(57)【要約】【課題】内部に分離材を収容する細胞分離フィルター装置であって良好な細胞回収率を達成可能な細胞分離フィルター装置と、当該細胞分離フィルター装置を用いる工程を含む細胞濃縮液の製造方法とを提供すること。【解決手段】周壁部と、第１壁部と、第２壁部と、分離材とを備える細胞分離フィルター装置において、第１壁部と第２壁部とにそれぞれ第１押え部と第２押え部とを設け、第１押え部と、第２押え部とで、細胞分離フィルター装置内に充填された分離材の、周壁部の内面に沿って位置する環状領域を挟み込んで圧縮し、周壁部の内面と環状領域の外周との最短距離をＬ１とし、周壁部の内部空間の径方向の断面積から算出される、周壁部の内部空間の断面の円相当径をＬ２とする場合に、Ｌ１をＬ２の１．００％以上７．７５％以下とする。【選択図】図１
2020195330.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィルター容器と、前記フィルター容器内に充填された分離材とを備える細胞分離フィルター装置であって、
前記フィルター容器が、筒状の周壁部と、前記周壁部の一端側の開口を閉鎖する第１壁部と、前記周壁部の他端側の開口を閉鎖する第２壁部と、を備え、
前記分離材は、前記周壁部の内面との間に隙間が形成されないように、前記フィルター容器内に充填されており、
前記第１壁部には、第１通液口が形成されており、
前記第２壁部には、第２通液口が形成されており、
前記第１壁部の内面に、第１突起部と、第１押え部とが形成されており、
前記第２壁部の内面に、第２押え部が形成されており、
前記第１突起部は、前記フィルター容器内に前記分離材が充填されたときに、前記第２壁部と協働して前記分離材を挟み込んで圧縮し、
前記第１押え部と、前記第２押え部とは、前記フィルター容器内に充填された前記分離材の、前記周壁部の内面に沿って位置する環状領域を挟み込んで圧縮し、
前記周壁部の内面と前記環状領域の外周との最短距離をＬ１とし、前記周壁部の内部空間の径方向の断面積から算出される、前記周壁部の内部空間の断面の円相当径をＬ２とする場合に、前記Ｌ１が前記Ｌ２の１．００％以上７．７５％以下である、細胞分離フィルター装置。
【請求項２】
前記Ｌ１が前記Ｌ２の１．００％以上３．５０％以下である、請求項１に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項３】
前記第１押え部の前記分離材を押圧する面の幅Ｗ１と、前記第２押え部の前記分離材を押圧する面の幅Ｗ２とが、それぞれＬ２の０．７５％以上６．００％以下である、請求項１又は２に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項４】
前記第１押え部の前記分離材を押圧する面の幅Ｗ１と、前記第２押え部の前記分離材を押圧する面の幅Ｗ２とが、それぞれＬ２の３．００％以上６．００％以下である、請求項１又は２に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項５】
前記第１押え部の前記分離材を押圧する面の幅が、前記第２押え部の前記分離材を押圧する面の幅よりも狭い、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項６】
前記周壁部の内部空間についての、前記第１壁部の主面及び前記第２壁部の主面に沿った断面の面積が１６．０５ｃｍ２以上であり、
前記第１突起部が、複数の第１突起からなり、
前記第１突起部と前記第１壁部の中心との距離は、１０．００ｍｍ以下であり、
前記複数の第１突起のうちの隣接する前記第１突起の最大距離が３６．７４ｍｍ以下である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項７】
前記第２壁部の内面に、前記第１突起部と協働して前記分離材を挟み込んで圧縮する第２突起部が形成されている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項８】
前記周壁部の内部空間についての、前記第１壁部の主面及び前記第２壁部の主面に沿った断面の面積が１６．０５ｃｍ２以上であり、
前記第２突起部が、複数の第２突起からなり、
前記第２突起部と前記第２壁部の中心との距離は、１０．００ｍｍ以下であり、
前記複数の第２突起部のうちの隣接する第２突起部の最大距離が３６．７４ｍｍ以下である、請求項７に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項９】
前記第１突起部が、複数の第１突起からなり、
前記第２突起部が、複数の第２突起からなり、
前記複数の第１突起の各々は、前記第１壁部の中央部に対して放射状に延在し、
前記複数の第１突起は、前記第１押え部に沿って配列されており、
前記複数の第２突起の各々は、前記第２壁部の中央部に対して放射状に延在し、
前記複数の第２突起は、前記第２押え部に沿って配列されている、請求項７又は８に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項１０】
前記第１突起の数、及び、前記第２突起の数が、それぞれ独立に、３本以上１０本以下である、請求項９に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項１１】
前記周壁部と前記第１壁部とが一体的に形成されている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項１２】
前記分離材が不織布又は多孔質セルロース粒子を含む多孔質体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の細胞分離フィルター装置。
【請求項１３】
細胞を含む細胞含有液を、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の細胞分離フィルター装置内に、前記第１通液口及び前記第２通液口のうちの一方の通液口から導入して前記分離材を通過させることで、前記細胞を前記分離材に捕捉させることと、
前記細胞分離フィルター装置内に回収液を導入し、前記分離材に捕捉された前記細胞を前記回収液中に遊離させて細胞濃縮液を生じさせることと、
前記細胞濃縮液を前記細胞分離フィルター装置内から回収することと、を含む細胞濃縮液の製造方法。
【請求項１４】
前記回収液を、前記第１通液口及び前記第２通液口のうちの他方の通液口から導入し、前記細胞濃縮液を前記一方の通液口から回収する、請求項１３に記載の細胞濃縮液の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離フィルター装置と、当該細胞分離フィルター装置を用いる工程を含む細胞濃縮液の製造方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、血液学や科学テクノロジーの急速な進歩に伴い、全血・骨髄・臍帯血・組織抽出物をはじめとする体液から必要な血液分画のみを分離して患者に投与することで治療効果を高め、さらに、治療に必要のない分画は投与しないことで副作用を抑制する、という治療スタイルが広く普及している。
【０００３】
例えば、血液輸血もその１つである。赤血球製剤は、出血や赤血球が不足する場合、又は赤血球の機能低下により酸素が欠乏している場合に使用される血液製剤である。赤血球製剤には、異常な免疫反応や移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）等の副作用を誘導する白血球は不要であり、フィルターで白血球を除去する必要がある。場合によっては白血球に加えて血小板も除去することもある。
【０００４】
一方、血小板製剤は、血液凝固因子の欠乏による出血ないし出血傾向にある患者に使用される血液製剤である。血小板製剤の製造のためには、遠心分離により、血小板以外の不要な細胞や成分は除去され、必要とされる血小板成分のみが採取されている。
【０００５】
加えて近年、白血病や固形癌治療に向けた造血幹細胞移植が盛んに行われるようになり、治療に必要な、造血幹細胞を含む白血球群を分離し投与する方法がとられている。この造血幹細胞のソースとして、ドナーの負担が少ない、増殖能力が優れている、等の利点から、骨髄や末梢血に加えて臍帯血も注目を浴びている。また近年、月経血中にも幹細胞が豊富に存在することが示唆され、これまで廃棄されていた月経血も貴重な幹細胞ソースとして利用される可能性がある。
【０００６】
骨髄や末梢血に関して、不要な細胞を除き白血球を分離・純化して投与することが望まれている一方で、臍帯血についても血縁者のためのバンキングが盛んになり、使用時まで凍結保存する必要性から、凍結保存による赤血球溶血を防ぐことを目的に白血球は分離・純化されている。
【０００７】
細胞分離方法として、最近では、赤血球と血小板は捕捉されず白血球のみを捕捉するフィルター材料を用いて白血球を回収する方法も報告されている（特許文献１、特許文献２、及び特許文献３を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００１−５１８７９２号公報
【特許文献２】国際公開第９８／３２８４０号
【特許文献３】特開平１０−３１３８５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
特許文献１、特許文献２、及び特許文献３に記載されるようなフィルター材料を分離材として用いて血液等の細胞含有液から細胞を回収する方法において、多くの血液（例えば１００ｍＬ超）を一度に処理する場合に、血液中の血球細胞やタンパク、夾雑物等による分離材の目詰まりの影響が大きい。分離材に目詰まりが生じると、回収液による細胞の逆洗回収時に、細胞分離フィルター装置の内部の圧力が急激に上昇する。その際に、フィルター容器が大きく変形することで、フィルター容器と分離材とのシール性が低下する。そうすると、フィルター容器と分離材との間に隙間ができ、回収液が偏流したりショートパスしたりすることで細胞回収率が低下する問題があった。
以上のように、細胞の回収率には未だ改良の余地があり、より優れた細胞回収率の達成が可能な細胞分離フィルター装置が求められている。
【００１０】
上記のような事情に鑑み、本発明の目的は、内部に分離材を収容する細胞分離フィルター装置であって良好な細胞回収率を達成可能な細胞分離フィルター装置と、当該細胞分離フィルター装置を用いる工程を含む細胞濃縮液の製造方法とを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者は、かかる課題を解決すべく、鋭意検討を進めた。その結果、周壁部と、第１壁部と、第２壁部と、分離材とを備える細胞分離フィルター装置において、第１壁部と第２壁部とにそれぞれ第１押え部と第２押え部とを設け、第１押え部と、第２押え部とで、細胞分離フィルター装置内に充填された分離材の、周壁部の内面に沿って位置する環状領域を挟み込んで圧縮し、周壁部の内面と環状領域の外周との最短距離をＬ１とし、周壁部の内部空間の径方向の断面積から算出される、周壁部の内部空間の断面の円相当径をＬ２とする場合に、Ｌ１をＬ２の１．００％以上７．７５％以下とすることによって上記の課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
【００１３】
〔１〕フィルター容器と、フィルター容器内に充填された分離材とを備える細胞分離フィルター装置であって、
フィルター容器が、筒状の周壁部と、周壁部の一端側の開口を閉鎖する第１壁部と、周壁部の他端側の開口を閉鎖する第２壁部と、を備え、
分離材は、周壁部の内面との間に隙間が形成されないように、フィルター容器内に充填されており、
第１壁部には、第１通液口が形成されており、
第２壁部には、第２通液口が形成されており、
第１壁部の内面に、第１突起部と、第１押え部とが形成されており、
第２壁部の内面に、第２押え部が形成されており、
第１突起部は、フィルター容器内に分離材が充填されたときに、第２壁部と協働して分離材を挟み込んで圧縮し、
第１押え部と、第２押え部とは、フィルター容器内に充填された前記分離材の、前記周壁部の内面に沿って位置する環状領域を挟み込んで圧縮し、
周壁部の内面と環状領域の外周との最短距離をＬ１とし、周壁部の内部空間の径方向の断面積から算出される、周壁部の内部空間の断面の円相当径をＬ２とする場合に、Ｌ１がＬ２の１．００％以上７．７５％以下である、細胞分離フィルター装置。
【００１４】
〔２〕Ｌ１がＬ２の１．００％以上３．５０％以下である、〔１〕に記載の細胞分離フィルター装置。
【００１５】
〔３〕第１押え部の分離材を押圧する面の幅Ｗ１と、第２押え部の分離材を押圧する面の幅Ｗ２とが、それぞれＬ２の０．７５％以上６．００％以下である、〔１〕又は〔２〕に記載の細胞分離フィルター装置。
【００１６】
〔４〕第１押え部の分離材を押圧する面の幅Ｗ１と、第２押え部の分離材を押圧する面の幅Ｗ２とが、それぞれＬ２の３．００％以上６．００％以下である、〔１〕又は〔２〕に記載の細胞分離フィルター装置。
【００１７】
〔５〕第１押え部の分離材を押圧する面の幅が、第２押え部の分離材を押圧する面の幅よりも狭い、〔１〕〜〔４〕のいずれか１つに記載の細胞分離フィルター装置。
【００１８】
〔６〕周壁部の内部空間についての、第１壁部の主面及び第２壁部の主面に沿った断面の面積が１６．０５ｃｍ２以上であり、
第１突起部が、複数の第１突起からなり、
第１突起部と第１壁部の中心との距離は、１０．００ｍｍ以下であり、
複数の第１突起のうちの隣接する第１突起の最大距離が３６．７４ｍｍ以下である、請求項〔１〕〜〔５〕のいずれか１つに記載の細胞分離フィルター装置。
【００１９】
〔７〕第２壁部の内面に、第１突起部と協働して分離材を挟み込んで圧縮する第２突起部が形成されている、〔１〕〜〔６〕のいずれか１つに記載の細胞分離フィルター装置。
【００２０】
〔８〕周壁部の内部空間についての、第１壁部の主面及び前記第２壁部の主面に沿った断面の面積が１６．０５ｃｍ２以上であり、
第２突起部が、複数の第２突起からなり、
第２突起部と第２壁部の中心との距離は、１０．００ｍｍ以下であり、
複数の第２突起部のうちの隣接する第２突起部の最大距離が３６．７４ｍｍ以下である、〔７〕に記載の細胞分離フィルター装置。
【００２１】
〔９〕第１突起部が、複数の第１突起からなり、
第２突起部が、複数の第２突起からなり、
複数の第１突起の各々は、第１壁部の中央部に対して放射状に延在し、
複数の第１突起は、第１押え部に沿って配列されており、
複数の第２突起の各々は、第２壁部の中央部に対して放射状に延在し、
複数の第２突起は、第２押え部に沿って配列されている、〔７〕又は〔８〕に記載の細胞分離フィルター装置。
【００２２】
〔１０〕第１突起部の数、及び、第２突起部の数は、それぞれ独立に、３本以上１０本以下である、〔９〕に記載の細胞分離フィルター装置。
【００２３】
〔１１〕周壁部と第１壁部とが一体的に形成されている、〔１〕〜〔１０〕のいずれか１つに記載の細胞分離フィルター装置。
【００２４】
〔１２〕分離材が不織布又は多孔質セルロース粒子を含む多孔質体である、〔１〕〜〔１１〕のいずれか１つに記載の細胞分離フィルター装置。
【００２５】
〔１３〕細胞を含む細胞含有液を、〔１〕〜〔１２〕のいずれか１つに記載の細胞分離フィルター装置内に、第１通液口及び第２通液口のうちの一方の通液口から導入して分離材を通過させることで、細胞を分離材に捕捉させることと、
細胞分離フィルター装置内に回収液を導入し、分離材に捕捉された細胞を回収液中に遊離させて細胞濃縮液を生じさせることと、
細胞濃縮液を細胞分離フィルター装置内から回収することと、を含む細胞濃縮液の製造方法。
【００２６】
〔１４〕回収液を第１通液口及び第２通液口の他方の通液口から導入し、細胞濃縮液を一方の通液口から回収する、〔１３〕に記載の細胞濃縮液の製造方法。
【発明の効果】
【００２７】
本発明によれば、内部に分離材を収容する細胞分離フィルター装置であって良好な細胞回収率を達成可能な細胞分離フィルター装置と、当該細胞分離フィルター装置を用いる工程を含む細胞濃縮液の製造方法とを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】周壁部近傍において、第１押え部と第２押え部とにより分離材の環状領域が圧縮された状態を模式的に示す、細胞分離フィルター装置の断面図である。
【図２】本発明の実施形態に係る細胞分離フィルター装置を示す斜視図である。
【図３】図１の細胞分離フィルター装置の分解斜視図である。
【図４Ａ】図１のＩＩＩ−ＩＩＩ線断面図である。
【図４Ｂ】図４Ａの分解断面図である。
【図５】図３の分離材収容部（特に、底部（第１壁部））を内面側からみた平面図である。
【図６】図３の蓋部（第２壁部）を内面側からみた平面図である。
【図７】実施例及び比較例で用いた細胞分離用デバイスの回路の概略を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
以下、本発明の実施形態について、必要に応じて図面を参照しつつ説明する。
【００３０】
≪細胞分離フィルター装置≫
細胞分離フィルター装置１は、フィルター容器２と、フィルター容器２内に充填された分離材５とを備える。以下、「細胞分離フィルター装置」を、「フィルター装置」とも記す。以下、「フィルター容器」を、「容器」とも記す。
フィルター装置１では、フィルター装置１内に、分離対象の細胞を含有する細胞含有液を通液させることにより、分離材５に分離対象の細胞が捕捉される。分離材５に補足された細胞は、フィルター装置１内に細胞回収液を導入することにより、分離材５から遊離され、回収される。
フィルター装置１では、フィルター容器２が後述する構成を備えることによって、高い回収率で細胞含有液から目的の細胞を回収することができる。
【００３１】
＜フィルター容器＞
フィルター容器２は、筒状の周壁部３０と、第１壁部１０と、第２壁部２０とを備える。第１壁部１０は、筒状の周壁部３０の一端側の開口を閉鎖する。第２壁部２０は、筒状の周壁部３０の、第１壁部１０により閉鎖される開口に対して、他端側の開口を閉鎖する。
【００３２】
第１壁部１０と、第２壁部２０とは、周壁部３０と一体化して形成されていてもよく、周壁部３０と別体であってもよい。ただし、フィルター容器２内に分離材５を充填するために、通常、第１壁部１０と、第２壁部２０との少なくとも一方は、周壁部から着脱可能であるように、周壁部３０と別体として設けられる。
【００３３】
かかる容器２内に、後述する細胞を分離するための分離材５が、周壁部３０の内面との間に隙間が形成されないように、容器２内に充填される。細胞回収液が、分離材５を通過せず、周壁部３０の内面と分離材５との隙間を細胞含有液がショートパスすることによる細胞回収率の低下を防ぐためである。
【００３４】
第１壁部１０には、第１通液口１１が形成されている。第２壁部２０には、第２通液口２１が形成されている。第１通液口１１、及び第２通液口２１の数は特に限定されない。第１通液口１１は、第１壁部１０に、１つ形成されても、２以上形成されてもよい。容器２の製造が容易であったり、フィルター装置１に細胞含有液を供給するためのチューブ（図１において不図示）を接続する操作が容易であったりすることから、第１通液口１１は、第１壁部１０に１つ形成されるのが好ましい。第２壁部２０における第２通液口２１の数は、第１壁部１０における第１通液口１１の数と同様である。
【００３５】
容器２の製造が容易であったり、分離材５に対して細胞含有液を均等に供給しやすかったりすることから、第１通液口１１と、第２通液口２１とは、それぞれ、第１壁部１０及び第２壁部２０の主面の中心又は略中心に開口を有するように１つ形成されるのが好ましい。
ここで、第１壁部１０の主面及び第２壁部２０の主面とは、容器２における空間に分離材５が充填されたときに、第１壁部１０及び第２壁部２０の分離材５に対向するか接する面を表す。
また、主面の中心とは、主面の形状が円である場合、当該円の中心である。主面の形状が凸多角形である場合、当該凸多角形に内接する円の中心を、主面の中心とする。
【００３６】
第１通液口１１、及び第２通液口２１の形状は、フィルター装置１内へ液体を導入入可能であり、フィルター装置１内の液体をフィルター装置１外に排出可能であれば特に限定されない。フィルター装置１内外に液体を流通させるためのチューブの接続が容易であることから、第１通液口１１、及び第２通液口２１は、それぞれノズルで構成されるのが好ましい。ノズルの形状や大きさについては特に限定はない。
【００３７】
第１壁部１０の内面には、第１突起部１２と、第１押え部１３とが形成されている。第２壁部２０の内面には、第２押え部２３が形成されている。
第１突起部１２は、第２壁部２０と協働して分離材５を挟み込んで圧縮する。これにより、分離材５は全体的に圧縮される。
さらに、分離材５において、第１突起部１２に当接する領域やその近傍の領域では分離材５の密に圧縮される。他方、第１突起部１２と当接しない領域では、分離材５が緩む。
【００３８】
このように、分離材５の全体、すなわち内層が圧縮されつつ、分離材５に密な部分と弛んだ部分とが形成されることにより、分離材５の弛んだ部分に細胞を捕捉しやすい。そのため、細胞の捕捉後に、フィルター装置１内に回収液を導入した際に、分離材５から細胞を回収液内に容易に遊離させることができる。
【００３９】
第１突起部１２は、周壁部３０の内面に沿って環状に形成された第１押え部１３により支持されるのが好ましい。
第１突起部１２の数は、所望する程度に分離材５を圧縮できる限り特に限定されない。第１突起部１２が複数形成される場合、第１突起部１２は、等間隔で配置されてもよいし、不規則に配置されてもよい。分離材５にむらなく細胞を含む液体を浸透させやすい点からは、第１突起部１２が、等間隔で配置されるのが好ましい。
【００４０】
第１突起部１２の形状は、直線であってもよく、曲線であってもよい。例えば、第１突起部１２の形状は、円弧状でもよく、Ｓ字状でもよく、ジグザグ状でもよい。また、第１突起部の形状は、放射状のみならず、分離材５に細胞含有液を浸透させる隙間を有する格子状、ドット状であってもよい。
【００４１】
第２壁部２０の内面にも、第１壁部１０と同様に、第２突起部２２が形成されているのが好ましい。第２突起部２２は、第１突起部１２と協働して分離材５を挟み込んで圧縮する。この場合、分離材５の第２突起部２２と当接する面にも、上記の粗密が形成される。
分離材５に捕捉された細胞は、容器２内に細胞回収液を供給することによって、分離材５から細胞回収液内に遊離されることで回収される。
分離材５の第２突起部２２と当接する面にも、粗密が形成されると、細胞回収液が分離材５の粗の部分から分離材５の中心部に向けて流入しやすく、分離材５に捕捉された細胞を良好に遊離させやすい。
【００４２】
第２突起部２２の数や形状については、第１突起部１２と同様である。
【００４３】
第１押え部１３と、第２押え部２３とは、容器内に充填された分離材５の、周壁部３０の内面に沿って位置する環状領域を挟み込んで圧縮する。
環状領域５０は、周壁部３０の内面と環状領域５０の外周との最短距離をＬ１とし、周壁部３０の内部空間の径方向の断面積から算出される、周壁部３０の内部空間の断面の円相当径をＬ２とする場合に、Ｌ１がＬ２の１．００％以上７．７５％以下であるように圧縮される。所望する細胞の回収率を高めやすい点から、Ｌ１はＬ２の１．００％以上３．５０％以下であるのが好ましい。
Ｌ１の具体的な長さとしては、例えば、０．５０ｍｍ以上６．００ｍｍ以下が好ましく、０．８０ｍｍ以上５．００ｍｍ以下がより好ましく、１．００ｍｍ以上４．００ｍｍ以下がさらに好ましい。
Ｌ１について、Ｌ２に対する比率が上記の範囲内であり、且つ、Ｌ１の具体的な長さが上記の範囲内であるのが特に好ましい。
Ｌ２の具体的な長さとしては、例えば、４０．００ｍｍ以上８０．００ｍｍ以下が好ましく、４５．００ｍｍ以上７０．００ｍｍ以下がより好ましい。
【００４４】
分離材５は細孔を有するため、圧縮により分離材５の寸法がある程度変化する。
ここで、Ｌ１がＬ２に対して小さすぎると、分離材５の端部が圧縮されることで、分離材５の端部が分離材５の主面の中央側に向かって引き込まれる。そうすると、周壁部３０と、分離材５の端部との間に隙間が生じ、分離材５によるシール性が低下する。この場合、細胞含有液や回収液が、周壁部３０と分離材５との間をショートパスすることにより、所望する細胞の回収率が低下しやすい。
他方、Ｌ１及びＬ２が上記の要件を満たすように、第１押え部１３と第２押え部２３とに挟み込まれて分離材５の外周部付近の環状領域５０が圧縮されると、図１に示されるように、分離材５の面方向に対して垂直な断面を観察した場合に、分離材５の環状領域５０よりも周壁部３０側の端部が扇形に広がる。
このような理由から、分離材５の環状領域５０が圧縮された場合に、分離材５の厚さ方向の中央部付近では、分離材５の端部が周壁部３０に押し付けられるように分離材５が変形する。
【００４５】
このように、フィルター装置１を用いて細胞含有液内の細胞を分離材５に捕捉させる際に、分離材５が環状領域５０の外側に適度にはみ出した状態で環状領域５０が圧縮されることで、分離材５が周壁部３０に押し付けられることにより、分離材５の主面の中心側から周壁部３０の近傍へ向かって流れる細胞含有液や回収液が、周壁部３０と分離材５との間の極狭い隙間を通過してショートパスしたり、編流が生じることによる細胞回収率の低下を抑制できる。
結果として、上記の所定の構成を備えるフィルター装置１を用いることにより、細胞含有液から、高い回収率で目的の細胞を回収することができる。
【００４６】
ここで、Ｌ１のＬ２に対する比率が小さすぎると、Ｌ１が短すぎるため、分離材５の変形量が小さく、周壁部３０と分離材５との間の極狭い隙間を通過することによる、細胞含有液のショートパスを抑制しにくい。
他方、Ｌ１のＬ２に対する比率が大きすぎると、分離材５の主面において、第１押え部１３及び第２押え部２３よりも内側の面積が減少するため、分離材５の利用効率が低下する。
【００４７】
第１押え部１３の分離材５を押圧する面の幅Ｗ１と、第２押え部２３の分離材５を押圧する面の幅Ｗ２とは、それぞれ前述のＬ２の０．７５％以上６．００％以下であるのが好ましく、３．００％以上６．００％以下であるのがより好ましい。
第１押え部１３の分離材５を押圧する面の幅Ｗ１と、第２押え部２３の分離材５を押圧する面の幅Ｗ２とは、それぞれ、０．５０ｍｍ以上３．５０ｍｍ以下であるのが好ましく、２．００ｍｍ以上３．５０ｍｍ以下であるのがより好ましい。
Ｗ１及びＷ２について、Ｌ２に対する比率が上記の範囲内であり、且つ、Ｗ１及びＷ２の幅の値が上記の範囲内であるのが特に好ましい。
上記の幅は広いほど、細胞含有液の周壁部３０付近へのショートパスを抑制しやすいが、上記の幅が広すぎると分離材５の利用効率が低下する。この点、上記の範囲内の幅であると、過度に分離材５の利用効率を低くすることなく、細胞含有液のショートパスの抑制について十分な効果を得やすい。
【００４８】
第１押え部１３の分離材５を押圧する面の幅は、第２押え部２３の分離材５を押圧する面の幅よりも狭いのが好ましい。
ここで、容器２内について、細胞回収液通液時に第２通液口２１から導入する細胞回収液の圧力により、周壁部３０の内面と第１押え部１３との間の溝に応力が集中して、容器２の溝近傍が変形してしまうおそれがある。
しかし、第１押え部１３の分離材５を押圧する面の幅が、第２押え部２３の分離材５を押圧する面の幅よりも狭いと、このような応力の集中を緩和させやすい。
【００４９】
容器２を構成する各部材は、任意の構造材料を使用して作製することができる。構造材料としては、具体的には非反応性ポリマー、生体親和性金属、合金、ガラス等が挙げられる。非反応性ポリマーとしては、アクリロニトリルブタジエンスチレンターポリマー（ＡＢＳ）等のアクリルニトリルポリマー；ポリテトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン、テトラフルオロエチレンとヘキサフルオロプロピレンのコポリマー、ポリ塩化ビニル等のハロゲン化ポリマー；ポリアミド、ポリイミド、ポリスルホン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニルクロリドアクリルコポリマー、ポリカーボネートアクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリスチレン、ポリメチルペンテン等が上げられる。容器２の材料として有用な金属材料（生体親和性金属、合金）としては、ステンレス鋼、チタン、白金、タンタル、金、及びそれらの合金、並びに金メッキ合金鉄、白金メッキ合金鉄、コバルトクロミウム合金、窒化チタン被覆ステンレス鋼等が挙げられる。特に好ましくは、耐滅菌製を有する素材である。具体的には、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリスルホン、ポリメチルペンテン等が挙げられる。
【００５０】
＜分離材＞
分離材５の形態は、特に限定されず、連通孔構造の多孔質体、繊維の集合体、織物等が挙げられる。好ましくは多孔質セルロース粒子を含む多孔質体である。また、好ましくは繊維で構成される織布又は不織布であり、より好ましくは不織布である。
【００５１】
分離材５の材質としては、例えば、ポリオレフィン（例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、高密度ポリエチレン、及び低密度ポリエチレン等）、ポリエステル、塩化ビニル、ポリビニルアルコール、塩化ビニリデン、レーヨン、ビニロン、ポリスチレン、アクリル系樹脂（例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクロニトリル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート等）、ナイロン（例えば、脂肪族ポリアミド、芳香族ポリアミド（アラミド））、ポリウレタン、ポリイミド、キュプラ、ケブラー、カーボン、フェノール樹脂、テトロン、パルプ、麻、セルロース、ケナフ、キチン、キトサン、ガラス、綿等を挙げることができる。中でも、ポリエステル、ポリプロピレン、アクリル、レーヨン、ナイロン、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレンテレフタレート等の高分子を好適に用いることができる。分離材５は、これらの材質のうち、単一の材質からなってもよいし、複数の材質を組み合わせた複合材からなってもよい。
【００５２】
分離材５の平均繊維径としては、目的の細胞の種類に合わせて適宜選択すればよく特に限定はない。
【００５３】
分離材５の性能をより向上させるために、分離材５に親水化処理を行ってもよい。
親水化処理により、目的とする必要細胞以外の細胞における非特異的な捕捉の抑制、細胞含有液を偏り無く分離材５中に通過させる性能の向上、必要細胞の回収効率向上等の効果が付与され得る。
【００５４】
親水化処理方法としては、
水溶性多価アルコール、又は水酸基やカチオン基、アニオン基を有するポリマー、あるいはその共重合体（例えば、ヒドロキシエチルメタクリレート、ジメチルアミノエチルメタクリレート、あるいはその共重合体等）を吸着させる方法；
水溶性高分子（ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等）を吸着させる方法；
疎水性膜に親水性高分子を固定する方法（例えば、表面に親水性モノマーを化学的に結合させる方法等）；
電子線照射する方法；
含水状態で細胞分離フィルターに放射線を照射することで親水性高分子を架橋不溶化する方法；
乾燥状態で熱処理することにより親水性高分子を不溶化し固定する方法；
疎水性膜の表面をスルホン化する方法；
親水性高分子と疎水性ポリマードープとの混合物から膜をつくる方法；
アルカリ（ＮａＯＨ、ＫＯＨ等）の水溶液による処理により膜表面に親水基を付与する方法；
疎水性多孔質膜をアルコールに浸漬した後、水溶性ポリマー水溶液で処理乾燥後、熱処理や放射線等で不溶化処理する方法；又は、
界面活性作用を有する物質を吸着させる方法等が挙げられる。
【００５５】
親水性高分子としては、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、エチレン−ビニルアルコール共重合体、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、多糖類（セルロース、キチン、キトサン等）、水溶性多価アルコール等が挙げられる。
【００５６】
疎水性ポリマーとしては、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン（ポリエチレン、ポリプロピレン等）、アクリル、ウレタン、ビニロン、ナイロン、ポリエステル等が挙げられる。
【００５７】
さらに回収目的とする細胞の分離材５への付着性を向上させるために、細胞付着性のタンパク質や、目的とする幹細胞上の発現されている特異的抗原に対する抗体を、分離材５上に固定化してもよい。細胞付着性のタンパク質としては、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、コラーゲン等が挙げられる。抗体としては、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ２７１等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、固定化方法としては、例えば、一般的なタンパク質の固定化方法である、臭化シアン活性化法、酸アジド誘導体法、縮合試薬法、ジアゾ法、アルキル化法、架橋法等の方法を任意に用いることができる。
【００５８】
分離材５の厚さは特に限定されない。分離材５の厚さは、前述の第１突起部１２と第２壁部２０との間隔、又は前述の第１突起部１２と第２突起部２２との間隔を考慮して適宜決定される。前述の第１突起部１２と第２壁部２０との間隔、又は第１突起部１２と第２突起部２２との間隔が４．００ｍｍ〜１２．００ｍｍである場合、分離材５の厚さは７．２０ｍｍ〜２１．６０ｍｍが好ましい。
【００５９】
以上説明した分離材５を、容器２に充填することにより、細胞分離フィルター装置１が構成される。
【００６０】
以下、図２〜図５により、細胞分離フィルター装置１の好ましい一態様について説明する。なお、以下、図２〜図５に示される細胞分離フィルター装置１について説明する種々の構成要件は、形状の制約等により適用不可能な場合を除き、前述の必須の構成要件を備える細胞分離用フィルター装置に、単独で、又は２つ以上の要件を組み合わせて適用可能である。
【００６１】
図２に示されるように、容器２は、分離材収容部３と、分離材収容部３に蓋をする蓋部（第２壁部）２０と、分離材収容部３と蓋部２０とを固定するためのキャップ４０とを備える。
図３に示されるように、かかる容器２内に、不織布等からなる分離材５を収容することにより、フィルター装置１が構成される。
【００６２】
分離材収容部３は、分離材５を充填するための空間を形成する筒状の周壁部３０と、周壁部３０の一端側において空間を閉鎖する底部（第１壁部）１０とが一体的に形成されてなる。以下、分離材収容部について単に「収容部」とも記す。
【００６３】
収容部３の底部１０の主面に沿った断面の形状は円形であっても、多角形のような円形以外の形状であってもよい。
収容部３の形状の好ましい具体例としては、例えば、容量約１〜４００ｍＬ程度、内径４５〜６０ｍｍ程度、厚さ１〜５０ｍｍ程度の円筒状や、容器内側の一片の長さ１〜１００ｍｍ程度の正方形又は長方形で、厚さが１〜５０ｍｍ程度の四角柱状等が挙げられる。
収容部３の周壁部３０の他端側には、空間を閉鎖するために蓋部２０が設けられる。
【００６４】
図３Ａに示されるように、収容部３の底部１０の中央部には、容器２内部に液体を導入するための液体導入口（第１通液口）１１が形成されている。また、蓋部２０の中央部には、容器２から液体を排出するための液体導出口（第２通液口）２１が形成されている。
液体導入口１１及び液体導出口２１は液体を送液するためのチューブを接続しやすくするために、ノズルで構成されている。前記ノズルの形状や大きさについては特に限定はない。
なお、便宜上、液体導入口１１、液体導出口２１と称するが、フィルター装置１の使用時には、液体導入口１１から液体が排出されてもよく、液体導出口２１から液体が導入されてもよい。
【００６５】
蓋部２０は栓型になっており、収容部３の内腔に押し込むことで、収容部３の周壁部３０の内面と接して固定される。
蓋部２０と収容部３の周壁部３０との接触面にはシール８が設けられるのが好ましい。このシール８により、蓋部２０と収容部３との気密性を確実にして、容器２内部からの細胞含有液や細胞回収液の漏れと、外部からの微生物等の侵入を防ぐことができる。シール８としては、例えば、蓋部２０の側面に設けた溝の周囲に樹脂製のパッキン（Ｏリング）を設けることが挙げられるが、シール８の配置や構成については特に限定はない。
【００６６】
蓋部２０は、収容部３に直接固定できるようにしてもよい（図示せず）。蓋部と収容部とが接触する面に、例えば、ネジを設けることで蓋部と収容部とを固定することができる。この場合、図２〜図４Ｂに示すキャップ４０は不要となる。
【００６７】
容器２内では、分離材５が積層されて充填される。例えば、繊維径の異なる分離材５を２層以上積層したフィルターとすることにより、細胞を捕捉する箇所が分散され、目詰まりの発生が抑制されるとともに、フィルターからの細胞の分離・回収も効率的に行うことができる。なお、繊維径が同じ分離材５が連続して積層された部分は、積層された分離材５の枚数によらず１層として扱う。
【００６８】
また、容器２には、液体導入口１１側に独立して分離材５内に留まっている非付着細胞を洗浄するための洗浄液導入口を設けたり（図示せず）、液体導出口２１側に独立して分離材５に捕捉された細胞を回収するための細胞回収液導入口（細胞含有液及び洗浄液の流れとは逆方向から細胞回収液を流すため）を備えていてもよい（図示せず）。
【００６９】
＜容器内の断面の面積＞
容器２内の空間における収容部３の底部（第１壁部）１０の主面、及び、蓋部（第２壁部）２０の主面に沿った断面の面積は、１６．０５ｃｍ２（容器２の径方向の内径Φ４５．２０ｍｍ）以上であるのが好ましい。
より好ましくは、容器２内の空間の断面の面積は、２４．０７ｃｍ２（容器２の内径Φ５５．００ｍｍ）以上３３．１８ｃｍ２（容器２の内径Φ６５．００ｍｍ）以下である。
また、容器２内の空間の断面の面積を、第１突起部１２と第２突起部２２との最小距離（例えば、５ｍｍ〜１２ｍｍ）で除した値が、２０以上６７以下であるのが好ましい。
【００７０】
このように、容器２内の面積、すなわちフィルター装置１内の面積を１６．０５ｃｍ２（内径Φ４５．２０ｍｍ）以上と大きくすることにより、分離材５の目詰まりを低減することができ、分離材５に細胞を効率的に捕捉させやすい。これにより、血液処理量を増加することができるとともに、細胞回収率を向上することができる。
さらに、容器２内の面積、すなわちフィルター装置１内の面積を２４．０７ｃｍ２以上３３．１８ｃｍ２以下（内径Φ５５．００ｍｍ以上Φ６５．００ｍｍ以下）と大きくすることにより、上述した通り、血液処理量を増加することができるとともに、細胞回収率を向上することができる。
【００７１】
なお、容器２内の面積、すなわちフィルター装置１内の面積を５０．２７ｃｍ２（容器２の内径Φ８０．００ｍｍ）とさらに大きくすると細胞回収率が低下する場合がある。これは、分離材５における細胞の捕捉量は増加するが、回収時に所定の圧力で導入される回収液が分離材５の中央部に集中することにより、分離材５の外周部に捕捉された細胞を回収することができないことによるものと考えられる。しかし、この場合でも、分離材５の外周部にも回収液が供給されるように、回収液の供給方法を調整することにより、細胞の回収率を高めることができる。
【００７２】
＜第１突起部＞
図３及び図５に示されるように、収容部３の底部１０の内面には、容器２内の空間に分離材５が充填されたときに、蓋部２０と協働して分離材５を挟み込んで圧縮するように、内面から容器２内の空間に向けて突出する複数の第１突起部１２が形成されている。
第１突起部１２の各々は、収容部３の底部１０の中央部に対して放射状に延在し、第１突起部１２は、収容部３の周壁部３０に沿って配列されている。
第１突起部１２は、周壁部３０に沿って環状に形成された第１押え部１３により支持される。
第１突起部１２は、等間隔で配置されてもよいし、不規則に配置されてもよい。分離材５にむらなく細胞を含む液体を浸透させやすい点からは、第１突起部１２が、等間隔で配置されるのが好ましい。
【００７３】
次に、第１突起部１２のうちの隣接する第１突起部１２間の距離について説明する。隣接する第１突起部１２において、収容部３の底部１０の中央部側の先端間の距離が最小となり、周壁部３０側の端部間の距離が最大となる。これより、以下では、隣接する第１突起部１２の中央側の先端間の距離を「最小距離」と表し、隣接する第１突起部１２の周壁部３０側の端部間の距離を「最大距離」と表す。
【００７４】
図５に示されるように、隣接する第１突起部１２間の最小距離Ａは、液体導入口（第１通液口）１１の内直径（例えば、約２．５ｍｍ）以上であることが好ましい。
より好ましくは、隣接する第１突起部１２の最小距離Ａは、３．７９ｍｍ（後述する中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第１突起部１２の数１０本）以上１３．７４ｍｍ（中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第１突起部１２の数３本）以下である。
また、液体導入口１１の内直径（例えば、約２．５ｍｍ）に対する第１突起部１２の最小距離Ａの比は、１．５（中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第１突起部１２の数１０本）以上５．５（中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第１突起部１２の数３本）以下であるのが好ましい。
【００７５】
このように、隣接する第１突起部１２間の最小距離Ａを液体導入口１１の内直径（例えば、約２．５ｍｍ）以上とすることにより、分離材５を適切に圧縮することができ、分離材５に細胞を効率的に捕捉することができる。また、第１突起部１２の間に血液及び回収液を効率的に通過させることができ、分離材５の中心部から外周部にわたって均一に細胞を捕捉することができる。これらにより、細胞回収率を向上することができる。
さらに、隣接する第１突起部１２の最小距離Ａを３．７９ｍｍ以上１３．７４ｍｍ以下とすることにより、上述した通り、細胞回収率を向上することができる。
【００７６】
また、第１突起部１２と収容部３の底部１０の中心との中心距離、換言すれば第１突起部１２で囲まれる領域の中心半径Ｒは、１０．００ｍｍ以下であるのが好ましい。
この場合、第１突起部１２で分離材５を圧縮する際に、分離材５における第１突起部１２の先端で囲まれる領域の内層を適切に圧縮できる一方で、この領域の不織布を緩めることができる。そのため、この領域において細胞を効率的に捕捉することができ、その結果、細胞回収率を向上することができる。
一方、中心半径が１０．００ｍｍよりも大きくなると、分離材５における第１突起部１２の先端で囲まれる領域の内層を適切に圧縮することができなくなる。そのため、この領域において、細胞が内層まで入り込んでしまい、回収液導入時に回収率が低下することが推測される（後述の実施例を参照）。
【００７７】
また、第１突起部１２の数は、３本（容器２の内径Φ５５．００ｍｍ、後述する第１突起部１２の円周距離Ｃ４０．００ｍｍ）以上１０本（容器２の内径Φ６５．００ｍｍ、第１突起部１２の円周距離Ｃ２０．００ｍｍ）以下であるのが好ましい。
このように、第１突起部１２の数を多くすることにより、分離材５を適切に圧縮することができ、分離材５に細胞を効率的に捕捉することができる。そのため、細胞回収率を向上することができる。
【００７８】
また、第１突起部１２のうちの隣接する第１突起部１２の最大距離Ｂは、３６．７４ｍｍ（容器２の内径Φ６５．００ｍｍ、第１突起部１２の数５本）以下であるのが好ましい。
より好ましくは、隣接する第１突起部１２の最大距離Ｂは、１９．３１ｍｍ（容器２の内径Φ５５．００ｍｍ、第１突起部１２の数１０本）以上３６．７４ｍｍ（容器２の内径Φ６５．００ｍｍ、第１突起部１２の数５本）以下である。
換言すれば、隣接する第１突起部１２の周壁部３０の内面と外面の中間面に沿った円周距離Ｃは、２０．００ｍｍ以上４０．００ｍｍ以下である。
これにより、第１突起部１２の数を多く設けることができ、分離材５を適切に圧縮することができ、分離材５に細胞を効率的に捕捉することができる。そのため、細胞回収率を向上することができる。
【００７９】
以上を踏まえ、より好ましくは、容器２内の空間の断面の面積が２８．２７ｃｍ２（容器２の内径Φ６０．００ｍｍ）において、第１突起部１２の中心半径Ｒが８．７５ｍｍであり、第１突起部１２の数が９本である。すなわち、隣接する第１突起部１２の最小距離Ａは４．４７ｍｍであり、最大距離Ｂは１９．５０ｍｍであるのがより好ましい。
【００８０】
なお、第１突起部１２の、第１突起部１２が突出する方向に対して垂直な断面の形状は、特に限定されない。第１突起部１２と、分離材５とを広い面で接触させやすいことから、典型的には、一辺が分離材５と当接する矩形であるのが好ましい。
【００８１】
第１突起部１２の幅Ｗは、１．５０ｍｍ以上３．５０ｍｍ以下であるのが好ましい。
第１突起部１２の幅が１．５０ｍｍよりも薄くなると、第１突起部１２が分離材５に局所的に食い込んでしまい、全体を適切に圧縮しにくい。
一方、第１突起部１２の幅が３．５０ｍｍよりも厚くなると、細胞回収率が低下しやすい。これは以下の理由による。フィルター装置１を薄くする際、第１突起部１２による分離材５への圧縮応力が小さくなり、分離材５における第１突起部１２が当接する領域が粗くなる。すると、この領域にも細胞が入り込んでしまい、細胞回収の為の回収液通液時にこれらを回収し難くなる。
【００８２】
ここで、容器２内の断面積を大きくすると、細胞回収の為の回収液通液時に液体導出口２１から導入する回収液の圧力により、収容部３の周壁部３０の内面と第１押え部１３との間の溝に応力が集中して、収容部３の溝近傍が変形してしまう可能性がある。収容部３の溝近傍が変形すると、収容部３の第１押え部１３と分離材５の間のシール性が低下して隙間が生じ、この隙間から回収液が偏流する。より具体的には、分離材５における第１押え部１３で圧縮された領域の圧縮度合いが低下し、この領域において回収液が偏流しやすい。そのため、分離材５に捕捉された細胞を回収液によって十分に遊離しにくく、所望する細胞回収率を達成しにくいが低下する可能性がある。
この点に関し、本実施形態によれば、収容部３に適度に多くの第１突起部１２を形成することができ、細胞回収時の回収液の圧力による収容部３の溝近傍の変形を低減することができる。そのため、収容部３の第１押え部１３と分離材５の間におけるシール性の低下を防ぎつつ、カラム強度の維持が可能となる。
【００８３】
＜第２突起部＞
図３及び図６に示すように、蓋部２０の内面には、容器２内の空間に分離材５が充填されたときに、収容部３の底部１０の第１突起部１２と協働して分離材５を挟み込んで圧縮するように、内面から容器２内の空間に向けて突出する複数の第２突起部２２が形成されている。第２突起部２２の形状は、上述した第１突起部１２と同様であればよい。
【００８４】
すなわち、第２突起部２２の各々は、蓋部２０の中央部に対して放射状に延在し、第２突起部２２は、蓋部２０で収容部３に蓋をする際に、収容部３の周壁部３０に沿って配列されるように設けられている。
第２突起部２２は、周壁部３０に沿って環状に形成された第２押え部２３により支持される。
【００８５】
また、図６に示すように、隣接する第２突起部２２間の最小距離Ａは、液体導出口（第２通液口）２１の内直径（例えば、約２．５ｍｍ）以上であるのが好ましい。
好ましくは、隣接する第２突起部２２の最小距離Ａは、３．７９ｍｍ（後述する中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第２突起部２２の数１０本）以上１３．７４ｍｍ（中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第２突起部２２の数３本）以下である。
また、液体導出口２１の内直径（例えば、約２．５ｍｍ）に対する第２突起部２２の最小距離Ａの比は、１．５（中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第２突起部２２の数１０本）以上５．５（中心半径Ｒ８．７５ｍｍ、第２突起部２２の数３本）以下であるのが好ましい。
【００８６】
また、第２突起部２２と蓋部２０の中心との中心距離、換言すれば第２突起部２２で囲まれる領域の中心半径Ｒは、１０．００ｍｍ以下であるのが好ましい。
【００８７】
また、第２突起部２２の数は、３本（容器２の内径Φ５５．００ｍｍ、後述する第２突起部２２の円周距離Ｃ４０．００ｍｍ）以上１０本（容器２の内径Φ６５．００ｍｍ、第２突起部２２の円周距離Ｃ２０．００ｍｍ）以下であるのが好ましい。
【００８８】
また、第２突起部２２のうちの隣接する第２突起部２２の最大距離Ｂは、３６．７４ｍｍ（容器２の内径Φ６５．００ｍｍ、第２突起部２２の数５本）以下であるのが好ましい。
より好ましくは、隣接する第２突起部２２の最大距離Ｂは、１９．３１ｍｍ（容器２の内径Φ５５．００ｍｍ、第２突起部２２の数１０本）以上３６．７４ｍｍ（容器２の内径Φ６５．００ｍｍ、第２突起部２２の数５本）以下である。
また、隣接する第２突起部２２の周壁部３０の内面と外面の中間面に沿った円周距離Ｃは、２０．００ｍｍ以上４０．００ｍｍ以下であるのが好ましい。
【００８９】
ここで、容器２内の断面積を大きくすると、細胞回収の為の回収液通液時に液体導出口２１から導入する回収液の圧力により、蓋部２０が変形してしまう可能性がある。蓋部２０が変形すると、蓋部２０の第２突起部２２と分離材５の間におけるシール性の低下によって隙間が生じ、この隙間から回収液が偏流する（換言すれば、分離材５における第２突起部２２で圧縮された領域の圧縮度合いが低下し、この領域において回収液が偏流する）。そのため、回収液によって分離材５に捕捉された細胞を十分に遊離することができず、細胞回収率が低下する可能性がある。
この点に関し、本実施形態によれば、蓋部２０に適度に多くの第２突起部２２を形成することができ、細胞回収時の回収液の圧力による蓋部２０の変形を低減することができる。そのため、蓋部２０の第２突起部２２と分離材５の間におけるシール性の低下を防ぎつつ、カラム強度の維持が可能となる。
【００９０】
以上を踏まえ、より好ましくは、容器２内の空間の断面の面積が２８．２７ｃｍ２（容器２の内径Φ６０．００ｍｍ）において、第２突起部２２の中心半径Ｒが８．７５ｍｍであり、第２突起部２２の数が９本である。すなわち、隣接する第１突起部１２の最小距離Ａは４．４７ｍｍであり、最大距離Ｂは１９．５０ｍｍである。
【００９１】
また、第２突起部２２の幅Ｗは、１．５０ｍｍ以上３．５０ｍｍ以下であるのが好ましい。
【００９２】
なお、本実施形態では、蓋部２０の内面に第２突起部２２を形成したが、蓋部２０は第２突起部２２を備えなくともよい。この場合、蓋部２０の内面側に、容器２内の空間に分離材５が充填されたときに、分離材５の片面から他方の面に向けて通液可能な状態で分離材５を支持する支持部材が設けられてもよい。支持部材としては、メッシュや目皿等が挙げられる。
【００９３】
以上説明したように、本実施形態の容器２に、後述する分離材５を収容してフィルター装置１を構成することにより、血液処理量を増加することができるとともに、細胞回収率を向上することができる。また、細胞回収時の回収液の圧力による蓋部２０の変形を低減することができ、収容部３の第１押え部１３と分離材５との間、及び、蓋部２０の第２突起部２２と分離材５との間におけるシール性の低下を防ぎつつ、カラム強度の維持が可能となる。
【００９４】
上述した本実施形態では、周壁部３０と底部（第１壁部）１０とが一体的に形成された収容部３、蓋部（第２壁部）２０、及び、キャップ４０とから構成される容器２を例示した。しかし、容器２の構成はこれに限定されない。例えば、収容部３における周壁部３０と底部（第１壁部）１０とが別体であってもよい。具体的には、収容部３は、底部側も開口された筒状の周壁部と、上述した蓋部（第２壁部）２０と同様な底部用蓋部（第１壁部）とから構成されてもよい。この場合、底部用蓋部（第１壁部）に、上述した液体導入口１１と、第１突起部１２と、第１押え部１３とが形成されればよい。
【００９５】
図２〜図４Ｂに示すように、フィルター装置１は、上記の通り、前述の容器２内の空間に、分離材５を充填して構成されている。
【００９６】
≪細胞濃縮液の製造方法≫
以上説明した細胞分離フィルター装置を用いる処理により、所望する細胞を含む細胞濃縮液を好適に製造することができる。
【００９７】
＜細胞＞
対象の細胞は、特に限定されない。例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、間葉系幹細胞、脂肪由来間葉系細胞、脂肪由来間質幹細胞、多能性成体幹細胞、骨髄ストローマ細胞、造血幹細胞等の多分化能を有する生体幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、キラーＴ細胞（細胞障害性Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、制御性Ｔ細胞等のリンパ球系の細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、顆粒球、赤血球、血小板等、神経細胞、筋細胞、線維芽細胞、肝細胞、心筋細胞等の体細胞又は、遺伝子の導入や分化等の処理を行った細胞が挙げられる。
【００９８】
このような細胞の中では、回収率を高める効果が顕著に表れやすいことから白血球、造血幹細胞及び／又は単核球が好ましい。
なお、白血球としては、末梢血中の好中球、好酸球、好塩基球等の顆粒球及び単球、リンパ球等の単核球が挙げられる。
以下、これらの細胞のうちの少なくとも１種類を含む細胞濃縮液を製造する方法を説明する。
【００９９】
＜細胞濃縮液の製造方法＞
細胞を含む細胞濃縮液を製造する好適な方法は、
細胞を含む細胞含有液を、前述のフィルター装置１内に液体導入口１１から導入して分離材５を通過させることで、細胞を分離材５に捕捉させることと、
フィルター装置１内に回収液を導入し、分離材５に捕捉された細胞を回収液中に遊離させて細胞濃縮液を生じさせることと、
細胞含有液をフィルター装置１内から回収することと、
を含む方法である。
【０１００】
細胞含有液としては、白血球及び／又は単核球を含む細胞を含む懸濁液であれば特に限定されず用いることができる。例えば、臍帯等の生体組織を酵素処理や破砕処理や抽出処理や分解処理や超音波処理等をした後の懸濁液、血液や骨髄液、臍帯血等の体液、血液や骨髄液を密度勾配遠心処理やろ過処理や酵素処理や分解処理や超音波処理等の前処理をして調製された細胞懸濁液等が細胞含有液として例示される。
また、細胞含有液は、上記した白血球等の細胞を生体外で培養液や刺激因子等を用いて培養や増殖等をした後の懸濁液であってもよい。
【０１０１】
フィルター装置１の液体導入口１１から細胞含有液を導入する際には、液体導入口１１と液体導出口２１との間に差圧を生じさればよい。差圧を生じさせる方法は、特に限定されず、細胞含有液を加圧することでフィルター装置１内へ細胞含有液を導入させる方法や、液体導出口２１側を減圧して、フィルター装置１内へ細胞含有液を吸入する方法等が挙げられる。
このようにして、フィルター装置１内に細胞含有液を供給し、細胞含有液を分離材５と接触させて、細胞を分離材５に捕捉させる。
差圧の程度としては、容器２や、分離材５に破損が生じたり、細胞含有液に含まれる細胞に過度の破砕が生じたりしない程度であれば、特に限定されない。
分離材５は、細胞を捕捉できるものを使用すればよい。
【０１０２】
次いで、細胞を捕捉した分離材５に回収液を供給することで、分離材５から細胞を回収液中に遊離させ、細胞を含む細胞濃縮液を生成させる。この白血球等を含む回収液を液体導入口から回収専用のバッグ等に導入することで白血球等を回収することができる。
回収液は、液体導出口２１又は液体導入口１１からフィルター装置１内に導入される。また、細胞を含む細胞濃縮液を、フィルター装置１内から回収する方法は特に限定されないが、典型的には、液体導入口１１から単球を含む細胞含有液が回収される。
回収液の流れによって、分離材５に捕捉された単球を回収液中に遊離させやすいことから、回収液を、液体導出口２１から分離材５を通過するようにフィルター装置１内に導入するのが好ましい。この場合、液体導出口２１から回収液を導入しつつ、細胞を含む細胞濃縮液をそのまま液体導入口１１から回収する、所謂逆洗操作を行うのが好ましい。
【０１０３】
回収液は、細胞と等張である溶液であれば特に限定はないが、生理食塩液やリンゲル液等の注射溶剤として使用実績のあるものや、緩衝液、細胞培養用の培地等が挙げられる。特に、培養工程を経る際はそのまま培養が行える培地が好ましく、培養工程を経ずそのまま治療に用いる際は、生理食塩液等の点滴等に使用実績のある等張液等、安全性が保証されている回収液を使用することが好ましい。
【０１０４】
以上説明した操作は、室温下で行ってもよいし、冷蔵温度下で行ってもよい。冷蔵温度下で行う場合、冷蔵された細胞含有液を処理することが挙げられる。細胞含有液の保管としては、冷蔵温度に設定した冷蔵庫による保管、ウォーターバスによる保管、及びドライアイスによる保管等が挙げられる。汎用性から冷蔵庫で保存することが好ましい。冷蔵温度としては、１℃以上６℃以下が好ましく、より好ましくは３℃以上５℃以下が好ましい。冷蔵温度が１℃未満では細胞は死滅し、６℃を超えて保存すると細菌が繁殖しコンタミネーションを起こす可能性がある。
【０１０５】
また、分離材５の状態を整えて、細胞を捕捉しやすくする観点から、フィルター装置１内に細胞含有液を供給する前に、液体導入口１１又は液体導出口２１から生理食塩水又は緩衝液をフィルター装置１内に導入し、分離材５と生理食塩水又は緩衝液とを接触させてもよい。
【０１０６】
回収液を用いて単球を含む細胞濃縮液を生じさせる前に、生理食塩水又は緩衝液を液体導入口１１から導入して液体導出口２１から導出させることにより、フィルター内の夾雑成分を除去でき、これにより回収される細胞内の不要成分を低減することができる。
【実施例】
【０１０７】
以下、実施例において本発明に関して詳細に述べるが、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。
【０１０８】
（実施例１〜９）
図３に示されるように、表１に示す高さ（内寸）と直径（内径）の円筒状の収容部３に、収容部３の直径に合わせて丸型にカットしたポリエステル不織布（目付３５ｇ／ｍ２、分離材５）を４５枚充填し、収容部３の開口部に蓋部２０を差し込み、その上からキャップ４０でネジ止めし、図２及び図４Ａに示すような構造を有するフィルター装置１を作製した。
【０１０９】
次に、フィルター装置１の液体導入口１１と液体導出口２１に、図７で示した回路を接続して細胞分離用デバイス１００を作製した。
【０１１０】
図７に示される回路において、液体導入口１１にはチューブ１１１が接続された。このチューブ１１１には、細胞懸濁液を収容する手段１２０及びプライミング用生理食塩水を収容する手段１２５に接続されたチューブ１１２と、フィルター装置１を通過した回収液を収容する手段（回収バッグ）１３０及び回収バッグ等に回収された回収液を回収する手段１３５に接続したチューブ１１３とを、流路切り替え手段１１６を介して接続した。
チューブ１１２には流路切り替え手段１１７を介して、細胞懸濁液を収容する手段１２０とプライミング用生理食塩水を収容する手段１２５とを接続した。
チューブ１１３には流路切り替え手段１１８を介して、フィルター装置１を通過した回収液を収容する手段１３０と回収バッグ等に回収された回収液を回収する手段１３５とを接続した。
また、液体導出口２１にはチューブ１１４を接続し、流路切り替え手段１１９を介して、フィルター装置１を通過した細胞懸濁液を収容する手段（廃液バッグ）１４５及び回収液を回収する手段１４０と接続した。
【０１１１】
細胞分離用デバイス１００を用いて細胞分離操作を実施した。なお、各流路切り替え手段の操作は、フィルター装置１に通液する液体の種類、送液する目的の手段に応じて、適宜行った。
まず、生理食塩水を収容する手段１２５の生理食塩水５０ｍＬ〜１５０ｍＬを用いてフィルター装置１のプライミング操作を行い、廃液バッグ１４５に細胞分離フィルター装置１を通過した生理食塩液を回収した。
次に、細胞懸濁液を収容する手段１２０から白血球濃厚液（ＣＰＤで抗凝固したウシ末梢血）１３０ｍＬを、フィルター装置１に重力を利用して通液し、通過液は廃液バッグ１４５に回収した。
上記操作で使用した白血球濃厚液は、ＣＰＤで抗凝固したウシ血液を３０００ｒｐｍ、３０分遠心分離して得たバッフィーコートより、処理する白血球数が１．０×１０９ｃｅｌｌｓ〜４．０×１０９ｃｅｌｌｓになるように調製した。
その後、流路切り替え手段１１７を用いて、生理食塩水を収容する手段１２５の生理食塩水１００ｍＬをフィルター装置１に重力を利用して通液し、通過液は廃液バッグ１４５に回収した。
最後に、生理食塩水５０ｍＬを１０〜５０ｍＬ／秒の流量で、回収液を回収する手段１４０としてシリンジを用いて手動でフィルター装置１の液体導出口２１より導入し、液体導入口１１に接続した回収バッグ１３０に回収した。
回収液（細胞濃縮液）、及び、処理前の細胞懸濁液（細胞含有液）の白血球濃度を、血球カウンター（Ｋ−４５００、シスメックス社）により測定した。その後、処理前の細胞懸濁液と回収液の体積より白血球数を算出して、細胞回収率（白血球回収率）を求めた。
【０１１２】
【表１】
2020195330.tif 000003
【０１１３】
表１によれば、周壁部３０と環状領域５０との最短距離である前述のＬ１が、Ｌ２の１．００％以上７．７５％以下であることにより、良好な細胞回収率を実現できることが分かる。
押え部の幅であるＷ１とＷ２とが同一である、実施例１と実施例４との比較によれば、Ｌ１がＬ２に対して長くなるほど、細胞回収率が低下する傾向があることが分かる。
Ｌ１が同一である、実施例３と実施例４との比較によれば、押え部の幅であるＷ１及びＷ２が広いほうが、細胞回収率が良好である傾向が分かる。
【符号の説明】
【０１１４】
１  細胞分離フィルター装置
２  フィルター容器
３  分離材収容部
５  分離材
８  シール
１０  底部（第１壁部）
１１  液体導入口（第１通液口）
１２  第１突起部
１３  第１押え部
２０  蓋部（第２壁部）
２１  液体導出口（第２通液口）
２２  第２突起部
２３  第２押え部
３０  周壁部
１００  細胞分離用デバイス
１１１  チューブ
１１２  チューブ
１１３  チューブ
１１４  チューブ
１１６  流路切り替え手段
１１７  流路切り替え手段
１１８  流路切り替え手段
１１９  流路切り替え手段
１２０  細胞懸濁液を収容する手段
１２５  プライミング用生理食塩水を収容する手段
１３０  回収液を収容する手段（回収バッグ）
１３５  回収液を回収する手段
１４０  回収液を回収する手段
１４５  細胞懸濁液を収容する手段（廃液バッグ）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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