(57)【要約】【課題】良好に溶血させることができ、かつ高い精度でヘモグロビン類を測定することができるヘモグロビン類測定用試薬を提供する。【解決手段】本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬であって、特定の非イオン性界面活性剤又は特定の両性界面活性剤を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬であって、
非イオン性界面活性剤又は両性界面活性剤を含み、
前記非イオン性界面活性剤が、下記成分Ａ１、下記成分Ａ２、下記成分Ａ３、下記成分Ａ４、下記成分Ａ５、下記成分Ａ６、下記成分Ａ７、下記成分Ａ８又は下記成分Ａ９であり、
前記両性界面活性剤が、下記成分Ｂ１、下記成分Ｂ２又は下記成分Ｂ３である、ヘモグロビン類測定用試薬。
成分Ａ１：オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル
成分Ａ２：オキシエチレン基の平均付加モル数が４０以上６０以下であるポリオキシエチレンステアリルエーテル
成分Ａ３：オキシエチレン基の平均付加モル数が９以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテル
成分Ａ４：オキシエチレン基の平均付加モル数が６以上１０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテル
成分Ａ５：オキシエチレン基の平均付加モル数が１５であるポリオキシエチレントリデシルエーテル
成分Ａ６：ＨＬＢ値が１１以上１５以下であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル
成分Ａ７：ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン
成分Ａ８：ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド
成分Ａ９：サポニン
成分Ｂ１：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホネート
成分Ｂ２：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシプロパンスルホネート
成分Ｂ３：ラウリルジメチルアミンオキサイド
【請求項２】
前記非イオン性界面活性剤を含み、
前記非イオン性界面活性剤が、前記成分Ａ１、前記成分Ａ２、前記成分Ａ３、前記成分Ａ４、前記成分Ａ５又は前記成分Ａ６を含み、
前記成分Ａ１が、オキシエチレン基の平均付加モル数が９、１２若しくは１９であるポリオキシエチレンラウリルエーテル、又はオキシエチレン基の平均付加モル数が１３若しくは２０であるポリオキシエチレンセチルエーテルであり、
前記成分Ａ２が、オキシエチレン基の平均付加モル数が５０であるポリオキシエチレンステアリルエーテルであり、
前記成分Ａ３が、オキシエチレン基の平均付加モル数が９又は１３であるポリオキシエチレンオレイルエーテルであり、
前記成分Ａ４が、オキシエチレン基の平均付加モル数が７又は９であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下のポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテルであり、
前記成分Ａ６が、ＨＬＢ値が１２．５、１２．７又は１４．０であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルである、請求項１に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項３】
前記非イオン性界面活性剤を含み、
前記非イオン性界面活性剤が、前記成分Ａ１又は前記成分Ａ３を含み、
前記成分Ａ１が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテルであり、
前記成分Ａ３が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテルである、請求項１に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項４】
前記成分Ａ１が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル、又はオキシエチレン基の平均付加モル数が１３であるポリオキシエチレンセチルエーテルであり、
前記成分Ａ３が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１３であるポリオキシエチレンオレイルエーテルである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項５】
前記非イオン性界面活性剤を含み、
前記非イオン性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項６】
前記両性界面活性剤を含み、
前記両性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項７】
赤血球含有検体と、請求項１〜６のいずれか１項に記載のヘモグロビン類測定用試薬とを混合して混合液を得る工程と、
前記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する工程とを備える、ヘモグロビン類の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、界面活性剤を含むヘモグロビン類測定用試薬に関する。また、本発明は、上記ヘモグロビン類測定用試薬を用いたヘモグロビン類の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、糖尿病及び異常ヘモグロビン病等の診断のために、ヘモグロビン類の濃度が測定されている。例えば、ヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビンＡ１ｂ、ヘモグロビンＦ、ヘモグロビンＡ１ｃ、ヘモグロビンＡ０及びヘモグロビンＡ２等のヘモグロビン、アセチル化ヘモグロビン及びカルバミル化ヘモグロビン等の修飾ヘモグロビン、並びにヘモグロビンＳ及びヘモグロビンＣ等の異常ヘモグロビン等のヘモグロビン類の濃度が測定されている。これらのヘモグロビン類の中でも、特に、ヘモグロビンＡ１ｃ値が測定されている。ヘモグロビン類の濃度を測定する方法としては、主に液体クロマトグラフィー法が挙げられる。
【０００３】
液体クロマトグラフィー法では、血液等の検体に溶血試薬を添加し、溶血後の試料を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定し、得られたクロマトグラムのピークを演算処理することによりヘモグロビンＡ１ｃ値等のヘモグロビン類の濃度を求める。従来、溶血試薬として、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０であるポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル（例えば商品名「トリトンＸ−１００」）を含む組成物が用いられている。
【０００４】
下記の特許文献１には、ヒトの血液のサンプル中のヘモグロビンＡ１ｃを他のグリコシル化及び非グリコシル化ヘモグロビン並びにヘモグロビンＡ１ｃの前駆体のシッフ塩基から分離するヘモグロビンＡ１ｃの分離方法が開示されている。また、特許文献１の実施例では、０．３３重量％のトリトンＸ−１００を含む溶血試薬が用いられている。
【０００５】
下記の特許文献２には、カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いる溶血試薬が開示されている。上記溶血試薬は、カオトロピックイオンを含有する。また、特許文献２の実施例では、０．１重量％のトリトンＸ−１００を含む溶血試薬が用いられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開昭５８−１９１９６８号公報
【特許文献２】特開２００１−０２１５５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献１，２に記載のようなオキシエチレン基の平均付加モル数が１０であるポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルを含む溶血試薬（ヘモグロビン類測定用試薬）は、溶血性能に優れる。そのため、全血等の検体を該溶血試薬で処理して、陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定すると、ヘモグロビン類のピークが良好に得られる。また、得られる全てのピークにおいてショルダーピーク及びピーク割れ等が生じにくい。そのため、高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。
【０００８】
また、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０であるポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルを含む溶血試薬は、陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定したときに、キャリーオーバーが少ない。そのため、多数の検体を連続測定した場合でも、高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。
【０００９】
一方、欧州において、ＲＥＡＣＨ規制（Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，Ａｕｔｈｏｒｉｓａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）が２００７年に発効し、特定の化学品の使用が制限されることとなった。また、２０１７年には、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０であるポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルを０．１重量％以上含む製品がＲＥＡＣＨ規制の対象とされた。また、欧州以外の国でもオキシエチレン基の平均付加モル数が１０であるポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルの使用量を削減することは、環境負荷の軽減と人体の安全性の向上に寄与する。
【００１０】
本発明の目的は、良好に溶血させることができ、かつ高い精度でヘモグロビン類を測定することができるヘモグロビン類測定用試薬を提供することである。より具体的には、本発明の目的は、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０であるポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテルを含まなくても、該成分が配合されたヘモグロビン類測定用試薬と同等のレベルで溶血させることができ、かつ同等の精度でヘモグロビン類を測定することができるヘモグロビン類測定用試薬を提供することである。
【００１１】
また、本発明の目的は、上記ヘモグロビン類測定用試薬を用いたヘモグロビン類の測定方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の広い局面によれば、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬であって、非イオン性界面活性剤又は両性界面活性剤を含み、前記非イオン性界面活性剤が、下記成分Ａ１、下記成分Ａ２、下記成分Ａ３、下記成分Ａ４、下記成分Ａ５、下記成分Ａ６、下記成分Ａ７、下記成分Ａ８又は下記成分Ａ９であり、前記両性界面活性剤が、下記成分Ｂ１、下記成分Ｂ２又は下記成分Ｂ３である、ヘモグロビン類測定用試薬が提供される。
【００１３】
成分Ａ１：オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル
【００１４】
成分Ａ２：オキシエチレン基の平均付加モル数が４０以上６０以下であるポリオキシエチレンステアリルエーテル
【００１５】
成分Ａ３：オキシエチレン基の平均付加モル数が９以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテル
【００１６】
成分Ａ４：オキシエチレン基の平均付加モル数が６以上１０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテル
【００１７】
成分Ａ５：オキシエチレン基の平均付加モル数が１５であるポリオキシエチレントリデシルエーテル
【００１８】
成分Ａ６：ＨＬＢ値が１１以上１５以下であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル
【００１９】
成分Ａ７：ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン
【００２０】
成分Ａ８：ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド
【００２１】
成分Ａ９：サポニン
【００２２】
成分Ｂ１：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホネート
【００２３】
成分Ｂ２：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシプロパンスルホネート
【００２４】
成分Ｂ３：ラウリルジメチルアミンオキサイド
【００２５】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬のある特定の局面では、前記非イオン性界面活性剤を含み、前記非イオン性界面活性剤が、前記成分Ａ１、前記成分Ａ２、前記成分Ａ３、前記成分Ａ４、前記成分Ａ５又は前記成分Ａ６を含み、前記成分Ａ１が、オキシエチレン基の平均付加モル数が９、１２若しくは１９であるポリオキシエチレンラウリルエーテル、又はオキシエチレン基の平均付加モル数が１３若しくは２０であるポリオキシエチレンセチルエーテルであり、前記成分Ａ２が、オキシエチレン基の平均付加モル数が５０であるポリオキシエチレンステアリルエーテルであり、前記成分Ａ３が、オキシエチレン基の平均付加モル数が９又は１３であるポリオキシエチレンオレイルエーテルであり、前記成分Ａ４が、オキシエチレン基の平均付加モル数が７又は９であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下のポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテルであり、前記成分Ａ６が、ＨＬＢ値が１２．５、１２．７又は１４．０であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルである。
【００２６】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬のある特定の局面では、前記非イオン性界面活性剤を含み、前記非イオン性界面活性剤が、前記成分Ａ１又は前記成分Ａ３を含み、前記成分Ａ１が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテルであり、前記成分Ａ３が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテルである。
【００２７】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬のある特定の局面では、前記成分Ａ１が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル、又はオキシエチレン基の平均付加モル数が１３であるポリオキシエチレンセチルエーテルであり、前記成分Ａ３が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１３であるポリオキシエチレンオレイルエーテルである。
【００２８】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬のある特定の局面では、前記非イオン性界面活性剤を含み、前記非イオン性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である。
【００２９】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬のある特定の局面では、前記両性界面活性剤を含み、前記両性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である。
【００３０】
本発明の広い局面によれば、赤血球含有検体と、上述したヘモグロビン類測定用試薬とを混合して混合液を得る工程と、前記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する工程とを備える、ヘモグロビン類の測定方法が提供される。
【発明の効果】
【００３１】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられる。本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、非イオン性界面活性剤又は両性界面活性剤を含む。本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、上記非イオン性界面活性剤が、以下の成分Ａ１〜Ａ９のいずれかの成分であるか、上記両性界面活性剤が、以下の成分Ｂ１〜Ｂ３のいずれかの成分である。成分Ａ１：オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル。成分Ａ２：オキシエチレン基の平均付加モル数が４０以上６０以下であるポリオキシエチレンステアリルエーテル。成分Ａ３：オキシエチレン基の平均付加モル数が９以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテル。成分Ａ４：オキシエチレン基の平均付加モル数が６以上１０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテル。成分Ａ５：オキシエチレン基の平均付加モル数が１５であるポリオキシエチレントリデシルエーテル。成分Ａ６：ＨＬＢ値が１１以上１５以下であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル。成分Ａ７：ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン。成分Ａ８：ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド。成分Ａ９：サポニン。成分Ｂ１：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホネート。成分Ｂ２：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシプロパンスルホネート。成分Ｂ３：ラウリルジメチルアミンオキサイド。本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、上記の構成が備えられているので、良好に溶血させることができ、かつ高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、本発明の一実施形態に係るヘモグロビン類測定用試薬を用いて陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する際に得られるクロマトグラムの例である。
【図２】図２は、従来のヘモグロビン類測定用試薬を用いて陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する際に得られるクロマトグラムの例である。
【図３】図３（ａ）及び（ｂ）は、ヘモグロビンＡ０ピークの形状を評価したクロマトグラムの例である。
【図４】図４（ａ）及び（ｂ）は、ファーストフラクションのピーク形状を評価したクロマトグラムの例である。
【図５】図５（ａ）〜（ｃ）は、ヘモグロビンＡ０ピーク高さを評価したクロマトグラムの例である。
【図６】図６（ａ）及び（ｂ）は、ヘモグロビン類測定用試薬と全血との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値及びヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量との関係を示す図である。
【図７】図７（ａ）及び（ｂ）は、ヘモグロビン類測定用試薬と測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値及びヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量との関係を示す図である。
【図８】図８（ａ）及び（ｂ）は、ヘモグロビン類測定用試薬と測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値及びヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量との関係を示す図である。
【図９】図９（ａ）及び（ｂ）は、ヘモグロビン類測定用試薬と測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）との混合液におけるカラム耐久性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００３４】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられる。本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、非イオン性界面活性剤又は両性界面活性剤を含む。
【００３５】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、上記非イオン性界面活性剤が、オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル、オキシエチレン基の平均付加モル数が４０以上６０以下であるポリオキシエチレンステアリルエーテル、オキシエチレン基の平均付加モル数が９以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテル、オキシエチレン基の平均付加モル数が６以上１０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテル、オキシエチレン基の平均付加モル数が１５であるポリオキシエチレントリデシルエーテル、ＨＬＢ値が１１以上１５以下であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、又はサポニンである。
【００３６】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、上記両性界面活性剤が、３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホネート、３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシプロパンスルホネート、又はラウリルジメチルアミンオキサイドである。
【００３７】
本明細書において、「オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル」を「成分Ａ１」と記載することがある。
【００３８】
成分Ａ１のうち、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル」を、本明細書において、「成分Ａ１’」と記載することがある。
【００３９】
本明細書において、「オキシエチレン基の平均付加モル数が４０以上６０以下であるポリオキシエチレンステアリルエーテル」を「成分Ａ２」と記載することがある。
【００４０】
本明細書において、「オキシエチレン基の平均付加モル数が９以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテル」を「成分Ａ３」と記載することがある。
【００４１】
成分Ａ３のうち、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテル」を、本明細書において、「成分Ａ３’」と記載することがある。
【００４２】
本明細書において、「オキシエチレン基の平均付加モル数が６以上１０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテル」を「成分Ａ４」と記載することがある。
【００４３】
本明細書において、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１５であるポリオキシエチレントリデシルエーテル」を「成分Ａ５」と記載することがある。
【００４４】
本明細書において、「ＨＬＢ値が１１以上１５以下であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル」を「成分Ａ６」と記載することがある。
【００４５】
本明細書において、「ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン」を「成分Ａ７」と記載することがある。
【００４６】
本明細書において、「ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド」を「成分Ａ８」と記載することがある。
【００４７】
本明細書において、「サポニン」を「成分Ａ９」と記載することがある。
【００４８】
本明細書において、「３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホネート」を「成分Ｂ１」と記載することがある。
【００４９】
本明細書において、「３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシプロパンスルホネート」を「成分Ｂ２」と記載することがある。
【００５０】
本明細書において、「ラウリルジメチルアミンオキサイド」を「成分Ｂ３」と記載することがある。
【００５１】
本明細書において、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１０であるポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル」を「成分Ｘ」と記載することがある。
【００５２】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、非イオン性界面活性剤又は両性界面活性剤を含み、上記非イオン性界面活性剤が、成分Ａ１、成分Ａ２、成分Ａ３、成分Ａ４、成分Ａ５、成分Ａ６、成分Ａ７、成分Ａ８又は成分Ａ９であるか、上記両性界面活性剤が、成分Ｂ１、成分Ｂ２又は成分Ｂ３である。
【００５３】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、上記の構成が備えられているので、良好に溶血させることができ、かつ高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。
【００５４】
成分Ｘを含む従来のヘモグロビン類測定用試薬では、良好に溶血させることができ、かつ高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。一方、成分Ｘを含まないヘモグロビン類測定用試薬では、良好に溶血させ、かつ高い精度でヘモグロビン類を測定することは困難である。
【００５５】
これに対して、本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、上記の構成が備えられているので、成分Ｘを含まない場合にも、成分Ｘが配合されたヘモグロビン類測定用試薬と同等のレベルで溶血させることができ、かつ同等の精度でヘモグロビン類を測定することができる。
【００５６】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、良好に溶血させることができるので、陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定したときに、ヘモグロビン類のピークを良好に得ることができる。また、得られる全てのピークにおいてショルダーピーク及びピーク割れ等が生じにくい。そのため、高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。また、本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、キャリーオーバーを少なくすることができる。そのため、多数の検体を連続測定した場合でも、高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。
【００５７】
また、検査センターでは、溶血試薬（ヘモグロビン類測定用試薬）と、被検査物質とを混合したあと、混合液が陽イオン交換クロマトグラフィーで測定されるまでに、一定期間（例えば数日程度）保存されることがある。本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、該試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性を高めることができる。なお、上記被検査物質には、血液等の赤血球含有検体（例えば、被検者の血液）だけではなく、赤血球を含まないヘモグロビン類含有検体（例えば、ヘモグロビン類標準物質及び測定管理用ヘモグロビン類物質等）も含まれる。本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、上記混合液が一定期間保存されても、保存前後でヘモグロビン類のピーク形状が変化しにくく、測定値が変動しにくい。
【００５８】
特に、本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬が、成分Ａ１’又は成分Ａ３’を含む場合には、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性をより一層高めることができ、また、ヘモグロビン類測定用試薬の保存安定性も高めることができる。
【００５９】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられる。上記ヘモグロビン類測定用試薬は、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられることが好ましい。
【００６０】
上記ヘモグロビン類としては、ヘモグロビンＡ１ａ、ヘモグロビンＡ１ｂ、ヘモグロビンＦ、ヘモグロビンＡ１ｃ、ヘモグロビンＡ０及びヘモグロビンＡ２等のヘモグロビン、アセチル化ヘモグロビン及びカルバミル化ヘモグロビン等の修飾ヘモグロビン、並びにヘモグロビンＳ及びヘモグロビンＣ等の異常ヘモグロビン等が挙げられる。
【００６１】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、上記ヘモグロビンＡ１ｃ値（ヘモグロビンＡ１ｃの濃度）を測定するために好適に用いられる。
【００６２】
図１は、本発明の一実施形態に係るヘモグロビン類測定用試薬を用いて陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する際に得られるクロマトグラムの例である。
【００６３】
図２は、従来のヘモグロビン類測定用試薬（成分Ｘを含む従来のヘモグロビン類測定用試薬）を用いて陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する際に得られるクロマトグラムの例である。
【００６４】
図１及び図２において、約１９秒に検出されたピークがヘモグロビンＡ１ｃのピークであり、約４０秒に検出されたピークがヘモグロビンＡ０のピークである。図１及び図２は、例えば、後述する実施例で測定された測定条件で測定した際のクロマトグラムの例である。
【００６５】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、成分Ｘを含む従来のヘモグロビン類測定用試薬と同等のピーク形状を得ることができる。
【００６６】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬では、ＲＥＡＣＨ規制の対象となっている成分を含まなくすることができるので、成分Ｘを含む従来のヘモグロビン類測定用試薬と比べて、環境への影響を小さくすることができ、安全性を高めることができる。
【００６７】
本発明に係るヘモグロビン類測定用試薬は、上記非イオン性界面活性剤を含んでいてもよく、上記両性界面活性剤を含んでいてもよく、上記非イオン性界面活性剤と上記両性界面活性剤との双方を含んでいてもよい。
【００６８】
（非イオン性界面活性剤）
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、非イオン性界面活性剤を含むことが好ましい。上記非イオン性界面活性剤は、成分Ａ１〜Ａ９のいずれかの成分である。上記非イオン性界面活性剤は、成分Ａ１〜Ａ９のうちの１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【００６９】
＜成分Ａ１＞
成分Ａ１は、オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテルである。成分Ａ１は、下記式（１）で表される成分である。成分Ａ１は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【００７０】
Ｒ−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ      ・・・（１）
【００７１】
上記式（１）中、Ｒは炭素数１２以上１７以下のアルキル基を表し、ｎは８以上２０以下の数を表す。
【００７２】
オキシエチレン基の平均付加モル数が８未満であり、かつアルキル基の炭素数が１２未満であるポリオキシエチレンアルキルエーテルでは、該界面活性剤が溶解しにくく、ヘモグロビン類測定用試薬を調製できないことがある。また、オキシエチレン基の平均付加モル数が８未満であり、かつアルキル基の炭素数が１２未満であるポリオキシエチレンアルキルエーテルでは、良好なピークが得られないことがある。また、オキシエチレン基の平均付加モル数が２０を超え、かつアルキル基の炭素数が１７を超えるポリオキシエチレンアルキルエーテルでは、良好なピークが得られなかったり、キャリーオーバーが生じたりすることがある。
【００７３】
界面活性剤の溶解性を高める観点、良好に溶血させ、高い精度でヘモグロビン類を測定する観点から、成分Ａ１におけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、好ましくは９以上、より好ましくは１０以上、更に好ましくは１１以上、好ましくは１９以下である。
【００７４】
本発明の効果を効果的に発揮する観点及びヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性を高める観点からは、成分Ａ１のアルキル基の炭素数は、好ましくは１７以下、より好ましくは１６以下であり、特に好ましくは１２又は１６である。なお、上記アルキル基の炭素数が１２である場合、成分Ａ１はポリオキシエチレンラウリルエーテルであり、上記アルキル基の炭素数が１６である場合、成分Ａ１はポリオキシエチレンセチルエーテルである。
【００７５】
したがって、成分Ａ１は、オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であるポリオキシエチレンラウリルエーテル、又はオキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であるポリオキシエチレンセチルエーテルであることが特に好ましい。
【００７６】
成分Ａ１がポリオキシエチレンラウリルエーテルである場合に、該ポリオキシエチレンラウリルエーテルにおけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、好ましくは９以上、より好ましくは１０以上、更に好ましくは１１以上、好ましくは１９以下、より好ましくは１６以下、更に好ましくは１３以下である。また、該ポリオキシエチレンラウリルエーテルにおけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、９、１２又は１９であることも好ましく、１２であることが最も好ましい。上記オキシエチレン基の平均付加モル数が上述の好ましい範囲又は値であると、界面活性剤の溶解性をより一層高めることができ、良好に溶血させ、より一層高い精度でヘモグロビン類を測定することができ、また、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性をより一層高めることができる。
【００７７】
成分Ａ１がポリオキシエチレンセチルエーテルである場合に、該ポリオキシエチレンセチルエーテルにおけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、好ましくは１０以上、より好ましくは１２以上、好ましくは１９以下、より好ましくは１６以下、更に好ましくは１４以下である。また、該ポリオキシエチレンセチルエーテルにおけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、１３又は２０であることも好ましく、１３であることが最も好ましい。上記オキシエチレン基の平均付加モル数が上述の好ましい範囲又は値であると、界面活性剤の溶解性をより一層高めることができ、良好に溶血させ、より一層高い精度でヘモグロビン類を測定することができ、また、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性をより一層高めることができる。
【００７８】
したがって、成分Ａ１は、オキシエチレン基の平均付加モル数が９、１２若しくは１９であるポリオキシエチレンラウリルエーテル、又はオキシエチレン基の平均付加モル数が１３若しくは２０であるポリオキシエチレンセチルエーテルであることが好ましい。また、成分Ａ１は、オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル、又はオキシエチレン基の平均付加モル数が１３であるポリオキシエチレンセチルエーテルであることが最も好ましい。
【００７９】
本発明の効果を効果的に発揮する観点、ヘモグロビン類測定用試薬の保存安定性及び該試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性を高める観点からは、成分Ａ１は、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテルであることが好ましい。すなわち、成分Ａ１は、成分Ａ１’であることが好ましい。
【００８０】
成分Ａ１のＨＬＢ（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｃ  Ｌｉｐｏｐｈｉｌｃ  Ｂａｌａｎｃｅ）値は、好ましくは１０以上、より好ましくは１２以上、好ましくは１８以下、より好ましくは１６以下である。上記ＨＬＢ値が上記下限以上であると、ミセルの発生を抑えることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。上記ＨＬＢ値が上記上限以下であると、血球成分の細胞膜を十分に溶解させることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。
【００８１】
成分Ａ１のＨＬＢ値、及び後述する各成分のＨＬＢ値は、グリフィン法によるＨＬＢ値を表す。ＨＬＢ値は、０以上２０以下の値をとり、ＨＬＢ値が小さいほど疎水性（親油性）が強く、ＨＬＢ値が大きいほど親水性が強い。グリフィン法によるＨＬＢ値は、下記式により算出される。
【００８２】
ＨＬＢ値＝２０×（親水基の分子量／分子量）
【００８３】
成分Ａ１の曇点は、好ましくは８０℃以上、より好ましくは９０℃以上、好ましくは１５０℃以下、より好ましくは１２０℃以下である。上記曇点が上記下限以上及び上記上限以下であると、界面活性剤の溶解性を高めることができ、ヘモグロビン類測定用試薬を良好に調製することができる。
【００８４】
なお、曇点とは、透明又は半透明な液体で温度変化によって相分離が起き、その結果、液体が不透明になる温度のことである。曇点は、一般に、下限臨界溶解温度と呼ばれることもある。
【００８５】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ１の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ１の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ１の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができ、また、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性をより一層高めることができる。
【００８６】
成分Ａ１の市販品としては、花王社製「エマルゲン１０９Ｐ」（オキシエチレン基の平均付加モル数９のポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（９）ラウリルエーテル）、花王社製「エマルゲン１２０」（オキシエチレン基の平均付加モル数１２のポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（１２）ラウリルエーテル）、花王社製「エマルゲン１４７」（オキシエチレン基の平均付加モル数１９のポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（１９）ラウリルエーテル）、花王社製「エマルゲン２２０」（オキシエチレン基の平均付加モル数１３のポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレン（１３）セチルエーテル）、及びＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製「Ｂｒｉｊ（登録商標）５８」（オキシエチレン基の平均付加モル数２０のポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテル）等が挙げられる。
【００８７】
＜成分Ａ２＞
成分Ａ２は、オキシエチレン基の平均付加モル数が４０以上６０以下であるポリオキシエチレンステアリルエーテルである。成分Ａ２は、下記式（２）で表される成分である。成分Ａ２は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【００８８】
Ｃ１８Ｈ３７Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ      ・・・（２）
【００８９】
上記式（２）中、ｎは４０以上６０以下の数を表す。
【００９０】
オキシエチレン基の平均付加モル数が４０未満であるポリオキシエチレンステアリルエーテルでは、該界面活性剤が溶解しにくく、ヘモグロビン類測定用試薬を調製できないことがある。また、オキシエチレン基の平均付加モル数が４０未満であるポリオキシエチレンステアリルエーテルでは、良好なピークが得られないことがある。また、オキシエチレン基の平均付加モル数が６０を超えるポリオキシエチレンステアリルエーテルでは、良好なピークが得られなかったり、キャリーオーバーが生じたりすることがある。
【００９１】
界面活性剤の溶解性を高める観点、良好に溶血させ、高い精度でヘモグロビン類を測定する観点から、成分Ａ２におけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、好ましくは４５以上、好ましくは５５以下である。界面活性剤の溶解性をより一層高める観点、より一層良好に溶血させ、より一層高い精度でヘモグロビン類を測定する観点から、成分Ａ２におけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、５０であることが最も好ましい。
【００９２】
成分Ａ２のＨＬＢ値は、好ましくは１３以上、より好ましくは１５以上、好ましくは１９以下、より好ましくは１８以下である。上記ＨＬＢ値が上記下限以上であると、ミセルの発生を抑えることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。上記ＨＬＢ値が上記上限以下であると、血球成分の細胞膜を十分に溶解させることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。
【００９３】
成分Ａ２のＨＬＢ値は、上述した方法で求めることができる。
【００９４】
成分Ａ２の曇点は、好ましくは８０℃以上、より好ましくは９０℃以上である。上記曇点が上記下限以上であると、界面活性剤の溶解性を高めることができ、ヘモグロビン類測定用試薬を良好に調製することができる。
【００９５】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ２の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ２の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ２の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【００９６】
成分Ａ２の市販品としては、花王社製「エマルゲン３５０」（オキシエチレン基の平均付加モル数５０のポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（５０）ステアリルエーテル）等が挙げられる。
【００９７】
＜成分Ａ３＞
成分Ａ３は、オキシエチレン基の平均付加モル数が９以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテルである。成分Ａ３は、下記式（３）で表される成分である。成分Ａ３は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【００９８】
Ｃ１８Ｈ３５Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ      ・・・（３）
【００９９】
上記式（３）中、ｎは９以上１５以下の数を表す。
【０１００】
オキシエチレン基の平均付加モル数が９未満であるポリオキシエチレンオレイルエーテルでは、該界面活性剤が溶解しにくく、ヘモグロビン類測定用試薬を調製できないことがある。また、オキシエチレン基の平均付加モル数が９未満であるポリオキシエチレンオレイルエーテルでは、良好なピークが得られないことがある。また、オキシエチレン基の平均付加モル数が１５を超えるポリオキシエチレンオレイルエーテルでは、良好なピークが得られなかったり、キャリーオーバーが生じたりすることがある。
【０１０１】
界面活性剤の溶解性を高める観点、良好に溶血させ、高い精度でヘモグロビン類を測定する観点から、成分Ａ３におけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、好ましくは１４以下である。界面活性剤の溶解性をより一層高める観点、より一層良好に溶血させ、より一層高い精度でヘモグロビン類を測定する観点から、成分Ａ３におけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、９又は１３であることが特に好ましく、１３であることが最も好ましい。
【０１０２】
本発明の効果を効果的に発揮する観点、ヘモグロビン類測定用試薬の保存安定性及び該試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性を高める観点からは、成分Ａ３は、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテルであることが好ましい。すなわち、成分Ａ３は、成分Ａ３’であることが好ましい。
【０１０３】
成分Ａ３のＨＬＢ値は、好ましくは１０以上、より好ましくは１２以上、好ましくは１７以下、より好ましくは１５以下である。上記ＨＬＢ値が上記下限以上であると、ミセルの発生を抑えることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。上記ＨＬＢ値が上記上限以下であると、血球成分の細胞膜を十分に溶解させることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。
【０１０４】
成分Ａ３のＨＬＢ値は、上述した方法で求めることができる。
【０１０５】
成分Ａ３の曇点は、好ましくは５０℃以上、より好ましくは８５℃以上、好ましくは１００℃以下、より好ましくは９５℃以下である。上記曇点が上記下限以上及び上記上限以下であると、界面活性剤の溶解性を高めることができ、ヘモグロビン類測定用試薬を良好に調製することができる。
【０１０６】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ３の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ３の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ３の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１０７】
成分Ａ３の市販品としては、花王社製「エマルゲン４０９ＰＶ」（オキシエチレン基の平均付加モル数９のポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレン（９）オレイルエーテル）、及び花王社製「エマルゲン４２０」（オキシエチレン基の平均付加モル数１３のポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレン（１３）オレイルエーテル）等が挙げられる。
【０１０８】
＜成分Ａ４＞
成分Ａ４は、オキシエチレン基の平均付加モル数が６以上１０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテルである。成分Ａ４は、下記式（４）で表される成分である。成分Ａ４は、炭素数が１１以上１５以下である第２級アルコールのエチレンオキシドの付加物である。成分Ａ４は、成分Ａ１とは異なる。成分Ａ４は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１０９】
ＣｍＨ２ｍ＋１Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ      ・・・（４）
【０１１０】
上記式（４）中、ｍは１１以上１５以下の数を表し、ｎは６以上１０以下の数を表す。
【０１１１】
オキシエチレン基の平均付加モル数が６未満であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテルでは、該界面活性剤が溶解しにくく、ヘモグロビン類測定用試薬を調製できないことがある。また、オキシエチレン基の平均付加モル数が６未満であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテルでは、良好なピークが得られないことがある。
【０１１２】
界面活性剤の溶解性を高める観点、良好に溶血させ、高い精度でヘモグロビン類を測定する観点から、成分Ａ４におけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、好ましくは７以上、好ましくは９以下であり、７又は９であることがより好ましい。
【０１１３】
成分Ａ４のＨＬＢ値は、好ましくは１０以上、より好ましくは１２以上、好ましくは１７以下、より好ましくは１５以下である。上記ＨＬＢ値が上記下限以上であると、ミセルの発生を抑えることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。上記ＨＬＢ値が上記上限以下であると、血球成分の細胞膜を十分に溶解させることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。
【０１１４】
成分Ａ４のＨＬＢ値は、上述した方法で求めることができる。
【０１１５】
成分Ａ４の曇点は、好ましくは３０℃以上、好ましくは６０℃以下である。上記曇点が上記下限以上及び上記上限以下であると、界面活性剤の溶解性を高めることができ、ヘモグロビン類測定用試薬を良好に調製することができる。
【０１１６】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ４の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ４の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ４の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１１７】
成分Ａ４の市販品としては、花王社製「エマルゲン７０７」（オキシエチレン基の平均付加モル数７、かつアルキル基の炭素数１１以上１５以下のポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテル）、及び花王社製「エマルゲン７０９」（オキシエチレン基の平均付加モル数９、かつアルキル基の炭素数１１以上１５以下のポリオキシエチレン−ｓｅｃ−アルキルエーテル）等が挙げられる。
【０１１８】
＜成分Ａ５＞
成分Ａ５は、オキシエチレン基の平均付加モル数が１５であるポリオキシエチレントリデシルエーテルである。成分Ａ５は、下記式（５）で表される成分である。成分Ａ５は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１１９】
Ｃ１３Ｈ２７Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１５Ｈ      ・・・（５）
【０１２０】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ５の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ５の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ５の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１２１】
成分Ａ５の市販品としては、ライオン社製「レオコールＴＤ−１５０」等が挙げられる。
【０１２２】
＜成分Ａ６＞
成分Ａ６は、ＨＬＢ値が１１以上１５以下であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルである。ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルは、オキシプロピレン基とオキシエチレン基とを有する。成分Ａ６は、下記式（６）で表される成分である。成分Ａ６は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１２３】
Ｒ−（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ）ｍ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨ      ・・・（６）
【０１２４】
上記式（６）中、Ｒはアルキル基を表し、ｍは１以上の数を表し、ｎは１以上の数を表す。
【０１２５】
成分Ａ６のＨＬＢ値は、好ましくは１１．５以上、より好ましくは１２以上、好ましくは１４．５以下である。上記ＨＬＢ値が上記下限以上であると、ミセルの発生を抑えることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。上記ＨＬＢ値が上記上限以下であると、血球成分の細胞膜を十分に溶解させることができ、カラムの目詰まりを効果的に抑えることができる。本発明の効果をより一層効果的に発揮する観点及びカラムの目詰まりをより一層効果的に抑える観点からは、成分Ａ６のＨＬＢ値は、１２．５、１２．７又は１４．０であることが好ましい。
【０１２６】
成分Ａ６のＨＬＢ値は、上述した方法で求めることができる。
【０１２７】
成分Ａ６の曇点は、好ましくは３０℃以上、より好ましくは５０℃以上、好ましくは９５℃以下、より好ましくは９０℃以下である。上記曇点が上記下限以上及び上記上限以下であると、界面活性剤の溶解性を高めることができ、ヘモグロビン類測定用試薬を良好に調製することができる。
【０１２８】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ６の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ６の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ６の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１２９】
成分Ａ６の市販品としては、花王社製「エマルゲンＬＳ−１０６」（ＨＬＢ値１２．５のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル)、花王社製「エマルゲンＬＳ−１１４」（ＨＬＢ値１４．０のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキル（Ｃ１２−１４）エーテル）、及び花王社製「エマルゲンＭＳ−１１０」（ＨＬＢ値１２．７のポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル）等が挙げられる。
【０１３０】
＜成分Ａ７＞
成分Ａ７は、ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンである。
【０１３１】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ７の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ７の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ７の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１３２】
成分Ａ７の市販品としては、同仁化学社製「ＭＥＧＡ−９」等が挙げられる。
【０１３３】
＜成分Ａ８＞
成分Ａ８は、ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０１３４】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ８の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ８の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ８の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１３５】
成分Ａ８の市販品としては、同仁化学社製「ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド」等が挙げられる。
【０１３６】
＜成分Ａ９＞
成分Ａ９は、サポニンである。成分Ａ９は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１３７】
成分Ａ９は、大豆サポニンであることが好ましく、下記式（９）で表される大豆サポニンであることがより好ましい。
【０１３８】
【化１】
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【０１３９】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ９の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ａ９の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ａ９の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１４０】
成分Ａ９の市販品としては、ナカライテスク社製「サポニン」等が挙げられる。
【０１４１】
（両性界面活性剤）
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、両性界面活性剤を含むことが好ましい。上記界面活性剤は、成分Ｂ１〜Ｂ３のいずれかの成分である。上記両性界面活性剤は、成分Ｂ１〜Ｂ３のうちの１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１４２】
＜成分Ｂ１＞
成分Ｂ１は、３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）である。
【０１４３】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ｂ１の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ｂ１の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ｂ１の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１４４】
成分Ｂ１の市販品としては、同仁化学社製「ＣＨＡＰＳ」等が挙げられる。
【０１４５】
＜成分Ｂ２＞
成分Ｂ２は、３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシプロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳＯ）である。
【０１４６】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ｂ２の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ｂ２の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ｂ２の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１４７】
成分Ｂ２の市販品としては、同仁化学社製「ＣＨＡＰＳＯ」等が挙げられる。
【０１４８】
＜成分Ｂ３＞
成分Ｂ３は、ラウリルジメチルアミンオキサイドである。
【０１４９】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ｂ３の含有量は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ｂ３の含有量は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。成分Ｂ３の含有量が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１５０】
成分Ｂ３の市販品としては、花王社製「アンヒトール２０Ｎ」等が挙げられる。
【０１５１】
（緩衝剤）
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、緩衝剤を含むことが好ましい。上記緩衝剤を含むことにより、ｐＨの変動を抑えることができる。上記緩衝剤は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１５２】
上記緩衝剤としては、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素二カリウム及びリン酸二水素カリウム等のリン酸塩、炭酸ナトリウム及び炭酸水素ナトリウム等の炭酸塩、ホウ酸ナトリウム等のホウ酸塩、カルボン酸、ジカルボン酸、カルボン酸誘導体、ヒドロキシカルボン酸、アニリン、アニリン誘導体、アミノ酸、アミン化合物、イミダゾール化合物、アルコール化合物、エチレンジアミン四酢酸、ピロリン酸、ピリジン、カコジル酸、グリセロールリン酸、２，４，６−コリジン、Ｎ−エチルモルホリン、モルホリン、４−アミノピリジン、アンモニア、エフェドリン、ヒドロキシプロリン、ピペリジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、並びにグリシルグリシン等が挙げられる。
【０１５３】
上記ヘモグロビン類測定用試薬のｐＨを後述する好ましい範囲に維持する観点からは、上記緩衝剤は、リン酸塩であることが好ましい。
【０１５４】
上記ヘモグロビン類測定用試薬中の上記緩衝剤の含有量は、緩衝作用を発揮できる含有量であれば特に限定されない。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、上記緩衝剤の含有量は、０．０１重量％以上であってもよく、０．０２重量％以上であってもよく、０．２重量％以下であってもよく、０．１重量％以下であってもよい。
【０１５５】
（無機塩類）
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、無機塩類を含むことが好ましい。上記無機塩類を含むことにより、浸透圧を良好に調整することができる。上記無機塩類は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１５６】
上記無機塩類としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、及び硫酸カリウム等が挙げられる。
【０１５７】
上記ヘモグロビン類測定用試薬の浸透圧を後述する好ましい範囲に維持する観点からは、上記無機塩類は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、又は硫酸カリウムであることが好ましく、塩化ナトリウムであることがより好ましい。
【０１５８】
上記ヘモグロビン類測定用試薬中の上記無機塩類の含有量は、特に限定されない。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、上記無機塩類の含有量は、０．１重量％以上であってもよく、１．０重量％以下であってもよい。
【０１５９】
（水）
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、水を含むことが好ましい。
【０１６０】
上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、上記水の含有量は、好ましくは８０重量％以上、より好ましくは９０重量％以上、更に好ましくは９５重量％以上である。
【０１６１】
（その他の成分）
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、上述した成分以外の他の成分を含んでいてもよい。上記他の成分としては、防腐剤、ヘモグロビン安定剤、及びｐＨ調整剤等が挙げられる。上記他の成分はそれぞれ、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【０１６２】
上記防腐剤としては、アジ化ナトリウム、チモール、及びプロピオン酸ナトリウム等が挙げられる。
【０１６３】
上記ヘモグロビン安定剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤、及びグルタチオン等が挙げられる。
【０１６４】
上記ｐＨ調整剤としては、塩酸、リン酸、硝酸、及び硫酸等の酸、並びに、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、水酸化バリウム、及び水酸化カルシウム等の塩基が挙げられる。
【０１６５】
（ヘモグロビン類測定用試薬の他の詳細）
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、上記非イオン性界面活性剤を含むことが好ましく、上記非イオン性界面活性剤として成分Ａ１、成分Ａ２、成分Ａ３、成分Ａ４、成分Ａ５又は成分Ａ６を含むことがより好ましく、成分Ａ１、又は成分Ａ３を含むことが更に好ましく、成分Ａ１’、又は成分Ａ３’を含むことが特に好ましい。この場合には、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。また、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性をより一層高めることができる。
【０１６６】
上記ヘモグロビン類測定用試薬が、上記非イオン性界面活性剤を含む場合に、上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、上記非イオン性界面活性剤の含有量（成分Ａ１〜Ａ９の合計の含有量）は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、上記非イオン性界面活性剤の含有量（成分Ａ１〜Ａ９の合計の含有量）は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。上記非イオン性界面活性剤の含有量（成分Ａ１〜Ａ９の合計の含有量）が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。また、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性をより一層高めることができる。
【０１６７】
上記ヘモグロビン類測定用試薬が、上記両性界面活性剤を含む場合に、上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、上記両性界面活性剤の含有量（成分Ｂ１〜Ｂ３の合計の含有量）は、好ましくは０．０１重量％以上、より好ましくは０．０５重量％以上、更に好ましくは０．０８重量％以上、特に好ましくは０．１重量％以上である。上記ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、上記両性界面活性剤の含有量（成分Ｂ１〜Ｂ３の合計の含有量）は、好ましくは１．０重量％以下、より好ましくは０．８重量％以下、更に好ましくは０．６重量％以下、特に好ましくは０．５重量％以下である。上記両性界面活性剤の含有量（成分Ｂ１〜Ｂ３の合計の含有量）が上記下限以上及び上記上限以下であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮することができる。
【０１６８】
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、成分Ｘを含まないことが好ましい。本発明では、成分Ｘを含まなくても、本発明の効果を発揮させることができる。また、本発明では、成分Ｘを含まなくても、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性を高めることができる。ただし、上記ヘモグロビン類測定用試薬は、成分Ｘを含んでいてもよい。例えば、上記ヘモグロビン類測定用試薬は、成分Ｘを、ＲＥＡＣＨ規制の対象とならない濃度（ヘモグロビン類測定用試薬１００重量％中、成分Ｘの含有量が０．１重量％未満）で含んでいてもよい。
【０１６９】
上記ヘモグロビン類測定用試薬のｐＨは、好ましくは６．０以上、より好ましくは７．０以上、好ましくは８．５以下、より好ましくは８．０以下である。上記ｐＨが上記下限以上及び上記上限以下であると、より一層良好に溶血させることができる。
【０１７０】
上記ヘモグロビン類測定用試薬の浸透圧は、好ましくは５０ｍＯｓｍ以上、より好ましくは７５ｍＯｓｍ以上、好ましくは２００ｍＯｓｍ以下、より好ましくは１５０ｍＯｓｍ以下である。上記浸透圧が上記下限以上及び上記上限以下であると、より一層良好に溶血させることができる。
【０１７１】
上記浸透圧は、浸透圧計（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製「オズモメーター３２５０」）を用いて測定することができる。
【０１７２】
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、赤血球を溶血させるために好適に用いられる。上記ヘモグロビン類測定用試薬は、溶血試薬であることが好ましい。
【０１７３】
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、被検査物質と混合されて好適に用いられる。上記被検査物質としては、血液等の赤血球含有検体、ヘモグロビン類標準物質、及び測定管理用ヘモグロビン類物質等が挙げられる。
【０１７４】
上記ヘモグロビン類測定用試薬は、赤血球を含まず、かつヘモグロビンの濃度が既知である検体（ヘモグロビン類標準物質、及び測定管理用ヘモグロビン類物質等）を溶解又は希釈する希釈液として好適に用いられる。さらに、上記ヘモグロビン類測定用試薬は、液体クロマトグラフの洗浄液及びカラムの洗浄液としても好適に用いられる。
【０１７５】
（ヘモグロビン類の測定方法）
本発明に係るヘモグロビン類の測定方法は、赤血球含有検体と、上述したヘモグロビン類測定用試薬とを混合して混合液を得る工程と、上記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する工程とを備える。
【０１７６】
上記陽イオン交換液体クロマトグラフィーは、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィーであることが好ましい。
【０１７７】
上記赤血球含有検体としては、血液等が挙げられる。
【０１７８】
一般に、上記陽イオン交換液体クロマトグラフィーにおいては、患者等から採取した血液（赤血球含有検体）から調製された混合液に加えて、赤血球を含まず、かつ測定対象のヘモグロビン類の濃度が既知である検体から調製された混合液も測定される。上記赤血球を含まず、かつ測定対象のヘモグロビン類の濃度が既知である検体としては、測定対象のヘモグロビン類標準物質（測定対象の既知濃度のヘモグロビン類）、測定対象の測定管理用ヘモグロビン類物質（測定対象の既知濃度のヘモグロビン類、好ましくは低濃度、中濃度、高濃度等の複数濃度を測定）等が挙げられる。上記ヘモグロビン類標準物質及び上記測定管理用ヘモグロビン類物質は、好ましくは用時調製検体、凍結乾燥検体又は凍結検体である。また、上記ヘモグロビン類標準物質及び上記測定管理用ヘモグロビン類物質は、凍結乾燥品又は凍結品として市販されている。
【０１７９】
上記ヘモグロビン類の測定方法では、例えば、以下のようにしてヘモグロビン類の濃度を求めることが好ましい。（１）上記赤血球含有検体と、上記ヘモグロビン類測定用試薬とを混合して混合液を得る。（２）上記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する。（３）測定対象のヘモグロビン類のピーク面積の、ヘモグロビンのピーク面積の合計に対する比（測定対象のヘモグロビン類のピーク面積／ヘモグロビンのピーク面積の合計）を測定対象のヘモグロビン値（ヘモグロビン類の濃度）とする。例えば、ヘモグロビンＡ１ｃ値を求める場合には、上記（３）において、ヘモグロビンＡ１ｃのピーク面積の、ヘモグロビンのピーク面積の合計に対する比（ヘモグロビンＡ１ｃのピーク面積／ヘモグロビンのピーク面積の合計）をヘモグロビンＡ１ｃ値とする。
【０１８０】
上記ヘモグロビン類の測定方法では、例えば、以下のようにしてヘモグロビン類の濃度を求めることもできる。（１）上記赤血球含有検体と、上記ヘモグロビン類測定用試薬とを混合して第１の混合液を得る。（２）測定対象のヘモグロビン類の濃度が既知であるヘモグロビン類含有検体と、上記ヘモグロビン類測定用試薬とを混合して第２の混合液を得る。（３）上記第１の混合液及び上記第２の混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する。（４）測定対象のヘモグロビン類の濃度が既知である上記ヘモグロビン類含有検体を含む上記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定して得られた測定値と、上記赤血球含有検体を含む上記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定して得られた測定値とを比較することで、上記赤血球含有検体中のヘモグロビン類の濃度を決定する。
【０１８１】
より一層良好に溶血させる観点からは、上記赤血球含有検体１ｍＬに対して、上記ヘモグロビン類測定用試薬を、好ましくは２５ｍＬ以上、より好ましくは５０ｍＬ以上、好ましくは４００ｍＬ以下、より好ましくは２００ｍＬ以下で混合することが好ましい。
【０１８２】
上記陽イオン交換液体クロマトグラフィーは、塩濃度のグラジエント又はｐＨのグラジエントで測定されることが好ましい。上記グラジエントは、リニアグラジエントであってもよく、ステップグラジエントであってもよい。
【０１８３】
上記グラジエントの測定では、２種以上の溶離液が用いられることが好ましい。上記塩濃度のグラジエントで測定する場合には、上記溶離液として、低塩濃度の溶離液及び高塩濃度の溶離液（例えば、ＮａＣｌ濃度が５０ｍＭである溶離液及びＮａＣｌ濃度が２００ｍＭである溶離液）を用いることができる。上記ｐＨグラジエントで測定する場合には、ｐＨの異なる２種の溶離液（例えば、ｐＨ５．４の溶離液とｐＨ８．０の溶離液）を用いることができる。また、上記溶離液として、市販品を用いることもできる。上記溶離液の市販品としては、アークレイ社製「溶離液８０Ａ」、「溶離液８０Ｂ」、「溶離液６０Ａ−ＶＰ／ＴＰ」、「溶離液６０Ｂ−ＶＰ／ＴＰ」、及び「溶離液６０Ｃ−ＶＰ」等が挙げられる。
【０１８４】
上記陽イオン交換液体クロマトグラフィーで用いられる陽イオン交換カラムとして、従来公知の陽イオン交換カラムを用いることができる。上記陽イオン交換カラムは、カルボキシル基、スルホン酸基、又はリン酸基等のカチオン交換基を有する充填剤が充填されたカラムであることが好ましい。陽イオン交換カラムの市販品としては、例えば、アークレイ社製「カラムユニット８０」及び「カラムユニットＨＳＶＩ−ＶＰ」等が挙げられる。
【０１８５】
以下、実施例、参考例及び比較例を挙げることにより、本発明を具体的に説明する。本発明は、以下の実施例に限定されない。
【０１８６】
（実施例１〜３０、参考例Ａ及び比較例１〜６９）
ヘモグロビン類測定用試薬の調製：
リン酸二水素カリウムと、リン酸水素二カリウムと、塩化ナトリウムと、アジ化ナトリウムと、水とを混合し第１の組成物を得た。得られた第１の組成物に、表２〜６に示す界面活性剤を添加して混合し、ヘモグロビン類測定用試薬を調製した。得られたヘモグロビン類測定用試薬の組成を以下の表１に示す。表１中の界面活性剤の種類、含有量、ＨＬＢ値及び曇点は、表２〜６に示した。なお、界面活性剤のＨＬＢ値は、上述した方法で測定された値である。
【０１８７】
【表１】
2020046435.tif 000004
【０１８８】
（評価）
（１）界面活性剤の溶解性
上記第１の組成物に界面活性剤を添加して混合した際の界面活性剤の溶解性を目視にて確認した。界面活性剤の溶解性を以下の基準で判定した。
【０１８９】
［界面活性剤の溶解性の判定基準］
○○：界面活性剤が１５分未満で完全に溶解する
○：界面活性剤が１５分以上３０分未満で完全に溶解する
△：界面活性剤が３０分以上１時間未満で完全に溶解する
×：界面活性剤が１時間以上で完全に溶解する、又は溶解しない
【０１９０】
（２）陽イオン交換液体クロマトグラフィーによる測定
採血管（積水メディカル社製）に収容された全血（赤血球含有検体）を用意した。全血１ｍＬに対して、得られたヘモグロビン類測定用試薬１００ｍＬを混合し、混合液を得た。得られた混合液を以下の条件で測定した。なお、「（１）界面活性剤の溶解性」の判定結果が×であるヘモグロビン類測定用試薬では、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによる測定を行わなかった。
【０１９１】
陽イオン交換クロマトグラフィー条件：
ＨＰＬＣ装置：グリコヘモグロビン分析装置（アークレイ社製「ＨＡ−８１８０」）
陽イオン交換カラム：カラムユニット８０（アークレイ社製）
溶離液Ａ：溶離液８０Ａ(アークレイ社製)
溶離液Ｂ：溶離液８０Ｂ(アークレイ社製)
【０１９２】
ＨＰＬＣ装置に搭載されている測定メソッドを用いて、測定を行った。
【０１９３】
（２−１）ピーク分離パターン
混合液を測定して得られたクロマトグラムについて、以下のｉ）〜ｉｉｉ）を確認した。なお、参考例Ａでは、図２に示すクロマトグラムのピークパターンが得られた。得られるクロマトグラムにおいて、約１９秒に検出されたピークがヘモグロビンＡ１ｃのピークであり、約４０秒に検出されたピークがヘモグロビンＡ０のピークである。
【０１９４】
ｉ）ヘモグロビンＡ１ｃピークの分離
参考例Ａで得られたヘモグロビンＡ１ｃのピーク高さと、実施例及び比較例で得られたヘモグロビンＡ１ｃのピーク高さとを比較した。参考例Ａで得られたヘモグロビンＡ１ｃのピーク高さに対して、得られたヘモグロビンＡ１ｃのピーク高さが吸光度基準で５０以上低下していない場合に、ヘモグロビンＡ１ｃピークの分離が良好と判定し、５０を超えて低下している場合に不良と判定した。
【０１９５】
ｉｉ）ヘモグロビンＡ０ピークの形状
参考例Ａでは、ヘモグロビンＡ０ピークのピークテール部分において、ピークは検出されない。実施例及び比較例で得られたヘモグロビンＡ０ピークのピークテールの形状を確認した。このピークテール部分において、ピークが検出されてない場合に、ヘモグロビンＡ０ピークの形状が良好と判定し、ピークが検出された場合に不良と判定した。
【０１９６】
なお、良好と判定されるクロマトグラムの例を図３（ａ）に示し、不良と判定されるクロマトグラムの例を図３（ｂ）に示した。
【０１９７】
ｉｉｉ）ファーストフラクションのピーク形状
参考例Ａでは、ファーストフラクションのピークにおいて、ショルダーピークは検出されない。実施例及び比較例で得られたファーストフラクションのピーク形状を確認した。このファーストフラクションのピークにおいて、ショルダーピークが検出されてない場合に、ファーストフラクションのピーク形状が良好と判定し、ショルダーピークが検出された場合に不良と判定した。
【０１９８】
なお、良好と判定されるクロマトグラムの例を図４（ａ）に示し、不良と判定されるクロマトグラムの例を図４（ｂ）に示した。図４（ｂ）において矢印で示したピークがショルダーピークである。
【０１９９】
［ピーク分離パターンの判定基準］
○：ｉ）〜ｉｉｉ）の判定が全て良好
×：ｉ）〜ｉｉｉ）の判定のいずれかが不良
【０２００】
（２−２）キャリーオーバー
全血とヘモグロビン類測定用試薬とを混合した混合液を測定した後に続けて、ヘモグロビン類測定用試薬のみを５回連続して測定した。得られたクロマトグラムについて、以下のｉ）〜ｉｉｉ）を確認した。
【０２０１】
ｉ）ヘモグロビンＡ０ピーク高さ
１回目のヘモグロビン類測定用試薬の測定において、参考例Ａで得られたヘモグロビンＡ０のピーク高さと、実施例及び比較例で得られたヘモグロビンＡ０のピーク高さとを比較した。参考例Ａで得られたヘモグロビンＡ０のピーク高さに対して、得られたヘモグロビンＡ０のピーク高さが吸光度基準で１００以上増加していない場合に良好と判定し、１００を超えて増加している場合に不良と判定した。
【０２０２】
なお、参考例Ａで得られたクロマトグラムの例を図５（ａ）に示し、良好と判定されるクロマトグラムの例を図５（ｂ）に示し、不良と判定されるクロマトグラムの例を図５（ｃ）に示した。
【０２０３】
ｉｉ）ヘモグロビンＡ１ｃピークの有無
１回目のヘモグロビン類測定用試薬の測定において、ヘモグロビンＡ１ｃピークの有無を確認した。ヘモグロビンＡ１ｃピークが観察されない場合に良好と判定し、ヘモグロビンＡ１ｃピークが観察される場合に不良と判定した。
【０２０４】
ｉｉｉ）ドリフトの発生の有無
１回目のヘモグロビン類測定用試薬の測定において、ヘモグロビンＡ０ピークのドリフトの有無を確認した。ドリフトが観察されない場合に良好と判定し、ドリフトが観察される場合に不良と判定した。
【０２０５】
［キャリーオーバーの判定基準］
○：ｉ）〜ｉｉｉ）の判定が全て良好
×：ｉ）〜ｉｉｉ）の判定のいずれかが不良
【０２０６】
（３）ｐＨ
参考例Ａ及び実施例で得られたヘモグロビン類測定用試薬のｐＨを、ｐＨ計（堀場製作所社製「Ｆ−５２」）を用いて測定した。
【０２０７】
（４）浸透圧
参考例Ａ及び実施例で得られたヘモグロビン類測定用試薬の浸透圧を、浸透圧計（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製「オズモメーター３２５０」）を用いて測定した。
【０２０８】
組成及び結果を下記の表２〜６に示す。なお、表２，３，５中、「Ｅ．Ｏ．」で表される値は、オキシエチレン基の平均付加モル数を意味する。
【０２０９】
【表２】
2020046435.tif 000005
【０２１０】
【表３】
2020046435.tif 000006
【０２１１】
【表４】
2020046435.tif 000007
【０２１２】
【表５】
2020046435.tif 000008
【０２１３】
【表６】
2020046435.tif 000009
【０２１４】
実施例１〜３０で得られたヘモグロビン類測定用試薬では、良好に溶血させることができ、かつ高い精度でヘモグロビン類を測定することができていることが理解できる。
【０２１５】
（参考例Ａ及び実施例３１〜３８）
表７に示す組成に変更したこと以外は、実施例１と同様にしてヘモグロビン類測定用試薬を調製した。
【０２１６】
（５）ヘモグロビン類測定用試薬の保存安定性
参考例Ａ及び界面活性剤の濃度が０．５重量％である実施例３２，３４，３６〜３８で得られたヘモグロビン類測定用試薬をそれぞれ、ガラス製バイアル瓶に密封し、６０℃で７日間保存した。保存後、目視にて、ヘモグロビン類測定用試薬の性状を確認した。
【０２１７】
一般に、ヘモグロビン類測定用試薬は室温で保存されるものである。本評価項目では、通常の保存条件よりも苛酷な温度条件でヘモグロビン類測定用試薬を保存し評価している。
【０２１８】
［ヘモグロビン類測定用試薬の保存安定性（６０℃、７日間）の判定基準］
Ａ：相分離が生じない
Ｂ：相分離が生じる
【０２１９】
（６）混合液の保存安定性
（６−１）全血との混合液の保存安定性
全血（赤血球含有検体）を用意した。また、参考例Ａ及び実施例３１〜３６で得られたヘモグロビン類測定用試薬を用意した。全血を、ヘモグロビン類測定用試薬で１０１倍希釈し、混合液を得た。得られた混合液を、ガラス製バイアル瓶に収容し、４℃で保存した。保存前、保存後１日目，２日目，５日目，７日目，９日目に、「（２）陽イオン交換液体クロマトグラフィーによる測定」に記載の測定条件で混合液を繰り返し３回測定し、その平均値からヘモグロビンＡ１ｃ値及びヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量を求めた。
【０２２０】
ヘモグロビンＡ１ｃ値（％）＝ヘモグロビンＡ１ｃのピーク面積／ヘモグロビンのピーク面積の合計
【０２２１】
ヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量（％）＝保存前のヘモグロビンＡ１ｃ値−保存後のヘモグロビンＡ１ｃ値
【０２２２】
図６（ａ）は全血との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値との関係を示す図である。図６（ｂ）は、全血との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量との関係を示す図である。
【０２２３】
［全血との混合液の判定基準］
○：５日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．２％以下である
△：５日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．２％を超え０．４％以下である
△△：５日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．４％を超え０．７％以下である
×：５日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．７％を超える
【０２２４】
（６−２）測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）との混合液の保存安定性
ヘモグロビンＡ１ｃ値が５．８％である測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）を用意した。また、参考例Ａ及び実施例３１〜３６で得られたヘモグロビン類測定用試薬を用意した。測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）を、ヘモグロビン類測定用試薬で１０１倍希釈し、混合液を得た。得られた混合液を、ガラス製バイアル瓶に収容し、４℃で保存した。保存前、保存後１日目，２日目，３日目，９日目，１４日目に、「（２）陽イオン交換液体クロマトグラフィーによる測定」での測定条件で混合液を繰り返し３回測定し、その平均値から上記と同様にしてヘモグロビンＡ１ｃ値及びヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量を求めた。
【０２２５】
図７（ａ）は測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値との関係を示す図である。図７（ｂ）は、測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量との関係を示す図である。
【０２２６】
［測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）との混合液の保存安定性の判定基準］
○：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．２％以下である
△：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．２％を超え０．４％以下である
△△：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．４％を超え０．７％以下である
×：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．７％を超える
【０２２７】
（６−３）測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）との混合液の保存安定性
測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）を、ヘモグロビンＡ１ｃ値が１０．４％である測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）に変更したこと以外は、「（６−２）測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（低濃度）（ＩＲＣ−Ｌ）との混合液の保存安定性」と同様にして、ヘモグロビンＡ１ｃ値及びヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量を求めた。
【０２２８】
図８（ａ）は測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値との関係を示す図である。図８（ｂ）は、測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）との混合液における、保存日数とヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量との関係を示す図である。
【０２２９】
［測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）との混合液の保存安定性の判定基準］
○：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．２５％以下である
△：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．２５％を超え０．４５％以下である
△△：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．４５％を超え０．７５％以下である
×：１４日目のヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量において、参考例Ａとの差の絶対値が０．７５％を超える
【０２３０】
組成及び結果を下記の表７に示す。
【０２３１】
【表７】
2020046435.tif 000010
【０２３２】
実施例３１〜３６で得られたヘモグロビン類測定用試薬では、実施例３７，３８で得られたヘモグロビン類測定用試薬と比べて、該試薬の保存安定性を高めることができた。また、実施例３１〜３６で得られたヘモグロビン類測定用試薬では、該試薬と被検査物質とが混合された混合液の保存安定性も高めることができた。実施例３１〜３６で得られたヘモグロビン類測定用試薬では、ヘモグロビン類測定用試薬と被検査物質とが混合された混合液を長期間保存した後であっても、高い精度でヘモグロビン類を測定することができる。
【０２３３】
（７）カラム耐久性
全血（赤血球含有検体）と、ヘモグロビンＡ１ｃ値が１０．４％である測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質（高濃度）（ＩＲＣ−Ｈ）と、参考例Ａ及び実施例３２で得られたヘモグロビン類測定用試薬とを用意した。全血を、ヘモグロビン類測定用試薬で１０１倍希釈し、液（１）を得た。また、測定管理用ヘモグロビンＡ１ｃ物質を、ヘモグロビン類測定用試薬で１０１倍希釈し、液（２）を得た。液（１）は、カラムに負荷を与えるための測定試料であり、液（２）は、ヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量及び理論段数の変化量を確認するための測定試料である。得られた液（１）及び液（２）を以下の手順及び条件で測定した。
【０２３４】
先ず、得られた液（２）を３回測定した。その後、得られた液（１）を複数回（数十回〜２００回）カラムに通すごとに液（２）を３回測定した。カラムへの負荷検体数が約３０００検体となるまで、上記の手順に従って液（１）及び液（２）を繰り返し測定した。
【０２３５】
陽イオン交換クロマトグラフィー条件：
ＨＰＬＣ装置：グリコヘモグロビン分析装置（アークレイ社製「ＨＡ−８１６０ＶＰ」）
陽イオン交換カラム：カラムユニットＨＳＶＩ−ＶＰ（アークレイ社製）
溶離液Ａ：溶離液６０Ａ−ＶＰ／ＴＰ（アークレイ社製）
溶離液Ｂ：溶離液６０Ｂ−ＶＰ／ＴＰ（アークレイ社製）
溶離液Ｃ：溶離液６０Ｃ−ＶＰ（アークレイ社製）
【０２３６】
ＨＰＬＣ装置に搭載されている測定メソッドを用いて、測定を行った。
【０２３７】
図９（ａ）はカラムへの負荷検体数と、ヘモグロビンＡ１ｃ値の変化量との関係を示す図である。図９（ｂ）はカラムへの負荷検体数と、理論段数の変化量との関係を示す図である。
【０２３８】
図９（ａ）において、縦軸は、最初に測定した液（２）におけるヘモグロビンＡ１ｃ値と、各負荷検体数で測定した液（２）におけるヘモグロビンＡ１ｃ値との差（最初に測定した液（２）におけるヘモグロビンＡ１ｃ値−各負荷検体数で測定した液（２）におけるヘモグロビンＡ１ｃ値）である。図９（ｂ）において、縦軸は、最初に測定した液（２）における理論段数と、各負荷検体数で測定した液（２）における理論段数との差（最初に測定した液（２）における理論段数−各負荷検体数で測定した液（２）における理論段数）である。
【０２３９】
実施例３２で得られたヘモグロビン類測定用試薬は、参考例Ａで得られたヘモグロビン類測定用試薬よりもカラム耐久性に優れていた。
【図１】
2020046435.tif 000011
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月12日(2019.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬であって、
非イオン性界面活性剤又は両性界面活性剤を含み、
前記非イオン性界面活性剤が、下記成分Ａ１、下記成分Ａ７、下記成分Ａ８又は下記成分Ａ９であり、
前記両性界面活性剤が、下記成分Ｂ１、下記成分Ｂ２又は下記成分Ｂ３である、ヘモグロビン類測定用試薬。
成分Ａ１：オキシエチレン基の平均付加モル数が８以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル
成分Ａ７：ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン
成分Ａ８：ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド
成分Ａ９：サポニン
成分Ｂ１：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパンスルホネート
成分Ｂ２：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシプロパンスルホネート
成分Ｂ３：ラウリルジメチルアミンオキサイド
【請求項２】
前記非イオン性界面活性剤を含み、
前記非イオン性界面活性剤が、前記成分Ａ１を含み、
前記成分Ａ１が、オキシエチレン基の平均付加モル数が９であるポリオキシエチレンラウリルエーテルである、請求項１に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項３】
前記非イオン性界面活性剤を含み、
前記非イオン性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である、請求項１又は２に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項４】
前記両性界面活性剤を含み、
前記両性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のヘモグロビン類測定用試薬。
【請求項５】
赤血球含有検体と、請求項１〜４のいずれか１項に記載のヘモグロビン類測定用試薬とを混合して混合液を得る工程と、
前記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する工程とを備える、ヘモグロビン類の測定方法。