(57)【要約】【課題】植物の開花や着果、果実の着色、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸（γ-ABA）含量の増加又は、収穫した果実の着色を促進することができる、早期に高品質な植物（果実又は穀物）の収穫量を向上させる安全な農園芸用組成物を提供する。【解決手段】イソロイシンを有効成分として含み、イソロイシン濃度が０．５ｍＭ〜７５ｍＭの溶液として果菜、果樹若しくは穀物植物又は収穫された果実に散布される、農園芸用組成物を、植物の葉面及び／又は果実に散布して、開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、必須アミノ酸と及び／又はγ-ABA含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上の少なくとも一つを奏させる。【選択図】図２
2020033388.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液を、果菜、果樹若しくは穀物植物に散布することを含む、植物の栽培方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は農園芸用組成物及び植物の栽培方法に関し、詳しくは、植物の開花や着果、又は、収穫前後の果実の着色等を促進し得る、農園芸用組成物及びその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
作物の生育や果実・実の品質を改良するため、化学肥料や植物ホルモンなどが使われているが、環境への影響や、コストの点で問題が残されている。環境への影響が少なく、安価な農園芸用組成物の成分として、アミノ酸が期待されており、例えば、プロリンを有効成分とする花芽形成促進剤（特許文献１）、バリン又はロイシン等の分岐鎖アミノ酸を含有する植物高温ストレス耐性付与剤（特許文献２）、１８種類のアミノ酸を含む植物生長促進液肥（特許文献３）、及び、アミノ酸発酵副生物又は核酸発酵副生物を含有する植物のアレロパシー効果、および／またはファイトアレキシン生産の増強用薬剤（特許文献４）等が知られている。また、グルタミン酸、アスパラギン酸及びフェニルアラニンを含む水溶液でタバコを水耕栽培することにより、葉のアミノ酸、葉緑素及びカロテノイドの含量が増加したことが報告されている（非特許文献１）。
【０００３】
前記の植物生長促進液肥（特許文献３）には、0.05%のイソロイシンが含まれており、散布濃度は0.019ｍＭ〜0.076ｍＭである。また、前記特許文献４には、0.2ｍＭ〜20ｍＭのイソロイシンでイネ種子を処理することにより、モミラクトンＡ，Ｂの生産が促進されたことが記載されている。
【０００４】
ところで、植物ホルモンの一種であるジャスモン酸は、形態形成（花の形成、塊茎の形成）などの生理作用や、虫害、病害などのストレスに応答する遺伝子群の転写活性化作用を有することが知られている（新しい植物ホルモンの科学）。また、トマトやイチゴ等の果実をジャスモン酸メチルで処理することにより、着果又は着色が促進されることが報告されている（非特許文献２、３）。
【０００５】
ジャスモン酸シグナル伝達においては、ジャスモン酸とイソロイシンが結合した(+)-7-iso-JA-Ileが活性型であることが知られている（非特許文献４〜６）。
【０００６】
イソロイシンとジャスモン酸の関連については、寒天培地で栽培したシロイヌナズナをイソロイシンとジャスモン酸メチルの混合物で処理することにより、寄生植物であるPhelipanche aegyptiacaの感染が抑制されたが、イソロイシン単独による処理では効果がなかったことが報告されている（非特許文献７）。また、ロイシン又はイソロイシンと、1-オキソ-インダン-4-カルボン酸、又は1-ヒドロキシインダン-4-カルボン酸との複合体の溶液にリママメ（Lima bean）苗を浸漬処理することにより、虫害抵抗性に関与している揮発性物質の合成が誘導され、アミノ酸とジャスモン酸の複合体がオクタデカノイドシグナル伝達経路の中間体であることが示されている（非特許文献８）。
【０００７】
また、浸透圧ストレスを誘導する溶液（D-ソルビトール、D-マンニトール、ポリエチレングリコール6000、塩化ナトリウム）に大麦の葉を浸漬処理すると、ジャスモン酸及びジャスモン酸とアミノ酸の複合体が増加したことが報告されている（非特許文献９）。
【０００８】
また、トマトの生長、栄養状態、並びに、タバココナジラミ（Bemisia tabaci）の生育、生存、及び繁殖に対する分岐鎖アミノ酸等の影響に関する報告がなされている（非特許文献１０）。この報告におけるイソロイシンの処理濃度は0.012ｍＭ〜0.035ｍＭである。
【０００９】
さらに、種々のアミノ酸、微量要素、及び植物ホルモンの混合肥料は、植物果実の着果率と収穫量を増加させることが報告されている（特許文献５）。この報告におけるイソロイシンの処理濃度は1.1 ｎＭ〜4.3 ｎＭである。
【００１０】
また、種々のアミノ酸、微量要素、及びキチンサン等を含む葉面散布剤肥料が、植物果実の増大、糖含量増加等の効果を有すること（特許文献６）、及び、微量要素及び種々のアミノ酸を含む葉面散布剤肥料が白菜の収穫量を増加させること（特許文献７）が、それぞれ報告されている。さらに、グルタミン酸によりリンゴのアントシアニンが（非特許文献１１）、フェニルアラニンによりブドウのアントシアニンが（非特許文献１２）、それぞれ増加することが報告されている。また、メチオニンにより果実の着色が促進されることが報告されている（特許文献８）。
【００１１】
以上のように、植物に対するイソロイシンや他のアミノ酸の効果に関する知見がいくつか報告されているが、高濃度のイソロイシン溶液の散布施用で、植物の開花や着果、又は、収穫した果実の着色等を促進し得ることは知られていない。
【００１２】
尚、チンゲンサイの水耕栽培において、栄養液の硝酸態窒素の20%を20種類の個々のアミノ酸で置換したことによる、生長等への影響を調べたところ、イソロイシンは植物の地上部（シュート）のチッ素、リンの含量を増加させたが、生長（株の重量）に効果がなかったことが報告されている（非特許文献１３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】特開2003-48803
【特許文献２】特開2012-197249
【特許文献３】韓国特許出願公開2013-107406号
【特許文献４】特開2012-10694
【特許文献５】中国特許出願公開第102627498号
【特許文献６】中国特許出願公開第102285823号
【特許文献７】中国特許第101891520号
【特許文献８】特開2007-259714
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Wu, X-P. et al., Scientia Agricultura Sinica, 2004, 37(3):357-361
【非特許文献２】Liu, L., Journal of Experimental Botany, 2012, 63(16):5751-5761
【非特許文献３】Concha, C.M. et al., Plant Physiology and Biochemistry, 2013, 70:433-444
【非特許文献４】Fonseca, S. et al., Plant Biology, 2009, 12:539-547
【非特許文献５】Fonseca, S. et al., Nature Chemical Biogogy, 2009, 5:344:350
【非特許文献６】Wasternack, C., Annals of Botany, 2013, 111:1021-1058
【非特許文献７】Nun, N.B. et al., Phytoparasitica, 2009, 37(5):485-488
【非特許文献８】Krumm, T. et al., FEBS Letters, 1995, 377(3):523-529
【非特許文献９】Kramell, R. et al., Journal of Plant Growth Regulation, 1995, 14(1):29-36
【非特許文献１０】Pang, S-T. et al., Chinese Journal of Eco-Agriculture, Apr. 2013, 21(4):465-473
【非特許文献１１】Wang, L. J., Journal of Fruit Science，2006, 23(2):157-160.
【非特許文献１２】Qu, J.G. et al., Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao. 2006, 22(2):299-305.
【非特許文献１３】Wang, H-J. et al., Pedosphere, 2007, 17(5):595-600
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、植物の開花や着果、果実の着色、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸（γ-ABA）含量の増加又は、収穫した果実の着色を促進することができる、早期に高品質な植物（果実又は穀物）の収穫量を向上させる安全な農園芸用組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、イソロイシン溶液を植物に散布することにより、開花や着果、果実の着色が促進され、また、イソロイシン溶液を果実に散布することにより果実の着色が促進されること等から、結果として、早期に高品質な植物を収穫量を向上させて生産できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
（１）０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液を、果菜、果樹若しくは穀物植物に散布することを含む、植物の栽培方法。
（２）イソロイシンがＬ−イソロイシンである、前記方法。
（３）前記イソロイシンを含有する溶液が、精製イソロイシン、イソロイシン発酵液もしくは発酵副生物、又はイソロイシンを含むそれらの分画物を含有する溶液である、前記方法。
（４）前記イソロイシン含有溶液の散布により、開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上から選ばれる一つ以上の作用が奏される、前記方法。
（５）前記溶液を、果菜、又は果樹に散布する、前記方法。
（６）植物がナス科、ブドウ科、又はバラ科に属する植物である、前記方法。
（７）植物がトマト、トウガラシ、ブドウ、又はリンゴである、前記方法。
（８）前記溶液を、物の葉面及び／又は果実に散布する、前記方法。
（９）０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液を、収穫された果実に散布する、果実の追熟を促進させる方法。
（１０）イソロイシンがＬ−イソロイシンである、前記追熟促進方法。
（１１）前記イソロイシンを含有する溶液が、精製イソロイシン、イソロイシン発酵液もしくは発酵副生物、又はイソロイシンを含むそれらの分画物を含有する溶液である、前記追熟促進方法。
（１２）前記イソロイシン含有溶液の散布により、果実の着色促進、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上から選ばれる一つ以上の作用が奏される、前記追熟促進方法。
（１３）果実が、ナス科、ブドウ科、又はバラ科に属する植物の果実である、前記追熟促進方法。
（１４）果実がトマト、ブドウ、又はリンゴである、前記追熟促進方法。
（１５）イソロイシンを有効成分として含み、イソロイシン濃度が０．５ｍＭ〜７５ｍＭの溶液として果菜、果樹若しくは穀物植物又は収穫されたそれらの果実に散布される、農園芸用組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】イソロイシンを散布したトマトの開花と着果の様子を示す図（生物の形態を示す写真）。矢印は着果を示す。
【図２】ミニトマト（マイクロトム）果実の着色個数の推移を示す図。縦軸は植物あたりの着色果実の数。
【図３】ミニトマト（マイクロトム）の着果数の推移を示す図。縦軸は植物あたりの平均果実数。
【図４】各種化合物を散布したトマト（桃太郎）の第一着果日を示す図。
【図５】各種化合物を散布したトマト（桃太郎）の着色を示す図。縦軸は４株当たりの着色果実数。ａ：着色した果実の個数、ｂ：同じ日の開花により生じた果実の写真（生物の形態）。
【図６】各種化合物を散布したトマト（桃太郎）の実の収穫個数を示す図。縦軸は４株当たりの果実数。
【図７】イソロイシン又はプロリンを散布したミニトマト（サンチェリーピュア）果実の着色個数の推移を示す図。縦軸は植物当たりの着色果実数。
【図８】イソロイシン又はプロリンを散布したミニトマト（サンチェリーピュア）の着果数の推移を示す図。縦軸は植物当たりの着果数。
【図９】イソロイシン又はプロリンを散布したミニトマト（サンチェリーピュア）の抗酸化作用（Antioxidant capacity）の比較を示す図。横軸はサンプル100g（新鮮重）中にカテキンと同等なフリーラジカルの消去能を有する抗酸化物質の量。
【図１０】プロリンを散布したミニトマト（サンチェリーピュア）の葉焼けを示す写真（生物の形態）。
【図１１】イソロイシンを散布したトマト（サンチェリーピュア）の実の着色及びカロテノイド分析の結果を示す図及び写真（生物の形態）。グラフ縦軸は、カロテノイド相対含量。
【図１２】イソロイシンを散布したミニトマト（サンチェリーピュア）におけるジャスモン酸合成に関与する遺伝子LOXとJAR1の発現を示す図。縦軸は相対発現量。
【図１３】イソロイシンを散布したミニトマト（サンチェリーピュア）におけるジャスモン酸応答遺伝子PI、MYC2の発現を示す図。縦軸は相対発現量。
【図１４】イソロイシンを散布したミニトマト（サンチェリーピュア）におけるカロテノイド生合成に関与する遺伝子の発現を示す図。縦軸は相対発現量。
【図１５】種々の濃度のイソロイシン散布したミニトマト（サンチェリーピュア）におけるLOX、JAR1、PI、MYC2遺伝子の発現を示す図。縦軸は相対発現量。
【図１６】種々の濃度のイソロイシン散布したトマト（キャデイー）におけるLOX、JAR1、PI、MYC2遺伝子の発現を示す図。縦軸は相対発現量。
【図１７】イソロイシンを散布したトウガラシ（アナハイム）におけるLOXとPsy遺伝子の発現を示す図。縦軸は相対発現量。
【図１８】イソロイシンを散布した中玉トマト（つくつく枝）の着色果実の収穫房数を示す図。
【図１９】イソロイシン発酵副生液を散布したトウガラシ（ピーマン：フルーピーレッドEX）におけるLOX遺伝子の発現を示す図。縦軸は相対発現量。
【図２０】イソロシン処理したブドウカルスのアントシアニン含量を示す図。縦軸は、アントシアニン量（μmol／g乾燥重量カルス）。
【図２１】イソロイシンを散布したブドウ果実のアントシアニン含量を示す図。
【図２２】イソロイシンを散布したリンゴ果実のアントシアニン含量を示す図。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の農園芸用組成物は、イソロイシンを有効成分として含む。イソロイシンはＬ−イソロイシンであることが好ましい。以下、本明細書において、アミノ酸は、特記しない限りＬ−体である。イソロイシンは、精製又は粗精製されたものであってもよく、イソロイシンを含む培養物（発酵液）もしくは発酵副生物、又はイソロイシンを含むそれらの分画物であってもよい。
【００２０】
本発明の農園芸用組成物は、本発明の効果を損なわない限り、イソロイシン以外に任意
の成分を含んでいてもよい。このような成分としては、担体、pH調整剤、肥効を高めるためのミネラル等の肥料成分、農薬成分、バインダー、増量剤等が挙げられる。これらの成分としては、本発明の効果を損なわない限り、通常農薬、肥料等に用いられている成分を用いることができる。
また、農園芸用組成物は、イソロイシン以外のアミノ酸を含んでいてもよい。
【００２１】
農園芸用組成物の剤型は、使用時に散布可能な溶液を調製することができる限り特に制限されず、液剤、粉剤、粒剤、乳剤等の何れの使用形態でも良い。
【００２２】
本発明の農園芸用組成物は、後述するように、植物に散布する場合は葉面及び／又は果実に散布することが好ましい。葉面又は果実への農園芸用組成物の展着力を高めるために展着剤を、また、イソロイシンの植物への浸透性を高めるために界面活性剤等の成分を添加してもよい。展着剤としては、例えばアプローチＢＩ TM（花王（株））、ミックスパワー TM（シンジェンタ  ジャパン（株））、スカッシュ TM（丸和バイオケミカル（株））などが挙げられる。界面活性剤としては非イオン性、陰イオン性、陽イオン性及び両イオン性のいずれも使用することが出来る。例を挙げると、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、オキシエチレンポリマー、オキシプロピレンポリマー、ポリオキシエチレンアルキルリン酸エステル、脂肪酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルスルホン酸塩、アルキルアリールスルホン酸塩、アルキルリン酸塩、アルキルリン酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキル硫酸エステル、第四級アンモニウム塩、オキシアルキルアミン、レシチン、サポニン等である。また、必要に応じてゼラチン、カゼイン、デンプン、寒天、ポリビニルアルコール、アルギン酸ソーダなどを補助剤として用いることが出来る。
【００２３】
また、使用に際して、固体状又は粉体状の農園芸用組成物を、水、アルコール類等の溶媒に溶解又は分散させてもよい。また、液状の農園芸用組成物を、水、アルコール類等の溶媒で希釈してもよい。アルコール類としては、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール等が挙げられる。
【００２４】
農園芸用組成物中のイソロイシン含量は、施用時にイソロイシンが後述する所定濃度の溶液として植物又は収穫された果実に散布され得る限り特に制限されない。本発明の農園芸用組成物であるために、製品の販売形態は固形物であっても溶液であってもよいが溶液の場合は０．５ｍＭ〜飽和濃度であることが好ましい。ちなみに、イソロイシンの水への溶解度は、約０．３Ｍ（40.2 g/L（20℃）、41.2 g/L（50℃））である。
農園芸用組成物の施用時のイソロイシン濃度は、通常０．５ｍＭ〜７５ｍＭ、好ましくは０．５ｍＭ〜５０．０ｍＭ、より好ましくは１．０ｍＭ〜２０．０ｍＭ、更に好ましくは５．０ｍＭ〜１０．０ｍＭである。農園芸用組成物中のイソロイシン含量は特に限定されないが、乾燥物換算で１重量％以上、好ましくは５０％以上、さらに好ましくは７０％以上であり、塩害など不純物による障害の回避及びイソロイシンの効果の顕在化の観点から、この範囲が好ましい。
【００２５】
本発明の農園芸用組成物は、開花促進作用、着果促進作用、着果数向上作用、果実の着色促進作用、必須アミノ酸及び／又はγ−アミノ酪酸含量向上作用、カロテノイド合成促進作用、及び、抗酸化作用向上作用の少なくとも一つの作用を有している。したがって、農園芸用組成物は、開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、必須アミノ酸及び／又はγ−アミノ酪酸含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上の少なくともいずれかの用途で用いることができ、その結果、早期に植物の収穫量を向上させること及び／又は品質を向上させることができる。
【００２６】
本発明の農園芸用組成物の適用対象は、イソロイシンにより上記作用が奏されるものであれば特に制限されず、開花前からの果菜（果実を食用とする野菜）、果樹、又は穀物植物等が含まれる。もちろん、開花後の果菜、果樹、又は穀物植物であってもよいが、通常、開花前からが好ましい。
【００２７】
果菜類としては、トマト（ミニトマトを含む）、オクラ、ナス、トウガラシ、キュウリ、メロン、ニガウリ、カボチャ、マクワウリ、ハヤトウリ、スイカ、イチゴ、ダイズ、小豆、ソラマメ、エンドウ、落花生、ササゲ、ルーピン、クローバー、アルファルファ等が挙げられる。
【００２８】
果樹としては、カリン、チュウゴクナシ、ナシ、マルメロ、セイヨウカリン、ジューンベリー、シポーバ、リンゴ、アメリカンチェリー、アンズ、ウメ、サクランボ、スミミザクラ、スピノサスモモ、スモモ、モモ、アーモンド、イチョウ、クリ、クルミ、ペカン、アケビ、イチジク、カキ、キイチゴ、キウイフルーツ、グミ、クワ、クランベリー、コケモモ、ザクロ、サルナシ、シーバックソーン、スグリ、ナツメ、ニワウメ、ビルベリー、フサスグリ、ブドウ、ブラックベリー、ブルーベリー、ポーポー、マツブサ、ラズベリー、ユスラウメ、ミカン属、キンカン属、カラタチ属、オリーブ、ビワ、ヤマモモ等の果樹等が挙げられる。
【００２９】
穀物植物は、種子を食用とする植物であり、コムギ、オオムギ、イネ、コーン、ソルガム、ミレット、燕麦、ライムギ、ライコムギ、ソバ等が挙げられる。
【００３０】
前記果菜の品種は特に制限されないが、例えば、トマト（ミニトマトを含む）としては、桃太郎、ローマ、黄寿、ファーストトマト、赤色丸玉、イエローキャロル、パルチェ、ミニキャロル、マイクロトム、サンチェリーピュア等が挙げられる。
【００３１】
トウガラシとしては、アナハイム、ピーマン、シシトウ、鷹の爪、万願寺とうがらし、パプリカ、ハバネロ、ジョロキア、ハラペーニョ等が挙げられる。
果樹の品種は特に制限されないが、例えば、ブドウとしては、カベルネ・ソーヴィニヨン、シャルドネ、テンプラニーリョ、ピノ・ノワール、マスカット、甲州、甲斐路、巨峰、ピオーネ等が挙げられる。
リンゴとしてはつがる、ふじ、ゴールデンデリシャス、紅玉、国光、陸奥、王林、ジョナゴールド等が挙げられる。
【００３２】
本発明において好ましい植物は、果実をつける植物であり、果菜、果樹のいずれもが含まれる。特に好ましい植物はナス科、ブドウ科、又はバラ科に属する植物であり、中でもトマト、トウガラシ、ブドウ、及びリンゴが好ましい。
【００３３】
本発明の方法は、０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液を、果菜、果樹若しくは穀物植物に散布することを含む、植物の栽培方法である。また、本発明の他の形態は、本発明の農園芸用組成物を、植物の葉面及び／又は果実に散布して、開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上の少なくとも一つを奏させる、植物の栽培方法である。
０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液は、本発明の農園芸用組成物を必要に応じて溶媒に溶解し、希釈することにより調製することができる。
本発明の農園芸用組成物を散布する植物体としては、葉又は果実が好ましい。特に好ましいのは葉面散布である。葉面散布は、少なくとも葉面に散布されればよいことを意味し、葉面と共に他の部位にも散布されてもよい。果実についても同様である。
また、農園芸用組成物は、収穫した果実に散布してもよい。果実に農園芸用組成物を散
布することによって、追熟を促進することができる。追熟の促進には、着色促進、リコピン含量増加、糖度増加、及びグルタミン酸などのアミノ酸含量の増加が含まれる。
【００３４】
本発明の一形態として、本発明の農園芸用組成物を植物に施用する、開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、アミノ酸及び／又はγ-ABA含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上の少なくとも一つのための方法がある。これは、早期に植物の収穫量を向上させる、品質を向上させる、生育を促進する、もしくは収穫時期を早める、植物の栽培方法である。
また、本発明の他の形態は、本発明の農園芸用組成物を収穫した果実に施用する、果実の追熟を促進させる方法である。
含量が向上するアミノ酸としては、必須アミノ酸が挙げられる。必須アミノ酸としては、トリプトファン、リジン、スレオニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、及び、ヒスチジンの少なくとも１種が挙げられる。
【００３５】
農園芸用組成物の散布量は特に制限されないが、イソロイシンの量として、通常、６．５ｇ〜３０００ｇ／ヘクタール、好ましくは６．５ｇ〜２０００ｇ／ヘクタール、より好ましくは１３ｇ〜８００ｇ／ヘクタール、更に好ましくは６５ｇ〜４００ｇ／ヘクタールであることが好ましい。
収穫した果実に施用する場合は、イソロイシンの量として、通常、０．００２ｇ〜０．３ｇ／g（果実）、好ましくは０．００２ｇ〜０．２ｇ／ｇ（果実）、より好ましくは０．００４ｇ〜０．０８ｇ／ｇ（果実）、更に好ましくは０．０２ｇ〜０．０４ｇ／g（果実）であることが好ましい。
【００３６】
植物への農園芸用組成物の施用時期は、期待する効果に応じて適宜設定することができる。例えば、開花促進には開花前、着果促進、着果数向上には着果前から着果後、着色促進には着果後から収穫前に施用することが好ましい。施用回数は特に制限されず、１回でもよく、２回以上であってもよい。
【００３７】
農園芸用組成物を散布する場合、散布方法は特に制限されないが、茎葉、果実を含む植物の地上部全体、好ましくは葉面及び／又は果実に農園芸用組成物が展着するように散布することが望ましい。人手により散布する場合は、農園芸用組成物の噴霧口が葉表面ないしは裏面部位に向くような操作が望まれる。また、ブームスプレーヤーを使用する場合は、散布液量を１ヘクタール当たり１００リットル以上、好ましくは２００〜３０００リットル、より好ましくは３００〜２０００リットルとすることが望ましい。また、静電気を利用することにより噴霧液の植物体への付着を促進させるいわゆる静電噴霧機や静電噴霧ノズル口を用いてもよい。
【００３８】
本発明の農園芸用組成物を葉面及び／又は果実に散布する場合、農業上通常用いられる葉面散布用肥料と混合してもよい。
【００３９】
本発明の方法により植物を栽培する場合の土壌に施用する基肥、追肥は、植物の種類に応じてその地域で通常行われている施肥量、施肥方法に準拠すればよい。また、本発明の方法で植物を栽培する場合の栽植密度は、植物の種類に応じてその地域で推奨されている密度でよいが、畦間（条間）については、葉面及び／又は果実に散布を実施する場合、散布資材が下部の葉にも容易に到達できるよう、20cm以上とすることが好ましい。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
【００４１】
〔実施例１〕ミニトマト（マイクロトム）に対するイソロイシンの効果
ミニトマト（マイクロトム（Micro-Tom））の種子３粒を、培養土を入れた直径10.5 cmのスリットポット（口径10.5cm×高さ8.8 cm）に播き、バイオトロン中で、温度２３℃、明期１４時間（６時〜２０時）、暗期１０時間（２０時〜６時）で栽培した。培養土は、くみあいニッピ園芸培土1号（日本肥糧株式会社）とバーミキュライトを3:1（体積比）で混合したものを使用した。
【００４２】
３週間後に1株を残し、間引きした。播種1ヶ月後から収穫まで、土壌施肥肥料としてHyponex液体肥料（N：P：K=6：10：5、株式会社ハイポネックスジャパン）の300倍希釈液を、１株（ポット）当たり100 ｍＬの量で、１週間に１回の頻度で灌注追肥した。
【００４３】
５株の植物が均一に生長し、蕾が出始めてから、水（Con.）、又は10 ｍＭ Ｌ−イソロイシン水溶液（Ile）を植物全体に、１週間に1回散布した。散布量は、１株当たり５ｍＬとした。
【００４４】
その後、各株の開花、果実の着果、着色、及び着果数を調査した。
【００４５】
ｉ）開花、着果
図１に、植物の開花と着果の様子を示す。Ileを散布したトマトは、Con.に比べて開花と着果が早く、開花数と着果数も多かった。
【００４６】
ii）果実の着色
トマトの着果後に、5日毎にオレンジ又は赤色に着色した果実の個数を調べた結果を図２に示す。Con.と比べてIleを散布したトマトの果実は着色が早く開始し、同時期における着色した果実の個数も多かった。これらの結果により、Ileの散布はトマト果実の着色を促進する効果があることが示され、トマトの生育促進ができた。
【００４７】
iii）着果数
トマト果実の着果数の経時的な推移を調べた結果を図３に示す。播種から82日後にトマトの果実を収穫した。Ileを散布したトマトは、収穫した果実の個数がCon.に比べて20%増加した。これは、Ile散布により、トマトの開花数及び着果率が増加した結果であると考えられ、トマトの収穫量も向上した。
【００４８】
〔実施例２〕トマト（桃太郎）に対するイソロイシンの効果
トマト（桃太郎ファイト）の種子３粒を、実施例１と同様にして、培養土を入れたスリットポットに播き、栽培を行った。但し、栽培は温室中（昼温度２５℃（６時〜２０時）、夜温度１５度（２０時〜６時））で行った。培養土および施肥は実施例１と同様とした。
【００４９】
３週間後に１株の植物を残し間引きした。第１段の花房が出た頃に支柱を立て、第２段目の花房が出た後に摘心を行った（頂芽摘去）。
【００５０】
４株の植物が均一に生長し、蕾が出始めてから、水（Con.）、10ｍＭイソロイシン水溶液（Ile）、10ｍＭグルタミン酸一ナトリウム水溶液（GluNa）、5 ｍＭ尿素水溶液（Urea）、又は10 ｍＭフェニルアラニン水溶液（Phe）を、植物全体に、２週間に1回散布した。散布量は植物の成長に伴って変更し、１株の植物に15〜30 mLとした。尚、Ureaは、各アミノ酸と窒素量が同等となるように、濃度は5 ｍＭとした。
【００５１】
その後、各株の第一着果日、果実の着色、及び着果数を調査した。
【００５２】
ｉ）第一着果日
図４に、各溶液を散布したトマト植物の第一着果日（初めて実をつけた日）を示す。Ile、GluNa、Urea、水、Pheを散布したトマトの順に着果した。水を散布したトマトでは、播種してから69日後に着果したのに対して、Ileを散布したトマトは播種から55日後に着果した。GluNaとUreaはそれぞれ播種から56日と63日後で、水（Con.）より早かった。一方、Pheを散布したトマトの着果は最も遅く、播種から83日後だった。このように、Ile散布が最もトマトの着果を早めた。
【００５３】
ii）果実の着色
トマトの播種107日後に、オレンジ又は赤色に着色した果実数を、図５aに示した。Ile散布は４個、Urea及びGluNa散布はそれぞれ１個、水（Con.）及びPhe散布はゼロであり、Ileを散布したトマトは着色した果実数が最も多かった。また、水（Con.）とIleを散布したトマトで、開花日が同じ花からできた果実の色を比較したところ、水散布の方が緑色で、Ile散布の方が既に赤色になって、早く色づいた（図５b）。このように、Ileによる果実着色の促進効果は、桃太郎トマトでも認められた。
【００５４】
iii）着果数
播種から３ヶ月栽培後にトマト果実を収穫し、その数を図６に示す。収穫された果実は、水（Con.）では８個、Ileでは１６個、Pheでは８個、Ureaでは１０個、GluNaでは１４個であった。このように、Ile散布によりトマトの着果数を増加させる効果は、桃太郎トマトでも認められ、収穫量も向上した。
【００５５】
〔実施例３〕ミニトマト（サンチェリーピュア）に対するイソロイシンの効果
ミニトマト（サンチェリーピュア、（トキタ種苗(株)））の種子３粒を、実施例１と同様にして、培養土を入れたスリットポットに播き、栽培を行った。但し、栽培は実施例2と同様に温室中で行った。培養土および施肥は実施例１と同様とした。
【００５６】
播種の1ヶ月後に、ロングポット9.0ｃｍ（口径9ｃｍ、高さ20ｃｍ、底面径6.4ｃｍ）に定植し、収穫まで栽培した。施肥は播種の1ヶ月後から収穫まで、肥料としてベジタブルライフA（大塚化学）の200倍希釈液を、１株（ポット）当たり100 ｍＬの量で、２日に１回の頻度で灌注追肥した。
【００５７】
４株の植物が均一に生長し、蕾が出始めてから、水（Con.）、10 ｍＭイソロイシン水溶液（Ile）、又は10 mMプロリン水溶液（Pro）を植物全体に、１週間に１回散布した。散布量は、植物の成長に伴って変更し、１株当たり１５〜３０ｍＬとした。
【００５８】
その後、各株の果実の着色、着果数、果汁中のアミノ酸含量、果汁中の糖度と酸度、及び果汁の抗酸化作用を調査した。
【００５９】
ｉ）果実の着色
図７に、着色した果実の個数を示す。着色した果実の個数は、Ile、Pro、Con.を散布したトマトの順に多かった。本実施例でも、Ile散布によるトマト果実の着色促進効果が確認された。
【００６０】
ii）着果数
トマト着果数を経時的に調べた結果を図８に示す。初期段階では、果実の個数はPro、Ile、水を散布したトマトの順に多かったが、途中からIleを散布したトマトの果実数が増加し、Proを散布したトマトの果実数を超えた。最終の収穫量は水（Con.）と比べて、Ile散布では果実の個数が16%増加し、Pro散布では9%増加した。
【００６１】
iii）果実のアミノ酸分析
水、Ile、又はProを散布したミニトマトから、それぞれ成熟したトマト果実を採って、アミノ酸の含量分析を行った。１試験区毎に、１株の植物の２段目の花房から２個ずつ、計８個の果実を採った。各々の果実から果汁を搾り出し、その果汁を0.02 ＮのHClで10倍希釈し、フィルターろ過を行った。得られたろ過液中のアミノ酸を測定した。アミノ酸の測定はL-8800高速アミノ酸分析計(Hitachi)を用い、当機器のマニュアルに従って行った
。各果汁のアミノ酸の量(μmol/ｍＬ)を計算し、８個の果実の平均値を、各試験区のアミノ酸量とした。
【００６２】
結果を表１に示す。Con.と比べて、Ileを散布したトマトでは、グルタミン酸（Glu）、アスパラギン(Asn)、グルタミン（Gln）、アスパラギン酸（Asn）、プロリン（Pro）、メチオニン（Met）の量が低下したが、アラニン（Ala）、γ-アミノ酪酸（γ-ABA）、イソロイシン（Ile）、ロイシン（Leu）、バリン（Val）、セリン（Ser）、グリシン（Gly）、スレオニン（Thr）、リジン（Lys）、ヒスチジン（His）、システイン（Cys）、アルギニン（Arg）、チロシン（Tyr）、及びトリプトファン（Trp）が増加した。Ile散布では分岐鎖アミノ酸と芳香族アミノ酸を含む多くの必須アミノ酸が増加した。
【００６３】
分岐鎖アミノ酸と芳香族アミノ酸は、植物の多くの二次代謝産物、例えば、フェニルプロパノイド、フラボノイド及びアルカロイドの合成の出発物質になる。また、機能性アミノ酸のγ-ABAも増加した。これらの結果から、トマトのIle散布により、果実の二次代謝を活性化したことが示唆された。必須アミノ酸と機能性アミノ酸のγ-ABAが増加することにより、トマトの栄養価値が高まることが期待できる。
【００６４】
【表１】
2020033388.tif 000003
【００６５】
iv）糖度と酸度分析
前記iii）と同様にして、各試験区のミニトマトから成熟したトマト果実を採り、各々の果実から果汁を搾り出した。各果汁中のグルコース、フルクトース、及び酸度を分析した。グルコース及びフルクトースの分析は、果汁の２０倍希釈液について、食品分析試薬F-Kit（Saccharose(Sucrose)/D-Glucose/D-Fructose Kit（Roche））、及びDU800 Spectrophotometer（Beckman Coulter）を用い、同キット及び機器のマニュアルに従って行った。酸度分析は、ポケット酸度計（PAL-AC1、ATAGO）を用いて測定した。
【００６６】
結果を表２に示す。Ileを散布したトマトでは、グルコース含量及びフルクトース含量はCon.とほぼ同じであった。一方、Proを散布したトマトは、グルコース含量及びフルクトース含量が最も少なかった。
また、酸度は、Proを散布したトマトでやや増加した。
【００６７】
【表２】
2020033388.tif 000004
【００６８】
ｖ）抗酸化作用
トマト果実からポリフェノールを抽出して、それらの抗酸化作用を調べた。
前記iii）と同様にして、各試験区のミニトマトから成熟したトマト果実を採った。果実を液体窒素で凍結後に粉砕し、0.5 gの粉末を2 mLのチューブに入れ、1.0mLの70%メタノールで２回抽出した。抽出液から、遠心エバポレーターを用いて液体を完全に蒸発させた、残渣を500μLの70%メタノールに溶解させ、サンプルとした。そのサンプルの抗酸化作用を、Lamien-Meda, Aら（Molecules, 2008, 13(3):581-594）を参照し、DPPH（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl）ラジカル法を使用して、フリーラジカル消去能を測定した。50μLのサンプルに700μLのメタノール、及び、750μLの0.02mg/mLのDPPH (ALFA  AESAR)を加えて、よく混合した。その後、15分間室温でインキュベートし、517nmの吸光度を測定した。サンプルの代わりに0、0.2、1、2、及び4μg/mLのカテキン（Catechin）を用いて検量線を作成した。測定されたフリーラジカル消去能を、サンプル100g（新鮮重）中に同等なフリーラジカルの消去能を有するカテキンに相当する量(mg)として換算した。結果を図９に示す。その結果、Ileを散布したトマト果実は、水（Con.）又はProを散布したトマト果実よりも抗酸化作用が増加した。
【００６９】
vi）その他
Proを散布したトマトの葉には、葉焼けの黒い斑点が現れたが、Ileを散布したトマトは葉焼けが見られなかった（図１０）。
以上から、早期にトマトの収穫量を向上させること及び品質を向上させることができることがわかった。
【００７０】
〔実施例４〕トマトの着色及びカロテノイド合成に対するイソロイシンの効果
実施例３と同様にして栽培したトマトの同段の花房から採ったほぼ同じの大きさの未成熟の果実に10ｍＭのイソロイシン水溶液(Ile)を散布して、果実の着色を調査した。
【００７１】
果実を６個ずつ、２つの100 ｍＬのガラスビーカーに入れて、一方に1 ｍＬの水（Con.）を、他方に１ｍLのIleを各々散布した後、各ビーカーにラップをかけて５時間放置し、その後にラップを外し放置した。試験は室温で行い、水及びIleの散布は1週間の間隔で合計2回行った。
【００７２】
各々６個の果実の中の３個については、試験開始時、及び、試験開始２７、３２、３４日後に果実の外観を記録した。27日目頃にIleを散布した果実は着色が始まり、Con.の水を散布した果実はまだ緑色であった。また、34日目頃にIle散布の果実は完熟の赤色になったが、水散布の果実はまだ半熟のオレンジ色であった。結果を図１１ａに示す。
また、残りの３個の果実（図１１ｂ）については、試験開始27日後に、果実のカロテノイドの含量を、以下の方法により測定した。種子を取り出したトマトの果実を液体窒素で凍結し、乳鉢で粉砕した。粉砕したサンプル0.5 mgを2ｍＬのチューブに入れ、１ ｍＬのクロロホルムを加え、シェーカー（Micro& shaker, IUCHI）で10 分振動しながら抽出し
た。5分遠心分離し（8000 ｒｐｍ）、下層のクロロホルム層を新しいチューブに移した。残ったチューブ中に再び0.5 mLのクロロホルムを加えて同様に抽出し、クロロホルム層を完全に取り出して上記のクロロホルム抽出液のチューブに移した。次に得られた抽出液から遠心エバポレーターを用いてクロロホルムを蒸発させた。その後、0.5 ｍＬのクロロホルムを加えて溶解したサンプル液を用いカロテノイドを分析した。カロテノイドの測定は、抽出サンプルをクロロホルムで100倍希釈し、DU800 Spectrophotometer（Beckman Coulter）を用いてカロテノイドの吸光スペクトル（480 ｎｍ）における吸光度を測定した。結果を図１１ｂに示す。
【００７３】
図１１に示されるように、水処理と比べて、Ileを散布したトマトの果実のカロテノイドの含量が高いことが、可視的な評価（図１１ａ）、及び、カロテノイド定量評価（図１１ｂ）からわかった。この結果から、果実へのIle散布で果実のカロテノイドの合成及び着色が促進されたことが分かった。
【００７４】
〔実施例５〕イソロイシン散布とジャスモン酸との関連
実施例３と同様にして栽培したミニトマト植物（サンチェリーピュア）に10 ｍＭのイソロイシン水溶液（Ile）と水（Con.）を葉面散布して、ジャスモン酸に関連する遺伝子の発現を分析した。葉面散布３時間後に同じ部位の葉を採集し、SV Total RNA Isolation
System TM（Promega）を用いて、そのキットのマニュアルに従ってRNAを分離した。ReverTra Ace TM qPCR RT Master Mix（TOYOBO）を用いて、抽出したRNAから一次鎖cDNAを合成した。
【００７５】
ｉ）ジャスモン酸合成に関与する遺伝子の分析
ジャスモン酸の生合成経路の上流にある13-リポキシゲナーゼ（LOX）遺伝子、及び、JAとIleからJA-Ileを合成する遺伝子（JASMONATE RESISTANT 1（JAR1））の発現を分析した。上記のcDNAを鋳型とし、表３に示したプライマーを用いてリアルタイムPCRを行い、遺伝子の発現量はアクチン（Actin）遺伝子に対する相対的な発現量で表した。結果を図１２に示す。
水（Con.）と比べて、Ileを散布したトマトの葉のLOX遺伝子とJAR1遺伝子の発現が有意に上昇した。
【００７６】
【表３】
2020033388.tif 000005
【００７７】
ii）ジャスモン酸に応答する遺伝子の分析
前記のcDNAを鋳型とする、ジャスモン酸の応答遺伝子Protease Inhibitor（PI）とMYC2のリアルタイムPCR解析の結果を図１３に示す。使用したプライマーは表３に示す。Ile散布により、PI遺伝子及びMYC2遺伝子ともに発現が上昇した。
【００７８】
iii）カロテノイドに関与する遺伝子の分析
ミニトマト植物に10 mMのイソロイシン水溶液（Ile）とCon.（水）を葉面散布し、２４時間後に葉から分離したRNAを用いて、カロテノイドの生合成に関与する遺伝子、フィトエンシンターゼ（Phytoene synthase、Psy）、フィトエンデサチュラーゼ（Phytoene desaturase、Pds）とζ-カロテンデサチュラーゼ（ζ-carotene desaturase、Zds）の発現を解析した。RNAの抽出、cDNAの合成、及びリアルタイムPCRの解析は、前記と同様にして行った。用いたプライマーは表３に示す。
結果を図１４に示す。Ileを散布したトマトでは、Psy、Pds及びZds遺伝子の発現が上昇した。
【００７９】
〔実施例６〕イソロイシン散布濃度の検討Ｉ
実施例３と同様にしてミニトマトを栽培し、植物ごとに１ ｍＭ、４ ｍＭ、７ ｍＭ、又は１０ ｍＭのイソロイシン水溶液（Ile）２０ｍＬを葉面及び果実に散布した。１週間後に再度Ileを同様に散布し、その３時間後に植物から葉を採って、実施例５と同様にしてLOX、JAR1、PIとMYC2の発現を分析した。使用したプライマーは表３に示す。
結果を図１５に示す。各遺伝子の発現は、ほぼIleの濃度に依存して増加した。
【００８０】
〔実施例７〕イソロイシン散布濃度の検討ＩＩ
実施例１と同様な栽培方法でバイオトロン室にトマト（品種：キャデイー、トキタ種苗(株)）を栽培した。播種後３週間の植物の葉面に水（Con.）、０．０１ｍＭ、０．１ｍＭ、５０ｍＭ、又は１００ｍＭのイソロイシン水溶液（Ile）を３ｍＬ散布して、第２本葉からサンプリングし、実施例５と同様にしてLOX、JAR1、PIとMYC2の発現を分析した。
結果を図１６に示す。５０ｍＭのIleの散布で各遺伝子の発現が促進された。
実施例６の結果と併せて、Ile濃度は０．５ｍＭ以上、７５ｍＭ以下が好ましいと考えられる。
【００８１】
〔実施例８〕イソロイシンのトウガラシに対する効果
トマトと同じナス科に属するトウガラシ（品種：アナハイム（Anaheim））に、10 ｍＭのイソロイシン水溶液（Ile）を散布して遺伝子発現解析を行った。実施例２と同様の方法で、ビニルハウス中でトウガラシを栽培した。
１週間に１回Ileを散布し、２回目に散布した後にトウガラシ植物から葉を採って、実施例５と同様な方法でRNA抽出、ｃＤＮＡ合成、及びリアルタイムPCRを行い、遺伝子の発現を分析した。LOX遺伝子については、２回目の散布３時間後に採った葉を用い、Psy遺伝子については２回目の散布から２４時間後に採った葉を用いて、各々発現を解析した。使用したプライマーは表３に示す。
【００８２】
結果を図１７に示す。Con.と比べて、Ileを散布したトウガラシはLOXとPsy遺伝子の発現が上昇した。
トマトと同じナス科植物のトウガラシでも、Ile散布によりジャスモン酸経路とカロテノイド経路が活性化されたことから、Ile散布は少なくともナス科植物全般に同様な効果が期待できる。
【００８３】
〔実施例９〕中玉トマトに対するイソロイシンの着色及び収穫房数促進効果
試験には、温室で栽培した、１２段目の果実が出た成長後半の中玉トマト（品種「つくつく枝」）を使用した。互いに近くの場所にある１２株のトマト植物を選び、６株は無処理区（対照）とし、残りの６株はIle処理区とした。試験対象の果実として、無処理区とイソロイシン（Ile）処理区の植物の第９段目と第１０段目からそれぞれ１０房のほぼ未着色の果実を選んで標識した。Ile処理区には対象果実とその植物の全体の葉にIle水溶液（Ile ３ ｍＭ；展着剤（スカッシュ０．２％、丸和バイオケミカル）を散布し、無処理区には散布しなかった。６株の植物のトータルの散布量は600mlであった。処理後、１１日、８日と２７日にトマト果実の着色を確認し房ごとに収穫を行った。
【００８４】
ほぼ全ての果実が着色（成熟）したか、又は、多くの果実がもうすぐ熟し過ぎになる（先端の果実がまだ未着色でも）状態で、収穫を行った。処理後１１日の収穫数は、無処理区では３房、Ile処理区では７房であった。処理後１８日での収穫数は、無処理区では４房、Ile処理区では３房であった。また、処理後２７日での収穫数は、無処理区では３房、Ile処理区では１房であった（図１８）。これらの結果から、Ile処理区ではトマトの着色が無処理区より早まって、Ileがトマトの着色を促進したことが示唆された。また、収穫した１０房の果実の中、無処理区では総個数の８５個の中に１５個の未着色の果実があ
り、Ile処理区では総個数の８６個の中に８個の未成熟の果実があり、Ile散布は未着色の果実数を減少させた。
【００８５】
〔実施例１０〕トウガラシ（ピーマン）に対するイソロイシン発酵副生液による効果
イソロイシン（Ile）発酵副生液を散布したトウガラシ（ピーマン、品種：フルーピーレッドEX）におけるジャスモン酸経路に関わるLOX遺伝子の発現を調べた。Ile発酵副生液（Ile濃度２．３４％（Ｗ／Ｖ））の希釈液をピーマンの葉に散布し、実施例５と同様にしてLOX遺伝子の発現を調べた。Ile発酵副生液の散布濃度は３．８ｍＭであった。結果を図１９に示す。Ile発酵副生液でも、同様の濃度のIleと同様なLOX遺伝子発現誘導が見られた。
【００８６】
〔実施例１１〕ブドウに対するイソロイシンの効果
（１）イソロイシン及び各種アミノ酸のブドウ培養細胞着色に対する効果
ヨーロッパブドウ（Vitis vinifera L.）由来の理化学研究所バイオリソースセンター保有の細胞株(VR, 管理番号RPC00003)をＭＳ寒天培地上で継代培養した。５ ｍＭの各種アミノ酸溶液を含むＭＳ寒天培地に継代培養したVRカルスを移植し、培養した。ポジティブコントロールには、着色促進効果が知られているアブシジン酸（ABA）100 μMを用いた（Jeong et al. Plant Science, 167:247-252, 2004）。移植後５日に、カルスを凍結乾燥し、破砕し、１％ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液を用いてアントシアニンを抽出した。抽出液の５３０ｎｍにおける吸光度を測定し、シアニジン-3-グルコシドを標準物質としてアントシアニンの含量を測定した。ポジティブコントロール処理区のカルスから抽出されたアントシアニンの含量を１００％とし、各アミノ酸処理区のカルスで蓄積されたアントシアニンの含量の相対値を測定した。
結果を表４に示す。イソロイシン（Ile）処理したカルスが最もアントシアニン含量が高かった。
【００８７】
【表４】
2020033388.tif 000006
【００８８】
（２）上記と同様にして、イソロイシン及びプロリンで処理したブドウカルスのアントシアニンの含量を測定した。結果を図２０に示す。１ ｍＭ以上のイソロイシン(Ile)処理でブドウカルスの着色が促進された。また、プロリン(Pro)処理した区でも着色が認められたが、Ile処理と比較して弱い効果であった。
【００８９】
（３）イソロイシンのブドウ着色に対する効果
試験には、試験畑で栽培している、べレゾーン期に入ったカベルネ・ソービニオンを使用した。１株あたり８房として、２株から合計１６房のブドウを選び、それらに対照（０．１％アプローチＢＩ、花王）、ポジテイブコントロール（１ｇ／Ｌアブシジン酸（ABA）＋０．１％アプローチＢＩ）、又は、１０ｍＭイソロイシン（Ile）＋０．１％アプローチＢＩを、1房あたりおよそ６．２５ｍＬ散布した。サンプルは、各々４房ずつ、４回に分けて回収した。果皮のアントシアニンは、果皮から水：アセトン＝１：２溶液で抽出
し、前記と同様にしてアントシアニン含量を測定した。結果を図２１に示す。Ileでブド
ウ果実を処理すると、果皮のアントシアニン含量が高まることが示された。
【００９０】
〔実施例１２〕リンゴ着色に対するイソロイシンの効果
成熟直前（着色開始前）のリンゴ（品種「つがる」）を収穫し、水道水、続いて蒸留水で洗浄した後、対照（水）と各濃度のイソロイシン（Ile）水溶液に１５分浸漬させた。各処理液には、アプローチＢＩ（花王）を０．１％添加した。処理区は以下のとおりである。
ｉ）対照区（水）、
ii）  １ｍＭIle
iii） ５ｍＭIle
iv）１０ｍＭIle
ｖ）０．４ｍＭメチルジャスモン酸（MeJA）
vi）１０ｍＭIle ＋ １ｍＭ amisoft TM（アニオン界面活性剤ココイルグルタミン酸ナトリウム）
【００９１】
処理後に果実を風乾し、インキュベーター中に静置した。条件は、温度（２０℃一定）、光条件（１２０μＭ／ｍ２／ｓ:40ワット型蛍光灯９本）、日長：１日あたり明期１６時間、暗期８時間とした。
リンゴ果皮色は、アントシアニン含量を測定することで評価した。各処理区の果実から採取した０．５ｇの果皮を、５ｍＬの２％蟻酸に４℃、２４時間浸漬してアントシアニンを抽出した。その抽出液中のアントシアニンを液体クロマトグラフィーで解析した。リンゴのアントシアニンは、ほとんどがシアニジンガラクトシドであるので、アントシアニン濃度は、シアニジンガラクトシド濃度として算出した。
【００９２】
結果を図２２に示す。Ileでリンゴ果実を処理すると、処理後１０日目、及び１５日目では、対照区に比べてアントシアニン含量が高まることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明の農園芸用組成物は、トマトやトウガラシ等の植物の開花、着果、又は果実の着色の促進、着果数の増加、必須アミノ酸及び／又はγ-ABA含量の増加、ジャスモン酸合成に関与する遺伝子の発現促進、又はカロテノイド合成に関与する遺伝子の発現促進の少なくともいずれかの作用を有する。ジャスモン酸合成に関与する遺伝子の発現促進により、植物が早期に熟成することが期待できる。
本発明の農園芸用組成物は、収穫した果実の着色を促進することができる。
以上から、本発明の農園芸用組成物は、早期に植物の収穫量を向上させること及び／又は品質を向上させることができる。
【図１】
2020033388.tif 000007
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年1月15日(2020.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液を植物に散布することを含む、植物の栽培方法であって、
植物がナス科、ブドウ科、若しくはバラ科に属する果菜又は果樹であり、
ただし、前記溶液がアルファルファ緑葉脱タンパク質上澄液と酢酸を含有する組成物である場合は除く、方法。
【請求項２】
０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液を植物に散布することを含む、特定の作用を得るための方法であって、
植物がナス科、ブドウ科、若しくはバラ科に属する果菜又は果樹であり、
植物がナス科に属する植物である場合は、前記特定の作用が開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上から選ばれる一つ以上の作用であり、
植物がブドウ科に属する植物である場合は、前記特定の作用が果実の着色促進、及び、カロテノイド合成促進から選ばれる一つ以上の作用であり、
植物がバラ科に属する植物である場合は、前記特定の作用が果実の着色促進、及び、カロテノイド合成促進から選ばれる一つ以上の作用であり、
ただし、前記溶液がアルファルファ緑葉脱タンパク質上澄液と酢酸を含有する組成物である場合は除く、方法。
【請求項３】
イソロイシンがＬ−イソロイシンである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記イソロイシンを含有する溶液が、精製イソロイシン、イソロイシン発酵液もしくは発酵副生物、又はイソロイシンを含むそれらの分画物を含有する溶液である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記イソロイシン含有溶液の散布により特定の作用が奏される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、
植物がナス科に属する植物である場合は、前記特定の作用が開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上から選ばれる一つ以上の作用であり、
植物がブドウ科に属する植物である場合は、前記特定の作用が果実の着色促進、及び、カロテノイド合成促進から選ばれる一つ以上の作用であり、
植物がバラ科に属する植物である場合は、前記特定の作用が果実の着色促進、及び、カロテノイド合成促進から選ばれる一つ以上の作用である、方法。
【請求項６】
植物がトマト、トウガラシ、ブドウ、又はリンゴである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記溶液を、植物の葉面及び／又は果実に散布する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
０．５ｍＭ〜７５ｍＭのイソロイシンを含有する溶液を、収穫された果実に散布する、果実の着色を促進させる方法であって、
果実がナス科又はバラ科に属する植物の果実である、方法。
【請求項９】
イソロイシンがＬ−イソロイシンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記イソロイシンを含有する溶液が、精製イソロイシン、イソロイシン発酵液もしくは発酵副生物、又はイソロイシンを含むそれらの分画物を含有する溶液である、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
果実がトマト又はリンゴである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
イソロイシンを有効成分として含み、イソロイシン濃度が０．５ｍＭ〜７５ｍＭの溶液として植物に散布される、特定の作用を得るための、農園芸用組成物であって、
植物がナス科、ブドウ科、若しくはバラ科に属する果菜又は果樹であり、
植物がナス科に属する植物である場合は、前記特定の作用が開花促進、着果促進、着果数向上、果実の着色促進、必須アミノ酸及び／又はγ-アミノ酪酸含量向上、カロテノイド合成促進、及び、抗酸化作用向上から選ばれる一つ以上の作用であり、
植物がブドウ科に属する植物である場合は、前記特定の作用が果実の着色促進、及び、カロテノイド合成促進から選ばれる一つ以上の作用であり、
植物がバラ科に属する植物である場合は、前記特定の作用が果実の着色促進、及び、カロテノイド合成促進から選ばれる一つ以上の作用であり、
ただし、アルファルファ緑葉脱タンパク質上澄液と酢酸を含有する組成物は除く、組成物。
【請求項１３】
植物がトマト、トウガラシ、ブドウ、又はリンゴである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記溶液を、植物の葉面及び／又は果実に散布する、請求項１２又は１３に記載の組成物。
【請求項１５】
イソロイシンを有効成分として含み、イソロイシン濃度が０．５ｍＭ〜７５ｍＭの溶液として収穫された果実に散布される、農園芸用組成物であって、
果実がナス科又はバラ科に属する植物の果実である、組成物。
【請求項１６】
果実がトマト又はリンゴである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
果実の着色を促進させるための組成物である、請求項１５又は１６に記載の組成物。