(57)【要約】      （修正有）【課題】T細胞共阻害因子リガンドのプログラム死リガンド1(PD-L1)タンパク質と結合する抗体、及び使用方法の提供。【解決手段】ヒトプログラム死リガンド1(PD-L1)タンパク質と結合する、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、特定のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域(HCVR)の３つの相補性決定領域(CDRs)（HCDR1、HCDR2、及びHCDR3）、及び、特定のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域(LCVR)の３つの相補性決定領域(CDRs)（LCDR1、LCDR2、及びLCDR3）を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Table 1(表1)に収載されている重鎖可変領域(HCVR)配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRの相補性決定領域(CDR)、及びTable 1(表1)に収載されている軽鎖
可変領域(LCVR)配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRのCDRを含む参
照抗体と、ヒトプログラム死リガンド1(PD-L1)タンパク質との結合について競合する、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体が、
(a)37℃で表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定して約310pM未満の結合解離平衡定数(KD)で単量体PD-L1に結合する特性、
(b)25℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて約180pM未満のKDで単量体ヒトPD-L1
に結合する特性、
(c)37℃で表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定して約15pM未満のKDで二量体ヒトPD-L1に結合する特性、及び
(d)25℃での表面プラズモン共鳴アッセイにおいて約8pM未満のKDで二量体ヒトPD-L1に
結合する特性
のうちの1つ又は複数の特性を有する、単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
参照抗体又はその抗原結合断片が、Table 1(表1)に記載のHCVR/LCVRアミノ酸配列対を
含む、請求項1に記載の単離された抗体又は抗原結合断片。
【請求項３】
参照抗体が、配列番号82/90、98/106、146/154、162/170、290/274、306/274、314/274及び330/274からなる群から選択されるHCVR/LCVRアミノ酸配列対を含む、請求項2に記載
の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
ヒトPD-L1と特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合断
片であって、Table 1(表1)に収載されているHCVR配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５】
ヒトPD-L1と特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合断
片であって、Table 1(表1)に収載されているLCVR配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６】
ヒトPD-L1と特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合断
片であって、(a)Table 1(表1)に収載されているHCVR配列からなる群から選択されるアミ
ノ酸配列を有するHCVRと、(b)Table 1(表1)に収載されているLCVR配列からなる群から選
択されるアミノ酸配列を有するLCVRとを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項７】
Table 1(表1)に収載されているHCVR配列のいずれか1つの中に含有されている3つの重鎖CDR(HCDR1、HCDR2及びHCDR3)と、Table 1(表1)に収載されているLCVR配列のいずれか1つ
の中に含有されている軽鎖CDR(LCDR1、LCDR2及びLCDR3)とを含む、請求項6に記載の単離
された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
(a)配列番号4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、188、204、220
、236、252、268、284、292、300、308、316、324、332及び340からなる群から選択され
るアミノ酸配列を有するHCDR1ドメインと、
(b)配列番号6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、190、206、222
、238、254、270、286、294、302、310、318、326、334及び342からなる群から選択され
るアミノ酸配列を有するHCDR2ドメインと、
(c)配列番号8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、192、208、224
、240、256、272、288、296、304、312、320、328、336及び344からなる群から選択され
るアミノ酸配列を有するHCDR3ドメインと、
(d)配列番号12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、196、212、228、244、260及び276からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCDR1ドメインと、
(e)配列番号14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、198、214、230、246、262及び278からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCDR2ドメインと、
(f)配列番号16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、200、216、232、248、264及び280からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCDR3ドメインと
を含む、請求項7に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
配列番号82/90、98/106、146/154、162/170、290/274、306/274、314/274及び330/274
からなる群から選択されるHCVR/LCVRアミノ酸配列対を含む、請求項8に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
PD-1又はB7-1の一方とのPD-L1の結合を遮断する単離された抗体又はその抗原結合断片
であって、配列番号2、34、50、82、98、146、162、178、186、234、250、266、290、306、314及び330からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRのCDR、及び配列番号10、42、58、90、106、154、170、194、242、258及び274からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRのCDRを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
PD-L1に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、PD-1又はB7-1の一方
とのPD-L1の結合を増進する、単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１２】
抗体が、配列番号18、66、114、130、202、218、282、298、322及び338からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRのCDR、及び配列番号26、74、122、138、210、226
及び274からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRのCDRを含む、請求項11に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１３】
抗体が、配列番号18/26、66/74、114/122、130/138、202/210、218/226、282/274、298/274、322/274及び338/274からなる群から選択されるHCVR/LCVRアミノ酸配列対を含む、
請求項11又は12に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１４】
抗体が、多重特異性抗原結合分子である、請求項1から13のいずれか一項に記載の抗体
又はその抗原結合断片。
【請求項１５】
請求項1から14のいずれか一項に記載のPD-L1と結合する単離された抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１６】
請求項1から7又は9から14のいずれか一項に記載の抗体のHCVRをコードするポリヌクレ
オチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１７】
請求項1から6又は8から14のいずれか一項に記載の抗体のLCVRをコードするポリヌクレ
オチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項１８】
請求項16又は17に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項１９】
請求項18に記載のベクターを発現する細胞。
【請求項２０】
PD-L1と特異的に結合する第1の抗原結合特異性と、腫瘍細胞特異的抗原、ウイルス感染細胞に特異的な抗原、及びT細胞共阻害因子からなる群から選択される抗原と特異的に結
合する第2の抗原結合特異性とを含む、多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２１】
第1の抗原結合特性が、Table 1(表1)に収載されている重鎖可変領域(HCVR)配列のいず
れか1つの中に含有されている3つの重鎖相補性決定領域(CDR)(HCDR1、HCDR2及びHCDR3)と、Table 1(表1)に収載されている軽鎖可変領域(LCVR)配列のいずれか1つの中に含有され
ている3つの軽鎖CDR(LCDR1、LCDR2及びLCDR3)とを含む、請求項20に記載の多重特異性抗
原結合分子又はその断片。
【請求項２２】
第1の抗原結合特異性が、Table 1(表1)に収載されているHCVR配列からなる群から選択
されるアミノ酸配列を有するHCVRと、Table 1(表1)に収載されているLCVR配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRとを含む、請求項21に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２３】
第1の抗原結合特異性が、配列番号82/90、98/106、146/154、162/170、290/274、306/274、314/274及び330/274からなる群から選択されるHCVR/LCVRアミノ酸配列対を含む、請
求項22に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２４】
第1の抗原結合特異性が、PD-1若しくはB7-1の一方の細胞外ドメイン又はその断片を含
む、請求項20に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２５】
第2の抗原結合特異性が、LAG3、TIM3、B7-1、CTLA-4、BTLA、CD28、2B4、LY108、TIGIT、ICOS及びCD160からなる群から選択されるT細胞共阻害因子と特異的に結合する、請求項20に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２６】
第2の抗原結合特異性が、CA9、CA125、黒色腫関連抗原(MAGE)、癌胎児抗原(CEA)、ビメンチン、腫瘍-M2-PK、前立腺特異的抗原(PSA)、MART-1及びCA19-9からなる群から選択さ
れる腫瘍細胞特異的抗原と特異的に結合する、請求項20から24のいずれか一項に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２７】
第2の抗原結合特異性が、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、C型肝炎ウイルス(HCV)、ヒト乳頭腫ウイルス(HPV)、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)及びサル免疫不全ウイルス(SIV)からなる群から選択されるウイルスに感染した細胞からの抗原と特異的に結合する、請求項20から24のいずれか一項に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２８】
腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌、非小細胞肺癌及び黒色腫からなる群から選択される癌の処置に使用するための、請求項20から26のいずれか一項に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項２９】
HIV、HPV、HBV、HCV、LCMV及びSIVからなる群から選択されるウイルスによって引き起
こされる慢性ウイルス感染症の処置に使用するための、請求項20から25又は27のいずれか一項に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項３０】
PD-L1と特異的に結合する第1の結合特異性と、PD-1若しくはB7-1の細胞外ドメイン又はその断片を含む第2の結合特異性とを含む、多重特異性抗原結合分子又はその抗原結合断
片。
【請求項３１】
腎細胞癌、結腸直腸癌、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、結腸癌、非小細胞肺癌及び黒色腫からなる群から選択される癌の処置に使用するための、請求項30に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項３２】
HIV、HPV、HBV、HCV、LCMV及びSIVからなる群から選択されるウイルスによって引き起
こされる慢性ウイルス感染症の処置に使用するための、請求項30に記載の多重特異性抗原結合分子又はその断片。
【請求項３３】
対象の免疫応答を増進する方法であって、請求項1から14のいずれか一項に記載の単離
された抗体若しくはその抗原結合断片又は請求項20から27若しくは30のいずれか一項に記載の多重特異性抗原結合分子若しくはその断片を含む医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【請求項３４】
対象の制御性T(Treg)細胞を阻害する方法であって、請求項1から14のいずれか一項に記載の単離されたヒト抗体若しくはその抗原結合断片又は請求項20から27若しくは30のいずれか一項に記載の多重特異性抗原結合分子若しくはその断片を含む医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【請求項３５】
対象のT細胞活性化を増進する方法であって、請求項1から14のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合断片又は請求項20から27若しくは30のいずれか一項に記載の多重特異性抗原結合分子若しくはその断片を含む医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【請求項３６】
対象が、腎細胞癌、卵巣癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌及び黒色腫からなる群から選択される疾患又は障害を有する、請求項33から35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
対象が、HIV、HCV、HBV、HPV、LCMV及びSIVからなる群から選択されるウイルスによっ
て引き起こされる慢性ウイルス感染症を有する、請求項33から35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
腫瘍又は腫瘍細胞の成長を阻害する方法であって、腫瘍又は腫瘍細胞を治療有効量の請求項1から14又は20から26のいずれか一項に記載の抗体と接触させる工程を含む方法。
【請求項３９】
抗体若しくはその抗原結合断片、又は抗体若しくはその抗原結合断片を含む医薬組成物が、第2の治療薬と併用して対象に投与される、請求項33から38のいずれか一項に記載の
方法。
【請求項４０】
第2の治療薬が、NSAID、コルチコステロイド、T細胞共阻害因子に対する抗体、腫瘍特
異的抗原に対する抗体、自己免疫組織抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、PD-1に対する抗体、抗酸化物質等の栄養補助食品、VEGFアンタゴニスト、化学療法薬、細胞傷害性薬剤及び抗ウイルス薬からなる群から選択される、請求項39に記載の方法。
【請求項４１】
抗体又はその抗原結合断片が、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内又は頭蓋内投与される、請求項33から40のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
抗体又はその抗原結合断片が、対象の体重1kgにつき約0.1mg〜約60mgの用量で投与される、請求項33から41のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫調節性受容体リガンドのプログラム死リガンド1(PD-L1)と特異的に結合するヒト抗体及びヒト抗体の抗原結合断片、並びにそれらの抗体を使用する治療及び診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
プログラム死リガンド1(PD-L1)(B7-H1又はCD274とも呼ばれる)は、リンパ系組織と非リンパ系組織両方、例えばCD4及びCD8 T細胞、マクロファージ系列細胞、末梢組織上ではもちろん、腫瘍細胞及びウイルス感染細胞上でも広範に発現される、290アミノ酸のタンパ
ク質受容体リガンドである(Dongら、1999、Nature Med.)。PD-L1は、T細胞共阻害性受容
体のCD28/CTLA-4(細胞傷害性Tリンパ球抗原)/ICOS(誘導性共刺激因子)ファミリー(Chenら、2013、Nature Rev. Immunol. 13:227〜242頁)に属する受容体PD-1及びB7-1と結合し、T細胞活性化を阻害することによって免疫応答を減弱する。PD-1又はB7-1とのPD-L1の結合
は、T細胞増殖及びサイトカイン分泌の減少をもたらし、その結果、癌及びウイルス感染
症等の疾患の際の液性及び細胞性免疫応答を損なわせる。
【０００３】
腫瘍細胞及びウイルス感染細胞上でのPD-L1の発現は、免疫応答を回避するために腫瘍
及び慢性ウイルス感染症によって利用される。PD-L1は多種多様な腫瘍上で発現され、動
物モデルでの研究によって、腫瘍上のPD-L1はT細胞活性化及び腫瘍細胞の溶解を阻害すること、並びに腫瘍特異的T細胞の死滅増加をもたらすことがあることが示されている。慢
性ウイルス感染症の場合、ウイルス感染細胞上で発現されたPD-L1はウイルス特異的T細胞上のPD-1と結合し、これらのT細胞は「疲弊」してエフェクター機能及び増殖能力を失う
ことになる(Freeman 2008、PNAS 105:10275〜10276頁)。PD-1:PD-L1系は、誘導制御性T(Treg)細胞発生及びTreg機能持続にも重要な役割を果たす(Franciscoら、2010、Immunol. Rev. 236:219〜242頁)。
【０００４】
PD-L1は、腫瘍免疫及び感染性免疫に重要な役割を果たすので、免疫療法の理想的な標
的である。モノクローナル抗体をはじめとするアンタゴニストでのPD-L1の遮断は、癌及
び慢性ウイルス感染症の処置に関して研究されている(Ribas 2012、NEJM 366:2517〜2519頁; Freeman 2008、PNAS 105:10275〜10276頁; Sheridan 2012、Nature Biotechnology 30:729〜730頁)。
【０００５】
PD-L1に対するモノクローナル抗体は当技術分野において公知であり、例えば米国特許
第7943742号、米国特許第8383796号、米国特許第8217149号、米国特許出願公開第2009/0055944号、米国特許出願公開第2012/0003056号、米国特許出願公開第2013/0034559号、米
国特許出願公開第2013/0045200号、米国特許出願公開第2013/0045201号、米国特許出願公開第2013/0045202号、及びWO2007/005874、WO2011/066389、WO2010/077634、EP1907424及びEP1899379に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第7943742号
【特許文献２】米国特許第8383796号
【特許文献３】米国特許第8217149号
【特許文献４】米国特許出願公開第2009/0055944号
【特許文献５】米国特許出願公開第2012/0003056号
【特許文献６】米国特許出願公開第2013/0034559号
【特許文献７】米国特許出願公開第2013/0045200号
【特許文献８】米国特許出願公開第2013/0045201号
【特許文献９】米国特許出願公開第2013/0045202号
【特許文献１０】WO2007/005874
【特許文献１１】WO2011/066389
【特許文献１２】WO2010/077634
【特許文献１３】EP1907424
【特許文献１４】EP1899379
【特許文献１５】米国特許第6,596,541号
【特許文献１６】米国特許出願第14/170,166号
【特許文献１７】米国特許出願公開第2004/0101920号
【特許文献１８】WO05/103081
【特許文献１９】米国特許出願第13/022759号
【特許文献２０】米国特許出願公開第2010/0331527号
【特許文献２１】米国特許第8257740号
【特許文献２２】米国特許第8246995号
【特許文献２３】米国特許第7,087,411号
【特許文献２４】米国特許出願公開第2007/0280945号A1
【特許文献２５】米国特許出願公開第2014/0088295号
【特許文献２６】米国特許出願公開第2010/0203056号A1
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Dongら、1999、Nature Med.
【非特許文献２】Chenら、2013、Nature Rev. Immunol. 13:227〜242頁
【非特許文献３】Freeman 2008、PNAS 105:10275〜10276頁
【非特許文献４】Franciscoら、2010、Immunol. Rev. 236:219〜242頁
【非特許文献５】Ribas 2012、NEJM 366:2517〜2519頁
【非特許文献６】Sheridan 2012、Nature Biotechnology 30:729〜730頁
【非特許文献７】Reddyら、2000、J. Immunol. 164:1925〜1933頁
【非特許文献８】Kabat、「Sequences of Proteins of Immunological Interest」、National Institutes of Health、Bethesda、Md.(1991)
【非特許文献９】Al-Lazikaniら、J. Mol. Biol. 273:927〜948頁(1997)
【非特許文献１０】Martinら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268〜9272頁(1989)
【非特許文献１１】Shieldら、(2002)JBC 277:26733頁
【非特許文献１２】Chattopadhyayら、2009、Immunol. Rev.
【非特許文献１３】Padlanら、1995 FASEB J.9:133〜139頁
【非特許文献１４】Vajdosら、2002 J Mol Biol 320:415〜428頁
【非特許文献１５】Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24:307〜331頁
【非特許文献１６】Gonnetら、(1992)Science 256:1443 45
【非特許文献１７】Altschulら(1990) J. Mol. Biol. 215:403〜410頁
【非特許文献１８】Altschulら(1997) Nucleic Acids Res. 25:3389〜3402頁
【非特許文献１９】Lloyd(1999)The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding
【非特許文献２０】Antibodies、Harlow及びLane、Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harbor、NY
【非特許文献２１】Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248:443〜63頁
【非特許文献２２】Tomer (2000) Prot. Sci. 9:487〜496頁
【非特許文献２３】Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267:252〜259頁
【非特許文献２４】Engen及びSmith (2001) Anal. Chem. 73:256A〜265A
【非特許文献２５】Junghansら、Cancer Res. 1990 50:1495〜1502頁
【非特許文献２６】Tuttら、1991、J. Immunol. 147:60〜69頁
【非特許文献２７】Kuferら、2004、Trends Biotechnol.22:238〜244頁
【非特許文献２８】Kleinら、2012、mAbs 4:6、1〜11頁
【非特許文献２９】Kazaneら、J. Am. Chem. Soc.(Epub:2012年12月4日)
【非特許文献３０】Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、PA
【非特許文献３１】Powellら、「Compendium of excipients for parenteral formulations」、PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52:238〜311頁
【非特許文献３２】Wuら、(1987) J. Biol. Chem. 262:4429〜4432頁
【非特許文献３３】Langer(1990)Science 249:1527〜1533頁
【非特許文献３４】Arruebo, M.ら、2009、「Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications」、J. Nanomat.第2009巻、Article ID 439389、24頁、doi:10. 1155/2009/439389
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、PD-L1に結合する抗体及びその抗原結合断片を提供する。本発明の抗体は、
とりわけ、PD-L1を発現する細胞、例えば癌細胞又はウイルス感染細胞の標的化に、及びPD-L1活性の調節に有用である。特定の実施形態において、本発明の抗体は、PD-L1活性の
阻害又は中和に有用であり、及びT細胞活性化を、例えばT細胞媒介死滅が有益である又は望ましい状況下で、刺激するのに有用である。本発明の抗PD-L1抗体又はそれらの抗原結
合部分を例えば多重特異性抗原結合分子の一部として含めて、免疫応答を調節すること及び/又は抗体を腫瘍細胞若しくはウイルス感染細胞等の特定の細胞タイプに標的化するこ
とができる。抗体は、癌及びウイルス感染症等の疾患又は障害の処置に有用である。
【０００９】
本発明の抗体は、完全長(例えば、IgG1又はIgG4抗体)でありえ、又は抗原結合部分[例
えば、Fab、F(ab')2又はscFv断片]しか含まないこともあり、機能性に影響を及ぼすよう
に、例えば残留エフェクター機能を除去するように、修飾されることもある(Reddyら、2000、J. Immunol. 164:1925〜1933頁)。特定の実施形態において、抗体は、二重特異性で
ありうる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
第1の態様において、本発明は、PD-L1と特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を提供する。本発明の例示的抗PD-L1抗体は、本明細書のTable 1(表1)及び2(表2)に収載されている。Table 1(表1)は、例示的抗PD-L1抗体の重鎖可変領域(HCVR)、軽鎖可変領域(LCVR)、重鎖相補性決定領域(HCDR1、HCDR2及びHCDR3)、及び軽鎖
相補性決定領域(LCDR1、LCDR2及びLCDR3)のアミノ酸配列識別子を示す。Table 2(表2)は
、例示的抗PD-L1抗体のHCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及びLCDR3の核
酸配列識別子を示す。
【００１１】
本発明は、HCVRを含む抗体又はその抗原結合断片であって、HCVRが、Table 1(表1)に収載されているHCVRアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、又はそのアミノ酸配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【００１２】
本発明は、LCVRを含む抗体又はその抗原結合断片であって、LCVRが、Table 1(表1)に収載されているLCVRアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、又はそのアミノ酸配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片
も提供する。
【００１３】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているLCVRアミノ酸配列のいずれかと対合しているTable 1(表1)に収載されているHCVRアミノ酸配列のいずれかを含むHCVRとLCVRのアミノ酸配列対(HCVR/LCVR)を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。特定の実施形態によ
ると、本発明は、Table 1(表1)に収載されている例示的抗PD-L1抗体のいずれかの中に含
有されているHCVR/LCVRアミノ酸配列対を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供する。
特定の実施形態において、HCVR/LCVRアミノ酸配列対は、配列番号2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/170、186/194、202/210、218/226、234/242、250/258、266/274、282/274、290/274、298/274、306/274、314/274、322/274、330/274、及び338/274からなる群から選択される。特定の実施形
態において、HCVR/LCVRアミノ酸配列対は、配列番号82/90(例えばH2M8314N)、162/170(例えばH2M8718N)、306/274(例えばH1H9364P2)、及び314/274(例えばH1H9373P2)のものから
選択される。特定の他の実施形態において、HCVR/LCVRアミノ酸配列対は、配列番号98/106(例えばH2M8316N)、146/154(例えばH2M8323N)、290/274(例えばH1H9351P2)、及び330/274(例えばH1H9387P2)のものから選択される。
【００１４】
本発明は、重鎖CDR1(HCDR1)を含む抗体又はその抗原結合断片であって、HCDR1が、Table 1(表1)に収載されているHCDR1アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、
又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。
【００１５】
本発明は、重鎖CDR2(HCDR2)を含む抗体又はその抗原結合断片であって、HCDR2が、Table 1(表1)に収載されているHCDR2アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、
又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。
【００１６】
本発明は、重鎖CDR3(HCDR3)を含む抗体又はその抗原結合断片であって、HCDR3が、Table 1(表1)に収載されているHCDR3アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、
又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。
【００１７】
本発明は、軽鎖CDR1(LCDR1)を含む抗体又はその抗原結合断片であって、LCDR1が、Table 1(表1)に収載されているLCDR1アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、
又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。
【００１８】
本発明は、軽鎖CDR2(LCDR2)を含む抗体又はその抗原結合断片であって、LCDR2が、Table 1(表1)に収載されているLCDR2アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、
又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。
【００１９】
本発明は、軽鎖CDR3(LCDR3)を含む抗体又はその抗原結合断片であって、LCDR3が、Table 1(表1)に収載されているLCDR3アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、
又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性
を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。
【００２０】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているLCDR3アミノ酸配列のいずれかと対合してい
るTable 1(表1)に収載されているHCDR3アミノ酸配列のいずれかを含むHCDR3とLCDR3のア
ミノ酸配列対(HCDR3/LCDR3)を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。特定の実施
形態によると、本発明は、Table 1(表1)に収載されている例示的抗PD-L1抗体のいずれか
の中に含有されているHCDR3/LCDR3アミノ酸配列対を含む、抗体又はその抗原結合断片を
提供する。特定の実施形態において、HCDR3/LCDR3アミノ酸配列対は、配列番号88/96(例
えばH2M8314N)、168/176(例えばH2M8718N)、312/280(例えばH1H9364P2)、及び320/280(例えばH1H9373P2)からなる群から選択される。特定の他の実施形態において、HCDR3/LCDR3
アミノ酸配列対は、配列番号104/112(例えばH2M8316N)、152/160(例えばH2M8323N)、296/280(例えばH1H9351P2)、及び336/280(例えばH1H9387P2)からなる群から選択される。
【００２１】
本発明は、Table 1(表1)に収載されている例示的抗PD-L1抗体のいずれかの中に含有さ
れている6個1セットのCDR(すなわち、HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)を含む、抗体又はその抗原結合断片も提供する。特定の実施形態において、HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3アミノ酸配列セットは、配列番号84-86-88-92-94-96(例えばH2M8314N);164-166-168-172-174-176(例えばH2M8718N);308-310-312-276-278-280(例えばH1H9364P2);及び316-318-320-276-278-280(例えばH1H9373P2)からなる群から選択される。特定の他の実施形態において、HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3アミノ酸配列セットは、配列番
号100-102-104-108-110-112(例えばH2M8316N);148-150-152-156-158-160(例えばH2M8323N);292-294-296-276-278-280(例えばH1H9351P2);及び332-334-336-276-278-280(例えばH1H9387P2)からなる群から選択される。
【００２２】
関連実施形態において、本発明は、Table 1(表1)に収載されている例示的抗PD-L1抗体
のいずれかによって定義されるようなHCVR/LCVRアミノ酸配列対の中に含有されている6個1セットのCDR(すなわち、HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)を含む、抗体又はその
抗原結合断片を提供する。例えば、本発明は、配列番号82/90(例えばH2M8314N)、98/106(例えばH2M8316N)、146/154(例えばH2M8323N)、162/170(例えばH2M8718N)、290/274(例え
ばH1H9351P2)、306/274(例えばH1H9364P2)、314/274(例えばH1H9373P2)及び330/274(例えばH1H9387P2)からなる群から選択されるHCVR/LCVRアミノ酸配列対の中に含有されているHCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3アミノ酸配列セットを含む、抗体又はその抗原結合断片を含む。HCVR及びLCVRアミノ酸配列中のCDRを同定する方法及び技術は、当技術分野
において周知であり、そのような方法及び技術を用いて、本明細書において開示する特定HCVR及び/又はLCVRアミノ酸配列中のCDRを同定することができる。CDRの境界を同定する
ために使用することができる例示的規約としては、例えばカバット(Kabat)定義、コチア(Chothia)定義及びAbM定義が挙げられる。一般論として、カバット定義は、配列多様性に
基づき、コチア定義は、構造ループ領域の位置に基づき、AbM定義は、カバットアプロー
チとコチアアプローチの折衷案である。例えば、Kabat、「Sequences of Proteins of Immunological Interest」、National Institutes of Health、Bethesda、Md.(1991);Al-Lazikaniら、J. Mol. Biol. 273:927〜948頁(1997);及びMartinら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268〜9272頁(1989)を参照されたい。公開データベースも抗体中のCDR配列の同定に利用可能である。
【００２３】
本発明は、修飾グリコシル化パターンを有する抗PD-L1抗体を含む。いくつかの実施形
態において、望ましくないグリコシル化部位を除去するための修飾は有用でありえ、又はオリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠いている抗体は、例えば抗体依存性細胞傷害(ADCC)機能を増加させるのに有用でありうる(Shieldら、(2002)JBC 277:26733頁を参照されたい)。他の応用例では、ガラクトシル化の修飾を行って、補体依存性細胞傷害(CDC)を修
飾することができる。
【００２４】
本発明は、HCVR及びLCVR各々がTable 1(表1)に収載されているHCVR及びLCVR配列から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRのCDR及びLCVRのCDRを含む抗体又はその抗原結合断片と、PD-L1との特異的結合について競合する、抗体及びその抗原結合断片も提供する。
【００２５】
本発明は、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を遮断する単離された抗体及びその抗原
結合断片も提供する。いくつかの実施形態において、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合
を遮断する抗体及びその抗原結合断片は、PD-L1上のPD-1/B7-1と同じエピトープと結合することもあり、又はPD-L1上のPD-1/B7-1とは異なるエピトープと結合することもある。特定の実施形態において、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を遮断する本発明の抗体は、Table 1(表1)に収載されているHCVR配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRのCDRと、Table 1(表1)に収載されているLCVR配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRのCDRとを含む。
【００２６】
代替実施形態において、本発明は、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を遮断しない抗
体及びその抗原結合断片も提供する。特定の実施形態において、本発明は、PD-L1に結合
する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合
を増進する抗体又はその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態において、PD-1/B7-1とのPD-L1の結合を増進する単離された抗体又はその抗原結合断片は、配列番号18、66、114、130、202、218、266、282、298、322及び338からなる群から選択されるアミノ酸
配列を有するHCVRのCDR、及び配列番号26、74、122、138、210、226及び274からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRのCDRを含む。いくつかの実施形態において、単
離された抗体又はその抗原結合断片は、配列番号18/26(例えばH2M8307N)、66/74(例えばH2M8312N)、114/122(例えばH2M8317N)、130/138(例えばH2M8321N)、202/210(例えばH1H9323P)、218/226(例えばH1H9327P)、266/274(例えばH1H9344P2)、282/274(例えばH1H9345P2)、298/274(例えばH1H9354P2)、322/274(例えばH1H9382P2)及び338/274(例えばH1H9396P2)からなる群から選択されるHCVR/LCVRアミノ酸配列対を含む。
【００２７】
本発明は、ヒト又は他の種からのPD-L1と特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片
も提供する。特定の実施形態において、抗体は、ヒトPD-L1と結合することもあり、及び/又はカニクイザルPD-L1と結合することもある。
【００２８】
本発明は、HCVR及びLCVR各々がTable 1(表1)に収載されているHCVR及びLCVR配列から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRのCDR及びLCVRのCDRを含む参照抗体又はその抗原結合断片と、PD-L1との結合について交差競合する抗体及びその抗原結合断片も提供する。
【００２９】
一実施形態において、本発明は、(a)PD-L1のPD-1との又はB7-1との結合を遮断する特性、(b)ヒトPD-L1及び/又はカニクイザルPD-L1と特異的に結合する特性、(c)混合リンパ球
反応(MLR)アッセイにおいてT細胞増殖を刺激する特性、並びに(d)MLRアッセイにおいてIL-2及び/又はインターフェロン-γ分泌を増加させる特性のうちの1つ又は複数を有する、
単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。
【００３０】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アゴニスト様式でPD-L1と特
異的に結合することもあり、すなわち、PD-L1結合及び/又は活性を増進又は刺激することもある。他の実施形態では、抗体は、アンタゴニスト様式でPD-L1と特異的結合すること
もあり、すなわち、PD-L1をその受容体に結合しないように遮断することもある。
【００３１】
特定の実施形態において、本発明の抗体又は抗原結合断片は、PD-L1への第1の結合特異性と第2の標的エピトープに対する第2の結合特異性とを含む、二重特異性である。第2の
標的エピトープは、PD-L1上の別のエピトープであることもあり、又はT細胞共阻害因子等の異なるタンパク質上の別のエピトープであることもある。特定の実施形態において、標的エピトープは、例えば異なるT細胞、B細胞、腫瘍細胞、自己免疫組織細胞又はウイルス感染細胞を含む、異なる細胞上にあることがある。
【００３２】
第2の態様において、本発明は、抗PD-L1抗体又はそれらの一部分をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、Table 1(表1)に収載されているHCVRアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているHCVR核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレオチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少
なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列
を含む。
【００３３】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているLCVRアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているLCVR核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレオチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００３４】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているHCDR1アミノ酸配列のいずれかをコードする
核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているHCDR1核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレ
オチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００３５】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているHCDR2アミノ酸配列のいずれかをコードする
核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているHCDR2核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレ
オチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００３６】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているHCDR3アミノ酸配列のいずれかをコードする
核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているHCDR3核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレ
オチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００３７】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているLCDR1アミノ酸配列のいずれかをコードする
核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているLCDR1核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレ
オチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００３８】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているLCDR2アミノ酸配列のいずれかをコードする
核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているLCDR2核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレ
オチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００３９】
本発明は、Table 1(表1)に収載されているLCDR3アミノ酸配列のいずれかをコードする
核酸分子を提供し、特定の実施形態では、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているLCDR3核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレ
オチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列を含む。
【００４０】
本発明は、HCVRをコードする核酸分子であって、HCVRが、3個1セットのCDR(すなわち、HCDR1-HCDR2-HCDR3)を含み、HCDR1-HCDR2-HCDR3アミノ酸配列セットが、Table 1(表1)に
収載されている例示的抗PD-L1抗体のいずれかによって定義される通りである、核酸分子
も提供する。
【００４１】
本発明は、LCVRをコードする核酸分子であって、LCVRが、3個1セットのCDR(すなわち、LCDR1-LCDR2-LCDR3)を含み、LCDR1-LCDR2-LCDR3アミノ酸配列セットが、Table 1(表1)に
収載されている例示的抗PD-L1抗体のいずれかによって定義される通りである、核酸分子
も提供する。
【００４２】
本発明は、HCVRとLCVRの両方をコードする核酸分子であって、HCVRが、Table 1(表1)に収載されているHCVRアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、LCVRが、Table 1(表1)に収載されているLCVRアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む、核酸も提供する。特定の実施形態において、核酸分子は、Table 2(表2)に収載されているHCVR核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレオチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列と、Table 2(表2)に収載されているLCVR核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、又はそれらのポリヌクレオチド配列と少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそれらのポリヌクレオチド配列の実質的に類似の配列とを含む。本発明のこの態様の特定の実施形態において、核酸分子はHCVR及びLCVRをコードし、HCVR及びLCVRは、両方とも、Table 1(表1)に収載されている同じ抗PD-L1抗体に由来する。
【００４３】
関連態様において、本発明は、抗PD-L1抗体の重鎖又は軽鎖可変領域を含むポリペプチ
ドを発現できる組換え発現ベクターを提供する。例えば、本発明は、上述の核酸分子、すなわちTable 1(表1)に記載のHCVR、LCVR及び/又はCDR配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む、組換え発現ベクターを含む。本発明の範囲には、そのようなベクターが導入された宿主細胞、並びに抗体又は抗体断片の生成を可能にする条件下で宿主細胞を培養し、そのように生成された抗体及び抗体断片を回収することによって、抗体又はそれらの部分を生成する方法も含まれる。
【００４４】
第3の態様において、本発明は、PD-L1と特異的に結合する第1の抗原結合特異性と、PD-L1、腫瘍細胞特異的抗原、感染細胞特異的抗原及びT細胞共阻害因子からなる群から選択
される抗原と特異的に結合する第2の抗原結合特異性とを含む、多重特異性抗原結合分子
及びその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態において、第1の抗原結合特異性は、Table 1(表1)中のHCVR配列から選択されるアミノ酸配列を有するHCVRに由来する3つのCDR
と、Table 1(表1)中のLCVR配列から選択されるアミノ酸配列を有するLCVRに由来する3つ
のCDRとを含むことがある。一実施形態において、第1の抗原結合特異性は、PD-1の若しくはB7-1の細胞外ドメインを含むこともあり、又はそれらの断片を含むこともある。第2の
抗原結合特異性は、PD-L1と同じ細胞上の抗原を標的にすることもあり、又は同じ組織タ
イプの異なる細胞上の抗原を標的にすることもあり、又は異なる組織タイプの異なる細胞上の抗原を標的にすることもある。例えば、多重特異性抗原結合分子は、T細胞に結合す
ることがあり、第1の抗原結合特異性は、PD-L1と特異的に結合することがあり、第2の抗
原結合特異性は、T細胞上のT細胞共阻害因子と結合することがある。或いは、別の実施形態において、第1の抗原結合特異性は、T細胞上のPD-L1と特異的に結合し、第2の抗原結合
特異性は、B細胞又はマクロファージ又は抗原提示細胞上の抗原/受容体に標的化される。特定の実施形態において、第2の抗原結合特異性は、腫瘍細胞上の抗原、又はウイルスに
感染した細胞上の抗原に向けられる。一実施形態において、第1の抗原結合特異性は、PD-1の細胞外ドメインを含み、第2の抗原結合特異性は、PD-L1上の異なるエピトープと特異
的に結合する。特定の実施形態において、第1の抗原結合特異性は、より低い親和性で、
例えば、10-8Mより大きい、10-7Mより大きい、10-6Mより大きい、又は10-5Mより大きいKDで、PD-L1と特異的に結合する。
【００４５】
第4の態様において、本発明は、PD-L1に特異的に結合する組換えヒト抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。関連態様において、本発明は、抗PD-L1抗体と第2の治療薬の組み合わせである組成物を特徴とする。一実施形態において、第2の治療薬は、抗PD-L1抗体と有利に併用される任意の薬剤である。抗PD-L1抗体と有利に併用することができる例示的薬剤としては、限定ではないが、PD-L1に結合する及び/若しくはPD-L1シグナル伝達を調節する他の薬剤(他の抗体若しくはその抗原
結合断片等を含む)、並びに/又はPD-L1に直接結合せず、それにもかかわらず免疫細胞活
性化を調節する薬剤が挙げられる。本発明の抗PD-L1抗体及び多重特異性抗原結合分子を
含む更なる併用療法及び共製剤は、本明細書中の他の箇所で開示する。
【００４６】
第5の態様において、本発明は、対象の免疫応答を調節する方法であって、それを必要
とする対象に本発明の抗PD-L1抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを
含む方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、対象の免疫応答を増進する方法であって、PD-L1に結合し、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を遮断する本発明の抗体又はその断片の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、対象のT細胞活性化を刺激又は増進する方法であって、それを必要とする対
象に本発明の遮断抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、対象の制御性T(Treg)細胞を阻害する方法であって、それを
必要とする対象に本発明の遮断抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態において、それを必要とする対象は、癌又はウイルス感染症等の疾患又は障害に罹患していることがある。代替実施形態において、本発明は、T細胞活性
化を阻害する方法であって、それを必要とする対象に本発明の活性化抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む方法を提供する。特定の更なる実施形態において、それを必要とする対象は、自己免疫疾患に罹患していることがある。
【００４７】
第6の態様において、本発明は、本発明の抗PD-L1抗体又は抗体の抗原結合部分を使用して対象の疾患又は障害、例えば癌又はウイルス感染症を処置する治療方法であって、それを必要とする対象に本発明の抗体又は抗体の断片を含む医薬組成物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。処置される障害は、PD-L1結合又は活性を刺激又は阻害す
ることによって向上、改善、阻害又は予防される任意の疾患又は状態である。特定の実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合断片は、それを必要とする対象に第2の治
療薬と併用して投与される。第2の治療薬は、T細胞共阻害因子に対する抗体、腫瘍細胞抗原に対する抗体、T細胞受容体に対する抗体、Fc受容体に対する抗体、ウイルス感染細胞
上のエピトープに対する抗体、PD-1に対する抗体、細胞傷害性薬剤、抗癌薬、抗ウイルス薬、抗炎症薬(例えばコルチコステロイド)、VEGFアンタゴニスト及び当技術分野において公知の任意の他の薬物又は治療法からなる群から選択することができる。特定の実施形態において、第2の治療薬は、本発明の抗体又はその抗原結合断片に関連した何らかの起こ
りうる副作用を、そのような副作用が起こった場合、相殺又は低減するのに役立つ薬剤でありうる。
【００４８】
特定の実施形態において、本発明は、腫瘍成長を抑制する方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、癌患者の生存時間を増す方法を提供する。癌の例としては、脳
癌(例えば多形神経膠芽腫)、肺癌(例えば非小細胞肺癌)、頭頸部扁平上皮癌、腎細胞癌、黒色腫、多発性骨髄腫、前立腺癌及び結腸癌を含む、原発及び/又は再発癌が挙げられる
が、これらに限定されない。方法は、血管内皮増殖因子(VEGF)アンタゴニスト(例えばア
フリベルセプト、ベバシズマブ)、アンジオポエチン-2(Ang2)阻害剤(例えば、抗Ang2抗体、例えばネスバクマブ)、リンパ球活性化遺伝子3(LAG-3)阻害剤、細胞傷害性T-リンパ球
抗原4(CTLA-4)阻害剤(例えばイピリムマブ)、CCR4阻害剤(例えばモガムリズマブ)、化学
療法薬及び放射線療法からなる群から選択される第2の治療薬との組み合わせで本発明の
抗PD-L1抗体の治療有効量を含む医薬組成物を投与すること含む。癌の処置に使用するた
めに本発明の抗PD-L1抗体と併用することができる更なる治療法/治療薬の更なる例は、本明細書中の他の箇所で説明する。
【００４９】
抗体又はその断片を皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内又は頭蓋内投与することができる。抗体又はその断片を対象の体重1kgにつき約0.1mg〜約100mgの用量で投与す
ることができる。
【００５０】
本発明は、PD-L1結合及び/又はシグナル伝達の遮断又は増進の恩恵を受ける疾患又は障害(例えば癌及び慢性ウイルス感染症)の処置のための医薬品の製造における、本発明の抗PD-L1抗体又はその抗原結合断片の使用も含む。
【００５１】
他の実施形態は、後に続く詳細な説明の総説から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１Ａ】本明細書の実施例8に記載するルシフェラーゼベースのPD-L1バイオアッセイの概略図である。パネルA:不活性ジャーカット細胞。
【図１Ｂ】本明細書の実施例8に記載するルシフェラーゼベースのPD-L1バイオアッセイの概略図である。パネルB:ジャーカット細胞はCD3xCD20二重特異性抗体によるT細胞受容体(TCR)クラスター化によって活性化される。
【図１Ｃ】本明細書の実施例8に記載するルシフェラーゼベースのPD-L1バイオアッセイの概略図である。パネルC:PD-1活性化は活性化されたジャーカット細胞における応答を減弱する。
【図１Ｄ】本明細書の実施例8に記載するルシフェラーゼベースのPD-L1バイオアッセイの概略図である。パネルD:PD-L1の遮断は、活性化されたジャーカット細胞における応答をレスキューする。
【図２】0日目にColon-26腫瘍細胞を移植し、示されている分子の組み合わせで3、6、10、13及び19日目に注射によって処置したマウス(「早期処置腫瘍モデル」)についての腫瘍成長及び生存結果を例証する図である。このグラフは、移植後様々な時点での様々な実験群についての腫瘍体積(mm3)を示す。X軸に沿って上向きの矢印は、処置注射のタイミングを示す。「mlgG2a」は、IgG2アイソタイプ対照であり、「Fc」は、ヒトFc対照であり、「VEGFトラップ」は、アフリベルセプトであり、「抗PD-1」は、抗マウスPD-1クローンRPMI-14であり、「抗PD-L1」は、本明細書中の他の箇所に記載の抗PD-L1モノクローナル抗体である。
【図３】0日目にColon-26腫瘍細胞を移植し、示されている分子の組み合わせで3、6、10、13及び19日目に注射によって処置したマウス(「早期処置腫瘍モデル」)についての腫瘍成長及び生存結果を例証する図である。このグラフは、移植後28日目の時点での各実験群における個々のマウスについての腫瘍体積(mm3)を示す。「mlgG2a」は、IgG2アイソタイプ対照であり、「Fc」は、ヒトFc対照であり、「VEGFトラップ」は、アフリベルセプトであり、「抗PD-1」は、抗マウスPD-1クローンRPMI-14であり、「抗PD-L1」は、本明細書中の他の箇所に記載の抗PD-L1モノクローナル抗体である。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本発明の方法を説明する前に、本発明が、説明する特定の方法及び実験条件に限定されないことを理解すべきである。そのような方法及び条件は変わることがあるからである。本明細書において用いる専門用語は、特定の実施形態の説明を目的にしたものに過ぎず、限定することを意図したものでないことも理解すべきである。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるからである。
【００５４】
別段の定義がない限り、本明細書において用いる全ての専門及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様又は等価の任意の方法及び材料を本発明の実施又は試験の際に使用することができるが、好ましい方法及び材料を次に説明する。本明細書において言及する全ての出版物は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００５５】
用語「PD-L1」は、CD274及びB7H1としても公知のプログラム死リガンド1を指す。完全
長PD-L1のアミノ酸配列は、GenBankに受託番号NP_054862.1として提供されており、本明
細書では配列番号351とも呼ばれる。用語「PD-L1」は、配列番号345、346、347又は348のアミノ酸配列を有するPD-L1のタンパク質変異体も含む。用語「PD-L1」は、組換えPD-L1
又はその断片を含む。この用語は、例えばヒスチジンタグ、マウス若しくはヒトFc、又はROR1等のシグナル配列と結合している、PD-L1又はその断片も包含する。例えば、この用
語は、完全長PD-L1(配列番号351、NP_054862.1)のアミノ酸残基19〜239と結合しているマウスFc(mIgG2a)又はヒトFc(hIgG1)をC末端に含む、配列番号347又は348によって例示される配列を含む。配列番号345によって例示されるようなタンパク質変異体は、NP_054862.1のアミノ酸残基19〜239と結合しているヒスチジンタグをC末端に含む。非ヒト種からのものであるという明記がない限り、用語「PD-L1」は、ヒトPD-L1を意味する。
【００５６】
PD-L1は、細胞外IgV様及びIgC様ドメイン(完全長PD-L1のアミノ酸19〜239)と膜貫通ド
メインとおおよそ30アミノ酸の細胞内ドメインとを有する、290アミノ酸のタンパク質で
ある。PD-L1は、抗原提示細胞(例えば樹状細胞、マクロファージ及びB細胞)等の多くの細胞上で、並びに造血及び非造血細胞(例えば血管内皮細胞、膵島、及び免疫特権部位)上で構成的に発現される。PD-L1は、多種多様な腫瘍及びウイルス感染細胞上でも発現され、
免疫抑制環境の構成要素である(Ribas 2012, NEJM 366:2517〜2519頁)。PD-L1は、2つのT細胞共阻害因子PD-1及びB7-1の一方と結合する。
【００５７】
用語「PD-1」は、CD279としても公知のプログラム死-1タンパク質、T細胞共阻害因子を指す。完全長PD-1のアミノ酸配列は、GenBankに受託番号NP_005009.2として提供されており、本明細書では配列番号352とも呼ばれる。この用語は、例えばヒスチジンタグ、マウ
ス若しくはヒトFc、又はROR1等のシグナル配列と結合している、PD-1又はその断片も包含する。例えば、この用語は、C93S変化があるNP_005009.2のアミノ酸残基25〜170と結合しているマウスFc(mIgG2a)又はヒトFc(hIgG1)をC末端に含む配列番号349又は350によって例示される配列を含む。
【００５８】
PD-1は、T細胞共阻害因子のCD28/CTLA-4/ICOSファミリーのメンバーである。PD-1は、IgV様である細胞外N末端ドメインと、膜貫通ドメインと、免疫受容体阻害性チロシンモチ
ーフ(ITIM)及び免疫受容体互換性チロシンモチーフ(ITSM)を含有する細胞内ドメインとを有する、288アミノ酸のタンパク質である(Chattopadhyayら、2009、Immunol. Rev.)。PD-1受容体は、2つのリガンド、PD-L1及びPD-L2を有する。
【００５９】
用語「B7-1」は、共刺激性因子CD80としても公知のTリンパ球活性化抗原を指す。B7-1
は、IgV様(aa 37〜138)及びIgC様(aa 154〜232)領域を含む細胞外N末端ドメインと、膜貫通ドメイン(aa 243〜263)と、C末端細胞内領域(aa 263〜288)とを有する、288アミノ酸の膜受容体である。完全長B7-1のアミノ酸配列は、GenBankに受託番号NP_005182.1として提
供されている。
【００６０】
本明細書で用いる場合、用語「T細胞共阻害因子」は、T細胞活性化又は抑制によって免疫応答を調節する、リガンド及び/又は受容体を指す。用語「T細胞共阻害因子」は、T細
胞共シグナル伝達分子としても公知であり、PD-1、リンパ球活性化遺伝子3タンパク質[LAG-3(CD223としても公知)]、細胞傷害性Tリンパ球抗原4(CTLA-4)、B及びTリンパ球アテニ
ュエーター(BTLA)、CD-28、2B4、LY108、T細胞免疫グロブリン及びムチン-3(TIM3)、免疫グロブリン及びITIMを有するT細胞免疫受容体[TIGIT(VSIG9としても公知)]、白血球関連
免疫グロブリン様受容体1[LAIR1(CD305としても公知)]、誘導性T細胞共刺激因子[ICOS(CD278としても公知)]、B7-1(CD80)、並びにCD160を含むが、これらに限定されない。
【００６１】
用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、4本のペプチド鎖、すなわちジスルフィド結
合によって相互に連結されている2本の重(H)鎖と2本の軽(L)鎖、からなる免疫グロブリン分子(すなわち「完全抗体分子」)はもちろん、それらの多量体(例えばIgM)又はその抗原
結合断片も指すことを意図する。各重鎖は、重鎖可変領域(「HCVR」又は「VH」)及び重鎖定常領域(ドメインCH1、CH2及びCH3からなる)からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域(「LCVR」又は「VL」)及び軽鎖定常領域(CL)からなる。VH及びVL領域は、フレームワーク領域(FR)と称する、より保存される領域が散在している、相補性決定領域(CDR)と称する超可変性の領域に、更に細分することができる。各VH及びVLは、3つのCDR及び4つのFRからなり、
アミノ末端からカルボキシ末端へ次の順序で配置されている:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。本発明の特定の実施形態において、抗体(又はその抗原結合断片)のFRは、
ヒト生殖細胞系列配列と同一であることもあり、又は天然に若しくは人工的に修飾されていることもある。アミノ酸コンセンサス配列は、2つ以上のCDRの並行分析に基づいて定義することができる。
【００６２】
1つ若しくは複数のCDR残基の置換、又は1つ若しくは複数のCDRの削除も可能である。1
つ又は2つのCDRがなくても結合することができる抗体が科学文献に記載されている。Padlanら(1995 FASEB J. 9:133〜139頁)は、公開されている結晶構造に基づいて抗体とその抗原の間の定常領域を分析し、CDR残基の約5分の1〜3分の1しか実際には抗原と接触しない
と結論付けた。Padlanは、1つ又は2つのCDRが、抗原と接触しているアミノ酸を有さない
、多くの抗体も発見した(Vajdosら、2002 J Mol Biol 320:415〜428頁も参照されたい)。
【００６３】
抗原と接触していないCDR残基は、分子モデリングにより及び/又は経験的に、コチアCDRの外側にあるカバットCDR領域から、以前の研究(例えば、CDRH2内の残基H60〜H65は必要とされないことが多い)に基づいて同定することができる。CDR又はその残基は、削除される場合、別のヒト抗体配列又はそのような配列のコンセンサス配列内の対応する位置を占めるアミノ酸で通常は置換される。CDR内の置換位置及び置換するためのアミノ酸も経験
的に選択することができる。経験的置換は、保存的置換であることもあり、又は非保存的置換であることもある。
【００６４】
本明細書において開示する完全ヒト抗PD-L1モノクローナル抗体は、対応する生殖細胞
系列配列と比較して、重鎖及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク及び/又はCDR領域に1
つ又は複数のアミノ酸置換、挿入及び/又は欠失を含むことがある。そのような突然変異
は、本明細書において開示するアミノ酸配列を例えば公開抗体配列データベースから入手できる生殖細胞系列配列と比較することによって、容易に突き止めることができる。本発明は、本明細書において開示するアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体及びその抗原結合断片であって、1つ又は複数のフレームワーク及び/又はCDR領域内の1個又は複数のアミノ酸が、抗体が由来した生殖細胞系列配列の対応する残基に、又は別のヒト生殖細胞系列配列の対応する残基に、又は対応する生殖細胞系列残基の保存的アミノ酸置換に突然変異されている(このような配列変化を本明細書ではまとめて「生殖細胞系列突然変異」と呼
ぶ)、抗体及びその抗原結合断片を含む。当業者は、本明細書に開示する重鎖及び軽鎖可
変領域配列で出発して、1つ又は複数の個々の生殖細胞系列突然変異又はそれらの組み合
わせを含む多数の抗体及び抗原結合断片を容易に生成することができる。特定の実施形態では、VH及び/又はVLドメイン内のフレームワーク及び/又はCDR残基の全てが、抗体が由
来した元の生殖細胞系列配列内で見つけられる残基に復帰突然変異されている。他の実施形態では、特定の残基のみ、例えば、FR1の最初の8アミノ酸内若しくはFR4の最後の8アミノ酸内で見つけられる突然変異残基のみ、又はCDR1、CDR2若しくはCDR3内で見つけられる突然変異残基のみが、元の生殖細胞系列配列に復帰突然変異されている。他の実施形態では、フレームワーク及び/又はCDR残基の1つ又は複数が、異なる生殖細胞系列配列(すなわち、抗体が当初由来した生殖細胞系列配列とは異なる生殖細胞系列配列)の対応する残基
に突然変異されている。更に、本発明の抗体は、フレームワーク及び/又はCDR領域内に、2つ以上の生殖細胞系列突然変異の何らかの組み合わせ、例えば、特定の個々の残基を特
定の生殖細胞系列配列の対応する残基に突然変異されているが、元の生殖細胞系列配列とは異なる特定の他の残基は維持されているか、又は異なる生殖細胞系列配列の対応する残基に突然変異されている組み合
わせを含有することもある。1つ又は複数の生殖細胞系列突然変異を含有する抗体及び抗
原結合断片は、ひとたび得らたら、1つ又は複数の所望の特性、例えば、結合特異性改善
、結合親和性増加、(場合によって)アンタゴニスト又はアゴニスト生物学的特性改善又は向上、免疫原性低減等について容易に試験することができる。この一般的手法で得られる抗体及び抗原結合断片は、本発明に包含される。
【００６５】
本発明は、1つ又は複数の保存的置換を有する本明細書において開示するHCVR、LCVR及
び/又はCDRアミノ酸配列のいずれかについての変異体を含む完全ヒト抗PD-L1モノクロー
ナル抗体も含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書において開示するHCVR、LCVR及び/又はCDRアミノ酸配列のいずれかと比較して10以下、8以下、6以下、4以下等の保存的ア
ミノ酸置換がある、HCVR、LCVR及び/又はCDRアミノ酸配列を有する抗PD-L1抗体を含む。
【００６６】
用語「ヒト抗体」は、本明細書で用いる場合、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本発明のヒトmAbは、ヒ
ト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基(例えば、イン
ビトロでのランダム若しくは部位特異的突然変異誘発によって又はインビボでの体細胞突然変異によって導入された突然変異)を、例えば、CDR、特にCDR3に含むことがある。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書で用いる場合、別の哺乳動物種(例えばマウス)の生殖細胞系列に由来するCDR配列がヒトFR配列にグラフトされたmAbを含むことを意図したものではない。この用語は、非ヒト哺乳動物において又は非ヒト哺乳動物の細胞において組換え生成された抗体を含む。この用語は、ヒト対象から単離された又はヒト対象において産生された抗体を含むことを意図したものではない。
【００６７】
用語「多重特異性抗原結合分子」は、本明細書で用いる場合、二重特異性、三重特異性又は多重特異性抗原結合分子、及びその抗原結合断片を指す。多重特異性抗原結合分子は、1つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であることもあり、又は1つより多くの標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含有することもある。多重特異性抗原結合分子は、単一の多官能性ポリペプチドであることもあり、又は互いに共有結合で若しくは非共有結合で会合している2つ以上のポリペプチドの多量体型複合体
であることもある。用語「多重特異性抗原結合分子」は、別の機能分子、例えば別のペプチド又はタンパク質、に連結させることができる、又はそのような別の機能性分子と共発現させることができる、本発明の抗体を含む。例えば、抗体又はその断片を1つ又は複数
の他の分子実体、例えばタンパク質又はその断片と(例えば、化学的結合、遺伝子融合、
非共有結合性会合によって、又は別様に)機能的に連結させて、第2の結合特異性を有する二重特異性又は多重特異性抗原結合分子を生成することができる。本発明によると、用語
「多重特異性抗原結合分子」は、二重特異性、三重特異性若しくは多重特異性抗体又はその抗原結合断片も含む。特定の実施形態では、本発明の抗体を別の抗体又はその抗原結合断片に機能的に連結させて、第2の結合特異性を有する二重特異性抗体を生成する。本発
明の二重特異性及び多重特異性抗体は、本明細書中の他の箇所で説明する。
【００６８】
用語「に特異的に結合する」、又は「と特異的に結合する」、又はこれらに類する用語は、抗体又はその抗原結合断片が、生理条件下で比較的安定している抗原との複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約1x10-8M以下の平衡解離定数を特徴
としうる(例えば、KDが小さいほど密な結合を示す)。2つの分子が特異的に結合するかど
うかを判定する方法は、当技術分野において周知であり、例えば平衡透析、表面プラズモン共鳴等を含む。本明細書に記載の抗体は、PD-L1と特異的に結合する表面プラズモン共
鳴、例えばBIACORE(商標)によって同定した。更に、PD-L1中の1つのドメイン及び1つ若しくは複数の更なる抗原と結合する多重特異性抗体、又はPD-L1の2つの異なる領域と結合する二重特異性のものは、それでもやはり、本明細書で用いる場合には「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【００６９】
用語「高親和性」抗体は、表面プラズモン共鳴、例えばBIACORE(商標)又は溶液親和性ELISAによって測定して、少なくとも10-8M、好ましくは10-9M、より好ましくは10-10M、よりいっそう好ましくは10-11M、よりいっそう好ましくは10-12Mの、KDとして表される、PD-L1への結合親和性を有するmAbを指す。
【００７０】
用語「遅いオフレート」、「Koff」又は「kd」とは、表面プラズモン共鳴、例えばBIACORE(商標)によって判定して、1 x 10-3s-1以下、好ましくは1 x 10-4s-1以下の速度定数
で、PD-L1から解離する抗体を意味する。
【００７１】
抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」等の用語は、本明細書において用いる場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、又は遺伝子操作されたポリペプチド又は糖タンパク質を含む。抗体の「抗原結合断片」又は「抗体断片」という用語は、本明細書で用いる場合、PD-L1と
結合する能力を保持する抗体の1つ又は複数の断片を指す。
【００７２】
特定の実施形態において、本発明の抗体又は抗体断片は、リガンド等の部分とコンジュゲートされていることもあり、或いは治療用部分、例えば、抗生物質、二次抗PD-L1抗体
、又は別の抗原、例えば腫瘍特異的抗原、ウイルス感染細胞抗原若しくはT細胞共阻害因
子、に対する抗体、又は免疫毒素、又は例えば癌、慢性ウイルス感染症若しくは自己免疫疾患をはじめとする疾患若しくは状態の処置に有用な任意の他の治療用部分とコンジュゲートされていることもある(「イムノコンジュゲート」)。
【００７３】
「単離された抗体」は、本明細書で用いる場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体(Ab)を実質的に含まない抗体を指す(例えば、PD-L1に特異的に結合する単離された抗体又はその断片が、PD-L1以外の抗原に特異的に結合するAbを実質的に含まない)ことを意図する。
【００７４】
本明細書で用いる場合の「遮断抗体」又は「中和抗体」(又は「PD-L1活性を中和する抗体」又は「アンタゴニスト抗体」)は、PD-L1との結合がPD-L1の少なくとも1つの生物活性を阻害する結果となる抗体を指すことを意図したものである。例えば、本発明の抗体は、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を防止又は遮断することがある。
【００７５】
本明細書で用いる場合の「活性化抗体」又は「促進抗体」(又は「アゴニスト抗体」)は、PD-L1との結合がPD-L1の少なくとも1つの生物活性を増加又は刺激する結果となる抗体
を指すことを意図する。例えば、本発明の抗体は、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を
増加又は増進することがある。
【００７６】
用語「表面プラズモン共鳴」は、本明細書で用いる場合、例えばBIACORE(商標)システ
ム(Pharmacia Biosensor AB社、Uppsala、Sweden及びPiscataway、N.J.)を使用してバイ
オセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによってリアルタイム生体分子相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。
【００７７】
用語「KD」は、本明細書で用いる場合、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことを意図する。
【００７８】
用語「エピトープ」は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が1つより多くのエピトープを有す
ることもある。それ故、抗体によって、結合する抗原領域が異なることもあり、有する生物学的効果が異なることもある。用語「エピトープ」は、B及び/又はT細胞が応答する抗
原上の部位も指す。この用語は、抗体によって結合される抗原の領域も指す。エピトープは、構造的又は機能的と定義されることがある。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープは、高次構造のものであることもあり、すなわち、非直鎖状アミノ酸からなることもある。特定の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基又はスルホニル基等の分子の化学的に活性な表面原子団である決定基を含むこともあり、特定の実施形態では、特異的三次元構造特性及び/又は特異的電荷特性を有することもある。
【００７９】
核酸又はその断片に言及するときの用語「実質的同一性」又は「実質的に同一の」は、適切なヌクレオチド挿入又は欠失を施して別の核酸(又はその相補鎖)と最適にアラインしたとき、下で論じるような周知の任意の配列同一異性アルゴリズム、例えばFASTA、BLAST又はGAPによって測定して、少なくとも約90%、より好ましくは少なくとも約95%、96%、97%、98%又は99%のヌクレオチド塩基にヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核
酸分子との実質的同一性を有する核酸分子は、特定の事例では、その参照核酸分子によってコードされたポリペプチドと同じ又は実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。
【００８０】
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的類似性」又は「実質的に類似の」は、デフォルトギャップ重みを用いてGAP又はBESTFITプログラム等によって最適にアラインしたとき、2つのペプチド配列が少なくとも90%の配列同一性、よりいっそう好ましくは少なくとも95%、98%又は99%の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない
残基位置は、保存的アミノ酸置換の点で異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、化学的特性(例えば電荷又は疎水性)が類似している側鎖(R基)を有する別のアミノ
酸残基によって置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させないであろう。2つ以上のアミノ酸配列が保存的置換の点
で互いに異なる場合、類似率又は類似度を上方調整して、置換の保存性を修正することができる。この調整を行う手段は、当業者に周知である。例えば、Pearson (1994) Methods
Mol. Biol. 24:307〜331頁を参照されたい。この参考文献は参照により本明細書に組み
込まれている。化学的特性が類似している側鎖を有するアミノ酸群の例としては、1)脂肪族側鎖:グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン、2)脂肪族-ヒドロキシル側鎖:セリン及びトレオニン、3)アミド含有側鎖:アスパラギン及びグルタミン、4)芳香族側鎖:フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン、5)塩基性側鎖:リシン、アルギニン及びヒスチジン、6)酸性側鎖:アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩、並びに7)硫黄
含有側鎖:システイン及びメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換群は、
バリン-ロイシン-イソロイシン、フェニルアラニン-チロシン、リシン-アルギニン、アラ
ニン-バリン、グルタミン酸塩-アスパラギン酸塩、及びアスパラギン-グルタミンである
。或いは、保存的置き換えは、参照により本明細書に組み込まれているGonnetら、(1992)Science 256:1443 45に開示されているPAM250対数尤度行列で正の値を有する任意の変化
である。「中等度保存的」置き換えは、PAM250対数尤度行列で負でない値を有する任意の変化である。
【００８１】
ポリペプチドについての配列類似性は、配列分析ソフトウェアを使用して概して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む、様々な置換、欠失及び他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似配列をマッチさせる。例えば、GCGソフトウェアには、デフォルトパラメータを使用して異なる生物種からの相同ペプチ
ド等の近縁ペプチド間の又は野生型タンパク質とその突然変異タンパク質間の配列相同性又は配列同一性を決定することができる、GAP及びBESTFIT等のプログラムが入っている。例えばGCGバージョン6.1を参照されたい。デフォルト又は推奨パラメータでFASTA(GCGバ
ージョン6.1の中のプログラム)を使用してポリペプチド配列を比較することもできる。FASTA(例えばFASTA2及びFASTA3)によって、問い合わせ配列と検索配列間の最良重複領域の
アラインメントと配列同一率が得られる[Pearson (2000)、上掲]。本発明の配列を様々な生物からの多数の配列が入っているデータベースと比較する際に好ましい別のアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用するコンピュータプログラムBLAST、特にBLASTP又はTBLASTNである。例えば、Altschulら(1990) J. Mol. Biol. 215:403〜410頁及び(1997) Nucleic Acids Res. 25:3389〜3402頁を参照されたい。前記参考文献の各々が参照により本明細書に組み込まれている。
【００８２】
「治療有効量」という句は、所望の効果を生じさせる量であって、そのために投与される量を意味する。正確な量は、処置の目的に依存することになり、当業者は公知の技術を用いてその量を突き止めることができるであろう[例えば、Lloyd(1999)The Art, Science
and Technology of Pharmaceutical Compoundingを参照されたい]。
【００８３】
本明細書で用いる場合、用語「対象」は、慢性ウイルス感染症、癌又は自己免疫疾患等の疾患又は障害の改善、予防及び/又は処置を必要としている動物、好ましくは哺乳動物
を指す。
【００８４】
本明細書で用いる場合、「抗癌薬」は、癌の処置に有用な任意の薬剤を意味し、そのような薬剤としては、細胞毒はもちろん、代謝拮抗薬、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、有糸分裂阻害剤、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン[O,P'-(DDD)]、インターフェロン及び放射性薬剤等の薬剤も挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で用いる場合、「細胞毒又は細胞傷害性薬剤」は、細胞に有害である任意の薬剤を意味する。例としては、Taxol(登録商標)(パクリタキセル)、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマ
イシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1-デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プ
ロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロパノロール及びピューロマイシン並びにこれらの類似体又はホモログが挙げられる。
【００８５】
本明細書で用いる場合、用語「抗ウイルス薬」は、宿主対象のウイルス感染症を処置、予防又は改善するために使用される任意の薬物又は治療法を指す。用語「抗ウイルス薬」は、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノホビル、リルピビリン、鎮痛薬及びコルチコステロイドを含むが、これらに限定されない。本発明に関して、ウイルス感染症は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、B型肝炎ウイルス(HBV)、C型肝炎ウイルス(HCV)、ヒト乳頭腫ウイルス(HPV)、リンパ球
性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)及びサル免疫不全ウイルス(SIV)を含む(しかしこれらに限定されない)ウイルスによって引き起こされる長期又は慢性感染症を含む。
【００８６】
本発明の抗体及び抗原結合断片は、PD-L1と特異的に結合し、PD-L1のPD-1との又はB7-1との相互作用を調節する。抗PD-L1抗体は、高い親和性でPD-L1と結合することもあり、又は低い親和性でPD-L1と結合することもある。特定の実施形態において、本発明の抗体は
、PD-L1と結合してPD-L1のPD-1との又はB7-1との相互作用を遮断する、遮断抗体である。いくつかの実施形態において、本発明の遮断抗体は、PD-L1のPD-1との又はB7-1との結合
を遮断し、及び/又はT細胞活性化を刺激又は増進する。いくつかの実施形態において、遮断抗体は、免疫応答の刺激若しくは増進に、及び/又は癌若しくは慢性ウイルス感染症に
罹患している対象の処置に、有用である。抗体は、それを必要とする対象に投与されたとき、HIV、LCMV又はHBV等のウイルスによる対象の慢性感染症を低減させることができる。抗体を使用して、対象の腫瘍細胞の成長を阻害することができる。抗体は、単独で使用されることもあり、又は癌若しくはウイルス感染症を処置するための当技術分野において公知の他の治療用部分若しくは治療様式と共に補助療法として使用されることもある。特定の実施形態において、低い親和性でPD-L1と結合する抗PD-L1抗体は、第1の結合特異性が
低い親和性でPD-L1と結合し、第2の結合特異性が、PD-L1の異なるエピトープ、T細胞共阻害因子、例えばPD-1、腫瘍特異的抗原、及び感染細胞特異的抗原からなる群から選択される抗原と特異的に結合する、多重特異性抗原結合分子として使用される。
【００８７】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、PD-L1と結合してPD-L1とPD-1/B7-1の相互
作用を増進する、アゴニスト抗体である。いくつかの実施形態において、活性化抗体は、PD-L1のPD-1との若しくはB7-1との結合を増進し、及び/又はT細胞活性化を阻害若しくは
抑制する。本発明の活性化抗体は、対象の免疫応答の阻害に及び/又は自己免疫疾患の処
置に有用でありうる。
【００８８】
特定の実施形態において、抗PD-L1抗体は、PD-L1への第1の結合特異性と、PD-L1の異なるエピトープ、T細胞共阻害因子、例えばPD-1、腫瘍特異的抗原及び感染細胞特異的抗原
からなる群から選択される抗原への第2の結合特異性とを含む、多重特異性抗原結合分子
である。特定の実施形態において、第1の結合特異性は、低い親和性で、例えば10-8M、10-7M以上のKDで、PD-L1と結合する。
【００８９】
本発明の特定の抗PD-L1抗体は、インビトロ又はインビボアッセイによって判定して、PD-L1と結合すること及びPD-L1の活性を中和することができる。PD-L1と結合してPD-L1の
活性を中和する本発明の抗体の能力は、本明細書に記載の結合アッセイ又は活性アッセイをはじめとする、当業者に公知の任意の標準的方法を用いて測定することができる。
【００９０】
結合活性を測定するための非限定的、例示的インビトロアッセイは、本明細書の実施例3で説明する。実施例3では、ヒトPD-L1及びカニクイザルPD-L1に対するヒト抗PD-L1抗体
の結合親和性及び動力学定数を表面プラズモン共鳴によって決定し、測定をT200 Biacore装置で行った。実施例4及び5では、遮断アッセイを用いて、インビトロでPD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合能力を遮断する抗PD-L1抗体の能力を判定した。実施例6では、遮断ア
ッセイを用いて、様々な抗PD-L1抗体間の交差競合を判定した。実施例7は、PD-L1を過剰
発現する細胞との抗体の結合を説明する。実施例8では、ルシフェラーゼアッセイを用い
て、T細胞においてPD-1/PD-L1シグナル伝達に拮抗する抗PD-L1抗体の能力を判定した。
【００９１】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、インビトロで、及び癌を有する対象において、又はLCMV等のウイルスに感染している対象において、T細胞活性化を増進又は刺激す
ることができる。特定の実施形態において、本発明の抗体は、対象の免疫応答を増進し、腫瘍成長を阻害するために、腫瘍特異的抗原に対する抗体又はT細胞共阻害因子等の第2の
治療薬と併用される。特定の実施形態において、本発明のアゴニスト抗体は、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を増進することができ、インビトロで及び/又は自己免疫疾患を有する対象においてT細胞活性化を阻害することもある。
【００９２】
PD-L1に特異的な抗体は、追加の標識若しくは部分を含有しないこともあり、又はN末端若しくはC末端標識若しくは部分を含有することもある。一実施形態において、標識又は
部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識(もしあれば)の位置によって、ペプチドが結合する表面に対するペプチドの配向が決まることもある。例えば、表面がアビジンで被覆されている場合、N末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのC末端部分が表面に対して遠位になるように配向されることになる。一実施形態において、標識は、放射性核種、蛍光色素又はMRI検出可能標識でありうる。特定の実施形態では、そのような標識
抗体を、イメージングアッセイを含む診断アッセイにおいて使用することができる。
【００９３】
抗体の抗原結合断片
特に別段の指示がない限り、用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、2本の免疫グロ
ブリン重鎖及び2本の免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子(すなわち「完全抗体分子」)は
もちろん、その抗原結合断片も包含すると解されるものとする。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」等の用語は、本明細書において用いる場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、又は遺伝子操作されたポリペプチド又は糖タンパク質を含む。抗体の「抗原結合断片」、又は「抗体断片」という用語は、本明細書で用いる場合、PD-L1と特異的に結合する能力を
保持する抗体の1つ又は複数の断片を指す。抗体断片としては、Fab断片、F(ab')2断片、Fv断片、dAb断片、CDRを含有する断片、又は単離されたCDRを挙げることができる。特定の実施形態において、用語「抗原結合断片」は、多重特異性抗原結合分子のポリペプチド又はその断片を指す。そのような実施形態において、用語「抗原結合断片」は、例えば、PD-L1と特異的に結合するPD-1の細胞外ドメインを含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、
完全抗体分子から、任意の好適な標準的技法、例えば、タンパク質消化、又は抗体可変及び(場合により)定常ドメインをコードするDNAの操作及び発現を含む組換え遺伝子操作法
を用いて、得ることができる。そのようなDNAは公知であり、及び/又は例えば商業的供給源、DNAライブラリー(例えばファージ-抗体ライブラリーを含む)から容易に入手することができ、又は合成することができる。DNAをシークエンシングし、化学的に又は分子生物
学技法の使用によって操作して、例えば、1つ若しくは複数の可変及び/若しくは定常ドメインを好適な高次構造に配置すること、又はコドンを導入すること、システイン残基を生成すること、アミノ酸を修飾する、付加させる若しくは欠失させること等ができる。
【００９４】
抗原結合断片の非限定的な例としては、(i)Fab断片、(ii)F(ab')2断片、(iii)Fd断片、(iv)Fv断片、(v)一本鎖Fv(scFv)分子、(vi)dAb断片、及び(vii)抗体の超可変領域[例えば、単離された相補性決定領域(CDR)、例えばCDR3ペプチド]を模倣するアミノ酸残基又は拘束FR3-CDR3-FR4ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。他の工学的に操作された分子、例えば、ドメイン特異的抗体、シングルドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、CDRグラフト抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノ
ボディ(例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディ等)、小モジュラー免疫薬(SMIP)、サメ可変IgNARドメインも、本明細書において用いる場合の「抗原結合断片」という表現に包
含される。
【００９５】
抗体の抗原結合断片は、少なくとも1つの可変ドメインを概して含むことになる。可変
ドメインは、いずれのサイズ又はアミノ酸組成のものであってもよく、一般的には、1つ
若しくは複数のフレームワーク配列に隣接している又は1つ若しくは複数のフレームワー
ク配列とインフレームである少なくとも1つのCDRを含むことになる。VLドメインと会合しているVHドメインを有する抗原結合断片の場合、VH及びVLドメインは、互いに対してあら
ゆる好適な配置で位置することができる。例えば、可変領域は二量体であることもあり、VH-VH、VH-VL又はVL-VL二量体を含有することがある。或いは、抗体の抗原結合断片は、
単量体VH又はVLドメインを含有することもある。
【００９６】
特定の実施形態において、抗体の抗原結合断片は、少なくとも1つの定常ドメインに共
有結合で連結されている少なくとも1つの可変ドメインを含有することがある。本発明の
抗体の抗原結合断片内で見つけることができる可変及び定常ドメインの非限定的、例示的高次構造としては、(i)VH-CH1、(ii)VH-CH2、(iii)VH-CH3、(iv)VH-CH1-CH2、(v)VH-CH1-CH2-CH3、(vi)VH-CH2-CH3、(vii)VH-CL、(viii)VL-CH1、(ix)VL-CH2、(x)VL-CH3、(xi)VL-CH1-CH2、(xii)VL-CH1-CH2-CH3、(xiii)VL-CH2-CH3、及び(xiv)VL-CLが挙げられる。上
に列挙した例示的高次構造のいずれかを含む、可変及び定常ドメインのいずれの高次構造においても、可変及び定常ドメインは、互いに直接連結されていることもあり、又は完全若しくは部分ヒンジ若しくはリンカー領域によって連結されていることもある。ヒンジ領域は、少なくとも2つ(例えば、5、10、15、20、40、60以上)のアミノ酸からなることがあり、これらのアミノ酸が、単一ポリペプチド分子内の隣接した可変及び/又は定常ドメイ
ン間の柔軟な又はやや柔軟な連鎖となる。更に、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いに、及び/又は1若しくは複数の単量体VH若しくはVLドメインと、非共有結合で(例えば、ジ
スルフィド結合によって)会合している、上に列挙したいずれかの可変及び定常ドメイン
高次構造のホモ二量体又はヘテロ二量体(又は他の多量体)を含むことがある。
【００９７】
完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性であることもあり、又は多重特異性(例えば二重特性)であることもある。抗体の多重特異性抗原結合断片は、各可変ドメインが別個の抗原と又は同じ抗原上の異なるエピトープと特異的に結合できる、少なくとも2つの異なる可変ドメインを概して含むことになる。本明細書において開示する例示的二
重特異性抗体形式を含めて、いずれの多重特異性抗体形式も、当技術分野において利用可能な通例の技法を用いる本発明の抗体の抗原結合断片との関連での使用に適応させることができる。
【００９８】
ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスでヒト抗体を産生する方法は当技術分野において公知である。任意のそのような公知の方法を本発明に関連して使用して、PD-L1と特異的に結合する
ヒト抗体を作製することができる。
【００９９】
下記のもののいずれか1つを含む免疫原を使用してPD-L1に対する抗体を産生することができる。特定の実施形態において、本発明の抗体は、完全長PD-L1[GenBank受託番号NP_054862.1(配列番号351)]等の一次免疫原で、又は組換え形態のPD-L1若しくは修飾ヒトPD-L1断片(配列番号345、347若しくは348)で、又は修飾カニクイザルPD-L1断片(配列番号346)
で免疫し、その後、二次免疫原で、又はPD-L1の免疫原性活性断片で免疫したマウスから
得られる。
【０１００】
特定の実施形態において、免疫原は、PD-L1のN末端又はC末端からのペプチドでありう
る。一実施形態において、免疫原は、PD-L1の細胞外IgV様及び/又はIgC様ドメインである。本発明の特定の実施形態において、免疫原は、配列番号351(NP_054862.1)のアミノ酸残基約19〜239にわたるPD-L1の断片である。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、免疫原は、大腸菌(E. coli)において又は任意の他の真
核若しくは哺乳動物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、において発現
された組換えPD-L1ペプチドであることもある。
【０１０２】
特定の実施形態において、PD-L1と特異的に結合する抗体は、上述の領域の断片を使用
して調製することができ、又は本明細書に記載する領域のN若しくはC末端のいずれか若しくは両方から指定領域を超えて約5〜約20アミノ酸残基伸長したペプチドを使用して調製
することができる。特定の実施形態では、上述の領域又はそれらの断片の任意の組み合わせをPD-L1特異的抗体の調製に使用することができる。
【０１０３】
VELOCIMMUNE(登録商標)技術(例えば米国特許第6,596,541号、Regeneron Pharmaceuticals社、VELOCIMMUNE(登録商標)を参照されたい)、又はモノクローナル抗体の任意の他の公知産生方法を用いて、ヒト可変領域及びマウス定常領域を有する、PD-L1に対する高親和
性キメラ抗体を最初に単離する。VELOCIMMUNE(登録商標)技術は、内在性マウス定常領域
遺伝子座に作動可能に連結されたヒト重鎖及び軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの産生を含み、したがって、マウスは、抗原刺激に応答してヒト可変領域及びマウス定常領域を含む抗体を生成する。抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするDNAを単離し、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域をコードするDNAに作動可能に連結させる。その後、完全ヒト抗体を発現することができる細胞においてDNAを発現させる。
【０１０４】
生物学的同等物
本発明の抗PD-L1抗体及び抗体断片は、記載する抗体のものとは異なるアミノ酸配列を
有するタンパク質だが、PD-L1に結合する能力を保持するタンパク質を包含する。そのよ
うな変異抗体及び抗体断片は、親配列と比較したときアミノ酸の1つ又は複数の付加、欠
失又は置換を含むが、記載する抗体のものと本質的に同等である生物活性を示す。同様に、本発明の抗体コードDNA配列は、開示する配列と比較して、1つ又は複数のヌクレオチドの付加、欠失又は置換を含む配列だが、本発明の抗体又は抗体断片と本質的に生物学的同等性である抗体又は抗体断片をコードする配列を包含する。
【０１０５】
2つの抗原結合タンパク質、又は抗体は、例えば、同じモル用量で同様の実験条件下で
単一用量又は複数の用量いずれかで投与されたときに吸収速度及び吸収量が有意差を示さない製剤学的同等物又は製剤学的代替物である場合、生物学的同等性とみなされる。いくつかの抗体は、それらが、吸収量の点で同等であるが吸収速度の点で同等ではなく、しかし吸収速度のそのような差が意図的であり、標識に反映されるため、有効な体内薬物濃度の例えば慢性使用時の達成に本質的なものでないため、及び研究する特定の製剤にとって医学的に重要でないとみなされるため、生物学的同等性とみなすことができる場合、同等物又は製剤学的代替物とみなされることになる。
【０１０６】
一実施形態において、2つの抗原結合タンパク質は、それらの安全性、純度又は効力に
臨床的に有意義な差がない場合、生物学的に同等である。
【０１０７】
一実施形態において、2つの抗原結合タンパク質は、患者に対する参照製品と生物由来
物質との1回又は複数回の切り替えを、そのような切り替えのない連続治療と比較して、
免疫原性の臨床的に有意な変化、又は有効性減少を含む、有害作用のリスクの予想される増加なしに行うことができる場合、生物学的に同等である。
【０１０８】
一実施形態において、2つの抗原結合タンパク質は、両方が、使用条件について共通の
作用機序によって、そのような機序が知られている範囲で作用する場合、生物学的に同等である。
【０１０９】
生物学的同等性は、インビボ及び/又はインビトロ法によって実証することができる。
生物学的同等性の測定は、例えば、(a)抗体又はその代謝物の濃度が血液、血漿、血清又
は他の生体液中で時間の関数として測定される、ヒト又は他の哺乳動物でのインビボ試験、(b)ヒトインビボバイオアベイラビリティーデータとの相関関係が認められており、そ
のようなデータが合理的に予測される、インビトロ試験、(c)抗体(又はその標的)の適切
な急性薬理作用が時間の関数として測定される、ヒト又は他の哺乳動物でのインビボ試験、及び(d)安全性、有効性又は抗体のバイオアベイラビリティー若しくは生物学的同等性
を確証する、十分に管理された臨床試験を含む。
【０１１０】
本発明の抗体の生物学的同等性変異体は、例えば、生物活性に必要とされない残基若しくは配列の様々な置換又は生物活性に必要とされない末端若しくは内部残基若しくは配列の欠失を行うことによって、構築することができる。例えば、生物活性に不可欠でないシステイン残基を欠失させて、又は他のアミノ酸と置き換えて、再生時に不必要な又は間違った分子間ジスルフィド架橋が形成するのを防止することができる。他の状況では、生物学的同等性抗体は、抗体のグリコシル化特性を修飾するアミノ酸変化、例えばグリコシル化を削除又は除去する突然変異を有する抗体変異体を含むこともある。
【０１１１】
Fc変異体を含む抗PD-L1抗体
本発明の特定の実施形態に従って、FcRn受容体との抗体の結合を、例えば中性pHと比較して酸性pHで、増進又は減少させる1つ又は複数の突然変異を有するFcドメインを含む、
抗PD-L1抗体を提供する。例えば、本発明は、FcドメインのCH2又はCH3領域に突然変異を
含む抗PD-L1抗体であって、突然変異がFcRnに対するFcドメインの親和性を酸性環境で(例えば、pHが約5.5〜約6.0の範囲であるエンドソームにおいて)増加させる、抗PD-L1抗体を含む。そのような突然変異は、動物に投与されたとき抗体の血清半減期を増加させる結果となりうる。そのようなFc修飾の非限定的な例としては、例えば、位置250(例えばE若し
くはQ)、250及び428(例えばL若しくはF)、252(例えばL/Y/F/W若しくはT)、254(例えばS若しくはT)及び256(例えばS/R/Q/E/D若しくはT)での修飾、又は位置428及び/若しくは433(
例えばH/L/R/S/P/Q若しくはK)及び/若しくは434[例えばA、W、H、F若しくはY(N434A、N434W、N434H、N434F若しくはN434Y)]での修飾、又は位置250及び/若しくは428での修飾、又は位置307若しくは308(例えば308F、V308F)及び434での修飾が挙げられる。一実施形態において、修飾は、428L(例えばM428L)及び434S(例えばN434S)修飾、428L、259I(例えばV259I)及び308F(例えばV308F)修飾、433K(例えばH433K)及び434(例えば434Y)修飾、252、254及び256(例えば252Y、254T及び256E)修飾、250Q及び428L修飾(例えばT250Q及びM428L)、
並びに307及び/又は308修飾(例えば308F又は308P)を含む。更に別の実施形態において、
修飾は、265A(例えばD265A)及び/又は297A(例えばN297A)修飾を含む。
【０１１２】
例えば、本発明は、250Q及び248L(例えばT250Q及びM248L)、252Y,254T及び256E(例えばM252Y、S254T及びT256E)、428L及び434S(例えばM428L及びN434S)、257I及び311I(例えばP257I及びQ311I)、257I及び434H(例えばP257I及びN434H)、376V及び434H(例えばD376V及びN434H)、307A,380A及び434A(例えばT307A、E380A及びN434A)、並びに433K及び434F(例え
ば、H433K及びN434F)からなる群から選択される突然変異の1つ又は複数の対又は群を含むFcドメインを含む、抗PD-L1抗体を含む。一実施形態において、本発明は、二量体安定化
を促進するためにIgG4のヒンジ領域にS108P突然変異を含むFcドメインを含む、抗PD-L1抗体を含む。前述のFcドメイン突然変異と本明細書において開示する抗体可変ドメイン内の他の突然変異との全ての可能な組み合わせが、本発明の範囲内で企図される。
【０１１３】
本発明は、キメラ重鎖定常(CH)領域を含む抗PD-L1抗体であって、キメラCH領域が、1つより多くの免疫グロブリンアイソタイプのCH領域に由来するセグメントを含む、抗PD-L1
抗体も含む。例えば、本発明の抗体は、ヒトIgG1、ヒトIgG2又はヒトIgG4分子に由来するCH3ドメインの一部又は全てと組み合わされた、ヒトIgG1、ヒトIgG2又はヒトIgG4分子に
由来するCH2ドメインの一部又は全てを含む、キメラCH領域を含むことがある。特定の実
施形態によると、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラCH領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトIgG1、ヒトIgG2又はヒトIgG4ヒンジ領域に由来する「下ヒンジ」配列(EUナンバリングに従って位置228〜236のアミノ酸残基)と組み合わされた、ヒトIgG1、ヒトIgG2又はヒトIgG4ヒンジ領域に由来する「上ヒンジ」アミノ酸配列(EUナンバリ
ングに従って位置216〜227のアミノ酸残基)を含むこともある。特定の実施形態によると
、キメラヒンジ領域は、ヒトIgG1又はヒトIgG4上ヒンジに由来するアミノ酸残基と、ヒトIgG2下ヒンジに由来するアミノ酸残基とを含む。本明細書に記載のキメラCH領域を含む抗体は、特定の実施形態では、抗体の治療的又は薬物動態的特性に悪影響を及ぼすことなく修飾Fcエフェクター機能を示すことができる。[例えば、2014年1月31日に出願された米国特許出願第14/170,166号を参照されたい(前記特許文献の開示は、その全体が参照により
本明細書に組み込まれている)]。
【０１１４】
抗体の生物学的特徴
一般に、本発明の抗体は、PD-L1と結合することによって機能する。本発明は、可溶性
単量体又は二量体PD-L1分子に高い親和性で結合する抗PD-L1抗体及びその抗原結合断片を含む。例えば、本発明は、例えば本明細書の実施例3で定義するようなアッセイ形式を用
いて、表面プラズモン共鳴によって測定して約318pM未満のKDで単量体PD-L1に(例えば25
℃で又は37℃で)結合する抗体及び抗体の抗原結合断片を含む。特定の実施形態において
、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書の実施例3で定義するようなアッセイ
形式、又は実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴によって測定して、約300pM未満、約250pM未満、約150pM未満、約100pM未満又は約50pM未満のKDで単量体PD-L1
に結合する。
【０１１５】
本発明は、例えば本明細書の実施例3で定義するようなアッセイ形式を用いて、表面プ
ラズモン共鳴によって測定して、約15pM未満のKDで二量体PD-L1に(例えば25℃で又は37℃で)結合する抗体及びその抗原結合断片も含む。特定の実施形態において、抗体又はその
抗原結合断片は、例えば、本明細書の実施例3で定義するようなアッセイ形式、又は実質
的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモン共鳴によって測定して、約12pM未満、約10pM未満、約8pM未満、又は約5pM未満のKDで二量体PD-L1に結合する。
【０１１６】
本発明は、例えば本明細書の実施例3で定義するようなアッセイ形式を用いて、表面プ
ラズモン共鳴によって測定して、約28nM未満のKDでカニクイザル[カニクイザル(Macaca fascicularis)]PD-L1に(例えば25℃で又は37℃で)結合する抗体又はその抗原結合断片も含む。特定の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書の実施例3で定義するようなアッセイ形式、又は実質的に類似のアッセイを用いて、表面プラズモ
ン共鳴によって測定して、約25nM未満、約20nM未満、約15nM未満、約10nM未満又は約5nM
未満のKDでカニクイザルPD-L1に結合する。
【０１１７】
本発明は、例えば、本明細書の実施例3で定義するようなアッセイ形式、又は実質的に
類似のアッセイを用いて、25℃又は37℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約1分
より長い解離半減期(t1/2)でPD-L1に結合する抗体及びその抗原結合断片も含む。特定の
実施形態において、本発明の抗体又は抗原結合断片は、例えば、本明細書の実施例3で定
義するようなアッセイ形式(例えばmAb捕捉若しくは抗原捕捉形式)、又は実質的に類似の
アッセイを用いて、25℃又は37℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約5分より長
い、約10分より長い、約30分より長い、約50分より長い、約60分より長い、約70分より長い、約80分より長い、約90分より長い、約100分より長い、約200分より長い、約300分よ
り長い、約400分より長い、約500分より長い、約600分より長い、約700分より長い、又は約800分より長いt1/2でPD-L1に結合する。
【０１１８】
本発明は、例えば実施例4に示すような、ELISAベースの免疫測定法アッセイ、又は実質的に類似のアッセイを用いて判定して、約770pM未満のIC50でPD-1とのPD-L1の結合を遮断する抗体又はその抗原結合断片も含む。本発明は、例えば実施例4に示すような、ELISAベースの免疫測定法アッセイ、又は実質的に類似のアッセイを用いて判定して、約10nM未満のIC50でB7-1とのPD-L1の結合を遮断する抗体又はその抗原結合断片も含む。本発明は、P
D-L1と結合して、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を増進する抗体及びその抗原結合断
片も含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、PD-L1の細胞外ドメインと結合するこ
ともあり、又はドメインの断片と結合することもある。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、1つより多くのドメインと結合することがある(交差反応性抗体)。特定の
実施形態において、本発明の抗体は、NP_054862.1(配列番号351)のアミノ酸残基19〜239
を含む細胞外ドメインに位置するエピトープと結合することがある。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号345〜348又は353のアミノ酸残基1〜221からなる群から選択
される1つ又は複数のアミノ酸を含むエピトープと結合することがある。
【０１２０】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、アミノ酸配列が配列番号351で示される完
全長タンパク質の任意の他の領域又は断片と結合することによりPD-L1と会合しているPD-1結合又はB7-1結合活性を遮断又は阻害することによって機能することもある。特定の実
施形態において、抗体は、PD-L1とPD-1/B7-1との相互作用を減弱又は調節することがある。
【０１２１】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、二重特異性抗体であることもある。本発明の二重特異性抗体は、PD-L1の1つのドメイン内の1つのエピトープに結合することがあり
、PD-L1の別のドメイン内の第2のエピトープに結合することもある。特定の実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、同じドメイン内の2つの異なるエピトープに結合する
ことがある。一実施形態において、多重特異性抗原結合分子は、PD-1の細胞外ドメイン又はその断片を含む第1の結合特異性と、PD-L1の別のエピトープへの第2の抗原結合特異性
とを含む。別の実施形態において、多重特異性抗原結合分子は、B7-1の細胞外ドメイン又はその断片を含む第1の結合特異性と、PD-L1の別のエピトープへの第2の抗原結合特異性
とを含む。
【０１２２】
一実施形態において、本発明は、PD-L1と結合する完全ヒトモノクローナル抗体又はそ
の抗原結合断片であって、以下の特徴の1つ又は複数を示す抗体又はその断片を提供する:(i)配列番号2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、186、202、218、234、250、258、266、274、282、290、298、306、314、322、330及び338からなる群から選
択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少
なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、HCVRを含むという特徴、(ii)配列番号10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、194、210、226、242、258及び274からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCVRを含むという特徴、(iii)配列番号8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、192、208、224、240、256、272、280、288、296、304、312、320、328、336及び344からなる群から選択されるアミノ酸配
列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、HCDR3ドメインと、配列
番号16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、200、216、232、248、264及び280からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少な
くとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCDR3ドメインとを含むという特徴、(iv)配列番号4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、188、204、220、236、252、268、284、292、300、308、316、324、332及び340からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%
、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミ
ノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、HCDR1ドメインと、配列番号6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、190、206、222、238、254、270、286、294、302
、310、318、326、334及び342からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのア
ミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、HCDR2ドメインと、配列番号12、28、44、60
、76、92、108、124、140、156、172、196、212、228、244、260及び276からなる群から
選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは
少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCDR1ドメインと、配列番号14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、198、214、230、246、262及び278からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ
酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCDR2ドメインとを含むという特徴、(V)PD-L1へ
の第1の結合特異性と、PD-L1、腫瘍特異的抗原、ウイルス感染細胞抗原及びT細胞共阻害
因子からなる群から選択される抗原への第2の結合特異性とを含む、多重特異性抗原結合
分子であるという特徴、(vi)約4pM〜約645nMのKDでヒトPD-L1と結合するという特徴、(vii)約70pM〜約400nMのKDでカニクイザルPD-L1と結合するという特徴、(viii)IC50≦770pM
でPD-L1のPD-1との結合を遮断又は増進するという特徴、(ix)IC50≦10nMでPD-L1のB7-1との結合を遮断又は増進するという特徴、(x)T細胞/APCルシフェラーゼレポーターアッセイにおいてPD-1誘導T細胞ダウンレギュレーションを遮断する及び/又はT細胞シグナル伝達
をレスキューするという特徴、(xi)混合リンパ球反応(MLR)アッセイにおいてT細胞増殖及び活性を刺激するという特徴、(xii)MLRアッセイにおいてIL-2及び/又はIFNγ生成を誘導するという特徴、及び(xiii)癌を有する対象において腫瘍成長を抑制し、生存時間を増加させるという特徴。
【０１２３】
一実施形態において、本発明は、PD-1との又はB7-1とのPD-L1の結合を遮断する完全ヒ
トモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、以下の特徴の1つ又は複数を示す
抗体又はその断片を提供する:(i)配列番号82、98、146、162、290、306、314及び330からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、HCVRを含むという特徴、(ii)配列番号90、106、154、170及び274からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは
少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCVRを含むという特徴、(iii)配列番号88、104、152、168、296、312、320及び336からな
る群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%
若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を
有する、HCDR3ドメインと、配列番号96、112、160、176、及び280からなる群から選択さ
れるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なく
とも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCDR3ドメインとを含むという特徴、(iv)配列番号84、100、148、164、292、308、316及び332か
らなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、HCDR1ドメインと、配列番号86、102、150、166、294、310、318及び334からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%
若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を
有する、HCDR2ドメインと、配列番号92、108、156、172及び276からなる群から選択され
るアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくと
も99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCDR1ドメインと、配列番号94、110、158、174及び278からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%若しくは少なくとも99%の配列同一性を有するそのアミノ酸配列の実質的に類似の配列を有する、LCDR2ドメインとを含むという
特徴、(V)PD-L1への第1の結合特異性と、PD-L1の異なるエピトープ、腫瘍特異的抗原、ウイルス感染細胞抗原及びT細胞共阻害因子からなる群から選択される抗原への第2の結合特
異性とを含む、多重特異性抗原結合分子であるという特徴、(vi)KD≦10-10MでヒトPD-L1
と結合するという特徴、(vii)KD≦10-7MでカニクイザルPD-L1と結合するという特徴、(viii)PD-L1のPD-1との又はB7-1との結合を遮断するという特徴、(ix)T細胞/APCルシフェラ
ーゼレポーターアッセイにおいてPD-1誘導T細胞ダウンレギュレーションを遮断する及び/又はT細胞シグナル伝達をレスキューするという特徴、(xi)混合リンパ球反応(MLR)アッセイにおいてT細胞増殖及び活性を刺激するという特徴、(xii)MLRアッセイにおいてIL-2及
び/又はIFNγ生成を誘導するという特徴、及び(xiii)癌を有する対象において腫瘍成長を抑制し、生存時間を増加させるという特徴。
【０１２４】
本発明の抗体は、上述の生物学的特徴の1つ若しくは複数、又はそれらの任意の組み合
わせを有することがある。本発明の抗体の他の生物学的特徴は、本明細書中の作業実施例を含む本開示の総説から当業者に明らかになるであろう。
【０１２５】
種選択性及び種交差反応性
本発明の特定の実施形態によると、抗PD-L1抗体は、ヒトPD-L1と結合するが、他の種からのPD-L1とは結合しない。或いは、本発明の抗PD-L1抗体は、特定の実施形態では、ヒトPD-L1と結合し、且つ1種又は複数の非ヒト種からのPD-L1と結合する。例えば、本発明の
抗PD-L1抗体は、ヒトPD-L1と結合することがあり、且つマウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル又はチンパンジーPD-L1のうちの1つ又は複数と、場合によって、結合することがあり、又は結合しないこともある。特定の実施形態において、本発明の抗PD-L1抗体は、ヒト及びカニクイザルPD-L1と同じ親和性で結合することもあり、異なる親和性で結合することもある。
【０１２６】
エピトープマッピング及び関連技術
本発明は、例えば細胞外(IgV様)ドメイン、細胞外IgC様ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む、PD-L1分子の1つ又は複数のドメイン内で見つけられる1つ又は複
数のアミノ酸と相互作用する抗PD-L1抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、PD-L1分子の上述のドメインのいずれかの中にあるアミノ酸3個以上(例えば3、4、5、6、7、8、9
、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20以上)の単一連続配列からなることがあ
る(例えば、ドメイン内の直鎖状エピトープ)。或いは、エピトープは、PD-L1分子の上述
のドメインのいずれか又は両方の中にある複数の非連続アミノ酸(又はアミノ酸配列)  からなることもある(例えば高次構造エピトープ)。
【０１２７】
当業者に公知の様々な技法を用いて、抗体がポリペプチド又はタンパク質中の「1つ又
は複数のアミノ酸と相互作用する」かどうかを判定することができる。例示的技法としては、例えば、Antibodies、Harlow及びLane(Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harbor、NY)に記載されているもの等の通例の交差遮断アッセイが挙げられる。他の方法としては、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット分析(Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248:443〜63頁)、ペプチド切断分析結晶学的研究、及びNMR分析が挙げられる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出及び抗原の化学的修飾等の方法を用いることができる(Tomer (2000) Prot. Sci. 9:487〜496頁)。抗体が相互作用するポリペプチド中のアミノ酸を同定するために用いることができるもう1つの方法は、質量分析によって検
出される水素/重水素交換である。一般論として、水素/重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識する工程、続いて抗体を重水素標識されたタンパク質と結合させる工程を含む。次に、タンパク質/抗体複合体を水に移し、抗体複合体によって保護されているア
ミノ酸中の交換可能なプロトンは、界面の一部でないアミノ酸中の交換可能なプロトンより遅い速度で重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質/抗体界面の
一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持することができ、したがって、界面に含まれないアミノ酸と比較して比較的高い質量を示す。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテア
ーゼ切断及び質量分析に付し、それによって、抗体が相互作用する特異的アミノ酸に応答する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267:252〜259頁、Engen及びSmith (2001) Anal. Chem. 73:256A〜265Aを参照されたい。
【０１２８】
用語「エピトープ」は、B及び/又はT細胞が応答する抗原上の部位を指す。B細胞エピトープは、連続アミノ酸、又はタンパク質の三次折りたたみによって並置された非連続アミノ酸、両方から形成されうる。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、変性溶媒に曝露されても概して保持されるが、三次折りたたみによって形成されるエピトープは、変性溶媒で処理されると概して失われる。エピトープは、概して少なくとも3、より通常は少
なくとも5又は8〜10アミノ酸を固有の空間的配座で含む。
【０１２９】
修飾援用プロファイリング(Modification-Assisted Profiling:MAP)は、抗原構造ベー
スの抗体プロファイリング(Antigen Structure-based Antibody Profiling:ASAP)とも呼
ばれ、化学的に又は酵素的に修飾された抗原表面との各抗体の結合プロファイルの類似性に従って同じ抗原に対する多数のモノクローナル抗体(mAb)をカテゴリー分けする方法で
ある[米国特許出願公開第2004/0101920号を参照されたい(この特許文献はその全体が参照により本明細書に特に組み込まれている)]。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープと明らかに異なる又は部分的に重複する固有のエピトープを反映しうる。この技術は、遺伝学的に同一の抗体の迅速なフィルタリングを可能にするので、特徴付けの焦点を遺伝学的に異なる抗体に合わせることができる。ハイブリドーマスクリーニングに応用すると、MAPは、所望の特徴を有するmAbを生成する低頻度のハイブリドーマクローンの同定を助長することができる。MAPを用いて、本発明の抗体を異なるエピトープに
結合する抗体の群に選別することができる。
【０１３０】
特定の実施形態において、抗PD-L1抗体又はその抗原結合断片は、配列番号351で例示されるような天然形のPD-L1若しくは配列番号345〜348で例示されるような組換え生成され
たPD-L1のいずれかで例示されるいずれか1つ又は複数の領域内のエピトープに結合するか、又はその断片と結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、PD-L1のア
ミノ酸残基19〜239からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸を含む細胞外領域と結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、配列番号346によって例示さ
れるような、カニクイザルPD-L1のアミノ酸残基1〜221からなる群から選択される1つ又は複数のアミノ酸を含む領域と結合する。
【０１３１】
特定の実施形態において、Table 1(表1)に示されているような本発明の抗体は、配列番号351の約位置19〜約位置130にわたるアミノ酸残基、又は配列番号351の約位置130〜約位置153にわたるアミノ酸残基、又は配列番号351の約位置153〜約位置210にわたるアミノ酸残基、又は配列番号351の約位置210〜約位置239にわたるアミノ酸残基からなる群から選
択される少なくとも1つのアミノ酸配列と相互作用する。これらの領域は、配列番号345〜348で部分的に例示される。
【０１３２】
本発明は、本明細書のTable 1(表1)に記載されている特定の例示的抗体のいずれかと同じ又はTable 1(表1)に記載されている例示的抗体のいずれかのCDR配列を有する抗体と同
じエピトープ又はエピトープの一部分と結合する、抗PD-L1抗体を含む。同様に、本発明
は、PD-L1又はPD-L1断片との結合について、本明細書のTable 1(表1)に記載されている特定の例示的抗体のいずれかと競合する、又はTable 1(表1)に記載されている例示的抗体のいずれかのCDR配列を有する抗体と競合する、抗PD-L1抗体も含む。例えば、本発明は、PD-L1との結合について、本明細書の実施例6で定義するような1つ又は複数の抗体(例えばH2aM8309N、H1H9329P、H1H9336P、H2aM8314N、H2aM8316N、H2AM8718N、H1H9387P2、H1H9351P2、H1H9364P2、H1H9373P2及びH2aM8306N)と交差競合する、抗PD-L1抗体を含む。本発明
は、PD-L1との結合について、本明細書の実施例6で定義するような1つ又は複数の抗体(例
えばH1H9396P2、H2aM8317N、H2aM8321N、H1H9323P、H1H9382P2、H1H9344P2、H1H9345P2及びH1H9354P2)と交差競合する、抗PD-L1抗体も含む。
【０１３３】
当技術分野において公知の通例の方法を用いることによって、抗体が、参照抗PD-L1抗
体と同じエピトープと結合するのか、又は結合について参照抗PD-L1抗体と競合するのか
を容易に判定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗PD-L1抗体と同じエ
ピトープと結合するかどうかを判定するために、参照抗体をPD-L1タンパク質又はペプチ
ドと飽和条件下で結合させる。次に、PD-L1分子と結合する試験抗体の能力を評価する。
試験抗体が参照抗PD-L1抗体との飽和結合後にPD-L1と結合できる場合、試験抗体は参照抗PD-L1抗体とは異なるエピトープと結合すると結論付けることができる。その一方で、試
験抗体が参照抗PD-L1抗体との飽和結合後にPD-L1タンパク質と結合できない場合には、試験抗体は、本発明の参照PD-L1抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する可
能性がある。
【０１３４】
抗体が参照抗PD-L1抗体と結合について競合するかどうかを判定するために、上記結合
方法論を2つの方向性で行う。第1の方向性では、参照抗体をPD-L1タンパク質と飽和条件
下で結合させ、その後、PD-L1分子との試験抗体の結合について評価する。第2の方向性では、試験抗体をPD-L1分子と飽和条件下で結合させ、その後、PD-L1分子との参照抗体の結合について評価する。両方の方向性で、第1の(飽和)抗体のみがPD-L1分子と結合できる場合には、試験抗体と参照抗体はPD-L1との結合について競合すると結論付けられる。当業
者には理解されるように、参照抗体と結合について競合する抗体は、参照抗体と同一のエピトープと必ずしも結合しなくてもよく、重複又は隣接エピトープに結合することによって参照抗体の結合を立体的に遮断することもある。
【０１３５】
2つの抗体は、各々が抗原との他方の結合を競合的に阻害(遮断)する場合、同じ又は重
複エピトープと結合する。すなわち、1、5、10、20又は100倍過剰の一方の抗体は、競合
結合アッセイ(例えば、Junghansら、Cancer Res. 1990 50:1495〜1502頁を参照されたい)で測定して、他方の結合を少なくとも50%、しかし好ましくは75%、90%又は更には99%阻害する。或いは、2つの抗体は、一方の抗体の結合を低減又は排除する、抗原の本質的にす
べてのアミノ酸突然変異が、他方の結合を低減又は排除する場合、同じエピトープを有する。2つの抗体は、一方の抗体の結合を低減又は排除するいくつかのアミノ酸突然変異が
、他方の結合を低減又は排除する場合、重複エピトープを有する。
【０１３６】
その場合には更なる通例の実験(例えばペプチド変異及び結合分析)を行って、試験抗体について観察される結合欠如が、参照抗体と同じエピトープと結合することに実際に起因するのかどうか、又は立体的遮断(又は別の現象)が、観察される結合欠如の原因であるのかどうかを確認することができる。この選別実験は、ELISA、RIA、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー又は当技術分野において利用可能な任意の他の定量的若しくは定性的抗体結合アッセイを用いて行うことができる。
【０１３７】
イムノコンジュゲート
本発明は、癌を処置するための、細胞毒又は化学療法薬等の治療性部分にコンジュゲートされたヒト抗PD-L1モノクローナル抗体(「イムノコンジュゲート」)を包含する。本明
細書で用いる場合、用語「イムノコンジュゲート」は、細胞毒、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的若しくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチド若しくはタンパク質又は治療薬に化学的に又は生物学的に連結されている抗体を指す。抗体は、抗体がその標的に結合することができるならばいずれの位置で細胞毒、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的若しくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチド又は治療薬に連結されていてもよい。イムノコンジュゲートの例としては、抗体薬物コンジュゲート及び抗体−毒素融合タンパク質が挙げられる。一実施形態において、薬剤は、PD-L1に
対する別の二次抗体であることもある。特定の実施形態において、抗体は、腫瘍細胞又はウイルス感染細胞に特異的な薬剤にコンジュゲートされていることもある。抗PD-L1抗体
に結合させることができる治療性部分のタイプは、処置される状態及び達成される所望の治療効果を考慮に入れることになる。イムノコンジュゲートの形成に好適な薬剤の例は、当技術分野において公知である。例えばWO 05/103081を参照されたい。
【０１３８】
多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性であることもあり、二重特異性であることもあり、又は多重特異性であることもある。多重特異性抗体は、1つの標的ポリペプチドの異なるエピト
ープに特異的であることもあり、又は1つより多くの標的ポリペプチドに特異的な抗原結
合ドメインを含有することもある。例えば、Tuttら、1991、J. Immunol. 147:60〜69頁、Kuferら、2004、Trends Biotechnol. 22:238〜244頁を参照されたい。
【０１３９】
一態様において、本発明は、免疫グロブリンの1つの抗原結合特異性が、PD-L1の細胞外ドメイン内(例えばIgV様領域内)のエピトープ又はその断片に特異的であり、免疫グロブ
リンの他の抗原結合特異性が、PD-L1の細胞外ドメイン内(例えばIgC様領域内)の異なるエピトープ、若しくは第2の治療標的との結合に特異的であるか、又は治療性部分にコンジ
ュゲートされる、多重特異性抗原結合分子又はその抗原結合断片を含む。特定の実施形態において、第1の抗原結合特異性は、PD-1若しくはB7-1、又はその断片を含むことがある
。一実施形態において、PD-L1と結合する第1の抗原結合特異性は、PD-1の細胞外ドメインを含む。本発明の特定の実施形態において、免疫グロブリンの1つの抗原結合特異性は、PD-L1(配列番号351)のアミノ酸残基19〜239内のエピトープ又はその断片に特異的であり、免疫グロブリンの他の特異性は、第2の標的抗原に特異的である。第2の標的抗原は、PD-L1と同じ細胞上にあることもあり、又は異なる細胞上にあることもある。一実施形態にお
いて、第2の標的細胞は、T細胞以外の免疫細胞、例えば、B細胞、抗原提示細胞、単球、
マクロファージ又は樹状細胞上にある。いくつかの実施形態において、第2の標的抗原は
、腫瘍細胞上で提示されることもあり、又はウイルス感染細胞上で提示されることもある。
【０１４０】
別の態様において、本発明は、PD-L1と結合する第1の抗原結合特異性と、腫瘍細胞上の標的抗原と特異的に結合する第2の抗原結合特異性とを有する、多重特異性抗原結合分子
又はその抗原結合断片を提供する。様々な実施形態において、腫瘍特異的抗原は、CA9、CA125、黒色腫関連抗原(MAGE)、癌胎児抗原(CEA)、ビメンチン、腫瘍-M2-PK、前立腺特異
的抗原(PSA)、MART-1、又はCA19-9のうちの1つである。他の特異的腫瘍関連抗原の非限定的な例としては、例えば、AFP、ALK、BAGEタンパク質、β-カテニン、bcr-abl、BRCA1、BORIS、炭酸脱水酵素IX、カスパーゼ-8、CCR5、CD19、CD20、CD30、CD40、CDK4、CTLA4、
サイクリン-B1、CYP1B1、EGFR、EGFRvIII、ErbB2/Her2、ErbB3、ErbB4、ETV6-AML、EpCAM、EphA2、Fra-1、FOLR1、GAGEタンパク質(例えばGAGE-1、-2)、GD2、GD3、GloboH、グリ
ピカン-3、GM3、gp100、Her2、HLA/B-raf、HLA/k-ras、HLA/MAGE-A3、hTERT、LMP2、MAGEタンパク質(例えばMAGE-1、-2、-3、-4、-6及び-12)、HLA-A2、MART-1、メソセリン、ML-IAP、Muc1、Muc2、Muc3、Muc4、Muc5、Muc16(CA-125)、MUM1、NA17、NY-BR1、NY-BR62、NY-BR85、NY-ESO1、OX40、p15、p53、PAP、PAX3、PAX5、PCTA-1、PLAC1、PRLR、PRAME、PSMA(FOLH1)、RAGEタンパク質、Ras、RGS5、Rho、SART-1、SART-3、Steap-1、Steap-2、サ
バイビン、TAG-72、TGF-β、TMPRSS2、Tn、TRP-1、TRP-2、チロシナーゼ、及びウロプラ
キン-3が挙げられる。他の実施形態において、第2の抗原結合特異性は、腎細胞癌、前立
腺癌、結腸直腸癌、黒色腫、乳癌、腎癌、卵巣癌及び膵癌(しかしこれらに限定されない)に特異的な腫瘍細胞上に存在する腫瘍抗原と結合する。本発明の抗体は、この態様では、PD-L1の活性を阻害しうる。
【０１４１】
別の態様において、本発明は、第2の抗原結合特異性がウイルス感染細胞に特異的な抗
原と結合する、多重特異性抗原結合分子又はその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態において、第2の抗原結合特異性は、HIV、HBV、HCV、HPV、LCMV及びSIVからなる群から選択されるウイルスに感染した細胞に特異的な抗原と結合する。
【０１４２】
別の態様において、本発明は、PD-L1と結合する第1の抗原結合特異性と、T細胞共阻害
因子、例えば、PD-1、LAG-3、TIM3、B7-1、CTLA-4、BTLA、CD-28、2B4、LY108、TIGIT、LAIR1、ICOS及びCD160と結合する第2の抗原特異性とを有する、多重特異性抗原結合分子又はその抗原結合断片を提供する。
【０１４３】
多重特異性抗原結合分子のいずれか又はそれらの変異体は、当業者に周知であるような標準的分子生物学的技法(例えば、組換えDNA及びタンパク質発現技術)を用いて構築する
ことができる。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、PD-L1特異的抗体は、PD-L1の異なるドメインと結合する様々な領域を互いに連結させて単一の結合分子内に二重ドメイン特異性を付与する二重特異性形式で産生される(「二重特異性のもの」)。適切に設計された二重特異性は、特異性と結合力の両方を増加させることによって総合的PD-L1阻害有効性を向上させることがで
きる。個々のドメインに対して特異性を有する様々な領域(例えば、N末端ドメインのセグメント)、又は1つのドメイン内の異なる領域と結合することができる様々な領域を、各領域を同時に別個のエピトープと又は1つのドメイン内の異なる領域と結合させる構造的足
場を用いて対合させる。二重特異性のものの一例では、1つのドメインに対して特異性を
有するバインダーからの重鎖可変領域(VH)を、第2のドメインに対して特異性を有する一
連のバインダーからの軽鎖可変領域(VL)と組み換えて、元のVHに対する元の特異性を破壊することなく、元のVHと対合させることができる非同族VLパートナーを同定する。この要領で、単一VLセグメント(例えばVL1)を2つの異なるVHドメイン(例えばVH1及びVH2)と組み合わせて、2つの結合「アーム」(VH1-VL1及びVH2-VL1)からなる二重特異性のものを生じ
させることができる。単一VLセグメントの使用は、系の複雑度を低減させ、その結果、二重特異性のものを生じさせるために使用されるクローニング、発現及び精製プロセスを単純化し、そのようなプロセスの効率を増す(例えば米国特許出願第13/022759号及び米国特許出願公開第2010/0331527号を参照されたい)。
【０１４５】
或いは、1つより多くのドメインにも結合し、且つ、これに限定されるものではないが
、例えば第2の異なる抗PD-L1抗体等の、第2の標的に結合する抗体を、本明細書に記載す
る技法又は当業者に公知の他の技法を用いて二重特異性形式で調製することができる。異なる領域と結合する抗体可変領域と、例えばPD-L1の細胞外ドメイン上の、関連する部位
と結合する可変領域とを互いに連結させて、単一の結合分子内に二重抗原特異性を付与することができる。この性質について適切に設計された二重特異性は、二重機能を果たす。細胞外ドメインに対する特異性を有する可変領域を、細胞外ドメインの外側対する特異性を有する可変領域と組み合わせ、各々の可変領域を別個の抗原と結合させる構造的足場を用いて対合させる。
【０１４６】
本発明に関連して使用することができる例示的二重特異性形式は、第1の免疫グロブリ
ン(Ig)CH3ドメイン及び第2のIg CH3ドメインの使用を含み、第1及び第2のIg CH3ドメインは、少なくとも1つのアミノ酸が互いに異なり、少なくとも1つのアミノ酸の相違は、アミノ酸の相違のない二重特異性抗体と比較してプロテインAとの二重特異性抗体の結合を低
減させる。一実施形態において、第1のIg CH3ドメインはプロテインAに結合し、第2のIg CH3ドメインは、プロテインA結合を低減又は消失させる突然変異、例えばH95R修飾(IMGT
エクソンナンバリングによる; EUナンバリングによるとH435R)を含有する。第2のCH3は、Y96F修飾(IMGTによる;EUによるとY436F)を更に含むこともある。第2のCH3内で見つけることができる更なる修飾としては、IgG1抗体の場合、D16E、L18M、N44S、K52N、V57M及びV8
2I(IMGTによる;EUによるとD356E、L358M、N384S、K392N、V397M及びV422I)、IgG2抗体の
場合、N44S、K52N及びV82I(IMGT;EUによるとN384S、K392N及びV422I)、並びにIgG4抗体の場合Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q及びV82I(IMGTによる;EUによるとQ355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q及びV422I)が挙げられる。上に記載した二重特異性抗体形式の異形が本発明の範囲内で企図される。
【０１４７】
本発明に関連して使用することができる他の例示的二重特異性形式としては、限定ではないが、例えば、scFbベースの又はダイアボディ二重特異性形式、IgG-scFv融合体、二重可変ドメイン(DVD)-Ig、クアドローマ、ノブイントゥーホール(knobs-into-holes)、共通軽鎖(例えば、ノブイントゥーホールを伴う共通軽鎖等)、CrossMab、CrossFab、(SEED)ボディ、ロイシンジッパー、Duobody、IgG1/IgG2二重作用性Fab(DAF)-IgG、及びMab2二重特異性形式が挙げられる(前述の形式についての総説については、例えば、Kleinら、2012、mAbs 4:6、1〜11頁、及びこの文献に引用されている参考文献を参照されたい)。二重特異性抗体は、ペプチド/核酸コンジュげーしょんを用いて構築することもでき、この場合、
例えば、直交化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用して、部位特異的抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成し、するとコンジュゲートは被定義組成、結合価及び幾何形状を有する多量体複合体に自己組織化する。[例えば、Kazaneら、J. Am. Chem. Soc.(Epub:2012年12月4日)を参照されたい]。
【０１４８】
治療的投与及び製剤
本発明は、本発明の抗PD-L1抗体又はその抗原結合断片を含む治療用組成物を提供する
。本発明による治療用組成物は、好適な担体、賦形剤、及び改善された移入、送達、耐容性等をもたらすために製剤に組み込まれる他の薬剤と共に投与されることになる。多くの適切な製剤を、全ての薬剤師に公知の処方集:Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、PAにおいて見つけることができる。これらの製剤とし
ては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、(カチオン性又は
アニオン性)脂質含有ビヒクル[例えば、LIPOFECTIN(商標)]、DNAコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス(様々な
分子量のポリエチレングリコール類)、半固体ゲル、並びにカルボワックスを含有する半
固体混合物が挙げられる。例えば、Powellら、「Compendium of excipients for parenteral formulations」、PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52:238〜311頁も参照されたい。
【０１４９】
抗体の用量は、投与すべき対象の年齢及び大きさ、標的疾患、状態、投与経路等に依存して変わることがある。本発明の抗体が成人患者の疾患若しくは障害の処置に、又はそのような疾患の予防に使用される場合、本発明の抗体を、通常、体重1kgにつき約0.1〜約100mg、より好ましくは体重1kgにつき約5〜約80、約10〜約60、又は約20〜約50mgの単一用
量で投与するのが有利である。状態の重症度に依存して、処置の頻度及び継続期間を調整することができる。特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合部位を少なくとも約0.1mg〜約800mg、約1〜約500mg、約5〜約300mg、又は約10〜約200mg、〜約100mg若しくは〜50mgの初回用量として投与することができる。特定の実施形態では、初回用量の後に、初回用量のものとほぼ同じ又はそれ未満でありうる量での抗体又はその抗原結合断片の第2の用量又は複数の後続用量が投与されることもあり、後続の用量は、少なくとも1日〜3日、少なくとも1週間、少なくとも2週間、少なくとも3週間、少なくとも4週間、少な
くとも5週間、少なくとも6週間、少なくとも7週間、少なくとも8週間、少なくとも9週間
、少なくとも10週間、少なくとも12週間又は少なくとも14週間、離される。
【０１５０】
様々な送達システム、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、突然変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス(例え
ば、Wuら、(1987) J. Biol. Chem. 262:4429〜4432頁を参照されたい)が公知であり、そ
のような送達システムを使用して本発明の医薬組成物を投与することができる。導入方法
としては、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外及び経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物を任意の適便な経路によって、例えば、注入又はボーラス注射によって、上皮内層又は粘膜皮膚内層(例えば、経口粘膜、直腸及び
腸粘膜等)による吸収によって投与してよく、他の生物活性薬剤と一緒に投与してもよい
。投与は、全身的であることもあり、又は局所的であることもある。医薬組成物をビヒクル、特にリポソームで送達することもできる(例えばLanger(1990)Science 249:1527〜1533頁を参照されたい)。
【０１５１】
本発明の抗体を送達するためのナノ粒子の使用も本明細書において企図される。抗体コンジュゲートナノ粒子は、治療用途にも診断用途にも使用することができる。抗体コンジュゲートナノ粒子並びに調製及び使用方法は、Arruebo, M.ら、2009(「Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications」、J. Nanomat.第2009巻、Article ID
439389、24頁、doi:10. 1155/2009/439389)によって詳細に記載されており、参考文献は参照により本明細書に組み込まれている。ナノ粒子を開発し、医薬組成物に含有されている抗体にコンジュゲートして、腫瘍細胞又は自己免疫組織細胞又はウイルス感染細胞に標的化してもよい。薬物送達用のナノ粒子は、例えば米国特許第8257740号又は同第8246995号にも記載されており、特許文献の各々はその全体が本明細書に組み込まれている。
【０１５２】
特定の状況では、医薬組成物を制御放出システムで送達することができる。一実施形態では、ポンプが使用されることがある。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる。更に別の実施形態では、制御放出システムを組成物の標的の近くに配置することができ、したがって全身用量の何分の一かしか必要としない。
【０１５３】
注射用調製物としては、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、腹腔内及び筋肉内注射、点滴注入等のための剤形を挙げることができる。これらの注射用製剤は、公知の方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、注射剤に従来使用されている滅菌水性媒体又は油性媒体に上記の抗体又はその塩を溶解、懸濁又は乳化することによって調製することができる。注射剤のための水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤を含有する等張溶液等があり、これらを適切な可溶化剤、例えばアルコール(例えばエタノール)、多価アルコール(例えば、プロピレングリコール、ポリエチ
レングリコール)、非イオン性界面活性剤{例えば、ポリソルベート80、HCO-50[硬化ヒマ
シ油のポリオキシエチレン(50mol)付加体]}等と併用してもよい。油性媒体としては、例
えば、ゴマ油、ダイズ油等が利用され、これらを可溶化剤、例えば安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と併用してもよい。好ましくは、このようにして調製された注射剤を適切なアンプルに充填する。
【０１５４】
本発明の医薬組成物は、標準的な針及び注射器で皮下又は静脈内送達することができる。加えて、皮下送達に関しては、ペン型送達デバイスが本発明の医薬組成物の送達に利用される。そのようなペン型送達デバイスは、再使用可能であることもあり、又は使い捨てであることもある。再使用可能なペン型送達デバイスには、医薬組成物が入っている交換可能カートリッジが一般に利用される。カートリッジ内の医薬組成物の全てを投与してしまい、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄することができ、医薬組成物が入っている新たなカートリッジと容易に交換することができる。その後、そのペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスには、交換可能カートリッジがない。もっと正確に言えば、使い捨てペン型送達デバイスには医薬組成物が予め充填されており、医薬組成物はデバイスの貯液部に保持されている。貯液部の医薬組成物が空になったら、デバイス全体を廃棄する。
【０１５５】
非常に多くの再使用可能ペン型及び自己注射器型送達デバイスが本発明の医薬組成物の皮下送達に利用される。例としては、ほんの数例を挙げると、AUTOPEN(商標)(Owen Mumfo
rd社、Woodstock、UK)、DISETRONIC(商標)ペン(Disetronic Medical Systems社、Burghdorf、Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25(商標)ペン、HUMALOG(商標)ペン、HUMALIN 70/30(商標)ペン(Eli Lilly and Co.社、Indianapolis、IN)、NOVOPEN(商標)I、II及びIII(Novo
Nordisk社、Copenhagen、Denmark)、NOVOPEN JUNIOR(商標)(Novo Nordisk社、Copenhagen、Denmark)、BD(商標)ペン(Becton Dickinson社、Franklin Lakes、NJ)、OPTIPEN(商標)、OPTIPEN PRO(商標)、OPTIPEN STARLET(商標)、並びにOPTICLIK(商標)(Sanofi-Aventis
社、Frankfurt、Germany)が挙げられるが、これらに限定されないのは確かである。本発
明の医薬組成物の皮下送達に利用される使い捨てペン型送達デバイスの例としては、ほんの数例を挙げると、SOLOSTAR(商標)ペン(Sanofi-Aventis社)、FLEXPEN(商標)(Novo Nordisk社)及びKWIKPEN(商標)(Eli Lilly社)、SURECLICK(商標)オートインジェクター(Amgen社、Thousand Oaks、CA)、PENLET(商標)(Haselmeier社、Stuttgart、Germany)、EPIPEN(Dey, L. P.)及びHUMIRA(商標)ペン(Abbott Labs社、Abbott Park、IL)が挙げられるが、これらに限定されないのは確かである。
【０１５６】
上で説明した経口又は非経口用の医薬組成物は、活性成分の用量を合わせることに適した単位用量の剤形に調製するのが有利である。単位用量でのそのような剤形としては、例えば、錠剤、ピル、カプセル、注射剤(アンプル)、坐剤等が挙げられる。含有される抗体の量は、一般に、単位用量の剤形1つにつき約5〜500mgであり、特に注射の形態の場合、
抗体は、約5〜約100mgで、及び他の剤形については約10〜約250mgで含有されることが好
ましい。
【０１５７】
抗体の治療上の使用
本発明の抗体は、癌、自己免疫疾患若しくはウイルス感染症等の疾患若しくは障害若しくは状態の処置、予防及び/若しくは改善に、並びに/又はそのような疾患、障害若しくは状態に関連した少なくとも1つの症状の改善に有用である。本発明のいくつかの実施形態
において、本明細書に記載する抗体は、例えば腎細胞癌、前立腺癌、卵巣癌、腎癌、結腸直腸癌、胃癌、乳癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌、脳癌、多発性骨髄腫及び黒色腫をはじめとする、原発又は再発癌に罹患している対象の処置に有用である。抗体を使用して、癌の早期又は後期の症状を処置することができる。一実施形態では、本発明の抗体又はその断片を使用して、転移性癌を処置することができる。抗体は、固形腫瘍と血液癌両方の腫瘍成長の低減又は阻害又は収縮に有用である。特定の実施形態では、抗体を使用して、腫瘍の再発を予防することができる。特定の実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合断片での処置は、対象の腫瘍の50%を超える退縮、60%を超える退縮、70%を超える退縮
、80%を超える退縮、又は90%を超える退縮をもたらすことができる。特定の実施形態では、抗体を使用して、癌に罹患している対象の生存時間を増すことができる。
【０１５８】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、慢性ウイルス感染症に罹患している対象の処置に有用である。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、宿主のウイルス力価の減少及び/又は疲弊T細胞のレスキューに有用である。一実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合断片を、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)又はヒト乳頭腫ウイルス(HPV)又はB/C型肝炎ウイルス(HBV/HCV)による感染症を有する患者に治療用量で投与することができる。関連実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合断片を使用して、カニクイザル等のサル対象のサル免疫不全ウイルス(SIV)による感染症を処置することができる。別の実施
形態では、本発明の抗体又はその断片を使用して、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)による慢性ウイルス感染症を処置することができる。
【０１５９】
特定の実施形態では、本発明の遮断抗体を癌又はウイルス感染症に罹患している対象に治療有効量で投与することができる。
【０１６０】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、円形脱毛症、自己免疫性肝炎、セリアック
病、ブレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、溶血性貧血、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、白斑、自己免疫性膵炎、自己免疫性じんま疹、自己免疫性血小板減少性紫斑病、クローン病、I型糖尿病、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃
腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、血管炎及びウェゲナー肉芽腫症をはじめとする(しかしこれらに限定されない)、自己免疫疾患の処置に有用である。特定の実施形態では、本発明の活性化抗体を使用して、自己免疫疾患に罹患している対象を処置することができる。
【０１６１】
本発明の1つ又は複数の抗体を使用して、疾患又は障害の1つ若しくは複数の症状若しくは状態を緩和若しくは予防することができ、又はそのような症状若しくは状態の重症度を低下させることができる。
【０１６２】
癌及び慢性ウイルス感染症等の疾患又は障害を発症するリスクがある患者に対して本発明の1つ又は複数の抗体を予防的に使用することも本明細書では企図される。
【０１６３】
本発明の更なる実施形態において、本抗体は、癌、自己免疫疾患又はウイルス感染症に罹患している患者を処置するための医薬組成物の調製に使用される。本発明の別の実施形態において、本抗体は、癌、自己免疫疾患又はウイルス感染症に有用な当業者に公知の任意の他の薬剤又は任意の他の治療法と共に補助療法として使用される。
【０１６４】
併用療法
併用療法は、本発明の抗PD-L1抗体、及び本発明の抗体と又は本発明の抗体の生物活性
断片と有利に併用することができる任意の更なる治療薬を含むことがある。
【０１６５】
本発明の抗体は、例えば腎細胞癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌及び黒色腫をはじめとする、癌を処置するために用いられる1つ又は複数の抗癌薬又は療法と
相乗的に併用することができる。腫瘍成長を阻害する及び/又は癌患者の生存時間を増す
ための免疫賦活及び/又は免疫補助(immunosupportive)療法と本発明の抗PD-L1抗体の併用が本明細書において企図される。免疫賦活療法は、抑制された免疫細胞に対する「ブレーキを解除すること」、又は免疫応答を活性化させるように「アクセルを踏むこと」のいずれかによって免疫細胞活性を増大させる直接免疫賦活療法を含む。例としては、他のチェックポイント受容体の標的化、ワクチン接種及びアジュバントが挙げられる。免疫補助様式は、免疫原性細胞死、炎症を促進することにより腫瘍の抗原性を増させることもあり、又は抗腫瘍免疫応答を促進する他の間接的作用を有することもある。例としては、放射線照射、化学療法、抗血管新生薬、及び外科手術が挙げられる。
【０１６６】
本発明の1つ又は複数の抗体は、PD-L1に対する二次抗体、PD-1に対する抗体(例えばニ
ボルマブ)、LAG-3阻害剤、CTLA-4阻害剤(例えばイピリムマブ)、TIM3阻害剤、BTLA阻害剤、TIGIT阻害剤、CD47阻害剤、別のT細胞共阻害因子又はリガンドのアンタゴニスト(例え
ば、CD-28、2B4、LY108、LAIR1、ICOS、CD160又はVISTAに対する抗体)、インドールアミ
ン-2,3-ジオキシゲナーゼ(IDO)阻害剤、血管内皮増殖因子(VEGF)アンタゴニスト[例えば
、「VEGFトラップ」、例えば米国特許第7,087,411号に記載されているようなアフリベル
セプト若しくは他のVEGF阻害性融合タンパク質、又は抗VEGF抗体若しくはその抗原結合断片(例えばベバシズマブ又はラニビズマブ)、又はVEGF受容体の小分子キナーゼ阻害剤(例
えばスニチニブ、ソラフェニブ又はパゾパニブ)]、Ang2阻害剤(例えばネスバクマブ)、トランスフォーミング増殖因子β(TGFβ)阻害剤、内皮増殖因子受容体(EGFR)阻害剤(例えばエルロチニブ、セツキシマブ)、共刺激性受容体に対するアゴニスト(例えば、糖質コルチコイドTNFR関連タンパク質に対するアゴニスト)、腫瘍特異的抗原に対する抗体[例えば、CA9、CA125、黒色腫関連抗原3(MAGE3)、癌胎児抗原(CEA)、ビメンチン、腫瘍-M2-PK、前
立腺特異的抗原(PSA)、ムチン-1、MART-1、及びCA19-9]、ワクチン(例えば、カルメット
−ゲラン桿菌、癌ワクチン)、抗原提示を増加させるためのアジュバント(例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子)、二重特異性抗体(例えば、CD3xCD20二重特異性抗体、PSMAxCD3二重特異性抗体)、細胞毒、化学療法薬(例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル及びビンクリスチン)、シクロホスファミド、放射線療法、IL-6R阻害剤(例えばサリルマブ)、IL-4R阻害剤(例えばシュピルマブ)、IL-10阻害剤、サイトカイン、例えばIL-2、IL-7、IL-21及びIL-15、抗体薬物コンジュゲート(ADC)(例えば抗CD19-DM4
ADC及び抗DS6-DM4 ADC)、抗炎症薬(例えばコルチコステロイド及び非ステロイド性抗炎
症薬)、抗酸化物質等の栄養補助食品、又は癌を処置するための任意の緩和ケアと併用す
ることができる。特定の実施形態では、本発明の抗PD-L1抗体を樹状細胞ワクチン、腫瘍
溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチン等をはじめとする癌ワクチンと併用して、抗腫瘍応答を増大させることができる。本発明の抗PD-L1抗体と併用することができる癌ワクチンの
例としては、黒色腫及び膀胱癌のためのMAGE3ワクチン、乳癌のためのMUC1ワクチン、脳
癌(多形神経膠芽腫を含む)のためのEGFRv3(例えばリンドペプミト)、又はALVAC-CEA(CEA+癌のため)が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の抗PD-L1抗体は、抗酸化物質等の栄養補助食品、又は癌を処置するための任意の緩和ケアと併用することができる。
【０１６７】
特定の実施形態では、本発明の抗PD-L1抗体を、長期持続的抗腫瘍応答を生じさせる及
び/又は癌を有する患者の生存時間を増す方法で、放射線療法と併用して投与することが
できる。いくつかの実施形態において、本発明の抗PD-L1抗体は、癌患者への放射線療法
の投与より前に、投与と同時に、又は投与後に投与されることがある。例えば、放射線療法を1又は複数線量で腫瘍性病変に投与し、その後、本発明の1又は複数用量の抗PD-L1抗
体を投与することができる。いくつかの実施形態では、放射線療法を腫瘍性病変に局所投与して、患者の腫瘍の局所免疫原性を増させ[アジュバント作用性放射線照射(adjuvinating radiation)]、及び/又は腫瘍細胞を死滅させ[切除性放射線照射(ablative radiation)]、その後、本発明のPD-L1抗体を全身投与することができる。例えば、頭蓋内放射線照射を、脳癌(例えば多形神経膠芽腫)を有する患者に、本発明の抗PD-L1抗体の前進投与と共
に投与することができる。特定の実施形態では、本発明の抗PD-L1抗体を放射線療法、及
び化学療法薬(例えばテモゾロミド)、又はVEGFアンタゴニスト(例えばアフリベルセプト)と併用して投与することができる。
【０１６８】
本発明の抗体又はそれらの断片を、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノホビル、リルピビリン及びコルチコステロイドをはじめとする(しかしこれらに限定されない)、当技術分野において公知の1つ又は複数の抗ウイルス薬と併用することができる。いくつかの実施形態では、本発明
の抗PD-L1抗体をLAG3阻害剤、CTLA-4阻害剤、PD-1阻害剤、又は別のT細胞共阻害因子の任意のアンタゴニストと併用投与して、慢性ウイルス感染症を処置することができる。
【０１６９】
本発明の抗体又はそれらの断片を当技術分野において公知の任意の薬物又は治療法(例
えばコルチコステロイド及び他の免疫抑制剤)と併用して、円形脱毛症、自己免疫性肝炎
、セリアック病、ブレーブス病、ギラン−バレー症候群、橋本病、溶血性貧血、炎症性腸疾患、炎症性ミオパチー、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、白斑、自己免疫性膵炎、自己免疫性じんま疹、自己免疫性血小板減少性紫斑病、クローン病、I型糖尿病、好酸球性筋膜炎
、好酸球性胃腸炎、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、乾癬性関節炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、血管炎及びウェゲナー肉芽腫症をはじめとする(しかしこれらに限定さ
れない)、自己免疫疾患又は障害を処置することができる。
【０１７０】
更なる治療活性成分を本発明の抗PD-L1抗体の投与より前に、投与と同時に、又は投与
後に投与してもよい。本開示の目的では、そのような投与レジメンは、第2の治療活性成
分「と併用しての」抗PD-L1抗体の投与とみなされる。
【０１７１】
更なる治療活性成分が本発明の抗PD-L1抗体の投与より前に対象に投与されることもあ
る。例えば、第1の成分が第2の成分の投与の1週間前、72時間前、60時間前、48時間前、36時間前、24時間前、12時間前、6時間前、5時間前、4時間前、3時間前、2時間前、1時間
前、30分前、15分前、10分前、5分前、又は1分未満前に投与される場合、第1の成分は第2の成分「より前」に投与されると考えることができる。他の実施形態では、更なる治療活性成分が本発明の抗PD-L1抗体の投与後に対象に投与されることもある。例えば、第1の成分が第2の成分の投与の1分後、5分後、10分後、15分後、30分後、1時間後、2時間後、3時間後、4時間後、5時間後、6時間後、12時間後、24時間後、36時間後、48時間後、60時間
後、又は72時間後に投与される場合、第1の成分は第2の成分「後」に投与されると考えることができる。更に他の実施形態では、更なる治療活性成分が本発明の抗PD-L1抗体の投
与と同時に対象に投与されることもある。「同時」投与は、本発明の目的では、例えば、抗PD-L1抗体及び更なる治療活性成分の対象への、単一剤形(例えば共製剤化されたもの)
での投与、又は互いに約30分以内にされる別個の剤形での投与を含む。別個の剤形で投与される場合、各剤形は、同じ経路によって投与されることもあり(例えば、抗PD-L1抗体と更なる治療活性成分は静脈内的に、皮下的に等で投与されることがある)、或いは、各剤
形は、異なる経路によって投与されることもある(例えば、抗PD-L1抗体は静脈内投与されることがあり、更なる治療活性成分は皮下投与されることがある)。いずれにせよ、単一
剤形での投与、同じ経路による別個の剤形での投与、又は異なる経路による別個の剤形での投与はすべて、本開示の目的では「同時投与」とみなされる。本開示の目的では、更なる治療活性成分の投与「より前」、「と同時」又は「後」(これらの用語は本明細書にお
いて上で定義した通りである)の抗PD-L1抗体の投与は、更なる治療活性成分「と併用しての」抗PD-L1抗体の投与とみなされる。
【０１７２】
本発明は、様々な投薬量の組み合わせを用いて、本発明の抗PD-L1抗体と本明細書中の
他の箇所に記載の1つ又は複数の更なる治療活性成分とが共製剤化される、医薬組成物を
含む。
【０１７３】
抗PD-L1抗体とVEGFアンタゴニストとを含む共製剤の投与を含めて、本発明の抗PD-L1抗体がVEGFアンタゴニスト(例えばVEGFトラップ、例えばアフリベルセプト)と併用して投与される例示的実施形態において、個々の成分は、対象に投与されることもあり、及び/又
は様々な投薬量の組み合わせを用いて共製剤化されることもある。例えば、抗PD-L1抗体
は、対象に投与されることもあり、及び/又は0.01mg、0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg
、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg、3.0mg、3.5mg、4.0mg、4.5mg、5.0mg、6.0mg、7.0mg、8.0mg、9.0mg及び10.0mgからなる群から選択される量で共製剤に含有されることもあり、VEGFアンタゴニスト(例えばVEGFトラップ、例えばアフリベルセプト)は、対象に投与されることもあり、及び/又は0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg及び3.0mgからなる群から選択される
量で共製剤に含有されることもある。組み合わせ/共製剤は、例えば、週に2回、週に1回
、2週間に1回、3週間に1回、月に1回、2カ月に1回、3カ月に1回、4カ月に1回、5カ月に1
回、6カ月に1回等を含む、本明細書中の他の箇所で開示する投与レジメンのいずれかに従って対象に投与することができる。
【０１７４】
投与レジメン
本発明の特定の実施形態によると、抗PD-L1抗体(又は抗PD-L1抗体と本明細書において
述べる更なる治療活性薬剤のいずれかとの組み合わせを含む医薬組成物)の複数の用量を
、定義された時間経過にわたって対象に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、本発明の抗PD-L1抗体の複数の用量を患者に逐次投与することを含む。本明細書
で用いる場合、「逐次投与すること」は、抗PD-L1抗体の各用量を対象に異なる時点で、
例えば、所定の間隔(例えば、数時間、数日、数週間又は数カ月)隔てた異なる日に投与することを意味する。本発明は、抗PD-L1抗体の単一初回用量、続いて抗PD-L1抗体の第2の1用量又は複数の用量、場合により、続いて抗PD-L1抗体の第3の1用量又は複数の用量を患
者に逐次的に投与することを含む方法を含む。抗PD-L1抗体は、0.1mg/kg〜約100mg/kgの
間の用量で投与することができる。
【０１７５】
用語「初回用量」、「第2の用量」及び「第3の用量」は、本発明の抗PD-L1抗体の投与
についての時系列を指す。したがって、「初回用量」は、処置レジメンの開始時に投与される用量(「ベースライン用量」とも呼ばれる)であり;「第2の用量」は、初回用量後に投与される用量であり、「第3の用量」は、第2の用量後に投与される用量である。初回、第2及び第3の用量は、全て同じ量のPD-L1を含有することもあるが、一般には投与頻度の点
から互いに異なることがある。しかし、特定の実施形態において、初回、第2及び/又は第3の用量に含有される抗PD-L1抗体の量は、処置の過程で互いに異なる(例えば、必要に応
じて上方又は下方調整される)。特定の実施形態では、2用量以上の(例えば、2、3、4又は5)用量が「負荷用量」として処置レジメンの開始時に投与され、その後、より低頻度で投与される後続の用量(例えば、「維持用量」)が投与される。
【０１７６】
本発明の特定の例示的実施形態において、各第2及び/又は第3の用量は、直前の用量の1〜26週間(例えば、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5
、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5週間以上)後に投与される。「直前の用量」という句は、本明細書で
用いる場合、複数の投与の順序に関して、介在する用量のないその順序のまさにその次の用量の投与の前に患者に投与される抗PD-L1抗体の用量を意味する。
【０１７７】
本発明のこの態様による方法は、抗PD-L1抗体の任意の数の第2及び/又は第3の用量を患者に投与することを含むことができる。例えば、特定の実施形態では、単一の第2の用量
のみが患者に投与される。他の実施形態では、2以上の(例えば、2、3、4、5、6、7、8以
上の)第2の用量が患者に投与される。同様に、特定の実施形態では、単一の第3の用量の
みが患者に投与される。他の実施形態では、2以上の(例えば、2、3、4、5、6、7、8以上
の)第3の用量が患者に投与される。
【０１７８】
複数の第2の用量を含む実施形態において、各々の第2の用量は、他の第2の用量と同じ
頻度で投与されることがある。例えば、各々第2の用量は、直前の用量の1〜2週間後又は1〜2カ月後に患者に投与されることがある。同様に、複数の第3の用量を含む実施形態において、各々の第3の用量は、他の第3の用量と同じ頻度で投与されることがある。例えば、各々の第3の用量は、直前の用量の2〜12週間後に患者に投与されることがある。本発明の特定の実施形態において、第2及び/又は第3の用量を患者に投与する頻度は、処置レジメ
ンの過程を通して様々でありうる。投与頻度は、臨床検査に従って個々の患者の必要に応じて医師によって処置の過程で調整されることもある。
【０１７９】
本発明は、2〜6の負荷用量が第1の頻度(例えば週に1回、2週間に1回、3週間に1回、1カ月に1回、2カ月に1回等)で患者に投与され、その後、より少ない頻度で患者に2以上の維
持用量が投与される。例えば、本発明のこの態様によると、負荷用量が、例えば1カ月に1回の頻度で投与される(例えば、1カ月に1回投与される2、3、4以上の負荷用量)場合、に
は、維持用量は、5週間に1回、6週間に1回、7週間に1回、8週間に1回、10週間に1回、12
週間に1回等で患者に投与されうる。
【０１８０】
抗体の診断上の使用
本発明の抗PD-L1抗体は、試料中のPD-L1を検出及び/又は測定するために、例えば診断
目的で、使用されることもある。いくつかの実施形態は、癌、自己免疫疾患又は慢性ウイルス感染症等の疾患又は障害を検出するためのアッセイにおける本発明の1つ又は複数の
抗体の使用を企図している。PD-L1についての例示的診断アッセイは、例えば、患者から
得た試料を本発明の抗PD-L1抗体と接触させることを含むことがあり、この場合、抗PD-L1抗体は、検出可能な標識又はレポーター分子で標識されるか、又は患者試料からPD-L1を
選択的に単離するための捕捉リガンドとして使用される。或いは、未標識の抗PD-L1抗体
を診断用途で二次抗体(それ自体が検出可能に標識されているもの)と併用することができる。検出可能な標識又はレポーター分子は、放射性同位元素、例えば3H、14C、32P、35S
若しくは125I、蛍光若しくは化学発光部分、例えばフルオレセイン、イソチオシアネート若しくはローダミン、又は酵素、例えばアルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ
、ホースラディッシュペルオキシダーゼ若しくはルシフェラーゼでありうる。試料中のPD-L1を検出又は測定するために使用することができる特定の例示的アッセイとしては、酵
素結合免疫吸着測定法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)及び蛍光活性化セルソーティング(FACS)が挙げられる。
【０１８１】
本発明によるPD-L1診断アッセイで使用することができる試料としては、正常又は病的
条件下で検出可能な量のPD-L1タンパク質又はその断片を含有する、患者から得ることが
できる任意の組織又は流体試料が挙げられる。一般に、健常な患者(例えば、癌にも自己
免疫疾患に罹患していない患者)から得られる特定の試料中のPD-L1のレベルを測定して、PD-L1のベースラインレベル又は基準レベルを先ず確立することになる。その後、PD-L1のこのベースラインレベルを、癌関連状態又はそのような状態に関連した症状を有する疑いのある個体から得た試料において測定されたPD-L1のレベルと比較することができる。
【０１８２】
PD-L1に特異的な抗体は、更なる標識若しくは部分を含有しないこともあり、又はN末端若しくはC末端標識若しくは部分を含有することもある。一実施形態において、標識又は
部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識(もしあれば)の位置によって、ペプチドが結合する表面に対するペプチドの配向が決まることがある。例えば、表面がアビジンで被覆されている場合、N末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのC末端部分が表面に対して遠位になるように配向されることになる。
【０１８３】
本発明の態様は、患者の癌又は自己免疫疾患の予後を予測するためのマーカーとしての本開示抗体の使用に関する。本発明の抗体を診断アッセイで使用して、患者の癌の予後を評価すること、及び生存時間を予測することができる。
【実施例】
【０１８４】
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物の作製及び使用方法の完全な開示及び説明を当業者に与えるために提示するものであり、本発明者らが自分達の発明と考える範囲を限定することを意図したものではない。用いる数値(例えば、量、温度等)に関して正確を期すように努めたが、多少の実験的誤差及び偏差を考慮すべきである。別段の指示がない限り、部は質量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、室温は約25℃であり、圧力は大気圧又はほぼ大気圧である。
【０１８５】
(実施例1)
PD-L1に対するヒト抗体の産生
配列番号351(Genbank受託番号NP_054862.1)のアミノ酸約19〜239にわたるPD-L1の断片
を使用して、PD-L1に対するヒト抗体を産生した。ヒト免疫グロブリン重鎖及びκ軽鎖可
変領域をコードするDNAを含むVELOCIMMUNE(登録商標)マウスに、免疫応答を刺激するためのアジュバントと共に免疫原を直接投与した。抗体免疫応答をPD-L1特異的免疫測定法に
よってモニターした。所望の免疫応答が達成されたら、脾細胞を回収し、マウス骨髄腫細胞と融合させて、それらの生存能を保ち、ハイブリドーマ細胞株を形成した。それらのハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択して、PD-L1特異的抗体を生成する細胞株
を同定した。この技法と上記の免疫原を用いて、いくつかの抗PD-L1キメラ抗体(すなわち、ヒト可変ドメインとマウス定常ドメインとを有する抗体)を得、この要領で産生した例
示的抗体をH2M8306N、H2M8307N、H2M8309N、H2M8310N、H2M8312N、H2M8314N、H2M8316N、H2M8317N、H2M8321N、H2M8323N、H2M8718N、H2M8718N2及びH2M8719Nと呼んだ。
【０１８６】
抗PD-L1抗体を、米国特許出願公開第2007/0280945号A1(その全体が参照により本明細書に特に組み込まれている)に記載されているように、骨髄腫細胞への融合なしで抗原陽性B細胞から直接単離もした。この方法を用いて、いくつかの完全ヒト抗PD-L1抗体(すなわち、ヒト可変ドメインとヒト定常ドメインとを有する抗体)を得、この要領で産生した例示
的抗体を次のように呼んだ:H1H9323P、H1H9327P、H1H9329P、H1H9336P、H1H9344P2、H1H9345P2、H1H9351P2、H1H9354P2、H1H9364P2、H1H9373P2、H1H9382P2、H1H9387P2及びH1H9396P2。
【０１８７】
この実施例の方法に従って産生した例示的抗体の生物学的特性は、下に示す実施例で詳細に説明する。
【０１８８】
(実施例2)
重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸及びヌクレオチド配列
Table 1(表1)は、本発明の選択された抗PD-L1抗体の重鎖及び軽鎖可変領域及びCDRのアミノ酸配列識別子を示すものである。対応する核酸配列識別子をTable 2(表2)に示す。
【０１８９】
【表１】
2020115876.tif 000002
【０１９０】
【表２】
2020115876.tif 000003
【０１９１】
本明細書では、概して次の命名法に従って抗体を呼ぶ。Fc接頭辞(例えば、「H1H」、「H2M」、「H2aM」等)、続いて数字の識別子(例えば、Table 1(表1)に示したような「8306
」、「9323」等)、続いて「P」、「N」、「P2」又は「N2」接尾辞。したがって、この命
名法に従って、本明細書では抗体を例えば「H2M8306N」、「H1H9344P2」等と呼ぶことが
ある。本明細書で用いる抗体名称のH1H、H2M及びH2aM接頭辞は、抗体の特定のFc領域アイ
ソタイプを示す。例えば、「H1H」抗体は、ヒトIgG1 Fcを有し、「H1M」抗体は、マウスIgG1 Fcを有し、「H2M」又は「H2aM」抗体は、マウスIgG2 Fcを有する(全ての可変領域は
、抗体名称の最初の「H」によって示されるように完全にヒトである)。当業者には理解されるように、特定のFcアイソタイプを有する抗体を異なるFcアイソタイプを有する抗体に変換することができる(例えば、マウスIgG1 Fcを有する抗体をヒトIgG4を有する抗体等に変換することができる)が、いずれにせよ、Table 1(表1)に示した数字の識別子によって
示される可変ドメイン(CDRを含む)は同じままとなり、抗原に対する結合特性は、Fcドメ
インの性質に関係なく、同一であるか、実質的に類似していると予想される。
【０１９２】
(実施例3)
表面プラズモン共鳴によって判定したときのPD-L1との抗体の結合
精製抗PD-L1モノクローナル抗体との抗原の結合の結合会合及び解離速度定数(それぞれKa及びKd)、平衡解離定数及び解離半減期(それぞれKD及びt1/2)は、Biacore 4000装置で
のリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを用いて決定した。Biacore
センサー表面をポリクローナルウサギ抗マウス抗体(GE社、# BR-1008-38)又はモノクローナルマウス抗ヒトFc抗体(GE社、# BR-1008-39)いずれかで誘導体化して、それぞれマウスFc又はヒトFcいずれかで表される、おおよそ200〜300RUの抗PD-L1モノクローナル抗体を
捕捉した。抗PD-L1抗体との結合について試験したPD-L1試薬は、組換えヒトPD-L1(受託番号NP_054862.1のアミノ酸19〜239)であって、C末端myc-myc-ヘキサヒスチジンタグと共に発現されるもの(hPD-L1-MMH;配列番号345)、組換えカニクイザルPD-L1であって、C末端myc-myc-ヘキサヒスチジンタグと共に発現されるもの(MfPD-L1-MMH;配列番号346)、組換え
ヒトPD-L1(受託番号NP_054862.1のアミノ酸19〜239)であって、C末端ヒトIgG1 Fcタグと
共に発現されるもの(hPD-L1-hFc;配列番号347)又はC末端マウスIgG2a Fcタグと共に発現
されるもの(hPD-L1-mFc;配列番号348)、及び組換えカニクイザルPD-L1であって、C末端マウスIgG2a Fcタグと共に発現されるもの(MfPD-L1-mFc;配列番号353)を含んだ。様々な濃
度のPD-L1試薬を抗PD-L1モノクローナル抗体捕捉表面全面に30μL/分の流量で注入した。捕捉されたモノクローナル抗体とのPD-L1試薬の結合を3〜4分間モニターする一方で、抗
体と結合しているPD-L1試薬の解離をHBST泳動緩衝液(0.01M HEPES pH7.4、0.1 M NaCl、3mM EDTA、0.05%v/v  界面活性剤tween-20)中で10分間モニターした。実験は25℃又は37℃のいずれかで行った。Scrubber 2.0c曲線フィッティングソフトウェアを使用してデータ
を処理し、1:1結合モデルにフィッティングすることによって、動力学的会合(Ka)及び解
離(Kd)速度定数を決定した。その後、その動力学的速度定数から、KD(M) = kd/ka及びt1/2(分) = [ln2/(60*kd)]として、結合解離平衡定数(KD)及び解離半減期(t1/2)を算出した
。25℃及び37℃での様々なPD-L1試薬との様々な抗PD-L1モノクローナル抗体の結合の結合動態パラメータをTable 3〜8(表3〜8)にまとめる。
【０１９３】
【表３】
2020115876.tif 000004
【０１９４】
【表４】
2020115876.tif 000005
【０１９５】
【表５】
2020115876.tif 000006
【０１９６】
【表６】
2020115876.tif 000007
【０１９７】
【表７】
2020115876.tif 000008
【０１９８】
【表８】
2020115876.tif 000009
【０１９９】
【表９】
2020115876.tif 000010
【０２００】
【表１０】
2020115876.tif 000011
【０２０１】
Table 3(表3)に示したように、25℃で、本発明の25種すべての抗PD-L1抗体は、55.8pM
〜421nMの範囲のKD値でhPD-L1-MMHと結合した。Table 4(表4)に示したように、37℃で、
本発明の25種すべての抗PD-L1抗体は、140pM〜647nMの範囲のKD値でhPD-L1-MMHと結合し
た。Table 5(表5)に示したように、25℃で、本発明の25種すべての抗PD-L1抗体は、4.26pM〜1.54nMの範囲のKD値でhPD-L1二量体と結合した。Table 6(表6)に示したように、37℃
で、本発明の25種すべての抗PD-L1抗体は、5.32pM〜5.0nMの範囲のKD値でhPD-L1二量体と結合した。Table 7(表7)に示したように、25℃で、本発明の25種すべての抗PD-L1抗体は
、72.4pM〜292nMの範囲のKD値でMfPD-L1-MMHと結合した。Table 8(表8)に示したように、37℃で、本発明の25種すべての抗PD-L1抗体は、133pM〜398nMの範囲のKD値でMfPD-L1-MMHと結合した。Table 9(表9)に示したように、25℃で、試験した本発明の20種すべての抗PD-L1抗体は、17.4pM〜626pMの範囲のKD値でMfPD-L1-mFcと結合した。Table 10(表10)に示
したように、37℃で、試験した本発明の20種すべての抗PD-L1抗体は、20.8pM〜825pMの範囲のKD値でMfPD-L1-mFcと結合した。
【０２０２】
(実施例4)
ELISAによって判定したときのPD-1とのPD-L1の結合の遮断
ヒトPD-L1をその結合パートナー、ヒトPD-1及びヒトB7-1受容体、と結合しないように
遮断するモノクローナル抗PD-L1抗体の能力を、2つの競合サンドイッチELISA形式を用い
て測定した。
【０２０３】
C末端hFcタグと共に発現された、細胞外ドメインの一部分(C93S変化を有する受託番号NP_005009.2のアミノ酸25〜170)からなる二量体ヒトPD-1タンパク質(hPD-1-hFc;配列番号350)と、C末端hFcタグと共に発現された細胞外ドメインの一部分からなる二量体ヒトB7-1
タンパク質(hB7-1-hFc-6His; R&D Systems社、#140-B1)とで、別々に、PBS緩衝液中、2μg/mLで一晩、4℃で96ウェルマイクロタイタープレートを被覆した。その後、PBS中のBSA
の0.5%(w/v)溶液を使用して非特異的結合部位を遮断した。C末端mFcタグと共に発現され
たヒトPD-L1細胞外ドメインの一部分からなる一定量の0.5nM又は8.0nMの二量体hPD-L1タ
ンパク質(hPD-L1-mFc;配列番号348)を、系列希釈で0〜210nMの間の範囲の濃度の抗PD-1抗体及びアイソタイプ対照抗体で別々に滴定した。その後、これらの抗体−タンパク質コンジュゲートを1時間、室温(RT)でインキュベートした。その後、0.5nM一定hPD-L1-mFcとのコンジュゲートは、hPD-1-hFcで被覆されたマイクロタイタープレートに移し、8nMの一定のhPD-L1-mFcとのコンジュゲートは、hB7-1-hFc-6His被覆プレートに移した。それらのコンジュゲートを1時間、室温で放置して被覆プレートと結合させた。1時間インキュベートした後、ウェルを洗浄し、プレート結合hPD-L1-mFcを、ホースラディッシュペルオキシダーゼと結合された抗mFcポリクローナル抗体(Jackson ImmunoResearch社、# 115-035-164)で検出した。試料をTMB溶液(BD Biosciences社、#51-2606KC及び#51-2607KC)で現像して
比色反応を生じさせ、1M硫酸で中和した後、Victor X5プレートリーダーを用いて450nmで吸光度を測定した。データ分析にはPrism(商標)ソフトウェアの中のシグモイド用量応答
モデルを用いた。算出IC50値(hPD-1-hFc又はhB7-1-hFc-6HisとのhPD-L1-mFcの結合の50%
を遮断するのに要する抗体の濃度と定義した)を遮断効力の指標として用いた。最大遮断
値は、ベースラインと比較したhPD-L1-mFc結合を遮断する抗体の能力を表す。用量曲線上の一定量のhPD-L1で測定された吸光度を0%遮断と定義し、加えられたhPD-L1のない吸光度を100%遮断と定義する。最高濃度の各抗体が入っているウェルの吸光度値を用いて、試験した最大抗体濃度で遮断率を決定した。25%未満の最大遮断率を有する抗体は非遮断薬と
みなし、それらのIC50値はTable 11(表11)に報告しなかった。-25%未満の最大遮断率を有する抗体を非遮断薬/エンハンサーと断定した。
【０２０４】
【表１１Ａ】
2020115876.tif 000012
【０２０５】
【表１１Ｂ】
2020115876.tif 000013
【０２０６】
Table 11(表11)に示したように、本発明の25種の抗PD-L1抗体のうちの19種は、250pM未満〜770pMの範囲のIC50値と26%〜100%の範囲の最大遮断率で、0.5nMのhPD-L1-mFcをhPD-1-hFcと結合しないように遮断した。試験した25種の抗PD-L1抗体のうちの4種をhPD-1-hFc
とのhPD-L1-mFcの結合の非遮断薬と断定し、その一方で試験した1種の抗体(H1H9327P)をhPD-1-hFcとのhPD-L1-mFcの結合の非遮断薬/エンハンサーと断定した。1種の抗体(H2aM8307N)は、29%の最大遮断率でhPD-1-hFcとのhPD-L1-mFcの結合の弱い遮断を明示したが、こ
の試料のIC50値は決定できなかった。
【０２０７】
更に、本発明の25種の抗PD-L1抗体のうちの14種は、<4nM〜10nMの範囲のIC50値と57%〜101%の範囲の最大遮断率で、8nMのhPD-L1-mFcをhB7-1-hFc-6Hisと結合しないように遮断
した。試験した25種の抗PD-L1抗体のうちの2種をhB7-1-hFc-6HisとのhPD-L1-mFcの結合の非遮断薬と断定し、その一方で試験した8種の抗体をhB7-1-hFc-6HisとのhPD-L1-mFcの結
合の非遮断薬/エンハンサーと断定した。1種の抗体(H1H9327P)は、41%の最大遮断率でhB7-1-hFc-6HisとのhPD-L1-mFcの結合の弱い遮断を明示したが、この試料のIC50値は決定で
きなかった。
【０２０８】
(実施例5)
バイオセンサーアッセイにより及び表面プラズモン共鳴により判定したときのPD-1とのPD-L1の結合の遮断
Octet Red96バイオセンサー装置(Fortebio社)でのリアルタイムバイオレイヤー干渉法
アッセイを用いて、又はBiacore 3000装置でのリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを用いて、様々な抗PD-L1モノクローナル抗体によるヒトPD-L1のヒトPD-1との結合の阻害を研究した。
【０２０９】
マウスFcと共に発現された抗PD-L1モノクローナル抗体についての阻害研究をOctet Red96装置で行った。先ず、C末端マウスIgG2a Fcタグと共に発現された100nMの組換えヒトPD-L1(hPD-L1-mFc;配列番号348)を500nMの各抗PD-L1モノクローナル抗体と共に少なくとも1時間インキュベートした後、阻害アッセイを実行した。C末端ヒトIgG1 Fcタグと共に発現されたおおよそ0.8nm〜1.2nmの組換えヒトPD-1(hPD-L1-hFc;配列番号350)を、抗ヒトIgG Fc捕捉バイオセンサーを使用して捕捉した。その後、hPD-1-hFcで捕捉されたOctetバイオセンサーを、hPD-L1-mFcと様々な抗PD-L1モノクローナル抗体の混合物が入っているウェ
ルに沈めた。1000rpmの速度でプレートを振盪しながら、Octet HBST緩衝液(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.05% v/v  界面活性剤P20、0.1mg/mL BSA)中、25℃で全実験を行った。実験の各ステップ間にバイオセンサーをOctet HBS緩衝液で洗浄した。実
験過程中にリアルタイム結合応答をモニターし、どのステップの終わりにも結合応答を記録した。捕捉されたhPD-1-hFcとのhPD-L1-mFcの結合を様々な抗PD-L1モノクローナル抗体の存在及び不在下で比較し、それを用いて、Table 12(表12)に示すように被験抗体の遮断
挙動を判定した。
【０２１０】
【表１２】
2020115876.tif 000014
【０２１１】
Table 12(表12)に示したように、Octet Red96装置で試験した12種の抗PD-L1抗体のうちの8種は、PD-L1-mFcのhPD-1-hFcとの結合の58%〜97%の範囲の遮断を明示した。試験した4種の抗PD-L1抗体は、hPD-L1-mFcのhPD-1-hFcとの結合を増進する能力を明示した。
【０２１２】
次に、ヒトFcと共に発現された抗PD-L1モノクローナル抗体についての阻害研究をBiacore 3000装置で行った。先ず、C末端ヒトIgG1 Fcタグと共に発現された100nMの組換えヒトPD-L1(hPD-L1-hFc;配列番号350)を500nMの各抗PD-L1モノクローナル抗体と共に少なくと
も1時間インキュベートした後、阻害アッセイを実行した。先ず、標準的なEDC-NHS化学を用いてCM5 Biacoreセンサー表面を抗マウスIgG2a特異的ポリクローナル抗体(Southern Biotech社、# 1080-01)で誘導体化した。次いで、C末端マウスIgG2a Fcタグと共に発現された約230RUの組換えヒトPD-1(hPD-1-mFc;配列番号348)を捕捉し、その後、様々な抗PD-L1
モノクローナル抗体の存在及び不在下、25μL/分の流量で2分間、100nMのhPD-L1-hFcを注入した。全実験をHBST泳動緩衝液(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.05% v/v  界面活性剤P20)中、25℃で行った。全実験過程中のリアルタイム結合応答をモニター
し、どのステップの終わりにも結合応答を記録した。捕捉されたhPD-1-mFcとのhPD-L1-hFcの結合を様々な抗PD-L1モノクローナル抗体の存在及び不在下で比較し、それを用いて、
Table 13(表13)に示すように被験抗体の遮断挙動を判定した。
【０２１３】
【表１３】
2020115876.tif 000015
【０２１４】
Table 13(表13)に示したように、Biacore 3000装置で試験した本発明の12種の抗PD-L1
抗体のうちの6種は、PD-L1-hFcのhPD-1-mFcとの結合の84%〜97%の範囲の遮断を明示した
。試験した6種の抗PD-L1抗体は、hPD-L1-hFcのhPD-1-mFcとの結合を増進する能力を明示
した。
【０２１５】
(実施例6)
抗PD-L1抗体間のOctet交差競合
Octet RED384バイオセンサー(Pall ForteBio社)でのリアルタイム無標識バイオレイヤ
ー干渉法アッセイを用いて、抗PD-L1モノクローナル抗体間の結合競合を判定した。1000rpmの速度でプレートを振盪しながら、Octet HBST緩衝液(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.05% v/v  界面活性剤P20、0.1mg/mL BSA)中、25℃で全実験を行った。2つの抗体が、C末端myc-myc-ヘキサヒスチジンタグと共に発現された組換えヒトPD-L1(hPD-L1-MMH;配列番号345)上のそれらのそれぞれのエピトープへの結合について互いに競合することができるかどうかを評価するために、先ず、hPD-L1-MMHの20μg/mL溶液が入っているウェルに抗ペンタHis抗体被覆Octetバイオセンサー先端部(Fortebio Inc社、# 18-5079)
を5分間沈めることによって、大体約0.3nmのhPD-L1-MMHを先端部上に捕捉した。次いで、
それらの抗原捕捉バイオセンサー先端部を、抗PD-L1モノクローナル一次抗体(以降、mAb-1と呼ぶ)の50μg/mL溶液が入っているウェルに5分間浸漬することによって、mAb-1で飽和させた。次いで、その後、バイオセンサー先端部を抗PD-L1モノクローナル二次抗体(以降、mAb-2と呼ぶ)の50μg/mL溶液が入っているウェルに浸漬した。バイオセンサー先端部は、実験の全てのステップとステップの間にOctet HBST緩衝液で洗浄した。図1に示すよう
に、実験過程中のリアルタイム結合応答をモニターし、どのステップの終わりにも結合応答を記録した。mAb-1と事前にコンジュゲートされたhPD-L1-MMHに対するmAb-2の結合応答を比較し、様々な抗PD-L1モノクローナル抗体の競合/非競合挙動を判定した。
【０２１６】
この実施例で用いた実験条件下で、(a)H2aM8309N、H1H9329P、H1H9336P、H2aM8314N、H2aM8316N、H2aM8718N、H1H9387P2、H1H9351P2、H1H9364P2、H1H9373P2及びH2aM8306Nは互いに交差競合し、(b)H2aM8310N、H2aM8321N及びH2aM8312Nは互いに交差競合し、(c)H1H9396P2、H2aM8317N、H2aM8321N、H1H9323P、H1H9382P2、H1H9344P2、H1H9345P2及びH1H9354P2は互いに交差競合し、及び(d)H1H9327PとH2aM8307Nは互いに交差競合した。一例として、競合は、一方の方向性では観察されたが、反対の方向性では観察されなかった:すなわ
ち、H2aM8307Nは、最初に適用されると、H2aM8309N、H1H9329P、H1H9336P、H2aM8314N、H2aM8316N、H2aM8718N、H1H9387P2、H1H9351P2、H1H9364P2、H1H9373P2及びH2aM8306Nと競合したが、反対の方向性で、H2aM8309N、H1H9329P、H1H9336P、H2aM8314N、H2aM8316N、H2aM8718N、H1H9387P2、H1H9351P2、H1H9364P2、H1H9373P2及びH2aM8306Nは、最初に適用
されると、H2aM8307Nと競合しなかった。
【０２１７】
(実施例7)
PD-L1を過剰発現する細胞との抗体結合
完全長ヒトPD-L1(受託番号NP_054862.1のアミノ酸1〜290)で安定的に形質転換されたヒト胚性腎細胞株(HEK293; ATCC, #CRL-1573)との抗PD-L1抗体の結合(HEK293/hPD-L1)をFACSによって判定した。
【０２１８】
アッセイのために、酵素不含解離用緩衝液を使用して接着細胞を剥離し、完全培地で遮断した。細胞を遠心分離し、2%FBSを含有する冷PBSに2.8x106細胞/mLの濃度で再浮遊させた。次いで、HEK293親細胞及びHEK293/hPD-L1細胞を15〜30分間、氷上で、各100nMの抗PD-L1抗体又はアイソタイプ対照抗体と共にインキュベートした。2%FBSを含有するD-PBSで
洗浄することによって未結合抗体を除去し、その後、細胞を、ヒトFcを特異的に認識するフィコエリトリン結合二次Fcγ断片(Jackson ImmunoResearch社、# 109-116-170)又はマ
ウスFcを特異的に認識するフィコエリトリン結合二次Fcγ断片(Jackson ImmunoResearch
社、#115-115-164)と共に15〜30分間、氷上でインキュベートした。2%FBSを含有するD-PBSで細胞を洗浄して未結合の二次検出試薬を除去し、HyperCyte(IntelliCyt社)フローサイトメーターを使用して蛍光測定値を獲得した。HyperCyteソフトウェアを使用してデータ
を分析した。
【０２１９】
【表１４】
2020115876.tif 000016
【０２２０】
Table 14(表14)に示したように、本発明の25種全ての抗PD-L1抗体は、親HEK293系に関
する結合と比較してHEK293/hPD-L1との強い結合を示した。
【０２２１】
(実施例8)
T細胞/APCルシフェラーゼレポーターアッセイにおけるPD-L1誘導T細胞ダウンレギュレー
ションの遮断
抗原提示細胞(APC)上で主要組織適合性コンジュゲートクラスI又はIIタンパク質によって提示される特異的ペプチドを認識するT細胞受容体(TcR)を刺激することにより、T細胞
活性化を達成する。活性化されたTcRが、次に、転写因子、例えば、アクチベータータン
パク質1(AP-1)、活性化T細胞核内因子(NFAT)又は活性化B細胞の核内因子κ軽鎖エンハン
サー(NFκb)により駆動されるレポーター遺伝子によってモニターすることができるシグ
ナル伝達事象のカスケードを開始させる。T細胞応答は、T細胞上で構成的に又は誘導的に発現される共受容体の会合によって調節される。1つのそのような受容体は、T細胞活性化の負の制御因子である、プログラム細胞死タンパク質1(PD-1)である。PD-1は、APCを含む標的細胞又は癌細胞上で発現されるそのリガンド、PD-L1、と相互作用し、この相互作用
は、TcRシグナロソームにホスファターゼを動員することによって阻害シグナルの送達を
もたらし、その結果、正のシグナル伝達が抑制されることになる。
【０２２２】
2つの哺乳動物細胞株、ジャーカット細胞(不死化T細胞株)とラージ細胞(B細胞株)、に
由来する混合培養物を利用することにより、APCとT細胞間の相互作用によって誘導されるT細胞シグナル伝達を測定するバイオアッセイを開発した(図1)。このバイオアッセイの第1の構成要素については、ジャーカットクローンE6-1細胞(ATCC、#TIB-152)に、Cignal Lenti AP-1 Luc Reporter(Qiagen-Sabiosciences社、#CLS-011L)を、製造業者の説明書に従って形質導入した。このレンチウイルスは、最小CMVプロモーターの制御下にあるホタル
ルシフェラーゼ遺伝子と、TPA誘導性転写応答要素(TRE)と、ピューロマイシン耐性遺伝子とをコードする。その後、その工学的に操作されたジャーカット細胞株に、ヒトPD-1の細胞外ドメイン(ヒトPD1、受託番号NP_005009.2のアミノ酸1〜170)とヒトCD300aの膜貫通及び細胞質ドメイン(ヒトCD300a、受託番号NP_009192.2のアミノ酸181〜299)とを含むPD-1
キメラを形質導入した。得られた安定な細胞株(Jurkat/AP1-Luc/hPD1-hCD300a)を選択し
、500ug/mL G418+1ug/mL  ピューロマイシンを補充したRPMI/10% FBS/ペニシリン/ストレプトマイシン/グルタミン中で維持した。
【０２２３】
バイオアッセイの第2の構成要素については、レンチウイルス(pLEX)ベクターシステム(Thermo Scientific Biosystems社、#OHS4735)にクローニングされたヒトPD-L1遺伝子(受
託番号NP_054862.1のアミノ酸1〜290)をラージ細胞(ATCC、#CCL-86)に形質導入した。PD-L1について陽性のラージ細胞(Raji/hPD-L1)を、PD-L1抗体を使用してFACSによって単離し、1ug/mLのピューロマイシンを補充したIscove/10% FBS/ペニシリン/ストレプトマイシン/グルタミン中で維持した
【０２２４】
APC/T細胞相互作用をシミュレートするために、T細胞上のCD3と結合する一方のFabアーム及びラージ細胞上のCD20と結合する他方のFabアームからなる、二重特異性抗体(CD3xCD20二重特異性抗体、例えば米国特許出願公開第2014/0088295号に開示されているようなもの)を利用した。このアッセイにおける二重特異性分子の存在は、T細胞上のCD3サブユニ
ットを、ラージ細胞上で内因的に発現されるCD20と架橋することにより、T細胞及びAPCの活性化をもたらす。CD3と抗CD3抗体のライゲーションがT細胞の活性化をもたらすことは
実証されている。このバイオアッセイにおいて、PD1/PD-L1相互作用を遮断する抗体は、
阻害シグナル伝達を無効化し、そしてその後AP1-Luc活性化増加をもたらすことによって
、T細胞活性をレスキューする。
【０２２５】
ルシフェラーゼベースのバイオアッセイでは、10%FBS及びペニシリン/ストレプトマイ
シン/グルタミンを補充したRPMI1640をアッセイ培地として使用して、抗PD-L1モノクローナル抗体(mAb)のスクリーニングを行うための細胞浮遊液及び抗体希釈物を調製した。ス
クリーニング当日、固定濃度のCD3xCD20二重特異性抗体(30pM)の存在下での抗PD-L1 mAb
のEC50値はもちろん、二重特異性抗体のみのEC50も判定した。下記の順序で細胞及び試薬を96ウェル白色平底プレートに添加した。抗PD-L1 mAb EC50の判定については、先ず、固定濃度のCD3xCD20二重特異性抗体(最終30pM)を調製し、マイクロタイタープレートウェルに添加した。次いで、抗PD-L1 mAb及び対照の12点系列希釈物を添加した(1.7pM〜100nMの範囲の最終濃度、加えて、アッセイ培地のみのウェル)。二重特異性抗体(単独)EC50の判
定については、0.17pM〜10nMの範囲の最終濃度の二重特異性抗体(加えて、アッセイ培地
のみのウェル)をマイクロタイタープレートに加えた。その後、2.5x106/mL  ラージ/hPD-L1細胞浮遊液を調製し、ウェルごとに20uLを添加した(最終細胞数/ウェル  5x104細胞)。プレートを室温で放置(15〜20分)し、この間に、2.5x106/mLのジャーカット/AP1-Luc/hPD1(ecto)-hCD300a(TM-Cyto)の浮遊液を調製した。20uLのジャーカット浮遊液(最終細胞数/ウェル  5x104細胞)をウェルごとに添加した。共培養物が入っているプレートを5〜6時間、37℃、5%CO2中でインキュベートした。その後、ルシフェラーゼ活性を検出した後、ONE-Glo(商標)(Promega社、# E6051)試薬を添加し、相対光単位(RLU)をVictorルミノメータ
ーで測定した。全ての試料を二連で試験した。
【０２２６】
スクリーニングされた各抗体についてのRLU値を、固定(30pM)濃度のCD3/CD20二重特異
性抗体を用いるが100%までの抗PD-L1抗体を用いないアッセイ条件を設定することによっ
て正規化した。この条件は、PD-1/PD-L1阻害シグナルの存在下で二重特異性分子によって惹起される最大AP1-Luc応答に対応する。抗PD-L1抗体を添加すると、阻害シグナルは抑制される。増加された刺激をここではEmax[試験した最高抗体用量(100nM)の存在下でのシグナルの増加百分率]として示す。試験した抗PD-L1抗体の効力を比較するために、正規化RLU値が125%に達した時点の抗体濃度を、GraphPad Prismを使用して12点応答曲線で4変数ロジスティック方程式から決定した。結果をTable 15(表15)に要約する。
【０２２７】
【表１５】
2020115876.tif 000017
【０２２８】
Table 15(表15)に示したように、試験した本発明の27種の抗PD-L1抗体のうちの14種は
、234.9〜138.1の範囲のEmax値でPD-1/PD-L1阻害を遮断した。本発明の27種の抗PD-L1抗
体のうちの13種は、このアッセイで試験したとき、PD1/PD-L1相互作用の実質的遮断を明
示しなかった。アイソタイプ対照は、PD1/PD-L1相互作用に干渉しなかった。
【０２２９】
(実施例9)
抗PD-L1抗体のインビボ有効性
関連インビボモデルにおける本発明の選ばれた数の抗PD-L1抗体の効果を判定するため
に、腫瘍細胞の皮下注射を含み、異なる日に開始する、MC38.ova腫瘍成長研究を、75% C5
7/Bl6/25% 129系統バックグラウンドでマウスPD-L1の細胞外ドメインの代わりにヒトPD-L1の細胞外ドメインの発現についてホモ接合性であったマウス(PD-L1 Humlnマウス)において行った。腫瘍免疫原性を増加させるために、及び明確に定義された抗原性卵白アルブミンペプチドに対するT細胞免疫応答のモニタリングを可能にするために、MC38.Ova(マウス結腸腺癌)細胞を、トリ卵白アルブミンを発現するように工学的に操作した。第2ステップでは、MC38.Ova細胞にSFFVプロモーター下でhPD-L1を発現するレンチウイルスベクターを形質導入した。hPD-L1について陽性のMC38.Ova(MC38.Ova/hPD-L1)を、hPD-L1特異的抗体
を使用してFACSによって単離した。これらの細胞は、低レベルの内在性マウスPD-L1を発
現することが判明した。
【０２３０】
第1の研究(研究番号1)のために、マウスを体重によって5つの処置又は対照群(n=5〜8マウス/群)に均等に分けた。0日目にマウスにイソフルラン吸入によって麻酔をかけ、その
後、100uLのDMEMの懸濁液中の1x106 MC38.ova/hPD-L1細胞を右側腹部に皮下注射した。処置群には、本発明の3種のPD-L1抗体のうちの1種、又は無関係の特異性を有する2種のアイソタイプ対照抗体のうちの1種、いずれかの500ugを実験3、7、10、14及び17日目に腹腔内注射したが、1つのマウス群は未処置のままにした。
【０２３１】
第2の研究(研究番号2)では、PD-L1ヒト化マウスを7つの処置群(n=5〜6マウス)に無作為に割り当てた。0日目に、マウスに1x106 MC38.Ova/hPD-L1細胞を皮下移植した。マウスにREGN a-PD-L1 ab(H1H8314N若しくはH1H9364P2若しくはH1H9373P2)、又はアイソタイプ対
照abs hIgG4 mut若しくはhIgG1を10mg/kg又は5mg/kgの用量で腹腔内投与した。マウス群
に抗体を3、7、10、14及び17日目に投与した。実験継続期間(21日)中、週2回のキャリパ
ー測定によって、腫瘍体積をモニターした。マウス群についての実験的投薬及び処置プロトコルをTable 16(表16)に示す。
【０２３２】
【表１６】
2020115876.tif 000018
【０２３３】
これらの研究のために、実験継続期間(17日)中、週2回のキャリパー測定によって平均
腫瘍体積をモニターし、実験の最後に生存率を記録した。加えて、無腫瘍マウスの数も研究の最後に評価した。平均腫瘍体積(mm3)(±SD)、生存率及び無腫瘍マウスの数として表
した結果をTable 17及び18(表17及び18)に示す。
【０２３４】
【表１７】
2020115876.tif 000019
【０２３５】
研究番号1についてTable 17(表17)に示したように、本発明の3種全ての抗PD-L1抗体は
、500ug/マウスの投薬量で腫瘍退縮の促進に効果的であり、抗体のうちの2種、H1H9364P2及びH1H9373P2を受けた処置群からの全てのマウスが17日目に無腫瘍であった。本発明の
抗PD-L1抗体のうちの1種、H1H8314Nを受けた処置群では5匹のマウスのうち4匹が17日目まで無腫瘍であったが、アイソタイプ対照群では5匹の動物のうち0匹が無腫瘍であった。試験後の一元配置ANOVAとダネット多重比較は、p値<0.05で、本発明の抗PD-L1抗体での処置とアイソタイプ対照抗体での処置との間の腫瘍体積の有意差を示した。
【０２３６】
【表１８】
2020115876.tif 000020
【０２３７】
Table 18(表18)に示したように、研究番号2では、選択抗PD-L1抗体の投与は、腫瘍生長の阻害をもたらして腫瘍退縮を促進した。3つ全ての抗PD-L1抗体は、10mg/kg用量及び5mg/kg用量で効果的であり、実験過程を通して用量依存的に処置マウスの腫瘍退縮を促進し
たが、対照群では5匹の動物のうちの0匹が無腫瘍であった。試験後の一元配置ANOVAとチ
ューキー多重比較は、p値<0.05以下で、抗PD-L1抗体での処置とアイソタイプ対照抗体で
の処置との間の腫瘍体積の有意差を示した。
【０２３８】
(実施例10)
マウス早期処置腫瘍モデルにおける抗PD-L1抗体とVEGFアンタゴニストの併用の抗腫瘍効
果
抗PD-L1抗体とVEGFアンタゴニストの併用の有効性を試験するために早期処置腫瘍モデ
ルを開発した。このモデルでは、腫瘍移植直後に併用療法を投与する。この実験は、抗PD-1抗体を単独で使用もし、VEGFアンタゴニストと併用もした。この実験で使用した抗PD-L1抗体は、マウスIgG2aと米国特許出願公開第2010/0203056号A1(Genentech社)による抗体
「YW243.55S70」のVH/VL配列を有する、抗PD-L1モノクローナル抗体であり、マウスPD-L1と交差反応性であった。この実験で使用したVEGFアンタゴニストは、アフリベルセプト(VEGF受容体に基づくキメラ分子であって、「VEGFトラップ」又は「VEGFR1R2-FcΔC1(a)」
としても公知であり、その十分な説明は本明細書中の他の箇所で与える)であった。この
実験で使用した抗PD-1抗体は、ラットIgG2を有する抗マウスPD-1クローン「RPMI-14」(Bio X Cell社、West Lebanon、NH)であった。
【０２３９】
この実験モデルについては、1.0x106 Colon-26腫瘍細胞を0日目にBALB/cマウスに皮下
移植した。測定可能な腫瘍が定着する前に、3日目に開始して、Table 19(表19)に示すよ
うな、単剤治療又は併用療法又は対照併用のうちの1つでマウスを処置した。
【０２４０】
【表１９】
2020115876.tif 000021
【０２４１】
様々な治療を2週間の期間にわたって5つの異なる時点で投与(すなわち、3日、6日、10
日、13日及び19日目に注射)した。
【０２４２】
各治療群の動物を、腫瘍発生率、腫瘍体積、生存時間中央値、50日目における無腫瘍動物の数に関して評価した。腫瘍成長の程度を図2(腫瘍成長曲線)及び図3(28日目における
腫瘍体積)に要約する。結果をTable 20(表20)にも要約する。
【０２４３】
【表２０】
2020115876.tif 000022
【０２４４】
腫瘍成長は、VEGFトラップ+抗PD-L1抗体の併用で処置した動物において、いずれかの治療薬のみを含む処置レジメンと比較して実質的に低減された(図2及び3を参照されたい)。更に、VEGFトラップ+抗PD-L1抗体群では生存期間が実質的に増加し、動物の90%は腫瘍移
植の少なくとも50日後まで生存した。対照的に、抗PD-L1及びVEGFトラップ単剤治療群に
ついては、50日目までの生存は、それぞれ50%及び30%に過ぎなかった[図3及びTable 20(
表20)を参照されたい]。
【０２４５】
本発明の範囲は、本明細書に記載する特定の実施形態によって限定されないものとする。実際、本明細書に記載するものに加えて、本発明の様々な修飾形態が、上述の説明及び添付の図面から当業者に明らかになるだろう。そのような修飾形態は、添付の特許請求の範囲の範囲に入ることが意図される。
【図１Ａ】
2020115876.tif 000023
【図１Ｂ】
2020115876.tif 000024
【図１Ｃ】
2020115876.tif 000025
【図１Ｄ】
2020115876.tif 000026
【図２】
2020115876.tif 000027
【図３】
2020115876.tif 000028
【配列表】
2020115876000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月3日(2020.4.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトプログラム死リガンド1(PD-L1)タンパク質と結合する、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号82のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域(HCVR)の３つの相補性決定領域(CDRs)（HCDR1、HCDR2、及びHCDR3）、及び、配列番号90のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域(LCVR)の３つの相補性決定領域(CDRs)（LCDR1、LCDR2、及びLCDR3）を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２】
配列番号84のアミノ酸配列を有するHCDR1と、配列番号86のアミノ酸配列を有するHCDR2と、配列番号88のアミノ酸配列を有するHCDR3と、配列番号92のアミノ酸配列を有するLCDR1と、配列番号94のアミノ酸配列を有するLCDR2と、配列番号96のアミノ酸配列を有するLCDR3と
を含む、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３】
配列番号82/90のHCVR/LCVRアミノ酸配列対を含む、請求項１又は２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４】
抗体がIgG1またはIgG4アイソタイプを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５】
抗体又はその抗原結合断片が、多重特異性抗原結合分子である、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項に記載のPD-L1と結合する単離された抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む、医薬組成物。
【請求項７】
請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片のHCVRをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項８】
請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片のLCVRを
コードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項９】
請求項７又は８に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項１０】
請求項９に記載のベクターを発現する細胞。
【請求項１１】
抗PD-L1抗体又はその抗原結合断片を生産する方法であって、請求項１０に記載の宿主細胞を当該抗体又は断片の生産を許容する条件の下で培養する工程、そして、そのようにして生産された抗体又は断片を回収する工程を含む、方法。
【請求項１２】
抗体又はその抗原結合断片を、許容し得る担体を含む医薬組成物として製剤化する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
対象の免疫応答を増進するための医薬組成物であって、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物。
【請求項１４】
対象の制御性T(Treg)細胞を阻害するための医薬組成物であって、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物。
【請求項１５】
対象のT細胞活性化を増進するための医薬組成物であって、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物。
【請求項１６】
対象が、腎細胞癌、脳腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、胃癌、腎臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、又は黒色腫を含む疾患又は障害を有する、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
対象が、HIV、HCV、HBV、HPV、LCMV、SIV、又はそれらの組合せを含むウイルスによって引き起こされる慢性ウイルス感染症を有する、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
腫瘍又は腫瘍細胞の成長を阻害するための医薬組成物であって、治療有効量の請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物。
【請求項１９】
腫瘍又は腫瘍細胞が、腎細胞癌、脳腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、胃癌、腎臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、又は黒色腫を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
第２の治療薬又は療法と併用するための、請求項１３から１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
第２の治療薬又は療法が、NSAID、コルチコステロイド、T細胞共阻害因子に対する抗体、腫瘍特異的抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、PD-1に対する抗体、IDO阻害剤、Ang2阻害剤、EGFR阻害剤、TGFβ阻害剤、抗酸化物質等の栄養補助食品、抗VEGF抗体等のVEGFアンタゴニスト、VEGF受容体の小分子キナーゼ阻害剤、VEGF阻害融合タンパク質、手術、放射線、ワクチン、化学療法薬、細胞傷害性薬剤、抗ウイルス薬、又はそれらの組合せを含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内又は頭蓋内投与のための、請求項１３から２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
抗体又はその抗原結合断片の投与用量が、対象の体重1kgにつき0.1mg〜60mgである、請求項１３から２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2020115876000001.pdf