(57)【要約】      （修正有）【課題】経口経路を介して投与できる治療上有効な生物薬剤の提供。【解決手段】所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；及び、アルブミンに結合し、アルブミン結合タンパク質Ｇ、又はそのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む、部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列を含み、ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列又はエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない化合物である医薬。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
経口投与による処置に使用するための化合物であって、該化合物は、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない前記化合物。
【請求項２】
前記部分（Ｉ）は、標的分子との選択的な相互作用が可能な結合ポリペプチドを含む、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項３】
結合ポリペプチドは、ブドウ球菌タンパク質ＡのドメインＢから誘導されたタンパク質Ｚの変異体であり、ここで該変異体は、配列番号７１９、配列番号７２０、および配列番号７２１から選択される足場アミノ酸配列を含み、Ｘは、任意のアミノ酸残基を示す、請求項２に記載の使用のための化合物。
【請求項４】
前記部分（ＩＩ）は、配列番号５１５に記載のアミノ酸配列を有する連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３を含む、請求項３に記載の使用のための化合物。
【請求項５】
前記部分（ＩＩ）は、アルブミン結合モチーフを含み、該モチーフは、アミノ酸配列：
ＧＶＳＤＸ５ＹＫＸ８Ｘ９Ｉ  Ｘ１１Ｘ１２ＡＸ１４ＴＶＥＧＶＸ２０  ＡＬＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｉ
からなり、
式中、互いに独立して、
Ｘ５は、ＹおよびＦから選択され；
Ｘ８は、Ｎ、Ｒ、およびＳから選択され；
Ｘ９は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、およびＹから選択され；
Ｘ１１は、Ｎ、Ｓ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘ１２は、Ｒ、Ｋ、およびＮから選択され；
Ｘ１４は、ＫおよびＲから選択され；
Ｘ２０は、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、およびＫから選択され；
Ｘ２３は、Ｋ、Ｉ、およびＴから選択され；
Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、およびＤから選択され；ならびに
Ｘ２５は、Ｈ、Ｅ、およびＤから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項６】
前記アルブミン結合モチーフは、配列番号１〜２５７から選択されるアミノ酸配列からなり、とりわけ、配列番号２、配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２５、配列番号２７、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１５５、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４および配列番号２４５、
から選択されるアミノ酸配列からなり、なかでも、配列番号３、配列番号５３、および配列番号２３９から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項５に記載の使用のための化合物。
【請求項７】
部分（ＩＩ）は、アミノ酸配列：
ＬＡＥＡＫＸａＸｂＡＸｃＸｄ  ＥＬＸｅＫＹ−［ＡＢＭ］−ＬＡＡＬＰ
を含み、
式中、
［ＡＢＭ］は、請求項５又は６に記載のアルブミン結合モチーフであり、
互いに独立して、
Ｘａは、ＶおよびＥから選択され；
Ｘｂは、Ｌ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘｃは、Ｎ、Ｌ、およびＩから選択され；
Ｘｄは、ＲおよびＫから選択され；ならびに
Ｘｅは、ＤおよびＫから選択される、請求項５又は６に記載の使用のための化合物。
【請求項８】
前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３の誘導体を含み、該誘導体は、以下から選択される１つの定義、すなわち：
ｉ）該アミノ酸配列は、配列番号２５８〜５１４から選択され、とりわけ、
配列番号２５９、配列番号２６０、配列番号２６６、配列番号２７２、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号３０３、配列番号３０６、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号４１２、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１および配列番号５０２、
から選択され、なかでも、配列番号２６０、配列番号３１０、および配列番号４９６から選択されること；
ｉｉ）該アミノ酸配列は、（ｉ）に記載の配列に対して８５％またはそれより大きい同一性を有するアミノ酸配列であること
から選択される１つの定義を満たすアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の使用のための化合物。
【請求項９】
前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３の誘導体を含み、該誘導体は、
ｉ）ＬＡＸ３ＡＫＸ６Ｘ７ＡＮＸ１０  ＥＬＤＸ１４ＹＧＶＳＤＦ  ＹＫＲＬＩＸ２６ＫＡＫＴ  ＶＥＧＶＥＡＬＫＸ３９Ｘ４０  ＩＬＸ４３Ｘ４４ＬＰ
式中、互いに独立して、
Ｘ３は、Ｅ、Ｓ、Ｑ、およびＣから選択され；
Ｘ６は、Ｅ、Ｓ、およびＣから選択され；
Ｘ７は、ＡおよびＳから選択され；
Ｘ１０は、Ａ、Ｓ、およびＲから選択され；
Ｘ１４は、Ａ、Ｓ、Ｃ、およびＫから選択され；
Ｘ２６は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ３９は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ４０は、ＡおよびＥから選択され；
Ｘ４３は、ＡおよびＫから選択され；
Ｘ４４は、Ａ、Ｓ、およびＥから選択され；
４５位におけるＬは、存在しているか、または存在しておらず；ならびに
４６位におけるＰは、存在しているか、または存在していない；
ならびに
ｉｉ）ｉ）で定義された配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の使用のための化合物。
【請求項１０】
誘導体は、配列番号５１６〜６５９および配列番号６７９〜７１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、とりわけ、
配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７、配列番号５６４〜５６５、配列番号６７９〜６８５および配列番号７０７〜７１８、
からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号５１６〜６５９からなる群から選択されるアミノ酸配列、とりわけ、
配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７および配列番号５６４〜５６５。
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
ａ）化合物であって、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない、化合物と； 
ｂ）少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤と
を含む、経口投与用の医薬組成物。
【請求項１２】
前記化合物は、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の化合物である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記治療活性の経口での生物学的利用能を増加させるための少なくとも１種の構成要素をさらに含む、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
腸溶性カプセルとして製剤化されている、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
化合物を経口投与することを含む、このような処置が必要な哺乳動物の対象の処置方法であって、該化合物は、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない前記処置方法。
【請求項１６】
請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物を経口投与することを含む、このような処置が必要な哺乳動物の対象の処置方法。
【請求項１７】
前記化合物は、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の化合物である、請求項１５又は１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物薬剤投与の分野の範囲内である。より具体的には、本発明は、所望の治療活性を付与する部分；およびアルブミンに結合するポリペプチド部分を含む化合物の経口投与を提供する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質治療剤の経口送達
現在販売されているタンパク質治療剤およびペプチド治療剤の大半は、非経口経路によって、すなわち消化管を通過させずに、例えば静脈内、筋肉内または皮下注射などによって投与される。体循環への直接的な静脈内投与は、１００％の生物学的利用能と薬物作用の迅速な開始をもたらす。しかしながら、血中の薬物濃度が即座に高くなることから、副作用の危険が増加する。その上、いずれの注射法による投与も、痛みと不快感のために低い患者のコンプライアンスに関連する。自己投与が不可能な場合が多く、したがって診療所で処置を行われなければならない。薬物の半減期が短く、十分なレベルの治療の作用を維持するために頻繁な反復投与が必要な場合、後者は特に問題となる。さらに患者の臨床的な処置、時によっては入院の必要性も、社会にとって高いコストを伴う。したがって、投与を簡易化することは、例えば経口、鼻腔内、肺、経皮または直腸などの代替送達経路を意図した薬物を開発する主要な原動力であるが、このような代替送達経路はいずれも、特定の利点と制限に関連する。経口投与は、特に小児患者の処置のための最も便利な投与経路の１つであり続けている。その上、経口製剤は、滅菌条件下での生産を必要としないことにより、薬物の１単位あたりの製造コストを低くしている（非特許文献１）。いくつかのタンパク質治療剤にとっても、インスリンに関して提唱されているように、経口送達経路がそれでもより生理学的である場合がある（非特許文献２）。
【０００３】
実際のところ、従来の低分子量薬物の経口送達は十分に確立されている。しかしながら、より大きく、より安定が低く、多くの場合極性であるペプチド治療剤およびタンパク質治療剤の経口送達は、例えば薬物が、１）胃の酸性の環境に対して耐性を有すること、２）消化管内の酵素分解に対して耐性を有すること、および３）腸上皮を通過し循環系に到達することが可能であることを要するといった他の課題に直面する。これらの課題に取り組むために、タンパク質それ自身を改変すること、または製剤もしくは薬物担体系を最適化することのいずれかによる様々なアプローチが試みられてきた。
【０００４】
経口での生物学的利用能に影響を与える因子
経口投与されるタンパク質治療剤の生物学的利用能は、例えば分子量、アミノ酸配列、疎水性、等電点（ｐＩ）、溶解性、およびｐＨ安定性などのタンパク質の生理学的特性によって左右され、加えて消化管でみられる生物学的な障壁、すなわちタンパク質分解性の環境および一般的に大きい分子の腸壁からの吸収が低いことによっても左右される。
【０００５】
消化管の生理化学的な環境は個体の摂食状態に応じて様々である。絶食段階と摂食段階とで変化する要因としては、胃のｐＨ、胃腸液の組成、および体積が挙げられる。ヒトにおいて、摂食状態における胃のｐＨは、およそ１〜２であるが、絶食状態では３〜７に上昇する。小腸全体ではｐＨは様々であるが、摂食状態および絶食状態ではそれぞれ平均しておよそｐＨ５および６．５である（非特許文献３）。ｐＨの差は、それぞれ特異的な最適ｐＨに関連するタンパク質分解酵素の活性レベルに影響を与える。胃において主要なプロテアーゼであるペプシンは、およそｐＨ２で最適な活性を有するが、腸のトリプシンおよびキモトリプシンは、およそｐＨ８で最適な活性を有する。その上、胃内容排出は、律速段階である。食物、特に脂肪分の多い食物は胃内容排出を遅くするため、薬物吸収速度
も遅くなり（非特許文献４）、薬物がタンパク質分解酵素に晒される時間を延長させる。それゆえに、食事中に、または食間に、有意な体積の液体、または様々なタイプの液体と一緒に、またはそれらなしで薬物が摂取される場合、薬物の生物学的利用能が影響を受ける可能性がある。
【０００６】
腸壁からの吸収が低いことは、経口送達されたタンパク質治療剤の生物学的利用能を制限する主な要因であり続けている。経口摂取された薬物は、どのような栄養素とも同様に、２つの選択肢；すなわち、細胞を通過する通路を利用する経細胞経路、または密着結合を介して隣接する細胞間の通路を利用する傍細胞経路のいずれかを使用することによって腸壁を通過する選択肢がある。５００Ｄａ未満の分子量を有する低分子物質が、いずれかの経路を使用して通過できる（非特許文献５）。より大きい分子量を有する薬物の腸壁を通過する能力は、例えば電荷、親油性、および親水性などの薬物の生理化学的特性によって左右される。親油性薬物の場合、経細胞ルート（ｔｒａｎｓｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｏｕｔｅ）が優先するが、親水性薬物は、傍細胞ルート（ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｏｕｔｅ）を通過できる（非特許文献１）。しかしながら、細胞間隙の寸法は１０Åから３０Å〜５０Åであるため、傍細胞輸送は、一般的に、半径が１５Å（約３．５ｋＤａ）未満の分子に限定されることが示唆されている（非特許文献６）。経細胞経路の場合と同様に、小さい分子量の物質は受動拡散によって容易に通過する。しかしながら、それよりも大きい分子量の物質は、例えば飲作用（非特異的な「細胞飲み込み作用（ｃｅｌｌ  ｄｒｉｎｋｉｎｇ）」）またはトランスサイトーシス（受容体介在輸送）などのエネルギー消費を要する活性過程に限定される。
【０００７】
最後に、生物学的利用能はさらに、患者間の変動、例えば年齢（胎児、新生児、および老齢の集団では、一般的に薬物はよりゆっくり代謝される）、消化管の健康状態、および全身の病状（例えば肝不全、腎機能の低下）など、加えて患者内の変動、すなわち長期にわたる同じ患者における変動の影響も受ける。
【０００８】
治療上有効な用量の送達を可能にし、製造コストを低下させ、それほどではないにせよ患者間および患者内の変動を考慮しなければならないため、経口投与されるタンパク質およびペプチドの生物学的利用能を増加させることが重要である。タンパク質治療剤の経口での生物学的利用能を改善する戦略は、例えば疎水性、電荷、ｐＨ安定性、および溶解性などの生理化学的特性を変化させること；薬物製剤にプロテアーゼ阻害剤または吸収促進剤を包含させること；および例えばエマルジョン、リポソーム、マイクロスフェアまたはナノ粒子などの製剤媒体（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｖｅｈｉｃｌｅ）の使用まで多岐にわたる（非特許文献７でまとめられている）。
【０００９】
インビボでのタンパク質の半減期の延長
経口投与されるペプチドおよびタンパク質薬の生物学的利用能が比較的低いことを考慮すると、生物学的に活性な形態で腸上皮膜を通過させようとする画分の長いインビボでの血漿中半減期を維持することが適切である。急速な腎クリアランスを予防するいくつかの戦略が文献に説明されており、これらは当業者公知である。これらの戦略としては、アルブミン、それらの抗体もしくはフラグメントとの融合、コンジュゲートまたは会合、または１種または数種のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導体へのコンジュゲートが挙げられる。ペグ化はさらに、粘膜からの吸収を促進し、ペプチド薬を安定化させ、プロテアーゼによる分解を防ぐことも報告されている（非特許文献８）。インビボにおいて、投与後に長い半減期を示す分子と会合することは、小さいサイズを保持し、長い半減期を示す分子の部分的なタンパク質分解を防ぐために、投与前にそれらに直接融合またはコンジュゲートしているよりも好ましい可能性がある。
【００１０】
インビボでのタンパク質の半減期を増加させるための血清アルブミンとの会合
血清アルブミンは、哺乳動物の血清中の最も豊富なタンパク質（ヒトにおいて、３５〜５０ｇ／ｌ、すなわち０．５３〜０．７５ｍＭ）であり、例えば特許文献１、特許文献２、およびＤｅｎｎｉｓら（非特許文献９）で、インビボで血清アルブミンへの会合を可能にすると予想される担体分子に、ペプチドまたはタンパク質を共有結合させるいくつかの戦略が説明されている。第１の文献では、特に、他のタンパク質の半減期を増加させるための、連鎖球菌由来タンパク質Ｇ（ＳｐＧ）から誘導されたアルブミン結合ペプチドまたはタンパク質の使用を説明している。その概念は、バクテリア由来のアルブミン結合ペプチド／タンパク質を、血液から急速に除去されることが示されている治療的に重要なペプチド／タンパク質に融合させることである。生成した融合タンパク質がインビボで血清アルブミンに結合すると、そのより長い半減期を利用して、融合した治療的に重要なペプチド／タンパク質の正味の半減期を増加させる。特許文献２およびＤｅｎｎｉｓらは、同じ概念に関するが、ここで著者は、血清アルブミンと結合させるのに比較的短いペプチドを利用している。ペプチドは、ファージディスプレイによるペプチドライブラリーから選択された。また特許文献３として公開された米国特許出願（Ｄｅｎｎｉｓ）も、同様にファージディスプレイ技術によって同定されたペプチドリガンドを含むコンストラクトの使用を開示しており、このようなペプチドリガンドは、血清アルブミンに結合し、腫瘍を標的化するための生物活性化合物にコンジュゲートする。
【００１１】
細菌性受容体タンパク質のアルブミン結合ドメイン
連鎖球菌由来タンパク質Ｇ（ＳｐＧ）は、所定の連鎖球菌属株の表面上に存在する二官能性受容体であり、ＩｇＧと血清アルブミンの両方に結合できる（非特許文献１０）。構造は、数種の構造的および機能的に異なるドメインが高度に繰り返されており（非特許文献１１）、これらのドメインは、より正確には３つのＩｇ−結合ドメインと３つの血清アルブミン結合ドメインである（非特許文献１２）。ＳｐＧにおける３つの血清アルブミン結合ドメインのうち１つの構造は、３ヘリックスバンドルの折り畳みを示すことが決定されている（非特許文献１３；非特許文献１４）。４６アミノ酸のモチーフをＡＢＤ（アルブミン結合ドメイン）と定義し、続いてＧ１４８−ＧＡ３（タンパク質Ｇ関連アルブミン結合に関するＧＡ）と名付けた。
【００１２】
またタンパク質Ｇに存在するもの以外の細菌性アルブミン結合ドメインも同定されており、そのうちいくつかは、タンパク質Ｇのものと構造的に類似している。このようなアルブミン結合ドメインを含有するタンパク質の例は、ＰＡＢ、ＰＰＬ、ＭＡＧ、およびＺＡＧタンパク質である（非特許文献１５）。このようなアルブミン結合ドメインの構造的および機能的な研究が行われており、例えばＪｏｈａｎｓｓｏｎとその協力者によって報告されている（非特許文献１６）。
【００１３】
上記で説明した３ヘリックスバンドルタンパク質に加えて、アルブミンに結合するその他の関連のない細菌タンパク質もある。例えば、「Ｍタンパク質」と名付けられた連鎖球菌由来タンパク質ファミリーは、アルブミンに結合するものを含む（例えば、非特許文献１７を参照）。非限定的な例は、タンパク質Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、およびＨである。
【００１４】
加工されたＡＢＤ変異体
Ｒｏｚａｋらは、Ｇ１４８−ＧＡ３の人工変異体の作製を報告しており、これらは様々な種特異性および安定性に関して選択され研究されており（非特許文献１５）、それに対してＪｏｎｓｓｏｎらは、ヒト血清アルブミンへの親和性が顕著に改善されたＧ１４８−ＧＡ３の人工変異体を開発した（非特許文献１８；特許文献４）。
【００１５】
連鎖球菌タンパク質Ｇ株１４８（Ｇ１４８）のアルブミン結合領域内で少数のＴ細胞およびＢ細胞エピトープが実験的に同定されたが（非特許文献１９）、このようなエピトー
プのために、アルブミン結合ドメインＧ１４８は、ヒト投与用の医薬組成物に使用するのにあまり好適ではないものとなっている。特許文献５で説明されているように、免疫刺激特性を低下させるために、Ｂ細胞およびＴ細胞エピトープの存在可能性をより低くしつつ高いアルブミン結合能力を保持する新しいＡＢＤ変異体を開発した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】ＷＯ９１／０１７４３
【特許文献２】ＷＯ０１／４５７４６
【特許文献３】ＵＳ２００４／０００１８２７
【特許文献４】ＷＯ２００９／０１６０４３
【特許文献５】ＷＯ２０１２／００４３８４
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Ｓａｌａｍａら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．５８：１５〜２８頁、２００６年
【非特許文献２】ＨｏｆｆｍａｎおよびＺｉｖ、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．３３：２８５〜３０１頁、１９９７年
【非特許文献３】Ｋｌｅｉｎ、ＡＡＰＳ  Ｊ．１２：３９７〜４０６頁、２０１０年
【非特許文献４】Ｓｉｎｇｈ、Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．３７：２１３〜５５頁、１９９９年
【非特許文献５】Ｍｕｅｌｌｅｒ、Ｃｕｒｒ  Ｉｓｓｕｅｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１３：１３〜２４頁、２０１１年
【非特許文献６】Ｒｕｂａｓら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８５：１６５〜９頁、１９９６年
【非特許文献７】Ｐａｒｋら、Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、７１：２８０〜２８７頁、２０１１年
【非特許文献８】Ｍｅｉｂｏｈｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｄｒｕｇｓ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００６年
【非特許文献９】Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：３５０３５〜４３頁、２００２年
【非特許文献１０】Ｂｊｏｅｒｃｋら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４：１１１３頁、１９８７年
【非特許文献１１】Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ  ５：１５６７頁、１９８６年
【非特許文献１２】Ｏｌｓｓｏｎら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １６８：３１９頁、１９８７年
【非特許文献１３】Ｋｒａｕｌｉｓら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ３７８：１９０頁、１９９６年
【非特許文献１４】Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：８１１４〜２０頁、２００２年
【非特許文献１５】Ｒｏｚａｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４５：３２６３〜３２７１頁、２００６年
【非特許文献１６】Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６６：８５９〜８６５頁、１９９７年
【非特許文献１７】ＮａｖａｒｒｅおよびＳｃｈｎｅｅｗｉｎｄ、ＭＭＢＲ  ６３：１７４〜２２９頁、１９９９年に記載の表２
【非特許文献１８】Ｊｏｎｓｓｏｎら、Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ  ２１：５１５〜２７頁、２００８年
【非特許文献１９】Ｇｏｅｔｓｃｈら、Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：１２５〜３２頁、２００３年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
上述した背景から明らかなように、経口経路を介して投与できる治療上有効な生物薬剤の必要が未だ残されている。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明の様々な態様は、以下でさらに定義される分子の経口投与を可能にすることによりこの必要性に取り組むものである。したがって、本発明は、このような経口投与による処置に使用するための分子；このような分子を含み、経口投与に適するように製剤化された医薬組成物；およびこのような分子または医薬組成物をこのような処置が必要な対象に経口投与することによる処置方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
Ｉ  使用するための化合物
第１の態様において、
本発明は、経口投与による処置に使用するための化合物であって、該化合物は、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない前記化合物を提供する。
【００２１】
上記で定義された化合物は、少なくとも２つの部分（Ｉ）および（ＩＩ）を含み、これらは、例えば、公知の有機化学的な方法を使用して共有結合で連結されていてもよいし、または一方もしくは両方の部分がポリペプチドである場合、ポリペプチドの組換え発現系で１つもしくはそれ以上の融合ポリペプチドとして発現されてもよいし、または直接的に、もしくは多数のアミノ酸を含むリンカーを介して他の任意の様式で合体していてもよい。例えば上記で定義された化合物を提供するために、アルブミン結合部分と他の部分とを連結することに関する議論については、例えば参照によって本明細書に組み入れられるＰＣＴ公報ＷＯ２０１０／０５４６９９およびＷＯ２０１２／００４３８４を参照されたい。
【００２２】
所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）
本発明の一実施形態において、部分（Ｉ）と名付けられた本化合物の一部は、ヒト内因性酵素、ホルモン、増殖因子、ケモカイン、サイトカイン、血液凝固および補体因子、自然免疫防御および調節ペプチドからなる群から選択される構成要素、例えば、インスリン、インスリン類似体、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＧＬＰ−１、ＢＮＰ、ＩＬ１−ＲＡ、ＫＧＦ、Ｓｔｅｍｇｅｎ（登録商標）、ＧＨ、Ｇ−ＣＳＦ、ＣＴＬＡ−４、ミオスタチン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、および第ＩＸ因子、ならびにそれらのうちいずれかの誘導体からなる群から選択される構成要素を含む。
【００２３】
他の実施形態において、部分（Ｉ）は、モジュリン（ｍｏｄｕｌｉｎ）、細菌毒素、ホルモン（ただしエキセンジンを除く）、自然免疫防御および調節ペプチド、酵素、および
活性化タンパク質からなる群から選択される、生物学的に活性な非ヒトタンパク質を含む。
【００２４】
さらにその他の実施形態において、部分（Ｉ）は、標的分子との選択的な相互作用が可能な結合ポリペプチドを含む。このような結合ポリペプチドは、例えば、抗体結合活性を実質的に保持する抗体ならびにそれらのフラグメントおよびドメイン；ミクロボディ、マキシボディ（ｍａｘｙｂｏｄｙ）、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、およびその他の小さいジスルフィド結合タンパク質；ならびにブドウ球菌タンパク質Ａおよびそれらのドメイン、その他の３へリックスドメイン、リポカリン、アンキリン反復ドメイン、セルロース結合ドメイン、γクリスタリン、緑色蛍光タンパク質、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞結合抗原４、クニッツドメインのようなプロテアーゼ阻害剤、ＰＤＺドメイン、ＳＨ３ドメイン、ペプチドアプタマー、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、テンダミスタット、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、トランスフェリン、ジンクフィンガー、およびコノトキシンからなる群から選択されてもよい。
【００２５】
このような実施形態ののうちいくつかの例において、結合ポリペプチドは、次にブドウ球菌タンパク質ＡのドメインＢから誘導されたタンパク質Ｚの変異体を含み、これは、Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｂら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １：１０７〜１３３頁、１９８７年で説明されている。このような多数の異なる標的に親和性を有する変異体は、多数の先行の出版物、例えば、これらに限定されないが、いずれも参照によって本明細書に組み入れられるＷＯ９５／１９３７４；Ｎｏｒｄら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（１９９７年）１５：７７２〜７７７頁；およびＷＯ２００９／０８０８１１で説明されているように、ライブラリーから選択され、さらに加工される。このような本発明に係る使用のための化合物の実施形態において、部分（Ｉ）に相当するタンパク質Ｚの変異体は、配列番号７１９、配列番号７２０、および配列番号７２１から選択される足場アミノ酸配列を含み、式中Ｘは、任意のアミノ酸残基を示す。上述した文献およびＰＣＴ公報で説明されているように、Ｘを含むアミノ酸位置はいずれもタンパク質Ｚ変異体の結合機能に関与しており、Ｚ変異体がどの標的に結合するように設計されているかに応じて様々であると予想される。これらの実施形態において、好ましくは、部分（Ｉ）の足場アミノ酸配列は、配列番号７１９または配列番号７２０を含む。
【００２６】
部分（Ｉ）が標的分子との選択的な相互作用が可能な結合ポリペプチドを含む本発明の実施形態において、前記標的分子は、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ１３８、ｃＭｅｔ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＣＡＩＸ、ＣＥＡ、ＩＬ−２受容体、ＩＧＦ１Ｒ、ＶＥＧＦＲ２、ＭＵＣ１、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＳＭＡ、タグ−７２、ＦＯＬＲ１、メソテリン、ＣＡ６、ＧＰＮＭＢ、インテグリン、およびｅｐｈＡ２のような腫瘍関連または他の細胞表面関連抗原；ＴＮＦ−α、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびそれらの受容体のようなサイトカイン；ＩＬ−８、ＣＣＬ−２、およびＣＣＬ１１、ならびにそれらの受容体のようなケモカイン；Ｃ３および第Ｄ因子のような補体因子；ＨＧＦおよびミオスタチンのような増殖因子；ＧＨ、インスリン、およびソマトスタチンのようなホルモン；アルツハイマー病のＡβペプチドのようなペプチド；他の疾患関連アミロイドペプチド；ヒスタミンおよびＩｇＥのような過敏症メディエーター（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ）；フォン−ウィルブランド因子のような血液凝固因子；ならびに細菌毒素およびヘビ毒のような毒素からなる群から選択されてもよい。
【００２７】
代替の実施形態において、部分（Ｉ）は、治療活性を有する非タンパク質様の構成要素を含む。その特に重要な例としては、アルブミンは、腫瘍組織中と炎症部位に蓄積するこ
とが示されていることから、細胞毒性物質および抗炎症薬が挙げられる（ＫｒａｔｚおよびＢｅｙｅｒ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ５：２８１〜９９頁、１９９８年；Ｗｕｎｄｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：４７９３〜８０１頁、２００３年）。これは、次に、関連腫瘍組織または炎症部位の標的化とそこでの蓄積のために、アルブミン結合部分と共にこのような化合物を経口送達することの論理的説明となる。細胞毒性物質の非限定的な例は、カリケアマイシン、オーリスタチン、ドキソルビシン、メイタンシノイド、タキサン、エクテイナシジン、ゲルダナマイシン、メトトレキセート、カンプトテシン、シクロホスファミド、シクロスポリン、およびそれらの誘導体、ならびにそれらの組み合わせである。抗炎症薬の非限定的な例は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）、コルチコステロイド、メトトレキセート、プレドニゾン、シクロスポリン、モロニサイドケイ皮酸（ｍｏｒｒｏｎｉｓｉｄｅ  ｃｉｎｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、レフルノミド、およびそれらの誘導体、ならびにそれらの組み合わせである。
【００２８】
このような実施形態において、非タンパク質様の部分（Ｉ）およびアルブミン結合部分（ＩＩ）は、非共有結合によって会合していてもよいが、現在のところこれらは共有結合で一緒に連結されていることが好ましい。
【００２９】
非タンパク質様の部分（Ｉ）のアルブミン結合部分（ＩＩ）へのコンジュゲートは、溶解性を増加させる可能性があり、したがって、経口投与には好適ではない別の方法では可溶性が不十分な化合物の生物学的利用能を増加させる可能性がある。
【００３０】
アルブミンに結合する部分（ＩＩ）
本明細書において定義されるように、経口投与による処置に使用するための化合物は、アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列を含む。
【００３１】
背景の章と本明細書で引用されたＲｏｚａｋらおよびＪｏｈａｎｓｓｏｎらによる文献で説明したように、上記のアルブミン結合タンパク質の多くが、ＧＡドメインと称されるアルブミン結合ドメインを含む。本発明の一実施形態において、本化合物の部分（ＩＩ）は、天然に存在するＧＡドメインまたはそれらの誘導体を含む。有用なこのようなＧＡドメインの具体的な例は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ１、ドメインＧＡ２、およびドメインＧＡ３、ならびにそれらの誘導体である。具体的な一実施形態において、部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３を含む。このアルブミン結合ドメインはまた、文献では「ＡＢＤ」または「ＡＢＤｗｔ」と称されることも多く、添付のリストにおいて配列番号５１５に記載のアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３の誘導体を含む。このような誘導体のいくつかは、例えば上述の参照によって本明細書に組み入れられるＷＯ２００９／０１６０４３およびＷＯ２０１２／００４３８４で説明されているようにして開発された。
【００３２】
ＷＯ２００９／０１６０４３で開示されたＡＢＤ誘導体を含む部分（ＩＩ）
したがって、ＷＯ２００９／０１６０４３を参照すれば、本発明に係る経口投与による処置に使用するための化合物の部分（ＩＩ）は、アルブミン結合モチーフを含んでいてもよく、このモチーフは、アミノ酸配列：
ＧＶＳＤＸ５ＹＫＸ８Ｘ９Ｉ  Ｘ１１Ｘ１２ＡＸ１４ＴＶＥＧＶＸ２０  ＡＬＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｉ
からなり、
式中、互いに独立して、
Ｘ５は、ＹおよびＦから選択され；
Ｘ８は、Ｎ、Ｒ、およびＳから選択され；
Ｘ９は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、およびＹから選択され；
Ｘ１１は、Ｎ、Ｓ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘ１２は、Ｒ、Ｋ、およびＮから選択され；
Ｘ１４は、ＫおよびＲから選択され；
Ｘ２０は、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、およびＫから選択され；
Ｘ２３は、Ｋ、Ｉ、およびＴから選択され；
Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、およびＤから選択され；ならびに
Ｘ２５は、Ｈ、Ｅ、およびＤから選択される。
【００３３】
上記した本化合物における部分（ＩＩ）で使用するためのアルブミン結合ポリペプチドに関連する配列のクラスの定義は、ＷＯ２００９／０１６０４３の実験の章で詳述されたような同定され特徴付けられた多数のアルブミン結合ポリペプチドの統計的分析に基づく。簡単に言えば、変異体は、ＡＢＤｗｔの親のポリペプチド配列（配列番号５１５）のランダム変異体の大規模なプールから選択され、前記選択は、例えばファージディスプレイまたは他の選択実験でのアルブミンとの相互作用に基づいてなされている。同定されたアルブミン結合モチーフ、または「ＡＢＭ」は、親の足場のアルブミン結合領域に相当し、この領域は、３ヘリックスバンドルタンパク質のドメイン内で２つのアルファヘリックスを構成する。親の足場中の２つのＡＢＭヘリックスの元のアミノ酸残基がすでにアルブミンとの相互作用のための結合表面を構成しているが、その結合表面は、本発明に係る置換によって改変されて、代替のアルブミン結合能力を付与する。
【００３４】
一実施形態において、Ｘ５は、Ｙである。
【００３５】
一実施形態において、Ｘ８は、ＮおよびＲから選択され、特にＲであってもよい。
【００３６】
一実施形態において、Ｘ９は、Ｌである。
【００３７】
一実施形態において、Ｘ１１は、ＮおよびＳから選択され、特にＮであってもよい。
【００３８】
一実施形態において、Ｘ１２は、ＲおよびＫから選択され、例えばＸ１２は、Ｒであるか、またはＸ１２は、Ｋである。
【００３９】
一実施形態において、Ｘ１４は、Ｋである。
【００４０】
一実施形態において、Ｘ２０は、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｓ、およびＲから選択され、特にＥであってもよい。
【００４１】
一実施形態において、Ｘ２３は、ＫおよびＩから選択され、特にＫであってもよい。
【００４２】
一実施形態において、Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｈ、およびＬから選択される。
【００４３】
より具体的な実施形態において、Ｘ２４は、Ｌである。
【００４４】
さらにより具体的な実施形態において、Ｘ２３Ｘ２４は、ＫＬである。
【００４５】
他のさらにより具体的な実施形態において、Ｘ２３Ｘ２４は、ＴＬである。
【００４６】
一実施形態において、Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、およびＨから選択される。
【００４７】
より具体的な実施形態において、Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、およびＨから選択され、Ｘ２３はＩである。
【００４８】
一実施形態において、Ｘ２５は、Ｈである。
【００４９】
ＷＯ２００９／０１６０４３の実験の章で詳細に説明されているように、アルブミン結合変異体を選択することにより、相当量の個々のアルブミン結合モチーフ（ＡＢＭ）配列を同定するに至った。これらの配列は、本発明の内容における部分（ＩＩ）としてのアルブミン結合アミノ酸配列の定義における、ＡＢＭ配列の個々の実施形態を構成する。個々のアルブミン結合モチーフの配列は、図１で配列番号１〜２５７として示される。所定の実施形態において、ＡＢＭは、配列番号１〜２５７から選択されるアミノ酸配列からなる。より具体的な実施形態において、ＡＢＭ配列は、配列番号２、配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２５、配列番号２７、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１５５、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４および配列番号２４５から選択される。さらにより具体的な実施形態において、ＡＢＭ配列は、配列番号３、配列番号５３、および配列番号２３９から選択される。
【００５０】
アルブミン結合部分（ＩＩ）の実施形態において、ＡＢＭは、３ヘリックスバンドルタンパク質ドメインの一部を形成する可能性がある。例えば、ＡＢＭは、実質的に、前記３ヘリックスバンドルタンパク質ドメイン内で、互いに連結されたループを有する２つのアルファヘリックスの一部を構成または形成する可能性がある。
【００５１】
特定の実施形態において、このような３ヘリックスバンドルタンパク質ドメインは、細菌性受容体タンパク質の３へリックスドメインからなる群から選択される。このような細菌性受容体タンパク質の非限定的な例は、連鎖球菌種のペプトストレプトコッカス属およびフィネゴルディア属（Ｆｉｎｅｇｏｌｄｉａ）由来のアルブミン結合受容体タンパク質からなる群から選択され、例えばタンパク質Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢからなる群から選択される。本発明の具体的な実施形態において、ＡＢＭは、例えば連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質Ｇなどのタンパク質Ｇの一部を形成する。この実施形態の様々な変異体において、ＡＢＭがその一部を形成する３ヘリックスバンドルタンパク質ドメインは、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ１、ドメインＧＡ２、およびドメインＧＡ３からなる群から選択され、特にドメインＧＡ３である。
【００５２】
代替の実施形態において、ＡＢＭは、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）由来の細菌性受容体タンパク質のタンパク質Ａの５つの３へリックスドメインのうち１つまたはそれ以上の一部を形成し；すなわち３ヘリックスバンドルタンパク質ドメインは、タンパク質ＡのドメインＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥからなる群から選択される。他の類似の実施形態において、ＡＢＭは、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）由来のタンパク質ＡのドメインＢから誘導されたタンパク質Ｚの一部を形成する。
【００５３】
ＡＢＭが３ヘリックスバンドルタンパク質ドメインの「一部を形成する」実施形態において、「一部を形成する」は、元のドメインにおいてＡＢＭが類似の構造的なモチーフと置換されるように、ＡＢＭの配列が、天然に存在する（または別の形態で元の）３ヘリックスバンドルドメインの配列に「挿入」されるかまたは「グラフト」されることを意味するものとして理解される。例えば、理論に制限されることは望まないが、ＡＢＭは、３ヘ
リックスバンドルの３つのヘリックスのうち２つを構成すると考えられ、それゆえにＡＢＭは、いずれかの３ヘリックスバンドル内でこのような２つのへリックスモチーフと置換されていてもよい。当業者であれば理解しているものと予想されるが、３ヘリックスバンドルドメインの２つのヘリックスの２つのＡＢＭヘリックスでの置換は、ポリペプチドの基本構造に影響を与えないようにして行われなければならない。すなわち、この実施形態に係るポリペプチドのＣα主鎖の全体の折り畳みは、それが一部を形成する３ヘリックスバンドルタンパク質ドメインの折り畳みと、例えば同じ順番で同じ二次構造の要素を有する等、実質的に同じと予想される。したがって、本発明のこの実施形態に係るポリペプチドが元のドメインと同じように折り畳まれる場合、本発明に係るＡＢＭは３ヘリックスバンドルドメインの「一部を形成」し、これは、基本の構造的な特性が共通であることを示し、このような特性としては、例えば結果的に類似のＣＤスペクトルをもたらすような特性が挙げられる。当業者は、関連する他のパラメーターについて認識している。
【００５４】
一実施形態において、アルブミン結合ポリペプチドは、３ヘリックスバンドルタンパク質ドメインであり、このドメインは、上記で定義されたアルブミン結合モチーフと、３つのへリックス構造の残りを構成する追加の配列とを含む。したがって、この実施形態において、部分（ＩＩ）は、アミノ酸配列：
ＬＡＥＡＫＸａＸｂＡＸｃＸｄ  ＥＬＸｅＫＹ−［ＡＢＭ］−ＬＡＡＬＰ
を有するアルブミン結合ドメインを含み、
式中、
［ＡＢＭ］は、この章において上記で定義されたアルブミン結合モチーフであり、
互いに独立して、
Ｘａは、ＶおよびＥから選択され；
Ｘｂは、Ｌ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘｃは、Ｎ、Ｌ、およびＩから選択され；
Ｘｄは、ＲおよびＫから選択され；ならびに
Ｘｅは、ＤおよびＫから選択される。
【００５５】
一実施形態において、Ｘａは、Ｖである。
【００５６】
一実施形態において、Ｘｂは、Ｌである。
【００５７】
一実施形態において、ＸＣは、Ｎである。
【００５８】
一実施形態において、Ｘｄは、Ｒである。
【００５９】
一実施形態において、Ｘｅは、Ｄである。
【００６０】
ここでもＷＯ２００９／０１６０４３の実験の章で詳細に説明されているように、多数のアルブミン結合変異体の選択および配列決定により、個々のアルブミン結合ドメインの配列を同定するに至った。これらの配列は、本発明の経口投与による処置で使用するための化合物の部分（ＩＩ）に含まれるアルブミン結合ドメインの個々の実施形態を構成する。これらの個々のアルブミン結合ドメインの配列は、図１に配列番号２５８〜５１４として示される。また、配列番号２５８〜５１４から選択される配列に対して８５％またはそれより大きい同一性を有するアミノ酸配列を有するアルブミン結合ドメインも本明細書における定義に包含される。特定の実施形態において、アルブミン結合ドメインの配列は、配列番号２５９、配列番号２６０、配列番号２６６、配列番号２７２、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号３０３、配列番号３０６、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号４１２、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１および配列番号５０２ならびにそれら
に対して８５％またはそれより大きい同一性を有する配列から選択される。本発明のこの態様のより具体的な実施形態において、アルブミン結合ポリペプチドの配列は、配列番号２６０、配列番号３１０、および配列番号４９６、ならびにそれらに対して８５％またはそれより大きい同一性を有する配列から選択される。
【００６１】
ＷＯ２０１２／００４３８４で開示されたＡＢＤ誘導体を含む部分（ＩＩ）
代わりにＷＯ２０１２／００４３８４を参照すれば、本発明に係る経口投与による処置に使用するための化合物の部分（ＩＩ）は、アルブミン結合ドメインを代わりに含んでいてもよく、このドメインは、次に、
ｉ）  ＬＡＸ３ＡＫＸ６Ｘ７ＡＮＸ１０  ＥＬＤＸ１４ＹＧＶＳＤＦ  ＹＫＲＬＩＸ２６ＫＡＫＴ  ＶＥＧＶＥＡＬＫＸ３９Ｘ４０ＩＬＸ４３Ｘ４４ＬＰ
式中、互いに独立して、
Ｘ３は、Ｅ、Ｓ、Ｑ、およびＣから選択され；
Ｘ６は、Ｅ、Ｓ、およびＣから選択され；
Ｘ７は、ＡおよびＳから選択され；
Ｘ１０は、Ａ、Ｓ、およびＲから選択され；
Ｘ１４は、Ａ、Ｓ、Ｃ、およびＫから選択され；
Ｘ２６は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ３９は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ４０は、ＡおよびＥから選択され；
Ｘ４３は、ＡおよびＫから選択され；
Ｘ４４は、Ａ、Ｓ、およびＥから選択され；
４５位におけるＬは、存在しているか、または存在しておらず；ならびに
４６位におけるＰは、存在しているか、または存在していない；
ならびに
ｉｉ）  ｉ）で定義された配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００６２】
この定義に係るアルブミン結合ドメインは、例えば、ヒトへの投与用の治療的分子のための融合またはコンジュゲートのパートナーとして好適に使用できるようにする一連の特色を示す。このクラスのアルブミン結合ドメインの利点は、ＷＯ２０１２／００４３８４で詳細に説明されている。
【００６３】
一実施形態において、Ｘ６は、Ｅである。
【００６４】
他の実施形態において、Ｘ３は、Ｓである。
【００６５】
他の実施形態において、Ｘ３は、Ｅである。
【００６６】
他の実施形態において、Ｘ７は、Ａである。
【００６７】
他の実施形態において、Ｘ１４は、Ｓである。
【００６８】
他の実施形態において、Ｘ１４は、Ｃである。
【００６９】
他の実施形態において、Ｘ１０は、Ａである。
【００７０】
他の実施形態において、Ｘ１０は、Ｓである。
【００７１】
他の実施形態において、Ｘ２６は、Ｄである。
【００７２】
他の実施形態において、Ｘ２６は、Ｅである。
【００７３】
他の実施形態において、Ｘ３９は、Ｄである。
【００７４】
他の実施形態において、Ｘ３９は、Ｅである。
【００７５】
他の実施形態において、Ｘ４０は、Ａである。
【００７６】
他の実施形態において、Ｘ４３は、Ａである。
【００７７】
他の実施形態において、Ｘ４４は、Ａである。
【００７８】
他の実施形態において、Ｘ４４は、Ｓである。
【００７９】
他の実施形態において、４５位にＬ残基が存在する。
【００８０】
他の実施形態において、４６位にＰ残基が存在する。
【００８１】
他の実施形態において、４６位にＰ残基は存在しない。
【００８２】
他の実施形態において、この章の定義に係るアルブミン結合ドメインにおいて、Ｘ７はＬ、ＥまたはＤではないという条件に従う。
【００８３】
この章の定義に係る部分（ＩＩ）で使用するためのアルブミン結合ドメインは、ＷＯ２０１２／００４３８４で詳細に説明されている好適なコンジュゲートパートナーとコンジュゲートするように製造されてもよい。
【００８４】
一実施形態において、部分（ＩＩ）のアルブミン結合ドメインのアミノ酸配列は、配列番号５１６〜６５９および配列番号６７９〜７１８のいずれか１つから選択され、例えば配列番号５１６〜６５９のいずれか１つから選択される。より具体的には、アミノ酸配列は、配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７、配列番号５６４〜５６５、配列番号６７９〜６８５および配列番号７０７〜７１８から選択される。したがって、アミノ酸配列は、配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７および配列番号５６４〜５６５から選択できる。
【００８５】
一実施形態において、この定義に係るアルブミン結合ドメインは、ｉ）で定義された配列のＮ末端および／またはＣ末端に位置する１つまたはそれ以上の追加のアミノ酸残基をさらに含む。これらの追加のアミノ酸残基は、ドメインによるアルブミンの結合を強化したり、折り畳まれたアルブミン結合ドメインの構造安定性を改善したりすることにおいて役立つ可能性があるが、例えば、ポリペプチドの生産、精製、インビボまたはインビトロでの安定化、連結、標識付け、または検出のうち１つまたはそれ以上、加えてそれらの任意の組み合わせに関する他の目的にも同様によく役立つ可能性がある。このような追加の
アミノ酸残基は、例えば、治療効果を付与するために部分（Ｉ）に化学的に連結したり；親和性マトリックスを得るためにクロマトグラフィー用樹脂に、または放射性金属と錯化するためにキレート化部分に化学的に連結したりする目的で付加された１つまたはそれ以上のアミノ酸残基を含んでいてもよい。
【００８６】
したがって、一実施形態において、アミノ酸配列ｉ）のＮ末端またはＣ末端におけるアルファへリックスの直前または直後に存在するアミノ酸は、構造安定性に影響を与える可能性がある。構造安定性の改善に寄与する可能性があるアミノ酸残基の一例は、上記で定義されたアミノ酸配列ｉ）のＮ末端に位置するセリン残基である。いくつかのケースにおいて、Ｎ末端のセリン残基は、セリン側鎖のガンマ酸素とグルタミン酸残基のポリペプチド主鎖のＮＨとを水素結合させることにより正規のＳ−Ｘ−Ｘ−Ｅキャッピングボックス（ｃａｐｐｉｎｇ  ｂｏｘ）を形成する可能性がある。このＮ末端のキャッピングは、この定義に係るアルブミン結合ドメインを構成する３へリックスドメインのうち第１のアルファへリックスの安定化に寄与する可能性がある。
【００８７】
したがって、一実施形態において、追加のアミノ酸は、ドメインのＮ末端に少なくとも１つのセリン残基を含む。言い換えれば、アミノ酸配列の前に、１つまたはそれ以上のセリン残基が存在していてもよい。他の実施形態において、追加のアミノ酸は、ドメインのＮ末端にグリシン残基を含む。アミノ酸配列ｉ）の前に、１つ、２つ、３つ、４つまたは任意の好適な数のアミノ酸残基が存在していてもよいことが理解される。したがって、アミノ酸配列の前に、単一のセリン残基、単一のグリシン残基、またはこれら２つの組み合わせ、例えばグリシン−セリン（ＧＳ）の組み合わせもしくはグリシン−セリン−セリン（ＧＳＳ）組み合わせなどが存在していてもよい。Ｎ末端に追加のアミノ残基を含むアルブミン結合ドメインの例は、配列番号６６０〜６７８、例えば配列番号６６０〜６６３および配列番号６７７〜６７８に記載されている。さらにその他の実施形態において、追加のアミノ酸残基は、配列ｉ）で定義されるようにＮ末端にグルタミン酸を含む。
【００８８】
同様に、アルブミン結合ドメインを構成する３へリックスドメインのうち第３のアルファへリックスの安定性を改善するのにＣ末端のキャッピングを利用してもよい。ｉ）で定義されたアミノ酸配列のＣ末端にプロリン残基が存在する場合、そのプロリン残基は、少なくとも部分的にキャッピング残基として機能する可能性がある。このようなケースにおいて、リシン残基のイプシロンアミノ基と、ポリペプチド主鎖中でリシンから２および３残基前に位置するアミノ酸のカルボニル基、例えば、Ｌ４５とＰ４６の両方が存在する場合、ｉ）で定義されたアミノ酸配列のロイシンおよびアラニン残基のカルボニル基とが水素結合することにより、Ｃ末端におけるプロリン残基の後のリシン残基はアルブミン結合ドメインの第３のへリックスのさらなる安定化に寄与する可能性がある。したがって、一実施形態において、追加のアミノ酸は、ドメインのＣ末端にリシン残基を含む。
【００８９】
追加のアミノ酸は、アルブミン結合ドメインの生産に関するものであってもよい。特に、Ｐ４６が存在する実施形態に係るアルブミン結合ドメインが化学的なペプチド合成によって生産される場合、Ｃ末端プロリンの後に続く１つまたはそれ以上の随意のアミノ酸残基が利益をもたらす可能性がある。このような追加のアミノ酸残基は、例えば合成のジペプチド化段階におけるジケトピペラジンなどの望ましくない物質の形成を防ぐ可能性がある。このようなアミノ酸残基の一例は、グリシンである。したがって、一実施形態において、追加のアミノ酸は、ドメインのＣ末端における、プロリン残基の直後、または上記で説明したような追加のリシンおよび／またはグリシン残基の後のグリシン残基を含む。あるいは、アミノ酸配列ｉ）のＣ末端にプロリン残基が存在する場合、ポリペプチドの生産は、このようなプロリン残基のアミド化によって利益を得る可能性がある。このケースにおいて、Ｃ末端のプロリンは、カルボキシルの炭素に追加のアミン基を含む。この章で説明されるドメインの一実施形態において、特にそれらのＣ末端がプロリンまたはペプチド
合成中にラセミ化することが公知の他のアミノ酸で終了しているドメインの一実施形態において、上述したＣ末端へのグリシンの付加、またはプロリンが存在する場合はプロリンのアミド化もまた、Ｃ末端のアミノ酸残基をラセミ化する際に起こり得る問題に対処することができる。この方式でアミド化されるドメインを化学合成ではなく組換え手段によって生産することが意図されている場合、Ｃ末端のアミノ酸のアミド化は、当業界公知のいくつかの方法、例えばＰＡＭアミド化酵素の使用による方法によって行うことができる。
【００９０】
Ｃ末端に追加のアミノ酸残基を含むアルブミン結合ドメインの例は、配列番号６６０〜６６７、例えば配列番号６６３〜６６５に記載されている。当業者であれば、例えば異なるタイプの予め作製されたペプチド合成のためのマトリックスなどによるＣ末端の改変を達成する方法について理解している。
【００９１】
他の実施形態において、追加のアミノ酸残基は、ドメインのＮ末端および／またはＣ末端にシステイン残基を含む。このようなシステイン残基は、ｉ）で定義されたアミノ酸配列の直前および／もしくは直後に存在していてもよいし、または上記で説明した他の任意の追加のアミノ酸残基の前および／もしくは後に存在していてもよい。ポリペプチド鎖のＮ末端および／またはＣ末端にシステイン残基を含むアルブミン結合ドメインの例は、配列番号６６４〜６６５（Ｃ末端）および配列番号６６６〜６６７（Ｎ末端）に記載されている。ポリペプチド鎖にシステイン残基を付加することにより、アルブミン結合ドメインのコンジュゲートを目的とした部位にチオール基が付与される可能性がある。あるいは、システイン残基導入と類似の様式で、ポリペプチド鎖のＣ末端にセレノシステイン残基を導入して、部位特異的なコンジュゲートを容易にすることもできる（Ｃｈｅｎｇら、Ｎａｔ  Ｐｒｏｔ  １：２頁、２００６年）。
【００９２】
一実施形態において、アルブミン結合ドメインは、２つ以下のシステイン残基を含む。他の実施形態において、アルブミン結合ドメインは、１つだけシステイン残基を含む。
【００９３】
部分（ＩＩ）の全般的に適用可能な態様
いくつかの実施形態において、本発明に係る使用のための化合物中の部分（ＩＩ）内のアルブミン結合ドメインは、相互作用のＫＤ値が、最大で１×１０−８Ｍ、すなわち１０ｎＭになるようにアルブミンに結合する。いくつかの実施形態において、相互作用のＫＤ値は、最大で１×１０−９Ｍ、最大で１×１０−１０Ｍ、最大で１×１０−１１Ｍ、または最大で１×１０−１２Ｍである。
【００９４】
一実施形態において、部分（ＩＩ）内のアルブミン結合ドメインは、ヒト血清アルブミンに結合する。その代わりに、またはそれに加えて、一実施形態において、アルブミン結合ドメインは、例えばマウス、ラット、イヌ、およびカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）由来のアルブミンなどのヒトの種以外の種由来のアルブミンに結合する。
【００９５】
上記で広く説明したように、アルブミン結合部分（ＩＩ）は、配列番号２５８〜７１８から選択されるアミノ酸配列もしくはそれらのサブセットを含んでいてもよいし、またはより大きいアルブミン結合ドメイン中のアルブミン結合モチーフとして、配列番号１〜２５７から選択される配列を含んでいてもよい。当業者であれば理解しているものと予想されるが、例えばこれらのポリペプチドドメインのアルブミン結合能力などの任意のポリペプチドの機能は、ポリペプチドの三次構造に依存する。しかしながら、αへリックスのポリペプチド中のアミノ酸の配列をそれらの構造に影響を及ぼすことなく変化させることも可能である（ＴａｖｅｒｎａおよびＧｏｌｄｓｔｅｉｎ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３１５（３）：４７９〜８４頁、２００２年；Ｈｅら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ
ＵＳＡ  １０５（３８）：１４４１２〜１７頁、２００８年）。したがって、上記で詳
細に開示された天然に存在するアルブミンタンパク質またはそれらの誘導体の改変された変異体はまた、部分（ＩＩ）に含まれるアルブミン結合ドメインの候補として想定される。例えば、アミノ酸残基の所定の機能分類（例えば疎水性、親水性、極性など）に属するアミノ酸残基を、同じ機能分類に属する別のアミノ酸残基と交換することが可能である。
【００９６】
したがって、部分（ＩＩ）は、配列番号１〜７１８との比較でわずかな差しか示さない、開示されたアルブミン結合タンパク質の変異体を含んでいてもよい。このような定義の１つは、配列番号２５８〜７１８から選択される配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するアルブミン結合ドメインである。いくつかの実施形態において、アルブミン結合ドメインは、配列番号２５８〜７１８から選択される配列に対して、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有する配列を有していてもよい。
【００９７】
用語「％同一な」または「％の同一性」は、本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、以下のように計算される。ＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗアルゴリズムを使用して標的配列に対してクエリー配列を並べる（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ、Ｊ．Ｄ．、Ｈｉｇｇｉｎｓ、Ｄ．Ｇ．およびＧｉｂｓｏｎ，Ｔ．Ｊ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２２：４６７３〜４６８０頁（１９９４年））。並べられた配列のうち最も短いものに対応するウィンドウで比較を行う。並べられた配列のうち最も短いものは、ある場合には例えば本明細書において開示されたアルブミン結合ドメインなどの標的配列のこともある。他の例において、クエリー配列が、並べられた配列のうち最も短いものを構成することもある。クエリー配列は、例えば、少なくとも１０のアミノ酸残基、例えば少なくとも２０のアミノ酸残基、例えば少なくとも３０のアミノ酸残基、例えば少なくとも４０のアミノ酸残基、例えば４５のアミノ酸残基からなっていてもよい。各位置のアミノ酸残基を比較して、標的配列中の同一な対応物を有するクエリー配列中の位置のパーセンテージを同一性の％として報告する。
【００９８】
用語「アルブミン結合」および「アルブミンへの結合親和性」は、本明細書で使用される場合、例えばＢｉａｃｏｒｅの機器などの表面プラズモン共鳴技術の使用によって試験できるポリペプチドの特性を指す。例えば、以下の実施例で説明されるように、アルブミンまたはそれらのフラグメントを機器のセンサーチップに固定し、試験されるポリペプチドを含有するサンプルをチップ上に通過させる実験で、アルブミン結合親和性を試験してもよい。あるいは、試験されるポリペプチドを機器のセンサーチップに固定し、アルブミンまたはそれらのフラグメントを含有するサンプルをチップ上に通過させる。これに関して、アルブミンは、例えばヒト血清アルブミンなどの哺乳動物由来の血清アルブミンであってもよい。次いで当業者は、このような実験により得られた結果を解釈して、少なくともポリペプチドのアルブミンへの結合親和性の定性的な尺度を確立してもよい。例えば相互作用のＫＤ値を決定するために定量的な尺度が求められる場合、表面プラズモン共鳴法を使用することもできる。結合値は、例えばＢｉａｃｏｒｅ２０００機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で定義してもよい。アルブミンを、好適には測定のセンサーチップに固定して、その親和性を決定しようとするポリペプチドのサンプルを連続希釈により製造して、注入する。次いで、例えば機器の製造元（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって供給されているＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．１ソフトウェアの１：１のラングミュア結合モデルを使用してＫＤ値を結果から計算してもよい。
【００９９】
ＩＩ  医薬組成物
第２の態様において、
本発明は、
ａ）化合物であって、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない、化合物と； 
ｂ）少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤と
を含む、経口投与用の医薬組成物を提供する。
【０１００】
したがって、本発明のこの第２の態様は、構成要素として、ａ）本発明の第１の態様に関して定義された化合物を含む医薬組成物を提供する。この化合物は、経口投与用の医薬組成物中に存在する場合、本発明の第１の態様に関して上記で説明した特性、特徴、特色、および／または実施形態のうちいずれか１つまたはそれ以上を任意の組み合わせで示すものでもよい。簡潔にするために、この情報は、この第２の態様に関して一語一語正確に繰り返さないが、参照により上記の開示に組み入れられるものとする。
【０１０１】
本医薬組成物はさらに、ｂ）少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤も含む。「添加剤」は、薬物製剤において希釈剤または媒体として使用される不活性物質である。添加剤は、投与または製造を容易にする、生成物の送達を改善する、薬物の一定の放出および生物学的利用能を向上させる、安定性を強化する、生成物同定を助ける、または他の生成物の特色を強化するために、治療活性を有する１種または複数種の化合物と混合される。添加剤は、結合剤、希釈剤／充填剤、潤滑剤、滑剤、崩壊剤、研磨剤、着色剤、懸濁化剤、フィルム形成剤、およびコーティング、可塑剤、分散剤、保存剤、香料、甘味料などに分類できる。
【０１０２】
本発明の医薬組成物のいくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）の経口での生物学的利用能を増加させるための少なくとも１種の構成要素をさらに含む。このような実施形態において、対象の構成要素は、プロテアーゼ阻害剤、吸収促進剤、粘膜付着性ポリマー、製剤媒体、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されてもよい。以下の章で、このような構成要素の使用およびそれらの科学的な論理的説明を治療剤の経口での生物学的利用能を改善する一般的な戦略に関して説明する。
【０１０３】
消化管の酸性および酵素性の環境に対する医薬組成物の耐性は、胃内で活性な関連ペプチドおよびタンパク質を標的とする酵素（例えばペプシン）ならびに腸内で活性な関連ペプチドおよびタンパク質を標的とする酵素（例えばトリプシン、キモトリプシン、およびカルボキシペプチダーゼ）の１種またはそれ以上の阻害剤（カクテルまたは個別に標的化するもの）を添加することによって高めることができる。このような阻害剤は、トリプシンおよびα−キモトリプシン阻害剤、例えばパンクレアチン阻害剤、ダイズトリプシン阻害剤、ＦＫ−４４８、メシル酸カモスタット、アプロチニン、ニワトリおよびアヒルのオボムコイド、カルボキシメチルセルロース、ならびにボーマン−バーク阻害剤；または粘膜付着性ポリマーとプロテアーゼ阻害剤とのコンジュゲート（非特許文献７）から選択できる。
【０１０４】
腸壁からのポリペプチドの吸収を増加させて治療効果を改善するために、医薬組成物は
、上皮バリアの透過性をより高くする吸収促進剤を包含していてもよい。吸収促進剤は、例えば、細胞膜の脂質二重層を破壊させて経細胞輸送を改善したり、または密着結合を断裂させて傍細胞輸送を容易にするキレート剤として作用したりすることが可能である。本発明のこの態様で使用するための吸収促進剤の非限定的な例は、洗浄剤、界面活性剤、胆汁酸塩、カルシウムキレート剤、脂肪酸、中鎖グリセリド、サリチレート、アルカノイルコリン、Ｎ−アセチル化α−アミノ酸、Ｎ−アセチル化非α−アミノ酸、キトサン、リン脂質、カプリン酸ナトリウム、アシルカルニチン、および閉鎖帯毒素（非特許文献１）である。
【０１０５】
医薬組成物における追加または代替の構成要素として、粘膜付着性ポリマーは、タンパク質分解から保護する可能性を有するが、主として、粘膜への部位特異的送達を達成するため、薬物吸収部位における滞留時間を長くするため、さらに膜透過を改善するために適用され、いずれも腸壁からの吸収の増加を促進する。本発明の医薬組成物に使用するための非限定的な例は、ポリ（メタクリル酸−ｇ−エチレングリコール）［Ｐ（ＭＡＡ−ｇ−ＥＧ）］ヒドロゲル微粒子、レシチン結合アルギネート微粒子、チオール化ポリマー（チオマー（ｔｈｉｏｍｅｒ））、胃腸粘膜付着性のパッチシステム（ＧＩ−ＭＡＰＳ）および粘膜付着性ポリマーとプロテアーゼ阻害剤とのコンジュゲート（Ｐａｒｋら、２０１１年、上記）である。
【０１０６】
例えばエマルジョン、リポソーム、マイクロスフェア、ナノスフェア、ナノカプセルまたは完全なカプセル封入などの製剤媒体は、タンパク質分解からの保護、所定の制御放出速度の実現、加えて腸壁からの送達の強化の促進に寄与する可能性がある。このような製剤媒体も、本発明の医薬組成物で使用するための代替または相補的な構成要素を構成する。特に、改変された表面特性を有するか、または標的分子に連結されているナノ粒子が使用される可能性がある。ナノ粒子表面の改変は、例えば、親水性の安定化剤、生体接着性ポリマーもしくは界面活性剤でコーティングすること、またはナノ粒子製剤中に親水性コポリマーを取り入れることのいずれかによって達成できる。このような親水性ポリマーの例としては、ＰＥＧおよびキトサンが挙げられる（ｄｅｓ  Ｒｉｅｕｘら、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ．１１６：１〜２７頁、２００６年）。標的化ナノ粒子の設計は、例えばレクチンまたはＲＧＤ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）誘導体などのリガンドをナノ粒子に連結させることにより、腸壁の上皮層の腸細胞またはＭ細胞で発現される受容体に特異的に付着するようになされる（ｄｅｓ  Ｒｉｅｕｘら、２００６年、上記）。またＭ細胞は、リンパ系への送達経路も提供する（ＲｕｂａｓおよびＧｒａｓｓ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、７：１５〜６９頁、１９９１年）。
【０１０７】
本発明の医薬組成物は、例えば、例えば丸剤、錠剤、カプセル、粉末または顆粒などの固体の形態で；例えばペーストなどの半固体の形態で；または例えばエリキシル、溶液または懸濁液などの液体の形態で経口投与されてもよい。現在のところ好ましくは固体の形態であり、このような形態は、例えばキトサン、アルギネート、微結晶性セルロース、ラクトース、サッカロース、デンプン、ゼラチン、乳糖、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、およびデンプングリコール酸ナトリウムなどの添加剤を含有していてもよい。液体の形態の調製物は、例えば甘味剤もしくは矯味矯臭剤などの添加剤、乳化剤もしくは懸濁化剤、または例えば水、エタノール、プロピレングリコール、およびグリセリンなどの希釈剤を含有していてもよい。
【０１０８】
製剤は、即時放出、遅延放出、または制御放出の適用を意図したものでもよい。即時放出を意図した錠剤またはカプセルは、急速に崩壊して、胃腸管の上部、すなわち胃で全ての活性物質を放出すると予想される。一方で、遅延放出または制御放出を意図した錠剤ま
たはカプセルは、時間依存性の放出（デポ製剤）または部位特異的な放出（例えば腸）用に設計できる。時間依存性の放出は、例えばマトリックスまたは膜の組成に応じた分解または拡散制御放出に基づいていてもよい。部位特異的な放出は、例えばｐＨ感受性または酵素感受性に基づいていてもよい。本発明に係る医薬組成物の製剤にとって特に好ましくは、小腸または結腸での放出を意図した腸溶性カプセルである。このような腸溶性カプセルは、胃の高い酸性ｐＨでは安定であるが、それよりも低い腸管の酸性ｐＨでは急速に溶解すると予想される。ｐＨ感受性の腸溶性フィルム形成剤の例としては、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）、酢酸トリメリト酸セルロース（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルアセテートスクシネート（ＨＰＭＣＡＳ）、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）などのセルロースポリマー、ならびに例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）誘導体、セラック（ＳＨ）、キトサン、およびキチンなどの他のポリマーが挙げられる。
【０１０９】
ＩＩＩ  処置方法
第３の態様において、
本発明は、化合物を経口投与することを含む、このような処置が必要な哺乳動物の対象の処置方法であって、該化合物は、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない前記処置方法を提供する。
【０１１０】
したがって、本発明のこの第３の態様は、本発明の第１の態様に関して定義された化合物を経口投与することを含む処置方法を提供する。場合により、この化合物は、本発明の第２の態様に関して定義された医薬組成物中に存在する状態で投与されてもよい。本化合物および医薬組成物はそれぞれ、本発明の第１および第２の態様に関して上記で説明した特性、特徴、特色、および／または実施形態のうちいずれか１つまたはそれ以上を任意の組み合わせで示すものでもよい。簡潔にするために、この情報は、この第３の態様に関して一語一語正確に繰り返さないが、参照により上記の開示に組み入れられるものとする。
【０１１１】
一実施形態において、本発明に係る処置方法は、特定された投与計画に従って実行される。最適な投与計画は、治療効果を付与する部分の効力、本明細書に記載の化合物の生物学的利用能、および処置しようとする疾患の性質によって決まると予想される。しかしながら、本明細書に記載の化合物の半減期を延長すると考えられるアルブミン結合部分（ＩＩ）を含む化合物は、所定レベルの治療効果を達成するのに１回の高用量を必要としないと予想されるが、長期にわたる循環系での滞留時間のために、より少ない反復回数の用量の投与で化合物の濃度上昇をもたらし、最終的に持続的な所望の治療効果を達成することが可能である。言い換えれば、経口投与後、生物学的利用能は、寿命の短い治療剤の生物学的利用能よりも低くてもよい。このような繰り返しの投与は、少なくとも月２回、週１回、週２回、週３回、１日１回、１日２回、例えば少なくとも１日３回などでなされてもよい。
【０１１２】
所定の疾患について、ボーラス用量を投与し、それに続いてそれより低い用量を繰り返し投与することが望ましい場合がある。ボーラス用量は、少なくとも１日１回、１日２回
、１日３回、１日４回または少なくとも１日５回、経口用に製剤化された薬物を複数回で摂取してもよい。あるいは、大量のボーラス用量は、別の経路を介して、例えば静脈内または皮下注射などによって投与してもよい。持続的な治療効果を達成する目的で、それに続く投与が、少なくとも月２回、週１回、週２回、週３回、１日１回、１日２回、１日３回、例えば少なくとも１日４回なされてもよい。
【０１１３】
用語の定義および使用
本明細書の文章において、「生物学的利用能」は、活性な医薬物質の投与された用量のうち体循環に到達した割合を指す。定義によれば、静脈内投与された薬物の生物学的利用能は、１００％である。しかしながら、薬物が他の経路を介して、例えば経口経路によって投与される場合、代謝と不完全な吸収のために生物学的利用能は減少する。絶対生物学的利用能は、非静脈内投与した後の体循環中の活性な薬物の生物学的利用能と、静脈内投与後の同じ薬物の生物学的利用能とを比較したものである。これは、非静脈内投与によって吸収された薬物の、それに対応する同じ薬物の静脈内投与に対する割合として計算される。この比較は、正規化されなければならない（例えば、異なる用量または対象の様々な体重を考慮するため）。薬物の絶対生物学的利用能を決定するためには、薬物動態学的な研究を行って、静脈内投与と非静脈内投与それぞれの後における薬物の血漿薬物濃度−時間プロットを得なければならない。絶対生物学的利用能は、非静脈内投与による用量で補正した曲線下面積（ＡＵＣ）を静脈内投与によるＡＵＣで割った値である。
【０１１４】
ここで、以下に示す非限定的な実施例によって本発明をさらに例示する。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１−１】本明細書の文章で論じられた様々なアミノ酸配列の略式のリストを提供する表である。
【図１−２】図１−１の続き。
【図１−３】図１−２の続き。
【図１−４】図１−３の続き。
【図１−５】図１−４の続き。
【図１−６】図１−５の続き。
【図１−７】図１−６の続き。
【図１−８】図１−７の続き。
【図１−９】図１−８の続き。
【図１−１０】図１−９の続き。
【図１−１１】図１−１０の続き。
【図１−１２】図１−１１の続き。
【図１−１３】図１−１２の続き。
【図１−１４】図１−１３の続き。
【図１−１５】図１−１４の続き。
【図１−１６】図１−１５の続き。
【図１−１７】図１−１６の続き。
【図１−１８】図１−１７の続き。
【図１−１９】図１−１８の続き。
【図１−２０】図１−１９の続き。
【図１−２１】図１−２０の続き。
【図１−２２】図１−２１の続き。
【図１−２３】図１−２２の続き。
【図１−２４】図１−２３の続き。
【図２】実施例１で説明されているようにして生産された精製したポリペプチド変異体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析の結果を示す。レーン１〜２：それぞれ２５および５０μｇのＰＥＰ０４４１９であり；レーン３〜４：それぞれ２５および５０μｇのＰＥＰ１０９８６であり；およびレーン５〜６：それぞれ２５および５０μｇのＰＥＰ０３９７３である。レーンＭ：Ｎｏｖｅｘ（登録商標）Ｓｈａｒｐ予備染色タンパク質標準（分子量：３．５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１１０、１６０、および２６０ｋＤａ）。
【図３Ａ】実施例２で説明されているようにマウスにＰＥＰ０３９７３（白抜きの四角）、ＰＥＰ１０９８６（白抜きの三角）、およびＰＥＰ０４４１９（白抜きの丸）それぞれを経口投与した後の薬物動態プロファイルを示す。図３Ａは、経時的に測定された血清濃度（１タイムポイントあたり３匹の動物の値の平均）を示す。
【図３Ｂ】図３Ａと同じであるが、３種のポリペプチドの投与された用量の変動で調節されたデータを示す（すなわち各タイムポイントにおける：［測定された血清濃度］／［投与された用量］）。
【図４】実施例３で説明されているように経口胃管栄養法（白抜きの四角）または十二指腸内投与（白抜きの丸）の後にラットから得られた血清サンプル中のＰＥＰ１０８９６の薬物動態プロファイルを示す。ＰＥＰ１０８９６の濃度をＥＬＩＳＡによって決定し、平均ｎＭ＋／−ＳＤ値を示す。
【図５】実施例４で説明されているようにＰＥＰ１０８９６を繰り返し十二指腸内投与した後の薬物動態プロファイルを示す。グラフ中では矢印でマークされた０、２、および２４時間のタイムポイントでポリペプチドを与えた。ＰＥＰ１０８９６の濃度をＥＬＩＳＡによって決定し、平均ｎＭ＋／−ＳＤ値を示す（白抜きの丸）。比較のために実施例３で決定された単回の十二指腸内投与後の薬物動態プロファイルを示す（白抜きの四角）。
【０１１６】
〔実施例１〕
ポリペプチドのクローニング、生産、および特徴付け
材料および方法
本発明を説明するために、それぞれＰＥＰ０３９７３、ＰＥＰ１０９８６、およびＰＥＰ０４４１９と称される３種のポリペプチドをマウスでの経口投与用に製造した。これまでにＦｅｌｄｗｉｓｃｈら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９８：２３２〜２４７頁、２０１０年；本文献ではＡＢＹ−０２５と称されている）で述べられているように、ＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６はそれぞれ、をタンパク質Ｚの変異体（ブドウ球菌タンパク質ＡのドメインＢの誘導体；Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｂら、１９８７年、上記）にＮ末端で融合した異なるアルブミン結合部分を含み、それに対してＰＥＰ０４４１９は、ＭＭＡ−ＤＯＴＡ（マレイミド−モノアミド−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）にＣ末端でコンジュゲートしたタンパク質Ｚの変異体である。したがって、ＰＥＰ０４４１９はアルブミン結合部分をまったく含まず、比較のために試験された。ＰＥＰ０３９７３は、野生型アルブミン結合ドメイン（ＡＢＤｗｔ、配列番号５１５；すなわち連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのＧＡ３ドメイン；Ｋｒａｕｌｉｓら、１９９６年、上記；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、２００２年、上記）を含み、それに対してＰＥＰ１０９８６は、このＧＡ３ドメインの誘導体（配列番号５２８）を含む。
【０１１７】
ポリペプチド変異体のクローニングおよび培養：ポリペプチドＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６をコードするＤＮＡをそれぞれ、標準的な分子生物学技術を使用して、Ｔ７プロモーター、多重クローニング部位、およびカナマイシン耐性遺伝子を含有する発現ベクターにクローニングした。発現ベクターは、Ｚ変異体配列のＮ末端にアミノ酸ＧＳＳＬＱをコードしており、Ｚ変異体およびアルブミン結合ドメイン配列は、ＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６においてそれぞれアミノ酸ＶＤおよびＶＤＳＳで隔てられている。
【０１１８】
ＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６それぞれを発現させるためのプラスミドで形
質転換した大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）培養物を、５０μｇ／ｍｌのカナマイシンと０．３ｍｌ／ｌの消泡剤（Ｂｒｅｏｘ  ＦＭＴ３０）とが補充されたＴＳＢ＋ＹＥ培地８００ｍｌに植え付け、ＯＤ６００がおよそ２になるまで３７℃で増殖させた。次いで１ＭのＩＰＴＧを最終濃度０．２ｍＭまで添加することによりタンパク質発現を誘導した。マルチファーメンター（ｍｕｌｔｉｆｅｒｍｅｎｔｏｒ）システムのＨｅｄｖｉｇ（Ｂｅｌａｃｈ  Ｂｉｏｔｅｋｎｉｋ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して培養を行った。誘導から５時間後に、１５９００×ｇで２０分の遠心分離により培養物を回収した。上清を捨て、細胞ペレットを収集し、−２０℃で保存した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥと染色されたゲルの目視検査を使用してタンパク質発現のレベルを決定した。
【０１１９】
ポリペプチド変異体の精製：可溶性のＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６を含むペレット化した細菌細胞をそれぞれ、２０Ｕ／ｍｌのＢｅｎｚｏｎａｓｅ（登録商標）が補充されたＴＳＴ緩衝液（２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、２００ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のトゥイーン２０、ｐＨ８）に懸濁し、超音波破砕で破壊させた。溶解産物を遠心分離で透明化し、ＴＳＴ−緩衝液で前もって平衡化したＸＫ５０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に充填された親和性アガロース１００ｍｌにローディングした。カラムをカラム体積（ＣＶ）の６倍量のＴＳＴ緩衝液で洗浄し、それに続いてＣＶの６倍量の５ｍＭのＮＨ４Ａｃ（ｐＨ５．５）で洗浄した後、結合したタンパク質をＣＶの３倍量の０．１ＭのＨＡｃで溶出させた。流速を１５ｍｌ／分とし、２８０ｎｍのシグナルをモニターした。ＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６を含有する画分をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって同定した。関連する画分をプールし、アセトニトリル（ＡＣＮ）を最終濃度１０％まで添加し、ＲＰＣ溶出液Ａ（０．１％のＴＦＡ、１０％のＡＣＮ、９０％の水）で前もって平衡化したＳｏｕｒｃｅ  １５ＲＰＣ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）１２５ｍｌが充填されたＦｉｎｅＬｉｎｅカラムにローディングした。ＣＶの５倍量のＲＰＣ溶出液Ａでカラムを洗浄した後、ＣＶの１０倍量の範囲内で０から６０％の直線的な濃度勾配のＲＰＣ溶出液Ｂ（０．１％のＴＦＡ、８０％のＡＣＮ、２０％の水）を用いて結合したタンパク質を溶出させた。流速を３０ｍｌ／分とし、２８０ｎｍのシグナルをモニターした。純粋なＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６を含有する画分をそれぞれＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって同定し、別々にプールした。
【０１２０】
精製したＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６を、ＸＫ５０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に充填されたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５ｍ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）５００ｍｌを使用した緩衝液の交換によりそれぞれ５０ｍＭのＮａＡｃ（ｐＨ４．５）および５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）に移した。最後に、３ｋＤａのＭＷＣＯを有する１５ｍｌのＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ遠心フィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濃縮を行った。
【０１２１】
実質的にＦｅｌｄｗｉｓｃｈら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０年、上記）で説明されているようにしてＰＥＰ０４４１９を生産した。上記でＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６に関して説明されているようにして、精製したＰＥＰ０４４１９を、緩衝液の交換により２５ｍＭのＮＨ４Ａｃ、６．２５ｍＭのＨＣｌ、１１２．５ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ４．９）に移し、濃縮した。
【０１２２】
精製したポリペプチド変異体の分析：ＮａｎｏＤｒｏｐ（登録商標）ＮＤ−１０００分光光度計を使用して２８０ｎｍで吸光度を測定することによりタンパク質濃度の決定を行った。
【０１２３】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析のために、濃縮したＰＥＰ０３９７３、ＰＥＰ１０９８６、およびＰＥＰ０４４１９を５ｍｇ／ｍｌに希釈し、４×ＬＤＳサンプル緩衝液と混合し、７０℃で１５分インキュベートし、１０ウェルのＮｕＰＡＧＥ（登録商標）４〜１２％ビスト
リスゲル上にローディングした。ゲルを、分子量マーカーとしてＮｏｖｅｘ（登録商標）Ｓｈａｒｐ予備染色タンパク質標準と染色のためのクーマシーブルーとを用いたＮｏｖｅｘ  Ｍｉｎｉ−ＣｅｌｌでのＭＥＳ  ＳＤＳ泳動緩衝液で泳動した。
【０１２４】
精製したＰＥＰ０３９７３、ＰＥＰ１０９８６、およびＰＥＰ０４４１９の同一性を検証するために、ＡＰＩ−ＥＳＩとシングル四重極質量分析器とを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００ＬＣ／ＭＳＤシステムを使用してＬＣ／ＭＳ−分析を行った。２５μｇを０．５ｍｌ／分の流速でＺｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ８狭口径カラム（２．１×１５０ｍｍ、３．５μｍ）にローディングした。溶出液Ｂの１０から７０％の直線的な濃度勾配を使用して、タンパク質を１５分かけて０．５ｍｌ／分で溶出させた。分離を３０℃で行った。イオンシグナルと２８０および２２０ｎｍでの吸光度をモニターした。イオンシグナルの分析によって精製したタンパク質の分子量を決定した。
【０１２５】
結果
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析で査定したところ、生産されたポリペプチドＰＥＰ０３９７３、ＰＥＰ１０９８６、およびＰＥＰ０４４１９は９８％を超える純度を有すると推定された（図１）。表１に、２８０ｎｍでの吸光度測定によって決定した場合の調製された濃度と、ＬＣ／ＭＳ−分析によって検証された正しい分子量とを要約した。
【０１２６】
【表１】
2020033372.tif 000002
【０１２７】
〔実施例２〕
マウスに経口投与されたポリペプチド変異体の薬物動態学的な分析
材料および方法
経口投与：実施例１で説明されているように製造されたポリペプチド変異体ＰＥＰ０３９７３、ＰＥＰ１０９８６、およびＰＥＰ０４４１９を、それぞれ６５μｍｏｌ／ｋｇ体重、９２μｍｏｌ／ｋｇ体重、および２９８μｍｏｌ／ｋｇ体重の用量で、絶食した雄ＮＭＲＩマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に胃管栄養法でタイムポイント０で経口投与した。投与からおよそ３０分後に再び食物を与えた。ＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６投与の１、３、８、２４、４８、および７２時間後に、さらにＰＥＰ０４４１９投与の１５、３０、６０、１８０、および４８０分後に、麻酔したマウスに心臓穿刺することによって血清サンプルを採取した。各タイムポイントで３匹のマウスを処分した。それぞれのポリペプチド変異体に特異的なサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによってそれぞれのタンパク質の血清中濃度を測定した。
【０１２８】
ＰＥＰ０３９７３のＥＬＩＳＡアッセイ：ＥＬＩＳＡプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒの９６ウェルの半分の面積のプレート、カタログ番号６７５０７４）を、１μｇ／ｍｌ（５０μｌ／ウェル）の炭酸緩衝液（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｃ３０４１）中の社内生産したヤギ抗タンパク質Ｚ免疫グロブリン（Ｉｇ）で４℃で一晩コーティングした。次の日、プレートをＰＢＳ（２．６８ｍＭのＫＣｌ、０．４７ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、１３７ｍＭのＮａ
Ｃｌ、８．１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、ｐＨ７．４）＋０．５％のカゼイン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｃ８６５４）、ＰＢＳＣで１．５時間ブロックした。血清サンプルおよび標準として使用される精製したＰＥＰ０３９７３を、ＰＢＳＣで３倍まで連続希釈して、５０μｌ／ウェルの総体積で二連で滴定し、さらに１．５時間インキュベートした。ＰＢＳＣで１μｇ／ｍｌに希釈した社内生産したウサギ抗タンパク質Ｚ／ＡＢＤｗｔ  Ｉｇを５０μｌ／ウェルで添加し、それに続いてＰＢＳＣで２０ｎｇ／ｍｌに希釈したＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕ−Ｎ１−抗ウサギＩｇＧ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒのカタログ番号ＡＤ０１０５）を５０μｌ／ウェルで添加することによって、結合したＰＥＰ０３９７３を検出した。抗体のインキュベート期間はそれぞれ１．５時間および１時間であり、各工程後に洗浄を行った。続いて、５分穏やかに撹拌した後に、５０μｌ／ウェルの強化溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒのカタログ４００１−００１０）を添加し、ＥＬＩＳＡリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ３、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で時間分解蛍光（ＴＲＦ）を読み取った。非線形回帰（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５）を使用して、ＰＥＰ０３９７３の標準曲線から血清サンプル中のＰＥＰ０３９７３の濃度を計算した。
【０１２９】
ＰＥＰ１０９８６のＥＬＩＳＡアッセイ：血清サンプル中のＰＥＰ１０９８６の濃度を、ＰＥＰ０３９７３に関して上記で説明したのと類似したＥＬＩＳＡアッセイによって決定したが、コーティングは８μｇ／ｍｌの社内生産したヤギ抗タンパク質ＺＩｇを用いて行われ、第１の検出工程は、上記において配列番号２で特定されたアルブミン結合ドメインに特異的な社内生産したウサギＩｇを２μｇ／ｍｌの濃度で使用して行われた。
【０１３０】
ＰＥＰ０４４１９のＥＬＩＳＡアッセイ：ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒの９６ウェルの半分の面積のプレート、カタログ番号３６９０）を、炭酸緩衝液中の２μｇ／ｍｌ（５０μｌ／ウェル）のタンパク質Ｚに対するヤギＩｇで４℃で終夜コーティングした。次の日、プレートをＰＢＳＣで１．５時間ブロックした。血清サンプルおよび標準として使用される精製したＰＥＰ０４４１９を、ＰＢＳＣで２倍まで連続希釈して、５０μｌ／ウェルの総体積で二連で滴定し、さらに１．５時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ＋０．０５％のトゥイーン（ＰＢＳＴ）で４回洗浄した。５０μｌ／ウェルのウサギ抗タンパク質Ｚ  Ｉｇ（ＰＢＳＣ中、０．１２５μｇ／ｍｌ）、それに続いてＰＢＳＣで１：１００００に希釈した５０μｌ／ウェルの抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｄａｋｏ、カタログ番号Ｐ０４４８）で、結合したＰＥＰ０４４１９を検出した。各抗体を１時間インキュベートし、各工程後に洗浄を行った。最後の洗浄の後、５０μｌ／ウェルのＴＭＢ  Ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３４０２１）で反応物を展開し、５０μｌ／ウェルのＨ２ＳＯ４の添加により止めた。ＥＬＩＳＡリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ３、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で４５０ｎｍにおける吸光度を読み取った。ＰＥＰ０４４１９の標準曲線から非線形回帰（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５）を使用して血清サンプル中のＰＥＰ０４４１９の濃度を計算した。
【０１３１】
結果
図２からわかるように、投与された３種全てのポリペプチドは、経口経路を介して投与された後に吸収された。驚くべきことに、アルブミン結合部分を含むポリペプチド、すなわちＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６は、サイズがアルブミン結合部分なしのポリペプチドのＰＥＰ０４４１９のほぼ２倍であるにもかかわらず、少なくともそれと同程度に吸収された。その上、アルブミン結合部分を含むポリペプチドは、アルブミン結合部分なしのポリペプチドと比較してかなり長い滞留時間を示したが、アルブミン結合部分なしのポリペプチドは、投与の８時間後に採取されたサンプル中で検出不可能であった（図３Ａおよび３Ｂを参照）。曲線下面積（ＡＵＣ）は、ＰＥＰ０３９７３、ＰＥＰ１０９８６、およびＰＥＰ０４４１９４それぞれについて１０６、９６、および７ｎＭｈであった。予測される薬物動態プロファイルから、ＰＥＰ０３９７３およびＰＥＰ１０９８６は、経口投与の際にそれらのアルブミン結合能力を保持していることが示された。
【０１３２】
〔実施例３〕
ラットにおけるＰＥＰ１０８９６の経口投与および十二指腸内投与の薬物動態学的な分析
材料および方法
経口投与：実施例１で説明されているように製造されたポリペプチドＰＥＰ１０９８６を、６７μｍｏｌ／ｋｇ体重の用量で、絶食した雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に、胃管栄養法でタイムポイント０で経口投与した。投与からおよそ３０分後に再び食物を与えた。投与の１、３、８、２４、７２、１２０、および１６８時間後にイソフルラン麻酔下で血液サンプルを採取し、標準的手法によって血清を調製した。実施例２で説明したサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによってＰＥＰ１０８９６の血清中濃度を測定した。
【０１３３】
十二指腸内投与：麻酔した雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）の十二指腸に留置カテーテル（ＩＩＴＣ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号Ｓ２Ｃ６）をその開始部から１０〜１５ｍｍ外科的に挿入し、皮下を通して背中に貫通させた。３〜５日間の回復期間を経た後、実施例１で説明されているように製造されたポリペプチドＰＥＰ１０９８６を、絶食したラットの十二指腸に６７μｍｏｌ／ｋｇ体重の用量でタイムポイント０で直接投与した。投与からおよそ３０分後に再び食物を与えた。ＰＥＰ１０９８６投与の１、３、８、２４、７２、１２０、および１６８時間後にイソフルラン麻酔下で血液サンプルを採取し、標準的手法によって血清を調製した。実施例２で説明したサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによってＰＥＰ１０８９６の血清中濃度を測定した。
【０１３４】
結果
経口投与および十二指腸内投与の後に得られたＰＥＰ１０８９６の薬物動態プロファイルを図４に示す。結果から、ラットにおいて、経口胃管栄養法後と十二指腸内投与後のいずれにおいてもＰＥＰ１０８９６は経口経路を介して吸収されたことが示された。十二指腸内投与は、経口胃管栄養法と比較して高いＣｍａｘ（３時間）濃度で示されるように（０．７１ｎＭに対して１１．３ｎＭ）、腸吸収の増加に寄与した。吸収が改善された結果として、少なくとも１５倍高いＡＵＣを得た。アルブミンと類似した半減期を有する長期の薬物動態プロファイルから、ＰＥＰ１０９８６は、胃管栄養法または十二指腸内投与のどちらでも経口摂取後でもアルブミン結合能力を保持していたことが示された。
【０１３５】
〔実施例４〕
ラットにおけるＰＥＰ１０８９６の繰り返しの十二指腸内投与の薬物動態学的な分析
材料および方法
十二指腸内反復投与：
実施例１で説明されているように製造されたポリペプチド変異体ＰＥＰ１０９８６を、実施例３で説明されているようにして絶食させたラットの十二指腸に直接投与した。６７μｍｏｌ／ｋｇ体重の用量で、０、２および２４時間のタイムポイントで３回ＰＥＰ１０９８６を投与した。各投与からおよそ３０分後に再び食物を与えた。ＰＥＰ１０９８６投与の１、３、５、２４、２７、９６、１４４、および１９２時間後にイソフルラン麻酔下で血液サンプルを採取し、標準的手法に従って血清を調製した。実施例２で説明したサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイによってＰＥＰ１０８９６の血清中濃度を測定した。
【０１３６】
結果
十二指腸内反復投与の後に得られたＰＥＰ１０８９６の薬物動態プロファイルを図５に示す。単回投与と反復投与との差を強調するために、実施例３で説明した十二指腸内投与の結果を図５に含めた。反復投与は、ラット血清中のポリペプチドＰＥＰ１０８９６の濃
度を高め、薬物動態プロファイルを延長したことから、ＰＥＰ１０９８６は、経口摂取後もアルブミン結合能力を保持していたことが示された。３回目の投与後に濃度が２回高く増加したことから、反復投与によってより高い血清レベルが達成される可能性があることが示された。
【０１３７】
実施形態の項目別一覧
１．経口投与による処置に使用するための化合物であって、該化合物は、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない前記化合物。
【０１３８】
２．前記部分（Ｉ）は、ヒト内因性酵素、ホルモン、増殖因子、ケモカイン、サイトカイン、血液凝固および補体因子、自然免疫防御および調節ペプチドからなる群から選択される構成要素、例えば、インスリン、インスリン類似体、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＧＬＰ−１、ＢＮＰ、ＩＬ１−ＲＡ、ＫＧＦ、Ｓｔｅｍｇｅｎ（登録商標）、ＧＨ、Ｇ−ＣＳＦ、ＣＴＬＡ−４、ミオスタチン、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、および第ＩＸ因子、ならびにそれらのうちいずれかの誘導体からなる群から選択される構成要素を含む、項目１に記載の使用のための化合物。
【０１３９】
３．前記部分（Ｉ）は、モジュリン、細菌毒素、ホルモン、自然免疫防御および調節ペプチド、酵素、および活性化タンパク質からなる群から選択される、生物学的に活性な非ヒトタンパク質を含む、項目１に記載の使用のための化合物。
【０１４０】
４．前記部分（Ｉ）は、標的分子との選択的な相互作用が可能な結合ポリペプチドを含む、項目１に記載の使用のための化合物。
【０１４１】
５．結合ポリペプチドは、抗体結合活性を実質的に保持する抗体ならびにそれらのフラグメントおよびドメイン；ミクロボディ、マキシボディ、アビマー、およびその他の小さいジスルフィド結合タンパク質；ならびにブドウ球菌タンパク質Ａおよびそれらのドメイン、その他の３へリックスドメイン、リポカリン、アンキリン反復ドメイン、セルロース結合ドメイン、γクリスタリン、緑色蛍光タンパク質、ヒト細胞傷害性Ｔ細胞結合抗原４、クニッツドメインのようなプロテアーゼ阻害剤、ＰＤＺドメイン、ＳＨ３ドメイン、ペプチドアプタマー、ブドウ球菌のヌクレアーゼ、テンダミスタット、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、トランスフェリン、ジンクフィンガー、およびコノトキシンからなる群から選択される足場から誘導された結合タンパク質からなる群から選択される、項目４に記載の使用のための化合物。
【０１４２】
６．前記結合ポリペプチドは、ブドウ球菌タンパク質ＡのドメインＢから誘導されたタンパク質Ｚの変異体を含み、ここで該変異体は、配列番号７１９、配列番号７２０、および配列番号７２１から選択される足場アミノ酸配列を含み、式中Ｘは、任意のアミノ酸残基を示す、項目５に記載の使用のための化合物。
【０１４３】
７．前記標的分子は、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３
、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ１３８、ｃＭｅｔ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＣＡＩＸ、ＣＥＡ、ＩＬ−２受容体、ＩＧＦ１Ｒ、ＶＥＧＦＲ２、ＭＵＣ１、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＳＭＡ、タグ−７２、ＦＯＬＲ１、メソテリン、ＣＡ６、ＧＰＮＭＢ、インテグリン、およびｅｐｈＡ２のような腫瘍関連または他の細胞表面関連抗原；ＴＮＦ−α、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１Ｒａ、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−３６、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびそれらの受容体のようなサイトカイン；ＩＬ−８、ＣＣＬ−２、およびＣＣＬ１１、ならびにそれらの受容体のようなケモカイン；Ｃ３および第Ｄ因子のような補体因子；ＨＧＦおよびミオスタチンのような増殖因子；ＧＨ、インスリン、およびソマトスタチンのようなホルモン；アルツハイマー病のＡβペプチドのようなペプチド；他の疾患関連アミロイドペプチド；ヒスタミンおよびＩｇＥのような過敏症メディエーター；フォン−ウィルブランド因子のような血液凝固因子；ならびに細菌毒素およびヘビ毒のような毒素からなる群から選択される、項目４〜６のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１４４】
８．前記部分（Ｉ）は、ａ）細胞毒性物質、例えばカリケアマイシン、オーリスタチン、ドキソルビシン、メイタンシノイド、タキサン、エクテイナシジン、ゲルダナマイシン、メトトレキセート、カンプトテシン、シクロホスファミド、シクロスポリン、およびそれらの誘導体、ならびにそれらの組み合わせ；ならびにｂ）抗炎症薬、例えば非ステロイド性抗炎症薬、サイトカイン抑制性抗炎症薬、コルチコステロイド、メトトレキセート、プレドニゾン、シクロスポリン、モロニサイドケイ皮酸、レフルノミド、およびそれらの誘導体、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される非タンパク質様の構成要素を含む、項目１に記載の使用のための化合物。
【０１４５】
９．前記部分（ＩＩ）は、天然に存在するＧＡドメインまたはそれらの誘導体を含む、項目１〜８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１４６】
１０．前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ１、ドメインＧＡ２、およびドメインＧＡ３、ならびにそれらの誘導体からなる群から選択されるＧＡドメインを含む、項目９に記載の使用のための化合物。
【０１４７】
１１．前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３またはそれらの誘導体を含む、項目１０に記載の使用のための化合物。
【０１４８】
１２．前記部分（ＩＩ）は、配列番号５１５に記載のアミノ酸配列を有する連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３を含む、項目１１に記載の使用のための化合物。
【０１４９】
１３．前記部分（ＩＩ）は、アルブミン結合モチーフを含み、該モチーフは、アミノ酸配列：
ＧＶＳＤＸ５ＹＫＸ８Ｘ９Ｉ  Ｘ１１Ｘ１２ＡＸ１４ＴＶＥＧＶＸ２０  ＡＬＸ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｉ
からなり、
式中、互いに独立して、
Ｘ５は、ＹおよびＦから選択され；
Ｘ８は、Ｎ、Ｒ、およびＳから選択され；
Ｘ９は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、およびＹから選択され；
Ｘ１１は、Ｎ、Ｓ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘ１２は、Ｒ、Ｋ、およびＮから選択され；
Ｘ１４は、ＫおよびＲから選択され；
Ｘ２０は、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、およびＫから選択され；
Ｘ２３は、Ｋ、Ｉ、およびＴから選択され；
Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、およびＤから選択され；ならびに
Ｘ２５は、Ｈ、Ｅ、およびＤから選択される、項目１〜１１のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５０】
１４．Ｘ５は、Ｙである、項目１３に記載の使用のための化合物。
【０１５１】
１５．Ｘ８は、ＮおよびＲから選択され、特にＲである、項目１３〜１４のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５２】
１６．Ｘ９は、Ｌである、項目１３〜１５のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５３】
１７．Ｘ１１は、ＮおよびＳから選択され、特にＮである、項目１３〜１６のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５４】
１８．Ｘ１２は、ＲおよびＫから選択され、Ｘ１２は、Ｒであるか、またはＫである、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５５】
１９．Ｘ１４は、Ｋである、項目１３〜１８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５６】
２０．Ｘ２０は、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、およびＳから選択され、特にＥである、項目１３〜１９のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５７】
２１．Ｘ２３は、ＫおよびＩから選択され、特にＫである、項目１３〜２０のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５８】
２２．Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｈ、およびＬから選択され、特にＬである、項目１３〜２１のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１５９】
２３．Ｘ２４は、Ｌである、項目２２に記載の使用のための化合物。
【０１６０】
２４．Ｘ２３Ｘ２４は、ＫＬである、項目２３に記載の使用のための化合物。
【０１６１】
２５．Ｘ２３Ｘ２４は、ＴＬである、項目２３に記載の使用のための化合物。
【０１６２】
２６．Ｘ２４は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、およびＨから選択される、項目２２に記載の使用のための化合物。
【０１６３】
２７．Ｘ２３は、Ｉである、項目２６に記載の使用のための化合物。
【０１６４】
２８．Ｘ２５は、Ｈである、項目１３〜２７のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１６５】
２９．前記アルブミン結合モチーフは、配列番号１〜２５７から選択されるアミノ酸配列からなり、とりわけ、
配列番号２、配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２５、配列番号２７、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１
５５、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４および配列番号２４５、
から選択されるアミノ酸配列からなり、なかでも、配列番号３、配列番号５３、および配列番号２３９から選択されるアミノ酸配列からなる、項目１３〜２８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１６６】
３０．部分（ＩＩ）は、アミノ酸配列：
ＬＡＥＡＫＸａＸｂＡＸｃＸｄ  ＥＬＸｅＫＹ−［ＡＢＭ］−ＬＡＡＬＰ
を含み、
式中、
［ＡＢＭ］は、項目１３〜２９のいずれか１項に記載のアルブミン結合モチーフであり、
互いに独立して、
Ｘａは、ＶおよびＥから選択され；
Ｘｂは、Ｌ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘｃは、Ｎ、Ｌ、およびＩから選択され；
Ｘｄは、ＲおよびＫから選択され；ならびに
Ｘｅは、ＤおよびＫから選択される、項目１３〜２９のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１６７】
３１．Ｘａは、Ｖである、項目３０に記載の使用のための化合物。
【０１６８】
３２．Ｘｂは、Ｌである、項目３０〜３１のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１６９】
３３．Ｘｃは、Ｎである、項目３０〜３２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１７０】
３４．Ｘｄは、Ｒである、項目３０〜３３のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１７１】
３５．Ｘｅは、Ｄである、項目３０〜３４のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１７２】
３６．前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３の誘導体を含み、該誘導体は、以下から選択される１つの定義、すなわち：
ｉ）該アミノ酸配列は、配列番号２５８〜５１４から選択され、とりわけ、
配列番号２５９、配列番号２６０、配列番号２６６、配列番号２７２、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号３０３、配列番号３０６、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号４１２、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１および配列番号５０２、
から選択され、なかでも、配列番号２６０、配列番号３１０、および配列番号４９６から選択されること；
ｉｉ）該アミノ酸配列は、（ｉ）に記載の配列に対して８５％またはそれより大きい同一性を有するアミノ酸配列であること
から選択される１つの定義を満たすアミノ酸配列を含む、項目１１に記載の使用のための化合物。
【０１７３】
３７．前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３の誘導体を含み、該誘導体は、
ｉ）ＬＡＸ３ＡＫＸ６Ｘ７ＡＮＸ１０  ＥＬＤＸ１４ＹＧＶＳＤＦ  ＹＫＲＬＩＸ２６ＫＡＫＴ  ＶＥＧＶＥＡＬＫＸ３９Ｘ４０  ＩＬＸ４３Ｘ４４ＬＰ
式中、互いに独立して、
Ｘ３は、Ｅ、Ｓ、Ｑ、およびＣから選択され；
Ｘ６は、Ｅ、Ｓ、およびＣから選択され；
Ｘ７は、ＡおよびＳから選択され；
Ｘ１０は、Ａ、Ｓ、およびＲから選択され；
Ｘ１４は、Ａ、Ｓ、Ｃ、およびＫから選択され；
Ｘ２６は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ３９は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ４０は、ＡおよびＥから選択され；
Ｘ４３は、ＡおよびＫから選択され；
Ｘ４４は、Ａ、Ｓ、およびＥから選択され；
４５位におけるＬは、存在しているか、または存在しておらず；ならびに
４６位におけるＰは、存在しているか、または存在していない；
ならびに
ｉｉ）ｉ）で定義された配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１１に記載の使用のための化合物。
【０１７４】
３８．Ｘ６は、Ｅである、項目３７に記載の使用のための化合物
【０１７５】
３９．Ｘ３は、Ｓであるか、またはＥである、項目３７〜３８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１７６】
４０．Ｘ７は、Ａである、項目３７〜３９のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１７７】
４１．Ｘ１４は、Ｓであるか、またはＣである、項目３７〜４０のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１７８】
４２．Ｘ１０は、Ａであるか、またはＳである、項目３７〜４１のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１７９】
４３．Ｘ２６は、Ｄであるか、またはＥである、項目３７〜４２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８０】
４４．Ｘ３９は、Ｄであるか、またはＥである、項目３７〜４３のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８１】
４５．Ｘ４０は、Ａである、項目３７〜４４のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８２】
４６．Ｘ４３は、Ａである、項目３７〜４５のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８３】
４７．Ｘ４４は、Ａであるか、またはＳである、項目３７〜４６のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８４】
４８．４５位におけるＬが存在する、項目３７〜４７のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８５】
４９．４６位におけるＰが存在する、項目３７〜４８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８６】
５０．誘導体は、配列番号５１６〜６５９および配列番号６７９〜７１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、特に、
配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７、配列番号５６４〜５６５、配列番号６７９〜６８５および配列番号７０７〜７１８、
からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号５１６〜６５９からなる群から選択されるアミノ酸配列、特に、
配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７および配列番号５６４〜５６５
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目３７に記載の使用のための化合物。
【０１８７】
５１．ｉ）で定義された配列のＮ末端および／またはＣ末端に位置する１つまたはそれ以上の追加のアミノ酸残基をさらに含む、項目３７〜５０のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１８８】
５２．誘導体は、配列番号６６０〜６６５および配列番号６７７〜６７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、項目５１に記載の使用のための化合物。
【０１８９】
５３．部分（ＩＩ）は、相互作用のＫＤが、最大で１×１０−８Ｍ、例えば最大で１×１０−９Ｍ、例えば最大で１×１０−１０Ｍ、例えば最大で１×１０−１１Ｍ、例えば最大で１×１０−１２Ｍになるようにアルブミンに結合する、項目１〜５２のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【０１９０】
５４．ａ）化合物であって、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない、化合物と； 
ｂ）少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤と
を含む、経口投与用の医薬組成物。
【０１９１】
５５．前記化合物は、項目２〜５３のいずれか１項に記載の化合物である、項目５４に記載の医薬組成物。
【０１９２】
５６．前記治療活性の経口での生物学的利用能を増加させるための少なくとも１種の構
成要素をさらに含む、項目５４〜５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【０１９３】
５７．前記構成要素は、プロテアーゼ阻害剤、吸収促進剤、粘膜付着性ポリマー、製剤媒体、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、項目５６に記載の医薬組成物。
【０１９４】
５８．丸剤、錠剤、カプセル、粉末または顆粒のような固体の形態；ペーストのような半固体の形態；およびエリキシル、溶液または懸濁液のような液体の形態から選択される形態で存在する、項目５４〜５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【０１９５】
５９．即時放出、遅延放出、または制御放出用に設計された製剤の形態である、項目５４〜５８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【０１９６】
６０．腸溶性カプセルとして製剤化されている、項目５４〜５９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【０１９７】
６１．化合物を経口投与することを含む、このような処置が必要な哺乳動物の対象の処置方法であって、該化合物は、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、Ｍ１／Ｅｍｍ１、Ｍ３／Ｅｍｍ３、Ｍ１２／Ｅｍｍ１２、ＥｍｍＬ５５／Ｅｍｍ５５、Ｅｍｍ４９／ＥｍｍＬ４９、Ｈ、Ｇ、ＭＡＧ、ＺＡＧ、ＰＰＬ、およびＰＡＢから選択される天然に存在するアルブミン結合タンパク質、またはそれらのいずれか１つのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない前記処置方法。
【０１９８】
６２．項目５４〜６０のいずれか１項に記載の医薬組成物を経口投与することを含む、このような処置が必要な哺乳動物の対象の処置方法。
【０１９９】
６３．前記化合物は、項目２〜５３のいずれか１項に記載の化合物である、項目６１〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【図１−１】
2020033372.tif 000003
【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図１−６】
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【図１−７】
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【図１−８】
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【図１−９】
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【図１−１０】
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【図１−１１】
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【図１−１２】
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【図１−１３】
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【図１−１４】
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【図１−１５】
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【図１−１６】
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【図１−１７】
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【図１−１８】
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【図１−１９】
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【図１−２０】
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【図１−２１】
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【図１−２２】
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【図１−２３】
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【図１−２４】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年11月1日(2019.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物を含む経口投与による処置に使用するための医薬であって、該化合物は、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、アルブミン結合タンパク質Ｇ、またはそのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む、部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない化合物である、前記医薬。
【請求項２】
前記部分（Ｉ）は、標的分子との選択的な相互作用が可能な結合ポリペプチドを含む、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
結合ポリペプチドは、ブドウ球菌タンパク質ＡのドメインＢから誘導されたタンパク質Ｚの変異体であり、ここで該変異体は、配列番号７１９、配列番号７２０、および配列番号７２１から選択される足場アミノ酸配列を含み、Ｘは、任意のアミノ酸残基を示す、請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
前記部分（ＩＩ）は、配列番号５１５に記載のアミノ酸配列を有する連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項５】
前記部分（ＩＩ）は、アルブミン結合モチーフを含み、該モチーフは、アミノ酸配列：
ＧＶＳＤＸ5ＹＫＸ8Ｘ9Ｉ  Ｘ11Ｘ12ＡＸ14ＴＶＥＧＶＸ20  ＡＬＸ23Ｘ24Ｘ25Ｉ
からなり、
式中、互いに独立して、
Ｘ5は、ＹおよびＦから選択され；
Ｘ8は、Ｎ、Ｒ、およびＳから選択され；
Ｘ9は、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、およびＹから選択され；
Ｘ11は、Ｎ、Ｓ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘ12は、Ｒ、Ｋ、およびＮから選択され；
Ｘ14は、ＫおよびＲから選択され；
Ｘ20は、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、およびＫから選択され；
Ｘ23は、Ｋ、Ｉ、およびＴから選択され；
Ｘ24は、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、およびＤから選択され；ならびに
Ｘ25は、Ｈ、Ｅ、およびＤから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項６】
前記アルブミン結合モチーフは、配列番号１〜２５７から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項５に記載の医薬。
【請求項７】
前記アルブミン結合モチーフは、配列番号２、配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２５、配列番号２７、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号１５５、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号２４４および配列番号２４５から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項６に記載の医薬。
【請求項８】
前記アルブミン結合モチーフは、配列番号３、配列番号５３、および配列番号２３９から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項７に記載の医薬。
【請求項９】
部分（ＩＩ）は、アミノ酸配列：
ＬＡＥＡＫＸaＸbＡＸcＸd  ＥＬＸeＫＹ−［ＡＢＭ］−ＬＡＡＬＰ
を含み、
式中、
［ＡＢＭ］は、請求項５〜８のいずれか一項に記載のアルブミン結合モチーフであり、
互いに独立して、
Ｘaは、ＶおよびＥから選択され；
Ｘbは、Ｌ、Ｅ、およびＤから選択され；
Ｘcは、Ｎ、Ｌ、およびＩから選択され；
Ｘdは、ＲおよびＫから選択され；ならびに
Ｘeは、ＤおよびＫから選択される、請求項５〜８のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項１０】
前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３の誘導体を含み、該誘導体は、以下から選択される１つの定義、すなわち：
ｉ）該アミノ酸配列は、配列番号２５８〜５１４から選択されること；および
ｉｉ）該アミノ酸配列は、（ｉ）に記載の配列に対して８５％またはそれより大きい同一性を有するアミノ酸配列であること
から選択される１つの定義を満たすアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項１１】
配列ｉ）は、配列番号２５９、配列番号２６０、配列番号２６６、配列番号２７２、配列番号２８２、配列番号２８４、配列番号３０３、配列番号３０６、配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２、配列番号４１２、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、配列番号４９９、配列番号５００、配列番号５０１および配列番号５０２、
から選択される、請求項１０に記載の医薬。
【請求項１２】
配列ｉ）は、配列番号２６０、配列番号３１０、および配列番号４９６から選択される、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
前記部分（ＩＩ）は、連鎖球菌株Ｇ１４８由来タンパク質ＧのドメインＧＡ３の誘導体を含み、該誘導体は、
ｉ）ＬＡＸ3ＡＫＸ6Ｘ7ＡＮＸ10  ＥＬＤＸ14ＹＧＶＳＤＦ  ＹＫＲＬＩＸ26ＫＡＫＴ
ＶＥＧＶＥＡＬＫＸ39Ｘ40  ＩＬＸ43Ｘ44ＬＰ
式中、互いに独立して、
Ｘ3は、Ｅ、Ｓ、Ｑ、およびＣから選択され；
Ｘ6は、Ｅ、Ｓ、およびＣから選択され；
Ｘ7は、ＡおよびＳから選択され；
Ｘ10は、Ａ、Ｓ、およびＲから選択され；
Ｘ14は、Ａ、Ｓ、Ｃ、およびＫから選択され；
Ｘ26は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ39は、ＤおよびＥから選択され；
Ｘ40は、ＡおよびＥから選択され；
Ｘ43は、ＡおよびＫから選択され；
Ｘ44は、Ａ、Ｓ、およびＥから選択され；
４５位におけるＬは、存在しているか、または存在しておらず；ならびに
４６位におけるＰは、存在しているか、または存在していない；
ならびに
ｉｉ）ｉ）で定義された配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項１４】
誘導体は、配列番号５１６〜６５９および配列番号６７９〜７１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の医薬。
【請求項１５】
誘導体は、配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７、配列番号５６４〜５６５、配列番号６７９〜６８５および配列番号７０７〜７１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の医薬。
【請求項１６】
誘導体は、配列番号５１６〜６５９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の医薬。
【請求項１７】
誘導体は、配列番号５１９〜５２０、配列番号５２２〜５２３、配列番号５２５〜５２６、配列番号５２８〜５２９、配列番号５３１〜５３２、配列番号５３４〜５３５、配列番号５３７〜５３８、配列番号５４０〜５４１、配列番号５４３〜５４４、配列番号５４６〜５４７、配列番号５４９〜５５０、配列番号５５２〜５５３、配列番号５５６〜５５７および配列番号５６４〜５６５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の医薬。
【請求項１８】
ａ）化合物であって、
−  所望の治療活性を付与する部分（Ｉ）；および
−  アルブミンに結合し、アルブミン結合タンパク質Ｇ、またはそのアルブミン結合ドメイン、フラグメントもしくは誘導体を含む、部分（ＩＩ）に対応するアミノ酸配列
を含み、
ただし、部分（Ｉ）は、エキセンジン配列、エキセンジン類似体の配列、エキセンジン活性を有するフラグメントの配列またはエキセンジン類似体の活性を有するフラグメントから選択されない、化合物と；
ｂ）少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤と
を含む、経口投与用の医薬組成物。
【請求項１９】
前記化合物は、請求項２〜１７のいずれか１項に記載の化合物である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記治療活性の経口での生物学的利用能を増加させるための少なくとも１種の構成要素をさらに含む、請求項１８又は１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
腸溶性カプセルとして製剤化されている、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2020033372000001.pdf