(57)【要約】      （修正有）【課題】商業生産およびヒトにおける治療的使用に適した特性を有するオンコスタチンＭ受容体抗原結合タンパク質を提供すること。【解決手段】抗体および機能的フラグメント、誘導体、突然変異タンパク質、およびそれらの変異体などの、抗オンコスタチンＭ受容体β（ＯＳＭＲ）抗原結合タンパク質を開示する。ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲへのＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１の結合を妨げる。抗ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲに関連した疾患および障害を研究する上で有用なツールであり、特に、ＯＳＭＲに関連した疾患および障害の治療方法及びＯＳＭＲへのＯＳＭ及び/またはＩＬ−３１の結合方法において特に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）抗原結合タンパク質、単離核酸または医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年５月３０日に出願されたＵＳ  Ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌ  Ａｐｐｌ.Ｎｏ.６１／８２９，０８２への優先権の利益を主張するものであり、その内容は、本明細書において全体が参照により組込まれる。
【背景技術】
【０００２】
オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）とインターロイキン３１（ＩＬ−３１）は、ＩＬ−６スーパーファミリーのメンバーであり、受容体サブユニットのオンコスタチンＭ受容体−β（ＯＳＭＲ）を共有する（Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ.，Ｎａｔ.Ｉｍｍｕｎｏｌ．５（７）：７５２−６０，２００４）。ＩＬ−３１を除き、このファミリーのメンバーのすべてが、その多量体受容体複合体に糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０）の共通の鎖を共有している。ＯＳＭは、ＯＳＭＲとｇｐ１３０を含むヘテロ二量体受容体複合体を介して信号を送達するとともに、ＩＬ−３１は、ＯＳＭＲとの組み合わせで、ｇｐ１３０様受容体、ＩＬ−３１Ｒ、を利用する（Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ，ｓｕｐｒａ；Ｄｒｅｎｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７9（３４）：３６１１２−２０，２００４）。一般
に、ＯＳＭＲとｇｐ１３０は、組織および細胞タイプにわたってかなり普遍的に発現され、様々な刺激条件下で誘発され得る。ＩＬ−３１Ｒの発現は比較的より制限され、しっかりと調節されているようである。ヒトおよびマウスでは同様に、ＩＬ−３１Ｒ  ｍＲＮＡ発現は、気管、骨格筋、胸腺および骨髄などの組織において低レベルで検出可能である（Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）。発現のレベルは全く異なるが、ＩＬ−３１Ｒ及びＯＳＭＲの両方は、皮膚や腸上皮細胞を含む多数の組織上に共発現するが、これはこれらの組織がＩＬ−３1に応答する必要があることを示唆している（Ｄｉｌｌｏｎ  ｅ
ｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｄａｍｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  ５６（９）；１２５７−６５，２００７）。ＯＳＭＲは上皮細胞上の肺において構成的に発現されている一方、ＩＬ−３１Ｒの発現は肺組織において無視できる程から低レベルのものであるが、気道チャレンジの様々な方法の際にアップレギュレートされる（Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｊａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．２８（４）：２０７−１９，２００８）。
【０００３】
主にＴリンパ球、マクロファージ、および好中球によって分泌され、ＯＳＭとＩＬ−３１は炎症を伴う様々な疾患状態において両方アップレギュレートされる。ＯＳＭは、骨形成、軟骨分解、コレステロールの取り込み、疼痛及び炎症を含む多様な生物学的役割に関与してきた（Ｃａｗｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４ｌ（１０）：１７６０−７１，１９９８；Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （Ｏｘｆｏｒｄ）３８（７）；６１２−７，１９９９；Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ.，Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ，３２（２）：２１８−２６，２０００；Ｍａｎｉｃｏｕｒｔ
ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｒｈｅｕｍ．４３（２）：２８１−８，２０００；ｄｅ  Ｈｏｏｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６０（５）：１７３３−４３，２００２；Ｌｕｚｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ４８（８）：２２６２−７４，２００３；Ｍｏｒｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２４（８）：１９４１−７，２００４；Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．４６（６）：１１６３−７１，２００５）。ＯＳＭは、様々な状況での細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の強力な調節因子であることが示されており、ＯＳＭが、線維症（過剰のＥＣＭ）及び軟骨分解（ＥＣＭの分解）などの、一見反対の病理学的結果を媒介することができることを示唆している。ＯＳＭが過剰発現したか、マウスの肺または関節にそれぞれ、外因的に投与された場合、組織のタイプと周囲の環境に応じて、これらの効果の両方が観察されてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，Ｔｒａｎｓ．３０（２）：１０７−１１，２００２；Ｈｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，４８（１２）：３４０４−１８，２００３；Ｒｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６２（６）：１９７５−８４，２００３）。さらに、ＯＳＭは、これらのタイプの結果が存在するヒト病理においてアップレギュレートされることが以前示された（Ｃａｗｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；  Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｍａｎｉｃｏｕｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；  Ｌｕｚｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）。主に、局所的に作用するサイトカイン、ＯＳＭは、関節リウマチ患者の関節（ＲＡ）からの滑液中で（Ｃａｗｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｍａｎｉｃｏｕｒｔ  ｅｔ
ａｌ．，ｓｕｐｒａ）、強皮症関連間質性肺疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を有する患者の気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液中で（Ｌｕｚｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）、及び、肝硬変を有する患者の肝臓中で（Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）、アップレギュレートされる。ＯＳＭによるＥＣＭへの提案されている影響は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）とＭＭＰの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）との間のバランスをシフトさせるＯＳＭの能力に一部帰せられ得る。ＴＩＭＰは、ＭＭＰのタンパク質分解活性の損失をもたらす高い親和性により、１：１の比でＭＭＰと結合する。ＴＩＭＰ−１とＴＩＭＰ−３は、ＯＳＭによって差動的にレギュレートされ、ＴＩＭＰ−１の増加とＴＩＭＰ−３の減少をもたらすことが以前示された（Ｇａｔｓｉｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４１（１）：５６−６３，１９９６）。細胞外マトリックスコンポーネントの消化をレギュレートすることに加えて、ＭＭＰは、ＴＧＦ−β、強力な前線維性サイトカインなどの多くのタンパク質の切断とそれに続く活性化にも関与している（Ｌｅａｓｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１８（７）：８１６−２７，２００４）。ＯＳＭは、インビトロでタイプIコラーゲンの転写を直接的に誘発することができるとも報告
されている（Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２５（２）：３０８−１３，１９９８)。
【０００４】
ＯＳＭ及びＩＬ−３１の両方の発現は、乾癬及びアトピー性皮膚炎患者の皮膚に見出されており、ＯＳＭＲ及びＩＬ−３１Ｒの突然変異は、全身皮膚アミロイド症に関連している。ＩＬ−３１のシステム全体のトランスジェニック過剰発現は、マウスの皮膚における掻痒炎症反応を誘発した。ＯＳＭ及びＩＬ−３１の両方は、侵害受容性および掻痒性の応答を促進することが示唆されているニューロンのＯＳＭＲを通じて信号を送達する。
まとめると、少なくとも炎症、細胞外マトリックスリモデリング、痛み、および掻痒症を含む多様な配列の病理学を促進するためのヒト疾患へのこれらのリンク及びＯＳＭ及びＩＬ−３１の能力は、ＯＳＭＲの遮断がＯＳＭＲに関連した多くの疾患及び障害における治療的介入の有用なターゲットであることを示唆している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ.，Ｎａｔ.Ｉｍｍｕｎｏｌ．５（７）：７５２−６０，２００４
【非特許文献２】Ｄｒｅｎｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７9（３４）：３６１１２−２０，２００４
【非特許文献３】Ｄａｍｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  ５６（９）；１２５７−６５，２００７
【非特許文献４】Ｊａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．２８（４）：２０７−１９，２００８
【非特許文献５】Ｃａｗｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４ｌ（１０）：１７６０−７１，１９９８
【非特許文献６】Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （Ｏｘｆｏｒｄ）３８（７）；６１２−７，１９９９
【非特許文献７】Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ.，Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ，３２（２）：２１８−２６，２０００
【非特許文献８】Ｍａｎｉｃｏｕｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｒｈｅｕｍ．４３（２）：２８１−８，２０００
【非特許文献９】ｄｅ  Ｈｏｏｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６０（５）：１７３３−４３，２００２
【非特許文献１０】Ｌｕｚｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ４８（８）：２２６２−７４，２００３
【非特許文献１１】Ｍｏｒｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２４（８）：１９４１−７，２００４
【非特許文献１２】Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．４６（６）：１１６３−７１，２００５
【非特許文献１３】Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，Ｔｒａｎｓ．３０（２）：１０７−１１，２００２
【非特許文献１４】Ｈｕｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，４８（１２）：３４０４−１８，２００３
【非特許文献１５】Ｒｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６２（６）：１９７５−８４，２００３
【非特許文献１６】Ｇａｔｓｉｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４１（１）：５６−６３，１９９６
【非特許文献１７】Ｌｅａｓｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１８（７）：８１６−２７，２００４
【非特許文献１８】Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２５（２）：３０８−１３，１９９８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、商業生産およびヒトにおける治療的使用に適した特性を有する抗ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質、例えば抗体およびその機能的フラグメントを提供する。抗ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲに関連した疾患及び障害、特にＯＳＭＲへのＯＳＭまたはＩＬ−３１の結合に関連した疾患及び障害の治療方法において有用である。本明細書では、高い親和性でＯＳＭＲに結合してＯＳＭ及び／またはＩＬ−３1のＯＳＭＲへの結合を
効果的にブロックし、それによって細胞内のＯＳＭＲ媒介シグナル伝達を減少させるようなＯＳＭＲ結合抗体が提供される。
【０００７】
第１の態様においては、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン、ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメイン、または、ｃ）ａ）の前記軽鎖可変ドメイン及びｂ）の前記重鎖可変ドメインを含む。
【０００８】
第１の態様の好ましい抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメインを含むもの；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメインを含むもの；及び、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメインを含むもの、を含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に対して上記の配列関係を有する重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列を選択的に含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に対して上記の配列関係を有する重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を選択的に含む。
【０００９】
第２の態様においては、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン；または、ｃ）ａ）の軽鎖可変ドメイン及びｂ）の重鎖可変ドメイン、を含む。
【００１０】
第２の態様の好ましい抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメインを含むもの；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメインを含むもの；及び、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメインを含むもの、を含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に対して上記の配列関係を有する重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列をオプションで含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に対して上記の配列関係を有する重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、オプションで、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を選択的に含む。
【００１１】
第３の態様では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；またはｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；を含む軽鎖可変ドメイン；ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；ｅ）ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：１３で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；またはｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；を含む重鎖可変ドメイン、を含む。
【００１２】
第３の態様の好ましいＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ａ）の軽鎖可変ドメインとｄ）の重鎖可変ドメインを含むもの；ｂ）の軽鎖可変ドメインとｅ）の重鎖可変ドメインを含むもの；及び、ｃ）の軽鎖可変ドメインとｆ）の重鎖可変ドメインを含むものを含む。
ａ）の軽鎖可変ドメインとｄ）の重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含む重鎖可変ドメインを、選択的に含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインは、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列を含む。
ｂ）の軽鎖可変ドメインとｅ）の重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含む重鎖可変ドメインを、オプションで含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインは、オプションで、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を含む。
【００１３】
本発明の第４の態様では、第１、第２、第３、又は第４の態様のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、１×１０−１０Ｍ以下の親和性でヒトＯＳＭＲに結合する。
【００１４】
本発明の第５の態様では、第１、第２、又は第３の態様のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ヒトＯＳＭのヒトＯＳＭＲへの、及び／またはヒトＩＬ−３１のヒトＯＳＭＲへの結合を阻害する。
【００１５】
本発明の第６の態様では、第１、第２、第３、第４又は第５の態様のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ヒトＯＳＭＲ発現細胞における、ヒトＯＳＭ媒介、及び／またはヒトＩＬ−３１媒介ＯＳＭＲシグナル伝達を減少させる。
【００１６】
本発明の第７の態様では、第１、第２、第３、第４、第５又は第６のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、カニクイザルＯＳＭＲ発現細胞における、ヒトＯＳＭ媒介、及び／またはヒトＩＬ−３１媒介ＯＳＭＲシグナル伝達を減少させる。
【００１７】
本発明の第８の態様では、第１、第２、第３、第４、第５、第６又は第７のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ヒト抗体などの抗体である。好ましい抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；ＳＥＱ  ＩＤ：２５で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；及び、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体、を含む。
さらなる抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０で示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；ＳＥＱ  ＩＤ：２５で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１で示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体；及び、ＳＥＱ  ＩＤ  ：２６で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２で示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む抗体、を含む。
【００１８】
第９の態様では、本発明は、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の１つまたは複数のポリペプチドコンポーネント、例えば抗体軽鎖または抗体重鎖、をコードする核酸または単離核酸を提供する。好ましい実施形態では、核酸は以下を含むポリペプチドをコードする：
【００１９】
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン；
【００２０】
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に少なくとも９５％の同一性を有する重鎖可変ドメイン；
【００２１】
ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン；
【００２２】
ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１
で示されるアミノ酸配列から、５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン；
【００２３】
ｅ）以下を含む軽鎖可変ドメイン：
【００２４】
ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；
【００２５】
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；または、
【００２６】
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：３８で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；または、
【００２７】
ｆ）以下を含む重鎖可変ドメイン：
【００２８】
ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；
【００２９】
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；または、
【００３０】
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：２０で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３。
特定の実施形態では、核酸または単離核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
特定の実施形態では、核酸または単離核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【００３１】
第９の態様の特定の実施形態では、核酸または単離核酸は抗体軽鎖をコードし、ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：２１，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３で示されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の同一性を有する。第９の態様の他の実施形態では、核酸または単離核酸は抗体重鎖をコードし、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５で示されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の同一性を有する。
特定の実施形態では、重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９で示されるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる。
【００３２】
第１０の態様では、本発明は、第９の態様の核酸または単離核酸を１つまたは複数含む発現ベクターを提供する。特定の実施形態では、発現ベクターは、抗体軽鎖、抗体重鎖、または抗体軽鎖と抗体重鎖の両方をコードする。
【００３３】
第１１の態様では、本発明は、本発明の第１０の態様の発現ベクターを１つまたは複数含む組み換え宿主細胞を含有する、プロモータに機能的にリンクした第９の態様の核酸または単離核酸を１つまたは複数含む組み換え宿主細胞を提供する。好ましい実施形態では、組換え宿主細胞は、ＯＳＭＲに結合する抗体を分泌する。好ましい宿主細胞は、ＣＨＯ細胞株などの哺乳動物宿主細胞である。
【００３４】
第１２の態様では、本発明は、自己免疫疾患、炎症性疾患、または細胞外マトリックスの沈着やリモデリングに関連する障害の治療方法を提供し、この方法は、必要とする患者に、第１，２，３，４，５，６，７，または８の態様のうちの任意の１つのＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の有効量を投与することを含む。好ましい実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体（例えば、Ａｂ１）、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体（例えば、Ａｂ２）、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体（例えば、Ａｂ３）である。いくつかの実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：２７で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体である。好ましい実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲへのＯＳＭの結合、またはＯＳＭＲへのＩＬ−３１の結合を阻害する。特に好ましい実施形態では、自己免疫疾患、炎症性疾患、または細胞外マトリックスの沈着やリモデリングに関連する障害は、線維症、軟骨分解、関節炎、慢性関節リウマチ、強皮症、強皮症関連の間質性肺疾患、特発性肺線維症、肝硬変、乾癬、アトピー性皮膚炎、全身性皮膚アミロイド症、原発性皮膚アミロイド症、炎症、掻痒性炎症、結節性痒疹及び痛みである。
【００３５】
第１３の態様では、本発明は、第１１の態様の組換え宿主細胞を培養して、その培養物からＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を単離することによる、第１，２，３，４，５，６，７，または８の態様のうちの任意の１つのＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の製造方法を提供する。
【００３６】
第１４の態様では、本発明は、以下の群から選択される抗体と交差競合する第１，２，３，４，５，６，７，または８の態様のうちの任意の１つのＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を提供する：
【００３７】
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体；
【００３８】
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体；
【００３９】
ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン；または
ｃ）ａ）の前記軽鎖可変ドメイン及びｂ）の前記重鎖可変ドメイン：
を含むオンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）抗原結合タンパク質。
（項目２）
前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示される前記アミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する項目１に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目３）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示される前記アミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する項目１または２に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目４）
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、１０以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列から、１０以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン；または
ｃ）ａ）の前記軽鎖可変ドメイン及びｂ）の前記重鎖可変ドメイン：
を含むオンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）抗原結合タンパク質。
（項目５）
前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する項目４に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目６）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列から、５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する項目４または５に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目７）
前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列を含む項目１〜６に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目８）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列を含む項目１〜７に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目９）
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；または
ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３：
を含む軽鎖可変ドメインと、
ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；
ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；または
ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３：
を含む重鎖可変ドメインと：
を含むオンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）抗原結合タンパク質。
（項目１０）
ａ）の前記軽鎖可変ドメイン及びｄ）の前記重鎖可変ドメインを含む項目９に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１１）
前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で示されるＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３で示されるＬＣＤＲ２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６で示されるＬＣＤＲ３配列を含み；前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２で示されるＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５で示されるＨＣＤＲ２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８で示されるＨＣＤＲ３配列を含む項目１０に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１２）
ｂ）の前記軽鎖可変ドメイン及びｅ）の前記重鎖可変ドメインを含む項目９に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１３）
前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１で示されるＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で示されるＬＣＤＲ２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７で示されるＬＣＤＲ３配列を含み；前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３で示されるＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で示されるＨＣＤＲ２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９で示されるＨＣＤＲ３配列を含む項目１２に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１４）
ｃ）の前記軽鎖可変ドメイン及びｆ）の前記重鎖可変ドメインを含む項目９に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１５）
前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で示されるＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５で示されるＬＣＤＲ２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８で示されるＬＣＤＲ３配列を含み；前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で示されるＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で示されるＨＣＤＲ２配列；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０で示されるＨＣＤＲ３配列を含む項目１４に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１６）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸を含む項目１〜７または９〜１１のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１７）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に対応する位置にアスパラギン酸を含む項目１６に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１８）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列を含む項目１〜７または９〜１１のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目１９）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸を含む項目１〜７，９，１２または１３のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２０）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に対応する位置にアスパラギン酸を含む項目１９に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２１）
前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を含む項目１〜７，９，１２または１３のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２２）
前記抗原結合タンパク質は、１×１０−１０Ｍ以下の親和性でヒトＯＳＭＲに特異的に結合する項目１〜２１のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２３）
前記抗原結合タンパク質は、ヒトＯＳＭＲへのヒトＯＳＭまたはヒトＩＬ−３１の結合を阻害する項目１〜２２のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２４）
前記抗原結合タンパク質は、ヒトＯＳＭＲ発現細胞におけるヒトＯＳＭ媒介またはヒトＩＬ−３１媒介ＯＳＭＲシグナル伝達を減少させる項目１〜２３のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２５）
前記抗原結合タンパク質は抗体である項目１〜２４のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２６）
前記抗原結合タンパク質はヒト抗体である項目２５に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２７）
前記軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ：２4で示されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖はＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖及び重鎖を含む項目２６に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２８）
前記軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ：２５で示されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖はＳＥＱ  ＩＤＮＯ：７で示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖及び重鎖を含む項目２６に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目２９）
前記軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ：２６で示されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖はＳＥＱ  ＩＤＮＯ：８で示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖及び重鎖を含む項目２６に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目３０）
前記軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ：２４で示されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖はＳＥＱ  ＩＤＮＯ：５０で示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖及び重鎖を含む項目２５に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目３１）
前記軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ：２５で示されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖はＳＥＱ  ＩＤＮＯ：５１で示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖及び重鎖を含む項目２５に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目３２）
前記軽鎖はＳＥＱ  ＩＤ：２６で示されるアミノ酸配列を含み、前記重鎖はＳＥＱ  ＩＤＮＯ：５２で示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖及び重鎖を含む項目２５に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質。
（項目３３）
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン；
ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列から、５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン；
ｅ）ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２、及びＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：３６で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；または
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２、及びＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：３８で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；
を含む軽鎖可変ドメイン：または
ｆ）ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２、及びＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：１８で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；
ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；または
ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２、及びＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：２０で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；
を含む重鎖可変ドメイン：
を含むポリペプチドをコードする単離核酸。
（項目３４）
前記ポリペプチドは抗体軽鎖を含む項目３３に記載の単離核酸。
（項目３５）
前記軽鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３で示される前記ヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目３４に記載の単離核酸。
（項目３６）
前記軽鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３で示される前記ヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目３５に記載の単離核酸。
（項目３７）
前記軽鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３で示される前記ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目３６に記載の単離核酸。
（項目３８）
前記軽鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３で示される前記ヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目３７に記載の単離核酸。
（項目３９）
前記ポリペプチドは抗体重鎖を含む項目３３に記載の単離核酸。
（項目４０）
前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示される前記アミノ酸配列を含む項目３９に記載の単離核酸。
（項目４１）
前記ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２で示される前記アミノ酸配列を含む項目３９に記載の単離核酸。
（項目４２）
前記重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で示される前記ヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目３９に記載の単離核酸。
（項目４３）
前記重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，またはＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：５で示される前記ヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目４２に記載の単離核酸。
（項目４４）
前記重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，またはＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：５で示される前記ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目４３に記載の単離核酸。
（項目４５）
前記重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４，またはＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：５で示されるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目４４に記載の単離核酸。
（項目４６）
前記重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９で示されるヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる項目４４に記載の単離核酸。
（項目４７）
項目３３〜４６のいずれか１項に記載の単離核酸を含む発現ベクター。
（項目４８）
前記単離核酸は、抗体軽鎖をコードする項目４７に記載の発現ベクター。
（項目４９）
前記単離核酸は、抗体重鎖をコードする項目４７に記載の発現ベクター。
（項目５０）
抗体重鎖をコードする単離核酸をさらに含む項目４８に記載の発現ベクター。
（項目５１）
プロモータに機能的にリンクした項目３３〜４６のいずれか１項に記載の単離核酸を含む組換え宿主細胞。
（項目５２）
項目４７〜５０のいずれか１項に記載の発現ベクターを含む組換え宿主細胞。
（項目５３）
前記宿主細胞は、項目４８及び４９に記載の発現ベクターを含む項目５２に記載の組換え宿主細胞。
（項目５４）
前記宿主細胞は、ＯＳＭＲに結合する抗体を分泌する項目５３に記載の組換え宿主細胞。
（項目５５）
前記細胞は、哺乳類由来のものである項目５１〜５４のいずれか１項に記載の組換え宿主細胞。
（項目５６）
前記細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である項目５５に記載の組換え宿主細胞。
（項目５７）
必要とする患者に、治療的有効量の項目１〜３２のいずれか１項に記載のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を投与することを含む疾患または障害の治療方法。
（項目５８）
前記ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は抗体である項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目５９に記
載の方法。
（項目６１）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目５８に記載の方法。
（項目６２）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目５８に記載の方法。
（項目６４）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目５８に記載の方法。
（項目６６）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目５８に記載の方法。
（項目６８）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６で示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２で示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む項目６７に記載の方法。
（項目７０）
前記抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲへのＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１の結合を阻害する項目５７〜６９のいずれか１項に記載の方法。
（項目７１）
前記疾患または障害は、自己免疫疾患、炎症性疾患、または細胞外マトリックス沈着またはリモデリングに関連する障害である項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記自己免疫疾患、前記炎症性疾患、または細胞外マトリックス沈着またはリモデリングに関連する前記障害は、線維症、軟骨分解、関節炎、慢性関節リウマチ、強皮症、強皮症関連の間質性肺疾患、特発性肺線維症、肝硬変、乾癬、アトピー性皮膚炎、全身性皮膚アミロイド症、原発性皮膚アミロイド症、炎症、掻痒性炎症、結節性痒疹及び痛みである、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
ａ）項目５１〜５６のいずれか１項に記載の組換え宿主細胞を培養すること；と
ｂ）前記培養物から前記ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を単離すること：
を含むオンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）抗原結合タンパク質の製造方法。
（項目７４）
前記ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、
ａ）ＳＥＱ  ＩＤ：２４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：6
で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体；
ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ：２５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７
で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体；と
ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ：２６で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８
で示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体：
からなる群から選択される抗体と交差競合する、項目１〜３２のいずれか１項に記載のオンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）抗原結合タンパク質。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のためのものであり、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書の本体内で引用される全ての参考文献は、その全体が参照により明示的に組込まれる。
【００４１】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質転換、タンパク質精製などのために、標準的な技術を使用することができる。酵素の反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当該分野で一般に遂行されているように、または本明細書に記載のように、実施することができる。以下の手順および技術は、一般に、当該技術分野で周知である従来の方法に従って、そして本明細書を通して引用され検討されている様々な一般的かつより具体的な参考文献に記載されているように、行うことができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，参照。これは、本明細書で任意の目的で、参照され組込まれている。具体的な定義が提供されていなければ、本明細書に記載の分析化学、有機化学、並びに医薬品及び薬剤化学に関連してい使用される命名法、及びそれらの実験の手順と技術は、当該技術分野で周知であり、一般に使用されているものである。化学合成、化学分析、薬学的調製、調剤、並びに送達及び患者の治療のために、標準的な技術を使用することができる。
ＯＳＭＲ
【００４２】
本明細書に記載される抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲに結合する。ＯＳＭとＩＬ−３１は、ＯＳＭＲを通じて信号を送達する。ＯＳＭＲは、タイプＩのサイトカイン受容体ファミリーのメンバーである。ＯＳＭＲは、糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０、インターロイキン６シグナルトランスデューサー（ＩＬ６ＳＴ）、ＩＬ６−β、またはＣＤ１３０としても知られる）とヘテロ二量体化してタイプＩＩＯＳＭＲを形成する。ＯＳＭＲは、ＩＬ−３１受容体Ａ（ＩＬ３１ＲＡ）ともヘテロ二量体化してＩＬ−３１受容体を形成し、従って、ＯＳＭ及びＩＬ−３１誘発性のシグナル伝達事象を伝達する。例示的な実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質はＯＳＭＲに結合し、ＯＳＭＲを発現する細胞におけるＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１媒介のシグナル伝達を防ぐ。
【００４３】
ヒトＯＳＭＲ配列は当技術分野で知られている。様々な態様において、ヒトＯＳＭＲタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＡＩ２５２１０，ＡＡＩ２５２１１，ＮＰ＿００３９９０，及びＥＡＷ５５９７６に提供されている。例示的なヒトＯＳＭＲアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）が表１に記載されている。タンパク質は、いくつかのドメインから構成される：アミノ酸１−２７は、哺乳動物細胞におけるタンパク質のプロセシング中に切断されるシグナル配列に対応する；アミノ酸２８−７４０は、細胞外ドメインに対応する；及び、アミノ酸７４１−７６１は、膜貫通ドメインに対応する。好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲの細胞外ドメインに結合し、ＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１のＯＳＭＲと相互作用を防ぐ。
【００４４】
ヒトＯＳＭ配列は当該技術分野で知られている。様々な態様において、ヒトＯＳＭタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＣＡＧ３０４２０，ＣＡＧ４６５０４，ＮＰ＿０６５３９１，Ｐ１３７２５，ＡＡＣ０５１７３，ＥＡＷ５９８６４，及びＡＡＨ１１５８９に提供されている。例示的なヒトＯＳＭアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９）が表１に記載されている。アミノ酸１−２５は、シグナル配列に対応する；アミノ酸２６−２２０は、成熟タンパク質に対応する；および、アミノ酸２２１−２５２は、プロペプチド配列に対応する。
【００４５】
ヒトＩＬ−３１の配列は、当該技術分野で知られている。様々な態様において、ヒトＩＬ−３１タンパク質配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＰ＿００１０１４３５８，ＡＡＳ８６４４８，ＡＡＩ３２９９９，ＡＡＩ３３００１，Ｑ６ＥＢＣ２，及びＥＡＷ９８３１０に提供されている。例示的なヒトＩＬ−３１アミノ酸配列（ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：４１）が、表１に提供されている。アミノ酸１−２３は、推定シグナル配列に対応する。
【００４６】
ヒトＩＬ３１ＲＡの配列は、当該技術分野で知られている。様々な態様において、ヒトＩＬ３１ＲＡタンパク質配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＡＳ８６４４７，ＮＰ＿００１２２９５６７，及びＣＢＬ９４０５１に提供されている。例示的なヒトＩＬ３１ＲＡ（ｖ４，ｉｓｏｆｏｒｍ３）アミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３）が、表１に提供されている。アミノ酸１−３２は、シグナル配列に対応する；及び、アミノ酸５３３−５５３は、膜貫通配列に対応する。
【００４７】
ヒトｇｐ１３０の配列は、当該技術分野で知られている。様々な態様において、ヒトｇｐ１３０タンパク質配列はＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ．Ｎｏ．ＡＡＩ１７４０３，ＡＡＩ１７４０５，ＥＡＷ５４９３６，ＮＰ＿００２１７５，ＡＢＫ４１９０５，及びＡＡＡ５９１５５に提供されている。例示的なヒトｇｐ１３０アミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５）が、表１に提供されている。タンパク質はいくつかのドメインから構成される：アミノ酸１−２２は、シグナル配列に対応する；アミノ酸２３−６１９は、細胞外ドメインに対応する；アミノ酸６２０−６４１は、膜貫通ドメインに対応する；および、アミノ酸６４２−９１８は、細胞質ドメインに対応する。
表１
【表１−１】
2020022482.tif 000002
【表１−２】
2020022482.tif 000003
【表１−３】
2020022482.tif 000004
【００４８】
本発明の特定の実施形態では、本明細書に記載した抗原結合タンパク質は、カニクイザルのＯＳＭＲに対してカニクイザルのＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１を高い親和性で結合するものとその相互作用をブロックするものを含め、ヒトとカニクイザルのＯＳＭＲの両方を高い親和性で結合する。これらの特性は、非ヒト霊長類において有益な毒性試験を可能にする。
【００４９】
アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）のＯＳＭＲタンパク質配列は当該技術分野で知られており、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ.ＸＰ＿００１０８３７
４５に提供されている。例示的なカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＯＳＭＲアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）が表２に提供されている。タンパク質はいくつかのドメインから構成される：アミノ酸１−２７は、哺乳動物細胞におけるタンパク質のプロセシング中に切断されるであろうシグナル配列に対応する；アミノ酸２８−７３７は、細胞外ドメインに対応する；および、アミノ酸７３８−７５７は、膜貫通ドメインに対応する。好ましい実施形態では、本明細書中に記載の抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲの細胞外ドメインに結合し、ＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１のＯＳＭＲとの相互作用を防止する。
【００５０】
アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）のＯＳＭタンパク質配列は当該技術分野で知られており、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ.  ＮＰ＿００１１８１４
０３に提供されている。例示的なカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＯＳＭアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤＮＯ：４０）が表２に提供されている。アミノ酸１−１９６は、成熟したカニクイザルのＯＳＭに対応する。
【００５１】
アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）のＩＬ−３１タンパク質配列は当該技術分野で知られており、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ.ＸＰ＿００１０９６
７４３に提供されている。例示的なカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＩＬ−３１アミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤＮＯ：４２）が表２に提供されている。この配列は、成熟したカニクイザルのＩＬ−３１を表す。
【００５２】
例示的なカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＩＬ３１ＲＡアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤＮＯ：４４）が表２に提供されている。アミノ酸１−１９は、シグナル配列に対応する；そして、アミノ酸５２０−５４０は、膜貫通ドメインに対応する。
【００５３】
アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）のｇｐ１３０タンパク質配列は当該技術分野で知られており、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ.  ＮＰ＿００１２５
２９２０に提供されている。例示的なカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のｇｐ１３０アミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤＮＯ：４６）が表２に提供されている。タンパク質はいくつかのドメインから構成される：アミノ酸１−２２は、シグナル配列に対応する;アミノ酸２３−６１９は、細胞外ドメインに対応する；アミノ酸６２０−６
４１は、膜貫通ドメインに対応する；そして、アミノ酸６４２−９１８は、細胞質ドメインに対応する。
表２
【表２−１】
2020022482.tif 000005
【表２−２】
2020022482.tif 000006
ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質
【００５４】
本発明は、ＯＳＭＲに特異的にを結合する抗原結合タンパク質を提供する。抗原結合タンパク質の実施形態は、ＯＳＭＲに特異的に結合するペプチド及び／またはポリペプチドを含む。このようなペプチドまたはポリペプチドは、１つまたは複数の翻訳後修飾を選択的に含んでもよい。抗原結合タンパク質の実施形態は、本明細書で種々定義されるように、特異的にＯＳＭＲに結合する抗体およびそのフラグメントを含む。これらは、ＯＳＭＲを結合する及び／または活性化することからＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１を阻害するものを含む、ヒトＯＳＭＲに特異的に結合する抗体を含む。
【００５５】
本発明の抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲに特異的に結合する。本明細書で使用される「特異的に結合する」は、他のタンパク質に対して、ＯＳＭＲを優先的に結合することを意味する。いくつかの実施形態では、「特異的に結合する」は、抗原結合タンパク質が、他のタンパク質に対するより、ＯＳＭＲに対して高い親和性を有することを意味する。ＯＳＭＲに特異的に結合するＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、１×１０−７Ｍ以下の、２×１０−７Ｍ以下の、３×１０−７Ｍ以下の、４×１０−７Ｍ以下の、５×１０−７Ｍ以下の、６×１０−７Ｍ以下の、７×１０−７Ｍ以下の、８×１０−７Ｍ以下の、９×１０−７Ｍ以下の、１×１０−８Ｍ以下の、２×１０−８Ｍ以下の、３×１０−８Ｍ以下の、４×１０−８Ｍ以下の、５×１０−８Ｍ以下の、６×１０−８Ｍ以下の、７×１０−８Ｍ以下の、８×１０−８Ｍ以下の、９×１０−８Ｍ以下の、１×１０−９Ｍ以下の、２×１０−９Ｍ以下の、３×１０−９Ｍ以下の、４×１０−９Ｍ以下の、５×１０−９Ｍ以下の、６×１０−９Ｍ以下の、７×１０−９Ｍ以下の、８×１０−９Ｍ以下の、９×１０−９Ｍ以下の、１×１０−１０Ｍ以下の、２×１０−１０Ｍ以下の、３×１０−１０Ｍ以下の、４×１０−１０Ｍ以下の、５×１０−１０Ｍ以下の、６×１０−１０Ｍ以下の、７×１０−１０Ｍ以下の、８×１０−１０Ｍ以下の、９×１０−１０Ｍ以下の、１×１０−１１Ｍ以下の、２×１０−１１Ｍ以下の、３×１０−１１Ｍ以下の、４×１０−１１Ｍ以下の、５×１０−１１Ｍ以下の、６×１０−１１Ｍ以下の、７×１０−１１Ｍ以下の、８×１０−１１Ｍ以下の、９×１０−１１Ｍ以下の、１×１０−１２Ｍ以下の、２×１０−１２Ｍ以下の、３×１０−１２Ｍ以下の、４×１０−１２Ｍ以下の、５×１０−１２Ｍ以下の、６×１０−１２Ｍ以下の、７×１０−１２Ｍ以下の、８×１０−１２Ｍ以下の、または、９×１０−１２Ｍ以下の、ヒトＯＳＭＲに対する結合親和性を有することができる。
【００５６】
抗原結合タンパク質の結合親和性を測定する方法は、当技術分野で知られている。親和性決定のために一般的に使用される方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（Ｍｏｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｍｙｓｚｋａ  “Ｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｕｓｉｎｇ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｌａｓｍｏｎ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（１９９８）２９５，２６８−２９４）、バイオレイヤー干渉法（Ａｂｄｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ  “Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  Ｌａｂｅｌ−ｆｒｅｅ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ,
ｔｈｅ  Ｏｃｔｅｔ”  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８）３７７，２０９−２１７）、キネティック排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）  （Ｄａｒｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｂｒａｕｌｔ  “Ｋｉｎｅｔｉｃ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ  ａｓｓａｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ”  Ａｓｓａｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈ  （２００４）２，６４７−６５７）、等温熱量測定（Ｐｉｅｒｃｅ  ｅｔ  ａｌ  “Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ  Ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ”  Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９９９）１９,２
１３−２２１）、及び、分析超遠心（Ｌｅｂｏｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ“Ｍｏｄｅｒｎ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ
ｓｃｉｅｎｃｅ：ａ  ｔｕｔｏｒｉａｌ  ｒｅｖｉｅｗ”  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （２００２），１１：２０６７−２０７９）を含む。実施例５は、親和性決定の例示的方法を提供する。
【００５７】
本明細書において、ＯＳＭＲ結合抗体の様々な実施形態に参照がなされる場合、それはそのＯＳＭＲ結合フラグメントも包含することが理解される。ＯＳＭＲ結合フラグメントは、ＯＳＭＲに特異的に結合する能力を保持する本明細書に記載の抗体のフラグメントまたはドメインの任意のものを含む。ＯＳＭＲ結合フラグメントは、本明細書に記載の足場の任意のものの中にあってもよい。
【００５８】
特定の治療的実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲへのＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１の結合を阻害し、及び／または、例えば、ＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１媒介シグナル伝達のような、ＯＳＭＲへのＯＳＭ及び/又はＩＬ−３１の結合に関連
する生物学的活性の１つまたは複数を阻害する。このような抗原結合タンパク質は、「中和」していると言われる。特定の実施形態では、中和ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲに特異的に結合し、少なくとも、約２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，３１，３２，３３，３４，３５，３6，３７，３８，３９，４
０，４１，４２，４３，４４，４５，４６，４７，４８，４９，５０，５１，５２，５３，５４，５５，５６，５７，５８，５９，６０，６１，６２，６３，６４，６５，６６，６７，６８，６９，７０，７１，７２，７３，７４，７５，７６，７７，７８，７９，８０，８１，８２，８３，８４，８５，８６，８７，８８，８９，９０，９１，９２，９３，９４，９５，９６，９７，９８，９９％以上だけなど、１０％と１００％の間の任意の％から、ＯＳＭＲへのＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１の結合を阻害する。例えば、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲへのＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１の結合をブロックするＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の能力を決定することによって、中和能力を試験することができる。例えば、実施例２と３の、ヒトＯＳＭＲとカニクイザルＯＳＭＲそれぞれのブロッキングアッセイを参照。あるいは、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１媒介の生物学的機能を測定するアッセイにおて、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の存在の効果を測定するアッセイで、中和能力を試験することができる。例えば、培養ウシ大動脈内皮細胞におけるプラスミノーゲンアクチベーター活性のシミュレーション、ヒト内皮細胞のＩＬ−６発現のレギュレーション、並びに、ＬＤＬ取り込みの刺激及びＨｅｐＧ２細胞における細胞表面のＬＤＬ受容体のアップレギュレーションなどの、生物学的応答を誘発するＯＳＭの能力。あるいは、皮膚の炎症を誘発するＩＬ−３１の能力。
【００５９】
抗原結合タンパク質の実施形態は、本明細書で種々定義されるように、1つまた複数の
相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する足場構造を含む。実施形態はさらに、重鎖または軽鎖の、１つまたは複数の抗体可変ドメインを有する足場構造を含む抗原結合タンパク質を含む。実施形態は、Ａｂ１軽鎖可変ドメイン（ＬＣｖ）、Ａｂ２  ＬＣｖ、及びＡｂ３  ＬＣｖ（それぞれ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７−２９）から成る群から選択される軽鎖可変ドメイン、及び／または、Ａｂ１重鎖可変ドメイン（ＨＣｖ）、Ａｂ２  ＨＣｖ、及びＡｂ３  ＨＣｖ（それぞれ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９−１１）から成る群から選択される重鎖可変ドメイン、及び、フラグメント、誘導体、突然変異タンパク質、及びその変異体、を含む抗体を含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の例示的な重鎖可変ドメイン変異体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に相当する位置に、アスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含有する。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の重鎖可変ドメイン変異体の一例である。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の例示的な重鎖可変ドメイン変異体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に相当する位置に、アスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含有する。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の重鎖可変ドメイン変異体の一例である。
【００６０】
Ａｂ１  ＬＣｖを含む例示的軽鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖である。
【００６１】
Ａｂ２  ＬＣｖを含む例示的軽鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖である。
【００６２】
Ａｂ３  ＬＣｖを含む例示的軽鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖である。
【００６３】
Ａｂ１  ＨＣｖを含む例示的重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖である。Ａｂ１  ＨＣｖの変異体を含む例示的重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖である。
【００６４】
Ａｂ２  ＨＣｖを含む例示的重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖である。Ａｂ２  ＨＣｖの変異体を含む例示的重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖である。
【００６５】
Ａｂ３  ＨＣｖを含む例示的重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖である。Ａｂ３  ＨＣｖの変異体を含む例示的重鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２で示されるアミノ酸配列を含む重鎖である。
【００６６】
想定される足場のさらなる例は、以下を含むが、これらに限定されない：フィブロネクチン、ネオカルチノスタチンＣＢＭ４−２、リポカリン、Ｔ細胞受容体、タンパク質Ａドメイン（プロテインＺ）、Ｉｍ９、ＴＰＲタンパク質、ジンクフィンガードメイン、ｐＶＩＩＩ、トリ膵臓ポリペプチド、ＧＣＮ４、ＷＷドメインＳｒｃホモロジードメイン３、ＰＤＺドメイン、ＴＥＭ−１  β−ラクタマーゼ、チオレドキシン、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、ＰＨＤフィンガードメイン、ＣＬ−２、ＢＰＴＩ、ＡＰＰＩ、ＨＰＳＴＩ、エコチン、ＬＡＣＩ−ＤＩ、ＬＤＴＩ、ＭＴＬ−ＩＩ、サソリ毒素、昆虫デフェンシンＡペプチド、ＥＥＴＩ−ＩＩ、Ｍｉｎ−２３、ＣＢＤ、ＰＢＰ、チトクロームｂ−５６２、Ｌｄｌの受容体ドメイン、γクリスタリン、ユビキチン、トランスフェリン、及び／またはＣ型レクチンライクドメイン。非抗体足場および治療薬としてのそれらの使用は、Ｇｅｂａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，１３：２４５−２５５（２００９）及び  Ｂｉｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２３（１０）：１２５７−６８（２００５）においてレビューされており、これは本明細書に参照によりその全体が組込まれている。
【００６７】
本発明の態様は、可変ドメインを含む抗体：Ａｂ１  ＬＣｖ／Ａｂ１  ＨＣｖ（ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：２７／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９），Ａｂ２  ＬＣｖ／Ａｂ２  ＨＣｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｏ：２８／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０），Ａｂ３  ＬＣｖ／Ａｂ３  ＨＣｖ（ＳＥＱ  Ｉ Ｄ  ＮＯ：２９／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、及びそれらの組合せ、並びにそのフラグメント、誘導体、突然変異タンパク質及びその変異体を含む。
可変ドメインを含む抗体：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４も含まれる。
【００６８】
本発明の例示的な抗体は、Ａｂ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４／  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６），Ａｂ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７），及びＡｂ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）を含む。
さらなる例示的な抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４/ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０；Ｓ
ＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５/ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６／
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２を含む。
【００６９】
典型的には、抗体軽鎖又は重鎖の各可変ドメインは、３つのＣＤＲを含む。重鎖可変ドメインは、重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、及び重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む。軽鎖可変ドメインは、軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、本明細書に記載される好ましい可変ドメイン内に含有される１つまたは複数のＣＤＲを含む。
【００７０】
このようなＣＤＲの例は以下を含むが、これらに限定されない：
【００７１】
Ａｂ１  ＬＣｖ：ＬＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０），ＬＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３），及びＬＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）のＣＤＲ；
【００７２】
Ａｂ２  ＬＣｖ：ＬＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１），ＬＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４），及びＥＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）のＣＤＲ；
【００７３】
Ａｂ３  ＬＣｖ：ＬＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２），ＬＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５），及びＬＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）のＣＤＲ；
【００７４】
Ａｂ１  ＨＣｖ：ＨＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２），ＨＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５），及びＨＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）のＣＤＲ；
【００７５】
Ａｂ２  ＨＣｖ：ＨＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３），ＨＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６），及びＨＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）のＣＤＲ；及び、
【００７６】
Ａｂ３  ＨＣｖ：ＨＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ；１４），ＨＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７），及びＨＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）のＣＤＲ。
【００７７】
いくつかの実施形態では、以下の抗原結合タンパク質を含む：Ａ）例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０，３１，及び３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３，３４，及び３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２；及び／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６，３７，及び３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、を含む軽鎖であるポリペプチド；及び／または、Ｂ）例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２，１３，及び１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５，１６，及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２；及び／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８，１９，及び２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、を含む重鎖であるポリペプチド。
【００７８】
さらなる実施形態では、抗原結合タンパク質は、Ａ）任意のＡｂ１  ＬＣｖ，Ａｂ２  ＬＣｖ，及びＡｂ３  ＬＣｖのＬＣＤＲ１，ＬＣＤＲ２，及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖アミノ酸配列、及び、Ｂ）任意のＡｂ１  ＨＣｖ，Ａｂ２  ＨＣｖ，及びＡｂ３  ＨＣｖのＨＣＤＲ１，ＨＣＤＲ２，及びＨＣＤＲ３を含む重鎖アミノ酸配列、を含む。
【００７９】
特定の実施形態では、ＣＤＲは、本明細書に示される例示的ＣＤＲからの、１つ以下の、２つ以下の、３つ以下の、４つ以下の、５つ以下の、または６つ以下の、アミノ酸の付加、欠失、または置換を含む。
【００８０】
本発明の態様は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，２８，及び２９からなる群から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗体を含む。本発明の態様は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，１０，及び１１からなる群から選択される重鎖可変ドメインを含む抗体を含む。本発明のさらなる態様は、Ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，２８，及び２９からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン、及びＢ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，１０，及び１１からなる群から選択される重鎖可変ドメイン、を含む抗体を含む。
【００８１】
本発明の抗体は、当該分野で公知の任意の定常領域を含むことができる。軽鎖定常領域は、例えばヒトのカッパーまたはラムダ型軽鎖定常領域などの、カッパーまたはラムダ型軽鎖定常領域を、例えば、含み得る。重鎖定常領域は、例えばヒトのアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミュー型重鎖定常領域などの、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミュー型重鎖定常領域を、例えば、含み得る。一実施形態では、軽鎖または重鎖定常領域は、天然に存在する定常領域のフラグメント、誘導体、変異体、または突然変異タンパク質である。
【００８２】
本発明の態様は、１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、６つ以下、７つ以下、８つ以下、９つ以下、または１０以下のアミノ酸の付加、欠失、または置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，２８，及び２９からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む抗体を含む。本発明の態様は、１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、６つ以下、７つ以下、８つ以下、９つ以下、または１０以下のアミノ酸の付加、欠失、または置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，１０，及び１１からなる群から選択される重鎖可変領域を含む抗体を含む。本発明のさらなる態様は、Ａ）１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、６つ以下、７つ以下、８つ以下、９つ以下、または１０以下のアミノ酸の付加、欠失、または置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，２８，及び２９からなる群から選択される軽鎖可変領域、及びＢ）１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、６つ以下、７つ以下、８つ以下、９つ以下、または１０以下のアミノ酸の付加、欠失、または置換を有するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，１０，及び１１からなる群から選択される重鎖可変領域、を含む抗体を含む。
【００８３】
一変形では、抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，２８，及び２９からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。他の変形では、抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，１０，及び１１からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、Ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，２８，及び２９からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列、及び、Ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，１０，及び１１からなる群から選択される軽鎖可変領域アミノ酸配列に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列、を含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９に対して上で定義した配列関係を有する重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に相当する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含有することができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインは、オプションで、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列を含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０に対して上で定義した配列関係を有する重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に相当する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含有することができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインは、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を含む。
【００８４】
特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、軽鎖及び／または重鎖ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６，３７，３８，１８，１９，及び２０で示される配列の群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、そのアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６，３７，３８，１８，１９，及び２０で示される例示的配列からの、１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、または６つ以下のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含む。従って、本発明の実施形態は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６，３７，３８，１８，１９，及び２０で示される配列の群から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列、を含む抗原結合タンパク質を含む。
【００８５】
特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、軽鎖及び／または重鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３，３４，３５，１５，１６，及び１７で示される配列の群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、そのアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３，３４，３５，１５，１６，及び１７で示される例示的配列からの、１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、または６つ以下のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含む。従って、本発明の実施形態は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３，３４，３５，１５，１６，及び１７で示される配列の群から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列、を含む抗原結合タンパク質を含む。
【００８６】
特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、軽鎖及び／または重鎖ＣＤＲ1を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０，３１，３２，１２，１３，及び１４で示される配列の群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、そのアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０，３１，３２，１２，１３，及び１４で示される例示的配列からの、１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下、または６つ以下のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含む。従って、本発明の実施形態は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０，３１，３２，１２，１３，及び１４で示される配列の群から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列、を含む抗原結合タンパク質を含む。
【００８７】
本発明の抗原結合タンパク質は、ヒトおよびモノクローナル抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では、「抗体模倣物」と呼ばれることもある）、キメラ抗体、抗体融合体（「抗体コンジュゲート」と呼ばれることもある）、及び、それぞれ、各フラグメント、などの伝統的な抗体の足場を含む。ＣＤＲの様々な組合せを含む上記のＣＤＲは、任意の以下の足場に移植することができる。
【００８８】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、本明細書に種々記載されるように、抗原に特異的に結合する１つまたは複数のポリペプチド鎖を含む単量体または多量体タンパク質の様々な形態を指す。特定の実施形態では、抗体は、組換えＤＮＡ技術によって産生される。さらなる実施形態では、抗体は、天然に存在する抗体の酵素的または化学的切断によって産生される。他の態様では、抗体は以下からなる群から選択される：ａ）はヒト抗体；ｂ）ヒト化抗体；ｃ）キメラ抗体；ｄ）モノクローナル抗体；ｅ）ポリクローナル抗体；ｆ）組換え抗体；ｇ）抗原結合性フラグメント；ｈ）単鎖抗体;ｉ）ダイアボディ；
ｊ）トリアボディ，ｋ）テトラボディ，ｌ）Ｆａｂフラグメント；ｍ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント，ｎ）ＩｇＡ抗体，ｏ）ＩｇＤ抗体，ｐ）ＩｇＥ抗体，ｑ）ＩｇＧ１抗体，ｒ）ＩｇＧ２抗体，ｓ）ＩｇＧ３抗体、ｔ）ＩｇＧ４抗体，及びｕ）ＩｇＭ抗体。
【００８９】
可変領域またはドメインは、フレームワーク領域（指定されたフレームワーク領域ＦＲ１，ＦＲ２，ＦＲ３，及びＦＲ4）内に埋め込まれた少なくとも３つの重鎖または軽鎖の
ＣＤＲを含む。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｎ.Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ。伝統的な抗体
構造単位は、典型的には、四量体を含む。各四量体は、典型的には、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対はある１つの「軽」鎖と１つの「重」鎖を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識を担う約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定する。ヒトの軽鎖は、カッパーまたはラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、それぞれ、ＩｇＭ,ＩｇＤ，
ＩｇＧ,ＩｇＡ，及びＩｇＥなどの抗体のアイソタイプを規定する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１,ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，及びＩｇＧ４などのいくつかのサブクラスを有するがこれらに限定されない。ＩｇＭは、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２などのサブクラスを有するがこれらに限定されない。本発明の実施形態は、本明細書に記載のように、抗原結合タンパク質の可変ドメインまたはＣＤＲを組み込むようなすべてのこのようなクラス及びサブクラスの抗体を含む。
【００９０】
ラクダおよびラマに見られるようないくつかの天然に存在する抗体は、２つの重鎖からなる二量体であり、軽鎖を含まない。本発明は、ＯＳＭＲに結合することができる
２つの重鎖またはそのフラグメントの二量体抗体を包含する。
【００９１】
重鎖及び軽鎖の可変領域は、典型的には、３つの超可変領域、すなわち、相補性決定領域またはＣＤＲにより連結された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。ＣＤＲは、抗原の認識結合を主に担う。各対の２つの鎖からのＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列しており、特異的エピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖および重鎖の両方は、ドメインＦＲ１，ＣＤＲ１，ＦＲ２，ＣＤＲ２，ＦＲ３，ＣＤＲ３，及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔの定義に従う。
【００９２】
ＣＤＲは、抗原結合のための主要な表面接触点を構成する。ＣＤＲ３または軽鎖及び、特に、重鎖のＣＤＲ３は、軽鎖及び重鎖の可変領域中の抗原結合において最も重要な決定基を構成することができる。いくつかの抗体では、重鎖ＣＤＲ３は、抗原と抗体の間の接触の主要なエリアを構成しているようである。ＣＤＲ３だけが変化するインビトロ選択スキームが、抗体の結合特性を変化させるか、またはどの残基が光源の結合に寄与するかを決定するのに使用することができる。
【００９３】
天然に存在する抗体は、典型的には、タンパク質分泌のための細胞経路に抗体を指示し、典型的には成熟抗体には存在していない、シグナル配列を含む。本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドは、以下に記載のように、天然に存在するシグナル配列または異種のシグナル配列をコードすることができる。
【００９４】
一実施形態では、抗原結合タンパク質は、本明細書に記載の１から６の例示的ＣＤＲを含む抗体である。本発明の抗体は、ＩｇＭ，ＩｇＧ（ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４を含む），ＩｇＤ，ＩｇＡ，またはＩｇＥ抗体を含む任意の型のものであってよい。具体的な実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ型抗体、例えばＩｇＧ１抗体である。
【００９５】
いくつかの実施形態では、例えば、抗原結合タンパク質が完全な重鎖及び軽鎖を有する抗体である場合、ＣＤＲは、すべて同じ種、例えばヒト、からのものである。あるいは、例えば、抗原結合タンパク質が、上記に概説した配列からの６つ未満のＣＤＲを含有する実施形態では、追加のＣＤＲは、他の種からのもの、または、例示的な配列に示されたものとは異なるヒトのＣＤＲのいずれかであってもよい。例えば、本明細書で同定される適切な配列からのＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３領域は、ＨＣＤＲ１，ＨＣＤＲ２，ＬＣＤＲ１，及びＬＣＤＲ２とともに使用することができ、これらは別の種または異なるヒト抗体の配列、またはそれらの組み合わせから所望により選択される。例えば、本発明のＣＤＲは、商業的に関連するキメラまたはヒト化抗体のＣＤＲ領域を置換することができる。
【００９６】
具体的な実施形態は、ヒトコンポーネントである抗原結合タンパク質の足場コンポーネントを利用している。しかし、いくつかの実施形態では、足場コンポーネントは、異なる種からの混合物であり得る。従って、抗原結合タンパク質が抗体である場合、このような抗体は、キメラ抗体及び／またはヒト化抗体であってもよい。一般に、「キメラ抗体」及び「ヒト化抗体」の両方は、２つ以上の種に由来する領域を組合せる抗体を指す。例えば、「キメラ抗体」は、伝統的に、マウス（または、場合によってはラット）由来の可変領域とヒト由来の定常領域を含む。
【００９７】
「ヒト化抗体」は、一般に、ヒト抗体に見出される配列と交換した可変ドメインフレームワーク領域を有する非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体では、全抗体は、１つ以上のＣＤＲを除いて、ヒト由来のポリヌクレオチドによってコードされるか、または１つ以上のＣＤＲ内を除いてそのような抗体と同一である。非ヒト生物に由来する核酸によってコードされている一部またはすべてのＣＤＲは、抗体を作成するために、ヒト抗体可変領域のβシートフレームワークに移植されるが、その特異性は、移植したＣＤＲによって決定される。このような抗体の作成は、例えば、ＷＯ  ９２／１１０１８，Ｊｏｎｅｓ  １９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５，Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ.,１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６に記載されている。ヒト化抗体は、遺伝子操作された免疫系を有するマウスを用いても生成することができる（Ｒｏｑｕｅ
ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４）。本明細書に記載の例示的な実施形態では、識別されたＣＤＲはヒトあり、従ってこの文脈において、ヒト化抗体およびキメラ抗体の両方はいくつかの非ヒトＣＤＲを含む：例えば、ヒト化抗体は、異なる種由来である１つまたは複数の他のＣＤＲ領域とともに、ＨＣＤＲ３及びＬＣＤＲ３領域を含んで生成されてもよい。
【００９８】
一実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、多重特異性抗体であり、特に「ダイアボディ」とも呼ばれることがある、二重特異性抗体である。これらは、単一の抗原上の２つ以上の異なる抗原または異なるエピトープに結合する抗体である。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）上のＯＳＭＲと抗原を結合する。このような抗体は、ＯＳＭＲ発現腫瘍細胞などのＯＳＭＲ発現細胞に対するエフェクター細胞応答を標的とするのに有用である。好ましい実施形態では、ヒトエフェクター細胞抗原はＣＤ３である。Ｕ.Ｓ.Ｐａｔ.Ｎｏ.７，２３５，６４１。二重特異性抗体を作製する方法は当該分野で知られている。そのような方法の１つは、細胞内で共発現する場合に、重鎖のヘテロ二量体形成を促進する「節」と「穴」を作成することなどのＦｃ部分を操作することを含む。Ｕ.Ｓ.７，６９５，９６３。他の方法も、Ｆｃ部分を操作することを含むが、静電ステアリングを使用して、細胞内で共発現する場合に、ヘテロ二量体形成を促進するが、ホモ二量体形成を妨げる。ＷＯ  ０９／０８９，００４は、その全体が参照により本明細書に組込まれている。
【００９９】
一実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質はミニボディである。ミニボディは、ＣＨ３ドメインに結合したｓｃＦｖを含む最小化された抗体様タンパク質である（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１）。
【０１００】
一実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質ドメインは抗体である；例えば、Ｕ.Ｓ.Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ.６，２４８，５１６参照。ドメイン抗体（ｄＡｂ）は、ヒト抗体の
重鎖（ＶＨ）または軽鎖（ＶＬ）のいずれかの可変領域に対応する、抗体の機能的結合ドメインである。ｄＡＢは、フル抗体サイズの１０分の１未満の、約１３ｋＤａの分子量を持つ。ｄＡＢは、細菌、酵母、及び哺乳動物細胞系などの様々な宿主においてよく発現する。また、ｄＡｂは非常に安定であり、凍結乾燥又は熱変性等の過酷な条件にさらされた後でも活性を保持する。例えば、ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ６，２９１，１５８；６，５８２，９１５；６，５９３，０８１；６，１７２，１９７；ＵＳ  Ｓｅｒｉａｌ  Ｎｏ．  ２００４／０１１０９４１；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  ０３６８６８４；ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ６，６９６，２４５，ＷＯ  ０４／０５８８２１，ＷＯ  ０４／００３０１９及びＷＯ  ０３／００２６０９参照。
【０１０１】
一実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は抗体フラグメントであり、すなわち、ＯＳＭＲに対して結合特異性を保持する、本明細書で概説される抗体のフラグメントである。様々な実施形態では、抗体結合タンパク質は、Ｆ（ａｂ），Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖ，または単鎖Ｆｖフラグメントを含むが、これらに限定されない。最低限、本明細書で意図されるように、抗体は、１つ以上のＣＤＲなどの軽鎖又は重鎖可変領域のすべて又は部分を含むＯＳＭＲに特異的に結合し得るポリペプチドを含む。
【０１０２】
ＯＳＭＲ結合抗体フラグメントのさらなる例は、以下を含むが、これらに限定されない。（ｉ）ＶＬ,ＶＨ,ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント,(ｉｉｉ)単一の抗体のＶＬ及びＶＨドメ
インからなるＦｖフラグメント；（ｉｖ）単一の変数からなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９,Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、（ｖ）単離
ＣＤＲ領域、（ｖｉ）２つの連結されたＦａｂフラグメントを含む２価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント（ｖｉｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、その２つのドメインが抗原結合部位を形成するように関連付けることができるペプチドリンカーによって連結されている、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５８７９−５８８３）、（ｖｉｉｉ）二重特異性単鎖Ｆｖダイマー（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）及び（ｉｘ）遺伝子融合によって構築される「ダイアボディ」または「トリアボディ」の多価又は多重特異的フラグメント（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３２６：４６１−４７９；ＷＯ  ９４／１３８０４；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８）。抗体フラグメントは修飾することができる。例えば、分子は、ＶＨ及びＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋の組込みによって安定化され得る（Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９−１２４５）。本発明の態様は、これらのフラグメントの非ＣＤＲコンポーネントがヒト配列である、実施形態を含む。
【０１０３】
一実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は完全にヒト抗体である。この実施形態では、上記で概説したように、具体的構造は、ＣＤＲ領域を含んで表される完全な重鎖及び軽鎖を含む。さらなる実施形態は、他のヒト抗体に由来する、他のＣＤＲ、フレームワーク領域、Ｊ及びＤ領域、定常領域、等とともに、本発明の１つ以上のＣＤＲを利用する。例えば、本発明のＣＤＲは、任意の数のヒト抗体、特に商業的に関連した抗体のＣＤＲに取って代ることができる。
【０１０４】
単鎖抗体は、単一のポリペプチド鎖を生じる、アミノ酸架橋（短いペプチドリンカー）を介して、重鎖及び軽鎖可変ドメイン（Ｆｖ領域）フラグメントを連結することによって形成することができる。このような単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、２つの可変ドメインポリペプチド（ＶＬ及びＶＨ）をコードするＤＮＡの間にペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合することによって調製されている。得られたポリペプチドは、抗原結合性単量体を形成するために、自分自身の上に折り返すことができる、または、これらは、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーの長さに応じて、多量体（例えば、２量体、３量体、または４量体）を形成することができる（Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ.，１９９７，Ｐｒｏｔ．Ｅ
ｎｇ．１０：４２３；Ｋｏｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１,Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１
８：９５−１０８）。異なるＶＬ及びＶＨ含有ポリペプチドを結合することによって、異なるエピトープに結合する多量体ｓｃＦｖを形成することができる（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ
ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．１８：３１−４０）。単鎖抗体の産生のために開発された技術は、Ｕ.Ｓ.Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．４，９４６，７７８；Ｂｉｒｄ，８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９：Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４，ｄｅ  Ｇｒａａｆ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．１７８：３７９−８７に記載されているものを含む。単鎖抗体は、本明細書で提供される抗体Ａｂ１  ＬＣｖ／Ａｂ１  ＨＣｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９），Ａｂ２  ＬＣｖ／Ａｂ２  ＨＣｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  １０），及びＡｂ３  ＬＣｖ／Ａｂ３  ＨＣｖ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）の可変ドメインの組合せを含むｓｃＦｖを含むが、これに限定されない。例示的な単鎖抗体は、以下の可変ドメインの組合せを含む：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８／ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４。
【０１０５】
一実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、抗体融合タンパク質（本明細書では「抗体コンジュゲート」」と呼ばれることもある）である。コンジュゲートパートナーはタンパク質性または非タンパク質性とすることができる。後者は、一般的に抗原結合タンパク質上とコンジュゲートパートナー上に官能基を使用して生成される。特定の実施形態では、抗体は、非タンパク質性化学物質（薬物）に複合されて、抗体薬物コンジュゲートを形成する。
【０１０６】
一実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、「合成抗体」と呼ばれることもある、抗体類似体である。例えば、様々な研究が、移植されたＣＤＲを有する代替タンパク質足場または人工の足場のいずれかを利用している。このような足場は、例えば生体適合性ポリマーからなる完全合成足場と同様に、結合タンパク質の３次元構造を安定化するために導入される突然変異を含むが、これらに限定されない。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｍａｔｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  ５３，Ｉｓｓｕｅ１：１２１−１２９．Ｒｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−６５４参照。さらに、足場としてフィブロネクチンコンポーネントを利用する抗体模倣体に基いた研究と同様に、ペプチド抗体模倣体（「ＰＡＭ」）を使用することができる。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチドおよびペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意味する。いくつかの実施形態では、２つ以上の共有結合したアミノ酸は、ペプチド結合によって結合されている。以下に概説するように、例えばタンパク質が、発現系および宿主細胞を用いて組換え的に産生される場合、タンパク質は、天然に存在するアミノ酸及びペプチド結合から構成されてもよい。あるいは、タンパク質は、合成アミノ酸（例えば、ホモフェニルアラニン、シトルリン、オルニチン、およびノルロイシン）、またはペプチド模倣構造、すなわち、ペプトイド（本明細書に、参照により組込まれているＳｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ.  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：９３６７参
照）などの「ペプチドまたはタンパク質類似体」含むことができ、これらはプロテアーゼまたは他の生理学的及び／または貯蔵条件に耐えることができる。このような合成アミノ酸は、抗原結合タンパク質が当技術分野で周知の従来の方法によってインビトロで合成される場合に特に、組込まれ得る。また、ペプチド模倣の、合成の及び天然に存在する残基／構造の任意の組合せを使用することができる。「アミノ酸」は、プロリンおよびヒドロキシプロリンなどのイミノ酸残基も含む。アミノ酸「Ｒ基」または「側鎖」は、（Ｌ）または（Ｓ）配置のいずれかであることができる。特定の実施形態では、アミノ酸は（Ｌ）または（Ｓ）配置である。
【０１０８】
特定の態様では、本発明は、ＯＳＭＲと結合し、いくつかの実施形態では、組換えヒトＯＳＭＲまたはその一部と結合する、組換え抗原結合タンパク質を提供する。この文脈では、「組換えタンパク質」は、当該分野で公知の任意の技術及び方法を使用した組み換え技術を用いて、すなわち、本明細書に記載されるような組換え核酸の発現によって、産生した、タンパク質である。組換えタンパク質の産生のための方法および技術は、当該分野で周知である。本発明の実施形態は、野生型ＯＳＭＲ及びその変異体と結合する組換え抗原結合タンパク質を含む。
【０１０９】
「実質的にからなる」は、本明細書に記載されるように、列挙されたＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：配列に対して、１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２,１３,１４,または１５％だけ変化することができ、かつ、まだ生物学的活性を保持することを意味
する。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、本発明の抗原結合タンパク質は、単離されたタンパク質または実質的に純粋なタンパク質である。「単離された」タンパク質は、それが通常はその天然状態で付随している物質の少なくとも一部だけ伴わず、例えば、所与のサンプルにおいて、全タンパク質のうち重量で少なくとも約５％、または少なくとも約５０％を構成する。単離されたタンパク質は、状況に応じて、総タンパク質含量うち重量で５〜９９．９％を構成することができることが理解される。例えば、タンパク質は、タンパク質が高い濃度レベルで産生されるように、誘発性プロモータまたは高発現プロモータの使用により、有意により高い濃度で産生され得る。この定義は、当該分野で知られている多様な生物及び／または宿主細胞における抗原結合タンパク質の生産を含む。
【０１１１】
アミノ酸配列については、配列同一性及び／または類似性は、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，１９８１，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２のローカル配列同一性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３の配列同一性アライメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２４４４の類似性の方法の研究、これらのアルゴリズムのコンピュータ実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ，及びＴＦＡＳＴＡ）、好ましくはデフォルト設定を使用して、または検査による、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２：３８７−３９５によって記載されたベストフィットシーケンスプログラムなどの、当該分野で公知の標準技術によって決定されるが、これらに限定されない。好ましくは、パーセント同一性は、以下のパラメータに基いて、ＦａｓｔＤＢによって計算される：１のミスマッチペナルティ;１のギャップペ
ナルティ；０．３３のギャップサイズペナルティ；３０の結合ペナルティ、“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，”Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ  １２７−１４９（１９８８），Ａｌａｎ  Ｒ.  Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ.。
【０１１２】
有用なアルゴリズムの例はＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、プログレッシブ、ペアワイズアラインメントを用いて関連配列の群から複数の配列アラインメントを作製する。それはまた、アラインメントを作成するために使用されるクラスタリング関係を示すツリーをプロットすることができる。ＰＩＬＥＵＰはＦｅｎｇ  ＆  Ｄｏｌｉｔｔｌｅ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０のプログレッシブアラインメント法の簡略化を使用する；この方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，１９８９；ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３によって記載されたものと同様である。有用なＰＩＬＥＵＰパラメータは、３．００のデフォルトギャップウエイト、０．１０のデフォルトギャップレングスウエイト、及び加重エンドギャップを含む。
【０１１３】
有用なアルゴリズムの他の例はＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、以下に記載されている：Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．ＭｏＬ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２；及びＫａｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３−５７８７。特に有用なＢＬＡＳＴプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６：４６０−４８０から入手したＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２プログタムである。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、その大部分がデフォルト値に設定されているいくつかの検索パラメータを使用する。調節可能なパラメータは以下の値に設定される：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝１１。ＨＳＰ  ＳおよびＨＳＰ  Ｓ２パラメータは動的な値であり、特定の配列の組成および目的の配列が検索される特定のデータベースの組成に依存してプログラム自体によって確立される；しかし、値は感度を上げるように調整することができる。
【０１１４】
さらに有用なアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２によって報告されたギャップ付きＢＬＡＳＴである。ギャップ付きＢＬＡＳＴは、ＢＬＯＳＵＭ−６２置換スコアを使用する；閾値Ｔパラメータは９に設定する；ギャップなしの拡張をトリガーするための２−ヒット方法は、１０＋ｋのｋａコストのギャップ長をチャージする；Ｘｕは１６に設定し、Ｘｇは、データベース検索段階は４０にとアルゴリズムの出力段階では６７に設定する。ギャップ付きアラインメントは、約２２ビットに対応するスコアによってトリガーされる。
【０１１５】
一般に、個々の変異体のＣＤＲ間のアミノ酸の相同性、類似性、または同一性は、本明細書に示される配列に対して、少なくとも８０％であり、より典型的には、少なくとも８５％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，及び、ほぼ１００％の好ましくは増加する相同性または同一性を有する。同様に、本明細書中で同定された結合タンパク質の核酸配列に対する「パーセント（％）核酸配列同一性」は、抗原結合タンパク質のコード配列中のヌクレオチド残基と同一である候補配列におけるヌクレオチド残基の％として定義される。具体的な方法は、それぞれ１及び０．１２５に設定したオーバーラップスパン及びオーバーラップフラクションでデフォルトパラメータを設定したＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２のＢＬＡＳＴＮモジュールを利用する。
【０１１６】
一般に、個々の変異体ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列と本明細書中に示されるヌクレオチド配列の間の核酸配列相同性、類似性、または同一性は、少なくとも８０％であり、より典型的には、少なくとも８０％，８１％，８２％，８３％，８４％，８５％，８６％，８７％，８８％，８９％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，及びほぼ１００％の好ましくは増加する相同性または同一性を有する。
【０１１７】
従って、「変異体ＣＤＲ」は、本発明の親ＣＤＲに対して特異的な相同性、類似性、または同一性を有するものであり、親ＣＤＲの特異性及び／または活性の少なくとも、８０％，８１％，８２％，８３％，８４％，８５％，８６％，８７％，８８％，８９％，９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％,または９９％
を含むがこれらに限定されない生物学的機能を共有する。
【０１１８】
アミノ酸配列変異を導入するための部位または領域は予め決定されるが、突然変異自体は予め決める必要はない。例えば、所与の部位での突然変異の性能を最適化するために、ランダム突然変異誘発は、標的コドン又は領域、及び所望の活性の最適な組合せについてスクリーニングされた発現した抗原結合タンパク質ＣＤＲ変異体で実施され得る。既知の配列を有するＤＮＡにおける所定の部位で置換変異を作製するための技術は、例えば、Ｍ１３プライマー突然変異誘発及びＰＣＲ突然変異誘発など、よく知られている。変異体のスクリーニングは、ＯＳＭＲ結合など、抗原結合タンパク質活動のアッセイを使用して行われる。
【０１１９】
アミノ酸置換は、典型的には単一残基である；挿入は、通常、約１から２０のアミノ酸残基のオーダーであろうが、著しく大きな挿入が許容され得る。欠失は、約１から２０のアミノ酸残基の範囲であるが、欠失がもっと大きくなる場合もあり得る。
【０１２０】
置換、欠失、挿入またはそれらの任意の組合せは、最終の誘導体または変異体に到達するために使用することができる。一般に、これらの変化は、分子の変化、特に免疫原性および抗原結合タンパク質の特異性を最小限にするために、数個のアミノ酸で行われる。しかし、特定の状況では、より大きな変化が許容され得る。保存的置換は、一般に、表３として示されている以下のチャートに従って作られる。
表３
【表３】
2020022482.tif 000007
【０１２１】
機能または免疫学的同一性の実質的な変化は、表３に示すものより保存性の少ない置換を選択することによってなされる。例えば、以下により大きく影響する置換がなされ得る：例えば、αヘリックスまたはβシート構造などの改変領域のポリペプチド骨格の構造；標的部位での分子の荷電または疎水；または側鎖のバルク。一般に、ポリペプチドの性質に最大の変化を生じることが予想される置換は、（ａ）例えば、セリルまたはスレオニルなどの親水性残基が、例えば、ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリルまたはアラニルなどの疎水性残基のために（またはによって）、置換される；（ｂ）システインまたはプロリンが任意の他の残基のために（またはによって）置換される；（ｃ）例えば、リシル、アルギニル、またはヒスチジルなどの電気的に陽性の側鎖を有する残基が、例えば、グルタミルまたはアスパルチルなどの電気的に陰性の残基のために（またはによって）置換される；（ｄ）例えば、フェニルアラニンなどのバルキーな側鎖を有する残基が、例えば、グリシンなどの側鎖を持たない残基のために（またはによって）置換される、ものである。
【０１２２】
変異体は、必要に応じて抗原結合タンパク質の特性を改変するためにも選択されるが、変異体は、典型的には、天然に存在する類似体と同じ定性的生物学的活性を示し、同じ免疫応答を誘発する。あるいは、変異体は、抗原結合タンパク質の生物学的活性が変更されるように設計することができる。例えば、グリコシル化部位は、本明細書に説明されるように、変更されるか、または除去され得る。
【０１２３】
本発明の範囲内で、ＯＳＭＲ抗体の他の誘導体は、ＯＳＭＲ抗体ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合した異種ポリペプチドを含む組換え融合タンパク質の発現によるなどの他のタンパク質またはポリペプチドとともに、ＯＳＭＲ抗体の共有結合または凝集コンジュゲート、またはそのフラグメントを含む。例えば、コンジュゲートしたペプチドは、例えば、酵母α因子リーダーなどの異種シグナル（すなわちリーダー）ポリペプチド、またはエピトープタグなどのペプチドであってもよい。ＯＳＭＲ抗体含有融合タンパク質は、ＯＳＭＲ抗体の精製または同定を容易にするために追加されたペプチドを含むことができる（例えば、ｐｏｌｙ−Ｈｉｓ）。ＯＳＭＲ抗体ポリペプチドは、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１２０４，１９８８，及びＵ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  ５，０１１，９１２に記載されているように、ＦＬＡＧペプチドにリンクすることもできる。ＦＬＡＧペプチドは非常に抗原性であり、迅速なアッセイおよび発現された組換えタンパク質の容易な精製を可能にする、特異的なモノクローナル抗体（ｍＡｂで）により可逆的に結合されるエピトープを提供する。ＦＬＡＧペプチドが所定のポリペプチドに融合された融合タンパク質を調製するのに有用な試薬は、市販されている（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
【０１２４】
一実施形態では、オリゴマーは、免疫グロブリン由来のポリペプチドを用いて、調製される。（Ｆｃドメインを含む）抗体由来ポリペプチドの種々の部分に融合した特定の異種ポリペプチドを含む融合タンパク質の調製が、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８：１０５３５；Ｂｙｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：６７７；及びＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１によって記載されている。
【０１２５】
本発明の一実施形態は、抗体のＦｃ領域にＯＳＭＲ抗体のＯＳＭＲ結合フラグメントを融合させることによって作製される２つの融合タンパク質を含む二量体を対象とする。二量体は、組換え発現ベクターで形質転換された宿主細胞中で遺伝子融合体を発現する適切な発現ベクターに、融合タンパク質をコードする遺伝子融合体を挿入し、発現された分裂タンパク質が、二量体を得るために鉄部分間に鎖間ジスルフィド結合が形成されるような分子を抗体様にアッセンブルすることを可能にすることによって作製することができる。
【０１２６】
本明細書で用いられる用語「鉄ポリペプチド」は、抗体のＦｃ領域由来のポリペプチドの天然および突然変異タンパク質型を含む。二量体化を促進するヒンジ領域を含有するそのようなポリペプチドの切断型も含まれる。Ｆｃ部分を含む融合タンパク質（及びそれから形成されるオリゴマー）は、プロテインＡまたはプロテインＧカラム上のアフィニティークロマトグラフィーによる容易な精製の利点を提供する。
【０１２７】
ＰＣＴ出願ＷＯ  ９３／１０１５１（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている１つの適切なＦｃポリペプチドは、ヒトのＩｇＧ抗体のＦｃ領域のＮ末端ヒンジ領域から天然のＣ末端に延在する単鎖ポリペプチドである。他の有用なＦｃポリペプチドは、Ｕ.Ｓ.Ｐａｔｅｎｔ  ５，４５７,０３５及びＢａｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅ
ＭＢＯ  Ｊ，１３：３９９２−４００１に記載されている鉄突然変異タンパク質である。この突然変異タンパク質のアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａに変更され、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕに変更され、アミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａに変更されされていることを除いて、ＷＯ  ９３／１０１５１に示されている天然Ｆｃ配列のものと同一である。この突然変異タンパク質はＦｃ受容体に対して、減少した親和性を示す。
【０１２８】
他の実施形態では、ＯＳＭＲ抗体の重鎖及び／又は軽鎖の可変部分は、抗体の重鎖および／または軽鎖の可変部分に対して置換されてもよい。
【０１２９】
オリゴマーＯＳＭＲ抗体誘導体を調製するための他の方法は、ロイシンジッパーの使用を含む。ロイシンジッパードメインは、それらが見出されるタンパク質のオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、当初いくつかのＤＮＡ結合タンパク質で同定され（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚ  ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０；１７５９−６４，１９８８）、それ以来、様々な異なるタンパク質が発見されている。既知のロイシンジッパーの中には、二量体化または三量体化する天然に存在するペプチドおよびその誘導体がある。可溶性オリゴマー性タンパク質を産生するのに適したロイシンジッパードメインの例は、ＰＣＴ出願ＷＯ  ９４／１０３０８に記載されており、肺サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰＤ）由来のロイシンジッパーは、Ｈｏｐｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３４４：１９１に記載されていて、本明細書に参照により組込まれている。融合される異種タンパク質の安定な三量体化を可能にする修正されたロイシンジッパーの使用は、Ｆａｎｓｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２６７−７８に記載されている。１つのアプローチにおいて、ロイシンジッパーペプチドに融合したＯＳＭＲ抗体フラグメントまたは誘導体を含む組換え融合タンパク質は、適切な宿主細胞中で発現され、形成する可溶性オリゴマーＯＳＭＲ抗体フラグメントまたは誘導体は、培養上清から回収される。
【０１３０】
抗原結合タンパク質の共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれ、常にではないが、一般的に、翻訳後に行われる。例えば、抗原結合タンパク質の共有結合修飾のいくつかのタイプは、抗原結合タンパク質の特定のアミノ酸残基を、選択された側鎖またはＮ−またはＣ−末端残基と反応できる有機誘導体化剤と反応させることによって、分子に導入される。
【０１３１】
システイニル残基は、最も一般的には、クロロ酢酸またはクロロアセタミドなどのα-
ハロアセテート（及び対応するアミン）と反応させ、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を得る。システイニル残基は、ブロモトリフルオロアセトン、αブロモβ−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルリン酸、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリベンゾエート、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノール、またはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応によっても誘導体化される。
【０１３２】
ヒスチジル残基は、ｐＨ５．５〜７．０でジエチルピロカーボネートとの反応によって誘導体化されるが、この薬剤はヒスチジル側鎖に対して比較的特異的であるからである。パラ−ブロモフェナシルブロミドも有用である；この反応は、好ましくはｐＨ６．０の０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中で行われる。
【０１３３】
リシニルおよびアミノ末端残基はコハク酸または他のカルボン酸無水物と反応させる。これらの薬剤による誘導体化は、リシニル残基の電荷を逆転させる効果を有する。アルファアミノ含有残基を誘導体化するための他の適切な試薬は、メチルピォリンなどのイミドエステル；ピリドキサールリン酸;  クロロボロヒドリド;  トリニトロベンゼンスルホン酸;Ｏ−メチルイソ尿素；２，４−ペンタンジオン；及び、トランスアミナーゼ触媒によ
るグリオキシル酸との反応、を含む。
【０１３４】
アルギニル残基は、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオン、及びニンヒドリンなどの従来の試薬の1つまたはいくつかとの反応によ
って修飾される。アルギニン残基の誘導体化は、反応が、グアニジン官能基の高いｐＫａのためアルカリ性条件下で行われることを必要とする。さらに、これらの試薬はリシンの基及びアルギニンイプシロン−アミノ基と反応することができる。
【０１３５】
チロシル残基の特異的修飾は、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によるチロシル残基へのスペクトル標識の導入に特に興味をもって、製造され得る。最も一般的には、Ｎ−アセチルイミダゾールとテトラニトロメタンが、Ｏ−アセチルチロシル種と３−ニトロ誘導体をそれぞれ形成するために使用される。チロシル残基は、クロラミンＴ法が上述のように適切である、ラジオイムノアッセイでの使用のための標識タンパク質を調製するために、１２５Ｉまたは１３１Ｉを用いてヨウ素化される。
【０１３６】
カルボキシル側基（アスパルチルまたはグルタミル）は、選択的に、カルボジイミド（Ｒ’−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）との反応によって修飾され、ここで、Ｒ及びＲ’は、所望により異なる、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル-4-エチル）カルボジイミドま
たは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４-ジメチルペンチル）カルボジイミド、な
どのアルキル基である。さらに、アスパルチルおよびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応によってアスパラギニルおよびグルタミニル残基に変換される。
【０１３７】
二官能性試薬による誘導体化は、様々な方法で使用するために、水不溶性支持体マトリックスまたは表面に抗原結合タンパク質を架橋する場合に有用である。通常用いられる架橋剤は、例えば、１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、例えば、３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）などのジスクシンイミジルエステルを含む４−アジドサリチル酸、ホモ二官能性イミドエステルとのエステルなどのN-ヒドロキシスクシンイミドエステル、及びビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンなどの二官能性マレイミド、などのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含む。メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プロピオイミデートなどの誘導化剤は、光の存在下で架橋を形成することができる光活性化中間体産生する。あるいは、Ｕ.Ｓ.  Ｐａｔ．Ｎｏ．３，９６９，２８７；３，６９１，０１６；４，１９５，１２８；４，２４７，６４２；４，２２９，５３７；及び４，３３０，４４０に記載の臭化シアン活性化炭水化物及びその反応基質などの反応性の水不溶性マトリックスが、タンパク質固定化のために使用される。
【０１３８】
グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、それぞれ対応するグルタミルおよびアスパルチル残基にしばしば脱アミド化される。あるいは、これらの残基は穏やかな酸性条件下で脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も本発明の範囲内に入る。
【０１３９】
他の修飾は、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ,Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，
Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９８３，ｐｐ．７９−８６）、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化、を含む。
【０１４０】
本発明の範囲内に含まれる、抗原結合タンパク質の他のタイプの共有結合的修飾は、タンパク質のグリコシル化パターンの変更を含む。当該技術分野で公知のように、グリコシル化パターンは、タンパク質が産生される、タンパク質（例えば、下で説明される、特定のグリコシル化アミノ酸残基の存在または非存在）の両方の配列、または宿主細胞、または生物に依存し得る。特定の発現システムは、下で説明される。
【０１４１】
ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型のどちらかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニンは、ここでＸはプロリンを除く任意のアミノ酸である、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。従って、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在が、潜在的なグリコシル化部位を作製する。Ｏ結合グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロース、のうちの１つの付着を意味するが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使用することができる。
【０１４２】
抗原結合タンパク質へのグリコシル化部位の付加は、（Ｎ結合グリコシル化部位について）１つまたは複数の上述したトリペプチド配列を含むように、アミノ酸配列を改変することによって、好都合に達成される。この改変は、（Ｏ結合グリコシル化部位について）出発配列への１つ以上のセリンまたはスレオニン残基の付加によって作られてもよいし、それによる置換によって作られてもよい。容易にするために、抗原結合タンパク質アミノ酸配列は、好ましくは、ＤＮＡレベルの変化により、特に、所望のアミノ酸に翻訳するコドンが生成されるように、予め選択された基で標的ポリペプチドをコードするＤＮＡを変異させることにより、改変される。
【０１４３】
抗原結合タンパク質の炭水化物部分の数を増加させる他の手段は、タンパク質へのグリコシドの化学的又は酵素的結合によるものである。これらの手順は、Ｎ結合型及びＯ結合型のグリコシル化のグリコシル化能力を有する宿主細胞でのタンパク質の産生を必要としないという点で、有利である。使用される結合モードに応じて、糖（類）は、（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインなどの遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、スレオニン、またはヒドロキシプロリンなどの遊離のヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンのような芳香族残、または（ｆ）グルタミンのアミド基基、に結合していてもよい。これらの方法は、１９８７年９月１１日に公開されたＷＯ  ８７／０５３３０、及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，１９８１，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６に記載されている。
【０１４４】
出発抗原結合タンパク質上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的または酵素的に達成することができる。化学的脱グリコシル化は、化合物トリフルオロメタンスルホン酸または同等の化合物へのタンパク質の曝露を必要とする。この治療は、連結糖（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン）を除くほとんどまたは全ての糖の切断をもたらすが、ポリペプチドはそのまま残す。化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１８：１３１によって記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１３８：３５０によって記載されているように、様々なエンド−及びエキソ−グリコシダーゼの使用によって達成することができる。潜在的なグリコシル化部位でのグリコシル化は、Ｄｕｓｋｉｎ
ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：３１０５によって記載されているように、化合物ツニカマイシンの使用によって防止することができる。ツニカマイシンは、タンパク質−Ｎ−グリコシド結合の形成をブロックする。
【０１４５】
抗原結合タンパク質の他のタイプの共有結合的修飾は、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．４，６４０，８３５；４，４９６，６８９；４，３０１，１４４；４，６７０，４１７；４，７９１，１９２または４，１７９，３３７に記載された方法で、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレンなどの様々なポリオールを含むがこれらに限定されない非タンパク性ポリマーに、抗原結合タンパク質を結合することを含む。また、当該技術分野で公知のように、アミノ酸置換は、ＰＥＧのようなポリマーの付加を容易にするために、抗原結合タンパク質内の様々な位置でなされ得る。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質の共有結合修飾は、１つまたは複数の標識の付加を含む。
【０１４７】
用語「標識基」は、任意の検出可能な標識を意味する。適切な標識基の例は、以下を含むが、これらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ，１４Ｃ，１５Ｎ，３５Ｓ，９０Ｙ，９９Ｔｃ，１１１Ｉｎ，１２５Ｉ，１３１Ｉ）、蛍光基（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素基（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、二次レポーターによって認識される化学発光基、ビオチニル基、または所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態では、標識基は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームを介して抗原結合タンパク質に結合されている。タンパク質を標識化する様々な方法が当該技術分野で公知であり、本発明の実施に使用することができる。
【０１４８】
一般に、標識は、それらが検出されるべきアッセイに応じて、様々なクラスに分類される：ａ）放射性同位体または重同位体でもよい同位体標識;  ｂ）磁気標識（例えば、磁
性粒子）；ｃ）レドックス活性部分；ｄ）光学色素；酵素基（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；ｅ）ビオチン化基；及びｆ）２次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列の、２次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグなど）。いくつかの実施形態では、標識基は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームを介して抗原結合タンパク質に結合されている。タンパク質を標識化する様々な方法が当該技術分野で公知であり、本発明の実施に使用することができる。
【０１４９】
特異的な標識は、光学色素を含み、この光学色素は、発色団、蛍光体及びフルオロフォア、このうち後者は多くの場合に特異的である、を含むが、これらに限定されない。フルオロフォアは、「小分子」蛍光物質、またはタンパク質性蛍光物質のいずれかであり得る。
【０１５０】
「蛍光標識」は、その固有の蛍光特性により検出され得る任意の分子を意味する。適切な蛍光標識は、限定されないが、フルオレセイン，ローダミン，テトラメチルローダミン，エオシン，エリスロシン，クマリン，メチル−クマリン，ピレン，Ｍａｌａｃｉｔｅ  ｇｒｅｅｎ，スチルベン，Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ，Ｃａｓｃａｄｅ  ＢｌｕｅＪ，Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ，ＩＡＥＤＡＮＳ，ＥＤＡＮＳ，ＢＯＤＩＰＹ  ＦＬ，ＬＣ  Ｒｅｄ  ６４０，Ｃｙ  ５，Ｃｙ  ５．５，ＬＣ  Ｒｅｄ  ７０５，Ｏｒｅｇｏｎ  ｇｒｅｅｎ，Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ｄｙｅｓ（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ３５０，Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ  ４３０，Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８，Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６，Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８，Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４，Ａｌｅｘａ
Ｆｌｕｏｒ  ６３３，Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６６０，Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６８０），Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ，Ｃａｓｃａｄｅ  Ｙｅｌｌｏｗ，及びＲ−ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（Ｐ．Ｅ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ），ＦＩＴＣ，Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ，並びにＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ），Ｃｙ５，Ｃｙ５．５，Ｃｙ７（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）を含むが、これらに限定されない。フルオロフォアを含む適切な光学色素は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｂｙ  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｐ．Ｈａｕｇｌａｎｄに記載されており、これは参照により本明細書に明確に組込まれる。
【０１５１】
適切なタンパク質性蛍光標識は、ウミシイタケ、Ｐｔｉｌｏｓａｒｃｕｓ、またはオワンクラゲ種のＧＦＰ（Ｃｈａｌｆｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６３：８０２−８０５）を含む緑色蛍光タンパク質、ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇｅｎｂａｎｋ  ＡｃｃｅｓｓｉｏＮ  Ｎｕｍｂｅｒ  Ｕ５５７６２）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ，Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．１８０１  ｄｅ  Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ  Ｂｌｖｄ．Ｗｅｓｔ，８ｔｈ  Ｆｌｏｏｒ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ  Ｈ３Ｈ  １Ｊ９；Ｓｔａｕｂｅｒ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２４：４６２−４７１；Ｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．６：１７８−１８２）、増強黄色蛍光タンパク質（ＥＹＦＰ，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ.
）、ルシフェラーゼ（Ｉｃｈｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：５４０８−５４１７）、βガラクトシダーゼ（Ｎｏｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：２６０３−２６０７）、及びウミシイタケ（ＷＯ９２／１５６７３，ＷＯ９５／０７４６３，ＷＯ９８／１４６０５，ＷＯ９８／２６２７７，ＷＯ９９／４９０１９，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏｓ．５２９２６５８，５４１８１５５，５６８３８８８，５７４１６６８，５７７７０７９，５８０４３８７，５８７４３０４，５８７６９９５，５９２５５５８）を含むが、これらに限定されない。上記引用文献のすべては参照により本明細書に明確に組込まれる。
【０１５２】
本明細書中に記載の例示的抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質によって結合されたＯＳＭＲ上の異なるエピトープに基く特性を有する。用語「エピトープ」は、例えば、抗原結合タンパク質が標的分子に結合している場合、抗体などの抗原結合タンパク質によって接触されている標的分子のアミノ酸を意味する。エピトープは、連続または非連続的であることができる。（例えば、（ｉ）単鎖ポリペプチドにおいて、ポリペプチド配列内では連続していないが、ターゲット分子の関連内にあるアミノ酸残基は、抗原結合タンパク質によて結合されている、または（ｉｉ）例えば、ＯＳＭＲとｇｐ１３０またはＯＳＭＲとＩＬ−３１受容体Ａなどの、２つ以上の個々のコンポーネントを含む多量体受容体において、アミノ酸残基は、個々の構成コンポーネントの１つ以上に存在しているが、抗原結合タンパク質によりまだ結合されている。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基を含むことができ、特異的な３次元構造特性、及び／または特異的荷電特性を有することができる。一般に、特定の標的分子に特異的な抗原結合タンパク質は、タンパク質及び／または高分子の複合混合物中の標的分子上のエピトープを優先的に認識するであろう。
【０１５３】
抗原結合タンパク質によって結合されたエピトープを特徴付ける方法は当該技術分野で周知であり、以下のものを含むがこれらに限定されない。ビニング（交差競合）（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ“Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｂｉｎｎｉｎｇ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｂｙ  ａ  ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ  ｐａｉｒｉｎｇ  ａｓｓａｙ”Ｊ  ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１１）３６５，１１８−２５）、ペプチドマッピング（例えば、ＰＥＰＳＰＯＴ（商標））（Ａｌｂｅｒｔ  ｅｔ
ａｌ  “Ｔｈｅ  Ｂ−ｃｅｌ１  Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉ−Ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩＩ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＥＳＨ８  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ”２００８  Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ  ９９，６３４−７）、キメラなどの突然変異誘導法（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｌｂａｌｉｚｕｍａｂ，ａ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  Ａｎｔｉ−ＨＩＶ−１  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔｅｄ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ”Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（２０１０）８４，６９３５−６９４２）、アラニンスキャニング（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ“Ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ
ｅｐｉｔｏｐｅ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ＨＧＨ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ａｌａｎｉｎｅ−ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ”Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８９）２４４，１０８１−１０８５)、アルギニンスキャニング（Ｌｉ
ｍ  ｅｔ  ａｌ“ａ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ
ｃａｎ  ｉｎｄｕｃｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２０１０）４９，３７９７−３８０４）、ＨＤ交換法（Ｃｏａｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ“Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｂｙ  ａｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ／ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｏｎ−ｌｉｎｅ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ，ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ”Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ，ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．（２００９）２３  ６３９−６４７）、ＮＭＲクロス飽和法（Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ“Ｐｒｅｃｉｓｅ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｍａｌａｒｉａ  ｐａｒａｓｉｔｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｂｙ  ＴＲＯＳＹ  ＮＭＲ  ｃｒｏｓｓ−ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （２００５）４４，５１８−２３）、及び結晶学（Ｇｅｒｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＩＬ−１７Ａ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ,  ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄ
ｙ”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ（２００９）３９４，９０５−２１）。これらの方法は、エピトープを含むアミノ酸に関して、それらが提供する詳細のレベルが異なる。実施例４は、エピトープビニングの例示的な方法を提供する。
【０１５４】
本発明の抗原結合タンパク質は、例えば、Ａｂ１，Ａｂ２，またはＡｂ３などの、本明細書に記載の例示的典型的抗原結合タンパク質と重複するエピトープを有するものを含む。特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は、例示的抗原結合タンパク質に関して同一のエピトープを持つ。他の実施形態では、抗原結合タンパク質は、例示的抗原結合タンパク質と同じアミノ酸のサブセットだけを結合する。
【０１５５】
特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、Ａｂ１，Ａｂ２，またはＡｂ３と同一であるかまたは重複するエピトープを持ち、かつ、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン；ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメイン；または、ｃ）ａ）の軽鎖可変ドメイン及びｂ）の重鎖可変ドメイン、を含む。
【０１５６】
特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、Ａｂ１，Ａｂ２，またはＡｂ３と同一であるかまたは重複するエピトープを持ち、かつ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメイン；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメイン；及び、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、または同一性を有する重鎖可変ドメイン、を含む。
【０１５７】
特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、Ａｂ１，Ａｂ２，またはＡｂ３と同一であるかまたは重複するエピトープを持ち、かつ、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン；ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０，またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン；または、ｃ）ａ）の軽鎖可変ドメイン及びｂ）の重鎖可変ドメイン、を含む。
【０１５８】
特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、Ａｂ１，Ａｂ２，またはＡｂ３と同一であるかまたは重複するエピトープを持ち、かつ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン；ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：２８で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン；及び、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する軽鎖可変ドメイン、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１で示されるアミノ酸配列から、１０以下または５以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有する重鎖可変ドメイン、を含む。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の例示的重鎖可変ドメイン変異体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含む。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の重鎖可変ドメイン変異体の例である。
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の例示的重鎖可変ドメイン変異体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含む。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の重鎖可変ドメイン変異体の例である。
【０１５９】
特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、Ａｂ１，Ａｂ２，またはＡｂ３と同一であるかまたは重複するエピトープを持ち、かつ、ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；ｂ）ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：３１で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３；または、ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２で示されるＬＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５で示されるＬＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８で示されるＬＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＬＣＤＲ３：を含む軽鎖可変ドメイン、及び、ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：１２で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３；または、ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４で示されるＨＣＤＲ１配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ１；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７で示されるＨＣＤＲ２配列から３以下のアミノ酸の付加、欠または置換を有するＨＣＤＲ２；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０で示されるＨＣＤＲ３配列から３以下のアミノ酸の付加、欠失または置換を有するＨＣＤＲ３、を含む重鎖可変ドメイン、を含む。
【０１６０】
上記のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、好ましくは、ａ）の軽鎖可変ドメイン及びｄ）の重鎖可変ドメインを含むもの；ｂ）の軽鎖可変ドメイン及びｅ）の重鎖可変ドメインを含むもの；及び、ｃ）の軽鎖可変ドメイン及びｆ）の重鎖可変ドメインを含むもの、を含む。
ａ）の軽鎖可変ドメイン及びｄ）の重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含む重鎖可変ドメインを含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインは、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３で示されるアミノ酸配列を含む。
ｂ）の軽鎖可変ドメイン及びｅ）の重鎖可変ドメインを含むＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０の７３位に対応する位置にアスパラギン以外のアミノ酸（例えば、アスパラギン酸）を含む重鎖可変ドメインを含むことができる。このような実施形態では、重鎖可変ドメインは、選択的に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を含む。
【０１６１】
同一のエピトープまたは重複するエピトープを持つ抗原結合性タンパク質は、抗原結合するために交差競合することが多い。従って、特定の実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、Ａｂ１,Ａｂ２,またはＡｂ３と交差競合する。「交差競合する」または「交差競争」は、標的上の同じエピトープまたは結合部位について競合することを意味する。このような競合は、参照抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合部分）が、テスト抗原結合タンパク質の特異的結合を防止または阻害する、及び、その逆、のアッセイによって決定され得る。多数のタイプの競合結合アッセイが、テスト分子が結合のために参照分子と競合するかどうかを決定するのに使用することができる。用いることができるアッセイの例は、固相直接または間接のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ），固相直接または間接の酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ），サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２−２５３参照），固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−９参照），固相直接標識サンドイッチアッセイ，ルミネックス（Ｊｉａ  ｅｔ  ａｌ．“ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ  Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｂｉｎｎｉｎｇ  ＦＯＲ  ｔｈｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００４）２８８，９１−９８），及び表面プラズモン共鳴（Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ,  ａ  
Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  Ａｎｔｉ−ＨＩＶ−１  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔｅｄ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ”Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（２０１０）８４，６９３５−４２）を含む。交差競合を決定する例示的な方法は、実施例５に記載されている。通常、競合する抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合、それは、少なくとも５０％，５５％，６０％，６５％，７０％，または７５％だけ参照抗原結合性タンパク質の共通抗原への結合を阻害する。いくつかの場合、結合は少なくとも８０％，８５％，９０％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，またはそれ以上阻害される。
ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
【０１６２】
本明細書に定義されるように、抗体を含む、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質をコードする核酸または単離された核酸は、本発明に包含される。好ましい核酸は、本明細書に記載の例示的な軽鎖および重鎖をコードするものを含む。
【０１６３】
Ａｂ１  ＬＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１で示される配列を含む核酸である。
【０１６４】
Ａｂ２  ＬＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２で示される配列を含む核酸である。
【０１６５】
Ａｂ３  ＬＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３で示される配列を含む核酸である。
【０１６６】
Ａｂ１  ＨＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３で示される配列を含む核酸である。
【０１６７】
Ａｂ２  ＨＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４で示される配列を含む核酸である。
【０１６８】
Ａｂ３  ＨＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５で示される配列を含む核酸である。
Ａｂ１  ＨＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７で示される配列を含む核酸である。
Ａｂ２ＨＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８で示される配列を含む核酸である。
Ａｂ３ＨＣをコードする例示的な核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９で示される配列を含む核酸である。
【０１６９】
本発明の態様は、本明細書に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド変異体（例えば、縮重による）を含む。
【０１７０】
本発明の態様は、以下の例示的実施形態を含む様々な実施形態を含むが、これらに限定されない。
【０１７１】
以下の群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
【０１７２】
Ａ．１．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：２７−２９で示される軽鎖可変ドメイン配列に少なくとも９０％同一である軽鎖可変ドメイン配列；
【０１７３】
２．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯＳ：９−１１で示される重鎖可変ドメイン配列に少なくとも９０％同一である重鎖可変ドメイン配列；
【０１７４】
３．（１）の軽鎖可変ドメイン及び（２）の重鎖可変ドメイン；及び、
【０１７５】
Ｂ．以下の配列と同じであるか、または各ＣＤＲにおいて３つ以下のアミノ酸の付加、置換、及び／または欠失だけ異なる、ＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン及び/またはＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；
【０１７６】
１．Ａｂ１の、軽鎖ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０），ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：３３），ＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６）または重鎖ＣＤＲ  １（ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：１２），ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５），ＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）;
【０１７７】
２．Ａｂ２の、軽鎖ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１），ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：３４），ＣＤＲ３  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７）または重鎖ＣＤＲ  １（ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：１３），ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６），ＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）;及び、
【０１７８】
３．Ａｂ３の、軽鎖ＣＤＲ１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２），ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ
ＮＯ：３５），ＣＤＲ３  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８）または重鎖ＣＤＲ  １（ＳＥＱ
ＩＤ  ＮＯ：１４），ＣＤＲ２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７），ＣＤＲ３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）。
いくつかの実施形態では、核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、核酸は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０，ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【０１７９】
好ましい実施形態では、核酸または単離核酸によってコードされるポリペプチドは、は、ＯＳＭＲを結合する抗原結合タンパク質のコンポーネントである。
【０１８０】
核酸の単離のためのプローブまたはプライマーとして、または、クエリ配列のデータベース検索用として使用される、本明細書に記載のアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列は、アミノ酸配列からの「逆翻訳」によって、または、ＤＮＡ配列コードが同定されているポリペプチドとの、アミノ酸の同一性の領域を同定することによって、得ることができる。周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の手順が、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の、またはＯＳＭＲ抗原結合タンパク質のポリペプチドフラグメントの所望の組み合わせをコードするＤＮＡ配列を単離して増幅するのに用いることができる。ＤＮＡフラグメントの組合せの所望の末端を定義するオリゴヌクレオチドは、５’及び３’プライマーとして用いられる。オリゴヌクレオチドはさらに、ＤＮＡフラグメントの増幅された組み合わせの発現ベクターへの挿入を容易にするために、制限エンドヌクレアーゼの認識部位を含むことができる。ＰＣＲ技術は、Ｓａｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：４８７（１９８８）；Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，ＳａＮ  Ｄｉｅｇｏ（１９８９）、ｐｐ．１８９−１９６；及びＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ．ａｌ．，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９９０）に記載されている。
【０１８１】
本発明の核酸分子は、１本鎖と２本鎖形態の両方のＤＮＡ及びＲＮＡ、並びに対応する相補的な配列を含む。ＤＮＡは、例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、化学的に合成されたＤＮＡ、ＰＣＲによって増幅されたＤＮＡ、及びそれらの組合せを含む。本発明の核酸分子は、全長遺伝子またはｃＤＮＡ分子、並びにそのフラグメントの組合せを含む。本発明の核酸は、好ましくは、ヒト供給源に由来するが、本発明は同様に、非ヒト種に由来するものを含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸は、単離された核酸である。「単離された核酸」は、天然に存在する供給源から単離された核酸の場合、核酸が単離された生物のゲノム中に存在する隣接した遺伝子配列から分離された核酸である。例えば、ＰＣＲ生成物、ｃＤＮＡ分子、またはオリゴヌクレオチドのような化学的にまたはテンプレートから酵素的に合成された核酸の場合には、このようなプロセスから得られた核酸は、単離された核酸であることが理解される。単離された核酸分子は、別々のフラグメントの形で、またはより大きな核酸構築物のコンポーネントとしての核酸分子を指す。一好適実施形態では、核酸は、実質的に汚染内因性物質を含まない。核酸分子は、好ましくは、実質的に純粋な形態で、及び、標準的な生化学的方法により、そのコンポーネントのヌクレオチド配列の同定、操作、及び回収を可能にする量または濃度で、少なくとも一度単離されたＤＮＡまたはＲＮＡに由来する（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ,２ｎｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒ
ｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）に概説されたものなど）。このような配列は、好ましくは、典型的には真核生物の遺伝子に存在する内部非翻訳配列、またはイントロンによって中断されないオープンリーディングフレームの形で提供され、及び／または構築される。非翻訳ＤＮＡの配列は、コード領域の操作または発現に干渉しないオープンリーディングフレームからの５’または３’に存在することができる。
【０１８３】
本発明は、本明細書に記載されるように、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質をコードする複数の核酸に、中程度にストリンジェントな条件、及びより好ましくは高度にストリンジェントな条件の下で、ハイブリダイズする核酸または単離された核酸も含む。ハイブリダイゼーション条件の選択に影響を与える基本的なパラメータ及び適切な条件を立案するためのガイダンスは、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，，Ｆｒｉｔｓｃｈ，ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ｃｈａｐｔｅｒｓ  ９  ａｎｄ  １１；及びＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ｓｅｃｔｉｏｎｓ  ２．Ｉ０及び６．３−６．４）に記載されており、そして、例えば、ＤＮＡの長さ及び／または基の組成に基いて、当業者によって容易に決定され得る。中程度にストリンジェントな条件を達成する一つの方法は、５ｘＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を含有する前洗浄溶液、約５０％のホルムアミド、６ｘＳＳＣ、約５５℃のハイブリダイゼーション温度のハイブリダイゼーション緩衝液（または、例えば、約４２℃のハイブリダイゼーション温度で、約５０％のホルムアミドを含むものなど、他の同様のハイブリダイゼーション溶液）の使用、及び、０．５ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中約６０℃の洗浄条件、を含む。一般的に、高度にストリンジェントな条件は、上記のようなハイブリダイゼーション条件として定義されるが、洗浄は約６８℃、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで行う。ＳＳＰＥ（１ｘＳＳＰＥは、０．１５ＭＮａＣｌ、１０ｍＭＮａＨ２ＰＯ４、及び１．２５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．４である）は、ＳＳＣハイブリダイゼーションと洗浄緩衝液において（１ｘＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ及び１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）と置換することができる；洗浄はハイブリダイゼーションが完了した後１５分間行われる。当業者に公知であり、以下にさらに記載されるように（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９参照）、洗浄温度と洗浄塩濃度は、ハイブリダイゼーション反応及び２本鎖の安定性を支配する基本原理を適用することによって、ストリンジェンシーの所望の程度を達成するために、必要に応じて調整することができることが、理解されるべきである。未知の配列の標的核酸へ核酸をハイブリダイズする場合、ハイブリッド長は、ハイブリダイズする核酸の長さであると仮定される。既知の配列の核酸がハイブリダイズされる場合、ハイブリッド長は核酸の配列を整列させ、領域または最適な配列相補性の領域を同定することによって決定することができる。長さが５０基対未満であると予想されるハイブリッドのハイブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）より５〜１０℃低くなるべきであり、ここでＴｍは以下の式に従って決定される。長さが１８基対未満のハイブリッドについては、Ｔｍ（℃）＝２（＃  ｏｆ  Ａ＋Ｔ  塩基）＋４（＃  ｏｆ  ＃Ｇ  ＋Ｃ  塩基）。長さが１８基対以上のハイブリッドについては、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（％Ｇ＋Ｃ）−（６００／Ｎ）、ここでＮはハイブリッド中の基の数であり、［Ｎａ＋］はハイブリダイゼーション緩衝液中のナトリウムイオンの濃度（１ｘＳＳＣに対して［Ｎａ＋］＝０．１６５Ｍ）である。好ましくは、それぞれのこのようなハイブリダイズする核酸は、ハイブリダイズする本発明の核酸の長さの、少なくとも１５ヌクレオチド（またはより好ましくは少なくとも１８ヌクレオチド、または少なくとも２０ヌクレオチド、または少なくとも２５ヌクレオチド、または少なくとも３０ヌクレオチド、または少なくとも４０ヌクレオチド、または最も好ましくは、少なくとも５０ヌクレオチド）、または少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、そして、最も好ましくは、少なくとも８０％）の長さを有し、かつ、ハイブリダイズする本発明の核酸と、少なくとも６０％の配列同一性（より好ましくは少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、そして最も好ましくは少なくとも９９．５％）を有し、ここで、配列同一性は、上記でより詳細に記載されているように、配列ギャップを最少にしつつ重複と同一性を最大にするように整列した時に、ハイブリダイズする核酸の配列を比較することによって決定される。
【０１８４】
本発明に係る変異体は、本明細書に概説するように、変異体をコードするＤＮＡを生成し、その後、細胞培養での組換えＤＮＡを発現するために、通常、カセットまたはＰＣＲ変異誘導または当技術分野で周知の他の技術を用いて、抗原結合タンパク質をコードするＤＮＡ中のヌクレオチドの部位特異的変異誘導によって調製される。しかし、１００〜１５０までの残基を有する変異体ＣＤＲを含む抗原結合タンパク質フラグメントは、確立された技術を用いてインビトロ合成によって調製することができる。変異体は、典型的には、例えば、ＯＳＭＲへの結合など、天然に存在する類似体と同じ定性的生物活性を示すが、以下にさらに詳細に概説されるように、修飾された特性を有する変異体も選択することができる。
【０１８５】
当業者によって理解されるであろうように、遺伝子コードの縮重により、非常に多数の核酸を製造することができ、これらの全ては、本発明のＣＤＲ（及び抗原結合タンパク質の重鎖及び軽鎖または他のコンポーネント）をコードする。従って、特定のアミノ酸配列を同定すると、当業者は、コードされるタンパク質のアミノ酸配列を変更しない方法で、単に一つ以上のコドンの配列を修飾することによって、任意の数の異なる核酸を製造することができるであろう。
【０１８６】
本発明は、上記のように少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、プラスミド、発現ベクター、転写または発現カセットの形態の発現システムや構築物も提供する。また、本発明は、このような発現システムまたは構築物を含む宿主細胞を提供する。
【０１８７】
典型的には、任意の宿主細胞で使用される発現ベクターは、プラスミド維持のためと、外因性ヌクレオチド配列のクローニングと発現のための配列を含むであろう。特定の実施形態で、「フランキング配列」と総称して呼ばれるこのような配列は、典型的には、以下のヌクレオチド配列の１つまたは複数を含むであろう：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製の起源、転写終結配列、ドナーとアクセプターのスプライス部位を含む完全なイントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をエンコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現されるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、及び、選択可能なマーカー要素。これらの配列のそれぞれは、以下に説明する。
【０１８８】
選択的に、ベクターは、「タグ」をコードする配列、すなわち、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質をコードする配列の５’または３’端に位置するオリゴヌクレオチド分子を含んでいてもよい；オリゴヌクレオチド配列は、（ヘキサＨｉｓなどの）ポリＨｉｓ、または、市販の抗体が存在するＦＬＡＧ、ＨＡ（インフルエンザウイルス血球凝集素）、またはｍｙｃなどの他の「タグ」をコードする。このタグは、典型的には、ポリペプチドの発現際にポリペプチドに融合され、宿主細胞からのＯＳＭＲ抗原結合タンパク質のアフィニティー精製または検出の手段として作用させることができる。アフィニティー精製は、例えば、アフィニティーマトリックスとしてタグに対する抗体を用いたカラムクロマトグラフィーにより、実施することができる。選択的に、タグはその後、切断のために特定のペプチダーゼを使用するなど、様々な手段によって生成ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質から除去される。
【０１８９】
フランキング配列は、同種（すなわち、宿主細胞と同じ種及び／または株から）、異種（すなわち、宿主細胞種または株以外の種から）、ハイブリッド（すなわち、複数の供給源からのフランキング配列の組合せ）、合成、または天然であってよい。従って、フランキング配列の供給源は、フランキング配列が宿主細胞組織において機能的であり、かつそれによって活性化され得るならば、任意の原核生物または真核生物、任意の脊椎動物もしくは無脊椎動物生物、または任意の植物であってよい。
【０１９０】
本発明のベクターにおいて有用なフランキング配列は、当技術分野で周知のいくつかの方法の任意のものによって得ることができる。典型的には、本明細書で有用なフランキング配列は、以前にマッピングによって、及び／または制限エンドヌクレアーゼ消化により同定されているので、適切な制限エンドヌクレアーゼを用いて適切な組織源から単離することができる。いくつかのケースでは、フランキング配列の完全なヌクレオチド配列を知ることができる。ここで、フランキング配列は、核酸合成またはクローニングのために本明細書に記載した方法を用いて合成することができる。
【０１９１】
フランキング配列のすべてまたはほんの一部でも公知であれば、フランキング配列は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、及び／または、同じまたは他の種からのオリゴヌクレオチド及び／またはフランキング配列フラグメントなどの適切なプローブでゲノムライブラリーをスクリーニングすることにより、得ることができる。フランキング配列が公知でない場合には、フランキング配列はを含むＤＮＡのフラグメントは、例えば、コード配列またはさらに別の遺伝子を含むことができるＤＮＡのもっと大きなフラグメントから単離することができる。単離は、アガロースゲル精製、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ）、または当業者に公知の他の方法を用いて単離に続いて適切なＤＮＡフラグメントを生成するための、制限エンドヌクレアーゼ消化によって達成することができる。この目的を達成するための適切な酵素の選択は、当業者には容易に明らかであろう。
【０１９２】
複製の起点は、通常、市販の原核生物発現ベクターであり、その起点は、宿主細胞におけるベクターの増幅を補助する。選択されたベクターが複製起点部位を含まない場合、既知の化学的配列に基づいて合成し、ベクターに連結することができる。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）からの複製の起点はほとんどのグラム陰性細菌に適しており、かつ、様々なウイルス起点（例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、またはＨＰＶもしくはＢＰＶなどのパピローマウイルス）は、哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般に、複製起点コンポーネントは、哺乳類発現ベクターには必要ではない（例えば、ＳＶ４０起点は、ウイルス初期プロモーターも含むという理由だけで使用されることが多い）。
【０１９３】
典型的には、転写終結配列はポリペプチドコード領域の末端の３’に位置し、転写を終結させる作用をする。通常、原核生物細胞における転写終結は、配列ポリＴ配列が続くＧ−Ｃリッチなフラグメントである。その配列は容易にライブラリーからクローニングされ、さらにはベクターの一部として市販されているが、それは、本明細書に記載の方法などの核酸合成法を用いて容易に合成することもできる。
【０１９４】
選択マーカー遺伝子は、選択培地中で増殖させた宿主細胞の生存及び増殖に必要なタンパク質をコードする。典型的な選択マーカー遺伝子は、（a）原核生物の宿主細胞のため
に、例えば、アンピシリン、テトラサイクリン、またはのカナマイシンなどの抗生物質または他の毒素に対する耐性を付与する；（b）細胞の栄養要求性欠損を補完するか；また
は、（c）複雑なまたは規定された培地から利用できない重要な栄養素を供給する、タン
パク質をコードする。特異的な選択可能なマーカーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、及びテトラサイクリン耐性遺伝子である。有利なことに、ネオマイシン耐性遺伝子も、原核生物と真核生物の両方の宿主細胞において、選択のために使用することができる。
【０１９５】
他の選択遺伝子は、発現される遺伝子を増幅するために使用することができる。増幅は、増殖または細胞の生存に重要なタンパク質の産生に必要な遺伝子が、連続的世代の組換え細胞の染色体内でタンデムに反復されるプロセスである。哺乳動物細胞に適切な選択可能なマーカーの例は、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）及びプロモーターチミジンキナーゼ遺伝子を含む。哺乳動物細胞形質転換体は、形質転換体のみが、ベクターに存在する選択可能な遺伝子によって生存するように一意的に適応させられる選択圧力下に置かれる。選択圧力は、培地中の選択剤の濃度が連続的に増加し、それによって、選択可能な遺伝子とＯＳＭＲポリペプチドに結合する抗原結合タンパク質抗体などのたの遺伝子をコードするＤＮＡの両方の増幅をもたらすような条件下で形質転換細胞を培養することによって、課される。その結果、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質のようなポリペプチドの増大した量が、増幅されたＤＮＡから合成される。
【０１９６】
リボソーム結合部位はｍＲＮＡの翻訳開始のために通常必要であり、シャイン・ダルガーノ配列（原核生物）またはコザック配列（真核生物）によって特徴付けられる。エレメントは、典型的には、発現されるポリペプチドの、プロモーターに対しては３’に、コード配列に対しては５’に位置する。特定の実施形態では、１つ以上のコード領域が作動可能に内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）に連結することができ、単一のＲＮＡ転写物から２つのオープンリーディングフレームの翻訳を可能にする。
【０１９７】
真核生物宿主細胞発現システムにおいてグリコシル化が望まれる場合などのいくつかのケースでは、グリコシル化または収量を改善するために、様々なプレまたはプロ配列を操作することができる。例えば、特定のシグナルペプチドのペプチダーゼ切断部位を変更するか、またはプロ配列を追加することができるが、これはグリコシル化にも影響を及ぼし得る。最終タンパク質生成物は、−１位（成熟タンパク質の最初のアミノ酸に対して）に、完全には除去されていないであろう発現に付随するする１つ以上の付加的なアミノ酸を有し得る。例えば、最終タンパク質生成物は、アミノ末端に結合した、ペプチダーゼ切断部位に見出される１つまたは２つのアミノ酸残基を有し得る。あるいは、いくつかの酵素切断部位の使用は、成熟ポリペプチド内のこのような領域で酵素が切れる場合、所望のポリペプチドのわずかに切取られた形態をもたらし得る。
【０１９８】
本発明の発現及びクローニングベクターは、典型的には、宿主生物によって認識され、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質をコードする分子に作動可能に連結されたプロモーターを含む。プロモーターは、配列は、構築遺伝子の転写を制御する構築遺伝子の開始コドン（一般的には、約１００〜１０００ｂｐ内）の上流（すなわち、５’）に位置する非転写配列である。プロモーターは、従来、誘導性プロモーターと構成的プロモーターの２つのクラスのいずれかに分類されている。誘導性プロモーターは、栄養物の有無または温度変化などの培養条件の何らかの変化に応答してそれらの制御下でＤＮＡからの増加したレベルの転写を開始する。構成的プロモーターは、一方、作動可能に連結された遺伝子を一様に転写する、すなわち、遺伝子発現に対する制御は、ほとんどまたは全くない。様々な潜在的な宿主細胞によって認識される多数のプロモーターは、周知である。適切なプロモーターは、制限酵素消化及びベクターへの所望のプロモーター配列の挿入によってソースＤＮＡからプロモーターを除去することにより、本発明のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を含むＤＮＡをコードする重鎖または軽鎖に、作動可能にリンクされる。
【０１９９】
酵母宿主と共に用いる好適なプロモーターも、当該技術分野で周知である。酵母エンハンサーは、酵母プロモーターとともに有利に使用される。哺乳動物の宿主細胞とともに使用するのに適したプロモーターは周知であり、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及び最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのゲノムウイルスから得られるものを含むが、これらに限定されない。他の適切な哺乳動物プロモーターは、異種哺乳動物プロモーター、例えば、ヒートショックプロモーター及びアクチンプロモーターを含む。
【０２００】
対象となり得るさらなるプロモーターは、以下を含むが、これらに限定されない：ＳＶ４０  初期プロモーター（Ｂｅｎｏｉｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ  ２９０：３０４−３１０）；ＣＭＶプロモーター（Ｔｈｏｒｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６５９−６６３）；ラウス肉腫ウイルスの３’長末端反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ  ２２：７８７−７９７）；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１,Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４４−１４４５）；  メタロチオネイン遺伝子由来のプロモーター及び制御配列Ｐｒｉｎｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ  ２９６：３９−４２）；及び、ベータラクタマーゼプロモーターなどの原核生物プロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７５：３７２７−３７３１）；または、ｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１−２５）。組織特異性を示し、トランスジェニック動物において利用されている以下の動物転写制御領域も対象である：膵臓の腺房細胞において活性であるエラスターゼＩ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ  ３８：６３９−６４６；Ｏｒｎｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，１９８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ７：４２５−５１５）；膵臓β細胞において活性であるインスリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１５：１１５−１２２）；リンパ系細胞において活性である免疫グロブリン遺伝子制御領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ  ３８：６４７−６５８；Ａｄａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１８：５３３−５３８；Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７：１４３６−１４４４）；精巣、乳房、リンパ系細胞及び肥満細胞において活性であるマウス乳癌ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６,  Ｃｅｌｌ  ４５：４８５−４９５）
；肝臓で活性であるアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌ．１：２６８−２７６）；肝臓で活性であるアルファ−ェトプロテイン遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１６３９−１６４８；Ｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：５３−５８）；肝臓において活性であるα１−アンチトリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ
Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−１７１）；骨髄細胞で活性であるβ−グロビン遺伝子制御領域（Ｍｏｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１５：３３８−３４０；Ｋｏｌｌｉａｓ  et  al．，１９８６，Ｃｅｌｌ  ４６：８９−９４）；脳内のオリゴデンドロサイト細胞において活性であるミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃｅｌｌ  ４８：７０３−７１２）；骨格筋で活性であるミオシン軽鎖−２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：２８３−２８６）；及び、視床下部で活性である性腺刺激放出ホルモン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３４：１３７２−１３７８）。
【０２０１】
エンハンサーは、より高等の真核生物によって、本発明のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を含む軽鎖又は重鎖をコードするＤＮＡの転写を増加させるように、ベクターに挿入することができる。エンハンサーは、転写を増加させるためにプロモーターに作用する、通常約１０〜３００ｂｐの長さの、ＤＮＡのシス作用性エレメントである。エンハンサーは、配向及び位置に比較的非依存性であり、転写ユニットの５’と３’の両方の位置で発見されている。哺乳動物遺伝子から入手可能ないくつかのエンハンサーが知られている（例えば、グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン及びインスリン）。しかしながら、典型的には、ウイルス由来のエンハンサーが使用される。当該技術分野で公知であるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーは、真核生物プロモーターの活性化のための例示的な増強エレメントである。エンハンサーは、ベクター中でコード配列の５’または３’のいずれかに配置することができるが、それは、典型的にはプロモーターから５’位に位置している。適切な天然または異種のシグナル配列（リーダー配列またはシグナルペプチド）をコードする配列が、列抗体の細胞外分泌を促進するために、発現ベクターに組み込むことができる。シグナルペプチドまたはリーダーの選択は、抗体が生成されるべき宿主細胞の種類に依存し、異種シグナル配列は、天然のシグナル配列を置き換えることができる。哺乳動物の宿主細胞において機能的であるシグナルペプチドの例は、以下のもを含む：ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．４，９６５，１９５に記載のインターロイキン７（ＩＬ−７）のシグナル配列；Ｃｏｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：７６８に記載のインターロイキン−２受容体のシグナル配列；ＥＰ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．０３６７  ５６６に記載のインターロイキン−４受容体シグナルペプチド；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．４，９６８，６０７に記載のタイプＩインターロイキン−１受容体シグナルペプチド；ＥＰ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．０  ４６０  ８４６に記載のタイプＩＩインターロイキン−１受容体シグナルペプチド。
【０２０２】
ベクターは、ベクターが宿主細胞ゲノムに組込まれたとき、発現を容易にする１つ以上のエレメントを含んでよい。例としては、ＥＡＳＥエレメント（Ａｌｄｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ．１９：１４３３−３８）及びマトリックス結合領域（ＭＡＲ）を含む。ＭＡＲは、クロマチンの構造組織を仲介して、統合バクターを「ポジション」効果から遮断することができる。従って、ＭＡＲは、ベクターが安定なトランスフェクタントを生成するために使用される場合に特に有用である。多数の天然及び合成のＭＡＲ含有核酸が、例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．６，２３９，３２８；７，３２６，５６７；６，１７７，６１２；６，３８８，０６６；６，２４５，９７４；７，２５９，０１０；６，０３７，５２５；７，４２２，８７４；７，１２９，０６２などで、当該技術分野で公知である。
【０２０３】
本発明の発現ベクターは、市販のベクターなどの出発ベクターから構築することができる。このようなベクターは、所望のフランキング配列のすべてを含んでも含まなくてもよい。本明細書に記載のフランキング配列の１つ以上がベクター内に既に存在していない場合、それらは個々に取得してベクターに連結してもよい。それぞれのフランキング配列を取得するのに用いられる方法当業者には周知である。
【０２０４】
ベクターが構築され、ＯＳＭＲ抗原結合配列を含む軽鎖、重鎖、または軽鎖及び重鎖をコードする核酸分子が、ベクターの適切な部位に挿入された後、完成したベクターは、増幅及び／またはポリペプチド発現に適した宿主細胞に挿入することができる。ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の発現ベクターの選択された宿主細胞への形質転換は、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、または他の既知の技術を含む周知の方法によって実施することができる。選択される方法は、部分的には、使用される宿主細胞のタイプの関数である。これらの方法及び他の適切な方法は当業者に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，ｓｕｐｒａに記載されている。
【０２０５】
宿主細胞は、適切な条件下で培養される場合、（宿主細胞が培地中にそれを分泌する場合）培養培地から、（それが分泌されない場合）それを産生する宿主細胞から直接、続いて、回収することができるＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を合成する。適切な宿主細胞の選択は、所望の発現レベル、（グリコシル化またはリン酸化などの）活性のために望ましいか、または必要とされる、ポリペプチドの修飾、及び生物学的に活性な分子への折り込みの容易さなどの様々な要因に依存するであろう。宿主細胞は、真核生物または原核生物であってよい。
【０２０６】
発現するための宿主として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該技術分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な不死化細胞株を含むが、これに限定されない。そして、当該技術分野で公知である発現システムで使用される任意の細胞株は、本発明の組換えポリペプチドを作製するのに使用することができる。一般に、宿主細胞は、所望の抗ＯＳＭＲ抗体ポリペプチドをコードするＤＮＡを含む組換え発現ベクターで形質転換される。使用することができる宿主細胞の中には、原核生物、酵母または高等真核細胞がある。原核生物は、例えば、大腸菌または桿菌などのグラム陰性またはグラム陽性生物を含む。高等真核細胞は、昆虫細胞及び哺乳動物起源の樹立細胞株を含む。適切な哺乳動物宿主細胞株の例は、サル腎臓細胞のＣＯＳ−７株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）（Ｇｌｕｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｃｅｌｌ  ２３：１７５）,Ｌ細胞，２９３細胞，Ｃ１２７細胞，３Ｔ３細胞（Ａ
ＴＣＣ  ＣＣＬ  １６３），チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞，または、無血清培地中で成長するベジＣＨＯ及び関連細胞株などのそれらの誘導体（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２８：３１），ＨｅＬａ細胞，ＢＨＫ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０）細胞株，及び、ＭｃＭａｈａｎ  ｅｔ  ａｌ.,１９９１,ＥＭＢＯ  Ｊ.１０：２８２１によって記載されているようなアフリカミドリザル腎細胞株ＣＶＩ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）に由来するＣＶＩ／ＥＢＮＡ細胞株，２９３などのヒト胎児腎臓細胞，２９３  ＥＢＮＡまたはＭＳＲ  ２９３，ヒト上皮Ａ４３１細胞，ヒトＣｏｌｏ２０５細胞，他の形質転換された霊長類細胞株，正常二倍体細胞，初代組織のインビトロ培養から得られる細胞株，一次外植片，ＨＬ−６０，Ｕ９３７，ＨａＫまたはジャーカット細胞を含む。様々なシグナル伝達またはレポーターアッセイにおいてポリペプチドを使用することが望ましい場合、選択的に、例えば、ＨｅｐＧ２細胞／３Ｂ、ＫＢ、ＮＩＨ  ３Ｔ３またはＳ４９などの哺乳動物細胞株が、ポリペプチドの発現のために使用され得る。あるいは、酵母などの下等真核生物において、または細菌などの原核生物において、ポリペプチドを産生することが可能である。適切な酵母は、サッカロミセス  セレビシエ、分裂酵母、クルイベロミセス株、カンジダ、または異種ポリペプチドを発現することが可能な任意の酵母株を含む。適切な細菌株は、大腸菌、枯草菌、ネズミチフス菌、または異種ポリペプチドを発現することができる任意の細菌株を含む。ポリペプチドが酵母または細菌で作製されている場合、機能性ポリペプチドを得るために、適切な部位のリン酸化またはグリコシル化によって、例えば、その中に産生されたポリペプチドを修飾することが望ましいであろう。このような共有結合は、既知の化学的又は酵素的方法を用いて達成することができる。ポリペプチドは、１つ以上の昆虫発現ベクターにおいて、及び昆虫発現システムを用いて、適切な制御配列に、本発明の核酸又は単離核酸を作動可能に連結することによっても、産生することができる。バキュロウイルス／昆虫細胞発現システムのための材料及び方法は、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．（ｔｈｅ  ＭａｘＢａｃ（登録商標）ｋｉｔ)からキット形
態で市販されており、このような方法は、Ｓｕｍｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．１５５５（１９８７），及びＬｕｃｋｏｗ  ａｎｄ  Ｓｕｍｍｅｒｓ，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：４７（１９８８）に記載されているように、当該技術分野で周知である。無細胞翻訳系も、本明細書に開示される核酸構築物由来のＲＮＡを用いてポリペプチドを産生するために使用することができる。細菌、真菌、酵母及び哺乳動物細胞宿主と使用するための適切なクローニング及び発現ベクターは、Ｐｏｕｗｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５）によって記載されている。好ましくは、作動可能に少なくとも１つの発現制御配列に結合された、本発明の核酸または単離核酸を含む宿主細胞は、「組換え宿主細胞」である。
【０２０７】
特定の実施形態では、細胞株は、どの細胞株が高発現レベルを有し、ＯＳＭＲ結合特性を有する抗原結合タンパク質を構成的に産生するかを決定することによって、選択することができる。他の実施形態では、自分自身の抗体を作らないが、異種の抗体を作って分泌する能力を持つＢ細胞系列由来の細胞株が選択され得る。
細胞枯渇ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質
【０２０８】
好ましい実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭＲを結合し、かつＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１結合を阻害して、それによって、ＯＳＭＲ−を発現する細胞における、ＯＳＭ−及び／またはＩＬ−３１−媒介のシグナル伝達を減少させる。しかしながら、特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質はＯＳＭＲを結合し、枯渇のためにＯＳＭＲ−を発現する細胞を標的とする。様々な態様では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、ＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１結合を阻害し、枯渇のためにＯＳＭＲ細胞を標的とする。
【０２０９】
細胞枯渇ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、例えば、自己免疫性疾患、炎症性疾患、細胞外マトリックス沈着またはリモデリングに関連した疾患または障害、またはＯＳＭＲ−を発現する腫瘍などの、ＯＳＭＲの過剰発現に関連した疾患または障害を治療するのに、特に有用である。例えば、抗体などの、抗原結合タンパク質を有する細胞を標的にする方法は、当該技術分野において周知である。例示的な実施形態は、以下に説明する。
抗体薬剤コンジュゲート
【０２１０】
本発明の実施形態は、抗体薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む。一般に、ＡＤＣは、細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、毒素、または放射性物質などの化学療法剤に、コンジュゲーしたト抗体を含む。リンカー分子は、抗体に薬剤をコンジュゲートするため使用することができる。ＡＤＣ技術において有用な多様なリンカー及び薬剤が当該技術分野で公知であり、本発明の実施形態で使用することができる。（ＵＳ２００９００２８８５６；ＵＳ２００９／０２７４７１３；ＵＳ２００７／００３１４０２；ＷＯ２００５／０８４３９０；ＷＯ２００９／０９９７２８；ＵＳ５２０８０２０；ＵＳ５４１６０６４；ＵＳ５４７５０９２；５５８５４９９；６４３６９３１；６３７２７３８；及び６３４０７０１参照、すべて参照により本明細書に組込まれる）。
リンカー
【０２１１】
特定の実施形態では、ＡＤＣは、１つ以上のリンカーコンポーネントで構成されたリンカーを含む。例示的なリンカーコンポーネントは、６−マレイミドカプロイル、マレイミドプロパノイル、バリン−シトルリン、アラニン−フェニルアラニン、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル、及び、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、Ｎ−スクシンイミジル４−（ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（「ＳＭＣＣ」、本明細書では、「ＭＣＣ」とも呼ばれる）、及びＮ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（「ＳＩＡＢ」）を含むが、これらに限定されない、リンカー試薬とのコンジュゲートに起因するもの、を含む。
【０２１２】
リンカーは、「切断可能な」リンカーまたは「非切断可能な」リンカーであり得る（Ｄｕｃｒｙ  ａｎｄ  Ｓｔｕｍｐ,Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．２０１０，２１
，５−１３；参照により本明細書にその全体が組込まれる）。切断可能なリンカーは、例えば標的細胞に内在化される場合など、特定の環境要因を受けた場合に薬物を放出するように設計されている。切断可能なリンカーは、酸不安定性リンカー、プロテアーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカーを含む。非切断可能なリンカーは、標的細胞による内在化及び標的細胞内での分解の際の抗体及び薬剤の少なくとも１つのアミノ酸と共有結合したままである傾向がある。例示的な非切断可能なリンカーは、ＭＣＣである。
薬剤
【０２１３】
特定の実施形態では、抗体は、化学療法剤にコンジュゲートされる。化学療法剤の例は、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル類；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリシン類；アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）及びトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン類(特にブラタシン及びブラタシノン)；カンプトセシン(合成類似体トポテカンを含む)；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ-１０６５(そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体を含む)；クリプトフィシン類(特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８)；ドラスタチン；ズオカルマイシン(合成類似体、ＫＷ-２１８９及びＣＢ１-ＴＭ１を含む)；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉ
ｎ）；スポンジスタチン；クロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロスレアス（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；（例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシンγ１及びカリケアマイシンθＩ、例えばＡｇｎｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ.Ｅｄ.Ｅｎｇｌ．３３：１８３−１８６（１９９４）参照；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；及びネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素蛋白エネジイン抗生物質発色団などの)エネジイン抗生物質
などの抗生物質、アクラシノマイシン類（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン(モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、２−ピロリノ-ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン（ｍ
ａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル(５−ＦＵ)などの代謝拮抗剤；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）などの葉酸類似体；フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリシン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリシン、ドキシフルリシン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリシン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、５−ＦＵなどのピリミジン類似体；カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）などのアンドロゲン類；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）などの葉酸リプレニッシャー（ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）；メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）及びアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｅ）などのメイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）類；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；トリアジコン（ｔ��ｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２'，２''−トリクロロトリエチルアミン；
トリコテセン類(特にＴ−２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリシン（
ｒｏｒｉｄｉｎｅ）Ａ及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）)；ウレタン；ビンデシ
ン；ダカーバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（商標），Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ(登録商標)，Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）などのタキソイド類；クロランブシル；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチン及びカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトミシンＣ；マイトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；及び上記の任意のものの薬学的に許容可能な塩類、酸又は誘導体を含む。この定義には、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、４-ヒドロキシタモキシ
フェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）などを含む抗エストロゲン；及び、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン；ｓｉＲＮＡ及び上記の任意のものの薬学的に許容可能な塩類、酸又は誘導体、などの、腫瘍に対するホルモン作用を調節または抑制するように作用する抗ホルモン剤、も含まれる。本発明で使用することができる他の化学療法剤は、ＵＳ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．２００８０１７１０４０またはＵＳ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．２００８０３０５０４４に開示されており、それぞれが、その全体が参照により本明細書に組込まれる。
【０２１４】
抗体は、２つ以上の異なる化学療法剤にコンジュゲートされ得るか、または、医薬組成物は、抗体コンポーネントが異なる化学療法剤にコンジュゲートされている場合を除いて同一である抗体の混合物を含み得ることを特徴とすること、が企図されている。このような実施形態は、標的細胞で複数の生物学的経路を標的とするのに有用であり得る。
【０２１５】
好ましい実施形態では、ＡＤＣは、チューブリン重合を阻害するように作用する分裂阻害剤である、1つ以上のメイタンシノイド分子にコンジュゲートされた抗体を含む。様々
な修飾を含むメイタンシノイドは、ＵＳ  Ｐａｔ．Ｎｏｓ．３８９６１１１；４１５１０４２；４１３７２３０；４２４８８７０；４２５６７４６；４２６０６０８；４２６５８１４；４２９４７５７；４３０７０１６；４３０８２６８；４３０９４２８；４３１３９４６；４３１５９２９；４３１７８２１；４３２２３４８；４３３１５９８；４３６１６５０；４３６４８６６；４４２４２１９；４４５０２５４；４３６２６６３；４３７１５３３；及びＷＯ  ２００９／０９９７２８に記載されている。メイタンシノイド薬物部分は、天然源から単離されるか、組換え技術をを用いて産生されるか、または合成的に調製され得る。例示的なメイタンシノイドは、Ｃ−１９−デクロロ（ＵＳ  Ｐａｔ  Ｎｏ．４２５６７４６）、Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０デメチル）＋/−Ｃ−１９−デ
クロロ（ＵＳ  Ｐａｔ．Ｎｏｓ．４３０７０１６及び４３６１６５０）、Ｃ−２０−デメトキシ（またはＣ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）＋／−デクロロ（ＵＳ  Ｐａｔ．Ｎｏ．４２９４７５７）、Ｃ−９−ＳＨ（ＵＳ  Ｐａｔ．Ｎｏ．４，４２４，２１９）、Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，３３１，５９８）、Ｃ−１４ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，４５０，２５４）、Ｃ−１５−ヒドロキシ/アシルオキシ（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，３６４，８６６）、Ｃ−１５−メトキ
シ（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．４，３１３，９４６及び４，３１５，９２９）、Ｃ−１８−Ｎデメチル（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．４，３６２，６６３及び４，３２２，３４８）、及び４，５−デオキシ（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，３７１，５３３）、を含む。
【０２１６】
メイタンシノイド化合物上の様々な位置が、所望の結合のタイプに応じて、結合位置として使用することができる。例えば、エステル結合を形成するためには、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ｈｙｄｒｏｚｙｍｅｔｈｙｌで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位のすべてが適切である（ＵＳ  Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５２０８０２０，ＲＥ３９１５１，及び６９１３７４８；ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌ．Ｐｕｂ．Ｎｏｓ．２００６０１６７２４５及び２００７００３７９７２，及びＷＯ  ２００９０９９７２８）。
【０２１７】
好ましいメイタンシノイドは、ＤＭ１，ＤＭ３，及びＤＭ４として当該技術分野で公知のものである（ＵＳ  Ｐａｔ．Ａｐｐｌ．Ｐｕｂ．Ｎｏｓ．２００９０３０９２４及び２００５０２７６８１２、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２１８】
メイタンシノイドを含むＡＤＣ、このようなＡＤＣを作製する方法、及びその治療的使用は、ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏｓ.５２０８０２０及び５４１６０６４，ＵＳ  Ｐａｔ
．Ａｐｐｌ．Ｐｕｂ．Ｎｏ．２００５０２７６８１２，及び  ＷＯ  ２００９０９９７２８に開示されている（すべて参照により本明細書に組込まれる）。メイタンシノイドのＡＤＣを製造するのに有用なリンカーは、当該技術分野で公知である（ＵＳ  Ｐａｔ．Ｎｏ．５２０８０２０及びＵＳ  Ｐａｔ．Ａｐｐｌ．Ｐｕｂ．Ｎｏｓ．２００５０１６９９３及び２００９０２７４７１３；すべて参照により本明細書に組込まれる）。ＳＭＣＣリンカーを含むメイタンシノイドのＡＤＣは、ＵＳ  Ｐａｔ．Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．２００５／０２７６８１２に開示されているように調製することができる。
エフェクター機能が強化された抗体
【０２１９】
抗体のＦｃ部分の機能の１つは、抗体がその標的に結合する場合に免疫システムと通信することである。これは、「エフェクター機能」と考えられる。通信は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす。ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰは、免疫系の細胞の表面上のＦｃ受容体へのＦｃの結合を介して媒介される。ＣＤＣは、例えば、Ｃ１ｑなどの補体系タンパク質とのＦｃの結合を介して媒介される。
【０２２０】
ＩｇＧのサブクラスは、エフェクター機能を媒介するそれらの能力において、変動する。例えば、ＩｇＧ１は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣの媒介において、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりずっと優れている。従って、ＯＳＭＲを発現する細胞が破壊の標的とされる実施形態では、抗ＯＳＭＲＩｇＧ１抗体が好ましいであろう。
【０２２１】
抗体のエフェクター機能は、Ｆｃに１以上の突然変異を導入することによって、増加させるか、または、減少させることができる。本発明の実施形態は、エフェクター機能を増加させるように設計されたＦｃを有する、例えば、抗体などの抗原結合タンパク質を含む（Ｕ．Ｓ．７，３１７，０９１及びＳｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２０：６８５−６９１，２００９；両方とも、その全体が参照により本明細書に組込まれる）。例示的なエフェクター機能を増加させるように設計されたＩｇＧ１  Ｆｃ分子は（Ｋａｂａｔ番号付けスキームに基いて）以下の置換を含む：
【０２２２】
Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ
【０２２３】
Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｓ／Ｉ３３２Ｅ
【０２２４】
Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ
【０２２５】
Ｓ２９８Ａ／Ｄ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ
【０２２６】
Ｐ２４７Ｉ／Ａ３３９Ｄ
【０２２７】
Ｐ２４７Ｉ／Ａ３３９Ｑ
【０２２８】
Ｄ２８０Ｈ／Ｋ２９０Ｓ
【０２２９】
Ｄ２８０Ｈ／Ｋ２９０Ｓ／Ｓ２９８Ｄ
【０２３０】
Ｄ２８０Ｈ／Ｋ２９０Ｓ／Ｓ２９８Ｖ
【０２３１】
Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ
【０２３２】
Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ
【０２３３】
Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ
【０２３４】
Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ
【０２３５】
Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ａ
【０２３６】
Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ
【０２３７】
Ｋ２９０Ｅ／Ｓ２９８Ｇ／Ｔ２９９Ａ
【０２３８】
Ｋ２９０Ｎ／Ｓ２９８Ｇ／Ｔ２９９Ａ
【０２３９】
Ｋ２９０Ｅ／Ｓ２９８Ｇ／Ｔ２９９Ａ／Ｋ３２６Ｅ
【０２４０】
Ｋ２９０Ｎ／Ｓ２９８Ｇ／Ｔ２９９Ａ／Ｋ３２６Ｅ
【０２４１】
本発明のさらなる実施形態は、例えば、抗体が、エフェクター機能を低下させるように設計されたＦｃを有する抗原結合タンパク質を含む。低下したエフェクター機能を有する例示的なＦｃ分子は、（Ｋａｂａｔ番号付けスキームに基いて）以下の置換を含む：
【０２４２】
Ｎ２９７Ａ（ＩｇＧ１）
【０２４３】
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＩｇＧ１）
【０２４４】
Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ（ＩｇＧ２）
【０２４５】
Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｅ３１８Ａ（ＩｇＧ４）
【０２４６】
Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ（ＩｇＧ２）
【０２４７】
Ｃ２２０Ｓ／Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｐ２３８Ｓ（ＩｇＧ１）
【０２４８】
Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ（ＩｇＧ１）
【０２４９】
Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＩｇＧ１）
【０２５０】
Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ（ＩｇＧ１）
【０２５１】
ＩｇＧ  Ｆｃ含有タンパク質のエフェクター機能を増加させる他の方法は、Ｆｃのフコシル化を減少させることによる。Ｆｃに付着した２分岐複合型オリゴ糖からのコアフコースの除去は、抗原結合またはＣＤＣエフェクター機能を変更することなく、ＡＤＣＣエフェクター機能を大きく増加した。例えば、抗体などの、Ｆｃ含有分子のフコシル化を減少または撤廃するいくつかの方法が知られている。これらは、ＦＵＴ８ノックアウト細胞株、変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３、ラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０、ＦＵＴ８遺伝子に対して特異的に低分子干渉ＲＮＡを含む細胞株、及び、β−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα−マンノシダーゼＩＩを共発現する細胞株、を含む特定の哺乳動物の細胞株における組換え発現を含む。あるいは、Ｆｃ含有分子は、例えば、大腸菌のような、植物細胞、酵母、または原核細胞などの非哺乳動物細胞において発現され得る。本発明の特定の実施形態では、組成物は、例えば、フコシル化が減少したまたは完全にフコシル化を欠くＡｂ１，Ａｂ２，またはＡｂ３などの抗体を含む。
医薬組成物
【０２５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、医薬的に有効な希釈剤、キャリア、可溶化剤、乳化剤、保存剤、及び／またはアジュバントとともに、本発明の抗原結合タンパク質の１つまたは複数を治療有効量含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、抗原結合タンパク質は抗体である。本発明の医薬組成物は、液体、凍結したもの、凍結乾燥組成物を含むが、これらに限定されない。
【０２５３】
好ましくは、製剤材料は、用いられる用量及び濃度で受容者に対して非毒性である。特定の実施形態では、例えば、ＯＳＭＲ-結合抗体などの、治療有効量のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を含む医薬組成物が提供される。
【０２５４】
特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、ｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、組成物の溶解または放出、吸着または浸透の速度を、修飾、維持または保存するための製剤材料を、含有してもよい。このような実施形態では、適切な製剤材料は、（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、プロリン、またはリシンなどの）アミノ酸；抗菌剤；（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは水素ナトリウム、亜硫酸などの）抗酸化剤；（ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩または他の有機酸などの）緩衝剤；（マンニトールまたはグリシンなどの）増量剤；（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの）キレート剤；（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどの）錯化剤；充填剤；単糖類；二糖類；及び、（グルコース、マンノースまたはデキストリンなどの）他の炭水化物；（血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどの）タンパク質；着色剤、香味剤及び希釈剤；乳化剤；（ポリビニルピロリドンなどの）親水性ポリマー；低分子量ポリペプチド；（ナトリウムなどの）塩形成対イオン；（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素などの）保存剤；（グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどの）溶媒；（マンニトールまたはソルビトールなどの）糖アルコール；懸濁化剤;  
（プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなどの）界面活性剤または湿潤剤；（スクロースまたはソルビトールなどの）安定性増強剤；（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくはナトリウム又は塩化カリウム、マンニトールソルビトールなどの）張度増強剤；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／または薬学的アジュバント、を含むが、これらに限定されない。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８”Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ，ｅｄ．），１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ参照。
【０２５５】
特定の実施形態では、最適な医薬組成物は例えば、企図する投与経路、送達形式及び所望の用量に依存して、当業者によって決定される。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，ｓｕｐｒａ参照。特定の実施形態では、このような組成物は、本発明の抗原結合タンパク質の物理的状態、安定性、インビボ放出速度及びインビボクリアランス速度に影響を与え得る。特定の実施形態では、医薬組成物における主要なビヒクルまたは担体は、性質が水性または非水性のいずれであってもよい。例えば、適切なビヒクルまたは担体は、おそらく非経口投与のための組成物において一般的な他の物質で補充された、注射用水、生理食塩水または人工脳脊髄液であり得る。血清アルブミンと混合した中性緩衝食塩水または生理食塩水は、さらなる例示的なビヒクルである。具体的な実施形態では、医薬組成物は、ｐＨ約７．０〜８．５のトリス緩衝剤、またはｐＨ約４．０〜５．５の酢酸緩衝液を含み、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。本発明の特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質組成物は、貯蔵のために、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形で、所望の純度を有する選択された組成物を任意の処方薬（ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ，ｓｕｐｒａ）と混合することによって調製することができる。さらに、特定の実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質生成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を使用して凍結乾燥物として製剤化することができる。
【０２５６】
本発明の医薬組成物は、非経口投与のために選択することができる。あるいは、組成物は、経口的になど、吸入または消化管を介する投与のために選択され得る。このような薬学的に許容可能な組成物の調製は、当業者の範囲内にある。製剤成分は、好ましくは、投与部位に許容可能な濃度内にある。特定の実施形態では、緩衝剤は、生理学的ｐＨで、または典型的には約５〜約８のｐＨ範囲内のわずかに低いｐＨで、組成物を維持するために使用される。
【０２５７】
非経口投与が企図される場合、本発明で使用する治療用組成物は、薬学的に許容可能なビヒクル中に所望のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を含有する、発熱物質を含まない、非経口的に許容可能な水溶液の形態で提供することができる。非経口注射のために特に適切なビヒクルは、滅菌蒸留水であり、その中で、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、滅菌、等張液として製剤化され、適切に保存される。特定の実施形態では、その調整は、蓄積注射を介して送達することができる生成物の制御放出または徐放性放出を提供し得る、注射可能なミクロスフェア、バイオ分解性粒子、（ポリ乳酸やポリグリコール酸などの）高分子化合物、ビーズまたはリポソームなどの物質を有する所望の分子の製剤を含むことができる。特定の実施形態では、循環中の持続期間を助長する効果を有するヒアルロン酸も、使用することができる。特定の実施形態では、埋め込み型薬物送達デバイスを、所望の抗原結合タンパク質を導入するために使用することができる。
【０２５８】
本発明の医薬組成物は、吸入用に製剤化することができる。これらの実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、乾燥した吸入可能な粉末として有利に製剤化される。具体的な実施形態では、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質吸入溶液は、エアロゾル送達のための噴霧剤と共に製剤化することができる。特定の実施形態では、溶液は、噴霧され得る。従って、肺投与及び製剤化の方法は、さらに、国際特許出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５に記載されており、これは参照により組込まれていて、化学的に修飾されたタンパク質の肺送達を記載している。
【０２５９】
製剤は経口的に投与され得ることも企図されている。この方法で投与されるＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、錠剤及びカプセルなどの固体剤形の配合に通常用いられる担体とともに、または、なしで製剤化され得る。特定の実施形態では、カプセルは、バイオアベイラビリティーが最大化され、前全身分解が最小化されるときに、胃腸管中の点で製剤の活性部分を放出するように設計され得る。ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質の吸収を促進するために、さらなる薬剤が含まれ得る。希釈剤、香味料、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤も用いることができる。
【０２６０】
持続または制御送達製剤にＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を含む製剤を含むさらなる薬学的組成物は、当業者には明らかであろう。リポソーム担体、生体侵食性微粒子または多孔性ビーズ、及び蓄積注射などの、様々な他の持続または制御送達手段を製剤化する技術も、当業者に周知である。例えば、参照により組込まれており、医薬組成物の送達のための多孔性ポリマー微粒子の制御放出を記載している、国際特許出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９を参照。持続放出製剤は、例えばフィルム、またはマイクロカプセルなどの、造形品の形態の半透過性ポリマーマトリックスを含むことができる。持続放出マトリックスは、ポリエステル，ヒドロゲル，ポリリラクチド（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．３，７７３，９１９及びＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＥＰ  ０５８４８１に開示されており、それぞれ参照により組込まれる），Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２：５４７−５５６），ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７及びＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５），エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，１９８１，ｓｕｐｒａ）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＵＲＯＰＥＡＮ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＥＰ  １３３，９８８）、を含むことができる。持続放出組成物は、当該技術分野で公知のいくつかの方法の任意のものによって調製され得るリポソームも含み得る。例えば、参照により組込まれている、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：３６８８−３６９２；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏｓ．ＥＰ
０３６，６７６；ＥＰ  ０８８，０４６及びＥＰ  １４３，９４９、参照。
【０２６１】
インビボ投与に用いられる医薬組成物は、典型的には、滅菌調製物として提供される。滅菌は、滅菌濾過膜を通した濾過によって達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合、この方法を用いた滅菌は、凍結乾燥及びリモデリングの前または後のいずれかで行うことができる。非経口投与のための組成物は、凍結乾燥形態でまたは溶液中に保存することができる。非経口組成物は一般に、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルなどの、滅菌アクセスポートを有する容器内に配置されている。
【０２６２】
本発明の態様は、本明細書に参照によりその全体が組込まれる、国際特許出願ＷＯ  ０６１３８１８１Ａ２（ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２２５９９）に記載されているように、自己緩衝ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質製剤を含む。
【０２６３】
上述のように、特定の実施形態は、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質のタンパク質組成物、特に、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質に加えて、本明細書のこのセクション及び他の場所に例示的に記載されているような賦形剤を１つ以上含む、医薬ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質を提供する。賦形剤は、この点で本発明において、製剤の物理的、化学的、または生物学的特性の調整など、粘度の調整などの多様な目的のために、及びまたは、効率を改善し、及びまたは、例えば、製造、輸送、貯蔵、使用前の準備、管理中、及びその後に発生する応力による劣化及び損傷に対して、このような製剤及びプロセスを安定化するための本発明のプロセスのために、使用することができる。
【０２６４】
タンパク質の安定化及び製剤材料及びこの点において有用な方法に関して、Ａｒａｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｏｌｖｅｎｔ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，”Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．８（３）：２８５−９１（１９９１）；Ｋｅｎｄｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｙｓｉｃａｌ  ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉＮ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ，”ｉｎ：ＲＡＴＩＯＮＡＬ  ＤＥＳＩＧＮ  ｏｆ  ＳＴＡＢＬＥ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＦＯＲＭＵＬＡＴＩＯＮＳ：ＴＨＥＯＲＹ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ,Ｃａｒｐｅ
ｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｎｎｉｎｇ，ｅｄｓ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１３：  ６１−８４（２００２），及びＲａｎｄｏｌｐｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：１５９−７５（２００２）などの多様な開示が利用できる。これらのそれぞれは、特に、獣医学及び／又はヒトの医学的使用のためのタンパク質医薬品及びプロセスに関して、本発明に従った自己緩衝タンパク質製剤のための同じ賦形剤及びプロセスに関連する部分において、その全体が参照により本明細書に組込まれる。
【０２６５】
例えば、製剤のイオン強度及び／または等張性を調整するために、及び／または、本発明に従う組成物のタンパク質または他の成分の溶解性及び／または物理的安定性を改善するために、本発明の特定の実施形態に従って、塩を使用することができる。
【０２６６】
周知のように、イオンは、タンパク質の表面上の帯電した残基に結合することによって、及び、タンパク質中の荷電及び極性基を遮蔽して静電相互作用、引力相互作用及び反発相互作用の強度を減少させることによって、タンパク質の天然状態を安定化することができる。イオンは、特に、タンパク質の変性ペプチド結合（−−ＣＯＮＨ）に結合することによって、タンパク質の変性状態を安定化することもできる。さらに、タンパク質中の荷電及び極性基とのイオン相互作用は、分子間の静電相互作用を減少させ、それによって、タンパク質の凝集及び不溶性を防止または低減することもできる。
【０２６７】
イオン種は、タンパク質への影響において大きく異なる。本発明に従う医薬組成物を製剤化するのに使用し得る、イオンの多くのカテゴリーランキングとそれらのタンパク質への効果が開発されてきた。一例は、溶液中のタンパク質の立体配座の安定性に及ぼす影響により、イオン性及び極性非イオン性溶質をランク付けするホフマイスターシリーズである。安定化溶質は、「コスモトロピック」と呼ばれる。不安定化溶質は、「カオトロピック」と呼ばれる。コスモトロープは、一般に、溶液からタンパク質を沈殿させるために（「塩析」）、高濃度（例えば、＞１モル硫酸アンモニウム）で使用される。カオトロープは、一般に義歯に使用され、及び／または、タンパク質を可溶化するために（「塩溶」）使用される。「塩析」と「塩溶」へのイオンの相対的有効性が、ホフマイスターシリーズ内の位置を定義する。
【０２６８】
遊離アミノ酸は、本発明の様々な実施形態によるＯＳＭＲ抗原結合タンパク質製剤において、増量剤、安定化剤、及び酸化防止剤、並びに他の標準的な用途として使用することができる。リシン、プロリン、セリン及びアラニンが、製剤中のタンパク質を安定化するために使用することができる。グリシンは、正しいケーキの構造と特性を確保するための凍結乾燥に有用である。アルギニンは、液体と凍結乾燥された製剤の両方において、タンパク質凝集を阻害するのに有用であり得る。メチオニンは、酸化防止剤として有用である。
【０２６９】
ポリオールは、例えば、マンニトール、スクロース、及びソルビトール、並びに、例えば、グリセロール及びプロピレングリコールなどの多価アルコール、並びに、本明細書中で説明する目的では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び関連物質、などの糖類を含む。ポリオールは、コスモトロピックである。それらは物理的及び化学的分解プロセスからタンパク質を保護するための液体及び凍結乾燥製剤の両方において、有用な安定化剤である。ポリオールは、製剤の張度を調節するのにも有用である。
【０２７０】
本発明の選択された実施形態において有用なポリオールの中には、凍結乾燥製剤においてケーキの構造的安定性を確保するために一般的に使用される、マンニトールがある。マンニトールはケーキに構造的安定性を確保する。マンニトールは、一般的には、例えば、スクロースなどの凍結乾燥保護剤と一緒に使用される。ソルビトール及びスクロースは、張度を調整するため、及び製造プロセス中にバルクの輸送または調製中に凍結融解ストレスに対して保護するための安定剤として、好適な薬剤に入る。例えば、グルコース及びラクトースなどの（遊離アルデヒドまたはケトン基を含有する）糖類を還元すると、表面リシン及びアルギニン残基を糖化することができる。従って、それらは、一般的に、本発明に従って使用するのに好適なポリオールの中にはない。また、酸性条件下で、フルクトース及びグルコースに加水分解され、その結果、糖化を生じさせるスクロースなどのこのような反応種を形成する糖類は、この点において、本発明の好ましいポリオールの中にはない。ＰＥＧは、タンパク質を安定化するのに、及び凍結保護剤として、有用であり、またこの点で、本発明で使用することができる。
【０２７１】
ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質製剤の実施形態は、はさらに界面活性剤を含む。タンパク質分子は、表面上の吸着、及び、空気−液体、固体−液体及び液体−液体界面における変性及びその結果としての凝集に敏感であるであろう。これらの効果は、一般的に、タンパク質濃度に反比例して拡大する。これらの有害な相互作用は、一般に、タンパク質濃度に反比例して拡大し、典型的には、出荷と取扱いの間に生成されるような、物理的撹拌によって悪化する。
【０２７２】
界面活性剤は、表面吸着を防止、最小化、または減少させるために通常使用される。この点で、本発明における有用な界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ソルビタンポリエトキシレートの他の脂肪酸エステル、及びポロキサマー１８８を含む。
【０２７３】
界面活性剤はまた、一般的に、タンパク質の立体配座の安定性を制御するためにも使用される。この点で界面活性剤の使用は、以降のタンパク質に特異的であり、任意の所与の界面活性剤は、典型的には、いくつかのタンパク質を安定化し、他のタンパク質を不安定にする。
【０２７４】
ポリソルベートは酸化的分解の影響を受けやすく、供給されるとき、タンパク質残基の側鎖、特にメチオニンの酸化を引き起こすのに十分な量の過酸化物を含むことが多い。このため、ポリソルベートは注意深く使用するべきであり、使用する場合には、その最小有効濃度で用いるべきである。この点において、ポリソルベートは、賦形剤はその最小有効濃度で使用するべきであるという原則を例示する。
【０２７５】
ＯＳＭＲタンパク質製剤の実施形態は、さらに１つ以上の抗酸化剤を含む。有害な酸化は、医薬製剤中で適正レベルの周辺酸素及び温度を維持し、光への曝露を避けることによってある程度防ぐことができる。タンパク質の酸化的分解を防ぐため、抗酸化賦形剤も使用することができる。この点における有用な抗酸化剤には、還元剤、酸素／フリーラジカル捕捉剤、及びキレート剤がある。本発明に係る治療用タンパク質製剤のための抗酸化剤は、好ましくは水溶性であり、製品の有効期間を通じてタンパク質の活性を維持する。ＥＤＴＡは、この点において本発明に係る好ましい抗酸化剤である。
【０２７６】
酸化防止剤は、タンパク質を損傷し得る。例えば、特にグルタチオンなどの還元剤は、分子内ジスルフィド結合を破壊することができる。従って、本発明で使用する抗酸化剤は、とりわけ、製剤中のタンパク質に損傷を与えるそれ自体の可能性を除去または十分に低減するように選択される。
【０２７７】
本発明による製剤は、特定のインスリン懸濁液を形成するのに必要な亜鉛などの、タンパク質補因子であり、タンパク質の配位錯体を形成するために必要とされている金属イオンを含んでもよい。金属イオンは、タンパク質を分解するいくつかのプロセスを阻害することもできる。しかし、金属イオンは、タンパク質を分解する物理的及び化学的プロセスを触媒もする。
【０２７８】
マグネシウムイオン（１０〜１２０ｍＭ）は、イソアスパラギン酸へのアスパラギン酸の異性化を阻害するために使用することができる。Ｃａ＋２イオン（１００ｍＭまで）は、ヒトデオキシリボヌクレアーゼの安定性を高めることができる。しかしＭｇ＋２,Ｍｎ
＋２,及びＺｎ＋２は、ｒｈＤＮａｓｅを不安定化し得る。同様に、Ｃａ＋２及びＳｒ＋
２は、第ＶＩＩＩ因子を安定化させることができ、それはＭｇ＋２，Ｍｎ＋２及びＺｎ＋２，Ｃｕ＋２及びＦｅ＋２によって不安定化されることができ、及びその凝集は、Ａｌ＋３イオンによって増大させられることができる。
【０２７９】
ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質製剤の実施形態は、１つ以上の保存剤をさらに含む。同じ容器からの複数の抽出を含む複数用量の非経口製剤を開発する際に、保存剤が必要である。それらの主な機能は、微生物の増殖を阻害し、貯蔵寿命または製剤の使用期間を通じて製品無菌性を確保することである。一般的に使用される保存剤は、ベンジルアルコール、フェノール及びｍ−クレゾールを含む。保存剤は、小分子の非経口での使用の長い歴史を持っているが、保存剤を含むタンパク質製剤の開発は難度が高い。保存剤は、ほとんどの場合、タンパク質に不安定化作用（凝集）を有し、これは複数回用量タンパク質製剤におけるそれらの使用を制限する主な要因となってきた。現在まで、ほとんどのタンパク質薬剤は、単回使用のみのために製剤化されてきた。しかし、複数回投与製剤が可能である場合、それらは、患者の利便性を可能にする追加の利点を有し、市場性を増加させた。良い例は保存製剤の開発が、より便利な、多用途注射ペンの発表の商品化に導いたヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）のものである。ｈＧＨの保存製剤を含む少なくとも４つのこのようなペンデバイスは、現在市販されている。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（液体,  Ｎｏｖｏ  Ｎｏ
ｒｄｉｓｋ），Ｎｕｔｒｏｐｉｎ  ＡＱ  （液体，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）＆ジェノトロピン(凍結乾燥-デュアルチャンバーカートリッジ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  Ｕｐｊｏｈｎ)はフェノールを含むが、Ｓｏｍａｔｒｏｐｅ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は、ｍ−クレゾー
ルを用いて製剤化されている。
【０２８０】
保存製剤の製剤化及び開発の間の幾つかの態様を考慮する必要がある。医薬品中の有効保存剤濃度は最適化されなければならない。このことは、タンパク質の安定性を損なうことなく抗菌効果を与える濃度範囲を有する剤形で、所与の保存剤を試験することを必要とする。
【０２８１】
予想されるように、保存剤を含有する液体製剤の開発は、凍結乾燥製剤より困難である。凍結乾燥製品は、保存剤を用いずに凍結乾燥し、使用時に保存剤含有希釈剤を用いてリモデリングすることができる。これは、保存剤がタンパク質と接触する時間を短縮し、接触に伴う安定性のリスクを著しく最少化する。液体製剤に関しては、保存剤の有効性と安定性は、全製品有効期間(約１８〜２４ケ月)にわたって維持されなければならない。留意すべき重要な点は、保存剤の有効性は、活性薬剤と全ての賦形剤コンポーネントを含む最終製剤中で示されるべきであるということである。
【０２８２】
ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質製剤は、一般に、投与の具体的な経路及び方法、具体的な投与量及び投与頻度、具体的な疾患の具体的な治療に対して、特に生体利用性と持続性の範囲で設計されるであろう。従って、製剤は、経口、経耳、経眼、経直腸、及び経膣を含むがこれらに限定されない任意の好適な経路による送達、並びに、静脈注射及び動脈注射、筋肉内注射、及び皮下注射を含む非経口経路による送達のために、本発明に従って設計することができる。
【０２８３】
医薬組成物が製剤化されたら、それは、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、結晶として、または脱水もしくは凍結乾燥粉末として、滅菌バイアル中に保存することができる。このような製剤は、すぐに使用できる形態または投与前にリモデリングされる形態（例えば、凍結乾燥）のいずれかで保存することができる。本発明は、単回用量投与単位を生成するためのキットも提供する。本発明のキットは、それぞれ、乾燥タンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器の両方をを含むことができる。本発明の特定の実施形態では、単室型及び多室型プレフィルドシリンジ(例えば、液体シリンジ及
び凍結乾燥シリンジ)を含むキットが提供される。
【０２８４】
用いられる治療有効量のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質含有医薬組成物は、例えば、治療の状況や目的に依存する。当業者は、治療のための適切な投与量レベルは、部分的に、送達される分子、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質が使用されていることの表示、投与経路、及び、患者のサイズ（体重、体表面または器官のサイズ）及び／または状態（年齢及び一般的な健康状態）に依存して変化することを理解するであろう。特定の実施形態では、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投薬量を滴定し、投与経路を変更することができる。典型的な用量は、上記の要因に応じて、約０．１μｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ以上の範囲とすることができる。具体的な実施形態では、用量は、１．０μｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、選択的に１０μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または１００μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができる。
【０２８５】
治療有効量のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、好ましくは、疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度や持続時間の増加、または、傷害または疾患の苦痛に起因する障害の防止をもたらす。
【０２８６】
医薬組成物は、医療デバイスを用いて投与することができる。医薬組成物を投与するための医療デバイスの例は、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏｓ．４，４７５，１９６；４，４３９，１９６；４，４４７，２２４；４，４４７,２３３；４，４８６，１９４；４，４
８７，６０３；４，５９６，５５６；４，７９０，８２４；４，９４１，８８０；５，０６４，４１３；５，３１２，３３５；５，３１２，３３５；５，３８３，８５１；及び５，３９９，１６３,に記載されており、すべて参照により本明細書に組込まれる。
ＯＳＭＲ−に連する疾患または障害の診断または治療の方法
【０２８７】
本発明のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、生物学的サンプル中のＯＳＭＲを検出するのに特に有用である。特定の実施形態では、患者から得られた生物学的サンプルは、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質と接触させられる。次に、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質へのＯＳＭＲの結合が、サンプル中のＯＳＭＲの存在量または相対量を決定するために検出される。このような方法は、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質による治療に適している患者を診断または決定するのに有用であり得る。
【０２８８】
特定の実施形態では、本発明のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、自己免疫障害、炎症性障害、または細胞外マトリックス沈着や再形成に関連する障害を、診断、検出、または治療するのに使用される。
【０２８９】
これらの障害の治療において、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、破壊のために、免疫系のＯＳＭＲ-発現細胞を標的にすることができ、及び／または、ＯＳＭＲのＯＳＭ及び／
またはＩＬ−３１との相互作用をブロックすることができる。
【０２９０】
ＯＳＭＲ-媒介シグナル伝達に関連する疾患または障害は、本明細書に開示される１つ
以上のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質による治療に特に適している。このような障害は、炎症、疼痛、掻痒症、結節性痒疹、皮膚炎、喘息、自己免疫疾患、腫瘍随伴自己免疫疾患、軟骨炎症、線維症（肺線維症及び皮膚線維症を含むが、これらに限定されない）、線維、線維性疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺炎、異常なコラーゲン沈着、全身皮膚アミロイドーシス、原発性皮膚アミロイドーシス、ベーチェット疾患、鼻ポリープ症、肝硬変、軟骨分解、骨分解、関節炎、リウマチ性関節炎、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、少間接型若年性関節リウマチ、多関節型若年性関節リウマチ、全身型若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎、若年腸疾患性リウマチ、若年反応性関節炎、若年性ライター症候群、ＳＥＡ症候群（血清陰性、腱付着部症、関節症症候群）、若年皮膚筋炎、若年性乾癬性関節炎、若年性強皮症、若年性全身性エリテマトーデス、若年性血管炎、少関節型関節リウマチ、多関節型リウマチ、全身発症関節リウマチ、強直性脊椎炎、腸疾患性関節炎、反応性関節炎、ライター症候群、ＳＥＡ症候群（血清陰性、腱付着部症、関節症症候群）、皮膚筋炎、乾癬性関節炎、強皮症、強皮症性肺疾患、血管炎、脊髄炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、サルコイドーシス、強皮症、硬化症、原発性胆汁硬化症、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、乾癬、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アテローム性動脈硬化症、狼瘡、スティル病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病の疾患、潰瘍性大腸炎、セリアック疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、喘息、ＣＯＰＤ、鼻副鼻腔炎、ポリープを伴う副鼻腔炎、好酸球性食道炎、好酸球性気管支炎、気管支炎、ギランバレー疾患、１型糖尿病、甲状腺炎（例えば、グレーブス疾患）、アジソン疾患、レイノー現象、自己免疫性肝炎、ＧＶＨＤ、移植片拒絶反応、腎障害、心血管疾患、感染症、敗血症、ＨＩＶ感染、外傷、腎臓移植腎症、ＩｇＡ腎症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、胆道閉鎖症、うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、放射線誘導線維症、化学療法誘導性線維症、火傷、外科的外傷、糸球体硬化症、など、を含むが、これらに限定されない。
【０２９１】
好ましい実施形態では、自己免疫障害、炎症性障害、または障害細胞外マトリックス沈着やリモデリングに関連した障害は、線維症、軟骨分解、関節炎、関節リウマチ、強皮症、強皮症関連間質性肺疾病、特発性肺線維症、肝硬変、乾癬、アトピー性皮膚炎、全身皮膚アミロイドーシス、原発性皮膚アミロイドーシス、炎症、掻痒、炎症、結節性痒疹、及び痛みである。
【０２９２】
特定の実施形態では、本発明のＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、癌または腫瘍形成性障害を診断、検出、または治療するために使用される。癌または腫瘍形成性障害の治療において、ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、破壊のために、免疫系のＯＳＭＲ-発現細胞を標
的にすることができ、及び／または、ＯＳＭＲのＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１との相互作用をブロックすることができて、それによってＯＳＭＲ媒介シグナル伝達を低減する。ＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１に媒介されるシグナル伝達をブロックするＯＳＭＲ抗原結合タンパク質は、癌患者における生存率の改善を促進するのに有用であろうと期待されている。ＯＳＭＲ抗原結合タンパク質で診断、検出、または治療され得る癌または腫瘍形成性障害は、一般的固形腫瘍、肺癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、子宮内膜癌、腎臓癌、食道癌、膵臓癌、扁平上皮癌、ブドウ膜黒色腫、子宮頸癌、結腸直腸癌、膀胱、脳、膵臓、頭部、頚部、肝臓、白血病、リンパ腫及びホジキン疾患、多発性骨髄腫、黒色腫、胃癌、星状細胞癌、胃、及び肺腺癌を含むが、これらに限定されない。
【０２９３】
抗原結合タンパク質は、腫瘍の増殖、進行及び／または転移を阻害するために使用することができる。このような阻害は、様々な方法を用いてモニターすることができる。例えば、阻害は、腫瘍サイズの減少及び／または腫瘍内の代謝活性の減少をもたらすことができる。これらのパラメータの両方は、例えば、ＭＲＩまたはＰＥＴスキャンによって測定することができる。阻害は、壊死、腫瘍細胞死のレベル、及び腫瘍内血管のレベルを確認するために、生検によってもモニターすることができる。転移の程度は、公知の方法を用いてモニターすることができる。
【０２９４】
本明細書に提供される、任意の及び全ての例、または例示的な言葉（例えば、「など」）の使用は、単に本発明の実施形態さらに明らかにするように意図されており、別途主張されなければ、本発明の範囲を限定するものではない。明細書の用語は、本発明の実施に不可欠なものとして、任意の非請求の要素を示すものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２９５】
実際と予測の両方の、以下の実施例は、本発明の具体的な実施形態及び特徴を例示する目的で提供されるものであり、その範囲を限定することを意図したものではない。
実施例１：ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）プラットフォームを用いた抗ＯＳＭＲ抗体の産生
【０２９６】
ヒトＯＳＭＲに対して指向する完全ヒト抗体が、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）技術（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏｓ．６，１１４，５９８；６，１６２，９６３；６，８３３，２６８；７，０４９，４２６；７，０６４，２４４,これは、
その全体が参照により本明細書に組込まれる;及び  Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１，１９９４；Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−５６；１９９７；Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘ.Ｍｅｄ.  １８８：４８３−９５,１９９８；及びＫｅｌｌｅｒｍａｎ
ｎ  ｅｔ  ａｌ.,Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３：５９３−７，２００２）を使用して生成された。
【０２９７】
ＯＳＭＲに抗体を生成するために、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物の２つの株、すなわち、ＸＭＧ２−ＫＬとＸＭＧ４−ＫＬマウス、が、ヒトＯＳＭＲ−Ｆｃ可溶性タンパク質（Ａｍｇｅｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａによって調製された）で免疫化された。適量の免疫源（すなわち、１０μｇ／マウスの可溶性ヒトＯＳＭＲ−Ｆｃタンパク質）が、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物の初期免疫化のために、１９９６年１２月３日に出願されたＵ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｉａｌ  Ｎｏ．０８／７５９，６２０、及び、国際特許出願の、１９９８年６月１１日に公開されたＷＯ  ９８／２４８９３,及び２０００年１２月２１日に公開されたＷＯ  ００／７６３１０に開示さ
れた方法に従って、使用された。これらの開示は、参照により本明細書に組込まれる。初回免疫後、免疫原のその後の追加免疫（５μｇ／マウスの可溶性ヒトＯＳＭＲ−Ｆｃタンパク質）が、スケジュールにより、マウスに抗ＯＳＭＲ抗体の適切な力価を誘導するのに必要な期間にわたって投与された。
【０２９８】
血清を最初の注射後約４週間で回収し、具体的な力価をＥＬＩＳＡにより決定した。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）動物を滴定するために使用されたプロトコルは以下の通りであった：コスター３３６８培地結合プレートを８μｇ／ｍＬ（５０μＬ／ウェル）のニュートラビジンでコーティングし、１ＸＰＢＳ／０．０５％のアジ化物中でで４℃で一晩インキュベートした。プレートは、ＲＯ水でタイターテック３サイクル洗浄を用いて洗浄した。プレートは、１ＸＰＢＳ／１％ミルクの２５０μＬを用いてブロックし、室温で少なくとも３０分間インキュベートした。ブロックは、タイターテック３サイクル洗浄を用い、ＲＯ水で洗い流した。次いで、１ＸＰＢＳ／１％ミルク／１０ｍＭＣａ２＋（アッセイ希釈液）５０μｌ／ウェル中で、ビオチン化したｈｕＯＳＭＲ−ＦＮＦＨ（Ａｍｇｅｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡで調製された）を２μｇ／ｍＬで捕捉し、室温で１時間インキュベートした。次いで、タイターテック３サイクル洗浄を用い、ＲＯ水で洗浄した。１次抗体に関しては、１：１００から２つ組みで、血清を１：３滴定した。アッセイ希釈液５０μＬ／ウェル中でこれを行い、室温で１時間インキュベートした。次いで、ＲＯ水で、タイターテック３サイクル洗浄を使用して洗浄した。２次抗体は、５０μＬ／ウェルのアッセイ希釈液中の４００ｎｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃＨＲＰであった。室温で１時間、これをインキュベートした。次いで、ＲＯ水で、タイターテック３サイクル洗浄を使用してこれを洗浄し、ペーパータオル上で叩いて乾燥させた。基材に関しては、一工程のＴＭＢ溶液（Ｎｅｏｇｅｎ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｋｅｎｔｕｃｋｙ）を使用し（５０μＬ／ウェル）、室温で３０分間展開させた。
【０２９９】
適切な力価を示す動物が同定された。５ＸＭＧ２ＫＬ動物が、ＯＳＭＲに特異的なＩｇＧ免疫応答で同定された。脾臓及び流入領域リンパ節が、これらの動物から採取され、ハイブリドーマ作製のために一緒にプールされた。特異的な免疫応答を有する５ＸＭＧ４ＫＬ動物が同様に回収され、別々の融合スクリーニングキャンペーンとして進められた。標準的な技術（Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６，４９５−７，１９７５）を用いてハイブリドーマを生成するために、免疫動物からの濃縮されたＢ細胞を、非分泌骨髄腫Ｐ３ｘ６３ＡＧ８．６５３細胞に融合した（（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ＣＲＬ−１５８０；Ｋｅａｒｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：１５４８−５０，１９７９）。
【０３００】
次いで、ハイブリドーマを９６ウェル組織培養プレート上に高密度（ウェルあたり複数の異なるハイブリドーマクローン）で播種し、４週間増殖させた。ハイブリドーマ株の上清を、蛍光マイクロボリュームアッセイ技術（ＦＭＡＴ）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）により、一過性にトランスフェクトした２９３Ｔ細胞上に発現した完全長ヒト及びカニクイザルのＯＳＭＲに結合するためにスクリーニングした。簡潔には、３８４ウェルＦＭＡＴプレート中で、３，０００  ＯＳＭＲ  ２９３Ｔトランスフェクション細胞と１５，０００親２９３Ｔ細胞の４０μｌの混合物が１５μＬのハイブリドーマ上清と混合され、１０μＬの抗ヒト軽鎖（ｈｕｋａｐｐａ／ｈｕｌａｍｂｄａ）Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）が二次抗体（１．０μｇ／ｍＬの最終濃度）を標識化した。次いで、プレートを室温で３時間インキュベートし、蛍光を、ＦＭＡＴリーダーを用いて読み取った。これらのスクリーニングは、ヒト及びカニクイザルＯＳＭＲに結合する８８５ハイブリドーマ株を同定した。
実施例２：ヒトＯＳＭＲブロッキングアッセイ
【０３０１】
ヒトＯＳＭＲを介したシグナル伝達をブロックするＯＳＭＲ抗体の能力は、リガンドとしてヒトオンコスタチンＭ（ＯＳＭ）またはヒトインターロイキン３１（ＩＬ−３１）のいずれかを有する２つのアッセイを用いて決定した。組合せで、そのアッセイは、抗体が、ＯＳＭ及び／またはＩＬ−３１の結合を介してトリガーされたＯＳＭＲのシグナル伝達を阻害できるかどうかを決定するのに用いられた。
【０３０２】
最初のスクリーニングにおいて、抗体は、ＯＳＭＲを通じてＯＳＭのシグナル伝達をブロックする能力について評価された。ＯＳＭによる一次正常ヒト肺線維芽細胞の刺激は、ＳＴＡＴ３のリン酸化とその後の核への移行を誘導する。細胞を、Ｃｏｓｔａｒ３８４ウェルプレートにウェルあたり３０００細胞で播種し、一晩接着させた。細胞を、２０分間抗体上清を用いて前処理し、次いで３０分間、８０  ｐＭのヒトＯＳＭで刺激した。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、３．５％のホルムアルデヒド溶液で固定し、（ＰＢＳＴで３回）洗浄し、０．５％トリトンＸ−１００溶液で透過処理した。次いで、細胞を、抗ホスホＳＴＡＴ３抗体で１時間染色し、洗浄し、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒコンジュゲート抗体（すべてＣｅｌｌｏｍｉｃｓからのＨｉｔＫｉｔに含まれる）で染色した。プレートを覆い、核強度値と細胞質強度値を生成するためのＣｅｌｌｏｍｉｃｓ独自のアルゴリズムを使用して、ＡｒｒａｙＳｃａｎ装置で読み取った。結果は、これら２つの値の間の差として報告され、最大限に刺激した細胞及び培地処理細胞（ＰＯＣ）を含むデータを制御するために、さらに正規化された。
【０３０３】
第２のアッセイでは、抗体は、ヒトのＩＬ−３１ＲＡ４及びＯＳＭＲを過剰発現した安定な細胞株において、ＯＳＭＲを通じてＩＬ−３１の増殖シグナルを阻害する能力について評価された。ＢａＦ３細胞を２つのプラスミド：ｐｃＤＮＡ３．１＋ｈｕＯＳＭＲｂ（ＮｅｏＲ）とｐｃＤＮＡ３．１＋ｈｕＩＬ３１ＲＡ４（ＺｅｏＲ）で安定的にトランスフェクトした。マウスＩｌ−３の非存在下で、この細胞株は、ヒトＩＬ−３１に応答して増殖することができ、従って、特に抗ＯＳＭＲ抗体のブロッキング能力を評価するために使用することができた。ＢａＦ３細胞を、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で９６ウェルプレートに播種した。抗体及びリガンド（ｈｕＩＬ−３１、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を１００μＬの最終容量にウェルに加え、プレートを５％ＣＯ２、３７℃の加湿チャンバー内で７２時間インキュベートした。インキュベーション後、２０μＬのＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅを各ウェルに加え、プレートをインキュベーターに戻した。プレートは、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅの添加後、様々な時点で、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘ
Ｐｌａｔｅリーダー（５７０−６００ｎｍ）で読み取った。
【０３０４】
２つのアッセイの結果は以下の表４に示されている。３０００を超えるハイブリドーマ上清が、これら２つのアッセイにおけるブロッキング能力についてスクリーニングされた；上位２００のブロッカーが、さらに４点滴定で試験され、１４が、組換えタンパク質の産生及びさらなる試験のために選択された。３つの例示的抗体（抗体１〜３）のＩＣ５０が、両方のアッセイについて示されている。いくつかの抗体は、それらがＩＬ−３１誘導増殖を阻害するより完全にＯＳＭ誘導ＳＴＡＴ３移行を阻害し、その逆も同様である。しかし、３つの抗体はすべて、ＯＳＭ及びＩＬ−３１媒介シグナル伝達の強力な阻害剤であった。
【表４】
2020022482.tif 000008
実施例３：カニクイザルＯＳＭＲブロッキングアッセイ
【０３０５】
カニクイザルＯＳＭＲを通じてシグナル伝達をブロックするＯＳＭＲ抗体の能力を、リガンドとしてヒトＯＳＭまたはヒトＩＬ−３１のいずれかを有する２つのアッセイを使用して調査した。
【０３０６】
最初のスクリーニングにおいて、抗体は、一次腎臓上皮細胞株を用いて、カニクイザルＯＳＭＲを通じてＯＳＭのシグナル伝達をブロックする能力について評価された。カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＯＳＭによるこれらの細胞の刺激は、ＳＴＡＴ３のリン酸化とその後の核への移行を誘導する。細胞を、Ｃｏｓｔａｒ３８４ウェルプレートにウェルあたり３０００細胞で播種し、一晩接着させた。細胞を、２０分間抗体上清を用いて前処理し、次いで３０分間、８０ｐＭのカニクイザルＯＳＭで刺激した。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、３．５％のホルムアルデヒド溶液で固定し、（ＰＢＳＴで３回）洗浄し、０．５％トリトンＸ−１００溶液で透過処理した。次いで、細胞を、抗ホスホＳＴＡＴ３抗体で１時間染色し、洗浄し、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒコンジュゲート抗体（すべてＣｅｌｌｏｍｉｃｓからのＨｉｔＫｉｔに含まれる）で染色した。プレートを覆い、核強度値と細胞質強度値を生成するためのＣｅｌｌｏｍｉｃｓ独自のアルゴリズムを使用して、ＡｒｒａｙＳｃａｎ装置で読み取った。結果は、これら２つの値の間の差として報告され、最大限に刺激した細胞及び培地処理細胞（ＰＯＣ）を含むデータを制御するために、さらに正規化された。
【０３０７】
第２のアッセイでは、抗体は、カニクイザルのＩＬ−３１ＲＡ及びＯＳＭＲを過剰発現した安定な細胞株において、カニクイザルＯＳＭＲを通じてＩＬ−３１の増殖シグナルを阻害する能力について評価された。実施例２と同様に、ＢａＦ３細胞を、ウェルあたり２０，０００細胞の密度で９６ウェルプレートに播種した。抗体及びリガンド（カニクイザルＩＬ−３１、社内、すなわち、Ａｍｇｅｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を１００μＬの最終容量にウェルに加え、プレートを５％ＣＯ２、３７℃の加湿チャンバー内で７２時間インキュベートした。インキュベーション後、２０μＬのＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅを各ウェルに加え、プレートをインキュベーターに戻した。プレートは、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅの添加後、様々な時点で、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘ  Ｐｌａｔｅリーダー（５７０−６００ｎｍ）で読み取った。
【０３０８】
２つのアッセイの結果は、両方のアッセイについて示された各抗体についてのＩＣ５０とともに以下の表５に示されている。結果は、抗体１，２，及び３のそれぞれがＯＳＭ−及びＩＬ−３１媒介シグナル伝達の強力な阻害剤であることを確認する。
【表５】
2020022482.tif 000009
実施例４：抗ＯＳＭＲ抗体のエピトープビニング
【０３０９】
抗体競合試験が、抗ＯＳＭＲゼノマウス抗体のエピトープを特徴づけるために実施された。互いに競合する抗体は、標的上の同じ部位を結合すると考えることができる。これらの実験では、ＯＳＭＲまたは関連のない抗体は、捕獲抗体に予め結合された、ストレプトアビジンでコーティングされたＬｕｍｉｎｅｘビーズ（ビオチン化一価マウス抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体）上に捕獲された。ＯＳＭＲ抗原または緩衝液（抗原なし）をウェルに加え、プローブ抗体を各ウェルに添加して、ＰＥ標識化した一価マウス抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体を用いて検出した。各ウェルの平均蛍光強度を測定した。完全な参考文献については、Jｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８８：９１−８，２０
０４参照。所与のウェルにおける蛍光の検出は、他のＯＳＭＲ抗体の存在下でさえ、プローブ抗体は、別々のエピトープに結合していることを実証して、ＯＳＭＲに結合できること、を示唆した。以下の表６に示すように、３つのビンの最小値が見出された。
【表６】
2020022482.tif 000010
実施例５：抗ＯＳＭＲ抗体の親和性の決定
【０３１０】
抗ＯＳＭＲ抗体の親和性を決定した。反応速度定数の決定は、人間ＯＳＭＲに対する抗体１〜３（Ａｂｓ１〜３）の相互作用を調査するために実施された。
【０３１１】
バイオセンサー分析は、ＣＭ５センサーチップを装備したＢｉａｃｏｒｅ  ３０００光学バイオセンサーを使用して、（ＨＢＳ−ＥＰ＋（１Ｘ）緩衝系（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ
ｐＨ７．４，１５０ｍＭのＮａＣｌ，３．０ｍＭのＥＤＴＡ，０．０５％界面活性剤Ｐ２０）中で、２５℃で行った。すべての試薬は、注入前に８℃に保った。ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，＃１０９−００５−０９８）をフローセル１及び２への標準的アミンカップリングを介してセンサーチップに固定化し（〜３０００  ＲＵ）、その後、エタノールアミンでブロックした。ｈＯＳＭＲ．ＦＨを１５０ｎＭのランニングバッファー中で調製し、０．６１７ｎＭに３倍に希釈した。抗体１〜３を、ランニングバッファー中で希釈した（０．２５〜０．５μｇ／ｍＬ）。抗体を１０μＬ／分の流速でフローセル２に注入した（１５μＬ）。約５０ＲＵの抗体が捕獲された。表面を安定化させ（９０秒）、次いで、各濃度（１５０、５０．０、１６．７、５．５６、１．８５及び０．６１７）のｈＯＳＭＲを、会合（５分）と解離（５分）を観察するために、５０μＬ／分の流速でフローセル１及び２を通過させた。サンプルを２連で及びランダムな順序で実行した。
【０３１２】
バッファ検体ブランク（０ｎＭのｈＯＳＭＲ）を、サンプル注入の前、際中、及び注後に注入した。抗体を、１０μＬ／分の流速でフローセル２に注入した（１５μＬ）。約５０ＲＵの抗体が捕獲された。表面を安定化させ（９０秒）、次いで、各濃度（１５０ｎＭ）のｈＯＳＭＲを、会合（５分）と解離（１〜２時間）を観察するために、５０μＬ／分の流速でフローセル１及び２を通過させた。サンプルは３連で実行した。
【０３１３】
バッファ検体ブランク（０ｎＭのｈＯＳＭＲ）を、サンプル注入の前及び注後に注入した。表面を、５０μＬ／分の流量で１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５、５０μＬ）の２回の注入で再生した。続いて、バッファブランク注入（１５秒）を行った
【０３１４】
データは、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０ソフトウェアを用いて、以下のように分析した。フローセル２からのデータを、フローセル１からのデータ（ブランク参照）から差し引いた。次いで、参照を差し引いたデータ（２−１）を、最も近い０ｎＭの濃度データからを差し引いた（二重参照）。解離速度定数（ｋｄ）を決定するために、二重参照された長解離データを、１：１結合モデルに適合させた。この解離速度定数は、会合速度定数（ｋａ）と平衡解離定数（ｋｄ）を決定するために、二重参照された短解離データを１：１結合モデルに適合させるための固定パラメータとして使用された。
【０３１５】
試薬はかなり良く挙動し、データ（以下の表７参照）は１：１結合モデルにかなりよく適合する。
【表７】
2020022482.tif 000011
実施例６：抗ＯＳＭＲ抗体
【０３１６】
ヒトＯＳＭＲに対して指向する完全ヒト抗体が、上記の実施例１に記載したＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を使用して生成された。抗体１，２，及び３のそれぞれがＯＳＭ−及びＩＬ−３１−媒介シグナル伝達の強力な阻害剤であることが示された。抗体１，２,及び３（すなわち，Ａｂ１，Ａｂ２，及びＡｂ３）の配列を決定し、以下の表８に示
す。
【表８−１】
2020022482.tif 000012
【表８−２】
2020022482.tif 000013
【表８−３】
2020022482.tif 000014
【表８−４】
2020022482.tif 000015
【表８−５】
2020022482.tif 000016
【表８−６】
2020022482.tif 000017
実施例７：修飾された抗ＯＳＭＲ抗体
【０３１７】
Ａｂ１,Ａｂ２,及びＡｂ３の修飾バージョンが生成された。抗体のすべての３つの修飾された形態では、重鎖ののＣ末端のリシンを除去した。Ａｂ１及びＡｂ２については、７３位のグリコシル化部位を、７３位のアスパラギンをアスパラギン酸で置換することによって除去した。これらの変異体は、Ａｂ１−Ｎ７３Ｄ及びＡｂ２−Ｎ７３Ｄと呼ばれる。修正抗体の配列は、以下の表９に記載されている（修飾されたヌクレオチドとアミノ酸は下線が引かれている）。
【表９−１】
2020022482.tif 000018
【表９−２】
2020022482.tif 000019
【表９−３】
2020022482.tif 000020
【表９−４】
2020022482.tif 000021
【０３１８】
ＥＬＩＳＡ実験を、異なるＦｃ領域を有するＡｂ１またはＡｂ２の可変領域（または、Ａｂ１またはＡｂ２のＮ７３Ｄ変異体）を含む抗体を使用して、様々なフォーマット（結合力なしのフォーマットのためのＣａｐｔｕｒｅ  ＥＬＩＳＡ；溶液相のフォーマットのためのＳａｎｄｗｉｃｈ  ＥＬＩＳＡ；固体結合のフォーマットのためのＤｉｒｅｃｔ  ＥＬＩＳＡ）で行った。
【０３１９】
Ａｂ１とＡｂ２のそれぞれは、ヒトＩｇＧ２由来のＣＨ１，ＣＨ２，ＣＨ３ドメインを含む。本明細書で使用する場合、用語「Ａｂ１」と「Ａｂ１  ＩｇＧ２  ＷＴ」は同じ抗体を指す。同様に、用語「Ａｂ２」と「Ａｂ２  ＩｇＧ２  ＷＴ」は同じ抗体を指す。
【０３２０】
「ＩｇＧ４Ｐ  ａｇｌｙ／ＩｇＧ１」として同定された抗体は、シャッフルを減らすためのＳｅｒからＰｒｏへの（２２８位での）変異を有する、ヒトＩｇＧ４からのＣＨ１ドメイン、ヒトＩｇＧ４からのヒンジ、Ｎ-結合グリコシル化部位を除去するためのＡｓｎ
からＧｌｎへの（２９７位での）変異を有する、ヒトＩｇＧ４からのＣＨ２ドメイン、及び、ヒトＩｇＧ１からのＣＨ３ドメイン、に融合したＡｂ１またはＡｂ２の可変領域（またはのＡｂ１またはＡｂ２のＮ７３Ｄ変異体）を含む。「ＩｇＧ４Ｐ  ａｇｌｙ／ＩｇＧ１」のフレームワークは、米国公開特許出願番号ＵＳ２０１２／０１００１４０に記載されている。
【０３２１】
ＥＬＩＳＡの結果は、Ｎ７３Ｄ置換を介したグリコシル化部位の除去は、ＯＳＭＲへの修飾抗体の結合に影響を及ぼさないことを示した。表１０参照。
【表１０】
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【０３２２】
ＢＩＡコア法を用いて結合研究を行った。異なるＦｃ領域を有するＡｂ１またはＡｂ２の可変領域（または、Ａｂ１またはＡｂ２のＮ７３Ｄ変異体）を含む抗体を、製造者のプロトコルに従ってＣＭ４チップ（ＧＥ  ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に固定化した。検体として、可溶性ＯＳＭＲを使用した。Ｎ７３Ｄ置換経由のＡｂ１及びＡｂ２の上のグリコシル化部位の除去は、結合親和性を改善した。Ａｂ１については、置換はＫｏｎ速度を改善し、一方、Ａｂ２については、置換はＫｏｆｆ速度を改善した。表１１参照。
【表１１】
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【０３２３】
Ｆａｂフラグメントの安定性を、抗体のアンフォールディング温度を評価することによって決定した。Ｆａｂフラグメントの高い融解温度が増加した安定性に直接相関する。Ｎ７３Ｄ置換経由のＡｂ２上のグリコシル化部位の除去は、示差走査蛍光定量実験によって評価されるように、Ｆａｂフラグメントの熱安定性に影響を与えず、Ａｂ１への小さな効果を示した。表１２参照。
【表１２】
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【０３２４】
ヒトＯＳＭＲを介してシグナル伝達をブロックする修飾された抗ＯＳＭＲ抗体の能力を評価した。修正された抗体は、ＩＬ３１,ＯＳＭ,又はＩＬ３１及びＯＳＭの存在下で、ＢａＦ＿ｈｕ−ＩＬ３１Ｒ／ＯＳＭＲ／ｇｐ１３０の細胞株の増殖を阻害する能力について評価された。結果は、示された各抗体に対するＩＣ５０とともに、下記の表１３及び１４に示す。結果は、Ａｂ１及びＡｂ２の修飾バージョンは、ＯＳＭ−及びＩＬ−３１−媒介のシグナル伝達の強力な阻害剤であることを確認する。
【表１３】
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【表１４】
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【０３２５】
本開示は、本開示の実施のための具体的な様式を含むように発見されたまたは提案された特定の実施形態の形で記載されている。記載された発明の様々な修正及び変更が、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本発明は、具体的な実施形態に関連して説明されているが、特許請求の範囲に記載の発明は、そのような具体的な実施形態に不当に限定されるべきではないことが理解すべきである。実際、関連分野の当業者に明らかである、本発明を実施するための記載された様式の様々な修正は、以下の特許請求の範囲内にあることが意図されている。
【配列表】
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