(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｃｌｏｇｇｉｎｇを生じずに簡便に工業的製造ができる高濃度抗体含有針付プレフィルドシリンジ製剤およびその製法を提供する。【解決手段】蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤は、針に水蒸気透過性の低い素材で形成されたキャップを具備する。蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤の製造方法は、１）針に水蒸気透過性の低い素材で形成されたキャップを具備した針付シリンジを放射線または電子線で滅菌する工程、２）無菌的に、当該針付シリンジに蛋白質溶液を封入する工程を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤であって、当該針に水蒸気透過性の低い素材で形成されたキャップを具備することを特徴とする、プレフィルドシリンジ製剤。
【請求項２】
キャップの素材が、ブチルゴムである、請求項１記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項３】
ブチルゴムが、ノルマルブチルゴムまたはハロゲン化ブチルゴムである、請求項２記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項４】
注射器本体が樹脂製である、請求項１〜３のいずれかに記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項５】
注射器本体がシクロオレフィン系の樹脂製である、請求項４記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項６】
シクロオレフィン系の樹脂がＣＯＰまたはＣＯＣである、請求項５記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項７】
蛋白質溶液が、当該蛋白質を80mg／ml以上含む溶液である、請求項１〜６のいずれかに記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項８】
蛋白質溶液が、当該蛋白質を100mg／ml以上含む溶液である、請求項７記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項９】
蛋白質溶液の粘度が２〜１００ｍＰａ・ｓである、請求項１〜８記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項１０】
蛋白質が抗体である、請求項１〜９のいずれかに記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項１１】
抗体濃度が１００〜３００ｍｇ／ｍＬで、粘度が６〜１００ｍＰａ・ｓである、請求項１０記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項１２】
抗体が抗IL6受容体抗体である、請求項１０または１１記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項１３】
抗体がトシリツマブである、請求項１２記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項１４】
以下の工程を含む、蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤の製造方法：
１）針に水蒸気透過性の低い素材で形成されたキャップを具備した針付シリンジを放射線または電子線で滅菌する工程；
２）無菌的に、当該針付シリンジに蛋白質溶液を封入する工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、注射針を保護するシリンジキャップ、針付シリンジ、及びプレフィルドシリンジ製剤、並びに針付プレフィルドシリンジ製剤の工業的製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、種々の抗体製剤が開発され実用に供されているが、多くの抗体製剤は静脈注射用製剤として用いられている。一方、医療現場のニーズにより、抗体含有製剤を自己注射可能な皮下注射用製剤として開発する要望が高くなっている。特に、プレフィルドシリンジに封入された溶液製剤が、その利便性からその開発の要望が高い。
【０００３】
皮下注射用の抗体含有製剤を設計するにあたっては、1回あたりの抗体投与量が大量となる一方で(80〜200mg-程度)、皮下注射では一般的に注射液量の制限があることから、投与液中の抗体の高濃度化が必須となっている。
【０００４】
近年、自己注用のプレフィルドシリンジ製剤として、内部に薬剤が充填された筒状の注射器本体と、前記注射器本体の先端に取り付けられた注射針と、前記注射器本体内に挿入され、該注射器本体の軸芯方向にスライド移動可能なプランジャとを備えたプレフィルドシリンジが医療現場で使用されるようになってきた。通常、この種のプレフィルドシリンジは、前記注射器本体に着脱可能に取り付けられたシリンジキャップであって、前記注射針を覆うシリンジキャップをさらに備えることにより、使用前に注射針が使用者の手や指等に誤って刺さることが防止されている。
【０００５】
トレイフィラー充填用のガラスシリンジの場合、薬液充填前の殺菌処理はエチレンオキサイド等の殺菌性のガスによる処理が行われている。これはγ線などの放射線を用いるとガラスが褐色に変色するためで、その為、針付シリンジの場合は殺菌性のガスを針に浸透させるためにそのキャップは通気性のある素材が使用されている。
【０００６】
プレフィルドシリンジ用に使用している、ブチルゴムなどの通気性の殆どない素材を使用したゴム栓としては、特許第4586079号に記載されたプレフィルドシリンジのティップキャップとして使用されている例があるが、いずれも針なしのガラス製シリンジであり、且つ工場内で洗浄滅菌して組立られたものであり、本発明の如く針付プレフィルドシリンジの針キャップとして使用されているものはない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第4586079号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
トレイフィラー充填用のガラスシリンジの場合、薬液充填前の殺菌処理はエチレンオキサイド等の殺菌性のガスによる処理が行われている。これはγ線などの放射線を用いるとガラスが褐色に変色するためで、その為、針付シリンジの場合は殺菌性のガスを針に浸透させるためにそのキャップは通気性のある素材が使用されている。
【０００９】
一方、皮下注射用の抗体含有プレフィルドシリンジ（PFS）製剤を設計するにあたっては、1回あたりの抗体投与量が大量となる一方で(80〜200mg程度)、皮下注射では一般的に注射液量の制限があることから、投与液中の抗体の高濃度化が必須となっている。
【００１０】
本発明者らは、このような高濃度の抗体を含む、針付プレフィルドシリンジ溶液製剤において、乾燥条件でフィルム等による外装をせずに（あるいは外装から取り出して）長期に放置した際に、その針キャップが通気性のある素材の場合、針中の溶液製剤が乾燥して針の目詰まり（Clogging）が生じることを見出した。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
そこで、本発明者らは、ブチルゴムなどの通気性のほとんどない素材を使用した針キャップを用いることで、針付プレフィルドシリンジ（PFS）製剤のCloggingを防止することができることを見出した。
【００１２】
一方、工業生産で用いられるトレイフィラー充填用のガラスシリンジの場合、この様な通気性のほとんどない針キャップを用いると、トレイフィラー充填用のガラスシリンジではガスによる針先の滅菌が困難となる。よって、本発明者らは、トレイフィラー充填用のシリンジの素材を、滅菌のための放射線照射で変色しない樹脂にすることにより、Cloggingを生じずに簡便に工業的製造ができる高濃度抗体含有針付プレフィルドシリンジ製剤を提供できることを見出した。
【００１３】
すなわち、本発明は以下〔１〕〜〔１４〕を提供する。
〔１〕蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤であって、当該針に水蒸気透過性の低い素材で形成されたキャップを具備することを特徴とする、プレフィルドシリンジ製剤。
【００１４】
〔２〕キャップの素材が、ブチルゴムである、〔１〕記載のプレフィルドシリンジ製剤。
〔３−１〕ブチルゴムが、ノルマルブチルゴムまたはハロゲン化ブチルゴムである、〔２〕のプレフィルドシリンジ製剤。
【００１５】
〔３−２〕蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤であって、当該針に水蒸気透過性の低い素材で形成されたキャップを具備することを特徴とし、ここで、前記キャップが、次のとおりの水蒸気透過性の値（JIS 7126-1による）を有する素材で形成される、プレフィルドシリンジ製剤：5℃で、0.1 g/m2・Day以下、あるいは0.05 g/m2・Day以下、あるいは0.01 g/m2・Day以下；または、25℃で、0.2 g/m2・Day以下、あるいは0.1 g/m2・Day以下；または、40℃で、0.2 g/m2・Day以下、あるいは0.1 g/m2・Day以下。
【００１６】
〔３−３〕キャップが、次のとおりの水蒸気透過性の値を有する素材で形成される〔３−２〕記載のプレフィルドシリンジ製剤：5℃で0.01 g/m2・Day以下（例えば約0.006 g/m2・Day）、または25℃で0.1 g/m2・Day以下（例えば約0.072 g/m2・Day）、または40℃で0.1 g/m2・Day以下（例えば約0.081 g/m2・Day）。
【００１７】
〔３−４〕キャップが、次のとおりの水蒸気透過性の値を有する素材で形成される〔３−２〕記載のプレフィルドシリンジ製剤：5℃で0.01 g/m2・Day以下（例えば約0.006 g/m2・Day）、25℃で0.1 g/m2・Day以下（例えば約0.072 g/m2・Day）且つ40℃で0.1 g/m2・Day以下（例えば約0.081 g/m2・Day）。
【００１８】
〔４〕注射器本体が樹脂製である、〔１〕〜〔３〕に記載のプレフィルドシリンジ製剤。
〔５〕注射器本体がシクロオレフィン系の樹脂製である、〔４〕のプレフィルドシリンジ製剤。
【００１９】
〔６〕シクロオレフィン系の樹脂がＣＯＰまたはＣＯＣである、〔５〕のプレフィルドシリンジ製剤。
〔７〕蛋白質溶液が、当該蛋白質を80mg／ml以上含む溶液である、〔１〕〜〔６〕に記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【００２０】
〔８〕蛋白質溶液が、当該蛋白質を100mg／ml以上含む溶液である、〔７〕のプレフィルドシリンジ製剤。
〔９〕蛋白質溶液の粘度が２〜１００ｍＰａ・ｓである、上記プレフィルドシリンジ製剤。
〔１０〕蛋白質が抗体である、上記プレフィルドシリンジ製剤。
〔１１〕抗体濃度が１００〜３００ｍｇ／ｍＬで、粘度が６〜１００ｍＰａ・ｓである、上記プレフィルドシリンジ製剤。
〔１２〕抗体が抗IL6受容体抗体である、〔１０〕または〔１１〕記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【００２１】
〔１３〕抗体がトシリツマブである、〔１２〕のプレフィルドシリンジ製剤。
〔１４〕以下の工程を含む、蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤の製造方法：
１）針に水蒸気透過性の低い素材で形成されたキャップを具備した針付シリンジを放射線または電子線で滅菌する工程；
２）無菌的に、当該針付シリンジに蛋白質溶液を封入する工程。
【発明の効果】
【００２２】
本発明のプレフィルドシリンジ製剤によれば、実質的に水蒸気不透性の素材からなる針キャップを用いることで、PFS製剤のCloggingを防止することができる。
さらに、工業生産で用いられるトレイフィラー充填用のシリンジの素材を、滅菌のための放射線照射で変色しない樹脂にすることにより、Cloggingを生じずに簡便に工業的製造ができる高濃度抗体含有針付プレフィルドシリンジ製剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】本発明の針キャップを具備した針付プレフィルドシリンジ（薬液充填前）を説明するための模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明において、「キャップ」とは、針付プレフィルドシリンジ製剤の注射針を保護し、無菌的に覆うことを目的とした「針キャップ」あるいは「シリンジキャップ」のことであり、これら三つの用語は本明細書において文脈に応じて互換的に同義に使用される。キャップは、製造時の装着や使用時の取り外しが可能なように、注射器本体に着脱可能に取り付けられる。さらに、キャップは、注射針を密封するように、注射器本体あるいは注射針と注射器本体のコネクタ部分に密着して取り付けられる。
【００２５】
本発明の針キャップを具備した針付プレフィルドシリンジの一例を図１に示す。
以下、本発明の一実施形態に係る、針キャップを具備した針付プレフィルドシリンジ製剤について説明する。
【００２６】
本発明に係る針付シリンジは、内部に薬剤が充填可能な注射器本体と、前記注射器本体の先端に取り付けられた注射針と、前記注射器本体に着脱可能に取り付けられたシリンジキャップであって、前記注射針を覆う、通気性のほとんどないシリンジキャップとを含むことを特徴とする。かかる構成によれば、長期に乾燥状態におかれたプレフィルドシリンジのCloggingを防止することができる。
【００２７】
プレフィルドシリンジのCloggingとは、薬液が針内部で乾燥し、使用時に排出困難となる現象である。したがって、Cloggingを防止するためには、シリンジキャップ（針キャップ）は、少なくとも針先を覆う部分の素材が、気体透過性が小さいもの、特に水蒸気透過性の少ない素材で形成されることが好ましい。
【００２８】
水蒸気透過性は、公知の試験法で評価することができる。例えば、水蒸気透過性の値は、所定の温度および湿度の条件で単位時間に単位面積の試験片を通過する水蒸気の量として表すことができる。公知の規格として日本工業規格のJIS K 7126-1：2006の「プラスチック―フィルム及びシート―ガス透過度試験方法―第１部：差圧法（Plastics -- Film and sheeting -- Determination of gas-transmission rate -- Part 1: Differential-pressure method）」、またはISO 2528の「シート状材料−水蒸気透過率試験方法−重量(ディッシュ)法（Sheet materials -- Determination of water vapour transmission rate -- Gravimetric (dish) method）」が挙げられる。
【００２９】
例えば、JIS 7126-1：2006によれば、本発明で使用されるシリンジキャップの水蒸気透過性は、製剤保管条件下、例えば5℃で、0.1 g/m2・Day以下、あるいは0.05 g/m2・Day以下、あるいは0.01 g/m2・Day以下が好ましい値である。または、25℃で、0.2 g/m2・Day以下、あるいは0.1 g/m2・Day以下が好ましい値である。または、40℃で、0.2 g/m2・Day以下、あるいは0.1 g/m2・Day以下が好ましい値である。
【００３０】
あるいは、プレフィルドシリンジの製造時から使用時までの保管状態の温度範囲（約５℃〜約４０℃）において、水蒸気透過性の低いことが好ましく、上述のISO2528又は JIS K 7126-1：2006に従う試験条件で、5℃で0.1 g/m2・Day以下、且つ25℃で、0.2 g/m2・Day以下、且つ40℃で、0.2 g/m2・Day以下であることが、より好ましい。
【００３１】
本発明の針キャップの素材としては、注射器本体に着脱可能、且つ注射器本体に密着可能な、弾性を有し、且つ水蒸気透過性の少ない材料である必要があり、具体的にはブチルゴム（IIR）等が挙げられる。
【００３２】
ブチルゴムは、ノルマルブチルゴムの他、ブロモブチルゴム（BIIR）やクロロブチルゴム（CIIR）等のハロゲン化ブチルゴムであってもよい。
キャップの構造としては、上述の材料がチューブ状に形成されており、一端が閉鎖し他端が注入針あるいは注射器本体の外周を密着して取り囲んで取り付け可能な開口部を有していれば特に制限はない。単層、複層、その他の構造のいずれでもよい。また、開口部の内側には、キャップを脱着するための溝や突起が付されていてもよい。キャップは、針先から注射器本体である外筒の一端までを覆うように取り付けられても、あるいは、針先から注射針と注射器本体のコネクタ部分までを覆うように取り付けられてもよい。
【００３３】
本発明のシリンジの注射器本体の素材としては、特に限定はされず、通常シリンジで使用可能な素材であればいかなるものでもよい。具体的には、ガラスや樹脂製のものであればよい。
【００３４】
本発明のプレフィルドシリンジをγ線などの放射線で滅菌処理を行う場合、注射器本体の素材は放射線による影響（着色、劣化など）の影響を受け難い素材が好ましい。具体的には、シクロオレフィン系樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂等の樹脂が挙げられ、特に好ましくはCOP（Cyclic Olefin Polymer: シクロオレフィンポリマー）、COC（Cyclic Olefin Copolymer: シクロオレフィンコポリマー）などのシクロオレフィン系樹脂である。このようなシリンジは、特に、工業生産で大量製造する際に用いられるトレイフィラー充填用のシリンジとして使用するのに適している。
【００３５】
本発明のシリンジの容量のサイズ（規格）は特に限定されない。具体的には、容量が０．５ｍＬ〜５．０ｍＬ、好ましくは１ｍLのような容量の小さいサイズのシリンジの場合に本発明の有利な効果が顕著である。
【００３６】
注射針のサイズも特に限定されない。具体的には、外径0.2 〜0.5mm、内径0.1 〜 0.3mmが好ましい。典型的な注射針のゲージは２５（外径0.50 〜0.53mm）、２６（外径0.44 〜0.47mm）、２７（外径0.40 〜0.42mm）、２８（外径0.34 〜0.37mm）、２９（外径0.32 〜0.35mm）、３０（外径0.29 〜0.32mm）、３１（外径0.25 〜0.27mm）、３２（外径0.22 〜0.24mm）又は３３Ｇ（外径0.20 〜0.22mm）であるが、本発明はこのサイズに限定されるものではない。
【００３７】
本発明のプレフィルドシリンジ製剤は、典型的には自己注射用製剤である。かかる構成によれば、プレフィルドシリンジ製剤の使用者が、医療従事者ではなく、患者自身であって、本発明のプレフィルドシリンジ製剤を不適切に長期放置したとしても、Clogging が起こるリスクを軽減化できる。
【００３８】
本発明においてCloggingの程度は、後述の実施例に記載の方法で判定される。
例えば、本発明のプレフィルドシリンジ製剤は、４０℃−８％ＲＨで４週間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、４０℃−８％ＲＨで６週間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、４０℃−８％ＲＨで２ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、４０℃−８％ＲＨで３ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、４０℃−８％ＲＨで４ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、４０℃−８％ＲＨで５ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、４０℃−８％ＲＨで６ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。
【００３９】
さらに、例えば、本発明のプレフィルドシリンジ製剤は、２５℃−７％ＲＨで４週間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、２５℃−７％ＲＨで６週間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、２５℃−７％ＲＨで２ヶ月保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、２５℃−７％ＲＨで２ヶ月保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、２５℃−７％ＲＨで３ヶ月保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、２５℃−７％ＲＨで４ヶ月保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、２５℃−７％ＲＨで５ヶ月保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、２５℃−７％ＲＨで６ヶ月保管された場合でも、Cloggingが起こらない。
【００４０】
さらに、例えば、本発明のプレフィルドシリンジ製剤は、５℃−２５％ＲＨで１ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、５℃−２５％ＲＨで２ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、５℃−２５％ＲＨで３ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、５℃−２５％ＲＨで６ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、５℃−２５％ＲＨで９ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、５℃−２５％ＲＨで１２ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、５℃−２５％ＲＨで１８ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。あるいは、５℃−２５％ＲＨで２４ヶ月間保管された場合でも、Cloggingが起こらない。
【００４１】
次に、本発明の別の実施形態に係る、針キャップを具備した針付プレフィルドシリンジ製剤の製造について説明する。
針キャップを具備した針付プレフィルドシリンジ製剤の製造において、一般的にはトレイフィラーを用いて薬液の充填を行うため、滅菌処理は薬液充填前に、例えば事前にシリンジメーカーにおいて、行われる。針付シリンジの組み立ては、注射器本体の先端に注射針を取り付けてから、当該注射針を覆うようにキャップ（シリンジキャップあるいは針キャップ）を取り付けることにより行われる。次いで、キャップを嵌めた状態の針付シリンジを、滅菌するのに十分な時間、放射線または電子線を照射することにより滅菌する。放射線滅菌の最も一般的な形態はガンマ線照射であり、線源としてはコバルト60などが用いられるが、これに限定はされない。ガンマ線は透過力に優れているため、梱包形態の制限がなく、線量のバラツキも少なく、ブチルコム製のキャップを装着した状態でも注射針の滅菌が可能である。放射線の線量は、滅菌対象である物体の量に依存し、典型的にはガンマ放射線の吸収線量として約10kGy〜60kGy、好ましくは約25kGy〜50kGyが照射される。滅菌の後、無菌環境下で注射器本体に薬液が充填され、次いで、プランジャが装着される。さらに、当該針付プレフィルドシリンジ製剤は、小包装単位で（例えば一本毎に）ピロー包装されることもある。
【００４２】
本発明の針付プレフィルドシリンジ製剤は、特に、皮下注用などの高濃度の蛋白質溶液に適用することが好ましい。本発明において、蛋白質溶液とは、有効成分として生理活性蛋白質を含む溶液製剤である。
【００４３】
蛋白質溶液中の生理活性蛋白質の濃度は50mg/ml以上が好ましい。
生理活性蛋白質としては抗体が好ましい。
高濃度の抗体を含有する抗体含有溶液製剤が特に好ましい。
【００４４】
本発明において、抗体含有溶液製剤とは、活性成分として抗体を含み、ヒト等の動物に投与できるように調製された溶液製剤で、好ましくは製造過程に凍結乾燥工程を含まないで製造された溶液製剤を言う。
【００４５】
本発明の一態様は、高濃度抗体含有溶液製剤が、針付プレフィルドシリンジに溶液状態で充填され、上述の注射器本体に上述のシリンジキャップが着脱可能に取り付けられた、自己注射用の皮下注製剤である。
【００４６】
本発明の高濃度抗体含有溶液製剤は、抗体濃度が５０ｍｇ／ｍＬ以上であるものをいい、８０ｍｇ／ｍＬ以上であるものが好ましく、さらには１００ｍｇ／ｍＬ以上であるものが好ましく、１２０ｍｇ／ｍＬ以上であるものがさらに好ましく、１５０ｍｇ／ｍＬがさらに好ましい。
【００４７】
また、本発明の抗体含有溶液製剤の抗体濃度の上限は、製造の観点から、一般的に３００ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは２５０ｍｇ／ｍＬであり、さらに好ましくは２００ｍｇ／ｍＬである。よって、本発明の高濃度抗体溶液製剤の抗体濃度は５０〜３００ｍｇ／ｍＬが好ましく、さらに１００〜３００ｍｇ／ｍＬが好ましく、さらに１２０〜２５０ｍｇ／ｍＬが好ましく、特に１５０〜２００ｍｇ／ｍＬが好ましい。
【００４８】
本発明に使用される抗体は、所望の抗原と結合する限り特に制限はなく、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよいが、均質な抗体を安定に生産できる点でモノクローナル抗体が好ましい。
【００４９】
本発明で使用されるモノクローナル抗体としては、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ヒツジ、ラクダ、サル等の動物由来のモノクローナル抗体だけでなく、キメラ抗体、ヒト化抗体、bispecific抗体など人為的に改変した遺伝子組み換え型抗体も含まれる。さらに、血中滞留性や体内動態の改善を目的とした抗体分子の物性の改変（具体的には、等電点（pI）改変、Fc受容体の親和性改変等）を行うために抗体の定常領域等を人為的に改変した遺伝子組み換え型抗体も含まれる。
【００５０】
また、本発明で使用される抗体の免疫グロブリンクラスは特に限定されるものではなく、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4などのIgG、IgA、IgD、IgE、IgMなどいずれのクラスでもよいが、IgG及びIgMが好ましい。
【００５１】
さらに本発明で使用される抗体には、定常領域と可変領域を有する抗体（wholeの抗体）だけでなく、Fv、Fab、F(ab)2などの抗体断片や、抗体の可変領域をペプチドリンカー等のリンカーで結合させた1価または2価以上の一本鎖Fv（scFv、sc(Fv)2）やscFvダイマーなどのDiabody等などの低分子化抗体なども含まれるが、wholeの抗体が好ましい。
【００５２】
上述した本発明で使用される抗体は、当業者に周知の方法により作製することができる。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、基本的には公知技術を使用し、以下のようにして作製できる。すなわち、所望の抗原や所望の抗原を発現する細胞を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞（ハイブリドーマ）をスクリーニングすることによって作製できる。ハイブリドーマの作製は、たとえば、ミルステインらの方法（Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73: 3-46 ）等に準じて行うことができる。抗原の免疫原性が低い場合には、アルブミン等の免疫原性を有する巨大分子と結合させ、免疫を行えばよい。
【００５３】
また、抗体遺伝子をハイブリドーマからクローニングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主に導入し、遺伝子組換え技術を用いて産生させた遺伝子組換え型抗体を用いることができる（例えば、Carl, A. K. Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 参照）。具体的には、ハイブリドーマのmRNAから逆転写酵素を用いて抗体の可変領域（V領域）のcDNAを合成する。目的とする抗体のV領域をコードするDNAを得たら、これを所望の抗体定常領域（C領域）をコードするDNAと連結し、これを発現ベクターへ組み込む。または、抗体のV領域をコードするDNAを、抗体C領域のDNAを含む発現ベクターへ組み込んでもよい。発現制御領域、例えば、エンハンサー、プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させることができる。
【００５４】
本発明では、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ（Chimeric）抗体、ヒト化（Humanized）抗体などを使用できる。これらの改変抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。キメラ抗体は、ヒト以外の哺乳動物、例えば、マウス抗体の重鎖、軽鎖の可変領域とヒト抗体の重鎖、軽鎖の定常領域からなる抗体であり、マウス抗体の可変領域をコードするDNAをヒト抗体の定常領域をコードするDNAと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得ることができる。
【００５５】
ヒト化抗体は、再構成（reshaped）ヒト抗体とも称され、ヒト以外の哺乳動物、たとえばマウス抗体の相補性決定領域（CDR; complementarity determining region）をヒト抗体の相補性決定領域へ移植したものであり、その一般的な遺伝子組換え手法も知られている。具体的には、マウス抗体のCDRとヒト抗体のフレームワーク領域（framework region；FR）を連結するように設計したDNA配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからPCR法により合成する。得られたDNAをヒト抗体定常領域をコードするDNAと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得られる（欧州特許出願公開番号EP 239400、WO 96/02576 参照）。CDRを介して連結されるヒト抗体のFRは、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Sato, K.et al., Cancer Res. (1993) 53, 851-856）。
【００５６】
抗体の活性、物性、薬物動態、安全性等を改善するために抗体のアミノ酸を置換する技術としては、例えば以下に述べる技術も知られており、本発明で使用される抗体には、このようなアミノ酸の置換（欠損や付加も含む）を施された抗体も含まれる。
【００５７】
IgG抗体の可変領域にアミノ酸置換を施す技術は、ヒト化（Tsurushita N, Hinton PR, Kumar S., Design of humanized antibodies: from anti-Tac to Zenapax., Methods. 2005 May;36(1):69-83.）をはじめとして、結合活性を増強させるための相補性決定領域(CDR)のアミノ酸置換によるaffinity maturation（Rajpal A, Beyaz N, Haber L, Cappuccilli G, Yee H, Bhatt RR, Takeuchi T, Lerner RA, Crea R., A general method for greatly improving the affinity of antibodies by using combinatorial libraries., Proc Natl Acad Sci U S A. 2005 Jun 14;102(24):8466-71.）、フレームワーク(FR)のアミノ酸置換による物理化学的安定性の向上（Ewert S, Honegger A, Pluckthun A., Stability improvement of antibodies for extracellular and intracellular applications: CDR grafting to stable frameworks and structure-based framework engineering., Methods. 2004 Oct;34(2):184-99. Review）が報告されている。また、IgG抗体のFc領域のアミノ酸置換を施す技術として、抗体依存性細胞障害活性(ADCC)活性や補体依存性細胞障害活性(CDC)活性を増強させる技術が知られている（Kim SJ, Park Y, Hong HJ., Antibody engineering for the development of therapeutic antibodies., Mol Cells. 2005 Aug 31;20(1):17-29. Review.）。さらに、このようなエフェクター機能を増強させるだけではなく、抗体の血中半減期を向上させるFcのアミノ酸置換の技術が報告されている（Hinton PR, Xiong JM, Johlfs MG, Tang MT, Keller S, Tsurushita N., An engineered human IgG1 antibody with longer serum half-life., J Immunol. 2006 Jan 1;176(1):346-56.、Ghetie V, Popov S, Borvak J, Radu C, Matesoi D, Medesan C, Ober RJ, Ward ES., Increasing the serum persistence of an IgG fragment by random mutagenesis., Nat Biotechnol. 1997 Jul;15(7):637-40.）。さらには抗体の物性改善を目的とした定常領域の種々のアミノ酸置換技術も知られている（WO 09/41613）。
【００５８】
また、ヒト抗体の取得方法も知られている。例えば、ヒトリンパ球をin vitroで所望の抗原または所望の抗原を発現する細胞で感作し、感作リンパ球をヒトミエローマ細胞、例えばU266と融合させ、抗原への結合活性を有する所望のヒト抗体を得ることもできる（特公平1-59878 参照）。また、ヒト抗体遺伝子の全てのレパートリーを有するトランスジェニック動物を抗原で免疫することで所望のヒト抗体を取得することができる（WO 93/12227, WO 92/03918、WO 94/02602, WO 94/25585、WO 96/34096, WO 96/33735参照）。さらに、ヒト抗体ライブラリーを用いて、パンニングによりヒト抗体を取得する技術も知られている。例えば、ヒト抗体の可変領域を一本鎖抗体（scFv）としてファージディスプレイ法によりファージの表面に発現させ、抗原に結合するファージを選択することができる。選択されたファージの遺伝子を解析すれば、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするDNA配列を決定することができる。抗原に結合するscFvのDNA配列が明らかになれば、当該配列を含む適当な発現ベクターを作製し、ヒト抗体を取得することができる。これらの方法は既に周知であり、WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, WO 95/15388を参考にすることができる。本発明で使用される抗体には、このようなヒト抗体も含まれる。
【００５９】
抗体遺伝子を一旦単離し、適当な宿主に導入して抗体を作製する場合には、適当な宿主と発現ベクターの組み合わせを使用することができる。真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞、真菌細胞を用いることができる。動物細胞としては、(1) 哺乳類細胞、例えば、CHO, COS、ミエローマ、BHK （baby hamster kidney）、HeLa、Vero、(2) 両生類細胞、例えば、アフリカツメガエル卵母細胞、あるいは(3) 昆虫細胞、例えば、sf9, sf21, Tn5などが知られている。植物細胞としては、ニコティアナ（Nicotiana)属、例えばニコティアナ・タバカム（Nicotiana tabacum)由来の細胞が知られており、これをカルス培養すればよい。真菌細胞としては、酵母、例えば、サッカロミセス（Saccharomyces）属、例えばサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces serevisiae）、糸状菌、例えば、アスペルギルス（Aspergillus）属、例えばアスペスギルス・ニガー（Aspergillus niger）などが知られている。原核細胞を使用する場合、細菌細胞を用いる産生系がある。細菌細胞としては、大腸菌（E. coli）、枯草菌が知られている。これらの細胞に、目的とする抗体遺伝子を形質転換により導入し、形質転換された細胞をin vitroで培養することにより抗体が得られる。
【００６０】
さらに、本発明で使用される抗体には、抗体修飾物が含まれる。例えば、ポリエチレングリコール（PEG）や細胞障害性薬剤等の各種分子と結合した抗体を使用することもできる（Farmaco. 1999 Aug 30;54(8):497-516.、Cancer J. 2008 May-Jun;14(3):154-69.）。本発明で使用される抗体にはこれらの抗体修飾物も包含される。このような抗体修飾物は、抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。これらの方法はこの分野において既に確立されている。
【００６１】
本発明で使用される抗体としては、抗組織因子抗体、抗IL-6レセプター抗体、抗IL-6抗体、抗グリピカン-3抗体、抗CD3抗体、抗CD20抗体、抗GPIIb/IIIa抗体、抗TNF抗体、抗CD25抗体、抗EGFR抗体、抗Her2/neu抗体、抗RSV抗体、抗CD33抗体、抗CD52抗体、抗IgE抗体、抗CD11a抗体、抗VEGF抗体、抗VLA4抗体、抗HM1.24抗原抗体、抗副甲状腺ホルモン関連ペプチド抗体（抗PTHrP抗体）、抗ガングリオシドGM3抗体、抗TPO受容体アゴニスト抗体、凝固第VIII因子代替抗体、抗IL31レセプター抗体、抗HLA抗体、抗AXL抗体、抗CXCR4抗体、抗NR10抗体、ファクターIXとファクターXとのBi-specific抗体などを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００６２】
本発明で使用する好ましい再構成ヒト化抗体としては、ヒト化抗インターロイキン６（IL-6）レセプター抗体（トシリツマブ、hPM-1あるいはMRA、WO92/19759参照）、ヒト化抗HM1.24抗原モノクローナル抗体（WO98/14580参照）、ヒト化抗副甲状腺ホルモン関連ペプチド抗体（抗PTHrP抗体）（WO98/13388を参照）、ヒト化抗組織因子抗体（WO99/51743参照）、抗グリピカン-3 ヒト化IgG1κ抗体（codrituzumab、GC33、WO2006/006693参照）、抗NR10ヒト化抗体（WO2009/072604参照）、ファクターIXとファクターXとのBi-specific
ヒト化抗体（ACE910、WO2012/067176を参照）などが挙げられる。本発明で使用するヒト化抗体として特に好ましいのは、ヒト化抗IL-6レセプター抗体、抗NR10ヒト化抗体、及びファクターIXとファクターXとのBi-specificヒト化抗体である。
【００６３】
ヒトIgM抗体としては、抗ガングリオシドGM3組み換え型ヒトIgM抗体（WO05/05636参照）などが好ましい。
低分子化抗体としては、抗TPO受容体アゴニストDiabody（WO02/33072参照）、抗CD47アゴニストDiabody（WO01/66737参照）などが好ましい。
【００６４】
本発明において等電点の低い抗体（低pI抗体）とは、特に天然では存在し難い、低い等電点を有する抗体をいう。このような抗体の等電点としては例えば3.0〜8.0、好ましくは5.0〜7.5、さらに好ましくは5.0〜7.0、特に好ましくは5.0〜6.5が挙げられるがこれらに限定されない。なお、天然の（または通常の）抗体は、通常7.5〜9.5の範囲の等電点を有すると考えられる。
【００６５】
さらに本発明で使用される抗体としては、抗体の表面に露出しているアミノ酸残基を改変することにより抗体のpIを低下させた、pI改変抗体が好ましい。このようなpI改変抗体とは、改変前の抗体のpIよりも1以上、好ましくは2以上、さらに好ましくは3以上、pIを低下させた抗体をいう。このようなpI改変抗体としては、例えば、WO2009/041621に記載された抗IL-6レセプター抗体であるSA237（MAb1、H鎖／配列番号：１、L鎖／配列番号：２）、抗NR10ヒト化抗体であり、WO2009/072604の実施例12に記載の方法で作製した、完全ヒト化NS22抗体などがあげられるがこれらに限定されない。
【００６６】
抗体の表面に露出しているアミノ酸残基としては、H鎖可変領域の場合、Kabatナンバリングに基づくアミノ酸残基であるH1, H3, H5, H8, H10, H12, H13, H15, H16, H19, H23, H25, H26, H31, H39, H42, H43, H44, H46, H61, H62, H64, H65, H68, H71, H72, H73, H75, H76, H81, H82b, H83, H85, H86, H105, H108, H110, H112の中から選択されるアミノ酸残基が挙げられるがこれらに限定されない。またＬ鎖可変領域の場合、Kabatナンバリングに基づくアミノ酸残基であるL1, L3, L7, L8, L9, L11, L12, L16, L17, L18, L20, L22, L24, L27, L38, L39, L41, L42, L43, L45, L46, L49, L53, L54, L55, L57, L60, L63, L65, L66, L68, L69, L70, L74, L76, L77, L79, L80, L81, L85, L100, L103, L105, L106, L107の中から選択されるアミノ酸残基が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６７】
本発明において「改変」とは、元のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基へ置換すること、元のアミノ酸残基を欠失させること、新たなアミノ酸残基を付加すること等をいうが、好ましくは、元のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基へ置換することを指す。
【００６８】
アミノ酸の中には、電荷を帯びたアミノ酸が存在することが知られている。一般的に、正の電荷を帯びたアミノ酸（正電荷アミノ酸）としては、リジン（K）、アルギニン（R）、ヒスチジン（H）が知られている。負の電荷を帯びたアミノ酸（負電荷アミノ酸）としては、アスパラギン酸（D）、グルタミン酸（E）等が知られている。これら以外のアミノ酸は電荷を有さないアミノ酸として知られている。
【００６９】
本発明において改変後のアミノ酸残基としては、好ましくは、以下の（ａ）または（ｂ）いずれかの群に含まれるアミノ酸残基から適宜選択されるが、特にこれらのアミノ酸に制限されない。
（ａ）グルタミン酸（E）、アスパラギン酸（D）
（ｂ）リジン（K）、アルギニン（R）、ヒスチジン（H）
また、改変前のアミノ酸残基が既に電荷を有する場合、電荷を有さないアミノ酸残基となるように改変することも好ましい態様の一つである。
【００７０】
すなわち、本発明における改変としては、（１）電荷を有するアミノ酸から電荷を有さないアミノ酸への置換、（２）電荷を有するアミノ酸から当該アミノ酸とは反対の電荷を有するアミノ酸への置換、（３）電荷を有さないアミノ酸から電荷を有するアミノ酸への置換が挙げられる。
【００７１】
等電点の値は、当業者公知の等電点電気泳動により測定することが可能である。また、理論等電点の値は、遺伝子およびアミノ酸配列解析ソフトウェア（Genetyx等）を用いて計算することができる。
【００７２】
アミノ酸残基の電荷が改変された抗体は、抗体をコードする核酸を改変し、当該核酸を宿主細胞で培養し、宿主細胞培養物から抗体を精製することによって取得することができる。本発明において「核酸を改変する」とは、改変によって導入されるアミノ酸残基に対応するコドンとなるよう核酸配列を改変することをいう。より具体的には、改変前のアミノ酸残基のコドンが改変によって導入されるアミノ酸残基のコドンになるように、核酸の塩基配列を改変することを言う。即ち、改変されるアミノ酸残基をコードするコドンは、改変によって導入されるアミノ酸残基をコードするコドンによって置換される。このような核酸の改変は、当業者においては公知の技術、例えば、部位特異的変異誘発法、PCR変異導入法等を用いて、適宜行うことが可能である。
【００７３】
本発明の蛋白質含有溶液製剤において使用する緩衝液は、溶液のｐＨを維持するための物質である緩衝剤を使用して調製する。本発明の高濃度抗体含有溶液製剤においては、溶液のｐＨが４〜８であることが好ましく、５．０〜７．５であることがより好ましく、５．５〜７．２であることがさらに好ましく、６．０〜６．５であることがなおさらに好ましい。本発明で使用可能な緩衝剤は、この範囲のｐＨを調整でき、且つ医薬的に許容可能なものである。このような緩衝剤は溶液製剤の分野で当業者に公知であり、例えば、リン酸塩（ナトリウムまたはカリウム）、炭酸水素ナトリウムなどの無機塩；クエン酸塩（ナトリウムまたはカリウム）、酢酸ナトリウム、コハク酸ナトリウムなどの有機酸塩；または、リン酸、炭酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、グルコン酸などの酸類を使用できる。さらに、Ｔｒｉｓ類及びＭＥＳ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳのようなグッド緩衝剤、ヒスチジン（例えばヒスチジン塩酸塩）、グリシンなどを使用してもよい。
【００７４】
本発明の高濃度抗体含有溶液製剤においては、緩衝液がヒスチジン緩衝液またはグリシン緩衝液であることが好ましく、特にヒスチジン緩衝液が好ましい。緩衝液の濃度は、一般には１〜５００ｍＭであり、好ましくは５〜１００ｍＭであり、さらに好ましくは１０〜２０ｍＭである。ヒスチジン緩衝液を使用する場合、緩衝液は好ましくは５〜２５ｍＭのヒスチジン、さらに好ましくは１０〜２０ｍＭのヒスチジンを含有する。
【００７５】
本発明の高濃度抗体含有溶液製剤は、有効成分である抗体にとって適切な安定化剤を添加することによって、安定化されることが好ましい。本発明の「安定な」高濃度抗体含有溶液製剤は、冷蔵温度（２〜８℃）で少なくとも１２ヶ月、好ましくは２年間、さらに好ましくは３年間；または室温（２２〜２８℃）で少なくとも３ヶ月、好ましくは６ヶ月、さらに好ましくは１年間、有意な変化が観察されない。例えば、５℃で２年間保存後の二量体量及び分解物量の合計が５.０％以下、好ましくは２％以下、さらに好ましくは１．５％以下、あるいは２５℃で６ヶ月保存後の二量体量及び分解物量の合計が５.０％以下、好ましくは２％以下、さらに好ましくは１．５％以下である。
【００７６】
本発明の製剤は、さらに界面活性剤を含有することができる。
界面活性剤としては、非イオン界面活性剤、例えばソルビタンモノカプリレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート等のソルビタン脂肪酸エステル；グリセリンモノカプリレート、グリセリンモノミリテート、グリセリンモノステアレート等のグリセリン脂肪酸エステル；デカグリセリルモノステアレート、デカグリセリルジステアレート、デカグリセリルモノリノレート等のポリグリセリン脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレンソルビタントリステアレート等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビットテトラステアレート、ポリオキシエチレンソルビットテトラオレエート等のポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル；ポリオキシエチレングリセリルモノステアレート等のポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールジステアレート等のポリエチレングリコール脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンラウリルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルエーテル；ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンプロピルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル等のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル；ポリオキシエチエレンノニルフェニルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル；ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン水素ヒマシ油）等のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油；ポリオキシエチレンソルビットミツロウ等のポリオキシエチレンミツロウ誘導体；ポリオキシエチレンラノリン等のポリオキシエチレンラノリン誘導体；ポリオキシエチレンステアリン酸アミド等のポリオキシエチレン脂肪酸アミド等のＨＬＢ６〜１８を有するもの；陰イオン界面活性剤、例えばセチル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、オレイル硫酸ナトリウム等の炭素原子数１０〜１８のアルキル基を有するアルキル硫酸塩；ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム等の、エチレンオキシドの平均付加モル数が２〜４でアルキル基の炭素原子数が１０〜１８であるポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩；ラウリルスルホコハク酸エステルナトリウム等の、アルキル基の炭素原子数が８〜１８のアルキルスルホコハク酸エステル塩；天然系の界面活性剤、例えばレシチン、グリセロリン脂質；スフィンゴミエリン等のフィンゴリン脂質；炭素原子数１２〜１８の脂肪酸のショ糖脂肪酸エステル等を典型的例として挙げることができる。本発明の製剤には、これらの界面活性剤の１種または２種以上を組み合わせて添加することができる。
【００７７】
好ましい界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル及びポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルであり、特に好ましいのはポリソルベート２０、２１、４０、６０、６５、８０、８１、８５並びにプルロニック（登録商標）型界面活性剤であり、最も好ましいのはポリソルベート２０、８０及びプルロニックＦ−６８（ポロキサマー１８８）である。
【００７８】
本発明の抗体製剤に添加する界面活性剤の添加量は、一般には０．０００１〜１０％（ｗ／ｖ）であり、好ましくは０．００１〜５％であり、さらに好ましくは０．００５〜３％である。
【００７９】
本発明の製剤には、必要に応じて、懸濁剤、溶解補助剤、等張化剤、保存剤、吸着防止剤、希釈剤、賦形剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤、含硫還元剤、酸化防止剤等を適宜添加することができる。
【００８０】
懸濁剤の例としては、メチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート等を挙げることができる。
【００８１】
溶液補助剤としては、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マグロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステル等を挙げることができる。
【００８２】
等張化剤としては例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム等を挙げることができる。
保存剤としては例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾール等を挙げることができる。
【００８３】
吸着防止剤としては例えば、ヒト血清アルブミン、レシチン、デキストラン、エチレンオキサイド・プロピレンオキサイド共重合体、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール等を挙げることができる。
【００８４】
含硫還元剤としては例えば、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−アセチルホモシステイン、チオクト酸、チオジグリコール、チオエタノールアミン、チオグリセロール、チオソルビトール、チオグリコール酸及びその塩、チオ硫酸ナトリウム、グルタチオン、炭素原子数１〜７のチオアルカン酸等のスルフヒドリル基を有するもの等が挙げられる。
【００８５】
酸化防止剤としては例えば、エリソルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、α−トコフェロール、酢酸トコフェロール、Ｌ−アスコルビン酸及びその塩、Ｌ−アスコルビン酸パルミテート、Ｌ−アスコルビン酸ステアレート、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリアミル、没食子酸プロピルあるいはエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、ピロリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム等のキレート剤が挙げられる。
【００８６】
本発明の抗体含有プレフィルドシリンジ溶液製剤は、皮下注、静注、筋注などで投与される。皮下注射用としては、1回あたりの抗体投与量が大量となる一方で(80〜200mg-程度)、注射液量の制限があるため、本発明の製剤は皮下注射用として特に適している。
【００８７】
好ましくは、本発明の抗体含有溶液製剤の浸透圧比は、約０．５〜４、より好ましくは、約０．７〜２、さらに好ましくは、約１である。
好ましくは、本発明の抗体含有溶液製剤の粘度は、約２〜１００ｍＰａ・ｓ、さらに好ましくは約２〜５０ｍＰａ・ｓ、さらに好ましくは約４〜５０ｍＰａ・ｓ、さらに好ましくは約６〜５０ｍＰａ・ｓである。ただし，ここで測定した本発明の粘度はコーンプレート型粘度計を用いた回転粘度計法（第15改正  日本薬局方  一般試験法 2.53 粘度測定法）で測定したものである。
また本願実施例から明らかなように、抗体等の蛋白質含有溶液の粘度が６ｍＰａ・ｓ以上、好ましくは１２ｍＰａ・ｓ以上、さらに好ましくは２０ｍＰａ・ｓ以上、さらに好ましくは５０ｍＰａ・ｓ以上である場合、シリンジの針からキャップを外して短時間（１０分以内）で針の目詰まり（Clogging）が生じることが判明した。従って、本発明のタンパク質溶液の粘度が６〜１００ｍＰａ・ｓ、好適には１２〜１００ｍＰａ・ｓ、さらに好適には２０〜１００ｍＰａ・ｓ、さらに好適には５０〜１００ｍＰａ・ｓである場合、本発明のシリンジキャップは必須となる。
蛋白質濃度が同じであっても、製剤中の抗体以外の成分の処方により、粘度が変化することがあり、粘度の上昇に伴いCloggingのリスクが上昇する。本発明のプレフィルドシリンジに封入される高濃度抗体溶液製剤の一態様として、抗体濃度が１００〜３００ｍｇ／ｍＬで、粘度が６〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１００〜３００ｍｇ／ｍＬで、粘度が１２〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１００〜３００ｍｇ／ｍＬで、粘度が２０〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１００〜３００ｍｇ／ｍＬで、粘度が５０〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１２０〜２５０ｍｇ／ｍＬで、粘度が６〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１２０〜２５０ｍｇ／ｍＬで、粘度が１２〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１２０〜２５０ｍｇ／ｍＬで、粘度が２０〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１２０〜２５０ｍｇ／ｍＬで、粘度が５０〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１５０〜２００ｍｇ／ｍＬで、粘度が６〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１５０〜２００ｍｇ／ｍＬで、粘度が１２〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１５０〜２００ｍｇ／ｍＬで、粘度が２０〜１００ｍＰａ・ｓ；抗体濃度が１５０〜２００ｍｇ／ｍＬで、粘度が５０〜１００ｍＰａ・ｓである溶液製剤が挙げられる。
【００８８】
本発明で使用される高濃度抗体含有溶液製剤において、抗体は、好ましくはヒト化抗体またはヒト抗体である抗インターロイキン-６レセプター抗体である。ヒト化抗インターロイキン-６レセプター抗体は好ましくはトシリズマブである。
【００８９】
ヒト化抗インターロイキン-６レセプター抗体を有効成分とする高濃度抗体含有溶液製剤の例は後述の実施例で使用されたアクテムラ皮下注薬液である。アクテムラ皮下注薬液は、日本では180mg/mLに高濃度化した皮下注製剤が承認され、容量0.9mLの針付シリンジに有効成分として162mgの抗体（トシリズマブ（遺伝子組み換え））、界面活性剤としてポリソルベート８０、安定化剤としてアルギニン及びメチオニンを含有する自己注射可能なプレフィルドシリンジ製剤が市販されているものの、薬液収納部である注射器本体はガラス製であり、シリンジキャップの材質としてはガス滅菌を可能とするために通気性のあるイソプレンゴムが用いられている。そのため、ピローフィルムとしては通気性の低い材料を用いて、薬液の蒸散を防いでいる。
【００９０】
本発明を以下の実施例によってさらに詳しく説明するが、本発明の範囲はこれらのみに限定されるものではない。
【実施例】
【００９１】
実施例１
透湿性が極めて低いゴムキャップ（材質：クロロブチルゴム）を装着して放射線(２５kGy)滅菌した27G針付ＣＯＰ製シリンジ(1ｍｌ規格)内に、無菌的に抗体含有溶液(トシリツマブ:180mg/mL、緩衝剤：20mmol/Lヒスチジン、安定化剤：100mmol/Lアルギニン及び30mmol/Lメチオニン、界面活性剤：0.2mg/mL ポリソルベート80、pH 6.0、粘度：約8mPa/s) 0.9ｍｌを充填、ストッパーで打栓し、低湿度保存下（40度6カ月、25度6カ月及び5度24カ月まで）保管後のClogging評価を実施した。
【００９２】
また、対照として、透湿性のあるゴムキャップ（材質：イソプレン）を装着してガス滅菌した27G針付ガラス製シリンジ(1ｍｌ規格)内に、同様に抗体含有溶液を0.9ｍｌ充填したものを用いた。
【００９３】
Clogging評価方法
各試料をオートグラフの所定位置にセットし，あらかじめオートグラフに固定した注射針付きシリンジに対する排出操作を行い，プランジャーストッパーにかかる負荷を排出速度100mm/minの条件で測定した。Cloggingの定義は，試料排出時に排出されない、あるいは通常の排出と比較し，負荷応力が異常な高値を示したものをCloggingと判断した。
【００９４】
評価結果
低湿度保存下（40度6カ月、25度6カ月及び5度24カ月まで）において、以下表の通りCloggingが発生しないことを確認した。一方で、透湿性のあるゴムキャップを用いた場合、40℃-8%RHの4weeks保管品で100%(3/3)のCloggingが認められた。
【００９５】
【表１】
2020195789.tif 000003
実施例２
蛋白質濃度が同じであっても、粘度の違いによってCloggingの発生頻度が変化する可能性を検証すべく、蛋白質濃度が同じで粘度が異なる2種類の抗体含有溶液を調製し、Cloggingの発生頻度を比較した。使用した抗体（Mab1)は、WO 2009/041621に記載された抗IL-6レセプター抗体（WO2011/090088中でもMab1と称する）である。当該抗体のアミノ酸配列はH鎖／配列番号：１、L鎖／配列番号：２で表され、これらの配列はWO2011/090088に記載されている。
抗体濃度は180mg/mLとし、処方は20mmol/Lヒスチジン、140mmol/Lアルギニン、アスパラギン酸（適量）、pH 6.0（試料A），または，20mmol/Lヒスチジン、20mmol/Lアルギニン、アスパラギン酸及び塩酸（適量）、pH 6.0（試料B）とした。
粘度評価方法
EMS粘度計（京都電子）（J Artif Organs. 16:359-367 (2013)）にて各試料の粘度h (mPa×s)を測定した。実験温度は25℃とした。測定結果を表2に記す。
Clogging評価方法
27G針付ＣＯＰ製シリンジ(1ｍｌ規格)に各抗体含有溶液を1.0ｍｌ充填し、ストッパーで打栓した。針内を抗体含有溶液で満たした状態でゴムキャップを装着せずに室温にて0分、10分、30分、及び60分放置した各試料をオートグラフの所定位置にセットし、排出速度100mm/minの条件でプランジャーストッパーにかかる負荷を測定した。Cloggingの定義は、試料排出時に排出されない、あるいは通常の排出と比較し、負荷応力が異常な高値を示したものをCloggingと判断した。各タイムポイントにつきN=3で測定し、Cloggingの発生頻度を求めた。測定結果を表2に記す。
評価結果
蛋白質濃度が同じであっても、粘度の上昇に伴いCloggingのリスクが上昇することが確認された。
【表２】
2020195789.tif 000004
【図１】
2020195789.tif 000005
【配列表】
2020195789000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年8月31日(2020.8.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
針付シリンジに蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤であって、
針付シリンジは、注射器本体と、注射器本体の先端に取り付けられた注射針と、注射針を覆うシリンジキャップとを含み、
シリンジキャップは、少なくとも針先を覆う部分がブチルゴムで形成されていること、および
蛋白質溶液の粘度は2〜100mPa・sであること
を特徴とする、針付プレフィルドシリンジ製剤。
【請求項２】
ブチルゴムが、ノルマルブチルゴムまたはハロゲン化ブチルゴムである、請求項１記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項３】
注射器本体が樹脂製である、請求項１または２に記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項４】
注射器本体がシクロオレフィン系の樹脂製である、請求項３記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項５】
シクロオレフィン系の樹脂がＣＯＰまたはＣＯＣである、請求項４記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項６】
蛋白質が抗体である、請求項１〜５のいずれかに記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項７】
抗体が抗IL6受容体抗体である、請求項６記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項８】
抗体がトシリツマブである、請求項７記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項９】
抗体が、配列番号：１の配列を有する重鎖および配列番号：２の配列を有する軽鎖を含む抗体である、請求項７記載のプレフィルドシリンジ製剤。
【請求項１０】
以下の工程を含む、蛋白質溶液を封入した針付プレフィルドシリンジ製剤の製造方法：
１）針に、5℃で0.1 g/m2・Day以下、または25℃で0.2 g/m2・Day以下、または40℃で0.2g/m2・Day以下である水蒸気透過性の値を有する素材で形成されたキャップを具備した針付シリンジを放射線または電子線で滅菌する工程；
２）無菌的に、当該針付シリンジに蛋白質溶液を封入する工程、ここで蛋白質溶液の粘度が2〜100mPa・sである。
【請求項１１】
シリンジキャップの水蒸気透過性が、5℃で0.1 g/m2・Day以下、または25℃で0.2 g/m2・Day以下、または40℃で0.2 g/m2・Day以下である、請求項１〜９のいずれかに記載のプレフィルドシリンジ製剤。