(57)【要約】【課題】  インスリングラルギン１００Ｕの製剤と曝露および活性で等価な、高単位インスリングラルギンを含有する水性医薬製剤、およびそれを使用する患者のＩ型およびII型糖尿病を治療する方法の提供。【解決手段】  ２００−１０００Ｕ／ｍＬ［２００−１０００ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］のインスリングラルギンを含むが、ただし製剤のインスリングラルギンの濃度は６８４Ｕ／ｍＬではない水性医薬製剤、およびその使用。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
３００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン［３００ＩＵヒトインスリンと等モル］を含む水性医薬製剤。
【請求項２】
亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセリン、ポリソルベート２０およびナトリウムを含む群より選択される１種またはそれ以上の賦形剤を含む請求項１に記載の水性医薬製剤。
【請求項３】
９０μｇ／ｍＬの亜鉛、２.７ｍｇ／ｍｌのｍ−クレゾールおよび２０ｍｇ／ｍｌのグ
リセリン８５％を含む、請求項２に記載の水性医薬製剤。
【請求項４】
９０μｇ／ｍＬの亜鉛、２.７ｍｇ／ｍｌのｍ−クレゾール、２０μｇ／ｍＬのポリソ
ルベート２０および２０ｍｇ／ｍｌのグリセリン８５％を含む、請求項２に記載の水性医薬製剤。
【請求項５】
ｐＨが３.４〜４.６である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項６】
ｐＨが４である、請求項５に記載の水性医薬製剤。
【請求項７】
ｐＨが４.５である、請求項５に記載の水性医薬製剤。
【請求項８】
患者のＩ型およびII型糖尿病を治療するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項９】
患者のＩ型およびII型糖尿病の治療において、長時間作用型インスリン曝露の持続時間を延長するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１０】
長時間作用型インスリンによる患者のＩ型およびII型糖尿病の治療において、低血糖の発生を減少させるための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１１】
患者のＩ型およびII型糖尿病の治療において、ピークレス長時間作用型基礎インスリンを与えるための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１２】
Ｉ型糖尿病およびII型糖尿病の治療のための医薬品の製造のための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性医薬製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００−１０００Ｕ／ｍＬ［２００−１０００ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］のインスリングラルギンを含む水性医薬製剤であるが、ただし該製剤の濃度が６８４Ｕ／ｍＬのインスリングラルギンではない、水性医薬製剤、およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリングラルギンは、３１B−３２B−Ｄｉ−Ａｒｇ  ヒトインスリン（ヒトインスリンのアナログ）であり、さらにＡ２１位のアスバラギンがグリシンでさらに置換されている。
【０００３】
ランタス（登録商標）は、単回投与の皮下注射後、２４時間の基礎インスリン供給を提供するインスリングラルギンを含有するインスリン製品である。
【０００４】
ランタス（登録商標）の糖動的効果は、皮下注射部位からのインスリングラルギンの遅延吸収および予測可能な吸収によって明らかなピークを示さずにスムーズな２４時間の濃度および作用プロファイルがもたらされるという点で現在市販されている他のインスリン製品と区別される。ランタス（登録商標）は、長時間作用型インスリン製品についての医療的な必要性を満たすために開発され、２４時間にわたり可能な限りスムーズな基礎インスリンプロファイルによって正常または正常に近い血中グルコースコントロールを得るために一日一回の注射として投与することができる。このような製剤は、一日中血中グルコースの良好なコントロールを提供し、その上より明らかな「ピーク」作用を持つ他のインスリン製剤で見られる低血糖症をもたらす傾向を最小にする。
【０００５】
多数の患者、特に肥満によってインスリン抵抗性が増加している患者は、血中グルコースを調節するために投与量の大きいものを用いている。例えば、１００単位（１００Ｕ）の用量は、１ｍＬのランタス（登録商標）Ｕ１００の注射が必要であり、これはいくらかの不快感を覚える場合がある；ランタス（登録商標）Ｕ１００  １ｍＬには、１００Ｕ（３．６３７８ｍｇ）のインスリングラルギンが含まれている。注入量を減らすために、１ｍＬあたり３００Ｕのインスリングラルギンを含む製剤が開発されてきた。本発明はインスリングラルギンＵ３００の製剤に限定されないが、本明細書中に記載される臨床試験は、インスリングラルギン３００Ｕ製剤を用いて行った；インスリングラルギンＵ３００  １ｍＬあたり３００Ｕ（１０．９１３４ｍｇ）のインスリングラルギンが含まれている。この製剤は、３分の１の注入量で同じ単位数のインスリングラルギンを患者に注入することができる。
【０００６】
インスリングラルギン製剤Ｕ１００とＵ３００は両方同じインスリン曝露および同じ効果、すなわちタイムプロファイルを提供するはずであると考えられた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
試験（Ｔ）の治験薬であるインスリングラルギンＵ３００の曝露および活性を、認可されている参照（Ｒ）製品であるランタスＵ１００の曝露および活性と等価なものについて、正常血糖クランプにて非肥満体の健常な被験者で試験した。インスリングラルギンの作用の長期的な持続時間を評価するための、皮下投与３０時間後を選択した。皮下投与後のインスリングラルギン濃度のタイムプロファイルより曝露を評価し、活性はインスリン１単位当たりのグルコース利用として同時に評価した。
【０００８】
反復デザイン（ｒｅｐｌｉｃａｔｅ  ｄｅｓｉｇｎ）により、限定数の患者で、ＦＤＡガイドライン「Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ
Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ」に推奨されているような生物学的同等性および変動性（ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ）を評価することができた。
【０００９】
それぞれの臨床試験により、曝露および活性の等価を確立することが期待された。
【００１０】
０．４Ｕ／ｋｇの用量を本試験のために選択した；この量は、患者における平均基礎インスリン用量に対応している。非肥満体の健常な被験者において、この用量は、正常血糖クランプの設定で測ることのできる血清インスリン濃度のかなりの上昇、持続的なグルコース低下効果をもたらす。
【００１１】
ガイドラインで支持される反復デザインは、無作為化プランによって割り当てられる予め定義された４通りのクロスオーバーシーケンス（ＲＴＴＲまたはＴＲＲＴ）で、いずれかのＩＰ（Ｒ：ランタス（登録商標）Ｕ１００、Ｔ：インスリングラルギンＵ３００）の２つの反復単回投与を必要とする。これは、４つの期間（Ｐ）１〜４において実行された。結果として、各被験者は、２つの向かい合う臍周囲領域を交互に０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００（Ｒ）およびインスリングラルギンＵ３００（Ｔ）の２つの反復単回皮下投与を受けた。
【００１２】
４〜１８日間の休薬期間は各投薬日から分離される。休薬期間の長さは、参加者と治験責任医師の両方が彼らのニーズに合わせ個々に変える。経験により、４日間というのは参加者に１週間あたりのクランプを１度にできる回復のための最小期間を構成し、一方１８日間というのは、クランプ期間の間に、被験者が試験に関係のない義務を自由に果たすことを可能にする３週間の休止期間を再び与える。
【００１３】
正常血糖クランプ来院の前に、ＳＣＲ（スクリーニング来院）において被験者は適格性についてスクリーニングされ、ＥＯＳ（試験終了時）来院において被験者は正常な健康状態を保障するための最終試験に参加する。スクリーニングおよびＰ１は２１日間より長く離してはならないが、ＥＯＳ来院は次に続く週であるＰ４のＤ１と同じ週日（すなわち、さらなる４日後）より前、かつＰ４のＤ２後の２週間よりも後（すなわち、さらなる１４日後）にはしなかった。
【００１４】
これは、計４回の反復投与を伴う単回投与試験である。ＩＰの効果は約２４時間続き、このことが、被験者が２日間施設に拘束される理由である。被験者は治療に４度曝露された。
【００１５】
本試験の主要な目的は、正常血糖クランプ技術を用いて、バイオアベイラビリティ（曝露）および生物有効性（活性）におけるランタス（登録商標）Ｕ１００（市販製剤）およびインスリングラルギン  Ｕ３００の平均生物学的同等性（ＡＢＥ）を評価することであった。
【００１６】
本試験の二次的な目的は、インスリングラルギンＵ３００の安全性および忍容性を評価することであった。
【００１７】
上述のように、Ｕ１００とＵ３００両方のインスリングラルギン製剤は、同じインスリン曝露およびインスリン効果を提供すると予測された。しかしながら驚いたことにインスリン曝露および効果は同じではないことが示された。インスリングラルギンＵ１００およびインスリングラルギンＵ３００はバイオアベイラビリティ（曝露）および生物有効性（
活性）において等価ではない。インスリングラルギンＵ３００投与後の曝露および活性は同量（０．４Ｕ／ｋｇ）のインスリングラルギンＵ１００の投与後の曝露および活性と比較した場合約４０％低かった。
【００１８】
しかし、インスリングラルギンＵ３００は、インスリングラルギンＵ１００よりも、基礎インスリンに望ましいよりフラットなＰＫ（曝露）およびＰＤ（活性）プロファイルを示した。健常な被験者に対する同じ皮下投与後の、インスリングラルギンＵ１００製剤とインスリングラルギンＵ３００製剤との間の曝露および活性におけるこれらの驚くべきかつ予測できない差異は、以下の図に効果的に示されている。注目すべきは、同時に血中グルコースが一定になったということである。
【００１９】
インスリングラルギンの血中グルコースの低下効果は、健常な正常血糖のビーグル犬においてさらに評価された。インスリングラルギン濃度の増加に伴い、作用の平均時間はそれぞれ６．８ｈ（Ｕ１００）から７．６９ｈ（Ｕ３００）まで増加した。
【００２０】
イヌにおいて、１００から３００Ｕ／ｍＬまでグラルギン濃度を増加することによって、血中グルコース低下の時間作用プロファイルは、よりフラットかつ延長された活性に向けて変化した。イヌにおける現在のデータはヒトにもあてはまり、インスリングラルギンのより高い薬物濃度がプロファイルおよび作用のより長い持続時間に積極的に関与することを示している。
【００２１】
さらに、１００Ｕ／ｍＬ、３００Ｕ／ｍＬ、５００Ｕ／ｍＬ、７００Ｕ／ｍＬおよび１０００Ｕ／ｍＬの濃度を有するインスリングラルギン製剤の沈殿物を顕微鏡で調べた。これらの研究により、濃度の増加に伴って明らかにより大きい粒子がもたらされるという沈殿物特性の違いが明らかとなった。
【００２２】
さらに、溶解特性に関しては、より高い濃度のインスリングラルギン製剤の影響がインビトロ試験系を用いることによって調査される。それを行うために、沈殿の研究が、インビボ条件を模擬するｐＨ７．４のリン酸緩衝液を用いて実施される。
【００２３】
沈殿したインスリンの上清は、インスリングラルギン含有量を測定するためにＨＰＬＣ技術を用いて試験される。
【００２４】
ＷＯ２００８／０１３９３８  Ａ２は、６８４Ｕ／ｍＬの濃度でインスリングラルギンを含有する水性医薬製剤を開示している。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明はインスリングラルギンＵ３００製剤に限定されず、本明細書中で詳述しているような他のより高い濃度のインスリングラルギン製剤を用いても有効であるが、本明細書中に記載される臨床試験は、インスリングラルギンＵ３００製剤を用いて実施した。
【００２６】
１ｍＬのインスリングラルギンＵ３００製剤は、１０．９１３ｍｇの２１A−Ｇｌｙ−
３０Bａ−Ｌ−Ａｒｇ−３０Bｂ−Ｌ−Ａｒｇ  ヒトインスリン［３００ＩＵのヒトインスリンと等モル］、９０μｇの亜鉛、２．７ｍｇのｍ−クレゾール、２０ｍｇのグリセリン
８５％、ＨＣｌおよびＮａＯＨを含有し（ｐＨ４．０）；比重は１．００６ｇ／ｍＬである。
【００２７】
しかしながら、賦形剤の種類およびそれらの濃度に関しては変更が可能である。
【００２８】
この医薬製剤は、２００−１０００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン［２００−１００
０ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］（この中で、当該製剤の濃度は６８４Ｕ／ｍＬではない）、好ましくは２５０−５００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン［２５０−５００ＩＵ
ヒトインスリンと等モル］、より好ましくは２７０−３３０Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン［２７０−３３０ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］、およびさらにより好ましくは３００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン［３００ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］を含有する。
【００２９】
界面活性剤、例えば、とりわけ非イオン性界面活性剤を医薬製剤に加えることができる。特に、調剤用に市販されている界面活性剤が好ましく、例えば以下のようなものである：グリセリン、ソルビトールなどのような高アルコールの部分エステルおよびエーテルならびに脂肪酸エステルおよびエーテル（Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、特にＴｗｅｅｎ（登録商標）２０およびＴｗｅｅｎ（登録商標）８０、Ｍｙｒｊ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標））、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）またはポロキサマー。これらの界面活性剤は、５−２００μｇ／ｍｌ、好ましくは５−１２０μｇ／ｍｌ、そして特に好ましくは２０−７５μｇ／ｍｌの濃度で医薬組成物中に存在している。
【００３０】
この製剤は、防腐剤（例えば、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、パラベン）、等張化剤（isotonic agent）（例えば、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、トレハロース、塩化ナトリウム、グリセリン）、緩衝物質、塩、酸およびアルカリをさらに含んでよく、さらなる賦形剤も含んでよい。これらの物質は各場合に個々にかまたは混合物として存在し得る。
【００３１】
グリセリン、デキストロース、ラクトース、ソルビトールおよびマンニトールは、１００−２５０ｍＭの濃度で、ＮａＣｌは１５０ｍＭまでの濃度で医薬製剤中に存在し得る。緩衝物質（例えば、リン酸エステル、酢酸エステル、クエン酸エステル、アルギニン、グリシルグリシンまたはＴＲＩＳ（すなわち２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）緩衝液および対応する塩）は、５−２５０ｍＭ、好ましくは１０−１００ｍＭの濃度で存在し得る。さらに賦形剤はとりわけ塩類またはアルギニンであり得る。
【００３２】
この製剤の亜鉛含有量は、０−１０００μｇ／ｍＬ、好ましくは２０−４００μｇ／ｍＬの亜鉛、最も好ましくは９０μｇ／ｍＬの存在量によって到達する濃度範囲である。この亜鉛は塩化亜鉛の形態で存在していてもよいが、その塩は塩化亜鉛に限定されない。
【００３３】
この医薬製剤において、グリセリンおよび／もしくはマンニトールは、１００−２５０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在し得、ならびに／またはＮａＣｌは、１５０ｍｍｏｌ／Ｌまでの濃度で存在し得る。
【００３４】
この医薬製剤において、緩衝物質は、５−２５０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で存在し得る。
【００３５】
本発明のさらなる目的は、例えばインスリンの放出を遅らせる塩のようなさらなる添加剤を含む医薬品インスリン製剤である。このような遅延放出インスリンと上記の製剤との混合物は、本発明に含まれる。
【００３６】
本発明のさらなる目的は、このような医薬製剤の製造方法である。これらの製剤を製造するために、これらの成分を水に溶解し、ＨＣｌおよび／またはＮａＯＨを用いてｐＨを調製する。同様に、本発明のさらなる目的は、糖尿病の治療のためのこのような製剤の使用である。
【００３７】
本発明のさらなる目的は、インスリン、インスリンアナログもしくはインスリン誘導体
またはこれらの製剤の製造工程の間の、安定剤としての界面活性剤の使用または添加である。
【００３８】
本発明はさらに、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ１）またはそのアナログもしくは誘導体、あるいはエキセンジン−３もしくは−４またはそのアナログもしくは誘導体、好ましくはエキセンジン−４をもさらに含む、上記の製剤に関する。
【００３９】
本発明はさらに、エキセンジン−４のアナログが以下からなる群より選択される、上記の製剤に関する：
Ｈ−ｄｅｓＰｒｏ36−エキセンジン−４−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ4−ＮＨ2および
Ｈ−ｄｅｓ（Ｐｒｏ36,37）−エキセンジン−４−Ｌｙｓ5−ＮＨ2、
またはこれらの薬理学的に許容される塩。
【００４０】
本発明はさらに、エキセンジン−４のアナログが以下からなる群より選択される、上記の製剤に関する：
ｄｅｓＰｒｏ36[Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−２（１−３９）
、
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１
−３９）および
ｄｅｓＰｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14Ｔｒｐ（Ｏ2）25，ＩｓｏＡｓｐ28］エキセンジン−
４（１−３９）、
またはこれらの薬理学的に許容される塩。
【００４１】
本発明はさらに、ペプチド−Ｌｙｓ6−ＮＨ2がエキセンジン−４のアナログのＣ末端に結合している、前出の段落で記載されたような製剤に関する。
【００４２】
本発明はさらに、エキセンジン−４のアナログが以下からなる群より選択される、上記の製剤に関する：
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌ
ｙｓ6−ＮＨ2
ｄｅｓ  Ａｓｐ28Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン
−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5  ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキ
センジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキセンジン
−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ａｓｐ28］エキ
センジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−  ｄｅｓ  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセ
ンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン
−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４
（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｍｅｔ（Ｏ）14  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ  36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ  37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓ
ｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14
，Ａｓｐ28］  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5  ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14
，Ａｓｐ28］  エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36［Ｍｅｔ（Ｏ）14、Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ6−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ａｓｐ28  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14、Ｔｒｐ（Ｏ2）25］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36,Pro37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14、Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14
，Ａｓｐ28］  エキセンジン−４（１−３９）−ＮＨ2、
ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14、Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−（Ｌｙｓ）6−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36,Pro37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14、Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｓｎ−（Ｇｌｕ）5−ｄｅｓ  Ｐｒｏ36，Ｐｒｏ37，Ｐｒｏ38［Ｍｅｔ（Ｏ）14
、Ｔｒｐ（Ｏ2）25，Ａｓｐ28］  エキセンジン−４（１−３９）−（Ｌｙｓ）6−ＮＨ2
、
またはその薬理学的に許容される塩。
【００４３】
本発明はさらに、Ａｒｇ34、Ｌｙｓ26（Ｎε（γ−グルタミル（Ｎα−ヘキサデカノイル）））  ＧＬＰ−１（７−３７）［リラグルチド］またはその薬理学的に許容される塩をさらに含む、上記の製剤に関する。
【００４４】
一実施態様において、本発明は２００−１０００Ｕ／ｍＬ［２００−１０００ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］、好ましくは２００Ｕ／ｍＬ〜６５０Ｕ／ｍＬ、さらに好ましくは７００Ｕ／ｍＬ〜１０００Ｕ／ｍＬ、より好ましくは２７０−３３０Ｕ／ｍＬの範囲で
、そして最も好ましくは３００Ｕ／ｍＬの濃度でインスリングラルギンを含む水性医薬製剤に関するが、ただし該製剤のインスリングラルギンの濃度は、６８４Ｕ／ｍＬではない。
【００４５】
さらに、その製剤は、エキセンジン−４のアナログ、例えば、リキシセナチド（ｌｉｘｉｓｅｎｔａｔｉｄｅ）、エクセナチドおよびリラグルチドをも含み得る。これらのエキセンジン−４アナログは、インスリングラルギン１Ｕあたり０．１μｇ〜１０μｇ、好ましくはインスリングラルギン１Ｕあたり０．２〜１μｇ、およびより好ましくはインスリングラルギン１Ｕあたり０．２５μｇ〜０．７μｇの範囲でその製剤中に存在する。リキシセナチドが好ましい。
【００４６】
さらに、その水性医薬製剤は、亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセリン、ポリソルベート２０およびナトリウムからなる群より選択される１種またはそれ以上の賦形剤を含み得る。具体的には、その水性医薬製剤は、９０μｇ／ｍＬの亜鉛、２．７ｍｇ／ｍｌのｍ−クレゾールおよび２０ｍｇ／ｍｌのグリセリン  ８５％を含み得る。場合により、その水性医薬製剤は、２０μｇ／ｍＬのポリソルベート２０を含み得る。
【００４７】
その水性医薬製剤のｐＨは、μμ３．４〜４．６の間、好ましくは４または４．５である。
【００４８】
本発明は、Ｉ型およびII型糖尿病を治療する方法に関し、該患者に本発明の水性医薬組成物を投与することを含む。
【００４９】
開示された種々の濃度範囲で好ましいのは３００Ｕ／ｍＬの濃度であり、好ましいインスリンアナログはインスリングラルギンである。さらにその水性医薬製剤は亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセリン、ポリソルベート２０およびナトリウムならびにそれらの混合物をも、本発明の水性医薬製剤に関して本明細書中で開示した範囲で含むことができる。好ましい実施態様において、その水性医薬製剤はインスリングラルギン１Ｕあたり０．１μｇ〜１０μｇのリキシセナチドも含む。
【００５０】
このインスリンは、１日１度投与されるのが好ましいが、必要に応じて１日に２度投与することも可能である。投薬の必要性は、正常または許容可能な血中グルコース濃度の達成によって決定される個々の患者の必要性による。
【００５１】
本発明はまた、該患者に本発明の水性医薬製剤を投与することを含む、Ｉ型およびII型糖尿病患者の治療においてインスリングラルギンの曝露の持続時間を延長する方法に関する。開示された種々の濃度範囲の中で好ましいのは、３００Ｕ／ｍＬの濃度である。さらにその水性医薬製剤は亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセリン、ポリソルベート２０およびナトリウムならびにそれらの混合物をも、本発明の水性医薬製剤に関して本明細書中で開示した範囲で含むことができる。好ましい実施態様において、その水性医薬製剤はインスリングラルギン１Ｕあたり０．１μｇ〜１０μｇのリキシセナチドも含む。
【００５２】
本発明はまた、インスリングラルギンを用いて、Ｉ型およびII型糖尿病患者の治療において低血糖の発生を低減する方法にも関し、該患者に本発明の水性医薬製剤を投与することを含む。開示された種々の濃度範囲の中で好ましいのは、３００Ｕ／ｍＬの濃度である。さらにその水性医薬製剤は亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセリン、ポリソルベート２０およびナトリウムならびにそれらの混合物をも、本発明の水性医薬製剤に関して本明細書中で開示した範囲で含むことができる。好ましい実施態様において、その水性医薬製剤はインスリングラルギン１Ｕあたり０．１μｇ〜１０μｇのリキシセナチドも含む。
【００５３】
本発明はまた、Ｉ型およびII型糖尿病患者の治療において、インスリングラルギンによってピークのない長時間作用型基礎インスリンを提供する方法に関し、該患者に本発明の水性医薬製剤を投与することを含む。開示された種々の濃度範囲の中で好ましいのは、３００Ｕ／ｍＬの濃度である。さらにその水性医薬製剤は亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセリン、ポリソルベート２０およびナトリウムならびにそれらの混合物をも、本発明の水性医薬製剤に関して本明細書中で開示した範囲で含むことができる。好ましい実施態様において、その水性医薬製剤はインスリングラルギン１Ｕあたり０．１μｇ〜１０μｇのリキシセナチドも含む。
【００５４】
Ｉ型糖尿病およびII型糖尿病の治療における前出の項目のいずれかに従う水性製剤の使用。
【００５５】
本願を、いくつかの実施例を用いて以下に説明するが、これらの例は決して限定することを目的としていない。
【００５６】
実施例１：プロトコルの記載
本試験は、６度の来院での健常な被験者における単一施設、無作為化、対照群あり（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）、単盲検、４期、２治療、２−シーケンスクロスオーバー試験であった：
来院１：スクリーニング（ＳＣＲ）
来院２〜５、期間（Ｐｅｒｉｏｄ：Ｐ）１−４：治療、正常血糖クランプ期間
来院６：試験終了時（ＥＯＳ）
被験者に、０．４Ｕ／ｋｇのインスリングラルギンＵ１００の単回皮下用量を投与、および代替的にはインスリングラルギンＵ３００を、２点の向かい合う臍周囲領域（左、右、左、右）の部位に異なる４日で注射した。この治験薬を治療ＲとＴを２シーケンスで反復（ＲＴＴＲまたはＴＲＲＴ）して、Ｐ１〜Ｐ４期に投与した。４〜１８日間の休薬期間により各投薬日を離した。
Ｒ：０．４Ｕ／ｋｇ−体重のインスリングラルギンＵ１００（市販の製剤；基準薬）
Ｔ：０．４Ｕ／ｋｇ−体重のインスリングラルギンＵ３００（試験薬）
Ｐ１は、ＳＣＲ後多くとも３〜２１日に行わねばならない。ＥＯＳ来院は、Ｐ４後の４〜１４日になされなければならない。
【００５７】
Ｐ１〜Ｐ４の期間中、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）を被験者に連結して、血中グルコースの測定とグルコース注入率の調整を行った。血中グルコース濃度およびグルコース注入率（ＧＩＲ）を、当該治験薬の皮下注射前の９０分間（ベースライン期間）、および治験薬投与後の３０時間にわたってモニタリングした。治験薬投与の６０分、３０分および５分前に測定された３つの空腹時血中グルコース値の平均値として決定された個々の空腹時血中グルコース濃度を５％下回る血中グルコース濃度を維持するために、２０％のグルコース液剤の注入を開始した。ＧＩＲのプロファイルが得られた。血液サンプルを、正常血糖クランプ期間中に所定の回数採取し、血清インスリングラルギン濃度を決定した。グルコースクランプ期間中、被験者は水道水を除いて絶食状態とした。
【００５８】
個体の本試験の所要期間は、ＳＣＲからＥＯＳ来院の間が最大１３週間までの見込みであった。
【００５９】
このプロトコルを、検討および書面による承認のために、個々の倫理委員会および／または治験審査委員会に提出した。このプロトコルは、１８ｔｈ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ（ヘルシンキ、１９６４）の勧告および全ての準拠する改正事項を満たしている。このプロトコルはまた、本試験が行なわれたドイツの法律、条例、ならびに全ての準拠するガイドラインをも満たしていた。全ての試験関連手順を行なう前に、イ
ンフームドコンセントを得た。
【００６０】
実施例２：被験者の選択
２０名の試験完了者を確保するために、２４人の健常な被験者に対して治療するように計画した。
【００６１】
以下の基準の全てを満たしている被験者が、本試験への登録を考慮された：
デモグラフィー
・１８歳〜５０歳の年齢のいずれかの性別である被験者：
・体重は５０ｋｇ〜１１０ｋｇであり、ボディマス指数（ＢＭＩ）は１８〜２８ｋｇ／ｍ2である；
健康状態
・以下の包括的な臨床評価（詳細な病歴および完全な身体検査）により健常であると証明されていること；
・少なくとも３ヶ月間、喫煙していないこと；
・１２誘導心電図、およびバイタルサイン、但し、治験責任医師が、異常を臨床上無関係であると判断した場合を除く；
・背臥位で５分休止後の正常バイタルサイン：
９５ｍＭＨｇ≦収縮期血圧≦１４０ｍＭＨｇ；
４５ｍＭＨｇ≦拡張期血圧≦９０ｍＭＨｇ；
４０ｂｐｍ≦心拍数≦１００ｂｐｍ；
・正常な１２誘導ＥＣＧ；１２０ｍｓ＜ＰＲ＜２２０ｍｓ、ＱＲＳ＜１２０ｍｓ、ＱＴｃ≦４３０ｍｓ
（女性の場合：ＱＴｃ≦４５０ｍｓ）；
・健常な被験者の各臨床検査項目は正常範囲内にあること、但し、治験責任医師が異常を臨床的に無関係であると判断する場合を除く；
しかしながら、血清レアチニンおよび肝酵素（ＡＳＴ、ＡＬＴ）は、臨床検査ノルムの上限を厳密に下回らなければならない；
・空腹時血清グルコース（≦１００ｍｇ／ｄＬ）およびグルコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ≦６．１％）として定義される正常代謝コントロールを有すること；
・被験者は、本試験に参加する前に、少なくとも４週間、日常的に用いている処方薬治療を中止せねばならない；
【００６２】
女性の被験者についての義務
・妊娠する可能性があり（閉経前および外科手術による不妊処理を行っていないかまたは閉経後２年未満として定義される）、性的に活発である女性被験者は、適切な避妊をおこなわなければならない。適切な避妊とは、インプラント、経口避妊薬またはホルモン剤と組み合わせた注射剤、ＩＵＤ（子宮内避妊器具）のような高度に効果的な避妊法（パールインデックス＜  １％）として定義される。本臨床試験の目的のための閉経後とは２年以上の無月経または外科的に不妊であることを含む；
・女性被験者は、前試験スクリーニングの間、および最初のクランプ前に、尿β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｂｅｔａ−ＨＣＧ）妊娠テストが陰性でなければならない。
【００６３】
規則（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）
・本試験に関する全ての手順の前に書面によるインフォームドコンセントを行う；
・健康保険制度でカバーされており、そして／または生物医学研究に関して施行された国内法令の勧告を遵守している；
・いかなる行政または法的な監督下にはない。
【００６４】
以下の項目のいずれかにあてはまる被験者は、本試験に含められていない：
病歴および臨床状態
・臨床上関連のある心血管、肺、胃腸、肝臓、腎臓、代謝、血液、神経、精神、全身性、眼または感染の疾患のいずれかの病歴または存在；いずれかの急性感染性疾患または急性疾患の兆候；
・薬物アレルギーの存在もしくは病歴、または医師によりアレルギー性疾患と診断され治療を受けた；
・キサンチン塩基を含む飲料の過剰摂取（＞４カップまたはグラス／日）；
・以下からの禁忌（正常範囲に従う−値が正常範囲外である場合は、治験責任医師がこの異常値が臨床的に無関係と理解した場合、その被験者は含まれ得る）：
−病歴／手術歴および身体検査
−臨床検査（血液、臨床化学およびディップスティックによる検尿）
−標準的な１２誘導心電図
−血圧および心拍数
・試験への参加前４週中の所定の薬物で継続中の治療または所定の薬物で定期的な治療
・本試験の目的を妨げ得る、試験前３ヶ月中の臨床的に有意な疾患の徴候、または試験前４週中のいずれかの主要な内科的疾患の兆候（治験責任医師の意見に従う）
・薬物の吸収、分布、代謝または排泄を妨げることが知られている疾患の存在もしくは続発症または他の病態
・薬物またはアルコールの乱用歴
・類似した化学構造を持つ治験薬または薬物に対する過敏症既往歴
・進行性致死的疾患
・本試験中に事前に計画された手術
・前３ヶ月中の５００ｍＬを超える献血
被験者は１度より多くの本試験への登録は許可されない。
【００６５】
一般的条件
・治験責任医師の判断において、本試験中、服薬遵守しそうにないか、または言語の問題もしくは精神発達遅滞のため、もしくは被験者が本試験の性質、範囲および起こりうる結果を理解できなくする精神状態に起因して協力できない被験者
・適用し得る規則に従って、以前の研究の排除期間内にある被験者；
・被験者が本プロトコルの実施に直接的に関与する治験責任医師もしくはいずれかの治験責任分担医師、研究助手、薬剤師、治験コーディネーター、または他のそのスタッフである；
・ＳＣＲ前の以前の３０日以内の治験薬の受領
【００６６】
生物学的状態
・以下のテストのいずれかに陽性反応である：ＨＢｓ抗原、抗ＨＣＶ抗体、抗ＨＩＶ１抗体、抗ＨＩＶ２抗体；
・ＳＣＲで尿の薬物スクリーニングでの陽性結果（アンフェタミン／メトアンフェタミン類、バルビツレート類、ベンゾジアゼピン類、カンナビノイド類、コカイン、オピエート類）；
・アルコール呼気テスト陽性
【００６７】
実施例３：治療
試験治療の詳細
【表１】
2020040990.tif 000002
【００６８】
ランタス（登録商標）／インスリングラルギン製剤の用量の算出
各被験者に投与するインスリングラルギンの量（０．４Ｕ／ｋｇ）を算出するために、体重（ｋｇ）は少数点以下１桁で測定し、以下の実施例に示すように算出したインスリンの量は切り上げるかまたは切り捨てして丸めている：７５．３ｋｇの体重の被験者に３０Ｕのインスリンを投与した（７５．３×０．４＝３０．１２  切り捨てして３０とする）；７４．４ｋｇの体重の被験者に３０Ｕのインスリンを投与した（７４．４×０．４＝２９．７６  切り上げして３０とする）。期間１の日１に記録した体重を、期間１の体重から２ｋｇより多く体重が変化しない限り、期間２、３および４についても治験薬用量の算出に用いた。
【００６９】
ユニット中の量は、インスリングラルギンＵ１００とインスリングラルギンＵ３００の両方とも同じであった。この比重は、両方の薬品について同じである。しかし、インスリングラルギンＵ１００と比較して、インスリングラルギンＵ３００はインスリングラルギンの濃度が３倍高いことを考慮して、インスリングラルギンＵ３００については注射すべき容量従って重量を１／３とした。個々の用量を投与する注射器を秤量して調製した。正味質量は、治験責任医師のソース文書（source-documentation）にのみ記録した。
【００７０】
注入剤の用量の算出および調製
【表２】
2020040990.tif 000003
【００７１】
グルコース液剤：個々の被験者の血中グルコースを決定した目標レベルに維持するために、２０％  グルコース液剤を人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）を用いて注入した。第２の注入ポンプ（人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）の一部）は、０．９％  塩化ナトリウム溶液を送達して、ラインの開存（line patent）を維持した。必要な２０％  グルコース液剤
の量が人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）の注入容量を超える場合、第２のグルコース注入ポンプを係合した。
【００７２】
ヘパリン：  １００ｍＬの０．９％  塩化ナトリウム溶液中の１００００ＩＵ  ヘパリンを、二腔カテーテルに約２ｍＬ／ｈの速度で注入し、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）による血中グルコースの測定のためのその開存を維持した。
【００７３】
盲検法（ｂｌｉｎｄｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄｓ）の説明：
本試験は、単盲検（single-blinde）である。容量の異なる注射は、投薬の盲検を不可
能にする。注射は、権限のある医師であるか、さもなければ本試験に関与していない医師によってなされた。治験責任医師は無作為化コードにアクセスした。
【００７４】
治療群への被験者の割り当て法
手順を臨床試験プロトコルで定めた後、本治験薬を本試験に含めた被験者にのみに投与した。
【００７５】
Ｐ１〜Ｐ４で注射すべき２つのランタス（登録商標）製剤の治療シーケンスのために無作為化スケジュールを、乱数表とリンクさせ、性別により階層化して作製した。
【００７６】
期間１の日１の朝、被験者がプロトコルに定められている基準を満たしていることを治験責任医師が確認すると直ぐに、適格な被験者をその施設により無作為化した。その後その乱数を、Ｐ１前に被験者の適格性が確認された順に被験者番号に割り当てた。ＳＣＲ後の性別階層認定のために、第一の被験者に適切な性別階層に対する第一の乱数を付与した。階層内に認定される次の被験者には、その階層内の次の乱数を付与した。
【００７７】
その乱数は、被験者に治療キットを割り当てるための治療キット番号として用いた。各被験者は、割り当てられた治療キット番号を持つ治験薬を投与された。この治療キットには、ＩＰ付き一般情報、治療キット番号、期間番号、コンテナボックス上に被験者番号を書くためのフィールド、および地方条例によって要求される追加記載が含まれている。
【００７８】
試験を永続的に中止した被験者は、既に与えられている場合、被験者番号および無作為化番号を保持しておいた。
【００７９】
包装およびラベリング
本治験薬は、無作為化プランに従って、サノフィ−アベンティス  ドイチュランド  ＧｍｂＨ、フランクフルト  アム  マイン  ドイツにより包装された。本治験薬を含むカートリッジおよびそれらをパックしたカートンは、試験番号、無作為化番号、バッチ番号、貯蔵条件、治験依頼者およびＰ番号でラベルされた。
【００８０】
治験薬の供給は、一度の出荷のものを受けた。全てのコンテナは、同一形式のラベルが付されていた。さらに、注射器用のラベル１セットが供給された。治験薬と予備薬剤は、異なる冷蔵庫に保管した。
【００８１】
治験薬投与の前に、薬剤師または薬剤師に指示された人が適切な治験薬を入れた注射器を調製し、その注射器に、この治験薬のコンテナに従う、被験者番号、無作為化番号および適切な期間をラベル付した。
【００８２】
このラベル付の内容は、地方条例の仕様および要件に従って行った。
【００８３】
貯蔵条件
本治験薬を＋２℃〜＋８℃の温度で光から保護して保管した。本試験薬は、凍結しないようにした。調製中は、その薬剤を光から保護する必要はなかった。
【００８４】
予備サンプル（ランタス（登録商標）Ｕ１００を３００カートリッジ、およびインスリングラルギンＵ３００を３００カートリッジ）を、この試験施設レベルで同じ条件で保管確保した。
【００８５】
実施例４：  治験製品の評価
活性または薬力学
インスリングラルギンによるインスリン受容体の刺激は、作用様式である。それに引き続く末梢グルコース取り込みおよび内因性グルコー産生の抑制は、血中グルコース濃度の減少がもたらす糖動的効果を含む。結果としてもたらされたグルコース利用は、血中グルコース濃度を一定に維持するために必要とされるグルコースのゲージ（ｇａｕｇｅ）によって最もよく特徴づけられる。
この正常血糖クランプ技術は、インスリングラルギンの注射後、ベースラインレベルより５％低く血中グルコース濃度を維持するのに必要なグルコースの量を評価するために用いられている。
【００８６】
臨床評価方法
オンラインでのグルコース測定を、グルコースオキシダーゼ法を用いて人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｅｌｋｈａｒｔ、ＩＮ、ＵＳＡ）により行った。
オフサイトの血中グルコースもまた、グルコースオキシダーゼ法を用いてＳｕｐｅｒ  ＧＬグルコース分析装置により測定した。
【００８７】
薬力学変数／エンドポイント
皮下注射されたインスリンの単位（用量）あたりの利用されたグルコース量が、糖動的効果の尺度（ｍｅａｓｕｒｅ）である。
連続的に記録されたグルコース注入率（ＧＩＲ）は、注射したインスリンの経時作用プ
ロファイルを反映している。
【００８８】
主要変数／エンドポイント
主要薬力学変数は、２４時間以内のグルコース注入率時間曲線下面積［ＧＩＲ−ＡＵＣ0-24h（ｍｇ・ｋｇ-1）］である。
【００８９】
副次変数／エンドポイント
副次薬力学変数は、５０％  ＧＩＲ−ＡＵＣ0-24hまでの時間［Ｔ50%−ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-24h)（ｈ）］である。
【００９０】
薬物動態学
サンプリング時間
血清インスリングラルギンおよびＣ−ペプチドの濃度の評価用に血液サンプルを治験薬の皮下注射の１時間前、３０分前および直前に採取し、その後は、注射の３０分後、１時間後、２時間後、その後は最大で２４時間までの２時間おきに、そして３０時間後に採取した。
インスリングラルギンサンプルの番号を、Ｐ００、Ｐ０１、Ｐ０２、Ｐ０３、Ｐ０４などと付け、Ｃ−ペプチドサンプルの番号をＣ００、Ｃ０１、Ｃ０２、Ｃ０３、Ｃ０４、などと付けた（試験のフローチャートも参照のこと）。
【００９１】
薬物動態学サンプリング数
最低１８のサンプルをクランプ来院（Ｐ１〜Ｐ４）ごとに採取した。１被験者あたり総計７２サンプルを採取した。
【００９２】
ＰＫ取り扱い手順
サンプル採取の正確な時間は、ＣＲＦで必ず記録する。薬物動態学サンプル（インスリングラルギン、Ｃ−ペプチド）の保管および配送については、特別な手順を用いた。
【００９３】
生物学的分析法
生物学的分析を、医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施基準（Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（ＧＬＰ））のＯＥＣＤ原則（１９９７年に改定）、ＥＮＶ／ＭＣ／ＣＨＥＭ（９８）１７およびその地域に適用されるＧＬＰ規則にて認められている、このタイプの試験に適用可能なＧＬＰ条件を基に実施した。
予備サンプルは利用できないので、インスリングラルギンの測定を優先する。
【００９４】
インスリングラルギン
血清インスリングラルギン濃度を、インスリングラルギン用に校正したヒトインスリン用のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）（インスリンＲＩＡキット、ＡＤＡＬＴＩＳ、イタリア）を用いて測定した。キットＲＥＦ  １０６２４。
このアッセイでの定量下限（ＬＬＯＱ）は、４．９２μＵ／ｍＬであった。
【００９５】
Ｃ−ペプチド
血清Ｃ−ペプチド濃度をＣ−ペプチド用のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）（Ｃ−ペプチド  ＲＩＡキット、ＡＤＡＬＴＩＳ、イタリア）を用いて測定した。キットＲＥＦ  Ｃ−ペプチド１０２８２。
定量下限（ＬＬＯＱ）は、０．０９０ｎｍｏｌ／Ｌであった。
【００９６】
生物学的分析法の要約
被検体    インスリン、Ｃ−ペプチド
マトリックス    血清
分析技術    ＲＩＡ
定量下限    インスリン  ４．９２μＵ／ｍＬ；Ｃ−ペプチド  ０．０９０ｎｍｏｌ／Ｌ
アッセイ容量    インスリン  １００μＬ；Ｃ−ペプチド  １００μＬ
方法参照    Ａｄａｌｔｉｓ  Ｓ．ｐ．Ａ．イタリア；キットＲＥＦ  １０６２４  インスリン（方法Ｎｏ．４３５ＶＡＬ０２）およびキットＲＥＦ  Ｃ−ペプチド１０２８２（方法Ｎｏ．ＤＭＰＫ／ＦＲＡ／２００３−０００２）
【００９７】
薬物動態学変数／エンドポイント
インスリングラルギン濃度の経時曲線が、皮下注射したＩＰの全身インスリン曝露の尺度（ｍｅａｓｕｒｅ）であった。
【００９８】
主要変数／エンドポイント
主要薬物動態学変数は、血清インスリングラルギン濃度の時間曲線下面積［ＩＮＳ−ＡＵＣ0-24h（μＵ・ｈ・ｍＬ-1）］であった。
【００９９】
副次変数／エンドポイント
副次薬物動態学変数は、５０％  ＩＮＳ−ＡＵＣ0-24hまでの時間［Ｔ50%−ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)（ｈ）］であった。
【０１００】
サンプリングした血液容量
【表３】
2020040990.tif 000004
【０１０１】
本試験の盲検を保護するための測定
本試験は単盲検試験である。生物学的分析測定は、臨床試験が完了した後に行なった。治療コードは、予測できない全ての重篤な有害事象（ＳＡＥ）を報告するために知られており、治験責任医師および／または治験依頼者のいずれかの判断に従ってＩＰの使用と合理的に関連付けられている。
【０１０２】
実施例５：試験手順
来院スケジュール
スクリーニング手順
各被験候補者の診療録を試験の開始前にチェックし、参加への適格性を決定した。被験者は、ＳＣＲでのスクリーニング試験前に１０時間絶食（水を除く）した。
【０１０３】
以下の項目／検査を評価した：
・年齢、および人種
・身体検査（心血管系、胸部および肺、甲状腺、腹部、神経系、皮膚および粘膜、ならびに筋骨格系を含む）
・関連する病歴および手術歴（本試験に関連する所見のみを記録すべきである）
・人体計測：身長および体重、ＢＭＩ［体重（ｋｇ）・（身長（ｍ））-2］の計算
・血圧および心拍数（背臥位で５分後、および立位で３分後）
・深部体温（鼓膜）
・標準１２誘導ＥＣＧ
・血液学的状態、臨床化学、および検尿（ディップスティック）
・凝固状態（ＩＮＲ、ａＰＰＴ）
・尿の薬物スクリーニング
・アルコールスクリーニング（呼気検知器）
・空腹時血中グルコース（≦１００ｍｇ．ｄＬ-1）およびグリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ≦６．１％）として定義される正常な代謝コントロール
・Ｂ型／Ｃ型肝炎およびＨＩＶ試験
【０１０４】
被験者がスクリーニングできない場合、スクリーニング試験の臨床結果を含むＳＣＲで得られた全てのデータをその被験者の診断録に記載した。
【０１０５】
来院のタイプによる記述
期間
各試験期間（Ｐ１〜Ｐ４）は日１および日２の２日間である。日１は、正常血糖クランプと治験薬の投与の開始日であった。日２は、治験薬の投与後３０時間にわたる正常血糖クランプの終了の日であった。試験期間（Ｐ１〜Ｐ４）の間には、４〜１８日の休薬期間を設けた。各治験薬投与前２日間は、激しい運動（例えば、マウンテンバイク、重労働の庭作業など）をさせなかった。アルコール飲料、グレープフルーツジュース、およびキサンチン誘導体を含む刺激性飲料（お茶、チョコレート、コーヒー、コカコーラ（商標）のような飲料など）およびグレープフルーツの摂取は、正常血糖クランプの２４時間前から完了まで許可しなかった。被験者は各試験期間（Ｐ１〜Ｐ４）の日１の１０時間前から絶食（水を除く）し、正常血糖クランプの終了まで絶食（水を除く）を続けた。被験者は、各クランプの来院につき約３２時間クリニックに滞在せねばならなかった。
【０１０６】
期間１の日１の朝、２７６００１００１で始まる９桁の被験者番号を被験者に割り当てた。ＳＣＲに入る資格を与えられた次の被験者には、被験者番号２７６００１００２を付与した。最初の被験者には無作為化番号１０１を与えた。資格を与えられた次の被験者には無作為化番号１０２を与えた。
【０１０７】
被験者に、彼らの体調に臨床的に有意な変化がなく、その前の期間からのプロトコル中で定められたような一般事項および食事制限を遵守することを確実にするよう依頼した。試験規則に違反した被験者は、本試験への参加から除外した。違反の種類により、被験者はその特定の期間のみ除外されることが可能であり、試験日の計画を立て直した。どのプロトコル違反も、前もってケースバイケースに基づいて治験依頼者と議論した。
【０１０８】
最期の期間以来の被験者の健康状態のいかなる変化も被験者の診療録（原本）およびＣＲＦに記録した。
【０１０９】
血圧、心拍数および深部体温（鼓膜）を、日１の朝、各治験薬投与（日２）３０時間後のクランプ手順の前および後に、少なくとも５分間安静にしてから背臥位で測定した。体重、アルコールスクリーニングおよびＲＢＣ、Ｈｂ、ＨｃＴ（Ｐ３およびＰ４のクランプ期間の前のみ）は、日１の朝、クランプを開始する前にのみ評価を行った。
【０１１０】
各期間の日１、被験者は午前６時３０分にクリニックに入院した。上記の検査を通過後、被験者は３本の静脈ラインを準備された。左腕の手の甲の静脈または手首外側の静脈に逆行様式でカニューレを導入し、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｅｌｋｈａｒｔ、ＩＮ、ＵＳＡ）に連結して血中グルコースの測定のために動脈血化した静脈血を連続的に記録した。動脈血化を達成するために、左手を約５５℃の「ホットボックス（Ｈｏｔ−Ｂｏｘ）」に入れた。第２の静脈ラインは、左腕の肘前静脈でとり、血清インスリングラルギンおよび参照血中グルコースの測定のためのサンプルを採取するために用いた。第３の静脈ラインは反対側の前腕にカニューレを導入し、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）を用いて２０％のグルコース液剤および０．９％の生理食塩水を注入した。
【０１１１】
人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）により血中グルコース濃度を測定し、グルコース注入率を調節して血中グルコース濃度を治験薬投与の６０分前、３０分前および５分前に測定した３回の空腹時血中グルコースの値の平均値として算出した個々の空腹時血中グルコースを５％下回る値に維持した。血中グルコースの測定のために追加の血液サンプル０．３ｍＬを治験薬の投与６０分前、３０分前および５分前に採取し、グルコースオキシダーゼ法に基づいて、臨床基準値と照らし合わせて確認した。
【０１１２】
午前９時頃、インスリングラルギンＵ１００（市販製剤）またはインスリングラルギンＵ３００のいずれかを、臍から５ｃｍ（左、右、左、右）の臍周囲領域に標準化された皮下脂肪厚法（ｓｋｉｎ  ｆｏｌｄ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を用いて注射した。０．３０ｍｍ×８ｍｍ（３０Ｇ）の針を備えた０．５ｍＬ容量のＵ１００インスリン注射器（製造元：Ｂｅｃｋｔｏｎ  ＆  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いた。
【０１１３】
治験薬に彼らそれぞれの治療キット番号、被験者番号（無作為化後にコンテナボックスに記載したもの）、および期間番号のラベルを付した（８．５章の包装およびラベリングを参照のこと）。
【０１１４】
治験薬の投与後、２０％グルコース液剤の注入を、一旦血中グルコース濃度を個々の空腹時濃度から５％下げ、そのレベルを維持する可変速度で開始した。このクランプ期間の所要時間は３０時間であった。グルコース送達速度は、予め定めてあったアルゴリズムを用いて１分間隔で血中グルコースの変化に応じて人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）によって調整した。この人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）からの血中グルコース値は、クランプ全体にわたり３０分間隔でグルコースオキシダーゼ法に基づいた臨床検査基準値と照らし合わせて確認した。必要に応じ、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）を臨床検査基準値法の結果に従って再校正した。被験者は、クランプ期間中背臥位のままであった。
【０１１５】
血清インスリングラルギンおよびＣ−ペプチド濃度の測定のための血液サンプルを投薬１時間前、３０分前および直前、その後治験薬投与の３０分後、１時間後、２時間後、その後は最大で２４時間までの２時間おきに、そして３０時間後に採取した。
【０１１６】
各試験期間（Ｐ１〜Ｐ４）の日２に、正常血糖クランプが完了した後食事を提供した。血圧、心拍数および深部体温（鼓膜）を記録し、血中グルコース測定用のサンプルを採取した。被験者は、治験責任医師によって安全が確認された後、クリニックから退院した。
【０１１７】
注射部位は、全クランプ期間中観察した。被験者の健康状態におけるいかなる変化も被験者の診療録（原本）およびＣＲＦに記録した。
【０１１８】
血液学的な安全性（Ｓａｆｅｔｙ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ）
Ｐ３におけるＲＢＣ、ＨｂおよびＨｃｔを、Ｐ４での貧血に備えて、分析した。陽性で
あった場合、Ｐ３とＰ４の間隔を許される最大の１８日まで延長し、Ｐ４の前に追加のＲＢＣ、ＨｂおよびＨｃｔ評価を行った。
【０１１９】
退院手順
被験者は、Ｐ４後、４〜１４日間の間に、ＥＯＳ来院のために再来院した。被験者は１０時間絶食（水を除く）した。最終期間以降の被験者の健康状態におけるいかなる変化も被験者の診療録（原本）およびＣＲＦに記録した。
【０１２０】
以下の項目／検査を評価した：
・身体検査（心血管系、胸部および肺、甲状腺、腹部、神経系、皮膚および粘膜、ならびに筋骨格系を含む）
・体重
・血圧および心拍数（背臥位で５分の後）
・深部体温（鼓膜）
・標準１２誘導ＥＣＧ
・血液学的状態、臨床化学、および検尿（ディップスティックによる）
・尿中のβ−ＨＣＧテスト（女性に対してのみ）
被験者は、有効な安全性データの治験責任医師によるレビューが完了した後、各期間の日２に退院した。
【０１２１】
生体サンプルの採取スケジュール
血液
ＳＣＲ（スクリーニング）：
・血液学、臨床化学、ＨｂＡ１ｃ、血清学（Ｂ／Ｃ型肝炎テスト、ＨＩＶ試験）：約２０ｍＬの血液を採取した。
Ｐ１〜Ｐ４（日１および日２）
・血中グルコース
人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）は、治験前の期間を含む全クランプ期間にわたり１分間隔で血中グルコースを自動測定する。人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）に必要とされる血液量は、２ｍＬ・ｈ-1である。およそ２５２ｍＬの血液量が、４期間に人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）でのグルコース測定に必要とされる。人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）から、血中グルコース値をチェックするための血液サンプル（０．３ｍＬ）を投薬の６０分前、３０分前、５分前および０分前、ならびに投薬後クランプの終わり（３０時間）までは３０分間隔で採取した。およそ４１ｍLの血液量が４期間に採取された。
・血清インスリングラルギンおよびＣ−ペプチドの濃度
静脈血液サンプル（３．５ｍＬ）を、投薬１時間前、３０分前、および直前と、投薬３０分後、１時間後、２時間後および２４時間までは２時間ごとに、そして３０時間後に採取した。およそ２５２ｍＬの血液量を４期間で採取した。インスリングラルギンの測定を優先的に行った。予備サンプルは、Ｃ−ペプチド濃度の測定のためにのみ用いた。
・ＲＢＣ、Ｈｂ、Ｈｃｔ
クランプ期間３および４を開始する前に静脈血液を採取した。約４ｍＬの血液を２期間に採取した。
【０１２２】
試験終了時（ＥＯＳ）来院：
・血液学、臨床化学：約１２ｍＬの血液を採取した。
・尿中の尿中のβ−ＨＣＧテスト（女性に対してのみ）
【０１２３】
ＳＣＲ−ＥＯＳの総血液量：
試験期間全体で、各被験者あたり総計約５８５ｍＬの血液を採取した。
【０１２４】
尿
定性的な尿の薬物スクリーニングをＳＣＲおよびＥＯＳに実施した。尿の薬物スクリーニングは、アンフェタミン／メトアンフェタミン、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、カンナビノイド、コカイン、オピエートからなる。定性的な安全性検尿（ｓａｆｅｔｙ  ｕｒｉｎａｌｙｓｉｓ）をＳＣＲおよびＥＯＳでディップスティックを用いて行った。安全性検尿は、以下の分析項目からなる：ｐＨ、タンパク質、グルコース、血液、赤血球、白血球、ビリルビン、ウロビリノーゲン、ケトン、比重、および亜硝酸塩。
【０１２５】
他の試験変数の測定スケジュール
身体検査は、ＳＣＲおよびＥＯＳにて実施した。
深部体温（鼓膜）は、ＳＣＲ、クランプ期間の前および後のＰ１〜Ｐ４、およびＥＯＳに記録した。
血圧および心拍数は、ＳＣＲおよびＥＯＳで、背臥位で約５分間安静にした後、および立位で３分間安静した後にも測定した。Ｐ１〜Ｐ４においては、血圧および心拍数を日１の朝にクランプ手順を開始する前に少なくとも５分間背臥位で安静にした後と、各治験薬投与３０時間後のクランプ手順が完了した後（日２）に記録した。
心電図（標準１２誘導）は、ＳＣＲおよびＥＯＳに記録した。
体重および身長は、ＳＣＲで測定した。体重は、Ｐ１〜Ｐ４の日１の朝（治験薬の投与前）およびＥＯＳに記録した。
アルコールスクリーニング（エタノール、呼気検知器）は、ＳＣＲおよびＥＯＳ、ならびにＰ１〜Ｐ４の日１の朝（治験薬の投与前）に行った。
【０１２６】
試験における制限事項
日１の夜（Ｐ１〜Ｐ４）から、その期間（クランプ期間）を通して、被験者はアルコール、茶、コーヒー、柑橘系飲料またはコーラ飲料の摂取、喫煙を控えた。柑橘系果実の摂取も試験期間を通して禁止した。被験者は、この試験の継続期間を通して、最終の管理まで、激しい身体活動をせず安定したライフスタイルを守ることを求められた。
【０１２７】
原データ（ｓｏｕｒｃｅ  ｄａｔａ）の定義
ＣＲＦに記録される以下に列挙した全ての評価は、以下に関する適切に署名され確認された原文書により裏付けられた：
・被験者の身元確認、病歴；
・臨床検査、バイタルサイン、体重および身長；
・臨床検査評価（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ）、ＥＣＧ；
・薬物動態の時点（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｔｉｍｅ  ｐｏｉｎｔｓ）；
・来院および評価の日時；
・投与日時、および注射部位；
・ＡＥ；
・クランプの所要期間（開始および終了時）
・その他
このＣＲＦは、他の項目についての原文書として考慮された。
【０１２８】
実施例６：  統計的考察
本実施例は、本試験のための統計学的分析プランの情報を提供する。統計学的分析プランは、被験者の参加前に立案された。
【０１２９】
被験者数の決定
ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)が初期パラメータであり、それに従って被験者数の算出を実施
した。
【０１３０】
この被験者数算出の目的のために、０．１２５と０．２２５の間で、自然対数変換したＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)のいくつかの被験者内標準偏差（ＳＤwithin）を考察した。平均
生物学的同等性アプローチのための被験者数の算出法を、４期、２治療、２シーケンスクロスオーバーデザインのために用いた。製剤比率について、９０％ＣＩが完全に［０．８０−１．２５］内に含まれる場合、平均生物学的同等性がそのパラメータにより結論付けられた。
【０１３１】
試験ＨＯＥ９０１／１０２２を、可変性における推算値のベースとした。試験ＨＯＥ９０１／１０２２の統計解析に基づいて、０．１７５の値が、自然対数変換したスケールにおける被験者内標準偏差（ＳＤwithin）を予測することができた。
【０１３２】
以下の表は、９０％検出力（power）で０．８５と１．１５の間の真比率を推算する生
物学的同等性対照間隔：［０．８０−１．２５］を用いて修正幾何平均値の平均生物学的同等性を表すのに必要とされる被験者の数を示している（対照製剤に対する試験）。
【０１３３】
【表４】
2020040990.tif 000005
【０１３４】
このデザインでは、自然対数スケールでの真のＳＤwithinが０．１７５である場合、０．９の真比率を可能にする９０％の能力で２つのインスリングラルギン製剤の同等性を示すためには、２０名の被験体（１シーケンスあたり１０名）が必要とされる。
総計２４名の無作為化された被験者が、治験中止の可能性のある場合のために計上される。
【０１３５】
被験者の説明（Ｓｕｂｊｅｃｔ  ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）
被験者の内訳
関与した、無作為化された、曝露された（すなわち任意の量の治験薬投与を受けた）、完了した（すなわち、全ての治験期間を完了した被験者）、発生した中止の主な理由に従って中止した、被験者の数を含む、被験者の説明責任の詳細な要約が、各シーケンスおよび全ての被験者について作製される。
最終来院での被験者の内訳は、シーケンス群、本試験の終了時と治験薬の最終投与の日の内訳状態、最終来院の日付、中断の理由を含む一覧表で提示される。最初の治験薬投与の開始時または開始後に起こる本試験からの撤退は全て、治験総括報告書（ＣＳＲ）の中に完全に記録される。
【０１３６】
プロトコルの逸脱
データベースのロックの前に、本プロトコルのコンプライアンスが、組み入れおよび除外基準、治療コンプライアンス、禁止された治療ならびに計画された評価のタイミングおよび有効性に関して調査される。プロトコルの逸脱はデータベースのロックの前に本試験チームによって確認され、欠損データおよびＩＰの中断を含むデータ審査報告書（Ｄａｔａ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｒｅｐｏｒｔ）中に一覧にされ、大したことのない逸脱または主要な逸脱として分類される。
治験責任医師によって報告されるような組み入れおよび除外基準に対する個別の逸脱は一覧表にされている。
他の逸脱はＣＳＲの本体中に一覧表にされ、および／または記載されている。
【０１３７】
解析母集団
解析されるべき母集団
任意の解析母集団から除外された被験者は、治療シーケンスおよび除外理由と共に列挙される。関連のある全ての情報がＣＳＲに完全に記録される。
無作為化スケジュールに従って割り当てられた治療とは異なる治療を受けた被験者の事象においては、解析は無作為化治療に従うのではなく実際に受けた治療に従って行われる。
【０１３８】
薬物動態学の母集団
治験薬投与に関するいかなる主要な逸脱も伴わず、ＰＫパラメータが有効である被験者は全て、薬物動態学母集団に含まれる。全てではなくいくつかの試験日においてＰＫプロファイルが不十分な被験者については、十分なプロファイルのパラメータをその解析に含んだ。
【０１３９】
薬力学の母集団
治験薬投与に関するいかなる主要な逸脱も伴わず、ＰＤパラメータが有効である被験者は全て、薬物動態学母集団に含まれる、全てではなくいくつかの試験日においてGIRプロ
ファイルが不十分な被験者については、十分なプロファイルのパラメータをその解析に含んだ。
【０１４０】
安全性の母集団
安全性の評価は、投与された治験薬の量にかかわらず、早くに中止した被験者も含めた、治験の投与を受けた被験者（曝露された母集団）をベースにした。
【０１４１】
人口統計学および基準値の特性
被験者の人口統計学特性、病歴および診断
以下のデータを収集した：性別、スクリーニング時の年齢、身長、体重、および人種。被験者ごとのボディマス指数（ＢＭＩ）は、体重および身長のデータより算出した：
ＢＭＩ＝体重［ｋｇ］・（身長［ｍ］）-2
【０１４２】
人口統計学および背景特徴に関する全ての変数を個別に列挙しまとめた。病歴および診断に関する組み入れ基準からの逸脱を個別に一覧にして記載した。
【０１４３】
ベースライン薬力学パラメータ
ベースライン血中グルコース濃度をシーケンスごとにまとめた。
【０１４４】
ベースライン安全性パラメータ
安全性変数について、変数として適用可能であっても、期間内または試験内の治験薬投
与前に最期に組み込まれた値をベースライン値とした。そのベースラインの投与前値を投与前に再確認する場合、その再確認した値をベースラインとして認め、統計量に用いた。
【０１４５】
治験薬曝露の程度およびコンプライアンス
しかるべき場合には治験薬投与の詳細および補足情報を個別に列挙しまとめた。
【０１４６】
前／併用  治療／療法
前治療および併用療法（ある場合）を、世界保健機関−薬物文献リスト（Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｌｉｓｔ）（ＷＨＯ−ＤＲＬ）に従ってコード化し、個別に列挙した。
【０１４７】
薬力学変数の解析
薬力学変数の記載
インスリン投与に依存する、体重による被験者間の同等性を達成するために、解析用にＧＩＲに関する全ての値を被験者の体重（ｋｇ）で割った。それにより以下のＧＩＲは常に体重で標準化されたフルコース注入量を言及する。
【０１４８】
主要ＰＤ変数：
・体重で標準化されたグルコース注入率の時間曲線下面積
［ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-24h)（ｍｇ・ｋｇ-1）］
副次ＰＤ変数：
・ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-24h)の５０％までの時間（ｈ）［Ｔ50%−ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-24h）（ｈ）］
以下の追加ＰＤ変数を導出した：
・体重で標準化したグルコース注入率の、クランプの終了までの時間曲線下面積［ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-end)（ｍｇ・ｋｇ-1）］
・体重で標準化したグルコース注入率の時間曲線下画分面積  ［ＧＩＲ−ＡＵＣ(4-20h)、ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-12h)、ＧＩＲ−ＡＵＣ（12-24h)（ｍｇ・ｋｇ-1）］
・体重で標準化した最大グルコース注入率  ［ＧＩＲmax（ｍｇ・ｋｇ-1・ｍｉｎ-1）
］
・ＧＩＲmax  までの時間 ［ＧＩＲ−ｔmax（ｈ）］
有意義かつ信頼性のあるデータを提供するためにＧＩＲｍａｘおよび対応するＧＩＲmaxまでの時間の値は、各被験体について平滑化したＧＩＲ曲線より導出した。
【０１４９】
一次解析
ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-24h)（ｍｇ・ｋｇ-1）についての相対的な生物有効性（活性）を推
定するために、線形混合効果モデルを用いて未変換パラメータを解析した。
この混合モデルは、シーケンス、期間、製剤に関する固定項、ならびに製剤特異的（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）な被験者間および被験者内分散、および被験者付随製剤分散（ｓｕｂｊｅｃｔ−ｂｙ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｖａｒｉａｎｃｅ）を伴うシーケンス内の被験者についてのランダム項を含む。その後製剤比率（Ｔ／Ｒ）についての点推定および９０％信頼区間をフィエラーの定理（Ｆｉｅｌｌｅｒ’ｓ  ｔｈｅｏｒｅｍ）［Ｆｉｅｌｌｅｒ、１９５４］に基づいて得た。
製剤比率についての信頼区間が［０．８０−１．２５］である場合、生物有効性（活性）が同等であると結論付けた。
その変数の分散についての仮定を確認した。
【０１５０】
二次解析／副次変数解析
個別の体重および平均体重で標準化したＧＩＲプロファイルならびに時間に対する平均パーセンテージ累積プロファイルをプロットした。
ＰＤパラメータは個別に列挙され、記述統計が作製される。
信頼限界を伴う製剤比率（Ｔ／Ｒ）を、１次解析について記載したような、対応する線形混合効果モデルを用いて、画分ＧＩＲ−ＡＵＣｓ（ｍｇ・ｋｇ-1）および標準化グルコース最大注入速度［ＧＩＲmax（ｍｇ・ｋｇ-1・ｍｉｎ-1）］について導いた。
５０％−ＧＩＲ−ＡＵＣ（ｈ）までの時間およびＧＩＲmaxまでの時間［ＧＩＲ−ｔmax（ｈ）］は、ノンパラメトリックに解析した。
【０１５１】
クランプの実施
血中グルコース濃度の個別プロファイルをプロットした。
【０１５２】
安全性データの解析
まとめた全ての安全性データは、安全性母集団をベースにした。
安全性データの解析用の個別の治験薬投与期（ｏｎ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｈａｓｅ）は治験薬の最初の投与で始まり、ＥＯＳ来院により終了した。
【０１５３】
有害事象（ＡＥ）
全てのAEは、ＭｅｄＤＲＡ（使用時のバージョン）を用いてコード化される。
【０１５４】
定義
治験薬投与中のAE有害事象
全てのＡＥを以下のように分類した：
・試験治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）：治療期間に初めて生じたかまたはそれ以前に発症していた場合治療中期間に悪化したＡＥ；
・非試験治療下で発現した有害事象（ＮＴＥＡＥ）：治療期間に悪化することなく、治療期間外に生じたＡＥ；
【０１５５】
製剤への割り当て
解析の目的のために、各ＴＥＡＥをＡＥの発症および／または悪化前に与えられた最期の製剤に割り当てた。ＴＥＡＥがある製剤において発生し、その後の製剤下で悪化した場合、両方の製剤に対するＴＥＡＥであると考える。
【０１５６】
欠測情報
情報の欠測または情報が矛盾していた場合、（例えば、部分的なデータまたは他の情報から）そのＡＥはＴＥＡＥではないと明らかに除外できる場合でない限り、ＡＥはＴＥＡＥとしてカウントした。
ＡＥの開始日が不完全または欠測していた場合、不完全な日が、ＡＥが治験前に始まっていたと示している場合を除いて、最初の治験薬投与後に生じたと推定した。
【０１５７】
試験治療下で発現した有害事象
全てのＡＥを個別に列挙した。それらを、器官別大分類による概要を含め、製剤ごとにまとめた。
【０１５８】
死亡、重篤な有害事象および他の重要な有害事象
死亡、重篤なＡＥおよび他の重要なＡＥのような場合は全て個別に列挙し、総括報告書に詳細に記載した。
【０１５９】
治験の中止につながる有害事象
治療の中止につながるＡＥは、個別に列挙し、総括報告書に詳細に記載した。
【０１６０】
臨床検査値の評価
潜在的な臨床的に重要な異常（ＰＣＳＡ）および範囲外基準は、本治験の統計解析プランにおいて定義した。潜在的な臨床的に重要な異常（ＰＣＳＡ）および範囲外基準の定義は、パラメータにより報告した。
個別データを被験者ごとおよび来院ごとに、加えて補足情報を列挙した。
正常範囲外の値の被験者およびＰＣＳＡのある被験者は、製剤ごとに、および治験評価の終了まで全期にわたり解析した。
ベースライン後ＰＣＳＡのある被験者を列挙した。
【０１６１】
バイタルサイン
潜在的な臨床的に重要な異常（ＰＣＳＡ）および範囲外基準は、本治験の統計解析プランにおいて定義した。ＰＣＳＡおよび範囲外基準の定義は、パラメータにより報告した。
ＰＣＳＡのある被験者は、製剤ごとに、および治験評価の終了まで全期にわたりまとめた。ベースライン後ＰＣＳＡのある被験者を列挙した。
生の値および導出されたパラメータは、製剤ごとに、および治験評価の終了まで全期にわたり解析した。個別データを、異常についてフラグを立てた上で、被験者ごとおよび来院ごとに、加えて補足情報を列挙した。
【０１６２】
ＥＣＧ
潜在的な臨床的に重要な異常（ＰＣＳＡ）および範囲外基準は、本治験の統計解析プランにおいて定義した。ＰＣＳＡおよび範囲外基準の定義は、パラメータにより報告した。
ＳＣＲおよびＥＯＳでのＰＣＳＡのある被験者を、全期にわたりまとめた。
個別データを、異常についてフラグを立てた上で、被験者ごとおよび来院ごとに、加えて補足情報を列挙した。
【０１６３】
薬物動態学データの解析
薬物動態学パラメータ
事実上の相対時刻をＰＫパラメータを導出するのに用いた。
【０１６４】
主要変数：
・ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)（μＵ・ｈ．ｍＬ-1）
副次ＰＫ変数：
・ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)の５０％までの時間（ｈ）［Ｔ50%−ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)
（ｈ）］
以下の追加ＰＫ変数を導出した：
・画分ＩＮＳ−ＡＵＣｓ［ＩＮＳ−ＡＵＣ(4-20h)、ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-12h)、ＩＮＳ−ＡＵＣ(12-24h)（μＵ・ｈ・ｍＬ-1）］
・クランプの終了までのＩＮＳ−ＡＵＣ  ［ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-end)（μＵ・ｈ・ｍＬ-1）］
・最大血清インスリン濃度  ［ＩＮＳ−Ｃmax（μＵ・ｍＬ-1）］
・ＩＮＳ−Ｃmaxまでの時間［ＩＮＳ−Ｔmax（ｈ）］
【０１６５】
統計解析
記述統計
濃度データの記述統計は、プロトコル時間によって表わした。
個別のおよび平均の血清インスリン濃度プロファイルをプロットした。
血清インスリン濃度を個別に列挙し、時点あたりの記述統計を作製した。
ＰＫパラメータの記述統計を製剤ごとに作製した。
Ｃ−ペプチドのプロファイルをプロットし、記述的に特徴づけた。
【０１６６】
一次解析
ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)についての相対的なバイオアベイラビリティーを推定するため
に、線形混合効果モデルを用いて、対数変換したパラメータを解析した。
この混合モデルは、シーケンス、期間、製剤に関する固定項、ならびに製剤特異的（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）な被験者間および被験者内分散、および被験者付随製剤分散（ｓｕｂｊｅｃｔ−ｂｙ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｖａｒｉａｎｃｅ）を伴うシーケンス内の被験者についてのランダム項を含む。
ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)について、演算推定および製剤間の差異についての９０％信頼
区間より得られた、製剤比率（Ｔ／Ｒ）に対する点推定および９０％信頼区間は、その混合効果モデルのフレームワーク内であることを意味し、その後その比率スケールを真数変換により変換した。
製剤比率についての信頼区間が［０．８０−１．２５］である場合、バイオアベイラビリティが同等であると結論付けた。
【０１６７】
副次ＰＫパラメータおよび追加ＰＫパラメータの解析
５０％−ＩＮＳ−ＡＵＣ（ｈ）までの時間および最大濃度までの時間［ＩＮＳ−Ｔmax
（ｈ）］をノンパラメトリックに解析した。
対数変換した画分ＩＮＳ−ＡＵＣおよびＩＮＳ−ＡＵＣ(0-end)（μＵ・ｈ・ｍＬ-1）
ならびに最大血清インスリングラルギン濃度［ＩＮＳ−Ｃmax（μＵ・ｍＬ-1）］を、１
次解析について記載したような対応する線形混合効果モデルを用いて解析した。点推定および信頼区間を報告した。
【０１６８】
Ｃ−ペプチド
入手できる場合、Ｃ−ペプチドのプロファイルをプロットし、記述的に特徴づけた。
【０１６９】
ＰＫ／ＰＤ解析
しかるべき場合、ＰＫ／ＰＤ解析を探索的に実行した。
【０１７０】
実施例６：治験結果
被験者の内訳
総数３５名（女性１１名、男性２４名）の被験者がスクリーニングされ、そのうち２４名の健康で適格な被験者が登録され、無作為化され、少なくとも１度の治験薬投与を受けた。２４名の無作為化された被験者のうち１名の被験者が最初の治療期間後に自身の要求に基づいて本治験から退いた。２３名の被験者はプロトコルに従って本治験を完了し、薬力学（ＰＤ）および薬物動態学（ＰＫ）解析に組み入れられた。安全性評価には２４名の治験被験者全てを含めた。
主なプロトコル逸脱はなかった。
【０１７１】
人口統計学特性
以下のデータを収集した：性別、スクリーニング時の年齢、身長、体重、および人種。被験者ごとのボディマス指数（ＢＭＩ）を、体重および身長のデータより算出した：
ＢＭＩ＝体重［ｋｇ］・（身長［ｍ］）-2
【０１７２】
【表５】
2020040990.tif 000006
【０１７３】
クランプの実施
２つの治験群、ランタスＵ１００およびランタスＵ３００は、個別のグルコースクランプレベルを定義するのに役立つ個別の絶食時ベースライン血中グルコース濃度に関して類似していた。投薬後のクランプの所要時間は３０時間であり、これは全ての治療期間において同じであった。
【０１７４】
主要エンドポイント
ランタスＵ１００とランタスＵ３００についてのバイオアベイラビリティ（曝露）の同等性は確立されなかった。ランタスＵ１００とランタスＵ３００についての生物有効性（活性）の同等性は確立されなかった。
【０１７５】
主要変数
０〜２４時間までの血清インスリングラルギン濃度の時間曲線下面積（ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)）は、ランタスＵ１００およびランタスＵ３００について等価でなかった。曝露
はＵ３００を用いると約４０％少なかった。０〜２４時間までの時間曲線に対するＧＩＲの曲線下面積（ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-24h)）は、ランタスＵ１００およびランタスＵ３００
について等価ではなかった。活性はＵ３００を用いると約４０％少なかった。
【０１７６】
副次変数
ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-24h)（ｈ）の５０％までの時間は、ランタスＵ１００とランタスＵ
３００で類似していた。ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-24h)（ｈ）の５０％までの時間は、ランタス
Ｕ３００が０．５４５（ｈ）（０．１５８−１．０３０）長く、この値は統計学的に重要である。
【０１７７】
安全性
重篤な有害事象（ＡＥ）は報告されなかった。治療（治験薬および参照薬）あたり５名の被験者が計１４のＴＥＡＥを報告し、それらの全てが軽度〜中程度であり、後遺症もなく解消した。最も高頻度に報告された事象は頭痛（治験あたり４名の被験者）であり、その後吐き気、嘔吐および発熱（Ｕ１００において１名の被験者）、および処置上の痛み（Ｕ３００において１名の被験者）であった。注目すべきは、頭痛はクランプ試験の間の一般的な意見であり、高浸透性グルコース液剤の注入に関連しているということである。しかしながら、治験薬との関連も排除できなかった。注射部位の反応は報告されなかった。
【０１７８】
結論
インスリングラルギンＵ１００およびインスリングラルギンＵ３００は、バイオアベイラビリティ（曝露）および生物有効性（活性）において等価ではない。インスリングラルギンＵ３００後の曝露および活性は同量（０．４Ｕ／ｋｇ）のインスリングラルギンＵ１００の投与後の曝露および活性と比較した場合約４０％低かった。
【０１７９】
しかし、インスリングラルギンＵ３００は、インスリングラルギンＵ１００よりも、基礎インスリンに望ましいよりフラットなＰＫ（曝露）およびＰＤ（活性）プロファイルを示した。健常な被験者に対する同じ皮下投与後の、インスリングラルギンＵ１００製剤とインスリングラルギンＵ３００製剤との間の曝露および活性におけるこれらの驚くべきかつ予測できない差異は、以下の図に効果的に示されている。注目すべきは、同時に血中グルコースが一定になったということである。
【０１８０】
インスリングラルギンＵ３００の投与は、安全性および忍容性に問題はなかった。
【０１８１】
実施例７：インスリングラルギンＵ３００の３つの異なる皮下用量のグルコース動的活性および曝露を比較する試験のための、理論的根拠
健常な被験者における試験からの結果（実施例１〜６を参照のこと）は、ランタス（登録商標）Ｕ１００とインスリングラルギンＵ３００との間の曝露および効果における非同等性を示した。被験者はＵ１００およびＵ３００について、同じ用量のインスリングラルギン（０．４Ｕ／ｋｇ）を受けたが、Ｕ３００からの同じ単位量の送達は、Ｕ１００からの送達よりも曝露および効果が約４０％低かった。しかしながら、インスリングラルギンＵ３００は、ランタス（登録商標）Ｕ１００よりも、基礎インスリンに望ましいよりフラットな薬力学プロファイルを示した。
【０１８２】
従って、以下の実施例において記載される新規の試験は、Ｉ型糖尿病患者による正常血糖クランプ設定におけるコンパレータとして、ランタス（登録商標）Ｕ１００の標準用量に対して、インスリングラルギンＵ３００の３つの異なる皮下用量のグルコース動的活性および曝露を比較する。
【０１８３】
この試験は、等効果なＵ３００の用量を、クランプ技術によって提供される血中グルコース処理のパラメータによって評価されるような、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００まで近づけることを目的とする。
【０１８４】
インスリングラルギン曝露は、皮下投与後の濃度−時間プロファイルおよび単位インスリンあたりのグルコース利用としての活性より評価される。
【０１８５】
本試験は、Ｉ型糖尿病の被験者の正常血糖クランプ設定において、ランタス（登録商標）Ｕ１００の標準用量と比較して、異なる用量のインスリングラルギンＵ３００の代謝性効果および曝露を評価するためにデザインされた。この試験は、４治療（Ｒ、Ｔ1、Ｔ2およびＴ3）、４治療期間（ＴＰ１−４）および４シーケンスを構成する。１度のスクリー
ニング来院（Ｄ−２８〜Ｄ−３）、４度の治療来院（ＴＰ１〜ＴＰ４においてＤ１〜Ｄ２）、および１度の試験終了時来院（最終投与後Ｄ５〜Ｄ１４）があり、安全性パラメータの最終評価を伴う。
【０１８６】
被験者は、ラテン方格デザインに従い、Ｒ、Ｔ1、Ｔ2およびＴ3の各治療に対して一旦
、クロスオーバー、二重盲検および無作為化様式で曝露された。このデザインは、薬理科学効果およびランタス（登録商標）Ｕ１００と比較して異なる用量のインスリングラルギンＵ３００の曝露を評価するのに適切であると考えられる。
【０１８７】
本治験用に選択されたランタス（登録商標）Ｕ１００の用量  ０．４Ｕ／ｋｇは、Ｉ型糖尿病患者に正常血糖を提供することが特徴であり、Ｉ型糖尿病患者による他のクランプ試験にて容易に研究された。
【０１８８】
インスリングラルギンＵ３００について、３つの異なる用量０．４、０．６および０．９Ｕ／ｋｇを試験する。この用量範囲は、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００に等効果なおよその用量を補完する（ｉｎｔｒａｐｏｌａｔｉｎｇ）ことができる。インスリングラルギンＵ３００の用量０．４Ｕ／ｋｇはすでに健常なボランティアで試験しており（実施例１〜６を参照のこと）、予め設定した観察期間終了の３０時間内で０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００よりも活性が低いことが明らかとなっている。総グルコースディスポジションによって測定される０．４Ｕ／ｋｇのインスリングラルギンＵ３００の生理活性は、参照治験薬（０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００）よりも３９．４％低かった。相応して、より高い用量のインスリングラルギンＵ３００、例えば０．６Ｕ／ｋｇのインスリングラルギンＵ３００は、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００と比較してほぼ等価なグルコース動的活性をもたらすことが期待された。さらに、比例的に用量を上げて行くことで、用量に比例する曝露および効果のプロファイルを調査することができる。
【０１８９】
Ｉ型糖尿病の患者における試験は、内因性インスリンの混乱効果（ｃｏｎｆｏｕｎｄｉｎｇ  ｉｍｐａｃｔ）を避け、曝露および作用の持続性の評価をより可能にする。さらに、インスリングラルギンに特有のアッセイがないため、全ての内因性インスリンを読み取るアッセイを用いることが強いられる。従って、外因性インスリングラルギン以外の、加えられた全てのインスリン源が過剰なインスリン濃度を不当に引き起こす。
【０１９０】
本試験は、クロスオーバーデザインであり；実践的および倫理的理由により、多くても３種類のＵ３００用量をランタス（登録商標）Ｕ１００と比較する。長時間作用型インスリン製剤のグルコース動的活性の評価は、延長した作用持続時間に起因して、正常血糖クランプの設定を３６時間まで伸ばすことを必要とする。
【０１９１】
活性な医薬品成分であるインスリングラルギンは、Ｕ１００とＵ３００の両方の製剤において同じである。本試験に用いられる用量は、日常用途の範囲内である。低血糖の全体的なリスクは完全に排除できないが、正常血糖クランプ技術によって制御される。
【０１９２】
薬力学
インスリングラルギンの薬力学活性は、Ｉ型糖尿病患者における正常血糖クランプ技術（これは、血中グルコース処理に対する投与された外因性インスリン製剤の効果を評価するために確立された標準手順である）によって評価される。
【０１９３】
正常血糖クランプ設定におけるグルコースディスポジションの評価に特有のパラメータは、体重で標準化された注入量（ＧＩＲ）、処理された総グルコース、ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36、およびＧＩＲ−ＡＵＣ0-36の所定のパーセンテージまでの時間（例えば、ＧＩＲ−Ａ
ＵＣ0-36の５０％までの時間）である。
【０１９４】
補助的なパラメータは、平滑化体重で標準化したＧＩＲの最大値ＧＩＲmax、および、
ＧＩＲmaxまでの時間ＧＩＲ−Ｔmaxである。
【０１９５】
インスリングラルギンの作用持続時間は、投薬と正常血糖（クランプ）レベルを超える予め特定された逸脱との間の時間から導出される。
【０１９６】
グルコースのモニタリングは、皮下投与後、インスリングラルギンの長時間持続作用に起因して３６時間実施される。
【０１９７】
薬物動態学
インスリングラルギンの徐放性質により、濃度プロファイルにおいて目立ったピークに欠けている。従って、ＩＮＳ−ＡＵＣの５０％までの時間（Ｔ50%  ＩＮＳ−ＡＵＣ0-36
）は、インスリングラルギンの曝露プロファイルの時間位置についての測定値として算出され、ＩＮＳ−ＣmaxおよびＩＮＳ−Ｔmaxは、追加測定値として役に立つ。
【０１９８】
主要試験目的
本試験の主要な目的は、０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００に対する、３つの異なるインスリングラルギンＵ３００用量の代謝性効果比率を評価することである。
【０１９９】
副次試験目的
本試験の副次的な目的は、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００に対して、３つの異なるインスリングラルギンＵ３００用量の曝露比率を評価すること、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００に対して用量の異なるインスリングラルギンＵ３００の作用持続時間を比較すること、インスリングラルギンＵ３００の用量応答および用量曝露の関係を調査すること、ならびにＩ型糖尿病患者におけるインスリングラルギンＵ３００の安全性および忍容性を評価することである。
【０２００】
実施例８：試験デザイン、プロトコルの記載
Ｉ型糖尿病を患う男性および女性の被験者における、第１相、単一施設、二重盲検、無作為化、クロスオーバー（４−治療、４−治療期間および４−シーケンス；ラテン方格）、アクティブコントロール、治療期間中（５〜１８日、好ましくは７日）の休薬期間を伴い、以下のインスリングラルギンの単回投与を受ける
・０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００（＝  対照試験  Ｒ）
・０．４Ｕ／ｋｇ  インスリングラルギン  Ｕ３００（＝  試験  Ｔ1）
・０．６Ｕ／ｋｇ  インスリングラルギン  Ｕ３００（＝  試験  Ｔ2）
・０．９Ｕ／ｋｇ  インスリングラルギン  Ｕ３００（＝  試験  Ｔ3）
この４つの治療ＲおよびＴ1-3は、被験者に無作為に割り当てられた以下の４−シーケ
ンス（１：１：１：１の比）
・Ｒ−Ｔ1−Ｔ2−Ｔ3
・Ｔ3−Ｒ−Ｔ1−Ｔ2
・Ｔ2−Ｔ3−Ｒ−Ｔ1
・Ｔ1−Ｔ2−Ｔ3−Ｒ
での、４つの治療期間（ＴＰ１〜ＴＰ４）における所定のクロスオーバー法である。
【０２０１】
試験参加の所要期間
・１人の被験者に対する総試験期間：約４〜１１週間（最低−最長期間、休薬期間に依存する、スクリーニングを除く）
・１人の被験者に対する試験の各期間の所要期間：
- スクリーニング：  ３〜２８日間（Ｄ−２８〜Ｄ−３）
- 治療期間  １−４：  ２日間（１晩の滞在）
- 休薬：  ５〜１８日間（連続した投与の間に、優先的には７日間）
- 試験終了時来院：  治験薬投与後のＤ５〜Ｄ１４の間の１日
【０２０２】
実施例９：  被験者の選択
計画された被験者の数：２０名の評価可能な被験者を確保するために、少なくとも２４名の被験者を登録するべきである。
【０２０３】
組み入れ基準
患者基本情報
Ｉ０１  年齢１８歳〜６５歳の男性または女性被験者であって、米国糖尿病学会で定義されているように（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅ．  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  １９９８；２１：５−１９）、１年より長く糖尿病を患っている
Ｉ０２  総インスリン用量＜  １．２Ｕ／ｋｇ／日
Ｉ０３  体重は、男性であれば５０．０ｋｇ〜９５．０ｋｇ、女性であれば５０．０ｋｇ〜８５．０ｋｇであり、ボディマス指数が１８．０〜３０．０ｋｇ／ｍ2である
健康状態
Ｉ０４  空腹時陰性血清Ｃ−ペプチド（＜０．３ｎｍｏｌ／Ｌ）
Ｉ０５  グリコヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）≦９．０％
Ｉ０６  試験前に少なくとも２ヶ月間、安定したインスリン管理ができている（被験者の安全性および試験の科学的な完全性に関する）
Ｉ０７  治験責任医師が、異常が臨床的に無関係であり、本試験の実施に干渉しないと判断した場合を除いて、病歴および身体検査（心血管系、胸部および肺、甲状腺、腹部、神経系、皮膚および粘膜、ならびに骨格筋系）において正常な所見である（被験者の安全性および試験の科学的な完全性に関する）
Ｉ０８  背臥位での１０分間の安静後の正常なバイタルサイン：９５ｍＭＨｇ  ＜  収縮期血圧  ＜  １４０ｍＭＨｇ；  ４５ｍＭＨｇ  ＜  拡張期血圧  ＜  ９０ｍＭＨｇ；
４０ｂｐｍ  ＜  心拍数  ＜  １００  ｂｐｍ
Ｉ０９  背臥位での１０分間の安静後の正常な標準１２誘導ＥＣＧ；  １２０ｍｓ  ＜ＰＱ  ＜２２０ｍｓ、ＱＲＳ  ＜  １２０ｍｓ、ＱＴｃ≦４４０ｍｓ（男性の場合）、≦
４５０  ｍｓ（女性の場合）
Ｉ１０  治験責任医師が、異常が糖尿病患者にとって臨床的に無関係であると判断した場合を除いて、正常範囲（または治験責任医療機関向けに定義されたスクリーニング閾値）内の臨床検査項目；しかし、血清クレアチニンは、臨床検査ノルムの上限を厳密に下回らねばならない；肝臓酵素（ＡＳＴ、ＡＬＴ）およびビリルビン（被験者がギルバート症候群であるという文書を有している場合を除く）は、１．５  ＵＬＮ  を上回ってはならない
【０２０４】
女性被験者のみ
Ｉ１１  妊娠する可能性のある（閉経後２年未満であるかまたは３ヶ月以上外科的に不妊ではない）女性は、スクリーニング時に血清β−ＨＣＧ妊娠テストで陰性、およびＴＰ１〜ＴＰ４の日１の尿β−ＨＣＧ  妊娠テストで陰性でなければならず、また医薬品の臨床試験のための非臨床試験の実施時期についてのガイドライン（ＣＰＭＰ／ＩＣＨ／２８６／９５、改定）の注記に従って、失敗率が低い（すなわち１年あたり１％未満）と定義されているバースコントロールの非常に有効な方法を用いなければならない。全試験期間中、妊娠する可能性のある女性被験者は、２つの独立した避妊法（例えばダイアフラムお
よび殺精子剤をコーティングしたコンドーム）を用いなければならない。コンドームと殺精子クリームの使用では十分に信頼できない。
閉経後２年未満であり、３ヶ月以上外科的に不妊ではない閉経後の女性は、ホルモン状態を測定する（ＦＳＨ  ＞３０  ＩＵ／Ｌ、エストラジオール  ＜  ２０  ｐｇ／ｍＬ）
【０２０５】
除外基準
病歴および臨床状態
Ｅ０１  臨床的に関連のある心血管、肺、胃腸、肝臓、腎臓、代謝性（Ｉ型糖尿病とは区別して）、血液、神経性、精神、全身性（全体として身体に影響を及ぼす）、眼、婦人科の（女性の場合）、または感染性疾患の病歴または存在；急性感染性疾患または急性の病気の兆候全て
Ｅ０２  過去６ヶ月間に、発作、昏睡または他人の助けを必要とするような重篤な低血糖の発症が１回より多くあった場合
Ｅ０３  頻繁な重篤な頭痛および／または偏頭痛、反復性の吐き気および／または嘔吐（月に２度より多く）
Ｅ０４  参加前の３ヶ月間の間の血液損失（≧３００ｍＬ）
Ｅ０５  症候性低血圧（血圧が低下すること全て）、または背臥位から立位に変えたとき、３分以内に２０ｍＭＨｇ以上のＳＢＰが低下することにより定義される無症候性起立性低血圧
Ｅ０６  薬物アレルギーの存在もしくは病歴または治験責任医師の判断に従う臨床的に重要なアレルギー疾患
Ｅ０７  試験期間中に、本治験プロトコルで許可されない薬物による治療を必要とする可能性があること
Ｅ０８  過去３ヶ月以内に任意の治験薬による試験に参加したこと
Ｅ０９  本試験前３ヶ月間における臨床的に重要な病気の症状、これは治験責任医師の意見に従い、本試験の目的に影響を及ぼし得るもの
Ｅ１０  薬物またはアルコールの乱用の存在（アルコール摂取量＞  ４０グラム／日
Ｅ１１  １日あたり５本または同等量よりも多く喫煙しており、本試験期間中に喫煙を中断できない
Ｅ１２  キサンチンベースの飲料の過剰摂取（＞４杯／日）
Ｅ１３  女性である場合、妊娠（β−ＨＣＧ試験陽性として定義される）、授乳中
【０２０６】
干渉物質
Ｅ１４  組み入れ前の１４日間以内またはその薬物の排出半減期もしくは薬力学半減期の５倍以内におけるあらゆる薬剤（Ｊｏｈｎ’ｓ  Ｗｏｒｔを含む）；試験開始前の最後の１ヶ月内におけるインスリン以外のあらゆる薬剤で最も長いものおよび定期的に使用しているもののどちらも（甲状腺ホルモン、脂質低下薬および降圧剤を除き、女性である場合はホルモン不妊法または閉経期ホルモン補充療法を除く）；最後の２８日間内でのあらゆるワクチン接種
【０２０７】
一般的条件
Ｅ１５  治験責任医師の判断において、本試験期間中、非従順でありそうかまたは言語の問題もしくは乏しい精神面での発達が理由で協力ができないであろう被験者
Ｅ１６  適用し得る法令に従う、以前の研究の排除期間内である被験者
Ｅ１７  緊急の場合に連絡不可能な被験者
Ｅ１８  被験者が本プロトコルの実施に直接的に関与する治験責任医師もしくは任意の補助治験責任医師、研究助手、薬剤師、治験コーディネーター、または他のこれらのスタッフである
【０２０８】
生物学的状態
Ｅ１９  以下のテストのどれに対しても陽性反応である：Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ  Ａｇ）、抗Ｂ型肝炎コア抗体（抗ＨＢｃ  Ａｂ）（化合物が陽性の免疫活性を有する場合）、抗Ｃ型肝炎ウイルス（抗ＨＣＶ２）抗体、抗ヒト免疫不全ウイルス１および２抗体（抗ＨＩＶ１および抗ＨＩＶ２  Ａｂ）
Ｅ２０  尿の薬物スクリーニングで陽性結果（アンフェタミン／メタミンフェタミン、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、カンナビノイド、コカイン、オピエート）
Ｅ２１  アルコールテスト陽性
【０２０９】
本試験特有事項
Ｅ２２  インスリングラルギンおよび賦形剤に対する過敏性がわかっている
Ｅ２３  深部脚静脈血栓の病歴もしくは存在全てまたは第１度親族（両親、兄妹または子供）に深部脚静脈血栓が頻繁に発症している
【０２１０】
実施例１０：治療
治験薬
・インスリングラルギン
異なる２つのインスリングラルギン製剤を用いる：
- １００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギンを含有する注射用のランタス（登録商標）Ｕ１００液剤（市販の製品）
- ３００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギンを含有する注射用のインスリングラルギン
Ｕ３００液剤
・用量：
- ランタス（登録商標）Ｕ１００：  ０．４Ｕ／ｋｇ（＝  参照試験  Ｒ）
- インスリングラルギン  Ｕ３００：  ０．４、０．６および０．９Ｕ／ｋｇ（＝試験  Ｔ1−Ｔ3）
・容器：  ３ｍＬのガラスカートリッジ
・施用経路：臍から横に５ｃｍ右と左の皮下に
・状態：  絶食時
・治療の所要期間：各期間につき１日、単回投与
・開始：  治療期間１〜４（ＴＰ１−４）の日１（Ｄ１）の０９：００
・参加した被験者の１００％が追加治療を受ける
【０２１１】
【表６】
2020040990.tif 000007
【０２１２】
投与
本試験は、計４回の治験薬投与を伴う単回投与試験である。被験者は、各被験者が参照治療（Ｒ）および各試験治療（Ｔ1-3）を一度受けるように、参照治療と試験治療の異な
るシーケンスに無作為化される。
【０２１３】
注射は臍の左または右に行い、両部位は別々の注射に用いられる。５〜１８日間の休薬期間は、連続的な投薬日期間から切り離し、好ましくは７日間（連続的な投薬期間の間の７日間）である。休薬期間の長さは、参加者と治験責任医師の両方が彼らのニーズに合わせ個々に変える。経験により、５日間は参加者に１週間あたりのクランプを１度にできる回復のための最小期間を構成し、一方１８日間は、投薬期間の間に避けられない場合に被験者に試験に関係のない義務を果たすための自由を可能にする３週間の休止期間を再び与える。
【０２１４】
ＩＰ投与は、絶食状態で投与され；被験者は、全クランプ期間を通して絶食を続ける。
【０２１５】
血中グルコース濃度は、前クランプ期間の投薬前１時間の間に任意のグルコース注入なしで５．５ｍｍｏｌ／Ｌ（１００ｍｇ／ｄＬ）  ±２０％の範囲内である。血中グルコースが任意のグルコース注入なしで少なくとも１時間安定している場合、ＩＰが投与される。ＩＰ投与は、治療期間１〜４の日１の９：００より早い時間および１４：００より遅い
時間には行わない。血中グルコースが１４：００前に安定しない場合投薬は行わない。その来院は終了し、被験者は後に新しい投薬来院１〜７日間を計画される。
【０２１６】
被験者ごとおよび投薬ごとに新しいカートリッジが用いられる。
【０２１７】
ＩＰ投与は、本試験にその他の点で関与していないかまたはＣＲＯでの本試験チームの一員ではない人物によってなされる。この人物はオープンなランダムリストに従って、ＩＰ投与を準備するためのランダムコードを得、それに従って被験者に投薬する。この準備および投薬は、第２の独立した人物によってチェックされる。投薬準備および治療シーケンスのそれぞれの文書は厳密に機密とし、任意の他の人物には開示されない。
【０２１８】
ＩＰ（インスリングラルギン）の用量の算出
各被験者に投与されるインスリングラルギンの量を算出するために、体重（ｋｇ）を小数点１ケタまで測定し、０．６Ｕ／ｋｇのインスリングラルギン用量について以下の例に示したように、算出したインスリンの量を整数まで切り上げまたは切り捨てた：
・体重７５．３ｋｇの被験者は、４５Ｕのインスリンを投与される（７５．３×０．６
＝  ４５．１８  、切り捨てにより４５とする）；
・体重７４．４ｋｇ被験者は、４５Ｕのインスリンを投与される（７４．４×０．６  ＝  ４４．６４、切り上げにより４５とする）。
【０２１９】
ＴＰ１  Ｄ１に記録された体重を全ての治療期間の治験薬用量の算出に用いる。この治験薬用量は、被験者の体重がＴＰ１からその後のＴＰのうちの１つまでの間に２ｋｇ以下でしか変化しなかった場合、変更されない。被験者の体重がＴＰ１からその後のＴＰのうちの１つまでの間に２ｋｇより多く変化した場合には、治験薬用量はそれぞれの治療期間のＤ１での体重に基づいて再計算される。
【０２２０】
シリンジおよび針
少量の注射液剤を正確に投与するのに適切に取り付けられた針を備えるシリンジのみが用いられる（例えば、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｒｅｆ  ３０５５０２、大きさ：１ｍＬ  ２７Ｇ  ３／８  ０．４０ｘ１０）。このシリンジは、治験責任医師より提供される。
【０２２１】
他の製品
クランプ手順期間中に用いられた他の製品を表５に記載する。
【０２２２】
【表７】
2020040990.tif 000008
【０２２３】
グルコース液剤、塩化ナトリウム液剤、ヘパリンおよびインスリングルリジンは、治験責任医師によって提供される。
【０２２４】
グルコース液剤：  ２０％  グルコース液剤は、被験者の個別の血中グルコースを設定した目的レベルに維持するために人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）を用いて注入される。第２の注入ポンプ（人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）の一部）は、ラインの開存を維持するために０．９％  塩化ナトリウム溶液を輸液する。必要な２０％  グルコース液剤の量が人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）の注入容量を超える場合、第２のグルコース注入ポンプを連動させる。
【０２２５】
ヘパリン：低用量ヘパリン液剤（１０．０００単位ヘパリン／１００ｍＬ生理食塩水）を、二腔カテーテルを介して注入する。このヘパリン液剤は、カテーテルの他の管腔において、人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）の血中グルコース測定のために用いられる血液と共に流され、系内の血液凝固を防止する目的がある。
【０２２６】
インスリングルリジン：  １５Ｕ  アピドラ（登録商標）［１００Ｕ／ｍＬ］を４９ｍＬの生理食塩水溶液に溶かし、癒着を防止するために１ｍＬの患者自身の血液を加えて０．３Ｕ／ｍＬの濃度で作製し、これを正常血糖を達成する個別の速度で注入する。
【０２２７】
盲検法の記載
被験者は、無作為化、盲検およびクロスオーバーのデザインで異なる４つの治療（Ｒ、Ｔ1、Ｔ2およびＴ3）を受ける。盲検を維持するために、第三者の非盲検人物をＩＰの調
合および投与に関与させる。この人物は本試験またはＣＲＯでの本試験チームの一員に別な方法では関与せず、どのような情報も誰にも開示せず、本試験の盲検状態を維持することを保証する。彼／彼女は、ランダムコードを入手し、それに従って被験者に投薬する。ＩＰの調製および投薬後、ランダムコードへのアクセス権を持つが同じように守秘義務のある第二の独立した人物によりチェックされる。
【０２２８】
治療群への被験者の割り付け法
ＩＰは、文書によりインフォームドコンセントを受けた被験者に対してのみ、本治験プロトコルに従って投与される。
【０２２９】
全ての組み入れ／除外基準を満たす被験者は、治療期間１の日１、治験薬投与の直前に割り当てられる：
・治療期間１のＤ１の朝における組み入れの経時順に従う増分被験者番号。９桁の被験者番号は、３つの部分（例えば、２７６  ００１  ００１、２７６  ００１  ００２、２７６  ００１  ００３、など）から構成されており、その最初の３桁（２７６）は国番号、真ん中の３桁は治験機関番号および最後の３桁はその機関内での被験者増分番号である。この被験者番号は全試験期間中変更せずに、被験者の同一性を確認する。
・予め計画した順番での治療番号の後、次の適格な被験者についての無作為化リストは、常に無作為化リストに従う次の治療番号を受ける
ＩＰ投与は、無作為化治療シーケンスに従ってなされる。
【０２３０】
本研究から退いた被験者は、すでに割り当てられている場合には彼らの被験者番号および治療番号を保持しておく。代替の被験者は、異なる同定番号（すなわち５００＋本研究を中止した被験者の番号）を有する。各被験者は本治験を中止した被験者と同じ治療シーケンスを受ける。
【０２３１】
スクリーニングで不合格であった被験者は、異なる番号を割り当てられる（例えば、９０１、９０２（インフォームドコンセントの署名後のスクリーニング期間中にＡＥが生じた場合のみ、ＣＲＦに記録するため））
注記：被験者の無作為化は、治験責任医師が本研究に関しての被験者の適格性を確認した後に行う。ベースラインパラメータは、投薬前直前に有効なパラメータである。
【０２３２】
包装およびラベリング
インスリングラルギン  Ｕ３００液剤は、３ｍＬカートリッジの再編成されたボックスでサノフィ−アベンティスより提供される。
【０２３３】
それぞれの番号のＩＰは、医薬品製造品質管理基準および地域の法的規制に従ってサノフィ−アベンティスの責任下で包装され、ＣＲＯに提供される。
【０２３４】
ラベル表示の内容は地域の法的規格および規制に従ってなされる。
【０２３５】
ランタス（登録商標）Ｕ１００は市販品であり、ＣＲＯにより注文される。
【０２３６】
貯蔵条件
全てのＩＰは、治験責任医師の責任下において適切に施錠された室内で保管され、権限を与えられた人物以外が近づいてはいけない。
【０２３７】
このＩＰは＋２℃〜＋８℃で保管し、光から保護し、凍結してはならない。
【０２３８】
本試験の間の無作為化コードへのアクセス
盲検を維持するために、第三者の非盲検人物をＩＰの調合および投与に関与させる。この人物は本試験および／またはＣＲＯでの本試験チームの一員に別な方法では関与せず、いかなる情報も誰にも開示せず、本試験の盲検状態を維持することを保証する。彼／彼女は、ランダムコードを入手し、それに従って被験者に投薬する。ＩＰの調製および投薬後、ランダムコードへのアクセス権を持つが同じように守秘義務のある第二の独立した人物によりチェックされる。
【０２３９】
有害事象の場合、その治験薬の知識が被験者の治療のために重要である場合の状況を除いては、そのコードは解読されない。各被験者について、治療の名前を含む解読資料（ｃｏｄｅ−ｂｒｅａｋｉｎｇ  ｍａｔｅｒｉａｌ）は、封緘されて配布される。それは、本臨床期間を通して治験機関内の安全な場所に置いておかれる。治験依頼者は、臨床試験の完了時に全ての解読資料（開封されているかまたは封をされている）を回収する。
【０２４０】
盲検状態が破られた場合、治験責任医師は、源データに開封の日付とコードを解読した理由を記録する。
【０２４１】
治験責任医師、治験施設薬剤師、またはＩＰの貯蔵および投与を行ったその他の人物は、本試験に用いられたＩＰが治験依頼者に指定されたように、かつ適切な法的規制に従って厳重に維持されることを保証する責任がある。
【０２４２】
全てのＩＰは、治験プロトコルに従ってなされ、配布され、再び戻されたＩＰの正確な記録が維持されることを保証するのが治験責任医師の責任である。
【０２４３】
併用治療
併用薬の使用は、除外基準Ｎｏ．  Ｅ１４に明示されているように、その基準下に述べられている薬物を除いて本試験期間中許可されず、治療期間１の日１の、被験者の組み入れ前に所定のタイムフレーム内で停止される（Ｅ１４を参照のこと）。
【０２４４】
被験者の標準インスリン治療とクランプ測定との干渉を避けるために、被験者は基礎インスリンの使用を控え、以下に切り替えねばならない：
・長時間作用型インスリン製品（すなわち、ランタス（登録商標）（インスリングラルギン）、Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標）（デテミル）またはウルトラレンテインスリン）に対する場合、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１における投薬の４８時間前より中間型または短時間作用型のインスリン製品へ
・中間型インスリン製品（すなわち、ＮＰＨ−インスリン）に対する場合、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１における投薬の２４時間前より短時間作用型へ
【０２４５】
短時間作用型インスリンの最終皮下注射は、治験薬投与の９時間前までである。ポンプ療法の被験者は、日１の朝、各ＩＰ投与の少なくとも６時間前にインスリン注入を中断する（９：００にＩＰ投与を開始するとすれば３：００頃に）。
【０２４６】
被験者の安全性を危険にさらさないような症候性の有害事象（例えば、頭痛）については、長期間持続する重篤なまたは中程度の有害事象のために併用薬を残しておく。特に、アセトアミノフェン／パラセタモールの使用は、肝毒性のリスクの知見がある場合、または肝臓酵素の異常が生じればすぐに禁止される。
【０２４７】
しかしながら、いかなる理由であっても特定の治療が必要とされる場合、正確な記録を適切な記録形式で取らねばならず、その記録には薬剤の名称（国際一般名）、１日の服用量およびこのような使用の継続期間を含む。治験依頼者は、頭痛の治療を除き、電子メールまたはファックスによって４８時間以内に通知されねばならない。
【０２４８】
潜在的なアレルギー反応の治療は、他で出版されているような推奨事項に従う（Ｓａｍｓｐｏｎ  ＨＡ、Ｍｕｎｏｚ−Ｆｕｒｌｏｎｇ  Ａ、Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｃｏｎｄ  ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ：  ｓｕｍｍａｒｙ  ｒｅｐｏｒｔ−Ｓｅｃｏｎｄ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ
ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ／Ｆｏｏｄ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  
Ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００６；１１７（２）：３９１−３９７）。アレルギー反応の重篤度に応じて、抗ヒスタミン剤、副腎皮質ホルモンおよびエピネフリンによるによる治療が考慮される。
【０２４９】
治療の説明責任およびコンプライアンス
・ＩＰ  コンプライアンス：
- ＩＰは、医師の直接的な指導の下で投与され、適切な記録は、ＩＰの分配および投与に責任のある人物または彼／彼女の代理人によって仕上げられる；治療シーケンスまたは用量における全ての情報は開示されず、文書は本試験に関与する他の人物がアクセスできないよう施錠される
- ＩＰ摂取は、測定可能な薬物アッセイ結果により確認される
・ＩＰの説明責任：
- ＩＰの分配および投与に責任のある人物または彼／彼女の代理人は、戻されたパック中に残っているカートリッジを数え、その後治療記録用紙（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｌｏｇ  Ｆｏｒｍ）に記入する
- 治験責任医師は、症例記録用紙（Ｃａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｆｏｒｍ）（ＣＲＦ）の適切なページに、投薬の日時に関する情報を記録する        
- その後本試験を管理するモニターチームが、（本試験の非盲検を防ぐために）データベースをロックした後にＩＰと適切な説明責任様式でそれらを比較することにより、ＣＲＦデータをチェックする。
【０２５０】
用いられたカートリッジは、データベースがロックされた後、本試験の終わりに治験依頼者によって完全に文書化された調整項目（ｒｅｃｏｎｃｉｌｉａｔｉｏｎ）が実施されるまで治験責任医師によって保管される。
【０２５１】
実施例１１：治験薬の評価
本試験は、０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００に対する、異なるインスリングラルギンＵ３００用量の代謝性効果および曝露比の評価、０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００に対する、異なる３つのインスリングラルギンＵ３００用量の作用持続時間の比較、インスリングラルギンＵ３００の用量応答性および用量と曝露の関係の説明、ならびにＩ型糖尿病の被験者における正常血糖クランプ設定時のインスリングラルギンＵ３００の安全性および忍容性の評価のためにデザインされる。
【０２５２】
薬力学
正常血糖クランプ
インスリングラルギンの薬力学効果、主に総グルコース処理およびインスリン作用の持続時間は、正常血糖クランプ技術によって評価される。
【０２５３】
正常血糖クランプの間、動脈血化した静脈の血中グルコース濃度（これは、全ての組織の総グルコース利用への供給、および被験者の血中グルコース濃度をその目的レベル（クランプレベル）に維持するのに必要とされるグルコース注入率（ＧＩＲ）を反映する）は、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）装置（連続グルコースモニタリングシステム、Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｅｌｋｈａｒｔ、ＩＮ、ＵＳＡ）を用いて連続的に測定され、記録される。
【０２５４】
グルコース要求量（ＧＩＲ−ＡＵＣ）は、外因性インスリン過剰により媒介される組織へのグルコース取り込み（グルコース処理またはグルコース低下活性）の尺度である。人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）は、１分間隔で血中グルコースレベルを測定し、予め設定したアルゴリズムを用いて血中グルコース中の変化に応じてそのグルコース注入率を調節す
る。
【０２５５】
クランプ手順
被験者の標準インスリン治療とクランプ測定との干渉を避けるために、被験者は基礎インスリンの使用を控え、以下に切り替えねばならない：
・長時間作用型インスリン製品（すなわち、ランタス（登録商標）（インスリングラルギン）、Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標）（デテミル）またはウルトラレンテインスリン）に対する場合、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１における投薬の４８時間前より中間型または短時間作用型のインスリン製品へ
・中間型インスリン製品（すなわち、ＮＰＨ−インスリン）に対する場合、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１における投薬の２４時間前より短時間作用型へ
【０２５６】
短時間作用型インスリンの最終皮下注射は、ＩＰ投与の９時間前までである。ポンプ療法の被験者は、日１の朝、各ＩＰ投与の少なくとも６時間前にインスリン注入を中断する（９：００にＩＰ投与を開始するとすれば３：００頃に）。
【０２５７】
治療期間１〜４（ＴＰ１〜ＴＰ４）の間、被験者は少なくとも１０時間、一晩絶食した後、Ｄ１の朝にクリニックに入る。
【０２５８】
Ｄ１の朝、前クランプ手順を開始し、被験者に人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）を連結する。血中グルコース濃度を４．４−６．６ｍｍｏｌ／Ｌ（８０−１２０ｍｇ／ｄＬ）に調節し、速効型インスリンアナログ（例えばインスリングルリジン）の静脈内ボーラス投与方法、および必要に応じて引き続くインスリンの個別注入により、これらの限界内を維持する。
【０２５９】
その後、治験薬投与の６０分前、投薬の１時間前からいかなるグルコース注入もなしに血中グルコースを５．５ｍｍｏｌ／Ｌ（１００ｍｇ／ｄＬ）  ±２０％（正常血糖クランプレベル）に調節する。このインスリングルリジン注入は治験薬の投与直前には中止する。
【０２６０】
血中グルコースがいかなるグルコース注入もなしに５．５ｍｍｏｌ／Ｌ（１００ｍｇ／ｄＬ）  ±２０％の範囲内で少なくとも１時間安定であればＩＰを投与する（ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１のＴ０、９：００頃）。被験者は、参照薬または治験薬（Ｒ、Ｔ1-3、表４を
参照のこと）を無作為化によって割り当てられたとおりに投与される。注射は臍の左または右になされる。
【０２６１】
ＩＰ投与は、治療期間１〜４の日１の９：００より早い時間および１４：００より遅い時間には行わない。血中グルコースが１４：００前に安定しない場合投薬は行わない。その来院は終了し、被験者は後に新しい投薬来院１〜７日間を計画される。
【０２６２】
ＩＰ投与は、絶食状態下で投与され；被験者は全クランプ期間を通して絶食を続ける。
【０２６３】
この正常血糖クランプ血中グルコースレベルはクランプの終了までグルコース液剤の静脈内注入法により連続的に維持される。
【０２６４】
任意の基礎インスリン補充の目的は、食間の代替内因性インスリン分泌に追加するかまたは分泌を平らにすることである。内因性インスリン分泌のない被験者において、本試験への参加を求められる場合、外因性インスリンが、肝臓グルコース生成物を処理するのに必要とされるインスリンの量をまかなうべきである。
【０２６５】
完璧に釣り合うと、過剰インスリンを補うための外部グルコースは不必要である。その結果グルコース注入率は約ゼロとなる。一旦インスリン作用が終わると、血中グルコース濃度は上昇する。この上昇までの時間と血中グルコース濃度が所定の閾値を越える時間を人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）で読み取る。
【０２６６】
ランタス（登録商標）Ｕ１００およびインスリングラルギン  Ｕ３００の選択された用量は平均基礎要求（ａｖｅｒａｇｅ  ｂａｓａｌ  ｎｅｅｄ）を超え、３６時間までに相当な大きさのＧＩＲに反映されるいくらかのグルコース要求の精製に向けられる。
【０２６７】
クランプのパフォーマンスを示す対応パラメータ（すなわちクランプのベースラインレベルで血中グルコースを維持するための精度）は、クランプ期間にわたる血中グルコースの変動性である。血中グルコースの変動性の尺度は、個々のクランプあたりの変動係数（ＣＶ％）である。
【０２６８】
血中グルコース中の低い変動係数は、クランプ設定におけるインスリン効果を正確に評価するために欠くことのできないものである。
【０２６９】
クランプ期間は治験薬注射の３６時間後である予め定めておいたクランプエンドを超えない。
【０２７０】
被験者は全グルコースクランプ（前クランプおよびクランプ）期間中絶食を続けるが、水は自由にとることができる。
【０２７１】
血中グルコースが、グルコース注入の中止後３０分後のクランプの終了前に１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を通過し、かつ治験責任医師が上記の１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を超える誤った血中グルコースレベルを導くような可能性のあるエラーが全て除外されていることを確認した場合、クランプの前ＩＰ投与時間に用いられるインスリングルリジンが、３６時間前にその所見を拡張するために与えられる。この場合、治験依頼者はその情報を得なければならない。
【０２７２】
被験者は、血中グルコースが十分等血糖（ｉｓｏｇｌｙｃｅｍｉｃ）範囲内である場合、クランプ設定から離れる。
【０２７３】
参加者は、ＴＰ１〜ＴＰ４の開放日（すなわち日２）に彼らの前治験薬を再開する。
【０２７４】
ＩＰの効果は約２４〜３６時間続き、このことが参加者を２日間施設にとどめる理由である。
【０２７５】
５〜１８日間の休薬期間は、連続的な投薬日期間から切り離し、好ましくは７日間（連続的な投薬期間の間の７日間）である。休薬期間の長さは、参加者と治験責任医師の両方が彼らのニーズに合わせ個々に変える。経験により、５日間は参加者に１週間あたりのクランプを１度にできる回復のための最小期間を構成し、一方１８日間は、投薬期間の間に避けられない場合に被験者に試験に関係のない義務を果たすための自由を可能にする３週間の休止期間を再び与える。
【０２７６】
スクリーニングおよびＴＰ１のＤ１は２８日を超えて切り離されないが、ＥＯＳは最終の投薬後Ｄ５より早くまたはＤ１４より遅くには生じない。
【０２７７】
薬力学サンプリング時間
前クランプ（ＩＰ投与の前）およびクランプ期間（ＩＰ投与後３６時間まで）の間、１
分おきの動脈血中グルコース濃度の測定のために、動脈血化した静脈血を２ｍＬ／ｈの速度で連続的に採決する。
【０２７８】
人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）校正用の動脈血化静脈血サンプル（０．２ｍＬ）（これは技術的な要求量である）を人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）に連結した後、治験薬投与後３６時間まで少なくとも３０分間隔で採取する。
【０２７９】
薬力学サンプルの数
血中グルコースはクランプ手順の間連続的に測定される。さらに、被験者１人の１治療期間につき少なくとも７４のサンプルをＩＰ投与後人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）の校正用に採取する。計７４×４×２４サンプル、すなわち７１０４サンプルを採取する（以下の表を参照のこと）。
【０２８０】
【表８】
2020040990.tif 000009
【０２８１】
薬力学取り扱い手順
【表９】
2020040990.tif 000010
【０２８２】
薬力学パラメータ
３６時間以内の体重で標準化したＧＩＲの曲線下面積（ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36）および３６時間以内の総ＧＩＲ−ＡＵＣの５０％までの時間（Ｔ50%−ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36）を算
出する。
【０２８３】
血中グルコースコントロールの持続時間は、正常血糖において、投薬からクランプグル
コースレベル（１００ｍｇ／ｄＬ）を超える逸脱までの時間として採用される。予め定義された限界内での制御された血中グルコースの時間は、投薬から特定の閾値（例えば、１１０、１３０および１５０ｍｇ／ｄＬの血中グルコースレベル）までが採用される。
【０２８４】
さらに、最大平滑化体重補正ＧＩＲ（ＧＩＲmax）およびＧＩＲmaxまでの時間ＧＩＲ−Ｔmaxを評価する。
【０２８５】
さらなる補足パラメータは必要に応じて導出される。
【０２８６】
安全性
ベースライン人口統計学特性
このベースライン人口統計学特性は以下から構成される：
・年齢（歳）
・体重（ｋｇ）
・身長（ｃｍ）
・ボディマス指数（ＢＭＩ）（ｋｇ／ｍ2）
ベースラインおよび本試験中の安全性評価
・スクリーニング時身体検査：  心血管系、胸部および肺、甲状腺、腹部、神経系、皮膚および粘膜、および筋骨格系ならびに関連する病歴および手術歴、糖尿病の病歴（糖尿病の診断、インスリン治療の開始、その後の合併症）；本試験に関連する知見のみが文書に記録される
・過去および現在の喫煙状況
・投薬前および試験期間中の身体検査：心血管系、腹部および肺；本試験に関連する知見のみが文書に記録される
・体温（耳）
・バイタルサイン：背臥位で１０分間の安静後測定された心拍数、呼吸数ならびに収縮期血圧および拡張期血圧、心拍数ならびに収縮期血圧および拡張期血圧は、立位で３分間の後にも測定する（人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）に連結されている場合は予定外の測定は除く）
臨床試験（血液サンプルの場合は絶食状態で）：
・血液学：赤血球数（ＲＢＣ）、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、ヘモグロビン（Ｈｂ）、白血球百分率数（ＷＢＣ）（好中球、好酸球、好塩基球、単球およびリンパ球）、血小板、ＩＮＲおよびａＰＴＴ
・生化学：
−電解質：  ナトリウム、カリウム、重炭酸塩、塩化物、カルシウム
−肝機能：  ＡＳＴ、ＡＬＴ、アルカリホスファターゼ、γ−グルタミルトランスフェラーゼ  （γＧＴ）、総ビリルビンおよび抱合型ビリルビン
−腎機能：クレアチニン、ＢＵＮ
−代謝：グルコース、アルブミン、総タンパク質、総コレステロール、トリグリセリド、ＨｂＡ１ｃ（スクリーニング、Ｄ１  ＴＰ１およびＥＯＳ時）、ＬＤＨ、アミラーゼ、リパーゼ、Ｃ−ペプチド（スクリーニングのみ）
−潜在的筋肉毒性：クレアチニンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）
−血清学：Ｂ型肝炎抗原（ＨＢｓ  Ａｇ）、抗Ｂ型肝炎コア抗体（ａｎｔｉ−ＨＢｃ
Ａｂ）、抗Ｃ型肝炎抗体（ａｎｔｉ−ＨＣＶ２）、抗ＨＩＶ１および抗ＨＩＶ２抗体
・保管用血液サンプル：  ５ｍＬの血液サンプルを乾燥した赤い蓋のついたチューブに採取し、約１５００ｇで１０分間、４℃で遠心分離する；その後血清を３つの保管用チューブに移し、すぐに蓋をしめて−２０℃で立てた状態で凍結させる。このサンプルは、予期しない安全性の問題が生じた場合、薬物投与前のベースライン値が、事前に評価されなかったパラメータ（例えば、血清学）用に確実に利用するために用いられる。このサンプルが用いられない場合は、治験依頼者の同意後に治験責任医師が破棄する
・検尿：タンパク質、グルコース、血液、ケトン体、ｐＨ
−定性検査：試験紙を用いて、定性検出のために新鮮な排尿試料に対してディップスティックを実施する；
−定量検査：  尿サンプル試験が、尿のディップスティックにより上記のパラメータのいずれかについて陽性である事象においては、グルコース、タンパク質、赤血球および白血球の数の定量測定が必要とされる（例えば、定量測定により任意の陽性ディップスティックパラメータを確認するため）。
・尿の薬物スクリーニング：  アンフェタミン／メトアンフェタミン、バルビツレート、ベンゾジアゼピン、カンナビノイド、コカイン、オピエート
・アルコール酒気検査
・妊娠／ホルモン検査（女性の場合）：
−スクリーニング時、血中β−ＨＣＧ
−ＴＰ１〜ＴＰ４、日１には尿β−ＨＣＧ
−閉経後２年以上経過の場合は、スクリーニング時にのみＦＳＨ／エストラジオール
・有害事象：被験者による自発的な報告または治験責任医師による観察
・ＥＣＧ  テレメトリー（シングルリード）
・１２誘導ＥＣＧ（自動）
・抗インスリン抗体
【０２８７】
臨床試験用の血液サンプルは絶食下状態で採取される。
【０２８８】
ＥＣＧ  方法論
ＥＣＧ  テレメトリー
・ＥＣＧ  テレメトリーは、医師により連続的にモニタリングされる。全ての不整脈イベントがプリンターによって記録され、被験者のＣＲＦに記載される。この文書はそのイベント、発生の時間および継続時間の診断を可能にし、治験責任医師またはその代理人によりサインされる。ＥＣＧテレメトリーは、このＥＣＧテレメトリー記録は、治験薬曝露を考慮した潜在的な再分析のために保管される。
【０２８９】
１２誘導  ＥＣＧ
・１２誘導ＥＣＧは、心電図装置（ＭＡＣ  ５５００TM）を使用して、背臥位で少なくとも１０分経過後に記録される。電極は本試験を通して各ＥＣＧ記録について同じ位置に配置される（リードの連結場所は消えないペンで印をつける）。
【０２９０】
・ＥＣＧは、（たとえあるとしても）ＰＫのサンプリング前に常に記録される。ＰＫサンプルはＥＣＧ後できる限り早く（１５分以内）に描かれる。
・各ＥＣＧは、同時１２誘導の、１０秒間の読み取りで構成される：
−シングル１２誘導ＥＣＧ（２５ｍＭ／ｓ、１０ｍｍ／ｍＶ）は、日時、被験者のイニシャルおよび番号、治験責任医師の署名、ならびに各誘導につき少なくとも３つの波形（ｃｏｍｐｌｅｘ）を含む、ＨＲ、ＰＲ、ＱＲＳ、ＱＴ、ＱＴｃ  自動校正評価を印刷する。治験責任医師の意見および自動値はＣＲＦに記録される。この印刷物は、施設レベルで保管される。
−ＥＣＧ中央検査部（ＥＣＧ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｌａｂ）による最終的な追加リーディングを可能にするデジタル記録：各デジタルファイルは、理論上時間（日付および時間ＤｘｘＴｘｘＨｘｘ）、実際の日付および実際の時間（記録時間）、治験依頼者研究コード、被験者番号（すなわち３桁）ならびに施設および国番号により同定される（関連する場合）。
・このデジタル記録、データ記憶および送信（要求のある場合は）は、全ての適用すべき法的規制（すなわちＦＤＡ  ２１  ＣＦＲ、第１１部）に従う。
【０２９１】
バイタルサイン、ＥＣＧ、および血液サンプルが治験薬投与および／または食事と同時に計画される場合、それらは治験薬投与および／または食事前になされる。ＰＫ、ＰＤ、または安全性のためのバイタルサイン、ＥＣＧ、および血液サンプルの測定が同時であるときは常に、以下の順番が重んじられる：ＥＣＧ、バイタルサイン、ＰＤ、ＰＫ、および安全性サンプル；ＰＫサンプルの正確なタイミング（ＰＫサンプルに対する時間窓許容についてのフローチャートを参照する）を重んじるために、他の測定は計画された時間の前になされる。この評価スケジュールは、本試験のデザインに適応される。
【０２９２】
注射部位の局所忍容性
注射部位における知見（例えば紅斑、浮腫、丘疹、硬化、小疱、疱疹）は、主に全体的刺激性評点（Ｇｌｏｂａｌ  Ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ  Ｓｃｏｒｅ）に従って採点される。評定尺度に従って≧３のスコアである局所注射部位反応は、有害事象としてさらに書き加えられる。
【０２９３】
被験者は、注射部位における感覚を報告することを求められる。
【０２９４】
薬物動態学
インスリングラルギンの薬物動態学評価のために、３６時間までのインスリン濃度曲線下面積（ＩＮＳ−ＡＵＣ）であるＩＮＳ−ＡＵＣ0-36、およびＩＮＳ−ＡＵＣ0-36の５０％までの時間が導出される。さらに、最大インスリン濃度ＩＮＳ−Ｃmax、およびＣmax（ＩＮＳ−Ｔmax）までの時間が得られる。
【０２９５】
サンプリング時間
治験薬の注射後０Ｈ、１Ｈ、２Ｈ、４Ｈ、６Ｈ、８Ｈ、１２Ｈ、１６Ｈ、２０Ｈ、２４Ｈ、２８Ｈ、３２Ｈおよび３６Ｈの時点において、インスリングラルギン濃度の測定のために血液を採血する。
【０２９６】
薬物動態学サンプルの数
【表１０】
2020040990.tif 000011
【０２９７】
薬物動態学取り扱い手順
ＩＰ投与およびサンプル採取の正確な時間はＣＲＦに記録しなければならない。
【０２９８】
薬物動態学パラメータ
単回投与後、以下の薬物動態学パラメータをインスリングラルギン濃度についての非分画法を用いて算出する。これらのパラメータは以下を含むがこれらに限定されない。
【０２９９】
【表１１】
2020040990.tif 000012
【０３００】
サンプリングされた血液量
【表１２】
2020040990.tif 000013
【０３０１】
本治験の盲検を保護するための測定
盲検を維持するために、第三者の非盲検人物をＩＰの調合および投与に関与させる。この人物は本試験および／もしくはＣＲＯでの本試験チームの一員に別な方法では関与しないかまたは治験依頼者ではない。彼／彼女はサノフィ−アベンティスよりランダムコードを入手し、そのランダムコードまたは他の全ての情報を他の人物に開示しない。安全上の理由で、治療の無作為化コードは重篤未知疑いのある有害事象（Ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ  Ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＳＵＳＡＲ））全ての保健当局（Ｈｅａｌｔｈ  Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ）への報告ならびに治験責任医師および／または治験依頼者いずれかの判断に従ってＩＰの使用と合理的に関連付けるために盲にされない。
【０３０２】
被験者の安全性
治験責任医師は安全性の問題の場合において全ての臨床的に関係のある決定を採用する
責任のある主要人物である。
【０３０３】
判断が必要な場合、専門医の意見は迅速に把握されるべきである（例えば、急性腎不全、痙攣、吹き出物、血管性浮腫、心停止、心電図の変形など）。
【０３０４】
実施例１２：試験手順
来院スケジュール
スクリーニング手順
スクリーニング手順は、参加への被験者の適格性を決定するために組み入れの３日前までに、２８日間以内で実施される。被験者は、治験責任医師より本試験の目的および手順の情報を受ける。被験者は本試験に関する実行の前にインフォームドコンセントに署名する。有害事象の記録はその後開始する。
【０３０５】
スクリーニングの前に、被験者は１０時間（必要である場合は、低血糖の対応策として少量の炭水化物を除いて）絶食（水以外）する。
【０３０６】
スクリーニング来院は以下の調査を含む：
１．人口統計学（年齢、性別、人種、過去および現在の喫煙状況、身長、体重、ＢＭＩ）
２．身体検査（心血管系、胸部および肺、甲状腺、腹部、神経系、皮膚および粘膜、ならびに筋骨格系）ならびに病歴および手術歴、糖尿病の病歴（糖尿病の診断、インスリン治療の開始、その後の合併症）；本試験に関連する知見のみが文書に記録される
３．関連のある先行治療および全ての併用治療、試験介入の直近２カ月前における平均的なインスリン療法
４．ＥＣＧ（標準１２誘導）、バイタルサイン測定（脈拍、背臥位で１０分間安静後および立位で３分間の後の収縮期血圧および拡張期血圧）、および深部体温（耳）
５．血液学、ＨｂＡ１ｃ、Ｃ−ペプチド、臨床化学、血清学、検尿、尿の薬物スクリーニング、アルコール酒気検査、β−ＨＣＧおよびＦＳＨ／エストラジオール血液検査（女性のみ、妥当な場合）による臨床試験
結論的な最終検査の結果に対して、１週間以内に１度の再検査が許可される。
【０３０７】
全ての組み入れ基準を満たし、除外基準にかからない被験者は、組み入れ来院の資格が得られる。
【０３０８】
スクリーニングで不合格である場合は、そのスクリーニング試験の基本結果が源文書に記録される。
【０３０９】
組み入れ手順（治療期間１の日１）
本試験への登録の資格を得た被験者は、ＴＰ１のＤ１の朝、７：００頃に絶食状態でクリニックに入る。
【０３１０】
この組み入れ試験は、最初の投薬日（Ｄ１、ＴＰ１）に実施され、以下の調査を含む：
最新の病歴（ＡＥ）に対する身体検査、以前の薬／併用薬および耳の体温
体重、ＢＭＩ（スクリーニング時で測定した身長）
ＥＣＧ（標準１２誘導）、バイタルサイン測定（背臥位で１０分安静した後、立位で３分経過後の心拍数、呼吸数、収縮期血圧および拡張期血圧）
血液学、臨床化学、検尿、尿の薬物スクリーニング、アルコール酒気検査、β−ＨＣＧ検尿（女性のみ、妥当な場合）による臨床試験。
【０３１１】
各被験者は、本試験への彼／彼女の組み入れの時間順に従って増加していく同定番号を
与えられる。
【０３１２】
無作為化は、治験責任医師による被験者の適格性が確認された後、Ｄ１／ＴＰ１で行う。１人より多くの被験者が同時に無作為化される場合、その被験者らはＤ１／ＴＰ１の朝の組み入れの経時順に従って連続して無作為化される（すなわち、最も低い番号の被験者が次に利用可能な無作為化番号を与えられる）。
【０３１３】
Ｄ１／ＴＰ１の臨床試験の結果がベースライン値であり、陰性でなければならないβ−ＨＣＧ検尿（スクリーニング来院時に採取されたサンプルに基づく）を除いて、確認試験であると考えられる。
【０３１４】
被験者が最終的に登録される場合、血液サンプルは、記録用および抗インスリン抗体の検出用に採血される（Ｄ１／ＴＰ１のみ）。
【０３１５】
来院のタイプ別記載
治療期間  １−４（Ｄ１〜Ｄ２）
被験者のクランプ測定による標準的なインスリン治療の干渉を防ぐために、被験者は、基礎インスリンの使用を控え、以下に切り替える
・長時間作用型インスリン製品（すなわち、ランタス（登録商標）（インスリングラルギン）、Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標）（デテミル）またはウルトラレンテインスリン）に対する場合、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１における投薬の４８時間前より中間型または短時間作用型のインスリン製品へ、
・中間型インスリン製品（すなわち、ＮＰＨ−インスリン）に対する場合、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１における投薬の２４時間前より短時間作用型へ
【０３１６】
短時間作用型インスリンの最終皮下注射は、治験薬投与の９時間前までである。ポンプ療法の被験者は、日１の朝、各ＩＰ投与の少なくとも６時間前にインスリン注入を中断する（９：００にＩＰ投与を開始するとすれば３：００頃に）。
【０３１７】
来院の際、被験者は以前の来院以降、彼らの体調に臨床的に重要な変化が起こっていないことを保証すること、プロトコルにおいて定義されている一般的および食事の制限を遵守すること、および必要な場合には彼らのインスリン治療を変更することを求められる。本試験基準に違反した場合、その被験者は本試験へのさらなる参加から排除される。違反の種類により、被験者は特定の期間のみ除外される場合があり、一度の試験または全試験の計画を立て直す。
【０３１８】
最終来院以降の被験者の健康状態および併用薬におけるいかなる変化も被験者の診療録（原本）およびＣＲＦに記録される。
【０３１９】
治験薬投与（各ＴＰのＤ１）直前の朝、体重、バイタルサイン、１２誘導ＥＣＧ、ＥＣＧモニタリングおよび深部体温を記録し、検尿ならびに尿薬物およびアルコールのスクリーニングを実施する。
【０３２０】
注射に必要とされるインスリングラルギンの量は、被験者の体重に従って算出される。
【０３２１】
貧血症に備えるために治療期間３のＤ１に血液学を分析する。陽性である場合、治療期間３と４の間の休薬間隔を可能な最大の１８日間まで延長するかまたはＴＰ４の開始を血液パラメータが正常になるまで延期する。追加の血液評価は治療期間４のＤ１になされる。
【０３２２】
被験者は、正常血糖クランプの終了まで絶食状態（水を除く）を維持する。
【０３２３】
その後、被験者は自動グルコース読み取り装置（人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM））に連結される３本の静脈ラインによって前クランプ手順を介する準備をし、サンプリング期間の全継続期間中、半座位（ｓｅｍｉ−ｒｅｃｕｍｂｅｎｔ  ｐｏｓｉｔｉｏｎ）のままになる。
【０３２４】
７：３０頃、左手の手背静脈または手首外側の静脈にカニューレを導入し、人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）に連結して血中グルコース濃度の測定のために動脈血化した静脈血を連続的に採取する。左手を約５５℃の空気温度を提供する加熱されたボックス（「ホットボックス（Ｈｏｔ−Ｂｏｘ）」）に入れ、動脈血化する。第２の静脈ラインは、左腕の肘前静脈でとり、インスリンおよび参照薬の血中グルコース測定のためのサンプルを採取するために用いた。第３の静脈ラインは反対側の前腕にカニューレを導入し、人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）のポンプで０．９％の生理食塩水および２０％のグルコース液剤、または外部ポンプを用いてインスリングラルジンを注入する。
【０３２５】
血管カテーテルの挿入からＤ１の９：００頃に治験薬を投与する６０分前まで、血中グルコースレベルは４．４〜６．６ｍｍｏｌ／Ｌ（８０−１２０ｍｇ／ｄＬ、前クランプ）内に維持される。血中グルコースレベルにより、さらなるインスリングルリジンの静脈内ボーラス注射を行い、その血中グルコースを目的範囲内に維持する。治験薬投与の１時間前には、クランプ終了まで静脈内ボーラス注射はなされない。
【０３２６】
血中グルコースを測定するために、さらなる血液サンプルを少なくとも３０分間隔で採取し、グルコースオキシダーゼ法をベースにした臨床基準値と照らし合わせて確認する。必要な場合、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）をその臨床検査基準値法の結果に従って再校正する。
【０３２７】
インスリン注入量は個別に調節される。血中グルコースが目的レベルで維持されている間、インスリンとグルコース両方の注入量は、クランプの導入期中、最小にされる。インスリングルリジン液剤は高精度の注入ポンプ（Ｔｅｒｕｍｏ  Ｓｐｒｉｔｚｅｎｐｕｍｐｅ  ＴＥ  ３１１TM）により注入され、２０％グルコース液剤は高精度の注入ポンプ（Ｔｅｒｕｍｏ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎｓｐｕｍｐｅ  ＴＥ  １７１TM）によって適用される。
【０３２８】
クランプレベルは、治験薬投与の６０分前に血中グルコースをクランプ期間の終わりまで約５．５ｍｍｏｌ／Ｌ（１００ｍｇ／ｄＬ）に維持するように調節される。この前クランプは延長され、ＩＰ投与は、導入期（前クランプ）中に目的のグルコースレベルを満たしていない場合には１４：００まで延期される。目的のグルコースレベルが１４：００までに確立されない場合には、その来院は終了し、被験者は１〜７日後に新しい投薬来院を計画される。
【０３２９】
インスリングルリジン注入は、治験薬投与の直前に中止される。ＰＫ用の最初のインスリンサンプルはその後すぐに採取される。９：００頃、無作為化計画に従い、参照治療（Ｒ、０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００）または試験治療（Ｔ1-3）のいず
れかの治験薬が標準化皮下脂肪技術（ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ  ｓｋｉｎ−ｆｏｌｄ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を用いて臍側部に投与される（表４）。
【０３３０】
クランプの間、１２誘導ＥＣＧはＩＰの注射２時間後および１２時間後、ならびにクランプ終了時に行われる。
【０３３１】
治験薬は、全試験期間の間、同じ人物によって投与されることが好ましい。注射の終了
時を時間ゼロ（Ｔ０）と定義し、その後のクランプ期間およびＰＫサンプリングの開始時間を定義する。
【０３３２】
全てのクランプ観察期間は３６時間続くため、予め定義されたクランプの終了時であるＤ２の２１：００頃に終了する。その後、被験者は、血中グルコースが十分等血糖（ｉｓｏｇｌｙｃｅｍｉｃ）範囲である場合正常血糖クランプ設定から離れ、食事および日常のインスリン治療を受ける。
【０３３３】
血中グルコースが、グルコース注入の中止後３０分間のクランプの期間に１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を通過し、かつ治験責任医師が上記の１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を超える誤った血中グルコースレベルを導くような可能性のあるエラーが全て除外されていることを確認した場合、薬物動態学の血液サンプリングのために、クランプ期間を３６時間まで延長するため、クランプの前ＩＰ投与時間に用いられる速効型インスリンアナログ（例えば、インスリングルリジン）が与えられる。この場合、治験依頼者はその情報を得なければならない。その後、被験者は、血中グルコースが十分等血糖（ｉｓｏｇｌｙｃｅｍｉｃ）範囲内である場合、正常血糖クランプ設定から離れ、食事および彼らの通常のインスリン治療を受ける。
【０３３４】
注射部位の反応は治験薬の注射後１５分はもちろん１時間後にも評価し、評価尺度に従って≧３のスコアが観察された場合はＡＥとして記録される。
【０３３５】
解放前に、自由な食事が提供され、通常のインスリン治療が再開される。バイタルサイン（心拍数；背臥位で１０分安静にした後、および３分間立位の後に測定される収縮期血圧および拡張期血圧）が繰り返され、血中グルコースが測定される（この血中グルコースの測定値は８０ｍｇ／ｄＬを上回らねばならない）。被験者は、治験医師によってかれらの健常な状態が保障された後、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ２に解放される。
【０３３６】
試験終了時来院
被験者は、ＴＰ４の最終投薬後、Ｄ５とＤ１４の間に試験終了時来院のために戻る。被験者は１０時間絶食（水を除く）しておく。このＥＯＳは以下の調査を含む：
病歴が更新されたことに伴う身体検査（体重、体温）
ＥＣＧ、バイタルサイン測定
血液学、ＨｂＡ１ｃ、生化学、検尿、および女性の場合にはβ−ＨＣＧ  血液検査による臨床試験
発生した全てのＡＥまたはＴＰ４以降に摂取した併用薬
抗インスリン抗体測定のための血液サンプル
治験責任医師は、全ての有効な臨床試験結果に基づいて、被験者が安全に本試験から解放されることを保証する。
【０３３７】
試験の制限事項
被験者は、日常のインスリン治療を、用いているインスリンのタイプ（長時間作用型、ＮＰＨ、中間作用型）に応じて−２〜−１日で中止する。その後血中グルコースレベルは通常の単時間作用型インスリンの複合皮下注射によって単独でコントロールされる。
【０３３８】
日常のインスリン治療は、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ２に解放された後、再開される。
【０３３９】
被験者は、本試験を通して、および試験前の２週間は、被験者の代謝性のコントロールまたはインスリン感度に関与するいかなる併用薬も摂ってはならない。
【０３４０】
アルコール飲料、グレープフルーツジュース、およびキサンチン誘導体を含有する刺激
性飲料（茶、コーヒー、コカコーラ（登録商標）のような飲料、チョコレート）の摂取は、クランプの完了まで、各治験薬投与の２４時間前から許可されない。
【０３４１】
オレンジジュースまたは同様の炭水化物は、クランプの間の低血糖に対する調整的手段として与えられるか、そうでなければ人工膵（ＢｉｏｓｔａｔｏｒTM）に連結されている場合は静脈内グルコース注入によって適切に打ち消される。
【０３４２】
各治験薬投与前の２日間は、激しい運動は許されない。
【０３４３】
１日あたり５本以下の喫煙をする被験者は本試験に含まれ、ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１およびＤ２を除いて本試験期間中喫煙をしてもよい。
【０３４４】
スクリーニングの日、被験者は少なくとも１０時間の一晩の絶食（必要な場合は低血糖に他する対策手段として少量の炭水化物を除く）後に施設を訪れる。
【０３４５】
ＴＰ１〜ＴＰ４のＤ１の朝、被験者は少なくとも１０時間の一晩の絶食後にクリニックに入り、Ｄ２のクランプ期間の終了まで絶食を続ける。自由な食事は、そのクランプの終了後に提供される。
【０３４６】
液体の供給は、各３６時間の期間につき少なくとも２５００ｍＬである。
【０３４７】
原データ（ｓｏｕｒｃｅ  ｄａｔａ）の定義
ＣＲＦに記録される以下に列挙した全ての評価は、以下に関する適切に署名され確認された原文書により裏付けられる：
・被験者の身元確認
・病歴（アレルギー反応の場合）
・臨床検査、バイタルサイン、体重および身長、体温；
・臨床検査評価（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ）、ＥＣＧ
・薬物動態の時点（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｔｉｍｅ  ｐｏｉｎｔｓ）
・来院および評価の日付および時間
・有害事象
・ＩＰ  投薬
・先行薬／併用薬
・クランプ手順の開始／終了、クランプデータ
【０３４８】
実施例１３：  統計的考察
被験者数の決定
本試験の主要な目的は、Ｕ１００（Ｒ）の１用量およびＵ３００の３つの異なる用量（Ｔ1〜Ｔ3）として与えられるインスリングラルギンについての比較代謝性効果を評価することである。
【０３４９】
試験ＰＫＤ１００８６のデータに基づき、約０．３７５の値が、自然対数変換されたスケールでＧＩＲ−ＡＵＣend of clampのＳＤwithinであると予測される。
【０３５０】
サンプル数算出の目的のために、０．３２５と０．４２５の間の被験者内ＳＤが用いられた。
【０３５１】
表１１は、修正幾何平均のペアワイズ治療比率（ｐａｉｒｗｉｓｅ    ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒａｔｉｏ）についての最大の不確実性（９０％信頼区間の点より）は９０％の確実性で得られ、１６〜２４の間の総被験者数Ｎに対して、ｌｏｇ  ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36に
ついての真の被験者内ＳＤ値は０．３２５〜０．４２５の間であると仮定することを示す。
【０３５２】
【表１３】
2020040990.tif 000014
【０３５３】
２０人の被験者について、ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36の真の被験者内ＳＤが０．３７５程度である場合、治療比率は１９．９％の最大不確実性（すなわち、９０％ＣＩが０．８０であり１／０．８０＝１．２５倍の観測比）、および９０％の確実性を有すると推定される。
【０３５４】
２０名の完了する被験者を確保するために２４名の被験者が含まれる。
【０３５５】
被験者の説明
被験者の内訳（ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）
関与した、無作為化された、曝露された（任意の量の治験薬を投与された）、完了した（すなわち全ての治験期間を完了した被験者）、中断についての主な理由に従って中断した被験者の数を含む、被験者の説明責任の詳細な要約が作製される。
【０３５６】
最終来院での被験者の内訳は、シーケンス群、本試験の終了時と治験薬の最終投与の日の内訳状態、最終来院の日付、中断の理由を含む一覧表で提示される。最初の治験薬投与の開始時または開始後に起こる本試験からの全ての撤退は、治験総括報告書（ＣＳＲ）の
中に完全に記録される。
【０３５７】
プロトコルの逸脱
本試験のデータをロックする前に、集団の定義および以下を含む他の試験基準について定義された基準に関して、臨床試験プロトコルの逸脱が調査される：
・組み入れおよび除外基準；
・治療のコンプライアンス；
・禁止された治療に関する、本臨床試験プロトコルのコンプライアンス；
・来院間隔および総治療所要期間に関する本臨床試験プロトコルのコンプライアンス；ならびに
・計画された活動および安全性評価が実施されたか否か、など。
【０３５８】
逸脱は、以下を含むがこれらに限定されない：
・無作為化後に（全ての変数の）いかなる評価も受けていない被験者；
・曝露されない被験者；
・（適切な場合）主要変数の全ての評価を受けていない被験者；
・組み入れ基準を満たしていなかったにもかかわらず本試験に介入した被験者；
・本試験の間に離脱基準が発生したが、離脱しなかった被験者；
・誤った治療または不正確な投薬を受けた被験者；
・禁止された併用薬を受けた被験者。
【０３５９】
主要な逸脱は列挙され、まとめられる。
【０３６０】
解析の母集団
任意の解析母集団（薬力学、薬物動態学および／または安全性）からの除外は全て、ＣＳＲに完全に記録される。
【０３６１】
任意の解析母集団から除外された被験者は、治療シーケンスおよび除外理由と共に列挙される。関連のある全ての情報がＣＳＲに完全に記録される。解析母集団について、全体および治療ごとの被験者の頻度が作表される。
【０３６２】
無作為化スケジュールに従って割り当てられた治療とは異なる治療を受けた被験者の事象については、解析は無作為化治療に従うのではなく実際に受けた治療に従って行われる。
【０３６３】
薬力学の母集団
治験薬投与に関するいかなる主要な逸脱も伴わず、ＰＤパラメータが有効である被験者は全て、薬物動態学母集団に含まれる、両方ではなく１つの期間においてＰＤプロファイルが不十分な被験者については、十分なプロファイルのパラメータをその解析に含んだ。
【０３６４】
ＩＰの投与後３６時間の観察期間内にインスリングルリジンを受けた（安全性の理由で）被験者については、薬力学データはインスリングルリジンの投与時までのみを考慮に入れる。
【０３６５】
薬力学解析からの除外
薬力学解析からの全ての除外事項は、その理由と共に列挙される。除外事項は、データベースのロックおよび盲検前にデータのレビューに基づいて決定され記録される。
【０３６６】
安全性の母集団
あらゆる比較治験薬に曝露された全ての被験者は、投与された治験薬の量にかかわらず
、安全性母集団に含まれる。
【０３６７】
薬物動態学の母集団
治験薬投与に関するいかなる主要な逸脱も伴わず、インスリンＰＫパラメータが有効である被験者は全て、薬物動態学母集団に含まれる。一度ＰＫプロファイルが不十分であったが、それが全ての治療期間ではなかった被験者については、十分なプロファイルのパラメータがその解析に含まれる。
【０３６８】
インスリングラルギンの生物学的分析アッセイは、インスリングルリジンのような他のインスリン類に干渉される。従って、ＩＰ投与後３６時間のクランプ観察期間内にインスリングルリジンを投与された（安全性の理由で）被験者のインスリングラルギンについての薬物動態学データは、評価から除外される。
【０３６９】
人口統計学およびベースラインの特性
被験者の人口統計学特性、病歴および診断
以下のデータを収集した：性別、スクリーニング時の年齢、身長、体重、および人種。被験者ごとのボディマス指数（ＢＭＩ）は、体重および身長のデータより算出する：
ＢＭＩ  ＝  体重［ｋｇ］／（身長［ｍ］）2
【０３７０】
人口統計学および背景特徴に関する全ての変数を、安全性母集団に関して個別に列挙しまとめる。
【０３７１】
病歴および診断に関する組み入れ基準からの逸脱を列挙し、個別に記載する。
【０３７２】
ベースライン安全性パラメータ
安全性変数について、変数として適用可能であっても、期間内または試験内の治験薬投与前に最期に組み込まれた値をベースライン値とする。そのベースラインの投与前値は、投与前に再確認する場合、その再確認した値をベースラインとして認め、統計量に用いる。
【０３７３】
治験曝露の程度および遵守
しかるべき場合には治験薬投与の詳細および補足情報を個別に列挙しまとめた。
【０３７４】
インスリングラルギンの個別総用量を治療ごとにまとめる。
【０３７５】
前／併用  治療／療法
前治療および併用療法（ある場合）を、世界保健機関−薬物文献リスト（Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｌｉｓｔ）（ＷＨＯ−ＤＲＬ、データベースをロックする時点で使用される最新バージョン）に従ってコード化し、個別に列挙した
併用インスリン薬（皮下）は、分けて列挙される。
【０３７６】
本クランプ手順中の任意の時間に与えられるインスリン注入またはボーラスは列挙されるかまたは、個人ベースで時間に対してプロットされる。本クランプ手順の間の投薬後に与えられるインスリン注入またはボーラスは、個人ベースで列挙される。
【０３７７】
薬力学変数の解析
全ての薬力学解析は、この薬力学母集団のデータを包含する。αレベルの調節は、複合解析に対してはなされない。
【０３７８】
インスリングラルギンの薬力学について、血中グルコース濃度およびグルコース注入率
（ＧＩＲ）がこのクランプ手順の間連続的に記録される。
【０３７９】
統計解析は、試験治療（Ｔ1〜Ｔ3）を参照治療（Ｒ）と比較する。
【０３８０】
薬力学変数の記載
被験者間の同等性を達成するために、体重でインスリン投与量を調節し、解析用にＧＩＲに関する全ての値を被験者の体重（ｋｇ）で割った。それにより以下において他に言及されない限りＧＩＲは常に体重で標準化されたフルコース注入量を言及する。
【０３８１】
主要ＰＤ変数
以下のＰＤ変数が主要変数であると考えられる。
【０３８２】
・体重で標準化されたグルコース注入率の時間曲線下面積
［ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36（ｍｇ／ｋｇ）］
ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36は、分刻みの時間尺度で段階的な定数関数について、矩形法則（ｒｅｃｔａｎｇｕｌａｒ  ｒｕｌｅ）に従って算出される。
【０３８３】
副次ＰＤ変数：
以下のＰＤ変数が導出され、副次変数として考慮される：
・ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36の５０％までの時間（ｈ）［Ｔ50%−ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36（ｈ）
］
・平滑化した体重で標準化した最大グルコース注入率［ＧＩＲmax（ｍｇ*ｍｉｎ／ｋｇ）］
・投薬後、ＧＩＲmaxに到達する最初の時間［ＧＩＲ−Ｔmax（ｈ）］
・正常血糖の所要時間（クランプレベルを超える平滑化血中グルコースプロファイルの上昇までの時間）は、投薬から、１０５ｍｇ／ｄＬ以下での平滑化血中グルコース濃度曲線の最終値までの時間として算出される
・予め定めておいた限度にコントロールされる血中グルコースの持続時間は、投薬から、以下の濃度以下での平滑化血中グルコース濃度の最終値までの時間として定義される
- １１０ｍｇ／ｄＬ
- １３０ｍｇ／ｄＬ
- １５０ｍｇ／ｄＬ
【０３８４】
平滑化
生の体重で標準化したＧＩＲの最大値は、ＧＩＲ修正においてノイズを受けやすい。従って、ＧＩＲmaxおよびＧＩＲmaxまでの時間の導出は、生の体重で標準化したＧＩＲデータに対して、ＬＯＥＳＳ（ｌｏｃａｌｌｙ  ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｓｍｏｏｔｈｉｎｇ  ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔｓ：平滑化散布点における局所重みづけ回帰）平滑化技術に基づく。ランタス（登録商標）のもとに公知であるようなＧＩＲプロファイルの予測されるモルホロジーにより、６％の平滑化因子が用いられる（ＳＡＳR、ＰｒｏＣ  ＬＯＥＳＳ、因子  ０．０６）。
【０３８５】
血中グルコースレベルは、ノイズを非常に受けやすい。従って、正常血糖の持続時間および血中グルコースコントロールの継続時間は、生の血中グルコースレベルに対して、ＬＯＥＳＳ（ｌｏｃａｌｌｙ  ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｓｍｏｏｔｈｉｎｇ  ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔｓ：平滑化散布点における局所重みづけ回帰）平滑化技術に基づく。モルホロジーにより、６％の平滑化因子が用いられる（ＳＡＳR、ＰＣ
ＬＯＥＳＳ、因子  ０．０６）。
【０３８６】
不十分な平滑化の場合には、異なる平滑化因子が追加解析のために用いられる。
【０３８７】
追加ＰＤ変数
さらなるパラメータを以下のとおりに導出する：
・グルコース注入の終わりまでの時間（投薬後、ゼロを超えるＧＩＲの最後の時間として）
追加ＰＤ変数は、結果の解釈のために必要であるとみなされる場合に導出される。
【０３８８】
一次ＰＤ解析
以下に記載される解析の前に、ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36が対数変換（自然対数）される。
【０３８９】
対数変換したＧＩＲ−ＡＵＣ0-36は、ＳＡＳ  ＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤを用いて、シーケンス、期間および治療についての固定項、ならびに、シーケンスブロック内の被験者についての治療の未構築Ｒマトリックス（ｉ，ｉ）分散および共分散を用いて、線形混合効果モデルにより解析される。
ｌｏｇ（パラメータ）＝  シーケンス＋期間＋治療＋誤差
【０３９０】
治療幾何平均の比（Ｔ1／Ｒ、Ｔ2／Ｒ、Ｔ3／Ｒ）についての９０％信頼区間（ＣＩ）
は、線形混合効果モデルフレームワーク内の治療手段間の差異についての推定値および９０％ＣＩをコンピュータにより計算し、真数変換により幾何平均の比に変換することにより得られる。同等性は、その比の９０％ＣＩが完全に参照間隔と同等な０．８０〜１．２５の範囲内である場合に結論付けられる。
【０３９１】
個別の比率（参照治療に対する試験治療）の一覧表は、対応する記述統計と共に提供される。
【０３９２】
二次解析／副次変数の解析
ＧＩＲプロファイルについての記述的な説明
個別の体重で標準化したＧＩＲ（ｍｇ*ｍｉｎ／ｋｇ）は、生データ、平滑化データお
よび累積生データについてプロットされる。
【０３９３】
時間に対しての、平均および中央値の体重で標準化したＧＩＲプロファイルならびに中央値割合累積プロファイルは治療ごとにプロットされる。
【０３９４】
累積プロットは投薬からクランプの終了までの時間をカバーする。
【０３９５】
導出されたＰＤパラメータについての記述的説明
ＰＤパラメータは個別に一覧表にされ、治療ごと尾に記述統計が作製される。
【０３９６】
副次ＰＤパラメータの治療比
信頼限界を伴う製剤比率（Ｔ1／Ｒ、Ｔ2／Ｒ、Ｔ3／Ｒ）は、一次解析について上に記
載したような、対応する線形混合効果モデルを用いて、標準化グルコース最大注入量［ＧＩＲmax（ｍｇ*ｍｉｎ／ｋｇ）］について導出される。治療間の診査比較は、従来の生物同等性基準（９０％  信頼限界  ０．８０〜１．２５）に基づく。
【０３９７】
ＧＩＲ−Ｔmax値の分散は各治療についてヒストグラムプロットによって表わされる。
さらに、試験治療および参照治療間のＧＩＲ−Ｔmaxにおける差異のヒストグラムが提供
される。
【０３９８】
副次ＰＤパラメータについての治療差異
Ｔ50%−ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36（ｈ）は、対になった治療比較について、Ｈｏｄｇｅｓ−
Ｌｅｈｍａｎｎ法をベースにノンパラメトリックに解析される。中央値におけるペアワイズ治療間差異（Ｔ１−Ｒ、Ｔ２−Ｒ、Ｔ３−Ｒ）についてのＣＩが導出される。Ｔ50%−
ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36値の分散は各治療についてヒストグラムプロットによって表わされる。さらに、治療間（Ｔ１−Ｒ、Ｔ２−Ｒ、Ｔ３−Ｒ）のＴ50%−ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36にお
ける差異のヒストグラムが提供される。
【０３９９】
ＧＩＲ−Ｔmax値の分散は各治療についてヒストグラムプロットによって表わされる。
さらに、試験治療および参照治療間のＧＩＲ−Ｔmaxにおける差異のヒストグラムが提供
される。
【０４００】
正常血糖および血中グルコースコントロールの持続時間は、ヒストグラムプロットによって表わされる。治療の比較は、ノンパラメトリックに行われる。
【０４０１】
クランプの実行
血中グルコース濃度の個別プロファイルをプロットした。
【０４０２】
クランプの所要時間は、投薬からクランプ終了までの間の時間（ｈｒ）としてクランプごとに得られる。
【０４０３】
クランプごとの血中グルコースの個別可変性は、クランプの個別開始時と個別終了時（またはクランプ中のインスリングルリジンの最初の投与）の間の血中グルコース値の変動係数（ＣＶ％）として導出される。クランプごとの個別平均血中グルコースレベルは、クランプの個別開始時と個別終了時（またはクランプ中のインスリングルリジンの最初の投与）の間の算術平均として導出される。
【０４０４】
パラメータは治療内で、個別に一覧表にされ記述的にまとめられる。
【０４０５】
安全性データの解析
安全性評価は個別の値（潜在的な臨床的に重要な異常）、記述統計（要約表、図）および必要な場合には統計解析（適切な推定値、信頼区間）のレビューに基づく。「潜在的な臨床的に重要な異常」（ＰＣＳＡ）  基準は、サノフィー・アベンティスの標準的基準に従って用いられる。基準は、本試験の統計解析プランに記録される。この安全性解析は、臨床試験からの安全性データの解析および報告に関するサノフィー・アベンティス基準に従って行われる。
【０４０６】
全ての安全性解析は、安全性母集団のデータを包含する。
【０４０７】
全ての安全性データについて、観察期間は３つの異なる分画に分けられる：
・前治療期間は、被験者がインフォームドコンセントを認めたときと、最初の比較治験薬投与との間の時間として定義される。
・治療中期間は、（最初の）治験薬投与からその後７２時間までの時間として定義される。
・後治療期間は、治療中期間後から、次の期間の（最初の）治験薬投与かまたはフォローアップ期間の終わりいずれかまでの時間として定義される。
【０４０８】
有害事象（ＡＥ）
全ての有害事象は、ＭｅｄＤＲＡ（データベースロック時の使用する際の最新バージョン）を用いてコード化される。
【０４０９】
以下の項目が、全ての有害事象について提供される：
・（被験者による）全ての有害事象の一覧
・有害事象に関連するコメントの一覧
【０４１０】
定義
安全性データに関して、観察期間は３つの異なる区分に分けられる：
・前治療期間は、被験者がインフォームドコンセントを認めたときと、最初の比較治験薬投与との間の時間として定義される。
・各期間あたりの治療中期間は、（最初の）治験薬投与からその後７２時間までの時間として定義される。
・後治療期間は、治療中期間後から、次の期間の（最初の）治験薬投与かまたはフォローアップ期間の終わりいずれかまでの時間として定義される。
【０４１１】
試験治療下で発現した有害事象
全てのＡＥを以下のように分類した：
・試験治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、治療期間に生じた（悪化を含む）全てのＡＥである；
・非試験治療下で発現した有害事象（ＮＴＥＡＥｓ）は、ＴＥＡＥとして分類されない全てのＡＥである：
- 前治療ＡＥ、治験薬の最初の投与前の前治療期間の間に発症した（または悪化した）ＡＥと定義される
- 後治療ＡＥ、治療中期間には悪化せず、後治療期間の間に発症したＡＥと定義される。
【０４１２】
治療への割り当て
解析の目的のために、各ＴＥＡＥをＡＥの発症（または悪化）に与えられた最期の治療に割り当てた。ＴＥＡＥがある治療において発生し、その後の治療下で悪化した場合、両方の治療に対するＴＥＡＥであると考える。
【０４１３】
欠測情報
情報の欠測または情報が矛盾していた場合、（例えば、部分的なデータまたは他の情報から）そのＡＥはＴＥＡＥではないと明らかに除外できる場合でない限り、ＡＥはＴＥＡＥとしてカウントされる。
【０４１４】
ＡＥの開始データが不完全または欠測している場合、不完全なデータがＡＥが治療前に始まっていたと示している場合を除いて、最初の治験薬投与後に生じたと推定される。
【０４１５】
試験治療下で発現した有害事象
試験治療下で発現した有害事象は列挙され、治療ごとにまとめられる：
・ＴＥＡＥの概要（少なくとも１つのＴＥＡＥ、重篤なＴＥＡＥ、中断につながるＴＥＡＥ、死亡（ある場合）の被験者数および割合
・主要な器官別大分類および基本語（ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ  ｔｅｒｍ）による、全ての試験治療下で発現した有害事象の要約（少なくとも１つのＴＥＡＥを伴う被験者の数および割合）（「インテキストテーブル」）
- 事象の数を伴わない表（治験総括報告書の本体用）
- 事象の数を含めた表（治験総括報告書の付表用）
- 製剤（Ｕ１００、Ｕ３００）ごとの被験者の数および被験者全体の数を含めた表（治験総括報告書の付表用）
・治療、器官別大分類および基本語による、被験者が示す試験治療下で発現した有害事象の列挙
【０４１６】
死亡、重篤な有害事象および他の重要な有害事象
死亡、重篤なＡＥおよび他の重要なＡＥのような場合は全て個別に列挙し、総括報告書に詳細に記載される。
【０４１７】
治療の中止につながる有害事象
いかなる発生の場合においても、治療の中止につながる全ての有害事象について個別の被験者の一覧表が作製される。
【０４１８】
臨床検査値の評価
血液学および生化学データ
臨床安全性パラメータは、治療期間１のＤ１およびＥＯＳ時に測定される。スケジュールごとに、これらの安全性パラメータは治療中期間に評価される（ＴＰ３およびＴＰ４での血液学を除く）。
【０４１９】
ベースラインとして用いられるべき値（血液学および生化学）は、最初の治療期間のＤ１前投薬で採取された値である。任意の計画されたベースライン試験が、任意の被験者について反復される場合、最終的に再チェックされた値がベースラインとして考慮される。ただしそれらは最初のＩＰ投与の前になされた。
【０４２０】
以下の表および列挙が提供される：
・ベースラインからの生データおよび変更についての記述統計（クレアチニンについての変化割合（％）を含む）
・後ベースラインのＰＣＳＡを伴う被験者から個別データの特定の一覧が提供され、機能および測定の時間によりソートされる
・計画された血液学および生化学についての再確認された値を含む全ての個別データは、生物学的機能および測定の時間ごとに列挙される。ある場合には、計画されていなかった臨床試験からのデータがこの一覧に含まれる。これらの一覧表において、個別データは下限または上限の臨床試験限界値よりも低いかもしくは高い場合、および／または定義されている場合、ＰＣＳＡ基準の絶対限界に達する場合にはフラグ化される
・以下のうち少なくとも１つを経験した被験者についての肝機能データの一覧表：
- 本試験期間中にＡＬＴ＞３ＵＬＮを少なくとも１回発生し、かつ総ビリルビン＞２ＵＬＮを少なくとも１回発生し、それらの少なくとも１つは最初の投与後である
- 治療中期間の定義にかかわらず、抱合型ビリルビン＞３５％総ビリルビン、かつ総ビリルビン＞１．５ＵＬＮが最初の投与後に同じサンプルで提供される
・特に、薬物取り込み、病歴および手術歴、アルコール習慣、トリガーファクター、ＡＬＴ値、関連する徴候および症状に伴う事象詳細な情報を含む、ＡＬＴ≧２ＵＬＮの増加に関する一覧表が提供される
・範囲外の定義の一覧表が提供される。
【０４２１】
ＰＣＳＡを伴う被験者の一覧表において、肝機能データ、ＣＰＫ、および好酸球が対応するＵＬＮの多発性（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）として説明される。
【０４２２】
検尿データ
再検査値を含む全ての定性検尿結果（ディップスティック）が一覧にされる。
【０４２３】
バイタルサイン
血圧および心拍数
心拍数ならびに収縮期血圧および拡張期血圧（ＳＢＰおよびＤＢＰ）は、人工膵（Ｂｉｏｓｔａｔｏｒ）に連結されている場合を除き、背臥位での１０分間安静後、および立位での３分間経過後に測定される。
【０４２４】
ベースラインとして用いられるべき値は、各治療期間のＤ１前投与評価値である。任意の計画されたベースライン試験が任意の被験者について繰り返される場合、最後の再検査値がベースラインとして考慮される。ただしそれらはＩＰ投与前になされた。
【０４２５】
心拍数および血圧については、起立性差異が背臥位から立位への変化として計算される。
【０４２６】
全てのパラメータについて、全ての未計画値および再検査値を含む「治療中」解析を実施する。
【０４２７】
以下の表および一覧が提供される：
・ベースラインの正常な状態または異常な状態にかかわらず、ＰＣＳＡを伴う被験者数の要約表がベースライン後ＰＣＳＡの発生表として提供される
・心拍数および血圧（背臥位および立位）について、計画された前投与測定および定義されたベースラインを基にした測定のタイプ（位置）、各パラメータおよび時点についての生データおよびベースラインからの変化（背臥位のみ）が記述統計にまとめられる
・無計画値および再検査値を含む全ての個別データが一覧表にされる（背臥位、立位、起立性差異）。その一覧表において、定義されている場合はＰＣＳＡ基準の限界に到達している場合、印をつけられる
・個別の後ベースラインＰＣＳＡのデータ一覧が提供される
・ある場合は、バイタルサイン評価に関するコメントも付表に載せる。
【０４２８】
体重、ボディマス指数、および体温
体重およびＢＭＩのベースラインとして用いられるべき値は、ＴＰ１のＤ１に収集された値である。
【０４２９】
体温のベースラインとして用いられるべき値は、各ＴＰのＤ１に収集された値である。
【０４３０】
個別データは、ＰＣＳＡ基準の限度に到達している場合にはその値に対する印（体重のみ）を含めて一覧表にされる。
【０４３１】
ＥＣＧ
心拍数、ＰＱ−、ＱＲＳ−、およびＱＴ−間隔ならびに自動読み取り機から収集されたＱＴ（ＱＴｃ）は、生パラメータ値およびベースラインからの変化として解析される。
【０４３２】
ベースラインとして用いられるべき値は各期間のＤ１投与前値である。いくつかの計画されたベースラインテストが任意の被験者について繰り返される場合、再検査値がベースラインとして考慮される。ただしそれらは期間の薬物投与前になされる。
【０４３３】
全てのパラメータについて、再検査値を含む、治療中期間になされた全てのベースライン後評価を用いて治療中解析が実施される。ベースライン後ＰＣＳＡを伴う被験者の数は、ベースラインの正常または異常な状態にかかわらず治療群ごとに要約表で提供される。
【０４３４】
全てのパラメータおよびベースラインからの変化についての生データは、パラメータ、治療、および測定時間ごとに記述統計でまとめられる。
【０４３５】
再検査値を含む個別データは一覧表にされ、治療、被験者、来院および測定時間によりソートされる。これらの一覧表において、ＰＣＳＡ基準の限度に到達している値は印がつけられる。
【０４３６】
ベースライン後ＰＣＳＡを伴う被験者からの個別データの一覧表が提供され、測定のタイプによってソートされ、被験者、期間および測定時間によってソートされる。
【０４３７】
さらに、延長したＱＴｃ（男性＞４５０ｍｓ、女性＞４７０ｍｓ）またはＱＴｃ＞６０ｍｓでのベースラインからの変化（男性および女性）を伴う被験者についての心臓のプロファイルの別々の一覧表、および最初の投薬後の定性評価において少なくとも１つの異常がある（すなわち異常なＥＣＧ）被験者の一覧表もまた提供される。
【０４３８】
他の関連する安全性パラメータ
身体検査
ある場合には、身体検査に関するコメントの一覧表が提供される。
【０４３９】
注射部位の局所忍容性
治療による頻度分布が、注射部位の局所忍容性のレベルについて提供される。個別データが一覧表にされる。各基準および治療において、被験者は最も重篤な結果を用いてカウントされる。
【０４４０】
アレルギー反応
アレルギー反応の一覧表
全てのアレルギー反応症例が、詳細な補足情報を含めて有害事象として記録される。全ての症例は治験総括報告書に詳細に記載される。
個別の症例および全ての補足データが一覧表にされる。
【０４４１】
アレルギー病歴および家族歴
アレルギー病歴および家族歴は、潜在的なアレルギー反応の任意の発症を伴う被験者について記録される。アレルギー病歴およびアレルギー家族歴の全ての詳細が個人ベースで一覧表にされる。
【０４４２】
抗インスリン抗体
本試験期間中および試験後調査からの抗インスリン抗体結果について、被験者の数を伴う要約表が提供される。個別の被験者一覧表が提供される。
【０４４３】
薬物動態学データの解析
薬物動態学パラメータ
ＰＫパラメータのリストは、上に示される。さらに、インスリンについてのＴ50%−Ａ
ＵＣ0-36が統計解析の項で導出される。
【０４４４】
統計解析
インスリングラルギンの薬物動態学パラメータは、各治療について、少なくとも算術平均および幾何平均、標準偏差（ＳＤ）、平均の標準誤差（ＳＥＭ）、変動係数（ＣＶ％）、最小値、中央値および最大値を用いて一覧表にされまとめられる。
【０４４５】
全ての薬物動態学解析は、上記に定義したような対応する薬物動態学母集団のデータを包含する。αレベルの調整は、複数解析にはなされない。
【０４４６】
統計解析は、試験治療（Ｔ1〜Ｔ3）と参照治療（Ｒ）を比較する。
【０４４７】
治療比の解析
この解析は、インスリングラルギンのＡＵＣ0-36について実施される。以下に記載され
る全ての解析の前に、ＡＵＣ0-36値が対数変換（自然対数）される。
【０４４８】
対数変換したパラメータは、ＳＡＳ  ＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤを用いて、シーケンス、期間および治療についての固定項、ならびに、シーケンスブロック内の被験者についての治療の未構築Ｒマトリックス（ｉ，ｉ）分散および共分散を用いて、線形混合効果モデルにより解析される。
ｌｏｇ（パラメータ）＝  シーケンス＋期間＋治療＋誤差。
【０４４９】
治療幾何平均の比（Ｔ1／Ｒ、Ｔ2／Ｒ、Ｔ3／Ｒ）についての推定値および９０％信頼
区間（ＣＩ）は、線形混合効果モデルフレームワーク内の治療手段間の差異についての推定値および９０％ＣＩをコンピュータにより計算し、真数変換により幾何平均の比に変換することにより得られる。生物同等性は、その比の９０％ＣＩが完全に参照間隔と同等な０．８０〜１．２５の範囲内である場合に結論付けられる。
【０４５０】
個別の治療比（Ｔ1／Ｒ、Ｔ2／Ｒ、Ｔ3／Ｒ）の一覧表は、対応する記述統計と共に提
供される。
【０４５１】
インスリンについてのＴ50%−ＡＵＣ0-36
インスリンについてのＴ50%−ＡＵＣ0-36の分散は、各治療についてのヒストグラムプ
ロットにて提示される。さらに、治療間（Ｔ1−Ｒ、Ｔ2−Ｒ、Ｔ3−Ｒ）のＴ50%−ＡＵＣ0-36における差異のヒストグラムが提供される。
【０４５２】
Ｔ50%−ＡＵＣ0-36（ｈ）は、ノンパラメトリックに解析される。
【０４５３】
インスリングラルギンＵ３００の用量−曝露関係
用量−曝露関係の記述的解析
インスリングラルギンＵ３００の用量−曝露関係は、以下により図表を用いて記載される
・被験者あたりの総用量に対する、曝露の被験者あたりのプロット
・体重（ｋｇ）あたりの用量に対する、曝露の被験者あたりのプロット
・体重（ｋｇ）あたりの用量に対する、用量で正規化された曝露の被験者あたりのプロット（０．６Ｕ／ｋｇでの用量正規化）
結果の解析が必要であるとみなされる場合、さらなる記述的解析が追加される。
【０４５４】
用量−曝露関係の統計解析
試験治療Ｔ1−Ｔ3について算出されたインスリングラルギンのＡＵＣについて、用量−曝露関係は、Ｇｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｏｕｇｈ  Ｋ、Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ  Ｍ、Ｋｅｅｎｅ  Ｏ  ｅｔ  ａｌ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｏｓｅ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｉｔｙ：ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｄｒｕｇ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １９９５；２９：１０３９−１０４８）における推奨に従って、「推定値」の解釈と共に経験パワーモデル（ｅｍｐｉｒｉｃａｌ  ｐｏｗｅｒ  ｍｏｄｅｌ）（ＰＫ−パラメータ＝ａ*用量b）を用いて評価される。
【０４５５】
この経験パワーモデルは、比例関係の確認と、薬物動態学および全ての離脱の臨床的重要性を評価することの両方に用いることのできる、非比例関係の程度の尺度を容易にかつ理解可能に提供する。しかしながら、用量比例関係研究の解析は、任意の非比例関係の薬物動態学および臨床的重要性が評価されることを可能にするために、有意な試験よりもむしろ推定を必要とする。
【０４５６】
このパワーモデルは、用量（Ｕ／ｋｇ体重）に対するランダム係数パワーモデルを用いた対数変換スケールで合致する：
ｌｏｇ（パラメータ）＝（ｌｏｇ（α）＋α［ｉ］）＋（β＋β［ｉ］）*ｌｏｇ（用
量）
ここで、ｌｏｇ（α）およびβは、それぞれ母集団の切片および勾配であり、α［ｉ］およびβ［ｉ］は、ｉ番目の被験者についてのαおよびβからのランダムな偏差である。
【０４５７】
βについての推定値および９０％信頼区間は、共分散パラメータの制限付き最尤法（ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｍａｘｉｍｕｍ  ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ（ＲＥＭＬ））推定による、ＳＡＳR／ＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤ手段での一般最小２乗推定（ｅｓｔｉｍａｔｅｄ  ｇ
ｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ  ｌｅａｓｔ  ｓｑｕａｒｅｓ）により得られる。βについての推定値および９０％信頼区間はさらに、ｒを、β推定値および信頼限界の冪に累乗することによる、ｒ倍の増加（ｒ＝１．５およびｒ＝２．２５［すなわち  高用量／低用量］）に伴うＰＫパラメータの増加についての推定値および９０％信頼区間を得るために用いられる。
【０４５８】
モデルの不適合（ｌａｃｋ−ｏｆ−ｆｉｔ）が明らかに存在する場合、（治療比の解析に用いられたような）混合効果モデルが解析に用いられる。ペアワイズ用量の増加に関連するパラメータの増加についての推定値および９０％ＣＩは、混合効果モデルのフレームワーク内の投薬間のペアワイズ差異についての仮定およびＣＩを最初に演算子、その後真数変換により比率に変換することにより得られる。
【０４５９】
ＰＫ／ＰＤ解析
適当な場合には、グラフィックディスプレイ（点図表プロット）がＰＫ／ＰＤ関係の説明のために説明される。
【０４６０】
実施例１４：  試験結果
被験者の内訳
Ｉ型糖尿病の被験者計２４名が登録され、無作為化され、少なくとも１用量の治験薬を受けた。２４名の無作為化された被験者のうち２名の被験者は自身の要求により本試験から離脱した。２２名の被験者が本プロトコルに従って試験を完了し、薬力学（ＰＤ）および薬物動態学（ＰＫ）解析に含まれた。治療された２４名全ての被験者が安全性評価に含まれた。
【０４６１】
主要なプロトコルの逸脱はなかった。
【０４６２】
人口統計学特性
以下のデータ（表１２）を収集した：性別、スクリーニング時の年齢、身長、体重、および人種。被験者ごとのボディマス指数（ＢＭＩ）を体重および身長のデータから算出した：ＢＭＩ＝体重［ｋｇ］・（身長［ｍ］）-2。
【０４６３】
【表１４】
2020040990.tif 000015
【０４６４】
クランプの実行
各被験者について４つの治療期間、Ｒ（ＬａｎｔｕｓＵ１００）、Ｔ１（０．４Ｕ／ｋｇ  ＨＯＥ９０１−Ｕ３００）、Ｔ２（０．６Ｕ／ｋｇ  ＨＯＥ９０１−Ｕ３００）およびＴ３（０．９Ｕ／ｋｇ  ＨＯＥ９０１−Ｕ３００）  において、インスリン薬物治療の前の個別のベースライン血中グルコース濃度は、１００ｍｇ／ｄＬ  のクランプレベルの定義と類似していた。投薬後、本クランプの観察期間の所要期間は３６時間であり、全ての治療期間で同じであった。
【０４６５】
主要エンドポイント
ＲおよびＴについてのバイオアベイラビリティ（曝露）および生物有効性（活性）における同等性は、立証されなかった。
【０４６６】
主要変数
血清インスリングラルギン濃度の０〜３６時間までの時間曲線下面積（ＩＮＳ−ＡＵＣ(0-36h)）は、ＲおよびＴ１およびＴ２については等価ではなく、Ｔ３ではほぼ等価であ
った。曝露は、Ｒと比較して、Ｔ１では約３７％未満、Ｔ２では約４３％未満およびＴ３でも同様であると推定された。
【０４６７】
０〜３６時間までの時間に対するＧＩＲの曲線下面積（ＧＩＲ−ＡＵＣ(0-36h)）は、
ＲおよびＴ１およびＴ２については等価ではなく、Ｔ３ではほぼ等価であった。血中グルコースコントロールを保つために必要とされる外因性グルコース利用は、Ｔ１では約８８％未満、Ｔ２では６７％でありＴ３でもほぼ同じであると推定された。
【０４６８】
副次変数
ＲでのＩＮＳ−ＡＵＣ(0-36h)（ｈ）の５０％までの時間は約１４時間であり、ゆえに
Ｔ１、Ｔ２およびＴ３それぞれでの約１６時間、１６時間および１９時間と比較して短かった。ＲでのＧＩＲ−ＡＵＣ(0-36h)（ｈ）の５０％までの時間は約１２時間であり、ゆ
えにＴ１、Ｔ２およびＴ３それぞれでの約１７時間、１８時間および２０時間と比較して短かった。
【０４６９】
安全性
重篤な有害事象（ＡＥ）またはＡＥに起因する離脱は報告されなかった。Ｒにおいて２名の被験者、Ｔ１において２名、およびＴ３において３名が計８件のＴＥＡＥを報告し、それらの全ては軽度〜中程度であって後遺症なしに解決した。最も高頻度に報告された事象は頭痛であった。注目すべきは、頭痛はクランプ試験の間の一般的な意見であり、高浸透性グルコース液剤の注入に関連しているということである。しかしながら、治験薬との関連も排除できない。Ｔ１、Ｔ２およびＴ３では注射部位の反応は報告されなかったが、Ｒにおいて２名の被験者が注射部位にほとんど確認できないような紅斑が現れた。
【０４７０】
結論
同じ用量のＲおよびＴ（Ｕ３００）は、単回投与後のバイオアベイラビリティ（曝露）および生物有効性（活性）において等価ではない。Ｔ１（０．４Ｕ／ｋｇ）およびＴ２（０．６Ｕ／ｋｇ）後の曝露および活性は、Ｒ（０．４Ｕ／ｋｇ）の投与後の曝露および活性と比較して少なかった。ＲおよびＴ３は曝露および外因性グルコース利用に関して実質的に同等であった。
【０４７１】
しかしながら、Ｔ１、Ｔ２およびＴ３は、Ｒに比べて平均付近でより変動の少ない、いっそうフラットなＰＫ（曝露）およびＰＤ（活性）プロファイル、すなわち基礎インスリン供給に望まれるようなプロファイルを示す。このことは、異なるプロファイルによって名目上等価な総曝露および総グルコース利用を提供するＲとＴ３を比較する場合に特に明らかである。
【０４７２】
Ｉ型糖尿病の被験者におけるＲ（ＬａｎｔｕｓＵ１００）およびＴ（ＨＯＥ９０１−Ｕ３００）の製剤間での曝露および活性におけるこれらの驚くべきかつ予想外の差異は、以下の図に効果的に示される。
【０４７３】
その上、Ｔ（ＨＯＥ９０１−Ｕ３００）の投与は安全性および忍容性の問題を伴わなかった。
【０４７４】
実施例１５：  Ｉ型糖尿病の患者において、異なる２つの皮下用量の（ＨＯＥ９０１−Ｕ３００）のグルコース動的活性および曝露をランタスＵ１００と比較するための、試験の理論的根拠
健常な被験者およびＩ型糖尿病の被験者における試験結果（前出の実施例を参照のこと）により、ランタス（登録商標）Ｕ１００とインスリングラルギン  Ｕ３００とでは曝露および有効性が同等ではないことが示された。被験者は、Ｕ１００およびＵ３００について同じ用量のインスリングラルギン（０．４Ｕ／ｋｇ）を投与されたが、Ｕ３００からの同じ単位量のＵ３００送達が引き起こした血中グルコースコントロールを維持するための曝露および外因性グルコース利用は、Ｕ１００からの送達よりも少なかった。ランタスＵ１００は、平均付近での著しい変動のない曝露および薬力学プロファイルを示すが、ＨＯＥ９０１−Ｕ３００は、基礎インスリン供給にとって望ましい曝露および薬力学プロファイルにおけるさらに少ない変動、それに加えより長い作用の持続時間を示した。
【０４７５】
定常状態条件下での薬物動態学および薬力学のプロファイルを評価するために、以下の実施例に記載される新しい試験は、Ｉ型糖尿病の患者における最終的な正常血糖クランプ設定とのコンパレータとして、ランタス（登録商標）Ｕ１００の標準用量に対して、異なる２つの皮下用量のインスリングラルギンＵ３００を比較する。本試験は、クランプ技術によってもたらされる血中グルコースコントロールおよび血中グルコース処理のパラメータにより評価されるように、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００と等効果なＵ３００の用量を推定することを目的とする。インスリングラルギン曝露は定常状態での反復皮下投与後の濃度−時間プロファイル、および定常状態での単位インスリンあたりのグルコース利用としての活性より評価される。
【０４７６】
本試験は、２つの並列グループでの２つのクロスオーバー治療（ＲおよびＴ１、ならびにＲおよびＴ２）、２−治療期間（ＴＰ１、ＴＰ２）および２−シーケンスをそれぞれ構成する。１度のスクリーニング来院（Ｄ２１〜Ｄ３）、院内期間（クランプ評価ごとに、Ｄ１〜Ｄ４朝、およびＤ８朝〜Ｄ１０夕方）を伴う治療来院（ＴＰ１およびＴＰ２のＤ１〜Ｄ１０、夕方の投薬を伴う）、および安全性パラメータの最終評価を伴う１度の試験終了時来院（最終投薬後Ｄ７〜Ｄ１０の間）がある。
【０４７７】
本試験のために選択されたランタスＵ１００の０．４Ｕ／ｋｇ用量は、Ｉ型糖尿病患者の正常血糖血中グルコースコントロールを提供することを特徴とし、Ｉ型糖尿病患者での他のクランプ研究において、容易に調査されている。
【０４７８】
インスリングラルギンＵ３００について試験される２つの異なる用量は、０．４および０．６  Ｕ／ｋｇである。この用量範囲は、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００に等効果なおよその用量を補完する（ｉｎｔｒａｐｏｌａｔｉｎｇ）ことができる。インスリングラルギンＵ３００の用量０．４Ｕ／ｋｇはすでに健常なボランティアおよびＩ型糖尿病患者で試験しており（前出の実施例を参照のこと）、予め設定した観察期間終了の３０時間および３６時間内で、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００よりも活性が低いことが明らかとなっている。０．４Ｕ／ｋｇのインスリングラルギン  Ｕ３００での血中グルコースコントロールが必要とする総グルコースディスポジションは、参照治験薬（０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００）よりも低かった。相応して、より高い用量のインスリングラルギンＵ３００、例えば０．６Ｕ／ｋｇのインスリングラルギンＵ３００は、より少ない総グルコースディスポジションでよりしっかりとした血中グルコースコントロールをもたらすことが期待された。さらに、比例的に用量を上げて行くことで、用量に比例する曝露および効果のプロファイルを調査することができる。
【０４７９】
Ｉ型糖尿病の患者における試験は、内因性インスリンの混乱効果（ｃｏｎｆｏｕｎｄｉｎｇ  ｉｍｐａｃｔ）を避け、曝露および作用の持続性の評価をより可能にする。
【０４８０】
本試験は、多くても２種類のＨＯＥ９０１−Ｕ３００  用量の以前の試験の結果に基づいたクロスオーバーデザインを採用しており、ランタス（登録商標）Ｕ１００と比較する。長時間作用型インスリン製品のグルコース動的活性の評価は、２４時間を超える正常血糖クランプ設定を必要とし、予め定義した注射間隔は、作用の延長された持続時間によった。
【０４８１】
活性な医薬品成分であるインスリングラルギンは、Ｕ１００とＵ３００の両方の製剤において同じである。本試験に用いられる用量は、日常用途の範囲内である。低血糖の全体的なリスクは完全に排除できないが、正常血糖クランプ技術によって制御される。
【０４８２】
薬力学
インスリングラルギンの薬力学活性は、Ｉ型糖尿病患者における正常血糖クランプ技術（これは、血中グルコース処理に対する投与された外因性インスリン製剤の効果を評価するために確立された標準手順である）によって評価される。
【０４８３】
正常血糖クランプ設定におけるグルコースディスポジションの評価に特有のパラメータは、体重で標準化されたグルコース注入率（ＧＩＲ）、２４時間および３６時間内に処理された総グルコース、それぞれＧＩＲ−ＡＵＣ0-24 およびＧＩＲ−ＡＵＣ0-36、ならび
にＧＩＲ−ＡＵＣ0-24 およびＧＩＲ−ＡＵＣ0-36の所定のパーセンテージまでの時間（
例えば、ＧＩＲ−ＡＵＣ0-36の５０％までの時間）である。
【０４８４】
補助的なパラメータは、平滑化体重で標準化したＧＩＲの最大値ＧＩＲmax、および、
ＧＩＲmaxまでの時間ＧＩＲ−Ｔmaxである。
【０４８５】
インスリングラルギンの作用持続時間は、投薬と正常血糖（クランプ）レベルを超える予め特定された逸脱との間の時間から導出される。
【０４８６】
グルコースのモニタリングは、皮下投与後、インスリングラルギンの長時間持続作用に
起因して３６時間実施される。
【０４８７】
薬物動態学
インスリングラルギンの徐放性質により、濃度プロファイルにおいて目立ったピークに欠けている。従って、ＩＮＳ−ＡＵＣの５０％までの時間（例えば、Ｔ50%  ＩＮＳ−Ａ
ＵＣ0-36）は、インスリングラルギンの曝露プロファイルの時間位置についての測定値として算出され、ＩＮＳ−ＣmaxおよびＩＮＳ−Ｔmaxは、追加測定値として役に立つ。
【０４８８】
主要試験目的
本試験の主要な目的は、定常状態において、０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００に対する、２つの異なるインスリングラルギンＵ３００用量の血中グルコースコントロールおよび必要とされる外因性グルコース利用を評価することである。
【０４８９】
副次試験目的
本試験の副次的な目的は、定常状態において、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００に対して、２つの異なるインスリングラルギンＵ３００用量の曝露比率を評価すること、０．４Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００に対して２つの異なるインスリングラルギンＵ３００用量の作用持続時間を比較すること、インスリングラルギンＵ３００の用量応答および用量曝露の関係を調査すること、ならびにＩ型糖尿病患者におけるインスリングラルギンＵ３００の安全性および忍容性を評価することである。
【０４９０】
実施例１６：  より高い濃度での長時間作用型インスリンの酸性製剤の溶解特性の変化
溶解特性に関しては、より高い濃度のインスリングラルギン製剤の影響がインビトロ試験系を用いることによって調査される。そうするために、沈殿の研究が、インビボ条件を模擬するｐＨ７．４のリン酸緩衝液を用いて実施される。
【０４９１】
沈殿したインスリンの上澄みは、インスリングラルギン含有量を測定するためにＨＰＬＣ技術を用いて調査される。
【０４９２】
本試験の詳細な記載：
沈殿緩衝溶液の調製：
１９．３２ｍｇのリン酸２水素ナトリウム１水和物（Ｍ：１３７．９８ｇ／ｍｏｌ）を１ｍＬの水に溶解した。０．１Ｍの水酸化ナトリウムまたは０．１Ｍの塩酸を用いてｐＨを７．４に調整した。
【０４９３】
沈殿研究の実施：
１０００Ｕ／ｍＬ  までの濃度のインスリングラルギン薬剤溶液、ならびに同量のインスリングラルギンおよび緩衝液を含む溶液をプラスチックチューブに入れ、わずかに振とうした。インスリングラルギンの沈殿後、分散物を予め定義した時間、ゆっくりとした回転速度で遠心分離した。所定量の溶解培地を取り出し、新しい緩衝培地に移した。
【０４９４】
インスリン含有量の測定：
上清サンプル中のインスリングラルギンの含有量を、水に溶解したリン酸２水素ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）および異なる量のアセトニトリルを含む、２つの移動相系を用いた逆相ＨＰＬＣによって、それぞれのインスリン参照標準に対して定量した。
【０４９５】
固定相として、オクタドデシルカラムを用い、検出波長は２１５ｎｍであった。
【０４９６】
より高い濃度の溶液（例えば、Ｕ５００およびＵ１０００）からのインスリングラルギ
ンの放出プロファイルはランタスＵ１００と比較してよりフラットで延長した。
【０４９７】
実施例１７：  沈殿物の顕微鏡分析
１００Ｕ／ｍＬ、３００Ｕ／ｍＬ、５００Ｕ／ｍＬ、７００Ｕ／ｍＬおよび１０００Ｕ／ｍＬの濃度を有するインスリングラルギン製剤の沈殿物を顕微鏡で調べた。２００μＬのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で沈殿した前記製剤（６０Ｕのインスリングラルギンの量と同じ）を、１００倍の大きさで透過型光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｍｏｄｅｌ  ＢＸ６１）で調べ、写真を以下に示し、また最大直径も示した。これらの研究により、濃度の増加に伴って明らかにより大きい粒子がもたらされるという沈殿物特性の違いが明らかとなった。これらの結果は図８に示した。
【０４９８】
実施例１８：  イヌにおけるインスリングラルギンの血中グルコース低下効果
インスリングラルギンの血中グルコース低下効果を健常な正常血糖のビーグル犬で評価した。このイヌは、０．３  ＩＵ／ｋｇの単回皮下注射を受けた。静脈血中グルコースを最初の注射前とその後の２４時間まで測定した。
【０４９９】
動物は、元々ハーラン（Ｈａｒｌａｎ）より得た、３０匹の健常な正常血糖のオスのビーグル犬群より取り出した。これらのイヌを標準化した条件下で、犬小屋の中で管理した。試験開始前日、それらのイヌを無作為に試験ケージに分配した。それらを、水道水へのアクセスは自由にして、実験開始前および実験中、１８時間絶食させた。本試験におけるイヌの体重は１３〜２７ｋｇであった。各実験後、それらのイヌを少なくとも２週間回復させた。
【０５００】
これらの動物をｎ＝６のグループに無作為化した。０時点において、これらの動物を試験化合物の単回投与で処理した。インスリングラルギンを、０．３  ＩＵ／ｋｇの用量で単回皮下注射として投与した。
【０５０１】
血液のサンプリングは、薬物投与（０ｈ）前およびその後２４時間まで、前腕静脈（橈側皮静脈）の穴を介して連続的に行った。血中グルコースを酵素処理で測定した（Ｇｌｕｃｏ−ｑｕａｎｔ(R）  グルコース／ＨＫキット  Ｒｏｃｈｅ／Ｈｉｔａｃｈｉ  ９１２）。
【０５０２】
インスリングラルギンの異なる濃度（１００および３００単位／ｍＬ）の調剤薬の皮下注射後の血中グルコースに対する影響を健常な正常血糖のビーグル犬において試験した。インスリングラルギン濃度の増加に伴い、作用の平均時間は、それぞれ６．８ｈ（Ｕ１００）〜７．６９ｈ（Ｕ３００）まで増加した。
【０５０３】
グラルギン濃度を１００から３００Ｕ／ｍＬまで増加させることによって、血中グルコース減少の時間作用プロファイルを、イヌにおいてよりフラットで延長した活性に向けて変化させた。
【０５０４】
イヌにおける現在のデータは、ヒトにおけるデータと一致し、インスリングラルギンのより高い薬物濃度が、作用のプロファイルおよびより長い持続時間に積極的に関連していることを示している。
【０５０５】
図
以下の図は、健常な被験者に対する同じ皮下投与後の、血中グルコース（ＰＤ）が一定である同時点における、ランタスＵ１００製剤およびランタスＵ３００製剤（インスリングラルギンＵ１００製剤およびインスリングラルギンＵ３００製剤）間の曝露（ＰＫ）および活性（ＰＤ）における驚くべきかつ予想外の差を効果的に示している。
【図面の簡単な説明】
【０５０６】
【図１】グルコース注入率（ＧＩＲ）  ランタスＵ１００
【図２】グルコース注入率（ＧＩＲ）  ランタス  Ｕ３００
【図３】血清インスリン濃度；  ランタスＵ１００（左）およびＵ３００（右）
【図４】血中グルコース（１／２）
【図５】血中グルコース（２／２）
【図６−１】正常血糖クランプ技術を用いた、Ｉ型糖尿病の患者における、０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００（インスリングラルギンＵ１００）と比較した、０．４、０．６および０．９Ｕ／ｋｇのＨＯＥ−９０１−Ｕ３００（インスリングラルギン  Ｕ３００）の無作為化、４−シーケンス、クロスオーバー、二重盲検、用量応答試験の結果。上パネル：  インスリングラルギン濃度（ｍＵ／Ｌ）、中パネル：血中グルコース（ＢＧ、ｍｇ／ｄＬ）、下パネル：グルコース注入率（ＧＩＲ、ｍｇ．ｋｇ-1．ｍｉｎ-1）。これらの曲線は、全ての被験者の全てのデータポイントのＬＯＷＥＳＳ平滑化平均を示す（母集団平均）；ＬＯＷＥＳＳは、ノイズで悪影響を及ぼされている時系列から、または２つの変数間の「ノイズの入った」関係の点図表プロットから、「平滑な」選択値群（ｓｅｔ  ｏｆ  ｖａｌｕｅｓ）を作製するデータ解析技術である。
【図６−２】図６−１の続きである。
【図７】グルコース注入率（ＧＩＲ、ｍｇ．ｋｇ-1．ｍｉｎ-1）。これらの曲線は、全ての被験者の全てのデータポイントのＬＯＷＥＳＳ平滑化平均を示す（母集団平均）；ＬＯＷＥＳＳは、ノイズで悪影響を及ぼされている時系列から、または２つの変数間の「ノイズの入った」関係の点図表プロットから、「平滑な」選択値群（ｓｅｔ  ｏｆ  ｖａｌｕｅｓ）を作製するデータ解析技術である。  凡例：  プロファイル１〜３（上から下に）  正常血糖クランプ技術を用いた、Ｉ型糖尿病患者における０．４、０．６および１．２Ｕ／ｋｇのランタス（登録商標）Ｕ１００（インスリングラルギンＵ１００）の、無作為化、二重盲検、並行群間用量応答試験の結果  凡例：プロファイル４〜７  （上から下に）  正常血糖クランプ技術を用いた、Ｉ型糖尿病患者における、０．４Ｕ／ｋｇ  ランタス（登録商標）Ｕ１００（インスリングラルギンＵ１００）と比較した、０．４、０．６および０．９Ｕ／ｋｇ  ＨＯＥ−９０１−Ｕ３００（インスリングラルギン  Ｕ３００の無作為化、４−シーケンス、クロスオーバー、二重盲検、用量応答試験の結果
【図８】インスリングラルギンの沈殿物の光学顕微鏡写真  濃度増加に伴う処方：  Ａ：  １００Ｕ／ｍＬ、Ｂ：  ３００Ｕ／ｍＬ、Ｃ：  ５００Ｕ／ｍＬ、Ｄ：  ７００Ｕ／ｍＬおよびＥ：  １０００Ｕ／ｍＬ、  倍率１００×であり、最大直径を含む。  全ての沈殿物は、インスリングラルギンの６０Ｕを用いて実施される
【図９】正常血糖のイヌにおけるインスリングラルギンＵ−１００対Ｕ−３００の時間作用プロファイル
【０５０７】
略語のリスト
℃          摂氏度
ＡＢＥ      平均生物学的同等性
ＡＥ        有害事象
ＡＬＴ      アラニンアミノトランスフェラーゼ
ａＰＰＴ    活性化部分トロンボプラスチン時間
ＡＲＦ      急性腎不全
ＡＳＴ      アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
β−ＨＣＧ  β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン
ｂｐｍ      １分あたりの拍数
ｃｍ        センチメートル
ＣＰＫ      クレアチニンホスホキナーゼ
ＣＲＦ      症例報告書
ＤＲＦ      矛盾解決フォーム（Ｄｉｓｃｒｅｐａｎｃｙ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｆｏｒｍ）
ＥＣＧ      心電図
ＥＯＳ      試験終了時（来院）
ＧＣＰ      医薬品の臨床試験の実施基準
ＧＧＴ      γ−グルタミルトランスフェラーゼ
Ｈｂ        ヘモグロビン
ＨｂＡ１ｃ  グリコシル化ヘモグロビン
ＨＢｓ      Ｂ型肝炎表面
Ｈｃｔ      ヘマトクリット
ＨＣＶ      Ｃ型肝炎ウイルス
ＨＩＶ      ヒト免疫不全ウイルス
ＨＲ        心拍数
ＩＮＮ      国際一般名称
ＩＮＲ      国際標準化比  （プロトロンビン時間）
ＩＰ        治験薬
ＩＲＢ／Ｉ  治験審査委員会／独立倫理委員会
Ｋｇ        キログラム
ＬＯＱ      定量限界
ＰＴ        プロトロンビン時間
ＱＴｃ      ＥＣＧ機械によって自動的に補正されるＱＴ間隔
ＱＴｃＢ    Ｂａｚｅｔｔの式によって補正されるＱＴ間隔
ＱＴｃＦ    Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａの式によって補正されるＱＴ間隔
ＱｔｃＮ    母集団アプローチによって補正されるＱＴ間隔
ＱｔｃＮｉ  個体の母集団アプローチによって補正されるＱＴ間隔
ＲＢＣ      赤血球数
ＳＢＰ      収縮期血圧
ＳＣＲ      スクリーニング（来院）
ＵＤＳ      尿の薬物スクリーニング
ＵＬＮ      正常範囲の上限
ＷＢＣ      白血球数
【図１】
2020040990.tif 000016
【図２】
2020040990.tif 000017
【図３】
2020040990.tif 000018
【図４】
2020040990.tif 000019
【図５】
2020040990.tif 000020
【図６−１】
2020040990.tif 000021
【図６−２】
2020040990.tif 000022
【図７】
2020040990.tif 000023
【図８】
2020040990.tif 000024
【図９】
2020040990.tif 000025
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月13日(2019.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２００-５００Ｕ／ｍＬ［２００-５００ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］のインスリングラルギンを含むが、ただし製剤のインスリングラルギンの濃度は２７０−３３０Ｕ／ｍＬではない水性医薬製剤。
【請求項２】
２００Ｕ／ｍＬ［２００ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］のインスリングラルギンを含む、請求項１の水性医薬製剤。
【請求項３】
５００Ｕ／ｍＬ［５００ＩＵ  ヒトインスリンと等モル］のインスリングラルギンを含む、請求項１の水性医薬製剤。
【請求項４】
リキシセナチド、エクセナチドおよびリラグルチドからなる群より選択されるエキセンジン−４のアナログを含む、請求項１〜３のいずれか1項に記載の水性医薬製剤。
【請求項５】
インスリングラルギン１Ｕあたり０.１μｇ〜１０μｇのリキシセナチドを含む、請求項４に記載の水性医薬製剤。
【請求項６】
インスリングラルギン１Ｕあたり０.２μｇ〜１μｇのリキシセナチドを含む、請求項５に記載の水性医薬製剤。
【請求項７】
インスリングラルギン１Ｕあたり０.２５μｇ〜０.７μｇのリキシセナチドを含む、請求項６に記載の水性医薬製剤。
【請求項８】
亜鉛、ｍ−クレゾール、グリセリン、ポリソルベート２０およびナトリウムを含む群より選択される１種またはそれ以上の賦形剤を含む請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項９】
９０μｇ／ｍＬの亜鉛、２.７ｍｇ／ｍｌのｍ−クレゾールおよび２０ｍｇ／ｍｌのグリセリン８５％を含む、請求項８に記載の水性医薬製剤。
【請求項１０】
９０μｇ／ｍＬの亜鉛、２.７ｍｇ／ｍｌのｍ−クレゾール、２０μｇ／ｍＬのポリソルベート２０および２０ｍｇ／ｍｌのグリセリン８５％を含む、請求項８に記載の水性医薬製剤。
【請求項１１】
ｐＨが３.４〜４.６である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１２】
ｐＨが４である、請求項１１に記載の水性医薬製剤。
【請求項１３】
ｐＨが４.５である、請求項１１に記載の水性医薬製剤。
【請求項１４】
患者のＩ型およびII型糖尿病を治療するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１５】
患者のＩ型およびII型糖尿病の治療において、長時間作用型インスリン曝露の持続時間を延長するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１６】
患者のＩ型およびII型糖尿病の治療において、低血糖の発生を減少させるための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１７】
患者のＩ型およびII型糖尿病の治療において、ピークレス長時間作用型基礎インスリンを与えるための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の水性医薬製剤。
【請求項１８】
Ｉ型糖尿病およびII型糖尿病の治療用医薬品の製造のための、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の水性医薬製剤の使用。