(57)【要約】      （修正有）【課題】ファブリー病の治療方法の提供。【解決手段】１−デオキシガラクトノジリマイシン及び酵素補充療法を使用するための投薬レジメン及び投与スケジュールの提供であり、具体的には、ミガラスタット塩酸塩及びアガルシダーゼを使用するための投薬レジメン及び投与スケジュールをさらに提供する。【選択図】図１
2020033360.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象者におけるファブリー病の治療方法であって、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンと有効量のα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法とを、それを必要とする患者に投与するステップを含む方法。
【請求項２】
投与される１−デオキシガラクトノジリマイシンの量が約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
投与される１−デオキシガラクトノジリマイシンの量が、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ及び約４５０ｍｇから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記患者が、１−デオキシガラクトノジリマイシンの投与の約０．５〜約４時間前から始まってその投与の約０．５〜約４時間後で終わる期間にわたり絶食する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記患者が、１−デオキシガラクトノジリマイシンの投与前少なくとも約２時間及び投与後少なくとも約２時間絶食する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記１−デオキシガラクトノジリマイシンが、前記α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与と同時乃至その投与の約４時間前の間に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記１−デオキシガラクトノジリマイシンが、前記α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与の約２時間前に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記１−デオキシガラクトノジリマイシンがミガラスタット塩酸塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法が、アガルシダーゼアルファ及びアガルシダーゼベータから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記１−デオキシガラクトノジリマイシンが、前記α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法に対する補助剤として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記１−デオキシガラクトノジリマイシン及びα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法が併用療法として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与とその約４時間後との間に、１−デオキシガラクトノジリマイシンの第２の用量が投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
前記１−デオキシガラクトノジリマイシン及びα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法が１〜４週間毎に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記１−デオキシガラクトノジリマイシン及びα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法が２週間毎に投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
対象者におけるファブリー病の治療用キットであって、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンと有効量のα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法とを含むキット。
【請求項１６】
１−デオキシガラクトノジリマイシンの量が、約１５０ｍｇ、約３００ｍｇ及び約４５０ｍｇから選択される、請求項１５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１１年３月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／４５１，７９８号明細書；２０１１年１２月２０日に出願された米国仮特許出願第６１／５７８，２０１号明細書及び２０１２年２月７日に出願された米国仮特許出願第６１／５９６，１６５号明細書に対する優先権を主張し、これらの開示は本明細書によって全体として参照により援用される。
【０００２】
本願は、ファブリー病の治療用の１−デオキシガラクトノジリマイシン及び酵素補充療法を使用するための投薬レジメン及び投与スケジュールを提供する。
【背景技術】
【０００３】
ファブリー病は、リソソーム酵素α−ガラクトシダーゼＡ（α−Ｇａｌ  Ａ）がα−Ｇａｌ  Ａ遺伝子（ＧＬＡ）における突然変異の結果として欠損することにより引き起こされる進行性のＸ連鎖性先天性スピンゴ糖脂質（ｇｌｙｃｏｓｐｉｎｇｏｌｉｐｉｄ）代謝異常である。Ｘ連鎖障害であるにもかかわらず、女性が様々な程度の臨床症状を発現し得る。ファブリーはまれな疾患であり、その発生率は、男性の４万人に１人乃至一般集団では１１万７千人に１人と推定される。さらに、遅発性の表現型であるファブリー病の変種が存在し、これは古典的な徴候及び症状を呈しないため、過小診断され得る。このこと、及びファブリー病の新生児スクリーニング試験から、ファブリー病の実際の発生率は現在の推定よりも高い場合があり得ると示唆される。
【０００４】
疾患の臨床症状は残存α−Ｇａｌ  Ａレベルと相関し得る。未治療では、ファブリー患者の平均余命は低下し、通常３０年目又は４０年目からの１０年間に、腎臓、心臓及び／又は中枢神経系を侵す血管疾患に起因して死亡が起こる。この酵素欠損症は、全身の血管内皮及び内臓組織に基質のグロボトリアオシルセラミド（ＧＬ−３）の細胞内蓄積を引き起こす。通常、２０〜４０歳代に、スピンゴ糖脂質（ｇｌｙｃｏｓｐｉｎｇｏｌｉｐｉｄ）の沈着に起因して徐々に腎機能の低下及び高窒素血症の憎悪が起こるが、１０歳代の若年でも起こり得る。ヘミ接合体（男性）及びヘテロ接合体（女性）の双方の患者で腎病変が認められる。
【０００５】
ほとんどの男性及び多くの女性で心疾患が起こる。初期の心臓所見としては、左室拡大、弁膜合併症及び伝導異常が挙げられる。僧帽弁閉鎖不全症は、小児期又は青年期に典型的に存在する最も高頻度の弁病変である。脳血管症状は主に多病巣性の小血管合併症に起因し、血栓症、一過性脳虚血発作、脳底動脈虚血及び動脈瘤、てんかん発作、片麻痺、片側感覚消失、失語症、迷路障害、又は脳出血を挙げることができる。脳血管症状の平均発症年齢は３３．８歳である。年齢が進むに従い、人格変化及び精神病的行動が顕在化し得る。
【０００６】
現行の承認済みのファブリー病治療は、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）である。２つのα−Ｇａｌ  Ａ製品：アガルシダーゼアルファ（Ｒｅｐｌａｇａｌ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）及びアガルシダーゼベータ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）；Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が、現在ファブリー病の治療に利用可能である。これらの２つの形態のＥＲＴは、患者の不十分なα−Ｇａｌ  Ａ活性を、組換え形態の酵素を静脈内投与して代償することを意図している。ＥＲＴは多くの状況に有効であるが、この治療には制約もある。ＥＲＴが脳卒中リスクを低下させることは実証されておらず、心筋の反応が遅くなり、且つ腎臓の一部の細胞型からのＧＬ−３排泄が限定的である。一部の患者はＥＲＴに対して免疫反応を生じる。
【０００７】
１−デオキシガラクトノジリマイシン及びその塩である１−デオキシガラクトノジリマイシン塩酸塩（その米国一般名（ＵＳＡＮ）であるミガラスタット塩酸塩によっても知られる）は、突然変異体α−Ｇａｌ  Ａに対する薬理学的シャペロンとして、この酵素に選択的に結合し、それによりその安定性を高め、酵素のその正しい三次元形状への折り畳みを補助することで作用する。このようにα−Ｇａｌ  Ａが安定すると、細胞の品質管理機構がこの酵素を正しく折り畳まれていると認識することが可能となり、従ってリソソームへの酵素の輸送が増加し、リソソームがその意図される生物学的機能であるＧＬ−３の代謝を果たすことが可能となる。ＥＲからリソソームへのα−Ｇａｌ  Ａの正しい輸送が回復する結果として、ミガラスタット塩酸塩はＥＲにおける誤って折り畳まれたタンパク質の蓄積も低減し、それにより細胞に対するストレス及びファブリー病の寄与因子であり得る一部の炎症様反応が軽減され得る。ミガラスタット塩酸塩の複数のインビトロ及びインビボ前臨床試験、並びに臨床試験が実施されている。ミガラスタット塩酸塩は、細胞内α−Ｇａｌ  Ａタンパク質の量を増加させること、及びリソソームへの変異酵素の輸送を増強することが示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願は、ファブリー病の治療用の１−デオキシガラクトノジリマイシン及び酵素補充療法を使用するための投薬レジメン及び投与スケジュールを提供する。特定の実施形態において、本願は、ファブリー病の治療用のミガラスタット塩酸塩及びアガルシダーゼ（例えば、アガルシダーゼアルファ又はアガルシダーゼベータ）を使用するための投薬レジメン及び投与スケジュールを提供する。
【０００９】
一実施形態において、この方法は、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンと有効量のα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法とを、それを必要とする患者に投与するステップを含む。１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の前、その後、又はそれと同時に投与され得る。一実施形態において、患者は、１−デオキシガラクトノジリマイシンの投与の約０．５〜約４時間前から始まってその投与の約０．５〜約４時間後で終わる期間にわたり絶食する。さらなる実施形態において、患者は、１−デオキシガラクトノジリマイシンの投与前少なくとも約２時間及び投与後少なくとも約２時間絶食する。
【００１０】
別の実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与と同時乃至その投与の約４時間前（Ｔ＝−４時間〜Ｔ＝０時間）の間に投与される。さらなる実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与の約２時間前に投与される。
【００１１】
詳細な実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンはミガラスタット塩酸塩である。一実施形態において、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法はアガルシダーゼアルファ又はアガルシダーゼベータである。
【００１２】
一実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法に対する補助剤として投与される。別の実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシン及びα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法は併用療法として投与される。
【００１３】
詳細な実施形態において、上述の方法により投与される１−デオキシガラクトノジリマイシンの量は、約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇである。一実施形態において、投与される１−デオキシガラクトノジリマイシンの量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ及び４５０ｍｇから選択される。
【００１４】
詳細な実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与の直前又はその投与と同時に投与される。代替的実施形態において、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与とその４時間後との間に、１−デオキシガラクトノジリマイシンの第２の用量が投与される。
【００１５】
特定の実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与も受けている患者に対し、１〜４週間毎に投与される。さらなる実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与も受けている患者に対し、１２〜１６日毎に投与される。さらなる実施形態において、１−デオキシガラクトノジリマイシンは、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法の投与も受けている患者に対し、１４日毎に投与される。特定の実施形態において、α−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法は、１−デオキシガラクトノジリマイシンの投与も受けている患者に対し、併用療法又は補助療法として１４日毎に投与される。
【００１６】
本願はまた、ファブリー病の治療に使用するための１−デオキシガラクトノジリマイシンも提供し、ここでこの治療は、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンと有効量のα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法とを、それを必要とするヒト対象者に投与するステップを含む。
【００１７】
本願はまた、ファブリー病の治療用医薬の調製における１−デオキシガラクトノジリマイシンの使用も提供し、ここでこの治療は、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンと有効量のα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法とを、それを必要とするヒト対象者に投与するステップを含む。
【００１８】
本願はまた、対象者におけるファブリー病の治療用キットも提供し、このキットは、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇの１−デオキシガラクトノジリマイシンと有効量のα−Ｇａｌ  Ａ酵素補充療法とを含む。特定の実施形態において、キット中の１−デオキシガラクトノジリマイシンの量は、１５０ｍｇ、３００ｍｇ及び約４５０ｍｇから選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】期間１及び期間２の間に０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ単独（期間１）又は１５０ｍｇミガラスタットとの併用（期間２）で治療した患者の血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性の合成図を示す。
【図２】ミガラスタットと同時投与した後の全患者の血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性ＡＵＣの増加を示す。
【図３】各試料採取時間点の部分ＡＵＣを示し、これは、０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与による血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性の活性増加を示した。
【図４Ａ−Ｂ】０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の２人の患者における皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。
【図５Ａ−Ｂ】０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の２人の患者における皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。図５Ａは、期間２の間に４０分長いＥＲＴ注入を受けた患者における０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。
【図６Ａ−Ｂ】１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の２人の患者における皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。
【図７Ａ−Ｂ】０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の２人の患者におけるＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。
【図８Ａ−Ｂ】０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の２人の患者におけるＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。
【図９Ａ−Ｂ】１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の２人の患者におけるＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。
【図１０】０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇのアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとを同時投与した後の血漿、皮膚及びＰＢＭＣ中のα−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を要約する表を示す。
【図１１】実施例２及び３の各試験対象者の遺伝子型を示す。
【図１２】１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータによる治療、及び１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用による治療に対する血漿ＡＵＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性を示す（挿入図は平均及び標準偏差）。
【図１３】０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータによる治療、及び０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用による治療に対する血漿ＡＵＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性を示す（挿入図は平均及び標準偏差）。
【図１４】アガルシダーゼベータ単独によるか、又は１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用での治療後２日目の皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性を示す（アガルシダーゼベータ単独とのベースラインを差し引いた比を付記）。
【図１５】アガルシダーゼベータ単独によるか、又は１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用での治療後７日目の皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性（アガルシダーゼベータ単独とのベースラインを差し引いた比を付記）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本願は、ファブリー病の治療用の１−デオキシガラクトノジリマイシン及びアガルシダーゼを使用するための投薬レジメン及び投与スケジュールを提供する。
【００２１】
定義
「ファブリー病」は、古典的ファブリー病、遅発型ファブリー病、及びα−ガラクトシダーゼＡ（α−Ｇａｌ  Ａ）をコードする遺伝子に突然変異を有するヘミ接合体の女性を指す。用語「ファブリー病」は、本明細書で使用されるとき、正常より低い内因性α−Ｇａｌ  Ａ活性を呈する対象者における任意の病態をさらに含む。
【００２２】
用語「ＡＵＣ」は、所与の薬物に対する体の経時的な総曝露量を評価する数学的計算を表す。投薬後の血中濃度如何をプロットするグラフでは、薬物濃度変量がｙ軸上にあり、時間がｘ軸上にある。指定された時間間隔についての薬物濃度曲線とｘ軸との間の面積が、ＡＵＣである。ＡＵＣは、投薬スケジュールの指針として、及び種々の薬物の体内アベイラビリティを比較するために用いられる。
【００２３】
用語「Ｃｍａｘ」は、投薬後に達成される最大血漿中濃度を表す。
【００２４】
用語「治療有効用量」及び「有効量」は、有益な治療反応をもたらすのに十分な特定の医薬化合物又は組成物の量を指す。有益な治療反応は、前述の症状及び代理臨床マーカーを含め、使用者（例えば臨床医）がその治療に対する有効な反応と認識し得る任意の反応であってよい。従って治療反応は、概して、疾患又は障害、例えばファブリー病の１つ以上の症状、例えば、当該技術分野でその疾患又は障害、例えばファブリー病に関して周知されている症状の寛解であり得る。
【００２５】
ファブリー病の代用マーカー改善の非限定的な例としては、細胞（例えば線維芽細胞）及び組織におけるα−ＧＡＬレベル又は活性の増加；組織学を用いて腎間質毛細血管生検の変化によって計測するときのＧＬ−３蓄積の減少；尿中ＧＬ−３レベルの低下；腎機能の評価（糸球体濾過率（ＧＦＲ）及び２４時間尿タンパクを含む；ホモシステイン及び血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）の血漿中濃度の低下；心筋細胞及び弁線維芽細胞内のＧＬ−３蓄積の低下；心肥大（特に左室肥大）の減少、弁閉鎖不全、及び不整脈の寛解；タンパク尿寛解；ＣＴＨ、ラクトシルセラミド、セラミドなどの脂質の尿中濃度の低下、並びにグルコシルセラミド及びスフィンゴミエリンの尿中濃度の上昇（Ｆｕｌｌｅｒら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００５；５１：６８８−６９４）；糸球体上皮細胞に層状封入体（ゼブラ小体）がないこと；腎機能の改善；発汗低下の軽減；被角血管腫がないこと；及び高周波感音難聴、進行性難聴、突発性難聴、又は耳鳴りなどの聴力異常の改善が挙げられる。神経学的症状の改善としては、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）又は脳卒中の予防；及び先端感覚異常（ａｃｒｏｐａｒａｅｓｔｈｅｓｉａ）（肢端の灼熱痛又は刺痛）として発現する神経因性疼痛の寛解が挙げられる。
【００２６】
語句「薬学的に許容可能な」は、ヒトへの投与時に生理学的に忍容され、且つ典型的には有害反応を生じない分子実体及び組成物を指す。好ましくは、本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容可能な」は、動物、より詳細にはヒトにおける使用について連邦政府若しくは州政府の規制当局によって認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の一般に認知されている薬局方に掲載されていることを意味する。用語「担体」は、化合物と共に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又は媒体を指す。かかる医薬担体は、無菌の液体、例えば水及び油であってもよい。水又は水溶液生理食塩水及び水性デキストロース及びグリセロール溶液が、好ましくは担体、特に注射液用担体として用いられる。好適な医薬担体は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ著、第１８版、又は他の版（本明細書によって全体として参照により援用される）に記載されている。
【００２７】
「１−デオキシガラクトノジリマイシン」（ＤＧＪ）は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピペルジン（ｐｉｐｅｒｄｉｎｅ）−３，４，５−トリオールを指す。本明細書で使用されるとき、全体を通じて「１−デオキシガラクトノジリマイシン」又は「ＤＧＪ」に対する参照は、その遊離塩基形態及び任意の薬学的に許容可能な塩形態の双方を含む。ＤＧＪの塩酸塩はミガラスタット塩酸塩として知られる。
【００２８】
用語「補助剤」又は「補助療法」は、効力、安全性を高め、又は他の形で主要な物質、治療、若しくは手技の性能を促進若しくは増強するために用いられる任意の追加的な物質、治療、又は手技を指す。
【００２９】
用語「併用療法」は、各治療法が個別に実施されたときの効果と比較して結果が増強される任意の治療法を指す。併用療法における個々の治療法は、同時に投与されても、又は連続的に投与されてもよい。
【００３０】
増強には、治療法を単独で実施したときに実現される結果と比較して有利な結果をもたらし得る様々な治療法の効果の任意の改善が含まれ得る。効果の増強及び効果が増強した判断は、様々なパラメータ、限定はされないが：時間的パラメータ（例えば、治療の長さ、回復時間、治療の長期効果又は治療の可逆性）；生物学的パラメータ（例えば、細胞数、細胞容積、細胞組成、組織容積、組織サイズ、組織組成）；空間的パラメータ（例えば、組織強度、組織サイズ又は組織到達性）及び生理学的パラメータ（例えば、体形矯正、疼痛、不快感、回復時間又は目に見える跡）によって計測され得る。効果の増強には、効果の増強が単独で実施したときの各治療法の相加効果より大きい相乗的増強が含まれ得る。効果の増強には、効果の増強が単独で実施したときの各治療法の相加効果と実質的に等しい相加的増強が含まれ得る。効果の増強には、効果の増強が単独で実施したときの各治療法の相加効果より低いが、単独で実施したときの各治療法の効果よりはなお良好である相乗効果未満が含まれ得る。
【００３１】
用語「約」及び「およそ」は、概して、計測の性質又は精度を所与として、計測した量の許容可能な程度の誤差を意味するものとする。典型的な例示的誤差程度は、所与の値又は値の範囲の２０パーセント（％）以内、好ましくは１０％以内、及びより好ましくは５％以内である。或いは、特に生体系における用語「約」及び「およそ」は、所与の値の桁内、好ましくは５倍以内及びより好ましくは２倍以内である平均値であってもよい。本明細書に提供される数量は、特に明記しない限り近似である。
【００３２】
製剤及び投与
１−デオキシガラクトノジリマイシンは、遊離塩基として、又は１−デオキシガラクトノジリマイシン塩酸塩（別名ミガラスタット塩酸塩）を含む薬理学的に許容可能な塩の形態として投与することができる。これは、任意の投与経路に好適な形態で、例えば、錠剤、カプセル、又は液体の形態で経口的に、又は注射用の滅菌水溶液で投与することができる。これは、即時放出、遅延放出、調節放出、持続放出、パルス放出又は制御放出適用のための、場合により香味剤及び着色剤を含む、錠剤、カプセル、オビュール剤（ｏｖｕｌｅ）、エリキシル剤、溶液若しくは懸濁液、ゲル、シロップ、洗口剤、又は使用前に水若しくは他の好適な媒体で構成する乾燥粉末の形態で、経口投与することができる。錠剤、カプセル、ロゼンジ、トローチ、丸薬、巨丸剤、散剤、ペースト、顆粒、ビュレット剤（ｂｕｌｌｅｔ）、又はプレミックス製剤などの固形組成物もまた使用することができる。経口用途の固形及び液状組成物は、当該技術分野において周知の方法に従い調製することができる。かかる組成物はまた、固体形態又は液体形態であってよい１つ以上の薬学的に許容可能な担体及び賦形剤も含有することができる。化合物を経口投与用に製剤化する場合、錠剤又はカプセルは、結合剤（例えば、アルファ化デンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能な賦形剤と共に、従来の手段で調製することができる。錠剤は、当該技術分野において周知の方法によりコーティングされてもよい。
【００３３】
薬学的に許容可能な賦形剤としてはまた、限定はされないが、微結晶性セルロース、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム及びグリシン、崩壊剤、例えばデンプン（好ましくはトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム及び特定の複合ケイ酸塩、及び造粒結合剤、例えばポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｏｌｉｄｏｎｅ）、ヒドロキシプロピルエチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、スクロース、ゼラチン、及びアカシアも挙げられる。加えて、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルクなどの潤滑剤を含むことができる。
【００３４】
特定の実施形態において、ミガラスタット塩酸塩は、ステアリン酸マグネシウム及びアルファ化デンプンと共に白色の硬ゼラチンカプセルに製剤化される。別の実施形態において、固形剤形は、約７５〜８０％のミガラスタット塩酸塩、約０．１〜２％のステアリン酸マグネシウム及び約２０〜２５％のアルファ化デンプンを含む。別の具体的な実施形態において、カプセルは、約７６．５％のミガラスタット塩酸塩、約０．５％のステアリン酸マグネシウム及び約２３％のアルファ化デンプンを含む。
【００３５】
酵素補充療法
現行の承認済みのファブリー病治療は、酵素補充療法である。２つの製品：アガルシダーゼアルファ（Ｒｅｐｌａｇａｌ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）及びアガルシダーゼベータ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）；Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）が、現在ファブリー病の治療に利用可能であり、世界中で販売されている。これらの２つの形態のＥＲＴは、患者の不十分なα−Ｇａｌ  Ａ活性を、組換え形態の酵素を静脈内投与して代償することを意図している。ＥＲＴは、腎臓の毛細血管内皮及び特定の他の細胞型におけるＧＬ−３沈着を低減することが実証されている。ＥＲＴは多くの状況に有効であるが、この治療には制約もある。ＥＲＴが脳卒中リスクを低下させることは実証されておらず、心筋の反応が遅くなり、且つ腎臓の一部の細胞型からのＧＬ−３排泄が限定的である。一部の患者はＥＲＴに対して免疫反応を生じる。
【００３６】
アガルシダーゼアルファの推奨投薬量は、静脈内注入として２週間毎に注入する０．２ｍｇ／ｋｇ体重である。ＥＲＴ未投与成人男性ファブリー患者において１０週間の試験を実施し、アガルシダーゼアルファの薬物動態学及び薬力学を評価した。０．１〜０．４ｍｇ／ｋｇの範囲の用量のアガルシダーゼアルファを投与した後の平均半減期は、５６〜７６分で、用量と半減期、クリアランス又は分布容積との間に有意な関係は認められなかった。この用量範囲にわたりＡＵＣは用量に線形比例した。血漿中ＧＬ−３レベルは全ての用量群で約５０％低下した；この低下は用量及び投与頻度とは無関係であった。試験中、１８人の患者のうち２人がＩｇＧ陽性になった。試験中、どの患者においてもＩｇＥ抗体は検出されなかった。
【００３７】
アガルシダーゼベータの推奨投薬量は、静脈内注入として２週間毎に注入する１ｍｇ／ｋｇ体重である。アガルシダーゼベータの製造業者は、米国でファブリー病に対して承認されているこの唯一のＥＲＴの薬物不足を公表している。結果として、アガルシダーゼベータは現在供給が制限され、患者は典型的には酵素の用量を減らして及び／又はより長期の投与間隔で（すなわち投与間が２週間より長い）投与を受ける。アガルシダーゼベータは非線形的な薬物動態を呈し、用量の増加に比例しない形で曝露（ＡＵＣ）値が増加し、且つクリアランスが減少する。用量を０．３ｍｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇに、及び１ｍｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇに増加させると、ＡＵＣ値はそれぞれ約６倍及び８倍増加した。０．３ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量投薬後の成人患者におけるアガルシダーゼベータの消失半減期は用量依存的で、４５〜１００分の範囲であった。
【００３８】
臨床試験においてアガルシダーゼで治療された成人患者の７９％及び小児患者の６９％で、アガルシダーゼベータに対するＩｇＧ抗体が生じた；ＩｇＧ抗体を生じた患者の大多数は、曝露後３ヶ月以内に生じた。男性、特に残存α−Ｇａｌ  Ａレベルが低い男性は、残存レベルが高い男性又は女性と比べてＩｇＧ抗体を生じやすい傾向にあった。小児患者におけるＩｇＧ抗体陽転はアガルシダーゼの半減期延長に関連した。しかしながら成人患者では、一つの試験において抗体陽転の前後で同じアガルシダーゼ薬物動態特性が観察された；別の試験では、ＩｇＧ力価が最も高い患者で最大アガルシダーゼ濃度及びＡＵＣ値がベースライン値の最高２６％低下した。アガルシダーゼに対するＩｇＧ抗体の存在は、酵素の活性を低下させることが報告されている。
【００３９】
ミガラスタット塩酸塩は野生型α−Ｇａｌ  Ａをインビトロでも、並びにインビボでも安定化させる。インビトロでは、ミガラスタット塩酸塩がｒｈα−Ｇａｌ  Ａと結合することにより、熱変性及び活性で計測したときの中性ｐＨにおけるｒｈα−Ｇａｌ  Ａの安定性が有意に時間依存的及び濃度依存的に増加することが実証されている。中性ｐＨの緩衝液中では、ｒｈα−Ｇａｌ  Ａは半減期が約３時間であり、活性の低下を示した；ミガラスタット塩酸塩と同時にインキュベートすると、ｒｈα−Ｇａｌ  Ａ活性の低下に関する半減期は約４０時間に増加した。
【００４０】
ラットでは、３ｍｇ／ｋｇのミガラスタット塩酸塩を経口投与し、続いて３０分後に１０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータを注射すると、ｒｈα−Ｇａｌ  Ａの血漿中半減期が２．６倍増加し、６０分目及び２４０分目の血漿中α−Ｇａｌ  Ａレベルがそれぞれ２．５倍及び１．５倍増加した。ＧＬＡ欠損マウスでは、３０、１００又は３００ｍｇ／ｋｇ用量のミガラスタット塩酸塩をｒｈα−Ｇａｌ  Ａの注射の３０分前及び２時間後に経口投与すると、ｒｈα−Ｇａｌ  Ａ単独投与と比較して組織中α−Ｇａｌ  Ａレベルが用量依存的に増加し、皮膚、心臓、腎臓、及び血漿中のＧＬ−３レベルが用量依存的に低下した。
【００４１】
ミガラスタット塩酸塩は、インビトロ及びインビボのいずれにおいてもアガルシダーゼアルファを安定化させることが示されている。アガルシダーゼアルファの物理的安定性に対するミガラスタット塩酸塩の効果を、インビトロ熱変性アッセイで評価した。このアッセイを用いると、アガルシダーゼアルファはｐＨ７．４で約５１℃の融解温度（Ｔｍ）を示した。しかしながら、１０μＭのミガラスタット塩酸塩を変性反応に含めた場合、アガルシダーゼアルファのＴｍは実質的に５９℃に上昇した。リソソーム酵素について予想されるとおり、アガルシダーゼアルファは低いｐＨでより安定しており（ｐＨ５．２で５８℃のＴｍ）、１０μＭのミガラスタット塩酸塩の存在下では熱変性に対してさらなる抵抗性を示した（６８℃のＴｍ）。これらのデータは、ミガラスタット塩酸塩の結合がアガルシダーゼアルファに高度な物理的安定性を付与することを示している。
【００４２】
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの血液からのアガルシダーゼアルファのクリアランス速度に対するミガラスタット塩酸塩の効果も調べた。動物に媒体（水）を投与するか、又は１、３、１０、若しくは３０ｍｇ／ｋｇのミガラスタット塩酸塩を単回強制経口投与し、続いて３０分後に０．２ｍｇ／ｋｇのアガルシダーゼアルファをボーラス尾静脈注射によって静脈内投与した。時間点に応じて血液を採取し、血漿中のα−Ｇａｌ  Ａ活性を計測した。ミガラスタット塩酸塩がない場合、α−Ｇａｌ  Ａ活性は急速に減退した；ミガラスタット塩酸塩を事前投与すると、３ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのミガラスタット塩酸塩の投与後、アガルシダーゼアルファの半減期（α−Ｇａｌ  Ａ活性により計測したとき）は用量依存的にそれぞれ約２倍及び３倍増加し、６０分目及び２４０分目の血漿中α−Ｇａｌ  Ａレベルはそれぞれ約２．５倍及び１．５倍増加した。インビトロ及びインビボのいずれにおいてもアガルシダーゼアルファに対するミガラスタット塩酸塩の効果は、アガルシダーゼベータに対してミガラスタット塩酸塩で観察されたものと同等である。
【００４３】
同時投与されるミガラスタット塩酸塩及びＦａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）の安全性を評価するＧＬＡ欠損マウスにおける予備研究が行われている。１ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回静脈内投与されるＦａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）と組み合わせて、ミガラスタット塩酸塩が３及び３０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に３回、４週間にわたり投与された。ミガラスタット塩酸塩とＦａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）とを同時投与される雄性ＧＬＡ欠損マウスで観察される生存、臨床状態又は血液学及び臨床化学パラメータに、薬物に直接関連する変化はないように見えた。
【実施例】
【００４４】
実施例１：ミガラスタット塩酸塩及びアガルシダーゼを使用するファブリー病の治療用投薬レジメン
本研究の一つの目的は、ファブリー病患者におけるミガラスタット塩酸塩とアガルシダーゼとの同時投与を含む投薬レジメンの安全性、有効性、及び薬力学を評価することである。
【００４５】
本研究の別の目的は、α−Ｇａｌ  Ａの分布に対する１５０ｍｇ用量及び４５０ｍｇ用量のミガラスタット塩酸塩の効果を評価することである。これは、アガルシダーゼ単独及びアガルシダーゼのミガラスタット塩酸塩との組み合わせを投薬した後の皮膚におけるアガルシダーゼの分布を、投薬２４時間後及び７日後のα−Ｇａｌ  Ａレベル及びタンパク質レベルの計測によって計測することにより、評価することができる。
【００４６】
評価され得る他の計測値は、以下である：
・各アガルシダーゼ用量投薬前及び投薬１４日後の尿中ＧＬ−３排泄；
・アガルシダーゼ単独及びアガルシダーゼのミガラスタット塩酸塩との組み合わせを投薬した後の、投薬２４時間後及び７日後における皮膚中ＧＬ−３；
・アガルシダーゼ注入の開始前並びに投与２時間後、４時間後、２４時間後、７日後及び１４日後に測定されるＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベル；
・アガルシダーゼの注入開始前の抗体価（ＩｇＧ）；
・アガルシダーゼの各用量投薬前及びアガルシダーゼの各用量投薬１４日後における血漿中グロボトリアオシルスフィンゴシン（リゾ−ＧＢ３）濃度及びリゾ−ＧＢ３の尿中排泄。
【００４７】
血漿、ＷＢＣ及び皮膚におけるα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルの計測は全て、Ｃｏｎ  Ａ捕捉有り及び無しで実施され、タンパク質レベルの測定はウエスタンブロットによる。
【００４８】
試験設計．これは、ミガラスタット塩酸塩とアガルシダーゼとの同時投与の安全性及び有効性を評価する第２相臨床二段階非盲検試験である。この試験は、試験登録の少なくとも１ヶ月前に安定用量（０．３〜１．０ｍｇ／ｋｇ）のアガルシダーゼベータ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標））又は（≧０．２ｍｇ／ｋｇ）のアガルシダーゼアルファ（Ｒｅｐｌａｇａｌ（登録商標））の投与を受けている１８〜６５歳の男性対象者で実施される。約１８人の対象者が参加する。
【００４９】
この非盲検試験は２つの段階からなる。ステージ１は、スクリーニングと、アガルシダーゼの薬物動態及び安全性に対する１５０ｍｇミガラスタット塩酸塩の効果並びに１５０ｍｇミガラスタット塩酸塩の薬物動態及び安全性に対するアガルシダーゼの効果を評価する３期間の試験とからなる。ステージ２は、スクリーニングと、アガルシダーゼの薬物動態及び安全性に対する４５０ｍｇミガラスタット塩酸塩の効果を評価する２期間の試験とからなる。ステージ２では、４５０ｍｇ用量のミガラスタット塩酸塩の薬物動態及び安全性に対するアガルシダーゼの効果は評価しない。ミガラスタット塩酸塩をアガルシダーゼのみを伴い投与したときのミガラスタット塩酸塩の血漿中曝露を特徴付けて、十分なミガラスタット塩酸塩血漿中濃度に達したことを確認する。
【００５０】
各対象者は、以下の治療の各々を以下に記載する順序で受ける。ステージ１は以下の期間からなる：
期間１：静脈内注入としてアガルシダーゼ単独；
期間２：ミガラスタット塩酸塩の１５０ｍｇ経口用量、その２時間後にアガルシダーゼの静脈内注入開始；
期間３：ミガラスタット塩酸塩の１５０ｍｇ経口用量。
【００５１】
期間１及び期間２に投与するアガルシダーゼの用量は同じである。アガルシダーゼアルファは４０分間の静脈内注入として投与し、アガルシダーゼベータは２時間の静脈内注入として投与する。
【００５２】
期間１について、その次に予定されるアガルシダーゼ注入の前に、対象者は以下の評価の実施を受ける：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査（血清化学、血液学及び検尿）、皮膚生検（α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルの計測用パンチ生検；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する）。
【００５３】
１日目の朝、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３の測定用に尿を採取し、続いて輸液ポンプを使用する注入として投与される対象者の現行のアガルシダーゼ用量を投与する。アガルシダーゼ注入の開始直前及びアガルシダーゼ注入の開始後２４時間にわたって薬物動態学及び薬力学分析用の血液試料を採取する。アガルシダーゼベータについては表２及びアガルシダーゼアルファについては表４に要約する時間点で、採取した血液試料から血漿中及びＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベル、血漿中リゾ−ＧＢ３及び血漿抗体価を測定する。アガルシダーゼ注入の終了時、注入後血液試料を採取した直後に、１２誘導ＥＣＧを実施する。
【００５４】
２日目、前日の注入開始から２４時間後にパンチ皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する。最終の薬物動態用試料の採取後、以下の評価を実施する：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、及び臨床検査（血清化学、血液学、及び検尿）。
【００５５】
７日目、対象者は以下の評価の実施を受ける：理学的検査、バイタルサイン、併用薬及び有害事象評価。皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの測定用血液試料もまた採取する。１４日目、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３排泄の測定用尿試料を採取する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの測定用血液試料もまた採取し、バイタルサインを評価する。
【００５６】
期間２について、その次に予定されるアガルシダーゼ注入の前に、対象者は以下の評価の実施を受ける：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査（血清化学、血液学及び検尿）。
【００５７】
１日目の朝、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３の測定用に尿を採取し、続いて、予定されるアガルシダーゼ注入の２時間前に１５０ｍｇの経口用量のミガラスタット塩酸塩を投与する。対象者は、少なくともミガラスタット塩酸塩の投与前２時間及び投与後２時間、絶食する。期間２では、各対象者は、輸液ポンプを使用する注入として期間１に投与された同じアガルシダーゼ用量の投与を受ける。アガルシダーゼ注入はミガラスタット塩酸塩用量の投与の２時間後に開始する。
【００５８】
ミガラスタット塩酸塩の投薬前及びミガラスタット塩酸塩の投薬１時間後に薬物動態学及び薬力学分析用の血液試料を採取する。アガルシダーゼ注入の開始直前及びアガルシダーゼ注入の開始後２４時間にわたってさらなる血液試料を採取する。アガルシダーゼベータについては表２及びアガルシダーゼアルファについては表４に要約する時間点で、採取した血液試料から血漿中及びＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベル、血漿中リゾ−ＧＢ３及び血漿抗体価を測定する。アガルシダーゼ注入の終了時、注入後血液試料を採取した直後に、１２誘導ＥＣＧを実施する。
【００５９】
２日目、前日の注入開始から２４時間後にパンチ皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する。最終の薬物動態用試料の採取後、以下の評価を実施する：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、及び臨床検査（血清化学、血液学、及び検尿）。
【００６０】
７日目、対象者は以下の評価の実施を受ける：理学的検査、バイタルサイン、併用薬、及び有害事象評価。皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの計測用血液試料もまた採取する。
【００６１】
１４日目、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３排泄の測定用尿試料を採取する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの測定用血液試料もまた採取し、バイタルサインを評価する。
【００６２】
期間２の後に全ての評価を完了した後、対象者は期間３に入る。全ての対象者が、１日目にその次のアガルシダーゼ注入を、その通常の投薬スケジュールに従い受ける。６日目、全ての対象者が以下の評価の実施を受ける：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、１２誘導ＥＣＧ、及び臨床検査（血清化学、血液学、及び検尿）。
【００６３】
７日目、１５０ｍｇ経口用量のミガラスタット塩酸塩を投与する。対象者は、少なくともミガラスタット塩酸塩の投与前２時間及び投与後２時間、絶食する。ミガラスタット塩酸塩の投薬前及び投与後２４時間にわたって血液試料を採取する。全ての血漿試料のミガラスタット塩酸塩濃度を計測する（試料採取時間点に関して、アガルシダーゼベータについては表２及びアガルシダーゼアルファの投与を受ける対象者については表４を参照のこと）。
【００６４】
８日目、最終の薬物動態用試料の採取後、以下の評価を実施する：有害事象評価、併用薬、理学的検査、バイタルサイン及び臨床検査（血清化学、血液学、及び検尿）。
【００６５】
期間３の追跡調査は期間３の２８日後に電話連絡による。以下の評価を実施する：併用薬及び有害事象。
【００６６】
ステージ２について、各対象者は、以下の治療の各々を以下に記載する順序で受ける：
期間１：注入としてアガルシダーゼ単独；
期間２：４５０ｍｇ経口用量のミガラスタット塩酸塩、その２時間後に開始；アガルシダーゼの静脈内注入。
【００６７】
期間１及び２に投与されるアガルシダーゼの用量は同じである。アガルシダーゼアルファは４０分間の静脈内注入として投与され、アガルシダーゼベータは２時間の静脈内注入として投与される。
【００６８】
期間１について、全ての適格性基準を満たす対象者は、その次に予定されるアガルシダーゼ注入の前に、以下の評価の実施を受ける：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査（血清化学、血液学及び検尿）、皮膚生検（α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルの計測用パンチ生検；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する）。
【００６９】
１日目の朝、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３の測定用に尿を採取し、続いて輸液ポンプを使用する注入として投与される対象者の現行のアガルシダーゼ用量を投与する。アガルシダーゼ注入の開始直前及びアガルシダーゼ注入の開始後２４時間にわたって薬物動態学及び薬力学分析用の血液試料を採取する。アガルシダーゼベータについては表３及びアガルシダーゼアルファについては表５に要約する時間点で、採取した血液試料から血漿中及びＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベル、血漿中リゾ−ＧＢ３及び血漿抗体価を測定する。アガルシダーゼ注入の終了時、注入後血液試料を採取した直後に、１２誘導ＥＣＧを実施する。
【００７０】
２日目、前日の注入開始から２４時間後にパンチ皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する。最終の薬物動態用試料の採取後、以下の評価を実施する：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、及び臨床検査（血清化学、血液学、及び検尿）。
【００７１】
７日目、対象者は以下の評価の実施を受ける：バイタルサイン、併用薬及び有害事象評価。皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの計測用血液試料もまた採取する。
【００７２】
１４日目、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３排泄の測定用尿試料を採取する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの測定用血液試料もまた採取し、バイタルサインを評価する。
【００７３】
期間２について、対象者は、その次に予定されるアガルシダーゼ注入の前に、以下の評価の実施を受ける：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、１２誘導ＥＣＧ、臨床検査（血清化学、血液学及び検尿）。
【００７４】
１日目の朝、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３の測定用に尿を採取し、続いて、予定されるアガルシダーゼ注入の２時間前に４５０ｍｇの経口用量のミガラスタット塩酸塩を投与する。対象者は、少なくともミガラスタット塩酸塩の投与前２時間及び投与後２時間、絶食する。期間２では、各対象者は、輸液ポンプを使用する注入として期間１に投与された同じアガルシダーゼ用量の投与を受ける。アガルシダーゼ注入はミガラスタット塩酸塩用量の投与の２時間後に開始する。
【００７５】
ミガラスタット塩酸塩用量投薬前及びミガラスタット塩酸塩の投与１時間後に薬物動態学及び薬力学分析用の血液試料を採取する。アガルシダーゼ注入の開始直前及びアガルシダーゼ注入の開始後２４時間にわたってさらなる血液試料を採取する。アガルシダーゼベータについては表３及びアガルシダーゼアルファについては表５に要約する時間点で、採取した血液試料から血漿中及びＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベル、血漿中リゾ−ＧＢ３及び血漿抗体価を測定する。アガルシダーゼ注入の終了時、注入後血液試料を採取した直後に、１２誘導ＥＣＧを実施する。
【００７６】
２日目、前日の注入開始から２４時間後にパンチ皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する；十分な試料が利用可能な場合、皮膚中ＧＬ−３もまた測定する。最終の薬物動態用試料の採取後、以下の評価を実施する：有害事象評価、併用薬、理学的検査、体重、バイタルサイン、及び臨床検査（血清化学、血液学、及び検尿）。
【００７７】
７日目、対象者は以下の評価の実施を受ける：バイタルサイン、併用薬、及び有害事象評価。皮膚生検を採取し、その生検からα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを測定する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの計測用血液試料もまた採取する。
【００７８】
１４日目、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３排泄の測定用の尿採取を実施する。ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａ及び血漿中酵素レベルの測定用血液試料もまた採取し、バイタルサインを評価する。
【００７９】
追跡調査は期間２の２８日後である。以下の評価を実施する：併用薬及び有害事象。
【００８０】
評価及び試料採取スケジュール。表１は、ステージ１及び２の評価スケジュールを示す。ミガラスタット塩酸塩のＦａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標）との同時投与に関する試料採取時間点及び分析物を表２及び表３に示す。ミガラスタット塩酸塩のＲｅｐｌａｇａｌ（登録商標）との同時投与に関する試料採取時間点及び分析物を表４及び表５に示す。
【００８１】
【表１】
2020033360.tif 000003
【００８２】
【表２】
2020033360.tif 000004
【００８３】
【表３】
2020033360.tif 000005
【００８４】
【表４】
2020033360.tif 000006
【００８５】
【表５】
2020033360.tif 000007
【００８６】
ミガラスタットＨＣｌ及びｒｈα−Ｇａｌ  Ａの薬物動態。血液試料中のミガラスタットＨＣｌの濃度を、バリデートされたＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて血漿で計測する。血漿中α−Ｇａｌ  Ａレベルを、Ｃｏｎ  Ａ有り及び無しで、４−ＭＵＧを用いて酵素活性を計測するバリデートされたアッセイにより測定する。α−Ｇａｌ  Ａタンパク質レベルを、抗ヒトＧａｌ  Ａ抗体を使用するウエスタンブロッティングにより計測する。
【００８７】
皮膚中α−Ｇａｌ  Ａ酵素レベル。皮膚生検試料でα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルを調べる。皮膚生検は「パンチ」装置を使用して行う。来院毎に一片を取り出す。皮膚中α−Ｇａｌ  Ａレベルを、Ｃｏｎ  Ａ有り及び無しで、４−ＭＵＧを用いて酵素活性を計測するバリデートされたアッセイにより測定する。α−Ｇａｌ  Ａタンパク質レベルを、抗ヒトＧａｌ  Ａ抗体を使用するウエスタンブロッティングにより計測する。
【００８８】
ＷＢＣ中α−Ｇａｌ  Ａレベル。Ｃｏｎ  Ａ有り及び無しで、４−ＭＵＧを用いて酵素活性を計測するバリデートされたアッセイにより、血液試料でＷＢＣのα−Ｇａｌ  Ａレベルを測定する。α−Ｇａｌ  Ａタンパク質レベルを、抗ヒトＧａｌ  Ａ抗体を使用するウエスタンブロッティングにより計測する。
【００８９】
血漿中リゾ−ＧＢ３。血漿中リゾ−ＧＢ３の計測を試験的に実施して、ＥＲＴ単独及びミガラスタット塩酸塩と同時投与されるＥＲＴの投与を受けている患者におけるデータを取得する。バリデートされたアッセイを用いて血漿中のリゾ−ＧＢ３の濃度を計測する。
【００９０】
尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３。期間１及び期間２の１日目及び１４日目、尿中ＧＬ−３及びリゾ−ＧＢ３排泄の分析用に各対象者から早朝第一尿試料を採取する。対象者は１日目及び１４日目の朝に尿を採取する。尿中ＧＬ−３及び尿中リゾ−ＧＢ３は、尿中クレアチニン濃度の関数として表す。
【００９１】
抗体価。血液試料を採取し、各血液試料のＩｇＧ抗体価を計測する。
【００９２】
安全性パラメータ。理学的検査所見の変化、バイタルサイン、経時的なＥＣＧ変化、臨床検査及び有害事象を検討することにより、安全性パラメータを評価する。
【００９３】
バイタルサイン、体重及び身長。スクリーニング時及び入院時に体温及び呼吸を計測する。安全性をモニタするため、２日目、７日目及び１４日目、アガルシダーゼ（期間１）又はミガラスタット塩酸塩（期間２及び期間３）の投薬前並びに投与の約１、２、３、４、及び６時間後に、体温、呼吸、座位血圧及び心拍数を計測する。バイタルサインをモニタするタイミングが採血と重なる場合、採血を優先し、それに応じてバイタルサインを調整する。
【００９４】
ＥＣＧモニタリング。ＥＣＧモニタリングを標準的な１２誘導ＥＣＧで実施する。
【００９５】
臨床検査。来院毎に臨床検査（血液学、血清化学）用の血液試料及び被検尿を採取し、中央検査室で分析する。血液学的検査には、全ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球、血小板及び白血球分画が含まれる。
・凝固（スクリーニングのみ）にはＩＮＲ及びａＰＴＴが含まれる。
・血清化学には、ＡＳＴ、ＡＬＴ、アルカリホスファターゼ、総ビリルビン、クレアチニン、尿素、グルコース、カルシウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、総タンパク量、アルブミン、重炭酸塩、ＬＤＨ、血中尿素窒素、塩化物、及びリン酸塩の計測が含まれる。同位体希釈質量分析（ＩＤＭＳ）参照方法用に較正されている試薬を使用して、血清クレアチニンの計測を実施する。
・検尿には、色、外観、比重、ｐＨ、タンパク質、グルコース、ケトン、血液、白血球エステラーゼ、亜硝酸塩、ビリルビン、ウロビリノーゲン及び沈渣の顕微鏡検査が含まれる。
【００９６】
薬物動態パラメータ。血漿中ミガラスタット塩酸塩濃度及びα−Ｇａｌ  Ａ酵素レベルから、ＡＵＣ０−ｔ、ＡＵＣ無限大、Ｃｍａｘ、ｔｍａｘ、ｋｅｌ及び半減期の非コンパートメント薬物動態パラメータを計算する。記述統計学を用いて処理することにより、薬物動態パラメータを要約する。併用でのそれぞれの化合物に対する各化合物単独のＡＵＣ０−ｔ比、ＡＵＣ無限大比を計算する。アガルシダーゼアルファ及びアガルシダーゼベータの投与を受けている対象者の薬物動態学及び薬力学データを個別に分析する。
【００９７】
統計的分析。必要に応じて記述統計（Ｎ、平均値、標準偏差、及び変動係数、標準誤差、中央値、最小値及び最大値）を提供する。個別（対象者毎）のＡＵＣ比及びＣｍａｘ比を以下のとおり計算することにより、同時投与された化合物に対する化合物の効果を評価する：
【数１】
2020033360.tif 000008
【００９８】
ＡＵＣ比及びＣｍａｘ比は、個々の比の平均値及び平均値の９０％信頼区間として表す。アガルシダーゼアルファ及びアガルシダーゼベータの投与を受けている対象者の薬物動態学及び薬力学データを、個別に分析する。結果は、必要に応じて表形式及びグラフ形式で提供する。試験薬が投与される対象者であって、且つ信頼できる薬物動態パラメータを生成するのに十分なデータを有する全ての対象者を、安全性及び薬物動態分析に組み入れる。
【００９９】
実施例２：ミガラスタット塩酸塩及びアガルシダーゼを使用するファブリー病の治療用投薬レジメン
ミガラスタットＨＣｌは、α−ガラクトシダーゼＡ（α−Ｇａｌ  Ａ）の薬理学的シャペロンであり、この酵素の安定性及び正しい折り畳みを増加させる。ミガラスタットは、血液のｐＨ／温度条件下で酵素を安定化させてα−Ｇａｌ  Ａの不活性化を防ぐことにより作用し得る。本研究の目的は、ファブリー病対象者におけるアガルシダーゼの安全性及び血漿薬物動態に対する、アガルシダーゼの投与２時間前に投与される１５０ｍｇ及び４５０ｍｇミガラスタットの効果を特徴付けることであった。本研究の目的はまた、ファブリー病患者におけるアガルシダーゼの血漿、皮膚、及びＰＢＭＣ薬物動態に対する１５０ｍｇ及び４５０ｍｇミガラスタットの効果を特徴付けること；ミガラスタットの血漿薬物動態に対する血漿アガルシダーゼの効果を特徴付けること；アガルシダーゼ注入前及び注入１４日後の尿中ＧＬ−３及び血漿中及び尿中リゾ−ＧＢ３を評価すること；及びアガルシダーゼ注入前の抗体価を評価することでもあった。
【０１００】
方法。この研究は、実施例１に記載される方法に従い実施した。具体的には、これは非盲検単回用量非無作為化固定順二段階試験であった。ステージ１は３つの期間から構成された：
（１）アガルシダーゼベータ０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇ（約２時間注入）又はアガルシダーゼアルファ０．２ｍｇ／ｋｇ（約４０分間注入）酵素補充単剤療法（ｍｏｎｔｈｅｒａｐｙ）（ＥＲＴ）；
（２）ＥＲＴ＋１５０ｍｇミガラスタット経口錠剤（単回用量）同時投与、ＥＲＴの２時間前にミガラスタットを投与；及び
（３）１５０ｍｇミガラスタット単剤療法。
【０１０１】
ステージ２は、ステージ１と同じ順序の２つの期間（すなわち、期間（１）及び（２））から構成されたが、但し期間２で３×１５０ｍｇミガラスタット経口錠剤（すなわち４５０ｍｇミガラスタット）を同時投与した。ステージ２は、以下の２つの期間から構成された：
（１）アガルシダーゼベータ０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇ（約２時間注入）又はアガルシダーゼアルファ０．２ｍｇ／ｋｇ（約４０分間注入）酵素補充単剤療法（ｍｏｎｔｈｅｒａｐｙ）（ＥＲＴ）；及び
（２）ＥＲＴ＋４５０ｍｇミガラスタット経口錠剤の同時投与。ＥＲＴの２時間前にミガラスタットを投与。
【０１０２】
治療期間は、最低１４日間のウォッシュアウト期間を隔てた。
【０１０３】
α−Ｇａｌ  Ａは、生体内での基質ＧＬ−３の分解における最初の段階を触媒する。α−Ｇａｌ  Ａはまた、人工の低分子量蛍光基質（ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）４−ＭＵＧなどの他の基質にも、同じα結合で作用する。４−ＭＵＧに対するα−Ｇａｌ  Ａ活性を、インビトロで血漿、皮膚、及びＰＢＭＣ試料から、段階希釈でミガラスタットを解離した後、計測した。
【０１０４】
ステージ１の期間１及び期間２からの、血漿、皮膚、及びＰＢＭＣ  α−ガラクトシダーゼＡ活性を有する６人の患者を評価した。期間１では、４人の患者に０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータＥＲＴを投与し、及び２人の患者に１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータＥＲＴを投与し、期間２では、１５０ｍｇミガラスタットを、同用量のＥＲＴの開始２時間前に同時投与した。いずれの期間についても、注入の継続期間は２時間であったが、但し一つの例外があった：０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータの投与を受ける１人の患者の注入は均等でなく、この患者は期間２では２時間４０分注入されたが、期間１では２時間のみ注入された。
【０１０５】
結果：
ミガラスタットの同時投与により血漿α−Ｇａｌ−Ａ活性が増加する
ＥＲＴ単独（期間１）と比べたミガラスタットとの同時投与（期間２）について、血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性ＡＵＣ（曲線下面積）の以下の平均増加が観察された：
０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ注入の平均増加：
・０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについて３．０倍（Ｎ＝４）
・個々の患者の増加：２．０倍、２．２倍、３．４倍、及び４．２倍
・注入時間が均等でなかった２．０倍の患者を除く平均増加：３．３倍
１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ注入の平均増加：
・１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについて１．９倍（Ｎ＝２）
・個々の患者の増加：１．６倍及び２．２倍
【０１０６】
期間１及び期間２の６人の患者の血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性合成図を図１に示す。ミガラスタットと同時投与した後の全患者の血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性ＡＵＣの増加を図２に示す。図３は、各試料採取時間点の部分ＡＵＣを示し、これは、０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与による血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性の活性増加を示す。
【０１０７】
ミガラスタットによる皮膚α−Ｇａｌ−Ａ活性の増加
ＥＲＴ単独（期間１）と比べたミガラスタットとの同時投与（期間２）について、皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の以下の平均増加が観察された：
０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ注入の平均増加：
・２日目の０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについて２．６倍（Ｎ＝３、１人の患者の試料は紛失した）
・個々の患者の増加：２．８倍、３．９倍、及び１．１倍
・皮膚活性は期間１の７日目から変化なし
１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ注入の平均増加：
・２日目及び７日目に１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについてそれぞれ１．９倍及び１．５倍（Ｎ＝２）
・個々の患者の増加：２日目に１．６倍及び２．１倍、７日目に１．７倍及び１．２倍
【０１０８】
０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を図４〜図６に示す。図５Ａは、期間２の間に４０分長いＥＲＴ注入を受けた患者における他の患者と比べた０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後の皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を示す。
【０１０９】
ミガラスタットによるＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ−Ａ活性の増加
ＥＲＴ単独（期間１）と比べたミガラスタットとの同時投与（期間２）について、ＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性の以下の平均増加が観察された：
０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ注入の平均増加：
・２日目、７日目、及び１４日目に０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについてそれぞれ２．３倍、２．０倍、及び２．２倍（Ｎ＝４）
・個々の患者の増加範囲：２日目、７日目、及び１４日目にそれぞれ１．４〜３．１倍、１．４〜２．３倍、及び１．７〜２．８倍
・皮膚活性は期間１の７日目から変化なし
１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ注入の平均増加：
・２日目、７日目、及び１４日目に１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについてそれぞれ１．８倍、４．８倍及び３．５倍（Ｎ＝２）
・個々の患者の増加：２日目、７日目、及び１４日目にそれぞれ１．１倍及び２．５倍、３．６倍及び６．０倍、及び１．７倍及び５．４倍
【０１１０】
０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットとの同時投与後のＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性の増加を図７〜図９に示す。
【０１１１】
結論：
０．５ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータとの１５０ｍｇミガラスタットの相互作用により、以下に関するα−Ｇａｌ  Ａ活性の増加が得られた：
全ての患者の血漿α−Ｇａｌ  Ａ  ＡＵＣ（Ｎ＝６）
全ての患者の２日目における皮膚α−Ｇａｌ  Ａ（Ｎ＝５）、但し７日目は５人の患者のうち３人のみ
全ての患者の２日目、７日目、及び１４日目におけるＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ（Ｎ＝６）
【０１１２】
０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータとの１５０ｍｇミガラスタットの相互作用により、アガルシダーゼベータ単独と比べてα−ガラクトシダーゼＡ活性ＡＵＣの２倍〜４倍の増加、２日目の皮膚α−ガラクトシダーゼＡ活性の１．１倍〜３．９倍の増加、並びに２日目、７日目、及び１４日目のＰＢＭＣ  α−ガラクトシダーゼＡ活性の１．１倍〜６．０倍の増加が得られた。７日目、４人の患者の皮膚で同時投与後にα−ガラクトシダーゼＡ活性が増加した。
【０１１３】
１５０ｍｇミガラスタット用量により、血漿、皮膚、及びＰＢＭＣにおいて投与後２４時間までは全用量（１．０ｍｇ／ｋｇ）と比べて半用量のアガルシダーゼベータ（０．５ｍｇ／ｋｇ）の酵素活性がより良好に増加した；しかしながら、投与後７日目及び１４日目、皮膚及びＰＢＭＣでは逆が該当した（１．０ｍｇ／ｋｇ＞０．５ｍｇ／ｋｇ）。この結果を要約する表を図１０に示す。
【０１１４】
アガルシダーゼベータ単独については、全ての患者であらゆる時間点におけるＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性がベースラインと比べて増加したが、しかしながら２人の患者は、０．５ｍｇ／ｋｇ注入後、ベースラインと比べて２日目の皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性が低下した。
【０１１５】
実施例３：ミガラスタット塩酸塩及びアガルシダーゼを使用するファブリー病の治療用投薬レジメン
以下の実施例は、実施例２に記載した試験の更新版である。本例にはさらなる対象者が含まれ、対象者は合計７人である。
【０１１６】
本例の目的は、ファブリー病と診断された男性においてＥＲＴ（アガルシダーゼ）と同時投与される２つの用量のミガラスタットＨＣｌ（１５０ｍｇ及び４５０ｍｇ）の安全性及びＰＫを評価することである。
【０１１７】
方法  これは進行中の非盲検非無作為化二段階固定順試験である。ステージ１は３つの期間からなる。
・期間１：ＥＲＴ単独の静脈内注入
・期間２：ミガラスタットＨＣｌ（１５０ｍｇ）を経口投与、その２時間後にＥＲＴ（期間１と同用量）の静脈内注入。
・期間３：ミガラスタットＨＣｌ  １５０ｍｇ単独の経口投与。
適格患者：男性、１８〜６５歳、ファブリー病を有する。
組入れ基準：
・ボディ・マス・インデックス（ＢＭＩ）１８〜３５。
・アガルシダーゼによる治療を投薬の少なくとも１ヵ月前に開始している。
・スクリーニング時の推定クレアチニンクリアランス（ＣＬｃｒ）≧５０ｍＬ／分。
除外基準：
・スクリーニング前の３ヶ月間に一過性脳虚血発作、虚血性脳卒中、不安定心筋梗塞が記録されている。
・臨床的に有意な不安定心疾患。
・イミノ糖類（例えば、ミグルスタット、ミグリトール）に対する感受性又はそれとの併用療法。
【０１１８】
対象者は、ある回の注入でその現行の用量及びレジメンのアガルシダーゼベータ単独（０．５又は１．０ｍｇ／ｋｇで約２時間）の投与を受け、続いてその次回の注入でアガルシダーゼベータの２時間前にミガラスタットＨＣｌ  １５０ｍｇの経口投与を受ける。
【０１１９】
現在の７人の対象者のうち５人が２週間毎に０．５ｍｇ／ｋｇの投与を受け、７人の対象者のうち２人が４週間毎に１．０ｍｇ／ｋｇの用量の投与を受けた。
【０１２０】
ステージ２では、４５０ｍｇ用量のミガラスタットＨＣｌを試験する。
【０１２１】
ステージ１及び２を、アガルシダーゼアルファ（０．２ｍｇ／ｋｇで約４０分間）のＥＲＴ注入により固有の対象者で繰り返す。
【０１２２】
試料：
各期間について血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性及びタンパク質レベル用に投与後２４時間まで系列血液試料を採取した。各期間の投与前並びに１日目、２日目、７日目、及び１４日目に、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるα−Ｇａｌ  Ａ活性用の血液試料を採取した。期間１の投与前並びに期間１及び２の間の２日目及び７日目に、皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性用のパンチ生検を採取した。血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性ＰＫパラメータには、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ０−ｔ、ＡＵＣ０−ｉｎｆ、及びｔ１／２が含まれる。薬物動態パラメータは、標準的な非コンパートメント手順（ＷＩＮＮＯＮＬＩＮ  バージョン５．０以上）を使用して計算する。
【０１２３】
血漿、皮膚、及びＰＢＭＣライセートにおけるα−Ｇａｌ  Ａ活性を、４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド（４−ＭＵＧ）を使用する蛍光酵素アッセイにより計測した。４ＭＵＧに対するα−Ｇａｌ  Ａ活性を、段階希釈によりミガラスタットを解離させた後にインビトロで計測した。
【０１２４】
抗ヒトα−Ｇａｌ  Ａ抗体を使用して、血漿試料に対してα−Ｇａｌ  Ａタンパク質のウエスタンブロット分析を実施した。ｒｈα−Ｇａｌ  Ａ（アガルシダーゼ）標準曲線を実行し、各試料中の適切なα−Ｇａｌタンパク質濃度を計算した。
【０１２５】
安全性パラメータには、有害事象（ＡＥ）、バイタルサイン、臨床検査（血液学、血清化学、及び検尿）、心電図（ＥＣＧ）、理学的検査、及び併用薬の使用が含まれる。
【０１２６】
結果：ステージ１の期間１及び期間２について予備的な結果が利用可能である。
【０１２７】
患者の素因及びデモグラフィクス：ステージ１の期間１及び期間２からの血漿、皮膚及びＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性を有する７人の患者を評価した。
・期間１では、７人の患者全員がアガルシダーゼベータ単独の投与を受けた；期間２では、全ての患者がアガルシダーゼベータの開始２時間前に１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌを同時投与された。
・２人の患者（対象者Ａ及びＢとして特定される）は、２時間の継続時間にわたるアガルシダーゼベータ１．０ｍｇ／ｋｇの静脈内注入を受けた。
・５人の患者（対象者Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧとして特定される）は、２時間の継続時間にわたるアガルシダーゼベータ０．５ｍｇ／ｋｇの静脈内注入を受け、但し１つの例外があった：対象者Ｅは期間２では２時間４０分注入されたが、期間１では２時間注入された。
・全ての対象者は、４４〜６１歳のファブリー病を有する男性で、ボディ・マス・インデックス（ＢＭＩ）が２０．９〜２９．１ｋｇ／ｍ２の範囲で、且つ推定ＣＬｃｒが５４〜８８ｍＬ／分の範囲であった。各対象者の遺伝子型を図１１に提供する。
【０１２８】
安全性：
これまでに１２例の有害事象（ＡＥ）が報告されており、そのうち１例は重篤であった。重篤ＡＥは一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）で、スクリーニング来院後に起こったが、投薬前には、入院を要した重篤度が緩和され、治験責任医師により試験薬とは無関係と見なされた。ＴＩＡは後遺症（ｓｅｑｕａｌａｅ）なしに解消した。他のＡＥは全て重篤度が軽度で、いずれも試験薬とは無関係と見なされ、ほとんどが無治療で解消した。３人の異なる対象者における３例のＡＥ：心房性期外収縮、心房粗動、及び下肢浮腫は続いているが、いずれも試験薬とは無関係である。
【０１２９】
血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性：
１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ単独による治療、及び１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータの１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用による治療に対するα−Ｇａｌ  Ａ活性（挿入図は平均及び標準偏差）の活性−時間プロファイルの血漿ＡＵＣ（曲線下面積）を、対象者Ａ及びＢについて図１２に示す。１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用治療により、１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ単剤療法による治療と比較して、対象者Ａ及びＢについてそれぞれ２．２倍及び１．６倍のα−Ｇａｌ  Ａ活性の増加が得られた。
【０１３０】
０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ単独による治療、及び０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータの１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用による治療に対するα−Ｇａｌ  Ａ活性（挿入図は平均及び標準偏差）の活性−時間プロファイルの血漿ＡＵＣ（曲線下面積）を、対象者Ｃ〜Ｇについて図１３に示す。０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用治療により、０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータ単剤療法による治療と比較して、α−Ｇａｌ  Ａ活性の２．０〜４．２倍の増加が得られた。
【０１３１】
血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性は、一つの例外を除き、酵素補充療法（ＥＲＴ）単独と比べて同時投与でほとんどの対象者について全ての時間点において増加した。対象者Ｅは期間２において４０分長い、均等でない注入を受け、それにより注入期間中の酵素活性の相対的な低下が生じた。しかしながら、ピーク活性後のいずれの対象者Ｅの時間点においても、ＥＲＴ単独と比べて増加した。加えて、Ｅｎｇら，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６８：７１１−７２２（２００１）と一致して、曝露量はα−Ｇａｌ  Ａ活性に対して非線形的に増加した。
【０１３２】
ＥＲＴ単独（期間１）と比べたミガラスタットＨＣｌとの同時投与（期間２）について、図１２及び図１３に示されるとおり、いずれの対象者でも血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性ＡＵＣが増加した。血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性ＡＵＣの平均増加は、０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータで３．０倍であった。注入時間が均等でない２．０倍の患者を除くと、平均増加は３．２倍であった。血漿α−Ｇａｌ  Ａ活性ＡＵＣの平均増加は、１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータで１．９倍であった。
【０１３３】
皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性
図１４は、０．５ｍｇ／ｋｇ又は１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータの１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用により対象者を治療すると、酵素単剤療法での治療単独と比較して、２日目の皮膚試料でα−Ｇａｌ  Ａ活性が増加したことを示す。図１５は、単剤療法後及びアガルシダーゼベータと１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとの併用療法後の７日目の皮膚試料におけるα−Ｇａｌ  Ａ活性を示す。皮膚α−Ｇａｌ  Ａ活性の以下の平均増加が観察された：０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについて２日目及び７日目にそれぞれ２．６倍及び１．４倍（Ｎ＝５）、及び１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについて２日目及び７日目にそれぞれ１．９倍及び１．５倍（Ｎ＝２）。
【０１３４】
ＰＭＢＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性
ＰＢＭＣ  α−Ｇａｌ  Ａ活性の以下の平均増加が観察された：０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータについて２日目、７日目、及び１４日目にそれぞれ２．４倍、１．９倍、及び２．１倍（Ｎ＝５）、及び２日目、７日目、及び１４日目にそれぞれ１．０ｍｇ／ｋｇ（Ｎ＝２）アガルシダーゼベータについて１．８倍、４．８倍及び３．５倍。
【０１３５】
ウエスタンブロット分析
７人の対象者のうち５人は、期間２（同時投与）／期間１（ＥＲＴ単独）ＡＵＣ比のウエスタンブロット分析によって血漿中α−Ｇａｌ  Ａタンパク質に変化は観察されなかった。しかしながら、２人の対象者（０．５ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータの投与を受けた対象者Ｃ及び１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータの投与を受けた対象者Ｇ）では、同時投与後にＥＲＴ単独と比べてタンパク質量が２０％増加した（データは図示せず）。
【０１３６】
結論
１５０ｍｇミガラスタットの０．５ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇアガルシダーゼベータとの相互作用により、血漿、皮膚、及びＰＢＭＣにおけるα−Ｇａｌ  Ａ活性の増加が得られた。１５０ｍｇミガラスタットＨＣｌとアガルシダーゼベータとの同時投与は、概して安全であり、十分に忍容された。
【０１３７】
本願は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されてはならない。代わりに、本願の様々な変形例が、本明細書に記載されるものに加えて、当業者には前述の説明及び添付の図から明らかとなるであろう。かかる変形例は、添付の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【０１３８】
さらに、全ての値は近似であり、説明のために提供されることが理解されるべきである。
【０１３９】
本願全体を通して特許、特許出願、刊行物、製品説明書、及びプロトコルが引用され、それらの開示はあらゆる目的から全体として参照により本明細書に援用される。
【図１】
2020033360.tif 000009
【図２】
2020033360.tif 000010
【図３】
2020033360.tif 000011
【図４Ａ−Ｂ】
2020033360.tif 000012
【図５Ａ−Ｂ】
2020033360.tif 000013
【図６Ａ−Ｂ】
2020033360.tif 000014
【図７Ａ−Ｂ】
2020033360.tif 000015
【図８Ａ−Ｂ】
2020033360.tif 000016
【図９Ａ−Ｂ】
2020033360.tif 000017
【図１０】
2020033360.tif 000018
【図１１】
2020033360.tif 000019
【図１２】
2020033360.tif 000020
【図１３】
2020033360.tif 000021
【図１４】
2020033360.tif 000022
【図１５】
2020033360.tif 000023
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月8日(2019.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【外国語明細書】
2020033360000001.pdf