(57)【要約】      （修正有）【課題】ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を遺伝子操作により得ることおよびそれを作製する方法の提供。【解決手段】タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖及び第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖を含み、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖及び第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている遺伝子操作免疫グロブリン鎖を含む、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片。【選択図】図１
2020040980.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、
各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、自然に存在するＣＨ３ドメインである、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体を形成する、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電アミノ酸でないかまたは８８Ｉでなく、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基が、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｃおよび８５．１Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／または８６Ｓおよび８６Ｖならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２０Ｋ、２０Ｗ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８５．１Ｗ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙおよび８６Ｆからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２０Ｋ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖおよび８６Ｆからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、７Ｆ、７Ｍ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８５．１Ａ、８
５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、９０Ｋ、９０Ｎ、および９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位および２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位および２６位のアミノ酸残基ならびに場合によってさらなる位置のアミノ酸残基を含み、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０位、２２位、２６位、７９位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｋ、２２Ｖ、２６Ｔ、７９Ｙ、８５．１Ｓ、８６Ｖおよび９０Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、８４位であるかまたは８４Ｌおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１７】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および８６位のアミノ酸残基を含むかまたは８５．１Ｃおよびその保存的アミノ酸置換ならびに８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｅ、５Ａ、７Ｆ、２０Ｔ、２２Ｖ、２６Ｔ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８８Ｒおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１８】
アミノ酸残基置換８５．１Ｃが、アミノ酸残基置換８５．１Ａまたは８５．１Ｓで置き換えられ、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１７に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１９】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３位、５位、２０位、２２位、２６位、２７位、８１位、８４位、８５．１位および８６位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８４Ｍ、８５．１Ｍ、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２１】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２２】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、７９位であるかまたは７９Ｆおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２３】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および８６位のアミノ酸残基を含むかまたは８５．１Ｎおよびその保存的アミノ酸置換ならびに８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、７Ｍ、２０Ｎ、２２Ａ、２７Ｅ、７９Ｆ、８１Ａ、８４．２Ｓ、８５．１Ｎ、８６Ｖ、８８Ｌおよび９０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からな
る群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８Ｉおよびその保存的アミノ酸置換であり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換された場合によるさらなるアミノ酸残基が、８１Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２５】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位のアミノ酸残基ならびに３位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択されるさらなる位置のアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位および８６位ならびに場合によって３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される
さらなる位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２７】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位および２２位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位のアミノ酸残基ならびに３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２８】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位および２２位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位および８６位ならびに場合によって３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２９】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、自然に存在するＣＨ３ドメインである、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体を形成する、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、２０Ｎおよび２０Ｔならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３３】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２６位にて置換されたアミノ酸残基が、２６Ｔおよび２６Ｅならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｋ、２０Ｓ、２０Ｗおよび２０Ｅからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２２Ｔ、２６Ｋ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｋ、２０Ｓおよび２０Ｅからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｋ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、７Ｆ、７Ｍ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、８８Ｌ、８８Ｒ、８８Ｗ、９０Ｋ、９０Ｎ、および９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項２５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３７】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリンの親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３８】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである、請求項１から３６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３９】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面か
らの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４０】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、自然に存在するＣＨ２ドメインである、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４１】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４２】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基が、８５．１Ａおよび８５．１Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／または８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換であり、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８
位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｅ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｗ、２０Ｓ、２０Ｅ、２０Ｑ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖ、８６Ｑおよび８６Ｆからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｅ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｗ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖおよび８６Ｆからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、５Ｙ、７Ｍ、７Ｌ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８３Ｍ、８３Ｔ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８４．３Ｄ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位および２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４７】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位および２６位のアミノ酸残基ならびに場合によってさらなる位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項３９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４８】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパ
ク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４９】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、自然に存在するＣＨ２ドメインである、請求項４８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、２０Ｎおよび２０Ｔならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項４８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５１】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２６位にて置換されたアミノ酸残基が、２６Ｔおよび２６Ｅならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項４８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｗおよび２０Ｓからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｉ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ
、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｑ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｙ、および８８Ｗからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項４８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｗおよび２０Ｓからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項４８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、５Ｙ、７Ｍ、７Ｌ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８３Ｍ、８３Ｔ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８４．３Ｄ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、８８Ｋ、８８Ｌ、８８Ｒ、８８Ｗ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項４８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５５】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ２ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ２ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ２ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ２ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ２ドメインである、請求項３９から５４のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５６】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が、隣接しない、請求項１から５５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５７】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２つのアミノ酸残基が置換されている、請求項１から５５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５８】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面か
らの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ４ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５９】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、自然に存在するＣＨ４ドメインである、請求項５８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない、請求項５８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体を形成する、請求項５８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、タンパク質−タンパク質界面を有するさらなる遺伝子操作ドメインを含み、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク
質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる、
請求項１から６１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、自然に存在するドメインである、請求項６２に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６４】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体を形成する、請求項６２に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６５】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーが、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される、請求項６４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６６】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとが、ヘテロ二量体を形成する、請求項６２から６５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６７】
第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるかもしくはＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＣＨ１ドメインであるか、または第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるかもしくはＩＧＫＣドメインである、請求項６２から６５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６８】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインとが、自然に存在するホモ二量体を形成する、請求項６２に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６９】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインお
よび自然に存在する免疫グロブリンの第４メンバーのドナードメインが、ＣＨ３ドメインである、請求項６８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７０】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである、請求項６８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインが、ＩｇＡ１  ＣＨ３ドメインまたはＩｇＡ２  ＣＨ３ドメインである、請求項６８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７２】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成により相互作用している、請求項６２から６７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７３】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とホモ二量体形成により相互作用している、請求項６８から７１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７４】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基が、ドメインのコア完全性にとって必須でないアミノ酸である、請求項６２から７３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７５】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、Ｆｃ領域を含む、請求項１から７４のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２つのアミノ酸残基が置換されている、請求項６２から７５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７７】
全長抗体である、請求項１から７６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７８】
ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または全長抗体が、二重特異性である、請求項６２または７７に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７９】
二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または二重特異性全長抗体が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２からなる群から選択される抗原と結合する、請求項７８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８０】
少なくとも１つの追加ポリペプチドが、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する、請求項１から７９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８１】
前記追加ポリペプチドが、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ドメイン抗体、薬理活性ペプチドもしくはタンパク質、受容体細胞外ドメイン、ＣＤＲグラフトポリペプチドおよび治療的遺伝子操作タンパク質足場からなる群から選択される、請求項８０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８２】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、
各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８３】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８４】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、自然に存在するドメインである、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成により相互作用している、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８７】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ４ドメインでない、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８８】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択されるドメインである、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８９】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインである、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインである、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９１】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０
Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｋ、２０Ｗ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｋ、８８Ｙ、および８８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｙ、および８８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｔ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌ、８８Ｉおよび８８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、２６Ｅ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｒ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｔ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌ、８８Ｉおよび８８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌおよび８８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、２６Ｅ、２６Ｔ、２６Ｋ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌおよび８８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２または８３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８８位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／もしくは８６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８８位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／もしくは８６位であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２から９３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二
量体断片。
【請求項９５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８５．１位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、８６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８５．１位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、８６位であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２から９３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２２位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２２位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、２２位および／もしくは８６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２２位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２２位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、２２位および／もしくは８６位であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２から９３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９７】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２０位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２０位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、２６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２０位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２０位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基が、２６位であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２から９３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９８】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位および９０位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８２から９７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９９】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２０位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位および９０位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項８３から９７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１００】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリ
ンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１２位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１１９位にてアミノ酸残基で置換される場合、１２位にて置換されたアミノ酸残基と１１９位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１３位にてアミノ酸残基で置換される場合、２６位にて置換されたアミノ酸残基と１３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２７位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１８位にてアミノ酸残基で置換される場合、２７位にて置換されたアミノ酸残基と１８位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が７９位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８４．３位にてアミノ酸残基で置換される場合、７９位にて置換されたアミノ酸残基と８４．３位
にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が１１位であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがヒンジ領域を含むドメインである場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ヒンジ領域の３位にて置換されず、
各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０１】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択されるドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０２】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ヘテロ二量体を形成する、請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とホモ二量体形成により相互作用している、請求項１０２に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０４】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ホモ二量体を形成する、請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０５】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体を形成する、請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０６】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーが、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される、請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０７】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンス
ーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であるか、または自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）である、請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０８】
配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）が、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で置換されている、請求項１０７に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０９】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であるか、または自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である、請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１０】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するホモ二量体を形成する、請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンの第２メンバーのドナードメインが、ＣＨ３ドメインである、請求項１１０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１２】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである、請求項１１０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１３】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＩｇＡ１  ＣＨ３ドメインまたはＩｇＡ２  ＣＨ３ドメインである、請求項１１０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１４】
前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、さらに、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され
、さらに、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている、請求項８２から１１３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つの３Ｄ構造上の位置が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の同一の３Ｄ構造上の位置と比較して異なるアミノ酸残基である、請求項８２から１１４のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でない、請求項８２から１１５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１７】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基が、ドメインのコア完全性にとって必須でないアミノ酸である、請求項８２から１１６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１８】
ヘテロ二量体免疫グロブリン断片が、少なくとも２つの遺伝子操作ドメインを含み、第１遺伝子操作ドメインが、第２遺伝子操作ドメインと非同一であり、両方の遺伝子操作ドメインが、それらのタンパク質−タンパク質界面を介する相互作用により集合している、請求項８２から１１７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１９】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６０位、１６２位、１６４位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１１４位、１１６位、１１８位、１２２位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６０位、１６２位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される、請求項９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２１】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、Ｓ１３１Ｖ、Ｓ１３１Ｔ、Ｓ１３１Ａ、Ｓ１３１Ｎ、Ｓ１３１Ｑ、Ｓ１３１Ｅ、Ｓ１３１Ｋ、Ｓ１３１Ｗ、Ｖ１３３Ａ、Ｖ１３３Ｇ、Ｖ１３３Ｔ、Ｖ１３３Ｌ、Ｖ１３３Ｉ、Ｎ１３７Ｑ、Ｎ１３７Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｎ１３７Ｖ、Ｎ１３７Ｓ、Ｎ１３７Ｒ、Ｎ１３７Ｅ、Ｓ１７４Ｔ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７４Ｒ、Ｓ１７４Ｈ、Ｓ１７４
Ｋ、Ｓ１７４Ｗ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７４Ｃ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７６Ｉ、Ｓ１７６Ｔ、Ｓ１７６Ｈ、Ｓ１７６Ｑ、Ｓ１７６Ｖ、Ｓ１７６Ｗ、Ｓ１７６Ｙ、Ｓ１７６Ｆ、Ｔ１７８Ｑ、Ｔ１７８Ｌ、Ｔ１７８Ｖ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１７８Ｅ、Ｔ１７８Ｉ、Ｔ１７８Ｋ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１７８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、Ｓ１１４Ｅ、Ｓ１１４Ｋ、Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ａ、Ｆ１１６Ｔ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｍ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｋ、Ｓ１３１Ｔ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ｌ、Ｖ１３３Ａ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３７Ｋ、Ｎ１３８Ｋ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｙ、Ｑ１６０Ｆ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ａ、Ｓ１６２Ｇ、Ｓ１６２Ｄ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｔ１６４Ｍ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６Ｆ、Ｓ１７６Ｖ、Ｓ１７６Ｙ、Ｔ１７８Ｗ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１７８Ｌ、Ｔ１７８Ｋ、Ｔ１８０Ｎ、Ｔ１８０ＲおよびＴ１８０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１３１Ｖ、１３１Ａ、１３１Ｎ、１３１Ｑ、１３１Ｅ、１３１Ｋ、１３１Ｗ、１３１Ｓ、１３３Ａ、１３３Ｇ、１３３Ｔ、１３３Ｌ、１３３Ｉ、１３７Ｑ、１３７Ｔ、１３７Ｋ、１３７Ｖ、１３７Ｒ、１３７Ｎ、１３７Ｅ、１７４Ｔ、１７４Ｍ、１７４Ｓ、１７４Ｒ、１７４Ｈ、１７４Ｋ、１７４Ｗ、１７４Ｆ、１７４Ｃ、１７４Ｎ、１７６Ｉ、１７６Ｔ、１７６Ｈ、１７６Ｑ、１７６Ｗ、１７６Ｙ、１７６Ｖ、１７６Ｆ、１７８Ｑ、１７８Ｌ、１７８Ｖ、１７８Ｒ、１７８Ｅ、１７８Ｔ、１７８Ｉ、１７８Ｋ、１７８Ｅおよび１７８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される、請求項９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１１４Ｅ、１１４Ｋ、１１４Ｑ、１１６Ａ、１１６Ｙ、１１８Ｍ、１１８Ｌ、１２２Ｄ、１３１Ｋ、１３１Ｎ、１３３Ａ、１３３Ｌ、１３３Ｔ、１３７Ｔ、１３７Ｅ、１３７Ｋ、１３８Ｅ、１３８Ｋ、１６０Ｙ、１６０Ｆ、１６０Ｋ、１６２Ｄ、１６２Ａ、１６２Ｇ、１６５Ｌ、１６５Ｍ、１６７Ｅ、１６７Ｓ、１７４Ｎ、１７４Ｍ、１７４Ｆ、１７４Ｓ、１７６Ｖ、１７６Ｆ、１７６Ｙ、１７８Ｗ、１７８Ｒ、１７８Ｌ、１７８Ｋ、１８０Ｎ、１８０Ｒ、および１８０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される、請求項９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１７８位のアミノ酸残基を含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１３１位、１３７位、１６０位、１７６位および１８０位か
らなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１７４位のアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７４Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１３１位、１３７位、１６２位、１６５位、１６７位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２７】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１７８位のアミノ酸残基を含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６２位、１６４位、１７４位および１７６位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２８】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１７６位のアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１８位、１３１位、１３３位、１３８位、１６０位、１６２位、１６７位、１７４位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２９】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１７６位のアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３３位、１３７位、１６０位、１６２位、１６４位、１７４位および１７８位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３０】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１２４位、１２６位、１２８位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１６８位、１７０位、１７３位、１７５位、１８１位、１８３位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３１】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１４１Ｖ、１４１Ｔ、１４１Ｎ、１４１Ｑ、１４１Ｅ、１４１Ｋ、１４１Ｗ、１４１Ｓ、１４３Ａ、１４３Ｔ、１４３Ｌ、１４３Ｉ、１４３Ｖ、１４７Ｑ、１４７Ｔ、１４７Ｖ、１４７Ｓ、１４７Ｒ、１４７Ｎ、１４７Ｅ、１８１Ｔ、１８１Ｍ、１８１Ａ、
１８１Ｒ、１８１Ｈ、１８１Ｋ、１８１Ｗ、１８１Ｆ、１８１Ｃ、１８１Ｎ、１８３Ｉ、１８３Ｈ、１８３Ｑ、１８３Ｖ、１８３Ｔ、１８３Ｗ、１８３Ｙ、１８３Ｆ、１８５Ｑ、１８５Ｌ、１８５Ｒ、１８５Ｅ、１８５Ｉ、１８５Ｔ、１８５Ｋ、１８５Ｙおよび１８５Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３２】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、Ｓ１２４Ｅ、Ｓ１２４Ｋ、Ｓ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ａ、Ｆ１２６Ｔ、Ｆ１２６Ｙ、Ｌ１２８Ｆ、Ｌ１２８Ｍ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｋ、Ａ１４１Ｔ、Ａ１４１Ｎ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｖ、Ｇ１４３Ａ、Ｇ１４３Ｌ、Ｇ１４３Ｔ、Ｋ１４７Ｔ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｈ１６８Ｙ、Ｈ１６８Ｆ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｄ、Ｆ１７０Ａ、Ｆ１７０Ｇ、Ｆ１７０Ｔ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｑ１７５Ｅ、Ｑ１７５Ｓ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ａ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３Ｖ、Ｓ１８３Ｆ、Ｓ１８３Ｙ、Ｖ１８５Ｗ、Ｖ１８５Ｒ、Ｖ１８５Ｌ、Ｖ１８５Ｋ、Ｔ１８７Ｎ、Ｔ１８７ＫおよびＴ１８７Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３３】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１８５位のアミノ酸残基を含むかまたはＶ１８５Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１４１位、１４３位、１４７位、１６８位、１８３位および１８７位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３４】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１８１位のアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８１Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１２８位、１４１位、１４３位、１４７位、１７０位、１７３位、１７５位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３５】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１８５位のアミノ酸残基を含むかまたはＶ１８５Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１７０位、１７３位、１８１位および１８３位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３６】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１８３位のアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８３Ｖおよびその保存的アミノ酸
置換ならびに場合によって１２８位、１４１位、１４３位、１４８位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３７】
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、１８３位のアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８３Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位および１８５位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＥＵ番号付けに従って示される、請求項８９または９０に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３８】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が、隣接しない、請求項８２から１３７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３９】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２つのアミノ酸残基が置換されている、請求項８２から１３８のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない、請求項８２から１３９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４１】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、互いに少なくとも１アミノ酸または少なくとも２アミノ酸または少なくとも３アミノ酸または少なくとも４アミノ酸または少なくとも５アミノ酸または少なくとも５から１０アミノ酸または少なくとも１０から３０アミノ酸異なるアミノ酸配列を有する、請求項８２から１４０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４２】
少なくとも１つの追加ポリペプチドが、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する、請求項８２から１４１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４３】
前記追加ポリペプチドが、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ドメイン抗体、薬理活性ペプチドもしくはタンパク質、受容体細胞外ドメイン、ＣＤＲグラフトポリペプチドおよび治療的遺伝子操作タンパク質足場からなる群から選択される、請求項１４２に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、タンパク質−タンパク質界面を有するさらなる遺伝子操作ドメインを含み、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基
で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる、
請求項８２または１００に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４５】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーが、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４６】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４７】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４８】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）またはＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーのドナードメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメイン（配列番号４７）であり、ただし自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーがＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパ
ーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４９】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）またはＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーのドナードメインが、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメイン（配列番号９６）またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメイン（配列番号９７）であり、ただし自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーがＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５０】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインが、ＩｇＡ１  ＣＨ３ドメインまたはＩｇＡ２  ＣＨ３ドメインである、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５１】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、自然に存在するドメインである、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５３】
第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとが、ヘテロ二量体を形成する、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作
ドメインの親ドメインとが、ホモ二量体を形成する、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でない、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５７】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＣＨ３ドメインである、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５８】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５９】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が、隣接しない、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６１】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２つのアミノ酸残基が置換されている、請求項１４４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６２】
Ｆｃ領域を含む、請求項８２から１６１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６３】
全長抗体である、請求項８２から１６１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６４】
ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または全長抗体が、二重特異性である、請求項１４４または１６３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６５】
二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または二重特異
性全長抗体が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２からなる群から選択される抗原と結合する、請求項１６４に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６６】
（ａ）第１親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基を、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、（ｂ）第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基を、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、
（ｃ）前記遺伝子操作免疫グロブリン鎖をコードする核酸を含む宿主細胞を培養するステップであって、培養が、核酸が発現され、遺伝子操作免疫グロブリン鎖が生成されるようなものであるステップと、
（ｄ）ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を宿主細胞培養物から回収するステップと
を含む、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を生成する方法。
【請求項１６７】
ドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換される、親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸残基が、両方のドメインのアルファ炭素トレースを重ね合わせることにより親ドメインのタンパク質−タンパク質界面上に重畳した場合に、親ドメインの最も近い残基と６Å未満以内の距離の３Ｄの位置を占めるドナードメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸残基であり、ドナードメインが、親ドメインとは異なる、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
第１親免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６９】
第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７０】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ホモ二量体を形成する、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７１】
第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ３ドメインである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７２】
第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ４ドメインである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７３】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ヘテロ二量体を形成する、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるかもしくはＩＧＫＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるかもしくはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ１ドメインである、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１７７】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体を形成する、請求項１６６から１７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７８】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーが、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される、請求項１６６から１７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７９】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である、請求項１７８に記載の方法。
【請求項１８０】
配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）が、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で置換されている、請求項１７９に記載の方法。
【請求項１８１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である、請求項１７８に記載の方法。
【請求項１８２】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するホモ二量体を形成する、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１８３】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンの第２メンバーのドナードメインが、ＣＨ３ドメインである、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でない、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１８５】
第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が、隣接しない、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１８６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１８７】
第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２つのアミノ酸残基が置換されている、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１８８】
第１および第２親免疫グロブリン鎖が、Ｆｃ領域を含む、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１８９】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基が、ドメインのコア完全性にとって必須でないアミノ酸である、請求項１６６から１８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９０】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、タンパク質−タンパク質界面を有するさらなる遺伝子操作ドメインを含み、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる、
請求項１６６に記載の方法。
【請求項１９１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成する、請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でない、請求項１９０に記載の方法。
【請求項１９３】
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片が、全長抗体である、請求項
１６６または１９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９４】
ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または全長抗体が、二重特異性である、請求項１６６または１９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９５】
二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または二重特異性抗体が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２からなる群から選択される抗原と結合する、請求項１９４に記載の方法。
【請求項１９６】
少なくとも１つの追加ポリペプチドが、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する、請求項１６６から１９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９７】
前記追加ポリペプチドが、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ドメイン抗体、薬理活性ペプチドもしくはタンパク質、受容体細胞外ドメイン、ＣＤＲグラフトポリペプチドおよび治療的遺伝子操作タンパク質足場からなる群から選択される、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９８】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有するドメインを含む多重ドメインタンパク質を用意するステップと、
（ｂ）ドナードメインとして、（ａ）のドメインとは異なる、タンパク質−タンパク質界面を有するドメインを含む自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーを選択するステップと、
（ｃ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインと、（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインとの３Ｄ構造を重畳するステップと、
（ｄ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインと（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインとを重畳した３Ｄ構造において露出タンパク質−タンパク質界面残基を同定するステップと、
ｅ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を、（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインからの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基からの３Ｄ構造上同等の位置にてアミノ酸残基で置換するステップと
を含む、多重ドメインタンパク質のドメインのタンパク質−タンパク質界面を遺伝子操作する方法。
【請求項１９９】
（ａ）の多重ドメインタンパク質のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインが、別のドメインとホモ二量体を形成できる、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２００】
（ａ）の多重ドメインタンパク質のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインが、別のドメインとヘテロ二量体を形成できる、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２０１】
多重ドメインタンパク質のドメイン中および自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーのドナードメイン中で同定される露出界面残基が、ドメインのコア完全性にとって必須でない、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２０２】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーが、自然に存在するヘテロ二量体である、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２０３】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーが、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２０４】
免疫グロブリンスーパーファミリーの自然に存在するメンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）またはＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２０５】
配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）が、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で置換されている、請求項２０４に記載の方法。
【請求項２０６】
免疫グロブリンスーパーファミリーの自然に存在するメンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）またはＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２０７】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーが、自然に存在するホモ二量体である、請求項１９８に記載の方法。
【請求項２０８】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの少なくとも１つのアミノ酸残基で置換されたタンパク質−タンパク質界面を有する少なくとも１つの遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの少なくとも１つのアミノ酸残基で置換されたタンパク質−タンパク質界面を有する少なくとも１つの遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を遺伝子操作により得るための、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインの使用であって、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体を形成する、使用。
【請求項２０９】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインが、Ｔ細胞受容体鎖から選択される、請求項２０８に記載の使用。
【請求項２１０】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である、請求項２０８に記載の使用。
【請求項２１１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である、請求項２０８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１１年３月２５日に出願された米国仮出願第６１／４６７，７２７号（その全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている）の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、遺伝子操作ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片およびそれを作製する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ヘテロ二量体タンパク質を作製する方法が報告されている。ヘテロ二量体二重特異性抗体を構築して生成するための第１のアプローチは、クアドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
ＣおよびＣｕｅｌｌｏ  ＡＣ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５（５９３４）：５３７〜４０ページ（１９８３））であった（これは、二重特異性抗体の所望の特異性を有するマウスモノクローナル抗体を発現する２つの異なるハイブリドーマ株化細胞の体細胞融合からなる）。得られるハイブリッド−ハイブリドーマ（またはクアドローマ）株化細胞内では２つの異なる免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖および軽鎖がランダムに対形成しているので、１０までの異なる免疫グロブリン種が生じ、そのうち１つだけが機能的な二重特異性抗体である（Ｋｕｆｅｒ  Ｐら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２２（５）：２３８〜４４ページ（２００４））。誤って対形成された副生成物の存在は、生成収率を著しく低下させ、生成物の均質性を達成するために精巧な精製手順が要求される。Ｉｇ重鎖の誤った対形成は、いくつかの合理的設計方策を用いることにより低下させることができ、それらのほとんどは、ＣＨ３ドメインホモ二量体の２つのサブユニット間の人造の相補的ヘテロ二量体界面の設計によるヘテロ二量体形成のための抗体重鎖を遺伝子操作により得る。遺伝子操作されたＣＨ３ヘテロ二量体ドメイン対の最初の報告は、ヘテロ二量体Ｆｃ部分を生じるための「空洞に入る隆起（ｐｒｏｔｕｂｅｒａｎｃｅ−ｉｎｔｏ−ｃａｖｉｔｙ）」アプローチについて記載するＣａｒｔｅｒらによりなされた（米国特許第５，８０７，７０６号；「穴に入る小塊（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）」；Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ＡＭら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１６（７）：６７７〜８１ページ（１９９８））。代替の設計が最近開発され、これは、ＷＯ２００７／１１０２０５に記載されるようなモジュールのコア組成を改変することによる新しいＣＨ３モジュール対の設計またはＷＯ２００７／１４７９０１もしくはＷＯ２００９／０８９００４に記載されるようなモジュール間の相補的塩橋の設計のいずれかに関与する。ＣＨ３遺伝子操作方策の不都合な点は、これらの技術が、著しい量の望ましくないホモ二量体の生成をまだもたらすことである。よって、ホモ二量体種の含量を最小限にする遺伝子操作技術に対する必要性が残っている。
【０００４】
これらの特許公報に記載されるようなＩｇ重鎖のヘテロ二量体形成における様々なアプローチに関係なく、任意のＣＨ３ドメイン合理的遺伝子操作などに基づく完全二重特異性抗体（すなわち、ユニークな抗原結合部位を創出する可変重鎖および軽鎖ドメインのユニークなセットをそれぞれが有する２つのＦＡＢ断片と１つの二量体Ｆｃ領域）の開発が直面する主な障害は、軽鎖の誤った対形成を回避するために、両方のＦＡＢにとって共通の軽鎖を有することが要求されることである（Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２４８（１〜２）：７〜１５ページ（２００１））。このことは、別個の重鎖により異なる抗原と結合する同一の軽鎖を有する抗体を用いることにより達成できるが、このような抗体を単離することが要求され、このことは、ディスプレイ技術の使用を通常含み、所望の特異性を有する２つの別個のヒトモノクローナル抗体を直接用いて、さ
らなるＣＤＲまたは軽鎖の遺伝子操作を用いずに完全二重特異性抗体に再び集合させることを可能にする技術は、現在ない。よって、全体的な構造が自然抗体と同様の、すなわち２つのＦＡＢ断片（それぞれがユニークな抗原結合部位を創出する可変重鎖および軽鎖ドメインのユニークなセットを有する）と１つの二量体Ｆｃ領域とを含む、完全で正しく集合した二重特異性抗体を作製する必要性が存在する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本開示は、全般的に、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を遺伝子操作により得ることおよびそれを作製する方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１２位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１１９位にてアミノ酸残基で置換される場合、１２位にて置換されたアミノ酸残基と１１９位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１３位にてアミノ酸残基で置換される場合、２６位にて置換されたアミノ酸残基と１３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作
免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２７位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１８位にてアミノ酸残基で置換される場合、２７位にて置換されたアミノ酸残基と１８位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が７９位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８４．３位にてアミノ酸残基で置換される場合、７９位にて置換されたアミノ酸残基と８４．３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が１１位であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがヒンジ領域を含むドメインである場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ヒンジ領域の３位にて置換されず、
各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【０００７】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グ
ロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【０００８】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８
４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、
各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【０００９】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位ならびに３位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択されるさらなる位置のアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００１０】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン
鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００１１】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、
自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２０位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００１２】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ４ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００１３】
別の態様では、本開示は、
（ａ）第１親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基を、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、
（ｂ）第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも
１つのアミノ酸残基を、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、
（ｃ）前記遺伝子操作免疫グロブリン鎖をコードする核酸を含む宿主細胞を培養するステップであって、培養が、核酸が発現され、遺伝子操作免疫グロブリン鎖が生成されるようなものであるステップと、
（ｄ）ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を宿主細胞培養物から回収するステップと
を含む、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を生成する方法を提供する。
【００１４】
別の態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有するドメインを含む多重ドメインタンパク質を用意するステップと、
（ｂ）ドナードメインとして、（ａ）のドメインとは異なる、タンパク質−タンパク質界面を有するドメインを含む自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーを選択するステップと、
（ｃ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインと、（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインとの３Ｄ構造を重畳するステップと、
（ｄ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインと（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインとを重畳した３Ｄ構造において露出タンパク質−タンパク質界面残基を同定するステップと、
（ｅ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を、（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインからの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基からの３Ｄ構造上同等の位置にてアミノ酸残基で置換するステップとを含む、多重ドメインタンパク質のドメインのタンパク質−タンパク質界面を遺伝子操作する方法を提供する。
【００１５】
さらなる態様では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの少なくとも１つのアミノ酸残基で置換されたタンパク質−タンパク質界面を有する少なくとも１つの遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの少なくとも１つのアミノ酸残基で置換されたタンパク質−タンパク質界面を有する少なくとも１つの遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を遺伝子操作により得るための、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインの使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】遺伝子操作ＣＨ３ドメインＢＴアルファ鎖および遺伝子操作ＣＨ３ドメインＢＴベータ鎖とヒトＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインとのアミノ酸配列アラインメントを示す図である。ＥＵ番号付けを用いる。
【図２】ＢＴアルファＨｉｓおよびＶＬ−ＢＴベータ鎖の様々な対形成の模式図である。ＢＴアルファ鎖は、そのＣ末端に融合したポリヒスチジンタグ配列を有し、ＢＴベータ鎖は、そのＮ末端に融合した可変ドメイン抗体を有する。
【図３】ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体およびＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓヘテロ二量体の両方の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータトランスフェクションアウトプット、還元条件。（３）プロテインＡ精製後のヒンジを有するヒトＩｇＧ１−Ｆｃトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（４）プロテインＡ精製後のヒンジを有するヒトＩｇＧ１−Ｆｃトランスフェクションアウトプット、還元条件。（５）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（６）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓトランスフェクションアウトプット、還元条件。（Ａ）不確定凝集物。（Ｂ）ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体。（Ｃ）ＢＴアルファＨｉｓホモ二量体。（Ｄ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓホモ二量体。（Ｅ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓ単量体。（Ｆ）ＢＴアルファＨｉｓ単量体。（Ｇ）ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓヘテロ二量体。
【図４Ａ】プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。（Ａ）不確定凝集物。（Ｂ）ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体。（Ｃ）ＢＴアルファＨｉｓホモ二量体。
【図４Ｂ】凝集物を省いた場合のプロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓホモ二量体に対するＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。（Ａ）不確定凝集物。（Ｂ）ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体。（Ｃ）ＢＴアルファＨｉｓホモ二量体。
【図５】ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、還元条件。（３）プロテインＡ精製後のヒンジを有するヒトＩｇＧ１−Ｆｃトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（４）プロテインＡ精製後のヒンジを有するヒトＩｇＧ１−Ｆｃトランスフェクションアウトプット、還元条件。（Ａ）不確定凝集物。（Ｂ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａホモ二量体。（Ｃ）ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体。（Ｄ）ＢＴアルファＨｉｓホモ二量体。（Ｅ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ単量体。
【図６】ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体の生成を確認するウェスタンブロット（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。ウェスタンブロットは、抗Ｈｉｓタグ抗体を用いて検出した。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、還元条件。（３）プロテインＡ精製およびＮｉ２＋−セファロース後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（４）プロテインＡ精製およびＮｉ２＋−セファロース後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、還元条件。（５）プロテインＡ精製、Ｎｉ２＋−セファロースおよびプロテインＬアガロース後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（６）プロテインＡ精製、Ｎｉ２＋−セファロースおよびプロテインＬアガロース後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、還元条件。
【図７Ａ】プロテインＡ精製後のＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。（Ａ）不確定凝集物。（Ｂ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａホモ二量体。（Ｃ）ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体。（Ｄ）ＢＴアルファＨｉｓホモ二量体。（Ｅ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ単量体。
【図７Ｂ】凝集物を省いた場合のプロテインＡ精製後のホモ二量体に対するＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。（Ａ）不確定凝集物。（Ｂ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａホモ二量体。（Ｃ）ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体。（Ｄ）ＢＴアルファＨｉｓホモ二量体。（Ｅ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ単量体。
【図７Ｃ】ヘテロ二量体ＢＴアルファＨｉｓ＿ＢＴベータ（Ｆ４０５Ａ）ＨＡヘテロ二量体のＤＳＣサーモグラムを示す図である。
【図８】ヘテロ二量体Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎ＿ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓの生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）実施例２からのＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）実施例２からのＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、還元条件。（３）Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎ＿ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓ、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（４）Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎ＿ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓ、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、還元条件。（５）「穴に入る小塊」Ｆｃ、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（６）「穴」が可変ドメイン抗体と融合した「穴に入る小塊」Ｆｃ構築物、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、還元条件。（Ａ）Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎ＿ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓヘテロ二量体。（Ｂ）ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓホモ二量体。（Ｃ）Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎホモ二量体。
【図９】プロテインＡ精製後のヘテロ二量体Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎ＿ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓの相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。（Ａ）Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎ＿ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓ。（Ｂ）ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓホモ二量体。（Ｃ）Ｆｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎホモ二量体。
【図１０】プロテインＡ精製後のＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）ＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、還元条件。（２）ＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（Ａ）ＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体。（Ｂ）ＶＬ−ＢＴガンマホモ二量体。（Ｃ）ＶＬ−ＢＴガンマ単量体。
【図１１Ａ】プロテインＡ精製後のＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。
【図１１Ｂ】微量の凝集体および単量体を相対的比率測定において省いた場合のプロテインＡ精製後のＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。
【図１２】一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子を発現した場合の可能性のある対形成の模式図である。
【図１３】一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（Ａ）一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子。（Ｂ）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマホモ二量体分子。（Ｃ）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子（半分の分子）。
【図１４】プロテインＡ精製後の一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。（１）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマホモ二量体分子。（２）一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子。（３）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子（半分の分子）。
【図１５】一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子のＤＳＣサーモグラムを示す図である。
【図１６】一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子を発現した場合の可能性のある対形成の模式図である。
【図１７】一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子、プロテインＡ精製後のトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（Ａ）一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子。（Ｂ）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３ホモ二量体分子。（Ｃ）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子（半分の分子）。
【図１８】プロテインＡ精製後の一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）。（１）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３ホモ二量体分子。（２）一価ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子。（３）ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子（半分の分子）。
【図１９Ａ】ヒトＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４  ＣＨ１ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図１９Ｂ】ヒトＩＧＨＧ１ヒンジ領域の配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図１９Ｃ】ヒトＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４  ＣＨ２ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する；（〜）は、配列アラインメント中のシフトを示す。
【図１９Ｄ】ヒトＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４  ＣＨ３ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２０Ａ】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２０Ｂ】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ２ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２０Ｃ】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）およびＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２１Ａ】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ４ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２１Ｂ】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ４ドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２２】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ヒトＩＧＫＣドメインの配列を示す図である；ＩＭＧＴ（登録商標）およびＥＵ番号付けを用いる；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２３Ａ】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有するヒトＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６、ＩＧＬＣ７および遺伝子操作バリアントの配列を示す図である；Ｋａｂａｔ残基１０８〜１６１を示す（ＩＭＧＴ（登録商標）およびＫａｂａｔ番号付けの両方を用いる）；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２３Ｂ】ヒトＴＲＡＣ（アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）定常ドメインに基づくタンパク質−タンパク質界面を有するヒトＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６、ＩＧＬＣ７および遺伝子操作バリアントの配列を示す図である；Ｋａｂａｔ残基１６２〜２１５を示す（ＩＭＧＴ（登録商標）およびＫａｂａｔ番号付けの両方を用いる）；影を付けた位置は、置換がないことを意味する。
【図２４】Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体を発現した場合の可能性のある改変重鎖対形成の模式図である。
【図２５】Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータの生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。各精製ステップ後のタンパク質プールの試料を示す（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡクロマトグラフィー後。（２）アニオンＩＥＸ後。（３）カチオンＩＥＸ後。（４）サイズ排除クロマトグラフィー後。（５）対照：ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質。（６）対照：モノクローナル抗体。
【図２６】プロテインＡ精製後のＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル、非還元条件）を示す図である。（Ａ）ＶＨ（抗ＥＧＦＲ）ＣＨ１−ＢＴアルファ＿ＶＬ（抗ＥＧＦＲ）−ＣＫホモ二量体。（Ｂ）Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体。（Ｃ）ｓｃＦｖ（抗ＨＥＲ２）−ＢＴベータホモ二量体。不純物は、測定から省いた。
【図２７】Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体のＤＳＣサーモグラムを示す図である。
【図２８Ａ】固定化ヒトＥＧＦＲ−Ｆｃへの／からのＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体の結合および解離を示すＢＩＡｃｏｒｅセンサーグラムを示す図である。
【図２８Ｂ】ＳＰＲ技術を用いる、二重特異性Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体と両方の抗原との同時結合を示す図である。Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体およびヒトＥＧＦＲ−Ｆｃを、固定化ヒトＨＥＲ２−Ｆｃに逐次的に注入した（実線）。対照：（点線）Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体と固定化ヒトＨＥＲ２−Ｆｃとの結合、（破線）ヒトＥＧＦＲ−Ｆｃと固定化ヒトＨＥＲ２−Ｆｃとの結合がない場合。
【図２９】抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体を発現する場合の可能性のある改変重鎖対形成の模式図である。両方の重鎖、すなわちＶＨ（抗ｈＶＬＡ２）−ＣＨ１−ＢＴアルファおよびＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＢＴデルタ−ＢＴベータは、それぞれＨｉｓおよびｃ−ｍｙｃタグとＣ末端で融合する。
【図３０】抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析を示す図である。試料を、各精製ステップの後に得た（非還元条件下での４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）；溶出および未結合のプールの両方を示す。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡクロマトグラフィーからの溶出プール。（２）プロテインＬクロマトグラフィーからの未結合プール。（３）プロテインＬクロマトグラフィーからの溶出プール。（４）Ｎｉ２＋−ＮＴＡクロマトグラフィーからの未結合プール。（５）Ｎｉ２＋−ＮＴＡクロマトグラフィーからの溶出プール。（Ａ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥ。（Ｂ）抗Ｈｉｓタグ抗体を用いて検出したウェスタンブロット。（Ｃ）抗ｃ−ｍｙｃタグ抗体を用いて検出したウェスタンブロット。
【図３１】抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体とＣＤ１９＋ＶＬＡ２−およびＣＤ１９−ＶＬＡ２＋細胞との結合のフローサイトメトリー検出を示す図である。染色細胞は、ＦＡＣＳ  ＣｙＡｎ（商標）ＡＤＰフローサイトメータで取得した。ヒストグラムは、各染色についてフィコエリスリン（ＰＥ）蛍光強度（Ｘ軸）による最大イベント（Ｙ軸）の正規化％を示す。ＡおよびＢ：Ｒａｊｉ細胞を、アイソタイプ対照としての抗ｈＶＬＡ２抗体（灰色のヒストグラム）または抗ｈＣＤ１９＿抗ＶＬＡ２二重特異性抗体（白色のヒストグラム）で染色した。１次抗体の結合を、（Ａ）マウス抗ｃ−ｍｙｃタグ抗体または（Ｂ）マウス抗Ｈｉｓタグ抗体により明示し、ＰＥ標識抗マウスＩｇ抗体で染色した。ＣおよびＤ：ＨＴ１０８０細胞を、アイソタイプ対照としての抗ｈＣＤ１９抗体（灰色のヒストグラム）または抗ｈＣＤ１９＿抗ＶＬＡ２二重特異性抗体（白色のヒストグラム）で染色した。１次抗体の結合を、（Ｃ）マウス抗ｃ−ｍｙｃタグ抗体または（Ｄ）マウス抗Ｈｉｓタグ抗体により明示し、ＰＥ標識抗マウスＩｇ抗体で染色した。
【図３２】抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体のＤＳＣサーモグラムを示す図である。
【図３３】ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａトランスフェクションアウトプット、還元条件。（Ａ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａホモ二量体。（Ｂ）ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体、（Ｃ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖（半分の分子）。
【図３４】プロテインＡ精製後のＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ａ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａホモ二量体。（Ｂ）ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体。（Ｃ）ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖（半分の分子）。
【図３５】Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡ精製後のＦｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）プロテインＡ精製後のＦｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、還元条件。（Ａ）ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡホモ二量体。（Ｂ）Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体。（Ｃ）Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿Ｆｃ  ＩＧＨＡＧホモ二量体。（Ｄ）ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ鎖（半分の分子）。（Ｅ）Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ鎖（半分の分子）。
【図３６】プロテインＡ精製後のＦｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ａ）ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡホモ二量体。（Ｂ）Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体。（Ｃ）Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿Ｆｃ  ＩＧＨＡＧホモ二量体。（Ｄ）ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ鎖（半分の分子）。（Ｅ）Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ鎖（半分の分子）。
【図３７】遺伝子操作ＣＨ４に基づくＦｃ鎖の模式図である。（Ａ）ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ鎖。（Ｂ）ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４鎖。（Ｃ）ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ鎖。（Ｄ）ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４鎖。
【図３８】ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４ヘテロ二量体の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４ヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４ヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、還元条件。（３）プロテインＬ精製後のＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４ヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、非還元条件。（４）プロテインＬ精製後のＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４ヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、還元条件。（Ａ）ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４ベータヘテロ二量体。
【図３９】プロテインＬ精製後のＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴ  ＩＧＨＭ−４ベータヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。
【図４０】ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４ヘテロ二量体の生成を示すＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。（Ｍ）図に示すとおりの分子量マーカー。（１）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４ヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、非還元条件。（２）プロテインＡ精製後のＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４ヘテロ二量体トランスフェクションアウトプット、還元条件。（Ａ）ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４ヘテロ二量体。（Ｂ）ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓホモ二量体。（Ｃ）ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４鎖（半分の分子）。（Ｄ）ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ鎖（半分の分子）。
【図４１】プロテインＡ精製後のＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４ヘテロ二量体の相対的割合を評価する走査デンシトメトリー分析（４〜１２％ＳＤＳトリス−グリシンポリアクリルアミドゲル）を示す図である。
【図４２】ＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＥＰ１、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＧＰおよびＩＧＨＭのヒトＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４定常ドメインについて３Ｄで同等の位置を同定するために本明細書、例えば実施例１、２、３、４、７、８、９、１０、１１および１２で用いたＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付けを示す図である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号を示す。
【図４３】ヒトＩＧＫＣ定常ドメインについて３Ｄで同等の位置を同定するために本明細書、例えば実施例５、６、７および９で用いたＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付けを示す図である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号を示す。
【図４４】ヒトＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７定常ドメインについて３Ｄで同等の位置を同定するために本明細書、例えば実施例７で用いたＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付けを示す図である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号を示す。
【図４５】ヒトＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＲＤＣ、ＴＲＧＣ１、ＴＲＧＣ２（２×）およびＴＲＧＣ２（３×）定常ドメインについて３Ｄで同等の位置を同定するために本明細書、例えば実施例１、２、３、４、５、７、８、９、１０および１２で用いたＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付けを示す図である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本開示は、全般的に、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を遺伝子操作により得ることおよびそれを作製する方法に関する。
【００１８】
用語「抗体」は、本明細書で言及する場合、全長抗体および任意のその抗原結合断片または単鎖を含む。抗体、具体的には自然に存在する抗体は、４つのポリペプチド鎖で構成されるＹ形単位の１または複数のコピーとして存在する糖タンパク質である。各「Ｙ」形は、重（Ｈ）鎖の２つの同一コピーと軽（Ｌ）鎖の２つの同一コピー（これらの相対的分子量によりこのように命名される）とを含有する。各軽鎖は重鎖と対形成し、各重鎖は別の重鎖と対形成する。鎖間共有ジスルフィド結合および非共有相互作用が、鎖同士を一緒に連結する。抗体、具体的に自然に存在する抗体は、可変領域を含有し、これは、２コピーの抗原結合部位である。タンパク質分解酵素であるパパインは、「Ｙ」形を３つの別々の分子に分ける（２つはいわゆる「Ｆａｂ」断片（Ｆａｂ＝ｆｒａｇｍｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ（抗原結合断片））であり、１つはいわゆる「Ｆｃ」断片または「Ｆｃ領域」（Ｆｃ＝ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ（結晶性断片））である）。Ｆａｂ断片は、軽鎖全体と重鎖の一部とからなる。重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）と、３または４つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４、抗体クラスまたはアイソタイプに応じて）とを含有する。ＣＨ１とＣＨ２ドメインとの間の領域はヒンジ領域とよばれ、Ｙ形抗体分子の２つのＦａｂ腕間のフレキシビリティを許容し、一定の距離離れた２つの抗原性決定因子との結合に対処するためにそれらが開いたり閉じたりすることを可能にする。「ヒンジ領域」は、本明細書で言及する場合、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧにおいてのみ存在する６〜６２アミノ酸の長さの配列領域であり、これは、２つの重鎖を橋かけするシステイン残基を包含する。ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの重鎖はそれぞれ４つのドメイン、すなわち１つの可変ドメイン（ＶＨ）と３つの定常ドメイン（ＣＨ１〜３）とを有する。ＩｇＥおよびＩｇＭは、１つの可変ドメインと４つの定常ドメイン（ＣＨ１〜４）とを重鎖上に有する。抗体の定常領域は、宿主組織、または免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）および補体系古典経路の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む因子との結合を媒介し得る。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に通常連結される。各軽鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＬ）と１つの軽鎖定常ドメインとを含有する。軽鎖定常ドメインは、カッパ軽鎖定常ドメイン（本明細書においてＩＧＫＣと称する）またはラムダ軽鎖定常ドメイン（本明細書においてＩＧＬＣと称する）である。ＩＧＫＣは、本明細書においてＣκまたはＣＫと同等に用い、同じ意味を有する。ＩＧＬＣは、本明細書においてＣλまたはＣＬと同等に用い、同じ意味を有する。用語「ＩＧＬＣドメイン」は、本明細書で用いる場合、全てのラムダ軽鎖定常ドメイン、例えばＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される全てのラムダ軽鎖定常ドメインを指す。ＶＨおよびＶＬ領域は、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲまたはＦＷ）と命名される）が散在する超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名される）にさらに細分化できる。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順序でアミノ��端からカルボキシ末端まで配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。
【００１９】
用語「全長抗体」は、本明細書で用いる場合、可変および定常領域を含む、抗体の自然な生物学的な形を構成する構造を含む。例えば、ヒトおよびマウスを含むほとんどの哺乳動物では、ＩｇＧクラスの全長抗体は四量体であり、２つの免疫グロブリン鎖の２つの同一の対からなり、各対は１つの軽鎖と１つの重鎖とを有し、各軽鎖は免疫グロブリンドメインＶＬと軽鎖定常領域とを含み、各重鎖は免疫グロブリンドメインＶＨ、ＣＨ１（Ｃ［γ］１）、ＣＨ２（Ｃ［γ］２）、ＣＨ３（Ｃ［γ］３）およびＣＨ４（Ｃ［γ］４、抗体クラスまたはアイソタイプに応じて）を含む。いくつかの哺乳動物、例えばラクダおよびラマでは、ＩｇＧ抗体は、２つの重鎖だけからなることがあり、各重鎖はＦｃ領域と結合した可変ドメインを含む。
【００２０】
抗体は、定常領域により遺伝子的に決定されるようにクラス（アイソタイプともいう）に群分けされる。ヒト定常軽鎖は、カッパ（ＣＫ）およびラムダ（Ｃ［λ］）軽鎖に分類
される。重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）またはイプシロン（ε）に分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥと規定する。従って、「アイソタイプ」は、本明細書で用いる場合、それらの定常領域の化学的および抗原的特徴により規定される免疫グロブリンのクラスおよび／またはサブクラスのいずれかを意味する。既知のヒト免疫グロブリンアイソタイプは、ＩｇＧ１（ＩＧＨＧ１）、ＩｇＧ２（ＩＧＨＧ２）、ＩｇＧ３（ＩＧＨＧ３）、ＩｇＧ４（ＩＧＨＧ４）、ＩｇＡ１（ＩＧＨＡ１）、ＩｇＡ２（ＩＧＨＡ２）、ＩｇＭ（ＩＧＨＭ）、ＩｇＤ（ＩＧＨＤ）およびＩｇＥ（ＩＧＨＥ）である。いわゆるヒト免疫グロブリン偽ガンマＩＧＨＧＰ遺伝子は、配列決定されたが、変更されたスイッチ領域のためにタンパク質をコードしない追加のヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子を表す（Ｂｅｎｓｍａｎａ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、１６（７）：３１０８ページ（１９８８））。変更されたスイッチ領域を有するにもかかわらず、ヒト免疫グロブリン偽ガンマＩＧＨＧＰ遺伝子は、全ての重鎖定常ドメイン（ＣＨ１〜ＣＨ３）およびヒンジについてオープンリーディングフレームを有する。その重鎖定常ドメインについての全てのオープンリーディングフレームは、推定される構造上の特徴を有する全てのヒト免疫グロブリン定常ドメインと良好に一致してアラインメントされるタンパク質ドメインをコードする。このさらなる偽ガンマアイソタイプは、本明細書においてＩｇＧＰまたはＩＧＨＧＰという。ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインイプシロンＰ１およびＰ２偽遺伝子（ＩＧＨＥＰ１およびＩＧＨＥＰ２）のようなその他の偽免疫グロブリン遺伝子が報告されている。ＩｇＧクラスは、治療目的のために最も一般的に用いられる。ヒトにおいて、このクラスは、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。マウスにおいてこのクラスは、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃおよびＩｇＧ３を含む。
【００２１】
用語「自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリー」は、本明細書で用いる場合、自然で見出すことができる（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＡＦおよびＢａｒｃｌａｙ  ＡＮ、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、６：３８１〜４０５ページ（１９８８））、すなわち遺伝子が遺伝子操作されていない免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーを指し、それらに限定されないが、抗原受容体、例えば抗体；免疫グロブリン；ＴＣＲ定常ドメインファミリーを含むＴ細胞受容体鎖；抗原提示分子、例えばクラスＩ  ＭＨＣ、クラスＩＩ  ＭＨＣまたはベータ−２ミクログロブリン；共受容体、例えばＣＤ４、ＣＤ８もしくはＣＤ１９；抗原受容体アクセサリー分子、例えばＣＤ３−γ、−δおよび−ε鎖、ＣＤ７９ａまたはＣＤ７９ｂ；共刺激または阻害分子、例えばＣＤ２８、ＣＤ８０またはＣＤ８６（Ｂ７．１およびＢ７．２分子としても知られる）；ナチュラルキラー細胞上の受容体、例えばキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）；接着分子、例えばＣＤ２、ＣＤ４８、ＳＩＧＬＥＣファミリー（例えばＣＤ２２、ＣＤ８３）、ＣＴＸファミリー（例えばＣＴＸ、ＪＡＭ、ＢＴ−ＩｇＳＦ、ＣＡＲ、ＶＳＩＧ、ＥＳＡＭ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、血管細胞接着分子（例えばＶＣＡＭ−１）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；サイトカインおよび増殖因子受容体、例えばインターロイキン−１受容体Ｉ型、インターロイキン−１受容体ＩＩ型前駆体（ＩＬ−１Ｒ−２、ＩＬ−１Ｒ−ベータ、ＣＤ１２１ｂ抗原）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、インターロイキン−６受容体アルファ鎖前駆体（ＩＬ−６Ｒ−アルファ、ＣＤ１２６抗原）、コロニー刺激因子１受容体前駆体（ＣＳＦ−１−Ｒ、ＣＤ１１５抗原、マクロファージコロニー刺激因子Ｉ受容体）、肥満／幹細胞増殖因子受容体前駆体（ＳＣＦＲ、ｃ−ｋｉｔ、ＣＤ１１７抗原）、塩基性線維芽細胞増殖因子受容体１前駆体（ＦＧＦＲ−１、チロシンキナーゼ受容体ＣＥＫ１）；受容体チロシンキナーゼ／ホスファターゼ、例えばチロシン−タンパク質キナーゼ受容体Ｔｉｅ−１前駆体または受容体型チロシン−タンパク質ホスファターゼミュー前駆体；Ｉｇ結合受容体、例えば多量体免疫グロブリン受容体（ＰＩＧＲ）または選択されたＦｃ受容体；およびその他、例えばＣＤ１４７、胸腺細胞分化抗原−１（Ｔｈｙ−１）（ＣＤ９０としても知られる）、ＣＤ７、ブチロフィリン（Ｂｔｎ）、ナトリウムチャネルサ
ブユニットベータ−１前駆体、タイチン（コネクチンとしても知られる巨大細胞内筋肉タンパク質）を含む。
【００２２】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインファミリーは、本明細書で用いる場合、ヒトＴＣＲ定常ドメインアルファ（これは、本明細書において「ヒトＴＣＲ定常ドメインアルファ」または「ＴＲＡＣ」という）（配列番号１；ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＯ７２２５８．１（残基１３５〜２２５）、これはＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＡＣの完全配列と同等である）、ヒトＴＣＲ定常ドメインベータ（これは、本明細書において「ヒトＴＣＲ定常ドメインベータ」または「ＴＲＢＣ２」という（配列番号２；ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１０２６．１（残基１３４〜２６１）、これはＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＢＣ２の残基１．８〜１２４と同等である）、ヒトＴＣＲ定常ドメインデルタ（これは、本明細書において「ヒトＴＣＲ定常ドメインデルタ」または「ＴＲＤＣ」という（配列番号３２；ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１１２５．１（残基１３５〜２２１）、これはＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＤＣの残基１．７〜１２０と同等である）、ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマ（これは、本明細書において「ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマ」または「ＴＲＧＣ１」という（配列番号３３；ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１１１０．１（残基１４５〜２４５）、これはＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＧＣ１の残基１．１〜１２４と同等である）およびＰａｎｇ  ＳＳら、Ｎａｔｕｒｅ、４６７（７３１７）：８４４〜８ページ（２０１０）に開示されるプレＴ細胞抗原受容体鎖（プレＴＣＲ）を含む。本発明の範囲内で、ヒトＴＣＲベータおよびガンマ定常ドメインのアロタイプバリアント（それぞれＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＢＣ１およびＴＲＧＣ２（２×）またはＴＲＧＣ２（３×））が等しく含まれる。
【００２３】
ＩＭＧＴ（登録商標）参照は、ＩＭＧＴ（登録商標）による（国際免疫遺伝（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）情報システム（登録商標）（Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ
Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ
Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））。
【００２４】
本発明のためにドナードメインとして用いることができる好ましい自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーは、ヒトＴＣＲ定常ドメインアルファ、ヒトＴＣＲ定常ドメインベータ、ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマ、ヒトＴＣＲ定常ドメインデルタ、ヒトＴＣＲ可変ドメインアルファ、ヒトＴＣＲ可変ドメインベータ、ヒトＴＣＲ可変ドメインガンマ、ヒトＴＣＲ可変ドメインデルタ、プレＴ細胞抗原受容体鎖ならびにＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択される。より好ましくは、ヒトＴＣＲ定常ドメインアルファ、ヒトＴＣＲ定常ドメインベータ、ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマ、ヒトＴＣＲ定常ドメインデルタおよびＣＨ３ドメインからなる群から選択されるドナードメイン、特にヒトＴＣＲ定常ドメインアルファ、ヒトＴＣＲ定常ドメインベータ、ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマおよびヒトＴＣＲ定常ドメインデルタからなる群から選択されるドナードメインである。好ましくは、本発明において言及する自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーは、ヒトの自然に存在する免疫グロブリンである。
【００２５】
用語「免疫グロブリン断片」は、本明細書で用いる場合、それらに限定されないが、（ｉ）ドメイン、（ｉｉ）Ｆａｂ’およびＦａｂ’−ＳＨを含む、ＶＬドメインとＶＨドメ
インとＣＬまたはＣＫドメインとＣＨ１ドメインとからなるＦａｂ断片、（ｉｉ）ＶＨドメインとＣＨ１ドメインとからなるＦｄ断片、（ｉｉｉ）単一の可変ドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ＥＳら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１（６２４２）：５４４〜６ページ（１９８９））、（ｉｖ）Ｆ（ａｂ’）２断片、２つの連結されたＦａｂ断片を含む二価断片、（ｖ）単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（ここで、ＶＨドメインとＶＬドメインとは、２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することを可能にするペプチドリンカーにより連結される）（Ｂｉｒｄ  ＲＥら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２（４８７７）：４２３〜６ページ（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ  ＪＳら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８５（１６）：５８７９〜８３ページ（１９８８））、（ｖｉ）「ダイアボディ」または「トリアボディ」、遺伝子融合により構築される多価または多重特異性断片（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  Ｐら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９０（１４）：６４４４〜８ページ（１９９３）；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ＩおよびＨｏｌｌｉｇｅｒ  Ｐ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ、３２６：４６１〜７９ページ（２０００））、（ｖｉｉ）Ｆｃ領域と融合したｓｃＦｖ、ダイアボディまたはドメイン抗体および（ｖｉｉｉ）同じまたは異なる抗体と融合したｓｃＦｖを含む。
【００２６】
用語「ヘテロ二量体免疫グロブリン」または「ヘテロ二量体断片」または「ヘテロ二量体」は、本明細書で用いる場合、少なくとも第１および第２ポリペプチド、例えば第１および第２ドメイン（ここで、第２ポリペプチドは、第１ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる）を含む免疫グロブリン分子または部分を含む。好ましくは、ヘテロ二量体免疫グロブリンは、２つのポリペプチド鎖を含み、ここで、第１鎖は、第２鎖と非同一の少なくとも１つのドメインを有し、両方の鎖は、集合している、すなわちそれらの非同一ドメインを介して相互作用している。具体的に、ヘテロ二量体免疫グロブリンは、少なくとも２つのドメインを含み、ここで、第１ドメインは、第２ドメインと非同一であり、両方のドメインは、集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用している。より好ましくは、ヘテロ二量体免疫グロブリンは、少なくとも２つの異なるリガンド、抗原または結合部位について結合特異性を有し、すなわち二重特異性である。ヘテロ二量体免疫グロブリンは、本明細書で用いる場合、それらに限定されないが、全長二重特異性抗体、二重特異性Ｆａｂ、二重特異性Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ領域と融合した二重特異性ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域と融合したダイアボディおよびＦｃ領域と融合したドメイン抗体を含む。好ましくは、ヘテロ二量体免疫グロブリン断片は、少なくとも２つのドメインを含み、ここで、第１ドメインは、第２ドメインと非同一であり、両方のドメインは、集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用している。より好ましくは、ヘテロ二量体免疫グロブリン断片は、少なくとも２つの遺伝子操作ドメインを含み、ここで、第１遺伝子操作ドメインは、第２遺伝子操作ドメインと非同一であり、すなわち、第１遺伝子操作ドメインは、第２遺伝子操作ドメインとはアミノ酸配列が異なり、両方の遺伝子操作ドメインは、それらのタンパク質−タンパク質界面を介する相互作用により集合している。
【００２７】
「自然に存在するヘテロ二量体」は、本明細書で用いる場合、それらに限定されないが、任意の重鎖ＣＨ１ドメイン（ＩＧＨＡ１  ＣＨ１、ＩＧＨＡ２  ＣＨ１、ＩＧＨＤ  ＣＨ１、ＩＧＨＥ  ＣＨ１、ＩＧＨＧ１  ＣＨ１、ＩＧＨＧ２  ＣＨ１、ＩＧＨＧ３  ＣＨ１、ＩＧＨＧ４  ＣＨ１、ＩＧＨＧＰ  ＣＨ１、ＩＧＨＭ  ＣＨ１）とヘテロ二量体を形成するＩＧＫＣドメインまたはＩＧＬＣドメイン（ＩＧＬＣ１またはＩＧＬＣ２またはＩＧＬＣ３またはＩＧＬＣ６またはＩＧＬＣ７）、例えばＩＧＫＣ／ＩＧＨＡ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＡ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＡ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＡ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＡ１  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＡ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＡ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＡ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＡ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＡ２  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＤ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＤ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＤ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＤ  ＣＨ
１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＤ  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＥ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＥ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＥ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＥ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＥ  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＧ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＧ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＧ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＧ１  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＧ１  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＧ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＧ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＧ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＧ２  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＧ２  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＧ３  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＧ３  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＧ３  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＧ３  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＧ３  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＧ４  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＧ４  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＧ４  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＧ４  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＧ４  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ１、ＩＧＫＣ／ＩＧＨＭ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ２／ＩＧＨＭ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ３／ＩＧＨＭ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ６／ＩＧＨＭ  ＣＨ１、ＩＧＬＣ７／ＩＧＨＭ  ＣＨ１を含む。「自然に存在するヘテロ二量体」の他の例は、抗体可変軽鎖ドメイン（カッパまたはラムダ）とヘテロ二量体形成する抗体可変重鎖ドメイン、ＴＣＲベータ可変ドメインとヘテロ二量体形成するＴＣＲアルファ可変ドメイン、ＴＣＲデルタ可変ドメインとヘテロ二量体形成するＴＣＲガンマ可変ドメイン、ＴＣＲベータ定常ドメインとヘテロ二量体形成するＴＣＲアルファ定常ドメイン、ＴＣＲデルタ定常ドメインとヘテロ二量体形成するＴＣＲガンマ定常ドメインを包含する。
【００２８】
用語「ホモ二量体免疫グロブリン」または「ホモ二量体断片」または「ホモ二量体」は、本明細書で用いる場合、少なくとも第１および第２ポリペプチド、例えば第１および第２ドメイン（ここで、第２ポリペプチドは、第１ポリペプチドとアミノ酸配列が同一である）を含む免疫グロブリン分子または部分を含む。好ましくは、ホモ二量体免疫グロブリンは、２つのポリペプチド鎖を含み、ここで、第１鎖は、第２鎖と少なくとも１つの同一のドメインを有し、両方の鎖は、集合している、すなわちそれらの同一ドメインを介して相互作用している。具体的に、ホモ二量体免疫グロブリンは、少なくとも２つの同一ドメインを含み、両方のドメインは、集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用している。好ましくは、ホモ二量体免疫グロブリン断片は、少なくとも２つのドメインを含み、第１ドメインは、第２ドメインと同一であり、両方のドメインは、集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用している。「自然に存在するホモ二量体」は、本明細書で用いる場合、それらに限定されないが、例えば同じ種、アイソタイプおよびサブクラスの２つのＣＨ３ドメイン、例えばヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３／ＩＧＨＧ１  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ３／ＩＧＨＧ２  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ３／ＩＧＨＧ３  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ３／ＩＧＨＧ４  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３／ＩＧＨＡ１  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３／ＩＧＨＡ２  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ３／ＩＧＨＥ  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＥＰ１
ＣＨ３／ＩＧＨＥＰ１  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ３／ＩＧＨＭ  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ３／ＩＧＨＤ  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ３／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ３、同じ種、アイソタイプおよびサブクラスの２つのＣＨ２ドメイン、例えばヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ２／ＩＧＨＧ１  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ２／ＩＧＨＧ２  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ２／ＩＧＨＧ３  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ２／ＩＧＨＧ４  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ２／ＩＧＨＡ１  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ２／ＩＧＨＡ２  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ２／ＩＧＨＥ  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＥＰ１  ＣＨ２／ＩＧＨＥＰ１  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ２／ＩＧＨＭ  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ２／ＩＧＨＤ  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ２／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ２、または同じ種、アイソタイプおよびサブクラスの２つのＣＨ４ドメイン、例えばヒトＩＧＨＥ  ＣＨ４／ＩＧＨＥ
ＣＨ４、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ４／ＩＧＨＭ  ＣＨ４を含む。好ましい「自然に存在するホモ二量体」は、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３／ＩＧＨＧ１  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ
３／ＩＧＨＧ２  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ３／ＩＧＨＧ３  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ３／ＩＧＨＧ４  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３／ＩＧＨＡ１  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３／ＩＧＨＡ２  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ３／ＩＧＨＥ  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ３／ＩＧＨＭ  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ３／ＩＧＨＤ  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ３／ＩＧＨＧＰ  ＣＨ３、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ２／ＩＧＨＥ  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ２／ＩＧＨＭ  ＣＨ２、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ４／ＩＧＨＥ  ＣＨ４およびヒトＩＧＨＭ  ＣＨ４／ＩＧＨＭ  ＣＨ４からなる群から選択される。
【００２９】
ほとんどの免疫グロブリン軽鎖は、会合して二量体になる（Ｎｏｖｏｔｎｙ  ＪおよびＨａｂｅｒ  Ｅ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８２（１４）：４５９２〜６ページ（１９８５））。カッパおよびラムダ軽鎖はともに、ホモ二量体を形成することが報告されており、カッパおよびラムダ軽鎖二量体のいくつかの結晶構造が、タンパク質データバンク（ＰＤＢ）データベースから入手可能である（Ｒｏｕｓｓｅｌ  Ａら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、２６０（１）：１９２〜９ページ（１９９９）、Ｈｕａｎｇ  ＤＢら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、９３（１４）：７０１７〜２１ページ（１９９６）；ｗｗｗ．ｐｄｂ．ｏｒｇ；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＦＣら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、８０（２）：３１９〜２４ページ（１９７７））。本発明の範囲内で、ＩＧＫＣドメインまたはＩＧＬＣドメイン（ＩＧＬＣ１またはＩＧＬＣ２またはＩＧＬＣ３またはＩＧＬＣ６またはＩＧＬＣ７）のホモ二量体を、タンパク質−タンパク質界面遺伝子操作のための親またはドナードメインと考えることができる。従って、「自然に存在するホモ二量体」は、本明細書で用いる場合、それらに限定されないが、同じ種、アイソタイプおよびサブクラスの２つのＩＧＫＣドメイン、例えばヒトＩＧＫＣ／ＩＧＫＣ、同じ種、アイソタイプおよびサブクラスの２つのＩＧＬＣドメイン、例えばヒトＩＧＬＣ１／ＩＧＬＣ１、ヒトＩＧＬＣ２／ＩＧＬＣ２、ヒトＩＧＬＣ３／ＩＧＬＣ３、ヒトＩＧＬＣ６／ＩＧＬＣ６、ヒトＩＧＬＣ７／ＩＧＬＣ７ならびにＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７の任意のその他の対の組み合わせも含む。
【００３０】
２つのドメインに関して、例えば２つの親ドメインまたは２つのドナードメインに関しての用語「ヘテロ二量体の形成」または「ヘテロ二量体を形成する」または「ヘテロ二量体を形成できる」は、本明細書で用いる場合、第１ドメインが第２ドメインと同一でなく、両方のドメインが集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用しており、該タンパク質−タンパク質界面が、普通は、同一でないことを意味する。両方のドメインのアミノ酸配列が少なくとも１アミノ酸残基異なる場合、第１ドメインは、第２ドメインと同一でない。第１親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と比較して異なるアミノ酸残基の少なくとも１つの３Ｄ構造上の位置を有する場合、タンパク質−タンパク質界面は、普通は、同一でない。
【００３１】
２つのドメインに関して、例えば２つの自然に存在する親ドメインまたは２つの自然に存在するドナードメインに関しての用語「自然に存在するヘテロ二量体の形成」または「自然に存在するヘテロ二量体を形成する」または「自然に存在するヘテロ二量体を形成できる」は、本明細書で用いる場合、第１ドメインが第２ドメインと同一でなく、両方のドメインが集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用しており、該タンパク質−タンパク質界面が、普通は、同一でないことを意味する。両方のドメインのアミノ酸配列が少なくとも１アミノ酸残基異なる場合、第１ドメインは、第２ドメインと同一でない。第１親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と比較して異なるアミノ酸残基の少なくとも１つの３Ｄ構造上の位置を有する場合、タンパク質−タンパク質界面は、普通は、同一でない。
【００３２】
２つのドメインに関して、例えば２つの親ドメインまたは２つのドナードメインに関しての用語「ホモ二量体の形成」または「ホモ二量体を形成する」または「ホモ二量体を形成できる」は、本明細書で用いる場合、第１ドメインが第２ドメインと同一であり、両方のドメインが集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用しており、該タンパク質−タンパク質界面が、普通は、同一であることを意味する。第１ドメインは、それらのアミノ酸配列が同一である場合、第２ドメインと同一である。第１親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と比較して３Ｄ構造上同一の位置にて同一アミノ酸を有する場合、タンパク質−タンパク質界面は、普通は、同一である。
【００３３】
２つのドメインに関して、例えば２つの自然に存在する親ドメインまたは２つの自然に存在するドナードメインに関しての用語「自然に存在するホモ二量体の形成」または「自然に存在するホモ二量体を形成する」または「自然に存在するホモ二量体を形成できる」は、本明細書で用いる場合、第１ドメインが第２ドメインと同一であり、両方のドメインが集合している、すなわちそれらのタンパク質−タンパク質界面を介して相互作用しており、該タンパク質−タンパク質界面が、普通は、同一であることを意味する。第１ドメインは、それらのアミノ酸配列が同一である場合、第２ドメインと同一である。第１親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２親またはドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と比較して３Ｄ構造上同一の位置にて同一アミノ酸を有する場合、タンパク質−タンパク質界面は、普通は、同一である。
【００３４】
用語「ドメイン」は、本明細書で用いる場合、タンパク質パートナー（すなわち別のタンパク質（もしくはその領域）または別のドメイン）と選択的に集合することを担い、かつ／あるいは完全な生物学的機能もしくはその一部、例えば受容体もしくは基質との結合を、独立してまたは多重ドメイン体の中で行うことができるポリペプチドの任意の領域を含む。通常、ドメインは、本明細書で言及する場合、ヒンジ領域でなく、かつ／またはヒンジ領域を含有しない。ドメインは、タンパク質鎖の残りの部分から独立して存在できる。ドメインは、緻密な３次元構造を形成し、独立して安定であり折り畳まれる。ドメインは、長さ約２５アミノ酸から５００アミノ酸までの間で長さが変動する。好ましくは、ドメインは、本明細書で用いる場合、長さ約７０アミノ酸から約１２０アミノ酸までの間で長さが変動する。ジンクフィンガーのような最も短いドメインは、金属イオンまたはジスルフィドブリッジにより安定化される。ドメインは、カルモジュリンのカルシウム結合型ＥＦハンドドメインのような機能的単位をしばしば形成する。これらは自己安定性であるので、あるタンパク質と別のタンパク質との間で遺伝子の遺伝子操作によりドメインを「交換」して、キメラタンパク質を作製できる。免疫グロブリンは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する可変ドメインおよび定常ドメインで構成される（Ｗｉｌｌｉａｍｓ
ＡＦおよびＢａｒｃｌａｙ  ＡＮ、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、６：３８１〜４０５ページ（１９８８）；Ｂｏｒｋ  Ｐら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２４２（４）：３０９〜２０ページ（１９９４））。本明細書に含まれるドメインは、ＣＨ１およびＣＨ３、具体的にはＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＧＰおよびＩＧＨＭからの自然に存在するＣＨ１およびＣＨ３；ＣＨ４、具体的にはＩＧＨＥおよびＩＧＨＭからの自然に存在するＣＨ４；ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７、具体的には自然に存在するＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７である。本明細書に含まれるさらなるドメインは、ＣＨ２、具体的にはＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＧＰおよびＩＧＨＭからの自然に存在するＣＨ２である。好ましくは、非グリコシル化ＣＨ２ドメインを本明細書において用い、これは、それらの非グリコシル化形では、本明細書で言及するようにホモ二量体である。非グリコシル化Ｆｃ断片中のＣＨ２ドメ
インは、自然にグリコシル化されたＦｃ断片中のＣＨ２ドメインと比較して、互いにより近接して近づく。マウス非グリコシル化ＩｇＧ１  Ｆｃ断片の結晶構造は、完全に非グリコシル化のＦｃ断片が、第１非グリコシル化免疫グロブリン鎖のＣＨ２ドメインからのＰｒｏ３３２と第２非グリコシル化免疫グロブリン鎖のＣＨ２ドメインからのＰｒｏ３３２との間の距離が１１．６Åだけである「閉鎖」構造を採用できることを示している（Ｆｅｉｇｅ  ＭＪら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３９１（３）：５９９〜６０８ページ（２００９））。本明細書に含まれるさらなるドメインは、本発明による遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有さない、すなわちその自然に存在するタンパク質−タンパク質界面を改変するために特に遺伝子操作されていない（ヒト化プロセスから生じるバックミューテーションを除く）ＶＨおよびＶＬドメインである。用語「自然に存在するドメイン」は、本明細書で用いる場合、自然で見出すことができる、すなわち遺伝子が遺伝子操作されていないドメインを指す。
【００３５】
本発明に含まれる全ての免疫グロブリン定常ドメインについて、番号付けは、ＩＭＧＴ（登録商標）に従うことができる（ＩＭＧＴ（登録商標）、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））。
【００３６】
ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択される全てのヒトＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインについて、番号付けは、「ＥＵ番号付けシステム」に従うことができる（Ｅｄｅｌｍａｎ  ＧＭら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、６３（１）：７８〜８５ページ（１９６９））。ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択される全てのヒトＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３免疫グロブリン重鎖定常ドメインについてのＩＭＧＴユニーク番号付けとＥＵ番号付けとの間の対応を、図１９に示す。ＩＧＨＧ１のヒトＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３定常領域についての完全な対応は、ＩＭＧＴデータベースで見出すことができる（ＩＭＧＴ（登録商標）、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５））；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））。
【００３７】
ヒトカッパ免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＩＧＫＣ）について、番号付けは、「ＥＵ番号付けシステム」に従うことができる（Ｅｄｅｌｍａｎ  ＧＭら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、６３（１）：７８〜８５ページ（１９６９））。ヒトＩＧＫＣ免疫グロブリン軽鎖定常ドメインについてのＩＭＧＴユニーク番号付けとＥＵ番号付けとの間の対応を、図２２に示す。ヒトＣＫドメインについての完全な対応は、ＩＭＧＴデータベースで見出すことができる（ＩＭＧＴ（登録商標）、国際免疫遺伝情報システ
ム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５））；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４（２００７））。
【００３８】
ヒトラムダ免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７）について、番号付けは、Ｄａｒｉａｖａｃｈ  Ｐら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８４（２４）：９０７４〜８ページ（１９８７）およびＦｒａｎｇｉｏｎｅ  Ｂら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８２（１０）：３４１５〜９ページ（１９８５）に記載されるような「Ｋａｂａｔ番号付けシステム」に従うことができる（Ｋａｂａｔ  ＥＡら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．第５版−ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ出版番号９１−３２４２（１９９１））。ヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７）についてのＩＭＧＴユニーク番号付けとＫａｂａｔ番号付けとの間の対応を、図２３に示す。ヒトＩＧＬＣドメインについての完全な対応は、ＩＭＧＴデータベースで見出すことができる（ＩＭＧＴ（登録商標）、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５））；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））。
【００３９】
ヒトＩＧＨＧ１免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、本明細書において次のドメイン境界として言及する：ＣＨ１［ＥＵ番号付け：１１８〜２１５］、ヒンジγ１［ＥＵ番号付け：２１６〜２３０］、ＣＨ２［ＥＵ番号付け：２３１〜３４０］およびＣＨ３［ＥＵ番号付け：３４１〜４４７］。本明細書で言及するヒトＣＫドメインは、残基１０８から２１４までにわたる（ＥＵ番号付け）。本明細書で言及するヒトＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７ドメインは、残基１０８から２１５までにわたる（Ｋａｂａｔ番号付け）。
【００４０】
「多重ドメイン体」または「多重ドメインタンパク質」は、本明細書で用いる場合、少なくとも２つのドメインを含む。これらの２つのドメインは、１つの免疫グロブリン鎖（１つのポリペプチド）上にあることができるか、または２つの免疫グロブリン鎖（２つのポリペプチド）上にあることができる。
【００４１】
用語「遺伝子操作免疫グロブリン鎖」は、本明細書で用いる場合、親ドメインとは異なるタンパク質−タンパク質界面を有する少なくとも１つの遺伝子操作ドメインを含む免疫グロブリン鎖を含む。
【００４２】
用語「親免疫グロブリン鎖」は、本明細書で用いる場合、任意の現存する免疫グロブリ
ン鎖、具体的には遺伝子操作免疫グロブリン鎖を設計するために親配列として用いることができる自然に存在する免疫グロブリン鎖を含む。好ましくは、親免疫グロブリン鎖、例えば第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親免疫グロブリン鎖および／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親免疫グロブリン鎖は、自然に存在する免疫グロブリン鎖である。
【００４３】
用語「親ドメイン」は、本明細書で用いる場合、任意の現存するドメイン、具体的には遺伝子操作ドメインを設計するために親配列として用いることができる自然に存在するドメイン、より具体的には自然に存在するヘテロ二量体もしくは自然に存在するホモ二量体を形成する、自然に存在するドメインを含む。第１、第２、第３および第４遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ジンクフィンガーでない。親ドメインは、通常、免疫グロブリンドメイン、例えば免疫グロブリン鎖のドメインである。好ましくは、親ドメイン、例えば第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインならびに／または第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、自然に存在するドメインである。
【００４４】
用語「ドナードメイン」は、本明細書で用いる場合、自然に存在するドメイン、具体的には自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、遺伝子操作ドメインを設計するためにドナー配列として用いることができる、すなわち親ドメイン中の３Ｄ構造上同等の位置のアミノ酸残基を置換するためにドナー配列として用いることができる自然に存在するドメインを含む。
【００４５】
用語「遺伝子操作ドメイン」は、本明細書で用いる場合、親ドメインおよびドナードメインから遺伝子操作されたドメインを含む。
【００４６】
用語「タンパク質−タンパク質界面」は、本明細書で用いる場合、別のタンパク質ドメインのアミノ酸残基とのタンパク質ドメインの直接接触会合を媒介することにより３Ｄ界面を規定するアミノ酸残基を含む。２つのドメイン間の直接接触会合を媒介するこれらのアミノ酸残基は、あるパートナーからの１または複数のアミノ酸と相互作用する別のパートナーからの任意のアミノ酸を含む。相互作用するアミノ酸残基に関する用語「相互作用する」は、本明細書で用いる場合、あるパートナー中のアミノ酸残基の任意の重原子から１５Å未満離れた少なくとも１つの重原子を有する別のパートナーからの任意のアミノ酸を含む。用語「アミノ酸残基の重原子」は、本明細書において、水素原子でないアミノ酸残基の任意の原子を指す。好ましくは、相互作用するアミノ酸残基は、あるパートナー中のアミノ酸残基の任意の重原子から１０Å未満離れた少なくとも１つの重原子を有する別のパートナーからの任意のアミノ酸を含む。最も好ましくは、相互作用するアミノ酸残基は、あるパートナー中のアミノ酸残基の任意の重原子から５Å未満離れた少なくとも１つの重原子を有する別のパートナーからの任意のアミノ酸を含む。アミノ酸残基の相互作用は、ファンデルワールス力、水素結合、水媒介水素結合、塩橋もしくは静電力、疎水接触およびジスルフィド結合を含む力または当業者に知られるその他の力により媒介できる。タンパク質−タンパク質界面は、より疎水的であり、タンパク質複合体中におけるよりも２倍多くのタンパク質表面を埋め、通常、それらが折り畳まれるときに集合する（Ｂａｈａｄｕｒ  ＲＰら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、５３（３）：７０８〜１９ページ（２００３））。４７のＦＡＢ断片の分析により、３Ｄ構造が実験的に決定され、定常ドメイン軽鎖中の５０までの残基および定常ドメイン重鎖中の５２までの残基が、ドメインタンパク質−タンパク質界面を構成することが示された（Ｐｏｔａｐｏｖ  Ｖら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３４２（２）：６６５〜７９ページ（２００４））。ＣＨ３タンパク質界面は、分子間接触をなす４つの逆平行ベータ鎖上にある１６残基を含み、各表面から１０９０Å２埋められている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  Ｗら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７（２６）：
９２６６〜７３ページ（１９９８））。
【００４７】
遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面とがホモ二量体形成により相互作用する場合、例えば両方のドナードメインがホモ二量体を形成する場合、そして親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の全てのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのアミノ酸残基で置換される場合、ホモ二量体形成により相互作用するとみなされる。従って、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第１遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の全てのアミノ酸残基が、同一の３Ｄ位置にて第２遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸残基と同一である場合、ホモ二量体形成により相互作用するとみなされる。
【００４８】
遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面とがホモ二量体形成により相互作用する場合、例えば両方のドナードメインがホモ二量体を形成する場合、そして親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の全てではないアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのアミノ酸残基で置換される場合、ヘテロ二量体形成により相互作用するとみなされる。より具体的に、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面とがホモ二量体形成により相互作用する場合、例えば両方のドナードメインがホモ二量体を形成する場合、そして第１親ドメインの少なくとも１つのアミノ酸残基が自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメイン中の３Ｄ構造上同等の位置にてアミノ酸残基で置換される場合（ここで、第２親ドメインは、３Ｄ構造上同一の位置にて第１親ドメイン中で置換された同一アミノ酸残基で置換されていない）、ヘテロ二量体形成により相互作用するとみなされる。
【００４９】
遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面と例えば自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面とがヘテロ二量体形成により相互作用する場合、例えば両方のドナードメインがヘテロ二量体を形成する場合、そして親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の全てのまたは全てではないアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのアミノ酸残基で置換される場合、ヘテロ二量体形成により相互作用するとみなされる。
【００５０】
従って、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第１遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸残基が、同一の３Ｄ位置にて第２遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸残基と全てが同一ではない場合、ヘテロ二量体形成により相互作用するとみなされる。
【００５１】
用語「３Ｄ構造上同等の位置」または「同等の３Ｄ位置」または「同等の３Ｄ構造上の
位置」または「３Ｄで同等の位置」は、本明細書において交換可能に用いられ、両方のドメインのアルファ炭素トレースを重ね合わせることにより親ドメインのタンパク質−タンパク質界面上に重畳した場合に、親ドメインの最も近い残基と６Å未満以内の距離の３Ｄの位置を占めるドナードメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸残基の位置を含む（ここで、ドナードメインは、親ドメインと異なる）。重ね合わせは、同じ基準系において原子の座標を比較することにより行うことができる。アルファ炭素トレースの他に、両方のドメインの主鎖原子（Ｎ、ＣおよびＯ）を重ね合わせることができる。３Ｄ構造上の位置は、視覚的検査（例えば直観に基づく設計または知見に基づく設計）に基づいても選択できるか、または位置は、エネルギー項、例えばファンデルワールス相互作用、水素結合相互作用など（すなわち合理的設計）を枚挙した後に選択できる。ドメインの３Ｄ構造は、本明細書で用いる場合、タンパク質データバンク（ｗｗｗ．ｐｄｂ．ｏｒｇ；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＦＣら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、８０（２）：３１９〜２４ページ（１９７７）；Ｂｅｒｍａｎ  ＨＭら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２３５〜４２ページ（２０００））またはその他のデータベースから取得できる結晶または溶液状態における実験的に解明された３Ｄ構造を含む。さらに、公共のデータベースから入手可能でないかまたは解明されていないドメインの３Ｄ構造は、Ａｂ  ｉｎｉｔｉｏ推定法（タンパク質のアミノ酸配列だけを必要とする）またはスレッドおよび相同性モデリング法（タンパク質ドメインについての３Ｄモデルが、進化的に関連するタンパク質の実験的構造から構築される）のようないくつかの計算方法を用いてモデル化できる（Ｚｈａｎｇ  Ｙ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ、１８（３）：３４２〜８ページ（２００８））。理論に束縛されることなく、代わりに、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けシステムを用いて、免疫グロブリンドメイン中の３Ｄ構造上同等の位置を同定できる。なぜなら、このシステムは、免疫グロブリンスーパーファミリードメインの３Ｄ構造の比較分析に基づくからである。
【００５２】
用語「ドメインのコア完全性にとって必須でない」は、本明細書で用いる場合、タンパク質ドメインの正しい折り畳みおよび／または疎水性コアにとって必須でない残基を含む。折り畳まれたタンパク質は、通常、疎水性コア（この中では側鎖の充填が折り畳まれた状態を安定化し、荷電または極性側鎖が、周囲の水、イオンまたは他のタンパク質もしくはタンパク質ドメインもしくは炭化水素のようなその他のリガンドと相互作用する溶媒露出表面を占める）を有する。分子内水素結合の形成は、タンパク質コア安定性のための別の重要な貢献をもたらす。タンパク質ドメインのコア完全性にとって必須でない残基は、それらに限定されないが、非プロリン残基、分子内ジスルフィド結合に関与する非システイン残基、露出残基、および分子内水素結合に関与しない残基を含む。
【００５３】
用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、本明細書で用いる場合、同じ意味を有し、交換可能に用いられる。
【００５４】
用語「アミノ酸」または「アミノ酸残基」は、本明細書で用いる場合、天然アミノ酸および非天然アミノ酸を含む。好ましくは、天然アミノ酸が含まれる。
【００５５】
用語「荷電アミノ酸」は、本明細書で用いる場合、リシン（正荷電）、アルギニン（正荷電）、ヒスチジン（正荷電）、アスパラギン酸（負荷電）およびグルタミン酸（負荷電）のアミノ酸を含む。普通は、本明細書で用いる場合の荷電アミノ酸は、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸およびグルタミン酸である。用語「荷電対」または「アミノ酸の荷電対」または「荷電アミノ酸対」は同じ意味を有し、交換可能に用いられ、１つの正荷電アミノ酸と１つの負荷電アミノ酸との任意の組み合わせを含む。これは、以下の荷電アミノ酸の対を含む：リシン／アスパラギン酸、リシン／グルタミン酸、アルギニン／アスパラギン酸、アルギニン／グルタミン酸、ヒスチジン／アスパラギン酸およびヒスチジン／グルタミン酸。
【００５６】
用語「置換」または「アミノ酸置換」または「アミノ酸残基置換」は、本明細書で用いる場合、アミノ酸配列中の第１アミノ酸残基を第２アミノ酸残基で置換することをいうが、該第１アミノ酸残基は、該第２アミノ酸残基とは異なり、すなわち置換されたアミノ酸残基は、置換したアミノ酸とは異なる。
【００５７】
用語「隣接していないアミノ酸残基」または「非隣接アミノ酸残基」は、本明細書で用いる場合、アミノ酸配列中の直接接していない、すなわち間に少なくとも１つのアミノ酸残基が介在している２つのアミノ酸を指す。
【００５８】
用語「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」は、本明細書で用いる場合、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬおよび軽鎖定常免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを含む。Ｆａｂは、単離されたこの領域、または全長抗体もしくは抗体断片の関係におけるこの領域を指し得る。
【００５９】
用語「Ｆｃ」または「Ｆｃ領域」は、本明細書で用いる場合、第１定常領域免疫グロブリンドメインを除く、抗体重鎖の定常領域を含むポリペプチドを含む。従って、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメインならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインと、これらのドメインのＮ末端のフレキシブルヒンジとのことをいう。ＩｇＡおよびＩｇＭについて、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧについて、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃ［γ］２およびＣ［γ］３）と、Ｃガンマ１（Ｃ［γ］１）とＣガンマ２（Ｃ［γ］２）との間のヒンジとを含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端まで（番号付けは、ＥＵインデックスに従う）を含むと定義される。Ｆｃは、単離されたこの領域またはＦｃポリペプチド、例えば抗体の関係におけるこの領域を指し得る。
【００６０】
用語「アミノ酸改変」は、本明細書において、ポリペプチド配列中のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含む。「アミノ酸置換」または「置換」は、本明細書において、親ポリペプチド配列中の特定の位置にてアミノ酸を別のアミノ酸に置き換えることを意味する。例えば、置換Ｒ９４Ｋは、９４位のアルギニンがリシンで置き換えられたバリアントポリペプチドを指す。例えば、９４Ｋは、リシンでの９４位の置換を示す。本明細書における目的のために、複数の置換を、スラッシュまたはコンマにより典型的に分ける。例えば、「Ｒ９４Ｋ／Ｌ７８Ｖ」または「Ｒ９４Ｋ，Ｌ７８Ｖ」は、置換Ｒ９４ＫおよびＬ７８Ｖを含む二重バリアントを指す。「アミノ酸挿入」または「挿入」は、本明細書で用いる場合、親ポリペプチド配列中の特定の位置でのアミノ酸の付加を意味する。例えば、挿入９４は、９４位での挿入を示す。「アミノ酸欠失」または「欠失」は、本明細書で用いる場合、親ポリペプチド配列中の特定の位置でのアミノ酸の除去を意味する。例えば、Ｒ９４−は、９４位のアルギニンの欠失を示す。
【００６１】
用語「保存的改変」または「保存的配列改変」は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合の特徴に著しく影響しないかまたはそれを変更しないアミノ酸改変を指すことを意図する。このような保存的改変は、アミノ酸置換、挿入および欠失を含む。改変は、本発明の抗体に、部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発のような当該技術分野において知られる標準的な技術により導入できる。
【００６２】
「保存的アミノ酸置換」は、本明細書で用いる場合、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるアミノ酸置換を含む。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、
トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
【００６３】
ヘテロ二量体免疫グロブリン
一態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１２位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１１９位にてアミノ酸残基で置換される場合、１２位にて置換されたアミノ酸残基と１１９位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１３位にてアミノ酸残基で置換される場合、２６位にて置換されたアミノ酸残基と１３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２７位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１８位にてアミノ酸残基で置換される場合、２７位にて置換されたアミノ酸残基と１８位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメイ
ンであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が７９位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８４．３位にてアミノ酸残基で置換される場合、７９位にて置換されたアミノ酸残基と８４．３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が１１位であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがヒンジ領域を含むドメインである場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ヒンジ領域の３位にて置換されず、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００６４】
好ましくは、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１２位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１１９位にてアミノ酸残基で置換される場合、１２位にて置換されたアミノ酸残基と１１９位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１３位にてアミノ酸残基で置換される場合、２６位にて置換されたアミノ酸残基と１３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２７位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１８位にてアミノ酸残基で置換される場合、２７位にて置換されたアミノ酸残基と１８位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて非置換または置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が７９位にてアミノ酸残基で置換され、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８４．３位にてアミノ酸残基で置換される場合、７９位にて非置換または置換されたアミノ酸残基と８４．３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が１１位であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがヒンジ領域を含むドメインである場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ヒンジ領域の３位にて置換されず、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００６５】
さらにより好ましくは、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面から
の３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１２位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１１９位にてアミノ酸残基で置換される場合、１２位にて置換されたアミノ酸残基と１１９位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１３位にてアミノ酸残基で置換される場合、２６位にて置換されたアミノ酸残基と１３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２７位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１８位にてアミノ酸残基で置換される場合、２７位にて置換されたアミノ酸残基と１８位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が７９位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８４．３位にてアミノ酸残基で置換される場合、７９位にて置換されたアミノ酸残基と８４．３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が１１位であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがヒンジ領域を含むドメインである場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ヒンジ領域の３位にて置換されず、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００６６】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＬＣドメインの５位は、Ｋａｂａｔ番号付けによる１１６位に対応する。
【００６７】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＬＣドメインの１２位は、Ｋａｂａｔ番号付けによる１２３位に対応する。
【００６８】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＬＣドメインの１３位は、Ｋａｂａｔ番号付けによる１２４位に対応する。
【００６９】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＬＣドメインの１８位は、Ｋａｂａｔ番号付けによる１２９位に対応する。
【００７０】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＬＣドメインの２０位は、Ｋａｂａｔ番号付けによる１３１位に対応する。
【００７１】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＬＣドメインの７９位は、Ｋａｂａｔ番号付けによる１６０位に対応する。
【００７２】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＫＣドメインの１１位は、ＥＵ番号付けによる１２２位に対応する。
【００７３】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＫＣドメインの１２位は、ＥＵ番号付けによる１２３位に対応する。
【００７４】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＫＣドメインの２０位は、ＥＵ番号付けによる１３１位に対応する。
【００７５】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＩＧＫＣドメインの８６位は、ＥＵ番号付けによる１７６位に対応する。
【００７６】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＣＨ１ドメインの２０位は、ＥＵ番号付けによる１４１位に対応する。
【００７７】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＣＨ１ドメインの２６位は、ＥＵ番号付けによる１４７位に対応する。
【００７８】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＣＨ１ドメインの２７位は、ＥＵ番号付けによる１４８位に対応する。
【００７９】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＣＨ１ドメインの８４．３位は、ＥＵ番号付けによる１７６位に対応する。
【００８０】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＣＨ１ドメインの８６位は、ＥＵ番号付けによる１８３位に対応する。
【００８１】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のＣＨ１ドメインの１１９位は、ＥＵ番号付けによる２１３位に対応する。
【００８２】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操
作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００８３】
好ましくは、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてア
ミノ酸残基で置換され、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて非置換または置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００８４】
さらにより好ましくは、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タ
ンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電アミノ酸でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００８５】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００８６】
好ましくは、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク
質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて非置換または置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００８７】
さらにより好ましくは、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメイ
ンであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電アミノ酸でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００８８】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてア
ミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、好ましくは荷電アミノ酸でなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、好ましくは荷電アミノ酸でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはヘテロ二量体断片を提供する。
【００８９】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、好ましくは荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タ
ンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、好ましくは荷電アミノ酸でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、好ましくは荷電アミノ酸でなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、好ましくは荷電アミノ酸でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはヘテロ二量体断片を提供する。
【００９０】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基が
、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、
各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００９１】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位ならびに３位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択されるさらなる位置のアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２０位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００９２】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン
鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００９３】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２０位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるア
ミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、２６位のアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２０位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００９４】
さらなる態様では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ４ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【００９５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとは、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインとは、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成する。
【００９６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーおよびそのドナードメインは、それぞれ自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が同一である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーおよびそのドナードメインは、それぞれ自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバー、特に自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーのドナードメインは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバー、特に自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインとは異なる。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１、第２、第３および第４メンバー、特にそのドナードメインは、それぞれ他のものとは異なる。
【００９９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとは、同一でない。いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖およびその遺伝子操作ドメインは、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖およびその遺伝子操作ドメインと同一でなく、すなわち遺伝子操作免疫グロブリン鎖、特にその遺伝子操作ドメインは、互いにアミノ酸配列が異なり、例えば第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖、特にその遺伝子操作ドメインは、互いに少なくとも１アミノ酸または少なくとも２アミノ酸または少なくとも３アミノ酸または少なくとも４アミノ酸または少なくとも５アミノ酸または少なくとも５から１０アミノ酸または少なくとも１０から３０アミノ酸異なるアミノ酸配列を有する。
【０１００】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／またはその遺伝子操作ドメインは、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／またはその遺伝子操作ドメインとアミノ酸配列が異なり、ここで、遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、ヘテロ二量体形成により相互作用する。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／またはその遺伝子操作ドメインは、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／またはその遺伝子操作ドメインとアミノ酸配列が異なり、ここで、遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、ホモ二量体形成により相互作用する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の少なくとも１つの置換されたアミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の少なくとも１つの置換されたアミノ酸残基と相互作用している。好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の少なくとも２つ、より好ましくは少なくとも３つ、最も好ましくは少なくとも４つ、特に少なくとも５つの置換されたアミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の少なくとも１つの置換されたアミノ酸残基と相互作用している。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５アミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖ならびにその遺伝子操作ドメインのそれぞれは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーならびにそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、荷電アミノ酸で置換されず、好ましくは荷電対で置換されない。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２６Ａおよび／もしくは２６Ｅおよび／もしくは８６Ｔで置換されず、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０Ｔおよび／もしくは２６Ｋおよび／もしくは８５．１Ａおよび／もしくは８８Ｔで置換されず、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とホモ二量体形成により相互作用し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインは、アミノ酸配列が同一でない。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ドメインのループ領域中で置換されない。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つの３Ｄ構造上の位置は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の同一の３Ｄ構造上の位置と比較して、異なるアミノ酸残基である。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインは、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖およびその遺伝子操作ドメインと同一でなく、すなわち遺伝子操作免疫グロブリン鎖、特にその遺伝子操作ドメインは、互いにアミノ酸配列が異なり、例えば第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖、特に第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインは、互いに少なくとも１アミノ酸または少なくとも２アミノ酸または少なくとも３アミノ酸または少なくとも４アミノ酸または少なくとも５アミノ酸または少なくとも５から１０アミノ酸または少なくとも１０から３０アミノ酸異なるアミノ酸配列を有する。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインは、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとアミノ酸配列が異なり、ここで、遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、ヘテロ二量体形成により相互作用する。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインは、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとアミノ酸配列が異なり、ここで、遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、ホモ二量体形成により相互作用する。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーおよびそのドナードメインは、それぞれ自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーおよびそのドナードメインは、それぞれ自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が同一である。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのそれぞれは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーならびにそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーおよびそのドナードメインとアミノ酸配列が異なる。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、同一の親ドメインを有する。いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、同一でない親ドメインを有する。いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、互いに１アミノ酸または２アミノ酸または３アミノ酸または４アミノ酸または５アミノ酸または５から１０アミノ酸または１０から３０アミノ酸、好ましくは少なくとも１アミノ酸または少なくとも２アミノ酸または少なくとも３アミノ酸または少なくとも４アミノ酸または少なくとも５アミノ酸または少なくとも５から１０アミノ酸または少なくとも１０から３０アミノ酸異なるアミノ酸配列を有する親ドメインを有する。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとは、同一である。いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとは、同一でない。いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとは、互いに１アミノ酸または２アミノ酸または３アミノ酸または４アミノ酸または５アミノ酸または５から１０アミノ酸または１０から３０アミノ酸、好ましくは少なくとも１アミノ酸または少なくとも２アミノ酸または少なくとも３アミノ酸または少なくとも４アミノ酸または少なくとも５アミノ酸または少なくとも５から１０アミノ酸または少なくとも１０から３０アミノ酸異なる。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン、特にＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。ＣＨ１、ＣＨ３は、ＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＧＰおよびＩＧＨＭからであることができる。ＣＨ４は、ＩＧＨＥおよびＩＧＨＭからであることができる。ＣＨ２は、ＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＧＰおよびＩＧＨＭからであることができる。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン、特に第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から、好ましくはＣＨ１ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択されるドメインである。
【０１２３】
普通は、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、自然に存在するドメインである。通常、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ヒトから、例えば自然に存在するヒトドメインからである。好ましくは、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ヒトから、かつ同じアイソタイプ、種およびサブクラスからである。いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメイン、特に第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ３ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインである。同等に好ましくは、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、異なるアイソタイプからである。いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＨＧ１からのＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＨＧ３からのＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ３からのヒトＣＨ３ドメインである。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン、特に第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ４ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ４ドメイン、特にＩＧＨＭからのヒトＣＨ４ドメインまたはＩＧＨＥからのヒトＣＨ４ドメインである。
【０１２５】
同等に、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインである。同等に、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインである。より好ましくは、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択されるヒトＣＨ１ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ１ドメインである。最も好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるかもしくはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、
ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるかもしくはＩＧＫＣドメインである。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される。普通は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、自然に存在するドメインである。通常、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ヒトからである。
【０１２７】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ヒトからでありかつ同じアイソタイプ、種およびサブクラスからである。第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ３ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインである。同等に好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、異なるアイソタイプからである。いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＨＧ１からのＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＨＧ３からのＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ３からのヒトＣＨ３ドメインである。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ４ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ４ドメイン、特にＩＧＨＭからのヒトＣＨ４ドメインまたはＩＧＨＥからのヒトＣＨ４ドメインである。同等に好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインである。同等に、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインである。より好ましくは、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択されるヒトＣＨ１ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ１ドメインである。
【０１２９】
同じ種、アイソタイプおよびサブクラスからの親ドメイン、例えば、例えば第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインとしてのＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインは、ホモ二量体を形成する。いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ホモ二量体、具体的に自然に存在するホモ二量体を形成する。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ヘテロ二量体、具体的に自然に存在するヘテロ二量体、例えばＣＨ１ドメインとＩＧＫＣドメインまたはＣＨ１ドメインとＩＧＬＣドメインを形成する。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ヘテロ二量体、例えばＩＧＨＧ１からのＣＨ３ドメインとＩＧＨＧ３からのＣＨ３ドメインを形成する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとは、ホモ二量体、具体的に自然に存在するホモ二量体を形成する。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとは、ヘテロ二量体、具体的に自然に存在するヘテロ二量体、例えばＣＨ１ドメインとＩＧＫＣドメインまたはＣＨ１ドメインとＩＧＬＣドメインを形成する。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとは、ヘテロ二量体、例えばＩＧＨＧ１からのＣＨ３ドメインとＩＧＨＧ３からのＣＨ３ドメインを形成する。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ２ドメインでない。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ３ドメインでない。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＶＨドメインでなく、ＶＬドメインでない。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ２からでない。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインである。さらにより好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＫＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメイン、より好ましくはＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択されるヒトＣＨ１ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ１ドメインである。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＩＧ
ＬＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインである。さらにより好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＬＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメイン、より好ましくはＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択されるヒトＣＨ１ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ１ドメインである。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであるか、または第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＩＧＫＣドメインおよび第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインである。さらにより好ましくは、第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＫＣドメインであるか、または第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメインであり、より好ましくは、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択されるヒトＣＨ１ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ１ドメインである。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＩＧＬＣドメインであるか、または第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ＩＧＬＣドメインおよび第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインである。さらにより好ましくは、第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＬＣドメインであるか、または第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＩＧＬＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの好ましい親ドメインは、ヒトＣＨ１ドメインである。より好ましくは、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択されるヒトＣＨ１ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ１ドメインである。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン、特に第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ３ドメイン、好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスのＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインである。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、第２遺伝子操作免疫
グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ３ドメイン、好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスのＣＨ３ドメインである。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、例えば、ヘテロ二量体免疫グロブリンがＦ（ａｂ’）２である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、遺伝子操作ドメインの親ドメインとさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインとの間にヒンジ領域を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基は、ドメインのコア完全性にとって必須でないアミノ酸であり、好ましくは、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換のために用いる自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基は、ドメインのコア完全性にとって必須でないアミノ酸である。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含むかまたは８５．１位および８６位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、より好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、８５．１位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含むかまたは８５．１位および８６位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、特に、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、８８位にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含むかまたは８５．１位および８６位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１４８】
従って、いくつかの実施形態では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免
疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、好ましくは荷電アミノ酸でなく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０Ａ、２０Ｅ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｓ、２０Ｔ、２０Ｖおよび２０Ｗならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、好ましくは、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｓ、２０Ｔ、２０Ｖおよび２０Ｗならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される２０位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｉ、２２Ｌ、２２Ｔおよび２２Ｖならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される２２位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から
選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｆ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｒ、８５．１Ｓ、８５．１Ｔおよび８５．１Ｗならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される８５．１位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、８６Ｆ、８６Ｈ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｑ、８６Ｓ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される８６位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｋ、８８Ｌ、８８Ｑ、８８Ｒ、８８Ｔ、８８Ｖ、８８Ｗ、８８Ｙならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される８８位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｉ、２２Ｌ、２２Ｔおよび２２Ｖならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される２２位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２６Ｋ、２６Ｑ、２６Ｒ、２６Ｓ、２６Ｔおよび２６Ｖならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される２６位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｆ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｒ、８５．１Ｓ、
８５．１Ｔおよび８５．１Ｗならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される８５．１位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、８６Ｆ、８６Ｈ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｑ、８６Ｓ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される８６位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｋ、８８Ｌ、８８Ｑ、８８Ｒ、８８Ｔ、８８Ｖ、８８Ｗ、８８Ｙならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択される８８位のアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８８位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および／もしくは８６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８８位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および／もしくは８６位であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、８８位のアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および／または８６位、好ましくは８５．１位および８６位のアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。通常、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基と第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基とが互いに相互作用し、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８５．１位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は８６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が８５．１位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は８６位であり、ここで、各群メンバ
ーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、８５．１位のアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、８６位のアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。通常、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位にて置換されたアミノ酸残基と第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８６位にて置換されたアミノ酸残基とが互いに相互作用し、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２２位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２２位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、２２位および／もしくは８６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２２位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２２位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、２２位および／もしくは８６位であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、２２位のアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、２２位および／または８６位、好ましくは２２位および８６位のアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。通常、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２２位にて置換されたアミノ酸残基と第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２２位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基とが互いに相互作用し、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２０位である場合、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２０位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、２６位であるか、または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換が２０位である場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２０位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用する第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は２６位であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、２０位のアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の置換されたアミノ酸残基は、２６位のアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。通常、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２０位にて置換されたアミノ酸残基と第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の２６位にて置換されたアミノ酸残基とが互いに相互作用し、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タン
パク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｒおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｈおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｈおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｈおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｅおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメイ
ンのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｑおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｌおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｒおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｒおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ２またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＰ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、
８８Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｈおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＰ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｈおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＰ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｋおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｋおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｉおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｉおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示
される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｌおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメイ
ンのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｋおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ３またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｒおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｆおよびその保存的ア
ミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＰ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｋおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＰ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＰ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｅおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２００】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ３であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置
換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ４であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｒおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ４であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ４であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ４であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｉおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｈおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ４であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｈおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ４であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｈおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メ
ンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商
標）番号付けに従って示される。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｌおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｉおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｉおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であ
り、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリ
ンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｌおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｉおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｉおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１また
はヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｑおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパ
ーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｉおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここ
で、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｇおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｇおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＫＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｇおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｔおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メ
ンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＤ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｉおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスー
パーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｇおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ２  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ３  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧ４  ＣＨ１またはヒトＩＧＨＧＰ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｇおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｙおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＬＣ１またはヒトＩＧＬＣ２またはヒトＩＧＬＣ３またはヒトＩＧＬＣ６またはヒトＩＧＬＣ７であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ１であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｇおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＡＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＢＣ１またはヒトＴＲＢＣ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｃまたは８５．１Ａまたは８５．１Ｃおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＡＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＢＣ１またはヒトＴＲＢＣ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｃまたは８５．１Ａまたは８５．１Ｃおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＡＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＢＣ１またはヒトＴＲＢＣ２であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＢＣ１またはヒトＴＲＢＣ２であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＡＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｒおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＢＣ１またはヒトＴＲＢＣ２であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＡＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＢＣ１またはヒトＴＲＢＣ２であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＡＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＤＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＧＣ１またはヒトＴＲＧＣ２（２ｘ）またはヒトＴＲＧＣ２（３ｘ）であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｌおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＤＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＧＣ１またはヒトＴＲＧＣ２（２ｘ）またはヒトＴＲＧＣ２（３ｘ）であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存
的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＤＣであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＧＣ１またはヒトＴＲＧＣ２（２ｘ）またはヒトＴＲＧＣ２（３ｘ）であり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ｌおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＧＣ１またはヒトＴＲＧＣ２（２ｘ）またはヒトＴＲＧＣ２（３ｘ）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＤＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８５．１Ｎおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＧＣ１またはヒトＴＲＧＣ２（２ｘ）またはヒトＴＲＧＣ２（３ｘ）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＤＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８５．１Ｎおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＧＣ１またはヒトＴＲＧＣ２（２ｘ）またはヒトＴＲＧＣ２（３ｘ）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ヒトＴＲＤＣであり、ここで、第１免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸置換は、２２Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｋ、２０Ｗ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｋ、８８Ｙ、および８８Ｗからなる
群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｙ、および８８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌおよび８８Ｋならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、２６Ｅ、２６Ｔ、２６Ｋ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌおよび８８Ｋならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｔ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌ、８８Ｉおよび８８Ｋならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｔ、２６Ｅ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｒ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｔ、８６Ｆ、８６Ｙ、８６Ｖ、８８Ｗ、８８Ｒ、８８Ｌ、８８Ｉおよび８８Ｋならびに／またはその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位および９０位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２０位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位および９０位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２８１】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換と、２６位、７９位および９０位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換とを含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換と、３位、５位、７位、２０位、８１位、８４位、８４．２位および９０位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換とを含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２８２】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換と、３位、５位、２６位、２７位、８１位、８３位および８４位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換とを含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換と、７位、２０位、２７位、７９位、８１位、８４．２位および９０位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換とを含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２８３】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換と、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２６位、７９位、８１位、８３位および８４．２位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換とを含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位、８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換と、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２０位、７９位、８１位、８３位および８４．２位からなる群から選択される位置にてさらなるアミノ酸残基置換とを含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイ
ン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択されるドメインであり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２８５】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択される。同等に好ましくは、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ４ドメイン、特に同じアイソタイプ、種およびサブクラスのＣＨ４ドメインである。
【０２８６】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインである。
【０２８７】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインである。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択されるドメインであり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ２ドメインでなく、ＣＨ３ドメインでなく、ＶＬドメインでなく、ＶＨドメインでなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が１２位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、１１９位にてアミノ酸残基で置換される場合、１２位にて置換されたアミノ酸残基と１１９位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、１３位にてアミノ酸残基で置換される場合、２６位にて置換されたアミノ酸残基と１３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操
作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が５位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位にてアミノ酸残基で置換される場合、５位にて置換されたアミノ酸残基と２０位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２７位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、１８位にてアミノ酸残基で置換される場合、２７位にて置換されたアミノ酸残基と１８位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が２０位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２６位にてアミノ酸残基で置換される場合、２０位にて置換されたアミノ酸残基と２６位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が７９位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、８４．３位にてアミノ酸残基で置換される場合、７９位にて置換されたアミノ酸残基と８４．３位にて置換されたアミノ酸残基とが、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が８６位にてアミノ酸残基で置換され、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、８６位にてアミノ酸残基で置換される場合、両方の８６位にて置換されたアミノ酸残基が、荷電対でなく、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が１１位であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインがヒンジ領域を含むドメインである場合、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ヒンジ領域の３位にて置換されず、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択されるドメインであり、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２９０】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、２０位、２２位、２６位、７９位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ
酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２９１】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、３位、５位、２０位、２２位、２６位、２７位、８１位、８３位、８４位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２９２】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、７９位、８１位、８３位、８４．２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、３位、５位、７位、１１位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、７９位、８１位、８３位、８４．２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーは、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される。いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーは、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される。
【０２９４】
好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である。同等に、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり得、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり得る。
【０２９５】
好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である。同等に、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり得、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり得る。
【０２９６】
さらなる実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、ここで、配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）は、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で、好ましくはアラニン（Ａ）で置換されている。
【０２９７】
さらなる実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定
常ドメインベータ（配列番号２）であり、ここで、配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）は、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で、好ましくはアラニン（Ａ）で置換されている。
【０２９８】
さらなる実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であるか、または自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である。
【０２９９】
さらなる実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および／または第２メンバーのドナードメインは、ＩｇＡ１  ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメイン（配列番号９６）である。さらなる実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および／または第２メンバーのドナードメインは、ＩｇＡ２  ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメイン（配列番号９７）である。
【０３００】
さらなる実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および／または第４メンバーのドナードメインは、ＩｇＡ１  ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメイン（配列番号９６）である。さらなる実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および／または第４メンバーのドナードメインは、ＩｇＡ２  ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメイン（配列番号９７）である。
【０３０１】
ドナードメインとしてのＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメインまたはＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメインは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインが、ＩＧＨＡ１またはＩＧＨＡ２とは異なるアイソタイプからのＣＨ３ドメイン、例えばＩＧＨＧ１もしくはＩＧＨＧ２もしくはＩＧＨＧ３もしくはＩＧＨＧ４  ＣＨ３ドメインまたは好ましくはＩＧＨＧ１  ＣＨ３、より好ましくはヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３である場合、特に有用である。
【０３０２】
さらなる実施形態では、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、さらに、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、ここで、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、さらに、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タ
ンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている。
【０３０３】
親ドメインがＩｇＧ１からである場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、例えばＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＥのＣＨ３ドメインから選択でき、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、例えばＩｇＭもしくはＩｇＥのＣＨ４ドメインからまたはＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４のＣＨ３ドメインから選択でき、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、例えばＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＥのＣＨ３ドメインから選択でき、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、例えばＩｇＭもしくはＩｇＥのＣＨ４ドメインからまたはＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４のＣＨ３ドメインから選択できる。通常、選択される自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは同じであり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは同じである。
【０３０４】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインとがヘテロ二量体、具体的に自然に存在するヘテロ二量体を形成するか、または具体的にＣＨ１ドメインとＩＧＫＣドメインであることを条件として、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリン鎖の第２メンバーのドナードメインは、ホモ二量体を形成するドメイン、通常、同じアイソタイプ、種およびサブクラスのドメイン、好ましくはＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ３ドメイン、さらにより好ましくはＩｇＧ１  ＣＨ３ドメイン、特にヒトＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインであり得る。同等に好ましくは、ＩｇＡ１  ＣＨ３ドメインまたはＩｇＡ２  ＣＨ３ドメイン、好ましくはヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメインまたはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメインである。
【０３０５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインとがヘテロ二量体、具体的に自然に存在するヘテロ二量体を形成するか、または具体的にＣＨ１ドメインとＩＧＫＣドメインであることを条件として、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリン鎖の第２メンバーのドナードメインは、ヘテロ二量体を形成するドメイン、好ましくはＴＣＲ定常ドメインファミリーからのドメイン、より好ましくはＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）とＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）とＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり得る。
【０３０６】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインとがホモ二量体、具体的に自然に存在するホモ二量体を形成するか、または具体的に同じアイソタイプ、種およびサブクラスのドメインであることを条件として、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリン鎖の第２メンバーのドナードメインは、ヘテロ二量体を形成するドメイン、好ましくはＴＣＲ定常ドメインファミリーからのドメイン、より好ましくはＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）とＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）とＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である。
【０３０７】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとがヘ
テロ二量体、具体的に自然に存在するヘテロ二量体を形成するか、または具体的にＣＨ１ドメインとＩＧＫＣドメインであることを条件として、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリン鎖の第４メンバーのドナードメインは、好ましくはホモ二量体を形成するドメイン、通常、同じアイソタイプ、種およびサブクラスのドメイン、好ましくはＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ３ドメイン、さらにより好ましくはＩｇＧ１  ＣＨ３ドメイン、特にヒトＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである。
【０３０８】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとがホモ二量体、具体的に自然に存在するホモ二量体を形成するか、または具体的に同じアイソタイプ、種およびサブクラスのドメインであることを条件として、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリン鎖の第４メンバーのドナードメインは、好ましくはヘテロ二量体を形成するドメイン、好ましくは、ＴＣＲ定常ドメインファミリーからのドメイン、より好ましくはＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）とＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）とＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である。
【０３０９】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインとがヘテロ二量体、具体的に自然に存在するヘテロ二量体を形成することを条件として、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインおよび自然に存在する免疫グロブリン鎖の第４メンバーのドナードメインは、ヘテロ二量体を形成するドメイン、好ましくはＴＣＲ定常ドメインファミリーからのドメイン、より好ましくはＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）とＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）とＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）またはＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリン
スーパーファミリーの第３および第４メンバーのドナードメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメイン（配列番号４７）であり、ただし自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）またはＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーのドナードメインは、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３ドメイン（配列番号９６）またはヒトＩＧＨＡ２  ＣＨ３ドメイン（配列番号９７）であり、ただし自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーがＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成により相互作用している。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とホモ二量体形成により相互作用している。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６０位、１６２位、１６４位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１１８位、１２２位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６０位、１６２位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣ
ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１３１Ｖ、Ｓ１３１Ｔ、Ｓ１３１Ａ、Ｓ１３１Ｎ、Ｓ１３１Ｑ、Ｓ１３１Ｅ、Ｓ１３１Ｋ、Ｓ１３１Ｗ、Ｖ１３３Ａ、Ｖ１３３Ｇ、Ｖ１３３Ｔ、Ｖ１３３Ｌ、Ｖ１３３Ｉ、Ｎ１３７Ｑ、Ｎ１３７Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｎ１３７Ｖ、Ｎ１３７Ｓ、Ｎ１３７Ｒ、Ｎ１３７Ｅ、Ｓ１７４Ｔ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７４Ｒ、Ｓ１７４Ｈ、Ｓ１７４Ｋ、Ｓ１７４Ｗ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７４Ｃ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７６Ｉ、Ｓ１７６Ｔ、Ｓ１７６Ｈ、Ｓ１７６Ｑ、Ｓ１７６Ｖ、Ｓ１７６Ｗ、Ｓ１７６Ｙ、Ｓ１７６Ｆ、Ｔ１７８Ｑ、Ｔ１７８Ｌ、Ｔ１７８Ｖ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１７８Ｅ、Ｔ１７８Ｉ、Ｔ１７８Ｋ、Ｔ１７８ＹおよびＴ１７８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｅ、Ｓ１１４Ｋ、Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ａ、Ｆ１１６Ｔ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｍ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｋ、Ｓ１３１Ｔ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ｌ、Ｖ１３３Ａ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３７Ｋ、Ｎ１３８Ｋ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｙ、Ｑ１６０Ｆ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ａ、Ｓ１６２Ｇ、Ｓ１６２Ｄ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｔ１６４Ｍ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６Ｆ、Ｓ１７６Ｖ、Ｓ１７６Ｙ、Ｔ１７８Ｗ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１７８Ｌ、Ｔ１７８Ｋ、Ｔ１８０Ｎ、Ｔ１８０ＲおよびＴ１８０Ｋからなる群から選択されるかまたはＳ１１４Ｅ、Ｓ１１４Ｋ、Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ａ、Ｆ１１６Ｔ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｍ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｋ、Ｓ１３１Ｔ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ｌ、Ｖ１３３Ａ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３７Ｋ、Ｎ１３８Ｋ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｙ、Ｑ１６０Ｆ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ａ、Ｓ１６２Ｇ、Ｓ１６２Ｄ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｔ１６４Ｍ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６Ｆ、Ｓ１７６Ｖ、Ｓ１７６Ｙ、Ｔ１７８Ｗ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１７８Ｌ、Ｔ１７８Ｋ、Ｔ１８０Ｎ、Ｔ１８０Ｒ、およびＴ１８０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１３１Ｖ、１３１Ａ、１３１Ｎ、１３１Ｑ、１３１Ｅ、１３１Ｋ、１３１Ｗ、１３１Ｓ、１３３Ａ、１３３Ｇ、１３３Ｔ、１３３Ｌ、１３３Ｉ、１３７Ｑ、１３７Ｔ、１３７Ｋ、１３７Ｖ、１３７Ｒ、１３７Ｎ、１３７Ｅ、１７４Ｔ、１７４Ｍ、１７４Ｓ、１７４Ｒ、１７４Ｈ、１７４Ｋ、１７４Ｗ、１７４Ｆ、１７４Ｃ、１７４Ｎ、１７６Ｉ、１７６Ｔ、１７６Ｈ、１７６Ｑ、１７６Ｗ、１７６Ｙ、１７６Ｖ、１７６Ｆ、１７８Ｑ、１７８Ｌ、１７８Ｖ、１７８Ｒ、１７８Ｅ、１７８Ｔ、１７８Ｉ、１７８Ｋ、１７８Ｅおよび１７８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４Ｅ、１１４Ｋ、１１４Ｑ、１１６Ａ、１１６Ｙ、１１８Ｍ、１１８Ｌ、１２２Ｄ、１３１Ｋ、１３１Ｎ、１３３Ａ、１３３Ｌ、１３３Ｔ、１３７Ｔ、１３７Ｅ、１３７Ｋ、１３８Ｅ、１３８Ｋ、１６０Ｙ、１６０Ｆ
、１６０Ｋ、１６２Ｄ、１６２Ａ、１６２Ｇ、１６５Ｌ、１６５Ｍ、１６７Ｅ、１６７Ｓ、１７４Ｎ、１７４Ｍ、１７４Ｆ、１７４Ｓ、１７６Ｖ、１７６Ｆ、１７６Ｙ、１７８Ｗ、１７８Ｒ、１７８Ｌ、１７８Ｋ、１８０Ｎ、１８０Ｒおよび１８０Ｋからなる群から選択されるかまたは１１４Ｅ、１１４Ｋ、１１４Ｑ、１１６Ａ、１１６Ｙ、１１８Ｍ、１１８Ｌ、１２２Ｄ、１３１Ｋ、１３１Ｎ、１３３Ａ、１３３Ｌ、１３３Ｔ、１３７Ｔ、１３７Ｅ、１３７Ｋ、１３８Ｅ、１３８Ｋ、１６０Ｙ、１６０Ｆ、１６０Ｋ、１６２Ｄ、１６２Ａ、１６２Ｇ、１６５Ｌ、１６５Ｍ、１６７Ｅ、１６７Ｓ、１７４Ｎ、１７４Ｍ、１７４Ｆ、１７４Ｓ、１７６Ｖ、１７６Ｆ、１７６Ｙ、１７８Ｗ、１７８Ｒ、１７８Ｌ、１７８Ｋ、１８０Ｎ、１８０Ｒおよび１８０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１２８位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１６８位、１７０位、１７３位、１７５位、１８１位、１８３位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置のアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１４１Ｖ、１４１Ｔ、１４１Ｎ、１４１Ｑ、１４１Ｅ、１４１Ｋ、１４１Ｗ、１４１Ｓ、１４３Ａ、１４３Ｔ、１４３Ｌ、１４３Ｉ、１４３Ｖ、１４７Ｑ、１４７Ｔ、１４７Ｖ、１４７Ｓ、１４７Ｒ、１４７Ｎ、１４７Ｅ、１８１Ｔ、１８１Ｍ、１８１Ａ、１８１Ｒ、１８１Ｈ、１８１Ｋ、１８１Ｗ、１８１Ｆ、１８１Ｃ、１８１Ｎ、１８３Ｉ、１８３Ｈ、１８３Ｑ、１８３Ｖ、１８３Ｔ、１８３Ｗ、１８３Ｙ、１８３Ｆ、１８５Ｑ、１８５Ｌ、１８５Ｒ、１８５Ｅ、１８５Ｉ、１８５Ｔ、１８５Ｋ、１８５Ｙおよび１８５Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｅ、Ｓ１２４Ｋ、Ｓ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ａ、Ｆ１２６Ｔ、Ｆ１２６Ｙ、Ｌ１２８Ｆ、Ｌ１２８Ｍ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｋ、Ａ１４１Ｔ、Ａ１４１Ｎ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｖ、Ｇ１４３Ａ、Ｇ１４３Ｌ、Ｇ１４３Ｔ、Ｋ１４７Ｔ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｈ１６８Ｙ、Ｈ１６８Ｆ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｄ、Ｆ１７０Ａ、Ｆ１７０Ｇ、Ｆ１７０Ｔ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｑ１７５Ｅ、Ｑ１７５Ｓ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ａ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３Ｖ、Ｓ１８３Ｆ、Ｓ１８３Ｙ、Ｖ１８５Ｗ、Ｖ１８５Ｒ、Ｖ１８５Ｌ、Ｖ１８５Ｋ、Ｔ１８７Ｎ、Ｔ１８７ＫおよびＴ１８７Ｒからなる群から選択されるかまたはＳ１２４Ｅ、Ｓ１２４Ｋ、Ｓ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ａ、Ｆ１２６Ｔ、Ｆ１２６Ｙ、Ｌ１２８Ｆ、Ｌ１２８Ｍ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｋ、Ａ１４１Ｔ、Ａ１４１Ｎ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｖ、Ｇ１４３Ａ、Ｇ１４３Ｌ、Ｇ１４３Ｔ、Ｋ１４７Ｔ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｈ１６８Ｙ、Ｈ１６８Ｆ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｄ、Ｆ１７０Ａ、Ｆ１７０Ｇ、Ｆ１７０Ｔ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｑ１７５Ｅ、Ｑ１７５Ｓ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ａ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３Ｖ、Ｓ１８３Ｆ、Ｓ１８３Ｙ、Ｖ１８５Ｗ、Ｖ１８５Ｒ、Ｖ１８５Ｌ、Ｖ１８５Ｋ、Ｔ１８７Ｎ、Ｔ１８７ＫおよびＴ１８７Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、
ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３２５】
Ｋａｂａｔ番号付けに従う親ドメインとしてのＩＧＬＣドメインのタンパク質−タンパク質界面中の１１４位、１１６位、１１８位、１２２位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６０位、１６２位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位は、同じ順序で、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される３位、５位、７位、１１位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位に対応する。
【０３２６】
ＥＵ番号付けに従う親ドメインとしてのＩＧＫＣドメインのタンパク質−タンパク質界面中の１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６０位、１６２位、１６４位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位は、同じ順序で、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される３位、５位、７位、１２位、１３位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位に対応する。
【０３２７】
ＥＵ番号付けに従う親ドメインとしてのＣＨ１ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の１２４位、１２６位、１２８位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１６８位、１７０位、１７３位、１７５位、１８１位、１８３位、１８５位および１８７位は、同じ順序で、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される３位、５位、７位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位に対応する。
【０３２８】
ＥＵ番号付けに従う親ドメインとしてのＣＨ４ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の１２４位、１２６位、１２８位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１６８位、１７０位、１７３位、１７５位、１８１位、１８３位、１８５位および１８７位は、同じ順序で、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される３位、５位、７位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位に対応する。
【０３２９】
従って、同等に、いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、３位、５位、７位、１２位、１３位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３３０】
従って、同等に、いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択されるＩＧＬＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、３位、５位、７位、１１位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３３１】
従って、同等に、いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、３位、５位、７位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３３２】
従って、同等に、いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ４ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、３位、５位、７位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１３１位、１３７位、１６０位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１２８位、１４１位、１４３位、１４７位、１７０位、１７３位、１７５位、１８１位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７８位でアミノ酸残基を含むかまたはＴ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１３１位、１３７位、１６０位、１７６位および１８０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８１位のアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８１Ａを含むかまたはＳ１８１Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１２８位、１４１位、１４３位、１４７位、１７０位、１７３位、１７５位、１８５位および１８７位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１３１Ｋ、Ｎ１３７Ｔ、Ｑ１６０Ｙ、Ｓ１７６Ｖ、Ｔ１７８ＷおよびＴ１８０Ｎからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＳ１３１Ｋ、Ｎ１３７Ｔ、Ｑ１６０Ｙ、Ｓ１７６Ｖ、Ｔ１７８ＷおよびＴ１８０Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝
子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｅ、Ｆ１２６Ａ、Ｌ１２８Ｆ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｆ１７０Ｄ、Ｖ１７３Ｌ、Ｑ１７５Ｅ、Ｓ１８１Ａ、Ｖ１８５Ｒからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＳ１２４Ｅ、Ｆ１２６Ａ、Ｌ１２８Ｆ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｆ１７０Ｄ、Ｖ１７３Ｌ、Ｑ１７５Ｅ、Ｓ１８１Ａ、Ｖ１８５ＲおよびＴ１８７Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１３１位、１３７位、１６２位、１６５位、１６７位、１７４位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１４１位、１４３位、１４７位、１６８位、１８３位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７４位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７４Ａを含むかまたはＳ１７４Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１３１位、１３７位、１６２位、１６５位、１６７位、１７８位および１８０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８５位でアミノ酸残基を含むかまたはＶ１８５Ｗを含むかまたはＶ１８５Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１４１位、１４３位、１４７位、１６８位、１８３位および１８７位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｓ１７４Ａ、Ｔ１７８ＲおよびＴ１８０Ｒからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＳ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｓ１７４Ａ、Ｔ１７８ＲおよびＴ１８０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ａ１４１Ｋ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｈ１６８Ｙ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＷおよびＴ１８７Ｎからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＡ１４１Ｋ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｈ１６８Ｙ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＷおよびＴ１８７Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１３１位、１３３位、１３
７位、１３８位、１６２位、１６４位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２８位、１４１位、１４３位、１４８位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位、１８３位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７８位でアミノ酸残基を含むかまたはＴ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６２位、１６４位、１７４位および１７６位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８３位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８３Ｖを含むかまたはＳ１８３Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２８位、１４１位、１４３位、１４８位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位、１８５位および１８７位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｋ、Ｆ１１６Ｔ、Ｓ１３１Ｔ、Ｖ１３３Ｌ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３８Ｋ、Ｓ１６２Ｇ、Ｔ１６４Ｍ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７６ＦおよびＴ１７８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＳ１１４Ｋ、Ｆ１１６Ｔ、Ｓ１３１Ｔ、Ｖ１３３Ｌ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３８Ｋ、Ｓ１６２Ｇ、Ｔ１６４Ｍ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７６ＦおよびＴ１７８Ｗならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｌ１２８Ｍ、Ａ１４１Ｎ、Ｇ１４３Ａ、Ｄ１４８Ｅ、Ｈ１６８Ｆ、Ｆ１７０Ａ、Ｑ１７５Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＬおよびＴ１８７Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＬ１２８Ｍ、Ａ１４１Ｎ、Ｇ１４３Ａ、Ｄ１４８Ｅ、Ｈ１６８Ｆ、Ｆ１７０Ａ、Ｑ１７５Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＬおよびＴ１８７Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１８位、１３１位、１３３位、１３８位、１６０位、１６２位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１７０位、１７３位、１８１位、１８３位および１８５位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７６位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７６Ｖを含むかまたはＳ１７６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１８位、１３１位、１３３位、１３８位、１６０位、１６２位、１６７位、１７４位、１７８位、１８０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８５位でアミノ酸残基を含むかまたはＶ１８５Ｗを含むかまたはＶ１８５Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１７０位、１７３位、１８１位および１８３位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｆ１１８Ｍ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ａ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｆ、Ｓ１６２Ａ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７６Ｖ、Ｔ１７８ＬおよびＴ１８０Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＦ１１８Ｍ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ａ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｆ、Ｓ１６２Ａ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７６Ｖ、Ｔ１７８ＬおよびＴ１８０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｋ、Ｆ１２６Ｔ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｌ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｆ１７０Ｇ、Ｖ１７３Ｍ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３ＦおよびＶ１８５Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＳ１２４Ｋ、Ｆ１２６Ｔ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｌ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｆ１７０Ｇ、Ｖ１７３Ｍ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３ＦおよびＶ１８５Ｗならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３３位、１３７位、１６０位、１６２位、１６４位、１７４位、１７６位および１７８位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位、１８３位および１８５位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７６位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７６Ｙを含むかまたはＳ１７６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３３位、１３７位、１６０位、１６２位、１６４位、１７４位および１７８位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメイ
ンであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８３位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８３Ｙを含むかまたはＳ１８３Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位および１８５位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＳ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３ＹおよびＶ１８５Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むか、またはＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３ＹおよびＶ１８５Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｖ１８５ＷおよびＳ１８３Ｖを含むかもしくはＶ１８５ＷおよびＳ１８３Ｖならびにその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１７４ＡもしくはＳ１７４Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／またはＳ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｆ１１８Ｆ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１８０Ｒからなる群から選択されるかもしくはＳ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｆ１１８Ｆ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１８０Ｒおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるさらなるアミノ酸を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１７６Ｆおよび／もしくはＴ１７８Ｗを含むかまたはＳ１７６Ｆおよび／もしくはＴ１７８Ｗならびにその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｈ１６８Ｆおよび／もしくはＦ１７０Ａを含むかまたはＨ１６８Ｆおよび／もしくはＦ１７０Ａならびにその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣ
ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｔ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｌ１２８Ｍを含むかまたはＬ１２８Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｔ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｆ１７０Ａを含むかまたはＦ１７０Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１８３ＹもしくはＳ１８３Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびにＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋからなる群から選択されるかもしくはＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるさらなるアミノ酸を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１７４Ｆおよび／もしくはＳ１７６Ｙを含むかまたはＳ１７４Ｆおよび／もしくはＳ１７６Ｙならびにその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１８３ＹもしくはＳ１８３Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびにＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋからなる群から選択されるかもしくはＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるさらなるアミノ酸を含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１６２ＴもしくはＳ１６２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびにＳ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋからなる群から選択されるかもしくはＳ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるさらなるアミノ酸を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６０位、１６２位、１６４位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｅ、Ｓ１１４Ｋ、Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ａ、Ｆ１１６Ｔ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｍ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｋ、Ｓ１３１Ｔ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ｌ、Ｖ１３３Ａ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３７Ｋ、Ｎ１３８Ｋ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｙ、Ｑ１６０Ｆ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ａ、Ｓ１６２Ｇ、Ｓ１６２Ｄ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｔ１６４Ｍ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６Ｖ、Ｓ１７６Ｆ、Ｓ１７６Ｙ、Ｔ１７８Ｗ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１７８Ｌ、Ｔ１７８Ｋ、Ｔ１８０Ｎ、Ｔ１８０ＲおよびＴ１８０Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１１４Ｅ、Ｓ１１４Ｋ、Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ａ、Ｆ１１６Ｔ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｍ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｓ１３１Ｋ、Ｓ１３１Ｔ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ｌ、Ｖ１３３Ａ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３７Ｋ、Ｎ１３８Ｋ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｙ、Ｑ１６０Ｆ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ａ、Ｓ１６２Ｇ、Ｓ１６２Ｄ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｔ１６４Ｍ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ａ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６Ｖ、Ｓ１７６Ｆ、Ｓ１７６Ｙ、Ｔ１７８Ｗ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１７８Ｌ、Ｔ１７８Ｋ、Ｔ１８０Ｎ、Ｔ１８０ＲおよびＴ１８０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１２８位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１６８位、１７０位、１７３位、１７５位、１８１位、１８３位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｅ、Ｓ１２４Ｋ、Ｓ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ａ、Ｆ１２６Ｔ、Ｆ１２６Ｙ、Ｌ１２８Ｆ、Ｌ１２８Ｍ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｋ、Ａ１４１Ｔ、Ａ１４１Ｎ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｖ、Ｇ１４３Ａ、Ｇ１４３Ｌ、Ｇ１４３Ｔ、Ｋ１４７Ｔ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｈ１６８Ｙ、Ｈ１６８Ｆ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｄ、Ｆ１７０Ａ、Ｆ１７０Ｇ、Ｆ１７０Ｔ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｑ１７５Ｅ、Ｑ１７５Ｓ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ａ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３Ｖ、Ｓ１８３Ｆ、Ｓ１８３Ｙ、Ｖ１８５Ｗ、Ｖ１８５Ｒ、Ｖ１８５Ｌ、Ｖ１８５Ｋ、Ｔ１８７Ｎ、Ｔ１８７ＫおよびＴ１８７Ｒからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１２４Ｅ、Ｓ１２４Ｋ、Ｓ１２４Ｑ
、Ｆ１２６Ａ、Ｆ１２６Ｔ、Ｆ１２６Ｙ、Ｌ１２８Ｆ、Ｌ１２８Ｍ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｋ、Ａ１４１Ｔ、Ａ１４１Ｎ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｖ、Ｇ１４３Ａ、Ｇ１４３Ｌ、Ｇ１４３Ｔ、Ｋ１４７Ｔ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｈ１６８Ｙ、Ｈ１６８Ｆ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｄ、Ｆ１７０Ａ、Ｆ１７０Ｇ、Ｆ１７０Ｔ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｑ１７５Ｅ、Ｑ１７５Ｓ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ａ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３Ｖ、Ｓ１８３Ｆ、Ｓ１８３Ｙ、Ｖ１８５Ｗ、Ｖ１８５Ｒ、Ｖ１８５Ｌ、Ｖ１８５Ｋ、Ｔ１８７Ｎ、Ｔ１８７ＫおよびＴ１８７Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１３１位、１３７位、１６０位、１７６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１２８位、１４１位、１４３位、１４７位、１７０位、１７３位、１７５位、１８１位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７８位でアミノ酸残基を含むかまたはＴ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１３１位、１３７位、１６０位、１７６位、１８０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８１位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８１Ａを含むかまたはＳ１８１Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１２８位、１４１位、１４３位、１４７位、１７０位、１７３位、１７５位、１８５位および１８７位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１３１Ｋ、Ｎ１３７Ｔ、Ｑ１６０Ｙ、Ｓ１７６Ｖ、Ｔ１７８Ｗ、Ｔ１８０Ｎからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１３１Ｋ、Ｎ１３７Ｔ、Ｑ１６０Ｙ、Ｓ１７６Ｖ、Ｔ１７８Ｗ、Ｔ１８０Ｎおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｅ、Ｆ１２６Ａ、Ｌ１２８Ｆ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｆ１７０Ｄ、Ｖ１７３Ｌ、Ｑ１７５Ｅ、Ｓ１８１Ａ、Ｖ１８５ＲおよびＴ１８７Ｒからなる群から選択されるかまたはＳ１２４Ｅ、Ｆ１２６Ａ、Ｌ１２８Ｆ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｆ１７０Ｄ、Ｖ１７
３Ｌ、Ｑ１７５Ｅ、Ｓ１８１Ａ、Ｖ１８５ＲおよびＴ１８７Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１３１位、１３７位、１６２位、１６５位、１６７位、１７４位、１７６位、１７８位、１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１４１位、１４３位、１４７位、１６８位、１８３位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７４位でアミノ酸残基を含むかまたは１７４Ａを含むかまたは１７４Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１３１位、１３７位、１６２位、１６５位、１６７位、１７８位および１８０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８５位でアミノ酸残基を含むかまたはＶ１８５Ｗを含むかまたはＶ１８５Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１４１位、１４３位、１４７位、１６８位、１８３位および１８７位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｓ１７４Ａ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１８０Ｒからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｓ１７４Ａ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１８０Ｒおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ａ１４１Ｋ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｈ１６８Ｙ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＷおよびＴ１８７Ｎからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＡ１４１Ｋ、Ｇ１４３Ｖ、Ｋ１４７Ｔ、Ｈ１６８Ｙ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＷおよびＴ１８７Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ド
メインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６２位、１６４位、１７４位、１７６位および１７８位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２８位、１４１位、１４３位、１４８位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位、１８３位、１８５位および１８７位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７８位でアミノ酸残基を含むかまたはＴ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１３１位、１３３位、１３７位、１３８位、１６２位、１６４位、１７４位および１７６位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８３位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８３Ｖを含むかまたはＳ１８３Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２８位、１４１位、１４３位、１４８位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位、１８５位および１８７位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｋ、Ｆ１１６Ｔ、Ｓ１３１Ｔ、Ｖ１３３Ｌ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３８Ｋ、Ｓ１６２Ｇ、Ｔ１６４Ｍ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７６ＦおよびＴ１７８Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１１４Ｋ、Ｆ１１６Ｔ、Ｓ１３１Ｔ、Ｖ１３３Ｌ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３８Ｋ、Ｓ１６２Ｇ、Ｔ１６４Ｍ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７６ＦおよびＴ１７８Ｗならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｌ１２８Ｍ、Ａ１４１Ｎ、Ｇ１４３Ａ、Ｄ１４８Ｅ、Ｈ１６８Ｆ、Ｆ１７０Ａ、Ｑ１７５Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＬおよびＴ１８７Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＬ１２８Ｍ、Ａ１４１Ｎ、Ｇ１４３Ａ、Ｄ１４８Ｅ、Ｈ１６８Ｆ、Ｆ１７０Ａ、Ｑ１７５Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５ＬおよびＴ１８７Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１８位、１３１位、１３３位、１３８位、１６０位、１６２位、１６７位、１７４位、１７
６位、１７８位および１８０位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１７０位、１７３位、１８１位、１８３位および１８５位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７６位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７６Ｖを含むかまたはＳ１７６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１８位、１３１位、１３３位、１３８位、１６０位、１６２位、１６７位、１７４位、１７８位、１８０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８５位でアミノ酸残基を含むかまたはＶ１８５Ｗを含むかまたはＶ１８５Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１４１位、１４３位、１４７位、１４８位、１７０位、１７３位、１８１位および１８３位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｆ１１８Ｍ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ａ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｆ、Ｓ１６２Ａ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７６ＶおよびＴ１７８Ｌからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＦ１１８Ｍ、Ｓ１３１Ｎ、Ｖ１３３Ａ、Ｎ１３８Ｅ、Ｑ１６０Ｆ、Ｓ１６２Ａ、Ｄ１６７Ｓ、Ｓ１７４Ｎ、Ｓ１７６ＶおよびＴ１７８Ｌならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基ならびにＴ１８０Ｋを含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｋ、Ｆ１２６Ｔ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｌ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｆ１７０Ｇ、Ｖ１７３Ｍ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３ＦおよびＶ１８５Ｗからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１２４Ｋ、Ｆ１２６Ｔ、Ａ１４１Ｔ、Ｇ１４３Ｌ、Ｋ１４７Ｅ、Ｄ１４８Ｋ、Ｆ１７０Ｇ、Ｖ１７３Ｍ、Ｓ１８１Ｍ、Ｓ１８３ＦおよびＶ１８５Ｗならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３３位、１３７位、１６０位、１６２位、１６４位、１７４位、１７６位および１７８位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタン
パク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１２４位、１２６位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位、１８３位および１８５位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１７６位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１７６Ｙを含むかまたはＳ１７６Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１１４位、１１６位、１１８位、１２３位、１２４位、１３３位、１３７位、１６０位、１６２位、１６４位、１７４位および１７８位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、１８３位でアミノ酸残基を含むかまたはＳ１８３Ｙを含むかまたはＳ１８３Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって１２４位、１２６位、１３３位、１３４位、１３９位、１４１位、１４３位、１６８位、１７０位、１７５位、１８１位および１８５位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３ＹおよびＶ１８５Ｋからなる群から選択されるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３ＹおよびＶ１８５Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｖ１８５ＷおよびＳ１８３Ｖを含むかまたはＶ１８５ＷおよびＳ１８３Ｖならびにその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１７４ＡまたはＳ１７４Ａおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／またはＳ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１８０Ｒか
らなる群から選択されるかもしくはＳ１１４Ｅ、Ｆ１１６Ａ、Ｓ１３１Ｔ、Ｎ１３７Ｔ、Ｓ１６２Ｄ、Ｅ１６５Ｌ、Ｄ１６７Ｅ、Ｔ１７８Ｒ、Ｔ１８０Ｒおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択されるさらなるアミノ酸を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、ここで、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１７６Ｆおよび／もしくはＴ１７８Ｗを含むかまたはＳ１７６Ｆおよび／もしくはＴ１７８Ｗならびにその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｈ１６８Ｆおよび／もしくはＦ１７０Ａを含むかまたはＨ１６８Ｆおよび／もしくはＦ１７０Ａならびにその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、ここで、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｔ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｌ１２８Ｍを含むかまたはＬ１２８Ｍおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、ここで、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｔ１７８Ｗを含むかまたはＴ１７８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換を含み、かつ／あるいは第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｆ１７０Ａを含むかまたはＦ１７０Ａおよびその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１８３Ｙを含むかまたはＳ１８３Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびにＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋからなる群から選択されるさらなるアミノ酸を含むかまたはＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１７４Ｆおよび／もしくはＳ１７６Ｙを含むかまたはＳ
１７４Ｆおよび／もしくはＳ１７６Ｙならびにその保存的アミノ酸置換を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＫＣドメインであり、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１８３Ｙを含むかまたはＳ１８３Ｙおよびその保存的アミノ酸置換ならびにＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋからなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基を含むかまたはＳ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１ＦおよびＶ１８５Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｓ１６２Ｔを含むかまたはＳ１６２Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびにＳ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋからなる群から選択されるさらなるアミノ酸を含むかまたはＳ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６ＹおよびＴ１７８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＥＵ番号付けに従って示される。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８８位でアミノ酸残基および場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および／または８６位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８８位にて置換されたアミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中の８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３８０】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される親ドメインとしてのＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位は、同じ順序で、ＥＵ番号付けに従って示される３４７位、３４９位、３５１位、３６４位、３６６位、３７０位、３７１位、３９２位、３９４位、３９７位、３９９位、４０５位、４０７位、４０９位および４１１位に対応する。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは
、ＣＨ３ドメインである。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、異なるアイソタイプのＣＨ３ドメインである。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ１
ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ３からのヒトＣＨ３ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ３からのヒトＣＨ３ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインである。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および８６位でアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、荷電アミノ酸でなく、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｉでなく、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基は、荷電アミノ酸でなく、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基および第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基は、荷電対でない。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｗまたは８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１（ＩＧＨＧ１）、ヒトＩｇＧ２（ＩＧＨＧ２）、ヒトＩｇＧ３（ＩＧＨＧ３）およびヒトＩｇＧＰ（ＩＧＨＧＰ）からなる群から選択されるドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｋ８８ＷまたはＫ８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＡ１（ＩＧＨＡ１）またはＩｇＡ２（ＩＧＨＡ２）ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｉ８８ＷまたはＩ８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＤ（ＩＧＨＤ）ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｖ８８ＷまたはＶ８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＥ  ＣＨ３（ＩＧＨＥ）ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｔ８８ＷまたはＴ８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ４（ＩＧＨＧ４）ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｒ８８ＷまたはＲ８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＭ（ＩＧＨＭ）ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、Ｅ８８ＷまたはＥ８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択されるさらなるアミノ酸残基であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２０Ｋ、２０Ｗ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８５．１Ｗ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙおよび８６Ｆからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのア
ミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖおよび８６Ｆからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２０Ｋ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖおよび８６Ｆからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４００】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖおよび８６Ｆからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、７Ｆ、７Ｍ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒからなる群から選択されるかまたは３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、７Ｆ、７Ｍ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０３】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインとしてのＣＨ３ドメインに関連するいくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８８Ｉおよびその保存的アミノ酸置換であり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換された場合によるさらなるアミノ酸残基は、８１Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０４】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインとしてのＣＨ３ドメインに関連するいくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８８Ｉおよびその保存的アミノ酸置換であり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換された場合によるさらなるアミノ酸残基は、８１Ｗおよび保存的アミノ酸置換であり、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換された場合によるさらなるアミノ酸残基もしくは追加のさらなるアミノ酸残基は、８６Ｔおよびその保存的アミノ酸置換ならびに／または８４Ｒおよびその保存的アミノ酸置換であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８８位および２０位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０６】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および／または８６位および２６位でアミノ酸残基ならびに場合によってさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０７】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基は、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｃおよび８５．１Ｎからなる群から選択されるかまたは８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｃおよび８５．１Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは８６Ｓおよび８６Ｖからなる群から選択されるかまたは８６Ｓおよび８６Ｖならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０８】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４０９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質
−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０位、２２位、２６位、７９位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置であり、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、８４位であるかまたは８４Ｌであるかまたは８４Ｌおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｋ、２２Ｖ、２６Ｔ、７９Ｙ、８５．１Ｓ、８６Ｖおよび９０Ｎからなる群から選択されるかまたは２０Ｋ、２２Ｖ、２６Ｔ、７９Ｙ、８５．１Ｓ、８６Ｖおよび９０Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および８６位でアミノ酸残基を含むかまたは８５．１Ｃおよびその保存的アミノ酸置換ならびに８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から、好ましくは３Ｅ、５Ａ、７Ｆ、２０Ｔ、２２Ｖ、２６Ｔ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８８Ｒおよび９０Ｒからなる群からもしくは３Ｅ、５Ａ、７Ｆ、２０Ｔ、２２Ｖ、２６Ｔ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８８Ｒおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１１】
いくつかの実施形態では、アミノ酸残基置換８５．１Ｃは、アミノ酸残基置換８５．１Ａまたは８５．１Ｓで置き換えられ、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３位、５位、２０位、２２位、２６位、２７位、８１位、８４位、８５．１位および８６位からなる群から選択される位置であり、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８４Ｍ、８５．１Ｍ、８６Ｆからなる群から選択されるかまたは３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８４Ｍ、８５．１Ｍ、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換さ
れたさらなるアミノ酸残基は、７９位であるかまたは７９Ｆであるかまたは７９Ｆおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８４Ｍ、８５．１Ｍ、８６Ｆからなる群から選択されるかまたは３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８４Ｍ、８５．１Ｍ、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および８６位でアミノ酸残基を含むかまたは８５．１Ｎおよびその保存的アミノ酸置換ならびに８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、７Ｍ、２０Ｎ、２２Ａ、２７Ｅ、７９Ｆ、８１Ａ、８４．２Ｓ、８８Ｌおよび９０Ｋからなる群から選択されるかまたは７Ｍ、２０Ｎ、２２Ａ、２７Ｅ、７９Ｆ、８１Ａ、８４．２Ｓ、８５．１Ｎ、８６Ｖ、８８Ｌおよび９０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１５】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位ならびに３位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択されるさらなる位置でアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位および８６位ならびに場合によって３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位および２２位でアミノ酸残基な
らびに場合によって３位、５位、７位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位ならびに３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位および２２位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位および８６位ならびに場合によって３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４１９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｎおよび２０Ｔならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２０】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２６位にて置換されたアミノ酸残基は、２６Ｔおよび２６Ｅならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２２位にて置換されたアミノ酸残基は、２２Ａおよび２２Ｖならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２２】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８６位にて置換されたアミノ酸残基は、８６Ｖおよび８６Ｆならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｋ、２０Ｓ、２０Ｗおよび２０Ｅからなる群から選択され、かつ／あるいは第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２２Ｔ、２６Ｋ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑおよび２０Ｅからなる群から選択され、かつ／あるいは第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｋ、２０Ｓおよび２０Ｅからなる群から選択され、かつ／あるいは第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｋ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位および２２位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｋ、２０Ｓ、２０Ｗおよび２０Ｅおよび２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２２Ｔからなる群から選択され、かつ／あるいは第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２６Ｋ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、７Ｆ、７Ｍ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、８８Ｌ、８８Ｒ、８８Ｗ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、７Ｆ、７Ｍ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、８８Ｌ、８８Ｒ、８８Ｗ、９０Ｋ、９０Ｎ、および９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４２９】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２６位にて置換されたアミノ酸残基は、２６Ｋ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅからなる群から選択され、かつ／あるいは第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２２Ｔ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４３０】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２６位および８６位にて置換されたアミノ酸残基は、２６Ｋ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅおよび８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｔ、８６Ｆからなる群から選択され、かつ／あるいは第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２２Ｔ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｔ、８８Ｉ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４３１】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｅ、３Ｋ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、８８Ｌ、８８Ｒおよび８８Ｗならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８８位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および／または８６位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位および９０位からなる群から選択される位置または３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８６位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに
従って示される。
【０４３３】
ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される親ドメインとしてのＣＨ２ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位および９０位は、同じ順序で、ＥＵ番号付けに従って示される２３９位、２４１位、２４３位、２５８位、２６０位、２６４位、２６５位、２８８位、２９０位、２９２位、２９３位、２９５位、２９６位、３０１位、３０３位、３０５位、３０７位に対応する。
【０４３４】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ２ドメインである。
【０４３５】
いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、異なるアイソタイプのＣＨ２ドメインである。
【０４３６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ１
ＣＨ２ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ２ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ３  ＣＨ２ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ３からのヒトＣＨ２ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ３  ＣＨ２ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ３からのヒトＣＨ２ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ２ドメイン、好ましくはＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ２ドメインである。
【０４３７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｗまたは８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４３８】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基は、８５．１Ａおよび８５．１Ｎからなる群から選択されるかまたは８５．１Ａおよび８５．１Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは８６Ｓまたは８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４３９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｅ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｗ、２０Ｓ、２０Ｅ、２０Ｑ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖ、８６Ｑおよび８６Ｆからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｅ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され
、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｗ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖおよび８６Ｆからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、５Ｙ、７Ｍ、７Ｌ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８３Ｍ、８３Ｔ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８４．３Ｄ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒからなる群から選択されるかまたは３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、５Ｙ、７Ｍ、７Ｌ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２０Ｓ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８３Ｍ、８３Ｔ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８４．３Ｄ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８８位および２０位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４３】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位および／または８６位および２６位でアミノ酸残基ならびに場合によってさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０位、２２位、２６位、７９位、８５．１位および９０位からなる群から選択される位置であり、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、８４位であるかまたは８４Ｌであるかまたは８４Ｌおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０Ｋ、２２Ｖ、２６Ｔ、７９Ｙ、８５．１Ｓおよび９０Ｎからなる群から選択されるかまたは２０Ｋ、２２Ｖ、２６
Ｔ、７９Ｙ、８５．１Ｓおよび９０Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５．１位にて置換されたアミノ酸残基は、８５．１Ｃであるかまたは８５．１Ｃおよびその保存的アミノ酸置換であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８６位にて置換されたアミノ酸残基は、８６Ｓであるかまたは８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３位、５位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から、好ましくは３Ｅ、５Ａ、２０Ｔ、２２Ｖ、２６Ｔ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８８Ｒおよび９０Ｒからなる群からまたは３Ｅ、５Ａ、２０Ｔ、２２Ｖ、２６Ｔ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８８Ｒおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４６】
いくつかの実施形態では、アミノ酸残基置換８５．１Ｃは、アミノ酸残基置換８５．１Ａまたは８５．１Ｓで置き換えられ、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３位、５位、２０位、２２位、２６位、２７位、８１位、８３位、８５．１位および８６位からなる群から選択される位置であり、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置または７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８３Ｍ、８５．１Ｍおよび８６Ｆからなる群から選択されるかまたは３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８３Ｍ、８５．１Ｍおよび８６Ｆならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、７９位であるかまたは７９Ｆであるかまたは７９Ｆおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択される位置もしくは７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４４９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８３Ｍ、８５．１Ｍおよび８６Ｆからなる群から選択されるかまたは３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８３Ｍ、８５．１Ｍおよび８６Ｆならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第
２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５．１位にて置換されたアミノ酸残基は、８５．１Ｎであるかまたは８５．１Ｎおよびその保存的アミノ酸置換であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２２位にて置換されたアミノ酸残基は、２２Ａであるかまたは２２Ａおよびその保存的アミノ酸置換であり、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、７Ｍ、２０Ｎ、２７Ｅ、７９Ｆ、８１Ａ、８４．２Ｓ、８８Ｌおよび９０Ｋからなる群から選択されるかまたは７Ｍ、２０Ｎ、２７Ｅ、７９Ｆ、８１Ａ、８４．２Ｓ、８８Ｌおよび９０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、５位、７位、２０位、８３位、８４．３位、８５．１位および８６位からなる群から選択される位置であり、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、５位、７位、２０位、８３位、８４．３位および８８位からなる群から選択される位置または５位、７位、２０位、８３位、８４．３位、８５．１位および８８位からなる群から選択される位置または５位、７位、２０位、８３位、８４．３位、８６位および８８位からなる群から選択される位置であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、５Ｙ、７Ｌ、２０Ｓ、８３Ｔ、８４．３Ｄ、８５．１Ｆおよび８６Ｙからなる群から選択されるかまたは５Ｙ、７Ｌ、２０Ｓ、８３Ｔ、８４．３Ｄ、８５．１Ｆおよび８６Ｙならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０位であるかまたは２０Ｓであるかまたは２０Ｓおよびその保存的アミノ酸置換ならびに場合によって５位、７位、８３位、８４．３位および８８位からなる群から選択される位置もしくは５位、７位、８３位、８４．３位、８５．１位および８８位からなる群から選択される位置もしくは５位、７位、８３位、８４．３位、８６位および８８位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基であり、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、５Ｙ、７Ｌ、２０Ｓ、８３Ｔ、８４．３Ｄ、８５．１Ｆおよび８６Ｙからなる群から選択されるかまたは５Ｙ、７Ｌ、２０Ｓ、８３Ｔ、８４．３Ｄ、８５．１Ｆおよび８６Ｙならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、８５．１位であるかまたは８５．１Ｆであるかまたは８５．１Ｆおよびその保存的アミノ酸置換であり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２０位であるかまたは２０Ｓであるかまたは２０Ｓおよびその保存的アミノ酸置換であり、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、５Ｙ、７Ｌ、８３Ｔ、８４．３Ｄ、８６Ｙおよび８８Ｋからなる群から選択されるかまたは５Ｙ、７Ｌ、８３Ｔ、８４．３Ｄ、８６Ｙおよび８８Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８３位、８４位、８４．２位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５４】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ２ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位ならびに３位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択されるさらなる位置であり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で２６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位および８６位ならびに場合によって３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位および２２位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位ならびに３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質
−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２０位および２２位でアミノ酸残基ならびに場合によって３位、５位、７位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置でさらなるアミノ酸残基を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基は、２６位および８６位ならびに場合によって３位、５位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８８位および９０位からなる群から選択されるさらなる位置でアミノ酸残基を含み、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｎおよび２０Ｔならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４５９】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２６位にて置換されたアミノ酸残基は、２６Ｔおよび２６Ｅならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４６０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２２位にて置換されたアミノ酸残基は、２２Ａおよび２２Ｖならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４６１】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８６位にて置換されたアミノ酸残基は、８６Ｖおよび８６Ｆならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４６２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｗおよび２０Ｓからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２２Ｉ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｑ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４６３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で２０位にて置換されたアミノ酸残基は、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｋ、２０Ｗおよび２０Ｓからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｒ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｗ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｈ、８６Ｔ、８６Ｗ、８６Ｙ、８６Ｖ、８６Ｆ、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｋ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、ここで、各群
メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４６４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基は、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、５Ｙ、７Ｍ、７Ｌ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８３Ｍ、８３Ｔ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８４．３Ｄ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、８８Ｋ、８８Ｌ、８８Ｒ、８８Ｗ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒからなる群から選択されるかまたは３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、５Ｙ、７Ｍ、７Ｌ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８３Ｍ、８３Ｔ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８４．３Ｄ、８５．１Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｎ、８５．１Ｍ、８５．１Ｆ、８６Ｓ、８６Ｆ、８６Ｙ、８８Ｋ、８８Ｌ、８８Ｒ、８８Ｗ、９０Ｋ、９０Ｎおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４６５】
いくつかの実施形態では、本開示は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが、同一でなく、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ４ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２０位、２２位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位からなる群から選択される位置にてアミノ酸残基置換を含み、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を提供する。いくつかの実施形態では、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、自然に存在するＣＨ４ドメインである。
【０４６６】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基は、８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、ここで、アミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。
【０４６７】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５アミノ酸残基、より特には少なくとも６、さらにより特には少なくとも７、最も特には全てのアミノ酸残基が置換されている。第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の同等に好ましくは２、より好ましくは３、最も好ましくは４、特に５アミノ酸残基、より特には６、さらにより特には７アミノ酸残基が置換されている。第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の同等に好ましくは２未満、より好ましくは３未満、最も好ましくは４未満、特に５未満のアミノ酸残基、より特には６未満、さらにより特には７未満のアミノ酸残基が置換されている。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５アミノ酸残基、より特には少なくとも６、さらにより特には少なくとも７、最も特には全てのアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる。
【０４６９】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基は、隣接しない。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５の置換されたアミノ酸残基は、隣接しない。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない。
【０４７２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない。
【０４７３】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列は、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない。
【０４７４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、タンパク質−タンパク質界面を有するさらなる遺伝子操作ドメインを含み、ここで、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および
／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインとは、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる。
【０４７５】
好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとは、同一でない。
【０４７６】
第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５アミノ酸残基、より特には少なくとも６、さらにより特には少なくとも７、最も特には全てのアミノ酸残基が置換されている。第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の同等に好ましくは２、より好ましくは３、最も好ましくは４、特に５アミノ酸残基、より特には６、さらにより特には７アミノ酸残基が置換されている。第１および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の同等に好ましくは２未満、より好ましくは３未満、最も好ましくは４未満、特に５未満のアミノ酸残基、より特には６未満、さらにより特には７未満のアミノ酸残基が置換されている。
【０４７７】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５アミノ酸残基、より特には少なくとも６、さらにより特には少なくとも７、最も特には全てのアミノ酸残基は、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる。
【０４７８】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインおよび第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が、隣接しない、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインおよび第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５
の置換されたアミノ酸残基は、隣接しない。
【０４７９】
いくつかの実施形態では、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、タンパク質−タンパク質を有するさらなる遺伝子操作ドメインを含み、ここで、前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第５メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第４遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第６メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第５メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第６メンバーのドナードメインとは、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体を形成し、
第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインおよび第４遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる。
【０４８０】
第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインおよび／または第４遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択され、ここで、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインおよび／または第４遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基は、例えば、上記のような、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインについてのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸残基の群から選択される。
【０４８１】
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第５および／または第６メンバーのドナードメインは、例えば、上記のような、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および／または第２メンバーのドナードメインの群から選択される。
【０４８２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号１４、配列番号１５および配列番号１６からなる群から選択され、好ましくは配列番号１４または配列番号１５のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。
【０４８３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。
【０４８４】
従って、さらなる態様では、本発明は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０４８５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｋ２４、Ｖ２６、Ｔ３０、Ｙ５２、Ｓ６５、Ｖ６７、Ｗ６９およびＮ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号１３のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０４８６】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号１４のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｅ７、Ａ９、Ｆ１１、Ｔ２４、Ｖ２６、Ｔ３０、Ｄ５４、Ｌ５７、Ｅ５９、Ａ６５、Ｓ６７、Ｒ６９およびＲ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号１４のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０４８７】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号１５のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０４８８】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｅ７、Ａ９、Ｆ１１、Ｔ２４、Ｖ２６、Ｔ３０、Ｄ５４、Ｌ５７、Ｅ５９、Ｃ６５、Ｓ６７、Ｒ６９およびＲ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号１５のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０４８９】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号１６のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成により相互作用している。
【０４９０】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｅ７、Ａ９、Ｆ１１、Ｔ２４、Ｖ２６、Ｔ３０、Ｄ５４、Ｌ５７、Ｅ５９、Ｓ６５、Ｓ６７、Ｒ６９およびＲ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号１６のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０４９１】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖（ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３のアミノ酸配列を含む）と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成により相互作用している。
【０４９２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｓ１４４Ｋ、Ｔ１４６Ｖ、Ｋ１５０Ｔ、Ｋ１７２Ｙ、Ｆ１８５Ｓ、Ｙ１８７Ｖ、Ｋ１８９ＷおよびＴ１９１Ｎからなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号３のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０４９３】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成により相互作用している。
【０４９４】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９
８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｑ１２７Ｅ、Ｙ１２９Ａ、Ｌ１３１Ｆ、Ｓ１４４Ｔ、Ｔ１４６Ｖ、Ｋ１５０Ｔ、Ｔ１７４Ｄ、Ｖ１７７Ｌ、Ｄ１７９Ｅ、Ｆ１８５Ｃ、Ｙ１８７Ｓ、Ｋ１８９ＲおよびＴ１９１Ｒからなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７または８または９または１０、または１１または１２、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号４のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０４９５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。
【０４９６】
さらなる態様では、本発明は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０４９７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｋ１２７、Ｔ１２９、Ｔ１４４、Ｌ１４６、Ｅ１５０、Ｋ１５１、Ｇ１７４、Ｍ１７７、Ｍ１８５、Ｆ１８７およびＷ１８９からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号３５のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０４９８】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号３４のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０４９９】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｍ１３１、Ｎ１４４、Ａ１４６、Ｅ１５１、Ｆ１７２、Ａ１７４、Ｓ１７９、Ｎ１８５、Ｖ１８７、Ｌ１８９およびＫ１９１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号３４のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５００】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４０のアミノ
酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３９のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。
【０５０１】
さらなる態様では、本発明は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５０２】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｋ７、Ｔ９、Ｔ２４、Ｌ２６、Ｅ３０、Ｋ３１、Ｇ５５、Ｍ５７、Ｍ６７、Ｆ６９およびＷ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号４０のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５０３】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号３９のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５０４】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｍ１１、Ｎ２４、Ａ２６、Ｅ３１、Ｆ５１、Ａ５３、Ｓ５８、Ｎ６４、Ｖ６６、Ｌ６８およびＫ７０からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号３９のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５０５】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。
【０５０６】
さらなる態様では、本発明は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５０７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、
好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｑ７、Ｙ９、Ｄ１６、Ｅ１７、Ｑ２２、Ｓ２４、Ｔ２６、Ｋ５１、Ｔ５３、Ｄ５８、Ｆ６４、Ｙ６６およびＫ６８からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号４８のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５０８】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号４９のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５０９】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｑ７、Ｙ９、Ｌ１１、Ｄ１６、Ｅ１７、Ｔ２６、Ｋ３０、Ｋ５３、Ｔ５５、Ｖ５７、Ｆ６７、Ｙ６９およびＫ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号４９のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５１０】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。
【０５１１】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｋ２４、Ｖ２６、Ｔ３０、Ｙ５２、Ｓ６５、Ｖ６７、Ｗ６９およびＮ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号７６のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５１２】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｅ７、Ａ９、Ｆ１１、Ｔ２４、Ｖ２６、Ｔ３０、Ｄ
５４、Ｌ５７、Ｅ５９、Ａ６５、Ｓ６７、Ｒ６９およびＲ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号１４のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５１３】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７８のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７９のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。さらなる態様では、本発明は、配列番号７８のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５１４】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号７８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号７８のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｅ７、Ｈ９、Ｒ３０、Ｒ５７、Ｅ５９、Ａ６５およびＴ６７からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号７８のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５１５】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号７９のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５１６】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｔ２４、Ｌ５２、Ｗ５４、Ｉ６９およびＲ７１からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号７９のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５１７】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含み、かつ／あるいは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号８５のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む。
【０５１８】
さらなる態様では、本発明は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン
鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５１９】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｋ２６、Ｖ２８、Ｙ５６、Ｓ７１、Ｖ７３、Ｗ７５およびＮ７７からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号８４のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５２０】
さらなる態様では、本発明は、タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号８５のアミノ酸配列を含むタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５２１】
いくつかの実施形態では、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９６％、特に少なくとも９７％、より特には少なくとも９８％、最も特には少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ただし配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列が、Ｅ８、Ａ１０、Ｆ１２、Ｖ２８、Ｄ５８、Ｌ６１、Ａ７１、Ｓ７３、Ｒ７５およびＲ７７からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１、通常２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７、最も特には全てを含有し、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列表中の配列番号８５のアミノ酸残基の番号付けに従って示される。
【０５２２】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、４、６、７、１３〜２９、３４、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４８、４９、５０、５１、５９、６１および６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、４、６、７、１３〜２９、３４、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４８、４９、５０、５１、５９、６１および６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５２３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、４、６、７、１３〜２９、３４、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４８、４９、５０、５１、５９、６１，６８、７３、７８および８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、４、６、７、１３〜２９、３４、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４８、４９、５０、５１、５９、６１、６８、７４、７９および８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５２４】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、７、１３、５９および６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グ
ロブリン鎖は、配列番号４、６、１４、１５、１６、１７、４１、５０および６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５２５】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、７、１３、５９、６８、７３および８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４、６、１４、１５、１６、１７、４１、５０、６１、７４および８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５２６】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３４、３９および４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３５、３６、４０および４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５２７】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４８、４９、５０および５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４８、４９、５０および５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４９または配列番号５１のアミノ酸配列を含む。同等に好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号５０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４９または配列番号５１のアミノ酸配列を含む。
【０５２８】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【０５２９】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、７、１３、５９および６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号４、６、１４、１５、１６、１７、４１、５０および６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５３０】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３４、３９および４１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３５、３６、４０および４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５３１】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、４、６、７、１３〜２９、３４、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４８、４９、５０、５１、５９、６１、６８、７３、７８および８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、４、６、７、１３〜２９、３４、３５、３６、３９、４０、４１、４２、４８、４９、５０、５１、５９、６１、６８、７４、７９および８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５３２】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ／あるいは第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【０５３３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、７、１３、５９、６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号３、７、１３、５９、６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０５３４】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面と相互作用する第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む。
【０５３５】
いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号７０のアミノ酸配列を含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面と相互作用する遺伝子操作ドメインを有する第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面と相互作用する遺伝子操作ドメインを有する第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５３６】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２ならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、Ｆｃ領域を含む。通常、Ｆｃ領域は、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＧおよびＩｇＭ  Ｆｃ領域からなる群から選択される。
【０５３７】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、同じ種から、好ましくは同じ種およびアイソタイプから、より好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスからのＦｃ領域を含む。
【０５３８】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および／または第２ならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、同じ種から、好ましくは同じ種およびアイソタイプから、より好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスからのＦｃ領域を含む。
【０５３９】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のＦｃ領域は、同一でない。いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のＦｃ領域は、互いに１アミノ酸または２アミノ酸または３アミノ酸または４アミノ酸または５アミノ酸または５から１０アミノ酸または１０から３０アミノ酸、好ましくは少なくとも２アミノ酸または少なくとも３アミノ酸または少なくとも４アミノ酸または少なくとも５アミノ酸または少なくと
も５から１０アミノ酸または少なくとも１０から３０アミノ酸異なるアミノ酸配列を有する。
【０５４０】
いくつかの実施形態では、本開示は、二重特異性であるヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５４１】
いくつかの実施形態では、本開示は、全長抗体である、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５４２】
いくつかの実施形態では、本開示は、二重特異性である全長抗体である、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５４３】
いくつかの実施形態では、本開示は、二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片または二重特異性抗体が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２からなる群から選択される抗原と結合する、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。好ましくは、二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片または二重特異性抗体は、ＨＥＲ２およびＥＧＦＲに特異的である。同等に好ましくは、二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片または二重特異性抗体は、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２に特異的である。
【０５４４】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを有する、Ｆａｂであるヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。
【０５４５】
いくつかの実施形態では、本開示は、Ｆ（ａｂ’）２断片であるヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供し、ここで、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖は、遺伝子操作ドメインとさらなる遺伝子操作ドメインとを含むが、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質界面は、第３免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと相互作用し、さらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質界面は、第３免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと相互作用し、ここで、これら２つの第３免疫グロブリン鎖のこれらの遺伝子操作ドメインのタンパク質界面は、互いに同じまたは異なる。
【０５４６】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの追加ポリペプチドが、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を提供する。好ましくは、１つの追加ポリペプチドが、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する。適切には、追加ポリペプチドは、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ドメイン抗体、薬理活性ペプチドもしくはタンパク質、受容体細胞外ドメイン、ＣＤＲグラフトポリペプチドおよび治療的遺伝子操作タンパク質足場からなる群から選択される。融合は、当業者に知られるような遺伝子の遺伝子操作により通常達成され、融合されるアミノ酸配列の一部を形成しないアミノ酸配列リンカーを含んでよい。
【０５４７】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも第１および第２の非同一遺伝子操作ドメインを含む多重ドメインタンパク質を提供し、第１および第２遺伝子操作ドメインのそれぞれは、タンパク質−タンパク質界面を含有し、ここで、第１親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、第２親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとは、ヘテロ二量体またはホモ二量体を形成する。
【０５４８】
多重ドメインタンパク質は、好ましくはＦｃ領域を含む。通常、Ｆｃ領域は、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＧおよびＩｇＭ  Ｆｃ領域からなる群から選択される。
【０５４９】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片または以下に記載するようなヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片を作製する方法を提供し、ここで、ドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換される、親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸残基は、両方のドメインのアルファ炭素トレースを重ね合わせることにより親ドメインのタンパク質−タンパク質界面上に重畳した場合に、親ドメインの最も近い残基と６Å未満以内の距離の３Ｄの位置を占めるドナードメインのタンパク質−タンパク質界面中のアミノ酸残基であり、ここで、ドナードメインは、親ドメインとは異なる。
【０５５０】
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片を作製する方法
さらなる態様では、本発明は、
（ａ）第１親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基を、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、
（ｂ）第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基を、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、
（ｃ）前記遺伝子操作免疫グロブリン鎖をコードする核酸を含む宿主細胞を培養するステップであって、培養が、核酸が発現され、遺伝子操作免疫グロブリン鎖が生成されるようなものであるステップと、
（ｄ）ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を宿主細胞培養物から回収するステップと
を含む、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を生成する方法を提供する。
【０５５１】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが同一でない方法を提供する。
【０５５２】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用している方法を提供する。
【０５５３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７からなる群から選択される第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインを含む方法を提供する。ＣＨ１、ＣＨ３は、ＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＧＰおよびＩＧＨＭからであり得、ＣＨ４は、ＩＧＨＥおよびＩＧＨＭからであり得る。ＣＨ２は、ＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＧＰおよびＩＧＨＭ
からであり得る。いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ４ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から、好ましくはＣＨ１ドメイン、ＩＧＫＣドメイン、ＩＧＬＣ１ドメイン、ＩＧＬＣ２ドメイン、ＩＧＬＣ３ドメイン、ＩＧＬＣ６ドメインおよびＩＧＬＣ７ドメインからなる群から選択されるドメインである。
【０５５４】
通常、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ヒトからである。好ましくは、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ヒトから、かつ同じアイソタイプ、種およびサブクラスからである。第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメイン、特に第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ３ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインである。
【０５５５】
同等に好ましくは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインである。同等に、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の好ましい親ドメインは、ＣＨ１ドメイン、より好ましくはＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４からなる群から選択されるヒトＣＨ１ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ１ドメインである。
【０５５６】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが自然に存在するホモ二量体を形成する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが自然に存在するヘテロ二量体を形成する方法を提供する。
【０５５７】
いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとが、自然に存在するヘテロ二量体もしくは自然に存在するホモ二量体を形成し、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用している方法を提供する。
【０５５８】
好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとは、自然に存在するヘテロ二量体を形成する。
【０５５９】
いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基が、ドメインのコア完全性にとって必須でないアミノ酸である方法を提供する。
【０５６０】
いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーがＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される方法を提供する。好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である。同等に、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）で
あり得、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり得る。さらなる実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）が、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で、好ましくはアラニン（Ａ）で置換されている方法を提供する。
【０５６１】
さらなる実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であるか、または自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である方法を提供する。
【０５６２】
いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である方法を提供する。
【０５６３】
いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である方法を提供する。
【０５６４】
いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）またはＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）またはＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３および第４メンバーのドナードメインが、ＩｇＧ１
ＣＨ３ドメイン（配列番号４７）であり、ただし自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である場合、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインがＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である方法を提供する。
【０５６５】
さらなる実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第
２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、タンパク質−タンパク質界面を有するさらなる遺伝子操作ドメインを含み、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第３メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第４メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄ構造上同等の位置でアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる方法を提供する。
【０５６６】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインと第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインとが同一でない方法を提供する。
【０５６７】
いくつかの実施形態では、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン、特に第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＣＨ３ドメイン、好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスのＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリンのさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインである。
【０５６８】
いくつかの実施形態では、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインは、ＩＧＬＣドメインまたはＩＧＫＣドメインのような軽鎖定常ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ１ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインは、ＣＨ３ドメイン、好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスのＣＨ３ドメインである。
【０５６９】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が隣接しない方法を提供する。
【０５７０】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリンのさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が隣接しない方法を提供する。
【０５７１】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリ
ン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５の置換されたアミノ酸残基が隣接しない方法を提供する。
【０５７２】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリンのさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５の置換されたアミノ酸残基が隣接しない方法を提供する。
【０５７３】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５、より特には少なくとも６、最も特には少なくとも７アミノ酸残基が置換されている方法を提供する。
【０５７４】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリンのさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは少なくとも４、特に少なくとも５、より特には少なくとも６、最も特には少なくとも７アミノ酸残基が置換されている方法を提供する。
【０５７５】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない方法を提供する。
【０５７６】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つの３Ｄ構造上の位置が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面の同一の３Ｄ構造上の位置と比較して異なるアミノ酸残基である方法を提供する。
【０５７７】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、同じ種から、好ましくは同じ種およびアイソタイプから、より好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスからの親ドメインを有する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、同一の親ドメイン、すなわち同一のアミノ酸配列を有する親ドメインを有する方法を提供する。
【０５７８】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、ＩｇＧ１、好ましくはヒトＩｇＧ１からの親ドメインを有する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、同一でない親ドメインを有する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、互いに１アミノ酸または２アミノ酸または３アミノ酸または４アミノ酸または５アミノ酸または５から１０アミノ酸または１０から３０アミノ酸異なるアミノ酸配列を有する親ドメインを有する方法を提供する。
【０５７９】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖がＦｃ領域を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、第１および／または第２ならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖がＦｃ領域を含む方法を提供する。通常、
Ｆｃ領域は、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＧおよびＩｇＭ  Ｆｃ領域からなる群から選択される。
【０５８０】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、同じ種から、好ましくは同じ種およびアイソタイプから、より好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスからのＦｃ領域を含む方法を提供する。
【０５８１】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および／または第２ならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、同じ種から、好ましくは同じ種およびアイソタイプから、より好ましくは同じ種、アイソタイプおよびサブクラスからのＦｃ領域を含む方法を提供する。
【０５８２】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のＦｃ領域が同一でない方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のＦｃ領域が、互いに１アミノ酸または２アミノ酸または３アミノ酸または４アミノ酸または５アミノ酸または５から１０アミノ酸または１０から３０アミノ酸異なるアミノ酸配列を有する方法を提供する。
【０５８３】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片が全長抗体である方法を提供する。
【０５８４】
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはその断片が二重特異性である全長抗体である方法を提供する。
【０５８５】
いくつかの実施形態では、本開示は、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２からなる群から選択される抗原と結合する、二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片または二重特異性全長抗体を提供する。好ましくは、二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片または二重特異性抗体は、ＨＥＲ２およびＥＧＦＲに特異的である。同等に好ましくは、二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはその断片または二重特異性抗体は、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２に特異的である。
【０５８６】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つの追加ポリペプチドが、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する方法を提供する。好ましくは、追加ドメインは、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する。場合によって、追加ドメインは、親ドメインを遺伝子操作する前に第１および／または第２親免疫グロブリン鎖と融合できる。適切には、追加ドメインは、ＦＡＢ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ドメイン抗体、薬理活性ペプチドもしくはタンパク質、受容体細胞外ドメイン、ＣＤＲグラフトポリペプチドおよび治療的遺伝子操作タンパク質足場からなる群から選択される。
【０５８７】
さらなる態様では、本発明は、
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有するドメインを含む多重ドメインタンパク質を用意するステップと、
（ｂ）ドナードメインとして、（ａ）のドメインとは異なる、タンパク質−タンパク質界面を有するドメインを含む自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーを選択するステップと、
（ｃ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインと、（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインとの３Ｄ構造を重畳するステップと、
（ｄ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインと（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインとを重畳した３Ｄ構造において露出タンパク質−タンパク質界面残基を同定するステップと、
ｅ）（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質
−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を、（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインからの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基からの３Ｄ構造上同等の位置にてアミノ酸残基で置換するステップと
を含む、多重ドメインタンパク質のドメインのタンパク質−タンパク質界面を遺伝子操作する方法を提供する。
【０５８８】
いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーが、自然に存在するホモ二量体である方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーが、自然に存在するヘテロ二量体である方法を提供する。通常、少なくとも２、好ましくは少なくとも３、より好ましくは少なくとも４、最も好ましくは少なくとも５、特に少なくとも６、より特には少なくとも７アミノ酸残基が置換されている。好ましくは、（ａ）の多重ドメインタンパク質のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインは、別のドメインとホモ二量体、好ましくは自然に存在するホモ二量体を形成できる。好ましくは、（ａ）の多重ドメインタンパク質のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインは、別のドメインとヘテロ二量体、好ましくは自然に存在するヘテロ二量体を形成できる。好ましくは、免疫グロブリン鎖中および選択された免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー中で同定される露出界面残基は、ドメインのコア完全性にとって必須でない。好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーは、ＴＣＲ定常ドメインファミリーから選択される。より好ましくは、ドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）またはＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であるが、代替の実施形態では、配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）は、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で置換されている。ドナードメインとして同様に好ましくは、ＣＨ３ドメイン、より好ましくはヒトＣＨ３ドメイン、特にＩＧＨＧ１からのヒトＣＨ３ドメインである。
【０５８９】
さらなる実施形態では、本開示は、ドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）またはＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である方法を提供する。
【０５９０】
いくつかの実施形態では、本開示は、第１および／または第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が隣接しない方法を提供する。
【０５９１】
好ましくは、（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を置換するために用いられる（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基は、Ｋ２０、Ｖ２２、Ｔ２６、Ｙ４３、Ｓ６１、Ｖ６３、Ｗ６５およびＮ６７からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列番号１中のアミノ酸の位置に対応する。代わりに好ましくは、（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を置換するために用いられる（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基は、Ｅ１０、Ａ１２、Ｆ１４、Ｔ２８、Ｖ３０、Ｔ３４、Ｄ５９、Ｌ６３、Ｅ６５、Ｃ７５、Ｓ７７、Ｒ７９およびＲ８１からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列番号２中のアミノ酸の位置に対応する。
【０５９２】
好ましくは、（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を置換するために用いられる（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基は、Ｋ４、Ｔ６、Ｔ２２、Ｌ２４、Ｅ２
８、Ｋ２９、Ｇ５３、Ｍ５６、Ｍ６３、Ｆ６５、Ｗ６７からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列番号３３中のアミノ酸の位置に対応する。代わりに好ましくは、（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を置換するために用いられる（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基は、Ｍ１３、Ｎ１８、Ａ２０、Ｅ２５、Ｆ４４、Ａ４７、Ｓ５１、Ｎ５７、Ｖ５９、Ｌ６１、Ｋ６３からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列番号３２中のアミノ酸の位置に対応する。
【０５９３】
好ましくは、（ａ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基の少なくとも１つのアミノ酸残基を置換するために用いられる（ｂ）のタンパク質−タンパク質界面を有するドナードメインの同定された露出タンパク質−タンパク質界面アミノ酸残基は、Ｑ１２７、Ｙ１２９、Ｌ１３１、Ｄ１３６、Ｅ１３７、Ｑ１４２、Ｓ１４４、Ｔ１４６、Ｋ１５０、Ｋ１７２、Ｔ１７４、Ｖ１７７、Ｄ１７９、Ｆ１８５、Ｙ１８７、Ｋ１８９からなる群から選択され、ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、配列番号１２中のアミノ酸の位置に対応する。
【０５９４】
さらなる態様では、本発明は、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの少なくとも１つのアミノ酸残基で置換されるタンパク質−タンパク質界面を有する少なくとも１つの遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの少なくとも１つのアミノ酸残基で置換されるタンパク質−タンパク質界面を有する少なくとも１つの遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖とを含むヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を遺伝子操作により得るための、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインの使用を提供する。
【０５９５】
通常、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインと自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインとは、自然に存在するヘテロ二量体または自然に存在するホモ二量体、好ましくは自然に存在するヘテロ二量体を形成する。好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーは、Ｔ細胞受容体鎖から選択される。
【０５９６】
より好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である。
【０５９７】
同等により好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）であり、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第２メンバーのドナードメインは、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）である。同等により好ましくは、自然に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの第１および第２メンバーのドナードメインは、ＣＨ３ドメインである。
【実施例１】
【０５９８】
ヒトα／βＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界面を有する免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体の構築。
本実施例は、ＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面（ＥＵ残基３４１〜４４７）中に、一方の鎖についてヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインアルファ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＯ７２２５８．１［残基１３５〜２２５］；配列番号１；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＡＣ［完全配列］、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ
ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））および第２鎖についてヒトＴＣＲ定常ドメインベータ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１０２６．１［残基１３４〜２６１］、配列番号２；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＢＣ２［ＩＭＧＴ（登録商標）残基１．８〜１２４］）からのタンパク質−タンパク質界面残基の部分集合から注意深く選択した変異を有する２つのヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖（各鎖は、ヒトヒンジ（γ１）、ＣＨ２およびＣＨ３定常ドメインからなる；ＥＵ残基２２１〜４４７）が、少なくとも７６％の効力を有するヘテロ二量体Ｆｃ分子へと集合することを証明する。ＴＲＢＣ２は、ヒトＴＣＲ定常ドメインベータについての２つの自然に存在するアロタイプのうちの１つである。ＴＲＢＣ１およびＴＲＢＣ２はともに、ＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖のＣＨ３ドメインを変異させる目的のために同等に用いることができるが、これは、これらのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸配列に差がないからである。
【０５９９】
変異は、ＬＣ１３  ＴＣＲ分子（Ｋｊｅｒ−Ｎｉｅｌｓｅｎ  Ｌら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、１０（１１）：１５２１〜３２ページ（２００２））の結晶構造と、ヒトＩＧＨＧ１からのＦｃ断片（Ｋｒａｐｐ  Ｓら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３２５（５）：９７９〜８９ページ（２００３））の結晶構造との重畳の分析から導いた。ＴＣＲおよびＩＧＨＧ１
Ｆｃの両方の３Ｄ構造は、タンパク質データバンクから取得し（ＴＲＢＣ２（配列番号２）およびヒトＩＧＨＧ１についてそれぞれＰＤＢコード１ＫＧＣおよび１Ｈ３Ｙ；ｗｗｗ．ｐｄｂ．ｏｒｇ；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＦＣら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、８０（２）：３１９〜２４ページ（１９７７））、Ｃｏｏｔソフトウェア（Ｅｍｓｌｅｙ  ＰおよびＣｏｗｔａｎ  Ｋ、Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ、６０（Ｐｔ１２  Ｐｔ１）：２１２６〜３２ページ（２００４））を用いて重畳し、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）からのＤｉｓｃｏｖｅｒｙ−Ｓｔｕｄｉｏソフトウェアを用いてさらに視覚化した。ＴＣＲヘテロ二量体定常ドメインとＣＨ３ホモ二量体の重畳した３Ｄ構造のタンパク質−タンパク質界面の調査を、合理的設計の開始点として用いた。いくつかのパラメータを考慮した；これらは、それらに限定されないが、プロリン残基の保存、ならびにドメインコアの完全性およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体からの静電的接触のいくらかに関与するアミノ酸位置の保存；ＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体において見出される特異的疎水性接触の撤廃、ならびにＴＣＲ定常ドメインヘテロ二量体中において見出される選択された疎水性接触でのこれらの置き換えを含んだ。この分析により、アミノ酸置換の２つの部分集合の設計が導かれ、一方の部分集合は、ＣＨ３ホモ二量体の１つのサブユニットのタンパク質−タンパク質界面とＴＣＲ定常ドメインアルファのタンパク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、第２部分集合は、ＣＨ３ホモ二量体の第２サブユニットのタンパク質−タンパク質界面とＴＣＲ定常ドメインベータのタンパク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、各部分集合は、ヘテロ二量体形成できる２つの新しくユニークなＣＨ３遺伝子操作ドメイン配列を創出した。
【０６００】
ヒトＴＣＲ定常ドメインアルファのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中に有するその遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖を「ＢＴアルファ鎖」（図１）と称し、ヒトＴＣＲ定常ドメインベータのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中に有するその遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖を「ＢＴベータ鎖」（図１）と称する。より具体的に、ＢＴアルファ鎖は、以下の置換：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ３６６Ｖ、Ｋ３７０Ｔ、Ｋ３９２Ｙ、Ｆ４０５Ｓ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９ＷおよびＴ４１１Ｎ（配列番号３）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作ＣＨ３ドメインを有するヒトＩＧＨＧ１からの免疫グロブリンＦｃ鎖からなり、従って、「ＢＴベータ鎖」は、以下の置換：Ｑ３４７Ｅ、Ｙ３４９Ａ、Ｌ３５１Ｆ、Ｓ３６４Ｔ、Ｔ３６６Ｖ、Ｋ３７０Ｔ、Ｔ３９４Ｄ、Ｖ３９７Ｌ、Ｄ３９９Ｅ、Ｆ４０５Ｃ、Ｙ４０７Ｓ、Ｋ４０９ＲおよびＴ４１１Ｒ（配列番号４）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作ＣＨ３ドメインを有するヒトＩＧＨＧ１からの免疫グロブリンＦｃ鎖からなる。
【０６０１】
ヘテロ二量体Ｆｃの形成は、非還元および還元条件下での試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により評価できる。ＢＴアルファ鎖およびＢＴベータ鎖は類似の分子量を有するので、ＢＴベータ鎖を可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬと略称する、ＩＧＫＪ１＊０１ジャンクションを有する、ＶＢＡＳＥ２  ｈｕｍＩＧＫＶ１１５配列に由来するサブファミリーカッパＩ−Ｏ１２メンバー、配列番号５；Ｒｅｔｔｅｒ  Ｉら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３３（データベース版）：Ｄ６７１〜４ページ（２００５））と融合して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥの移動度の差を生じさせ、その結果、ヘテロ二量体の形成の同定を容易にした（配列番号６）（図２）。さらに、ヘテロ二量体中のＢＴアルファ鎖の存在を確認できるようにするために、一連の６ヒスチジン残基をそのＣ末端に含めた（配列番号７）。このヘテロ二量体構築物を、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータと略称する。
【０６０２】
ＢＴアルファＨｉｓおよびＶＬ−ＢＴベータ鎖ｃＤＮＡコード配列を創出するために、ＢＴアルファ鎖の遺伝子操作ＣＨ３ドメイン（配列番号８）およびＢＴベータ鎖の遺伝子操作ＣＨ３ドメインをコードするｃＤＮＡを、ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成した。ＢＴベータ鎖は、当初はＦ４０５Ａ変異を用いて合成し、これをその後標準的な突然変異誘発によりＦ４０５Ｃ（配列番号９）に変換した。ＰＣＲアセンブリ技術を用いて、各鎖は、ヒトＩＧＨＧ１ヒンジ（ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ２定常ドメインをコードする合成ｃＤＮＡ（ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧにより別個に合成）の下流に融合されたそれらのそれぞれの遺伝子操作ＣＨ３ドメインｃＤＮＡコード配列を有した。ＢＴアルファＨｉｓ鎖のＣ末端にあるポリヒスチジン配列を、ＰＣＲ増幅中にアンチセンスオリゴヌクレオチド中に含め、ＶＬ−ＢＴベータ鎖のＮ末端にある可変カッパドメイン抗体を、ドメインｃＤＮＡ（ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧにより別個に合成）をＢＴベータ鎖ｃＤＮＡコード配列の上流にＰＣＲアセンブリ技術を用いて融合することにより遺伝子操作した。最後に、ＢＴアルファＨｉｓ鎖およびＶＬ−ＢＴベータ鎖コードＤＮＡ配列（それぞれ配列番号１０および１１）を独立したベクター（これは、ＣＭＶプロモーターとウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルとを有する改変ｐＲＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ、ＵＳＡ）ベクターに基づく）中でライゲーションした。両方の鎖発現ベクターにおいて、分泌は、マウスＶＪ２Ｃリーダーペプチドにより駆動された。
【０６０３】
ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体の一過性発現のために、等量の各遺伝子操作鎖ベクターを懸濁馴化ＨＥＫ−ＥＢＮＡ細胞（ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１０８５２）に、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いて同時トランスフェクトした。典型的には、１ｍｌあたり８０〜１２０万細胞の密度の細胞懸濁物１００ｍｌに、ＢＴアルファＨｉｓ鎖をコードする発現ベクター５０μｇとＶＬ−ＢＴベータ鎖をコードする発現ベクター５０μｇとを含有するＤＮＡ−ＰＥＩ混合物をトランスフェクトする。各遺伝子操作鎖遺伝
子をコードする組換え発現ベクターを宿主細胞に導入すると、細胞を４〜５日間の期間さらに培養して培養培地（０．１％プルロニック酸、４ｍＭグルタミンおよび０．２５μｇ／ｍｌジェネテシンを補ったＥＸ−ＣＥＬＬ２９３、ＨＥＫ２９３無血清培地（Ｓｉｇｍａ、Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ））中への分泌を可能にすることによりヘテロ二量体構築物が生成される。ヘテロ二量体構築物を、次いで、無細胞上清から組換えＳｔｒｅａｍｌｉｎｅ  ｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ培地（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて精製し、さらなる分析のために用いた。
【０６０４】
一過性トランスフェクション生成収率は、２０ｍｇ／ｌを超えた。典型的なＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果を図３に示す。プロテインＡ精製の後に、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体は、主に生成された種であり、ホモ二量体種はほとんど存在しない（レーン１）。特に興味深いのは、還元条件下での標準ホモ二量体ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＣ８２５２７．１残基１０３〜３２９；配列番号１２（レーン３））のＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度と比較であり、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体は、ＢＴアルファＨｉｓ鎖とＶＬ−ＢＴベータ鎖とについて予測される２つの分子量バンドに分解する（レーン２；それぞれ２５．５ｋＤａおよび３７．２ｋＤａ；Ａｓｎ２９７での鎖Ｎ−グリコシル化に相当するようにこれらの分子量のそれぞれにさらに３ｋＤａを加える必要がある）が、標準ホモ二量体ヒトＩＧＨＧ１
Ｆｃ（レーン４）は、ＢＴアルファＨｉｓ鎖と類似の移動度を有する１つのユニークな分子量バンドに崩壊する。従って、非還元条件下では、標準ホモ二量体ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃと比較することにより、非常に低い存在度で存在する微量のＢＴアルファＨｉｓホモ二量体を同定することができる。最後に、凝集物も非常に低い存在度で検出できる。
【０６０５】
プロテインＡ精製調製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を、非還元ＳＤＳ−ポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により評価できる。上記の異なる種の相対的比率を、製造者により提供されるプロトコールに従ってＦｌｕｏｒＣｈｅｍ  ＳＰイメージングシステム（Ｗｉｔｅｃ  ＡＧ、Ｌｉｔｔａｕ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて定量した。ＢＴアルファ鎖Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータ鎖ヘテロ二量体は、全体的に、プロテインＡ精製物の少なくとも７６．１％であり（図４Ａ）、相対的比率測定において微量の凝集物を省くと、ＢＴアルファ鎖Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータ鎖ヘテロ二量体は、全体的に、プロテインＡ精製物の少なくとも８３．８％である（図４Ｂ）。
【実施例２】
【０６０６】
ヒトα／βＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界面を有する免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体バリアントの構築。
Ｔ細胞受容体ドメインは、折り畳み中に凝集および間違った会合を非常にしやすく、このことは、しばしば、正しくないジスルフィド結合形成によりひどくなる（Ｐｅｃｏｒａｒｉ  Ｆら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、２８５（４）：１８３１〜４３ページ（１９９９））。ＴＣＲ定常ドメインベータ中で対形成していないシステインを変異させることにより、Ｅ．ｃｏｌｉ中でのＴＣＲ分子の生成が容易になることが示されている（Ｗｉｌｌｃｏｘ  ＢＥら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ、８（１１）：２４１８〜２３ページ（１９９９））。さらに、この対形成していないシステインは、いくつかのＴＣＲ分子結晶構造中で変異されている。ＢＴベータ鎖コードＤＮＡ配列中でのＣ４０５ＡおよびＣ４０５Ｓの変異を、ヒトＩＧＨＧ１からのＦｃ断片（Ｋｒａｐｐ  Ｓら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３２５（５）：９７９〜８９ページ（２００３））の結晶構造を、ＣＤ１ｄ−α−ＧａｌＣｅｒ特異的ＴＣＲ分子５Ｅ（ＰＤＢコード２ＣＤＦ、Ｇａｄｏｌａ  ＳＤら、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ、２０３（３）：６９９〜７１０ページ（２００６））の結晶構造およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ＨＡ１．７（ＰＤＢコード１Ｊ８Ｈ、Ｈｅｎｎｅｃｋｅ  ＪおよびＷｉｌｅ
ｙ  ＤＣ、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ、１９５（５）：５７１〜８１ページ（２００２））の結晶構造と重畳する分析から導いた。ＢＴベータ鎖の遺伝子操作ＣＨ３ドメインは、当初はＦ４０５Ａ変異を用いて合成したので、この構築物を直接用いて、Ｆ４０５Ａ変異の導入以外は実施例１に記載するＶＬ−ＢＴベータ鎖と同一の新しいＶＬ−ＢＴベータ鎖を構築した。Ｆ４０５Ａ変異を有するＶＬ−ＢＴベータ鎖を次いで改変して、標準的な突然変異誘発技術を用いて、Ｆ４０５Ｓ変異を有する第２ＶＬ−ＢＴベータ鎖を創出した。それらのＦ４０５ＡおよびＦ４０５Ｓ変異以外は実施例１に記載するＶＬ−ＢＴベータ鎖と同一のこれらの２つの新しい鎖は、本明細書においてそれぞれ「ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖」または「ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ」および「ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓ鎖」または「ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓ」という。
【０６０７】
ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓヘテロ二量体およびＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体の一過性発現を、実施例１に記載するようにして行った。ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体についての生成収率は、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体と同様であった（それぞれ２２ｍｇ／ｌ）。ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓヘテロ二量体について、３７ｍｇ／ｌの生成収率が得られた。実施例１に記載するＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体に対するＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓヘテロ二量体形成の質を評価するために、両方のＢＴヘテロ二量体を同じＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で泳動させた（図３、レーン１（ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータ）および５（ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓ））。プロテインＡ精製の後に、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓヘテロ二量体は、主に生成された種であるが、実施例１に記載するＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体と比較すると、著しくより多い量の単量体の種およびＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓホモ二量体種が観察され、このことは、変異Ｆ４０５Ｓ置換よりも自然に存在するＦ４０５Ｃ置換のヘテロ二量体集合効率がより高いことを示した。ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体と同様に、還元条件下では、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓヘテロ二量体は、ＢＴアルファＨｉｓ鎖とＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ｓ鎖とについて予測される２つの分子量バンドに分解する（レーン６）。
【０６０８】
ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体についての典型的なＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果を図５に示す。プロテインＡ精製の後に、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体は、主に生成された種であり、ホモ二量体種はほとんど存在しない（レーン１）。ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータヘテロ二量体と同様に、還元条件下では、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体は、ＢＴアルファＨｉｓ鎖とＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖とについて予測される２つの分子量バンドに分解する（レーン２）。従って、非還元条件下では、標準ホモ二量体ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ（レーン３：非還元条件、レーン４：還元条件）と比較することにより、非常に低い存在度で存在する微量のＢＴアルファＨｉｓホモ二量体を同定することができる。最後に、微量のＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａホモ二量体および単量体ならびに凝集物も非常に低い存在度で検出できる。
【０６０９】
ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体のアイデンティティをさらに証明するために、プロテインＡ精製物をＮｉ２＋アフィニティセファロース（ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に載せたが、これは、ポリヒスチジン配列のためにＢＴアルファＨｉｓ鎖を含有する種に特異的なクロマトグラフィーステップである。洗浄ステップの後に、Ｎｉ２＋アフィニティステップからの結合および溶出画分をプールし、プロテインＬアフィニティアガロース（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）に載せたが、これは、可変軽鎖カッパドメイン抗体を有する種、すなわちＶＬ
−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖を特異的に選択するスーパー抗原アフィニティ樹脂である。上記の精製ステップのアウトプットを、次いで、セイヨウワサビペルオキシダーゼで標識したポリヒスチジン配列に対する抗体を用いるウェスタンブロットにより評価することにより、ＢＴアルファＨｉｓ鎖を検出した。ブロットを、Ｓｉｇｍａ  Ｆａｓｔ３，３’−ジアミノベンジジン沈降基質（Ｓｉｇｍａ、Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて染色した。図６は、ＢＴアルファＨｉｓ鎖が、Ｎｉ２＋セファロースの前後で一貫して検出されるが、プロテインＬアガロースクロマトグラフィー後にも（より重要なことに）検出されることを示し、このことは、ヘテロ二量体のアイデンティティを証明する。
【０６１０】
プロテインＡ精製調製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を、非還元ＳＤＳ−ポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により評価できる。上記の異なる種の相対的比率を、製造者により提供されるプロトコールに従ってＦｌｕｏｒＣｈｅｍ  ＳＰイメージングシステム（Ｗｉｔｅｃ  ＡＧ、Ｌｉｔｔａｕ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて定量した。ＢＴアルファ鎖Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータ鎖ヘテロ二量体は、全体的に、プロテインＡ精製物の少なくとも８０．７％であり（図７Ａ）、相対的比率測定において微量の凝集物およびＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖単量体を省くと、ＢＴアルファ鎖Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖ヘテロ二量体は、全体的に、プロテインＡ精製物の少なくとも８６．９％である（図７Ｂ）。
【０６１１】
タンパク質安定性は、組換え抗体治療薬の開発にとって重要な問題である。乏しい安定性は、様々な細胞型で発現させた場合に抗体の折り畳み能力に影響することがあり（Ｇａｒｂｅｒ  ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ
Ｃｏｍｍｕｎ、３５５（３）：７５１〜７ページ（２００７））、臨床的物質の画分が誤って折り畳まれ、非機能的になり、かつ／または凝集しやすくなり、よって、潜在的に免疫原性になることを導く（Ｃｈｉｒｉｎｏ  ＡＪら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ、９（２）：８２〜９０ページ（２００４））。追加タンパク質ドメインから干渉されることなくヘテロ二量体Ｆｃ断片の固有の安定性を評価するために、可変カッパドメインを有さないＢＴベータ鎖（この鎖は、他のＢＴベータ鎖と同様にして遺伝子操作したが、Ｃ末端ＨＡタグ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ）を有し、ＶＬドメインを有さなかった、ＢＴベータ（Ｆ４０５Ａ）ＨＡ鎖と略称する；配列番号１７）をＢＴアルファＨｉｓ鎖と同時発現させた。得られたヘテロ二量体分子：ＢＴアルファＨｉｓ＿ＢＴベータ（Ｆ４０５Ａ）ＨＡを上記のようにして精製し、示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を用いて分析した。熱量測定は、ＶＰ−ＤＳＣ示差走査微小熱量計（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で行った。セル体積は０．１２８ｍｌであり、加熱速度は１℃／分であり、過剰圧力は６４ｐ．ｓ．ｉ．に維持した。タンパク質は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で２ｍｇ／ｍｌの濃度で用いた。タンパク質のモル熱容量を、タンパク質を省いた同一緩衝液を含有する二連で測定した試料との比較により推定した。部分モル熱容量および融解曲線は、標準的な手順を用いて分析した。サーモグラムはベースライン補正し、濃度を正規化した後に、Ｏｒｉｇｉｎ（ｖ７．０）ソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄにより提供）において非二状態モデルを用いてさらに分析した。
【０６１２】
ヒトＩｇＧサブクラスについての予測される融解プロフィールは、既知であり（Ｇａｒｂｅｒ  ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、３５５（３）：７５１〜７（２００７））、全てのプロフィールは、ＣＨ２、ＣＨ３およびＦＡＢドメインの独立したアンフォールディングに対応する３つのアンフォールディング転移を含有することが示されている。４つのヒトＩｇＧサブクラスのうち、ＩＧＨＧ１は最も安定なＣＨ３ドメイン（約８５℃）を有し、他のサブクラスのＣＨ
３ドメインは安定性がより低い（しかし、７０℃未満で融解するものは知られていない）。同様に、全てのサブクラスは、ＣＨ２ドメインについて約７０℃の融解温度を有することが知られている（Ｇａｒｂｅｒ  ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、３５５（３）：７５１〜７ページ（２００７））。全体的に、安定抗体Ｆｃ断片（ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）について７０℃未満での融解転移は予測されない。図７Ｃは、ＢＴアルファＨｉｓ＿ＢＴベータ（Ｆ４０５Ａ）ＨＡヘテロ二量体のサーモグラムを示し、これは、ＣＨ２ドメインと遺伝子操作ＣＨ３ドメインとの両方の融解転移に相当する７０℃での単一の鋭い転移を示す。熱吸収ピークの後に鋭い減少は記録されず、このことは、安定抗体Ｆｃ断片について予測されるような、熱アンフォールディング後に沈降または凝集体形成が発生しなかったことを示すことに注目することが重要である（Ｌｉｕ  Ｈら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ、１０６（２）：１４４〜５３ページ（２００６））。さらに、ヘテロ二量体Ｆｃ断片は、自然に存在するＦｃ断片に類似の安定性を有するが、これは、そのドメインの融解転移が、ＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインがともにおよそ７０℃で融解する（Ｇａｒｂｅｒ  ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、３５５（３）：７５１〜７ページ（２００７））ヒトＩＧＨＧ４  Ｆｃ断片について観察されたものと類似するからである。結論として、この熱アンフォールディング研究は、ＴＣＲアルファおよびベータ定常ドメインに基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有するヘテロ二量体Ｆｃ断片が安定であり、さらなる治療用ヘテロ二量体免疫グロブリンを構築するために適切であることを示す。
【実施例３】
【０６１３】
最小限の置換を有する、ヒトα／βＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界面を有する免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体バリアントの構築。
一方の鎖についてヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインアルファ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＯ７２２５８．１、残基１３５〜２２５；配列番号１；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＡＣ［完全配列］、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））および第２鎖についてヒトＴＣＲ定常ドメインベータ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１０２６．１［残基１３４〜２６１］、配列番号２；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＢＣ２［ＩＭＧＴ（登録商標）残基１．８〜１２４］）からの鍵となるタンパク質−タンパク質界面残基を起源とする少ない数のアミノ酸置換を有して、可能性のあるホモ二量体の形成を超えてヘテロ二量体を形成するＢＴアルファおよびベータ鎖の対を同定するために、実施例１および２に記載される２以上の置換を、各鎖に徐々に導入した。
【０６１４】
ヒトＴＣＲ定常ドメインアルファおよびベータからの鍵となるタンパク質−タンパク質界面残基を起源とするアミノ酸置換の複数の部分集合があり、それを選択して、ＴＣＲ定常ドメイン配列とそれぞれＢＴアルファおよびベータ鎖中のヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ配列との間で交替できる。考慮されるそれぞれの部分集合についての残基の選択肢は、構造上の考慮すべき事柄、例えばタンパク質−タンパク質表面相互作用の計算に基づく。全ての置換部分集合を、標準的な分子生物学の技術を用いてヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ  ＤＮＡコード配列（配列番号１２）を変異させることにより遺伝子操作した（実施例１）。得られたバ
リアントを、次いで、以前に言及した改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションし、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、実施例１に記載するようにして同時トランスフェクトした。タンパク質生成も実施例１に従った。置換の各部分集合を、そのヘテロ二量体形成率について、非還元および還元条件下での試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析と走査デンシトメトリー（実施例１で述べるようにして）との組み合わせを用いて評価した。
【０６１５】
遺伝子操作鎖は、実施例１と同様に分子量が近いので、ＢＴベータ鎖バリアントを可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬと略称する、ＩＧＫＪ１＊０１ジャンクションを有する、ＶＢＡＳＥ２  ｈｕｍＩＧＫＶ１１５配列に由来するサブファミリーカッパＩ−Ｏ１２メンバー、配列番号５；Ｒｅｔｔｅｒ  Ｉ．ら、２００５、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、３３、データベース版Ｄ６７１〜Ｄ６７４ページ）と融合して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥの移動度の差を生じさせ、その結果、ヘテロ二量体の形成の同定を容易にした。これらの鎖を実施例１から区別するために、そしてこれらのＢＴ鎖は部位特異的突然変異誘発により導入した特異的ＴＣＲアルファおよびベータ定常ドメインに基づく置換以外はヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ配列と同一のアミノ酸配列を有するので、ＢＴアルファおよびＶＬ−ＢＴベータ鎖は、本明細書において、それぞれＦｃ（ＢＴＡ）鎖およびＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）鎖と略称する。各鎖について、ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ配列に導入した特異的置換は、ＥＵ番号付けを用いて示す。これらの発現実験の結果を、収率およびヘテロ二量体形成率の点について、表１にまとめる。各鎖において２から６の置換を作製した。
【０６１６】
典型的なＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果を図８に示す。プロテインＡ精製の後に、ヘテロ二量体は、主に生成された種であり、ホモ二量体種はほとんど存在しない（レーン１）。還元条件下で、ヘテロ二量体は、遺伝子操作Ｆｃ（ＢＴＡ）鎖と他の遺伝子操作ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）鎖とについて予測される２つの分子量バンドに分解する（レーン２；それぞれ約２５ｋＤａおよび約３７ｋＤａ）。一過性トランスフェクション生成収率は５０ｍｇ／ｌまでであったが、最良のヘテロ二量体形成率は９０％であった。
【０６１７】
置換部分集合の最良の組み合わせは、９０％のヘテロ二量体形成率（図９）および一過性トランスフェクション収率３０ｍｇ／ｌを有するＦｃ（ＢＴＡ）−Ｓ３６４Ｋ−Ｔ３６６Ｖ−Ｋ３７０Ｔ−Ｋ３９２Ｙ−Ｋ４０９Ｗ−Ｔ４１１Ｎ＿ＶＬ−Ｆｃ（ＢＴＢ）−Ｆ４０５Ａ−Ｙ４０７Ｓ（配列番号２３および２４）であった。各鎖において試験した最小限の数の置換は、６４％のヘテロ二量体形成率および一過性トランスフェクション収率３５ｍｇ／ｌを有する２であった。本明細書で記載するヘテロ二量体形成技術を現存する方法と比較するために、可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬ、配列番号５）と融合した「穴」を包含する部分を有する「穴に入る小塊」Ｆｃバリアント（Ｍｅｒｃｈａｎｔ  ＡＭら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１６（７）：６７７〜８１ページ（１９９８））を創出した（Ｆｃ−Ｔ３６６Ｗ＿ＶＬ−Ｆｃ−Ｔ３６６Ｓ−Ｌ３６８Ａ−Ｙ４０７Ｖと略称する；ＥＵ番号付け；配列番号３０および３１）。並列する発現実験において、「穴に入る小塊」に基づく分子は、６６％だけのヘテロ二量体形成率を有した（データは示さず）。
【０６１８】
【表１】
2020040980.tif 000003
【実施例４】
【０６１９】
ヒトδ／γＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界面を有する免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体の構築。
本実施例は、ＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面（ＥＵ残基３４１〜４４７）中に、一方の鎖についてヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインデルタ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１１２５．１［残基１３５〜２２１］；配列番号３２；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＤＣ［ＩＭＧＴ（登録商標）残基１．７〜１２０］、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））および第２鎖についてヒトＴＣＲ定常ドメインガンマ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１１１０．１［残基１４５〜２４５］、配列番号３３；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＧＣ１［ＩＭＧＴ（登録商標）残基１．１〜１２４］）からのタンパク質−タンパク質界面残基の部分集合から注意深く選択した変異を有する２つのヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖（各鎖は、ヒトヒンジ（γ１）、ＣＨ２およびＣＨ３定常ドメインからなる；ＥＵ残基２２１〜４４７）が、少なくとも５２％の効力を有するヘテロ二量体Ｆｃ分子へと集合することを証明する。ＴＲＧＣ１およびＴＲＤＣは、自然に存在するアイソタイプである。ＴＲＧＣ１は、ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマについての２つの自然に存在するアロタイプのうちの１つである。ＴＲＧＣ１およびＴＲＧＣ２（２×または３×と称する）はともに、ＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖のＣＨ３ドメインを変異させる目的のために同等に用いることができるが、これは、これらのタンパク質−タンパク質界面のアミノ酸配列に差がないからである。
【０６２０】
変異は、Ｇ１１５γδＴＣＲ分子（Ａｌｌｉｓｏｎ  ＴＪら、Ｎａｔｕｒｅ、４１１（６８３９）：８２０〜４ページ（２００１））の結晶構造と、ヒトＩＧＨＧ１からのＦｃ断片（Ｋｒａｐｐ  Ｓら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３２５（５）：９７９〜８９ページ（２００３））の結晶構造との重畳の分析から導いた。ＴＣＲおよびＩＧＨＧ１  Ｆｃの両方の３Ｄ構造は、タンパク質データバンクから取得し（ヒトＴＣＲおよびヒトＩＧＨＧ１についてそれぞれＰＤＢコード１ＨＸＭおよび１Ｈ３Ｙ；ｗｗｗ．ｐｄｂ．ｏｒｇ；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＦＣら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、８０（２）：３１９〜２４ページ（１９７７））、Ｃｏｏｔソフトウェア（Ｅｍｓｌｅｙ  ＰおよびＣｏｗｔａｎ  Ｋ、Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ、６０（Ｐｔ１２  Ｐｔ１）：２１２６〜３２ページ（２００４））を用いて重畳し、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）からのＤｉｓｃｏｖｅｒｙ−Ｓｔｕｄｉｏソフトウェアを用いてさらに視覚化した。ＴＣＲヘテロ二量体定常ドメインとＣＨ３ホモ二量体の重畳した３Ｄ構造のタンパク質−タンパク質界面の調査を、合理的設計の開始点として用いた。いくつかのパラメータを考慮した；これらは、それらに限定されないが、プロリン残基の保存、ならびにドメインコアの完全性およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体からの静電的接触のいくらかに関与するアミノ酸位置の保存；ＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体において見出される特異的疎水性接触の撤廃、ならびにＴＣＲ定常ドメインヘテロ二量体中において見出される選択された疎水性接触でのこれらの置き換えを含んだ。この分析により、アミノ酸置換の２つの部分集合の設計が導かれ、一方の部分集合は、ＣＨ３ホモ二量体の１つのサブユニットのタンパク質−タンパク質界面とＴＣＲ定常ドメインデルタのタンパク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、第２部分集合は、ＣＨ３ホモ二量体の第２サブユニットのタンパク質−タンパク質界面とＴＣＲ定常ドメインガンマのタンパク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、各部分集合は、ヘテ
ロ二量体形成できる２つの新しくユニークなＣＨ３遺伝子操作ドメイン配列を創出した。
【０６２１】
ヒトＴＣＲ定常ドメインデルタのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中に有するその遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖を「ＢＴデルタ鎖」と称し、ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中に有するその遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖を「ＢＴガンマ鎖」と称する。より具体的に、ＢＴデルタ鎖は、以下の置換：Ｌ３５１Ｍ、Ｓ３６４Ｎ、Ｔ３６６Ａ、Ｇ３７１Ｅ、Ｋ３９２Ｆ、Ｔ３９４Ａ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｎ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９ＬおよびＴ４１１Ｋ（配列番号３４）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作ＣＨ３ドメインを有するヒトＩＧＨＧ１からの免疫グロブリンＦｃ鎖からなり、従って、「ＢＴガンマ鎖」は、以下の置換：Ｑ３４７Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｓ３６４Ｔ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３７０Ｅ、Ｇ３７１Ｋ、Ｔ３９４Ｇ、Ｖ３９７Ｍ、Ｆ４０５Ｍ、Ｙ４０７Ｆ、Ｋ４０９Ｗ（配列番号３５）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作ＣＨ３ドメインを有するヒトＩＧＨＧ１からの免疫グロブリンＦｃ鎖からなる。
【０６２２】
Ｆｃヘテロ二量体の形成は、非還元および還元条件下での試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により評価できる。ＢＴデルタ鎖およびＢＴガンマ鎖は類似の分子量を有するので、ＢＴガンマ鎖を可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬと略称する、ＩＧＫＪ１＊０１ジャンクションを有する、ＶＢＡＳＥ２  ｈｕｍＩＧＫＶ１１５配列に由来するサブファミリーカッパＩ−Ｏ１２メンバー、配列番号５；Ｒｅｔｔｅｒ  Ｉら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ、３３（データベース版）：Ｄ６７１〜４ページ（２００５））と融合して（ＶＬ−ＢＴガンマ、配列番号３６）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥの移動度の差を生じさせ、その結果、ヘテロ二量体の形成の同定を容易にした。得られたヘテロ二量体構築物を、ＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマと略称する。
【０６２３】
ＢＴデルタおよびＶＬ−ＢＴガンマ鎖ｃＤＮＡコード配列を創出するために、ＢＴデルタ鎖の遺伝子操作ＣＨ３ドメイン（配列番号３７）およびＢＴガンマ鎖の遺伝子操作ＣＨ３ドメイン（配列番号３８）をコードするｃＤＮＡを、ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成した。ＰＣＲアセンブリ技術を用いて、各鎖は、ヒトヒンジＩＧＨＧ１（ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ）およびＣＨ２定常ドメインをコードする合成ｃＤＮＡの下流に融合されたそれらのそれぞれの遺伝子操作ＣＨ３ドメインｃＤＮＡコード配列を有した（ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧにより別個に合成）。ＶＬ−ＢＴガンマ鎖のＮ末端にある可変カッパドメイン抗体を、ドメインｃＤＮＡ（ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧにより別個に合成）をＢＴガンマ鎖ｃＤＮＡコード配列の上流にＰＣＲアセンブリ技術を用いて融合することにより遺伝子操作した。
【０６２４】
得られたバリアントを、次いで、以前に言及した改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションし、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、実施例１に記載するようにして同時トランスフェクトした。タンパク質生成も実施例１に従った。一過性トランスフェクション収率は、６０ｍｇ／ｌまでであった。典型的なＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果を図１０に示す。
【０６２５】
プロテインＡ精製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を評価するために、異なる種の相対的比率を、実施例１に記載する手順に従って、非還元ＳＤＳポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により定量した。ＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体は、プロテインＡ精製物の少なくとも５２．１％であり（図１１Ａ）、相対的比率測定において微量の凝集物および単量体を省くと、ＢＴデルタ＿ＶＬ−ＢＴガンマヘテロ二量体は、プロテインＡ精製物の少なくとも５７．５％である（図１１Ｂ）。
【実施例５】
【０６２６】
ヒトα／βＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界面を有するヘテロ二量体Ｆｃを有する一価免疫グロブリンならびにヘテロ二量体δ／γＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ１−ＣＫタンパク質−タンパク質界面を有するＦＡＢ断片の構築。
本実施例は、少なくとも３つのヒト免疫グロブリン鎖、すなわちヒト重鎖定常ドメインＣＨ１（γ１）、ヒンジ（γ１）、ＣＨ２（γ１）およびＢＴアルファまたはＢＴベータ鎖からの遺伝子操作ＣＨ３ドメインと融合した重鎖可変ドメインからなる１つの鎖、１つのＢＴアルファまたは１つのＢＴベータ鎖、ならびにヒトＣκ軽鎖定常ドメインと融合した軽鎖可変ドメインからなる１つの鎖（ここで、ＣＨ１（γ１）（ＩＧＨＧ１、ＥＵ残基１１８〜２１５）とＣκ（ＩＧＫＣ、ＥＵ残基１０８〜２１４）ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、それぞれ自然に存在するヒトＴＣＲ定常ドメインデルタ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１１２５．１［残基１３５−２２１］；配列番号３２；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＤＣ［ＩＭＧＴ（登録商標）残基１．７〜１２０］、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））および自然に存在するヒトＴＣＲ定常ドメインガンマ（ＧｅｎＢａｎｋデータベース受託番号ＡＡＡ６１１１０．１［残基１４５〜２４５］；配列番号３３；ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＧＣ１［ＩＭＧＴ（登録商標）残基１．１〜１２４］）からのタンパク質−タンパク質界面残基の部分集合を用いて選択した位置にて注意深く置換されている）が、少なくとも５０％の効力を有するＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体免疫グロブリン分子へと集合することを証明する。
【０６２７】
変異は、ＴＣＲ分子の結晶構造とヒトＦＡＢ（γ１）断片の結晶構造との重畳の分析から導いた。ＴＣＲおよびヒトＦＡＢ（γ１）断片の両方の３Ｄ構造は、タンパク質データバンクから取得し（それぞれＰＤＢコード１ＨＸＭおよび１ＶＧＥ；Ａｌｌｉｓｏｎ  ＴＪら、Ｎａｔｕｒｅ、４１１（６８３９）：８２０〜４ページ（２００１）；Ｃｈａｃｋｏ  Ｓら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７１（２１）：１２１９１〜８ページ（１９９６））、Ｃｏｏｔソフトウェア（Ｅｍｓｌｅｙ  ＰおよびＣｏｗｔａｎ  Ｋ、Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ、６０（Ｐｔ１２  Ｐｔ１）：２１２６〜３２ページ（２００４））を用いて重畳し、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）からのＤｉｓｃｏｖｅｒｙ−Ｓｔｕｄｉｏソフトウェアを用いてさらに視覚化した。δ／γＴＣＲヘテロ二量体定常ドメインとＣＨ１（γ１）−Ｃκヘテロ二量体の重畳した３Ｄ構造のタンパク質−タンパク質界面の調査を、合理的設計の開始点として用いた。いくつかのパラメータを考慮した；これらは、それらに限定されないが、プロリン残基の保存、ならびにドメインコアの完全性およびＣＨ１（γ１）とＣκドメインとの間の静電的接触のいくらかに関与するアミノ酸位置の保存；ＣＨ１（γ１）−Ｃκヘテロ二量体において見出される特異的疎水性接触の撤廃、ならびにＴＣＲ定常ドメインガンマ−デルタヘテロ二量体中において見出される選択された疎水性接触でのこれらの置き換えを含んだ。この分析により、アミノ酸置換の２つの部分集合の設計が導かれ、一方の部分集合は、ＣＨ１（γ１）ドメインのタンパク質−タンパク質界面とＴＣＲ定常ドメインデルタのタンパク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、第２部分集合は、Ｃκドメインのタンパク質−タンパク質界面とＴＣＲ定常ドメインガンマのタン
パク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、これにより、自然に存在するＣＨ１（γ１）−Ｃκヘテロ二量体ドメイン対とは異なるがまだヘテロ二量体形成できる２つの遺伝子操作された新規でユニークなドメインが創出された。
【０６２８】
可変重鎖ドメインと、ヒトＴＣＲ定常ドメインデルタのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をそのタンパク質−タンパク質界面中に有するヒトＣＨ１（γ１）ドメインとを含むＦＡＢ断片の遺伝子操作重鎖を「ＶＨ−ＣＨ１デルタ」（図１２）と称し、可変軽鎖ドメインと、ヒトＴＣＲ定常ドメインガンマのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をそのタンパク質−タンパク質界面中に有するヒトＣκドメインとを含む遺伝子操作カッパ軽鎖を「ＶＬ−ＣＫガンマ」（図１２）と称する。より具体的に、ＶＨ−ＣＨ１デルタは、以下の置換：Ｌ１２８Ｍ、Ａ１４１Ｎ、Ｇ１４３Ａ、Ｄ１４８Ｅ、Ｈ１６８Ｆ、Ｆ１７０Ａ、Ｑ１７５Ｓ、Ｓ１８１Ｎ、Ｓ１８３Ｖ、Ｖ１８５Ｌ、Ｔ１８７Ｋ（配列番号３９）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作ＣＨ１（γ１）ドメインを有する遺伝子操作重鎖ＦＡＢ断片からなり、従って、ＶＬ−ＣＫガンマは、以下の置換：Ｓ１１４Ｋ、Ｆ１１６Ｔ、Ｓ１３１Ｔ、Ｖ１３３Ｌ、Ｎ１３７Ｅ、Ｎ１３８Ｋ、Ｓ１６２Ｇ、Ｔ１６４Ｍ、Ｓ１７４Ｍ、Ｓ１７６Ｆ、Ｔ１７８Ｗ（配列番号４０）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作Ｃκドメインを有する遺伝子操作カッパ軽鎖からなる。
【０６２９】
本実施例では、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０９５０３１号に開示されるヒト化抗ヒトＣＤ１９抗体からの可変重鎖および軽鎖ドメイン（ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）およびＶＬ（抗ｈＣＤ１９）と略称する）をインプットとして用いて、それぞれＶＨ−ＣＨ１デルタおよびＶＬ−ＣＫガンマ鎖を構築した。以前に記載するＢＴベータ鎖（実施例１〜３）（本実施例では、鎖は、Ｃ末端ｃ−ｍｙｃタグ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＮ）を有したことに注意されたい、ＢＴベータｃ−ｍｙｃ鎖と略称する）の上流に融合したＶＨ−ＣＨ１デルタ鎖の組み合わせは、新しく遺伝子操作された免疫グロブリン重鎖をもたらし、これは、上記の新しく遺伝子操作されたＶＬ−ＣＫガンマ軽鎖および実施例１〜３に記載するＢＴアルファＨｉｓ鎖と同時発現させると、新規なＦＡＢ断片（ここで、ＣＨ１（γ１）およびＣκ定常ドメインは、それぞれＴＣＲデルタおよびＴＣＲガンマ定常ドメインタンパク質−タンパク質界面に基づく新規なタンパク質−タンパク質界面と、ＴＣＲアルファおよびベータ定常ドメインに基づくヘテロ二量体遺伝子操作ＣＨ３ドメインを有するＦｃ断片とを有する（実施例１〜３））を有する新しい型のヘテロ二量体一価（すなわち１つの抗原に対して１つの特異性を有する）免疫グロブリン分子が創出される。この新規な免疫グロブリン分子は、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ（配列番号４１、７および４２）と略称する。
【０６３０】
ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ鎖およびＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ鎖ｃＤＮＡコード配列（それぞれ配列番号４３および４４）を創出するために、ＣＨ１デルタドメイン配列（配列番号４５）とＣＫガンマドメイン配列（配列番号４６）とをともに包含するユニークなｃＤＮＡをＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成した。ＰＣＲを用いて、各鎖を個別に増幅し、それぞれの遺伝子操作定常ドメインｃＤＮＡコード配列を、それらのそれぞれの可変ドメインをコードする合成ｃＤＮＡ（ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧにより別個に合成）の下流に融合した。得られたＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタｃＤＮＡ断片を、次いで、Ｃ末端ｃ−ｍｙｃタグを有するＢＴベータＦ４０５Ａ鎖の上流にさらに融合して、最終のＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ鎖を作製した。その後、２つの鎖を、次いで、実施例１に記載する改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションした。ＢＴアルファＨｉｓ鎖は、実施例１を起源とした（配列番号１０）。
【０６３１】
ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿
ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子の一過性発現のために、等量の３つの遺伝子操作鎖ベクターを懸濁馴化ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、以前に記載するようにして（実施例１）同時トランスフェクトした。ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体構築物を、次いで、無細胞上清からプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製し、さらなる分析（実施例１に従う手順）のために用いた。ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体の正しい集合は、非還元条件下での試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により評価できるが、これは、正しく集合した分子は、可能性のあるホモ二量体種とは異なるＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度を有すると予測されるからである。
【０６３２】
一過性トランスフェクション収率は、１６ｍｇ／ｌを超えた。典型的なＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果を図１３に示す。プロテインＡ精製の後に、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子（レーン１）は、主に生成された種（Ａ）であり、いくらかのホモ二量体種（Ｂ）といくらかの半分の分子（Ｃ）とが存在する。
【０６３３】
プロテインＡ精製調製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を、非還元ＳＤＳ−ポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により評価できる（実施例１に従う手順）。図１４は、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子が、プロテインＡ精製物の少なくとも５０％であることを示す。
【０６３４】
ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子の熱安定性を、熱量測定（ＤＳＣ）を用いて評価した（方法について実施例２を参照されたい）。モノクローナル抗体は、それらのアイソタイプに特徴的であり、通常、ＦＡＢ断片、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン（実施例２を参照されたい）についての転移を組み合わせた融解プロフィールを有する；抗体融解プロフィールの範囲内で、ＦＡＢ断片についての特異的転移は容易に同定できる（Ｇａｒｂｅｒ
ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、３５５（３）：７５１〜７ページ（２００７））。図１５は、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子についての熱アンフォールディング実験の例を示す：７０．７℃および約７５℃での２つのオーバーラップする鋭い転移が観察され、これらは、遺伝子操作ＦＡＢ断片、ＣＨ２ドメインおよび遺伝子操作ＣＨ３ドメインの融解転移に相当する。ＢＴアルファＨｉｓ＿ＢＴベータ（Ｆ４０５Ａ）ＨＡヘテロ二量体Ｆｃは以前の測定（実施例２）において７０℃にて単一の鋭い融解転移を示したので、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ分子の遺伝子操作ＦＡＢ断片の融解転移は、約７５℃の中間点を有すると結論付けることができる。熱吸収ピークの後に鋭い減少は記録されず、このことは、熱アンフォールディングの後に沈降または凝集体形成が発生しなかったことを示すことに注目することが重要である（Ｌｉｕ  Ｈら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ、１０６（２）：１４４〜５３ページ（２００６））。結論として、この熱変性研究は、ＴＣＲデルタおよびガンマ定常ドメインに基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有する新規なＦＡＢ断片が、安定であり、さらなる治療用ヘテロ二量体免疫グロブリン、より精密には定常ドメインの２つの新規なヘテロ二量体対（一方の対はヒトＴ細胞受容体定常ドメインアルファおよびベータに基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有し、他方の対はヒトＴ細胞受容体定常ドメインデルタおよびガンマに基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有する）を含む免疫グロブリン分子を構築するために適切であることを示す。
【実施例６】
【０６３５】
ヒトα／βＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界
面を有するヘテロ二量体Ｆｃを有する一価免疫グロブリンならびにホモ二量体ＩＧＨＧ１
ＣＨ３定常ドメインに基づくＣＨ１−ＣＫタンパク質−タンパク質界面を有するＦＡＢ断片の構築。
本実施例は、少なくとも３つのヒト免疫グロブリン鎖、すなわちヒト重鎖定常ドメインＣＨ１（γ１）、ヒンジ（γ１）、ＣＨ２（γ１）およびＢＴアルファまたはＢＴベータ鎖からの遺伝子操作ＣＨ３ドメインと融合した重鎖可変ドメインからなる１つの鎖、１つのＢＴアルファまたは１つのＢＴベータ鎖、ならびにヒトＣκ軽鎖定常ドメインと融合した軽鎖可変ドメインからなる１つの鎖（ここで、ＣＨ１（γ１）（ＩＧＨＧ１、ＥＵ残基１１８〜２１５）とＣκ（ＩＧＫＣ、ＥＵ残基１０８〜２１４）ドメインのタンパク質−タンパク質界面は、ヒトＣＨ３（γ１）定常ドメイン（ＩＧＨＧ１、ＥＵ残基３４１〜４４７；配列番号４７）からのタンパク質−タンパク質界面残基の部分集合を用いて選択された位置にて注意深く置換されている）が、少なくとも５１．９％の効力を有するＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体免疫グロブリン分子へと集合することを証明する。
【０６３６】
変異は、Ｆｃ（γ１）断片の結晶構造とヒトＦＡＢ（γ１）断片の結晶構造との重畳の分析から導いた。Ｆｃ（γ１）断片およびヒトＦＡＢ（γ１）断片の両方の３Ｄ構造は、タンパク質データバンクから取得し（それぞれＰＤＢコード１Ｈ３Ｕおよび１ＶＧＥ；Ｋｒａｐｐ  Ｓら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３２５（５）：９７９〜８９ページ（２００３）、Ｃｈａｃｋｏ  Ｓら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２７１（２１）：１２１９１〜８ページ（１９９６））、Ｃｏｏｔソフトウェア（Ｅｍｓｌｅｙ  ＰおよびＣｏｗｔａｎ  Ｋ、Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ、６０（Ｐｔ１２  Ｐｔ１）：２１２６〜３２ページ（２００４））を用いて重畳し、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）からのＤｉｓｃｏｖｅｒｙ−Ｓｔｕｄｉｏソフトウェアを用いてさらに視覚化した。ホモ二量体ＣＨ３（γ１）定常ドメイン対とＣＨ１（γ１）−Ｃκヘテロ二量体の重畳した３Ｄ構造のタンパク質−タンパク質界面の調査を、合理的設計の開始点として用いた。いくつかのパラメータを考慮した；これらは、それらに限定されないが、プロリン残基の保存、ならびにドメインコアの完全性およびＣＨ１（γ１）−Ｃκヘテロ二量体からの静電的接触のいくらかに関与するアミノ酸位置の保存、ＣＨ１（γ１）−Ｃκヘテロ二量体において見出される特異的疎水性接触の撤廃、ならびにホモ二量体ＣＨ３定常ドメイン対中において見出される選択された疎水性接触でのこれらの置き換えを含んだ。この分析により、アミノ酸置換の２つの部分集合の設計が導かれ、一方の部分集合は、ＣＨ１（γ１）定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヒトＣＨ３（γ１）定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、第２部分集合は、Ｃκドメインのタンパク質−タンパク質界面とヒトＣＨ３（γ１）定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面との間の同等の３Ｄ位置を起源とし、これにより、自然に存在するＣＨ１（γ１）−Ｃκヘテロ二量体ドメイン対とは異なるがまだヘテロ二量体形成できる２つの遺伝子操作された新規でユニークなドメインが創出された。
【０６３７】
可変重鎖ドメインと、ＣＨ３（γ１）定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をそのタンパク質−タンパク質界面中に有するヒトＣＨ１（γ１）ドメインとを含むＦＡＢ断片の遺伝子操作重鎖を「ＶＨ−ＣＨ１３」（図１６）と称し、可変軽鎖ドメインと、ＣＨ３（γ１）定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面に由来する変異をそのタンパク質−タンパク質界面中に有する遺伝子操作ヒトＣκ定常ドメインとを含む遺伝子操作カッパ軽鎖を「ＶＬ−ＣＫ３」（図１６）と称する。より具体的に、ＶＨ−ＣＨ１３鎖は、以下の置換：Ｓ１２４Ｑ、Ｆ１２６Ｙ、Ｋ１３３Ｄ、Ｓ１３４Ｅ、Ｔ１３９Ｑ、Ａ１４１Ｓ、Ｇ１４３Ｔ、Ｈ１６８Ｋ、Ｆ１７０Ｔ、Ｑ１７５Ｄ、Ｓ１８１Ｆ、Ｓ１８３Ｙ、Ｖ１８５Ｋ（配列番号４８）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作ＣＨ１（γ１）ドメインを有する遺伝子操作重鎖ＦＡＢ断片からなり、従って、ＶＬ−ＣＫ３ドメインは、以下の置換：Ｓ１１４Ｑ、Ｆ１１６Ｙ、Ｆ１１８Ｌ、Ｅ１２３Ｄ、Ｑ１２４Ｅ、Ｖ１３
３Ｔ、Ｎ１３７Ｋ、Ｑ１６０Ｋ、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ１６４Ｖ、Ｓ１７４Ｆ、Ｓ１７６Ｙ、Ｔ１７８Ｋ（配列番号４９）（ＥＵ番号付け）を有する遺伝子操作Ｃκドメインを有する遺伝子操作軽鎖ＦＡＢ断片からなる。
【０６３８】
本実施例では、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０９５０３１号に開示されるヒト化抗ヒトＣＤ１９抗体からの可変重鎖および軽鎖ドメイン（ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）およびＶＬ（抗ｈＣＤ１９）と略称する）をインプットとして用いて、それぞれＶＨ−ＣＨ１３およびＶＬ−ＣＫ３鎖を構築した。以前に記載するＢＴベータ鎖（本実施例において、鎖は、Ｃ末端ｃ−ｍｙｃタグ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＮ）を有したことに注意されたい、ＢＴベータｃ−ｍｙｃ鎖と略称する）の上流に融合したＶＨ−ＣＨ１３鎖の組み合わせは、新しく遺伝子操作された免疫グロブリン重鎖をもたらし、これは、上記の新しく遺伝子操作されたＶＬ−ＣＫ３軽鎖および実施例１〜３に記載するＢＴアルファＨｉｓ鎖と同時発現させると、新規なＦＡＢ断片（ここで、ＣＨ１（γ１）およびＣκ定常ドメインは、ＣＨ３（γ１）定常ドメインホモ二量体タンパク質−タンパク質界面に基づく新規なタンパク質−タンパク質界面と、ＴＣＲアルファおよびベータ定常ドメインに基づくヘテロ二量体遺伝子操作ＣＨ３ドメインを有するＦｃ断片とを有する（実施例１〜３を参照されたい））を有する新しい型のヘテロ二量体一価（すなわち１つの抗原に対して１つの特異性を有する）免疫グロブリン分子が創出される。この新規な免疫グロブリン分子は、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３（配列番号５０、７および５１）と略称する。
【０６３９】
ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ鎖およびＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３鎖ｃＤＮＡコード配列（それぞれ配列番号５２および５３）を創出するために、ＣＨ１３ドメイン配列（配列番号５４）およびＣＫ３ドメイン配列（配列番号５５）とをともに包含するユニークなｃＤＮＡをＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成した。ＰＣＲを用いて、各鎖を個別に増幅し、それぞれの遺伝子操作定常ドメインｃＤＮＡコード配列を、それらのそれぞれの可変ドメインをコードする合成ｃＤＮＡ（ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧにより別個に合成）の下流に融合した。得られたＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３  ＤＮＡ断片を、Ｃ末端ｃ−ｍｙｃタグを有するＢＴベータＦ４０５Ａ鎖の上流にさらに融合して、最終のＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ鎖を作製した。その後、２つの鎖を、実施例１に記載する改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションした。ＢＴアルファＨｉｓ鎖は、実施例１を起源とした（配列番号１０）。
【０６４０】
ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子の一過性発現のために、等量の３つの遺伝子操作鎖ベクターを懸濁馴化ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、以前に記載するようにして（実施例１）同時トランスフェクトした。ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体構築物を、次いで、無細胞上清からプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製し、さらなる分析（実施例１に従う手順）のために用いた。ＦＡＢ遺伝子操作ヘテロ二量体の正しい集合は、非還元条件下での試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により評価できるが、これは、正しく集合した分子は、可能性のあるホモ二量体種とは異なるＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度を有すると予測されるからである。
【０６４１】
一過性トランスフェクション収率は、５０ｍｇ／ｌであった。典型的なＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果を図１７に示す。プロテインＡ精製の後に、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子（レーン１）は、主に生成された種（Ａ）であり、いくらかのホモ二量体種（Ｂ）といくらかの半分の分子（Ｃ）とが存在する。
【０６４２】
プロテインＡ精製調製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を、非還元ＳＤＳ−ポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により評価できる（実施例１に従う手順）。図１８は、ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１３−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ＿ＢＴアルファＨｉｓ＿ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫ３分子が、プロテインＡ精製物の少なくとも５１．９％であることを示す。
【０６４３】
結論として、本実施例は、ホモ二量体ＣＨ３（γ１）定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面に基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有する新規なＦＡＢ断片が、さらなる治療用ヘテロ二量体免疫グロブリン、より精密には定常ドメインの２つの新規なヘテロ二量体対（一方の対はヒトＴ細胞受容体定常ドメインアルファおよびベータに基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有し、他方の対はホモ二量体ＣＨ３（γ１）定常ドメインに基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有する）を含む免疫グロブリン分子を構築するために適切であることを示す。
【実施例７】
【０６４４】
自然に存在するホモ二量体またはヘテロ二量体免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーに由来する遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有する免疫グロブリンドメイン。
本実施例は、アクセプタードメイン中の新規なタンパク質−タンパク質界面を創出し、１つの遺伝子操作ドメインが別の遺伝子操作ドメインとヘテロ二量体形成またはホモ二量体形成により相互作用することを可能にするためのヒト免疫グロブリンドメイン中の変異の様々なセットを提供する。
【０６４５】
変異は、自然に存在する二量体免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー、例えば自然に存在するホモ二量体ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ドメインからまたは自然に存在するヘテロ二量体、例えばヒトＴＣＲα（ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＡＣ、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））、ＴＣＲβ（ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＢＣ１およびＴＲＢＣ２）、ＴＣＲγ（ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＧＣ１、ＴＲＧＣ２（２×）およびＴＲＧＣ２（３×））ならびにＴＣＲδ（ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＴＲＤＣ）定常ドメインから導くことができ、γ１、γ２、γ３、γ４、α１、α２、εおよびμアイソタイプ（それぞれＩＭＧＴ（登録商標）参照ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＧ４、ＩＧＨＡ１、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＥ、ＩＧＨＭ）のヒト重鎖免疫グロブリン定常ドメイン中に、またはヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインκ（ＩＭＧＴ（登録商標）参照ＩＧＫＣ）中に、またはヒト免疫グロブリン軽鎖定常ドメインλ１、λ２、λ３、λ６およびλ７（それぞれＩＭＧＴ（登録商標）参照ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７）中に導入できる。
【０６４６】
本実施例では、アミノ酸置換は、ＴＣＲドメイン（ＰＤＢコード：１ＫＧＣまたは１Ｊ８Ｈ（ＴＣＲα−ＴＣＲβ）および１ＨＸＭ（ＴＣＲδ−ＴＣＲγ））の３Ｄ構造とヒトＩｇＧドメインの３Ｄ構造（これらは、公共データベースから取得した（表２を参照されたい）かまたは入手可能性に応じてモデル化した（α１、α２、εのＣＨ１ドメイン；γ２、γ３、α２、μのＣＨ２ドメイン；γ２、γ３、α２、μのＣＨ３ドメインおよびμのＣＨ４ドメイン））との重畳の分析から導いた。さらに、アミノ酸置換は、対の様式で
のヒトＩｇＧドメインの３Ｄ構造の重畳の分析から導いた；例えば、ドメインのヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体対を、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１−Ｃκヘテロ二量体に重畳した。モデルは、構造相同性−モデリングサーバＳＷＩＳＳ−ＭＯＤＥＬ（Ａｒｎｏｌｄ  Ｋら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、２２（２）：１９５〜２０１ページ（２００６）；ｈｔｔｐ：／／ｓｗｉｓｓｍｏｄｅｌ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ）を自動化モードにて以下のインプットとともに用いて算出した：計画の要件に依存する特異的アミノ酸置換とともにＩＭＧＴ（登録商標）データベースから取得したタンパク質ドメインアミノ酸配列（国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））、ならびにＳＷＩＳＳ−ＭＯＤＥＬソフトウェアにより自動的に同定される、関連タンパク質ドメインからの実験的に解明された３Ｄ構造からなる３Ｄ構造鋳型。全ての実験的に解明された３Ｄ構造は、ＲＣＳＢタンパク質データバンク（ｗｗｗ．ｐｄｂ．ｏｒｇ；Ｂｅｒｍａｎ  ＨＭら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２３５〜４２ページ（２０００））から取得した。重畳は、Ｃｏｏｔソフトウェア（Ｅｍｓｌｅｙ  ＰおよびＣｏｗｔａｎ  Ｋ、Ａｃｔａ
Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ、６０（Ｐｔ１２  Ｐｔ１）：２１２６〜３２ページ（２００４））を用いて行った。分析のための視覚化は、Ａｃｃｅｌｒｙｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）からのＤｉｓｃｏｖｅｒｙ−Ｓｔｕｄｉｏソフトウェアで行った。変異の各部分集合の選択は、実施例１に記載するものと同様の基準に従った。
【０６４７】
ドナードメインまたは親ドメインとして用いるためのホモ二量体またはヘテロ二量体免疫グロブリンドメインの例は、ヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ１、ＩＧＨＡ１  ＣＨ２、ＩＧＨＡ１  ＣＨ３、ＩＧＨＡ２  ＣＨ１、ＩＧＨＡ２  ＣＨ２、ＩＧＨＡ２  ＣＨ３、ＩＧＨＤ
ＣＨ１、ＩＧＨＤ  ＣＨ２、ＩＧＨＤ  ＣＨ３、ＩＧＨＧ１  ＣＨ１、ＩＧＨＧ１  ＣＨ２、ＩＧＨＧ１  ＣＨ３、ＩＧＨＧ２  ＣＨ１、ＩＧＨＧ２  ＣＨ２、ＩＧＨＧ２  ＣＨ３、ＩＧＨＧ３  ＣＨ１、ＩＧＨＧ３  ＣＨ２、ＩＧＨＧ３  ＣＨ３、ＩＧＨＧ４  ＣＨ１、ＩＧＨＧ４  ＣＨ２、ＩＧＨＧ４  ＣＨ３、ＩＧＨＧＰ  ＣＨ１、ＩＧＨＧＰ  ＣＨ２、ＩＧＨＧＰ  ＣＨ３、ＩＧＨＥ  ＣＨ１、ＩＧＨＥ  ＣＨ２、ＩＧＨＥ  ＣＨ３、ＩＧＨＥ  ＣＨ４、ＩＧＨＭ  ＣＨ１、ＩＧＨＭ  ＣＨ２、ＩＧＨＭ  ＣＨ３、ＩＧＨＭ
ＣＨ４、ＩＧＫＣ、ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６、ＩＧＬＣ７、ＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＴＲＤＣ、ＴＲＧＣ１、ＴＲＧＣ２（２ｘ）、およびＴＲＧＣ２（３ｘ）からなる群から選択される。
【０６４８】
【表２】
2020040980.tif 000004
【０６４９】
ヒトＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３およびＩＧＨＧ４アイソタイプ間のＣＨ１〜ＣＨ３ドメインについてのアミノ酸の変動の詳細は、図１９で見出すことができる。
【０６５０】
ヒトＩＧＨＧ１〜Ｇ４  ＣＨ１、ＩＧＨＧ１〜Ｇ４  ＣＨ２、ＩＧＨＧ１〜Ｇ４  ＣＨ３、ＩＨＧＥ  ＣＨ４、ＩＧＨＭ  ＣＨ４、ＩＧＫＣおよびＩＧＬＣ（ＩＧＬＣ１、ＩＧＬＣ２、ＩＧＬＣ３、ＩＧＬＣ６およびＩＧＬＣ７）タンパク質−タンパク質界面に導入できるヒトＴＣＲ定常ドメイン（ＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ２、ＴＲＤＣおよびＴＲＧＣ１）またはヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面に由来する置換の完全なリストを図２０〜２３に示し、これは、ＩＭＧＴ（登録商標）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／、国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））において参照されるようにＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに対応する。
【０６５１】
ＴＣＲ定常ドメイン（α、β、δ、γ）またはＩＧＨＧ１のＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面に由来する鍵となるアミノ酸残基での置換のために考慮した好ましい位置の完全な概要も以下に示す。ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けは、免疫グロブリンスーパーファミリードメインの３Ｄ構造の比較分析に基づくので、これは、ドナードメインとアクセプター（親）ドメインとの間の置換の３Ｄで同等の位置を定義する。
【０６５２】
７．１分子モデリングの例。
７．１．１ヒトＴＣＲα−ＴＣＲβ定常ドメインタンパク質−タンパク質界面に基づくヘテロ二量体ドメイン対のモデリング。
ａ．ＴＣＲαに基づく置換。
ヒトＴＣＲα定常ドメイン（ドナードメイン）のタンパク質−タンパク質界面からのア
ミノ酸配列位置（これらは、親免疫グロブリンドメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄで同等のアミノ酸配列位置を置換するために用いる）を以下に列挙する：
・ヒトＴＣＲαからのドナー位置は、以下のとおりである：２０位、２２位、２６位、７９位、８５．１位、８６位、８８位および９０位（以下のアミノ酸を有する：Ｋ２０、Ｖ２２、Ｔ２６、Ｙ７９、Ｓ８５．１、Ｖ８６、Ｗ８８およびＮ９０）（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される（国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７）））。
・全てのヒト免疫グロブリンドメイン中のアクセプター位置は、以下のとおりである：２０位、２２位、２６位、７９位、８５．１位、８６位、８８位および９０位；α１：ＣＨ２（７８）、α２：ＣＨ２（７８）、ε：ＣＨ２（８１）およびε：ＣＨ３（８０）中の７９位以外（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６５３】
ｂ．ＴＣＲβに基づく置換。
ヒトＴＣＲβ定常ドメイン（ドナードメイン）のタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸配列位置（これらは、親免疫グロブリンドメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄで同等のアミノ酸配列位置を置換するために用いる）を以下に列挙する：
・ヒトＴＣＲベータからのドナー位置は、以下のとおりである：３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．１位、８４．３位、８５．１位、８６位、８８位および９０位（以下のアミノ酸を有する：Ｅ３、Ａ５、Ｆ７、Ｔ２０、Ｖ２２、Ｔ２６、Ｄ８１、Ｌ８４．１、Ｅ８４．３、Ｃ８５．１またはＡ８５．１またはＳ８５．１、Ｓ８６、Ｒ８８およびＲ９０）（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
・全てのヒト免疫グロブリンドメイン中のアクセプター位置は、以下のとおりである：３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位；α１：ＣＨ２（８０）、α２：ＣＨ２（８０）、ε：ＣＨ２（８３）中の８１位以外；α１：ＣＨ２（８３）、α２：ＣＨ２（８３）中の８４位以外；α１：ＣＨ２（８４）、α２：ＣＨ２（８４）中の８４．２位以外（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６５４】
ｃ．ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体上のヒトＴＣＲα−ＴＣＲβ定常ドメインタンパク質−タンパク質界面のモデリング。
ヒトＴＣＲα／β定常ドメインに由来するタンパク質−タンパク質界面を有するヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体に基づいて新規なヘテロ二量体をモデリングするために、そのタンパク質−タンパク質界面中で選択されたアミノ酸で置換されたヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３単量体の２つのモデルを算出した（方法について上記を参照されたい）。一方の単量体は、そのタンパク質−タンパク質界面中の選択された同等の３Ｄ位置にて、ヒトＴＣＲα定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸で置換され、第２単量体は、そのタンパク質−タンパク質界面中の選択された同等の３Ｄ位置にて、ヒトＴＣＲβ定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸で置換された。２つの遺伝子操作タンパク質ドメインについて得られたモデルのＣαトレースを、視覚的検査のために、実験的に解明された親ＣＨ３ホモ二量体３Ｄ構造（ＰＤＢコード１Ｈ３Ｕ）にさらに重畳
した。さらに、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面のコンピュータ解析を、オンラインＰＩＣウェブサーバ（ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｃｋ．ｍｂｕ．ｉｉｓｃ．ｅｒｎｅｔ．ｉｎ／〜ＰＩＣ／、Ｔｉｎａ  ＫＧら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３５（ウェブサーバ版）：Ｗ４７３〜６ページ（２００７））を用いて行った。表３および４は、コンピュータ解析および直接測定から同定された遺伝子操作ヘテロ二量体のタンパク質−タンパク質界面中の相互作用残基を列挙する（各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す）。自然に存在するホモ二量体およびヘテロ二量体タンパク質−タンパク質界面残基に由来する置換を用いてそれらのタンパク質−タンパク質界面中で遺伝子操作された多数の免疫グロブリンドメイン対のモデリングから、残基２０、２２、２６、８５．１、８６および８８、特に残基２２、８５．１、８６および８８（番号付けはＩＭＧＴ（登録商標）に従う）が、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面間の最も重要な接触を提供することが繰り返し見出された。より全般的に、タンパク質−タンパク質相互作用の視覚的検査および計算（オンラインＰＩＣウェブサーバ（ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｃｋ．ｍｂｕ．ｉｉｓｃ．ｅｒｎｅｔ．ｉｎ／〜ＰＩＣ／、Ｔｉｎａ  ＫＧら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３５（ウェブサーバ版）：Ｗ４７３〜６ページ（２００７）または当該技術分野において既知の他のタンパク質−タンパク質相互作用プログラムを用いる）により、残基２０、２２、２６、８５．１、８６および８８、特に残基２２、８５．１、８６および８８は、全ての遺伝子操作ドメインのヘテロ二量体形成またはホモ二量体形成について最も重要な相互作用を媒介することが見出された。
【０６５５】
理論に束縛されることなく、新しく遺伝子操作されたドメインタンパク質−タンパク質界面の分析は、相互作用残基の４つの重要な部分集合を同定した：第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基８８は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基８５．１および８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基８５．１は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基２２は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基２２および残基８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基２０は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基２６と相互作用する。
【０６５６】
逆に、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基８８は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基８５．１および８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基８５．１は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基２２は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基２２および残基８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴベータ）中の残基２０は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴアルファ）中の残基２６と相互作用する。
【０６５７】
【表３】
2020040980.tif 000005
【０６５８】
【表４】
2020040980.tif 000006
【０６５９】
７．１．２ヒトＴＣＲδ−ＴＣＲγ定常ドメインタンパク質−タンパク質界面に基づくヘテロ二量体ドメイン対のモデリング。
ａ．ＴＣＲδに基づく置換。
ヒトＴＣＲδ定常ドメイン（ドナードメイン）のタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸配列位置（これらは、親免疫グロブリンドメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄで同等のアミノ酸配列位置を置換するために用いる）を以下に列挙する：
・ヒトＴＣＲデルタからのドナー位置は、以下のとおりである：７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８２位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位（以下のアミノ酸を有する：Ｍ７、Ｎ２０、Ａ２２、Ｅ２７、Ｆ７９、Ａ８２、Ｓ８４．２、Ｎ８５．１、Ｖ８６、Ｌ８８およびＫ９０）（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
・全てのヒト免疫グロブリンドメイン中のアクセプター位置は、以下のとおりである：７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位、９０位；α１：ＣＨ２（７８）、α２：ＣＨ２（７８）、ε：ＣＨ２（８１）およびε：ＣＨ３（８０）中の７９位以外；α１：ＣＨ２（８０）、α２：ＣＨ２（８０）、ε：ＣＨ２（８３）およびε：ＣＨ３（８２）中の８１位以外；α１：ＣＨ２（８４）、α２：ＣＨ２（８４）、ε：ＣＨ２（８４．４）中の８４．２位以外（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６６０】
ｂ．ＴＣＲγに基づく置換。
ヒトＴＣＲγ定常ドメイン（ドナードメイン）のタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸配列位置（これらは、親免疫グロブリンドメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄで同等のアミノ酸配列位置を置換するために用いる）を以下に列挙する：
・ヒトＴＣＲガンマからのドナー位置は、以下のとおりである：３位、５位、２０位、２２位、２６位、２７位、８１位、８４位、８５．１位、８６位および８８位（以下のアミノ酸を有する：Ｋ３、Ｔ５、Ｔ２０、Ｌ２２、Ｅ２６、Ｋ２７、Ｇ８１、Ｍ８４、Ｍ８５．１、Ｆ８６およびＷ８８）（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
・全てのヒト免疫グロブリンドメイン中のアクセプター位置は、以下のとおりである：３位、５位、２０位、２２位、２６位、２７位、８１位、８４位、８５．１位、８６位、８８位；α１：ＣＨ２（８０）、α２：ＣＨ２（８０）、ε：ＣＨ２（８３）中の８１位以外；γ１、γ２、γ３、γ３：ＣＨ２（全ての８３について）、α１：ＣＨ２（８３）、α２：ＣＨ２（８３）、ε：ＣＨ２（８４．１）、μ：ＣＨ２（８３）およびμ：ＣＨ３（８３）中の８４位以外（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６６１】
ｃ．ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体上のヒトＴＣＲδ−ＴＣＲγ定常ドメインタンパク質−タンパク質界面のモデリング。
ヒトＴＣＲδ／γ定常ドメインに由来するタンパク質−タンパク質界面を有するヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体に基づいて新規なヘテロ二量体をモデリングするために、そのタンパク質−タンパク質界面中で選択されたアミノ酸で置換されたヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３単量体の２つのモデルを算出した（方法について上記を参照されたい）。一方の単量体は、そのタンパク質−タンパク質界面中の選択された同等の３Ｄ位置にて、ヒトＴＣＲδ定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸で置換され、第２単量体は、そのタンパク質−タンパク質界面中の選択された同等の３Ｄ位置にて、ヒトＴＣＲγ定常ドメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸で置換された。２つの遺伝子操作タンパク質ドメインについて得られたモデルのＣαトレースを、視覚的検査のために、実験的に解明された親ＣＨ３ホモ二量体３Ｄ構造（ＰＤＢコード１Ｈ３Ｕ）にさらに重畳した。さらに、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面のコンピュータ解析を、オンラインＰＩＣウェブサーバ（ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｃｋ．ｍｂｕ．ｉｉｓｃ．ｅｒｎｅｔ．ｉｎ／〜ＰＩＣ／、Ｔｉｎａ  ＫＧら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３５（ウェブサーバ版）：Ｗ４７３〜６ページ（２００７））を用いて行った。表５および６は、コンピュータ解析および直接測定から同定された遺伝子操作ヘテロ二量体のタンパク質−タンパク質界面中の相互作用残基を列挙する（各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す）。自然に存在するホモ二量体およびヘテロ二量体タンパク質−タンパク質界面残基に由来する置換を用いてそれらのタンパク質−
タンパク質界面中で遺伝子操作された多数の免疫グロブリンドメイン対のモデリングから、残基２０、２２、２６、８５．１、８６および８８、特に残基２２、８５．１、８６および８８（番号付けはＩＭＧＴ（登録商標）に従う）が、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面間の最も重要な接触を提供することが繰り返し見出された。より全般的に、タンパク質−タンパク質相互作用の視覚的検査および計算（オンラインＰＩＣウェブサーバ（ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｃｋ．ｍｂｕ．ｉｉｓｃ．ｅｒｎｅｔ．ｉｎ／〜ＰＩＣ／、Ｔｉｎａ  ＫＧら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３５（ウェブサーバ版）：Ｗ４７３〜６ページ（２００７）または当該技術分野において既知の他のタンパク質−タンパク質相互作用プログラムを用いる）により、残基２０、２２、２６、８５．１、８６および８８、特に残基２２、８５．１、８６および８８は、全ての遺伝子操作ドメインのヘテロ二量体形成またはホモ二量体形成について最も重要な相互作用を媒介することが見出された。
【０６６２】
理論に束縛されることなく、新しく遺伝子操作されたドメインタンパク質−タンパク質界面の分析は、相互作用残基の４つの重要な部分集合を同定した：第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基８８は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基８５．１および８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基８５．１は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基２２は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基２２および残基８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基２０は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基２６と相互作用する。逆に、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基８８は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基８５．１および８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基８５．１は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基２２は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基２２および残基８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴガンマ）中の残基２０は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＢＴデルタ）中の残基２６と相互作用する。
【０６６３】
【表５】
2020040980.tif 000007
【０６６４】
【表６】
2020040980.tif 000008
【０６６５】
７．１．３ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３定常ドメイン対タンパク質−タンパク質界面に基づくヘテロ二量体ドメイン対のモデリング。
ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３定常ドメイン（ドナードメイン）のタンパク質−タンパク質界
面からのアミノ酸配列位置（これらは、親免疫グロブリンドメインのタンパク質−タンパク質界面からの３Ｄで同等のアミノ酸配列位置を置換するために用いる）を以下に列挙する：
ａ．ＩＧＨＧ１のヒトＣＨ３からのドナー位置の第１セットは、以下の位置を含む：３位、５位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８６位および８８位（以下のアミノ酸を有する：Ｑ３、Ｙ５、Ｄ１２、Ｅ１３、Ｑ１８、Ｓ２０、Ｔ２２、Ｋ７９、Ｔ８１、Ｄ８４．２、Ｆ８５．１、Ｙ８６およびＫ８８）（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６６６】
全てのヒト免疫グロブリン軽鎖ドメイン以外の全てのヒト免疫グロブリンドメイン中の第１セットについてのアクセプター位置は、以下のとおりである：３位、５位、１２位、１３位、１８位、２０位、２２位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８６位および８８位、γ１、γ２、γ３、γ３：ＣＨ２（全ての８３について）中の８１位以外、γ１、γ２、γ３、γ３：ＣＨ２（全ての８４．３について）中の８４．２位以外（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６６７】
ｂ．ＩＧＨＧ１のヒトＣＨ３からのドナー位置の第２セットは、以下の位置を含む：３位、５位、７位、１２位、１３位、２２位、２６位、７９位、８１位、８４位、８５．１位、８６位および８８位（以下のアミノ酸を有する：Ｑ３、Ｙ５、Ｌ７、Ｄ１２、Ｅ１３、Ｔ２２、Ｋ２６、Ｋ７９、Ｔ８１、Ｖ８４、Ｆ８５．１、Ｙ８６およびＫ８８）（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６６８】
全てのヒト免疫グロブリン軽鎖ドメイン中の第２セットについてのアクセプター位置は、以下のとおりである：３位、５位、７位、１２位、１３位、２２位、２６位、７９位、８１位、８３位、８５．１位、８６位および８８位（第２セットが以下：３位、５位、７位、１１位、１２位、２２位、２６位、７９位、８１位、８３位、８５．１位、８６位および８８位であるヒトＩＧＬＣドメイン以外）（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。
【０６６９】
ｃ．ヒトＣＨ１−ＣＫヘテロ二量体タンパク質−タンパク質界面上のヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３ホモ二量体タンパク質−タンパク質界面のモデリング。
ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３定常ドメイン（ＣＨ１３）のタンパク質−タンパク質界面に由来する同等の３Ｄ位置のアミノ酸を用いてそのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１ドメインについてのモデル、およびヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ３定常ドメイン（ＣＫ３）のタンパク質−タンパク質界面に由来する同等の３Ｄ位置のアミノ酸を用いてそのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたヒトＣκドメインについてのモデルを算出した（方法について上記を参照されたい）。２つの遺伝子操作タンパク質ドメインについて得られたモデルのＣαトレースを、視覚的検査のために、実験的に解明された親ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１−Ｃκヘテロ二量体３Ｄ構造（ＰＤＢコード１ＶＧＥ）にさらに重畳した。さらに、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面のコンピュータ解析を、オンラインＰＩＣウェブサーバ（ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｃｋ．ｍｂｕ．ｉｉｓｃ．ｅｒｎｅｔ．ｉｎ／〜ＰＩＣ／、Ｔｉｎａ  ＫＧら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ、３５（ウェブサーバ版）：Ｗ４７３〜６ページ（２００７））を用いて行った。表７および８は、コンピュータ解析および直接測定から同定された遺伝子操作ヘテロ二量体のタンパク質−タンパク質界面中の相互作用残基を列挙する（各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示す）。自然に存在するホモ二量体およびヘテロ二量体タンパク質−タンパク質界面残基に由来する置換を用いてそれらのタ
ンパク質−タンパク質界面中で遺伝子操作された多数の免疫グロブリンドメイン対のモデリングから、残基２０、２２、２６、８５．１、８６および８８、特に残基２２、８５．１、８６および８８（番号付けはＩＭＧＴ（登録商標）に従う）が、遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面間の最も重要な接触を提供することが繰り返し見出された。より全般的に、タンパク質−タンパク質相互作用の視覚的検査および計算（オンラインＰＩＣウェブサーバ（ｈｔｔｐ：／／ｃｒｉｃｋ．ｍｂｕ．ｉｉｓｃ．ｅｒｎｅｔ．ｉｎ／〜ＰＩＣ／、Ｔｉｎａ  ＫＧら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３５（ウェブサーバ版）：Ｗ４７３〜６ページ（２００７）または当該技術分野において既知の他のタンパク質−タンパク質相互作用プログラムを用いる）により、残基２０、２２、２６、８５．１、８６および８８、特に残基２２、８５．１、８６および８８は、全ての遺伝子操作ドメインのヘテロ二量体形成またはホモ二量体形成について最も重要な相互作用を媒介することが見出された。
【０６７０】
理論に束縛されることなく、新しく遺伝子操作されたドメインタンパク質−タンパク質界面の分析は、相互作用残基の４つの重要な部分集合を同定した：第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基８８は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基８５．１および８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基８５．１は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基２２は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基２２および残基８６と相互作用し、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基２０は、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基２６と相互作用する。逆に、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基８８は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基８５．１および８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基８５．１は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基２２は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基２２および残基８６と相互作用し、第２遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＫ３）中の残基２０は、第１遺伝子操作免疫グロブリン（ＣＨ１３）中の残基２６と相互作用する。
【０６７１】
【表７】
2020040980.tif 000009
【０６７２】
【表８】
2020040980.tif 000010
【０６７３】
７．２ヒトＴＣＲ定常ドメイン（ＴＲＡＣ、ＴＲＢＣ２、ＴＲＤＣ、ＴＲＧＣ１）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３に由来するドナー位置のまとめ。
ヒトＴＲＡＣ（ＴＣＲα、アルファと略称する）、ＴＲＢＣ２（ＴＣＲβ、ベータと略称する）、ＴＲＤＣ（ＴＣＲδ、デルタと略称する）、ＴＲＧＣ１（ＴＣＲγ、ガンマと略称する）およびＩＧＨＧ１  ＣＨ３（ＣＨ３と略称する）に由来するドナー位置のまとめは、表９で見出される。各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される。ＣＨ３についてのアミノ酸位置（セットｉ）は、軽鎖ドメイン以外の全てのヒト免疫グロブリンドメインを置換するためのドナー位置である。ＣＨ３についてのアミノ酸位置（セットｉｉ）は、全てのヒト免疫グロブリン軽鎖ドメインを置換するためのドナー位置である。
【０６７４】
【表９】
2020040980.tif 000011
【０６７５】
７．３追加の置換についての基礎
より全般的なアプローチでは、３、５、７、１２、１３、１８、２０、２２、２６、２７、７９、８１、８２、８４、８４．１、８４．２、８４．３、８５．１、８６、８８および９０からなる群から選択される免疫グロブリンスーパーファミリーの自然に存在する二量体タンパク質ドメインからのタンパク質−タンパク質界面残基をドナー残基として用いて新しい二量体を創出できる（ここで、各群メンバーのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される）。表１０は、親ドメイン中の同じ位置にてアミノ酸を置換するために用いることができる、ヘテロ二量体ドナードメインＣＨ１、ならびに異なるアイソタイプを起源とするホモ二量体ドメインＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４からの選択された位置２０位、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位のアミノ酸残基を示す。表１１は、親ドメイン中の同じ位置にてアミノ酸を置換するために用いることができる、様々なヘテロ二量体ヒト免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーからの選択された位置２０位、２２位、２６位、８５．１位、８６位および８８位のアミノ酸残基
を示す。
【０６７６】
【表１０】
2020040980.tif 000012
【０６７７】
【表１１】
2020040980.tif 000013
【０６７８】
７．４  ＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付け、ＥＵ番号付けおよびＫａｂａｔ番号付けの間の対応。
上記のヒト重鎖定常ドメインのほとんどについてのＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付けとＥＵ番号付けとの間の対応は、表１２で見出される。ヒトカッパ定常軽鎖ドメインについてのＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付けとＥＵ番号付けとの間の対応、およびヒトラムダ定常軽鎖ドメインについてのＩＭＧＴ（登録商標）ユニーク番号付けとＫａｂａｔ番号付けとの間の対応はともに、表１３で見出される。
【０６７９】
ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ１〜ＣＨ３、ＩＧＫＣおよびＩＧＬＣドメインについての完全な対応は、図１９Ａ、１９Ｂ、１９Ｃ、１９Ｄ、２２、２３Ａおよび２３Ｂで、ならびに代わりにＩＭＧＴ（登録商標）データベース（国際免疫遺伝情報システム（登録商標）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２７（１）：２０９〜１２ページ（１９９９）；Ｒｕｉｚ  Ｍら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２８（１）：２１９〜２１ページ（２０００）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、２９（１）：２０７〜９ページ（２００１）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ、３１（１）：３０７〜１０ページ（２００３）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰら、Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２９（３）：１８５〜２０３ページ（２００５）；Ｋａａｓ  Ｑら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ＆Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、６（４）：２５３〜６４ページ（２００７））で、より具体的には
ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＨＧｎｂｅｒ．ｈｔｍｌ；
ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＫＣｎｂｅｒ．ｈｔｍｌ；
ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｅｓ／ＩＭＧＴＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＣｈａｒｔ／Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ／Ｈｕ＿ＩＧＬＣｎｂｅｒ．ｈｔｍｌ
で見出されるページから見出される。
【０６８０】
【表１２】
2020040980.tif 000014
【０６８１】
【表１３】
2020040980.tif 000015
【実施例８】
【０６８２】
ヒトα／βＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界面を有する二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンの構築。
受容体チロシンキナーゼのＨＥＲファミリーは、細胞成長、分化および生存の重要なメディエータである（Ｅａｒｐ  ＨＳら、Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ、３５（１）：１１５〜３２ページ（１９９５））；この受容体ファミリーは、４つの別個のメンバー：上皮増殖因子受容体ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１またはＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２またはｐ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４またはｔｙｒｏ２）を含み、これらは、一般的に、細胞中で様々な組み合わせで見出される（Ｒｏｗｉｎｓｋｙ  ＥＫ、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ、５５：４３３〜５７ページ（２００４）；Ｈｙｎｅｓ  ＮＥおよびＬａｎｅ  ＨＡ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ、５（５）：３４１〜５４ページ（２００５））。受容体二量体形成は、ＥｒｂＢ機能のためおよびこれらの受容体のシグナル伝達活性のために必須の要件である（Ｂａｓｅｌｇａ  ＪおよびＳｗａｉｎ  ＳＭ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ、９（７）：４６３〜７５ページ（２００９））；より具体的に、受容体ヘテロ二量体形成は、様々なＨＥＲリガンドに対する細胞応答の多様性を増加させると考えられる。ＨＥＲファミリーからの単一受容体を標的にする治療薬は、現在、乳がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、頭頚部がんおよび膵臓がんのような疾患の処置において用いられている（Ｅｎｇｅｌｍａｎ  ＪＡおよびＪａｎｎｅ  ＰＡ、  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、１４（１０）：２８９５〜９ページ（２００８）；Ｂａｓｅｌｇａ  ＪおよびＳｗａｉｎ  ＳＭ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ、９（７）：４６３〜７５ページ（２００９））。これらの治療法はいくらか成功したが、天然のおよび誘導された耐性ならびに毒性に関連する問題が、これらの効力を現在制限している（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｃら、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ、６（７）：４９１〜５００ページ（２００５）；Ｊｏｎｅｓ  ＫＬおよびＢｕｚｄａｒ  ＡＵ、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ、１０（１２）：１１７９〜８７ページ（２００９））。ＨＥＲファミリーからの複数の受容体を標的にできる治療薬は、臨床効力の改善とより低い毒性とを提供できる。
【０６８３】
少なくとも２つのＨＥＲ受容体と特異的に結合できる二重特異性分子（図２４）を生成するために、組換えヒト化抗ＨＥＲ２抗体４Ｄ５（ｒｈｕＭＡｂＨＥＲ２、ｈｕＭＡＢ４Ｄ５−８、トラスツズマブまたはＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）；米国特許第５，８２１，３３７号）および組換えキメラ抗ＥＧＦＲ抗体Ｃ２２５（ＩＭＣ−Ｃ２２５、セツキシマブまたはＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）；ＰＣＴ公開第ＷＯ９６／４０２１０号）に由来する抗原結合部位を、ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）での遺伝子合成のためにインプットとして選択した。両方の抗体について、重鎖可変配列（ＶＨ）および軽鎖可変配列（ＶＬ）を合成し、抗ＨＥＲ２抗体４Ｄ５および抗ＥＧＦＲ抗体Ｃ２２５についてそれぞれｓｃＦｖ断片（ＶＨおよびＶＬドメインを１５アミノ酸ＧｌｙＳｅｒリンカー：（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３と融合した）およびキメラＦＡＢ断片（すなわちマウスＶＬ−ヒトＣＫ鎖と集合したマウスＶＨ−ヒトＣＨ１（γ１）鎖）へと再フォーマットした。全てのＤＮＡ操作は、標準的な分子生物学の技術に従い、ＰＣＲ増幅およびＰＣＲ断片アセンブリ法を主に含んだ。二重特異性分子の抗ＥＧＦＲ部分を創出するために、抗ＥＧＦＲ抗体Ｃ２２５マウスＶＨ−ヒトＣＨ１（γ１）鎖を、実施例１に記載するＢＴアルファ鎖の上流に融合し（ＶＨ（抗ＥＧＦＲ）−ＣＨ１−ＢＴアルファ鎖と略称する、配列番号５６）、抗ＥＧＦＲ抗体Ｃ２２５マウスＶＬを、ヒトカッパ定常ドメインの上流に融合した（ＶＬ（抗ＥＧＦＲ）−ＣＫ鎖と略称する、配列番号５７）。二重特異性分子の抗ＨＥＲ２部分を創出するために、抗ＨＥＲ２  ｓｃＦｖを、実施例２に記載するＢＴベータＦ４０５Ａ鎖の上流に、短いＧｌｙＳｅｒアミノ酸リンカー（ＧＧＧＳ）を２つの配列間に用いて融合した（ｓｃＦｖ（抗ＨＥＲ２）−ＢＴベータ鎖と略称する、配列番号５８）。３つ全ての得られた鎖を、実施例１で言及した改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してさらにライゲーションし、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、実施例１に記載するようにして同時トランスフェクトした。タンパク質生成も実施例１に記載する手順に
従った。
【０６８４】
１つのＶＨ（抗ＥＧＦＲ）−ＣＨ１−ＢＴアルファ鎖と、１つのＶＬ（抗ＥＧＦＲ）−ＣＫ鎖と、１つのｓｃＦｖ（抗ＨＥＲ２）−ＢＴベータ鎖（配列番号５９、６０および６１）とからなる予測される二重特異性分子を「Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータ」と称する。
【０６８５】
Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体をホモ二量体から単離するために、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）ステップをプロテインＡ精製の後に行った（実施例１に従う手順）。まず、アニオン−ＩＥＸステップを行った；プロテインＡ溶出物の緩衝液を交換し（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ９．０に交換）、ＡＫＴＡ精製装置で稼働する４ｍｌ  ＳｏｕｒｃｅＱ３０充填済みカラム（ともにＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから）に載せた。Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータを、次いで、ｐＨ９．０からｐＨ５．０までの範囲の浅いｐＨ勾配を用いて溶出した（最終緩衝液条件は５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．０であった）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の後に、大部分のＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体を含有する画分をプールし、５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．０に再緩衝した。第２ステップでは、カチオンＩＥＸを、アニオンＩＥＸステップからの再緩衝画分を１ｍｌ  ＭｏｎｏＳカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に載せ、５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．０から５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ９．０までの浅い勾配を実行することにより行った。Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体を含有する画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により選択した。最後に、精製したＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体を、サイズ排除クロマトグラフィーカラム（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  ＨＲ１６／６０、ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で洗練して微量の凝集物を除去し、最終二重特異性分子の緩衝液をＰＢＳに交換した。図２５は、各精製ステップ後ならびに２つの対照分子：ｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質およびモノクローナル抗体のポリアクリルアミドＳＤＳゲルプロフィールを示す。一過性トランスフェクションからの生成収率は、３０ｍｇ／ｌまでであり、非還元ＳＤＳポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析（方法について実施例１を参照されたい）により判断してヘテロ二量体形成率は４９．５％であった（図２６）。
【０６８６】
Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体の安定性を評価するために、精製物を示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を用いて分析した。熱量測定は、ＶＰ−ＤＳＣ示差走査微小熱量計（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ
Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で実施例２に記載するようにして行った。セル体積は０．１２８ｍｌであり、加熱速度は１℃／分であり、過剰圧力は６４ｐ．ｓ．ｉ．に維持した。タンパク質は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で０．９５ｍｇ／ｍｌの濃度で用いた。図２７は、６９．５および７５．９℃にて２つの温度転移を示すＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体のサーモグラムを示す。熱吸収ピークの後に鋭い減少は記録されず、このことは、熱アンフォールディングの後に沈降または凝集体形成が発生しなかったことを示すことに注目することが重要である（Ｌｉｕ  Ｈら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ、１０６（２）：１４４〜５３ページ（２００６））。よって、Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体について観察された融解転移は、ヒトＩＧＨＧ４  Ｆｃ断片ＣＨ２およびＣＨ３ドメインについて
観察されたものと同様であり、安定ヒトＦＡＢ断片について一般的に観察される融解転移と同様である（Ｇａｒｂｅｒ  ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、３５５（３）：７５１〜７ページ（２００７））。結論として、この熱アンフォールディング研究は、ＴＣＲアルファおよびベータ定常ドメインに基づく遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有するＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体が、自然に存在する免疫グロブリンと同様の熱安定性を有することを示す。
【０６８７】
Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体がその同族抗原（ヒトＥＧＦＲおよびヒトＨＥＲ２）の両方に同時に結合する能力を、ＢＩＡｃｏｒｅ２０００装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により試験した。本実施例では、ヒトＥＧＦＲおよびＨＥＲ２受容体からの組換え細胞外ドメインを、ヒトＦｃ（γ１）断片の上流に個別に融合した（それぞれＥＧＦＲ−ＦｃおよびＨＥＲ２−Ｆｃと略称する、配列番号６２および６３）。簡単に述べると、ヒトＥＧＦＲおよびＨＥＲ２の細胞外ドメインを、ＰＣＲにより、ｉｍａＧｅｎｅｓクローン番号：ＥＸ−Ａ０２７５−ＭＯ２およびＥｘ−ＢＯＯ１７−Ｍ１０（ｉｍａＧｅｎｅｓ  ＧｍｂＨ、ｃａｍｐｕｓ  Ｂｅｒｌｉｎ−Ｂｕｃｈ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）からそれぞれ増幅した。ＰＣＲ生成物を、次いで、ヒトＦｃ（γ１）部分の上流にＰＣＲアセンブリ法を用いて融合し（それぞれ配列番号６４および６５）、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのｐｃＤＮＡ３．１ベクターＤＮＡに基づく哺乳動物細胞発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＡＧ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中に独立してクローニングした。最後に、各組換えベクターをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした；トランスフェクションの４〜５日後に、上清を採集し、組換えタンパク質を、プロテインＡアフィニティクロマトグラフィーにより均質に精製した。ＳＰＲ実験は、２５℃にて、１×ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中で３０μｌ／分の流速で行った。精製Ｆｃ融合抗原を、研究グレードのＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に、アミンカップリングにより、製造者により提供される標準的なプロトコールを用いて固定化した。ＥＦＧＲ−ＦｃおよびＨＥＲ２−Ｆｃ（チップの異なるチャネルに固定化した）は、それぞれ４１０および８８０応答単位（ＲＵ）のシグナルを導いた。固定化抗原を欠くチャネルを参照チャネルとして用いた。このチャネルからの応答を測定から減じた。結合および同時結合実験のために、Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体およびＥＧＦＲ−Ｆｃを１×ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）中でそれぞれ２５および１００ｎＭの最終濃度まで希釈した。全ての分析物について、注入は２分間に制限した。図２８Ａは、Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体と固定化ＥＧＦＲ−Ｆｃとの間の結合および解離を示す。分析物としてのＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータおよびＥＧＦＲ−Ｆｃの固定化ＨＥＲ２−Ｆｃへの同時結合を図２８Ｂに示す。この結合実験において、Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴ��ータヘテロ二量体を、ＨＥＲ２−Ｆｃが固定化されたチャネルにまず注入し、抗原とのＥｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ  ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体の結合を示した。この最初の注入の３分後にＥＧＦＲ−Ｆｃを注入し、Ｅｒｂｉｔｕｘ  ＦＡＢ−ＢＴアルファ＿Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ
ｓｃＦｖ−ＢＴベータヘテロ二量体との同時結合イベントをもたらして、観察された応答が真の同時結合イベントであり、両方の抗原間の相互作用でないことを確認し、ＥＧＦＲ−Ｆｃを固定化ＨＥＲ２−Ｆｃに注入し、著しい応答は記録されなかった（図２８Ｂ）。
【実施例９】
【０６８８】
ヒトα／βＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ３−ＣＨ３タンパク質−タンパク質界面を有する二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリン、およびヘテロ二量体δ／γＴ細胞受容体定常ドメインに基づくＣＨ１−ＣＫタンパク質−タンパク質界面を有するＦＡＢ断片の構築。
実施例５は、ヒトＴＣＲ定常ドメインデルタおよびガンマのタンパク質−タンパク質界面に基づく改変ＣＨ１（γ１）およびＣκ定常ドメインの新規なセットを提供する。ＦＡＢ定常ドメインのこの新しい対は、共通軽鎖を用いることに妥協する必要なしにヒト二重特異性抗体を創出する機会を提供する。
【０６８９】
この新規な型の二重特異性抗体は、異なる可変ドメインを有する２つの別個の重鎖と、異なる可変ドメインを有する２つの別個の軽鎖とに基づく。二重特異性抗体の４つの別個の鎖の正しい集合は、２つの原理に基づく：（１）２つの異なる抗体重鎖にヘテロ二量体を形成させるために、実施例１〜３に記載する遺伝子操作ヘテロ二量体ＣＨ３ドメインの新規な対を用いる、（２）可能性のあるいずれの誤った軽鎖対形成をも回避するために、実施例５に記載するＣＨ１（γ１）およびＣκ定常ドメインの新規なセットを二重特異性抗体の２つのＦＡＢ腕の一方に導入する。よって、二重特異性抗体は、少なくとも３つの異なるタンパク質−タンパク質界面を３つの異なる部分：ＣＨ１（γ１）およびＣκ定常ドメインの自然に存在するヘテロ二量体対を有する第１ＦＡＢ腕と、ＴＣＲデルタおよびＴＣＲガンマ定常ドメインのヘテロ二量体対を起源とするタンパク質−タンパク質界面を有するＣＨ１（γ１）およびＣκ定常ドメインの新規なヘテロ二量体対を有する第２ＦＡＢ腕と、ヘテロ二量体ＴＣＲアルファおよびＴＣＲベータ定常ドメインを起源とするタンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作ＣＨ３（γ１）定常ドメインの新規なヘテロ二量体対を有する１つのＦｃ断片の中に包含する（図２９）。
【０６９０】
少なくとも２つの抗原と特異的に結合できる完全で正しく集合した二重特異性抗体を生成するために、ヒト化抗ヒトＣＤ１９抗体からの可変重鎖および可変軽鎖ドメイン（それぞれＶＨ（抗ｈＣＤ１９）およびＶＬ（抗ｈＣＤ１９）と略称する、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０９５０３１号に開示される）、ならびにヒトＶＬＡ−２受容体（ＶＬＡ２）抗体のヒト化抗アルファ２サブユニットからの可変重鎖および可変軽鎖ドメイン（それぞれＶＨ（抗ｈＶＬＡ２）およびＶＬ（抗ｈＶＬＡ２）と略称する、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０５６８５８号に開示される）を、発現および機能研究のためのインプットとして選択した。ＶＨ（抗ｈＶＬＡ２）およびＶＬ（抗ｈＶＬＡ２）ドメインについてのコードｃＤＮＡは、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０５６８５８号に記載される研究から入手可能であった。
【０６９１】
二重特異性抗体の４つの別個の鎖を創出するために、２つの新しい免疫グロブリン鎖を、ＰＣＲ技術を用いて創出した：ヒトＣＨ１（γ１）−ＢＴアルファＨｉｓ鎖（実施例１および２）の上流に融合した可変重鎖ＶＨ（抗ｈＶＬＡ２）からなる第１鎖（ＶＨ（抗ｈＶＬＡ２）−ＣＨ１−ＢＴアルファＨｉｓと略称する、配列番号６６）と、自然に存在するヒトＣκ定常ドメインの上流に融合した可変軽鎖ＶＬ（ｈＶＬＡ２）からなる第２鎖（ＶＬ（抗ｈＶＬＡ２）−ＣＫと略称する、配列番号６７）。ＰＣＲアセンブリの後に、両方の鎖ｃＤＮＡを、実施例１に記載する改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションした。最終の２つの免疫グロブリン鎖は、実施例５を起源とする完全二重特異性抗体を生成する必要があった：ＶＨ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＨ１デルタ−ＢＴベータｃ−ｍｙｃ鎖からなる第３鎖（配列番号４３）と、ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）−ＣＫガンマ鎖からなる第４鎖（配列番号４４）。４つ全ての別個の鎖を有する得られた二重特異性抗体は、抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体と略称する（配列番号６８、６９、４１および４２）。
【０６９２】
組換え免疫グロブリン鎖を有する４つ全てのベクターをＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に同時トランスフェクトし、タンパク質生成を実施例１に記載する手順に従って行った。ヒトＶＬＡ２抗原（抗ｈＶＬＡ２抗体と略称する）またはヒトＣＤ１９抗原（ｈＣＤ１９抗体と略称する）のいずれかに対する単一特異性を有する少量の抗体種が、それぞれ鎖「１」と鎖「２」および鎖「３」と鎖「４」の同時トランスフェクションにより得られた。これらの抗体は、後に、ＦＡＣＳ実験において対照として用いた（以下を参照されたい）。
【０６９３】
一過性トランスフェクションの生成収率は、プロテインＡ精製（実施例１に従う手順）後に約１８ｍｇ／ｌであった。完全に集合した二重特異性分子を微量のホモ二量体種から単離するために、２つのアフィニティクロマトグラフィーステップを逐次的に実行した。第１ステップは、プロテインＬアフィニティクロマトグラフィーに基づき（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ  ＵＳＡからのプロテインＬ樹脂；製造者のプロトコールに従って用いた）、カッパサブグループκ１およびκ３を起源とするがκ２を起源としない軽鎖可変ドメインに対するプロテインＬの特異性を利用した（Ｎｉｌｓｏｎ  ＢＨら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２６７（４）：２２３４〜９ページ（１９９２））。可変ＶＬ（抗ｈＶＬＡ２）軽鎖ドメインはκ２サブクラスに属し、可変ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）軽鎖ドメインはκ１サブクラスに属するので、このステップにより、可変ＶＬ（抗ｈＣＤ１９）ドメインを欠くいずれのホモ二量体抗体種も除去できた（上記の鎖「４」を参照されたい）。第２ステップについて、プロテインＬ精製後のタンパク質プールの緩衝液を５０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ９．０、２００ｍＭ  ＮａＣｌに交換し、０．６ｍｌ／分の流速でＡＫＴＡ精製装置で稼働する１ｍｌ  ＨｉｓＴｒａｐ  Ｎｉ２＋−ＮＴＡアフィニティクロマトグラフィーカラム（ともにＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＧｍｂＨ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから）に載せた。このステップにより、ＢＴアルファ鎖を欠くいずれのホモ二量体抗体種も除去できた（上記の鎖「１」を参照されたい）。
【０６９４】
抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の存在を確認するために、ウェスタンブロット分析を、精製プロセスの異なるステップにて単離した試料の分割量に対して行った。検出のために、セイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲート抗Ｈｉｓタグ（Ｓｉｇｍａ、Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）および抗ｃ−ｍｙｃタグ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｓｃｈｗｅｉｚ）ＡＧ、Ｒｏｔｋｒｅｕｚ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）抗体を用いた。染色のために、ペルオキシダーゼ基質ＳＩＧＭＡ  ＦＡＳＴ３，３’−ジアミノベンジジン（Ｓｉｇｍａ、Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いた。２つのウェスタンブロット（抗Ｈｉｓタグ抗体を用いて検出したものと、抗ｃ−ｍｙｃ抗体を用いて検出したもの）の比較により、２つの精製ステップの後の抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の存在が確認された（図３０、パネルＢおよびＣのレーン５）。
【０６９５】
抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の二重の特異性を確認するために、２つの独立するＦＡＣＳ結合実験を設計した。両方の実験では、二重特異性抗体を、標的細胞の細胞表面にて提示されるその２つの同族抗原のうちの１つとの結合について試験し、第２の特異性を有する鎖上に存在するアフィニティタグを用いて検出した。抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の特異性は、ヒトＣＤ１９細胞表面タンパク質とヒトＶＬＡ−２受容体のアルファ２サブユニットとの両方に向かうので、Ｒａｊｉ株化細胞（ヒトバーキットリンパ腫株化細胞、ＤＳＭＺクローン番号：ＡＣＣ３１９）およびＨＴ１０８０株化細胞（ヒト線維肉腫株化細胞、ＡＴＣＣクローン番号：ＣＣＬ−１２１）をそれぞれ標的細胞として選択した。Ｒａｊｉ細胞は、厳密にＣＤ１９＋およびＶＬＡ２−であり、ＨＴ１０８０細胞は、ＶＬＡ２＋およびＣＤ１９−である（データは示さず）ので、いずれの偽陽性も妨げられる。両方の株化細胞を標準培養条件から採集して計数した（トリパンブルー排除に従って生存率＞９０％）。細胞を、染色緩衝液：ＰＡＡからの２．５％ＦＢ
Ｓ（ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐａｓｃｈｉｎｇ、Ａｕｓｔｒｉａ；カタログ番号：Ａ１５−１０１）およびＧＩＢＣＯ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＡＧからの１０％ｖｅｒｓｅｎｅ（Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、カタログ番号：１５０４０）を補ったＰＢＳ溶液中で１回洗浄した後に、染色手順を行った。染色は、条件あたり２×１０５細胞に対して、氷上のＶ底９６ウェルプレート中で行った。各インキュベーションステップは、１０μｇ／ｍｌの抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体を補った５０μｌの染色緩衝液中で行い、さらに２０分間インキュベートした。細胞を、次いで、冷却染色緩衝液で２回洗浄し、マウス抗Ｈｉｓタグ抗体（Ｓｉｇｍａ、Ｂｕｃｈｓ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；カタログ番号：Ａ７０５８−１ＶＬ）またはマウス抗ｃ−ｍｙｃタグ抗体（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｓｃｈｗｅｉｚ）ＡＧ、Ｒｏｔｋｒｅｕｚ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；カタログ番号：１１６６７１４９００１）のいずれか（ともに染色緩衝液中で１０μｇ／ｍｌの濃度）とともに２０分間インキュベートした。染色緩衝液中でのみ細胞を維持した対照試料も、両方の株化細胞について作製した。検出のために、細胞を染色緩衝液で２回洗浄し、染色緩衝液中に１：２００の希釈で用いるフィコエリスリンコンジュゲートマウス抗ヒトＩｇ  Ｆｃ断片特異的抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＵＳＡ；流通業者：ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＣＢＩ  Ｍｅｄｉｃａｌｓ  ＰＶ、Ｂａａｒ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ；カタログ番号：１２−４９９８−８２）とともに２０分間インキュベートした。最後に、細胞を染色緩衝液で１回洗浄し、３００μｌの冷却染色緩衝液に再懸濁し、速やかにフローサイトメトリーにより分析した（ＣｙＡｎ（商標）ＡＤＰ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｓ．Ａ．、Ｎｙｏｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。データは、Ｆｌｏｗｊｏ（登録商標）ソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ、ＵＳＡ）を用いて処理した；ヒストグラムを、前方および側方散乱パラメータゲーティングに基づいて生細胞に対してプロットした。図３１Ａは、マウス抗ｃ−ｍｙｃタグ抗体を用いて検出された、Ｒａｊｉ細胞との抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の結合を示し、この実験では、ｃ−ｍｙｃタグを欠く抗ｈＶＬＡ２抗体を陰性対照として用いる。図３１Ｂは、マウス抗Ｈｉｓタグ抗体を用いて検出された、Ｒａｊｉ細胞との抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の結合を示し、この実験でも抗ｈＶＬＡ２抗体を陰性対照として用いるが、これは、それがポリヒスチジンタグ配列を有するにもかかわらずｈＣＤ１９特異性を欠くからである。図３１Ｃは、マウス抗ｃ−ｍｙｃタグ抗体を用いて検出された、ＨＴ１０８０細胞との抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の結合を示し、この実験では、抗ｈＣＤ１９抗体を陰性対照として用いるが、これは、それがｃ−ｍｙｃタグ配列を有するにもかかわらずｈＶＬＡ２特異性を欠くからである。図３１Ｄは、マウス抗Ｈｉｓタグ抗体を用いて検出された、ＨＴ１０８０細胞との抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の結合を示し、この実験では、ポリヒスチジンタグ配列を欠く抗ｈＣＤ１９抗体を陰性対照として用いる。これらの４つの独立した結合実験を一緒にすると、標的細胞と一方のＦＡＢ腕で会合する場合に、抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体は、反対のＦｃサブユニット（他方のＦＡＢ腕を有する、図３１Ｂおよび３１Ｃを参照されたい）上にあるタグを介して常に検出可能であることが示される。このことは、抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２が、２つの別個のＦＡＢ断片（それぞれがヘテロ二量体Ｆｃ領域により一緒にされるユニークな特異性を有する）に正しく集合した４つの異なる鎖からなる完全二重特異性抗体であるというアイデンティティを証明する。
【０６９６】
抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体の熱安定性を、熱量測定（ＤＳＣ）を用いて評価した（方法について実施例２を参照されたい；タンパク質は、ＰＢＳ中に０．５７ｍｇ／ｍｌの濃度で用いた）。図３２は、７０．９、７６．６および８２．８℃にて３つの鋭い転移を示す抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体のサーモグラムを示し、これらのいずれも７０℃未満でないので、安定な免疫グロブリン分子であることを意味する（実施例２）。熱吸収ピークの後に鋭い減少は記録されず、このことは、熱アンフォールディングの後に沈降または凝集体形成が発生しなかったことを示すことに注目することが
重要である（Ｌｉｕ  Ｈら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ、１０６（２）：１４４〜５３ページ（２００６））。実施例２からのＢＴアルファＨｉｓ＿ＢＴベータヘテロ二量体Ｆｃ断片は７０℃にて単一の鋭い融解転移を示したので、両方のＦＡＢ腕についての融解転移は、正しく集合した安定なＦＡＢ断片について予測されるような７５℃を超える中間点を有すると結論付けることができる（Ｇａｒｂｅｒ  ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ、３５５（３）：７５１〜７ページ（２００７））。結論として、この熱アンフォールディング研究は、抗ｈＣＤ１９＿抗ｈＶＬＡ２二重特異性抗体が安定であることを示す。
【０６９７】
本実施例は、組み合わせた場合に、ヒトＴ細胞受容体定常ドメインに由来する遺伝子操作タンパク質−タンパク質界面を有する定常ドメインの２以上の新規なヘテロ二量体対を、安定でヒトにおける治療用の使用のために適切である新規な二重特異性抗体を創出するための基礎単位として用いることができることも示す。
【実施例１０】
【０６９８】
混合ガンマ免疫グロブリンアイソタイプバックグラウンドを有する免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体バリアントの構築。
本実施例は、２つのヒトＣＨ３ドメイン、すなわちＴ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインアルファおよびベータから（実施例１に記載するように）注意深く選択したＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有するＩＧＨＧ１に由来する１つのドメインとＩＧＨＧ３に由来する第２ドメインとが、ヘテロ二量体Ｆｃ分子へと集合することを証明する。
【０６９９】
変異は、実施例１に記載するような、ヒトＬＣ１３  ＴＣＲ分子（ＰＤＢコード１ＫＧＣ；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＦＣら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、８０（２）：３１９〜２４ページ（１９７７））の結晶構造とヒトＩＧＨＧ１からのＦｃ断片（ＰＤＢコード１Ｈ３Ｙ）の結晶構造との重畳の分析から導いた。ヒトＩＧＨＧ１およびＩＧＨＧ３  ＣＨ３ドメインは、３８４位、３９２位、３９７位、４２２位、４３５位および４３６位（ＥＵ番号付け）だけが異なるので、これらのタンパク質−タンパク質界面は、３９２位の残基以外は同一であり、実施例１に記載する３Ｄで同等の位置に基づく混合アイソタイプヘテロ二量体免疫グロブリンの設計が可能である。
【０７００】
本実施例に記載するヘテロ二量体免疫グロブリンは、２つのＦｃ鎖バリアント、すなわちＴＣＲ定常ドメインアルファタンパク質−タンパク質界面から注意深く選択したＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有するヒトＩＧＨＧ３起源からの１つの鎖（ＢＴアルファＩＧＨＧ３鎖という）（配列番号７３）およびＴＣＲ定常ドメインベータタンパク質−タンパク質界面から注意深く選択したＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有するヒトＩＧＨＧ１起源からの１つの鎖（ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖という）（配列番号７４）の集合からなる。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度の差を生じさせるために、後者のＦｃ鎖バリアントを可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬと略称する）と融合して、ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖（配列番号７５）と称する遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得た。本明細書で記載するＩＧＨＧ３起源からの遺伝子操作ＣＨ３ドメインは、ＣＨ３−ＢＴアルファＩＧＨＧ３ドメインと略称し、配列番号７６を有する。ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖は、実施例２に記載するＣＨ３−ＢＴベータＦ４０５Ａドメイン（配列番号１４）を包含する。上記の２つの鎖の集合からなるヘテロ二量体免疫グロブリンは、ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体と略称する。
【０７０１】
ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖をコードするｃＤＮＡを実施例２に記載するようにして構築した。ＢＴアルファＩＧＨＧ３鎖をコードするｃＤＮＡは、ＣＨ３−ＢＴアルファＩＧＨＧ３ドメインコード配列（配列番号７７）を包含し、これは、ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ
（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により元々合成された。ヒトＩＧＨＧ１ヒンジおよびＣＨ２ドメインコード配列を、その後、この合成断片の上流に標準的ＰＣＲアセンブリ法を用いて付加した。ＰＣＲ生成物をコードする各鎖を消化し、精製し、以前に言及した（実施例１）改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションした。２つの得られた配列確認済み組換えベクターを、次いで、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、実施例１に記載するようにして同時トランスフェクトした。タンパク質の生成および精製も実施例１に従った。ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体について、１０ｍｇ／ｌの生成収率が得られた。
【０７０２】
プロテインＡ精製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を評価するために、異なる種の相対的比率を、実施例１に記載する手順に従う非還元ＳＤＳポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により定量した。プロテインＡ精製の後に、ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体は、主に生成された種であり、その後にＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａホモ二量体とＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖（半分の分子）が続く（図３３；レーン１）。還元条件下では、ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体は、ＢＴアルファＩＧＨＧ３とＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａ鎖（半分の分子）とについて予測される２つの分子量バンドに分解する（図３３；レーン２）。図３４は、ＢＴアルファＩＧＨＧ３＿ＶＬ−ＢＴベータＦ４０５Ａヘテロ二量体が、プロテインＡ精製物の少なくとも９１％であることを示す。
【実施例１１】
【０７０３】
混合免疫グロブリンクラスバックグラウンドを有する免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体バリアントの構築。
本実施例は、ＩＧＨＡ１またはＩＧＨＡ２からのＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面から注意深く選択したＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有するＩＧＨＧ１に由来する２つのヒトＦｃ鎖が、ヘテロ二量体Ｆｃ分子へと集合することを証明し、そのことにより、ホモ二量体免疫グロブリンドメインの２つの異なる対からのタンパク質−タンパク質界面を組み合わせて、新規なヘテロ二量体タンパク質−タンパク質界面対（これは、ホモ二量体免疫グロブリンドメインの自然に存在する対とグラフトさせると、ドメインヘテロ二量体形成を導く）を創出できることを証明する。本明細書に記載する方法の範囲はＩＧＨＡ１に限定されず、全ての型のホモ二量体免疫グロブリンドメインを用いる広範囲の用途を有することに注意されたい。ＩＧＨＡ１およびＩＧＨＡ２は同一のＣＨ３ドメインアミノ酸配列を有し、本明細書で用いるＩＧＨＡ１  ＣＨ３アミノ酸配列（配列番号９６）は、ＩＧＨＡ２  ＣＨ３アミノ酸配列（配列番号９７）と完全に交換可能である。
【０７０４】
変異は、ヒトＩＧＨＧ１およびＩＧＨＡ１  Ｆｃ断片（それぞれＫｒａｐｐ  Ｓら、Ｊ
Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、３２５（５）：９７９〜８９ページ（２００３）およびＨｅｒｒ  ＡＢら、Ｎａｔｕｒｅ、４２３（６９４０）：６１４〜２０ページ（２００３））の結晶構造のＣＨ３ドメインタンパク質−タンパク質界面相互作用の分析から導いた。ＩＧＨＧ１およびＩＧＨＡ１  Ｆｃの３Ｄ構造は、タンパク質データバンクから取得し（それぞれＰＤＢコード１Ｈ３Ｙおよび１ＯＷ０；ｗｗｗ．ｐｄｂ．ｏｒｇ；Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＦＣら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、８０（２）：３１９〜２４ページ（１９７７））、実施例１に記載するようにしてさらに分析した。
【０７０５】
本実施例に記載するヘテロ二量体免疫グロブリンは、２つのＦｃ鎖バリアント、すなわち自然に存在するヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３定常ドメイン対のタンパク質−タンパク質界面中で見出される３Ｄで同等の位置の選択された群に由来する変異をＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中に有するその１つのヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖（「Ｆｃ  ＩＧＨ
ＡＧ」鎖と称する）と、自然に存在するヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３定常ドメイン対のタンパク質−タンパク質界面中で見出される３Ｄで同等の位置の選択された群に由来する変異をＣＨ３ドメインのタンパク質−タンパク質界面中に有するその第２遺伝子操作ヒトＩＧＨＧ１  Ｆｃ鎖（「Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ」鎖と称する）との集合からなり、ここで、自然に存在するヒトＩＧＨＡ１  ＣＨ３定常ドメイン対のタンパク質−タンパク質界面中で見出される３Ｄで同等の位置の選択された群は、各遺伝子操作ＣＨ３ドメインにおいて異なる。より具体的に、「Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ」鎖は、以下の置換：Ｑ３４７Ｅ、Ｙ３４９Ｈ、Ｋ３７０Ｒ、Ｖ３９７Ｒ、Ｄ３９９Ｅ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｔ（ＥＵ番号付け）を有するＣＨ３ドメイン（ＣＨ３  ＩＧＨＡＧドメインと略称する；配列番号７８）を有する、ヒトＩＧＨＧ１からの免疫グロブリンＦｃ鎖からなり、逆に、「Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ」は、以下の置換：Ｓ３６４Ｔ、Ｋ３９２Ｌ、Ｔ３９４Ｗ、Ｋ４０９ＩおよびＴ４１１Ｒ（ＥＵ番号付け）を有するＣＨ３ドメイン（ＣＨ３  ＩＧＨＧＡドメインと略称する；配列番号７９）を有する、ヒトＩＧＨＧ１からの免疫グロブリンＦｃ鎖からなる。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度の差を生じさせるために、一方のＦｃ鎖バリアントを可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬと略称する）と融合した。異なるＰＣＲステップにより、２つの最終の鎖、すなわちＦｃ  ＩＧＨＡＧ鎖（配列番号８０）およびＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ鎖（配列番号８１）が得られた。これら２つの鎖の集合から得られる本明細書で記載するヘテロ二量体免疫グロブリン構築物は、Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体と称する。
【０７０６】
ＣＨ３  ＩＧＨＧＡおよびＣＨ３  ＩＧＨＡＧドメインについてのｃＤＮＡコード配列（それぞれ配列番号８２および８３）を、ＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成し、ＰＣＲアセンブリ法によりそれらのそれぞれの遺伝子操作鎖を創出するために用いた。ＰＣＲ生成物をコードする各鎖を消化し、精製し、以前に言及した（実施例１）改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションした。２つの得られた配列確認済み組換えベクターを、次いで、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、実施例１に記載するようにして同時トランスフェクトした。タンパク質生成および精製も実施例１に従った。Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体について、１２ｍｇ／ｌの生成収率が得られた。
【０７０７】
プロテインＡ精製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を評価するために、異なる種の相対的比率を、実施例１に記載する手順に従う非還元ＳＤＳポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により定量した。プロテインＡ精製の後に、Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体は、主に生成された種であり、その後にＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡホモ二量体と単鎖（Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ鎖およびＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ鎖、すなわち半分の分子）が続く（図３５、レーン１）。還元条件下では、Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体は、Ｆｃ  ＩＧＨＡＧとＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡ鎖とについて予測される２つの分子量バンドに分解する（図３５、レーン２）。図３６は、Ｆｃ  ＩＧＨＡＧ＿ＶＬ−Ｆｃ  ＩＧＨＧＡヘテロ二量体が、プロテインＡ精製物の少なくとも５４％であることを示す。
【実施例１２】
【０７０８】
異なる免疫グロブリンクラスバックグラウンドを有する免疫グロブリンＦｃヘテロ二量体バリアントの構築
１２．１キメラＩＧＨＧ１−ＩＧＨＭ免疫グロブリンクラスバックグラウンドを有するヘテロ二量体バリアントの構築
本実施例は、それぞれヒトＩＧＨＧ１ヒンジ、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ２ドメインおよび遺伝子操作ヒトＩＧＨＭ  ＣＨ４ドメインからなる２つの鎖（ここで、１つの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインアルファのタンパク質−タンパク質界面の３Ｄで同等の
位置から注意深く選択したＩＧＨＭ  ＣＨ４ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有し、第２鎖は、ＴＣＲ定常ドメインベータのタンパク質−タンパク質界面の３Ｄで同等の位置から注意深く選択したＩＧＨＭ  ＣＨ４ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有する）が、ヘテロ二量体免疫グロブリンへと集合することを証明し、３Ｄで同等の位置は、実施例１に記載するものと同一である。
【０７０９】
具体的に、本実施例に記載するヘテロ二量体免疫グロブリンは、２つのＦｃ鎖バリアント、すなわち遺伝子操作ＩＧＨＭ  ＣＨ４ドメイン（そのタンパク質−タンパク質界面は、自然に存在するヒトＴＣＲ定常ドメインアルファのタンパク質−タンパク質界面中で見出される３Ｄで同等の位置の選択された群で置換される）を含む１つの遺伝子操作鎖（「ＢＴアルファＩＧＨＭ−４」鎖と称する）および遺伝子操作ＩＧＨＭ  ＣＨ４ドメイン（そのタンパク質−タンパク質界面は、自然に存在するヒトＴＣＲ定常ドメインベータのタンパク質−タンパク質界面中で見出される３Ｄで同等の位置の選択された群で置換される）を含む第２遺伝子操作鎖（「ＢＴベータＩＧＨＭ−４」鎖と称する）の集合からなる。より具体的に、ＢＴアルファＩＧＨＭ−４鎖は、以下の置換：Ｔ２０Ｋ、Ｔ２２Ｖ、Ｖ７９Ｙ、Ｆ８５．１Ｓ、Ｈ８６Ｖ、Ｉ８８ＷおよびＴ９０Ｎ（ＩＭＧＴ番号付け）を有するヒトＩＧＨＭからのＣＨ４ドメイン（ＩＧＨＭ  ＣＨ４アルファドメインと略称する；配列番号８４）を包含し、逆に、ＢＴベータＩＧＨＭ−４鎖は、以下の置換：Ｄ３Ｅ、Ｙ５Ａ、Ｌ７Ｆ、Ｔ２２Ｖ、Ｓ８１Ｄ、Ｍ８４Ｌ、Ｆ８５．１Ａ、Ｈ８６Ｓ、Ｉ８８ＲおよびＴ９０Ｒ（ＩＭＧＴ番号付け）を有するヒトＩＧＨＭからのＣＨ４ドメイン（ＩＧＨＭ  ＣＨ４ベータドメインと略称する；配列番号８５）を包含する。
【０７１０】
ＩＧＨＭ  ＣＨ４アルファドメインおよびＩＧＨＭ  ＣＨ４ベータドメインについてのｃＤＮＡコード配列（それぞれ配列番号８６および８７）をＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成し、それらのそれぞれの遺伝子操作鎖をＰＣＲアセンブリ法により創出するために用いた。ポリヒスチジンコード配列をＰＣＲアンチセンスオリゴヌクレオチドに含めることにより、短い一連の６ヒスチジン残基をＢＴアルファＩＧＨＭ−４鎖のＣ末端に付加した（Ｈｉｓと略称する）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度の差を生じさせるために、一方のＦｃ鎖バリアントを可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬと略称する）と融合した。異なるＰＣＲステップにより、２つの最終の鎖、すなわちＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ鎖（配列番号８８）およびＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４鎖（配列番号８９）が得られた（Ａと表示する図３７およびＢと表示する図３７）。これらの２つの鎖の集合から得られる本明細書で記載するヘテロ二量体免疫グロブリン構築物は、ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴ  ＩＧＨＭ−４ベータヘテロ二量体と称する。
【０７１１】
ＰＣＲ生成物をコードする各鎖を消化し、精製し、以前に言及した改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションした。２つの得られた配列確認済み組換えベクターを、その後、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、実施例１に記載するようにして同時トランスフェクトした。タンパク質発現も実施例１に従った。精製は、プロテインＬアフィニティアガロース（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）を用いて行った。細胞培養上清およびプロテインＬ精製調製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を、非還元ＳＤＳポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により評価した（実施例１に記載する手順）。
【０７１２】
プロテインＬ精製の後に、ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴ  ＩＧＨＭ−４ベータヘテロ二量体が、いずれの混入物もなしで単離され（図３８、レーン３、Ａと表示する）、これは、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥバンドの走査デンシトメトリー分析により測定して、プロテインＬ溶出物の１００％である（図３９）。還元条件下では、ＢＴアルファＩＧＨＭ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４ヘテロ二量体バンドは、ＢＴ
アルファＩＧＨＭ−４  ＨｉｓおよびＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＭ−４鎖（半分の分子）について予測される２つの分子量バンドに分解する（図３８、レーン４）。
【０７１３】
１２．２キメラＩＧＨＧ１−ＩＧＨＥ免疫グロブリンクラスバックグラウンドを有するヘテロ二量体の構築
本実施例は、それぞれヒトＩＧＨＧ１ヒンジ、ヒトＩＧＨＧ１  ＣＨ２ドメインおよび遺伝子操作ヒトＩＧＨＥ  ＣＨ４ドメインからなる２つの鎖（ここで、１つの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）定常ドメインアルファのタンパク質−タンパク質界面の３Ｄで同等の位置から注意深く選択したＩＧＨＥ  ＣＨ４ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有し、第２鎖は、ＴＣＲ定常ドメインベータのタンパク質−タンパク質界面の３Ｄで同等の位置から注意深く選択したＩＧＨＥ  ＣＨ４ドメインのタンパク質−タンパク質界面中の変異を有する）が、ヘテロ二量体免疫グロブリンへと集合することを証明し、３Ｄで同等の位置は、実施例１に記載するものと同一である。
【０７１４】
具体的に、本実施例に記載するヘテロ二量体免疫グロブリンは、２つのＦｃ鎖バリアント、すなわち遺伝子操作ＩＧＨＥ  ＣＨ４ドメイン（そのタンパク質−タンパク質界面は、自然に存在するヒトＴＣＲ定常ドメインアルファのタンパク質−タンパク質界面中で見出される３Ｄで同等の位置の選択された群で置換される）を含む１つの遺伝子操作鎖（「ＢＴアルファＩＧＨＥ−４」鎖と称する）および遺伝子操作ＩＧＨＥ  ＣＨ４ドメイン（そのタンパク質−タンパク質界面は、自然に存在するヒトＴＣＲ定常ドメインベータのタンパク質−タンパク質界面中で見出される３Ｄで同等の位置の選択された群で置換される）を含む第２遺伝子操作鎖（「ＢＴベータＩＧＨＥ−４」鎖と称する）の集合からなる。より具体的に、ＢＴアルファＩＧＨＥ−４鎖は、以下の置換：Ｔ２０Ｋ、Ａ２２Ｖ、Ｑ２６Ｔ、Ｓ７９Ｙ、Ｆ８５．１Ｓ、Ｆ８６Ｖ、Ｒ８８ＷおよびＥ９０Ｎ（ＩＭＧＴ番号付け）を有するヒトＩＧＨＥからのＣＨ４ドメイン（ＩＧＨＥ  ＣＨ４アルファドメインと略称する；配列番号９０）を包含し、逆に、ＢＴベータＩＧＨＧＥ４鎖は、以下の置換：Ｙ５Ａ、Ａ２２Ｖ、Ｑ２６Ｔ、Ｔ８１Ｄ、Ｒ８４Ｌ、Ｔ８４．２Ｅ、Ｆ８５．１Ａ、Ｆ８６ＳおよびＥ９０Ｒ（ＩＭＧＴ番号付け）を有するヒトＩＧＨＥからのＣＨ４ドメイン（ＩＧＨＥ  ＣＨ４ベータドメインと略称する；配列番号９１）を包含する。
【０７１５】
実施例１２．１と同様に、ＩＧＨＥ  ＣＨ４アルファおよびＩＧＨＥ  ＣＨ４ベータドメインについてのｃＤＮＡコード配列（それぞれ配列番号９２および９３）をＧＥＮＥＡＲＴ  ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）により合成し、それらのそれぞれの遺伝子操作鎖をＰＣＲアセンブリ法により創出するために用いた。ポリヒスチジンコード配列をＰＣＲアンチセンスオリゴヌクレオチドに含めることにより、短い一連の６ヒスチジン残基をＢＴアルファＩＧＨＥ−４鎖のＣ末端に付加した（Ｈｉｓと略称する）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度の差を生じさせるために、一方のＦｃ鎖バリアントを可変軽鎖カッパドメイン抗体（ＶＬと略称する）と融合した。異なるＰＣＲステップにより、２つの最終の鎖、すなわちＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ鎖（配列番号９４）およびＶＬ−ＢＴ  ＩＧＨＥ−４ベータ鎖（配列番号９５）が得られた（Ｃと表示する図３７およびＤと表示する図３７）。これらの２つの鎖の集合から得られる本明細書で記載するヘテロ二量体免疫グロブリン構築物は、ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴ  ＩＧＨＥ−４ベータヘテロ二量体と称する。
【０７１６】
ＰＣＲ生成物をコードする各鎖を消化し、精製し、以前に言及した改変ｐＲＥＰ４ベクター中に独立してライゲーションした。２つの得られた配列確認済み組換えベクターを、その後、ＨＥＫ２９３−ＥＢＮＡ細胞に、実施例１に記載するようにして同時トランスフェクトした。タンパク質生成および精製も実施例１に従った。プロテインＡ精製調製物中のホモ二量体に対するヘテロ二量体の割合を、非還元ＳＤＳポリアクリルアミド（４〜１２％）ゲルバンドの走査デンシトメトリー分析により評価した（実施例１に記載する手順
）。
【０７１７】
プロテインＡ精製の後に、ヘテロ二量体が単離され（図４０、レーン１、Ａと表示する）、ヘテロ二量体形成率は１０％であり（図４１、ピーク２）、ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓホモ二量体（図４０、レーン１、Ｂと表示する）、ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４鎖（半分の分子）（図４０、レーン１、Ｃと表示する）およびＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ鎖（半分の分子）（図４０、レーン１、Ｄと表示する）に対応するバンドが観察される。還元条件下では、ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  Ｈｉｓ＿ＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４ヘテロ二量体は、ＢＴアルファＩＧＨＥ−４  ＨｉｓとＶＬ−ＢＴベータＩＧＨＥ−４鎖（半分の分子）について予測される２つの分子量バンドに分解する（図４０、レーン２）。
【図１】
2020040980.tif 000016
【図２】
2020040980.tif 000017
【図３】
2020040980.tif 000018
【図４Ａ】
2020040980.tif 000019
【図４Ｂ】
2020040980.tif 000020
【図５】
2020040980.tif 000021
【図６】
2020040980.tif 000022
【図７Ａ】
2020040980.tif 000023
【図７Ｂ】
2020040980.tif 000024
【図７Ｃ】
2020040980.tif 000025
【図８】
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【図９】
2020040980.tif 000027
【図１０】
2020040980.tif 000028
【図１１Ａ】
2020040980.tif 000029
【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2020040980.tif 000033
【図１５】
2020040980.tif 000034
【図１６】
2020040980.tif 000035
【図１７】
2020040980.tif 000036
【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
2020040980.tif 000053
【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
2020040980.tif 000059
【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
2020040980.tif 000062
【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
2020040980.tif 000067
【図４１】
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【図４２】
2020040980.tif 000069
【図４３】
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【図４４】
2020040980.tif 000071
【図４５】
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【配列表】
2020040980000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月20日(2019.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作親ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、第１のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基で置換されている第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖と、
（ｂ）タンパク質−タンパク質界面を有する遺伝子操作親ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖であって、前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、第２のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基で置換されている第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と
を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作親ドメインと第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作親ドメインとが、同一でなく、
第１のドナードメインと第２のドナードメインとが、自然に存在するＴＣＲ定常ドメインヘテロ二量体または自然に存在するＴＣＲ定常ドメインホモ二量体を形成し、
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＣＨ３ドメインであり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位のアミノ酸残基を含み、
第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位のアミノ酸残基を含み、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメイン中で８５．１位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基と相互作用し、
各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項２】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、自然に存在するＣＨ３ドメインである、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、タンパク質−タンパク質界面を有する第３遺伝子操作ドメインを含み、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、第３のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、第４のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基で置換され、
第３のドナードメインと第４のドナードメインとが、自然に存在するＴＣＲ定常ドメインヘテロ二量体または自然に存在するＴＣＲ定常ドメインホモ二量体を形成し、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる、
請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項４】
第１および第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、Ｆｃ領域を含む、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項５】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／もしくは第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインならびに／または第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２つのアミノ酸残基が置換されている、請求項３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項６】
ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または全長抗体が、二重特異性である、請求項３に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項７】
二重特異性ヘテロ二量体免疫グロブリンもしくはそのヘテロ二量体断片または二重特異性全長抗体が、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９およびＶＬＡ−２からなる群から選択される抗原と結合する、請求項６に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項８】
少なくとも１つの追加ポリペプチドが、第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖と融合する、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項９】
前記追加ポリペプチドが、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ドメイン抗体、薬理活性ペプチドもしくはタンパク質、受容体細胞外ドメイン、ＣＤＲグラフトポリペプチドおよび治療的遺伝子操作タンパク質足場からなる群から選択される、請求項８に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１０】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の置換されたアミノ酸残基が、隣接しない、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１１】
第１および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも２つのアミノ酸残基が置換されている、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１２】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメインであるか、または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ３  ＣＨ３ドメインであり、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインが、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインである、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１３】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのアミノ酸配列が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのアミノ酸配列と比較して、１または複数のアミノ酸残基の挿入を含有しない、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１４】
３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されている、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１５】
３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基が、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されている、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１６】
（ａ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｂ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８５位および／または８６位にて置換されたアミノ酸残基が、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｃおよび８５．１Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、かつ／または８６Ｓおよび８６Ｖならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｃ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｙ、８８Ｋおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２０Ｋ、２０Ｗ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｒ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８５．１Ｗ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖ、８６Ｗ、８６Ｙおよび８６Ｆからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｄ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で８８位にて置換されたアミノ酸残基が、８８Ｑ、８８Ｌ、８８Ｖ、８８Ｒ、８８Ｅ、８８Ｉ、８８Ｔ、８８Ｙおよび８８Ｗからなる群から選択され、かつ／または第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｖ、２０Ｔ、２０Ａ、２０Ｎ、２０Ｑ、２０Ｅ、２０Ｓ、２０Ｋ、２２Ａ、２２Ｇ、２２Ｔ、２２Ｌ、２２Ｉ、２２Ｖ、２６Ｑ、２６Ｔ、２６Ｋ、２６Ｖ、２６Ｓ、２６Ｎ、２６Ｅ、８５．１Ｔ、８５．１Ｍ、８５．１Ａ、８５．１Ｓ、８５．１Ｒ、８５．１Ｈ、８５．１Ｋ、８５．１Ｆ、８５．１Ｃ、８５．１Ｎ、８６Ｓ、８６Ｉ、８６Ｔ、８６Ｈ、８６Ｑ、８６Ｖおよび８６Ｆからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｅ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８位および２０位のアミノ酸残基を含み、ならびに３位、５位、７位、２２位、２６位、２７位、７９位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基を含んでもよく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｆ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および／または８６位および２６位のアミノ酸残基を含み、ならびにさらなる位置のアミノ酸残基を含んでもよく、アミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｇ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および８６位のアミノ酸残基を含むかまたは８５．１Ｃおよびその保存的アミノ酸置換ならびに８６Ｓおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｅ、５Ａ、７Ｆ、２０Ｔ、２２Ｖ、２６Ｔ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４．２Ｅ、８８Ｒおよび９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｈ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８５．１位および８６位のアミノ酸残基を含むかまたは８５．１Ｎおよびその保存的アミノ酸置換ならびに８６Ｖおよびその保存的アミノ酸置換を含み、第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、７Ｍ、２０Ｎ、２２Ａ、２７Ｅ、７９Ｆ、８１Ａ、８４．２Ｓ、８５．１Ｎ、８６Ｖ、８８Ｌおよび９０Ｋならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、あるいは
（ｉ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたアミノ酸残基が、８８Ｉおよびその保存的アミノ酸置換であり、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換された場合によるさらなるアミノ酸残基が、８１Ｗおよびその保存的アミノ酸置換であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１４または１５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１７】
（ａ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｅ、３Ｋ、５Ａ、５Ｔ、７Ｆ、７Ｍ、２０Ｋ、２０Ｎ、２０Ｔ、２２Ａ、２２Ｌ、２２Ｖ、２６Ｅ、２６Ｔ、２７Ｅ、２７Ｋ、７９Ｆ、７９Ｙ、８１Ａ、８１Ｇ、８１Ｄ、８４Ｌ、８４Ｍ、８４．２Ｅ、８４．２Ｓ、８５．１Ａ、８５．１Ｃ、８５．１Ｍ、８５．１Ｎ、８５．１Ｓ、８６Ｆ、８６Ｓ、８６Ｖ、９０Ｋ、９０Ｎ、および９０Ｒならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｂ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０位、２２位、２６位、７９位、８５．１位、８６位および９０位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｃ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、２０Ｋ、２２Ｖ、２６Ｔ、７９Ｙ、８５．１Ｓ、８６Ｖおよび９０Ｎならびにその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｄ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、８４位であるかまたは８４Ｌおよびその保存的アミノ酸置換であり、ならびに３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸であってもよく、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｅ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３位、５位、７位、２０位、２２位、２６位、８１位、８４位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｆ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３位、５位、２０位、２２位、２６位、２７位、８１位、８４位、８５．１位および８６位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｇ）第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、３Ｋ、５Ｔ、２０Ｔ、２２Ｌ、２６Ｅ、２７Ｋ、８１Ｇ、８４Ｍ、８５．１Ｍ、８６Ｆおよびその保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、
（ｈ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、７位、２０位、２２位、２７位、７９位、８１位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置であり、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、あるいは
（ｉ）第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面中で置換されたさらなるアミノ酸残基が、７９位であるかまたは７９Ｆおよびその保存的アミノ酸置換であり、ならびに７位、２０位、２２位、２７位、８１位、８４．２位、８５．１位、８６位、８８位および９０位からなる群から選択される位置のさらなるアミノ酸残基であってもよい、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１４または１５に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１８】
アミノ酸残基置換８５．１Ｃが、アミノ酸残基置換８５．１Ａまたは８５．１Ｓで置き換えられ、各群メンバーのアミノ酸の位置が、ＩＭＧＴ（登録商標）番号付けに従って示される、請求項１７に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片。
【請求項１９】
（ａ）第１親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基を、第１のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの残基にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、
（ｂ）第２親免疫グロブリン鎖の親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基を、第２のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からの残基にて置換して、遺伝子操作ドメインを含む第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖を得るステップと、
（ｃ）前記遺伝子操作免疫グロブリン鎖をコードする核酸を含む宿主細胞を培養するステップであって、培養が、核酸が発現され、遺伝子操作免疫グロブリン鎖が生成されるようなものであるステップと、
（ｄ）ヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を宿主細胞培養物から回収するステップと
を含む、請求項１に記載のヘテロ二量体免疫グロブリンまたはそのヘテロ二量体断片を生成する方法。
【請求項２０】
ａ）第１のドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、第２のドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）である、
ｂ）第１のドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインアルファ（配列番号１）であり、第２のドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインベータ（配列番号２）であり、配列番号２中のアミノ酸７５位のシステイン（Ｃ）が、アラニン（Ａ）またはセリン（Ｓ）で置換されている、あるいは、
ｃ）第１のドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインガンマ（配列番号３３）であり、第２のドナードメインが、ＴＣＲ定常ドメインデルタ（配列番号３２）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖が、タンパク質−タンパク質界面を有するさらなる遺伝子操作ドメインを含み、前記第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または前記第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記さらなる遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、第３のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とヘテロ二量体形成によりまたはホモ二量体形成により相互作用し、
前記第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の前記遺伝子操作ドメインの親ドメインのタンパク質−タンパク質界面の少なくとも１つのアミノ酸残基が、第４のドナードメインのタンパク質−タンパク質界面からのアミノ酸残基で置換され、
第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖および／または第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖のさらなる遺伝子操作ドメインならびに第３遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面が、第１遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインおよび第２遺伝子操作免疫グロブリン鎖の遺伝子操作ドメインのタンパク質−タンパク質界面とは異なる、
請求項１９に記載の方法。