(57)【要約】【課題】本発明の目的は、哺乳動物の精子などの生体細胞を粒状に容易かつ確実に凍結させることができる生体細胞粒状凍結体作成具を提供する。【解決手段】生体細胞粒状凍結体作成具１は、採取容器接続用開口部２４に向かって縮径する漏斗部２０と、脚部３１ａ，３１ｂ，３１ｃとを備える作成具本体２と、漏斗部２０の上部に収納された板状部材４とを備える。漏斗部２０は、複数の側孔２６を備え、板状部材４は、複数の貫通孔４２を備える。作成具本体２および板状部材４は、液体窒素内に沈むものであり、液体窒素に浸漬された状態にて、板状部材４の上方から生体細胞含有液体を滴下することにより、板状部材４の貫通孔４２内にて、生体細胞粒状凍結体が形成され、生体細胞粒状凍結体が、漏斗部を下降し、採取容器接続用開口部２４に誘導されるものとなっている。【選択図】図１５
2020108336.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体窒素耐性材料により形成された生体細胞粒状凍結体作成具であって、
前記生体細胞粒状凍結体作成具は、下端に採取容器接続用開口部を有し、前記採取容器接続用開口部に向かって縮径する漏斗部と、前記漏斗部を起立保持するための脚部とを備える作成具本体と、前記漏斗部の上部に収納された板状部材とを備え、
前記漏斗部は、液体窒素流通用の複数の側孔を備え、前記板状部材は、上面から下面まで貫通する複数の液体窒素流入用貫通孔を備え、前記作成具本体および前記板状部材は、液体窒素内に沈むものであり、前記作成具本体および前記板状部材が、液体窒素に浸漬された状態にて、前記板状部材の上方から生体細胞含有液体を滴下することにより、前記板状部材の前記貫通孔内にて、生体細胞粒状凍結体が形成され、形成された前記生体細胞粒状凍結体が、前記漏斗部を下降し、前記採取容器接続用開口部に誘導されるものとなっていることを特徴とする生体細胞粒状凍結体作成具。
【請求項２】
前記生体細胞粒状凍結体作成具は、精子含有粒状凍結体作成具である請求項１に記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
【請求項３】
前記漏斗部は、同一内径にて延びる上部と、前記上部の下端より延びるテーパー状縮径部を備え、前記板状部材は、前記上部に収納され、かつ、収納された前記板状部材の上面は、前記漏斗部の上端より下方に位置するものとなっている請求項１または２に記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
【請求項４】
前記板状部材の前記貫通孔は、下面に向かって拡径したテーパー状貫通孔である請求項１ないし３のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
【請求項５】
前記板状部材の上面における前記貫通孔の開口の総面積は、前記板状部材の上面全体の面積の４０％以上である請求項１ないし４のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
【請求項６】
前記作成具本体は、上方に延びる把持部を備えている請求項１ないし５のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
【請求項７】
前記側孔は、前記漏斗部の中心軸にほぼ平行に延びるものとなっている請求項１ないし６のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の精子などの生体細胞を粒状に凍結させるために用いられる生体細胞粒状凍結体作成具に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳動物の精子の凍結保存は、特定の系統や品種の遺伝資源の保存を可能とする。また、絶滅の危機に瀕している動物種の維持にも有効である。さらに、ヒトの不妊治療においても有用である。
精子の凍結方法は、現在では冷媒として液体窒素による急速凍結法が一般的となっている。精子凍結に特に特化した凍結器具はあまりなく、特開２００７−１６１３０７（特許文献１）が提案されている程度である。また、精子凍結装置としては、特開平５−２８５１６３（特許文献２）が提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００７−１６１３０７
【特許文献２】特開平５−２８５１６３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
特許文献１の凍結保存容器は、生物試料を凍結保存するための容器であって、口部及び底部を備え、耐寒性プラスチックで構成された容器基部と、内腔を備え、耐寒性フィルムで構成された封止部を含み、前記封止部は、前記封止部の上端部が前記口部よりも上に突出し、前記内腔と前記口部が連通するように前記容器基部の口部に結合したものとなっている。この凍結保存容器によれは、液体窒素及び／又は雑菌が容器内部に侵入しにくいために、容器内部に保存した生物試料が汚染されることがない。また、液体窒素が容器内部に侵入した状態で解凍作業などを行った場合、液体窒素が急激に膨張し、容器の破損などを防止し、作業者が怪我をするおそれがない。
また、特許文献２の精子凍結装置は、略水平方向に精子封入容器１を整列保持する整列凍結架台２と該整列凍結架台２を冷媒中の適当な位置へ支持する懸垂装置３とからなる精子凍結装置である。
精子の凍結は、凍結後の使用が容易な形態で凍結されることが望ましい。しかし、特許文献１および２に開示のものを用いても良好な形態の凍結精子を得ることはできなかった。
本発明の目的は、哺乳動物の精子などの生体細胞を粒状に容易かつ確実に凍結させることができる生体細胞粒状凍結体作成具を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するものは、以下のものである。
（１）  液体窒素耐性材料により形成された生体細胞粒状凍結体作成具であって、
前記生体細胞粒状凍結体作成具は、下端に採取容器接続用開口部を有し、前記採取容器接続用開口部に向かって縮径する漏斗部と、前記漏斗部を起立保持するための脚部とを備える作成具本体と、前記漏斗部の上部に収納された板状部材とを備え、
前記漏斗部は、液体窒素流通用の複数の側孔を備え、前記板状部材は、上面から下面まで貫通する複数の液体窒素流入用貫通孔を備え、前記作成具本体および前記板状部材は、液体窒素内に沈むものであり、前記作成具本体および前記板状部材が、液体窒素に浸漬された状態にて、前記板状部材の上方から生体細胞含有液体を滴下することにより、前記板状部材の前記貫通孔内にて、生体細胞粒状凍結体が形成され、形成された前記生体細胞粒状凍結体が、前記漏斗部を下降し、前記採取容器接続用開口部に誘導されるものとなっている生体細胞粒状凍結体作成具。
【０００６】
（２）  前記生体細胞粒状凍結体作成具は、精子含有粒状凍結体作成具である上記（１）に記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
（３）  前記漏斗部は、同一内径にて延びる上部と、前記上部の下端より延びるテーパー状縮径部を備え、前記板状部材は、前記上部に収納され、かつ、収納された前記板状部材の上面は、前記漏斗部の上端より下方に位置するものとなっている上記（１）または（２）に記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
（４）  前記板状部材の前記貫通孔は、下面に向かって拡径したテーパー状貫通孔である上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
（５）  前記板状部材の上面における前記貫通孔の開口の総面積は、前記板状部材の上面全体の面積の４０％以上である上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
（６）  前記作成具本体は、上方に延びる把持部を備えている上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
（７）  前記側孔は、前記漏斗部の中心軸にほぼ平行に延びるものとなっている上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の生体細胞粒状凍結体作成具。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の生体細胞粒状凍結体作成具は、液体窒素耐性材料により形成されており、下端に採取容器接続用開口部を有し、採取容器接続用開口部に向かって縮径する漏斗部と、漏斗部を起立保持するための脚部とを備える作成具本体と、漏斗部の上部に収納された板状部材とを備える。漏斗部は、液体窒素流通用の複数の側孔を備え、板状部材は、上面から下面まで貫通する複数の液体窒素流入用貫通孔を備え、作成具本体および板状部材は、液体窒素内に沈むものであり、作成具本体および板状部材が、液体窒素に浸漬された状態にて、板状部材の上方から生体細胞含有液体を滴下することにより、板状部材の貫通孔内にて、生体細胞粒状凍結体が形成され、形成された生体細胞粒状凍結体が、漏斗部を下降し、採取容器接続用開口部に誘導されるものとなっている。
【０００８】
このため、生体細胞含有液体を滴下することにより、容易に生体細胞粒状凍結体を形成でき、かつ、形成された生体細胞粒状凍結は、採取容器接続用開口部に誘導されるため、接続用開口部に接続した採取容器に容易に採取可能である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具の正面図である。
【図２】図２は、図１に示した生体細胞粒状凍結体作成具の平面図である。
【図３】図３は、図１に示した生体細胞粒状凍結体作成具の底面図である。
【図４】図４は、図１に示した生体細胞粒状凍結体作成具の縦断面図である。
【図５】図５は、図１に示した生体細胞粒状凍結体作成具の斜視図である。
【図６】図６は、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具に使用される作成具本体の平面図である
【図７】図７は、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具に用いられる板状部材の正面図である。
【図８】図８は、図７に示した板状部材の平面図である。
【図９】図９は、図７に示した板状部材の縦断面図である。
【図１０】図１０は、図７に示した板状部材の斜視図である。
【図１１】図１１は、本発明の他の実施例の生体細胞粒状凍結体作成具の正面図である。
【図１２】図１２は、採取容器が接続された本発明の生体細胞粒状凍結体作成具の正面図である。
【図１３】図１３は、図１２に示した採取容器が接続された本発明の生体細胞粒状凍結体作成具の縦断面図である。
【図１４】図１４は、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具の作用を説明するための説明図である。
【図１５】図１５は、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具の作用を説明するための説明図である。
【図１６】図１６は、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具の作用を説明するための説明図である。
【図１７】図１７は、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具の作用を説明するための説明図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の生体細胞粒状凍結体作成具を図面に示す実施例を用いて説明する。
本発明の生体細胞粒状凍結体作成具１は、液体窒素耐性材料により形成されており、下端に採取容器接続用開口部２４を有し、採取容器接続用開口部２４に向かって縮径する漏斗部２０と、漏斗部２０を起立保持するための脚部３１ａ，３１ｂ，３１ｃとを備える作成具本体２と、漏斗部２０の上部に収納された板状部材４とを備える。漏斗部２０は、液体窒素流通用の複数の側孔２６を備え、板状部材４は、上面から下面まで貫通する複数の液体窒素流入用貫通孔４２を備え、作成具本体２および板状部材４は、液体窒素内に沈むものであり、作成具本体２および板状部材４が、液体窒素に浸漬された状態にて、板状部材４の上方から生体細胞含有液体を滴下することにより、板状部材４の貫通孔４２内にて、生体細胞粒状凍結体が形成され、形成された生体細胞粒状凍結体が、漏斗部２０を下降し、採取容器接続用開口部２４に誘導されるものとなっている。
なお、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具１は、精子、精子、造血幹細胞、多能性幹細胞等の幹細胞、胚などの卵、卵子などの生体細胞、植物細胞などの粒状凍結体を作成するために用いることができる。特に、精子の粒状凍結体の作成に有効である。言い換えれば、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具１は、精子含有粒状凍結体作成具として用いることが有効である。
【００１１】
この実施例の生体細胞粒状凍結体作成具１は、図１ないし図１０に示すように、作成具本体２と、作成具本体２に収納された板状部材４とを備える。
作成具本体２は、下端に採取容器接続用開口部２４を有し、採取容器接続用開口部２４に向かって縮径する漏斗部２０と、漏斗部２０を起立保持するための脚部３１ａ，３１ｂ，３１ｃとを備える。
漏斗部２０は、図１ないし図６に示すように、同一内径にて延びる短い円筒状の上部２１と、上部２１の下端より、下方に向かって縮径しながら延びるテーパー状縮径部２２を備える。テーパー状縮径部２２は、テーパー状内面２２ａを備える。漏斗部２０は、液体窒素流通用の複数の側孔２６を備える。この実施例では、液体窒素流通用の複数の側孔２６は、テーパー状縮径部２２の上部側面に設けられている。また、複数の側孔２６は、漏斗部２０のテーパー状縮径部２２のほぼ同じ円周上に等角度となるように配置されている。なお、側孔２６は、上部２０の側面に設けてもよい。また、テーパー状縮径部２２の全体に設けてもよい。また、この実施例では、漏斗部２０は、上端にフランジ部２８を備えている。このため、漏斗部２０の最大外径部位は、このフランジ部２８となっている。フランジ部２８は、上面は平坦面となっている。
【００１２】
さらに、この実施例では、側孔２６は、テーパー状縮径部２２の下面から上面を貫通するように、漏斗部２０の軸方向（言い換えれば、上下方向、縦方向）に延びるものとなっている。このため、液体窒素が収納されている容器に、生体細胞粒状凍結体作成具１を上方から浸漬する際に、液体窒素の漏斗部への流入が良好なものとなっている。特に、この実施例では、側孔２６は、漏斗部２０の中心軸にほぼ平行に縦方向に延びるものとなっている。また、この実施例では、側孔２６の開口面は、漏斗部２０の中心軸に対して所定角度斜めに設けられている。また、側孔２６の下面および上面の開口面は、漏斗部の軸方向に長い楕円状のものとなっている。側孔２６の数としては、３〜２０程度が好ましく、特に、５〜１５程度が好ましい。
【００１３】
そして、漏斗部２０は、下端に採取容器接続用開口部２４を備えている。採取容器接続用開口部２４は、漏斗部２０の中心軸にその中心が位置するように形成されている。この実施例では、漏斗部２０は、テーパー状縮径部２２の下端より、下方に延びる筒状下部２３を備える。筒状下部２３は、外径がほぼ同一にて所定長下方に延びる筒状部である。筒状下部２３の内部は、所定内径にて延びるテーパー状縮径部との連接部と、連接部と連続し、急激に縮径するテーパー部と、テーパー部より下方にほぼ同一内径にて延びる内径小径部とを備えている。
そして、採取容器接続用開口部２４は、漏斗部２０の筒状下部２３より、下方に延びるものとなっている。この実施例では、採取容器接続用開口部２４は、漏斗部２０の筒状下部２３より、下方に延びるものとなっており、外径は、筒状下部より小径に形成されており、内径は、筒状下部２３の内径とほぼ同じ内径にて、下端まで延びるものとなっている。採取容器接続用開口部２４は、外面に形成された小径外径部により、採取容器の上端開口を接続（装着）可能なものとなっている。
【００１４】
作成具本体２は、漏斗部２０を採取容器接続用開口部２４が下方となるように、起立保持するための脚部３１ａ，３１ｂ，３１ｃを備えている。この実施例では、脚部３１ａ，３１ｂ，３１ｃは、漏斗部２０の設けられた脚部上部形成部２７ａ，２７ｂ，２７ｃと、その下端に接続された棒状体により形成されている。特に、この実施例では、脚部上部形成部２７ａ、２７ｂ，２７ｃは、下端に小径部を備え、棒状体は、上端に脚部上部形成部２７ａ、２７ｂ，２７ｃの上記小径部と係合可能な凹部を備えている。脚部の数としては、３〜６程度が好ましい。
また、作成具本体２は、脚部を含め、一体物により形成してもよい。
【００１５】
作成具本体２に収納された板状部材４について、図７ないし図１０を用いて説明する。この実施例は、板状部材４は、漏斗部２０に収納されており、離脱可能なものとなっている。なお、板状部材４は、漏斗部２０より離脱不能なものであってもよい。
【００１６】
板状部材４は、上面から下面まで貫通する複数の液体窒素流入用貫通孔４２を備える。板状部材４は、所定の厚さを有する円盤状部材である。この実施例の板状部材は、所定の内径を有する貫通孔４２が複数設けられている。さらに、この実施例では、板状部材４の上面部４３における貫通孔４２の開口の総面積は、板状部材４の上面全体の面積の３５％以上であることが好ましい。特に、４０％以上であることが好ましい。このようにすることにより、生体細胞含有液体の貫通孔４２への直接の滴下が容易なものとなる。また、板状部材４の厚さとしては、４〜１５ｍｍ程度が好ましく、特に、６〜１２ｍｍが好ましい。
【００１７】
また、この実施例の板状部材４では、貫通孔４２は、下面に向かって拡径したテーパー状貫通孔４２となっている。このようにすることにより、貫通孔４２内にて形成された生体細胞粒状凍結体の板状部材４からの流出が確実なものとなる。貫通孔４２の上面４２ａの内径としては、４〜７ｍｍ程度が好適であり、特に、５〜６ｍｍが好ましい。
【００１８】
また、この実施例では、貫通孔４２の上面４２ａの内縁は、面取りされている。このため、貫通孔４２の周縁部に滴下された生体細胞含有液体の貫通孔４２への誘導を可能としている。貫通孔４２の上面４２ａの内縁が面取りされているため、貫通孔４２の面取りされた下端が、貫通孔４２の最小内径部となっている。貫通孔４２は、この最小内径部より、下面４２ｂに向かってテーパー状に拡径している。テーパー角度としては、２〜１０°が好ましく、特に、４〜８°が好ましい。また、この実施例の板状部材４では、貫通孔４２の下面４２ｂの内縁も面取りされている。
【００１９】
そして、この実施例の生体細胞粒状凍結体作成具１では、図４に示すように、板状部材４は、漏斗部２０の上部２１に収納され、かつ、収納された板状部材４の上面４３は、漏斗部２０の上端（上部２１の上端）より下方に位置するものとなっている。このため、板状部材４の上面に滴下された生体細胞含有液体が、生体細胞粒状凍結体作成具１の外方に流出することを防止している。
【００２０】
そして、生体細胞粒状凍結体作成具１では、作成具本体２および板状部材４は、液体窒素内に沈むものとなっている。さらに、作成具本体２および板状部材４が、液体窒素に浸漬された状態にて、板状部材４の上方から生体細胞含有液体を滴下することにより、板状部材４の貫通孔４２内にて、生体細胞粒状凍結体が形成され、形成された生体細胞粒状凍結体が、漏斗部２０を下降し、採取容器接続用開口部２４に誘導されるものとなっている。
【００２１】
そして、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具としては、図１１に示す実施例の生体細胞粒状凍結体作成具１ａのように、作成具本体２ａが、上方に延びる把持部３２を備えるものであってもよい。この実施例の生体細胞粒状凍結体作成具１ａと上述した生体細胞粒状凍結体作成具１との相違点は、把持部３２のみである。この実施例では、把持部３２は、把持部３２を構成する棒状部と、棒状部を漏斗部２０の上部側面に固定する固定部３３により形成されている。このような把持部を設けることにより、生体細胞粒状凍結体作成具の液体窒素浴槽（液体窒素充填容器）への浸漬および引き上げ作業が容易となる。
【００２２】
作成具本体２、具体的には、漏斗部２０、脚部２７ａ、２７ｂ，２７ｃを形成する棒状体および板状部材４は、液体窒素耐性材料により形成されている。また、作成具本体２および板状部材４は、液体窒素内に沈降するものが用いられる。そのような材料としては、金属、例えば、ステンレス鋼、アルミ、アルミ合金など、液体窒素耐合成樹脂、例えば、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート）、ポリオレフィン（例えば、ポリエチレン、超高分子量ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−プロピレン共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体）、スチレン系樹脂（例えば、ポリスチレン、メタクリレート−スチレン共重合体、メタクリレート−ブチレン−スチレン共重合体）、ポリアミド（例えば、６ナイロン，６６ナイロン）、ポリサルホン、フッ素樹脂、ポリイミド等が使用できる。
【００２３】
そして、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具１には、図１２および図１３に示すように、生体細胞粒状凍結体採取容器５が接続され、使用される。採取容器５としては、市販のものが使用される。採取容器５は、底部５３を有する筒状本体５０と、上部開口部５１と、収納部５２を有する。生体細胞粒状凍結体作成具１の採取容器接続用開口部２４は、上記の採取用容器５の上部開口部５１が接続可能な形状に形成されている。
【００２４】
次に、本発明の生体細胞粒状凍結体作成具１の作用について、図１４ないし図１７を用いて、精子含有粒状凍結体を作成する実施例を用いて説明する。
精液の受付を行い、氏名、カルテ番号等の確認および、目視による観察（血精液症等のチェック）を行う。次に、患者氏名の確認を行い、シリンジに、精液を数ｍｌ吸引して精液量の測定を行った後、シリンジで精液を数回吸入、排出して液化ならびに均一化を図る。精液が均一に液化されたら、これをスライドグラスに滴下して精子数および運動率を観察する。次に、精液の液化状態およびゲルの混在を観察する。
【００２５】
そして、精液に同量のハンクス液または生食を加えてシリンジで吸入、排出を繰り返して希釈し、この希釈した精液をシリンジに吸引して、密度勾配液収納遠心分離管の密度勾配液上に積層する。精液の全量を密度勾配液に積層した後、密度勾配液収納遠心分離管の精液と、密度勾配液の界面の両側部分、通常両側２ｃｍの範囲を、例えばＬ型攪拌棒で攪拌して界面を無くする。
【００２６】
次に、密度勾配液収納遠心分離管を例えば、３０００ｒｐｍ（１．０００ｘｇ）で２０〜３０分間遠心分離する。遠心分離により、精子は、密度勾配液収納遠心分離管の下部に濃縮される。トランスファーカニューレ（所定長の細管）を先端に装着したシリンジを準備し、トランスファーカニューレの先端部を遠心分離管の精子集約層に配置した後、シリンジを操作して吸引し、トランスファーカニューレ内に精子濃厚液を採取する。
【００２７】
そして、精子を採取したトランスファーカニューレを洗浄液収納遠心分離管内に挿入し、シリンジを操作して、トランスファーカニューレ内の精子濃厚液を精子洗浄液内に注入する。そして、トランスファーカニューレを用いて、撹拌した後、洗浄液収納遠心分離管を例えば、３０００ｒｐｍ（１．０００ｘｇ）で２０〜３０分間遠心分離する。これにより、下層に洗浄された精子集約層が形成される。トランスファーカニューレを先端に装着した別のシリンジを用いて、精子集約層より上層部分を吸引除去する。これにより、洗浄された濃厚精液が採取される。
【００２８】
そして、濃厚精液に精子凍結保存液を添加して、精子含有液体を作成する。作成した精子含有液体１７をピペット１６に吸引採取したものを準備する。
また、図１２および図１３に示すように、生体細胞粒状凍結体作成具１に生体細胞粒状凍結体採取容器５を接続したものを準備し、図１４に示すように、これを液体窒素１８が注入されている凍結作業用容器１５内に浸漬し、必要により、液体窒素を添加し、生体細胞粒状凍結体作成具１の板状部材４の上面４３付近に液体窒素の上面が位置する状態とする。この状態を図１４に示す。
【００２９】
そして、図１５に示すように、精子含有液体１７を吸引したピペット１６を、板状部材４のいずれかの貫通孔４２の上部に配置し、板状部材４に精子含有液体１７を滴下する。なお、滴下された精子含有液体は、板状部材４の貫通孔内に流入するとともに、貫通孔内にて、粒状化し凍結する。これにより、精子含有粒状凍結体３０が形成される。図１６に示すように、形成された精子含有粒状凍結体３０は、板状部材４の貫通孔４２を下降し、漏斗部２０のテーパー状縮径部２２のテーパー状内面２２ａに誘導され、採取容器接続用開口部２４を通過し、採取用容器５内に流入する。ピペット１６内の精子含有液体１７がなくなるまで、滴下する位置を変えながら、上記作業を繰り返して行う。これにより、採取用容器５内に複数の精子含有粒状凍結体３０が採取される。
【００３０】
そして、生体細胞粒状凍結体作成具１を液体窒素より引き上げ、採取容器５を取り外し、採取容器５にキャップを装着することにより、図１７に示すように、液体窒素１８とそれに浸漬した複数の精子含有粒状凍結体３０の採取作業が完了する。キャップ６が装着された採取容器５は、液体窒素が充填されているキャニスターに投入され保管される。
【符号の説明】
【００３１】
１，１ａ  生体細胞粒状凍結体作成具
２  作成具本体
４  板状部材
２０  漏斗部
２１  上部
２２  テーパー状縮径部
２４  採取容器接続用開口部
３１ａ，３１ｂ，３１ｃ  脚部
２６  側孔
４２  貫通孔
３２  把持部
【図１】
2020108336.tif 000003
【図２】
2020108336.tif 000004
【図３】
2020108336.tif 000005
【図４】
2020108336.tif 000006
【図５】
2020108336.tif 000007
【図６】
2020108336.tif 000008
【図７】
2020108336.tif 000009
【図８】
2020108336.tif 000010
【図９】
2020108336.tif 000011
【図１０】
2020108336.tif 000012
【図１１】
2020108336.tif 000013
【図１２】
2020108336.tif 000014
【図１３】
2020108336.tif 000015
【図１４】
2020108336.tif 000016
【図１５】
2020108336.tif 000017
【図１６】
2020108336.tif 000018
【図１７】
2020108336.tif 000019