(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒトにおける髄膜炎菌血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）に対する免疫応答を誘導するための方法の提供。【解決手段】ａ）特定のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド、及びｂ）前記a)とは異なる特定のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含み、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２及びＢ１０７からなる群から選択されるポリペプチドを発現するＭｅｎＢに対する免疫応答を誘導する、ワクチン組成物を使用する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおける髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する免疫応答を誘導するための組成物であって、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド、およびｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含み、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７からなる群から選択されるポリペプチドを発現する少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対する免疫応答を誘導する、有効量の前記組成物の使用。
【請求項２】
誘導される免疫応答が殺菌性である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
組成物がポリソルベート８０をさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
組成物がアルミニウムをさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
組成物がヒスチジン緩衝液をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
組成物が塩化ナトリウムをさらに含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
組成物が、約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド；約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド；約２．８モル比のポリソルベート８０；約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム；約１０ｍＭのヒスチジン；および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
組成物が、約６０μｇの第１のポリペプチド；約６０μｇの第２のポリペプチド；約１８μｇのポリソルベート８０；約２５０μｇのアルミニウム；約７８０μｇのヒスチジン；および約４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
組成物が、４つの異なる、別々に作製されたタンパク質−莢膜多糖コンジュゲートの混合物を含む少なくとも１つの追加の免疫原性組成物をさらに含み、免疫組成物における第１のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ｗの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第２のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ｙの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第３のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第４のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ｃの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、担体タンパク質がジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７および破傷風トキソイドからなる群から選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
担体タンパク質がジフテリアトキソイドである、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
担体タンパク質が破傷風トキソイドである、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
少なくとも１つの追加の免疫原性組成物が、液体組成物である、請求項９に記載の使用。
【請求項１３】
少なくとも１つの追加の免疫原性組成物が凍結乾燥されない、請求項９に記載の使用。
【請求項１４】
組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株に対する免疫応答を誘導する、請求項９から１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株に対する免疫応答を誘導する、請求項９から１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株に対する免疫応答を誘導する、請求項９から１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
組成物が、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株に対する免疫応答を誘導する、請求項９から１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
組成物が、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株の少なくとも１つ、およびその任意の組合せに対する免疫応答を誘導する、請求項９から１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
有効量の組成物が１用量を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
有効量の組成物が２用量を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
有効量の組成物が追加用量をさらに含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
有効量の組成物が多くても２用量を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
有効量の組成物が多くても３用量を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
組成物がハイブリッドタンパク質を含まない、請求項１に記載の使用。
【請求項２５】
組成物が融合タンパク質を含まない、請求項１に記載の使用。
【請求項２６】
組成物が凍結乾燥されない、請求項１に記載の使用。
【請求項２７】
組成物がホルムアルデヒドを含まない、請求項１に記載の使用。
【請求項２８】
組成物がジフテリアトキソイドもＣＲＭも含まない、請求項９に記載の使用。
【請求項２９】
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖が、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーにコンジュゲートされ、リンカーがカルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、請求項９に記載の使用。
【請求項３０】
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖が、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によりＡＤＨリンカーにコンジュゲートされ、リンカーがカルボジイミド化学反応により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート）、請求項９に記載の使用。
【請求項３１】
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ（ＭｅｎＷ）莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）、請求項９に記載の使用。
【請求項３２】
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）、請求項９に記載の使用。
【請求項３３】
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖が、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされ、リンカーが、カルボジイミド化学反応により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖が、ＡＤＨリンカーに、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされ、リンカーが、カルボジイミド化学反応により破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされている（ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ（ＭｅｎＷ）莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖が、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）、請求項９に記載の使用。
【請求項３４】
組成物が、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーの非存在下でＭｅｎＡ莢膜糖を含まない、請求項９に記載の使用。
【請求項３５】
患者が１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満である、請求項１から３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
患者が１８〜２４カ月齢未満である、請求項１から３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
患者が２４カ月齢以上〜１０歳未満である、請求項１から３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３８】
組成物が、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも２倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する、請求項１から３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３９】
組成物が、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも４倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する、請求項１から３８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４０】
組成物が、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも８倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する、請求項１から３９のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本出願は、２０１９年２月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／８０３，７３０号、２０１９年７月１日に出願された米国仮特許出願第６２／８６９，４２３号の利益を主張する。前記出願はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）組成物およびその方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、敗血症、髄膜炎、および死亡を引き起こし得るグラム陰性被包性細菌である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を、化学的および抗原的に顕著な多糖類莢膜に基づいて少なくとも１２種の血清群（血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺ）に分類することができる。５種の血清群（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ）を代表する株が、大部分の疾患の原因となる。
【０００４】
髄膜炎菌（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、抗生物質が利用可能であるにも拘わらず、数時間以内に小児および若年成人を殺傷し得る破壊的な疾患である。
【０００５】
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）疾患の防止のためのワクチンであるＴＲＵＭＥＮＢＡ（二価ｒＬＰ２０８６）は、髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）のバリアントである、２つのタンパク質抗原からなる。ｆＨＢＰは、２つのサブファミリー、ＡおよびＢとして存在する。それぞれのサブファミリー内で、数百種類のユニークなｆＨＢＰバリアントが同定されている。この配列多様性にも拘わらず、それぞれのサブファミリーに由来する１つのタンパク質を含有するワクチンは、ｆＨＢＰバリアントの多様性を代表するＭｅｎＢ株にわたる広いカバー範囲を誘導することが示された。ライセンス交付は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において侵襲性ＭｅｎＢ株の補体媒介性殺滅を開始する抗体を惹起するワクチンの能力に基づくものであった。髄膜炎菌疾患の風土性のため、どのｆＨＢＰバリアントに個体が曝露され得るかを予測するのは不可能である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国仮特許出願第６２／８０３，７３０号
【特許文献２】米国仮特許出願第６２／８６９，４２３号
【特許文献３】国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０３２４８９号
【特許文献４】米国特許出願公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号
【特許文献５】国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／１３２４５２号
【特許文献６】米国特許出願公開第ＵＳ２０１６００３０５４３号
【特許文献７】ＷＯ０４／０８３２５１
【特許文献８】米国特許第４，７０９，０１７号
【特許文献９】米国特許第４，９５０，７４０号
【特許文献１０】米国特許第５，９１７，０１７号
【特許文献１１】米国特許第６，４５５，６７３号
【特許文献１２】米国特許第５，８４３，７１１号
【特許文献１３】ＥＰ０３７２５０１
【特許文献１４】ＥＰ０３７８８８１
【特許文献１５】ＥＰ０４２７３４７
【特許文献１６】ＷＯ９３／１７７１２
【特許文献１７】ＷＯ９４／０３２０８
【特許文献１８】ＷＯ９８／５８６６８
【特許文献１９】ＥＰ０４７１１７７
【特許文献２０】ＷＯ９１／０１１４６
【特許文献２１】ＷＯ０２／０９１９９８
【特許文献２２】ＷＯ０１／７２３３７
【特許文献２３】ＷＯ００／６１７６１
【特許文献２４】ＥＰ５９４６１０
【特許文献２５】ＷＯ００／５６３６０
【特許文献２６】ＷＯ００／１０５９９
【特許文献２７】米国特許第４，０５７，６８５号
【特許文献２８】米国特許第４，６７３，５７４号
【特許文献２９】米国特許第４，８０８，７００号
【特許文献３０】米国特許第４，４５９，２８６号
【特許文献３１】ＰＣＴ出願公開ＷＯ９３／１５７６０
【特許文献３２】ＷＯ９５／０８３４８
【特許文献３３】ＷＯ９６／２９０９４
【特許文献３４】ＷＯ９８／４２７２１
【特許文献３５】米国特許第４，３６５，１７０号
【特許文献３６】ＥＰ−０−１６１−１８８
【特許文献３７】ＥＰ−２０８３７５
【特許文献３８】ＥＰ−０−４７７５０８
【特許文献３９】ＷＯ９５／０８３４８
【特許文献４０】ＷＯ９６／２９０９４
【特許文献４１】ＷＯ２０１２０２５８７３
【特許文献４２】米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１７１１９４号
【特許文献４３】米国特許出願公開第ＵＳ２００９／００１６９４６号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｕｃｈｉｄａら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２１８；３８３８〜３８４４、１９７３
【非特許文献２】ＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔｏｘｉｎｓ、Ｅｄ：Ｆｒａｎｋｅｌ，  Ｍａｅｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ、１９９２
【非特許文献３】Ｋｕｏら（１９９５）  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６３；２７０６〜１３
【非特許文献４】Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７２；４８８４〜７
【非特許文献５】Ｆａｌｕｇｉら（２００１）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３１；３８１６〜３８２４
【非特許文献６】Ｌｏｗｒｙら（１９５１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １９３、２６５〜２７５
【非特許文献７】Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １００、２０１〜２２０（１９７９）
【非特許文献８】Ｍｏｎｓｉｇｎｙら（１９８８）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １７５、５２５〜５３０
【非特許文献９】Ｇｅｖｅｒら（１９７９）  Ｍｅｄ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５；１７１〜２８８
【非特許文献１０】Ｂｅｔｈｅｌｌら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １９７９、２５４；２５７２〜４
【非特許文献１１】Ｈｅａｒｎら、Ｊ．  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．  １９８１．  ２１８；５０９〜１８
【非特許文献１２】Ｃｈｕ  Ｃ．ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９８３、２４５〜２５６
【非特許文献１３】Ｅｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．２７（２４）：３１７５〜３１８０（２００９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）疾患の防止のためのワクチンによって与えられるカバー範囲を探索し続けることは、免疫カバー範囲の幅を示すさらなる証拠を提供するのに有用であり、役立つ。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一態様では、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）の第１の脂質化ポリペプチドバリアントと、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  ｆＨＢＰの第２の脂質化ポリペプチドバリアントとを含む組成物の使用に関する。一実施形態では、組成物は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７からなる群から選択されるポリペプチドを発現する少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する。
【００１０】
例えば、一態様では、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチドと、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドとを含む組成物の使用に関する。
【００１１】
一態様では、本発明は、サブファミリーＡ株およびサブファミリーＢ株を含む、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対する殺菌性免疫応答を誘導するための有効量の組成物の使用に関する。別の態様では、本発明は、ヒトにおける髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌性免疫応答を誘導するための有効量の組成物の使用に関する。好ましい態様では、本発明は、ヒトにおける髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する殺菌性免疫応答を誘導するための有効量の組成物の使用に関する。使用は、ヒトに、有効量の組成物を投与することを含む。
【００１２】
一実施形態では、組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチド、およびｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドを含む。一実施形態では、組成物は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７からなる群から選択されるポリペプチドを発現する少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対する殺菌性免疫応答を誘導する。
【００１３】
一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０をさらに含む。一実施形態では、組成物は、アルミニウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、ヒスチジン緩衝液をさらに含む。一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチド；約１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチド；約２．８モル比のポリソルベート８０；約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウム；約１０ｍＭのヒスチジン；および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、組成物は、約６０μｇの第１のポリペプチド；約６０μｇの第２のポリペプチド；約１８μｇのポリソルベート８０；約２５０μｇのアルミニウム；約７８０μｇのヒスチジン；および約４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。
【００１４】
一実施形態では、組成物は、４つの異なる、別々に作製されたタンパク質−莢膜多糖コンジュゲートの混合物を含む少なくとも１つのさらなる免疫原性組成物であって、第１のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ｗの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第２のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ｙの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第３のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、第４のコンジュゲートが担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ｃの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜多糖を含み、担体タンパク質がジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７および破傷風トキソイドからなる群から選択される、免疫原性組成物をさらに含む。一実施形態では、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイドである。一実施形態では、担体タンパク質は、破傷風トキソイドである。一実施形態では、少なくとも１つのさらなる免疫原性組成物は、液体組成物である。一実施形態では、少なくとも１つのさらなる免疫原性組成物は、凍結乾燥されない。一実施形態では、使用は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株、および／または髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株の少なくとも１つ、またはその任意の組合せに対する免疫応答を誘導することを含む。
【００１５】
一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート）は、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされる；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート）は、ＡＤＨリンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされる；髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）は、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされる；および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）は、リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされる。一実施形態では、組成物は、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーの非存在下でＭｅｎＡ莢膜糖を含まない。
【００１６】
一実施形態では、組成物の有効量は、１用量を含む。一実施形態では、組成物の有効量は、２用量を含む。一実施形態では、組成物の有効量は、追加用量をさらに含む。一実施形態では、組成物の有効量は、多くても２用量を含む。一実施形態では、組成物の有効量は、多くても３用量を含む。
【００１７】
一実施形態では、組成物は、ハイブリッドタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、融合タンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、凍結乾燥されない。一実施形態では、組成物は、ホルムアルデヒドを含まない。一実施形態では、組成物は、ジフテリアトキソイドもＣＲＭも含まない。
【００１８】
一実施形態では、患者は、１２〜１８カ月齢未満または１８〜２４カ月齢未満である。一実施形態では、患者は、１８〜２４カ月齢未満である。一実施形態では、患者は、２４カ月齢以上〜１０歳未満である。
【００１９】
一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも２倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。
【００２０】
一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも４倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。
【００２１】
一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、第１の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも８倍高い血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１Ａ】Ｈ因子結合タンパク質（ＦＨｂｐ）系統樹：一次およびさらなる髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）試験株バリアントならびに一次およびさらなるＭｅｎＢ試験株のバリアント有病率。図１Ａにおいて、４つの一次および１０種のさらなるＭｅｎＢ試験株によって発現されるＦＨｂｐバリアントの系統発生関係およびＦＨｂｐサブファミリー関係が示される。スケールバーは、タンパク質配列に基づく遺伝的距離を示す。ＦＨｂｐサブファミリー内のアミノ酸配列同一性は、８３％以上である。ｈＳＢＡ＝ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＭｅｎＢ単離物コレクション（ｎ＝１２６３）に基づくバリアント有病率（左垂直軸；バー）および累積有病率（右垂直軸；丸）を描画する。バリアントは、ＭｅｎＢ単離物コレクション中でのそれらの有病率ランクに基づいて順序付けられる。スケールが左右のｙ軸間で異なることに留意されたい。
【図２】図２は、さらなる髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）試験株の選択のために使用されるアルゴリズムを示す。ＭｅｎＢ単離物コレクション（ｎ＝１２６３）は、この図面中に例として使用される。ＦＨｂｐ、Ｈ因子結合タンパク質、ＳＴ、配列型。
【図３】図３は、菱形（「殺滅」）がｈＳＢＡにおいて感受性であった株に印を付けるグラフを描画する。ワクチン接種前後の血清試料間でｈＳＢＡ力価の４倍の上昇が達成された場合、株は、組成物（配列番号１を有する第１のポリペプチドおよび配列番号２を有する第２のポリペプチドを含む（すなわち、ＴＲＵＭＥＮＢＡ））免疫血清に対して感受性であると考えた。黒色の三角（「殺滅なし」）は、ｈＳＢＡ力価のベースラインからの４倍の上昇を達成しなかった株に対応する。本明細書に開示される１１種のｆＨＢＰバリアント（すなわち、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７）は、この試験において１つの株によってそれぞれ表され、それぞれ、ｈＳＢＡにおいてＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清に感受性である。これらの株は、図３で注釈され、表１に詳述される。この試験において評価された１０９種のＭｅｎＢ株は、ＭＥＡＳＵＲＥアッセイを使用して決定されたｆＨＢＰ表面発現レベルに基づいて高いものから低いものへ順序付けられる。また、それぞれの株を、対象を一致させたワクチン接種前後の血清試料（ワクチン接種前および第３の用量のＴＲＵＭＥＮＢＡの１カ月後）のプールを使用してｈＳＢＡにおいて試験した。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
配列識別子
配列番号１は、組換え髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２は、組換え髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０１ポリペプチド抗原のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３は、配列番号１および配列番号２の１〜４位のアミノ酸残基を記載する。
配列番号４は、組換え髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＡ  ＬＰ２０８６ポリペプチド（ｒＬＰ２０８６）（Ａ０５）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＡ  ＬＰ２０８６  Ｍ９８２５０７７１ポリペプチド（Ａ０５）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号８は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１０は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１４は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１５は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１６は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ４４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１７は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１８は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０７のアミノ酸配列を記載する。
配列番号１９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２０は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２４は、組換え髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＢ  ＬＰ２０８６ポリペプチド（ｒＬＰ２０８６）（Ｂ０１）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２５は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＢ  ＬＰ２０８６  ＣＤＣ−１５７３ポリペプチド（Ｂ０１）ポリペプチドのＮ末端のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２６は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ｂ１６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２７は、ｆＨＢＰ  Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株のアミノ酸配列を記載する。配列番号２７はまた、ｆＨＢＰ  Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２８は、ｆＨＢＰ  Ａ１９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号２９は、ｆＨＢＰ  Ｂ４７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３０は、ｆＨＢＰ  Ｂ４９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３１は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３２は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０７のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３３は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３４は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３５は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３６は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３７は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３８は、Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ｂ１６を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３９は、ｆＨＢＰ  Ａ１０を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ株のアミノ酸配列を記載する。配列番号３９はまた、ｆＨＢＰ  Ａ１０を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４０は、ｆＨＢＰ  Ａ１９を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４１は、ｆＨＢＰ  Ｂ４７を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４２は、ｆＨＢＰ  Ｂ４９を発現する非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ株のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４３は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ４４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４４は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４５は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４６は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４７は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０１のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４８は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０１のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４９は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５０は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５３は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ１２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５４は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５５は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ６２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５６は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ６２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５７は、アミノ酸１位にＮ末端Ｃｙｓを含む、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２９のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５８は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号５９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６０は、非脂質化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ２４のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ０２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６４は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ２８のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６５は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ４２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６６は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ６３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６７は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ７６のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６８は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０５のアミノ酸配列を記載する。
配列番号６９は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０７のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７０は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ０８のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７１は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１３のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７２は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ５２のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７３は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＢ１０７のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７４は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、２０８６バリアントＡ５６のアミノ酸配列を記載する。
【００２４】
本発明者らは驚くべきことに、第１の脂質化ポリペプチドと、第２の脂質化ポリペプチドとを含む組成物のためのさらなる医学的使用を発見した。例えば、第１の脂質化ポリペプチドと、第２の脂質化ポリペプチドとを含む組成物を投与することによって、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株であって、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７から選択されるいずれか１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）バリアントを発現する、株に対する免疫応答を、哺乳動物において誘導する方法が、本明細書に開示される。組成物における例示的なポリペプチドは、配列番号１、配列番号２および配列番号６〜７４に記載のいずれか１つの配列を有するポリペプチドを含んでもよい。
【００２５】
好ましい実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質化ポリペプチドと、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質化ポリペプチドとを含む。組成物は、ヒトにおいて許容される安全性プロファイルを有し、組成物は驚くべきことに、バリアントＡ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７を発現する株からなる群から選択される少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株または複数の株に対する、ヒトにおける広い交差反応性殺菌性免疫応答を惹起する。
【００２６】
組成物およびワクチン
一態様では、本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する組成物の使用に関する。組成物は、第１の脂質化ポリペプチドと、第２の脂質化ポリペプチドとを含む。組成物中の例示的ポリペプチドは、配列番号１、配列番号２および配列番号６〜７４に記載の配列から選択されるいずれか１つの配列を有するポリペプチドを含んでもよい。
【００２７】
好ましい実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第１の脂質化ポリペプチドと、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第２の脂質化ポリペプチドとを含む。
【００２８】
一実施形態では、組成物は、融合タンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、キメラタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ハイブリッドタンパク質を含まない。一実施形態では、組成物は、ペプチド断片をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、ｆＨＢＰではない髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）ポリペプチドをさらに含まない。例えば、一実施形態では、組成物は、ＰｏｒＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、ＮａｄＡタンパク質を含まない。別の実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）ヘパリン結合抗原（ＮＨＢＡ）をさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）外膜小胞（ＯＭＶ）をさらに含まない。好ましい実施形態では、組成物は、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド以外の抗原をさらに含まない。
【００２９】
一実施形態では、組成物は、例えば、以下のポリペプチド：Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ａ２２、Ｂ０３、Ｂ０９、Ａ１２、Ａ１９、Ａ０５、Ａ０７、Ａ０６、Ａ１５、Ａ２９、Ｂ０１、Ａ５６、Ａ６２、Ｂ１５、およびその任意の組合せのいずれか１つなどの、さらなるポリペプチドを含む。好ましくは、組成物は、Ａ０５とＢ０１ポリペプチドの組合せを含む。別の好ましい実施形態では、組成物は、Ｂ２４とＡ０５ポリペプチドの組合せを含む。別の実施形態では、組成物は、Ａ０５、Ａ１２、Ｂ０９、およびＢ４４ポリペプチドの組合せを含む。一実施形態では、組成物は、脂質化ｆＨＢＰを含む。一実施形態では、組成物は、非脂質化ｆＨＢＰを含まない。
【００３０】
別の実施形態では、組成物は、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０３２４８９号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２００９３８５２号、国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／１３２４５２号、および米国特許出願公開第ＵＳ２０１６００３０５４３号に記載された非脂質化ｆＨＢＰのいずれか１つなどの、非脂質化ｆＨＢＰを含む。一実施形態では、組成物は、少なくとも１つの非脂質化ｆＨＢＰと、少なくとも１つの脂質化ｆＨＢＰとを含む。
【００３１】
一部の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、および配列番号６２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％の同一性を有するポリペプチドを含む。
【００３２】
一態様では、本発明者らは驚くべきことに、ポリペプチド抗原が、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７からなる群から選択される少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株などの、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂの少なくとも１つの株に対する免疫応答を誘導することを発見した。
【００３３】
一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ  Ｍ９８２５０７７１株および／または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ  ＣＤＣ１５７３株に由来しないポリペプチドをさらに含まない。
【００３４】
一実施形態では、組成物は、配列番号１に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。別の実施形態では、組成物は、配列番号２に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。例えば、組成物は、配列番号１および／または配列番号２の全長に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。
【００３５】
一実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む。一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド、ポリソルベート８０の各ポリペプチドに対するモル比２．８、リン酸アルミニウムとして０．５ｍｇのアルミニウム／ｍｌ、１０ｍＭヒスチジン、および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含み、組成物は、好ましくは、約０．５ｍｌの総量を有する。
【００３６】
別の実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第１の脂質化ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第２の脂質化ポリペプチド、ポリソルベート８０の各ポリペプチドに対するモル比２．８、リン酸アルミニウムとして０．５ｍｇのアルミニウム／ｍｌ、１０ｍＭヒスチジン、および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む。
【００３７】
さらなる実施形態では、組成物は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド；ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド；ｃ）１８μｇのポリソルベート８０；ｄ）２５０μｇのアルミニウム；ｅ）７８０μｇのヒスチジン、およびｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。
【００３８】
例示的な実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる約６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド、ポリソルベート８０の第１の脂質化ポリペプチドおよび第２の脂質化ポリペプチドに対するモル比２．８、０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウム、１０ｍＭヒスチジン、および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含み、組成物は、約０．５ｍｌの総量を有する。例示的な実施形態では、組成物は、滅菌等張性緩衝化液体懸濁液である。例示的な実施形態では、組成物は、ｐＨ６．０を有する。例示的な実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、アルミニウムに吸着される。
【００３９】
一実施形態では、組成物は、約０．５ｍｌの総量を有する。一実施形態では、組成物の第１の用量は、約０．５ｍｌの総量を有する。「第１の用量」とは、０日目に投与される組成物の用量を指す。「第２の用量」または「第３の用量」とは、第１の用量と同じ量であっても、またはなくてもよい、第１の用量の後に投与される組成物の用量を指す。
【００４０】
組成物は、ヒトへの第１の用量の投与後に免疫原性である。一実施形態では、第１の用量は、総量で約０．５ｍｌである。
【００４１】
組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受けた後のヒトにおいて、第１の用量を受ける前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、少なくとも１倍高い、好ましくは、少なくとも２倍高い髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。
【００４２】
好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対するものである。別の実施形態では、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ、Ａ０５株に対するものである。別の実施形態では、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ、Ｂ０１株に対するものである。最も好ましくは、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、サブファミリーＢ、Ｂ０１株および少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、サブファミリーＡ、Ａ０５株に対するものである。
【００４３】
別の好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、サブファミリーＢ、Ｂ２４株に対するものである。別の好ましい実施形態では、殺菌力価または殺菌性免疫応答は、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ、サブファミリーＡ、Ａ２２株に対するものである。
【００４４】
一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、組成物の用量を受けた後のヒトにおいて、前記用量を受ける前のヒトにおける血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、例えば、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍高いなど、少なくとも１倍より高い髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。
【００４５】
一実施形態では、組成物は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイにおいて同一の条件下で測定した場合、組成物の用量を受けた後のヒトにおいて、前記用量を受ける前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する血清免疫グロブリンの殺菌力価よりも、例えば、少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍高いなど、少なくとも１倍より高い髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する血清免疫グロブリンの殺菌力価を誘導する。
【００４６】
一実施形態では、組成物は、ヒトのための免疫原性組成物である。別の実施形態では、組成物は、ワクチンである。「ワクチン」とは、抗原に特異的である免疫応答を誘導する少なくとも１つのエピトープを含有する抗原を含む組成物を指す。ワクチンを、皮下、経口、口鼻、または鼻内投与経路によって対象に直接投与することができる。好ましくは、ワクチンは、筋肉内投与される。一実施形態では、組成物は、ヒトのためのワクチンである。一実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物である。
【００４７】
一実施形態では、組成物は、液体組成物である。好ましい実施形態では、組成物は、液体懸濁組成物である。別の好ましい実施形態では、組成物は、凍結乾燥されない。
【００４８】
一実施形態では、組成物は、ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物との組合せを含む。ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物とは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂの複数の株に対する有効な広く防御的な免疫応答を誘導する単一の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）ポリペプチド成分を含む組成物を指す。具体的には、一実施形態では、ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、（ａ）ＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６サブファミリーＡタンパク質（配列番号１）および（ｂ）ＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６サブファミリーＢタンパク質（配列番号２）を含む。
【００４９】
ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、それぞれ、約３、約３、約１．５および約１．３の比（ＴＴの多糖に対する比）でＴＴにそれぞれ独立にコンジュゲートされた、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹの精製莢膜多糖を含む組成物を指す。具体的には、組成物は、（ｃ）アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｄ）ＡＤＨリンカーであって、カルボジイミド化学反応によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）にコンジュゲートされたリンカーに１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によってコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート）；（ｅ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート）；（ｆ）リンカーの非存在下で、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸化学によって破傷風トキソイド担体タンパク質（ＴＴ）に直接コンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲート）を含む。好ましくは、ＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、凍結乾燥粉末として提供される。
【００５０】
ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴ、ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴ、ＭｅｎＷ−ＴＴ、およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートは、以下のステップ：多糖薬物物質中間体の製造、ＴＴ薬物物質中間体の製造、多糖の微小流体化、多糖の誘導体化（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴおよびＭｅｎＣＡＨ−ＴＴプロセスのみについて）、ＴＴのさらなる精製、およびＴＴへの個々の多糖のコンジュゲーションによって調製される。
【００５１】
ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＡ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、１−シアノ−４−ジメチルアミノ−ピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＡを、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）を用いて誘導体化して、ＭｅｎＡＡＨを形成させる。ＭｅｎＡＡＨと破傷風トキソイド（ＴＴ）とを、カルボジイミド媒介性縮合（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＣ）カップリング技術）によってカップリングして、ＭｅｎＡＡＨ−破傷風トキソイドコンジュゲート（ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴ）を形成させる。
【００５２】
ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＣ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、ＣＤＡＰを用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＣを、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）を用いて誘導体化して、ＭｅｎＣＡＨを形成させる。ＭｅｎＣＡＨとＴＴとを、カルボジイミド媒介性縮合（ＥＤＡＣカップリング技術）によってカップリングして、ＭｅｎＣＡＨ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴ）を形成させる。
【００５３】
ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＷ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、ＣＤＡＰを用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＷを、ＴＴに直接カップリングして、ＭｅｎＷ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＷ−ＴＴ）を形成させる。
【００５４】
ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートに関しては、ＭｅｎＹ多糖を最初に微小流体化して、分子サイズおよび粘度を低下させた後、ＣＤＡＰを用いるシアニル化によって活性化する。活性化されたＭｅｎＹを、ＴＴに直接カップリングして、ＭｅｎＹ−破傷風トキソイド（ＭｅｎＹ−ＴＴ）を形成させる。
【００５５】
一実施形態では、組成物は、ＴＴ／多糖比の平均３を有するＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＴＴ／多糖比の平均３を有するＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＴＴ／多糖比の平均１．５を有するＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート；およびＴＴ／多糖比の平均１．３を有するＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートをさらに含む。好ましい実施形態では、組成物は、５ｍｃｇのＭｅｎＡ多糖および約１５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート；５ｍｃｇのＭｅｎＣ多糖および約１５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート；５ｍｃｇのＭｅｎＷ多糖および約７．５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート；および５ｍｃｇのＭｅｎＹ多糖および約６．５ｍｃｇのＴＴを有するＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む。組成物は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、スクロース、および塩化ナトリウムをさらに含んでもよい。
【００５６】
別の実施形態では、組成物は、ＭｅｎＡ多糖；ＭｅｎＣ多糖；ＭｅｎＷ多糖；およびＭｅｎＹ多糖と、ＴＴ担体タンパク質とを含む、ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート；ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート；およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む。組成物は、スクロースおよびトロメタノールをさらに含んでもよい。例えば、一実施形態では、組成物は、１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＡ多糖；１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＣ多糖；１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＷ多糖；および１０μｇ／ｍＬのＭｅｎＹ多糖；８８μｇ／ｍＬのＴＴ担体タンパク質；１６４ｍＭスクロース；および１．６ｍＭトロメタノールを含む。
【００５７】
一実施形態では、本発明は、液体ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物を用いて復元されている凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物から得られる液体免疫原性組成物の使用に関する。復元とは、乾燥凍結乾燥組成物を、液体希釈剤の添加によって液体形態に回復させることを指す。１つの好ましい実施形態では、液体ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物は、液体ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物ではない液体組成物を用いて復元された、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と併用投与されない、同時投与されない、および同時に投与されない。例えば、１つの好ましい実施形態では、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、塩化ナトリウムおよび水からなる水性希釈剤を用いて復元されず、続いて、液体ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と併用投与されない、同時投与されない、および同時に投与されない。
【００５８】
むしろ、好ましい実施形態では、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物は、ヒトへの１回、すなわち、単回の投与において、ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と共に投与される。得られる単回投与（例えば、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物）は、第２の容器に由来する、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物と混合される、第１の容器に由来する、ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物から生じてもよい。あるいは、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物の単回投与は、ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物とを含む１つの（単一の）容器から生じてもよい。ワクチンまたは免疫原性組成物のための送達デバイスは、当業界で公知である。一実施形態では、ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物は、イブプロフェン、パラセタモール、およびアモキシシリンのいずれか１つと併用投与される。
【００５９】
第１のポリペプチド
組成物は、第１の脂質化ポリペプチドと、第２の脂質化ポリペプチドとを含む。組成物中の例示的な第１のポリペプチドは、配列番号１、配列番号２および配列番号６〜７４に記載の配列から選択されるいずれか１つの配列を有するポリペプチドを含んでもよい。
【００６０】
一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１のポリペプチドを含み、ここで、組成物は、好ましくは、０．５ｍｌの総量を有する。別の実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１に由来する改変Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰの説明は、それぞれその全体が参照により組み込まれる、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／００９３８５２号に開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３つの位置で共有的に連結された３つの主要な脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１でＮ末端脂質化される。第１のポリペプチドは、合計２５８個のアミノ酸を含む。
【００６１】
第１のポリペプチドが配列番号１を含む実施形態では、ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１に由来する対応する野生型配列と比較して、ポリペプチドのＮ末端領域中に導入された２つの改変を含む。第２の位置にあるグリシンが、クローニング部位を導入する結果として付加される。第２の改変は、４個のアミノ酸の欠失を含む。したがって、一実施形態では、第１のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号１の最初の４個のアミノ酸残基を参照されたい。
【００６２】
第１のポリペプチド配列と野生型髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）配列とのＮ末端の差異を、以下に示す。したがって、一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３個、またはそれより多いアミノ酸残基を含む。好ましくは、第１のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の４個、より好ましくは、少なくとも最初の６個、最も好ましくは、少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。
【００６３】
組換えおよび髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）サブファミリーＡ  ＬＰ２０８６ポリペプチドの推定Ｎ末端配列の比較。
ｒＬＰ２０８６  Ｍ９８２５０７７１  ＣＧＳＳ−−−−−ＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号４）
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｌ）ＬＰ２０８６  Ｍ９８２５０７７１  Ｃ−ＳＳＧＳ−ＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤ（配列番号５）。
＞Ａ０５（配列番号１）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ
【００６４】
一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第１のポリペプチドは、合計２５８個のアミノ酸を有する。一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に対する１００％未満の配列同一性を有するアミノ酸配列を含まない。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、アミノ酸配列ＫＤＮを含む。例えば、配列番号１のアミノ酸残基７３〜７５を参照されたい。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む。
【００６５】
好ましい実施形態では、第１のポリペプチドは、当業界で公知の標準的な技術を使用して組換え宿主細胞中で容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。好ましくは、第１のポリペプチドは、配列番号１の少なくとも最初の２個、より好ましくは、少なくとも最初の４個、最も好ましくは、少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。
【００６６】
別の実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。
【００６７】
一実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約３０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第１のポリペプチドを含み、ここで、組成物は、好ましくは、０．５ｍｌの総量を有する。別の実施形態では、組成物は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む約１２０μｇ／ｍｌの第１のポリペプチドを含む。
【００６８】
第２のポリペプチド
組成物は、第１の脂質化ポリペプチドと、第２の脂質化ポリペプチドとを含む。組成物中の例示的な第２のポリペプチドは、配列番号１、配列番号２および配列番号６〜７４に記載の配列から選択されるいずれか１つの配列を有するポリペプチドを含んでもよい。
【００６９】
一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第２のポリペプチドを含み、ここで、組成物は、好ましくは、０．５ｍｌの総量を有する。別の実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチドを含む。ポリペプチドは、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３に由来するＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）である。ｆＨＢＰの説明は、それぞれその全体が参照により組み込まれる、ＷＯ２０１２０３２４８９および米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／００９３８５２号に開示されている。ポリペプチドは、ポリペプチドの３つの位置で共有的に連結された３つの主要な脂肪酸Ｃ１６：０、Ｃ１６：１、およびＣ１８：１でＮ末端脂質化される。第２のポリペプチドは、合計２６１個のアミノ酸を含む。一実施形態では、第２のポリペプチドは、Ｎ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ配列（配列番号３）を含む。配列番号２の最初の４個のアミノ酸残基を参照されたい。
＞Ｂ０１（配列番号２）
ＣＧＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＴＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＥＱＤＰＥＨＳＥＫＭＶＡＫＲＲＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＤＶＭＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＶＡＹＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＥＫＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ
【００７０】
一実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、第２のポリペプチドは、合計２６１個のアミノ酸を有する。一実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。別の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に対する１００％未満の配列同一性を有するポリペプチドをさらに含まない。好ましい実施形態では、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは、それぞれのポリペプチドのＮ末端にＣ−Ｇ−Ｓ−Ｓ（配列番号３）配列を含む。
【００７１】
好ましい実施形態では、第２のポリペプチドは、当業界で公知の標準的な技術を使用して組換え宿主細胞中で容易に発現される。別の好ましい実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２のＮおよび／またはＣドメイン上に殺菌性エピトープを含む。一実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。好ましくは、第２のポリペプチドは、配列番号２の少なくとも最初の２個、より好ましくは、少なくとも最初の４個、最も好ましくは、少なくとも最初の８個のアミノ酸残基を含む。
【００７２】
別の実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列の少なくとも最後の４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個のアミノ酸残基を含む。
【００７３】
一実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約３０μｇ／ｍｌのポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇのポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む約６０μｇの第２のポリペプチドを含み、ここで、組成物は、好ましくは、０．５ｍｌの総量を有する。別の実施形態では、組成物は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む１２０μｇ／ｍｌの第２のポリペプチドを含む。
【００７４】
糖
本明細書を通して、用語「糖」は、多糖またはオリゴ糖を示してもよく、その両方を含む。多糖は、公知の方法によって、また、場合によっては、微小流体化によって、細菌から単離されるか、または細菌から単離され、ある程度のサイズに切られる。多糖を切断して、多糖試料の粘度を低下させる、および／またはコンジュゲートされた生成物の濾過性を改善することができる。オリゴ糖は、少数の反復単位（典型的には、５〜３０の反復単位）を有し、典型的には、加水分解された多糖である。
【００７５】
それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から独立に選択される担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。１つまたは複数の髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、他のものに由来する異なる担体タンパク質にコンジュゲートすることができるが、一実施形態では、それらは全て同じ担体タンパク質にコンジュゲートされる。例えば、それらを全て、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から選択される同じ担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。この文脈では、ＣＲＭ１９７およびＤＴを、それらがただ１つのアミノ酸によって異なるため、同じ担体タンパク質であると考えることができる。好ましい実施形態では、存在する全ての髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＴＴにコンジュゲートする。
【００７６】
タンパク質担体が組成物中で２つ以上の糖について同じである場合、その糖を、タンパク質担体の同じ分子にコンジュゲートすることができる（それにコンジュゲートされた２つのさらに異なる糖を有する担体分子）［例えば、ＷＯ０４／０８３２５１を参照されたい；例えば、単一の担体タンパク質を、ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹにコンジュゲートすることができる］。あるいは、糖はタンパク質担体の異なる分子にそれぞれ別々にコンジュゲートすることができる（それにコンジュゲートされた１つの型の糖だけを有するタンパク質担体の各分子）。
【００７７】
一実施形態では、少なくとも２つの異なる糖コンジュゲートを、同じ型の担体タンパク質に別々にコンジュゲートし、ここで、１つまたは複数の糖を、タンパク質担体上の第１の型の化学基によって担体タンパク質にコンジュゲートし、１つまたは複数の糖を、タンパク質担体上の第２の（異なる）型の化学基によって担体タンパク質にコンジュゲートする。
【００７８】
一実施形態では、２つのコンジュゲートは、同じ担体に連結されるが、異なるコンジュゲーション化学反応によって連結された同じ糖を含む。代替的な実施形態では、２つの異なる糖を、タンパク質担体上の異なる基にコンジュゲートする。
【００７９】
「同じ型の担体タンパク質に別々にコンジュゲートされる」とは、糖が、同じ担体に個別的にコンジュゲートされることを意味する（例えば、ＭｅｎＡは、破傷風トキソイド上のアミン基を介して破傷風トキソイドにコンジュゲートされ、ＭｅｎＣは、破傷風トキソイドの異なる分子上のカルボン酸基を介して破傷風トキソイドにコンジュゲートされる）。
【００８０】
莢膜糖を、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から独立に選択される同じ担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。本発明のコンジュゲートにおいて使用することができるタンパク質担体のより完全な一覧は、以下に提示される。この文脈では、ＣＲＭ１９７およびＤＴは、それらがただ１個のアミノ酸によって異なるため、同じ担体タンパク質であると考えることができる。ある実施形態では、存在する全ての莢膜糖がＴＴにコンジュゲートされる。
【００８１】
糖は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ莢膜糖（ＭｅｎＷ）のいずれか１つ、またはその任意の組合せを含んでもよい。
【００８２】
タンパク質担体上に存在する第１および第２の化学基は、互いに異なり、理想的には、コンジュゲーションを目的として容易に使用することができる天然の化学基である。それらは、カルボキシル基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、イミダゾリル基、グアニジル基、およびインドリル基からなる群から独立に選択することができる。一実施形態では、第１の化学基はカルボキシルであり、第２はアミノである、またはその逆である。これらの基は、以下でより詳細に説明される。
【００８３】
特定の実施形態では、免疫原性組成物は、１つまたは複数がタンパク質担体上の第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介して担体タンパク質にコンジュゲートされているＭｅｎＡおよびＭｅｎＣからなる第１の群から選択され、１つまたは複数の異なる糖が、タンパク質担体上の第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介して担体タンパク質にコンジュゲートされているＭｅｎＣ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＷからなる第２の群から選択される、少なくとも２つの異なる髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含む。
【００８４】
さらなる実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＡ、および第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＣを含む。
【００８５】
別の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＣ、および第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＹを含む。
【００８６】
別の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＡ、ならびに第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＣ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＷを含む。
【００８７】
別の実施形態では、免疫原性組成物は、第１の型の化学基（例えば、カルボキシル）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ、ならびに第２の型の化学基（例えば、アミノ）を介してコンジュゲートされたＭｅｎＹおよびＭｅｎＷを含む。
【００８８】
医薬（免疫原性）組成物中に含まれる本発明の糖は、破傷風トキソイド（ＴＴ）、破傷風トキソイド断片Ｃ、破傷風毒素の非毒性変異体［ＴＴのそのようなバリアントは全て、本発明の目的にとって同じ型の担体タンパク質であると考えられることに留意されたい］、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、ＣＲＭ１９７、ジフテリア毒素の他の非毒性変異体［ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ１９７、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２１８；３８３８〜３８４４、１９７３）；ＣＲＭ９、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３およびＣＲＭ１０７ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔｏｘｉｎｓ、Ｅｄ：Ｆｒａｎｋｅｌ，  Ｍａｅｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ、１９９２によって記載された他の変異；Ｇｌｕ−１４８からＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒおよび／もしくはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失もしくは変異および米国特許第４，７０９，０１７号もしくは米国特許第４，９５０，７４０号に開示された他の変異；Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／もしくはＬｙｓ５３４の少なくとも１つもしくは複数の残基の変異ならびに米国特許第５，９１７，０１７号もしくは米国特許第６，４５５，６７３号に開示された他の変異；または米国特許第５，８４３，７１１号に開示された断片など］（ＤＴのそのようなバリアントは全て、本発明の目的にとって同じ型の担体タンパク質であると考えられることに留意されたい）、肺炎球菌ニューモリシン（Ｋｕｏら（１９９５）  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６３；２７０６〜１３）、ＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質−通常は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから抽出される−ＥＰ０３７２５０１）、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、増殖因子またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ７２；４８８４〜７）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡもしくはＢ（ＷＯ００／６１７６１）またはプロテインＤ（ＥＰ５９４６１０およびＷＯ００／５６３６０）などの、様々な病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３１；３８１６〜３８２４）などの担体タンパク質にコンジュゲートされている。
【００８９】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、そこに含有される少なくとも２つ、３つ、４つまたはそれぞれの糖において同じ型の担体タンパク質を使用する（独立に）。
【００９０】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ＴＴ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７、ＴＴの断片ＣおよびプロテインＤからなる群から選択される担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖を含む。
【００９１】
本発明の免疫原性組成物は、Ｍｅｎ糖の担体タンパク質に対する比が１：５〜５：１、１：２〜５：１、１：０５〜１：２．５または１：１．２５〜１：２．５（ｗ／ｗ）である、少なくとも１つの髄膜炎菌糖（例えば、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＷ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＡ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹまたはＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ）コンジュゲートを含んでもよい。１つの好ましい実施形態では、組成物は、それぞれ、約３、約３、約１．５および約１．３の比（トキソイドの多糖に対する比）で破傷風トキソイドにそれぞれコンジュゲートされたＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹを含む。
【００９２】
コンジュゲートにおける糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）を、滅菌されたコンジュゲートを使用して決定することができる。タンパク質の量は、Ｌｏｗｒｙアッセイ（例えば、Ｌｏｗｒｙら（１９５１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １９３、２６５〜２７５またはＰｅｔｅｒｓｏｎら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １００、２０１〜２２０（１９７９））を使用して決定され、糖の量は、ＭｅｎＡについてはＩＣＰ−ＯＥＳ（誘導結合プラズマ発光分析）、ＭｅｎＣについてはＤＭＡＰアッセイならびにＭｅｎＷおよびＭｅｎＹについてはレゾルシノールアッセイ（Ｍｏｎｓｉｇｎｙら（１９８８）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １７５、５２５〜５３０）を使用して決定される。
【００９３】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖がリンカー、例えば、二官能性リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートされた、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖コンジュゲートを含む。リンカーは、例えば、反応性アミノ基と反応性カルボン酸基、２つの反応性アミノ基または２つの反応性カルボン酸基を有する、ヘテロ二官能性またはホモ二官能性であってもよい。リンカーは、例えば、４〜２０、４〜１２、５〜１０個の炭素原子を有する。可能なリンカーは、ＡＤＨである。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド（ＷＯ００／１０５９９）、ニトロフェニル−エチルアミン（Ｇｅｖｅｒら（１９７９）  Ｍｅｄ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５；１７１〜２８８）、ハロゲン化ハロアルキル（米国特許第４，０５７，６８５号）、グリコシド結合（米国特許第４，６７３，５７４号、米国特許第４，８０８，７００号）、ヘキサンジアミンおよび６−アミノカプロン酸（米国特許第４，４５９，２８６号）が挙げられる。
【００９４】
本発明の免疫原性組成物中に存在する糖コンジュゲートを、任意の公知のカップリング技術によって調製することができる。コンジュゲーション方法は、シアン酸エステルを形成するための１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いる糖の活性化に依拠してもよい。かくして、活性化された糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングすることができる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化担体タンパク質（例えば、ＧＭＢＳを使用する）またはホロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミドもしくはＮ−スクシンイミジルブロモアセテートブロモアセテートを使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合を介して担体にカップリングすることができるチオール化された多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってよい。場合により、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製してもよい）を、ヘキサンジアミンまたはＡＤＨとカップリングし、アミノ誘導体化された糖を、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質にコンジュゲートする。そのようなコンジュゲートは、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９３／１５７６０（Ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）およびＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／２９０９４に記載されている。
【００９５】
他の好適な技術は、カルビイニド（ｃａｒｂｉｉｎｉｄｅ）、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ−ニトロ安息香酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ−ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する。多くは、ＷＯ９８／４２７２１に記載されている。コンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基と、ＣＤＩとの反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  １９７９、２５４；２５７２〜４、Ｈｅａｒｎら、Ｊ．  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．  １９８１．  ２１８；５０９〜１８）、次いで、カルバメート結合を形成するタンパク質との反応によって形成され得るカルボニルリンカーを含んでもよい。これは、一次ヒドロキシル基へのアノマー末端の還元、ＣＤＩカルバメート中間体を形成する一次ヒドロキシル基とＣＤＩとの一次ヒドロキシル基の反応の任意選択の保護／脱保護およびタンパク質上でのＣＤＩカルバメート中間体と、アミノ基とのカップリングを含んでもよい。
【００９６】
コンジュゲートはまた、米国特許第４，３６５，１７０号（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ）および米国特許第４，６７３，５７４号（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）に記載の直接的還元的アミノ化法によって調製することもできる。他の方法は、ＥＰ−０−１６１−１８８、ＥＰ−２０８３７５およびＥＰ−０−４７７５０８に記載されている。
【００９７】
さらなる方法は、例えば、ＥＤＡＣを使用する、カルボジイミド縮合（Ｃｈｕ  Ｃ．ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１９８３、２４５〜２５６）によるアジピン酸ヒドラジド（ＡＤＨ）を用いて誘導体化されたシアノゲンブロミド（またはＣＤＡＰ）活性化糖のタンパク質担体へのカップリングを含む。
【００９８】
ある実施形態では、糖上のヒドロキシル基（場合により、活性化されたヒドロキシル基、例えば、シアン酸エステルによって活性化されたヒドロキシル基）を、タンパク質上のアミノまたはカルボキシル基に直接的に、または間接的に（リンカーを介して）連結される。リンカーが存在する場合、糖上のヒドロキシル基は、例えば、ＣＤＡＰコンジュゲーションを使用することにより、リンカー上のアミノ基に連結されてもよい。リンカー（例えば、ＡＤＨ）中のさらなるアミノ基を、例えば、カルボジイミド化学反応を使用することにより、例えば、ＥＤＡＣを使用することにより、タンパク質上のカルボン酸基にコンジュゲートすることができる。ある実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖（または一般的な糖）は、リンカーが担体タンパク質にコンジュゲートされる前に最初にリンカーにコンジュゲートされる。あるいは、リンカーは糖へのコンジュゲーションの前に担体にコンジュゲートされてもよい。
【００９９】
一般的には、タンパク質担体上の以下の型の化学基を、カップリング／コンジュゲーションのために使用することができる：
Ａ）カルボキシル（例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸を介する）。一実施形態では、この基は、直接的に糖上のアミノ基に、またはカルボジイミド化学反応を用いて、例えば、ＥＤＡＣを用いてリンカー上のアミノ基に連結される。
Ｂ）アミノ基（例えば、リシンを介する）。一実施形態では、この基は、直接的に糖上のカルボキシル基に、またはカルボジイミド化学反応を用いて、例えば、ＥＤＡＣを用いてリンカー上のカルボキシル基に連結される。別の実施形態では、この基は、直接的に糖上のＣＤＡＰもしくはＣＮＢｒで活性化されたヒドロキシル基に、またはリンカー上のそのような基に；アルデヒド基を有する糖もしくはリンカーに；スクシンイミドエステル基を有する糖もしくはリンカーに連結される。
Ｃ）スルフヒドリル（例えば、システインを介する）。一実施形態では、この基は、ブロモもしくはクロロアセチル化された糖またはマレイミド化学反応を用いてリンカーに連結される。一実施形態では、この基は、ビスジアゾベンジジンを用いて活性化／改変される。
Ｄ）ヒドロキシル基（例えば、チロシンを介する）。一実施形態では、この基は、ビスジアゾベンジジンを用いて活性化／改変される。
Ｅ）イミダゾリル基（例えば、ヒスチジンを介する）。一実施形態では、この基は、ビスジアゾベンジジンを用いて活性化／改変される。
Ｆ）グアニジル基（例えば、アルギニンを介する）。
Ｇ）インドリル基（例えば、トリプトファンを介する）。
【０１００】
糖上で、一般的には、以下の基をカップリングのために使用することができる：ＯＨ、ＣＯＯＨまたはＮＨ２。アルデヒド基を、過ヨード酸塩、酸加水分解、過酸化水素などの当業界で公知の様々な処理の後に生成することができる。
【０１０１】
直接カップリング手法：
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ  →シアン酸エステル＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
糖−アルデヒド＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ→シッフ塩基＋ＮａＣＮＢＨ３→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＮＨ２−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート
糖−ＮＨ２＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート。
【０１０２】
スペーサー（リンカー）手法による間接カップリング：
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−−ＮＨ２→糖−ＮＨ２＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ＋ＥＤＡＣ→コンジュゲート
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−ＳＨ＋ＳＨ−Ｐｒｏｔ（露出したシステインを含む、または例えば、ＳＰＤＰによってタンパク質のアミノ基の改変後に得られる天然タンパク質）→糖−Ｓ−Ｓ−Ｐｒｏｔ
糖−ＯＨ＋ＣＮＢｒまたはＣＤＡＰ→シアン酸エステル＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−ＳＨ＋マレイミド−Ｐｒｏｔ（アミノ基の改変）→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−−ＮＨ２→糖−ＮＨ２＋ＥＤＡＣ＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−−ＳＨ＋ＳＨ−Ｐｒｏｔ（露出したシステインを含む、または例えば、ＳＰＤＰによってタンパク質のアミノ基の改変後に得られる天然タンパク質）→糖−Ｓ−Ｓ−Ｐｒｏｔ
糖−ＣＯＯＨ＋ＥＤＡＣ＋ＮＨ２−−ＳＨ→糖−−ＳＨ＋マレイミド−Ｐｒｏｔ（アミノ基の改変）→コンジュゲート
糖−アルデヒド＋ＮＨ２−−ＮＨ２→糖−−ＮＨ２＋ＥＤＡＣ＋ＣＯＯＨ−Ｐｒｏｔ→コンジュゲート
注：上記のＥＤＡＣの代わりに、任意の好適なカルボジイミドを使用してもよい。
【０１０３】
まとめると、糖とのカップリングのために一般的に使用することができるタンパク質担体化学基の型は、アミノ基（例えば、リシン残基上の）、ＣＯＯＨ基（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸残基上の）およびＳＨ基（接近可能な場合）（例えば、システイン残基上の）である。
【０１０４】
ある実施形態では、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖（または一般的な糖）を、担体タンパク質に直接コンジュゲートする；ＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＣ糖を、担体タンパク質に直接コンジュゲートしてもよい。例えば、ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣ；またはＭｅｎＷ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣを、担体タンパク質に直接連結する。少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＣＤＡＰによって直接コンジュゲートしてもよい。例えば、ＭｅｎＷ；ＭｅｎＹ；ＭｅｎＣ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＹ；ＭｅｎＷおよびＭｅｎＣ；ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣ；またはＭｅｎＷ、ＭｅｎＹおよびＭｅｎＣを、ＣＤＡＰによって担体タンパク質に直接連結する（ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／２９０９４を参照されたい）。ある実施形態では、全ての髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、破傷風トキソイドにコンジュゲートする。
【０１０５】
ある実施形態では、特に、これらの糖を、場合により、ＣＤＡＰを使用して、タンパク質に直接連結する場合、ＭｅｎＷおよび／もしくはＹ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である、ならびに／またはＭｅｎＣ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：４または１：０．５〜１：１．５（ｗ／ｗ）である。
【０１０６】
ある実施形態では、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖（または一般的な糖）を、リンカー、例えば、二官能性リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする。リンカーは、例えば、反応性アミン基と反応性カルボン酸基、２つの反応性アミン基または２つの反応性カルボン酸基を有する、ヘテロ二官能性またはホモ二官能性であってもよい。リンカーは、例えば、４〜２０個、４〜１２個、５〜１０個の炭素原子を有する。可能なリンカーは、ＡＤＨである。
【０１０７】
ある実施形態では、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣを、リンカーを介して担体タンパク質（例えば、破傷風トキソイド）にコンジュゲートする。
【０１０８】
ある実施形態では、少なくとも１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖を、ＣＤＡＰおよびＥＤＡＣを使用してリンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする。例えば、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣを、上記のようにＣＤＡＰおよびＥＤＡＣを使用してリンカー（例えば、ＡＤＨなどの、その末端に２個のヒドラジノ基を有するもの）を介してタンパク質にコンジュゲートする。例えば、ＣＤＡＰを使用して、糖をリンカーにコンジュゲートし、ＥＤＡＣを使用して、リンカーをタンパク質にコンジュゲートする。リンカーを介するコンジュゲーションは、ＭｅｎＡ；ＭｅｎＣ；またはＭｅｎＡおよびＭｅｎＣについて、１：０．５〜１：６；１：１〜１：５または１：２〜１：４の糖の担体タンパク質に対する比をもたらしてもよい。
【０１０９】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＡ莢膜糖は、反復単位の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、例えば、反復単位の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の少なくともＯ−３位に存在する。
【０１１０】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＣ莢膜糖は、（α２→９）連結されたＮｅｕＮＡｃ反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、例えば、反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％のＯ−７および／またはＯ−８位に存在する。
【０１１１】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＷ莢膜糖は、反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、例えば、反復単位の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％のＯ−７および／またはＯ−９位に存在する。
【０１１２】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＹ莢膜糖は、反復単位の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％が少なくとも１つまたは２つの位置でＯ−アセチル化されるように、少なくとも部分的にＯ−アセチル化される。Ｏ−アセチル化は、反復単位の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％の７および／または９位に存在する。
【０１１３】
Ｏ−アセチル化のパーセンテージは、Ｏ−アセチル化を含有する反復単位のパーセンテージを指す。これは、コンジュゲーションの前および／またはコンジュゲーションの後に糖において測定することができる。
【０１１４】
本発明の一実施形態では、免疫原性組成物、存在する糖、または存在するそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＴＴにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、別々の担体タンパク質に別々にコンジュゲートする。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートは、１：５〜５：１または１：１〜１：４（ｗ／ｗ）の糖：担体比を有する。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つまたは３つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖コンジュゲートを、担体タンパク質に直接コンジュゲートする。さらなる実施形態では、ＭｅｎＷおよび／もしくはＭｅｎＹ、ＭｅｎＷおよび／もしくはＭｅｎＣ、ＭｅｎＹおよび／もしくはＭｅｎＣ、またはＭｅｎＷおよびＭｅｎＣおよびＭｅｎＹを、担体タンパク質に直接コンジュゲートする。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つまたは３つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖コンジュゲートを、ＣＤＡＰ化学によって直接コンジュゲートする。さらなる実施形態では、ＭｅｎＷおよび／またはＹ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である。さらなる実施形態では、ＭｅｎＣ糖の担体タンパク質に対する比は、１：０．５〜１：２（ｗ／ｗ）である。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つまたは３つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、リンカー（２つの反応性アミノ基（ＡＤＨなど）もしくは２つの反応性カルボキシル基、または一方の末端に反応性アミノ基を、他方の末端に反応性カルボキシル基を有する二官能性であってもよい）を介して担体タンパク質にコンジュゲートする。リンカーは、４〜１２個の炭素原子を有してもよい。さらなる実施形態では、リンカーを介してコンジュゲートされた髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、ＣＤＡＰ化学を用いてリンカーにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、担体タンパク質を、カルボジイミド化学反応を用いて、例えば、ＥＤＡＣを使用してリンカーにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を、担体タンパク質をリンカーにコンジュゲートする前にリンカーにコンジュゲートする。さらなる実施形態では、ＭｅｎＡを、リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする（ＭｅｎＡ糖の担体タンパク質に対する比は、１：２〜１：５（ｗ／ｗ）であってもよい）。さらなる実施形態では、ＭｅｎＣを、リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする（ＭｅｎＣ糖の担体タンパク質に対する比は、１：２〜１：５（ｗ／ｗ）であってもよい）。
【０１１５】
天然の、またはわずかに切断された多糖コンジュゲートを使用することによって、１つまたは複数の以下の利点を実現することができる：１）０．２μｍのフィルターを通して濾過できる高い免疫原性を有するコンジュゲート；２）免疫記憶を増強することができる（実施例３に記載）；３）コンジュゲート中の多糖のタンパク質に対する比（ｗ／ｗ）を増大させることができるような、コンジュゲート中の多糖のタンパク質に対する比の変化（これは、担体抑制効果の減少をもたらし得る）；４）加水分解を受けやすい免疫原性コンジュゲート（ＭｅｎＡコンジュゲートなど）を、コンジュゲーションのためのより大きい多糖の使用によって安定化することができる。より大きい多糖の使用は、コンジュゲート担体とのより多い架橋をもたらすことができ、コンジュゲートからの遊離糖の遊離を低下させることができる。先行技術において記載されたコンジュゲートワクチンは、コンジュゲーションを改善するためにコンジュゲーションの前に多糖を脱重合する傾向がある。より大きいサイズの糖を保持する髄膜炎菌（または糖）コンジュゲートワクチンは、髄膜炎菌疾患に対する良好な免疫応答を提供することができる。
【０１１６】
本発明の免疫原性組成物は、かくして、コンジュゲーション前のそれぞれの糖の平均サイズが、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１０ｋＤａ、１２０ｋＤａまたは１３０ｋＤａより上である１つまたは複数の糖コンジュゲートを含んでもよい。一実施形態では、コンジュゲーション後のコンジュゲートは、濾過前の試料と比較して、濾過後に５０、６０、７０、８０、９０または９５％を超える収率が得られるように、０．２μｍのフィルターを通して容易に濾過可能であるべきである。
【０１１７】
特に、本発明の免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の平均サイズ（重量平均分子量；Ｍｗ）は、５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１０ｋＤａ、１２０ｋＤａまたは１３０ｋＤａより上である。
【０１１８】
好ましい実施形態では、ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２５０ｋＤａ、２６０ｋＤａ、２７０ｋＤａ、２８０ｋＤａ、または２９０ｋＤａ、最も好ましくは、約３００ｋＤａ、多くても３５０ｋＤａまたは３３０ｋＤａである。好ましい実施形態では、ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも１５０ｋＤａ、１６０ｋＤａ、１７０ｋＤａ、１８０ｋＤａ、または１９０ｋＤａ、最も好ましくは、約２００ｋＤａ、多くても２５０ｋＤａまたは２３０ｋＤａである。好ましい実施形態では、ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２４０ｋＤａ、２５０ｋＤａ、２６０ｋＤａ、または２７０ｋＤａ、最も好ましくは、約２８０ｋＤａ、多くても３３０ｋＤａまたは３１０ｋＤａである。好ましい実施形態では、ＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの平均Ｍｗは、少なくとも２２０ｋＤａ、２３０ｋＤａ、２４０ｋＤａ、または２５０ｋＤａ、最も好ましくは、約２７０ｋＤａ、多くても３２０ｋＤａまたは３００ｋＤａである。
【０１１９】
免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、天然の糖であるか、または天然の多糖の重量平均分子量に対して２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０倍までの係数によって切断される。
【０１２０】
本発明の目的のために、「天然の多糖」とは、その目的が糖のサイズを減少させるためのものであるプロセスにかけられていない糖を指す。多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少するようになってもよい。そのような糖は、依然として天然である。多糖がサイジング技術にかけられた場合にのみ、多糖は天然ではないと考えられる。
【０１２１】
本発明の目的のために、「２倍までの係数によって切断される」とは、糖が、糖のサイズを減少させるが、天然の多糖のサイズの半分を超えるサイズを保持することを意図するプロセスにかけられることを意味する。３倍、４倍などは、同じように解釈されるべきであり、すなわち、糖は、多糖のサイズを減少させるが、天然の多糖のサイズの１／３、１／４などを超えるサイズを保持することを意図するプロセスにかけられる。
【０１２２】
本発明の態様では、免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は天然の多糖である。
【０１２３】
本発明の態様では、免疫原性組成物は、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹのうちの少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つに由来する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖を含み、少なくとも１つ、２つ、３つもしくは４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍までの係数によって切断される。
【０１２４】
本発明の免疫原性組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）、血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、血清群Ｗ莢膜糖（ＭｅｎＷ）、血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、血清群ＣおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＣＹ）、血清群ＣおよびＡ莢膜糖（ＭｅｎＡＣ）、血清群ＣおよびＷ莢膜糖（ＭｅｎＣＷ）、血清群ＡおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＹ）、血清群ＡおよびＷ莢膜糖（ＭｅｎＡＷ）、血清群ＷおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＷＹ）、血清群Ａ、ＣおよびＷ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＷ）、血清群Ａ、ＣおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＹ）；血清群Ａ、ＷおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＷＹ）、血清群Ｃ、ＷおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＣＷＹ）；または血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹ莢膜糖（ＭｅｎＡＣＷＹ）のコンジュゲートを含んでもよい。これは、本明細書で記載される場合、血清群Ａ、Ｃ、ＷおよびＹの「１つ、２つ、３つもしくは４つ」または「少なくとも１つ」、またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の定義である。
【０１２５】
ある実施形態では、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つまたはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の平均サイズは、ＭＡＬＬＳによって決定された場合、５０ｋＤａ〜１５００ｋＤａ、５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、５０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜１５００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜５００ｋＤａ、１０１ｋＤａ〜３００ｋＤａである。
【０１２６】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＡ糖は、５０〜５００ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜５００ｋＤａ、５５〜９０ｋＤａ、６０〜７０ｋＤａまたは７０〜８０ｋＤａまたは６０〜８０ｋＤａの分子量を有する。
【０１２７】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＣ糖は、１００〜２００ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、１０１〜１３０ｋＤａ、１５０〜２１０ｋＤａまたは１８０〜２１０ｋＤａの分子量を有する。
【０１２８】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＹ糖は、６０〜１９０ｋＤａ、７０〜１８０ｋＤａ、８０〜１７０ｋＤａ、９０〜１６０ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａまたは１１０〜１４０ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、１００〜１４０ｋＤａ、１４０〜１７０ｋＤａまたは１５０〜１６０ｋＤａの分子量を有する。
【０１２９】
ある実施形態では、存在する場合、ＭｅｎＷ糖は、６０〜１９０ｋＤａ、７０〜１８０ｋＤａ、８０〜１７０ｋＤａ、９０〜１６０ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、１１０〜１４０ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａまたは１２０〜１４０ｋＤａの分子量を有する。
【０１３０】
本明細書における糖の分子量または平均分子量は、コンジュゲーションの前に測定された糖の重量平均分子量（Ｍｗ）を指し、ＭＡＬＬＳによって測定される。
【０１３１】
ＭＡＬＬＳ技術は、当業界で周知であり、典型的には、実施例２に記載のように実行される。髄膜炎菌糖のＭＡＬＬＳ分析のために、２つのカラム（ＴＳＫＧ６０００および５０００ＰＷｘｌ）を組み合わせて使用することができ、糖は水中に溶出される。糖は、光散乱検出器（例えば、４８８ｎｍの１０ｍＶアルゴンレーザーを装備したＷｙａｔｔ  Ｄａｗｎ  ＤＳＰ）および干渉屈折計（例えば、Ｐ１００セルおよび４９８ｎｍの赤色フィルターを装備したＷｙａｔｔ  Ｏｔｉｌａｂ  ＤＳＰ）を使用して検出される。
【０１３２】
ある実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、天然の多糖であるか、または通常の抽出プロセスの間にサイズが減少した天然の多糖である。
【０１３３】
ある実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、機械的切断、例えば、微小流体化または超音波処理によって切断される。微小流体化および超音波処理は、濾過できるコンジュゲートを十分に提供するより大きい天然の多糖のサイズを低下させる利点を有する（例えば、０．２μｍのフィルターを通す）。サイジングは、２０、１０、８、６、５、４、３、２または１．５倍以下の係数による。
【０１３４】
ある実施形態では、免疫原性組成物は、天然の多糖と、２０倍以下の係数によって切断される糖との混合物から作製される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）コンジュゲートを含む。例えば、ＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＡに由来する糖は天然である。例えば、ＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＷに由来する糖は、２０、１０、８、６、５、４、３または２倍以下の係数によって切断される。例えば、免疫原性組成物は、１０倍以下の係数によって切断され、および／または微小流体化されるＭｅｎＹおよび／またはＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＡから作製されたコンジュゲートを含有する。例えば、免疫原性組成物は、天然のＭｅｎＡおよび／またはＭｅｎＣおよび／またはＭｅｎＷおよび／またはＭｅｎＹから作製されたコンジュゲートを含有する。例えば、免疫原性組成物は、天然のＭｅｎＣから作製されたコンジュゲートを含む。例えば、免疫原性組成物は、１０倍以下の係数によって切断され、および／または微小流体化される天然のＭｅｎＣおよびＭｅｎＡから作製されたコンジュゲートを含む。例えば、免疫原性組成物は、１０倍以下の係数によって切断され、および／または微小流体化される天然のＭｅｎＣおよびＭｅｎＹから作製されたコンジュゲートを含む。
【０１３５】
ある実施形態では、糖の多分散性は、１〜１．５、１〜１．３、１〜１．２、１〜１．１または１〜１．０５であり、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、コンジュゲートの多分散性は、１．０〜２．５、１．０〜２．０、１．０〜１．５、１．０〜１．２、１．５〜２．５、１．７〜２．２または１．５〜２．０である。全ての多分散性の測定は、ＭＡＬＬＳによるものである。
【０１３６】
糖は、細菌から単離された多糖のサイズから１．５、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８または２０倍まで切断されてもよい。
【０１３７】
一実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖は、天然の多糖であるか、または１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖は、天然の多糖である。さらなる実施形態では、少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖は、微小流体化によって切断される。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖は、１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）コンジュゲートは、天然の多糖と、１０倍以下の係数によって切断された糖との混合物から作製される。さらなる実施形態では、血清群Ｙに由来する莢膜糖は、１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、血清群ＡおよびＣに由来する莢膜糖は、天然の多糖であり、血清群ＷおよびＹに由来する糖は、１０倍以下の係数によって切断される。さらなる実施形態では、それぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）莢膜糖の平均サイズは、５０ｋＤａ〜３００ｋＤａまたは５０ｋＤａ〜２００ｋＤａである。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える平均サイズまたは５０〜１００ｋＤａもしくは５５〜９０ｋＤａもしくは６０〜８０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＡ莢膜糖を含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または１００〜２００ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、８０〜１２０ｋＤａ、９０〜１１０ｋＤａ、１５０〜２００ｋＤａ、１２０〜２４０ｋＤａ、１４０〜２２０ｋＤａ、１６０〜２００ｋＤａもしくは１９０〜２００ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＣ莢膜糖を含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または６０〜１９０ｋＤａもしくは７０〜１８０ｋＤａもしくは８０〜１７０ｋＤａもしくは９０〜１６０ｋＤａもしくは１００〜１５０ｋＤａ、１１０〜１４５ｋＤａもしくは１２０〜１４０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＹ莢膜糖を含む。さらなる実施形態では、免疫原性組成物は、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａを超える、または６０〜１９０ｋＤａもしくは７０〜１８０ｋＤａもしくは８０〜１７０ｋＤａもしくは９０〜１６０ｋＤａもしくは１００〜１５０ｋＤａ、１４０〜１８０ｋＤａ、１５０〜１７０ｋＤａもしくは１１０〜１４０ｋＤａの平均サイズを有するＭｅｎＷ莢膜糖を含む。
【０１３８】
本発明のある実施形態では、少なくとも２つ、３つ、４つのそれぞれ、またはそれぞれの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖コンジュゲートの糖用量は、同じであるか、またはほぼ同じであってもよい。
【０１３９】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ｐＨ７．０〜８．０、ｐＨ７．２〜７．６またはｐＨ約７．４もしくは正確にｐＨ７．４で調整もしくは緩衝化される、またはそこに調整される。
【０１４０】
本発明の免疫原性組成物またはワクチンを、安定剤、例えば、スクロースまたはトレハロースなどのポリオールの存在下で凍結乾燥してもよい。
【０１４１】
上記で考察された髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）糖の組合せについて、アルミニウム塩アジュバントを使用しない、またはアジュバントを全く使用しないのが有利であってよい。
【０１４２】
活性薬剤は、本発明の医薬組成物またはワクチン中に変化する濃度で存在してもよい。典型的には、物質の最小濃度は、その意図される使用を達成するのに必要な量であるが、最大濃度は、溶液中で保持されるか、または初期混合物内に均一に懸濁される最大量である。例えば、治療剤の最小量は、単一の治療的に有効な用量を提供するものであってもよい。生物活性物質については、最小濃度は、復元の際に生物活性にとって必要な量であり、最大濃度は、均一な懸濁液を維持することができない点にある。
【０１４３】
別の実施形態では、組成物は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ莢膜多糖と、担体分子とのコンジュゲートを含む。血清群Ｘ莢膜多糖の構造は、Ｏ−アセチル基を含まないα−（１−４）ホスホジエステル結合によって一緒に保持されたＮ−アセチルグルコサミン−４−リン酸残基からなる。担体分子は、ジフテリアまたは破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７またはプロテインＤであってもよい。好ましい実施形態では、実施例に例示されるように、組成物は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ莢膜多糖のコンジュゲートを含まない。
【０１４４】
安定性
用語「安定な」および「安定性」とは、一定期間にわたって免疫原性を保持する抗原の能力を指す。安定性を、経時的に効力で測定することができる。用語「安定な」および「安定性」はさらに、免疫原性組成物の物理的、化学的、およびコンフォメーション的な安定性を指す。タンパク質組成物の不安定性は、より高次のポリマーを形成するためのタンパク質分子の化学的分解もしくは凝集により、ヘテロ二量体の単量体への解離、脱グリコシル化、グリコシル化の改変、または本発明に含まれるタンパク質組成物の少なくとも１つの生物活性を減少させる任意の他の構造的改変によって引き起こされ得る。安定性を、試料の光散乱、光（吸光度、もしくは光密度）、サイズ（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーによる）の見かけの減弱、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によるｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏでの生物活性および／または特性の測定を含む、当業界で周知の方法によって評価することができる。安定性を評価するための他の方法は、当業界で公知であり、本発明に従って使用することもできる。
【０１４５】
一部の実施形態では、本発明の安定製剤中の抗原は、少なくとも１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、２４カ月、３０カ月、３６カ月、４２カ月、４８カ月、５４カ月、または６０カ月にわたって、参照標準と比較して、少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の効力を維持することができる。一部の実施形態では、本発明の安定製剤中の抗原は、少なくとも１年、２年、３年、４年または５年にわたって、参照標準と比較して、少なくとも５０％の効力を維持することができる。用語「安定な」および「安定性」はまた、一定期間にわたってエピトープまたは免疫反応性を維持する抗原の能力を指す。例えば、本発明の安定製剤中の抗原は、少なくとも１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、２４カ月、３０カ月、３６カ月、４２カ月、４８カ月、５４カ月、または６０カ月にわたって、参照標準と比較して、そのエピトープまたは免疫反応性の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％を維持することができる。一部の実施形態では、安定性は、環境条件に関して測定される。環境条件の非限定例としては、光、温度、凍結／解凍サイクル、撹拌、およびｐＨが挙げられる。当業者であれば、本明細書に開示される方法または当業界で公知の他の方法を使用して、抗原エピトープまたは免疫反応性の存在を決定することができる。一部の実施形態では、抗原の安定性は、その製剤化の日付から測定される。一部の実施形態では、抗原の安定性は、その保存条件の変化の日付から測定される。保存条件の変化の非限定例としては、冷凍から冷蔵への変化、冷凍から室温への変化、冷蔵から室温への変化、冷蔵から冷凍への変化、室温から冷凍への変化、室温から冷蔵への変化、明るいところから暗いところへの変化、または撹拌の導入が挙げられる。
【０１４６】
一実施形態では、用語「安定な」および「安定性」は、アルミニウムに結合した状態となる、抗原の能力を含む。例えば、本発明の安定製剤は、少なくとも１時間、６時間、１２時間、１８時間、２４時間、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、９カ月、１２カ月、１８カ月、２４カ月、３０カ月、３６カ月、４２カ月、４８カ月、５４カ月、または６０カ月にわたって、参照標準と比較して、製剤中のアルミニウム（例えば、リン酸アルミニウム）に結合したタンパク質の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％を含む。例えば、実施例１３を参照されたい。好ましい実施形態では、総サブファミリーＡ  ｒＬＰ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド）の少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％が、組成物中のアルミニウムに結合している。好ましい実施形態では、総サブファミリーＢ  ｒＬＰ２０８６ポリペプチド（例えば、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド）の少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％が、組成物中のアルミニウムに結合している。
【０１４７】
アルミニウム結合の決定。アルミニウムと、少なくとも１つのタンパク質抗原とを含む組成物を、アルミニウムが沈降するように遠心分離した。アルミニウムに吸着したタンパク質の遠心分離は、当業界で公知である。例えば、Ｅｇａｎら、Ｖａｃｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．２７（２４）：３１７５〜３１８０（２００９）を参照されたい。アルミニウムに結合したタンパク質も沈降したが、アルミニウムに結合しなかったタンパク質は上清中に残存した。上清中の総タンパク質およびペレットを、Ｌｏｗｒｙ  Ａｓｓａｙによって決定した。結合したタンパク質のパーセンテージを、上清中の総タンパク質を、組成物に添加された総タンパク質で除算し、１００％を乗算することによって算出した。同様に、結合しなかったタンパク質のパーセンテージを、上清中の総タンパク質を、組成物に添加された総タンパク質で除算し、１００％を乗算することによって算出した。サブファミリーＡとサブファミリーＢ抗原との両方を含む組成物については、個々のサブファミリーＡおよびＢタンパク質の上清中の濃度を、イオン交換クロマトグラフィーによって決定した。サブファミリーＡおよびＢタンパク質の分離および溶出を、強力な陰イオンカラムおよび高い塩濃度の溶出液を使用して実行した。サブファミリーＡとＢタンパク質の両方を、励起＝２８０ｒｕｎおよび放出＝３１０ｒｕｎに設定した蛍光検出器を使用して検出および定量した。サブファミリーＡおよびサブファミリーＢタンパク質は、異なる保持時間で溶出し、ｒＬＰ２０８６タンパク質参照材料に対して生成された標準曲線を使用して定量した。結合しなかったタンパク質のパーセンテージを、上清中の総タンパク質を、組成物に添加された総タンパク質で除算し、１００％を乗算することによって算出した。結合したタンパク質のパーセンテージを、１００％から結合しなかったタンパク質のパーセンテージを減算することによって算出した。
【０１４８】
ポリソルベート８０
ポリソルベート８０（ＰＳ−８０）は、非イオン性界面活性剤である。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのモノクローナル抗体に基づく効力アッセイを使用する加速安定性試験は、最終製剤中のＰＳ−８０のＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６タンパク質に対するより高いモル比でのサブファミリーＢタンパク質の不安定性を示した。ＰＳ−８０の変化する比を用いるさらなる実験は、効力を保持するためのＰＳ−８０のＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６タンパク質に対する最適モル比が、約２．８±１．４であることを示した。
【０１４９】
組成物中のＰＳ−８０の濃度は、ＰＳ−８０のポリペプチドに対するモル比に依存する。一実施形態では、組成物は、ＰＳ−８０の第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドに対する２．８±１．４のモル比を含む。一実施形態では、組成物は、ＰＳ−８０の第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドに対する２．８±１．１のモル比を含む。一実施形態では、組成物は、ＰＳ−８０のポリペプチドに対する少なくとも１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、または３．３のモル比を含む。好ましくは、組成物は、ＰＳ−８０のポリペプチドに対する２．８のモル比を含む。
【０１５０】
ＰＳ−８０のポリペプチドに対するモル比は、ＰＳ−８０の測定された濃度と、測定された総ポリペプチド濃度とからの算出によって決定され、ここで、両方の値はモルで表される。例えば、ＰＳ−８０のタンパク質に対するモル比は、最終薬物物質中の、ＰＳ−８０の測定された濃度（例えば、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）による）の、測定された総タンパク質濃度（例えば、イオン交換−高速液体クロマトグラフィー（ＩＥＸ−ＨＰＬＣ）による）に対する算出によって決定され、ここで、両方の値はモルで表される。
【０１５１】
ＲＰ−ＨＰＬＣは、ワクチン製剤中のポリソルベート８０の濃度を定量するために使用される。デタージェントの濃度は、脂肪酸部分の鹸化によって決定される；ポリソルベート８０は、４０℃でのアルカリ加水分解によって遊離オレイン酸に変換される。試料は、Ｃ１８カラムを使用するＲＰ−ＨＰＬＣによって分離され、２００ｎｍの波長のＵＶ検出器を使用して定量される。
【０１５２】
第１および第２のポリペプチドは、陰イオン交換ＨＰＬＣによって分解される。ｒＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡおよびＢタンパク質は、異なる保持時間で溶出し、それぞれのｒＬＰ２０８６タンパク質参照材料に対して生成された標準曲線を使用して定量される。
【０１５３】
用語「モル比」ならびにｆＨＢＰおよびＰＳ−８０を含む免疫原性組成物の説明は、それぞれその全体が参照により組み込まれる、ＷＯ２０１２０２５８７３および米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１７１１９４号にさらに開示されている。
【０１５４】
本明細書で使用される用語「モル比」とは、組成物中の２つの異なる要素のモル数の比を指す。一部の実施形態では、モル比は、デタージェントのモルの、ポリペプチドのモルに対する比である。一部の実施形態では、モル比は、ＰＳ−８０のモルの、タンパク質のモルに対する比である。一実施形態では、タンパク質およびポリソルベート８０の濃度に基づいて、モル比を、以下の式：
モル比＝ＰＳ−８０（％）／タンパク質（ｍｇ／ｍｌ）ｘ２１６
を使用して算出することができる。
【０１５５】
一実施形態では、組成物は、約０．００１５、０．００１７、０．００１９、０．００２１、０．００２３、０．００２５、０．００２７、０．００２９、０．００３１、０．００３３、０．００３５、０．００３７、０．００３９、０．００４１、０．００４３、０．００４５、０．００４７、０．００４９、０．００５１ｍｇ／ｍＬのＰＳ−８０を含む。好ましくは、組成物は、約０．００３５ｍｇ／ｍＬのＰＳ−８０を含む。
【０１５６】
別の実施形態では、組成物は、約１０μｇ、１１μｇ、１２μｇ、１３μｇ、１４μｇ、１５μｇ、１６μｇ、１７μｇ、１８μｇ、１９μｇ、２０μｇ、２１μｇ、２２μｇ、２３μｇ、２４μｇ、または２５μｇのＰＳ−８０を含む。好ましい実施形態では、組成物は、約１８μｇのＰＳ−８０を含む。一実施形態では０．０２ｍｇより多いポリソルベート８０を含まない。
【０１５７】
別の実施形態では、組成物は、０．０００５％〜１％の範囲のＰＳ−８０濃度を含む。例えば、組成物中のＰＳ−８０濃度は、少なくとも０．０００５％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１０％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、または１．１％のＰＳ−８０であってもよい。好ましい実施形態では、組成物は、約０．０７％のＰＳ−８０を含む。
【０１５８】
任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。
【０１５９】
アルミニウム
組成物は、好ましくは、約０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含む。一実施形態では、組成物は、リン酸アルミニウムとして約０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウムを含む。製造性および安定性の増強を提供するための安定剤として、０．５０ｍｇ／ｍｌのＡｌＰＯ４が添加される。この濃度は、サブファミリーＡおよびＢタンパク質のアルミニウムへの結合を維持する（９０％の結合またはそれより良好な結合）。
【０１６０】
リン酸アルミニウムを製造するためのプロセスは、その全体が参照により組み込まれる米国特許出願公開第ＵＳ２００９／００１６９４６号に記載されている。
【０１６１】
一実施形態では、組成物は、アルミニウム以外の、多価陽イオンをさらに含まない。一実施形態では、組成物は、Ａｌ（ＯＨ）３もＡｌ（ＳＯ４）３もさらに含まない。
【０１６２】
一実施形態では、組成物は、少なくとも５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、１５０μｇ、１６０μｇ、１７０μｇ、１８０μｇ、１９０μｇ、２００μｇ、２１０μｇ、２２０μｇ、２３０μｇ、２４０μｇ、または２５０μｇのアルミニウムを含む。一実施形態では、組成物は、多くても５００μｇ、４９０μｇ、４８０μｇ、４７０μｇ、４６０μｇ、４５０μｇ、４４０μｇ、４３０μｇ、４２０μｇ、４１０μｇ、４００μｇ、３９０μｇ、３８０μｇ、３７０μｇ、３６０μｇ、３５０μｇ、３４０μｇ、３３０μｇ、３２０μｇ、３１０μｇ、３００μｇ、２９０μｇ、２８０μｇ、２７０μｇ、２６０μｇ、または２５０μｇのアルミニウムを含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。最も好ましい実施形態では、組成物は、２５０μｇのアルミニウムを含む。
【０１６３】
一実施形態では、組成物は、少なくとも０．００５ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．０３ｍｇ／ｍｌ、０．０４ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．０６ｍｇ／ｍｌ、０．０７ｍｇ／ｍｌ、０．０８ｍｇ／ｍｌ、０．０９ｍｇ／ｍｌ、０．１０ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、または０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含む。一実施形態では、組成物は、多くても２．０ｍｇ／ｍｌ、１．９ｍｇ／ｍｌ、１．８ｍｇ／ｍｌ、１．７ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、または０．７ｍｇ／ｍｌのＰＳ−８０を含む。好ましい実施形態では、組成物は、約０．０７ｍｇ／ｍｌのＰＳ−８０を含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましい実施形態では、組成物は、０．５ｍｇ／ｍｌのリン酸アルミニウムを含む。最も好ましい実施形態では、組成物は、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）として０．５ｍｇ／ｍｌのアルミニウムを含む。この濃度は、サブファミリーＡおよびＢタンパク質のアルミニウムへの結合を維持する（少なくとも９０％の結合またはそれより良好な結合）。
【０１６４】
一実施形態では、組み合わせた組成物中の総ＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６ポリペプチドのアルミニウムに対するパーセンテージは、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である。好ましくは、組み合わせた組成物中の総ＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６ポリペプチドのアルミニウムに対するパーセンテージは、少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも１００％である。
【０１６５】
別の実施形態では、免疫原性組成物中のアルミニウムに結合したポリペプチドの濃度は、凍結乾燥組成物を復元する前の液体組成物中のアルミニウムに結合したポリペプチドの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。一実施形態では、濃度は、復元前の液体組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％低下する。
【０１６６】
別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。別の実施形態では、免疫原性組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度は、凍結乾燥組成物中のＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートの濃度と比較して、２４時間後に低下しない。一実施形態では、濃度は、復元前の凍結乾燥組成物中のそれぞれの濃度と比較して、２４時間後に多くても１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％低下する。
【０１６７】
賦形剤
一実施形態では、組成物は、ヒスチジンを含む。一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムを含む。組成物は、好ましくは、約１０ｍＭのヒスチジン、および約１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、組成物は、１０ｍＭのヒスチジンおよび１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
【０１６８】
別の実施形態では、組成物は、約６５０μｇ、６６０μｇ、６７０μｇ、６８０μｇ、６９０μｇ、７００μｇ、７１０μｇ、７２０μｇ、７３０μｇ、７４０μｇ、７５０μｇ、７６０μｇ、７７０μｇ、７８０μｇ、７９０μｇ、８００μｇ、８１０μｇ、８２０μｇ、８３０μｇ、８４０μｇ、または８５０μｇのヒスチジンを含む。好ましくは、組成物は、約７８０μｇのヒスチジンを含む。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。
【０１６９】
一実施形態では、組成物は、トリス、リン酸、またはコハク酸緩衝液を含む。好ましい実施形態では、組成物は、トリス緩衝液を含まない。好ましくは、組成物は、リン酸緩衝液を含まない。１つの好ましい実施形態では、組成物は、コハク酸緩衝液を含まない。好ましい実施形態では、組成物は、ヒスチジン緩衝液を含む。
【０１７０】
一実施形態では、組成物は、塩化ナトリウムを含む。ＭｅｎＡＢＣＷＹ組成物中の塩化ナトリウム濃度は、１６０．５〜１６１．１ｍＭで変化してもよい。
【０１７１】
好ましい実施形態では、組成物のｐＨは、６．０〜７．０、最も好ましくは、ｐＨ６．０である。一実施形態では、組成物のｐＨは、多くても６．１である。一実施形態では、組成物のｐＨは、５．５〜７．５である。好ましい実施形態では、組成物のｐＨは、５．８〜７．０、最も好ましくは、ｐＨ５．８〜ｐＨ６．０である。一実施形態では、組成物のｐＨは、多くても６．１である。一実施形態では、組成物のｐＨは、５．８である。
【０１７２】
キット
本発明のさらなる態様は、哺乳動物において髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する殺菌抗体を惹起するための組成物の用量を投与するためのキットである。
【０１７３】
一態様では、キットは、上記の第１のポリペプチドと、上記の第２のポリペプチドとを含む第１の組成物を含む。好ましい実施形態では、第１のポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。別の好ましい実施形態では、第２のポリペプチドは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。キットは、ＭｅｎＡＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＣＡＨ−ＴＴコンジュゲート、ＭｅｎＷ−ＴＴコンジュゲート、およびＭｅｎＹ−ＴＴコンジュゲートを含む第２の組成物をさらに含む。一実施形態では、キットは、第１の容器が第１の組成物を含み、第２の容器が第２の組成物を含む、少なくとも２つの容器を含む。
【０１７４】
一実施形態では、キットは、液体の第１の組成物と、凍結乾燥された第２の組成物とを含む。好ましくは、キットは、液体ＭｅｎＢ二価ｒＬＰ２０８６組成物と、凍結乾燥されたＭｅｎＡＣＷＹ−ＴＴ組成物とを含む。
【０１７５】
本発明者らは驚くべきことに、第１の組成物と第２の組成物との組合せを含む組成物が、第１の組成物中のＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６ポリペプチドに関して、ポリソルベート８０のモル比を変化させるが、組み合わせた組成物のためのさらなる界面活性剤は、驚くべきことに、組み合わせた組成物中でのＭｅｎＢ  ｒＬＰ２０８６ポリペプチドの可溶性および安定性を維持するのに必要ではないことを発見した。したがって、一実施形態では、キットは、０．０２ｍｇより多いポリソルベート８０を含まない。
【０１７６】
本発明の一実施形態では、キットは、以下の市販の免疫原性組成物：ＭＥＮＡＣＴＲＡ（Ｒ）、ＭＥＮＶＥＯ（Ｒ）、ＡＤＡＣＥＬ（Ｒ）、ＨＡＶＲＩＸ（Ｒ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（Ｒ）、ＲＥＰＥＶＡＸのどの１つも、そのいずれの組合せもさらに含まない。例えば、キットは、好ましくは、担体タンパク質がジフテリアトキソイドである、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まない。一実施形態では、キットは、担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、髄膜炎菌Ａ、Ｃ、ＹおよびＷ多糖コンジュゲート（ＭＣＶ４）組成物をさらに含まない。一実施形態では、キットは、ＮＩＭＥＮＲＩＸが塩化ナトリウムおよび水からなる希釈剤を含む、ＮＩＭＥＮＲＩＸワクチンをさらに含まない。
【０１７７】
殺菌活性
組成物をヒトに投与することによって誘導される免疫応答を、４つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）株に対するヒト補体（ｈＳＢＡ）を使用する血清殺菌アッセイを使用して決定する。
【０１７８】
全ての試験株、特に、第１のポリペプチド（配列番号１）と異種である配列を有するリポタンパク質２０８６バリアントを発現する株に対する高い割合のｈＳＢＡ応答は、組成物が広い防御ワクチンであり、少なくとも髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対する高い血清防御を提供するには２用量で十分であることを示唆する。
【０１７９】
全ての試験株、特に、第１のポリペプチド（配列番号１）と第２のポリペプチド（配列番号２）の両方にとって異種である配列を有するリポタンパク質２０８６バリアントを発現する株に対する高い割合のｈＳＢＡ応答は、組成物が広い防御ワクチンであり、ｒＬＰ２０８６（ＦＨＢＰ）サブファミリーＡおよび／またはサブファミリーＢを発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対する高い血清防御を提供するには、約６カ月間以内に多くても３用量で十分であることを示唆する。
【０１８０】
サブファミリーＡ株
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡタンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。例えば、一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｍ９８２５０７７１株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＡ株である。
【０１８１】
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ｆＨＢＰ  Ａ０２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２８を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ４２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。さらなる実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２およびＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ６３株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ７６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。
【０１８２】
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ｆＨＢＰ  Ａ１０を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ２２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ａ５６を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ０４を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ１２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ１５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ１９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ２２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ２９を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ａ０７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ｆＨＢＰ  Ａ６２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。
【０１８３】
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３およびＡ７６からなる群から選択されるｆＨＢＰを発現するいずれか１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株、ならびにそれらの任意の組合せを含む。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ａ１０、Ａ２２、Ａ５６、Ａ０４、Ａ０５、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２２、Ａ２９、およびＡ０７からなる群から選択されるｆＨＢＰを発現するいずれか１つの髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株、ならびにそれらの任意の組合せを含む。
【０１８４】
一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ａ０２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ａ２８株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ａ４２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ａ６３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ａ７６株に対するものである。
【０１８５】
一実施形態では、免疫応答は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３およびＡ７６からなる群から選択される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ａ１０、Ａ２２、Ａ５６、Ａ０４、Ａ０５、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２２、Ａ２９、およびＡ０７からなる群から選択される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株、ならびにそれらの任意の組合せに対するものである。
【０１８６】
一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１に対して異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、第１のポリペプチド（配列番号１）に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８４％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。
【０１８７】
別の実施形態では、免疫応答は、第１のポリペプチドに対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株Ｍ９８２５０７７１によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても９９％、より好ましくは多くても８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して殺菌性である。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。
【０１８８】
サブファミリーＢ株
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。例えば、一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＣＤＣ１１２７株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。好ましい実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＣＤＣ１５７３株に対して異種であるリポタンパク質２０８６バリアントを発現するＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）サブファミリーＢ株である。
【０１８９】
一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ｆＨＢＰ  Ｂ０５を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ０７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６（ｆＨＢＰ）Ｂ０８を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ｂ１３を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ｂ５２を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、ＬＰ２０８６  Ｂ１０７を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株である。さらなる実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７からなる群から選択されるいずれか１つの株を含む。さらなる実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、Ｂ１０７、Ｂ０１、Ｂ２４、Ｂ４４、Ｂ１６、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１５３からなる群から選択されるいずれか１つの株を含む。
【０１９０】
一実施形態では、免疫応答は、Ｂ０１を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株に対して異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ０５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ０７株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ０８株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ１３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ５２株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ１０７株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ２４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ４４株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ１６株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ０３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ０９株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ１５株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ  Ｂ１５３株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３に対して異種である髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。
【０１９１】
一実施形態では、免疫応答は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３およびＡ７６からなる群から選択される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株に対するものである。一実施形態では、免疫応答は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２、Ｂ１０７、Ｂ０１、Ｂ２４、Ｂ４４、Ｂ１６、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１５３からなる群から選択される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株、ならびにそれらの任意の組合せに対するものである。
【０１９２】
一実施形態では、免疫応答は、第２のポリペプチドに対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも８７％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。
【０１９３】
別の実施形態では、免疫応答は、第２のポリペプチドに対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。別の実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。好ましい実施形態では、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株ＣＤＣ１５７３によって発現されるＨ因子結合タンパク質に対して多くても９９％の同一性、より好ましくは少なくとも８８％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨ因子結合タンパク質を発現する髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。
【０１９４】
一実施形態では、ｈＢＳＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７、ならびにそれらの任意の組合せを含む。さらなる実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７、Ｂ２４、Ｂ１６、Ｂ４４、Ｂ０３、およびＢ０９、ならびにそれらの任意の組合せを含む。一実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７、ならびにそれらの任意の組合せを含む。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５およびＢ１６、またはそれらの任意の組合せをさらに含む。別の実施形態では、ｈＳＢＡ株は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６、ならびにそれらの任意の組合せを含む。
【０１９５】
サブファミリーＡおよびサブファミリーＢ株
一実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する。好ましくは、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。一実施形態では、方法は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７からなる群から選択される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株、ならびにそれらの任意の組合せに対する免疫応答を誘導する。一実施形態では、方法は、Ａ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７、Ａ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６からなる群から選択される髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ株、ならびにそれらの任意の組合せに対する免疫応答を誘導する。
【０１９６】
一実施形態では、方法は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答を誘導する。好ましくは、免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株および髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して殺菌性である。
【０１９７】
一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対する免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答よりも高い。例えば、一実施形態では、免疫原性組成物は、同一条件下で試験した場合、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対してよりも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対して高い殺菌力価を誘導する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対するより高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の第２の用量後、３０日以内に生じる。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対するより高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の第３の用量の非存在下で生じる。
【０１９８】
別の実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対する免疫応答は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対する免疫応答よりも高い。例えば、一実施形態では、免疫原性組成物は、同一条件下で試験した場合、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＡ株に対してよりも、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対して高い殺菌力価を誘導する。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対するより高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の第２の用量後、３０日以内に生じる。一実施形態では、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群ＢサブファミリーＢ株に対するより高い殺菌力価は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫原性組成物の第３の用量の非存在下で生じる。
【０１９９】
力価
一実施形態では、組成物は、同一の条件下で、例えば、ｈＳＢＡにおいて測定した場合、組成物の用量の投与前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価と比較して、ヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価の増加を誘導する。一実施形態では、殺菌力価の増加は、同一の条件下で、例えば、ｈＳＢＡにおいて測定した場合、組成物の第１の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、組成物の第１の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較される。一実施形態では、力価の増加は、同一の条件下で、例えば、ｈＳＢＡにおいて測定した場合、組成物の第２の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、組成物の第２の用量後に観察される。別の実施形態では、殺菌力価の増加は、同一の条件下で、例えば、ｈＳＢＡにおいて測定した場合、組成物の第３の用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、組成物の第３の用量後に観察される。
【０２００】
一実施形態では、組成物は、殺菌力価が、同一の条件下で、例えば、ｈＳＢＡにおいて測定した場合、用量の投与前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価よりも少なくとも１倍より高い、用量の投与後のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価を誘導する。例えば、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価は、同一の条件下で、例えば、ｈＳＢＡにおいて測定した場合、用量の投与前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価と比較して、組成物の用量を受けた後のヒトにおいて少なくとも１．０１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、または１６倍高くてもよい。
【０２０１】
一実施形態では、「応答者」とは、組成物が、用量の投与後のヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価を誘導し、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価が用量の投与前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価よりも少なくとも１倍より高い、ヒトを指す。好ましい実施形態では、応答者は、用量の投与前のヒトにおける殺菌力価と比較して、ｈＳＢＡ力価の少なくとも４倍以上の上昇を達成する。そのような応答者を、防御力価を有するものと言うことができる。一部の実施形態では、防御力価は、１：４よりも高いものである。
【０２０２】
一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、測定可能な効果をもたらす血清試料の最も高い希釈率の逆数である。例えば、一実施形態では、ｈＳＢＡ力価は、Ｔ３０  ＣＦＵ値（すなわち、試験血清を除く全てのアッセイ成分を含有するアッセイウェル中でのインキュベーション後に生存する細菌数；１００％の細菌生存率）と比較して、ＭｅｎＢ細菌の少なくとも５０％の減少（５０％の細菌生存率）をもたらす試験血清の最も高い２倍希釈率の逆数である。
【０２０３】
一実施形態では、組成物は、ｈＳＢＡにおいて同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価よりも少なくとも２倍高い第１の用量を受けた後のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価を誘導する（例えば、第１の用量の非存在下でのヒトにおける殺菌力価よりも高い）。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価よりも少なくとも４倍高いヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価を誘導する。一実施形態では、組成物は、ヒト補体を利用するヒト血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において同一の条件下で測定した場合、第１の用量を受ける前のヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価よりも少なくとも８倍高いヒトにおける髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂに対する殺菌力価を誘導する。
【０２０４】
好ましい実施形態では、ヒト血清補体は、所与のＳＢＡ試験株に関する低い内在性殺菌活性を有するヒトに由来する。低い内在性殺菌活性とは、例えば、所与のＳＢＡ試験株に対する少なくとも１：４未満の希釈率の殺菌力価を指す。一実施形態では、ヒト補体は、組成物がヒトに投与されなかった場合、所与のＳＢＡ試験株に対する、１：２の希釈率などの、少なくとも１：４未満のｈＳＢＡ力価を有するヒトに由来する。
【０２０５】
ヒトは、二価ｒＬＰ２０８６組成物などの、組成物の投与前に１：４未満のｈＳＢＡ力価を示してもよいか、またはヒトは、組成物の投与前に１：４以上のｈＳＢＡ力価を示してもよい。したがって、好ましい実施形態および例では、少なくとも１用量の組成物のヒトへの投与は、例えば、１：８以上のｈＳＢＡ力価、１：１６以上のｈＳＢＡ力価、および１：３２以上のｈＳＢＡ力価などの、少なくとも１：４より高いｈＳＢＡ力価をもたらす。本明細書に記載のそれぞれの実施例は、二価ｒＬＰ２０８６組成物がヒトに投与された場合の、１：８以上および／または１：１６以上のｈＳＢＡ力価を有するヒト対象の割合の評価を含む。１：４よりも高いｈＳＢＡ力価のそのような好ましい評価は、防御、すなわち、ヒトにおいて誘導される殺菌性免疫応答が組成物と関連することを示す。
【０２０６】
一実施形態では、ヒトは、組成物の第１の用量の投与後にｈＳＢＡの定量下限（ＬＬＯＱ）と等しいか、またはそれより高いｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の第２の用量の投与後にｈＳＢＡのＬＬＯＱと等しいか、またはそれより高いｈＳＢＡ力価を有する。別の実施形態では、ヒトは、組成物の第３の用量の投与後にｈＳＢＡのＬＬＯＱと等しいか、またはそれより高いｈＳＢＡ力価を有する。
【０２０７】
方法および投与
一態様では、本発明は、ヒトにおいて髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に対する免疫応答を誘導する方法に関する。別の態様では、本発明は、ヒトにワクチン接種する方法に関する。一実施形態では、方法は、上記の組成物の少なくとも１用量をヒトに投与することを含む。好ましい実施形態では、方法は、上記の組成物の多くても１用量をヒトに投与することを含む。別の実施形態では、方法は、上記の組成物の少なくとも第１の用量および第２の用量をヒトに投与することを含む。
【０２０８】
一実施形態では、第２の用量は、第１の用量の少なくとも２０、３０、５０、６０、１００、１２０、１６０、１７０、または１８０日後および第１の用量の多くても２５０、２１０、２００、または１９０日後に投与される。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。
【０２０９】
別の実施形態では、第２の用量は、第１の用量の約３０日後に投与される。別の実施形態では、第２の用量は、例えば、０、２カ月の免疫化スケジュールにおけるなど、第１の用量の約６０日後に投与される。別の実施形態では、第２の用量は、例えば、０、６カ月の免疫化スケジュールにおけるなど、第１の用量の約１８０日後に投与される。さらに別の実施形態では、第２の用量は、例えば、２、６カ月の免疫化スケジュールにおけるなど、第１の用量の約１２０日後に投与される。
【０２１０】
一実施形態では、方法は、２用量の組成物および多くても２用量をヒトに投与することを含む。一実施形態では、２用量を、第１の用量後、約６カ月の期間内に投与する。一実施形態では、方法は、ヒトへの追加免疫のさらなる投与を含まない。本明細書で使用される「追加」とは、ヒトへの組成物のさらなる投与を指す。多くても２用量の組成物をヒトに投与することが有利であり得る。そのような利点としては、例えば、ヒトが完全な投与スケジュールを順守することが容易になること、およびスケジュールの費用効果を容易にすることが挙げられる。
【０２１１】
一実施形態では、第１の用量および第２の用量は、第１の用量の後、約２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００日、多くても４００、３９０、３８０、３７０、３６５、３５０、３４０、３３０、３２０、３１０、３００、２９０、２８０、２７０、２６０、２５０、２４０、２３０、２２０、２１０、または２００日の期間にわたってヒトに投与される。任意の最小値を、本明細書に記載の任意の最大値と組み合わせて、範囲を定義することができる。好ましくは、第１および第２の用量は、少なくとも４週間空けて、例えば、８週間以上空けて、２カ月以上空けて、３カ月以上空けて、６カ月以上空けてなどで投与される。
【０２１２】
一実施形態では、第１の用量および第２の用量は、約３０日の期間にわたってヒトに投与される。別の実施形態では、第１の用量および第２の用量は、約６０日の期間にわたってヒトに投与される。別の実施形態では、第１の用量および第２の用量は、約１８０日の期間にわたってヒトに投与される。
【０２１３】
都合のよいことに、第１の用量を、別のワクチンと実質的に同時に（例えば、同じ医療相談もしくは医療専門家への訪問の間に、または第１の用量の髄膜炎菌ワクチンの２４時間以内に）、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性、もしくは好ましくは、無細胞性のいずれか）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ワクチン、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン、および／またはポリオワクチン（好ましくは、不活化ポリオウイルスワクチン）と実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与されるワクチンはそれぞれ、一価ワクチンであってもよく、または組合せワクチンの一部（例えば、ＤＴＰワクチンの一部）であってもよい。
【０２１４】
都合のよいことに、第２の用量を、別のワクチンと実質的に同時に（例えば、同じ医療相談もしくは医療専門家への訪問の間に、または第２の用量の髄膜炎菌ワクチンの２４時間以内に）、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性、もしくは無細胞性のいずれか）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ワクチン、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン、ポリオワクチン（好ましくは、不活化ポリオウイルスワクチン）、インフルエンザワクチン、水痘ワクチン、麻疹ワクチン、おたふく風邪ワクチン、および／または風疹ワクチンと実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与されるワクチンはそれぞれ、一価ワクチンであってもよく、または組合せワクチンの一部（例えば、ＭＭＲワクチンの一部）であってもよい。
【０２１５】
都合のよいことに、第３の用量を、別のワクチンと実質的に同時に（例えば、同じ医療相談もしくは医療専門家への訪問の間に、または第３の用量の髄膜炎菌ワクチンの２４時間以内に）、例えば、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン（細胞性、もしくは無細胞性のいずれか）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ワクチン、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン、ポリオワクチン（好ましくは、不活化ポリオウイルスワクチン）、インフルエンザワクチン、水痘ワクチン、麻疹ワクチン、おたふく風邪ワクチン、および／または風疹ワクチンと実質的に同時に投与することができる。これらの任意選択で同時投与されるワクチンはそれぞれ、一価ワクチンであってもよく、または組合せワクチンの一部（例えば、ＭＭＲワクチンの一部）であってもよい。
【実施例】
【０２１６】
以下の実施例は、本発明の実施形態を例示するものである。本明細書で別途記述されない限り、以下の実施例において、組成物の好ましい例示的な実施形態である、０．５ｍＬ用量あたり、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド、０．５ｍＬ用量あたり、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド、２．８のポリソルベート８０の第１のポリペプチドに対するモル比、２．８のポリソルベート８０の第２のポリペプチドに対するモル比、組成物１ｍｌあたり０．５ｍｇのＡｌ３＋、１０ｍＭのヒスチジン、および１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む二価組換えワクチン（ｒＬＰ２０８６）を参照する。より具体的には、二価組換えｒＬＰ２０８６ワクチン（ＴＲＵＭＥＮＢＡとしてライセンス供与される）は、（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第１の脂質化ポリペプチド；（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む６０μｇの第２の脂質化ポリペプチド；（ｃ）１８μｇのポリソルベート８０；（ｄ）２５０μｇのアルミニウム；（ｅ）７８０μｇのヒスチジン；および（ｆ）４３８０μｇの塩化ナトリウムを含む。各用量は０．５ｍＬであった。
【０２１７】
（実施例１）
組換え抗原
非脂質化組換えｆＨＢＰ（ｒＰ２０８６）バリアントを発現させ、精製した。ＭＮ８６−９９４−１１結合エピトープ中の突然変異を、部位特異的突然変異誘発によって導入した。この場合、プラスミドベクターｐＥＴ３０ａ中にクローニングされたＨｉｓタグ付きバージョンのｒＰ２０８６−Ｂ０１を、組換え変異体の精製を容易にするための突然変異誘発鋳型として使用した。突然変異誘発キットを使用し、反応において使用される変異原性オリゴヌクレオチドを設計した。意図された突然変異の存在および二次突然変異の非存在を、ＤＮＡシーケンシングによって確認した。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株ＢＬ２１（ＤＥ３）中で発現された変異体を、Ｎｉセファロース親和性クロマトグラフィーおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。全てのＣＤおよびＩＴＣ実験を、１ｘＰＢＳ、ｐＨ７．４中で行った。タンパク質および抗体試料を、実験緩衝液に対して完全に透析した。ｒＰ２０８６−Ｂ０１（配列番号２）およびＭＮ８６−９９４−１１の濃度を、それぞれ、２８０ｎｍで０．３６３および１．４（ｍｇ／ｍｌ）−１ｃｍ−１の減衰係数を使用して分光光度法により決定した。光散乱を考慮に入れた。
【０２１８】
（実施例２）
ＭＥＡＳＵＲＥアッセイ
１％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ中で固定した５０μＬ／ウェルの容量の細菌を、９６ウェルのＵ底ポリスチレンプレート中に播種し、遠心分離し、１ｘＰＢＳ中の１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ中で１回洗浄した。ｍＡｂ  ＭＮ８６−９９４−１１−１またはマウスＩｇＧ（陰性対照）を、細菌ペレットに添加し、再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートした。２回の洗浄後、ビオチン化ヤギ抗マウスＩｇＧ（サブクラス１＋２ａ＋２ｂ＋３）を細胞ペレットに添加し、再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、ストレプトアビジン−ＰＥ中に再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートした。さらに２回洗浄した後、細胞ペレットを１％ＰＦＡ中に再懸濁した。Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６フローサイトメーター上でウェルあたり２０，０００の事象を獲得し、ＡＣＣＵＲＩ  ＣＦＬＯＷソフトウェアを使用して分析した。ＰＥチャネルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、対数前方散乱対側方散乱ドットプロットにおいて細菌細胞にゲートをかけた後、それぞれの試料について決定した。ＭＥＡＳＵＲＥアッセイのＬＯＤを超えると考えられるｆＨＢＰ発現について、ＭＦＩ値は、少なくとも１００の任意の閾値およびそのアッセイにおける対照マウスのＩｇＧ  ＭＦＩの３倍を超えていなければならなかった。血清群Ｂ莢膜発現を、抗血清群Ｂ  ｍＡｂの使用を除いて以前に記載されたものと同じ染色手順に従って決定した後、ビオチン化ヤギ抗マウスＩｇＭと共にインキュベートした。
【０２１９】
（実施例３）
血清殺菌アッセイ
若年成人に由来するヒト血清を使用するｈＳＢＡを実施した。スクリーニングアッセイにおいて固有の検出可能な殺菌活性を示さないヒト血清を、外因性補体源として使用した。対象一致させたプールした免疫前血清を使用して、プールした免疫後血清中で観察されたｈＳＢＡ力価がワクチンにより誘導された抗体の結果であることを証明した。さらに、枯渇実験を行って、ｆＨＢＰに対する抗体の特異性を証明した。簡単に述べると、同じサブファミリーに由来するｆＨＢＰは、血清抗体の、細菌の表面上に発現される抗原との結合について競合し、ｈＳＢＡ力価を有意に低下させたが、競合剤として使用した無関係のタンパク質および多糖はそうしなかった（データは示さない）。本明細書で報告される試験においては、１０９種のＮｍＢ株のうちの４５種を、若年成人臨床試験６１０８Ａ１−５００（１８〜２５歳）に登録した５人の対象に由来する免疫前および免疫後のヒト血清を用いて試験し、６４種のＮｍＢ株を、第５の対象から入手可能な血清が不十分であったため、同じ５人の対象のうちの４人に由来する免疫前および免疫後のヒト血清を用いて試験した。株を、プールしたヒト血清および最大で５つのヒト血清補体ロットを用いるｈＳＢＡにおいて試験した。ｈＳＢＡにおいて試験した株は、システム適合基準を満たした５０％を超えるアッセイについて免疫前および免疫後のヒト血清試料の間でｈＳＢＡ力価の４倍の上昇が観察された場合、殺滅されたと指定した。臨床試験のために使用することができる株を同定することができるように、この厳密な手法を採用した。一部の例では、二価ｒＬＰ２０８６血清によって殺滅され得る株だけが特異的補体源を使用して殺滅され得るため、それらを陰性とスコア化した。血清の非存在下での殺菌性インキュベーション後の生存細菌数（Ｔ３０）の、入力細菌数（Ｔ０）に対する比が５０％以上であった場合、適切なシステム適合性が達成された。５０％を超えるアッセイについてｈＳＢＡ力価の４倍の上昇が観察されなかった場合、株を、ｈＳＢＡにおいて感受性でない（殺滅されない）と考えた。例として、所与のＮｍＢ株について、免疫前の血清プールのｈＳＢＡ力価が１：４未満（または２の力価）であった場合、４倍の上昇を達成するためには、免疫後の血清プールに関して１：８以上のｈＳＢＡ力価が必要である；そのような４倍の上昇が５０％を超えるアッセイ（例えば、システム適合基準を満たしている３つのアッセイのうちの２つまたは３つ）について観察された場合、所与のＮｍＢ株は、ｈＳＢＡにおいて感受性である（殺滅される）と考えられる。
【０２２０】
ｈＳＢＡのために、ヒト血清補体を、複数の正常で健康なヒト成人からプールするか、または個々のドナーから使用する（すなわち、プールしない）ことができる。
【０２２１】
（実施例４）
ＴＲＵＭＥＮＢＡに対するヒト免疫応答の幅：ｈＳＢＡにおいて感受性であるＭｅｎＢ株によって発現されるｆＨＢＰバリアントの概要
序論＆目的：髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）疾患の防止のためのワクチンであるＴＲＵＭＥＮＢＡ（二価ｒＬＰ２０８６）は、髄膜炎菌Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）のバリアントである、２つのタンパク質抗原を含む。ｆＨＢＰは、２つのサブファミリー、ＡおよびＢとして存在する。それぞれのサブファミリー内で、数百種類のユニークなｆＨＢＰバリアントが同定されている。この配列多様性にも拘わらず、それぞれのサブファミリーに由来する１つのタンパク質を含有するワクチンは、ｆＨＢＰバリアントの多様性を代表するＭｅｎＢ株にわたる広いカバー範囲を誘導することが示された。ライセンス交付は、ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）において侵襲性ＭｅｎＢ株の補体媒介性殺滅を開始する抗体を惹起するワクチンの能力に基づくものであった。髄膜炎菌疾患の風土性のため、どのｆＨＢＰバリアントに個体が曝露され得るかを予測するのは不可能である。この理由から、本発明者らは、ＴＲＵＭＥＮＢＡによって与えられるカバー範囲を探索し続け、免疫カバー範囲の幅を示すさらなる証拠をここに提示する。
【０２２２】
材料＆方法：ＴＲＵＭＥＮＢＡのカバー範囲の幅を確認するために、ＭｅｎＢ侵襲株（ｎ＝１０９）を選択した。株は、それぞれ、２２種および１６種のユニークなサブファミリーＡおよびサブファミリーＢのｆＨＢＰバリアントをコードしていた。細菌表面でのｆＨＢＰの発現を、フローサイトメトリーＭＥｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ  Ａｎｔｉｇｅｎ  ＳＵＲｆａｃｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＭＥＡＳＵＲＥ）アッセイを使用して決定した。探索的ｈＳＢＡを、若年成人からのワクチン接種前後の血清（対象一致させた）を使用して実施した。ワクチン接種前後の血清試料の間でｈＳＢＡ力価の４倍の上昇が達成された場合、株はＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清に感受性であると考えた。
【０２２３】
結果：１０９種の株のうち、８７種（ほぼ８０％）が、ｈＳＢＡにおいてＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清に感受性であった。これは、以前に報告されたバリアントに加えて、ｆＨＢＰバリアントＡ０２、Ａ２８、Ａ４２、Ａ６３、Ａ７６、Ｂ０５、Ｂ０７、Ｂ０８、Ｂ１３、Ｂ５２およびＢ１０７を発現する株を含んでいた。殺滅することができなかった大部分の株は、ｈＳＢＡにおいて殺菌性殺滅を開始するのに十分であると考えられたレベルよりも下であるｆＨＢＰ発現レベルを有していた。図３、表１、表２、および表３を参照されたい。
【０２２４】
【表１】
2020128372.tif 000003
【０２２５】
【表２】
2020128372.tif 000004
【０２２６】
【表３】
2020128372.tif 000005
【０２２７】
結論：ｈＳＢＡは、髄膜炎菌ワクチンの効能の代理と認識されている。アッセイの複雑性は、数百個のユニークなｆＨＢＰ配列バリアントのそれぞれを発現するＭｅｎＢ株に対するＴＲＵＭＥＮＢＡ免疫血清の殺菌活性の証明を妨げる。ＴＲＵＭＥＮＢＡによって与えられる免疫カバー範囲の幅を示すために、本発明者らは、さらなる多様なｆＨＢＰバリアントを発現するＭｅｎＢ株を、ワクチン抗原に対して異種であるにも拘わらず、ｈＳＢＡにおいて殺滅することができることを示す。
【０２２８】
（実施例５）
アミノ酸配列
＞ｆＨＢＰ＿Ａ０２
ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤＦＴＫＫＱＧＹＧＧＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号６３）
＞ｆＨＢＰ＿Ａ２８
ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＳＩＡＧＫＱ（配列番号６４）
＞ｆＨＢＰ＿Ａ４２
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＲＴＦＫＡＧＮＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＮＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＳＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＰＮＧＲＬＨＹＳＩＤＦＴＫＫＱＧＹＧＲＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号６５）
＞ｆＨＢＰ＿Ａ６３
ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＴＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＧＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＤＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＳＩＡＧＫＱ（配列番号６６）
＞ｆＨＢＰ＿Ａ７６
ＣＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＰＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＴＥＫＶＮＮＰＤＫＴＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＶＧＫＳＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＡＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＧＥＫＶＨＥＩＳＩＡＧＫＱ（配列番号６７）
＞ｆＨＢＰ＿Ｂ０５
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＶＱＤＳＥＤＳＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＧＧＳＡＴＹＲＧＴＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＥＬＡＴＡＹＩＫＰＤＥＫＲＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＧＱＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧＩＱＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号６８）
＞ｆＨＢＰ＿Ｂ０７
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＫＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＶＱＤＳＥＤＳＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＧＧＳＡＴＹＲＧＴＡＬＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＥＬＡＴＡＹＩＫＰＤＥＫＲＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＧＱＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＶＮＧＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号６９）
＞ｆＨＢＰ＿Ｂ０８
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＳＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＫＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＶＱＤＳＥＤＳＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＧＧＳＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＥＬＡＴＡＹＩＫＰＤＥＫＲＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＧＱＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号７０）
＞ｆＨＢＰ＿Ｂ１３
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＲＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＶＱＤＳＥＨＳＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＥＧＧＲＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＩＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＡＡＤＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＡＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＧＫＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＫＴＶＮＧＩＲＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号７１）
＞ｆＨＢＰ＿Ｂ５２
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＱＳＬＴＬＤＱＳＶＲＫＮＥＫＬＫＬＡＡＱＧＡＥＫＴＹＧＮＧＤＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＶＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＥＱＤＬＥＨＳＧＫＭＶＡＫＲＲＦＫＩＧＤＩＡＧＥＨＴＳＦＤＫＬＰＫＤＶＭＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＶＡＹＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＤＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＥＫＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＫＴＡＮＧＩＨＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号７２）
＞ｆＨＢＰ＿Ｂ１０７
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＲＴＦＫＡＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＩＲＱＩＥＶＤＧＱＬＩＴＬＥＳＧＥＦＱＶＹＫＱＳＨＳＡＬＴＡＬＱＴＥＱＶＱＤＳＥＨＳＧＫＭＶＡＫＲＱＦＲＩＧＤＩＶＧＥＨＴＳＦＧＫＬＰＫＤＶＭＡＴＹＲＧＴＡＦＧＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＳＰＥＬＮＶＤＬＡＡＡＤＩＫＰＤＥＫＨＨＡＶＩＳＧＳＶＬＹＮＱＡＥＫＧＳＹＳＬＧＩＦＧＧＱＡＱＥＶＡＧＳＡＥＶＥＴＡＮＧＩＲＨＩＧＬＡＡＫＱ（配列番号７３）
＞Ａ５６
ＣＳＳＧＧＧＧＶＡＡＤＩＧＡＧＬＡＤＡＬＴＡＰＬＤＨＫＤＫＧＬＫＳＬＴＬＥＤＳＩＳＱＮＧＴＬＴＬＳＡＱＧＡＥＫＴＦＫＶＧＤＫＤＮＳＬＮＴＧＫＬＫＮＤＫＩＳＲＦＤＦＶＱＫＩＥＶＤＧＱＴＩＴＬＡＳＧＥＦＱＩＹＫＱＤＨＳＡＶＶＡＬＱＩＥＫＩＮＮＰＤＫＩＤＳＬＩＮＱＲＳＦＬＶＳＧＬＧＧＥＨＴＡＦＮＱＬＰＳＧＫＡＥＹＨＧＫＡＦＳＳＤＤＡＧＧＫＬＴＹＴＩＤＦＡＡＫＱＧＨＧＫＩＥＨＬＫＴＰＥＱＮＶＥＬＡＳＡＥＬＫＡＤＥＫＳＨＡＶＩＬＧＤＴＲＹＧＳＥＥＫＧＴＹＨＬＡＬＦＧＤＲＡＱＥＩＡＧＳＡＴＶＫＩＲＥＫＶＨＥＩＧＩＡＧＫＱ（配列番号７４）
【０２２９】
（実施例６）
二価ＦＨｂｐ髄膜炎菌Ｂワクチンの広いカバー範囲を評価するための多様な株の選択
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の伝染は通常、上気道の無症状性定着をもたらすが、一部の個体では、菌血症および侵襲性髄膜炎菌疾患（ＩＭＤ）が起こる。ＩＭＤは一般的に、髄膜炎および／または敗血症として見つかる；肺炎、敗血症性関節炎、喉頭蓋炎、および中耳炎はめったに観察されない。高い症例致死率は、ＩＭＤと関連し（１０％〜１５％）、生存者の約２０％は、手足の切断、聴力低下、および神経学的障害などの重篤な生涯にわたる後遺症を有する。
【０２３０】
世界のほぼ全ての髄膜炎菌疾患は、１２種の特徴付けられた髄膜炎菌血清群のうちの６種（すなわち、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｘ、およびＹ）によって引き起こされる。莢膜多糖に基づく有効なワクチンが、血清群Ａ、Ｃ、Ｗ、およびＹについて開発されている。しかしながら、ヒト神経細胞上に存在するポリシアル酸構造との類似性のため、ＭｅｎＢ多糖の免疫原性は弱い。近年、特に髄膜炎菌血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）は、欧州、米国、カナダ、オーストラリア、およびニュージーランドにおけるＩＭＤの大部分と関連してきた。外膜小胞（ＯＭＶ）に基づくワクチンは、単一のＭｅｎＢアウトブレイク株によって引き起こされる流行を制御するために上手く使用されてきたが、生成される免疫応答は主に高度に可変性のポリンＡタンパク質（ＰｏｒＡ）に対するものである。したがって、有効性は、一般に、標的株に限定される。結果として、多様なＭｅｎＢ株にわたって防御殺菌抗体を誘導することができる表面露出タンパク質が、広く有効なＭｅｎＢワクチンの開発のために求められている。
【０２３１】
ＭｅｎＢのほぼ全ての株の上で発現される保存された表面露出リポタンパク質である、Ｈ因子結合タンパク質（ＦＨｂｐ；ＬＰ２０８６およびＧＮＡ１８７０としても公知である）が、そのような標的として同定された。アミノ酸配列に基づいて、ＦＨｂｐは２つの免疫学的に異なるサブファミリー（サブファミリーＡおよびサブファミリーＢと呼ばれる）に分けられる；それぞれのＭｅｎＢ株は、単一のサブファミリーのバリアントを発現する（図１Ａを参照されたい）。
【０２３２】
ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ（ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）、二価ｒＬＰ２０８６；Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、ＵＳＡ）は、一方はサブファミリーＡ（バリアントＡ０５）に由来し、他方はサブファミリーＢ（バリアントＢ０１）に由来する、等量の２つの組換え脂質化ＦＨｂｐ抗原から構成される、二価の組換えタンパク質ＭｅｎＢワクチンである。重要なことに、この組合せのＦＨｂｐバリアントは、多様なＭｅｎＢ株に対する防御を提供することができると予測される。ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐは、米国、カナダ、欧州、およびオーストラリアを含む、いくつかの国および地域においてＩＭＤの防止のために認可されている。別のＭｅｎＢワクチンであるＭｅｎＢ−４Ｃ（Ｂｅｘｓｅｒｏ（登録商標）、４ＣＭｅｎＢ；ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ、Ｓｒｌ、Ｓｉｅｎａ、Ｉｔａｌｙ）も、組換えＦＨｂｐ補体（サブファミリーＢに由来する非脂質化バリアント１．１）ならびに２つの他の組換えタンパク質抗原およびＯＭＶを有する。かくして、ＭｅｎＢ−４Ｃは、広いカバー範囲を得るために単一抗原の２つのバリアントを含有する、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐとは異なる。
【０２３３】
ヒト補体を使用する血清殺菌アッセイ（ｈＳＢＡ）は、髄膜炎菌の補体依存的、抗体媒介性溶解を測定する。ｈＳＢＡ力価は、５０％以上のアッセイ細菌を殺滅する最も高い血清希釈率と定義される；１：４以上のｈＳＢＡ力価は、髄膜炎菌疾患に対する防御の許容される相関であり、この相関に基づくｈＳＢＡ応答率は、髄膜炎菌ワクチン効能の代理として使用されている。ＳＢＡ応答率は、血清群ＣおよびＡの多糖ワクチンのための天然の防御と特異的に相関している。血清群特異的多糖は可変性ではないため、広いワクチンカバー範囲を推察するには、それぞれの血清群に由来する単一の株で十分であった。ＭｅｎＢ  ＯＭＶワクチンもまた有効であり、ワクチンにより惹起されたｈＳＢＡ力価は、流行を引き起こす標的株に対する防御と相関していた。タンパク質配列多様性および発現レベルの変動性が、異なる髄膜炎菌疾患株間で異なることを考慮すると、ｈＳＢＡを使用したタンパク質に基づくワクチンの株カバー範囲の正確な予測は、莢膜多糖を標的とするワクチンについてよりも複雑である。例えば、ＰｏｒＡは、ＯＭＶワクチン免疫化後に防御を与える血清殺菌抗体の主な標的である。ＰｏｒＡは、小さい細胞表面に露出した領域が高い程度の配列多様性を有する細胞表面ポリンである。防御免疫は、米国における散在性ＭｅｎＢ疾患を引き起こす株の約８０％に対して防御する２０種の異なるＰｏｒＡ血清サブタイプを発現する株を用いて証明される必要があると推定されている。歴史的には、ＯＭＶワクチンは、１つのＰｏｒＡを含有し、ワクチン抗原と比較してアミノ酸配列において異種であるＰｏｒＡ配列を有する株に対する防御を示さなかった。したがって、ワクチンにより惹起される抗体が髄膜炎菌疾患株に対して有効であり得ることを証明するための代表的な試験株の選択は、タンパク質に基づくワクチンにとって最も重要である。
【０２３４】
前臨床および初期臨床試験においてＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって惹起された免疫血清は、ワクチンＦＨｂｐバリアントＡ０５およびＢ０１にとって異種であるＦＨｂｐサブファミリーＡおよびＢバリアントを含有する多様なＭｅｎＢ株を殺滅することができる広い殺菌抗体を示した。ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐカバー範囲の潜在的な幅の初期評価において、多様なＦＨｂｐバリアントを含む１００種のＭｅｎＢ単離物、地理的起源、および遺伝的背景を、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ免疫ウサギ血清を使用するｈＳＢＡにおいて試験した。試験した１００種の株のうち、８７種がこれらのｈＳＢＡにおいて殺滅された。殺滅されなかった１３種の株の分析により、所与のＭｅｎＢ株上でのＦＨｂｐ表面発現レベル閾値がｈＳＢＡ応答に影響することが示唆された。続いて、単離物がｈＳＢＡにおいて予測通り殺滅されたものよりも上のＦＨｂｐ表面発現レベル閾値が決定された。株感受性を決定する潜在的な因子のさらなる調査により、殺滅が、ＦＨｂｐ配列バリアント、多遺伝子座配列型、またはＰｏｒＡサブタイプとは大部分は無関係であることが見出された。
【０２３５】
臨床試験のために広い抗原多様性および疫学的多様性を有する株を選択するために、１２００種を超える侵襲性ＭｅｎＢ疾患単離物を、米国および欧州の研究室および健康機関から収集して、収集の時間が同時であるＭｅｎＢ単離物の有病率を提供した；全ての株が、ＦＨｂｐ遺伝子を含有していた。偏りのない手法を使用して、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ免疫原性試験における使用のための４つの抗原的および疫学的に多様な代表試験株を選択した。選択基準は、ワクチン抗原にとって異種であり、ＭｅｎＢ疾患単離物中でのＦＨｂｐの多様性を十分に反映するＦＨｂｐバリアントの発現、低いものから中程度のＦＨｂｐ表面発現レベル、および低いベースラインｈＳＢＡ血清陽性率を含んでいた。これらの４種のＭｅｎＢ試験株は、両方のＦＨｂｐサブファミリーに由来するＦＨｂｐバリアント（株［バリアント］：ＰＭＢ２００１［Ａ２２］、ＰＭＢ８０［Ａ５６］、ＰＭＢ２７０７［Ｂ２４］、およびＰＭＢ２９４８［Ｂ４４］；図１Ａを参照されたい）を発現する。
【０２３６】
４つの一次ＭｅｎＢ試験株を使用して生成された免疫原性データを補完するため、および４つの一次ＭｅｎＢ試験株に対する免疫応答が、ＭｅｎＢ疾患を引き起こす単離物によって発現されるＦＨｂｐバリアントの多様性に対する免疫応答を予測することを証明するために、１０種のさらなる試験株を使用するｈＳＢＡを開発した。１０種のさらなる試験株を、米国および欧州においてＭｅｎＢ疾患を引き起こす株に見出された優勢なＦＨｂｐバリアントを含むように選択した。ここで、本発明者らは、（ｉ）１０種のさらなる試験株を選択するために使用される戦略および基準を記載する、および（ｉｉ）４つの一次ＭｅｎＢ株を使用するｈＳＢＡによって測定された免疫応答が、１０種のさらなる試験株を使用して得られる応答を予測することを証明し、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって惹起される免疫応答の広いカバー範囲をさらに証明し、支持するデータを提示する。
【０２３７】
結果
さらなるＭｅｎＢ試験株の供給源および選択基準
１０種のさらなるＭｅｎＢ試験株のうちの９種は、１２６３種の侵襲性の疾患を引き起こすＭｅｎＢ株のコレクション（ＭｅｎＢ単離物コレクション）から得られたものであった。ＭｅｎＢ単離物コレクションについて、ＵＳ株は、集団の約１３％を包含する、Ａｃｔｉｖｅ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｃｏｒｅ  Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅサイト（２０００〜２００５）に由来するものであった。欧州単離物（２００１〜２００６）は、ノルウェー、フランス、チェコ共和国の公衆衛生研究所およびマンチェスターの健康保護局（イングランド、ウェールズ、および北アイルランドをカバーする）に由来するものであり、体系的に収集され（全ての第７または第８の単離物が国の参照研究所で受けた注文によって含まれていた）、その期間に侵襲性ＭｅｎＢ単離物の約１３％を占めていた。ＦＨｂｐバリアントＡ０７を発現する株は、スペインおよびドイツに由来するさらなる５５１種の疾患を引き起こすＭｅｎＢ株を含むＭｅｎＢ単離物コレクションの拡張（ｎ＝１８１４）から得られたものであった。拡張されたＭｅｎＢ単離物コレクションを、これらの株上でのＦＨｂｐの低い表面発現、高いベースライン血清陽性率、および容易に入手できる補体供給源の欠如のため、適切ではないＭｅｎＢ単離物コレクション中のＡ０７発現株として使用した。
【０２３８】
さらなるＭｅｎＢ試験株を選択するために使用された基準は、（ｉ）米国および／または欧州におけるＭｅｎＢ疾患を引き起こす株間でのＦＨｂｐバリアント有病率、（ｉｉ）ＭｅｎＢ一次試験株によって発現されるものとは異なる必要があるＦＨｂｐバリアント、（ｉｉｉ）株が、それが属するバリアント群を代表することを確保するために、対応するＦＨｂｐバリアント群について中央レベルにあるか、またはそれより下であるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＦＨｂｐ発現レベル、（ｉｖ）ｈＳＢＡにおける技術的適合性、および（ｖ）バリアント群に関する優勢なクローン複合体の考慮（優勢な複合体が存在した場合）であった。これらの基準を満たす株も、好適なヒト補体ロットの十分な入手可能性を含む、ｈＳＢＡにおいて技術的に適合することが必要であった（図２）。カットオフレベルより下である（すなわち、対応するＦＨｂｐバリアント群について中央レベルにあるか、またはそれより下である）発現レベルを示すそれぞれのＦＨｂｐバリアント群の株を無作為に選択したところ、必要とされる遺伝的、表現型、およびｈＳＢＡ開発基準を満たすＦＨｂｐバリアント群内の第１の株がさらなるＭｅｎＢ試験株になった。この方法の例外は、第２相試験におけるその以前の使用に基づいてＵＳ  ＦＤＡによって提供された指針と共同して、また、それを使用して選択された、ＦＨｂｐバリアントＢ０３を発現する株のために作られた。
【０２３９】
さらなるＭｅｎＢ試験株の特徴
１０種のさらなる選択されたＭｅｎＢ試験株は、４つの一次試験株におけるバリアント（Ａ２２、Ａ５６、Ｂ２４、Ｂ４４）と異なるＦＨｂｐバリアントＡ０６、Ａ０７、Ａ１２、Ａ１５、Ａ１９、Ａ２９、Ｂ０３、Ｂ０９、Ｂ１５、およびＢ１６を発現し、ワクチン抗原と比較して異なる配列を有する（表４）。４つの一次試験株によって発現される特定のバリアントは、ＭｅｎＢ単離物コレクション中の疾患を引き起こす単離物の４２．０％（５３０／１２６３）に存在し、１０種のさらなる試験株によって発現される特定のバリアントは、ＭｅｎＢ単離物コレクション中の疾患を引き起こす単離物のさらなる重複しない３８．８％（４９０／１２６３）に存在する。
【０２４０】
【表４】
2020128372.tif 000006
【０２４１】
免疫原性分析：１０種のさらなる株に関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を有する対象
４つの一次株を使用して、青少年および若年成人における２つの重要な第３相試験に参加する対象においてＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの２または３用量後の血清学的応答を評価した。１０種のさらなるｈＳＢＡ株に対する血清学的応答を、試験対象のサブグループにおいて評価した。大部分の対象は、それぞれの一次試験株（それぞれ、６４．０％〜９９．１％および８７．１％〜９９．５％）および１０種のさらなるＭｅｎＢ試験株（それぞれ、５１．６％〜１００．０％および７１．３％〜９９．３％）について、用量２の１カ月後および用量３の１カ月後に定量下限以上のｈＳＢＡ（ＬＬＯＱ；すなわち、株に応じて、１：８または１：１６に等しいｈＳＢＡ力価）を有していた（表５）。一次試験株およびさらなるＭｅｎＢ試験株について、ＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価を達成する対象の割合のベースラインからの実質的な増加が、第２のＭｅｎＢ−ＦＨｂｐ用量後にＭｅｎＢ−ＦＨｂｐレシピエント間で観察され（０、２、６カ月のスケジュール）、第３の用量後にさらなる増加が観察された。
【０２４２】
【表５−１】
2020128372.tif 000007
【０２４３】
【表５−２】
2020128372.tif 000008
【０２４４】
一次株およびさらなる株に関する陽性的中率
一次ＭｅｎＢ試験株および１０種のさらなるＭｅｎＢ試験株に関するワクチン誘導性ｈＳＢＡ応答間の関係を評価した（表６）。ＦＨｂｐサブファミリー内で、陽性的中率（ＰＰＶ）は、用量３の１カ月後に、多くの一次／さらなる株の対について８０％より高かった。かくして、一次試験株を使用するｈＳＢＡにおいて測定された免疫応答は、同じサブファミリー内のさらなる株に関する免疫応答を高度に予測した。用量２の１カ月後のＰＰＶは通常、用量３の１カ月後に観察されたものよりもわずかに低く、試験にわたって、サブファミリーＡおよびＢ株の対について、それぞれ、６１．６％〜１００％および７０．０％〜１００％の範囲であった。まとめると、全てのＰＰＶは、一次およびさらなる株のｈＳＢＡ応答を比較する場合、防御応答に関する高い予測可能性を示した。
【０２４５】
【表６−１】
2020128372.tif 000009
【０２４６】
【表６−２】
2020128372.tif 000010
【０２４７】
考察
防御の幅を決定するためのＭｅｎＢ−ＦＨｂｐワクチンの臨床評価の重要成分は、配列および発現可変性が、収集の時点で同時的であったＭｅｎＢ疾患を引き起こす株の多様性を代表する表面タンパク質抗原を有する試験株を使用するｈＳＢＡの開発であった。青少年および若年成人における第３相試験に記載されたように、全て、ワクチン抗原に対して異種であるＦＨｂｐバリアントを発現する４つの一次ＭｅｎＢ試験株に関するｈＳＢＡ応答データは、二価ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐワクチンが、多様な疾患を引き起こす髄膜炎菌株にわたって広いカバー範囲を提供することを強く示唆する。本明細書に記載される１０種のさらなるＭｅｎＢ試験株は、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐに関する支援的な免疫学的データを提供し、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐに対する免疫応答を測定するための４つの一次試験株の使用の妥当性をさらに確認する。４つの一次試験株について得られる応答は、さらなる１０種の試験株について得られる応答を予測するため、ｈＳＢＡにおいて一次株を評価することによって得られる免疫学的応答は、侵襲性ＭｅｎＢ疾患を引き起こす多様な株を代表する。
【０２４８】
ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐのライセンス交付試験における仮説試験により駆動される免疫原性評価のために、偏りのない手法を使用して、米国および欧州で収集された疾患を引き起こすＭｅｎＢのパネルから４つの一次ＭｅｎＢ試験株を選択した。同様の方法を使用して、試験株がＭｅｎＢ単離物の抗原多様性を代表することを確保するための特定の選択基準を考慮に入れて、１０種のさらなるＭｅｎＢ  ｈＳＢＡ試験株を選択した。集合的に、１４種のＭｅｎＢ試験株は、優勢な髄膜炎菌ＦＨｂｐの大部分を代表し、ＦＨｂｐバリアントは、米国および欧州における循環している侵襲性の疾患を引き起こす単離物の約８０％に対応する。
【０２４９】
陽性的中率分析を使用して、同じサブファミリー内のＦＨｂｐを発現する一次およびさらなる試験株間の、ｈＳＢＡにより測定された免疫応答の関連を決定した。全てのＰＰＶ分析は、さらなる株に対して観察される防御応答に関する一次株に対する防御応答の高い予測可能性を示した。これらのＰＰＶ分析は、４つの一次ＭｅｎＢ試験株に対して観察される応答が、ワクチン抗原バリアントとは異なるさらなる配列多様性ＦＨｂｐバリアントを発現する他の疾患を引き起こすＭｅｎＢ株に対する応答を代表することを示す。
【０２５０】
４つの一次試験株および１０種のさらなるＭｅｎＢ試験株に対する、ｈＳＢＡによって測定されるＭｅｎＢ−ＦＨｂｐにより惹起される応答を、個々のワクチンレシピエントに由来する血清を使用して評価した。機能的な殺菌性抗体を有するワクチン接種された対象の割合を決定することにより、プールされた血清を使用しては可能ではない、個体レベルでのＭｅｎＢ−ＦＨｂｐカバー範囲の幅の評価を決定した。４つの一次ＭｅｎＢ試験株を選択して、ＭｅｎＢ疾患を引き起こすＩＭＤの多様性を表し、かくして、ｈＳＢＡを使用してＭｅｎＢ−ＦＨｂｐに関する潜在的なカバー範囲の幅を支持した。１：４以上のｈＳＢＡ力価を有する個体の応答は、防御の許容される相関であり、髄膜炎菌ワクチン効能の代用である。かくして、応答は、ワクチンカバー範囲の幅の包括的かつ生物学的に予測的な評価を提供する。ワクチンカバー範囲の幅を記載するための４つの一次ＭｅｎＢ試験株に対するｈＳＢＡ応答の関連性は、欧州および米国に由来する多様かつ同時的なＭｅｎＢアウトブレイク株に対して、ならびに非ＭｅｎＢ疾患を引き起こす株（すなわち、髄膜炎菌血清群Ｃ、Ｙ、ＷおよびＸ）に対しても観察される、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによる防御殺菌応答の証明によって支持される。
【０２５１】
別の方法である、酵素結合免疫吸着アッセイに基づく髄膜炎菌抗原タイピングシステム（ＭＡＴＳ）を使用して、ＭｅｎＢ−４Ｃのワクチンカバー範囲を予測した。しかしながら、ＭＡＴＳは、ＭｅｎＢ−４Ｃに特異的な抗原のカバー範囲を予測するに過ぎず、異なる抗原組成を有する他のワクチンのカバー範囲を評価するには有用ではない。具体的には、ＭＡＴＳは、殺菌活性よりはむしろ、抗原発現を測定するものであり、それぞれの抗原に関する参照株と比較した相対効力として報告される。成分抗原のいずれか１つに関する相対効力がＭｅｎＢ−４Ｃ免疫血清の殺菌活性と等しい場合（すなわち、正の殺菌閾値を達成する）、その株は殺滅に対して感受性であると考えられる。しかしながら、ワクチン接種された個体に由来する血清はＭＡＴＳにおいて使用されないため、アッセイは、免疫化に応答して１：４以上のｈＳＢＡ力価（すなわち、防御の相関）を達成する集団の割合を予測することができない。
【０２５２】
注目すべきことに、ｈＳＢＡの実施における制限が存在する。例えば、ｈＳＢＡは労働集約的であり、特に、より多数の株および／または血清を評価しようとする場合、大量の血清およびアッセイ適合性補体を必要とし得る。さらに、ｈＳＢＡにおいて使用されるアッセイ試薬および株の性能における研究室間の差異は、ワクチン間の応答の比較およびカバー範囲の幅の評価を制限する。ＰＰＶ分析の既知の制限は、有病率に対する応答の規模の依存性（すなわち、この設定では、さらなる株に関してＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡを達成する対象の割合）である。しかしながら、さらなる株に対する一定範囲のワクチン接種後応答が存在したが（用量２後および用量３後、１カ月で）、ＰＰＶは均一に高かったことは、この分析において注目すべきことである。
【０２５３】
総合すると、１０種のさらなるＭｅｎＢ  ｈＳＢＡ試験株から得られた免疫原性データは、４つの一次ＭｅｎＢ  ｈＳＢＡ試験株から得られた応答データを支持し、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐによって提供されるＭｅｎＢ単離物の広いカバー範囲を確認する。これは、防御の認識された代用（ｈＳＢＡ）と共に、ワクチン抗原の配列および発現に関してＭｅｎＢ株の疫学を使用した、ＭｅｎＢワクチンの惹起された免疫応答の正確な評価を適用し、この知識を使用して、ワクチンライセンス交付をもたらした、初めての研究である。
【０２５４】
方法
ＦＨｂｐ表面発現の定量
全ての株について、ＦＨｂｐ表面発現を、両方のＦＨｂｐサブファミリーに共通の保存されたＦＨｂｐエピトープのモノクローナル抗体（ＭＮ８６−９９４−１１）認識を使用するフローサイトメトリーアッセイであるＭＥＡＳＵＲＥアッセイによって定量した。ＭＥＡＳＵＲＥアッセイの詳細は、以前に記載されている。それぞれのＦＨｂｐバリアント群について採用されたカットオフレベルは、２５．２％の相対標準偏差の精度推定を使用する、観察された中央平均蛍光強度＋１標準偏差であった。
【０２５５】
免疫原性分析
１０種のさらなるＭｅｎＢ試験株のそれぞれを、ｈＳＢＡにおいて使用して、ＭｅｎＢ−ＦＨｂｐの２つの重要な第３相試験に参加する対象に由来する血清を試験した。それぞれの試験に由来する合計９００人の対象を、３つのサブセット（それぞれｎ＝３００）に分割した；１０種のさらなる試験株を、これらのサブセットにわたって割り当てて、２つのサブセットがそれぞれ、３つの試験株を含み、１つのサブセットが４つの試験株を含むようにした。それぞれの試験に由来する１５０以上の評価可能なｈＳＢＡの結果が得られることを確保するために、サブセットは３００人の対象に由来する試料を含んでいた。第３相臨床試験の血清を使用するｈＳＢＡによって測定された免疫応答は、株に応じて、１：８または１：１６に等しいｈＳＢＡ力価である、アッセイのＬＬＯＱに基づくものであった。
【０２５６】
陽性的中率分析
ＦＨｂｐサブファミリー内のそれぞれの一次／さらなる株の対に関するＰＰＶを、一次株応答者（一次株についてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価）の総数のうちの、さらなる株に応答する（さらなる株についてＬＬＯＱ以上のｈＳＢＡ力価）対象の割合と定義した。ＰＰＶ分析は、４つの一次株に対する観察されたｈＳＢＡ応答が、同じサブファミリーに由来するＦＨｂｐを発現するさらなる株に対する免疫応答を予測するかどうかを評価した。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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