(57)【要約】【課題】  アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンを含む抗疲労用組成物を提供すること。【解決手段】  アーティチョーク葉抽出物を含む抗疲労用組成物、及びシナロピクリンを含む抗疲労用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アーティチョーク葉抽出物を含む、抗疲労用組成物。
【請求項２】
アーティチョーク葉抽出物を対象の体重１ｋｇあたり１日に固形成分に換算して１〜４０ｍｇ投与される量で含有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
アーティチョーク葉抽出物が、前記抽出物の重量あたりシナロピクリンを０．１〜１０ｗｔ％で含有し、シナロピクリンが対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ投与される、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
経口投与形態である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
シナロピクリンを含む、抗疲労用組成物。
【請求項７】
シナロピクリンが、対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ投与される量である、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
経口投与形態である、請求項６又は７に記載の組成物。
【請求項９】
筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による、請求項６〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンを含む抗疲労用組成物に関する。本発明は、さらに、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンを含む、筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による抗疲労用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９９９年の厚生省疲労調査研究班の疫学調査によって、我が国で疲労を自覚している人の割合は、就労人口の約６割（約４７００万人）であり、その半数を超える人（約２９００万人）が半年以上の慢性的な疲れに悩まされていることが報告された（非特許文献１）。さらに２００２年の厚生労働省実施の労働者健康状況調査では、普段の仕事に疲れを感じるとする労働者の割合が約７割にのぼると報告された（非特許文献２）。
【０００３】
疲労や疲労感に起因した疾患の発症も知られており、疲労や疲労感に対策を講じることは、労働者の労働環境からの離脱を防ぐことや国民医療費の削減などの経済損失の軽減に資するものと期待されている。こうした背景から、科学根拠に基づいた抗疲労用組成物が開発されることの社会的意義は非常に大きい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】木谷照夫、疲労の実態調査と健康づくりのための疲労回復法に関する研究（厚労省）平成１１年度研究業績報告．２０００
【非特許文献２】厚生労働省、平成１４年労働者健康状況調査、厚生労働省統計情報２００３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンを含む抗疲労用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、アーティチョーク葉抽出物に安静時若しくは平常時の疲労感、及び／又は運動負荷後の疲労感を改善又は軽減する効果を有することを見出し、本発明を成した。具体的には、本発明は、以下に記載の抗疲労用組成物を提供する：
［項１］  アーティチョーク葉抽出物を含む、抗疲労用組成物；
［項２］  アーティチョーク葉抽出物を対象の体重１ｋｇあたり１日に固形成分に換算して１〜４０ｍｇ投与される量で含有する、項１記載の組成物；
［項３］  アーティチョーク葉抽出物が、前記抽出物の重量あたりシナロピクリンを０．１〜１０ｗｔ％で含有し、シナロピクリンが対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ投与される、項１又は項２記載の組成物；
［項４］  経口投与形態である、項１〜項３のいずれかに記載の組成物；
［項５］  １日に１回摂取される、項４に記載の組成物；
［項６］  筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による、項１〜５のいずれかに記載の組成物；
［項７］  安静時若しくは平常時又は運動後の抗疲労用組成物である、項６に記載の組成物；
［項８］  運動機能向上による、項１〜７のいずれかに記載の組成物；
［項９］  運動後の抗疲労用組成物である、項８に記載の組成物；
［項１０］  シナロピクリンを含む、抗疲労用組成物；
［項１１］  シナロピクリンが、対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ投与される量である、項１０記載の組成物；
［項１２］  経口投与形態である、項１０又は項１１に記載の組成物；
［項１３］  １日に１回摂取される、項１２に記載の組成物；
［項１４］  筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による、項１０〜１３のいずれかに記載の組成物；
［項１５］  安静時若しくは平常時又は運動後の抗疲労用組成物である、項１４に記載の組成物；
［項１６］  運動機能向上による、項１０〜１５のいずれかに記載の組成物；
［項１７］  運動後の抗疲労用組成物である、項１６に記載の組成物；
［項１８］  アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンを配合することを含む、抗疲労用組成物の製造方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によって、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンを含む抗疲労用組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】アーティチョーク葉抽出物によるミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、アーティチョーク葉抽出物を添加しない陰性対照（−）のミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性を１００％とした場合の相対的なミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性［％］を示し、横軸は、アーティチョーク葉抽出物の添加濃度［μｇ／ｍＬ］を示す。
【図２】各種溶媒で抽出したアーティチョーク葉抽出物によるミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、アーティチョーク葉抽出物を添加しない陰性対照（−）のミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性を１００％とした場合の相対的なミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性［％］を示し、横軸は、アーティチョーク葉の各種溶媒で抽出した抽出物を示す。各抽出物には、アーティチョーク葉抽出物３００μｇ／ｍＬに相当する濃度のアーティチョークを含めた。
【図３】液体クロマトグラフィーにより分取したアーティチョーク葉酢酸エチル抽出物の各画分による、ミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、アーティチョーク葉抽出物を添加しない陰性対照（−）のミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性を１００％とした場合の相対的なミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性［％］を示し、横軸は、液体クロマトグラフィーにより分取したアーティチョーク葉酢酸エチル抽出物の各画分を示す。各画分には、アーティチョーク葉酢酸エチル抽出物１２μｇ／ｍＬに相当する濃度のアーティチョークを含めた。
【図４】アーティチョーク葉抽出物による脂質代謝関連遺伝子「カルニチンパルミトイル基転移酵素１Ａ（ＣＰＴ１Ａ）」の遺伝子発現に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、アーティチョーク葉抽出物を添加しない陰性対照（−）のＣＰＴ１Ａ遺伝子発現量を１とした場合の相対的な遺伝子発現レベルを示し、横軸は、アーティチョーク葉抽出物の添加濃度［μｇ／ｍＬ］を示す。
【図５】アーティチョーク葉抽出物によるグルコースの取り込み促進に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、アーティチョーク葉抽出物を添加しない陰性対照（−）での細胞による２デオキシグルコース（２ＤＧ）の取り込み量［μＭ］を示し、横軸は、アーティチョーク葉抽出物（ＡＣ）の添加濃度［μｇ／ｍＬ］を示す。
【図６】アーティチョーク葉抽出物による安静時の疲労感に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、ビジュアルアナログスケール（ＶＡＳ）評価を示し、横軸は、安静時の疲労感の各項目を示す。各項目における棒は、ＶＡＳ計測した時期（アーティチョーク葉抽出物の摂取開始後の週数）を示す。
【図７】アーティチョーク葉抽出物による運動負荷後の疲労感に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、ＶＡＳ評価を示し、横軸は、安静時の疲労感の各項目を示す。各項目における棒は、ＶＡＳ計測した時期（アーティチョーク葉抽出物の摂取開始後の週数）を示す。
【図８】アーティチョーク葉抽出物による抗酸化作用に対する影響を示す棒グラフ。縦軸は、８−イソプラスタン濃度［ｐｇ／ｍｇ］を示し、横軸は、ＶＡＳ計測した時期（アーティチョーク葉抽出物の摂取開始後の週数）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
「アーティチョーク」（学名：Ｃｙｎａｒａ  ｓｃｏｌｙｍｕｓ、和名：チョウセンアザミ）は、キク科チョウセンアザミ属の多年草である。
【００１０】
本明細書において「アーティチョーク葉抽出物」は、アーティチョークの葉から得られた抽出物を意味する。アーティチョーク葉抽出物は、限定するものではないが、公知の抽出方法によって調製することができ、又は商業的に入手することができる。アーティチョーク葉の抽出は、例えば、アーティチョーク葉を溶媒に浸漬した後に、ホモジナイズすること、加熱すること、室温で長時間溶媒に浸すこと、振とうすること、超音波をかけること、加圧することのいずれか又はこれらの組合せにより行うことができる。この例において、アーティチョーク葉を、そのまま用いてもよいし、細かく破砕した破砕物を用いてもよい。
【００１１】
アーティチョーク葉抽出物としては、限定するものではないが、有機溶媒抽出物、水抽出物又はアルコール抽出物が挙げられる。アーティチョーク葉有機溶媒抽出物は、限定するものではないが、アセトン、フェノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、アセトニトリルなどの有機溶媒を用いて、常法に従ってアーティチョーク葉から抽出することができる。アーティチョーク葉水抽出物は、限定するものではないが、水を用いて常法に従ってアーティチョーク葉から抽出することができる。アーティチョーク葉アルコール抽出物は、限定するものではないが、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンなどのアルコールを用いて、アーティチョーク葉から常法に従って抽出することができる。アーティチョーク葉抽出物は、例えば、アセトン抽出物である。他の例において、アーティチョーク葉抽出物は、水抽出物である。他の例において、アーティチョーク葉抽出物は、エタノール抽出物である。他の例において、アーティチョーク葉抽出物は、各種の溶媒で抽出された抽出物の混合物である。アーティチョーク葉抽出物は、さらに常法に従って、分離精製されてもよい。分離精製の方法としては、限定するものではないが、液体クロマトグラフィーが挙げられる。
【００１２】
アーティチョーク葉抽出物の形態としては、限定するものではないが、液状、固形状が挙げられる。アーティチョーク葉抽出物の形態は、例えば、固形状である。固形状のアーティチョーク葉抽出物は、限定するものではないが、液状のアーティチョーク葉抽出物を凍結乾燥法により調製することができる。本明細書において、固形成分に換算したアーティチョーク葉抽出物の重量は、凍結乾燥法により調製された固形状のアーティチョーク葉抽出物の重量を意味する。
【００１３】
アーティチョーク葉抽出物中のシナロピクリンの含有量は、常法により、例えば液体クロマトグラフィー（例えばＨＰＬＣ）により測定することができる。
【００１４】
本明細書において「シナロピクリン」は、分子式Ｃ１９Ｈ２２Ｏ６のセスキテルペン類の化合物であり、核因子ＮＦｋＢならびにＴＮＦ−αとの相互作用による抗炎症作用を有することが知られている。シナロピクリンは、限定するものではないが、公知の化学合成方法によって調製することができ、植物から抽出して調製することができ、又は商業的に入手できる。シナロピクリンの抽出方法としては、例えば特開２００６−２０６５３２に記載の方法を用いることができる。
【００１５】
シナロピクリンを抽出可能な植物としては、限定するものではないが、アーティチョーク、カルドン（Ｃｙｎａｒａ  ｃａｒｄｕｎｃｕｌｕｓ）、ヤグルマギク（Ｃｅｎｔａｕｒｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ)、Ｔｒｉｃｈｏｌｅｐｉｓ  ｇｌａｂｅｒｒｉｍａ、Ａｍｂｅｒｂｏａ  ｄｉｖａｒｉｃａｔａ、Ｓａｕｓｓｕｒｅａ  ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉａが挙げられる。シナロピクリンを抽出できる植物体としては、限定するものではないが、葉、花、茎、枝、根茎及び種子のいずれか又はこれらの組合せが挙げられる。シナロピクリンを抽出する植物体は、例えば、葉、又は葉と花などの組合せである。
【００１６】
本明細書において「抗疲労」は、対象における疲労又は疲労感が改善又は軽減されることを意味する。抗疲労は、本明細書に記載の抗疲労用組成物が投与される前と比べて、前記組成物が投与された後（例えば、摂取開始後、毎日摂取し続けて４週目）に、対象における疲労又は疲労感が改善又は軽減されることが指標とされる。疲労又は疲労感は、例えば、後述の実施例に記載のように、ビジュアルアナログスケール（Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇｕｅ  Ｓｃａｌｅ：ＶＡＳ）を用いて評価される。１つの実施形態において、疲労又は抗疲労感の改善又は軽減は、ＶＡＳにおける数値（ｃｍ）の減少によって評価される。
【００１７】
抗疲労は、限定するものではないが、安静時若しくは平常時の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び／又は「体の軽快さ」の改善又は軽減、並びに／或いは、運動後の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び／又は「呼吸の乱れ」の改善又は軽減が挙げられる。抗疲労は、例えば、安静時若しくは平常時の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せである。他の例において、抗疲労は、運動後の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「呼吸の乱れ」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せである。他の例において、抗疲労は、安静時若しくは平常時の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せと、運動後の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「呼吸の乱れ」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せと、の組合せである。
【００１８】
他の例において、抗疲労は、安静時若しくは平常時の「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せと、運動後の「疲れの感覚」及び「身体的疲労感」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せと、の組合せである。他の例において、抗疲労は、安静時若しくは平常時の「身体的疲労感」の改善又は軽減及び運動後の「身体的疲労感」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せである。他の例において、抗疲労は、安静時若しくは平常時の「体の軽快さ」の改善又は軽減及び運動後の「呼吸の乱れ」の改善又は軽減のいずれか又はそれらの組合せである。
【００１９】
本明細書において「筋肉細胞」は、筋肉を構成する細胞を意味する。筋肉は、形態学的に、横紋筋（骨格筋及び心筋）、及び平滑筋（内臓筋）に分類され、機能的には、随意筋（骨格筋）及び不随意筋（内臓筋及び心筋）に分類される。筋肉細胞は、限定するものではないが、骨格筋を構成する細胞（筋管細胞）、心筋を構成する細胞（心筋細胞）、及び内臓筋を構成する細胞が挙げられる。筋肉細胞は、例えば、筋管細胞である。
【００２０】
本明細書において「筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化」は、限定するものではないが、筋肉細胞におけるミトコンドリアＴＣＡ回路（クエン酸回路）の活性化、筋肉細胞における脂質代謝関連遺伝子発現の亢進、及び筋肉細胞におけるグルコース取り込みの促進のいずれか又はこれらの組合せが挙げられる。
【００２１】
本明細書において「運動時」は、体を動かしている時を意味する。運動時は、限定するものではないが、スポーツなどの運動を行っている時、及び日常生活で身体的な負荷のかかる労働をしている時などが挙げられる。本明細書において「運動後」は、体を動かした一定期間後を意味する。運動後は、限定するものではないが、スポーツなどの運動を行った直後若しくは数分後、又は日常生活で身体的な負荷のかかる労働をした直後若しくは数分後などが挙げられる。本明細書において「安静時」若しくは「平常時」は、特にスポーツなどの運動若しくは肉体労働を行っていない普段どおりの時期若しくは状態を意味する。安静時若しくは平常時は、限定するものではないが、日常のデスクワークをしている時若しくは状態、読書をしている時若しくは状態などが挙げられる。
【００２２】
本発明において「対象」は、疲労若しくは疲労感の改善又は軽減の必要性のある動物を意味する。対象としては、限定するものではないが、家畜動物、伴侶動物（ペット）、霊長類が挙げられる。家畜動物としては、限定するものではないが、ウシ、ブタ、ヒツジが挙げられる。伴侶動物としては、限定するものではないが、イヌ、ネコ、ウサギが挙げられる。霊長類としては、限定するものではないが、サル、チンパンジー、ヒトが挙げられる。対象は、好ましくは霊長類であり、より好ましくはヒトである。
【００２３】
抗疲労用組成物がアーティチョーク葉抽出物又は天然植物由来のシナロピクリンを含む場合、天然物由来の抽出物又は天然物由来のシナロピクリンにより調製されるため、対象にとって安全であり、好ましい。
【００２４】
抗疲労用組成物は、限定するものではないが、シナロピクリンを含有するアーティチョーク葉組成物を含む。１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、抗疲労成分として、アーティチョーク葉抽出物のみを含む。
【００２５】
抗疲労用組成物は、限定するものではないが、シナロピクリンを含有するアーティチョーク葉抽出物に加えて、薬学上許容される担体を含む。そのような抗疲労用組成物は、シナロピクリンを含有するアーティチョーク葉抽出物と薬学上許容される担体とを、常法に従って、合することで製造される。
【００２６】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、シナロピクリンを含む。１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、抗疲労成分として、シナロピクリンのみを含む。抗疲労用組成物は、限定するものではないが、シナロピクリンに加えて、薬学上許容される担体を含む。そのような抗疲労用組成物は、シナロピクリンと薬学上許容される担体とを、常法に従って、合することで製造される。
【００２７】
本明細書において「薬学上許容される担体」は、適用される対象に対して不都合な作用をもたらさない担体を意味する。薬学上許容される担体としては、限定するものではないが、賦形剤、結合剤、希釈剤、添加剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁剤、防腐剤が挙げられる。薬学上許容される担体としては、例えば、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、カカオバターが挙げられる。
【００２８】
抗疲労用組成物の投与形態は、限定するものではないが、経口投与形態又は非経口投与形態であり、好ましくは経口投与形態である。経口投与形態としては、限定するものではないが、顆粒剤、散剤、錠剤（糖衣錠を含む）、丸剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤が挙げられる。非経口投与形態としては、限定するものではないが、外用剤（例えば、経鼻投与剤、経皮剤）、坐剤が挙げられる。経鼻投与剤としては、限定するものではないが、エマルション剤が挙げられる。経皮剤としては、限定するものではないが、クリーム、ジェル、ローション、貼付剤が挙げられる。抗疲労用組成物は、例えば、経口投与形態であり、例えば、カプセル剤である。これらの製剤は、当分野で通常行われている手法により、薬学上許容される担体を用いて製剤化することができる。
【００２９】
抗疲労用組成物は、限定するものではないが、医薬品、サプリメント、特定保健用食品、栄養機能食品、又は機能性表示食品である。
【００３０】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、アーティチョーク葉抽出物が体重５０ｋｇの対象に対して１日あたり固形成分に換算した５０〜２０００ｍｇ、好ましくは１００〜１０００ｍｇ、より好ましくは２００〜５００ｍｇ投与されるように配合される。
【００３１】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、アーティチョーク葉抽出物が対象の体重１ｋｇあたり１日に固形成分に換算した１〜４０ｍｇ、好ましくは２〜２０ｍｇ、より好ましくは４〜１０ｍｇ投与されるように配合される。
【００３２】
１つの実施形態において、アーティチョーク葉抽出物は、前記抽出物の重量あたり、シナロピクリンを０．１〜１０ｗｔ％、好ましくは０．５〜５ｗｔ％、より好ましくは０．７５〜２．５ｗｔ％、さらに好ましくは１ｗｔ％含有し、該シナロピクリンが体重５０ｋｇの対象に対して１日あたり０．５〜２０ｍｇ、好ましくは１〜１０ｍｇ、より好ましくは２〜５ｍｇ、或いは、シナロピクリンが対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ、好ましくは２０〜２００μｇ、より好ましくは４０〜１００μｇ投与される、或いは、該シナロピクリンが対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ、好ましくは２０〜２００μｇ、より好ましくは４０〜１００μｇ投与される。
【００３３】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、シナロピクリンが体重５０ｋｇの対象に対して１日あたり０．５〜２０ｍｇ、好ましくは１〜１０ｍｇ、より好ましくは２〜５ｍｇ投与されるように配合される。
【００３４】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、シナロピクリンが対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ、好ましくは２０〜２００μｇ、より好ましくは４０〜１００μｇ投与されるように配合される。
【００３５】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、カプセル剤などの経口投与形態である。カプセル剤は、限定するものではないが、シナロピクリンが体重５０ｋｇの対象に１日あたり０．５〜２０ｍｇ、好ましくは１〜１０ｍｇ、より好ましくは２〜５ｍｇ摂取されるように配合される、或いは、シナロピクリンが対象の体重１ｋｇあたり１日に１０〜４００μｇ、好ましくは２０〜２００μｇ、より好ましくは４０〜１００μｇ摂取されるように配合される。
【００３６】
シナロピクリンの１日あたりの投与量、又はアーティチョーク葉抽出物の１日あたりの投与量は、１回で投与されてもよく、又は複数回に分けて投与されてもよい。好ましくは、シナロピクリンの１日当たりの投与量、又はアーティチョーク葉抽出物の投与量は、１日１回で投与される。
【００３７】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物の製造のための、アーティチョーク葉抽出物の使用又はシナロピクリンの使用が提供される。本明細書中に記載のアーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリン、或いは抗疲労用組成物等に対する特徴は、この実施形態における、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリン、或いは抗疲労用組成物等にも適用される。他の態様は、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンを配合する工程を含む、抗疲労用組成物の製造方法を提供する。１つの実施形態において、配合工程は、薬学上許容される担体を配合することをさらに含む。
【００３８】
１つの実施形態において、抗疲労用組成物は、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンに加えて、動物飼料原料を含む。そのような抗疲労用組成物は、アーティチョーク葉抽出物又はシナロピクリンと動物飼料原料とを、常法に従って、合することにより製造される。本明細書において「動物飼料原料」は、摂食する動物が摂食可能な成分又は前記成分を含む組成物を意味する。動物飼料原料は、限定するものではないが、肉、ダイズなどのタンパク源、穀物類などの炭水化物源、野菜、ビタミン類、ミネラル類が挙げられる。
【００３９】
抗疲労用組成物に対する表示としては、限定するものではないが、抗疲労；疲労が改善又は軽減される；安静時若しくは平常時又は運動時若しくは運動後の疲労又は疲労感が改善又は軽減される；疲れの感覚及び／又は身体的疲労感が軽減される又は改善する；体の軽快さが向上する及び／又は改善する；呼吸が安定する及び／又は乱れにくい、或いは、これらの組合せが挙げられる。他の例において、抗疲労用組成物に対する表示としては、限定するものではないが、筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による抗疲労；筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による安静時若しくは平常時の抗疲労；筋肉細胞におけるエネルギー代謝の活性化による運動後の抗疲労；運動機能向上による運動後の抗疲労、或いは、これらの組合せが挙げられる。
【００４０】
以下に、本発明の好ましい実施形態を説明するが、それらの説明は例示であって制限的なものではなく、添付する特許請求の範囲に記載の発明をいかようにも限定するものではない。
［実施例］
【００４１】
製造例１：  アーティチョーク葉アセトン抽出物の調製
アーティチョーク乾燥葉（１００ｇ）を１５００ｍＬの７０％アセトン中でホモジナイズし（１００００ｒｐｍ、５分）、吸引濾過により残渣（１）と濾液（１）を得た。残渣（１）を、１０００ｍＬの７０％アセトン中でさらにホモジナイズし（１００００ｒｐｍ、５分）、吸引濾過により残渣（２）と濾液（２）を得た。濾液（１）と濾液（２）とを混合し、その混合液を４０℃にて減圧濃縮した。その濃縮物を凍結乾燥して、アーティチョーク葉アセトン抽出物（２８．２ｇ）を得た。得られたアーティチョーク葉アセトン抽出物中のシナロピクリン含有量（ｗｔ％）を測定するために、液体クロマトグラフィーを行った。液体クロマトグラフィーの条件は、以下のとおりであった：
システム：  ＬＣ−２０１０ＡＨＴ（ＳＨＩＭＡＺＵ）
カラム：  Ｃａｐｃｅｌｌ  ＰＡＫ  Ｃ１８（ＳＨＩＳＥＩＤＯ）
温度：  ４０℃
流速：  １．０  ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：  水：アセトニトリル＝７２：２８
検出波長：  ２１０ｎｍ
標準品：  シナロピクリン（Ｐｈｙｔｏｌａｂ  ＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ）
アーティチョーク葉アセトン抽出物は、前記抽出物の重量あたりシナロピクリンを約１．２ｗｔ％含有した。
【００４２】
製造例２：  アーティチョーク葉水抽出物の調製
アーティチョーク乾燥葉（１００ｇ）を３０００ｍＬの水に浸漬し、８０〜９０℃で１時間抽出した後、吸引濾過により濾液を得た。その濾液を４０℃にて減圧濃縮し、固形分１０％の濃縮液７１０ｇを得た。その濃縮液の一部（１００ｇ）にデキストリン（パインデックス＃１：松谷化学工業株式会社）４０ｇを混合し、その混合物を凍結乾燥して、アーティチョーク葉水抽出物（５０ｇ）を得た。
得られたアーティチョーク葉アセトン抽出物中のシナロピクリン含有量（ｗｔ％）を、上記同様、液体クロマトグラフィーにより測定した。アーティチョーク葉水抽出物は、前記抽出物の重量あたりシナロピクリンを約１．０ｗｔ％含有した。
【００４３】
実施例１：  アーティチョーク葉抽出物によるミトコンドリアにおける代謝活性の亢進
ラット骨格筋由来のＬ６細胞株を筋管細胞に分化させるために、Ｌ６細胞株を２４ｗｅｌｌプレートに播種し、前記細胞を１０％ウシ血清含有Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ａｌｐｈａ（ＭＥＭα）培地中、３７℃、５％ＣＯ２にてサブコンフレントになるまで培養した。次いで、培地を２％ウシ血清含有ＭＥＭαに交換して、細胞培養をさらに７日間継続し、筋管細胞に分化させた。得られた筋管細胞を実施例１の被験細胞とした。
【００４４】
アーティチョーク葉抽出物によってミトコンドリアにおける代謝活性が変化するかを調べるために、ミトコンドリアＴＣＡ回路（クエン酸回路）の総デヒドロゲナーゼ活性を測定した。被験細胞の培養液に、試験物質として０．２ｖ／ｖ％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中のアーティチョーク葉アセトン抽出物（製造例１）を２００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬとなるように添加し、細胞培養を２４時間行った。培養後に、細胞数測定試薬（ＷＳＴ−８：キシダ化学株式会社）を用いて、ミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性を測定した（ｎ＝３）。
アーティチョーク葉抽出物を含まない０．２ｖ／ｖ％ＤＭＳＯを培養液に添加した被験細胞を、陰性対照とした。陰性対照のミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性を同様に測定した（ｎ＝３）。
【００４５】
陰性対照のミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性に対する、各試験での総デヒドロゲナーゼ活性の相対値（％）を算出した。各試験のミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性の平均値、標準偏差を算出した（表１）。
【表１】
2020040884.tif 000002
【００４６】
被験物質を添加していない陰性対照のミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性と比べて、被験物質２００μｇ／ｍＬを添加した場合、その相対活性値は平均で１２９％（＝［被験物質添加（＋）時のミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性］／［被験物質非添加（−）時のミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性］×１００）にまで上昇した。この結果は、アーティチョーク葉抽出物（被験物質）の添加によって、ミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性が上昇することを示す（表１、図１）。
【００４７】
また、被験物質添加によるミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性（相対値）の上昇は、その添加量を２００μｇ／ｍＬから４００μｇ／ｍＬに増加させたところ、１２９％から１３４％に上昇した。この結果は、筋管細胞におけるミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性が、アーティチョーク葉抽出物（被験物質）の濃度に依存して上昇することを示す（表１、図１）。
【００４８】
実施例２：  アーティチョーク葉抽出物中の有効成分分析
実施例１で示された、アーティチョーク葉抽出物によるミトコンドリアにおける代謝活性の亢進作用がアーティチョーク葉抽出物中のいずれの成分によりもたらされたかを調べた。
【００４９】
アーティチョーク葉抽出物（製造例１）を２０倍量の水に浸漬して、分析対象物質を水中に抽出した。得られた水溶液を当量のヘキサンを用いて液液抽出を５回行い、水層（１）とヘキサン層を得た。得られたヘキサン層を４０℃にて減圧濃縮し、窒素ガスで乾固させ、ヘキサン抽出物（３．３％）を得た。
次いで、上記ヘキサン抽出処理後の水層（１）と当量の酢酸エチルを用いて液液抽出を５回行い、水層（２）と酢酸エチル層とを得た。得られた酢酸エチル層を４０℃にて減圧濃縮し、窒素ガスで乾固させ、酢酸エチル抽出物（４．０％）を得た。
前記酢酸エチル抽出処理後の水層（２）を４０℃にて減圧濃縮し、凍結乾燥させて、水抽出物（８６．４％）を得た。
【００５０】
前記抽出物について、実施例１と実質的に同じ方法で、ミトコンドリアＴＣＡ回路（クエン酸回路）の総デヒドロゲナーゼ活性を測定した（図２）。実施例１と同様、アーティチョーク葉抽出物によって、ミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性が上昇した（図２：陰性対照（−）対アーティチョーク葉抽出物）。そのアーティチョーク葉抽出物中の分析対象物質をヘキサン、酢酸エチル、及び水に分配した前記抽出物によるミトコンドリア総デヒドロゲナーゼ活性の結果は、酢酸エチル抽出物に、他の抽出物に比して強い総デヒドロゲナーゼ活性が見出された（図２）。
【００５１】
前記酢酸エチル抽出物中の分析対象物質を特定するために、液体クロマトグラフィーを行った。液体クロマトグラフィーの条件は以下のとおりであった：
＜ＨＰＬＣ条件＞
システム：  ７１７  ｐｌｕｓ  Ａｕｔｏ  ｓａｍｐｌｅｒ（Ｗａｔｅｒｓ）
カラム：  Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ−５  １０×２５０ｍｍ
（ＮＯＭＵＲＡ  ＣＨＥＭＩＣＡＬ）
温度：  ４０℃
流速：  ５．０ ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：  （Ａ）０．１％ ギ酸、（Ｂ）アセトン
勾配：  ０ｍｉｎ（Ａ）９０％  →  ７０ｍｉｎ（Ａ）５０％
【００５２】
前記酢酸エチル抽出物２５ｍｇをメタノール５００ｍＬに溶解し、そのメタノール溶液２００μＬを前記液体クロマトグラフシステムにインジェクトした。前記ＨＰＬＣ条件にて分取された８画分（画分Ｎｏ．１〜画分Ｎｏ．８）を、４０℃で減圧乾固した。各画分の収率を以下の表に示す：
【表２】
2020040884.tif 000003
【００５３】
調製した各画分について、実施例１と実質的に同じ方法で、ミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性を測定した。測定結果を、各画の収率からアーティチョーク葉抽出物１２μｇ／ｍＬ相当に換算した（図３）。図３から理解されるように、画分Ｎｏ．７に、強いミトコンドリアＴＣＡ回路の総デヒドロゲナーゼ活性が見られた。
【００５４】
画分Ｎｏ．７、及びシナロピクリン標準品（Ｐｈｙｔｏｌａｂ  ＧｍｂＨ  ＆  Ｃｏ．  ＫＧ）について、ＨＰＬＣ分析及びＬＣ−ＭＳ分析を行った。ＨＰＬＣ分析の結果、画分Ｎｏ．７の分析対象物質とシナロピクリンとのＵＶスペクトル及びリテンションタイムが一致した。また、ＬＣ−ＭＳ分析の結果、画分Ｎｏ．７の分析対象物質とシナロピクリンとの分子量が一致した。これらの結果は、アーティチョーク葉抽出物中の分析対象物質がシナロピクリンであることを示す。
【００５５】
実施例３：  アーティチョーク葉抽出物による脂質代謝関連遺伝子発現の亢進
実施例１と同様にして、ラット骨格筋由来のＬ６細胞株を筋管細胞に分化させ、得られた被験細胞を実施例３の被験細胞とした。
アーティチョーク葉抽出物によって筋管細胞における脂質代謝が変化するかを調べるために、脂質代謝関連遺伝子であるカルニチンパルミトイル基転移酵素１Ａ（ＣＰＴ１Ａ）の発現量を測定した。被験細胞の培養液に、０．１ｖ／ｖ％ＤＭＳＯ中の試験物質アーティチョーク葉抽出物（製造例１）を２００μｇ／ｍＬとなるように添加し、細胞を２４時間培養した。細胞培養後に、被験細胞からＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを作成した。遺伝子発現量を測定する際に用いたプライマーを表３に示す。
【表３】
2020040884.tif 000004
【００５６】
得られたｃＤＮＡから、Ｐｏｗｅｒ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳｔｅｐＯｎｅ Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて定量ＰＣＲを行った（ｎ＝４）。ＣＰＴ１Ａの発現量は、１８Ｓの発現量を内部標準として補正し、陰性対照の発現量を１とした相対値で表した（表４）。
【表４】
2020040884.tif 000005
【００５７】
被験物質を添加していない陰性対照の脂質代謝関連遺伝子ＣＰＴ１Ａの発現量と比べて、被験物質２００μｇ／ｍＬを添加した場合、その相対発現量は平均で１．７９（＝［被験物質添加（＋）時のＣＰＴ１Ａ発現量］／［被験物質非添加（−）時の発現量ＣＰＴ１Ａ］）にまで上昇した。この結果は、アーティチョーク葉抽出物（被験物質）の添加によって、筋管細胞における脂質代謝関連遺伝子の発現が増大することを示す（表４、図４）。
【００５８】
実施例４：  アーティチョーク葉抽出物によるグルコース取り込みの促進
マウス骨格筋由来のＣ２Ｃ１２細胞株を筋管細胞に分化させるために、Ｃ２Ｃ１２細胞株を１２ｗｅｌｌプレートに播種し、１０％ウシ血清を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）培地中、３７℃、５％ＣＯ２にてサブコンフレントになるまで培養した。培地を２％ウシ血清含有ＤＭＥＭに交換して、細胞培養をさらに５日間継続し、筋管細胞に分化させた。
【００５９】
アーティチョーク葉抽出物によって筋管細胞による糖の取り込みが変化するかを調べるために、グルコース取り込み量を測定した。被験細胞の培養液に、試験物質として０．１ｖ／ｖ％ＤＭＳＯ中のアーティチョーク葉アセトン抽出物（製造例１）を１００μｇ／ｍＬとなるように添加し、細胞培養を４時間行った。培養後に、被験細胞をＫｒｅｂｓ‐Ｒｉｎｇｅｒ‐ｐｈｏｓｐｈａｔｅ‐Ｈｅｐｅｓ（ＫＲＰＨ）で洗浄し、１ｍＭの２デオキシグルコース（２ＤＧ）を含むＫＲＰＨ緩衝液中で２０分間培養した。培養後の被験細胞をＫＲＰＨ緩衝液で２回洗浄し、被験細胞を１．２ｍｌの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中に回収した。
【００６０】
回収した被験細胞に対して超音波処理（５分）を施して、細胞を破砕した。細胞破砕液を８０℃で１５分間熱処理した後、１３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離を行った。遠心分離後のサンプル上清を回収し、測定試料とした。測定試料中の２ＤＧ濃度を、２−デオキシグルコース（２ＤＧ）代謝速度測定キット（コスモバイオ株式会社）を用いて測定した（ｎ＝３）。２ＤＧ濃度は、キットに添付された使用説明書に従って測定した。
測定結果の平均値、標準偏差を算出した（表５）。
【表５】
2020040884.tif 000006
【００６１】
被験物質を添加していない陰性対照（−）の２ＤＧの取り込み量は平均で６．５１［μＭ］であり、被験物質１００μｇ／ｍＬを添加した場合の２ＤＧ代謝速度は平均で１０．０３［μＭ］であった。この結果は、アーティチョーク葉抽出物（被験物質）の添加によって、筋管細胞による糖（２ＤＧ）の取り込み量が上昇することを示す（表５、図５）。
【００６２】
実施例５：  アーティチョーク葉抽出物による抗疲労作用
［モニタリング］
安静時の疲労感、及び運動後の疲労感におけるアーティチョーク葉抽出物の抗疲労作用の有無を調べるために、モニタリング試験を行った。
被験者１２名（男性７名、女性５名）は、４週間毎日アーティチョーク葉抽出物（製造例２）を含有するカプセル剤を１日１回２カプセル（アーティチョーク葉抽出物３００ｍｇ相当量）を摂取するよう依頼された。カプセル剤は、１日のうち任意の時間帯に摂取された。
【００６３】
［安静時の疲労感］
被験者は、当該モニタリングの開始時（０週目）、開始後１週目、及び開始後４週目に、さらにモニタリング終了後の観察（後期観察）のためにモニタリング終了後１週目（モニタリングの開始後５週目）に安静時の疲労感が評価された。安静時の疲労感の評価は、評価時直近１週間の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」の３項目について、ビジュアルアナログスケール（Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇｕｅ  Ｓｃａｌｅ：ＶＡＳ）を用いて評価した。
【００６４】
ＶＡＳは、白紙に１０ｃｍの線を引き、その１０ｃｍ線の左端に各項目に対応する感覚のうち最良の感覚が示され、その１０ｃｍ線の右端に各項目に対応する状態のうち最悪の感覚が示されており、被験者は、各項目について自らの感覚に近い場所に線を引くことによって行われる。安静時の疲労感の評価に用いたＶＡＳによるアンケート項目の内容を示す（表６）。
【表６】
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【００６５】
ＶＡＳでは、被験者が引いた線の位置が１０ｃｍの線の左端から何ｃｍの位置にあるかを計測し、その数値（ｃｍ）が各アンケート項目における評価となる。即ち、ＶＡＳでの評価が５ｃｍである場合、その被験者はアンケート項目に対して最良の感覚と最悪の感覚の中間の感覚を覚えていること示す。本モニタリングにおけるアンケート項目「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」の平均値、及び標準偏差を算出した（表７）。各アンケート項目に対する有意差検定（Ｐ値）はウィルコクソン順位和検定により行った。
【表７】
2020040884.tif 000008
【００６６】
アーティチョーク葉抽出物カプセル剤の摂取後、１週目、４週目へと時が経過するにつれて「疲れの感覚」に関するＶＡＳ評価が低減した（表７、図６）。これは「疲れの感覚」が時間の経過と共に、最良の感覚の方に近づいていること、即ち「疲れの感覚」が該カプセル剤の摂取を継続することで改善していることを示す。また、該カプセル剤摂取後４週で、該カプセル剤摂取時と比べて、有意に「疲れの感覚」が改善した（図６「疲れの感覚」Ｐ＜０．０５）。加えて、後期観察では「疲れの感覚」が該カプセル剤摂取開始後４週と比べて増大傾向にあることが観察された（表７、図６）。これは、該カプセル剤の摂取を止めることで、「疲れの感覚」が最悪の感覚に近づいていること、即ち「疲れの感覚」が悪化傾向にあることを示す。
【００６７】
同様に、アーティチョーク葉抽出物カプセル剤の摂取後、１週目、４週目へと時が経過するにつれて、「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」に関するＶＡＳ評価が低減した（表７、図６）。これらは「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」が該カプセル剤の摂取を継続することで改善していることを示す。また、該カプセル剤摂取後４週で、該カプセル剤摂取時と比べて、有意に「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」が改善した（図６「身体的疲労感」Ｐ＜０．０５、「体の軽快さ」Ｐ＜０．０１）。加えて、後期観察では「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」が該カプセル剤摂取開始後４週と比べて増大したことが観察された（図６「身体的疲労感」Ｐ＜０．０５、「体の軽快さ」Ｐ＜０．０１）。これは、該カプセル剤の摂取を止めることで、「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」が最悪の感覚に近づいていること、即ち「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」が悪化したことを示す。
【００６８】
これらの結果は、アーティチョーク葉抽出物に安静時の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」、及び「体の軽快さ」を改善させる作用があることを示している。毎日１日１回のアーティチョーク葉抽出物カプセル剤の摂取によって、１週間を通じての安静時の疲労感（「疲れの感覚」、「身体的疲労感」、及び「体の軽快さ」）に改善が見られたことは、該カプセル剤摂取後の数時間の範囲の効果ではなく、約１日持続する効果であると推測される。
【００６９】
［運動負荷試験］
被験者は、当該モニタリングの間、週に一回、８７段の階段を昇るよう依頼された。各被験者が８７段の階段を昇るのに要した時間を測定した。各被験者は、８７段の階段を昇り終えた後に、運動負荷後の疲労感が評価された。運動負荷後の疲労感の評価では、運動負荷後の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「呼吸の乱れ」の３項目についてＶＡＳを用いて評価した。運動負荷後の疲労感の評価に用いたＶＡＳによるアンケート項目の内容を示す（表８）。
【００７０】
【表８】
2020040884.tif 000009
【００７１】
各アンケート項目「疲れの感覚」、「身体的疲労感」及び「呼吸の乱れ」の平均値、及び標準偏差を算出した（表９）。各アンケート項目に対する有意差検定（Ｐ値）はウィルコクソン順位和検定により行った。
【表９】
2020040884.tif 000010
【００７２】
アーティチョーク葉抽出物カプセル剤の摂取後、１週目、４週目へと時が経過するにつれて「疲れの感覚」に関するＶＡＳ評価が低減した（表９、図７）。これは「疲れの感覚」が時間の経過と共に、最良の感覚の方に近づいていること、即ち「疲れの感覚」が該カプセル剤の摂取を継続することで改善していることを示す。また、該カプセル剤摂取後４週で、該カプセル剤摂取時と比べて、有意に「疲れの感覚」が改善した（図７「疲れの感覚」Ｐ＜０．０５）。
加えて、後期観察では「疲れの感覚」が該カプセル剤摂取開始後４週と比べて増大したことが観察された（表９、図７）。これは、該カプセル剤の摂取を止めることで、「疲れの感覚」が最悪の感覚に近づいていること、即ち「疲れの感覚」が悪化したことを示す。
【００７３】
同様に、アーティチョーク葉抽出物カプセル剤の摂取後、１週目、４週目へと時が経過するにつれて、「身体的疲労感」及び「呼吸の乱れ」に関するＶＡＳ評価が低減した（表９、図７）。これらは「身体的疲労感」及び「体の軽快さ」が該カプセル剤の摂取を継続することで改善していることを示す。「身体的疲労感」及び「呼吸の乱れ」については、該カプセル剤摂取後１週で、該カプセル剤摂取時と比べて、有意な改善が観察された（図７「身体的疲労感」Ｐ＜０．０５、「呼吸の乱れ」Ｐ＜０．０５）。
【００７４】
加えて、後期観察では、「身体的疲労感」が該カプセル剤摂取開始後４週と比べて増大したこと及び「呼吸の乱れ」が増大傾向にあることが観察された（表９、図７）。これらは、該カプセル剤の摂取を止めることで、「身体的疲労感」及び「呼吸の疲れ」が最悪の感覚に近づいていること、即ち「身体的疲労感」が悪化したこと及び「呼吸の乱れ」が悪化傾向にあることを示す。
【００７５】
これらの結果は、アーティチョーク葉抽出物に運動負荷後の「疲れの感覚」、「身体的疲労感」、及び「呼吸の乱れ」を改善させる作用があることを示している。アーティチョーク葉抽出物カプセル剤によって、運動負荷後の疲労感（「疲れの感覚」、「身体的疲労感」、及び「呼吸の乱れ」）に改善が見られたことは、アーティチョーク葉抽出物による、筋管細胞におけるエネルギー代謝の活性化（実施例１〜４）によって運動機能が向上したためと推測される。
【００７６】
実施例６：  アーティチョーク葉抽出物による抗酸化作用
疲労又は疲労感に、酸化ストレスが関係することが広く知られている（例えば、Ｊｐｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ（薬理と治療）ｖｏｌ．３７  ｎｏ．３（２００９）２５５〜２６３頁）。クロロゲン酸がアーティチョーク葉抽出物中に含まれることは公知である（Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ３３（２）２３３−２２９（２０１０））。１日に複数回のクロロゲン酸（１５〜３２５ｍｇ／回）を摂取することによって、抗酸化作用が奏されることは公知である（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．２００２ Ｏｃｔ ９；５０（２１）：６２１１−６））。
これらの技術背景から、実施例５で実証された「アーティチョーク葉抽出物による抗疲労作用」が、アーティチョーク葉抽出物中のクロロゲン酸の抗酸化作用によるものである可能性が考えられた。そこで、実施例５で摂取されたアーティチョーク葉抽出物含有カプセル剤による抗酸化作用（酸化ストレスに対する作用）を評価した。
【００７７】
製造例１、２で得られたアーティチョーク葉アセトン抽出物中のクロロゲン酸含有量（ｗｔ％）を測定するために、液体クロマトグラフィーを行った。液体クロマトグラフィーの条件は、以下のとおりであった：
システム：  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）
カラム：  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ）
温度：  ４０℃
流速：  ０．４ｍＬ／ｍｉｎ
移動相：  （Ａ）０．２Ｍ  リン酸、
（Ｂ）０．０５Ｍ  リン酸水素アンモニウム：アセトニトリル＝２０：８０
勾配：  ０ｍｉｎ（Ａ）９７％  →  ８ｍｉｎ（Ａ）５０％、（Ｂ）５０％
検出波長：  ２８０ｎｍ
標準品：  クロロゲン酸（ＴＧＩ）
【００７８】
アーティチョーク葉アセトン抽出物（製造例１）は、抽出物の重量あたりクロロゲン酸を０．５５ｗｔ％含有した。アーティチョーク水抽出物（製造例２）は、抽出物の重量あたりクロロゲン酸を０．４８ｗｔ％含有した。
本実施例で摂取されたクロロゲン酸量は、概要、１日あたり１．３５ｍｇ（＝アーティチョーク葉抽出物３００［ｍｇ］×クロロゲン酸含有量０．４５［ｗｔ％］）であった。
【００７９】
抗酸化作用に対するアーティチョーク葉抽出物の評価には、実施例５に参加した被験者のうち、合意の得られた被験者６名（全員男性）に対して行った。抗酸化作用の評価は、尿中の酸化ストレスマーカーである８−イソプラスタン濃度を、当該モニタリングの開始時（０週目）、開始後１週目、及び開始後４週目に測定することで評価した（図８）。
【００８０】
８−イソプラスタンは、リン脂質の酸化により形成されるプロスタグランジン様の化合物であり、酸化ストレスマーカーとして利用されている。８−イソプラスタン濃度は、８−イソプラスタンＥＬＩＳＡキット（コスモ・バイオ株式会社）を用いて測定した。測定試料として、起床後の初尿を用いた。８−イソプラスタン濃度は、同じ初尿試料中のクレアチニン濃度を用いて補正された。８−イソプラスタン濃度（測定値）が高いほど酸化ストレス度が高いことを示す。
【００８１】
図８から理解されるように、アーティチョーク葉抽出物カプセル剤の摂取０週目、１週目、４週目をそれぞれ比較しても、８−イソプラスタン濃度に変化は観察されなかった。これは、摂取されたアーティチョーク葉抽出物カプセル剤が、酸化ストレスに有意な影響を及ぼさないことを示す。
【００８２】
上記のとおり、本実施例で摂取されたクロロゲン酸量は１．３５ｍｇ／日であった。クロロゲン酸による抗酸化作用は、その摂取量が１５〜３２５ｍｇ／回／日の場合に奏されることが知られている（Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．２００２ Ｏｃｔ ９；５０（２１）：６２１１−６）。本実施例で有意な抗酸化作用が示されなかった結果は、摂取されたクロロゲン酸量（１．３５ｍｇ／量）が抗酸化作用を示す量ではなかったことが要因と考えられた。
【００８３】
実施例５、実施例６の結果を併せて考慮すれば、アーティチョーク葉抽出物による抗疲労作用は、アーティチョーク葉抽出物による酸化ストレスに対する作用によるものではないことが示唆され、実施例１〜４の結果も併せて考慮すれば、アーティチョーク葉抽出物による抗疲労作用は、アーティチョーク葉抽出物中の生理活性成分シナロピクリンによりもたらされるものであると考えられた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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