(57)【要約】【課題】シクロスポリンＡ２型の新規な結晶形を提供すること。【解決手段】従来知られている、非晶質形、液晶形、正方晶形（１型）および斜方晶形（３型）ではないシクロスポリンＡの新規の結晶形（２型）を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロスポリンＡ２型と、
ビヒクルと
を含む製剤。
【請求項２】
前記ビヒクルが、少なくとも１つの界面活性剤および少なくとも１つの安定剤を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
シクロスポリンが、約０．０１〜約１０％の濃度である、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
前記ビヒクルが、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート、ポリエチレングリコール６６０ヒドロキシステアレート、ポリオキシエチレン（４０）ステアレートＭｙｒｊ５２、プルロニックＦ６８、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、およびグリコール酸ナトリウムからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、４、５、または６つの界面活性剤を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ビヒクルが、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリエチレングリコール６６０ヒドロキシステアレート、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレン（４０）ステアレートＭｙｒｊ５２、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のプルロニックＦ６８、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、および約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）のグリコール酸ナトリウムからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、４、５、または６つの界面活性剤を含む、請求項３に記載の製剤。
【請求項６】
前記ビヒクルが、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびカルボキシメチルセルロースからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、または４つの安定剤を含む、請求項４に記載の製剤。
【請求項７】
前記ビヒクルが、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のヒドロキシプロピルセルロース、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のヒドロキシプロピルメチルセルロース、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のヒドロキシエチルセルロース、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリビニルピロリドン、および約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のカルボキシメチルセルロースからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、または４つの安定剤を含む、請求項５に記載の製剤。
【請求項８】
前記ビヒクルが、さらに、グリセリン、マンニトール、Ｐｅｍｕｌｅｎ  ＴＲ−２、クエン酸ナトリウム二水和物、塩化カリウム、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム十水和物、および水から選択される、１、２、３、４、５、６、７、８、または９つの成分を含む、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
前記ビヒクルが、さらに、約１．０〜約２．２％の濃度のグリセリン、約０．５％の濃度のマンニトール、約０．０１〜約０．１％の濃度のＰｅｍｕｌｅｎ  ＴＲ−２、約０．４％の濃度のクエン酸ナトリウム二水和物、約０．１４％の濃度の塩化カリウム、約０．２５％の濃度のホウ酸、約０．４１％の濃度のホウ酸ナトリウム十水和物、および水から選択される、１、２、３、４、５、６、７、８、または９つの成分を含む、請求項７に記載の製剤。
【請求項１０】
シクロスポリンの製剤を調製する方法であって、
シクロスポリンＡ２型をビヒクルと混合して懸濁剤を形成する工程、および
前記懸濁剤を砕粉する工程
を含む、方法。
【請求項１１】
前記懸濁剤を、約１０分〜約１２０分間砕粉する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記懸濁剤を、約６０分間砕粉する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
シクロスポリンＡ２型の粒子と、
ビヒクルと
を含む、製剤であって、
前記粒子の平均粒径（ｄ９０）が、約１０μｍ未満である、製剤。
【請求項１４】
前記粒子の平均粒径が、約１μｍ未満である、請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
ドライアイ、眼瞼炎、マイボーム腺疾患、角膜知覚障害、アレルギー性結膜炎、アトピー性角結膜炎、春季カタル、および翼状片から選択される状態を治療する方法であって、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の製剤を、このような状態を有する患者に投与する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１１年１１月１５日出願の米国仮特許出願第６１／５５９，８６６号の優先権を主張し、この出願の内容全体は、参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、ナノテクノロジーおよび薬剤配合技術に関する。
【０００３】
シクロスポリンＡは、ドライアイ疾患を治療するために使用される薬剤であるＲｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）の活性成分である。シクロスポリンＡは、水に溶けにくく、現在は、油中に薬剤を溶解させてエマルジョンを形成するか、または薬剤を高レベルの界面活性剤および／または溶解剤と混合して水性溶液を形成することのどちらかにより配合される。本発明者らは、１マイクロメートル以下（この数字を比較すると、ヒトの髪の平均厚が約１００μメートルである）の平均寸法を有するシクロスポリンＡの粒子を含むナノ懸濁剤を調製するための、新規結晶多形のシクロスポリンＡを使用するシクロスポリンＡの製剤を発見した。
【０００４】
シクロスポリンＡのナノ懸濁剤は、眼に局所的に送達される際、以下の、
・懸濁剤と比較して、溶解に有利なより大きな表面積によるより高い生物学的利用率と、・生物学的利用率のさらなる改善につながる、より小さな粒子による眼でのより長い保持期間と、
・異物感または粒子の刺激が起こるより低い可能性により、涙が低減し、眼からの製剤の排出が低減することと、
・製剤の界面活性剤および溶解剤のレベルが低くなることによる、薬剤の耐性および生物学的利用率の改善と
を含む１つ以上の利点を有し得る。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】砕粉前の懸濁剤と比較した、高圧ホモジナイザーを使用して調製したシクロスポリンＡ２型ナノ懸濁剤の粒度分布を示す。
【図２】異なる界面活性剤および安定剤を使用して調製したシクロスポリンＡ２型ナノ懸濁剤の粒度分布を比較する。
【図３】Ｎａ  ＣＭＣを含むビヒクル中に希釈した製剤の粒度分布を示す。
【図４】マイクロフルイダイザーを使用した砕粉の後に、シクロスポリン２型を使用したナノ懸濁剤と比較した、シクロスポリンＡ３型を使用したナノ懸濁剤の平均粒径を示す。２型は、ナノ懸濁剤（粒径＜１μｍ）を形成するのに対して、３型はナノ懸濁剤を形成しない。
【図５】図５〜１３は、メスのＮＺＷラビットに本発明による４つの異なる製剤（表２に要約される）およびＲｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）を単一局所用量で投与（合計２匹のラビット、１つの眼あたり１つの製剤を投与）した際の結果を示す。図５は、角膜中の濃度を示す。
【図６】薬物動態データをまとめる。
【図７】眼球結膜中の濃度を示す。
【図８】眼瞼結膜中の濃度を示す。
【図９】眼球結膜および眼瞼結膜の薬物動態データをまとめる。
【図１０】眼球結膜中の濃度を示す。
【図１１】眼瞼結膜中の濃度を示す。
【図１２】涙腺中の濃度を示す。
【図１３】涙腺の薬物動態データをまとめる。
【図１４】新規の結晶形（本明細書に２型として示される）、正方晶形（本明細書に１型として示される）、および斜方晶形（本明細書に３型として示される）のＣｓＡの特徴的な粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンを表す。
【図１５】ＣｓＡ結晶２型のＸＲＰＤ回折を表す。
【図１６】ＣｓＡ２型の水吸着／脱着プロファイルを表す。
【図１７】１％のＰＳ８０を有する０．０４％製剤から収集したＣｓＡ２型のＭＤＳＣ解析を表す。
【図１８】シクロスポリンＡの形態のシミュレーションされたＸＲＰＤパターンを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
シクロスポリンＡ
シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は、以下の化学構造：
【化１】
2020040968.tif 000002
を有する環状ペプチドである。
【０００７】
当該物質の化学名は、シクロ［［（Ｅ）−（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−４−メチル−２−（メチルアミノ）−６−オクテノイル］−Ｌ−２−アミノブチリル−Ｎ−メチルグリシル−Ｎ−メチル−Ｌロイシル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニル−Ｄ−アラニル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎ−メチル−Ｌ−ロイシル−Ｎメチル−Ｌ−バリル］である。また、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、シクロスポリンＡ、シクロスポリン（ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、およびシクロスポリンＡ（ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ  Ａ）としても知られている。これは、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）（アラガン、カリフォルニア州アーバイン）の活性成分であり、Ｒｅｓｔａｓｉｓは、０．０５％（ｗ／ｖ）のシクロスポリンを含むエマルジョンである。Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）は、乾性角結膜炎に関連する眼の炎症により涙の産生が抑制されていると考えられる患者の涙の産生を増加させるため、米国で承認されている。
【０００８】
シクロスポリンＡ２型
シクロスポリンＡは、非晶質形、液晶形、正方晶形（１型）および斜方晶形（３型）で存在することが知られている。新規の結晶形である、シクロスポリンＡ２型は近年発見された。
【０００９】
ＣｓＡ２型のＸＲＰＤパターンは、正方晶形および斜方晶形と顕著に異なる（図１４）。ＣｕＫα照射、λ＝１．５４Å、３０ｋＶ／１５ｍＡをＸ線源としＸ線解析計によりスキャンした際、ＣｓＡ２型の主要な結晶ピークは：７．５、８．８、１０．２、１１．３、１２．７、１３．８、１４．５、１５．６および１７．５（２θ）（図１５において、それぞれ約１１．８、１０．０、８．７、７．８、７．０、６．４、６．１、５．６および５．１Åでの結晶格子中の面間隔ｄ）に現れる。これらの主要なピークは、バックグラウンドの５倍以上の強度を有するピークであると共に、斜方晶形または正方晶形と比べ２型に特有であることが示される。
【００１０】
一実施形態において、ＣｓＡの新規の結晶形（２型）は、シクロスポリンＡの不定比水和物である。別の実施形態において、この結晶２型は、式：
【化２】
2020040968.tif 000003
により表され、式中、
Ｘは、水分子の数であり、０〜３の値をとる。一実施形態において、上記の式中のＸは２である。
【００１１】
２型は、水性懸濁剤中で、ＣｓＡの速度論的に安定な形として存在する。２型を含む懸濁剤は、保存する際に他の知られている多形体または仮晶体に変換しない。１型および非晶形は、水の存在下で２型へと変換することが見いだされている。
【００１２】
ＣｓＡ２型の水和物形の単結晶構造が決定されており、この結晶構造パラメータを表２に挙げる。これらの結果から、２型は他の知られているシクロスポリンＡの結晶形と比較して独特であることが示される。
【表１】
2020040968.tif 000004
【００１３】
ＣｓＡ２型の非対称単位は、１つのシクロスポリンＡ分子と２つの水分子とを含む。水に水素結合できる任意の小分子が、空間充填剤の役割を果たすことにより、斜方晶二水和物から歪められた単斜晶系二水和物にわたる潜在的な構造範囲を与える可能性がある。この単結晶構造から計算されたＸＲＰＤパターンを図８に示すが、このパターンは図２に示される実験のパターンと一致した。これらの一致したパターンは、２型がシクロスポリンＡの独特かつ純粋な結晶形であることをさらに裏付ける。
【００１４】
理論に拘束されるものではないが、ＫＦ滴定および蒸気収脱着解析（ＶＳＡ）と組み合わせた熱重量解析は、ＣｓＡ２型が、ＣｓＡの不定比水和物であることを示唆している。シクロスポリン２型の蒸気収着解析は、図１６に示されるように、新規の結晶形内の水含量が、相対湿度により可逆的に変動することを示す。正方晶と同様に、新規のＣｓＡ形は、モジュレイテッド示差走査熱量測定（ＭＤＳＣ）解析により示されるように、融点より前の１２４．４℃で、液晶または非晶形への相転移を起こす（図１７）。
【００１５】
シクロスポリンＡ２型は、０．０５％の非晶質シクロスポリン（ｗ／ｖ）を１％のポリソルベート８０中に懸濁し、６５℃までこの溶液を加熱し、その温度で２４時間保存し、それから真空濾過により沈殿を回収することにより得られてもよい。その後、さらなる量を調製するために、シクロスポリンＡ２型を種晶として使用して、シクロスポリンＡ２型を得ることができる。この方法では、約３０ｇのシクロスポリンＡを１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む９００ｍｌの水に懸濁し、この溶液を６５℃まで加熱し、それからそれを０．２ｇのシクロスポリンＡ２型と共に５２℃で仕込む。その後、この溶液を、６１℃〜６５℃で約２２時間撹拌し、その結果として得られる沈殿を回収する。
【００１６】
ＣｓＡ２型に関するさらなる詳細は、米国特許出願第１３／４８０，７１０号に記載されており、その全内容は、参照により本明細書に援用される。
【００１７】
シクロスポリンＡ２型の懸濁剤
本発明の組成物は、眼科的に許容可能なシクロスポリンＡ２型の懸濁剤である。「眼科的に許容可能な」とは、本発明では、ヒトなどのほ乳類の眼に投与される際に非刺激性となるように、懸濁剤を製剤化することを意味する。一実施形態において、本組成物は懸濁剤であり、すなわち、これらの懸濁剤は、約１μｍ超の平均粒径を有し液体ビヒクル中に分散されるシクロスポリンＡ２型を含む。別の実施形態において、この組成物は、ナノ懸濁剤であり、すなわち、これらの懸濁剤は、約１μｍ未満の平均粒径を有し液体ビヒクル中に分散されるシクロスポリンＡ２型を含む。
【００１８】
一実施形態において、本懸濁剤は、約０．００１％〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度のシクロスポリンＡ２型を含む。一実施形態において、この懸濁剤は、約０．００１％〜約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．００１〜約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００１％〜約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．００１〜約０．０２％（ｗ／ｖ）、または約０．００１％〜約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度でシクロスポリンＡ２型を含む。別の実施形態において、この懸濁剤は、約０．０１％〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約０．０２％（ｗ／ｖ）、または約０．０１％〜約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度のシクロスポリンＡ２型を含む。別の実施形態において、この懸濁剤は、約０．０１％〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．１％〜約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．０１％〜約１％（ｗ／ｖ）、または約１％〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度のシクロスポリンＡ２型を含む。
【００１９】
たとえば、本懸濁剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％（ｗ／ｖ）、約０．００３％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）、約０．００６％（ｗ／ｖ）、約０．００７％（ｗ／ｖ）、約０．００８％（ｗ／ｖ）、約０．００９％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０１５％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０２５％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０３５％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０４５％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０５５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０６５％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０７５％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０８５％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．０９５％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．１５％（ｗ／ｖ）、約０．２（ｗ／ｖ）、約０．２５％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．３５％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．４５％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．５５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．６５％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．７５％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．８５％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約０．９５％（ｗ／ｖ）、または約１．０％（ｗ／ｖ）のシクロスポリンＡ２型を含んでもよい。
【００２０】
一実施形態において、本懸濁剤は界面活性剤を含む。一実施形態において、この界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ポリソルベート８０）、ポリエチレングリコール６６０ヒドロキシステアレート（Ｓｏｌｕｔｏｌ）、ポリオキシエチレン（４０）ステアレートＭｙｒｊ５２（ＰＯＥ−４０−Ｓｔｅａｒａｔｅ）、プルロニックＦ６８（Ｐｏｌａｘａｍｅｒ１８８）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ポリソルベート２０）、およびグリコール酸ナトリウム（ＮａＧＣ）から選択される。本ビヒクルは、これら全ての界面活性剤、または上記界面活性剤の内の１、２、３、４、または５つを含んでもよい。
【００２１】
約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を使用することができる。一実施形態において、本懸濁剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、または約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含む。たとえば、この懸濁剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％（ｗ／ｖ）、約０．００３％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）、約０．００６％（ｗ／ｖ）、約０．００７％（ｗ／ｖ）、約０．００８％（ｗ／ｖ）、約０．００９％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、または約５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含む。
【００２２】
２種類以上の界面活性剤を使用する際、本懸濁剤は、この界面活性剤それぞれを同一量または異なる量で含んでもよい。
【００２３】
界面活性剤に加えて、本懸濁剤は安定剤を含んでもよい。一実施形態において、この安定剤は、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、Ｐｅｍｕｌｅｎ（登録商標）、およびＰｅｍｕｌｅｎ（登録商標）ＴＲ−２から選択される。Ｐｅｍｕｌｅｎ（登録商標）は、Ｌｕｂｒｉｚｏｌ  Ｃｏｒｐにより生産される高分子量の、アクリル酸およびＣ１０−Ｃ３０アクリル酸アルキルの架橋コポリマーの商標名である。Ｐｅｍｕｌｅｎ（登録商標）ＴＲ−２は、他のＰｅｍｕｌｅｎ（登録商標）ポリマーよりも高いレベルの疎水基を含むＣ１０−Ｃ３０アクリル酸アルキルクロスポリマーである。ビヒクルは、これらすべての安定剤を含んでもよく、または全く含まなくてもよく、あるいは、このうちの１、２、３、４、または５つを含んでもよい。
【００２４】
約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の安定剤を使用することができる。一実施形態において、本懸濁剤は、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、または約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）の安定剤を含む。たとえば、本懸濁剤は、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、または約１０％の安定剤を含んでもよい。
【００２５】
２種類以上の界面活性剤を使用する際、本懸濁剤は、この界面活性剤それぞれを同一量または異なる量で含んでもよい。
【００２６】
界面活性剤に加えて、本ビヒクルはまた、グリセリン、マンニトール、クエン酸ナトリウム二水和物、塩化カリウム、ホウ酸、およびホウ酸ナトリウム十水和物から選択される浸透圧調整剤を含んでもよい。この浸透圧調整剤は、望ましい浸透圧を得る必要がある際に添加され、ビヒクルは、これら全ての浸透圧調整剤を含んでもよく、または浸透圧調整剤を全く含まなくてもよく、またはこれら浸透圧剤の内、１、２、３、４、または５つを含んでもよい。一実施形態において、浸透圧調整剤は、約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の量で存在する。２つ以上の浸透圧調整剤を使用する際、本懸濁剤は、この浸透圧調整剤それぞれを同一量または異なる量で含んでもよい。
【００２７】
本懸濁剤は、通常、本懸濁剤を眼に投与するために適した状態にするために望ましいｐＨ、浸透圧、および他の特徴を提供するのに十分な量の水を含む。
【００２８】
シクロスポリンＡ２型の懸濁剤を調製する方法
本発明の製剤は、上述のように、懸濁剤を形成するために、適切な界面活性剤、安定剤、および浸透圧調整剤と、シクロスポリンＡ２型を混合することにより調製してもよい。微細な粒子状のシクロスポリンＡが望ましい場合には、この懸濁剤を、マサチューセッツ州ニュートンのＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｉｎｔ’ｌ  Ｃｏｒｐ．から商業的に入手可能なもののような高圧ホモジナイザーを使用して砕粉する。シクロスポリンＡ２型の固有で驚くべき特性は、望ましい場合に砕粉することが可能であり、平均粒径（ｄ９０）１μｍ未満の懸濁剤を得られることである。このようなナノ懸濁剤中のシクロスポリンＡは、溶解に有利なより広い表面積のため、他のシクロスポリンＡ（マクロ）懸濁剤と比較してより高い生物学的利用率を有する。粒子がより小さいことによりシクロスポリンＡが眼により長く保持されるため、生物学的利用率がさらに高くなる。粒子のより小さいナノ懸濁剤により、本製剤を眼に滴下する際に対象が知覚する異物感または他の刺激を生じにくい製剤がもたらされる。また、粒子がより小さいため、これらは界面活性剤および安定剤とより容易に結びつき、これによりそれらをより低い濃度で使用することが可能となる。
【００２９】
シクロスポリンＡ２型の懸濁剤を砕粉した後、この生成物は最終生成物を得るために希釈される。
【００３０】
治療方法
本発明の組成物は、シクロスポリンＡ（Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）など）での局所治療に適することが知られているいずれかの眼の状態を治療するために本明細書に記載される濃度で使用してもよい。たとえば、本発明の組成物を使用して、ドライアイを患う患者を治療し、眼瞼炎およびマイボーム腺疾患を治療し、眼の屈折矯正手術のために損なわれた角膜知覚を回復させ、アレルギー性結膜炎ならびにアトピー性角結膜炎および春季カタルを治療し、かつ翼状片（ｐｔｙｒｅｇｉａ）、結膜および角膜の炎症、角結膜炎、移植片対宿主病、移植後の緑内障、角膜移植、真菌性角膜炎、タイゲソン点状表層角膜炎、ブドウ膜炎、およびテオドール（Ｔｈｅｏｄｏｒｅ）上輪部角結膜炎や、その他の状態を治療してもよい。
【００３１】
国際ドライアイ研究会（ＤＥＷＳ）は、ドライアイを「涙液膜の浸透圧の増加および眼の表面の炎症を伴う、不快感、視覚障害、および眼の表面に対する潜在的な損傷を招く涙液膜の不安定性の症状を起こす涙および眼の表面の多因子性疾患」と定義する。この定義は、涙の不足または過度の涙の蒸発により引き起こされる乾性角結膜炎などの状態を含む。
【００３２】
眼瞼炎は、皮膚および皮膚に関連する構造（髪および脂腺）、粘膜皮膚移行部、ならびにマイボーム腺を含む、前部および後部の瞼の境界の炎症を産生する慢性障害である。また、進行期では、結膜、涙液膜、および角膜表面に影響を与え、ドライアイに関連することもある。眼瞼炎は、一般的に前部眼瞼炎または後部眼瞼炎に分類され、前部眼瞼炎は瞼の睫毛固定領域に影響を与え、後部眼瞼炎は瞼板の腺開口部に影響を与える。
【００３３】
マイボーム腺疾患は、原発性マイボーム腺炎、二次性マイボーム腺炎、およびマイボーム脂漏症といった３つの形の内の１つとして最もよく起こり得る。マイボーム脂漏症は、炎症の存在しない状態での過度のマイボーム腺の分泌（分泌過剰マイボーム腺疾患）により特徴付けられる。対照的に、原発性マイボーム腺炎は、停滞し濃縮したマイボーム腺分泌（妨害型分泌過剰マイボーム腺疾患）により区別される。二次性マイボーム腺炎は局所的な炎症応答を示し、マイボーム腺が、前部の眼瞼縁の眼瞼炎から斑状の形で二次的に炎症を起こす。
【００３４】
角膜知覚障害は、多くはレーザー屈折矯正角膜切除術、レーザー照射による角膜上皮下の切除（ＬＡＳＥＫ）、ＥＰＩ−ＬＡＳＥＫ、注文に応じた上皮の非接触式切除、または角膜の神経を断つ他の手順などの屈折矯正手術後に起こる。また、角膜知覚障害は、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、およびＶＺＶウイルスなどのウイルス感染後に起こり得る。角膜知覚障害を有する患者は、涙の産生および蒸発は正常であるにも関わらず、しばしば眼の乾燥感を訴え、このことは、このような患者の「乾き」は、外科手術またはウイルス感染後の炎症により角膜の神経が切断される際に起こる角膜の神経障害の急性的な形態であることを示唆する。
【００３５】
アレルギー性結膜炎は、１つ以上のアレルゲンに対する過敏症から生じる結膜の炎症であり、急性、断続性、または慢性であってもよい。それは季節的に、すなわち、１年のうちの一定期間起こるか、または常時、すなわち通年で慢性的に起こる。季節性および通年性のアレルギー性結膜炎の症状は、結膜の炎症に加えて、流涙、涙（ｔｅａｒｉｎｇ）、結膜の血管拡張、痒み、乳頭増殖、結膜浮腫、眼瞼浮腫、および眼脂を含む。この眼脂は、就寝後、眼の上方にかさぶたを形成してもよい。
【００３６】
アトピー性角結膜炎は、しばしば視力障害を引き起こす、慢性的、重篤な形態のアレルギー性結膜炎である。症状は、痒み、炎症（ｂｕｒｎｉｎｇ）、疼痛、発赤、異物感、光知覚、およびかすみ目を含む。眼脂、特に、夜の睡眠から目覚める際の眼脂が症状として現れることが多い。この眼脂は、粘質であり、粘着性かつ粘液性であってもよい。下部の結膜は、しばしば上部の結膜よりも顕著に影響を受ける。この結膜は、蒼白、浮腫状、および無特徴から乳頭増殖、上皮下線維症、結膜円蓋短縮化（ｆｏｒｍｉｘ  ｆｏｒｅｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ）、睫毛乱生、眼瞼内反および睫毛欠損を含む、進行性疾患の特徴を有するまでの範囲であってよい。一部の患者では、この疾患は、点状上皮性角膜症（ｐｕｎｃｔａｔｅ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｅｒｏｓｉｏｎｓ）、角膜血管新生、および視覚を損ない得る他の特性の角膜症へと進行する。概して、結膜の細胞増殖、上皮偽管状形成、および上皮中で脱顆粒する好酸球およびマスト細胞数の増加がある。ＣＤ２５＋Ｔリンパ球、マクロファージ、および樹状細胞（ＨＬＡ−ＤＲ．ｓｕｐ．+，  ＨＬＡ−ＣＤ１＋）が、角膜固有質で有意に増加する。
【００３７】
アトピー性角結膜炎のように、春季カタルは、重篤な形のアレルギー性結膜炎であるが、下部結膜よりも上部結膜により顕著に影響を与える傾向がある。春季カタルは２つの形態で起こる。眼瞼形態では、四角状の、固く、平坦で密に固まった乳頭が存在し、眼球（角膜縁）形態では、角膜周囲の結膜が、肥大し、灰白色となる。両方の形態で、粘液分泌をしばしば伴う。角膜上皮の損失が、疼痛および羞明を伴って起こることがあり、同様に、中心の角膜プラーク形成およびトランタス点を伴うこともある。
実施例
【００３８】
本発明は、以下の実施例によりさらに詳細に示される。
【００３９】
実施例１
本発明者らは、以下の組成物を調製した。
【表２】
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表１の製剤を、以下の工程により調製した。
１．濃縮型シクロスポリンＡナノ懸濁剤の調製
ａ．シクロスポリンＡ懸濁剤を適切なビヒクルと混合して懸濁剤を形成する。この懸濁剤中のシクロスポリンＡの濃度は、１〜１０％の範囲である。
ｂ．シクロスポリンＡ懸濁剤を高圧ホモジナイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（登録商標）、マサチューセッツ州ニュートンのＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓにより製造）またはボールミルを使用して粉砕して、ｄ９０＜１１Ｊｍとなるようなナノ懸濁剤を得る。
ｃ．ナノ懸濁濃縮物を調製するために使用されるビヒクルを表１に列挙する。
【００４０】
２．最終生成物の調製
ａ．ステップ１において調製し、濃縮ナノ懸濁剤を、点眼投与に適したビヒクル中に希釈し、要求される有効成分用量のシクロスポリンＡを備えた最終生成物を得る。希釈に適したビヒクルは、望ましい濃度のＣｓＡを備えた最終製剤を得るために緩衝剤、安定剤、ゲル化剤および／または希釈物を含んでもよい。
ｂ．このナノ懸濁濃縮物を希釈後調製したナノ懸濁製剤の組成物を表２に列挙する。
【００４１】
異なる製剤の粒度分布を図１、２、および３に示す。
【００４２】
図１は、砕粉前の懸濁剤と比較した、高圧ホモジナイザーを使用して調製したシクロスポリンＡ２型ナノ懸濁剤の粒度分布を示す。
【００４３】
図２は、異なる界面活性剤および安定剤を使用して調製したシクロスポリンＡ２型ナノ懸濁剤の粒度分布を比較する。
【００４４】
図３は、Ｎａ  ＣＭＣを含むビヒクル（表２、ビヒクルＡ）で希釈した製剤の粒度分布を示す。ナノ懸濁濃縮物と比較して、２週間にわたり、希釈した製剤において粒径の変化は見られない。
【００４５】
シクロスポリンＡ３型の平均粒径を図４に示す。シクロスポリンＡ２型は、ナノ懸濁剤（粒径＜１μｍ）を形成するのに対し、３型はこれを形成しない。
【００４６】
これらの実験は、２型が一貫して、他の結晶形のＣｓＡよりも小さな粒径をもつナノ懸濁剤を生成したことを示す。より粒径が小さい２型ナノ懸濁剤は、他の型よりも有益である。他にも理由はあるが、溶解のためのより大きな表面積および眼におけるより長い保持期間により、物理的安定性が改善されると同時に、生物学的利用率がより高くなると予想される。
【００４７】
実施例２
本発明者らは、以下の表２に列挙したシクロスポリンＡナノ懸濁剤を調製した。
【表３】
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【００４８】
本発明者らは、メスのＮＺＷラビットに上記の製剤を単一局所用量で投与した（合計２匹のラビット、１つの眼に１つの製剤）。この結果を図５〜１３にまとめる。これらにより、製剤Ｂ１は、５倍低い用量のシクロスポリンＡ（０．０１％対０．０５％）を送達するが、０．０５％のＲｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）と比較可能な角膜への曝露を維持し、かつ、眼球結膜および眼瞼結膜への送達が改善することを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月20日(2019.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロスポリンＡ２型と、
ビヒクルと
を含み、シクロスポリンＡの他の結晶形を実質的に含まない、
ドライアイ、眼瞼炎、マイボーム腺疾患、角膜知覚障害、アレルギー性結膜炎、アトピー性角結膜炎、春季カタル、および翼状片から選択される状態を処置するための医薬組成物。
【請求項２】
前記ビヒクルが、少なくとも１つの界面活性剤および少なくとも１つの安定剤を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
シクロスポリンＡ２型が、約０．０１〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ビヒクルが、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート、ポリエチレングリコール６６０ヒドロキシステアレート、ポリオキシエチレン（４０）ステアレートポロキサマー１８８、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、およびグリコール酸ナトリウムからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、４、５、または６つの界面活性剤を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ビヒクルが、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリエチレングリコール６６０ヒドロキシステアレート、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレン（４０）ステアレート、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポロキサマー１８８、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、および約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）のグリコール酸ナトリウムからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、４、５、または６つの界面活性剤を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ビヒクルが、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびカルボキシメチルセルロースからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、または４つの安定剤を含む、請求項４または５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ビヒクルが、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のヒドロキシプロピルセルロース、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のヒドロキシプロピルメチルセルロース、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のヒドロキシエチルセルロース、約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のポリビニルピロリドン、および約０．１〜約５％（ｗ／ｖ）の濃度のカルボキシメチルセルロースからなる群からそれぞれ選択される、１、２、３、または４つの安定剤を含む、請求項４または５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ビヒクルが、さらに、グリセリン、マンニトール、アクリル酸及びＣ１０−Ｃ３０アクリル酸アルキルの架橋コポリマー、クエン酸ナトリウム二水和物、塩化カリウム、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム十水和物、および水から選択される、１、２、３、４、５、６、７、８、または９つの成分を含む、請求項６または７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ビヒクルが、さらに、約１．０〜約２．２％（ｗ／ｖ）の濃度のグリセリン、約０．５％（ｗ／ｖ）の濃度のマンニトール、約０．０１〜約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のアクリル酸及びＣ１０−Ｃ３０アクリル酸アルキルの架橋コポリマー、約０．４％（ｗ／ｖ）の濃度のクエン酸ナトリウム二水和物、約０．１４％（ｗ／ｖ）の濃度の塩化カリウム、約０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のホウ酸、約０．４１％（ｗ／ｖ）の濃度のホウ酸ナトリウム十水和物、および水から選択される、１、２、３、４、５、６、７、８、または９つの成分を含む、請求項６または７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
状態がドライアイである、請求項１〜９のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１１】
シクロスポリンＡ２型の粒子と、
ビヒクルと
を含み、シクロスポリンＡの他の結晶形を実質的に含まない、
ドライアイ、眼瞼炎、マイボーム腺疾患、角膜知覚障害、アレルギー性結膜炎、アトピー性角結膜炎、春季カタル、および翼状片から選択される状態を治療するための医薬組成物であって、
前記粒子の平均粒径（ｄ９０）が、約１０μｍ未満である、医薬組成物。
【請求項１２】
前記粒子の平均粒径が、約１μｍ未満である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
状態がドライアイである、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2020040968000001.pdf