(57)【要約】      （修正有）【課題】脳腫瘍の臨床像を正確に反映したモデルを用いて、新しい脳腫瘍治療薬を開発する手段の提供。【解決手段】以下の工程を含むことを特徴とする脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法、（１）標識された脳腫瘍幹細胞を、非ヒト動物の脳へ移植する工程、（２）工程（１）で移植された脳腫瘍幹細胞から腫瘍を形成させる工程、（３）工程（２）で形成させた腫瘍を含む脳切片を作製する工程、（４）被験物質の存在下で、工程（３）で作製した脳切片を培養する工程、（５）工程（４）で培養した脳切片に含まれる腫瘍の浸潤性を評価する工程。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含むことを特徴とする脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法、
（１）標識された脳腫瘍幹細胞を、非ヒト動物の脳へ移植する工程、
（２）工程（１）で移植された脳腫瘍幹細胞から腫瘍を形成させる工程、
（３）工程（２）で形成させた腫瘍を含む脳切片を作製する工程、
（４）被験物質の存在下で、工程（３）で作製した脳切片を培養する工程、
（５）工程（４）で培養した脳切片に含まれる腫瘍の浸潤性を評価する工程。
【請求項２】
脳腫瘍幹細胞が、受託番号NITE P-02861として寄託されているhG008であることを特徴とする請求項１に記載の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法。
【請求項３】
工程（５）が、工程（４）で培養した脳切片に含まれる腫瘍細胞の遊走速度及び／又は遊走距離を計測する工程であることを特徴とする請求項１又は２に記載の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法。
【請求項４】
非ヒト動物が、マウスであることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法に関する。本発明のスクリーニング方法は、腫瘍の浸潤性を定量的に評価することが可能であることから、脳腫瘍の中でも浸潤性が治療上の問題となるグリオーマ（悪性神経膠腫）に対する治療薬開発に特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
グリオーマは浸潤性が高く、極めて治療困難であるが、その原因として脳腫瘍幹細胞の浸潤性が注目されている。新たな治療薬を開発するためには、浸潤性を含めた臨床像を反映する動物モデルおよび薬剤スクリーニングの確立が必須である。
【０００３】
これまでヒトグリオーマから樹立した細胞株は均一な細胞集団で、マウスに移植すると、腫瘍塊を形成するが浸潤性に乏しい（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Minami N. et al. Cancer Med. 2017 Nov;6(11):2635-2645
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
グリオーマに対する新たな治療薬の開発には、浸潤性を含めたグリオーマの臨床像を反映したモデルが必要であるが、現在までそのようなモデルは開発されていない。
【０００６】
本発明は、このような背景の下になされたものであり、実際のグリオーマの臨床像を正確に反映したモデルを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、ヒトグリオーマ幹細胞株であるhG008をマウスの脳へ移植することにより、浸潤性の高い脳腫瘍が形成されることを見出し、この知見に基づき、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、以下の〔１〕〜〔４〕を提供するものである。
〔１〕以下の工程を含むことを特徴とする脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法、
（１）標識された脳腫瘍幹細胞を、非ヒト動物の脳へ移植する工程、
（２）工程（１）で移植された脳腫瘍幹細胞から腫瘍を形成させる工程、
（３）工程（２）で形成させた腫瘍を含む脳切片を作製する工程、
（４）被験物質の存在下で、工程（３）で作製した脳切片を培養する工程、
（５）工程（４）で培養した脳切片に含まれる腫瘍の浸潤性を評価する工程。
【０００９】
〔２〕脳腫瘍幹細胞が、受託番号NITE P-02861として寄託されているhG008であることを特徴とする〔１〕に記載の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法。
【００１０】
〔３〕工程（５）が、工程（４）で培養した脳切片に含まれる腫瘍細胞の遊走速度及び／又は遊走距離を計測する工程であることを特徴とする〔１〕又は〔２〕に記載の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法。
【００１１】
〔４〕非ヒト動物が、マウスであることを特徴とする〔１〕乃至〔３〕のいずれかに記載の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、脳腫瘍治療薬の新規なスクリーニング方法を提供する。本発明のスクリーニング方法は、腫瘍の浸潤性を定量的に評価することが可能であることから、脳腫瘍の中でも浸潤性が治療上の問題となるグリオーマに対する治療薬開発に特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】U87及びhG008に関する図。Ａ及びＢは、それぞれU87及びhG008のin vitroでの明視野画像とVenus蛍光画像を示す。Ｃ及びＤは、それぞれin vivoでのU87及びhG008のHE染色画像を示す。Ｅ及びＦは、それぞれin vivoでのU87及びhG008のVenus蛍光画像を示す。Ｇ及びＨは、それぞれU87及びhG008移植マウスの生存曲線を示す。Ｉ及びＪは、それぞれU87及びhG008移植マウスの脳の肉眼画像とIVIS画像を示す。
【図２】U87及びhG008のタイムラプスイメージングに関する図。ＡはhG008移植マウスの脳切片のタイムラプス画像を示す。ＢはU87移植マウスの脳切片のタイムラプス画像を示す。Ｃは腫瘍細胞の遊走速度及び遊走距離に関するグラフ及び表を示す。
【図３】hG008のタイムラプスイメージングに関する図。Ａは皮質、線条体、及び脳梁における腫瘍細胞の遊走速度及び遊走方向に関する画像、グラフ及び表を示す。Ｂは腫瘍細胞の分裂に関するタイムラプス画像を示す。Ｃは分裂前後における腫瘍細胞の速度に関する画像、グラフ及び表を示す。Ｄは線条体における軸索の束と腫瘍細胞を表す画像を示す。Ｅは脳梁における腫瘍細胞の仮足に関する画像及びグラフを示す。
【図４】hG008の分化に関する図。Ａはin vitroでの分化及び未分化マーカー（GFAP、Nestin、O4、及びNeuN）の発現に関する画像を示す。Ｂは脳切片培養開始から96時間後での線条体（移植した側の線条体）における分化及び未分化マーカーの発現に関する画像を示す。Ｃは脳切片培養開始から96時間後での脳梁における分化及び未分化マーカーの発現に関する画像を示す。Ｄは脳切片培養開始から96時間後での線条体（移植した側と反対側の線条体）における分化及び未分化マーカーの発現に関する画像を示す。
【図５】hG008の指向性に関する図。Ａは線条体、脳梁、帯状回における軸索と腫瘍細胞を表す画像を示す。Ｂは側脳室下角及び側脳室体部における腫瘍細胞を表す画像を示す。Ｃは血管周囲における腫瘍細胞を表す画像を示す。
【図６】薬剤スクリーニングに関する図。Ａはテモゾロミド存在又は非存在下における腫瘍細胞を表す画像を示す。Ｂはテモゾロミド存在又は非存在下における腫瘍細胞の遊走速度及び遊走距離に関するグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法は、下記の工程（１）〜（５）を含むものである。
【００１５】
工程（１）では、標識された脳腫瘍幹細胞を、非ヒト動物の脳へ移植する。
【００１６】
脳腫瘍幹細胞としては、浸潤性の高い脳腫瘍から単離された脳腫瘍幹細胞を使用することができる。脳腫瘍の中でもグリオーマは一般に浸潤性が高いことから、脳腫瘍幹細胞としてはグリオーマ幹細胞を使用するのが好ましい。浸潤性の高いグリオーマから単離されたグリオーマ幹細胞としては、hG008（Fukaya R. et al., Cancer Res. 2016 May; 76(9):2813-2823）を挙げることができる。hG008は、本発明者によって樹立されたヒトグリオーマ幹細胞株であり、下記の通り、寄託機関に寄託されている。
寄託機関：独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8）
受託番号：NITE P-02861
受託日：2019年1月8日
【００１７】
脳腫瘍幹細胞は、標識されたものを使用する。標識は、脳腫瘍幹細胞を可視化できるものであればどのようなものでもよいが、通常は、蛍光物質又は発光物質を使用する。使用する蛍光物質は特に限定されないが、蛍光タンパク質を使用するのが好ましく、特にGFPやその誘導体を使用することが好ましい。GFPの誘導体としては、Venus、BFP、CFP、YFP、RFPなどを挙げることができる。蛍光タンパク質による脳腫瘍幹細胞の標識は、レンチウイルスベクターを用いて行うことができる。このような標識に使用するレンチウイルスベクターは市販されている。使用する発光物質も特に限定されず、ルシフェラーゼなどを使用することができる。
【００１８】
非ヒト動物としては、通常、ヒト以外の哺乳動物を使用する。例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、サルなどを使用することができる。これらの動物の中では、マウスを使用するのが好ましい。脳腫瘍幹細胞は、hG008などヒト由来のものを通常使用するので、非ヒト動物への脳腫瘍幹細胞の移植は異種移植となり、拒絶反応により生着しない。したがって、非ヒト動物としては、ヌードマウスなどの免疫不全動物を使用するのが好ましい。
【００１９】
脳腫瘍細胞をマウスなどの非ヒト動物の脳へ移植することは、以前から行われてきており、本発明における脳腫瘍幹細胞の移植も、このような脳腫瘍細胞の移植方法と同様に行うことができる。例えば、マウスの脳へ腫瘍幹細胞を移植する場合は、Minami N. et al. Cancer Med. 2017 Nov;6(11):2635-2645の記載に従って行うことができる。
【００２０】
移植する脳腫瘍幹細胞の数は、脳腫瘍幹細胞や非ヒト動物の種類によって適宜設定されるが、マウスの脳へhG008を移植する場合は、好ましくは1×104〜1×106個であり、より好ましくは、5×104〜5×105個である。
【００２１】
工程（２）では、工程（１）で移植された脳腫瘍幹細胞から腫瘍を形成させる。
【００２２】
腫瘍の形成には特別な方法は必要なく、脳腫瘍幹細胞を移植した非ヒト動物を一定期間飼育すればよい。
【００２３】
工程（３）では、工程（２）で形成させた腫瘍を含む脳切片を作製する。
【００２４】
脳切片の作製は、腫瘍が、切片の作製が可能な大きさになった時期に行う。具体的な時期は、脳腫瘍幹細胞や非ヒト動物の種類によって適宜設定されるが、マウスの脳へhG008を移植した場合は、好ましくは移植から30〜60日後であり、より好ましくは移植から40〜50日後である。
【００２５】
脳切片の作製は、公知の方法に従って行うことができる。例えば、マウスの脳切片を作製する場合は、Minami N. et al. Cancer Med. 2017 Nov;6(11):2635-2645の記載に従って行うことができる。切片は、冠状面、矢状面、横断面の切片のいずれであってもよいが、冠状面の切片が好ましい。
【００２６】
工程（４）では、被験物質の存在下で、工程（３）で作製した脳切片を培養する。
【００２７】
被験物質は特に限定されず、天然物、合成化合物のいずれであってもよい。具体的には、低分子化合物、タンパク質、ペプチド、核酸などを例示することができる。被験物質は精製されているものであってもよいが、細胞抽出液や細胞破砕液のような未精製のものであってもよい。また、化合物ライブラリーに含まれる物質を被験物質とすることもできる。
【００２８】
脳切片の培養は、公知の方法に従って行うことができる。例えば、マウスの脳切片を培養する場合は、Minami N. et al. Cancer Med. 2017 Nov;6(11):2635-2645の記載に従って行うことができる。
【００２９】
培養期間は、被験物質の腫瘍の浸潤性に対する効果を確認できる期間であれば特に限定されないが、好ましくは3〜10日であり、より好ましくは4〜8日間である。
【００３０】
工程（５）では、工程（４）で培養した脳切片に含まれる腫瘍の浸潤性を評価する。
【００３１】
浸潤性の評価は、顕微鏡によって切片上の腫瘍細胞を観察し、それに基づいて行ってもよいが、腫瘍細胞の遊走速度及び／又は遊走距離を計測することによって行ってもよい。このように浸潤性の評価を腫瘍細胞の遊走速度や遊走距離に基づいて行うことにより、浸潤性を定量的に評価することが可能になる。腫瘍細胞の遊走速度や遊走距離の計測は、市販の解析ソフト（例えば、Imaris（Bitplane社））を使用して行うことができる。
【００３２】
工程（５）において評価された腫瘍の浸潤性（即ち、被験物質の存在下での腫瘍の浸潤性）は、通常、コントロールの浸潤性（即ち、被験物質の非存在下での腫瘍の浸潤性）と比較し、コントロールよりも浸潤性が低い（例えば、遊走速度が低い、遊走距離が短いなど）場合に被験物質を、脳腫瘍治療薬と判定する。
【００３３】
本発明の脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法は、以下のような利点を有する。
１）これまでの抗腫瘍薬のスクリーニング方法は、腫瘍細胞の生存性（腫瘍細胞が死ぬかどうか）に基づいて被験物質を選択していたが、本発明のスクリーニング方法は、腫瘍細胞の生存性のみならず、浸潤性（腫瘍細胞の浸潤性を抑制するかどうか）に基づいて被験物質を選択可能である。脳腫瘍の中でも特にグリオーマは、高い浸潤性が治療上の問題となっていることから、浸潤性を抑制できる物質を効率的に選択できる本発明のスクリーニング方法は、グリオーマに対する治療薬開発の有効なツールとなると考えられる。
【００３４】
２）本発明のスクリーニング方法は、浸潤性を定量的に評価できるので、多数の被験物質を迅速かつ簡便に評価することができる。
【実施例】
【００３５】
以下に、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３６】
〔実施例１〕  ヒトグリオーマ幹細胞株hG008
代表的なヒトグリオーマ細胞株U87と、本発明者が樹立したヒトグリオーマ幹細胞株hG008を比較した。まず、in vitroで、U87は、接着環境下で培養すると、単層を構成した（図１Ａ）。細胞にはffLuc(Venus蛍光タンパク質とLuc(ルシフェラーゼ)の融合タンパク質遺伝子)をレンチウイルスベクターで導入しており、蛍光タンパク質にて詳細に観察可能である。ヌードマウス脳に移植すると、HE染色でその腫瘍境界は明瞭で、びまん性に浸潤するグリオーマの臨床像を反映しておらず（図１Ｃ）、Venus蛍光タンパク質により、脳内で境界明瞭な腫瘍が観察された（図１Ｅ）。また急速に増大する腫瘍で、1×105個の細胞を移植後3週間程度で死亡した（図１Ｇ）。肉眼的にも腫瘍は境界明瞭ではっきり視認でき（図１Ｉ左）、IVIS生体イメージングシステムで観察すると、巨大なピークが１つ同定された（図１Ｉ右）。
【００３７】
一方、hG008は、in vitroで、低接着環境下にて培養すると、スフェアを形成した（図１Ｂ）。またU87と同様に細胞にffLucをレンチウイルスベクターで導入しており、蛍光タンパク質にて詳細に観察可能である。ヌードマウス脳に移植すると、HE染色で腫瘍の境界は不鮮明であり（図１Ｄ）、Venus蛍光タンパク質により、脳梁を介して対側にびまん性に浸潤し、ヒトグリオーマの臨床像を反映していた（図１Ｆ）。1×105個の細胞を移植後、びまん性に浸潤するため、約3か月程度かけて死亡した（図１Ｈ）。肉眼的には腫瘍は不明瞭ではっきり視認できなかった（図１J左）。IVIS生体イメージングシステムで観察すると、対側に浸潤するためピークが２つ同定された（図１J右）。また脊髄播種するマウスも見られ、播種性病変もグリオーマの末期に観察される病態であり、臨床像を反映していた。
【００３８】
〔実施例２〕  タイムラプスイメージング（U87とhG008の比較）
脳切片培養（脳を厚さ200μmの切片で１週間培養可能）を行うことにより、U87とhG008の生体内での浸潤性をタイムラプスイメージングにより動的に観察した。
【００３９】
hG008は脳の様々な部位に応じて、異なる浸潤像を呈した（図２Ａ）。例えば、線条体では、びまん性に浸潤していった。一方、皮質領域への浸潤性はあまり高くなく、腫瘍細胞は比較的疎であった。側脳室下角周囲には明らかに指向性を持ち浸潤していき、脊髄播種の元であると考えられる。また、脳梁は一方向性に浸潤した。
【００４０】
U87は、巨大な塊として腫瘍サイズが拡大し、浸潤や指向性は見られないため、基本的には移植部位に限局して腫瘍は増大した（図２Ｂ）。
【００４１】
hG008とU87の遊走速度、遊走距離を定量化した。その結果、遊走速度はほぼ同等であるが、遊走開始地点と、最終地点との距離は、圧倒的にhG008が長いことがわかった（図２Ｃ）。これはhG008がU87と異なり指向性を持ち遊走しているためである。
【００４２】
〔実施例３〕  タイムラプスイメージング（hG008の脳部位別の比較）
hG008は脳の線状体、皮質、脳梁における移動速度を比較したところ、脳梁での移動速度は他より有意に速かった。また方向性を解析したところ、脳梁は他の部位と比較して一方向性の動きを示した。また、細胞の分裂前後での移動速度を比較したところ、分裂後は前と比較して、有意に早い速度で遊走した。
【００４３】
Imaris定量解析ソフトで細胞をトレースすることにより定量化した。その結果、hG008の遊走速度は、脳梁が最も早く、また脳梁は一方向性に遊走していることがわかった（図３Ａ）。
【００４４】
hG008の特徴の一つとして、分裂を生体内で繰り返すことが上げられる。本発明者は分裂をする瞬間も詳細に解析することに成功している（図３Ｂ）。
【００４５】
分裂をする瞬間、腫瘍細胞は自身の径をもっとも縮小させ、その後２つの娘細胞がお互いを反発するように分裂した。このため、hG008の遊走速度が最も早い瞬間は、分裂直後であった（図３Ｃ）。
【００４６】
脳梁に対して線条体はランダムに遊走するように見えるが、線条体の束に沿うように遊走していることが、リアルタイム解析により明らかになった（図３Ｄ）。
【００４７】
hG008のもう一つの特徴として、U87と異なり、長い仮足を延ばしながら遊走することが挙げられる。最も長い仮足を伸ばす部位は脳梁であり（図３Ｅ）、これは脳梁が均一な軸索で構成されている部位だからと推察される。
【００４８】
〔実施例４〕  分化
hG008は、in vitro のみならずin vivoでも未分化性を維持した状態で広範囲に浸潤していることが明らかになった。
【００４９】
hG008は、移植直前、in vitro無血清培地での培養化ではNestinのみ発現し、その他GFAP(アストロサイト系のマーカー)、O4(オリゴデンドロサイト系のマーカー)、NeuN(ニューロン系のマーカー)は陰性であり、未分化性が維持されていた（図４Ａ）。
【００５０】
生体内に移植するとどのように変化するのかを詳細に観察したところ、脳切片培養開始後96時間から、移植した側の線条体でのみGFAP陽性の腫瘍細胞（アストロサイト系への分化）が観察された（図４Ｂ）。しかし、脳梁や、対側の線条体等では分化した細胞は観察されなかった（図４Ｃ、Ｄ）。従って、大部分の腫瘍細胞はNestin陽性（未分化性を維持した）のまま広範囲に浸潤していることが確認された。
【００５１】
〔実施例５〕  指向性
hG008は、軸索（Neurofilamentにて染色）に沿い浸潤し（図５Ａ）、血管周囲（perivascular area）にも指向性を有していた（図５Ｃ）。さらに、側脳室下角には、マウス神経前駆細胞が高密度に存在しているが、同部位への指向性も有することが明らかになった（図５Ｂ）。一方、側脳室体部には、明らかな指向性は認めなかった。
【００５２】
〔実施例６〕  薬剤スクリーニング
本切片培養系を用いて、薬剤効果の定量化が可能であり、薬剤スクリーニングとして利用できる。
【００５３】
1×105個のhG008をヌードマウスの線条体に移植後、45日で断頭し、実施例２と同様の方法で200μm厚の脳切片を作製し、7日間培養を行った。脳切片を培養する培地に現在の悪性神経膠腫に対して標準治療薬であるテモゾロミド（TMZ）を投与した。その結果、コントロールと比してTMZは腫瘍増大抑制効果を呈した（図６Ａ）。
【００５４】
残存腫瘍細胞の遊走速度及び遊走距離を計測したところ、コントロールに比して有意に減少しており（図６Ｂ）、腫瘍細胞の遊走能の低下が治療効果を反映している。
【００５５】
〔実験方法〕
（１）hG008細胞の培養方法
hG008細胞の培養は、-80度凍結から融解後、低接着フラスコ（Corning社製）内でNS(neurosphere)培地（D-MEM/Ham's F-12培地(HEPES含有)（和光純薬工業社製）に20 ng/ml 組換えヒト上皮成長因子(PeproTech社製), 20 ng/ml 組換えヒト線維芽細胞増殖因子-2 (PeproTech社製), 103 units/ml組換えヒト白血病阻止因子(ナカライテスク社製), 2% B-27 supplement (Thermo Fisher Scientific社製), 1単位/ml ヘパリンナトリウム（エイワイファーマ社製）, Antibiotic-Antimycotic Mixed Stock Solution (100x)（ナカライ）を添加）で行った。培地交換は、3〜4日間に1度行った。10日間培養した後、細胞塊（スフェア状）を遠心で回収し、TrypLE Selectを用いて単一細胞へ分散後、再度NS培地に懸濁した。1×105細胞/mlの濃度で低接着フラスコに播種し、その後、再度3〜4日ごとに培地交換を行い、10日後に細胞塊を同様に単一細胞へ分散後、播種することで移植に必要な細胞数を確保した。
【００５６】
（２）マウス脳の切片培養方法
hG008にffLuc(Venus蛍光タンパク質とLuc2ホタルルシフェラーゼの融合遺伝子)発現レンチウイルスベクター(CSII-EF-ffLuc)(Cell Transplant 20:727-739, 2011)を感染させ、シングルセルクローニングを行い、ffLucが安定に高発現するhG008細胞株（hG008-ffLuc）を得た。
【００５７】
1×105個のhG008-ffLucを、全身麻酔したT細胞欠損マウス(Female BALB/c nude mouse, 20g, 6w)の右線条体(大泉門より右方2mm、脳表より深さ3mm)に定位的に移植した。移植から45日後に非灌流下で断頭し、ビブラトームを用いて200μm厚の脳切片を作製し、sterile porous (0.4 μm) insert membranes (Merck Millipore)上で切片培養を開始した。6cmガラスボトムディッシュには、1800μlのNS(neurosphere)培地（D-MEM/Ham's F-12培地(HEPES含有)（和光純薬工業社製）に20 ng/ml 組換えヒト上皮成長因子(PeproTech社製), 20 ng/ml 組換えヒト線維芽細胞増殖因子-2 (PeproTech社製), 103 units/ml組換えヒト白血病阻止因子(ナカライテスク社製), 2% B-27 supplement (Thermo Fisher Scientific社製), 1単位/ml ヘパリンナトリウム（エイワイファーマ社製）を添加）を満たした。腫瘍はVenus蛍光タンパク質により緑に標識されており、同日より共焦点顕微鏡によりタイムラプスで最大で6〜7日間撮影を行った。治療用ディッシュには、上記培地にテモゾロミド250μMを投与した。2日に1度培地交換を行い、その都度 テモゾロミドを同量投与した。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明は、脳腫瘍治療薬のスクリーニング方法に関するものなので、この脳腫瘍治療薬を製造する産業分野において利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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