(57)【要約】      （修正有）【課題】癌治療に対する感受性を予測するためのバイオマーカー、及びバイオマーカーの組み合わせの提供。【解決手段】特定のＡＫＴへの変異の存在を決定することを含む、ＡＫＴ阻害剤に対する腫瘍細胞の増殖の感受性を予測する方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＫＴへの変異の存在を決定することを含む、ＡＫＴ阻害剤に対する腫瘍細胞の増殖の感受性を予測する方法であって、ＡＫＴへの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性と相関する方法。
【請求項２】
ＡＫＴへの変異の存在が、ＡＴＰ競合的ＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の増加と相関する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＡＫＴへの変異の存在が、アロステリックＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の減少と相関する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＡＫＴへの変異の存在が、パン−ＰＩ３Ｋ ＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の減少と相関する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
変異が、表１、表２、図２，図３、図１６又は図１７に示される変異に対応する、又は一致する、請求項１から４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
変異が、Ｌ５２、Ｋ１８９又はＤ３２３に対応する、又は一致する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＡＫＴがＡＫＴ１、ＡＫＴ２又はＡＫＴ３である、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＡＫＴがＡＫＴ１である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＡＫＴへの変異がＡＫＴのＰＨ−ドメインとキナーゼドメインの間の相互作用を破壊する、請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＡＫＴへの変異がＡＫＴのリン酸化を増加させる、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
リン酸化の増加が構成的リン酸化に起因する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
方法が細胞のＰＴＥＮの状態を決定することを更に含み、ＰＴＥＮの欠損が阻害剤に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍細胞が卵巣癌又は前立腺癌腫瘍細胞である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
方法が細胞のＰＩ３Ｋの変異の存在を決定することを更に含み、ＰＩ３Ｋの変異の存在が阻害剤による阻害剤に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＰＩ３Ｋの変異が、Ｈ１０４７Ｒ及びＨ１０４７Ｌのうち一つ又は両方である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
方法が細胞のｐＡＫＴプロファイルを決定することを更に含み、ｐＡＫＴの高活性プロファイルが阻害剤による阻害剤に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１５の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
方法が細胞のｐＡＫＴプロファイルを決定することを更に含み、ｐＡＫＴの低活性プロファイルが阻害剤による阻害剤に対する感受性の低下と相関する、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
方法が細胞のＨｅｒ２及び／又はＨｅｒ３の状態を決定することを更に含み、細胞のＨｅｒ２＋及び／又はＨｅｒ３＋状態が阻害剤による阻害剤に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
方法が細胞のＭｅｔキナーゼの変異の存在を決定することを更に含み、Ｍｅｔキナーゼの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性と相関する、請求項１から１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
方法が細胞のＢ−Ｒａｆ又はＫ−Ｒａｓの変異の存在を決定することを更に含み、Ｂ−Ｒａｆ又はＫ−Ｒａｓの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の低下と相関する、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
方法が、細胞におけるＦＯＸＯ３ａの局在化プロファイルを決定することを更に含み、
ＦＯＸＯ３ａの細胞質局在化プロファイルがＡｋｔ阻害剤による阻害に対する細胞の感受性と相関する、請求項１から２０の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
腫瘍細胞が、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、胃癌、又は膵臓癌細胞である、請求項１から１２又は１４から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
腫瘍細胞が内分泌抵抗性乳癌細胞である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２４】
方法が細胞のＩＮＰＰ４Ｂ、ＰＨＬＰＰ、及び／又はＰＰ２Ａの状態を決定することを更に含み、ＩＮＰＰ４Ｂ、ＰＨＬＰＰ、及び／又はＰＰ２Ａの欠損が阻害剤に対する感受性の増加と相関する、請求項１から２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＡＫＴ阻害剤が、（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ、７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン又はその薬学的に許容される塩である、請求項１から２４の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ＡＫＴへの変異の存在を決定するために患者から生理学的サンプルを得ることを更に含む、請求項１から２５の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
生理学的サンプル中のＡＫＴの変異の存在を決定することを更に含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＡＫＴへの変異の存在が確定される患者に、ＡＫＴ阻害剤が投与されるべきであると知らせることを更に含む、請求項１から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＡＫＴへの変異の存在が確定される患者に、ＡＫＴ阻害剤が投与されるべきでないと知らせることを更に含む、請求項１から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ＰＩ３ｋ、ＰＴＥＮ及びＡＫＴの変異の一以上を含む癌細胞を処置する方法であって、該細胞にＧＤＣ−００６８又はその塩を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
関連出願への相互参照
この特許出願は、２０１１年４月１日に出願された米国出願シリアル番号６１／４７１０３６号の優先権の利益を主張し、その出願は参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
細胞が、最終的に細胞に対して増殖優位性を与える変異を持っている場合に癌が発生する可能性がある。体細胞変異は、例えば、ヌクレオチド塩基の置換、欠失、挿入、増幅及び再編成を含む。癌に生じる体細胞変異の同定は、癌の発生に関する価値ある情報を提供する。そのような情報はまた、癌における診断マーカー及び治療標的の同定に有用である。（例えば Bamford et al. (2004) British Journal of Cancer 91:355-358を参照）。癌に関連する体細胞変異の同定は、臨床の場において、例えば、特定の治療に応答するであろう患者集団を区別することにおいて、貴重であることが証明されている。（例えば、Lynch et al. (2004) N. Engl. J. Med. 350:2129-2139; O'Hare (2004) Blood 104:2532-2539を参照）。従って、癌で起こる体細胞変異を同定するための継続的必要性が存在する。
【０００３】
生殖細胞の変化、又は多型性は、生物のゲノム中に存在する遺伝的変異である。多型は、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）、短いタンデム反復（ＳＴＲ）、及び一塩基多型（ＳＮＰ）を含む。生殖細胞の変化は、癌を含む特定の疾患に対する感受性と関連することができる。（例えば、Vierimaa et al. (2006) Science 312:1228-1230; Landi et al. (2006) Science 313:521-522; Zhu et al. (2004) Cancer Research 64:2251-2257を参照）。従って、癌と関連付けられる多型を同定するための継続的必要性が存在する。
【０００４】
本発明の特定の実施態様の概要
本明細書に記載された発明は、上記の必要性を満たし、そして他の利点を提供する。
【０００５】
出願人は、バイオマーカーは、癌などの過剰増殖性疾患を治療する際のＡＫＴ阻害剤の有効性を予測することができることを発見した。
【０００６】
出願人は、ＡＫＴの特定の変異は、ＡＫＴのＰＨドメインとキナーゼドメイン間の相互作用を妨害する可能性があることを発見した。これらのドメイン間の分裂は、その変異（単数又は複数）によって引き起こされ、ＡＫＴの恒常的リン酸化および恒常的ＡＫＴシグナル伝達をもたらすと思われる。これらの効果はまた、細胞の形質転換を可能にする。これらの変異は、ＰＩ３Ｋ及びアロステリックＡｋｔ阻害剤に対する耐性を付与する。従って、そのような変異の存在は、ＰＩ３Ｋ及びアロステリックＡｋｔ阻害剤の有効投与量が多くなるであろうことを示し、また、ＡＴＰ競合的Ａｋｔ阻害剤など、ＰＩ３Ｋ及び／又はアロステリックＡｋｔ阻害剤以外の阻害剤が使用されるべきであることを示している。単独で、又は本明細書に記載の他のバイオマーカーと組み合わせたこのバイオマーカーの使用は、単独で、又は、５−ＦＵ、白金剤（カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチンなど）イリノテカン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ＳＮ−３８、カペシタビン、テモゾロミド、エルロチニブ、ＰＤ−０３２５９０１、パクリタキセル、ベバシズマブ、ペルツズマブ、タモキシフェン、ラパマイシン、ラパチニブ、ＰＬＸ−４０３２、ＭＤＶ３１００、アビラテロン、及びＧＤＣ−０９７３と他のＭＥＫ阻害剤などの別の治療用化合物と組み合わせて投与される、ＡＫＴ阻害剤に対する腫瘍細胞の増殖の感受性を予測するために有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、ＡＫＴ、及びＰＨとキナーゼドメインの相互作用を示し（図１Ａ及び１Ｂ）、また、これらのドメイン間の相互作用の位置を示している（１Ｃ）。
【図２】図２は、ＰＨドメインのキナーゼドメインとの相互作用を破壊すると考えられる場所での合成変異が、Ａｋｔの恒常的リン酸化を生じることを表す結果を示す。
【図３】図３は、体細胞変異を示す。
【図４】図４は、恒常的Ａｋｔリン酸化につながる体細胞変異は、恒常的ＡＫＴシグナルを導くことを示す結果を示す。
【図５】図５は、Ａｋｔ１の変異体は細胞を形質転換することができることを示す結果を示す。
【図６】図６は、Ａｋｔ１の変異体はＰＩ３Ｋ阻害剤とＡＫＴアロステリック阻害剤に対する耐性を付与することを示す結果を示す。
【図７】図７は、ＧＤＣ−００６８で処置された患者からの腫瘍におけるｐＰＲＡＳ４０  Ｔ２４６の変化を示す。
【図８】図８は、活性化されたＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路を持つ腫瘍を示す。
【図９】図９は、高ＡＫＴ活性プロファイルがＧＤＣ−００６８に対する感受性を予測することを表す結果を示す。
【図１０】図１０は、前立腺及び卵巣細胞株において、ＰＴＥＮ欠損とＧＤＣ−００６８に対する感受性との強い相関を実証する結果を示す。結果は、ＧＤＣ−００６８において正規化された単一化合物の用量応答のものである。
【図１１】図１１は、ＰＴＥＮ欠損とＰＩＫ３ＣＡ変異がインビトロでＧＤＣ−００６８単剤と強く相関していることを実証する結果を示す。
【図１２Ａ−１２Ｂ】図１２Ａと１２Ｂは、異種移植片モデルにおけるＧＤＣ−００６８単剤活性の結果とインビトロでの細胞株スクリーニングデータを示し、腫瘍増殖阻害の割合が最も高いことはまた、ＰＴＥＮの欠損又はＰＩ３Ｋ変異のどちらかによる経路活性化の証拠を有することを示している。強い有効性が、ＡＫＴ経路の活性化を持ち（かつＭＥＫ経路活性化を持たない）モデルで観察される。
【図１３】図１３は、様々な細胞株の感受性に対するＧＤＣ−００６８とＭＥＫ阻害剤の間の負の相関を示す結果を示す。
【図１４】図１４は、ＡＫＴ経路活性化（ＰＴＥＮ欠損、ＰＩ３Ｋ変異）を持つ細胞株における強い相乗効果を実証する結果を示す。ＢＬＩＳＳ解析は、ＭＥＫ阻害剤（ＧＤＣ−０９７３）と組み合わせたＧＤＣ−００６８の広い相乗効果を示している。
【図１５】図１５は、シスプラチン＋５ＦＵの併用効果はＡＫＴ経路活性化と関連していることの結果を示す。５ＦＵ／シスプラチン（ＦＯＬＦＯＸ）の組み合わせスクリーニングは、相加効果の証拠を示している。相加効果は経路活性化と関連している：ＰＴＥＮ、ｐＡＫＴ、ＰＩ３Ｋ変異。
【図１６】ＰＨ−キナーゼドメインの接触部位の変異はＡＫＴ活性化へと導く。（Ａ）空ベクター（ＥＶ）、野生型（ＷＴ）、ミリストイル化（Ｍｙｒ）又はＥ１７Ｋ ＡＫＴ１を単独又はＭＥＫ１ Ｎ３と一緒に安定的に発現する、ＢａＦ３細胞のＩＬ−３非依存性増殖。（Ｂ）アロステリック阻害剤と複合体化したＡＫＴのＰＨ及びＫＤの「明白な」表示（ＰＤＢ受託番号３Ｏ９６）。（Ｃ）ＡＫＴ１ ＰＨ−ＫＤ界面の変異の影響を評価するために用いられるスクリーニングを示す模式図。（Ｄ）ＰＨ−ＫＤ界面の変異はＢａＦ３細胞のＩＬ−３非依存性増殖を促進する。（Ｅ）空のベクター及び示されたＡＫＴ１コンストラクトを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロット解析。
【図１７】図１７ヒト癌における体細胞のＡＫＴ変異。ＡＫＴファミリーのメンバーでの体細胞変異。水平の黒い棒はＡＫＴ１、２、及び３にわたって保存される残基を示す。
【０００８】
詳細の記述
最近の構造研究では、ドメイン間の阻害的相互作用がＡＫＴの活性化の調節において重要な役割を果たしていることを示している。変異スクリーニングを使用して、Ａｋｔの活性化は、ＰＨ−キナーゼドメインの接触に関与する残基中の変異に起因し得ることをここに示す。さらに、ヒト癌において新規な変異の同定が報告されており、そのうちのいくつかはＰＨ−ＫＤ界面における残基を含む。
【０００９】
以前に同定された変異Ｅ１７Ｋに加えて、臨床サンプルで識別されたＡＫＴ１のＰＨドメイン変異体Ｌ５２Ｒおよびキナーゼドメイン変異体Ｄ３２３Ｈは、細胞の形質転換を媒介し、生体内で発癌性である。完全長ＡＫＴ１の構造を調べると、Ｅ１７、Ｌ５２及びＤ３２３はＰＨ−ＫＤ界面に位置することが明らかとなり、これらの位置での置換は、ＰＨ−ＫＤの結合を乱すと予測される。これと一致して、Ｌ５２Ｒ及びＤ３２３Ｈの双方は、２−ハイブリッドアッセイでｐＨ−ＫＤの結合弱める。かねてＥ１７Ｋの活性化のメカニズムは、改変された脂質結合特異性に起因している。これらの結果は、Ｅ１７Ｋ活性化の基礎となる更なるメカニズムであるべきドメイン間の相互作用の摂動を示唆している。まとめると、これらの知見は、本明細書で同定されたＡＫＴ１ ＰＨ−ＫＤの界面変異の発癌性は、ドメイン間接触の不安定化に起因することを示唆している。
【００１０】
ＡＫＴを含むＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ経路のメンバーを標的とした阻害剤は、現在様々な開発段階にある。以前の研究では、ＡＫＴのアロステリック阻害剤は、このような阻害剤が閉じた「ＰＨ−ｉｎ」コンフォメーションに優先的に結合するため、インタクトなＰＨ−ＫＤ界面を必要とすることが示されている。これと一致して、オープンな（「ＰＨ−ｏｕｔ」）コンフォメーションを好むＡＫＴの変異は、それらはＡＴＰ競合的阻害剤に対する感受性を保持しているが、アロステリックなＡＫＴ阻害剤に対する感受性の減少を示す。これは、Ａｋｔの変異状態は、クリニックでの阻害剤の選択に重要な意味を持っていることを示している。ＡＫＴ変異は、ナイーブな腫瘍におけるドライバーとして機能することができるが、また、ＡＫＴ経路の上流成分を標的とする薬剤に応答して腫瘍において生じ得る。
特定の実施態様では、Ｂ−Ｒａｆ変異又はＫ−Ｒａｓ変異の存在は負の予測因子である（即ち禁忌となる）、それらの患者は、ＧＤＣ−００６８などのＡＫＴ阻害剤を受けるように処置群から選択されるべきである。
【００１１】
ＧＤＣ−００６８、及び類似のＡＴＰ競合的阻害剤は、優先的に活性なＡｋｔを標的にし、Ａｋｔを脱リン酸化をブロックすることによって、高リン酸化状態であるが非活性化状態に固定する。ｐＡｋｔの増加は、ＧＤＣ−００６８及び似たようなＡＴＰ競合的阻害剤の作用にたいする薬力学的バイオマーカー（「ＰＤバイオマーカー」）として使用することができる。
【００１２】
本発明の特定の実施態様において、ｐＧＳＫ−３βまたはＰＲＡＳ４０は、ＧＤＣ−００６８のようなＡＫＴ阻害剤のための薬力学的バイオマーカーとして使用することができる。更に、特定の実施態様において、ＧＤＣ−００６８のような化合物の適切な投与量を、ＰＤバイオマーカー、例えば、ｐＧＳＫ−３βまたはＰＲＡＳ４０を使用して、ＡＫＴ経路の阻害に基づいて決定して調整することができる（図７を参照）。
【００１３】
また、ＧＤＣ−００６８及び類似のＡＴＰ競合的阻害剤は、Ａｋｔの過剰活性化に対してより活性であることが提案される。
【００１４】
活性なＡｋｔの優先的な標的化は、Ａｋｔの変異、ＰＴＥＮ欠損（ヘミ接合またはホモ接合のいずれか）、ＩＮＰＰ４Ｂ機能喪失、ＰＨＬＰＰ機能喪失、ＰＰ２Ａ機能喪失、ＰＩ３Ｋ変異およびＨｅｒ２及び／又はＨｅｒ３増幅に起因するものも含め、活性なＡｋｔの高定常状態レベルを有する腫瘍について、ＧＤＣ−００６８及び類似のＡＴＰ競合的阻害剤の治療指数を増加させるために癌遺伝子の付加と協調して作用し得る。
ＧＤＣ−００６８の有効性は、例えば前立腺癌、乳癌および卵巣癌などＰＴＥＮ欠損であるか又はＰＩ３ｋ変異を持つ腫瘍では予測されている。
【００１５】
ＰＴＥＮの欠損は、例えば膵臓癌において、ＭＥＫ阻害剤との相乗効果を予測するバイオマーカーである。
【００１６】
従って、ＧＤＣ−００６８の活性はＡＫＴ経路の活性化と関連し、例えば選択的に関連付けられている。この関係の証拠は、細胞株および異種移植片試験において実証された。
【００１７】
ＰＴＥＮの欠損、ＰＩ３Ｋキナーゼドメインの変異及び高ｐＡＫＴレベルは、化学療法化合物と併用して相加効果を持ち、かつ例えばＭＥＫ阻害剤とともに相乗効果を持つ、化合物の活性を例えば単剤として予測する重要なマーカーである。興味深いことに、ＭＥＫ阻害剤との相乗効果は、ＭＥＫ経路の活性化で見られる。逆に、ＭＥＫ経路（例えば、ＫＲＡＳ／ＢＲＡＦ）の活性化は、単剤（例えば、ＧＤＣ−００６８）の活性に対する耐性のマーカーである。化合物の活性、例えば、ＧＤＣ−００６８活性の他の潜在的な予測因子としては、ＲＴＫ駆動による経路活性化（乳癌でのＨＥＲ２及び胃癌でのＭｅｔ）、ＡＫＴ１のＥ１７Ｋ変異、ＡＫＴ２の増幅、ＡＫＴ３の過剰発現及びＰＩ３Ｋ増幅が含まれる。
【００１８】
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【００１９】
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切な場合はいつでも、単数で使用される用語はまたその逆も複数形を含む。以下に記載される任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれた任意の文書と競合する場合では、以下に記載の定義が優先されるものとする。
【００２０】
ここで交換可能に用いる「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを意味し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド又は塩基、及び／又はそれらの類似体(アナログ)、又はＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによりポリマー中に取り込み可能な任意の基質とすることができる。ポリヌクレオチドは、修飾されたヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体を含み得る。存在するならば、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーの集合化(「アセンブリ」とも言う)の前又は後になされ得る。ヌクレオチドの配列は非ヌクレオチド成分により中断されてもよい。ポリヌクレオチドは合成後に、例えば標識成分との結合によりさらに修飾されてもよい。他のタイプの修飾には、例えば「キャップ(caps)」、類似体との自然に生じたヌクレオチドの一又は複数の置換、ヌクレオチド間修飾、例えば非荷電連結(例えばホスホン酸メチル、ホスホトリエステル、ホスホアミダート、カルバマート等)及び荷電連結(ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート等)を有するもの、ペンダント部分、例えばタンパク質(例えばヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ-L-リジン等)を含むもの、インターカレータ(intercalators)を有するもの(例えばアクリジン、ソラレン等)、キレート剤を含むもの(例えば金属、放射性金属、ホウ素、酸化的金属等)、アルキル化剤を含むもの、修飾された連結を含むもの(例えばアルファアノマー核酸等)、並びにポリヌクレオチド(一又は複数)の未修飾形態が含まれる。さらに、糖類中に通常存在する任意のヒドロキシル基は、例えばホスホナート基、ホスファート基で置き換えられてもよく、標準的な保護基で保護されてもよく、又は付加的なヌクレオチドへのさらなる連結を調製するように活性化されてもよく、もしくは固体支持体に結合していてもよい。５'及び３'末端のＯＨはホスホリル化可能であり、又は１〜２０の炭素原子を有するアミン又は有機キャップ基部分で置換することもできる。また他のヒドロキシルは標準的な保護基に誘導体化されてもよい。さらにポリヌクレオチドは当該分野で一般的に知られているリボース又はデオキシリボース糖類の類似形態のものをさらに含み、これらには例えば２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ又は２’−アジド−リボース、炭素環式糖の類似体、アルファ−アノマー糖、エピマー糖、例えばアラビノース、キシロース類又はリキソース類、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、及び非塩基性ヌクレオシド類似体、例えばメチルリボシドが含まれる。一又は複数のホスホジエステル連結は代替の連結基で置き換えてもよい。これらの代替の連結基には、限定されるものではないが、ホスファートがＰ(Ｏ)Ｓ(「チオアート」)、Ｐ(Ｓ)Ｓ(「ジチオアート」)、「(Ｏ)ＮＲ２(「アミダート」)、Ｐ(Ｏ)Ｒ、Ｐ(Ｏ)ＯＲ'、ＣＯ又はＣＨ２(「ホルムアセタール」)と置き換えられた実施態様のものが含まれ、ここでそれぞれのＲ及びＲ'は独立して、Ｈ又は、エーテル(-Ｏ-)結合を含んでいてもよい置換もしくは未置換のアルキル(１−２０Ｃ)、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シ��ロアルケニル又はアラルジル(araldyl)である。ポリヌクレオチド中の全ての結合が同一である必要はない。先の記述は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含むここで引用される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００２１】
本明細書中で用いる「オリゴヌクレオチド」とは、短く、少なくとも７ヌクレオチド長であって約２００未満のヌクレオチド長の一本鎖ヌクレオチドを意味する。
【００２２】
オリゴヌクレオチドは合成であっても良い。「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」なる用語は、相互に排他的なものではない。ポリヌクレオチドについての上述した記載はオリゴヌクレオチドと等しく、十分に適用可能である。
【００２３】
「プライマー」は、核酸にハイブリダイズし、一般に遊離した３’−ＯＨ基を供給することにより、相補的なポリヌクレオチドの重合を促進する一本鎖ポリヌクレオチドである。
【００２４】
「ヌクレオチド変化（変異）」なる用語は、参照ポリヌクレオチド配列（例えば野生型配列）と比較した場合の、ポリヌクレオチド配列における変化（例えば、単一のヌクレオチド多型性（ＳＮＰ）のような、一以上のヌクレオチドのヌクレオチド挿入、欠失、逆位又は置換）を指す。この用語には、特に明記しない限り、ポリヌクレオチド配列の相補鎖における対応する変化も包含される。ヌクレオチド変化は、体細胞変異または生殖系列の多型であってもよい。
【００２５】
「アミノ酸変化（変異）」なる用語は、参照ポリペプチド配列（例えば野生型配列）と比較した場合の、ポリペプチド配列の特定のアミノ酸位（一又は複数）での変化（例えば一又は複数のアミノ酸の挿入、置換又は欠失、例えば、内部欠失又はＮ−又はＣ−末端トランケーションなど）を指す。
【００２６】
「検出」は、直接的及び間接的な検出を含む検出する任意の手段を含む。
【００２７】
本明細書中で用いる「診断」なる用語は、分子又は病理学的状態、疾患ないしは症状の同定又は分類を指す。例えば、「診断」は特定のタイプの癌、例えば、肺癌の同定を指し得る。「診断」はまた、例えば、組織学により（例えば、非小細胞肺癌）、分子の特徴による（例えば、特定の遺伝子又はタンパク質におけるヌクレオチド及び／又はアミノ酸変異（複数）により特徴付けられる肺癌）、あるいはその両方による、特定の型の癌の分類を指すことができる。
【００２８】
本明細書中で用いる「予後」なる用語は、癌のような腫瘍性疾患の再発、転移拡散、及び薬剤耐性を含む癌に起因し得る死又は進行の可能性の予測を意味する。
【００２９】
「予測」なる用語又は（及び予測するなどの変形）は、患者が薬剤又は一連の薬剤に対して有利又は不利に応答する可能性を意味する。一実施態様では、予測はその応答の程度に関する。別の実施態様では、予測は、例えば特定の治療的薬剤による治療及び／又は原発性腫瘍の外科的切除、及び／又は癌の再発を伴わない一定期間の化学療法などの治療の後に患者が生存しているか改善しているかどうか、及び／又はその可能性に関する。本発明の予測方法は、任意の特定の患者のために最も好適な治療様式を選択することによって、治療決定を臨床的に行うことができる。本発明の予測方法は、患者が、治療投薬計画、例えば特定の治療剤や組み合わせの投与、外科的介入、化学療法などを含む特定の治療投薬計画に有利に応答するかどうか、又は治療投薬計画の後に患者が長期に生存しているかどうかを予測する際の有用なツールである。
【００３０】
「細胞増殖性疾患」及び「増殖性疾患」は、無視できない程の異常な細胞増殖に関連した疾患を意味する。
【００３１】
一実施態様において、細胞増殖性疾患は癌である。
【００３２】
本明細書中で用いる「腫瘍」なる用語は、悪性、良性を問わず全ての腫瘍性細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を意味する。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」は、ここで述べられるように、相互に排他的ではない。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」という用語はここで意味するように相互排他的ではない。
【００３３】
用語「癌」及び「癌性」は、無秩序な細胞成長及び細胞増殖を典型的に特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を記述する。癌の例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含む。癌のより詳細な例は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、腎細胞癌、消化管癌、胃癌、食道癌、膵臓癌、グリオーマ、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌（例えば、内分泌抵抗性乳癌）、結腸癌、直腸癌、肺癌、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、メラノーマ、白血病及び他のリンパ球増殖性疾患、及び様々な型の頭部癌及び頸部癌が含まれる。
【００３４】
用語「肺腫瘍」は、限定されないが、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌（後者は限定されないが腺癌、扁平上皮癌、大細胞癌を含む）を含む肺の任意の腫瘍を指す。
【００３５】
「新生物」又は「腫瘍性細胞」は、対応する正常組織又は細胞よりも迅速に増殖する、又は増殖を惹起する刺激の除去後にも増殖し続ける異常な組織又は細胞を指す。
【００３６】
「肺腫瘍細胞」は、インビボまたはインビトロの何れかの肺腫瘍細胞を意味し、原発性肺腫瘍又は転移性肺腫瘍、並びにこのような細胞に由来する細胞株由来の細胞を包含する。
【００３７】
ここで使用される「治療」（及び「治療する」又は「治療している」などの変形）とは、治療される個体又は細胞の自然の経過を変化させる試みにおける臨床的介入を意味し、予防のため、又は臨床病理経過中に実施することができる。治療の所望する効果には、疾患の発症又は再発の予防、症状の緩和、疾病の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾病の進行速度の低減、病状の回復又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。
【００３８】
「個体」、「被検体」又は「患者」は脊椎動物である。特定の実施態様では、脊椎動物は哺乳動物である。哺乳動物には、これに限定されないが、家畜（例えばウシ）、スポーツ用動物、愛玩動物（例えばネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（ヒト及び非ヒト霊長類を含む）及び齧歯類（例えばマウス及びラット）が含まれる。特定の実施態様では、哺乳動物はヒトであり、男性又は女性の何れかのヒトであり得る。
【００３９】
「有効量」とは、所望される治療的又は予防的結果を達成するのに必要な期間、必要な用量での有効量を意味する。
【００４０】
個体に所望する反応を引き出すための本発明の物質／分子の「治療的有効量」は、病状、年齢、性別、個体の体重、及び物質／分子の能力等の要因に応じて変わり得る。治療的有効量とは、物質／分子の任意の毒性又は有害な影響を、治療的に有益な効果が上回る量を含む。「予防的有効量」は、所望する予防的結果を達成するのに必要な期間、用量で有効な量を意味する。必ずではないが、典型的には、予防的用量は、疾病の前又は初期の段階に患者に使用されるために、予防的有効量は治療的有効量よりも少ない。
【００４１】
本明細書中で用いる「長期の」生存なる用語は、治療的治療の後、少なくとも１年、５年、８年又は１０年の生存を指す。
【００４２】
本発明に従って用いられる場合、特定の治療薬又は治療選択に対する「耐性の増加」なる用語は、薬剤の標準的な用量又は標準的な治療手順に対する応答の減少を意味する。
【００４３】
本発明に従って用いられる場合、特定の治療薬又は治療選択に対する「感受性の減少」なる用語は、薬剤の標準的な用量又は標準的な治療手順に対する応答の減少を意味し、この応答の減少は薬剤の用量や治療の強度を増やすことによって、（少なくとも部分的に）補われうるものである。
【００４４】
「患者応答」は、限定するものではないが以下のものを含む患者に利益を示す任意のエンドポイントを使用して評価できる。（１）緩徐化又は完全な増殖停止を含む、ある程度の腫瘍増殖の阻害、（２）腫瘍細胞数の減少、（３）腫瘍サイズの減少、（４）近接する末梢器官及び／又は組織への腫瘍細胞浸潤の阻害（例えば減少、緩徐化又は完全な停止）、（５）転移の阻害（例えば減少、緩徐化又は完全な停止）、（６）必ずではないが腫瘍の退縮又は拒絶が生じ得る抗腫瘍免疫応答の亢進、（７）腫瘍と関連する一又は複数の症状の、ある程度の軽減、（８）治療後の生存期間の増加、及び／又は（９）治療後の特定の時点での死亡率の減少。
【００４５】
「抗体」（Ａｂ）及び「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、類似の構造的特徴を有する糖タンパク質を意味する。抗体は、特定の抗原に対して結合特異性を示すが、免疫グロブリンは、抗体と、一般に抗原特異性を欠く抗体様分子の双方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えばリンパ系では低レベルで、骨髄腫では高レベルで産出される。
【００４６】
「抗体」及び「免疫グロブリン」なる用語は、最も広義で相互に交換可能に使用され、モノクローナル抗体（例えば、全長又は無傷のモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物活性を示す限り二重特異性抗体）が含まれ、さらにある種の抗体断片（ここに詳細に記載されるもの）も含まれ得る。抗体は、キメラ、ヒト、ヒト化及び／又は親和成熟したものであってよい。
【００４７】
「ＦＯＸＯ３ａ」とは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴキナーゼシグナル伝達経路の下流標的であるフォークヘッド／ウィングドヘリックスボックスクラスＯタンパク質を指す。活性化されたＡＫＴキナーゼはリン酸化によりＦＯＸＯ３ａの活性を直接制御し、その移行を細胞質に導き、ここでそれは１４−３−３シャペロンタンパク質によって隔離される。ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴキナーゼの阻害はＦＯＸＯ３ａの脱リン酸化及び核局在を導き、その活性化をもたらす。ＦＯＸＯ３ａの核局在は、それを転写因子として作用させ、ｐ２７Ｋｉｐ１及びＢｉｍ等の主要標的のアップレギュレーションを通して細胞周期停止及び／又はアポトーシスを導く。
【００４８】
「局在プロファイル」とは、第二の位置における量と比較した、一位置における任意分子の量を指す。一実施例では、ＦＯＸＯ３ａ局在プロファイルは、細胞細胞質における量と比較した細胞核におけるＦＯＸＯ３ａの量を指す。局在プロファイルは、比（例えば核におけるＦＯＸＯ３ａの量／細胞質におけるＦＯＸＯ３ａの量）又は減算（例えば核におけるＦＯＸＯ３ａの量−細胞質におけるＦＯＸＯ３ａの量）において表されることができる。「核局在プロファイル」とは、細胞質より核において実質的により高いＦＯＸＯ３ａレベルを有すると決定される局在プロファイルを指す。一実施例では、核局在プロファイルは、細胞質より核において約５０％より大きいＦＯＸＯ３ａを有する。他の実施例では、核局在プロファイルは、細胞質より核において約７０％より大きい、あるいは約８０％より大きい、あるいは約９０％より大きいＦＯＸＯ３ａを有する。「核局在プロファイル」とは、細胞質より核において実質的により高いＦＯＸＯ３ａレベルを有すると決定される局在プロファイルを指す。一実施例では、核局在プロファイルは、細胞質より核において約５０％より大きいＦＯＸＯ３ａを有する。他の実施例では、核局在プロファイルは、細胞質より核において約７０％より大きい、あるいは約８０％より大きい、あるいは約９０％より大きいＦＯＸＯ３ａを有する。
【００４９】
従って、一態様では、腫瘍細胞においてＦＯＸＯ３ａの局在化プロファイルを決定することを含む、ＡＫＴキナーゼ経路阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を包含し、ここではＦＯＸＯ３ａを細胞質局在化プロファイルは、ＡＫＴキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性と相関し、そしてＦＯＸＯ３ａの核局在化プロファイルは、ＡＫＴキナーゼ阻害剤による阻害に対する抵抗性と相関している。
【００５０】
「ｐＡＫＴプロファイル」とは、任意のサンプルにおける、非活性化又は非リン酸化ＡＫＴのレベルと比較した、ＡＫＴの活性化又はリン酸化（「ｐＡＫＴ」）のレベルを指す。一実施例では、サンプルは腫瘍細胞である。ｐＡＫＴプロファイルは、比（例えば腫瘍細胞におけるｐＡＫＴの量／該細胞又は同じタイプの非腫瘍細胞における非リン酸化ＡＫＴの量）又は減算（例えば腫瘍細胞におけるｐＡＫＴの量−該細胞又は同じタイプの非腫瘍細胞における非リン酸化ＡＫＴの量）において表されることができる。ｐＡＫＴプロファイルはまた、ＡＫＴリン酸化の下流標的（例えば、ｐＧＳＫ又はＰＲＡＳ４０）の量を測定することによって経路の活性化のレベルを単位として表現することができる。「高ｐＡＫＴプロファイル」とは、ベースライン値より高い、サンプルにおける全体ＡＫＴの活性化又はリン酸化レベルを指す。一実施例では、ベースライン値は、任意の細胞タイプのｐＡＫＴの基礎レベルである。別の実施例では、ベースライン値は、任意のサンプル細胞集団におけるｐＡＫＴのアベレージ又は平均である。別の実施例では、「高ｐＡＫＴプロファイル」とは、細胞において増幅されたリン酸化又は活性化ＡＫＴを過剰発現する又は有する腫瘍細胞を指し、同じ哺乳類又は患者集団からの同じタイプの正常で健康な（例えば非腫瘍性）細胞のアベレージと比較される。一例が図９に示され、高ｐＡＫＴプロファイルがＡＫＴ阻害剤、例えばＧＤＣ−００６８に対する感受性を予測することを実証している。ｐＡＫＴプロファイルはまた、特定のＰＩ３ｋ／ＡＫＴキナーゼ経路阻害剤の効果を予測するために他のマーカー（例えばＦＯＸＯ３ａ局在プロファイル）との組合せにおいて使用されてもよい。
【００５１】
サンプルにおけるＡＫＴ活性化のレベル及びｐＡＫＴの量を測定する方法は、当分野で知られている。例えば、AKT Activity Assay Kit (Abcam（登録商標）, San Francisco, CAから入手可能）等の免疫沈降アッセイが使用され得る。別の実施例では、AKT Western Blot Assay Kit (Cell Signaling Technology, Danvers, MAから入手可能）等のウエスタンブロットアッセイが使用され得る。ｐＡＫＴレベル測定のための知られているほかのアッセイフォーマットは、ケミルミネッセンス結合免疫吸着法を含み、Cicenas, J, et. al., “Increased level of phosphorylated akt measured by chemiluminescence-linked immunosorbent assay is a predictor of poor prognosis in primary breast cancer overexpressing ErbB-2," Breast Can. Res., 7(4), R394, 2005を参照のこと。使用されうる他のアッセイも利用可能であり、例えばAlphaScreen SureFire Akt 1 (p-Thr308) Assay Kit (Perkin Elmer, Waltham, MAから入手可能）である。
【００５２】
ＰＩ３Ｋ変異の存在を決定する方法は当該分野で知られている。例えば、リアルタイムＰＣＲを用いたＰＩＫ３ＣＡ遺伝子における特定の変異の検出のためのアッセイは（エキソン９及び２０、そしてまたＨ１０４７Ｒ又はＨ１０４７Ｌ変異において）公知である（Qiagen, Valencia, CAから入手できる）。
【００５３】
核酸は、ゲノムＤＮＡ；ゲノムＤＮＡから転写されるＲＮＡ；又はＲＮＡから生成されるｃＤＮＡであってもよい。核酸は、脊椎動物（例えば哺乳動物）に由来してもよい。核酸は、その供給源から直接得られる場合、又はそれがその供給源において見出される核酸のコピーである場合、特定の供給源に「由来する」という。
【００５４】
核酸及びアミノ酸配列における変異は、当業者に周知の方法によって検出され得る。この種の方法は、ＤＮＡ塩基配列決定、アレル特異的ヌクレオチド取り込みアッセイ及びアレル特異的プライマー伸長アッセイ（例えばアレル特異的ＰＣＲ、アレル特異的ライゲーション連鎖反応（ＬＣＲ）及びｇａｐ−ＬＣＲ）を含むプライマー伸長アッセイ；アレル特異的オリゴヌクレオチド・ハイブリダイゼーション検定法（例えばオリゴヌクレオチド・ライゲーション・アッセイ）；切断剤からの保護を核酸デュプレックスのミスマッチ塩基を検出するために用いる切断保護アッセイ；ＭｕｔＳタンパク質結合の分析；変異体及び野生型核酸分子の可動性を比較する電気泳動的解析；、変性こう配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ、例えばMyers et al. (1985) Nature 313:495に記載）；ミスマッチ塩基対のＲＮアーゼ切断の分析；ヘテロ二本鎖ＤＮＡの化学的又は酵素による切断の分析；マススペクトル分析（例えばＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）；遺伝子のビット分析（ＧＢＡ）；５’ヌクレアーゼ・アッセイ（例えばＴａｑＭａｎ（登録商標））；及び分子ビーコンを用いたアッセイを含むが、これに限定されるものではない。これらの方法のいくつかは、以下でより詳細に検討される。
【００５５】
標的核酸変異の検出は、その分野で公知の技術を用いて、標的核酸分子クローニング及び配列決定により達成され得る。あるいは、ポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）のような増幅技術を、腫瘍組織のゲノムＤＮＡ標本から直接標的核酸配列を増幅するために用いることができる。増幅された配列の核酸配列が決定され、変異が同定される。増幅技術はその分野で公知であり、例えば、ＰＣＲはSaiki et al., Science 239:487, 1988；米国特許第４６８３２０３号及び同第４６８３１９５号において記載される。
【００５６】
その分野で公知であるリガーゼ連鎖反応もまた、標的核酸配列を増幅するために用いることができる。例えばWu et al., Genomics 4:560-569 (1989)を参照。さらにアレル特異的ＰＣＲとして公知の技術もまた、変異（例えば置換）を検出するために用いることができる。例えば、Ruano and Kidd (1989) Nucleic Acids Research 17:8392; McClay et al.(2002) Analytical Biochem.301:200-206を参照。この技術のある実施態様において、アレル特異的プライマーを用いることができ、そのプライマーの３’末端ヌクレオチドは標的核酸における特定の変異に相補的である（すなわち、特異的に塩基対合できる）。特定の変異がない場合、増幅産物は観察されない。Amplification Refractory Mutation System(ARMS)もまた、変異（例えば置換）を検出するために用いることができる。ＡＲＭＳは、例えば、ヨーロッパ特許出願公開番号０３３２４３５及びNewton et al., Nucleic Acids Research, 17:7, 1989において記載される。
【００５７】
変異（例えば置換）を検出するために有用な他の方法は（１）単一塩基伸長アッセイなどのアレル特異的ヌクレオチド取り込みアッセイ（Chen et al. (2000) Genome Res. 10: 549-557;Fan et al. (2000) Genome Res. 10: 853-860;Pastinen et al. (1997) Genome Res. 7: 606-614；及びYe et al. (2001) Hum. Mut. 17: 305-316)参照）；（２）アレル特異的ＰＣＲを含むアレル特異的プライマー伸長アッセイ(Ye et al. (2001) Hum. Mut. 17: 305-316;及びShen et al. Genetic Engineering News, vol. 23, Mar. 15, 2003参照）；（３）５’ヌクレアーゼアッセイ（De La Vega et al. (2002) BioTechniques 32:S48-S54（ＴａｑＭａｎ（登録商標）アッセイを記載）; Ranade et al. (2001) Genome Res. 11: 1262-1268；及びShi (2001) Clin. Chem. 47:164-172参照）；（４）分子ビーコンを用いるアッセイ(Tyagi et al. (1998) Nature Biotech. 16:49-53;及びMhlanga et al. (2001) Methods 25:463-71参照）；及び、（５）オリゴヌクレオチド・ライゲーション・アッセイ（Grossman et al. (1994) Nuc. Acids Res. 22: 4527-4534;米国特許出願公開番号ＵＳ２００３／０１１９００４ Ａ１；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ０１／９２５７９ Ａ２；及び米国特許第６０２７８８９号参照）を含むが、これに限定されるものではない。
【００５８】
変異は、ミスマッチ検出法によってもまた検出され得る。ミスマッチは、１００％相補的でないハイブリダイズされた二本鎖核酸である。完全な相補性の欠如は、欠失、挿入、逆転又は置換に起因している場合がある。ミスマッチ検出法の１つの例は、例えば、Faham et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 102:14717-14722 (2005)及びFaham et al., Hum. Mol. Genet. 10:1657-1664 (2001)において記載されるミスマッチ修復検出（（Mismatch Repair Detection）(MRD)）アッセイである。他のミスマッチ切断技術の例は、ＲＮアーゼ保護法であり、Winter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:7575, 1985及びMyers et al., Science 230:1242, 1985においてその詳細が記載される。例えば、本発明の方法は、ヒト野生型標的核酸に相補的な標識化されたリボプローブを用いてもよい。組織サンプルの由来される標的核酸及びリボプローブは、共にアニール（ハイブリダイズ）され、二本鎖ＲＮＡ構造におけるいくつかのミスマッチを検出することが可能な酵素ＲＮアーゼＡによってその後消化される。ミスマッチがＲＮアーゼＡによって検出されると、ミスマッチの部位で切断される。したがって、アニールされたＲＮＡ標本が電気泳動的ゲルマトリックスに分離され、ミスマッチが検出されてＲＮアーゼＡによって切断された場合、リボプローブ及びｍＲＮＡもしくはＤＮＡに対して全長二本鎖ＲＮＡより小さいＲＮＡ産物が確認される。リボプローブは、標的核酸の完全長である必要はなく、それが変異を有すると推測される位置を含むならば標的核酸の一部であってもよい。
【００５９】
これと同様の方法で、例えば酵素的もしくは化学的な切断を通して、ミスマッチを検出するためにＤＮＡプローブを用いることができる。例えばCotton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:4397, 1988;及びShenk et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72:989, 1975を参照。あるいは、ミスマッチは、マッチする二本鎖と比較して、ミスマッチ二本鎖の電気泳動易動度の変動によって検出することができる。例えば、Cariello, Human Genetics, 42:726, 1988を参照。変異を含むと推測される標的核酸は、リボプローブ又はＤＮＡプローブのいずれかにより、ハイブリダイゼーションの前に増幅されてもよい。特に標的核酸の変化が、大きな再配列（例えば欠失及び挿入）である場合、その変化はサザンハイブリダイゼーションを用いても検出できる。
【００６０】
標的核酸又は周囲のマーカー遺伝子に対する制限断片長多形性（ＲＦＬＰ）プローブを、変異（例えば挿入又は欠失）の検出に用いることができる。挿入及び欠失を、標的核酸のクローニング、配列決定及び増幅により検出することができる。一本鎖ＤＮＡ高次構造多型（ＳＳＣＰ）分析もまた、アレルの塩基変化変異体の検出に用いることができる。例えば、Orita et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:2766-2770, 1989, and Genomics, 5:874-879, 1989を参照。
【００６１】
本発明は、本発明の方法を行うのに適した種々の組成物をも提供する。例えば、本発明は、この種の方法で用いられるアレイを提供する。一実施態様において、本発明のアレイは、本発明の変異を検出するために有用な、個人の核酸分子又は核酸分子のコレクションを含む。例えば、本発明のアレイは、一連の別々に配置された個々のアレル特異的オリゴヌクレオチド又はアレル特異的オリゴヌクレオチドのセットを含んでもよい。固体基質（例えばスライドグラス）に核酸を結合させるためのいくつかの技術は、その分野において周知である。１つの方法は、固体基質（例えばアミン基、アミン基の誘導体又は正電荷を有する他のグループ）に給合可能な反応性成分を含む修飾塩基又はアナログを、合成される核酸分子に組み込むことである。それから、合成された産物を、固体基質（例えばアルデヒド又は他の反応基を有するコーティング付きスライドグラス）に接触させる。アルデヒド又は他の反応基は、増幅された産物上で反応性成分と共有結合を形成し、スライドグラスに共有結合する。アミノプロピルシリカ（amino propryl silican）界面化学を用いるような他の方法もまた公知技術である。
【００６２】
上記の方法のいずれかによると、生体試料は当業者に周知である特定の方法を用いて得られる。生体試料は、脊椎動物、特に哺乳動物から得られてもよい。組織生検は、腫瘍組織の典型的な試験片を得るために、たびたび用いられる。あるいは、腫瘍細胞は、公知の、又は興味がある腫瘍細胞を含むと考えられる組織又は体液の形で間接的に得られることができる。例えば、肺癌病変の試料は、切除、気管支鏡検査法、微細な針穿刺吸引、気管支擦過法によるか、痰肋膜体液又は血液から、得られてもよい。標的核酸（又はコード化されたポリペプチド）の変異は、腫瘍試料又は他の体試料（例えば尿、痰又は血清）から検出され得る。癌細胞は、腫瘍から脱落し、この種の体試料に出現する。
【００６３】
この種の体試料のスクリーニングにより、疾患（例えば癌）の簡潔な早期診断が達成される。さらに、治療の進捗は、標的核酸（又はコード化されたポリペプチド）における変異について、この種の体試料を検査することによって、より容易にモニターすることができる。さらに腫瘍細胞の組織標本を拡充するための方法は、この分野において公知である。例えば、組織は、パラフィン又はクリオスタット切片から単離されてもよい。癌細胞は、フローサイトメトリー又はレーザーキャプチャーマイクロダイセクションにより正常細胞から分離され得る。
【００６４】
ＡＫＴキナーゼ阻害剤
特定のＡＫＴキナーゼ阻害剤は、ＡＫＴの活性部位への結合に関してＡＴＰと競合するそれらの能力のため、ＡＴＰ競合的阻害剤として知られている。アロステリック阻害剤として知られている特定のＡＫＴキナーゼ阻害剤は、ＡＫＴの活性部位に結合しない。また、ＡＫＴキナーゼ阻害剤は、パン−ＡＫＴ阻害剤であることができ、ここで阻害剤は、ＡＫＴ−１、ＡＫＴ−２及びＡＫＴ−３の２以上の活性を阻害することができることを特徴とする。ＡＫＴキナーゼ阻害剤は、選択的ＡＫＴ阻害剤であることができ、ここでその阻害剤は、他の二つの活性を阻害することなく、ＡＫＴ−１、ＡＫＴ−２及びＡＫＴ−３の活性を阻害することができることを特徴とする。
【００６５】
一実施態様では、ＡＫＴキナーゼ阻害剤は、ＡＴＰ競合的阻害剤である。その他の実施態様において、ＡＴＰ競合的阻害剤は、パン−ＡＫＴ阻害剤である。例えば、特定の実施態様において、Ａｋｔ阻害剤は、式ＩのＡＴＰ競合的、パン−ＡＫＴ阻害剤
2020022457.tif 000003
及びその互変異性体、分割エナンチオマー、分割ジアステレオマー、溶媒和物、及び塩であって、ここで
Ｒ１はＨ、Ｍｅ、Ｅｔ及びＣＦ３であり、
Ｒ２はＨ又はＭｅであり、Ｒ５はＨ又はＭｅであり、
Ａは
2020022457.tif 000004
であり、
ここでＧは１〜４のＲ９基で置換されていてもよいフェニル又はハロゲンで置換されていてもよい５-６員のヘテロアリールであり、
Ｒ６及びＲ７は独立して、Ｈ、ＯＣＨ３、(Ｃ３-Ｃ６シクロアルキル)-(ＣＨ２)、(Ｃ３-Ｃ６シクロアルキル)-(ＣＨ２ＣＨ２)、Ｖ-(ＣＨ２)０-１であり、ここでＶは５-６員のヘテロアリール、Ｗ-(ＣＨ２)１-２であり、ここでＷはフェニル(Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＭｅ、ＣＦ３又はＭｅで置換されていてもよい)、Ｃ３-Ｃ６-シクロアルキル(Ｃ１-Ｃ３アルキル又はＯ(Ｃ１-Ｃ３アルキル)で置換されていてもよい)、ヒドロキシ-(Ｃ３-Ｃ６-シクロアルキル)、フルオロ-(Ｃ３-Ｃ６-シクロアルキル)、ＣＨ(ＣＨ３)ＣＨ(ＯＨ)フェニル、４-６員の複素環(Ｆ、ＯＨ、Ｃ１-Ｃ３アルキル、シクロプロピルメチル又はＣ(＝Ｏ)(Ｃ１-Ｃ３アルキル)で置換されていてもよい)、又はＣ１-Ｃ６-アルキル(ＯＨ、オキソ、Ｏ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、ＣＮ、Ｆ、ＮＨ２、ＮＨ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、Ｎ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)２、シクロプロピル、フェニル、イミダゾリル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、オキセタニル又はテトラヒドロピラニルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよい)であり、又はＲ６及びＲ７はそれらが結合する窒素と共に、ＯＨ、ハロゲン、オキソ、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、Ｏ(Ｃ１-Ｃ３アルキル)、Ｃ(＝Ｏ)ＣＨ３、ＮＨ２、ＮＨＭｅ、Ｎ(Ｍｅ)２、Ｓ(Ｏ)２ＣＨ３、シクロプロピルメチル及びＣ１-Ｃ３アルキルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよい４-７員の複素環を形成し、
Ｒａ及びＲｂはＨであるか、又はＲａはＨであり、Ｒｂ及びＲ６はそれらが結合する原子と共に、１又は２つの環窒素原子を有する５-６員の複素環し、
Ｒｃ及びＲｄはＨ又はＭｅであるか、又はＲｃ及びＲｄはそれらが結合する原子と共にシクロプロピル環を形成し、
Ｒ８はＨ、Ｍｅ、Ｆ又はＯＨであるか、又はＲ８及びＲ６はそれらが結合する原子と共に、１又は２つの環窒素原子を有する５-６員の複素環を形成し、
各Ｒ９は独立してハロゲン、Ｃ１-Ｃ６-アルキル、Ｃ３-Ｃ６-シクロアルキル、Ｏ-(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｓ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、ＣＮ、ＯＣＨ２-フェニル、ＣＨ２Ｏ-フェニル、ＮＨ２、ＮＨ-(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、Ｎ-(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)２、ピペリジン、ピロリジン、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＯＣＨ２Ｆ、ＯＣＨＦ２、ＯＨ、ＳＯ２(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、Ｃ(Ｏ)ＮＨ２、Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、及びＣ(Ｏ)Ｎ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)２であり、
Ｒ１０はＨ又はＭｅであり、
ｍ、ｎ及びｐは独立して０又は１である。
【００６６】
別の実施態様は、式ＩのＡＫＴ阻害剤を含み、ここでＲ１はメチルであり、Ｒ２、Ｒ５及びＲ１０はＨであり、Ｇは１−３のＲ９で置換されていてもよいフェニルであり、Ｒ９はハロゲン、Ｃ１−Ｃ３アルキル、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３ＯＣＨ３又はＯＣＨ２フェニルであり、Ｒｃ及びＲｄはＨ又はメチルであり、ｍ、ｎ及びｐは０又は１であり、Ｒ８はＨ又はメチルであるＡＫＴ阻害剤を含む。
【００６７】
別の実施態様は、次から選択される式ＩのＡＫＴ阻害剤含む：
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン ジヒドロクロリド；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン ジヒドロクロリド；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン ジヒドロクロリド；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-メトキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン ジヒドロクロリド；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン ジヒドロクロリド；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((Ｓ)-７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((Ｓ)-７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(２Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-((３Ｓ)-４-((５Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(２Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-(７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メトキシフェニル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((Ｒ)-７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-(７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン ジヒドロクロリド；
２-(４-クロロフェニル)-３-(イソプロピルアミノ)-１-(４-(７-メトキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(３,４-ジフルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(ピリジン-３-イルメチルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(２,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(ペンタン-３-イルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-((１Ｓ,２Ｒ)-１-ヒドロキシ-１-フェニルプロパン-２-イルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((１Ｒ,４Ｒ)-４-ヒドロキシシクロヘキシルアミノ)プロパン-１-オン；
((３Ｓ,４Ｒ)-４-(３,４-ジクロロフェニル)ピロリジン-３-イル)(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)メタノン；
((３Ｒ,４Ｓ)-４-(３,４-ジクロロフェニル)ピロリジン-３-イル)(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)メタノン；
２-(４-クロロフェニル)-２-ヒドロキシ-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
４-アミノ-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-メチルペンタン-１-オン；
４-アミノ-２-(３,４-ジフルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-メチルペンタン-１-オン；
(４-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)ピペリジン-４-イル)(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)メタノン；
(３-(４-クロロフェニル)ピロリジン-３-イル)(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)メタノン；
１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)-２-ｐ-トリルプロパン-１-オン；
１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)-２-(４-メトキシフェニル)プロパン-１-オン；
３-(エチルアミノ)-２-(４-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(メチルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(ピロリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((Ｓ)-７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((Ｒ)-７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((Ｒ)-７-ヒドロキシ-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ)-７-ヒドロキシ-５,７-ジメチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(４-(３,４-ジクロロフェニル)ピペリジン-４-イル)(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)メタノン ジヒドロクロリド；
４-(３,４-ジクロロフェニル)ピロリジン-３-イル)(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)メタノン ジヒドロクロリド；
１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(４-メトキシフェニル)-３-(ピロリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(２,２,２-トリフルオロエチルアミノ)プロパン-１-オン；
３-(ｔｅｒｔ-ブチルアミノ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(メチル(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-クロロチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)-２-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
４-(１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)-１-オキソプロパン-２-イル)ベンゾニトリル；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
３-(アゼチジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(３-ヒドロキシアゼチジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(ネオペンチルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-(４-フルオロピペリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-((Ｓ)-３-フルオロピロリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-(エチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピル(メチル)アミノ)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-(４,４-ジフルオロピペリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-(３,３-ジフルオロピロリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(４-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-３-(３,４-ジフルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-((Ｒ)-３-フルオロピロリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)-２-(４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(シクロプロピルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(３-ヒドロキシアゼチジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(３-ヒドロキシアゼチジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-４-アミノ-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-メチルペンタン-１-オン；
(Ｓ)-４-アミノ-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-メチルペンタン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((Ｒ)-ピロリジン-３-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((Ｓ)-ピロリジン-３-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-((Ｒ)-１-アセチルピロリジン-３-イルアミノ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-((Ｓ)-１-アセチルピロリジン-３-イルアミノ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(ピペリジン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(１-アセチルピペリジン-４-イルアミノ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(２-メトキシエチルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-４-(ジメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)ブタン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((１ｒ,４Ｓ)-４-ヒドロキシシクロヘキシルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(アゼチジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(アゼチジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-((Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-オキソプロピルアミノ)アセトアミド；
２-((Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-オキソプロピルアミノ)-Ｎ,Ｎ-ジメチルアセトアミド；
２-((Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-オキソプロピルアミノ)-Ｎ-メチルアセトアミド；
(Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(イソプロピルアミノ)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-４-(ジメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(イソブチルアミノ)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-((２-メトキシエチル)(メチル)アミノ)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(イソプロピルアミノ)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(３-ヒドロキシアゼチジン-１-イル)ブタン-１-オン；
２-((Ｒ)-３-(４-ブロモフェニル)-４-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-オキソブチルアミノ)-Ｎ,Ｎ-ジメチルアセトアミド；
(Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(２-ヒドロキシエチルアミノ)ブタン-１-オン；
(２Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-４-(２-ヒドロキシ-１-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)エチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-アミノ-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヨードフェニル)プロパン-１-オン；
４-((Ｒ)-２-アミノ-３-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-オキソプロピル)ベンゾニトリル；
(Ｒ)-２-アミノ-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(メチルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-(２-ヒドロキシエチル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-(２-ヒドロキシエチル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(３-メトキシアゼチジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-４-(シクロヘキシルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ブタン-１-オン；
(２Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(２-ヒドロキシプロピルアミノ)ブタン-１-オン；
(２Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-４-(２-ヒドロキシ-１-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)エチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)ブタン-１-オン；
(２Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-４-(２-ヒドロキシ-１-フェニルエチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)ブタン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(エチル(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)アミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(２-メトキシエチルアミノ)ブタン-１-オン；
(２Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(３,３,３-トリフルオロ-２-ヒドロキシプロピルアミノ)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-((１-ヒドロキシシクロプロピル)メチルアミノ)ブタン-１-オン；
２-((Ｒ)-３-(４-ブロモフェニル)-４-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-オキソブチルアミノ)アセトアミド；
(Ｒ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-４-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)ブタン-１-オン；
(Ｒ)-４-(３-(１Ｈ-イミダゾール-１-イル)プロピルアミノ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)ブタン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-モルフォリノプロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-モルフォリノプロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(３-アミノアゼチジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(３-アミノアゼチジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-チオモルホリノプロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-チオモルホリノプロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-フルオロピペリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-フルオロピペリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(３-メトキシアゼチジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(３-メトキシアゼチジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(ジメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-フルオロ-３-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(メトキシアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メトキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メトキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(４-アミノピペリジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-アミノピペリジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(メチル(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピル(メチル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-(メチルスルホニル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-(メチルアミノ)ピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-(メチルアミノ)ピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-エチルピペラジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-エチルピペラジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-((Ｓ)-３-(ジメチルアミノ)ピロリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-((Ｓ)-３-(ジメチルアミノ)ピロリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((Ｒ)-テトラヒドロフラン-３-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((Ｒ)-テトラヒドロフラン-３-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(２-フルオロエチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-フルオロ-３-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３,５-ｂｉｓ(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-メトキシフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
４-((Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-オキソプロピル)ピペラジン-２-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((Ｒ)-３-ヒドロキシピロリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-(ジメチルアミノ)ピペリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-(ジメチルアミノ)ピペリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-クロロ-５-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-ブロモ-４-メトキシフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(ピペリジン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(１-アセチルピペリジン-４-イルアミノ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-((Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-１-オキソプロパン-２-イルアミノ)-Ｎ-イソプロピルアセトアミド；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-２-(ジメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(２-モルホリノエチルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-((Ｓ)-４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)-３-メチルピペラジン-１-イル)-２-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
２-((Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-１-オキソプロパン-２-イルアミノ)-Ｎ,Ｎ-ジメチルアセトアミド；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(１,４-オキサゼパン-４-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(１,４-オキサゼパン-４-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(２-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(シクロヘキシルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(シクロヘキシルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メトキシシクロヘキシルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((Ｓ)-テトラヒドロフラン-３-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルテトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(２-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)エチルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(３,３,３-トリフルオロプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-((テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル)メチルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(イソプロピル(メチル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(ｔｅｒｔ-ブチルアミノ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(ｔｅｒｔ-ブチルアミノ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-モルフォリノプロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)-２-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
３-((Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-オキソプロピルアミノ)プロパンアミド；
３-((Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-オキソプロピルアミノ)プロパンアミド；
(４-(４-クロロフェニル)ピペリジン-４-イル)(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)メタノン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３,５-ジフルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-((Ｒ)-３-アミノピロリジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-((Ｒ)-３-アミノピロリジン-１-イル)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-モルフォリノプロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-モルフォリノプロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(４-エチルピペラジン-１-イル)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-エチルピペラジン-１-イル)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-３-(４-アセチルピペラジン-１-イル)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(ビス(シクロプロピルメチル)アミノ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-３-((シクロプロピルメチル)(メチル)アミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)-２-(４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-((３Ｓ,５Ｒ)-３,５-ジメチルピペラジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-クロロフェニル)-３-((２Ｓ,６Ｒ)-２,６-ジメチルモルホリノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-((２Ｓ,６Ｒ)-２,６-ジメチルモルホリノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-((３Ｓ,５Ｒ)-３,５-ジメチルピペラジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-メチルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３,４-ジクロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-イソプロピルピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)-２-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-２-(２-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(４-ブロモ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(４-ヒドロキシピペリジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピル(メチル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-ブロモ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-ブロモ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピル(メチル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(４-クロロ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
２-(４-クロロフェニル)-３-((３Ｓ,４Ｒ)-４-(ジメチルアミノ)-３-フルオロピペリジン-１-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-２-フルオロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(ｔｅｒｔ-ブチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-２-フルオロフェニル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-２-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)-２-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-２-(４-(トリフルオロメチル)フェニル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-３-(ｔｅｒｔ-ブチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソブチルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-３-(シクロペンチルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロ-３-フルオロフェニル)-３-(シクロペンチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(２-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピル(メチル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-((２-ヒドロキシエチル)(イソプロピル)アミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(２-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(２-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-アミノ-２-(２-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメチル)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-２-(３-フルオロ-４-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-３-(４,４-ジメチルシクロヘキシルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-ブロモフェニル)-３-(３,３-ジメチルシクロヘキシルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(４,４-ジメチルシクロヘキシルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(４-クロロフェニル)-３-(３,３-ジメチルシクロヘキシルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)-２-(チオフェン-２-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-ブロモチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-ブロモチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-ブロモチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｒ)-２-(５-ブロモピリジン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-ブロモピリジン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-ブロモチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-ブロモチオフェン-２-イル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-クロロチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-クロロチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(イソプロピルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-クロロチオフェン-２-イル)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)-３-(テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イルアミノ)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-クロロチオフェン-２-イル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｒ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；
(Ｓ)-２-(５-クロロチオフェン-２-イル)-３-(シクロプロピルメチルアミノ)-１-(４-((５Ｒ,７Ｓ)-７-ヒドロキシ-５-メチル-６,７-ジヒドロ-５Ｈ-シクロペンタ[ｄ]ピリミジン-４-イル)ピペラジン-１-イル)プロパン-１-オン；及び
その塩。
【００６８】
別の実施態様は、式ＩのＡＫＴ阻害剤を含み、次の化合物をふくむ：
2020022457.tif 000005
2020022457.tif 000006
及びその塩。
【００６９】
式Ｉの化合物の調製
式Ｉの化合物は、米国特許公開第２００８／００５１３９９号(米国特許出願第１１／７７３，９４９号、２００７年７月５日出願、名称“Hydroxylated and Methoxylated Pyrimidyl Cyclopentanes as AKT Protein Kinase Inhibitors”)に記載される方法に従って調製され得、出典明記によりそれを全ての目的に対して援用する。
【００７０】
式Ｉの化合物は単一的に、又は少なくとも２、例えば５〜１，０００の化合物、又は１０〜１００の化合物を含んでなる化合物ライブラリーとして調製されうる。式Ｉの化合物のライブラリーは、コンビナトリアルな「スプリット及びミックス」アプローチによって、又は溶液相もしくは固相化学の何れかを使用する複数のパラレル合成によって調製されうる。
【００７１】
説明目的のために、スキーム１−４は式Ｉの化合物並びに主要中間体を調製するための一般的な方法を示す。当業者は、他の合成経路が使用されうることが理解できるだろう。特定の開始材料及び試薬がスキームに示され、下で検討されるが、他の開始材料及び試薬が、様々な誘導体及び／又は反応条件をもたらすために容易に代用されうる。更に、下に記載の方法によって調製される多くの化合物は、本開示を考慮のもと、当業者に良く知られる一般的な化学を使用して更に修飾されてもよい。
【００７２】
2020022457.tif 000007
スキーム１は式Ｉの化合物１０を調製する方法を示し、ここでＲ１はＨであり、Ｒ２はＯＨであり、Ｒ５はＨである。ピリミジン２の形成は、エタノールなどの適切な溶媒中においてＫＯＨ等の塩基の存在下、チオ尿素とのケトエステル１の反応によって達成されうる。標準的な還元条件下(例えばラネーニッケル及びＮＨ４ＯＨ)において化合物２のメルカプト基の還元により化合物３を得た後、ヒドロキシピリミジン３は標準的な条件下(例えばＤＩＥＡ／ＤＣＥ中におけるＰＯＣｌ３)において塩素化され、化合物４が得られる。化合物４は次いで、標準的な条件下(例えばＣＨＣｌ３などの適切な溶媒中におけるＭＣＰＢＡ)において酸化され、ピリミジン-オキサイド５が得られる。無水酢酸でのピリミジン-オキサイドの処理は、転位生成物６を生成する。化合物７は、化合物６を標準的なＳＮＡｒ反応条件下で適切に置換されたピペリジンと反応させることによって化合物７が得られる。化合物７は化合物８を得るために加水分解され、次いで中間体９を生成するために脱保護される。ＨＢＴＵなどのカップリング試薬の存在下における適切なアミノ酸を用いたピペラジニルシクロペンタ[ｄ]ピリミジン９のアシル化と、必要であればその後の脱保護は、式Ｉの化合物１０を生成する。
【００７３】
2020022457.tif 000008
スキーム２は式Ｉの化合物２２、２５及び２７の調製方法を示し、ここでＲ１、Ｒ２及びＲ５はメチルである。スキーム２によると、臭素による(＋)-プレゴン１１のブロム化は、ジブロミド１２を生成する。ナトリウムエトキシド等の塩基によるジブロミド１２の処理は、プレゲネート１３を生成する。プレゲネート１３のオゾン分解はケトエステル１４を生成する。エタノール中におけるＫＯＨ等の塩基の存在下におけるチオ尿素によるケトエステル１４の処理と、その後の標準的な条件下(例えばアンモニア中におけるラネーニッケル触媒)におけるメルカプト基の還元はヒドロキシピリミジン１６を生成する。標準的な条件下(例えば、ＰＯＣｌ３)におけるヒドロキシピリミジン１６の塩素化は、４-クロロピリミジン１７を生成する。ＭＣＰＢＡ又は過酸化水素などの酸化剤による４-クロロピリミジン１７の酸化は、Ｎ-オキサイド１８を生成する。無水酢酸によるＮ-オキサイド１８の転位は中間体１９を生成する。化合物１９はスキーム１に記載の手順に従い所望のピペラジンと反応され、化合物２０(Ｒ５がＨ)及び２３(Ｒ５がＭｅ)が得られる。化合物２０及び２３は、キラル固定を有するＨＰＬＣを使用してキラル分離処理され、次いで水酸化リチウム等の塩基による処理によって加水分解され、化合物２１及び２４がそれぞれ得られる。脱保護後、化合物２１及び２４は次いで適切なアミノ酸と反応され、化合物２２及び２５がそれぞれ得られる。
【００７４】
あるいは、化合物２４の７-ヒドロキシ基は、ＮａＨ又はＫＯＨ等の塩基の存在下においてハロゲン化アルキル等のアルキル化試薬によりアルキル化され、化合物２６(Ｒ２がＭｅ)が得られうる。脱保護後、化合物２６は次いで適切なアミノ酸と反応され、化合物２７が得られる。
【００７５】
2020022457.tif 000009
スキーム３は、化合物７３及び７４の他の調製方法を示す。スキーム３によると、アンモニアシントンを使用する１４のアミノ化は６３を生成する。５０℃−２５０℃及び／又は高圧での、ホルムアミドの存在下における、例えばギ酸アンモニウムの使用によるピリミジン形成は、二環系ユニット６４を生成する。例えばＰＯＣｌ３又はＳＯＣｌ２を用いる６４の活性化は、活性化ピリミジン６５を生成する。０℃〜１５０℃での適切な保護／置換ピペリジンを使用したこの脱離基の置換は、ピペリジン６６を生成する。−２０℃〜５０℃での、例えばｍ-クロロ過安息香酸(「ＭＣＰＢＡ」又は「ｍ-ＣＰＢＡ」)又はＯｘｏｎｅ(登録商標)を使用した酸化は、Ｎ-オキサイド６７を生成する。アシル化剤(例えば無水酢酸)による処理と、その後の加熱(４０℃〜２００℃)は転位を引き起こし、６８が得られる。０℃〜５０℃での、例えばＬｉＯＨ又はＮａＯＨを使用した加水分解は、アルコール６９を生成する。適切な温度での、例えばＳｗｅｒｎ条件、ＭｎＯ４又はピリジン-ＳＯ３複合体を使用した酸化は、ケトン７０を生成する。キラルリガンドの存在下、水素、ＣＢＳ触媒又は水素化ホウ素還元剤の存在下における、例えば触媒活性キラル触媒を使用した不斉還元は、アルコール７１又は７２で(Ｒ)又は(Ｓ)立体化学を生じる。あるいは、非-キラル還元剤が使用され得(例えばＨ２，Ｐｄ／Ｃ)、シクロペンタンユニットにおけるメチル基に、面選択性及び最終的にはジアステレオ選択性を提供させる。還元から低ジアステレオ選択性が得られたら、ジアステレオマーは(例えば)クロマトグラフィー、結晶化又は誘導体化によって分離されうる。最後に、０℃〜５０℃での、例えば酸を使用したＢｏｃ-基の脱保護、適切に機能化されたアミノ酸を使用したアシル化、及びこのアミノ酸のアミンの最終的な機能化(例えば、何れかの保護基の除去、アルキル化、還元的アミノ化又はアシル化による新しい置換基の導入)は、最終化合物７３及び７４を生じる。
【００７６】
2020022457.tif 000010
化合物(１)へのキラル補助基(例えばＥｖａｎｓ オキサゾリジノン等)の導入は、標準的なアシル化手順によって達成され、コンジュゲート(２)が得られうる。例えば、−２０℃〜１００℃での、アミン塩基の存在下における、活性化剤(例えばＣＯＣｌ２)又は混合無水物組成(例えば２,２-ジメチルプロパノイルクロライド)による酸の処理と、その後の適切なキラル補助基(Ｘ)による処理は、化合物(２)を生成する。立体化学及びキラル補助基の選択は、新しく生成されたキラル中心の立体化学及びジアステレオ選択性を決定しうる。低温度(例えば−２０℃〜−１００℃)でのルイス酸(例えばＴｉＣｌ４)、及びアミン塩基(例えばＨｕｎｉｇ塩基)による化合物(２)の処理と、低温度での適切に置換されたイミニウムイオン前駆体(３)の使用は、化合物(４)を生じる。温度、ルイス酸及びキラル補助基は全て、添加付加物のジアステレオ選択性に影響することが予想されうる。最後に、穏やかな条件下(例えば−１０℃〜３０℃でのＬｉＯＨ／Ｈ２Ｏ)におけるけん化は、所望の酸(５)を生じる。
【００７７】
別の実施態様では、ＡＫＴキナーゼ阻害剤は式ＩＩのＡＴＰ競合的、パン−ＡＫＴ阻害剤
2020022457.tif 000011
及びその立体異性体、互変異性体又は薬学的に許容可能な塩であって、ここで
Ｇは、１〜３のＲａ基で置換されていてもよいフェニル又はハロゲンによって置換されていてもよい５−６員のヘテロアリールであり、
Ｒ１及びＲ１ａは、Ｈ、Ｍｅ、ＣＦ３、ＣＨＦ２又はＣＨ２Ｆから独立して選択され、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ又は-ＯＨであり、
Ｒ２ａは、Ｈであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｒ４は、Ｈ、又はＦ、-ＯＨ又は-Ｏ(Ｃ１-Ｃ３アルキル)で置換されていてもよいＣ１-Ｃ４アルキルであり、
Ｒ５及びＲ５ａはＨ及びＣ１-Ｃ４アルキルから独立して選択されるか、又はＲ５及びＲ５ａはそれらが結合する原子と共に、５-６員のシクロアルキル又は５-６員の複素環を形成し、ここで複素環は酸素ヘテロ原子を有し、
各Ｒａは独立してハロゲン、Ｃ１-Ｃ６-アルキル、Ｃ３-Ｃ６-シクロアルキル、-Ｏ-(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、ＣＦ３、-ＯＣＦ３、Ｓ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、ＣＮ、-ＯＣＨ２-フェニル、ＮＨ２、-ＮＯ２、-ＮＨ-(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、-Ｎ-(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)２、ピペリジン、ピロリジン、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、-ＯＣＨ２Ｆ、-ＯＣＨＦ２、-ＯＨ、-ＳＯ２(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、Ｃ(Ｏ)ＮＨ２、Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)、及びＣ(Ｏ)Ｎ(Ｃ１-Ｃ６-アルキル)２であり、
ｊは、１又は２である。
【００７８】
他の実施態様では、ＡＫＴ阻害剤化合物を含み、
2020022457.tif 000012
を含む。
【００７９】
一実施態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＧＤＣ-００６８から選択される上式の化合物である。
【００８０】
式ＩＩの化合物は国際公開第２００９００６５６７号に記載される方法に従って調製され得、出典明記により全ての目的に対し援用する。
【００８１】
一実施態様では、ＡＫＴ阻害剤は式ＩＩＩのアロステリックＡＴＰ阻害剤化合物であって：
2020022457.tif 000013
ここで、
Ｒ１及びＲ２は独立して水素、Ｃ１−Ｃ５アルキル、ヒドロキシル、Ｃ１−５アルコキシ又はアミンであり、ｐは１〜６の整数であり、Ａは５−１４の炭素環式、二環式又は三環式芳香族環又はヘテロ芳香族環であり、これはハロゲン、ＯＨ、アミノ、ジアルキルアミノ、モノアルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ６-アルキル又はフェニルで置換されていてもよく、これはハロゲン、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はシクロプロピルメチルで置換されていてもよく；一実施態様ではＡは次の構造の内一つを有し、
2020022457.tif 000014
ここで、Ｄ及びＥは、独立して-ＣＨ又はＮであり、
ここで、Ｒ３及びＲ４は、各々独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、アミノ、ジアルキルアミノ、モノアルキルアミノ又はＣ１−Ｃ６-アルキルであり、これはハロゲン、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はシクロプロピルメチルで置換されていてもよく、
Ｒ５は、ハロゲン、ＯＨ、アミノ、ジアルキルアミノ、モノアルキルアミノ又はＣ１−Ｃ６-アルキルで置換されていてもよく、これはハロゲン、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はシクロプロピルメチルで置換されていてもよい５又は６員の芳香族環又はヘテロ芳香族環であり、一実施態様ではＲ５はフェニルであり、
Ｂは次の式を有する芳香族の、ヘテロ芳香族のサイクリック又はヘテロサイクリック環であり、
2020022457.tif 000015
ここで、Ｑ、Ｔ、Ｘ及びＹは各々、-ＣＨ、-ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、Ｎ又はＯから成る群から独立して選択され、
Ｚは-ＣＨ、-ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、Ｎ、Ｏ又は-Ｃ＝Ｃ-であり、
Ｒ６及びＲ７は水素、ハロゲン、カルボニル及び５又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環(ハロゲン、ＯＨ、アミノ、ジアルキルアミノ、モノアルキルアミノ又はＣ１−Ｃ６-アルキルで置換されていてもよく、これはハロゲン、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はシクロプロピルメチルで置換されていてもよい)から成る群から独立して選択され、一実施態様ではＲ６又はＲ７はピリジニルであるか、又はＲ６及びＲ７は共に、５−６員の芳香族の、ヘテロ芳香族の、サイクリック又はヘテロサイクリック環を形成し、これはハロゲン、ＯＨ、アミノ、ジアルキルアミノ、モノアルキルアミノ又はＣ１−Ｃ６-アルキルで置換されていてもよく、これはハロゲン、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ３アルキル又はシクロプロピルメチルで置換されていてもよく、一実施態様では、Ｂは次の構造の内一つを有し、
2020022457.tif 000016
ここでＸ、Ｙ、Ｑ、Ｒ６及びＲ７は上記の通りであり、Ｘ’、Ｑ’及びＴ’は-ＣＨ又はＮである。
【００８２】
別の実施態様では、 ＡＫＴ阻害剤は次の式を有するアロステリック阻害剤
2020022457.tif 000017
を含み、
(上式中、
ａは０又は１であり、ｂは０又は１であり、ｍは０、１又は２であり、ｎは０、１又は２であり、ｐは０、１又は２であり、ｒは０又は１であり、ｓは０又は１であり、
Ｑは、-ＮＲ７Ｒ８、
2020022457.tif 000018
から選択され、
Ｒ１は、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂＣ１-Ｃ６アルキル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂアリール、Ｃ２-Ｃ６アルケニル、Ｃ２-Ｃ６アルキニル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂヘテロシクリル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂＣ３-Ｃ６シクロアルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１-Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ(Ｃ＝Ｏ)ｂＮＲ７Ｒ８、ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＮＲ７Ｒ８、Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ７Ｒ８、ＮＲｃＳ(Ｏ)ｍＲａ、オキソ、ＣＨＯ、ＮＯ２、ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＲａ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ６アルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ６シクロアルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、及びＯ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂ-複素環から独立して選択され、ここで、前記アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、Ｃ１-Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ及びＳ(Ｏ)２ＮＲ７Ｒ８から独立して選択され、ここで前記アルキル、アリール及びヘテロシクリルはＲｚから選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ７及びＲ８は、Ｈ、(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ１０アルキル、(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ８シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂヘテロシクリル、Ｃ１-Ｃ１０アルキル、アリール、Ｃ２-Ｃ１０アルケニル、Ｃ２-Ｃ１０アルキニル、ヘテロシクリル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、ＳＯ２Ｒａ及び(Ｃ＝Ｏ)ＮＲｂ２から独立して選択され、ここで、前記アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシリル(ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｙｌ)、アルケニル、及びアルキニルはＲｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、又は
Ｒ７及びＲ８はそれらが結合する窒素と共に、各環に５-７員を有する単環系又は二環系複素環を形成し、窒素の他に、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１又は２の更なるヘテロ原子を有していてもよく、前記単環系又は二環系複素環はＲｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｒｚは、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ１-Ｃ１０)アルキル、Ｏｒ(Ｃ１-Ｃ３)ペルフルオロアルキル、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ２-Ｃ１０)アルケニル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ２-Ｃ１０)アルキニル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-アリール、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ヘテロシクリル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-Ｎ(Ｒｂ)２、Ｃ(Ｏ)Ｒａ、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ＣＯ２Ｒａ、Ｃ(Ｏ)Ｈ、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ＣＯ２Ｈ、Ｃ(Ｏ)Ｎ(Ｒｂ)２、Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、及びＳ(Ｏ)２Ｎ(Ｒｂ)２ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＲａ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ１０アルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ８シクロアルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、及びＯ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂ-複素環から選択され、ここで前記アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１-Ｃ６アルキル、オキソ、及びＮ(Ｒｂ)２から選択される３つまでの置換基で置換されていてもよく、
Ｒａは、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、アリール又はヘテロシクリルであり、
Ｒｂは、Ｈ、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、アリール、ヘテロシクリル、(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)ＯＣ１-Ｃ６アルキル、(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１-Ｃ６アルキル又はＳ(Ｏ)２Ｒａであり、
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１-Ｃ６アルキル、アリール、Ｃ２-Ｃ６アルケニル、Ｃ２-Ｃ６アルキニル、ヘテロシクリル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル及びＣ１-Ｃ６ペルフルオロアルキルから選択され、ここで前記アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシリル(ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｙｌ)、アルケニル、及びアルキニルはＲｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよい)
又はその薬学的に許容可能な塩又は立体異性体を含む。
【００８３】
別の実施態様では、 ＡＫＴ阻害剤は次式を有するアロステリックＡＫＴ阻害剤、
2020022457.tif 000019
を含み、
(上式中、
ａは０又は１であり、ｂは０又は１であり、ｍは０、１又は２であり、ｎは０、１、２又は３であり、ｐは０、１又は２であり、ｒは０又は１であり、ｓは０又は１であり、ｕ、ｖ、ｗ及びｘはＣＨ及びＮから独立して選択され、ただし、ｕ、ｖ、ｗ及びｘの内一つのみがＮであり得、
Ｑは、-ＮＲ５Ｒ６、
2020022457.tif 000020
から選択され、
Ｒ１は、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂＣ１-Ｃ６アルキル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂアリール、Ｃ２-Ｃ６アルケニル、Ｃ２-Ｃ６アルキニル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂヘテロシクリル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂＣ３-Ｃ６シクロアルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１-Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ(Ｃ＝Ｏ)ｂＮＲ７Ｒ８、ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＮＲ７Ｒ８、Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ７Ｒ８、ＮＲｃＳ(Ｏ)ｍＲａ、オキソ、ＣＨＯ、ＮＯ２、ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＲａ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ６アルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ６シクロアルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、及びＯ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂ-複素環から独立して選択され、ここで前記アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、Ｃ１-Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ及びＳ(Ｏ)２ＮＲ７Ｒ８から独立して選択され、ここで前記アルキル、アリール及びヘテロシクリルは、Ｒｚから選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ７及びＲ８は、Ｈ、(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ１０アルキル、(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ８シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂヘテロシクリル、Ｃ１-Ｃ１０アルキル、アリール、Ｃ２-Ｃ１０アルケニル、Ｃ２-Ｃ１０アルキニル、ヘテロシクリル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、ＳＯ２Ｒａ及び(Ｃ＝Ｏ)ＮＲｂ２から独立して選択され、ここで前記アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシリル(ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｙｌ)、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、又は
Ｒ７及びＲ８はそれらが結合する窒素と共に、各環に５−７員を有する単環系又は二環系複素環を形成し、窒素の他に、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１又は２の更なるヘテロ原子を有していてもよく、前記単環系又は二環系複素環はＲｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｒｚは、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ１-Ｃ１０)アルキル、Ｏｒ(Ｃ１-Ｃ３)ペルフルオロアルキル、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ２-Ｃ１０)アルケニル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ２-Ｃ１０)アルキニル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-アリール、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ヘテロシクリル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-Ｎ(Ｒｂ)２、Ｃ(Ｏ)Ｒａ、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ＣＯ２Ｒａ、Ｃ(Ｏ)Ｈ、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ＣＯ２Ｈ、Ｃ(Ｏ)Ｎ(Ｒｂ)２、Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、及びＳ(Ｏ)２Ｎ(Ｒｂ)２ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＲａ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ１０アルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ８シクロアルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、及びＯ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂ-複素環から選択され、ここで前記アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１-Ｃ６アルキル、オキソ、及びＮ(Ｒｂ)２から選択される３つまでの置換基で置換されていてもよく、
Ｒａは、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、アリール又はヘテロシクリルであり、
Ｒｂは、Ｈ、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、アリール、ヘテロシクリル、(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)ＯＣ１-Ｃ６アルキル、(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１-Ｃ６アルキル又はＳ(Ｏ)２Ｒａであり
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１-Ｃ６アルキル、アリール、Ｃ２-Ｃ６アルケニル、Ｃ２-Ｃ６アルキニル、ヘテロシクリル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル及びＣ１-Ｃ６ペルフルオロアルキルから選択され、ここで前記アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシリル(ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｙｌ)、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよい)
又はその薬学的に許容可能な塩又は立体異性体を含む。
【００８４】
別の実施態様は、次式を有するアロステリックＡＫＴ阻害剤
2020022457.tif 000021
を含み、
(上式中、
ａは０又は１であり、ｂは０又は１であり、ｍは０、１又は２であり、ｎは０、１、２又は３であり、ｐは０、１又は２であり、ｒは０又は１であり、ｓは０又は１であり、ｕ、ｖ、及びｘはＣＨ及びＮから独立して選択され、Ｗは結合、ＣＨ又はＮであり、
Ｑは−ＮＲ５Ｒ６、
2020022457.tif 000022
から選択され、
Ｒ１は、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂＣ１-Ｃ６アルキル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂアリール、Ｃ２-Ｃ６アルケニル、Ｃ２-Ｃ６アルキニル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂヘテロシクリル、(Ｃ＝Ｏ)ａＯｂＣ３-Ｃ６シクロアルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＯｂＣ１-Ｃ６ペルフルオロアルキル、Ｏａ(Ｃ＝Ｏ)ｂＮＲ７Ｒ８、ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＮＲ７Ｒ８、Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、Ｓ(Ｏ)２ＮＲ７Ｒ８、ＮＲｃＳ(Ｏ)ｍＲａ、オキソ、ＣＨＯ、ＮＯ２、ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＲａ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ６アルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ６シクロアルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、及びＯ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂ-複素環から独立して選択され、ここで前記アルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、及びシクロアルキルは、Ｒｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ２は、Ｃ１-Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ＣＯ２Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＯＨ及びＳ(Ｏ)２ＮＲ７Ｒ８から独立して選択され、ここで前記アルキル、アリール及びヘテロシクリルはＲｚから選択される１、２又は３の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ７及びＲ８は、Ｈ、(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ１０アルキル、(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ８シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂヘテロシクリル、Ｃ１-Ｃ１０アルキル、アリール、Ｃ２-Ｃ１０アルケニル、Ｃ２-Ｃ１０アルキニル、ヘテロシクリル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル、ＳＯ２Ｒａ及び(Ｃ＝Ｏ)ＮＲｂ２から独立して選択され、ここで前記アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシリル(ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｙｌ)、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、又は
Ｒ７及びＲ８はそれらが結合する窒素と共に、各環に５-７員を有する単環系又は二環系複素環を形成し、窒素の他に、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される１又は２の更なるヘテロ原子を有していてもよく、前記単環系又は二環系複素環はＲｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよく、
Ｒｚは、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ１-Ｃ１０)アルキル、Ｏｒ(Ｃ１-Ｃ３)ペルフルオロアルキル、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、オキソ、ＯＨ、ハロ、ＣＮ、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ２-Ｃ１０)アルケニル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ２-Ｃ１０)アルキニル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-アリール、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ヘテロシクリル、(Ｃ＝Ｏ)ｒＯｓ(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-Ｎ(Ｒｂ)２、Ｃ(Ｏ)Ｒａ、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ＣＯ２Ｒａ、Ｃ(Ｏ)Ｈ、(Ｃ０-Ｃ６)アルキレン-ＣＯ２Ｈ、Ｃ(Ｏ)Ｎ(Ｒｂ)２、Ｓ(Ｏ)ｍＲａ、及びＳ(Ｏ)２Ｎ(Ｒｂ)２ＮＲｃ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＲａ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ１-Ｃ１０アルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)ＯｂＣ３-Ｃ８シクロアルキル、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂアリール、及びＯ(Ｃ＝Ｏ)Ｏｂ-複素環から選択され、ここで前記アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルは、Ｒｂ、ＯＨ、(Ｃ１-Ｃ６)アルコキシ、ハロゲン、ＣＯ２Ｈ、ＣＮ、Ｏ(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１-Ｃ６アルキル、オキソ、及びＮ(Ｒｂ)２から選択される３つまでの置換基で置換されていてもよく、
Ｒａは、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、アリール又はヘテロシクリルであり、
Ｒｂは、Ｈ、(Ｃ１-Ｃ６)アルキル、アリール、ヘテロシクリル、(Ｃ３-Ｃ６)シクロアルキル、(Ｃ＝Ｏ)ＯＣ１-Ｃ６アルキル、(Ｃ＝Ｏ)Ｃ１-Ｃ６アルキル又はＳ(Ｏ)２Ｒａであり、
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１-Ｃ６アルキル、アリール、Ｃ２-Ｃ６アルケニル、Ｃ２-Ｃ６アルキニル、ヘテロシクリル、Ｃ３-Ｃ８シクロアルキル及びＣ１-Ｃ６ペルフルオロアルキルから選択され、ここで前記アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシリル(ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｙｌ)、アルケニル、及びアルキニルは、Ｒｚから選択される一又は複数の置換基で置換されていてもよい)
又はその薬学的に許容可能な塩又は立体異性体を含む。
【００８５】
別の実施態様は
2020022457.tif 000023
から選択されるアロステリックＡＫＴ阻害剤及びその塩含む。
【００８６】
一実施態様では、キナーゼ阻害剤はＡＫＴ-１選択的ＡＴＰ競合的阻害剤であり、式ＩＶの化合物
2020022457.tif 000024
及びその薬学的に許容可能な塩であり、ここで
Ａｒは、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、及び置換ヘテロアリールから選択され、
Ｑは、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、置換シクロヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、及び置換ヘテロアリールから選択され、
Ｒ１及びＲ２は、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、及び置換ヘテロアリールから独立して選択されるか、又はＲ１及びＲ２は、Ｒ１及びＲ２が結合される窒素と共にシクロヘテロアルキル、置換シクロヘテロアルキル、ヘテロアリール、及び置換ヘテロアリールから選択される環を形成し、
ｐは、２、３、４、及び５から選択され、
ｑは、０又は１である。
【００８７】
式ＩＶの化合物は、
2020022457.tif 000025
及びその塩を含む。
【００８８】
別の実施態様は、次の式を有するペリホシン等のＡＫＴ阻害剤を含む
2020022457.tif 000026
【００８９】
別の実施態様は、抗ＡＫＴ抗体及び抗ＡＫＴ ＤＮＡ又はＲＮＡ等のＡＫＴ阻害剤を含む。
【００９０】
別の実施態様は、次式を有するＡＫＴ阻害剤
2020022457.tif 000027
及びその薬学的に許容される塩を含む。
【００９１】
別の実施態様は、以下の配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドなどのＡＫＴ阻害剤を含む：５’ｃｃａｇｃｃｃｃｃａｃｃａｇｔｃｃａｃｔ３’（配列番号１），５’ｃｇｃｃａａｇｇａｇａｔｃａｔｇｃａｇｃ３’（配列番号２），５’ｇｃｔｇｃａｔｇａｔｃｔｃｃｔｔｇｇｃｇ３’（配列番号３），５’ａｇａｔａｇｃｔｇｇｔｇａｃａｇａｃａｇ３’（配列番号４），５’ｃｇｔｇｇａｇａｇａｔｃａｔｃｔｇａｇｇ３’（配列番号５），５’ｔｃｇａａａａｇｇｔｃａａｇｔｇｃｔａｃ３’（配列番号６），５’ｔｇｇｔｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇ３’（配列番号７）及び５’ｇｇｃｇｃｇａｇｃｇｃｇｇｇｃｃｔａｇｃ３’（配列番号８）。
【００９２】
本発明の特定の実施態様を、以下の非限定的な実施例により説明する。
【００９３】
ＡＫＴ１活性化変異
出願人は、ＡＫＴ１の特定の変異は、ＡＫＴ１のＰＨドメインとキナーゼドメイン間の相互作用を妨害する可能性があることを発見した。これらのドメイン間の分裂は、その変異（単数又は複数）によって引き起こされ、ＡＫＴ１の恒常的リン酸化および恒常的ＡＫＴ１シグナル伝達をもたらすと思われる。これらの効果はまた、細胞の形質転換を可能にする。これらの変異は、ＰＩ３Ｋ及びアロステリックＡｋｔ阻害剤に対する耐性を付与する。従って、そのような変異の存在は、ＰＩ３Ｋ及びアロステリックＡｋｔ阻害剤の有効投与量が多くなるであろうことを示し、また、競合的Ａｋｔ阻害剤など、ＰＩ３Ｋ及び／又はアロステリックＡｋｔ阻害剤以外の阻害剤が使用されるべきであることを示している。  
【００９４】
ＡＫＴ，及びＰＨとキナーゼドメインの相互作用が図１Ａと１Ｂに示される。出願人はまた、ｐＨドメインとキナーゼドメイン間の相互作用の位置を図１Ｃに提示する。
【００９５】
ＰＨドメインのキナーゼドメインとの相互作用を破壊すると考えられる場所での合成変異が、Ａｋｔの恒常的リン酸化を生じることを表す結果を図２に示す。
【００９６】
癌患者に見られる体細胞変異を図３に示す。
【００９７】
出願人は、体細胞変異が恒常的Ａｋｔリン酸化を導き、また、Ａｋｔの恒常的シグナル伝達をもたらすことを見出した（図４参照）。
【００９８】
出願人はまた、Ａｋｔ１変異体が細胞を形質転換できることを実証した（図５を参照）。
【００９９】
興味深いことに、Ａｋｔ１変異体は、ＰＩ３Ｋ阻害剤とＡＫＴアロステリック阻害剤に対する耐性を付与している。そのようなバイオマーカーを持つ患者に対してどの治療計画が最も有益であるかを示唆するバイオマーカーのこの発見は有益と考えられる。従って、これらの変異は、癌の診断及び適切な治療処置を決定するために重要である。
【０１００】
更に、Ａｋｔの変異はまた、Ａｋｔの膜局在化にも影響を与え、細胞膜への最小限の転座を持つ。
【０１０１】
特定の実施態様において、本発明は、単離または精製され得、ＡＫＴ変異体をコードし、ＡＫＴ変異体のアミノ酸配列となる核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子）を提供する。特定の実施態様において、本発明は、潜在的なＡＫＴ阻害化合物をスクリーニングするために、このような変異体を使用する方法を提供する。
【０１０２】
ＡＫＴの恒常的活性化をもたらす変異
タンパク質キナーゼＡＫＴは、細胞生存および増殖の重要な調節因子であり、しばしばヒトの癌において過剰に活性化される。分子内プレクストリン相同（ＰＨ）ドメイン−キナーゼドメイン（ＫＤ）相互作用は、非活性状態におけるＡＫＴの維持に重要である。キナーゼドメインからＰＨを押しのけるコンホメーション変化に続いてＡＫＴ活性化が進行する。これらの自己阻害的相互作用を理解するために、ＰＨ−ＫＤ界面において変異を生成したところ、それらの大部分がＡＫＴの恒常的活性化をもたらすことが見出された。このような変異は、活性化がヒトの癌及び他の疾患で発生し得る別のメカニズムである可能性がある。これを支持するものとして、ＰＨ−ＫＤ界面におけるＡＫＴ１における体細胞変異は、以前はヒトの癌においては記載されていないことが見出された。さらに、ＡＫＴ１体細胞変異体は、恒常的に活性であり、発癌性のシグナル伝達につながる。更に、ＡＫＴ１変異体はアロステリックＡＫＴ阻害剤により効果的には阻害されず、アロステリック阻害のためのインタクトなＰＨ−ＫＤ界面の必要性と一致している。これらの結果は、ＰＨ−ＫＤ界面でＡＫＴ変異を有する患者において、治療的介入の重要な意味を持っている。
【０１０３】
本研究では、ＡＫＴの活性化に対するＰＨ−ＫＤ相互作用の摂動の効果を理解するために体系的な分析が行われた。ＰＨ−ＫＤ界面で残基を変異させることにより、ドメイン間の接触を壊すことがＡＫＴ活性化につながる。この与えられた多数のヒト腫瘍を、ＰＨ−ＫＤ接触部位での変異が癌において起こるかどうかを確認するため配列決定した。興味深いことに、これらの部位でＡＫＴに変異を保有するヒト腫瘍は、ＰＨ−ＫＤの相互作用の破壊を示し、癌におけるＡＫＴ活性化のための重要なメカニズムであることが分かった。これらの腫瘍特異的体細胞変異は活性について試験され、それが発癌性であることが示されている。また、ＡＫＴ阻害剤がこれらの変異体に対して試験され、ＡＴＰ競合的阻害剤は、アロステリックＡＫＴ阻害剤と比較してより効果的である。
【０１０４】
ＰＨ−キナーゼドメイン接触を乱すとＡｋｔの活性化につながる。
ＡＫＴの活性化状態を評価するために、アッセイは、ＩＬ−３依存性ＢａＦ３細胞の増殖因子非依存性生存を促進するＡＫＴの能力を測定したものを開発した。ＢａＦ３プロＢ細胞は、癌遺伝子の強制発現により、増殖因子を非依存的にすることができる。野生型ＡＫＴ１（ＷＴ ＡＫＴ１）、ミリストイル化（Ｍｙｒ）またはＥ１７Ｋ ＡＫＴ１変異体を発現しているＢａＦ３細胞が作成され、活性化ＡＫＴはそれ自身では因子非依存性を促進することができないことがわかった。しかし、Ｍｙｒ ＡＫＴ１または発癌性Ｅ１７Ｋ ＡＫＴ１と、ＭＡＰ２キナーゼＭＥＫ１（ＭＥＫ１ΔＮ３、Ｓ２１８Ｅ、Ｓ２２２Ｄ）の活性型の共発現は、ＢａＦ３細胞のは因子非依存性増殖と生存を促進した。活性なＭＥＫ１（ＭＥＫ１ Ｎ３）と組み合わせたＷＴ ＡＫＴ１は、このアッセイで若干の活性を示したが、変異体ＡＫＴ１と比較して効果は少なかった。
【０１０５】
ＢａＦ３アッセイが、ＰＨ−ＫＤ相互作用を壊したその結果を調べるために用いられた。最近発表されたＡＫＴ１の完全長構造を用いて (Wu et al., (2010). PLoS One 5, e12913)、残基がＰＨ−ＫＤ界面で同定された。これらの部位での変異は、好ましい相互作用を除去し、立体容積を増加させ、またはドメイン間の極性接触に関わる側鎖の電荷を逆転させることにより、ＰＨ−ＫＤ相互作用を損なうように設計された。３５のこのようなＡＫＴ１変異体のライブラリが生成された（図１６、表１）。また、プールには、陽性対照としての役割を果たすＡＫＴ１ Ｅ１７Ｋ変異体コンストラクト、及び活性の陰性対照として役割を果たすサイレント変異を有するＷＴ ＡＫＴ１クローンが含まれていた。三つのＡＫＴ変異体ライブラリーが、ＭＥＫ１ Ｎ３と一緒に変異体を安定的に共発現するＢａＦ３細胞のプールを得るために使用された。ＩＬ−３の非存在下で増殖させた後、細胞のプールを、ＩＬ−３の退薬後３日目と４日目にサンプリングし、次世代配列決定を用いて、プール内の様々な変異体の割合が０時間での入力と比較して決定された（図１６Ｃ）。各変異は、入力度数に比べて所与の時点での観測度数の正規化された比率に基づいて点数化され、次いでこれらの比率はＷＴ ＡＫＴ１の比率に対して正規化された。予想されたように、ＡＫＴ１ Ｅ１７Ｋは５０回以上、野生型より濃縮された。同様に、Ｔ８１Ｙ及びＤ３２３Ａなどの変異体も強く濃縮され（ＷＴに対して＞１５倍）、これらの変異がＡＫＴの活性化につながることを示している。他の変異体、Ｒ２３Ａ、Ｎ５３Ａ、Ｆ５５Ｙ、Ｌ７８Ｔ、Ｑ７９Ｅ、Ｗ８０Ａ、Ｅ１９１Ａ、Ｔ１９５Ｉ、Ｖ２７０Ａ、Ｖ２７１Ａ、Ｌ３２１Ａ、Ｄ３２５Ａ及びＲ３２８Ａはこのアッセイでは中庸な濃縮を示し（３日又は４日の時点のどちらかでＷＴに対して２〜６倍）、活性化する可能性がある（図１６Ｄ、表１）。
【０１０６】
2020022457.tif 000028
2020022457.tif 000029
【０１０７】
さらに、ＰＨ−ＫＤ界面変異体の効果を理解するために、安定的に各々のＡＫＴ１突然変異体を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞株が生成され、Ｔ３０８及びＳ４７３リン酸化状態（ｐＴ３０８およびｐＳ４７３）を評価した。生存アッセイスクリーニングと一致して、Ｎ５３Ａ、Ｆ５５Ｙ、Ｌ７８Ｔ、Ｑ７９Ｅ、Ｗ８０Ａ、Ｔ８１Ｙ、Ｅ１９１Ａ、Ｔ１９５Ｉ、Ｌ３２１Ａ、Ｄ３２３Ａ、Ｄ３２５ＡおよびＲ３２８Ａ変異体は、Ｔ３０８とＳ４７３においてリン酸化の上昇を示した。更に、ＡＫＴ１変異体Ｎ５４Ａ、Ｖ８３Ｄ、Ｅ１１４Ａ、Ｌ２０２Ｆ、Ｖ３２０Ａ、Ｎ３２４ＫおよびＹ３２６Ａは、生存スクリーニングでは軽度の濃縮（ＷＴに対して〜１．５−２倍）のみを示したものの、それらはｐＴ３０８とｐＳ４７３のレベルの上昇を示した。これらの結果は、ＰＨ−ＫＤ接触を破壊させることは、ＡＫＴの恒常的リン酸化につながることを示唆している。
【０１０８】
癌におけるＡＫＴ体細胞変異の同定
ＰＨ−ＫＤ界面の摂動がＡＫＴ活性化をもたらのであれば、そのような変異がヒトの原発性腫瘍で生じるかを評価した。潜在的なＡＫＴの変異を同定するために、ＡＫＴ１、２および３のすべてのコーディングエクソンが、６５の結腸直腸、５１の乳癌、４８の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腺癌（アデノ）、４３のＮＳＣＬＣ（扁平上皮）、４３の腎癌、３７メラノーマ、３３の胃癌、３２の卵巣癌、１５の食道癌、１１の肝細胞癌（ＨＣＣ）、１０の小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）その他６つ（５つの肺大細胞とその他の１つの肺癌）からなる合計３９４のヒト原発性腫瘍サンプルで配列決定された。タンパク質を変える、ＡＫＴ１の変異は、乳癌の４％（２／５１）および結腸癌の１．５％（１／６５）に認められた。ＡＫＴ２体細胞変異は、ＮＳＣＬＣの約５％に認められた（アデノ；２／４３）（図１７）。
【０１０９】
Ｅ１７Ｋ変異のほかに、コドン５２、Ｌ５２ＲにおけるＡＫＴ１変異もある。Ｌ５２は、ｐＨ−ＫＤ界面にあり、Ｖ２７０、Ｖ２７１、Ｙ３２６およびキナーゼドメインにおけるＲ３２８のメチレン部分と疎水性接触を作る。Ｌ５２Ａ変異は、ＷＴと比較してＡＫＴ１のリン酸化のレベルを増加させたが、ＢａＦ３アッセイにおける生存の増加にはつながらなかった。しかしながら、Ｌ５２Ｒ変異は、好ましい疎水性相互作用が失われ、Ｒ３２８との好ましくない相互作用が導入されるため、ＰＨ−ＫＤ相互作用に有害である（従って、ＡＫＴ１活性を促進する）可能性がある。同様に、乳房腫瘍で同定されるＤ３２３Ｈ変異はＡＫＴ１キナーゼドメインに位置し、ＰＨドメインでの３塩基性残基（Ｋ１４、Ｒ２３とＲ２５）の近傍にある（図１Ｂ、２Ｂ）。合成変異体Ｄ３２３Ａは、恒常的に活性であり、ヒスチジンはアラニンよりもドメイン間接触にさらに破壊的（立体容積の増大；電荷反転の可能性）であるため、Ｄ３２３Ｈもまた恒常的に活性であることを示唆している。Ｒ９６残基は主要なＰＨドメインヘリックスに位置し、キナーゼドメイン界面から除かれ遠くに離れており、従って、ＰＨ−ＫＤ相互作用の破壊を介して活性化を促進する可能性は低い。全長のＡＫＴ１結晶構造において、電子密度は、残基Ｅ１９８からＫ１８９に関して観察されない。このキナーゼドメインループは、ＰＨドメインヘリックスのＣ末端の近傍であるが、Ｋ１８９Ｎ変異に関連したＡＫＴ１活性の変化の構造ベースの推定は不可能である。
【０１１０】
2020022457.tif 000030
【０１１１】
ＡＫＴ１体細胞変異体は、恒常的に信号を送り、トランスフォーメーションにつながる。
ＡＫＴ１体細胞変異の機能的関連性を評価するために、ＰＨ−ＫＤの相互作用に影響を与えることが予測されるＬ５２ＲおよびＤ３２３Ｈ変異体を試験した。加えて、キナーゼドメインに生じるＫ１８９Ｎ変異を試験した。これらの変異体は、Ｎ末端にＦＬＡＧタグ付きのＡＫＴ１ ＷＴ、ミリストイル化ＡＫＴ１（Ｍｙｒ ＡＫＴ１）、又は変異体Ｅ１７Ｋ、Ｌ５２Ｒ、Ｋ１８９Ｎ及びＤ３２３Ｈを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞を用いて、シグナル伝達に対するそれらの効力について試験された。イムノブロット分析は、形質導入されたベクター又はＡＫＴ１ ＷＴ細胞とは異なり、Ｋ１８９Ｎを除くすべての変異体は、Ｍｙｒ ＡＫＴ１に類似して、ｐＴ３０８及びｐＳ４７３両方の増加を示した。これと一致して、我々は、空のベクター、ＷＴ ＡＫＴ１、あるいはＫ１８９ＮのＡＫＴ１変異体を発現する細胞と比較して、Ｍｙｒまたは変異体ＡＫＴ１を発現する細胞内におけるＡｋｔ基質のＦＯＸＯとＳ６リボソームタンパク質のリン酸化の同時増加を観察した。興味深いことに、Ｍｙｒ ＡＫＴまたはＬ５２Ｒ変異体とは異なり、Ｅ１７ＫまたはＤ３２３Ｈの発現は、ＡＫＴ基質のＰＲＡＳ４０のリン酸化の上昇を生じず、これらの変異体は、異なる下流のエフェクター経路に係合することができることを示唆している。
ＡＫＴ１のＰＨ−キナーゼドメイン変異体は、ドメイン間の相互作用を弱め、細胞膜移行の障害を示す。
【０１１２】
癌特異的ＡＫＴ１変異であるＬ５２ＲとＤ３２３Ｈは、ＰＨ−ＫＤ相互作用を破壊すると予想される位置に存在するが、観察されたアミノ酸置換は、以前に作成され分析された合成変異体とは異なっていた。これらの体細胞突然変異がドメイン間の相互作用を弱めるかどうかを直接試験するために、ＶＰ１６活性化ドメイン（ＶＰ１６ ＡＤ）とＧａｌ４ ＤＮＡ結合ドメイン（Ｇａｌ４ ＤＢＤ）にそれぞれ融合したＡＫＴのＰＨ及びＫＤコンストラクトを用いて、哺乳動物の２−ハイブリッドアッセイを行った。相互作用の強度は、ルシフェラーゼ活性が相互作用の強さに比例したルシフェラーゼレポーターを用いて測定した。Ｌ５２ＲのＰＨドメイン／ＷＴ−ＫＤとＷＴ−ＰＨ／Ｄ３２３Ｈ ＫＤの組み合わせは、ＷＴ−ＰＨ／ＷＴ−ＫＤまたはＥ１７Ｋ−ＰＨ／ＷＴ−ＫＤに比べて、相互作用シグナルの５０％の減少を示し、Ｌ５２Ｒ及びＤ３２３Ｈ変異体は、ＰＨ−ＫＤ相互作用が不足していることを確認した。
【０１１３】
ＡＫＴ変異体の活性化のメカニズムを更に理解するために、それらの細胞局在を決定した。休止細胞では、野生型ＡＫＴ１は、細胞質および核全体に拡散的に局在しており、そして細胞分裂刺激に応答して細胞膜へ急速に移行し、活性化をもたらす。
【０１１４】
Ｌ５２ＲのＰＨドメイン変異体は、ＧＦＰ−ＡＫＴ１のＰＨドメイン融合コンストラクトを用いて、細胞内局在および膜移行について試験された。ＷＴ及びＥ１７Ｋ ＡＫＴ１のＰＨドメインＧＦＰ融合コンストラクトは対照とした。増殖因子刺激の非存在下においては、ＷＴ ＡＫＴ１のＰＨドメインは、細胞質および核全体に分布するが、Ｅ１７Ｋ ＡＫＴ１のＰＨドメインは、恒常的に細胞膜に局在していた。Ｅ１７Ｋ ＡＫＴ１のＰＨドメインとは対照的に、Ｌ５２Ｒ ＡＫＴ１のＰＨドメインは、細胞質と核全体に分布し、ＷＴ ＡＫＴ１のＰＨドメインのように挙動していた。しかし、増殖因子刺激により、ＷＴ ＡＫＴ１のＰＨドメインとは異なり、Ｌ５２Ｒ変異体のＰＨドメインは細胞膜に移行しなかった。このことは、改変された脂質親和性と局在性に応答して活性化されるＥ１７Ｋ変異体とは異なり、Ｌ５２Ｒ変異体は、自己阻害的相互作用が存在しないことに起因して、細胞質で活性化される可能性が最も高いことを示唆している。
【０１１５】
ＡＫＴ２とＡＫＴ３のＰＨ−ＫＤの相互作用の破壊は、それらの活性化につながる。
ＡＫＴファミリーメンバーの共通のドメイン構造を考慮して、ＡＫＴ２とＡＫＴ３においてＰＨ−ＫＤ相互作用を破壊することがそれらの活性化をもたらすことができるかどうかを試験した。これを試験するためにＡＫＴ２の変異体であるＬ５２ＲとＤ３２４Ｈ及びＡＫＴ３の変異体であるＬ５１ＲとＤ３２０Ｈ（ＡＫＴ１のＬ５２ＲとＤ３２３Ｈに相当）が生成され、それらの全てはＰＨ−ＫＤ相互作用を破壊すると予測される。ＡＫＴ３のＥ１７Ｋ変異はメラノーマで見つけることができ、そしてヒトの低血糖においてＡＫＴ２のＥ１７Ｋ変異が報告されているので、ヒトの癌で同定されている付加的なＡＫＴ２及びＡＫＴ３体細胞変異と一緒に、Ｅ１７ＫのＡＫＴ２とＡＫＴ３変異体を作成した。また、Ｍｙｒ ＡＫＴ２とＭｙｒ ＡＫＴ３を陽性対照として作成した。ＡＫＴ２及びＡＫＴ３変異体を安定的にＮＩＨ３Ｔ３細胞で発現させ、Ｔ３０８及びＳ４７３のリン酸化状態を評価した。ＡＫＴ２のＥ１７Ｋ、Ｌ５２Ｒ及びＤ３２４Ｈ、及びＡＫＴ３のＥ１７Ｋ、Ｌ５１Ｒ及びＤ３２０Ｈすべては、ＷＴ ＡＫＴ２又ははＡＫＴ３発現している細胞に比べてｐＴ３０８とｐＳ４７３の上昇を示した。活性化状態と一致して、これらのＡＫＴ２及びＡＫＴ３変異体は、活性化されたＭＥＫ１と組み合わせて、ＢａＦ３細胞の増殖因子非依存性生存を支持することができた。興味深いことに、ヒトの癌で同定されたＡＫＴ２変異体Ｒ３７１ＨもｐＴ３０８とｐＳ４７３の上昇を示したが、ＢａＦ３の増殖因子非依存性生存を促進することはできなかった。残りの変異体（ＡＫＴ２のＶ９０ＬとＲ１０１Ｌ及びＡＫＴ３のＱ１２４ＬおよびＧ１７１Ｒ）はｐＴ３０８とｐＳ４７３の増加を示さず、そしてＢａＦ３細胞の増殖因子非依存性生存を支持することはできなかった。完全長ＡＫＴ２及びＡＫＴ３に対して生成された相同性モデルを探索してみると、これらの変異は表面に露出したループに全て存在し、ＰＨ−ＫＤ界面に近位ではない。ＡＫＴ２のＶ９０ＬとＡＫＴ３のＱ１２４ＬはＡＫＴ１の電子密度に定められないループにあるにもかかわらず、これらのループの末端は、ＰＨ−ＫＤ界面に近位にはないことに留意すべきである。このように、構造解析は、ＡＫＴ２のＲ３７１Ｈがいかにリン酸化を上昇させることができるのか、あるいは、どのようにこれらの変異体のいずれかが、それらが同定された癌の原動力となりうるのかについて、全く見識を提供していない。
【０１１６】
ＡＫＴ１体細胞変異体は、生体内で発癌を促進する。
これまでの研究では、安定に癌遺伝子を発現するＢａＦ３細胞は、マウスに移植されたときに白血病様の疾患を促進し、全生存期間の減少を引き起こすことを示してきた。ＡＫＴ１変異体は、活性なＭＥＫ１と共働し、ＢａＦ３細胞の因子非依存性増殖を促進するため、このモデル系はインビボでそれらの腫瘍形成能を試験された。ＭＥＫ１ Ｎ３とＭｙｒ ＡＫＴ１または変異型ＡＫＴ１ Ｅ１７Ｋ、Ｌ５２Ｒ又はＤ３２３Ｈを共発現するＢａＦ３細胞を移植したマウスは、１９から２０．５日の生存期間の中央値を示した。これとは対照的に、ＭＥＫ１ Ｎ３とＡＫＴ１ ＷＴを共発現するＢａＦ３細胞を受けたマウスは、２９日の有意に長い生存期間の中央値を有している。このことは、活性なＭＥＫ１との関連でＡＫＴ１ ＷＴは、その効果はＡｋｔ変異体と比べて控えめであったものの、ＢａＦ３細胞の因子非依存性生存を支持することができるという事実と一致している。
【０１１７】
予想されたように、ＭＥＫ１ Ｎ３を単独で発現した対照ＢａＦ３細胞を受けたマウスは、５５日間の研究期間終了時に生存していた。疾患の進行を追跡調査するため、移植後１９日に処置群あたり３匹のマウスのコホートに剖検が実施された。全生存期間の減少と一致して、ＷＴ ＡＫＴ１又はベクター対照細胞を受けたマウスと比較して、ＧＦＰタグ付きＢａＦ３細胞のかなりの割合が、変異型ＡＫＴ１を受けたマウスの骨髄及び脾臓において見出された。変異型ＡＫＴ１を発現するマウスにおいて、肝臓と脾臓のに有意拡大が見つかった。ヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色された肝臓、脾臓、および骨髄切片の組織学的検査は、ベクター対照あるいははＷＴ ＡＫＴ１細胞を受けたものと比較して、変異型ＡＫＴ１形質導入細胞を受けたマウスにおいて白血病性芽球による浸潤の証拠を示した。これらの結果は、インビボでＡＫＴ１変異体の形質転換能を裏づけている。
【０１１８】
ＡＫＴ１ ＰＨ−ＫＤ相互作用欠損変異体は、アロステリック阻害剤に対して感受性が低い。
ＡＫＴのいくつかのＡＴＰ−競合的およびアロステリック小分子阻害剤が開発及び／又は臨床試験中である(Mattmann et al., (2011). Expert Opin Ther Pat.; Pal et al., (2010).Expert Opin Investig Drugs 19, 1355-1366)。以前の研究では、ＡＫＴのアロステリック阻害剤は、それらの活性のためにインタクトなＰＨ−ＫＤ界面の存在を必要とすることを示した。いくつかのＡＫＴ１体細胞変異体は、ＰＨ−ＫＤ接触を損なったことを考えると、アロステリック阻害剤は、これらの変異体の活性を阻害することにおいて有効性が低い可能性が高いことが予測された。２つのＡＴＰ−競合的阻害剤(ＧＮＥ−６９２ Bencsik et al. (2010). Bioorg Med Chem Lett 20, 7037-7041)及び GSK690693 (Rhodes et al. (2008). Cancer Res 68, 2366-2374)と、２つのアロステリック阻害剤（阻害剤ＶＩＩＩ (Lindsley et al., (2005). Bioorg Med Chem Lett 15, 761-764) 及びＧＮＥ−９２９の活性が組み替え全長ＷＴと変異体ＡＫＴ１酵素で試験された。ＷＴ又はＡＫＴ１変異体を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の増殖に対する阻害剤の効果も試験した。
【０１１９】
2020022457.tif 000031
【０１２０】
生化学的活性アッセイにおいて、ＡＴＰ−競合的阻害剤のＧＮＥ−６９２とＧＳＫ６９０６９３は、ＷＴ ＡＫＴ１酵素（ＧＮＥ−６９２ ＩＣ５０ ２４．３ｎＭ）並びに変異型酵素（Ｅ１７Ｋ，Ｌ５２Ｒ及びＤ３２３Ｈ；ＧＮＥ−６９２ ＩＣ５０ ３．７−１５．８ｎＭ）の活性をブロックすることにおいて有効であった。同様に、ＡＴＰ−競合的阻害剤は、細胞ベース増殖アッセイにおいてＷＴ及び変異型ＡＫＴ１の両方に対して同等に有効であった。対照的に、アロステリック阻害剤、阻害剤ＶＩＩＩとＧＮＥ−９２９は、ＷＴ ＡＫＴ１と比較して（阻害剤ＶＩＩＩ：ＩＣ５０ １１９．３ｎＭ；図６Ｃ）、組換え全長変異酵素に対してあまり有効ではなかった（阻害剤ＶＩＩＩ：Ｌ５２Ｒに対してＩＣ５０ ２６８．４ｎＭ；Ｄ３２３Ｈに対してＩＣ５０＞１μＭ）。これと一致して、細胞ベースのアッセイにおいて、アロステリック阻害剤、阻害剤ＶＩＩＩは、ＷＴと比較して、ＡＫＴ ＡＫＴ１変異体を発現する細胞の増殖を阻止する点で少なくとも５０％有効性が低いことが見出された。
【０１２１】
アロステリック阻害剤にする変異体の感受性の低下が損なわれたＰＨ−ＫＤ相互作用によるものであることを確認するため、インビトロでの生化学的再構成アッセイが、精製された組換えＰＨドメインとキナーゼドメインを用いて行われた。この系では、アロステリック阻害剤ＶＩＩＩは、ＡＫＴ１キナーゼドメイン単独に対してアッセイした場合、その活性をブロックすることができなかった。しかし、精製されたＷＴ ＰＨドメインがキナーゼドメインに追加されて酵素を再構成したときに、阻害剤ＶＩＩＩは、完全長ＷＴ酵素（ＩＣ５０  ８０．８ｎＭ）と比較して再構成された酵素にＩＣ５０の３倍の増加（ＩＣ５０ ２３８．８ｎＭ）があったものの、酵素の活性をブロックすることができた。これとは対照的に、変異型ＰＨドメイン（Ｌ５２Ｒ又はＥ１７Ｋ）との再構成はは、ＡＫＴ１をブロックする阻害剤ＶＩＩＩの能力をさらに減損した（Ｌ５２Ｒ ＩＣ５０ ７１３．５ｎＭ及びＥ１７Ｋ ＩＣ５０＞１μＭ）。同様に、ＷＴ ＰＨドメインが変異体Ｄ３２３Ｈのキナーゼドメインと再構成されたときに、阻害剤ＶＩＩＩは活性を示さなかった。アロステリック阻害剤によるＥ１７Ｋの阻害の欠如は、ＰＩＰ２に対する親和性の増加に加えて、この変異はその活性化をもたらすＰＨ−ＫＤ相互作用にも影響を及ぼし得ることを示唆している。細胞ベースの２−ハイブリッドアッセイにおいて、Ｅ１７Ｋ変異体は、ｐＨ−ＫＤ相互作用の障害を明らかにしておらず、Ｅ１７Ｋ活性化の正確なメカニズムは更なる探求が必要であることを示している。これらのデータは、ＡＫＴ１アロステリック阻害剤のためのインタクトなＰＨ−ＫＤ界面の重要性を確認している。
【０１２２】
代替ＰＤバイオマーカーアッセイ
多血小板血漿（ＰＲＰ）中のホスホ−ＧＳＫ−３ｂを、異なる時点でＧＤＣ−００６８で処置した後の患者におけるＡｋｔ経路の阻害を２２日間にわたり測定するために代替ＰＤバイオマーカーとして使用した。末梢血を抗凝固剤として０．３８％のクエン酸塩を含んでいるバキュテイナーに収集した。血液を室温で１５分間、２００ｇで遠心した。ＰＲＰ層を慎重にチューブから採取した後、界面活性剤、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む緩衝液中で溶解した。ＰＲＰ溶解物におけるリン酸化及び総ＧＳＫ−３βレベルは、ホスホ−ＧＳＫ３β／総ＧＳＫ３β多重化ＭＳＤアッセイを用いて測定した。ｐＧＳｋ−３βレベルは、総ＧＳＫ−３βレベルに対して規格化し、ｐＧＳｋ−３βの投与後阻害は、各患者について投与前のレベルの比として表した。用量２００ｍｇで７５％のｐＧＳＫ３βレベルの減少を示し、用量と時間依存的な薬理学的応答が実証された。
【０１２３】
逆相タンパク質アレイ
ＧＤＣＣ００６８による治療を受けた患者からのコア針腫瘍生検は、ＯＣＴ中に急速冷凍され８ｕｍの切片に薄片化された。組織はＴＰＥＲ、３００ｍＭのＮａＣｌ及びホスファターゼ阻害剤を含有するＲＰＰＡ溶解緩衝液で溶解した。溶解物のリン酸化シグネチャを逆相タンパク質アレイを用いて分析した：サンプルはニトロセルローススライド上に印刷され、総タンパク質濃度を決定するためにＳｙｐｒｏで染色した。各スライドを、４℃で一晩異なる抗体で染色した。その後、データは全タンパク質レベルに規格化し、空間的影響は、象限中央値正規化（Quadrant median normalization）を用いて除いた。ｐＰＲＡＳ４０の６０％−７０％の減少及びサイクリンＤ１の５０％減少（ベースラインと比較して）が、毎日４００ミリグラムで処置された全３人の患者で生じた。ＲＰＰＡの方法と概要については、Reverse phase protein microarrays advance to use in clinical trials, Molecular Oncology. 2010 Dec;4(6):461-81, Mueller C et alを参照。特定の実施態様において、本明細書中で治療されるべき癌は、ＡＫＴ、ＰＩ３Ｋ、ＰＴＥＮおよびＨＥＲ２変異、又はＡＫＴ、ＰＩ３Ｋ、ＰＴＥＮ又はＨＥＲ２の異常なシグナル伝達を含む。一例において、癌は、高ｐＡＫＴ活性及びＰＴＥＮが低い又は欠損状態を含む胃癌である。
【０１２４】
特定の態様において、本発明は、ＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２の増幅と関連付けられている癌を有する患者を、患者へ本発明の組み合わせを投与することを含み治療するための方法を提供する。別の態様において、本発明は、患者の癌がＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２の増幅と関連付けられているかを決定することを含む、本発明の組み合わせで治療することができる癌を有する患者を同定するための方法を提供し、ここで、ＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２の増幅と患者の癌との関連は、本発明の組合せで治療することができる癌を示す。更なる態様において、本発明は、本発明の組み合わせで識別された患者を治療することを更に含む方法を提供する。
【０１２５】
別の例において、治療すべき癌は、ＨＥＲ２陽性または陰性の状態との組み合わせた、ＰＴＥＮ陽性、低い又は欠損状態と関連付けられる。例としては、（ｉ）ＰＴＥＮ陰性（ＨＳｃｏｒｅが約１０未満又は０）及びＨｅｒ２陰性、（ｉｉ）ＰＴＥＮが低い（ＨＳｃｏｒｅが約２００未満）及びＨｅｒ２陰性、（ｉｉｉ）ＰＴＥＮ陰性及びＨｅｒ２陽性、又は（ｉｖ）ＰＴＥＮ陽性及びＨｅｒ２陰性の何れかである胃癌を含む。この例では、癌は、式Ｉの化合物、例えば、ＧＤＣ−００６８又はその塩と、ＦＯＬＦＯＸとの組み合わせで治療することができる。
【０１２６】
本明細書に引用した全ての文献は、参考として援用される。本発明の特定の実施態様が記載され、多くの詳細が例示の目的で述べられているが、詳細の一部は、本発明の基本原理から逸脱することなく変更することができる。
【０１２７】
本発明の実施態様を説明する文脈において用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び類似の用語の使用は、本明細書に示さなれない限り、又は明らかに文脈と矛盾しない限り、単数および複数の両方に及ぶものと解釈されるべきである。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」及び「含む（containing）」は、特に断りのない限り制限の無い（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ）用語（即ち、「含むがこれらに限定されない」を意味する）として解釈されるべきである。本明細書において値の範囲の列挙は、本明細書中示されない限り、その範囲内に入る各別々の値を個々に言及する簡便な方法としての役割を果たすことを単に意図しており、各別個の値はそれが個々に本明細書に記載されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に詳述される順番に加えて、本明細書に記載される方法は、本明細書中に示されているか、又はそうでなければ明らかに文脈と矛盾しない限り、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書で提供される任意の及び全ての実施例、又は例示的言語（例えば「等」（such as））の使用は、単により良く本発明の実施態様の理解を容易にするために意図されており、他に特許請求の範囲に特に記載されない限り、必ずしも本発明の範囲に制限を課すものではない。本明細書中の如何なる語句も、任意の非請求要素が本発明の実施に不可欠であることを示すとして解釈されるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年10月10日(2019.10.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＫＴへの変異の存在を決定することを含む、ＡＫＴ阻害剤に対する腫瘍細胞の増殖の感受性を予測する方法であって、
ＡＫＴへの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性と相関し、
ＡＫＴ阻害剤が（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ、７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン又はその薬学的に許容される塩であり、変異がＬ５２、Ｅ１７又はＱ７９に一致する、方法。
【請求項２】
腫瘍細胞が、卵巣癌腫瘍細胞、前立腺癌腫瘍細胞、乳癌腫瘍細胞、結腸直腸癌腫瘍細胞、胃癌腫瘍細胞、子宮内膜癌腫瘍細胞、および膵臓癌腫瘍細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
腫瘍細胞が卵巣癌腫瘍細胞又は前立腺癌腫瘍細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
腫瘍細胞が乳癌腫瘍細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
乳癌腫瘍細胞が内分泌抵抗性乳癌細胞である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＡＫＴへの変異の存在が、ＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の増加と相関する、請求項１から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＡＫＴがＡＫＴ１、ＡＫＴ２又はＡＫＴ３である、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＡＫＴがＡＫＴ１である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＡＫＴへの変異がＡＫＴのＰＨ−ドメインとキナーゼドメインの間の相互作用を破壊する、請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＡＫＴへの変異がＡＫＴのリン酸化を増加させる、請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
リン酸化の増加が構成的リン酸化に起因する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
方法が細胞のＰＴＥＮの状態を決定することを更に含み、ＰＴＥＮの欠損が阻害剤に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
方法が細胞のＰＩ３Ｋの変異の存在を決定することを更に含み、ＰＩ３Ｋの変異の存在が阻害剤による阻害に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＰＩ３Ｋの変異が、Ｈ１０４７Ｒ及びＨ１０４７Ｌのうち一つ又は両方である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
方法が細胞のｐＡＫＴプロファイルを決定することを更に含み、ｐＡＫＴの高活性プロファイルが阻害剤による阻害に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
方法が細胞のｐＡＫＴプロファイルを決定することを更に含み、ｐＡＫＴの低活性プロファイルが阻害剤による阻害に対する感受性の低下と相関する、請求項１から１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
方法が細胞のＨｅｒ２及び／又はＨｅｒ３の状態を決定することを更に含み、細胞のＨｅｒ２＋及び／又はＨｅｒ３＋状態が阻害剤による阻害に対する感受性の増加と相関する、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
方法が細胞のＭｅｔキナーゼの変異の存在を決定することを更に含み、Ｍｅｔキナーゼの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性と相関する、請求項１から１７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
方法が細胞のＢ−Ｒａｆ又はＫ−Ｒａｓの変異の存在を決定することを更に含み、Ｂ−Ｒａｆ又はＫ−Ｒａｓの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の低下と相関する、請求項１から１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
方法が、細胞におけるＦＯＸＯ３ａの局在化プロファイルを決定することを更に含み、
ＦＯＸＯ３ａの細胞質局在化プロファイルがＡｋｔ阻害剤による阻害に対する細胞の感受性と相関する、請求項１から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
方法が細胞のＩＮＰＰ４Ｂ、ＰＨＬＰＰ、及び／又はＰＰ２Ａの状態を決定することを更に含み、ＩＮＰＰ４Ｂ、ＰＨＬＰＰ、及び／又はＰＰ２Ａの欠損が阻害剤に対する感受性の増加と相関する、請求項１から２０の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
患者から得た生理学的サンプルにおいてＡＫＴへの変異の存在を決定することを更に含む、請求項１から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＡＫＴへの変異の存在を決定するための１又は複数の薬剤を含む、ＡＫＴ阻害剤に対する腫瘍細胞の増殖の感受性を予測するためのキットであって、
ＡＫＴへの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性と相関し、
ＡＫＴ阻害剤が（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ、７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン又はその薬学的に許容される塩であり、変異がＬ５２、Ｅ１７又はＱ７９に一致する、キット。
【請求項２４】
腫瘍細胞が、卵巣癌腫瘍細胞、前立腺癌腫瘍細胞、乳癌腫瘍細胞、結腸直腸癌腫瘍細胞、胃癌腫瘍細胞、子宮内膜癌腫瘍細胞、および膵臓癌腫瘍細胞からなる群から選択される、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
１又は複数のＡＫＴ変異を含む癌細胞を治療するための医薬の製造における、（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ、７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン又はその薬学的に許容される塩の使用であって、変異がＬ５２、Ｅ１７又はＱ７９に対応、又は一致する、使用。
【請求項２６】
癌細胞が、卵巣癌腫瘍細胞、前立腺癌腫瘍細胞、乳癌腫瘍細胞、結腸直腸癌腫瘍細胞、胃癌腫瘍細胞、子宮内膜癌腫瘍細胞、および膵臓癌腫瘍細胞からなる群から選択される、請求項２５に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２７】
本発明の実施態様を説明する文脈において用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び類似の用語の使用は、本明細書に示さなれない限り、又は明らかに文脈と矛盾しない限り、単数および複数の両方に及ぶものと解釈されるべきである。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」及び「含む（containing）」は、特に断りのない限り制限の無い（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ）用語（即ち、「含むがこれらに限定されない」を意味する）として解釈されるべきである。本明細書において値の範囲の列挙は、本明細書中示されない限り、その範囲内に入る各別々の値を個々に言及する簡便な方法としての役割を果たすことを単に意図しており、各別個の値はそれが個々に本明細書に記載されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に詳述される順番に加えて、本明細書に記載される方法は、本明細書中に示されているか、又はそうでなければ明らかに文脈と矛盾しない限り、任意の適切な順序で行うことができる。本明細書で提供される任意の及び全ての実施例、又は例示的言語（例えば「等」（such as））の使用は、単により良く本発明の実施態様の理解を容易にするために意図されており、他に特許請求の範囲に特に記載されない限り、必ずしも本発明の範囲に制限を課すものではない。本明細書中の如何なる語句も、任意の非請求要素が本発明の実施に不可欠であることを示すとして解釈されるべきではない。
＜本発明の更なる実施態様＞
［実施態様１］
ＡＫＴへの変異の存在を決定することを含む、ＡＫＴ阻害剤に対する腫瘍細胞の増殖の感受性を予測する方法であって、ＡＫＴへの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性と相関する方法。 
［実施態様２］ 
ＡＫＴへの変異の存在が、ＡＴＰ競合的ＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の増加と相関する、実施態様１に記載の方法。 
［実施態様３］ 
ＡＫＴへの変異の存在が、アロステリックＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の減少と相関する、実施態様１に記載の方法。 
［実施態様４］ 
ＡＫＴへの変異の存在が、パン−ＰＩ３Ｋ ＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の減少と相関する、実施態様１に記載の方法。 
［実施態様５］ 
変異が、表１、表２、図２，図３、図１６又は図１７に示される変異に対応する、又は一致する、実施態様１から４の何れか一に記載の方法。 
［実施態様６］ 
変異が、Ｌ５２、Ｋ１８９又はＤ３２３に対応する、又は一致する、実施態様５に記載の方法。 
［実施態様７］ 
ＡＫＴがＡＫＴ１、ＡＫＴ２又はＡＫＴ３である、実施態様１から６の何れか一項に記載の方法。 
［実施態様８］ 
ＡＫＴがＡＫＴ１である、実施態様７に記載の方法。 
［実施態様９］ 
ＡＫＴへの変異がＡＫＴのＰＨ−ドメインとキナーゼドメインの間の相互作用を破壊する、実施態様１から８の何れか一に記載の方法。 
［実施態様１０］ 
ＡＫＴへの変異がＡＫＴのリン酸化を増加させる、実施態様１から９の何れか一に記載の方法。 
［実施態様１１］ 
リン酸化の増加が構成的リン酸化に起因する、実施態様１０に記載の方法。 
［実施態様１２］ 
方法が細胞のＰＴＥＮの状態を決定することを更に含み、ＰＴＥＮの欠損が阻害剤に対する感受性の増加と相関する、実施態様１から１１の何れか一に記載の方法。 
［実施態様１３］ 
腫瘍細胞が卵巣癌又は前立腺癌腫瘍細胞である、実施態様１２に記載の方法。 
［実施態様１４］ 
方法が細胞のＰＩ３Ｋの変異の存在を決定することを更に含み、ＰＩ３Ｋの変異の存在が阻害剤による阻害に対する感受性の増加と相関する、実施態様１から１３の何れか一に記載の方法。 
［実施態様１５］ 
前記ＰＩ３Ｋの変異が、Ｈ１０４７Ｒ及びＨ１０４７Ｌのうち一つ又は両方である、実施態様１４に記載の方法。 
［実施態様１６］ 
方法が細胞のｐＡＫＴプロファイルを決定することを更に含み、ｐＡＫＴの高活性プロファイルが阻害剤による阻害に対する感受性の増加と相関する、実施態様１から１５の何れか一に記載の方法。 
［実施態様１７］ 
方法が細胞のｐＡＫＴプロファイルを決定することを更に含み、ｐＡＫＴの低活性プロファイルが阻害剤による阻害に対する感受性の低下と相関する、実施態様１から１６の何れか一に記載の方法。 
［実施態様１８］ 
方法が細胞のＨｅｒ２及び／又はＨｅｒ３の状態を決定することを更に含み、細胞のＨｅｒ２＋及び／又はＨｅｒ３＋状態が阻害剤による阻害に対する感受性の増加と相関する、実施態様１から１７の何れか一に記載の方法。 
［実施態様１９］ 
方法が細胞のＭｅｔキナーゼの変異の存在を決定することを更に含み、Ｍｅｔキナーゼの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性と相関する、実施態様１から１８の何れか一に記載の方法。 
［実施態様２０］ 
方法が細胞のＢ−Ｒａｆ又はＫ−Ｒａｓの変異の存在を決定することを更に含み、Ｂ−Ｒａｆ又はＫ−Ｒａｓの変異の存在がＡＫＴ阻害剤に対する細胞の感受性の低下と相関する、実施態様１から１９の何れか一に記載の方法。 
［実施態様２１］ 
方法が、細胞におけるＦＯＸＯ３ａの局在化プロファイルを決定することを更に含み、
ＦＯＸＯ３ａの細胞質局在化プロファイルがＡｋｔ阻害剤による阻害に対する細胞の感受性と相関する、実施態様１から２０の何れか一に記載の方法。 
［実施態様２２］ 
腫瘍細胞が、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、胃癌、又は膵臓癌細胞である、実施態様１から１２又は１４から２１の何れか一に記載の方法。 
［実施態様２３］ 
腫瘍細胞が内分泌抵抗性乳癌細胞である、実施態様２２に記載の方法。 
［実施態様２４］ 
方法が細胞のＩＮＰＰ４Ｂ、ＰＨＬＰＰ、及び／又はＰＰ２Ａの状態を決定することを更に含み、ＩＮＰＰ４Ｂ、ＰＨＬＰＰ、及び／又はＰＰ２Ａの欠損が阻害剤に対する感受性の増加と相関する、実施態様１から２３の何れか一に記載の方法。 
［実施態様２５］ 
ＡＫＴ阻害剤が、（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ、７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン又はその薬学的に許容される塩である、実施態様１から２４の何れか一に記載の方法。
［実施態様２６］ 
ＡＫＴへの変異の存在を決定するために患者から生理学的サンプルを得ることを更に含む、実施態様１から２５の何れか一に記載の方法。 
［実施態様２７］ 
生理学的サンプル中のＡＫＴの変異の存在を決定することを更に含む、実施態様２６に記載の方法。 
［実施態様２８］ 
ＡＫＴへの変異の存在が確定される患者に、ＡＫＴ阻害剤が投与されるべきであると知らせることを更に含む、実施態様１から２７の何れか一に記載の方法。 
［実施態様２９］ 
ＡＫＴへの変異の存在が確定される患者に、ＡＫＴ阻害剤が投与されるべきでないと知らせることを更に含む、実施態様１から２７の何れか一に記載の方法。 
［実施態様３０］ 
ＰＩ３ｋ、ＰＴＥＮ及びＡＫＴの変異の一以上を含む癌細胞を処置する方法であって、該細胞にＧＤＣ−００６８又はその塩を投与することを含む方法。
【外国語明細書】
2020022457000001.pdf