(57)【要約】【課題】マイクロウェルにＰＣＲ反応液を簡単にかつ低コストで充填できるマイクロ流体デバイスを提供する。【解決手段】一面１ａにマイクロウェル２ａのアレイ２が形成された基板１と、基板に重ね合わされてマイクロウェルのアレイを被覆するＰＤＭＳ製のカバーシート３を有する。カバーシートの基板に対向する面３ａ内に、マイクロチャネル４が格子状に形成される。マイクロチャネルはマイクロウェルの径よりも小さい幅を有し、カバーシートが基板に重ね合わされたとき、各マイクロウェルにマイクロチャネルが部分的に重なる。基板に、基板に重ね合わされたカバーシートの周囲を取り囲むオイル遮断壁５が立設される。カバーシートにおけるマイクロウェルのアレイと重なり合わない位置に、ＰＣＲ反応液注入口６が形成され、ＰＣＲ反応液注入口はカバーシートを厚み方向に貫通し、かつマイクロチャネルに連通する。【選択図】図２
2020039269.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
デジタルＰＣＲ法において使用されるマイクロ流体デバイスであって、
一面にマイクロウェルのアレイが形成された基板と、
ガスを吸蔵し得る合成樹脂から形成され、前記基板の前記一面側に重ね合わされて、前記マイクロウェルのアレイを被覆するカバーシートと、を有し、
前記カバーシートの前記基板に対向する面内に、マイクロチャネルが格子状に形成され、前記マイクロチャネルは前記マイクロウェルの径よりも小さい幅を有し、前記カバーシートが前記基板に重ね合わされた状態で、それぞれの前記マイクロウェルに前記マイクロチャネルが部分的に重なるようになっており、
前記基板の前記一面に、前記基板に重ね合わされた前記カバーシートの周囲を取り囲むオイル遮断壁が立設され、
前記カバーシートにおける前記マイクロウェルと重なり合わない位置に、ＰＣＲ反応液注入口が形成され、前記ＰＣＲ反応液注入口は、前記カバーシートを厚み方向に貫通するとともに、前記マイクロチャネルに連通していることを特徴とするマイクロ流体デバイス。
【請求項２】
前記カバーシートの前記マイクロチャネルの格子のピッチが、前記基板の前記マイクロウェルのアレイのピッチよりも小さいことを特徴とする請求項１に記載のマイクロ流体デバイス。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載のマイクロ流体デバイスを使用する方法であって、
（１）前記カバーシートを前記基板に重ね合せた状態で、前記基板および前記カバーシートを所定時間脱気した後、大気圧下に置くステップと、
（２）前記ＰＣＲ反応液注入口にＰＣＲ反応液を注入し、前記マイクロウェルのアレイおよび前記マイクロチャネルを密閉空間にするとともに、前記カバーシートのガス吸蔵作用を利用して前記密閉空間内を減圧状態に維持することによって、それぞれの前記マイクロウェルおよび前記マイクロチャネルを前記ＰＣＲ反応液で満たすステップと、
（３）前記カバーシートおよび前記オイル遮断壁間に低揮発性オイルを注入した後、前記カバーシートを前記基板から徐々に剥がすことによって、前記ＰＣＲ反応液を前記マイクロウェル毎に隔離した状態で前記オイル遮断壁内側の前記基板上に前記マイクロウェルのアレイを被覆する前記低揮発性オイルの層を形成するステップと、
（４）前記マイクロウェルのアレイを前記低揮発性オイルの層で被覆した前記基板に、熱サイクル装置を用いて熱サイクルを適用し、ＰＣＲ増幅を行うステップと、を有していることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デジタルＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction）法において使用されるマイクロ流体デバイスに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
デジタルＰＣＲ法においては、まず、テンプレート（増幅対象）ＤＮＡ、ＤＮＡ合成酵素（ＤＮＡポリメラーゼ）およびプライマーと呼ばれるオリゴヌクレオチド等を含む反応液（ＰＣＲ反応液）が、複数のマイクロウェル（反応パーティション）に分配される。このとき、マイクロウェルのサイズが均一であれば、ＤＮＡ分子の分配はポアソン分布に従う。
【０００３】
その後、マイクロウェルは、ＰＣＲ用の熱サイクル装置によって、変性（９４℃程度）・アニーリング（６０℃程度）・伸長（７２℃程度）のための３段階の温度変化を生じさせる熱サイクル、あるいは変性（９４℃程度）・アニーリング／伸長（６０℃〜６８℃程度）のための２段階の温度変化を生じさせる熱サイクルを適用され、それによって一斉にＰＣＲ増幅が行われる。
【０００４】
このとき、ＤＮＡ分子が１つ以上存在していたマイクロウェル内では、ＰＣＲ増幅が進行し、ＰＣＲ生産物が得られる。なお、ＰＣＲ反応液には予め蛍光プローブが含有され、ＰＣＲ生産物が存在していれば蛍光シグナルが得られるようになっている。
【０００５】
こうして、デジタルＰＣＲ終了後、各マイクロウェルの蛍光シグナルのオン／オフが判定される。そして、マイクロウェルの全体に占める蛍光陽性ウェルの割合がわかれば、マイクロウェル１個当たりの平均ＤＮＡ分子数λが、
λ＝−ｌｎ（１−ｐ）
ここで、ｐは蛍光陽性液滴の割合を表す、によって算出される。
【０００６】
さらに、マイクロウェルの個数とマイクロウェル１個当たりの体積が既知であるから、ＰＣＲ反応液中のＤＮＡ分子数が算出される。
このように、デジタルＰＣＲは、従来のＰＣＲとは異なり、外部リファレンスを用いることなくＤＮＡの絶対定量を可能とする。
【０００７】
デジタルＰＣＲ法の実施には、通常、マイクロ流体デバイスが使用されるが、従来のデジタルＰＣＲ用マイクロ流体デバイスとして、例えば、特許文献１に記載されたものがある。
特許文献１に記載のデジタルＰＣＲ用マイクロ流体デバイスは、一面に、それぞれマイクロチャネルに接続された複数のマイクロウェル（出口のない反応チャンバ）からなるマイクロウェルアレイ（反応チャンバアレイ）が形成された板状の気体透過性エラストマー基材と、マイクロウェルアレイと同一平面において適用され、エラストマー層によってマイクロウェルアレイから分離された蒸気バリアとを有している。
【０００８】
このデジタルＰＣＲ用マイクロデバイスにおいては、ＰＣＲ反応液が、マイクロチャネルを通じて加圧送液され、各マイクロウェル内に充填される。
次いで、ＰＣＲ反応液と親和性のない液体がマイクロチャネルを通じて加圧送液されて、マイクロチャネル内のＰＣＲ反応液が非親和性の液体に置き換えられ、それによって、ＰＣＲ反応液がマイクロウェル毎に隔離（区画化）される。
【０００９】
その後、ＰＣＲ用熱サイクル装置を用いて、このマイクロ流体デバイスに所定の熱サイクルが適用され、ＰＣＲ増幅が行われる。
【００１０】
しかしながら、従来のデジタルＰＣＲ用マイクロ流体デバイスにおいては、ＰＣＲ反応液の送液に緻密な制御が必要とされ、そのために高価な送液システムを備えねばならなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特許第５４０４６３８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、本発明の課題は、マイクロウェルにＰＣＲ反応液を簡単にかつ低コストで充填できるマイクロ流体デバイスを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記課題を解決するため、本発明によれば、デジタルＰＣＲ法において使用されるマイクロ流体デバイスであって、一面にマイクロウェルのアレイが形成された基板と、ガスを吸蔵し得る合成樹脂から形成され、前記基板の前記一面側に重ね合わされて、前記マイクロウェルのアレイを被覆するカバーシートと、を有し、前記カバーシートの前記基板に対向する面内に、マイクロチャネルが格子状に形成され、前記マイクロチャネルは前記マイクロウェルの径よりも小さい幅を有し、前記カバーシートが前記基板に重ね合わされた状態で、それぞれの前記マイクロウェルに前記マイクロチャネルが部分的に重なるようになっており、前記基板の前記一面に、前記基板に重ね合わされた前記カバーシートの周囲を取り囲むオイル遮断壁が立設され、前記カバーシートにおける前記マイクロウェルと重なり合わない位置に、ＰＣＲ反応液注入口が形成され、前記ＰＣＲ反応液注入口は、前記カバーシートを厚み方向に貫通するとともに、前記マイクロチャネルに連通していることを特徴とするマイクロ流体デバイスが提供される。
【００１４】
本発明の好ましい実施例によれば、前記カバーシートの前記マイクロチャネルの格子のピッチが、前記基板の前記マイクロウェルのアレイのピッチよりも小さくなっている。
【００１５】
また、本発明によれば、上記のマイクロ流体デバイスを使用する方法であって、（１）前記カバーシートを前記基板に重ね合せた状態で、前記基板および前記カバーシートを所定時間脱気した後、大気圧下に置くステップと、（２）前記ＰＣＲ反応液注入口にＰＣＲ反応液を注入し、前記マイクロウェルのアレイおよび前記マイクロチャネルを密閉空間にするとともに、前記カバーシートのガス吸蔵作用を利用して前記密閉空間内を減圧状態に維持することによって、それぞれの前記マイクロウェルおよび前記マイクロチャネルを前記ＰＣＲ反応液で満たすステップと、（３）前記カバーシートおよび前記オイル遮断壁間に低揮発性オイルを注入した後、前記カバーシートを前記基板から徐々に剥がすことによって、前記ＰＣＲ反応液を前記マイクロウェル毎に隔離した状態で前記オイル遮断壁内側の前記基板上に前記マイクロウェルのアレイを被覆する前記低揮発性オイルの層を形成するステップと、（４）前記マイクロウェルのアレイを前記低揮発性オイルの層で被覆した前記基板に、熱サイクル装置を用いて熱サイクルを適用し、ＰＣＲ増幅を行うステップと、を有していることを特徴とする方法が提供される。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、カバーシートを基板に重ね合せた状態で脱気した後大気圧下に置き、次いで、ＰＣＲ反応液注入口をＰＣＲ反応液によって塞いで、基板とカバーシートの間に、マイクロチャネルおよびマイクロウェルアレイによる密閉空間を形成するとともに、カバーシートの空気吸蔵作用を利用して密閉空間内を減圧状態にすることによって、ＰＣＲ反応液を自律的に密閉空間内に流し込んでマイクロチャネルおよびすべてのマイクロウェルをＰＣＲ反応液で満たし、その後、カバーシートおよびオイル遮断壁間への低揮発性オイルの注入後、カバーシートを基板から徐々に剥がし、低揮発性オイルを基板とカバーシートの境界部に流入させることによって、ＰＣＲ反応液をマイクロウェル毎に隔離するとともに、オイル遮断壁内側の基板上にマイクロウェルのアレイを被覆する低揮発性オイルの層を形成する。
【００１７】
こうして、従来のような高価な送液システムを備えることなく、簡単にかつ低コストでマイクロウェルにＰＣＲ反応液を充填することができる。
さらには、ＰＣＲ反応液充填後のマイクロウェルを低揮発性オイル層で被覆しているので、その後の熱サイクル装置を用いた熱サイクルの適用の間に、ＰＣＲ反応液が蒸発することを確実に防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の１実施例によるデジタルＰＣＲ用マイクロ流体デバイスの斜視図である。
【図２】図１のマイクロ流体デバイスの平面図であり、（Ａ）は基板を示す図であり、（Ｂ）はカバーシートの基板に対向する面側から見た図である。
【図３】図１のマイクロ流体デバイスのカバーシートが基板に重ね合わされた状態を示す平面図である。
【図４】図１のマイクロ流体デバイスの使用法を説明する模式図であり、ＰＣＲ反応液注入口から３つのマイクロウェルに至るマイクロチャネルに沿った側断面を示す図である。
【図５】マイクロウェルのアレイへのＰＣＲ反応液の充填が完了した状態を示す図２（Ａ）に類似の図である。
【図６】マイクロチャネルの顕微鏡写真であり、（Ａ）は光学顕微鏡で撮影したものであり、（Ｂ）はレーザー共焦点顕微鏡で撮影したものである。
【図７】マイクロチャネルおよびマイクロウェルがインジゴカルミン水溶液によって満たされた状態を撮影した光学顕微鏡写真である。
【図８】インジゴカルミン水溶液が充填されたマイクロウェルがミネラルオイル層によって被覆された状態を撮影した光学顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、添付図面を参照しつつ、本発明の構成を好ましい実施例に基づいて説明する。
図１は、本発明の１実施例によるデジタルＰＣＲ用マイクロ流体デバイスの斜視図であり、図２は、図１のマイクロ流体デバイスの平面図であり、（Ａ）は基板を示す図であり、（Ｂ）はカバーシートの基板に対向する面側から見た図である。また、図３は、図１のマイクロ流体デバイスのカバーシートが基板に重ね合わされた状態を示す平面図である。
【００２０】
図１〜図３を参照して、本発明によれば、一面１ａにマイクロウェル２ａのアレイ２が形成された基板１と、ガスを吸蔵し得る合成樹脂から形成され、基板１の一面１ａ側に重ね合わされてマイクロウェル２ａのアレイ２を被覆し得るカバーシート３が備えられる。
【００２１】
この実施例では、基板１としてガラス基板が使用され、マイクロウェル２ａのアレイ２は公知のフォトリソグラフィー技術を用いて形成されている。
なお、エッチング技術を用いてガラス基板上に直接マイクロウェル２ａのアレイ２を形成することもできる。
また、カバーシート３を形成する合成樹脂として、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）が用いられている。
【００２２】
さらに、カバーシート３の基板１に対向する面３ａ内に、マイクロチャネル４が格子状に形成されている。
この実施例では、マイクロチャネル４は、公知のレーザーによる微細溝加工技術を用いて形成されている。
図３からよくわかるように、マイクロチャネル４はマイクロウェル２ａの径よりも小さい幅を有し、カバーシート３が基板１に重ね合わされたとき、各マイクロウェル２ａにマイクロチャネル４が部分的に重なるようになっている。
【００２３】
この場合、マイクロチャネル４の格子のピッチが、マイクロウェル２ａのアレイ２のピッチよりも小さくなっていることが好ましい。
【００２４】
また、基板１の面１ａに、基板１に重ね合わされたカバーシート３の周囲を取り囲むオイル遮断壁５が立設されている。
この実施例では、オイル遮断壁５は、ＰＤＭＳから形成され、矩形枠状を有しており、プラズマ接着法によって基板１の面１ａに固着されている。
【００２５】
さらに、カバーシート３におけるマイクロウェル２ａのアレイ２と重なり合わない位置に、ＰＣＲ反応液注入口６が形成されている。
ＰＣＲ反応液注入口６は、カバーシート３を厚み方向に貫通するとともに、マイクロチャネル４と連通している。
【００２６】
次に、本発明のマイクロ流体デバイスの使用法を説明する。
図４は、図１のマイクロ流体デバイスの使用法を説明する模式図であり、ＰＣＲ反応液注入口から３つのマイクロウェルに至るマイクロチャネルに沿った側断面を示す図である。そして、図４（Ａ）は、カバーシートを基板に重ね合せた状態で脱気した後、大気圧下に置いた状態を示し、図４（Ｂ）は、ＰＣＲ反応液注入口にＰＣＲ反応液を注入した状態を示し、図４（Ｃ）は、マイクロチャネルおよびマイクロウェルをＰＣＲ反応液で満たした後、カバーシートおよびオイル遮断壁間に低揮発性オイルを注入した状態を示し、図４（Ｄ）は、カバーシート３を基板から徐々に剥がす状態を示し、図４（Ｅ）は、マイクロウェル毎にＰＣＲ反応液を隔離するとともにマイクロウェルを低揮発性オイル層で被覆した状態を示している。
なお、図４中、参照番号９は、マイクロウェル２ａのアレイ２の形成の際に、基板（ガラス基板）１上に形成されたレジスト膜を示している。
また、図５は、マイクロウェルのアレイへのＰＣＲ反応液の充填が完了した状態を示す図２（Ａ）に類似の図である。
【００２７】
まず、図４（Ａ）を参照して、カバーシート３が基板１に重ね合わされた状態で、基板１およびカバーシート３が所定時間脱気された後、大気圧下に置かれる。このとき、カバーシート３は空気の吸蔵を開始する。
カバーシート３の基板１への重ね合わせに際し、カバーシート３を形成するＰＤＭＳの強い自己吸着性により、カバーシート３を基板１（レジスト膜９）に接触させるだけで、カバーシート３と基板１を密着状態で（剥離可能に）接合することができる。
【００２８】
なお、この実施例では、カバーシート３を、レジスト膜９を介して基板１に密着状態で（剥離可能に）接合しているが、マイクロウェルアレイ２が直接基板１に形成される場合にも、これと同様にして、カバーシート３を基板１と密着状態で（剥離可能に）接合することができる。
【００２９】
次いで、図４（Ｂ）に示すように、ＰＣＲ反応液注入口６にＰＣＲ反応液７が注入される。こうして、ＰＣＲ反応液注入口６がＰＣＲ反応液７によって塞がれ、マイクロウェル２ａのアレイ２およびマイクロチャネル４が密閉空間にされるとともに、カバーシート３の空気吸蔵作用によって密閉空間内が減圧状態に維持される。それによって、ＰＣＲ反応液７が自律的に密閉空間（マイクロチャネル４およびマイクロウェル２ａ）内に流れ込んでいく。
【００３０】
最終的には、図４（Ｃ）に示すように、それぞれのマイクロウェル２ａおよびマイクロチャネル４がＰＣＲ反応液７で満たされ、そして、カバーシート３およびオイル遮断壁５間に低揮発性オイル８が注入される。
【００３１】
次いで、図４（Ｄ）に示すように、カバーシート３が基板１から徐々に剥がされ、それによって低揮発性オイル８が基板１とカバーシート３の境界部に流入し、図４（Ｅ）および図５に示すように、ＰＣＲ反応液７がマイクロウェル２ａ毎に隔離された状態で、オイル遮断壁５の内側の基板１上にマイクロウェル２ａのアレイ２を被覆する低揮発性オイル８の層が形成される。
こうして、ＰＣＲ反応液７のマイクロウェル２ａのアレイ２への充填が完了する。
【００３２】
その後、マイクロウェル２ａのアレイ２が低揮発性オイル８の層で被覆された基板１に、熱サイクル装置を用いて熱サイクルが適用され、ＰＣＲ増幅が行われる。
【００３３】
本発明によれば、カバーシート３を基板１に重ね合せた状態で脱気した後大気圧下に置き、次いで、ＰＣＲ反応液注入口６をＰＣＲ反応液７によって塞いで、基板１とカバーシート３の間にマイクロチャネル４およびマイクロウェルアレイ２による密閉空間を形成するとともに、カバーシート３の空気吸蔵作用を利用して密閉空間内を負圧にすることによって、ＰＣＲ反応液７を自律的に密閉空間内に流し込んでマイクロチャネル４およびすべてのマイクロウェル２ａをＰＣＲ反応液７で満たし、カバーシート３およびオイル遮断壁５間への低揮発性オイル８の注入後、カバーシート３を基板１から徐々に剥がすことによって、ＰＣＲ反応液７をマイクロウェル２ａ毎に隔離するとともに、オイル遮断壁５内側の基板１上にマイクロウェル２ａのアレイ２を被覆する低揮発性オイル８の層を形成する。
【００３４】
こうして、従来のような高価な送液システムを備えることなく、簡単にかつ低コストでマイクロウェル２ａにＰＣＲ反応液７を充填することができる。
さらには、ＰＣＲ反応液７充填後のマイクロウェル２ａを低揮発性オイル８の層で被覆しているので、その後の熱サイクル装置を用いた熱サイクルの適用の間に、ＰＣＲ反応液７の蒸発を確実に防止することができる。
【００３５】
［実験］
次に、本発明の効果を確認すべく、実験を行ってその結果を評価した。
（マイクロウェルのアレイの作製）
ガラス基板１上にネガティブフォトレジスト剤であるＳＵ−８  ３０５０（MicroChem）を適量滴下し、スピンコーターを用いて５００ｒｐｍで５秒間スピンコートした後、２０００ｒｐｍで３０秒間スピンコートすることでＳＵ−８の薄膜（レジスト膜）９を基板１上に形成した。
【００３６】
次に、この基板１をホットプレートによって９５℃で６０分間加熱した後、室温まで冷却した。そして、レジスト膜９上にフォトマスクを配置し、朝日分光社製水銀ランプ光源（ＲＥＸ−２５０）を用いて、照射強度５０％、露光時間２５秒の条件下に、３６５ｎｍロングパスフィルターを通して得られた紫外光をレジスト膜９に露光させた。
【００３７】
さらに、フォトマスクを取り外した基板１を、ホットプレートによって９５℃で３分間加熱した後、室温まで冷却し、現像液であるＳＵ−８  developerに浸して１０分間撹拌することで現像を行った。そして、基板１をイソプロパノールによって洗浄した後、窒素ガスをブローして乾燥した。
それによって、基板１上に、マイクロウェル２ａのアレイ２を作製した。
【００３８】
マイクロウェル２ａのアレイ２のサイズは次の通りである。
・マイクロウェル２ａの直径：約１００μｍ
・マイクロウェル２ａの深さ：約６０μｍ
・アレイ２のピッチ：約５０μｍ
【００３９】
また、オイル遮断壁５として、ＰＤＭＳ製の矩形フレームを、プラズマ接着法によって基板１上に固着した。
【００４０】
（格子状マイクロチャネル４を備えたカバーシート３の作製）
モメンティブ社製のＰＤＭＳ成形用の主剤と硬化剤を１０：１の重量比で混合し、混合の際に発生した気泡を取り除くために、デシケータ内に上記の混合液を入れて油圧式減圧ポンプによって減圧脱気した。
【００４１】
気泡の除去の完了後、ＰＤＭＳ成形用の型に混合液を流し込み、これを１００℃に加熱した乾燥機に入れ、１時間放置することで硬化させ、カバーシート３を作製した。
【００４２】
このカバーシート３の表面にＣＯ２レーザーマーカーを用いて格子状マイクロチャネル４（１２５本×１２５本）を作製した。
マイクロチャネル４のサイズは次の通りである。
・マイクロチャネルの幅：約２０μｍ
・マイクロチャネルの深さ：約１０μｍ
・格子のピッチ：隣接するマイクロチャネルの中心線間の間隔＝約７０μｍ、隣接するマイクロチャネルの側縁間の間隔＝約５０μｍ
【００４３】
作製したカバーシート３のマイクロチャネル４の顕微鏡写真を図６に示した。図６中、（Ａ）は光学顕微鏡で撮影した写真であり、（Ｂ）はレーザー共焦点顕微鏡で撮影した写真である。
【００４４】
また、生検トレバンを用いて、カバーシート３に直径３ｍｍのＰＣＲ反応液注入口６を形成した。
【００４５】
（マイクロチャネル４およびマイクロウェル２ａへの試料溶液の自動充填）
カバーシート３を基板１に重ね合せた状態でデシケータ内に入れ、油圧式減圧ポンプを用いてデシケータ内を減圧することによって、カバーシート３の脱気を７０分間行った後、そのまま大気圧下に置き、ＰＣＲ反応液注入口６に、０．１８ｗ／ｖ％インジゴカルミン水溶液（ＰＣＲ反応液７の代用）を注入した。
【００４６】
そして、インジゴカルミン水溶液が、負圧となったマイクロチャネル４およびマイクロウェル２ａ内に自動的に流れ込み、マイクロチャネル４およびマイクロウェル２ａのアレイ２がインジゴカルミン水溶液で満たされることを、光学顕微鏡による観察によって確認した。
その際に撮影した顕微鏡写真を図７に示した。
【００４７】
（マイクロウェル２ａのアレイ２への試料溶液の充填）
次に、カバーシート３とオイル遮断壁５の間に、低揮発性オイルとしてミネラルオイルを注入し、カバーシート３を基板１から徐々に剥がし、マイクロウェル２ａのアレイ２が、インジゴカルミン水溶液を充填された状態でミネラルオイル層によって被覆されることを、光学顕微鏡による観察によって確認した。
その際に撮影した顕微鏡写真を図８に示した。
【００４８】
（熱サイクルの適用）
マイクロウェル２ａのアレイ２にインジゴカルミン水溶液を充填してミネラルオイル層で被覆した基板１に、熱サイクル装置を用いて熱サイクル（９９℃〜５８℃、３０回）を適用し、マイクロウェル２ａ内のインジゴカルミン水溶液が蒸発していないことを光学顕微鏡による観察によって確認した。
【符号の説明】
【００４９】
１  基板
１ａ  一面
２  マイクロウェルのアレイ
２ａ  マイクロウェル
３  カバーシート
３ａ  面
４  マイクロチャネル
５  オイル遮断壁
６  ＰＣＲ反応液注入口
７  ＰＣＲ反応液
８  低揮発性オイル
９  レジスト膜
【図１】
2020039269.tif 000003
【図２】
2020039269.tif 000004
【図３】
2020039269.tif 000005
【図４】
2020039269.tif 000006
【図５】
2020039269.tif 000007
【図６】
2020039269.tif 000008
【図７】
2020039269.tif 000009
【図８】
2020039269.tif 000010