(57)【要約】      （修正有）【課題】抗ＣＤ４７薬の赤血球毒性が緩和され、それによって抗ＣＤ４７薬の治療上有効量での治療を可能にする方法の提供。【解決手段】抗ＣＤ４７薬の治療上有効量を該対象に投与する前に、第１の抗ＣＤ４７抗体、第１の抗ＣＤ４７抗体とは種類が異なる第２の抗ＣＤ４７抗体、及びそれらの組み合わせから選択された刺激剤を投与する、方法。細胞のターンオーバーは、アポトーシスプログラムまたは除去のために細胞を特徴付ける他の細胞変化の誘導、及びマクロファージ、樹状細胞等を含む貪食細胞によって次のマーカー認識で始まる。このプロセスは、望ましくない細胞の特異的かつ選択的除去を必要とする。【選択図】図８
2020128414.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する抗ＣＤ４７抗体の治療量を含み、対象の癌の治療の方法に使用するための医薬組成物であって、
前記方法は、
（ａ）第１の抗ＣＤ４７抗体、前記第１の抗ＣＤ４７抗体とは種類が異なる第２の抗ＣＤ４７抗体、及びそれらの組み合わせから選択された刺激剤を、前記対象に、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の供与に伴う赤血球の減少に因る毒性を減少させるように治療上有効量よりも少ない準治療量だけ供与すること、及び
（ｂ）第１の抗ＣＤ４７抗体の治療上有効量を癌治療のために前記対象に供与すること
を含み、
ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）の開始後、３日〜２１日の範囲で行われ、前記準治療量は１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである、
医薬組成物。
【請求項２】
前記準治療量は１ｍｇ／ｋｇ〜７．５ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記準治療量は１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記準治療量は１ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記準治療量は１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
細胞のターンオーバーは、アポトーシスプログラムまたは除去のために細胞を特徴付ける他の細胞変化の誘導、及びマクロファージ、樹状細胞等を含む貪食細胞によって次のマーカー認識で始まる。このプロセスは、望ましくない細胞の特異的かつ選択的除去を必要とする。健常細胞と異なり、望ましくない／死んだ細胞は、貪食細胞上の受容体によって順番に認識され得る「イートミー（ｅａｔ−ｍｅ）」シグナル、すなわち、「アルタードセルフ（ａｌｔｅｒｅｄ  ｓｅｌｆ）」、と呼ばれるマーカーまたはリガンドを提示する。健常細胞は、貪食細胞を活性に阻害する「ドント・イートミー（ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ−ｍｅ）」シグナルを提示することがある。これらのシグナルは、死細胞で下方調節され、変化した構造で存在するか、または「イートミー」またはプロ食作用シグナルの上方調節によって抑制されるかのいずれかである。健常細胞上の細胞表面タンパク質ＣＤ４７及び貪食細胞受容体ＳＩＲＰαのその関与は、アポトーシス細胞除去及びＦｃＲ介在貪食細胞を含む複数の様式によって介在される貪食を遮断し得る、重要な「ドント・イートミー」シグナルを構成する。貪食細胞上のＳＩＲＰαのＣＤ４７介在した関与を遮断すること、またはノックアウトマウスでのＣＤ４７発現の減少は、生細胞の除去及び非高齢赤血球を生じ得る。ＳＩＲＰαの遮断は、前貪食シグナルも存在する細胞について、通常は貪食されない標的の貪食も可能にする。
【０００２】
ＣＤ４７は、単一Ｉｇ様ドメイン及び５つの膜貫通領域を有する、広く発現された膜貫通型糖タンパク質であり、ＳＩＲＰαのＮＨ２末端Ｖ様ドメインによって介在される結合を有するＳＩＲＰαのための細胞リガンドとして機能する。ＳＩＲＰαは、マクロファージ、顆粒球、骨髄系樹状細胞（ＤＣ）、肥満細胞を含む骨髄性細胞、及び造血幹細胞を含むその前駆体で主に発現される。ＣＤ４７結合を介在するＳＩＲＰα上の構造決定因子は、Ｌｅｅら（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：７７４１−７７５０；Ｈａｔｈｅｒｌｅｙら（２００７）Ｊ．Ｂ．Ｃ．２８２：１４５６７−７５によって議論され、ＣＤ４７結合におけるＳＩＲＰα  ｃｉｓ二量化の役割は、Ｌｅｅら（２０１０）Ｊ．Ｂ．Ｃ．２８５：３７９５３−６３によって議論される。正常細胞の貪食作用を阻害するＣＤ４７の役割と合致して、ＣＤ４７は、造血幹細胞（ＨＳＣ）及びその前駆細胞においてその移行期直前及び移行期中に一時的に上方調節され、そして、これらの細胞におけるＣＤ４７のレベルはインビボで貪食される可能性を決定する、証拠が存在する。
【０００３】
プログラムされた細胞死（ＰＣＤ）及び貪食細胞除去は、損傷された、前癌状態のまたは感染された細胞を除くために生物が応答する一般的な方法である。したがって、この生物応答（例えば、癌細胞、慢性的に感染した細胞等）を残存する細胞は、ＰＣＤ及び貪食細胞除去を避ける方法を工夫してきた。ＣＤ４７、すなわち「ドント・イートミー」シグナルは、幅広い疾患細胞、癌細胞、及び感染細胞上で構成的に上方調節され、これらの細胞に貪食を避けさせる。１つの細胞（例えば、癌細胞、感染細胞等）と別の細胞（例えば、貪食細胞）上のＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する抗ＣＤ４７薬は、ＣＤ４７発現の増加を妨害し、癌細胞及び／または感染細胞の貪食を促進する。したがって、抗ＣＤ４７薬は、幅広い症状／疾患を治療及び／または保護するために使用され得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１２／０２８２１７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、抗ＣＤ４７薬の最初の高用量は、マウス及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ）モデルにおいて赤血球（ＲＢＣ）の用量依存的減少を引き起こし得る。この貧血症の重度は、治療的有効性に関連した徐放血清濃度を達成するために必要とされるより高用量の使用を不可能にする。本発明は、抗ＣＤ４７薬の赤血球毒性が緩和され、それによって抗ＣＤ４７薬の治療上有効量での治療を可能にする方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
抗ＣＤ４７薬の治療量で個体を治療する方法であって、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量を該個体に投与する前に刺激剤を投与することによる方法が提供される。実施形態によっては、本発明の方法は、ＣＤ４７介在貪食を調節することを目的とした治療法を最適化する際の使用を見出す。かかる実施形態によっては、個体は、癌のための抗ＣＤ４７薬の用量で治療されることになる。他の実施形態によっては、個体は、細胞内病原体での感染のための抗ＣＤ４７薬の用量で治療されることになる。本方法では、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量は、刺激剤を投与した後約３日〜約２１日に投与される。本発明の実施形態によっては、２またはそれ以上の物質が投与される。好適な刺激剤は、赤血球産生刺激剤（ＥＳＡ）、及び／または抗ＣＤ４７薬の初回刺激量を含む。
【０００７】
本発明の方法で使用するための抗ＣＤ４７薬は、癌細胞、細胞内病原体で感染した細胞、幹細胞等を含むこれらに限定されない標的細胞に存在するＣＤ４７と貪食細胞に存在するＳＩＲＰαとの間の結合を妨害する。一般的に、かかる細胞はいずれも、治療される個体に存在する。かかる方法は、前貪食シグナルの存在下で、標的細胞の貪食を増加させ得る。本方法は、ＣＤ４７介在ＳＩＲＰαシグナル伝達の遮断を受けやすい任意の疾患について対象を治療するために使用され得る。好適な抗ＣＤ４７薬は、可溶性ＳＩＲＰαポリペプチド、可溶性ＣＤ４７、抗ＣＤ４７抗体、抗ＳＩＲＰα抗体などを含み、抗体との用語は、当該分野で公知の、抗体フラグメント及びその変異体を包含する。
【０００８】
上記の抗ＣＤ４７薬の治療量は、赤血球（ＲＢＣ）の減少及び貧血を招くことがある。本方法は、この問題を解決し、驚くべきことに、本明細書で使用される刺激剤が赤血球の減少に因る毒性を顕著に減少させることを示す。理論に拘束されるものではないが、刺激剤は、ＣＤ４７介在貪食に対してより抵抗性であり得、そのため抗ＣＤ４７薬の次の投与中に減少することがほとんどない網状赤血球（未成熟ＲＢＣ）の産生を増加させると考えられる。
【０００９】
本発明のある実施形態は、場合により、刺激剤の投与に対する個体の感応性を決定するステップを含む。例えば、網状赤血球計数、またはヘモグロビンの減少は、刺激剤が網状赤血球の産生を増加させたか否かを決定するために使用され得る。網状赤血球計数は、刺激剤投与の前及び後で行われ、網状赤血球の増加に効果的である計測時間を許容することができる。あるいは、増加した赤血球生成の決定のための任意の好適な方法が使用され得る。
【００１０】
刺激剤の投与後、網状赤血球産生の増加に効果的な時間が可能になることによって、抗ＣＤ４７薬の治療量が投与され得る。該治療量は、多数の異なった方法で投与され得る。実施形態によっては、刺激剤が投与された後、２またはそれ以上の治療上有効量が投与される。実施形態によっては、２またはそれ以上の段階的に増加する濃度の量で、場合によっては等しい量で、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量は投与される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１Ａ−Ｂは、ＭＩＡＰ４１０（ＩｇＧ１アイソタイプ）またはＭＩＡＰ４７０（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）の単回２５０μｇＩＰ注入を野生型マウスに施した後のヘマトクリット（ＨＣＴ）の百分率変化及びヘモグロビンの百分率変化を示す。
【図２】図２は、ＭＩＡＰ４１０（ＩｇＧ１アイソタイプ）またはＭＩＡＰ４７０（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）の単回２５０μｇＩＰ注入をＣＤ４７−／−マウスに施した後のヘモグロビンの百分率変化を示す。
【図３】図３Ａ−Ｂは、対照マウスＩｇＧ、ＭＩＡＰ４１０またはＭＩＡＰ７４０の２５０μｇＩＰ投与を野生型マウスに３日毎に施した後のヘマトクリット（ＨＣＴ）の百分率変化及びヘモグロビンの百分率変化を示す。
【図４】図４は、Ｉｇ様細胞外ドメインにおけるヒト及びマカクＣＤ４７間の配列アラインメントを表す。ヒトＣＤ４７ＥＣＤ（配列番号：４);Ｃｙｎｏ（マカク）ＣＤ４７ＥＣＤ（配列番号：５)。
【図５】図５は、マウスＣＤ４７は除いて、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４がヒト及びカニクイザルＣＤ４７を認識することを示す。ＥＬＩＳＡを、抗マウスＦｃ特異抗体をコーティングした後にヒト、マウス及びｃｙｎｏ  ＣＤ４７−ｍＦｃ融合タンパク質を加えて行った。無関係なマウスＦｃ（ｍＦｃ）融合タンパク質を陰性対照として使用した。次いで、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を加えた。結合した抗体を、ＨＲＰ結合抗ヒトカッパ（κ）抗体を用いて検出した。
【図６】図６は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４結合を測定した結合定数の概要を示す。ＳＰＲ結合試験を、ＧＬＭセンサーチップを用いるバイオ・ラッドＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６システムで行った。結合データを２５℃で収集した。反応データを１：１の相互作用モデルを使って全体的に適合させた。括弧の数字は最後に報告された桁での標準誤差を表す。（Ａ）ヒトＣＤ４７への結合。（Ｂ）カニクイザルＣＤ４７への結合。
【図７】図７は、非ヒト霊長類Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４毒物動態研究データを示す。カニクイザルＮＨＰに、示されたレベルでの単回投与によってＨｕ５Ｆ９−Ｇ４を投与した。（Ａ）貧血が用量依存で発生したが、自発的に治癒した。灰色バーはヒトにおける輸血の必要性を示すヘモグロビンの範囲を示す。（Ｂ）血清レベルの測定による薬物動態（ＰＫ）解析は、他の用量は除外して１０及び３０ｍｇ／ｋｇで行った治療レベルでは短半減期を示した。
【図８】図８は、非ヒト霊長類Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４用量漸増毒物動態研究データを示す。ＥＰＯの単回投与による前処理なし、または前処理ありのいずれかを受けたカニクイザルＮＨＰは、示された用量と時点での用量漸増試験でＨｕ５Ｆ９−Ｇ４を投与された。（Ａ）ヘモグロビンを連続的に測定して貧血を監視した。（Ｂ）ＥＬＩＳＡ法によってＨｕ５Ｆ９−Ｇ４レベルで血清をスクリーニングし、薬物動態を確定した。パネル（Ａ）の灰色バーは輸血の開始傾向があるヒトのヘモグロビンの範囲を示す。パネル（Ｂ）の灰色バーは異種移植研究における強力活性を伴う血清Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の範囲を示す。
【図９】図９は、非ヒト霊長類Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４負荷−維持投与毒物動態研究データを示す。カニクイザルＮＨＰは、１日目に１ｍｇ／ｋｇまたは３ｍｇ／ｋｇの負荷投与（ＬＤ）（すなわち、初回刺激量）を受け、次いで、示された時点で１０または３０ｍｇ／ｋｇの維持用量（ＭＤ）を受けた。各々の実験群で２頭のＮＨＰ（実線及び破線）を使用した。（Ａ）ヘモグロビンを連続的に測定し貧血を監視した。（Ｂ）ＥＬＩＳＡ法によってＨｕ５Ｆ９−Ｇ４レベルで血清をスクリーニングし、薬物動態を確定した。パネル（Ａ）の灰色バーは輸血を開始する可能性があるヒトのヘモグロビンの範囲を示す。パネル（Ｂ）の灰色バーは異種移植研究においてヒト原発ＡＭＬに対して強力な活性を伴う血清Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の範囲（すなわち、治療的に有効な血清レベルの範囲）を示す。
【図１０】図１０は、種々の用量の抗ＣＤ４７剤（本事例ではｈｕ５Ｆ９−Ｇ４抗体）に関連する網赤血球増加レベルを実証する網赤血球数データを示す。
【図１１】図１１は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が腫瘍の成長及び転移を阻害することを示す。Ａ）Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が異物移植アッセイで膀胱癌を完全に排除する。Ｂ）Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が生体内でヒト前立腺癌転移を予防する。
【図１２−１】図１２は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が樹立された転移を排除することを示す。Ａ−Ｂ）Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が肺（Ａ）及び脳（Ｂ）における転移性乳癌細胞を排除する。Ｃ）Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が切除した乳房腫瘍の再成長を抑制する。Ｄ）ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の血清中濃度は治療有効性と関連した。したがって、ヒト化抗体（例えば、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４）は、非ヒト化抗体と病気（例えば、癌または慢性感染）の治療に関して同じ一般的性質を有し、対象方法はヒト化抗体（例えば、抗ＣＤ４７抗体）を使用して、癌及び／または慢性感染を治療する時に有効である。
【図１２−２】図１２は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が樹立された転移を排除することを示す。Ａ−Ｂ）Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が肺（Ａ）及び脳（Ｂ）における転移性乳癌細胞を排除する。Ｃ）Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が切除した乳房腫瘍の再成長を抑制する。Ｄ）ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の血清中濃度は治療有効性と関連した。したがって、ヒト化抗体（例えば、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４）は、非ヒト化抗体と病気（例えば、癌または慢性感染）の治療に関して同じ一般的性質を有し、対象方法はヒト化抗体（例えば、抗ＣＤ４７抗体）を使用して、癌及び／または慢性感染を治療する時に有効である。
【図１３】図１３は、実施例４を説明する研究設計を表す。
【図１４】図１４は、実施例４で記載した研究の継続期間での全コホートのヘモグロビンレベルデータを表す（図１３も参照せよ）。
【図１５】図１５は、実施例４で記載した研究の全コホートにおけるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４（ヒト化抗ＣＤ４７抗体）の薬物動態プロファイルを表す（図１３も参照のこと）。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、刺激剤を最初に投与することによって抗ＣＤ４７薬の治療量で対象を治療するための方法に関する。
【００１３】
本方法及び組成物を説明する前に、本発明は記載された特定の方法または組成物に限定されるものでなく、よって勿論変動し得ることを理解されたい。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的であり、限定するものでない点も理解されたい。
【００１４】
値の範囲が提供される場合には、下限の単位の１０分の１までの各介在値は、文脈が別途明白に指定しない限り、該範囲の上限と下限との間において具体的に開示されている、と理解されたい。記載された範囲中の任意の記載の値または介在値と、該記載された範囲中の任意の他の記載値または介在値との間の各より小さい範囲は、本発明に包含される。これらのより小さい範囲の上限と下限は、独立して該範囲に含まれることもありまたは含まれないこともあり、また、記載された範囲で任意に具体的に除かれた限界を条件として、両限界のいずれか一方もしくは両方が該小さい範囲に含まれるか、または両限界のいずれも該小さい範囲に含まれないような各範囲も本願に包含される。記載された範囲が該限界の１つまたは両方を含む場合に、これらの含まれた限界のいずれか一方または両方を除く範囲も、本発明に含まれる。
【００１５】
他に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書に記載の方法及び材料と類似または同等の任意の方法及び材料が本発明の実施または試験で使用され、可能性のある好ましい方法及び材料が本明細書で記載される。本明細書に記載の全ての刊行物は、刊行物が一緒に引用される方法及び／または材料を開示及び記載するために、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００１６】
本開示を読んだ当業者には明らかであろうが、本明細書に記載及び例証された個々の実施形態の各々は、別個の成分及び特徴を有し、これらの別個の成分及び特徴は、本発明の範囲または趣旨を逸脱しない他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴とは容易に分離されまたはそれらと組み合わされてよい。任意の記載の方法は、記載された事象の順でまたは論理的に可能な任意の他の順で実行され得る。
【００１７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、「ｔｈｅ（その）」は、文脈が明確に指摘しない限り、複数形も含むことに留意されたい。したがって、例えば、「ａ  ｃｅｌｌ（１つの細胞）」への言及は、かかる細胞の複数形を含み、「ｔｈｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ（そのペプチド）」への言及は、１またはそれ以上のポリペプチド及びその等価物、例えば当業者に公知のポリペプチド等を含む。
【００１８】
本明細書で議論される刊行物は、本願の出願日前にその開示が提供されているにすぎない。本明細書では、本発明が先行発明によってかかる開示を実際より早める権利を与えていることを認めていると解釈されるべきものはない。更に、提供された刊行物の日付は、個別に確認される必要があるかもしれない実際の公表日とは異なっていることがある。
【００１９】
定義
抗ＣＤ４７薬
本明細書で使用される用語「抗ＣＤ４７薬」は、ＣＤ４７（例えば、標的細胞）のＳＩＲＰα（例えば、貪食細胞）への結合を減少させる任意の物質を意味する。好適な抗ＣＤ４７薬の非限定的な例は、高親和性ＳＩＲＰαポリペプチド、抗ＳＩＲＰα抗体、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド、及び抗ＣＤ４７抗体または抗体フラグメントを含むがこれらに限定されないＳＩＲＰα薬を含む。実施形態によっては、好適な抗ＣＤ４７薬（例えば、抗ＣＤ４７抗体、ＳＩＲＰα薬等）は、ＣＤ４７に特異的に結合してＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を減少させる。実施形態によっては、好適な抗ＣＤ４７薬（例えば、抗ＳＩＲＰα抗体、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド等）は、ＳＩＲＰαに特異的に結合してＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を減少させる。ＳＩＲＰαに結合する好適な抗ＣＤ４７薬は、（例えば、ＳＩＲＰα発現貪食細胞において）ＳＩＲＰαを活性化しない。好適な抗ＣＤ４７薬の効果は、（更に以下に記載の）物質をアッセイすることによって評価され得る。例示的なアッセイでは、標的細胞は、候補物質の存在下または非存在下でインキュベートされる。本発明の方法で使用するための物質は、該物質の非存在下での貪食と比べて、少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２０％、少なくとも１４０％、少なくとも１６０％、少なくとも１８０％または少なくとも２００％）、貪食を上方調節するだろう。同様に、ＳＩＲＰαのチロシンリン酸化のレベルのためのインビトロアッセイは、候補物質の非存在下で観察されたリン酸化と比べて、少なくとも５％（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％）、リン酸化の減少を示すだろう。
【００２０】
実施形態によっては、抗ＣＤ４７薬は、結合時にＣＤ４７を活性化しない。ＣＤ４７が活性化されると、アポトーシスへの同種のプロセス（すなわち、プログラムされた細胞死）が起こり得る（Ｍａｎｎａ及びＦｒａｚｉｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４，１０２６−１０３６，２００４年２月１日）。したがって、実施形態によっては、抗ＣＤ４７薬は、ＣＤ４７発現細胞の細胞死を直接には誘導しない。
【００２１】
病原体（例えば、ポックスウイルス、粘液腫ウイルス、シカポックスウイルス、豚痘ウイルス、ヤギ痘ウイルス、羊痘ウイルス等）の中には、感染を可能にする病原性因子として働くＣＤ４７アナログ（すなわち、ＣＤ４７模倣体）（例えば、Ｍ１２８Ｌタンパク質）を発現するものもあり（Ｃａｍｅｒｏｎら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２００５年６月２０日；３３７（１）：５５−６７）、病原体の中には、宿主細胞中で内因性ＣＤ４７の発現を誘導するものもある。よって、ＣＤ４７アナログを発現する病原体で感染した細胞は、単独でまたは内因性ＣＤ４７と組み合わせて病原体によって提供されたＣＤ４７アナログを発現し得る。このメカニズムは、内因性ＣＤ４７のレベルを増加させながらまたは増加させることなく、病原体に、感染細胞中での（ＣＤ４７アナログの発現を介した）ＣＤ４７発現を増加させる。実施形態によっては、抗ＣＤ４７薬（例えば、抗ＣＤ４７抗体、ＳＩＲＰα薬、ＳＩＲＰα抗体、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド等）は、ＣＤ４７アナログ（すなわち、ＣＤ４７模倣体）のＳＩＲＰαへの結合を減少させ得る。場合によっては、好適な抗ＣＤ４７薬（例えば、ＳＩＲＰα薬、抗ＣＤ４７抗体等）は、ＣＤ４７アナログ（すなわち、ＣＤ４７模倣体）に結合して、ＣＤ４７アナログのＳＩＲＰαへの結合を減少させ得る。場合によっては、好適な抗ＣＤ４７薬（例えば、ＳＩＲＰα抗体、可溶性ＣＤ４７ポリペプチド等）は、ＳＩＲＰαに結合し得る。ＳＩＲＰαに結合する好適な抗ＣＤ４７薬は、（例えば、ＳＩＲＰα発現貪食細胞において）ＳＩＲＰαを活性化しない。抗ＣＤ４７薬は、該病原体がＣＤ４７アナログを提供する病原体である場合には、本明細書で提供される方法のいずれかで使用され得る。言い換えれば、本明細書で使用される用語「ＣＤ４７」は、ＣＤ４７及びＣＤ４７アナログ（すなわち、ＣＤ４７模倣体）を包含する。
【００２２】
ＳＩＲＰα薬
ＳＩＲＰα薬は、通常、シグナル配列及び膜貫通型ドメインとの間に存在する、認識できる親和性でＣＤ４７と結合するために十分であるＳＩＲＰαの部分、または結合活性を維持するそのフラグメントを含む。好適なＳＩＲＰα薬は、天然型タンパク質ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を減少（例えば、遮断、抑制等）する。ＳＩＲＰα薬は、通常、ＳＩＲＰαの少なくともｄ１ドメインを含むことになる。実施形態によっては、ＳＩＲＰα薬は、例えば第２ポリペプチドとインフレームで融合された、融合タンパク質である。実施形態によっては、第２ポリペプチドは、例えば、該融合タンパク質が循環から急速に除去されないように、該融合タンパク質の大きさを増加させることができる。実施形態によっては、第２ポリペプチドは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部または全部である。Ｆｃ領域は、高親和性ＳＩＲＰα薬によって提供された「ドント・イートミー」シグナルの遮断を亢進する、「イートミー」シグナルを提供することによって貪食を助ける。他の実施形態では、第２ポリペプチドは、例えば、増大したサイズ、多量体化ドメイン、及び／または結合の付加またはＩｇ分子との相互作用を提供する場合には、Ｆｃに実質的に類似した任意の好適なポリペプチドである。
【００２３】
実施形態によっては、本題の抗ＣＤ４７薬は、ＳＩＲＰα由来ポリペプチド及びそのアナログを含む「高親和性ＳＩＲＰα薬」である。高親和性ＳＩＲＰα薬は、本明細書に参照によって具体的に組み込まれている国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１３／２１９３７号に記載されている。高親和性ＳＩＲＰα薬は、天然型ＳＩＲＰαタンパク質の変異体である。実施形態によっては、高親和性ＳＩＲＰα薬は、可溶性であり、該ポリペプチドは、ＳＩＲＰα膜貫通型ドメインを欠き、野生型ＳＩＲＰα配列と比べて少なくとも１つのアミノ酸変化を含み、該アミノ酸変化は、例えば、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍またはそれ以上、オフ速度を減少させることによって、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαポリペプチド結合の親和性を増加させる。
【００２４】
高親和性ＳＩＲＰα薬は、通常、シグナル配列及び膜貫通型ドメインとの間に存在する、認識できる親和性、例えば高親和性でＣＤ４７と結合するために十分であるＳＩＲＰαの部分、または結合活性を維持するそのフラグメントを含む。高親和性ＳＩＲＰα薬は、通常、親和性を増加させるために修飾されたアミノ酸残基を有するＳＩＲＰαの少なくともｄ１ドメインを含むことになる。実施形態によっては、本発明のＳＩＲＰα変異体は、例えば第２ポリペプチドとインフレームで融合された、融合タンパク質である。実施形態によっては、第２ポリペプチドは、例えば、該融合タンパク質が循環から急速に除去されないように、該融合タンパク質の大きさを増加させることができる。実施形態によっては、第２ポリペプチドは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部または全部である。Ｆｃ領域は、高親和性ＳＩＲＰα薬によって提供された「ドント・イートミー」シグナルの遮断を亢進する、「イートミー」シグナルを提供することによって貪食を助ける。他の実施形態では、第２ポリペプチドは、例えば、増大したサイズ、多量体化ドメイン、及び／または結合の付加またはＩｇ分子との相互作用を提供する場合には、Ｆｃに実質的に類似した任意の好適なポリペプチドである。増加した親和性を提供するアミノ酸変化は、ｄ１ドメインに局在化されるため、高親和性ＳＩＲＰα薬は、ｄ１ドメイン内に野生型配列と比べて少なくとも１つのアミノ酸変化を有するヒトＳＩＲＰαのｄ１ドメインを含む。かかる高親和性ＳＩＲＰα薬は、場合により、追加のアミノ酸配列、例えば、抗体Ｆｃ配列；ｄ１ドメイン以外の野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の部分であって、野生型タンパク質またはそのフラグメントの残基１５０〜３７４を含むがそれに限定されず、通常ｄ１ドメインを有する連続するフラグメントである部分；等を含む。高親和性ＳＩＲＰα薬は、単量体または多量体、すなわち、二量体、三量体、四量体等でよい。
【００２５】
抗ＣＤ４７抗体
実施形態によっては、本題の抗ＣＤ４７薬は、ＣＤ４７に特異的に結合する抗体（すなわち、抗ＣＤ４７抗体）であり、１つの細胞（例えば、感染細胞）上のＣＤ４７と別の細胞（例えば、貪食細胞）上のＳＩＲＰαとの間の相互作用を減少させる。実施形態によっては、好適な抗ＣＤ４７抗体は、結合時に、ＣＤ４７を活性化しない。好適な抗体の非限定的な例は、クローンＢ６Ｈ１２、５Ｆ９、８Ｂ６及びＣ３を含む（例えば、本明細書で参照によって具体的に引用されている国際特許出願公開第ＷＯ２０１１／１４３６２４号に記載されている）。好適な抗ＣＤ４７抗体は、かかる抗体の完全なヒト、ヒト化またはキメラ体を含む。ヒト化抗体（例えば、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４）は、その低抗原性のために、ヒトでのインビボ適用のために特に有用である。同様に、イヌ化（ｃａｎｉｎｉｚｅｄ）、ネコ化（ｆｅｌｉｎｉｚｅｄ）等の抗体は、それぞれ、イヌ、ネコ等の抗体は、それぞれ、イヌ、ネコ及び他の種での適用に特に有用である。本題の抗体は、ヒト化抗体、またはイヌ化、ネコ化、ウマ化、ウシ化、ブタ化等の抗体、及びそれらの変異体を含む。
【００２６】
抗ＳＩＲＰα抗体
実施形態によっては、本題の抗ＣＤ４７薬は、ＳＩＲＰαに特異的に結合する抗体（すなわち、抗ＳＩＲＰα抗体）であり、１つの細胞（例えば、感染細胞）上のＣＤ４７と別の細胞（例えば、貪食細胞）上のＳＩＲＰαとの間の相互作用を減少させる。好適な抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰαの活性化がおそらく貪食を阻害するので、ＳＩＲＰαを介するシグナル伝達を活性化または刺激せずにＳＩＲＰαに結合し得る。代わりに、好適な抗ＳＩＲＰα抗体は、正常細胞を超えて損傷細胞の選択的貪食を促進する。他の細胞（例えば、非感染細胞）と比べてＣＤ４７（例えば、感染細胞）のより高度なレベルを発現するこれらの細胞は、選択的に貪食されることになる。したがって、好適な抗ＳＩＲＰα抗体は、（貪食を阻害するためのシグナル応答を十分に活性化／刺激することなく）ＳＩＲＰαに特異的に結合し、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との相互作用を遮断する。好適な抗ＳＩＲＰα抗体は、かかる抗体の完全なヒト、ヒト化またはキメラ体を含む。ヒト化抗体は、その低い抗原性に因ってヒトでのインビボ適用のために特に有用である。同様に、イヌ化（ｃａｎｉｎｉｚｅｄ）、ネコ化（ｆｅｌｉｎｉｚｅｄ）等の抗体は、それぞれ、イヌ、ネコ及び他の種での適用に特に有用である。本題の抗体は、ヒト化抗体、またはイヌ化、ネコ化、ウマ化、ウシ化、ブタ化等の抗体、及びそれらの変異体を含む。
【００２７】
可溶性ＣＤ４７ポリペプチド
実施形態によっては、本題の抗ＣＤ４７薬は、ＳＩＲＰαに特異的に結合し、１つの細胞（例えば、感染細胞）上のＣＤ４７と別の細胞（例えば、貪食細胞）上のＳＩＲＰαとの間の相互作用を減少させる、可溶性ＣＤ４７ポリペプチドである。好適な可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、ＳＩＲＰαの活性化はおそらく貪食を阻害するので、ＳＩＲＰαを介したシグナル伝達を活性化または刺激しないで、ＳＩＲＰαに結合し得る。代わりに、好適な可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、正常細胞を超えて損傷細胞の選択的貪食を促進する。正常な非標的細胞（例えば、正常細胞）と比べてＣＤ４７（例えば、感染細胞）のより高度なレベルを発現するこれらの細胞は、選択的に貪食されることになる。したがって、好適な可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、貪食を阻害するためのシグナル応答を十分に活性化／刺激することなく、ＳＩＲＰαに特異的に結合する。
【００２８】
場合によっては、好適な可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、（例えば、本明細書に参照によって具体的に組み込まれている、米国特許出願公開第ＵＳ２０１００２３９５７９号に構造的に記載されている）融合タンパク質でよい。しかしながら、ＳＩＲＰαを活性化／刺激しない融合タンパク質のみが、本明細書で提供される方法に好適である。好適な可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、貪食を阻害する十分なＳＩＲＰα活性を刺激することなく、ＳＩＲＰαに特異的に結合し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害し得る、変異体を含む任意のペプチドもしくはペプチドフラグメント、または天然に存在するＣＤ４７配列（例えば、細胞外ドメイン配列または細胞外ドメイン変異体）も含む。
【００２９】
ある実施形態では、ＣＤ４７の細胞外部分が典型的には１４２のアミノ酸長であり、配列番号３で示されるアミノ酸配列を有するように、可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号２）を含むＣＤ４７の細胞外ドメインを含む。本明細書に記載の可溶性ＣＤ４７ポリペプチドはまた、アミノ酸配列を少なくとも６５％〜７５％、７５％〜８０％、８０〜８５％、８５％〜９０％または９５％〜９９％（または６５％〜１００％の間で具体的に列挙されていない任意の同一性の割合）含むＣＤ４７細胞外ドメイン変異体であって、ＳＩＲＰαシグナル伝達を刺激することなくＳＩＲＰαに結合する能力を維持する変異体を含む。
【００３０】
ある実施形態では、シグナルペプチドアミノ酸配列は、別のポリペプチド（例えば、免疫グロブリンまたはＣＴＬＡ４）から得られるシグナルペプチドアミノ酸配列で置換され得る。例えば、細胞外膜を横断する細胞表面ポリペプチドである完全長ＣＤ４７と異なり、可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは分泌され、したがって、可溶性ＣＤ４７ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、通常細胞から分泌されるポリペプチドと関連するシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み得る。
【００３１】
他の実施形態では、可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、シグナルペプチドを欠くＣＤ４７の細胞外ドメインを含む。具体的な実施形態では、シグナルペプチドを欠くＣＤ４７細胞外ドメインは、配列番号１で示されるアミノ酸配列（１２４アミノ酸）を有する。本明細書に記載されるように、シグナルペプチドは、分泌されたまたは膜貫通型のタンパク質の細胞表面上に曝露されない。なぜならば、該シグナルペプチドは該タンパク質の転座中に開裂されるか、または該シグナルペプチドは細胞外膜に固定されたままのいずれかであるからである（かかるペプチドはシグナルアンカーとも呼ばれる）。ＣＤ４７のシグナルペプチド配列は、前駆体ＣＤ４７ポリペプチドからインビボで開裂されると考えられている。
【００３２】
他の実施形態では、可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、ＣＤ４７細胞外ドメイン変異体を含む。かかる可溶性ＣＤ４７ポリペプチドは、ＳＩＲＰαシグナル伝達を刺激することなくＳＩＲＰαに結合する能力を維持する。ＣＤ４７細胞外ドメイン変異体は、配列番号１と少なくとも６５％〜７５％、７５％〜８０％、８０〜８５％、８５％〜９０％または９５％〜９９％同一であるアミノ酸配列を有し得る（記載された範囲のいずれか１つの間の任意の同一性の割合を含む）。
【００３３】
用語「治療」、「治療すること」、「治療する」等は、本明細書で使用され、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを一般的に意味する。該効果は、疾患またはその症状（複数）を完全にもしくは部分的に抑制する点で予防的であり、及び／または疾患及び／または該疾患の原因となる逆の効果を部分的もしくは完全に安定化または治癒する点で、治療的であり得る。用語「治療」は、哺乳動物、特にヒトの疾患の任意の治療を包含し、（ａ）該疾患及び／または症状に罹患しやすいが未だそれを有すると診断されていない対象において、該疾患及び／または症状（複数）が発症しないようにすること；（ｂ）該疾患及び／または症状（複数）を阻害すること、すなわち、それらの発症を抑えること；あるいは（ｃ）該疾患の症状（複数）を緩和すること、すなわち、該疾患及び／または症状（複数）を後退させること、を含む。治療を必要としている人は、既に障害を受けている（ｉｎｆｌｉｃｔｅｄ）人（例えば、癌を有する人、感染症を有する人等）、並びに抑制が望まれている人（例えば、癌に増加した感受性を有する人、感染症に増加した可能性を有する人、癌を有すると疑われる人、感染症を有すると疑われる人等）を含む。
【００３４】
標的細胞は、損傷された（ｉｎｆｌｉｃｔｅｄ）細胞でよく、用語「障害を受けた」は本明細書で使用されて、抗ＣＤ４７薬で治療され得る症状、病気または疾患を有する対象を意味する。「障害を受けた」対象は、癌を有していてよく、感染症（例えば、慢性感染症）、及び他の超増殖性症状、例えば硬化症、線維症等を有していてよい。「損傷した細胞」は、症状、病気または疾患を引き起こす損傷細胞でよい。非限定的な例として、障害を受けた患者の損傷した細胞は、癌細胞、感染細胞等でよい。病気または疾患が抗ＣＤ４７薬で治療され得る１つの徴候は、関連した細胞（すなわち、損傷した細胞、例えば癌性細胞、感染細胞等）が同一細胞種の正常細胞と比べて、ＣＤ４７の増加したレベルを発現することである。
【００３５】
治療的処置は、投与前に対象が障害を受けている処置であり、予防的処置は、投与前に対象が障害を受けていない処置である。実施形態によっては、対象は、処置前に、障害を受ける高い可能性を有するか、または障害を受けると疑われる。実施形態によっては、対象は、障害を受ける高い可能性を有すると疑われる。
【００３６】
抗ＣＤ４７薬で治療され得る症状、病気及び／または疾患の例は、癌及び感染症（例えば、慢性感染症）を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される「癌」は、癌の任意の形態を含む（例えば、白血病；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；転移；微小残存病変；固形腫瘍癌、例えば、乳房、膀胱、結腸、卵巣、グリア芽腫、平滑筋肉腫、及び頭頸部扁平上皮癌；等）。癌細胞が非癌細胞と比べてＣＤ４７の増加した発現を示す任意の癌は、本方法及び組成物によって治療されるべき好適な癌である。
【００３７】
本明細書で使用される用語「感染」は、生物（すなわち、対象）の少なくとも１つの細胞が感染性物質によって感染されている任意の状態を意味する（例えば、対象が細胞内病原体感染症、例えば慢性細胞内病原体感染症を有している）。本明細書で使用される用語「感染性物質」は、感染された生物の少なくとも１つの細胞において増加したＣＤ４７発現を誘導する外来生物実体（すなわち、病原体）を意味する。例えば、感染性物質は、細菌、ウイルス、原生動物及び真菌を含むがこれらに限定されない。細胞内病原体は特に興味深い。感染性疾患は、感染性物質によって起こる疾患である。感染性物質の中には、ある条件下で認識可能な症状または疾患を引き起こさないものもあるが、変化した条件下で症状または疾患を引き起こす潜在性を有する。本方法は、慢性病原体感染症、例えば、ウイルス性感染症、例えばレトロウイルス、レンチウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ヒトパピローマウイルス等を含むがこれらに限定されない；細胞内細菌感染症、例えばマイコバクテリウム種、クラミドフィラ種、エシェリヒア種、リケッチア種、ブルセラ種、レジオネラ種、フランシセラ種、リステリア種、コクシエラ種、ナイセリア種、サルモネラ種、エルシニア種、ヘリコバクター・ピロリ等；及び細胞内原生動物病原体、例えば、プラスモディウム種、トリパノソーマ種、ジアルジア種、トキソプラズマ種、リーシュマニア種等、の治療に使用され得る。
【００３８】
本明細書で使用する「標的細胞」は、表面上のＣＤ４７発現細胞であり、ＣＤ４７陽性表現型を（例えば、抗ＣＤ４７薬の投与によって）マスクするかまたは改変することは増加した貪食をもたらす。通常、標的細胞は、哺乳動物細胞、例えばヒト細胞である。
【００３９】
用語「レシピエント」、「個体」、「対象」、「宿主」及び「患者」は、本明細書で交換的に使用され、診断、治療または治療法が望まれる任意の哺乳動物対象、特にヒトを意味する。治療目的の「哺乳動物」は、哺乳動物として分類される任意の動物を意味し、ヒト、家畜及び農場動物、及び動物園、スポーツまたはペット動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ等を含む。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【００４０】
「治療上有効量」または「治療量」は、所望の臨床的結果を得る（すなわち、治療的効果を達成する）ために十分な量である。治療上有効量は、１またはそれ以上の投与で投与され得る。本発明の目的のために、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量は、標的細胞（例えば、標的細胞）の貪食を増加させることによって疾患状態（例えば、癌または慢性感染症）の進行を軽減、緩和、安定、逆転、抑制、遅延または遅らせるために十分な量である。したがって、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量は、標的細胞の貪食を増加させるための有効量で、貪食細胞上のＳＩＲＰαへの、標的細胞上のＣＤ４７の結合を減少させる。
【００４１】
実施形態によっては、治療上有効量は、約４０μｇ／ｍｌまたはそれ以上（例えば、約５０ｕｇ／ｍｌまたはそれ以上、約６０ｕｇ／ｍｌまたはそれ以上、約７５ｕｇ／ｍｌまたはそれ以上、約１００ｕｇ／ｍｌまたはそれ以上、約１２５ｕｇ／ｍｌまたはそれ以上、または約１５０ｕｇ／ｍｌまたはそれ以上）の、抗ＣＤ４７薬（例えば、抗ＣＤ４７抗体）の徐放血清レベルをもたらす。実施形態によっては、治療上有効量は、約４０μｇ／ｍｌ〜約３００ｕｇ／ｍｌ（例えば、４０ｕｇ／ｍｌ〜約２５０ｕｇ／ｍｌ、約４０ｕｇ／ｍｌ〜約２００ｕｇ／ｍｌ、約４０ｕｇ／ｍｌ〜約１５０ｕｇ／ｍｌ、約４０ｕｇ／ｍｌ〜約１００ｕｇ／ｍｌ、約５０ｕｇ／ｍｌ〜約３００ｕｇ／ｍｌ、約５０ｕｇ／ｍｌ〜約２５０ｕｇ／ｍｌ、約５０ｕｇ／ｍｌ〜約２００ｕｇ／ｍｌ、約５０ｕｇ／ｍｌ〜約１５０ｕｇ／ｍｌ、約７５ｕｇ／ｍｌ〜約３００ｕｇ／ｍｌ  約７５ｕｇ／ｍｌ〜約２５０ｕｇ／ｍｌ、約７５ｕｇ／ｍｌ〜約２００ｕｇ／ｍｌ、約７５ｕｇ／ｍｌ〜約１５０ｕｇ／ｍｌ、約１００ｕｇ／ｍｌ〜約３００ｕｇ／ｍｌ、約１００ｕｇ／ｍｌ〜約２５０ｕｇ／ｍｌ、または約１００ｕｇ／ｍｌ〜約２００ｕｇ／ｍｌ）の範囲である抗ＣＤ４７薬（例えば、抗ＣＤ４７抗体）の徐放血清レベルをもたらす。実施形態によっては、固形腫瘍を治療するための治療上有効量は、１００μｇ／ｍｌまたはそれ以上（例えば、約１００ｕｇ／ｍｌ〜約２００ｕｇ／ｍｌの範囲の徐放血清レベル）の抗ＣＤ４７薬（例えば、抗ＣＤ４７抗体）の徐放血清レベルをもたらす。実施形態によっては、非固形腫瘍（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ））を治療するための治療上有効量は、約５０μｇ／ｍｌまたはそれ以上（例えば、７５μｇ／ｍｌまたはそれ以上の徐放血清レベル；または約５０ｕｇ／ｍｌ〜約１５０ｕｇ／ｍｌの範囲の徐放血清レベル）の抗ＣＤ４７薬（例えば、抗ＣＤ４７抗体）の徐放血清レベルをもたらす。
【００４２】
したがって、単一の治療上有効量または一連の治療上有効量は、抗ＣＤ４７薬の血清レベルを達成し、維持することがきるであろう。抗ＣＤ４７薬の治療上有効量は、使用される特定の物質に依拠し得るが、通常８ｍｇ／ｋｇ体重またはそれ以上（例えば、約８ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上、約１０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上、約１５ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上、約２０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上、約２５ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上、約３０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上、約３５ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上、または約４０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上）、あるいは約１０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ）である。特定の血清レベルを達成し及び／または維持するために必要とされる用量は、投薬量間の時間に正比例し、投与される投薬数に反比例する。したがって、投薬頻度が増えるにつれて、必要とされる用量は減少する。投薬方法の最適化は、当業者によって容易に理解及び実施されるだろう。
【００４３】
準治療量は、所望の臨床結果をもたらすためには十分でない用量（すなわち、量）である。例えば、抗ＣＤ４７薬の準治療量は、疾患状態（例えば、癌、感染症、炎症等）の進行を軽減、緩和、安定、逆転、抑制、遅延または遅らせるために十分でない量である。場合によっては、（以下により詳述する）刺激剤としての抗ＣＤ４７薬の準治療量を用いることが望ましい。刺激剤としての抗ＣＤ４７薬の準治療量の使用は、所望の結果（例えば、対象は、「刺激され」て、治療上有効量を受け取る）を達成するが、該用量は、「治療的用量」であるとは考えられない。なぜならば、準治療量は、標的細胞の貪食を十分には増加させず、該疾患状態の進行を軽減、緩和、安定、逆転、抑制、減速または遅延させるために十分でないからである。抗ＣＤ４７薬の準治療量は、使用される具体的な物質に依拠し得、一般的には約１０ｍｇ／ｋｇ未満である。
【００４４】
「維持用量」は、治療上有効量を意図する用量である。例えば、治療上有効量を決定するための実験では、複数の異なった維持用量が異なった対象に投与されることがある。そのようなわけで、維持用量の中には治療上有効量であるものもあり、準治療量であるものもある。
【００４５】
刺激剤
本明細書で使用する用語「刺激剤」は、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の将来的投与のために対象を刺激する物質を意味する。本発明者らは、（例えば、マウス及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ）モデルで以下に示すように）刺激剤を最初に投与しないで抗ＣＤ４７薬の治療上有効量が対象に投与されると、高用量は赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ）（赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）、ＲＢＣ）の用量依存的減少を引き起こし得ることを発見した。当業者は、ＲＢＣの減少を測定する方法を容易に理解するだろう。例えば、ＲＢＣの減少は、例えばヘマトクリット値のパーセンテージ変化を長期間測定することによって及び／または長期間のヘモグロビン（例えば、長時間のパーセント変化、ｇ／ｄＬ等）を測定することによって監視され得る（図１〜図３及び図７〜図９）。よって、ＲＢＣ減少によって起こる貧血の重度（場合によって、死）は、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の使用を不可能にすることがある。しかしながら、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の投与前に刺激剤を投与することによって、対象は、刺激剤の投与後に起こり得る一時的で低度の貧血を超える逆効果を経験しない。したがって、刺激剤の投与は、抗ＣＤ４７の治療上有効量の将来的投与のために対象を刺激するのに役立つ。
【００４６】
刺激剤を使用する本方法は、特に、霊長類を治療する場合に関連する。なぜならば、霊長類はＲＢＣ数に感受性であり、貧血を発症しやすいからである。したがって、実施形態によっては、対象は、霊長類（例えば、ヒト、原猿、類人猿、キツネザル、ロリス、メガネザル、モンキー、サル（ａｐｅ）、オマキザル、ホエザル、コモンリスザル、ヒヒ、マカク、ギボン、大型類人猿等）である。
【００４７】
刺激剤は、対象におけるＲＢＣ数を増加させ、それによって抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の投与によって起こるＲＢＣの減少を阻止する。したがって、実施形態によっては、刺激剤は、赤血球産生刺激剤（ＥＳＡ）である。ＥＳＡは、当該分野で知られており、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、ＥＰＯ誘導体及びＥＰＯ刺激化合物を含むが、これらに限定されない。好適な例は、以下を含むがこれらに限定されない：ＥＰＯアルファ、ＥＰＯベータ、ＥＰＯデルタ、ＥＰＯオメガ、ＥＰＯゼータ、ダルベポエチンアルファ（アラネスプ）、エポエチンアルファ（プロクリット）、エポセプト（ルピン・ファーマ）、ナノキン（ナノジェン・バイオテクノロジー、ベトナム）、エポフィット（インタス・ファーマ）、エポゲン（アムジェン）、エポギン、エプレックス（ヤンセン・シラグ）、ネオレコルモン（ホフマン・ラ・ロシュ）、レコルモン、メトキシポリエチレングリコール−エポエチンベータ（ミルセラ）（ロシュ）、ダイネポ、エポマックス、シラポ（スターダ）、レタクリット（ホスピラ）、エポセプト（ルピン・ファーマシューティカルズ）、ＥＰＯトラスト（パナセア・バイオテク）、エリプロセーフ（バイオコン）、レポイチン（インド血清研究所）、ヴィントール（エムクレ・ファーマシューティカルズ）、エポフィット（インタス・ファーマ）、エリキン（インタス・バイオファーマシューティカ）、ウェボックス（ウォックハル・バイオテク）、エスポゲン（ＬＧ・ライフ・サイエンシーズ）、レリポイエチン（レライアンス・ライフ・サイアンシーズ）、シャンポイエチン（シャンタ・バイオテクニクス）、ジィロップアカディラ（ヘルスケア）、ＥＰＩＡＯ（ｒＨｕＥＰＯ）、及び（瀋陽サンシャインファーマシューティカル株式会社、中国）。投与されるべきＥＳＡの用量は、使用される物質の性質に依拠し、多数の対象の特定の因子（例えば、年齢、体重等）にも依拠する。ＥＳＡの好適な用量を決定する方法は当該分野で知られている。実施形態によっては、ＥＳＡは、製造者の示唆に従う用量で投与され、場合によっては、約５０単位／ｋｇ体重、約１００単位／ｋｇ体重または約１５０単位／ｋｇ体重のように低くても、または約１７，０００単位／ｋｇ体重のように高くてもよい。
【００４８】
実施形態によっては、刺激剤は、抗ＣＤ４７薬の準治療量を含む。本発明者らは、刺激剤としての抗ＣＤ４７薬の準治療量の投与は、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の将来の投与のために対象を効果的に刺激し、それによって治療上有効量と関連した重度の貧血を避けることを発見した。
【００４９】
したがって、本明細書で使用される用語「初回刺激量」は、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量がＲＢＣの重大な減少（減少したヘマトクリットまたは減少したヘモグロビン）をもたらさないように、該治療上有効量の投与のために対象を刺激する刺激剤（例えば、抗ＣＤ４７薬、ＥＳＡ等）の量を意味する。抗ＣＤ４７薬の具体的な好適な初回刺激量は、使用される該物質の性質及び多数の対象の特定の因子（例えば、年齢、体重等）に依って変動し得る。抗ＣＤ４７薬の具体的な好適な初回刺激量の例は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ）を含むが、これらに必ずしも限定されない。実施形態によっては、刺激剤は、ＥＳＡと抗ＣＤ４７薬の初回刺激量との組合せを含む。
【００５０】
「負荷量」は、初回刺激量を目的とした用量である。例えば、有効初回刺激量を決定するための実験では、異なった対象に複数の異なった負荷量が投与され得る。そのようなわけで、負荷量の中には、初回刺激量もあり、初回刺激量でないものもある。
【００５１】
用語「特異的結合」、「特異的に結合する」等は、溶液または反応混合物中の他の分子または部分と比べて、ある分子に非共有的にまたは共有的に選択的に結合することを意味する（例えば、抗体は、他の入手可能なポリペプチドと比べて特定のポリペプチドまたはエピトープに特異的に結合するか、またはＳＩＲＰαポリペプチドに特異的に結合する）。実施形態によっては、１つの分子が特異的に結合する別の分子についての１つの分子の親和性は、１０−５Ｍまたはそれ未満（例えば、１０−６Ｍまたはそれ未満、１０−７Ｍまたはそれ未満、１０−８Ｍまたはそれ未満、１０−９Ｍまたはそれ未満、１０−１０Ｍまたはそれ未満、１０−１１Ｍまたはそれ未満、１０−１２Ｍまたはそれ未満、１０−１３Ｍまたはそれ未満、１０−１４Ｍまたはそれ未満、１０−１５Ｍまたはそれ未満、または１０−１６Ｍまたはそれ未満）のＫＤ（解離定数）によって特徴付けられる。「親和性」は、結合の強度、より低いＫＤと相関する増加した結合親和性を意味する。
【００５２】
本明細書で使用される用語「特異的結合メンバー」は、特異的結合対のメンバーを意味する（すなわち、２つの分子、通常２つの異なった分子、その分子の１つ、例えば第１の特異的結合メンバーは、非共有手段によって他の分子、例えば、第２の特異的結合メンバーに特異的に結合する）。好適な特異的結合メンバーは、ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαに特異的に結合する物質（すなわち、抗ＣＤ４７薬）、またはＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を遮断する物質を含む。
【００５３】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は本明細書で交換的に使用されて、アミノ酸残基のポリマーを言う。該用語は、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が対応する天然のアミノ酸の人工的な化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー、並びに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーにも適用される。
【００５４】
用語「貪食細胞」及び「食細胞」は、本明細書で交換的に使用されて、貪食することができる細胞を言う。これらは、食細胞の３つの主なカテゴリを有する：マクロファージ、単核細胞（組織球及び単球）；多形核白血球（好中球）及び樹状細胞。
【００５５】
患者に関する用語「試料」は、血液及び生物的起源の他の液体試料、固体組織試料、例えば生検試料または組織培養物もしくはそれから得られたもしくは単離された細胞、及びそれらの子孫を包含する。定義は、その入手、例えば試薬による処理の後に任意の方法で作製され、洗浄され、またはある細胞集団、例えば癌細胞を濃縮した試料も含む。定義はまた、特定の種類の分子、例えば核酸、ポリペプチド等を濃縮した試料を含む。
【００５６】
用語「生物学的試料」は臨床試料を包含し、また外科切除によって得られた組織、生検によって得られた組織、培養物中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、組織試料、臓器、骨髄、血液、血漿、血清等も含む。「生物学的試料」は、標的細胞または正常コントロール細胞を含む試料か、あるいはかかる細胞またはそれらから得られる生物学的液体（例えば、癌性細胞、感染細胞等）を含むと疑われる試料、例えばかかる細胞から得られるポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドを含む試料（例えば、細胞溶解物、またはポリヌクレオチド及び／またはポリペプチドを含む他の細胞抽出物）を含む。患者からの損傷した（ｉｎｆｌｉｃｔｅｄ）細胞を含む生物学的試料は、非損傷細胞も含み得る。
【００５７】
用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には（完全長モノクローナル抗体を含む）モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、及び、所望の生物学的活性を示す限り、抗体フラグメントを含む。「抗体」（Ａｂ）及び「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同一の構造特性を有する糖タンパク質である。抗体は特定の抗原に結合特異性を示すが、免疫グロブリンは、抗体及び抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系によって低レベルで、骨髄腫によって高いレベルで産生される。
【００５８】
本明細書で使用される「抗体フラグメント」及び「その全ての文法上の変異体」は、抗原結合部位を含むインタクト抗体の一部、または該インタクト抗体の可変領域として定義され、該部分は、インタクト抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（すなわち、抗体アイソタイプによってＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４）を有さない。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；二重特異性抗体；連続アミノ酸残基の１つの連続した配列からなる一次構造を有するポリペプチドである任意の他の抗体フラグメント（本明細書では、「単一鎖抗体フラグメント」または「単一鎖ポリペプチド」と称する）であって、以下を含むがこれらに限定されない抗体フラグメント：（１）単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（２）関連する重鎖部分を有さない、１つの軽鎖可変ドメインのみを含む単一鎖ポリペプチド、または該軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むそのフラグメント、（３）関連する軽鎖部分を有さない、１つの重鎖可変ドメインのみを含む単一鎖ポリペプチド、または該重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むそのフラグメント、及び（４）非ヒト種由来の単一Ｉｇドメインを含むナノ抗体、または他の特異的単一ドメイン結合分子；並びに、抗体フラグメントから形成された多重特異的または多価構造、を含む。１またはそれ以上の重鎖を含む抗体フラグメントにおいて、重鎖（複数）は、インタクト抗体の非Ｆｃ領域で見出された任意の定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプのＣＨ１）を含むことがあり、及び／またはインタクト抗体で見出された任意のヒンジ領域配列を含むことがあり、及び／または該ヒンジ領域配列または重鎖（複数）の定常ドメイン配列に融合されたまたは位置するロイシンジッパー配列を含むことがある。
【００５９】
本発明で使用される用語「エピトープ」は、抗体のパラトープが結合する抗原上の任意の抗原決定基を意味する。エピトープ抗原決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面分類からなり、通常、特定の三次元構造特性並びに特定の充電特性を有する。
【００６０】
方法
抗ＣＤ４７薬の治療量で対象を治療する方法が提供される。本方法は、対象に刺激剤を投与するステップに続いて、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量を該対象に投与するステップを含む。実施形態によっては、治療上有効量を投与するステップは、刺激剤の投与開始後、少なくとも約３日（例えば、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、または少なくとも約１０日）後に行われる。この期間は、例えば、個体による亢進された網状赤血球産生を提供するために十分である。
【００６１】
実施形態によっては、治療上有効量を投与するステップは、刺激剤の投与開始後に、約３日〜約２１日の範囲（例えば、約３日〜約１７日、約３日〜約１４日、約３日〜約１２日、約４日〜約１２日、約５日〜約１２日、約５日〜約１１日、約５日〜約１０日、約５日〜約９日、約６日〜約８日、約３日、約４日、約５日、約６、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、または約１２日）で行われる。この期間は、例えば、個体による亢進された網状赤血球産生を提供するために十分である。
【００６２】
実施形態によっては、２またはそれ以上の刺激剤は、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量を投与する前に投与される。かかる場合には、刺激剤は同一であっても異なっていてもよい。第１の刺激剤は、任意の次に投与される刺激剤と同一または異なった用量で投与され得る。実施形態によっては、２またはそれ以上の刺激剤は、同時に投与されるか、及び／または２つの刺激剤の投与は時間的に重複している、１つの（刺激剤の）投与は別の刺激剤の前後に開始するかまたは終了し得る。
【００６３】
抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の投与は、多数の異なった方法で達成される。場合によっては、刺激剤が投与された後に、２またはそれ以上の治療上有効量が投与される。治療上有効量の好適な投与は、単一量の投与でよく、または毎日、準各週、各週、２週間に一回、月に一回、毎年等でよい。場合によっては、治療上有効量は、増加する濃度の２またはそれ以上の用量（すなわち、増加用量）として投与され、そこでは、（ｉ）用量の全てが治療量であるか、または（ｉｉ）準治療用（または２またはそれ以上の準治療量）が最初に投与され、治療量が前記増加によって達成される。増加する濃度（すなわち、増加用量）を説明するための１つの非限定的な例として、治療上有効量は、準治療量で開始して毎週投与され（例えば、５ｍｇ／ｋｇの用量）、投与が停止されるかまたは継続される（例えば、継続治療量、例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）点に治療量（例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量）が到達するまで、各々の次の用量は、特定の増加量（例えば、５ｍｇ／ｋｇ）によってまたは変動する増加量によって増加され得る。増加する濃度（すなわち、増加用量）を説明するための別の非限定的な例として、治療上有効量は、治療量で開始して毎週投与され（例えば、１０ｍｇ／ｋｇの用量）、投与が停止されるかまたは継続される（例えば、継続治療量、例えば、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｍｌの用量等）点に治療量（例えば、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｍｌ等）が到達するまで、各々の次の用量は、特定の増加量（例えば、１０ｍｇ／ｋｇ）によってまたは変動する増加量によって増加され得る。実施形態によっては、治療上有効量の投与は、継続注入でよく、用量は時間と共に変更され得る（例えば、増加される）。
【００６４】
投薬量及び頻度は、患者における抗ＣＤ４７薬の半減期に依って変動し得る。ご承知のように、かかる指針は、例えば抗体フラグメントの使用、抗体コンジュゲートの使用、ＳＩＲＰα薬の使用、可溶性ＣＤ４７ペプチド等の使用において、活性物質の分子量について調整されることになる。投薬量は、局所投与、例えば鼻腔内、吸入等について、または全身性投与、例えばｉ．ｍ．、ｉ．ｐ．、ｉ．ｖ．等のために変動され得る。
【００６５】
刺激剤の効率的投与
実施形態によっては、刺激剤の投与が効果的であったか否かを決定するステップは、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量を対象に投与するステップの前に行われる。刺激剤の投与が効果的でない場合には、刺激剤を改めて再度投与することが望ましい。かかる場合には、異なった用量及び／または異なった刺激剤が使用されるか、あるいは同一の用量及び同一の刺激剤が使用され得る。刺激剤の投与が効果的である場合（すなわち、以下に詳述するように、網状赤血球計数は、投与が効果的であることを示す）、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量が送達され得る。
【００６６】
刺激剤の初回刺激量が対象において、（ＥＳＡ刺激剤を投与した後、及び抗ＣＤ４７薬の初回刺激量を投与した後に起こる）ＲＢＣ数を増加させ得るので、最近産生された（すなわち、若い）赤血球（すなわち、網状赤血球）の評価は、刺激剤の投与が効果的であるか否かを決定するための評価ツールとして役立ち得る。
【００６７】
網状赤血球の評価方法は、血液試料中の網状赤血球の絶対数または相対数を測定することを含む（例えば、網状赤血球計数は、刺激剤の投与前及び後に対象からの血液試料で行われる）。網状赤血球の評価及び／または計数する方法は当業者によって知られており、任意の慣用方法が使用され得る。好適な方法の例は、形態学的評価に基づく試料中の網状赤血球数の計数を含むがこれに限定されない。網状赤血球は、特定の染色、例えば新規なメチレンブルー（ＮＭＢ）で視覚化できるメッシュ様ネットワークを示す。網状赤血球は、通常のロマノフスキー染色で見たときに、他の赤血球よりも僅かに青く見える。網状赤血球はまた僅かに大きく、全血球計数による高ＭＣＶ（平均赤血球容積）としてピックアップされる。
【００６８】
網状赤血球を評価する好適な方法の別の例は、若い／未成熟ＲＢＣのマーカーの発現に基づく網状赤血球数の計数を含むがこれに限定されない（例えば、ＣＤ７１発現は、より古いＲＢＣに比べて若いＲＢＣでは増加し、ＣＤ７１は網状赤血球を同定するためのマーカーとして役立ち得る）。
【００６９】
網状赤血球を評価する好適な方法の別の例は、試料を、核酸（ＤＮＡ及びＲＮＡ）を顕在化する蛍光色素（例えば、チアゾールオレンジ、ポリメチン等）と接触させた後に、細胞によって示される蛍光量を測定することに基づいて該試料中の網状赤血球数を計数すること、を含むがこれに限定されない。例えば、非選択的核酸色素は、網状赤血球の残渣ＲＮＡを染色し得るが、ＤＮＡ選択的核酸色素（例えば、チアゾールオレンジ）は網状赤血球を染色しない。なぜならば、網状赤血球はＤＮＡを有さない（そのため、網状赤血球はＤＲＡＱ５陰性である）。匹敵できる蛍光の中程度レベルは、網状赤血球を成熟ＲＢＣ（ＲＮＡもＤＮＡも有さないため、蛍光が非常に低い）及びリンパ球（網状赤血球と異なり、大量のＤＮＡを有する）と識別する。したがって、網状赤血球計数は、（例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いる）自動式では実行できない。
【００７０】
刺激剤の投与が効果的であるか否かを決定するための好適な方法の別の例は、血中のＥＰＯレベルを測定することを含む。ＥＳＡはＥＰＯ産生を直接的に刺激するために使用され得るが、抗ＣＤ４７薬の初回刺激量もＥＰＯレベルの増加を引き起こす。そのようなわけで、刺激剤の投与が効果的であるか否かを決定するステップは、血中のＥＰＯレベルを（例えば、刺激剤の投与前後に）測定することを含み得る。
【００７１】
刺激剤の投与が効果的であるか否かを決定するための好適な方法の別の例は、ヘモグロビンを測定することを含む。ヘモグロビンを測定する方法は、当業者によって知られており、任意の慣用な方法が使用され得る。ヘモグロビンは、通常、血液試料由来の全血球数計数（ＣＢＣ）の一部として測定される。研究室へモグロビン試験法は、血液試料（動脈、静脈、または毛細血管）、及びヘモグロビンアナライザ及びＣＯオキシメータでの分析を必要とする。更に、非侵襲的ヘモグロビン試験法（例えば、パルスＣＯオキシメータ）も使用され得る。ヘモグロビンを測定する１つの非限定的な例として、赤血球を崩壊してヘモグロビンを溶液に入れる。遊離のヘモグロビンは、ヘモグロビン分子と強固に結合してシアンメトヘモグロビンを形成する、化学物質含有シアニドに曝露される。該試料を特異の紫外線波長（例えば、５４０ｎｍ）に曝露することによって、ヘモグロビン量が測定される。
【００７２】
刺激剤の投与が効果的であるか否かを（例えば、網状赤血球計数によって）決定することは、ステップ（ａ）の開始後、約３日〜約１２日の範囲（例えば、約４日〜約１１日、約５日〜約１０日、約６日〜約１０日、約７日〜約９日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、または約１２日）で行われる。
【００７３】
網状赤血球計数を行うと、約４００×１０9 個の網状赤血球／Ｌまたはそれ以上が、刺激剤の投与が効果的であったことを示している。網状赤血球計数は、網状赤血球である赤血球のパーセンテージとして通常表され、健常成人の正常数は０．５％〜２％の範囲である。網状赤血球数がこのような方法で表現される時には、約４％またはそれ以上（例えば、４．５％またはそれ以上、５％またはそれ以上、５．５％またはそれ以上、または６％またはそれ以上）の値は、刺激剤の投与は効果的であったことを示している。場合によっては、網状赤血球数の倍増加は計算することができ、２倍またはそれ以上（例えば、３倍またはそれ以上、３．５倍またはそれ以上、４倍またはそれ以上、４．５倍またはそれ以上、または５倍以上）の増加は、刺激剤の投与が効果的であったことを示している。ヘモグロビン測定が行われる場合には、約２〜約４ｇ／ｄＬの絶対的減少または約１２％またはそれ以上の相対的減少（例えば、約１５％またはそれ以上、１７．５％またはそれ以上、２０％またはそれ以上、２５％またはそれ以上、または３０％またはそれ以上）、または約１２％〜約３０％（例えば、約１５％〜約３０％、約１５％〜約２５％、または約２０％〜約３０％）の範囲の相対的減少は、刺激剤の投与が効果的であったことを示している。
【００７４】
実施形態によっては、対象は、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量の投与後に、疾患（例えば、癌または感染症）の臨床的徴候を監視される。
【００７５】
キット
本方法で使用するためのキットも提供される。本キットは、刺激剤及び抗ＣＤ４７薬を含む。実施形態によっては、キットは、２またはそれ以上の刺激剤を含む。実施形態によっては、キットは、２またはそれ以上の抗ＣＤ４７薬を含む。実施形態によっては、刺激剤は、投薬剤形（例えば、刺激投薬剤形）で提供される。実施形態によっては、刺激剤は、２またはそれ以上の異なった投薬剤形（例えば、２またはそれ以上の異なった刺激投薬剤形）で提供される。実施形態によっては、抗ＣＤ４７薬は投薬剤形（例えば、治療上有効量の投薬剤形）で提供される。実施形態によっては、抗ＣＤ４７薬は、２またはそれ以上の異なった投薬剤形（例えば、２またはそれ以上の異なった治療上有効量の投薬剤形）で提供される。キットの文脈で、刺激剤及び／または抗ＣＤ４７薬は液体または固体形態で任意の慣用の包装（例えば、スティックパック、ドーズパック等）で提供され得る。
【００７６】
上記成分に加えて、本キットは、（ある実施形態では）本方法を実施するための教示を更に含んでよい。これらの教示は、様々な形態で本キットに存在してよく、その１またはそれ以上はキットに存在してよい。これらの教示が存在することがある１つの形態は、キットの包装、添付文書等における、好適な媒体または基質に関する印刷した情報、例えば情報が印刷される１枚または複数の紙である。これらの教示の更に別の形態は、該情報が記録されているコンピュータ読み取り可能媒体、例えば、ディスケット、コンパクトディスク（ＣＤ）、フラッシュドライブ等である。存在することがあるこれらの教示の更に別の形態は、離れたサイトで該情報にアクセスできるインターネットを介して使用されるウェブサイトアドレスである。
【００７７】
有用性
本方法及びキットは、標的細胞（例えば、癌細胞、感染細胞等）が、同種の正常細胞と比べてＣＤ４７の増加した発現を示す、任意の障害（ｉｎｆｌｉｃｔｉｏｎ）を治療するために使用され得る。投与される抗ＣＤ４７薬は、ＳＩＲＰα（例えば、マクロファージ上のＳＩＲＰα）と標的細胞（例えば、癌細胞、感染細胞等）上のＣＤ４７との間の相互作用を阻害し、それによって該標的細胞のインビボ貪食を増加させる。本方法は、抗ＣＤ４７薬の治療上有効量を、治療を必要とする対象に投与することを含み、それは、該医薬と他の薬物（例えば、抗癌剤、抗感染症剤等）との組合せを含むがこれに限定されない。
【００７８】
実施形態によっては、障害は慢性感染症、すなわち、最大１週間、２週間等の期間内に宿主免疫系によって除外されない障害である。場合によっては、慢性感染症は、病原体の遺伝的要素の宿主ゲノム、例えばレトロウイルス、レンチウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス等への組み込みを含む。他の場合では、慢性感染症は、例えばある細胞内細菌または原生動物病原体は宿主細胞内に存在する病原体細胞から起こる。更に、実施形態によっては、感染症は、ヘルペスウイルスまたはヒトパピローマウイルスのように潜在的な段階にある。
【００７９】
対象のウイルス病原体は、レトロウイルス及びレンチウイルス病原体、例えば、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ、ＦＩＶ、ＳＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス等を含むがこれらに限定されない。対象の微生物は、以下を含むがこれらに限定されない：エルシニア種、例えば、Ｙ．ペスティス（ｐｅｓｔｉｓ）、Ｙ．シュードツベルクローシス（ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｙ．エンテロコリチカ（ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）；フランシセラ種、パスツレラ種、ビブリオ種、例えば、Ｖ．コレレ（ｃｈｏｌｅｒａｅ）、Ｖ．パラヘモリチカス（ｐａｒａｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）；レジオネラ種、例えば、Ｌ．ニューモフィラ（ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）；リステリア種、例えば、Ｌ．モノサイトゲネス（ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；マイコプラズマ種、例えば、Ｍ．ホミニス（ｈｏｍｉｎｉｓ）、Ｍ．ニューモニエ（ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；マイコバクテリウム種、例えば、Ｍ．ツベルクローシス（ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．レプレ（ｌｅｐｒａｅ）；リケッチア種、例えば、Ｒ．リケッチア（ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、Ｒ．チフィ（ｔｙｐｈｉ）；クラミジア種、例えば、Ｃ．トラコマチス（ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、Ｃ．ニューモニエ（ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｃ．シタッシ（ｐｓｉｔｔａｃｉ）；ヘリコバクター種、例えば、Ｈ．ピロリ（ｐｙｌｏｒｉ）等。細胞内原生動物病原菌、例えば、プラスモディウム種、トリパノソーマ種、ジアルジア種、トキソプラズマ種、リーシュマニア種等も含まれる。
【００８０】
本発明の方法で治療される感染症は、一般的に、宿主細胞、すなわち、細胞内相にそのライフサイクルの少なくとも一部を有する病原体を含む。本発明の方法は、処理の非存在下での貪食と比べて、宿主生物の病原体細胞による、感染細胞のより効率的な除去を提供し、病原体のライフサイクルの細胞内相に関する。
【００８１】
実施形態によっては、本発明の方法は、病原性細胞内感染症に罹患した患者の診断；病原性細胞内感染症に罹患したと以前に診断された患者の選択；場合により更なる治療法と組み合わせて抗ＣＤ４７薬のレジメンで該患者を治療すること；及び治療の有効性について該患者を監視すること、を含む。監視は、感染症の臨床的指標、例えば、発熱、白血球数等を測定してもよく、及び／または病原体の存在を直接監視してもよい。
【００８２】
治療は、他の活性物質と組み合わせてよい。抗体の種類は、ペニシリン、例えばペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリン、オキサアシリン、カルベニシリン、ナフシリン、アンピシリン等；β−ラクタマーゼ阻害剤、例えば、セファロスポリン、例えばセファクロル、セファゾリン、セフロキシム、モキサラクタム等と組み合わせたペニシリン；カルバペネム；モノバクタム；アミノグリコシド；テトラサイクリン；マクロリド；リンコマイシン；ポリミキシン；スルホンアミド；キノロン；クロラムフェニコール；メトロニダゾール；スペクチノマイシン；トリメトピリム；バンコマイシン等を含む。サイトカインも含まれてよい、例えば、インターフェロンγ、腫瘍壊死因子α、インターロイキン１２等。抗ウイルス剤、例えば、アシクロビル、ガンシクロビルも治療に使用されてよい。
【００８３】
実施形態によっては、障害は癌である。上記のように、同種の非癌性細胞に比べて癌性細胞がＣＤ４７の増加したレベルを発現する任意の癌は、本方法で治療され得る。
【００８４】
本明細書で使用される用語「癌」は、異常な制御不可能な細胞増殖によって起こった様々な症状を意味する。「癌性細胞」と称される、癌を起こすことができる細胞は、特徴的な性質、例えば制御不可能な増殖、不死性、転移性潜在力、急激な成長及び増殖速度、及び／またはある典型的な形態学的特徴を有する。癌は、腫瘍または腫瘍（複数）の存在を（例えば、臨床的または放射線的手段によって）検出すること、腫瘍内のまたは別の生物学的試料（例えば、組織生検）からの細胞を試験すること（例えば、組織生検からの試料）、癌の指標である血液マーカーを測定すること、及び癌の指標である遺伝子型を検出すること、を含むがこれに限定されない多数の方法のいずれかで検出され得る。しかしながら、上記検出方法の１またはそれ以上での陰性の結果は、必ずしも癌の非存在を示すものではない、例えば、次に起こる再発によって証明されるように、癌治療に完全な応答を示した患者が依然として癌を有していることがある。
【００８５】
本明細書で使用される用語「癌」は、悪性腫瘍（例えば、上皮内癌、浸潤癌、転移癌）、及び前悪性症状、すなわち、その組織学的起源にかかわらず新形態変化を含む。用語「癌」は、任意のステージ、グレード、組織形態学的特徴、侵襲性、罹患組織の攻撃性または悪性度、または細胞攻撃性に限定されない。特に、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩの癌、ステージＩＩＩの癌、ステージＩＶの癌、Ｉグレード癌、ＩＩグレード癌、ＩＩＩグレード癌、悪性癌及び原発性悪性腫瘍が含まれる。
【００８６】
治療され得る癌及び癌細胞は、白血病、リンパ腫及び骨髄腫を含む血液の癌、及び脳腫瘍（神経膠芽腫、髄芽細胞腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣細胞腫）を含む固形癌、悪性腫瘍、例えば、肺、肝臓、甲状腺、骨、副腎、脾臓、腎臓、リンパ節、小腸、膵臓、結腸、胃、乳房、子宮内膜、前立腺、精巣、卵巣、皮膚、頭頸部及び食道の癌を含むが、これらに限定されない。
【００８７】
１つの実施形態では癌は血液の癌である。１つの実施形態では血液の癌は白血病である。別の実施形態では血液の癌は骨髄腫である。１つの実施形態では血液の癌はリンパ腫である。
【００８８】
１つの実施形態では、白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）から選択される。１つの実施形態では、白血病はＡＭＬである。１つの実施形態では、白血病はＡＬＬである。１つの実施形態では、白血病はＣＬＬである。更なる実施形態では、白血病はＣＭＬである。１つの実施形態では、癌細胞は白血病細胞であり、例えば、ＡＭＬ細胞、ＡＬＬ細胞、ＣＬＬ細胞またはＣＭＬ細胞に限定されない。
【００８９】
抗ＣＤ４７薬を用いる治療に応答する好適な癌は、白血病；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；転移；最小残存疾患；固形癌、例えば乳房、膀胱、結腸、卵巣、膠芽細胞腫、平滑筋肉腫、及び頭頸部扁平上皮癌等を含むが、これらに限定されない。例えば、（ｉ）Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０１２年４月２４日；１０９（１７）：６６６２−７：“ＣＤ４７シグナル制御タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）相互作用はヒト固形腫瘍の治療標的である”；（ｉｉ）Ｅｄｒｉｓら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０１２年４月２４日；１０９（１７）：６６５６−６１：“ＣＤ４７タンパク質を標的にする抗体療法は攻撃的な転移性平滑筋肉腫のモデルに有効である”；及び（ｉｉｉ）米国特許出願第２０１１００１４１１９号；これらの全てはその全体が本明細書に組み込まれている、を参照。
【００９０】
医薬組成物
好適な抗ＣＤ４７薬及び／または刺激剤は、治療的使用のため、例えばヒト治療のために好適な医薬組成物で提供される。実施形態によっては、本発明の医薬組成物は、１またはそれ以上の本発明の治療物質またはその薬学的に許容される塩、エステル、またはその溶媒和物を含む。実施形態によっては、抗ＣＤ４７薬または刺激剤の使用は、別の治療剤（例えば、別の抗感染症剤または別の抗癌剤）と組み合わせた使用を含む。１またはそれ以上の本発明の抗ＣＤ４７薬及び／または刺激剤を含む治療製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の純度を有する抗ＣＤ４７薬または刺激剤を任意の生理学的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することによって保存のために調製される（レミントンのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．著（１９８０年））。抗ＣＤ４７薬または刺激剤の組成物は、優れた医療業務に一致した方法で調合され、投薬され及び投与されることになる。この文脈で考慮する因子は、治療されるべき具体的な疾患、治療される具体的な哺乳動物、個々の患者の臨床状態、疾患の原因、該薬の送達部位、投与方法、投与計画、及び医療者に公知の他の因子を含む。
【００９１】
抗ＣＤ４７薬または刺激剤は、局所、経口、非経口、肺内、及び鼻腔内を含む任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入は、筋肉内、静脈内（ボーラス及び一滴ずつ）、動脈内、腹腔内、髄こう内または皮下投与を含む。
【００９２】
抗ＣＤ４７薬または刺激剤は、必要ではないが、場合により活性を増強しまたは治療的効果を増加させる、１またはそれ以上の物質と共に調合される。一般的に、同一の投薬量でかつ上記の使用されてきた投薬経路で、または従来採用されてきた投薬量の約１〜９９％で使用される。
【００９３】
抗ＣＤ４７薬または刺激剤は、通常、活性治療剤及び別の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として投与される。好ましい形態は、意図した投与形式及び治療的適用に依拠する。該組成物はまた、望まれる製剤に依って、動物用またはヒト投与用医薬組成物を調合するため一般的に使用されるビヒクルとして定義される、薬学的に許容される、非毒性担体または希釈剤を含む。希釈剤は、組合せの生物学的活性に影響を与えないように選択される。かかる希釈剤の例は、蒸留水、生理学的リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、デキストロース液、及びハンクス液である。加えて、医薬組成物または製剤は他の担体、アジュバント、または非毒性、非治療的、非免疫学的安定化剤等を含んでもよい。
【００９４】
更に他の実施形態によっては、医薬組成物は、大きなゆっくりと代謝される高分子、例えばタンパク質、多糖、例えばキトサン、ポリ乳酸、ポリグルコール酸及びコポリマー（例えば、ラテックス機能化セファロース（登録商標）、アガロース、セルロース等）、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマー、及び脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）を含んでもよい。
【００９５】
担体は、直接的なまたはリンカー基を介してのいずれかの共有結合、及び非共有的会合を含む、様々な方法で該物質を有することができる。好適な共有結合担体は、タンパク質、例えばアルブミン、ペプチド及び多糖、例えばアミノデキストランを含み、その各々は、成分の結合の複数部位を有する。担体は、非共有結合等の非共有的会合によってまたはカプセル化によって、抗ＣＤ４７薬または刺激剤を有することもできる。担体の性質は、本発明の目的のために水溶性または不溶性のいずれかでよい。当業者は、抗ＣＤ４７薬及び／または刺激剤を結合するための他の好適な担体を知るか、または規定の実験を用いてそれを確認するだろう。
【００９６】
許容される担体、賦形剤または安定化剤は、採用される投薬量及び濃度でレシピエントに非毒性であり、緩衝液、例えばリン酸、クエン酸及び他の有機酸、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、保存料（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシン；シクロヘキサノール：３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラシン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン；単糖、二糖、及びグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭化水素；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖類、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成カウンターイオン、例えばナトリウム、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／または非イオン性界面活性剤、例えばツィーン（登録商標）、プルロニック（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。インビボ投与に使用される製剤は殺菌性でなければならない。これは、殺菌性濾過膜による濾過によって容易に達成される。
【００９７】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術または界面重合、例えば、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）またはマクロエマルジョンで、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル、によって調製されたマイクロカプセルにカプセル化されてもよい。かかる技術はレミントンのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．著（１９８０）に開示されている。
【００９８】
放射線核種剤に特異的な担体及びリンカーは、放射性ハロゲン化小分子及びキレート化合物を含む。放射線核種キレートは、金属または酸化金属、放射線核種を結合するためのドナー原子として窒素及びイオウ原子を含むものを含むキレート化合物から形成され得る。
【００９９】
本発明において画像化部分として使用するためのＸ線写真部分は、比較的大きな原子、例えば金、イリジウム、テクネチウム、バリウム、タリウム、ヨウ素、及びそれらの同位体を有する化合物及びキレートを含む。より毒性の低いＸ線写真画像部分、例えばヨウ素またはヨウ素同位体が本発明の方法で使用されるのが好ましい。かかる部分は、許容される化学的リンカーまたはキレート担体によって抗ＣＤ４７薬または刺激剤に複合化され得る。本発明で使用するための陽子放出部分は、抗ＣＤ４７薬または刺激剤とのフッ素化反応によって容易に複合化され得る１８Ｆを含む。
【０１００】
典型的には、組成物は、液状液または懸濁液のいずれかとしての注射液として調製され、注射前の液状ビヒクルのための溶液または懸濁液に好適な固体形態も調製され得る。本調製物は、以下で議論するように、ポリ乳酸、ポリグリコール酸または増強したアジュバンド効果のためのコポリマー等のリポソームまたは微粒子に乳化されまたはカプセル化され得る。Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７，１９９０、及びＨａｎｅｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２８：９７−１１９，１９９７。本発明の物質は、活性成分の徐放またはパルス放出を可能にするような方法で調合され得る、デポー注射剤またはインプラント調製物の形態で投与され得る。該医薬組成物は、一般的には殺菌の、実質的には等張であり、米国食品医療品局の医薬品製造品質管理（ＧＭＰ）規範の全てに完全に合致するように調合される。
【０１０１】
抗ＣＤ４７薬及び／または刺激剤の毒性は、細胞培養物または実験動物における標準的医薬的手段によって、例えばＬＤ５０（集団の５０％致死量）またはＬＤ１００（集団の１００％致死量）を決定することによって決定され得る。毒性と治療効果との用量比は、治療指数である。これらの細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータは、ヒトでの使用のための治療投薬量の範囲及び／または刺激剤投薬量の範囲を更に最適化するために使用され得る。正確な調合、投与経路及び投薬量は、患者の症状の点から個々の医師によって選択され得る。
【０１０２】
本発明を十分に説明してきたが、本発明の趣旨または範囲を逸脱することなく、様々な変更及び改変がなされ得ることが当業者には明らかであろう。
【０１０３】
実験
以下の例を提示し、当業者に完全な開示及び本発明の生産及び使用方法の説明を提供する。また、以下の例は、発明者が発明とみなすものの範囲を制限する意図もないし、下記の実験が実施した全ての、または唯一の実験であることを表す意図もない。使用した数字（例えば、量、温度など）に関して正確さを確保するための試みがなされているが、一部の実験誤差及び偏りは当然に含まれる。特に明記しない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は大気圧または大気圧近傍である。
【０１０４】
本明細書に記載した全公報及び特許出願は、各々の公報または特許出願が援用されるために具体的、かつ個別的に示されているように、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１０５】
本発明は、発明の実施の好ましい方法を含むために本発明で発見または提案された特定の実施形態に関して記載した。本開示を考慮して、多数の修飾及び変化は発明の意図した範囲から逸脱することなく例証された特定の実施形態で実施され得ることは当業者に理解されるであろう。例えば、コドンの重複性のためタンパク質配列に影響を及ぼすことなく基盤をなすＤＮＡ配列を変えることができる。更に、生物学的機能的等価性の考慮により種類または量において生物学的作用に影響を及ぼすことなく、タンパク質構造を変化させることができる。全てのそのような変更は、付属のクレームの範囲内に包含されることが意図される。
【実施例】
【０１０６】
実施例１
野生型マウスにおける抗ＣＤ４７抗体の単回投与
ＭＩＡＰ４１０（ＩｇＧ１アイソタイプ）またはＭＩＡＰ４７０（ＩｇＧ２ａアイソタイプ）の単回２５０μgＩＰ注入を野生型マウスに施した。この抗体用量は、およそ１０ｍｇ／ｋｇ用量と等価である。血液を眼窩後叢から収集し、ＣＢＣ分析をＨｅｍａＴｒｕｅ血液分析計で抗体注入の後１、３、６日目に実施した。ヘマトクリット（ＨＣＴ）及び赤血球（ＲＢＣ）値の百分率変化を図１に示す。全ての抗ＣＤ４７ｍＡｂ処理マウスが貧血を発生し、その最低値が投与の約３日後に生じた。ＭＩＡＰ４７０はより顕著な貧血を誘発する。これはＩｇＧ１及びＩｇＧ２ａアイソタイプによって誘発される特異的なＦｃＲ仲介作用に起因する可能性がある。
【０１０７】
ＣＤ４７−／−マウスにおける抗ＣＤ４７抗体の単回投与
ＣＤ４７−／−マウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手し、２５０μｇの対照マウスＩｇＧ、ＭＩＡＰ４１０またはＭＩＡＰ４７０をＩＰに注入した。血液を収集し、ｍＡｂ注入の７２時間後に分析した。投与したＣＤ４７−／−マウスのいずれにも貧血は観察されなかった。ヘモグロビンの百分率変化を図２に示す。これは、野生型マウスで観察された貧血はＣＤ４７に結合した抗ＣＤ４７抗体の直接的な結果であったことを示す。
【０１０８】
野生型マウスにおける抗ＣＤ４７抗体の複数注入
ＷＴマウスに、２５０μｇの対照マウスＩｇＧ、ＭＩＡＰ４１０またはＭＩＡＰ７４０を３日に１回与えた（図３に破線縦線で表した）。赤血球の毒性を各々の注入前にＣＢＣ分析で監視した。ＨＣＴの急激な低下は最初の抗体注入と同時（０日目）に発生した。二回目の注入（３日目）はヘマトクリットの更なる低下をもたらさなかった。マウスは、その後の注入に対し耐性になったように思われ、最終的に対照ＩｇＧ治療マウスと類似した範囲に戻った。抗ＣＤ４７抗体の反復投与は初期貧血を悪化させないという発見は、非ヒト霊長類における以降の実験の基本である。
【０１０９】
実施例２
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）における投与戦略の検証
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４抗ＣＤ４７抗体（及び、その親５Ｆ９）はヒトＣＤ４７に結合するが、マウスＣＤ４７には結合しない。適切な毒性種を特定するために、マカク（カニクイザル）非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＣＤ４７の配列をヒトＣＤ４７用いて整列した。そして、２つの配列が細胞外ドメインで僅か３個のアミノ酸の相違を含むことが明らかになった（図４）。３個の非保存アミノ酸は全てＳＩＲＰ−ａｌｐｈａ相互作用領域外に位置することが、刊行物のＸ線結晶構造によって明らかになった。
【０１１０】
カニクイザルＮＨＰ  ＣＤ４７−Ｆｃ融合タンパク質が生成した。これは、実際にはＨｕ５Ｆ９−Ｇ４がカニクイザルＮＨＰＣＤ４７に結合する（図５）ことを明らかにした。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）親和性測定を更にＢｉａｃｏｒｅを用いて実行した。結果は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４はヒトＣＤ４７の親和性に匹敵する親和性でカニクイザルＣＤ４７に結合することを示す（図６）。
【０１１１】
加えて、フローサイトメトリー及び免疫蛍光法を別々に使用して、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４抗体は、ヒト白血球及び組織に類似する分布のカニクイザルＮＨＰ白血球と正常組織に結合することを示した。総合すれば、これらの研究は、カニクイザルは安全性及び毒性学研究に適切な種であるであることを実証した。
【０１１２】
抗ＣＤ４７抗体はＮＨＰｓ（単回投与）で用量依存的貧血を引き起こす。
多くのＮＨＰ研究を、専売グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）発現系を使用してＬｏｎｚａによって作製された精製Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４抗体を用いて行った。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を、０．１、０．３、１、３、１０または３０ｍｇ／ｋｇで単回投与として投与し、臨床病理学パラメータを、全血球数及び代謝パネルを含めて監視した。網赤血球増加及び球状赤血球症を伴う用量依存的貧血が肝臓または腎臓機能障害を伴わずに観察された（図７）。遊離血漿ヘモグロビンは検出がなく、血管内溶血の不在を示した。血清レベルの測定による薬物動態のモニタリングは、短半減期をもたらす大きな抗原シンクが存在することを示した（図７）。単回投与によって、異種移植研究では僅か１０及び３０ｍｇ／ｋｇで血清レベルが一過的に効力を伴う範囲に達することができた。したがって、適切な投与が貧血を最小化しながら治療的に有効な抗ＣＤ４７剤レベルを達成し、維持することができる。
【０１１３】
抗ＣＤ４７抗体の濃度漸増は貧血を悪化させない。
本発明者らは、エリスロポエチン（ＥＰＯ）の前投与が若いＲＢＣ産生を刺激することで貧血を弱めると推測した。これらの考慮から、本発明者らは初期の低用量が老化ＲＢＣの損失を弱め、低感受性の若いＲＢＣの産生を刺激し、それによって以降のより多くの用量の耐性を容易化する可能性があるとの仮説に基づいてＮＨＰで別々の用量増加試験を行った（図８）。２頭の動物を本研究に登録し、１週間の間隔で投薬した。１頭はＥＰＯ前処理（３、１０、３０、１００及び３００ｍｇ／ｋｇ）し、１頭は非前処理（１、３、１０、３０及び１００ｍｇ／ｋｇ）とした。どちらの場合も、ＮＨＰは初期投薬で軽度な貧血を示し、反復投与によって悪化しなかった。実際、ヘモグロビンだけがＥＰＯ前処理なしでもヒトでの輸血の上限に達した。動物は１００及び３００ｍｇ／ｋｇを含めて全ての用量に良好な耐容性を示し、更なる血液または代謝異常を伴わなかった。研究の終了時点で、両方の動物を安楽死させて、解剖及び組織病理学解析から異常がないことが分かった。
【０１１４】
この用量増加試験から、本発明者らはＮＨＰでＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬物動態を明らかにした。
正常組織に発現したＣＤ４７の大きな抗原シンクの存在と一致して、初期の低用量Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は２４時間の半減期で血清から迅速に取り除かれた（図９）。対照的に、高用量Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は持続した血清レベルを生み出して抗原シンクの飽和を示した。３００ｍｇ／ｋｇで投薬した動物は、５ｍｇ／ｍｌのピークレベルを有し、ほぼ２週間１ｍｇ／ｍｌ超のレベルを維持した。
【０１１５】
抗ＣＤ４７抗体の単回負荷投与はより高い維持用量を可能にする。
これらの研究は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が主要な毒作用を伴わずに長期にわたる治療的血清レベルを達成することが可能な用量でＮＨＰに投与し得ることを示した。潜在的な臨床投与戦略をモデル化するために、本発明者らは負荷維持投薬手法を用いた別のＮＨＰ研究を行った。本研究では、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を、グレード３の毒性を伴わない軽い貧血及び網状赤血球増加症を刺激し得る負荷投与で投与する。本発明者らの単回投与データ（上記を参照のこと）から、負荷投与として１日に１または３ｍｇ／ｋｇのいずれかを選択した。１週間後、１０または３０ｍｇ／ｋｇのいずれかの維持用量を投与し、毎週３投与を継続した。両方の負荷投与は共に、３０ｍｇ／ｋｇの維持用量でも貧血の重症度を軽減し、グレード３の毒性の発生はなかった。第一維持用量の後のＰＫデータは動物が治療レベルを達成することを示す。本研究は、負荷−維持戦略が潜在的に治療的な薬物レベルを達成しながら貧血を軽減（グレード３の毒性を防止する）することを示唆する。図１０は、抗ＣＤ４７剤（この場合はｈｕ５Ｆ９−Ｇ４抗体）の種々の用量と関連する網状赤血球増加症レベルを実証する網状赤血球計数データを示す。
【０１１６】
実施例３
異物移植アッセイにおける抗ＣＤ４７抗体の治療有効性
本発明者らは、ブロッキング抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（クローンＢ６Ｈ１２、マウスＩｇＧ１）は、乳房、膀胱、結腸、卵巣、グリア芽細胞腫、平滑筋肉腫及び頭頸部扁平上皮癌を含む固形腫瘍増殖及び転移の阻害に有効であることを以前に報告した（ＰＭＩＤ：２２４５１９１３、２２４５１９１９）。抗ＣＤ４７モノクローナル抗体も、血液学的腫瘍増殖の類似した阻害を引き起こした（ＰＭＩＤ：２１１７７３８０、２０８１３２５９、１９６３２１７９、１９６３２１７８）。本発明者らは、ヒト化抗体（例えば、上記の研究で用いたヒト化抗ＣＤ４７抗体、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４）も固形腫瘍増殖の阻害及び転移排除に非常に有効であることを確認した（図１１）。
【０１１７】
固形腫瘍に対するｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の有効性を調査するために、ヒト膀胱腫瘍細胞株（６３９Ｖ）を免疫不全マウスに皮下移植した。腫瘍マウスをＰＢＳまたはｈｕ５Ｆ９−Ｇ４で治療した。腫瘍負荷のため全ＰＢＳ治療マウスを治療４週間後に安楽死させた。対照的に、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４治療コホートでは腫瘍増殖は観察されなかった（図１１）。次いで、これらのマウスを更に４週間（更なるｈｕ５Ｆ９−Ｇ４処理なし）観察した。腫瘍成長はｈｕ５Ｆ９−Ｇ４で治療したマウスで観察されなかった。これは腫瘍が完全に排除されたことを示した（図１１Ａ）。
【０１１８】
腫瘍転移の形成に対するｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の効果を評価するために、本発明者らは免疫不全マウスにヒト転移性前立腺腫瘍試験片を皮下移植した。腫瘍移植と同時に、本発明者らはＰＢＳまたはｈｕ５Ｆ９−Ｇ４で治療を開始した。治療の６週間後、リンパ節転移の数及びサイズの顕著な減少が観察された（図１１Ｂ）。これらの結果は、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は腫瘍転移を阻害または排除し得ることを示す。
【０１１９】
樹立転移を排除するｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の可能性を示すために、本発明者らはマウス乳房脂肪体にヒト乳癌初代培養細胞を移植した。肺における腫瘍転移の存在を確認した後に、本発明者らは原発腫瘍を切除して、ＰＢＳまたはｈｕ５Ｆ９−Ｇ４で治療を開始した。４週間後に、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４治療マウスで肺転移増殖の有意な阻害が観察された（図１２Ａ）。更に、脳における腫瘍転移の完全な排除が観察された（図１２Ｂ）。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は切除された原発腫瘍の再増殖も阻害したが、これはｈｕ５Ｆ９−Ｇ４が微小残存病変の治療に有効であることを示す（図１２Ｃ）。
【０１２０】
ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の血清中濃度を実験全体で観察した。１００−２００μｇ／ｍｌの間のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４濃度は治療有効性と関連した（図１２ＡＤ）。これらのデータは、ヒト化抗体（例えば、ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４）は非ヒト化抗体と、病気（例えば、癌または慢性感染）の治療に関して同一の一般的性質を有しており、対象方法はヒト化抗体を用いて腫瘍を治療及び／または慢性感染を治療する際に効果的であることを示す。
【０１２１】
実施例４
カニクイザルの以前の毒性学的実験では、本発明者らのヒト化抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４）の単回注入が、１０ｍｇ／ｋｇ以上で投薬すると容認できないレベルの貧血（Ｈｂ＞７ｇ／ｄＬ）を引き起こした。本発明者らの前臨床医学モデル（１００−２００ｕｇ／ｍｌ）では、１０ｍｇ／ｋｇ未満のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４用量は治療有効性を伴う血清レベルを生み出すには不十分である。本新研究は、５ｍｇ／ｋｇの単一の初回（ｐｒｉｍｉｎｇ）用量は、それ以外の場合では毒性の可能性があるレベル（おそらく致死レベル）での以降の維持（ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ）用量からカニクイザルを保護するのに十分であることを明らかにした。（研究デザインを参照：図１３）。
【０１２２】
貧血はＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与に関係するにもかかわらず、いずれの動物でも臨床徴候で毒性の証拠は観察されなかった。したがって、初回／維持用量戦略は３００ｍｇ／ｋｇ程の高用量であってもＨｕ５Ｆ９−Ｇ４が臨床的に良好な忍容性を示すことを可能にする（図１４）。本発明者らは、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与は、ＣＤ４７の段階的な損失を老化ＲＢＣ上のＣＤ４７の即時遮断で置き換えることによって老化ＲＢＣの排除過程を加速させると考えている。老化ＲＢＣの成熟前喪失は、続く網状赤血球増加症によって補償される（これは全研究で観察された）。そして、時間と共に初期貧血は老化ＲＢＣが若い細胞で置き換えられるにつれて治癒し、結果として、ＲＢＣプールの年齢構成がより若い細胞へシフトする。群２−４（図１３、図１４、図１５）における血清中濃度は治療有効性を伴う最小限１００−２００ｕｇ／ｍｌレベルを十分上回った。
【０１２３】
図１３。研究設計。動物（＃遠い右カラム内のオス及びメス）を５群に分割し、その１つは抗ＣＤ４７抗体を受けなかった。群２−５の全動物が初回刺激量（５ｍｇ／ｋｇ）を受け、その後で群２−５は表示した維持用量を受けた。
【０１２４】
図１４。研究継続期間に対する全コホートのヘモグロビンレベル
本研究では水平破線は毒性限界用量を表す（Ｈｂ＜７）。本グラフ上の各々の点は個別の動物を表す。異なる維持用量レベルでのＨｂレベルに統計的差異はない。初回刺激量（５ｍｇ／ｋｇ）は、後続用量の高低にかかわらず防止効果がある。
【０１２５】
図１５。全コホートにおけるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬物動態プロファイル。
群３−４は、有効性を伴う最小濃度（目標範囲）を十分に上回るＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の血清中濃度を達成する。
【０１２６】
実施例５
アカゲザル及び／またはカニクイザルで研究を行った。アカゲザルとカニクイザルは共に薬理学的に関連する動物種（アカゲザルのＣＤ４７はカニクイザルのＣＤ４７と１００％の配列相同性を共有する）とみなされる。
【０１２７】
アメリカ食料医薬品局（ＦＤＡ）医薬品最適研究基準（ＧＬＰ）規定（２１ＣＦＲパート５８）にしたがって全研究を行った。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の開発は、利用可能なＩＣＨ医薬品委員会、及びＦＤＡガイダンス文書に従った。
【０１２８】
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４（ヒト化抗ＣＤ４７抗体）の生体外溶血アッセイ
ＣＤ４７は赤血球上で発現し、老化赤血球上で作用するため、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４がヒトまたはサル（アカゲザル及びカニクイザル）の赤血球の直接血管内溶血を誘発するかどうかを評価する試験を読取として遊離ヘモグロビンを使用して行った。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は、ヒトまたはサル（アカゲザルまたはカニクイザル）赤血球のいずれも溶血も誘発しなかった。
【０１２９】
生体外のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４で刺激したヒトＰＢＭＣにおけるサイトカイン産生
本研究の目的は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４による潜在的サイトカイン放出誘導を評価することであった。この生体外実験では、３個の別々のドナーから収集した培養ＰＭＢＣを、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４（２０ｇ／ｍｌをプレートに結合した）、または非特異的ヒトＩｇＧ４抗体（陰性対照）、または抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体（陽性対照）と共にインキュベートした。サイトカインストームに関連する多くの炎症促進性サイトカイン（例えば、 ＴＮＦ-α、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−６）を含む５０の異なるサイトカインをルミネックス（Ｌｕｍｉｎｅｘ）多重化分析で評価した。評価した異なるサイトカインのうちＨｕ５Ｆ９−Ｇ４はヒトＰＢＭＣｓでサイトカイン放出を誘導しなかった。加えて、サイトカイン放出症候群の臨床徴候はいずれのサルの研究でも観察されなかった。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４によるヒトＰＢＭＣの治療は、非特異的ＩｇＧ４抗体またはＣＤ３／ＣＤ２８抗体で治療したＰＢＭＣと比較してＩＬ１−ＲＡ、ＭＩＰ１ｂ／ＣＣＬ４、ＩＬ−８及びＥＮＡ−７８／ＣＸＣＬ５のレベルの減少をもたらした。ＣＤ４７とこれらの４つのサイトカインとの関係は明白でないが、サイトカインレベルの減少と直接的に関連する可能性がある何らの治療関連効果の証拠もサル研究では観察されなかった。
【０１３０】
カニクイザルに１時間静脈内注入または皮下注入で投与したＨｕ５Ｆ９−Ｇ４及びＢ６Ｈ１２−Ｇ４の単回投与研究
本研究の目的は、オスのカニクイザルに１時間ＩＶ注入による単回投与として投与したＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の潜在的毒性及び毒物動態を評価することであった。本研究では、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を、１日目に単一のオスサルに１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。サルを、臨床徴候、摂食量、体重及び臨床病理学パラメータ（血液学、凝固（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）、血液学、臨床化学）の変化について評価した。試料を、研究の継続期間全体で毒物動態分析のために収集した。動物を１４日目に試験施設動物コロニーに戻した。
【０１３１】
治療関連の変化が血液学的パラメータで観察され、軽度から中度の赤血球数（ＲＢＣ）、ヘモグロビン、ヘマトクリットの減少、網状赤血球数及び赤血球分布幅の顕著な増加、並びに白血球、リンパ球及び単球数の一過性の増加が含まれた。変化は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４に関係するとみなされる臨床化学パラメータでも観察され、これらは乳酸デヒドロゲナーゼ、ビリルビン、ＡＳＴ及びＡＬＴの一過性増加を含んだ。血液学及び臨床化学パラメータの変化は、１４日目までにベースラインレベルに部分的または完全に戻った。
【０１３２】
要約すると、１０ｍｇ／ｋｇでのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の単回投与は忍容性に優れており、血液学及び臨床化学パラメータの過渡変化に限定される治療関連所見を伴った。
【０１３３】
アカゲザルへの静脈注入投与による研究
本研究を実施して、カニクイザルの研究が行われた同じ試験施設（ネバダ州レノ、チャールスリバー研究所）でアカゲザルに投与した場合の血液学及び臨床化学パラメータに及ぼすＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の潜在的な効果を評価した。この研究では、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を、３ｍｇ／ｋｇで１時間ＩＶ注入してメスアカゲザル（Ｎ＝２）に単回投与した。動物を１４日間評価した後に施設動物コロニーに戻した。
【０１３４】
ＨｕＦ５９−Ｇ４の投与は優れた耐性を示し、臨床徴候、体重または摂食量においてＨｕ５Ｆ９−Ｇ４に直接的に関連するとみなされる変化は注目されなかった。水様糞便が７、８及び１４日に両方の動物で観察されたが、これは多分、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の直接効果よりもむしろ研究関係手順と関係した。加えて、水様糞便は任意の他のサル研究では報告されなかった。治療関連の変化はＲＢＣ及びヘモグロビンレベルの減少を含む血液学的パラメータで両方の動物に観察された。しかし、これらの減少は１４日目までに回復し、９．４及び９．１ｇ／ｄＬ（表１）の最低値でも重症ではなかった。遊離血漿ヘモグロビンは任意の時点でどちらの動物にも検出されなかった。総ビリルビンの増加は各々の動物でも観察されたが、血液学的変化と一致し、研究の終了まで連続した可逆性傾向を示した。
【０１３５】
要約すると、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４はアカゲザルで優れた耐性を示し、本研究で観察された治療関連の変化はチャールスリバー研究所（ネバダ州レノ）で実行されたカニクイザル研究で注目された所見と一致しした。
【０１３６】
【表１】
2020128414.tif 000003
【０１３７】
アカゲザルに投与したＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬物動態及び忍容性に関する研究
本研究の初期目的は、髄腔内レザバー（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）で移植したアカゲザルにおける１時間ＩＶ注入として、または髄こう内投与によって投与したＨｕ５Ｆ９-Ｇ４の薬物動態及び潜在的効果を評価することであった。しかし、１時間ＩＶ注入によってＨｕ５Ｆ９−Ｇ４を投与された第一サルで観察された重症貧血のため髄こう内投与段階を含む残りの研究要素を断念した。本研究では、１頭のオスアカゲザルに、０日目に３ｍｇ／ｋｇ初回刺激量として、１時間ＩＶ注入によってＨｕ５Ｆ９−Ｇ４を投与し、次いで１５日目及び２２日目に１ｍｇ／ｋｇ維持用量を投与した（初期研究設計での維持用量は８、１５、２２及び２９日目に３０ｍｇ／ｋｇを投与した）。
【０１３８】
ＲＢＣ数及びヘモグロビンの相当な減少が、３ｍｇ／ｋｇ初回刺激量の投与後２４時間以内に観察された（表２）。この動物で観察された貧血により８日目の最初に計画した維持用量を投与しなかった。ＲＢＣ数及びヘモグロビンレベルは回復傾向を示し、１４日目までには、ＲＢＣ数及びヘモグロビンレベルはそれぞれ４．３１Ｍ／μＬ及び１０．８ｇ／ｄＬに復帰した。したがって、薬注を１４日目に再開した。しかし、維持用量を（３０ｍｇ／ｋｇよりはむしろ）１ｍｇ／ｋｇに低減した。１６日目に、ＲＢＣ数及びヘモグロビンが再び減少し始めたが、１７日目までにＲＢＣ数及びヘモグロビンは回復し始めた。次いで、動物に、２１日目で第二の維持用量を投与した（しかし、２１日目後に追加的な臨床病理学データは収集されなかった）。加えて、血小板の減少が最初の維持用量の投与後の２日目に注目されたが（１４日目）、血小板は２１日目までに予備研究レベルに戻った。この変化は、単回投与アカゲザル研究を含む任意の他のサル研究で観察されていなかったことから、本研究で注目された血小板の減少はＨｕ５Ｆ９−Ｇ４と直接的に関係するかどうかは不明である。
【０１３９】
【表２】
2020128414.tif 000004
【０１４０】
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の単回投与及び反復投与研究並びにカニクイザルに１時間静脈内注入で投与したＦＤ６−ＩｇＧ２の単回投与研究
以前の単回投与研究で観察された貧血は、ＲＢＣに発現したＣＤ４７結合の結果としてのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬理作用と関係する可能性がある。ＲＢＣが老化するにつれて、ＲＢＣは徐々にＣＤ４７発現を失い、糖タンパク質及び糖脂質からシアル酸を失い、おそらくプロ食作用（ｐｒｏ−ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ）シグナルを蓄積し、結果的に食作用による排除に至る方法で膜リン脂質を再編成する（Ｄａｎｏｎ、１９８８）。本発明者らは、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与は、ＣＤ４７の段階的な損失を老化ＲＢＣ上のＣＤ４７の即時遮断で置き換えることによって老化ＲＢＣの排除過程を加速させると仮定する。老化ＲＢＣの成熟前喪失（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｌｏｓｓ）は、続く網状赤血球増加症によって補償される。そして、初期貧血は老化ＲＢＣが若い細胞で置き換えられるにつれて治癒し、ＲＢＣプールの年齢構成がより若い細胞へシフトする。これらの考察に基づいて、本研究を、ｉ）初期の低用量Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は、網状赤血球増加症の十分な誘導にもかかわらず老化ＲＢＣの限定的損失を引き起こし、それによって、より低感受性の若いＲＢＣの産生を刺激し、動物を重症貧血から保護する；及び、ｉｉ）エリスロポエチン（ＥＰＯ；ＲＢＣ産生を刺激する赤血球形成（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ）刺激剤）による前処理が低感受性の若いＲＢＣの産生を誘導し、それによってＨｕ５Ｆ９−Ｇ４投与後に老化ＲＢＣの一掃を補償する可能性があるかどうかを評価するために実行した。別の抗体候補（ＦＤ６−ＩｇＧ２）を本研究で評価したがこのＩＮＤの考察はしない。本研究では、オスカニクイザルに１ｍｇ／ｋｇでの単回投与として、または４週間（１、８、１５、２２日目）、３ｍｇ／ｋｇで週１回、１時間ＩＶ注入によってＨｕ５Ｆ９−Ｇ４を投与した。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の用量を週１回投与した１頭のサルに、５日目にＩＶ注入（１７，０００Ｕ／ｋｇ）によってエリスロポエチン（ＥＰＯ）で前処理し、ＥＰＯでの前処理が以前に観察されたＨｕ５Ｆ９−Ｇ４関連貧血を低減するかどうかを評価した。加えて、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の用量を週１回投与した１頭のサルに、１、２、５、８、９、１２、１５、１６、１９、２２、２３及び２６日目にＩＶ注入（０．５ｍｇ／ｋｇ）でデキサメタゾン、筋肉内（ＩＭ）注入（５ｍｇ／ｋｇ）でベネドリル（Ｂｅｎａｄｒｙｌ）も投与（デキサメタゾンとベネドリルは同時に投与した）し、デキサメタゾン及びベネドリルがＨｕ５Ｆ９−Ｇ４関連貧血を低減するかどうかを評価した。研究設計を表３に示す。
【０１４１】
【表３】
2020128414.tif 000005
【０１４２】
標準安全性パラメータ（例えば、臨床観察、体重、臨床病理学など）を研究に組み込んだ。そして、ＣＤ４７は脳で発現する（参照を追加）ため獣医学神経学的検査を行った。血液を毒物動態研究全体の時点で収集した。群２及び群３の動物は３１日目に終端処理し、群４は２９日目に終端処理した（群１のサルは試験施設動物コロニーに戻した）。
【０１４３】
予定外の死は起こらなかった。また、治療関連の変化は、臨床徴候、体重、摂食量、獣医学神経学的検査、凝固または尿分析パラメータ、臓器重量、あるいは肉眼または顕微鏡検査で注目されなかった。
【０１４４】
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４に関する変化は血液学及び臨床化学パラメータの変化に限定された。単回投与動物（群１）の変化は、赤血球量（ＲＢＣ数、ヘモグロビン、ヘマトクリットレベル）及び平均赤血球容積（ＭＣＶ）の減少を誘導し、また平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）及び赤血球分布幅（ＲＤＷ）を増加した。これらの変化は２日目までに観察された。この動物は豊富な網状赤血球反応を有し、血液塗抹標本（ｂｌｏｏｄ ｓｍｅａｒ）評価で観察されたＲＢＣ形態変化が軽微から軽度の球状赤血球症、赤血球大小不同及び多染性を包含した。週１回Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を投与したサルにおける治療関連の変化は、赤血球（ＲＢＣ）量とＭＣＶの減少及びＭＣＨＣ増加を含んだ。これらの変化は３日目まで注目され、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４単独またはデキサメタゾン／ベネドリルを一緒に投与した他のサルと比較してＥＰＯで前処理した動物では顕著でなかった。赤血球量の変化は２７日目（２２日目での最終投与の５日後）までに部分的に回復し、対応する豊富な網状赤血球反応に関連した。単回投与サルと同様に、ＲＢＣ形態変化は軽微から中度の球状赤血球症、赤血球大小不同及び多染性を包含した。遊離血漿ヘモグロビンの有意な上昇は、単回投与または反復投与Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４治療サルでは検出されなかった。
【０１４５】
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４投与に関係するとみなされた臨床化学パラメータ変化は、乳酸デヒドロゲナーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（単回投与動物のみ）、総ビリルビン（軽微）の増加、及びハプトグロビンの減少（反復投与治療Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４単独、及びデキサメタゾン／ベネドリルのサルのみ）を含んだ。臨床化学パラメータのこれらの変化は、研究終了までに完全もしくは部分的な回復の徴候を示した。
【０１４６】
要約すると、１ｍｇ／ｋｇでの単回投与としてのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４投与、または３ｍｇ／ｋｇの用量で４週間週１回の投与（単独またはＥＰＯによる前処理と共に、あるいはデキサメタゾン／ベネドリル投与の組合せで）はオスカニクイザルで良好な忍容性を示した。また、治療関連の影響は血液学（ＲＢＣ形態を含む）及び臨床化学パラメータの変化に限定された。部分的または完全な回復が研究の終了までに赤血球量及び臨床化学パラメータの変化で注目された。
【０１４７】
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４またはＦＤ６単量体の反復投与研究及び カニクイザルＸｘへの静脈内注入で投与したＦＤ６−ＩｇＧ４の単回投与研究
本研究の目的は、５週間にわたる用量漸増で１時間ＩＶ注入を介してメスカニクイザルに投与した時のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の潜在的毒性及び毒物動態を評価することであった（ＦＤ６−ＩｇＧ２は本研究で評価した別の抗体候補であった）。本研究では、１頭のサルに５日目にＥＰＯ（１７，０００Ｕ／ｋｇ）、次いで週１回の１、８、１５、２４及び３１日目にＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の用量を最大３００ｍｇ／ｋｇまで漸増して投与した。他のサルに、週１回の１、８、１５、２４及び３１日目にＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の用量を最大１００ｍｇ／ｋｇまで（ＥＰＯによる前処理なし）漸増させて投与した。標準安全性パラメータを本研究に組み込んだ。また、動物は両方とも４３日目（最後のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４投与後の１３日目）に終端処理した。研究設計を表４に示す。
【０１４８】
【表４】
2020128414.tif 000006
【０１４９】
両方の動物は共に研究の予定終了まで生き残った。また、治療関連の変化は、臨床徴候、体重、摂食量、凝固及び尿分析パラメータ、腎臓、肝臓または心臓の影響を示す臨床化学パラメータ、臓器重量、あるいは肉眼または顕微鏡検査で注目されなかった。治療関連の所見は血液学及び臨床化学パラメータの変化に限定された。以前の研究と一致して、血液学的変化は赤血球量（ＲＢＣ数、ヘモグロビン、ヘマトクリット）の減少及び網状赤血球数の増加を包含した。他の変化はＭＣＨＣ及びＲＤＷの増加を含み、またＭＣＶの減少も観察された。ＲＢＣ数及びヘモグロビンの減少は研究終了までに両方の動物で予備研究値近くに戻った（表５）。豊富な網状赤血球数が、３日目に開始した両方の動物で観察され、４３日目までに両方の動物で予備研究値近くに戻った。
【０１５０】
【表５】
2020128414.tif 000007
【０１５１】
ＲＢＣ形態変化は以前の研究と一致し、軽微から顕著に至る小赤血球、赤血球大小不同、多染性及び球状赤血球症を含んだ。予想通りに（ＥＰＯの薬理作用に基づく）、これらの変化は動物Ｎｏ.１５０１と比較して動物Ｎｏ.２５０１（ＥＰＯ前処理なし）で、より顕著であった。ＲＢＣ形態変化 は、３７日目までに部分的または完全な回復を示した（表６）。
【０１５２】
【表６】
2020128414.tif 000008
【０１５３】
加えて、リンパ球数及び単球数の増加が両方の動物で観察され、およそ２０日目に最も高く、リンパ球数については予備研究値の２．５８−３．７倍及び単球数については予備研究値の４．４−６．１３倍にわたった。臨床化学的変化は、両方の動物で観察されたハプトグロビンの減少が含まれたが、これは研究終了までに予備研究レベルに戻った。ビリルビンの増加も動物Ｎｏ．２５０１で１３日目に観察された（ＥＰＯ前処理なし）。
【０１５４】
両方の動物をＨｕ５Ｆ９−Ｇ４に曝露して毒物動態を確認した。そして、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の循環濃度が用量の増加につれて一般に増加した。最大１００ｍｇ／ｋｇの用量でのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与は１４時間の半減期中央値をもたらした。
【０１５５】
要約すると、最大１００ｍｇ／ｋｇ（ＥＰＯ前処理なし）または３００ｍｇ／ｋｇ（ＥＰＯ前処理）の用量で週１回１時間ＩＶ注入によって投与したＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の用量の漸増投与はカニクイザルで一般に忍容性が良好であった。治療関連の変化は血液学（ＲＢＣ形態を含む）及び臨床化学的パラメータに限定され、これは研究終了までに部分的または完全に可逆的であった。
【０１５６】
カニクイザルに１時間の静脈内注入で投与したＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の単回投与または漸増投与研究
以前の研究に基づいて、より低用量でのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の初期投与は、カニクイザルで許容され、それ以降のより高用量の投与を可能にする。本研究の目的は、低用量レベルでの初回刺激量として、次いでより高用量レベルでの反復維持用量として投与した場合にＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の潜在的毒性及び毒物動態を評価することであった。加えて、本研究は初回刺激量／維持薬注療法を用いた有望な臨床薬注予定をモデル化するように設計した。本研究では、メスカニクイザルにリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、または１日目に単一初回刺激量として１時間ＩＶ注入によるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４用量を漸増（０．１〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲）して投与した（群Ａ及びＨ）。群Ｂ−Ｆの動物に、１日目にＰＢＳまたは初回刺激量としてＨｕ５Ｆ９−Ｇ４、次いで、ＰＢＳの複数の維持用量または種々のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の用量レベルを投与した。群Ｄ（１０５０１）及び群Ｆ（１２５０１）における１頭の動物に、６８日目に第二初回／維持用量サイクル（３ｍｇ／ｋｇの初回刺激量）の投与を開始し、次いで７５、７８、８２及び８５日目に２週間、週２回維持用量（３０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。動物Ｎｏ.１０５０１について１日目の第一初回刺激量は１ｍｇ／ｋｇであったが、６８日目の第二初回刺激量は３ｍｇ／ｋｇに増加し、初回刺激量レベルの増加が許容されるかどうかを評価した（動物Ｎｏ．１２５０１については１日目と６８日目の初回刺激量は３ｍｇ／ｋｇであった）。初回／維持用量予定で投与するよりはむしろ、群Ｇの動物には１、８、１５及び２２日目に１０ｍｇ／ｋｇで週１回Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を投与した（低赤血球量のため１５日目の用量は投与しなかった）。研究設計を表７に示す。
【０１５７】
【表７−１】
2020128414.tif 000009
【０１５８】
【表７−２】
2020128414.tif 000010
【０１５９】
【表７−３】
2020128414.tif 000011
【０１６０】
全動物を、臨床徴候、摂食量、体重、臨床病理学パラメータ（血液学、凝固、臨床化学、尿分析）の変化について評価した。血液試料を毒物動態の研究及びＡＤＡ反応の評価の全体で収集した。赤血球（ＲＢＣ）量減少レベルにより群Ｇ（１３５０１；１０ｍｇ／ｋｇの初回／維持用量）の動物について１５日目に投与を中止した。この動物に、２２日目に最後の予定用量を投与した。１２０日目に安楽死させて、完全な解剖検査を受けた動物Ｎｏ.１０５０１（群Ｄ）及び１２５０１（群Ｆ）を除き、動物を１２０日目に試験施設コロニーに戻した；臓器の重さを計量し、組織の顕微鏡試験も行った。
【０１６１】
予定外の死は発生しなかった。また、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の全体的投与は臨床的に十分に許容された。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４関連とされた所見は血液学及び臨床化学パラメータの変化に限られた。
【０１６２】
単回投与群（Ａ及びＨ）：血液学パラメータ
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４（群Ａ及びＨ）の単回投与を施した動物で血液学的変化が注目された。赤血球（ＲＢＣ）量の可変的減少は、群Ａの動物（０．１〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲で初回刺激量を漸増して投与した）において、≧０．３ｍｇ／ｋｇの投与群で３日目から１４日目までの間で観察された（０．１ｍｇ／ｋｇでは変化は観察されなかった）。赤血球（ＲＢＣ）量の減少は、０．３ｍｇ／ｋｇでは予備研究レベルの最大０．７３倍、１及び１０ｍｇ／ｋｇでは予備研究の０．６３倍、３０ｍｇ／ｋｇでは予備研究の０．５３倍に及んだ（表８）。興味深いことに、群Ｈの動物についての赤血球（ＲＢＣ）量は、動物に最高の初期用量（３０ｍｇ／ｋｇ）を投与した場合であっても予備研究レベル以下に僅かしか減少しなかった。しかし、これらの減少は群Ａ及びＨでは最終評価時点まで回復傾向の継続を示した。全動物（対照を含めて）で、反応性赤血球形成を示す網状赤血球数が増加した。加えて、ＭＣＨＣ（≧０．３ｍｇ／ｋｇ）及びＲＤＷ（≧０．１ｍｇ／ｋｇ）の増加が注目され、ＭＣＨＣは予備研究値の最大１．２倍、ＲＤＷは予備研究値の最大２倍増加した。ＭＣＶの減少も用量≧０．３ｍｇ／ｋｇで注目され、予備研究値の最大０．９１倍に及んだ。遊離血漿ヘモグロビンは任意の動物で検出されなかった。リンパ球数は用量０．３ｍｇ／ｋｇで増加し、予備研究値の１．１９〜１．８６倍に及ぶ値であった；リンパ球の増加は白血球数に対応し、予備研究の最大２．５倍に及んだ。ＲＢＣ形態変化 は、６日目及び１０日目に評価して用量≧０．１ｍｇ／ｋｇで注目された；これらの変化は高用量ほど（０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ）重度が増加し、軽微から顕著に至る大赤血球、小赤血球、赤血球大小不同、多染性及び球状赤血球症を包含した。
【０１６３】
【表８】
2020128414.tif 000012
【０１６４】
初回／維持用量群（Ｂ−Ｆ）及び週１回投与（群Ｇ）：血液学パラメータ
１日目に初回刺激量、次いでＨｕＦ５９−Ｇ４の反復維持投与（群Ｂ−Ｆ）及びＨｕＦ５９−Ｇ４の週１回投与した動物で観察された血液学的変化は、単回投与動物（群Ａ及びＨ）で観察されたものと一貫した。赤血球（ＲＢＣ）量（赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット）の可変的減少が初回刺激量≧１ｍｇ／ｋｇ及び維持用量≧１０ｍｇ／ｋｇを投与した群で観察された（表９−１０）。これらの赤血球（ＲＢＣ）量の減少はより早い時点（５日、８日、１２日）でより大きくなる傾向を示した。加えて、赤血球（ＲＢＣ）量の減少は、初回／維持用量予定で投与した他の動物と比較して週１回１０ｍｇ／ｋｇを投与した動物でより大きかった（動物Ｎｏ.１３５０１；群Ｇ）。興味深いことに、動物Ｎｏ.１０５０１（群Ｄ）のヘモグロビンレベルは１日目の１ｍｇ／ｋｇでの第一初回刺激量の後に減少したが、６８日目の、より高い第二初回刺激量、または７５、７８、８２及び８５日目の第二周期の維持用量の後はヘモグロビンレベルの低下はなかった（表９−１０）。更に、第二周期の初回／維持用量を投与した他の動物（Ｎｏ.１２５０１；群Ｆ）のヘモグロビンレベルは第二周期の間に予備研究レベルを維持した。これらのデータは、１０ｍｇ／ｋｇ以下の初回刺激量で生じた貧血が初回刺激量１０ｍｇ／ｋｇと比較して重症ではなく、また、初期用量が低いほどカニクイザルによって許容されるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の維持用量の連続投与を可能にすることを示す。更に、これらのデータは、初回／維持用量予定は週１回の用量予定で観察された程の重症度を生じないことを示す（群Ｇ）。全ての初回刺激量／維持群で研究の終了までに赤血球（ＲＢＣ）量は回復傾向を示した。動物１３５０１（群Ｇ、１週間に１回１０ｍｇ／ｋｇ）は、低赤血球（ＲＢＣ）量（ヘモグロビンレベルが１２日目に６．５ｇ／ｄＬであった）のため１５日目に投与を中止した。しかし、ヘモグロビンレベルが１９日に回復を開始したため、この動物に投与を再開し、２２日目に最終投与を施した（表９−１０）。動物Ｎｏ.１３５０１のヘモグロビンレベルは着実に回復への傾向を維持し、最終時点（７１日）までに予備研究レベルを僅かに超えるまで戻った。網状赤血球数は全ての群（Ｂ−Ｆ、対照を含む）で増加したが、これは反応性赤血球形成を示す。ＭＣＨＣ及びＲＤＷは初回／維持用量≧１／１０ｍｇ／ｋｇで増加し、ＭＣＨＣの値は予備研究の１．２１倍、ＲＤＷの値は予備研究の２．４１倍に至った。ＭＣＶの可変的な減少（予備研究の最大０．９０倍）も観察された。赤血球（ＲＢＣ）量の変化と同様に、ＭＣＨＣ、ＲＤＷ及びＭＣＶで観察された変化は、初回／維持用量予定を投与した他の動物と比較して、週１回１０ｍｇ／ｋｇを投与した動物Ｎｏ.１３５０１（群Ｇ）でより顕著であった。ＭＣＨＣ、ＲＤＷ及びＭＣＶの変化が予備研究レベルまで、または近くまで連続した回復傾向を示し、これらの変化は可逆的であることを示した。重要なことに、遊離血漿ヘモグロビンは任意の動物で観察されなかった。ＲＢＣ形態変化 （血液学的パラメータの変化と一致する）も観察され、赤血球大小不同、大赤血球、小赤血球（３／３０ｍｇ／ｋｇの初回／維持用量で観察されなかった）、多染性及び球状赤血球症が含まれた。全体として、これらの変化の発生率及び重症度は用量依存的には起こらなかった。また、評価時点に基づいて研究終了までに部分的または完全な回復傾向を示した。リンパ球数も初回／維持用量≧１／１０ｍｇ／ｋｇで増加し、予備研究値の１．２５〜２．０１倍に及び、他のパラメータと一貫して、全体的に回復傾向を示した。
【０１６５】
【表９−１】
2020128414.tif 000013
【０１６６】
【表９−２】
2020128414.tif 000014
【０１６７】
【表１０】
2020128414.tif 000015
【０１６８】
単回投与群（Ａ及びＨ）：臨床化学パラメータ
単回投与動物（群Ａ及びＨ）では用量≧１ｍｇ／ｋｇで総ビリルビンの増加が注目され、６日目に増加が起こり、予備研究値の１．５６〜３．２９倍に及んだ。総ビリルビンの増加は用量依存的に起こらず、また回復傾向を示した。ＡＬＴ及びＡＳＴの増加は、６日目に３０ｍｇ／ｋｇを投与した単一動物（動物１４５０１；群Ｈ）で注目されたが、これらの増加は最終時点までに回復傾向を示した。ハプトグロビンは用量≧０．１ｍｇ／ｋｇで減少したが、ハプトグロビンは４２日目に２頭のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４治療動物及び１頭のＰＢＳ対照動物の予備研究を含めて、全動物について３〜４時点で検出レベル未満であった。したがって、ハプトグロビンの減少はこの研究ではＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の単一用量投与と不確定な関係があるとみなされた。
【０１６９】
初回／維持群（Ｂ−Ｆ）及び週１回投与（群Ｇ）：臨床化学パラメータ
単回投与群と同様に、総ビリルビンは初回／維持用量予定を投与した全群で増加した。しかし、総ビリルビンのレベルは研究全体で１ｍｇ／ｄＬ未満のままであった（表１１）。総ビリルビンの増加は研究の最終で回復傾向を示した。ハプトグロビンレベルは全群で減少し、研究の最終で回復傾向を示した（表１１）。ＡＬＴ、ＡＳＴ及びＬＤＨの散発的な変化は研究過程のいくつかの時点で２、３の動物に起こった。しかし、これらの変化は、研究期間の間で僅か１日または２日に起きた正常範囲内（試験施設の歴史的データベースに基づいて）であり、事実上一過性であった。
【０１７０】
【表１１−１】
2020128414.tif 000016
【０１７１】
【表１１−２】
2020128414.tif 000017
【０１７２】
動物のＮｏ.１０５０１（群Ｄ）及び１２５０１（群Ｆ）は１２０日目に安楽死させて完全な解剖検査を受けた。臓器の重さを計り組織の顕微鏡試験も行った。食細胞及び単核細胞の浸潤による軸索変性が特徴である、単一で最小の白質部変性の病巣が動物Ｎｏ.１０５０１の延髄内で注目されたが、この所見は、顕微鏡試験を受けた動物の数（２）が少ないこと及び所見の最小の性質のために、この病巣がＨｕ５Ｆ９−Ｇ４に関連するかまたは付帯的であるかは不明である。重要なことに、この所見は中心的なＧＬＰ８週間毒性学的研究において注目されなかったが、これはこの所見は事実上付帯的な可能性があることを示す。
【０１７３】
毒物動態は、測定可能なＨｕ５Ｆ９−Ｇ４濃度が、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を用量≦０．３ｍｇ／ｋｇで単回投与した群で得られなかったことを示した。Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０−ｔは一般に用量が増加するにつれて増加した。また、Ｃｍａｘの増加は用量≧１ｍｇ／ｋｇでは用量比例より大きいように見えた。ＡＵＣ０−ｔの増加も用量に比例しなかった。１０及び３０ｍｇ／ｋｇの用量レベルについてのＴ１／２はそれぞれ１０．７対４６．５時間であったが、これはＴ１／２は用量増加に伴って増加し得ることを示唆する。
【０１７４】
反復投与を施した群については、１または３ｍｇ／ｋｇ（１日目または６８日目）の初回刺激量及び１０または３０ｍｇ／ｋｇの反復投与の後に、平均Ｃｍａｘが１日目から８日目まで増加した。Ｃｍａｘの増加は１日目から８日目まで用量比例的より大きかった。１（１日目）ｍｇ／ｋｇまたは３（６８日目）ｍｇ／ｋｇの初回刺激量及び３０ｍｇ／ｋｇの維持用量の後に平均Ｃｍａｘが１日目から８日目まで増加した。Ｃｍａｘの増加は、１日目から８日目まで用量比例より大きかった。半減期は１０．８から１７３時間の範囲にあった。いくつかの動物はＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の予想された血清中濃度より低かったが、これはＡＤＡの存在を示唆する。
【０１７５】
要約すると、２種類までの初回／維持用量予定では、最大３０ｍｇ／ｋｇの単一初回刺激量、または最大３／３０ｍｇ／ｋｇの初回／維持用量としてのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与はカニクイザルで臨床的に十分耐えられた。１０ｍｇ／ｋｇでのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の週１回の投与は臨床的に忍容性が高かったが、低赤血球（ＲＢＣ）量のために１５日目に投与を中止する必要があった。しかし、ヘモグロビンレベルは１９日目に回復傾向を示し、したがってこの動物で投与を再開した。治療関連の変化は血液学の変化（ＲＢＣ形態を含む）及び臨床化学パラメータに限定された。赤血球（ＲＢＣ）量の減少は以前の研究と一貫し、ＲＢＣ数及びヘモグロビンの減少は、老化ＲＢＣ上のＣＤ４７への結合及びクリアランスの加速で想定されるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬理学的作用と関連する可能性がある。老化ＲＢＣのクリアランスは、初期貧血と早期の時点で観察される補償網赤血球増加をもたらし、老化ＲＢＣを若いＲＢＣに置き換える。血液学及び臨床化学パラメータにおける治療関連の変化は全て研究終了までに部分的または完全な回復傾向を示したが、これは、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４のこれらの影響が可逆的であることを示す。重要なことに、データは、初回／維持用量予定で誘導された貧血は、週１回の投与による程の重症ではなく、初回刺激量≦１０ｍｇ／ｋｇは忍容性があることを示す。そのように、初回刺激量≦１０ｍｇ／ｋｇによる初回刺激量予定は以降の研究で用いた。
【０１７６】
カニクイザルへの静脈内注入投与後のＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬物動態
本研究の目的は、以前の研究で評価されなかった用量レベルで、初回／維持用量予定として１時間ＩＶ注入で投与する際にＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の潜在的毒性及び毒物動態を評価することであった。本研究では、１日目に５ｍｇ／ｋｇで初回刺激量としてＨｕ５Ｆ９−Ｇ４をオスカニクイザルに投与し、次いで、８、１１、１５、１８、２２及び２５日目に週２回、１５０ｍｇ／ｋｇで維持用量を投与した。研究設計を表１２に示す。
【０１７７】
【表１２】
2020128414.tif 000018
【０１７８】
臨床徴候、体重、血液学、凝固及び臨床化学パラメータ（７７日目までに収集した）の変化について動物を評価した。血液試料も収集し、フローサイトメトリーを用いて受容体占有を評価したが、このＩＮＤのデータは考察しない。毒物動態及びＡＤＡ反応の評価のために１４９日目まで研究全体で試料を収集した。両方の動物を研究の終了で試験施設動物コロニーに戻した。
【０１７９】
動物は両方とも研究の予定した終了まで生き残り、治療関連の影響の証拠は臨床徴候、摂食量または体重で注目されなかった。治療関連の所見は両方の動物で観察され、血液学及び臨床化学パラメータの変化を含んだ。予備研究と一致し、軽度の貧血が５日目（５ｍｇ／ｋｇ初回投与後の４日目）に注目された。ＲＢＣ数の有意な減少が、８日目（動物１０３６）及び１１日目（動物１０３７）から開始した両方の動物で観察された。１８日目に、標準レベルに戻るＲＢＣの傾向が動物１０３６で観察された。しかし、動物１０３７はＲＢＣ数で有意な減少を示し続けた（表１３）。両方の動物についてＲＢＣ数の減少は網状赤血球の有意な増加と一致した。ＲＢＣ数と同様に、標準レベルに戻る網状赤血球の傾向が動物１０３６で観察された。しかし、動物１０３７では網状赤血球が増加し続けた。加えて、動物１０３７（１５日目に開始した）でヘモグロビンレベルが有意に減少した。動物１０３６のヘモグロビンレベルも減少したが、この動物で観察された減少は動物１０３７ほど顕著ではなく、ヘモグロビンが１０．０ｇ／ｄＬを僅かに下回って低下した１１日目以外は研究過程で１０．０ｇ／ｄＬ以上を維持した（表１３）。遊離血漿ヘモグロビンはどちらの動物でも観察されなかった。動物１０３７について重症貧血のため１５日目に投与を止めた。この動物は投与を再開せずに貧血が回復するかどうかを評価した。したがって、動物Ｎｏ.１０３７には１８、２２及び２５日に投与をしなかった。動物１０３６のヘモグロビンレベルは研究の大半で１０．０ｇ／ｄＬ超残っているため、投与を計画通り継続した。貧血にもかかわらず、毒性を示す臨床徴候はどちらの動物でも観察されなかった。加えて、他の臨床病理パラメータの主要な変化は、白血球数、血小板またはクレアチニンレベルを含めて観察されなかった。２２日目に両方の動物を獣医師スタッフによって、特に脾臓の触感に注意して検査した。脾臓の触感からいずれの動物も異常がないことが分かった。
【０１８０】
【表１３】
2020128414.tif 000019
【０１８１】
動物１０３７のＲＢＣ及びヘモグロビンレベルは有意に減少し、網状赤血球は２９日目まで有意に高い（予備研究と比較して）ままであった。しかし、４８日目までにＲＢＣ、ヘモグロビン及び網状赤血球は回復し始め、７７日目までにこれらのパラメータは予備研究レベルに戻った。更に、動物１０３６で観察されたこれらの血液学的パラメータの変化は、２２日目に戻り始め、７７日までに予備研究レベルに戻った。したがって、動物１０３７はＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与に関連した貧血により感受性であるように見えるが、投与終了（１５日目）は、経時的に貧血が可逆的であることを示す。ＲＢＣ形態変化も両方の動物で観察され、軽微から顕著に至る赤血球大小不同、小赤血球、多染性及び球状赤血球症を含めて以前の研究と一貫した。
【０１８２】
毒物動態は、血清Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４濃度が１日目から１５日目の投与後４時間まで２頭間で類似することを示した（動物１０３７は投与中止を１５日目に開始した）。両方のサルのＴ１／２は１７３から２１２時間の範囲にあった。
【０１８３】
要約すると、本研究における治療関連の影響は以前の研究と一貫し、血液学的及び臨床化学パラメータの変化を含んだ。動物１０３７で観察された重度の貧血を含む治療関連の全ての変化は可逆的であり、研究の終了までに正常範囲に戻った。加えて、観察された貧血にもかかわらず、毒性の臨床徴候はどちらの動物でも観察されなかった。
【０１８４】
８週間回復期を伴うカニクイザルの静脈内注入によるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の８週間毒性試験
ＧＬＰ試験の目的は、カニクイザルに初回刺激量、次いで反復維持用量を投与した場合にＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の潜在的毒性及び毒物動態を評価することであった。以前の研究で観察された動物Ｎｏ.１０３７での５／１５０ｍｇ／ｋｇ初回／維持用量による重症貧血により、本研究では使用する初回刺激量及び最大維持用量を５／１００ｍｇ／ｋｇとし、臨床研究で提案した用量の合理的安全域を提供した。賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ）またはＨｕ５Ｆ９−Ｇ４（５ｍｇ／ｋｇ）を１時間ＩＶ注入によって投与した。１日目に５ｍｇ／ｋｇで初回刺激量を投与し、次いで５、１０、５０または１００ｍｇ／ｋｇの用量で賦形剤またはＨｕ５Ｆ９−Ｇ４を維持用量として連続７週間、週２回投与した（８、１１、１５、１８、２２、２５、２９、３２、３６、３９、４３、４６、５０及び５３日目）。群５では初回刺激量及び維持用量は同じ投与レベル（５ｍｇ／ｋｇ）を用いた。回収した動物を賦形剤及び高投与群に含めて任意の治療関連効果の可逆性を評価した。研究設計を表１４に示す。
【０１８５】
【表１４】
2020128414.tif 000020
【０１８６】
安全性薬理学パラメータを本研究に取り込み、呼吸機能（視覚的呼吸速度）、心臓血管機能（ＥＣＧ）及び中枢神経系機能に及ぼす影響を示す臨床徴候（例えば、活性、挙動）の変化を含めた。血液試料を毒物動態の研究全体で収集し、ＡＤＡ反応の評価、並びにＣＤ４７の受容体占有を評価した。研究の継続期間全体で臨床病理学試料を評価し、以前の研究データに基づいて特異的パラメータ（例えば、ヘモグロビン、ＲＢＣ、網状赤血球）を評価した。重症貧血を２頭の動物（動物Ｎｏ.３００２；群３、初回／維持用量５／５０ｍｇ／ｋｇ；動物Ｎｏ.４５０４；群４、初回／維持用量５／１００ｍｇ／ｋｇ）で観察した。また、これらの動物は投与を中止し、貧血の回復及び一旦薬注を再開するとどのように反応するかを評価した。動物Ｎｏ.３００２は維持用量６−９について投与を中止し（２５、２９、３２及び３６日）、３９日目に投与を再開した（維持用量１０）。動物Ｎｏ.４５０４は２５日目（用量６）に投与を中止し、投与期間の終了まで投与の中止を継続した。主な研究動物を５７日目に終端処理し、また回収動物を１０９日目に終端処理した。生存中の部分の研究を完了し、主な研究動物の全データは組織病理学を含めて利用可能である。回収動物のデータは利用が可能な場合は提出される。
【０１８７】
本研究おいて予定外の死は起きなかった。また、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与は臨床的に良好な忍容性を示した。治療関連の影響は臨床徴候、体重、身体及び眼科検査、体温、ＥＣＧ、呼吸または心拍数、凝固または尿分析パラメータ、臓器計量、あるいは肉眼及び顕微鏡検査で観察されなかった。
【０１８８】
以前のパイロット研究と一貫して、血液学的パラメータにおける治療関連の変化は全てのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４治療群で観察され、軽度から中度の赤血球量（ＲＢＣ数、ヘモグロビン及びヘマトクリットを含む）の減少を含むが、これは１日目の初回刺激量の後に最も顕著であった。これらの血液学的パラメータ変化は、投与相の終了までに回復傾向を示した（ヘモグロビンの変化は表１５を参照のこと）。ＲＢＣ数、ヘモグロビン及びヘマトクリットの減少は全てのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４治療群で観察されたが、これらの変化は明確な用量依存的方法で生じなかった。網状赤血球の増加が全Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４治療群で観察され、赤血球量の減少と関連する豊富な赤血球形成反応を示した。以前の研究と一貫して、赤血球量の減少は、ＭＣＶ及びハプトグロビンの減少、また、ＭＣＨＣ、網状赤血球及びＲＤＷの増加と関連した。遊離血漿ヘモグロビンは任意の投与群で観察されなかった。リンパ球の最小から軽度な増加も観察されたが、これらの増加は事実上一時的かつ散発的であり、また用量依存的に生じなかった。血小板の最小から軽度な増加が８日目に観察（大部分の群で対照と比較して統計的に有意であった）されたが、１１日目までに大部分の群で対照値に戻り始めた。血小板の増加は加速赤血球産生に対する反応性血小板新生及び生理反応であると考えられており、これは網状赤血球の随伴性増加によって明白であった。血液学的パラメータの全ての治療関連変化は投与相の終了まで部分的または完全に可逆的であった。
【０１８９】
【表１５−１】
2020128414.tif 000021
【０１９０】
【表１５−２】
2020128414.tif 000022
【０１９１】
【表１５−３】
2020128414.tif 000023
【０１９２】
【表１５−４】
2020128414.tif 000024
【０１９３】
【表１５−５】
2020128414.tif 000025
【０１９４】
【表１５−６】
2020128414.tif 000026
【０１９５】
【表１５−７】
2020128414.tif 000027
【０１９６】
【表１５−８】
2020128414.tif 000028
【０１９７】
【表１５−９】
2020128414.tif 000029
【０１９８】
【表１５−１０】
2020128414.tif 000030
【０１９９】
ヘモグロビンは１日目に初回刺激量を投与した後に全てのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４治療動物で減少したが、ヘモグロビンの減少は一般に８日目で第一維持用量を投与した後に最も顕著であった（表１６の１１日目のヘモグロビンレベルを参照せよ）。ヘモグロビン減少の大きさは動物全体で異なり、１１日目にヘモグロビンレベル≦１０．０ｇ／ｄＬを持つ動物の発生率は、群２（２／１０ｍｇ／ｋｇ）、群３（５／５０ｍｇ／ｋｇ）、群４（５／１００ｍｇ／ｋｇ）及び群５（５／５ｍｇ／ｋｇ）で、それぞれ６７％、３０％、９０％及び５０％であった。貧血（１１日目で）は群２、群３または群５の間で明確な用量依存的方法で発生しなかったが、群４はヘモグロビンレベル≦１０．０ｇ／ｄＬを持つ最多の動物を有した。全体として、ヘモグロビン回復の継続傾向が動物全体で観察され、およそ１５日目〜３２日から始まって研究終了まで継続した。しかし、動物Ｎｏ.３６０２が４６日目に第１１回目の維持用量を投与した後にヘモグロビンの別の大幅な減少を有したことは、研究の終了近くで注目された１つの例外であった（ヘモグロビンが５５日目及び５７日目に７．０ｇ／ｄＬも減少した；表１６）。しかし、動物Ｎｏ.３６０２のヘモグロビンレベルは６０日目に回復し始め（最後の維持用量の７日後）、１０９日目の研究終了までに予備研究レベル（１３．４ｇ／ｄＬ）に戻った。観察された重症貧血により、２頭の動物（動物Ｎｏ.３００２；群３、初回／維持用量５／５０ｍｇ／ｋｇ；動物Ｎｏ.４５０４；群４、初回／維持用量５／１００ｍｇ／ｋｇ）の投与を中止し、貧血の回復及び一旦薬注を再開するとどのように反応するかを評価した。動物Ｎｏ.３００２は、より重度な貧血（１５日目及び１８日目に５．７ｇ／ｄＬ程の低さ）を示し、維持用量６−９の投与を中止した（２５、２９、３２及び３６日目）。投与を３９日目に再開した（維持用量１０）。動物Ｎｏ.４５０４は２５日目（用量６）に投与を中止し、投与期間の終了まで投与の中止を継続した（ヘモグロビンレベルの変化は表１６を参照せよ）。動物Ｎｏ.３００２で注目された赤血球数、ヘモグロビン及び網状赤血球の変化は３６日目に回復し始めて、５７日目の研究終了まで回復し続けた。同様に、動物Ｎｏ.４５０４の血液学的変化は回復し始めて、研究終了まで回復傾向が継続した（１０９日目；この動物は回復群にいた）。したがって、少数の動物が特にＨｕ５Ｆ９−Ｇ４に起因する貧血に感受性の可能性があるように見えるが、貧血は一過性であり、ヘモグロビンレベルは経時的に回復する。
【０２００】
【表１６】
2020128414.tif 000031
【０２０１】
血液細胞形態変化は、以前の研究と一致し、加速赤血球破壊／クリアランス及び赤血球形成の亢進と関連があると考えられた。これらの変化は、事実上軽微から顕著まで様々であり、赤血球大小不同、球状赤血球症（小赤血球）、多染性、並びに赤血球損傷／クリアランスと一致したエクセントロサイト及び非定型赤血球断片を含んだ。赤血球サイズの範囲の可変性は、より小さな球状赤血球症とより大きな多染性細胞（網状赤血球）の混合によるものであった。いくつかのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４治療動物の循環で有核の赤血球数の一時的な増加も観察された。赤血球形態変化は研究の終了まで回復傾向の継続を示した。骨髄塗抹標本評価の変化は軽微から中程度であったが、異常な核形状を持つ副次的な細胞、複合核、細胞核ブレビング及び／または核対細胞質成熟不同時性（異常核対細胞質成熟）からなる赤血球系統の変化（異形成）に限られていた。付加的な変化はＨｕ５Ｆ９−Ｇ４と関連する加速赤血球形成反応に関係すると考えられ、付加的な変化として、加速赤血球形成を伴うより未熟な赤血球前駆体への最小〜軽度の適度なシフトと共に、群３及び群４（メスだけ）の平均Ｍ：Ｅ比率の穏和な低下を含んだ。
【０２０２】
以前の研究と一致して、血液学的パラメータの治療関係の変化（すなわち、ＲＢＣ及びヘモグロビンの減少、網状赤血球の増加）は総ビリルビンの増加及びハプトグロビンの減少と関連した。臨床化学パラメータの他の変化は高用量群（５／１００ｍｇ／ｋｇ）にだけ観察され、アルブミンの僅かな減少（２頭のメスの動物）、グロブリンの僅かな増加、及びアルブミン対グロブリン比率の対応する減少を含んだ。臨床化学パラメータの全治療関係の変化は、投与相の終了時点で部分的または完全に可逆的であった。
【０２０３】
８日目の毒物動態は、１日目の５ｍｇ／ｋｇでの初回刺激量、及び８日目の５、１０、５０または１００ｍｇ／ｋｇでの初期維持用量の後のＣｍａｘの増加は１０〜１００ｍｇ／ｋｇが用量比例、５〜１００ｍｇ／ｋｇが用量比例より大きいことを示した。ＡＵＣ０−７２の増加は５０〜１００ｍｇ／ｋｇが用量比例に向かう傾向を示したが、ＡＵＣ０−７２の変化は５〜１００または１０〜１００ｍｇ／ｋｇが用量比例より大きかった。平均Ｔ１／２は用量の増加に伴って増加傾向を示し、５ｍｇ／ｋｇで６時間、１００ｍｇ／ｋｇで５２時間にわたった。曝露では明らかな性差はなかった。２５日目の毒物動態は、３週間５、１０、５０または１００ｍｇ／ｋｇで週２回投与した後、曝露での増加（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０−７２）は５〜１００ｍｇ／ｋｇが用量比例より大きかったが、１０〜１００ｍｇ／ｋｇが用量比例であることを示した。加えて、曝露はオスザルと比較してメスで低い傾向を示した。見掛けＴ１／２は、高用量と比較して５ｍｇ／ｋｇでより短かった。いくつかの動物ではＴ１／２は２５日目と８日目の間で類似し、他の動物ではＴ１／２は２５日目でより長くなるように見えた。平均Ｔ１／２は６．３時間（５ｍｇ／ｋｇ）〜６６時間（５０ｍｇ／ｋｇ）の範囲にあった。７週間、５、１０、５０または１００ｍｇ／ｋｇで週２回投与した後の５３日目の毒物動態は、曝露（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０−７２）の増加が５〜１００ｍｇ／ｋｇで用量比例より大きかったが、１０〜１００ｍｇ／ｋｇで用量比例であることを示した。
【０２０４】
２５日目または８日目と比較して５３日目の濃度対時間分布は、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の血中濃度が反復投与と伴に増加し続けることを示唆した。５ｍｇ／ｋｇの用量（ＡＤＡによる影響を受けると思われる）を除いて、５３日目の曝露（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０−７２）の平均値及び中央値は各々の用量群の中で２５日目または８日目より一般に高かったが、これは週２回投与の継続によるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の更なる蓄積を示唆した。ＡＤＡの発生は曝露量に影響を及ぼすと思われるが、この影響力は主に５ｍｇ／ｋｇの維持用量で注目された。そして、用量≧１０ｍｇ／ｋｇの維持用量では全体的に曝露量が研究を通して維持された。
【０２０５】
要約すると、治療関連の所見は以前の研究と一致し、血液学的及び臨床化学パラメータ並びに骨髄細胞の変化を含んだ。血液学的パラメータ変化は網赤血球増加を組み合わせた赤血球数及びヘモグロビンの減少を含んだ。重要なことに、遊離血漿ヘモグロビンは研究全体でいずれの動物でも検出されなかった。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４関連貧血は、群２、３または５の間で明確な用量依存的方法で生じなかったが、ヘモグロビンレベル≦１０．０ｇ／ｄＬを持つ動物の数は最も高い維持用量（１００ｍｇ／ｋｇ）を投与した群５で最も多かった。ヘモグロビンレベルは、およそ１５−３２日目に開始した全動物で回復傾向を示し、研究終了まで継続したが、４６日目に第１１回の維持用量投与後、研究終了近くで１頭の動物（群３）に再びヘモグロビンの大幅な低下が観察された。しかし、この動物のヘモグロビンは研究終了（１０９日目）までに予備研究レベルに戻った。２頭の動物（群３及び４群の各１頭）で、それぞれ観察された重症貧血により投与を中止した。重要なことに、これらの動物で観察された重症貧血にもかかわらず、毒性の臨床徴候は注目されなかった。また、各々の動物のヘモグロビンレベルは研究終了まで継続した回復傾向を示した。赤血球形態変化 は、加速赤血球破壊／クリアランス及び赤血球形成の亢進と一致し、非定型赤血球断片、赤血球大小不同、球状赤血球症（小赤血球）及び多染性からなった。血液学的パラメータ変化は総ビリルビンの増加及びハプトグロビンの減少と関連した。臨床化学パラメータの他の治療関連変化は、高用量群だけに観察され、アルブミンの僅かな減少、グロブリンの僅かな増加、及び対応するアルブミン対グロブリン比率（Ａ：Ｇ）を含んだ。これらの全ての治療関連の変化は、研究終了まで、全てのＨｕ５Ｆ９−Ｇ４投与群において部分的または完全に可逆的であった。骨髄細胞の変化は、異常な核形状を持つ副次的な細胞、複合核、細胞核ブレビング及び／または核対細胞質成熟不同時性からなる赤血球系統の形態変化に限られていた。
【０２０６】
全体として、週１回（１日）、５ｍｇ／ｋｇで初回刺激量、次いで最大１００ｍｇ／ｋｇで７週連続、週２回の維持用量として、１時間ＩＶ注入によるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４投与は臨床的に十分許容された。治療関連貧血にもかかわらず、投与を中止した動物を含めて臨床毒性の徴候は観察されなかった。本研究で観察された変化は以前の研究と一致し、ＲＢＣ上に発現したＣＤ４７への結合による老化ＲＢＣ除去の工程を加速させるＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬理作用と関係すると考えられた。したがって、データの全体に基づいて、本研究に関して重篤な毒性が発現しない最大用量（ＨＴＮＳＴＤ）は、５／１００ｍｇ／ｋｇの初回量／維持用量であると考えられた。
【０２０７】
遺伝毒性
小分子製剤で通常実施される遺伝毒性学研究の規模とタイプはバイオテクノロジー製品に適用できない［ＩＣＨ  Ｓ６（Ｒ１）］。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４のようなモノクローナル抗体はＤＮＡまたは他の染色体材料と直接的に相互作用することはないと考えられている。したがって、変異原性試験は不適当とみなし計画しない。
【０２０８】
発癌性
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４による発癌性研究を実施していない。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の作用機構に基づいて、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は発癌性ではないと考えられる。更に、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は増殖因子でも免疫抑制剤でもない。したがって、予想される患者の規模及び機構的懸念がないことを想定すれば、発癌性研究は予定（有効な毒物動態評価を含めて）されない。
【０２０９】
生殖毒性と発生毒性（範囲検出研究及び有効な毒物動態評価を含む）
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４による生殖・発生毒性試験を実行していない。形式的であるが、自立型繁殖試験を実行しない。治療関連の影響は、８週間の毒性学研究において雌雄生殖臓器の顕微鏡試験で注目されなかった。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の潜在的な奇形発生効果はたとえあったとしても実験動物で知られていないため、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４を妊婦に投与するべきではない。妊娠を避けるために、提案された第一期臨床試驗に登録された男性及び出産の可能性のある女性に適切な予防措置が（例えば、女性は陰性妊娠反応を示さなければならないし、患者は十分な避妊予防措置などに同意しなければならない）。
【０２１０】
局所忍容性
自立型局所忍容性試験を実行しなかった。しかし、ＩＣＨ  Ｓ６（Ｒ１）と一貫して、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の局所忍容性の評価（注入部位由来組織試料の臨床観察、肉眼検査及び顕微鏡検査）を反復用量毒性試験の一部として実行した。
【０２１１】
考察及び結論
提案した臨床試験ではＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与を支持して包括的な一連の毒性学研究を行った。これらの研究として、試験管内溶血研究、アカゲザル及びカニクイザルにおける単回及び反復投与研究、並びにヒト組織集団における組織交叉反応性研究が挙げられる。
【０２１２】
全サル研究にわたる主要で一貫した治療関連所見は貧血（赤血球数及びヘモグロビンの減少に反映される）であった。貧血は一般に第一用量（または初回／維持用量予定研究における初回刺激量）の投与後に発生し、赤血球のクリアランス加速、及び赤血球形態変化（例えば、赤血球大小不同、多染性及び球状赤血球症）を含む網赤血球増加を示す変化を伴った。重要なことに、遊離血漿ヘモグロビンは全研究にわたって観察されなかった。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４に関連した血液学的パラメータ変化は、一般にハプトグロビン及び総ビリルビンの変化を伴った。常時を除きハプトグロビンはしばしば減少し、総ビリルビンの増加が一般に観察された。しかし、ハプトグロビン及び総ビリルビンの変化は用量依存的に発生しなかった。全ての研究にわたって、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４に関連した血液学的及び臨床化学パラメータ変化は研究の間に回復傾向を示し、研究終了まで部分的または完全に可逆的であった。骨髄細胞学の変化（ＧＬＰ８週研究で実行；ＰＲ０１３）は、加速赤血球形成に関連すると考えられ、赤血球系統の形態変化、平均Ｍ：Ｅ比の減少、加速赤血球形成を伴うより未熟な赤血球前駆体への適度なシフトを含んだ。
【０２１３】
老化赤血球の正常なクリアランスにおけるＣＤ４７の既知の役割及びサル研究全体で得られた結合データに基づいて、一次治療関連変化（すなわち、貧血）はＲＢＣで発現したＣＤ４７に結合したＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の薬理作用に関係があると考えられる。本発明者らは、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与は、老化ＲＢＣ上のＣＤ４７の即時遮断によってＣＤ４７の段階的損失を置換することによって老化赤血球の排除の過程を加速すると考えている。老化ＲＢＣの成熟前喪失は、続く網状赤血球増加症（全研究にわたって観察された）によって補償され、老化ＲＢＣが若い細胞によって置き換えられるにつれて経時的に初期貧血が治癒し、結果として、ＲＢＣプールの年齢分布が若い細胞にシフトする。
【０２１４】
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与に関連した貧血にもかかわらず、毒性の証拠は任意の動物での臨床徴候で観察されなかった。したがって、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４は３００ｍｇ／ｋｇ程の高用量でも臨床的に忍容性が良好であった。Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与は一過性の貧血をもたらしたが毒性の臨床徴候は注目されなかった。また、Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４はサルによって、３００ｍｇ／ｋｇ程の高用量でも臨床的に良好な忍容性を示した。しかし、毒性学研究から、少数の動物が特にＨｕ５Ｆ９−Ｇ４関連貧血に感受性であることが分かった。これらのサルがＨｕ５Ｆ９−Ｇ４に起因する貧血に、より感受性である原因は現時点で不明であるが、貧血は一過性であり、一貫して投与終了と同時に回復傾向を示した。ある患者が他の患者より高感受性であり得るため、血液学変化を提案の臨床研究において厳格に監視し、予め特定したレベル以下の貧血が発生した患者に適切な措置が採られる。
【０２１５】
Ｈｕ５Ｆ９−Ｇ４に関連した貧血は、全サル研究の全体で部分的または完全に可逆的であり、投与を再開した動物を含め投与を中止した動物では治癒した。８週間の毒性学的研究のＨＮＳＴＤは、初回／維持用量が５／１００ｍｇ／ｋｇ（試験の最大用量）であった。毒物動態データに基づいて、８週間の毒性学研究で使用した５ｍｇ／ｋｇの初回刺激量は、計画した臨床試験において提案の開始初回刺激量０．１ｍｇ／ｋｇより２８倍〜１９４倍に及ぶ安全域（ＡＵＣに基づく）を提供することが予測される。週２回の１００ｍｇ／ｋｇの維持用量は、提案した臨床試験で予定した０．１ｍｇ／ｋｇの開始維持用量の７６６−８０３倍に及ぶ安全域（ＡＵＣに基づく）を提供することが予測される。
【０２１６】
要約すると、毒物学研究の結果に基づいて、非臨床的安全性評価プログラムは提案した臨床試験に関してＨｕ５Ｆ９−Ｇ４の投与（例えば、ＩＶ注入として）を支持する。
【図１】
2020128414.tif 000032
【図２】
2020128414.tif 000033
【図３】
2020128414.tif 000034
【図４】
2020128414.tif 000035
【図５】
2020128414.tif 000036
【図６】
2020128414.tif 000037
【図７】
2020128414.tif 000038
【図８】
2020128414.tif 000039
【図９】
2020128414.tif 000040
【図１０】
2020128414.tif 000041
【図１１】
2020128414.tif 000042
【図１２−１】
2020128414.tif 000043
【図１２−２】
2020128414.tif 000044
【図１３】
2020128414.tif 000045
【図１４】
2020128414.tif 000046
【図１５】
2020128414.tif 000047
【配列表】
2020128414000001.app