(57)【要約】      （修正有）【課題】非免疫抑制シクロスポリンＡ誘導体であるアリスポリビルなど、環式ウンデカペプチドの製造のために有用な方法および中間体を提供する。【解決手段】シクロスポリンを、ブテニル−メチル−トレオニン側鎖上でアシル化し、次いで、開環反応させる（環をサルコシンとＮ−メチル-ロイシン残基との間で開く）。例えば、ＣｓＡから開始するとき、配列Ｖａｌ−Ｎ（Ｍｅ）Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｎ（Ｍｅ）Ｌｅｕ−Ｎ（Ｍｅ）Ｌｅｕ−Ｎ（Ｍｅ）Ｖａｌ−Ｎ（Ｍｅ）ＢｍｔＡｂｕ−Ｓａｒの第２の直鎖状デカペプチド中間体を得ることについては、この直鎖状ペプチド中間体をエドマン分解（Ｎ−末端残基を除去）させることを含む方法を開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式３の化合物またはその塩
【化１８】
2020033349.tif 000019
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］を調製するための方法であって、
シクロスポリンＡをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；
アセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物を得るステップとを含
む方法。
【請求項２】
式４の化合物またはその塩
【化１９】
2020033349.tif 000020
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］を調製するための請求項１に記載の方法であって、
式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
前記化合物を結晶化して式４の化合物を得るステップとを含む方法。
【請求項３】
式４の化合物またはその塩
【化２０】
2020033349.tif 000021
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］を調製するための方法であって、
ｉ）シクロスポリンＡをアシル化してアセチル−シクロスポリンＡを形成するステップ
と；
ｉｉ）アセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
ｉｉｉ）開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物
【化２１】
2020033349.tif 000022
またはその塩を得るステップと；
ｉｖ）式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで
ｖ）前記化合物を結晶化して式４の化合物またはその塩を得るステップとを含む方法。
【請求項４】
式３の化合物またはその塩
【化２２】
2020033349.tif 000023
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］。
【請求項５】
式４の化合物またはその塩
【化２３】
2020033349.tif 000024
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］。
【請求項６】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞８０重量％である、請求項１または３に記載の
方法。
【請求項７】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞８５重量％である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
出発物質シクロスポリンＡ）の純度が、アッセイで６０〜８０重量％である、請求項７
に記載の方法。
【請求項９】
シクロスポリンＡ、シクロスポリンＢから、またはシクロスポリンＤから、またはシク
ロスポリンＧから、式３の化合物またはその塩
【化２４】
2020033349.tif 000025
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルであり、Ｒ２は、メチル、エチル、またはプロピルである］を調製する方法であっ
て、
シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ
、Ｄ、またはＧを形成するステップと；
アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを開環するステップと；
開環されたアセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを結晶化して式３の化合物を
得るステップとを含む方法。
【請求項１０】
式４の化合物またはその塩
【化２５】
2020033349.tif 000026
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルであり、Ｒ２は、メチル、エチル、またはプロピルである］を調製するための請求
項９に記載の方法であって、
式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
前記化合物を結晶化して式４の化合物を得るステップとを含む方法。
【請求項１１】
式４の化合物またはその塩
【化２６】
2020033349.tif 000027
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルであり、Ｒ２は、メチル、エチル、またはプロピルである］を調製する方法であっ
て、
ｖｉ）シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧをアシル化して、アセチル−シクロスポリ
ンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを形成するステップと；
ｖｉｉ）アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを開環するステップと；
ｖｉｉｉ）開環されたアセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを結晶化して式
３の化合物またはその塩
【化２７】
2020033349.tif 000028
を得るステップと；
ｉｘ）式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
ｘ）前記化合物を結晶化して式４の化合物またはその塩を得るステップとを含む方法。
【請求項１２】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞９０重量％である、請求項９または１１に記載
の方法。
【請求項１３】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞９２重量％である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
出発物質シクロスポリンＡ）の純度が、アッセイで６０〜８０重量％である、請求項１
３に記載の方法。
【請求項１５】
式３の化合物またはその塩
【化２８】
2020033349.tif 000029
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルであり、Ｒ２は、メチル、エチル、またはプロピルである］。
【請求項１６】
式４の化合物またはその塩
【化２９】
2020033349.tif 000030
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルであり、Ｒ２は、メチル、エチル、またはプロピルである］。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロスポリン誘導体の開環、続いて、環式ポリペプチド、より具体的には
、（ＤＥＢ０２５、Ｄｅｂｉｏ０２５、またはＤｅｂｉｏとしても知られる）アリスポリ
ビルなどの環式ウンデカペプチドの調製に有用な新規な方法、新規なプロセスステップお
よび新規の中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、環式ポリペプチド、例えば、アリスポリビルなどの環式ウンデカペプチドな
どの調製のための方法に関する。
【０００３】
アリスポリビルは、ＷＯ２００６／０３８０８８に記載されているＣ型肝炎ウイルス（
ＨＣＶ）感染症またはＨＣＶによって誘発される障害の治療のために用いられるシクロフ
ィリン（Ｃｙｐ）阻害薬である。さらに、ＷＯ２００９／０４２８９２には、多発性硬化
症の治療においてアリスポリビルを使用するための方法が記載されており；ＷＯ２００９
／０９８５７７には、筋ジストロフィーの治療においてアリスポリビルを使用するための
方法が記載されており；ＷＯ２００８／０８４３６８には、ウルリッヒ先天性筋ジストロ
フィーの治療においてアリスポリビルを使用するための方法が記載されている。
【０００４】
アリスポリビルおよびその合成は、ＷＯ００／０１７１５に記載されている。アリスポ
リビルは、ＣＡＳ登録番号２５４４３５−９５−５が付与されている。
【０００５】
実験室スケールでアリスポリビルを調製するための方法は、ＷＯ２００６／０３８０８
８およびＷＯ２００８／０８４３６８において、J.F.Guichouxの「De nouveaux analogue
s de Cycloposrine A comme agent anti-HIV-1」 PhD thesis、Faculte des Sciences de
L'Universite de Lausanne、2002年が記載されている。
【０００６】
下記に示す通り、環式ウンデカペプチドは、式（Ｉａ）［式中、ｎ＝２である］の環式
ポリペプチドである。
【０００７】
アリスポリビル（式Ｉ）は、式（Ｉｂ）［式中、ｎ＝２であり、ａａ１は、Ｄ−ＭｅＡ
ｌａであり、ａａ２は、ＥｔＶａｌである］の環式ウンデカペプチドである。
【０００８】
【化１】
2020033349.tif 000002
【０００９】
一般的な式：
シクロ−（ＡＸＸ１−ＡＸＸ２−ＡＸＸ３−ＡＸＸ４−ＡＸＸ５−ＡＸＸ６−ＡＸＸ−７
−ＡＸＸ８−ＡＸＸ９−ＡＸＸ１０−ＡＸＸ１１）は、最重要なＳａｒフラグメントで作
製された断片化としてＷＯ２０１０／０５２５５９  Ａ１の事例からの例を包含するもの
とする。
ＡＸＸ１＝ＭｅＢｍｔ、Ｂｍｔ、ＭｅＬｅｕ、デソキシ−ＭｅＢｍｔ、メチルアミノオク
タン酸
ＡＸＸ２＝Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｎｖａ
ＡＸＸ３＝Ｓａｒ
ＡＸＸ４＝ＭｅＬｅｕ、Ｖａｌ
ＡＸＸ５＝Ｖａｌ、Ｎｖａ
ＡＸＸ６＝ＭｅＬｅｕ、Ｌｅｕ
ＡＸＸ７＝Ａｌａ、Ａｂｕ
ＡＸＸ８＝Ｄ−Ａｌａ
ＡＸＸ９＝ＭｅＬｅｕ、Ｌｅｕ
ＡＸＸ１０＝ＭｅＬｅｕ、Ｌｅｕ
ＡＸＸ１１＝ＭｅＶａｌ、Ｖａｌ、Ｄ−ＭｅＶａｌ
【００１０】
および他の組み合わせのすべては、ＷＯ２０１０／０５２５５９  Ａ１において包含さ
れた。
【００１１】
数年間にわたって、シクロスポリンＡ（ＣｙＡ）は、炎症性もしくはウイルス性疾患の
治療のために有用である種々の合成環式ウンデカペプチドのための原料として用いられて
きた。環式ウンデカペプチドは、菌株の選択によって得ることができるが、しかしながら
、ほとんどの天然でない誘導体を得るには、例えば、式（Ｉａ）もしくは式（Ｉｂ）の環
式ポリペプチドの開環、その後のアミノ酸置換を利用する化学転換を必要とする。
【００１２】
従来から、例えば、式（Ｉａ）の環式ポリペプチドを、選択性が高い方法で開環し、ア
ミノ酸残基を、エドマン分解によって除去して、最重要な中間体として開環された環式ポ
リペプチドにアクセスする（Wenger, R.M.In Peptides 1996年；Ramage, R.；Epton, R.
編;The European Peptides Society、1996年；pp.173；Wenger, R.M.ら、Tetrahedron Le
tters 2000年、41巻、7193頁.）。多数の科学者および企業は、純粋なシクロスポリンＡ
およびカラムクロマトグラフィーによる精製を用いて環式ウンデカペプチドを得られるこ
の信頼できるおよび選択的な戦略を用いている。
【００１３】
さらに、開環されたシクロスポリンＡなどの生成物の精製は、シリカでの液体クロマト
グラフィーによる精製のいくつかのステップを含む。全体的に得られる収率が並みである
ことの他に、精製スキームの主な欠点は、クロマトグラフィーのステップに対するコスト
が非常にかかることである。文献に記載されるシクロスポリンＡもしくはその構造的類似
体に由来するかかる生成物の大規模な精製プロセスは、一般に、クロマトグラフィーによ
る精製または少なくとも吸着クロマトグラフィーによる精製前を含む。かかる精製前は、
例えば、抽出、向流抽出および／または超臨界流体抽出を採用してもよい。
【００１４】
しかしながら、コストのかかる高品質な前駆体が必要となるため、これらの技法はどれ
も、所望の品質要件、許容される全収率、および産業規模の生産のために許容されるコス
トで最重要な開環された中間体を得るために十分に満足がいくようなものではないと思わ
れる。
【００１５】
本発明者らは、ジメトキシカルベニウムイオン（セファロスポリン誘導体のメチル化に
ついてＮｏｖａｒｔｉｓ社の特許出願ＥＰ０９０８４６１  Ａ１に記載されている）が、
大環式ポリペプチドの開環においてオキソニウムイオン（トリメチルもしくはトリエチル
オキソニウムメールワイン塩）と同じ化学的反応をすることを同定した。新たな条件は、
有利には、ｉｎ  ｓｉｔｕで調製することができ、したがって、吸湿性の危険物質の取扱
いを回避すると、ジクロロメタンまたはジクロロエタンなどの望ましくない塩素化された
溶媒を用いる必要性をなくし、例えば、トルエン、キシレン、アニソールなどの種々の溶
媒中で進行させ、遺伝毒性のエピクロロヒドリン（epichlorhydrin）から生じるオキソニ
ウムメールワイン塩を用いないようにすることができる。専用のカルベニウムテトラフル
オロホウ酸塩または三フッ化ホウ素およびオルトエステル誘導体、好ましくは、オルトギ
酸トリメチルの反応によって作製された、ｉｎ  ｓｉｔｕで生成された反応種は、下記の
化合物３などの所望の開環されたポリペプチドをもたらす。
【００１６】
本発明者らは、選択性が高いエドマン分解戦略の利点を維持しながら、新たに同定され
た結晶性の中間体を十分に利用する改善された方法を同定した。
【００１７】
以下の開示は、結晶化などの方法によって、シクロスポリンＡ
【００１８】
【化２】
2020033349.tif 000003
【００１９】
シクロスポリンＢ
【００２０】
【化３】
2020033349.tif 000004
シクロスポリンＤ
【００２１】
【化４】
2020033349.tif 000005
またはシクロスポリンＧ
【００２２】
【化５】
2020033349.tif 000006
【００２３】
の開環およびこれらを生成し精製する方法により誘導された新たに単離した結晶性の中間
体を示す。この手法によって、開環されたシクロスポリンＡ、シクロスポリンＢ、シクロ
スポリンＤもしくはシクロスポリンＧへの速やかな、実用的なおよびさらにより効果的な
アクセスが可能になり、この手法は、アリスポリビルなどの環式ウンデカペプチドを生成
するために用いることができる。さらに、本開示による方法は、同じ順序によって開環す
ることができる他のシクロスポリンに適用することもできる。塩酸（ＨＣｌ）、フルオロ
ホウ酸（ＨＢＦ４）、またはヘキサフルオロリン酸（ＨＰＦ６）など、開環されたシクロ
スポリン塩を、いくつかの段階で形成させることができるということが判明した。
【００２４】
本発明は、アセタート、ピバロアート（pivaloate）などのシロスポリン（cylosporine
）エステルおよびＨＣｌ塩、ＨＢＦ４塩もしくはＨＰＦ６塩などの開環されたシクロスポ
リンＡ、シクロスポリンＢ、シクロスポリンＤまたはシクロスポリンＧ塩など、新規の結
晶性中間体、ならびにそれらを生成する方法を提供する。
【発明の概要】
【００２５】
式３の化合物またはその塩
【００２６】
【化６】
2020033349.tif 000007
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］を調製するための方法を提供する。本方法は、シクロスポリンＡをアシル
化して、アセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；アセチル−シクロスポリン
Ａを開環するステップと；開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化
合物を得るステップとを含む。
【００２７】
式４の化合物またはその塩
【００２８】
【化７】
2020033349.tif 000008
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］を調製するための方法を提供する。本方法は、式３の化合物をエドマン分
解するステップと；次いで、その化合物を結晶化して式４の化合物を得るステップとを含
む。
【００２９】
式４の化合物またはその塩
【００３０】
【化８】
2020033349.tif 000009
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］を調製するための方法を提供する。本方法は、シクロスポリンＡをアシル
化してアセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；アセチル−シクロスポリンＡ
を開環するステップと；開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３
【００３１】
【化９】
2020033349.tif 000010
の化合物を得るステップと；
式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、その化合物を結晶化して式４の
化合物またはその塩を得るステップとを含む。
【００３２】
式３の化合物またはその塩
【００３３】
【化１０】
2020033349.tif 000011
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］が提供される。
【００３４】
式４の化合物またはその塩
【００３５】
【化１１】
2020033349.tif 000012
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】化合物３についてのプロトンＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２】化合物４についてのプロトンＮＭＲスペクトルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
環式ポリペプチド、より具体的には、アリスポリビルなどの環式ウンデカペプチドを生
成するための本発明による一般的な方法を、下記のスキームに示すが；しかしながら、こ
の一般的なスキームは、環式ポリペプチド、より具体的には、シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ
、またはＧに由来する環式ウンデカペプチドを作製するために用いることもできる。
【００３８】
【化１２】
2020033349.tif 000013
【００３９】
詳細には、アリスポリビルは、上記に示される通り、シクロスポリンＡをアシル化して
アセチル−シクロスポリンＡ（２）を形成し；開環させ；結晶化して化合物３を得、化合
物３をエドマン分解し；結晶化して化合物４を得、次いで、化合物４を閉環して（下記に
示す通り）アリスポリビルを形成することにより、シクロスポリンＡ（Ｒ２がエチルであ
る化合物（１））を式４の化合物に変換することにより作製することができる。
【００４０】
【化１３】
2020033349.tif 000014
【００４１】
本発明は、特に、各セクションに記載されている方法に関する。同様に、本発明は、独
立に、対応するセクション内のプロセス順序に記載されるすべての単一のステップに関す
る。したがって、本明細書に記載されている一連のステップからなる任意のプロセスのう
ちのそれぞれのおよびすべての単一のステップは、それ自体、本発明の好ましい実施形態
である。したがって、本発明はまた、本方法の実施形態に関し、これによれば、本方法の
任意のステップにおける中間体として得られる化合物は、出発物質として用いられる。
【００４２】
本発明はまた、本発明による化合物の調製のために特に開発している中間体、これらの
使用およびこれらの調製方法に関する。
【００４３】
本出願において、１セクション中でなされた説明はまた、別段の記載がない限り、他の
セクションに適用可能であり得ることにも留意すべきである。
【００４４】
シクロスポリンＡ、シクロスポリンＢ、シクロスポリンＤまたはシクロスポリンＧもし
くはそれらの塩は、例えば、発酵によって調製することができる。
【００４５】
一実施形態では、本発明は、シクロスポリンＡ、シクロスポリンＢ、シクロスポリンＤ
またはシクロスポリンＧをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、もしく
はＧを形成するステップと；開環するステップと；結晶化するステップとを含む、式３の
化合物を調製する方法に関する。
【００４６】
一実施形態では、本発明は、式３の化合物をエドマン分解するステップと、当技術分野
で周知の反応を行うステップと、それを結晶化して式４の化合物を得るステップとを含む
、式４の化合物またはその塩を調製する方法に関する。
【００４７】
本発明の他の実施形態は、式３または式４の化合物を調製する方法に関し、出発物質シ
クロスポリンＡの純度は、＞８０重量％である。
【００４８】
本発明の他の実施形態は、式３または式４の化合物を調製する方法に関し、出発物質シ
クロスポリンＡの純度は、＞８５重量％である。
【００４９】
本発明の他の実施形態は、式３または式４の化合物を調製する方法に関し、出発物質シ
クロスポリンＡの純度は、アッセイで６０〜８０重量％である。
【００５０】
上記で示される方法では、新規のおよび進歩性のある化合物が含まれる。その結果、本
発明のさらなる対象は、下記に示される化合物である。
【００５１】
式３の化合物またはそれらの塩
【００５２】
【化１４】
2020033349.tif 000015
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルであり、Ｒ２は、メチル、エチル、またはプロピルである］。
【００５３】
式４の化合物またはそれらの塩
【００５４】
【化１５】
2020033349.tif 000016
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルであり、Ｒ２は、メチル、エチル、またはプロピルである］。
【００５５】
式３の化合物またはそれらの塩
【００５６】
【化１６】
2020033349.tif 000017
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］。
【００５７】
式４の化合物またはそれらの塩
【００５８】
【化１７】
2020033349.tif 000018
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたは
エチルである］。
【００５９】
以下の実施例は、反応ステップ、中間体および／または本発明の方法の好ましい実施形
態を表し、その範囲を制限することなく本発明を例示する。
【００６０】
メルワイン（Merwein）塩との化合物３ＨＢＦ４塩の調製
アセチル−シクロスポリンＡ（そのままの状態で１００ｇ）を、ジクロロメタン（１８
０ｍＬ）中で２０〜２５℃でトリメチルオキソニウムテトラフルオロボラート（３２ｇ）
と反応させた。２０ｈ後、アセトニトリル（２００ｍＬ）および水（６５０ｍＬ）を加え
て、加水分解を行った。３ｈ後、２０〜２５℃で、これらの相を分離し、反応混合物を、
２−メチル−テトラヒドロフランによる共沸蒸留（溶媒交換ジクロロメタン／２−メチル
−テトラヒドロフラン）により乾燥した。次いで、所望の生成物を、２−メチル−テトラ
ヒドロフラン（９００ｍＬ）および２−メトキシ−２−メチルプロパン（４００ｍＬ）か
ら結晶化して白色の結晶粉末として化合物３ＨＢＦ４を生成した（乾燥後６３．９ｇ、純
度＞９２％）。
0.69, (3H, d, J = 6.6Hz); 0.71, (3H, d, J = 6.5Hz); 0.81, (6H, m); [0.82 .. 0.89
], (24H, m); 0.90, (3H, d, J = 6.6Hz); 0.93, (3H, d, J = 6.6Hz); 1.16, (6H, m); 
[1.23 .. 1.50], (4H, m); 1.52, (1H, m); [1.32 .. 1.73], (8H, m); 1.59, (3H, d, J
= 6.0Hz); 1.65, (2H, m); 1.65, 2.13, (2H, m); 1.93, 1.94, (3H, s); 2.03, (1H, m
); 2.19, (1H, m); 2.45, (3H, s); 2.72, (3H, s); 2.84, (3H, s); 2.86, (3H, s); 2.
99, (3H, s); 3.02, (3H, s); 3.06, (3H, s); 3.62, 3.68, (3H, s); 3.78, (1H, m); 3
.87, 4.53, (1H, d, J = 17.2Hz, 18.6Hz); 4.10, 4.26, (1H, d, J = 18.6Hz, 16.8Hz);
4.23, (1H, m); 4.60, (1H, m); 4.62, (1H, m); 4.66, (1H, m); 5.02, (1H, m); 5.13
, (1H, dd, J = 11.3Hz, 4.7Hz); 5.26, (1H, m); 5.29, (1H, m); 5.32, (1H, m); 5.36
, (1H, m); 5.39, (2H, m); 7.72, (1H, d, J = 7.3Hz); 8.14, (1H, d, J = 7.3Hz); 8.
21, 8.35, (1H, d, J = 7.3Hz, 8.1Hz); 8.85, (2H, s, br); 8.96, (1H, d, J = 8.4Hz)
.
【００６１】
オルトギ酸トリメチルおよびボロントリフルオリドエーテラートの使用による化合物３Ｈ
ＢＦ４塩の調製
アセチル−シクロスポリンＡ（１０ｇ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液を、−１５
℃でテトラフルオロホウ酸ジメトキシカルベニウムのスラリに加え、−２０℃で三フッ化
ホウ素（２ｍｌ）をオルトギ酸トリメチル（２ｍｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液
にゆっくりと添加することにより生成した。添加後、室温に温まるまでスラリを放置し、
２０ｈ撹拌し続けた。その後、アセトニトリル（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）を加え
た。０℃で２ｈ撹拌してから、相を分割した。次いで、有機相を水で洗浄し、溶媒を２−
メチル−テトラヒドロフランに切り替え、２−メトキシ−２−メチルプロパンで飽和させ
た後、減圧下で乾燥させた白色固形物として化合物３を得た（５．１ｇ、＞９０％純度）
（図１を参照のこと）。
【００６２】
化合物ＨＢＦ４塩の調製：
化合物３の前もって調製した塩（３４．６２ｇ）を炭酸ナトリウム（４．８ｇ）、トル
エン（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）と共に反応器に仕込んだ。得られた混合物を、２
０〜２５℃で３０分間撹拌し、これらの相を分離した。フェニルイソチオシアナート（３
．８１ｇ）を２０〜２５℃で１ｈ滴加し、得られた反応混合物を完了まで撹拌した。次い
で、メタノール（２０ｍＬ）、および水中の４８％フルオロホウ酸（２．５ｇ）を加え、
混合物をさらに１ｈ撹拌した。次いで、水（２５ｍＬ）を加え、これらの相を分割した。
水層を再度トルエン（５０ｍＬ）で抽出し、次いで、２−メチル−テトラヒドロフラン（
１００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を共沸により乾燥し、所望の生成物を２−メチル−
テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）および２−メトキシ−２−メチルプロパン（５０ｍＬ
）から結晶化して白色の結晶粉末として化合物４ＨＢＦ４を生成した（約３０ｇ、乾燥後
、＞９３％純度）。（図２を参照のこと）
0.69, (3H, d, J = 6.2Hz); 0.73, (3H, d, J = 7.0Hz); 0.81, (3H, t, J = 7.3Hz, 7.3
Hz); 0.82, (3H, m); 0.85, (9H, m); 0.88, (6H, m); 0.91, (3H, d, J = 7.0Hz); 0.93
, (3H, d, J = 6.6Hz); 0.99, (3H, d, J = 7.0Hz); 1.17, (6H, d, J = 6.6Hz); [1.30 
.. 1.55], (9H, m); 1.60, (3H, d, J = 5.5Hz); [1.56 .. 1.72], (4H, m); 1.93, 1.95
(3H, s); 2.09, (1H, m); 2.14, (1H, m); 2.20, (1H, m); 2.74, (3H, s); 2.82, 3.06
, (3H, s); 2.84, (3H, s); 2.87, (3H, s); 2.94, (3H, s); 3.02, (3H, s); 3.63, 3.6
8, (3H, s); 3.88, 4.52, (1H, d, J = 17.2Hz, 18.6Hz); 4.10, 4.24, (1H, d, J = 18.
7Hz, m); 4.24, (2H, m); 4.39, 4.62, (1H, m); 4.66, (1H, m); 5.02, (1H, m); 5.08,
(1H, m); 5.26, (2H, m); 5.32, (1H, m); 5.37, (1H, m); 5.39, (2H, m); 7.84, 8.51
(1H, d, J = 7.3Hz, 8.1Hz); 7.98, (3H, s, br); 8.07, 8.18 (1H, d, J = 7.7Hz, 7.3
Hz); 8.13, 8.27, (1H, d, J = 7.3Hz, 8.1Hz).
【００６３】
アリスポリビルの調製：
前述の中間体４（約１０９ｇ）を少しずつ１５℃でトルエンおよび炭酸ナトリウム／水
の混合物に加え、１５℃で３時間撹拌した。水相を分離した。ジペプチド（約２８ｇ）お
よびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（８．１ｇ）を０℃で加えた。水（２．
５ｍＬ）を混合物に加え、Ｎ−メチルモルホリン（１７．９ｇ）を−１０℃で添加し、そ
の後、ジシクロヘキシルカルボジイミド（２１．９ｇ）のトルエン溶液を−１０℃で添加
し、その温度で３時間撹拌した。反応混合物を１０時間で０℃まで加熱した。完了時、反
応混合物をろ過し、ろ液を５％炭酸ナトリウム溶液、５％食塩液、２Ｍ塩酸および１０％
食塩液で抽出した。有機相を再度ろ過し、真空中で５０℃で濃縮した。
【００６４】
水素化ホウ素ナトリウム（０．５９ｇ）をジグライム（１４．３ｇ）に２０〜４０℃で
溶解した。混濁した溶液を１２〜１６℃まで冷却した。グリシン（０．５９ｇ）をその温
度で加えた。約６ｇのトルエンの入った溶液の形態の前もって調製した生成物（６．２ｇ
）を１２〜１６℃で白色の懸濁液に添加した。次いで、１２〜１６℃でトルエンにメタノ
ールを加えることにより還元を加速させた。この添加を制御し、３つの部分に分けて行っ
た。反応をさらに３時間撹拌し、内部温度１０〜２０℃で急冷溶液（酢酸溶液）に加えた
。水素発生（蓄積なし）を踏まえて添加の速度を変更した。これらの相を分離し、上部の
有機生成物相を水で抽出し、続いて濃縮した。
【００６５】
前もって調製した生成物（５ｇ）を、トルエン（約５ｇ）に溶解し、４０〜６０分間硫
酸（０．８ｇ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に５０℃で添加した。約２時間後、溶液を
１５〜２０℃まで冷却し、メタノール中の２５％ベンジルトリメチルアンモニウムヒドロ
キシド（約１２ｇ）を添加した（発熱反応）。２時間後、水を添加し、混合物を２２℃で
およそ２０時間撹拌した。完了時、溶液を１０〜１５℃まで冷却し、水で希釈し、希硫酸
で中和した。最上部のトルエン相の分離後、蒸留により下部の生成物相からメタノールを
除去した。分離される油性の生成物を酢酸エチルで抽出し、水および食塩液の順序で洗浄
し、希硫酸でｐＨ７．０〜７．５に調整した。次いで、有機相を共沸により乾燥し、次い
で、０〜５℃の冷ヘプタンに沈殿させた。生成物懸濁液をろ過し、ヘプタンで洗浄し、真
空中で６０℃で乾燥した。
【００６６】
ジクロロメタンに溶解した「ウンデカペプチドアミノ酸」前駆体（全体的な最終質量に
対して５〜１３％）およびジクロロメタンに溶解したＤＣＣを、約１０ｈ並行して連続的
に４０℃でジクロロメタン中のＣｌ−ＨＯＢＴおよびＮＭＭの混合物に加えた。添加の終
了時に、混合物をさらに２ｈ撹拌し、ろ過してＤＣＵ塩を除去し、濃縮して粗生成物とし
てアリスポリビルを得た。
【図１】
2020033349.tif 000031
【図２】
2020033349.tif 000032
【手続補正書】
【提出日】令和1年10月29日(2019.10.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式３の化合物またはその塩
【化１】
2020033349.tif 000033
［式中、Ｒはメチルであり、Ｒ'はメチルであり、Ｒ2はエチルである］を調製するための方法であって、
シクロスポリンＡをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；テトラフルオロホウ酸ジメトキシカルベニウムを用いてアセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物を得るステップ
とを含む方法。
【請求項２】
式４の化合物またはその塩
【化２】
2020033349.tif 000034
［式中、Ｒはメチルであり、Ｒ'はメチルであり、Ｒ2はエチルである］を調製するための方法であって、
請求項１に記載の方法で調製された式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
前記化合物を結晶化して式４の化合物を得るステップとを含む方法。
【請求項３】
式４の化合物またはその塩
【化３】
2020033349.tif 000035
［式中、Ｒはメチルであり、Ｒ'はメチルであり、Ｒ2はエチルである］を調製する方法であって、
ｉ）シクロスポリンＡをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；
ｉｉ）テトラフルオロホウ酸ジメトキシカルベニウムを用いてアセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
ｉｉｉ）開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物またはその塩
【化４】
2020033349.tif 000036
を得るステップと；
ｉｖ）式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
ｖ）前記化合物を結晶化して式４の化合物またはその塩を得るステップとを含む方法。
【請求項４】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞８０重量％である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞８５重量％である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、アッセイで６０〜８０重量％である、請求項１または３に記載の方法。
【請求項７】
シクロスポリンＡから式３の化合物またはその塩
【化５】
2020033349.tif 000037
［式中、Ｒはメチルであり、Ｒ'はメチルであり、Ｒ2はエチルである］を調製する方法であって、
シクロスポリンＡをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；
テトラフルオロホウ酸ジメトキシカルベニウムを用いてアセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物を得るステップ
とを含む方法。
【請求項８】
式４の化合物またはその塩
【化６】
2020033349.tif 000038
［式中、Ｒはメチルであり、Ｒ'はメチルであり、Ｒ2はエチルである］を調製するための方法であって、
請求項７に記載の方法により調製された式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
前記化合物を結晶化して式４の化合物を得るステップとを含む方法。
【請求項９】
式４の化合物またはその塩
【化７】
2020033349.tif 000039
［式中、Ｒはメチルであり、Ｒ'はメチルであり、Ｒ2はエチルである］を調製するための方法であって、
ｖｉ）シクロスポリンＡをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；
ｖｉｉ）テトラフルオロホウ酸ジメトキシカルベニウムを用いてアセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
ｖｉｉｉ）開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物またはその塩
【化８】
2020033349.tif 000040
を得るステップと；
ｉｘ）式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
ｘ）前記化合物を結晶化して式４の化合物またはその塩を得るステップとを含む方法。
【請求項１０】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞９０重量％である、請求項７または９に記載の方法。
【請求項１１】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞９２重量％である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
出発物質シクロスポリンＡの純度が、アッセイで６０〜８０重量％である、請求項７または９に記載の方法。
【請求項１３】
【化９】
2020033349.tif 000041
の結晶性ＨＢＦ4塩。
【請求項１４】
【化１０】
2020033349.tif 000042
の結晶性ＨＢＦ4塩。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
ジクロロメタンに溶解した「ウンデカペプチドアミノ酸」前駆体（全体的な最終質量に対して５〜１３％）およびジクロロメタンに溶解したＤＣＣを、約１０ｈ並行して連続的に４０℃でジクロロメタン中のＣｌ−ＨＯＢＴおよびＮＭＭの混合物に加えた。添加の終了時に、混合物をさらに２ｈ撹拌し、ろ過してＤＣＵ塩を除去し、濃縮して粗生成物としてアリスポリビルを得た。
本願は以下の発明に関するものである。
（１）  式３の化合物またはその塩
【化１８】
2020033349.tif 000043
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルである］を調製するための方法であって、
シクロスポリンＡをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；
アセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物を得るステップとを含む方法。
（２）  式４の化合物またはその塩
【化１９】
2020033349.tif 000044
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルである］を調製するための前記１に記載の方法であって、
式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
前記化合物を結晶化して式４の化合物を得るステップとを含む方法。
（３）  式４の化合物またはその塩
【化２０】
2020033349.tif 000045
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルである］を調製するための方法であって、
ｉ）シクロスポリンＡをアシル化してアセチル−シクロスポリンＡを形成するステップと；
ｉｉ）アセチル−シクロスポリンＡを開環するステップと；
ｉｉｉ）開環されたアセチル−シクロスポリンＡを結晶化して式３の化合物
【化２１】
2020033349.tif 000046
またはその塩を得るステップと；
ｉｖ）式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで
ｖ）前記化合物を結晶化して式４の化合物またはその塩を得るステップとを含む方法。
（４）  式３の化合物またはその塩
【化２２】
2020033349.tif 000047
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルである］。
（５）  式４の化合物またはその塩
【化２３】
2020033349.tif 000048
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルである］。
（６）  出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞８０重量％である、前記（１）または（３）に記載の方法。
（７）  出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞８５重量％である、前記（６）に記載の方法。
（８）  出発物質シクロスポリンＡ）の純度が、アッセイで６０〜８０重量％である、前記（７）に記載の方法。
（９）  シクロスポリンＡ、シクロスポリンＢから、またはシクロスポリンＤから、またはシクロスポリンＧから、式３の化合物またはその塩
【化２４】
2020033349.tif 000049
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルであり、Ｒ2は、メチル、エチル、またはプロピルである］を調製する方法であって、
シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを形成するステップと；
アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを開環するステップと；
開環されたアセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを結晶化して式３の化合物を得るステップとを含む方法。
（１０）  式４の化合物またはその塩
【化２５】
2020033349.tif 000050
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルであり、Ｒ2は、メチル、エチル、またはプロピルである］を調製するための前記９に記載の方法であって、
式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
前記化合物を結晶化して式４の化合物を得るステップとを含む方法。
（１１）  式４の化合物またはその塩
【化２６】
2020033349.tif 000051
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルであり、Ｒ2は、メチル、エチル、またはプロピルである］を調製する方法であって、
ｖｉ）シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧをアシル化して、アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを形成するステップと；
ｖｉｉ）アセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを開環するステップと；
ｖｉｉｉ）開環されたアセチル−シクロスポリンＡ、Ｂ、Ｄ、またはＧを結晶化して式３の化合物またはその塩
【化２７】
2020033349.tif 000052
を得るステップと；
ｉｘ）式３の化合物をエドマン分解するステップと；次いで、
ｘ）前記化合物を結晶化して式４の化合物またはその塩を得るステップとを含む方法。
（１２）  出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞９０重量％である、前記（９）または（１１）に記載の方法。
（１３）  出発物質シクロスポリンＡの純度が、＞９２重量％である、前記（１２）に記載の方法。
（１４）  出発物質シクロスポリンＡ）の純度が、アッセイで６０〜８０重量％である、前記（１３）に記載の方法。
（１５）  式３の化合物またはその塩
【化２８】
2020033349.tif 000053
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルであり、Ｒ2は、メチル、エチル、またはプロピルである］。
（１６）  式４の化合物またはその塩
【化２９】
2020033349.tif 000054
［式中、Ｒは、メチル、エチル、プロピルまたはフェニルであり、Ｒ’は、メチルまたはエチルであり、Ｒ2は、メチル、エチル、またはプロピルである］。
【外国語明細書】
2020033349000001.pdf