(57)【要約】【課題】たんぱく質などの栄養素を含み、さらに、血糖値上昇抑制効果または中性脂肪上昇抑制効果等の健康機能性を有する組成物を提供することを課題とする。【解決手段】本発明者らは、鋭意研究の中で、酵母（酵母たんぱく質）は、たんぱく質補給とともに、血糖や中性脂肪の上昇抑制といった健康機能も併せ持つことを見出し、本発明を完成させた。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母菌体または酵母残渣の細胞壁分解酵素処理物である酵母たんぱく質含有組成物。
【請求項２】
酵母菌体または酵母残渣の細胞壁分解酵素処理物である血糖値上昇抑制用酵母たんぱく質
含有組成物。
【請求項３】
酵母菌体または酵母残渣の細胞壁分解酵素処理物である血中中性脂肪上昇抑制用酵母たん
ぱく質含有組成物。
【請求項４】
請求項１の酵母たんぱく質含有組成物を含む食品であって、食後の血糖値の上昇を抑える若しくは食後の血糖値の上昇をゆるやかにする、または食後の血中中性脂肪の上昇を抑える若しくは食後の血中中性脂肪の上昇をゆるやかにすると表示する食品。
【請求項５】
酵母菌体または酵母残渣に細胞壁分解酵素処理をする工程を含む、請求項１の酵母たんぱく質含有組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵母たんぱく質含有組成物及び血糖値上昇抑制効果または中性脂肪上昇抑制
効果を有する組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
超高齢化社会の進展に伴い、健康寿命の延伸の重要性は高まってきている。
一方で、世界の人口増加に伴う食糧危機や日本国内における食料自給率（特に、たんぱく質）の低さが問題となってきている。
【０００３】
このようななか、医薬品に頼ることなく、普段の食事の中で健康寿命を延伸させようと
うコンセプトから機能性食品という概念が生まれ注目されている。
健康志向の高まりも伴って、健康機能性を有する食品素材を加える食品が年々増加し、
定保健用食品や機能性表示食品などが注目されている。種々の健康機能性を有する食品
材が知られているが、血糖や中性脂肪の上昇を抑制させる機能性食品としては難消化性
キストリンなどが挙げられる（特許文献１）。しかしながら、難消化性デキストリンは
ウモロコシ澱粉由来の焙焼デキストリンにα-アミラーゼ及びグルコシダーゼを作用させ
、グルコースを分離させた食物繊維であるため、たんぱく質などの栄養素はほとんど含
れない。
【０００４】
また、酵母由来のたんぱく質を大豆や小麦由来のたんぱく質代替として用いることは知
れている（特許文献２）。これらは、たんぱく質を栄養素としての利用を想定しており
血糖や中性脂肪の上昇を抑制などの健康機能性素材として利用する概念はなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１６−１１９８６１号公報
【特許文献２】特開２０１３−５３０８３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、たんぱく質などの栄養素を含み、さらに、血糖値上昇抑制効果または
中性脂肪上昇抑制効果等の健康機能性を有する組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、鋭意研究の中で、酵母（酵母たんぱく質）は、たんぱく質補給とともに
血糖や中性脂肪の上昇抑制といった健康機能も併せ持つことを見出し、本発明を完成さ
た。
【０００８】
（１）酵母菌体または酵母残渣の細胞壁分解酵素処理物である酵母たんぱく質含有組成
。
（２）酵母菌体または酵母残渣の細胞壁分解酵素処理物である血糖値上昇抑制用酵母た
ぱく質含有組成物。
（３）酵母菌体または酵母残渣の細胞壁分解酵素処理物である血中中性脂肪上昇抑制用
母たんぱく質含有組成物。
（４）前記（１）の酵母たんぱく質含有組成物を含む食品であって、食後の血糖値の上
を抑える若しくは食後の血糖値の上昇をゆるやかにする、または食後の血中中性脂肪の
昇を抑える若しくは食後の血中中性脂肪の上昇をゆるやかにすると表示する食品。
（５）酵母菌体または酵母残渣に細胞壁分解酵素処理をする工程を含む、酵母たんぱく
含有組成物の製造方法。 
【発明の効果】
【０００９】
本発明によると、酵母菌体や酵母エキス等を抽出した後の酵母菌体（本発明では「酵母
残渣」ともいう）を細胞壁分解酵素処理した組成物は、酵母が持つ栄養素としてのタンパク質と血糖値上昇抑制効果または中性脂肪上昇抑制効果等の健康機能性を併せ持つ組成物を提供することができる。本発明では、酵母たんぱく質にも、健康機能効果を見出した。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】酵素濃度と反応溶液の粘度・可溶化率の関係
【図２】酵素反応時間と反応溶液の粘度・可溶化率（Brix）の関係
【図３】酵母たんぱく質含有組成物の分子量分布解析結果
【図４】酵母たんぱく質含有組成物の食後血糖値抑制効果
【図５】酵母たんぱく質含有組成物の食後血中中性脂肪抑制効果
【図６】酵母たんぱく質含有組成物のグルコシダーゼ阻害
【図７】酵母たんぱく質含有組成物のリパーゼ阻害および胆汁酸吸着試験
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の酵母たんぱく質含有組成物は、酵母菌体または、酵母残渣を細胞壁分解酵素処
理することで得られる。
【００１２】
本発明で使用する酵母としてはサッカロミセス、エンドミコプシス、サッカロミコデス、ネマトスポラ、キャンディダ、トルロプシス、プレタノミセス、ロドトルラなどの属に属する菌、あるいはいわゆるビール酵母、パン酵母、清酒酵母などが挙げられる。このうち、特に食経験が多いキャンディダ・ユティリス又はサッカロマイセス・セレビシエが望しい。
【００１３】
本発明では、酵母の培養方法に制限はなく、一般的な方法を採用できる。一般的には、酵母を培養する際の培地には、炭素源として、ブドウ糖、酢酸、エタノ−ル、グリセロ−ル、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液等が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸塩などが使用される。リン酸、カリウム、マグネシウム源も過リン酸石灰、リン酸アンモニウム、塩化カリウム、水酸化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等の通常の工業用原料でよく、その他亜鉛、銅、マンガン、鉄イオン等の無機塩を添加する。その他は、ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等を使用しないでも培養可能であるが、これらを添加しても良い。コーンスチーブリカー、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、ペプトン等の有機物を添加しても良い。
【００１４】
培養温度やｐＨ等の培養条件は、特に制限なく適用でき、使用する酵母菌株に合わせて設定し、培養すれば良い。一般的には、培養温度は２０〜４０℃、ｐＨは３．０〜９．０で培養するのが一般的である。培養形式としては、バッチ培養、あるいは連続培養のいずれでも良く、培養時の撹拌、通気等の条件は特に制限なく、一般的な方法でよい。
【００１５】
本発明では、酵母の一般的な培養で得られた酵母菌体をそのまま利用することができる。ビール製造工程でできる酵母菌体なども利用可能である。また、酵母菌体から酵母エキス等の有用成分を抽出した後に残る酵母菌体（酵母残渣）を用いることもできる。酵母エキスや有用成分の抽出方法は、特に制限がないが、酵母に熱水、酸・アルカリ性溶液、自己消化、機械的破砕等のいずれか一つ以上を用いて抽出処理することにより酵母エキスや有用成分を抽出したものを利用することができる。
【００１６】
本発明では、前記のような方法で得られた酵母菌体または酵母残渣に対して、酵母細胞
壁分解酵素を作用させる。酵母細胞壁分解酵素は、グルカナーゼを用いることが好ましい。さらに、プロテアーゼを含まない、又はプロテアーゼ活性を有さないグルカナーゼを用いることが特に好ましい。細胞壁分解酵素がプロテアーゼ活性を有さないものであれば、プロテアーゼを含んでいても、酵素製剤中のプロテアーゼが作用しない温度、ｐＨで細胞壁分解酵素を作用させても良い。プロテアーゼ活性が低い又は有さない酵素としては、Streptomyces属由来の細胞壁分解酵素「デナチームＧＥＬ」（ナガセケムテックス社製）、Talaromyces属由来の「Ｆｉｌｔｅａｓｅ ＢＲＸ」（ＤＳＭ社製）等を例示することができる。なお、プロテアーゼを含まないグルカナーゼを用いた場合、プロテアーゼが作用しない条件でプロテアーゼ処理した場合等には、グルカナーゼ処理後にプロテアーゼ処理をしてもよい。プロテアーゼは、任意のものを使用できる。
【００１７】
酵素処理条件は、特に制限はない。使用する酵素により、当業者であれば、適宜選択できる条件でよい。酵母菌体等の懸濁濃度、酵素濃度等は任意であるが、一般的に酵母菌体等の懸濁濃度は、５〜２０重量％、グルカナーゼの添加濃度は酵母に対し０．００１〜１０％、好ましくは０．０１〜０．５％ でｐＨは中性付近が望ましいが酵素が作用するｐＨ範囲内であれば構わない。反応温度についても至適温度付近が望ましく、特に制限はない。酵素反応時間は任意である。酵素反応の調整は、本発明品を直接摂取する場合、他の食品と混合する場合など、使用態様により、当業者が適宜調整することでよい。例えば、本発明品を直接摂取する場合では、酵母又は酵母残渣に対して、酵素を０．３重量％となるように添加し、５時間反応する。これにより、酵母又は酵母残渣の水への溶解性が高くなるため扱いやすい。
【００１８】
酵素処理後、水に溶解する成分と溶解しない成分を分離してもよいが、分離せず、そのまま本発明の酵母たんぱく質含有組成物として利用してもよい。
【００１９】
本発明のたんぱく質含量は、ケルダール法（総窒素量に窒素−タンパク質換算係数６．２５を乗じることにより算出）により算出した。本発明では、組成物中に５０重量％以上含有することが好ましい。他の成分は任意であるが、食物繊維、ビタミン等を含有してよい。
【００２０】
得られた酵母酵素処理物は、そのまま水等で溶解し、飲料として摂取、又は、例えば打錠等でサプリメントの形としても、一般食品にたんぱく素材として混合して使用又は調理してもかまわない。また、加塩や濃縮などで液体調味料として使用してもかまわない。乾燥する場合は、乾燥方法に制限ない。通常利用されている粉末化する方法としては、スプレードライ、凍結乾燥、ドラムドライなど一般的な粉末化方法を利用することができる
【００２１】
ヒトが摂取する場合の摂取量および摂取回数は、摂取形態、被摂取者の年齢、体重等により異なる。通常は、本発明の組成物として、１日あたり１〜４０ｇの摂取でよい。
【実施例】
【００２２】
以下に、本願発明を具体的に示すが、本願発明は、これに限定されるものではない。
【００２３】
本願における各種測定方法等は以下の方法による。
＜粘度の測定方法＞
粘度は、ｂ型粘度計（東機産業社製、ＴＶＢ−１０Ｍ）を使用し、１０重量％、５０℃および７
０℃の粘度を測定した。
【００２４】
＜分子量分布の測定方法＞
酵素処理した酵母たんぱくの可溶性画分の分子量分布測定はゲル濾過を用いたＨＰＬＣ分析により実施した。酵素処理した酵母たんぱくを乾燥させた乾燥酵母たんぱく組成物２５ｍｇに超純水１ｍＬを加え、ボルテックスで充分振動分散させたのち、遠心分離を行い（１５，０００ｒｐｍ，  ３分）、上清部分を回収した。０．４５μｍフィルター濾過を行った後、下記条件にてＨＰＬＣ分析を行った。
＜ＨＰＬＣ条件＞
ＨＰＬＣ：Agilent  １２００システム
移動相：超純水
カラム：YMC-Pack Diol-300（５μｍ，  ３００×８．０ｍｍＩ．Ｄ．，ナカライテスク社製）
カラムオーブン温度：３０℃
検出器：ＲＩ
流速：０．７ｍＬ／ｍｉｎ．
インジェクト量：５０μＬ
【００２５】
＜可溶化率＞
可溶化率は常圧加熱乾燥法により、酵母たんぱくおよび酵母たんぱく可溶性画分の固形分（全固形分（％）：Ｗ１，  可溶性画分固形分（％）：Ｗ２）を算出し、下記計算式より可溶化率を算出した。
可溶化率（％）＝（１００−Ｗ１）×Ｗ２÷Ｗ１
（前処理方法）
１  サンプルを５ｇ採取、蒸留水４５ｇを加えた。
２  スターラーで３０分間撹拌し、しっかりと分散させた。
３  全固形分測定用のサンプルはそのままサンプリングした。
４  可溶性固形分測定用として、１０ｍＬを１５ｍＬ遠沈管にはかりとり、１０，０００ｒｐｍ（９，０００Ｇ）で１０分間遠心分離し、上清を回収したものをサンプリングした。
（固形分測定方法）
サンプル量２ｇ、海砂使用量を１０ｇとし、１０５℃４時間の常圧加熱乾燥法により、酵母たんぱく全量固形分（％，  Ｗ１）および可溶性画分固形分（％，  Ｗ２）を測定した。
【００２６】
（酵母たんぱく質含有組成物の物性）
食品用ＫＲ酵母（興人ライフサイエンス社製）を乾燥菌体として１ｋｇを水に懸濁して、菌体濃度を１０重量％とした後、４０℃、ｐＨ７．０に調整後、細胞壁分解酵素（ナガセケムテックス社製「グルカナーゼＧＥＬ」）を酵母菌体あたり、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．１、０．３重量％となるよう酵素を添加し、５時間反応させた。反応後、１０％溶液の粘度および可溶化率を測定し、図１のような結果となった。なお図１は、ＫＲ酵母を用いた場合の結果である。
【００２７】
物性の異なる酵母たんぱく質含有組成物は図１に示すように酵素濃度を変更することで製造することができるが、以下に示す通り酵素反応時間を変更することでも製造可能である。酵母菌体に対して、酵素を０．０３重量％添加し、粘度と上清Ｂｒｉｘを測定した結果を図２に示す。本試験において粘度は音叉振動式レオメーターＲＶ−１００００（株式会社エー・アンド・デイ製）を用い、１０％懸濁液のサンプル濃度で５０℃、振幅１．０ｍｍにて測定した。また、懸濁液を１５，０００ｒｐｍで遠心分離した上清溶液のＢｒｉｘを測定することで可溶化率の目安とした。
図１、２の結果から、細胞壁が高分解された低粘性タイプの酵母たんぱく質含有組成物（Ｈ体）を製造するためには、酵素濃度を高め反応時間を短縮する方が製造適性は高いが、低濃度で長時間酵素処理を行うことでも製造可能である。また、細胞壁を低分解し高粘性タイプの酵母たんぱく質含有組成物（Ｌ体）を製造する場合は、高濃度の酵素を作用させると短時間で製造が完了するメリットがあるが、物性確保のための反応時間の設定が難しくなるため、安定的に製造するためには酵素濃度を下げる方が適している。
このように、酵素濃度、酵素反応時間については、製造者が目的に応じ適時選択できる。
【００２８】
得られた酵母たんぱく質含有組成物の分子量分布解析結果の一部を図３に示す。分子量の大きいものから（１）（２）（３）の３本のピークが特徴的である。Ｈ体は、酵素を０．３重量％添加し、５時間反応させたもの、Ｌ体は、酵素を０．０３重量％添加し、５時間反応させたものである。酵素条件が強くなるほど、（１）のピークが減少し、（２）および（３）のピーク割合が上昇していく。
【実施例１】
【００２９】
（酵母たんぱく質含有組成物の製造）
酵母としてＫＲ酵母を、グルカナーゼとして「デナチームＧＥＬ」（ナガセケムテックス社製）を用いた酵母たん白の製造例を下記に示す。水１８Ｋｇにトルラ酵母２ｋｇを懸濁させ、ｐＨを７．０に調整後、デナチームＧＥＬをＫＲ酵母に対し、０．０３重量％（酵母たんぱく質含有組成物Ｌ体）または０．３重量％（酵母たんぱく質含有組成物Ｈ体）となるよう添加し、６０℃で５ｈ撹拌した。反応溶液を９０℃以上で１０分間撹拌し酵素を失活させたのち、スプレードライにて粉末化することで酵母たんぱく質含有組成物を得た。酵母たんぱく質含有組成物中のたんぱく質含量は、ケルダール法により測定し、６２重量％であった。さらに水に再懸濁し、水溶性画分と非水溶性画分（たんぱく質高含有画分）を分離した。
【実施例２】
【００３０】
（酵母たんぱく質含有組成物の食後血糖値の抑制効果）
酵母たんぱく質含有組成物の有効性試験を行った。健常な成人男女にＫＲ酵母、酵母た
んぱく質含有組成物Ｌ体、酵母たんぱく質含有組成物Ｈ体、パインファイバー、βグルカンリッチ大豆粉を下記のプロトコルに従い試験をした。
【００３１】
（試験方法）
ステップ１：負荷食（水２００ｍｌにブドウ糖７５ｇを溶解した食品）を摂取
ステップ２：ステップ１の負荷食にＫＲ酵母を分散したものを摂取
ステップ３：ステップ１の負荷食に酵母たんぱく質含有組成物Ｈ体を分散したもの摂取
ステップ４：ステップ1の負荷食に酵母たんぱく質含有組成物Ｈ体の非水溶性画分を分散したもの摂取
以下 上記と同様に各試料（酵母たんぱく質含有組成物Ｌ、パインファイバー、βグルカ
ンリッチ大豆粉）を分散もしくは溶解させたもの摂取した。
※ステップ間の休止期間は2日以上とした。
（用法・用量）
ステップ２以降の試験では、下記の容量をステップ１の負荷食に溶解もしくは分散させ摂取した。摂取量は、図４に記載。
摂取後、０分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１２０分経過時にランセットにより指先から採血し、血糖値を測定した。
Δ血糖AUC%は下記計算式により算出した。
Δ血糖AUC%＝（被験サンプル添加７５ｇブドウ糖摂取後１２０分までの血糖値の総面積）÷（７５ｇブドウ糖摂取後１２０分までの血糖値の総面積）×１００％
【００３２】
結果は、図４に示す。
酵母そのものも酵素細胞壁を低分解させたものも、高分解させたものもいずれも食後血糖値の上昇抑制効果が認められた。
また、血糖値の上昇抑制効果は、水溶性未分画の酵母たんぱく質含有組成物のみならず、たんぱく質豊富な非水溶性画分いずれでも認められた。
【実施例３】
【００３３】
（食後中性脂肪の抑制効果）
健常な成人男女にＫＲ酵母、酵母たんぱく質含有組成物Ｌ体、酵母たんぱく質含有組成物Ｈ体、パインファイバー、βグルカンリッチ大豆粉を下記のプロトコルに従い試験をした。
【００３４】
（試験食品）
試験食品１  ＫＲ酵母５ｇ
試験食品２  酵母たんぱく質組成物Ｌ体３ｇ
試験食品３  酵母たんぱく質組成物Ｈ体３ｇ
試験食品４  酵母たんぱく質組成物Ｈ体の不溶性画分２．４ｇ
試験食品５  パインファイバー６ｇ
試験食品６  βグルカンリッチ大豆粉３ｇ
（試験方法）
ステップ１：総脂質４６．４ｇの食事メニュー＋水２００ｇ
ステップ２：ステップ１の食事メニュー＋試験食品１を水２００ｇに懸濁したもの
ステップ３：ステップ１の食事メニュー＋試験食品２を水２００ｇに懸濁したもの
ステップ４：ステップ１の食事メニュー＋試験食品３を水２００ｇに懸濁したもの
ステップ５：ステップ１の食事メニュー＋試験食品４を水２００ｇに懸濁したもの
ステップ６：ステップ１の食事メニュー＋試験食品５を水２００ｇに溶解したもの
ステップ７：ステップ１の食事メニュー＋試験食品６を水２００ｇに懸濁したもの
各ステップ間で２４時間以上の休止期間を設ける
なお、総脂質４６．４ｇの食事メニューの構成は下記の通り
冷凍ハンバーグ１個（脂質：２５．１ｇ）
バターロール２個（脂質：１６．０ｇ）
フライドポテト１袋（１００ｇ）（脂質：５．３ｇ）
【００３５】
摂取後、１、２、３、４、５、６時間経過時にランセットにより指先から採血し、血中トリグリセライド（ＴＧ）量を測定した。
ΔＴＧ値ＡＵＣ％は下記計算式により算出した。
ΔＴＧ値ＡＵＣ％＝（高脂肪食＋被験サンプル摂取後６時間までの血中ＴＧの総面積）÷（高脂肪食摂取後６時間までの血中ＴＧの総面積）×１００％
有効性試験結果は図5の通りである。酵母そのものも酵素細胞壁を低分解させたものも、
高分解させたものもいずれも食後中性脂肪の上昇抑制効果が認められた。
また、中性脂肪値の上昇抑制効果は、分画操作を行っていない酵母たんぱく質含有組成物のみならず、たんぱく質豊富な非水溶性画分いずれでも認められた。なおグラフ中の０．０３％５ｈ、０．３％５ｈは、酵素添加濃度と反応時間を表す。酵素処理をした酵母たんぱく質組成物は、たんぱく質と細胞壁の溶解成分との相乗効果により、より強い中性脂肪の上昇抑制効果が認められた。
【実施例４】
【００３６】
（酵母たんぱく質含有組成物のα-グルコシダーゼ阻害効果）
酵母たんぱく質含有組成物の血糖抑制効果の作用機序を解明するためにα-アミラーゼ阻
害効果およびα-グルコシダーゼ阻害効果を下記のプロトコルに従い試験をした。
【００３７】
（α-アミラーゼ阻害）
＜酵素液＞
ブタ膵臓由来のα−アミラーゼ（ＳＩＧＭＡ社製）を５０ｍＭ  ＮａＣｌ入り  ０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６．９）で５Ｕ／ｍＬになるように溶解したものを使用した。
＜検体溶液＞
ポジティブコントロールとしてアカルボース（富士フィルム和光純薬社製）を用いた。
検体溶液は下記の通りになるように５０ｍＭ  ＮａＣｌ入り  ０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６．９）に溶解もしくは分散したものを使用した。
酵母、酵母含有組成物、パインファイバー：１００ｍｇ／ｍＬ
アカルボース：１ｍｇ／ｍＬ
＜基質溶液＞
１％可溶性デンプン／５０ｍＭ ＮａＣｌ入り０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６．９）
＜操作手順＞
１  検体溶液１００μＬと基質溶液１００μＬを混合。
２  酵素液１００μＬ加え、３７℃で正確に１０分間浸とう混合。
３  ０．５ｍｏｌ／Ｌの酢酸水溶液１ｍＬを加え、反応を停止。
４  １５，０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を回収。
５  回収した上清溶液５００μＬに０．１５％ヨウ素−１．５％ヨウ化カリウム水溶液を５００μＬ加え混合。
６  １５，０００ｒｐｍで２分間遠心分離。
７  Ａｂｓ７００ｎｍを測定。
８  検量線より残存デンプン濃度Ｘを求めた。
また、２の工程において酵素液を添加せず、３の工程後に酵素液を添加しＡｂｓ７００ｎｍを算出、検量線よりデンプン濃度Ｃを求めた。
阻害活性は以下の式にて算出した。
阻害率（％）＝１００−（１−Ｃ／Ｘ）×１００
【００３８】
（α-グルコシダーゼ阻害）
＜粗酵素液＞
粗酵素液はラット腸管アセトンパウダー（ＳＩＧＭＡ社製）１．５ｇを０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０）１５ｍＬに懸濁、氷水中でホモジナイズ後、遠心分離した上清液をさらに０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０）で２倍希釈したものを使用した。
＜検体溶液＞
ポジティブコントロールとしてアカルボース（富士フィルム和光純薬社製）を用いた。
検体溶液は下記の通りになるように０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０）に溶解もしくは分散
したものを使用した。
酵母、酵母含有組成物、パインファイバー：１００ｍｇ／ｍＬ
アカルボース：１ｍｇ／ｍＬ
＜基質溶液＞
基質には４−ニトロフェニル−α−Ｄ−グルコピラノシド（東京化成工業社製）を用い、０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０）で１０ｍＭ濃度になるように溶解したものを使用した。
＜操作手順＞
１  検体溶液１００μＬと基質溶液１００μＬを混合。
２  酵素液５０μＬ加え、３７℃で正確に３０分間浸とう混合。
３  ０．２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液２５０μＬを加え反応を停止
４  １５，０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を回収。
５  上清のＡｂｓ４１５ｎｍを測定。
２の工程において酵素液を添加せず、３の工程後に酵素液を添加しＡｂｓ４１５ｎｍを算出したものを盲検とし５との差値を算出、検量線よりｐ−ニトロフェノール濃度Ｘを求めた。
上記工程の基質溶液の代わりに、０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０）を用い、ｐ−ニトロフェノール濃度Ｃを求めた。
阻害活性は以下の式にて算出した。
阻害率（％）＝（１−Ｘ／Ｃ）×１００
【００３９】
酵母、酵母たんぱく質含有組成物を用いたグルコシダーゼ阻害効果は図6の通りである。
酵母、酵母たんぱく質含有組成物でグルコシダーゼ阻害効果が認められ、酵母および酵母たんぱく質含有組成物の有する食後血糖値の上昇抑制効果の作用機序のひとつとしてグルコシダーゼ阻害が推察された。
【実施例５】
【００４０】
（酵母たんぱく質含有組成物のリパーゼ抑制効果）
酵母たんぱく質含有組成物の血糖抑制効果の作用機序を解明するためにリパーゼ阻害効果および胆汁酸吸着試験を下記のプロトコルに従い試験した。
【００４１】
（リパーゼ阻害活性）
＜酵素液＞
ブタ膵臓リパーゼ（ＳＩＧＭＡ製）を０．１Ｍ  トリス緩衝液（０．１Ｍ  ＮａＣｌを含む０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液，  ｐＨ７．０）で１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解したものを使用した。
＜検体溶液＞
ポジティブコントロールとしてオルリスタット（東京化成工業社製）を用いた。
検体濃度は下記の通りになるように０．１Ｍ  トリス緩衝液（０．１Ｍ  ＮａＣｌを含む０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液，  ｐＨ７．０）に溶解もしくは分散したものを使用した。
酵母、酵母含有組成物、パインファイバー：１００ｍｇ／ｍＬ
オリルスタット：０．１ｍｇ／ｍＬ
＜基質溶液＞
基質溶液は下記の配合で作成後、超音波で均一化したものを使用した。
オリーブオイル（味の素社製）：２ｇ
大豆レシチン（富士フィルム和光純薬社製）：２５０ｍｇ
コール酸ナトリウム（富士フィルム和光純薬社製）：１００ｍｇ
０．１Ｍ  トリス緩衝液（０．１Ｍ  ＮａＣｌを含む０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液，ｐＨ７．０）で５０ｍＬにメスアップ
＜操作手順＞
１  検体溶液１００μＬと基質溶液１００μＬを混合。
２  酵素液５０μＬ加え、３７℃で正確に６０分間浸とう混合。
３  沸騰水中で２分静置の後、０．２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液５００μＬを加え反応を停止。次いで      ０．１Ｍ  トリス緩衝液を５００μＬ加え希釈。
４  １５，０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清を回収。
５  ＮＥＦＡ  Ｃ−テストワコー（富士フィルム和光純薬株式会社製）のプロトコルに従い、反応      させた上清液のＡｂｓ５５０ｎｍを測定
６  １の工程においてあらかじめ熱湯中で失活させた酵素液を用い同様の操作を行い、Ａｂｓ５５０ｎｍを算出したものを盲検とし５との差値を算出、検量線よりオレイン酸換算の遊離脂肪酸濃度Ｘを求めた。
上記工程の基質溶液の代わりに、０．１Ｍ  トリス緩衝液（０．１Ｍ  ＮａＣｌを含む０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩
衝液，  ｐＨ７．０）を用いオレイン酸換算の遊離脂肪酸濃度Ｃを求めた。
阻害活性は以下の式にて算出した。
阻害率（％）＝（１−Ｘ／Ｃ）×１００
【００４２】
（胆汁酸吸着試験）
＜検体＞
ポジティブコントロールとしてコレスチラミン（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）を用いた。
試料の添加量は下記の通り。
コレスチラミン：２５  ｍｇ
酵母、酵母含有組成物、パインファイバー：２００  ｍｇ
＜操作手順＞
１  １５ｍｌ遠沈管に試料を量り取り、水５  ｍｌに懸濁。
２  ０．２ｍＭ  コール酸ナトリウム溶液  ５ｍｌを加え、懸濁（０．２Ｍリン酸バッファー（ｐＨ６．８）を      使用、終濃度０．１ｍＭコール酸ナトリウム／０．１Ｍリン酸バッファーとなる）。
３  振とう機にて転倒混和  （３７℃，  ２ｈ，  １００ｒｐｍ）。
４  ２ｍｌをエッペンに取り、遠心分離（１５０００ｒｐｍ，  １０ｍｉｎ）。
５  上清を回収し、フィルター濾過（０．４５μｍ）。
６  総胆汁酸−テストワコー（富士フィルム和光純薬株式会社製）のプロトコルに従い、上      清のＡｂｓ  ５６０ｎｍを測定。
７  試料のリン酸バッファー懸濁液（コール酸ナトリウムを含まない）を用い工程３以降の同様の操作を行ったものを盲検とし工程５との差値を算出、検量線より遊離胆汁酸濃度Ｘ（ｍＭ）を求めた。
胆汁酸吸着率は以下の式にて算出した。
胆汁酸吸着率（％）＝（１−Ｘ／０．１）×１００
【００４３】
酵母、酵母たんぱく質含有組成物を用いたリパーゼ阻害効果は図７の通りである。酵母及び酵母たんぱく質含有組成物いずれにおいてもリパーゼ阻害が認められた。さらに、胆汁酸吸着試験においても酵母および酵母たんぱく質含有組成物には効果が認められたことから、酵母および酵母たんぱく質含有組成物の有する食後中性脂肪上昇抑制効果の作用機序として酵母素材が胆汁酸を吸着することで油脂のミセル化形成を阻害し、リパーゼを効きにくくしているものが一要因であると推察された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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