(57)【要約】      （修正有）【課題】臓器の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防のための、特に３５歳以上の臓器のＩＲＩの予防のための医薬組成物の提供。【解決手段】ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターを含有する医薬組成物であって、拡張条件ドナー（ＥＣＤ）由来の、虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）のリスクがある腎臓のＩＲＩの予防のために用いられ、インビボまたはエクスビボで臓器を一時的ｐ５３インヒビターと接触させることを必要とする。新規の一時的ｄｓＮＡ  ｐ５３インヒビターをさらに提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）のリスクがある臓器のＩＲＩの予防方法であって、前記臓器を、前記臓器のＩＲＩの予防を与えるのに有効な量のｐ５３遺伝子の一時的インヒビターと接触させることを含み、前記臓器が３５歳以上である、前記方法。
【請求項２】
虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防に用いるｐ５３遺伝子の一時的インヒビターであって、前記インヒビターが、ＩＲＩのリスクがある３５歳以上の臓器と接触させるためのものである、前記インヒビター。
【請求項３】
虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防を与えるための薬物の製造のためのｐ５３遺伝子の一時的インヒビターの使用であって、前記インヒビターが、ＩＲＩのリスクがある３５歳以上の臓器と接触させるためのものである、前記使用。
【請求項４】
前記ＩＲＩのリスクがある臓器が、被験者生来の臓器、再留置臓器及び移植臓器から成る群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５】
前記生来の臓器のＩＲＩのリスクが、前記臓器への血流の一時的休止または前記臓器の一時的な全体的低酸素によって課せられる、請求項４に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項６】
前記血流の一時的休止が、血栓症、血管収縮、血管圧迫又は引き続き再留置される被験者の体からの臓器の除去の少なくとも１つに起因する、請求項５に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項７】
前記移植臓器が死体ドナー由来である、請求項４に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項８】
前記臓器を前記一時的インヒビターと接触させることが、ＩＲＩのリスクがある臓器を有する被験者に前記一時的インヒビターを投与することを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項９】
前記リスクがある臓器が、被験者生来の臓器であり、前記被験者の体から除去されたことがない、請求項４に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１０】
前記リスクがある臓器が、被験者に再留置されたことがある、請求項９に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１１】
前記リスクがある臓器が、被験者に移植されたことがある、請求項７に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１２】
前記臓器を前記一時的インヒビターと接触させることが、レシピエントへの臓器の移植または再留置前にエクスビボで前記臓器を前記一時的インヒビターと接触させることを含む、請求項１０及び１１に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１３】
前記ＩＲＩのリスクがある臓器が４５歳以上である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１４】
ＩＲＩの予防が、ＩＲＩ関連臓器機能不全の予防をもたらす、請求項９に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１５】
ＩＲＩの予防が、ＩＲＩ関連臓器移植後臓器機能障害の予防をもたらす、請求項１０または１１に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１６】
前記臓器が、腎臓、肝臓、膵臓、心臓、肺、腸、皮膚、血管、脳、網膜、複合組織、血管、耳、手足、またはその一部から成る群より選択される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１７】
前記臓器が腎臓である、請求項１６のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１８】
前記臓器が移植腎であり、ＩＲＩの予防が臓器移植後臓器機能障害の予防をもたらす、請求項１７のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項１９】
ＤＧＦの予防が、死体腎移植を受ける透析依存性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後少なくとも最初の７日間の透析支援の量、強度及び持続時間の低減をもたらす、請求項１８に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２０】
ＤＧＦの予防が、移植術と移植後最初の透析治療との間のより長い時間間隔、移植術後初期クールの透析のより短い平均持続時間及び移植後第１月の最後におけるより高い測定糸球体濾過率（ｍＧＦＲ）の少なくとも１つをもたらす、請求項１８または１９に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２１】
ＩＲＩの予防が、死体腎移植を受ける透析依存性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後最初の３０日間の透析支援の量、強度及び／または持続時間の低減をもたらす、請求項１７に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２２】
ＩＲＩの予防が、死体腎移植を受ける透析依存性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後最初の１８０日間の透析支援の量、強度及び／または持続時間の低減をもたらす、請求項１７に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２３】
前記臓器が、前記ドナーからの除去後、前記レシピエントに留置される前に、冷蔵によって全体的に保存される、請求項７〜２２のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２４】
前記臓器が、前記ドナーからの除去後、前記レシピエントに留置される前の少なくとも一部の時間、機械灌流によって保存される、請求項７〜２２のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２５】
（ａ）死体拡張条件ドナー由来の腎臓を有するレシピエントを選択するステップ、及び（ｂ）前記レシピエントのＤＧＦの予防を与えるのに有効な量のｐ５３遺伝子の一時的インヒビターを前記レシピエントに投与するステップをさらに含む、請求項７〜２４のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２６】
前記腎臓が、死体拡張条件ドナーでないドナー由来である、請求項７〜２４のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２７】
前記腎臓が、下記：高血圧の病歴、１.５ｍｇ／ｄｌより高い終末血清クレアチニン値、または心血管原因の脳死の少なくとも２つは持たない５０歳以上５９歳以下のドナー由来である、請求項２６に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２８】
前記腎臓が、６０歳を超えないドナー由来である、請求項２６に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項２９】
ＩＲＩの予防が急性腎傷害（ＡＫＩ）の予防を与える、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項３０】
前記ＡＫＩが、心血管手術、心肺手術、腎臓手術、急性尿管閉塞、ショック、全体的低酸素及び／またはネフロトキシンへの曝露に起因する、請求項２９に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項３１】
死体由来のドナー腎臓の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防方法であって、前記腎臓を、前記腎臓のＩＲＩの予防を与えるのに有効な量のｐ５３の一時的インヒビターと接触させることを含む、前記方法。
【請求項３２】
死体由来のドナー腎臓の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防方法に用いるｐ５３の一時的インヒビターであって、前記インヒビターが前記腎臓と接触させるためのものである、前記インヒビター。
【請求項３３】
死体由来のドナー腎臓の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防を与えるための薬物の製造のためのｐ５３遺伝子の一時的インヒビターの使用であって、前記インヒビターが前記腎臓と接触させるためのものである、前記使用。
【請求項３４】
ＩＲＩの予防が、死体腎移植を受ける透析依存性後期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後最初の１８０日間の透析支援の量、強度及び持続時間の低減をもたらす、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項３５】
前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターが、有機小分子、タンパク質、抗体もしくはそのフラグメント、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物及び核酸分子、またはこれらの医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグから成る群より選択される、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項３６】
前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターが、一本鎖アンチセンス核酸（ｓｓＮＡ）、二本鎖ＮＡ（ｄｓＮＡ）、低分子干渉ＮＡ（ｓｉＮＡ）、低分子ヘアピン型ＮＡ（ｓｈＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）もしくはその模倣物、アプタマー、及びリボザイム、またはこれらの医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグから成る群より選択される核酸分子である、請求項３２に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項３７】
前記核酸分子が、修飾ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体及び／もしくは非通常性成分を含まないかまたは少なくとも１つ含むｓｓＮＡ又はｄｓＮＡである、請求項３６に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項３８】
前記核酸分子が、非修飾ｄｓＮＡもしくは化学修飾ｄｓＮＡ、またはその塩もしくはプロドラッグから成る群より選択されるｄｓＮＡである、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項３９】
前記ｄｓＮＡが、表２(配列番号２１〜３３、３５、３７)に示す核酸配列を有するアンチセンス鎖を含む、請求項３８に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４０】
前記ｄｓＮＡが、アンチセンス鎖配列５'  ＵＧＡＡＧＧＧＵＧＡＡＡＵＡＵＵＣＵＣ  ３'（配列番号３７）及びセンス鎖配列５'  ＧＡＧＡＡＵＡＵＵＵＣＡＣＣＣＵＵＣＡ  ３'（配列番号３６）を含む、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４１】
前記ｄｓＮＡが、下記構造： 
５’  ＵＧＡＡＧＧＧＵＧＡＡＡＵＡＵＵＣＵＣ  ３’（アンチセンス鎖）（配列番号３７)
３’  ＡＣＵＵＣＣＣＡＣＵＵＵＡＵＡＡＧＡＧ  ５’（センス鎖）（配列番号３６)
を有する合成低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であり、
構造中、Ａ、Ｃ、Ｕ及びＧはそれぞれリボヌクレオチドであり、各連続リボヌクレオチドは、次のリボヌクレオチドに共有結合によって連結され、かつ
前記アンチセンス鎖と前記センス鎖の両方における交互リボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖の５’末端と３’末端の両方に２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドが存在し、前記センス鎖の５’末端と３’末端の両方に非修飾リボヌクレオチドが存在する、請求項４０に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４２】
前記５’末端及び前記３’末端がリン酸化されていない、請求項４１に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４３】
前記二本鎖ＮＡ化合物が、医薬的に許容できる塩の形態である、請求項３８〜４２のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４４】
前記医薬的に許容できる塩がナトリウム塩である、請求項４３に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４５】
前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターが、約１〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項３９〜４４のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４６】
前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターが、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４５に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４７】
前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターが、医薬的に許容できる担体を含む液体組成物として投与されるべきである、請求項４〜４６のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４８】
前記一時的インヒビターが、生理学的に許容できる水性賦形剤を含む注射可能組成物として投与される、請求項４〜４７のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項４９】
前記一時的インヒビターが、静脈内（ＩＶ）注射によって投与される、請求項４８に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５０】
前記静脈内（ＩＶ）注射が、単回治療で投与され、前記単回治療は、単一用量または複数用量を含む、請求項４９に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５１】
前記単回治療が単一用量である、請求項５０に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５２】
前記単回治療が単回静脈内プッシュ（ＩＶＰ）である、請求項５０または５１に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５３】
前記静脈内（ＩＶ）注射が、自家移植／再留置または同種移植／移植再灌流に続いて手術中に投与される、請求項４９〜５２のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５４】
前記静脈内（ＩＶ）注射が、中心静脈ラインの近位部に直接または末梢ラインを通じて投与される、請求項５３に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５５】
前記インヒビターが、全身に、皮下に、局所に、吸入により、滴下注入（肺）により投与される、請求項４８に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５６】
前記一時的インヒビターが、リポソームまたはナノ粒子内で抱合または調合される、請求項１〜５５のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５７】
前記レシピエントに、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗菌薬、免疫抑制薬、及びこれらの任意の組み合わせから成る群より選択される薬物がさらに投与される、請求項７〜２８及び３１〜５６のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５８】
前記薬物が、カルシニューリンインヒビターである免疫抑制薬である、請求項５７に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項５９】
前記免疫抑制薬が、タクロリムス（ＴＡＣ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、ミコフェノール酸（ＭＰＡ）、コルチコステロイド、シクロスポリン、アザチオプリン、シロリムス、及びこれらの任意の組み合わせから成る群より選択される、請求項５７又は５８に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項６０】
前記免疫抑制薬がタクロリムス（ＴＡＣ）である、請求項５９に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項６１】
前記レシピエントに抗体導入療法薬がさらに投与される、請求項５７〜６０のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項６２】
前記抗体導入療法薬が、手術に際して及び移植再灌流前に投与される、請求項６１に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項６３】
前記抗体導入療法薬が、ポリクローナル抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）または抗ＣＤ２５（抗ＩＬ−２Ｒ）モノクローナル抗体を含む、請求項６１または６２に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項６４】
前記インヒビターが、前記インヒビター及び使用説明書を含むキット内に存在する、請求項１〜６３のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【請求項６５】
前記インヒビターが、表Ｐに示すｄｓＲＮＡ分子である、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の方法、インヒビターまたは使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
この出願は、ファイル名「２６２-ＰＣＴ１＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」で存在し、サイズが２９キロバイトであり、ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓとオペレーティング・システム適合性を有するＩＢＭ−ＰＣ機械形式で２０１５年５月２７日に生成されたヌクレオチド及び／またはアミノ酸配列を参照により組み込み、本出願に添えて提出する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、一部の実施形態において、臓器の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防方法、特に３５歳以上の臓器のＩＲＩに関する。特定用途としては、３５歳以上のドナーの臓器の再留置及び移植における生来臓器のインビボでのＩＲＩの予防がある。さらなる実施形態は、死体腎移植のレシピエントにおける臓器移植後臓器機能障害（ｄｅｌａｙｅｄ  ｇｒａｆｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）（ＤＧＦ）の予防ならびに透析の頻度、量及び持続時間の低減を含む。本方法は、インビボまたはエクスビボで臓器を一時的ｐ５３インヒビターと接触させることを必要とする。新規の一時的ｄｓＲＮＡ  ｐ５３インヒビターをさらに提供する。
【背景技術】
【０００３】
虚血再灌流傷害
虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）は、虚血期間後に血液供給が組織に戻るときに組織または臓器に起こる細胞障害である。虚血期間中に血中酸素及び栄養が欠如すると、血行の再開が、細胞機能障害、アポトーシス及び壊死を含めた酸化的損傷をもたらす状態を生じさせる。
【０００４】
ＩＲＩは、とりわけ外科術、創傷、外傷、閉塞、留置術及び移植術の結果としていずれの体組織でも起こり得る。
【０００５】
臓器移植後臓器機能障害
臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）は、特に拡張条件ドナー（Ｅｘｐａｎｄｅｄ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  Ｄｏｎｏｒ）（ＥＣＤ）または冷虚血時間が長期に及んだ標準的な基準ドナー（Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  Ｄｏｎｏｒ）（ＳＣＤ）からの腎臓のレシピエントにおいて、死体腎移植（ＤＤＲＴ）等の腎移植を含めた臓器移植の予後に悪影響を与える重要な危険因子である。
【０００６】
ＵＮＯＳ腎移植登録データベースの１３８，０００を超える症例の解析により、短期急性拒絶率の改善にもかかわらず長期移植片生着期間（＞１０年）は変化しないままだったことが明らかになった（Ｔａｋａｄａ  Ｍ,  ｅｔ  ａｌ．；  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．  １９９７  Ｄｅｃ  １５；  ６４（１１）：  １５２０−５）。この後向き再調査で特定された移植片生着不良を含めた長期予後不良に対する主な要因の１つはＤＧＦであった。ＤＧＦは、ＵＮＯＳによって、移植術後最初の７日以内の透析の必要性と定義される。ＤＧＦの病因論は十分に解明されていないが、疑う余地なく多因子性であり、移植術に直接起因する移植片へのＩＲＩが中止的役割を果たす。ＩＲＩは、動物モデルで実証されたように、慢性同種移植片機能障害の発症の主な危険因子である抗原非依存性プロセスである（Ｇｏｅｓ  Ｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．  １９９５  ２７；５９（４）：  ５６５−７２；  Ｋｕｓａｋａ  Ｍ,  ｅｔ  ａｌ.,  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．  １９９９  ６７（９）：１２５５−６１；  Ｔａｋａｄａ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ；  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．  １９９７  ６４（１１）：１５２０−５）。移植術前の冷蔵中に腎臓への局所血流低下が原因で起こった虚血状態の後に続く移植術後の血液供給の再開後の酸化的ストレスは、急性尿細管傷害につながる一連のイベントを惹起する。腎尿細管細胞機能障害及びアポトーシス細胞死がこのプロセスの顕著な特徴である（Ｏｂｅｒｂａｕｅｒ  Ｒ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  １９９９  １０（９）：２００６−１３；  Ｇｉｒａｌ−Ｃｌａｓｓｅ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  １９９８  ５４（３）：９７２−８）。
【０００７】
移植を待つ候補者と利用可能なドナー臓器との間で増大する不同性のため、拡張条件ドナー（ＥＣＤ）からの腎臓の使用が増加している（Ｏｒｇａｎ  Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  （ＯＰＴＮ），  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ  （ＳＲＴＲ）．  ２００８  ＯＰＴＮ  ／  ＳＲＴＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ：  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｄａｔａ  １９９８−２００７  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．  Ｒｉｃｈｍｏｎｄ  （ＶＡ）：  Ｈｅａｌｔｈ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  ａｎｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ’ｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  （ＨＲＳＡ）／Ｕ.Ｓ.  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；  ２００９  Ｏｃｔ  ７  ［２０１４年４月引用］)。
【０００８】
米国特許第６，５９３，３５３号、第６，９８２，２７７号、第７，００８，９５６号及び第７，０１２，０８７号は、癌ならびに他の疾患及び障害の治療用のｐ５３の一時的阻害に関する。
【０００９】
本出願の譲受人に譲渡された米国特許出願公開第２００６／００６９０５６号は、短干渉ｐ５３分子及び使用方法に関するものである。
【００１０】
本出願の譲受人に譲渡された米国特許第７，９１０，５６６号及び第８，１４８，３４２号は、それぞれ、短干渉ｐ５３分子で急性腎損傷（ＡＫＩ）及び急性腎不全（ＡＲＦ）を治療する方法に関するものである。
【００１１】
本出願の譲受人に譲渡されたＷＯ２０１０／１４４３３６は、再発性腎発作への曝露に起因する慢性腎疾患（ＣＫＤ）をもつ被験者をｐ５３インヒビターで治療する方法に関するものである。
【００１２】
本出願の譲受人に譲渡された米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０２２２４０９及び欧州特許第ＥＰ２１７０４０３号は、死体ドナーからの腎移植のレシピエントにおける臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）を、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御するために二本鎖ＲＮＡ化合物を用いて低減する方法に関する。
【００１３】
本出願の譲受人に譲渡されたＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５９３４９号は、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御するために修飾された二本鎖核酸化合物を提供する。
【００１４】
生来臓器及びドナー臓器における虚血再灌流傷害の予防または減弱方法のための未だ対処されていない必要性が残っている。
【発明の概要】
【００１５】
本開示は、一時的ｐ５３インヒビターで治療されている３５歳以上の死体腎臓のレシピエントは、より若い死体腎臓のレシピエント及び未治療患者に比べて臨床成績で大きい改善を示すという驚くべき、かつ臨床的に有意な知見に基づいている。本発明者らは、さらに驚くべきことにｐ５３遺伝子の一時的インヒビターが約３０歳超（例えば、約３５歳超、約４０、４５または５０歳超）の腎臓及び拡張条件ドナー（ＥＣＤ）と標準的な基準ドナー（ＳＣＤ）の両方からの腎臓を含めた腎臓におけるＤＧＦの予防の提供にさらに有効であることを見い出した。さらに、死体腎臓のレシピエントを一時的ｐ５３インヒビターで治療すると、未治療レシピエントに比べて移植術後の透析の量及び持続時間を低減することになる。
【００１６】
以下、本明細書及び添付の特許請求の範囲に本発明の態様及び実施形態を記載する。
【００１７】
第１態様により、臓器の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防方法であって、臓器を、臓器のＩＲＩの予防を与えるのに有効な量の一時的ｐ５３遺伝子インヒビターと接触させることを含み、該臓器は３５歳以上である、方法を提供する。さらに、虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防に用いるｐ５３遺伝子の一時的インヒビターであって、ＩＲＩのリスクがある３５歳以上の臓器と接触させるための当該インヒビター、及び虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防を与えるための薬物の製造のためのｐ５３遺伝子の一時的インヒビターの使用であって、該インヒビターが、ＩＲＩのリスクがある３５歳以上の臓器と接触させるためのものである当該使用を提供する。臓器がＩＲＩのリスクがある本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、臓器は、被験者生来の臓器、再留置臓器または移植臓器である。
【００１８】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、生来臓器におけるＩＲＩのリスクは、臓器への血流の一時的休止または臓器の一時的な全体的低酸素によって課せられる。血流の一時的休止は、例えば、血栓症、血管収縮、血管圧迫又は引き続き再留置される被験者の体からの臓器の除去の少なくとも１つに起因する。
【００１９】
本発明は、一部の実施形態では、約３０もしくは３４歳超の臓器、または約３５歳超の臓器、または約３６歳超の臓器、または約３７歳超の臓器、または約３８歳超の臓器、または約３９歳超の臓器、または約４０歳超の臓器、または約４１歳超の臓器、または約４２歳超の臓器、または約４３歳超の臓器、または約４４歳超の臓器、または約４４歳超の臓器、または約４６歳超の臓器、または約４７歳超の臓器、または約４８歳超の臓器、または約４９歳超の臓器、または約５０歳超の臓器、または約３０もしくは３４歳超のドナー臓器、または約３５歳超のドナー臓器、または約３６歳超のドナー臓器、または約３７歳超のドナー臓器、または約３８歳超のドナー臓器、または約３９歳超のドナー臓器、または約４０歳超のドナー臓器、または約４１歳超のドナー臓器、または約４２歳超のドナー臓器、または約４３歳超のドナー臓器、または約４４歳超のドナー臓器、または約４４歳超のドナー臓器、または約４６歳超のドナー臓器、または約４７歳超のドナー臓器、または約４８歳超のドナー臓器、または約４９歳超のドナー臓器、または約５０歳超のドナー臓器、または死体拡張条件ドナー（ＥＣＤ）に関するものである。さらに、本方法は、ドナーから除去後及び移植術前に冷蔵により全体的に保存された臓器を含める。
【００２０】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、移植臓器が死体ドナーに由来する。種々の実施形態では、臓器を一時的インヒビターと接触させることは、ＩＲＩのリスクがある臓器を持つ被験者に一時的インヒビターを投与することを含む。リスクがある臓器は、被験者生来の臓器であってよく、被験者の体から取り出されたことがない。あるいは、リスクがある臓器は被験者に再留置されたかまたは被験者に移植されたことがある。
【００２１】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、臓器を一時的インヒビターと接触させることは、臓器のレシピエントへの移植術または再留置術前にエクスビボで臓器を一時的インヒビターと接触させることを含む。
【００２２】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、ＩＲＩのリスクがある臓器は４５歳以上である。
【００２３】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、ＩＲＩの予防が、ＩＲＩ関連臓器機能不全の予防またはＩＲＩ関連臓器移植後臓器機能障害の予防をもたらす。
【００２４】
本方法、インヒビター、または使用の一部の実施形態では、臓器は、腎臓、肝臓、膵臓、心臓、肺、腸、皮膚、血管、脳、網膜、複合組織、血管、耳、手足、またはこれらの一部から成る群より選択される。一部の実施形態では、臓器は肺、心臓又は腎臓、好ましくは腎臓である。
【００２５】
本方法、インヒビター、または使用の種々の実施形態においては、臓器は移植腎であり、ＩＲＩの予防が臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の予防をもたらす。ＤＧＦの予防は、死体腎移植を受ける透析依存性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後少なくとも最初の７日間の透析支援の量、強度及び持続時間の低減をもたらす。一部の実施形態では、ＤＧＦの予防は、移植術と移植後最初の透析治療との間のより長い時間間隔、移植後初期クールの透析のより短い平均持続時間及び移植後第１月の最後におけるより高い測定糸球体濾過率（ｍＧＦＲ）の少なくとも１つをもたらす。
【００２６】
本方法、インヒビター、または使用の一部の実施形態では、ＩＲＩの予防は、死体腎移植を受ける透析依存性後期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後最初の３０日、最初の６０日、最初の１２０日及び最初の１８０日までの間の透析支援の量、強度及び／または持続時間の低減をもたらす。
【００２７】
本方法、インヒビター、または使用の種々の実施形態においては、臓器、例えば腎臓は、ドナーからの除去後、レシピエントに留置する前に冷蔵によって全体的に保存される。
【００２８】
本方法、インヒビター、または使用の種々の実施形態においては、臓器、例えば腎臓は、ドナーからの除去後、レシピエントに留置する前の少なくとも一部の時間、機械灌流によって保存される。
【００２９】
ドナー腎臓のＩＲＩの予防の方法、インヒビター、または使用の一部の実施形態では、本方法は、（ａ）死体拡張条件ドナー由来の腎臓を有するレシピエントを選択するステップ、及び（ｂ）該レシピエントにＤＧＦの予防を与えるのに有効な量のｐ５３遺伝子の一時的インヒビターを投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、腎臓は、死体拡張条件ドナーでないドナー由来である。代替実施形態では、腎臓は、下記の少なくとも２つは持たない５０歳以上５９歳以下のドナー由来である：高血圧の病歴、１.５ｍｇ／ｄｌより高い終末血清クレアチニン値、または心血管原因の脳死。一部の実施形態では、腎臓は６０歳を超えないドナー由来である。
【００３０】
ＩＲＩの予防の方法、インヒビターまたは使用のさらなる実施形態では、ＩＲＩの予防は、心血管手術、心肺手術、腎臓手術、急性尿管閉塞、ショック、全体的低酸素及び／またはネフロトキシンへの曝露の少なくとも１つに起因する急性腎傷害（ＡＫＩ）の予防を与える。
【００３１】
第２態様において、本明細書では死体由来のドナー腎臓の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防方法であって、腎臓を、該腎臓のＩＲＩの予防を与えるのに有効な量のｐ５３の一時的インヒビターと接触させることを含む方法を提供する。死体由来のドナー腎臓の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防に用いるｐ５３の一時的インヒビターであって、該インヒビターが該腎臓と接触させるためのものである、インヒビターをさらに提供する。死体由来のドナー腎臓の虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防を与えるための薬物の製造のためのｐ５３の一時的インヒビターの使用であって、該インヒビターが腎臓と接触させるためのものである使用をさらに提供する。
【００３２】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、ＩＲＩの予防は、死体腎移植を受ける透析依存性後期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後最初の１８０日間の透析支援の量、強度及び／または持続時間の低減をもたらす。
【００３３】
本明細書で上述した方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターは、有機小分子、タンパク質、抗体もしくはそのフラグメント、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物及び核酸分子、またはこれらの医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグから成る群より選択される。ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターは、一本鎖アンチセンス核酸（ｓｓＮＡ）、二本鎖ＮＡ（ｄｓＮＡ）、低分子干渉ＮＡ（ｓｉＮＡ）、低分子ヘアピン型ＮＡ（ｓｈＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アプタマー、及びリボザイム、またはこれらの医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグから成る群より選択される核酸分子であってよい。核酸分子は、修飾または化学的に修飾されていてもよい。本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、核酸分子は、修飾ヌクレオチド、非修飾ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体及び非通常性成分の１つ以上を含むｓｓＮＡ又はｄｓＮＡである。
【００３４】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の好ましい実施形態では、ｄｓＮＡは、非修飾ｄｓＮＡもしくは化学修飾ｄｓＮＡ、またはその塩もしくはプロドラッグから成る群より選択される。一部の実施形態では、ｄｓＮＡは、表２（配列番号２１〜３３、３５、３７）に示す核酸配列を有するアンチセンス鎖を含む。種々の実施形態においては、ｄｓＮＡは、アンチセンス鎖配列５'  ＵＧＡＡＧＧＧＵＧＡＡＡＵＡＵＵＣＵＣ   ３'及びセンス鎖配列５'  ＧＡＧＡＡＵＡＵＵＵＣＡＣＣＣＵＵＣＡ  ３'を含む。
【００３５】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の特定実施形態では、ｄｓＮＡ分子は、下記構造を有する合成低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であり、
５’  ＵＧＡＡＧＧＧＵＧＡＡＡＵＡＵＵＣＵＣ  ３’（アンチセンス鎖）（配列番号３７)
３’  ＡＣＵＵＣＣＣＡＣＵＵＵＡＵＡＡＧＡＧ  ５’（センス鎖）（配列番号３６)
構造中、Ａ、Ｃ、Ｕ及びＧはそれぞれリボヌクレオチドであり、各連続リボヌクレオチドは、次のリボヌクレオチドに共有結合によって連結され、かつ
アンチセンス鎖とセンス鎖の両方の交互リボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の５’末端と３’末端の両方に２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドが存在し、センス鎖の５’末端と３’末端の両方に非修飾リボヌクレオチドが存在する。ｄｓＮＡは、末端がリン酸化されているかまたは５’末端及び３’末端の１つ以上がリン酸化されていなくてよい。一部の実施形態では、ｄｓＮＡは、５’末端及び３’末端でリン酸化されていない。ｄｓＮＡ 分子は、好ましくは医薬的に許容できる塩、例えばナトリウム塩の形態である。
【００３６】
本明細書で上述した方法、インヒビターまたは使用の種々の実施形態において、ＩＲ傷害の予防は、約１.０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇの用量でｐ５３遺伝子の一時的インヒビターを投与する予防を与える。
【００３７】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターを組成物として調合する。一部の実施形態では、医薬的に許容できる担体を含む液体組成物として一時的インヒビターを投与してよい。
【００３８】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、組成物は、細胞標的成分をさらに含む。細胞標的成分は、ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターに共有結合または非共有結合していてよい。
【００３９】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、一時的インヒビターは、生理学的に許容できる賦形剤を含む注射可能組成物としてレシピエントに投与される。一時的インヒビターを静脈内（ＩＶ）注射で投与してよい。単一用量または複数用量であってよい単回治療で、静脈内（ＩＶ）注射を投与してよい。本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、単回治療は、単一用量または複数用量、好ましくは単一用量である。単回治療は、例えば、単回静脈内プッシュ（ＩＶＰ）である。
【００４０】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、自家移植／再留置または同種移植／移植再灌流に続いて手術中に静脈内（ＩＶ）注射を投与する。中心静脈ラインの近位部に直接または末梢ラインを通じて静脈内（ＩＶ）注射を投与する。
【００４１】
一時的インヒビターの投与モード及び用量は、担当医または病院スタッフが決定し、臓器、徴候、被験者の全体的健康及び年齢を含めた種々の因子に応じて決まるだろう。一部の実施形態では、一時的インヒビターを全身に、皮下に、局所に、吸入により、滴下注入（肺）により投与する。標的臓器によっては、一時的インヒビターは、例えば、リポソーム、リポプレックス、マイクロ粒子もしくはナノ粒子内で抱合又は調合され得る。
【００４２】
レシピエントがドナーから臓器を受けた方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗菌薬、免疫抑制薬、及びこれらの任意の組み合わせから成る群より選択される薬物をレシピエントにさらに投与する。一部の実施形態では、薬物は、カルシニューリンインヒビターである免疫抑制薬である。種々の実施形態において、免疫抑制薬は、タクロリムス（ＴＡＣ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、ミコフェノール酸（ＭＰＡ）、コルチコステロイド、シクロスポリン、アザチオプリン、シロリムス、及びこれらの任意の組み合わせから成る群より選択される。一部の実施形態では、免疫抑制薬はタクロリムス（ＴＡＣ）である。例えば手術に際して及び移植再灌流前にレシピエントに抗体導入療法薬をさらに投与してよい。種々の実施形態においては、抗体導入療法薬は、ポリクローナル抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）または抗ＣＤ２５（抗ＩＬ−２Ｒ）モノクローナル抗体を含む。
【００４３】
本方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、インヒビターは、インヒビター及び使用説明書を含むキット中に存在する。例えば、インヒビターは、容器内に液体または固体形態で存在する。キットは、希釈剤及び／または投与手段、例えば注射器をさらに含めてよい。
【００４４】
本発明の一部の実施形態の態様により、少なくとも１．２５の腎臓ドナーリスク指標（ＫＤＲＩ）を有するドナーから腎臓をレシピエントが受けた腎移植のレシピエントの臓器移植後臓器機能障害の予防に用いるｐ５３遺伝子のインヒビターを提供する。本発明の一部の実施形態の態様により、少なくとも１．２５の腎臓ドナーリスク指標（ＫＤＲＩ）を有するドナーから腎臓をレシピエントが受けた腎移植のレシピエントのＤＧＦの予防を与えるための薬物の製造のためのｐ５３遺伝子のインヒビターの使用を提供する。
【００４５】
本明細書に記載の方法、インヒビターまたは使用の一部の実施形態では、腎臓は、少なくとも１．５０、少なくとも１．７５、少なくとも２．０、または少なくとも２．５でさえのＫＤＲＩを有するドナー由来である。一部の実施形態では、腎臓は、１．２５〜１．５０、１．５〜１７５、１．７５〜２．０、２．０〜２．５または２．５〜３．０でさえの範囲のＫＤＲＩを有するドナー由来である。
【００４６】
一部の実施形態では、腎臓は、少なくとも７０％の腎臓ドナープロファイル指標（ＫＤＰＩ）を有するドナー由来である。一部の実施形態では、ＫＤＰＩは、７５％より大きく、８０％より大きく、または８５％より大きくさえある。
【００４７】
一部の実施形態では、死体ドナー腎臓は、ドナーからの除去後、レシピエントに留置される前に、全体的に冷蔵保存される。
【００４８】
一部の実施形態では、死体ドナー腎臓は、ドナーからの除去後、レシピエントに留置される前の少なくとも一部の時間、機械灌流によって保存される。
【００４９】
一部の実施形態では、臓器移植後臓器機能障害の予防成績は、移植後最初の透析までの時間の延長、移植後透析平均数の減少及び持続時間の短縮ならびに移植後最初の１カ月間の測定糸球体濾過率（ｍＧＦＲ）の改善の少なくとも１つを含む。
【００５０】
一部の実施形態では、死体ＥＣＤドナーは 少なくとも約６０歳のドナーである。
【００５１】
一部の実施形態では、死体ＥＣＤドナーは、高血圧の病歴、約１．５ｍｇ／ｄＬより大きい終末血清クレアチニン値及び死因としての心血管発作から成る群より選択される少なくとも２つの条件を有する少なくとも約５０歳のドナーである。
【００５２】
特に定義のない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般的に理解する意味と同じ意味を有する。矛盾がある場合は、定義を含め、本明細書が優先する。
【００５３】
本明細書で使用する場合、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、「ｈａｖｉｎｇ」及びその文法的異形は、言及した特徴、整数、ステップまたは成分を特定するものと解釈すべきであるが、１つ以上のさらなる特徴、整数、ステップ、成分またはこれらの群の追加を妨げない。これらの用語は、用語「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ」及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ」を包含する。
【００５４】
本明細書で使用する場合、不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、文脈により他の意味が明白に指示されていない限り、「少なくとも１つ」または「１つ以上」を意味する。
【００５５】
本明細書で使用する場合、用語「拡張条件ドナー（Ｅｘｐａｎｄｅｄ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｄｏｎｏｒ）（ＥＣＤ）」は、６０歳以上の腎臓ドナー、または、下記の少なくとも２つを有する５０歳以上５９歳以下のドナーを表す：高血圧の病歴、１.５ｍｇ／ｄｌより大きい終末血清クレアチニン値、または心血管原因の脳死。
【００５６】
本明細書で使用する場合、「標準的な基準ドナー（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｄｏｎｏｒ）（ＳＣＤ）」は、５０歳未満で、任意の数の原因で脳死になったドナーである。これには外傷または他の医学的問題、例えば脳卒中を患う５０歳未満のドナーを含めるものとする。小児科ドナー、または以下の２つ以上を有しない５０歳以上５９歳以下のドナーは標準的な基準ドナーとみなされる：高血圧の病歴、１.５ｍｇ／ｄｌより大きい終末血清クレアチニン値、もしくは心血管原因の脳死。
【００５７】
本明細書で使用する場合、用語「臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）」は、移植術後２４時間以内に失敗した同種移植を除き、腎臓移動後７日以内に透析支援を必要とすることを意味する。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「腎臓ドナーリスクプロファイル（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｏｎｏｒ  Ｒｉｓｋ  Ｐｒｏｆｉｌｅ）（ＫＤＲＩ）」は、ｈｔｔｐ：／／ｏｐｔｎ．ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．ｈｒｓａ．ｇｏｖ／ＣｏｎｔｅｎｔＤｏｃｕｍｅｎｔｓ／Ｋｉｄｎｅｙ＿Ｐｒｏｐｏｓａｌ_ＦＡＱ．ｐｄｆで米国臓器調達及び移植ネットワークにより定義されるように、中央値（５０パーセンタイル）ドナーと比べた特定死体ドナー由来の移植後の腎移植不全の相対的リスク（平均的な成人レシピエントにおいて）を表す。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「腎臓ドナープロファイル指標（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｏｎｏｒ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  Ｉｎｄｅｘ）（ＫＤＰＩ）」は、ｈｔｔｐ：／／ｏｐｔｎ．ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．ｈｒｓａ．ｇｏｖ／ＣｏｎｔｅｎｔＤｏｃｕｍｅｎｔｓ／Ｋｉｄｎｅｙ＿Ｐｒｏｐｏｓａｌ＿ＦＡＱ．ｐｄｆで米国臓器調達及び移植ネットワークにより定義されるように、腎移植後の移植不全のリスクを表す。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語ＤＧＦの「予防」は、移植術と移植後最初の透析治療との間のより長い時間間隔、移植後初期クールの透析のより短い平均持続時間または移植後第１月の最後におけるより高い測定糸球体濾過率として現れるように、透析支援の阻止または透析支援の強度及び持続時間の低減を表す。
【００６１】
本明細書で使用する場合、特に指定のない限り、化合物または分子（すなわち一時的インヒビター）の「治療的に有効な量」は、ｐ５３の発現増加に伴う障害の治療または管理において治療的利益を与えるのに十分な量またはｐ５３の発現増加に伴う障害と関連する１つ以上の症状を遅延させるかもしくは最小限にするのに十分な量である。
【００６２】
本明細書で使用する場合、特に指定のない限り、化合物（すなわちインヒビター）の「予防的に有効な量」は、ｐ５３の発現増加に伴う障害、またはｐ５３の発現増加に伴う障害と関連する１つ以上の症状を予防し、その発症を遅延させ、もしくはその重症度を低減するかまたはその再発を予防もしくは遅延させるのに十分な量である。
【００６３】
本明細書で使用する場合、用語「冷蔵」は、約０℃以下の温度での貯蔵、例えば、氷上貯蔵を意味する。該貯蔵は、例えば、臓器によるエネルギー消費速度を低減する。
【００６４】
本明細書で使用する場合、用語「機械灌流」は、腎臓の血管を通して保存溶液をポンプ駆動循環させながら正常な体温未満で貯蔵することを意味する。該灌流は、残存する細胞内エネルギー貯蔵の持続または補充に役立ち、さらにエネルギーが消費される速度をも低減する。
【００６５】
「３５歳以上の臓器」とは、その生来の宿主に存在するか、その生来の宿主に再留置されたか、ドナーから除去されたか、またはレシピエントに移植された体内臓器、例えば腎臓、肝臓、膵臓、心臓、肺、腸、皮膚、血管、脳、網膜、複合組織、血管、耳、手足等、またはその一部を意味し、年齢は宿主またはドナーの誕生日から数える。
【００６６】
「虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の予防方法」は、ＩＲＩに起因する損傷を予防、減弱または軽減すること、例えば、細胞死及び／またはアポトーシス及び／または壊死及び／または酸化的ストレスを予防、減弱または軽減することを意味する。
【００６７】
本明細書で使用する場合、「ＩＲＩのリスクがある臓器」とは、血流の一時的休止または一時的な全体的低酸素を経験した臓器を意味する。非限定例では、血流の一時的休止は、任意の理由または引き続き再留置もしくは移植される臓器の体からの除去のための血栓症、血管収縮、及び血管圧迫に起因し得る。
【００６８】
本明細書で使用する場合、「臓器移植後臓器機能障害」または「ＤＧＦ」は、臓器移植術後の臓器不全を意味する。腎移植に関するときは、ＵＮＯＳによれば、ＤＧＦは、移植後最初の７日以内の透析の要求と定義される。
【００６９】
本明細書で使用する場合、腎移植に関するときの用語ＤＧＦの「予防」は、例えば、移植術と移植後最初の透析治療との間のより長い時間間隔、移植後初期クールの透析のより短い平均持時間または移植後第１月の最後におけるより高い測定糸球体濾過率として現れるように、透析支援の阻止または透析支援の頻度及び持続時間の低減を指す。
【００７０】
ｐ５３の一時的インヒビター
ｐ５３の一時的インヒビターは、癌性増殖リスクを高めずに、治療または予防効果を誘発するのに十分な長さの時間、例えば臓器上または被験者内のｐ５３遺伝子の発現または機能を低減することを目的とする。一時的なｐ５３阻害方法は、とりわけ、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，５９３，３５３号、第６，９８２，２７７号、第７，００８，９５６号及び第７，０１２，０８７号に開示されている。
【００７１】
本明細書で使用する場合、用語「インヒビター」は、遺伝子の発現または該遺伝子の産物（ｍＲＮＡ、タンパク質）の活性を、所望の生物学的または生理学的効果を達成するのに十分な程度まで低減（部分的または全体的に）できる化合物を指す。例えば、発現は、インヒビターの非存在下で観察される発現より９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％以下に低減され得る。好ましくは、インヒビターはｐ５３の発現または活性を可逆的に低減する一時的インヒビターである。
【００７２】
ｐ５３の「一時的」インヒビターは、２４時間まで、３６時間まで、４８時間まで、７２時間まで、９６時間まで、１２０時間まで、または長くても１２０時間、７日、１０日、２０日もしくは３０日だけその効果を発揮する分子を指す。
【００７３】
「ｐ５３遺伝子」のインヒビターは、有機小分子、タンパク質、抗体またはそのフラグメント、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物もしくは核酸分子、またはこれらの医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグであってよい。
【００７４】
有機小分子は、例えば、ピフィスリンであり得る。
【００７５】
本明細書で使用する「核酸アプタマー」は、標的分子に特異的に結合する核酸分子を意味し、この核酸分子は、好ましくはインビボで、標的分子によって認識される配列を含む配列を有する。標的分子は、対象のいずれの分子でもあり得る。例えば、アプタマーを用いて、タンパク質のリガンド結合ドメインに結合させ、それによって天然に存在するリガンドと該タンパク質との相互作用を阻止することができる。
【００７６】
用語「抗体」は、とりわけ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥ抗体を指す。この定義には、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が含まれる。この用語は、全抗体または抗原結合ドメインを含む抗体、例えばＦｃ部のない抗体、一本鎖抗体、ミニ抗体、基本的に抗体の可変部、抗原結合ドメイン等のみから成る抗体のフラグメントを指す。用語「抗体」を用いて、ｃＤＮＡワクチン接種によって得られたポリヌクレオチド配列に対する抗体を表すこともある。この用語は、選択的にそれらの抗原、例えばｐ５３遺伝子産物に結合する能力を保持し、とりわけ以下のように例示される抗体フラグメントをも包含する：
（１)Ｆａｂ、酵素パパインで全抗体を分解することによって産生されて軽鎖と、重鎖の一部とをもたらすことができる、抗体分子の一価の抗原結合フラグメントを含有するフラグメント；
（２）(Ｆａｂ')２、全抗体を酵素ペプシンで処理することによってその後の還元なしに得ることができる抗体フラグメント；Ｆ（ａｂ’２）は、２つのジスルフィド結合で一緒に保持された２つのＦａｂフラグメントの二量体である；
（３）Ｆｖ、２つの鎖として表される軽鎖の可変部及び重鎖の可変部を含有する遺伝子操作されたフラグメントと定義される；及び
（４）一本鎖抗体（ＳＣＡ）、遺伝子融合一本鎖分子として適切なポリペプチドリンカーによって連結された軽鎖の可変部及び重鎖の可変部を含有する遺伝子操作された分子と定義され、例えばｓｃＦｖ等。
【００７７】
ＣＤＲ移植を行なって、抗体分子の特定の性質、例えば親和性または特異性等を変えることができる。ＣＤＲ移植の非限定例は、米国特許第５，２２５，５３９号に開示されている。
【００７８】
単一ドメイン抗体は、免疫化ラクダ科動物、例えばラクダ及びラマ等の特有の重鎖抗体から単離される。この小抗体は非常に頑強であり、単量体状態で高親和性にて抗原と結合する。米国特許６８３８２５４は、ラクダ科動物の重鎖免疫グロブリンに由来する抗体またはそのフラグメントの生成について述べている。
【００７９】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、特異抗原に対して実質的に均一な抗体集団であり、技術上周知である。モノクローナル抗体は、当業者に既知の方法で得られる。
【００８０】
ｍＡｂは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡを含めたいずれの免疫グロブリンクラス、及びそのいずれのサブクラスのものであってもよい。ｍＡｂを産生するハイブリドーマは、インビトロまたはインビボで培養可能である。高力価のｍＡｂは、インビボで、例えば、原始のプライム化Ｂａｌｂ／ｃマウスに個々のハイブリドーマ由来の細胞を腹腔内注射して、高濃度の所望ｍＡｂを含有する腹水液を生じさせて得られる。技術上周知のカラムクロマトグラフィー法を用いて、該腹水液から、または培養上清からイソ型ＩｇＭ又はＩｇＧのｍＡｂを精製することができる。
【００８１】
「特異的結合親和性」は、抗体が、ｐ５３ポリペプチドまたはそのフラグメントに、同様の条件下で別のポリペプチドにそれが結合するよりも高い親和性で結合することを意味する。
【００８２】
用語「エピトープ」は、抗体が結合することができ、かつ当該抗体が認識することもできる分子の当該部分を指す意味である。「抗原」は、抗体が結合することができ、さらに、動物に当該抗原のエピトープに結合できる抗体を産生させ得る分子又は分子の一部である。抗原は、１つまたは複数のエピトープを有し得る。上記で言及した特異的反応は、抗原が、高い選択的様式で、その対応抗体と反応し、かつ他の抗原によって誘発され得る他の抗体の多数とは反応しないことを示す意味である。
【００８３】
エピトープまたは抗原決定因子は、通常は、アミノ酸又は糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面集団から成り、特異的な三次元構造特性のみならず特異的な電荷特性をも有する。
【００８４】
抗体は、ヒトまたは非ヒト抗体であってよい。非ヒト抗体は、組換え法によりヒト化してヒトにおけるその免疫原性を減らしてよい。当業者は抗体のヒト化方法を知っている。
【００８５】
ｍＡｂまたはフラグメント、そのキメラもしくはヒト化抗体は、ｐ５３遺伝子産物のインヒビターとして、それ自体使用可能であり、またはこれを用いてｐ５３遺伝子の一時的インヒビターに抱合させてよい。ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターに抱合させると、抗体は、ＩＲＩのリスクがある臓器を標的にするのに役立ち得る。
【００８６】
本明細書で使用する場合、用語「ペプチド」は、ペプチド、タンパク質、タンパク質フラグメント等を意味するように広く用いられる。当業者は、本明細書で開示するペプチドはペプチド模倣物として合成可能であることを認めるであろう。「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃまたはｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）」は、ペプチドの生物学的活性を模倣するが、事実上、完全にはペプチドでない分子である。本明細書で使用する用語「ペプチド模倣物」は、それが構造的に基礎とするペプチドの活性を有するペプチド様分子を意味する。該ペプチド模倣物には、化学修飾されたペプチド、天然に存在しないアミノ酸を含有するペプチド様分子、及びペプチド模倣物が誘導されるペプチドの選択的標的活性等の活性を有するペプチドが含まれる。ペプチド模倣物はアミノ酸類似体を含めることができ、例えば、アミド結合アイソスター、例えばレトロインベルソ修飾、還元アミド結合、メチレンチオエエーテルもしくはメチレンスルホキシド結合、メチレンエーテル結合、エチレン結合、チオアミド結合、ｔｒａｎｓ−オレフィンもしくはフルオロオレフィン結合、１，５−二置換テトラゾール環、ケトメチレンもしくはフルオロケトメチレン結合アイソスターまたは別のアミドアイソスター等を含有するペプチド様分子であり得る。当業者には、これら及び他のペプチド模倣物が本明細書に記載の用語「ペプチド模倣物」の意味の範囲内に包含されることが分かる。ペプチド、タンパク質またはそのフラグメントをｐ５３遺伝子産物のインヒビターとして、それ自体使用可能であり、またはこれを用いてｐ５３遺伝子の一時的インヒビターに抱合させてよい。ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターに抱合させると、ペプチドは、ＩＲＩのリスクがある臓器へのインヒビターの送達の標的促進に役立ち得る。
【００８７】
本明細書で使用する場合、「組成物」または「治療組成物」は、１種以上の活性成分と、他の成分、例えば医薬的に許容できる担体及び賦形剤等との製剤を意味する。治療組成物の目的は、活性成分の被験者への投与を促進することである。
【００８８】
用語「医薬的に許容できる担体」は、被験者に有意な刺激を引き起こさず、かつ投与される活性成分の活性及び特性を実質的に抑止しない担体または希釈剤を指す。アジュバントは、これらのフレーズに含まれる。用語「賦形剤」は、治療組成物に添加されて活性成分の投与をさらに促進する不活性物質を意味する。
【００８９】
本明細書の教示の実施に用いる治療組成物は、当技術分野で平均的スキルの者が精通している手法を用いて、活性成分の治療組成物への加工を容易にする賦形剤及びアジュバントを含む１種以上の医薬的に許容できる担体を用いて、一般的に、ある量の活性成分を他の成分と混合することを含む通常の様式で調合可能である。適切な手法は、参照により本明細書に組み込む「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  最新版に記載されている。例えば、本明細書の教示の実施に有用な治療組成物は、技術上周知の１つ以上のプロセス、例えば、混合、ブレンディング、ホモジナイズ、溶解、造粒、乳化、被包、封入及び凍結乾燥プロセスによって製造可能である。
【００９０】
本明細書の教示の実施に適した治療組成物としては、意図した目的を果たすのに有効な量（治療的に有効な量）の活性成分を含む組成物がある。治療的に有効な量の決定は、当業者の能力の十分範囲内であり、例えば、最初は動物モデルから推算される。
【００９１】
連邦法は、ヒトの治療における医薬組成物の使用は、連邦政府の機関による承認を要求する。米国においては、施行は、該承認の獲得に適した規制を発行するための食品医薬品局の責任であり、合衆国法典第２１編第３０１〜３９２条に詳述されている。ほとんどの国で同様の承認が必要とされる。規制は国ごとに異なるが、個々の手順は当業者に周知であり、本明細書で提供する組成物及び方法はそれに応じて従うのが好ましい。
【００９２】
添付図面を参照して本発明の一部の実施形態を説明する。図面と共に、この説明により、当業者には本発明の一部の実施形態の実施方法が明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】老若ラットドナー由来の腎臓におけるｐ５３の虚血誘発活性化のタンパク質レベルを示すグラフである。
【図２】図２ａはｍＩＴＴ（ＥＥ）集団、図２ｂはＥＣＤ／ＣＳ層における移植後最初の透析までの副次的エンドポイント時間を示す線グラフである。
【図３】ドナー腎臓タイプ毎の移植腎レシピエントにおけるＤＧＦ相対的リスク低減に及ぼすＱＰＩ−１００２治療の影響を実証するフォレストプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００９４】
本明細書では、ｐ５３遺伝子を一時的に阻害する化合物及び組成物、ならびに死体腎移植レシピエントにおける臓器のＩＲＩの予防、透析の量と持続時間の低減のため及び拡張条件ドナー（ＥＣＤ）腎臓のレシピエントの臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の予防のための使用を提供する。
【００９５】
ｐ５３の一時的インヒビター
ｐ５３の一時的インヒビターは、例えば臓器又は被験者において、癌性増殖のリスクを高めずに治療または予防効果を誘発するのに十分な長さの時間、ｐ５３遺伝子の発現または機能を低減することを目的とする。一時的なｐ５３の阻害方法は、参照によりその全体を本明細書に組み込む米国特許第６，５９３，３５３号、第６，９８２，２７７号、第７，００８，９５６号及び第７，０１２，０８７号に開示されている。
【００９６】
本明細書で使用する場合、用語「インヒビター」は、遺伝子の発現または該遺伝子の産物（ｍＲＮＡ、タンパク質）の活性を、所望の生物学的または生理学的効果を達成するのに十分な程度まで低減（部分的または全体的に）できる化合物を指す。例えば、発現は、インヒビターの非存在下で観察される発現より９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％以下に低減され得る。好ましくは、インヒビターは、ｐ５３の発現または活性を可逆的に低減する一時的インヒビターである。
【００９７】
ｐ５３の「一時的」インヒビターは、２４時間まで、３６時間まで、４８時間まで、７２時間まで、９６時間まで、１２０時間までまたは長くても３０日間その効果を発揮する分子を指す。
【００９８】
「ｐ５３遺伝子」のインヒビターは、有機小分子、タンパク質、抗体またはそのフラグメント、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物もしくは核酸分子、またはこれらの医薬的に許容できる塩もしくはプロドラッグであってよい。
【００９９】
有機小分子は、例えば、ピフィスリンであり得る。
【０１００】
ｐ５３遺伝子のインヒビターは、特異的タンパク質標的分子に結合する核酸またはペプチドである「アプタマー」であり得る（例えば、特許文献：Ｓｕｎｄａｒａｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕ.  Ｊ.  Ｐｈａｒｍ.  Ｓｃｉ.  ２０１３，  ４８：２５９−２７１；ＷＯ１９９２／０１４８４３、米国特許第５，８６１，２５４号、第５，７５６，２９１号、第６，３７６，１９０号参照）。
【０１０１】
アプタマーを用いて標的遺伝子を阻害するかまたは特異的標的細胞もしくは臓器に対する他の阻害物質を標的にすることができる（例えばＵＳ２００６／０１０５９７５参照)。
【０１０２】
アプタマーには、タンパク質と高い（ｎＭ）親和性で結合できる、構造的にＲＮＡ及びＤＮＡと異なるリガンドの分類である「チオリン酸オリゴヌクレオチドアプタマー」、「チオアプタマー」または「ＴＡ」を含む意味がある。ＴＡは、標的遺伝子を阻害するため又はそれ自体標的成分として使用することもできる。
【０１０３】
特定の好ましい実施形態では、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御又は阻害する化合物は、ｐ５３をコードするヌクレオチド配列（例えばｍＲＮＡ配列）またはその一部、例えば、１つ以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットをコードするヒトｐ５３のｍＲＮＡコード配列（配列番号１〜７）と結合する核酸分子（例えば、アンチセンス分子、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ)、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＮＡ（ｄｓＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）又は低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））である。種々の実施形態においては、核酸分子は、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する非修飾もしくは化学修飾ｄｓＮＡ化合物、例えばｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡから成る群より選択される。
【０１０４】
一部の実施形態では、核酸分子は、ｐ５３発現を下方制御する合成の非修飾二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）化合物である。
【０１０５】
一部の好ましい実施形態では、核酸分子は、ｐ５３発現を下方制御する合成の化学修飾二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。特定の好ましい実施形態では、「ｐ５３」はヒトｐ５３遺伝子を指す。特定の好ましい実施形態では、「標的遺伝子」はヒトｐ５３遺伝子を指す。
【０１０６】
本明細書で提供する化学修飾核酸分子及び組成物は、対応する非修飾核酸分子と比較したときに血清安定性の上昇、細胞取り込みの改善、非特異的活性の低減、免疫原性の低減、エンドソーム放出の改善、標的組織または細胞への特異的送達の改善及びノックダウン／下方制御活性の上昇の少なくとも１つを含めた有益な特性を示す。
【０１０７】
核酸化合物
この開示の文脈では、用語「核酸化合物」または「核酸分子」は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）もしくはリボ核酸（ＲＮＡ）のオリゴマー（オリゴヌクレオチド）もしくはポリマー（ポリヌクレオチド）またはその組み合わせを意味する。この用語には、天然に存在する核酸塩基、糖及びヌクレオシド間共有結合で構成される化合物が含まれる。
【０１０８】
「ｄｓＲＮＡ」は、ＲＮＡ及びＲＮＡ類似体を含めた低分子二本鎖核酸分子である。「ｄｓＮＡ」は、ＲＮＡ、修飾ヌクレオチド及び／または非通常性ヌクレオチドを含めた低分子二本鎖核酸分子である。用語ｄｓＲＮＡ及びｄｓＮＡは互換的に使用可能である。
【０１０９】
用語「ｄｓＲＮＡ」は、塩基対によって一緒に保持された逆平行ポリリボ核酸の２本の鎖に関するものである。２本の鎖は、２本の鎖間に十分な配列相同性があり、二本鎖構造が全長にわたって少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の相補性で形成されているという条件で、同一の長さまたは異なる長さであってよい。一実施形態によれば、ｄｓＲＮＡ分子に関してヌクレオチドオーバーハングがない。別の実施形態によれば、ｄｓＲＮＡ分子は、ヌクレオチドオーバーハング、非ヌクレオチドオーバーハングまたはその組み合わせから選択され得るオーバーハングを含む。他の実施形態によれば、これらの鎖は、１〜１０個の塩基、好ましくは１〜６個の塩基が少なくとも鎖端に存在するように整列し、鎖がアニールされるときに二本鎖の一端または両端に１〜１０個の残基のオーバーハングが生じるようには整列していない。
【０１１０】
一部の実施形態では、本出願のｄｓＲＮＡは、１５〜１００ｂｐ、１５〜５０ｂｐ、１５〜４０ｂｐ、１５〜３０、又は１５〜２５ｂｐである。さらなる実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス及び／またはアンチセンス鎖の５’及び／または３’末端は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれより多くのヌクレオチドオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス及び／またはアンチセンス鎖の５’及び／または３’末端に１〜６個のヌクレオチドオーバーハングを含む。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡの末端は平滑である。
【０１１１】
用語「ｓｉＲＮＡ」は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）機構と相互作用し、ＲＮＡｉ経路を誘発できる阻害性低分子ｄｓＲＮＡ（一般的に１５〜２５ｂｐ）に関するものである。典型的に、ｓｉＲＮＡは、終端に対称の２塩基以上の３’オーバーハングの有無にかかわらず、好ましくは中心の１５〜１９ｂｐの二本鎖領域を含む１５〜２５塩基長として合成される。
【０１１２】
二本鎖干渉ＲＮＡ（例えばｓｉＮＡ及びｓｉＲＮＡ）の鎖が連結してヘアピンまたはステムループ構造（例えばｓｈＲＮＡ）を形成することがある。従って、既に述べたように、本発明の一部の実施形態のＲＮＡサイレンシング薬は低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）であってもよい。
【０１１３】
本発明明細書で使用する用語「ｓｈＲＮＡ」は、相補性配列の第１及び第２領域を含む、ステムループ構造を有するＲＮＡ分子を指し、これらの領域の相補性及び配向性の程度は、塩基対形成がこれらの領域間で起こるのに十分であり、第１及び第２領域は、ループ領域によって結合している第１及び第２領域である領域間で塩基対形成が起こるのに十分であり、ループは、該ループ領域内のヌクレオチド（又はヌクレオチド類似体）間の塩基対形成の欠如から生じる。
【０１１４】
本明細書で使用する場合、用語「修飾ヌクレオチド」は少なくとも１つの修飾を含むヌクレオチドを指し、この修飾は、糖修飾、核酸塩基修飾またはヌクレオチド間結合修飾（前記ヌクレオチドと連続したヌクレオチドとの間）またはその組み合わせであってよい。該修飾ヌクレオチドは、望ましい特性、例えば、細胞取り込みの向上、核酸標的に対する親和性の向上及びヌクレアーゼ安定性の向上等のため、天然に存在する形態より好ましいことが多い。
【０１１５】
ヌクレオチド間結合修飾：ＲＮＡ及びＤＮＡの骨格を構成する天然に存在するヌクレオチド間結合は、３’−５’ホスホジエステル結合である。本発明の一部の実施形態の核酸化合物は、少なくとも１つの修飾された（非天然）ヌクレオチド間結合を含むことがある。修飾されたヌクレオシド間結合には、リン原子を保持するヌクレオシド間結合及びリン原子を持たないヌクレオシド間結合があり得る。
【０１１６】
中にリン原子を含有する修飾されたヌクレオシド間結合の非限定例としては、例えば、普通の３’−５’結合を有するホスホロチオアート、キラルホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルその他のアルキルホスホナート、例えば、３’−アルキレンホスホナート、５’−アリレンホスホナート及びキラルホスホナート等、ホスフィナート、ホスホルアミダート、例えば３’−アミノホスホルアミダート及びアミノアルキルホスホルアミダート等、チオノホスホルアミダート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、ホスホノアセタート（ＰＡＣＥ）及びチオホスホノアセタート、セレノホスファート及びボラノホスファート、これらの２’−５’結合類似体、ならびに１つ以上のヌクレオチド間結合が３’−３’、５’−５’または２’−２’結合である反転極性を有するものが挙げられる。
【０１１７】
中にリン原子を含まない修飾されたヌクレオチド間結合の非限定例としては、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子及びアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環式ヌクレオシド間結合が挙げられる。これらには、モルホリノ結合（一部はヌクレオシドの糖部分から形成される）；シロキサン結合；スルフィド、スルホキシド及びスルホン結合；ホルムアセチル及びチオホルムアセチル結合；メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル結合；リボアセチル結合；アルケン含有結合；スルファマート結合；メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ結合；スルホナート及びスルホンアミド結合；アミド結合；ならびに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２成分部を有する他の結合が挙げられる。
【０１１８】
ヘテロ原子ヌクレオシド間結合の非限定例としては、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ２−、ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−（メチレン（メチルイミノ）又はＭＭＩ結合として知られる）、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−及び−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ２−が挙げられる（天然に存在するホスホジエステルヌクレオチド間結合は−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−ＣＨ２−として表される）。
【０１１９】
糖修飾：本明細書で開示する核酸化合物中の糖部には、いずれの修飾もない２’−ヒドロキシルペントフラノシル糖部がある。あるいは、本発明の核酸化合物は、１以上置換されたかまたは他のやり方で修飾された糖部を含有することがある。糖置換基の好ましい位置は、天然の３’−５’−ヌクレオシド間結合では通常用いられない２’位である。他の好ましい位置は、３’及び５’末端である。２つの隣接糖単位間の結合が２’−５’結合であるとき、３’糖位は修飾を受けやすい。好ましい糖置換基としては、−ＯＨ；−Ｆ；−Ｏ−アルキル、−Ｓ−アルキル、または−Ｎ−アルキル；−Ｏ−アルケニル、−Ｓ−アルケニル、または−Ｎ−アルケニル；−Ｏ−アルキニル、−Ｓ−アルキニルまたは−Ｎ−アルキニル；または−Ｏ−アルキル−Ｏ−アルキルがあり、アルキル、アルケニル及びアルキニルは、置換または非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ２−Ｃ１０アルケニル及びアルキニル、Ｃ１−Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルアリール、アラルキル（例えば−プロパルギル、−プロピル、−エチニル、−エテニル及びプロペニル）が挙げられる。糖修飾の非限定例としては、メトキシ（−Ｏ−ＣＨ３）、メチルチオ（−Ｓ−ＣＨ３）、−ＯＣＮ、−ＯＣＦ３、アミノプロポキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、アリル（−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、−Ｏ−アリル（−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、−Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、及び−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２（式中、ｎ及びｍは１〜約１０である）、２’−メトキシエトキシ（２’−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ（２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２）、−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３）、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＮ、−ＳＯＣＨ３、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＯＮＯ２、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＮＨ２、イミダゾール、カルボキシラート、チオアート、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ及び置換シリルが挙げられる。
【０１２０】
上記２’−糖置換基をアラビノ（上方）位またはリボ（下方）位に組み込んでよい。２’−アラビノ修飾の例は、２’−Ｆである（２’−Ｆ−アラビノ修飾ヌクレオチドは典型的にフルオロアラビモ核酸（ＦＡＮＡ）と呼ばれる）。一部の実施形態によれば、糖部を２’−デオキシペントフラノシル糖部のように修飾することができる。
【０１２１】
一部の好ましい実施形態では、修飾ヌクレオチドは少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを含む。
【０１２２】
上記のものに糖部の２’位以外の位置、特に３’末端ヌクレオシドまたは２’−５’結合ヌクレオシドの糖の３’位及び５’末端ヌクレオチドの５’位に同様の修飾を施してもよい。
【０１２３】
核酸塩基修飾：本明細書に開示する核酸化合物は、「非修飾」又は「天然の」核酸塩基を含んでよく、これには、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）が含まれる。あるいは、本発明の核酸化合物は、１以上置換されるかまたは他のやり方で修飾された核酸塩基を含有し得る。核酸塩基修飾の非限定例としては、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチルアデニン、６−メチルグアニン、２−プロピルアデニン、２−プロピルグアニンならびにアデニン及びグアニンの他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−ハログアニン、８−アミノアデニン、８−アミノグアニン、８−チオールアデニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルアデニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルアデニン、８−ヒドロキシルグアニンならびに他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ（例えば５−ブロモ）ウラシル、５−ハロ（例えば５−ブロモ）シトシン、５−トリフルオロメチルウラシル、５−トリフルオロメチルグアニンならびに他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、２−Ｆ-アデニン、２−アミノ-アデニンが挙げられる。修飾核酸塩基部分には、プリンまたはピリミジン塩基が他のヘテロ環と置き換わっているもの、例えば８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザ-グアニン、７−デアザ-アデニン、３−デアザグアニン及び３−デアザアデニンも含まれ得る。さらなる例として、非プリニル及び非ピリミジニル塩基を有する核酸塩基、例えば２−アミノピリジン、２−ピリドン及びトリアジンがある。
【０１２４】
ヌクレオチド類似体：本発明の一部の実施形態の核酸化合物は、１つ以上のヌクレオチド類似体を含むことがある。本明細書では代わりに「ヌクレオチド模倣物」と呼ばれる用語「ヌクレオチド類似体」は、フラノース環またはフラノース環とヌクレオチド間結合が代替基と置き換わっているヌクレオチドを指す。核酸塩基部分（修飾又は非修飾）は維持される。
【０１２５】
ヌクレオチド類似体の非限定例としては、ヌクレオチドの糖骨格がアミド含有骨格、特にアミノエチルグリシン骨格と置き換わっているペプチド核酸（ＰＮＡ）；フラノース環がモルホリン環と置き換わっていているモルホリノ核酸；フラノース環がシクロヘキセニル環と置き換わっているシクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）；二環式糖部（ＢＮＡ）を含む核酸、例えばリボシル糖環の２’−ヒドロキシル基が糖環の４’炭素原子と結合し、それによって２’−Ｃ、４’−Ｃ−オキシメチレン結合を形成して二環式糖部、２’−Ｏ，４’−エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）等を形成している「ロックド核酸」（ＬＮＡ）；ヒドロキシルペントフラノシル糖部がトレオース糖部と置き換わっているトレオース核酸；リボース糖部がアラビノース糖部と置き換わっているアラビノ核酸（ＡＮＡ）；リボース環が、Ｃ２’−Ｃ３’結合を欠くている非環式類似体と置き換わっているアンロックド核酸（ＵＮＡ）；典型的Ｄ−リボース環がＬ−リボース環と置き換わり、結果として、天然ヌクレオチドの鏡像であるヌクレオチド及び２’−５’結合を含み、典型的３’−５’ヌクレオチド間結合が２’−５’結合（好ましくは２’−５’ホスファートベースヌクレオチド間結合）と置き換わっているヌクレオチドを形成しているミラーヌクレオチドが挙げられる。「修飾ヌクレオチド」について上述したように、上記ヌクレオチド類似体はさらに修飾され得ることを強調すべきである。
【０１２６】
本発明の一部の実施形態の核酸化合物は、さらに少なくとも１つの非通常性部分を含んでもよい。本明細書で使用する用語「非通常性部分」は、「脱塩基ヌクレオチド」または「脱塩基ヌクレオチド類似体」を指す。該脱塩基ヌクレオチドは、塩基を欠いているかまたは１’位の塩基の代わりに他の化学基を有する糖部を包含する。脱塩基ヌクレオチドは、脱塩基リボース部（上述したように非修飾または修飾）または脱塩基デオキシリボース部（非修飾または修飾）を含んでよい。さらに、脱塩基ヌクレオチドは、例えば、リバース脱塩基ホスホルアミダイトが５’アミダイト(３’アミダイトの代わりに)によって連結されて、結果として５’−５’リン酸結合をもたらすリバース脱塩基ヌクレオチドであってよい。用語「脱塩基ヌクレオチド類似体」は、糖部が塩基を欠いているかまたは１’位の塩基の代わりに他の化学基を有する、上記いずれのヌクレオチド類似体をも包含する。
【０１２７】
末端修飾：末端リン酸基に修飾を施すことができる。例えば、核酸配列の３’末端を安定化するためのさまざまな安定化化学の非限定例を使用することができ、［３−３’］−逆位デオキシリボース；デオキシリボヌクレオチド；［５’−３’］−３’−デオキシリボヌクレオチド；［５’−３’］−リボヌクレオチド；［５’−３’］−３’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド；３’−グリセリル；［３’−５’］−３’−デオキシリボヌクレオチド；［３’−３’］−デオキシリボヌクレオチド；［５’−２’］−デオキシリボヌクレオチド；及び［５−３’］−ジデオキシリボヌクレオチドが挙げられる。示した修飾及び非修飾骨格構造に加えて、上述したように、これらの構造は、さまざまなヌクレオチド間結合修飾、糖修飾及び／または核酸塩基修飾と併用することができる。
【０１２８】
本明細書に開示する一部の実施形態の核酸化合物は平滑末端を含んでよい（すなわち、末端はいずれのオーバーハンギングヌクレオチドをも含まない)。あるいは、本発明の核化合物は、少なくとも１つのオーバーハングを含んでよく、前記オーバーハングは、ヌクレオチドオーバーハング（例えば３’末端ヌクレオチドオーバーハング）及び非ヌクレオチドオーバーハングから成る群より選択され得る。
【０１２９】
特定実施形態では、ｐ５３を標的にする化学修飾ｄｓＮＡ化合物、それを含む組成物及びキットならびにアポトーシス（プログラム細胞死）を伴う状態または病態の治療におけるその使用方法を提供する。特定実施形態では、本発明は、ドナーからの除去後、レシピエントに留置される前に全体的に冷蔵によって保存された腎臓として含まれる死体拡張条件ドナー（ＥＣＤ）からの腎臓の、レシピエントにおける臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の予防のための該化合物の使用に関する。
【０１３０】
一部の実施形態では、ｐ５３遺伝子を標的にし、下方制御する核酸化合物は、オリゴヌクレオチド配列（配列番号８〜３７）を有している。一部の実施形態では、該化合物の医薬的に許容できる塩を使用する。二本鎖構造を有する核酸化合物の一部の実施形態では、一方の鎖のオリゴヌクレオチド配列は、配列番号８〜２０、３４及び３６の１つから選択され、他方の鎖のオリゴヌクレオチド配列は、配列番号２１〜３３、３５及び３７の１つから選択される。例えば、配列番号２１；配列番号２２；配列番号２３；配列番号２４；配列番号２５；配列番号２６；配列番号２７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３５；または配列番号３７。
【０１３１】
一部の実施形態では、ｐ５３のインヒビターは、二本鎖構造を有する核酸分子、または該分子の医薬的に許容できる塩であり、（ａ）核酸分子は、センス鎖及び相補的アンチセンス鎖を含む二本鎖であり；（ｂ）核酸分子の各鎖は、１９ヌクレオチド長であり；（ｃ）アンチセンス鎖の１９ヌクレオチド配列は、哺乳動物のｐ５３をコードするｍＲＮＡの連続配列（例えば、配列番号１〜７）またはその一部に相補的であり；かつ（ｄ）センチ鎖及びアンチセンス鎖は、下表１（配列番号８〜３７）に示すオリゴヌクレオチド配列から選択される。
【０１３２】
【表１】
2020128383.tif 000002
【０１３３】
表１に与えた全ての位置は、センス鎖及びアンチセンス鎖について５’＞３’である。
【０１３４】
他の実施形態では、ｐ５３のインヒビターは核酸化合物（例えばｄｓＮＡ分子）、または該化合物の医薬的に許容できる塩であり、（ａ）核酸分子は、センス鎖及び相補的アンチセンス鎖を含む二本鎖であり；（ｂ）核酸分子の各鎖は１９ヌクレオチド長であり；（ｃ）アンチセンス鎖の１９ヌクレオチド配列は、哺乳動物のｐ５３をコードするｍＲＮＡの連続配列（例えば、配列番号１〜７）またはその一部に相補的であり；かつ（ｄ）センス鎖及びアンチセンス鎖は、下表２に示す配列対セットを含む。
【０１３５】
【表２】
2020128383.tif 000003
【０１３６】
表２に与えた全ての位置は、センス鎖及びアンチセンス鎖について５’＞３’である。
【０１３７】
好ましい実施形態では、二本鎖核酸分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、センス鎖配列番号３６及びアンチセンス鎖配列番号３７；センス鎖配列番号１６及びアンチセンス鎖配列番号２９；センス鎖配列番号１９及びアンチセンス鎖配列番号３２；ならびにセンス鎖配列番号１９及びアンチセンス鎖配列番号２８から成る群より選択される。
【０１３８】
ＱＰ−１００２
分子量１２，３１９．７５ダルトンを有するＱＰＩ−１００２（「Ｉ５ＮＰ」、ＣＡＳ番号１２３１７３７−８８−４としても知られる）（プロトン化形）、ＱＰＩ−１００２ナトリウム塩：１３，１１１．１０ダルトン（ナトリウム塩）は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路の活性化によってアポトーシス促進遺伝子ｐ５３の発現を一時的に阻害するようにデザインされたヌクレアーゼ耐性の化学修飾合成二本鎖（１９塩基対）ＲＮＡオリゴヌクレオチドである。ＱＰＩ−１００２のナトリウム塩は分子式：Ｃ３８０Ｈ４４８Ｏ２６２Ｎ１４０Ｐ３６Ｎａ３６を有する。ＲＮＡ二本鎖は、リボース糖の２’位の修飾を利用して、ヌクレアーゼの分解から部分的に保護される。
【０１３９】
ＱＰＩ−１００２の構造は以下のとおりであり、
５’  ＵＧＡＡＧＧＧＵＧＡＡＡＵＡＵＵＣＵＣ  ３’（アンチセンス鎖）（配列番号３７）
３’  ＡＣＵＵＣＣＣＡＣＵＵＵＡＵＡＡＧＡＧ  ５’（センス鎖）（配列番号３６）
Ａ、Ｃ、Ｕ及びＧは、それぞれリボヌクレオチドであり、各連続リボヌクレオチドが次のリボヌクレオチドと共有結合により結合し；かつアンチセンス鎖とセンス鎖の両方の交互リボヌクレオチドは２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の５’終端と３’終端の両方に２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドが存在し、センス鎖の５’終端と３’終端の両方に非修飾リボヌクレオチドが存在する。その結果、アンチセンス鎖では、第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７及び第１９の各リボヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり、センス鎖では、第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６及び第１８の各リボヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドである。
【０１４０】
ｐ５３タンパク質は、低温保存、特に２６時間以上のような長期低温保存の後、及び大きい心臓手術後に心肺バイパス術から患者を取り出した後に移植されたドナー心臓に起こり得る急性腎尿細管（虚血再灌流）傷害の結果として活性化され、アポトーシス／プログラム細胞死を誘発する。ＱＰＩ−１００２によるｐ５３発現の一時的阻害は、近位の尿細管上皮細胞が細胞の損傷を修復し、ひいてはアポトーシスの誘発を回避する時間を提供する。発明者らは、アポトーシスの誘発の一時的遮断が、長期虚血後の再灌流傷害の重症度、頻度または持続時間を低減することを示した。
【０１４１】
ｐ５３の一時的インヒビターの投与用量は、予防を達成するのに有効でなければならず、予防には、限定するものではないが、生存率の改善もしくはより速い回復、または症状及び当業者が適切な尺度として選択する他の指標の改善もしくは減弱もしくは予防が含まれる。本明細書で開示する化合物は、従来のいずれの投与経路によっても投与可能である。本化合物は、化合物としてまたは医薬的に許容できる塩として投与可能であり、単独でまたは医薬的に許容できる担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクルと組み合わせて活性成分として投与可能であることに留意すべきである。本化合物は、経口、皮下または非経口、例えば静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、及び鼻腔内投与等ならびにくも膜下腔内及びインフュージョン手法により投与可能である。化合物の留置剤も有用である。注射用には液体形態を調製することができ、注射には、皮下、経皮、静脈内、筋肉内、くも膜下腔内、及び他の非経口投与経路が含まれる。液体組成物は、有機共溶媒を含む場合と含まない場合の水溶液、水性または油性懸濁液、食用油を含むエマルション、ならびに同様の医薬ビヒクルを含む。さらに、ある一定の状況下では、鼻腔内及び同様の投与のためのエアロゾルとして、本発明の新規治療に用いる組成物を形成してもよい。治療される患者は、温血動物、特にヒトを含めた哺乳動物である。医薬的に許容できる担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクルならびに留置担体は、一般的に、本発明の活性成分と反応しない不活性な無毒の固体または液体フィラー、希釈剤または被包材を指し、それらには、リポソーム、脂質付加グリコサミノグリカン及びミクロスフェアが含まれる。多くのこのような留置剤、送達システム、及びモジュールは当業者に周知である。
【０１４２】
例示様式で本発明について記載した。使用した用語法は、本質的に限定ではなく説明の言語の範疇に入る意図である。
【０１４３】
本明細書のいずれの文書の引用も、該文書が本出願のいずれかの請求項の特許性に関連する先行技術であるか、または資料とみなすことを承認する意図でない。いずれの文書の内容または日付に関するいずれの記載も出願時に出願人が利用可能な情報に基づいており、該記載の正確さに関する承認を構成しない。
【実施例】
【０１４４】
さらに推敲することなく、当業者は、前述の説明を用いて、本発明を最大限に利用できると考えられる。従って、以下の好ましい具体的実施形態は、単に例示として解釈され、決して請求発明の限定として解釈されないものとする。
【０１４５】
実施例１：ラットドナー由来の腎臓における虚血再灌流誘発ｐ５３活性化。
若い（３月齢）及び老齢（１４月齢）ＳＤラット（ｎ＝４〜６）から腎臓を摘出し、５時間冷虚血（ＣＩ）にさらした。各動物から１つの腎臓をタンパク質抽出用に加工し、第２の腎臓を３月齢の同系ラットに移植した。手術及び結果として生じた虚血再灌流傷害（ＩＲ）の発症後２４時間に移植腎臓を摘出し、やはりタンパク質抽出用に加工した。ＥＬＩＳＡでｐ５３発現レベルについてタンパク質抽出物を解析した。
【０１４６】
結果：図１中、Ｙ軸は、ＥＬＩＳＡで測定したｐ５３タンパク質レベルに対応する任意単位を示す。図１は、若いラット（３月齢）由来の移植腎臓に比べて、老齢ラット由来の移植腎臓においてｐ５３タンパク質レベルが有意に高いことを示す。種々の翻訳後修飾によって起こるｐ５３活性化後には、顕著なタンパク質安定化のためｐ５３タンパク質の定常状態レベルが上昇することに留意されたい。
【０１４７】
実施例２：腎臓移植レシピエントにおける虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）及び臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の予防のためのｐ５３遺伝子のインヒビターの使用
死体腎移植を受けるＥＳＲＤ透析依存性患者における臓器移植後臓器機能障害の予防ならびにこれらの患者における安全性及びＱＰＩ−１００２のＰＫのためのＱＰＩ−１００２の臨床活性のプラセボ対照無作為化前向き二重盲検多施設第ＩＩ相用量増加研究（再灌流の３０分後に１０ｍｇ／ｋｇの単一ボーラスＩＶ用量を与えた）。
【０１４８】
この研究の主目的は、１）ＤＧＦの予防におけるＱＰＩ−１００２の有効性を評価すること及び２）死体腎移植後の高リスク患者におけるＱＰＩ−１００２の単一用量ＩＶボーラス注入の安全性をさらに評価することである。
【０１４９】
主要エンドポイントは、ＤＧＦの発生率であったが、このプロトコルではＤＧＦを移植後最初の７日間で透析を必要とすることと定義した。副次的エンドポイントには、透析患者における透析重度、移植直後（５日以内）の非透析患者における腎臓機能ならびに中期観察ポイント、すなわち移植後３０日での腎臓機能を測定するパラメーターを含めた。
【０１５０】
材料及び方法
試験製品：ＱＰＩ−１００２は、Ｑｕａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ.，  Ｆｒｅｍｏｎｔ  ＣＡによって提供され、リン酸緩衝食塩水中で保存料無添加の無菌溶液として調合されたものだった。アルミニウムのフリップオフオーバーシールを備えたテフロンコートブチルゴム栓で封止したクリアタイプＩガラスバイアルに製品を満たした。各バイアルは単回使用のために準備した。バイアルは２〜８℃で貯蔵し、光から保護した。使用前に溶液を室温に温めた。
【０１５１】
ＱＰＩ−１００２は、手術完了及び心肺バイパス装置から患者を移動させた後、または移植腎臓の再灌流後約３０分に１０ｍｇ/ｋｇの用量でボーラス静脈内注射により投与した。
【０１５２】
冷蔵：ドナーから除去した後、冷蔵保存する腎臓に冷保存溶液を流し、溶液に浸した無菌バッグに入れた。無菌バッグは、破砕氷を含有する追加バッグの内側に置いた。
【０１５３】
機械再灌流：ドナーから除去した後、機械灌流により保存する腎臓は、臓器を通る灌流液を連続的に汲み上げるように形成された灌流装置に接続した。ドナー腎臓の機械灌流のために一般的に用いられる装置の非限定例には、Ｗａｔｅｒｓ  ＲＭ３（ＩＧＬ／Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ  ＭＮ）及びＬｉｆｅＰｏｒｔ腎臓運搬装置（Ｏｒｇａｎ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ｄｅｓ  Ｐｌａｉｎｅｓ，  ＩＬ，  ＵＳＡ）がある。適切な保存溶液の非限定例には、ＵＷ（ウィスコンシン大学）溶液及びＨＴＫ（ヒスチジン−トリプトファン−ケトグルタル酸）溶液がある。機械灌流中、灌流圧力をモニターし、腎臓の血管拡張の必要に応じてベラパミルを投与した。
【０１５４】
患者：書面によるインフォームドコンセントを得た後、ＤＤＲＴを受ける予定の３３２名の患者を、同種移植片再灌流（移植腎臓の血流の確立）後、手術中に、単一ＩＶ用量のＱＰＩ−１００２、１０．０ｍｇ／ｋｇまたは等張食塩水プラセボ（０．９％ＮａＣｌ）のどちらかを二重盲検様式で受けるように１：１無作為化した。３３１名の患者が研究薬（ＱＰＩ−１００２又はプラセボ）を受けた。薬局の調剤ミスのため、１名の患者は研究薬を受けなかった。
【０１５５】
下表は、患者解析セットの詳細を提供する。
【０１５６】
【表Ａ】
2020128383.tif 000004
【０１５７】
主要な適格性基準をデザインして、プロトコル特定ドナータイプ及び保存様式（全体的に冷臓（ＣＳ）又は少なくとも部分的に機械灌流（ＭＰ））に基づいて形成した４つの部分群の死体ドナーから腎臓移植を受ける予定の患者を登録した：
・ＥＣＤ／ＣＳ：持続期間と無関係に、冷虚血時間（ＣＩＴ）の全期間冷蔵したＥＣＤ腎臓
・ＥＣＤ／ＭＰ：全ＣＩＴが少なくとも２６時間であった冷虚血時間中に任意の時間間隔で機械灌流により保存したＥＣＤ腎臓
・全ＣＩＴが少なくとも２６時間であった、冷蔵保存したＳＣＤ／ＳＣＤ腎臓
・全ＣＩＴが少なくとも２６時間であった、冷虚血期間中に任意の時間間隔で機械灌流により保存したＳＣＤ腎臓。
【０１５８】
従って、推算ＣＩＴ持続時間は、ＥＣＤ／ＣＳ患者研究群（全体的に冷蔵したＥＣＤ腎臓）における研究適格性を制限しなかった。推算ＣＩＴ持続時間は、他の患者研究群における適格性を制限した（≧２６時間）。
【０１５９】
下表は、有効性解析のための層別化結果を提供する。
【０１６０】
【表Ｂ】
2020128383.tif 000005
【０１６１】
移植まで臓器ドナータイプを正確に同定しなかったので、無作為化時に、最終臓器タイプを同定しなかったことに留意すべきである。表Ｂから分かるように、ＥＣＤ／ＣＳは最大層であり（Ｎ＝１７８（ｍＩＴＴ（ＥＥ））、５０％より多くの患者がこの層に含まれた。ＩＴＴ及びＩＴＴＥＥ層は、無作為化に用いた臓器ドナータイプ（ＥＣＤ／ＳＣＤ）として表Ｂに示してある。ｍＩＴＴ（ＥＥ）は、実際の臓器ドナータイプ（ＥＣＤ／ＳＣＤ）通りに表Ｂに示してある。
【０１６２】
ドナーの年齢は、下表Ｃに詳述する通りだった。
【０１６３】
【表Ｃ】
2020128383.tif 000006
【０１６４】
ＤＧＦは、腎臓移動後２４時間以内の透析の必要性と定義した（高カリウム血症及び／または血液量過多症を除く）。
【０１６５】
３２７名の有効性評価可能患者（１６２名のＱＰＩ−１００２；１６５名のプラセボ）のうち、平均年齢は、それぞれ、５８．９歳及び５９．１歳であり；６４．８％及び６８．５％が男性で、２３．５％及び２２．４％が黒人だった（ｐ＝ｎｓ）。レシピエントの体重、肥満度指数（ＢＭＩ）、移動前ピーク％パネル反応性抗体（ＰＲＡ）、事前輸血状態またはＨＬＡ不適合に基づいた有意な治療差はなかった。Ｉｒｉｓｈノモグラム（２０１０）によって判定した移動前ＤＧＦリスクは、両群で３５〜３６％であった（ｐ＝ｎｓ）。ドナーのうち、各群の約２／３がＥＣＤであり、１／３がＳＣＤであり；平均ＣＩＴ及び終末血清クレアチニン、高血圧を有する％及び死因は、群間で有意な差がなかった。
【０１６６】
下表Ｄに、レシピエント及びドナの人口統計学の詳細な説明を提供する。
【０１６７】
【表Ｄ】
2020128383.tif 000007
【０１６８】
＊  体重：スクリーニング評価でのレシピエントの体重；
＊＊  ＢＭＩ：肥満度指数
＊＊＊  ＰＲＡ：パネル反応性抗体
【０１６９】
表Ｅは、非人口統計学的ドナーＤＧＦリスク変量を提供する。
【０１７０】
【表Ｅ】
2020128383.tif 000008
【０１７１】
表Ｅ中：＊Ｓｃｒ：血清クレアチニン濃度；＊ＰＲＡ：パネル反応性抗体。
【０１７２】
結果
有効性エンドポイント：研究の主要エンドポイントは、全ての無作為化及び移植患者の治療企図（ＩＴＴ）集団における臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）発生率であり、ＤＧＦは、移植後最初の７日以内に開始された透析の必要性と定義したが、以下のものは除く：
（ｉ）下記理由の１つ以上のため最初の２４時間の間に行なった透析：
・高カリウム血症または血液量過多症の治療
・超急性拒絶反応または他の抗体媒介急性拒絶反応（生検確認）
・同種移植に関わる技術的な血管合併症：血管傷害または技術的な手術合併症に起因する腎臓動脈及び／または静脈血栓症。
（ｉｉ）下記理由の１つ以上のため移植後最初の７日間に行なった透析：
・閉塞性尿路疾患（Ｘ線撮影で確認）
・主疾患（根底にあるＥＳＲＤの病因、生検確認）、例えば巣状分節性糸球体硬化症等の劇症性再発
・血栓性微小血管症の特異的診断（血栓性血小板減少性紫斑病または溶血性尿毒症症候群、生検確認）。
【０１７３】
主要エンドポイントに加えて、以下の重要な探索有効性エンドポイントをも評価した：
１．  研究薬を受けた全ての無作為化及び移植患者の修正治療企図（（ｍＩＴＴ）（ＥＥ））集団におけるＤＧＦの発生率、ＤＧＦを移植後最初の７日以内の急性透析の必要性と定義し、下記を除く：
−下記理由の１つ以上のために最初の２４時間中に行なった透析：
・高カリウム血症または血液量過多症の治療
・超急性拒絶反応または他の抗体媒介急性拒絶反応（生検確認）
・同種移植に関わる技術的な血管合併症：血管傷害または技術的な手術合併症に起因する腎臓動脈及び／または静脈血栓症。
−下記理由の１つ以上のため移植後最初の７日間に行なった透析：
・閉塞性尿路疾患（Ｘ線撮影で確認）
・主疾患（根底にあるＥＳＲＤの病因、生検確認）、例えば巣状分節性糸球体硬化症等の劇症性再発
・血栓性微小血管症の特異的診断（血栓性血小板減少性紫斑病または溶血性尿毒症症候群、生検確認）
２．経時的な腎機能の改善速度における治療差
３．腎置換療法の必要性における治療差。
【０１７４】
前述したように、ＤＧＦは、ＱＰＩ−１００２及びプラセボ患者のそれぞれ５０名（３０．９％）及び６０名（３６．４％）で起こり（ｐ＝０．３４９）、ＤＧＦリスクの相対的低減は１５．１％であった。最大の患者群（ＥＣＤ／ＣＳ、ｎ＝１７８）においては、ＤＧＦ率は、ＱＰＩ−１００２対プラセボについてそれぞれ２７．９％及び３９．３％であり、臨床的に意味のある３０．７％の相対的低減であった（ｐ＝０．１１１）。移植後最初の透析までの透析なしのままでいる時間の確率は、ＱＰＩ−１００２に関して有意に長く改善され（ログランクｐ＝０．０４５）、この層の透析の平均持続時間は数値的に短かった（ＱＰＩ−１００２対プラセボについて、それぞれ３．５日対９．０日、ｐ＝０．０９７）。本薬物の全体的な安全性プロファイルは、初期移植後期間中のＤＤＲＴレシピエントの間で予測されたものと一致し、両治療群で同様であった。
【０１７５】
表Ｆは、ＩＴＴＥＥ集団（無作為化の通りに解析）における主要な有効性エンドポイント結果を提供する。
【０１７６】
【表Ｆ】
2020128383.tif 000009
【０１７７】
ＩＴＴＥＥ集団及びＥＣＤ／ＣＳ層において移植後最初の７日間の任意の時に透析を受けた（ＵＮＯＳ定義）副次的エンドポイントの結果を下表Ｇに与える。
【０１７８】
【表Ｇ】
2020128383.tif 000010
【０１７９】
図２ａ及び２ｂは、ｍＩＴＴ（ＥＥ）集団（図２ａ）及びＥＣＤ／ＣＳ層（図２ｂ）における移植後最初の透析までの透析なしのままでいる時間の副次的エンドポイント確率についての結果を提供し、全集団と比べてＱＰ１−１００２で治療したＥＣＤ/ＣＳ集団における大きな低減改善を示している。
【０１８０】
全ての患者及びＥＣＤ／ＣＳ層における移植後初期クールの透析の副次的エンドポイント持続時間を下表Ｈに与える。
【０１８１】
【表Ｈ】
2020128383.tif 000011
【０１８２】
＊  Ｐ値：（独立ｔ検定）
＊＊  移植後最初の週の間に開始した透析クールを受けた全ての患者
＊＊＊  移植後最初の週の間に開始した透析クールを受けた全てのＥＣＤ／ＣＳ患者
【０１８３】
表Ｈは、ＥＣＤ／ＣＳ層において３０％より多くの臨床的に有意な低減が達成され、その結果、ＱＰＩ−１００２を受けた患者では平均して１週間の透析が削減されたことを示している。
【０１８４】
さらなる副次的有効性エンドポイントは、移植後第１週間の７日の少なくとも３日間ｅＧＦＲ＞１０ｍＬ／分／１．７３ｍ２を達成する頻度だった（非透析ベースＤＧＦ定義）。結果を表Ｉに与える。
【０１８５】
【表Ｉ】
2020128383.tif 000012
【０１８６】
＊  透析クールを受けていない（かつ少なくとも４８時間いかなる透析をも受けなかった）患者の血清クレアチニン濃度に限定した解析。
【０１８７】
さらなる非透析ＤＧＦ副次的有効性エンドポイントは、推算ＧＦＲ（ｅＧＦＲ）対移植後時間の勾配であった。結果を表Ｊに与える。
【０１８８】
【表Ｊ】
2020128383.tif 000013
【０１８９】
＊  ｅＧＦＲ：いずれかのクールの透析中または完了の４８時間以内に得た血清クレアチニン結果の検出後に計算した。
【０１９０】
さらなる非透析ＤＧＦ副次的有効性エンドポイントは、非放射標識ヨータラマートで、市販プロトコル（Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ,  Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ  ＭＮ）を用いて、北米現地だけで日３０の研究訪問にて測定したＧＦＲであった。日３０の訪問の４８時間以内に透析依存性の患者及び甲殻類またはヨウ素化造影剤にアレルギーの病歴のある患者もこのアッセイの参加から除外した。結果を表Ｋに与える。
【０１９１】
【表Ｋ】
2020128383.tif 000014
【０１９２】
さらなる非透析ＤＧＦ副次的有効性エンドポイントは、プロトコル特定の日２〜日３定量化尿量から決定した場合の移植後２〜３日の間の尿量であり；報告された総量を各患者について２４時間採取の尿量に正規化した。解析は、（日２〜日３）の採尿期間の最後までのいずれかの時に透析を受けたか、またはまだ透析を受けている全ての患者の結果を除外した。結果を表Ｌに与える。
【０１９３】
【表Ｌ】
2020128383.tif 000015
【０１９４】
さらなる非透析ＤＧＦ副次的有効性エンドポイントは、Ｈｕｍａｒら（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ２００２）及びＪｏｈｎｓｔｏｎら（ＮＤＴ，  ２００６）の基準によって定義した場合のＤＧＦ、ＳＧＦ及びＩＧＦを有する患者の百分率での治療差に基づいた。結果を表Ｍに与える。データは、ＱＰＩ−１００２治療群におけるＤＧＦから緩徐移植機能（ＳＧＦ）へのシフトを示唆している。
【０１９５】
【表Ｍ】
2020128383.tif 000016
【０１９６】
年齢定義限界
主要有効性エンドポイント：ｍＩＴＴ（ＥＥ）集団全体、事前指定ＥＣＤ／ＣＳ層及び４５歳超または３５歳超のドナーから腎臓を受けた患者における主プロトコル定義に基づくＤＧＦ結果及びＵＮＯＳ定義に基づくＤＧＦ結果（相対リスク及び９５％信頼区間）を図３に示す。図３は、ドナー腎臓タイプ毎の移植レシピエントにおけるＤＧＦ相対リスクに及ぼすＱＰＩ−１００２治療の影響を実証するフォレストプロットを示す。相対リスク（ＲＲ）は、所与の患者部分群においてＱＰＩ−１００２治療患者のＤＧＦ発生率とプラセボ治療患者のＤＧＦ発生率との間の比率として計算する。ボックスプロット：ボックスの内側に「＋」で推算ＲＲ値を示してある。ボックスサイズは、それぞれのサンプルサイズに比例する。線端は、それぞれの計算ＲＲ９５％信頼限界（ＣＬ）を表す。他の定義：Ｎ：所与の部分群の患者数。ＲＲＲ：ＲＲＲ（％）＝１００＊（ＲＲ−１）として計算した相対リスク低減（％）。ＬＣＬ：ＲＲＲの９５％下側信頼限界。ＵＣＬ：ＲＲＲの９５％上側信頼限界。
【０１９７】
４５歳超のドナーから腎臓を受けた患者で最強薬物効果が観察され（ｎ＝２５２；部分群帰属とは無関係に、この研究の全ての評価可能患者の７７％）、ＱＰＩ−１００２がプラセボに対して約−３０％、ＤＧＦの発生率を低減した。結果は、このプロトコルにおけるＤＧＦの主定義または広く容認されているＵＮＯＳ定義のどちらを用いても同一だった。この−３０％の差は、統計的にも（プロトコルが定義したＤＧＦ−ｐ＝０．０４８；ＵＮＯＳのＤＧＦ定義−ｐ＝０．０１６）臨床的にも有意であった。さらに、ドナーの年齢閾値を３５歳に下げたとき（ｎ＝２８１；部分群帰属とは無関係に、この研究の全ての評価可能患者の８６％）、ＱＰＩ−１００２は、その能力を保持し続けてＤＧＦ率を、臨床的及び統計的に有意な差である、相対的に−２７％低減した(ＤＧＦのＵＮＯＳ定義、ｐ＝０．０２３)。
【０１９８】
これらの結果は、以前のＥＣＤ、ＳＣＤ、ＤＣＤ分類を置き換えるために命名された新ＯＰＴＮ  ＵＮＯＳ分類と適合する。
【０１９９】
副次的有効性エンドポイント：移植後最初の３０日における透析の初期クールの持続時間（日で）及び透析の強度（セッション数で）を調べることによって、ＱＰＩ−１００２がＤＧＦの重症度に及ぼす影響を評価した。両パラメーターについて、ＱＰＩ−１００２は、ｍＩＴＴ（ＥＥ）集団全体（ｎ＝１１０）、及びＥＣＤ／ＣＳ腎臓を受けた患者の部分群（ｎ＝６０）または４５歳超（ｎ＝８８）また３５歳超（ｎ＝１０１）のドナーから腎臓を受けた患者において数値的に優れた結果をもたらした。詳細には、ＥＣＤ／ＣＳ腎臓を受けた透析ＱＰＩ−１００２治療患者においては、透析の持続時間も強度もプラセボ群に対して−４６％短縮された。高齢腎臓（４５歳超または３５歳超のどちらかのドナー）を受けた透析患者及び患者集団全体においては、これらの低減は−２６％〜−３３％の範囲だった。
【０２００】
非透析患者において移植直後期間（５日）にＱＰＩ−１００２が腎臓機能に及ぼす影響を、尿量ならびに糸球体機能に関連するクレアチニンに基づくパラメーター、すなわちｅＧＦＲ及び血清クレアチニン濃度を測定することによって評価した。ＱＰＩ−１００２治療ＥＣＤ／ＣＳ患者の間では、移植後日２〜日３の尿量が５００ｍｌを超えた患者数は、プラセボ群と比較すると３５％多かった（ｎ＝８１；ｐ＝０．０１１）。高齢ドナーから腎臓を受けた患者の間では、ＱＰＩ−１００２治療に伴う対応百分率増加は、３５歳（ｎ＝１３２）及び４５歳（ｎ＝１１８）のドナー年齢閾値に対して、それぞれ１８％及び２０％だった。
【０２０１】
表３ａ、３ｂ及び３ｃは、レシピエント集団全体、４５歳以上のドナーから腎臓を受けたレシピエントの集団、及び３５歳以上のドナーから腎臓を受けたレシピエントの集団のエンドポイントデータを示す。「ＤＧＦの持続期間」（すなわち、ＤＧＦ開始日からＤＧＦ停止日を数えた連続日の総数）。
【０２０２】
【表３ａ】
2020128383.tif 000017
【０２０３】
【表３ｂ】
2020128383.tif 000018
【０２０４】
【表３ｃ】
2020128383.tif 000019
【０２０５】
表３ａ〜３ｃの全ての日３０のＧＦＲ値は観察値であり、ベースラインから変化しないことに留意されたい。結論：マージナル腎臓で死体腎移植を受けた患者におけるＱＰＩ−１００２の臨床的有益性は、ドナー年齢とともに増加する。
【０２０６】
４５歳超のドナーから腎臓を受けた患者に関して、彼らの主部分群分類とは無関係に、最良の主要エンドポイント結果が得られた（本研究の全ての評価可能患者の７７％を構成した）。３５歳の閾値（部分群分類と関係なく本研究の全ての評価可能患者の８６％）は、同様の下記有益性をもたらした：
この研究の主要エンドポイントである移植後第１週の透析の発生率の臨床的に有意義であり、かつ一部の部分群では、統計的に有意な低減；
ＤＧＦを経験した患者の透析の持続時間及び強度の臨床的に有意義な低減；
非透析患者における移植直後期間の経時的な尿量及びｅＧＦＲ勾配の臨床的に有意義な増加；及び、
日３０のｅＧＦＲの臨床的に有意義な増加。
【０２０７】
非透析／腎機能回復有効性の結論：
１．経時的ｅＧＦＲ勾配。集団全体は、プラセボ治療患者に比べてＱＰＩ−１００２治療患者で経時的にｅＧＦＲ改善速度の中程度の増加を示した。ＥＣＤ／ＣＳ層は、プラセボ治療患者と比べてＱＰＩ−１００２治療患者で経時的なｅＧＦＲ改善速度の臨床的に有意な増加（４４％  ＭＤＲＤ）を示した（ＭＤＲＤ式で計算したｅＧＦＲについてｐ＝０．０６５）。
【０２０８】
２．日３０でのｍＧＦＲ。集団全体は、ＱＰＩ−１００２治療患者でプラセボに対してｍＧＦＲの４．５ｍＬ／分／１．７３ｍ２の増加を示した。一方でＥＣＤ／ＣＳ層は、ＱＰＩ−１００２治療患者でプラセボに対して臨床的及び統計的に１３．７２ｍＬ／分／１．７３ｍ２の増加を示した（ｐ＝０．０３５）。
【０２０９】
３．移植後尿量。集団全体は、ＱＰＩ−１００２患者でプラセボに対して尿量の１３％増加を示した（ｐ＝０．０９）。一方でＥＣＤ／ＣＳ層は、ＱＰＩ−１００２患者でプラセボに対して尿量の３５％増加を示した（ｐ＝０．０１１）。
【０２１０】
４．ＱＰＩ−１００２治療群におけるＤＧＦからＳＧＦへのシフト。
【０２１１】
結論：ＤＧＦの比率は、最大（ＥＣＤ／ＣＳ）群においてプラセボを受けた患者に比べてＱＰＩ−１００２治療患者の間で数値的に低下し、両治療群の間で移植後透析必要性の低減及び同等の安全性プロファイルを伴った。全体的に冷蔵したＥＣＤ腎臓でＤＤＲＴを受けた患者は、手術中のＱＰＩ−１００２による再灌流後治療から、移動後１カ月で透析の必要性低減及びより高いＧＦＲという点で利益を得ることができる。
【０２１２】
血管再灌流後のＱＰＩ−１００２による単一用量治療は、プラセボの安全性プロファイルと同様、かつ死体腎移植のレシピエントの間で期待される安全性プロファイルに匹敵する安全性プロファイルを伴った。
【０２１３】
ＱＰＩ−１００２による単一用量治療レシピエント全体が、プラセボと比較して１５％低いＤＧＦ率を示した。この結果は、統計的には有意でなかった。
【０２１４】
研究患者の最大層である全体的に冷蔵したＥＣＤ腎臓のレシピエントの間では、ＱＰＩ−１００２に有利なＤＧＦ率の３０％の治療差が統計的有意さに近づいた（ｐ＝０．１１）。
【０２１５】
副次的エンドポイント解析は、下記エンドポイントにおけるプラセボに対して臨床的に有意な有益な治療差を実証した：
・  古典的ＵＮＯＳ定義によるＤＧＦ率
・  最初の透析までの時間
・  ＤＧＦの重症度：持続時間及び強度
・  ｅＧＦＲ勾配
・  移植後２〜３日の尿量
・  ＤＧＦからＳＧＦへのシフト。
【０２１６】
これらの副次的エンドポイントの多くについて、研究の最大層である全体的に冷蔵したＥＣＤ腎臓のレシピエントの結果は、統計的有意さにさらに密接に近づいた（達成した場合もある）。
【０２１７】
薬剤経済学的に可能性のある有益性が、ＱＰＩ−１００２による単一用量治療を伴うＥＣＤ／ＣＳ層において、以下の観点から観察された：
・カプラン・マイヤー解析によって実証されるように（ログランクｐ＜０．０５）、透析なしのままでいる有意に高い確率；及び
・移植後最初の３０日間で受けたより少ない総透析治療（より低い透析「強度」）、統計的有意さに接近した差（ｐ＜０．１０）。
【０２１８】
実施例２：種々の年齢のドナー由来の腎臓のレシピエントにおける臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の予防のためのｐ５３遺伝子のインヒビターの使用。
ＥＣＤドナーの基準を必ずしも満たしていない種々の年齢のドナー由来の腎臓を用いて、実施例１と同様の研究を行なってＱＰＩ−１００２の有効性を試験した。
【０２１９】
この有効性解析において、最良の主要エンドポイント結果は、４５歳超のドナーから腎臓を受けた患者（彼らの主部分群分類に関係なく、この研究の全ての評価可能患者の７７％を構成した）に対して得られた。重要なことに、３５歳の閾値（部分群分類に関係なく、この研究の全ての評価可能患者の８６％を構成した）は、同様の有益性をもたらした（下記）：
この研究の主要エンドポイントである移植後第１週の透析の発生率の臨床的に有意義であり、かつ一部の部分群では、統計的に有意な低減； 
ＤＧＦを経験した患者の透析の持続時間及び強度の臨床的に有意義な低減；
非透析患者における移植直後期間の経時的な尿量及びｅＧＦＲ勾配の臨床的に有意義な増加；及び
日３０のｅＧＦＲの臨床的に有意義な増加。
【０２２０】
実施例３：第ＩＩ相研究の透析解析
目的：透析は薬剤経済学的影響のみならず健康上の因果関係を有する。従って、治療群間の日０〜日１８０の透析数の比較は興味深い。
【０２２１】
統計法：治療群（Ｉ５ＮＰ、プラセボ）間で比較するため
・高頻度のゼロ値観察を可能にするポアソン確率分布に基づいた統計モデルであるゼロ過剰ポアソン回帰モデル（Ｚｅｒｏ−ｉｎｆｌａｔｅｄ  Ｐｏｉｓｓｏｎ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ）（ＺＩＰ）。患者変量毎の透析数はこのような性質である。
・感受性解析：ノンパラメトリック検定：ウィルコクソン及び中央値
・記述統計学：カウント、平均、標準偏差（ＳＤ）、中央値、最小及び最大を使用。
【０２２２】
解析は、第１クールのみに限定しないかまたはＤＧＦイベントを必要条件としなかった。
【０２２３】
解析スキーム：ＭＩＴＴ（ＥＥ）集団について解析を行なった。
・全ての患者にわたって
・ドナー年齢＞３５歳の患者群
・ドナー年齢＞４５歳の患者群
【０２２４】
研究持続期間解析
・０〜１８０日及び
・０〜７日
・７（＋）−３０日
・３０＋
【０２２５】
技術的（データ）詳細：解析データは、「Ｄｉａｌ」ファイルから引き出す。一般的に、「Ｄｉａｌ」データセットにおいては、日３０前の任意のレコードをセッションとみなし、日３０からそれ以降のレコードをクールとみなし、これには開始日付と最終日付が含まれる。あるクールにおける透析数は以下のように計算する：あるクールの透析数＝３＊（クールの最終日付−クールの開始日付）／７。
【０２２６】
結果：
・患者全体：この研究では全体的に９３６回の透析を行なった。時間間隔に応じたそれらの分布及び全体的な透析分布を表４ａに要約する。
【０２２７】
【表４ａ】
2020128383.tif 000020
【０２２８】
表４ｂは、各治療群の患者毎の透析数の平均、ＳＴＤ、最小、最大及び中央値を要約する。最も右側の列は、治療比較についての差検定から得られたｐ値を含む。
【０２２９】
【表４ｂ】
2020128383.tif 000021
【０２３０】
Ｉ５ＮＰ群の患者毎の透析平均数は２．２９であり、プラセボ群（３．４４）の約２／３である。中央値検定によればｐ値は０．０８６である。
【０２３１】
ＺＩＰモデルによって得られたｐ値は０．０１４であり、Ｉ５ＮＰ群ではプラセボ群に対して患者毎の透析数の有意な低減があることを意味する。
【０２３２】
・ドナー年齢＞４５の腎臓患者の部分集団：
・全体で、ドナー年齢＞４５歳の部分集団で７９６回の透析を行なった。時間間隔に応じたそれらの分布及び全体的な分布を表４ｃに要約する。
【０２３３】
【表４ｃ】
2020128383.tif 000022
【０２３４】
表４ｄは、治療群に応じた患者毎の透析平均数の記述統計を含む。
【０２３５】
【表４ｄ】
2020128383.tif 000023
【０２３６】
Ｉ５ＮＰ群の患者毎の透析平均数は２．１５であり、プラセボ群（４．１４）の約１／２である。この差は統計的に有意であり、ｐ値は中央値検定により０．００７６である。
【０２３７】
ＺＩＰモデルにより得られたｐ値は＜０．０１であり、Ｉ５ＮＰ群ではプラセボ群に対して患者毎の透析数の有意な低減があることを意味する。
【０２３８】
・ドナー年齢＞３５の腎臓患者：
・全体で、ドナー年齢＞３５歳の腎臓の部分集団で８７１回の透析を行なった。時間間隔に応じたそれらの分布及び全体的な分布を表４ｅに要約する。
【０２３９】
【表４ｅ】
2020128383.tif 000024
【０２４０】
表４ｆは、治療群に応じた患者毎の透析平均数の記述統計を含む。
【０２４１】
【表４ｆ】
2020128383.tif 000025
【０２４２】
Ｉ５ＮＰ群の患者毎の透析平均数は２．２７であり、プラセボ群（３．９５）の約３／５である。この差は統計的に有意であり、ｐ値は中央値検定により０．０１４９である。
【０２４３】
ＺＩＰモデルにより得られたｐ値は＜０．０１であり、Ｉ５ＮＰ群ではプラセボ群に対して患者毎の透析数の有意な低減があることを意味する。
【０２４４】
要約：
・全体的に、ＱＰＩ-１００２患者群は、プラセボ患者群の約２／３の透析を消費した。
・ｍＩＴＴＥＥ集団全体においては、ＺＩＰ回帰モデルにより、Ｉ５ＮＰ群でプラセボ群に対して患者毎の透析数の有意な低減があり、それは感受性ノンパラメトリック検定によって支持される。
・ドナー年齢に応じた部分集団においては、ｐ値は小さく、治療群間の差、患者毎の透析平均数が増加する。
【０２４５】
実施例４：活性ｄｓＮＡ化合物のための新規配列の生成
独自のアルゴリズム及びｐ５３遺伝子のｍＲＮＡの既知配列(配列番号１〜７)を用いて、多くの可能性のあるｄｓＮＡ化合物の配列を生成した。オリゴヌクレオチド配列には、独自のアルゴリズムにおけるそれらのスコアに基づいて、ヒトｐ５３遺伝子発現を標的にするための最良の予測配列として優先順位をつけた。
【０２４６】
ｐ５３遺伝子のｄｓＮＡ一時的インヒビターの生成に役立つ典型的なセンス及びアンチセンス配列は上表２に示してあり、これには配列番号３６及び３７；８及び２１；９及び２２；９及び３１；１０及び２３；１１及び２４；１２及び２５；１３及び２６；１４及び２７；１５及び２８；１６及び２８；１６及び２９；１７及び３０；１８及び３１；１８及び２２；１９及び３２；１９及び２８；２０及び３３；ならびに２０及び２１が含まれる。
【０２４７】
実施例５：活性核酸化合物及び二本鎖核酸化合物の生成に好ましい配列の同定
最良スコアリングのオリゴヌクレオチド配列に、それらのインビトロ活性に基づいてさらに優先順位をつけた。このために、下記修飾パターンを有するｄｓＲＮＡ化合物を合成した：
アンチセンス鎖及びセンス鎖に非修飾リボヌクレオチド、ならびにアンチセンス鎖とセンス鎖の両方に−ｄＴｄＴ＄３’−末端オーバーハングを有するｄｓＲＮＡ化合物であり、ｄＴはチミジンを示し、ｄＴ＄は、末端ホスファートがないチミジンを示す。
交互２’−Ｏ−メチル（Ｍｅ）糖修飾リボヌクレオチドを有するｄｓＲＮＡ化合物は、アンチセンス鎖の第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７及び第１９位に２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドが存在し、それによって全く同じ修飾、すなわち２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドがセンス鎖の第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６及び第１８位に存在する。
【０２４８】
インビトロ活性研究のために下記アッセイを用いた。
【０２４９】
活性アッセイ
内因的にｐ５３遺伝子を発現する約１．５〜２×１０５の被験ヒトまたはラット細胞（ヒトＨＣＴ１１６細胞またはラットＲＥＦ５２細胞）を６ウェルプレート内の１.５ｍｌの成長培地内で約２４時間３０〜５０％コンフルエンスまで成長させた。次にＬｉｏｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００試薬を用いて１ウェル当たり０．００１−１００ｎＭの所要最終濃度の被験ｄｓＮＡ化合物で細胞をトラスフェクトした。研究のトランスフェクション効率を判定するため、５つのウェルを独立にＬｉｏｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００試薬で処理し、「負の対照サンプル」と定義し、５つのウェルを５ｎＭの最終濃度の活性ｄｓＲＮＡ化合物で独立にトランスフェクトして「正の活性サンプル」（正の対照）と定義した。トランスフェクション効率を判定するための正の対照としてＣｙ３標識ｓｉＲＮＡトランスフェクト細胞を用いた。次に細胞を３７±１℃、５％ＣＯ２インキュベーター内で４８〜７２時間インキュベートした。ｄｓＲＮＡトランスフェクト細胞を収集し、ＥＺ−ＲＮＡキット［Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（＃２０−４１０−１００）］を用いてＲＮＡを単離した。以下のように逆転写を行なった：リアルタイムｑＰＣＲに従ってｃＤＮＡを合成し、ヒト及び／またはラットｐ５３のｍＲＮＡレベルを定量し、各サンプルについてシクロフィリンＡ（ＣＹＮＡ、ＰＰＩＡ）ｍＲＮＡの当該レベルに正規化した。ｄｓＲＮＡ活性は、非トランスフェクト対照サンプルに対するｓｉＲＮＡ処理サンプル中のｍＲＮＡ量の比率に基づいて決定した。
【０２５０】
活性研究の結果としてｐ５３遺伝子の下方制御のための新規ｄｓＲＮＡ化合物に好ましい配列を同定した（結果は示さず）。これらの配列は上表１に示してある（配列番号８〜３７）。
【０２５１】
実施例６：修飾二本鎖核酸化合物の生成及び試験
修飾二本鎖核酸化合物の生成のために好ましい配列（配列番号８〜３７）を用いた。好ましいアンチセンス鎖及びセンス鎖配列を用いて生成されたいくつかの修飾二本鎖核酸化合物を下表Ｎ及びＯに示す。下表Ｐは、好ましいアンチセンス鎖及びセンス鎖配列(配列番号８〜３７)を用いて生成されたいくつかの好ましい修飾二本鎖核酸化合物を示す。
【０２５２】
【表Ｎ】
2020128383.tif 000026
【０２５３】
全ての上記及び下記表中、二本鎖名は、互換的に用いるプレフィックス「ｐ５３」及び「ＴＰ５３」により特定してある。
【０２５４】
表Ｎ中の全てのｄｓＲＮＡでは、
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、非修飾リボヌクレオチドを示し；
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ（表中では、下線付きの太字で記載）は、２−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを示す。
【０２５５】
種々の実施形態では、表Ｎ中の核酸化合物において、アンチセンス鎖及びセンス鎖の各々の３’末端及び５’末端のリボヌクレオチドはリン酸化されていてもされていなくてもよい。表Ｎ中の核酸化合物の一部の実施形態では、アンチセンス鎖及びセンス鎖の各々において３’末端のリボヌクレオチドはリン酸化され、５’末端のリボヌクレオチドはリン酸化されていない。表Ｎ中の各核酸化合物の一部の実施形態では、アンチセンス鎖及びセンス鎖は３’末端でも５’末端でもリン酸化されていない。
【０２５６】
ｐ５３遺伝子の下方制御のための二本鎖核酸化合物の生成用の特定の典型的な二本鎖を本明細書の下表Ｏに示す。以下の実施例セクションでさらなる二本鎖を提供する。
【０２５７】
【表Ｏ−１】
2020128383.tif 000027
【０２５８】
【表Ｏ−２】
2020128383.tif 000028
【０２５９】
表Ｏの全ての二本鎖核酸化合物では、
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、非修飾リボヌクレオチドを示し；
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ（表中では、下線付きの太字で記載）は、２−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを示し；
ａ、ｕ、ｃ、ｇは、隣接ヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間リン酸結合により連結されたヌクレオチド（５’＞３’）を示し；
ｃａｐは、キャッピング部分を示す。一部の好ましい実施形態では、キャッピング部分は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位デオキシリボース部分、逆位デオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−ｐｉ、非ヌクレオチド部分、ミラーヌクレオチド。５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）及び抱合体部分から成る基である。
ｐｉは、３’リン酸を示す。
ｚは、キャッピング部分を示す。
＄は、末端リン酸がないことを示す。
ｄＴ＄は、チミジン（リン酸なし）を示す。
Ｃ３は、１，３−プロパンジオール，モノ（二水素リン酸）（Ｃ３）［ＣＡＳ  ＲＮ：１３５０７−４２−１］を示す。
Ｃ３−Ｃ３は、２つの連続Ｃ３分子を示す。
【０２６０】
上表Ｏに記載の核酸化合物の種々の実施形態において、アンチセンス鎖の３’末端で共有結合しているＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングは、リン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【０２６１】
上表Ｏに記載の核酸化合物の一部の実施形態では、各核酸化合物において、アンチセンス鎖の５’末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている。上表Ｏに記載の核酸化合物の一部の実施形態では、各核酸化合物において、アンチセンス鎖の５’末端のリボヌクレオチドはリン酸化されていない。
【０２６２】
【表Ｐ】
2020128383.tif 000029
【０２６３】
上記及び下記の全ての表中、二本鎖名は、互換的に用いるプレフィックス「ｐ５３」及び「ＴＰ５３」により特定してある。従って、例えばプレフィックス「ｐ５３＿１３」及び「ＴＰ５３＿１３」により特定された化合物は、センス鎖配列５’  ＣＡＧＡＣＣＵＡＵＧＧＡＡＡＣＵＡＣＵ  ３’（配列番号８）及びアンチセンス鎖配列５’  ＡＧＵＡＧＵＵＵＣＣＡＵＡＧＧＵＣＵＧ  ３’（配列番号２１）を有する二本鎖核酸化合物を示す。
【０２６４】
表Ｐ中の全てのｄｓＲＮＡ化合物では、
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、非修飾リボヌクレオチドを示し；
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃ（表中では、下線付きの太字で記載）は、２−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを示し；
ａ、ｕ、ｃ、ｇは、隣接ヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間リン酸結合により連結されたヌクレオチド（５’＞３’）を示し；
Ｃ３は、３−ヒドロキシプロパン−１−リン酸キャッピング部分としても特定される１，３−プロパンジオール，モノ（二水素リン酸）［ＣＡＳ  ＲＮ：１３５０７−４２−１］を示し；
Ｃ３−Ｃ３は、２つの連続Ｃ３分子から成るキャッピング部分を示し；
ｐｉは、３’リン酸を示し；
５’−ｐｈｏｓは、５’リン酸を示す。
【０２６５】
これら及び他の化学修飾は、とりわけ、本出願の譲受人に譲渡され、参照により本明細書に組み込む米国特許及び米国特許出願公開８，３６２，２２９；２０１２０２８３３０９；２０１３００３５３６８；２０１３０３２４５９１で見い出すことができる。
【０２６６】
修飾二本鎖核酸化合物の活性をヒトＨＣＴ１１６細胞及びラットＲＥＦ５２細胞で研究した。
【０２６７】
表Ｑは、ヒトＨＣＴ１１６細胞株の一部の二本鎖核酸分子について得られたインビトロ活性結果を要約する。全てのｄｓＮＡ化合物は上表Ｐに記載してある。
【０２６８】
ｐ５３＿１３＿Ｓ５００化合物は、センス鎖配列番号８及びアンチセンス鎖配列番号２１ならびに下記修飾パターンを有する：アンチセンス鎖の第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７及び第１９位に交互２’−Ｏ−メチル（Ｍｅ）糖修飾リボヌクレオチドが存在し、それによって全く同じ修飾、すなわち２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドがセンス鎖の第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６及び第１８位に存在する。
【０２６９】
表Ｑ中のインビトロ活性は、対照に対する残存標的ｍＲＮＡの％として示してある。
【０２７０】
【表Ｑ−１】
2020128383.tif 000030
【表Ｑ−２】
2020128383.tif 000031
【表Ｑ−３】
2020128383.tif 000032
【０２７１】
表Ｒは、ラットＲＥＦ５２細胞株の一部の二本鎖核酸分子について得られたインビトロ活性結果を要約する。
【０２７２】
表Ｒ中のインビトロ活性は、対照に対する残存標的ｍＲＮＡの％として示してある。
【０２７３】
【表Ｒ】
2020128383.tif 000033
2020128383.tif 000034
【０２７４】
実施例７：ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２系を用いた二本鎖ＲＮＡ分子のノックダウン活性の評価
３つのｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２ベース（Ｐｒｏｍｅｇａ）構築物を調製して潜在的な活性を評価した。ｐｓｉＣＨＥＣＫ構築物は、適合相補性ガイド（ＡＳ−ＣＭ）の単一コピーを含有した。１．３〜１．５×１０６個のヒトＨｅＬａ細胞を１０ｃｍ皿に播種した。次に細胞を３７±１℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で２４時間インキュベートした。播種後１日で成長培地を８ｍｌの新鮮成長培地と交換し、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００試薬を製造業者のプロトコルに従って用いて各プレートに上記プラスミドの１つをトランスフェクトし、３７±１℃及び５％ＣＯ２で５時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を９６ウェルプレートに１ウェル当たり５×１０３個の細胞の最終濃度で８０μｌの成長培地に再び播いた。１６時間後、１００μｌの最終体積中０．０１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲の最終濃度でＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００試薬を用いて細胞にトランスフェクションＲＮＡ化合物をトランスフェクトした。次に、後述するようにＲｅｎｉｌｌａ及びＦｉｒｅＦｌｙルシフェラーゼ活性を評価した後、細胞を３７±１℃で４８時間インキュベートした。
【０２７５】
二本鎖ＲＮＡ化合物によるトランスフェクションの４８時間後に、各ｓｉＲＮＡトランスフェクトサンプルにおいて、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（登録商標）アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｃａｔ＃Ｅ１９６０）を製造業者のプロトコルに従って用いて、Ｒｅｎｉｌｌａ及びＦｉｒｅＦｌｙルシフェラーゼ活性を測定した。各サンプルについて、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性値をＦｉｒｅＦｌｙルシフェラーゼ活性値で割った（正規化）。Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性は、最終的に、対応ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２プラスミドのみをトランスフェクトしたが二本鎖ＲＮＡをトランスフェクトしない細胞において得られた正規化値に対する被験サンプルの正規化活性値の百分率として表される。
【０２７６】
ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２系における活性研究の結果（結果示さず）を用いて、ｐ５３遺伝子を下方制御するための高活性二本鎖核酸化合物の生成に最良の高活性配列を選択した。
【０２７７】
上記実施例は、本発明の実施形態を実施する特定の方法を例示したが、当業者には、本明細書に明確に示していない本発明の実施形態を実施する代替法が分かるであろう。本開示は、本発明の原理の例示とみなすべきであり、説明した実施形態に本発明を限定する意図でないことを理解すべきである。
【０２７８】
当業者は、日常の実験だけを利用して、本明細書に記載した本発明の特定実施形態の等価物を認識し、あるいは確認できるであろう。該等価物は、下記特許請求の範囲に包含されるものとする。
【図１】
2020128383.tif 000035
【図２ａ】
2020128383.tif 000036
【図２ｂ】
2020128383.tif 000037
【図３】
2020128383.tif 000038
【配列表】
2020128383000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月20日(2020.4.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターを含有する医薬組成物であって、
当該医薬組成物は、拡張条件ドナー（ＥＣＤ）由来の、虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）のリスクがある腎臓のＩＲＩの予防のために用いられることを特徴とし、
前記拡張条件ドナーは、６０歳以上のドナーである、又は、高血圧の病歴、１.５ｍｇ／ｄｌより高い終末血清クレアチニン値、または心血管原因の脳死、の少なくとも２つを有する５０歳以上５９歳以下のドナーであり、
前記インヒビターは前記腎臓と接触させるためのものであり、前記一時的インヒビターを前記腎臓と接触させることが、前記一時的インヒビターが、ＩＲＩのリスクがある腎臓を移植された被験者に投与されるように用いられること、または、レシピエントへの前記腎臓の移植前にエクスビボで前記腎臓と接触させるように用いられること、を含み、
前記腎臓は、前記ドナーからの除去後、移植前に、冷蔵によって全体的に保存され、
前記インヒビターは、下記構造を有する合成低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）である
５’  ＵＧＡＡＧＧＧＵＧＡＡＡＵＡＵＵＣＵＣ  ３’（アンチセンス鎖）（配列番号３７)
３’  ＡＣＵＵＣＣＣＡＣＵＵＵＡＵＡＡＧＡＧ  ５’（センス鎖）（配列番号３６)
（構造中、Ａ、Ｃ、Ｕ及びＧはそれぞれリボヌクレオチドであり、各連続リボヌクレオチドは、次のリボヌクレオチドに共有結合によって連結され、かつ
アンチセンス鎖とセンス鎖の両方の交互リボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり、アンチセンス鎖の５’末端と３’末端の両方に２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドが存在し、センス鎖の５’末端と３’末端の両方に非修飾リボヌクレオチドが存在する）；
または、
前記インヒビターは、下記から選択される二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）である
【表１】
2020128383.tif 000039
（表中、
2020128383.tif 000040
は、非修飾リボヌクレオチドを示し；
2020128383.tif 000041
は、２−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを示し；
2020128383.tif 000042
は、隣接ヌクレオチドに２’−５’ヌクレオチド間リン酸結合により連結されたヌクレオチド（５’＞３’）を示し；
Ｃ３は、３−ヒドロキシプロパン−１−リン酸キャッピング部分としても特定される１，３−プロパンジオール，モノ（二水素リン酸）［ＣＡＳ  ＲＮ：１３５０７−４２−１］を示し；
Ｃ３−Ｃ３は、２つの連続Ｃ３分子から成るキャッピング部分を示し；
ｄＴはチミジンを示し、
ｄＴ＄は、末端ホスファートがないチミジンを示し；
ｐｉは、３’リン酸を示し；
５’−ｐｈｏｓは、５’リン酸を示す）
医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物であって、
前記ＩＲＩの予防が、ＩＲＩ関連臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）の予防をもたらし、
任意選択で、
前記ＤＧＦの予防が、死体腎移植を受ける透析依存性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後少なくとも最初の７日間の透析支援の量、強度及び持続時間の低減をもたらす、または、
前記ＤＧＦの予防が、移植術と移植後最初の透析治療との間のより長い時間間隔、移植術後初期クールの透析のより短い平均持続時間及び移植後第１月の最後におけるより高い測定糸球体濾過率（ｍＧＦＲ）の少なくとも１つをもたらす、
医薬組成物。
【請求項３】
請求項１〜２のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ＩＲＩの予防が、死体腎移植を受ける透析依存性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後最初の３０日間の透析支援の量、強度及び／または持続時間の低減をもたらす、または、
前記ＩＲＩの予防が、死体腎移植を受ける透析依存性末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者の移植後最初の１８０日間の透析支援の量、強度及び／または持続時間の低減をもたらす、
医薬組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記腎臓が、前記ドナーからの除去後、前記レシピエントに留置される前の少なくとも一部の時間、機械灌流によって保存される、
医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記インヒビターが、配列番号３７のアンチセンス鎖及び配列番号３６センス鎖を含む合成低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）であり、前記５’末端及び前記３’末端がリン酸化されていない、
医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ｓｉＲＮＡまたはｄｓＲＮＡ化合物が、医薬的に許容できる塩の形態であり、特に、前記医薬的に許容できる塩がナトリウム塩である、
医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターは、約１〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量（たとえば、約１０ｍｇ／ｋｇの用量）で投与される、
医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターは、医薬的に許容できる担体を含む液体組成物として投与され、特に、前記ｐ５３遺伝子の一時的インヒビターは、生理学的に許容できる水性賦形剤を含む注射可能組成物として投与され、
前記インヒビターの投与が、任意選択で、以下の１または複数を含む、
−前記一時的インヒビターが、静脈内（ＩＶ）注射によって投与される；
−前記静脈内（ＩＶ）注射が、単回治療で投与され、前記単回治療は、単一用量または複数用量を含む；
−前記単回治療が単一用量である；
−前記単回治療が単回静脈内プッシュ（ＩＶＰ）である；
−前記静脈内（ＩＶ）注射が、同種移植／移植再灌流に続いて手術中に投与され、任意選択で、前記静脈内（ＩＶ）注射が、中心静脈ラインの近位部に直接または末梢ラインを通じて投与される；
−前記注射可能組成物が、全身に、皮下に、局所に、吸入により、滴下注入（肺）により投与される；
医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記一時的インヒビターが、リポソームまたはナノ粒子内で抱合または調合される、
医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、前記レシピエントに、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗菌薬、免疫抑制薬、及びこれらの任意の組み合わせから成る群より選択される薬物がさらに投与され、
前記薬物は、以下の基準
−前記薬物が、カルシニューリンインヒビターである免疫抑制薬である；
−前記免疫抑制薬が、タクロリムス（ＴＡＣ）、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、ミコフェノール酸（ＭＰＡ）、コルチコステロイド、シクロスポリン、アザチオプリン、シロリムス、及びこれらの任意の組み合わせから成る群より選択される；
−前記免疫抑制薬がタクロリムス（ＴＡＣ）である；
の一または複数を満たす、
医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の医薬組成物であって、前記レシピエントに抗体導入療法薬がさらに投与され、
特に、前記抗体導入療法薬は手術に際して及び移植再灌流前に投与され、
任意選択で、前記抗体導入療法薬が、ポリクローナル抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）または抗ＣＤ２５（抗ＩＬ−２Ｒ）モノクローナル抗体を含む、
医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、
前記インヒビターが、前記インヒビター及び使用説明書を含むキット内に存在する、
医薬組成物。
【外国語明細書】
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2020128383000002.pdf
2020128383000003.pdf
2020128383000004.pdf