(57)【要約】      （修正有）【課題】５’末端、３’末端、または５’末端および３’末端に改変を含有する核酸に関し、改変核酸を製造するために使用され得る化合物が開示される。改変核酸は、非改変核酸と比較して、発現の改善、より低い免疫原性、および安定性の改善を有する。【解決手段】式Ｉの化合物またはその塩。2020183399.tif 000188【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物またはその塩
【化１２２】
2020183399.tif 000163
であって、式中、
Ｚ１が、
【化１２３】
2020183399.tif 000164
、キャップ０、キャップ１、
【化１２４】
2020183399.tif 000165
であり、ただしＺ１が、
【化１２５】
2020183399.tif 000166
、キャップ０、またはキャップ１である場合、−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方と
もが−ＯＨであることはなく、かつＡ２が無ではなく；
Ｚ２が、無、または−Ｏ−、−Ｓ−、任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で
置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテ
ロアリール、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアルケ
ニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、
【化１２６】
2020183399.tif 000167
からなる群から選択される結合部分であり；
Ａ１およびＡ３が独立して、無、ＮＨ、Ｓ、およびＯからなる群から選択され；
Ａ２が、無、または＞ＣＲ６Ｒ７、＞ＮＲ６、＞ＮＮＲ６Ｒ７、＞ＮＯＲ６、＞Ｓ、お
よび＞Ｏからなる群から選択され；
Ｙが、無、または任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で置換されたアルケニ
ル、任意選択で置換されたアルキニル、−（ＣＨ２）ｎＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯ
Ｒ１５、および−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＮＲ１２からなる群から選択される結合部分であ
り；
Ｒ１が、Ｈ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアル
ケニル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、および
任意選択で置換されたヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ２が、Ｈ、−ＯＨ、任意選択で置換されたアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、お
よび−ＮＲ１２Ｒ１３からなる群から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８が独立して、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、ポリアミン
、ＰＥＧ、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１２Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１４Ｃ（Ｏ）Ｒ１５
、−（ＣＨ２）ｎ１ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ
（Ｏ）Ｒ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（
Ｏ）−（ＮＲ１２）２−Ｃ（Ｏ）−Ｘ２、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（Ｏ）−［ＮＲ１２
−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ３］１〜３−Ｘ２からなる群から選択されるか、またはＲ６お
よびＲ８が一緒になって環を形成し、ここで該環が、任意選択で置換され、かつ１０〜８
０個の環原子を含有し、その中の１０〜４０個の環原子がヘテロ原子であってもよく、ま
たはＲ６およびＲ７が一緒になって３〜８員環を形成し、ここで該環が、任意選択で置換
され、かつその中の１〜６個の環原子がヘテロ原子であってもよく；
Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６が独立して、Ｈ、任意
選択で置換された低級アルキル、および任意選択で置換されたアシルからなる群から選択
され；
Ｒ９が、Ｈおよび任意選択で置換された低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１０が、Ｈ、−ＮＲ１２Ｒ１３、および−ＯＲ１６からなる群から選択され；
ｎが、１〜４であり；
ｎ１が、０〜１０であり；
ｎ２が、１〜１２であり；
ｎ３が、１〜８であり；
Ｘが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、および任意選択で置換されたアルカンジイルからなる群から選択
され；
Ｘ１が、
【化１２７】
2020183399.tif 000168
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４が独立して、Ｈおよび−ＯＲ１６からなる群から選択されるか、または
Ｒ３およびＲ４が一緒になってＯ−Ｑ−Ｏを形成し；
Ｑが、−ＣＨ２−および−Ｃ（Ｍｅ）２−からなる群から選択され；
Ｘ２が、親和性部分および検出部分からなる群から選択され；並びに
Ｘｎが、核酸塩基である、化合物またはその塩。
【請求項２】
以下の式
【化１２８】
2020183399.tif 000169
を有し、式中、
変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下の式
【化１２９】
2020183399.tif 000170
を有し、式中、
変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下の式
【化１３０】
2020183399.tif 000171
を有し、式中、
変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
以下の式
【化１３１】
2020183399.tif 000172
を有し、式中、
＊Ｚ１が、
【化１３２】
2020183399.tif 000173
、キャップ０、およびキャップ１からなる群から選択され、ただしＡ２が無でないか、ま
たは−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨであることはなく、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
【化１３３】
2020183399.tif 000174
からなる群から選択される構造を含む、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
以下の式
【化１３４】
2020183399.tif 000175
を有し、式中、
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８が、−ＯＨであり、
Ａ２が、無であり、
Ｘｎが、核酸塩基であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
【化１３５】
2020183399.tif 000176
からなる群から選択される構造を含む、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
以下の式
【化１３６】
2020183399.tif 000177
を有し、式中、
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８が、−ＯＨであり、
Ａ２が、無であり、
Ｘｎが、核酸塩基であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
以下の式
【化１３７】
2020183399.tif 000178
を有し、式中、
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８が、−ＯＨであり、
Ａ２が、無であり、
Ｘｎが、核酸塩基であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
式ＩＸの化合物またはその塩
【化１３８】
2020183399.tif 000179
であって、式中、
Ｚが、−ＯＨ、
【化１３９】
2020183399.tif 000180
からなる群から選択され、
ｎ４が、０〜２であり、
他の変数が、式１で定義されるとおりである、化合物またはその塩。
【請求項１２】
【化１４０】
2020183399.tif 000181
からなる群から選択される構造を含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
式Ｘの化合物またはその塩
【化１４１】
2020183399.tif 000182
であって、式中、
Ｚが、−ＯＨ、
【化１４２】
2020183399.tif 000183
からなる群から選択され、
ｎ４が、０〜２であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、化合物またはその塩。
【請求項１４】
【化１４３】
2020183399.tif 000184
からなる群から選択される構造を含む、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
式ＸＩの化合物またはその塩
【化１４４】
2020183399.tif 000185
であって、式中、
Ｚが、−ＯＨ、
【化１４５】
2020183399.tif 000186
からなる群から選択され、
ｎ４が、０〜２であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、化合物またはその塩。
【請求項１６】
【化１４６】
2020183399.tif 000187
からなる群から選択される構造を含む、請求項１５に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景技術
単離された核酸、特にタンパク質をコードする核酸は、様々な臨床適用の魅力的な候補
物質である。特に、ｍＲＮＡなどの、タンパク質をコードするＲＮＡは、臨床適用の可能
性のある、いくつかの利点を提供する。例えば、ＲＮＡを、インビボ、インビトロ、また
は生体外で細胞にトランスフェクトして、疾患の治療または診断のための所望の療法用ま
たは診断用タンパク質の発現を誘発することができる。しかしながら、ＲＮＡ療法の可能
性は、ＲＮＡの安定性および半減期により、ならびにコードされるタンパク質の発現レベ
ルにより限定される。
【０００２】
天然のｍＲＮＡは５’キャップ構造を含有し、これはＲＮＡの安定化を補助し、真核生
物遺伝子発現に必須である（Shuman, S. et al Mol. Microbiol. 1995, 17, 405-410）。
これらのｍＲＮＡはさらに、３’ポリＡ尾部も含有する。両方の改変は、コードされるタ
ンパク質の翻訳を安定化し、改善する。５’キャップ構造は、真核生物メッセンジャーＲ
ＮＡ（ｍＲＮＡ）の５’末端に見られ、多くのウイルスＲＮＡは、５’−５’三リン酸結
合によりプレｍＲＮＡの５’末端ヌクレオシドに結合したＮ７−メチルグアノシンヌクレ
オシドからなる（Shatkin, A. J. Cell 1976, 2, 645-53、Shuman, S. Prog. Nucleic Ac
id Res. Mol. Biol. 2001, 66, 1-40、Decroly, E. et al PLoS Pathog. 2011, 7, e1002
059）。このキャップ構造は、最終的にｍＲＮＡ翻訳をもたらす多くの役割を果たす。ま
た、ＲＮＡキャッピングは、ＲＮＡスプライシングおよび核からのエクスポートなどの他
のプロセスのために、ならびに細胞の生来の免疫機構によるｍＲＮＡの認識を避けるため
に重要である（Daffis, S. et al Nature 2010, 468, 452-6、Zust, R. et al Nat. Immu
nol. 2011, 12, 137-43）。いくつかの合成キャップアナログが説明されている。例えば
、国際公開第２００９／１４９２５３号パンフレット、同第２０１１／０１５３４７号パ
ンフレットを参照のこと。
【０００３】
合成ｍＲＮＡは典型的に、ＲＮＡポリメラーゼおよびＤＮＡ鋳型を用いる酵素合成、続
いて５’キャップおよび３’末端の酵素付加により調製される（Peyrane, F. et al Nucl
eic Acids Res. 2007, 35, e26）。しかしながら、プロセスは高価で制御困難であり、そ
れゆえ、商業的スケールでの生産に望ましくない。
【０００４】
したがって、効率的に生産することができ、ＲＮＡによりコードされる生成物（例えば
タンパク質）の発現を改善し、免疫原性を低下させ、および／または安定性を改善する、
５’末端、３’末端、または５’末端および３’末端で改変されたＲＮＡが求められてい
る。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、５’末端、３’末端、または５’末端および３’末端の両方に改変を含有す
る核酸分子（例えばＲＮＡおよびＤＮＡ分子）に関する。核酸分子は好ましくは、生成物
、例えばポリペプチドまたは核酸をコードするＲＮＡ分子であり、より好ましくはＣＲＩ
ＳＰＲゲノム編集技術のためのＣａｓ９タンパク質をコードするｍＲＮＡ、および／また
はＣＲＩＳＰＲゲノム編集技術のためのｓｇＲＮＡ（またはｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒ
ＲＮＡ）の３’末端を含む、ｍＲＮＡである。
【０００６】
一態様では、本開示は、式Ｉの化合物およびその塩（好ましくは薬学的に許容される塩
）：
【０００７】
【化１】
2020183399.tif 000002
に関し、式中、
Ｚ１は、
【０００８】
【化２】
2020183399.tif 000003
、キャップ０、キャップ１、
【０００９】
【化３】
2020183399.tif 000004
であり；
ただしＺ１が
【００１０】
【化４】
2020183399.tif 000005
、キャップ０、またはキャップ１である場合、−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方と
もが−ＯＨであることはないか、またはＡ２は無ではなく；
Ｚ２は、無、または−Ｏ−、−Ｓ−、任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で
置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテ
ロアリール、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアルケ
ニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、
【００１１】
【化５】
2020183399.tif 000006
からなる群から選択される結合部分であり；
Ａ１およびＡ３は独立して、無、ＮＨ、Ｓ、およびＯからなる群から選択され；
Ａ２は、無、または＞ＣＲ６Ｒ７、＞ＮＲ６、＞ＮＮＲ６Ｒ７、＞ＮＯＲ６、＞Ｓ、お
よび＞Ｏからなる群から選択され；
Ｙは、無、または任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で置換されたアルケニ
ル、任意選択で置換されたアルキニル、−（ＣＨ２）ｎＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯ
Ｒ１５、および−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＮＲ１２からなる群から選択される結合部分であ
り；
Ｒ１は、Ｈ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアル
ケニル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、および
任意選択で置換されたヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、−ＯＨ、任意選択で置換されたアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、お
よび−ＮＲ１２Ｒ１３からなる群から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は独立して、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、ポリアミン
、ＰＥＧ、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１２Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１４Ｃ（Ｏ）Ｒ１５
、−（ＣＨ２）ｎ１ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ
（Ｏ）Ｒ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（
Ｏ）−（ＮＲ１２）２−Ｃ（Ｏ）−Ｘ２、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（Ｏ）−［ＮＲ１２
−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ３］１〜３−Ｘ２からなる群から選択されるか、またはＲ６お
よびＲ８は一緒になって環を形成し、ここで該環は任意選択で置換され、かつ１０〜８０
個の環原子を含有し、その中の１０〜４０個の環原子はヘテロ原子であってもよく、もし
くはＲ６およびＲ７は一緒になって３〜８員環を形成し、ここで該環は任意選択で置換さ
れ、かつその中の１〜６個の環原子はヘテロ原子であってもよく；
Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６は独立して、Ｈ、任意
選択で置換された低級アルキル、および任意選択で置換されたアシルからなる群から選択
され；
Ｒ９は、Ｈおよび任意選択で置換された低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｈ、−ＮＲ１２Ｒ１３、および−ＯＲ１６からなる群から選択され；
ｎは、１〜４であり；
ｎ１は、０〜１０であり；
ｎ２は、１〜１２であり；
ｎ３は、１〜８であり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、および任意選択で置換されたアルカンジイルからなる群から選択
され；
Ｘ１は、
【００１２】
【化６】
2020183399.tif 000007
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈおよび−ＯＲ１６からなる群から選択されるか、または
Ｒ３およびＲ４は一緒になってＯ−Ｑ−Ｏを形成し；
Ｑは、−ＣＨ２−および−Ｃ（Ｍｅ）２−からなる群から選択され；
Ｘ２は、親和性部分および検出部分からなる群から選択され；
Ｘｎは、核酸塩基である。
【００１３】
いくつかの態様では、式Ｉの化合物は、５’末端および３’末端の両方で改変され、式
ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶの化合物、またはそれらの塩（好ましくは薬学的に許容される塩）、
【００１４】
【化７】
2020183399.tif 000008
である。式ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶの変数は、式Ｉで定義されるとおりであり、ただし
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨであることはないか、またはＡ２は
無ではない。いくつかの実施形態では、上記化合物は、式ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化
合物であり、ただし−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨであることはな
いか、またはＡ２は無ではない。
【００１５】
他の態様では、式Ｉの化合物は、５’末端で改変され、３’末端では改変されず、式Ｖ
Ｉ、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩの化合物、またはそれらの塩（好ましくは薬学的に許容される
塩）、
【００１６】
【化８】
2020183399.tif 000009
である。式ＶＩ、ＶＩＩ、およびＶＩＩＩの変数は、式Ｉで定義されるとおりであり、た
だし−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８は両方とも−ＯＨであり、かつＡ２は無である。
【００１７】
ある特定の好ましい実施形態では、上記化合物は、式Ｉ〜ＩＶおよびＶＩ〜ＶＩＩＩの
いずれかの化合物であり、式中、Ｙは、アルキル結合部分、好ましくは低級アルキル結合
部分、例えば（−ＣＨ２−）であり；Ｒ１は、置換アリールまたは置換ヘテロアリール、
例えばフェニルで置換されたアリールまたはフェニルで置換されたヘテロアリールである
。特に好ましい実施形態では、−Ｙ−Ｒ１は、
【００１８】
【化９】
2020183399.tif 000010
であってもよい。
【００１９】
他の態様では、式Ｉの化合物は、３’末端で改変され、５’末端では改変されず、式Ｖ
の化合物またはその塩（好ましくは薬学的に許容される塩）、
【００２０】
【化１０】
2020183399.tif 000011
である。式Ｖで、＊Ｚ１は、
【００２１】
【化１１】
2020183399.tif 000012
、キャップ０、およびキャップ１からなる群から選択され、他の変数は、式Ｉで説明され
るとおりであり、ただしＡ２は無ではないか、または−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の
両方ともが−ＯＨであることはない。
【００２２】
式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物は、核酸塩基、Ｘｎを含有し、これは任意の所望の核酸塩基、
例えばアデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、または改変核酸塩基、例えばシュード
ウラシルであってもよい。好ましい核酸塩基は、アデニンである。
【００２３】
式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物中のＲＮＡは、任意の所望のＲＮＡ分子であってもよいが、好
ましいものは、生成物、例えばタンパク質をコードする。
【００２４】
他の態様では、本開示は、本明細書で開示される５’末端改変核酸（例えばＲＮＡ）を
調製するために使用され得るグアノシンまたはプリン誘導体に関する。特定の態様では、
本開示は、式ＩＸ、Ｘ、ＸＩの化合物、またはそれらの塩（薬学的に許容される塩）、
【００２５】
【化１２】
2020183399.tif 000013
に関する。式ＩＸ、Ｘ、およびＸＩの各々で、
Ｚは−ＯＨ、
【００２６】
【化１３】
2020183399.tif 000014
からなる群から選択され、
ｎ４は、０〜２であり、他の変数は式Ｉで定義されるとおりである。本態様のある特定
の好ましい実施形態では、Ｙは、アルキル結合部分、好ましくは低級アルキル結合部分、
例えば（−ＣＨ２−）であり；Ｒ１は、置換アリールまたは置換ヘテロアリール、例えば
フェニルで置換されたアリールまたはフェニルで置換されたヘテロアリールである。特に
好ましい実施形態では、−Ｙ−Ｒ１は、
【００２７】
【化１４】
2020183399.tif 000015
であってもよい。
【００２８】
また、本発明は、本明細書で開示される化合物の使用方法および製造方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
発明の詳細な説明
本発明は以下に詳細に説明されるが、本明細書で説明する特定の方法論、プロトコル、
および試薬は変動することができるので、本発明はこれらに限定されないことが理解され
るべきである。また、本明細書で使用する用語は特定の実施形態を説明する目的のための
みであり、本発明の範囲を限定するとは意図されず、本発明の範囲は付属の特許請求の範
囲によってのみ限定されることが理解されるべきである。別に定義されない限り、本明細
書で使用する全ての技術用語および科学用語は、当業者により通常理解されるのと同じ意
味を有する。
【００３０】
本開示は、５’末端、３’末端、または５’末端および３’末端の両方に改変を含有す
る核酸分子（例えばＲＮＡおよびＤＮＡ分子）に関する。上記核酸分子は好ましくは、生
成物、例えばポリペプチドまたは核酸をコードするＲＮＡ分子であり、より好ましくはｍ
ＲＮＡである。本明細書で開示されるように改変したＲＮＡまたはｍＲＮＡは、任意の所
望の方法、例えば酵素合成または化学合成を用いて生産することができる。５’末端改変
は、ＲＮＡによりコードされる生成物（例えばタンパク質）の発現を増大させ、免疫原性
を低下させ、かつ／またはＲＮＡの安定性を改善する、グアノシンまたはプリンに基づく
キャップ構造を含む。３’末端改変は、ＲＮＡの末端リボースの３’および２’位置で、
例えばこれらの位置の間に環原子を挿入すること、または１つもしくは両方のヒドロキシ
ル基を他の置換基で置換することにより、シス−ジオールを改変して、ＲＮＡによりコー
ドされる生成物（例えばタンパク質）の発現を増大させ、かつ／または（例えば分解速度
を遅延させることにより）ＲＮＡの安定性を改善することを含む。所望の場合、３’末端
改変は、様々な官能部分、例えば親和性部分または検出部分を含むことができる。かかる
部分を含有する化合物は、例えば画像化、生化学分析、および生体共役反応に特に有用で
ある。
【００３１】
本明細書で説明および例示するように、本明細書で開示されるグアノシンまたはプリン
に基づく５’末端キャップ構造を含有するＲＮＡを調製した。これらの改変ＲＮＡは、ｅ
ＩＦ４Ｅに結合すること、および細胞内で翻訳されることが示された。また、３’末端Ｒ
ＮＡが調製され、改変されていないＲＮＡと比較して半減期および発現の増大を有した。
【００３２】
一態様では、本開示は、５’末端キャップ構造、３’末端改変、または５’末端キャッ
プ構造および３’末端改変を含有するＲＮＡ分子に関する。かかるＲＮＡ分子は、式Ｉの
化合物およびその塩（好ましくは薬学的に許容される塩）、
【００３３】
【化１５】
2020183399.tif 000016
であり、式中、
Ｚ１は、
【００３４】
【化１６】
2020183399.tif 000017
、キャップ０、キャップ１、
【００３５】
【化１７】
2020183399.tif 000018
であり；
ただしＺ１が
【００３６】
【化１８】
2020183399.tif 000019
、キャップ０、またはキャップ１である場合、−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方と
もが−ＯＨであることはないか、またはＡ２は無ではなく；
Ｚ２は、無、または−Ｏ−、−Ｓ−、任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で
置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテ
ロアリール、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアルケ
ニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、
【００３７】
【化１９】
2020183399.tif 000020
からなる群から選択される結合部分であり；
Ａ１およびＡ３は独立して、無、ＮＨ、Ｓ、およびＯからなる群から選択され；
Ａ２は、無、または＞ＣＲ６Ｒ７、＞ＮＲ６、＞ＮＮＲ６Ｒ７、＞ＮＯＲ６、＞Ｓ、お
よび＞Ｏからなる群から選択され；
Ｙは、無、または任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で置換されたアルケニ
ル、任意選択で置換されたアルキニル、−（ＣＨ２）ｎＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯ
Ｒ１５、および−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＮＲ１２からなる群から選択される結合部分であ
り；
Ｒ１は、Ｈ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアル
ケニル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、および
任意選択で置換されたヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、−ＯＨ、任意選択で置換されたアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、お
よび−ＮＲ１２Ｒ１３からなる群から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は独立して、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、ポリアミン
、ＰＥＧ、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１２Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１４Ｃ（Ｏ）Ｒ１５
、−（ＣＨ２）ｎ１ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ
（Ｏ）Ｒ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（
Ｏ）−（ＮＲ１２）２−Ｃ（Ｏ）−Ｘ２、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（Ｏ）−［ＮＲ１２
−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ３］１〜３−Ｘ２からなる群から選択されるか、またはＲ６お
よびＲ８は一緒になって環を形成し、ここで該環は、任意選択で置換され、かつ１０〜８
０個の環原子を含有し、その中の１０〜４０個の環原子はヘテロ原子であってもよく、も
しくはＲ６およびＲ７は一緒になって３〜８員環を形成し、ここで該環は、任意選択で置
換され、かつその中の１〜６個の環原子はヘテロ原子であってもよく；
Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６は独立して、Ｈ、任意
選択で置換された低級アルキル、および任意選択で置換されたアシルからなる群から選択
され；
Ｒ９は、Ｈおよび任意選択で置換された低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｈ、−ＮＲ１２Ｒ１３、および−ＯＲ１６からなる群から選択され；
ｎは、１〜４であり；
ｎ１は、０〜１０であり；
ｎ２は、１〜１２であり；
ｎ３は、１〜８であり；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、および任意選択で置換されたアルカンジイルからなる群から選択
され；
Ｘ１は、
【００３８】
【化２０】
2020183399.tif 000021
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈおよび−ＯＲ１６からなる群から選択されるか、または
Ｒ３およびＲ４は一緒になってＯ−Ｑ−Ｏを形成し；
Ｑは、−ＣＨ２−および−Ｃ（Ｍｅ）２−からなる群から選択され；
Ｘ２は、親和性部分および検出部分からなる群から選択され；
Ｘｎは、核酸塩基である。
【００３９】
ある特定の好ましい実施形態では、上記化合物は式Ｉの化合物であり、式中、
Ｚ１は、
【００４０】
【化２１】
2020183399.tif 000022
であり；
Ｙは、アルキル結合部分、好ましくは低級アルキル結合部分、例えば（−ＣＨ２−）で
あり；
Ｒ１は、置換アリールまたは置換ヘテロアリール、例えばフェニルで置換されたアリー
ルまたはフェニルで置換されたヘテロアリールである。特に好ましい実施形態では、−Ｙ
−Ｒ１は、
【００４１】
【化２２】
2020183399.tif 000023
であってもよい。
【００４２】
他の好ましい実施形態では、上記化合物は、式Ｉの化合物であり、式中、−Ａ１−Ｒ５
および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨであることはないか、またはＡ２は無ではない。
別の好ましい実施形態では、−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨである
ことはなく、かつＡ２は無ではない。
【００４３】
いくつかの態様では、式Ｉの化合物は、５’末端および３’末端の両方で改変され、式
ＩＩ、ＩＩＩ、もしくはＩＶの化合物、またはそれらの塩、
【００４４】
【化２３】
2020183399.tif 000024
である。式ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶの変数は、式Ｉで定義されるとおりであり、ただし
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨであることはないか、またはＡ２は
無ではない。いくつかの実施形態では、上記化合物は、式ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化
合物であり、ただし−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨであることはな
いか、またはＡ２は無ではない。
【００４５】
この態様のある特定の好ましい実施形態では、Ｙは、アルキル結合部分、好ましくは低
級アルキル結合部分、例えば（−ＣＨ２−）であり；Ｒ１は、置換アリールまたは置換ヘ
テロアリール、例えばフェニルで置換されたアリールまたはフェニルで置換されたヘテロ
アリールである。特に好ましい実施形態では、−Ｙ−Ｒ１は、
【００４６】
【化２４】
2020183399.tif 000025
であってもよい。
【００４７】
他の態様では、式Ｉの化合物は、５’末端で改変され、３’末端では改変されず、式Ｖ
Ｉ、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩの化合物、またはそれらの塩、
【００４８】
【化２５】
2020183399.tif 000026
である。式ＶＩ、ＶＩＩ、およびＶＩＩＩの変数は、式Ｉで定義されるとおりであり、た
だし−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８は両方とも−ＯＨであり、かつＡ２は無である。こ
の態様のある特定の好ましい実施形態では、Ｙは、アルキル結合部分、好ましくは低級ア
ルキル結合部分、例えば（−ＣＨ２−）であり；Ｒ１は、置換アリールまたは置換ヘテロ
アリール、例えばフェニルで置換されたアリールまたはフェニルで置換されたヘテロアリ
ールである。特に好ましい実施形態では、−Ｙ−Ｒ１は、
【００４９】
【化２６】
2020183399.tif 000027
であってもよい。
【００５０】
他の態様では、式Ｉの化合物は、３’末端で改変され、５’末端では改変されず、式Ｖ
の化合物またはその塩、
【００５１】
【化２７】
2020183399.tif 000028
である。式Ｖで、＊Ｚ１は、
【００５２】
【化２８】
2020183399.tif 000029
、キャップ０、およびキャップ１からなる群から選択され、他の変数は、式Ｉで説明され
るとおりであり、ただしＡ２は無ではないか、または−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の
両方ともが−ＯＨであることはない。
【００５３】
式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物は、核酸塩基、Ｘｎを含有し、これは任意の所望の核酸塩基、
例えばアデニン、グアニン、シトシン、ウラシル、または改変核酸塩基、例えばシュード
ウラシルであってもよい。好ましい核酸塩基は、アデニンである。
【００５４】
式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物のＲＮＡは、任意の所望のＲＮＡ分子であってもよいが、好ま
しいものは、生成物、例えばタンパク質をコードする。好適なタンパク質は、療法用タン
パク質、例えば抗体またはその抗原結合断片、受容体、サイトカイン、および増殖因子；
抗原、例えば病原体または腫瘍細胞からの抗原を含む。ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡは、リボ
ース−リン酸骨格を含有してもよく、リボース環の１”位置に結合した通常の核酸塩基ア
デニン、シトシン、グアニン、およびウラシルを伴う。所望の場合、１つまたは複数の改
変塩基が、所望の程度までＲＮＡに含まれてもよい。例えば、核酸塩基の０．１％〜１０
０％が、改変塩基、例えばシュードウラシルであってもよい。所望の場合、ＲＮＡ分子は
、１つまたは複数のアミド亜リン酸エステル、チオリン酸エステル、メチルホスホン酸、
ホスホロセレノ酸、または他の好適な結合を含有してもよい。
【００５５】
他の態様では、本開示は、本明細書で開示される５’末端改変核酸（例えばＲＮＡ）を
調製するために使用され得るグアノシンまたはプリン誘導体に関する。
【００５６】
特定の態様では、本開示は、式ＩＸ、Ｘ、ＸＩの化合物、またはそれらの塩（薬学的に
許容される塩）、
【００５７】
【化２９】
2020183399.tif 000030
に関する。式ＩＸ、Ｘ、およびＸＩの各々で、
Ｚは、−ＯＨ、
【００５８】
【化３０】
2020183399.tif 000031
からなる群から選択され；
ｎ４は、０〜２であり；他の変数は、式Ｉで定義されるとおりである。この態様のある
特定の好ましい実施形態では、Ｙは、アルキル結合部分、好ましくは低級アルキル結合部
分、例えば（−ＣＨ２−）であり；Ｒ１は、置換アリールまたは置換ヘテロアリール、例
えばフェニルで置換されたアリールまたはフェニルで置換されたヘテロアリールである。
特に好ましい実施形態では、−Ｙ−Ｒ１は、
【００５９】
【化３１】
2020183399.tif 000032
であってもよい。
【００６０】
式ＩＸの好ましい化合物で、Ｒ２は好ましくは、任意選択で置換されたアミノであり；
Ｘは好ましくは、Ｏであり；かつ／またはＸ１は好ましくは、
【００６１】
【化３２】
2020183399.tif 000033
であり、式中、Ｒ３およびＲ４は、式Ｉで定義されるとおりである。
【００６２】
エンドキャップされた核酸を使用する方法
本明細書で開示されるエンドキャップされた核酸は、診断または療法目的のために細胞
による所望のタンパク質の生産を誘発することを含む、様々な目的のために使用すること
ができる。例えば、タンパク質をコードするエンドキャップされたｍＲＮＡは、インビボ
またはインビトロで細胞にトランスフェクトすることができる。ｍＲＮＡのトランスフェ
クションの好適な方法は本分野で周知であり、例えばカチオン性ポリマー、リン酸カルシ
ウム、またはカチオン性脂質を使用して、トランスフェクションを促進する方法、ならび
に直接注入、微粒子銃による粒子送達、電気穿孔法、レーザー照射、ソノポーレーション
、および磁気ナノ粒子法を含む。例えばKim et al, Anal Bioanal Chem. 397:3173-3178 
(2010)を参照のこと。
【００６３】
トランスフェクトされるべき細胞は好ましくは、例えば哺乳類、魚類、鳥類、より好ま
しくはヒトからの、動物細胞である。好適な動物被験体は、例えばウシ、ブタ、ウマ、シ
カ、ヒツジ、ヤギ、バイソン、ウサギ、ネコ、イヌ、ニワトリ、アヒル、シチメンチョウ
などを含む。
【００６４】
また、本発明のエンドキャップされたＲＮＡ分子は、個々の患者から外植した細胞（例
えばリンパ球、骨髄穿刺液、組織生検）などの細胞に生体外で送達し、続いて通常、エン
ドキャップされたＲＮＡ分子をトランスフェクトされた細胞の選択後、上記細胞を患者に
再移植することができる。患者に送達する細胞の適切な量は、患者の状態、および所望の
効果により変動し、これは熟練した当業者が決定することができる。好ましくは、使用さ
れる細胞は自家性である、すなわち、細胞は治療される患者から得られる。
【００６５】
エンドキャップされた核酸（例えばｍＲＮＡ）は、ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ
ｒｅｇｕｌａｒｌｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ
ｒｅｐｅａｔｓ）として知られるゲノム編集技術で使用することができ、これは細菌抗
ウイルス防御システムの部分であり、真核細胞における標的化ゲノム編集を誘発するため
に使用することができる。ゲノム編集のためのツールとして使用される場合、ＩＩ型ＣＲ
ＩＳＰＲシステムは典型的に、２個または３個の構成要素：ＲＮＡ依存性ＤＮＡエンドヌ
クレアーゼであるＣａｓ９タンパク質、およびＤＮＡ鎖切断部位当たり１つまたは２つの
いずれかのＲＮＡからなる（天然の２つのＲＮＡシステムは、ＣＲＩＳＰＲ−ＲＮＡ（ｃ
ｒＲＮＡ）およびトランス活性化ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含み、一方、単一のＲＮ
Ａシステムでは、２つのｃｒＲＮＡおよびｔｒａｃｒＲＮＡが、シングルガイドＲＮＡ（
ｓｇＲＮＡ）と呼ばれる単一の機能的転写産物に再設計される）。ＣＲＩＳＰＲ編集の標
準システムは、レンチウイルスベクター内でｓｇＲＮＡまたは多数のＲＮＡおよびＣａｓ
９タンパク質をコードすることができる。しかしながら、ウイルスベクターでの問題は、
それらがコードすることができる追加の遺伝子のサイズには限界があり、サイズが長さ約
１０００〜２０００アミノ酸に及ぶ大きなＣａｓ９タンパク質はウイルスベクター内でコ
ードすることが困難であり得ることである。インビトロで転写されたｓｇＲＮＡ（または
ｃｒＲＮＡ＋ｔｒａｃｒＲＮＡ）と共に調合されたインビトロで転写されたＣａｓ９  ｍ
ＲＮＡを用いた全ＲＮＡ  ＣＲＩＳＰＲシステムを、インビボ、インビトロ、または生体
外での細胞へのトランスフェクションのために共に調合して、トランスフェクトされた細
胞のゲノムを特異的に編集することができる。本明細書で開示されるエンドキャップされ
たｍＲＮＡは、この用途によく適している。
【００６６】
また、エンドキャップされた核酸は、様々な生化学目的および分析目的のために使用す
ることができる。例えば、エンドキャップされた核酸は、ＲＮＡ代謝を研究するために、
およびＲＮＡの他の生体分子との相互作用を研究するために、画像化研究に使用すること
ができる。
【００６７】
合成スキーム
本発明の化合物は、以下のスキームまたは実施例で説明する経路により調製することが
できる。
【００６８】
スキーム１：式ＶＩで定義される、一般構造Ｉの化学キャップされたｍＲＮＡは、ｍＲ
ＮＡ−５’一リン酸を、好適に緩衝した水性生理食塩水（緩衝液：ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＳ
、ＭＥＳ、ＰＢＳ）中で、５．５〜７．５の範囲の好適なｐＨにて、有機溶媒、例えばＤ
ＭＦおよびＤＭＳＯの存在下または不在下で、好適なルイス酸性アクチベータ、例えばＭ
ｎＣｌ２、ＮｉＣｌ２、ＺｎＣｌ２の存在下にて、一般構造ＩＩのイミダゾール活性化キ
ャップ構造と反応させることにより得ることができる。
【００６９】
【化３３】
2020183399.tif 000034
【００７０】
スキーム２：一般構造ＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、リン酸
塩ＩＩＩ（トリブチルアンモニウム塩）を、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＮＭ
Ｐ、リン酸トリメチル中で、好適な温度、例えば室温にて、イミダゾールまたはＮ−メチ
ル−イミダゾール、好適な三級ホスフィン、例えばトリフェニルホスフィン、好適なオキ
シダント、例えば２，２’−ジピリジルジスルフィド、および好適な塩基、例えばトリエ
チルアミンで処理することにより調製することができる。（ａ）M. Lewdorowicz, Y. Yof
fe, J. Zuberek, J. Jemielity, J. Stepinski, R. Kierzek, R. Stolarski, M. Shapira
, E. Darzynkiewicz, RNA 2004, 10, 1469、ｂ）R. Worch, J. Stepinski, A. Niedzwiec
ka, M. Jankowska-Anyszka, C. Mazza, S. Cusack, R. Stolarski, E. Darzynkiewicz, N
ucleosides Nucleotides and Nucleic Acids 2005, 24, 1131、ｃ）M. Warminski, J. Ko
walska, J. Buck, J. Zuberek, M. Lukaszewicz, C. Nicola, A. N. Kuhn, U. Sahin, E.
Darzynkiewicz, J. Jemielity, Bioorg. Med. Chem., 2013, 23, 3753）。
【００７１】
【化３４】
2020183399.tif 000035
【００７２】
スキーム３：一般構造ＩＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、活性
化リン酸塩ＩＶを、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、または水中で、ルイス酸、例
えば塩化亜鉛、塩化マグネシウム、または塩化マンガンの存在下にて、好適な温度、例え
ば室温で、トリエチルアンモニウムリン酸塩または同様のリン酸塩と反応させることによ
り調製することができる。（ａ）M. Lewdorowicz, Y. Yoffe, J. Zuberek, J. Jemielity
, J. Stepinski, R. Kierzek, R. Stolarski, M. Shapira, E. Darzynkiewicz, RNA 2004
, 10, 1469、ｂ）R. Worch, J. Stepinski, A. Niedzwiecka, M. Jankowska-Anyszka, C.
Mazza, S. Cusack, R. Stolarski, E. Darzynkiewicz, Nucleosides Nucleotides and N
ucleic Acids 2005, 24, 1131、ｃ）M. Warminski, J. Kowalska, J. Buck, J. Zuberek,
M. Lukaszewicz, C. Nicola, A. N. Kuhn, U. Sahin, E. Darzynkiewicz, J. Jemielity
, Bioorg. Med. Chem., 2013, 23, 3753）。
【００７３】
一般構造ＩＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、Ｖを、好適な溶媒
、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、またはＮＭＰ中で、室温〜６０℃の範囲の好適な反応温度に
て、好適なアルキル化試薬、例えばハロゲン化アルキル、トリフレート、またはメシル酸
塩を用いてアルキル化することにより調製することができる。
【００７４】
また、Ｘ＝Ｏである場合、一般構造ＩＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定
義され、ＶＩを、好適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、０℃〜室温の範囲の好適な
温度にて、二リン酸テトラクロリドと反応させることにより調製することができる（J. E
msley, J. Moore, P.B. Udy, J. Chem. Soc. (A) Inorg. Phys. Theor. 1971, 2863）。
【００７５】
また、Ｘ＝ＮＨである場合、一般構造ＩＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に
定義され、ＩＶを、好適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、０℃〜室温の範囲の好適
な温度にて、イミド−ビス（ホスホリルジクロリド）と反応させることにより調製するこ
とができる（A. M. Rydzik, M. Kulis, M. Lukaszewicz, J. Kowalska, J. Zuberek, Z. 
M. Darzynkiewicz, E. Darzynkiewicz, J. Jemielity, Bioorganic & Med. Chem. 2012, 
20, 1699）。
【００７６】
また、Ｘ＝ＣＨ２である場合、一般構造ＩＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様
に定義され、ＩＶを、好適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、好適な温度、例えば０
℃または室温にて、メチレンビス（ホスホン酸ジクロリド）と反応させることにより調製
することができる（ａ）M. Honcharenko, M. Zytek, B. Bestas, P. Moreno, J. Jemieli
ty, E. Darzynkiewicz, C. I. E. Smith, R. Stroemberg, Bioorg. Med. Chem., 2013 ,2
1, 7921、ｂ）M. Kalek, J. Jemielity, Z. M. Darzynkiewicz, E. Bojarska, J. Stepin
ski, R. Stolarski, R. E. Davis, E. Darzynkiewic, Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 32
23、ｃ）M. Kalek, J. Jemielity, J. Stepinski, R. Stolarski, E. Darzynkiewics, Te
trahedron Lett. 2005, 46, 2417）。
【００７７】
【化３５】
2020183399.tif 000036
【００７８】
スキーム４：一般構造ＩＶの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、リン酸
塩ＶＩＩ（トリブチルアンモニウム塩）を、好適な溶媒、例えばＤＭＦまたはＤＭＳＯ中
で、好適な温度、例えば室温にて、イミダゾール、好適な三級ホスフィン、例えばトリフ
ェニルホスフィン、好適なオキシダント、例えば２，２’−ジピリジルジスルフィド、お
よび好適な塩基、例えばトリエチルアミンで処理することにより調製することができる（
P. C. Joshi, M. F. Aldersley, D. V. Zagorevskii, J. P. Ferris, Nucleosides, Nucl
eotides and Nucleic Acids 2012, 31, 7, 536）。
【００７９】
【化３６】
2020183399.tif 000037
【００８０】
スキーム５：一般構造ＶＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、ＶＩ
ＩＩを、好適な溶媒、例えばＤＭＦまたはＤＭＳＯ中で、室温〜５０℃の範囲の好適な反
応温度にて、好適なアルキル化試薬、例えばハロゲン化アルキル、トリフレート、または
メシル酸塩を用いてアルキル化することにより調製することができる。
一般構造ＶＩＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、Ｘを、好適な溶
媒、例えばリン酸トリメチル中で、０℃または室温の範囲の好適な温度にて、好適なリン
酸化剤、例えば塩化ホスホリルと反応させることにより得ることができる。
また、一般構造ＶＩＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、ＩＸを、好
適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、０℃〜室温の範囲の好適な温度にて、好適なリ
ン酸化剤、例えば塩化ホスホリルと反応させることにより調製することができる。
一般構造ＩＸの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、Ｘを、好適な溶媒、
例えばＤＭＦまたはＤＭＳＯ中で、室温〜５０℃の範囲の好適な反応温度にて、好適なア
ルキル化試薬、例えばハロゲン化アルキル、トリフレート、またはメシル酸塩を用いてア
ルキル化することにより調製することができる。
【００８１】
【化３７】
2020183399.tif 000038
【００８２】
スキーム６：一般構造ＶＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、Ｘを、
好適な溶媒、例えばＤＭＦまたはＤＭＳＯ中で、室温〜５０℃の範囲の好適な反応温度に
て、好適なアルキル化試薬、例えばハロゲン化アルキル、トリフレート、またはメシル酸
塩を用いてアルキル化することにより調製することができる。
【００８３】
【化３８】
2020183399.tif 000039
【００８４】
スキーム７：Ｘ＝Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、およびＡ＝ＣＨ３である場合、一般構造ＸＩおよび
ＸＩＩの化合物は、それぞれ、ＸＩＩＩおよびＸＩＶから、好適な溶媒、例えば四塩化炭
素中で、好適な反応温度、例えば８５℃にて、好適なラジカル開始剤、例えばアゾジイソ
ブチロニトリル、およびハロゲン化ドナー、例えばＮ−ブロモスクシンイミド、Ｎ−ブロ
モアセトアミド、Ｎ−クロロスクシンイミド、Ｎ−ヨードスクシンイミド、臭化物、塩化
物、またはヨウ化物を用いたラジカルハロゲン化により調製することができる（ａ）K. Z
iegler, A. Spath, E. Schaaf, W. Schumann, E. Winkelmann, Ann. 1942, 551, 80、ｂ
）A. Nechvatal, Advances in Free-Radical Chemistry (London) 1972, 4, 175）。
【００８５】
Ｘ＝Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、およびＡ＝ＣＨ２ＯＨである場合、一般構造ＸＩおよびＸＩＩの
化合物は、それぞれ、ＸＩＩＩおよびＸＩＶから、好適な溶媒、例えばジクロロメタン中
で、好適な反応温度、例えば室温にて、好適なホスフィン、例えばトリフェニルホスフィ
ン、および好適なオキシダント、例えば四臭化炭素、四塩化炭素、Ｎ−ヨードスクシンイ
ミドと反応させることにより調製することができる（ａ）R. Appel, Angew. Chem. Int. 
Ed. 1979, 14, 801、ｂ）Cadogan, J, ed. (1979). Organophosphorus Reagents in Orga
nic Synthesis. London: Academic Press）。
【００８６】
Ｘ＝Ｂｒ、Ｃｌ、Ｉ、およびＡ＝ＣＨ２ＯＨである場合、一般構造ＸＩおよびＸＩＩの
化合物は、それぞれ、ＸＩＩＩおよびＸＩＶから、好適な酸、例えばＨＢｒ（４８％水性
）、ＨＣｌ（１２Ｍ水性）、またはＨＩ（水性）で処理することにより調製することがで
きる（ａ）M. Uchida, F. Tabusa, M. Komatsu, S. Morita, T. Kanbe, K. Nakagawa, Ch
em. Pharm. Bull. 1985, 33, 3775、ｂ）V. Boekelheide, G. K. Vick, J. Am. Chem. So
c. 1956, 78, 653、ｃ）K. M. Doxsee, M. Feigel, K. D. Stewart, J. W. Canary, C. B
. Knobler, D. J. Cram, J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 3098.）。
【００８７】
Ｘ＝ＯＭｓ、ＯＴｆ、およびＡ＝ＣＨ２ＯＨである場合、一般構造ＸＩおよびＸＩＩの
化合物は、それぞれ、ＸＩＩＩおよびＸＩＶから、好適な塩基、例えば三級アミン、例え
ばトリエチルアミンの存在下で、好適な溶媒、例えばジクロロメタン中にて、好適な試薬
、例えばＭｓＣｌ、（Ｍｓ）２Ｏ、（Ｔｆ）２Ｏと反応させることにより調製することが
できる。
【００８８】
Ａ＝ＣＨ２ＯＨである場合、一般構造ＸＩＩＩの化合物は、対応する酸（Ａ＝ＣＯＯＨ
）から、好適な溶媒、例えばテトラヒドロフラン中で、好適な反応温度、例えば室温にて
、好適な還元剤、例えばボランジメチルスルフィド付加物または水素化アルミニウムリチ
ウムと反応させることにより調製することができる（ａ）N. G. Gaylord, Reduction wit
h Complex Metal Hydrides, Wiley, NY, .1956, 322、ｂ）H. C. Brown, W. Korytnyk, J
. Am. Chem. Soc. 1960, 82, 3866）。
【００８９】
Ａ＝ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨである場合、一般構造ＸＩＩＩおよびＸＩＶの化合物は、鈴木
クロスカップリング反応により、好適なアリール基質ＸＶ〜ＸＶＩＩを出発物質として用
いて調製することができる（N. Miyaura, A. Suzuki, Chem. Rev. 1995, 95, 2457）。
【００９０】
Ｂ＝Ｂｒ、Ｉ、ＯＴｆである場合、クロスカップリング反応は、ＸＶまたはＸＶＩを、
好適な溶媒混合物、例えばＤＭＦ／Ｈ２Ｏ中で、好適な温度、例えば室温、５０℃、また
は８０℃にて、好適な触媒、例えばＳｐｈｏｓ  ｐａｌｌａｄａｃｙｃｌｅ  Ｇ２（クロ
ロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシ−１，１’−ビフェニル
）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ））および好適な
塩基、例えばＫ２ＣＯ３を用いて、ボロン試薬ＸＶＩＩ（Ｃ＝Ｂ（ＯＨ）２、Ｂｐｉｎ）
と反応させることを含む（T. E. Barder, S. D. Walker, J. R. Martinelli, S. L. Buch
wald, S. L. J. Am. Chem. Soc. 2005, 127 4685、ｂ）R. A. Altman, S. L. Buchwald, 
Nature Protocols 2007, 2, 3115-3121）。
【００９１】
Ｂ＝Ｂ（ＯＨ）２、Ｂｐｉｎである場合、クロスカップリング反応は、ＸＶまたはＸＶ
Ｉを、好適な溶媒混合物、例えばＤＭＦ／Ｈ２Ｏ中で、好適な温度、例えば室温、５０℃
、または８０℃にて、好適な触媒、例えばＳｐｈｏｓ  ｐａｌｌａｄａｃｙｃｌｅ  Ｇ２
（クロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシ−１，１’−ビフ
ェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ））、およ
び好適な塩基、例えばＫ２ＣＯ３を用いて、試薬ＸＶＩＩ（Ｃ＝Ｂｒ、Ｉ、ＯＴｆ）と反
応させることを含む。化合物ＸＶＩ〜ＸＶＩＩは市販されている。
【００９２】
【化３９】
2020183399.tif 000040
【００９３】
スキーム８：式Ｖで定義される、一般構造ＸＶＩＩＩの化学的に３’改変したｍＲＮＡ
は、ＲＮＡを、好適に緩衝した水溶液（緩衝液：ＮａＯＡｃ、ＴＲＩＳ、ＰＢＳ、ＭＥＳ
、ＨＥＰＥＳ）中で、５．０〜７．５の範囲の好適なｐＨにて、０℃〜室温の範囲の温度
で、ＮａＩＯ４と共に、一般構造ＸＸと反応させ、続いて好適な求核試薬、例えばヒドラ
ジン、アシルヒドラゾン、ヒドロキシルアミン、１，２−アミノチオール、アミンで処理
することにより得ることができる。
【００９４】
式Ｖで定義される、一般構造ＸＶＩＩＩの化学的に３’改変したｍＲＮＡは、ＲＮＡを
、好適に緩衝した水溶液（緩衝液：ＮａＯＡｃ、ＴＲＩＳ、ＰＢＳ、ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ
）中で、５．０〜７．５の範囲の好適なｐＨにて、０℃〜室温の範囲の温度で、ＮａＩＯ
４と共に、一般構造ＸＸと反応させ、続いて好適なアミン求核試薬、例えばヒドラジン、
アシルヒドラゾン、ヒドロキシルアミン、アミンで処理し、続いて室温〜３７℃の範囲の
温度にて、好適な還元剤、例えばＮａＣＮＢＨ３で処理することにより得ることができる
。
【００９５】
式Ｉで定義される、一般構造ＸＩＸのＲＮＡは、ＲＮＡを、好適に緩衝した水溶液（緩
衝液：ＮａＯＡｃ、ＴＲＩＳ、ＰＢＳ、ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ）中で、５．０〜７．５の範
囲の好適なｐＨにて、０℃〜室温の範囲の温度で、ＮａＩＯ４と共に、一般構造ＸＸと反
応させ、続いて好適な求核試薬、例えばメルドラム酸で処理することにより得ることがで
きる。
【００９６】
【化４０】
2020183399.tif 000041
【００９７】
スキーム９：以下に定義される、一般構造ＸＸＩおよびＸＸＩＩの５’３’ビス改変Ｒ
ＮＡは、それぞれ、構造ＸＸＩＩＩおよびＸＸＩＶの３’改変ＲＮＡから、スキーム１で
説明する条件下で、グアノシン誘導体ＩＩと反応させることにより得ることができる。
【００９８】
【化４１】
2020183399.tif 000042
【００９９】
スキーム１０：一般構造ＸＸＶの化学キャップされたｍＲＮＡは、ｍＲＮＡ−５’一リ
ン酸を、好適に緩衝した水性生理食塩水（緩衝液：ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＳ、ＭＥＳ、ＰＢ
Ｓ）中で、５．５〜７．５の範囲の好適なｐＨにて、有機溶媒、例えばＤＭＦおよびＤＭ
ＳＯの存在下または不在下で、好適なルイス酸性アクチベータ、例えばＭｎＣｌ２、Ｎｉ
Ｃｌ２、ＺｎＣｌ２の存在下にて、一般構造ＸＸＶＩのイミダゾール活性化キャップ構造
と反応させることにより得ることができる。
【０１００】
【化４２】
2020183399.tif 000043
調製され得る例示的な５’キャップ構造は、
【０１０１】
【化４３】
2020183399.tif 000044
を含む。
【０１０２】
スキーム１１：一般構造ＸＸＶＩの化合物は、ＹおよびＲ１が式Ｉと同様に定義され、
リン酸塩ＸＸＶＩＩ（トリブチルアンモニウム塩）を、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭ
ＳＯ、ＮＭＰ、リン酸トリメチル中で、好適な温度、例えば室温にて、イミダゾールまた
はＮ−メチル−イミダゾール、好適な三級ホスフィン、例えばトリフェニルホスフィン、
好適なオキシダント、例えば２，２’−ジピリジルジスルフィド、および好適な塩基、例
えばトリエチルアミンで処理することにより調製することができる（ａ）M. Lewdorowicz
, Y. Yoffe, J. Zuberek, J. Jemielity, J. Stepinski, R. Kierzek, R. Stolarski, M.
Shapira, E. Darzynkiewicz, RNA 2004, 10, 1469、ｂ）R. Worch, J. Stepinski, A. N
iedzwiecka, M. Jankowska-Anyszka, C. Mazza, S. Cusack, R. Stolarski, E. Darzynki
ewicz, Nucleosides Nucleotides and Nucleic Acids 2005, 24, 1131、ｃ）M. Warminsk
i, J. Kowalska, J. Buck, J. Zuberek, M. Lukaszewicz, C. Nicola, A. N. Kuhn, U. S
ahin, E. Darzynkiewicz, J. Jemielity, Bioorg. Med. Chem., 2013, 23, 3753）。
【０１０３】
【化４４】
2020183399.tif 000045
【０１０４】
スキーム１２：一般構造ＸＸＶＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が式Ｉと同様に
定義され、活性化リン酸塩ＸＸＩＸを、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、または水
中で、ルイス酸、例えば塩化亜鉛、塩化マグネシウム、または塩化マンガンの存在下にて
、好適な温度、例えば室温で、トリエチルアンモニウムリン酸塩または同様のリン酸塩と
反応させることにより調製することができる（ａ）M. Lewdorowicz, Y. Yoffe, J. Zuber
ek, J. Jemielity, J. Stepinski, R. Kierzek, R. Stolarski, M. Shapira, E. Darzynk
iewicz, RNA 2004, 10, 1469、ｂ）R. Worch, J. Stepinski, A. Niedzwiecka, M. Janko
wska-Anyszka, C. Mazza, S. Cusack, R. Stolarski, E. Darzynkiewicz, Nucleosides N
ucleotides and Nucleic Acids 2005, 24, 1131、ｃ）M. Warminski, J. Kowalska, J. B
uck, J. Zuberek, M. Lukaszewicz, C. Nicola, A. N. Kuhn, U. Sahin, E. Darzynkiewi
cz, J. Jemielity, Bioorg. Med. Chem., 2013, 23, 3753）。
【０１０５】
また、Ｘ＝Ｏである場合、一般構造ＸＸＶＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が式
Ｉと同様に定義され、ＸＸＶＩＩＩを、好適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、０℃
〜室温の範囲の好適な温度にて、二リン酸テトラクロリドと反応させることにより調製す
ることができる（J. Emsley, J. Moore, P.B. Udy, J. Chem. Soc. (A) Inorg. Phys. Th
eor. 1971, 2863）。
【０１０６】
また、Ｘ＝ＮＨである場合、一般構造ＸＸＶＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が
式Ｉと同様に定義され、ＸＸＶＩＩＩを、好適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、０
℃〜室温の範囲の好適な温度にて、イミド−ビス（ホスホリルジクロリド）と反応させる
ことにより調製することができる（A. M. Rydzik, M. Kulis, M. Lukaszewicz, J. Kowal
ska, J. Zuberek, Z. M. Darzynkiewicz, E. Darzynkiewicz, J. Jemielity, Bioorganic
& Med. Chem. 2012, 20, 1699）。
【０１０７】
また、Ｘ＝ＣＨ２である場合、一般構造ＸＸＶＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２
が式Ｉと同様に定義され、ＸＸＶＩＩＩを、好適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、
好適な温度、例えば０℃または室温にて、メチレンビス（ホスホン酸ジクロリド）と反応
させることにより調製することができる（ａ）M. Honcharenko, M. Zytek, B. Bestas, P
. Moreno, J. Jemielity, E. Darzynkiewicz, C. I. E. Smith, R. Stroemberg, Bioorg.
Med. Chem., 2013 ,21, 7921、ｂ）M. Kalek, J. Jemielity, Z. M. Darzynkiewicz, E.
Bojarska, J. Stepinski, R. Stolarski, R. E. Davis, E. Darzynkiewic, Bioorg. Med
. Chem. 2006, 14, 3223、ｃ）M. Kalek, J. Jemielity, J. Stepinski, R. Stolarski, 
E. Darzynkiewics, Tetrahedron Lett. 2005, 46, 2417）。
【０１０８】
一般構造ＸＸＩＸの化合物（Ｚ＝イミダゾール、Ｎ−メチルイミダゾリウム）は、Ｙ、
Ｒ１、およびＺ２が式Ｉと同様に定義され、リン酸塩ＸＸＩＸ（Ｚ＝ＯＨ、トリブチルア
ンモニウム塩）を、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＮＭＰ、リン酸トリメチル中
で、好適な温度、例えば室温にて、イミダゾールまたはＮ−メチル−イミダゾール、好適
な三級ホスフィン、例えばトリフェニルホスフィン、好適なオキシダント、例えば２，２
’−ジピリジルジスルフィド、および好適な塩基、例えばトリエチルアミンで処理するこ
とにより調製することができる（ａ）M. Lewdorowicz, Y. Yoffe, J. Zuberek, J. Jemie
lity, J. Stepinski, R. Kierzek, R. Stolarski, M. Shapira, E. Darzynkiewicz, RNA 
2004, 10, 1469、ｂ）R. Worch, J. Stepinski, A. Niedzwiecka, M. Jankowska-Anyszka
, C. Mazza, S. Cusack, R. Stolarski, E. Darzynkiewicz, Nucleosides Nucleotides a
nd Nucleic Acids 2005, 24, 1131、ｃ）M. Warminski, J. Kowalska, J. Buck, J. Zube
rek, M. Lukaszewicz, C. Nicola, A. N. Kuhn, U. Sahin, E. Darzynkiewicz, J. Jemie
lity, Bioorg. Med. Chem., 2013, 23, 3753）。
【０１０９】
また、一般構造ＸＸＩＸの化合物（Ｚ＝ＯＨ）は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が式Ｉと同様
に定義され、ＸＸＶＩＩＩを、好適な溶媒、例えばリン酸トリメチル中で、０℃〜室温の
範囲の好適な温度にて、好適なリン酸化剤、例えば塩化ホスホリルと反応させることによ
り調製することができる。
【０１１０】
また、一般構造ＸＸＶＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が実施形態式Ｉと同様に
定義され、クロスカップリング反応により、好適なアリール基質および化合物ＸＸＸを出
発物質として用いて、調製することができる（N. Miyaura, A. Suzuki, Chem. Rev. 1995
, 95, 2457）。
【０１１１】
化合物ＸＸＸは、市販されている８−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−プリン−２，６（３
Ｈ，７Ｈ）−ジオン（Ａ＝Ｈ）または８−ブロモ−１，３−ジメチル−１Ｈ−プリン−２
，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（Ａ＝Ｍｅ）を、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ま
たはＮＭＰ中で、室温〜６０℃の範囲の好適な反応温度にて、好適なアルキル化試薬、例
えばハロゲン化アルキル、トリフレート、またはメシル酸塩を用いてアルキル化すること
により得ることができる。
【０１１２】
【化４５】
2020183399.tif 000046
【０１１３】
スキーム１３：一般構造ＸＸＶＩＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が式Ｉと同様
に定義され、一般構造ＸＸＸＩＩのアミドから、好適な溶媒、例えばエタノール、イソプ
ロパノール、またはＴＨＦ中で、５０〜１００℃の範囲の温度にて、適切な塩基、例えば
ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、またはナトリウムイ
ソ−プロポキシドを用いた環化により得ることができる。
【０１１４】
一般構造ＸＸＩＸの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が式Ｉと同様に定義され、一般構
造ＸＸＸＩのモノまたはジアルキルリン化水素およびリン酸塩から、溶媒、例えばＤＭＦ
、ＤＭＳＯ、ＮＭＰ、またはＴＨＦ中で、０℃〜３０℃の範囲の温度にて、好適なルイス
酸、例えば臭化トリメチルシリル、三臭化ホウ素、または三塩化アルミニウムを用いた加
水分解により得ることができる。
【０１１５】
一般構造ＸＸＸＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が実施形態式Ｉと同様に定義され
、一般構造ＸＸＸＩＩのアミドから、好適な溶媒、例えばエタノール、イソプロパノール
、またはＴＨＦ中で、５０〜１００℃の範囲の温度にて、適切な塩基、例えばナトリウム
ｔｅｒｔ−ブトキシド、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、またはナトリウムイソ−プロポ
キシドを用いた環化により得ることができる。
【０１１６】
【化４６】
2020183399.tif 000047
【０１１７】
スキーム１４：一般構造ＸＸＸＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１、およびＺ２が実施形態ＸＸ
Ｘと同様に定義され、ＸＸＸＩＩＩを、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、またはＮ
ＭＰ中で、室温〜５０℃の範囲の温度にて、好適なアクチベータ、例えばＨＡＴＵ、ＨＢ
ＴＵ、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロ
ニウムテトラフルオロホウ酸塩、または（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピ
ロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、および好適な塩基、例えばトリエチ
ルアミンまたはヒューニッヒ塩基を用いて、リンカーユニットの適切なカルボン酸でアシ
ル化することにより得ることができる。
【０１１８】
一般構造ＸＸＸＩＩＩの化合物は、Ｙ、Ｒ１が実施形態式Ｉと同様に定義され、ＸＸＸ
ＩＶ（Ｙが置換基Ｒ１の対応するカルボン酸である）を、好適な溶媒、例えばＴＨＦ、ジ
エチルエーテル、またはジオキサン中で、室温〜１２０℃の範囲の温度にて、還元剤、例
えば水素化アルミニウムリチウムまたはＲｅｄ−Ａ１を用いて還元することにより得るこ
とができる。
【０１１９】
一般構造ＸＸＸＩＶの化合物は、市販されている５，６−ジアミノピリミジン−４（３
Ｈ）−オン（ＸＸＸＶ）を、好適な溶媒、例えばＤＭＦ、ＤＭＳＯ、またはＮＭＰ中で、
室温〜５０℃の範囲の温度にて、好適なアクチベータ、例えばＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、Ｏ−
（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテト
ラフルオロホウ酸塩、または（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホ
スホニウムヘキサフルオロホスフェート、および好適な塩基、例えばトリエチルアミンま
たはヒューニッヒ塩基を用いて、適切なカルボン酸でアシル化して、置換基Ｒ１を導入す
ることにより得ることができる。
【０１２０】
【化４７】
2020183399.tif 000048
【０１２１】
スキーム１５：上記に定義される、一般構造ＸＸＸＶＩおよびＸＸＸＶＩＩの５’３’
−ビス改変ＲＮＡは、それぞれ、構造ＸＬおよびＸＬＩの３’改変ＲＮＡから、スキーム
１で説明する条件下で、グアノシン誘導体ＸＸＶＩと反応させることにより得ることがで
きる。ＸＸＶＩの合成をスキーム１０で説明する。
【０１２２】
【化４８】
2020183399.tif 000049
【０１２３】
定義
「アシル」という用語は、任意選択で置換されたアルキルカルボニル、任意選択で置換
されたアリールカルボニルを指す。かかるアシル基の例として、アセチル、ベンゾイルな
どが挙げられる。
【０１２４】
「親和性部分」という用語は、目的の分子、例えばタンパク質、もしくは核酸、または
他の分子に特異的に結合する分子を指す。親和性部分の例として、ビオチンおよびジゴキ
シゲニンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２５】
「アルカンジイル」という用語は、脂肪族炭化水素に由来する一般式ＣｎＨ２ｎの二価
ラジカルを指す。別に指定されない限り、かかるアルカンジイルは、置換アルカンジイル
を含む。好適な例として、メタンジイル（−ＣＨ２−）、エタンジイル（−ＣＨ２−ＣＨ
２−）などが挙げられる。
【０１２６】
「アルケニル」および「アルキニル」という用語は、単独または組合せで、本明細書で
使用されるとき、１〜２０個の炭素原子を含有し、かつ不飽和の１つまたは複数のユニッ
トを含む、脂肪族直鎖または分岐鎖炭化水素鎖を指す。アルケニルは、少なくとも１つの
炭素−炭素二重結合を含有するが、炭素−炭素三重結合は含有しない。アルキニルは、少
なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含有する。好ましいアルケニルおよびアルキニル基
は、２〜１０個の炭素原子または２〜６個の炭素原子を含むことができる。好適なアルケ
ニル基は、例えばビニル、アリル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２
−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペ
ンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘ
キセニル、１−ヘプテニル、２−ヘプテニル、３−ヘプテニル、４−ヘプテニル、５−ヘ
プテニル、６−ヘプテニル、１−オクテニル、２−オクテニル、３−オクテニル、４−オ
クテニル、５−オクテニル、６−オクテニル、７−オクテニル、１−ノネニル、２−ノネ
ニル、３−ノネニル、４−ノネニル、５−ノネニル、６−ノネニル、７−ノネニル、８−
ノネニル、１−デセニル、２−デセニル、３−デセニル、４−デセニル、５−デセニル、
６−デセニル、７−デセニル、８−デセニル、または９−デセニルを含む。好適なアルキ
ニル基は、例えばエチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチ
ニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニ
ル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシニ
ル、１−ヘプチニル、２−ヘプチニル、３−ヘプチニル、４−ヘプチニル、５−ヘプチニ
ル、６−ヘプチニル、１−オクチニル、２−オクチニル、３−オクチニル、４−オクチニ
ル、５−オクチニル、６−オクチニル、７−オクチニル、１−ノニニル、２−ノニニル、
３−ノニニル、４−ノニニル、５−ノニニル、６−ノニニル、７−ノニニル、８−ノニニ
ル、１−デシニル、２−デシニル、３−デシニル、４−デシニル、５−デシニル、６−デ
シニル、７−デシニル、８−デシニル、または９−デシニルを含む。アルケニルおよびア
ルキニル基は任意選択で、本明細書で説明するように置換することができる。
【０１２７】
「アルキル」という用語は、単独または組合せで、本明細書で使用されるとき、１〜２
０個の炭素原子を含有する、脂肪族直鎖または分岐鎖飽和炭化水素鎖を指す。ある特定の
実施形態では、アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を含むことができる。さらなる実施
形態では、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を含むことができる。アルキル基は任意選
択で、本明細書で説明するように置換することができる。アルキル基の例として、メチル
、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ
ｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソ−アミル、ヘキシル、オクチル、ノイルなどが挙げられ
る。
【０１２８】
「アミノ」という用語は、基−ＮＨ２を指す。
【０１２９】
「アミノアルキル」という用語は、一級、二級、または三級アミノ基で置換されたアル
キルを指す。好ましいアミノアルキル基は、１つまたは複数の一級、二級、および／また
は三級アミン基、ならびに１〜約１２個の炭素原子、より好ましくは１〜約８個の炭素原
子、さらにより好ましくは１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有するアミノア
ルキル基を含む。かかるアミノアルキルの例として、アミノメチル、アミノエチルなどが
挙げられる。
【０１３０】
「アリール」という用語は、単独または組合せで、本明細書で使用されるとき、少なく
とも１つの芳香環を含有する炭素環式芳香族炭化水素環系を意味する。芳香環系は、芳香
族もしくは非芳香族炭化水素環を含む縮合環系、または非芳香族炭化水素環を含む芳香環
系である場合がある。「アリール」という用語は、芳香族基、例えばフェニル、ナフチル
、アントラセニル、およびフェナントリルを包含する。アリールは任意選択で、本明細書
で説明するように置換することができる。
【０１３１】
「キャップ０」という用語は、唯一のメチル化がｍ７Ｇにあるキャップを指す。「キャ
ップ１」という用語は、Ｎ１に追加のメチル化を有するキャップを指す。一般化したキャ
ップ構造は、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ１ｍｐＮ２ｍｐＮ３ｐ．．．．として表さ
れ、Ｎは任意のヌクレオチド、好ましくはプリンまたはピリミジンであり、ｐはリン酸基
であり、ｍはメチル基である。グアノシンのＮ７位置にメチル基を含有するｍ７Ｇは、ｍ
ＲＮＡの５’最末端にある。その一方で、Ｎ１およびＮ２位置でのメチル化は、リボース
部分の２’−ＯＨ基での置換である。様々なキャップ構造は、それらが含有するメチル基
の数に基づいて分類される（Banerjee, A. K. Microbiological Rev., 1980, 44, 175）
。
【０１３２】
「シクロアルケニル」という用語は、単独または他の用語との組合せで、本明細書で使
用されるとき、別に示されない限り、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有し、好
ましくは３〜１０個の炭素原子、すなわち、３、４、５、６、７、８、９、または１０個
の炭素原子、好ましくは３〜６個の炭素原子を有し、環を形成する「アルケニル」の環式
変形を表す。また、「シクロアルケニル」という用語は、その二環式変形を含むことが意
味される。二環式環が形成される場合、各対応する環は２つの隣接した炭素原子で互いに
接続されることが好ましいが、しかしながら、あるいは２つの環は同じ炭素原子を介して
接続される、すなわち、それらはスピロ環系を形成するか、またはそれらは架橋環系を形
成する。シクロアルケニルの例として、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペン
テニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキセニル、シクロ
ヘプテニル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクテニル、シクロノネイル、シクロデセ
ニル、ビシクロ［２．２．１］−２−ヘプテニル、ビシクロ［２．２．１］−２−オクテ
ニル、またはビシクロ［４．４．０］−２−デセニルが挙げられる。シクロアルケニル基
は任意選択で、本明細書で説明するように置換することができる。
【０１３３】
「シクロアルキル」という用語は、単独または他の用語との組合せで、本明細書で使用
されるとき、別に示されない限り、二環式および多環式アルキル基を含む「アルキル」の
環式変形を表す。二環式または多環式環系の環は、縮合されていてもよく、単一の共有原
子を介して結合され、すなわちそれらはスピロ環系または架橋環系を形成する。シクロア
ルキルは好ましくは、３〜１０個の炭素原子、すなわち、３、４、５、６、７、８、９、
または１０個の炭素原子、好ましくは３〜６個の炭素原子を含有して、環を形成すること
ができる。好適なシクロアルキル基の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロ
ペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、またはシ
クロデシルが挙げられる。好適なシクロアルキル基の例として、シクロプロピル、シクロ
ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、スピロ［
３，３］ヘプチル、スピロ［３，４］オクチル、スピロ［４，３］オクチル、ビシクロ［
４．１．０］ヘプチル、ビシクロ［３．２．０］ヘプチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプ
チル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［５．１．０］オクチル、ビシクロ［
４．２．０］オクチルなどが挙げられる。シクロアルキル基は任意選択で、本明細書で説
明するように置換することができる。
【０１３４】
「検出部分」という用語は、好適な方法を用いて容易に検出され得る化学部分を指す。
検出部分の例として、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、および放射性物質が挙げられ
るが、これらに限定されない。
【０１３５】
「半減期」（Ｔ１／２）という用語は、分子の活性、量、または数の半分を除去するの
に必要な期間に関する。本発明の文脈では、ＲＮＡの半減期は、上記ＲＮＡの安定性の表
示である。
【０１３６】
「ヘテロ原子」という用語は、窒素、酸素、および硫黄を指す。
【０１３７】
「ヘテロアリール」という用語は、本明細書で使用されるとき、１つまたは複数の炭素
環原子が独立して、Ｏ、Ｓ、およびＮにより置換されたアリールである。ある特定の実施
形態では、ヘテロアリールは、５〜７個の炭素原子を含むことができる。また、上記用語
は、複素環式環がアリール環と縮合するか、ヘテロアリール環が他のヘテロアリール環と
縮合するか、ヘテロアリール環がヘテロシクロアルキル環と縮合するか、またはヘテロア
リール環がシクロアルキル環と縮合した、縮合多環式基を包含する。ヘテロアリール基の
例として、ピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル
、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル、ピラニル、フリル、チエニル、オキサゾリ
ル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリ
ル、インドリル、イソインドリル、インドリジニル、ベンゾイミダゾリル、キノリル、イ
ソキノリル、キノキサリニル、キナゾリニル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベン
ゾジオキソリル、ベンゾピラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベン
ゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、クロモニル、ク
マリニル、ベンゾピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾロピリダジニル、テトラ
ヒドロイソキノリニル、チエノピリジニル、フロピリジニル、ピロロピリジニルなどが挙
げられる。例示的な三環性複素環式基として、カルバゾリル、ベンジドリル、フェナント
ロリニル、ジベンゾフラニル、アクリジニル、フェナントリジニル、キサンテニルなどが
挙げられる。ヘテロアリールは任意選択で、本明細書で説明するように置換することがで
きる。
【０１３８】
「ヘテロシクリル」という用語は、環内の１〜３個の炭素原子が独立して、Ｏ、Ｓ、ま
たはＮにより置換された、上記に定義されるシクロアルキル基を意味する。かかるヘテロ
シクリル基の例は、ピロリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニ
ル、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリ
ニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、インドリニル、イソインドリニル、ジヒド
ロベンゾフラニル、ジヒドロ−イソベンゾフラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒ
ドロイソキノリニル、テトラヒドロキノキサリニル、クロマニル、イソクロマニル、ジヒ
ドロベンゾオキサジニル、ジヒドロベンゾチアジニル、またはジヒドロベンゾジオキシニ
ルである。ヘテロシクリルは任意選択で、本明細書で説明するように置換することができ
る。
【０１３９】
「免疫原性」という用語は、免疫反応を誘発する能力を指す。
【０１４０】
「結合基」という用語は、２つの他の部分を結合する二価ラジカルを指す。結合基は一
般的に、１〜４０個の原子を含有し、例えばアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロ
アルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、または複素環結合基である場
合があり、そのうちの各々は任意選択で、本明細書で説明するように置換することができ
る。例えば、好適な結合基として、メタンジイル（−ＣＨ２−）、エタンジイル（−ＣＨ
２−ＣＨ２−）、エテンジイル（−ＣＨ＝ＣＨ−）、エチンジイル（−Ｃ≡Ｃ−）、−Ｃ
Ｈ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−（Ｃ６Ｈ４）
−、−（Ｃ６Ｈ１０）−などが挙げられる。好適な結合基の追加の例として、
【０１４１】
【化４９】
2020183399.tif 000050
が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４２】
「低級」という用語は、単独または組合せで、本明細書で使用されるとき、別に特に定
義されない場合、１〜６（６を含む）個の炭素原子を含有することを意味する。
【０１４３】
「核酸塩基」という用語は、ヌクレオチドの構成成分である窒素含有塩基を指す。核酸
塩基として、例えば主要な核酸塩基シトシン、グアニン、アデニン、チミン、ウラシル；
シュードウラシル；および改変核酸塩基、例えばｍ５Ｃ（５−メチルシチジン）、ｍ５Ｕ
（５−メチルウリジン）、ｍ６Ａ（Ｎ６−メチルアデノシン）、ｓ２Ｕ（２−チオウリジ
ン）、Ｕｍ（２’−０−メチルウリジン）、ｍ１Ａ（１−メチルアデノシン）；ｍ２Ａ（
２−メチルアデノシン）；Ａｍ（２−１−Ｏ−メチルアデノシン）；ｍｓ２ｍ６Ａ（２−
メチルチオ−Ｎ６−メチルアデノシン）；ｉ６Ａ（Ｎ６−イソペンテニルアデノシン）；
ｍｓ２ｉ６Ａ（２−メチルチオ−Ｎ６イソペンテニルアデノシン）；ｉｏ６Ａ（Ｎ６−（
シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン）；ｍｓ２ｉｏ６Ａ（２−メチルチオ−Ｎ
６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン）；ｇ６Ａ（Ｎ６−グリシニルカル
バモイルアデノシン）；ｔ６Ａ（Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン）；ｍｓ２ｔ
６Ａ（２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン）；ｍ６ｔ６Ａ（Ｎ６
−メチル−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン）；ｈｎ６Ａ（Ｎ６−ヒドロキシノ
ルバリルカルバモイルアデノシン）；ｍｓ２ｈｎ６Ａ（２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキ
シノルバリルカルバモイルアデノシン）；Ａｒ（ｐ）（２’−Ｏ−リボシルアデノシン（
リン酸塩））；Ｉ（イノシン）；ｍ１Ｉ（１−メチルイノシン）；ｍ’Ｉｍ（１，２’−
Ｏ−ジメチルイノシン）；ｍ３Ｃ（３−メチルシチジン）；Ｃｍ（２Ｔ−Ｏ−メチルシチ
ジン）；ｓ２Ｃ（２−チオシチジン）；ａｃ４Ｃ（Ｎ４−アセチルシチジン）；ｆ５Ｃ（
５−フォンニルシチジン（fonnylcytidine））；ｍ５Ｃｍ（５，２−Ｏ−ジメチルシチジ
ン）；ａｃ４Ｃｍ（Ｎ４アセチル２ＴＯメチルシチジン）；ｋ２Ｃ（ライシジン）；ｍ１
Ｇ（１−メチルグアノシン）；ｍ２Ｇ（Ｎ２−メチルグアノシン）；ｍ７Ｇ（７−メチル
グアノシン）；Ｇｍ（２’−Ｏ−メチルグアノシン）；ｍ２２Ｇ（Ｎ２，Ｎ２−ジメチル
グアノシン）；ｍ２Ｇｍ（Ｎ２，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン）；ｍ２２Ｇｍ（Ｎ２，
Ｎ２，２’−Ｏ−トリメチルグアノシン）；Ｇｒ（ｐ）（２’−Ｏ−リボシルグアノシン
（リン酸塩））；ｙＷ（ワイブトシン）；ｏ２ｙＷ（ペルオキシワイブトシン）；ＯＨｙ
Ｗ（ヒドロキシワイブトシン）；ＯＨｙＷ＊（未修飾ヒドロキシワイブトシン）；ｉｍＧ
（ワイオシン）；ｍｉｍＧ（メチルグアノシン）；Ｑ（キューオシン）；ｏＱ（エポキシ
キューオシン）；ｇａｌＱ（ガラクトシル（galtactosyl）−キューオシン）；ｍａｎＱ
（マンノシル−キューオシン）；ｐｒｅＱｏ（７−シアノ−７−デアザグアノシン）；ｐ
ｒｅＱｉ（７−アミノメチル−７−デアザグアノシン）；Ｇ（アーケオシン）；Ｄ（ジヒ
ドロウリジン）；ｍ５Ｕｍ（５，２’−Ｏ−ジメチルウリジン）；ｓ４Ｕ（４−チオウリ
ジン）；ｍ５ｓ２Ｕ（５−メチル−２−チオウリジン）；ｓ２Ｕｍ（２−チオ−２’−Ｏ
−メチルウリジン）；ａｃｐ３Ｕ（３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジ
ン）；ｈｏ５Ｕ（５−ヒドロキシウリジン）；ｍｏ５Ｕ（５−メトキシウリジン）；ｃｍ
ｏ５Ｕ（ウリジン５−オキシ酢酸）；ｍｃｍｏ５Ｕ（ウリジン５−オキシ酢酸メチルエス
テル）；ｃｈｍ５Ｕ（５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン）；ｍｃｈｍ５Ｕ（
５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル）；ｍｃｍ５Ｕ（５−メト
キシカルボニルメチルウリジン）；ｍｃｍ５Ｕｍ（Ｓ−メトキシカルボニルメチル−２−
Ｏ−メチルウリジン）；ｍｃｍ５ｓ２Ｕ（５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウリ
ジン）；ｎｍ５ｓ２Ｕ（５−アミノメチル−２−チオウリジン）；ｍｎｍ５Ｕ（５−メチ
ルアミノメチルウリジン）；ｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５−メチルアミノメチル−２−チオウリジ
ン）；ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ（５−メチルアミノメチル−２−セレノウリジン）；ｎｃｍ５Ｕ
（５−カルバモイルメチルウリジン）；ｎｃｍ５Ｕｍ（５−カルバモイルメチル−２’−
Ｏ−メチルウリジン）；ｃｍｎｍ５Ｕ（５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン）；
ｃｎｍｍ５Ｕｍ（５−カルボキシメチルアミノメチル−２−Ｌ−Ｏメチルウリジン）；ｃ
ｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン）；ｍ６２Ａ（
Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン）；Ｔｍ（２’−Ｏ−メチルイノシン）；ｍ４Ｃ（Ｎ４
−メチルシチジン）；ｍ４Ｃｍ（Ｎ４，２−Ｏ−ジメチルシチジン）；ｈｍ５Ｃ（５−ヒ
ドロキシメチルシチジン）；ｍ３Ｕ（３−メチルウリジン）；ｃｍ５Ｕ（５−カルボキシ
メチルウリジン）；ｍ６Ａｍ（Ｎ６，Ｔ−Ｏ−ジメチルアデノシン）；ｒｎ６２Ａｍ（Ｎ
６，Ｎ６，Ｏ−２−トリメチルアデノシン）；ｍ２’７Ｇ（Ｎ２，７−ジメチルグアノシ
ン）；ｍ２’２’７Ｇ（Ｎ２，Ｎ２，７−トリメチルグアノシン）；ｍ３Ｕｍ（３，２Ｔ
−Ｏ−ジメチルウリジン）；ｍ５Ｄ（５−メチルジヒドロウリジン）；ｆ５Ｃｍ（５−ホ
ルミル−２’−Ｏ−メチルシチジン）；ｍｌＧｍ（１，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン）
；ｍ’Ａｍ（１，２−０−ジメチルアデノシン）イリノメチルウリジン（irinomethyluri
dine））；ｔｍ５ｓ２Ｕ（Ｓ−タウリノメチル−２−チオウリジン））；ｉｍＧ−ｌ４（
４−デメチルグアノシン）；ｉｍＧ２（イソグアノシン）；またはａｃ６Ａ（Ｎ６−アセ
チルアデノシン）、ヒポキサンチン、イノシン、８−オキソ−アデニン、その７−置換誘
導体、ジヒドロウラシル、シュードウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５
−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−メチルウラシル、５−
（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−
（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロ
モウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−メ
チルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキ
ニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２
−ジメチルグアニン、７−デアザグアニン、８−アザグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ２
〜Ｃ６）アルキニルグアニン、８−ヒドロキシグアニン、６−チオグアニン、８−オキソ
グアニン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，４−ジアミノプリン
、２，６−ジアミノプリン、８−アザプリンなどが挙げられる。
【０１４４】
基が「無」であると定義される場合、基が不在であることを意味する。
【０１４５】
「任意選択で置換された」という用語は、先行する基が置換されていてもよいし、また
は置換されていなくてもよいことを意味する。置換されている場合、「任意選択で置換さ
れた」基の置換基は、単独または組合せの、以下の基または基の特定の指定されるセット
：低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルカノイル、低級ヘテロアル
キル、低級ヘテロシクロアルキル、低級ハロアルキル、低級ハロアルケニル、低級ハロア
ルキニル、低級ペルハロアルキル、低級ペルハロアルコキシ、低級シクロアルキル、フェ
ニル、アリール、アリールオキシ、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、オキソ、低級
アシルオキシ、カルボニル、カルボキシル、低級アルキルカルボニル、低級カルボキシエ
ステル、低級カルボキサミド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルア
ミノ、アリールアミノ、アミド、ニトロ、チオール、低級アルキルチオ、低級ハロアルキ
ルチオ、低級ペルハロアルキルチオ、アリールチオ、スルホン酸塩、スルホン酸、三置換
シリル、Ｎ３、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＯ２ＣＨ３、ＣＯ２Ｈ、ニトリル、
ＣＦ３、シクロアルキル、ピリジニル、チオフェン、フラニル、低級カルバミン酸塩、ハ
ロフェニル、ヒドロキシフェニル、ハロアルキル、およびヒドロキシアルキルから独立し
て選択される１つまたは複数の置換基を含んでもよいが、これらに限定されない。２つの
置換基は、共に連結されて、５、６、または７員芳香族または非芳香族炭素環式または１
〜３個のヘテロ原子を含有する複素環式環を形成してもよく、例えばメチレンジオキシま
たはエチレンジオキシを形成する。任意選択で置換された基は、置換されなくても（例え
ば−ＣＨ２ＣＨ３）、完全に置換されても（例えば−ＣＦ２ＣＦ３）、一置換されても（
例えば−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）、または完全置換〜一置換の中間のいずれかのレベルで置換さ
れても（例えば−ＣＦ２ＣＦ３）よい。置換基が置換に関して無制限に列挙される場合、
置換形態および非置換形態の両方が包含される。置換基が「置換された」と限定される場
合、置換形態が特に意図される。加えて、特定の部分について任意選択の置換基の様々な
セットは、必要に応じて定義することができ、これらの場合、任意選択の置換は、多くの
場合「により任意選択で置換された」という句の直後に続いて、定義されるとおりである
。
【０１４６】
本発明に従う化合物は、「薬学的に許容される調製物」で提供することができる。かか
る組成物は、塩、緩衝液、保存剤、担体、および任意選択で他の療法用剤を含有すること
ができる。「薬学的に許容される塩」は、生理学的に適合性であり、好ましくは非毒性の
塩を含む。例えば、酸添加塩は、例えば化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイ
ン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはリン酸などの薬学的
に許容される塩の溶液と混合することにより形成することができる。さらに、化合物が酸
性部分を有する場合、その好適な薬学的に許容される塩として、アルカリ金属塩（例えば
ナトリウムまたはカリウム塩）；アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムまたはマグネシ
ウム塩）；および好適な有機リガンド（例えばアンモニウム、四級アンモニウム、ならび
にハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、スルホン酸アル
キル、およびアリールスルホン酸エステルなどの対アニオンを用いて形成されるアミンカ
チオン）で形成される塩を挙げることができる。薬学的に許容される塩の例示的な例とし
て、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベン
ゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、
酪酸塩、エデト酸カルシウム、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩
化物、クエン酸塩、クラブラン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、
二塩酸塩、ドデシル硫酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシル酸塩、エ
タンスルホン酸塩、蟻酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコヘプトン酸塩、グルコ
ン酸塩、グルタミン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、半硫酸塩、ヘ
プタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヘキシルレソルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩
酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩
、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル酸塩、ラウリル硫酸
塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホ
ン酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ナプシル酸塩、ニコ
チン酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、
パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩
、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、ポ
リガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性
酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオ
ジド、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられるが、これらに限定されない（例えばBe
rge, S. M. et al J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19を参照のこと）。
【０１４７】
「ＰＥＧ」という用語は、繰返し単位
【０１４８】
【化５０】
2020183399.tif 000051
を有するポリマーを指し、式中、ｎ２は２〜１２である。直鎖または分岐鎖ポリエチレン
グリコールポリマーは、この用語に包含され、ポリエチレングリコールのモノメチルエー
テル（ｍＰＥＧ）を含む。また、「ＰＥＧ」という用語は、
【０１４９】
【化５１】
2020183399.tif 000052
などのニューコム型樹状分子、およびまた
【０１５０】
【化５２】
2020183399.tif 000053
を包含する。ＰＥＧはいくつかの処方で市販されている（例えばＣａｒｂｏｗａｘ（商標
）（Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）、Ｐｏｌｙ−Ｇ（登録商標）（
Ａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｎｏｒｗａｌｋ  ＣＴ）、およびＳｏｌｂａｓｅ）。
【０１５１】
「ポリアミン」という用語は、少なくとも１つのアミノ水素原子を有する少なくとも２
つのアミノ基を含有するアミン化合物を指す。ポリアミンの例として、ポリエチレンイミ
ン、ポリプロピレンイミン、ポリビニルアミン、ポリアリルアミン、エチレンジアミン、
ヘキサメチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチ
レンペンタミン、およびビスヘキサメチレントリアミンが挙げられるが、これらに限定さ
れない。
【０１５２】
本明細書で開示される式において、表示
【０１５３】
【化５３】
2020183399.tif 000054
は、５’から３’の向きのＲＮＡを指す。
【０１５４】
実施例
材料および方法：全ての試薬は、別に示されない限り、市販の供給源から購入し、処理
せずに使用した。ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ４００ＭＨｚまた
は５００ＭＨｚ  ＮＭＲ分析計上でＩＣＯＮ−ＮＭＲを用いて、ＴｏｐＳｐｉｎプラグラ
ム制御下で行った。１３Ｃ  ＮＭＲおよび３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルを記録した。別に示
されない限り、スペクトルを２９８Ｋで測定し、溶媒共鳴に対して参照した。化学シフト
（δ）をｐｐｍで報告し、シグナルをｓ（単重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（
四重線）、およびｍ（多重線）として記載する。質量スペクトルをＬＣ−ＭＳシステム上
でエレクトロスプレイイオン化法を用いて以下に示される構成の器具の連なりから得た。
［Ｍ＋Ｈ−］＋は、化学種のプロトン化分子イオンを指す。［Ｍ−Ｈ＋］−は、化学種の
脱プロトン化分子イオンを指す。
【０１５５】
ＬＣＭＳ法１  ＲＸＮＭＯＮ＿ＡＣＩＤＣ
器具  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ；Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ
質量分析計
カラム  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ３０×３．０ｍｍ、３．５μｍ
カラム温度  ４０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル
流速  ２ｍｌ／分
勾配  １．７分間で５％〜９５％Ｂ
【０１５６】
ＬＣＭＳ法２  ＲＸＮＭＯＮ  Ａｃｉｄｉｃ＿Ｐｏｌａｒ＿＝ＲＸＮＭＯＮ  Ａｃｉｄ
ｉｃ＿Ｐｏｌａｒ＿ＰｏｓＮｅｇ
器具  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ；Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ
質量分析計
カラム  Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ３０×３．０ｍｍ、３．５μｍ
カラム温度  ４０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル
流速  ２ｍｌ／分
勾配  １．２０分間で１％〜３０％Ｂ、０．６５分間で３０％〜９５％Ｂ
【０１５７】
ＬＣＭＳ法４  ＲＸＮＭＯＮ＿Ｂａｓｉｃ＿Ｐｏｌａｒ
器具  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ；Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ
質量分析計
カラム  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ３０×３．０ｍｍ、３．５μｍ
カラム温度  ４０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋５ｍＭ水酸化アンモニウム、Ｂ：アセトニトリル
流速  ２ｍｌ／分
勾配  １．２０分間で１％〜３０％Ｂ、０．６５分間で３０％〜９５％Ｂ
【０１５８】
ＬＣＭＳ法５  ＳＱ４ｍＲＮＡｃａｐ＿ＦＩＡ  Ａｃｉｄｉｃ
器具  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ、ＳＱ検出器を伴う
カラム  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×５０ｍｍ
カラム温度  ５０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．１％蟻酸、Ｂ：アセトニトリル＋０．１％蟻酸
流速  １ｍｌ／分
勾配  ５０％Ｂ均一濃度、２．１６分間
【０１５９】
ＬＣＭＳ法６  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＬＣＴｐ２  Ｔｏｆ＿製品分析ａｃｉｄｉｃ
器具  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ、Ｗａｔｅｒｓ  ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅ
ｒ  ＸＥ検出器を伴う
カラム  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×５０ｍｍ
カラム温度  ５０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．１％蟻酸、Ｂ：アセトニトリル＋０．１％蟻酸
流速  １ｍｌ／分
勾配  ７．５分間で２％〜９８％Ｂ
【０１６０】
ＬＣＭＳ法７  ＳＱ４  ａｃｉｄｉｃ  ｐｏｌａｒ
器具  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ、ＳＱ検出器を伴う
カラム  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×５０ｍｍ
カラム温度  ５０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．１％蟻酸、Ｂ：アセトニトリル＋０．１％蟻酸
流速  １ｍｌ／分
勾配  １．２０分間で１％〜３０％Ｂ；０．９５分間で３０％〜９８％Ｂ
【０１６１】
ＬＣＭＳ法８  ＳＱ４  ａｃｉｄｉｃ
器具  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ、ＳＱ検出器を伴う
カラム  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１×５０ｍｍ
カラム温度  ５０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋０．１％蟻酸、Ｂ：アセトニトリル＋０．１％蟻酸
流速  １ｍｌ／分
勾配  １．７６分間で２％〜９８％Ｂ
【０１６２】
ＬＣＭＳ法９  ＩＰＣ
器具  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑｕａｔｔｒｏ  ｍｉｃｒｏ  ＡＰＩ、Ａｇｉｌｅｎｔ  １
１００シリーズポンプ
カラム  Ｘｂｒｉｄｇｅ  ＢＥＨ  Ｃ１８  ２．５μｍ  ３．０×１００ｍｍ
カラム温度  ８０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋２００ｍＭ  ＨＦＩＰ＋８ｍＭ  ＴＥＡ、Ｂ：メタノール
流速  １ｍｌ／分
勾配  ３．６５分まで３０％Ｂ；３．７５分で９９％Ｂへ、３．８５分まで９９％Ｂ
【０１６３】
ＬＣＭＳ法１０  ｓｃｏｕｔ  ｂａｓｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ
器具  Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ；Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ
質量分析計
カラム  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ、３０×３．０ｍｍ、３．５μｍ
カラム温度  ４０℃
溶離液  Ａ：Ｈ２Ｏ＋５ｍＭ水酸化アンモニウム、Ｂ：アセトニトリル
流速  ２ｍｌ／分
勾配  ４．３０分間で５％〜８０％Ｂ、５．０分で９５％Ｂへ
【０１６４】
略語：
ＡＴＰ  アデノシン５’三リン酸
Ａｔｍ  大気
ＡｃＯＨ  酢酸
Ａｑ  水性
Ａｒ  アリール
ｂｒ  ブロード
ｂｒ．ｓ．、ｂｓ  ブロード単重線
ＢＳＡ  ウシ血清アルブミン
℃  摂氏
ＣＤＣｌ３  重水素化クロロホルム
ＣＨ２Ｃｌ２、ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＣＨ３ＣＮ、ＭｅＣＮ  アセトニトリル
ｄ  二重線
ｄｄ  二重線の二重線
ｄｄｄ  二重線の二重線の二重線
ＤＩＰＥＡ  Ｎ−エチルジイソプロピルアミン
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＡＰ  ジメチルアミノピリジン
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ｄｔ  三重線の二重線
ＥＳＩ  エレクトロスプレイイオン化
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥｔＯＨ  エタノール
ＦＣＣ  フラッシュカラムクロマトグラフィー
Ｇ  ゲージ
ＧＭＰ  グアノシン５’一リン酸
ＧＤＰ  グアノシン５’二リン酸
ＧＴＰ  グアノシン５’三リン酸
ｈ  時間
ＨＣｌ  塩酸
ＨＡＴＵ  １−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［
４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ  Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル
ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＥＰＥＳ  ２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホ
ン酸
ＨＦＩＰ  ヘキサフルオロイソプロパノール
ＨＯＢｔ  ヒドロキシベンゾトリアゾール（hydoxybenzotriazole）
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
ｉ−ＰｒＯＨ  イソプロピルアルコール
Ｈ２Ｏ  水
Ｋ  ケルビン
ＫＯＨ  水酸化カリウム
ＬＣ  液体クロマトグラフィー
Ｍ  モル
ｍ  多重線、質量
ＭｅＯＨ  メタノール
ＭＥＳ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸
ＭｇＳＯ４  硫酸マグネシウム
ＭＨｚ  メガヘルツ
ｍＬ  ミリリットル
ｍｍ  ミリメートル
ｍｍｏｌ  ミリモル
ｍｉｎ  分
ｍＲＮＡ  メッセンジャーリボ核酸
ＭＳ  質量分析法
ｍｗ  マイクロ波
ｍ／ｚ  質量対電荷の比
ＮａＯＨ  水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＮＥｔ３  トリエチルアミン
ＮＨ３  アンモニア
ＮＭＲ  核磁気共鳴
ＰＢＳ  リン酸緩衝食塩水
ｐｐｔ  沈殿物
ｐｐｍ  百万分率
ｒｂｆ  丸底フラスコ
Ｒｆ  遅延因子
ＲＰ  逆相
ＲＴ、ｒｔ  室温
Ｒｔ  保持時間
ｓ  単重線
ｓａｔ．  飽和
ＳＭ  出発物質
ｔ  三重線
ＴＢＡ  トリブチルアミン
ＴＥＡ  トリエチルアミン
ＴＥＡＢ  トリエチルアンモニウム重炭酸塩
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＴＬＣ  薄層クロマトグラフィー
ＴＲＩＳ  ２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオール
ＵＰＬＣ  高性能液体クロマトグラフィー
Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ  アミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン塩酸塩
ｗｔ  重量
Ｘｐｈｏｓ  Ｐｄ  Ｇ２  第２世代Ｘｐｈｏｓプレ触媒、クロロ（２−ジシクロヘキシル
ホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２
’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）
μｇ  マイクログラム
μＬ  マイクロリットル
【０１６５】
ヌクレオチドトリアルキルアンモニウム塩を、対応する市販されているナトリウム塩か
ら文献の手順に従って（Y. Thillier, E. Decroly, F. Morvan, B. Canard, J.-J. Vasse
ur, F. Debart RNA 2012, 18, 856-868、ＧＭＰナトリウム塩：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉ
ｃｈ  Ｇ８３７７番、ＧＤＰナトリウム塩：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｇ７１２７番
、２’−デオキシＧＭＰナトリウム塩：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｄ９５００番、イ
ノシン５’一リン酸ナトリウム塩：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉ４６２５番、イノシ
ン５’二リン酸ナトリウム塩：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉ４３７５番）または以下
に説明する条件と同様の条件下で得た。
【０１６６】
ＧＭＰトリエチルアンモニウム塩：
【０１６７】
【化５４】
2020183399.tif 000055
ＧＭＰナトリウム塩（２．０ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）を、ＲＮアーゼ非含有水（４０ｍ
Ｌ）に溶解し、ＤＯＷＥＸ樹脂（５０ＷＸ８、４０ｇ、Ｈ２Ｏで完全にすすいだ）上を通
過させて、ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）中のトリエチルアミン（１０ｇ、９８ｍｍｏｌ）の氷冷
溶液に入れた。溶離に続いて、溶離液のＵＶ吸収を測定し、さらなるＧＭＰが溶離しなく
なるまで樹脂を水ですすいだ。得られた溶液を真空下で約５００ｍＬまで濃縮し、その後
凍結乾燥させて、表題の生成物を白色固体として得た（２．２ｇ、１Ｈ−ＮＭＲにより判
定するとＧＭＰ／ＴＥＡ  １／２）。
【０１６８】
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩：
【０１６９】
【化５５】
2020183399.tif 000056
ＧＤＰ−二ナトリウム塩（１．１７ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を水（１００ｍＬ）に溶解
し、ＤＯＷＥＸ樹脂（５０ＷＸ８、１０ｍＬ、＞１．７ミリ当量／ｍＬ、Ｈ２Ｏで完全に
すすいだ）上を通過させて、ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中のトリブチルアミン（１．３４ｇ、
７．２０ｍｍｏｌ）の氷冷溶液に入れた。樹脂を水（１０００ｍＬ）ですすぎ、得られた
溶液を真空下で約５００ｍＬまで濃縮し、その後凍結乾燥させて、表題の生成物を無色の
固体として得た（１．８８ｇ、１Ｈ−ＮＭＲにより判定するとＧＤＰ／ＴＢＡ  １／２．
５）。
【０１７０】
ＧＭＰのＮ７アルキル化のための一般手順
方法Ａ：２ドラムバイアル中で、グアノシン一リン酸トリブチルアンモニウム塩（５０
ｍｇ、６８μｍｏｌ）をＤＭＳＯ（６８０μＬ）中に溶解し、市販されている臭化アルキ
ルまたは塩化アルキル試薬（４当量）で処理した。塩化物アルキル化試薬を使用した場合
、および（２−ブロモエトキシ）−ベンゼン基質の場合、ＮａＩを添加した（５ｍｇ、０
．５当量）。得られた溶液を、４０℃で１８時間振盪または撹拌した。得られた溶液を直
接、ＨＰＬＣ（逆相、Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡからＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ  ０〜１０
０％）による精製に供した。所望の生成物を含有する画分を集め、溶媒を凍結乾燥により
除去して、純粋な生成物を無色の固体または泡沫として得た。
【０１７１】
方法Ｂ：２ドラムバイアル中で、ＤＭＳＯ中のＧＭＰまたはＧＤＰトリエチルもしくは
トリブチルアンモニウム塩の０．１Ｍ溶液を、臭化物アルキル化試薬（４当量）で処理し
た。上記溶液を室温または５５℃で１８時間撹拌し、その後直接、逆相カラムクロマトグ
ラフィー（ＩＳＣＯ  Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｃ１８ａｑ．  溶離液：０．１Ｍトリエチルア
ンモニウム重炭酸塩（ｐＨ＝８．０）からＭｅＣＮ  ０〜１００％）による精製に供した
。所望の生成物を含有する画分を集め、溶媒を凍結乾燥により除去し、トリブチルアンモ
ニウム塩としての純粋な生成物を無色の固体または泡沫として得た。
【実施例１】
【０１７２】
Ｎ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−５’−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０１７３】
【化５６】
2020183399.tif 000057
ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のグアノシン一リン酸トリエチルアンモニウム塩（１００ｍｇ、
０．１７７ｍｍｏｌ）および４−ビフェニルメチルブロミド（１７５ｍｇ、０．７１０ｍ
ｍｏｌ）の溶液を、５５℃で一晩撹拌した。上記溶液を直接、逆相カラムクロマトグラフ
ィー（ＩＳＣＯ  Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｃ１８  ３０ｇ  Ｇｏｌｄカートリッジ、溶離液Ａ
：０．１Ｍ  ＴＥＡＢ；Ｂ：０．１Ｍ  ＴＥＡＢ中の２０％ＭｅＣＮ；勾配：０〜１００
％  Ｂ／Ａ）による精製に供した。生成物画分を集め、凍結乾燥させて、表題の化合物を
白色粉末として得た（３８ｍｇ、２８％）。1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm: 7.58-7.67 
(4H, m), 7.46-7.53 (4H, m), 7.38-7.46 (1H, m), 5.97-6.03 (1H, m), 5.63-5.76 (2H,
m), 4.62-4.69 (1H,m), 4.46-4.52 (1H, m), 4.32-4.40 (1H, m), 3.97-4.18 (2H, m), 
3.11-3.25 (8.6H, q), 1.20-1.34 (13H, t). 31P NMR (162 MHz, D2O): δ ppm: 3.73 (1
P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ：１．３９分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  観察値：５２９．８。計算値
：５３０．１。
【実施例２】
【０１７４】
Ｎ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０１７５】
【化５７】
2020183399.tif 000058
ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中のグアノシン二リン酸トリエチルアンモニウム塩（４００ｍｇ、
０．５３８ｍｍｏｌ）および４−ビフェニルメチルブロミド（４００ｍｇ、１．６１９ｍ
ｍｏｌ）の溶液を、室温で一晩撹拌した。１Ｍ  ＮａＣｌＯ４アセトン溶液（３．２３ｍ
Ｌ）を添加し、その後アセトンで希釈した。沈殿物を、遠心分離により分離し、アセトン
で洗浄し、真空下で乾燥させた。このようにして得られた固体を、０．１Ｍ  ＴＥＡＢ（
５ｍＬ）中に溶解した。得られた溶液を、逆相カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  Ｔ
ｅｌｅｄｙｎｅ  Ｃ１８、３０ｇ  Ｇｏｌｄカートリッジ、溶離液Ａ：０．１Ｍ  ＴＥＡ
Ｂ；Ｂ：０．１Ｍ  ＴＥＡＢ中の９０％ＭｅＣＮ；勾配：０〜１００％  Ｂ／Ａ）による
精製に供した。生成物画分を集め、凍結乾燥させて、表題の化合物を白色粉末として得た
（９０ｍｇ、１８％）。1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm: 7.57-7.67 (4H, m), 7.39-7.53
(5H, m), 5.92 -6.00 (1H, d), 5.64-5.75 (2H, m), 4.67-4.72 (2H, m), 4.56-4.64 (1
H, m), 4.34-4.40 (1 H, m), 4.26-4.34 (2H, m), 3.12-3.24 (12H, q), 1.27 (18H, t).
31P NMR (162 MHz, D2O): δ ppm: 7.16 (1P), 10.93 (1P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ：１．
４３分、ＭＳ［Ｍ−Ｈ］＋  観察値：６０８．２、計算値：６０８．１。
【実施例３】
【０１７６】
Ｎ７−（４−クロロフェノキシエチル）−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０１７７】
【化５８】
2020183399.tif 000059
ＤＭＳＯ（４ｍＬ）中のグアノシン二リン酸トリエチルアンモニウム塩（５００ｍｇ、
０．６７２ｍｍｏｌ）および４−クロロフェニル２−ブロモエチルエーテル（６３３ｍｇ
、２．６９ｍｍｏｌ）の溶液を、５５℃で一晩撹拌した。１Ｍ  ＮａＣｌＯ４アセトン溶
液（４ｍＬ）を添加し、その後アセトンで希釈した。沈殿物を、遠心分離により分離し、
アセトンで洗浄し、真空下で乾燥させた。このようにして得られた固体を、０．１Ｍ  Ｔ
ＥＡＢ（５ｍＬ）中に溶解した。得られた溶液を、イオン交換クロマトグラフィー（ＴＯ
ＳＯＨ、ＴＳＫゲルＤＥＡＥ−５ＰＷ、２１．５ｍｍ×１５ｃｍ、１３μｍ、溶離液Ａ：
Ｈ２Ｏ；Ｂ：水中の１Ｍ  ＴＥＡＢ；勾配：０〜１００％  Ｂ／Ａ）による精製に供した
。生成物画分を集め、凍結乾燥させて、表題の化合物を白色粉末として得た（２５ｍｇ、
４％）。1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm:  7.22-7.31 (2H, d), 6.86-6.94 (2H, d), 5.9
6-6.03 (1H, m), 4.46-4.52 (1H, m), 4.37-4.44 (1H, m), 4.29-4.37 (1H, m), 4.19-4.
29 (2H, m), 3.12-3.26 (9H, q), 1.20-1.34 (16H, t).  31P NMR (162 MHz, D2O): δ p
pm: 9.91 (1P), 11.28 (1P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ：１．２０分、ＭＳ［Ｍ−Ｈ］＋  観察
値：５９６．８、計算値：５９６．０。
【実施例４】
【０１７８】
Ｎ７−（４−クロロフェノキシエチル）−５’−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０１７９】
【化５９】
2020183399.tif 000060
以前に説明されるように調製した（A. R. Kore et al Bioorg. Med. Chem. 2013, 21, 
4570、Chen et al J. Med. Chem. 2012, 55, 3837）。生成物は、白色粉末として得られ
た。（８４ｍｇ、１２％）。1H NMR (400 MHz, D2O) δ ppm: 7.18-7.27 (2H, d), 6.83-
6.93 (2H, d), 5.92-6.02 (1H, m), 4.41-4.48 (1H, m), 4.33-4.41 (1H, m), 4.11-4.20
(1H, m), 3.97-4.09 (1H, m), 3.13-3.26 (10H, q), 1.20-1.34 (15H, t). 31P NMR (16
2 MHz, D2O): δ ppm: 3.39 (1P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ：１．２０分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋
観察値：５１７．８、計算値：５１８．１。
【実施例５】
【０１８０】
Ｎ７−ベンジル−５’−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０１８１】
【化６０】
2020183399.tif 000061
以前に説明されるように調製した（Brown et al J. Mol Biol. 2007, 372, 7-15）。生
成物は、白色粉末として得られた（５５ｍｇ、３８％）。1H NMR (400MHz, D2O) δ ppm:
7.33-7.45 (5H, m), 6.02-6.11 (1H, m), 5.64-5.73 (2H, m), 4.44-4.53 (1H, m), 4.3
3-4.42 (1H, m), 3.96-4.17 (2H, m), 3.19 (10H, q), 1.27 (14H, t).  31P NMR (162 M
Hz, D2O): δ ppm: 3.78 (1P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ：０．８４分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  観
察値：４５４．２、計算値：４５４．１。
【実施例６】
【０１８２】
Ｎ７−（６−フェニルピリジン−３−イル）メチル）−５’−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０１８３】
【化６１】
2020183399.tif 000062
ステップ１．  ５−（ブロモメチル）−２−フェニルピリジン
【０１８４】
【化６２】
2020183399.tif 000063
酢酸中の３３％ＨＢｒ（２．９３ｍＬ、１６．２０ｍｍｏｌ）中の（６−フェニルピリ
ジン−３−イル）メタノール（３００ｍｇ、１．６２０ｍｍｏｌ）の溶液を、４０℃で一
晩撹拌した。揮発性物質を蒸発させた。残留物をＤＣＭの間で分割し、重炭酸ナトリウム
溶液で希釈し、有機層を分離した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ、真空下で濃縮して、
固体を得た（２７７ｍｇ、６９％）。ＬＣＭＳ法３  Ｒｔ：１．３６分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］
＋  観察値：２４９．９、計算値：２５０．０。
ステップ２．  Ｎ７−（６−フェニルピリジン−３−イル）メチル）−５’−ＧＭＰ  Ｔ
ＥＡ塩
【０１８５】
【化６３】
2020183399.tif 000064
表題の化合物（４０ｍｇ、２３％）を、１３０ｍｇのＧＭＰ  ＴＥＡ塩から、実施例５
で説明する方法により調製した。1H NMR (400MHz, D2O) δ ppm: 8.57-8.66 (1H, m), 7.
85-7.93 (1H, m), 7.66-7.82 (3H, m), 7.39-7.52 (3H, m), 5.91-6.02 (1H, m), 5.58-5
.77 (2H, m), 4.42-4.50 (1H, m), 4.28-4.37 (1H, m), 4.06-4.17 (1H, m), 3.95-4.02 
(1H, m), 3.06-3.23 (10H, m), 1.11-1.30 (15H, m).  31P NMR (162 MHz, D2O): δ ppm
: 3.54 (1P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ：０．９１分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  観察値：５３１．０
、計算値：５３１．１。
【実施例７】
【０１８６】
Ｎ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２’，３’−イソプロピリデン
−５’−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０１８７】
【化６４】
2020183399.tif 000065
ステップ１：Ｎ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２’，３’−イソ
プロピリデングアノシン
【０１８８】
【化６５】
2020183399.tif 000066
ＤＭＳＯ（２ｍＬ）中の２’，３’−イソプロピリデングアノシン（５００ｍｇ、１．
５４７ｍｍｏｌ）および４−ビフェニルメチルブロミド（１４５ｍｇ、０．８４９ｍｍｏ
ｌ）の溶液を、室温で一晩撹拌した。上記溶液を直接、逆相ＨＰＬＣ（Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ
５０×５０ｍｍ、５μｍカラム、溶離液Ａ：５ｍＭ  ＮＨ４ＯＨを含む水；Ｂ  ５ｍＭ
ＮＨ４ＯＨを含むＭｅＣＮ；勾配：１５〜４０％  Ｂ／Ａ）による精製に供した。生成
物画分を集め、凍結乾燥させて、表題の化合物を白色粉末として得た（２６０ｍｇ、３４
％）。ＬＣＭＳ法１  Ｒｔ：１．０２分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  観察値：４９０．１、計算
値：４９０．２。
ステップ２：Ｎ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２’，３’−イソ
プロピリデン−５’−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０１８９】
【化６６】
2020183399.tif 000067
三塩化ホスホリル（９５μＬ、１．０２１ｍｍｏｌ）を、０℃のリン酸トリメチル（１
ｍＬ）中のＮ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２’，３’−イソプ
ロピリデングアノシン（１００ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）の混合物にゆっくりと添加し
、Ｎ２下で３時間撹拌した。反応混合物を、０℃の１Ｍ  ＴＥＡＢ溶液（３ｍＬ）に一滴
ずつ添加し、得られた混合物を遠心分離した。このようにして得られた溶液を、逆相カラ
ムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ  Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｃ１８  ３０ｇ  Ｇｏｌｄカート
リッジ、溶離液Ａ：０．１Ｍ  ＴＥＡＢ；Ｂ：０．１Ｍ  ＴＥＡＢ中の３０％ＭｅＣＮ；
勾配：０〜１００％  Ｂ／Ａ）による精製に供した。生成物画分を集め、凍結乾燥させて
、表題の化合物を白色粉末として得た（３８ｍｇ、２４％）。1H NMR (400MHz, D2O) δ 
ppm: 9.70-9.90 (1H, br), 7.57-7.69 (4H, m), 7.29-7.57 (5H, m), 6.01-6.13 (1H, m
), 5.61-5.78 (2H, m), 5.34-5.41 (1H, m), 5.09-5.15 (1H, m), 4.52-4.60 (1H, m), 3
.98-4.09 (1H, m), 3.80-3.92 (1H, m), 2.60 (8H, q), 1.50 (3H, s), 1.34 (4H, s), 1
.00 (14H, t). 31C (162 MHz, D2O): δ ppm: 0.224 (1P).ＬＣＭＳ法４  Ｒｔ：０．９
４分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  観察値：５７０．１、計算値：５７０．２。
【実施例８】
【０１９０】
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（（２−（ホス
ホノオキシ）エトキシ）メチル）−９Ｈ−プリン−７−イウム−６−オレートトリエチル
アンモニウム塩
【０１９１】
【化６７】
2020183399.tif 000068
ステップ１：７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（
（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）−９Ｈ−プリン−７−イウム−６−オレート
【０１９２】
【化６８】
2020183399.tif 000069
アシクログアノシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａ４６６９番）のアルキル化を、
以下の一般手順Ｂに従って行った。ＬＣ−ＭＳ法１  Ｒｔ＝０．９５分；ＭＳ  ｍ／ｚ［
Ｍ＋Ｈ］＋３９２．２。
ステップ２：７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（
（２−（ホスホノオキシ）エトキシ）メチル）−９Ｈ−プリン−７−イウム−６−オレー
トトリエチルアンモニウム塩
【０１９３】
【化６９】
2020183399.tif 000070
ステップ１で得られたアルコール（７３ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、ＰＯ（ＯＭｅ）
３（１．９ｍＬ）中に懸濁し、ＰＯＣｌ３（８６ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を添加した。
上記溶液を室温で３時間撹拌し、その後ＴＥＡＢ（０．１Ｍ、１ｍＬ）の添加により抑制
した。得られた溶液を直接、カラムクロマトグラフィー（ＩＳＯＣ  ＲＰ  Ｃ１８Ａｑ、
ＴＥＡＢ  ０．１ＭおよびＭｅＣＮ；０〜１００％ＭｅＣＮで溶離）による精製に供した
。得られた画分の凍結乾燥後、生成物を無色の泡沫として得た（８４ｍｇ、０．１４ｍｍ
ｏｌ、７５％、１Ｈ−ＮＭＲにより決定するとリン酸塩対ＮＥｔ３の比  １／１．４）。
ＬＣ−ＭＳ法６  Ｒｔ＝１．７９分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋４７２．１１６８；計算
値：４７２．１１４５、1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.45 7.44 (3H, m), 7.54 (2H, d, J
= 8.14 Hz), 7.50 (2H, d, J = 7.80 Hz), 5.53 (2H, s), 5.50 (2H, s), 3.78 - 3.74 
(2H, m), 3.65 - 3.62 (2H, m), 3.05 (8.4 H, q, J = 7.34 Hz, NEt3), 1.13 (12.7 H, 
t, J = 7.56 Hz, NEt3).
【実施例９】
【０１９４】
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（（２−（（ヒ
ドロキシ（ホスホノオキシ）ホスホリル）オキシ）エトキシ）メチル）−９Ｈ−プリン−
７−イウム−６−オレートトリエチルアンモニウム塩
【０１９５】
【化７０】
2020183399.tif 000071
ステップ１：アシクログアノシンリン酸トリエチルアンモニウム塩（上記に説明するよ
うに得られた、７７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（無水、６．７ｍＬ）中に懸濁
し、イミダゾール（１０１ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、２，２’−ジピリジルジスルフィ
ド（１５１ｍｇ、０．６８５ｍｍｏｌ）、およびＮＥｔ３（３４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ
）を添加した。上記懸濁液を室温で１０分間撹拌し、その後トリフェニルホスフィン（１
８３ｍｇ、０．６９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物は薄黄色に変わり、室温で５時
間撹拌した。アセトン中のＮａＣｌＯ４溶液（１Ｍ、２．１ｍＬ）およびアセトン（１５
ｍＬ）を添加し、懸濁液を氷上で１０分間維持した。得られた溶液を遠心分離し（３分間
、２０００×ｇ）、ペレットを１０ｍＬの氷冷アセトンで２回洗浄した。ペレットを真空
下で乾燥させ、イミダゾール活性化リン酸塩（５０ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ、７１％）
を得、これをさらに精製することなく、使用した。
ステップ２：ステップ１で得られた活性化リン酸塩を、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中に懸濁し
、リン酸トリブチルアンモニウム（ＤＭＦ中の１．０Ｍ、０．５ｍＬ、０．４７９ｍｍｏ
ｌ）およびＺｎＣｌ２（１３ｍｇ、０．０９６ｍｍｏｌ）を添加した。上記溶液を室温で
５時間激しく撹拌し、その後直接、ＩＳＣＯ  ＲＰＡｑ１８上でのカラムクロマトグラフ
ィーによる精製に供し、０．１Ｍ  ＴＥＡＢおよびＭｅＣＮ、０〜１００％ＭｅＣＮで溶
離した。生成物を含有する画分の凍結乾燥により、表題の生成物を無色の固体として得た
（５２ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ、６８％、１Ｈ  ＮＭＲにより決定するとリン酸塩対Ｎ
Ｅｔ３の比  １／２．４５）。ＬＣ−ＭＳ：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］
＋５５２．１  ＬＣＭＳ法１；1H NMR (400 MHz, D2O) δ 7.59 - 7.54 (4 H, m), 7.40 
- 7.36 (4H, m), 7.32 - 7.28 (1H, m), 5.58 (2H, s), 5.55 (2H, s), 3.98 - 3.94 (2H
, m), 3.73 - 3.71 (2H, m), 3.08 (q, J = 7.22 Hz, NEt3), 1.13 (12.7 H, t, J = 7.5
6 Hz, NEt3).
【実施例１０】
【０１９６】
７−（（２−クロロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）メチル）−５’−ＧＤＰ  
ＴＥＡ塩
【０１９７】
【化７１】
2020183399.tif 000072
ステップ１：２−クロロ−４−メチル−１，１’−ビフェニル
【０１９８】
【化７２】
2020183399.tif 000073
２ドラムバイアル中で、ヨウ化フェニル（２００ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）および（２
−クロロ−４−メチルフェニル）ボロン酸（１６７ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ
（４．９ｍＬ）中に溶解した。Ｋ２ＣＯ３（４００μＬのＨ２Ｏ中の５４２ｍｇ）および
Ｓｐｈｏｓ  Ｐａｌｌａｄａｃｙｃｌｅ  Ｇ２（７．１ｍｇ、９．８μｍｏｌ）の水溶液
を添加し、得られた懸濁液を８０℃で３時間激しく撹拌した。室温まで冷却後、ＤＣＭ（
５ｍＬ）を添加し、有機層を水（１０ｍＬ）、１０％ＬｉＣｌ（水性、３×１０ｍＬ）で
洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空下での溶媒の除去後に得られた残留物を、フ
ラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタンからヘプタン中の２０％ＥｔＯＡｃ）
による精製に供した。２−クロロ−４−メチル−１，１’−ビフェニルを、無色の油とし
て得た（１４７ｍｇ、０．７２５ｍｍｏｌ、７４％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.4
5 7.44 (3H, m), 7.41 - 7.36 (1H, m), 7.32 (1H, br s), 7.25 (1H, d, J = 7.58 Hz),
7.14 (1H, d, J = 7.58 Hz), 2.40 (3H, s).
ステップ２：４−（ブロモメチル）−２−クロロ−１，１’−ビフェニル
【０１９９】
【化７３】
2020183399.tif 000074
２−クロロ−４−メチル−１，１’−ビフェニル（１４０ｍｇ、０．６９１ｍｍｏｌ）、
Ｎ−ブロモスクシンイミド（１３５ｍｇ、０．７６０ｍｍｏｌ）、およびアゾジイソブチ
ロニトリル（１１ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を、ＣＣｌ４（６．９ｍＬ）中に溶解し、
溶液を８５℃で１時間撹拌した。上記溶媒を真空下で除去し、残留物をフラッシュクロマ
トグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタンからヘプタン中の２０％ＥｔＯＡｃ）により精製し、
表題の化合物を出発物質との混合物中（１Ｈ  ＮＭＲにより判定すると３：１）で、無色
の固体として得た（１７３ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ、６６％）。上記混合物を、続くア
ルキル化反応でそのまま使用した。
ステップ３：７−（（２−クロロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）メチル）−５
’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２００】
【化７４】
2020183399.tif 000075
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩（７０ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）を、ステップ２の生
成物（７３ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）で一般手順Ｂに従ってアルキル化した。表題の生成
物を、無色の固体として得た（３０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、４２％）。ＬＣＭＳ法１
：Ｒｔ＝１．０１分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６４４．０；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 10.42 (1H, s), 7.93 (1H, s), 7.78 (1H, d, J = 8.12 Hz), 7.72 - 7.63 (1H, m)
, 7.47 - 7.35 (9 H, m), 5.81 (1H, s), 5.72 (1H, br s), 4.48 (1H, br s), 4.40 (1H
, br s), 4.14-4.04 (3H, m), 3.34 (br, NEt3), 1.03 (12.7 H, t, J = 7.56 Hz, NEt3)
.
【実施例１１】
【０２０１】
７−（（３−メトキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）メチル）−５’−ＧＤＰ
ＴＥＡ塩
【０２０２】
【化７５】
2020183399.tif 000076
ステップ１：３−メトキシ−４−メチル−１，１’−ビフェニル
【０２０３】
【化７６】
2020183399.tif 000077
２ドラムバイアル中で、ヨウ化フェニル（２００ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）および（３
−メトキシ−４−メチルフェニル）ボロン酸（１６３ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を、ＤＭ
Ｆ（４．９ｍＬ）中に溶解した。Ｋ２ＣＯ３（４００μＬのＨ２Ｏ中の５４２ｍｇ）およ
びＳｐｈｏｓ  Ｐａｌｌａｄａｃｙｃｌｅ  Ｇ２（７．１ｍｇ、９．８μｍｏｌ）の水溶
液を添加し、得られた懸濁液を８０℃で１２時間激しく撹拌した。室温まで冷却後、ＤＣ
Ｍ（５ｍＬ）を添加し、有機層を水（１０ｍＬ）、１０％ＬｉＣｌ（水性、３×１０ｍＬ
）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空下での溶媒の除去後に得られた残留物を
、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタンからヘプタン中の２０％ＥｔＯＡ
ｃ）による精製に供した。３−メトキシ−４−メチル−１，１’−ビフェニルを、無色の
油として得た（１４９ｍｇ、０．７５２ｍｍｏｌ、７７％）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 7.70 - 7.66 (2H, m), 7.53 - 7.49 (2H, m), 7.44 - 7.39 (1H, m), 7.28 (1H, d,
J = 7.04 Hz), 7.19 (1H, dd, J = 7.60, 1.77 Hz), 7.13 (1H, d, J = 1.50 Hz), 3.97
(3H, s), 2.37 (3H, s).
ステップ２：４−（ブロモメチル）−３−メトキシ−１，１’−ビフェニル
【０２０４】
【化７７】
2020183399.tif 000078
３−メトキシ−４−メチル−１，１’−ビフェニル（１４７ｍｇ、０．７４１ｍｍｏｌ）
、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１４５ｍｇ、０．８１６ｍｍｏｌ）、およびアゾジイソブ
チロニトリル（１２ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を、ＣＣｌ４（７．４ｍＬ）中に溶解し
、溶液を８５℃で１時間撹拌した。上記溶媒を真空下で除去し、残留物をフラッシュクロ
マトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタンからヘプタン中の２０％ＥｔＯＡｃ）により精製し
、表題の化合物を無色の固体として得た（１６３ｍｇ、０．５８８ｍｍｏｌ、７９％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.62 - 7.59 (2H, m), 7.49 - 7.45 (2H, m), 7.43 - 7.39
(2H, m), 7.18 (1H, dd, J = 7.75, 1.66 Hz), 7.11 (1H, d, J = 1.59 Hz), 4.65 (2H,
s), 3.99 (3H, s).
ステップ３：７−（（３−メトキシ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）メチル）−
５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２０５】
【化７８】
2020183399.tif 000079
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩（１００ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）を、ステップ２の
生成物（１０２ｍｇ、０．３６９ｍｍｏｌ）で一般手順Ｂに従ってアルキル化した。表題
の生成物を無色の固体として得た（４６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、４５％）。ＬＣＭＳ
法１  Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６４０．０；1H NMR (400 MHz, DMS
O-d6) δ 9.80 (1H, s), 7.66 (2H, d, J = 7.49 Hz), 7.47 - 7.43 (3H, m), 7.38 - 7.
34 (1H, m), 7.21 (1H, br s), 7.15 (1H, d, J = 7.59 Hz), 5.83 (1H, s), 5.56 (2H, 
s), 4.48 (2H, s), 4.14 (1H, br s), 4.06 (1H, br s), 3.95 (3H, s), 2.68 (br, NEt3
), 1.04 (t, J= 6.81 Hz, NEt3).
【実施例１２】
【０２０６】
７−（６−フェニルピリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２０７】
【化７９】
2020183399.tif 000080
ステップ１：３−（ヒドロキシメチル）−６−フェニルピリジン−２（１Ｈ）−オン
【０２０８】
【化８０】
2020183399.tif 000081
ＴＨＦ（２４ｍＬ）中の２−オキソ−６−フェニル−１，２−ジヒドロピリジン−３−
カルボン酸（５３３ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ボランジメチルスルフィド複合
体（ＴＨＦ中の１．０Ｍ、９９１μＬ、９．９１ｍｍｏｌ）を添加し、懸濁液を室温で１
８時間撹拌した。気体放出が止まるまで、ＭｅＯＨをゆっくりと添加した。得られた溶液
をＥｔＯＡｃと塩水との間で分割し、有機層をＮａＳＯ４上で乾燥させた。真空下での溶
媒の除去および残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＤＣＭからＤＣＭ中
の５％ＭｅＯＨ）による精製により、表題の化合物を淡黄色固体として得た（３３１ｍｇ
、１．６５ｍｍｏｌ、６６％）。ＬＣＭＳ法１  Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ−
ＯＨ−］＋１８３．６。
ステップ２：３−（ブロモメチル）−６−フェニルピリジン−２（１Ｈ）−オン
【０２０９】
【化８１】
2020183399.tif 000082
３−（ヒドロキシメチル）−６−フェニルピリジン−２（１Ｈ）−オン（３３１ｍｇ、１
．６５ｍｍｏｌ）をＨＢｒ（水性、４８％、１６．５ｍＬ）で処理し、懸濁液を室温で１
時間、その後６０℃で１時間撹拌した。この時間の間、懸濁液は最初に澄み、その後沈殿
物が形成される。沈殿物をろ過し、水で完全に洗浄し、真空下で乾燥させて、３−（ブロ
モメチル）−６−フェニルピリジン−２（１Ｈ）−オンを無色の粉末として得る（３８８
ｍｇ、１．４６９ｍｍｏｌ、８９％）。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.08-7.74 (4H, 
m), 7.55 - 7.51 (3H, m), 7.50 - 7.46 (1H, m), 5.28 (2H, s).
ステップ３：７−（６−フェニルピリジン−２（１Ｈ）−オン−３−イル）−５’−ＧＤ
Ｐ  ＴＥＡ塩
【０２１０】
【化８２】
2020183399.tif 000083
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩（１００ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）を、ステップ２の
生成物（１０２ｍｇ、０．３６９ｍｍｏｌ）で一般手順Ｂに従ってアルキル化した。表題
の生成物を、無色の固体として得た（４６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、４５％）。ＬＣＭ
Ｓ法１  Ｒｔ＝０．７３分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６２７．１；1H NMR (400 MHz, D
MSO-d6) δ 9.7 (1H, s), 7.78 - 7.76 (2H, m), 7.63 (1H, d, J = 7.33 Hz), 7.47 - 7
.55 (5 H, m), 6.69 (1H, d, J = 7.33 Hz), 5.82 (1H, d, J = 2.04 Hz), 5.45 (2H, s)
, 4.47 (1H, br), 4.40 (1H, dd, J = 5.48 Hz), 4.13 (1H, br), 4.08 (1H, br), 4.03 
(1H, br), 3.35 (br, NEt3), 1.05 (t, J = 6.49 Hz, NEt3).
【実施例１３】
【０２１１】
７−（３，５−ジメチルベンジル）−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２１２】
【化８３】
2020183399.tif 000084
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩（１５０ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）を、３，５−ジメ
チルベンジルブロミド（１１０ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）で一般手順Ｂに従ってアルキ
ル化した。表題の生成物を、無色の固体として得た（６６ｍｇ、０．０９０ｍｍｏｌ、４
９％）。ＬＣＭＳ法１  Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋５６１．９；1H N
MR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.38 (1H, s), 8.20 (1H, d, J = 7.48 Hz), 7.95 (1H, d, 
J = 8.73 Hz), 7.65 - 7.58 (1H, m), 5.81 (2H, br s), 4.44 (1H, br s), 4.38 (1H, b
r s), 4.13 - 4.04 (2H, m), 2.69 (br, NEt3), 1.05 (t, J = 6.49 Hz, NEt3).
【実施例１４】
【０２１３】
７−（３−フルオロベンジル）−グアノシン−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２１４】
【化８４】
2020183399.tif 000085
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩（１５０ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）を、３−フルオ
ロベンジルブロミド（１０５ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）で一般手順Ｂに従ってアルキル
化した。表題の生成物を、無色の固体として得た（４０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ、３０
％）。ＬＣＭＳ法１  Ｒｔ＝０．５９分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋５５１．９；1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ 10.38 (1H, s),7.61 (1H, d, J = 9.96 Hz), 7.54 (1H, d, J =
7.87 Hz), 7.38 (1H, dd, J = 14.50, 7.44 Hz), 5.79 (1H, d, J = 1.82 Hz), 5.66 (1
H, br s), 4.45 (1H, br s), 4.39 (1H, br s), 4.11 - 4.05 (2H, m), 2.73 (br, NEt3)
, 1.05 (t, J = 6.49 Hz, NEt3).
【実施例１５】
【０２１５】
７−（（３−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）メチル）−５’−ＧＤＰ
ＴＥＡ塩
【０２１６】
【化８５】
2020183399.tif 000086
ステップ１：３−フルオロ−４−メチル−１，１’−ビフェニル
【０２１７】
【化８６】
2020183399.tif 000087
２ドラムバイアル中で、ヨウ化フェニル（８００ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）および（３
−フルオロ−４−メチルフェニル）ボロン酸（６０４ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）を、ＤＭ
Ｆ（１９．６ｍＬ）中に溶解した。Ｋ２ＣＯ３（１．９ｍＬのＨ２Ｏ中の２．１７ｇ）お
よびＳｐｈｏｓ  Ｐａｌｌａｄａｃｙｃｌｅ  Ｇ２（２８．３ｍｇ、３９．０μｍｏｌ）
の水溶液を添加し、得られた懸濁液を８０℃で１６時間激しく撹拌した。室温まで冷却後
、ＤＣＭ（１５ｍＬ）を添加し、有機層を水（１０ｍＬ）、１０％ＬｉＣｌ（水性、３×
１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空下での溶媒の除去後に得られた
残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタンからヘプタン中の２０％
ＥｔＯＡｃ）による精製に供した。３−フルオロ−４−メチル−１，１’−ビフェニルを
、無色の油として得た（７４６ｍｇ、３．６１ｍｍｏｌ、９１％、９０％純度）。1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 - 7.66 (2H, m), 7.48 - 7.36 (6H, m), 2.27 (3H, d, J 
= 1.68 Hz).
ステップ２：４−（ブロモメチル）−３−フルオロ−１，１’−ビフェニル
【０２１８】
【化８７】
2020183399.tif 000088
３−フルオロ−４−メチル−１，１’−ビフェニル（３００ｍｇ、１．６１１ｍｍｏｌ）
、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３１５ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）、およびアゾジイソブチ
ロニトリル（２６．５ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）をＣＣｌ４（１６ｍＬ）中に溶解し、
溶液を８５℃で１時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残留物をフラッシュクロマトグ
ラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタンからヘプタン中の２０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、表
題の化合物を淡黄色固体として得た（３１１ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、７２％）。1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.74 - 7.71 (2H, m), 7.62 (1H, d, J = 7.92 Hz), 7.57 (1H,
dd, J = 11.47, 1.70 Hz), 7.53 (1H, dd, J = 7.92, 1.60 Hz), 7.51 - 7.46 (2H, m),
7.43 - 7.38 (1H, m).
ステップ３：７−（（３−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−４−イル）メチル）−
５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２１９】
【化８８】
2020183399.tif 000089
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩（１５０ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）を、ステップ２で
得た臭化物（１４７ｍｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）で一般手順Ｂに従ってアルキル化した。
表題の生成物を、無色の固体として得た（４５ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ、３０％）。Ｌ
ＣＭＳ法１  Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６２７．９；1H NMR (400 MH
z, DMSO-d6) δ 10.13 (1H, s), 7.69 - 7.67 (2H, m), 7.55 - 7.50 (2H, m), 7.48 - 7
.44 (3H, m), 7.41 - 7.38 (1H, m), 5.84 - 5.78 (2H, m), 4.46 - 4.43 (2H, m), 4.11
- 4.06 (2H, m), 2.75 (br, NEt3), 1.05 (t, J = 6.49 Hz, NEt3).
【実施例１６】
【０２２０】
７−（ベンズヒドリル）−グアノシン−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２２１】
【化８９】
2020183399.tif 000090
ＧＤＰトリブチルアンモニウム塩（１５０ｍｇ、０．１８４ｍｍｏｌ）を、ベンズヒド
リルブロミド（９１ｍｇ、０．３６９ｍｍｏｌ）で一般手順Ｂに従ってアルキル化した。
表題の生成物を、無色の固体として得た（２０ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、３０％）。Ｌ
ＣＭＳ法１  Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６１０．１；1H NMR (400 MH
z, DMSO-d6) δ 7.53 - 7.47 (2H, m), 7.44 - 7.29 (8H, m), 5.86 (1H, d, J = 4.62 H
z), 5.82 (1H, d, J = 4.32), 4.72 (1H, br s), 4.48 - 4.40 (1H, br s), 4.20 - 4.02
(3H, m), 3.98 - 3.92 (2H, m), 2.62 (br, NEt3), 1.00 (t, J = 6.49 Hz, NEt3).
【実施例１７】
【０２２２】
７−（（１−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）フェニル４−イ
ル）メチル）−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２２３】
【化９０】
2020183399.tif 000091
Ｎ７−アルキル化ＧＭＰ誘導体の分析データを表１に示す。以下のアナログは、一般法
ＡもしくはＢによる方法と同様に、または実施例１〜１７で説明する方法と類似する方法
で調製した。
【０２２４】
【表１−１】
2020183399.tif 000092
【０２２５】
【表１−２】
2020183399.tif 000093
【０２２６】
【表１−３】
2020183399.tif 000094
【０２２７】
【表１−４】
2020183399.tif 000095
【０２２８】
【表１−５】
2020183399.tif 000096
【０２２９】
【表１−６】
2020183399.tif 000097
【０２３０】
【表１−７】
2020183399.tif 000098
【０２３１】
Ｎ７−アルキル化ＧＤＰ誘導体の分析データを表２に示す。以下のアナログは、一般法
ＡもしくはＢによる方法と同様に、または実施例１〜１７で説明する方法と類似する方法
で調製した。
【０２３２】
【表２−１】
2020183399.tif 000099
【０２３３】
【表２−２】
2020183399.tif 000100
【０２３４】
Ｎ７−アルキル化イオノシン誘導体の分析データを表３に示す。以下のアナログは、一
般法ＡもしくはＢによる方法と同様に、または実施例１〜１７で説明する方法と類似する
方法で調製した。
【０２３５】
【表３】
2020183399.tif 000101
Ｃ８置換キサンチンの合成手順
【実施例１８】
【０２３６】
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−８−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−
プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【０２３７】
【化９１】
2020183399.tif 000102
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の８−ブロモ−３−メチル−１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）
−ジオン（２４５ｍｇ、１．０００ｍｍｏｌ）、４−（ブロモメチル）−１，１’−ビフ
ェニル（２４７ｍｇ、１．０００ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（３８．５ｍｇ、１．０
００ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩撹拌した。水を反応混合物に添加した。得られた
固体をろ過により回収し、水で洗浄し、乾燥させた。ＩＳＣＯ精製（シリカ８０ｇ、ＤＣ
Ｍ中の０〜５％ＭｅＯＨ）により、表題の生成物を得た。
【実施例１９】
【０２３８】
（４−（７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−３−メチル−２，６−ジ
オキソ−２，３，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−プリン−８−イル）フェニル）ホスホン
酸
【０２３９】
【化９２】
2020183399.tif 000103
ジオキサン（１ｍＬ）中の実施例１８の反応混合物（６０ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）
、ジメチル（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２
−イル）フェニル）ホスホン酸塩（４５．５ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３
（３０．９ｍｇ、０．２９２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジ
ウム（１６．９ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、および水（０．２ｍＬ）を、Ｎ２で２分間
パージし、その後密閉バイアル中で１００℃にて一晩撹拌した。Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ精製
（Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３０×５０ｍｍ  ５μｍカラム、ＡＣＮ／
Ｈ２Ｏ  ｗ／５ｍＭ  ＮＨ４ＯＨ  ７５ｍｌ／分で、３．５分間にわたる１５〜４０％Ａ
ＣＮ勾配）により、モノメチルエステルおよびジメチルエステルを単離した。これらの２
つの生成物を含有する画分を混合し、真空下で濃縮した。残留物をＤＭＦ（１ｍＬ）中に
溶解し、ブロモトリメチルシラン（１１２ｍｇ、０．７２９ｍｍｏｌ）を添加した。反応
混合物を室温で一晩撹拌した。水およびＭｅＯＨを添加して、反応を抑制し、得られた溶
液を真空下で濃縮した。Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ精製（Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ
１８  ３０×５０ｍｍ  ５μｍカラム、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ  ｗ／５ｍＭ  ＮＨ４ＯＨ  ７５
ｍｌ／分で、３．２分間にわたる５〜２０％ＡＣＮ勾配）により、所望の生成物を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.64-7.77 (2H, m), 7.54-7.64 (6H, m), 7.27-7.4
6 (3H, m), 7.03-7.15 (2H, m), 5.56-5.71 (2H, m), 3.42 (3H, s).ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉ
ｄｇｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ３．０×３０ｍｍ  ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ  ｗ／５ｍＭ  ＮＨ４
ＯＨ  ７５ｍｌ／分で、２分間にわたる５〜９５勾配）Ｒｔ＝０．５１分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ
］＋  観察値：４８９．３、計算値：４８９．４。
【実施例２０】
【０２４０】
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−８−ブロモ−１，３−ジメチル−
１Ｈ−プリン−２，６（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン
【０２４１】
【化９３】
2020183399.tif 000104
表題の生成物を、上記に説明する方法に従う類似する方法で調製した。1H NMR (400 MH
z, メタノール-d4): δ ppm 7.88-8.00 (2H, m), 7.68-7.78 (2H, m), 7.49-7.59 (4H, m
), 7.27-7.44 (3H, m), 7.03-7.15 (2H, m), 5.72-5.81 (2H, m), 3.63 (3H, s), 3.38 (
3H, s).ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３．５μｍ  ３．０×３０ｍｍ  ＡＣＮ／
Ｈ２Ｏ  ｗ／５ｍＭ  ＮＨ４ＯＨ  ７５ｍｌ／分で、２分間にわたる５〜９５勾配）Ｒｔ
：０．６３分、ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋  観察値：５０３．３、計算値：５０３．４。
【０２４２】
Ｃ８置換プリンの一般合成
【０２４３】
【化９４】
2020183399.tif 000105
ステップ１：６−アミノ−５−（（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）アミノ）ピリ
ミジン−４（３Ｈ）−オン
【０２４４】
【化９５】
2020183399.tif 000106
２−（４−クロロフェノキシ）酢酸（１３．３ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（９
０ｍＬ、０．８Ｍ）中に溶解し、トリエチルアミン（１４．４ｇ、１４３ｍｍｏｌ、２当
量）およびＨＡＴＵ（２７．１ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温で３０分
間撹拌し、その後ピリドン（９．０ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）を添加した。上記混合物を室
温で一晩撹拌後、反応を水で抑制し、ｐＨを５Ｎ  ＨＣｌの添加により１に調節した。白
色沈殿物を回収し、１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、真空下で２日間乾燥させた（１２．７ｇ、４
３．１ｍｍｏｌ、６０％）。得られたアミドを、次のステップでそのまま使用した。
上記で得たアミド（１０ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中に溶解し
、０℃まで冷却した。ＬｉＡｌＨ４（７．７３ｇ、２０４ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し
、混合物を室温で３０分間、５０℃で５時間撹拌した。上記混合物をその後、０℃まで冷
却し、１Ｎ  ＨＣｌの添加により抑制した。白色沈殿物を回収し、１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し
、真空下で２日間乾燥させた。生成物を白色固体として得、さらに精製することなく使用
した（３．０ｇ、１０．７ｍｍｏｌ、３２％）。
ステップ２：アシル化および環閉鎖のための一般手順：
【０２４５】
【化９６】
2020183399.tif 000107
カルボン酸をＤＭＦ（０．１Ｍ）中に取り、ＨＡＴＵ（２当量）およびトリエチルアミン
（４．５当量）で処理した。上記溶液を室温で１５分間撹拌し、その後ステップ１で得た
ピリミジンを添加した。得られた溶液を室温で１６時間撹拌し、その後ＥｔＯＡｃで希釈
し、緩衝溶液（ｐＨ＝７．０）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、混合した有
機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させた。真空下での上記溶液の濃縮により、茶色油を得、こ
れをＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。
Ｒ＝ＯＨについて：上記で得たアミドをイソプロパノール（０．１Ｍ）中に取り、ｔｅ
ｒｔ−ブトキシドナトリウムを添加し（５当量）、混合物を８０℃で４時間撹拌した。上
記溶液が酸性になり、沈殿物が形成されるまで、酢酸を添加した。沈殿物をろ過し、水で
洗浄し、真空下で乾燥させた。得られたアルコールを、リン酸トリメチル中のＰＯＣｌ３
での０℃で２時間の処理によりリン酸化した。反応をＴＥＡＢ（１Ｍ）で抑制し、直接、
ＲＰ−ＨＰＬＣによる精製に供した。
Ｒ＝ＰＯ（ＯＥｔ）２について：上記で得たリン酸エステルを、ＴＭＳＢｒ（５．５当
量）を含むＤＭＦ中の０．７Ｍ溶液の処理により加水分解した。室温で１６時間撹拌後、
反応をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  １／１および１Ｍ  ＴＥＡＢの添加により抑制した。懸濁液を
ろ過し、直接、ＲＰ−ＨＰＬＣによる精製に供した。
【０２４６】
Ｃ８置換プリンの分析データを表４に示す。以下のアナログは、上記に説明する方法に
より調製した。
【０２４７】
【表４】
2020183399.tif 000108
【０２４８】
イミダゾール活性化ｍＲＮＡキャップの調製
ＧＭＰおよびＧＤＰ誘導体のイミダゾール活性化の一般手順：
ＤＭＦ中のＮ７−アルキル化−ＧＭＰ／ＧＤＰ誘導体のトリエチルアンモニウム塩の溶
液に、イミダゾール（１０当量）、２，２’−ジピリジルジスルフィド（４当量）、およ
びＴＥＡ（２当量）を添加した。反応を室温で５分間撹拌し、その後トリフェニルホスフ
ィン（４当量）を添加し、反応の色が黄色に変わった。室温で１６〜１８時間撹拌後、ア
セトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４（１０当量）を反応に添加すると、白色沈殿物が生成した
。追加のアセトンを反応に添加し、得られた懸濁液を４℃で２０分間冷却し、遠心分離し
た。上清を注ぎ出し、沈殿物をアセトンで洗浄し、４℃で１０分間冷却し、遠心分離した
。この洗浄手順をさらに１回または２回繰り返した。得られた沈殿物を真空下で乾燥させ
て、イミダゾール活性化Ｎ７−アルキル化ＧＭＰ／ＧＤＰ誘導体のナトリウム塩を得た。
【実施例２１】
【０２４９】
Ｐ２−イミダゾリドＮ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−５’−ＧＤ
Ｐナトリウム塩
【０２５０】
【化９７】
2020183399.tif 000109
ジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）中のＮ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イ
ルメチル）−５’−ＧＤＰのトリエチルアンモニウム塩（４５ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ
）、イミダゾール（５０ｍｇ、０．７４２ｍｍｏｌ）、２，２’−ジチオジピリジン（６
５ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２０７μＬ、１．４８４ｍｍｏｌ）
、およびトリフェニルホスフィン（７８ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で
３時間撹拌した。アセトン中の過塩素酸ナトリウムの溶液（１Ｍ、１ｍＬ）を添加し、そ
の後アセトン（４０ｍＬ）で希釈した。沈殿物を遠心分離により分離し、アセトンで３回
洗浄し、真空下で乾燥させて、表題の化合物をナトリウム塩として得た（３４ｍｇ、９３
％）。1H NMR (400MHz, D2O) δ  ppm: 7.80-7.90 (1H, s), 7.63-7.72 (4H, m), 7.38-7
.56 (5H, m), 7.18-7.27 (1H, s), 6.86-6.95 (1H, s), 5.97-6.07 (1H, m), 5.59-5.75 
(2H, m), 4.58-4.64 (2H, m), 4.33-4.40 (3H, m), 4.16-4.29 (1H, m), 4.06-4.16 (1H,
m). 13C NMR(162 MHz, D2O): δ ppm: 11.712 (1P), 19.863 (1P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ
：１．３５分、ＭＳ［Ｍ−Ｈ］＋  観察値：６５９．１、計算値：６５９．１。
【実施例２２】
【０２５１】
Ｐ２−イミダゾリドＮ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−５’−ＧＭ
Ｐナトリウム塩
【０２５２】
【化９８】
2020183399.tif 000110
表題の化合物を、実施例２１で説明する方法と類似する方法で合成した。1H NMR (400M
Hz, D2O) δ ppm: 7.78-7.83 (1H, s), 7.43-7.49 (4H, m), 7.16-7.40 (5H, m), 7.01-7
.08 (1H, s), 6.83-6.90 (1H, s), 5.79-5.87 (1H, m), 5.51-5.76 (2H, m), 4.50-4.57 
(1H, m), 4.20-4.35 (2H, m), 4.00-4.16 (2H, m). 31P NMR (162 MHz, D2O): δ ppm: 8
.134 (1P).ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ：１．３２分、ＭＳ［Ｍ−Ｈ］＋  観察値：５７７．９、
計算値：５７８．２。
【実施例２３】
【０２５３】
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（（２−（（ヒ
ドロキシ（（ヒドロキシ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ホスホリル）オキシ）ホスホ
リル）オキシ）エトキシ）メチル）−９Ｈ−プリン−７−イウム−６−オレート
【０２５４】
【化９９】
2020183399.tif 000111
表題の化合物を、上記に説明する二リン酸エステルのイミダゾール活性化の一般手順に
従って合成した。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ［Ｍ−Ｈ］＋  観察値：６０２．３、計算値：６０
２．１。
【実施例２４】
【０２５５】
Ｐ２−イミダゾリド−Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２’−Ｏ−メチ
ル−５’−ＧＤＰナトリウム塩
【０２５６】
【化１００】
2020183399.tif 000112
ステップ１：Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２’−Ｏ−メチル−グア
ノシン
【０２５７】
【化１０１】
2020183399.tif 000113
２’ＯＭｅ−グアノシン（０．６７３ｍｍｏｌ）および１−（２−ブロモエトキシ）−
４−クロロベンゼン（２．７０ｍｍｏｌ）を、４ｍｌの無水ＤＭＳＯ中に取り、５０℃で
２０時間撹拌した。反応を室温まで冷却し、ＤＭＳＯで希釈し、分取ＨＰＬＣ［Ｓｈｉｍ
ａｄｚｕ  Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ５μｍ、１００ｍ
ｍ×３０ｍｍカラム；０〜２０分；５〜３０％  ＡＣＮ中の０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ中の
０．１％ＴＦＡ；４２ｍＬ／分）］上で精製した。生成物画分を集め、トルエンと共沸さ
せながら濃縮して、表題の化合物のトリフルオロ酢酸塩を白色固体として得た（９９ｍｇ
、０．１７ｍｍｏｌ、２６％）。ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ＝１．３８分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋
Ｈ］＋  ４５２．２。
ステップ２：Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２’−Ｏ−メチル−５’
−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０２５８】
【化１０２】
2020183399.tif 000114
０℃まで冷却した１．０ｍｌのリン酸トリメチル中のＮ７−（２−（４−クロロフェノキ
シ）エチル）−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（０．０８５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＯＣ
ｌ３（０．５３６ｍｍｏｌ）を一滴ずつゆっくりと添加した。反応を０℃で６．５時間撹
拌し、その後−２０℃まで１６時間冷却した。反応をその後、０℃まで２時間温めた。追
加のＰＯＣｌ３（０．５３６ｍｍｏｌ）を反応に添加し、反応を０℃で３時間撹拌した。
反応を０℃で１Ｍ  ＴＥＡＢ（水性）（３．５ｍｌ）によりゆっくりと抑制した。ＴＥＡ
Ｂ添加の完了に際して、反応を室温まで温めて、過剰のＰＯＣｌ３の抑制を確実にした。
抑制した反応を直接、分取イオン交換クロマトグラフィー［（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫゲルＤ
ＥＡＥ−５ＰＷ、１３μｍ、２１．５×１５０ｍｍ、０〜３０分：０〜１００％  １Ｍ  
ＴＥＡＢ、５ｍｌ／分）］上で精製した。生成物画分の凍結乾燥により、表題の化合物の
トリエチルアンモニウム塩を白色固体として得、これを直接、次のステップで使用した。
ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ＝１．３４分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋  ５３２．９；1H NMR (D2
O) δ: 7.16-7.22 (m, 2H), 6.80-6.86 (m, 2H), 6.03 (d, J=3.4 Hz, 1H), 4.78-4.84 (
m, 2H), 4.48-4.54 (m, 2H), 4.46 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.25-4.30 (m, 1H), 4.18-4.22 
(m, 1H), 4.09-4.17 (m, 1H), 3.96-4.03 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.14 (q, J=7.4 Hz, 
NEt3), 1.21 (t, J=7.3 Hz, NEt3).
ステップ３：Ｐ１−イミダゾリドＮ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２’
−Ｏ−メチル−５’−ＧＭＰナトリウム塩
【０２５９】
【化１０３】
2020183399.tif 000115
１．０ｍｌの無水ＤＭＦ中のＮ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２’−Ｏ
−メチル−５’−ＧＭＰ（０．０５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、イミダゾール（０．５１４ｍ
ｍｏｌ）、２，２’−ジピリジルジスルフィド（０．２２７ｍｏｌ）、およびＴＥＡ（０
．０７２ｍｍｏｌ）を添加した。ＰＰｈ３（０．２２９ｍｍｏｌ）をその後、反応に添加
すると、色が黄色に変わった。室温で１８時間撹拌後、アセトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４
（０．２５０ｍｍｏｌ）を反応に添加し、続いて４ｍｌのアセトンを添加した。得られた
懸濁液を４℃で２０分間冷却し、遠心分離した。上清を注ぎ出し、得られた沈殿物を５ｍ
ｌのアセトンで洗浄し、４℃で２０分間冷却し、再び遠心分離した。この洗浄手順をさら
に２回繰り返した。得られたオフホワイトの固体を真空下で乾燥させて、表題の化合物の
ナトリウム塩（３０ｍｇ）を得た。この化合物を直接、ステップ４で使用した。ＬＣＭＳ
法５  ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｚ＝５８０．４（Ｍ−Ｈ＋）。
ステップ４：Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２’−Ｏ−メチル−５’
−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２６０】
【化１０４】
2020183399.tif 000116
１ｍｌの無水ＤＭＦ中のＰ１−イミダゾリドＮ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチ
ル）−２’−Ｏ−メチル−５’−ＧＭＰナトリウム塩（０．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、オ
ルトリン酸トリブチルアンモニウム（A. R. Kore, G. Parmar, Syn. Comm. 2006, 36, 33
93-3399中で説明されるように調製した；ＤＭＦ中の１Ｍ、０．２５０ｍｍｏｌ）を一滴
ずつ添加し、続いてＺｎＣｌ２（０．０５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温で４．５
時間撹拌し、その後水（１ｍｌ）で抑制し、油っぽい固体になるまで濃縮した。この固体
をＤＭＦ（１ｍｌ）中に取り、アセトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４（０．５００ｍｍｏｌ）
を添加し、続いて７ｍｌのアセトンを添加した。得られた懸濁液を０℃まで約１０分間冷
却し、遠心分離し、上清を注ぎ出した。固体をアセトンで１回洗浄し、遠心分離し、上清
を注ぎ出した。得られた固体をその後、真空下で乾燥させて、任意の残留有機物を除去し
、Ｈ２Ｏ中に取り、分取イオン交換クロマトグラフィー［（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫゲルＤＥ
ＡＤ−５ＰＷ、１３μｍ、２１．５×１５０ｍｍ、０〜１００％  １Ｍ  ＴＥＡＢ、５ｍ
ｌ／分）］を用いて精製した。生成物画分を集め、濃縮し、エタノールと共沸させて、表
題の化合物のトリエチルアンモニウム塩を白色固体として得た（５．７ｍｇ、６．６μｍ
ｏｌ、１３％）。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝６１２．０（Ｍ＋Ｈ＋）；1H
NMR (D2O) δ: 9.25 (s, 1H), 7.13 (d, J=8.9 Hz, 2H), 6.79 (d, J=8.9 Hz, 2H), 5.9
9 (d, J=3.1 Hz, 1H), 4.76-4.87 (m, 2H), 4.40-4.54 (m, 3H), 4.24-4.35 (m, 2H), 4.
13-4.23 (m, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.13 (q, J=7.3 Hz, NEt3), 1.17-1.23 (m, J=7.3, 7.
3 Hz, NEt3).
ステップ５：Ｐ２−イミダゾリド−Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２
’−Ｏ−メチル−５’−ＧＤＰナトリウム塩
【０２６１】
【化１０５】
2020183399.tif 000117
０．５ｍｌの無水ＤＭＦ中のＮ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−２’−Ｏ
−メチル−５’−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩（６．５５μｍｏｌ）の懸濁液に、イミダゾール（８
８μｍｏｌ）、２，２’−ジピリジルジスルフィド（２７．２μｍｏｌ）、およびＴＥＡ
（１４．３μｍｏｌ）を添加した。ＰＰｈ３（２６．７μｍｏｌ）をその後、反応に添加
すると、色が黄色に変わった。室温で１８時間撹拌後、アセトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４
（０．１００ｍｍｏｌ）を反応に添加し、続いてアセトン（２ｍｌ）を添加すると、白色
沈殿物が生成した。この懸濁液を４℃で２０分間冷却し、遠心分離した。上清を注ぎ出し
、得られた沈殿物をアセトン（３ｍｌ）で洗浄し、４℃で１０分間冷却し、遠心分離した
。このアセトン洗浄手順をさらに１回繰り返した。得られた白色固体を真空下で乾燥させ
て、表題の化合物のナトリウム塩（４．６ｍｇ、６．４μｍｏｌ、９７％）を得た。この
化合物を直接、ｍＲＮＡキャッピング反応で使用した。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ（ＥＳ−）：
ｍ／ｚ＝６６０．２（Ｍ−Ｈ＋）。
【実施例２５】
【０２６２】
Ｐ２−イミダゾリド−Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３’−Ｏ−メチ
ル−５’−ＧＤＰナトリウム塩
【０２６３】
【化１０６】
2020183399.tif 000118
ステップ１：Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３’−Ｏ−メチル−５’
−グアノシン
【０２６４】
【化１０７】
2020183399.tif 000119
３’ＯＭｅ−グアノシン（０．６７３ｍｍｏｌ）および１−（２−ブロモエトキシ）−
４−クロロベンゼン（２．７０ｍｍｏｌ）を、４ｍｌの無水ＤＭＳＯ中に取り、５０℃で
２０時間撹拌した。反応を室温まで冷却し、ＤＭＳＯで希釈し、分取ＨＰＬＣ［Ｓｈｉｍ
ａｄｚｕ  Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ（Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ５μｍ、１００ｍ
ｍ×３０ｍｍカラム；０〜２０分：５〜３０％  ＡＣＮ中の０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ中の
０．１％ＴＦＡ；４２ｍＬ／分）］上で精製した。生成物画分を集め、トルエンと共沸さ
せながら濃縮して、表題の化合物のトリフルオロ酢酸塩を白色固体として得た（１２４ｍ
ｇ、０．２２３ｍｍｏｌ、３３％）。ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ＝１．３９分；ＭＳ  ｍ／ｚ［
Ｍ＋Ｈ］＋４５２．９。
ステップ２：Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３’−Ｏ−メチル−５’
−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩
【０２６５】
【化１０８】
2020183399.tif 000120
０℃まで冷却した１．０ｍｌのリン酸トリメチル中のＮ７−（２−（４−クロロフェノキ
シ）エチル）−３’−Ｏ−メチル−５’−グアノシン（０．１１５ｍｍｏｌ）の溶液に、
ＰＯＣｌ３（０．５３６ｍｍｏｌ）を一滴ずつゆっくりと添加した。反応を０℃で６．５
時間撹拌し、その後−２０℃まで１６時間冷却した（冷凍庫に一晩入れた）。反応をその
後、０℃まで２時間温めた。追加のＰＯＣｌ３（０．５３６ｍｍｏｌ）を反応に添加し、
反応を０℃で３時間撹拌した。反応を１Ｍ  ＴＥＡＢ（水性）（３．５ｍｌ）で０℃にて
ゆっくりと抑制した。ＴＥＡＢ添加の完了に際して、反応を室温まで温めて、過剰のＰＯ
Ｃｌ３の抑制を確実にした。抑制した反応を直接、分取イオン交換クロマトグラフィー［
（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫゲルＤＥＡＥ−５ＰＷ、１３μｍ、２１．５×１５０ｍｍ、０〜３
０分：０〜１００％  １Ｍ  ＴＥＡＢ、５ｍｌ／分）］上で精製した。生成物画分の凍結
乾燥により、表題の化合物のトリエチルアンモニウム塩を白色固体として得、これを得ら
れた状態のままで次のステップにおいて使用した。ＬＣＭＳ法２  Ｒｔ＝１．３４分；Ｍ
Ｓ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋５３２．８；1H NMR (D2O) δ: 7.16-7.23 (m, 2H), 6.79-6.87 
(m, 2H), 5.94 (d, J=4.0 Hz, 1H), 4.78-4.86 (m, 2H), 4.47-4.52 (m, J=5.0, 5.0 Hz,
2H), 4.36-4.43 (m, 1H), 4.09-4.17 (m, 1H), 4.07 (t, J=5.0 Hz, 1H), 3.93-4.01 (m
, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.13 (q, J=7.4 Hz, NEt3), 1.21 (t, J=7.3 Hz, NEt3).
ステップ３：Ｐ１−イミダゾリド−Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３
’−Ｏ−メチル−５’−ＧＭＰナトリウム塩
【０２６６】
【化１０９】
2020183399.tif 000121
１．０ｍｌの無水ＤＭＦ中のＮ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３’−Ｏ
−メチル−５’−ＧＭＰ  ＴＥＡ塩（０．０７５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、イミダゾール（
０．７３４ｍｏｌ）、２，２’−ジピリジルジスルフィド（０．３４０ｍｍｏｌ）、およ
びＴＥＡ（０．１０８ｍｍｏｌ）を添加した。ＰＰｈ３（０．３４３ｍｍｏｌ）をその後
、反応に添加すると、反応の色が黄色に変わった。室温で１８時間撹拌後、アセトン中の
１Ｍ  ＮａＣｌＯ４（０．３７５ｍｍｏｌ）を添加し、続いて４ｍｌのアセトンを添加し
た。得られた懸濁液を４℃で２０分間冷却し、遠心分離した。上清を注ぎ出し、得られた
沈殿物をアセトン（５ｍｌ）で洗浄し、４℃で２０分間冷却し、遠心分離した。この洗浄
手順をさらに２回繰り返した。得られたオフホワイトの固体を真空下で乾燥させて、表題
の化合物のナトリウム塩（４５ｍｇ）を得た。この化合物を直接、ステップ４で使用した
。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｚ＝５８０．４（Ｍ−Ｈ＋）。
ステップ４：Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３’−Ｏ−メチル−５’
−ＧＤＰ  ＴＥＡ塩
【０２６７】
【化１１０】
2020183399.tif 000122
１ｍｌの無水ＤＭＦ中のＰ１−イミダゾリド−Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エ
チル）−３’−Ｏ−メチル−５’−ＧＭＰナトリウム塩（０．０７５ｍｍｏｌ）の溶液に
、オルトリン酸トリブチルアンモニウム（A. R. Kore, G. Parmar, Syn. Comm. 2006, 36
, 3393-3399中で説明されるように調製した；ＤＭＦ中の１Ｍ、０．３７５ｍｍｏｌ）を
一滴ずつ添加し、続いてＺｎＣｌ２（０．０７６ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温で４
．５時間撹拌し、その後水（１ｍｌ）で抑制し、油っぽい固体になるまで濃縮した。この
固体をＤＭＦ（１ｍｌ）中に取り、アセトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４（１．００ｍｍｏｌ
）を添加し、続いてアセトン（７ｍｌ）を添加した。得られた懸濁液を０℃まで１０分間
冷却し、遠心分離し、上清を注ぎ出した。固体をアセトンで１回洗浄し、遠心分離し、上
清を注ぎ出した。得られた固体をその後、真空下で乾燥させて、任意の残留有機物を除去
し、分取イオン交換クロマトグラフィー［（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫゲルＤＥＡＤ−５ＰＷ、
１３μｍ、２１．５×１５０ｍｍ、０〜１００％  １Ｍ  ＴＥＡＢ、５ｍｌ／分）］を用
いて精製した。生成物画分を集め、濃縮し、エタノールと共沸させて、表題の化合物のト
リエチルアンモニウム塩を白色固体として得た（１４．３ｍｇ、４．２１μｍｏｌ、８％
）。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｚ＝６１０．２（Ｍ−Ｈ＋）；1H NMR (D2O) 
δ: 9.30 (s, 1H), 7.15 (d, J=9.0 Hz, 2H), 6.80 (d, J=9.0 Hz, 2H), 5.92 (d, J=4.0
Hz, 1H), 4.77-4.87 (m, 2H), 4.71-4.75 (m, 1H), 4.39-4.49 (m, 3H), 4.23-4.32 (m,
1H), 4.06-4.17 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.13 (q, J=7.4 Hz, NEt3), 1.21 (t, J=7.3 
Hz, NEt3).
ステップ５：Ｐ２−イミダゾリド−Ｎ７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）−３
’−Ｏ−メチル−５’−ＧＤＰナトリウム塩
【０２６８】
【化１１１】
2020183399.tif 000123
０．５ｍｌの無水ＤＭＦ中の２−アミノ−７−（２−（４−クロロフェノキシ）エチル）
−９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（ホスホ
ノオキシ）ホスホリル）オキシ）メチル）−４−メトキシテトラヒドロフラン−２−イル
）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウム（４．２０μｍｏｌ）の
懸濁液に、イミダゾール（８８μｍｏｌ）、２，２’−ジピリジルジスルフィド（２７．
２μｍｏｌ）、およびＴＥＡ（１４．３μｍｏｌ）を添加した。ＰＰｈ３（２６．７μｍ
ｏｌ）をその後、反応に添加すると、反応の色が黄色に変わった。室温で１８時間撹拌後
、アセトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４（０．１００ｍｍｏｌ）を反応に添加し、続いてアセ
トン（２ｍｌ）を添加すると、白色沈殿物が生成した。この懸濁液を４℃で２０分間冷却
し、遠心分離した。上清を注ぎ出し、得られた沈殿物をアセトン（３ｍｌ）で洗浄し、４
℃で１０分間冷却し、遠心分離した。このアセトン洗浄手順をさらに１回繰り返した。得
られた白色固体を真空下で乾燥させて、表題の化合物のナトリウム塩（７．２ｍｇ）を得
た。この化合物を直接、ｍＲＮＡキャッピング反応で使用した。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ（Ｅ
Ｓ−）：ｍ／ｚ＝６６０．２（Ｍ−Ｈ＋）。
【実施例２６】
【０２６９】
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（（２Ｒ，３Ｒ
，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（（ヒドロキシ（１Ｈ−
イミダゾール−１−イル）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）メチル）テトラヒ
ドロフラン−２−イル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウム
【０２７０】
【化１１２】
2020183399.tif 000124
ステップ１：Ｎ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−グアノシン
【０２７１】
【化１１３】
2020183399.tif 000125
グアノシン（２．６５ｍｍｏｌ）および４−ブロモメチルビフェニル（６．０７ｍｍｏ
ｌ）を無水ＤＭＳＯ（７．５ｍｌ）中に取り、室温で６０時間撹拌した。反応をＤＭＳＯ
で希釈し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ上で精製した。集めた生成物画分を、トルエンと共沸させ
ながら濃縮し、１：１  Ｈ２Ｏ／アセトニトリル中に取り、凍結し、凍結乾燥させて、表
題の化合物のトリフルオロ酢酸塩を白色固体として得た。ＬＣＭＳ法１  Ｒｔ＝０．９４
分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋４５０．０。
ステップ２：７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（ホスホノ
メチル）ホスホリル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−６−オキソ−
６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウム
【０２７２】
【化１１４】
2020183399.tif 000126
−１０℃の１．０ｍｌのリン酸トリメチル中のＮ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−
イルメチル）−グアノシン（０．２６６ｍｍｏｌ）の溶液に、−１０℃まで冷却した１．
０ｍｌのリン酸トリメチル中のメチレンジホスホン酸ジクロリド（１．００ｍｍｏｌ）の
溶液をゆっくりと添加した。反応を−１０℃〜０℃で６．５時間撹拌し、その後−２０℃
で６０時間置いた。反応を、０℃の１Ｍ  ＴＥＡＢ（９ｍｌ）に添加することにより、ゆ
っくりと抑制した。添加の完了に際して、反応を室温まで温めて、過剰のメチレンジホス
ホン酸ジクロリドの抑制を確実にした。得られた溶液を直接、分取ＨＰＬＣ［（Ｐｈｅｎ
ｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ  ５μｍ  Ｃ１８  １００ｍｍ×３０ｍｍカラム；０
〜１５分：１０〜４０％  ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ中の０．１Ｍ  ＴＥＡＢ、２５ｍｌ／分）］上
で精製した。生成物画分を集め、凍結し、凍結乾燥させて、表題の化合物のトリエチルア
ンモニウム塩を白色固体として得た（１６ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、７％）。ＬＣＭＳ法
２  Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ  ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋６０８．１；1H NMR (D2O) δ: 9.51 
(s, 1H), 7.25-7.35 (m, 4H), 7.10-7.25 (m, 5H), 5.70 (d, J=3.4 Hz, 1H), 5.42-5.58
(m, 2H), 4.50 (t, J=3.9 Hz, 1H), 4.40 (t, J=5.1 Hz, 1H), 4.28-4.33 (m, 1H), 4.2
0-4.28 (m, 1H), 4.06-4.17 (m, 1H), 3.12 (q, J=7.3 Hz, NEt3), 2.17 (t, J=19.7 Hz,
2H), 1.20 (t, J=7.3 Hz, NEt3).
ステップ３：７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（（ヒドロ
キシ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ホスホリル）メチル）ホスホリル）オキシ）メチ
ル）テトラヒドロフラン−２−イル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−
７−イウム
【０２７３】
【化１１５】
2020183399.tif 000127
１．０ｍｌの無水ＤＭＦ中の７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−
アミノ−９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロ
キシ（ホスホノメチル）ホスホリル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−２−イル）
−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウム（０．０１６ｍｍｏｌ）の
溶液に、イミダゾール（０．１７６ｍｍｏｌ）、２，２’−ジピリジルジスルフィド（０
．０８２ｍｍｏｌ）、およびＴＥＡ（０．０２９ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温で１
０分間撹拌し、その後トリフェニルホスフィン（０．０８４ｍｍｏｌ）を添加すると、反
応の色が黄色に変わった。室温で１８時間撹拌後、アセトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４（０
．２５０ｍｍｏｌ）を反応に添加し、続いてアセトン（５ｍｌ）を添加すると、白色沈殿
物が生成した。得られた懸濁液を４℃で２０分間冷却し、遠心分離した。上清を注ぎ出し
、沈殿物をアセトン（５ｍｌ）で洗浄し、４℃で１０分間冷却し、遠心分離した。この洗
浄手順をさらに１回繰り返した。得られた沈殿物を真空下で乾燥させて、表題の化合物の
ナトリウム塩を白色固体として得た（１０．８ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ、８１％）。こ
の化合物を直接、ｍＲＮＡキャッピング反応で使用した。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ（ＥＳ−）
：ｍ／ｚ＝６５７．５（Ｍ−Ｈ＋）。
【実施例２７】
【０２７４】
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（（２Ｒ，３Ｒ
，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（（ヒドロキシ（１Ｈ−
イミダゾール−１−イル）ホスホリル）アミノ）ホスホリル）オキシ）メチル）テトラヒ
ドロフラン−２−イル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウム
【０２７５】
【化１１６】
2020183399.tif 000128
ステップ１：７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（ホスホノ
アミノ）ホスホリル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−６−オキソ−
６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−７−イウム
【０２７６】
【化１１７】
2020183399.tif 000129
Ｎ７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−グアノシン（０．１７７ｍｍ
ｏｌ）を、０℃のリン酸トリメチル（２．０ｍｌ）中のジクロロホスフィニルホスホルイ
ミド酸トリクロリド（J. Emsley, J. Moore, P.B. Udy, J. Chem. Soc. A 1971, 2863-28
64、０．８９１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応を０℃で１．５時間撹拌し、その後−
２０℃まで冷却し、１６時間置いた。反応を０℃まで温め、追加のジクロロホスフィニル
ホスホルイミド酸トリクロリド（０．８９１ｍｍｏｌ）を反応に添加した。ＬＣＭＳ（方
法２  ＲＸＮＭＯＮ＿Ａｃｉｄｉｃ＿Ｐｏｌａｒ＿ＰｏｓＮｅｇ．ｏｌｐ−ＺＱ１）によ
りモニターして少量の出発物質しか残っていないようになるまで、反応を０℃で５時間撹
拌した。反応を、０℃の１Ｍ  ＴＥＡＢ（１０ｍｌ）にゆっくりと添加することにより抑
制した。添加の完了に際して、反応を室温まで温めて、過剰のジクロロホスフィニルホス
ホルイミド酸トリクロリドの抑制を確実にした。得られた懸濁液をろ過し、ろ過物を分取
ＨＰＬＣ［（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ  ５μｍ  Ｃ１８  １００ｍｍ
×３０ｍｍカラム；０〜１５分：１０〜５０％  ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ中の０．１Ｍ  ＴＥＡＢ
、２５ｍｌ／分）］に供した。生成物画分を集め、凍結し、凍結乾燥させて、表題の化合
物のトリエチルアンモニウム塩を白色固体として得た（１３．５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏ
ｌ、１０％）。ＬＣＭＳ法６  計算値：６０８．１１８６；発見値：６０９．１２９０［
Ｍ＋Ｈ＋］；1H NMR (D2O) δ: 9.51 (s, 1H), 7.49-7.57 (m, 4H), 7.38-7.44 (m, 4H),
7.31-7.38 (m, 1H), 5.90 (d, J=3.6 Hz, 1H), 5.55-5.68 (m, 2H), 4.63 (t, J=4.3 Hz
, 1H), 4.48 (t, J=5.1 Hz, 1H), 4.29-4.38 (m, 1H), 4.17-4.26 (m, 1H), 4.04-4.17 (
m, 1H), 3.13 (q, J=7.3 Hz, NEt3), 1.21 (t, J=7.3 Hz, NEt3).
ステップ２：７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（（ヒドロ
キシ（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）ホスホリル）アミノ）ホスホリル）オキシ）メチ
ル）テトラヒドロフラン−２−イル）−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−
７−イウム
【０２７７】
【化１１８】
2020183399.tif 000130
７−（［１，１’−ビフェニル］−４−イルメチル）−２−アミノ−９−（（２Ｒ，３Ｒ
，４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（（（ヒドロキシ（ホスホノアミノ）ホス
ホリル）オキシ）メチル）テトラヒドロフラン−２−イル）−６−オキソ−６，９−ジヒ
ドロ−１Ｈ−プリン−７−イウム（０．００７ｍｍｏｌ）を、１．０ｍｌの無水ＤＭＦ中
に取り、イミダゾール（０．０７３ｍｍｏｌ）、２，２’−ジピリジルジスルフィド（０
．０３６ｍｍｏｌ）、およびＴＥＡ（０．０１４ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温で５
分間撹拌し、その後トリフェニルホスフィン（０．０３８ｍｍｏｌ）を添加すると、反応
の色が黄色に変わった。室温で１６時間撹拌後、アセトン中の１Ｍ  ＮａＣｌＯ４（０．
１００ｍｍｏｌ）を反応に添加し、続いてアセトン（５ｍｌ）を添加すると、白色沈殿物
が生成した。得られた懸濁液を４℃で２０分間冷却し、遠心分離した。上清を注ぎ出し、
沈殿物をアセトン（５ｍｌ）で洗浄し、４℃で１０分間冷却し、遠心分離した。この洗浄
手順をさらに１回繰り返した。得られた沈殿物を真空下で乾燥させて、表題の化合物のナ
トリウム塩を白色固体として得た（２．３ｍｇ、３．４μｍｏｌ、３３％）。この化合物
を直接、ｍＲＮＡキャッピング反応で使用した。ＬＣＭＳ法５  ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｚ
＝６５８．３（Ｍ−Ｈ＋）。
【０２７８】
イミダゾール活性化ＧＤＰ誘導体の分析データを表５に示す。以下の実施例は、上記に
説明するイミダゾール活性化の一般手順に従って、または実施例２１〜２７で説明する方
法に類似する方法で調製した。
【０２７９】
【表５−１】
2020183399.tif 000131
【０２８０】
【表５−２】
2020183399.tif 000132
【０２８１】
イミダゾール活性化ＧＭＰ誘導体の分析データを表６に示す。以下の実施例は、上記に
説明するイミダゾール活性化の一般手順に従って、または実施例２１〜２７で説明する方
法に類似する方法で調製した。
【０２８２】
【表６】
2020183399.tif 000133
【０２８３】
オリゴヌクレオチドおよびＲＮＡのキャッピングのために、上記に示す実施例で得られ
たイミダゾール活性化一および二リン酸塩を、ＲＮＡｓｅ非含有水中に溶解して、Ｈ２Ｏ
中のイミダゾール活性化ＧＭＰ／ＧＤＰ誘導体の２０ｍＭ溶液を得た（１Ｈ−ＮＭＲによ
り決定される、試料中に存在する活性化イミダゾールの量に基づいて）。
【０２８４】
オリゴヌクレオチドの３’末端改変の一般手順：
オリゴ５−／５Ｐｈｏｓ／ｒＧｒＡｒＡｒ  ＡｒＡｒＡ  ｒＡｒＡｒＡｒ  ＡｒＡ−３
（オリゴヌクレオチド１）および５−／５Ｐｈｏｓ／ｒＧｒＵ／ｉＦｌｕｏｒＴ／ｒＵｒ
ＣｒＧ  ｒＣｒＣｒＡ  ｒＵｒＵ／ｉ６−ＴＡＭＮ／ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡ
ｒＡｒＡ  ｒＡ−３（オリゴヌクレオチド２）をＩＤＴから購入した。
手順Ａ（濃縮反応）：ＰＢＳ緩衝液中に１０μＭオリゴヌクレオチドを含有する溶液を
、５０×ＮａＩＯ４（５ｍＭストック溶液、５００μＭ最終濃度）で処理し、０℃で１時
間維持した。得られた溶液を、１００×Ｎａ２ＳＯ３（１０ｍＭストック溶液、１ｍＭ最
終濃度）で処理し、室温にした。１０分後、水中の１００×求核試薬を添加し（１０ｍＭ
ストック溶液、１ｍＭ最終濃度）、溶液を室温で一晩維持した。上記溶液をＰｒｉｎｃｅ
ｔｏｎ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ＣＳ１００スピンカラムを用いて脱塩した。
手順Ｂ（還元的アミノ化反応）：ＰＢＳ緩衝液中に１０μＭオリゴヌクレオチドを含有
する溶液を、５０×ＮａＩＯ４（５ｍＭストック溶液、５００μＭ最終濃度）で処理し、
０℃で１時間維持した。得られた溶液を、２００×Ｎａ２ＳＯ３（１０ｍＭストック溶液
、２ｍＭ最終濃度）で処理し、室温にした。１０分後、１００×求核試薬（水中の１０ｍ
Ｍストック溶液、１ｍＭ最終濃度）およびＮａＢＨ３ＣＮ（水中の１００ｍＭストック溶
液、１０ｍＭ最終濃度）を添加した。上記溶液を３７℃で一晩振盪し、Ｐｒｉｎｃｅｔｏ
ｎ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ＣＳ１００スピンカラムを用いて脱塩した。
【０２８５】
３’改変オリゴヌクレオチドの分析データを表７に示す。以下の実施例は、上記に説明
する一般手順に従って調製した。
【０２８６】
【表７−１】
2020183399.tif 000134
【０２８７】
【表７−２】
2020183399.tif 000135
【０２８８】
ｍＲＮＡの３’末端改変の一般手順：
水中のｍＲＮＡ（０．５〜１．５ｍｇ／ｍＬ、９０μＬ）を、ＮａＩＩＯ４（３Ｍ  Ｎ
ａＯＡｃ緩衝液中の０．１Ｍ、ｐＨ５．２、最終濃度１０ｍＭ）で処理し、溶液を暗条件
で氷上にて１時間維持した。試料をＰｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｃｅ
ｎｔｒｉｓｐｉｎカラムを用いて脱塩し、ＰＢＳ緩衝液で平衡化した。上記溶液を適切な
求核試薬（５ｍＭの最終濃度のためにＨ２ＯまたはＤＭＳＯ中）で処理し、Ｈ２Ｏで０．
７５倍に希釈し、５００ｒｐｍで室温にて２時間振盪した。得られた溶液をＰｒｉｎｃｅ
ｔｏｎ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ＣｅｎｔｒｉＳｐｉｎ  １０カラム（ＰＢＳで平衡化
、その後Ｈ２Ｏで平衡化）で２回脱塩した。得られたＲＮＡ溶液を、ＬｉＣｌ沈殿により
さらに精製した。
【０２８９】
生物学的データ
ビオチン化および表面固定化ｈＥＩＦ４Ｅへのキャップアナログ結合の分析：
二重ヒスチジンおよびアビジンタグ付きヒトＥＩＦ４Ｅ（Ｈｉｓ６−３Ｃ−ａｖｉ−ｅ
ＩＦ４Ｅ）を、８ＬのＴＢ培地中で発現させた。０．４ｍＭ  ＩＰＴＧによる誘発を２．
０  ＯＤ６００で行い、細胞を１５  ＯＤ６００で回収した。２２５グラムのペレットを
緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  Ｔ
ＣＥＰ、ｐＨ７．５；１０％グリセロール、プロテアーゼ阻害剤、およびＤＮａｓｅを含
有する）中に６００ｍＬの体積になるように希釈し、マイクロフルイダイザーに１回通す
。試料を、５ｍＬ  ＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰ  ＩＭＡＣ上に４．０ｍＬ／分  ＩＭＡＣにて
、１カラム体積の２５ｍＭ〜５００ｍＭイミダゾール勾配により流した。ＧＳＴ−Ｐｒｅ
Ｓｃｉｓｓｉｏｎプロテアーゼ（２ｍｇ、自家製）を試料に添加し、４℃で一晩反応させ
た。切断した液溜まりを、重力カラム中の０．５ｍＬ  ＧＳＴおよび０．５  ＩＭＡＣ樹
脂に通した。試料体積を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＴＣＥＰを用いて
８００ｍＬに増大し、５ｍＬのｈｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＦＦに４．０ｍＬ／分で０〜１Ｍ  
ＮａＣｌ勾配により２０カラム体積にわたり通した。試料をその後、１２４ｍＬ  Ｓ７５
ゲルろ過カラム上に２０ｍｇ／ｍＬで注入した。最終的なＡｖｉ−ｅＩＦ４Ｅ（２６９３
１Ｄａ）を、１×ビシン緩衝液中に１ｍｇ／ｍＬになるように希釈し、体積は２．５ｍｇ
になり、ＡＴＰ／ビオチン混合物と混合した（１０ｍＭ  ＡＴＰ、１０ｍＭ  Ｍｇ（ＯＡ
ｃ）２、５０μＭ  ｄ−ビオチン最終）。ビオチンリガーゼ（自家製の２５μｇ  Ｂｉｒ
Ａ）を反応に添加した。反応をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＴｈｅｒｍｏＭｉｘｅｒ  Ｒ上で
３０℃にて６０分間混合しながら（５００ｒｐｍ）行い、ＬＣ−ＭＳを用いて完了をチェ
ックした。試料に、１００μｌの固定化グルタチオン（緩衝液で１：１）を添加し、４℃
で１５分間混合して、Ｃ３およびＢｉｒ３を結合させ、遠心分離により除去した。試料を
、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、ｐＨ７．５で平衡化し
た２つの連続ＰＤ−１０カラムを用いて緩衝液交換した。
ｅＩＦ４Ｅ安定性が低いため、ストレプトアビジンコーティング済みチップを準備し、
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００上で１０℃にて流した。ｅＩＦ４Ｅ（０．０４ｍｇ／ｍＬ、１
５０μｌ）は、Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐ  ＳＡ（ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ、ＢＲ−１００５−３１）の試料チャネルに、５０００〜７０００ＲＵ（
応答単位）の表面密度まで結合した。緩衝液は、１×ＰＢＳ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．
１％グリセロール、０．１％ＣＨＡＰＳ、および１％ＤＭＳＯを用いて、３０μＬ／分で
チップ上を流れた。様々なキャップアナログの試料を、１００μＭ〜１ｎＭ未満の範囲内
の様々な濃度に希釈した。試料をＢｉａｃｏｒｅチップに注入し、２分間の会合時間およ
び５分間の解離時間を有した。ブランクを引くために、いくつかの緩衝液注入を各試料に
ついて行った。
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアを用いて全てのセットについて分析を行っ
た。全ての化合物についての結合分析を、１μＭ化合物での応答単位として報告し、ここ
で、より高いＲＵ値は、表面固定化ｅＩＦ４Ｅタンパク質へのより大きなリガンド結合と
して解釈される。１サブセットの化合物を、速度論結合分析および熱力学（定常状態親和
性）結合分析のいずれかまたは両方を用いてさらに特徴付けて、解離定数を決定した。定
常状態親和性フィットを初期設定で行った（４秒間、その後５秒間ウィンドウでの注入の
ための停止）。速度論フィットは通常、１：１結合モデルで行い、一定ＲＩ＝０および全
ての他の変数は包括的にフィットするように設定した。
【０２９０】
上記に説明する方法を用いたキャップアナログのＢｉａｃｏｒｅ結合データを、表８に
示す。
【０２９１】
【表８−１】
2020183399.tif 000136
【０２９２】
【表８−２】
2020183399.tif 000137
【０２９３】
【表８−３】
2020183399.tif 000138
【０２９４】
【表８−４】
2020183399.tif 000139
【０２９５】
【表８−５】
2020183399.tif 000140
【０２９６】
ＥＩＦ４Ｅへのキャップアナログの競合結合のＦＲＥＴアッセイ
材料：Ｈｉｓタグ付きｅＩＦ４Ｅタンパク質を、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔ
ｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（８０Ｒ−１２５；Ａｃｔｏｎ、ＭＡ）から購入
し、ｔＲＮＡを、ＳＩＧＭＡ（Ｒ５６３６；Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。ビ
オチン化２０ヌクレオチドＲＮＡオリゴ（５’Ｐｈｏｓ／ｒＧｒＧｒＡ  ｒＣｒＣｒＣ  
ｒＣｒＵｒＣ  ｒＵｒＣｒＣ  ｒＣｒＵｒＣ  ｒＣｒＣｒＣ  ｒＣｒＣビオチン−３’）
を、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ
、ＩＡ）から購入した。ユーロピウム標識抗ｈｉｓ抗体を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（
ＡＤ０１１０；Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）から購入し、ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６４７を
接合したストレプトアビジンを、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｓ３２３５７；
Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）から購入した。
【０２９７】
ｅＩＦ４Ｅ結合のＴＲ−ＦＲＥＴアッセイ：
ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）、０．０２％  Ｔｗｅｅｎ、および
０．１％  ＢＳＡのアッセイ緩衝液中で、４つの別々の追加のステップを用いて行った。
最初に、５μｌのＨｉｓ−ｅＩＦ４Ｅ（１０ｎＭ）およびｔＲＮＡ（０．１ｍｇ／ｍｌ）
を黒壁３８４ウェル小体積プレートに添加した。次に、１μｌ／ウェルの新たに希釈した
化合物を、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸ液体ディスペンサーを
用いて、１％の最終ＤＭＳＯ濃度で添加した。化合物およびｅＩＦ４Ｅを室温で１５分間
結合させた。第３の添加は、全てのウェルへの４μｌの化学キャップされた７ｍＧＤＰイ
ミダゾールｍＲＮＡ−ビオチン（１０ｎＭ）の添加からなるが、ただし、１つのカラムは
、バックグラウンド対照として使用するために緩衝液のみを含有した。結合反応を室温で
１時間インキュベートした。最後に、５μｌのユーロピウム標識抗Ｈｉｓ抗体（１０ｎＭ
）およびａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ  ６４７を接合したストレプトアビジン（１０ｎＭ）Ｔ
Ｒ−ＦＲＥＴ検出試薬を各ウェルに添加し、光から保護して室温で１時間インキュベート
した。プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）上で
読み取って、Ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ（６６５ｎｍ）およびユーロピウム（６１５ｎｍ）
の両方からのシグナルを測定した。キャップアナログ濃度の関数としてのａｌｅｘａ  ｆ
ｌｕｏｒとユーロピウム蛍光との比を、データ分析のために計算し、データをＧｒａｐｈ
Ｐａｄで標準のＥＣ５０阻害曲線にフィットさせた。
【０２９８】
上記に説明する方法を用いたＮ７−アルキル化ＧＭＰ誘導体のＦＲＥＴアッセイデータ
を、表９に示す。
【０２９９】
【表９−１】
2020183399.tif 000141
【０３００】
【表９−２】
2020183399.tif 000142
【０３０１】
【表９−３】
2020183399.tif 000143
【０３０２】
【表９−４】
2020183399.tif 000144
【０３０３】
【表９−５】
2020183399.tif 000145
【０３０４】
【表９−６】
2020183399.tif 000146
【０３０５】
【表１０−１】
2020183399.tif 000147
【０３０６】
【表１０−２】
2020183399.tif 000148
【０３０７】
【表１１】
2020183399.tif 000149
【０３０８】
【表１２】
2020183399.tif 000150
【０３０９】
５’一リン酸ｍＲＮＡの生成
標準のＴ７転写反応は５’三リン酸ｍＲＮＡをもたらし、これは、三リン酸構造が最終
生成物で所望される場合、イミダゾールリン酸活性化キャップアナログと適合性でない。
本明細書で説明するイミダゾール活性化キャップアナログを用いて標準の三リン酸キャッ
プ構造を生成するために、ＲＮＡ基質は、化学キャッピングのための５’一リン酸ｍＲＮ
Ａ（イミダゾール−二リン酸キャップアナログを用いる場合）または５’二リン酸ｍＲＮ
Ａ（イミダゾール−一リン酸キャップアナログを用いる場合）のいずれかを有しなければ
ならない。一または二リン酸５’末端ｍＲＮＡを生成する試みで、１０ｍＭ  ＧＭＰまた
は１０ｍＭ  ＧＤＰのいずれかの転写反応への添加を試験した。１０ｍＭ  ＧＭＰは９５
％を超える５’一リン酸ｍＲＮＡを産生したが、１０ｍＭ  ＧＤＰは完全に転写反応を阻
害した。それゆえ、５’三リン酸キャップｍＲＮＡ構造の生成のために、本発明者は、１
０ｍＭ  ＧＭＰを含有する転写反応およびイミダゾール−二リン酸活性化キャップアナロ
グの使用に焦点を当てた。
【０３１０】
ｍＲＮＡのインビトロ転写（レプチンおよびルシフェラーゼ）：
インビトロ転写のためのＤＮＡ鋳型を生成するために、プラスミドｐＧＥＭ−ｏＴ７−
ＴＥＶ−ｏＫ−Ｇｌｕｃ（ＮｃｏＩ）−２ｈＢＧ−（ＮｏｔＩ）−１２０ＡまたはｐＧＥ
Ｍ−ｏＴ７−ＴＥＶ−ｈＬｅｐｔｉｎ−ＧＡｏｐｔ−２ｈＢＧ−１２０Ａを、制限酵素Ｂ
ｓｐＱ１（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）で製造業
者のプロトコルに従って直鎖状にした。直鎖状ＤＮＡベクターを、３倍体積の１００％エ
タノールおよび１／１０体積の３Ｍ  ＮａＯＡｃ、ｐＨ５．１での沈殿により精製した。
この次に７０％エタノールで洗浄し、ＤＮＡを水中に再懸濁した。
【０３１１】
４０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８、８ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ各ＮＴＰ、１０ｍ
Ｍ  ＤＴＴ、２ｍＭスペルミジン、０．００４Ｕ／μＬ無機ピロホスファターゼ（Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）、１Ｕ／μＬ  ＲＮａｓｅ
阻害剤（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）、５Ｕ／μ
Ｌ  Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉ
ｃｈ、ＭＡ）、および０．２μｇ／μＬの直鎖状プラスミドＤＮＡ中で、インビトロ転写
を行った。
【０３１２】
ｍＲＮＡ調製が５’末端化学キャッピングのためである場合、１０ｍＭのＧＭＰ（Ｓｉ
ｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を転写反応中に添加した。反応を３
７℃で１．５時間インキュベートした。ＤＮＡ鋳型を、０．０４Ｕ／μＬのＴＵＲＢＯ  
ＤＮａｓｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を添加することによ
り消化し、３７℃でさらに３０分間インキュベートした。転写産物をＬｉＣｌ（最終濃度
２．８１ｍＭ）により沈殿させ、続いて７０％エタノールで洗浄した。ペレットをヌクレ
アーゼ非含有水中に再懸濁した。
【０３１３】
ＲＮＡの化学キャッピング：
使用したＲＮＡは、５’一リン酸塩で合成した２０ヌクレオチド合成ＲＮＡ分子（Ｉｎ
ｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：５’−Ｐ−ｒＧｒＧｒＡｒＣｒ
ＣｒＣｒＣｒＵｒＣｒＵｒＣｒＣｒＣｒＵｒＣｒＣｒＣｒＣｒＣｒＣ−３’）、または上
記に説明するようにインビトロ転写した５’一リン酸含有ｍＲＮＡ（ガウシアルシフェラ
ーゼｍＲＮＡまたはヒトレプチンｍＲＮＡ）のいずれかであった。３’改変および非改変
ＲＮＡの両方を使用した。
【０３１４】
ＲＮＡ溶液を最初に、６５℃で１０分間加熱することにより、水中で変性させた。上記
混合物を氷上で５分間冷却し、その後キャッピング緩衝液（１００ｍＭ  ＭＥＳ緩衝液、
ｐＨ６．０、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、および５ｍＭ  ＭｎＣｌ２）に添加した。イミダゾ
ール活性化キャップアナログをその後、５ｍＭの最終濃度になるように、反応に添加した
。反応をＴｈｅｒｍｏｓｈａｋｅｒ（Ｇｒａｎｔ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｃａｍｂｒｉ
ｄｇｅ、ＵＫ）中で室温にて一晩行った。ＥＤＴＡを５０ｍＭの最終濃度になるように添
加することにより、反応を抑制した。キャップされた生成物を、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒ
ａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ  Ｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌ
ｅｒｉｃａ、ＭＡ）を用いて脱塩した。生成物を、ＬｉＣｌ沈殿（最終２．８１ｍＭ  Ｌ
ｉＣｌ）でさらに精製し、７０％エタノールで洗浄した。ペレットを、ヌクレアーゼ非含
有水中に再懸濁した。
【０３１５】
いくつかの場合、化学キャップされたｍＲＮＡを、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓ
ｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ３．５μｍ  ２．１×１００ｍｍカラムを用いる逆相ＨＰＬＣを
用いてさらに精製した（表１３）。移動相Ａは水中の０．１Ｍトリエチルアンモニウム酢
酸塩（ＴＥＡＡ）であり、移動相Ｂは７５％水／２５％アセトニトリル中の０．１Ｍ  Ｔ
ＥＡＡであった。カラム流速は０．８ｍｌ／分であり、カラム温度は６５℃であった。画
分を手動で回収した。
【０３１６】
【表１３】
2020183399.tif 000151
【０３１７】
２０ヌクレオチド合成ＲＮＡオリゴマーのキャッピングのＬＣ／ＭＳ分析：
キャップされたオリゴヌクレオチドおよび非キャップオリゴヌクレオチドを、Ｗａｔｅ
ｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１００Å、２．１×７
５ｍｍカラム上で分解した。水性移動相は、０．８μＭ  ＥＤＴＡ、７．１５ｍＭトリエ
チルアミン、および１９２．３ｍＭヘキサフルオロイソプロパノールを含有した。有機移
動相は、メタノールである。カラムを６５℃で維持し、流速は０．３５ｍＬ／分であった
。典型的な勾配は、２分間で５％〜１６％有機物に傾斜し、続いて２０分間で１６％〜２
５％傾斜した。オリゴヌクレオチドのＨＰＬＣ後ＭＳ分析を、Ｔｈｅｒｍｏ  ＬＴＱ−Ｏ
ｒｂｉｔｒａｐ  ＸＬまたはＡＢＳｃｉｅｘ  ６５００  Ｑ  Ｔｒａｐのいずれかを用い
て行った。質量分析計を、ＥＳＩ−ＭＳネガティブモードで作動させ、７３５〜１５５０
ｍ／ｚをスキャンした。
【０３１８】
【表１４】
2020183399.tif 000152
【０３１９】
【表１５】
2020183399.tif 000153
【０３２０】
【表１６】
2020183399.tif 000154
【０３２１】
【表１７】
2020183399.tif 000155
【０３２２】
ルシフェラーゼｍＲＮＡのトランスフェクション、および発光読み出し
細胞培養：ＨＥＫ２９３を、９６ウェルポリＤリジンコート済みプレート中に３０，０
００細胞／ウェルの密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで一晩インキ
ュベートする。培養培地はＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ、カタログ番号３０−２００３）、１０％
ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であり、抗生物質は含まない。
【０３２３】
ｍＲＮＡトランスフェクション：１００ｎｇ／ウェルのｍＲＮＡを、０．４μｌ／ウェ
ルのＤｈａｒｍａＦＥＣＴ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ２（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ  Ｔ−２００２−０１）を用いてトランスフェクトする。これは、１：４の比のｍＲ
ＮＡ対トランスフェクション試薬である。ｍＲＮＡおよびトランスフェクション試薬を、
ＯｐｔｉＭＥＭ中で混合して、１０μｌ／ウェルの最終体積を得る。混合物を室温で２０
分間インキュベートする。一晩培養した培地を、プレートを反転させることにより細胞か
ら除去する。９０μｌの新しい培養培地を各ウェルに添加する。１０μｌのｍＲＮＡ混合
物を各ウェルに添加する。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートする
。
【０３２４】
培地回収：ガウシアルシフェラーゼタンパク質が培地中に分泌される。培地を回収する
ために、９０μｌの培地を細胞からｖ底９６ウェルプレートに移す。プレートを１０００
ｒｐｍで５分間遠心分離する。８０μｌの上清を新しいｖ底プレートに移し、凍結するか
、または直接、ルシフェラーゼ発現アッセイで使用する。
【０３２５】
ルシフェラーゼ発現アッセイ：ＢｉｏＬｕｘガウシアルシフェラーゼアッセイキット（
Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ  カタログ番号Ｅ３３００Ｌ）を、ルシフェラ
ーゼアッセイを行うために使用する。ＢｉｏＬｕｘ  ｇＬＵＣ基質の１：１００希釈物を
アッセイ緩衝液中に作製する（１０μｌの基質：１０００μｌのアッセイ緩衝液）。２０
μｌのトランスフェクション培地を９６ウェル白色透明底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｂ
ｉｏ−ｏｎｅ  ６５５０９５）に添加する。プレートを、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３マ
イクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて読み取る。時
間０で、５０μＬの基質混合物を培地プレートに添加し、データを６０秒間収集する。相
対的発光単位（ＲＬＵ）は３０秒でピークに達し、結果をこの時点を用いて計算する。％
ルシフェラーゼ活性を、各改変ｍＲＮＡのＲＬＵを酵素キャップされたＣａｐ−０  ｍＲ
ＮＡのＲＬＵについて正規化し、１００倍することにより計算する。
【０３２６】
スキーム１６：ＨＰＬＣ精製化学キャップされたｍＲＮＡと比較した、酵素キャップさ
れたＨＰＬＣ精製ｍＲＮＡ（Ｃａｐ−１）のルシフェラーゼ活性。
【０３２７】
【化１１９】
2020183399.tif 000156
【０３２８】
スキーム１７：化学キャップされたｍＲＮＡと比較した、酵素キャップされたｍＲＮＡ
（キャップ−０）のルシフェラーゼ活性。
【０３２９】
【化１２０】
2020183399.tif 000157
【０３３０】
キャップされたレプチンｍＲＮＡのトランスフェクション、および発光読み出し
細胞培養：ＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルポリＤリジンコートされたプレート中に３
０，０００細胞／ウェルの密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで一晩
インキュベートする。培養培地はＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ、カタログ番号３０−２００３）、
１０％  ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であり、抗生物質は含まない。
【０３３１】
ｍＲＮＡトランスフェクション：１００ｎｇ／ウェルのｍＲＮＡを、０．４μｌ／ウェ
ルのＤｈａｒｍａＦＥＣＴ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ２（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ  Ｔ−２００２−０１）を用いてトランスフェクトする。これは、１：４の比のｍＲ
ＮＡ対トランスフェクション試薬である。ｍＲＮＡおよびトランスフェクション試薬を、
ＯｐｔｉＭＥＭ中で混合して、１０μｌ／ウェルの最終体積を得る。混合物を室温で２０
分間インキュベートする。一晩培養した培地を、プレートを反転させることにより細胞か
ら除去する。９０μｌの新しい培養培地を各ウェルに添加する。１０μｌのｍＲＮＡ混合
物を各ウェルに添加する。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートする
。
【０３３２】
培地回収：タンパク質が培地中に分泌される。培地を回収するために、９０μｌの培地
を細胞からｖ底９６ウェルプレートに移す。プレートを１０００ｒｐｍで５分間遠心分離
する。８０μｌの上清を新しいｖ底プレートに移す。
【０３３３】
ヒトレプチンタンパク質ＥＬＩＳＡアッセイ：マウス血漿中のヒトレプチンをＥＬＩＳ
Ａにより測定した。Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｄｕｏｓｅｔから購入した抗体（カタログ
番号ＤＹ３９８Ｅ、捕獲抗体についてパート番号８４０２７９および検出抗体についてパ
ート番号８４０２８０）を、ＰＢＳを用いて再構成し、再びＰＢＳを用いて滴定した。捕
獲抗体で、白色Ｎｕｎｃ（登録商標）Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ３８４ウェルプレート（カタロ
グ番号４６０３７２）上を、３０μｌ／ウェルで４μｇ／ｍＬにてコーティングした。室
温で一晩のインキュベーション後、捕獲抗体を吸引し、プレートを９０μＬ／ウェルのＫ
ＰＬミルクブロッカー（カタログ番号５０−８２−００）により室温で２時間ブロックし
た。インキュベーションが完了すると、プレートを吸引し、組換え標準および試料を３０
μＬ／ウェルでプレートに添加し、３７℃で２時間、６００ｒｐｍにて振盪した。試料／
標準希釈物を、カゼイン試料希釈液（０．７％カゼイン、１．７ｍＭ第一リン酸ナトリウ
ム、８．１ｍＭ第二リン酸ナトリウム七水和物、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．７％  Ｔｒ
ｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および０．１％アジ化ナトリウム）を用いて作製した。続いて、
Ｔｅｋｎｏｖａプレート洗浄溶液（カタログ番号Ｐ１１９２）を用いて、１００μｌ／ウ
ェルで洗浄／吸引を３回行った。次に、検出抗体を、カゼイン検出抗体希釈液（０．４％
カゼイン、１．７ｍＭ第一リン酸ナトリウム、８．１ｍＭ第二リン酸ナトリウム七水和物
、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、および０．１％アジ化ナトリウム）を用いて１２．５ｎｇ／ｍ
Ｌに希釈し、３０μｌ／ウェルで添加し、室温で２時間置いた。このインキュベーション
後、プレートを再び洗浄し、ＨＲＰ希釈緩衝液（１．７ｍＭ第一リン酸ナトリウム、８．
１ｍＭ第二リン酸ナトリウム七水和物、０．１４５Ｍ  ＮａＣｌ、０．１％クロロアセト
アミド、１％ＢＳＡプロテアーゼ非含有、および０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０）中の１
：１２５０希釈のポリ−ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号２１１４０）の溶液
を各ウェルに添加し（３０μｌ／ウェル）、室温で３０分間インキュベートした。最終的
な洗浄／吸引により、ＨＲＰ溶液を除去し、化学発光基質を３０μＬ／ウェルで添加した
（カタログ番号１８５９６７８および１８５９６７９）。プレートを、Ｓｐｅｃｔｒａｍ
ａｘＭ５プレートリーダーを用いて５０ｍｓの積分時間で迅速に読み取った。ＥＬＩＳＡ
の動的範囲は、５〜１５０ｐＭのヒトレプチンである。
【０３３４】
スキーム１８：化学キャップされたＨＰＬＣ精製ｍＲＮＡでのレプチン発現データ。
【０３３５】
【化１２１】
2020183399.tif 000158
【０３３６】
ＨＥＫ２９３細胞Ｓ１００抽出物：Ｓ１００抽出物を、Ｓ１００調製の標準プロトコル
に従って調製した。ＨＥＫ２９３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＳＨ３０５２
１．０２）細胞を、８０％  ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １２
３３８）および２０％  ＳＦＭ４中で、８％ＣＯ２にて加湿大気で、１００ｒｐｍで回転
する軌道振盪器上にて生育させた。２．５×１０９細胞を、臨床用遠心機で１，５００ｒ
ｐｍにて５分間ペレット化した。ペレットを１Ｌの氷冷ＤＰＢＳ中で洗浄し、再び臨床用
遠心機で４℃にて１，５００ｒｐｍで１０分間回転させた。上清を除去し、細胞ペレット
を２５０ｍｌの氷冷ＰＢＳ中に再懸濁し、ピペッティングにより破壊し、臨床用遠心機で
４℃にて１，７００ｒｐｍで６分間回転させた。上清を除去し、ペレットを５倍体積の緩
衝液Ａ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．９、１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍ
Ｍ  ＫＣｌ、新たに添加した０．５ｍＭ  ＤＴＴ）中に再懸濁した。細胞を氷上で１０分
間インキュベートし、２，０００ｒｐｍで１０分間回転させ、上清を除去した。追加の体
積の緩衝液Ａを添加し、ペレットを、緩いダンス型乳棒ホモジナイザーを５往復すること
により破壊した。細胞を、きついダンス型乳棒ホモジナイザーを１５往復することにより
溶解し、顕微鏡を用いて溶解を確認した。溶解した材料を、臨床用遠心機で４℃にて４，
５００ｒｐｍで１０分間回転させた。上清を除去し、Ｓ１００抽出物を作製するために使
用した。０．１１倍体積の緩衝液Ｂ（０．３Ｍ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．９、１．
４Ｍ  ＫＣｌ、３０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）をＳ１００に添加し、反転することにより穏やか
に混合し、超遠心機で４℃にて１０２，０００ｇで１時間回転させた。上清を除去し、冷
却した１５ｍＬ円錐管に入れた。脂質層の下の下層からの透明な上清を除去し、１Ｌの緩
衝液Ｄ（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７．９、２０％グリセロール、０．１Ｍ  
ＫＣｌ、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５ｍＭ  ＤＴＴ、０．５ｍＭ  ＰＭＳＦ）に対して
４℃で５時間を超えて透析した。Ｓ１００抽出物を、すぐに使用できるまで、少ない一定
分量で８０℃にて保存した。
【０３３７】
ＦＲＥＴ  ＲＮＡ分解アッセイ：ＲＮＡ分解アッセイを、Uhler et al J. Am. Chem. S
oc. 2003, 125, 14230-14231のプロトコルに従って、いくらかの改変を伴って行った。オ
リゴ５−／５Ｐｈｏｓ／ｒＧｒＵ／ｉＦｌｕｏｒＴ／  ｒＵｒＣｒＧ  ｒＣｒＣｒＡ  ｒ
ＵｒＵ／ｉ６−ＴＡＭＮ／ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡ  −３およ
び５−／５Ｐｈｏｓ／ｒＧｒＵ／ｉＦｌｕｏｒＴ／ｒＵｒＣｒＧ  ｒＣｒＣｒＡ  ｒＵｒ
Ｕ／ｉ６−ＴＡＭＮ／ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡｒＡｒＡ  ｒＡ／３ＢＩＯ−３
をＩＤＴから購入し、ＲＮＡ分解アッセイで使用した。アッセイ緩衝液は、１３０ｍＭ  
Ｋ−グルタミン酸塩ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２からなった。実験の直前にＤＴＴを
１０ｍＭの最終濃度になるように添加した。１００μＭまたは２００μＭのオリゴを、そ
れぞれ、反応体積２５μＬおよび５０μＬによって使用した。Ｓ１００抽出物は、０．３
％〜２０％  ｖ／ｖで変化し、緩衝液Ｄは、全ての試料について全反応体積の２０％であ
った。全ての反応を、３８４ウェルプレートで３７℃にて行った。１００秒で、Ｓ１００
抽出物をオリゴ緩衝液混合物に添加した。フルオレセインを４９０ｎｍで励起し、蛍光放
射を５２０ｎｍおよび５８５ｎｍで測定した。データを毎分２時間収集した。ＦＲＥＴ比
Ｑ（＝Ｆ５８５／Ｆ５２０）を計算し、初期値Ｑ０について正規化した。データをＰｒｉ
ｓｍ  ５．０を用いて、単一指数関数減衰関数ｙ＝ｙ０−Ｐｌａｔｅａｕ＊ｅｘｐ（−Ｋ
＊Ｘ）＋Ｐｌａｔｅａｕにフィットさせた。ミカエリス−メンテンパラメータを抽出する
ために、％Ｓ１００［Ｘ］に対する速度定数ｋｄｅｃの依存性を、Ｐｒｉｓｍ  ５．０を
用いて、ミカエリス−メンテン式Ｙ＝Ｖｍａｘ＊Ｘ／（Ｋｍ＋Ｘ）にフィットさせた。
【０３３８】
【表１８−１】
2020183399.tif 000159
【０３３９】
【表１８−２】
2020183399.tif 000160
【０３４０】
ｍＲＮＡの３’末端改変
ルシフェラーゼ３’末端改変ｍＲＮＡのトランスフェクション、および発光読み出し：
細胞培養：ＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルポリＤリジンコート済みプレート中に３０
，０００細胞／ウェルの密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで一晩イ
ンキュベートする。培養培地はＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ、カタログ番号３０−２００３）、１
０％  ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であり、抗生物質は含まない。
【０３４１】
ｍＲＮＡトランスフェクション：３０ｎｇ／ウェルのｍＲＮＡを、０．４μｌ／ウェル
のＤｈａｒｍａＦＥＣＴ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ２（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉ
ｃ  Ｔ−２００２−０１）を用いてトランスフェクトする。ｍＲＮＡおよびトランスフェ
クション試薬を、ＯｐｔｉＭＥＭ中で混合して、１０μｌ／ウェルの最終体積を得る。混
合物を室温で２０分間インキュベートした。一晩培養した培地を、プレートを反転させる
ことにより細胞から除去した。９０μｌの新しい培養培地を各ウェルに添加し、１０μｌ
のｍＲＮＡ混合物を各ウェルに添加した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２で２４時間イン
キュベートする。
【０３４２】
培地回収：ガウシアルシフェラーゼタンパク質が培地中に分泌される。培地を回収する
ために、トランスフェクション２４時間後、９０μｌの培地を細胞からｖ底９６ウェルプ
レートに移し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。８０μｌの上清を新しいｖ底プレ
ートに移し、凍結するか、または直接、ルシフェラーゼ発現アッセイもしくはレプチンＥ
ＬＩＳＡで使用した。
【０３４３】
ルシフェラーゼ発現アッセイ：ＢｉｏＬｕｘガウシアルシフェラーゼアッセイキット（
Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ  カタログ番号Ｅ３３００Ｌ）を、ルシフェラ
ーゼアッセイを行うために使用する。ＢｉｏＬｕｘ  ｇＬＵＣ基質の１：１００希釈物を
アッセイ緩衝液中に作製する（１０μｌの基質：１０００μｌのアッセイ緩衝液）。２０
μｌのトランスフェクション培地を９６ウェル白色透明底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｂ
ｉｏ−ｏｎｅ  ６５５０９５）に添加する。プレートを、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ  ３マ
イクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて読み取る。時
間０で、５０μＬの基質混合物を培地プレートに添加し、データを６０秒間収集する。相
対的発光単位（ＲＬＵ）は３０秒でピークに達し、結果をこの時点を用いて計算する。％
ルシフェラーゼ活性を、各改変ｍＲＮＡのＲＬＵを酵素キャップされたＣａｐ１  ｍＲＮ
ＡのＲＬＵについて正規化し、１００倍することにより計算する。
【０３４４】
【表１９−１】
2020183399.tif 000161
【０３４５】
【表１９−２】
2020183399.tif 000162
【０３４６】
本明細書全体を通して、様々な出版物が参照されている。本発明が属する分野の状態を
より完全に説明するために、これらの出版物の開示はそれらを全体として、本明細書中で
参照により本明細書に組み込まれる。
【０３４７】
本発明は、開示される実施形態を参照して説明されているが、当業者は、上記に詳述さ
れる特定の実施例および研究は単に本発明の例示であることを容易に理解するであろう。
様々な改変が本発明の趣旨から逸脱することなくなされ得ることが理解されるべきである
。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【手続補正書】
【提出日】令和2年7月22日(2020.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記述された発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３４７】
本発明は、開示される実施形態を参照して説明されているが、当業者は、上記に詳述される特定の実施例および研究は単に本発明の例示であることを容易に理解するであろう。様々な改変が本発明の趣旨から逸脱することなくなされ得ることが理解されるべきである。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
式Ｉの化合物またはその塩
【化１２２】
2020183399.tif 000189
であって、式中、
Ｚ１が、
【化１２３】
2020183399.tif 000190
、キャップ０、キャップ１、
【化１２４】
2020183399.tif 000191
であり、ただしＺ１が、
【化１２５】
2020183399.tif 000192
、キャップ０、またはキャップ１である場合、−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方と
もが−ＯＨであることはなく、かつＡ２が無ではなく；
Ｚ２が、無、または−Ｏ−、−Ｓ−、任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で
置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテ
ロアリール、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアルケ
ニル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、
【化１２６】
2020183399.tif 000193
からなる群から選択される結合部分であり；
Ａ１およびＡ３が独立して、無、ＮＨ、Ｓ、およびＯからなる群から選択され；
Ａ２が、無、または＞ＣＲ６Ｒ７、＞ＮＲ６、＞ＮＮＲ６Ｒ７、＞ＮＯＲ６、＞Ｓ、お
よび＞Ｏからなる群から選択され；
Ｙが、無、または任意選択で置換された低級アルキル、任意選択で置換されたアルケニ
ル、任意選択で置換されたアルキニル、−（ＣＨ２）ｎＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎＣＯＯ
Ｒ１５、および−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＮＲ１２からなる群から選択される結合部分であ
り；
Ｒ１が、Ｈ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたシクロアル
ケニル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロアリール、および
任意選択で置換されたヘテロシクリルからなる群から選択され；
Ｒ２が、Ｈ、−ＯＨ、任意選択で置換されたアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、お
よび−ＮＲ１２Ｒ１３からなる群から選択され；
Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８が独立して、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、ポリアミン
、ＰＥＧ、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１２Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ１ＮＲ１４Ｃ（Ｏ）Ｒ１５
、−（ＣＨ２）ｎ１ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＯＲ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ
（Ｏ）Ｒ１５、−（ＣＨ２）ｎ１Ｃ（Ｏ）ＮＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（
Ｏ）−（ＮＲ１２）２−Ｃ（Ｏ）−Ｘ２、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ３−Ｃ（Ｏ）−［ＮＲ１２
−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ３］１〜３−Ｘ２からなる群から選択されるか、またはＲ６お
よびＲ８が一緒になって環を形成し、ここで該環が、任意選択で置換され、かつ１０〜８
０個の環原子を含有し、その中の１０〜４０個の環原子がヘテロ原子であってもよく、ま
たはＲ６およびＲ７が一緒になって３〜８員環を形成し、ここで該環が、任意選択で置換
され、かつその中の１〜６個の環原子がヘテロ原子であってもよく；
Ｒ７、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、およびＲ１６が独立して、Ｈ、任意
選択で置換された低級アルキル、および任意選択で置換されたアシルからなる群から選択
され；
Ｒ９が、Ｈおよび任意選択で置換された低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ１０が、Ｈ、−ＮＲ１２Ｒ１３、および−ＯＲ１６からなる群から選択され；
ｎが、１〜４であり；
ｎ１が、０〜１０であり；
ｎ２が、１〜１２であり；
ｎ３が、１〜８であり；
Ｘが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、および任意選択で置換されたアルカンジイルからなる群から選択
され；
Ｘ１が、
【化１２７】
2020183399.tif 000194
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４が独立して、Ｈおよび−ＯＲ１６からなる群から選択されるか、または
Ｒ３およびＲ４が一緒になってＯ−Ｑ−Ｏを形成し；
Ｑが、−ＣＨ２−および−Ｃ（Ｍｅ）２−からなる群から選択され；
Ｘ２が、親和性部分および検出部分からなる群から選択され；並びに
Ｘｎが、核酸塩基である、化合物またはその塩。
［２］
以下の式
【化１２８】
2020183399.tif 000195
を有し、式中、
変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
［３］
以下の式
【化１２９】
2020183399.tif 000196
を有し、式中、
変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
［４］
以下の式
【化１３０】
2020183399.tif 000197
を有し、式中、
変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
［５］
以下の式
【化１３１】
2020183399.tif 000198
を有し、式中、
＊Ｚ１が、
【化１３２】
2020183399.tif 000199
、キャップ０、およびキャップ１からなる群から選択され、ただしＡ２が無でないか、ま
たは−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８の両方ともが−ＯＨであることはなく、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
［６］
【化１３３】
2020183399.tif 000200
からなる群から選択される構造を含む、請求項５に記載の化合物。
［７］
以下の式
【化１３４】
2020183399.tif 000201
を有し、式中、
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８が、−ＯＨであり、
Ａ２が、無であり、
Ｘｎが、核酸塩基であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
［８］
【化１３５】
2020183399.tif 000202
からなる群から選択される構造を含む、請求項７に記載の化合物。
［９］
以下の式
【化１３６】
2020183399.tif 000203
を有し、式中、
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８が、−ＯＨであり、
Ａ２が、無であり、
Ｘｎが、核酸塩基であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
［１０］
以下の式
【化１３７】
2020183399.tif 000204
を有し、式中、
−Ａ１−Ｒ５および−Ａ３−Ｒ８が、−ＯＨであり、
Ａ２が、無であり、
Ｘｎが、核酸塩基であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、請求項１に記載の化合物。
［１１］
式ＩＸの化合物またはその塩
【化１３８】
2020183399.tif 000205
であって、式中、
Ｚが、−ＯＨ、
【化１３９】
2020183399.tif 000206
からなる群から選択され、
ｎ４が、０〜２であり、
他の変数が、式１で定義されるとおりである、化合物またはその塩。
［１２］
【化１４０】
2020183399.tif 000207
からなる群から選択される構造を含む、請求項１１に記載の化合物。
［１３］
式Ｘの化合物またはその塩
【化１４１】
2020183399.tif 000208
であって、式中、
Ｚが、−ＯＨ、
【化１４２】
2020183399.tif 000209
からなる群から選択され、
ｎ４が、０〜２であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、化合物またはその塩。
［１４］
【化１４３】
2020183399.tif 000210
からなる群から選択される構造を含む、請求項１３に記載の化合物。
［１５］
式ＸＩの化合物またはその塩
【化１４４】
2020183399.tif 000211
であって、式中、
Ｚが、−ＯＨ、
【化１４５】
2020183399.tif 000212
からなる群から選択され、
ｎ４が、０〜２であり、
他の変数が、式Ｉで定義されるとおりである、化合物またはその塩。
［１６］
【化１４６】
2020183399.tif 000213
からなる群から選択される構造を含む、請求項１５に記載の化合物。
【外国語明細書】
2020183399000001.pdf