、１０ｍｍｏｌ)、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド(１.８ｇ、１１ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(３.６７ｇ、１４ｍｍｏｌ)を１００ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、次いでＤＩＡＤ(２.４８ｍＬ、１２ｍｍｏｌ)を０℃で加えた。結果として得られた溶液を室温で一晩攪拌し、濃縮し、乾燥した。残渣を５０ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンで処理した。混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣をエーテルで処理し、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、２.６ｇ(９１％)の化合物１９−２を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２５１［Ｍ＋Ｈ］。
【０８７４】
化合物１９−３：化合物１９−２(３１５ｍｇ、１.１ｍｍｏｌ)、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ(３６５ｍｇ、１ｍｍｏｌ)、ＥＤＣ(３８２ｍｇ、２ｍｍｏｌ)およびＨＯＢｔ(３０６ｍｇ、２ｍｍｏｌ)の混合物のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、１.０５６ｍＬ(６ｍｍｏｌ)のジイソプロピルエチルアミンを加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌し、酢酸エチルで抽出し、５％クエン酸、飽和炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をＳｉｌｉａＳｅｐ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ(４０g)を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０−１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶出し、４０５ｍｇ(７０％)の化合物１９−３を得た。
【０８７５】
化合物１９−４：化合物１９−３を１５ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、３１５ｍｇ(９８％)の化合物１９−４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３７９［Ｍ＋Ｈ］。
【０８７６】
化合物１９−５：化合物１４−３(３２２ｍｇ、１ｍｍｏｌ)のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、デス−マーチン  ペルヨージナン(６３６ｍｇ、１.５ｍｍｏｌ)を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応を１５ｍＬの飽和炭酸ナトリウム溶液に溶解したチオ硫酸ナトリウム(１.４ｇ、８.８５ｍｍｏｌ)で停止した。混合物を分離し、有機層を飽和炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をＳｉｌｉａＳｅｐ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ(４０g)を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０−１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶出し、１７０ｍｇ(５３％)の化合物１９−５を得た。
【０８７７】
化合物１９−６：モノメチルドラスタチン塩酸塩１.０ｇ(１.２４ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に１.１９ｇ(３.７２ｍｍｏｌ)の化合物１７を加え、次いで１.４ｍＬ(２４.８ｍｍｏｌ)の酢酸および１５６ｍｇ(２.４８ｍｍｏｌ)のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。結果として得られた混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空中で除去した。残渣を重炭酸ナトリウムを用いてｐＨ８に調製し、ＤＣＭで抽出し、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をＳｉｌｉａＳｅｐ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ(４０ｇ)を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０−５％メタノール／ＤＣＭで溶出し、６８０ｍｇ(５１％)の化合物１９−６を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５３８［Ｍ＋２Ｈ］,１０７５［Ｍ＋Ｈ］。
【０８７８】
化合物１９−７：化合物１９−６(６８０ｍｇ、０.６３２ｍｍｏｌ)のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に、２０ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンを加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮した。残渣をエーテルで処理し、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、６６０ｍｇ(９８％)の化合物１９−７を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５１０［Ｍ＋２Ｈ］,１０１９［Ｍ＋Ｈ］。
【０８７９】
化合物１９−８：化合物１９−７(２８０ｍｇ、０.２５７ｍｍｏｌ)、化合物１９−４(３８ｍｇ、０.０８５７ｍｍｏｌ)およびＮ−メチルモルフォリン(０.２８３ｍＬ、２.５７ｍｍｏｌ)のＮ−メチルピロリドン（５ｍＬ）溶液に、９８ｍｇ(０.２５７ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、１６０ｍｇ(７１％)の化合物１９−８を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５９６［Ｍ＋４Ｈ］,７９４［Ｍ＋３Ｈ］,１１９１［Ｍ＋２Ｈ］。
【０８８０】
化合物１９：化合物１９−８(１６０ｍｇ、０.０６１３ｍｍｏｌ)を１．５ｍＬのＤＭＦに溶解し、２０μＬ(０.６１３ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、１２０ｍｇ(７５％)の化合物１９を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４５１［Ｍ＋５Ｈ］,５６３［Ｍ＋４Ｈ］,７５１［Ｍ＋３Ｈ］,１１２６［Ｍ＋２Ｈ］。
【０８８１】
[実施例２０：化合物２０の合成]
【０８８２】
【化１７９】
2020143151.tif 000191
【０８８３】
化合物２０−２：テトラ(エチレングリコール)２０−１（８．０ｇ、４１.２ｍｍｏｌ)のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液に、１．６５ｇの水素化ナトリウムを０℃で加えた。反応混合物を室温で３０分攪拌した。６.２１ｇのＴＢＳ−Ｃｌを溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、反応を１ＮのＨＣｌ（２ｍＬ）で停止した。残渣を食塩水に懸濁し、酢酸エチル(１００ｍＬ×１、５０ｍＬ×２)で抽出した。有機層を食塩水と混合して洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、５．７ｇの化合物２０−２を得た。
【０８８４】
化合物２０−３：化合物２０−２(５００ｍｇ、１.６２ｍｍｏｌ)のジクロロメタン（３０ｍＬ）溶液に、デス−マーチン  ペルヨージナン(１.０３ｇ、２.４３ｍｍｏｌ)を加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応を１５ｍＬの飽和炭酸ナトリウム溶液に溶解したチオ硫酸ナトリウム(１.４ｇ、８.８５ｍｍｏｌ)を加えることで停止した。混合物を分離し、有機層を飽和炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、４００ｍｇの化合物２０−３を得た。
【０８８５】
化合物２０−４：モノメチルドラスタチン塩酸塩２１３ｍｇ(０.２６３ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液に２４５ｍｇ(０.７５ｍｍｏｌ)の化合物２０−３を加え、次いで０.３０３ｍＬ(５ｍｍｏｌ)の酢酸および３４ｍｇ(０.５ｍｍｏｌ)のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを加えた。結果として得られた混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を真空中で除去した。３ｍＬの６０％アセトニトリルを加え、次いで０．２ｍＬのＨＦピリジンを０℃で加えた。結果として得られた溶液を常温で２時間攪拌した。有機溶媒を真空中で除去した。残渣を重炭酸ナトリウムを用いてｐＨ８に調整し、ＤＣＭで抽出し、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、１６０ｍｇの化合物２０−４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４７４［Ｍ＋２Ｈ］,９４７［Ｍ＋Ｈ］。
【０８８６】
化合物２０−５：化合物２０−４(５０ｍｇ、０.０６２ｍｍｏｌ)のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液に、０．３ｍＬのホスゲン／トルエンを０℃で加えた。精製を伴わずに次の段階を行うため、反応混合物を０℃で３時間攪拌し、真空中で濃縮した。
【０８８７】
化合物２０−６：化合物１９−４(７.６ｍｇ、０.０１７ｍｍｏｌ)および化合物２０−５(０.０６２ｍｍｏｌ)を２５μＬのジイソプロピルエチルアミンに加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、３３ｍｇの化合物２０−６を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５８２［Ｍ＋４Ｈ］,７７５［Ｍ＋３Ｈ］,１１６３［Ｍ＋２Ｈ］。
【０８８８】
化合物２０：化合物２０−６(３３ｍｇ、０.０１４ｍｍｏｌ)を１ｍＬのＤＭＦに溶解し、１４μＬ(０.４３ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、１０ｍｇの化合物２０を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５４９［Ｍ＋４Ｈ］,７３２［Ｍ＋３Ｈ］,１０９８［Ｍ＋２Ｈ］。
【０８８９】
[実施例２１：化合物２１の合成]
【０８９０】
【化１８０】
2020143151.tif 000192
【０８９１】
化合物２１−２：Ｎ，Ｎ’−ジメチレンジアミン２１−１(５ｍＬ、４６.５ｍｍｏｌ)およびアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル１３ｍＬ(１１６ｍｍｏｌ)の混合物を８５℃にて１時間熱した。さらに１３ｍＬ(１１６ｍｍｏｌ)のアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルを加えた。反応混合物を続けて８５℃で１時間熱し、室温で一晩攪拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をヘキサンで希釈し、ＳｉｌｉａＳｅｐ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ(１２０g)を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、０−５％メタノール／ＤＣＭで溶出し、１０.１ｇ(６２％)の化合物２１−２を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３４５［Ｍ＋Ｈ］。
【０８９２】
化合物２１−３：化合物２１−２(５.０ｇ、１４.５ｍｍｏｌ)のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、４０ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンを加えた。反応混合物を室温で２日間攪拌し、真空中で濃縮した。残渣をエーテルで処理し、ろ過し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥し、４.３ｇ(９７％)の化合物２１−３を得た。
【０８９３】
化合物２１−４：１６６ｍｇ（０．５４４ｍｍｏｌ）の化合物２１−３および０.１５ｍＬのＮ−メチルモルフォリンのＮ−メチルピロリドン（１０ｍＬ）溶液に、１６０ｍｇの化合物１６−１１を加え、次いで０.０６８ｍＬ(０.４０８ｍｍｏｌ)のＤＥＣＰを加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、３５−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、１００ｍｇ(５０％)の化合物２１−４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４６４［Ｍ＋３Ｈ］,６９６［Ｍ＋２Ｈ］,１３９１［Ｍ＋Ｈ］。
【０８９４】
化合物２１−５：化合物１９−４(１１ｍｇ、０.０２５ｍｍｏｌ)、化合物２１−４(１１５ｍｇ、０.０７７ｍｍｏｌ)およびＮ−メチルモルフォリン(０.０２８ｍＬ、０.２５ｍｍｏｌ)のＮ−メチルピロリドン（１．５ｍＬ）溶液に、２９.３ｍｇ(０.０７７ｍｍｏｌ)のＨＡＴＵを加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、６０ｍｇ(６７％)の化合物２１−５を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６２５［Ｍ＋５Ｈ］,７８１［Ｍ＋４Ｈ］,１０４１［Ｍ＋３Ｈ］。
【０８９５】
化合物２１：化合物２１−５(６０ｍｇ、０.０１４ｍｍｏｌ)を１ｍＬのＤＭＦに溶解し、７μＬ(０.２１ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、２９ｍｇ(５８％)の化合物２１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５９９［Ｍ＋５Ｈ］,７４９［Ｍ＋４Ｈ］,９９８［Ｍ＋３Ｈ］。
【０８９６】
[実施例２２：化合物２２の合成]
【０８９７】
【化１８１】
2020143151.tif 000193
【０８９８】
化合物２２−１：化合物１９−４(７.６ｍｇ、０.０１７ｍｍｏｌ)、化合物１２−７(４０ｍｇ、０.０５１ｍｍｏｌ)およびＤＩＥＡ(０.０３０ｍＬ、０.１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）に、３２ｍｇ(０.０８５ｍｍｏｌ)のＨＡＴＵを加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、２４ｍｇ(６８％)の化合物２２−１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ６１２［Ｍ＋３Ｈ］,９１７［Ｍ＋２Ｈ］,１８３４［Ｍ＋Ｈ］。
【０８９９】
化合物２２：化合物２２−１(２４ｍｇ、０.０１２ｍｍｏｌ)を１ｍＬのＤＭＦに溶解し、１２μＬ（０．３６ｍｍｏｌ）の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、１５ｍｇ(５８％)の化合物２１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５６９［Ｍ＋３Ｈ］,８５２［Ｍ＋２Ｈ］,１７２６［Ｍ＋２Ｈ］。
【０９００】
［実施例２３：化合物２３の合成］
【０９０１】
【化１８２】
2020143151.tif 000194
【０９０２】
化合物２３−１：化合物１４−３(４.０ｇ、１２.４ｍｍｏｌ)およびＤＩＥＡ６.６ｍＬ(３７.２ｍｍｏｌ)のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液に、３．３１ｇのトルエンスルホン酸塩化物を０℃で加えた。反応混合物を室温で２日間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、５％クエン酸、水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、３.５gの化合物２３−１を得た。
【０９０３】
化合物２３−２：化合物２３−１(３.５ｇ、７.３４ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、アジ化ナトリウム(１.４４ｇ、２２.０２ｍｍｏｌ)を加えた。反応混合物を５０℃で２日間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、２.１gの化合物２３−２を得た。
【０９０４】
化合物２３−３：化合物２３−２(２.１ｇ、６.０５ｍｍｏｌ)のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）溶液に、４００ｍｇ(１０％)のＰｄ−Ｃを加えた。結果として得られた混合物を、１気圧のＨ２の下で、２４時間室温で攪拌した。反応混合物をろ過し、真空中で濃縮し、２．１ｇの化合物２３−３を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３２２［Ｍ＋Ｈ］。
【０９０５】
化合物２３−４：化合物２３−３(３３ｍｇ、０.１０２ｍｍｏｌ)、化合物１２−７(４０ｍｇ、０.０５１ｍｍｏｌ)およびジイソプロピルエチルアミン（５４μＬ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、３８ｍｇのＨＡＴＵを加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、５２ｍｇの化合物２３−４を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５２５［Ｍ＋２Ｈ］,１０４９［Ｍ＋Ｈ］。
【０９０６】
化合物２３−５：化合物２３−４(５２ｍｇ、０.０４５ｍｍｏｌ)を５ｍＬの４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンに溶解した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、真空中で濃縮し、５２ｍｇ（１００％）の化合物２３−５を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４９７［Ｍ＋２Ｈ］,９９３［Ｍ＋Ｈ］。
【０９０７】
化合物２３−６：化合物１９−４(７.６ｍｇ、０.０１７ｍｍｏｌ)、化合物２３−６(５２ｍｇ、０.０５１ｍｍｏｌ)およびＤＩＥＡ(０.０３０ｍＬ、０.１７ｍｍｏｌ)のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に、３２ｍｇ(０.０８５ｍｍｏｌ)のＨＡＴＵを加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、２６ｍｇ(６１％)の化合物２３−６を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５８３［Ｍ＋４Ｈ］,７７７［Ｍ＋３Ｈ］,１１６５［Ｍ＋２Ｈ］。
【０９０８】
化合物２３：化合物２３−６(２６ｍｇ、０.０１ｍｍｏｌ)を１ｍＬのＤＭＦに溶解し、１０μＬ(０.３１ｍｍｏｌ)の無水ヒドラジンを加えた。結果として得られた溶液を室温で１時間攪拌した。反応は１Ｎ塩酸塩溶液により停止した。反応混合物を分取ＨＰＬＣで精製し、２０−７０％ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、２０分、２５４ｎｍで溶出し、１０ｍｇ(４０％)の実施例２３を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５５０［Ｍ＋４Ｈ］,７３３［Ｍ＋３Ｈ］,１１００［Ｍ＋２Ｈ］。
【０９０９】
【表３】
2020143151.tif 000195
2020143151.tif 000196
2020143151.tif 000197
2020143151.tif 000198
【０９１０】
［実施例２４：一過性トランスフェクション］
ＣＨＯ−Ｓ培養細胞を、トランスフェクションの約１６時間前に、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ
Ｃｈｏ培地に０．７５×１０６／ｍＬの濃度で播種した。細胞の数が１．４〜１．６×１０６／ｍＬになる翌日には、細胞はトランスフェクション可能となる。細胞が目的の数に達したときに、４００ｍＭのｐＡＦストックを、１．４ｍＭの最終培養濃度になるように加える。ＰＥＩ／ＤＮＡ複合体を以下の通り調製した：ＤＮＡ（１．４２μｇ／１×１０６細胞）をＲＰＭＩ（全培養液容積の５％（ｖ／ｖ））に溶解し、ＤＮＡ／ＲＰＭＩ混合物を室温で２分間インキュベートし、ＰＥＩストック（１ｍｇ／ｍＬ）をＤＮＡ溶液に３：１の割合（ｍＬ  ＰＥＩ／μｇ  ＤＮＡ）で加え、混合物を室温で５分間インキュベートした。培養細胞に混合物を穏やかに加え、攪拌した。フラスコを３２℃インキュベーターに移した。トランスフェクションの６日後にウエスタンブロット解析を実施した。トランスフェクションの７日後に上清を回収した。
【０９１１】
［実施例２５：ＣＤ７０−ＡＤＣインビボ有効性試験］
ＮＣＡ１と結合したＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１の抗腫瘍活性を、腎細胞癌異種移植マウスモデルにおいて試験した。７８６−Ｏ（ヒト腎細胞癌細胞）を、腫瘍の断片として、生後５週間のメスのヌードマウスにインビボの２経路に対して移植した。試験群毎に１０個体のマウスを、異なる投与量のＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１（ヒスチジン５０ｍＭ、ＮａＣｌ１００ｍＭ、トレハロース５％、ＰＨ６．０に調整）にて処理し、対照の構成であるＡＤＣを含まない試験ビヒクルと比較した。これらの投与は、一調査あたり一日一回、尾への注射によって経静脈投与によって行った。マウスの体重を測定し、電子ノギスを用いて腫瘍を３次元的に測定した。個々の腫瘍の容積を、高さ×幅×長さ、で計算した。血管新が発達した適切な大きさの腫瘍（腫瘍の外観により決定）を持つマウスを、治療グループへ無作為に抽出し、第３３日目（細胞注射の３週間後）に、個体の体重に基づいて投薬した。この試験の結果を図２に示す。
【０９１２】
【表４】
2020143151.tif 000199
【０９１３】
［実施例２６：バーキットリンパ腫モデルにおけるＣＤ７０−ＡＤＣ］
非抱合型ＡＲＸ−αＣＤ７０およびＡＲＸ−αＣＤ７０複合ＡＤＣの抗腫瘍活性を、ダウディ（Ｄａｕｄｉ）（バーキットリンパ腫）腫瘍モデルにおいて測定した。試験群毎に１０個体のメスのヌードマウスを被験体として用いた。全ての群（Ｎ＝２０）に対して、１日目に単回経静脈投与を行い、試験を開始した。５つの群（試験群毎に１０個体の試験体と、１０個体のビヒクル）を用いて、一週間後にそれらをランダム化した。
【０９１４】
【表５】
2020143151.tif 000200
【０９１５】
２１日経過後（または腫瘍が再成長を始めたとき）に、二度目の注射を投与し、非ビヒクル群を、それぞれ同等の１０個の群に分割し、二回目の経静脈注射を与えた。
【０９１６】
マウスの体重を測定し、電子ノギスを用いて腫瘍を３次元的に測定した。個々の腫瘍の容積を、高さ×幅×長さ、で計算した。血管が発達した適切な大きさの腫瘍（腫瘍の外観により決定）を持つマウスを、治療グループへ無作為に抽出し、第３３日目（細胞注射の３週間後）に、個体の体重に基づいて投薬した。
【０９１７】
［実施例２７：ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１  ７８６−Ｏ  ９６時間細胞毒性試験］
ＡＲＸ−αＣＤ７０抗体薬物複合体の細胞毒性を、７８６−Ｏ細胞中のドラスタチンと比較した。ＩＣ５０が測定され、この実験の結果を、図３Ａに示す。
【０９１８】
［実施例２８：ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１  Ｃａｋｉ−１  ９６時間細胞毒性試験］
ＡＲＸ−αＣＤ７０抗体薬物複合体の細胞毒性を、Ｃａｋｉ−１細胞中のドラスタチンと比較した。ＩＣ５０が測定され、この実験の結果を、図３Ｂに示す。
【０９１９】
［実施例２９：腎臓癌の７８６−Ｏ異種移植モデル中の、３つのＣＤ７０−ＡＳ２６９の抗腫瘍活性］
７８６−Ｏ腎細胞癌腫瘍モデルを、メスのヌードマウスに用いた。１０個の群（各群に１０個体のヌードマウス）において、それぞれのマウスに７８６−Ｏ腫瘍の断片を与え、その後一週間後、および腫瘍が１００〜３００ｍｍ３に成長したときにランダム化した。各群（それぞれの投与レベルに１つずつ、およびビヒクルに１つ）は以下のように処理した。
−−ビヒクル
−−ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１−ＩｇＧ１ｖ１を０．５、１．および３ｍｇ／ｋｇ
−−ＣＤ７０−７Ｆ２−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１−ＩｇＧ１ｖ１を０．５、１．および３ｍｇ／ｋｇ
−−ＣＤ７０−８Ａ１−ＨＡ１２２−ＮＣＡ１−ＩｇＧ１ｖ１を０．５、１．および３ｍｇ／ｋｇ
単回投与注射は、移植から１２日目に、１００個体のマウス全てに静脈内に行った。データを含むこれらの実験の結果を、図４〜６に示す。
【０９２０】
［実施例３０：癌の研究のための、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１のヒト臨床試験］
癌の研究のための、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１の安全性および／または有効性に関するヒト臨床試験。
【０９２１】
目的は、ＡＲＸ−αＣＤ７０と結合したドラスタチン類縁体を含む投与用組成物の安全性および薬物動態を比較することである。
【０９２２】
試験デザイン：本試験では、フェイズ１、１機関、非盲検、無作為化した用量漸増試験の後、腎臓癌患者におけるフェイズ２試験を実施する。患者は、試験への参加以前に、αＣＤ７０と結合したドラスタチン類縁体に曝露されてはならない。患者は、試験開始の２週間以内に、がんの治療を受けてはならない。治療には、化学療法剤、造血成長因子、およびモノクローナル抗体等のバイオ療法剤の使用が含まれる。患者は、以前の治療により受けた全ての毒性から回復（グレード０または１）している必要がある。全ての被験者は、安全性評価を受け、薬物動態解析のための全ての採血は、スケジュール通りに実施される。全ての試験は、研究所倫理委員会の認可および患者の同意に基づき実施される。
【０９２３】
フェイズ１：患者は、２８日間のサイクル毎に、第１日、８日および１５日目にＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１を静脈注射で投与される。ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１の用量は、以下の原則による判定に基づいた毒性により、維持され、又は調整され得る。治療は、許容できない毒性が無ければ、２８日毎に繰り返される。ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１の最大耐用量（ＭＴＤ）が決定されるまで、３〜６人の患者の集団に対して、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１の用量が漸増される。ＭＴＤは、３人のうちの２人の患者、または、６人のうちの２人の患者が用量規制毒性を経験する直前の用量として決定される。用量規制毒性は、ＮａｔｉｏＮａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｒｕｔｅ（ＮＣＩ）  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＴＣＡＥ）  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．０（２００６年８月９日）の定める定義および基準に基づき決定される。
【０９２４】
フェイズ２：患者は、フェイズ１と同様に、フェイズ１で決定されたＭＴＤにて、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１を投与される。治療は、疾病の進行または許容できない毒性が無ければ、４週間ごとに２〜６コースを繰り返す。２コースの試験治療の完了後、完全または部分的な奏功を示した患者は、さらに４コースを受けてもよい。６コースの試験治療の完了後に２か月を超えて安定な状態を保つ患者は、元の適性尺度を満たすのであれば、疾病の進行に際してさらに６コースを受けてもよい。
【０９２５】
採血：血液は、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ１の投与前および投与後に、直接の静脈穿刺により、連続的に採取される。血清濃度の決定のための静脈血サンプル（５ｍＬ）は、投与の約１０分前、および投与のおよそ１日、８日、および１５日後に採取される。各血清サンプルは、２等分される。全ての血清サンプルは、−２０℃で保存される。血清サンプルは、ドライアイス上で輸送される。
【０９２６】
薬物動態：患者は、薬物動態評価のため、治療開始前、および第１日、８日および１５日目に、血漿／血清サンプルの採取を受ける。薬物動態パラメーターは、Ｄｉｇｉｔａｌ
Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  Ｃｏｒｐｏｌａｔｉｏｎ  ＶＡＸ８６００  ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ上で、最新版のＢＩＯＡＶＬソフトウエアを使用し、モデルに依存しない方法により計算される。以下の薬物動態パラメーターが決定される：最高血清濃度（Ｃｍａｘ）；最高血清濃度到達時間（ｔｍａｘ）；一次台形公式により計算される、開始時から最後の採血までの、濃度−時間曲線の下側の面積（ＡＵＣ）（ＡＵＣ０−７２）；および、消失率定数から計算される終末消失半減期（ｔ１／２）。消失率定数は、連続データの末端線形領域の濃度−時間対数線形プロットの線形回帰により推計される。薬物動態パラメーターの平均値、標準偏差（ＳＤ）および変動係数（ＣＶ）は、各治療において求められる。パラメーター平均値の比（保存された形式（formulation）／保存されない形式）が求められる。
【０９２７】
併用療法における患者の反応：患者の反応は、Ｘ線、ＣＴスキャンおよびＭＲＩによるイメージングにより判定され、イメージングは、試験の開始前および最初のサイクルの終了時に実施され、追加のイメージングが、４週間ごと、または続きのサイクルの終了時に実施される。画像診断法は、がんのタイプおよび実行可能性／入手可能性に基づき選択され、同じ画像診断法は、類似のがんのタイプ、並びに各患者の試験コースの間を通じて利用される。奏功率は、ＲＥＣＩＳＴ尺度(Therasse et al, J.Natl. Cancer Inst. 2000 Feb 2;92(3):205−16; http:／／ctep.cancer.gov／forms／TherasseRECISTJNCI.pdf)を用いて決定される。患者はまた、がん前駆細胞の表現型の変化、およびクローンの成長（clonogenic growth）の変化を、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティングおよびＩＨＣにより、および、細胞の遺伝学的変化をＦＩＳＨにより、判定するために、がん／腫瘍生検を受ける。患者は、試験治療の完了後、４週間定期的に追跡される。
【０９２８】
[細胞毒性活性、細胞増殖抑制活性、および免疫調節活性についての追加アッセイ]
標的細胞に対するエフェクター機能を抗体が仲介するかどうかを決定する方法が知られている。本明細書では、それらの方法の、例示としての非制限例を記載する。
【０９２９】
抗ＣＤ７０抗体または誘導体が、活性化した免疫細胞またはＣＤ７０発現癌細胞に対する、抗体に依存した細胞障害活性を仲介するかどうかを決定するために、抗体およびエフェクター免疫細胞の存在下で標的細胞死を測定するアッセイが用いられ得る。このタイプの細胞毒性を測定するのに用いられるアッセイは、エフェクター細胞および標的特異抗体の存在下で、インキュベーション後の、代謝的に標識された標的細胞から放出された５１Ｃｒの定量に基づくことができる(例えば、erussia and Loza, 2000, Methods in Molecular Biology 121:179-92; and "51Cr Release Assay of Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC)" in Current Potocols in Immunology, Coligan et al. eds.,Wileyand Sons, 1993を参照)。例えば、Ｎａ２５１ＣｒＯ４に標識され、ウェルあたり５０００細胞の密度で９６ウェルのプレートに蒔かれた、活性化免疫細胞（例えば、活性化リンパ球）またはＣＤ７０発現癌細胞は、抗ＣＤ７０抗体の濃度を変化させて３０分間処理されることができ、その後、標準ヒト末梢血管単核細胞（ＰＢＭＣ）と４時間混合した。標的細胞死に伴う膜破壊により、培養上清に５１Ｃｒが放出される。放出された５１Ｃｒは、細胞毒性活性の測定として、収集および放射能評価できる。ＡＤＣＣを測定する他のアッセイは、非放射性の標識を含んでいてもよく、または特定の酵素の誘導的放出に基づいてもよい。例えば、時間分解蛍光光度法に基づく非放射性のアッセイが、商業的に入手できる(Delphia, Perkin Elmer)。このアッセイは、細胞膜を貫通し、その後加水分解して膜不透過性親水性リガンド（ＴＤＡ）を形成する、蛍光増強リガンド（ＢＡＴＤＡ）であるアセトキシメチルエステルを有する積載標的細胞に基づいている。標的特異抗体とＰＢＭＣエフェクター細胞とを混合したとき、ＴＤＡは、溶解した細胞から放出され、ユウロピウムと混合したときには高度に蛍光を発するキレートを形成することができる。時間分解蛍光光度計にて測定したシグナルは、細胞の溶解量と相関する。
【０９３０】
抗ＣＤ７０抗体または誘導体が、活性化した免疫細胞またはＣＤ７０発現癌細胞に対する、抗体に依存した細胞食作用を仲介するかどうかを決定するために、エフェクター免疫細胞によって標的細胞内部化を測定するアッセイが用いられる（例えば、新鮮な養殖マクロファージまたは確立されたマクロファージ様細胞株）が用いられ得る（例えば、以下参照：Munn and Cheung, 1990, J. Exp. Med. 172:231-37; Keler et al., 2000, J. Immunol. 164:5746-52; Akewanlop et al., 2001, Cancer Res. 61:4061-65）。例えば、標的細胞は、ＰＫＨ６７（Ｓｉｇｍａ）のような親油性の膜染料を用いて標識してもよく、標的特異抗体で覆ってもよいし、エフェクター免疫細胞と４〜２４時間混合してもよい。その後、食細胞表面マーカー（例えばＣＤ１４）に対して特異性のある、蛍光色素で標識された抗体と対比染色することによってエフェクター細胞を特定した。そして、２色のフローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡によって該エフェクター細胞を分析した。二重陽性細胞は、内部化した標的細胞を有するエフェクター細胞を表している。これらのアッセイにとって、エフェクター細胞は、Ｍ−ＣＳＦもしくはＧＭ−ＣＳＦを用いて５〜１０日間培養することにより、マクロファージへ分化したＰＢＭＣに由来する単球でありうる（例えば、Munn and Cheung, supraを参照）。ＡＴＣＣから入手できる、ヒトのマクロファージのような細胞株Ｕ９３７（Larrick et al., 1980, J. Immunology 125:6-12）またはＴＨＰ−１（Tsuchiya et al., 1980, Int. J. Cancer 26:171-76）を、代替の食作用細胞源として使用してもよい。
【０９３１】
また、抗体が、標的細胞との結合に対する、補体に依存した細胞毒性を仲介するかどうかを決定する方法が知られている。同様の方法は、ＣＤ７０結合剤が、活性化した免疫細胞またはＣＤ７０発現癌細胞上のＣＤＣを仲介するかどうかを決定するために適用することができる。そのような方法の実施例を以下に記載する。
【０９３２】
有効な補体の原料は、正常ヒト血清、またはウサギを含む実験動物から精製するかのどちらかである。標準アッセイにおいて、ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０発現活性化免疫細胞（例えば、活性化リンパ球）またはＣＤ７０発現癌細胞とともに、補体の存在下でインキュベートされる。そのようなＣＤ７０結合剤の、細胞溶解を仲介する能力は、いくつかの読み出しによって定量することができる。一例としては、Nasup.５１ＣｒＯ４放出アッセイが用いられる。このアッセイにおいて、標的細胞はＮａ５１ＣｒＯ４によって標識される。非取り込み型のＮａ５１ＣｒＯ４は洗浄され、細胞は適切な密度（典型的には、５０００〜５００００細胞／ウェル）で９６ウェルのプレートに蒔かれる。正常血清または生成された補体の存在下で、ＣＤ７０結合剤とともにインキュベーションは、ＣＯ２５％の大気中、３７℃において、２〜６時間持続する。細胞溶解を表している、放出された放射能は、培養上清のアリコットにおいて、ガンマ線計数によって測定される。最大細胞溶解は、洗浄剤（０．５〜１％ＮＰ−４０またはTriton X-100）処理による、組み込みＮａ５１ＣｒＯ４の放出によって測定される。自然発生的な、バックグラウンド細胞溶解は、補体のみが存在し、ＣＤ７０結合剤が全く存在しないウェル中で測定される。パーセンテージ細胞溶解は、（ＣＤ７０結合剤由来の溶解−自然発生的溶解）／最大細胞溶解、として算出される。第２の読み出しは、生細胞による、代謝色素（例えば、Alamar Blue）の減少である。このアッセイにおいて、標的細胞は補体とＣＤ７０結合剤とともにインキュベートされ、かつ上述のようにインキュベートされる。インキュベーションの最後に、Alamar Blue(Biosource International, Camarillo, Calif.)の１／１０体積を加える。インキュベーションは、ＣＯ２５％の大気中、３７℃において、最大１６時間持続する。代謝的に活性な生細胞の指標としてのAlamar Blueの減少は、５３０ｎｍ励起および５９０ｎｍ発光の蛍光分析により測定される。第３の読み出しは、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）の細胞膜透過性である。補体活性化の結果としての、原形質膜中の細孔の形成は、ＰＩの細胞中への進入を容易にする。ＰＩは細胞内で、核中に拡散し、ＤＮＡと結合する。ＤＮＡと結合して、６００ｎｍのＰＩ蛍光は著しく増大する。ＣＤ７０結合剤および補体を有する標的細胞の処理は、上述のように行われる。インキュベーションの最後に、ＰＩを最終濃度５ｍｕ．ｇ／ｍｌになるように加える。その後、励起に４８８ｎｍアルゴンレーザーを用いるフローサイトメトリーによって、細胞浮遊が検査される。溶解細胞は、６００ｎｍの蛍光発光により検出される。
【０９３３】
[免疫学的疾患またはＣＤ７０発現する癌の追加の動物モデル]
本発明の抗ＣＤ７０結合剤（例えば、１つ以上の天然にコードされていないアミノ酸を有する抗体もしくは誘導体、および本発明のＡＤＣ）は、免疫学的疾患またはＣＤ７０発現癌の動物モデルにおいて、試験または実証され得る。免疫学的疾患またはＣＤ７０発現癌の、確立された多くの動物モデルが当業者に知られている。それらのモデルのうちいずれも、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の有効性をアッセイするのに用いることができる。そのようなモデルの非制限例を以下に記載する。
【０９３４】
糖尿病、狼瘡、全身性硬化症、シェーグレン症候群、経験的自己免疫性脳脊髄炎（多発性硬化症）、甲状腺炎、重症筋無力症、関節炎、ブドウ膜炎、および炎症性腸疾患を含む、全身性および臓器特異的な自己免疫疾病の動物モデルの実施例は、Bigazzi、"Animal Models of Autoimmunity: Spontaneous and Induced," in The Autoimmune Diseases (Rose and Mackay eds., Academic Press, 1998)、および、"Animal Models for Autoimmune and Inflammatory Disease," in Current Protocols in Immunology (Coligan et al. eds., Wiley and Sons, 1997)に記述されている。
【０９３５】
アレルギー症状（例えば、喘息および皮膚炎）は、げっ歯類においてもモデル化することができる。気道過敏症は、オボアルブミン(Tomkinson et al., 2001, J. Immunol. 166:5792-800)またはマンソン住血吸虫卵白抗原(Tesciuba et al., 2001, J. Immunol. 167:1996-2003)によって、マウスに生じさせることができる。マウスのＮｃ／Ｎｇａ系は、血清中のＩｇＥを著しく増大し、自然発症的にアトピー性皮膚炎様病変を患う(Vestergaardet al., 2000, Mol. Med. Today 6:209-10; Watanabe et al., 1997, Int. Immunol. 9:461-66; Saskawa et al., 2001, Int. Arch. Allergy Immunol. 126:239-47)。
【０９３６】
致死的に放射線処理された組織不適合ホストへの、免疫形質転換受容性ドナーリンパ球の注射は、マウスにＧＶＨＤを生じさせるための古典的なアプローチである。あるいは、親Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスモデルは、急性かつ長期に渡るＧＶＨＤを引き起こすシステムを提供する。このモデルにおいて、Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスモデルは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびＤＢＡ／２マウスの親系統の交配によるＦ１子孫である。非放射のＢ６Ｄ２Ｆ１マウスへの、ＤＢＡ／２リンパ球の転移は、慢性的なＧＶＨＤを引き起こす。それに対して、非放射のＢ６Ｄ２Ｆ１マウスへの、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／１０、またはＢ１０．Ｄ２リンパ球の転移は、急性のＧＶＨＤを引き起こす(Slayback et al., 2000, Bone Marrow Transpl. 26:931-938; Kataoka et al., 2001, Immunology 103:310-318)。
【０９３７】
加えて、ヒト造血幹細胞および成熟末梢血リンパ球の両方は、ＳＣＩＤマウスに移植することができる。そして、これらのリンパ−造血細胞はＳＣＩＤマウス中で機能し続ける(McCune et al., 1988, Science 241:1632-1639; Kamel-Reid and Dick, 1988, Science 242:1706-1709; Mosier et al., 1988, Nature 335:256-259)。このことは、ヒトリンパ球における潜在的治療薬の直接試験のための、小動物モデルシステムを提供した(例えば、 Tournoy et al., 2001, J. Immunol. 166:6982-6991を参照)。
【０９３８】
さらに、ＣＤ７０発現ヒト腫瘍細胞株を、適切な免疫不全げっ歯類系統（例えば、無胸腺症のヌードマウスまたはＳＣＩＤマウス）に移植することによって、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の生体内有効性を試験するための小動物モデルを作成することができる。ＣＤ７０発現ヒトリンパ球株の実施例としては、例えば、Daudi(Ghetie et al., 1994, Blood83:1329-36; Ghetie et al., 1990, Int. J. Cancer 15:481-85; de Mont et al., 2001,
Cancer Res. 61:7654-59)、HS-Sultan(Cattan and Maung, 1996, Cancer Chemother. Pharmacol. 38:548-52; Cattan and Douglas, 1994, Leuk. Res. 18:513-22)、Raji(Ochakovskaya et al., 2001, Clin. Cancer Res. 7:1505-10; Breisto et al., 1999, Cancer Res. 59:2944-49)、およびCA46(Kreitman et al., 1999, Int. J. Cancer 81:148-55)が挙げられる。ＣＤ７０発現ホジキンリンパ腫株の非制限例は、L428(Drexler, 1993, Leuk. Lymphoma 9:1-25; Dewan et al., 2005, Cancer Sci. 96:466-473)である。ＣＤ７０発現ヒト腎細胞癌細胞株の非制限例としては、786-O(Ananth et al., 1999, Cancer Res. 59:2210-16; Datta et al., 2001, Cancer Res. 61:1768-75)、ACHN(Hara et al., 2001, J.
Urol. 166:2491-94; Miyake et al., 2002, J. Urol. 167:2203-08)、Caki-1(Prewettet
al., 1998, Clin. Cancer Res. 4:2957-66; Shi and Siemann, 2002, Br. J. Cancer87:119-26)、およびCaki-2(Zellweger et al., 2001, Neoplasia 3:360-67)が挙げられる。ＣＤ７０発現上咽頭癌細胞株の非制限例としては、Ｃ１５およびＣ１７ (Busson et al.,
1988, Int. J. Cancer 42:599-606; Bernheim et al., 1993, Cancer Genet. Cytogenet. 66:11-5)が挙げられる。ＣＤ７０発現ヒト神経膠腫細胞株の非制限例としては、Ｕ３７３(Palma et al., 2000, Br. J. Cancer 82:480-7)およびU87MG (Johns et al., 2002, Int. J. Cancer 98:398-408)が挙げられる。多発性骨髄腫細胞株の非制限例としては、MM.1S(Greenstein et al., 2003, Experimental Hematology 31:271-282)およびL363(Diehl et al., 1978, Blut 36:331-338)が挙げられる。(Drexler and Matsuo, 2000, Leukemia Research 24:681-703も参照)。これらの腫瘍細胞株は、皮下注射による固体腫瘍、または静脈注射による播種性の腫瘍のいずれかとして、免疫不全げっ歯類ホストに定着させることができる。ホストに定着するとすぐに、これらの腫瘍モデルは、本明細書で記載したように、インビボの腫瘍成長の変調における、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の治療効果を評価することに適用することができる。
【０９３９】
[ＣＤ７０に関連する疾患］
本明細書に記載の抗ＣＤ７０抗体およびＡＤＣは、免疫細胞（例えば、リンパ球または樹状細胞）の不適切な活性化によるＣＤ７０の発現によって特徴づけられるＣＤ７０発現癌または免疫疾患の治療または予防に有用である。そのようなＣＤ７０の発現は、例えば、細胞表面上のＣＤ７０タンパク質レベルの増加および／または発現したＣＤ７０の変化した抗原性が原因でありうる。本明細書に記載の方法による、免疫疾患の治療または予防は、そのような治療または予防を必要としている対象への、有効量の抗ＣＤ７０抗体または誘導体の投与によって達成される。この投与のために、抗体または誘導体は、（ｉ）ＣＤ７０を発現し、患部と関連している活性化免疫細胞と結合しており、（ｉｉ）活性化免疫細胞に、細胞毒性、細胞増殖抑制性、または免疫調節性効果を及ぼす。ある実施形態において、細胞毒性、細胞増殖抑制性、または免疫調節性は、細胞毒性薬剤、細胞増殖抑制性薬剤、または免疫調節性薬剤との結合無しに発揮される。ある実施形態において、細胞毒性、細胞増殖抑制性、または免疫調節性は、細胞毒性薬剤、細胞増殖抑制性薬剤、または免疫調節性薬剤との結合によって発揮される。
【０９４０】
免疫細胞の正常ではない活性化によって特徴づけられ、本明細書に記載の方法によって治療または予防される免疫疾患は、例えば病気の根底にある過敏な反応の種類によって、分類され得る。この過敏な反応は、一般的に、４つの種類に分類される。それは、アナフィラキシー反応、細胞毒性（細胞溶解性）反応、免疫複合体反応、または細胞性免疫（ＣＭＩ）反応である（遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応としても言及される）。（例えば、Fundamental Immunology (William E. Paul ed., Raven Press, N.Y., 3rd ed. 1993)を参照）。
【０９４１】
そのような免疫疾患の特定の例としては以下のものが挙げられる。：関節リウマチ、乾癬性関節炎、自己免疫性脱髄疾患（autoimmune demyelinative diseases）（例えば、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎）、内分泌性眼障害、ブドウ膜網膜炎、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、甲状腺機能亢進症、糸球体腎炎、自己免疫性肝臓疾患（autoimmune hepatological disorder）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、過敏症、アレルギー反応、シェーグレン症候群（Sjogren's syndrome）、Ｉ型糖尿病、原発性胆汁性肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症（Wegener's granulomatosis）、線維筋痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、多発性内分泌腺不全（multiple endocrine failure）、シュミット症候群（Schmidt's syndrome）、自己免疫性ブドウ膜炎（autoimmune uveitis）、アディソン病（Addison's disease）、副腎炎、甲状腺炎、橋本甲状腺炎（Hashimoto's thyroiditis）、自己免疫性甲状腺疾患、悪性貧血、胃委縮症（gastric atrophy）、慢性肝炎、ルポイド肝炎、アテローム性動脈硬化症、亜急性皮膚エリテマトーデス、副甲状腺機能低下症、ドレスラー症候群（Dressler's syndrome）、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病、溶血性貧血、尋常性天疱瘡、天疱瘡、疱疹状皮膚炎、円形脱毛症（alopecia arcata）、類天疱瘡、強皮症、全身性進行性硬化症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着症、レイノー現象、食道運動障害（esophageal dysmotility）、手指硬化症）および毛細血管拡張症）、 男性および女性の自己免疫性不妊症、強直性脊椎炎（ankylosing spondolytis）、潰瘍性大腸炎、混合結合組織病、結節性多発動脈炎（polyarteritis nedosa）、全身性壊死性血管炎、アトピー性皮膚炎、アトピー性鼻炎、グッドパスチャー症候群、シャーガス病、サルコイドーシス、リウマチ熱、喘息、再発性流産（recurrent abortion）、抗リン脂質症候群、農夫肺、多形性紅斑、心術後症候群、クッシング症候群、自己免疫性慢性活動性肝炎、鳥飼育者肺、中毒性表皮壊死症、アルポート症候群（Alport's syndrome）、肺胞炎、アレルギー性肺胞炎、線維化性肺胞炎、間質性肺病（interstitial lung disease）、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、輸血反応、高安動脈炎（Takayasu's arteritis）、リウマチ性多発性筋痛、側頭動脈炎、住血吸虫症、巨細胞性動脈炎、回虫症、アスペルギルス症、サムター症候群（Sampter's syndrome）、湿疹、リンパ腫様肉芽腫症、ベーチェット病（Behcet's disease）、カプラン症候群、川崎病、デング熱、脳脊髄炎、心内膜炎、心内膜心筋線維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑（erythema elevatum et diutinum）、乾癬、胎児赤芽球症、好酸球性筋膜炎、シャルマン症候群（Shulman's syndrome）、フェルティ症候群（Felty's syndrome）、フィラリア症、毛様体炎、慢性毛様体炎（chronic cyclitis）、異時性毛様体炎（heterochronic cyclitis）、フックス毛様体炎（Fuch's cyclitis）、ＩｇＡ腎症（IgA nephropathy）、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（Henoch-Schonlein purpura）、移植片対宿主病、移植拒絶（transplantation rejection）、心筋症、イートン・ランバート症候群（Eaton-Lambert syndrome）、再発性多発性軟骨炎、クリオグロブリン血症、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（Waldenstrom's macroglobulemia）、エヴァンス症候群（Evan's syndrome）、および自己免疫性性腺機能不全。
【０９４２】
したがって、本明細書に記載の方法は、Ｂリンパ球の疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、リウマチ様関節炎、およびＩ型糖尿病）、Ｔｈ１−リンパ球の病気（例えば、リウマチ様関節炎、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁性肝硬変症、ヴェグナー肉芽腫症、結核、または移植片対宿主病）、またはＴｈ２−リンパ球の病気（例えば、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身性硬化症、または慢性移植片対宿主病）の治療を含む。一般的に、樹状細胞に関係する疾患は、Ｔｈ１−リンパ球またはＴｈ２−リンパ球の疾患に関係する。
【０９４３】
ある実施形態において、免疫学的疾患は、疾患と関連する活性化Ｔ細胞がＣＤ７０を発現するというＴ細胞疾患のような、Ｔ細胞を仲介とした免疫の病気である。抗ＣＤ７０結合剤（例えば、抗体または誘導体）は、前記のようなＣＤ７０発現活性化Ｔ細胞を枯渇させるために投与され得る。特定の実施形態において、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の投与は、ＣＤ７０発現活性化Ｔ細胞を枯渇させ得る。その一方で、静止Ｔ細胞は、抗ＣＤ７０または誘導体によって、実質的に枯渇されない。この文脈で、”実質的に枯渇されない”とは、静止Ｔ細胞の約６０％以下、または約７０％以下、または８０％以下は枯渇されないということを意味している。
【０９４４】
また、本明細書に記載の抗ＣＤ７０抗体およびＡＤＣは、ＣＤ７０を発現する癌の治療または予防に有用である。本明細書に記載の方法によれば、ＣＤ７０を発現する癌の治療または予防は、そのような治療または予防が必要な対象に、効果的な量の抗ＣＤ７０抗体または誘導体を投与することにより実現される。治療または予防は、抗体または誘導体が（ｉ）ＣＤ７０発現癌細胞と結合し、（ｉｉ）細胞毒性効果または細胞増殖抑制効果を及ぼして、ＣＤ７０発現癌細胞の増殖を枯渇または抑制することにより実現される。ある実施形態において、細胞毒性、細胞増殖抑制性、免疫調節性は、細胞毒性、細胞増殖抑制性、または免疫調節性薬剤との結合無しに発現する。ある実施形態において、細胞毒性、細胞増殖抑制性、免疫調節性は、細胞毒性薬剤、細胞増殖抑制性薬剤、または免疫調節性薬剤と結合することにより発現する。
【０９４５】
本明細書に記載の方法により治療または予防し得るＣＤ７０発現癌は、例えば、種々の非ホジキンリンパ腫のサブタイプ（無痛性ＮＨＬ、濾胞性ＮＨＬ、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性ＮＨＬ、または周辺帯ＮＨＬ）；ホジキン病（例えば、リード・スタンバーグ細胞）；Ｂ細胞系統の癌（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（diffuse large B-cell lymphomas）、濾胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、外套細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ性白血病（例えば、急性リンパ性白血病、慢性リンパ球性白血病）を含む）；エプスタイン・バール・ウイルス陽性Ｂ細胞リンパ腫（Epstein Barr Virus positive B cell lymphomas）；腎細胞癌（例えば、明細胞および乳頭の）；上咽頭癌；胸腺癌；神経膠腫；グリア芽腫；神経芽細胞腫；星状細胞腫；髄膜腫；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症；多発性骨髄腫；並びに、大腸癌、胃癌、および直腸癌である。前記癌は、例えば、新しく診断され得る、事前治療され得る、または難治性もしくは再発性であり得る。ある実施形態において、ＣＤ７０発現癌は、１つの細胞あたり少なくとも約１５，０００、少なくとも１０，０００、または少なくとも５，０００個のＣＤ７０分子を有する。
【０９４６】
本発明の、抱合または非抱合型抗ＣＤ７０抗体の組み合わせ投与のための治療措置に関して、特定の実施形態において、抗ＣＤ７０結合剤は、治療薬剤と同時に投与される。別の特定の実施形態において、抗Ｃ７０抗体は、治療薬剤と複合化される。ある実施形態において、対象は、抗ＣＤ７０結合剤および任意の治療薬剤の投与の後、観察される。
【０９４７】
例えば、治療薬剤は、癌細胞または活性化した免疫細胞に治療効果を及ぼす薬剤の何れかであり得る。一般的に、治療薬剤は、細胞毒性または免疫調節性薬剤である。そのような組み合わせ投与は、疾患パラメータ（例えば、症状の重症度、症状の数、または再発の頻度）に対して、追加効果もしくは相乗効果を有する。
【０９４８】
有用な種類の細胞毒性または免疫調節性薬剤としては、例えば、抗チューブリン薬、アウリスタチン（auristatins）、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製抑制薬、アルキル化薬剤（例えば、シスプラチン、モノ（白金）、ビス（白金）および３核白金錯体のような白金錯体、およびカルボプラチン）、アントラサイクリン、抗生物質、葉酸代謝拮抗薬、代謝拮抗剤、化学療法増感剤、ズオカルマイシン、エトポシド、フッ化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン、ニトロソウレア、platinol（登録商標）、プレ成形化合物（pre-forming compounds）、プリン代謝拮抗物質、ピューロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、などが挙げられる。
【０９４９】
個々の、細胞毒性または免疫調節性薬剤としては、例えば、アンドロゲン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、アスパラギナーゼ、５−アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシイミン、カンプトセシン、カルボプラチン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ＣＣ−１０６５、クロラムブシル、シスプラチン、コルヒチン、シクロホスファミド、シタラビン、シチジンアラビノシド、サイトカラシンＢ、ダカルバジン、ダクチノマイシン（アクチノマイシン）、ダウノルビシン、ダカルバジン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エストロゲン、５−フルオロデオキシウリジン（5-fluordeoxyuridine）、５−フルオロウラシル、グラミシジンＤ、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ニトロイミダゾール、パクリタキセル、プリカマイシン、プロカルバジン、ラパマイシン（シロリムス）、ストレプトゾトシン、テノポシド、６−チオグアニン、チオＴＥＰＡ、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ＶＰ−１６およびＶＭ−２６が挙げられる。
【０９５０】
ある典型的な実施形態において、治療薬剤は細胞毒性薬剤である。適している細胞毒性薬剤としては、例えば、ドラスタチン（例えば、アウリスタチンＥ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ）、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、エンジインおよびレキシトロプシン）、ズオカルマイシン、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ピューロマイシン、ビンカアルカロイド、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エポチロンＡおよびＢ，クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、ディスコデルモリド、エレウテロビン、並びにミトキサントロンが挙げられる。
【０９５１】
ある実施形態において、細胞毒性薬剤は、例えば、ドキソルビシン、パクリタキセル、メルファラン、ビンカアルカロイド、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、またはエトポシドのような、従来の化学療法薬である。ある実施形態において、治療薬は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾロン、およびビンクリスチン）、ＣＨＯＰ−Ｒ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾロン、およびリツキシマブ）、またはＡＢＶＤ（ドキソルビシン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、およびダカルバジン）のような、併用療法薬であってもよい。ＣＣ−１０６５類似物、カリケアマイシン、メイタンシン、ドラスタチン１０の類似物、リゾキシン、およびパリトキシンのような薬剤は、抗ＣＯ７０抗体またはその誘導体と結合させることができる。
【０９５２】
特定の実施形態において、細胞毒性薬剤または細胞増殖抑制性薬剤は、アウリスタチンＥ（当分野においてドラスタチン−１０としても知られている）またはその誘導体である。一般的に、アウリスタチンＥ誘導体は、例えば、アウリスタチンＥとケト酸との間に形成されたエステルである。例えば、アウリスタチンＥは、パラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応して、それぞれＡＥＢおよびＡＥＶＢを生成することができる。他の一般的なアウリスタチン誘導体としては、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥが挙げられる。アウリスタチンＥおよびその誘導体の合成および構造は、米国特許出願公報２００３００８３２６３号および２００５０００９７５１号)、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０３／２４２０９、国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０２／１３４３５、並びに米国特許第６，３２３，３１５；６，２３９，１０４；６，０３４，０６５；５，７８０，５８８；５，６６５，８６０；５，６６３，１４９；５，６３５，４８３；５，５９９，９０２；５，５５４，７２５；５，５３０，０９７；５，５２１，２８４；５，５０４，１９１；５，４１０，０２４；５，１３８，０３６；５，０７６，９７３；４，９８６，９８８；４，９７８，７４４；４，８７９，２７８；４，８１６，４４４；および４，４８６，４１４号に記載されている。
【０９５３】
特定の実施形態において、細胞毒性薬剤はＤＮＡ副溝結合剤である（例えば、米国特許第６，１３０，２３７号を参照）。例えば、ある実施形態において、副溝結合剤は、ＣＢＩ化合物である。他の実施形態において、副溝結合剤は、エンジイン（例えば、カリケアマイシン）である。抗チューブリン剤の例としては、以下に示すものだけには限らないが、タキサン（例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（ドセタキセル）、Ｔ６７（Tularik）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン）、およびドラスタチン（例えば、アウリスタチンＥ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ）が挙げられる。他の抗チューブリン剤としては、例えば、バッカチン誘導体、タキサン類似化合物（例えば、エポチロンＡおよびＢ）、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルシミド、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモリド、並びにエレウテロビンが挙げられる。
【０９５４】
ある実施形態において、細胞毒性薬剤は、抗チューブリン剤の他の群であるマイタンシノイドである。例えば、特定の実施形態において、メイタンシノイドは、メイタンシンまたはＤＭ−１（ImmunoGen, Inc.; see also Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-131）である。ある実施形態において、治療薬剤は、放射性同位体ではない。ある実施形態において、治療薬剤は、リシンまたはサポリンではない。特定の実施形態において、治療薬剤は、ＡＶＡＳＴＩＮ（ベバシズマブ）もしくはＮＥＸＡＶＡＲ（ソラフェニブ）のような抗ＶＥＧＦ物質、ＳＵＴＥＮＴ（リンゴ酸スニチニブ）のようなＰＤＧＦ遮断薬、またはＮＥＸＡＶＡＲ（トシル酸ソラフェニブ）のようなキナーゼ阻害剤である。ある実施形態において、細胞毒性もしくは免疫調節性薬剤は、代謝拮抗剤である。代謝拮抗剤は、例えば、プリン拮抗剤（例えば、アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル)、ジヒドロ葉酸還元酵素抑制剤（例えば、メトトレキサート）、アシクロビル、ガングシクロビル、ジドブジン、ビダラビン、リババリン、アジドチミジン、シチジンアラビノシド、アマンタジン、ジデオキシウリジン、ヨードデオキシウリジン、ポスカルネト、またはトリフルリジンであり得る。
【０９５５】
他の実施形態において、細胞毒性または免疫調節性薬剤は、タクロリムス、サイクロスポリン、またはラパマイシンである。さらなる実施形態において、細胞毒性薬剤は、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミフォスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、ベクサロテン、ベクサロテン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、クラドリビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピルビシン、エポエチンアルファ、エストラムスチン、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルベストラント、ゲムシタビン、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、ゴセレリン、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブメシレート、インターフェロン・アルファ−２ａ、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、レバミゾール、メクロレタミンもしくはナイトロジェン・マスタード、メゲストロール、メスナ、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ナンドロロンフェンプロピオネート、オプレルベキン、オキサリプラチン、パミドロン酸、ペガデマーセ、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロマイド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシル・マスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、またはゾレドロネートである。
【０９５６】
さらなる実施形態において、治療薬剤は、ヒト化抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ；Genentech；キメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体）；ＯＶＡＲＥＸ（AltaRex Corporation、MA）；ＰＡＮＯＲＥＸ（Glaxo Wellcome、ＮＣ；マウスＩｇＧ２ａ抗体）；Cetuximab Erbitux（Imclone Systems Inc.、NY；抗ＥＧＦＲＩｇＧキメラ抗体）；Vitaxin（MedImmune、Inc.、MD；Campath I／H（Leukosite、ＭＡ；ヒト化ＩｇＧ１抗体）；Smart MI95（Protein Design Labs, Inc.、CA；ヒト化抗ＣＤ３３ＩｇＧ抗体）；LymphoCide（Immunomedics, Inc.、NJ；ヒト化抗ＣＤ２２ＩｇＧ抗体）、Smart ID10（Protein Design Labs, Inc.、CA；ヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体）；Oncolym（Techniclone, Inc.、CA；放射標識されたマウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体）；Allomune（BioTransplant、CA；ヒト化抗ＣＤ２ｍＡｂ）；Avastin（Genentech, Inc.、CA；抗ＶＥＧＦヒト化抗体）；Epratuzamab（Immunomedics, Inc., NJ and Amgen、CA；抗ＣＤ２２抗体）；CEAcide（Immunomedics、NJ；ヒト化抗ＣＥＡ抗体）；または抗ＣＤ４０抗体（例えば、米国特許第6,838,261号に開示される）のような抗体である。
【０９５７】
他の好適な抗体としては、以下に記載する抗原に対する抗体が挙げられるが、これに制限されない。：ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、Ｌ６、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ、Ｌｅｗｉｓ  ．ｌａｍｄａ、アルファフェトプロテイン、、ＣＡ  ２４２、胎盤性アルカリ・ホスファターゼ、前立腺特異的膜抗原、前立腺酸性フォスファターゼ、上皮成長因子、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、抗トランスフェリン受容体、ｐ９７、ＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、前立腺特異的抗原、ＩＬ−２受容体、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＣＤ３０，ＣＤ３３，ＣＤ２２、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ムチン、Ｐ２１、ＭＰＧ、およびＮｅｕ癌遺伝子産物。
【０９５８】
ある実施形態において、治療薬剤は免疫調節性薬剤である。免疫調節性薬剤は、例えば、ガンシクロビル、エタネルセプト、タクロリムス、サイクロスポリン、ラパマイシン、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（レナリドミド）、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、またはメトトレキサートであり得る。あるいは、免疫調節性薬剤は、例えば、グルココルチコイド（例えば、コルチゾールまたはアルドステロン）またはグルココルチコイド類似物（例えば、プレドニゾンまたはデキサメタゾン）であってもよい。
【０９５９】
ある典型的な実施形態において、免疫調節性薬剤は、アリールカルボキシル誘導体、ピラゾール含有誘導体、オキシカム誘導体、およびニコチン酸誘導体のような抗炎症剤である。抗炎症剤の分類としては、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、およびロイコトリエン受容体アンタゴニストが挙げられる。ある実施形態において、免疫調節性薬剤は、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、まあはＩＬ−２のようなサイトカインである。好適なシクロオキシゲナーゼ阻害剤としては、メクロフェナム酸、メフェナム酸、カルプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、フェンブフェン、フェノプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ナブメトン、ナプロキセン、スリンダク、テノキシカム、トルメチン、およびアセチルサリチル酸が挙げられる。
【０９６０】
好適なリポキシゲナーゼ阻害剤としては、酸化還元抑制剤（例えば、カテコールブタン誘導体、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）、マソプロコール、フェニドン、イアノパレン、インダゾリノン、ナファザトロム、ベンゾフラノール、アルキルヒドロキシルアミン）および非酸化還元抑制剤（例えば、ヒドロキシチオゾール、メトキシアルキルチオゾール、ベンゾピランおよびそれらの誘導体、メトキシテトラヒドロピラン、ボスウェリア酸およびボスウェリア酸のアセチル化誘導体、並びにシクロアルキルラジカルで置換されたキノリンメトキシフェニル酢酸）、および酸化還元抑制剤の前駆体が挙げられる。
【０９６１】
別の好適なリポキシゲナーゼ阻害剤としては、酸化防止剤（例えば、フェノール、没食子酸プロピル、フラボノイドおよび／またはフラボノイドを含有する天然の基質、フラボンのヒドロキシル化誘導体、フラボノール、ジヒドロケルセチン、ルテオリン、ガランジン(galangin)、オロボール(orobol)、カルコンの誘導体、４、２’、４’−トリヒドロキシカルコン、オルソ−アミノフェノール、Ｎ−ヒドロキシウレア、ベンゾフラノール、エブセレン(ebselen)、およびセレン含有酵素の還元活性を増大させる化学腫）、鉄キレート剤（例えば、ヒドロキサム酸およびその派生物、Ｎ−ヒドロキシウレア、２−ベンジル−１−ナフトール、カテコール、ヒドロキシルアミン、カルノゾールトロロクスＣ(carnosol trolox C)、カテコール、ナフトール、スルファサラジン、ジレウトン(zyleuton)、５−ヒドロキシアントラニル酸、および４−(オメガ−アリールアルキル)フェニルアルカノン酸)、イミダゾール含有化合物(例えば、ケトコナゾールおよびイトラコナゾール)、フェノチアジン、およびベンゾピラン誘導体が挙げられる。
【０９６２】
さらに別の好適なリポキシゲナーゼ阻害剤としては、エイコサノイドの阻害剤（例えば、オクタデカテトラエン酸、エイコサテトラエン酸、ドコサペンタエン酸、エイコサヘキサエン酸、およびドコサヘキサエン酸、並びにそれらのエステル、ＰＧＥ１(プロスタグランジンＥ１)、ＰＧＡ２(プロスタグランジンＡ２)、ビプロストール、１５−モノハイドロキシエイコサテトラエン酸、１５−モノハイドロキシ−エイコサトリエン酸、１５−モノハイドロキシエイコサペンタエン酸、ロイコトリエンＢ５、ロイコトリエンＣ５、並びにロイコトリエンＤ５）、カルシウム循環を妨害する化合物、フェノチアジン、ジフェニルブチルアミン、ベラパミル、フスコサイド(fuscoside)、クルクミン、クロロゲン酸、コーヒー酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸(eicosatetrayenoic acid)(ＥＴＹＡ)、ヒドロキシフェニルレチナミド、イオナパレン、エスクリン、ジエチルカルバマジン、フェナントロリン、バイカレイン、プロキシクロミル、チオエーテル、硫化ジアリル、および硫化ジ（１−プロペニル）が挙げられる。
【０９６３】
ロイコトリエン受容体アンタゴニストとしては、カルシトリオール、オンタゾラスト（ontazolast）、Bayer Bay-x-1005、Ciba-Geigy CGS-25019C、エブセレン（ebselen）、Leo Denmark ETH-615、Lilly LY-293111、Ono ONO-4057、Terumo TMK-688、Boehringer Ingleheim BI-RM-270、Lilly LY 213024、Lilly LY 264086、Lilly LY 292728、Ono ONO LB457、Pfizer 105696、Perdue Frederick PF 10042、Rhone-Poulenc Rorer RP 66153、SmithKline Beecham SB-201146、SmithKline Beecham SB-201993、SmithKline Beecham SB-209247、Searle SC-53228、Sumitamo SM 15178、American Home Products Way 121006、Bayer Bay-o-8276、Warner-Lambert CI-987、Warner-Lambert CI-987BPC-15LY 223982、Lilly LY 233569、Lilly LY-255283、MacroNex MNX-160、Merck and Co. MK-591、Merck and Co. MK-886、Ono ONO-LB-448、Purdue Frederick PF-5901、Rhone-Poulenc Rorer RG 14893、Rhone-Poulenc Rorer RP 66364、Rhone-Poulenc Rorer RP 69698、Shionoogi S-2474、Searle SC-41930、Searle SC-50505、Searle SC-51146、Searle SC-52798、SmithKlineBeecham SKand F-104493、Leo Denmark SR-2566、Tanabe T-757、およびTeijin TEI-1338が挙げられる。
【０９６４】
実施例として記載された本発明は、本発明の範囲の制限を意図するものではない。下記の例に記載する細胞株は、American Type Culture Collection (ATCC)若しくはDeutsche Sammlung von MikroorganismenおよびZellkulturen GmbH、Braunschweig、Germany (DMSZ)、またはその他によって定められる条件に従って培養を維持された。細胞培養試薬は、Invitrogen Corp., Carlsbad, Califから得られた。本発明は、本明細書に記載された具体的な実施形態によって、その範囲を制限されるものではない。実際には、前述の記載および添付の図によって、本明細書で記載したことに加えて、本発明の様々な変更が、当業者にとって明らかになるだろう。そのような変更は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０９６５】
【図１】非抱合型ＡＲＸ−αＣＤ７０抗体ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９を、７８６−Ｏ腫瘍の断片の移植から７日目のメスのヌードマウスに単回投与した（３ｍｇ／ｋｇ）場合の、抗腫瘍効果のグラフであり、コントロールビヒクルと比較したものである。
【図２】図１と同条件において、腎細胞癌異種移植モデルにおける抗体薬物複合体ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９−ＮＣＡ（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇ）を投与処理されたメスのヌードマウスの被験群における腫瘍容量のグラフである。
【図３Ａ】７８６−Ｏ細胞における、３つのＡＲＸ−抗体薬物複合体（ＣＤ７０−２Ｈ５−ＮＣＡ１、ＣＤ７０−６９Ａ７−ＮＣＡ１、およびＣＤ７０ｈＩＦ６−ＮＣＡ１）の細胞毒性アッセイから得た結果を示すグラフである。
【図３Ｂ】Ｃａｋｉ−１細胞における、３つのＡＲＸ−抗体薬物複合体（ＣＤ７０−２Ｈ５−ＮＣＡ１、ＣＤ７０−６９Ａ７−ＮＣＡ１、およびＣＤ７０ｈＩＦ６−ＮＣＡ１）の細胞毒性アッセイから得た結果を示すグラフ図である。
【図４Ａ】ＡＳ２６９と抱合するαＣＤ７０抗体ＣＤ７０−２Ｈ５−ＨＡ１１９を１２日目に単回投与後の、時間経過における腫瘍容量のグラフである。
【図４Ｂ】ＡＳ２６９と抱合するαＣＤ７０抗体ＣＤ７０−８Ａ１−ＨＡ１２２を１２日目の単回投与後の、時間経過における腫瘍容量のグラフである。
【図４Ｃ】αＣＤ７０抗体ＣＤ７０−７Ｆ２−ＨＡ１１９複合体を１２日目の単回投与後の、時間経過における腫瘍容量のグラフである。
【図５】種々の試験群の、７８６−Ｏ腫瘍の断片の移植から４９日経過後に測定された腫瘍容量のドットプロットを示す図である。
【図６Ａ】ＣＤ７０−２Ｈ５−ＡＳ２６９（３ｍｇ／ｋｇ）、ＣＤ７０−８Ａ１−ＡＳ２６９を３ｍｇ／ｋｇ、およびＣＤ７０−７Ｆ２−ＡＳ２６９（３ｍｇ／ｋｇ）にて投与処理したメスのヌードマウス被験群の腫瘍容量のグラフである。
【図６Ｂ】ビヒクルと比較した、ＣＤ７０−２Ｈ５−ＡＳ２６９（１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）にて処理したメスのヌードマウス被験群の腫瘍容量のグラフである。
【図６Ｃ】ビヒクルと比較した、８Ａ１−ｐＡＦ１−ＡＳ２６９（１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇ）にて処理したメスのヌードマウス被験群の腫瘍容量のグラフである。
【図１】
2020143151.tif 000232
【図２】
2020143151.tif 000233
【図３Ａ】
2020143151.tif 000234
【図３Ｂ】
2020143151.tif 000235
【図４Ａ】
2020143151.tif 000236
【図４Ｂ】
2020143151.tif 000237
【図４Ｃ】
2020143151.tif 000238
【図５】
2020143151.tif 000239
【図６Ａ】
2020143151.tif 000240
【図６Ｂ】
2020143151.tif 000241
【図６Ｃ】
2020143151.tif 000242
【配列表】
2020143151000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年7月2日(2020.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＶＩＩＩ）または（ＩＸ）を構成する化合物であって、
前記化合物は、ドラスタチンと結合しているαＣＤ７０抗体であり、
前記結合は、前記抗体中にある天然にコードされていないアミノ酸を介して生じており、
式（ＶＩＩＩ）または（ＩＸ）は、以下に対応する化合物、またはその化合物の、活性代謝物、薬学的に許容されるプロドラッグ、もしくは溶媒和物。
【化１】
2020143151.tif 000243
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または３である）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ１および／またはＲ２は、αＣＤ７０抗体であり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよく、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化２】
2020143151.tif 000244
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌは、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、および、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレンからなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化３】
2020143151.tif 000245
Ｕは、以下の構造を有し、
【化４】
2020143151.tif 000246
ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、および、ｎ’’’’は、それぞれ独立して、１以上の整数である。）
【請求項２】
Ｒ１は、ポリペプチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記抗体は、抗ＣＤ７０（αＣＤ７０）抗体である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記αＣＤ７０抗体は、１以上の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記αＣＤ７０抗体は、少なくとも１、かつ１０以下の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２は、ポリペプチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記αＣＤ７０抗体は、１以上の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記αＣＤ７０抗体は、少なくとも１、かつ１０以下の天然にコードされていないアミノ酸を含んでいる、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）を構成する化合物であって、
前記化合物は、ドラスタチンと結合しているαＣＤ７０抗体であり、
前記結合は、前記抗体中にある天然にコードされていないアミノ酸を介して生じており、
式（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）は、以下に対応する化合物、またはその塩。
【化５】
2020143151.tif 000247
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または３である）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ１および／またはＲ２は、αＣＤ７０抗体であり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよく、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化６】
2020143151.tif 000248
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化７】
2020143151.tif 000249
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【化８】
2020143151.tif 000250
各ｎおよびｎ’は、独立して、１以上の整数である。）
【請求項１３】
Ｒ１は、ポリペプチドである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２は、ポリペプチドである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１７】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）を構成するドラスタチンアナログを誘導体化するための方法であって、
前記誘導体化されたドラスタチンアナログは、ドラスタチンと結合しているαＣＤ７０抗体であり、
前記結合は、前記抗体中にある天然にコードされていないアミノ酸を介して生じており、
該方法は、該ドラスタチンアナログを、式（ＸＸＸＶＩＩ）の試薬に接触させる工程を含み、
式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、または（ＶＩ）は、以下に対応し、
【化９】
2020143151.tif 000251
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化１０】
2020143151.tif 000252
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯＲ８、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ８は、ＯＨ、または、−ＮＨ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｙは、ＮＨ２−Ｏ−、または、メチルであり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、および−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化１１】
2020143151.tif 000253
Ｕは、以下の構造を有し、
【化１２】
2020143151.tif 000254
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【化１３】
2020143151.tif 000255
または、Ｌは存在せず、Ｙはメチルであり、Ｒ５はＣＯＲ８であり、Ｒ８は−ＮＨ（アルキレン−Ｏ）ｎ−ＮＨ２であり、
ｎ、ｎ’、ｎ’’、ｎ’’’、および、ｎ’’’’は、それぞれ独立して、１以上の整数である。）
式（ＸＸＸＶＩＩ）は、以下に対応する、方法。
【化１４】
2020143151.tif 000256
（式中、
Ａは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または、置換アラルキレンであり、
Ｂは、任意であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（ここで、ｋは、１、２、または、３）、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレン、または、置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群より選択されたリンカーであり（なお、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルであり、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または、置換アルキルである）、
Ｋは、
【化１５】
2020143151.tif 000257
であり、
Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または、置換シクロアルキルであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ１および／またはＲ２は、αＣＤ７０抗体であり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは、置換低級アルキルであるか、または、Ｒ３およびＲ４、もしくは、２つのＲ３基が、シクロアルキル、もしくは、ヘテロシクロアルキルを任意に形成してもよい。）
【請求項２０】
前記誘導体化されたドラスタチンアナログは、式（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、または（ＸＩＩＩ）の構造を有する、少なくとも１つのオキシムを含有するアミノ酸である、請求項１９に記載の方法。
【化１６】
2020143151.tif 000258
【請求項２１】
前記ドラスタチンアナログを、式（ＸＸＸＶＩＩ）の前記試薬に、水溶液中、弱酸性条件下において接触させる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）を構成する化合物であって、
前記化合物は、ドラスタチンと結合しているαＣＤ７０抗体であり、
前記結合は、前記抗体中にある天然にコードされていないアミノ酸を介して生じており、
式（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）、（ＸＸＶＩＩ）、（ＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＩＸ）、または（ＸＸＸ）は、以下に対応する化合物。
【化１７】
2020143151.tif 000259
（式中、
Ｚは、以下の構造を有し、
【化１８】
2020143151.tif 000260
Ｒ５は、Ｈ、ＣＯ２Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、または、チアゾールであり、
Ｒ６は、ＯＨ、または、Ｈであり、
Ａｒは、フェニル、または、ピリジンであり、
Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、樹脂、少なくとも１つのアミノ酸、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドであり、
Ｒ１および／またはＲ２は、αＣＤ７０抗体であり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または、置換低級アルキルであり、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル、または、水素であり、
Ｌ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、およびＬ４は、それぞれ独立して、結合、−アルキレン−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−アルキレン−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−Ｊ−アルキレン、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ’’−Ｃ（Ｍｅ）２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ’’’−ＮＨＣ（Ｏ）−（アルキレン−Ｏ）ｎ’’’’−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−、−アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−、−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｊ−（アルキレン−Ｏ）ｎ’−アルキレン−Ｊ’−、−Ｗ−、−アルキレン−Ｗ−、アルキレン’−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−Ｊ−（アルキレン−ＮＭｅ）ｎ−アルキレン−Ｗ−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−、−（アルキレン−Ｏ）ｎ−アルキレン−Ｕ−アルキレン；−Ｊ−アルキレン−ＮＭｅ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−Ｗ−、および−アルキレン−Ｊ−アルキレン’−ＮＭｅ−アルキレン’’−ＮＭｅ−アルキレン’’’−Ｗ−からなる群より選択されるリンカーであり、
Ｗは、以下の構造を有し、
【化１９】
2020143151.tif 000261
Ｕは、以下の構造を有し、
【化２０】
2020143151.tif 000262
各ＪおよびＪ’は、独立して、以下の構造を有し、
【化２１】
2020143151.tif 000263
ｎおよびｎ’は、それぞれ独立して、１以上の整数であり、
各Ｒ１６は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ＮＯ２、ＣＮ、および、置換アルキルからなる群より選択される。）
【請求項２３】
Ｒ１は、ポリペプチドである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ２は、ポリペプチドである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２７】
前記ポリペプチドは、抗体である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
前記抗体は、αＣＤ７０抗体である、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
請求項１〜１８および２２〜２８いずれか１項に記載の化合物と、
薬学的に許容される担体、賦形剤または結合剤と、を含む、薬学的組成物。