(57)【要約】【課題】抗体薬物複合体組成物の製剤化方法の提供。【解決手段】本発明は、ＡＤＣのバッチ間で効力変動性を低下させ、意図する狭い範囲内でそのような治療用組成物を投与することを提供する、抗体薬物複合体（「ＡＤＣ」）を含む治療用組成物を製剤化するための改善された方法を提供する。本発明は、薬物濃度に基づいて抗体薬物複合体（「ＡＤＣ」）を含む治療用組成物を製剤化することによって、ＡＤＣのバッチ間で効力の変動性を狭め、本方法に従って製剤化された薬物の毒性を最小限にし、その有効性を増加させるための新規の方法を提供する。【選択図】図１
2020122012.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年９月２日に出願された米国特許仮出願番号第６２／０４４，５９２号の優先権及び利益を主張し、その内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍表面抗原に特異的に結合する抗体は、細胞毒性薬を抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の形態で送達するために使用される。細胞毒性薬は、典型的には、システインまたはリジン残基で抗体にコンジュゲートされる。抗体当たりコンジュゲートした薬物の分子数は、薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）とも言われ、通常、０〜８の範囲の種の分布である。ＡＤＣの製造バッチのＤＡＲは、分光光度測定を用いて経験的に決定され、ＡＤＣ治療用組成物は、典型的には、薬物負荷が異なるＡＤＣ種の混合物を含有する。従って、ＡＤＣバッチのＤＡＲは、バッチ内のＡＤＣ種の平均ＤＡＲを表す。
【０００３】
ＡＤＣがん治療薬及び抗体がん治療薬は、両方とも微量の抗体タンパク質濃度に基づいて製剤化され、仕様に従わなければならない。製剤ラベルは「微量」または標的タンパク質濃度の情報を与えるが、バイアル中の薬物濃度は、許容基準に従いながらも、ＤＡＲの許容変動により標的抗体濃度に対して変動し得る。ＡＤＣの効力は、一般的に、濃度に対して線形である。抗体とは異なり、ＡＤＣは、ＤＡＲにより可変効力のさらなる可能性を有する。抗体濃度の典型的な仕様とＤＡＲとにより、患者投与が微量の抗体濃度に基づいている場合に、ＡＤＣ製品バイアル中の細胞毒性薬の濃度をバッチ間で多少変動させることができる。
【０００４】
患者は、安全かつ有効なＡＤＣ用量を受けることが重要である。ＡＤＣ組成物を製剤化する改善された方法は、バッチ間の効力、有効性、及び／または毒性の変動性を有利に低下させ、患者が意図した治療範囲内でＡＤＣを受けることを確実にする。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、薬物濃度に基づいて抗体薬物複合体（「ＡＤＣ」）を含む治療用組成物を製剤化することによって、ＡＤＣのバッチ間で効力の変動性を狭め、本方法に従って製剤化された薬物の毒性を最小限にし、その有効性を増加させるための新規の方法を提供する。
【０００６】
本発明は、少なくとも部分的には、いくつかのＡＤＣの有効性及び毒性が抗体の用量ではなく薬物の用量によって完全にまたはほとんど引き起こされるという発見に基づいている。抗体ベースの治療薬、例えば、医薬組成物を含有するＡＤＣを製剤化する従来の方法は、抗体濃度に基づいて患者に投与することに依存していた。これは、抗体のみを含有する組成物には有利であり得るが、抗体濃度を用いてＡＤＣを製剤化することは、薬物濃度を変動させて、所望の範囲外にさせる可能性がある。ＡＤＣの効力は、一般的に、結合薬物の濃度に対して線形であり、これは、式［薬物］＝ＤＡＲ×［抗体］で示されるように、抗体濃度とＤＡＲの両方によって影響を受ける。ＤＡＲ、抗体、及び薬物の各々は、所与のＡＤＣ仕様で定義されるように、所与の許容可能な範囲内で変動する。しかしながら、薬物と抗体は結合するため、ある成分の変動性は、他の成分に影響を及ぼす。例えば、抗体濃度における±１０〜２０％の変動性（業界基準による許容可能な範囲内である）は、薬物濃度における±１０〜２０％の変動を引き起こし、バイアル中の製剤の効力の±２０〜４０％の変動性を引き起こし得る。ＤＡＲの±１５％変動は、薬物の濃度を１５％高くまたは低くさせるため、効力をさらに変動させる。この効果は、薬物の濃度が毒性及び有効性の主なけん引役であることが実証されているＡＤＣの特定のサブセットに特に関連し得る。
【０００７】
ＡＤＣは、「薬物」分子としても知られる細胞毒性剤に連結し、抗体分子当たりコンジュゲートした薬物分子の数は、用語「薬物対抗体」比（「ＤＡＲ」）によって表される。ＡＤＣの製造バッチのＤＡＲは、薬物の濃度と抗体の濃度との比率を得ることによって、分光光度測定を用いて経験的に決定される。ＡＤＣの特定のバッチのＤＡＲは、そのバッチ内で各抗体分子に結合した薬物の平均数を表す。臨床開発用の典型的なＤＡＲ仕様は、±１０〜１５％の範囲である。従来、ＡＤＣ製剤化における最初のステップは、薬物と抗体の両方のモル濃度を決定し、ＤＡＲを算出することである。次いで、ＡＤＣは、以下のように製造したＤＡＲ値に従って薬物濃度が変動できるように、標的抗体濃度に製剤化される：
［薬物］＝ＤＡＲ×［抗体］。
【０００８】
これに対し、本発明は、固定抗体濃度及び固定ＤＡＲで定義された標的薬物濃度に基づいてＡＤＣ組成物を製剤化することによって、効力及び毒性の変動性を最小にすることができるという発見に基づいている。従って、ＡＤＣの効力、有効性、及び／または毒性が、投与された薬物の量によって主に引き起こされることが実証されている場合には、細胞毒性薬の濃度の変動性を低下させる改善された方法は有益であろう。従って、以下に記載される製剤化方法は、固定抗体濃度及び固定ＤＡＲで標的薬物濃度を決定することと、標的薬物濃度を達成するように抗体薬物複合体組成物を製剤化することとを含む。そのような改善された製剤化方法により、バッチ失敗のさらなるリスクなく、意図した狭い薬物範囲内で患者に確実に投与される。
【０００９】
一態様において、本発明は、一般に、抗体薬物複合体組成物における効力変動性を（例えば、少なくとも約５％、１０％、２０％以上まで）低下させる方法を提供する。本方法は、固定抗体濃度及び固定薬物抗体比で標的薬物濃度を決定すること；及び標的薬物濃度を達成するように抗体薬物複合体組成物を製剤化することによって、組成物における効力変動性を低下させることを含む。一実施形態において、薬物濃度の変動性は、約±１０％である。種々の実施形態において、変動性は、約±５、６、７、８、または９％未満である。一実施形態において、本方法は、バッチ間の効力変動を（例えば、少なくとも約５％、１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％以上まで）低下させる。変動を±として表す場合、特定の値よりも特定の％だけ高いまたは低い変動を説明することを意図することに留意すべきである。変動を単一の合計値（例えば、少なくとも１０％）として表す場合、最大と最小の可能性のある値間の差を表すことを意図する。別の実施形態において、組成物は、最終製剤である。さらに別の実施形態において、薬物濃度は、抗体仕様濃度内で変動する。一実施形態において、抗体濃度は、標的抗体濃度±約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０％未満に等しい。別の実施形態において、抗体濃度は、標的抗体濃度±約１０％、１２％、１５％、または２０％未満に等しい。
【００１０】
別の異なる態様において、本発明は、抗体薬物複合体を含む組成物における効力変動性を低下させる方法を提供する。本方法は、抗体濃度の仕様範囲と薬物濃度の仕様範囲が重なる範囲の中間点に入る可変薬物濃度を標的化することにより抗体薬物複合体を製剤化することによって、組成物における効力変動性を低下させることを含む。この場合、本発明は、抗体薬物複合体を含有する組成物における効力変動性を低下させる方法を提供する。本方法は、（ａ）抗体薬物複合体組成物のＤＡＲを測定すること；（ｂ）抗体仕様の上限と抗体仕様の下限を決定することであり、抗体仕様の上限は、標的抗体濃度＋仕様が許す最大変動であり、抗体仕様の下限は、標的抗体濃度−仕様が許す最大変動である；（ｃ）定義された薬物仕様の上限と定義された薬物仕様の下限を決定することであり、ここで定義された薬物仕様の上限は、標的薬物濃度＋仕様が許す最大変動であり、定義された薬物仕様の下限は、標的薬物濃度−仕様が許す最大変動である；（ｄ）以下のように算出された薬物仕様の上限（ＵＳＬ（薬物））を決定すること：
ＵＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の上限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｅ）以下のように算出された薬物仕様の下限（ＬＳＬ（薬物））を決定すること：
ＬＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の下限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｆ）ステップ（ｄ）で算出されたＵＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義された薬物仕様の上限と比較し、２つの値のうちの低い方を薬物仕様の有効な上限として選択すること；（ｇ）ステップ（ｅ）で算出されたＬＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義された薬物仕様の下限と比較し、２つの値のうちの高い方を薬物仕様の有効な下限として選択すること；及び（ｈ）抗体薬物複合体組成物を、薬物仕様の有効な上限と薬物仕様の有効な下限の間の中間点である標的薬物濃度に製剤化することによって、組成物における効力変動性を低下させることを含む。一実施形態において、本方法は、薬物の仕様上限と下限の範囲を約±３〜９％に狭める。別の実施形態において、本方法は、薬物の仕様上限と下限の範囲を約±４％に狭める。一実施形態において、ステップ（ｂ）における仕様が許す最大変動は、約±１５％である。別の実施形態において、ステップ（ｂ）における仕様が許す最大変動は、約±１０、１１、１２、１３、または１４％未満である。一実施形態において、ステップ（ｃ）における仕様が許す最大変動は、約±１５％である。別の実施形態において、ステップ（ｃ）における仕様が許す最大変動は、約±１０、１１、１２、１３、または１４％未満である。種々の実施形態において、抗体は、非機能性抗体である。種々の実施形態において、ＤＡＲは、ＤＡＲ仕様の下限またはＤＡＲ仕様の上限である。種々の実施形態において、ＤＡＲ仕様の下限は、２．３、２．４、または２．５である。種々の実施形態において、ＤＡＲ仕様の上限は、２．９、３．０、または３．１である。
【００１１】
関連する態様において、例えば、抗体が機能性抗体である場合、本発明は、抗体濃度の仕様範囲と薬物濃度の仕様範囲が重なる範囲の中間点に入る可変薬物濃度を標的化することによって、ＡＤＣを製剤化する場合に薬物濃度の変動を最小限にさせる抗体濃度を標的化する、抗体薬物複合体を製剤化する方法も提供する。これにより、ＡＤＣ製剤における抗体濃度のより厳格制御が可能となる。
【００１２】
別の態様において、本発明は、抗体薬物複合体組成物を製剤化する方法を提供する。本方法は、固定抗体濃度及び固定薬物抗体比で標的薬物濃度を決定すること；標的薬物濃度を達成するように抗体薬物複合体組成物を製剤化することを含む。
【００１３】
さらに別の態様において、本発明は、抗体メイタンシノイド複合体を含む組成物における効力変動性を低下させる方法を提供する。本方法は、固定抗体濃度及び固定メイタンシノイド対抗体比で標的メイタンシノイド濃度を決定すること；及び標的メイタンシノイド濃度を達成するように抗体メイタンシノイド複合体組成物を製剤化することによって、組成物における効力変動性を低下させることを含む。
【００１４】
さらに別の態様において、本発明は、抗体メイタンシノイド複合体組成物を製剤化する方法を提供する。本方法は、固定抗体濃度及び固定メイタンシノイド対抗体比で標的メイタンシノイド濃度を決定すること；及び標的メイタンシノイド濃度を達成するように抗体メイタンシノイド複合体組成物を製剤化することを含む。
【００１５】
さらに別の態様において、本発明は、抗体ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン）複合体組成物を製剤化する方法を提供する。本方法は、固定抗体濃度及び固定ベンゾジアゼピン対抗体比で標的ベンゾジアゼピン濃度を決定すること；及び標的ベンゾジアゼピン濃度を達成するように抗体ベンゾジアゼピン複合体組成物を製剤化することを含む。
【００１６】
別の異なる態様において、本発明は、抗体ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン）複合体を含有する組成物における効力変動性を低下させる方法を提供する。本方法は、（ａ）抗体ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピン）複合体組成物のＤＡＲを測定すること；（ｂ）抗体仕様の上限と抗体仕様の下限を決定することであり、ここで抗体仕様の上限は標的抗体濃度＋仕様が許す最大変動であり、抗体仕様の下限は、標的抗体濃度−仕様が許す最大変動である；（ｃ）定義されたベンゾジアゼピン仕様の上限と定義されたベンゾジアゼピン仕様の下限を決定することであり、ここで定義されたベンゾジアゼピン仕様の上限は、標的ベンゾジアゼピン濃度＋仕様が許す最大変動であり、定義されたベンゾジアゼピン仕様の下限は、標的ベンゾジアゼピン濃度−仕様が許す最大変動である；（ｄ）以下のように算出されたベンゾジアゼピン仕様の上限（ＵＳＬ（薬物））を決定すること：
ＵＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の上限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｅ）以下のように算出されたベンゾジアゼピン仕様の下限（ＬＳＬ（薬物））を決定すること：
ＬＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の下限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｆ）ステップ（ｄ）で算出されたＵＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義されたベンゾジアゼピン仕様の上限と比較し、２つの値のうちの低い方をベンゾジアゼピン仕様の有効な上限として選択すること；（ｇ）ステップ（ｅ）で算出されたＬＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義されたベンゾジアゼピン仕様の下限と比較し、２つの値のうちの高い方をベンゾジアゼピン仕様の有効な下限として選択すること；及び（ｈ）抗体ベンゾジアゼピン複合体組成物を、ベンゾジアゼピン仕様の有効な上限とベンゾジアゼピン仕様の有効な下限の間の中間点である標的ベンゾジアゼピン濃度に製剤化することによって、組成物における効力変動性を低下させることを含む。
【００１７】
さらに別の態様において、本発明は、意図する狭い範囲内で対象に投与する方法を提供する。本方法は、任意の上述の態様の方法に従って製剤化された抗体薬物複合体組成物を提供すること、及び上述の組成物を対象に投与することを含む。
【００１８】
さらに別の態様において、本発明は、上述の態様の方法に従って製剤化された抗体薬物複合体を含有する医薬組成物を提供し、微量薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度は、ラベルで提供される。
【００１９】
本明細書に記載された本発明の任意の上述の態様または任意の他の態様の種々の実施形態において、薬物は、細胞毒性剤である。細胞毒性剤としては、限定されないが、チューブリン阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び細胞周期または有糸分裂かく乱物質が挙げられる。細胞毒性剤の非限定例としては、メイタンシノイド；ベンゾジアゼピン化合物、例えば、ピロロベンゾジアゼピン及びインドリノベンゾジアゼピン；及びオーリスタチン）が挙げられる。上述の態様の特定の実施形態において、本方法は、バッチ間の効力変動を（例えば、少なくとも約５％、１０％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％以上まで）低下させる。他の実施形態において、組成物は、最終製剤である。さらに他の実施形態において、抗体濃度は、抗体仕様濃度内で変動する。上述の態様のさらに他の実施形態において、本方法は、抗体メイタンシノイド複合体を製造する上でバッチ間の効力変動性を低下させる。上述の態様の種々の実施形態において、組成物は、約１０〜４０％（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０％）まで効力の変動を許される。上述の態様の他の実施形態において、組成物は、約１０〜２０％（例えば、１０、１２、１５、１８、２０％）まで効力の変動を許される。上述の態様のさらに他の実施形態において、抗体濃度仕様は、標的±約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０％未満に等しい。他の実施形態において、抗体濃度仕様は、標的±約１０％、１２％、１５％、または２０％未満に等しい。上述の態様の種々の実施形態において、組成物の効力の変動性は、抗体薬物複合体組成物を抗体濃度に基づいて製剤化する場合と比べて低下する。上述の態様の種々の実施形態において、抗体濃度及び複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度は、分光光度測定によって決定される。上述の態様の種々の実施形態において、薬物対抗体比は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）またはＳＥＣ−質量分析法（ＳＥＣ−ＭＳ）によって決定される。上述の態様の他の実施形態において、組成物の有効性または毒性は、薬物対抗体比または抗体濃度とは無関係であるが、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）の総投与用量に依存する。上述の態様のさらに他の実施形態において、組成物の有効性は、薬物対抗体比とは無関係であるかまたはおおむね無関係である。上述の態様の種々の実施形態において、組成物の毒性は、薬物対抗体比とは無関係であるかまたはおおむね無関係である。上述の態様の種々の実施形態において、有効性または毒性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度に依存するかまたはおおむね依存する。上述の態様の種々の実施形態において、有効性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、毒性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度に依存する、実��的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、有効性は、抗体濃度とは無関係である、実質的に無関係である、または少なくとも一部が無関係である。上述の態様の種々の実施形態において、毒性は、抗体濃度とは無関係である、実質的に無関係である、または少なくとも一部が無関係である。上述の態様の種々の実施形態において、有効性及び毒性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度及び抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、有効性及び毒性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度よりも抗体濃度に依存しない。上述の態様の種々の実施形態において、有効性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度及び抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、毒性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度及び抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、有効性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度及び抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存し、毒性は、複合体薬物濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、有効性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度及び抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存し、毒性は、抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、毒性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度及び抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存し、有効性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、毒性は、抗体濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存し、有効性は、複合体薬物（例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン）濃度に依存する、実質的に依存する、または少なくとも一部が依存する。上述の態様の種々の実施形態において、抗体薬物複合体組成物は、注入用に製剤化される。上述の態様の種々の実施形態において、抗体薬物複合体は、薬学的に許容可能な非経口ビヒクルと共に製剤化される。上述の態様の種々の実施形態において、抗体薬物複合体は、単位投与量注入可能な形態で製剤化される。
【００２０】
本明細書に記載される本発明の任意の上述の態様または任意の他の態様の種々の実施形態において、本方法は、仕様上限（ＵＳＬ）及び仕様下限（ＬＳＬ）を決定することを含む。特定の実施形態において、算出されたＵＳＬ及びＬＳＬは、以下の式を用いて決定される：
ＵＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の上限×ＰＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
ＬＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の下限×ＰＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量。
【００２１】
上述の態様のいずれかの他の実施形態において、細胞毒性化合物または薬物は、チューブリン阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、または細胞周期または有糸分裂かく乱物質である。
【００２２】
上述の態様のいずれかのさらに他の実施形態において、薬物としては、メイタンシノイド及びメイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン化合物（例えば、ピロロベンゾジアゼピン及びインドリノベンゾジアゼピン；表１も参照されたい：化合物Ｄ１〜Ｄ１０及びＤＧＮ４６２）、タキソイド、ＣＣ−１０６５及びＣＣ−１０６５類似体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類似体、エンジイン、例えば、カリケアマイシン、ドラスタチン及びドラスタチン類似体、例えば、オーリスタチン、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、及びモルホリノ−ドキソルビシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２３】
上述の態様の種々の実施形態において、メイタンシノイドは、ＤＭ１、ＤＭ３、またはＤＭ４である。上述の態様の種々の実施形態において、ベンゾジアゼピン化合物は、以下の表１に列挙されている代表的な細胞毒性剤Ｄ１〜Ｄ１０及びＤＧＮ４６２から選択される。
【００２４】
【表１−１】
2020122012.tif 000003
【表１−２】
2020122012.tif 000004
表１に列挙されている化合物の他の変形（例えば、スルホン酸化バージョン）も考えられ、当業者には容易に明らかになるであろう点に留意されたい。
【００２５】
上述の態様の種々の実施形態において、抗体は、機能性抗体または非機能性抗体であってもよい。非機能性抗体としては、例えば、ｈｕＤＳ６及びエフェクター媒介細胞死滅のみを有する抗体、例えば、ｈｕＭｏｖｌ９（Ｍ９３４６Ａ）、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３、ｈｕＭｙ９−６（Ｚ４６８１Ａ）、及びｈｕＢ４が挙げられる。機能性抗体としては、例えば、ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ及びｈｕＣＤ３７−３が挙げられる。特定の実施形態において、薬物は、ベンゾジアゼピン化合物であり、抗体は、非機能性抗体である。特定の実施形態において、薬物は、メイタンシノイドであり、抗体は、非機能性抗体である。
【００２６】
上述の態様の種々の実施形態において、リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）、またはＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）などの開裂可能なリンカーである。上述の態様の種々の実施形態において、リンカーは、２−イミノチオラン、無水アセチルコハク酸、スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）などの開裂不可能なリンカーである。一般的なリンカーである２−イミノチオラン及び無水アセチルコハク酸は、開裂可能または開裂不可能なリンカーとして使用することができる。
【００２７】
上述の態様の種々の実施形態において、リンカー抗体薬物複合体は、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＭｏｖｌ９−Ｄ２、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＭｙ９−６−Ｄ２、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−Ｄ２、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＤＳ６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭｌ、ｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、またはｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ−ＳＭＣＣ−ＤＭｌである。
【００２８】
本発明の他の特徴及び利点は、詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【００２９】
定義
他に定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する分野において当業者によって通常理解される意味を有する。以下の参考文献は、当業者に本発明で使用する用語の多くの一般的な定義を提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．、１９８８）；Ｔｈｅ  Ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、５ｔｈ  Ｅｄ．、Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；及び  Ｈａｌｅ  ＆  Ｍａｒｈａｍ、Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で用いられる場合、以下の用語は、別に指定のない限り、これらの文献で定義された意味となる。
【００３０】
用語「調整理想体重（ＡＩＢＷ）」とは、性別、全体重、及び身長を占めるサイズ記述子を指す。ＡＩＢＷは、例えば、式ＡＩＢＷ＝ＩＢＷ＋０．４（ｋｇ体重−ＩＢＷ）を用いて算出することができ、ここで：
理想体重（ＩＢＷ）
１．ＩＢＷ１（雄）＝０．９Ｈ１−８８
２．ＩＢＷ１（雌）＝０．９Ｈ１−９２。
（１Ｈ＝ｃｍ身長；Ｗ＝ｋｇ体重）
ＩＢＷ、ＬＢＷ、及びＡＤＪは、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｄｕｆｆｕｌｌ、Ｂｒｉｔｉｓｈ
Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５８：１１９−１３３（２００４）でより詳細に説明されており、その内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００３１】
「細胞毒性剤」とは、細胞に毒性がある小分子化学化合物、ペプチド、または核酸分子を意味する。本明細書に記載されたいくつかの実施形態において、参照を容易にするために、用語「薬物」は、細胞毒性剤を指すために使用される。例えば、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）において、用語「薬物」は、用語「細胞毒性剤」と交換可能に使用される。特定の実施形態において、細胞毒性剤（または「薬物」）は、抗体にコンジュゲートされる。一つの特定の実施形態において、細胞毒性剤は、ＤＭ１、ＤＭ３、またはＤＭ４などのメイタンシノイドである。他の実施形態において、細胞毒性剤としては、ベンゾジアゼピン化合物（例えば、ピロロベンゾジアゼピン及びインドリノベンゾジアゼピン；表１も参照されたい：化合物Ｄ１〜Ｄ１０及びＤＧＮ４６２）、タキソイド、ＣＣ−１０６５及びＣＣ−１０６５類似体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類似体、エンジイン、例えば、カリケアマイシン、ドラスタチン及びドラスタチン類似体、例えば、オーリスタチン、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、及びモルホリノ−ドキソルビシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
「薬物対抗体比（ＤＡＲ）」とは、抗体当たりコンジュゲートした「薬物」（すなわち、細胞毒性剤）分子の平均数を意味する。ＤＡＲは、限定されないが、分光法、動的光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、質量分析法が併用されるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＭＳ）、及び質量分析法を含む、当該技術分野で公知の任意の方法を用いて特徴付けられる。
【００３３】
「メイタンシノイド対抗体比（ＭＡＲ）」とは、抗体当たりコンジュゲートしたメイタンシノイド分子の平均数を意味する。
【００３４】
「標的抗体濃度」とは、所望の抗体濃度を意味する。
【００３５】
「標的薬物濃度」または「標的細胞毒性剤濃度」とは、薬物または細胞毒性剤の所望の濃度を意味する。薬物または細胞毒性剤の濃度は、薬物の複合体形態に基づいて大部分が算出されるが、試料中で見られる遊離または非複合体薬物の少量を含み得ることに留意すべきである。
【００３６】
「標的メイタンシノイド濃度」とは、メイタンシノイドの所望の濃度を意味する。
【００３７】
「効力変動性」とは、異なるバッチの製剤に存在する異なる効力を意味する。効力変動性は、少なくとも約5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％以上まで低下するのが望
ましい。
【００３８】
「製剤」とは、医薬品有効成分を含有する最終剤形を意味する。一実施形態において、最終製剤は、本発明の抗体薬物複合体を単体または賦形剤と組み合わせて含有する容器（例えば、バイアル）である。
【００３９】
「仕様」とは、薬物または製剤がその意図する使用に適格であるように遵守しなければならない一連の基準を意味する。仕様は、通常、製造者によって提案され、規制機関（例えば、ＦＤＡ）で承認される。
【００４０】
本明細書で用いられる場合、「機能性抗体」とは、アポトーシスまたは壊死などの直接的な細胞死滅機序によって細胞死に影響を及ぼす抗体を指すことを意味する。機能性抗体は、薬物にコンジュゲートされずに（「未修飾の抗体」）インビボで直接的な細胞死滅活性を有する。機能性抗体の非限定例としては、ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ抗体及びｈｕＣＤ３７−３抗体が挙げられる。本明細書で用いられる場合、「非機能性抗体」とは、（ｉ）インビボで未知の細胞死滅活性（例えば、未修飾の抗体、例えば、ｈｕＤＳ６として非直接的または間接的な細胞死滅）を有する、または（ｉｉ）エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の結果として間接的な細胞死滅活性を有する、または（ｉｉｉ）エフェクター機能が増加した場合にインビボで複合体活性が増している、または（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の任意の組み合わせを有する抗体を指すことを意味する。非機能性抗体は、例えば、増殖剤（例えば、増殖因子）の結合を遮断することによって抗増殖活性を有し得る。間接的な細胞死滅活性を有する非機能性抗体の非限定例としては、ｈｕＭｏｖｌ９、ｈｕＭｙ９−６、及びｈｕＢ４が挙げられる。
【００４１】
「ｈｕＢ４」とは、ヒトＣＤ１９などのＣＤ１９に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。本発明の例示的なｈｕＢ４抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得る：
【化１】
2020122012.tif 000005
【００４２】
「ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４」とは、ＣＤ１９に特異的に結合し、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）リンカーを介して細胞毒性メイタンシノイドであるＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）メイタンシン（ＤＭ４）にコンジュゲートされるｈｕＢ４抗体を含む抗体薬物複合体を意味する。ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、例えば、米国特許第８，４３５，５２８号及び国際特許出願公開第Ｗ０２００４／１０３２７２号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００４３】
「ｈｕＭｏｖｌ９」（「Ｍ９３４６Ａ」とも言われる）とは、葉酸受容体α（葉酸受容体１または本明細書で「ＦＯＬＲ１」としても知られる）に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＭｏｖｌ９の詳細な配列は、米国特許第８，５５７，９６６号及び同第８，７０９，４３２号及び国際特許出願公開第：ＷＯ２０１１／１０６５２８号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＭＯＶ１９抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得る：
【化２】
2020122012.tif 000006
【００４４】
「ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４」（「ＩＭＧＮ８５３」とも言われる）とは、ＦＯＬＲ１に特異的に結合し、ジスルフィド含有リンカーであるＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（ｓＳＰＤＢ）を介して細胞毒性メイタンシノイドであるＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）メイタンシン（ＤＭ４）にコンジュゲートされるｈｕＭｏｖｌ９抗体を含む抗体薬物複合体を意味する。ＡＤＣ  ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、例えば、Ａｂら、ＡＡＣＲ；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１１；７１（８  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｕｍｂｅｒ  ４５７６、及び米国特許第８，５５７，９６６号及び同第８，７０９，４３２号及び国際特許出願公開第：ＷＯ２０１１／１０６５２８号に記載されており、それら各々の内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００４５】
「ｈｕＤＳ６」とは、がん性細胞により発現されたＭｕｃｌムチン受容体（例えば、ヒトＭｕｃ１）上のＣＡ６シアログリコトープに特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＤＳ６の例示的な配列は、米国特許第７，８３４，１５５号及び国際特許出願公開第：ＷＯ２００５／００９３６９号及びＷＯ２００７／０２４２２２号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＤＳ６抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化３】
2020122012.tif 000007
【００４６】
「ｈｕＭｙ９−６」（「Ｚ４６８１Ａ」とも言われる）とは、ヒトＣＤ３３などの白血球分化抗原ＣＤ３３に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＭｙ９−６重鎖可変領域部分の例示的な配列は、米国特許公開第２００６０１７７４５５号に記載されており、その内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。ｈｕＭｙ９−６軽鎖可変領域部分の例示的な配列は、当該技術分野で公知であり、米国特許第７，５５７，１８９号、同第７，３４２，１１０号、同第８，１１９，７８７号及び同第８，３３７，８５５号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＭｙ９−６抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化４】
2020122012.tif 000008
【００４７】
「ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２」（「ＩＭＧＮ７７９」とも言われる）とは、開裂可能なジスルフィドリンカーを介してＤＧＮ４６２と呼ばれるモノイミン部分を含有するインドリノベンゾジアゼピン二量体にコンジュゲートされる抗ｈｕＣＤ３３抗体を意味する。
【化５】
2020122012.tif 000009
【００４８】
「ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ」（「Ｊ２８９８Ａ」とも言われる）とは、ヒトＥＧＦＲなどのＥＧＦＲに特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。本発明の例示的なｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化６】
2020122012.tif 000010
【００４９】
「ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ−ＳＭＣＣ−ＤＭｌ」（「ＩＭＧＮ２８９」とも言われる）とは、ＥＧＦＲに特異的に結合し、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）リンカーを介してメイタンシノイドであるＮ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−ｌ−オキソプロピル）−メイタンシン（ＤＭ１）にコンジュゲートされるｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ抗体を含む抗体薬物複合体を意味する。ＡＤＣ  ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ−ＳＭＣＣ−ＤＭｌは、例えば、米国特許第８，７９０，６４９号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０５８５８８号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００５０】
「ｈｕＣＤ３７−３」とは、ヒトＣＤ３７などのＣＤ３７に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＣＤ３７−３の例示的な配列は、米国特許第８，７６５，９１７号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／１１２９７８号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＣＤ３７−３抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化７】
2020122012.tif 000011
【００５１】
「ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１」（「ＩＭＧＮ５２９」とも言われる）とは、開裂不可能なマレイミド由来チオエーテルベースリンカーであるスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）を介して、メイタンシノイドであるＮ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン（ＤＭ１）に共有結合するＣＤ３７に特異的に結合するヒト化ＩｇＧ１抗体Ｋ７１５３Ａを含む抗体薬物複合体を意味する。
【００５２】
「ｈｕＣＤ３７−５０」とは、ヒトＣＤ３７などのＣＤ３７に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＣＤ３７−５０の例示的な配列は、米国特許第８，７６５，９１７号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／１１２９７８号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＣＤ３７−５０抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化８】
2020122012.tif 000012
【００５３】
「ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３」とは、ヒトＣＤ１２３などのＣＤ１２３に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。例示的なｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３抗体は、米国仮特許出願第６２／１８６，１６１号に記載されており、その内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。
【００５４】
用語「抗体」は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、またはこれらの組み合わせなどの標的を、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位によって認識し、特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で用いられる場合、用語「抗体」は、インタクトポリクローナル抗体、インタクトモノクローナル抗体、エピトープ結合性抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片など）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）突然変異体、単一可変の新規抗原受容体ドメイン抗体断片（ＶＮＡＲ、またはＶＮＡＲドメイン）を含む免疫グロブリンの新規抗原受容体抗体（ＩｇＮＡＲ）、ヒンジ領域が除去されているユニボディ、ナノボディ、単一低分子可変抗体ドメイン（Ａｂｌｙｎｘ）からなる抗体断片、ＣＨドメイン（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６）に結合しているｓｃＦｖを含む遺伝子操作された抗体断片であるミニボディ、（ｉ）インビボでのＦａｂアーム交換に非許容状態である安定なヒンジ領域と、（ｉｉ）インビボでのＦａｂアーム交換に許容状態に改変されたＩｇＧ４様ＣＨ３ドメインとを含む二重特異性改変ＩｇＧ１抗体であるＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）（例えば、ＷＯ２００８／１１９３５３及びＷＯ２０１１／１３１７４６を参照されたい）、少なくとも２つのインタクト抗体から生成される二重特異性抗体などの多重特異性抗体、健康な組織では不活性のままであるが、疾患微小環境では特異的に活性化される（例えば、疾患微小環境におけるプロテアーゼ濃縮または特異性による開裂）組み換えマスクモノクローナル抗体であるプロボディ（Ｄｅｓｎｏｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ５：２０７ｒａｌ４４、２０１３を参照されたい）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、及び抗体が所望の生物活性を示す、抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、免疫グロブリンの５つの主要なクラス：それぞれ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）のいずれであってもよい。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造及び三次元配置を有する。抗体の「可変領域」は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域の、単独または組み合わせのいずれかを指す。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても知られる、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって結合する４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖のＣＤＲは、ＦＲによって非常に近接して、共に保持され、他の鎖に由来するＣＤＲを用いて、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するには少なくとも２つの技術がある：（１）異種間の配列変動に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（５ｔｈ  ｅｄ．、１９９１，  Ｎ���ｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．））；及び（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｊ．  Ｍｏｌｅｃ．  Ｂｉｏｌ．  ２７３：９２７−９４８）。加えて、ＣＤＲを決定する技術分野において、これら２つのアプローチの組み合わせを使用することがある。
【００５５】
用語「抗体断片」は、インタクト抗体の部分を指し、インタクト抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、直鎖抗体、一本鎖抗体、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
用語「がん」及び「がん性」は、哺乳動物において、細胞集団の無秩序な細胞増殖が特徴である、生理学的状態を指すかまたは説明する。がんとしては、血液がんまたは固形腫瘍が挙げられる。より具体的には、がんは、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性単球性白血病、前骨髄球性白血病、好酸球性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、例えば、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ））またはリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、黒色腫、肺がん（例えば、非小細胞肺がん；ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、子宮内膜がん、腹膜がん、膵臓がん、乳がん、前立腺がん、頭部及び頸部の扁平上皮がん、及び頸部がんである。
【００５７】
「類似体」とは、同一ではないが、類似の機能的または構造的特徴を有する分子を意味する。例えば、ポリペプチド類似体は、天然のポリペプチドと比較して類似体の機能を向上させる特定の生化学的修飾を有しながら、対応する天然のポリペプチドの生物活性を保持する。そのような生化学的修飾は、例えば、配位子結合を改変せずに、類似体のプロテアーゼ耐性、膜透過性、または半減期を増加し得る。類似体は、人工アミノ酸を含み得る。
【００５８】
用語「キメラ抗体」は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が、２つ以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両者の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する、哺乳動物の一種（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応し、一方、定常領域は、その種において免疫反応を引き起こすことを避けるため、別の種（通常はヒト）に由来する抗体中の配列に相同である。
【００５９】
本開示では、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）（含有する」及び「ｈａｖｉｎｇ（有する）」などは、米国特許法に帰する意味を有し、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」などを意味し得る；「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（実質的に〜からなる）」または「ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ（実質的に〜から構成される）」も同様に、米国特許法に帰する意味を有し、この用語は、ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ（非制限的な用語）であり、記載されているもの以外のものの存在も許容する。但し、記載されているものの基本的または新規な特性は、記載されているもの以外のものの存在によって変化しないが、従来技術の実施形態を除外するものとする。
【００６０】
「検出する」とは、検出される被検物質の存在、不在、または量を特定することを指す。
【００６１】
「疾病」とは、細胞、組織、または器官の正常な機能に損傷を与えるかまたは干渉する任意の状態または疾患を意味する。疾病の例としては、本発明の組成物で治療される新生物及びがんが挙げられる。
【００６２】
「有効量」とは、治療していない患者と比較して疾病の症状を改善するために必要な作用物質の量を意味する。疾病の治療的処置に本発明を実施するために用いられる活性物質（複数可）（例えば、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）または薬物）の有効量は、対象者の投与様式、年齢、体重、及び総体的な健康状態によって異なる。最終的には、治療を行う医師または獣医が適切な量及び投薬計画を決定する。このような量を、「有効な」量と呼ぶ。
【００６３】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、本明細書で交換可能に使用され、特定の抗体によって認識され特異的に結合される能力がある抗原の一部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、タンパク質の３次折り畳みによって並列する、隣接アミノ酸及び非隣接アミノ酸の両者から形成し得る。隣接アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、タンパク質変性に際して保持され、一方、３次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には、タンパク質変性に際して損なわれる。エピトープは、典型的には、少なくとも３つ、より一般的には、少なくとも５つまたは８〜１０個のアミノ酸を独特の空間構造内に含む。
【００６４】
「製剤化する」とは、製剤を製造するのに使用されるプロセスを意味する。
【００６５】
用語「ヒト化抗体」は、特異的な免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、最小非ヒト（例えば、マウス）配列を含有するそれらの断片である、非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲに由来し、所望の特異性、親和性、及び能力を有する残基で置換された、ヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６）。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する、非ヒト種由来の抗体中の対応する残基で置換される。ヒト化抗体は、Ｆｖフレームワーク領域内及び／または置換された非ヒト残基内のいずれかにおける追加的残基の置換によってさらに修飾して、抗体の特異性、親和性、及び／または能力を改良及び最適化し得る。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てを含有する、少なくとも１つ、典型的には２つか３つの可変ドメインを実質的に全て含み、一方、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン・コンセンサス配列のものである。また、ヒト化抗体は、少なくとも一部の免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含み得る。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許５，２２５，５３９号に記載されている。
【００６６】
ヒト化の目的は、完全な抗原結合親和性と抗体の特異性を維持しながら、ヒトへの導入のために、マウス抗体などの異種抗体の免疫原性を低減することである。
【００６７】
ヒト化抗体は、再表面形成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）またはＣＤＲグラフト化などの様々な技術を用いて製造してもよい。本明細書で用いられる場合、再表面形成技術は、分子モデル、統計解析、及び突然変異誘発の組み合わせを使用して、抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を標的宿主の既知抗体の表面に似ているように変化させる。
【００６８】
抗体を再表面形成する計画と方法、及び異なる宿主内の抗体の免疫原性を低下させる他の方法は、米国特許第５，６３９，６４１号（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）に開示されており、これは本明細書にその全てが参照により組み入れられる。簡単に言えば、好ましい方法において、（１）抗体重鎖及び軽鎖可変領域のプールの部位の整列は、重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面露出位置の一式を与えるために生成し、ここでの全ての可変領域のための整列部位は、少なくとも約９８％同一であり；（２）アミノ酸残基を露出する重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面の一式は、げっ歯動物抗体（またはその断片）のために定義され；（３）アミノ酸残基を露出した重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面の一式は、同定されるアミノ酸残基を露出するげっ歯動物表面の一式と大部分が密接に同一であり；（４）ステップ（２）において定義されるアミノ酸残基を露出する重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面の一式は、げっ歯動物抗体の相補性決定領域の任意の残基の任意の原子の５Å以内にあるそれらのアミノ酸残基を除き、ステップ（３）において同定されるアミノ酸残基を露出した重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面の一式に置き換えられ；（５）結合特異性を有するヒト化げっ歯動物抗体を生産する。
【００６９】
抗体は、ＣＤＲ−グラフト化（ＥＰ０２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号；及び同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面形成（ＥＰ０  ５９２  １０６；ＥＰ０  ５１９  ５９６；Ｐａｄｌａｎ  Ｅ．Ａ．，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  Ｇ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ  Ｍ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む種々の他の技術を用いてヒト化され得る。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含む当該技術分野で公知の種々の方法により製造され得る。米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、同第５，５４５，８０６号、及び同第５，８１４，３１８号；及び国際特許出願公開第ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５及びＷＯ９１／１０７４１号（上述の参照文献の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）も参照されたい。
【００７０】
用語「ヒト抗体」は、ヒトによって製造される抗体、または、当該技術分野で公知の任意の技術を使用してヒトによって製造された抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義は、インタクトまたは全長の抗体、その断片、及び／または、例えば、マウス軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体などの、少なくとも１つのヒト重鎖及び／または軽鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。
【００７１】
用語「抗体薬物複合体」または「ＡＤＣ」は、本明細書で用いられる場合、細胞結合剤（すなわち、抗体またはその断片）に結合する化合物を指す。典型的には、細胞結合剤（例えば、抗体）は、リンカーによって薬物に共有結合する。
【００７２】
用語「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」とは、その天然の状態で見いだされるとおりの、通常付随している成分から、全くないから種々の程度までで存在する物質を指す。「単離する」は、元の供給源または環境からのある程度の分離を示す。「精製する」とは、単離より高い分離の程度を示す。「精製された」または「生物学的に純粋な」タンパク質は、いかなる不純物も、タンパク質の生物学的特性にも実質的に影響を及ぼさず、他の有害な結果も引き起こさないように、他の物質を十分に含まない。すなわち、本発明の核酸またはペプチドは、これが組み換えＤＮＡ技術によって生成される場合には、細胞性物質、ウイルス物質、または培養培地を、または化学合成される場合には、化学前駆体や他の化学物質を実質的に含まれなければ、精製されている。純度及び均一性は、典型的には、分析化学技術（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィー）を使用して決定される。用語「精製された」は、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲル中で本質的に１本のバンドを生じることを示し得る。改変（例えば、リン酸化またはグリコシル化）に供され得るタンパク質に関しては、種々の改変が、別々に精製され得る種々の単離されたタンパク質を生じ得る。
【００７３】
「リンカー」とは、化合物をタンパク質に連結することができる化学的部分である。一実施形態において、リンカーは、メイタンシノイドなどの薬物を、抗体またはその断片などの細胞結合剤に安定した共有結合で連結する。リンカーは、化合物または抗体が活性を維持する条件で、酸誘導開裂、光誘導開裂、ペプチダーゼ誘導開裂、エステラーゼ誘導開裂、及びジスルフィド結合の開裂を受け易くすること、またはそれに実質的に抵抗性にすることができる。適切なリンカーは、当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、及びエステラーゼに不安定な基が挙げられる。リンカーは、本明細書に記載され、かつ当該技術分野で公知の荷電リンカー及びその親水性形態も含む。
【００７４】
例示的な開裂可能なリンカーとしては、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）、及びジスルフィドＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な開裂不可能なリンカーとしては、２−イミノチオラン、無水アセチルコハク酸、及びスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。一般的なリンカーである２−イミノチオラン及び無水アセチルコハク酸は、開裂可能または開裂不可能なリンカーとして使用することができる。
【００７５】
「モノクローナル抗体」とは、単一の抗原決定基、すなわちエピトープの極めて特異的な認識及び結合に関与する均一な抗体集団を指す。これは、異なる抗原決定基に向けられた異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体とは対照的である。用語「モノクローナル抗体」は、インタクト及び全長のモノクローナル抗体、並びに抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）の両方、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原識別部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」は、限定されないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え体発現、及び遺伝子組み換え動物による手法を含む任意の手法によって作製されるそのような抗体を指す。
【００７６】
「特異的に結合する」とは、対象のポリペプチドを認識及び結合するが、試料中、例えば、本発明のポリペプチドを自然に含む生体試料中の他の分子は実質的に認識及び結合しない化合物または抗体を意味する。
【００７７】
本発明の方法において有用な核酸分子には、対象のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子が含まれる。そのような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一である必要はないが、典型的には、実質的な同一性を呈する。内在性配列と「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１つの鎖とハイブリダイズすることができる。本発明の方法において有用な核酸分子には、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子が含まれる。そのような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一である必要はないが、典型的には、実質的な同一性を呈する。内在性配列と「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも１つの鎖とハイブリダイズすることができる。
【００７８】
「実質的に同一」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載されたアミノ酸配列のうちのいずれか１つ）または核酸配列（例えば、本明細書に記載された核酸配列のうちのいずれか１つ）と少なくとも５０％同一性を示すポリペプチドまたは核酸分子を意味する。好ましくは、このような配列は、比較のために使用される配列と、アミノ酸レベルまたは核酸レベルで少なくとも６０％、より好ましくは、８０％もしくは８５％、及びより好ましくは、９０％、９５％またはさらに９９％同一である。
【００７９】
配列同一性は、通常、配列解析ソフトウェア（例えば、ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐの配列解析ソフトウェアパッケージ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ），Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ，  １７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  Ｗｉｓ．  ５３７０５，  ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定される。このようなソフトウェアは、相同性の程度を種々の置換、欠失、及び／または他の改変に割り当てることによって、同一配列もしくは類似配列を適合させる。保存的置換は、典型的には、以下の群内での置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；及びフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定する例示的アプローチにおいて、ＢＬＡＳＴプログラムは、密接に関連した配列を示すｅ−３〜ｅ−１００の間の確率スコアとともに使用され得る。
【００８０】
「対象」とは、限定はされないが、ヒトあるいはウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコなどの非ヒト哺乳動物を包含する哺乳動物を意味する。
【００８１】
用語「治療的有効量」は、抗体または他の薬物が、対象または哺乳動物の疾病または疾患を「治療する」ために有効な量を指す。がんの場合、治療的有効量の薬物は、がん細胞の数を低下させ、腫瘍の大きさを縮小し、がん細胞の末梢器官中への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅らせる、または停止させる）、腫瘍の転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせる、または停止させる）、腫瘍の成長をある程度阻害し、及び／または、がんに関連する１つ以上の症状をある程度回復させることが可能である。本明細書における「治療すること」の定義を参照されたい。薬物が存在するがん細胞の成長を阻害し、及び／またはがん細胞を殺す限り、その薬物は、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性があり得る。「予防的有効量」とは、所望の予防結果を達成するために必要な投与量及び期間で有効な量を指す。必然ではないが、予防的投与量は、典型的には疾患の初期段階以前または早期に対象に使用するため、予防的有効量は、治療的有効量より少ないであろう。
【００８２】
本明細書で提供される範囲は、範囲内の全ての値に対する省略であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からのいずれかの数、数の組み合わせ、または部分範囲を包含していると理解される。
【００８３】
本明細書で用いられる場合、用語「治療する」、「治療すること」、「治療」などは、疾患及び／またはそれに付随する症状を減少することまたは改善することを指す。疾患または病態を治療することは、これを除外するものではないが、疾患、病態またはそれに付随する症状を完全に消失させることを必要としていないことを理解されたい。
【００８４】
具体的に述べているかまたは内容から明らかでない限り、本明細書で用いられる場合、用語、「または」は、包括的であると理解される。具体的に述べているかまたは内容から明らかでない限り、本明細書で用いられる場合、用語、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、単数または複数であると理解される。
【００８５】
具体的に述べているかまたは内容から明らかでない限り、本明細書で用いられる場合、用語「約」は、当該技術分野における通常の許容の範囲内として、例えば、平均値の２標準偏差内と理解される。「約」は、述べられた値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％以内であると理解される。内容から明確でない限り、本明細書で提供される全ての数値は、用語「約」によって修飾されている。
【００８６】
本明細書にある可変基の任意の定義における化学基の列挙の記述は、単一の基または列挙された基の組み合わせとしてのその可変基の定義を包含する。本明細書にある可変基または態様についての実施態様の記述は、単一の実施態様のいずれか、または他のいずれかの実施態様もしくはその一部との組み合わせとしての実施態様を包含する。
【００８７】
本明細書で提供される組成物または方法のいずれも、本明細書で提供される他の組成物及び方法のいずれかの１つまたはそれ以上と組み合わせることができる。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
抗体薬物複合体組成物における効力変動性の低下方法であって、
（ａ）固定抗体濃度及び固定薬物抗体比（ＤＡＲ）で標的薬物濃度を決定すること；及び
（ｂ）該標的薬物濃度を達成するように該抗体薬物複合体組成物を製剤化することによって、該組成物における効力変動性を低下させること
を含む、前記方法。
（項目２）
抗体薬物複合体を含む組成物における効力変動性の低下方法であって、
（ａ）標的抗体濃度及び固定薬物抗体比（ＤＡＲ）で薬物濃度を決定すること；
（ｂ）該抗体濃度の仕様範囲と該薬物濃度の仕様範囲が重なる範囲の中間点を同定する可変薬物濃度を標的化すること；
（ｃ）該抗体薬物複合体組成物を該標的可変薬物濃度に製剤化することによって、該組成物における効力変動性を低下させること
を含む、前記方法。
（項目３）
前記薬物濃度の変動性が、約±１０％である、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記抗体濃度の変動性が、約±１０％である、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記変動性が、約±５、６、７、８、または９％未満である、項目３または４に記載の方法。
（項目６）
抗体薬物複合体を含む組成物における効力変動性の低下方法であって、
（ａ）該抗体薬物複合体組成物のＤＡＲを測定すること；
（ｂ）抗体仕様の上限と抗体仕様の下限を決定すること、該抗体仕様の上限は、該仕様は、標的抗体濃度＋該仕様が許す最大変動であり、該抗体仕様の下限は、標的抗体濃度−該仕様が許す最大変動である；
（ｃ）定義された薬物仕様の上限と定義された薬物仕様の下限を決定すること、該定義された薬物仕様の上限は、標的薬物濃度＋該仕様が許す最大変動であり、該定義された薬物仕様の下限は、標的薬物濃度−該仕様が許す最大変動である；
（ｄ）以下のように算出された薬物仕様の上限（ＵＳＬ（薬物））を決定すること：
ＵＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の上限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｅ）以下のように算出された薬物仕様の下限（ＬＳＬ（薬物））を決定すること：
ＬＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の下限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｆ）ステップ（ｄ）で算出されたＵＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義された薬物仕様の上限と比較し、該２つの値のうちの低い方を薬物仕様の有効な上限として選択すること；
（ｇ）ステップ（ｅ）で算出されたＬＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義された薬物仕様の下限と比較し、該２つの値のうちの高い方を薬物仕様の有効な下限として選択すること；及び
（ｈ）該抗体薬物複合体組成物を、該薬物仕様の有効な上限と該薬物仕様の有効な下限の間の中間点である標的薬物濃度に製剤化することによって、前記組成物における効力変動性を低下させること
を含む、前記方法。
（項目７）
前記方法が、前記薬物と前記抗体の仕様上限と下限の範囲を約±３〜９％に狭める、請求項６に記載の方法。
（項目８）
前記方法が、前記薬物の仕様上限と下限の範囲を約±４％に狭める、項目６に記載の方法。
（項目９）
ステップ（ｂ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１５％である、項目６に記載の方法。
（項目１０）
ステップ（ｂ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１０、１１、１２、１３、または１４％未満である、項目６に記載の方法。
（項目１１）
ステップ（ｃ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１５％である、項目６に記載の方法。
（項目１２）
ステップ（ｃ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１０、１１、１２、１３、または１４％未満である、項目６に記載の方法。
（項目１３）
前記抗体が、非機能性抗体である、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記薬物濃度が、前記抗体仕様濃度内で変動する、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記抗体濃度及び前記薬物濃度が、変動を許される、項目２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
抗体薬物複合体組成物の製剤化方法であって、
（ａ）固定抗体濃度及び固定薬物抗体比で標的薬物濃度を決定すること；及び
（ｂ）ステップ（ａ）の該標的薬物濃度を達成するように該抗体薬物複合体組成物を製剤化すること
を含む、前記方法。
（項目１７）
前記薬物が、チューブリン阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、または細胞周期かく乱物質である、項目１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記薬物が、メイタンシノイドである、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記薬物が、ベンゾジアゼピン化合物である、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記ベンゾジアゼピン化合物が、ピロロベンゾジアゼピンまたはインドリノベンゾジアゼピンである、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記薬物が、オーリスタチンである、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記抗体が、非機能性抗体である、項目１３〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記薬物が、ベンゾジアゼピン化合物であり、前記抗体が、非機能性抗体である、項目１〜１７、１９、２０、及び２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記薬物が、メイタンシノイドであり、前記抗体が、非機能性抗体である、項目１〜
１８、２０、及び２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記抗体が、機能性抗体である、項目１〜１２及び１４〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
抗体メイタンシノイド複合体を含む組成物における効力変動性の低下方法であって、
（ａ）固定抗体濃度及び固定メイタンシノイド対抗体比で標的メイタンシノイド濃度を決定すること；及び
（ｂ）該標的メイタンシノイド濃度を達成するように該抗体メイタンシノイド複合体組成物を製剤化することによって、該組成物における効力変動性を低下させること
を含む、前記方法。
（項目２７）
前記方法が、前記抗体薬物複合体または抗体メイタンシノイド複合体を製造する上でバッチ間の効力変動性を低下させる、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記組成物が、最終製剤である、項目１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
抗体メイタンシノイド複合体組成物の製剤化方法であって、
（ａ）固定抗体濃度及び固定メイタンシノイド対抗体比で標的メイタンシノイド濃度を決定すること；及び
（ｂ）該標的メイタンシノイド濃度を達成するように前記抗体メイタンシノイド複合体組成物を製剤化すること
を含む、前記方法。
（項目３０）
抗体ベンゾジアゼピン複合体を含む組成物における効力変動性の低下方法であって、
（ａ）該抗体ベンゾジアゼピン複合体組成物のＤＡＲを測定すること；
（ｂ）抗体仕様の上限と抗体仕様の下限を決定することであり、ここで該抗体仕様の上限は、標的抗体濃度＋該仕様が許す最大変動であり、該抗体仕様の下限は、標的抗体濃度−該仕様が許す最大変動である；
（ｃ）定義されたベンゾジアゼピン仕様の上限と定義されたベンゾジアゼピン仕様の下限を決定することであり、該定義されたベンゾジアゼピン仕様の上限は、標的ベンゾジアゼピン濃度＋該仕様が許す最大変動であり、該定義されたベンゾジアゼピン仕様の下限は、標的ベンゾジアゼピン濃度−該仕様が許す最大変動である；
（ｄ）以下のように算出されたベンゾジアゼピン仕様の上限（ＵＳＬ（薬物））を決定すること：
ＵＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の上限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｅ）以下のように算出されたベンゾジアゼピン仕様の下限（ＬＳＬ（薬物））を決定すること：
ＬＳＬ（薬物）μｇ／ｍＬ＝抗体濃度仕様の下限×ＤＡＲ×薬物分子量×１０００／抗体分子量
（ｆ）ステップ（ｄ）で算出されたＵＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義されたベンゾジアゼピン仕様の上限と比較し、該２つの値のうちの低い方をベンゾジアゼピン仕様の有効な上限として選択すること；
（ｇ）ステップ（ｅ）で算出されたＬＳＬ（薬物）をステップ（ｃ）で定義されたベンゾジアゼピン仕様の下限と比較し、該２つの値のうちの高い方をベンゾジアゼピン仕様の有効な下限として選択すること；及び
（ｈ）該抗体ベンゾジアゼピン複合体組成物を、該ベンゾジアゼピン仕様の有効な上限と該ベンゾジアゼピン仕様の有効な下限の間の中間点である標的ベンゾジアゼピン濃度に製剤化することによって、前記組成物における効力変動性を低下させること
を含む、前記方法。
（項目３１）
前記方法が、前記薬物と前記抗体の仕様上限と下限の範囲を約±３〜５％に狭める、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記方法が、前記仕様上限と下限の範囲を約±４％に狭める、項目３０に記載の方法。（項目３３）
ステップ（ｂ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１５％である、項目３０に記載の方法。
（項目３４）
ステップ（ｂ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１０、１１、１２、１３、または１４％未満である、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
ステップ（ｃ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１５％である、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
ステップ（ｃ）における前記仕様が許す前記最大変動が、約±１０、１１、１２、１３、または１４％未満である、項目３０に記載の方法。
（項目３７）
前記抗体が、非機能性抗体である、項目２６〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
前記ＤＡＲが、ＤＡＲ仕様の下限またはＤＡＲ仕様の上限である、項目６〜１５及び３０〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
前記ＤＡＲ仕様の下限が、２．３、２．４、または２．５である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記ＤＡＲ仕様の上限が、２．９、３．０、または３．１である、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
前記組成物が、約１０〜４０％まで効力が変動する、項目１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
前記組成物が、約１０〜２０％まで効力が変動する、項目１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記組成物が、約２０％まで効力が変動する、項目１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
組成物効力の変動性が、前記抗体薬物複合体組成物を抗体濃度のみに基づいて製剤化する場合と比べて低下する、項目１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記抗体濃度及び薬物濃度が、分光光度測定によって決定される、項目１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
薬物対抗体比が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）またはＳＥＣ−質量分析法（ＳＥＣ−ＭＳ）によって決定される、項目１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記抗体薬物複合体組成物が、注入用に製剤化される、項目１〜４４のいずれか１項
に記載の方法。
（項目４８）
前記抗体薬物複合体が、薬学的に許容可能な非経口ビヒクルと共に製剤化される、項目１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
前記抗体薬物複合体が、単位投与量注入可能な形態で製剤化される、項目１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
前記メイタンシノイドが、ＤＭ１、ＤＭ３、またはＤＭ４である、項目１８〜４９のいずれか１項に記載の方法。
（項目５１）
前記抗体が、非機能性抗体である、項目３８〜５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目５２）
前記非機能性抗体が、ｈｕＭｏｖ１９、ｈｕＭｙ９−６、またはｈｕＢ４である、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記非機能性抗体が、ｈｕＤＳ６である、項目５１に記載の方法。
（項目５４）
前記抗体が、機能性抗体である、項目２６〜５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目５５）
前記機能性抗体が、ｈｕＥＧＦＲ−７ＲまたはｈｕＣＤ３７−３である、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記抗体薬物複合体が、開裂可能なリンカーまたは開裂不可能なリンカーを含む、項目１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
（項目５７）
前記開裂可能なリンカーが、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）、またはジスルフィドＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）である、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記開裂不可能なリンカーが、２−イミノチオラン、無水アセチルコハク酸、またはスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記抗体薬物複合体が、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＭｏｖｌ９−Ｄ２、ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＭｙ９−６−Ｄ２、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−Ｄ２、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＤＳ６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭｌ、ｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、またはｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１である、項目１、２、６、１６、２６、２９、または３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
意図する狭い範囲内での対象への投与方法であって、
項目１〜５９のいずれか１項に記載の方法に従って製剤化された抗体薬物複合体組成
物を前記対象に投与すること
を含む、前記方法。
（項目６１）
項目１〜１８、２２、２４、２６〜２９、３１〜５２、５６、及び５７のいずれか１項に記載の方法に従って製剤化されたｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４抗体薬物複合体を含む医薬組成物であって、
微量メイタンシノイド濃度は、ラベルで提供される、前記医薬組成物。
（項目６２）
項目２〜１７、１９、２０、２２、２３、３０〜４９、５１、５２、５６、及び５７のいずれか１項に記載の方法に従って製剤化されたｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２抗体薬物複合体を含む医薬組成物であって、
微量ＤＧＮ４６２濃度は、ラベルで提供される、前記医薬組成物。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４のメイタンシノイド対抗体比（ＭＡＲ）における細胞毒性効力の依存性を示すグラフである。ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、スルホ−ＳＰＤＢリンカーを介して細胞毒性メイタンシノイドＤＭ４にコンジュゲートされたＦＯＬＲ１に対してヒト化モノクローナル抗体（ｈｕＭｏｖｌ９）を含む免疫複合体である。細胞毒性効力は、ＭＡＲ３．４を有するｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４標準品と比較して測定される。効力％＝ＥＣ５０参照／ＥＣ５０被験物質×１００％。
【図２】ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の濃度における細胞毒性効力の依存性を示すグラフである。
【図３】眼の毒性（「眼毒性」）における薬物対抗体比（ＤＡＲ）の推定効果をシミュレートする２つの散布図と表を提供する。ＡＩＢＷは、調整理想体重を指す。ＤＡＲは、薬物投与レベルに基づいて算出された。
【図４】眼の毒性における薬物対抗体比（ＤＡＲ）と濃度の推定効果をシミュレートする散布図と表を提供する。ＤＡＲは算出し、対応するＡＤＣは、患者には実際に投与されなかった。
【図５】ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４複合体を同じＤＭ４用量で投与した場合の、ＫＢ及びＩＧＲＯＶ−１ネズミ異種移植モデルにおいて腫瘍容積中央値におけるＤＡＲの効果の欠如を示す２つのグラフを含む。マウスには、ｈｕＭｏｖｌ９−ｓＳＰＤＢ−ＤＭ４を投与した。全ての複合体は、２５μｇ／ｋｇのＤＭ４及び可変抗体用量（低ＤＡＲ複合体はより多く、高ＤＡＲ複合体はより少なく）で投与した。同様の抗腫瘍活性は、可変のＤＡＲ用量及び抗体用量に関わらず観察された。
【図６】投与したＤＭ４用量が同じであった場合に、３．６ＤＡＲと比較して、９．０ＤＡＲを有する複合体におけるネズミ体重に対するＤＭ４用量の効果が同様であることを示すグラフである。全ての複合体は、１．４ｍｇ／ｋｇのＤＭ４及び可変抗体用量（低ＤＡＲ複合体はより多く、高ＤＡＲ複合体はより少なく）で投与した。
【図７】投与したＤＭ１用量が同じであった場合に、種々のメイタンシノイド対抗体比を有する複合体における平均の体重変化に対するＤＭ１用量の効果が同様であることを示すグラフである。全ての複合体は、３．０ｍｇ／ｋｇのＤＭ１及び可変抗体用量（低ＤＡＲ複合体はより多く、高ＤＡＲ複合体はより少なく）で投与した。毒性は、ＤＡＲに関わらず全ての複合体に対して同様であった。
【図８】ＡＤＣ  ｈｕＤＳ６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（「ｈｕＤＳ６−ＤＭ４」）；ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（「ｈｕＢ４−ＤＭ４」）；及びｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（「ｈｕＭｙ９−６−ＤＭ４」）を含む、種々のＤＡＲの抗体−ＳＰＤＢ−ＤＭ４複合体を受けたマウスにおけるインビボ毒性試験を示すグラフである。
【図９Ａ】図９Ａ及び９Ｂは、ＤＭ４濃度に基づいてＡＤＣ組成物を調製する利点を示す表である。図９Ａは、抗体薬物複合体を標的抗体濃度（５．０±１．０ｍｇ／ｍｌ）及びＤＡＲ３．４±０．５（丸で囲んだ）で製剤化する場合に得られる許容可能なＤＭ４濃度をμｇ／ｍｌで示す。ＤＭ４濃度は、５．０ｍｇ／ｍＬ標的抗体濃度と３．４ＤＡＲ標的（枠で囲んだ）で９１．１である。低い効力変動（ＤＭ４濃度の枠で囲んだ領域）は、ａ±１０％仕様によるＤＭ４濃度に基づいて製剤化することで可能となった。標的のＤＡＲ、抗体及びＤＭ４濃度を枠で囲む。図９Ｂでは、抗体濃度仕様は、高−低ＤＡＲ極値（枠で囲んだ領域）で失敗である。標的のＤＡＲ、抗体及びＤＭ４濃度を枠で囲む。
【図９Ｂ】図９Ａ及び９Ｂは、ＤＭ４濃度に基づいてＡＤＣ組成物を調製する利点を示す表である。図９Ａは、抗体薬物複合体を標的抗体濃度（５．０±１．０ｍｇ／ｍｌ）及びＤＡＲ３．４±０．５（丸で囲んだ）で製剤化する場合に得られる許容可能なＤＭ４濃度をμｇ／ｍｌで示す。ＤＭ４濃度は、５．０ｍｇ／ｍＬ標的抗体濃度と３．４ＤＡＲ標的（枠で囲んだ）で９１．１である。低い効力変動（ＤＭ４濃度の枠で囲んだ領域）は、ａ±１０％仕様によるＤＭ４濃度に基づいて製剤化することで可能となった。標的のＤＡＲ、抗体及びＤＭ４濃度を枠で囲む。図９Ｂでは、抗体濃度仕様は、高−低ＤＡＲ極値（枠で囲んだ領域）で失敗である。標的のＤＡＲ、抗体及びＤＭ４濃度を枠で囲む。
【図１０Ａ】図１０Ａ乃至１０Ｃは、標的薬物（ＤＧＮ４６２）濃度を達成するために抗体濃度を変動させることによって抗体薬物複合体（ＡＤＣ）バッチを製剤化する効果を示すグラフである。「ＵＳＬ」及び「ＬＳＬ」は、抗体濃度の仕様上限と下限を示す。ＤＧＮ４６２は、例示の薬物である。垂直線（細長い「Ｉ」）は、薬物濃度の上限と下限を示す。「ＤＡＲ」は、薬物対抗体比を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ａ乃至１０Ｃは、標的薬物（ＤＧＮ４６２）濃度を達成するために抗体濃度を変動させることによって抗体薬物複合体（ＡＤＣ）バッチを製剤化する効果を示すグラフである。「ＵＳＬ」及び「ＬＳＬ」は、抗体濃度の仕様上限と下限を示す。ＤＧＮ４６２は、例示の薬物である。垂直線（細長い「Ｉ」）は、薬物濃度の上限と下限を示す。「ＤＡＲ」は、薬物対抗体比を示す。
【図１０Ｃ】図１０Ａ乃至１０Ｃは、標的薬物（ＤＧＮ４６２）濃度を達成するために抗体濃度を変動させることによって抗体薬物複合体（ＡＤＣ）バッチを製剤化する効果を示すグラフである。「ＵＳＬ」及び「ＬＳＬ」は、抗体濃度の仕様上限と下限を示す。ＤＧＮ４６２は、例示の薬物である。垂直線（細長い「Ｉ」）は、薬物濃度の上限と下限を示す。「ＤＡＲ」は、薬物対抗体比を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａ乃至１１Ｃは、抗体及び薬物濃度（白い楕円）を変動させることでＡＤＣ組成物を製剤化することが、標的薬物濃度（灰色の菱形）を達成するために抗体仕様のみを変動させるのと比較して、抗体及び薬物の両方の許容仕様範囲を狭めることを示すグラフである。
【図１１Ｂ】図１１Ａ乃至１１Ｃは、抗体及び薬物濃度（白い楕円）を変動させることでＡＤＣ組成物を製剤化することが、標的薬物濃度（灰色の菱形）を達成するために抗体仕様のみを変動させるのと比較して、抗体及び薬物の両方の許容仕様範囲を狭めることを示すグラフである。
【図１１Ｃ】図１１Ａ乃至１１Ｃは、抗体及び薬物濃度（白い楕円）を変動させることでＡＤＣ組成物を製剤化することが、標的薬物濃度（灰色の菱形）を達成するために抗体仕様のみを変動させるのと比較して、抗体及び薬物の両方の許容仕様範囲を狭めることを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００８９】
本発明は、抗体薬物複合体（「ＡＤＣ」）を含む治療用組成物を製剤化することによって、ＡＤＣのバッチ間で効力の変動性を狭め、及び／または、より広い薬物対抗体比（ＤＡＲ）範囲にわたって薬物及び抗体の仕様を狭める改善された方法を提供する。
【００９０】
一態様において、本発明は、少なくとも部分的には、いくつかのＡＤＣの有効性及び毒性が抗体の用量ではなく薬物の用量によって完全または部分的に引き起こされるという発見に基づいている。標的薬物濃度に基づいてＡＤＣ組成物を製剤化することは、最終製剤の効力変動を有利に最小限にし、患者が意図する狭い範囲内で投与されることを確実にする。
【００９１】
従来、抗体薬物複合体治療用組成物は、抗体濃度に基づいて製剤化されている。いくつかの変動性は、所与の仕様が許容可能な範囲内のままであっても、抗体濃度に基づいて抗体薬物複合体を製剤化することに固有のものである。特に、ＡＤＣ製造プロセスの最後で、複合体中の抗体の濃度を測定し、複合体を希釈して、固定抗体濃度に基づいて標的薬物濃度に到達する。実際には、最終製剤中の抗体濃度は、標的濃度からの変動を許される。一例において、製剤化仕様は、抗体ベース濃度で±２０％の変動が可能である（例えば、５．０ｍｇ／ｍＬの標的抗体濃度について４．０〜６．０ｍｇ／ｍＬが可能である）。従って、ＤＡＲに応じて、最終製剤のＡＤＣ効力は、±３５％にまで変動することができ、所望の範囲外になる可能性がある。
【００９２】
以下の本明細書で報告する製剤化方法は、固定抗体濃度及び固定薬物対抗体比で薬物濃度を決定すること、所望の薬物濃度を達成するように抗体薬物複合体組成物を製剤化することを含む。簡単に言えば、薬物濃度に基づいてＡＤＣ組成物を製剤化し、例えば、±１０％の薬物濃度仕様を追加することで、最終製剤に存在する効力を標的薬物濃度の±１０％（±１０％仕様）に著しく狭める。薬物濃度に基づいてＡＤＣを製剤化し、薬物濃度の変動が１０％を超えないようにすることで、効力が±１０％しか変動しないようにさせる。従って、本発明の新規の製剤化方法は、狭い範囲の薬物濃度に製剤化することによるＤＡＲ効力依存性を排除する。この製剤化戦略によって、抗体濃度が仕様を外れるリスクはほんの僅かしか増えないため、仕様に従わないバッチリスクはかなり低い。そのような改善された製剤化方法により、患者には、ＡＤＣのバッチが仕様に従わないリスクを実質的に加えることなく意図する狭い範囲内で投与することが確実になる。
【００９３】
さらに別の態様において、本発明は、抗体薬物複合体を含む組成物における効力変動性を低下させる方法を提供する。本方法は、薬物及び抗体の両方の可変濃度を両方の仕様が重なる範囲内に標的化すること（すなわち、１つの濃度の大きな変動（±１０〜１５％）ではなく両方の濃度値が小さな変動（±４〜９％）を有すること）によって抗体薬物複合体を製剤化することで、組成物における効力変動性を低下させることを含む。一実施形態において、小さな変動は、約４、５、６、７、８、または９％である。他の実施形態において、大きな変動は、約１０、１１、１２、１３、１４、または１５％である。
【００９４】
別の態様において、本発明は、抗体薬物複合体を含む組成物における効力変動性を低下させる方法を提供する。本方法は、薬物または抗体のいずれかの可変濃度を両方の仕様が重なる範囲内に標的化することによって抗体薬物複合体を製剤化することで、組成物における効力変動性を低下させることを含む。
【００９５】
抗体薬物複合体製剤
ＡＤＣがん治療薬は、抗体がん治療薬と同様に；すなわち、抗体タンパク質濃度に基づいて製剤化される。製剤ラベルは、投与のベースとなる「微量」または標的濃度の情報（例えば、ｍｇ／ｋｇまたはｍｇ／ｍ２ベースで）を与えるが、抗体濃度の典型的な仕様は、標的±１０〜２０％である。ＡＤＣの効力は一般的に濃度に対して直線であるため、製剤の効力は±２０％まで変動し得る。ＡＤＣは、抗体とは異なり、薬物対抗体比（ＤＡＲ）により可変効力というさらなる可能性を有する。初期の臨床開発の典型的なＤＡＲ仕様は、標的±１５％であり、これにより、連結した細胞毒性の量を所与の抗体濃度によって変動させることができる。ほとんどのＡＤＣでは、ＤＡＲと、効力が投与された複合体薬物の濃度によって部分的または完全に指示されたことを示す効力との間には直線関係があることを実証することができる。
【００９６】
多くのＡＤＣでは、毒性は、抗体の用量に関わらず投与した複合体薬物の用量に完全に依存することをげっ歯動物で実証することができる。従って、毒性は、投与した複合体薬物の用量が同じである限り、ＤＡＲとは無関係である。抗体が固有の抗腫瘍活性をもたないいくつかのＡＤＣでは、有効性は、薬物の用量に完全に依る。そのような場合、有効性は、投与した複合体薬物の用量が同じである限り、ＤＡＲに関わらず同じである。しかしながら、抗体濃度及びＤＡＲの典型的な仕様により、複合体薬物の濃度は多少変動させることができる。いくつかのＡＤＣでは、抗体が固有の抗腫瘍活性を有する、または、例えば、機能性抗体と見なされる場合であっても、ＡＤＣ有効性は、抗体ではなく薬物の用量によってより引き起こされ得る。
【００９７】
ＡＤＣの有効性及び毒性が、投与された複合体薬物の量によって主に引き起こされることを実証することが可能な場合において、抗体ではなく複合体薬物の濃度の仕様を狭めることは有益であると立証することができる。従って、本発明は、抗体の濃度ではなく薬物の濃度に基づいて治療用組成物を製剤化するための方法を提供する。薬物の標的濃度は、固定抗体濃度及び固定ＤＡＲで算出された薬物濃度である。標的複合体薬物濃度近くに設定された仕様は、製剤バイアルで許容可能な効力変動を指示する。従って、±１０％の薬物濃度の仕様は、許容可能な効力変動を±１０％に狭める。
【００９８】
他の実施形態において、治療用組成物は、ＤＡＲ及び抗体仕様に基づいて可変薬物濃度を標的化することで製剤化し、薬物及び抗体の両方の濃度が重なる抗体及び薬物の濃度の有効な仕様範囲の中心内に入るＡＤＣ治療用組成物を達成することができる。標的の±５％以内のＤＡＲで、可変薬物濃度を標的化することによって達成される有効な範囲の中心は、静的な薬物濃度を使用する場合には、最終製剤化製品と実質的に同様であり得る。ＤＡＲが標的ＤＡＲの±５〜１５％で変動する場合に改善が実現される。これらのＤＡＲ上限及び下限で、可変薬物濃度を標的化することによって治療用組成物を製剤化することは、抗体濃度を約±１５％まで変動させる静的な薬物濃度を標的化することに比べて、薬物（例えば、約±４％）及び抗体濃度（例えば、約±１０％）の両方に対する変動性をより小さくすることができる。そのような範囲は、ＡＤＣ組成物を製剤化するのに有用であり、その例としては、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２が挙げられる。一実施形態において、本発明は、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２を製剤化するための本明細書に記載された方法の使用を特徴とし、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２は、開裂可能なジスルフィドリンカーであるｓ−ＳＰＤＢを介して抗ＣＤ３３抗体であるｈｕＭｙ９−６にコンジュゲートされたＤＧＮ４６２を含む抗体薬物複合体である。本発明に有用な他の薬物としては、表１に表されたものまたはそれらの変形など、並びに以下の構造式によるベンゾジアゼピン類が挙げられる：
【化９】
2020122012.tif 000013
【化１０】
2020122012.tif 000014
【００９９】
抗体薬物複合体
本発明は、細胞毒性剤（例えば、薬物またはプロドラッグ）に連結またはコンジュゲートされる本明細書に開示される、抗体（例えば、腫瘍抗原に結合する抗体）または抗体断片を含むＡＤＣ、及びそれらの機能性等価物を製剤化するための改善された方法に関する。種々の抗体を本発明の方法で使用することができる。特定の実施形態において、抗体は、ＦＯＬＲ１（ＦＲαとしても知られる）、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＭＵＣ１、ＣＡ６、ＣＤ３７、ＥＧＦＲなどの抗原またはリガンド、及び上に挙げたポリペプチドのいずれかの断片に特異的に結合する。特定の実施形態において、本発明としては、以下の抗体：ｈｕＭｏｖｌ９、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３、ｈｕＢ４、ｈｕＤＳ６、ｈｕＣＤ３７−５０、ｈｕＣＤ３７−３、及びｈｕＥＧＦＲ−７Ｒのいずれかを含むＡＤＣが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
適当な薬物またはプロドラッグは、当該技術分野で公知である。薬物またはプロドラッグは、細胞毒性であり得る。本発明のＡＤＣで使用される細胞毒性薬は、細胞（例えば、がん細胞）の死滅をもたらし、または細胞死を誘発し、または細胞生存をある程度減少させる任意の化合物であり、例えば、チューブリン阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡアルキル化剤、及び細胞周期かく乱物質が挙げられる。特定の実施形態において、適当な細胞毒性薬としては、メイタンシノイド及びメイタンシノイド類似体が挙げられる。他の適当な細胞毒性薬としては、例えば、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロベンゾジアゼピン及びインドリノベンゾジアゼピン；表１も参照されたい：化合物Ｄ１〜Ｄ１０及びＤＧＮ４６２）、タキソイド、ＣＣ−１０６５及びＣＣ−１０６５類似体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類似体、エンジイン、例えば、カリケアマイシン、ドラスタチン及びドラスタチン類似体、例えば、オーリスタチン、トマイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、及びモルホリノ−ドキソルビシンが挙げられる。
【０１０１】
ＡＤＣは、薬物またはプロドラッグを抗体または機能性等価物に連結させるために、連結基を用いて調製することができる。適当な連結基は、当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸に不安定な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、及びエステラーゼに不安定な基が挙げられる。
【０１０２】
薬物またはプロドラッグは、例えば、ジスルフィド結合を介して抗体またはその断片に連結し得る。リンカー分子または架橋剤は、抗体またはその断片と反応することができる反応化学基を含み得る。細胞結合剤と反応させるための反応化学基は、例えば、Ｎ−スクシンイミジルエステル及びＮ−スルホスクシンイミジルエステルであり得る。さらに、リンカー分子は、薬物と反応してジスルフィド結合を形成するジチオピリジル基などの反応化学基を含む。リンカー分子としては、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（例えば、Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１７３：７２３−７３７（１９７８）を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）（例えば、米国特許第４，５６３，３０４号を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）（米国公開第２００９０２７４７１３号を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）（例えば、ＣＡＳ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  ｎｕｍｂｅｒ  ３４１４９８−０８−６を参照のこと）、２−イミノチオラン、または無水アセチルコハク酸、スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）が挙げられる。例えば、抗体または細胞結合剤は、架橋試薬で修飾することができるため、遊離または保護チオール基を含有する、誘導された抗体または細胞結合剤をジスルフィド含有またはチオール含有メイタンシノイドと反応させて、複合体を生成する。複合体は、限定されないが、ＨＰＬＣ、サイズ排除、吸着、イオン交換及び親和性捕捉を含むクロマトグラフィー、ならびに透析または接線流濾過によって精製することができる。
【０１０３】
本発明の一態様において、抗体は、ＡＤＣの効力、溶解度、または有効性を強化する上で、ジスルフィド結合及びポリエチレングリコールスペーサーを介して、細胞毒性薬に連結されている。そのような開裂可能な親水性リンカーは、例えば、ＷＯ２００９／０１３４９７６に記載されている。このリンカー設計の付加的な利益は、抗体薬物複合体の、所望の高い単量体比率及び最小の凝集である。この態様において具体的に意図されるのは、ポリエチレングリコールスペーサー（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ＝１〜１４）を有し、薬物負荷が２〜８の狭い範囲である、ジスルフィド基（−Ｓ−Ｓ−）により連結された細胞結合剤及び薬物の複合体である。これらの複合体は、がん細胞に対する比較的高い強力な生物活性を示し、最小のタンパク質凝集で、高い結合収率（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｙｉｅｌｄ）及び高い単量体比率という、所望の生化学的性質を有する。
【０１０４】
本明細書に開示されるリンカーの多くは、米国特許第７，９８９，５９８号；同第８，１６３，８８８号；同第８，１９８，４１７号；同第８，２３６，３１９号；同第８，５６３，５０９号；米国特許出願公開第：ＵＳ２０１３００２９９００号及び国際特許出願公開第ＷＯ２００９／０１３４９７６号；ＷＯ２００９／１３４９７７号；及びＷＯ２０１２／１７７８３７号に詳細に記載されており、上記の特許及び出願の各々の内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０５】
本発明には、例えば、メイタンシノイド、ベンゾジアゼピン化合物、オーリスタチン、ＤＮＡアルキル化剤、または他の対象化合物などの約２〜約８個の薬物分子が、抗体またはその断片に連結されており、同じ細胞結合剤に連結された、より少ないかまたはより多い数の薬物の薬物負荷と比較して、複合体の抗腫瘍作用がより一層有効である態様が含まれる。
【０１０６】
一態様において、薬物対抗体比は、平均約２〜約８（例えば、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１）である。実質的に任意の細胞毒性薬をＡＤＣで使用することができる。特定の実施形態において、本発明に有用な細胞毒性剤は、メイタンシノイド及びメイタンシノイド類似体である。適当なメイタンシノイドの例としては、メイタンシノールのエステル及びメイタンシノール類似体が挙げられる。メイタンシノール及びメイタンシノール類似体と同様に、微小管形成を阻害し、かつ哺乳類細胞に非常に有毒な、あらゆる薬物が含まれる。
【０１０７】
特定の実施形態において、本発明のＡＤＣは、メイタンシノイドを含む。本発明に有用なメイタンシノイドとしては、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン（ＤＭ３と呼ばれる）、及びＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）メイタンシン（ＤＭ４）が挙げられるが、これらに限定されない。
ＤＭ１は、以下の構造式によって表される：
【化１１】
2020122012.tif 000015
米国特許公開第２０１３０１５６７９６号も参照されたい。
ＤＭ４は、以下の構造式によって表される：
【化１２】
2020122012.tif 000016
米国特許公開第２０１３０１５６７９６号も参照されたい。
【０１０８】
適当なメイタンシノールエステルの例としては、修飾芳香環を有するもの、他の位置で修飾を有するものが挙げられる。そのような適当なメイタンシノイドは、米国特許第４，４２４，２１９号；同第４，２５６，７４６号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６２，６６３号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３７１，５３３号；同第５，２０８，０２０号；同第５，４１６，０６４号；同第５，４７５，０９２号；同第５，５８５，４９９号；同第５，８４６，５４５号；同第６，３３３，４１０号；同第７，２７６，４９７号、及び同第７，４７３，７９６号に開示されている。
【０１０９】
立体障害チオール結合を含有する側鎖を含む別のメイタンシノイドは、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン（ＤＭ３と呼ばれる）であり、以下の構造式（Ｖ）によって表される：
【化１３】
2020122012.tif 000017
【０１１０】
米国特許第５，２０８，０２０号及び同第７，２７６，４９７号で教示されているメイタンシノイドの各々は、本発明の複合体に使用することもできる。この場合、米国特許第５，２０８，０２０号及び米国特許第７，２７６，６９７号の全ての開示は参照により本明細書に組み込まれる。例示のメイタンシノイド構造の炭素位は、以下に提供される：
【化１４】
2020122012.tif 000018
【０１１１】
メイタンシノイドにおける多くの位置は、連結部分を化学的に連結する位置として機能し得る。例えば、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシで修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシ基を有するＣ−２０位は、全て有用であることが期待される。いくつかの実施形態において、Ｃ−３位は、連結部分を化学的に連結する位置として機能し、及びいくつかの特定の実施形態において、メイタンシノールのＣ−３位は、連結部分を化学的に連結する位置として機能する。
【０１１２】
このような抗体−メイタンシノイド複合体を生成するためのいくつかの記載が、米国特許第６，３３３，４１０号、同第６，４４１，１６３号、同第６，７１６，８２１号、及び同第７，３６８，５６５号において提供され、それら各々の全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１３】
一般的に、水性緩衝液中の抗体の溶液を、反応性基を有するジスルフィド部分を有するモル過剰のメイタンシノイドとともに、インキュベートすることができる。反応混合物を、過剰なアミン（例えば、エタノールアミン、タウリンなど）の添加により急冷することができる。次いで、メイタンシノイド−抗体複合体は、ゲルろ過によって精製することができる。
【０１１４】
抗体分子当たりに結合したメイタンシノイド分子の平均数は、２５２ｎｍ及び２８０ｎｍでの吸光度を分光光度的に測定し、抗体のモル濃度及び薬物のモル濃度を決定することによって、決定することができる。ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４に対する例示的な算出を本明細書で以下に示す。次いで、抗体分子当たりのメイタンシノイド分子の平均数は、薬物のモル濃度を抗体のモル濃度で割ることによって算出される。メイタンシノイド分子／抗体の平均数は、例えば、１〜１０個または２〜５個であり得る。いくつかの実施形態において、メイタンシノイド分子／抗体の平均数は、３．４である。
【０１１５】
特定の実施形態において、本発明のＡＤＣは、ベンゾジアゼピンを含む。本発明に有用なベンゾジアゼピンとしては、例えば、ピロロベンゾジアゼピン及びインドリノベンゾジアゼピン（表１も参照されたい：化合物Ｄ１〜Ｄ１０及びＤＧＮ４６２）が挙げられる。上述の態様の種々の実施形態において、ベンゾジアゼピン化合物は、表１に列挙されている代表的な細胞毒性剤であるＤ１〜Ｄ１０及びＤＧＮ４６２から選択される。ＤＧＮ４６２は、例えば、米国特許第８、７６５，７４０号に記載されており、その内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。化合物Ｄ２は、例えば、米国仮特許出願第６２／０４５，２３６号及び「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  （ＡＤＣｓ）  ｏｆ  Ｉｎｄｏｌｉｎｏ−Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  ＤＮＡ−Ａｌｋｙｌａｔｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ」、２０１５  ＡＡＣＲ，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｕｍｂｅｒ
６５２に記載されている。化合物Ｄ２は、例えば、米国仮特許出願第６２／０４５，２４８号、及び「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  （ＡＤＣｓ）  ｏｆ  Ｉｎｄｏｌｉｎｏ−Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  ＤＮＡ−Ａｌｋｙｌａｔｉｎｇ
Ａｇｅｎｔｓ」、２０１５  ＡＡＣＲ，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｕｍｂｅｒ  ６５２に記載されている。
【０１１６】
医薬組成物
本発明は、本明細書に記載された１以上のＡＤＣを含む医薬組成物をさらに提供する。特定の実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容可能なビヒクルをさらに含む。これらの医薬組成物は、腫瘍増殖を阻害し、ヒト患者のがんを治療するための用途を見出す。
【０１１７】
本発明の医薬組成物に使用される抗体薬物複合体の例としては、限定されないが、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＭｏｖｌ９−Ｄ２、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄｌ、ｈｕＭｙ９−６−Ｄ２、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−Ｄ２、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−Ｄ１０、ｈｕＡｎｔｉ−ＣＤ１２３−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２、ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＤＳ６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｈｕＣＤ３７−５０−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、またはｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１が挙げられる。
【０１１８】
特定の実施形態において、製剤は、貯蔵及び使用のために、精製された本発明のＡＤＣを薬学的に許容されるビヒクル（例えば、担体、賦形剤）と組み合わせることによって調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ
ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００）。本発明は、薬物濃度に基づいてそのような組成物の製剤を提供する。いくつかの実施形態において、本発明のＡＤＣは、適当な担体、希釈剤及び／または賦形剤、例えば、０．９％生理食塩水（０．９％ｗ／ｖ  ＮａＣ１）、５％（ｗ／ｖ）デキストロースで提供され；Ｔｗｅｅｎ２０などの安定化剤も含有し得る。特定の実施形態において、ＡＤＣは、ＩＶバッグまたは薬物バイアルで提供される。
【０１１９】
他の適当な薬学的に許容可能なビヒクルとしては、リン酸、クエン酸、酢酸、コハク酸及び他の有機酸などの無毒な緩衝剤；塩化ナトリウムなどの塩；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、グルコース、マンノース、またはデキストリンなどの炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、局所処置または全身処置のいずれかのために任意の数の方法で投与することができる。投与は、静脈内、動脈内、注入を含む非経口；経口；経皮；または頭蓋内（例えば、髄膜下または脳室内）であってもよよい。
【０１２１】
抗体薬物複合体を含むキット
本発明は、本明細書に記載された方法を実施するために用いることができる抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を含むキットを提供する。特定の実施形態において、キットは、１以上の容器中にＡＤＣを含み、ＡＤＣの量は、薬物濃度に基づいており、ＡＤＣの量は、仕様から±１０％程度まで変動する。開示されたＡＤＣが、当該技術分野において周知の確立されたキット形式の１つに容易に組み入れられ得ることを、当業者は容易に認識するであろう。所望の場合、キットは、患者を治療するためにＡＤＣを使用する説明書を含み得る。説明書は、容器（存在するとき）に直接、または容器に貼付したラベルとして、或いは容器内にまたは容器と共に供給される別個のシート、パンフレット、カード、またはホルダーとして印刷できる。
【０１２２】
本発明の実施には、別段の指示がないかぎり、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生物化学、及び免疫学の従来技術を使用するが、これらは十分に当業者の理解の範囲内である。このような技術は、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」，Ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｇａｉｔ，１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｗｅｉｒ，１９９６）；「Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ」（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ａｕｓｂｅｌ，１９８７）；「ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ」，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）  のような文献に十分に説明されている。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチド及びポリペプチドの製造に適用でき、このようにして本発明を作成し実施する際に考慮できる。特定の実施態様のために特に有用な技術は、以下のセクションで検討される。
【０１２３】
以下の実施例は、本発明のアッセイ、スクリーニング、及び治療方法をどのように作成して用いるかについての完全な開示及び記載を当業者に提供するために提示されており、本発明者らが彼らの発明と見なしているものの範囲を限定することを意図していない。
【実施例】
【０１２４】
実施例１：ＡＤＣインビトロ効力は、細胞または対象に送達された薬物の量に依る
ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の抗ＦＯＬＲ１モノクローナル抗体部分は、細胞表面抗原であるＦＯＬＲ１（ＦＲαとしても知られる）を標的にし、これと結合する。抗体と抗原が相互作用し、内在化した後、免疫複合体はＤＭ４を放出し、ＤＭ４はチューブリンに結合し、微小管重合／分解動力学を乱すことによって、ＦＯＬＲ１発現腫瘍細胞の細胞分裂及び細胞増殖を阻害する。ＦＯＬＲ１、葉酸受容体ファミリーのメンバーは、種々の上皮由来がん細胞上で過剰発現される。
【０１２５】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）のインビトロ効力は、メイタンシノイド対抗体比（ＭＡＲ）とも言われる薬物抗体比（ＤＡＲ）に直線的に関連付けられる（図１）。図１及び２に示すデータは、例示のＡＤＣとしてｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４を用いて生成した。事実、１つのＤＡＲにわたって３１％の効力シフト（すなわち、２．９〜３．９）があり、ＤＭ４の用量において算出された２９％の差が得られた。図２は、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４濃度の細胞毒性効力への一般的依存性を示す。複合体濃度を標準品の濃度の半分に希釈する場合、細胞毒性効力は、標準品の半分である。同様に、複合体の出発濃度が標準品の濃度の２倍である場合、細胞毒性効力は、標準品の２倍である。特異的な細胞毒性アッセイの詳細を以下の実施例６で提供する。
【０１２６】
標的ＤＡＲ３．４で、最終製剤に存在する実際のＤＡＲの許容可能な変動性範囲は、２．９〜３．９で変動することができる（図３）。
【０１２７】
実施例２：ＤＭ４用量は、インビボ毒性及び有効性を引き起こす
ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４では、ＡＤＣレベルをできるたけ高く達成し、眼毒性閾値に接近せずに有効性を達成することが望ましい。図３に示すように、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４  ＤＡＲがおおよそ３．４であり、投与量が３．３〜７ｍｇ／ｋｇの範囲である場合、３２％の患者が眼毒性レベルを上回ることが分かった。ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４  ＤＡＲが２．９であり、投与量が３．３〜７ｍｇ／ｋｇの範囲である場合、１３％の患者が眼毒性レベルを上回ることが予想される。ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４  ＤＡＲが３．４であり、投与量が３．３〜７ｍｇ／ｋｇの範囲である場合、３２％の患者は、彼らが受けるＤＭ４用量の減少に基づいて、眼毒性レベルを上回ることが予想される。ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４ＤＡＲが３．９であり、投与量が３．３〜７ｍｇ／ｋｇの範囲である場合、４８％の患者は、彼らが受けるＤＭ４用量の増加に基づいて、眼毒性レベルを上回ることが予想される。
【０１２８】
ＤＡＲが２．９である５ｍｇ／ｋｇのｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（調整理想体重）では、眼毒性閾値を超える患者はいなかった。しかしながら、ＤＡＲが５ｍｇ／ｋｇのｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４で３．４または３．９である場合、１４％及び５７％の患者が、それぞれ、眼毒性閾値を超えた。３．４のＤＡＲコホートの実際の臨床データを（グラフ上の黒丸で）図４に示す。残りのデータは、シミュレートされた投与量分析を反映する。
【０１２９】
図４は、患者が意図する狭い範囲内で用量を受けることを確実にする重要性を示す。理想的には、最大有効性及び安全性を確実にするため、患者は、眼毒性閾値に接近するがそれを超えない用量のｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４を受ける。
【０１３０】
実施例３及び４で述べた通り、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４に対して、毒性は、投与されたＤＭ４の量に依る。ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４による前臨床有効性試験は、ＤＭ４用量が同じである場合、ＤＡＲには依存しないことを示した。さらに、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４と多くの他の複合体による前臨床毒性試験は、毒性は、ＤＡＲに関わらず連結したＤＭ４の用量によって引き起こされることを示した。
【０１３１】
実施例３：ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の抗腫瘍活性は、ＤＡＲに無関係であった
ＫＢ及びＩＧＲＯＶ−１ネズミ異種移植モデル中のｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４活性（図５）を分析するインビボ研究を実施した。ＫＢ細胞株は、腫瘍細胞のＨｅＬａ細胞汚染から確立した。ＫＢ細胞株は、再現性を有してヌードマウスで腫瘍を形成し、葉酸受容体を過剰発現するため、腫瘍モデルとして使用する。ＩＧＲＯＶ−１腫瘍モデルは、ヒト卵巣がんから得られる。
【０１３２】
２．５〜４．１の範囲の異なるＤＡＲを有するＨｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４を、２５μｇ／ｋｇのＤＭ４用量と可変抗体投与量とで、ＫＢまたはＩＧＲＯＶ−１腫瘍異種移植を有するマウスに投与した。図５に示すように、同じＤＭ４用量を投与する限り、ＤＡＲは、有効性に影響を及ぼさなかった。この分析の結果は、ＤＭ４投与量が、ＤＡＲに関わらずＦＯＬＲ１−陽性ＫＢ及びＩＧＲＯＶ−１腫瘍モデルにおける有効性を決定したことを示した。
【０１３３】
実施例４：毒性は、薬物抗体比に無関係であった
薬物抗体比がｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の最大耐用量（ＭＴＤ）に与える影響を評価するためにインビボ試験を実施した（図６）。マウスは、ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４を１４００μｇ／ｋｇの固定ＤＭ４用量で受けた。抗体用量は変動した。マウス体重は、毒性の尺度として監視した。投与したＡＤＣは、薬物対抗体比（例えば、ＤＡＲ９．０対ＤＡＲ３．６）を大きく変動させた。興味深いことに、同じＤＭ４投与量を投与する限り、ＤＡＲは、３．６〜９．０の範囲内で毒性に影響を及ぼさなかった。従って、毒性は、ＤＡＲに無関係であった。
【０１３４】
別のインビボ毒性分析では、ＡＤＣ  ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を３．０ｍｇ／ｋｇの固定ＤＭ１用量で投与した。ＤＡＲは変動した（例えば、２．３、３．５、６．３、１０．１）が、ＤＭ１投与量は一定に保った。平均体重（ＢＷ）変化は、毒性の指標として監視した。体重減少は、異なるＤＡＲ複合体で同様であり、毒性は、ＤＭ１用量を一定に保つ限り、ＤＡＲに無関係であったことを示している（図７）。
【０１３５】
このインビボ分析は、ｈｕＤＳ６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、及びｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４を含む抗体−ＳＰＤＢ−ＤＭ４複合体に拡張した（図８）。ＡＤＣ  ｈｕＤＳ６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（「ｈｕＤＳ６−ＤＭ４」としても知られる）は、開裂可能なジスルフィド架橋剤であるＮ−スクシンイミジル−４−２−ピリジルジチオブタン酸（ＳＰＤＢ）を介して強力な細胞毒性メイタンシノイドであるＤＭ４に連結したヒト化モノクローナル抗体であるｈｕＤＳ６である。ＡＤＣ  ｈｕＤＳ６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、卵巣がん、乳がん、子宮頸がん、肺がん、及び膵臓がんなどの固形腫瘍を標的にする。ＡＤＣ  ｈｕＢ４−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（「ｈｕＢ４−ＤＭ４」としても知られる）は、開裂可能なジスルフィド架橋剤であるＮ−スクシンイミジル−４−２−ピリジルジチオブタン酸（ＳＰＤＢ）を介してＤＭ４に結合したヒト化モノクローナルＩｇＧ１である抗ＣＤ１９抗体（ｈｕＢ４）からなる新規の抗体薬物複合体である。ＡＤＣ  ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（「ｈｕＭｙ９−６−ＤＭ４」としても知られる）は、骨髄性細胞上で主に発現されるシグレックファミリー抗原であるＣＤ３３に特異的に結合するＡＤＣである。ＡＤＣ  ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、急性骨髄性白血病を治療するための臨床評価を受けた。
【０１３６】
図８に示すように、特定された複合体を３〜４の異なる用量で投与し、マウス生存率を毒性の指標として測定した。４つの複合体のＤＡＲ範囲は、（３．４９〜４．０の範囲で）狭かったため、ＬＤ５０範囲（５０％の動物が致死する用量）も狭かった（１．６〜２ｍｇ／ｋｇのＤＭ４用量）。異なるＤＡＲを有する複合体を８０ｍｇ／ｋｇの抗体用量で投与し、マウス生存率を毒性の指標として測定した（図８）。全ての複合体の同様の結果は、ＤＡＲに関わらず、毒性が投与された総ＤＭ４用量によって引き起こされることを示す。すなわち、２．１〜５．１のＤＡＲ範囲内では、毒性は、異なるＤＡＲの影響を受けない。
【０１３７】
実施例５：薬物濃度に基づいてＡＤＣ治療用組成物を製剤化することは、ＤＡＲ変動から得られる効力変動を最小にする。
従来、抗体薬物複合体の治療用組成物は、抗体濃度に基づいて製剤化されている。図９Ａは、仕様の許容可能な範囲内のままであっても、抗体濃度に基づいて、抗体薬物複合体を製剤化するのに固有の変動性を示す。特に、ＡＤＣ製造プロセスの最後で、抗体の濃度を測定し、抗体を希釈して、ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ  ＤＭ４については５．０ｍｇ／ｍｌである標的薬物濃度に到達する。図９Ａでは、ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４に対する標的抗体濃度（５．０ｍｇ／ｍｌ）を枠で囲み、標的ＤＡＲ（３．４）を丸で囲む。この標的抗体濃度で、ＤＭ４濃度は９１．１μｇ／ｍｌである。実際には、最終製剤の抗体濃度は、標的濃度からの変動を許される。最終製品の抗体濃度は、４．０ｍｇ／ｍｌまで低下、または６．０ｍｇ／ｍｌまで上昇することができた。従って、ＤＭ４濃度の枠で囲んだ領域で示したように、ＤＡＲに応じて、最終製剤のＤＭ４濃度は、６２．１μｇ／ｍｌまで低下、または１２５．４μｇ／ｍｌまで上昇することができた。
【０１３８】
ＤＭ４濃度に基づいてＡＤＣ組成物を製剤化し、＋／−１０％のＤＭ４濃度仕様を加えることで、最終製剤に存在する効力を標的ＤＭ４濃度の＋／−１０％（強調して示す；＋／−１０％仕様）に著しく狭める。
【０１３９】
仕様に従わないバッチに対する傾向を図９Ｂに示し、標的のＤＭ４濃度及びＤＡＲを強調表示する。ＤＭ４濃度を上に示し、ＤＡＲを左に示し、得られた抗体濃度を強調表示した枠内に示す（５．０ｍｇ／ｍｌ）。抗体濃度が標的から±２０％を超えて変動する場合、そのバッチは仕様外である。仕様に従わないバッチに存在する抗体の濃度を太字で示す（図９Ｂ）。仕様に従わないバッチのリスクはかなり低い。
【０１４０】
要するに、現在の製剤化仕様は、抗体ベース濃度（４．０〜６．０ｍｇ／ｍＬ）で±２０％変動することができる。従って、ＡＤＣ効力は、ＤＡＲに応じて±３５％程度まで変動できた。ＤＭ４濃度に基づいてＡＤＣを製剤化し、ＤＭ４濃度を±１０％程度変動させることによって、効力は、たった±１０％だけ変動することができる。従って、新規の製剤化方法は、狭い範囲のＤＭ４濃度に製剤化することによってＤＡＲ効力依存性を排除する。このような製剤戦略は、抗体濃度がその仕様外であることによる仕様に従わないバッチのリスクをほんの僅かしか増加させない。
【０１４１】
実施例６：ＤＡＲ複合体製剤
ｈｕＭｏｖｌ９抗体、ＳＰＤＢリンカー、及び細胞毒性薬であるＤＭ４を含むＡＤＣ  ｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、ＡＤＣの一例であり、インビトロ効力、インビボ有効性、及びインビボ毒性は、ＤＡＲに無関係であり、投与されたＤＭ４の濃度によって完全に引き起こされる。従って、ｈｕＭｏｖ１９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、ｈｕＭｏｖ１９濃度ではなくＤＭ４濃度によって製剤化することが良好な候補である。これが製剤効力を狭めるという仮説を試験するために、一定範囲のＤＡＲを有する一連のｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４複合体を製造した。複合体を塩基製剤緩衝剤（１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％（ｗ／ｖ）ショ糖、ｐＨ５．０）に精製し、各試料のＤＭ４及びｈｕＭｏｖｌ９抗体濃度を、それぞれ、２５２ｎｍ及び２８０ｎｍの波長にて分光光度法で測定した。複合体を含むＤＭ４及びｈｕＭｏｖｌ９抗体のモル濃度を以下のように算出した：
【数１】
2020122012.tif 000019
【０１４２】
種々のＤＡＲ複合体の各々は、２つの異なる方法で製剤化した：１つは、標的ｈｕＭｏｖｌ９抗体濃度が５．０ｍｇ／ｍＬ±２０％の仕様範囲内に到達するように、塩基製剤緩衝剤で希釈した。加えて、種々のＤＡＲ複合体は、提案された９１．１μｇ／ｍＬ±１０％の仕様内の標的ＤＭ４濃度になるように製剤化した。全ての試料には、特異的な細胞毒性アッセイを施した。
【０１４３】
特異的な細胞毒性アッセイは、透明な底が付いた無菌の、９６−ウェル、平底の黒色組織培養プレートの重複ウェル中で希釈系列のｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４薬物複合体を含有する培地の存在下で葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）陽性細胞（ＫＢ）をインキュベートすることを含む。各アッセイプレートは、ＫＢ細胞を有するウェルと培地がブランクのウェルで同一希釈の一連の標準品、対照物質、及び被験物質を含有する。３７℃±２℃での４日間のインキュベーション期間後、プレートを培養器から取り除き、１時間室温に平衡化させた後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｒｅａｇｅｎｔを加えた。プレートをさらに２時間インキュベートした後、Ｖｉｃｔｏｒ  ＩＩＩプレートリーダー上の発光シグナルを分析し、記録した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）は、固有の安定形態のルシフェラーゼを使用して、生存細胞の指標としてＡＴＰを測定する。生成された発光シグナルは、ウェルに存在する生存細胞数に正比例し、同様に、そのウェル中の薬物の細胞傷害に反比例する。ルシフェラーゼ反応はＡＴＰを要するため、生成された光の量が、生存細胞の数を反映する、存在するＡＴＰの量に比例するように条件は作成されている。３つのプレートデータファイルをＰＬＡ２．０ソフトウェアにインポートし、標準品及び被験物質のＥＣ５０値は、各試料の６回繰り返し測定データ全てを用いて、制約付きの４パラメーターロジスティック曲線フィッティングから決定した。勾配の差及び平行度の許容基準を満たす試料について、被験物質の相対効力％は、制約付き４ＰＬ曲線フィッティングから導出されたＩＣ５０から報告される。効力％は、以下のように算出する：
【数２】
2020122012.tif 000020
被験物質ＥＣ５０が標準品ＥＣ５０よりも小さい場合、被験物質が標準品よりも効力が大きく、算出された％効力が１００％を超えることを示す。逆に、被験物質ＥＣ５０が標準品ＥＣ５０よりも大きい場合、被験物質が標準品よりも効力が小さく、算出された％効力が１００％未満であることを示す。
【０１４４】
これらの算出結果を表２及び表３（以下）に示す。表２の効力アッセイに使用した標準品は試料Ａであるが、表３の効力アッセイに使用した標準品は試料Ｆであった。各試料の希釈系列は、ＡＤＣが臨床設定で投与される方法を模倣するために、５ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｏｖｌ９の微量濃度を想定して作成した。５ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｏｖｌ９濃度（表２）を標的にするようにｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４  ＡＤＣを製剤化する場合、予想されるように広範囲の効力があり、ＡＤＣの最高と最低の効力間は、合計で〜２×差の５９．８〜１２４．６％である。これは、±３５％の予想範囲と十分一致している。９１．０ｍｇ／ｍＬのＤＭ４濃度を標的にするように種々のＤＡＲのｈｕＭｏｖｌ９−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４  ＡＤＣを製剤化する場合とは対照的に、得られた相対効力の範囲は、合計で〜１×の８０．９〜１０６．５％とはるかに狭い。これは、±１０％の予想範囲と十分一致している。測定した効力のほとんどは、ＤＭ４濃度に基づいて期待値の１５％以内である。これは、効力及び濃度の両方の測定アッセイの組み合わせた実験誤差内である。まとめると、これらの結果は、ＡＤＣについて典型的であるように、ｈｕＭｏｖｌ９濃度標的よりもＤＭ４濃度標的に製剤化する利点を示す。
【表２】
2020122012.tif 000021
【表３】
2020122012.tif 000022
【０１４５】
実施例７：可変抗体及び薬物濃度を標的化することで、より広範囲のＤＡＲにわたる仕様ウィンドウを狭める。
場合によっては、標的薬物濃度の変動により、非標的濃度（例えば、抗体濃度）の大きな変動よりも薬物及び抗体両方の濃度の小さな変動に到達させることが望ましいことがある。このような方法を用いてＡＤＣ組成物を製剤化することは、抗体及び薬物の両方の濃度が特定のＤＡＲ値で重なる範囲の真ん中を標的化することによって仕様範囲を最大にする。実際には、薬物仕様は、抗体仕様よりも狭い（例えば、薬物の±１０％対抗体の±１５％）。従って、抗体及び薬物濃度の変動をより小さくさせることで、仕様には従わないが、完全に安全に使用されるバッチのリスクを最小限にしながら、（絶対標的よりも）強化された薬物濃度仕様を達成するためのさらなる制御戦略を提供する。
【０１４６】
上述の方法を用いてｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２のＡＤＣを製剤化する望ましさを示す。ｈｕＭｙ９−６−スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＧＮ４６２のＡＤＣは、開裂可能なジスルフィドリンカーであるスルホ−ＳＰＤＢを介して新規のＤＮＡアルキル化剤であるＤＧＮ４６２にコンジュゲートされた抗体ｈｕＭｙ９−６を含むＣＤ３３標的抗体薬物複合体である。
【０１４７】
図１０Ａ、１０Ｂ、及び１０Ｃの各々では、抗体仕様範囲の上限及び下限を点線で示し、Ｘ軸は、薬物のバッチのＤＡＲを示し、標的ＤＡＲは２．７であり；垂直線は、所与のＤＡＲでのＤＧＮ４６２仕様の上限及び下限を示し、各垂直線上の濃い灰色の菱形は、特定のＤＡＲでのＤＧＮ４６２仕様範囲と抗体仕様範囲の間の重なりを示す。図１１Ａでは、バッチのＤＡＲが２．７である場合、ＤＧＮ４６２仕様範囲の中心は、抗体範囲の中心内にきちんと収まっている。図１０Ｂでは、バッチのＤＡＲが標的ＤＡＲに近い場合、抗体濃度を達成するのに必要な固定ＤＧＮ４６２標的濃度は、抗体の仕様上限と下限に十分に収まっている。図１０Ｃでは、バッチのＤＡＲがＤＡＲ仕様の上限及び下限、それぞれ、３．０〜３．１及び２．３〜２．４に近付く場合、ＤＧＮ４６２標的濃度を達成するのに必要な抗体の量が抗体濃度の仕様上限と下限に近付くため、固定ＤＧＮ４６２濃度は、定義された抗体濃度仕様に近いかまたは該仕様を超える。従って、改善された製剤化方法は望ましい。
【０１４８】
図１１Ａ〜１１Ｃは、特に、ＤＡＲがＤＡＲ仕様の上限及び下限（例えば、３．０〜３．１及び２．３〜２．４）に近付く場合に、ＤＧＮ４６２及び抗体の両方の濃度を変動させることによって得られる改善を示す。可変薬物濃度を標的化することで、抗体濃度の仕様範囲と薬物濃度の仕様範囲が重なる範囲の真ん中を同定する（図１１Ａ）。全薬物の有効範囲の中心は、抗体仕様上限を十分に下回る。従って、ＤＡＲ仕様の上限及び下限で、可変ＤＧＮ４６２を標的化する方法は、標的抗体濃度を完全に±１５％変動させる代わりに＋／−１０％の変動に制限することで、より一貫性のある製品が生成される。これに対し、ＤＡＲが上限及び下限に近付くバッチでは、固定ＤＧＮ４６２標的濃度を達成するために抗体濃度を変動させることは、標的抗体濃度からより大きな偏差を引き起こし、効力及び毒性変動性のリスクを増加させる（図１１Ａ及び１１Ｂ）。図１１Ｃは、ＤＡＲ仕様の上限及び下限に可変薬物濃度を標的化する方法により提供される改善を示し、ＤＧＮ４６２濃度及び抗体濃度は、標的薬物濃度を達成するために抗体濃度を使用する場合（灰色の菱形）（固定標的全薬物がＤＡＲ２．３で抗体の仕様上限を超える）に比べて、４％のより狭い限界（白い楕円）間で維持される。
【０１４９】
以下の式は、薬物の仕様上限及び仕様下限を算出するのに有用である。
【数３】
2020122012.tif 000023
【０１５０】
表４は、ＤＧＮ４６２（ＵＳＬ  ＤＧＮ４６２、ＬＳＬ  ＤＧＮ４６２）の仕様上限及び下限を算出するのに使用した方法を示す。抗体濃度仕様の上限は一定である。ＤＡＲは、抗体薬物複合体のバッチについて経験的に決定される。所望の仕様上限及び下限による算出は、以下のように実施した：
【数４】
2020122012.tif 000024
【０１５１】
値「２．３０」及び「１．７０」は、抗体仕様の上限及び下限を定義する。分母は、抗体の分子量である。
【表４】
2020122012.tif 000025
−ＬＳＬ及びＵＳＬを特定の点で算出する場合、これらの限界は、提案された仕様から外れる
−これらの異常値は、＞または＜規則を用いて、ＬＳＬ（３４．０ｍｇ／ｍＬ）またはＵＳＬ（４１．５ｍｇ／ｍＬ）のいずれかに設定することができる
−提案されるのは、製剤化の目的のため、ＤＡＲを小数点第２位まで報告することである
【０１５２】
以下の例では、ＡＤＣは、可変薬物濃度を標的化することによって製剤化される。ここでは、ＡＤＣは、標的ＤＡＲが２．７、抗体濃度が２．０ｍｇ／ｍＬ、及び細胞毒性剤濃度が３９．２μｇ／ｍＬであるＤ２（分子量９６１．０５ｇ／ｍｏｌ）にコンジュゲートした非機能性抗体であるｈｕＭｏｖｌ９（分子量１４５６７６ｇ／ｍｏｌ）を含む。ＡＤＣは、薬物の可変濃度を標的化し、抗体濃度の標的からのオフセットを最小にするように製剤化される。図１１Ａに示すように、可変薬物濃度を標的化することで、静的な薬物濃度を利用する場合（図１１Ａ；例えば、表４〜７を参照のこと）の±１５％に対して、得られた抗体濃度を±１０％（１．８〜２．２）まで変動させる。可変薬物を標的化することで、抗体仕様範囲と薬物仕様範囲が重なる範囲の真ん中を同定する（図１１Ａ；例えば、表４〜７を参照のこと）。
【０１５３】
表５は、Ｄ２（ＵＳＬ  Ｄ２、ＬＳＬ  Ｄ２）の仕様上限及び下限を算出するのに使用した方法を示す。抗体濃度仕様の上限及び下限は一定であり、ＤＡＲは経験的に決定される。
【表５】
2020122012.tif 000026
【０１５４】
別の例では、ＡＤＣは、可変細胞毒性剤濃度を標的化することによって製剤化される。ここでは、ＡＤＣは、標的ＤＡＲが２．７、抗体濃度が２．０ｍｇ／ｍＬ、及び細胞毒性剤濃度が３４．３μｇ／ｍＬであるＤ１（分子量８３８ｇ／ｍｏｌ）にコンジュゲートした非機能性抗体であるｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ（分子量１４４９７５ｇ／ｍｏｌ）を含む。ＡＤＣは、細胞毒性剤の可変濃度を標的化し、抗体濃度の標的からのオフセットを最小にするように製剤化される。
【０１５５】
表６は、Ｄ１（ＵＳＬ  Ｄ１、ＬＳＬ  Ｄ１）の仕様上限及び下限を算出するのに使用した方法を示す。抗体濃度仕様の上限及び下限は一定であり、ＤＡＲは経験的に決定される。
【表６】
2020122012.tif 000027
【０１５６】
さらに別の例では、ＡＤＣは、可変細胞毒性剤濃度を標的化することによって製剤化される。ここでは、ＡＤＣは、標的ＤＡＲが２．７、抗体濃度が２．０ｍｇ／ｍＬ、及び細胞毒性剤濃度が４４．０μｇ／ｍＬであるＤ１０（分子量１０６２．２２ｇ／ｍｏｌ）にコンジュゲートした機能性抗体であるｈｕＭｙ９−６（分子量１４６１９２ｇ／ｍｏｌ）を含む。ＡＤＣは、細胞毒性剤の可変濃度を標的化し、抗体濃度の標的からのオフセットを最小にするように製剤化される。
【０１５７】
表７は、Ｄ１（ＵＳＬ  Ｄ１、ＬＳＬ  Ｄ１）の仕様上限及び下限を算出するのに使用した方法を示す。抗体濃度仕様の上限及び下限は一定であり、ＤＡＲは経験的に決定される。
【表７】
2020122012.tif 000028
【０１５８】
（他の実施形態）
前述の説明から、本明細書に記載されている本発明を、様々な使用及び条件に適用するために、改変及び修正できることは明らかであろう。このような実施態様もまた以下の特許請求の範囲の範囲内にある。
【０１５９】
本明細書の可変部の任意の定義における構成要素のリストの記述は、単一構成要素またはリストされている構成要素の組み合わせ（または小組み合わせ）のいずれかとしてのその可変部の定義を包含している。本明細書の実施態様の記述は、単一の実施態様のいずれかとして、またはその他のいずれかの実施態様またはそれらの部分との組み合わせとしてその実施態様を包含している。
【０１６０】
本明細書に述べられている全ての特許及び刊行物は、それぞれの独立した特許及び刊行物が参照により取り込まれることを具体的かつ個々に示しているのと同じ程度に、参照により本明細書に取り込まれている。
【図１】
2020122012.tif 000029
【図２】
2020122012.tif 000030
【図３】
2020122012.tif 000031
【図４】
2020122012.tif 000032
【図５】
2020122012.tif 000033
【図６】
2020122012.tif 000034
【図７】
2020122012.tif 000035
【図８】
2020122012.tif 000036
【図９Ａ】
2020122012.tif 000037
【図９Ｂ】
2020122012.tif 000038
【図１０Ａ】
2020122012.tif 000039
【図１０Ｂ】
2020122012.tif 000040
【図１０Ｃ】
2020122012.tif 000041
【図１１Ａ】
2020122012.tif 000042
【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年5月8日(2020.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
「ｈｕＢ４」とは、ヒトＣＤ１９などのＣＤ１９に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。本発明の例示的なｈｕＢ４抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得る：
【化１】
2020122012.tif 000045
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
「ｈｕＭｏｖｌ９」（「Ｍ９３４６Ａ」とも言われる）とは、葉酸受容体α（葉酸受容体１または本明細書で「ＦＯＬＲ１」としても知られる）に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＭｏｖｌ９の詳細な配列は、米国特許第８，５５７，９６６号及び同第８，７０９，４３２号及び国際特許出願公開第：ＷＯ２０１１／１０６５２８号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＭＯＶ１９抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得る：
【化２】
2020122012.tif 000046
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
「ｈｕＤＳ６」とは、がん性細胞により発現されたＭｕｃｌムチン受容体（例えば、ヒトＭｕｃ１）上のＣＡ６シアログリコトープに特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＤＳ６の例示的な配列は、米国特許第７，８３４，１５５号及び国際特許出願公開第：ＷＯ２００５／００９３６９号及びＷＯ２００７／０２４２２２号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＤＳ６抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化３】
2020122012.tif 000047
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
「ｈｕＭｙ９−６」（「Ｚ４６８１Ａ」とも言われる）とは、ヒトＣＤ３３などの白血球分化抗原ＣＤ３３に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＭｙ９−６重鎖可変領域部分の例示的な配列は、米国特許公開第２００６０１７７４５５号に記載されており、その内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。ｈｕＭｙ９−６軽鎖可変領域部分の例示的な配列は、当該技術分野で公知であり、米国特許第７，５５７，１８９号、同第７，３４２，１１０号、同第８，１１９，７８７号及び同第８，３３７，８５５号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＭｙ９−６抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化４】
2020122012.tif 000048
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
「ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ」（「Ｊ２８９８Ａ」とも言われる）とは、ヒトＥＧＦＲなどのＥＧＦＲに特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。本発明の例示的なｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化６】
2020122012.tif 000049
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
「ｈｕＣＤ３７−３」とは、ヒトＣＤ３７などのＣＤ３７に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＣＤ３７−３の例示的な配列は、米国特許第８，７６５，９１７号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／１１２９７８号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＣＤ３７−３抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化７】
2020122012.tif 000050
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
「ｈｕＣＤ３７−５０」とは、ヒトＣＤ３７などのＣＤ３７に特異的に結合するヒト化抗体またはそのエピトープ結合性断片を意味する。ｈｕＣＤ３７−５０の例示的な配列は、米国特許第８，７６５，９１７号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／１１２９７８号に記載されており、それらの内容全体を参照によって本願明細書に引用したものとする。本発明の例示的なｈｕＣＤ３７−５０抗体は、以下のＣＤＲ（太字及び下線で示す）または以下の軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）配列を含み得るかまたはからなる：
【化８】
2020122012.tif 000051
【外国語明細書】
2020122012000001.pdf