(57)【要約】【課題】アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有する組成物の提供。【解決手段】マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物を含有することを特徴とする、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性作用を有する組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物を含有することを特徴とする、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性作用を有する組成物。
【請求項２】
マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物が、水、有機溶媒、またはこれらの混合物で抽出された抽出物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
有機溶媒が、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトン、１−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−２−プロパノール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ヘキサン、ジエチルエーテル、２−ブタノン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、食用油脂、プロパン、ブタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンおよび１，１，２−トリクロロエテンからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物が、根および／またはストロンからの抽出物である、請求項１〜３いずれか記載の組成物。
【請求項５】
マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物の濃度が、０．１０ｍｇ／ｍＬ以上である、請求項１〜４いずれか記載の組成物。
【請求項６】
マメ科カンゾウ属に属する植物が、ウラルカンゾウ種である、請求項１〜５いずれか記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６いずれか記載の組成物を有効成分とする、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）に関連する疾患の予防あるいは軽減のための食品または医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物の抽出物を含有し、アンギオテンシン変換酵素（Angiotensin Converting Enzyme：ＡＣＥ）阻害活性を有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
マメ科カンゾウ属に属する植物を原料とする甘草は、古くから生薬として用いられており、鎮痙、鎮痛、鎮咳、去痰など様々な作用を有することが知られている。
【０００３】
また、甘草疎水性抽出物を含有する高血圧症などを予防または改善するための組成物（特許文献１および２）、グリチルリチン酸を含まない甘草抽出物を含んでなる血圧などを低下させるための調製物（特許文献３）も知られている。
【０００４】
さらに、甘草抽出物は、血圧降下作用を有するサーデンペプチド（イワシペプチド）を含有する組成物において、甘草抽出物を加えることによりサーデンペプチドに固有の不快臭を抑制する作用も有することが知られている（特許文献４）。
【０００５】
しかしながら、甘草抽出物が、ＡＣＥ阻害作用を有することは、これまで知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００２／０４７６９９号
【特許文献２】国際公開第２００８／１４３１８２号
【特許文献３】特開第２００２−１１４６９５号
【特許文献４】特開第２００９−２８４９００号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ＡＣＥ阻害活性を有する組成物を提供することを目的とする。また、本発明は、当該組成物を有効成分とするＡＣＥに関連する疾患の予防あるいは軽減のための食品または医薬品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは鋭意検討した結果、マメ科カンゾウ属に属する植物からの抽出物が、ＡＣＥ阻害活性を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
［１］マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物を含有することを特徴とする、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性作用を有する組成物。
［２］マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物が、水、有機溶媒、またはこれらの混合物で抽出された抽出物である、［１］に記載の組成物。
［３］有機溶媒が、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトン、１−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−２−プロパノール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ヘキサン、ジエチルエーテル、２−ブタノン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、食用油脂、プロパン、ブタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンおよび１，１，２−トリクロロエテンからなる群から選択される少なくとも１つである、［１］または［２］に記載の組成物。
［４］マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物が、根および／またはストロンからの抽出物である、［１］〜［３］いずれか記載の組成物。
［５］マメ科カンゾウ属に属する植物の抽出物の濃度が、０．１０ｍｇ／ｍＬ以上である、［１］〜［４］いずれか記載の組成物。
［６］マメ科カンゾウ属に属する植物が、ウラルカンゾウ種である、［１］〜［５］いずれか記載の組成物。
［７］［１］〜［６］いずれか記載の組成物を有効成分とする、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）に関連する疾患の予防あるいは軽減のための食品または医薬品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の組成物は、ＡＣＥ阻害活性を有するので、ＡＣＥに関連する疾患を予防あるいは軽減することができる。さらに、本発明の組成物は、天然由来の抽出物を含有しており、安全性が高い。したがって、本発明の組成物は、ＡＣＥに関連する疾患の予防あるいは軽減のための食品または医薬品として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の組成物は、マメ科カンゾウ属に属する植物からの抽出物を含む。マメ科カンゾウ属に属する植物としては、例えばGlycyrrhiza acanthocarpa、G.aspera、G.astragalina、G.bucharica、G.echinata（ロシアカンゾウ種）、G.eglandulosa、G.foetida、G.foetidissima、G.glabra（スペインカンゾウ種）、G.gontscharovii、G.iconica、G.inflate（新疆カンゾウ種）、G.korshinskyi、G.lepidota（アメリカカンゾウ種）、G.pallidiflora、G.squamulosa、G.triphylla、G.uralensis（ウラルカンゾウ種）、G.yunnanensis、などが挙げられ、これらマメ科カンゾウ属に属する植物の変種も使用できる。好ましくは、スペインカンゾウ種およびウラルカンゾウ種であり、より好ましくは、ウラルカンゾウ種である。本発明では、例えば、マメ科カンゾウ属ウラルカンゾウ種に属する都甘草（「都１号」とも称される）が用いられる。
【００１１】
都甘草の特性は、「草丈はかなり高、根の数はかなり多、根の太さはかなり太、根の表皮の色は褐、根の横断面の黄色系着色の強弱は強、茎の数は中、茎のアントシアニン着色の強弱は無、茎の毛の粗密は無または粗、葉の長さは長、葉の幅はかなり広、葉の波打ちの強弱は中、小葉の数は中、小葉の葉身の長さはかなり長、小葉の葉身の幅はかなり広、花序の数はやや多、花序の長さは中、小花の数はかなり多、花の色はＮ８１Ａ、乾燥根の重量はかなり重、グリチルリチン酸含量はやや多である（カラーチャートはＲＨＳを使用）」である。「都甘草」は、「北農試系」と比較して、草丈がかなり高であること、小葉の葉身の長さがかなり長であること等で区別性が認められる。また、「北大系」と比較して、草丈がかなり高であること、小葉の葉身の長さがかなり長であること等で区別性が認められる。さらに、「医療大系」と比較して、草丈がかなり高であること、小葉の葉身の長さがかなり長であること、枯れ上がりの早晩性が晩であること等で区別性が認められる。
【００１２】
本発明の組成物に含まれる抽出物は、例えば、上記マメ科カンゾウ属に属する植物の根、ストロン、葉、茎またはこれらの部位の混合物からの抽出物である。本発明の組成物において、根および／またはストロンからの抽出物であってもよく、葉および／または茎からの抽出物であってもよい。好ましくは、マメ科カンゾウ属に属する植物の根および／またはストロンからの抽出物であり、より好ましくは都甘草の根および／またはストロンからの抽出物である。
【００１３】
本発明における抽出物は、通常植物抽出に使用される溶媒を用いて、定法に従って抽出することにより得られる。例えば、植物を抽出溶媒に浸漬し、静置または撹拌することにより得られる。
【００１４】
抽出に用いる植物は、そのまま（生）、その乾燥物、またはそれらの裁断もしくは粉砕したものであり得る。
【００１５】
抽出に用いる溶媒としては、植物の抽出に従来使用されていた溶媒が挙げられ、例えば、水、有機溶媒、またはこれらの混合物が挙げられる。
有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトン、１−ブタノール、２−ブタノール、２−メチル−２−プロパノール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ヘキサン、ジエチルエーテル、２−ブタノン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、食用油脂、プロパン、ブタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンおよび１，１，２−トリクロロエテンが挙げられる。
好ましくは、水、エタノールまたはこれらの混合物が挙げられる。また、水とエタノールの混合物を使用する場合、該混合物中のエタノール濃度は、例えば０．１〜９９．５ｖ／ｖ％、好ましくは５〜８０ｖ／ｖ％、より好ましくは１０〜７０ｖ／ｖ％である。
【００１６】
抽出方法は、通常用いられる方法であればよく、例えば、室温または加熱下で任意の装置を用いて抽出することができる。具体的には、溶媒を満たした処理層に植物を投入し、時々撹拌して溶出させ、その後、必要に応じて遠心分離、ろ過に供して抽出残渣を除去することにより抽出物を得ることができる。また、抽出方法として、水、亜酸化窒素、二酸化炭素等からなる超臨界流体を用いた方法を使用してもよい。
【００１７】
抽出に用いる溶媒の量は、特に限定されないが、例えば植物（乾燥重量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬ、好ましくは５〜５０ｍＬである。
抽出条件は、十分に抽出される条件であれば特に限定されないが、通常、抽出温度が低温であればより長時間の抽出を行い、抽出溶媒が高温であればより短時間の抽出を行う。抽出温度は、０〜１００℃の範囲で適宜設定され、好ましくは室温（約２５℃）から抽出溶媒の沸点以下の範囲である。抽出時間は、１０分〜２４時間の範囲で設定され、好ましくは３０分〜５時間の範囲である。抽出溶媒として水を用いる場合、抽出条件は、例えば約２０〜９５℃で約３０分〜３時間である。抽出溶媒としてエタノールまたは水とエタノールとの混合溶媒を用いる場合、抽出条件は、例えば約２０〜８０℃で約３０分〜３時間である。
抽出回数は単回でもよく、収率を上げるために複数回であってもよい。
【００１８】
得られた抽出物は、そのまま本発明の組成物として用いることができる。また、抽出物を、必要に応じて、脱色または脱臭などを目的として精製に供してもよい。精製方法としては、例えば、活性炭処理、吸着処理、イオン交換樹脂処理などが挙げられる。
【００１９】
抽出物を、さらに濃縮または濃縮乾固してもよく、適当な溶媒で希釈してもよく、または必要に応じて賦形剤を添加後乾燥して粉体状にしてもよい。濃縮または濃縮乾固の方法としては、例えば、減圧濃縮（エバポレーターを用いる方法など）、膜濃縮が挙げられる。粉末状にする方法としては、例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥、流動層乾燥が挙げられる。抽出物を粉末状にする際に用いられる賦形剤としては、従来使用されているものが挙げられ、例えば、加工デンプン、デキストリンなどが挙げられる。
【００２０】
本発明における「抽出物」は、上記のような抽出方法で得られた各種溶剤抽出液、その精製画分、その希釈液、その濃縮液、およびその乾燥物（粉末等）を含む。
【００２１】
本発明の組成物中に含まれるマメ科カンゾウ属に属する植物からの抽出物の量は、所望の効果を発揮できる量であれば特に限定されない。例えば、本発明の組成物が液体組成物である場合、液体組成物中の濃度（抽出物の乾燥重量／液体組成物の体積）として、その下限は、例えば０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、好ましくは０．１０ｍｇ／ｍＬ以上であり、その上限は、例えば１００ｍｇ／ｍＬ以下、好ましくは１０ｍｇ／ｍＬ以下である。
また、本発明の組成物が固体組成物である場合、固体組成物中の配合割合（抽出物の乾燥重量／組成物の乾燥重量）として、その下限は、例えば０．０１重量％以上、好ましくは０．１重量％以上であり、その上限は、例えば９９重量％以下、好ましくは５０重量％以下である。
【００２２】
本発明における抽出物は、ＡＣＥ活性阻害作用を有するので、ＡＣＥに関連する疾患を予防あるいは軽減することができる。ＡＣＥは、昇圧系であるレニン・アンギオテンシン系において血管収縮作用を有するアンギオテンシンＩＩを生成する一方、降圧作用を有するブラジキニンの分解酵素でもある。このためＡＣＥ活性を阻害することは、アンギオテンシンＩＩの生成抑制およびブラジキニンの不活性化抑制という二つの機序による降圧効果を生じる。したがって、本発明の組成物は、ＡＣＥ活性阻害作用を通じて、血圧改善効果、例えば血圧降下効果を示す。
【００２３】
ここでいう「血圧改善」には、ヒトなどの哺乳類の血管拡張を改善する、正常な血管拡張を維持する、血圧を低下させる、安定な血圧を維持する、ならびに血管の内皮細胞を変性から保護することなどが含まれる。また、血管拡張は、血管の拡張、特に血管の一部への血流の増加をもたらす細動脈の拡張を意味する。
【００２４】
また、本発明における抽出物は、天然のマメ科カンゾウ属に属する植物由来であるので、安全性も高い。したがって、本発明の組成物は、食品および医薬品として、特にＡＣＥに関連する疾患の予防あるいは軽減のための食品および医薬品として有用である。
【００２５】
本発明の医薬品は、上記抽出物または上記組成物を用いて、常法に従って製造される。例えば、上記抽出物または上記組成物を、製剤技術分野において慣用の薬学的に許容される担体または添加剤に添加・混合するなど公知の方法を用いて、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、経口液剤、シロップ剤などの経口投与のための剤形にすることができる。
担体または添加剤としては、例えば賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、pH調整剤、界面活性剤、安定化剤、酸味料、香料などが挙げられる。これら添加剤は、製剤技術分野において慣用の量が用いられる。
【００２６】
賦形剤としては、例えば、トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、コムギコデンプン、コメデンプン、部分アルファー化デンプン、アルファー化デンプン、有孔デンプンなどのデンプン類；乳糖水和物、ショ糖、果糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、トレハロース、マルチトール、粉末還元麦芽糖水アメ、ラクチトールなどの糖または糖アルコール類；無水リン酸水素カルシウム、結晶セルロース、粉末セルロース、沈降炭酸カルシウム、炭酸カルシウムなどが挙げられる。
崩壊剤としては、例えば、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（L-HPC）、ヒドロキシプロピルスターチなどが用いられ、好ましくは、クロスカルメロースナトリウム、L-HPCである。
結合剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、コポリビドン、アラビアゴム末、メチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、カルメロースナトリウム、デキストリン、部分アルファー化デンプン、プルラン、アラビアゴム、カンテン、ゼラチン、トラガント、アルギン酸ナトリウムなどが用いられ、好ましくは、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースである。
流動化剤としては、例えば、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、タルクなどが用いられ、好ましくは、軽質無水ケイ酸、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムである。
滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、ショ糖脂肪酸エステルなどが挙げられる。
着色剤としては、例えば、黄色三二酸化鉄、三二酸化鉄、食用青色1号、食用青色2号、食用黄色4号、食用黄色5号、食用緑色3号、食用赤色2号、食用赤色3号、食用赤色102号、食用赤色104号、食用赤色105号、食用赤色106号、食用レーキ色素、リボフラビン、リボフラビンリン酸エステルナトリウムなどが挙げられる。
ｐＨ調整剤としては、例えば、クエン酸、リン酸、炭酸、酒石酸、フマル酸、酢酸、アミノ酸およびそれらの塩類などが挙げられる。
界面活性剤として、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート80、ポリオキシエチレン(160)ポリオキシプロピレン(30)グリコールなどが挙げられる。
安定化剤としては、例えばトコフェロール、エデト酸四ナトリウム、ニコチン酸アミド、シクロデキストリン類などが挙げられる。
酸味料としては、例えば、アスコルビン酸、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸などが挙げられる。
香料としては、例えば、L-メントール、ハッカ油、レモン油、バニリンなどが挙げられる。
上記した担体または添加剤は、２種以上を適宜、混合して用いてもよい。
【００２７】
本発明の医薬品は、抽出物を乾燥重量換算で０．０５〜５ｇ、好ましくは０．１〜１．５ｇ含有する単位投与量形態であるのが好ましい。ここで「単位投与量形態」とは、物理的に分けた単位を意味し、各単位は所望の効果が得られるように計算した予め定められた量の有効成分を担体または添加剤と共に含んでいる。
【００２８】
本発明の医薬品の投与量は、投与する対象体の年齢、性別体重および状態ならびに投与経路、投与スケジュール、剤形および製剤組成などにより異なるが、例えば１〜１０００ｍｇ、好ましくは５〜５００ｍｇである。当該投与量は、１日に１回、または２回もしくは３回以上に分けて投与してもよい。
【００２９】
本発明の食品は、上記抽出物または上記組成物を用いて常法に従い製造される。例えば、上記抽出物または上記組成物を食品、その食材またはその食品中間素材に添加するなどの公知の手段でもって製造される。例えば、マメ科カンゾウ属に属する植物を水やエタノールで抽出したのち、濃縮し、得られた濃縮抽出物を食品材料に添加し、次いで常法により食品とすることにより製造される。
【００３０】
上記食品としては、例えば、菓子類（例えばポテトチップスをはじめとするスナック菓子、ビスケットまたはクッキーなどの焼菓子、チョコレート、ガム、またはキャンディ等）、デザート類（例えばプリン、ゼリー、ヨーグルトまたはアイスクリーム等）のような嗜好食品の他、麺類（例えば、そば、うどん、ラーメンまたはパスタ等）、シリアルフーズ（例えばコーンフレークまたはオートミール等）のような主食に準ずるもの、調味食品（例えばスープ、カレーまたはシチュー等）、農産加工品（例えばジャム等）、乳油食品（例えばスプレッド類またはチーズ等）、健康食品（例えばプロテインまたはファイバー等）、カロリー調整食品、ノンアルコール飲料（例えば大豆焙煎茶飲料、穀物茶、コーヒー飲料、紅茶飲料、緑茶飲料、麦茶飲料、抹茶飲料、野菜汁飲料、オレンジジュース、グレープフルーツジュース、清涼飲料等）、またはアルコール飲料（例えばビール、ワイン、清酒、発泡酒、梅酒、ウィスキー、ブランデー、焼酎、ウォッカ、ラム、ジン、リキュール類またはカクテル類等）などが挙げられる。
【００３１】
本発明の食品は、例えば、栄養補助食品、健康補助食品、栄養調整食品などを含む一般食品、ならびに特定保健用食品、栄養機能食品および機能性表示食品を含む保健機能食品とすることができる。例えば、本発明の食品は、特定の保健の目的が期待できる旨（例えば、「血圧を低下させる機能が報告されており、血圧が高めの方に適しています。」）を科学的根拠に基づいて表示する機能性表示食品とすることができる。また、本発明の食品は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、液体、シロップなどの経口摂取のための形態を有するサプリメントであってもよい。
【００３２】
本発明の食品中に含まれる抽出物含有組成物の量は、所望の効果を発揮できる量であればよく、食品の一般的な摂取量、食品の種類、組成などに応じて適宜決定すればよい。例えば、本発明の食品は、抽出物含有組成物を、乾燥重量として０．１〜９９．０重量％の範囲で含むことができる。
【００３３】
本発明の食品の摂取量は、摂取する対象体の年齢、性別体重および状態ならびに食品の種類、組成などにより異なり得て、例えば１〜１０００ｍｇ、好ましくは５〜５００ｍｇである。当該摂取量は、１日に１回、または２回もしくは３回以上に分けて摂取してもよい。
【００３４】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３５】
［実施例１〜５］都甘草の根およびストロンからの水製エキスの調製
都甘草の根およびストロン３ｋｇに水約３０Ｌを加え、９０℃で約２時間抽出した後、メッシュろ過し、２３．２Ｌの抽出液を得た。さらにこの抽出液を約６０℃で減圧濃縮し、２５４４ｇの濃縮液を得た。この濃縮液２５１１ｇを噴霧乾燥し、乾燥抽出物６０８ｇを得た。
上記乾燥抽出物約１．０ｇを５０％エタノール溶液２０ｍｌで抽出後、０．１ｍｏｌ／ｌ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）にて適宜希釈して、０．１ｍｇ／ｍＬ（実施例１）、０．１２５ｍｇ／ｍＬ（実施例２）、０．１５ｍｇ／ｍＬ（実施例３）、０．２ｍｇ／ｍＬ（実施例４）および０．２２５ｍｇ／ｍＬ（実施例５）の試料濃度を有する都甘草の根およびストロンからの水製エキス含有組成物を得た。
【００３６】
［実施例６〜１０］都甘草の根およびストロンからのエタノールエキスの調製
都甘草の根およびストロン３ｋｇに３０％エタノール約３０Ｌを加え、６０℃で約２時間抽出した後、メッシュろ過し、２５．２Ｌの抽出液を得た。さらにこの抽出液を約６０℃で減圧濃縮し、２８４９ｇの濃縮液を得た。この濃縮液２８０２ｇを噴霧乾燥し、乾燥抽出物６３６ｇを得た。
上記乾燥抽出物約１．０ｇを５０％エタノール溶液２０ｍｌで抽出後、０．１ｍｏｌ／ｌ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）にて適宜希釈して、０．１ｍｇ／ｍＬ（実施例６）、０．１２５ｍｇ／ｍＬ（実施例７）、０．１５ｍｇ／ｍＬ（実施例８）、０．１７５ｍｇ／ｍＬ（実施例９）および０．２ｍｇ／ｍＬ（実施例１０）の試料濃度を有する都甘草の根およびストロンからのエタノールエキス含有組成物を得た。
【００３７】
［試験例］
１．試験概要
アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）活性試験はＮａｋｎｏ  ｅｔａｌ．  Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ７０，  １１１８−１１２６（２００６）に記載の方法に基づき、基質（Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）からＡＣＥにより分解されるジペプチドをオルトフタルアルデヒド（以下「ＯＰＡ」と略す。）により蛍光化した後、反応物の蛍光強度を測定することで実施した。ＡＣＥ活性阻害は試験溶液を加えない未処置区の活性を１００％とした場合の相対ＡＣＥ活性をもとに評価した。ＩＣ５０値は試料濃度（ｍｇ／ｍｌ）と阻害率（％）のグラフから算出した。
【００３８】
２．検体
下記検体１）および２）の試験溶液として、上記実施例で得られた組成物を使用した。また、ポジティブコントロール（検体３））として、サーデンペプチド（商品名：サーデンペプチドＮ１００、製造者：仙味エキス株式会社）を使用した。
１）都甘草の根およびストロンからの水製エキス（実施例１〜５）
２）都甘草の根およびストロンからのエタノールエキス（実施例６〜１０）
３）サーデンペプチド（ポジティブコントロール）
【００３９】
３．試験方法
０．１ｍｏｌ／ｌ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）（未処置区）または各試験溶液を９６穴マイクロプレートに２５μｌ加え、２０ｍＵ／ｍｌ  ＡＣＥ溶液を２５μｌ加えて３７℃で５分間インキュベートした。８ｍｍｏｌ／ｌ  Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ溶液を２５μｌ加え、３７℃で３０分間反応した。その後、０．１ｍｏｌ／ｌ  水酸化ナトリウム溶液を２５μｌ加えて反応を停止し、１％ＯＰＡ溶液を２５μｌ加え、室温で２０分間放置した。さらに、０．１ｍｏｌ／ｌ  塩酸を２５μｌ入れて室温で１０分間放置し、マイクロプレートリーダーで蛍光強度を測定した。なお、ブランクは２０ｍＵ／ｍｌ  ＡＣＥ溶液の代わりにＰＢＳを用いて同様に試験した。
＜マイクロプレートリーダー操作条件＞
機種：ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ２ｅ
測定条件：蛍光、ｅｎｄｐｏｉｎｔモード、ボトムリード
励起波長：３５５ｎｍ
蛍光波長：４６０ｎｍ
【００４０】
４．試験結果
各試験溶液中の阻害率の結果を表１に示した。この結果、濃度依存的なＡＣＥ活性阻害の増強が認められた。試料濃度と阻害率の関係を示すグラフから算出されたＩＣ５０値を表２に示した。
【表１】
2020128355.tif 000002
【表２】
2020128355.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明の組成物は、ＡＣＥ阻害活性を有するので、ＡＣＥに関連する疾患を予防あるいは軽減することができる。さらに、本発明の組成物は、天然由来の抽出物を含有しており、安全性が高い。したがって、本発明の組成物は、ＡＣＥに関連する疾患の予防あるいは軽減のための食品または医薬品として利用することができる。