(57)【要約】【課題】化学物質防護材および／または抗酸化物質として有用である栄養補助剤が必要である。【解決手段】本発明は、有効成分として、グルコラファニンと、ミロシナーゼと、アスコルビン酸と、グルカンとの組合せからなり、該組合せによりこれら有効成分相互間の相乗作用が発現する経口投与可能な組成物に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として、グルコラファニンと、ミロシナーゼと、アスコルビン酸と、グルカンとの組合せからなり、該組み合わせによりこれら有効成分相互間の相乗作用が発現する経口投与可能な組成物。
【請求項２】
前記グルカンが、α-グルカン、β-グルカン、又はα-グルカンとβ-グルカンの組み合わせである請求項1に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項３】
乳癌を治療、予防し、その発現を低減し、それと関連する症状を減少させ、その二次再発を低減させるための組成物であって、該組成物が有効成分として、グルコラファニンと、ミロシナーゼと、アスコルビン酸と、グルカンとの組合せからなり、該組み合わせによりこれら有効成分相互間の相乗作用が発現する組成物。
【請求項４】
前記グルカンが、α-グルカン、β-グルカン、又はα-グルカンとβ-グルカンの組み合わせである請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
有効成分として、グルコラファニンと、ミロシナーゼと、アスコルビン酸と、グルカンとを提供するように調剤された経口投与可能な組成物であって、前記グルコラファニンと、前記ミロシナーゼと、前記アスコルビン酸と、前記グルカンとから成ることによりこれらの有効成分が相乗作用を発現し、少なくとも前記グルコラファニンがブロッコリー抽出物または粉末として提供され、前記グルカンはキノコ抽出物または粉末として提供される経口投与可能な組成物。
【請求項６】
前記ブロッコリー抽出物または粉末が、グルコラファニンを約１〜約７５重量％の量で含む請求項５に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項７】
前記ブロッコリー抽出物または粉末が、ミロシナーゼを含む、請求項５に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項８】
酵素増強物質をさらに含む、請求項５に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項９】
前記酵素増強物質が、アスコルビン酸を含む、請求項５に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項１０】
前記組成物が腸溶コーティング剤形である、請求項５記載の経口投与可能な組成物。
【請求項１１】
前記グルカンが、α-グルカン、β-グルカン、又はα-グルカンとβ-グルカンの組み合わせである請求項５に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項１２】
乳癌を治療、予防し、その発現を低減し、それと関連する症状を減少させ、その二次再発を低減させるための組成物であって、該組成物は、有効成分として、グルコラファニンと、ミロシナーゼと、アスコルビン酸と、グルカンとを提供するように調剤され、前記グルコラファニンと、前記ミロシナーゼと、前記アスコルビン酸と、前記グルカンとから成ることによりこれらの有効成分が相乗作用を発現し、少なくとも前記グルコラファニンがブロッコリー抽出物または粉末として提供され、前記グルカンはキノコ抽出物または粉末として提供される組成物。
【請求項１３】
有効成分として、スルフォラファンとグルカンの組合せからなり、該組み合わせによりこれら有効成分相互間の相乗作用が発現する経口投与可能な組成物。
【請求項１４】
前記グルカンが、α-グルカン、β-グルカン、又はα-グルカンとβ-グルカンの組み合わせである請求項１３に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項１５】
ケルセチン、アミノ糖、グリコサミノグリカン、アボカド／ダイズ不けん化物、ビタミン、コーヒー果実、マグネシウム、シリマリン、プロアントシアニジン、ウルソール酸、クルクミン、フィトステロールおよびフィトスタノールからなる群から選択される１種以上の成分を更に含む、請求項１３に記載の経口投与可能な組成物。
【請求項１６】
乳癌を治療、予防し、その発現を低減し、それと関連する症状を減少させ、及び／又はその二次再発を低減させるための組成物であって、該組成物は、スルフォラファンとグルカンによる相乗作用を発現する組合せからなる組成物。
【請求項１７】
前記グルカンが、α-グルカン、β-グルカン、又はα-グルカンとβ-グルカンの組み合わせである請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
被験者において、NAD(P)H:キノンオキシドレダクターゼ１（NQO-1）のレベルを増大させる、またはその遺伝子発現を増大させるための組成物であって、該組成物は、スルフォラファンとグルカンによる相乗作用を発現する組合せからなる組成物。
【請求項１９】
前記グルカンが、α-グルカン、β-グルカン、又はα-グルカンとβ-グルカンの組み合わせである請求項１８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、各々、参照によりその全文が組み込まれる、以下の出願の優先権を主張する：２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３２８号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３４２号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３８６号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３９６号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，３６４号；２０１２年７月５日に出願された米国仮特許出願第６１，６６８，３７４号および２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９４，４１７号。
【０００２】
本発明は、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびキノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、スルホラファンまたはその誘導体およびキノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、ブロッコリー抽出物または粉末およびキノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末の組合せに関する。本発明は、これらの組合せに関する組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
天然生成物の使用は、ヒトおよびコンパニオンアニマルにとってますます人気が高まってきている。これらの天然生成物のうち一部は、栄養補助食品およびメディカルフード中に組み込まれている。当技術分野では、化学物質防護材（chemoprotective agent）および／または抗酸化物質として有用である栄養補助剤が必要である。さらに、当技術分野では、乳房と関連する状態および障害にとって有用な医薬組成物および栄養補助食品が必要である。
【０００４】
天然生成物の使用による化学物質防護は、ヒトおよび家畜に影響を及ぼす多数の状態の発生を防ぐまたは低減するための安全で、有効な、安価な、容易に利用可能な、実用的な手段として発展している。分子レベルで細胞に損傷を与え得る発癌物質は、非毒性前駆体として摂取および吸入されることが多いということがわかっている。これらの非毒性前駆体は、次いで、身体中で発癌性物質に変換し得る。解毒酵素またはその補助因子を活性化し得る天然物質などの化学物質防護剤は、対抗し、排出を可能にするか、または免疫系などのその他の天然に存在する防御を増強し得る。
【０００５】
一部の天然生成物は、抗酸化活性を有する。酸化ストレスは、加齢、神経変性性疾患の進行ならびに虚血などの生理的外傷において主要な役割を果たす。抗酸化物質は、重要な生体分子の酸化を低減または阻害でき、癌、冠動脈心疾患、卒中および神経変性性疾患の治療、予防またはその発生の低減において役割を果たし得、アルツハイマー病、痴呆および卒中が、酸化ストレスによって影響を受ける状態の例である。
【０００６】
癌は、主に、内部から（すなわち、エストロゲン、プロゲステロンホルモン）であろうと、外部から（すなわち、プラスチックに由来するビスフェノールＡ（ＢＰＡ））であろうと環境的な負荷に対する曝露および慢性炎症の結果であると考えられている。幸運にも、環境的な負荷からの損傷は、身体の多数の細胞種において見られる第ＩＩ相の化学物質防護酵素の複雑なネットワークによって打ち消され得る。エストロゲンおよびその代謝物は、乳房組織および腫瘍の増殖につながり得るということが周知である。さらに悪いことに、キノンエストロゲン代謝物は、乳房組織に侵入し、腺管および腺上皮細胞の核中に移動する能力を有する。そこで、それらは、ＤＮＡと結合してキノンエストロゲン−ＤＮＡ付加体を形成し、下流突然変異につながる。これらの突然変異は、腫瘍のまさに基礎である癌開始に関与していると考えられている。幸運にも、特定の第ＩＩ相酵素、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ（ＮＱＯ１）は、危険な、高度に反応性のキノンエストロゲンをとらえて、それらを身体から容易に除去され得る不活性化学物質に代謝することができる。したがって、癌罹患率を低下させるための主要な機序は、ＮＱＯ１を含めた防護的な第ＩＩ相酵素を誘導することである。ＮＱＯ１のレベルの増大は、高レベルのキノンエストロゲンに起因する任意の状態と関連する症状の治療、予防、修復、その発生の低減および減少に有効であり得る。キノンエストロゲンの例として、それだけには限らないが、エストロゲンのカテコールキノンが挙げられる。キノンエストロゲンは、各々、参照によりその全文が組み込まれる、以下の参考文献に記載されている：非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；および非特許文献４。
【０００７】
化学物質防護特性および抗酸化特性を有すると考えられる天然生成物の一例として、スルホラファンがある。スルホラファンは、１−イソチオシアナト−４−メチルスルフィニルブタンとしても知られる有機硫黄化合物である。スルホラファン前駆体、グルコラファニンは、ブロッコリー、芽キャベツおよびキャベツなどのアブラナ科の野菜から得ることができる。しかし、化学予防に適切なレベルを得るには、大量の野菜が消費されなければならない。グルコラファニンは、アブラナ科野菜などの種々の外因性供給源中および腸細菌叢において内因性に生じるミロシナーゼと呼ばれるチオグルコシダーゼ酵素によって、スルホラファンに変換される。しかし、グルコラファニンの経口摂取の際には、すべての動物が、スルホラファンへのその変換を達成できるわけではなく、これは、細菌叢集団および全体的な健康の多様性による可能性が最も高い。さらに、胃などの酸性環境では、グルコラファニンは、不活性代謝物に変換され得る。活性代謝物、スルホラファンは、核内赤血球−２関連因子（Ｎｒｆ２）を誘導し、これは、次いで、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ（ＮＱＯ１）およびヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）などの第ＩＩ相解毒酵素および細胞防御酵素の産生を上方制御する。スルホラファンは、Ｐ−４５０シトクロム酵素の合成を大幅に変更することなく、これらの酵素の産生を誘導すると考えられてきた。第ＩＩ相酵素の上方制御は、細胞毒性からの脳の保護、脂肪蓄積の毒性効果からの肝臓の保護および種々のその他の組織の解毒を含め、種々の生命活動において役割を果たすと考えられる。
【０００８】
スルホラファンおよびその前駆体グルコラファニンは、広く研究されている。Ｓｈａｐｉｒｏら（非特許文献５）は、ブロッコリースプラウトグルコシノレートおよびイソチオシアネートの安全性、忍容性および代謝を決定する第Ｉ相臨床研究を論じている。Ｓｈａｐｉｒｏらは、健常ヒト対象における、グルコラファニンなどのグルコシノレートまたはスルホラファンなどのイソチオシアネートのいずれかを含有するスプラウト抽出物のプラセボ対照の二重盲検無作為化臨床試験を論じている。この研究は、これらの物質の投与は、秩序だった、臨床上大きな副作用をもたらさないことを見出した。Ｙｅら（非特許文献６）は、ヒトにおけるブロッコリースプラウトイシオチオシアネート（isiothiocyanates）の薬物動態を論じている。
【０００９】
いくつかのキノコが、その薬効のために使用または研究されている。これらの「薬用キノコ」は、抗ウイルス活性、抗微生物活性、抗癌活性、血糖降下活性および／または抗炎症活性などの有益な特性を有すると考えられている。薬用キノコの例として、マイタケ、シイタケ、レイシ、クレミニ（ｃｒｅｍｉｎｉ）、アーモンド、クリ、キクラゲ（ｗｏｏｄ  ｅａｒ）、キクラゲ（ｃｌｏｕｄ  ｅａｒ）、ポルチーニ（ｐｏｒｃｉｎｉ）、インクキャップ（ｉｎｋ  ｃａｐ）、ヤルタグンブ（ｙａｒｔａ  ｇｕｎｂｕ）、エノキタケ、シメジ、タイガーミルク（ｔｉｇｅｒ  ｍｉｌｋ）、モレル（ｍｏｒｅｌ）、バンブー（ｂａｍｂｏｏ）、タモギタケ、ピンクオイスター（ｐｉｎｋ  ｏｙｓｔｅｒ）、エリンギ、ヒラタケ、カリフラワー、白キクラゲ、ゴールデンゼリー（ｇｏｌｄｅｎ  ｊｅｌｌｙ）、マツタケ、メキシカントリュフ（Ｍｅｘｉｃａｎ  ｔｒｕｆｆｌｅ）およびフクロタケが挙げられる。
【００１０】
マイタケキノコ（グリフォラ・フロンドサ（Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ））は、食品として広く消費され、免疫機能を増強し、癌を治療するために、伝統医学において使用される食用キノコである。グルカンを含有するマイタケキノコは、抗腫瘍効果および免疫調節効果などの有益な特性を有すると考えられている。有効成分として、グルカン、例えば、タンパク質が結合したβ−グルカンを含有するマイタケキノコから得られた標準化された抽出物が存在する。β１，６−グルカン（タンパク質が結合した多糖）が、マイタケキノコ中の活性成分として同定されている。マイタケキノコは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで腫瘍転移を阻害する抗腫瘍効果を有すると実証されている。一研究では、マイタケ抽出物を使用する対象の半分において、腫瘍退縮または症状の大幅な改善が観察された。閉経後乳癌患者の研究では、マイタケ抽出物の経口投与は、免疫調節効果を有すると示された。
【００１１】
シイタケキノコ（レンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ））は、東アジア原産の食用キノコである。シイタケキノコは、抗ウイルス効果、抗生物質効果、抗炎症効果、抗高血圧効果および抗発癌効果を有すると仮定されるマイコケミカル（ｍｙｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を含有する。これは、大部分は、グルカン、αおよびβ両グルカンの結果であると考えられる。一部のシイタケキノコ抽出物は、４０％を超えるαグルカン含量を有する。さらに、レンチナン（１，３β−Ｄ−グルカン、シイタケから単離された多糖）は、十分に研究されており、シイタケの有益な効果において役割を果たすと考えられている。結腸癌細胞において抗癌効果を有すると示されており、これは、発癌物質前駆体を活性形態に代謝すると知られているシトクロムＰ４５０−１Ａ酵素を抑制するその能力によるものであり得る。レンチン（そのタンパク質成分）は、強力な抗真菌特性を有し、白血病細胞の増殖を阻害し、ヒト免疫不全ウイルス−１逆転写酵素の活性を抑制するとわかっている。
【００１２】
レイシキノコ（ガノデルマ・ルシダム（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ））はまた、リンジー（ｌｉｎｇｚｋｉ）キノコとしても知られる、東アジアに見られる食用キノコである。レイシキノコは、抗腫瘍効果、抗癌効果、免疫調節効果および免疫治療効果を有すると考えられている。レイシキノコは、β−グルカンなどのグルカン、カンタキサンチン、ステロール、クマリン、ガノデリン酸およびマンニトールを含め、その活性に寄与すると考えられているいくつかの成分を有する。
【００１３】
パン酵母（サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））は、グルカン、特に、β−グルカンの供給源であり得る。パン酵母の活性成分は、各々、参照によりその全文が組み込まれる、非特許文献７、特許文献１、特許文献２および特許文献３に記載される方法などのいくつかの方法で抽出され得る。
【００１４】
グルカンは、各々、参照によりその全文が組み込まれる、以下の参考文献に記載されている：非特許文献８および非特許文献９。
【００１５】
Ｚｈａｎｇら（非特許文献１０）は、スルホラファンおよび構造的に関連する合成ノルボルニルイシオチオシアネート（isiothiocyanates）の抗発癌活性を決定するための、スプラーク−ドーリーラットにおける研究を論じている。この研究は、スルホラファンの投与が乳腺腫瘍の形成の阻止において有効であると決定した。
【００１６】
Ｃｏｒｎｂｌａｔｔら（非特許文献１１）は、乳房における化学予防法におけるスルホラファンの効果を決定するための、スプラーク−ドーリーラットにおける研究を論じている。研究は、いずれかのスルホラファンの経口投与が、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ（ＮＱＯ１）酵素活性の３倍の増大および乳腺上皮におけるヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）酵素の免疫染色の４倍の上昇をもたらすと決定した。
【００１７】
Ｍｕｎｄａｙら（非特許文献１２）は、ラットにおける膀胱癌発生に対するブロッコリースプラウトの凍結乾燥水性抽出物の効果に関する研究を論じている。この研究は、ブロッコリースプラウト抽出物の投与は、膀胱において、オキシダントおよび発癌物質に対する防護活性を有する酵素であるグルタチオンＳ−トランスフェラーゼおよびＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１の大幅な誘導をもたらすことを見出した。
【００１８】
Ｆａｎｇら（非特許文献１３）は、ヒト乳房癌腫細胞系統（ＭＤＡ−ＭＢ−４５３およびＭＣＦ−７）、ヒト非悪性乳房上皮細胞系統（ＭＣＦ−１０Ｆ）および２種の骨髄腫細胞系統（ＲＰＭＩ０８２２６およびＩＭ−９）に対する、シイタケキノコの酢酸エチル画分の抗増殖性効果を決定する研究を開示している。この研究は、シイタケキノコ中の成分による腫瘍細胞の成長の阻害は、アポトーシスの誘導に起因し得ることを見出した。
【００１９】
Ｋｉｍら（非特許文献１４）は、シイタケ（レンチヌス・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ））から培養された米糠由来のエキソバイオポリマーのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化および抗癌効果を調べる研究を開示している。この研究によって、ナチュラルキラー細胞活性化による癌の予防および／または治療のためにエキソバイオポリマーは有効であり得ることがわかった。
【００２０】
Ｌｏｕｉｅら（非特許文献１５）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの膀胱癌Ｔ２４細胞におけるインターフェロン−αの抗癌活性に対する、インターフェロン−αおよびマイタケキノコＤ画分（ＰＤＦ、生理活性キノコ抽出物）の組合せの相乗効果を論じている。
【００２１】
Ｍａｓｕｄａら（非特許文献１６）は、肺転移のマウスモデルにおけるマイタケキノコの画分の抗転移活性を評価する研究を論じている。この研究は、この画分が、ナチュラルキラー細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化およびＩＣＡＭ−１などの接着分子の抑制により、血管内皮細胞との腫瘍細胞接着の阻害をもたらして腫瘍転移を阻害することを見出した。
【００２２】
特許文献４は、カプセル化されているか、コーティングされている、グルコラファニンなどのグルコシノレートおよびミロシナーゼを含む製剤を開示している。
【００２３】
本明細書において引用されるすべての参考文献は、参照によりその全文が組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２４】
【特許文献１】米国特許第７，８０３，６０５号明細書
【特許文献２】米国特許第５，７０２，７１９号明細書
【特許文献３】米国特許第８，３２３，６４４号明細書
【特許文献４】欧州特許出願第２２１３２８０号明細書
【非特許文献】
【００２５】
【非特許文献１】Ｎｕｔｔｅｒら、Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｔｏｘｉｃｏｌ、１９９４年、７巻：２３〜２８頁
【非特許文献２】Ｃａｖａｌｉｅｒｉら、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、２００６年；１０８９巻：２８６〜３０１頁
【非特許文献３】Ｂｏｌｔｏｎら、Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ  Ｔｏｘｉｃｏｌ、２００８年、２１巻（１号）：９３〜１０１頁
【非特許文献４】Ｃａｖａｌｉｅｒｉら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ、２００６年、１７６６巻：６３〜７８頁
【非特許文献５】Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ、（２００６年）、５５巻（１号）、５３〜６２頁
【非特許文献６】Ｃｌｉｎｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、２００、３１６巻：４３〜７５３頁
【非特許文献７】Ｂａｃｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ、１９６９年、１１４巻（３号）：５５７〜５６７頁
【非特許文献８】Ｖｅｔｖｉｃｋａら、Ｅｎｄｏｃｒ  Ｍｅｔａｂ  ｌｍｍｕｎ  Ｄｉｓｏｒｄ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ、２００９年、９巻（１号）：６７〜７５頁
【非特許文献９】Ｖｅｔｖｉｃｋａら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｆｏｏｄ、２００８年：１１巻（４号）：６１５〜６２２頁
【非特許文献１０】Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、（１９９４年）、９１巻、３１４７〜３１５０頁
【非特許文献１１】Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、（２００７年）、３８巻（７号：１４８５〜１４９０頁
【非特許文献１２】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、（２００８年）、６８巻（５号）：１５９３〜１６００頁
【非特許文献１３】Ｊ  Ａｌｔｅｒｎ  Ｃｏｍｐｌｅｍ  Ｍｅｄ、（２００６年）、１２巻（２号）：１２５〜１３２頁
【非特許文献１４】Ｊ  Ｍｅｄ  Ｆｏｏｄ、（２００７年）、１０巻（１号）：２５〜３１頁
【非特許文献１５】ＢＪＵＩ、（２００９年）、１５３巻（９号）：１２１５〜１２２１頁
【非特許文献１６】Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．（２００８年）、３１巻（６号）：１１０４〜１１０８頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明は、（ｉ）スルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニン；（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、好ましくは、グルコシダーゼ酵素、より好ましくは、チオグルコシダーゼ酵素、最も好ましくは、ミロシナーゼ；（ｉｉｉ）酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸および；（ｉｖ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を含む組成物を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファン前駆体、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、（ｉｉｉ）酵素増強物質および（ｉｖ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、対象において、癌、特に、乳癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌および膀胱癌を治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファン前駆体、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、（ｉｉｉ）酵素増強物質および（ｉｖ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、対象において、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１（ＮＱＯ−１）のレベルを増大するか、またはその遺伝子発現を増大する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファン前駆体、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、（ｉｉｉ）酵素増強物質および（ｉｖ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、キノンエストロゲンのレベルの上昇と関連する疾患または状態を、治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。
【００２７】
本発明は、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を含む組成物を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、対象において、癌、特に、乳癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌および膀胱癌を、治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ抽出物）または粉末を投与することを含む、対象において、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１（ＮＱＯ−１）のレベルを増大するか、またはその遺伝子発現を増大する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）スルホラファンまたはその誘導体および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、キノンエストロゲンのレベルの上昇と関連する疾患または状態を治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。
【００２８】
本発明は、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を含む組成物を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、対象において、癌、特に、乳癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌および膀胱癌を、治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、対象において、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１（ＮＱＯ−１）のレベルを増大するか、またはその遺伝子発現を増大する方法を提供する。本発明はまた、対象に、（ｉ）ブロッコリー抽出物または粉末および（ｉｉ）キノコ（好ましくは、マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末を投与することを含む、キノンエストロゲンのレベルの上昇と関連する疾患または状態を、治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】実施例４に記載されるような、アスコルビン酸を用いない３８℃でのグルコラファニンの変換を示すグラフである。
【図２】実施例４に記載されるような、アスコルビン酸濃度の関数としての、３８℃で約１０分以内の変換を示すグラフである。
【図３】実施例４に記載されるような、３８℃および１ｍＭアスコルビン酸で３０分以内のスルホラファンへの変換を示すグラフである。
【図４】実施例５に記載されるような、疑似腸液におけるグルコラファニンのスルホラファンへの変換を示すグラフである。
【図５】実施例６に記載される実験の結果を示すグラフである。
【図６】実施例７に記載される実験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明は、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびキノコ（マイタケ、シイタケまたはレイシキノコなど）抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、スルホラファンまたはその誘導体およびキノコ（マイタケ、シイタケまたはレイシキノコ）抽出物または粉末などの組合せに関する。本発明はまた、ブロッコリー抽出物または粉末およびマイタケ、シイタケまたはレイシキノコ抽出物または粉末の組合せに関する。本発明はまた、スルホラファン前駆体、スルホラファンまたはその誘導体およびブロッコリー抽出物のうち１種以上の混合物とともの、キノコ抽出物または粉末の使用に関する。本発明は、これらの組合せに関連する組成物を提供する。
【００３１】
本発明はまた、これらの組合せを投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、組合せは、対象に、投与することを含む、対象において、癌、特に、乳癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌および膀胱癌を治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少、および／またはその二次再発を低減するために投与され得る。いくつかの実施形態では、組合せは、対象においてＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１（ＮＱＯ−１）のレベルを増大するか、またはその遺伝子発現を増大するために投与され得る。いくつかの実施形態では、組合せは、キノンエストロゲンのレベルの上昇と関連する疾患または状態を治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少、および／またはその二次再発を低減するために投与され得る。
【００３２】
スルホラファンはまた、１−イソチオシアナト−４−メチルスルフィニルブタンとしても知られる。スルホラファンの誘導体として、それだけには限らないが、スルホラファンのスルホキシチオカルバメート類似体、６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネート（６−ＨＩＴＣ）ならびに異なる側鎖および／またはイソチオシアナトとスルホキシド基の間に種々の長さのスペーサーを有するスルホラファンの構造を含む化合物が挙げられる。スルホラファンの誘導体の例として、各々、参照によりその全文が組み込まれる以下の参考文献に記載されるものが挙げられる：Ｈｕら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、２０１３年、６４巻：５２９〜５３９頁；Ａｈｎら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２０１０年、１０７巻（２１号）：９５９０〜９５９５頁およびＭｏｒｉｍｉｓｔｕら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２００２年、２７７巻：３４５６〜３４６３頁およびＢａｉｒｄら、Ａｒｃｈ  Ｔｏｘｉｃｏｌ、２０１１年、８５巻（４号）：２４１〜２７２頁。
【００３３】
いくつかの実施形態では、組成物は、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約３μｇ〜約５ｇ、好ましくは、約５μｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約７μｇ〜約７５０ｍｇ、より好ましくは、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、最も好ましくは、約１００μｇ〜約１００ｍｇの量のスルホラファンまたはその誘導体、好ましくは、スルホラファンを含む。いくつかの実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約１ｍｇ〜約２０ｍｇを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象へのスルホラファンまたはその誘導体、好ましくはスルホラファンの、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約３μｇ〜約５ｇ、好ましくは、約５μｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約７μｇ〜約７５０ｍｇ、より好ましくは、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、最も好ましくは、約１００μｇ〜約１００ｍｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、本方法は、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの投与を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象への、スルホラファンまたはその誘導体、好ましくはスルホラファンの、約０．０１μｇ／ｋｇ〜約０．２ｇ／ｋｇ、好ましくは、約０．０５μｇ／ｋｇ〜約０．０７ｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．０７μｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１１ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約０．２μｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、本方法は、約２μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約０．３ｍｇ／ｋｇの投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。合計の一日用量とは、２４時間の期間で対象に投与される化合物または成分の総量を指す。
【００３５】
いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファンまたはその誘導体のうち２種以上の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、スルホラファンまたはその誘導体のうち２種以上を含む。例えば、方法または組成物は、スルホラファンおよび１種以上のその誘導体の両方または２種以上の誘導体を含み得る。方法または組成物がスルホラファンまたはその誘導体のうち２種以上を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各スルホラファンもしくはその誘導体の量または２種以上のスルホラファンもしくはその誘導体の総量を指し得る。
【００３６】
用語「スルホラファン前駆体」とは、スルホラファンを産生するために使用され得る任意の化合物、物質または材料を指す。好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体は、好ましくは、酵素によってスルホラファンに変換または代謝され得る化合物を含む。いくつかの好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体は、グルコラファニンを含む。グルコラファニンは、４−メチルスルフィニルブチルグルコシノレートおよび１−Ｓ−［（１Ｅ）−５−（メチルスルフィニル）−Ｎ−（スルホナトオキシ）ペンタンイミドイル］−１−チオ−Ｂ−Ｄ−グルコピラノースとしても知られるグルコシノレートである。
【００３７】
いくつかの実施形態では、組成物は、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約２５０μｇ〜約５ｇ、より好ましくは、約５００μｇ〜約２０００ｍｇ、さらにより好ましくは、約１ｍｇ〜約７５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約１．５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約２ｍｇ〜約１００ｍｇ、最も好ましくは、約３ｍｇ〜約７５ｍｇのスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを含む。いくつかの実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約３．５ｍｇ〜約５０ｍｇのスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、方法は、対象に、約１μｇ〜約１０ｇ、好ましくは、約２５０μｇ〜約５ｇ、より好ましくは、約５００μｇ〜約２０００ｍｇ、さらにより好ましくは、約１ｍｇ〜約７５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約１．５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、さらにより好ましくは、約２ｍｇ〜約１００ｍｇ、最も好ましくは、約３ｍｇ〜約７５ｍｇの量のスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約３．５ｍｇ〜約５０ｍｇの投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に、一定量のスルホラファン前駆体を、約１μｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約５μｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約７．５μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは、約１０μｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約２５μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの量で投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約５０μｇ／ｋｇ〜約８００μｇ／ｋｇの投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００３９】
いくつかの実施形態では、方法は、２種以上のスルホラファン前駆体の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、２種以上のスルホラファン前駆体を含む。方法または組成物が２種以上のスルホラファン前駆体を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各スルホラファン前駆体の量またはスルホラファン前駆体の総量を指し得る。
【００４０】
スルホラファン前駆体は、スルホラファンに変換または代謝され得る。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体は、酵素によってスルホラファンに変換される。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素は、グルコシダーゼ酵素、好ましくは、チオグルコシダーゼ酵素、より好ましくは、ミロシナーゼを含む。ミロシナーゼはまた、チオグルコシドグルコヒドロラーゼとしても知られる。
【００４１】
いくつかの実施形態では、組成物は、酵素を、約１ｐｇ〜約１μｇ、好ましくは、約５０ｐｇ〜約５００ｎｇ、最も好ましくは、約１ｎｇ〜約１５０ｎｇの量で含む。いくつかの実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約５ｎｇ〜約７５ｎｇの酵素を含む。
【００４２】
いくつかの実施形態では、方法は、酵素、好ましくは、ミロシナーゼを、約１ｐｇ〜約１μｇ、好ましくは、約５０ｐｇ〜約５００ｎｇ、最も好ましくは、約１ｎｇ〜約１５０ｎｇの量で投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約５ｎｇ〜約７５ｎｇの酵素の投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象に酵素を、約０．０２ｐｇ／ｋｇ〜約０．０２μｇ／ｋｇ、好ましくは、約０．７ｐｇ／ｋｇ〜約７ｎｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約０．０２ｎｇ／ｋｇ〜約２ｎｇ／ｋｇの量で投与することを含む。対象がヒトであるいくつかの好ましい実施形態では、方法は、約０．１ｎｇ／ｋｇ〜約１ｎｇ／ｋｇの投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００４３】
いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる２種以上の酵素の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる２種以上の酵素を含む。方法または組成物が２種以上の酵素を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各酵素の量または酵素の総量を指し得る。
【００４４】
本発明はまた、それだけには限らないが、ブロッコリー種子およびスプラウト抽出物および粉末を含めたブロッコリー抽出物および／または粉末の使用を提供する。本発明は、ブロッコリー抽出物および／または粉末を投与する方法ならびにブロッコリー抽出物および／または粉末を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末は、約１重量％〜約７５重量％、より好ましくは、約２．５％〜約５０％、さらにより好ましくは、約５％〜約２５％、最も好ましくは、約１０％〜約２０％のスルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンを含有するよう標準化される。ブロッコリー抽出物および粉末の例として、それだけには限らないが、各々参照によりその全文が組み込まれる、米国特許第５，４１１，９８６号；同５，７２５，８９５号；同５，９６８，５０５号；同５，９６８，５６７号；同６，１７７，１２２号；同６，２４２，０１８号；同６，５２１，８１８号；同７，３０３，７７０号および同８，１２４，１３５号に記載されたものが挙げられる。ブロッコリーの粉末は、例えば、ブロッコリー、好ましくは、ブロッコリースプラウトを風乾、凍結乾燥、ドラム乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥および／または部分真空乾燥することによって得られ得る。いくつかの実施形態では、組成物および方法は、約１μｇ〜約１０ｇ、より好ましくは、約２５０μｇ〜約５ｇ、さらにより好ましくは、約５００μｇ〜約１ｇ、好ましくは、約６００μｇ〜約５００ｍｇ、より好ましくは、約７５０μｇ〜約４００ｍｇ、最も好ましくは、約１ｍｇ〜約３００ｍｇのブロッコリー抽出物の使用を含む。いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末は、スルホラファン前駆体またはスルホラファンを上記の量で提供するのに十分な量で組成物中に存在するか、対象に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、方法は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸の投与をさらに含み得る。
【００４５】
スルホラファンもしくはその誘導体、スルホラファン前駆体および／またはスルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素は、それだけには限らないが、アブラナ科（アブラナ科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）としても知られる）由来の１種以上の植物を含めた任意の供給源から得られ得る。アブラナ科由来の植物の例として、それだけには限らないが、ブロッコリー、芽キャベツ、カリフラワー、キャベツ、セイヨウワサビ、パースニップ、ダイコン、ワサビ、クレソンおよび白ガラシが挙げられる。いくつかの好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニンおよび酵素、好ましくは、ミロシナーゼは、ブロッコリー、ブロッコリースプラウトまたはブロッコリー種子から得られる。スルホラファン前駆体および酵素は、同一供給源から得ても、異なる供給源から得てもよい。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体および酵素の両方が、これらの植物に由来する抽出物または粉末、好ましくは、ブロッコリー種子またはスプラウト抽出物または粉末から得られ得る。
【００４６】
本発明は、酵素増強物質の使用を提供する。酵素増強物質は、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素の活性を増強するために使用され得る。いくつかの実施形態では、酵素増強物質は、酵素補因子、好ましくは、アスコルビン酸を含む。アスコルビン酸はまた、アスコルビン酸塩またはビタミンＣとしても知られ、ミロシナーゼの活性を増強し得る。いくつかの実施形態では、アスコルビン酸などの酵素増強物質なしには、スルホラファンへの変換反応は遅すぎて、ピーク吸収に必要とされる部位で生じない場合がある。酵素増強物質は、天然供給源から得てもよく、または合成によって製造してもよい。
【００４７】
いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは、約１ｍｇ〜約２５０ｍｇ、最も好ましくは、約１ｍｇ〜約１２５ｍｇの酵素増強物質を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト使用に適した組成物は、約１ｍｇ〜約５０ｍｇの酵素増強物質を含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸の、約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは、１ｍｇ〜約２５０ｍｇ、最も好ましくは、約１ｍｇ〜約１２５ｍｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ〜約５０ｍｇの投与を含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、酵素増強物質、好ましくは、アスコルビン酸の、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、最も約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの量での投与を含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約０．７ｍｇ／ｋｇの酵素増強物質の投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００４９】
いくつかの実施形態では、方法は、２種以上の酵素増強物質の投与を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、２種以上の酵素増強物質を含む。方法または組成物が２種以上の酵素増強物質を含むいくつかの実施形態では、上記の量は、各酵素増強物質の量または酵素増強物質の総量を指し得る。
【００５０】
本発明は、キノコ抽出物または粉末の使用を提供する。いくつかの実施形態では、キノコは、それだけには限らないが、マイタケ、シイタケ、レイシ、クレミニ（ｃｒｅｍｉｎｉ）、アーモンド、クリ、キクラゲ（ｗｏｏｄ  ｅａｒ）、キクラゲ（ｃｌｏｕｄ  ｅａｒ）、ポルチーニ（ｐｏｒｃｉｎｉ）、インクキャップ（ｉｎｋ  ｃａｐ）、ヤルタグンブ（ｙａｒｔａ  ｇｕｎｂｕ）、エノキタケ、シメジ、タイガーミルク（ｔｉｇｅｒ  ｍｉｌｋ）、モレル（ｍｏｒｅｌ）、バンブー（ｂａｍｂｏｏ）、タモギタケ、ピンクオイスター（ｐｉｎｋ  ｏｙｓｔｅｒ）、エリンギ、ヒラタケ、カリフラワー、白キクラゲ、ゴールデンゼリー（ｇｏｌｄｅｎ  ｊｅｌｌｙ）、マツタケ、メキシカントリュフ（Ｍｅｘｉｃａｎ  ｔｒｕｆｆｌｅ）およびフクロタケを含めた「薬用キノコ」を含み得る。好ましい実施形態では、キノコは、マイタケキノコ、シイタケキノコ、レイシキノコおよび／またはこれらのうち１種以上の混合物を含む。
【００５１】
マイタケキノコは、マイタケ（Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ）種に属する。マイタケキノコは、生物活性を有するいくつかの画分を含有し得る。マイタケキノコにおいて見られる成分の例として、それだけには限らないが：グルカン（α−グルカンおよびβ−グルカンなど）；脂質（オクタデカン酸およびオクタデカジエン酸など）；リン脂質（ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリンおよびホスファチジン酸など）が挙げられる。
【００５２】
シイタケキノコは、シイタケ（ｌｅｎｔｉｎｕｌａ  ｅｄｏｄｅｓ）種に属する。シイタケキノコは、生物活性を有するいくつかの画分を含有し得る。シイタケキノコにおいて見られる成分の例として、それだけには限らないが、グルカン（α−グルカンおよびβ−グルカンなど）、タンパク質（レンチンなど）；脂質（リノール酸など）；およびリグニンが挙げられる。
【００５３】
レイシキノコは、レイシ（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ）種に属する。レイシキノコは、生物活性を有するいくつかの画分を含有し得る。レイシキノコに見られる成分の例として、それだけには限らないが：グルカン（α−グルカンおよびβ−グルカン）、カンタキサンチン、ステロール、クマリン、ガノデリン酸およびマンニトールが挙げられる。
【００５４】
いくつかの好ましい実施形態では、キノコ抽出物または粉末は、１種以上のグルカンを含む。グルカンは、グリコシド結合によって連結されたＤ−グルコースモノマーの多糖であり、αまたはβ型であり得る。いくつかの実施形態では、グルカンは、１種以上のα−グルカンおよび／またはβ−グルカンを含む。α−グルカンとして、それだけには限らないが、１，４−α−グルカンおよび１，６−α−グルカンが挙げられ、β−グルカンとして、それだけには限らないが、１，３−β−グルカン、１，４−β−グルカンおよび１，６−β−グルカンが挙げられる。グルカンは、種々のポリマーコンフィギュレーションで発現され得る。好ましい実施形態では、マイタケキノコ抽出物または粉末は、１，３−β−グルカンおよび／または１，６−β−グルカンを含む。好ましい実施形態では、シイタケキノコ抽出物または粉末は、１，４−α−グルカンを含む。好ましい実施形態では、レイシキノコ抽出物または粉末は、１，３−β−グルカンおよび／または１，６−β−グルカンを含む。いくつかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、キノコ抽出物または粉末の代わりに、精製された形態のグルカンまたは合成によって製造されたグルカンの使用を含み得る。
【００５５】
いくつかの実施形態では、マイタケキノコ抽出物または粉末が使用され得る。いくつかの実施形態では、マイタケキノコ抽出物または粉末は、約１％〜約７５％、より好ましくは、約５％〜約５０％、さらにより好ましくは、約１０％〜約３０％、最も好ましくは、約１５％〜約２０％の１種以上のグルカン、好ましくは、β−グルカン、より好ましくは、１，３−βグルカンおよび／または１，６−β−グルカンを含有するよう標準化される。マイタケキノコ抽出物および粉末の例として、それだけには限らないが、各々、その全文が参照により組み込まれる米国特許第５，８５４，４０４号；ＷＯ２００７１４２１３０、ＥＰ０８９３４４９；ＷＯ２００９０６３８８５；ＷＯ２００６１０７２０８；ＷＯ２００７０２４４９６；およびＷＯ２００１０５４６７３に記載されるものが挙げられる。マイタケキノコの粉末は、例えば、マイタケキノコを風乾、凍結乾燥、ドラム乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥および／または部分真空乾燥することによって得られ得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約２５０μｇ〜約１００ｍｇ、好ましくは、約５００μｇ〜約７５ｍｇ、最も好ましくは、約７５０μｇ〜約５０ｍｇを含む。いくつかの実施形態では、ヒトに適した組成物は、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのマイタケキノコ抽出物を含む。いくつかの実施形態では、方法は、約２５０μｇ〜約１００ｍｇ、好ましくは、約５００μｇ〜約７５ｍｇ、最も好ましくは、約７５０μｇ〜約５０ｍｇの投与を含む。対象がヒトであるいくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのマイタケキノコ抽出物の投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００５６】
いくつかの実施形態では、シイタケキノコ抽出物または粉末が使用され得る。いくつかの実施形態では、シイタケキノコ抽出物または粉末は、約１％〜約７５％、好ましくは、約１０％〜約６０％、さらにより好ましくは、約２５％〜約５０％、最も好ましくは、約３０％〜約４０％の１種以上のグルカン、好ましくは、α−グルカン、より好ましくは、１，４−α−グルカンを含有するよう標準化される。シイタケキノコ抽出物の例として、それだけには限らないが、各々、参照によりその全文が組み込まれる、米国特許第５，７８０，０９７号；同６，５８２，７２３号；ＷＯ２００５１０７４９６、ＷＯ２００７０２４４９６およびＷＯ２００００３３０６９に記載されるものが挙げられる。マイタケキノコの粉末は、例えば、マイタケキノコを風乾、凍結乾燥、ドラム乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥および／または部分真空乾燥することによって得られ得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍｇ〜約１ｇ、好ましくは、約１０ｍｇ〜約５００ｍｇ、最も好ましくは、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇを含む。いくつかの実施形態では、ヒトに適した組成物は、約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇのシイタケキノコ抽出物または粉末を含む。いくつかの実施形態では、方法は、約１ｍｇ〜約１ｇ、好ましくは、約１０ｍｇ〜約５００ｍｇ、最も好ましくは、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇの投与を含む。対象がヒトであるいくつかの好ましい実施形態では、方法は、対象への約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇのシイタケキノコ抽出物または粉末の投与を含む。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。上記の量は、個々の用量の投与または合計の一日用量を指し得る。
【００５７】
いくつかの実施形態では、レイシキノコ抽出物または粉末が使用され得る。いくつかの実施形態では、レイシキノコ抽出物は、約１％〜約７５％、より好ましくは、約５％〜約５０％、さらにより好ましくは、約１０％〜約３０％、最も好ましくは、約１５％〜約２０％の１種以上のグルカン、好ましくは、β−グルカン、より好ましくは、１，３−βグルカンおよび／または１，６−β−グルカンを含む。マイタケキノコの粉末は、例えば、マイタケキノコを風乾、凍結乾燥、ドラム乾燥、噴霧乾燥、加熱乾燥および／または部分真空乾燥することによって得られ得る。
【００５８】
いくつかの実施形態では、組成物および／または方法は、マイタケキノコ抽出物もしくは粉末、シイタケキノコ抽出物もしくは粉末またはレイシキノコ抽出物もしくは粉末などのキノコ抽出物または粉末のうち１種の使用を含む。いくつかの実施形態では、組成物および／または方法は、１種以上の種類のキノコ抽出物または粉末の混合物の使用を含む。いくつかの実施形態では、組成物および／または方法は、マイタケキノコ抽出物または粉末、シイタケキノコ抽出物または粉末およびレイシキノコ抽出物または粉末のうち１種以上の混合物の使用を含む。組成物および方法は、抽出物もしくは粉末または抽出物および粉末の混合物の使用を含み得る。
【００５９】
本発明はまた、キノコ抽出物または粉末の代わりに、またはそれに加えて任意のグルカンの豊富な成分の使用を提供する。グルカンの豊富な成分の一例として、パン酵母がある。いくつかの実施形態では、酵母調製物が使用され得る。いくつかの実施形態では、酵母調製物は、約０．１％〜約５０％、好ましくは、約０．５％〜約２５％、最も好ましくは、約０．５％〜約１０％の１種以上のグルカンを含む。酵母調製物の例として、各々、参照によりその全文が組み込まれる、米国特許第５，２２３，４９１号および米国特許第５，５７６，０１５号において論じられるものが挙げられる。
【００６０】
本発明の方法は、１種以上のさらなる成分の投与をさらに含み得る。本発明の組成物は、１種以上のさらなる成分をさらに含み得る。さらなる成分は、医薬品有効成分、栄養補助食品および栄養抽出物を含み得る。さらなる成分の例として、それだけには限らないが、ウルソール酸、ケルセチンまたはその誘導体、グルコサミンなどのアミノ糖、コンドロイチンなどのグリコサミノグリカン、アボカド／ダイズ不けん化物、ビタミンＫ２などのビタミン、コーヒー果実、マグネシウム、ウルソール酸、プロアントシアニジン、α−およびβ−グルカン、クルクミン、フィトステロール、フィトスタノールならびにＳ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭｅ）が挙げられる。これらのさらなる成分は、オオアザミ（シリブムマリアナム（Ｓｉｌｙｂｕｍ  ｍａｒｉａｎｕｍ））抽出物（シリマリン）、クランベリー（ヴァシニアム・マクロカーポン（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ））抽出物（プロアントシアニジン、ケルセチンおよびウルソール酸）、ウコン（クルクマ・ロンガ（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ））中に存在し得る。
【００６１】
いくつかの実施形態では、β−グルカン対スルホラファンまたはその誘導体の比（β−グルカン：スルホラファンまたはその誘導体）は、約５０：１〜約１：５０、好ましくは、約２５：１〜約１：２５、より好ましくは、約１０：１〜約１：２０、より好ましくは、約５：１〜約１：１０、さらにより好ましくは、約１：１〜約１：８、最も好ましくは、約１：３〜約１：５である。いくつかの実施形態では、α−グルカン対スルホラファンまたはその誘導体の比（α−グルカン：スルホラファンまたはその誘導体）は、約１：５０〜約５０：１、好ましくは、約１：１０〜約２５：１、より好ましくは、約１：５〜約２０：１、より好ましくは、約１：１〜約１５：１、さらにより好ましくは、約２：１〜約１０：１、最も好ましくは、約３：１〜約８：１である。いくつかの実施形態では、β−グルカン対スルホラファン前駆体の比（β−グルカン：スルホラファン前駆体）は、約５０：１〜約１：５０、好ましくは、約３０：１〜約１：３５、より好ましくは、約２０：１〜約１：２５、より好ましくは、約１０：１〜約１：２０、さらにより好ましくは、約５：１〜約１：１５、最も好ましくは、約１：１〜約１：１０である。いくつかの実施形態では、α−グルカン対前駆体の比（α−グルカン：前駆体）は、約１：５０〜約１００：１、好ましくは、約１：２５〜約７５：１、より好ましくは、約１：１０〜約５０：１、より好ましくは、約１：５〜約４０：１、さらにより好ましくは、約１：１〜約３０：１、最も好ましくは、約２：１〜約２０：１である。
【００６２】
いくつかの実施形態では、組成物は、それだけには限らないが、経口、直腸、静脈内、皮下、筋肉内、経皮、経粘膜および局所に適した医薬剤形を含めた単位剤形を含む。いくつかの好ましい実施形態では、組成物は、経口投与可能な剤形または直腸投与可能な剤形を含む。経口投与可能な剤形の例として、それだけには限らないが、錠剤、カプセル剤、飲料中に分散可能な粉末、溶液、懸濁液もしくはエマルジョンなどの液体、ソフトゲル／チュアブルカプセル剤、チュアブルバーまたは当技術分野で公知のその他の好都合な剤形が挙げられる。好ましい実施形態では、組成物は、錠剤、カプセル剤またはソフトチュアブルトリートを含む。経口投与可能な剤形は、即時放出、持続放出または遅延放出用に製剤化され得る。
【００６３】
いくつかの実施形態では、少なくともスルホラファン前駆体、酵素および酵素増強物質は、少なくとも４、好ましくは、少なくとも５のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、小腸、好ましくは、十二指腸における放出を可能にする剤形で提供される。いくつかの実施形態では、少なくともスルホラファンまたはその誘導体および／あるいはブロッコリー抽出物または粉末は、少なくとも４、好ましくは、少なくとも５のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、小腸、好ましくは、十二指腸における放出を可能にする剤形で提供される。いくつかの実施形態では、キノコ抽出物または粉末および／あるいは何らかの任意選択のさらなる成分も、少なくとも４、好ましくは、少なくとも５のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、小腸、好ましくは、十二指腸において放出される。小腸は、十二指腸、空腸および回腸を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、これらの成分の各々（すなわち、スルホラファン前駆体、酵素、酵素増強物質、スルホラファンまたはその誘導体、ブロッコリー抽出物または粉末、キノコ抽出物または粉末および／あるいはさらなる成分）は、同時にまたは付随して（すなわち、互いに短い期間内に）放出される。これは、４未満のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、胃においてグルコラファニンを放出するよう製剤化されたグルコラファニン含有組成物を上回る利益を提供する。これなどの低ｐＨ環境では、酸性環境は、スルホラファン前駆体の変換をその他の生理学的に不活性の最終産物、例えば、スルホラファンニトリルおよびエピチオニトリルに変え得る。
【００６５】
いくつかの実施形態では、組成物は、腸溶コーティング剤形または４未満のｐＨを有する胃腸管の領域、例えば、胃における分解に対して耐性である任意の剤形を含む経口投与可能な組成物を含み得る。例えば、経口投与可能な組成物は、腸溶コーティングを含む錠剤またはカプセル剤を含み得る。腸溶コーティングは、それだけには限らないが、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタル酸ポリビニル、メタクリル酸コポリマー、メタクリル酸：アクリル酸エステルコポリマー、ヒドロキシプロピルメチル酢酸コハク酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルローストリメリテート、セラック、セルロースアセテートトリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロースおよびそれらの混合物を含めた材料を含み得る。腸溶コーティングは、当技術分野で公知の任意の適した腸溶性ポリマーを含み得る。いくつかの実施形態では、組成物中の成分のうち１種以上が、腸溶性ポリマーのマトリックス中に包埋され得る。いくつかの実施形態では、経口投与可能な組成物は、胃酸中でゆっくりと溶解し、小腸へ移動するカプセル剤、例えば、ＣＡＰＳＵＧＥＬ（登録商標）によって市販されているＤＲＣＡＰＳ（商標）耐酸性カプセル剤または任意のその他の耐酸性カプセル剤を含む。
【００６６】
最も好ましい形態では、経口投与可能な組成物は、周囲の媒体が、少なくとも４、より好ましくは、少なくとも５のｐＨでない限り溶解しないコーティングによって囲まれている。あるいは、ｐＨでなく時間によって放出を制御するコーティングが使用され得、速度は、胃腸管のｐＨが、少なくとも４、より好ましくは、少なくとも５に上がった後まで成分が放出されないよう調整される。したがって、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素および酵素増強物質の、またはスルホラファンの胃での存在を防ぐよう、徐放製剤が使用され得る。標準コーティング技術を使用して、コーティング層（複数可）が、経口投与可能な組成物上に適用され得る。腸溶コーティング材料は、有機または水性溶媒中に溶解または分散され得る。腸溶コートが溶解するｐＨは、選択されたポリマーもしくはポリマーの組合せおよび／またはペンダント基の割合によって制御され得る。例えば、ポリマーフィルムの溶解特徴は、自由なカルボキシル基対エステル基の割合によって変更され得る。腸溶コーティング層はまた、クエン酸トリエチル、フタル酸ジブチル、トリアセチン、ポリエチレングリコール、ポリソルベートまたはその他の可塑剤などの医薬上許容される可塑剤も含有する。分散剤、着色剤、抗接着剤および消泡剤などの添加剤も含まれ得る。
【００６７】
組成物は、１種以上の非医薬品有効成分（一般に「賦形剤」としても知られる）を含有し得る。非有効成分は、例えば、有効成分を、使用するのに安全で、好都合なそうでなければ許容される、適用可能な、有効な調製物に、可溶化、懸濁、増粘、希釈、乳化、安定化、保存、保護、着色、風味づけおよび形作るのに役立つ。賦形剤は、医薬上許容される賦形剤であることが好ましい。医薬上許容される賦形剤のクラスの例として、滑沢剤、緩衝剤、安定化剤、発泡剤、色素、着色剤、香味剤、増量剤、嵩高剤、芳香、放出調整剤、アジュバント、可塑剤、流動促進剤、離型剤、ポリオール、造粒剤、希釈剤、結合剤、緩衝剤、吸収剤、流動促進剤、接着剤、抗付着剤、酸味料、軟化剤、樹脂、粘滑薬、溶媒、界面活性剤、乳化剤、エラストマーおよびそれらの混合物が挙げられる。
【００６８】
いくつかの実施形態では、（ｉ）スルホラファン前駆体、好ましくは、グルコラファニン、（ｉｉ）スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、好ましくは、グルコシダーゼ酵素、より好ましくは、チオグルコシダーゼ酵素、最も好ましくは、ミロシナーゼ、（ｉｉｉ）酵素増強物質、好ましくは、酵素補因子、より好ましくは、アスコルビン酸および（ｉｖ）キノコ抽出物または粉末（グルカンを含有する）の組合せは、相乗作用を示す。いくつかの実施形態では、スルホラファン（またはその誘導体）およびキノコ抽出物または粉末（グルカンを含有する）の組合せは、相乗効果を示す。相乗とは、２種以上の成分の組合せが、単独で使用された場合に物質よってもたらされる効果の合計より大きい結果を提供する効果を指す。好ましい実施形態では、相乗効果は、相加効果より大きい。いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびマイタケ、シイタケまたはレイシキノコ抽出物または粉末の組合せは、（ｉ）各成分単独、（ｉｉ）スルホラファン前駆体および酵素の組合せ単独ならびに／または（ｉｉｉ）スルホラファン前駆体、酵素および酵素増強物質の組合せ単独と比較して統計的に有意に大きい効果を有する。
【００６９】
好ましい実施形態では、スルホラファン前駆体、酵素、酵素増強物質およびキノコ抽出物または粉末（グルカンを含有する）の組合せは、スルホラファン前駆体単独およびキノコ抽出物または粉末単独と比較して、統計的に有意なおよび／または相加より大きい効果を有することによって相乗作用を示す。いくつかの実施形態では、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびキノコ抽出物または粉末の組合せは、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸単独の組合せと比較して、またグルカン単独と比較して、相乗効果を有する。
【００７０】
いくつかの実施形態では、スルホラファン（またはその誘導体）およびキノコ抽出物または粉末の組合せは、（ｉ）スルホラファン（もしくはその誘導体）単独、および／または（ｉｉ）キノコ抽出物もしくは粉末単独よりも、統計的に有意な、および／または相加よりも大きな効果を有する。いくつかの実施形態では、スルホラファンおよびグルカンの組合せは、スルホラファン単独およびグルカン単独と比較して相乗効果を有する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末およびキノコ抽出物または粉末の組合せは、（ｉ）ブロッコリー抽出物もしくは粉末単独および／または（ｉｉ）キノコ抽出物もしくは粉末単独よりも、統計的に有意なおよび／または相加より大きな効果を有する。いくつかの実施形態では、ブロッコリー抽出物または粉末およびグルカンの組合せは、ブロッコリー抽出物または粉末単独およびグルカン単独と比較して相乗効果を有する。
【００７２】
本発明は、それを必要とする対象へ投与する方法を含めた使用する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質およびキノコ抽出物または粉末の組合せの投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファンまたはその誘導体およびキノコ抽出物または粉末の組合せの投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、ブロッコリー抽出物または粉末およびキノコ抽出物または粉末の組合せの投与を含む。
【００７３】
いくつかの実施形態では、方法は、対象において、癌、特に、乳癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌、肝臓癌および膀胱癌を治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少、および／またはその二次再発を低減することに関する。方法は、乳房、前立腺、結腸、肺、肝臓および膀胱などの組織および臓器への損傷を低減することまたは損傷を減速することにおいて有用であり得る。本発明は、生殖系（それだけには限らないが、乳房および前立腺を含む）、結腸、肝臓、膀胱、腎臓、中枢神経系、心血管系、肺系、泌尿生殖器系、造血系および関節と関連する疾患および状態を治療、予防、それと関連する症状を減少、および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。本発明はまた、良性嚢胞などの嚢胞を治療、予防、それと関連する症状を減少、および／またはその二次再発を低減する方法を提供する。
【００７４】
いくつかの実施形態では、方法は、対象において、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１（ＮＱＯ−１）のレベルを増大するか、またはその遺伝子発現を増大することに関する。方法はまた、ＮＱＯ−１の遺伝子発現またはレベルの増大から恩恵を受けるであろう疾患および状態の治療、予防、それに関連する症状の減少および／またはその二次再発の低減においても有用であり得る。このような疾患および状態の例として、それだけには限らないが、癌、骨髄異形成症候群、心血管疾患および遅発性ジスキネジアが挙げられる。
【００７５】
いくつかの実施形態では、本方法は、キノンエストロゲンのレベルの上昇と関連する疾患または状態を治療、予防、その発生を低減、それと関連する症状を減少および／またはその二次再発を低減することに関する。このような疾患または状態の例として、それだけには限らないが、癌、骨髄異形成症候群、心血管疾患および遅発性ジスキネジアが挙げられる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、方法は、バイオマーカーに対して有益な効果を提供することおよびこれらのバイオマーカーの異常なレベルと関連する症状を治療、予防し、その発生を低減し、それと関連する症状を減少させることに関する。このようなバイオマーカーの例として、それだけには限らないが、ＮＡＤＰＨ依存性酵素、チオレドキシン（ＴＸＮ）、チオレドキシンレダクターゼ−１（Ｔｘｎｒｄ−１）、グルタミン酸−システインリガーゼサブユニット（ＧＣＬＣ）、スルホトランスフェラーゼ１Ａ１（ＳＵＬＴ１Ａ１）、ヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＭＯＸ１）、グルタチオンペルオキシダーゼ−３（ＧＰｘ−３）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼθ２（ＧＳＴＴ２）、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ１（ＭＧＳＴ１）、アルデヒドオキシダーゼ（ＡＯＸ１）、アルド−ケト還元酵素１Ｂ８（Ａｋｒ１ｂ８）、フラビン含有モノオキシゲナーゼ２（ＦＭＯ２）、Ｆｅ受容体領域受容体ＩＩＩ（Ｆｃｇｒ３）、トリプターゼβ１（ＴＰＳＢ１）、肥満細胞プロテアーゼ−６（Ｍｃｐｔ６）、ニューレキシン−１−α（ＮＲＸＮ−１）、小眼球症関連転写因子（ＭＩＴＦ）、ＩＩ型ヨードチロニンデヨージナーゼ（ＤＩＯ２）、アンジオポエチン−１４（Ａｎｇｐｔ１４）、分化抗原（ＣＤ３６）およびＮｔｅｌが挙げられる。これらのバイオマーカーの高いまたは異常なレベルと関連する疾患または状態として、それだけには限らないが、癌、肺および中枢神経系結核、多発性硬化症、クローン病、アテローム性動脈硬化症、変形性関節症、喘息、卒中、肺気腫、糖尿病性腎症、慢性組織球性胎盤絨毛組織炎、高血圧症、腹部大動脈瘤、炎症性腸疾患、慢性副鼻腔炎、冠動脈疾患および腎臓疾患が挙げられる。
【００７７】
いくつかの実施形態では、方法は、スルホラファンおよびグルカンを含有するキノコ抽出物または粉末の組合せを、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ブロッコリー抽出物または粉末およびグルカンを含有するキノコ抽出物または粉末の組合せを、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの好ましい実施形態では、方法は、対象に、グルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびグルカンを含有するキノコ抽出物または粉末の組合せを投与することを含む。好ましい実施形態では、組合せは、本発明の方法において相乗効果を示す。
【００７８】
好ましい実施形態では、組合せの１種以上の成分（例えば、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素、酵素増強物質、キノコ抽出物もしくは粉末；またはスルホラファンもしくはその誘導体およびキノコ抽出物もしくは粉末；またはブロッコリー抽出物もしくは粉末およびキノコ抽出物もしくは粉末）は、１種の組成物または剤形で一緒に、または別個に、好ましくは、治療特性が重複する期間内に投与される。いくつかの実施形態では、組合せの成分は、２種以上の経口投与可能な組成物または剤形で投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、スルホラファン前駆体、スルホラファン前駆体をスルホラファンに変換できる酵素および酵素増強物質は、１種の経口投与可能な剤形で投与されるが、キノコ抽出物または粉末は、１種以上の別個のまたはさらなる経口投与可能な剤形で投与される。好ましい実施形態では、組合せの成分は、１つの剤形で投与される。
【００７９】
いくつかの実施形態では、組合せは、１日１〜１０回、好ましくは、１日１〜５回、より好ましくは、１日１〜３回、最も好ましくは、１日１回の頻度で投与され得る。
【００８０】
本願において開示される用量は、好ましくは、ヒトに適した用量を指す。用量算出は、体重、表面積、代謝速度および種差を評価することによって当業者によって決定され得る。
【００８１】
用語「対象」とは、哺乳動物およびトリを含めた任意の動物を指す。哺乳動物として、それだけには限らないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ラクダ、ゾウ、ライオン、トラ、クマ、アシカおよびウサギが挙げられる。好ましい実施形態では、対象は、ヒト、ネコおよびイヌなどの食物として消費されない哺乳動物を含む。
【実施例１】
【００８２】
製剤
【００８３】
以下は、本発明の例示的製剤である。
【００８４】
製剤Ａ
グルコラファニン含有ブロッコリー種子抽出物（約１２重量％）、５０ｍｇ〜５グラム、ミロシナーゼ含有凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、アスコルビン酸、１ｍｇ〜５０ｍｇ、αグルカン含有シイタケキノコ抽出物（約４０重量％）、１ｍｇ〜２５０ｍｇ
【００８５】
製剤Ｂ
グルコラファニン含有ブロッコリー種子抽出物（約１２重量％）、５０ｍｇ〜５グラム、ミロシナーゼ含有凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、アスコルビン酸、１ｍｇ〜５０ｍｇ、βグルカン含有マイタケキノコ抽出物（約２０重量％）、１〜１００ｍｇ
【００８６】
製剤Ｃ
以下を含む経口投与可能組成物：
ブロッコリー種子抽出物
ブロッコリースプラウト抽出物
マイタケキノコ抽出物
アスコルビン酸
ヒドロキシプロピルメチルセルロース
微晶質セルロース
コーンスターチ
エチルセルロース
クロスカルメロースナトリウム
デンプングリコール酸ナトリウム
クロスポビドン
二酸化ケイ素
アルギン酸ナトリウム
中鎖トリグリセリド
マルトデキストリン
オレイン酸
ステアリン酸マグネシウム
ステアリン酸
【実施例２】
【００８７】
以下の条件を含む疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）法を開発した：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨアミド、１．７μｍ粒径；２．１ｍｍ×１００ｍｍ
移動相：２０％  １０ｍＭ  酢酸アンモニウム、ｐＨ５．０；８０％アセトニトリル；
分離モード：イソクラティック
カラム温度：７０℃
流速：０．７ｍｌ／分
上記の条件によって、スルホラファン前駆体、グルコラファニンを含めた典型的なアブラナ科グルコシノレート５種の分離が可能となる。
【実施例３】
【００８８】
アスコルビン酸濃度の関数としてのグルコラファニンの消費
約１２重量％のグルコラファニンを含有する約２５０ｍｇのブロッコリー種子抽出物を、０〜６００μモル／リットルの範囲の可変濃度のアスコルビン酸の存在下での、固定濃度のブロッコリースプラウト由来ミロシナーゼによる加水分解に付した。反応混合物を３８℃で温度制御し、６０分間の間、１５分毎にアリコートを取り出し、クロマトグラフィーによってグルコラファニンの濃度を決定した。グルコラファニン消費速度は、スルホラファンへのその変換速度として解釈した。増大するアスコルビン酸濃度の関数としてのグルコラファニン含量低減のグラフ表示は、一連の直線プロットをもたらし、線形回帰直線の傾斜は、μモル／分でのグルコラファニン消費の速度を反映する。６００μモル／リットル濃度のアスコルビン酸の存在下で、反応速度が、アスコルビン酸の調節効果の不在下で進行するものと比較して１３倍に増大したことは明らかである。
【００８９】
【表１】
2020128416.tif 000003
【実施例４】
【００９０】
グルコラファニンのスルホラファンへの等モル変換
【００９１】
ミロシナーゼ活性の調節におけるアスコルビン酸の役割をさらに解明するために、２パートの実験を実施した。すべての溶液は、ミロシナーゼ活性にとって最適とこれまでに同定されたｐＨ７．５の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水中で調製し；各サンプルチューブは、ミロシナーゼの供給源として、正確に秤量された１００ｍｇの凍結乾燥ブロッコリー粉末を有していた。実験は、３８℃で２時間実施し、３０分刻みでサンプルアリコートを採取し、ＨＰＬＣによってグルコラファニンおよびスルホラファン両含量を評価した。強酸性「停止」溶液を利用して、採取したアリコートにおいてさらなるミロシナーゼ活性を即時的に阻害した。対照サンプルは、アスコルビン酸を含有しておらず、酵素的変換は、補因子によって補助されずに進行した。
【００９２】
パート１。固定濃度のアスコルビン酸の存在下で（１ｍｍｏｌ／リットル）、２５０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲の増大する量のブロッコリー種子抽出物（約１２重量％グルコラファニン）を添加した。
【００９３】
パート２。２５０ｍｇで固定されたブロッコリー種子抽出物の量を維持しながら、アスコルビン酸の濃度を０．４ｍｍｏｌ／リットル〜３．８ｍｍｏｌ／リットルで変えた。
【００９４】
以下の表は、μモルで表されるグルコラファニンおよびスルホラファンを示す。ほとんどの反応混合物において最初の３０分以内に、グルコラファニンのスルホラファンへの変換が完了したことは明らかである。しかし、アスコルビン酸の刺激効果を伴わない、対照サンプルにおいて生じる酵素的変換の注意深い検討によって、グルコラファニンのスルホラファンへの等モル変換が示され、すなわち、消費されるグルコラファニンの量は、等量の産生されるスルホラファンをもたらす。
【００９５】
【表２】
2020128416.tif 000004
【００９６】
実験のパート２では、ミロシナーゼの活性に対する増大する濃度のアスコルビン酸の調節効果を評価した。グルコラファニンのスルホラファンへのミロシナーゼによって促進される変換の、最初の、見かけ上線形の増大が、約２ｍｍｏｌ／Ｌのアスコルビン酸濃度まで観察され、続いてその後、かなり横ばい状態となる。
【００９７】
最後に、実験のパート１の３０分後のスルホラファン収量の検討は、１ｍｍｏｌ／リットルのアスコルビン酸の存在下で、１００ｍｇの凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末中に含有される固定量のミロシナーゼは、予想可能な線形で、少なくとも２００μモルのスルホラファンを産生できることを示す。図１、２、３および４は、この研究の結果を示す。
【実施例５】
【００９８】
疑似腸液の存在下でのグルコラファニンのスルホラファンへの変換
【００９９】
疑似腸液（ＳＩＦ）粉末（組成物、ｐＨおよびイオン強度の点でヒト腸内容物を密接に近似する商業的に供給される濃縮物）を使用した。実験は、ＵＳＰ溶解装置２（パドル式）を使用し、これでは、６つの溶解容器中に、５００ｍｌの疑似腸液を、ミロシナーゼの供給源として１５０ｍｇの凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末とともに分注した。容器１〜４では、アスコルビン酸の濃度を０．２５〜１．００ｍｍｏｌ／リットルで変え、容器５では、１ｍｍｏｌ／リットルのアスコルビン酸に加えて、３．１２５ｇのパンクレアチン８ｘ  ＵＳＰ）を懸濁し；容器６では、１ｍｍｏｌ／リットルのアスコルビン酸に加えて、３．１２５ｇのパンクレアチン（８ｘ  ＵＳＰ）、２倍量の凍結乾燥ブロッコリースプラウト粉末（３００ｍｇ）を加えた。容器を３８℃にしたのち、各々に、２５０ｍｇのグルコラファニンの豊富な（１２重量％）ブロッコリー種子抽出物を加え、得られた懸濁液を７５ＲＰＭで２時間撹拌した。１５分毎にアリコートを取り出し、スルホラファンについてアッセイした。図４は、特に、実験の最初の段階でのスルホラファンの高い収率とアスコルビン酸の高い濃度の間の直接相関を示す。
【実施例６】
【０１００】
以下の研究を実施して、Ｎａｄ（Ｐ）Ｈ：キノンオキシドレダクターゼ１（ＮＱＯ−１）の遺伝子発現に対する、スルホラファンおよび２０％  ｂ-グルカンを含有するマイタケキノコ抽出物の組合せの効果を調べた。ＮＱＯ−１は、エストロゲンキノンを代謝して、それらが、突然変異および最終的には発癌を引き起こすＤＮＡ付加体を形成するのを妨ぐことができるタンパク質をコードする。ＮＱＯ−１発現の増大は、乳房、結腸、肝臓、肺、皮膚および前立腺の健康にとって好都合である。
【０１０１】
この研究では、マクロファージ細胞系統ＲＡＷ２６４．７を、ＤＭＳＯ（媒体対照）、スルホラファン（ＳＦＮ）、約２０％のβ−グルカン含量を有するマイタケキノコ抽出物（マイタケ）またはスルホラファンおよびマイタケキノコ抽出物の組合せを用いて２４時間処理した。特に、細胞を、（ｉ）ＤＭＳＯ（媒体対照）、（ｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮ、（ｉｉｉ）２５０μｇ／ｍｌマイタケ、（ｉｖ）５００μｇ／ｍｌマイタケ、（ｖ）７５０μｇ／ｍｌマイタケ、（ｖｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび２５０μｇ／ｍｌマイタケ、（ｖｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび５００μｇ／ｍｌマイタケならびに（ｖｉｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび７５０μｇ／ｍｌマイタケのうち１種を用いて処理した。ＮＱＯ−１遺伝子発現の遺伝子発現を、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって分析した。図５に表わされる結果は、以下を示す：
【表３】
2020128416.tif 000005
【０１０２】
結果は、スルホラファンおよびマイタケキノコ抽出物の組合せが、各成分単独と比較して相乗効果を有していたことを示している。この効果は、単に相加的にとどまらないものであることがわかった。
【実施例７】
【０１０３】
以下の研究は、Ｎａｄ（Ｐ）Ｈ：キノンキノンオキシドレダクターゼ１（ＮＱＯ−１）の遺伝子発現に対する、スルホラファンおよび４０％のαグルカンを含有するシイタケキノコ抽出物の組合せの効果を調べるために実施した。
【０１０４】
この研究では、マクロファージ細胞系統ＲＡＷ２６４．７を、ＤＭＳＯ（媒体対照）、スルホラファン（ＳＦＮ）、少なくとも２０％のα−グルカン含量を有するシイタケキノコ抽出物（シイタケ）またはスルホラファンおよびシイタケキノコ抽出物の組合せを用いて、２４時間処理した。特に、細胞を、（ｉ）ＤＭＳＯ（媒体対照）、（ｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮ、（ｉｉｉ）１００μｇ／ｍｌシイタケ、（ｉｖ）２５０μｇ／ｍｌシイタケ、（ｖ）５００μｇ／ｍｌシイタケ、（ｖｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび１００μｇ／ｍｌシイタケ、（ｖｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび２５０μｇ／ｍｌシイタケならびに（ｖｉｉｉ）０．５μＭ  ＳＦＮおよび５００μｇ／ｍｌシイタケのうち１種を用いて処理した。ＮＱＯ−１遺伝子発現の遺伝子発現を、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって分析した。図６に表わされる結果は、以下を示す：
【表４】
2020128416.tif 000006
【０１０５】
結果は、スルホラファンおよびシイタケキノコ抽出物の組合せが、各成分単独と比較して相乗効果を有していたことを実証する。この効果は、単に相加的にとどまらないものであることがわかった。
【実施例８】
【０１０６】
対象は、乳癌を呈し、損傷を受けた乳房組織および乳房疼痛を含めた症状に苦しんでいる。この女性にグルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびマイタケキノコ抽出物を含有する錠剤を投与する。錠剤は、小腸において内容物を放出する腸溶コーティング製剤である。錠剤の毎日投与の１か月後、対象は、症状の改善と相関する、ＮＱＯ−１を含めた代替バイオマーカーの調節を経験する。
【実施例９】
【０１０７】
対象は、乳癌を呈し、損傷を受けた乳房組織および乳房疼痛を含めた症状に苦しんでいる。この女性にグルコラファニン、ミロシナーゼ、アスコルビン酸およびシイタケキノコ抽出物を含有する錠剤を投与する。錠剤は、小腸において内容物を放出する腸溶コーティング製剤である。錠剤の毎日投与の１か月後、対象は、症状の改善と相関する、ＮＱＯ−
１を含めた代替バイオマーカーの調節を経験する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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