(57)【要約】【課題】リポソームに内包させる流動性物質における主成分の原料として難溶性物質を用いたリポソームの製造方法を提供する。【解決手段】リポソームの製造方法は、酸性又はアルカリ性の溶液に、リポソームに内包させる流動性物質の主成分の原料として難溶性物質を溶解させる溶解工程と、溶解工程により難溶性物質が溶解した溶液に、その溶液を中性側に調整するためのｐＨ調節剤を加えるｐＨ調節工程と、ｐＨ調節工程後の溶液とリポソームの膜材料となる脂質とを混ぜ合せ、溶液を内包するリポソームを製造するリポソーム化工程とを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソームの製造方法であって、
酸性又はアルカリ性の溶液に、リポソームに内包させる流動性物質における主成分の原料として難溶性物質を溶解させる溶解工程と、
前記溶解工程により前記難溶性物質が溶解した溶液に、その溶液を中性側に調整するためのｐＨ調節剤を加えるｐＨ調節工程と、
前記ｐＨ調節工程後の溶液とリポソームの膜材料となる脂質とを混ぜ合せ、前記溶液を内包するリポソームを製造するリポソーム化工程とを含む、リポソームの製造方法。
【請求項２】
請求項１に記載のリポソーム化工程により製造された多数のリポソームと、前記多数のリポソームを浸漬させる液体とを含むリポソーム含有液を製造する、リポソーム含有液の製造方法。
【請求項３】
リポソーム含有液の製造方法であって、
リポソームに内包させる溶液とリポソームの膜材料となる脂質とを混ぜ合わせ、前記溶液を内包するリポソームを製造するリポソーム化工程と、
前記リポソーム化工程により製造された多数のリポソームと、前記多数のリポソームを浸漬させる液体と、前記液体中において前記多数のリポソームを分散状態に維持するための増粘安定剤とを含むリポソーム含有液を製造する調整工程とを含む、リポソーム含有液の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リポソーム又はリポソーム含有液の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リポソームは、脂質分子により形成される少なくとも１つの脂質二重層により囲まれた小胞（例えば、１０〜１００μｍの小胞）である。近年、健康食品、化粧品、医薬品などの様々な分野で、リポソームの研究や開発が行われている。
【０００３】
特許文献１には、リポソーム膜中にビタミンＡ類を含有するリポソーム水懸濁液が記載されている。このリポソーム水懸濁液は、公知の方法に従い、リポソームの膜成分並びに膜中に配合する薬物及び添加物（ビタミンＡ類、ビタミンＥアセテート、ＢＨＴなど）を有機溶媒に溶解し、有機溶媒を留去して膜質膜を形成させた後、水溶性成分を溶解した溶液で水和することによりリポソーム水懸濁液を調製する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許３１３２０３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ところで、従来は、水に溶ける水溶性物質又は有機溶媒に溶ける脂溶性物質を原料として用いて、リポソームに内包させる流動性物質（液体など）を得ている。従来は、リポソームに内包させる流動性物質における主成分の原料として、難溶性物質は用いられていない。
【０００６】
本発明は、このような事情に鑑みてなされたものであり、リポソームに内包させる流動性物質における主成分の原料として難溶性物質を用いたリポソームの製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上述の課題を解決するべく、第１の発明は、酸性又はアルカリ性の溶液に、リポソームに内包させる流動性物質における主成分の原料として難溶性物質を溶解させる溶解工程と、溶解工程により難溶性物質が溶解した溶液に、その溶液を中性側に調整するためのｐＨ調節剤を加えるｐＨ調節工程と、ｐＨ調節工程後の溶液とリポソームの膜材料となる脂質とを混ぜ合せ、溶液を内包するリポソームを製造するリポソーム化工程とを含む、リポソームの製造方法である。
【０００８】
第２の発明は、第１の発明におけるリポソーム化工程により製造された多数のリポソームと、多数のリポソームを浸漬させる液体とを含むリポソーム含有液を製造する、リポソーム含有液の製造方法である。
【０００９】
第３の発明は、リポソームに内包させる溶液とリポソームの膜材料となる脂質とを混ぜ合わせ、溶液を内包するリポソームを製造するリポソーム化工程と、リポソーム化工程により製造された多数のリポソームと、多数のリポソームを浸漬させる液体と、液体中において多数のリポソームを分散状態に維持するための増粘安定剤とを含むリポソーム含有液を製造する調整工程とを含む、リポソーム含有液の製造方法である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明では、酸性又はアルカリ性の溶液を用いた溶解工程と、溶解工程により難溶性物質が溶解した溶液を中性側に調整するｐＨ調節工程とを行うため、リポソームに内包させる流動性物質における主成分の原料として、難溶性物質を用いることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の実施形態を詳細に説明する。なお、以下の実施形態は、本発明の一例であって、本発明、その適用物、あるいはその用途の範囲を制限することを意図するものではない。
【００１２】
［リポソームの製造方法］
本実施形態は、リポソームに内包させる流動性物質（液体、ゾル等）における主成分の原料として難溶性物質を用いたリポソームの製造方法（以下、「本製造方法」という。）である。本製造方法は、酸性又はアルカリ性の溶液に難溶性物質を溶解させる溶解工程と、溶解工程により難溶性物質が溶解した溶液に、その溶液を中性側に調整するためのｐＨ調節剤（溶解工程後の溶液とは逆の極性を有するｐＨ調節剤）を加えるｐＨ調節工程と、ｐＨ調節工程後の溶液とリポソームの膜材料となる脂質とを混ぜ合せ、溶液を内包するリポソームを製造するリポソーム化工程とを、この順番で行う。
【００１３】
ここで、流動性物質における主成分としては、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、鉄分などの鉱物系の元素が挙げられる。そして、難溶性物質としては、その金属自体又は金属塩を用いることができる。例えば、流動性物質における主成分がカルシウムの場合、難溶性物質として炭酸カルシウムを用いることができる。流動性物質における主成分がマグネシウムの場合、難溶性物質として水酸化マグネシウムを用いることができる。流動性物質における主成分が亜鉛の場合、難溶性物質として亜鉛そのものを用いることができる。流動性物質における主成分が鉄分の場合、難溶性物質として水酸化鉄を用いることができる。また、流動性物質における主成分としてはカルシウムなどの鉱物系の成分以外に、ヒアルロン酸、コンドロイチンなどを採用することもできる。
【００１４】
まず酸性の溶液に難溶性物質を溶解させる場合の溶解工程及びｐＨ調節工程について説明を行う。溶解工程は、塩酸、酢酸、クエン酸、又はリンゴ酸などの酸性溶液（有機酸又は無機酸の溶液）中において難溶性物質を溶解させる工程である。難溶性物質の溶解を促進させるために加熱をしてもよい。また、酸性溶液は、例えば濃度が濃いもの（例えば、ｐＨ＝０以上４以下の溶液）を用いる。なお、リポソームを飲食品に用いる場合、酸性溶液としてはクエン酸の溶液を好適に用いることができる。
【００１５】
例えば、流動性物質の主成分がカルシウムで難溶性物質として炭酸カルシウムを用いる場合、溶解工程では、式１に示すように、例えば塩酸溶液に炭酸カルシウムを入れて炭酸カルシウムを溶解させる。溶解工程後の溶液（水溶液）は、塩化カルシウムが水に溶けた状態となり、また未反応の塩酸により酸性となる。
式１：ＣａＣＯ３＋２ＨＣｌ→ＣａＣｌ２＋Ｈ２Ｏ＋ＣＯ２
【００１６】
ｐＨ調節工程は、溶解工程後の溶液に対しｐＨ調整剤（中和剤）を混ぜることにより、溶液を所定のｐＨに調整する工程である。所定のｐＨは、６．５以上８以下の範囲である。ｐＨ調整剤としては、塩基性の物質を入れる。ｐＨ調整剤として、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、アンモニアム又は炭酸水素ナトリウム（重曹）などを用いることができる。上述した例（溶解工程において塩酸溶液中でカルシウムを溶解させる例）の場合も、これらの物質を用いることができる。なお、リポソームを飲食品に用いる場合、ｐＨ調整剤としては炭酸水素ナトリウムを好適に用いることができる。
【００１７】
次に、アルカリ性の溶液に難溶性物質を溶解させる場合の溶解工程及びｐＨ調節工程について説明を行う。溶解工程は、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、アンモニアム又は炭酸水素ナトリウムなどのアルカリ性溶液中において難溶性物質を溶解させる工程である。難溶性物質の溶解を促進させるために加熱をしてもよい。また、アルカリ性溶液は、例えば濃度が濃いもの（例えば、ｐＨ＝１０以上１４以下の溶液）を用いる。なお、リポソームを食品に用いる場合、アルカリ性溶液としては炭酸水素ナトリウム溶液を好適に用いることができる。
【００１８】
例えば、流動性物質の主成分として亜鉛を用いる場合、溶解工程では、式２に示すように、例えば水酸化ナトリウム溶液に亜鉛（難溶性物質）を入れて亜鉛を溶解させる。溶解工程後の溶液（水溶液）は、亜鉛イオンが水に溶けた状態となり、また未反応の水酸化ナトリウムによりアルカリ性となる。
式２：Ｚｎ＋２ＮａＯＨ＋２Ｈ２Ｏ→Ｎａ２［Ｚｎ（ＯＨ）４］＋Ｈ２
【００１９】
ｐＨ調節工程は、溶解工程後の溶液に対しｐＨ調整剤（中和剤）を混ぜることにより、溶液を所定のｐＨに調整する工程である。所定のｐＨは、６．５以上８以下の範囲である。ｐＨ調整剤としては、酸性の物質を入れる。ｐＨ調整剤として、塩酸、酢酸、クエン酸、又はリンゴ酸などを用いることができる。上述した例（溶解工程において亜鉛を水酸化ナトリウムに溶解させる例）の場合も、これらを用いることができる。リポソームを食品に用いる場合、ｐＨ調整剤としてはクエン酸を好適に用いることができる。
【００２０】
なお、酸性の溶液に難溶性物質を溶解させる場合であっても、アルカリ性の溶液に難溶性物質を溶解させる場合であっても、ｐＨ調整剤としては、ｐＨ調整剤を入れた溶液において、難溶性物質の溶解に用いた溶液との中和反応により生成される生成塩が溶解するものを選択してもよいし、生成塩が溶解しないもの選択してもよい。生成塩が溶解しないｐＨ調整剤を用いる場合は、ｐＨ調節工程後に、生成塩を濾過する工程を行う。
【００２１】
次に、リポソーム化工程は、ｐＨ調節工程後の溶液（以下、「被内包液」という。）を内包するリポソームを製造する工程である。リポソーム化工程では、被内包液とリポソームの膜材料となる脂質（リン脂質、糖脂質など）とを混ぜ合せ、被内包液を内包するリポソームを形成する。リポソーム化工程におけるリポソームの製造には、バンガム法、逆相蒸発法、クロスフロー注入法、エクストルージョン法、フレンチプレス法、ホモジナイゼーション法、エタノール注入法、脱水−再水和法等の方法を用いることができる。
【００２２】
例えばバンガム法を用いる場合、有機溶媒（クロロホルム、メタノールなど）に脂質を溶解させた後に、減圧下で有機溶媒を留去し脂質薄膜を得る。そして、ここに被内包液を加え、超音波乳化機などを用いて機械力で水和分散をさせることで、リポソームが製造される。なお、有機溶媒を用いずに、被内包液に脂質を分散させた脂質分散液を超音波乳化機により撹拌することによりリポソームを製造する方法を選択してもよい。
【００２３】
また逆相蒸発法を用いる場合、有機溶媒（クロロホルムなど）に脂質を溶解させ、さらに被内包液を加えてエマルションとする。そして、減圧下において、エマルション中の有機溶媒を除去し、さらに水を添加することで、リポソームが製造される。
【００２４】
なお、リポソームの膜材料としてリン脂質を用いる場合、例えば大豆レシチン、ホスファチジルセリン等を用いることができる。リポソームの膜材料として糖脂質を用いる場合、ガラクトシルセラミド、ジガラクトシルグリセリド等を用いることができる。また、リポソームの膜材料として脂質以外に、コレステロール等の脂質膜安定化剤などを用いてもよい。
【００２５】
このように本実施形態によれば、酸性又はアルカリ性の溶液を用いた溶解工程と、溶解工程により難溶性物質が溶解した溶液を中性側に調整するｐＨ調節工程とを行うため、リポソームに内包させる流動性物質の主成分の原料として、難溶性物質を用いることができる。
【００２６】
ここで、少なくともリポソーム化工程は、リポソーム製造装置で行われる。リポソーム化工程において製造された多数のリポソームについて、健康食品や化粧品、医薬品などに利用する場合、タンクなどの移動用容器に入れた状態でリポソーム製造装置から移動させる。この時、多数のリポソームは、移動用容器中において液体に浸漬させたリポソーム含有液の状態で移動させる。
【００２７】
多数のリポソームを浸漬させる液体（リポソーム含有液の液成分）としては、リポソーム化工程においてリポソームを形成した溶液（以下、「リポソーム形成液」と言う。）をそのまま用いることもできるし、別の溶液を用いることもできる。別の溶液を用いる場合は、リポソーム形成液から多数のリポソームを単離して添加する。本実施形態では、何れの場合においても、リポソーム化工程後に、移動用容器の液体中において多数のリポソームを分散状態に維持するための増粘安定剤を添加する調整工程を行う。調整工程では、増粘安定剤の添加後のリポソーム含有液を攪拌する。なお、増粘安定剤の添加は、リポソーム含有液を移動用容器に入れる前に行ってもよいし、リポソーム含有液を入れた移動用容器において行ってもよい。
【００２８】
調整工程で添加する増粘安定剤としては、グリセリン、ペクチン、アラビアガム、グアーガム、キサンタンガム、タマリンドガム、カラギーナン、プロピレングリコール、カルボシキメチルセルロースなどを用いることができる。また、リポソーム含有液には増粘安定剤以外の添加剤（例えば、防腐剤、界面活性剤など）を加えてもよい。
【００２９】
ここで、移動用容器内のリポソーム含有液では、増粘安定剤がなければ、長時間が経過すると、沈殿によりリポソームが高密度の部分と低密度の部分が形成される。そのため、例えば、リポソーム含有液から、リポソーム含有液を入れたカプセル剤を製造する場合、カプセル間においてリポソーム数に偏りが生じる。
【００３０】
それに対し、本実施形態では、増粘安定剤を加える調整工程を行う。調整工程では、増粘安定剤を加えた後の容液を撹拌してリポソームを分散させる。そのため、長時間が経過しても、移動用容器内においてリポソームの密度がある程度均一に保たれる。従って、リポソーム含有液からカプセル剤を製造する場合、カプセル間におけるリポソーム数の偏りを抑制することができる。カプセル剤は、増粘安定剤を含むリポソーム含有液が封じ込められたものとなる。
［実施形態の変形例］
【００３１】
本実施形態における調整工程は、リポソームに内包させる流動性物質の主成分（例えば、Ｑ１０、クルクミン、ビタミン類等）の原料として、水に溶ける水溶性物質又は有機溶媒に溶ける脂溶性物質を用いる場合にも適用することができる。この場合、リポソームの製造方法は、原料（例えばＬ−アスコルビン酸）を液体（例えばＲＯ水）に溶解させてリポソームに内包させる被内包液を準備する溶解工程と、被内包液とリポソームの膜材料となる脂質とを混ぜ合わせて被内包液を内包するリポソームを製造するリポソーム化工程と、リポソーム化工程により製造された多数のリポソームと、多数のリポソームを浸漬させる液体と、その液体中において多数のリポソームを分散状態に維持するための増粘安定剤とを含むリポソーム含有液を製造する調整工程と、この順番で行う。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明は、リポソーム又はリポソーム含有液の製造方法等に適用可能である。