(57)【要約】【課題】免疫系におけるグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の中心的役割に着目し、ＩＬＣ２の活性を抑制することができる薬剤を開発することを課題とする。【解決手段】ジスルフィラムが、ＩＬＣ２活性及び／又は増殖作用を抑制することを見出し、ジスルフィラムを含むＩＬＣ２の活性抑制剤を提供する。【選択図】図１
2020040924.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジスルフィラムを含むグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制剤。
【請求項２】
前記活性抑制剤が、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の増殖を抑制する、請求項１に記載の活性抑制剤。
【請求項３】
前記活性抑制剤が、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）によるサイトカイン産生を抑制する、請求項１に記載の活性抑制剤。
【請求項４】
前記活性抑制剤が、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）による好酸球活性化を抑制する、請求項１に記載の活性抑制剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制剤を含む、好酸球性炎症抑制剤。
【請求項６】
ジスルフィラムを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患の治療又は予防用組成物。
【請求項７】
グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患が、喘息、喘息類似疾患、アレルギー性鼻炎、好酸球性副鼻腔炎、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、肝硬変、胆道閉鎖症、ウイルス性肝炎、寄生虫感染、インフルエンザウイルス感染、好酸球性肺炎、好酸球性胸水、間質性肺炎、全身性エリテマトーデス（SLE）、食物アレルギー、ピロリ菌関連胃疾患、動脈硬化、膀胱癌再発、下部消化管GVHD、好酸球性炎症を伴う慢性咳嗽からからなる群から選ばれる、請求項６に記載の治療又は予防用組成物。
【請求項８】
前記グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患が、Ｔｈ２型喘息又は非Ｔｈ２型喘息、咳喘息、アトピー咳嗽、非アトピー咳嗽、非喘息性好酸球性気管支炎（ＮＡＥＢ）である、請求項７に記載の治療又は予防用組成物。
【請求項９】
ジスルフィラムを含む、炎症性疾患の治療又は予防用組成物。
【請求項１０】
前記炎症性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、咽喉頭炎、膀胱炎、肝炎、肺炎、膵炎、腸炎、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、血管炎症候群、混合性結合組織病、成人スティル病、クローン病、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、急速進行性糸球体腎炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病（免疫性血小板減少症）、バセドウ病、天疱瘡、及び類天疱瘡からなる群から選ばれる、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジスルフィラムを含むグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制剤、好酸球性炎症抑制剤、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患又は炎症性疾患の治療又は予防用の医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジスルフィラムは、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）阻害活性を有し、肝臓におけるエタノール代謝を抑制する。その結果、ジスルフィラムを服用した後に、アルコールを摂取すると、二日酔いや悪酔いの原因となるアセトアルデヒドを体内に蓄積させる。ジスルフィラムのＡＬＤＨ阻害活性を利用し、ジスルフィラムは、アルコール依存症の患者に対して使用する嫌酒薬として開発されている。また、癌患者において、ＡＬＤＨ活性を阻害することで、標的薬剤の有効性を増大させることが見いだされている（特許文献１：特表２０１６−５０９０４５）。
【０００３】
上記のＡＬＤＨ阻害活性とは別に、ジスルフィラムが細胞からの種々の細胞傷害薬をポンピングする原形質膜状のＰ糖蛋白質ポンプ（ＡＴＰ駆動性の１７０ｋｄの流出ポンプ）の成熟を防止することも報告されている（非特許文献１：T. W. Loo et al., J.Natl.CancerInst.,92、898〜902、2000）。さらには、ジスルフィラムには癌細胞や癌幹細胞においてアポトーシスを誘導して増殖を抑制するとの報告もあり、抗癌剤として使用されうる（特許文献２：特開２０１３−１００２６８、特許文献３：ＷＯ２０１６／１１１３０７、非特許文献２：Skrott Z et al., Nature 2017, 552 (7684): 194-199）。また、ジスルフィラムには抗菌効果を発揮することも報告されている（非特許文献３：van Rijn SP, Antimicrob Agents Chemother, 2017 Aug 24; 61 (9））。さらに、ジスルフィラムが、結核菌に対する抗菌活性を有することも報告されている（非特許文献４：Horita Y, et al., Antimicrob Agents Chemother. 2012 Aug;56(8):4140-5；非特許文献５：Dalecki AG, et al., Antimicrob Agents Chemother. 2015 Aug;59(8):4835-44.）。
【０００４】
近年の研究から、生体の粘膜組織において、抗原受容体を持たないリンパ球が数多く存在することが明らかとなり、粘膜バリア機能の維持や、感染初期応答などの粘膜免疫に関与する自然リンパ球（Innate Lymphoid Cell：ＩＬＣ）と名付けられた。このＩＬＣと呼ばれる細胞群には、これまで発見されてきたＬｔｉ細胞、非Ｔ非Ｂ細胞、ＮＨ細胞、Ｎｕｏｃｙｔｅなどが包含され、サイトカインの発現パターンに基づき機能的な観点からグループ１、グループ２、及びグループ３に分類されている。グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）は、ＩＬ−５及びＩＬ−１３を産生することで、ヘルパー２型Ｔ細胞（Ｔｈ２）と共同して好酸球を誘導する。Ｔ細胞欠損マウスにおいてもＩＬ−５やＩＬ−１３が産生され、それにより肺における好酸球増加がみられた一方で、ＩＬＣ２欠損マウスではアレルギー応答が観察されないことが報告されている（非特許文献6：Immunity (2012) 37(3) 463-74）。また、ＩＬＣ２誘導性のＩＬ−１３が、樹状細胞の遊走を促してＴＨ２細胞分化を誘導することから、ＩＬＣ２が気管支喘息慢性期における「２型免疫応答」の引き金となる細胞群であると報告されている（非特許文献7：Immunity (2014) 40(3) 425-35)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２０１６−５０９０４５号公報
【特許文献２】特開２０１３−１００２６８号公報
【特許文献３】国際公開第２０１６／１１１３０７号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】T. W. Loo et al., J.Natl.CancerInst., (2000) 92 (11), p.898-902
【非特許文献２】Skrott Z et al., Nature 2017, 552 (7684): 194-199）
【非特許文献３】Long TE, Antimicrob Agents Chemother, 2017 Aug 24; 61 (9
【非特許文献４】Horita Y, et al., Antimicrob Agents Chemother. 2012 Aug;56(8):4140-5
【非特許文献５】；非特許文献５：Dalecki AG, et al., Antimicrob Agents Chemother. 2015 Aug;59(8):4835-44
【非特許文献６】Halim TY, et al., Immunity, (2012) 37(3) 463-74
【非特許文献７】Halim TY, et al., Immunity, (2014) 40(3) 425-35
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
免疫系におけるグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の中心的役割に着目し、ＩＬＣ２の活性を抑制することができる薬剤を開発することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題に鑑み、本発明者らは、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性の抑制剤を選別可能なスクリーニング系を確立した。このスクリーニング系に基づいて、候補薬剤のスクリーニングを行ったところ、ＩＬＣ２の活性を抑制できる薬剤として、ジスルフィラムを選択することができた。本発明者らは、ジスルフィラムが、ＩＬＣ２誘導性のｉｎ  ｖｉｖｏ喘息モデルにおいて、好酸球及びＴｈ２の細胞数を抑制すること、さらにはｉｎ  ｖｉｖｏ喘息モデル及びｉｎ  ｖｉｔｒｏの実験系において、ＩＬ−５及びＩＬ−１３の産生量を低下することを見出し、本発明に至った。
【０００９】
したがって、本発明は、以下に関する：
［１］  ジスルフィラムを含むグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制剤。
［２］  前記活性抑制剤が、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の増殖を抑制する、項目１に記載の活性抑制剤。
［３］  前記活性抑制剤が、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）によるサイトカイン産生を抑制する、項目１に記載の活性抑制剤。
［４］  前記活性抑制剤が、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）による好酸球活性化を抑制する、項目１に記載の活性抑制剤。
［５］  項目１〜４に記載のグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制剤を含む、好酸球性炎症抑制剤。
［６］  ジスルフィラムを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患の治療又は予防用組成物。
［７］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患が、喘息、喘息類似疾患、アレルギー性鼻炎、好酸球性副鼻腔炎、アトピー性皮膚炎、好酸球性炎症を伴う咳嗽、接触性皮膚炎、肝硬変、胆道閉鎖症、ウイルス性肝炎、寄生虫感染、インフルエンザウイルス感染、好酸球性肺炎、好酸球性胸水、間質性肺炎、全身性エリテマトーデス（SLE）、食物アレルギー、ピロリ菌関連胃疾患、動脈硬化、膀胱癌再発、下部消化管GVHDからなる群から選ばれる、項目６に記載の治療又は予防用組成物。
［８］  前記グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患が、Ｔｈ２型喘息又は非Ｔｈ２型喘息、咳喘息、アトピー咳嗽、非アトピー咳嗽、非喘息性好酸球性気管支炎（ＮＡＥＢ）である、項目７に記載の治療又は予防用組成物。
［９］  ジスルフィラムを含む、炎症性疾患の治療又は予防用組成物。
［１０］  炎症性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、咽喉頭炎、膀胱炎、肝炎、肺炎、膵炎、腸炎、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、血管炎症候群、混合性結合組織病、成人スティル病、クローン病、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、急速進行性糸球体腎炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病（免疫性血小板減少症）、バセドウ病、天疱瘡、及び類天疱瘡からなる群から選択される、項目９に記載の組成物。
［１１］  ジスルフィラムを適用することを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制方法。
［１２］  ジスルフィラムを適用することを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の増殖抑制方法。
［１３］  ジスルフィラムを適用することを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）によるサイトカイン産生の抑制方法。
［１４］  ジスルフィラムを適用することを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）による好酸球活性化の抑制方法。
［１５］  ジスルフィラムを適用することを含む、好酸球性炎症の抑制方法。
［１６］  ジスルフィラムを投与することを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患の治療又は予防方法。
［１７］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患が、喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球性副鼻腔炎、アトピー性皮膚炎、好酸球性炎症を伴う慢性咳嗽、接触性皮膚炎、肝硬変、胆道閉鎖症、ウイルス性肝炎、寄生虫感染、インフルエンザウイルス感染、好酸球性肺炎、好酸球性胸水、間質性肺炎、全身性エリテマトーデス（SLE）、食物アレルギー、ピロリ菌関連胃疾患、動脈硬化、膀胱癌再発、下部消化管GVHDからなる群から選ばれる、項目１６に記載の治療又は予防方法。
［１８］  前記喘息が、Ｔｈ２型喘息又は非Ｔｈ２型喘息、咳喘息、アトピー咳嗽、非アトピー咳嗽、非喘息性好酸球性気管支炎（ＮＡＥＢ）である、項目１７に記載の治療又は予防方法。
［１９］  ジスルフィラムを含む、炎症性疾患の治療又は予防方法。
［２０］  炎症性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、咽喉頭炎、膀胱炎、肝炎、肺炎、膵炎、腸炎、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、血管炎症候群、混合性結合組織病、成人スティル病、クローン病、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、急速進行性糸球体腎炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病（免疫性血小板減少症）、バセドウ病、天疱瘡、及び類天疱瘡からなる群から選択される、項目１９に記載の方法。
［２１］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制剤の製造のための、ジスルフィラムの使用。
［２２］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の増殖抑制剤の製造のための、ジスルフィラムの使用。
［２３］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）によるサイトカイン産生抑制剤の製造のための、ジスルフィラムの使用。
［２４］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）による好酸球活性化を抑制剤の製造のための、ジスルフィラムの使用。
［２５］  好酸球性炎症の抑制剤の製造のための、ジスルフィラムの使用。
［２６］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患の治療又は予防用の医薬の製造のためのジスルフィラムの使用。
［２７］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患が、喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球性副鼻腔炎、アトピー性皮膚炎、好酸球性炎症を伴う慢性咳嗽、接触性皮膚炎、肝硬変、胆道閉鎖症、ウイルス性肝炎、寄生虫感染、インフルエンザウイルス感染、好酸球性肺炎、好酸球性胸水、間質性肺炎、全身性エリテマトーデス（SLE）、食物アレルギー、ピロリ菌関連胃疾患、動脈硬化、膀胱癌再発、下部消化管GVHDからなる群から選ばれる、項目２４に記載の使用。
［２８］  前記喘息が、Ｔｈ２型喘息又は非Ｔｈ２型喘息、咳喘息、アトピー咳嗽、非アトピー咳嗽、非喘息性好酸球性気管支炎（ＮＡＥＢ）である、項目２６に記載の使用。
［２９］  炎症性疾患の治療又は予防用の医薬の製造のための、ジスルフィラムの使用。
［３０］  炎症性疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、咽喉頭炎、膀胱炎、肝炎、肺炎、膵炎、腸炎、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、血管炎症候群、混合性結合組織病、成人スティル病、クローン病、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、急速進行性糸球体腎炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病（免疫性血小板減少症）、バセドウ病、天疱瘡、及び類天疱瘡からなる群から選択される、項目２９に記載の使用。
［３１］  グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患の治療又は予防において使用するためのジスルフィラム。
［３２］  ＩＬＣ２の活性抑制を介して、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患の治療又は予防において使用するためのジスルフィラム。
【発明の効果】
【００１０】
ジスルフィラムは、以下の：
（１）ＩＬＣ２の増殖及び／又は活性の抑制効果、
（２）サイトカイン産生抑制効果、
（３）Ｔｈ２の低減効果及び／又は活性化の抑制効果、
（４）好酸球の遊走及び／又は活性化の抑制効果、
（５）ＩＬＣ２関連疾患の抑制、改善、治療、及び／又は予防効果、
（６）好酸球性炎症の抑制、改善、治療、及び／又は予防効果、並びに
（７）炎症性疾患の抑制、改善、治療、及び／又は予防効果
のうちの少なくとも１の効果を発揮する。また、ジスルフィラムは嫌酒薬としてすでに上市されていることから、重篤な副作用を誘導する可能性が低い。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、ＯＶＡ喘息モデルマウスにおける気道洗浄液（ＢＡＬ）中の総細胞数（１）、好酸球数（２）、ＩＬＣ２細胞数（３）、及びＴｈ２細胞数（４）について、ジスルフィラム（Disulfiram）の投与による作用を示すグラフである。
【図２】図２は、ＯＶＡ喘息モデルマウスにおける肺組織におけるＩＬＣ２細胞数（１）、及びＴｈ２細胞数（２）について、ジスルフィラム（Disulfiram）の投与による作用を示すグラフである。
【図３】図３は、ＩＬ−３３誘導喘息モデルマウスにおける気道洗浄液（ＢＡＬ）中の総細胞数（１）、好酸球数（２）、ＩＬＣ２細胞数（３）、及びＴｈ２細胞数（４）について、ジスルフィラム（ＤＳＦ）の投与による作用を示すグラフである。
【図４】図４は、ＩＬ−３３誘導喘息モデルマウスにおける肺組織におけるＩＬＣ２細胞数（１）、及びＴｈ２細胞数（２）について、ジスルフィラム（ＤＳＦ）の投与による作用を示すグラフである。
【図５】図５は、ＩＬ−３３誘導喘息モデルマウスにおける気道洗浄液（ＢＡＬ）中のＩＬ−５量（１）及びＩＬ−１３量（２）について、ジスルフィラム（ＤＳＦ）の投与による作用を示すグラフである。
【図６】図６は、ＩＬ−３３誘導喘息モデルマウスにおけるムチンスコアについて、ジスルフィラム（ＤＳＦ）の投与による作用を示すグラフである。
【図７】図７は、インビトロにおける培養マウスＩＬＣ２のＰＩ陰性細胞数に対するジスルフィラムの作用を示す。
【図８】図８は、インビトロにおける培養マウスＩＬＣ２によるＩＬ−５量（１）及びＩＬ−１３量（２）に対するジスルフィラムの作用を示す。
【図９】図９は、ヒト末梢血ＩＬＣ２におけるＩＬ−５量（１）及びＩＬ−１３量（２）に対するジスルフィラムの作用を示す。
【図１０】図１０は、ヒト末梢血由来Ｔｈ２細胞の生存率（１）、並びに産生するＩＬ−５量（２）に対するジスルフィラムの影響を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、ジスルフィラムを含むグループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）の活性抑制剤に関する。
【００１３】
ジスルフィラムは、テトラエチルチウラムジスルフィドという化合物であり、下記の化学式：
【化１】
2020040924.tif 000003
によって表される。ジスルフィラムは、アルコールデヒドロゲナーゼの活性を阻害することで、肝臓におけるエタノール代謝を抑制することから、嫌酒薬としてノックビンやアンタビュースという商品名で市販されている。すでに市販されていることから、重篤な副作用についての知見が十分に蓄積しており、新たな適応拡大のための臨床試験を簡略化しうる。
【００１４】
グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）とは、抗原受容体を持たない自然リンパ球の１種であり、主にＩＬ−５及びＩＬ−１３を産生する自然リンパ球である。ＩＬＣ２は、ＧＡＴＡ３依存的にリンパ球系共通前駆細胞（ＣＬＰ）から分化する。ＩＬＣ２は、Ｔ細胞やＢ細胞で特定されている表面抗原であるＬｉｎｅａｇｅマーカーを有していないことでも特徴づけることができる。Ｌｉｎｅａｇｅマーカーとしては、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣD５、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、Ｂ２２０、ＮＫ１．１、Ｇｒ−１、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＦｃｅＲＩａなどが挙げられ、このうちのいくつかを組み合わせて使用する。その一方で、ＩＬＣ２は、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３などのサイトカインに対する受容体を発現していることが知られており、さらにＳｃａ−１、ｃ−Ｋｉｔ、Ｔｈｙ１、ＩＣＯＳなどのマーカーを発現している。一例として、マウスにおいてはＬｉｎ−ＩＬ−７Ｒａ＋Ｔｈｙ１．２＋ＳＴ２＋やＬｉｎ−Ｔ１／ＳＴ２＋Ｔｈｙ１．２＋ＳＴ２＋の表現型を有する細胞を、ヒトにおいてはＬｉｎ−ＩＬ−７Ｒａ＋ＣＲＴＨ２＋ＣＤ１６１＋の表現型を有する細胞をＩＬＣ２と呼ぶこともできる。ＩＬＣ２はＩＬ−２５やＩＬ−３３、ＴＳＬＰ等のサイトカインによって活性化される。活性化されたＩＬＣ２は、ＩＬ―４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３などのサイトカインを産生する。また、こうしたサイトカインの働きを介し、ＩＬＣ２は、好酸球の誘導や活性化、杯細胞過形成を引き起こす。
【００１５】
ＩＬＣ２の活性は、ＩＬＣ２の増殖能、又はＩＬ−１３及びＩＬ−５の産生能により判定することができ、またＩＬ−１３やＩＬ−５のサイトカインにより引き起こされる好酸球の誘因や、杯細胞過形成によっても判定することができる。ＩＬＣ２の活性抑制剤は、好酸球の活性化を抑制することで、好酸球性炎症疾患の治療又は予防に用いられうる。
【００１６】
本発明の別の態様では、ジスルフィラムを含む、炎症性疾患の治療又は予防用組成物に関する。本発明のさらなる態様では、ジスルフィラムを含む、グループ２自然リンパ球（ＩＬＣ２）関連疾患の治療又は予防用組成物に関する。
【００１７】
本発明の組成物により治療又は予防されうる炎症性疾患の一例として、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、咽喉頭炎、膀胱炎、肝炎、肺炎、膵炎、腸炎、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、血管炎症候群、混合性結合組織病、成人スティル病、クローン病、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、重症筋無力症、ギラン・バレー症候群、急速進行性糸球体腎炎、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病（免疫性血小板減少症）、バセドウ病、天疱瘡、及び類天疱瘡などが挙げられる。
【００１８】
また、本発明において、炎症性疾患の中でも、ＩＬＣ２が関連する疾患が特に好ましい。ＩＬＣ２は、呼吸器、皮膚、血液、消化器、目、鼻などの様々な組織に存在することが報告されており、これらの組織における疾患、特にアレルギー疾患に関わっている。研究の進展に伴い、さらに多くの組織における疾患にも関与しうる。ＩＬＣ２が関与するアレルギーは、自然型アレルギーと呼ばれ、Ｔｈ２細胞が関与する獲得型アレルギーとは区別しうる一方で、ＩＬＣ２が産生するＩＬ−１３及びＩＬ−５は、Ｔｈ２細胞も産生することができ、それにより生じる杯細胞過形成や好酸球の誘因といった最終的な事象の点では区別できないこともある。一例として、ＩＬＣ２関連疾患としては、皮膚、呼吸器及び消化管のアレルギー性炎症が挙げられる。
【００１９】
呼吸器におけるＩＬＣ２関連疾患としては、喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球性副鼻腔炎、好酸球性肺炎（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ症候群、慢性好酸球性肺炎）、運動誘発性気管支収縮、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性気管支炎、慢性気管支炎、肺気腫、鼻茸、特発性肺線維症、アレルギー性気管支炎、肺胞炎、気管支拡張症、好酸球性胸水、間質性肺炎などが挙げられる。皮膚におけるＩＬＣ２関連疾患としては、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、強皮症、乾癬、蕁麻疹、水疱などが挙げられる。その他の組織におけるＩＬＣ２関連疾患として、肝硬変、胆道閉鎖症、ウイルス性肝炎、寄生虫感染、インフルエンザウイルス感染、全身性エリテマトーデス（SLE）、食物アレルギー、ピロリ菌関連胃疾患、動脈硬化、膀胱癌再発、下部消化管ＧＶＨＤなどが含まれうる。ＩＬＣ２関連疾患としては、特に喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球性副鼻腔炎、アトピー性皮膚炎、好酸球性炎症を伴う慢性咳嗽、接触性皮膚炎、肝硬変、胆道閉鎖症、ウイルス性肝炎、寄生虫感染、インフルエンザウイルス感染、好酸球性肺炎、好酸球性胸水、間質性肺炎、全身性エリテマトーデス（SLE）、食物アレルギー、ピロリ菌関連胃疾患、動脈硬化、膀胱癌再発、下部消化管GVHDが挙げられる。
【００２０】
本発明の抑制剤又は組成剤が用いられる疾患として、喘息や喘息類似疾患が挙げられる。喘息は、慢性の気道炎症である。好酸球性の炎症が典型的であるものの、好酸球以外の炎症性細胞が主体の表現型も存在している。本発明の抑制剤又は組成物が有効な喘息としては、Ｔｈ２型喘息又は非Ｔｈ２型喘息が挙げられる。Ｔｈ２型喘息としては、早期発症アレルギー型喘息、アスピリン喘息、後期発症好酸球優位型喘息、アレルギー性気管支肺真菌症（ABPM）が挙げられる。非Ｔｈ２型喘息としては、後期発症非アレルギー型喘息、好中球優位型喘息、肥満関連喘息が挙げられる。ＩＬＣ２との関連性の観点から、本発明の抑制剤又は組成物が有効な喘息として、Ｔｈ２型喘息、特に好酸球優位型喘息が挙げられる。喘息類似疾患として、好酸球性炎症を伴う慢性咳嗽が挙げられる。具体的に、咳喘息、アトピー咳嗽、非喘息性好酸球性気管支炎が知られており、ＩＬＣ２との関連性との観点から、これらの疾患の治療に、本発明の抑制剤又は組成物が有効である。また、喘息の患者のなかには、高用量の吸入副腎皮質ステロイド薬を用いてもコントロールが困難な重症患者が存在する。そのようなステロイド抵抗性の喘息にＩＬＣ２の関与が示唆されている。したがって、本発明の抑制剤又は組成物は、ステロイド抵抗性アレルギー疾患、特にステロイド抵抗性の喘息の治療又は予防に有用である。
【００２１】
好酸球は細胞傷害性を有する顆粒タンパク質を含んでおり、Ｉ型アレルギー反応に関与し、また寄生虫感染に対する防御反応を担っている。好酸球が産生する顆粒タンパク質の沈着が慢性気管支喘息患者の気道組織やアトピー性皮膚炎患者の病変部位に認められる。好酸球性の炎症として、好酸球が関与する慢性気管支喘息、アトピー性皮膚炎、鼻茸、好酸球増多症候群、好酸球性鼻炎、好酸球性筋膜炎、慢性好酸球性白血病／特発性好酸球増加症候群、好酸球性肺炎などのアレルギー性疾患が挙げられる。本発明の抑制剤又は組成物は、ＩＬＣ２の活性抑制を介して、好酸球の作用を抑制することができる。したがって、本発明の抑制剤又は組成物により、上述の好酸球性の炎症に係る疾患が、治療又は予防されうる。
【００２２】
本発明の抑制剤及び/又は組成物は、本発明の技術分野において用いられる任意の構成成分を含んでもよい。そのような構成成分として、追加の有効成分、緩衝剤、賦形剤、希釈剤、安定剤、抗酸化剤、保存剤、香味剤などが含まれてもよい。追加の有効成分としては、抗炎症剤、抗菌剤、免疫抑制剤などが主に挙げられる。
【００２３】
追加の有効成分として併用される抗炎症剤としては、ステロイド、非ステロイド、抗ヒスタミン薬、Ｔｈ２サイトカイン阻害薬、ロイコトリエン拮抗薬、トロンボキサンＡ２阻害剤などが使用されうる。追加の有効成分は、本発明の抑制剤及び/又は組成物と同時に又は経時的に投与することができる。
【００２４】
本明細書で使用する場合、治療又は予防とは、疾患の症状の緩解、緩和、軽減、進行抑制などを意味する。本発明の抑制剤及び／又は組成物は、目的の組織に応じて任意の経路で投与することができる。投与経路としては、例えば、経口投与、又は鼻腔内、口腔内、気道内、直腸内、皮下、経皮、筋肉内、静脈内、若しくは腹腔内などの非経口投与が挙げられる。投与形態としては、例えば、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、坐剤、注射剤、軟膏、又はテープ剤などが挙げられる。
【００２５】
ジスルフィラムの用量は、患者の状態、性別、体重、又は年齢に応じて、また投与形態及び投与経路に応じて任意に選択することができる。経口投与する場合には、一例として、１日当たり１０ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲で投与しうる。十分なＩＬＣ２活性抑制効果を発揮する観点から、５００ｍｇ以上が好ましく、１０００ｍｇ以上がさらに好ましい。副作用を抑制する観点から、５００ｍｇ以下が好ましく、１００ｍｇ以下がさらに好ましい。
【００２６】
本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
【００２７】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
【実施例】
【００２８】
実施例１：ドラッグスクリーニング
８４０種の既存薬剤ライブラリーについて、ＩＬＣ２活性に基づいてスクリーニングを行った。ＩＬＣ２の増殖又はサイトカイン産生に対する抑制効果を有する１２７種類の薬剤を得た。その中で抗がん剤・ステロイド以外の薬剤７３種類について着目した。その中で、抗寄生虫、農薬、抗ウイルス薬以外の６０種類に着目し、ＩＬＣ２の増殖及びサイトカイン産生の両方を抑制した２２種類の薬剤を得た。その中で、ジスルフィラムをＩＬＣ２抑制剤として特に有用な薬剤として得た。
【００２９】
実施例２：ＯＶＡ喘息モデルマウスへのジスルフィラムの投与
ＯＶＡ喘息モデルマウスの作成
卵白アルブミン（ＯＶＡ：１５μｇ）と一緒に水酸化アルミニウム（アラム）を、１日目、９日目、１５日目に雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６週齢）に腹腔内投与することにより、ＯＶＡに対する感作を成立させた。次に、２２日目から２４日目にかけて、４０μｌのＰＢＳに溶解した卵白アルブミン（１０ｎｇ）を鼻腔内投与することで、ＯＶＡ喘息モデルマウスを作成した。
【００３０】
ジスルフィラムの投与
感作マウスに対して、２２日目〜２４日目にかけて毎日、卵白アルブミンの鼻腔投与と同時に、ジスルフィラム（３０ｍｇ／マウス）を胃内投与した。対照として、ジスルフィラムの代わりにオイルを投与した。
【００３１】
フローサイトメトリーによる測定
２８日目にマウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）を取得し、また肺のサンプルを取得した。ＢＡＬについて、血球計算盤を用いて総細胞数及び好酸球数を測定した。好酸球数の測定のために、計数前にDiff-quick染色を行って好酸球を染色した。また、ＢＡＬについてフローサイトメトリー法により分析し、ＩＬＣ２細胞数、Ｔｈ２細胞数をそれぞれ測定した。結果を図１に示す。また、肺のサンプルについて、フローサイトメトリー法により分析を行い、ＩＬＣ２細胞数及びＴｈ２細胞数を測定した。結果を図２に示す。
【００３２】
ＯＶＡ喘息モデルマウスから取得されたＢＡＬにおいて、総細胞数、好酸球数、ＩＬＣ２細胞数、Ｔｈ２細胞数は、いずれもジスルフィラムの投与により、有意に減少した。また、ＯＶＡ喘息モデルマウスから取得された肺サンプルにおいて、ＩＬＣ２細胞数及びＴｈ２細胞数はいずれもジスルフィラムの投与により、有意に減少した。
【００３３】
実施例３：ＩＬ−３３誘導喘息モデルマウスへのジスルフィラムの投与
ＩＬ−３３誘導喘息モデルマウスの作成
ＩＬ−３３（０．５μｇ）を、１日目、３日目に雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６~８週齢）に鼻腔内投与することにより、ＩＬ−３３誘導喘息モデルマウスを作成した。
【００３４】
ジスルフィラムの投与
ジスルフィラム（３ｍｇ／マウス、又は３０ｍｇ／マウス）を、１日目〜３日目にかけて毎日胃内投与した。対照として、ジスルフィラムの代わりにオイルを投与した。
【００３５】
フローサイトメトリーによる測定
５日目にマウスの気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）を取得し、また肺のサンプルを取得した。ＢＡＬについて、血球計算盤を用いて総細胞数及び好酸球数を測定した。好酸球数の測定のために、計数前にDiff-quick染色を行って好酸球を染色した。また、ＢＡＬについてフローサイトメトリー法により分析し、ＩＬＣ２細胞数、Ｔｈ２細胞数をそれぞれ測定した。結果を図３に示す。また、肺のサンプルについて、フローサイトメトリー法により分析を行い、ＩＬＣ２細胞数及びＴｈ２細胞数を測定した。結果を図４に示す。
【００３６】
ＩＬ３３誘導喘息モデルマウスから取得されたＢＡＬにおいて、総細胞数、好酸球数、ＩＬＣ２細胞数、Ｔｈ２細胞数は、いずれもジスルフィラムの投与により、有意に減少した。また、ＩＬ３３誘導喘息モデルマウスから取得された肺サンプルにおいて、ＩＬＣ２細胞数及びＴｈ２細胞数はいずれもジスルフィラムの投与により、有意に減少した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【００３７】
サイトカイン発現量の測定
５日目に取得された気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）において、Quantikine ELISAキット（R&D Systems)を用いて、ＩＬ−５及びＩＬ−１３の濃度を測定した（図５）。ＩＬ−３３の投与により、ＢＡＬ中のＩＬ−５及びＩＬ−１３濃度は増加した。ＩＬ−３３の投与により増加したＩＬ−５及びＩＬ−１３濃度は、ジスルフィラム（ＤＳＦ）の投与により、用量依存的に有意に低下した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【００３８】
ムチンスコアの決定
肺サンプルに対し、ＰＡＳ染色を行った。気道上皮細胞におけるＰＡＳ陽性率を４段階でスコア化した（０：０％、１：１〜２５％、２、２６〜５０％、３：５１〜７５％、４：７６％〜１００％）。それぞれのサンプルにおいて、平均スコアを算出した（図６）。ＩＬ−３３の投与により増大したムチンスコアは、ジスルフィラム（ＤＳＦ）の投与により、用量依存的に有意に低下した（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【００３９】
ジスルフィラム投与による毒性試験
ジスルフィラム（３０ｍｇ／マウス）を、１日目〜３日目にかけて毎日胃内投与した。対照として、ジスルフィラムの代わりにオイルを投与した。５日目に脾臓重量、体重、脾総細胞数、脾臓のTh2細胞、B細胞、NK細胞、肺総細胞数、肺のTh2細胞、B細胞、NK細胞について比較したところ、対照とジスルフィラム投与群とで、ジスルフィラムによる毒性は見られなかった（データ未掲載）。
【００４０】
実施例４：マウスＦＡＬＣ由来培養ＩＬＣ２細胞におけるジスルフィラムの作用
ＩＬＣ２細胞培養実験
マウスＦＡＬＣ細胞から派生させたＩＬＣ２細胞（１００００細胞／ウェル）を、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２又は１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３３添加ＲＰＭＩ培養液で３日間培養した。ＲＰＭＩ培養液の組成は、下記のとおりである。
【表１】
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ＩＬ−３３添加ＲＰＭＩ培養液には、さらにジスルフィラムの非添加群、及び添加群（１０−９ｍｏｌ／ｌ、１０−８ｍｏｌ／ｌ、１０−７ｍｏｌ／ｌ、１０−６ｍｏｌ／ｌ）に分け、培養を行った。
【００４１】
細胞培養後、プロピジウムヨージド（ＰＩ）染色を行い、フローサイトメトリーによりＰＩ陰性細胞の数を測定した（図７）。ＩＬ−３３添加群において、ＩＬ−２添加群と比較して、ＰＩ陰性細胞数が増加した。増加したＰＩ陰性細胞数は、ジスルフィラムの濃度（１０−７ｍｏｌ／ｌ、１０−６ｍｏｌ／ｌ）において有意に低下した（＊＊ｐ＜０．０１）。ＰＩ陽性細胞は死細胞を表すことから、ＩＬ−３３添加で増加した死細胞の数が、ジスルフィラムの添加により減少することあら、ＩＬ−３３で増加したＩＬＣ２をジスルフィラムが抑制することを示す。
【００４２】
また、培養上清を取得し、Quantikine ELISAキット（R&D Systems)を用いて、ＩＬ−５及びＩＬ−１３の濃度を測定した（図８）。ＩＬ−３３添加群において、ＩＬ−２添加群と比較して、ＩＬ−５及びＩＬ−１３の濃度が増加した。増加したＩＬ−５は、ジスルフィラムの濃度（１０−７ｍｏｌ／ｌ、１０−６ｍｏｌ／ｌ）において有意に低下した（＊＊ｐ＜０．０１）。また、増加したＩＬ−１３は、ジスルフィラムの濃度（１０−７ｍｏｌ／ｌ、１０−６ｍｏｌ／ｌ）において用量依存的に低下した。
【００４３】
実施例５：ヒト末梢血由来ＩＬＣ２細胞におけるジスルフィラムの影響
１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３３、及び５０ｎｇ／ｍｌのＴＳＬＰ添加ＲＰＭＩ培養液を作成した。この培養液には、さらにジスルフィラムの非添加群、及び添加群（１０−９ｍｏｌ／ｌ、１０−８ｍｏｌ／ｌ、１０−７ｍｏｌ／ｌ、１０−６ｍｏｌ／ｌ）に分け、ヒト末梢血から取得したＩＬＣ２細胞（５００細胞／ウェル）を培養した。培養上清を取得し、Quantikine ELISAキット（R&D Systems)を用いて、ＩＬ−５及びＩＬ−１３の濃度を測定した（図９）。
【００４４】
実施例６：ヒト末梢血由来Ｔｈ２細胞におけるジスルフィラムの影響
ヒト末梢血由来のTh2細胞（５０００細胞／ウェル）を、ジスルフィラム（ＤＳＦ）の非添加ＲＰＭＩ培養液及び添加ＲＰＭＩ培養液（１０-9、１０-8、１０-7、１０-6ｍｏｌ／ｌ）で２４時間培養した。ＰＩ陰性細胞をフローサイトメトリーにより計数した。２４時間培養後の細胞の生存率を示した（図１０（１））。ジスルフィラムは用量依存的に、Ｔｈ２細胞の生存率を減少させた。
【００４５】
ヒト末梢血由来TH２細胞（５０００細胞／ウェル）を、Dynabeads（登録商標）ヒトT−Activator CD3/ CD28（Veritas）とともに、ジスルフィラムの非添加ＲＰＭＩ培養液及び添加ＲＰＭＩ培養液（１０-9、１０-8、１０-7、１０-6ｍｏｌ／ｌ）で２４時間培養した。培養上清を取得し、Quantikine ELISAキット（R&D Systems)を用いて、ＩＬ−５の濃度を測定した（図１０（２））。１０-7及び１０-6ｍｏｌ／ｌの濃度のジスルフィラムにより、IL-5の産生が抑制された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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