(57)【要約】【課題】生体適合性が高く、かつ担持された生体適合性ポリマーの血液中への溶出が少ない、血液処理用ビーズを提供すること。【解決手段】多孔質ビーズ、及び上記多孔質ビーズの表面上に担持されたポリマーを有する、血液処理用ビーズであって、上記多孔質ビーズは、アクリル系樹脂、スチレン系樹脂、及びセルロース系樹脂からなる群から選択される少なくとも一つの樹脂から構成され、上記ポリマーは、両性イオン型モノマーを単量体単位として含み、上記両性イオン型モノマーは、上記ポリマーを構成するモノマー全体を基準として、１０モル％以上３０モル％以下である、血液処理用ビーズが提供される。【選択図】図１
2020006156.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多孔質ビーズ、及び前記多孔質ビーズの表面上に担持されたポリマーを有する、血液処理用ビーズであって、
前記多孔質ビーズは、アクリル系樹脂、スチレン系樹脂、及びセルロース系樹脂からなる群から選択される少なくとも一つの樹脂から構成され、
前記ポリマーは、両性イオン型モノマーを単量体単位として含み、
前記両性イオン型モノマーは、前記ポリマーを構成するモノマー全体を基準として、１０モル％以上３０モル％以下である、血液処理用ビーズ。
【請求項２】
前記血液処理用ビーズの表面における、窒素原子の割合が、原子番号３番から９２番までの原子の総数を基準として、原子百分率で０．２％以上０．９％以下である、請求項１に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項３】
前記両性イオン型モノマーは、下記式（１）：
【化１】
2020006156.tif 000013
｛式（１）中、Ｒ１は、水素原子又はメチル基であり、Ｙは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、Ｒ２は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは１〜５であり、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素原子数１〜４のアルキル基であり、Ｒ５は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは０〜４であり、Ｚは、−ＣＯＯ−又はＳＯ３−である。｝
で表されるモノマー、及び
下記式（２）：
【化２】
2020006156.tif 000014
｛式（２）中、Ｒ１は、水素原子又はメチル基であり、Ｙは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、Ｒ２は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは１〜５であり、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ6は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素原子数１〜４のアルキル基であり、Ｒ５は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは０〜４である。｝
で表されるモノマーからなる群から選択される少なくとも一つである、請求項１又は２に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項４】
前記ポリマーは、下記式（３）：
【化３】
2020006156.tif 000015
｛式（３）中、Ｒ７は、水素原子又はメチル基であり、Ｒ８は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｒ−であり、ｒは１〜５であり、Ｒ９は、−ＣＨ２ＣｔＨ２ｔ＋１であり、ｔは０〜３である。｝
で表されるモノマーを単量体単位として更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項５】
前記ポリマーは、前記両性イオン型モノマー、及び前記式（３）のモノマーから構成される、請求項４に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項６】
前記式（３）中、ｒは１〜３であり、ｔは０又は１である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項７】
前記式（１）中、Ｒ１はメチル基であり、ｑは１〜３であり、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、メチル基又はエチル基であり、ｍは０又は１である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項８】
前記両性イオン型モノマーは、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、［２−（メタクリロイルオキシ）エチル］ジメチル−（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド、［３−（メタクリロイルアミノ）プロピル］ジメチル（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド、及びリン酸２−（メタクリロイルオキシ）エチル２−（トリメチルアンモニオ）エチルからなる群から選択される少なくとも一つである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項９】
前記多孔質ビーズの細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量が０．５ｃｍ３／ｇ以上であり、細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量が０．２ｃｍ３／ｇ以下である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項１０】
前記多孔質ビーズの体積平均粒子径は、３００μｍ〜１０００μｍである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項１１】
血液から１０００Ｄａ超〜６６０００Ｄａ未満の疎水性蛋白質分子を除去する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
【請求項１２】
血液からサイトカイン及びハイモビリティグループボックス１（ＨＭＧＢ１）を除去する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の多孔質吸着ビーズ。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズを有する、血液浄化器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液処理用ビーズに関する。
【背景技術】
【０００２】
敗血症をはじめとする虚血性疾患の治療においては、その原因物質と考えられる炎症性メディエーター、例えばサイトカイン及びアラーミン等を患者の血液中から除去する、種々のアフェレシス療法が行われている。近年、アフェレシス療法の一つとして、炎症性メディエーターを吸着により除去する、吸着型血液浄化器の開発が進んでいる。
【０００３】
上市されている吸着型血液浄化器としては、例えば、エンドトキシン除去機能を有する繊維をロール状に巻き付けた吸着体を用いた、トレミキシン（登録商標）（東レ・メディカル株式会社）；アラーミン（ＨＭＧＢ１）及びサイトカイン（ＩＬ−６等）吸着機能を有する中空糸を用いた、持続的血液浄化療法（ＣＲＲＴ）向け吸着型血液浄化器である、セプザイリス（登録商標）（バクスター株式会社）；並びにサイトカイン除去機能を有する多孔性ポリマービーズを用いた、ＣｙｔｏＳｏｒｂ（登録商標）（サイトソーベンツ社）等が挙げられる。
【０００４】
血液浄化器は患者の血液に直接触れるため、生体適合性を有することが必要である。血液浄化器に生体適合性を付与するため、吸着体は、生体適合性ポリマー、典型的には親水性ポリマーでコーティングされる。
【０００５】
特許文献１は、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（ＣＭＢ）と、二重結合１個及び有機基を有するアルケン化合物で表される生体適合性を有する重合性モノマーとを共重合させた、生体適合性ポリマーを記載している。
【０００６】
特許文献２は、非イオン性基を有するモノマー単位と、塩基性含窒素官能基を有するモノマー単位と、ホモポリマーを形成した場合にＮ値が２以下となるモノマー単位とを含む、特定構造の共重合体を記載している。この共重合体をフィルター上に担持することにより、赤血球へ悪影響を与えずに赤血球を含む生体由来液を処理することが可能な、生体由来液処理フィルターを提供することができる。
【０００７】
特許文献３は、両性イオン部分およびオリゴエチレングリコール部分の少なくとも１つを複数有する架橋ポリマー材料を、吸着体としての多孔質ビーズ上にコーティングすることを記載している。
【０００８】
特許文献４は、２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）と、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（ＣＭＢ）とを共重合させた生体適合性ポリマーであって、ＣＭＢが、全単量体単位中１〜７モル％含まれる、生体適合性ポリマーを記載している。
【０００９】
特許文献５は、２−メトキシエチルアクリレート（ＭＥＡ）と、［２−（メタクリロイルオキシ）エチル］ジメチル−（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド（ＳＰＢ）、または［３−（メタクリロイルアミノ）プロピル］ジメチル（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド（ＳＰＢＡ）とを共重合させた生体適合性ポリマーであって、ＳＢＡＣが、全単量体単位中１〜７モル％含まれる、生体適合性ポリマーを記載している。
【００１０】
このような吸着型血液浄化器は、虚血性疾患の治療のほか、心臓手術及び臓器移植手術などの、炎症性メディエーターの過剰産生が問題となる場面での活用が期待されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特表２００７−１３０１９４号公報
【特許文献２】特開２０１７−１８５０３７号公報
【特許文献３】特表２０１６−５１４５６８号公報
【特許文献４】国際公開第２０１５／０９８７６３号
【特許文献５】国際公開第２０１５／１２５８９０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
しかしながら、上記の特許文献１〜３等に記載されているような従来の生体適合性ポリマーを、医療材料にコーティング（本願明細書において「担持」ともいう。）すると、医療材料の生体適合性を向上させることはできるものの、両性イオンを含むポリマーは水溶性が高いため、水や血液と接触したときに上記ポリマーが血液中に溶出してしまう。吸着型血液浄化器において、溶出物は少ないほうが良く、上記の特許文献４及び５のように、コーティングするポリマーは、両性イオンを含む単量体単位の含有率を十分に抑制することが必要であると考えられている。
【００１３】
上記のような背景に鑑み、本発明は、生体適合性が高く、かつ担持された生体適合性ポリマーの血液中への溶出が少ない、血液処理用ビーズを提供することを課題の一つとする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本願発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、医療用材料として特定の樹脂で構成される多孔質ビーズの表面上に、両性イオン型モノマーを単量体単位として特定量含むポリマーを担持することにより、該ポリマーの水への溶出量を抑制できることを見いだし、本発明を完成するに至った。以下、本発明の実施形態の例を列記する。
［１］
多孔質ビーズ、及び上記多孔質ビーズの表面上に担持されたポリマーを有する、血液処理用ビーズであって、
上記多孔質ビーズは、アクリル系樹脂、スチレン系樹脂、及びセルロース系樹脂からなる群から選択される少なくとも一つの樹脂から構成され、
上記ポリマーは、両性イオン型モノマーを単量体単位として含み、
上記両性イオン型モノマーは、上記ポリマーを構成するモノマー全体を基準として、１０モル％以上３０モル％以下である、血液処理用ビーズ。
［２］
上記血液処理用ビーズの表面における、窒素原子の割合が、原子番号３番から９２番までの原子の総数を基準として、原子百分率で０．２％以上０．９％以下である、項目１に記載の血液処理用ビーズ。
［３］
上記両性イオン型モノマーは、下記式（１）：
【化１】
2020006156.tif 000003
｛式（１）中、Ｒ１は、水素原子又はメチル基であり、Ｙは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、Ｒ２は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは１〜５であり、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素原子数１〜４のアルキル基であり、Ｒ５は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは０〜４であり、Ｚは、−ＣＯＯ−又はＳＯ３−である。｝
で表されるモノマー、及び
下記式（２）：
【化２】
2020006156.tif 000004
｛式（２）中、Ｒ１は、水素原子又はメチル基であり、Ｙは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、Ｒ２は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは１〜５であり、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ6は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素原子数１〜４のアルキル基であり、Ｒ５は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは０〜４である。｝
で表されるモノマーからなる群から選択される少なくとも一つである、項目１又は２に記載の血液処理用ビーズ。
［４］
上記ポリマーは、下記式（３）：
【化３】
2020006156.tif 000005
｛式（３）中、Ｒ７は、水素原子又はメチル基であり、Ｒ８は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｒ−であり、ｒは１〜５であり、Ｒ９は、−ＣＨ２ＣｔＨ２ｔ＋１であり、ｔは０〜３である。｝
で表されるモノマーを単量体単位として更に含む、項目１〜３のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
［５］
上記ポリマーは、上記両性イオン型モノマー、及び上記式（３）のモノマーから構成される、項目４に記載の血液処理用ビーズ。
［６］
上記式（３）中、ｒは１〜３であり、ｔは０又は１である、項目１〜５のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
［７］
上記式（１）中、Ｒ１はメチル基であり、ｑは１〜３であり、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、メチル基又はエチル基であり、ｍは０又は１である、項目１〜６のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
［８］
上記両性イオン型モノマーは、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン、［２−（メタクリロイルオキシ）エチル］ジメチル−（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド、［３−（メタクリロイルアミノ）プロピル］ジメチル（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド、及びリン酸２−（メタクリロイルオキシ）エチル２−（トリメチルアンモニオ）エチルからなる群から選択される少なくとも一つである、項目１〜７のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
［９］
上記多孔質ビーズの細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量が０．５ｃｍ３／ｇ以上であり、細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量が０．２ｃｍ３／ｇ以下である、項目１〜８のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
［１０］
上記多孔質ビーズの体積平均粒子径は、３００μｍ〜１０００μｍである、項目１〜９のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
［１１］
血液から１０００Ｄａ超〜６６０００Ｄａ未満の疎水性蛋白質分子を除去する、項目１〜１０のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズ。
［１２］
血液からサイトカイン及びハイモビリティグループボックス１（ＨＭＧＢ１）を除去する、項目１〜１１のいずれか一項に記載の多孔質吸着ビーズ。
［１３］
項目１〜１２のいずれか一項に記載の血液処理用ビーズを有する、血液浄化器。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、生体適合性が高く、かつ担持された生体適合性ポリマーの血液中への溶出が少ない、血液処理用ビーズを提供することができる。なお、上述の記載は、本発明の全ての実施形態及び本発明に関する全ての利点を開示したものとみなしてはならない。本発明の更なる実施形態及びその利点は、以下の記載及び図面を参照することにより明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎ（オルガノ社製、スチレン系ポリマービーズ）の、Ｌｏｇ微分細孔容積分布及び積算細孔容量を示すグラフである。
【図２】図２は、ピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０（ピュロライト社製、アクリル系ビーズ）の、Ｌｏｇ微分細孔容積分布及び積算細孔容量を示すグラフである。
【図３】図３は、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎ、及びピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０の、累計体積粒度分布を示すグラフである。
【図４】図４は、血小板付着性の評価方法を説明するための模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態（以下、「本実施形態」という。）を例示する目的で詳細に説明するが、本発明は本実施形態に限定されるものではない。本願明細書において、各数値範囲の上限値及び下限値は任意に組み合わせることができる。
【００１８】
《血液処理用ビーズ》
〈生体適合性ポリマー〉
本実施形態における血液処理用ビーズは、吸着体としての多孔質ビーズ上に担持されたポリマーを有する。ポリマーは、両性イオン型モノマーを単量体単位として含むポリマーである（「生体適合性ポリマー」ともいう。）。本願明細書において、「両性イオン型モノマー」は、ｐＨ７．０の条件下で、一分子内に、正電荷と負電荷の両方を有するモノマーである。生体適合性ポリマーが両性イオン型モノマーを単量体単位として含み、かつ、後述する特定の材料から構成される多孔質ビーズと組み合わせることによって、生体適合性が高く、かつ担持された生体適合性ポリマーの血液中への溶出が少ない血液処理用ビーズを提供することができる。その理由としては、理論に限定されないが、発明者らは以下のように推定している。すなわち、両性イオン型モノマーは高い親水性を有するため、生体適合性を向上させることができるが、しかしながら、水や血液に接した際に溶出しやすいという問題があった。特に、吸着型血液浄化器では、血液処理用ビーズは、数時間から長い時には１日以上、血液と接触し続ける。使用時に多孔質ビーズ上にコーティングしたポリマーが溶出すると、吸着型血液浄化器の生体適合性が長時間維持できなくなるとともに、そのポリマーが血液内に溶出する可能性が高まる。本実施形態では、ポリマーを担持させている多孔質ビーズが吸着体として機能し、溶出する生体適合性ポリマーをその細孔内に吸着することができる。その結果、より良好な血液適合性を有しつつ、生体適合性ポリマーの血液中への溶出が低減された、血液処理用ビーズを得ることができる。
【００１９】
両性イオン型モノマーとしては、アミノ基（−ＮＨ２、−ＮＨＲ３、ＮＲ３Ｒ４）とカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）との両性イオン型モノマー、アミノ基とスルホン酸基（−ＳＯ３Ｈ）との両性イオン型モノマー、及びアミノ基とリン酸基（−ＯＰＯ３Ｈ２）との両性イオン型モノマーからなる群から選択される少なくとも一つであることが好ましく、アミノ基とカルボキシル基との両性イオン型モノマーである場合、多孔質ビーズがＣａ２＋を吸着し、血液凝固の亢進を抑制できる点で更に好ましい。
【００２０】
両性イオン型モノマーとしては、下記式（１）：
【化４】
2020006156.tif 000006
｛式（１）中、Ｒ１は、水素原子又はメチル基であり、Ｙは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、Ｒ２は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは１〜５であり、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素原子数１〜４のアルキル基であり、Ｒ５は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは０〜４であり、Ｚは、−ＣＯＯ−又はＳＯ３−である。｝
で表されるモノマーであることが好ましい。
【００２１】
上記式（１）中、Ｒ１はメチル基であり、ｑは１〜３であり、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、メチル基又はエチル基であり、ｍは０又は１であることが好ましい。
【００２２】
上記式（１）のモノマーとしては、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（ＣＭＢ）、［２−（メタクリロイルオキシ）エチル］ジメチル−（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド（ＳＰＢ）、［３−（メタクリロイルアミノ）プロピル］ジメチル（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド（ＳＰＢＡ）、及び［３−（メタクリロイルアミノ）プロピル］ジメチル（３−スルホブチル）アンモニウムからなる群から選択される少なくとも一つであることがより好ましい。上記式（１）のモノマーとしては、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（ＣＭＢ）である場合、多孔質ビーズがＣａ２＋を吸着し、血液凝固の亢進を抑制できる点でより好ましい。
【００２３】
両性イオン型モノマーとしては、下記式（２）：
【化５】
2020006156.tif 000007
｛式（２）中、Ｒ１は、水素原子又はメチル基であり、Ｙは、酸素原子又は−ＮＨ−であり、Ｒ２は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは１〜５であり、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ6は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素原子数１〜４のアルキル基であり、Ｒ５は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｍ−であり、ｍは０〜４である。｝
で表されるモノマーであることもまた好ましい。
【００２４】
上記式（２）中、Ｒ１はメチル基であり、ｑは１〜３であり、Ｒ３、Ｒ４およびＲ6は、それぞれ独立して、メチル基又はエチル基であり、ｍは１又は２であることが好ましい。
【００２５】
上記式（２）のモノマーとしては、リン酸２−（メタクリロイルオキシ）エチル２−（トリメチルアンモニオ）エチル（ＭＰＣ）が挙げられる。
【００２６】
両性イオン型モノマーとしては、上記式（１）及び（２）のモノマーからなる群から選択される少なくとも一つのモノマーであることが好ましい。
【００２７】
両性イオン型モノマーの含有量は、生体適合性ポリマーを構成するモノマー全体を基準として、好ましくは１０モル％以上３０モル％以下、より好ましくは１２モル％以上３０モル％以下、さらに好ましくは１５モル％以上３０モル％以下である。両性イオン型モノマーの含有量が上記範囲内である場合、生体適合性ポリマーの水への溶出量を抑制しつつ、より高い生体適合性を有する血液処理用ビーズが得られる傾向にある。生体適合性ポリマーの組成及び構造の分析方法については、実施例の欄で詳述する。
【００２８】
ポリマーは、下記式（３）：
【化６】
2020006156.tif 000008
｛式（３）中、Ｒ７は、水素原子又はメチル基であり、Ｒ８は、−ＣＨ２（ＣＨ２）ｒ−であり、ｒは１〜５であり、Ｒ９は、−ＣＨ２ＣｔＨ２ｔ＋１であり、ｔは０〜３である。｝
で表されるモノマーを単量体単位として更に含むことが、生体適合性ポリマーの水への溶出量を抑制しつつ、より高い生体適合性を有する血液処理用ビーズを得るうえで、好ましい。
【００２９】
式（３）中、Ｒ７は好ましくはメチル基であり、ｒは好ましくは１〜３、より好ましくは１又は２であり、ｔは好ましくは０〜２、より好ましくは０又は１である。
【００３０】
式（３）で表されるモノマーの含有量は、生体適合性ポリマーを構成するモノマー全体を基準として、好ましくは４０モル％以上、より好ましくは６０モル％以上である。該モノマーの含有量の上限値は限定されず、生体適合性ポリマーを構成するモノマー全体を基準として、好ましくは９０モル％以下、８０モル％以下、又は６０モル％以下であってもよい。
【００３１】
生体適合性ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）は、好ましくは５，０００以上５，０００，０００以下、より好ましくは１０，０００以上１，０００，０００以下、更に好ましくは１０，０００以上３００，０００以下である。生体適合性ポリマーの重量平均分子量が上記範囲内であると、多孔質ビーズへの適度な含浸性、血液中への溶出の防止、及び担持量の低減等の観点から好ましい。生体適合性ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）の分析方法は、例えば、比較例に記載するように、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）などにより測定することができる。
【００３２】
生体適合性ポリマーが「多孔質ビーズの表面上に担持されている」とは、他の一つの表現では、生体適合性ポリマーが、多孔質ビーズの表面の少なくとも一部に存在する状態を指すものである。したがって、本実施形態において、生体適合性ポリマーは、多孔質ビーズの表面の全てに担持（コーティング）されている必要はない。また、本発明の課題を解決することができる限りにおいて、生体適合性ポリマーは、多孔質ビーズの細孔内に存在していてもよく、細孔をある程度閉塞していてもよい。
【００３３】
生体適合性ポリマーは、上記両性イオン型モノマー、及び上記式（３）のモノマーから構成されてもよい。しかしながら、生体適合性ポリマーは、上記両性イオン型モノマー、及び上記式（３）のモノマーに加えて、他のモノマーを単量体単位として更に含んでいてもよい。他のモノマーとしては、これらのモノマーと共重合可能であれば限定されない。
【００３４】
他のモノマーとしては、両性イオン型ではなく、かつ式（３）に該当しないモノマーである。他のモノマーとしては、例えば、ｐＨ７．０の条件下で部分的もしくは完全に正電荷を帯びる官能基、又は負電荷を帯びる官能基のいずれか一方を有する、カチオン性又はアニオン性モノマーが挙げられる。正電荷又は負電荷を帯びる官能基としては、例えば、アミノ基（−ＮＨ２、−ＮＨＲ３、ＮＲ３Ｒ４）、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、リン酸基（−ＯＰＯ３Ｈ２）、及びスルホン酸基（−ＳＯ３Ｈ）が挙げられる。カチオン性又はアニオン性モノマーとしては、より具体的には、２−アミノエチルメタクリレート（ＡＥＭＡ）、ジメチルアミノエチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、ジエチルアミノエチルメタクリレート（ＤＥＡＥＭＡ）、［２−（メタクリロイルオキシ）エチル］トリメチルアンモニウム、アクリル酸（ＡＡｃ）、メタクリル酸（ＭＡｃ）、及びリン酸２−（メタクリロイルオキシ）エチルが挙げられる。他のモノマーとしては、より具体的には、メチルアクリレート、エチルアクリレート、イソプロピルアクリレート、ブチルアクリレート、ヘキシルアクリレート、２−エチルヘキシルアクリレート、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、イソプロピルメタクリレート、ブチルメタクリレート、ヘキシルメタクリレート、２−エチルヘキシルメタクリレート、メトキシメチルアクリレート、エトキシメチルアクリレート、プロポキシメチルアクリレート、ブトキシメチルアクリレート、エトキシメチルメタクリレート、プロポキシメチルメタクリレート、ブトキシメチルメタクリレート、及び２−（２−エトキシエトキシ）エチルアクリレート（Ｅｔ２Ａ）等もまた挙げられる。これらの中でも、両性イオン型モノマー及び上記式（３）のモノマーと、カチオン性又はアニオン性モノマーとを組み合わせて使用することが好ましい。
【００３５】
他のモノマーの量は、存在する場合、生体適合性ポリマーを構成するモノマー全体を基準として、１モル％以上、５モル％以上、又は１０モル％以上、３０モル％以下、２５モル％以下、又は２０モル％以下であってもよい。
【００３６】
〈多孔質ビーズ〉
本実施形態における血液処理用ビーズは、吸着体としての多孔質ビーズを有する。多孔質ビーズは、アクリル系樹脂、スチレン系樹脂、及びセルロース系樹脂からなる群から選択される少なくとも一つの樹脂から構成される。本願明細書において、本発明の課題を解決することができる限りにおいて、多孔質ビーズは、他の樹脂及び他の成分を含んでいてもよい。
【００３７】
多孔質ビーズとしては、市販の多孔質ビーズを使用することができる。アクリル系樹脂から構成される市販の多孔質ビーズとしては、例えば、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ７ＨＰ（オルガノ社製）、ダイヤイオンＴＭＨＰ２ＭＧ（三菱ケミカル社製）、ピュロソーブＴＭＰＡＤ６１０（ピュロライト社製）、ピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０（ピュロライト社製）及びＭｕｒｏｍａｃ（商標登録）ＰＡＰ−９２１０（室町ケミカル社製）等を挙げることができる。スチレン系樹脂から構成される市販の多孔質ビーズとしては、例えば、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ４（オルガノ社製）、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ２０００（オルガノ社製）、アンバーライトＴＭＦＰＸ６６（オルガノ社製）、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎ（オルガノ社製）、ダイヤイオンＴＭＨＰ２０（三菱ケミカル社製）、ダイヤイオンＴＭＨＰ２１（三菱ケミカル社製）、ダイヤイオンＴＭＳＰ７００（三菱ケミカル社製）、ピュロソーブＴＭＰＡＤ６００（ピュロライト社製）、ピュロソーブＴＭＰＡＤ９００（ピュロライト社製）、及びＭｕｒｏｍａｃ（商標登録）ＳＡＰ−９２１０（室町ケミカル社製）等を挙げることができる。セルロース系樹脂から構成される市販の多孔質ビーズとしては、例えば、ビスコパール（商標登録）ミニ（レンゴー株式会社社製）、及びＣ８３２９（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）等を挙げることができる。
【００３８】
多孔質ビーズの体積平均粒子径は、好ましくは３００μｍ〜１０００μｍ、より好ましくは４００μｍ〜８００μｍ、更に好ましくは４２０μｍ〜７００μｍである。体積平均粒子径が３００μｍ以上であることにより、血液をカラムに流した際の圧上昇を効果的に抑制することができ、体積平均粒子径が１０００μｍ以下であることにより、迅速な吸着性能を発揮することできる。本願において、多孔質ビーズの「体積平均粒子径」の測定方法については、実施例の欄で詳述する。
【００３９】
多孔質ビーズの細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量が、０．５ｃｍ３／ｇ以上であることが好ましく、０．８ｃｍ３／ｇ以上であることがより好ましく、１．０ｃｍ３／ｇ以上であることが更に好ましい。該積算細孔容量の上限値は、好ましくは３．５ｃｍ３／ｇ以下、より好ましくは３．０ｃｍ３／ｇ以下、更に好ましくは２．５ｃｍ３／ｇ以下である。該積算細孔容量が上記範囲内である場合、ポリマーを担持させている多孔質ビーズの吸着性がより向上し、その結果、多孔質ビーズはより多くの疎水性蛋白質分子を除去することができるため好ましい。また該積算細孔容量が上記範囲内である場合、溶出する生体適合性ポリマーをその細孔内により効果的に吸着することができる。その結果、より良好な血液適合性を有しつつ、生体適合性ポリマーの血液中への溶出が低減された血液処理用ビーズを得ることができるため好ましい。
【００４０】
積算細孔容量の特徴に加えて、又は他の実施形態において、多孔質ビーズの細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量が、０．２ｃｍ３／ｇ以下であることが好ましく、０．１ｃｍ３／ｇ以下であることがより好ましく、０．０５ｃｍ３／ｇ以下であることが更に好ましい。該積算細孔容量が上記特徴を有する場合、多孔質ビーズは疎水性蛋白質分子の吸着に適したサイズの細孔を多く有し、その結果、より吸着性に優れた血液処理用ビーズを得ることができるため好ましい。多孔質ビーズの積算細孔容量の測定方法については、実施例の欄で詳述する。
【００４１】
〈血液処理用ビーズの元素割合及び原子割合〉
（元素分析に基づく元素割合）
血液処理用ビーズ全体を構成する元素のうち、窒素元素の割合は、０質量％超１．０質量％以下であることが好ましく、０質量％超０．３質量％以下であることがより好ましい。窒素元素の割合が上記範囲内である場合、血液処理用ビーズは、疎水性蛋白質分子を吸着しつつ高い血液適合性を有するため好ましい。血液処理用ビーズ全体を構成する元素のうち、炭素元素、水素元素、及び酸素元素の総和は、９７．０質量％以上であることが好ましく、９９．０質量％以上であることがより好ましい。これらの元素の割合が上記範囲内である場合、血液処理用ビーズはより多くの疎水性蛋白質分子を除去することができるため好ましい。血液処理用ビーズ全体を構成する元素を基準とする元素割合は、元素分析で測定することができる。測定方法については、実施例の欄で詳述する。
【００４２】
（ＸＰＳに基づく原子割合）
上記元素分析に基づく元素割合の特徴に加えて、又は他の実施形態において、血液処理用ビーズの表面に存在する窒素原子の割合は、血液処理用ビーズの表面に存在する原子番号３番のリチウム原子から原子番号９２番のウラン原子の総数を基準として、原子百分率で０．２％以上０．９％以下であることが好ましく、０．２％以上０．７％以下であることがより好ましく、０．３％以上０．５％以下であることが更に好ましい。血液処理用ビーズの表面に存在する窒素原子数の割合が上記範囲内である場合、血液処理用ビーズは、疎水性蛋白質分子を吸着しつつ高い血液適合性を有するため好ましい。なお、血液処理用ビーズの表面に存在する窒素原子の割合は、窒素を含有する生体適合性ポリマーを用いることにより調整することができる。例えば、両性イオン型モノマーとして、窒素を含有する両性イオン型モノマーを用いてもよく、他のモノマーとして、窒素を含有する他のモノマーを用いてもよく、又はこれらの両方を用いてもよい（総称して、「窒素含有モノマー」ともいう。）。より具体的には、（１）生体適合性ポリマーを構成する窒素含有モノマーの割合を調整することにより、及び／又は（２）多孔質ビーズ上の窒素を含有する生体適合性ポリマーの担持量を調整することにより、血液処理用ビーズの表面に存在する窒素原子の割合を調整することができる。血液処理用ビーズの表面に存在する炭素原子と酸素原子の割合の総和は、血液処理用ビーズの表面に存在する原子番号３番のリチウム原子から原子番号９２番のウラン原子の総数を基準として、原子百分率で９７．０％以上であることが好ましい。血液処理用ビーズの表面に存在するリン原子の割合は、血液処理用ビーズの表面に存在する原子番号３番のリチウム原子から原子番号９２番のウラン原子の総数を基準として、原子百分率で、好ましくは３％以下、より好ましくは１％以下である。血液処理用ビーズの表面に存在する特定の原子の割合は、X線光電分光法（ＸＰＳ）により測定することができる。測定方法については、実施例の欄で詳述する。
【００４３】
血液処理用ビーズを粉砕して粉体にし、該粉体の表面をＸＰＳで測定することにより、血液処理用ビーズの全体を構成する特定原子の割合を、原子番号３番から９２番までの原子の総数を基準として測定することができる。このようにして測定した血液処理用ビーズの全体を構成する窒素原子の割合は、原子番号３番から９２番までの原子の総数を基準として、０％超０．１％以下であることが好ましい。血液処理用ビーズの全体を構成するリン原子の割合は、原子番号３番から９２番までの原子の総数を基準として、０．１％以下であることが好ましい。窒素原子及びリン原子の割合が、それぞれ上記範囲内である場合、血液処理用ビーズは、疎水性蛋白質分子を吸着しつつ高い血液適合性を有するため好ましい。
【００４４】
〈血液処理用ビーズの吸着性〉
本実施形態における血液処理用ビーズは、例えば、血液から１０００Ｄａ超〜６６０００Ｄａ未満の疎水性蛋白質分子を除去すると、ポリマーを担持させている多孔質ビーズの吸着性がより向上し、溶出する生体適合性ポリマーをその細孔内により効果的に吸着することができる。その結果、より良好な血液適合性を有しつつ、生体適合性ポリマーの血液中への溶出が低減された血液処理用ビーズを得ることができるため好ましい。本願明細書において、ある疎水性蛋白質分子を「除去することができる」とは、除去対象の疎水性蛋白質分子を含む血漿サンプル中を血液処理用ビーズに接触させて振とうさせたとき、該血液処理用ビーズへの該疎水性蛋白質の吸着率が３０％以上であることを意味する。血液処理用ビーズの吸着性の評価方法は、実施例の欄で詳述する。本実施形態における血液処理用ビーズは、より好ましくは８０００Ｄａ超〜６６０００Ｄａ未満、更に好ましくは８０００Ｄａ超〜５１０００Ｄａ未満の疎水性蛋白質分子を除去することができる。例えば、サイトカインは分子量約５〜６０ｋＤａ（ＩＬ−１ｂ：約１７．５ｋＤａ、１Ｌ−６：約２４．５ｋＤａ、ＩＬ−８：約８ｋＤａ、ＩＬ−１０（二量体）：約３７．５ｋＤａ、ＴＮＦ−α（三量体）：約５１ｋＤａ）、アラーミンであるハイモビリティグループボックス１（ＨＭＧＢ１）は分子量約３０ｋＤａの疎水性蛋白質である。
【００４５】
除去される疎水性蛋白質分子としては、敗血症の原因と考えられる蛋白質分子、例えば、病原微生物に由来する外因性物質であるＰＡＭＰｓ(pathogen-associated molecular patterns)；並びに炎症反応に繋がる種々の炎症性メディエーター、例えば、組織障害により放出される内因性物質であるアラーミン、及び炎症反応を引き起こすサイトカインが挙げられる。疎水性蛋白質分子としては、白血球もまた挙げられる。
【００４６】
ＰＡＭＰｓとしては、例えば、エンドトキシン（ＬＰＳ）、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）、リポテイコ酸、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、及びフラジェリン等が挙げられる。
【００４７】
アラーミンとしては、例えば、ハイモビリティグループボックス１（ＨＭＧＢ１）、熱ショックタンパク（ＨＳＰｓ）、ヒストン、フィブリノーゲン、好中球エラスターゼ、及びマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）等が挙げられる。
【００４８】
サイトカインとしては、例えば、インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、及びＩＬ−１８）、並びに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α、及びＴＮＦ−β）等が挙げられる。
これらの中でも、血液処理用ビーズは、アラーミン及びサイトカインを除去することが好ましく、ＨＭＧＢ１及びサイトカインを除去することがより好ましい。
【００４９】
〈血液処理用ビーズの生体適合性〉
本実施形態における血液処理用ビーズは、上記のように優れた吸着性を維持しながら、生体適合性にも優れている。用語「生体適合性」とは、血液浄化器の目的や使用方法によって異なるが、本願明細書においては、血液処理用ビーズへの血小板の付着量を生体適合性の指標として用いる。血液処理用ビーズへの血小板の付着量が抑制されるほど、血液処理用ビーズは生体適合性に優れている。血液処理用ビーズの血小板付着性の評価方法は、実施例の欄で詳述する。
【００５０】
本実施形態における血液処理用ビーズは、実施例の欄で詳述する「血液処理用ビーズの血小板付着性」の評価方法に基づいて測定した場合に、血小板残存率は、好ましくは８１％〜１００％、より好ましくは８３％〜９５％、更に好ましくは８５％〜９５％である。
【００５１】
《血液処理用ビーズの製造方法》
本実施形態の血液処理用ビーズの製造方法は限定されない。例えば、本実施形態の血液処理用ビーズの製造方法は、アクリル系樹脂、スチレン系樹脂、及びセルロース系樹脂からなる群から選択される少なくとも一つの樹脂から構成される多孔質ビーズの表面上に、本実施形態における生体適合性ポリマーを担持することを含む。本実施形態における生体適合性ポリマーは、両性イオン型モノマーを単量体単位として含む。生体適合性ポリマー及び両性イオン型モノマーについての詳細は上述したので、ここでは記載を省略する。
【００５２】
〈生体適合性ポリマーの製造方法〉
本実施形態において、生体適合性ポリマーの製造方法は限定されない。例えば、生体適合性ポリマーの製造方法は、任意の溶媒中に両性イオン型モノマーを含有するモノマー溶液を調整することと、上記モノマー溶液に任意の重合開始剤を添加して重合溶液を調整することと、上記モノマーを重合させることとを含む。
【００５３】
両性イオン型モノマーに加えて、上記式（３）のモノマーを、上記モノマー溶液中及び／又は上記重合溶液中に更に添加して、両性イオン型モノマーと共重合させてもよい。上記式（３）のモノマーについての詳細は上述したので、ここでは記載を省略する。
【００５４】
重合された生体適合性ポリマーは、任意の精製方法、例えば、再沈澱法、透析法、限外濾過法、及び抽出法等によって精製することができる。精製された生体適合性ポリマーは、任意の乾燥方法、例えば、減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥、及び加熱乾燥等によって乾燥させることができる。
【００５５】
〈生体適合性ポリマーの担持方法〉
生体適合性ポリマーを多孔質ビーズの表面上に担持する方法としては、任意の担持方法、例えば塗布法、スプレー法、及びディップ法等を用いることができる。
【００５６】
例えば、ディップ法は、任意の溶媒、例えばアルコール、クロロホルム、アセトン、テトラヒドロフラン、及びジメチルホルムアミド等に上記生体適合性ポリマーを溶解したコーティング溶液を調整し、コーティング溶液に多孔質ビーズを浸漬することを含む。含浸後、コーティング溶液から多孔質ビーズを取り出して余分な溶液を取り除き、次いで任意の乾燥方法により乾燥させることができる。乾燥方法としては、乾燥気体中での風乾、減圧雰囲気中で常温又は加熱しながら乾燥を行う減圧乾燥等が挙げられる。減圧乾燥は、本実施形態における多孔質ビーズ１ｇ当たりのポリマーの量を少なくする観点から好ましい。
【００５７】
塗布法及びスプレー法では、例えば、上記コーティング溶液を多孔質ビーズに塗布又はスプレーした後、上記のように乾燥させることを含む。
【００５８】
《血液浄化器》
本実施形態の血液浄化器は、本実施形態の血液処理用ビーズを有する。血液浄化器は、一般に、血液入口、内部空間、及び血液出口を有する本体容器を有し、内部空間は血液処理用ビーズを収容することができる。血液浄化処理の際には、一般に、処理前の血液が血液入口を通って内部空間へと導入され、内部空間内に存在する本実施形態の血液処理用ビーズと接触することによって処理され、処理済み血液は血液出口を通って流出することができる。
【００５９】
本体容器の形状としては、限定されないが、例えば、筒状、典型的には円筒状のカラム等を挙げることができる。
【００６０】
本体容器を構成する材料としては、限定されないが、熱可塑性樹脂、例えばポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステル、ポリスチレン、ポリ四フッ化エチレン、ポリカーボネート、アクリロニトリルブタジエンスチレン（ＡＢＳ）、及びビニル芳香族炭化水素と共役ジエンとからなる共重合体等が挙げられる。また、封止のために熱硬化性樹脂、例えばポリウレタン、及びエポキシ等が用いられることもある。
【実施例】
【００６１】
以下、実施例及び比較例により本発明の実施形態を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例及び比較例に限定されるものではない。
【００６２】
《多孔質ビーズの物性測定》
〈多孔質ビーズの体積平均粒子径〉
超純水にて膨潤された多孔質ビーズの大きさをデジタルマイクロスコープＶＨＸ―９００（キーエンス社製）を用いて２０００ビーズ測定し、それらの体積平均を体積平均粒子径（μｍ）として算出した。
【００６３】
〈多孔質ビーズの積算細孔容量〉
超純水にて膨潤された多孔質ビーズを凍結後２４時間凍結乾燥し、多孔質ビーズを乾燥させた後、ＶａｃＰｒｅｐ０６１（島津製作所−マイクロメリティックス社製）を用いて６０℃で１５時間の脱ガス処理（減圧乾燥）を行った。その後、ＴｒｉＳｔａｒII  ３０２０（島津製作所−マイクロメリティックス社製）を用いてＮ２ガス吸着法にて積算細孔容量（ｃｍ３／ｇ）の測定を行った。この際、積算細孔容量としてはＢＪＨ法によるDesorption Cumulative Pore Volumeを採用した。
【００６４】
〈多孔質ビーズの比表面積〉
上記の乾燥後の血液処理用ビーズを、ＶａｃＰｒｅｐ０６１（島津製作所−マイクロメリティックス社製）を用いて６０℃で１５時間の脱ガス処理（減圧乾燥）を行った。その後、ＴｒｉＳｔａｒII  ３０２０（島津製作所−マイクロメリティックス社製）を用いてＮ２ガス吸着法にて比表面積（ｍ２／ｇ）の測定を行った。この際、比表面積としてはＢＥＴプロットによる値を採用した。
【００６５】
《コート後ビーズの物性測定》
〈コート後ビーズの溶出量測定〉
１００ｍＬコニカルビーカーと秤量瓶を超純水で十分に洗浄し、完全に乾燥させた。乾燥させた秤量瓶の重量を、使用直前に測定した（これを「処理前の秤量瓶の重量」とする）。１００ｍＬコニカルビーカーに、コート後ビーズ５．０ｍＬ（乾燥時１．１０ｇ）を加えた後、超純水を５０ｍＬ加えた（この溶液を「サンプル溶液」とする）。また、別の１００ｍＬコニカルビーカーに超純水５０ｍＬのみを加えた（この溶液を「Ｂｌａｎｋ溶液」とする）。次に、この２種類のビーカーの上部をアルミホイルで完全に覆い、同時に、１２１℃で２０分間オートクレーブ滅菌処理（ＬＳＸ−５００Ｌ、トミー精工社製）を行った。オートクレーブ滅菌処理後の２種類のビーカーを室温まで冷却後、ビーカー内の溶液を、濾紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ、Ｎｏ．５Ｃ）を用いて濾過し、新しい１００ｍＬコニカルビーカーに移し替えた。得られた２種類の濾過後溶液を、それぞれ２０ｍＬずつ別の秤量瓶に入れ、ホットプレート上で秤量瓶内の溶液の水分を蒸発させた。その後、それらの秤量瓶を、熱風乾燥機（ＤＮ４１０１、ヤマト社製）内で、１０５℃で１時間さらに乾燥し、乾燥後の秤量瓶の重量を測定した（これを「処理後の秤量瓶の重量」とする）。
【００６６】
サンプル溶液の蒸発残存物、Ｂｌａｎｋ溶液の蒸発残存物、およびコート後ビーズの溶出物量を以下の式により算出した。算出されたＢｌａｎｋ溶液の蒸発残存物が０．３ｍｇ以下になった場合にのみ、コート後ビーズの溶出物量の値として採用した。コート後ビーズの溶出物量の値は、２度測定及び算出し、その平均値が１．０ｍｇを超えた場合に溶出が多いと判断し、１．０ｍｇ以下の時に溶出が少ないと判断した。
サンプル溶液の蒸発残存物（ｍｇ）＝処理後の秤量瓶の重量（ｍｇ）−処理前の秤量瓶の重量（ｍｇ）
Ｂｌａｎｋ溶液の蒸発残存物（ｍｇ）＝処理後の秤量瓶の重量（ｍｇ）−処理前の秤量瓶の重量（ｍｇ）
コート後ビーズの溶出物量（ｍｇ）＝サンプル溶液の蒸発残存物（ｍｇ）−Ｂｌａｎｋ溶液の蒸発残存物（ｍｇ）
【００６７】
《実施例１》
〈コーティングポリマーの合成〉
２−メトキシエチルメタクリレート（ＭＥＭＡ、化７構造式（ｉ）の化合物）と、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルメタクリレート（ＤＥＡＥＭＡ、化７構造式（ｉｉ）の化合物）と、Ｎ−メタクリロイルオキシエチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウム−α−Ｎ−メチルカルボキシベタイン（ＣＭＢ、化７構造式（ｉｉｉ）の化合物）との共重合体を通常の溶液重合によって合成した。重合条件は、エタノール溶液中、開始剤としてアゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）０．００２５モル／Ｌ存在下、各モノマー濃度を１モル／Ｌとし、反応温度６０℃にて８時間重合反応を行い、ポリマー重合液を得た。得られたポリマー重合液をジエチルエーテルに滴下し、析出したポリマーを回収した。回収したポリマーを、ジエチルエーテルを用いて再沈殿操作を行うことで精製した。その後、得られたポリマーを減圧条件下で２４時間乾燥してコーティングポリマーを得た。
【００６８】
コーティングポリマー中のＭＥＭＡモノマー単位と、ＤＥＡＥＭＡモノマー単位と、ＣＭＢモノマー単位とのモル比は以下のように測定した。得られたコーティングポリマーをジメチルスルホキシドへ溶解した後、１Ｈ−ＮＭＲ測定を行うことにより算出したチャートにおける４．３２ｐｐｍ（ＣＭＢに固有のＨ原子由来）のピーク及び２．６３ｐｐｍ（ＤＥＡＥＭＡに固有のＨ原子由来）のピークと、０．６５−２．１５ｐｐｍ（全体のＨ原子量）の面積比から次の式により算出した。
ＤＥＡＥＭＡモノマーのモル比＝（“２．６３ｐｐｍ領域の面積比”／２）／（“０．６５−２．１５ｐｐｍ領域の面積比”／５−“２．６３ｐｐｍ領域の面積比”×０．３）×１００
ＣＭＢモノマーのモル比＝（“４．３２ｐｐｍ領域の面積比”／２）／（“０．６５−２．１５ｐｐｍ領域の面積比”／５−“２．６３ｐｐｍ領域の面積比”×０．３）×１００
ＭＥＭＡモノマーのモル比＝１００−ＤＥＡＥＭＡモノマーのモル比−ＣＭＢモノマーのモル比
コーティングポリマーにおけるＭＥＭＡモノマー単位と、ＤＥＡＥＭＡモノマー単位と、ＣＭＢモノマー単位とのモル比は、８０／１０／１０と算出された。
【００６９】
〈コーティング液の調製〉
上記コーティングポリマーを５７Ｗ／Ｗ％のエチルアルコールへ添加した後、１２時間撹拌し、コーティングポリマー濃度が０．２重量％のコーティング液を調整した。
【００７０】
〈ビーズの調製〉
多孔質ビーズとしてアンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎ（オルガノ社製、スチレン系ポリマービーズ、体積平均粒子径６０９μｍ、細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量１．４７２ｃｍ３／ｇ、細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量０．０２０ｃｍ３／ｇ）を用いた。アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０ＮのＬｏｇ微分細孔容積分布及び積算細孔容量のグラフを図１に、累計体積粒度分布のグラフを図３に示す。超純水で膨潤されたビーズ８ｍＬ（乾燥時１．７６ｇ）をポリプロピレン（ＰＰ）製の５０ｍＬコニカルチューブに入れた後、５７Ｗ／Ｗ％のエチルアルコール４０ｍＬを加えた。振とう機（インビトロシェイカーＷＡＶＥ−Ｓ１、ＴＡＩＴＥＣ社製）を用いて振とう角度１０度、４０ｒ／ｍｉｎで１２時間振とう後、振とう後の溶液をセルストレーナー（セルストレーナー、ナイロンメッシュ７０μｍ、フナコシ社製）にて濾過した。濾過後の溶液の２２０ｎｍにおける吸光度を島津紫外可視分光光度計ＵＶ−２６００（島津製作所社製）にて測定後、濾過にて得られたビーズを再度５０ｍＬコニカルチューブに加えた。このコニカルチューブへの５７Ｗ／Ｗ％のエチルアルコールの添加、振とう機による１２時間の振とう、セルストレーナーによる溶液除去の一連の作業を、濾過後溶液の２２０ｎｍにおける吸光度が０．０３以下になるまで繰り返し行った。
【００７１】
〈コート後ビーズの作成〉
上記処理により得られたビーズを含有した５０ｍＬコニカルチューブに、上記コーティング液４０ｍＬを加え、振とう機（インビトロシェイカーＷＡＶＥ−Ｓ１、ＴＡＩＴＥＣ社製）を用いて振とう角度１０度、４０ｒ／ｍｉｎで１２時間振とうさせた。その後、コート処理後溶液をセルストレーナー（セルストレーナー、ナイロンメッシュ７０μｍ、フナコシ社製）にて濾過し、コート後ビーズを得た。濾過後のコート処理後溶液の２２０ｎｍにおける吸光度を島津紫外可視分光光度計ＵＶ−２６００にて測定後、濾過にて得られたコート後ビーズを再度５０ｍＬコニカルチューブに加えた。
【００７２】
続いて、上記のコート後ビーズを含有した５０ｍＬコニカルチューブを、５０℃で１５時間真空乾燥（絶対圧力０．００３ＭＰａ以下）を行った後、コニカルチューブ内に２０Ｗ／Ｗ％のエチルアルコールを４０ｍＬ加えた。振とう機（インビトロシェイカーＷＡＶＥ−Ｓ１、ＴＡＩＴＥＣ社製）を用いて振とう角度１０度、４０ｒ／ｍｉｎで１２時間振とう後、ビーズが浸潤した溶液をセルストレーナー（セルストレーナー、ナイロンメッシュ７０μｍ、フナコシ社製）にて除去し、得られたビーズを再度５０ｍＬコニカルチューブに加えた。その後、５０ｍＬコニカルチューブへの超純水４０ｍＬの添加、振とう機による３時間の振とう、セルストレーナーによる溶液除去の一連の作業を計３度繰り返し行い、コート後ビーズを得た。得られたコート後ビーズの溶出物量を測定したところ、１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。
【００７３】
〈血液処理用ビーズの作成〉
上記のコート後ビーズ３ｍＬを１５ｍＬコニカルチューブに加えた。その後、１５ｍＬコニカルチューブへの超純水１２ｍＬの添加、振とう機による３時間の振とう、セルストレーナーによる溶液除去の一連の作業を計２度繰り返し行った。最後にコニカルチューブに生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬工場社製）を１２ｍＬ充填し、γ線照射により滅菌作業を行い、血液処理用ビーズを得た。
【００７４】
《血液処理用ビーズの物性測定》
〈血液処理用ビーズ全体の元素分析〉
上記の血液処理用ビーズ１ｍＬに含まれる溶液をセルストレーナーにて除去し、得られたビーズを１５ｍＬコニカルチューブに加えた。その後、１５ｍＬコニカルチューブへ超純水１２ｍＬを添加することで、ビーズ溶液を超純水にて置換した。超純水にて置換された血液処理用ビーズを５０℃で１５時間真空乾燥（絶対圧力０．００３ＭＰａ以下）を行った。乾燥後の血液処理用ビーズを、元素分析装置（株式会社堀場製作所製、酸素・窒素・水素分析装置ＥＭＧＡ−９３０）を用いて元素分析を行った。試験は３検体で分析し、その平均値を採用した。その結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。
【００７５】
〈血液処理用ビーズ表面のＸＰＳ測定〉
上記の乾燥後の血液処理用ビーズから無作為に５０粒選択し、そのビーズ１粒１粒の表面状態を、Ｋ−Ａｌｐｈａ＋（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を用いて、ＸＰＳにて測定した。測定条件は、照射Ｘ線：単結晶分光ＡＩ  Ｋα、Ｘ線スポット径：１５０μｍ、中和電子銃：使用、であった。それらの５０粒の血液処理用ビーズ表面に存在する、原子番号３番のリチウム原子から原子番号９２番のウラン原子の総数に対する窒素原子存在率の値を平均化したものを、血液処理用ビーズ表面の窒素原子存在率（％）として算出した。その結果を表３に記す。
【００７６】
〈血液処理用ビーズ全体のＸＰＳ測定〉
上記の乾燥後の血液処理用ビーズをすりこぎ棒により粉砕し、血液処理用ビーズの粉体を作製した。その粉体の表面状態を、Ｋ−Ａｌｐｈａ＋（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  社製）を用いて、ＸＰＳにて測定した。測定条件は、照射Ｘ線：単結晶分光ＡＩ  Ｋα、Ｘ線スポット径：１５０μｍ、中和電子銃：使用、であった。測定は１０検体について行い、原子番号３番のリチウム原子から原子番号９２番のウラン原子の総数に対する窒素原子存在率の値を平均化したものを、血液処理用ビーズ全体の窒素原子存在率（％）として算出した。その結果を表３に記す。
【００７７】
〈血液処理用ビーズのフロー評価法による血小板付着性〉
図４は、血小板付着性の評価方法を説明するための模式図である。血液処理用ビーズ１．５ｍＬ（乾燥時０．３３ｇ）を、生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬工場社製）にて膨潤させた。上記膨潤した血液処理用ビーズ（１１）を、空気が入らないように注意しながら、２．５ｍＬシリンジに詰めた。このとき、ビーズが漏れないよう、図４に示すように、血液処理用ビーズの上下を、メッシュ（１２）及びＯ−リング（１３）で挟んだ。血液処理用ビーズ１．５ｍＬが詰まったミニカラム（１０）を作製した。
【００７８】
健常ボランティアから採血した血液にヘパリンナトリウム（ヘパリンナトリウム注５万単位／５０ｍＬ、ニプロ社製）を１０００ＩＵ／ｍＬ濃度になるように添加した（これを「処理前血液（２１）」とする）。次に、図４に示すように実験回路を組み立て、血液処理用ビーズを詰めたミニカラム（１０）に、生理食塩水（大塚生食注、大塚製薬工場社製）をシリンジポンプ（２０）（ＴＥ−３５１、テルモ社製）を用いて、流速１ｍＬ／ｍｉｎで１０分間通液させた。続いて、上記の処理前血液（２１）を流速１ｍＬ／ｍｉｎで、シリンジポンプ（２０）（ＴＥ−３５１、テルモ社製）を用いて通液した。処理前血液の通液開始２分後から、ミニカラム通液後の血液を１５ｍＬコニカルチューブ（３０）に採取し、採取した血液（これを「処理後血液（３１）」とする）が９ｍＬになった時点で血液の通液を終了した。処理後血液と処理前血液の血小板濃度を、ミクロセルカウンター  ＸＴ−１８００ｉ（Ｓｙｓｍｅｘ社製）にて測定し、下記式からビーズへの血小板残存率を算出したところ、８５％であった。上記の方法により、血小板残存率が８０％以下である場合、血液処理用ビーズの血小板付着量は多いと判断し、血小板残存率が８０％より高い場合、血液処理用ビーズの血小板付着量は少ないと判断した。
血小板残存率（％）＝処理後血液の血小板数／処理前血液の血小板数×１００
尚、今回の実験で使用した処理前血液は、白血球濃度：５３１０個／μＬ、赤血球濃度：５０５×１０＾４個／μＬ、血小板濃度：１９６×１０＾３個／μＬ、ヘマトクリット値：４１．０％であった。ヘモクロンJr．シグニチャー＋（インターナショナルテクニダイン社製、ヘモクロン  テストカ−トリッジ  ＪＡＣＴ−ＬＲ）にて測定した、処理前血液の活性化凝固時間は３１９秒であった。
【００７９】
《実施例２》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＣＭＢ＝９０／１０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物量を測定したところ、１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８３％であり、血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【００８０】
〈血液処理用ビーズの吸着性〉
健常ボランティアから採血した血液にヘパリンナトリウム（ヘパリンナトリウム注５万単位／５０ｍＬ、ニプロ社製）を２０００  ＩＵ／ｍＬ濃度になるように添加後、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｏ１１１：Ｂ４由来のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を０．１μｇ／ｍＬ濃度になるように添加し、振とう機（インビトロシェイカーＷＡＶＥ−Ｓ１、ＴＡＩＴＥＣ社製）を用いて振とう角度１０度、１０ｒ／ｍｉｎで２４時間、３７℃で振とうさせた。その後、遠心機（ハイブリッド高速冷却遠心機  ６２００、久保田商事社製）を用いて、室温で２０００ｇで２０分間遠心し、上清を血漿サンプルとして取得した。取得した血漿サンプル３．６ｍＬと上記の血液処理用ビーズ０．４５ｍＬ（乾燥時０．１０ｇ）をポリプロピレン（ＰＰ）製の５ｍＬチューブ内で混合し、振とう機を用いて振とう角度１０度、１０ｒ／ｍｉｎで２時間、３７℃で振とうさせた（これをビーズ接触有サンプルとする）。この時、取得した血漿サンプル３．６ｍＬにビーズを添加しないサンプルも準備し、ビーズ接触有サンプルと同じ処理を行った（これをビーズ接触無サンプルとする）。振とうさせた後のＰＰ製チューブを、遠心機を用いて、室温で２０００ｇで１分間遠心し、ビーズ接触有及び無サンプルの上清を取得した。取得した上清を用いて、各種サイトカイン濃度をＢｉｏ−Ｐｌｅｘシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製  Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  ヒト  サイトカイン  ＧＩ２７−ｐｌｅｘ  パネル）を用いて、添付の取扱説明書に従い測定した。またＨＭＧＢ−１濃度はＨＭＧＢ１  ＥＬＩＳＡＫ  Ｋｉｔ  ＩＩ（株式会社  シノテスト製）を用いて、添付の取扱説明書に従い測定した。ここで、ビーズのサイトカイン、ＨＭＧＢ−１吸着率は下記式にて算出した。その結果を表２に示す。
各種サイトカイン吸着率（％）＝（“ビーズ接触無サンプルのサイトカイン濃度”−“ビーズ接触有サンプルのサイトカイン濃度”）／“ビーズ接触無サンプルのサイトカイン濃度”×１００
ＨＭＧＢ−１吸着率（％）＝（“ビーズ接触無サンプルのＨＭＧＢ−１濃度”−“ビーズ接触有サンプルのＨＭＧＢ−１濃度”）／“ビーズ接触無サンプルのＨＭＧＢ−１濃度”×１００
尚、今回の実験におけるビーズ接触無サイトカイン濃度、ビーズ接触無ＨＭＧＢ−１濃度はＩＬ−１ｂ：３６５８ｐｇ／ｍＬ、ＩＬ−６：５５４０ｐｇ／ｍＬ、ＩＬ−８：６１４４ｐｇ／ｍＬ、ＩＬ−１０：８４６ｐｇ／ｍＬ、ＴＮＦ−α：８０８５ｐｇ／ｍＬ、ＨＭＧＢ−１：２７ｎｇ／ｍＬであった。
【００８１】
《実施例３》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＣＭＢ＝８０／２０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８９％であり血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。実施例２と同様の方法で、サイトカイン吸着性能評価を実施した結果を表２に示す。
【００８２】
《実施例４》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＣＭＢ＝７０／３０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８９％であり血小板付着量は少なかった。
【００８３】
《実施例５》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＭＰＣ（リン酸２−（メタクリロイルオキシ）エチル２−（トリメチルアンモニオ）エチル、化７構造式（iｖ）の化合物）＝８５／１５（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８３％であり血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【００８４】
《実施例６》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＳＰＢ（２−（メタクリロイルオキシ）エチル］ジメチル−（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド、化７構造式（ｖ）の化合物）＝８８／１２（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８４％であり血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【００８５】
《実施例７》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＳＰＢ＝７０／３０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８７％であり血小板付着量は少なかった。
【００８６】
《実施例８》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＳＰＢＡ（［３−（メタクリロイルアミノ）プロピル］ジメチル（３−スルホプロピル）アンモニウムヒドロキシド、化７構造式（ｖｉ）の化合物））＝８８／１２（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８３％であり血小板付着量は少なかった。
【００８７】
《実施例９》
コーティングポリマーの組成がＭＥＡ（２−メトキシエチルアクリレート、化７構造式（ｖｉｉ）の化合物）／ＣＭＢ＝７０／３０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８５％であり血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。実施例２と同様の方法で、サイトカイン吸着性能評価を実施した結果を表２に示す。
【００８８】
《実施例１０》
コーティングポリマーの組成がＭＣ３Ａ（３−メトキシプロピルアクリレート、化７構造式（ｖｉｉｉ）の化合物）／ＣＭＢ＝７０／３０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８７％であり血小板付着量は少なかった。
【００８９】
《実施例１１》
コーティングポリマーの組成がＥｔ２Ａ（２−（２−エトキシエトキシ）エチルアクリレート、化７構造式（ｉｘ）の化合物）／ＣＭＢ＝７０／３０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８６％であり血小板付着量は少なかった。
【００９０】
《実施例１２》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０（ピュロライト社製、アクリル系ポリマービーズ、体積平均粒子径６２１μｍ、細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量０．８２３ｃｍ３／ｇ、細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量０．０３８ｃｍ３／ｇ）を選択したこと以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。ピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０のＬｏｇ微分細孔容積分布及び積算細孔容量のグラフを図２に、累計体積粒度分布のグラフを図３に示す。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は９１％であり血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【００９１】
《実施例１３》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０を選択したこと、コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝６０／２０／２０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８６％であり血小板付着量は少なかった。
【００９２】
《実施例１４》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０を選択したこと以外は、実施例３と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８７％であり血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【００９３】
《実施例１５》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０を選択したこと以外は、実施例７と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８５％であり血小板付着量は少なかった。
【００９４】
《実施例１６》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０を選択したこと以外は、実施例９と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８５％であり血小板付着量は少なかった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。実施例２と同様の方法で、サイトカイン吸着性能評価を実施した結果を表２に示す。
【００９５】
《実施例１７》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０を選択したこと以外は、実施例１０と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８８％であり血小板付着量は少なかった。
【００９６】
《比較例１》
使用コーティング液のコーティングポリマー濃度が０重量％である（コーティングポリマーを溶解させなかった）こと以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は７４％であり血小板付着量は多かった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。実施例２と同様の方法で、サイトカイン吸着性能評価を実施した結果を表２に示す。
【００９７】
《比較例２》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ＝１００（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は７９％であり血小板付着量は多かった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。実施例２と同様の方法で、サイトカイン吸着性能評価を実施した結果を表２に示す。
【００９８】
《比較例３》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＣＭＢ＝９５／５（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は７９％であり血小板付着量は多かった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【００９９】
《比較例４》
コーティングポリマーの組成がＭＥＭＡ／ＣＭＢ＝６０／４０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．２ｍｇであり、溶出物は多かった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。
【０１００】
《比較例５》
コーティングポリマーの組成がＭＥＡ／ＤＥＡＥＭＡ／ＣＭＢ＝４０／２０／４０（モル比）であること以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．４ｍｇであり、溶出物は多かった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【０１０１】
《比較例６》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０を選択したこと以外は、比較例１と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で血小板付着性評価を実施した結果、血小板残存率は８０％であり血小板付着量は多かった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。実施例２と同様の方法で、サイトカイン吸着性能評価を実施した結果を表２に示す。
【０１０２】
《比較例７》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりにピュロソーブＴＭＰＡＤ９５０を選択したこと以外は、比較例５と同様であるコート後ビーズ、血液処理用ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．４ｍｇであり、溶出物は多かった。実施例１と同様の方法で血液処理用ビーズの元素分析を行った結果、窒素元素の割合は０．３質量％以下であった。実施例１と同様の方法で、ビーズ表面のＸＰＳ測定、ビーズ全体のＸＰＳ測定を行った結果を表３に示す。
【０１０３】
《比較例８》
（ビーズの合成）
酢酸ビニル１００ｇ、トリアリルイソシアヌレート６４．３ｇ、酢酸エチル１００ｇ、ヘプタン１００ｇ、ポリ酢酸ビニル（重合度５００）７．５ｇおよびアゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）３．８ｇよりなる均一混合液と、ポリビニルアルコール（ケン化率８７−８９％）１重量％、リン酸二水素ナトリウム二水和物０．０５重量％およびリン酸水素二ナトリウム十二水和物１．５重量％を溶解した超純水４００ｍＬとをフラスコに入れ、十分に撹拌しながら６５℃で１８時間、さらに７５℃で５時間加熱撹拌して懸濁重合を行なった。溶液を濾過して得られた粒状共重合体を、超純水により洗浄した後、アセトン抽出により洗浄した。最後に、洗浄後の粒状共重合体を、苛性ソーダ４６．５ｇおよびメタノール２Ｌよりなる溶液中で４０℃で１８時間攪拌することで、ＰＶＡ系ポリマービーズ（体積平均粒子径１１０μｍ、細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量０．２７０ｃｍ３／ｇ、細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量０．００５ｃｍ３／ｇ以下）を得た。
【０１０４】
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、比較例１と同様であるコート後ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は１．０ｍｇ以下で低かった。
【０１０５】
《比較例９》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例１と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は１．８ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１０６】
《比較例１０》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例３と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は２．０ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１０７】
《比較例１１》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例４と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は２．３ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１０８】
《比較例１２》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例６と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は１．９ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１０９】
《比較例１３》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例７と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は２．２ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１１０】
《比較例１４》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例８と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は２．１ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１１１】
《比較例１５》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例９と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は１．３ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１１２】
《比較例１６》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、上記で得られたＰＶＡ系ポリマービーズを選択したこと以外は、実施例１０と同様であるコート後ビーズを使用した。実施例１と同様の方法でビーズの溶出を判定したところ、溶出量は１．２ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１１３】
《比較例１７》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、活性炭ビーズ（クレハ社製、平均粒子径５７６μｍ、細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量０．１３４ｃｍ３／ｇ、細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量０．００５ｃｍ３／ｇ以下）を選択したこと以外は、比較例１と同様であるコート後ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．０ｍｇ以下であり、溶出物は少なかった。
【０１１４】
《比較例１８》
ビーズとして、アンバーライトＴＭＸＡＤＴＭ１１８０Ｎの代わりに、活性炭ビーズ（クレハ社製、平均粒子径５７６μｍ、細孔径５ｎｍ〜１００ｎｍの積算細孔容量０．１３４ｃｍ３／ｇ、細孔径１００ｎｍ〜２００ｎｍの積算細孔容量０．００５ｃｍ３／ｇ以下）を選択したこと以外は、実施例４と同様であるコート後ビーズを作製した。実施例１と同様の方法でコート後ビーズの溶出物測定を行ったところ１．２ｍｇであり、溶出物は多かった。
【０１１５】
以上、実施例及び比較例における、生体適合性ポリマー（コート剤）の組成、多孔質ビーズの種類、コート後ビーズの溶出物測定結果、血液処理用ビーズの生体適合性（血小板付着量）を下記表１及び２に記載する。また、実施例及び比較例における、血液処理用ビーズの表面及び全体のＸＰＳ測定に基づく原子割合を、下表３に記載する。
【０１１６】
今回実施例および比較例で使用した血液処理用ビーズの元素分析に基づく窒素元素の割合は、すべての血液処理用ビーズにおいて０．３質量％以下であった。また、血液処理用ビーズの元素分析に基づく、炭素元素と水素元素と酸素元素の割合の総和は、すべての血液処理用ビーズにおいて９９．０質量％以上であった。
【０１１７】
【表１】
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【０１１８】
【表２】
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【０１１９】
【表３】
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【０１２０】
【化７】
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【産業上の利用可能性】
【０１２１】
本発明の血液処理用ビーズは、例えば、敗血症をはじめとする虚血性疾患の治療に使用することができる。また、本発明の血液処理用ビーズは、虚血性疾患の治療のほか、心臓手術及び臓器移植手術などの炎症性メディエーターの過剰産生が問題となる場面での活用も期待される。
【符号の説明】
【０１２２】
１０    ミニカラム
１１    血液処理用ビーズ
１２    メッシュ
１３    Ｏ−リング
２０    シリンジポンプ
２１    処理前血液
３０    コニカルチューブ
３１    処理後血液
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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