(57)【要約】【課題】本発明は、電磁波過敏症患者を治療できる、又はその症状と思われる症状を緩和できる医薬組成物又は食品組成物を提供することを課題とする。【解決手段】本発明はパパイヤ発酵食品を有効成分として含有し、電磁波過敏症を治療するための医薬組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
パパイヤ発酵食品を有効成分として含有し、電磁波過敏症を治療するための医薬組成物。
【請求項２】
脳血流低下を抑制するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
認知障害、睡眠障害及び／又は倦怠感を軽減するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
認知障害が短期記憶の喪失、集中力低下、及び注意障害から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
パパイヤ発酵食品を有効成分として含有し、電磁波過敏症に関連する脳血流低下、認知障害、睡眠障害及び／又は倦怠感を緩和するための食品組成物。
【請求項６】
パパイヤ発酵食品の用量が、体重７０ｋｇの成人に対して０．５〜３０ｇ／日である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物又は食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、電磁波過敏症を治療するための医薬組成物に関する。具体的には、本発明は、パパイヤ発酵食品を有効成分として含有し、電磁波過敏症を治療するための医薬組成物、並びに、脳血流低下、認知障害、睡眠障害及び／又は倦怠感を治療・緩和するための医薬組成物及び食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、電波・電磁波の発生源が多様化する中で、一般に「電磁波過敏症」と称され、電磁波及び電磁場に由来する過敏症に悩む人が増えてきている。その症状は人により異なるうえ、重症度には広い幅があり、影響を受ける人の中には日常生活に支障をきたす人もいる。
【０００３】
ＷＨＯ（世界保健機関）によれば、電磁波過敏症（ＥＨＳ）は、電磁場不耐症症候群（ＥＭＦＩＳ）とも呼ばれ、電磁場（ＩＥＩ−ＥＭＦ）に起因する特発性環境不耐性（ＩＥＩ）である（非特許文献１）。これらの患者によって報告された、慢性不眠症、倦怠感、過敏症及びうつ病傾向を引き起こす可能性のあるすべての症状は、電磁場に曝されるたびに発生する（非特許文献２〜６）。
【０００４】
一方で、「電磁波過敏症」には医学的診断基準がなく、ＷＨＯは、様々な症状の存在は真実とした上で、「医学的診断基準はなく、その症状が電磁界曝露と関連するような科学的根拠はない」としている。
【０００５】
最近、本発明者らは、臨床的に電磁波過敏症が一時的な側頭葉内の脳内組織脈動の減少に関連することを示し、その症状を生物学的に特徴付けした。さらに、末梢血にはいくつかの生物学的異常があった。この異常は、様々な程度の酸化ストレス、炎症、及び自己免疫応答を反映する。そして本発明者らは、この過程が、これらの患者の側頭葉における脳血液関門の開放及び脳血流の減少を説明することができるという仮説を立てた（非特許文献７）。
【０００６】
カリカパパイヤ（Ｃａｒｉｃａ  ｐａｐａｙａ  Ｌｉｎｎ）の未熟果を糖と共に食用酵母菌で発酵させることにより製造されるパパイヤ発酵食品（Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｐａｐａｙａ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ；ＦＰＰ）は、唾液と混ぜ合わせることにより水と混ぜ合わせる場合に比べ、マルトースとマルトトリオースが増加するものである。
【０００７】
ＦＰＰの経口摂取により、オリゴ糖が増加し腸内環境を整える働きが期待され、２型糖尿病患者の血糖値の上昇抑制、エネルギー代謝の向上、並びに、免疫を高めることによる創傷の治癒促進も期待されている（特許文献１〜３）。ＦＰＰはまた、抗酸化特性を有し、加齢に伴う諸症状に対する効果を得られることで知られている（非特許文献８）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１１−０４１４７８号公報
【特許文献２】国際公開２０１６−０２７３３４号
【特許文献３】国際公開２０１６−０２７３３３号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】HanssonMild K, Repacholi M, van Deventer E, Ravazzani P, eds. 2006. Electromagnetic Hypersensitivity:Proceedings, International Workshop on EMF Hypersensitivity, Prague, CzechRepublic, October 25-27, 2004. Geneva (Switzerland):WHO Press. p. 16.
【非特許文献２】Bergqvist U, Vogel E, Editors.Possible health implications of subjective symptoms and electromagnetic fields.A report prepared by a European group of experts for the European Commission,DGV. Arbete och Halsa, 1997:19. Swedish National Institute for Working Life,Stockholm, Sweden. http://www2.niwl.se/forlag/en/
【非特許文献３】Santini R, Seigne M,Bonhomme-Faivre L, Bouffet S, Defrasme E, Sage M. Symptoms experienced by usersof digital cellular phones: a study of a French engineering school. ElectromagnBiol Med. 2002, 21:81-88.
【非特許文献４】Roosli M. Radiofrequencyelectromagnetic field exposure and non-specific symptoms of ill health: asystematic review. Environ Res. 2008, 107:277-287.
【非特許文献５】Baliatsas C, Van Kamp I, Bolte J,Schipper M, Yzermans J, Lebret E. Non-specific physical symptoms andelectromagnetic field exposure in the general population: can we get morespecific? A systematic review. Environ Int. 2012, 41:15-28.
【非特許文献６】Hagstrom M1, Auranen J, Ekman R.Electromagnetic hypersensitive Finns: Symptoms, perceived sources andtreatments, a questionnaire study. Pathophysiology. 2013, 20:117-122.
【非特許文献７】Belpomme D, Campagnac C, IrigarayP. Reliable disease biomarkers characterizing and identifyingelectrohypersensitivity and multiple chemical sensitivity as two etiopathogenicaspects of a unique pathological disorder. Rev Environ Health. 2015, 30:251-271.
【非特許文献８】Aruoma OI, Hayashi Y, Marotta F,Mantello P, Rachmilewitz E, Montagnier L. Applications and bioefficacy of thefunctional food supplement fermented papaya preparation. Toxicology 278: 6-16,2010.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
否定的な見方がある一方で、電磁波過敏症に関連する症状は確かに存在しており、症状に苦しむ患者のために、その治療法の確立が必要とされている。本発明は、電磁波過敏症患者を治療できる、又はその症状と思われる症状を緩和できる医薬組成物又は食品組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、「電磁波過敏症」を自己報告している患者を対象に、パパイヤ発酵食品を投与したところ、全体の５０〜６０％の患者において臨床的改善がみられ、そのうち２０〜３５％は、主に短期記憶の喪失、集中力低下、及び注意障害といった認知的症状、不眠症、倦怠感などの軽減に大幅な改善が示され、血液検査や超音波脳内脈断層撮影（ＵＣＴＳ）による側頭葉における脈動指数（ＰＩ）の測定からも有意な正常化を見出し、本発明の完成に至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、例えば、以下の各発明に関する。
［１］  パパイヤ発酵食品を有効成分として含有し、電磁波過敏症を治療するための医薬組成物。
［２］  脳血流低下を抑制するための、項１に記載の医薬組成物。
［３］  認知障害、睡眠障害及び／又は倦怠感を軽減するための、項１に記載の医薬組成物。
［４］  認知障害が短期記憶の喪失、集中力低下、及び注意障害から選択される、項３に記載の医薬組成物。
［５］  パパイヤ発酵食品を有効成分として含有し、電磁波過敏症に関連する脳血流低下、認知障害、睡眠障害及び／又は倦怠感を緩和するための食品組成物。
［６］  パパイヤ発酵食品の用量が、体重７０ｋｇの成人に対して０．５〜３０ｇ／日である、項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物又は食品組成物。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の組成物によれば、電磁波過敏症に関連する諸症状、特に脳血流低下、認知障害、睡眠障害及び／又は倦怠感などの症状を緩和することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ＵＣＴＳを用いた平均脈動指数（ＰＩ）値の測定のための、側頭葉に個別化された異なる中大脳動脈依存領域を示す概略図である。
【図２】ＵＣＴＳで測定した左右の側頭葉の異なる領域の脈動指数（ＰＩ）の試験開始時Ｔ０と、３ヶ月後Ｔ３（Ａ）又は６ヶ月後Ｔ６（Ｂ）との比較を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の組成物は、ＦＰＰを有効成分として含有する。ＦＰＰは、上述のように、カリカパパイヤ（Ｃａｒｉｃａ  ｐａｐａｙａ  Ｌｉｎｎ）の未熟果を糖と共に食用酵母菌で発酵させることにより製造されるパパイヤ由来の発酵製品である。
【００１６】
ＦＰＰは、大里研究所により開発され、株式会社大里ラボラトリーが製造し、株式会社大里インターナショナルが販売するものであることが好ましい（特許文献１、非特許文献８）。当該ＦＰＰは、「ＦＰＰ  Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｐａｐａｙａ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ」（登録商標）、又は「Ｉｍｍｕｎ’Ａｇｅ」（登録商標）として入手できる。当該ＦＰＰは、ＩＳＯ９００１：２００８、ＩＳＯ１４００１：２００４、ＩＳＯ２２０００：２００５の認証を受け、欧米で最も厳しい食品安全規格であるＦＳＳＣ２２０００をＪＩＡ国内第一号で取得した工場で生産されており品質面、環境面及び安全面で保証がされている。
【００１７】
ＦＰＰの製造方法は、例えば特許文献１に記載されている。ＦＰＰは、日本食品分析センターによる分析では、ＦＰＰ１００ｇ中９１．２ｇが炭水化物であり、他に少量のタンパク質（０．３ｇ）、脂質（０．２ｇ）、カリウム（１４．９ｍｇ）及び水分（８．５ｇ）が含まれている（ロットＮｏ．０９１；２０１４年５月２７日付け分析試験成績書）。
【００１８】
ＦＰＰは、経口摂取に適するよう顆粒剤、散剤、細粒剤など種々の形態に適宜調製することができ、調製に際し、添加剤、例えば賦形剤、結合剤、滑沢剤など適宜加えることができる。
【００１９】
ＦＰＰの使用量は、有効成分として、体重７０ｋｇの成人に対して、０．５〜３０ｇ／日であればよく、好ましくは１〜２０ｇ／日、さらに好ましくは３〜１５ｇ／日又は９ｇ〜３０ｇ／日、最も好ましくは３〜９ｇ／日、６〜９ｇ／日又は９〜１５ｇ／日である。
【００２０】
本発明の組成物は、電磁波過敏症の治療、すなわち、電磁波過敏症に関連する諸症状の治療又は緩和に有効である。電磁波過敏症は、上述したように、電磁場に起因する特発性環境不耐症であり、「ある程度の電磁波／電磁場に曝露されると、身体に様々な不調が現れる」、「電磁場／電磁場に曝されることによって健康を害する」といった考えによりストレスが生じ、それによって引き起こされる様々な症状を指す。
【００２１】
電磁波には、波長の短い順にガンマ線、エックス線、紫外線、可視光線、赤外線、電波がある。「電磁波過敏症」を主張する人々は主として、送電線や家電製品から発せられる商用電源周波数（５０／６０Ｈｚ）と、携帯電話や基地局塔からのマイクロ波がその症状の原因としている。
【００２２】
電磁波過敏症には、明確な診断基準がないものの、例えば非特許文献７に記載のように、患者の自己報告、及び、主な症状に基づき診断される。電磁波過敏症に関連する又は関連性があると疑われる症状としては、例えば、チクチクした感覚、灼熱感、皮疹、発赤、ヒリヒリとした痛みなどの皮膚症状、脳血流低下、頭痛、倦怠感、睡眠障害、認知障害、精神的ストレス、筋肉痛、めまい、吐き気、動悸、消化器の障害などの症状が挙げられる。具体的な診断方法は、たとえば、実施例に記載の基準にしたがって評価することができる。
【００２３】
本発明の組成物は、電磁波過敏症の臨床的改善をもたらすことができる。特に脳血流低下を抑制することができ、また、認知障害、睡眠障害及び／又は倦怠感を軽減することができる。認知障害は、例えば、短期記憶の喪失、集中力低下、注意障害などが挙げられる。
【実施例】
【００２４】
本発明者らは、電磁波過敏症を自己報告した患者を対象に対するＦＰＰの効果を検証するための下記の臨床試験を行った。臨床試験には、ＥＭＦＩＳを有する３２人の患者が参加し、そのうち２６人及び１６人がそれぞれ３ヶ月及び６ヶ月のＦＰＰ処置後に評価された。臨床評価は、検証された事前に確立されたアンケートを使用して、特定の対面インタビューによって実施した。生物学的評価は、酸化的ストレス及び酸化的ストレスに関連した炎症、並びに炎症関連末梢血検査に加えて、超音波脳内脈断層撮影（ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｔｏｍｏｓｐｈｙｇｍｏｇｒａｐｈｙ、ＵＣＴＳ）を用いた側頭葉における脳内組織脈動指数（ｐｕｌｓｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｎｄｅｘ、ＰＩ）の測定からなった。
【００２５】
＜材料及び方法＞
インクルージョン基準（参加基準）
５つの基準に基づいてＥＭＦＩＳを臨床的に定義した（非特許文献４〜７）：
（１）観察された臨床症状を説明する既知の病理学の欠如；
（２）発生源（無線周波数及び／又は高周波数、低周波数及び／又は極低周波数）にかかわらず、電磁波の影響を受けた症候の再現性；
（３）電磁波回避の場合の臨床症状の退縮又は消失；
（４）科学文献のＥＨＳ自己報告患者で以前に報告されたものと適合する臨床症状；
（５）症状の慢性的な進化。
【００２６】
臨床試験に含める前に、すべての患者は、ＥＭＦＩＳ非関連病理を除外するために、全般的及び神経学的臨床検査、並びに全身的な一般的な生物学的検査を受けた。したがって、試験に含めるためには、患者は正常な頸動脈及び脊髄エコードップラー、正常の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）又はコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、及び正常の血液検査を有し、血液検査が現在用いられているものであり、特に血液学、肝臓及び腎臓の検査を含む。さらに、患者は、１８歳から７５歳まで、１８．５〜２５の体格指数、正常末梢血圧、正常空腹時血糖、グルテン及び／又はラクトース／カゼイン不耐性なし、多種化学物質過敏状態（ＭＣＳ）の関連病理なしとの条件を満していた。
【００２７】
さらに、すべての患者は、癌、アルツハイマー病、ＩＩ型糖尿病及び／又は心血管疾患のような病状の病歴を持たず、以前に治療されたかどうかに関わらず、ＥＭＦＩＳの臨床活性期にあった。すなわち、本発明者らが使用した評価尺度システムに従って、グレード２又は３の臨床症状を示した（下記の＜評価＞の欄を参照）。
【００２８】
しかし、いわゆるＥＨＳ患者の臨床症状は主に主観的に発現しているため、客観的にＥＭＦＩＳを有する患者を特徴付ける２つの追加の生物学的包括的基準を使用した：
（１）ＵＣＴＳを用いて少なくとも１つの側頭葉の領域で測定された平均組織ＰＩが低い（以前に報告したように、ＥＨＳ自己報告患者では、側頭葉のいくつかの領域に平均組織ＰＩが低い（非特許文献７））；
（２）おそらくＥＨＳと関連している３つの末梢血バイオマーカーの少なくとも１つの増加（非特許文献７）：炎症のメディエーターであるヒスタミンの増加、酸化ストレス関連ＢＢＢ開口のマーカーであるタンパク質Ｓ１００Ｂの増加、及び、熱ショック細胞ストレス関連炎症及び／又は免疫応答のマーカーであるシャペロンタンパク質Ｈｓｐ２７及び／又はＨｓｐ７０の増加（表１）。
【００２９】
この臨床試験は、ＥＣＥＲＩ科学／倫理諮問委員会によって合意され、試験の前にすべての患者が署名した書面による同意の承認を含む、現在受け入れられている倫理ガイドラインに従って実施された。この非侵襲的な調査は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＥｕｄｒａＣＴ）に登録番号２０１７−００３９３７−２７で登録されている。
【００３０】
＜ＦＰＰ治療及び試験のデザイン＞
ＦＰＰは、大里研究所によって、４．５ｇ粉末／小袋として提供され、市販されているこのＦＰＰ製品の治験における推奨用量（９ｇ／日）に従って、１回１袋、１日２回（朝夕）、６ヶ月間投与された。なお、ＦＰＰの成分は、例えばＡｒｕｏｍａ  ＯＩら、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．  ２０１０，  ２７８：６−１６によって報告されている。
【００３１】
この試験は、オープンプロスペクティブ  クロスオーバー  フェーズＩ−ＩＩ試験であり、各患者は時間の経過と共にそれ自身のコントロールとして働く。以前に治療された患者の場合に、本試験に参加する前の治療による最終的な後退効果による偏りを避けるために、治験参加時（Ｔｉ）と治療プロトコール開始時（Ｔ０）との間の最短１ヶ月間のウォッシュアウト期間が設けられた。
【００３２】
さらに、患者は、試験期間中に臨床症状を変える可能性のあるファクターを避けるために、通常のライフスタイルを維持するように求められた。彼らの通常の食生活、身体活動、定期的な生活行動、及び作業活動は、試験品質保証プロセス中に体系的に記録され、慎重に分析された。
【００３３】
＜評価＞
患者は、Ｔｉ、Ｔ０、３ヶ月治療後（Ｔ３）、及び６ヶ月治療後（Ｔ６）に、臨床的及び生物学的に連続的に調査された。検証された事前に確立されたアンケート及び完全な臨床試験を使用して、特定の対面インタビューによって、Ｔ０と比較して、Ｔ３及びＴ６で臨床的評価を系統的に実施した。評価には、ＦＰＰ耐性及びＥＭＦＩＳ症状に対する臨床効果が含まれていた。症状評価尺度システムを使用して臨床評価を行った。
グレード０：症状なし；
グレード１：軽度及び／又は一時的な症状；
グレード２：集中的又は永続的な症状；
グレード３：集中的で永続的な症状。
【００３４】
グレード３からグレード２へ、又はグレード２からグレード１へのシフトは「マイナー」な改善と分類されたが、グレード２〜３からグレード０へのシフトは「メジャー」な症状改善と見なされた。
【００３５】
Ｔ３又はＴ６での全般的臨床応答は、以下の等級付けシステムを用いてＴ０と比較して評価した：
完全応答（ＣＲ）：すべての症状の消失（すなわちグレード０）；
部分応答（ＰＲ）：グレード１の症状の持続；
安定（Ｓ）：変化なし；
失敗（Ｆ）：グレード２又は３の症状の増加。
【００３６】
完全な生物学的評価は、Ｔｉ及びＴ０と比較して、Ｔ３及び／又はＴ６について行った。生物学的評価は、Ｔｉと比較した、Ｔ３又はＴ６のＵＣＴＳによるＰＩ測定、末梢血中のＥＭＦＩＳ関連炎症関連バイオマーカー（すなわち、ヒスタミン、タンパク質Ｓ１００Ｂ、シャペロンタンパク質Ｈｓｐ２７及びＨｓｐ７０）の量、酸化的ストレス関連バイオマーカーの量が含まれていた。
【００３７】
＜超音波脳内脈断層撮影（ＵＣＴＳ）＞
頭蓋内の脈動測定は、最初は米国で開発された、その後フランスでＵＣＴＳが標準化され、開発された。本試験では、従来の大脳組織関連の超音波技術を更生させて、２つの側頭葉の正確なＰＩを測定した。予備的な臨床データにより、ＥＨＳを訴えた患者は、しばしば、短期記憶の喪失、頻繁な聴覚異常又は嗅覚異常に加え、集中力の欠如（集中力低下）などがあることが分かったからである。
【００３８】
ＵＣＴＳ技術は、非特許文献７に記載されている。ＵＣＴＳは、送信超音波源からの２ＭＨｚのパルス超音波の異なる強度レベルでの放出を使用して、皮質から脳の中線までの側頭葉のセンチメートルの厚さのセクションによる平均組織ＰＩの測定を可能にする非侵襲的なコンピュータ化された技術（図１）、さらに、側頭葉における種々の神経学的及び血管組織構造、特に中大脳動脈（ｍｉｄｄｌｅ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｒｔｅｒｙ、ＭＣＡ）における血管ネットワークの毛細血管中の赤血球（ＲＢＣ）に対する、これらの超音波の反射の分析からなる。
【００３９】
図１は、Ｐａｒｉｎｉ  Ｍら、Ａｇｒｅｓｓｏｌｏｇｉｅ．  １９８４，  ２５：５８５−５８９による、ＵＣＴＳを用いた平均ＰＩの測定のための、側頭葉に個別化された異なる中大脳動脈（ＭＣＡ）依存領域を示す概略図である。皮膚頭蓋表面から３ｃｍ（３ｔｈｃｍ）で得られた平均ＰＩ値と、４ｃｍ（４ｔｈｃｍ）で得られた平均ＰＩ値との加算は、皮質／皮質下部（皮質／下皮質）領域に相当する。３ｃｍ（３ｔｈｃｍ）から５ｃｍ（５ｔｈｃｍ）で得られた平均ＰＩ値の加算は、中大脳動脈（ＭＣＡ）の表面領域（浅中大脳動脈、ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ＭＣＡ）に相当する。５ｃｍ（５ｔｈｃｍ）から７ｃｍ（７ｔｈｃｍ）までの平均ＰＩ値がＭＣＡの深部領域（深中大脳動脈、ｄｅｅｐ  ＭＣＡ）に相当し、７ｃｍで得られた平均ＰＩ値は、内包／視床領域（ｃａｐｓｕｌｏ−ｔｈａｌａｍｉｃ  ａｒｅａ）に相当する。３ｃｍから７ｃｍで得られた値の加算はＭＣＡ依存性頸動脈面積（ＭＣＡ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃａｒｏｔｉｄｉａｎ  ａｒｅａ）に相当する。最後に、８ｃｍから９ｃｍで得られた値の加算は、脊椎／脳底領域（ｖｅｒｔｅｂｒｏ−ｂａｓｉｌａｒ  ａｒｅａ）に対応する。
【００４０】
調査された異なる側頭葉領域に対応する平均ＰＩ値は、使用した標準的なＵＣＴＳ装置によって直接記録された。その結果、ＵＣＴＳを使用することにより、すべての患者で異なる組織領域のそれぞれにおける平均ＰＩを測定することができた。本発明者らが以前、７２７のＥＨＳ及び／又はＭＣＳ患者に対して、６つの個別化された側頭葉領域において、それぞれの生理学的平均ＰＩ値を決定し、生理学的平均ＰＩ基準値として使用された一連の正常履歴のコントロールと比較した（Ｐａｒｉｎｉ  Ｍら、  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  １４３  ｈｅａｌｔｈｙ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ．  Ａｇｒｅｓｓｏｌｏｇｉｅ．  １９８４，  ２５：５８５−  ５８９．）。これは、正常被験者と比較して、自己報告ＥＨＳを有する患者の脳拍動が、１つ又は２つの側頭葉のいくつかの組織領域において、ほとんどの場合、嚢核−視床領域において減少し、又は完全に抑制されたことを示すことができた。これらの領域内では、ＥＨＳ及び／又はＭＣＳ患者において脳血流が低下する可能性がある（非特許文献７）。
【００４１】
したがって、本試験では、ＦＰＰが正常ＰＩを回復できるかどうかを調べるために、Ｔｉ、Ｔ３及び／又はＴ６においてＵＣＴＳを用いて、ＦＰＰ投与の前後の側頭葉におけるＰＩを測定した。
【００４２】
＜炎症及び酸化ストレス関連バイオマーカー＞
この試験の目的の１つは、ＦＰＰ抗炎症及び抗酸化ストレス効果の可能性を実証するために、ＦＰＰ処置前後のＥＭＦＩＳ保有患者の末梢血における炎症及び酸化ストレス関連バイオマーカーを測定することであった。
【００４３】
＜採血＞
静脈血漿の採血は、パリの実験室「Ｌａｂｏ  ＸＶ」のＴｉ、Ｔ０、Ｔ３及びＴ６で行った。ＥＨＳ関連バイオマーカーは、ヘパリン酸リチウムでの全血収集後に血漿で測定したヒスタミンを除いて、この実験室で血清について測定した。酸化ストレスに関連するバイオマーカーについては、ヘパリン酸リチウムで全血を採取し、−８０℃で直ちに凍結させた後、グルノーブル大学病院の酸化ストレス測定及び分析に特化した試験室Ｅｑｕｉｎｏｘ（フランス）に送った。
【００４４】
＜炎症関連のバイオマーカー＞
本試験で使用した炎症関連バイオマーカーの測定方法は既知である（例えば、非特許文献７）。ヒスタミンについては、ＥＬＩＳＡ特異的試験（ＩＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＧｍｂＨのヒスタミンＥＬＩＳＡ  ＲＥ５９２２１）を、タンパク質Ｓ１００Ｂについては、定量的自動化化学発光イムノアッセイ（ＤｉａＳｏｒｉｎ  Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ  ＧｍｂＨのＬｉａｓｏｎ  Ｓ１００）を用いた。シャペロンタンパク質Ｈｓｐ２７については、定量的サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ試験（Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓ（商標）Ｈｓｐ２７  ＥＬＩＳＡキット）を、シャペロンタンパク質Ｈｓｐ７０については、酵素免疫測定試験（Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓ（商標）Ｈｓｐ７０高感度酵素免疫測定アッセイキット）を用いた。全ての試験は、市販で入手可能な試薬を用いて実施され、各患者の値は商業会社から得られた正常な基準値と比較された。試験の感度、特異性及び再現性は、会社によって提供されたものと一致した。全てのアッセイは、推奨される製造業者の方法に従って行った。
【００４５】
＜酸化的及び抗酸化的ストレス関連バイオマーカー＞
ＦＰＰ処理の前後に、血漿及び／又は赤血球中の酸化ストレスバイオマーカー、抗酸化酵素及び酵素タンパク質を測定するために一連の試験を使用した（表１）。血漿からＲＢＣを分離するために、遠心分離（４０００ｇ、１０分、４℃）を行った。この試験で使用した各バイオマーカーについて得られた正常な参照値は、一連の１２３の正常な被験者の分析から予め決定された。
【００４６】
（酸化的ストレスバイオマーカー）
酸化的ストレス評価のために、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）、総チオバルビツール酸（ＴＢＡ）、及びチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）合計３つの血漿中マーカー、並びに総チオール基（ｔｏｔａｌ  ｔｈｉｏｌ  ｇｒｏｕｐ）タンパク質を測定した（表１）。
【００４７】
ＭＤＡを測定するために、ＴＢＡとの反応を使用した。次いで、ＭＤＡ−ＴＢＡ複合体を干渉物質から分離し、ＵＶ／可視検出と組み合わせた逆相ＨＰＬＣを用いて特異的に同定した。実際、ＭＤＡは、そのＴＢＡとの反応後のその強い吸光性及び蛍光性に基づいて定量された（Ｏｈｋａｗａ  Ｈら、  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９７９，  ９５：３５１−３５８）。結果はリットルあたりのμモル（μＭ）で示した。
【００４８】
脂質過酸化中間体の量については、Ｏｈｋａｗａらの方法の改変を用いて全血漿ＴＢＡＲＳを測定した。この方法は、ＴＢＡＲＳのアルデヒド機能とＴＢＡとの反応に基づいて、ＴＢＡＲＳ−ＴＢＡ着色複合体を形成し、これを蛍光測定法によって定量化した。結果はμＭで示した。総チオール（ＳＨ）基タンパク質の投与量について、試薬として５，５’−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）を用い、４１２ｎｍで分光光度的に血漿ＳＨ群のレベルを測定した（Ｊｏｃｅｌｙｎ  ＰＣら、  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １９８７，  １４３：４４−６７）。結果は、１リットルあたりの単位（Ｕ／ｌ）で示した。
【００４９】
（抗酸化性非酵素タンパク質）
血漿中の還元型グルタチオン（ＧＳＨ）と酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）の投与量は、Ａｋｅｒｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １９８１，  ７７：３７３−３８２の方法に従って行った。簡潔に述べると、遠心分離（４００ｇ、１０分間、４℃）した全血４００μｌをメタホウ酸３．６ｍｌに集めた。遠心分離後、総グルタチオン及びＧＳＨを酸性タンパク質非含有上清中で酵素的に測定した。脱タンパク質抽出物に２−ビニルピリジンを添加することにより、ＧＳＨをマスクした後、ＧＳＳＧのアッセイを行った。総グルタチオン及びＧＳＨについてはＧＳＳＧを酵素的に測定した。結果はμＭで表した。
【００５０】
最後に、血漿中の総抗酸化物質状態（ＴＡＳ）の測定を、ｒａｎｄｏｘキット（Ｒａｎｄｏｘ  Ｔｏｔａｌ  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ、ＮＸ２３３２、Ｒａｎｄｏｘ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を用いた比色法により行った（Ｍｉｌｌｅｒ  ＮＪら、  Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ  （Ｌｏｎｄ）．  １９９３，  ８４：４０７−４１２）。結果はμＭで表した。
【００５１】
（抗酸化酵素タンパク質）
酸化酵素の測定は、ＲＢＣ、或いは、ＲＢＣ及び血漿の両方で行った。ＲＢＣ中のＣｕ−Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性を測定するために、Ｐｙｒｏｇａｌｌｏｌの自己酸化を阻害するＳＯＤの能力に基づく簡単で迅速な試験である、Ｍａｒｋｌｕｎｄ  Ｓら、  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９７４，  ４７：４６９−４７４によって記載された方法を用いた。実際、ｐＨ７．９では、反応はＳＯＤによって阻害され、反応中のスーパーオキサイドアニオンラジカル、O２O−に対するＳＯＤのほぼ全効果を示す。この方法では、ピロガロール自己酸化の速度を、４２０ｎｍでの吸光度の増加から分光光度的に測定した。１単位のＳＯＤ活性は、ピロガロール自己酸化の速度を５０％阻害するのに必要な酵素の量として定義される。結果は、単位／ｍｇヘモグロビン（Ｕ／ｍｇ  Ｈｂ）で表した。
【００５２】
グルタチオン還元酵素（ＧＲ）の量については、ｒａｎｄｏｘキット（Ｒａｎｄｏｘ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙのＧＲ２３６８）の比色法を用いた（Ｍａｎｎｅｒｖｉｋ  Ｂら、  Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ２００：  １０．１００２／０４７１１４０８５６．ｔｘ０７０２ｓ００）。結果は、赤血球ＧＲの場合は単位／ｇヘモグロビン（Ｕ／ｇ  Ｈｂ）、血漿ＧＲの場合は単位／リットル（Ｕ／ｌ）で表した。
【００５３】
さらに、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性を、Ｇｕｎｚｌｅｒ  ＷＡら、Ｚ  Ｋｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  Ｋｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９７４，  １２：４４４−４４８に記載の方法を用いた。ＧＰｘアッセイは、ＮＡＤＰＨのＮＡＤＰ＋への酸化に基づいており、これは３４０ｎｍでの吸光度の低下を伴う。この減少の割合は、サンプル中のＧＰｘ活性に正比例する。ＧＰｘ活性はリットル当たりのモール数で（ｎＭ）分当たりのＮＡＤＰＨ酸化で評価し、その結果は、赤血球ＧＰｘの場合はユニット／ｇヘモグロビン（Ｕ／ｇ  Ｈｂ）で、血漿のＧＰｘの場合はリットル当たりの単位（Ｕ／Ｌ）で示した。
【００５４】
【表１】
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【００５５】
＜統計分析＞
この試験の設計は、治療の前後で得られたデータの群内比較からなる、症例交叉（クロスオーバー）臨床試験であった。
【００５６】
ＦＰＰ治療前後の臨床評価を以下のように記載した。全般的な応答率に加えて、主要な副作用及び軽度の症状改善が、上記＜評価＞で既に定義された臨床基準に従って確立された。
【００５７】
３つの異なる統計的検定を使用した：
（１）症候性（表２及び３）及びバイオマーカー評価（表６）に対する患者のパーセンテージの比較のための独立性のカイ二乗検定；
（２）比較した２つの群から得られた値、例えば、平均正常基準値に対する平均ＰＩ値（表５）、或いは、酸化ストレスを有する患者に対する、酸化ストレスを有さない患者から得られた様々な酸化ストレス関連バイオマーカーについて得られた値（表８）を比較するための、フィッシャーの正確確率検定とその後の両側スチューデントｔ検定；
（３）Ｗｉｌｃｏｘｏｎ符号順位検定（ＰＩ値（表５）又はバイオマーカー分析（表７及び９）のように、時間測定で得られた異なる値の群内比較のために、正規分布と一致しないと仮定したため。）。
すべての統計分析は、ＸＬＳＴＡＴソフトウェアを用いて行った。
【００５８】
＜結果＞
３２人の患者のうち、２６人がＴ３で臨床症状及び生物学的試験の両方について評価可能であった。ＴｉとＴ３との間のフォローアップ期間中に５例が失われ、１例は評価できなかった。Ｔ６では、１８人の患者が評価可能であり、４例はＴ３のプロトコールから除外され、Ｔ３とＴ６の間の追跡期間に失われた４例があった。
【００５９】
＜臨床評価＞
この試験では、評価可能な患者のすべてがＦＰＰに対して高い忍容性を示した。表２、３及び４は、臨床データをまとめたものである。
【００６０】
Ｔ３において、主な症状：短期記憶喪失、集中力低下／注意障害、不眠症、倦怠感の例の２０〜４０％で改善が得られた。対照的に、うつ病傾向、並びに頭痛、耳鳴及び感覚異常などの神経症状の症例のわずか５〜１５％の改善がみられた。しかし、軽度の改善を含めると、症例の全体的な改善は、解析された症状のタイプによって症例の約３０〜６０％に達し、６ヶ月のＦＰＰ治療に達した患者についてはＴ６まで持続した（表２）。
【００６１】
【表２】
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【００６２】
表３は、Ｔ０に対するＴ３及びＴ６における症状のある患者のパーセンテージが、分析された各症状について統計的に有意に低下したことを示す（ｐ＜０．０００１）。
【００６３】
【表３】
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【００６４】
最終的に、２６の評価可能な症例のうちの１４例においてＴ３で完全又は部分的な臨床応答が得られ、全体的な応答率は５３．８％であった（表４）。
【００６５】
【表４】
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【００６６】
＜ＵＣＴＳ＞
表５及び図２に示されるように、ＴｉでＵＣＴＳを使用することによって、左右それぞれの側頭葉の内包／視床領域及び深部ＭＣＡ（深中大脳動脈）領域及び脊髄／脳底領域における平均ＰＩ値の統計的に有意な減少が確認された。一方、左右両方の側頭葉において、皮質／下皮質及び表層ＭＣＡ（浅中大脳動脈）領域に統計学的に有意に増加した。Ｔ３／Ｔ６では、側頭葉の内包／視床領域、並びに、右側及び左側頭葉の深部ＭＣＡ領域及び脊椎／脳底領域それぞれについて、Ｔｉの正常な平均ＰＩ値と比較して、統計的に有意な回復が見出された。
【００６７】
したがって、ＰＩ回復を示さない右側頭葉の脊柱／脳底領域を除いて、Ｔｉで減少したＰＩ値を示したすべての組織領域において、Ｔ３／Ｔ６では、ＦＰＰ治療後の統計的に有意な正常な平均ＰＩ値まで回復した。対照的に、Ｔｉにおける平均組織ＰＩ値が正常又は増加した他の組織領域については、Ｔ３／Ｔ６における平均ＰＩ値は統計的に有意に増加した。
【００６８】
【表５】
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【００６９】
図２には、Ｔｉと比較した、Ｔ３／Ｔ６で左右の側頭葉の異なる領域でＵＣＴＳによって記録された平均ＰＩ値を示す。（Ａ）は右側頭葉、（Ｂ）は左側頭葉を示し、白いバーはＴｉの平均値±ＳＤ、黒いバーはＴ３／Ｔ６の平均値±ＳＤを示し、＊はWilcoxon符号順位検定を用いた統計的に有意な値を示す。
【００７０】
＜炎症関連のバイオマーカー＞
表６及び７は、Ｔｉにおいて炎症関連バイオマーカーの増加を示すＥＨＳ保有患者について、Ｔ３とＴ６で得られた結果をＴｉと比較した結果を示す。
【００７１】
表６に示すように、Ｔｉと比較して、Ｔ３及びＴ６におけるヒスタミン、Ｓ１００Ｂ、及びＨＳＰ２７／ＨＳＰ７０シャペロンタンパク質の異常な炎症関連バイオマーカー値を有するＥＨＳ患者の数及びパーセンテージが有意に減少した（ｐ＜０．０００１）。これは、初期に検出可能な炎症を有するＥＨＳ患者の末梢血におけるＦＰＰ関連抗炎症効果の発生を示唆している。さらに、表７に示すように、ＦＰＰ関連抗炎症効果は、Ｔ３及びＴ６におけるヒスタミン及びＨｓｐ２７／Ｈｓｐ７０シャペロンタンパク質の平均±ＳＤ値をＴｉにおける値と比較することによって確認され、平均値±ＳＤはＴｉに対してＴ３及びＴ６において統計的に有意に減少した。
【００７２】
【表６】
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【００７３】
【表７】
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【００７４】
＜酸化ストレス及び抗酸化ストレス関連バイオマーカー＞
結果を表８及び９に示す。注目すべき発見は、２６人の評価可能な患者のうち１２人（４６％）が酸化ストレスを経験したことである。これらの患者は、Ｔ０において正常な基準値に対して、血漿中のＭＤＡ及びＴＢＡＲＳの統計的に有意な増加を示したが、これらの値は、検出可能な酸化ストレスを有さない患者において得られた値と統計的に有意に異なっていた（ｐ＜０．０００１）。さらに、酸化ストレスを有さない患者からの酸化ストレス患者の個別化は、正常な基準値と比較して、酸化ストレス耐性患者において統計学的に有意に増加したが（ｐ＜０．０００１）、酸化ストレスを有さない患者では増加はなかった（表８）。
【００７５】
【表８】
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【００７６】
【表９】
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【００７７】
表９に示すように、酸化ストレスを有する患者のグループでは、Ｔ０と比較してＴ３における血漿中のＭＤＡレベルの統計的に有意な低下（ｐ＜０．０００１）、赤血球におけるグルタチオンペルオキシダーゼ活性の統計的に有意な増加が認められた（ｐ＜０．０１）。この結果は、初期に検出可能な酸化ストレスを有する患者において、ＦＰＰによる検出可能な抗酸化効果を有する可能性があることを示唆している。
【００７８】
＜結論＞
全体的に、臨床的改善が５０〜６０％の症例で得られ、そのうち２０〜３５％は主に、短期記憶の喪失、集中力低下、注意障害、不眠、倦怠感などの認知症状の軽減が見られた。この臨床的改善は、側頭葉における平均脳内組織脈拍数（ＰＩ）の統計的に有意な正常回復、並びに、血漿中のマロンジアルデヒド濃度の統計的に有意な低下（ｐ＜０．０００１）、及び、酸化ストレスを経験している患者の赤血球におけるグルタチオンペルオキシダーゼ活性の増加（ｐ＜０．０１）によって証明される、ＦＰＰ関連抗酸化効果によって客観的に支持された。さらに、本試験では、末梢血中のヒスタミン（ｐ＝０．０４９）及びＨＳＰ２７／ＨＳＰ７０シャペロンタンパク質（ｐ＝０．００７）の統計的に有意な減少を示すことにより、ＦＰＰ関連抗炎症効果のある程度の証拠が示された。これらの結果は、ＥＨＳ自己報告患者におけるＦＰＰの有益な臨床的及び生物学的治療効果が示唆された。ＦＰＰは、ＥＭＦＩＳ保有患者、すなわちいわゆるＥＨＳ自己報告患者に対して有効な治療剤である。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
ＦＰＰは、これから増えるであろう「電磁波過敏症」や「化学物質過敏症」などの環境因子に起因する「環境病」の治療法確立の一助となることが期待されている。
【図１】
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【図２】
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