(57)【要約】      （修正有）【課題】ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に関連する疾患、特に胃食道癌などの癌疾患を有効に治療および／または予防するための治療法の提供。【解決手段】胃食道癌を有するヒト患者への抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の投与が、少なくとも１０００ｍｇ／ｍ２の用量まで安全であり、良好に耐容されることを明らかにするデータを提示する。さらに、前記抗体がこれらの患者において抗腫瘍細胞作用を及ぼすために完全に機能性であることおよび抗腫瘍活性についての証拠が得られたことを明らかにするデータを提示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法であって、前記抗体を少なくとも４０μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように投与する方法。
【請求項２】
提供される前記血清レベルが４０μｇ／ｍｌから７００μｇ／ｍｌの間である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記血清レベルが少なくとも７日間提供される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、少なくとも３００ｍｇ／ｍ２の抗体の用量を投与することを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法であって、前記抗体を少なくとも３００ｍｇ／ｍ２の用量で投与する方法。
【請求項６】
ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法であって、前記患者の癌細胞の少なくとも５０％がＣＬＤＮ１８．２陽性であり、および／または前記患者の癌細胞の少なくとも４０％がＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である、癌疾患を治療または予防する方法。
【請求項７】
前記癌疾患の治療が安定な疾患の達成をもたらす、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
癌患者において安定な疾患を達成する方法であって、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を前記患者に投与することを含む方法。
【請求項９】
安定な疾患が少なくとも２ヶ月間達成される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体を単回投与または複数回投与で投与する、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法であって、前記抗体を複数回投与で投与する方法。
【請求項１２】
前記抗体を少なくとも３回投与で投与する、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体の前記投与を少なくとも７日間の時間間隔をおいて行う、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
制吐薬、鎮痙薬、副交感神経遮断薬および胃粘膜を保護する作用物質から成る群より選択される１つまたはそれ以上を投与することをさらに含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体、ならびに制吐薬、鎮痙薬、副交感神経遮断薬および胃粘膜を保護する作用物質から成る群より選択される１つまたはそれ以上を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法。
【請求項１６】
前記方法が、アプレピタント（例えばＥｍｅｎｄ）などのニューロキニン１（ＮＫ１）受容体アンタゴニスト、オンダンセトロン（例えばＺｏｆｒａｎ）、グラニセトロン（例えばＫｙｔｒｉｌ、Ｓａｎｃｕｓｏ）もしくはパロノセトロン（例えばＡｌｏｘｉ）などの５−ＨＴ３受容体アンタゴニストまたはこれらの２もしくはそれ以上の組合せ、ブチルスコポラミン（例えばＢｕｓｃｏｐａｎ）などの鎮痙薬、およびパントプラゾール（例えばＰａｎｔｏｚｏｌ）などのプロトンポンプ阻害剤を前記患者に投与することを含む、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体をｉ．ｖ．注入によって投与する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｉ．ｖ．注入が１から４時間にわたる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を投与することを含む癌疾患の治療または予防に対する癌患者の応答性を判定する方法であって、前記患者において１またはそれ以上のマーカーの血中レベルを測定する工程を含み、前記１またはそれ以上のマーカーが、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３、ＣＡ  １９−９、ＣＥＡ、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−６、ＩＦＮγおよびＴＮＦαから成る群より選択される、癌患者の応答性を判定する方法。
【請求項２０】
前記レベルを血液、血漿または血清中で測定する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記１またはそれ以上のマーカーが、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３、ＣＡ  １９−９、ＣＥＡ、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＦＮγおよびＴＮＦαから成る群より選択され、前記抗体の投与後の前記マーカーの少なくとも１つのレベルの低下が、前記患者が癌疾患の治療または予防に対して応答性であることを示す、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記マーカーがＩＬ−６であり、前記抗体の投与後の前記マーカーのレベルの上昇が、前記患者が癌疾患の治療または予防に対して応答性であることを示す、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２３】
癌患者が、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を投与することを含む癌疾患の治療または予防に適しているかどうかを判定する方法であって、ＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞のパーセンテージを測定する工程を含む方法。
【請求項２４】
少なくとも５０％のＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞のレベルが、前記患者が癌疾患の治療または予防に適していることを示す、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である少なくとも５０％の癌細胞のレベルが、前記患者が癌疾患の治療または予防に適していることを示す、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）媒介性溶解、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）媒介性溶解、アポトーシスの誘導および増殖の阻害の１つまたはそれ以上による細胞死を媒介する、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体が、（ｉ）アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３７、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３８、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３９、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４０、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４１、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４２、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４３、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４５、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４６、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４７、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４８、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０８、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０９またはＤＳＭ  ＡＣＣ２８１０の下で寄託されたクローンによって産生されるおよび／または前記クローンから入手可能な抗体、（ｉｉ）（ｉ）に含まれる前記抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、（ｉｉｉ）（ｉ）に含まれる前記抗体の特異性を有する抗体、ならびに（ｉｖ）（ｉ）に含まれる前記抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含有し、および好ましくは（ｉ）に含まれる前記抗体の特異性を有する抗体から成る群より選択される抗体である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記癌が胃食道癌である、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌が、転移性、抗療性または再発性の進行した胃食道癌である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記患者が、ピリミジン類似体、白金化合物、エピルビシン、ドセタキセルおよび抗腫瘍薬治療のための解毒剤から成る群より選択される少なくとも１つの薬剤による事前治療を受けたことがある、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記患者が、０から１の間のＥＣＯＧパフォーマンスステータスおよび／または７０から１００％の間のカルノフスキー指数を有する、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記患者がヒト患者である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ＣＬＤＮ１８．２が配列番号：１に従うアミノ酸配列を有する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
胃および食道（胃食道：ＧＥ）の癌は、いまだ満たされていない最大の医学的必要性を有する悪性疾患の１つである。胃癌は世界全体で癌による死亡の原因の第２位である。食道癌の発生率はこの数十年間増加しており、組織学的なタイプおよび原発腫瘍部位の変化と合致する。食道の腺癌は、現在米国および西ヨーロッパでは扁平上皮癌よりも高頻度であり、大部分の腫瘍が遠位食道に位置する。ＧＥ癌についての全体的な５年生存率は、実質的な副作用に結び付く確立された標準治療が積極的に実施されているにもかかわらず、２０〜２５％である。
【０００２】
患者の大部分は局所的に進行した疾患または転移性疾患を示し、初回化学療法を受けなければならない。治療レジメンは、ほとんどが第三の化合物（例えばタキサンまたはアントラサイクリン）と組み合わせた白金またはフルオロピリミジン誘導体の骨格に基づく。それでもなお、進行のない平均生存期間は５〜７ヶ月、全体的な平均生存期間は９〜１１ヶ月というのが期待できる最良値である。
【０００３】
これらの癌のための様々な新世代併用化学療法レジメンから大きな利益が得られないことが、研究を標的薬の使用へと促してきた。最近、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ陽性胃食道癌に関してトラスツズマブが承認された。しかし、患者の約２０％しか標的を発現せず、この治療に適格ではないので、医学的必要性は今もなお高い。
【背景技術】
【０００４】
密着結合分子クローディン１８のスプライス変異体２（クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）は、密着結合タンパク質のクローディンファミリーの成員である。ＣＬＤＮ１８．２は、膜を貫通する４つのドメインと２つの小さな細胞外ループを含む２７．８ｋＤａの膜貫通タンパク質である。
【０００５】
正常組織では、胃を除いて、ＲＴ−ＰＣＲによるＣＬＤＮ１８．２の検出可能な発現は存在しない。ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体を用いた免疫組織化学は、胃が唯一の陽性組織であることを明らかにする。
【０００６】
ＣＬＤＮ１８．２は、短命の分化した胃上皮細胞上で排他的に発現される高度に選択的な胃系統抗原である。ＣＬＤＮ１８．２は悪性形質転換の過程で維持され、したがってしばしばヒト胃癌細胞の表面で提示される。さらに、この汎腫瘍抗原は、食道腺癌、膵腺癌および肺腺癌において有意のレベルで異所性に活性化される。ＣＬＤＮ１８．２タンパク質はまた、胃腺癌のリンパ節転移および、特に卵巣への、遠隔転移（いわゆるクルーケンベルク腫瘍）においても局在する。
【０００７】
ＣＬＤＮ１８．２に対するキメラＩｇＧ１抗体、ＩＭＡＢ３６２はＧａｎｙｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＡＧ．によって開発された。ＩＭＡＢ３６２は高い親和性および特異性でＣＬＤＮ１８．２の１番目の細胞外ドメイン（ＥＣＤ１）を認識する。ＩＭＡＢ３６２は、クローディン１８の密接に関連するスプライス変異体１（ＣＬＤＮ１８．１）を含むいかなる他のクローディンファミリー成員にも結合しない。ＩＭＡＢ３６２は正確な腫瘍細胞特異性を示し、４つの独立した極めて強力な作用機構を束ねる。標的結合後、ＩＭＡＢ３６２は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび腫瘍細胞表面での標的の架橋結合によって誘導されるアポトーシスの誘導による細胞死ならびに増殖の直接阻害を媒介する。したがって、ＩＭＡＢ３６２は、インビトロおよびインビボでヒト胃癌細胞株を含むＣＬＤＮ１８．２陽性細胞を効率的に溶解する。ＩＭＡＢ３６２で処置した場合、ＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞株を担持するマウスは生存上の恩恵を受け、マウスの４０％までが腫瘍の後退を示す。
【０００８】
ＩＭＡＢ３６２の毒性およびＰＫ／ＴＫプロフィールはマウスおよびカニクイザルにおいて十分に検討されており、これには用量設定試験、カニクイザルにおける２８日間反復投与毒性試験およびマウスにおける３ヶ月間反復投与毒性試験が含まれる。マウス（最長処置期間は週１回投与で３ヶ月間、最高用量レベルは４００ｍｇ／ｋｇ）およびカニクイザル（週１回適用で最大５週間、最大１００ｍｇ／ｋｇまで）の両方で、ＩＭＡＢ３６２  ｉ．ｖ．の反復投与は良好に耐容される。全身または局所毒性の徴候は誘導されない。特に、胃毒性はいずれの毒性試験においても認められていない。ＩＭＡＢ３６２は免疫の活性化およびサイトカイン放出を誘導しない。雄性または雌性生殖器官への有害作用は記録されなかった。ＩＭＡＢ３６２は、標的を欠く組織には結合しない。マウスにおける生体内分布は、胃毒性が存在しない理由が、ＩＭＡＢ３６２エピトープのアクセス可能性を大きく低下させると考えられる、健常胃上皮の管腔部位における密着結合のコンパートメント化である可能性が高いことを指示する。このコンパートメント化は悪性形質転換の際に失われ、このエピトープをＩＭＡＢ３６２によってドラッガブルなものになす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本明細書で本発明者らは、胃食道癌を有するヒト患者へのＩＭＡＢ３６２などの抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の投与が、少なくとも１０００ｍｇ／ｍ２の用量まで安全であり、良好に耐容されることを明らかにするデータを提示する。さらに、本明細書で提示するデータは、前記抗体がこれらの患者において抗腫瘍細胞作用を及ぼすために完全に機能性であることおよび抗腫瘍活性についての証拠が得られたことを明らかにする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は一般に、癌疾患、例えば胃癌、食道癌、膵癌、肺癌、例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、結腸癌、肝癌、頭頸部癌および胆嚢の癌ならびにこれらの転移、特に胃癌転移、例えばクルーケンベルク腫瘍、腹膜転移およびリンパ節転移を含む、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に関連する疾患を有効に治療および／または予防するための治療法を提供する。特に好ましい癌疾患は、胃、食道、膵管、胆管、肺および卵巣の腺癌である。
【００１１】
１番目の態様では、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法を提供し、ここで前記抗体は、少なくとも４０μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように投与する。異なる実施形態では、前記抗体を少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５０μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも４００μｇ／ｍｌまたは少なくとも５００μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように投与する。異なる実施形態では、前記抗体を８００μｇ／ｍｌ、７００μｇ／ｍｌ、６００μｇ／ｍｌ、５５０μｇ／ｍｌまたは５００μｇ／ｍｌ以下の血清レベルを提供するように投与する。１つの実施形態では、提供される血清レベルは、４０μｇ／ｍｌから７００μｇ／ｍｌの間、好ましくは４０μｇ／ｍｌから６００μｇ／ｍｌの間、好ましくは５０μｇ／ｍｌから５００μｇ／ｍｌの間、例えば１５０μｇ／ｍｌから５００μｇ／ｍｌの間または３００μｇ／ｍｌから５００μｇ／ｍｌの間である。本明細書で使用される場合、「血清レベル」という用語により、血清中の当該物質の濃度が意味される。１つの実施形態では、血清レベルは少なくとも７日間または少なくとも１４日間提供される。１つの実施形態では、前記方法は、少なくとも３００ｍｇ／ｍ２、例えば少なくとも６００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１５００ｍｇ／ｍ２まで、１２００ｍｇ／ｍ２までまたは１０００ｍｇ／ｍ２までの抗体の用量を投与することを含む。
【００１２】
２番目の態様では、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法を提供し、ここで前記抗体は、少なくとも３００ｍｇ／ｍ２、例えば少なくとも６００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１５００ｍｇ／ｍ２まで、１２００ｍｇ／ｍ２までまたは１０００ｍｇ／ｍ２までの用量で投与する。
【００１３】
３番目の態様では、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法を提供し、ここで患者の癌細胞の少なくとも５０％、好ましくは６０％、７０％、８０％または９０％はＣＬＤＮ１８．２陽性であり、および／または患者の癌細胞の少なくとも４０％、好ましくは５０％または６０％はＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である。この態様では、本発明はまた、癌疾患を治療または予防する方法であって、ａ．少なくとも５０％、好ましくは６０％、７０％、８０％または９０％のＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞を示す、および／またはＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である少なくとも４０％、好ましくは５０％または６０％の癌細胞を示す患者を同定すること、ならびにｂ．ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を前記患者に投与すること、を含む方法を提供する。１つの実施形態では、患者の癌細胞の少なくとも９５％または少なくとも９８％はＣＬＤＮ１８．２陽性である。１つの実施形態では、患者の癌細胞の少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％はＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である。
【００１４】
本明細書で述べる態様のいずれかの方法の１つの実施形態では、癌疾患の治療は安定な疾患の達成をもたらす。１つの実施形態では、安定な疾患は、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間または少なくとも６ヶ月間達成される。
【００１５】
４番目の態様では、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌患者において安定な疾患を達成する方法を提供する。１つの実施形態では、安定な疾患は、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間または少なくとも６ヶ月間達成される。
【００１６】
本明細書で述べる態様のいずれかの方法の１つの実施形態では、抗体を単回投与または複数回投与で投与する。
【００１７】
５番目の態様では、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法を提供し、ここで前記抗体は複数回投与で投与する。
【００１８】
本発明によれば、抗体を複数回投与で投与する場合、抗体は、好ましくは少なくとも３回投与、少なくとも４回投与、少なくとも５回投与、少なくとも６回投与、少なくとも７回投与、少なくとも８回投与、少なくとも９回投与または少なくとも１０回投与、好ましくは３０、２５、２０、１５または１０回投与で投与する。抗体の投与は、好ましくは少なくとも７日間、少なくとも１０日間、少なくとも１４日間または少なくとも２０日間の時間間隔をおいて行う。抗体の投与は、好ましくは７から３０日間、１０から２０日間、好ましくは約１４日間の時間間隔をおいて行う。
【００１９】
３番目、４番目または５番目の態様の方法の１つの実施形態では、抗体を少なくとも４０μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように投与する。異なる実施形態では、抗体を少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５０μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも４００μｇ／ｍｌまたは少なくとも５００μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように投与する。異なる実施形態では、抗体を８００μｇ／ｍｌ、７００μｇ／ｍｌ、６００μｇ／ｍｌ、５５０μｇ／ｍｌまたは５００μｇ／ｍｌ以下の血清レベルを提供するように投与する。１つの実施形態では、提供される血清レベルは、４０μｇ／ｍｌから７００μｇ／ｍｌの間、好ましくは４０μｇ／ｍｌから６００μｇ／ｍｌの間、好ましくは５０μｇ／ｍｌから５００μｇ／ｍｌの間、例えば１５０μｇ／ｍｌから５００μｇ／ｍｌの間または３００μｇ／ｍｌから５００μｇ／ｍｌの間である。１つの実施形態では、血清レベルは少なくとも７日間または少なくとも１４日間提供される。１つの実施形態では、前記方法は、少なくとも３００ｍｇ／ｍ２、例えば少なくとも６００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１５００ｍｇ／ｍ２まで、１２００ｍｇ／ｍ２までまたは１０００ｍｇ／ｍ２までの抗体の用量を投与することを含む。
【００２０】
前記態様のいずれかの方法の１つの実施形態では、前記方法は、制吐薬、鎮痙薬、副交感神経遮断薬および胃粘膜を保護する作用物質から成る群より選択される１つまたはそれ以上を投与することをさらに含む。
【００２１】
６番目の態様では、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体ならびに制吐薬、鎮痙薬、副交感神経遮断薬および胃粘膜を保護する作用物質から成る群より選択される１つまたはそれ以上を患者に投与することを含む、癌疾患を治療または予防する方法を提供する。
【００２２】
本発明の方法が、制吐薬、鎮痙薬、副交感神経遮断薬および胃粘膜を保護する作用物質から成る群より選択される１つまたはそれ以上を投与することを含む場合、種々の実施形態における前記方法は、（ｉ）制吐薬と鎮痙薬、（ｉｉ）鎮痙薬と胃粘膜を保護する作用物質、（ｉｉｉ）制吐薬と胃粘膜を保護する作用物質または（ｉｖ）制吐薬、鎮痙薬および胃粘膜を保護する作用物質、を投与することを含む。
【００２３】
１つの実施形態では、制吐薬は、抗体の投与の前に嘔吐予防薬として投与される。１つの実施形態では、制吐薬は、抗体の投与と同時にまたは抗体の投与後に制吐処置として投与される。１つの実施形態では、制吐薬としては、５−ＨＴ３受容体アンタゴニストおよび／またはニューロキニン１（ＮＫ１）受容体アンタゴニストが挙げられる。好ましくは、ＮＫ１受容体アンタゴニストにはアプレピタント（例えばＥｍｅｎｄ）が挙げられ、５−ＨＴ３受容体アンタゴニストにはオンダンセトロン（例えばＺｏｆｒａｎ）、グラニセトロン（例えばＫｙｔｒｉｌ、Ｓａｎｃｕｓｏ）もしくはパロノセトロン（例えばＡｌｏｘｉ）またはこれらの２もしくはそれ以上の組合せが挙げられる。
【００２４】
１つの実施形態では、鎮痙薬としてはブチルスコポラミン（Ｂｕｓｃｏｐａｎ）が挙げられる。
【００２５】
１つの実施形態では、胃粘膜を保護する作用物質としては、胃酸の産生を低減する作用物質が挙げられる。１つの実施形態では、胃粘膜を保護する作用物質としては、プロトンポンプ阻害剤、ミソプロストールおよびオメプラゾールから成る群より選択される作用物質が挙げられる。１つの実施形態では、胃粘膜を保護する作用物質としては、プロトンポンプ阻害剤とミソプロストールの組合せが挙げられる。１つの実施形態では、プロトンポンプ阻害剤としてはパントプラゾール（例えばＰａｎｔｏｚｏｌ）が挙げられる。
【００２６】
１つの実施形態では、本発明の方法は、アプレピタント（例えばＥｍｅｎｄ）などのＮＫ１受容体アンタゴニスト、オンダンセトロン（例えばＺｏｆｒａｎ）、グラニセトロン（例えばＫｙｔｒｉｌ、Ｓａｎｃｕｓｏ）もしくはパロノセトロン（例えばＡｌｏｘｉ）またはこれらの２またはそれ以上の組合せなどの５−ＨＴ３受容体アンタゴニスト、ブチルスコポラミン（Ｂｕｓｃｏｐａｎ）などの鎮痙薬、およびパントプラゾール（例えばＰａｎｔｏｚｏｌ）などのプロトンポンプ阻害剤を患者に投与することを含む。
【００２７】
前記態様のいずれかの方法の１つの実施形態では、抗体はｉ．ｖ．注入によって投与される。１つの実施形態では、ｉ．ｖ．注入は１から４時間にわたり、好ましくは約２時間にわたる。
【００２８】
６番目の態様では、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を投与することを含む癌疾患の治療または予防に対する癌患者の応答性を判定する方法を提供し、前記方法は、患者において１またはそれ以上のマーカーの血中レベルを測定する工程を含み、１またはそれ以上のマーカーは、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３、ＣＡ  １９−９、ＣＥＡ、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−６、ＩＦＮγおよびＴＮＦαから成る群より選択される。この態様では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体の投与の前後、例えば抗体の単回用量の投与後に、血液などの生物学的試料を患者から採取し、１またはそれ以上のマーカーのレベルを確立し得る。複数の試料を同じ組織から採取し、平均レベルを決定して、それらのレベルの起こり得る変動を説明し得る。抗体の投与後の１またはそれ以上のマーカーのレベルを投与前に測定したレベルと比較する。それゆえ患者への抗体の作用を、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を投与した後のマーカーのレベルの望ましい変化によって同定することができる。患者がＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を投与した後にマーカーのレベルの望ましい変化を示す場合、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体による治療を開始し得る。
【００２９】
１つの実施形態では、レベルを血液、血漿または血清中で測定する。
【００３０】
１つの実施形態では、１またはそれ以上のマーカーは、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３、ＣＡ  １９−９、ＣＥＡ、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＦＮγおよびＴＮＦαから成る群より選択され、抗体の投与後のマーカーの少なくとも１つのレベルの低下は、患者が癌疾患の治療または予防に対して応答性であることを示す。
【００３１】
１つの実施形態では、マーカーはＩＬ−６であり、抗体の投与後のマーカーのレベルの上昇は、患者が癌疾患の治療または予防に対して応答性であることを示す。
【００３２】
８番目の態様では、本発明は、癌患者が、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を投与することを含む癌疾患の治療または予防に適しているかどうかを判定する方法を提供し、前記方法は、ＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞のパーセンテージを測定する工程を含む。
【００３３】
この実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体の投与前に、腫瘍試料（例えば腫瘍生検）などの生物学的試料を患者から採取し、ＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞のレベルを確立し得る。複数の試料を採取し、平均レベルを決定して、それらのレベルの起こり得る変動を説明し得る。患者がＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞の望ましいレベルを有する場合、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を投与し得る。
【００３４】
１つの実施形態では、少なくとも５０％、好ましくは６０％、７０％、８０％または９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％のＣＬＤＮ１８．２陽性癌細胞のレベルは、患者が癌疾患の治療または予防に適していることを示す。１つの実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％の癌細胞のレベルは、患者が癌疾患の治療または予防に適していることを示す。
【００３５】
ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、生細胞の表面上に存在するＣＬＤＮ１８．２の天然エピトープに結合し得る。１つの実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、ＣＬＤＮ１８．２の第一細胞外ループに結合する。１つの実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）媒介性溶解、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）媒介性溶解、アポトーシスの誘導および増殖の阻害の１つまたはそれ以上による細胞死を媒介する。１つの実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、モノクローナル、キメラもしくはヒト化抗体、または抗体のフラグメントである。１つの実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、（ｉ）アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３７、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３８、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３９、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４０、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４１、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４２、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４３、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４５、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４６、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４７、ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４８、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０８、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０９またはＤＳＭ  ＡＣＣ２８１０の下で寄託されたクローンによって産生されるおよび／または前記クローンから入手可能な抗体、（ｉｉ）（ｉ）に含まれる抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、（ｉｉｉ）（ｉ）に含まれる抗体の特異性を有する抗体、ならびに（ｉｖ）（ｉ）に含まれる抗体の抗原結合部分または抗原結合部位、特に可変領域を含有し、および好ましくは（ｉ）に含まれる抗体の特異性を有する抗体、から成る群より選択される抗体である。１つの実施形態では、抗体は、治療薬、例えば毒素、放射性同位体、薬物または細胞傷害性薬剤に連結される。
【００３６】
１つの実施形態では、癌はＣＬＤＮ１８．２陽性である。１つの実施形態では、癌の細胞はＣＬＤＮ１８．２を発現する。１つの実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２の発現は細胞の表面においてである。１つの実施形態では、癌細胞の少なくとも５０％、好ましくは６０％、７０％、８０％または９０％はＣＬＤＮ１８．２陽性であり、および／または癌細胞の少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％はＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である。１つの実施形態では、癌細胞の少なくとも９５％または少なくとも９８％はＣＬＤＮ１８．２陽性である。１つの実施形態では、癌細胞の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％はＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である。
【００３７】
１つの実施形態では、癌疾患は、胃癌、食道癌、膵癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、肝癌、頭頸部癌、胆嚢の癌およびこれらの転移から成る群より選択される。癌疾患は、クルーケンベルク腫瘍、腹膜転移および／またはリンパ節転移であり得る。１つの実施形態では、癌は腺癌、特に進行した腺癌である。１つの実施形態では、癌は、胃の癌、食道、特に下部食道の癌、食道胃接合部の癌および胃食道癌から成る群より選択される。特に好ましい実施形態では、癌は胃食道癌、例えば転移性、抗療性または再発性の進行した胃食道癌である。患者は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ陰性患者であるかまたはＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性状態を有するがトラスツズマブ治療に適格でない患者であり得る。１つの実施形態では、患者は、ピリミジン類似体（例えばフルオロウラシルおよび／またはカペシタビン）、白金化合物（例えばシスプラチンおよび／またはオキサリプラチン）、エピルビシン、ドセタキセルならびに抗腫瘍薬治療のための解毒剤（例えばフォリン酸カルシウムおよび／またはフォリン酸）から成る群より選択される少なくとも１つの薬剤による治療を以前に受けたことがある。１つの実施形態では、患者は、０から１の間のＥＣＯＧパフォーマンスステータスおよび／または７０から１００％の間のカルノフスキー指数を有する。特に好ましい実施形態では、患者はヒト患者である。
【００３８】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２は、好ましくは配列番号：１に従うアミノ酸配列を有する。
【００３９】
本発明はまた、本明細書で述べる方法における使用のための、本明細書で述べる作用物質、例えばＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体も提供する。
【００４０】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】試験中のＩＭＡＢ３６２の平均血中濃度。
【図２Ａ】（図２）患者のＰＢＭＣのＡＤＣＣ活性。（図２Ａ）ＩＭＡＢ３６２投与後７日目（白い四角）または１４日目（黒い四角）にＰＢＭＣを６名の患者の血液試料から精製した。ＩＭＡＢ３６２  ３１．６３μｇ／ｍｌおよび健常ドナーからのＰＢＭＣまたは患者のＰＢＭＣ（Ｅ：Ｔ＝２０：１）の２４時間の添加後に得られた、ＣＬＤＮ１８．２を発現するＮＵＧＣ−４胃癌標的細胞の特異的溶解率。
【図２Ｂ】種々の患者のＰＢＭＣの添加の２４時間後に得られたＮＵＧＣ−４細胞のＩＭＡＢ３６２濃度依存性特異的溶解（グラフは平均±標準偏差を示す、ｐ値は対応のないｔ検定を用いて計算した）。
【図２Ｃ】漸増濃度のＩＭＡＢ３６２の添加後の健常対照ＰＢＭＣのＡＤＣＣ反応曲線。アッセイは、患者のＰＢＭＣに関する各々のＡＤＣＣ分析と並行して実施した。
【図２Ｄ】漸増濃度のＩＭＡＢ３６２の添加後の患者ＰＢＭＣのＡＤＣＣ反応曲線（患者０２０２については曲線を作成するのに十分なＰＢＭＣが得られなかった。
【図２Ｅ】全患者および健常ドナーに関する半最大死滅率を、内蔵されている非線形回帰解析ツールを用いてＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアで計算した。
【図３】ＩＭＡＢ３６２媒介性ＣＤＣを誘導する患者補体成分の能力。ＣＬＤＮ１８．２およびルシフェラーゼ陽性ＣＨＯ−Ｋ１標的細胞を用いてＣＤＣアッセイを実施した。細胞、血清（２０％ｖ／ｖ）および抗体を３７℃で８０分間インキュベートした。患者試料を、新鮮０．５μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２を注入前血清試料（灰色のバー）に添加することによって調製した。ＨＳＣ：０．３〜１０μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２でスパイクした健常ヒト血清プール対照（陽性対照）。Ｈｉ：１０μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２でスパイクした熱不活性化ヒト血清プール（陰性対照）。患者数を示す。誤差バー：±標準偏差。
【図４Ａ】（図４）時間をかけてｉ．ｖ．投与したＩＭＡＢ３６２と相互作用する患者補体成分の能力。各患者の注入前血清を使用して各試料中のＩＭＡＢ３６２濃度を０．５μｇ／ｍｌに調整する（希釈係数１０〜６８０倍）ことにより、基準化したＣＤＣアッセイを実施した。（図４Ａ）図３に示すようにＣＤＣアッセイを実施した。
【図４Ｂ】図３に示すようにＣＤＣアッセイを実施した。
【図４Ｃ】各ドットは１名の患者の測定結果を表す。白い四角：ヒト血清中０．５μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２。ｐ値は対応のあるｔ検定で得た。誤差バー：±標準偏差。
【図５Ａ】ｉ．ｖ．投与した循環ＩＭＡＢ３６２によって誘導される細胞傷害の動態。抗体および補体供給源としてＮＵＧＣ−４標的細胞、健常ドナーのＰＢＭＣ（Ｅ：Ｔ＝４０：１）および患者血清試料（２５％ｖ／ｖ）を全細胞傷害アッセイにおいて使用し、総合的な細胞傷害活性を測定した。各患者について、ＩＭＡＢ３６２投与の１、７、１４および２８〜３２日後に血清試料を採取した。患者を漸増用量のＩＭＡＢ３６２（３３〜１０００ｍｇ／ｍ２）で処置した。アッセイにおいて存在する抗体濃度を各バーの下に示す。ＨＳＣ：２００．０μｇ／ｍｌの新鮮ＩＭＡＢ３６２でスパイクしたヒト血清プール対照（ＥＣ８０〜１００）。ＰＳＣ：２００．０μｇ／ｍｌの新鮮ＩＭＡＢ３６２でスパイクした患者の注入前血清対照。ｎ．ａ．：入手できず。
【図５Ｂ】ｉ．ｖ．投与した循環ＩＭＡＢ３６２によって誘導される細胞傷害の動態。抗体および補体供給源としてＮＵＧＣ−４標的細胞、健常ドナーのＰＢＭＣ（Ｅ：Ｔ＝４０：１）および患者血清試料（２５％ｖ／ｖ）を全細胞傷害アッセイにおいて使用し、総合的な細胞傷害活性を測定した。各患者について、ＩＭＡＢ３６２投与の１、７、１４および２８〜３２日後に血清試料を採取した。患者を漸増用量のＩＭＡＢ３６２（３３〜１０００ｍｇ／ｍ２）で処置した。アッセイにおいて存在する抗体濃度を各バーの下に示す。ＨＳＣ：２００．０μｇ／ｍｌの新鮮ＩＭＡＢ３６２でスパイクしたヒト血清プール対照（ＥＣ８０〜１００）。ＰＳＣ：２００．０μｇ／ｍｌの新鮮ＩＭＡＢ３６２でスパイクした患者の注入前血清対照。ｎ．ａ．：入手できず。
【図６Ａ】熱不活性化患者血清におけるＩＭＡＢ３６２のＡＤＣＣ活性の動態。患者の補体を熱不活性化し（５６℃、３０分間）、ＡＤＣＣ活性を検出して（黒色および灰色バー部分）、血清成分の付加的な作用（白色バー部分）を計算したことを除き、先の図面で述べたようにアッセイを実施した。
【図６Ｂ】熱不活性化患者血清におけるＩＭＡＢ３６２のＡＤＣＣ活性の動態。患者の補体を熱不活性化し（５６℃、３０分間）、ＡＤＣＣ活性を検出して（黒色および灰色バー部分）、血清成分の付加的な作用（白色バー部分）を計算したことを除き、先の図面で述べたようにアッセイを実施した。
【図７Ａ】患者血清中に存在するＩＭＡＢ３６２によって誘導されるＣＤＣ活性。ＣＬＤＮ１８．２およびルシフェラーゼ陽性ＣＨＯ−Ｋ１標的細胞を用いてＣＤＣアッセイを実施した。これらを、抗体注入の１、７、１４および２８〜３２日後に得た２０％ｖ／ｖ患者血清と共に８０分間インキュベートした。患者を３３〜１０００ｍｇ／ｍ２のＩＭＡＢ３６２用量で処置した。各アッセイにおいて存在する抗体濃度を各バーの下に示す。ＨＳＣ：示されている漸減濃度のＩＭＡＢ３６２でスパイクした健常ヒト血清プール対照。ＰＣ：陽性対照（１０μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２でスパイクした患者の注入前血清）。
【図７Ｂ】患者血清中に存在するＩＭＡＢ３６２によって誘導されるＣＤＣ活性。ＣＬＤＮ１８．２およびルシフェラーゼ陽性ＣＨＯ−Ｋ１標的細胞を用いてＣＤＣアッセイを実施した。これらを、抗体注入の１、７、１４および２８〜３２日後に得た２０％ｖ／ｖ患者血清と共に８０分間インキュベートした。患者を３３〜１０００ｍｇ／ｍ２のＩＭＡＢ３６２用量で処置した。各アッセイにおいて存在する抗体濃度を各バーの下に示す。ＨＳＣ：示されている漸減濃度のＩＭＡＢ３６２でスパイクした健常ヒト血清プール対照。ＰＣ：陽性対照（１０μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２でスパイクした患者の注入前血清）。
【図８】患者におけるＩＭＡＢ３６２の反復注入の薬物動態結果。３００ｍｇ／ｍ２の反復投与で処置した４名の患者（コホート１、左の図）および６００ｍｇ／ｍ２の反復投与で処置した３０名までの患者（１回目の注入は３０名の患者、５回目の注入は１２名の患者）（コホート２およびコホート３を一緒に、右の図）の血清中のＩＭＡＢ３６２の平均±ｓｄ濃度（μｇ／ｍｌ）。矢印はＩＭＡＢ３６２注入を示す。１回目の注入は０日目に行った。
【図９】完全な解析セット（ＦＡＳ）における患者の進行のない生存期間。
【図１０】プロトコルごと（ＰＰ）のセットにおける患者の進行のない生存期間（ｎ＝２０）。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明を以下で詳細に説明するが、本発明は本明細書で述べる特定の方法、プロトコルおよび試薬に限定されず、これらは異なり得ることが理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することだけを目的とし、本発明の範囲を限定することを意図されず、本発明の範囲は付属の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解されるべきである。特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術および学術用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００４３】
以下において、本発明の要素を説明する。これらの要素を具体的な実施形態と共に列挙するが、これらは、付加的な実施形態を創製するために任意の方法および任意の数で組み合わせてもよいことが理解されるべきである。様々に説明される例および好ましい実施形態は、本発明を明白に記述される実施形態だけに限定すると解釈されるべきではない。この説明は、明白に記述される実施形態と多くの開示される要素および／または好ましい要素とを組み合わせた実施形態を支持し、包含すると理解されるべきである。さらに、本出願において記述されるすべての要素の任意の並び替えおよび組合せは、文脈上特に指示されない限り、本出願の説明によって開示されるとみなされるべきである。
【００４４】
好ましくは、本明細書で使用される用語は、"Ａ  ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ  ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｅｒｍｓ：  （ＩＵＰＡＣ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）"，Ｈ．Ｇ．Ｗ．Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．Ｎａｇｅｌ，ａｎｄ  Ｈ．Ｋｏｌｂｌ，Ｅｄｓ．，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，ＣＨ−４０１０  Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９９５）に記載されているように定義される。
【００４５】
本発明の実施は、特に指示されない限り、当分野の文献（例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  １９８９参照）中で説明される化学、生化学、細胞生物学、免疫学および組換えＤＮＡ技術の従来の方法を用いる。
【００４６】
本明細書および以下の特許請求の範囲全体を通して、文脈上特に要求されない限り、「含む」という語および「含むこと」などの変形は、記述される成員、整数もしくは工程または成員、整数もしくは工程の群の包含を意味するが、いかなる他の成員、整数もしくは工程または成員、整数もしくは工程の群の排除も意味しないと理解され、しかし一部の実施形態においては、そのような他の成員、整数もしくは工程または成員、整数もしくは工程の群が排除され得る、すなわち主題が記述される成員、整数もしくは工程または成員、整数もしくは工程の群の包含に存する。本発明の説明に関連して（特に特許請求の範囲に関連して）使用される「１つの」および「その」という用語および同様の言及は、本明細書で特に指示されない限りまたは文脈と明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書中の値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に属する各々別々の値を個別に言及することの簡略化した方法であることが意図されている。本明細書で特に指示されない限り、各個別の値は本明細書で個別に列挙されているかのごとくに本明細書に組み込まれる。本明細書で述べるすべての方法は、本明細書で特に指示されない限りまたは文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書で提供されるありとあらゆる例または例示的言語（例えば「など」）の使用は、単に本発明をよりよく説明することを意図し、本発明あるいは特許請求されるものの範囲に限定を課すものではない。本明細書中のいかなる言語も、特許請求されない要素が本発明の実施に必須であることを指示すると解釈されるべきではない。
【００４７】
本明細書の本文全体を通していくつかの資料を引用する。本明細書で引用される資料（すべての特許、特許出願、学術出版物、製造者の仕様書、指示書等を含む）の各々は、上記または下記のいずれでも、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書のいかなる内容も、本発明が先行発明のためにそのような開示に先行する権利を有さないことの承認と解釈されるべきではない。
【００４８】
「ＣＬＤＮ１８」という用語はクローディン１８に関し、クローディン１８スプライス変異体１（クローディン１８．１（ＣＬＤＮ１８．１））およびクローディン１８スプライス変異体２（クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２））を含む任意の変異体を包含する。
【００４９】
「ＣＬＤＮ１８．２」という用語は、好ましくはヒトＣＬＤＮ１８．２に関し、特に配列表の配列番号：１に従うアミノ酸配列または前記アミノ酸配列の変異体を含む、好ましくはそれから成るタンパク質に関する。
【００５０】
「ＣＬＤＮ１８．１」という用語は、好ましくはヒトＣＬＤＮ１８．１に関し、特に配列表の配列番号：２に従うアミノ酸配列または前記アミノ酸配列の変異体を含む、好ましくはそれから成るタンパク質に関する。
【００５１】
本発明による「変異体」という用語は、特に、突然変異体、スプライス変異体、立体配座変異体、アイソフォーム、対立遺伝子変異体、種変異体および種ホモログ、特に天然に存在するものを指す。対立遺伝子変異体は、遺伝子の正常な配列中の変化に関するが、その重要性はしばしば不明である。完全な遺伝子配列決定は、しばしば所与の遺伝子について数多くの対立遺伝子変異体を同定する。種ホモログは、所与の核酸配列またはアミノ酸配列のものとは異なる種を起源とする核酸配列またはアミノ酸配列である。「変異体」という用語は、任意の翻訳後修飾変異体および立体配座変異体を包含する。
【００５２】
本発明によれば、「ＣＬＤＮ１８．２陽性癌」という用語は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する癌細胞、好ましくは前記癌細胞の表面にＣＬＤＮ１８．２を発現する癌細胞を含む癌を意味する。
【００５３】
「細胞表面」は、当分野におけるその通常の意味に従って使用され、したがってタンパク質および他の分子による結合にアクセス可能である細胞の外側を含む。
【００５４】
ＣＬＤＮ１８．２は、これが細胞の表面に位置し、前記細胞に添加されたＣＬＤＮ１８．２特異的抗体による結合にアクセス可能である場合、前記細胞の表面に発現されている。
【００５５】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２は、発現のレベルが胃細胞または胃組織における発現と比較してより低い場合、細胞において実質的に発現されていない。好ましくは、発現のレベルは、胃細胞または胃組織における発現の１０％未満、好ましくは５％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％もしくは０．０５％未満であるかまたはさらに一層低い。好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２は、発現のレベルが胃以外の非癌組織における発現のレベルを２倍しか、好ましくは１．５倍しか上回らない場合、および好ましくは前記非癌組織における発現のレベルを上回らない場合、細胞において実質的に発現されていない。好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２は、発現のレベルが検出限界より低い場合および／または発現のレベルが細胞に添加されたＣＬＤＮ１８．２特異的抗体による結合を許容しないほど低い場合、細胞において実質的に発現されていない。
【００５６】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２は、発現のレベルが胃以外の非癌組織における発現のレベルを２倍以上、好ましくは１０倍、１００倍、１０００倍または１００００倍上回る場合、細胞において発現されている。好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２は、発現のレベルが検出限界より高い場合および／または発現のレベルが細胞に添加されたＣＬＤＮ１８．２特異的抗体による結合を許容するのに十分なほど高い場合、細胞において発現されている。好ましくは、細胞において発現されるＣＬＤＮ１８．２は、前記細胞の表面に発現されるまたは露出される。
【００５７】
本発明によれば、「疾患」という用語は、癌、特に本明細書で述べる癌の形態を含む、任意の病的状態を指す。癌または癌の特定の形態への本明細書での言及は、その癌転移も包含する。好ましい実施形態では、本出願に従って治療されるべき疾患は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞を含む。
【００５８】
「ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に関連する疾患」または同様の表現は、本発明によればＣＬＤＮ１８．２が疾患組織または器官の細胞において発現されることを意味する。１つの実施形態では、疾患組織または器官の細胞におけるＣＬＤＮ１８．２の発現は、健常組織または器官における状態と比較して増大している。増大とは、少なくとも１０％、特に少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも１００００％またはさらにそれ以上の増大を指す。１つの実施形態では、発現は疾患組織においてのみ認められ、健常組織における発現は抑制されている。本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞に関連する疾患としては癌疾患が挙げられる。さらに、本発明によれば、癌疾患は、好ましくは癌細胞がＣＬＤＮ１８．２を発現するものである。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「癌疾患」または「癌」は、異常調節された細胞成長、増殖、分化、接着および／または移動を特徴とする疾患を包含する。癌の３つの悪性特性（制御されない増殖（正常限界を超えた分裂）、浸潤（隣接組織への侵入および隣接組織の破壊）および時として転移（リンパ節または血液を介した体内の他の場所への拡大））は、自己限定性で、浸潤または転移しない良性腫瘍から癌を区別する。大部分の癌は腫瘍を形成するが、一部は、白血病のように、腫瘍を形成しない。「癌細胞」とは、急速で制御不能の細胞増殖によって成長し、新たな成長を開始させた刺激が停止した後も成長し続ける異常細胞を意味する。好ましくは、「癌疾患」はＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞を特徴とし、癌細胞はＣＬＤＮ１８．２を発現する。ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞は、好ましくは癌細胞、好ましくは本明細書で述べる癌の癌細胞である。
【００６０】
本発明によれば、「腫瘍」または「腫瘍疾患」という用語は、好ましくは腫脹または病変を形成する細胞（新生細胞、腫瘍形成性細胞または腫瘍細胞と呼ばれる）の異常増殖を指す。「腫瘍細胞」により、急速で制御されない細胞増殖によって成長し、新たな成長を開始させた刺激が停止した後も成長し続ける異常細胞が意味される。腫瘍は、構造機構および正常組織との機能的協調の部分的または完全な欠如を示し、ならびに通常は明確な組織塊を形成し、これは良性、前悪性または悪性のいずれかであり得る。
【００６１】
本発明によれば、腫瘍は、好ましくは悪性腫瘍である。「悪性腫瘍」は癌と同義に使用される。
【００６２】
「腺癌」は、腺組織から発生する癌である。この組織は、上皮組織として知られるより大きな組織カテゴリーの一部でもある。上皮組織としては、皮膚、腺ならびに身体の腔および器官を裏打ちする様々な他の組織が挙げられる。上皮は発生学的に外胚葉、内胚葉および中胚葉に由来する。腺癌として分類されるために、細胞は、分泌特性を有する限り、必ずしも腺の一部である必要はない。この形態の癌腫は、ヒトを含む一部の高等哺乳動物において発生し得る。高分化型腺癌は、それらが由来する腺組織に類似する傾向があるが、低分化型はその傾向がない場合もある。生検からの細胞を染色することにより、病理学者は腫瘍が腺癌であるかまたは何らかの他の種類の癌であるかを決定する。腺癌は、体内での腺の遍在性のために身体の多くの組織で発生し得る。各々の腺が同じ物質を分泌しているとは限らないが、細胞への外分泌機能が存在する限り、腺とみなされ、それゆえその悪性形態は腺癌と命名される。悪性腺癌は他の組織に浸潤し、転移するのに十分な時間があればしばしば転移する。卵巣腺癌は最も一般的な種類の卵巣癌である。卵巣腺癌としては、漿液性および粘液性腺癌、明細胞腺癌および類内膜腺癌が挙げられる。
【００６３】
「転移」とは、そのもとの部位から身体の別の部分への癌細胞の拡大を意味する。転移の形成は非常に複雑な過程であり、原発性腫瘍からの悪性細胞の分離、細胞外マトリックスの侵襲、体腔および脈管に侵入するための内皮基底膜の貫入、ならびに次に、血液によって運ばれた後、標的器官の浸潤に依存する。最後に、標的部位での新たな腫瘍の成長は血管新生に依存する。腫瘍転移はしばしば原発性腫瘍の除去後でも起こり、これは、腫瘍細胞または成分が残存し、転移能を発現し得るからである。１つの実施形態では、本発明による「転移」という用語は、原発性腫瘍および所属リンパ節系から遠く離れた転移に関連する「遠隔転移」に関する。１つの実施形態では、本発明による「転移」という用語はリンパ節転移に関する。本発明の治療法を用いて治療可能な転移の１つの特定の形態は、原発部位として胃癌から生じる転移である。好ましい実施形態では、そのような胃癌転移は、クルーケンベルク腫瘍、腹膜転移および／またはリンパ節転移である。
【００６４】
クルーケンベルク腫瘍は、すべての卵巣腫瘍の１％〜２％を占める卵巣のまれな転移性腫瘍である。クルーケンベルク腫瘍の予後はまだ非常に不良であり、クルーケンベルク腫瘍のための確立された治療は存在しない。クルーケンベルク腫瘍は卵巣の転移性印環細胞腺癌である。胃は大部分のクルーケンベルク腫瘍症例（７０％）における原発部位である。結腸、虫垂および乳房（主として浸潤性小葉癌）の癌がその次に最も多い原発部位である。胆嚢、胆管、膵臓、小腸、ファーター膨大部、子宮頸および膀胱／尿膜管の癌に由来するクルーケンベルク腫瘍のまれな症例が報告されている。
【００６５】
クルーケンベルク腫瘍を有する女性は、典型的には５０代であり、平均年齢は４５歳であるので、転移癌を有する患者としては非常に若い傾向がある。この若年分布は、一部には若齢女性における胃の印環細胞腺癌の発生率が高いことに関連づけることができる。一般的に呈する症状は、通常は卵巣障害に関連し、そのうち最も多いのが腹痛および腹部膨満（主として、通常は両側性でしばしば大きな卵巣腫瘤による）である。残りの患者は非特異的な胃腸症状を有するかまたは無症候性である。加えて、クルーケンベルク腫瘍は、報告によれば卵巣支質によるホルモン産生から生じる男性化に結びつく。腹水は症例の５０％で存在し、通常は悪性細胞を明らかにする。
【００６６】
クルーケンベルク腫瘍は、報告された症例の８０％より多くで両側性である。卵巣は通常非対称に腫脹し、隆起した輪郭を有する。切片の表面は黄色または白色である；それらは通常固体であるが、時として嚢胞性である。重要な点として、クルーケンベルク腫瘍を有する卵巣の被膜表面は、典型的にはなめらかで、癒着または腹膜沈着物がない。注意すべき点として、卵巣への他の転移性腫瘍は表面インプラントに関連する傾向がある。これは、クルーケンベルク腫瘍の肉眼形態が一見原発卵巣腫瘍のように見えることがある理由を説明し得る。しかし、クルーケンベルク腫瘍の両側性はその転移性と一致する。
【００６７】
クルーケンベルク腫瘍を有する患者は有意に高い全体的死亡率を有する。大部分の患者は２年以内に死亡する（平均生存期間、１４ヶ月）。いくつかの試験は、卵巣への転移が発見された後に原発性腫瘍が同定された場合は予後が不良であり、原発性腫瘍が明らかにされないままである場合は予後がさらに悪化することを示す。
【００６８】
「治療する」とは、被験体において腫瘍の大きさもしくは腫瘍の数を低減することを含む、疾患を予防するもしくは排除する；被験体において疾患を停止させるもしくは疾患の進行を遅らせる；被験体において新たな疾患の発症を阻止するもしくは遅らせる；現在疾患を有しているもしくは以前に疾患を有していたことがある被験体において症状および／もしくは再発の頻度もしくは重症度を低下させる；ならびに／または被験体の生存期間を延長する、すなわち増大させるために、化合物または組成物または化合物もしくは組成物の組合せを被験体に投与することを意味する。
【００６９】
特に、「疾患の治療」という用語は、疾患またはその症状を治癒する、期間を短縮する、改善する、予防する、進行もしくは悪化を減速させるもしくは阻止する、または発症を予防するもしくは遅延させることを包含する。
【００７０】
「患者」という用語は、本発明によれば、ヒト、非ヒト霊長動物または別の動物、特に哺乳動物、例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコまたはげっ歯動物、例えばマウスおよびラットを含む、治療のための被験体、特に疾患被験体を意味する。特に好ましい実施形態では、患者はヒトである。
【００７１】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を、ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質と組み合わせて、すなわち前記作用物質と同時に、作用物質の前におよび／または作用物質の後に投与し得る。
【００７２】
「ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質」という用語は、作用物質または作用物質の組合せを細胞に提供することが、細胞に前記作用物質または作用物質の組合せが提供されない状況と比較して、ＣＬＤＮ１８．２のＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルの増大、好ましくは細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２タンパク質レベルの増大を生じさせる作用物質または作用物質の組合せを指す。好ましくは、細胞は癌細胞、特にＣＬＤＮ１８．２を発現する癌細胞、例えば本明細書で述べる癌型の細胞である。「ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質」という用語は、特に、作用物質または作用物質の組合せを細胞に提供することが、細胞に前記作用物質または作用物質の組合せが提供されない状況と比較して、前記細胞の表面により高い密度のＣＬＤＮ１８．２を生じさせる作用物質または作用物質の組合せを指す。「ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化すること」は、特に、作用物質または作用物質の組合せがＣＬＤＮ１８．２の発現の低下を防ぐかまたは低下を低減する、例えば作用物質または作用物質の組合せが提供されない場合はＣＬＤＮ１８．２の発現が低下すると考えられ、前記作用物質または作用物質の組合せの提供がＣＬＤＮ１８．２発現の前記低下を防ぐかまたは前記低下を低減する状況を含む。「ＣＬＤＮ１８．２の発現を増大させること」は、特に、作用物質または作用物質の組合せがＣＬＤＮ１８．２の発現を増大させる、例えば作用物質または作用物質の組合せが提供されない場合はＣＬＤＮ１８．２の発現が低下するか、基本的に一定なままであるかまたは増大すると考えられ、前記作用物質または作用物質の組合せの提供が、作用物質または作用物質の組合せが提供されない状況と比較してＣＬＤＮ１８．２発現を増大させ、そのため生じる発現が、作用物質または作用物質の組合せが提供されない場合にＣＬＤＮ１８．２の発現が低下するか、基本的に一定なままであるかまたは増大させるであろう状況と比較してより高い状況を含む。
【００７３】
本発明によれば、「ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質」という用語は、化学療法剤または化学療法剤の組合せ、例えば細胞増殖抑制剤を含む。化学療法剤は、以下の方法：（１）細胞のＤＮＡを損傷し、そのため細胞はもはや複製することができない、（２）細胞複製が不可能であるように新たなＤＮＡ鎖の合成を阻害する、（３）細胞が２個の細胞に分裂することができないように細胞の有糸分裂過程を停止させる、の１つで細胞に影響を及ぼし得る。
【００７４】
本発明によれば、「ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質」という用語は、好ましくは、作用物質または作用物質の組合せ、例えば細胞増殖抑制性化合物または細胞増殖抑制性化合物の組合せを細胞、特に癌細胞に提供することが、細胞が細胞周期の１またはそれ以上の期で、好ましくはＧ１期およびＧ０期以外、好ましくはＧ１期以外の細胞周期の１またはそれ以上の期で、好ましくは細胞周期のＧ２期またはＳ期、例えば細胞周期のＧ１／Ｇ２期、Ｓ／Ｇ２期、Ｇ２期またはＳ期の１またはそれ以上で停止するまたは蓄積することを生じさせる、作用物質または作用物質の組合せに関する。「細胞が細胞周期の１またはそれ以上の期で停止するまたは蓄積すること」という用語は、細胞周期の前記１またはそれ以上の期にある細胞のパーセンテージが増大することを意味する。各々の細胞は、自らを複製するために４つの期を含む周期を通過する。Ｇ１と呼ばれる最初の期は、細胞がその染色体を複製する準備をする段階である。２番目の段階はＳと呼ばれ、この期にＤＮＡ合成が起こり、ＤＮＡが複製される。次の期はＧ２期であり、ここでＲＮＡおよびタンパク質が複製する。最終段階はＭ期であり、これが実際の細胞分裂の段階である。この最終段階では、複製したＤＮＡおよびＲＮＡが分離し、細胞の別々の末端へと移動して、細胞が実際に２個の同一の機能性細胞に分裂する。ＤＮＡ損傷剤である化学療法剤は、通常Ｇ１および／またはＧ２期の細胞の蓄積を生じさせる。代謝拮抗物質などのＤＮＡ合成を妨げることによって細胞増殖をブロックする化学療法剤は、通常Ｓ期の細胞の蓄積を生じさせる。これらの薬剤の例は、６−メルカプトプリンおよび５−フルオロウラシルである。
【００７５】
本発明によれば、「ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質」という用語には、エピルビシンなどのアントラサイクリン、オキサリプラチンおよびシスプラチンなどの白金化合物、５−フルオロウラシルまたはそのプロドラッグなどのヌクレオシド類似体、ドセタキセルなどのタキサン類、ならびにイリノテカンおよびトポテカンなどのカンプトテシン類似体、ならびに薬剤の組合せ、例えばエピルビシンなどのアントラサイクリン、オキサリプラチンおよび５−フルオロウラシルの１つまたはそれ以上を含む薬剤の組合せ、例えばオキサリプラチンおよび５−フルオロウラシルを含む薬剤の組合せ、または本明細書で述べる他の薬剤の組合せが含まれる。
【００７６】
１つの好ましい実施形態では、「ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質」は、「免疫原性細胞死を誘導する作用物質」である。
【００７７】
特定の状況では、癌細胞は、腫瘍特異的免疫応答を活性化するために免疫系によって解読される時空的に規定されたシグナルの組合せの放出に結び付く致死的ストレス経路に入り得る（Ｚｉｔｖｏｇｅｌ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃｅｌｌ  １４０：７９８−８０４）。そのような状況では、癌細胞は、樹状細胞などの先天性免疫エフェクターによって感知されて、腫瘍細胞死が有効な抗癌免疫応答を誘発し得るようにＣＤ８＋  Ｔ細胞およびＩＦＮ−γシグナル伝達を含むコグネイト免疫応答を引き起こすシグナルの放出を始動させる。これらのシグナルとしては、細胞表面における小胞体（ＥＲ）シャペロンであるカルレティキュリン（ＣＲＴ）のアポトーシス前露出、ＡＴＰのアポトーシス前分泌、および核タンパク質ＨＭＧＢ１のアポトーシス後放出が挙げられる。合わせて考慮すると、これらの工程は免疫原性細胞死（ＩＣＤ）の分子決定基を構成する。アントラサイクリン、オキサリプラチンおよびγ線照射はＩＣＤを規定するすべてのシグナルを誘導することができるが、例えばシスプラチンは、ＥＲストレスを必要とする工程である、ＥＲから死細胞の表面へのＣＲＴ転位を誘導する能力を欠き、ＥＲストレス誘導物質であるタプシガルギンによる補完を必要とする。
【００７８】
本発明によれば、「免疫原性細胞死を誘導する作用物質」という用語は、細胞、特に癌細胞に提供された場合、細胞が、最終的に腫瘍特異的免疫応答を生じさせる致死的ストレス経路に入るのを誘導することができる作用物質または作用物質の組合せを指す。特に、細胞に提供された場合免疫原性細胞死を誘導する作用物質は、細胞が、特に細胞表面における小胞体（ＥＲ）シャペロンであるカルレティキュリン（ＣＲＴ）のアポトーシス前暴露、ＡＴＰのアポトーシス前分泌、および核タンパク質ＨＭＧＢ１のアポトーシス後放出を含む、時空的に規定されたシグナルの組合せを放出することを誘導する。
【００７９】
本発明によれば、「免疫原性細胞死を誘導する作用物質」という用語は、アントラサイクリンおよびオキサリプラチンを包含する。
【００８０】
アントラサイクリンは、抗生物質でもある、癌化学療法において一般的に使用される薬剤のクラスである。構造的に、すべてのアントラサイクリンは共通の４環性７，８，９，１０−テトラヒドロテトラセン−５，１２−キノン構造を共有し、通常は特定部位でのグリコシル化を必要とする。
【００８１】
アントラサイクリンは、好ましくは以下の作用機構の１またはそれ以上を生じさせる：１．ＤＮＡ／ＲＮＡ鎖の塩基対の間にインターカレートすることによってＤＮＡおよびＲＮＡ合成を阻害し、したがって急速に増殖する癌細胞の複製を妨げる。２．トポイソメラーゼＩＩ酵素を阻害し、超コイルＤＮＡの弛緩を妨げ、したがってＤＮＡの転写および複製をブロックする。３．ＤＮＡおよび細胞膜を損傷する鉄媒介性遊離酸素ラジカルを生成する。
【００８２】
本発明によれば、「アントラサイクリン」という用語は、好ましくはトポイソメラーゼＩＩのＤＮＡの再結合を阻害することによって、好ましくはアポトーシスを誘導するための作用物質、好ましくは抗癌剤に関する。
【００８３】
好ましくは、本発明によれば、「アントラサイクリン」という用語は、一般に、以下の環構造：
【化１】
2020143153.tif 000002
を有し、その類似体および誘導体、医薬的塩、水和物、エステル、コンジュゲートならびにプロドラッグを含む化合物のクラスを指す。
【００８４】
アントラサイクリンおよびアントラサイクリン類似体の例としては、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、イダルビシン、ロドマイシン、ピラルビシン、バルルビシン、Ｎ−トリフルオロ−アセチルドキソルビシン−１４−バレレート、アクラシノマイシン、モルホリノドキソルビシン（モルホリノ−ＤＯＸ）、シアノモルホリノ−ドキソルビシン（シアノモルホリノ−ＤＯＸ）、２−ピロリノ−ドキソルビシン（２−ＰＤＯＸ）、５−イミノダウノマイシン、ミトキサントロンおよびアクラシノマイシンＡ（アクラルビシン）が挙げられるが、これらに限定されない。ミトキサントロンはアントラセンジオンクラスの化合物の成員であり、前記クラスの化合物は、アントラサイクリンの糖部分を欠くが、ＤＮＡへのインターカレーションを許容する平面多環式芳香族環構造を保持するアントラサイクリン類似体である。
【００８５】
本発明によるアントラサイクリンとして特に好ましいのは、以下の式の化合物である：
【化２】
2020143153.tif 000003
式中、Ｒ１は、ＨおよびＯＨから成る群より選択され、Ｒ２は、ＨおよびＯＭｅから成る群より選択され、Ｒ３は、ＨおよびＯＨから成る群より選択され、ならびにＲ４は、ＨおよびＯＨから成る群より選択される。
【００８６】
１つの実施形態では、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＯＭｅであり、Ｒ３はＨであり、およびＲ４はＯＨである。別の実施形態では、Ｒ１はＯＨであり、Ｒ２はＯＭｅであり、Ｒ３はＨであり、およびＲ４はＯＨである。別の実施形態では、Ｒ１はＯＨであり、Ｒ２はＯＭｅであり、Ｒ３はＯＨであり、およびＲ４はＨである。別の実施形態では、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨであり、およびＲ４はＯＨである。
【００８７】
本発明に関連してアントラサイクリンとして特に企図されるのはエピルビシンである。エピルビシンは、以下の式：
【化３】
2020143153.tif 000004
を有するアントラサイクリン薬剤であり、米国ではＥｌｌｅｎｃｅの商品名で、および他のところではＰｈａｒｍｏｒｕｂｉｃｉｎまたはＥｐｉｒｕｂｉｃｉｎ  Ｅｂｅｗｅの商品名で市販されている。特に、「エピルビシン」という用語は、化合物（８Ｒ，１０Ｓ）−１０−［（２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−メチル−オキサン−２−イル］オキシ−６，１１−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−８−メチル−９，１０−ジヒドロ−７Ｈ−テトラセン−５，１２−ジオンを指す。エピルビシンは、副作用を引き起こすことがより少ないと考えられるので、一部の化学療法レジメンでは、最も一般的なアントラサイクリンであるドキソルビシンよりも好ましい。
【００８８】
本発明によれば、「白金化合物」という用語は、白金錯体などのその構造中に白金を含有する化合物を指し、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンなどの化合物を包含する。
【００８９】
「シスプラチン」または「シスプラチナム」という用語は、以下の式：
【化４】
2020143153.tif 000005
の化合物シス−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（ＣＤＤＰ）を指す。
【００９０】
「カルボプラチン」という用語は、以下の式：
【化５】
2020143153.tif 000006
の化合物シス−ジアンミン（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）を指す。
【００９１】
「オキサリプラチン」という用語は、以下の式：
【化６】
2020143153.tif 000007
のジアミノシクロヘキサン担体配位子に錯化した白金化合物である化合物を指す。
【００９２】
特に、「オキサリプラチン」という用語は、化合物［（１Ｒ，２Ｒ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ，Ｏ'）白金（ＩＩ）を指す。注射用のオキサリプラチンも、Ｅｌｏｘａｔｉｎｅの商品名で市販されている。
【００９３】
「ヌクレオシド類似体」という用語は、プリン類似体およびピリミジン類似体の両方を包含するカテゴリーである、ヌクレオシドの構造類似体を指す。特に、「ヌクレオシド類似体」という用語は、フルオロウラシルおよびそのプロドラッグを含むフルオロピリミジン誘導体を指す。
【００９４】
「フルオロウラシル」または「５−フルオロウラシル」（５−ＦＵまたはｆ５Ｕ）（Ａｄｒｕｃｉｌ、Ｃａｒａｃ、Ｅｆｕｄｉｘ、ＥｆｕｄｅｘおよびＦｌｕｏｒｏｐｌｅｘの商標名で市販されている）という用語は、以下の式：
【化７】
2020143153.tif 000008
のピリミジン類似体である化合物である。
【００９５】
特に、この用語は、化合物５−フルオロ−１Ｈ−ピリミジン−２，４−ジオンを指す。
【００９６】
「カペシタビン」（Ｘｅｌｏｄａ、Ｒｏｃｈｅ）という用語は、組織中で５−ＦＵに変換されるプロドラッグである化学療法剤を指す。経口的に投与し得るカペシタビンは、以下の式：
【化８】
2020143153.tif 000009
を有する。
【００９７】
特に、この用語は、化合物ペンチル［１−（３，４−ジヒドロキシ−５−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）−５−フルオロ−２−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−４−イル］カルバメートを指す。
【００９８】
タキサン類は、最初にイチイ属の植物などの天然源から誘導されたジテルペン化合物のクラスであるが、一部は人工的に合成されている。タキサンクラスの薬剤の主たる作用機構は微小管機能の破壊であり、それにより細胞分裂の過程を阻害する。タキサン類としては、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）およびパクリタキセル（Ｔａｘｏｌ）が挙げられる。
【００９９】
本発明によれば、「ドセタキセル」という用語は、以下の式：
【化９】
2020143153.tif 000010
を有する化合物を指す。
【０１００】
本発明によれば、「パクリタキセル」という用語は、以下の式：
【化１０】
2020143153.tif 000011
を有する化合物を指す。
【０１０１】
本発明によれば、「カンプトテシン類似体」という用語は、化合物カンプトテシン（ＣＰＴ；（Ｓ）−４−エチル−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３'，４'：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン）の誘導体を指す。好ましくは、「カンプトテシン類似体」という用語は、以下の構造：
【化１１】
2020143153.tif 000012
を含む化合物を指す。
【０１０２】
本発明によれば、好ましいカンプトテシン類似体は、ＤＮＡ酵素トポイソメラーゼＩ（トポＩ）の阻害剤である。本発明による好ましいカンプトテシン類似体は、イリノテカンおよびトポテカンである。
【０１０３】
イリノテカンは、トポイソメラーゼＩの阻害によってＤＮＡの巻戻しを防ぐ薬剤である。化学用語では、これは、以下の式：
【化１２】
2020143153.tif 000013
を有する天然アルカロイドカンプトテシンの半合成類似体である。
【０１０４】
特に、「イリノテカン」という用語は、化合物（Ｓ）−４，１１−ジエチル−３，４，１２，１４−テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−３，１４−ジオキソ１Ｈ−ピラノ［３'，４'：６，７］−インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−９−イル−［１，４'−ビピペリジン］−１'−カルボキシレートを指す。
【０１０５】
トポテカンは、式：
【化１３】
2020143153.tif 000014
のトポイソメラーゼ阻害剤である。
【０１０６】
特に、「トポテカン」という用語は、化合物（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３'，４'：６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩を指す。
【０１０７】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質は、化学療法剤、特に癌治療において確立された化学療法剤であってよく、薬剤の組合せ、例えば癌治療における使用に関して確立された薬剤の組合せの一部であってよい。そのような薬剤の組合せは、化学療法において使用される薬剤の組合せであってよく、ＥＯＸ化学療法、ＥＣＦ化学療法、ＥＣＸ化学療法、ＥＯＦ化学療法、ＦＬＯ化学療法、ＦＯＬＦＯＸ化学療法、ＦＯＬＦＩＲＩ化学療法、ＤＣＦ化学療法およびＦＬＯＴ化学療法から成る群より選択される化学療法レジメンにおいて使用される薬剤の組合せであってよい。
【０１０８】
ＥＯＸ化学療法において使用される薬剤の組合せは、エピルビシン、オキサリプラチンおよびカペシタビンを含む。ＥＣＦ化学療法において使用される薬剤の組合せは、エピルビシン、シスプラチンおよび５−フルオロウラシルを含む。ＥＣＸ化学療法において使用される薬剤の組合せは、エピルビシン、シスプラチンおよびカペシタビンを含む。ＥＯＦ化学療法において使用される薬剤の組合せは、エピルビシン、オキサリプラチンおよび５−フルオロウラシルを含む。
【０１０９】
エピルビシンは通常５０ｍｇ／ｍ２、シスプラチンは６０ｍｇ／ｍ２、オキサリプラチンは１３０ｍｇ／ｍ２の用量で投与され、５−フルオロウラシルは２００ｍｇ／ｍ２／日の持続静注でおよび経口カペシタビンは６２５ｍｇ／ｍ２で１日２回、３週間のサイクルで合計８回投与される。
【０１１０】
ＦＬＯ化学療法において使用される薬剤の組合せは、５−フルオロウラシル、フォリン酸およびオキサリプラチン（通常５−フルオロウラシル２，６００ｍｇ／ｍ２を２４時間注入、フォリン酸２００ｍｇ／ｍ２およびオキサリプラチン８５ｍｇ／ｍ２を２週間ごと）を含む。
【０１１１】
ＦＯＬＦＯＸは、フォリン酸（ロイコボリン）、５−フルオロウラシルおよびオキサリプラチンで構成される化学療法レジメンである。２週間ごとに投与される推奨用量スケジュールは次のとおりである：１日目：オキサリプラチン８５ｍｇ／ｍ２のＩＶ注入およびロイコボリン２００ｍｇ／ｍ２のＩＶ注入、次いで５−ＦＵ  ４００ｍｇ／ｍ２のＩＶボーラス、次いで５−ＦＵ  ６００ｍｇ／ｍ２の２２時間持続注入としてのＩＶ注入；２日目：ロイコボリン２００ｍｇ／ｍ２の１２０分間にわたるＩＶ注入、次いで５−ＦＵ  ４００ｍｇ／ｍ２の２〜４分間にわたって投与されるＩＶボーラス、次いで５−ＦＵ  ６００ｍｇ／ｍ２の２２時間持続注入としてのＩＶ注入。
【０１１２】
ＦＯＬＦＩＲＩ化学療法において使用される薬剤の組合せは、５−フルオロウラシル、ロイコボリンおよびイリノテカンを含む。
【０１１３】
ＤＣＦ化学療法において使用される薬剤の組合せは、ドセタキセル、シスプラチンおよび５−フルオロウラシルを含む。
【０１１４】
ＦＬＯＴ化学療法において使用される薬剤の組合せは、ドセタキセル、オキサリプラチン、５−フルオロウラシルおよびフォリン酸を含む。
【０１１５】
「フォリン酸」または「ロイコボリン」という用語は、化学療法剤５−フルオロウラシルとの相乗作用的組合せにおいて有用な化合物を指す。フォリン酸は、以下の式：
【化１４】
2020143153.tif 000015
を有する。
【０１１６】
特に、この用語は、化合物（２Ｓ）−２−｛［４−［（２−アミノ−５−ホルミル−４−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロ−１Ｈ−プテリジン−６−イル）メチルアミノ］ベンゾイル］アミノ｝ペンタン二酸を指す。
【０１１７】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体を、γδ  Ｔ細胞を刺激する作用物質と組み合わせて、すなわち前記作用物質と同時に、作用物質の前におよび／または作用物質の後に投与し得る。
【０１１８】
γδ  Ｔ細胞（ガンマデルタＴ細胞）は、その表面に独特のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＴ細胞の小さなサブセットである。Ｔ細胞の大部分は、α−ＴＣＲ鎖およびβ−ＴＣＲ鎖と呼ばれる２本の糖タンパク鎖から成るＴＣＲを有する。これに対し、γδ  Ｔ細胞では、ＴＣＲは１本のγ鎖と１本のδ鎖で構成される。この群のＴ細胞は、通常、αβ  Ｔ細胞よりもはるかにまれである。ヒトγδ  Ｔ細胞は、感染症および自己免疫のようなストレス監視応答において重要な役割を果たす。腫瘍における形質転換誘導性変化も、γδ  Ｔ細胞によって媒介されるストレス監視応答を生じさせ、抗腫瘍免疫を増強することが示唆されている。重要な点として、抗原係合後、病変部位の活性化されたγδ  Ｔ細胞は、サイトカイン（例えばＩＮＦγ、ＴＮＦα）および／または他のエフェクター細胞の動員を媒介するケモカインを提供し、細胞傷害（細胞死受容体および細胞溶解性顆粒経路を介して）およびＡＤＣＣなどの即時エフェクター機能を示す。
【０１１９】
末梢血中のγδ  Ｔ細胞の大部分はＶγ９Ｖδ２  Ｔ細胞受容体（ＴＣＲγδ）を発現する。Ｖγ９Ｖδ２  Ｔ細胞はヒトおよび霊長動物に特有であり、これらは多くの急性感染において劇的に増大し、例えば結核症、サルモネラ症、エールリヒア症、ブルセラ症、野兎病、リステリア症、トキソプラスマ症およびマラリアでは、数日以内に他のすべてのリンパ球を上回り得るので、侵入病原体による「危険」を感知する際に早期で必須の役割を果たすと推測される。
【０１２０】
γδ  Ｔ細胞は、小さな非ペプチドリン酸化抗原（ホスホ抗原）、例えば細菌において合成されるピロリン酸塩およびメバロン酸経路を介して哺乳動物細胞において産生されるイソペンテニルピロリン酸塩（ＩＰＰ）に応答する。正常細胞中のＩＰＰ産生はγδ  Ｔ細胞の活性化には十分でないが、腫瘍細胞におけるメバロン酸経路の調節不全はＩＰＰの蓄積およびγδ  Ｔ細胞の活性化をもたらす。ＩＰＰはまた、メバロン酸経路の酵素であるファルネシルピロリン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ）を阻害する、アミノビスホスホネートによって治療的に増大させることもできる。数ある中でも、ゾレドロン酸（ＺＡ、ゾレドロネート、Ｚｏｍｅｔａ（商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）はそのようなアミノビスホスホネートの代表であり、既に骨粗しょう症および転移性骨疾患の治療のために臨床的に患者に投与されている。インビトロでのＰＢＭＣの処置後、ＺＡは特に単球によって取り込まれる。ＩＰＰは単球中に蓄積し、γδ  Ｔ細胞の発現を刺激する抗原提示細胞へと分化する。この状況では、活性化γδ  Ｔ細胞のための増殖および生存因子としてインターロイキン２（ＩＬ−２）の添加が好ましい。最後に、特定のアルキル化アミンはインビトロでＶγ９Ｖδ２  Ｔ細胞を活性化すると記述されているが、わずかにミリモル濃度である。
【０１２１】
本発明によれば、「γδ  Ｔ細胞を刺激する作用物質」という用語は、インビトロおよび／またはインビボで、特にγδ  Ｔ細胞の活性化と増殖を誘導することによって、γδ  Ｔ細胞、特にＶγ９Ｖδ２  Ｔ細胞の発現を刺激する化合物に関する。好ましくは、この用語は、哺乳動物細胞において産生されるイソペンテニルピロリン酸塩（ＩＰＰ）を、好ましくはメバロン酸経路の酵素、ファルネシルピロリン酸シンターゼ（ＦＰＰＳ）を阻害することによって、インビトロおよび／またはインビボで増大させる化合物に関する。
【０１２２】
γδ  Ｔ細胞を刺激する１つの特定の群の化合物は、ビスホスホネート、特に窒素含有ビスホスホネート（Ｎ−ビスホスホネート；アミノビスホスホネート）である。
【０１２３】
例えば、本発明における使用のための適切なビスホスホネートは、その類似体および誘導体、医薬的塩、水和物、エステル、コンジュゲートならびにプロドラッグを含む、以下の化合物の１またはそれ以上を包含し得る：
［１−ヒドロキシ−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）エタン−１，１−ジイル］ビス（ホスホン酸）、ゾレドロン酸、例えばゾレドロネート；
（ジクロロ−ホスホノ−メチル）ホスホン酸、例えばクロドロネート；
｛１−ヒドロキシ−３−［メチル（ペンチル）アミノ］プロパン−１，１−ジイル｝ビス（ホスホン酸）、イバンドロン酸、例えばイバンドロネート；
（３−アミノ−１−ヒドロキシプロパン−１，１−ジイル）ビス（ホスホン酸）、パミドロン酸、例えばパミドロネート；
（１−ヒドロキシ−１−ホスホノ−２−ピリジン−３−イル−エチル）ホスホン酸、リセドロン酸、例えばリセドロネート；
（１−ヒドロキシ−２−イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−３−イル−１−ホスホノエチル）ホスホン酸、ミノドロン酸；
［３−（ジメチルアミノ）−１−ヒドロキシプロパン−１，１−ジイル］ビス（ホスホン酸）、オルパドロン酸；
［４−アミノ−１−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシ−オキシド−ホスホリル）−ブチル］ホスホン酸、アレンドロン酸、例えばアレンドロネート；
［（シクロヘプチルアミノ）メチレン］ビス（ホスホン酸）、インカドロン酸；
（１−ヒドロキシエタン−１，１−ジイル）ビス（ホスホン酸）、エチドロン酸、例えばエチドロネート；および
｛［（４−クロロフェニル）チオ］メチレン｝ビス（ホスホン酸）、チルドロン酸。
【０１２４】
本発明によれば、ゾレドロン酸（ＩＮＮ）またはゾレドロネート（Ｚｏｍｅｔａ、Ｚｏｍｅｒａ、ＡｃｌａｓｔａおよびＲｅｃｌａｓｔの商品名でＮｏｖａｒｔｉｓによって市販されている）は特に好ましいビスホスホネートである。Ｚｏｍｅｔａは、多発性骨髄腫および前立腺癌などの癌を有する患者において骨折を予防するため、ならびに骨粗しょう症を治療するために使用される。また、悪性の高カルシウム血症を治療するためにも使用でき、骨転移からの疼痛を治療するのにも役立ち得る。
【０１２５】
１つの特に好ましい実施形態では、本発明によるγδ  Ｔ細胞を刺激する作用物質はＩＬ−２と併用して投与される。そのような組合せは、γ９δ２  Ｔ細胞の増殖および活性化を媒介するのに特に有効であることが示されている。
【０１２６】
インターロイキン２（ＩＬ−２）は、免疫系におけるサイトカインシグナル伝達分子の一種であるインターロイキンである。リンパ球を誘引するタンパク質であり、微生物感染に対する、および異物（非自己）と自己を識別するうえでの身体の天然応答の一部である。ＩＬ−２は、リンパ球によって発現されるＩＬ−２受容体に結合することによってその作用を媒介する。
【０１２７】
本発明に従って使用されるＩＬ−２は、γδ  Ｔ細胞の刺激を支持するまたは可能にする任意のＩＬ−２であってよく、任意の種、好ましくはヒトに由来し得る。Ｉｌ−２は、単離され得るか、組換え生産され得るかまたは合成ＩＬ−２であってよく、天然に存在するＩＬ−２または修飾ＩＬ−２であってよい。
【０１２８】
本発明によれば、「制吐薬」という用語は、嘔吐および／または悪心に対して有効な化合物、組成物または薬剤に関する。１つの実施形態では、制吐薬としては、５−ＨＴ３受容体アンタゴニストおよび／またはニューロキニン１（ＮＫ１）受容体アンタゴニストが挙げられる。
【０１２９】
５−ＨＴ３受容体アンタゴニストは、中枢神経系および胃腸管においてセロトニン受容体をブロックする。その例としては、経口錠剤形態、口腔溶解錠形態でもしくは注射剤中で投与することができるオンダンセトロン（Ｚｏｆｒａｎ）、錠剤形態でもしくは注射剤中で投与できるドラセトロン（Ａｎｚｅｍｅｔ）、錠剤（Ｋｙｔｒｉｌ）、経口溶液（Ｋｙｔｒｉｌ）、注射剤（Ｋｙｔｒｉｌ）もしくは上腕への単一経皮パッチ（Ｓａｎｃｕｓｏ）中で投与できるグラニセトロン（Ｋｙｔｒｉｌ，Ｓａｎｃｕｓｏ）、経口カプセルもしくは注射剤形態で投与できるトロピセトロン（Ｎａｖｏｂａｎ）、注射剤または経口カプセル中で投与できるパロノセトロン（Ａｌｏｘｉ）およびミルタザピン（Ｒｅｍｅｒｏｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３０】
ＮＫ１受容体アンタゴニストとしては、アプレピタント（Ｅｍｅｎｄ）が挙げられるが、これに限定されない。
【０１３１】
５−ＨＴ３受容体アンタゴニストとＮＫ１受容体アンタゴニストの好ましい組合せは、オンダンセトロン（Ｚｏｆｒａｎ）とアプレピタント（Ｅｍｅｎｄ）の組合せである。
【０１３２】
特に５−ＨＴ３受容体アンタゴニストおよび／またはＮＫ１受容体アンタゴニストと組み合わせて、本発明に従って使用できるさらなる制吐薬としては、運動促進剤としてＧＩ管に作用するメトクロプラミド（Ｒｅｇｌａｎ）、ロラゼパム、アトロピン、アリザプリド（Ｌｉｔｉｃａｎ、Ｐｌｉｔｉｃａｎ、Ｓｕｐｅｒａｎ、Ｖｅｒｇｅｎｔａｎ）およびジメンヒドリナート（Ｄｒａｍａｍｉｎｅ、Ｄｒｉｍｉｎａｔｅ、Ｇｒａｖｏｌ、Ｇｒａｖａｍｉｎ、Ｖｏｍｅｘ、Ｖｅｒｔｉｒｏｓａｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３３】
本発明によれば、鎮痙薬（同義語：抗痙攣薬）を投与することができる。本発明によれば、「鎮痙薬」という用語は、筋痙攣を抑制する化合物、組成物または薬剤に関する。好ましくは、鎮痙薬は平滑筋収縮のために有用である。消化器系における痙性作用を治療するうえで有効な鎮痙薬が、本発明によれば好ましい。したがって、好ましい鎮痙薬は胃腸痙攣の軽減において有効である。
【０１３４】
鎮痙薬としては、ブチルスコポラミン臭化物、ブチルヒヨスチンおよび臭化ブチルヒヨスチンとしても知られる、ブチルスコポラミンが挙げられるが、これに限定されない。これは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＧｍｂＨ，ＧｅｒｍａｎｙによってＢｕｓｃｏｐａｎの商品名で市販されている。
【０１３５】
本発明によれば、副交感神経遮断薬を投与することができる。本発明によれば、「副交感神経遮断薬」という用語は、副交感神経系の活性を低減する化合物、組成物または薬剤に関する。副交感神経遮断薬としてはアトロピンが挙げられるが、これに限定されない。
【０１３６】
本発明によれば、「プロトンポンプ阻害剤」という用語は、主たる作用が胃酸産生の顕著で長期的な低減である化合物、組成物または薬剤に関する。
【０１３７】
プロトンポンプ阻害剤としては、ベンゾイミダゾール誘導体およびイミダゾピリジン誘導体が挙げられる。プロトンポンプ阻害剤の例としては、オメプラゾール（商標名：Ｇａｓｅｃ、Ｌｏｓｅｃ、Ｐｒｉｌｏｓｅｃ、Ｚｅｇｅｒｉｄ、ｏｃｉｄ、Ｌｏｍａｃ、Ｏｍｅｐｒａｌ、Ｏｍｅｚ，）、ランソプラゾール（商標名：Ｐｒｅｖａｃｉｄ、Ｚｏｔｏｎ、Ｍｏｎｏｌｉｔｕｍ、Ｉｎｈｉｂｉｔｏｌ、Ｌｅｖａｎｔ、Ｌｕｐｉｚｏｌｅ）、デクスランソプラゾール（商標名：Ｋａｐｉｄｅｘ、Ｄｅｘｉｌａｎｔ）、エソメプラゾール（商標名：Ｎｅｘｉｕｍ、Ｅｓｏｔｒｅｘ、ｅｓｓｏ）、パントプラゾール（商標名：Ｐｒｏｔｏｎｉｘ、Ｓｏｍａｃ、Ｐａｎｔｏｌｏｃ、Ｐａｎｔｏｚｏｌ、Ｚｕｒｃａｌ、Ｚｅｎｔｒｏ、Ｐａｎ、Ｃｏｎｔｒｏｌｏｃ、Ｔｅｃｔａ）、ラベプラゾール（商標名：ＡｃｉｐＨｅｘ、Ｐａｒｉｅｔ、Ｅｒｒａｚ、Ｚｅｃｈｉｎ、Ｒａｂｅｃｉｄ、Ｎｚｏｌｅ−Ｄ、Ｒａｂｅｌｏｃ、Ｒａｚｏ）およびイラプラゾール（商標名：Ｉｌａｐｒｏ、Ｌｕｐｉｌｌａ、Ａｄｉｚａ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３８】
本発明によれば、特に非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を投与する場合、胃粘膜への保護作用を有する他の化合物、組成物または薬剤を投与することができる。
【０１３９】
例えば、ＮＳＡＩＤの胃潰瘍形成の一般的な有害作用を予防するため、特にＮＳＡＩＤ誘導性胃潰瘍を予防するために他の化合物、組成物または薬剤を投与することができる。１つの実施形態では、ＮＳＡＩＤ誘導性胃潰瘍の予防のために使用される合成プロスタグランジンＥ１（ＰＧＥ１）類似体である、ミソプロストールを投与することができる。ミソプロストールは胃壁細胞に作用して、アデニル酸シクラーゼのＧタンパク質共役受容体媒介性阻害によって胃酸の分泌を阻害し、これは細胞内サイクリックＡＭＰレベルの低下および胃壁細胞の頂端表面におけるプロトンポンプ活性の低下をもたらす。
【０１４０】
さらに、オメプラゾールは、ＮＳＡＩＤ誘導性潰瘍の治療において少なくともミソプロストールと同程度に有効であるが、有意により良好に耐容されることが証明された。
【０１４１】
非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、鎮痛および解熱（熱を下げる）作用を提供し、より高用量では、抗炎症作用を与える薬剤のクラスである。「非ステロイド系」という用語は、これらの薬剤をステロイドから区別する。この群の薬剤の最も著名な成員はアスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンである。
【０１４２】
ＮＳＡＩＤに関連する主たる有害薬剤反応（ＡＤＲ）の１つは、ＮＳＡＩＤの胃腸（ＧＩ）作用に関する。これらの作用は、多くの症例において潰瘍穿孔および上部胃腸出血の危険性をもたらすのに十分なほど重篤である。ＮＳＡＩＤ患者は、消化不良、ＮＳＡＩＤ関連上部胃腸有害事象、胃腸（ＧＩ）管の刺激およびＧＩ潰瘍形成を経験する。ＮＳＡＩＤはＧＩ管への二重の攻撃を引き起こす：酸性分子は胃粘膜を直接刺激し、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の阻害は保護的プロスタグランジンのレベルを低下させる。ＧＩ管におけるプロスタグランジン合成の阻害は、胃酸分泌の増加、重炭酸分泌の減少、粘液分泌の減少および上皮粘膜への栄養作用の減少を生じさせる。したがって、ＮＳＡＩＤは、本発明によれば好ましくは投与しない。弱い抗炎症作用しか及ぼさないためＮＳＡＩＤとしては分類されないプラセタモールまたは「アセトアミノフェン」は、本発明に従う鎮痛薬として投与することができるが、疼痛管理のためには効率的でないことがあり、したがって、特にオピオド（ｏｐｉｏｄ）の投与を避けるために、ＮＳＡＩＤの投与が必要となり得る。
【０１４３】
一般に、胃（しかし必ずしも腸は該当しない）の有害作用は、プロトンポンプ阻害剤、例えばオメプラゾール、エソメプラゾール、またはプロスタグランジン類似体ミソプロストールの併用によって、酸の産生を抑制することを通して低減することができる。
【０１４４】
「抗原」という用語は、免疫応答が向けられるおよび／または向けられるべきであるエピトープを含有するタンパク質またはペプチドなどの作用物質に関する。好ましい実施形態では、抗原は、ＣＬＤＮ１８．２などの腫瘍関連抗原、すなわち細胞質、細胞表面および細胞核に由来し得る癌細胞の成分、特に細胞内でまたは癌細胞上の表面抗原として、好ましくは大量に、産生される抗原である。
【０１４５】
本発明に関連して、「腫瘍関連抗原」という用語は、好ましくは、正常条件下では限られた数の組織および／もしくは器官においてまたは特定の発生段階で特異的に発現され、１またはそれ以上の腫瘍または癌組織中で発現されるまたは異常発現されるタンパク質に関する。本発明に関連して、腫瘍関連抗原は、好ましくは癌細胞の細胞表面に関連し、好ましくは正常組織中では全く発現されないかまたはまれにしか発現されない。
【０１４６】
「エピトープ」という用語は、分子中の抗原決定基、すなわち免疫系によって認識される、例えば抗体によって認識される分子中の部分を指す。例えば、エピトープは、免疫系によって認識される、抗原上の別々の三次元部位である。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基群から成り、通常は特定の三次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する。立体配座エピトープと非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下では前者への結合は失われるが後者への結合は失われないことによって区別される。ＣＬＤＮ１８．２などのタンパク質のエピトープは、好ましくは前記タンパク質の連続部分または不連続部分を含み、好ましくは５〜１００、好ましくは５〜５０、より好ましくは８〜３０、最も好ましくは１０〜２５アミノ酸長であり、例えばエピトープは、好ましくは８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５アミノ酸長であり得る。
【０１４７】
「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質を指し、その抗原結合部分を含む任意の分子を包含する。「抗体」という用語は、限定されることなく、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、例えばｓｃＦｖ、ならびにＦａｂおよびＦａｂ'フラグメントなどの抗原結合抗体フラグメントを含む、モノクローナル抗体および抗体のフラグメントまたは誘導体を包含し、またすべての組換え形態の抗体、例えば原核生物において発現される抗体、非グリコシル化抗体、ならびに本明細書で述べる任意の抗原結合抗体フラグメントおよび誘導体も包含する。各々の重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）と重鎖定常領域を含む。各々の軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）と軽鎖定常領域を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存された、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される領域が間に組み入れられた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分することができる。各々のＶＨとＶＬは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された、３つのＣＤＲと４つのＦＲから成る：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的補体系の第一成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【０１４８】
本明細書で述べる抗体はヒト抗体であり得る。「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を包含することが意図されている。本明細書で述べるヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えばインビトロでランダムまたは部位特異的突然変異誘発によってまたはインビボで体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含み得る。
【０１４９】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種からの免疫グロブリンに実質的に由来する抗原結合部位を有する分子を指し、ここで分子の残りの免疫グロブリン構造は、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく。抗原結合部位は、定常ドメインに融合した完全な可変ドメインを含み得るか、または可変ドメイン内の適切なフレームワーク領域に移植された相補性決定領域（ＣＤＲ）だけを含み得る。抗原結合部位は、野生型であり得るかまたは１もしくはそれ以上のアミノ酸置換によって修飾されていてもよい、例えばヒト免疫グロブリンにより密接に類似するように修飾されていてもよい。ヒト化抗体の一部の形態は、すべてのＣＤＲ配列を保存する（例えばマウス抗体からの６つのＣＤＲ全部を含むヒト化マウス抗体）。他の形態は、もとの抗体に比べて変化した１またはそれ以上のＣＤＲを有する。
【０１５０】
「キメラ抗体」という用語は、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の各々の一部分が、特定の種に由来するまたは特定のクラスに属する抗体中の対応する配列に相同であり、鎖の残りのセグメントは別の抗体中の対応する配列に相同である抗体を指す。典型的には、軽鎖と重鎖の両方の可変領域が哺乳動物の１つの種に由来する抗体の可変領域を模倣し、定常部分は別の種に由来する抗体の配列に相同である。そのようなキメラ形態の１つの明らかな利点は、可変領域を、例えばヒト細胞調製物に由来する定常領域と組み合わせて、容易に入手可能な非ヒト宿主生物からのＢ細胞またはハイブリドーマを用いて現在公知の供給源から好都合に誘導できることである。可変領域は調製の容易さという利点を有し、その特異性は供給源に影響されないが、ヒトである定常領域は、抗体を注射した場合、非ヒト供給源からの定常領域よりもヒト被験体からの免疫応答を惹起する可能性が低い。しかし、その定義はこの特定の例に限定されない。
【０１５１】
抗体の「抗原結合部分」（もしくは単に「結合部分」）または抗体の「抗原結合フラグメント」（もしくは単に「結合フラグメント」）という用語または同様の用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１またはそれ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は完全長抗体のフラグメントによって実行され得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨドメインから成る一価フラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントである、Ｆ（ａｂ'）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨドメインから成るＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の１本の腕のＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインから成る、ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｖｉｉ）場合により合成リンカーによって連結されていてもよい２またはそれ以上の単離されたＣＤＲの組合せ、が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によってコードされるが、それらを、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して一価分子を形成する一本鎖タンパク質（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えばＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３参照）として作製することを可能にする合成リンカーによって、組換え法を用いてそれらを連結することができる。そのような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることが意図されている。さらなる例は、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合した結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域、を含む結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である。結合ドメインポリペプチドは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域であり得る。結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、さらに、米国特許出願第２００３／０１１８５９２号および同第２００３／０１３３９３９号に開示されている。これらの抗体フラグメントは当業者に公知の従来技術を用いて得られ、フラグメントは、無傷抗体と同じ方法で有用性に関してスクリーニングされる。
【０１５２】
「二重特異性分子」という用語は、２つの異なる結合特異性を有する任意の作用物質、例えばタンパク質、ペプチド、またはタンパク質複合体もしくはペプチド複合体を包含することが意図されている。例えば、前記分子は、（ａ）細胞表面抗原および（ｂ）エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体、に結合し得るまたはこれらと相互作用し得る。「多重特異性分子」または「ヘテロ特異性分子」という用語は、３つ以上の異なる結合特異性を有する任意の作用物質、例えばタンパク質、ペプチド、またはタンパク質複合体もしくはペプチド複合体を包含することが意図されている。例えば、前記分子は、（ａ）細胞表面抗原、（ｂ）エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体および（ｃ）少なくとも１つの他の成分、に結合し得るまたはこれらと相互作用し得る。したがって、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２および他の標的、例えばエフェクター細胞上のＦｃ受容体に対する二重特異性、三重特異性、四重特異性および他の多重特異性分子を包含するが、これらに限定されない。「二重特異性抗体」という用語はダイアボディも包含する。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが１本のポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間での対合を許容するには短すぎるリンカーを使用し、それによりそれらのドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させて、２つの抗原結合部位を創製する、二価の二重特異性抗体である（例えばＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。
【０１５３】
抗体は、細胞毒、薬剤（例えば免疫抑制剤）または放射性同位体などの治療成分または作用物質に結合し得る。細胞毒または細胞傷害性薬剤は、細胞に有害であり、特に細胞を死滅させる任意の作用物質を包含する。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロールおよびピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログが挙げられる。抗体コンジュゲートを形成するための適切な治療薬としては、代謝拮抗物質（例えばメトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えばメクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）（シスプラチン）、アントラサイクリン（例えばダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えばダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂薬（例えばビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、治療薬は細胞傷害性物質または放射性毒性物質である。別の実施形態では、治療薬は免疫抑制剤である。さらに別の実施形態では、治療薬はＧＭ−ＣＳＦである。好ましい実施形態では、治療薬は、ドキソルビシン、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミドまたはリシンＡである。
【０１５４】
抗体はまた、放射性同位体、例えばヨウ素１３１、イットリウム９０またはインジウム１１１に結合して、細胞傷害性放射性医薬品を生成することもできる。
【０１５５】
本発明の抗体コンジュゲートは、所与の生物学的応答を調節するために使用することができ、薬剤成分は古典的化学療法剤に限定されると解釈されるべきではない。例えば薬剤成分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質としては、例えば酵素活性毒素もしくはその活性フラグメント、例えばアブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素もしくはジフテリア毒素；腫瘍壊死因子もしくはインターフェロンγなどのタンパク質；または生物学的応答調節剤、例えばリンホカイン、インターロイキン１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）もしくは他の増殖因子などが挙げられ得る。
【０１５６】
そのような治療成分を抗体に結合するための技術は周知であり、例えばＡｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ"，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ"，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，"Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ"，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  '８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）；"Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ"，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）、およびＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，"Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ"，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９−５８（１９８２）参照。
【０１５７】
本明細書で使用される場合、抗体は、その抗体が動物を免疫することによってまたは免疫グロブリン遺伝子ライブラリをスクリーニングすることによって得られる場合、特定の生殖細胞系配列に「由来」し、前記スクリーニングにおいて選択される抗体は、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列において少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに一層好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％同一である。典型的には、特定の生殖細胞系配列に由来する抗体は、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０個以下のアミノ酸相違、より好ましくは５、またはさらに一層好ましくは４、３、２または１個以下のアミノ酸相違を示す。
【０１５８】
本明細書で使用される場合、「ヘテロ抗体」という用語は、そのうちの少なくとも２つが異なる特異性を有する、共に連結された２またはそれ以上の抗体、その誘導体または抗原結合領域を指す。これらの異なる特異性としては、エフェクター細胞上のＦｃ受容体に対する結合特異性、および標的細胞、例えば腫瘍細胞上の抗原またはエピトープに対する結合特異性が挙げられる。
【０１５９】
本明細書で述べる抗体はモノクローナル抗体であり得る。本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は単一結合特異性および親和性を示す。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、不死化細胞に融合した、非ヒト動物、例えばマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【０１６０】
本明細書で述べる抗体は組換え抗体であり得る。「組換え抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、組換え手段によって作製される、発現される、創製されるまたは単離されるすべての抗体、例えば（ａ）免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックもしくはトランスクロモソーマルである動物（例えばマウス）またはそれから作製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体、および（ｄ）免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって作製された、発現された、創製されたまたは単離された抗体、を包含する。
【０１６１】
本明細書で述べる抗体は、マウス、ラット、ウサギ、モルモットおよびヒトを含むがこれらに限定されない、様々な種に由来し得る。
【０１６２】
本明細書で述べる抗体は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を包含し、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２などのＩｇＡ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＭおよびＩｇＤ抗体を含む。様々な実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１抗体、より特定するとＩｇＧ１、カッパまたはＩｇＧ１、ラムダアイソタイプ（すなわちＩｇＧ１、κ、λ）、ＩｇＧ２ａ抗体（例えばＩｇＧ２ａ、κ、λ）、ＩｇＧ２ｂ抗体（例えばＩｇＧ２ｂ、κ、λ）、ＩｇＧ３抗体（例えばＩｇＧ３、κ、λ）またはＩｇＧ４抗体（例えばＩｇＧ４、κ、λ）である。
【０１６３】
「トランスフェクトーマ」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体を発現する組換え真核生物宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、植物細胞、または酵母細胞を含む真菌細胞を包含する。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、「異種抗体」は、そのような抗体を産生するトランスジェニック生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック生物から構成されず、および一般にトランスジェニック生物以外の種に由来する生物において認められるものに対応するアミノ酸配列またはコード核酸配列を有する抗体を指す。
【０１６５】
本明細書で使用される場合、「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生物起源の軽鎖と重鎖を有する抗体を指す。例えば、マウス軽鎖と結合したヒト重鎖を有する抗体はヘテロハイブリッド抗体である。
【０１６６】
本発明は、本発明の目的上「抗体」という用語に包含される、本明細書で述べるすべての抗体および抗体の誘導体を包含する。「抗体誘導体」という用語は、抗体の任意の修飾形態、例えば抗体と別の作用物質もしくは抗体とのコンジュゲート、または抗体フラグメントを指す。
【０１６７】
本明細書で述べる抗体は、好ましくは単離されている。本明細書で使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図されている（例えば、ＣＬＤＮ１８．２に特異的に結合する単離された抗体は、ＣＬＤＮ１８．２以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。ヒトＣＬＤＮ１８．２のエピトープ、アイソフォームまたは変異体に特異的に結合する単離された抗体は、しかし、他の関連抗原、例えば他の種からの関連抗原（例えばＣＬＤＮ１８．２種ホモログ）に対する交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、実質的に他の細胞物質および／または化学物質不含であり得る。本発明の１つの実施形態では、「単離された」モノクローナル抗体の組合せは、異なる特異性を有し、十分に定義された組成物または混合物中で組み合わされている抗体に関する。
【０１６８】
本発明による「結合」という用語は、好ましくは特異的結合に関する。
【０１６９】
本発明によれば、抗体が標準的なアッセイにおいて所定の標的に有意の親和性を有し、および前記所定の標的に結合する場合、前記抗体は前記所定の標的に結合することができる。「親和性」または「結合親和性」は、しばしば平衡解離定数（ＫＤ）によって測定される。好ましくは、「有意の親和性」という用語は、１０−５Ｍもしくはそれ以下、１０−６Ｍもしくはそれ以下、１０−７Ｍもしくはそれ以下、１０−８Ｍもしくはそれ以下、１０−９Ｍもしくはそれ以下、１０−１０Ｍもしくはそれ以下、１０−１１Ｍもしくはそれ以下、または１０−１２Ｍもしくはそれ以下の解離定数（ＫＤ）で所定の標的に結合することを指す。
【０１７０】
抗体が標準的なアッセイにおいて標的に有意の親和性を有さず、および前記標的に有意に結合しない、特に検出可能に結合しない場合、前記抗体は前記標的に（実質的に）結合することができない。好ましくは、抗体が、最大２μｇ／ｍｌまで、好ましくは１０μｇ／ｍｌまで、より好ましくは２０μｇ／ｍｌまで、特に５０μｇ／ｍｌまたは１００μｇ／ｍｌ以上までの濃度で存在する場合、前記抗体は前記標的に検出可能に結合していない。好ましくは、抗体が、その抗体が結合することができる所定の標的への結合に関するＫＤよりも少なくとも１０倍、１００倍、１０３倍、１０４倍、１０５倍または１０６倍高いＫＤで前記標的に結合する場合、前記抗体は前記標的に有意の親和性を有さない。例えば、抗体が結合することができる標的への結合に関するＫＤが１０−７Ｍである場合、前記抗体が有意の親和性を有さない標的への結合に関するＫＤは、少なくとも１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍ、１０−３Ｍ、１０−２Ｍまたは１０−１Ｍである。
【０１７１】
抗体が、所定の標的に結合することができるが、他の標的には結合することができない、すなわち標準的なアッセイにおいて他の標的には有意の親和性を有さず、および他の標的に有意に結合しない場合、前記抗体は前記所定の標的に特異的である。本発明によれば、抗体が、ＣＬＤＮ１８．２に結合することができるが、他の標的には（実質的に）結合することができない場合、前記抗体はＣＬＤＮ１８．２に特異的である。好ましくは、そのような他の標的に対する親和性および結合が、ＣＬＤＮ１８．２に無関係なタンパク質、例えばウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、または非クローディン膜貫通タンパク質、例えばＭＨＣ分子もしくはトランスフェリン受容体、または何らかの他の特定のポリペプチドに対する親和性または結合を有意に上回らない場合、前記抗体はＣＬＤＮ１８．２に特異的である。好ましくは、抗体が、その抗体が特異的でない標的への結合に関するＫＤよりも少なくとも１０倍、１００倍、１０３倍、１０４倍、１０５倍または１０６倍低いＫＤで所定の標的に結合する場合、前記抗体は前記所定の標的に特異的である。例えば、抗体が特異的である標的への結合に関するＫＤが１０−７Ｍである場合、前記抗体が特異的でない標的への結合に関するＫＤは、少なくとも１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍ、１０−３Ｍ、１０−２Ｍまたは１０−１Ｍである。
【０１７２】
標的への抗体の結合は、任意の適切な方法：例えばＢｅｒｚｏｆｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，"Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ"Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８４）、Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９９２）参照、および本明細書で述べる方法を用いて実験的に決定することができる。親和性は、従来の技術を用いて、例えば平衡透析によって；製造者によって概説される一般的手順を用いて、ＢＩＡｃｏｒｅ  ２０００装置を使用することによって；放射性標識標的抗原を用いた放射性免疫検定法によって；または当業者に公知の別の方法によって、容易に決定し得る。親和性データは、例えばＳｃａｔｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ，５１：６６０（１９４９）の方法によって解析し得る。特定の抗体抗原相互作用の測定される親和性は、異なる条件下で、例えば異なる塩濃度、ｐＨの下で測定された場合、異なり得る。したがって、親和性および他の抗原結合パラメータ、例えばＫＤ、ＩＣ５０の測定は、好ましくは抗体および抗原の標準溶液および標準緩衝液を使用して行われる。
【０１７３】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えばＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。
【０１７４】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプスイッチ」は、抗体のクラスまたはアイソタイプがある１つのＩｇクラスからその他のＩｇクラスの１つに変化する現象を指す。
【０１７５】
物体に適用される場合の本明細書で使用される「天然に存在する」という用語は、物体を自然界で見出すことができるという事実を指す。例えば、自然界の供給源から単離することができる生物（ウイルスを含む）中に存在し、実験室においてヒトによって意図的に改変されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
【０１７６】
本明細書で使用される「再編成された」という用語は、基本的にそれぞれ完全なＶＨまたはＶＬドメインをコードする立体配座においてＶセグメントがＤ−ＪまたはＪセグメントに直接隣接して位置する、重鎖または軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の立体配置を指す。再編成された免疫グロブリン（抗体）遺伝子座は、生殖細胞系ＤＮＡとの比較によって同定することができ、再編成された遺伝子座は、少なくとも１つの組み換えられた７量体／９量体相同性エレメントを有する。
【０１７７】
Ｖセグメントに関して本明細書で使用される「再編成されていない」または「生殖細胞系立体配置」という用語は、Ｖセグメントが、ＤまたはＪセグメントに直接隣接するように組み換えられていない立体配置を指す。
【０１７８】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、ＣＬＤＮ１８．２中に存在するエピトープ、好ましくはＣＬＤＮ１８．２の細胞外ドメイン内、特に第一細胞外ドメイン内、好ましくはＣＬＤＮ１８．２のアミノ酸位置２９〜７８内に位置するエピトープに結合することができる抗体である。特定の実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、（ｉ）ＣＬＤＮ１８．１上には存在しないＣＬＤＮ１８．２上のエピトープ、好ましくは配列番号：３、４および５、（ｉｉ）ＣＬＤＮ１８．２−ループ１上に局在するエピトープ、好ましくは配列番号：８、（ｉｉｉ）ＣＬＤＮ１８．２−ループ２上に局在するエピトープ、好ましくは配列番号：１０、（ｉｖ）ＣＬＤＮ１８．２−ループＤ３上に局在するエピトープ、好ましくは配列番号：１１、（ｖ）ＣＬＤＮ１８．２−ループ１およびＣＬＤＮ１８．２−ループＤ３を包含するエピトープ、または（ｖｉ）ＣＬＤＮ１８．２−ループＤ３上に局在する非グリコシル化エピトープ、好ましくは配列番号：９、に結合することができる抗体である。
【０１７９】
本発明によれば、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有するが、ＣＬＤＮ１８．１に結合する能力は有さない抗体である。好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体はＣＬＤＮ１８．２に特異的である。好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、好ましくは細胞表面に発現されたＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体である。特定の好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、生細胞の表面に存在するＣＬＤＮ１８．２の天然エピトープに結合する。好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、配列番号：１、３〜１１、４４、４６および４８〜５０から成る群より選択される１またはそれ以上のペプチドに結合する。好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、前述したタンパク質、ペプチドまたはその免疫原性フラグメントもしくは誘導体に特異的である。ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、配列番号：１、３〜１１、４４、４６および４８〜５０から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むタンパク質もしくはペプチド、または前記タンパク質もしくはペプチドを発現する核酸もしくは宿主細胞で動物を免疫する工程を含む方法によって入手し得る。好ましくは、抗体は、癌細胞、特に前述した癌型の細胞に結合し、および好ましくは、非癌性細胞には実質的に結合しない。
【０１８０】
好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体の、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞への結合は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞の死滅を誘導または媒介する。ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞は、好ましくは癌細胞であり、特に腫瘍形成性胃癌、食道癌、膵癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、肝癌、頭頸部癌および胆嚢癌細胞から成る群より選択される。好ましくは、抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）媒介性溶解、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）媒介性溶解、アポトーシスおよびＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞の増殖の阻害の１またはそれ以上を誘導することによって細胞の死滅を誘導または媒介する。好ましくは、細胞のＡＤＣＣ媒介性溶解はエフェクター細胞の存在下で起こり、エフェクター細胞は、特定の実施形態では単球、単核細胞、ＮＫ細胞およびＰＭＮから成る群より選択される。細胞の増殖の阻害は、ブロモデオキシウリジン（５−ブロモ−２−デオキシウリジン、ＢｒｄＵ）を使用したアッセイにおいて細胞の増殖を定量することによってインビトロで測定できる。ＢｒｄＵは、チミジンの類似体である合成ヌクレオシドであり、複製中の細胞の新たに合成されたＤＮＡに組み込まれることができ（細胞周期のＳ期の間に）、ＤＮＡ複製の間にチミジンと置き換わる。例えばＢｒｄＵに特異的な抗体を使用して、組み込まれた化学物質を検出することにより、そのＤＮＡを活発に複製していた細胞が示される。
【０１８１】
好ましい実施形態では、本明細書で述べる抗体は、以下の特性：
ａ）ＣＬＤＮ１８．２に対する特異性；
ｂ）約１００ｎＭまたはそれ以下、好ましくは約５〜１０ｎＭまたはそれ以下、より好ましくは約１〜３ｎＭまたはそれ以下のＣＬＤＮ１８．２に対する結合親和性；
ｃ）ＣＬＤＮ１８．２陽性細胞上でＣＤＣを誘導または媒介する能力；
ｄ）ＣＬＤＮ１８．２陽性細胞上でＡＤＣＣを誘導または媒介する能力；
ｅ）ＣＬＤＮ１８．２陽性細胞の増殖を阻害する能力；
ｆ）ＣＬＤＮ１８．２陽性細胞のアポトーシスを誘導する能力
の１つまたはそれ以上を特徴とし得る。
【０１８２】
特に好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、ＤＳＭＺ（Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ  Ｗｅｇ  １ｂ，３１８２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ；新住所：Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ．７Ｂ，３１８２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に寄託された、以下の名称およびアクセッション番号を有するハイブリドーマによって産生される：
ａ．１８２−Ｄ１１０６−０５５、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３７、２００５年１０月１９日寄託
ｂ．１８２−Ｄ１１０６−０５６、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３８、２００５年１０月１９日寄託
ｃ．１８２−Ｄ１１０６−０５７、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７３９、２００５年１０月１９日寄託
ｄ．１８２−Ｄ１１０６−０５８、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４０、２００５年１０月１９日寄託
ｅ．１８２−Ｄ１１０６−０５９、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４１、２００５年１０月１９日寄託
ｆ．１８２−Ｄ１１０６−０６２、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４２、２００５年１０月１９日寄託
ｇ．１８２−Ｄ１１０６−０６７、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４３、２００５年１０月１９日寄託
ｈ．１８２−Ｄ７５８−０３５、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４５、２００５年１１月１７日寄託
ｉ．１８２−Ｄ７５８−０３６、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４６、２００５年１１月１７日寄託
ｊ．１８２−Ｄ７５８−０４０、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４７、２００５年１１月１７日寄託
ｋ．１８２−Ｄ１１０６−０６１、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２７４８、２００５年１１月１７日寄託
ｌ．１８２−Ｄ１１０６−２７９、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０８、２００６年１０月２６日寄託
ｍ．１８２−Ｄ１１０６−２９４、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２８０９、２００６年１０月２６日寄託
ｎ．１８２−Ｄ１１０６−３６２、アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２８１０、２００６年１０月２６日寄託。
【０１８３】
本発明による好ましい抗体は、上述したハイブリドーマによって産生されるおよび上述したハイブリドーマから得られるもの、すなわち１８２−Ｄ１１０６−０５５の場合は３７Ｇ１１、１８２−Ｄ１１０６−０５６の場合は３７Ｈ８、１８２−Ｄ１１０６−０５７の場合は３８Ｇ５、１８２−Ｄ１１０６−０５８の場合は３８Ｈ３、１８２−Ｄ１１０６−０５９の場合は３９Ｆ１１、１８２−Ｄ１１０６−０６２の場合は４３Ａ１１、１８２−Ｄ１１０６−０６７の場合は６１Ｃ２、１８２−Ｄ７５８−０３５の場合は２６Ｂ５、１８２−Ｄ７５８−０３６の場合は２６Ｄ１２、１８２−Ｄ７５８−０４０の場合は２８Ｄ１０、１８２−Ｄ１１０６−０６１の場合は４２Ｅ１２、１８２−Ｄ１１０６−２７９の場合は１２５Ｅ１、１８２−Ｄ１１０６−２９４の場合は１６３Ｅ１２、および１８２−Ｄ１１０６−３６２の場合は１７５Ｄ１０；ならびにそのキメラおよびヒト化形態である。
【０１８４】
好ましいキメラ抗体およびそれらの配列を以下の表に示す。
【表１−１】
2020143153.tif 000016
【０１８５】
好ましい実施形態では、抗体、特に本発明によるキメラ形態の抗体は、配列番号：１３によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントなどのヒト重鎖定常領域に由来するアミノ酸配列を有する重鎖定常領域（ＣＨ）を含む抗体を包含する。さらなる好ましい実施形態では、抗体、特に本発明によるキメラ形態の抗体は、配列番号：１２によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントなどのヒト軽鎖定常領域に由来するアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む抗体を包含する。特定の好ましい実施形態では、抗体、特に本発明によるキメラ形態の抗体は、配列番号：１３によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントなどのヒトＣＨに由来するアミノ酸配列を有するＣＨを含み、および配列番号：１２によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントなどのヒトＣＬに由来するアミノ酸配列を有するＣＬを含む抗体を包含する。
【０１８６】
１つの実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、マウスκ可変軽鎖、ヒトκ軽鎖定常領域アロタイプＫｍ（３）、マウス重鎖可変領域、ヒトＩｇＧ１定常領域、アロタイプＧ１ｍ（３）を含むキメラマウス／ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。
【０１８７】
特定の好ましい実施形態では、キメラ形態の抗体は、配列番号：１４、１５、１６、１７、１８、１９およびそのフラグメントから成る群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ならびに／または配列番号：２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８およびそのフラグメントから成る群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖を含む抗体を包含する。
【０１８８】
特定の好ましい実施形態では、キメラ形態の抗体は、以下の可能性（ｉ）〜（ｉｘ）から選択される重鎖と軽鎖の組合せを含む抗体を包含する：
（ｉ）重鎖は配列番号：１４によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２１によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｉｉ）重鎖は配列番号：１５によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２０によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｉｉｉ）重鎖は配列番号：１６によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２２によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｉｖ）重鎖は配列番号：１８によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２５によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖ）重鎖は配列番号：１７によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２４によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖｉ）重鎖は配列番号：１９によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２３によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖｉｉ）重鎖は配列番号：１９によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２６によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖｉｉｉ）重鎖は配列番号：１９によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２７によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、ならびに
（ｉｘ）重鎖は配列番号：１９によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、および軽鎖は配列番号：２８によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む。
【０１８９】
（ｖ）に従う抗体が特に好ましい。
【０１９０】
上記で使用される「フラグメント」または「アミノ酸配列のフラグメント」は、抗体配列の一部、すなわちＮ末端および／またはＣ末端で短縮された抗体配列であり、抗体中で前記抗体配列に置き換わった場合、前記抗体のＣＬＤＮ１８．２への結合および好ましくは本明細書で述べる前記抗体の機能、例えばＣＤＣ媒介性溶解またはＡＤＣＣ媒介性溶解を保持する配列に関する。好ましくは、アミノ酸配列のフラグメントは、前記アミノ酸配列からのアミノ酸残基の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を含む。配列番号：１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７および２８から成る群より選択されるアミノ酸配列のフラグメントは、好ましくはＮ末端の１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３個のアミノ酸が除去されている前記配列に関する。
【０１９１】
好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、配列番号：２９、３０、３１、３２、３３、３４およびそのフラグメントから成る群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【０１９２】
好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、配列番号：３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３およびそのフラグメントから成る群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１９３】
特定の好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、以下の可能性（ｉ）〜（ｉｘ）から選択される重鎖可変領域（ＶＨ）と軽鎖可変領域（ＶＬ）の組合せを含む：
（ｉ）ＶＨは配列番号：２９によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：３６によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｉｉ）ＶＨは配列番号：３０によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：３５によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｉｉｉ）ＶＨは配列番号：３１によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：３７によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｉｖ）ＶＨは配列番号：３３によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：４０によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖ）ＶＨは配列番号：３２によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：３９によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖｉ）ＶＨは配列番号：３４によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：３８によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖｉｉ）ＶＨは配列番号：３４によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：４１によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｖｉｉｉ）ＶＨは配列番号：３４によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：４２によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む、
（ｉｘ）ＶＨは配列番号：３４によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含み、およびＶＬは配列番号：４３によって表されるアミノ酸配列またはそのフラグメントを含む。
【０１９４】
（ｖ）に従う抗体が特に好ましい。
【０１９５】
好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、以下の実施形態（ｉ）〜（ｖｉ）から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のセットを含有するＶＨを含む：
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号：１４の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１４の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１４の１１６〜１２５位、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号：１５の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１５の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１５の１１６〜１２６位、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号：１６の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１６の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１６の１１６〜１２４位、
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号：１７の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１７の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１７の１１６〜１２６位、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号：１８の４４〜５１位、ＣＤＲ２：配列番号：１８の６９〜７６位、ＣＤＲ３：配列番号：１８の１１５〜１２５位、および
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号：１９の４５〜５３位、ＣＤＲ２：配列番号：１９の７１〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：１９の１１７〜１２８位。
【０１９６】
好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、以下の実施形態（ｉ）〜（ｉｘ）から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のセットを含有するＶＬを含む：
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号：２０の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２０の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２０の１１５〜１２３位、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号：２１の４９〜５３位、ＣＤＲ２：配列番号：２１の７１〜７３位、ＣＤＲ３：配列番号：２１の１１０〜１１８位、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号：２２の４７〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：２２の７０〜７２位、ＣＤＲ３：配列番号：２２の１０９〜１１７位、
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号：２３の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２３の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２３の１１５〜１２３位、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号：２４の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２４の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２４の１１５〜１２３位、
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号：２５の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２５の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２５の１１５〜１２２位、
（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号：２６の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２６の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２６の１１５〜１２３位、
（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号：２７の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２７の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２７の１１５〜１２３位、および
（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号：２８の４７〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：２８の７０〜７２位、ＣＤＲ３：配列番号：２８の１０９〜１１７位。
【０１９７】
好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、以下の実施形態（ｉ）〜（ｉｘ）から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のセットをそれぞれ含有するＶＨとＶＬの組合せを含む：
（ｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１４の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１４の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１４の１１６〜１２５位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２１の４９〜５３位、ＣＤＲ２：配列番号：２１の７１〜７３位、ＣＤＲ３：配列番号：２１の１１０〜１１８位、
（ｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１５の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１５の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１５の１１６〜１２６位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２０の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２０の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２０の１１５〜１２３位、
（ｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１６の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１６の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１６の１１６〜１２４位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２２の４７〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：２２の７０〜７２位、ＣＤＲ３：配列番号：２２の１０９〜１１７位、
（ｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１８の４４〜５１位、ＣＤＲ２：配列番号：１８の６９〜７６位、ＣＤＲ３：配列番号：１８の１１５〜１２５位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２５の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２５の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２５の１１５〜１２２位、
（ｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１７の４５〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：１７の７０〜７７位、ＣＤＲ３：配列番号：１７の１１６〜１２６位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２４の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２４の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２４の１１５〜１２３位、
（ｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１９の４５〜５３位、ＣＤＲ２：配列番号：１９の７１〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：１９の１１７〜１２８位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２３の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２３の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２３の１１５〜１２３位、
（ｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１９の４５〜５３位、ＣＤＲ２：配列番号：１９の７１〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：１９の１１７〜１２８位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２６の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２６の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２６の１１５〜１２３位、
（ｖｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１９の４５〜５３位、ＣＤＲ２：配列番号：１９の７１〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：１９の１１７〜１２８位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２７の４７〜５８位、ＣＤＲ２：配列番号：２７の７６〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：２７の１１５〜１２３位、および
（ｉｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号：１９の４５〜５３位、ＣＤＲ２：配列番号：１９の７１〜７８位、ＣＤＲ３：配列番号：１９の１１７〜１２８位、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号：２８の４７〜５２位、ＣＤＲ２：配列番号：２８の７０〜７２位、ＣＤＲ３：配列番号：２８の１０９〜１１７位。
【０１９８】
さらなる好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に対するモノクローナル抗体、好ましくは本明細書で述べるＣＬＤＮ１８．２に対するモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１またはそれ以上、好ましくは少なくともＣＤＲ３可変領域を含み、ならびに好ましくは、本明細書で述べる重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１またはそれ以上、好ましくは少なくともＣＤＲ３可変領域を含む。１つの実施形態では、前記相補性決定領域（ＣＤＲ）の１またはそれ以上は、本明細書で述べる相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のセットから選択される。特に好ましい実施形態では、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、好ましくは、ＣＬＤＮ１８．２に対するモノクローナル抗体、好ましくは本明細書で述べるＣＬＤＮ１８．２に対するモノクローナル抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、ならびに好ましくは、本明細書で述べる重鎖可変領域（ＶＨ）および／または軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
【０１９９】
１つの実施形態では、本明細書で述べる１またはそれ以上のＣＤＲ、ＣＤＲのセットまたはＣＤＲのセットの組合せを含む抗体は、それらの介在フレームワーク領域と共に前記ＣＤＲを含む。好ましくは、その部分は、１番目と４番目のフレームワーク領域のいずれかまたは両方の少なくとも約５０％を含み、前記５０％は、１番目のフレームワーク領域のＣ末端の５０％および４番目のフレームワーク領域のＮ末端の５０％である。組換えＤＮＡ技術によって行われる抗体の構築は、本発明の可変領域を免疫グロブリン重鎖、他の可変ドメイン（例えばダイアボディの作製において）またはタンパク質標識を含むさらなるタンパク質配列に連結するためのリンカーの導入を含む、クローニングまたは他の操作工程を容易にするために導入されるリンカーによってコードされる可変領域のＮ末端またはＣ末端側に残基の導入を生じさせ得る。
【０２００】
１つの実施形態では、本明細書で述べる１またはそれ以上のＣＤＲ、ＣＤＲのセットまたはＣＤＲのセットの組合せを含む抗体は、ヒト抗体フレームワーク内に前記ＣＤＲを含む。
【０２０１】
抗体の重鎖に関して特定の鎖または特定の領域もしくは配列を含む抗体への本明細書における言及は、好ましくは前記抗体のすべての重鎖が前記特定の鎖、領域または配列を含む状況に関する。これは抗体の軽鎖にも対応して適用される。
【０２０２】
「核酸」という用語は、本明細書で使用される場合、ＤＮＡおよびＲＮＡを包含することが意図されている。核酸は一本鎖または二本鎖であってよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【０２０３】
本発明によれば、「発現」という用語はその最も一般的な意味で使用され、ＲＮＡの産生またはＲＮＡとタンパク質／ペプチドの産生を包含する。この用語は核酸の部分的発現も含む。さらに、発現は一過性にまたは安定に実施され得る。
【０２０４】
特定のアミノ酸配列、例えば配列表に示すものに関して本明細書で与えられる教示は、前記特定配列と機能的に等価である配列、例えば特定のアミノ酸配列の特性と同一または類似の特性を示すアミノ酸配列を生じさせる前記特定配列の変異体にも関するように解釈されるべきである。１つの重要な特性は、抗体のその標的への結合を保持することまたは抗体のエフェクター機能を維持することである。好ましくは、特定の配列に関して変異体である配列は、それが抗体中で前記特定配列に置き換わる場合、前記抗体のＣＬＤＮ１８．２への結合および好ましくは本明細書で述べる前記抗体の機能、例えばＣＤＣ媒介性溶解またはＡＤＣＣ媒介性溶解を保持する。
【０２０５】
特にＣＤＲ、超可変領域および可変領域の配列は、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を失わずに修飾され得ることが当業者に認識される。例えば、ＣＤＲ領域は、本明細書で特定される抗体の領域に同一または高度に相同である。「高度に相同」により、１〜５、好ましくは１〜４、例えば１〜３または１もしくは２個の置換がＣＤＲ内で為されていてもよいことが企図される。加えて、超可変領域および可変領域は、本明細書で特定して開示される抗体の領域と実質的な相同性を示すように修飾され得る。
【０２０６】
本発明の目的上、アミノ酸配列の「変異体」は、アミノ酸挿入変異体、アミノ酸付加変異体、アミノ酸欠失変異体および／またはアミノ酸置換変異体を包含する。タンパク質のＮ末端および／またはＣ末端に欠失を含むアミノ酸欠失変異体は、Ｎ末端および／またはＣ末端切断変異体とも呼ばれる。
【０２０７】
アミノ酸挿入変異体は、特定のアミノ酸配列内に１または２またはそれ以上のアミノ酸の挿入を含む。挿入を有するアミノ酸配列変異体の場合、１またはそれ以上のアミノ酸残基がアミノ酸配列内の特定の部位に挿入されているが、生じる産物の適切なスクリーニングを伴うランダムな挿入も可能である。
【０２０８】
アミノ酸付加変異体は、１またはそれ以上のアミノ酸、例えば１、２、３、５、１０、２０、３０、５０またはそれ以上のアミノ酸のアミノ末端および／またはカルボキシ末端融合を含む。
【０２０９】
アミノ酸欠失変異体は、配列からの１またはそれ以上のアミノ酸の除去、例えば１、２、３、５、１０、２０、３０、５０またはそれ以上のアミノ酸の除去を特徴とする。欠失はタンパク質の任意の位置であり得る。
【０２１０】
アミノ酸置換変異体は、配列内の少なくとも１個の残基が除去され、別の残基がその位置に挿入されていることを特徴とする。相同なタンパク質もしくはペプチドの間で保存されていないアミノ酸配列内の位置に修飾が存在することおよび／またはアミノ酸が類似の特性を有する別のアミノ酸で置換されることが好ましい。好ましくは、タンパク質変異体内のアミノ酸変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち類似の荷電または非荷電アミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化は、側鎖が関連するアミノ酸のファミリーの１つの置換を包含する。天然に存在するアミノ酸は、一般に４つのファミリー：酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）アミノ酸に分けられる。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、時として芳香族アミノ酸として一緒に分類される。
【０２１１】
好ましくは、所与のアミノ酸配列と前記所与のアミノ酸配列の変異体であるアミノ酸配列との間の類似性の程度、好ましくは同一性の程度は、少なくとも約６０％、６５％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。類似性または同一性の程度は、好ましくは、参照アミノ酸配列の全長の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または約１００％であるアミノ酸領域に関して与えられる。例えば、参照アミノ酸配列が２００個のアミノ酸から成る場合、類似性または同一性の程度は、好ましくは少なくとも約２０、少なくとも約４０、少なくとも約６０、少なくとも約８０、少なくとも約１００、少なくとも約１２０、少なくとも約１４０、少なくとも約１６０、少なくとも約１８０または約２００個のアミノ酸、好ましくは連続するアミノ酸に関して与えられる。好ましい実施形態では、類似性または同一性の程度は参照アミノ酸配列の全長に関して与えられる。配列類似性、好ましく配列同一性を決定するためのアラインメントは、当分野で公知のツールを用いて、好ましくは最良配列アラインメントを使用して、例えばＡｌｉｇｎを使用して、標準的な設定、好ましくはＥＭＢＯＳＳ：：ニードル、マトリックス：Ｂｌｏｓｕｍ６２、キャップオープン１０．０、ギャップ伸長０．５を用いて実施することができる。
【０２１２】
「配列類似性」は、同一であるかまたは保存的アミノ酸置換であるアミノ酸のパーセントを示す。２つのアミノ酸配列の間の「配列同一性」は、これらの配列間で同一であるアミノ酸のパーセントを示す。
【０２１３】
「同一性パーセント」という用語は、最良のアラインメント後に得られる、比較しようとする２つの配列の間で同一であるアミノ酸残基のパーセントを表すことが意図されており、このパーセントは純粋に統計的であって、２つの配列間の相違はランダムにおよびそれらの全長にわたって分布している。２つのアミノ酸配列の間の配列比較は、従来これらの配列を最適に整列した後で比較することによって実施され、前記比較は、配列類似性の局所領域を同定し、比較するためにセグメントごとにまたは「比較ウィンドウ」ごとに実施される。比較のための配列の最適アラインメントは、手作業による以外に、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，１９８１，Ａｄｓ  Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２，４８２の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３の局所相同性アルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５，２４４４の類似性検索法によって、またはこれらのアルゴリズムを使用したコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ  Ｐ、ＢＬＡＳＴ  ＮおよびＴＦＡＳＴＡ）によって作成され得る。
【０２１４】
同一性パーセントは、比較する２つの配列の間で同一の位置の数を決定し、これら２つの配列間の同一性パーセントを得るためにこの数を比較する位置の数で除して、得られた結果に１００を乗じることによって計算される。
【０２１５】
「トランスジェニック動物」という用語は、１またはそれ以上の導入遺伝子、好ましくは重鎖および／もしくは軽鎖導入遺伝子、または導入染色体（動物の天然ゲノムＤＮＡに組み込まれているかもしくは組み込まれていない）を含むゲノムを有し、好ましくは導入遺伝子を発現することができる動物を指す。例えばトランスジェニックマウスは、マウスが、ＣＬＤＮ１８．２抗原および／またはＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞で免疫化された場合、ヒト抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を産生するように、ヒト軽鎖導入遺伝子と、ヒト重鎖導入遺伝子またはヒト重鎖導入染色体のいずれかを有し得る。ヒト重鎖導入遺伝子は、ＨＣｏ７もしくはＨＣｏｌ２マウスなどのトランスジェニックマウス、例えばＨｕＭＡｂマウスの場合のように、マウスの染色体ＤＮＡに組み込まれ得るか、またはヒト重鎖導入遺伝子は、国際公開第０２／４３４７８号に記載されているトランスクロモソーマル（例えばＫＭ）マウスの場合のように、染色体外に維持され得る。そのようなトランスジェニックおよびトランスクロモソーマルマウスは、Ｖ−Ｄ−Ｊ組換えおよびアイソタイプスイッチを受けることによってＣＬＤＮ１８．２に対するヒトモノクローナル抗体の多数のアイソタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＡおよび／またはＩｇＥ）を産生し得る。
【０２１６】
本明細書で使用される「低減する」または「阻害する」は、レベル、例えば細胞の発現のレベルまたは増殖のレベルの、好ましくは５％またはそれ以上、１０％またはそれ以上、２０％またはそれ以上、より好ましくは５０％またはそれ以上、最も好ましくは７５％またはそれ以上の全体的な低下または全体的な低下を引き起こす能力を意味する。
【０２１７】
「増大させる」または「増強する」などの用語は、好ましくは少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらに一層好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも１００％、少なくとも２００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも１００００％またはさらにそれ以上の増大または増強に関する。
【０２１８】
ｍＡｂの作用機構
以下は、本発明の抗体の治療効果の基礎となる機構についての考察を提供するが、これはいかなる意味においても本発明への限定とみなされるべきではない。
【０２１９】
本明細書で述べる抗体は、好ましくはＡＤＣＣまたはＣＤＣを介して、好ましくは免疫系の成分と相互作用する。本明細書で述べる抗体は、ペイロード（例えば放射性同位体、薬剤もしくは毒素）を標的して腫瘍細胞を直接死滅させるためにも使用でき、または伝統的な化学療法剤と相乗作用的に使用して、Ｔリンパ球への化学療法剤の細胞傷害性副作用のために損なわれた可能性がある抗腫瘍免疫応答を含み得る補完的な作用機構を介して腫瘍を攻撃することもできる。しかし、本明細書で述べる抗体はまた、単に細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２に結合することによって、したがって、例えば細胞の増殖をブロックすることによっても作用を及ぼし得る。
【０２２０】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害
ＡＤＣＣは、本明細書で述べるエフェクター細胞、特にリンパ球の細胞死滅能力を表し、これは、好ましくは標的細胞が抗体によって印づけられることを必要とする。
【０２２１】
ＡＤＣＣは、好ましくは、抗体が腫瘍細胞上の抗原に結合し、抗体Ｆｃドメインが免疫エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）と係合した場合に起こる。Ｆｃ受容体のいくつかのファミリーが同定されており、特定の細胞集団は、規定されたＦｃ受容体を特徴的に発現する。ＡＤＣＣは、抗原提示および腫瘍に対するＴ細胞応答の誘導をもたらす様々な程度の即時腫瘍破壊を直接誘導する機構とみなすことができる。好ましくは、ＡＤＣＣのインビボ誘導は、腫瘍に対するＴ細胞応答および宿主由来の抗体応答をもたらす。
【０２２２】
補体依存性細胞傷害
ＣＤＣは、抗体によって指令され得るもう１つの細胞死滅方法である。ＩｇＭは補体活性化のために最も有効なアイソタイプである。ＩｇＧ１およびＩｇＧ３も、どちらも古典的補体活性化経路によってＣＤＣを指令するのに非常に有効である。好ましくは、このカスケードにおいて、抗原抗体複合体の形成は、ＩｇＧ分子などの関与する抗体分子のＣＨ２ドメイン上のごく近接する多数のＣ１ｑ結合部位の露出を生じさせる（Ｃ１ｑは補体Ｃ１の３つのサブ成分の１つである）。好ましくは、これらの露出されたＣ１ｑ結合部位は、それまでの低親和性Ｃ１ｑ−ＩｇＧ相互作用を高いアビディティの相互作用へと変換し、それが、一連の他の補体タンパク質を含む事象のカスケードを開始させ、エフェクター細胞化学走性／活性化物質Ｃ３ａおよびＣ５ａのタンパク質分解性放出を導く。好ましくは、補体カスケードは、細胞内へのおよび細胞から外への水と溶質の自由な通過を促進する細胞膜の細孔を作り出す、膜傷害性複合体の形成で終了する。
【０２２３】
本明細書で述べる抗体は、従来のモノクローナル抗体法、例えばＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５（１９７５）の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む、様々な技術によって作製することができる。体細胞ハイブリダイゼーション手順が原則として好ましいが、モノクローナル抗体を作製するための他の技術、例えばＢリンパ球のウイルス形質転換もしくは発癌性形質転換または抗体遺伝子のライブラリを用いたファージディスプレイ技術も使用することができる。
【０２２４】
モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製するための好ましい動物系はマウスの系である。マウスにおけるハイブリドーマの作製は極めて広く確立された手順である。免疫プロトコルおよび融合のために免疫脾細胞を単離する技術は当分野で公知である。融合パートナー（例えばマウス骨髄腫細胞）および融合手順も公知である。
【０２２５】
モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを作製するための他の好ましい動物系は、ラットおよびウサギの系である（例えばＳｐｉｅｋｅｒ−Ｐｏｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９２：９３４８（１９９５）に記載されている；またＲｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．１２４：２９５（２００５）も参照のこと）。
【０２２６】
さらに別の好ましい実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、マウスの系ではなくヒト免疫系の一部分を担持するトランスジェニックまたはトランスクロモソーマルマウスを使用して作製できる。これらのトランスジェニックおよびトランスクロモソーマルマウスは、それぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスとして公知のマウスを含み、本明細書では集合的に「トランスジェニックマウス」と称する。そのようなトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体の生産は、国際公開第２００４／０３５６０７号の中でＣＤ２０に関して詳述されているように実施することができる。
【０２２７】
モノクローナル抗体を作製するためのさらに別の方策は、定義された特異性を有する抗体を産生するリンパ球から抗体をコードする遺伝子を直接単離することであり、例えばＢａｂｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｓｉｎｇｌｅ，ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｏｆ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ参照。組換え抗体工学の詳細については、Ｗｅｌｓｃｈｏｆ  ａｎｄ  Ｋｒａｕｓ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ＩＳＢＮ−０−８９６０３−９１８−８およびＢｅｎｎｙ  Ｋ．Ｃ．Ｌｏ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ＩＳＢＮ  １−５８８２９−０９２−１も参照のこと。
【０２２８】
抗体を作製するため、上述したように、抗原配列、すなわちそれに対して抗体が向けられるべき配列に由来する担体結合ペプチド、組換え発現された抗原もしくはそのフラグメントの富化調製物および／または抗原を発現する細胞でマウスを免疫することができる。あるいは、抗原またはそのフラグメントをコードするＤＮＡでマウスを免疫することができる。抗原の精製または富化調製物を使用した免疫が抗体を生じない場合は、免疫応答を促進するために抗原を発現する細胞、例えば細胞株でマウスを免疫することもできる。
【０２２９】
免疫プロトコルの経過中、尾静脈または眼窩後採血によって得られる血漿および血清試料に関して免疫応答を観測することができる。免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスを融合のために使用できる。特異的抗体を分泌するハイブリドーマの割合を高めるため、犠死および脾切除の３日前に抗原発現細胞を用いてマウスを腹腔内または静脈内経路で追加免疫することができる。
【０２３０】
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを作製するため、免疫マウスからの脾細胞およびリンパ節細胞を単離し、マウス骨髄腫細胞株などの適切な不死化細胞株に融合することができる。生じたハイブリドーマを、次に、抗原特異的抗体の産生に関してスクリーニングすることができる。その後個々のウェルを、ＥＬＩＳＡによって抗体を分泌するハイブリドーマに関してスクリーニングすることができる。抗原発現細胞を使用した免疫蛍光法およびＦＡＣＳ分析により、抗原に対して特異性を有する抗体を同定できる。抗体を分泌するハイブリドーマを再度プレートし、再びスクリーニングして、モノクローナル抗体に関してまだ陽性である場合は限界希釈によってサブクローニングすることができる。その後、安定なサブクローンをインビトロで培養し、特徴づけのために組織培養培地中で抗体を作製することができる。
【０２３１】
抗体はまた、例えば当分野で周知の組換えＤＮＡ技術および遺伝子トランスフェクション法の組合せを用いて（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２）、宿主細胞トランスフェクトーマ中で産生させることもできる。
【０２３２】
例えば、１つの実施形態では、関心対象の遺伝子、例えば抗体遺伝子を、国際公開第８７／０４４６２号、同第ＷＯ８９／０１０３６号および欧州特許第３３８  ８４１号に開示されているＧＳ遺伝子発現系または当分野で周知の他の発現系によって使用されるような真核生物発現プラスミドなどの発現ベクターに連結することができる。クローニングした抗体遺伝子を含む精製プラスミドを、ＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの真核生物宿主細胞、あるいは植物由来細胞、真菌または酵母細胞のような他の真核細胞に導入することができる。これらの遺伝子を導入するのに使用される方法は、電気穿孔、リポフェクチン、リポフェクタミンその他のような当分野で記述されている方法であり得る。宿主細胞へのこれらの抗体遺伝子の導入後、抗体を発現する細胞を同定し、選択することができる。これらの細胞はトランスフェクトーマであり、その後これらを発現レベルに関して増幅し、抗体を生産するためにスケールアップすることができる。これらの培養上清および／または細胞から組換え抗体を単離し、精製することができる。
【０２３３】
あるいは、クローニングした抗体遺伝子を、微生物、例えば大腸菌などの原核細胞を含む、他の発現系において発現させることができる。さらに、抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えばヒツジおよびウサギからの乳もしくは雌鶏からの卵において、またはトランスジェニック植物において生産することができる；例えばＶｅｒｍａ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２１６：１６５−１８１；Ｐｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：１４７−１５７；およびＦｉｓｃｈｅｒ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．３８０：８２５−８３９参照。
【０２３４】
キメラ化
マウスモノクローナル抗体は、毒素または放射性同位体で標識した場合、ヒトにおいて治療用抗体として使用することができる。非標識マウス抗体は、反復適用した場合ヒトにおいて高度に免疫原性であり、治療効果の低下をもたらす。主たる免疫原性は重鎖定常領域によって媒介される。ヒトにおけるマウス抗体の免疫原性は、それぞれの抗体をキメラ化またはヒト化した場合、低減するまたは完全に回避することができる。キメラ抗体は、その異なる部分が異なる動物種に由来する抗体、例えばマウス抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域を有するものである。抗体のキメラ化は、マウス抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をヒト重鎖および軽鎖の定常領域と連結することによって達成される（例えばＫｒａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｓｅｒｉｅｓ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  ＩＳＢＮ−０−８９６０３−９１８−８によって記述されている）。好ましい実施形態では、キメラ抗体は、ヒトκ軽鎖定常領域をマウス軽鎖可変領域に連結することによって作製される。同じく好ましい実施形態では、キメラ抗体は、ヒトλ軽鎖定常領域をマウス軽鎖可変領域に連結することによって作製できる。キメラ抗体の作製のための好ましい重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。キメラ抗体の作製のための他の好ましい重鎖定常領域は、ＩｇＧ２、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＭである。
【０２３５】
ヒト化
抗体は、主として、６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）内に位置するアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体間でＣＤＲの外側の配列よりも多様である。ＣＤＲ配列は大部分の抗体−抗原相互作用に関与するので、異なる特性を有する異なる抗体からのフレームワーク配列に移植された、特定の天然に存在する抗体からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現することが可能である（例えばＲｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；およびＱｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９−１００３３参照）。そのようなフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む公的ＤＮＡデータベースから入手することができる。これらの生殖細胞系配列は、Ｂ細胞の成熟の間にＶ（Ｄ）Ｊ連結によって形成される、完全に構築された可変遺伝子を含まないので、成熟抗体遺伝子配列とは異なる。生殖細胞系遺伝子配列はまた、高親和性二次レパートリー抗体の配列とも、可変領域全体にわたって均一に個別に異なる。
【０２３６】
抗原に結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えばＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット法、免疫蛍光法およびフローサイトメトリ分析）を用いて決定することができる。
【０２３７】
抗体を精製するため、選択したハイブリドーマをモノクローナル抗体精製用の２リットルスピナーフラスコ中で増殖させることができる。あるいは、透析に基づくバイオリアクターにおいて抗体を生産することができる。上清をろ過し、必要に応じて濃縮した後、プロテインＧ−セファロースまたはプロテインＡ−セファロースによるアフィニティクロマトグラフィに供することができる。溶出したＩｇＧを、純度を保証するためにゲル電気泳動および高性能液体クロマトグラフィによって検査できる。緩衝液をＰＢＳに交換し、１．４３の吸光係数を使用してＯＤ２８０によって濃度を決定することができる。モノクローナル抗体をアリコートに分け、−８０℃で保存することができる。
【０２３８】
選択したモノクローナル抗体がユニークなエピトープに結合するかどうかを判定するため、部位指定または多部位指定突然変異誘発が使用できる。
【０２３９】
抗体のアイソタイプを決定するため、様々な市販のキット（例えばＺｙｍｅｄ、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）によるアイソタイプＥＬＩＳＡを実施できる。マイクロタイタープレートのウェルを抗マウスＩｇで被覆することができる。ブロックした後、プレートを周囲温度で２時間、モノクローナル抗体または精製アイソタイプ対照と反応させる。次に、ウェルをマウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂもしくはＩｇＧ３、ＩｇＡまたはマウスＩｇＭ特異的ペルオキシダーゼ結合プローブのいずれかと反応させることができる。洗浄後、プレートをＡＢＴＳ基質（１ｍｇ／ｍｌ）で展開し、４０５〜６５０のＯＤで分析することができる。あるいは、ＩｓｏＳｔｒｉｐ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｓｏｔｙｐｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号１４９３０２７）を、製造者によって述べられているように使用し得る。
【０２４０】
免疫したマウスの血清中の抗体の存在または抗原を発現する生細胞へのモノクローナル抗体の結合を明らかにするために、フローサイトメトリを用いることができる。天然にまたはトランスフェクション後に抗原を発現する細胞株と抗原発現を欠く陰性対照（標準的な増殖条件下で増殖させた）を、ハイブリドーマ上清中または１％ＦＢＳを含有するＰＢＳ中で様々な濃度のモノクローナル抗体と混合し、４℃で３０分間インキュベートすることができる。洗浄後、ＡＰＣ標識またはＡｌｅｘａ６４７標識抗ＩｇＧ抗体を、一次抗体染色と同じ条件下で抗原結合モノクローナル抗体に結合することができる。単一生細胞をゲートする側方光散乱特性を利用したＦＡＣＳ装置でのフローサイトメトリによって試料を分析することができる。単一測定において抗原特異的モノクローナル抗体を非特異的結合体から区別するために、同時トランスフェクションの方法が使用できる。抗原と蛍光マーカーをコードするプラスミドを一過性にトランスフェクトした細胞を上述したように染色することができる。トランスフェクトされた細胞は、抗体染色細胞とは異なる蛍光チャネルで検出できる。トランスフェクト細胞の大部分は両方の導入遺伝子を発現するので、抗原特異的モノクローナル抗体は蛍光マーカー発現細胞に選択的に結合し、一方非特異的抗体は同等の割合で非トランスフェクト細胞に結合する。蛍光顕微鏡検査を用いた選択的なアッセイをフローサイトメトリアッセイに加えてまたはその代わりに使用し得る。細胞を上述したように正確に染色し、蛍光顕微鏡法によって検査することができる。
【０２４１】
免疫したマウスの血清中の抗体の存在または抗原を発現する生細胞へのモノクローナル抗体の結合を明らかにするために、免疫蛍光顕微鏡分析を用いることができる。例えば、自然にまたはトランスフェクション後に抗原を発現する細胞株と抗原発現を欠く陰性対照を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００ＩＵ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭ／Ｆ１２培地中、標準的な増殖条件下にチャンバースライド中で増殖させる。次に細胞をメタノールまたはパラホルムアルデヒドで固定するかまたは未処理のまま放置することができる。その後細胞を、２５℃で３０分間、抗原に対するモノクローナル抗体と反応させることができる。洗浄後、同じ条件下で細胞をＡｌｅｘａ５５５標識抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）と反応させることができる。その後蛍光顕微鏡法によって細胞を検査することができる。
【０２４２】
抗原を発現する細胞からの細胞抽出物および適切な陰性対照を調製し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供することができる。電気泳動後、分離された抗原をニトロセルロース膜に移し、ブロックして、試験するモノクローナル抗体でプローブする。抗マウスＩｇＧペルオキシダーゼを使用してＩｇＧ結合を検出し、ＥＣＬ基質で展開することができる。
【０２４３】
抗体を、当業者に周知の方法で免疫組織化学によって、例えば通常の外科手術の間に患者から得た、または自然にもしくはトランスフェクション後に抗原を発現する細胞株を接種した異種移植腫瘍を担持するマウスから得た、非癌組織試料または癌組織試料からの、パラホルムアルデヒドもしくはアセトンで固定した凍結切片またはパラホルムアルデヒドで固定したパラフィン包埋組織切片を使用して、抗原との反応性をさらに試験することができる。免疫染色のために、抗原に対して反応性の抗体をインキュベートし、次いで供給者の指示に従ってホースラディッシュペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスまたはヤギ抗ウサギ抗体（ＤＡＫＯ）と共にインキュベートすることができる。
【０２４４】
抗体を、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞の食作用および死滅を媒介するその能力に関して試験することができる。インビトロでのモノクローナル抗体活性の試験は、インビボモデルにおける試験に先立つ初期スクリーニングを提供する。
【０２４５】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
簡単に述べると、健常ドナーからの多形核細胞（ＰＭＮ）、ＮＫ細胞、単球、単核細胞または他のエフェクター細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離、次いで混入赤血球の溶解によって精製することができる。洗浄したエフェクター細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎仔血清または５％熱不活性化ヒト血清を添加したＲＰＭＩに懸濁し、ＣＬＤＮ１８．２を発現する５１Ｃｒ標識標的細胞と、エフェクター細胞対標的細胞の様々な比率で混合することができる。あるいは、標的細胞を蛍光増強リガンド（ＢＡＴＤＡ）で標識してもよい。死細胞から放出される増強リガンドを有するユウロピウムの高度蛍光キレートを蛍光光度計によって測定することができる。もう１つの選択的な技術は、ルシフェラーゼによる標的細胞のトランスフェクションを利用し得る。添加したルシファーイエローは、その後、生細胞によってのみ酸化され得る。次に精製抗ＣＬＤＮ１８．２  ＩｇＧを様々な濃度で添加することができる。無関係なヒトＩｇＧを陰性対照として使用できる。アッセイは、使用するエフェクター細胞型に依存して３７℃で４〜２０時間実施できる。培養上清中の５１Ｃｒ放出またはＥｕＴＤＡキレートの存在を測定することによって試料を細胞溶解に関して検定することができる。あるいは、ルシファーイエローの酸化から生じるルミネセンスは生細胞の評価尺度であり得る。
【０２４６】
抗ＣＬＤＮ１８．２モノクローナル抗体はまた、細胞溶解が複数のモノクローナル抗体で増強されるかどうかを判定するために様々な組合せで試験することもできる。
【０２４７】
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）
モノクローナル抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を、様々な公知の技術を用いてＣＤＣを媒介するその能力に関して試験することができる。例えば、補体のための血清は、当業者に公知の方法で血液から入手できる。ｍＡｂのＣＤＣ活性を測定するために、種々の方法が使用できる。例えば５１Ｃｒ放出を測定することができ、またはヨウ化プロピジウム（ＰＩ）排除アッセイを用いて膜透過性上昇を評価することができる。簡単に述べると、標的細胞を洗浄し、５×１０５／ｍｌを様々な濃度のｍＡｂと共に室温または３７℃で１０〜３０分間インキュベートすることができる。次に血清または血漿を２０％（ｖ／ｖ）の最終濃度まで添加し、細胞を３７℃で２０〜３０分間インキュベートすることができる。各々の試料からのすべての細胞をＦＡＣＳチューブ内のＰＩ溶液に添加することができる。その後ＦＡＣＳＡｒｒａｙを使用してフローサイトメトリ分析によって直ちに混合物を分析することができる。
【０２４８】
選択的なアッセイでは、ＣＤＣの誘導を接着細胞で測定することができる。このアッセイの１つの実施形態では、細胞を、アッセイの２４時間前に組織培養平底マイクロタイタープレートに３×１０４／ウェルの密度で接種する。その翌日、増殖培地を取り出し、細胞を抗体と共に三つ組みでインキュベートする。対照細胞を、それぞれバックグラウンド溶解および最大溶解の測定のために増殖培地または０．２％サポニンを含有する増殖培地と共にインキュベートする。室温で２０分間インキュベートした後、上清を取り、ＤＭＥＭ中の２０％（ｖ／ｖ）ヒト血漿または血清（あらかじめ３７℃に温めておく）を細胞に添加して、３７℃でさらに２０分間インキュベートする。各々の試料からのすべての細胞をヨウ化プロピジウム溶液（１０μｇ／ｍｌ）に添加する。次に、上清を、２．５μｇ／ｍｌ臭化エチジウムを含有するＰＢＳに交換し、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅを使用して５２０ｎｍ励起での蛍光放出を６００ｎｍで測定する。特異的溶解のパーセントを以下のように計算する：特異的溶解％＝（試料蛍光−バックグラウンド蛍光）／（最大溶解蛍光−バックグラウンド蛍光）×１００。
【０２４９】
モノクローナル抗体によるアポトーシスの誘導および細胞増殖の阻害
アポトーシスを開始させる能力に関して試験するため、モノクローナル抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を、例えばＣＬＤＮ１８．２陽性腫瘍細胞、例えばＳＮＵ−１６、ＤＡＮ−Ｇ、ＫＡＴＯ−ＩＩＩまたはＣＬＤＮ１８．２トランスフェクト腫瘍細胞と共に３７℃で約２０時間インキュベートすることができる。細胞を採取し、Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ結合緩衝液（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で洗浄して、ＦＩＴＣまたはＡＰＣと結合したＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共に暗所で１５分間インキュベートすることができる。各々の試料からのすべての細胞をＦＡＣＳチューブ内のＰＩ溶液（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ）に添加し、直ちにフローサイトメトリによって評価することができる（上記のように）。あるいは、モノクローナル抗体による細胞増殖の一般的な阻害は市販のキットで検出できる。ＤＥＬＦＩＡ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号ＡＤ０２００）は、マイクロプレートにおける増殖中の細胞のＤＮＡ合成の間の５−ブロモ−２'−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の組込みの測定に基づく非同位体免疫検定法である。組み込まれたＢｒｄＵは、ユウロピウム標識モノクローナル抗体を用いて検出される。抗体検出を可能にするため、Ｆｉｘ液を用いて細胞を固定し、ＤＮＡ変性する。非結合抗体を洗い流し、ＤＥＬＦＩＡ誘導剤を添加して標識抗体からユウロピウムイオンを溶液中に解離し、溶液中で前記イオンはＤＥＬＦＩＡ誘導剤の成分と高度蛍光キレートを形成する。検出において時間分解蛍光光度法を利用して、測定された蛍光は、各々のウェルの細胞におけるＤＮＡ合成に比例する。
【０２５０】
前臨床試験
ＣＬＤＮ１８．２に結合するモノクローナル抗体はまた、ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞の増殖を制御するうえでのそれらの効果を測定するためにインビボモデルにおいて（例えばＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞株、ＤＡＮ−Ｇ、ＳＮＵ−１６もしくはＫＡＴＯ−ＩＩＩ、またはトランスフェクション後にＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞株、例えばＨＥＫ２９３を接種した異種移植腫瘍を担持する免疫不全マウスにおいて）試験することもできる。
【０２５１】
ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞を免疫無防備状態マウスまたは他の動物に異種移植した後のインビボ試験を、本明細書で述べる抗体を使用して実施することができる。腫瘍を有さないマウスに抗体を投与し、次いで腫瘍細胞を注射して、腫瘍の形成または腫瘍関連症状を予防する抗体の作用を測定することができる。腫瘍担持マウスに抗体を投与し、腫瘍の成長、転移または腫瘍関連症状を低減するそれぞれの抗体の治療効果を測定することができる。抗体の適用は、併用の相乗効果および潜在的毒性を測定するために他の物質、例えば細胞増殖抑制剤、増殖因子阻害剤、細胞周期ブロッカー、血管新生阻害剤または他の抗体の適用と組み合わせることができる。抗体によって媒介される毒性副作用を分析するため、動物に抗体または対照試薬を接種し、ＣＬＤＮ１８．２抗体治療に関連する可能性がある症状に関して十分に検討することができる。ＣＬＤＮ１８．２抗体のインビボ適用の起こり得る副作用には、特に、胃を含むＣＬＤＮ１８．２発現組織における毒性が含まれる。ヒトおよび他の種、例えばマウスにおいてＣＬＤＮ１８．２を認識する抗体は、ヒトにおけるモノクローナルＣＬＤＮ１８．２抗体の適用によって媒介される潜在的副作用を予測するために特に有用である。
【０２５２】
抗体によって認識されるエピトープのマッピングは、Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ  ＩＳＢＮ−０８９６０３−３７５−９による"Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）"およびＯｌｗｙｎ  Ｍ．Ｒ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ，Ｆｒａｎｋ  Ｃ．Ｈａｙによる"Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ"Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  Ｓｅｒｉｅｓ，２４８において詳述されているように実施することができる。
【０２５３】
本明細書で述べる化合物および作用物質は、任意の適切な医薬組成物の形態で投与し得る。
【０２５４】
医薬組成物は、通常単位投与形態で提供され、それ自体公知の方法で調製され得る。医薬組成物は、例えば溶液または懸濁液の形態であり得る。
【０２５５】
医薬組成物は、塩、緩衝物質、防腐剤、担体、希釈剤および／または賦形剤を含有してよく、それらすべてが、好ましくは医薬的に許容される。「医薬的に許容される」という用語は、医薬組成物の活性成分の作用と相互作用しない物質の無毒性を指す。
【０２５６】
医薬的に許容されない塩は、医薬的に許容される塩を調製するために使用することができ、本発明に包含される。この種の医薬的に許容される塩は、非限定的に、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸等から調製されるものを含む。医薬的に許容される塩はまた、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩としても調製され得る。
【０２５７】
医薬組成物における使用のための適切な緩衝物質としては、塩中の酢酸、塩中のクエン酸、塩中のホウ酸および塩中のリン酸が挙げられる。
【０２５８】
医薬組成物における使用のための適切な防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベンおよびチメロサールが挙げられる。
【０２５９】
注射用製剤は、乳酸リンガー液などの医薬的に許容される賦形剤を含有し得る。
【０２６０】
「担体」という用語は、適用を容易にする、増強するまたは可能にするために活性成分が組み合わされる、天然または合成の有機または無機成分を指す。本発明によれば、「担体」という用語はまた、患者への投与に適する、１またはそれ以上の適合性の固体または液体充填剤、希釈剤または被包物質も包含する。
【０２６１】
非経口投与のために可能な担体物質は、例えば滅菌水、リンガー液、乳酸リンガー液、滅菌塩化ナトリウム溶液、ポリアルキレングリコール、水素化ナフタレンおよび、特に生体適合性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーである。
【０２６２】
本明細書で使用される場合の「賦形剤」という用語は、医薬組成物中に存在してよく、および活性成分ではないすべての物質、例えば担体、結合剤、潤滑剤、増粘剤、界面活性剤、防腐剤、乳化剤、緩衝剤、着香剤または着色剤を指示することが意図されている。
【０２６３】
本明細書で述べる作用物質および組成物は、任意の従来の経路によって、例えば注射または注入を含む非経口投与によって投与し得る。投与は、好ましくは非経口的であり、例えば静脈内、動脈内、皮下、皮内または筋肉内経路である。
【０２６４】
非経口投与に適する組成物は、通常、好ましくは受容者の血液と等張である、活性化合物の滅菌水性または非水性調製物を含む。適合性担体および溶媒の例は、リンガー液および等張塩化ナトリウム溶液である。加えて、通常は滅菌の、固定油が溶液または懸濁液の媒質として使用される。
【０２６５】
本明細書で述べる作用物質および組成物は有効量で投与される。「有効量」は、単独でまたはさらなる投与物と共に所望の反応または所望の作用を達成する量を指す。特定の疾患または特定の状態の治療の場合、所望の反応は、好ましくは疾患の進行の阻止に関する。これは、疾患の進行を遅らせること、特に疾患の進行を妨げるまたは逆転させることを含む。疾患または状態の治療における所望の反応はまた、前記疾患または前記状態の発症の遅延または発症の防止であり得る。
【０２６６】
本明細書で述べる作用物質または組成物の有効量は、治療される状態、疾患の重症度、患者の年齢、生理的状態、大きさおよび体重を含む患者の個別のパラメータ、治療の期間、付随する治療の種類（存在する場合）、特定の投与経路および同様の因子に依存する。したがって、本明細書で述べる作用物質の投与される用量は、そのような様々なパラメータに依存し得る。患者における反応が初期用量で不十分である場合は、より高用量（または異なる、より限局された投与経路によって達成される効果的により高い用量）を使用し得る。
【０２６７】
本明細書で述べる作用物質および組成物は、本明細書で述べるような様々な障害を治療または予防するために、例えばインビボで、患者に投与することができる。好ましい患者としては、本明細書で述べる作用物質および組成物を投与することによって矯正または改善することができる障害を有するヒト患者が挙げられる。これには、ＣＬＤＮ１８．２の変化した発現パターンを特徴とする細胞に関わる障害が含まれる。
【０２６８】
例えば、１つの実施形態では、本明細書で述べる抗体は、癌疾患、例えばＣＬＤＮ１８．２を発現する癌細胞の存在を特徴とする本明細書で述べるような癌疾患を有する患者を治療するために使用できる。
【０２６９】
本発明に従う、前述した医薬組成物および治療の方法は、本明細書で述べる疾患を予防するための免疫またはワクチン接種にも使用し得る。
【０２７０】
本発明を以下の実施例によってさらに説明するが、それらは本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２７１】
（実施例１）
進行した胃食道癌を有する入院患者におけるＩＭＡＢ３６２の安全性および忍容性を評価する臨床ファーストインヒューマン単回投与多施設第Ｉ相オープンラベルｉ．ｖ．注入用量漸増試験
ＩＭＡＢ３６２の最大耐量または最大適用可能単回用量（ＭＴＤ）を決定し、ＩＭＡＢ３６２の安全性、忍容性および有害事象プロフィールを検討し、ＩＭＡＢ３６２の単回漸増用量の薬物動態プロフィールを決定し、ＩＭＡＢ３６２の単回投与適用の免疫原性を決定し、および進行した胃食道（ＧＥ）癌を有する患者におけるＩＭＡＢ３６２の潜在的抗腫瘍活性を決定するために、ＩＭＡＢ３６２に関するヒトでの臨床ファーストインヒューマン単回投与多施設第Ｉ相オープンラベルｉ．ｖ．注入用量漸増試験を実施した。
【０２７２】
この試験は、ＩＭＡＢ３６２の単回静脈内注入および４週間の治療なしフォローアップ期間に関するファーストインヒューマン第Ｉ相、多施設、非無作為化、患者間単回用量漸増、オープンラベル臨床試験として設計された。
【０２７３】
試験に含めるために、患者は以下の選択基準をすべて満たさなければならなかった：
・組織学検査によって証明された進行胃食道癌の転移性、抗療性または再発性疾患
・免疫組織化学によって確認されたＣＬＤＮ１８．２発現またはＣＬＤＮ１８．２発現の判定に適した腫瘍の組織試料が入手できること
・フルオロピリミジン、白金化合物および／またはエピルビシン、および−臨床的に適切な場合は−ドセタキセルを含む事前の標準化学療法
・ＲＥＣＩＳＴ基準（治験登録前６週間以内のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンまたは磁気共鳴断層撮影（ＭＲＴ））による疾患の少なくとも１つの測定可能な部位
・年齢１８歳以上
・試験の通知後の書面によるインフォームドコンセント
・ＥＣＯＧパフォーマンスステータス（ＰＳ）０〜１またはカルノフスキー指数７０〜１００％
・平均余命＞３ヶ月
・血小板数≧１００，０００／ｍｍ３
・ヘモグロビン≧１０ｇ／ｄｌ
・ＩＮＲ＜１．５
・ビリルビン正常
・ＡＳＴおよびＡＬＴ＜正常値の上限（ＵＬＮ）の２．５倍（肝転移が存在する場合はＵＬＮの５倍）
・クレアチニン＜１．５×ＵＬＮ
・妊娠の潜在的可能性を有する女性（登録前２年未満に最終月経）に関して：基線時に妊娠検査（β−ＨＣＧ）陰性および試験薬の注入後８週間、２つの極めて有効な避妊方法を使用すること
・男性患者は試験薬の注入後８週間、一般に認められている避妊方法を使用しなければならない。
【０２７４】
以下の基準の１つまたはそれ以上を示す患者は試験に含めなかった：
・妊娠または母乳栄養
・ヒト化およびキメラ抗体を含む、モノクローナル抗体に対する事前のアレルギー反応または不耐性
・本試験への事前の登録
・事前の抗腫瘍化学療法または放射線療法から３週間未満
・本試験と同時または本試験前４週間以内の他の試験薬または装置
・他の併用抗癌剤または療法
・ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗体についての陽性検査歴
・既知の肝炎
・以下のいずれかを含むがこれらに限定されない、制御されていないまたは重篤な疾病：
−非経口抗生物質を必要とする進行中または活動性の感染
−症候性うっ血性心不全
−不安定狭心症
−制御されていない高血圧
−臨床的に重要な不整脈
−過去６ヶ月以内の心筋梗塞
−過去４週間以内の胃出血
−症候性消化性潰瘍
−脳転移の臨床症状または確認された転移
−試験へのコンプライアンスを不可能にする精神疾病または社会的状況
・ビタミンＫアンタゴニスト（例えばクマジン）と抗凝固薬の同時投与
・治療用量のヘパリン（予防用量は許容される）の同時投与。
【０２７５】
合計２９名の患者から、１５名の患者に試験薬を投与し、用量コホート（３３、１００、３００、６００または１０００ｍｇ  ＩＭＡＢ３６２／ｍ２）の１つに割り当てた。これらの患者は安全性母集団（ＳＰ）を形成した。潜在的な用量制限毒性は用量群のいずれにおいても発生しなかったので、潜在的用量制限毒性を確認するために追加患者を試験する必要はなかった。それゆえ、各用量コホート中３名だけの患者、すなわち全体で１５名の患者が試験薬を摂取した。
【０２７６】
種々のＩＭＡＢ３６２用量コホートへの患者割り当てを以下の表１に示す。
【０２７７】
【表１】
2020143153.tif 000017
【０２７８】
試験を早期に終了した患者はなかった、すなわちすべての患者がプロトコルに従って試験を完了した。
【０２７９】
Ａ．安全性評価
ＩＭＡＢ３６２は安全であり、良好に耐容されることが認められた。
【０２８０】
患者のうち８名で発生した２５のＡＥ（有害事象）だけが治療関連と評価された。治療関連ＡＥは用量群間で同様であった。これらのＡＥのうち半数以上が胃腸障害（主として悪心、嘔吐）であった。これらの関連ＡＥのうち１つだけが重度（嘔吐）と評価され、他はすべて軽度または中等度であった。転帰不明の味覚異常（ＣＴＣグレード１（軽度））の１例および回復しなかったＧＧＴ上昇（ＣＴＣグレード２（中等度））の１例を除き、すべての関連ＡＥが回復した。
【０２８１】
試験薬注入期間中または注入後４週間以内に発生し、グレード３の毒性（悪心、嘔吐および脱毛を除く）またはグレード４もしくは５の毒性（ＣＴＣバージョン３．０による）のいずれかであった、治療関連ＡＥと定義された用量制限毒性（ＤＬＴ）は、いずれの用量群においても観察されなかった。したがって、本試験において決定されたＩＭＡＢ３６２の最大耐量または最大適用可能単回用量（ＭＴＤ）は１０００ｍｇ／ｍ２である。
【０２８２】
関連ＳＡＥおよび疑わしい予期せぬ重篤な有害反応（ＳＵＳＡＲ）は、本試験では発生しなかった。
【０２８３】
７名の患者だけが、グレード３（重度）と評価された基準範囲外の少なくとも１つの臨床検査値を有していた。用量作用関係および試験薬との明らかな関連性は認められなかった。ＣＴＣグレード４（生命を脅かす）または５（死亡）の臨床検査値は報告されなかった。
【０２８４】
結論として、用量群の間でＡＥプロフィールおよび他の安全性パラメータに関連する差異は見られなかった。一般的に言って、単回投与で与えられるＩＭＡＢ３６２は安全であり、良好に耐容され、悪心および嘔吐が最も一般的な関連有害事象であることが認められた。
【０２８５】
Ｂ．薬物動態および免疫原性の評価
薬剤濃度の測定のために、すべての患者のＩＭＡＢ３６２血清レベルを試験薬の注入の直前、注入の終了時、注入の終了後３、８、１２および２４時間目ならびに３日目（Ｖ３）、５日目（Ｖ４）、８日目（Ｖ５）、１５日目（Ｖ６）および２９日目（Ｖ７）に測定した。
【０２８６】
各患者についての試験経過中のＩＭＡＢ３６２血清レベルの概略を表２に示す。３００  ｍｇ／ｍ２用量群の１名の患者（番号１２０１）に関して、理由不明で、試験薬の注入前（Ｖ２、０日目）に既に低いＩＭＡＢ３６２血清レベル（１２．６３３μｇ／ｍｌ）が測定された。
【０２８７】
【表２】
2020143153.tif 000018
【０２８８】
用量群ごとの観察された平均ピーク濃度（Ｃｍａｘ）を表３に示す。Ｃｍａｘについての漸増平均値はＩＭＡＢ３６２の漸増注入用量に対応する。
【０２８９】
【表３】
2020143153.tif 000019
【０２９０】
試験期間中のＩＭＡＢ３６２の平均血中濃度のグラフ表示を図１に示す。
【０２９１】
最も高いＩＭＡＢ３６２レベルは、注入の終了直後から注入の終了後８時間目まで測定された。注入の終了後３時間目に、平均ＩＭＡＢ３６２濃度は、３３ｍｇ／ｍ２群において１４．１μｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍ２群では５０．７μｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍ２群では１６４．２μｇ／ｍＬ、６００ｍｇ／ｍ２群では３０７．８μｇ／ｍＬ、および１０００ｍｇ／ｍ２群では５０２．６μｇ／ｍＬであった。
【０２９２】
ＩＭＡＢ３６２の薬物動態は用量依存性である。最高用量レベルは２時間の注入後最初の８時間以内に観察された。ＩＭＡＢ３６２の平均半減期は、全体では８．５日であり、種々の用量コホートにおいて約５日から約１２日の範囲であった。
【０２９３】
本発明者らは、インビトロ作用機構試験から、５０μｇ／ｍｌのＩＭＡＢ３６２濃度でＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび増殖の阻害による抗腫瘍細胞作用の堅固な遂行が期待できること、ならびに主たる作用機構と考えられる、ＡＤＣＣおよびＣＤＣのＥＣ５０値がこの濃度レベルの半分によってでさえもカバーされると決定した。この知識に基づき、３００ｍｇ／ｍ２および６００ｍｇ／ｍ２の用量レベルを、ＩＭＡＢ３６２に関する複数回投与試験におけるより綿密な評価のために同定した。３００ｍｇ／ｍ２および６００ｍｇ／ｍ２のＩＭＡＢ３６２を摂取していた患者は、８日目（Ｖ５）にこれらのレベルを明らかに上回り、１５日目（Ｖ６）には５０μｇ／ｍｌに近かった。
【０２９４】
ＩＭＡＢ３６２のこの単回投与後に患者における抗薬剤抗体の証拠は存在しなかった。
【０２９５】
Ｃ．抗腫瘍活性の評価
潜在的抗腫瘍活性の評価のための主要測定項目は、ＩＭＡＢ３６２注入後２〜５週間目（Ｖ６／Ｖ７）のＲＥＣＩＳＴ（バージョン１．０）分類による腫瘍状態であった。すべての患者がプロトコルに従って試験を完了したので、評価はもっぱらＶ７、すなわち薬剤注入後４〜５週間目に実施した。すべての患者をＣＴによって評価した。
【０２９６】
３名の患者は測定可能な疾患を有していなかった（患者１１０１および１２０１は標的病変を有さず、患者０３０２については個別のデータが入手できなかった）が、これは正式な効果評価ではなかったので、これらの患者を抗腫瘍活性の分析のための母集団に含めた。
【０２９７】
全体として、いずれの患者についても完全なまたは部分的応答は評価できなかった。安定な疾患は、６００ｍｇ／ｍ２用量群の１５名の患者のうち１名について観察された。治療した患者においてＣＬＤＮ１８．２について陽性に染まる腫瘍細胞の割合は１％〜８０％（５０％までの腫瘍細胞が膜染色を有する）の範囲であり、この患者の腫瘍細胞の９０％またはそれ以上がＣＬＤＮ１８．２について陽性に染まり、大きな割合の腫瘍細胞が膜染色を示した。３００ｍｇ／ｍ２群の２名の患者も進行せず、これらの患者は標的病変を有していなかったので、客観的腫瘍応答に関しては評価不能であり、非ＣＲ、非ＰＤと分類した。ＳＤの期間は約２ヶ月であった。非ＣＲ、非ＰＤの期間は、それぞれ約２ヶ月および６週間であった。
【０２９８】
患者による全体的応答の概略を表４に示す。
【０２９９】
【表４】
2020143153.tif 000020
【０３００】
腫瘍状態（全体的応答）の評価に寄与する種々のパラメータを以下で述べる。
【０３０１】
最長径（標的病変）の合計の変化、ＩＭＡＢ３６２治療後の非標的病変の状態、新たな病変の発生に関して、ＩＭＡＢ３６２治療後の評価結果（Ｖ７に評価した）の概略を表５に示す。
【０３０２】
【表５】
2020143153.tif 000021
【０３０３】
Ｖ１からＶ７までの標的病変の最長径の合計のパーセンテージ変化は、異なる治療用量に関して明らかな差を示さなかった。
【０３０４】
非標的病変に関して、明確な進行（Ｖ１からＶ７まで）は、低い用量レベルの患者においてより頻繁に報告されたが、６００ｍｇ／ｍ２および１０００ｍｇ／ｍ２用量レベルでは報告されなかった。
【０３０５】
３００ｍｇ／ｍ２群の１名の患者（０４０３）では、非標的病変において明確な進行が観察され、１つの標的病変リンパ節では最長径の減少が認められた。
【０３０６】
新たな病変に関しては、用量群の１つに対する優先傾向は認められなかった。
【０３０７】
患者０３０２（６００ｍｇ／ｍ２用量群）および０２０５（１０００ｍｇ／ｍ２用量群）の場合は、新たな病変の発生が進行性疾患としての全体的応答の評価の理由であった。
【０３０８】
ＲＥＣＩＳＴによる非標的病変の状態の評価のために、血清腫瘍抗原ＣＡ １２５、ＣＡ １５−３、ＣＡ １９−９およびＣＥＡのレベルをＶ２（１日目、注入前）、Ｖ６およびＶ７に中央検査室で測定した。
【０３０９】
少なくとも安定な疾患の全体的応答を有する３名の患者についての血清腫瘍マーカーの概略を表６に示す。
【０３１０】
【表６】
2020143153.tif 000022
【０３１１】
イメージングによる安定な疾患または非ＣＲ／非ＰＤを有する３名の患者のうちで、２名の患者は観察期間中安定な腫瘍マーカーを有していた。１名の患者（０２０４）は、治療後４つすべての腫瘍マーカーの大きな減少を示した。進行性疾患を有する患者の大部分は、これに対し、腫瘍マーカーレベルの上昇を経験した。
【０３１２】
ＩＭＡＢ３６２注入後４〜５週間目（Ｖ６／Ｖ７）の腫瘍状態（ＲＥＣＩＳＴ分類による）を基線と比較した。全体として、いずれの患者についても完全なまたは部分的応答は評価できなかった。１５名の患者のうち１名（６００ｍｇ／ｍ２用量群）は、試験終了時に安定な疾患を示した。非測定可能疾患を有する３００ｍｇ／ｍ２用量群の２名の患者は非ＣＲ／非ＰＤを示した。これと一致して、これら３名の患者の腫瘍マーカーレベルは、安定なまま（２名の患者）であるかまたはなお一増大きく低下した（１名の患者）。進行性疾患を有する患者の大部分は、経時的に腫瘍マーカーレベルの上昇を示した。
【０３１３】
腫瘍状態（全体的応答）の評価に寄与するパラメータに関して、１つの病変の減少が３００ｍｇ／ｍ２用量群において観察された。スクリーニング時（Ｖ１）に、１５名の患者のうち１３名は合計３２の非標的病変を有していた。ＩＭＡＢ３６２治療後（Ｖ７に評価した）、非標的病変の明確な進行が合計５名の患者について報告され、３３ｍｇ／ｍ２用量群の３名、１００ｍｇ／ｍ２用量群の１名および３００ｍｇ／ｍ２用量群の１名であった。これら５名の患者のいずれについても、全体的応答は、その非標的病変の進行だけに起因して進行性疾患と評価されなかった。合計１７の新たな病変が試験の経過中に観察され、用量群全体に均一に分布していた。２名の患者（６００ｍｇ／ｍ２および１０００ｍｇ／ｍ２用量群）の場合は、新たな病変の発生が進行性疾患としての全体的応答の評価の理由であった。
【０３１４】
さらに、選択した患者において補助的なデータを収集し、これらのデータは、患者の血清成分および患者のＰＢＭＣが、ＩＭＡＢ３６２の主要な作用機構であるＣＤＣおよびＡＤＣＣをそれぞれ媒介するうえで完全に機能性であり、強力であることを示した。
【０３１５】
結論として、抗腫瘍活性の示唆（安定な疾患、腫瘍マーカーの減少）が３００ｍｇ／ｍ２および６００ｍｇ／ｍ２用量群において認められた。用量群の小さな標本サイズのために、効果の傾向に関して結論を下すことは難しい。
【０３１６】
Ｃ．全体的結論
この治験は、ＩＭＡＢ３６２の単回静脈内注入および４週間の治療なしフォローアップ期間に関するファーストインヒューマン第Ｉ相、多施設、非無作為化、患者間単回用量漸増、オープンラベル臨床試験として設計された。
【０３１７】
合計１５名の患者に試験薬を投与し、用量コホート（３３、１００、３００、６００または１０００ｍｇ  ＩＭＡＢ３６２／ｍ２）の１つに割り当てた。用量群は比較可能とみなすことができる。患者統計データおよび基線特性についての関連する不均衡は認められなかった。
【０３１８】
試験の主要目的に関して、用量制限毒性（ＤＬＴ）はいずれの用量群においても観察されなかった。それゆえ、本試験におけるＩＭＡＢ３６２の適用可能な単回用量は１０００ｍｇ／ｍ２であった。ＩＭＡＢ３６２は安全であり、良好に耐容され、悪心および嘔吐が最も一般的な関連有害事象であった。
【０３１９】
ＡＥプロフィールおよびＡＥ発生率は種々の用量群において同様であることが認められた。何らかの血液学、生化学または凝固パラメータの臨床的に有意の悪化を有する個別患者の数において用量群の間で明らかな差は認められなかった。
【０３２０】
ＲＥＣＩＳＴ基準によるＩＭＡＢ３６２の潜在的抗腫瘍活性に関して、完全なまたは部分的応答はいずれの患者についても認められなかった。１５名の患者のうち１名（６００ｍｇ／ｍ２用量群）は、試験終了時に安定な疾患を示した。非測定可能疾患を有する３００ｍｇ／ｍ２用量群の２名の患者は非ＣＲ／非ＰＤを示した。イメージングによる安定な疾患を有するこれら３名の患者のうちで、２名は観察期間中安定な腫瘍マーカーレベルを有していた。１名の患者は、治療後４つすべての腫瘍マーカーの大きな減少を示した。
【０３２１】
この試験および、ＩＭＡＢ３６２の標的血清レベルが６００ｍｇ／ｍ２用量レベルで達成されることを示す薬物動態試験は、この用量をさらに評価すべきであることを裏付ける。
【０３２２】
さらに、補助データは、患者の免疫エフェクターが、ＩＭＡＢ３６２の主要作用機構であるＣＤＣおよびＡＤＣＣをそれぞれ媒介するうえで完全に機能性であり、強力であることを確認する。
【０３２３】
（実施例２）
薬剤の効力
この第Ｉ相臨床試験のために実施したインビトロ分析の目的には、（ｉ）患者の血液中に存在するエフェクター細胞がＩＭＡＢ３６２依存性ＡＤＣＣを誘導することができるかどうか、（ｉｉ）患者の補体系がＩＭＡＢ３６２依存性ＣＤＣを誘導することができるかどうか、ならびに（ｉｉｉ）ＡＤＣＣおよびＣＤＣを誘導するＩＭＡＢ３６２の能力が患者における投与後に変化するかどうかの分析が含まれた。
【０３２４】
患者における投与後にＩＭＡＢ３６２によって誘導される細胞溶解活性を詳細に検討するために種々の種類のアッセイを実施した。アッセイは、患者血清または血液試料から単離した患者ＰＢＭＣのいずれかを用いて実施した（表７）。比較のためならびにＣＤＣおよび血清ＡＤＣＣアッセイの機能性を検証するために、新鮮ＩＭＡＢ３６２を段階希釈したヒト血清プール（健常ヒト被験者から作製した）を各アッセイに並行して含めた。ＰＢＭＣに関するＡＤＣＣアッセイの機能性を試験するため、健常ドナーから単離した血液細胞を、各患者について同じアッセイにおいて陽性対照として使用した。
【０３２５】
Ａ．試験材料および方法
種々のインビトロアッセイのために、ＩＭＡＢ３６２の注入前ならびにＩＭＡＢ３６２抗体投与の１、７、１４および２８〜３２日後に患者血清試料を採取した（表７）。これらを、ＣＤＣにおけるＩＭＡＢ３６２抗体および補体の供給源としてまたは血清ＡＤＣＣアッセイにおける抗体源として使用した。患者の注入前血清を「ＩＭＡＢ３６２なし」の陰性対照として使用し、およびＩＭＡＢ３６２濃度を０．５μｇ／ｍｌに調整する患者血清試料の希釈のために使用した。新鮮血液試料を注入の１４日後（患者０２０３については７日後）に採取し、ＡＤＣＣアッセイのためのエフェクター細胞の供給源として使用した。
【０３２６】
【表７】
2020143153.tif 000023
【０３２７】
血液試料を患者から収集し（表７）、血清を採取して、血清アリコートを調製し、直ちに−８０℃で保存した。これらの試料すべての分析を、全２４血清試料の収集後に単一実験において実施した。
【０３２８】
ＡＤＣＣに関しては、新鮮血液試料（Ｎａ２ＥＤＴＡ  １５ｍｌ）を使用してＰＢＭＣを単離し、その翌日にＡＤＣＣアッセイを実施した。
【０３２９】
ＩＭＡＢ３６２と連動したＡＤＣＣを誘導する患者のＰＢＭＣの能力を、ＩＭＡＢ３６２の投与の１４日後（患者０２０３については７日後）に患者から得た、新鮮Ｎａ２ＥＤＴＡ  １５ｍｌで抗凝固処理した血液試料を使用することによってエクスヒボで試験した。血液試料のＰＢＭＣを、到着時にフィコール密度勾配遠心分離を用いて単離した。ＰＢＭＣを２４時間培養し、その翌日、様々な濃度の外因的に添加したＩＭＡＢ３６２と共に、ルシフェラーゼをトランスフェクトしたＣＬＤＮ１８．２陽性ＮＵＧＣ４ヒト胃癌細胞を標的としてＡＤＣＣアッセイを実施した。ＰＢＭＣを２０：１のＥ：Ｔ比で添加し、アッセイ物を３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。健常ドナーから得たＰＢＭＣを同じ設定で並行して試験し、アッセイの有効性を分析した（陽性アッセイ対照）。このＰＢＭＣ原液を液体Ｎ２中で保存し、患者のＰＢＭＣを用いた各々のＡＤＣＣアッセイのために、このＰＢＭＣ原液からのアリコートを解凍して、並行して分析した。
【０３３０】
使用した特性付けられた材料は以下のとおりであった：
・ＣＬＤＮ１８．２陽性標的細胞：一過性にルシフェラーゼをトランスフェクトしたＮＵＧＣ４−１０ｃＨ１１Ｅ１０胃癌細胞
・陽性対照エフェクター細胞：健常ドナーから得たＰＢＭＣ（凍結Ｎ２ストックロットＩＤ：２７６−ＳＭＳ−０９−００７０６、４ｅ７ｃ／バイアル、ＭＮＺ、０８．０７．０７．ＳＪＡ）
・機能的対照抗体：段階希釈液中のＩＭＡＢ３６２（０．４ｎｇ／ｍｌ〜１２６．５μｇ／ｍｌ）
・アッセイ陰性対照抗体：アイソタイプ対照（リツキシマブ、１２６．５μｇ／ｍｌ）。
【０３３１】
ＩＭＡＢ３６２と連動して補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導する患者血清成分の能力を経時的にエクスビボで分析した。血清試料を採取し、−８０℃で保存して、すべての患者試料を同じ実験において並行して検定した。
【０３３２】
固定量の０．５μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２（インビトロＥＣ５０濃度に相当する）を外因的に添加した注入前血清に加えて、ＩＭＡＢ３６２投与の１、７、１４および２８〜３２日後に採取した試料も試験し、この試料では循環ＩＭＡＢ３６２を０．５μｇ／ｍｌに調整しなければならなかった（基準化したＣＤＣ）。各アッセイにおける最終血清中濃度を２０％に調整した。ＣＬＤＮ１８．２を安定にトランスフェクトしたルシフェラーゼトランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１細胞を標的として使用した。比較のためにＩＭＡＢ３６２でスパイクした健常ヒトドナーの血清プールを試験した。
【０３３３】
使用した特性付けられた材料は以下のとおりであった：
・ＣＬＤＮ１８．２陽性標的細胞：安定にトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｋ１  ｐ７４０  ｌｕｃｉ  ＃２Ａ５細胞。
・アッセイ陽性対照：健常ドナーからのヒト血清プール中で調製し、３１．６ｎｇ／ｍｌ〜１０．０μｇ／ｍｌの範囲の最終濃度にしたＩＭＡＢ３６２段階希釈液（１：３．１６）。
・機能的対照抗体：各患者の注入前血清試料中で０．５μｇ／ｍｌの最終アッセイ濃度に調整したＩＭＡＢ３６２。
・アッセイ陰性対照抗体：ヒト血清プール中で希釈したアイソタイプ対照抗体（リツキシマブ）。
【０３３４】
ＡＤＣＣおよびＣＤＣを誘導するその能力を統合した、ヒト循環中のＩＭＡＢ３６２によって媒介される全体的細胞傷害性の動態を「ワンチューブ」アッセイにおいて分析した。
【０３３５】
ＩＭＡＢ３６２のｉ．ｖ．投与の７、１４および２８〜３２日後に採取した、したがって患者の補体因子プラス循環ＩＭＡＢ３６２を含有する各患者の血清をこのアッセイで試験した。各アッセイにおいて２５％（ｖ／ｖ）の最終血清中濃度まで血清を適用した。健常対照のＰＢＭＣをエフェクター細胞として添加し、ＮＵＧＣ−４細胞を標的細胞として使用して、Ｅ：Ｔ比は４０：１であった。
【０３３６】
付加的な設定では、血清を熱不活性化し、補体活性を破壊した。この２番目のアッセイは、したがってもっぱら患者血清中に存在するＩＭＡＢ３６２によって誘導されるＡＤＣＣ活性を反映する。
【０３３７】
第Ｉ相試験期間中、血清試料を採取し、−８０℃で保存した。すべての患者試料を同じ実験において並行して検定した。
【０３３８】
使用した特性付けられた材料は以下のとおりであった：
・ＣＬＤＮ１８．２陽性標的細胞：安定にルシフェラーゼをトランスフェクトしたＮＵＧＣ−４  １０ＣＨ１１  ｌｕｃｉ  ｅＧＦＰ＃２胃癌細胞。
・エフェクター細胞：健常ドナーからのＰＢＭＣ（新鮮軟膜）。
・機能的対照抗体：ヒト血清プール中でスパイクしたＩＭＡＢ３６２段階希釈液（０．２６ｎｇ／ｍｌ〜２００．０μｇ／ｍｌ）。
・試料陽性対照：ＩＭＡＢ３６２（２００．０μｇ／ｍｌ）（この設定でのＩＭＡＢ３６２についてのＥＣ８０〜１００である）でスパイクした患者の注入前血清試料。
・アッセイ陰性対照抗体：ヒト血清プール中のアイソタイプ対照抗体（リツキシマブ）。
【０３３９】
患者の血液中での長期間の循環後に患者血清中に存在する補体と相互作用してこれを活性化し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導するＩＭＡＢ３６２の能力を、ＩＭＡＢ３６２投与の１、７、１４および２８〜３２日後にエクスビボで分析した。アッセイ中で患者血清試料を直接使用することによってアッセイを実施した（基準化していないＣＤＣ）。陽性対照として、固定量の１０μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２（インビトロＥＣ９０〜１００濃度に相当する）を外因的に添加した注入前血清。各アッセイにおける最終血清中濃度を２０％に調整した。ＣＬＤＮ１８．２を安定にトランスフェクトしたルシフェラーゼトランスフェクトＣＨＯ−Ｋ１細胞を標的として使用した。比較のためにＩＭＡＢ３６２でスパイクした健常ヒトドナーの血清プールを試験した。
【０３４０】
第Ｉ相試験期間中、血清試料を採取し、−８０℃で保存した。すべての患者試料を同じ実験において並行して検定した。
【０３４１】
使用した特性付けられた材料は以下のとおりであった：
・ＣＬＤＮ１８．２陽性標的細胞：安定にトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｋ１  ｐ７４０  ｌｕｃｉ  ＃２Ａ５細胞。
・機能的対照抗体：健常ドナーからのヒト血清プール中で調製し、３１．６ｎｇ／ｍｌ〜１０．０μｇ／ｍｌの範囲の最終濃度にしたＩＭＡＢ３６２段階希釈液（１：３．１６）。
・試料陽性対照：ＩＭＡＢ３６２（１０．０μｇ／ｍｌ）（インビトロＣＤＣ−ＥＣ９０〜１００濃度）でそれぞれスパイクした注入前患者血清試料。
・アッセイ陰性対照抗体：ヒト血清プール中で希釈したアイソタイプ対照抗体。
【０３４２】
Ｂ．結果
ＡＤＣＣを媒介する患者のＰＢＭＣの能力
ＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞を溶解する患者免疫細胞の能力を分析するために、内因性にＣＬＤＮ１８．２を発現するＮＵＧＣ−４胃癌細胞を漸増濃度のＩＭＡＢ３６２と共におよび患者のＰＢＭＣと共にインキュベートした。健常ドナーからのＰＢＭＣに関するアッセイを機能的対照として含めた。
【０３４３】
患者のＰＢＭＣは、ＩＭＡＢ３６２用量依存的溶解率を示し、約３０μｇ／ｍｌの濃度で最大２７〜７７％であった。これは、同じアッセイにおいて試験した健常対照ＰＢＭＣで得た１４〜５６％の最大溶解率と有意に異ならない（対応のないｔ検定）（図２）。ＡＤＣＣ活性は患者０２０４に関して最も大きかった。
【０３４４】
これらのデータは、胃癌患者のＰＢＭＣが、健常ドナーから得たＰＢＭＣと比較して、ＩＭＡＢ３６２と連動してヒトＣＬＤＮ１８．２陽性胃癌細胞のＡＤＣＣを誘導するうえで劣らないことを示す。
【０３４５】
ＣＤＣを誘導する患者の補体系の能力
血清中に存在するＩＭＡＢ３６２と相互作用して、ＣＤＣを誘導する患者補体の能力を試験した。注入前血清試料を新鮮０．５μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２でスパイクし、ＣＤＣ活性を、ヒト血清プール中でスパイクした同じ抗体濃度と比較した。血清／抗体試料をＣＨＯ−Ｋ１  ｐ７４０  ｌｕｃｉ  ＃２Ａ５細胞と共にインキュベートし、８０分後にルシフェラーゼ活性を測定することによって溶解を判定した。
【０３４６】
すべての患者が８０分以内に有意のＣＤＣを誘導することができた（図３）。６名の患者のうち５名に関して、５０〜７１％の範囲の最大溶解率を認めた。これは、本発明者らが健常対照からのプール血清を用いた並行試験によって得たデータと同等である（６４．５％）。注目すべき点として、患者０２０４は新鮮ＩＭＡＢ３６２に関する最も高いＣＤＣ活性を示した（９３．９％）。
【０３４７】
静脈内循環ＩＭＡＢ３６２による細胞死を誘導する患者血清中の可溶性エフェクターの能力
次に、患者においてその循環期間中を通して、ｉ．ｖ．投与したＩＭＡＢ３６２と相互作用する患者血清の能力を、ＣＤＣアッセイにおけるＩＭＡＢ３６２投与後種々の時点で採取した血清試料をＣＬＤＮ１８．２陽性ＣＨＯ−Ｋ１標的細胞に関して試験することによって検討した。血清試料は、補体を含む患者特異的可溶性エフェクターならびにＩＭＡＢ３６２のための供給源であった。血清試料中のＩＭＡＢ３６２濃度をＥＬＩＳＡによって測定し（ｖｉｖｏＳｃｉｅｎｃｅ）（表８）、各患者の対応する注入前血清を希釈剤として使用して、０．５μｇ／ｍｌ（ＩＭＡＢ３６２の平均ＥＣ５０）の最終ＩＭＡＢ３６２濃度に調整した。ＩＭＡＢ３６２濃度は治療用量および採血の時点に依存して異なるので、試料についての希釈係数は患者間で大きく異なり、４．６倍から６８８倍の範囲であった。健常ドナー（ＨＳＣ）からの血清プールを対照として使用した（図４）。
【０３４８】
陽性対照（それぞれの患者の注入前血清＋新鮮ＩＭＡＢ３６２）と比較して死滅活性は最初の２４時間以内は保持されるが、１週間後に採取した血清試料の細胞溶解活性は低下しており、これがその後の週にはさらに進行している（図４）。そうであっても、ＩＭＡＢ３６２の投与の２週間後でさえもかなりの細胞傷害が患者血清によって遂行された。２８〜３２日後のＣＤＣ活性の喪失は有意であり、低用量のＩＭＡＢ３６２で処置した患者において最も顕著である（図４）。高用量（０２０４；６００ｍｇ／ｍ２および０２０５；１０００ｍｇ／ｍ２）で処置した患者では、ＣＤＣ活性は検討した期間を通じてより良好に保存されると思われた。現在入手可能なデータに基づき、この低下の基礎となる機構はこれまでのところ理解されていない。
【０３４９】
【表８】
2020143153.tif 000024
【０３５０】
ＩＭＡＢ３６２誘導性細胞傷害への血清成分の影響
ｍＡＢのＡＤＣＣ活性はヒト血清の存在下で損なわれ得る。ＡＤＣＣ活性への患者血清の影響を検討した。このために、ＩＭＡＢ３６２投与の７、１４および２８〜３２日後に採取した、したがって患者の補体因子プラス循環中のｉ．ｖ．投与したＩＭＡＢ３６２に相当する、各患者の血清を使用した。すべての患者血清試料を２５％（ｖ／ｖ）の最終血清中濃度に希釈し、各患者のアッセイ試料中の残存するＩＭＡＢ３６２濃度を計算した（表８）。このＡＤＣＣアッセイでは、１名の健常ドナーからのＰＢＭＣをエフェクターとして使用し、ＮＵＧＣ−４細胞を標的細胞として使用した（Ｅ：Ｔ比＝４０：１）。比較可能性を確保するために、全患者に関するすべてのアッセイを同じ条件、標的細胞およびドナーＰＢＭＣを使用して単一実験で並行して実施した。機能的アッセイ対照として、健常ヒト血清プールをＩＭＡＢ３６２（２００．０μｇ／ｍｌ）でスパイクした。付加的な陽性対照として、個々の患者の注入前血清試料を２００．０μｇ／ｍｌ  ＩＭＡＢ３６２（この系におけるＩＭＡＢ３６２についてのインビトロＥＣ８０〜１００に相当する）でスパイクした。
【０３５１】
本発明者らは、すべてのアッセイにおいて、投与後の患者血清中に存在するＩＭＡＢ３６２抗体が高度に活性であり、細胞傷害を誘導することを認めた（図５）。ＩＭＡＢ３６２の生物活性は投与後２８〜３２日間にわたって保持され、特異的死滅は全用量群においてまだ４８％を上回った。用量群間の全体的な差は意外にも小さく、飽和効果を示唆した。より低用量（３３〜３００ｍｇ／ｍ２）で治療された患者では、特異的死滅の７７．７〜８７．４％から４８．３〜６６．８％への中等度の低下が、血清中の抗体濃度の低下と相関して経時的に認められた（図５の上のパネル）。長期間にわたって安定に維持された最も高い活性は、６００または１０００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２で治療された患者で認められた（図５の下のパネル）。
【０３５２】
血清試料を用いてこのアッセイを反復し、この場合は補体因子を５６℃で３０分間インキュベートすることによって不活性化した。熱不活性化患者血清試料による細胞傷害は、すべての症例において未処理血清で得られたものと比較してより低かった。同様の低下は、健常ドナー（ＨＳＣ、図６）からの熱不活性化プールに関しても認められた。
【０３５３】
要約すると、これらのデータは、患者血清は可溶性血清成分のＡＤＣＣ能力を阻害するのではなく、ＩＭＡＢ３６２が誘導する総細胞溶解活性を増大させることを示す。
【０３５４】
患者血清におけるＩＭＡＢ３６２媒介性ＣＤＣの動態
種々の用量群の患者からの血清におけるＩＭＡＢ３６２のＣＤＣ能力の動態を測定するために、ＩＭＡＢ３６２投与の１、７、１４および２８日後に血清試料を採取した。
【０３５５】
やはり、この血清は補体ならびにＩＭＡＢ３６２のための供給源としての役割を果たした。最終血清中濃度を２０％（ｖ／ｖ）最終容量に調整した。各ＣＤＣアッセイ試料中の最終ＩＭＡＢ３６２濃度を表７に記載する。陽性対照として、患者の注入前試料を新鮮ＩＭＡＢ３６２抗体でスパイクし、１０μｇ／ｍｌ（このＣＤＣアッセイ系におけるＩＭＡＢ３６２のインビトロＥＣ９５）の最終濃度にした。さらに、ＣＤＣアッセイの機能的対照のために、ＩＭＡＢ３６２の段階希釈液（０．０３２〜１０μｇ／ｍｌ）をヒト血清プール中で調製した。ＣＬＤＮ１８．２およびルシフェラーゼを安定にトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｋ１細胞に関する標準化アッセイを標的細胞として使用した。すべての血清試料を解凍し、同じ実験において並行して試験した。
【０３５６】
ＣＤＣ活性は各血清試料中の抗体濃度と良好に相関する（図７）。最も重要な点として、データは、ＣＤＣ媒介性細胞傷害活性が４週間にわたって維持されることを示唆する。特に、高用量群の患者はこの期間を通じてＣＤＣ活性の低下を示さない。
【０３５７】
要約および結論
ＧＥＣを有する患者は、ＩＭＡＢ３６２と連動してＣＬＤＮ１８．２を発現する標的細胞のＡＤＣＣおよびＣＤＣの両方を誘導するその能力を損なわれないと思われる。注目すべき点として、ＡＤＣＣおよびＣＤＣにおいて見られた最大特異的溶解ならびにＡＤＣＣに関して測定されたＥＣ５０は患者０２０４に関して最も高く、この患者は最も著明な臨床および血清腫瘍抗原応答を有していた。
【０３５８】
ＩＭＡＢ３６２の投与後種々の時点での循環ＩＭＡＢ３６２に関するＣＤＣのエクスビボ分析は、投与の２週間後もまだ、強力なＡＤＣＣおよびＣＤＣを誘導するのに十分な活性ＩＭＡＢ３６２が患者の循環中に存在することを示した。
【０３５９】
循環ＩＭＡＢ３６２と連動した患者のＣＤＣ活性は、現在までのところ不明の理由で経時的に減少する。
【０３６０】
（実施例３）
サイトカイン
サイトカインの血清レベルは患者の免疫状態の指標としての役割を果たし得る。この臨床試験において、サイトカインを分析することの目的は、主として安全性モニタリングを支持するためであった。本発明者らは、潜在的なバイオマーカー候補物を定義するという見地からこの補助分析の範囲内でサイトカインを検討した。
【０３６１】
サイトカインレベルを、ＩＭＡＢ３６２注入の１日前および治療サイクルの３日目と５日目に測定した。検討したサイトカインには、プロ炎症性（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）および抗炎症性（ＩＬ−４、ＩＬ−１０）サイトカインならびにＴ細胞の増殖と機能に必要なサイトカイン（ＩＬ−２）およびＮＫ細胞の増殖に必要なサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＬ−１５）が含まれた。
【０３６２】
サイトカインをＥＬＩＳＡおよびフローサイトメトリによって分析した（Ｉｎｔｅｒｌａｂ）。サイトカインを、ＩｎｔｅｒｌａｂのＳＯＰ−ＭＵ−ＩＭＭ．Ｍ．０１４４．０５"Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｉｘ  Ｃｙｔｏｋｉｎ−Ｃｈｅｃｋ  ＩＬ４，ＩＬ６，ＩＬ１３，ＴＮＦ−ａｌｐｈａ，ＩＦＮ−ｇａｍｍａ，ＭＣＰ−１，ＩＬ１０  ＩＬ２，ＩＬ１−β，ＩＬ１２ｐ７０，ＩＬ８，ＩＬ１７Ａ，ＩＬ２３"およびＳＯＰ−ＭＵ−ＩＭＭ．Ｍ．０１５１．０２"Ｈｕｍａｎｅｓ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １５"に従って分析した。
【０３６３】
ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＦＮγおよびＴＮＦαのサイトカイン血清レベルを１５名の患者のうち１４名に関して分析した（表９）。患者０４０３（３００ｍｇ／ｍ２）についてはサイトカインレベルを測定しなかった。基準範囲を上回る血清サイトカインレベル値だけを時間的変化に関して分析した。基準範囲値はＩｎｔｅｒｌａｂによって定義された（ＣＳＲ  ＧＭ−ＩＭＡＢ−００１参照）。
【０３６４】
表９：１日目、３日目および５日目のサイトカイン血清レベル
全患者のサイトカイン血清レベルを１日目、３日目および５日目に測定した。各サイトカインについての基準範囲を示す。検出限界より下または上の値を、計算のためにそれぞれの検出限界に設定した。
【表９】
2020143153.tif 000025
【０３６５】
プロ炎症性サイトカインレベル（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）は、１４名の患者のうち９名（０１０４、０１０５、０２０１、０２０３、０２０４、０１１２、１２０２、０１１２、０２０５）においてそれぞれの基準範囲を上回った。ＩＦＮγレベルは２名の患者（０２０１、１２０２）で高く、ＴＮＦαレベルはこれら２名の患者のうち１名（０２０１）で高かった。両患者においてＩＦＮγおよびＴＮＦαレベルはＩＭＡＢ３６２の投与前に高く、その後の日には低下していた。ＩＬ−６レベルは８名の患者（０１０４、０１０５、０２０３、１１０１、０２０４、０１１２、１２０２、０２０５）において高かった。ＩＭＡＢ３６２投与および用量−作用関係に関してＩＬ−６レベルの変化の明確なパターンは明らかにならなかった。患者０２０４（６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２）のＩＬ−６レベルは、投与前には高くなかったが、注入の２日後にかなり上昇し、他のいずれの患者も示さないパターンであった。すべての患者に関してＩＬ−１およびＩＬ−１２レベルはそれぞれの基準範囲内にとどまった。
【０３６６】
抗炎症性サイトカインレベル（ＩＬ−４、ＩＬ−１０）は、１４名の患者のうち６名（０１０３、０１０４、０２０１、０２０２、０２０３、１１０１）においてそれぞれの基準範囲を上回った。ＩＬ−１０レベルは６名の患者（０１０３、０１０４、０２０１、０２０２、０２０３、１１０１）で高く、ＩＬ−４レベルはこれらの患者のうち２名（０２０１、０２０２）で高かった。抗炎症性サイトカインレベルの変動は、ＩＭＡＢ３６２の投与および用量−作用関係に関して明らかなパターンを示さない。
【０３６７】
Ｔ細胞およびＮＫ細胞の機能と増殖のためのサイトカイン、ＩＬ−２およびＩＬ−１５レベルは、１４名の患者のうち９名（０１０４、０２０１、０２０２、０２０３、１１０１、１２０１、０２０４、１２０２、０２０５）においてそれぞれの基準範囲を上回った。ＩＬ−２レベルは６名の患者（０２０１、０２０２、０２０３、１１０１、１２０２、０２０５）で基準範囲を上回り、ＩＬ−１５レベルは５名の患者（０１０４、０２０２、１２０１、０２０４、１２０２）で基準範囲を上回った。投与前に高いＩＬ−２／ＩＬ−１５レベルを有していた９名の患者のうち７名（０１０４、０２０１、０２０２、０２０３、１２０１、１２０２、０２０５）は、その後の日にはサイトカインレベルの低下を示した：ＩＬ−２／ＩＬ−１５レベルは、ＩＭＡＢ３６２投与前にはそれぞれの基準範囲を上回り、ＩＭＡＢ３６２投与後２日目および４日目には低下した。この群における最も顕著な低下はＩＬ−２血清中濃度に関して認められた。ＩＬ−２の高い注入前レベルを有する５名の患者（０２０１、０２０２、０２０３、１２０２、０２０５）全員において、それぞれの注入前レベルの５０％未満への低下が投与後４日目に認められた。この低下は、３３ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２の投与前にかなり高いＩＬ−２レベル（３５４ｐｇ／ｍＬ）を有していた１名の患者（０２０１）でも観察することができた。
【０３６８】
異なるＩＬ−２濃度プロフィールが患者１１０１（３００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２）によって示され、注入前および注入後２日目には基準範囲内のＩＬ−２レベルであったが、注入後４日目には高いＩＬ−２濃度を有していた。
【０３６９】
ＩＬ−１５レベルは、高いＩＬ−１５注入前レベルを有していた４名の患者（０１０４、０２０２、１２０１、１２０２）全員において投与後４日目に低下した。この濃度プロフィールは、観察されたＩＬ−２濃度プロフィールと非常に類似するが、相対的なレベル低下はそれほど顕著ではない。
【０３７０】
用量−作用関係は、分析したサイトカインのいずれに関しても認められない。
【０３７１】
上記を要約すると、患者の治療前レベルの分析は、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−１５が胃食道疾患を有する後期患者の実質的な割合において高いことを示した。これに対し、いずれの患者もＩＬ−１、ＩＬ−１２、ＩＬ−４、ＩＦＮγおよびＴＮＦαの高レベルを有していないかまたは１名の患者だけが高レベルを有していた。
【０３７２】
ＩＭＡＢ３６２治療後最初の５日以内のサイトカインレベルの変化の分析は以下の観察をもたらした。高いＩＬ−２レベルを有する５名の患者全員において、これらのレベルが大きく低下することが認められ、５名の患者のうち４名は正常基準値に達した。同様に、高いＩＬ−１５レベルを有する４名の患者全員において、ＩＭＡＢ３６２投与後に中等度の低下が観察された。治療後の高レベルの低下も、それぞれＩＦＮγおよびＴＮＦαの高レベルを有する１名の患者について認められた。ＩＬ−６は、これに対し、ＩＭＡＢ３６２投与後に上昇し、４名の患者は治療前におよび１４名の患者のうち７名は治療後５日目に基準レベルを上回るＩＬ−６を示した。
【０３７３】
（実施例４）
胃または下部食道の進行した腺癌を有する患者におけるＩＭＡＢ３６２の複数回投与の効果と安全性を評価する国際的多施設オープンラベル第ＩＩａ相複数回投与試験
胃または下部食道の進行した腺癌を有する患者におけるＩＭＡＢ３６２の複数回投与の効果と安全性を検討するために、国際的多施設オープンラベル第ＩＩａ相複数回投与試験を実施した。この試験の主要目的は、ＲＥＣＩＳＴによる寛解率（ＣＲ、ＰＲ）を検討することであった。この試験の副次的目的は次のとおりであった：ＩＭＡＢ３６２の複数回投与のＣＴＣＡＥ  ｖ３．０による有害事象の頻度および重症度ならびに耐用性、進行のない生存期間（ＰＦＳ）：１回目の注入の開始から最初に観察された疾患進行の日または何らかの原因による死亡の日（いずれか最初に発生した方）までの時間、ヒト抗キメラ抗体の分析による免疫原性、生活の質、臨床的利益（ＲＥＣＩＳＴによるＣＲ、ＰＲおよびＳＤ）、ならびに血清レベルによるＩＭＡＢ３６２の薬物動態。
【０３７４】
患者は、自らの腫瘍中のＩＭＡＢ３６２標的、ＣＬＤＮ１８．２の存在の測定のためのスクリーニングを受けた。ＣＬＤＮ１８．２の状態を、標準化プロトコルに従って実施される、抗クローディン１８抗体を用いた免疫組織化学によって決定した。細胞の少なくとも５０％が少なくとも２＋（２倍強度）の染色強度で染色される腫瘍を有する患者をこの治験に登録した。選択基準および除外基準をスクリーニング来院（Ｖ１）の間に検査した。患者は、胃食道癌の治療を専門とする大学病院から募集した。
【０３７５】
患者は以下の選択基準をすべて満たさなければならなかった：
・組織学検査によって証明された胃または下部食道の進行した腺癌の転移性、抗療性または再発性疾患
・腫瘍細胞の少なくとも５０％が少なくとも２＋（スケールで０から３＋）の染色強度を有するパラフィン包埋腫瘍組織試料における免疫組織化学によって確認されたＣＬＤＮ１８．２発現
・ＲＥＣＩＳＴ基準（２回目の来院前２週間以内のＣＴスキャンまたはＭＲＩ）による疾患の少なくとも１つの測定可能な部位
・年齢≧１８歳
・書面によるインフォームドコンセント
・ＥＣＯＧパフォーマンスステータス（ＰＳ）０〜１またはカルノフスキー指数７０〜１００％
・平均余命＞３ヶ月
・血小板数≧１００，０００／ｍｍ３
・ヘモグロビン≧１０ｇ／ｄｌ
・ビリルビン正常
・ＡＳＴおよびＡＬＴ＜正常値の上限（ＵＬＮ）の２．５倍（肝転移が存在する場合はＵＬＮの５倍）
・クレアチニン＜１．５×ＵＬＮ
・妊娠の潜在的可能性を有する女性（登録前２年未満に最終月経）に関して：基線時に妊娠検査（β−ＨＣＧ）陰性および治療期間中と試験薬の最後の注入後８週間、２つの極めて有効な避妊方法を使用すること
・性的パートナーが妊娠の可能性がある女性である男性患者は、治療期間中と試験薬の最後の注入後８週間、一般に認められている避妊方法を使用しなければならない。
【０３７６】
以下の除外基準のいずれか１つまたはそれ以上に合致する患者は試験登録に適格ではなかった：
・妊娠または母乳栄養
・ヒト化またはキメラ抗体を含む、モノクローナル抗体に対する事前の重篤なアレルギー反応または不耐性
・事前の抗腫瘍化学療法または放射線療法から３週間未満
・本試験と同時または本試験前４週間以内の他の試験薬または装置
・他の併用抗癌療法（試験治療下の適応症のためではない）
・既知のＨＩＶ感染または既知の活動性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型）
・ビタミンＫアンタゴニスト（例えばクマジン、マルクマール）と抗凝固薬の併用
・治療用量のヘパリン（予防用量は許容される）
・以下のいずれかを含むがこれらに限定されない、制御されていない疾病：
−非経口抗生物質を必要とする進行中または活動性の感染
−症候性うっ血性心不全
−不安定狭心症
−制御されていない高血圧
−臨床的に重要な不整脈
−過去６ヶ月以内の心筋梗塞
−過去４週間以内の胃出血
−症候性消化性潰瘍
−脳転移の臨床症状
・試験へのコンプライアンスを不可能にする精神疾病または社会的状況。
【０３７７】
すべてのコホートの全患者が、２週間ごとに２、５、６、７および８回目の来院時にＩＭＡＢ３６２の反復投与を受けた（５回の適用）。用量漸増手順は、ＩＭＡＢ３６２の２つの異なる用量（抗体／体表面積）の以下のコホートを包含した：
コホート１：３００ｍｇ／ｍ２
コホート２：６００ｍｇ／ｍ２
コホート３：６００ｍｇ／ｍ２
【０３７８】
抗体溶液を２週間ごとに２時間の静脈内注入として投与した。注入時間が２時間以上であることが重要であった。注入にあたっては、注入時間を制御するために注入システム（例えばＩｎｆｕｓｏｍａｔ（登録商標）ｆｍＳ）を使用しなければならなかった。製造者によって適合性に関して検査された、試験薬が送達される注入セットを薬剤適用のために使用しなければならなかった。試験薬の注入の時間は午前中でなければならなかった。適格な医師が注入の間およびその後２４時間対応可能でなければならなかった。
【０３７９】
３７名の患者が少なくとも１つの治療を受けた。残念ながら前記患者のうち３名についてはデータベースにおいて文書化が完全ではなく、そのため３４名の患者を全患者治療セット（ＡＰＴセット）に含め、安全性分析に使用する。４、６および２４名の患者をそれぞれ３００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２のコホート１、６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２のコホート２および６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２のコホート３に割り当てた。
【０３８０】
治療期間中、コホート１の１名の患者、コホート２の３名の患者およびコホート３の１２名の患者は、ＩＭＡＢ３６２の５回の注入を受ける前に試験を中止し、５回目の注入の２週間後に９回目の来院（２回目の腫瘍イメージングを含む）を完了した。これらの患者は置き換えられた。
【０３８１】
コホート２の２名の患者は基線時に測定可能な疾患を有さず、効果分析から除外された。小さなプロトコルからの逸脱、例えば２回目の来院より＞１４日前の基線腫瘍評価（ｎ＝３；８．８％）、ヘモグロビン＜１０ｇ／ｄｌ（ｎ＝５；１４．７％）、ビリルビンの異常値（ｎ＝３；８．８％）、ＡＬＴまたはＡＳＴ＞２．５ＵＬＮ（肝転移の症例では＞５ＵＬＮ）（ｎ＝２；５．９％）、クレアチニンの値＞１．５ＵＬＮ（ｎ＝１；２．９％）およびスクリーニング期間と治療の開始との間の長い時間ウィンドウ（＞１５日）（ｎ＝２；５．９％）が発生したが、分析からの除外には至らなかった。１名の患者は過去６ヶ月以内に心筋梗塞を有していた。放棄が認められた。
【０３８２】
コホート２と３において患者は６００ｍｇ／ｍ２の同用量を摂取したので、これらの患者を１つの群として分析することに決定した。ＡＰＴセットの全患者（ｎ＝３４）がコーカサス人であった。平均年齢は、３００ｍｇ／ｍ２用量群では６２歳（４５〜６５歳の範囲）および６００ｍｇ／ｍ２用量群では６１歳（４２〜７７歳の範囲）であった。
【０３８３】
癌の局在および組織病理学的悪性度分類の結果の概略を表１０に示す。最初の診断からこの試験のためのスクリーニング来院までの平均期間は１６ヶ月（最短２．７ヶ月／最長５６ヶ月）であった。ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現状態は、６００ｍｇ／ｍ２で治療された５名の患者を除く患者に関して大部分が不明であった。これら５名の患者のうち１名はＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性であった。
【０３８４】
ＴＮＭ分類を胃（ｎ＝１６）および食道または胃食道接合部（ｎ＝１９）の癌に関して特定した。ＡＰＴセットにおいて患者の２５％はＴ１または２と分類される胃の原発腫瘍を示し、３１％はＴ３、２５％はＴ４の原発腫瘍を示し、１９％については不明であった。診断の時点で、ＡＰＴセット中の患者の６９％はＮ１分類によって示される少なくとも１または２の浸潤されたリンパ節を有し、患者の５６％は腹膜転移（Ｍ１）を有していた。食道または胃食道接合部の癌を有する患者の６９％は≧Ｔ３と診断された。少なくとも１または２の浸潤されたリンパ節（Ｎ１）が患者の８４％に関して報告された。加えて患者の８４％は腹膜転移を示した。
【０３８５】
表１０：最初の診断時の腫瘍の位置および種類の概略
（１名の患者は食道癌と胃癌を有していた；数名の患者は胃の異なる部分を侵す胃癌を有していた）
【表１０】
2020143153.tif 000026
【０３８６】
ＭｅｄＤＲＡ  ＳＯＣベースで、最も頻度の高い臨床的に関連する既往症は、２５名の患者（７３．５％）では外科手術、３０名の患者（８８．２％）では化学療法および７名の患者（７９．４％）では放射線であった。大部分の症例において、手術は器官の外科的切除（胃切除（７２％）、食道切除（１６％）、リンパ節切除（３２％）胆嚢切除（２０％）など）から成った。
【０３８７】
４名を除くすべての患者が、その試験疾患のために少なくとも１つの事前治療を受けていた。ＷＨＯ  ＤＤ  ＡＴＣベースで、最も頻繁に使用された薬剤は、ピリミジン類似体（フルオロウラシルおよび／またはカペシタビン）、白金化合物（シスプラチンおよび／またはオキサリプラチン）、ならびに抗腫瘍薬治療のための解毒剤（フォリン酸カルシウムおよび／またはフォリン酸）であった。他の過去の薬物治療（遅くとも注入の日に終了）も記録した。
【０３８８】
３４名の患者のうち合計３０名（８８．２％）は、少なくとも１つの合併症、すなわち試験薬の注入の日に進行中である疾患を有していた。ＭｅｄＤＲＡ  ＳＯＣベースで、最も一般的な診断は、１９名の患者（５６％）で「胃腸障害」、１２名の患者（３５％）で「一般・全身障害」、１０名の患者（２９％）で「代謝および栄養障害」、ならびに８名の患者（２３．５％）で「筋骨格および結合組織障害」であった。併用療法は、主として酸関連障害のための薬剤（１７名の患者；５０％）、鎮痛薬（１２名の患者；３５．３％）およびＧＩ障害のための薬剤（１０名の患者；２９．４％）であった。
【０３８９】
Ａ．安全性評価
試験薬の注入は試験施設において試験者によって投与され、患者は少なくとも２４時間および最長７２時間まで観察のために病院に留まらなければならなかったため、試験プロトコルへの全体的コンプライアンスは確保された。適格被験者の用量コホートへの割り当ては、試験プロトコルによって規定されたように正確に実施された（ＤＳＭＢによって管理された）。スクリーニング来院の１回目の日から最後の試験日までの時間と定義された試験期間は、最短１８日から最長３５５日までの範囲であった。平均試験期間は１０６日であった。１６名の患者は、９回目の標的来院前に早期に試験を終了した。
【０３９０】
すべての用量群の患者は、平均４．５〜５回のＩＭＡＢ３６２の注入を受けた。ＡＰＴセットにおける１回のＩＭＡＢ３６２注入の平均期間は１２５分であった。プロトコルで規定された１２０分未満の期間を有する患者が１名存在した。この患者は嘔吐のために注入を停止し、試験を早期に中止した。
【０３９１】
３００ｍｇ／ｍ２（ｎ＝４）または６００ｍｇ／ｍ２（ｎ＝３０）の少なくとも１回の投与を受けた３４名の患者全員を含むＡＰＴセットに関して安全性分析を実施した。医師の記述による２４１の有害事象をＭｅｄＤＲＡ辞書に従ってコード化し、基本語に置き換えた。基本語による有害事象は、各患者について１回のみ計数した（同じ有害事象が試験期間中にその患者に関して２回以上発生した場合も）。各患者において発生した最も高いＮＣＩ−ＣＴＣグレードを記録した。３２名（９４％）の患者は、試験期間中に少なくとも１つの有害事象を有していた（関係性に関わらず）。２名の患者に関しては有害事象が記録されなかった。全体で６名の患者（１８％）は、薬剤に関連する可能性がある有害事象を経験しなかった。基本語による１０４の薬剤関連有害事象が２８名の患者について報告された。８件の薬剤に関連する可能性がある重篤な有害事象が４名の患者について報告された。低用量群（３００ｍｇ／ｍ２）の患者数が少ないため、両用量群間の詳細な比較はできなかった。３００ｍｇ／ｍ２コホートと６００ｍｇ／ｍ２群（コホート２および３）における関連有害事象を有する患者の発生率は、それぞれ７５％と８３％である。
【０３９２】
全体で、ＳＯＣからのＡＥ、「胃腸障害」（２７／３４名の患者、７９．４％）、「一般・全身障害および投与部位の状態」（２６／３４ 名の患者、７６．５％）が最も多く報告された。ＭｅｄＤＲＡ  ＰＴベースで、最も頻繁に記録されたＡＥは、「悪心」（１８名の患者における５７事象）、「嘔吐」（１６名の患者における５２事象）および「疲労」（１４名の患者における２０事象）であった。全体で、記録されたＡＥのうち１９２だけが試験者によって試験薬に関連すると評価された。これらの治療関連ＡＥは１０４の異なる基本語に分類され、２８／３４名の患者において認められた。
【０３９３】
大部分の関連有害事象は軽度から中等度であった。中等度の薬剤関連の治療下で発現した事象を有する８名（２３．５％）の患者および重篤な薬剤関連の治療下で発現した事象を有する１２名（３５．３％）の患者が存在した。
【０３９４】
重度の薬剤関連ＡＥは、嘔吐が３００ｍｇ／ｍ２用量群の２名の患者について報告され、１名の患者では悪心を合併した。６００ｍｇ／ｍ２用量群では１０名の患者が重篤な薬剤関連有害事象を経験し、嘔吐があった６名の患者のうち３名は付加的に悪心を経験し、１名の患者は過敏症（アレルギー反応）、１名の患者は唾液分泌過多、１名の患者は脱水症、および１名の患者は低アルブミン血症を経験した。最後の２名の患者は嘔吐と悪心も報告した。２名の患者は、試験薬注入の間に関連する過敏症（アレルギー反応）を患い、そのうち１名は中等度、１名は重度と分類された。どちらの患者も注入を中止した後は回復した。
【０３９５】
報告されたすべての治療下で発現した事象において、ＡＥのために１２／３４名の患者に試験薬の作用が必要であった。７（２１％）例では、ＡＥは永続的な試験の中止をもたらした。基礎となる有害事象は、３名の患者（過敏症（アレルギー反応）（ｎ＝２）、嘔吐および腹痛）では薬剤関連であり、その他の４名の患者（全般的な健康状態の悪化（ｎ＝３）、肺炎）では非薬剤関連であった。１名の患者では用量を低減し、別の１名の患者では悪心を伴う重症の嘔吐により４日間薬剤投与を先延ばしにした。３名の患者では注入を中断／延長した。２７名の患者（７９％）はＡＥのために併用治療を受けた。１１名の患者は入院した。
【０３９６】
１３名の患者が記録された３１件のＳＡＥを有していた。１名の患者は試験の２回目のスクリーニング期間中に死亡した。１２名の患者は他の重篤な有害事象を有しており、前記有害事象は４名の患者において試験薬関連であった。嘔吐、悪心ならびにＧＩ出血および脱水症のような関連有害事象は、試験者によって試験薬に関連すると判定された。本試験では４件のＳＡＲおよび２件のＳＵＳＡＲ（嘔吐およびＧＩ出血を伴う嘔吐）が存在した。最終的な転帰は、７例において死亡であった。いずれの死亡例も、試験者によって試験薬に関連すると分類されなかった。
【０３９７】
１名の患者は、痩身の食事状況で（ＢＭＩ  １９．３）、良好な全身状態（ＥＣＯＧパフォーマンスステータスグレード１、カルノフスキー指数８０％）の４５歳のコーカサス人男性であった。
【０３９８】
患者は、２週間ごとに２０１１年１１月４日、１１月２２日および３回目として１２月６日に３００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２の注入を受けた。試験前に患者は既にグレード１の悪心および嘔吐を患っていた。２０１０年１１月７日にグレード３の嘔吐が診断された。これは重症と評価されたので、患者は入院しなければならなかった。嘔吐が２０１０年１１月１７日にグレード１になり、最終的に完全に停止したので、患者は同日に退院することができた。２回目と３回目のＩＭＡＢ３６２注入の前に、患者は悪心および嘔吐の予防として強力な前投薬（アリザプリド、アプレピタント、メトクロプラミド、ジメヒドリナート）で治療され、そのため再び悪心または嘔吐を患うことはなかった。試験者は、嘔吐を試験薬に関連すると評価した。報告は２０１１年１月１９日に主催者によって受理され、ＳＡＥは、予期されないが試験薬に関連すると判定され、そのためＳＵＳＡＲとして報告された。
【０３９９】
１名の患者は７７歳のコーカサス人男性であった。この患者は、スクリーニング時に正常な食事状況で（ＢＭＩ  ２４）、非常に良好な全身状態（ＥＣＯＧパフォーマンスステータス：グレード０、カルノフスキー指数：１００％）であった。試験前に、患者は既に悪心を患っており、そのため必要に応じてメトクロプラミドで治療された。患者は、死亡により試験を早期に中止しなければならなかったため、２０１１年１１月９日に６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２の１回の適用だけを受けた。左肺の胸水が注入前にＸ線によって診断され、ＳＡＥと報告された。翌朝、吐血が発生した。パントプラゾールおよびオンダンセトロンｉ．ｖ．８ｍｇの投与後、同日に嘔吐は減少し、吐血は回復した。嘔吐はグレード３からグレード２に減少し、最終的に２０１１年１１月１２日に停止したため、患者は２０１１年１１月１３日に退院することができた。試験者はこの事象を試験薬関連と評価した。報告は２０１１年１１月１０日に主催者によって受理され、この事象は、予期されないが試験薬に関連すると判定し、そのためＳＵＳＡＲとして報告された。患者の全身状態は悪化し、腎不全を発症して、残念ながら２０１１年１２月６日に死亡した。
【０４００】
１名の患者は、栄養状態良好な食事状況で（ＢＭＩ  ２６）、非常に良好な全身状態（ＥＣＯＧパフォーマンスステータスグレード０；カルノフスキー指数：１００％）の４２歳のコーカサス人男性であった。この患者は６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２の２回の注入を受けた。２０１２年３月２０日に患者は１回目の試験薬適用を受けた。悪心と重症の嘔吐を発症したので、注入の３５分後に注入速度を低減しなければならなかった。症状は、パントプラゾール４０ｍｇおよびグラニセトロン３ｍｇならびにブチルスコポラミンｉ．ｖ．２バイアルおよびアプレピタントｉ．ｖ．８０ｍｇで治療された。この重篤な有害事象は長期間の入院をもたらした。試験者はこの事象を試験薬に関連すると評価した。ＳＡＥ報告は２０１２年３月２１日に主催者によって受理され、この事象は、予期されるものであり、試験薬に関連すると判定された。数日後、２０１２年３月２４日に患者は、悪心および嘔吐によって引き起こされた重度の脱水症のために再び入院しなければならなかった。さらに、患者は上胃部の疼痛に苦しんでいた。患者はメタミゾールｉ．ｖ．１ｇ、ブプレノルフィンのパッチおよび水分補給のための注入を受けた。２０１２年３月３０日に症状は軽減し、患者は脱水症状から回復した。試験者はこの事象を試験薬に関連しないと評価した。ＳＡＥ報告は２０１２年３月２６日に主催者によって受理され、この事象は予期されず、試験薬に関連しないと判定された。２０１２年４月３日に患者は２回目の注入を受け、これは再び悪心および嘔吐のＡＥをもたらした。患者はメトクロプラミドｐ．ｏ．３０滴およびジメンヒドリナートｉ．ｖ．１バイアルで治療された。２０１２年４月５日に症状が悪化したので、症状は重症と評価された。加えて患者は嚥下障害に悩まされ、したがって食物摂取が大きく減少した。２０１２年４月１５日に症状が消失した。試験者はこの事象を試験薬に関連すると評価した。ＳＡＥ報告は２０１２年４月１９日に主催者によって受理され、この事象は、予期され、試験薬に関連すると判定された。
【０４０１】
１名の患者は、栄養状態良好な食事状況で（ＢＭＩ  ２６）、良好な全身状態（ＥＣＯＧパフォーマンスステータスグレード１；カルノフスキー指数：９０％）の７３歳のコーカサス人男性であった。２０１１年１１月８日から２０１２年１月３日まで、患者は２週間ごとに６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２の５回の予定された試験薬適用を受けた。２０１１年１１月８日に患者はＩＭＡＢ３６２の１回目の適用を受けた。この注入中および注入後に、患者は悪心および嘔吐を発症した。症状は２０１１年１１月９日に深刻になった。メトクロプラミドでの治療後、症状は１日後に消散した。試験者はこの事象を試験薬に関連すると評価した。ＳＡＥ報告は２０１１年１１月１０日に主催者によって受理され、この事象は、予期され、試験薬に関連すると判定された。２０１１年１２月６日に３回目の注入が行われた。患者は中等度の嘔吐および軽度の悪心を患い、クレマスチン、ラニチジンおよびオンダンセトロンで治療された。嘔吐は１日続いた。悪心は７日間持続した。試験は、疾患の進行のため２０１２年１月１６日に打ち切られた。フォローアップ来院は実施されなかった。
【０４０２】
結論として、ＩＭＡＢ３６２は、胃、食道または胃食道接合部の進行した腺癌を有する、多くの事前治療を受けた患者集団において安全であり、良好に耐容されることが認められた。全体で、ＳＯＣからのＡＥ、「胃腸障害」（２７／３４名の患者、７９．４％）、「一般・全身障害および投与部位の状態」（２６／３４ 名の患者、７６．５％）が最も頻繁に報告された。
【０４０３】
ＭｅｄＤＲＡ  ＰＴベースで、最も頻繁に記録されたＡＥは、「悪心」（１８名の患者における５７事象）、「嘔吐」（１６名の患者における５２事象）および「疲労」（１４名の患者における２０事象）であった。
【０４０４】
全体では、記録されたＡＥのうち１９２だけが試験者によって試験薬に関連すると評価された。これらの治療関連ＡＥは３４名の患者のうち２８名で認められた。これらの関連ＡＥの８３％は、２５名の患者で記録された胃腸障害（６８％、１３０ＡＥ）および１６名の患者で記録された一般・全身障害（１５％、２９ＡＥ）であった。
【０４０５】
ＭｅｄＤＲＡ  ＰＴベースで、大部分の関連有害事象は軽度から中等度であり、悪心（５０％）、嘔吐（４７％）、疲労（２７％）、腹痛（１５％）、末梢浮腫（１５％）、食欲不振（１２％）および下痢（１２％）が患者の１０％より多くで発生した。
【０４０６】
２名の患者は試験薬注入の間に関連する過敏症（アレルギー反応）を発現し、そのうち１名は中等度、１名は重度と分類された。どちらの患者も注入を停止した後は回復した。
【０４０７】
ＣＴＣグレード４（生命を脅かす）または５（死亡）の異常な試験薬関連臨床検査値は報告されていない。
【０４０８】
重度の関連する治療下で発現した事象を有する患者は１２名（３５．３％）であった。重症の薬剤関連ＡＥは、嘔吐が３００ｍｇ／ｍ２用量群の２名の患者について報告され、１名の患者では悪心を合併した。６００ｍｇ／ｍ２用量群では１０名の患者が重度の薬剤関連有害事象を経験し、嘔吐があった６名の患者のうち３名は付加的に悪心を経験し、１名の患者は過敏症（アレルギー反応）、１名の患者は唾液分泌過多、１名の患者は脱水症、および１名の患者は低アルブミン血症を経験した。最後の２名の患者は嘔吐と悪心も報告した。
【０４０９】
分析の時点で１３名の患者はすべての薬剤関連有害事象から回復しており、２名の患者は回復が進行中であり、１１名の患者は少なくとも１つのＡＥから回復せず、２名については状況が不明であった。少なくとも１つの薬剤関連有害事象が回復しなかった１１名の患者のうちで、９名は胃腸障害（悪心４名、嘔吐２名）を有していた。
【０４１０】
１３名の患者が、７名の死亡を含む、記録された３１件のＳＡＥを有していた。１名の患者はスクリーニング期間中、すなわち試験薬注入の開始前に死亡し、そのためスクリーニング事象と分類された。４名の患者では、嘔吐（ｎ＝４）、悪心（ｎ＝２）、脱水症（ｎ＝１）およびＧＩ出血（ｎ＝１）のような治療下で発現した胃腸ＳＡＥが治療関連と判定された。嘔吐があったこれらの患者のうちの１名は３００ｍｇ／ｍ２で治療され、その他の３名は６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２で治療された。関連のない腎不全のために死亡した１名を除き、これら４名の患者のうち３名は回復した。
【０４１１】
薬剤関連有害事象の発生率は３００ｍｇ／ｍ２用量群と６００ｍｇ／ｍ２用量群の間で同等であり、それぞれ患者の７５％と８３％であった。悪心、嘔吐および疲労の頻度および重症度も両用量群間で同等であった。用量と有害事象の頻度／重症度の間に明らかな関係は存在しなかった。
【０４１２】
胃腸管に関して報告された大部分のＡＥに関する有害事象プロフィールは、基礎となる疾患と一致し、またＣＬＤＮ１８．２発現プロフィールとも一致する。ＣＬＤＮ１８．２は胃上皮細胞（密着結合中）でも発現されるので、悪心および嘔吐はオンターゲット作用であることが示唆される。
【０４１３】
一般的に言って、３００ｍｇ／ｍ２および６００ｍｇ／ｍ２の複数回投与で与えられるＩＭＡＢ３６２は、安全であり、良好に耐容され、嘔吐および悪心が最も一般的な関連有害事象であることが認められた。
【０４１４】
Ｂ．薬物動態および免疫原性の評価
ＩＭＡＢ３６２の反復投与適用のための予備薬剤濃度データは、それぞれ３００ｍｇ／ｍ２および６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２を投与された、１番目のコホートの４名の患者および２番目と３番目のコホートの３４名の患者に関して入手可能である。
【０４１５】
【表１１】
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【０４１６】
血液試料を毎回注入前に採取した。１回目の注入後、さらなる試料を注入の終了時ならびに注入の終了後１、１．５、２、３、４、６、１２、２４時間目、３および６日目に採取した。最後の注入後、試料を注入の終了時ならびに最後の注入の終了後１、１．５、２時間目および１４日目ならびに４〜８週目に採取した。コホート１〜３に割り当てた個々の患者からの投与前試料中ではいかなる分析物も検出できなかった。
【０４１７】
１回目のＩＭＡＢ３６２注入後、ｃｍａｘ値は、１番目のコホートについては２０８．９μｇ／ｍＬから３４９．６μｇ／ｍＬの間にわたった。２番目と３番目のコホートについては、合わせると、ｃｍａｘ値は１回目の適用後２６９．１μｇ／ｍＬから５７５．１μｇ／ｍＬまでの範囲であった。
【０４１８】
その後の時点で（Ｖ３からＶ５まで）採取した血清試料中では、ＩＭＡＢ３６２の濃度の時間依存的な低下が認められた（図８）。５回目の来院時に２回目の注入前に、１１．３μｇ／ｍＬから３６．８μｇ／ｍＬの間（平均値２２．５±１０．５μｇ／ｍＬ）の最小血清レベルがコホート１に関して測定され、コホート２と３を合わせて１７．０μｇ／ｍＬから１００．２μｇ／ｍＬまで（平均値５４．５±２９．０μｇ／ｍＬ）が測定された。
【０４１９】
８回目の来院時（５７日目）に５回目の注入前に、３２．４μｇ／ｍＬから６７．１μｇ／ｍＬの間（平均値４６．１±１８．５μｇ／ｍＬ）の最小血清レベルがコホート１に関して測定され、２８．３μｇ／ｍＬから３０１．６μｇ／ｍＬまで（平均値１４７．２±９３．１μｇ／ｍＬ）がコホート２および３に関して測定された（表１２）。
【０４２０】
８回目の来院時の注入後、ｃｍａｘ値は、１番目のコホートについては２５９．１μｇ／ｍＬから３２６．５μｇ／ｍＬまでにわたり、コホート２および３に関しては２７８．１μｇ／ｍＬから６４２．６μｇ／ｍＬまでの範囲であった（表１１）、
【０４２１】
コホート１については、平均Ｃｍａｘ値を１回目のＩＭＡＢ３６２注入の９０分後（２７０．６±６３．９μｇ／ｍＬ）および５回目の注入の９０分後（２７９．２±２７．７）に測定した。合わせたコホート２および３については、平均Ｃｍａｘ値を１回目のＩＭＡＢ３６２注入の終了時（３４０．８±８０．２μｇ／ｍＬ）および５回目の注入の６０分後（４４３．３±９７．７）に測定した（表１２）。
【０４２２】
要約すると、ＩＭＡＢ３６２の測定された血清レベルは、３００ｍｇ／ｍ２で治療された患者ではＩＭＡＢ３６２の血清中濃度が２週間ごとのサイクルの間に５０〜１００μｇ／ｍｌの所望レベルより下に低下することを示した。６００ｍｇ／ｍ２の用量では、これに対し、患者の大部分においてＩＭＡＢ３６２の血清レベルは最初の適用から２週間後でも５０μｇ／ｍｌを上回った。５回目の投与の７〜２９日（平均値１５日）後に、用量レベルは５０μｇ／ｍｌを上回った（平均値１５１．３±９０．１μｇ／ｍＬ）。
【０４２３】
表１２：３００および６００ｍｇ／ｍ２  ＩＭＡＢ３６２の反復投与の記述薬物動態データ
３００ｍｇ／ｍ２の反復投与で治療された４名の患者（コホート１）および６００ｍｇ／ｍ２の反復投与で治療された３０名までの患者（１回目の注入３０名、５回目の注入１２名）（コホート２と３を合わせて）の血清中のＩＭＡＢ３６２の平均±ｓｄ濃度（μｇ／ｍｌ）
【表１２】
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【０４２４】
ＩＭＡＢ３６２の軽度の蓄積がサイクルとサイクルの間で認められた。蓄積率は、１回目の投与前値に基づき２回目の注入前に１．０３倍から３．５２倍にわたった（平均値２．０４）。
【０４２５】
表１３：反復注入後のＩＭＡＢ３６２の蓄積
蓄積率を決定するために、６、７、８および９．ｘ（応答者治療）回目の来院前と２回目の注入（５回目の来院）前のＩＭＡＢ３６２濃度比を計算した。
【表１３】
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【０４２６】
結論として、ＩＭＡＢ３６２の薬物動態は用量依存的であることが認められた。
【０４２７】
１回目のＩＭＡＢ３６２注入後、ｃｍａｘ値は、１番目のコホートについては２０８．９μｇ／ｍＬから３４９．６μｇ／ｍＬの間にわたった。２番目と３番目のコホートについては、合わせると、ｃｍａｘ値は１回目の適用後２６９．１μｇ／ｍＬから５７５．１μｇ／ｍＬまでの範囲であった。
【０４２８】
その後の時点で（Ｖ３からＶ５まで）採取した血清試料中では、ＩＭＡＢ３６２の濃度の時間依存的な低下が認められた。５回目の来院時に２回目の注入前に、１１．３μｇ／ｍＬから３６．８μｇ／ｍＬの間（平均値２２．５±１０．５μｇ／ｍＬ）の最小血清レベルがコホート１に関して測定され、コホート２と３を合わせて１７．０μｇ／ｍＬから１００．２μｇ／ｍＬまで（平均値５４．５±２９．０μｇ／ｍＬ）が測定された。
【０４２９】
８回目の来院時（５７日目）に５回目の注入前に、３２．４μｇ／ｍＬから６７．１μｇ／ｍＬの間（平均値４６．１±１８．５μｇ／ｍＬ）の最小血清レベルがコホート１に関して測定され、２８．３μｇ／ｍＬから３０１．６μｇ／ｍＬまで（平均値１４７．２±９３．１μｇ／ｍＬ）がコホート２および３に関して測定された。
【０４３０】
８回目の来院時の５回目の注入後、ｃｍａｘ値は、１番目のコホートについては２５９．１μｇ／ｍＬから３２６．５μｇ／ｍＬまでにわたり、コホート２および３に関しては２７８．１μｇ／ｍＬから６４２．６μｇ／ｍＬまでの範囲であった。
【０４３１】
コホート１については、平均Ｃｍａｘ値を１回目のＩＭＡＢ３６２注入の９０分後（２７０．６±６３．９μｇ／ｍＬ）および５回目の注入の９０分後（２７９．２±２７．７）に測定した。合わせたコホート２および３については、平均Ｃｍａｘ値を１回目のＩＭＡＢ３６２注入の終了時（３４０．８±８０．２μｇ／ｍＬ）および５回目の注入の６０分後（４４３．３±９７．７）に測定した。
【０４３２】
要約すると、ＩＭＡＢ３６２の測定された血清レベルは、３００ｍｇ／ｍ２で治療された患者ではＩＭＡＢ３６２の血清中濃度が２週間ごとのサイクルの間に５０〜１００μｇ／ｍｌの所望レベルより下に低下することを示した。６００ｍｇ／ｍ２の用量では、これに対し、患者の大部分においてＩＭＡＢ３６２の血清レベルは最初の適用から２週間後でも５０μｇ／ｍｌを上回った。５回目の投与の７〜２９日（平均値１５日）後に、用量レベルは５０μｇ／ｍｌを上回った（平均値１５１．３±９０．１μｇ／ｍＬ）。
【０４３３】
Ｃ．抗腫瘍活性の評価
完全分析セット（ＦＡＳ）：
試験薬を少なくとも１回摂取し、治療後の効果データが入手可能であったすべての被験者が含まれた。
【０４３４】
分析の時点で５０名の患者は６００ｍｇ／ｍ２の用量で登録された。このうち９名は最近になって含められ、最近の登録のため現時点ではさらなるデータは入手不能である。１０名の患者については２回目の腫瘍イメージングが実施されておらず、そのためこれらの患者はＦＡＳセットに含まれていない。ＦＡＳセットは３１名の患者を含む。
【０４３５】
平均年齢は５７歳で、３５歳から７７歳の範囲にわたった。ＦＡＳセットの患者は９０％の平均カルノフスキー指数を有していた（７０〜１００％の範囲）。患者の大部分（８１％）は、少なくとも１つの化学療法レジメンで事前治療されていた。６名の患者は事前の化学療法レジメンを受けていなかった。
【０４３６】
【表１４】
2020143153.tif 000030
【０４３７】
事前化学療法レジメンの平均数は２．０（０〜５の範囲）であった。胃食道癌のための化学療法レジメンは、主として５−ＦＵ誘導体、白金化合物、タキサン類、エピルビシン、イリノテカン、ＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性患者に対するトラスツズマブおよび他の治験薬の様々な組合せから成る。ＦＡＳセット中、患者の８１％は５−ＦＵまたはカペシタビンを少なくとも１回摂取し、７４％は登録前に少なくとも１回白金化合物で治療された。６名（１９％）の患者は、トラスツズマブまたは他の治験薬で事前治療されていた。６名（１９％）の患者は、試験開始前に放射線療法も受けていた。
【０４３８】
疾患の末期であるため、患者は平均２．０の転移部位（１．０〜４．０の範囲）を有していた。最も顕著なのは、リンパ節（１９名の患者、６１％）；肝臓（１３名の患者、４２％）；腹水（８名の患者、２６％）および腹膜（７名の患者、２３％）であった。
【０４３９】
全体的な疾患制御率は３９％であった（表１５）。４名の患者は確認された部分応答を有し、８名の患者は疾患の安定化を有していた。これらの患者についての１回目の再評価は、２名の患者を除き、１回目の注入の８〜１１週間後に行われ、前記２名については１回目の腫瘍再評価はそれぞれ６週間後に行われた。
【０４４０】
【表１５】
2020143153.tif 000031
【０４４１】
臨床疾患制御があった１２名の患者のうち６名では、基線時に高かった少なくとも１つの腫瘍マーカー（ＣＥＡ；ＣＡ１９−９；ＣＡ１２５；ＣＡ１５−３）が、試験期間中を通じて３５〜７６％減少した。３名の患者ではすべての腫瘍マーカーがカットオフ値を下回り、１名の患者については腫瘍マーカー結果が入手できなかった。
【０４４２】
興味深いことに、最良効果として進行性疾患を有する４名の患者も、試験期間中に２９から５４％の間の腫瘍マーカーの減少があった。
【０４４３】
部分応答は、それぞれ２．３ヶ月の治療後（２名の患者）、６．５ヶ月（１名の患者）および４．８ヶ月（１名の患者）の治療後に達成された。ＰＲは１名の患者について確認され、さらに４．４ヶ月間持続し、これはこの患者について９．２ヶ月のＰＦＳをもたらす。その他の３名の患者については、それぞれ６週間後（１名の患者）および１２週間後（２名の患者）に確認が行われた。さらなる詳細は表１６に見出すことができる。
【０４４４】
表１６：各患者ベースのＦＡＳセットの詳細な評価
ｎ．ａ．−データがまだ入手可能でない；ｎ．ｄ．検出不能。＊−事象が２０１２年１１月まで起こらなかったため検査したかまたは現時点で正確な日付が不明である。フォローアップの最後の日付を各症例において使用した。＃−腫瘍マーカーはカットオフ値を下回る。そのため本文中では計数されていない。
【表１６−１】
2020143153.tif 000032
【表１６−２】
2020143153.tif 000033
【０４４５】
ＦＡＳセットの患者に関する進行のない生存期間の平均は１０週間（最短４週間；最長４０週間）であった。事象の入手可能性が限られているため、図９に示す臨床的利益を有する患者（ＰＲ＋ＳＤ）についての進行のない生存期間の平均は価値が限られる。臨床的利益を有さない患者（ＰＤ）は、平均で９週間（最短４週間；最長１１週間）の進行のない生存期間を有していた（図９）。
【０４４６】
臨床的利益を有する患者（最良効果としてＰＲまたはＳＤ）または進行性疾患を有する患者（最良効果としてＰＤ）の間で年齢（平均５６歳対５９歳）、事前の化学療法レジメンなし（平均１．９対２．１）、カルノフスキー指数（平均８９対８８％）に関して差はなかった。転移部位の数だけが応答者群においてより低く、非応答者群の平均２．３と比較して平均１．９であった。その差は統計的に有意ではない。
【０４４７】
ＩＨＣ染色の強度（平均および最大）は、臨床的利益を有する患者と進行性疾患を有する患者の間で同様であった。染色された細胞の数は両群間で異なっていた。染色細胞の最大数および染色細胞の平均数は臨床的利益を有する患者においてより高く、それぞれ７７％対６７％および７１％対６０％であった。
【０４４８】
転移の位置に関しても差が認められた。臨床的利益を有する患者では、胸水（２５％対５％）、腹膜癌腫症（４２％対１１％）および腹水（４２％対１６％）の頻度が最良効果として進行性疾患を有する患者と比較してより高かった。肝転移の存在は臨床的利益を有する患者においてはるかに少なかった（１７％対５８％）。
【０４４９】
プロトコルごと（ＰＰ）のセット：
ＰＰ集団は、重要なプロトコルの逸脱なしに治療期間（９回目の来院まで）を完了したすべての患者を包含した。
【０４５０】
ＦＡＳセットの３１名の患者のうちで、２名は重要なプロトコルの違反（標的病変なし）があり、９名の患者は９回目の来院まで試験プロトコルを完了せず、そのためＩＭＡＢ３６２の必要な注入を５回未満しか受けなかった。ＰＰセットは２０名の患者を含む。
【０４５１】
平均年齢は６０歳で、３５歳から７７歳までの範囲であった。ＰＰセットの患者は９０％の平均カルノフスキー指数を有していた（７０〜１００％の範囲）。患者の大部分（８０％）は、少なくとも１つの化学療法レジメンで事前治療されていた。４名の患者は事前の化学療法レジメンを受けていなかった。
【０４５２】
【表１７】
2020143153.tif 000034
【０４５３】
事前化学療法レジメンの平均数は２．０（０〜５の範囲）であった。胃食道癌のための化学療法レジメンは、主として５−ＦＵ誘導体、白金化合物、タキサン類、エピルビシン、イリノテカン、ＨＥＲ２／ｎｅｕ陽性患者に対するトラスツズマブおよび他の治験薬の様々な組合せから成る。ＰＰセット中、患者の８０％は５−ＦＵまたはカペシタビンを少なくとも１回摂取し、７５％は登録前に少なくとも１回白金化合物で治療された。５名（２５％）の患者は、トラスツズマブまたは他の治験薬で事前治療されていた。さらなる詳細は表１７に見出すことができる。５名（２５％）の患者は、試験開始前に放射線療法も受けていた。
【０４５４】
疾患の末期であるため、患者は平均３．０の転移部位（１．０〜４．０の範囲）を有していた。最も顕著なのは、リンパ節（１３名の患者、６５％）；肝臓（９名の患者、４５％）；腹水（６名の患者、３０％）および肺（５名の患者、２５％）であった。
【０４５５】
全体的な疾患制御率は５０％であった。４名の患者は確認された部分応答を有し、６名の患者は疾患の安定化を有していた。これらの患者についての１回目の再評価は、１名の患者を除き、１回目の注入の８〜１１週間後に行われ、前記１名については１回目の腫瘍再評価はそれぞれ６週間後に行われた（表１８）。
【０４５６】
【表１８】
2020143153.tif 000035
【０４５７】
臨床疾患制御があった１０名の患者のうち６名では、基線時に高かった少なくとも１つの腫瘍マーカー（ＣＥＡ；ＣＡ１９−９；ＣＡ１２５；ＣＡ１５−３）が、試験期間中を通じて３５〜７６％減少した。２名の患者ではすべての腫瘍マーカーがカットオフ値を下回り、１名の患者については腫瘍マーカーの結果が入手できなかった。
【０４５８】
興味深いことに、最良効果として進行性疾患を有する３名の患者も、試験期間中に２９から５４％の腫瘍マーカーの減少があった。
【０４５９】
部分応答は、それぞれ２．３ヶ月の治療後（２名の患者）、６．５ヶ月（１名の患者）および４．８ヶ月（１名の患者）の治療後に達成された。ＰＲは１名の患者について確認され、さらに４．４ヶ月間持続し、これはこの患者に９．２ヶ月間のＰＦＳをもたらす。その他の３名の患者については、それぞれ６週間後（１名の患者）および１２週間後（２名の患者）に確認が行われた。さらなる詳細は表１９に見出すことができる。
【０４６０】
表１９：各患者ベースのＰＰセットの詳細な評価
ｎ．ａ．−データがまだ入手可能でない；ｎ．ｄ．検出不能。＊−事象が２０１２年１１月まで起こらなかったため打ち切られかまたは現時点で正確な日付が不明である。フォローアップの最後の日を各症例において使用した。＃−腫瘍マーカーはカットオフ値を下回る。そのため本文中では計数されていない。
【表１９−１】
2020143153.tif 000036
【表１９−２】
2020143153.tif 000037
【０４６１】
ＰＰセットの患者に関する進行のない生存期間の平均は１８週間（最短９週間；最長４０週間）であった。事象の入手可能性が限られているため、図１０に示す臨床的利益を有する患者（ＰＲ＋ＳＤ）についての進行のない生存期間の平均は有用性が限られる。臨床的利益を有さない患者（ＰＤ）は、平均で１０週間（最短９週間；最長１０週間）の進行のない生存期間を有していた（図１０）。
【０４６２】
臨床的利益を有する患者（最良効果としてＰＲまたはＳＤ）または進行性疾患を有する患者（最良効果としてＰＤ）の間で年齢（平均５７歳対６２歳）、事前の化学療法レジメンなし（平均２．１対２．０）、カルノフスキー指数（平均８８対８８％）に関して差はなかった。転移部位の数だけが、臨床的利益を有さない患者の平均２．２と比較して臨床的利益を有する患者では平均３．０でより高かった。その差は統計的に有意ではない。
【０４６３】
ＩＨＣ染色の強度（平均および最大）は、臨床的利益を有する患者と進行性疾患を有する患者の間で同様であった。染色された細胞の数は両群間で差があった。染色細胞の最大数および染色細胞の平均数は臨床的利益を有する患者においてより高く、それぞれ７６％対６６％および７０％対６６％であった。
【０４６４】
転移の位置に関しても差が認められた。臨床的利益を有する患者では、胸水（３０％対１０％）、腹膜癌腫症（４０％対０％）および腹水（４０％対２０％）の頻度が最良効果として進行性疾患を有する患者と比較してより高かった。肝転移の存在は臨床的利益を有する患者においてはるかに少なかった（２０％対７０％）。
【０４６５】
結論として、５回目のＩＭＡＢ３６２注入後２週間目（Ｖ９）に腫瘍の状態（ＲＥＣＩＳＴによる）を基線と比較した。３１名の患者（ＦＡＳ）については基線後に少なくとも１回の病期分類が入手可能であった。患者を、平均２．０の事前化学療法および平均２．０の転移部位で、疾患の末期に登録した。
【０４６６】
確認された部分応答は４名の患者で評価され、１３％の全体的応答率をもたらした。このうち３名は現在進行中であり、期間は計算することができなかった。加えて、８名の患者は疾患の安定化を有し、３９％の疾患制御率をもたらした。分析の時点で、臨床的利益を有するこれら１２名の患者の進行のない生存期間は６週間から４０週間の範囲であった。これらの患者のうち７名について事象が現在まで記録されていないので、平均値を計算することができなかった。臨床的利益を有する患者のうち９名では、少なくとも１つの腫瘍マーカーが基線時に高く、このうち６名では同時に−３５から−７６％減少した。興味深いことに、最良効果として進行性疾患を有する４名の患者も、試験の経過中に高い腫瘍マーカーの少なくとも１つの−２９から−５４％の減少があった。全体的な進行のない生存期間の平均は１０週間で、４〜４０週間の範囲であった。
【０４６７】
臨床的利益を有する患者（４ＰＲ＋８ＳＤ＝３９％）では、腹膜癌腫症、胸水および腹水の発生率がより高く、肝転移の発生率は臨床的利益を有さない患者におけるよりも低かった。他方で、確認された部分応答を有する１名の患者は高頻度の肝転移を有していた。
【０４６８】
現在のデータセットに関して、臨床的利益を有する患者は陽性ＩＨＣ染色のより高い数の細胞を有していたと思われる。
【０４６９】
さらに、選択した患者において補助データを収集し、これらのデータは、患者の血清成分および患者のＰＢＭＣが、ＩＭＡＢ３６２の主要な作用機構であるＣＤＣおよびＡＤＣＣをそれぞれ媒介するうえで完全に機能性であり、強力であることを示した。
【０４７０】
結論として、抗腫瘍活性（部分応答、安定な疾患、腫瘍マーカーの減少）が認められ、ＩＭＡＢ３６２はさらなる検討に値する。
【０４７１】
Ｄ．全体的結論
この治験は、３つのコホートによる第ＩＩａ相、多施設、非無作為化、患者間複数回投与用量漸増、オープンラベル臨床試験として設計された。この臨床試験に適格な患者は、標準的な治療に抗療性であるかまたは広く認められている療法を受けていないことが要求された。
【０４７２】
この中間報告のために、３４名の患者が安全性分析（ＡＰＴセット）に関して評価可能であり、そのうち４名がコホート１（３００ｍｇ／ｍ２）、６名がコホート２（６００ｍｇ／ｍ２）および２０名がコホート３（６００ｍｇ／ｍ２）に登録された。複数回投与スケジュールで与えられたＩＭＡＢ３６２は、胃食道癌を有する多くの事前治療を受けた患者において安全であり、良好に耐容され、悪心と嘔吐が最も一般的な関連有害事象であった。大部分の関連有害事象は軽度から中等度であった。２名の患者だけがアレルギー反応を呈し、そのうち１名は中等度、１名は重度であった。この第ＩＩａ相試験および先の第Ｉ相試験においてグレード４およびグレード５の有害事象（臨床検査パラメータを含む）は存在しなかった。登録されているモノクローナル抗体の大部分が生命を脅かすグレード４および５の副作用と関連するので、ＩＭＡＢ３５２が現在までグレード４の関連ＡＥを引き起こさなかったことは注目に値する。ベバシズマブについての転移性乳癌の適応症は、２００８年の最初の予備承認後、２０１１年１１月にＦＤＡによって取り消された。ベバシズマブは寿命を延長させず、腸穿孔および鼻中隔穿孔を伴う、重篤な高血圧と出血を引き起こした。セツキシマブは、?瘡様の発疹ならびにグレード３〜４の注入反応、治療前に抗ヒスタミン薬ジフェンヒドラミンによる予防を必要とする、アナフィラキシーおよび心停止を引き起こす。トラスツズマブはまだ広く使用されているが、患者の２〜７％において症候性心機能不全を引き起こし、これは１０年以上にわたって公知である。
【０４７３】
潜在的抗腫瘍活性の評価のための主要測定項目はＲＥＣＩＳＴによる腫瘍状態であった。基線後に少なくともこの１つの評価を受けた患者は３１名で、そのためこれらの患者はＦＡＳに含まれた。多くの事前治療を受けた３１名（ＲＲ１３ ％、３９％のＤＣＲ）の患者中４例のＰＲおよび８例のＳＤは、二次治療または末期治療として承認された標的化単独療法に関する他の第ＩＩ相試験における応答結果と非常に良好に匹敵する。
【０４７４】
ＥＧＦＲアンタゴニストであるセツキシマブは、３０名の患者に関する第ＩＩ相試験において８週間後に測定された末期（大部分は２またはそれ以上の転移部位および事前治療を有していた）ＧＥＣにおいて３％のＲＲ（さらに７％ＳＤ）を達成した。５５名の末期患者に関する２番目の試験では、セツキシマブは、８週間後に測定された５％ＲＲおよびさらなる１１％のＳＤをもたらした。同様の応答率がＥＧＦＲ陽性の抗療性ｍＣＲＣ患者において達成され、セツキシマブは後ほどこの適応症で承認された。
【０４７５】
スニチニブおよびエルロチニブは、合計約１５０名の患者に関する種々の第ＩＩ相試験で末期ＧＥＣ患者において試験された。６〜８週間後のＤＣＲは１６〜３９％の間で変動があり、応答率は３〜７％とそれぞれ報告された。
【０４７６】
乳癌における二次療法としてのトラスツズマブに関する第ＩＩ相の客観的応答率は１１％で、さらに≧６ヶ月のＳＤは９％であった。事前治療された肺癌におけるエルロチニブに関しては９％の応答率が報告された。ソラフェニブは腎癌での２つの第ＩＩ相試験で２％〜１８％のＲＲを達成し、テムシロリムスについては７％のＲＲが腎癌治験において報告された。その後これらの標的化療法化合物は化学療法と併用してさらに開発され、これらの適応症において登録された。
【０４７７】
ＩＭＡＢ３６２は安全で有効な抗体である。標的表面分子の優れた組織特異性および抗体の高精度の結合から予想されるように、治験薬は他の市販の標的化療法と比較して良好に耐容される。さらに、数名の患者において、他の既に市販されている標的化療法の第ＩＩ相結果と同等またはより良好な臨床活性の証拠が認められている。
【０４７８】
（実施例５）
ＩＭＡＢ３６２誘発性悪心／嘔吐
ＩＭＡＢ３６２はＮＣＩ−ＣＴＣグレード３までの悪心／嘔吐を誘発することが認められた。その症候学は以下のように説明することができる：（ｉ）非用量依存性、（ｉｉ）主として注入から５分以内の、急性発症が注入の終了後も持続することがある、（ｉｉｉ）上胃部痙攣、過流涎から始まる、（ｉｖ）嘔吐は前徴なしに始まり得る、（ｖ）全胃切除術を受けた患者ではまれである、（ｖｉ）反応は最初の注入時に発現し、一方症状はサイクルごとに増大する。
【０４７９】
これらの有害反応が全胃切除術を受けた患者ではまれにしか起こらないという事実は、基礎となる機構がオンターゲット作用であることを示唆する。ＩＭＡＢ３６２に関しては嘔吐が悪心よりも頻繁であり、前徴の悪心を伴わずに起こることがしばしば報告されている。発症は急性ならびに遅発性の両方であり得る。本発明者らは、少量のＩＭＡＢ３６２が限定的にアクセス可能な密着結合エピトープに結合すると仮定する。これは、密着結合の限局性の破壊および粘膜下組織中への胃酸の漏出をもたらす。生じた組織反応と痙攣が悪心／嘔吐のカスケードを開始させる。
【０４８０】
したがって、推奨される対策は、有効な制吐薬による予防および胃粘膜の保護である。
【０４８１】
例えば、患者は、投薬を開始する前に制吐薬による予防を受けるべきである。予防と治癒的介入の両方のために、ＮＫ−１受容体（例えばアプレピタント／Ｅｍｅｎｄ）と５−ＨＴ３受容体遮断薬（例えばオンダンセトロン／Ｚｏｆｒａｎ）の組合せが推奨され、さらなる化合物に拡大され得る。制吐薬の投与は、好ましくは少なくとも各サイクルの最初の３日間行う。各々のＩＭＡＢ３６２注入の直前のブチルスコポラミン／ブスコパンの予防的投与が考慮され得る。
【０４８２】
粘膜保護のためのどのような手段も胃症状を低減し得る。これに関して、プロトンポンプ阻害剤および／またはミソプロストールを使用してよく、例えば各サイクルの１〜２日目または３日目に投与し得る。非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は使用すべきでないが、アセトアミノフェンは許容される。アセトアミノフェンが疼痛管理に有効でない場合は、オピオイド治療を避けるため、疼痛管理に必要であればＮＳＡＩＤを使用することができる。ＮＳＡＩＤを摂取している患者は、好ましくはプロトンポンプ阻害剤および／またはミソプロストールで治療される。
【０４８３】
したがって、制吐薬による予防および胃粘膜の保護はＩＭＡＢ３６２注入の直前に開始し得る。例えば、以下の組合せを投与してよく、静脈内適用が好ましい：
・ＮＫ−１  ＲＡ：例えばアプレピタント／Ｅｍｅｎｄ（１５０ｍｇ  ＩＶ）
・５−ＨＴ３  ＲＡ：例えばパロノセトロン（０．２５ｍｇ  ＩＶ）、オンダンセトロン／Ｚｏｆｒａｎ（８ｍｇ  ＩＶ）、グラニセトロン（３ｍｇ  ＩＶ）
・ブチルスコポラミン／ｂｕｓｃｏｐａｎ
・プロトンポンプ阻害剤：パントプラゾール／Ｐａｎｔｏｚｏｌ
【０４８４】
場合により、メトクロプラミド／ＭＣＰ、ロラゼパムおよび／またはアトロピンも投与し得る。
【０４８５】
ＩＭＡＢ３６２は、免疫学的作用機構に顕著に依存する抗体であり、この作用機構は免疫抑制性化合物によって障害され得る。この理由から、ステロイド類は制吐薬による予防において回避されるべきであり、他の化合物がうまくいかなかった場合にのみ使用されるべきである。
【０４８６】
さらに、ＩＭＡＢ３６２への暴露は慎重であるべきである。例えば、最初の１５〜３０分間の綿密なモニタリングが推奨される。必要に応じて、注入速度を遅くするべきであり（例えば２時間ではなく４時間まで）、注入の中断を含めるべきである。
【０４８７】
制吐薬による予防ならびに胃粘膜の保護は、例えば各サイクルの３日目まで継続することができる。
【図１】
2020143153.tif 000038
【図２Ａ】
2020143153.tif 000039
【図２Ｂ】
2020143153.tif 000040
【図２Ｃ】
2020143153.tif 000041
【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
2020143153.tif 000043
【図３】
2020143153.tif 000044
【図４Ａ】
2020143153.tif 000045
【図４Ｂ】
2020143153.tif 000046
【図４Ｃ】
2020143153.tif 000047
【図５Ａ】
2020143153.tif 000048
【図５Ｂ】
2020143153.tif 000049
【図６Ａ】
2020143153.tif 000050
【図６Ｂ】
2020143153.tif 000051
【図７Ａ】
2020143153.tif 000052
【図７Ｂ】
2020143153.tif 000053
【図８】
2020143153.tif 000054
【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月2日(2020.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者の癌疾患を治療または予防するための医薬の調製のための、クローディン−１８スプライス変異体２（ＣＬＤＮ１８．２）に結合する能力を有する抗体の使用であって、
前記癌疾患は、ＣＬＤＮ１８．２を発現する癌細胞により特徴付けられ、
前記治療は、前記抗体を、少なくとも４０μｇ／ｍｌの血清レベルを提供するように、前記ヒト患者に非経口投与することを含み、
前記抗体は、列番号：３２で表されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖と、配列番号：３９で表されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖とを含む、使用。
【請求項２】
提供される前記血清レベルが４０μｇ／ｍｌから７００μｇ／ｍｌの間である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記血清レベルが少なくとも７日間提供される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記ヒト患者の癌細胞の少なくとも５０％がＣＬＤＮ１８．２陽性であり、および／または前記ヒト患者の癌細胞の少なくとも４０％がＣＬＤＮ１８．２の表面発現に関して陽性である、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
制吐薬、鎮痙薬、副交感神経遮断薬および胃粘膜を保護する作用物質から成る群より選択される１つまたはそれ以上を投与することをさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記治療が、ＣＬＤＮ１８．２の発現を安定化するまたは増大させる作用物質との組み合わせ療法であり、前記作用物質が、エピルビシン、オキサリプランチン、シスプラチン、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ドセタキセル、イリノテカン、トポテカン、およびこれらの作用物質の組み合わせから成る群より選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記抗体が、静脈内注入により投与される、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記静脈内注入が、１時間から４時間にわたる、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記抗体が、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）媒介性溶解、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）媒介性溶解、アポトーシスの誘導および増殖の阻害の１つまたはそれ以上による細胞死を媒介する、請求項１から８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記抗体が、（ｉ）アクセッション番号ＤＳＭ  ＡＣＣ２８１０の下で寄託されたクローンによって産生されるおよび／または前記クローンから入手可能な抗体、（ｉｉ）（ｉ）に含まれる前記抗体のキメラ化またはヒト化形態である抗体、（ｉｉｉ）（ｉ）に含まれる前記抗体の特異性を有する抗体、ならびに（ｉｖ）（ｉ）に含まれる前記抗体の可変領域を含有し、かつ（ｉ）に含まれる前記抗体の特異性を有する抗体、から成る群より選択される抗体である、請求項１から９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記癌が、胃の癌、食道の癌、食道胃接合部の癌、または胃食道癌である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記ヒト患者が、ピリミジン類似体、白金化合物、エピルビシン、ドセタキセルおよび抗腫瘍薬治療のための解毒剤から成る群より選択される少なくとも１つの薬剤による事前治療を受けたことがある、請求項１から１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
前記ヒト患者が、０から１の間のＥＣＯＧパフォーマンスステータスおよび／または７０から１００％の間のカルノフスキー指数を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
ＣＬＤＮ１８．２が配列番号：１に従うアミノ酸配列を有する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の使用。