(57)【要約】【課題】過活動膀胱の予防又は改善、及びそれに伴う諸症状の緩和に有用な、過活動膀胱の予防又は改善剤を提供する。【解決手段】３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善剤。
【請求項２】
過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、請求項１記載の過活動膀胱の予防又は改善剤。
【請求項３】
３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とするＡＴＰ放出抑制剤。
【請求項４】
３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善用食品。
【請求項５】
過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、請求項１記載の過活動膀胱の予防又は改善用食品。
【請求項６】
３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とするＡＴＰ放出抑制用食品。
【請求項７】
代謝前駆体がロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸又は３’−Ｏ−メチルロズマリン酸のいずれかである請求項１〜３のいずれか１項記載の剤、又は請求項４〜６のいずれか１項記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過活動膀胱の予防又は改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
頻尿（ひんにょう）とは、様々な原因により１日の排尿回数が増えてしまう症状である。頻尿の原因としては、尿崩症、高血圧症、水分、カフェイン、アルコールの過剰摂取、加齢などの尿量の増加に因るものと、過活動膀胱、尿路感染、間質性膀胱炎など尿量の増加に因らないものに大別される。さらに、膀胱や前立腺など泌尿器系の臓器に病気が存在して起こる場合や、神経的な緊張も、頻尿の原因の１つと言われている。
一方、過活動膀胱（ｏｖｅｒａｃｔｉｖｅ  ｂｌａｄｄｅｒ：ＯＡＢ）は、尿意切迫感、頻尿、切迫性尿失禁の排尿障害を呈する疾患である。過活動膀胱の症状は日常生活に支障をきたし生活の質を低下させること、特に高齢者に多く見られ４０歳以上の罹患者は１０４０万人を超えると推定されていることから、近年の高齢化社会に伴って注目が集まっている。健常人では膀胱内の蓄尿量と尿意は相関関係にあるが、過活動膀胱患者では尿の蓄積により尿意切迫感が生じるため排尿筋が収縮すると考えられている。しかしながら、その発症機構には未だ不明な点が多い。
【０００３】
近年、過活動膀胱を引き起こす要因の１つとして、膀胱知覚神経系（膀胱求心性神経系）の興奮性の亢進が指摘されている。この知覚神経系の興奮は、蓄尿による膀胱の伸展刺激を受けて膀胱上皮細胞から放出される各種の伝達物質（アデノシン三リン酸（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ：以下ＡＴＰとも略記する）、アセチルコリン（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）等）によって引き起こされると考えられている。ヒトでは加齢により膀胱上皮から放出されるＡＴＰ量が増加すること、及び過活動膀胱患者では膀胱伸展時のＡＴＰ放出量が増大していることが報告されている（非特許文献１、２）。また、ラットの膀胱にＡＴＰを投与すると排尿筋の過活動が誘発されて排尿間隔が短縮するとの報告もある（非特許文献３）。さらに、膀胱上皮からのＡＴＰ放出を抑制する物質が、過活動膀胱の予防又は改善剤となり得ることも明らかにされている（特許文献１）。
【０００４】
現在のところ、薬物による過活動膀胱の治療には、膀胱収縮を促すアセチルコリンの作用を抑制する抗コリン薬が主に使われている。しかし、抗コリン薬は服用に伴う、口の渇き、便秘、排尿の困難性等の副作用を起こすことが知られている。このような実情から、より効果的な過活動膀胱の予防、治療剤が望まれている。
【０００５】
一方、ロズマリン酸の代謝産物としてヒト尿中に排出される３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸は、シクロオキシゲナーゼ２の発現抑制活性を有し、抗炎症作用があることが報告されている（特許文献２）。
しかし、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸が、過活動膀胱の予防又は改善や膀胱上皮からのＡＴＰ放出に作用することは全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１１−１３３４４０号公報
【特許文献２】特開２００５−２７２３６２号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】日本脊髄障害医学会雑誌，2005年，第18巻，p．18-19
【非特許文献２】European Urology, 2010年, 第57巻, p．1087-1092
【非特許文献３】Journal of Urology，2002年，第168巻，p．1230-1234
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、過活動膀胱の予防又は改善、及びそれに伴う諸症状の緩和に有用な、過活動膀胱の予防又は改善剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、過活動膀胱の症状に有効な素材について探索したところ、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸に、膀胱求心性神経の興奮を引き起こす膀胱上皮からのＡＴＰ放出を抑制する効果があり、これが過活動膀胱の予防又は改善に有用であることを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下の１）〜４）に係るものである。
１）３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善剤。
２）３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とするＡＴＰ放出抑制剤。
３）３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善用食品。
４）３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とするＡＴＰ放出抑制用食品。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤及びＡＴＰ放出抑制剤によれば、排尿を制御する神経伝達物質であるＡＴＰの膀胱上皮細胞からの放出を抑制し、過活動膀胱及びそれに伴う尿意切迫感、頻尿、切迫性尿失禁等の排尿障害を予防又は改善することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明において、「３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸」は、下記式（Ａ）で示される化合物を指す。当該３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸は、ロズマリン酸（下記式（Ｂ））のヒト代謝産物である（前記特許文献２）。
【００１３】
【化１】
2020033272.tif 000002
【００１４】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤及びＡＴＰ放出抑制剤において、所定の作用を発揮する活性成分は３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸であるが、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸はロズマリン酸のヒト代謝産物であることから、生体内において３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸に代謝される代謝前駆体であるロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸及び３’−Ｏ−メチルロズマリン酸も本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、及びＡＴＰ放出抑制剤の有効成分となり得る。
【００１５】
本発明において、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸は、後記製造例に示すとおり、例えば下記の反応スキームに従って合成することができる。
【００１６】
【化２】
2020033272.tif 000003
【００１７】
３−Ｏ−メチルロズマリン酸及び３’−Ｏ−メチルロズマリン酸についても、下記の反応スキームに従って、同様に合成することができる。
【００１８】
【化３】
2020033272.tif 000004
【００１９】
【化４】
2020033272.tif 000005
【００２０】
また、ロズマリン酸は、市販品であってもよいし、常法に基づき化学合成すること（SYNTHESIS, 755-762 (1996)、Can. J. Chem., 75, 1783-1794 (1997)）、或いはロズマリン酸を含有するシソ科植物等の植物体又は培養細胞から抽出・精製することにより取得することができる（特開昭６２−３２８８９号公報）。
【００２１】
３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸及びその代謝前駆体には、光学異性体が存在する。本発明の３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸及びその代謝前駆体は、これらのいずれかの光学異性体であっても、光学異性体の混合物であってもよい。本発明ではＲ体又は光学異性体混合物が好ましい。
【００２２】
本発明の３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸及びその代謝前駆体は、その薬学的に許容される塩又は溶媒和物とすることができる。このような塩の好ましい例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩のようなアルカリ金属およびアルカリ土類金属塩、あるいは酸付加塩などが挙げられる。溶媒和物の好ましい例としては、水和物、アルコール和物あるいはアセトン和物などが挙げられる。
【００２３】
後記実施例に示すように、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸は、ラット摘出膀胱からのＡＴＰ放出抑制効果を示す。ヒトの膀胱上皮には、膀胱上皮の伸展を感知するＥＮａＣ（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｎａ  ｃｈａｎｎｅｌ）ファミリーやＴＲＰ（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）ファミリーに属する受容体（メカノセンサー）が存在し、当該メカノセンサーが蓄尿による膀胱の伸展刺激を感知すると膀胱上皮細胞からＡＴＰが放出され、膀胱求心性神経の興奮を引き起こす。過活動膀胱や尿路閉塞患者の膀胱上皮細胞では、これらのメカノセンサーが健常人に比べて高発現しているとの報告がある（Urologia  Internationals，2006年，第76巻，p.289-295、Urology  View，2007年，第5巻，p.31-36）。そして、膀胱上皮からのＡＴＰ放出抑制物質は、過活動膀胱の予防又は改善剤となり得ることが明らかにされている（前記特許文献１）
したがって、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸又はその代謝前駆体をヒトを含む動物に摂取又は投与することにより、膀胱上皮細胞からＡＴＰの放出が抑制され、過活動膀胱の予防又は改善が可能となる。
すなわち、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物（以下、「本発明の化合物」とも称する）は、過活動膀胱の予防又は改善剤、又はＡＴＰ放出抑制剤となり、或いは過活動膀胱の予防又は改善剤及びＡＴＰ放出抑制剤を製造するために使用できる。
【００２４】
また、本発明の化合物は、過活動膀胱の予防又は改善及びＡＴＰ放出抑制のために使用することができる。
ここで、過活動膀胱の予防又は改善のため、ＡＴＰ放出抑制のための「使用」は、ヒトを含む動物への投与又は摂取であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００２５】
本発明において、「過活動膀胱」とは、尿意切迫感、頻尿、及び切迫性尿失禁で構成される症状症候群を呈する病的状態を意味する。過活動膀胱の背景に共通して存在するのは、潜在的な排尿筋過活動状態である。過活動膀胱の診断には、膀胱癌などの悪性腫瘍、尿道結石などの尿路結石、間質性膀胱炎などの下部尿路の炎症性疾患などを除外する必要がある。したがって、下部尿路の炎症性疾患であり、背景に尿路上皮障害が存在する間質性膀胱炎及びこれにより生じる膀胱不快感や膀胱痛等の症状とは異なる。
また、「ＡＴＰ放出抑制」とは、膀胱上皮細胞からのＡＴＰの放出量が減少することを意味し、これにより膀胱求心性神経の興奮が抑制される。
また、本発明において「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止若しくは遅延、又は個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。また、「改善」とは、疾患、症状若しくは状態の好転、疾患、症状若しくは状態の悪化の防止若しくは遅延、又は疾患、症状若しくは状態の進行の逆転、防止若しくは遅延をいう。
【００２６】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤及びＡＴＰ放出抑制剤は、ヒトを含む動物に摂取又は投与した場合に、過活動膀胱の予防又は改善効果、ＡＴＰ放出抑制剤効果を発揮する医薬品、医薬部外品、サプリメント又は食品となり、或いはこれらへ配合するための素材又は製剤となり得る。
また、本発明の食品には、一般飲食品のほか、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品、機能性表示食品、サプリメントが包含される。
【００２７】
本発明の化合物を含む上記医薬品（医薬部外品を含む）は、任意の投与形態で投与され得るが、経口投与が好ましい。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射等の投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬品製剤の形態で投与することができる。
【００２８】
このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥剤等が挙げられる。これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、賦形剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００２９】
また、本発明の化合物を配合した上記食品の形態は、清涼飲料水、茶系飲料、コーヒー飲料、果汁飲料、炭酸飲料、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食等の各種食品の他、さらには、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、トローチ剤等の固形製剤）の栄養補給用組成物が挙げられる。なかでも、錠剤が好ましい。
種々の形態の食品を調製するには、本発明の化合物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００３０】
上記の医薬品（医薬部外品を含む）や食品中の本発明の化合物の含有量は、その使用形態により異なるが、医薬品（医薬部外品を含む）の場合、通常３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸量換算で、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、更に好ましくは１質量％以上であり、また、好ましくは１００質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは７０質量％以下である。また、好ましくは０．０１〜１００質量％、より好ましくは０．１〜９０質量％、更に好ましくは１〜７０質量％である。
一方、食品の場合、通常３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸量換算で、０．００１質量％以上が好ましく、０．０１質量％以上がより好ましく、０．１質量％以上が更に好ましく、５０質量％以下が好ましく、１０質量％以下がより好ましく、３質量％以下が更に好ましい。あるいは、０．００１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましく、０．１〜３質量％が更に好ましい。
【００３１】
本発明の化合物を医薬品や食品として、或いは医薬品や食品に配合して使用する場合のヒトへの投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人（６０ｋｇ）１人当たりの１日の投与量は、通常、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸量換算で、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１０ｍｇ以上、更に好ましくは５０ｍｇ以上であり、また、好ましくは４００００ｍｇ以下、より好ましくは１５０００ｍｇ以下、更に好ましくは５０００ｍｇ以下である。また、好ましくは０．１〜４０００ｍｇ、より好ましくは１０〜１５０００ｍｇ、更に好ましくは５０〜５０００ｍｇである。
また、上記製剤は、任意の投与計画に従って摂取又は投与され得るが、１日１回〜数回に分け、摂取又は投与され得る。摂取又は投与期間は適宜決定することができ、例えば、１日以上が好ましく、７日以上がより好ましく、３０日以上がさらに好ましい。
【００３２】
上記医薬品、医薬部外品又は食品の摂取又は投与対象としては、好ましくは、過活動膀胱に伴う症状、すなわち尿意切迫感、頻尿、切迫性尿失禁等が認められるヒト、及びそのおそれがあるヒト、その疾患・症状の予防又は緩和を期待するヒトが挙げられる。
【００３３】
上述した実施形態に関し、本発明はさらに以下の態様を開示する。
【００３４】
＜１＞３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善剤。
＜２＞過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、＜１＞の過活動膀胱の予防又は改善剤。
＜３＞３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とするＡＴＰ放出抑制剤。
＜４＞３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とする過活動膀胱の予防又は改善用食品。
＜５＞過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、＜４＞の過活動膀胱の予防又は改善用食品。
＜６＞３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を有効成分とするＡＴＰ放出抑制用食品。
＜７＞代謝前駆体がロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸又は３’−Ｏ−メチルロズマリン酸のいずれかであり、好ましくはロズマリン酸である＜１＞〜＜３＞のいずれかの剤、又は＜４＞〜＜６＞のいずれかの食品。
【００３５】
＜８＞過活動膀胱の予防又は改善剤を製造するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上の使用。
＜９＞過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、＜８＞の使用。
＜１０＞ＡＴＰ放出抑制剤を製造するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上の使用。
＜１１＞過活動膀胱の予防又は改善用食品を製造するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上の使用。
＜１２＞過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、＜１１＞の使用。
＜１３＞ＡＴＰ放出抑制用食品を製造するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上の使用。
＜１４＞代謝前駆体がロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸又は３’−Ｏ−メチルロズマリン酸のいずれかであり、好ましくはロズマリン酸である＜８＞〜＜１３＞の使用。
【００３６】
＜１５＞過活動膀胱の予防又は改善に使用するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上。
＜１６＞過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、＜１５＞の３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上。
＜１７＞ＡＴＰ放出抑制に使用するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上。
＜１８＞代謝前駆体がロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸又は３’−Ｏ−メチルロズマリン酸のいずれかであり、好ましくはロズマリン酸である＜１５＞〜＜１７＞の３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上。
【００３７】
＜１９＞過活動膀胱を予防又は改善するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上の非治療的使用。
＜２０＞過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、＜１５＞の非治療的使用。
＜２１＞ＡＴＰ放出を抑制するための、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上の非治療的使用。
＜２２＞代謝前駆体がロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸又は３’−Ｏ−メチルロズマリン酸のいずれかであり、好ましくはロズマリン酸である＜１９＞〜＜２１＞の非治療的使用。
【００３８】
＜２３＞３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取する過活動膀胱の予防又は改善方法。
＜２４＞過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、＜２３＞の方法。
＜２５＞３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸若しくはその代謝前駆体、又はそれらの塩若しくは溶媒和物から選択される１種以上を、それらを必要とする対象に有効量で投与又は摂取するＡＴＰ放出抑制方法。
＜２６＞代謝前駆体がロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸又は３’−Ｏ−メチルロズマリン酸のいずれかであり、好ましくはロズマリン酸である＜２３＞〜＜２５＞の方法。
【００３９】
＜２７＞＜１＞〜＜２＞、＜８＞〜＜９＞の過活動膀胱の予防又は改善剤、＜３＞及び＜１０＞のＡＴＰ放出抑制剤、＜４＞〜＜５＞、＜１１＞〜＜１２＞の過活動膀胱の予防又は改善用食品、＜６＞及び＜１３＞のＡＴＰ放出抑制用食品における、前記有効成分の含有量は、総量中３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸量換算で、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、更に好ましくは１質量％以上であり、また、好ましくは９５質量％以下、より好ましくは９０質量％以下、更に好ましくは７０質量％以下である。また、好ましくは０．０１〜９５質量％、より好ましくは０．１〜９０質量％、更に好ましくは１〜７０質量％である。
【００４０】
＜２８＞＜１５＞〜＜２６＞において、成人（６０ｋｇ）１人当たりの１日の投与量は、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸量換算で、好ましくは０．１ｍｇ以上、より好ましくは１０ｍｇ以上、更に好ましくは５０ｍｇ以上であり、また、好ましくは４００００ｍｇ以下、より好ましくは１５０００ｍｇ以下、更に好ましくは５０００ｍｇ以下である。また、好ましくは０．１〜４００００ｍｇ、より好ましくは１０〜１５０００ｍｇ、更に好ましくは５０〜５０００ｍｇである。
【実施例】
【００４１】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４２】
製造例  ３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸の合成
（１）試薬
３−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）乳酸ナトリウム（１）（ラセミ混合物）は東京化成工業社より、フェルラ酸（３）は富士フイルム和光純薬工業社より、それぞれ購入して使用した。
【００４３】
（２）α−ヒドロキシ−３−メトキシ−４−（２−プロピレニロキシ）ベンゼンプロパン酸２−プロピレニルエステル（２）の合成
【００４４】
【化５】
2020033272.tif 000006
【００４５】
３−（３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニル）乳酸ナトリウム（１）（５００ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（８８５ｍｇ、６．４１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬナスフラスコにとり、アルゴン置換した後、超脱水アセトン７．１ｍＬを加え、分散させた。その後、臭化アリル（２．７７ｍＬ、３２．０ｍｍｏｌ）を加え、Ｎ２置換後ｒｅｆｌｕｘ条件下に２０時間撹拌した。
反応終了後、Ｎｏ．５Ａのろ紙にてろ過し、ろ過残渣を塩化メチレン（２５ｍＬ）で洗浄し、ろ液と洗浄液を併せ、減圧濃縮を行った。これに塩化メチレン２０ｍＬとＨ２Ｏ（超純水）  ２０ｍＬを加え、分層後、塩化メチレン層を回収した。水層は、さらに塩化メチレン５ｍＬで３回抽出し、回収した。回収した塩化メチレン層を併せて、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した（乾燥固形分量９８８．２ｍｇ）。
これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物（２）の精製品５１３ｍｇ（無色、油状、収率８２％）を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件は、以下の通り。
【００４６】
＜シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件＞
カラム： Universal Premium L (30 μm, 60 Å, 3.0 x 16.5 cm, 40 g) （Yamazen社）
インジェクトカラム：INJECT COLUMN S （Yamazen社）
溶離液：ヘキサン / 酢酸エチル = 95 / 5 (4 min) 95 / 5 (11 min) 74 / 26 (14 min) 74 / 26
流速：20 mL / min、分取時間：29 min、分取容量：12 mL / 本、48本分取
分取各Fr.をTLCにて確認後、目的Fr.（fr.43-53）を減圧濃縮、乾燥。
【００４７】
（３）３−メトキシ−４−（２−プロピレニロキシ）フェニル−２−プロピレン酸（４）の合成
【００４８】
【化６】
2020033272.tif 000007
【００４９】
フェルラ酸（３）（５００ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）に、超脱水エタノール１７ｍＬを加え、溶解させた。その後、臭化アリル（２６７μＬ、３．０９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（４２７ｍｇ、３．０９ｍｍｏｌ）を順次加え、Ｎ２置換後ｒｅｆｌｕｘ条件下に５．５時間撹拌した。ＴＬＣにより反応進行を確認しつつ、室温まで放冷し、水酸化カリウム（４３４ｍｇ、７．７４ｍｍｏｌ）を加え、さらに１６時間撹拌した。
反応終了後、減圧濃縮し、Ｈ２Ｏ（超純水）  ２５ｍＬに溶解後、２Ｎ塩酸および濃塩酸を添加して、ｐＨ＝０とした。これを酢酸エチル（２５ｍＬ）で５回抽出した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥、減圧濃縮した（乾燥固形分量６８７．５ｍｇ）。
これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物（４）の精製品２２１．４ｍｇ（無色、油状、収率３７％）を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件は、以下の通り。
【００５０】
＜シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件＞
カラム： Universal Premium L (30 μm, 60 Å, 3.0 x 16.5 cm, 40 g) （Yamazen社）
インジェクトカラム：INJECT COLUMN M （Yamazen社）
溶離液：
1%酢酸 in ヘキサン / 1%酢酸 in 酢酸エチル = 100 / 0 (4 min) 100 / 0 (11 min) 84 / 16 (24 min) 84 / 16 (0 min) 80 / 20 (7 min) 80 / 20
流速：20 mL / min、分取時間：46 min、分取容量：12 mL / 本、77本分取
分取各Fr.をTLCにて確認後、目的Fr.（fr.48-75）を減圧濃縮、乾燥。
【００５１】
（４）α−［［３−［３−メトキシ−４−（２−プロピレニロキシ）フェニル］−１−オキソ−２−プロピレニル］オキシ］−３−メトキシ−４−（２−プロピレニロキシ）ベンゼンプロパン酸２−プロピレニルエステル（５）の合成
【００５２】
【化７】
2020033272.tif 000008
【００５３】
化合物（２）（１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）に、塩化メチレン１．７ｍＬを加え、溶解させた。その後、化合物（４）（１０４ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（６．３ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を順次加え、−２０℃に冷却した後、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（８８．２ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ２置換後室温で２４時間撹拌した後、析出した尿素をろ過除去、酢酸エチルで洗浄し、減圧濃縮した（乾燥固形分量２８８．５ｍｇ）。
これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物（５）の精製品１５１．８ｍｇ（白色、ワックス状）を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件は、以下の通り。
【００５４】
＜シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件＞
カラム： Universal Premium L (30 μm, 60 Å, 3.0 x 16.5 cm, 40 g) （Yamazen社）
インジェクトカラム：INJECT COLUMN S （Yamazen社）
溶離液：
ヘキサン / 酢酸エチル = 87 / 13 (4 min) 87 / 13 (11 min) 66 / 34 (14 min) 66 / 34
流速：20 mL / min、分取時間：29 min、分取容量：12 mL / 本、48本分取
分取各Fr.をTLCにて確認後、目的Fr.（fr.34-36）を減圧濃縮、乾燥。
【００５５】
（５）３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸（Ａ）の合成
【００５６】
【化８】
2020033272.tif 000009
【００５７】
化合物（５）（８７．３ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下のグローブボックス中で５０ｍＬナスフラスコに採り、超脱水テトラヒドロフラン８．６ｍＬおよびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）錯体（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４）（１９．８ｍｇ、１７．２μｍｏｌ）、モルホリン（４５０μＬ、５．１５ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応混合物は、Ｎ２雰囲気下、室温で１８時間撹拌した。
反応終了後、減圧濃縮した後、１Ｎ塩酸２０ｍＬで酸性化し、これを酢酸エチル（２０ｍＬ）で３回抽出した。酢酸エチル層は併せて、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した（乾燥固形分量１１７．０ｍｇ）。これを、分取ＴＬＣにて精製し、標題化合物（Ａ）の精製品６１．４ｍｇ（白色、粉末状、収率９２％）を得た。分取ＴＬＣの条件は、以下の通り。
なお以下の実施例では、合成した３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸をジメチルスルホキサイド（ＤＭＳＯ）で適宜希釈して評価に供した。
＜分取TLCの条件＞
TLC： PLC Silica gel 60 F254 (1mm, 20x20cm, #1.13895.0001) （Merck社）
展開溶媒：クロロホルム / アセトン/ 88%ギ酸 = 75 / 16.5 / 8.5   200mL
脱離液：クロロホルム / アセトン / 88%ギ酸 = 75 / 16.5 / 8.5  15mL
【００５８】
【表１】
2020033272.tif 000010
【００５９】
（実施例１）  ３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸が摘出膀胱からのＡＴＰ放出に及ぼす影響検討
本試験は、既報（The Journal of Urology, 2011年, 第185巻, p.341-346）を参考に実施した。試験に用いるラットとしては、ＳＤ（１１−１３週齢、雌、日本ＳＬＣ社より入手）を使用した。ラットはイソフルラン麻酔下にて腹部大動脈を切断し、放血することで安楽死させ、腹部を開腹した。次に、尿道近くに存在する膀胱の左右の尿管を結紮し、尿道を５ｍｍ程度残しながら膀胱及び尿道を摘出した。Ｋｒｅｂｓ溶液で膀胱及び尿道内を洗浄した後、残尿を除き電子天秤を用いて膀胱重量を測定した。Ｋｒｅｂｓ溶液の組成は以下の通り。１１８ｍＭ  ＮａＣｌ，４．７ｍＭ  ＫＣｌ，２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２，１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４，１．２ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４，２５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３，１１．１ｍＭ  Ｄ−（＋）−ｇｌｕｃｏｓｅ。
【００６０】
摘出した膀胱に尿道を通してＫｒｅｂｓ溶液注入用のカテーテルを挿入し、尿道部分を結紮した。カテーテル挿入後の膀胱は、３７℃のＫｒｅｂｓ溶液を充填した組織バス中（Ｏ２：９５％，ＣＯ２：５％）で２０ｍｉｎ培養した。培養後、３００μＬのＫｒｅｂｓ溶液を０．０４ｍＬ／ｓｅｃｏｎｄの速度で膀胱内に注入し、１０ｍｉｎ後に注入した溶液を、ベースライン測定用サンプルとしてカテーテルを介して回収した。次に、２０ｍｉｎの培養後、９００μＬの試験溶液を同様の速度で膀胱内に注入し、伸展刺激を負荷した。１０ｍｉｎ後に注入した溶液を、進展刺激負荷サンプルとして回収した。進展刺激負荷時に注入する試験溶液には、対照群（ｎ＝８）として０．１％となるようにＤＭＳＯを添加したＫｒｅｂｓ溶液を、処理群（ｎ＝９）として製造例の３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸を１ｍＭとなるように添加したＫｒｅｂｓ溶液を使用した。尚、回収したサンプルは氷上で保存し、採取後２ｈ以内にＡｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  （ＡＴＰ）の測定に供した。
【００６１】
ＡＴＰ量は、ルシフェラーゼの発光を利用したＡＴＰ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を用いて測定した。サンプルは３０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ，４℃で遠心分離した後、１００μＬの上清を測定に使用した。ルシフェラーゼの発光強度測定には、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ  （Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いた。結果は平均値±標準誤差で表記し、統計学的有意差の検定には、Ｔｕｒｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ  ｔｅｓｔを使用した。
【００６２】
伸展刺激負荷時に０．１％  ＤＭＳＯ溶液を膀胱内に注入した対照群におけるＡＴＰ放出量（ｐｍｏｌ／ｇ  ｔｉｓｓｕｅ）は、ベースライン時の３．３±７．７と比較して、１５２６．３±１８４．２と有意に増加した（表２）。同様に、伸展刺激負荷時に１ｍＭ  ３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸を膀胱内に注入した処理群におけるＡＴＰ放出量も、ベースライン時の１２．６±５．０と比較して、９６０．２±１５５．６と有意に増加したが、その放出量は対照群と比較して有意に抑制された（表２）。尚、本試験に使用した膀胱の重量は、対照群は８７．８±３．８ｍｇ、処理群は９２．３±２．７ｍｇで有意差は認められなかった。
【００６３】
【表２】
2020033272.tif 000011
【００６４】
（実施例２）  ３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸がラット排尿機能に及ぼす影響検討
過活動膀胱患者で低下することが知られている蓄尿量について、既報（Neurourol Urodynamics，2012年，第31巻，p．148-155）の解析方法を参考に実施した。
試験に用いるラットとしては、ＳＤ（１１−１３週齢、雌、日本ＳＬＣ社より入手）を使用した。２％イソフルラン麻酔条件下において、カテーテルの先端をラットの膀胱に挿入し、他方の先端は皮下を通して頭頂部の体外に導出し固定した。４日間の回復期間を経た後、ラットをボールマンケージ内に保定し、頭頂部のカテーテルに三方活栓を介してシリンジポンプを接続した。ボールマンケージで３０分間馴化させた後、０．９％生理食塩水を流速５ｍＬ／時間で投与しながら、三方活栓を介して接続した圧トランスデューサーにより膀胱内圧を測定した。膀胱内投与から１２００秒以上経過後を開始点とし、その後の２４００秒間の膀胱内圧データを処理前（ベースライン）のデータとして取得した。その後０．１％となるようにＤＭＳＯを添加した生理食塩水または製造例の３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸を１ｍＭとなるように添加した生理食塩水へ投与液を変換し、変換後から２４００秒間の膀胱内圧データを処理後のデータとして取得した。取得した膀胱内圧データ上、排尿は圧の一時的な上昇とその後の圧の低下として示される。蓄尿量は、膀胱内圧データ上の排尿間隔×膀胱内注入速度で算出した。結果は平均値±標準誤差で表記し、統計学的有意差の検定には、ｕｎｐａｉｒ−ｅｄ  Ｔ−ｔｅｓｔを使用した。
【００６５】
生理食塩水を膀胱内投与した際のベースライン時の蓄尿量を基準として、０．１％ＤＭＳＯ溶液（対照群、ｎ＝１２）または１ｍＭ  ３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸溶液（処理群、ｎ＝１２）を膀胱内投与した際の蓄尿量の変化率を算出した。その結果、対照群の変化率は１．９±３．５％であったのに対して、処理群では１６．８±５．９％と、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸の投与により有意に蓄尿量を増加させることが示された（Ｐ＜０．０５）。尚、本試験に使用したラットの体重及び膀胱重量は、対照群では２３８．１±３．１ｇ、１６２．０±１０．８ｍｇ、処理群では２３８．７±３．４ｇ、１５８．７±８．６ｍｇであり、両群間に有意差は認められなかった。
【００６６】
以上のように、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸を膀胱に作用させることで、進展刺激に伴うＡＴＰ放出が有意に抑制されると共に、蓄尿量が増加する。これは、３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸が、ＡＴＰ放出の抑制に有効であることを示している。さらに、ＡＴＰ放出を抑制する３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸は、過活動膀胱の予防又は改善に有効であることを示している。
したがって、ＡＴＰ放出を抑制する３，３’−ジ−Ｏ−メチルロズマリン酸、及びその代謝前駆体であるロズマリン酸、３−Ｏ−メチルロズマリン酸及び３’−Ｏ−メチルロズマリン酸は、過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤、過活動膀胱の予防又は改善用食品、並びにＡＴＰ放出抑制用食品の有効成分とすることができる。