(57)【要約】      （修正有）【課題】炎症性疾患を阻害、治療、および／または予防する方法の提供。【解決手段】ｂｒｉｄｇｉｎｇ  ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ 1（Ｂｉｎ１）、特にＭｙｃ結合ドメインに免疫学的に特異的な少なくとも１種類の抗体または抗体フラグメントを投与する工程を有する。2020143077.tif 000005【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする患者の炎症性腸疾患を治療、阻害、および／または予防する方法であって、前記患者に少なくとも１つの抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントを投与する工程を有する、方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法であって、少なくとも１つの抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントと、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを有する組成物を投与する工程を有する、方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、Ｂｉｎ１のＭｙｃ結合ドメインに免疫学的に特異的である、方法。
【請求項４】
請求項１記載の方法において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、配列ＩＤ番号：２に免疫学的に特異的である、方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎またはクローン病である、方法。
【請求項６】
請求項１記載の方法であって、さらに、少なくとも１つの抗炎症薬の投与を有する、方法。
【請求項７】
それを必要とする患者の大腸癌を治療、阻害、および／または予防する方法であって、前記患者に少なくとも１つの抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントを投与する工程を有する、方法。
【請求項８】
請求項７記載の方法であって、少なくとも１つの抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントと、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを有する組成物を投与する工程を有する、方法。
【請求項９】
請求項７記載の方法において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、Ｂｉｎ１のＭｙｃ結合ドメインに免疫学的に特異的である、方法。
【請求項１０】
請求項７記載の方法において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、配列ＩＤ番号：２に免疫学的に特異的である、方法。
【請求項１１】
請求項７記載の方法であって、さらに、少なくとも１つの化学療法剤の投与を有する、方法。
【請求項１２】
それを必要とする患者の神経変性疾患を治療する方法であって、前記患者に少なくとも１つの抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントを投与する工程を有する、方法。
【請求項１３】
請求項１２記載の方法であって、少なくとも１つの抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントと、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを有する組成物を投与する工程を有する、方法。
【請求項１４】
請求項１２記載の方法において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、Ｂｉｎ１のＭｙｃ結合ドメインに免疫学的に特異的である、方法。
【請求項１５】
請求項１２記載の方法において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、配列ＩＤ番号：２に免疫学的に特異的である、方法。
【請求項１６】
請求項１２記載の方法において、前記神経変性疾患はタウノパチーである、方法。
【請求項１７】
請求項１２記載の方法において、前記神経変性疾患はアルツハイマー病である、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願書類は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）のもと、２０１５年１月２０日に提出された米国仮特許出願第６２／１０５，３５８号の優先権を請求するものである。前述の出願書類は、この参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は免疫療法の分野に関する。具体的には、本発明は抗Ｂｉｎ１抗体の投与により疾患および障害を治療する新規組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、大腸（結腸）と関連した炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の一形態であり、先進国におけるその頻度は２０世紀中頃から増加している（Danese et al.(2011) N. Engl. J. Med., 365:1713-25）。ＩＢＤの発症率および有病率が最も高かったのは北欧および北米で、アジアで最も低かった。西洋化した環境および生活様式はＩＢＤの発症と関連しており、喫煙、脂肪および糖分の高い食事、薬物の使用、ストレス、および高い社会経済的状態と関連している。ＵＣの発症率は年間１．２〜２０．３／１００，０００人であり、その有病率は年間７．６〜２４６．０／１００，０００症例である（Danese et al.(2011) N. Engl. J. Med., 365:1713-25）。ＵＣ患者は大腸癌を発症する平均リスクがはるかに高い（Eaden et al.(2001) Gut 48:526-35）。大腸癌のリスクは３０年のＵＣで１８％の高さである。大腸癌のリスク上昇は、一部、炎症により誘導されるバリア機能の消失のためである。今のところ、ＵＳの病原因子は不明である。ＵＣは複雑な多因子疾患と考えられており、自己免疫、改変マイクロバイオーム、粘膜バリアの障害、および粘膜免疫および遺伝的要因はこの疾患において重要な役割を果たすと仮定されてきた（Danese et al.(2011) N. Engl. J. Med., 365:1713-25）。
【０００４】
ＵＣは、細胞の密着結合（ＴＪ）に依存する腸バリアの欠損と関連している（Das et al.(2012) Virchows Arch.460:261-70）。ＴＪを向上させ、バリア機能を改善するために標的とすることができる遺伝子およびタンパク質を特定することで、ＵＣの新しい治療戦略が見つかる可能性がある。ＴＪ機能は一般にＩＢＤの疾患修飾因子としての役割を果たす。マウスのＴＪが損傷しても腸疾患を引き起こすのに十分ではないが、粘膜の免疫反応を誘発し、これが誘発されると免疫介在性大腸炎の発症が加速し、重症度が増す可能性がある（Su et al.(2009) Gastroenterology 136:551-63）。管腔抗原または感染性細菌が間質に入らないようにすることで、ＴＪは無秩序な炎症を阻害する。実際、選択的に腸透過性を決定することができるため、ＴＪは腸生理学および病態生理学に強く影響する（Madara, J.L.(1998) Annu.Rev. Physiol., 60:143-59）。
【０００５】
今のところ、ＵＣを効果的に予防する強力な薬物または治療法はない。潰瘍性大腸炎では炎症性サイトカイン、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γが上昇している。現在、大腸炎の治療では抗炎症薬および免疫抑制剤（例えば、ＴＮＦα阻害薬）が処方されるが、日和見感染のリスクなどの副作用、および特定個人での有効性欠如は治療の質を制限する（Yapal et al.(2007) Ann.Gastroenterology 20:48-53）。したがって、大腸炎を予防するさらなる免疫療法を開発する必要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の１つの観点に従い、それを必要とする患者の炎症性疾患を阻害、治療、および／または予防する方法を提供する。前記方法は、Ｂｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントの投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がＢｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメント、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を有する組成物の投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がさらに、少なくとも１種類の他の治療薬の投与、またはＢｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントを同時におよび／または連続的に用い、炎症性腸疾患を治療、阻害、または予防する方法を有する。
【０００７】
本発明の別の観点に従い、それを必要とする患者の大腸癌を阻害、治療、および／または予防する方法を提供する。前記方法は、Ｂｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントの投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がＢｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメント、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を有する組成物の投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がさらに、少なくとも１種類の他の治療薬の投与、またはＢｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメントを同時におよび／または連続的に用い、大腸癌を治療、阻害、または予防する方法を有する。
【０００８】
本発明の別の観点に従い、それを必要とする患者の神経変性障害、特にタウオパチーを阻害、治療、および／または予防する方法を提供する。前記方法は、Ｂｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１種類の抗体または抗体フラグメントの投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がＢｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１つの抗体または抗体フラグメント、および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を有する組成物の投与を有する。特定の実施形態では、前記方法がさらに、少なくとも１種類の他の治療薬の投与、またはＢｉｎ１に対して免疫学的に特異的な、少なくとも１種類の抗体または抗体フラグメントを同時におよび／または連続的に用い、神経変性障害を治療、阻害、または予防する方法を有する。
【０００９】
上記疾患の１つを阻害、治療、および／または予防する組成物も提供される。前記組成物は、少なくとも１つのＢｉｎ１抗体および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を有する。前記組成物はさらに、眼疾患の治療に用いる少なくとも１つの他の薬物を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａ〜１Ｇは、大腸炎のマウスモデルにおいて抗Ｂｉｎ１抗体が保護するマウス結腸の画像を示している。図１Ａ：正常なマウス結腸。図１Ｂ：３％  ＤＳＳを与えたマウスの結腸。図１Ｃ：ＩｇＧ（０．１ｍｇ／マウス）を投与し、続いて３％  ＤＳＳを与えたマウス結腸。図１Ｄ：ＩｇＧ（０．５ｍｇ／マウス）を投与し、続いて３％  ＤＳＳを与えたマウス結腸。図１Ｅ：抗Ｂｉｎ１抗体（０．１ｍｇ／マウス）を投与し、続いて３％  ＤＳＳを与えたマウス結腸。図１Ｆおよび１Ｇ：Ｂｉｎ１抗体（０．５ｍｇ／マウス）を投与し、続いて３％  ＤＳＳを与えたマウス結腸。
【図２】図２Ａ〜２Ｆは、抗Ｂｉｎ１抗体が結腸のリンパ濾胞を保護することを示している。図２Ａ：正常な結腸と限局したリンパ濾胞。図２Ｂ〜２Ｄ：ＤＳＳを与える前にＤＳＳのみを与えた（図２Ｂ）またはＩｇＧを処理した（図２Ｃおよび２Ｄ）マウス。結腸のリンパ濾胞は小さいことが認められる。図２Ｅおよび２Ｆ：抗Ｂｉｎ１抗体を処理し、後でＤＳＳを与えたマウスは、結腸のリンパ濾胞が無変化であった。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、抗Ｂｉｎ１抗体を処理したＣａｃｏ−２細胞が、ＩｇＧ対照と比較して短絡電流が増加したことを示している。Ｂｉｎ１を処理したＣａｃｏ−２細胞にＴＰＡを処理した場合、７日目（図３Ａ）および１１日目（図３Ｂ）に短絡電流の変化はなかった。＊＊＊ｐ＜０．０００１、ＡＮＯＶＡにより判定。
【図４】図４は、Ｂｉｎ−１抗体処理後のＣａｃｏ−２細胞のクローディン発現を示している。矢印は、抗Ｂｉｎ１モノクローナル抗体で処理したクローディン−２、−３、および−７のダウンレギュレーションを示している。
【図５】図５Ａ〜５Ｃは、サイトカイン処理したＣａｃｏ−２細胞の電気生理学的特徴を示している。抗Ｂｉｎ１抗体を処理したＣａｃｏ−２細胞をサイトカインＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γ存在下でインキュベートすると、抵抗性が高く（図５Ａ）、短絡回路が得られ（図５Ｂ）、マンニトールの流動性が低くなった（図５Ｃ）。
【図６】図６は、サイトカイン曝露後の抗Ｂｉｎ１抗体処理Ｃａｃｏ−２細胞におけるクローディン発現を示している。クローディン−２、−３、および−７は抗Ｂｉｎ１抗体を処理するとダウンレギュレートされた。
【図７】図７は、抗Ｂｉｎ１抗体を処理してもＨＴ２９Ｂ６細胞のキヌレニン発現レベルが上昇しないことを示している。前記サイトカインＩＦＮ−γおよびＩＦＮ−γとＴＮＦ−αの併用によりＨＴ２９Ｂ６細胞のキヌレニン値が上昇するが、抗Ｂｉｎ１抗体はキヌレニン発現値を上昇させない。
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、抗Ｂｉｎ１抗体処理により細胞培養でタウの発現が減少することを示している。抗Ｂｉｎ１抗体（０．０５ｍｇ／ｍｌ）処理したＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞は、低用量のテトラサイクリン（１ｕｇ／ｍｌ、図８Ａ）または高用量のテトラサイクリン（１０ｕｇ／ｍｌ、図８Ｂ）によりタウを誘導後、全タウおよびリン酸化タウの発現が少なかった。
【図９】図９Ａ〜９Ｄは、顕微鏡で判断すると、抗Ｂｉｎ１抗体処理により細胞培養でタウの発現が減少することを示している。未処理のＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞（図９Ａ）、テトラサイクリン（１ｕｇ／ｍｌ）処理し、タウを誘導したＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞（図９Ｂ）、ＩｇＧ（０．０５ｍｇ／ｍｌ）およびテトラサイクリン（１ｕｇ／ｍｌ）処理したＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞（図９Ｃ）、およびＢｉｎ１  ｍＡｂ（０．０５ｍｇ／ｍｌ）およびテトラサイクリン（１ｕｇ／ｍｌ）処理したＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞（図９Ｄ）を検討した。核はＤＡＰＩ染色し、タウはＣｙ３（プローブＤＡ９抗体）で染色した。
【図１０】図１０Ａおよび１０Ｂは、健康ドナーおよびＡＤ患者の血清を用い、ＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞のタウ発現をプロービングしたことを示している。健康ドナー（図１０Ａ）およびＡＤ患者（図１０Ｂ）の血清を用い、ＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞のタウ発現を検討した。抗Ｂｉｎ１抗体処理したＨＥＫ細胞は、健康または罹患状態の血清をプロービングした際、タウオリゴマーレベルが低かった。
【図１１】図１１は、タウの抗Ｂｉｎ１抗体処理は、細胞シグナル伝達タンパク質を変化させることを示している。抗Ｂｉｎ１抗体処理し、タウを発現したＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞は、ウエスタンブロット法で判断すると、ＰＰ２Ａサブユニットａ、ＰＰ２Ａサブユニットｃ、ｐＧＳＫ３β、ｐ３８ＭＡＰＫの発現が変化し、Ｂｉｎ１の発現が少なくなっていた。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
前記Ｂｉｎ１遺伝子は、膜およびアクチンの動態、細胞極性、ストレスシグナル伝達、および小胞輸送に関与する、ＢＡＲ（Bin/Amphiphysin/Rvs）アダプタータンパク質ファミリーをコードする（Prendergast et al.(2009) Biochim.Biophys.Acta, 1795:25-36）。マウスモデルの前記Ｂｉｎ１遺伝子の減弱は、上皮バリア機能の向上と関連して、硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）により誘導される実験的大腸炎の重症度を低下させた（Chang et al.(2012) Dig.Dis.Sci., 57:1813-21）。本明細書では、大腸炎モデルにおける遺伝子減弱のフェノコピー効果に対するＢｉｎ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の影響を検討した。炎症性腸疾患、大腸癌、および神経変性疾患の治療に用いられる、Ｂｉｎ１タンパク質を標的とした新規治療が提供される。
【００１２】
本発明は、炎症性腸疾患を抑制、予防、および／または治療する組成物および方法を提供する。前記方法は、少なくとも１種類の抗Ｂｉｎ１抗体を被験者に投与する工程を有する。前記「炎症性腸疾患」は、消化管の炎症性活動（炎症）、特に大腸および／または小腸の炎症状態により特徴付けられる障害または疾患を指す。炎症性腸疾患は、下痢を伴うことが多い、腹痛の再発により特徴付けられる不確定な病因を持つ慢性状態であることが多い。炎症性腸疾患の例には、これに限定されるものではないが、クローン病（限局性腸炎、限局性回腸炎、または肉芽腫性回大腸炎とも呼ばれる）、大腸炎（例えば、潰瘍性大腸炎、未定型大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸に発生した腸炎（diversion colitis）、顕微鏡的大腸炎、感染性大腸炎、またはコラーゲン蓄積大腸炎）、ベーチェット症候群、小腸および／または近位腸の特発性炎症、およびＩＢＤ関連下痢を含む。特定の実施形態では、前記「炎症性腸疾患」が潰瘍性大腸炎（ＵＣ）またはクローン病である。本発明の方法は、さらに、治療される炎症性腸疾患に対する少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。炎症性腸疾患の治療薬の例には、これに限定されるものではないが、抗炎症薬、ＴＮＦα阻害薬（例えば、モノクローナル抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、およびゴリムマブ）、受容体融合タンパク質（例えば、エタネルセプト）、ステロイド、アミノサリチル酸塩（例えば、バルサラジド、メサラジン、オルサラジン、スルファサラジン）、および免疫調節薬または免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、微量栄養素（例えば、亜鉛、ベルベリン））を含む。被験者に投与される薬物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される基剤を有する組成物に含まれてもよい。１種類以上の薬物が投与される場合（例えば、抗Ｂｉｎ１抗体と追加治療薬など）、前記薬物は（前後に）連続しておよび／または同時に（併用）投与してもよい。前記薬物は同じ組成物または別の組成物で投与してもよい。
【００１３】
本発明は、癌を抑制、予防、および／または治療する組成物および方法を提供する。前記方法は、少なくとも１種類の抗Ｂｉｎ１抗体を被験者に投与する工程を有する。特定の実施形態では、前記癌が大腸癌である。大腸癌は、結腸癌または腸癌とも呼ぶことができ、結腸、直腸、および／または虫垂の癌性増殖を含む。本発明の方法は、さらに、治療される癌に対する少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。例えば、前記方法は、さらに、少なくとも１種類の化学療法薬の投与および／または抗癌治療（例えば、放射線療法および／または癌細胞または腫瘍を除去する手術（例えば、切除）を有する。被験者に投与される薬物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される基剤を有する組成物に含まれてもよい。１種類以上の薬物が投与される場合（例えば、抗Ｂｉｎ１抗体と追加化学療法薬など）、前記薬物は（前後に）連続しておよび／または同時に（併用）投与してもよい。前記薬物は同じ組成物または別の組成物で投与してもよい。
【００１４】
化学療法薬は、抗癌活性を示す化合物であり、および／または細胞に有害である（例えば、毒素）。適切な化学療法薬には、これに限定されるものではないが、毒素（例えば、サポリン、リシン、アブリン、臭化エチジウム、ジフテリア毒素、および緑膿菌外毒素）、タキサン、アルキル化剤（例えば、テモゾロマイド、クロランブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、およびウラシル・マスタードなどのナイトロジェンマスタード；チオテパなどのアジリジン；ブスルファンなどのメタンスルホン酸エステル；カルムスチン、ロムスチン、およびストレプトゾシンなどのニトロソウレア；白金錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、テトラプラチン、オルマプラチン、チオプラチン、サトラプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、ヘプタプタチン、イプロプラチン、トランスプラチン、およびロバプラチン）；マイトマイシン、プロカルバジン、ダカルバジン、およびアルトレタミンなどの生体還元性アルキル化剤；ＤＮＡ鎖切断剤（例えば、ブレオマイシン）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、アムサクリン、メノガリル、アモナフィド、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルダウノマイシン、エリプチシン、ダウノマイシン、ピラゾロアクリジン、イダルビシン、ミトキサントロン、ｍ−ＡＭＳＡ、ビサントレン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デオキシドキソルビシン、エトポシド（ＶＰ−１６）、リン酸エトポシド、オキサントラゾール、ルビダゾン、エピルビシン、ブレオマイシン、およびテニポシド）；ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、プリカマイシン）；代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサートなどの葉酸拮抗薬）；フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ＣＢ３７１７、アザシチジン、シタラビン、およびフロキシウリジンなどのピリミジン拮抗薬；メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビン、ペントスタチンなどのプリン拮抗薬；アスパラギナーゼ；およびヒドロキシウレアなどのリボヌクレオチド還元酵素阻害剤）；アントラサイクリン；チューブリン相互作用薬（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびパクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（商標）））；および抗体（例えば、ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ））を含む。
【００１５】
放射線療法は、ｘ線、ガンマ線、ニュートロン、プロトン、などの照射源から標的癌細胞への高エネルギー放射酸の使用を指す。放射線は、外部照射するか、または放射性物質を内部に投与することができる。化学放射線療法では、化学療法と放射線療法を併用する。
【００１６】
本発明は、神経変性疾患を抑制、予防、および／または治療する組成物および方法を提供する。前記方法は、少なくとも１種類の抗Ｂｉｎ１抗体を被験者に投与する工程を有する。神経変性疾患の例には、これに限定されるものではないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、レヴィー小体病、筋萎縮性側索硬化症、プリン病、およびハンチントン病を含む。特定の実施形態では、前記神経変性疾患がタウノパチーである。本明細書で用いるとおり、「タウノパチー」は、主にリン酸化または高リン酸化タウタンパク質の異常蓄積から成る、神経原線維変化により特徴付けられる神経変性疾患を指す。タウタンパク質の異常リン酸化は多くの神経変性疾患で認められる。タウノパチーの例は、Ｌｅｅらが示している（Ann.Rev. Neurosci.(2001) 201:1121-1159）。タウノパチーの例には、これに限定されるものではないが、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症症候群、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、拳闘家認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化、ダウン症候群、前頭側頭認知症、染色体１７に連鎖したパーキンソニズム、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、ハレルフォルデン・スパッツ病、筋緊張性ジストロフィー、ニーマン・ピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン病、ピック病、ハンチントン病、脳炎後パーキンソン症候群、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性全脳炎、散発性大脳皮質基底核症候群、および神経原線維型老年認知症を含む。特定の実施形態では、前記タウノパチーがアルツハイマー病である。
【００１７】
本発明の方法は、さらに、治療される神経変性疾患に対する少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。例えば、前記方法は、さらに、少なくとも１種類の他の治療薬の投与を有する。神経変性疾患治療薬の例には、これに限定されるものではないが、コリンエステラーゼ阻害薬（例えば、ドネペジル、ガランタミン、リバスチグミン）およびＮ−メチルＤ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）拮抗薬（例えば、アマンタジン、メマンチン）を含む。被験者に投与される薬物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される基剤を有する組成物に含まれてもよい。１種類以上の薬物が投与される場合（例えば、抗Ｂｉｎ１抗体と追加治療薬など）、前記薬物は（前後に）連続しておよび／または同時に（併用）投与してもよい。前記薬物は同じ組成物または別の組成物で投与してもよい。
【００１８】
本明細書で上述のとおり、本発明の方法（および組成物）は、被験者に対してＢｉｎ１（bridging integrator 1、抗Ｂｉｎ１抗体）に免疫学的に特異的な少なくとも１種類の抗体または抗体フラグメントを投与する工程を有する。特定の実施形態では、前記抗Ｂｉｎ１抗体がヒトＢｉｎ１に免疫学的に特異的である。ヒトＢｉｎ１およびそのイソ型／変異型のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋ遺伝子ＩＤ番号：２７４で示される。ヒトＢｉｎ１の典型的なアミノ酸配列（４５１アミノ酸）は、
2020143077.tif 000002
である。
【００１９】
特定の実施形態では、Ｂｉｎ１のアミノ酸配列が、配列ＩＤ番号：１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の相同性または同一性を有する。
【００２０】
特定の実施形態では、前記抗Ｂｉｎ１抗体がＢｉｎ１のエクソン１３によりコードされたスプライスイソ型に免疫学的に特異的である（例えば、DuHadaway et al.(J. Cell Biochem.(2003) 88:635-642を参照）。特定の実施形態では、前記抗Ｂｉｎ１抗体がＢｉｎ１のＭｙｃ結合ドメインに免疫学的に特異的である（例えば、配列ＩＤ番号：１のアミノ酸２７０〜３８３）である。特定の実施形態では、前記抗Ｂｉｎ１抗体が、以下の配列（または配列内のエピトープ）［３２３〜３５６］と少なくとも９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の相同性または同一性を有するアミノ酸配列と免疫学的に特異的である。
2020143077.tif 000003
【００２１】
特定の実施形態では、前記抗Ｂｉｎ１抗体は米国特許第６，０４８，７０２号に報告された抗Ｂｉｎ１モノクローナル抗体であり、前記抗Ｂｉｎ１抗体の説明はこの参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、前記抗Ｂｉｎ１抗体は抗Ｂｉｎ１モノクローナル抗体９９Ｄである（米国特許第６，０４８，７０２号に報告され、抗Ｂｉｎ１抗体、特に９９Ｄについてはこの参照により本明細書に組み込まれる）。ハイブリドーマ分泌モノクローナル抗体９９Ｄは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC HB-12580）に預けている。
【００２２】
本発明の抗体は、天然であるか、合成であるか、または修飾したものであってもよい（例えば、組み換え技術により作られた抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、ラクダ科抗体など）。前記抗体は、少なくとも１種類の精製タグを有してもよい。特定の実施形態では、前記抗体が抗体フラグメントである。抗体フラグメントには、これに限定されるものではないが、単一ドメイン（Ｄａｂ、例えば、単鎖可変軽鎖または重鎖ドメイン）、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、およびＦ（ｖ）を含む免疫グロブリンフラグメント；およびこれに限定されるものではないが、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、ｍｉｎｉｂｏｄｙ、ｄｉａｂｏｄｙ、ｔｒｉａｂｏｄｙ、およびｔｅｔｒａｂｏｄｙを含むこれらの免疫グロブリンフラグメントの（例えばリンカーを介した）融合体を含む。前記抗体は、少なくとも１種類の抗体または抗体フラグメントを有するタンパク質（例えば、融合タンパク質）としてもよい。本発明の特定の実施形態では、前記抗体がＦｃ領域を有する。本発明の特定の実施形態では、前記抗体がモノクローナル抗体を有する。
【００２３】
また本発明は、免疫グロブリンを模倣した合成タンパク質も含む。例には、これに限定されるものではないが、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）分子（Ａｆｆｉｂｏｄｙ、Ｂｒｏｍｍａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、ｄａｒｐｉｎｓ（設計されたアンキリン反復タンパク質、Kawe et al.(2006) J. Biol.Chem., 281:40252-40263）、およびｐｅｐｔａｂｏｄｉｅｓ(Terskikh et al.(1997) PNAS 94:1663-1668）を含む。
【００２４】
本発明の抗体は、さらに修飾されていてもよい。例えば、前記抗体はヒト化してもよい。特定の実施形態では、前記ハイブリッド抗体（またはその一部）が抗体または抗体フラグメント定数の骨格に挿入される。例えば、本発明の抗体の前記可変軽鎖ドメインおよび／または可変重鎖ドメインを別の抗体構成に挿入してもよい。組み換え技術により抗体を生成する方法は、当該分野で周知である。実際、特定の抗体および抗体フラグメント構成物には市販のベクターが利用できる。
【００２５】
本発明の抗体は、他の成分と結合／連結していてもよい。例えば、前記抗体は、少なくとも１種類の検出剤、画像化剤、造影剤、または治療用化合物（例えば、上記参照）と操作により結合してもよい（例えば、選択的にリンカーを介した共有結合）。本発明の抗体は、少なくとも１種類の精製タグ（例えば、Ｈｉｓタグ）を有してもよい。
【００２６】
本発明の抗体分子は、当該分野で既知の様々な方法により調整可能である。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体は、Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al. eds.に説明されたとおり調整可能である。抗体は化学的架橋、ハイブリッドハイブリドーマ技術、および細菌または酵母細胞などの宿主細胞に発現された組み換え抗体フラグメントの発現により調整可能である。本発明の１つの実施形態では、前記抗体分子が、宿主細胞で組み換え抗体または抗体フラグメントを発現することにより生成される。前記抗体をコードした核酸分子は、発現ベクターに挿入されるか、宿主細胞に導入されてもよい。次に、得られた抗体分子を単離し、発現系から精製される。前記抗体は、選択的に精製タグを有し、これにより前記抗体を精製することができる。
【００２７】
本発明の抗体分子の純度は、当業者に既知の標準的方法により評価することができ、これに限定されるものではないが、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学検査、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、サイズ交換クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、ウェスタンブロッティング、表面プラスモン共鳴および質量分析を含む。
【００２８】
少なくとも１種類の抗Ｂｉｎ１抗体を有する組成物も本発明に含まれる。特定の実施形態では、前記組成物は、少なくとも１つの抗Ｂｉｎ１抗体または抗体フラグメントおよび少なくとも１つの薬学的に許容される担体を有する。前記組成物は、さらに、治療される疾患または障害を阻害、治療、および／または予防する、少なくとも１種類の他の治療用化合物を有してもよい（例えば、上記）。代わりに、少なくとも１種類の他の治療用化合物は、少なくとも１種類の薬学的に許容される担体とは別の組成物に含まれてもよい。また本発明は、少なくとも１種類の抗Ｂｉｎ１抗体または抗体フラグメントを有する第１の組成物、および治療される疾患または障害を阻害、治療、および／または予防する、少なくとも１種類の他の治療用化合物を有する第２の組成物を有するキットを含む。前記第１および第２の組成物は、さらに、少なくとも１種類の薬学的に許容される担体を有する。
【００２９】
上記に説明したとおり、本発明の組成物は、炎症性腸疾患、神経変性疾患、および／または大腸癌の治療に有用である。前記組成物の治療有効量は、前記被験者に投与されてもよい。用量、方法、および投与時間は、本明細書に提供された教示を考え、当業者が容易に決定することができる。
【００３０】
本明細書で説明された抗体は、薬学的製剤として患者に投与される。本明細書で使用する「患者」の用語は、ヒトまたは動物被験者を指す。これらの抗体は、指示された疾患または障害の治療を目的とした医師のガイドラインのもと、治療に利用してもよい。
【００３１】
本発明の抗体分子を有する薬学的製剤は、水、緩衝食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、オイル、界面活性剤、懸濁剤、またはその適切な混合物など、許容できる媒体（例えば、薬学的に許容される担体）を投与するため、便利に製剤化してもよい。選択した媒体中の薬物濃度は変化する可能性があり、前記媒体は前記薬学的製剤の望みの投与経路により選択することができる。従来の媒体または薬物が投与される薬物と適合しない場合を除き、前記薬学的製剤での使用は検討される。
【００３２】
特定患者への投与に適した本発明の抗体の用量および投与方法は、前記抗体が投与される患者の年齢、性別、体重、全身の医学的状態、および特定の状態およびその重症度を考慮し、医師が決定することができる。前記医師は、前記抗体の投与経路、前記抗体と併用される薬学的担体、および前記抗体の生物学的活性を検討してもよい。
【００３３】
適切な薬学的製剤の選択は、選択された投与方法によって決まる。例えば、本発明の抗体は、望みの組織またはその周辺領域に直接注射することにより投与してもよい。この場合、薬学的製剤は、標的組織と適合する媒体に分散された抗体分子を有する。
【００３４】
また、抗体は非経口的に、血流への静注、または皮下、筋肉内、または腹腔内注射により投与してもよい。非経口注射用の薬学的製剤は当該分野で既知である。非経口注射が前記抗体の投与方法として選択される場合、確実に十分な量の分子が標的細胞に到達し、生物学的作用を発揮するような手順をとる必要がある。前記抗体の親油性、または送達される薬学的製剤は、前記分子が標的部位に到達することができるように、増量する必要がある。さらに、十分な数の分子が前記標的細胞に到達するように、前記抗体は細胞を標的とする担体で送達する必要がある。分子の親油性を上昇させる方法は当該分野で既知である。これに限定されるものではないが、Ｆａｂフラグメント、Ｄａｂ、ｓｃＦｖ、またはｄｉａｂｏｄｙを含む小分子の形態の前記抗体を投与する場合、これに限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはアルブミン結合抗体またはペプチドなどの第２の（担体）分子に結合し、血中での保持時間を延長してもよい。
【００３５】
薬学的担体との詳細な混合物に活性成分として本発明の化合物を含む薬学的組成物は、従来の薬学的配合技術により調整可能である。前記担体は、例えば、静脈内、経口、または非経口など、投与に望ましい製剤形態により、様々な形態をとることができる。経口投与剤形での前記抗体の調製では、例えば、（例えば、懸濁液、エリキシル剤、および液剤などの）経口液体製剤の場合は水、グリコール、オイル、アルコール、香料、保存料、着色料など；または（例えば、粉末、カプセル、および錠剤などの）経口固体製剤の場合はデンプン、糖、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体など、有用な薬学的媒体をすべて利用することができる。投与が簡便であるため、錠剤およびカプセルは症例の固体薬学的担体が明らかに利用される、最も有利な経口投与担体である。望ましい場合、錠剤は標準的な技術により糖コーティングまたは腸溶性コーティングとすることができる。非経口投与では、前記担体は、通常、例えば溶解を助けるため、または保存の目的で、他の成分を介して滅菌水を有する。注射可能な懸濁液を調整することもでき、この場合、適切な液体担体、懸濁剤などを利用することができる。
【００３６】
本発明の薬学的製剤は、投与を簡便にし、用量を均一とするため、投与量単位で製剤化することができる。本明細書で用いる投与量の単位形態は、治療を受ける患者に適した薬学的製剤の物理学的な離散単位を指す。各投与量は、選択された薬学的担体と関連した望みの作用を生じるために計算された量の活性成分を含む必要がある。適切な投与量単位を決定する方法は、当業者に周知である。
【００３７】
投与量単位は患者の体重に比例して増減してもよい。特定の病的状態を軽減するために適した濃度は、当該分野で周知の投与量濃度曲線の計算から決定することができる。
【００３８】
本発明によれば、抗Ｂｉｎ１抗体分子の投与に適した投与量単位は、動物モデルにおける抗体分子の毒性評価により決定することができる。様々な濃度の抗体薬学的製剤を前記疾患または障害のマウスモデルに投与することができ、最少および最大投与量は前記結果および治療結果としての副作用に基づき決定することができる。適切な投与量単位は、他の標準的薬物と併用した前記抗体分子投与の有効性を評価することでも決定可能である。抗Ｂｉｎ１抗体の投与量単位は、個々にまたは他の治療との併用で決定することができる。
【００３９】
前記抗Ｂｉｎ抗体を有する薬学的製剤は、前記病的症状が軽減または改善するまで、適切な間隔、例えば、少なくとも１日２回以上で投与することができ、この後前記投与量を維持用量まで減量することができる。特定の症例において適切な間隔は、通常、患者の状態に依存する。
【００４０】
本発明の方法はさらに、本発明の組成物を投与後、前記被験者の疾患または障害をモニタリングし、前記方法の有効性をモニタリングする工程を有する。
【００４１】
定義
以下の定義は、本発明の理解を促すために提供される。
【００４２】
単数系の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が明らかにそうでないことを示していない限り、複数の言及も含む。
【００４３】
化合物または薬学的組成物の「治療有効量」は、特定の障害または疾患の症状を予防、阻害、治療、または軽減するために有効な量を指す。本明細書における眼疾患の治療は、前記眼疾患、その症状、またはその疾病素質を治癒、軽減、および／または予防することを指す。
【００４４】
「薬学的に許容される」は、連邦または州政府の規制当局により承認されているか、米国薬局方、または他の一般的に認識されている、動物、特にヒトに使用される薬局方に掲載されていることを示す。
【００４５】
「担体」は、例えば、本発明の活性物質が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、補助剤、または溶媒を指す。薬学的に許容される担体は、水、および石油、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油など、動物、植物、または合成由来のものを含むオイルなどの滅菌液体とすることができる。水または水性滅菌溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液は、好ましくは担体、特に注射用溶液として利用される。適切な薬学的担体は、例えば、E.W. Martinの「Remington's Pharmaceutical Sciences」に説明されている。
【００４６】
「抗体」または「抗体分子」は、特異的抗原に結合する抗体およびそのフラグメントを含む免疫グロブリンである。本明細書に用いるとおり、抗体または抗体分子は未処理の免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分を融合したものを意図する。
【００４７】
本明細書に用いるとおり、「免疫学的に特異的な」の用語は、１もしくはそれ以上のタンパク質のエピトープまたは対象化合物に結合するが、抗原性生物学的分子の混合物を含むサンプルにおいて、実質的に他の分子を認識し、結合することのない、タンパク質／ポリペプチド、特に抗体を指す。
【００４８】
本明細書に用いるとおり、「予防する」の用語は、状態を発生するリスクがあるが、結果として被験者が前記状態を発生する可能性が低下する、被験者の予防的治療を指す。
【００４９】
本明細書に用いる「治療する」の用語は、患者の状態の改善（例えば、１もしくはそれ以上の症状）、前記状態の進行遅延など、疾患に苦しむ患者に利益を与えるすべてのタイプの治療を指す。
【００５０】
本明細書に用いるとおり、「宿主」、「被験者」、および「患者」の用語は、ヒトなどの哺乳類を含む動物を指す。
【００５１】
本明細書に用いるとおり、「免疫抑制剤（immunosuppressantおよびimmunosuppressive agent）」の用語は、免疫反応またはそれと関連する症状を抑制する化合物または組成物を含む。免疫抑制剤には、これに限定されるものではないが、プリン類似体（例えば、アザチオプリン）、メトトレキサート、シクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ）、シクロホスファミド、レフルノミド、ミコフェノール酸塩（ミコフェノール酸モフェチル）、ステロイド（例えば、グルココルチコイド、コルチコステロイド）、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、クロラムブシル、ＣＤ２０拮抗薬（例えば、リツキシマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ、またはオファツムマブ）、アバタセプト、ＴＮＦ拮抗薬（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト）、マクロライド（例えば、ピメクロリムス、タクロリムス（ＦＫ５０６）、およびシロリムス）、デヒドロエピアンドロステロン、レナリドミド、ＣＤ４０拮抗薬（例えば、抗ＣＤ４０Ｌ抗体）、アベチムスナトリウム、ＢＬｙｓ拮抗薬（例えば、抗ＢＬｙＳ（例えば、ベリムマブ）、ダクチノマイシン、ブシラミン、ペニシラミン、レフルノミド、メルカプトプリン、ピリミジン類似体（例えば、シトシンアラビノシド）、ミゾリビン、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、フェニルアラニンマスタード、ブスルファン、およびシクロホスファミド）、葉酸拮抗薬（例えば、アミノプテリンおよびメトトレキサート）、抗生物質（例えば、ラパマイシン、アクチンマイシンＤ、マイトマイシンＣ、プラマイシン、およびクロラムフェニコール）、ヒトＩｇＧ、抗リンパ球グロブリン（ＡＬＧ）、抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ４抗体（ＯＫＴ４）、抗ＣＤ５抗体、抗ＣＤ７抗体、抗ＩＬ−２受容体（例えば、ダクリズマブおよびバシリキシマブ）、抗α／βＴＣＲ抗体、抗ＩＣＡＭ−１抗体、ムロモナブ−ＣＤ３、抗ＩＬ−１２抗体、アレムツズマブ、および免疫毒素抗体）、およびその誘導体および類似体を含む。
【００５２】
本明細書に用いるとおり、「抗炎症薬」は炎症性疾患またはそれに伴う症状の治療に用いられる化合物を指す。抗炎症薬には、これに限定されるものではないが、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ、例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メチルサリチル酸、ジフルニサル、インドメタシン、スリンダク、ジクロフェナク、ケトプロフェン、ケトロラク、カルプロフェン、フェノプロフェン、メフェナム酸、ピロキシカム、メロキシカム、メトトレキサート、セレコキシブ、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトリコキシブ、およびニメスリド）、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、ベタメサゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメサゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、およびフルチカゾン）、ラパマイシン、アセトアミノフェン、グルココルチコイド、ステロイド、β拮抗薬、抗コリン剤、メチルキサンチン、金注射（例えば、アウロチオマレイン酸ナトリウム）、スルファサラジン、およびダプソンを含む。
【００５３】
以下の例は、本発明の様々な実施形態を説明するために提供される。この例はいかなる方法でも本発明を制限する意図はない。
【実施例】
【００５４】
本明細書では大腸炎のＤＳＳモデル（Chang et al.(2012) Dig.Dis.Sci., 57:1813-21）を用い、前記Ｂｉｎ１  ｍＡｂの有効性を評価した。簡単には、前記ＤＳＳモデルでは、マウスに飲用水として３％デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ、ＭＷ  ３６〜５０ｋＤａ）を投与した。抗Ｂｉｎ１抗体（モノクローナル９９Ｄ）を投与したマウスは、対照マウスと比較して、ＤＳＳ誘導大腸炎により組織学的に保護された。マウスＩｇＧ注射の有無にかかわらず、ＤＳＳ処理マウスの結腸粘膜に重度の病変が観察され、粘膜および粘膜下部位への好中球およびリンパ球の浸潤は高レベルであり、粘膜の腺窩構造が消失していた（図１Ｂ−Ｅ）。対照的に、高用量の抗Ｂｉｎ１抗体投与マウスは、未処理の対照と同様、結腸粘膜はより正常であった（図１Ｆ−Ｇ）。表１は、マウスから得られ、組織的に染色した組織の縦断的評価により決定した、各群の結腸浸食度をまとめている。
【００５５】
【表１】
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【００５６】
腸管のバリア欠損は除き、大腸炎の主な特徴は固有層へのリンパ球および好中球動員を伴う炎症である。リンパ濾胞として出現する腸管関連リンパ系組織（ＧＡＬＴ）は、結腸の独特の炎症現象と内腔抗原サンプリングに関与する。組織学的評価では、ＤＳＳのみまたはＤＳＳ＋非特異的マウスＩｇＧを投与したマウスの結腸のリンパ濾胞に破裂があることが明らかとなった。リンパ球および好中球は、炎症性の移動と一致した粘膜層で同様に認められた。しかし、ＤＳＳ＋抗Ｂｉｎ１抗体を投与したマウスではリンパ濾胞は未変化であった（図２）。これらの所見は、抗Ｂｉｎ１抗体の投与がおそらくはバリア機能を直接改善することにより、前記リンパ濾胞を保護し、炎症を制限することを示している。
【００５７】
モノクローナル抗体９９Ｄは、Ｂｉｎ１エクソン１３によりコードされたＣ末端Ｍｙｃ結合ドメイン内のエピトープを認識する。代わりに、このエクソンはすべての細胞タイプに発現された２つのタンパク質イソ型にスプライスされるため、９９Ｄは結腸上皮細胞に発現された２つのＢｉｎ１イソ型の１つのみを認識する（DuHadaway et al., (2003) J. Cell.Biochem., 88:635-42）。対照的に、モノクローナル抗体２Ｆ１１は、Ｂｉｎ１エクソン７および８でコードされたＮ末端ＢＡＲドメイン内のエピトープを認識する（DuHadaway et al., (2003) J. Cell.Biochem., 88:635-42）。そのように、２Ｆ１１は「ｐａｎ−イソ型」抗Ｂｉｎ１  ｍＡｂである。前記９９Ｄおよび２Ｆ１１  ｍＡｂｓは、ヒトおよびマウスＢｉｎ１をいずれも認識する。しかし、９９Ｄとは異なり、２Ｆ１１は９９Ｄのように大腸炎を予防しない。そのため、以下に示す研究では、９９Ｄを用いてＴＪパラメータの機能的効果を検討したが、２Ｆ１１は発現解析のみに使用した。
【００５８】
抗Ｂｉｎ１抗体の細胞作用および機能的メカニズムを評価するため、十分な報告があるヒト結腸上皮細胞培養モデルＣａｃｏ−２を用いた。コフルエンスでは、Ｃａｃｏ−２細胞層が効率的なバリア機能を持つ機能的ＴＪを形成する。分化型Ｃａｃｏ−２細胞では（維持培地でコフルエンス１１日目）、細胞を９９Ｄ抗体とインキュベートした場合、ウエスタンブロットで２Ｆ１１により検出すると、Ｂｉｎ１発現の低下が認められた。この結果は、９９Ｄが結腸細胞のＢｉｎ１の遺伝的減弱を表現型模写していることを示している。
【００５９】
ＵＣは、細胞ＴＪの異常漏出により生じる腸管バリア機能欠損により特徴付けられ、この場合、ＴＪは疾患修飾因子として作用すると考えられる。上皮細胞では、ＴＪｓは尖端（内腔）および側底（間質）液コンパートメントを分ける役割を果たすため、傍細胞拡散の選択的透水性バリアとして機能する。ＴＪｓは上皮組織を規定し、ｏｃｃｌｕｄｉｎおよび前記クローディンにより形成し、これが構築されることで、上皮細胞間の細胞間隙における分子の流れをコントロールする傍細胞バリアが確立する。クローディンはＺＯ−１などのＴＪ複合体の細胞内足場タンパク質と相互作用する。特に、クローディン−２は、ＴＪｓ間の小分子カチオンの特異的透過性に作用する傍細胞チャネルを形成する上で重要な役割を果たす。前記Ｃａｃｏ−２細胞モデルは、９９Ｄの傍細胞透過性およびＴＪタンパク質（クローディン）発現に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ作用を検討するために使用した。炎症刺激を模倣するため、ホルボールエステル１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）を用い細胞を短時間（４時間）インキュベートした。コンフルエントなＣａｃｏ−２細胞培養は、炎症性刺激の存在下または非存在下、１１日間９９ＤまたはＩｇＧで処理した。コンフルエンスにより誘導した分化期間中、９９Ｄにより処理したＣａｃｏ−２細胞層は、傍細胞の抵抗性に可変性の変化を示したが、短絡電流に対する作用は一定で、ＴＰＡの阻害作用に対抗する（図３）。
【００６０】
マウスＩｇＧまたは９９Ｄ  ｍＡｂの未処理または処理Ｃａｃｏ−２細胞層において、前記ＴＪタンパク質、クローディン−２、−３、および−７の定常状態値を比較した。９９Ｄ処理により、分析したすべてのクローディン値が低下した（図４）。ＴＰＡに曝露した細胞では、分析したクローディンすべての発現が強く上昇していることが認められた。
【００６１】
ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γは、ＵＣに関与する炎症誘発性サイトカインである。抗Ｂｉｎ１抗体の有無によりこれらのサイトカインがどのようにＣａｃｏ−２細胞に影響するかを判断するため、試験を行った。サイトカインに曝露した場合、抗Ｂｉｎ１抗体を事前に処理したＣａｃｏ−２細胞層は抵抗が有意に高くなった（図５Ａ）。これらの細胞層の漏出度は放射性標識したＤ−マンニトールにより決定した。抗Ｂｉｎ１抗体処理し、サイトカインを曝露させたＣａｃｏ−２細胞層は、サイトカイン処理したＣａｃｏ−２細胞層のみ（高漏出度）と比較し、マンニトールの漏出度が低かった（図５Ｃ）。この実験は、抗Ｂｉｎ１抗体存在下では、炎症性サイトカイン曝露後に細胞ＴＪｓが損なわれることはないことを証明している。前記サイトカイン曝露後、前記クローディンタンパク質の発現も分析した。クローディン−３、−４、および−７値およびｏｃｃｌｕｄｉｎの発現にサイトカイン投与間で変化はなかった。ただし、クローディン−１、−２、および−５はサイトカイン曝露による変化はなかった。抗Ｂｉｎ１抗体は、前記サイトカイン曝露後のこれらのタンパク質の低下を予防した（図６）。
【００６２】
インドールアミン２，３ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）はヘム含有酵素であり、ホルミルキヌレニンへのトリプトファンの異化代謝における律速段階を触媒する。ＩＤＯ活性は組織微小環境において炎症反応の特徴を調節し、発癌作用をサポートする（Prendergast et al.(2010) Am. J. Pathol., 176:2082-7）。ＩＤＯはＴエフェクター細胞の機能を抑制し、Ｔ制御性細胞の分化を助け、癌における免疫回避のメディエーターと考えられる。一部の細胞では、Ｂｉｎ１の消失によりＩＤＯ１の発現が増加する（Muller et al.(2005) Cancer Res., 65:8065-8）。Ｂｉｎ１の減少によりＩＤＯ１が増加するか否かを検討するため、ＨＴ２９Ｂ６細胞（ヒト結腸上皮細胞株）を抗Ｂｉｎ１抗体処理した。ＩＤＯ１の増加はキヌレニン発現値を分析することでモニターした。ＨＴ２９  Ｂ６細胞を抗Ｂｉｎ１抗体によりインキュベートした場合、キヌレニン値は増加しなかった（図７）。この結果は、抗Ｂｉｎ１抗体処理はＩＤＯ１を誘導しないため、腫瘍微小環境に優位に働くことはないことを証明した。これらの結果を考慮し、前記抗Ｂｉｎ１抗体を大腸炎および大腸癌の治療に用いることができる。
【００６３】
痴呆のもっとも一般的な原因であるアルツハイマー病（ＡＤ）は、主に高齢者が罹患する、原因不明の進行性神経変性脳疾患である。今のところ、ＡＤを予防または治療する有効な薬物はない（Zhu et al.(2006) Clin.Interv.Aging 1:143-154）。ＡＤは、病理学的には、アミロイドベータ（Ａβ）の細胞外沈着および神経原線維変化およびそれ以外は微小管が関連したタンパク質であるタウの過リン酸化フィラメントから成る神経網により特徴付けられる。Ａβは見かけ上ＡＤ発症の開始因子であるが、異常タウタンパク質も重要な役割を果たしていることはますます明確になってきている。インスリンシグナル伝達カスケードの障害は可溶性Ａβがタウリン酸化を誘導する経路に関与し、さらに、ＡＤのインスリンシグナル調節不全を治療することが治療アプローチになる可能性があることを示している（Tokutake et al.(2012) J. Biol.Chem., 287:35222-35233）。
【００６４】
これに限定されるものではないが、前頭側頭認知症、ピック病、拳闘家認知症、大脳皮質基底核変性症、および進行性核上麻痺を含むいくつかの神経変性疾患にタウ沈着がみられる。これらの疾患では、集合的にはタウノパチーと呼ばれる異常タウが主な病理的特徴である。家族性痴呆を引き起こすタウの変異が特定されたことで、神経変性疾患の原因となっているのはタウの異常のみであることが証明された。タウはアルツハイマー病（ＡＤ）にも大きく関与している（Wolfe, M.S.(2009) J. Biol.Chem., 284: 6021-6025）。
【００６５】
ＡＤの原因は、遺伝的危険因子と環境的危険因子の複雑な相互作用の影響を受ける。アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン１および２遺伝子の変異は、早期発症型家族性ＡＤと関連していた。さらに、アポリポ蛋白Ｅ（ＡＰＯＥ）遺伝子は遅発性ＡＤの感受性多型であり、高齢集団では最も多くみられるＡＤタイプ、かつ最も多くみられる痴呆である。ＡＰＯＥ  ε４対立遺伝子はＡＤの発症リスクを上昇させるが、ＡＤの原因として必要でも十分でもなく、ＡＰＯＥの遺伝子検査は明確な予測因子と解釈することはできない（Cassidy et al.(2008) Alzheimers Dement.4:406-413）。
【００６６】
様々な集団を対象とした多数の全ゲノム連鎖研究（ＧＷＡＳ）から、ＢＩＮ１は散発性アルツハイマー病（ＡＤ）に関与していた（Seshadri et al.(2010) JAMA 303:1832-1840）。ＢＩＮ１は、ＡＤの遺伝的決定要因としても同定されている（Lambert et al.(2011) Neurobiol.Aging 32:756.e11-5）。全ゲノム連鎖研究を用いたメタアナリシスでも、ＡＤと関連したＢｉｎ１遺伝子座で多重変異体が同定された（Hu et al.(2011) PLoS One 6:e16616）。さらに、ＢＩＮ１発現レベルは疾患の進行に関与し、発現率が高いと発症年齢が遅延した（Karch et al.(2012) PLoS One 7:e50976）。ＢＩＮ１の転写レベルはＡＤ脳で増加し、ＢＩＮ１の約２８ｋｂ上流で挿入された新規の３ｂｐ対立遺伝子が同定され、これがｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写活性を上昇させることが同定された（Chapuis et al.(2013) Mol.Psychiatry 18:1225-34）。タウおよびＢＩＮ１はヒト神経芽細胞腫細胞およびマウス脳に共存して相互作用し、ＢＩＮ１はタウの病状を調節することで、ＡＤリスクに介在する可能性がある（Chapuis et al.(2013) Mol.Psychiatry 18:1225-34）。
【００６７】
ＢＩＮ１のイソ型は少なくとも１５種類知られており、最も長いイソ型（ｉｓｏ１）を含め、多くは脳に発現しているが、ｉｓｏ１は脳特異的で軸索起始部およびランビエ絞輪に限局している。ＢＩＮ１のこの最長のイソ型の量は、年齢をマッチさせた対照群と比較し、ＡＤ脳で有意に減少しており、より小さなＢＩＮ１イソ型が有意に増加している（Holler et al.(2014) J, Alzheimers Dis., 42:1221-1227）。さらに、ＢＩＮ１は神経原線維変化（ＮＦＴ）の病状の程度と有意に関連していたが、びまん性または老人斑、またはアミロイド−βペプチドの量とは有意に関連していなかった。ＢＩＮ１は、これもＮＦＴの病状を主な特徴とする別のヒト疾患、筋緊張性ジストロフィーで異常発現することが知られている。これらのデータは、ＢＩＮ１がＮＦＴ病状の調節因子およびタウの病状を特徴とする他のヒト疾患としてＡＤに関与していることを示している。
【００６８】
Ｂｉｎ１の発現はＡＤ時に増加し、Ｂｉｎ１はタウを調節することでＡＤリスクに介在する。タウを発現するＨＥＫ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞に抗Ｂｉｎ１抗体を処理した。タウは異なる抗体を用いてプロービングし、全タウおよびリン酸化タウの発現を測定した。特に、全タウおよびリン酸化タウはＡＤで増加している（Sjogren et al.(2001) J. Neurol.Neurosurg.Psychiatry 70:624-630）。ＤＡ９およびタウ５抗体を用いてプロービングした場合、全タウの発現はＢｉｎ１処理タウ発現ＨＥＫ細胞で減少することが分かった。リン酸化タウレベルも、ＰＨＦ１抗体によるプロービングで判定すると、抗Ｂｉｎ１抗体処理後に低下した（図８）。抗Ｂｉｎ１抗体がタウの発現を減少させたことを確認するため、タウの発現を蛍光顕微鏡検査によりモニターした。明るい赤色蛍光を発光する未処理細胞と比較し、抗Ｂｉｎ１抗体処理ＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞では蛍光強度が低くなることが分かった（図９）。これらの研究は、抗Ｂｉｎ１抗体を用いてタウの発現を抑制し、ＡＤなどのタウノパチーを予防／治療できることを証明している。
【００６９】
加齢はＡＤの発症率を上昇させることが知られている。しかし、タウオリゴマーの毒性型がいつ脳で形成されるのかは不明である。健康ドナー（４０代中頃）およびＡＤ患者の血清を用い、ＨＥＫ  ２９３  Ｔ−ＲＥｘ（商標）細胞のタウ発現を検討した。抗Ｂｉｎ１抗体処理したＨＥＫ細胞は、健康または罹患状態の血清を検討した場合、タウオリゴマー値が低かった（図１０）。前記研究では、さらに、抗Ｂｉｎ１抗体がタウの発現を抑制することが示されている。
【００７０】
抗Ｂｉｎ１抗体２Ｆ１１を用いたウエスタンブロット実験では、タウ存在下ではＢｉｎ１タンパク質が増加するが、その発現は抗Ｂｉｎ１抗体９９Ｄの処理により減少することが示された。タウのリン酸化はタウキナーゼとホスファターゼ活性とのバランスにより調節される。この平衡状態の崩壊はタウの異常リン酸化に由来するため、タウの凝集に関与する可能性がある（Martin et al.(2013) Ageing Res.Rev., 12:39-49）。タンパク質ホスファターゼ２Ａ（ＰＰ２Ａ）は、脳のＳｅｒ／Ｔｈｒホスファターゼ活性の大部分の原因となる大きな酵素ファミリーである。ＰＰ２Ａは、構造的役割を果たすＡサブユニットと触媒的役割を果たすＣサブユニット、および制御的役割を果たすＢサブユニットで構成される、二量体コア酵素から成る。本明細書では、抗Ｂｉｎ１抗体がＰＰ２Ａサブユニットｃの発現を低下させると判断された。また、抗Ｂｉｎ１抗体は、ＩｇＧ処理ＨＥＫ細胞と比較し、ｐ３８ＭＡＰＫの発現を減少させる（図１１）。
【００７１】
最後に、タウタンパク質を過剰発現したトランスジェニックマウスでは、リチウムの注入によりＧＳＫ３βのリン酸化が増加する（Muyllaert et al.(2008) Genes Brain Behav., 7:57-66）。本明細書では、抗Ｂｉｎ１抗体の投与により、未投与の対照と比較し、ＧＳＫ３βのリン酸化が増加した（図１１）。
【００７２】
本発明が関与する本技術の状態をより詳細に説明するため、前述の明細書に数件の出版物および特許文書が引用されている。これらの各引用の開示は、この参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００７３】
本発明の特定の好適な実施形態が説明され、具体的に上記に例示されているが、本発明はそのような実施形態に限定されるものではないことは意図されるものである。以下の請求項に示されるとおり、本発明の範囲および精神から離れずに、様々な変形形態が可能である。
【００７４】
【図１Ａ−Ｇ】
2020143077.tif 000006
【図２Ａ−Ｆ】
2020143077.tif 000007
【図３Ａ−Ｂ】
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【図４】
2020143077.tif 000009
【図５Ａ−Ｃ】
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【図６】
2020143077.tif 000011
【図７】
2020143077.tif 000012
【図８Ａ−Ｂ】
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【図９Ａ−Ｂ】
2020143077.tif 000014
【図９Ｃ−Ｄ】
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【図１０Ａ−Ｂ】
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【図１１】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年5月27日(2020.5.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経変性障害の治療および／または予防のための医薬組成物であって、抗Ｂｉｎ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、医薬組成物。
【請求項２】
請求項１の医薬組成物において、前記神経変性障害はタウノパチーである、医薬組成物。
【請求項３】
請求項２記載の医薬組成物において、前記タウノパチーは、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症症候群、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、拳闘家認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化、ダウン症候群、前頭側頭認知症、染色体１７に連鎖したパーキンソニズム、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、ハレルフォルデン・スパッツ病、筋緊張性ジストロフィー、ニーマン・ピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン病、ピック病、ハンチントン病、脳炎後パーキンソン症候群、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性全脳炎、散発性大脳皮質基底核症候群、および神経原線維型老年認知症から選択される、医薬組成物。
【請求項４】
請求項２記載の医薬組成物において、前記タウノパチーはアルツハイマー病である、医薬組成物。
【請求項５】
請求項１記載の医薬組成物において、前記抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントは、Ｂｉｎ１のＭｙｃ結合ドメインに免疫学的に特異的である、医薬組成物。
【請求項６】
請求項５記載の医薬組成物において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、モノクローナル抗体９９Ｄまたはモノクローナル抗体９９Ｄの抗原結合フラグメントである、医薬組成物。
【請求項７】
請求項１記載の医薬組成物において、前記抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントは、キメラ抗体、単鎖可変ドメイン、二重特異性抗体、ｍｉｎｉｂｏｄｙ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）、およびＦ（ｖ）、ｓｃＦｖ、またはｓｃＦｖ−Ｆｃである、医薬組成物。
【請求項８】
請求項１記載の医薬組成物において、前記抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントは、配列ＩＤ番号：２に免疫学的に特異的である、医薬組成物。
【請求項９】
請求項１記載の医薬組成物であって、さらに少なくとも１つの抗炎症薬を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
神経変性障害の治療のための製剤の製造における抗Ｂｉｎ１抗体またはその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項１１】
請求項１０記載の使用において、前記神経変性障害はタウノパチーである、使用。
【請求項１２】
請求項１１記載の使用において、前記タウノパチーは、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知症症候群、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、拳闘家認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化、ダウン症候群、前頭側頭認知症、染色体１７に連鎖したパーキンソニズム、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、ハレルフォルデン・スパッツ病、筋緊張性ジストロフィー、ニーマン・ピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン病、ピック病、ハンチントン病、脳炎後パーキンソン症候群、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性全脳炎、散発性大脳皮質基底核症候群、および神経原線維型老年認知症から選択される、使用。
【請求項１３】
請求項１１記載の使用において、前記タウノパチーはアルツハイマー病である、使用。
【請求項１４】
請求項１０記載の使用において、前記抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントは、Ｂｉｎ１のＭｙｃ結合ドメインに免疫学的に特異的である、使用。
【請求項１５】
請求項１４記載の使用において、前記抗Ｂｉｎ１抗体は、モノクローナル抗体９９Ｄまたはモノクローナル抗体９９Ｄの抗原結合フラグメントである、使用。
【請求項１６】
請求項１０記載の使用において、前記抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントは、キメラ抗体、単鎖可変ドメイン、二重特異性抗体、ｍｉｎｉｂｏｄｙ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）、およびＦ（ｖ）、ｓｃＦｖ、またはｓｃＦｖ−Ｆｃである、使用。
【請求項１７】
請求項１０記載の使用において、前記抗Ｂｉｎ１抗体またはそのフラグメントは、配列ＩＤ番号：２に免疫学的に特異的である、使用。
【外国語明細書】
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