(57)【要約】      （修正有）【課題】個体の嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰ及び／又は嗅覚受容体のにおい成分に対する応答性を検出することにより、個人の感覚特性や体質等にも関連する有用な嗅覚受容体に関する情報の取得及び利用を提供する。【解決手段】以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子の１種又は２種以上の一塩基多型を検出する工程、を備えることで、ヒト個体の嗅覚の感受性などの体質を評価できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上の一塩基多型を検出する工程、
を備える、体質の評価方法。
【請求項２】
前記１種又は２種以上の一塩基多型は、前記ＯＲ１Ａ１におけるＰ２８５Ｓ（以下、ＯＲ１Ａ１−Ｐ２８５Ｓという。以下、同じ。）、
ＯＲ２ＡＫ２−Ｓ８４Ｎ、ＯＲ２ＡＫ２−Ｖ１８８Ｍ、ＯＲ２ＡＫ２−Ｖ１５Ａ及びＯＲ２ＡＫ２−Ｒ２７０Ｗ、
ＯＲ２Ｊ２−Ｋ３１２Ｍ、ＯＲ２Ｊ２−Ｙ７４Ｈ、ＯＲ２Ｊ２−Ｖ１４６Ａ及びＯＲ２Ｊ２−Ｔ２１８Ａ、
ＯＲ２Ｌ３−Ｉ３９Ｔ、ＯＲ２Ｌ３−Ｐ７８Ｌ、ＯＲ２Ｌ３−Ｓ１０４Ｌ及びＯＲ２Ｌ３−Ｍ１３９Ｖ、
ＯＲ２Ｗ１−Ｄ２９６Ｎ、
ＯＲ８Ｄ１−Ｃ１２７Ｗ及びＯＲ８Ｄ１−Ｌ１９４Ｐ、
ＯＲ８Ｈ１−Ｇ２Ｓ、
ＯＲ１０Ｇ３−Ｓ７３Ｇ及びＯＲ１０Ｇ３−Ｒ２９２Ｑ、
ＯＲ５１Ｉ２−Ｔ１３４Ａ、ＯＲ５１Ｉ２−Ｒ１５１Ｐ及びＯＲ５１Ｉ２−Ｒ２６３Ｈ、
ＯＲ５１Ｌ１−Ｔ１９６Ｉ及びＯＲ５１Ｌ１−Ｉ２８１Ｍ、並びに
ＯＲ５１Ｖ１−Ｌ３６Ｆ
からなる群から選択される、請求項１に記載の評価方法。
【請求項３】
前記１種又は２種以上の一塩基多型の検出工程は、前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子の少なくとも前記１種又は２種以上の一塩基多型を規定する領域を含むポリヌクレオチド領域を増幅し、前記ポリヌクレオチド領域を含む増幅断片について前記１種又は２種以上の一塩基多型の存在を検出する工程である、請求項１又は２に記載の評価方法。
【請求項４】
前記体質は、嗅覚に関する応答性である、請求項１〜３のいずれかに記載の評価方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の評価方法に用いるキットであって、
前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子の前記１種又は２種以上の一塩基多型を規定する領域を含むポリヌクレオチド領域を増幅するためのプライマーセットと、
前記プライマーセットによって増幅された増幅断片を検出するための１種又は２種以上のプローブと、
を備える、キット。
【請求項６】
さらに、前記１種又は２種以上のプローブを備える固相担体を、備える、請求項５に記載のキット。
【請求項７】
以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子によってコードされる１種又は２種以上の嗅覚受容体の応答性に関する嗅覚受容体応答性情報に基づいて、前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上の一塩基多型の存在可能性を予測する工程、
とを備える、遺伝子多型の予測方法。
【請求項８】
前記嗅覚受容体応答性情報は、ヒト個体の嗅覚受容体を利用した応答性評価結果から得られた情報である、請求項７に記載の予測方法。
【請求項９】
前記嗅覚受容体応答性情報は、異なる強度のにおい成分をヒト個体の嗅覚受容体に作用させてヒト個体における知覚程度に基づく情報である、請求項７又は８に記載の予測方法。
【請求項１０】
ヒト個体についての体質関連情報の取得方法であって、
以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子によってコードされる１種又は２種以上の嗅覚受容体の応答性に関する嗅覚受容体応答性情報、及び／又は
前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上の一塩基多型に関する嗅覚受容体遺伝子多型情報を取得する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、嗅覚受容体遺伝子の遺伝子多型の検出及びその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、嗅覚受容体遺伝子の一塩基多型（（single nucleotide polymorphism：ＳＮＰ）と嗅覚等の体質変化（老化を含む。））との関係が明らかになってきている（非特許文献１〜１４）。また、嗅覚受容体は、嗅上皮以外の脳、心蔵、肝臓、腎臓、精巣、卵巣等の組織でも発現していることが報告されている（非特許文献１５）。例えば、精巣で発現している嗅覚受容体ＯＲ１Ｄ２のＳＮＰが、精子走化症（不妊）に関与していることも明らかになっている（非特許文献１，２）。さらに、糖尿病やアルコール依存症に関連しているＳＮＰ（ＯＲ１４Ｊ１、ＯＲ５１Ｌ１）も見出されている（非特許文献１３，１４）。ＯＲ１Ａ２、ＯＲ１Ｄ２、ＯＲ４Ｆ１５は、ガン組織での発現も確認されており、ガンとの関連も推測されている（非特許文献１６）。さらにまた、２７種の嗅覚受容体のＳＮＰの機能評価も報告されている（非特許文献１７）。
【０００３】
また、近年、遺伝子、環境、ライフスタイルに関する個人毎の相違を考慮した予防や治療法（Personalized Healthcare，Personalized Medicine）の開発が進められている。将来は、これらのビッグデータを活用した個人に最適なサービス、製品を提供する時代になると予測される。一方、産業界では“ものづくり”から“ことづくり”に重点が置かれるようになり、個人ごとに異なる感覚特性に訴える商品開発が進められている。また、車両などの種々の移動体、住宅、店舗等の種々の生活空間内での臭いに対する要求が厳しくなってきている。そこで、加齢臭やミドル脂臭や生乾き臭が同定され、対策用の製品が多く市販されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ottaviano G., et al. : Med Hypotheses, 84: 437-441, 2015
【非特許文献２】Ottayiano G., et al. : Eur Arch Otorhinolaryngol, 270: 3079-3086, 2013
【非特許文献３】McRae J .. F, et al.: Chem Senses, 37: 585-593, 2012
【非特許文献４】Nicholas E., etal.: PLoS Genet, 6: e1000993, 2010
【非特許文献５】Zhang Y., et al.: J Assist Reprod Genet, 32: 95-101, 2015
【非特許文献６】Makela C., et al. : J Assist Reprod Genet, 32: 903-908, 2015
【非特許文献７】Jaeger S.R., et al. :Curr Biol, 23: 1601-1605, 2013
【非特許文献８】Keller A., et al. :Nature, 449: 468-472, 2007
【非特許文献９】Kathrine L., et al.: PLoS One, 7: e35259, 2012
【非特許文献１０】Antti K., et al. : Chem Senses, 37: 869-881, 2012
【非特許文献１１】Antti K., et al.: Chem Senses, 37: 541-552, 2012
【非特許文献１２】Menasha I., et al. : PLoS Biol, 5: e284, 2007
【非特許文献１３】Jahromi M.M., et al. :Autoimmun Rev, 12: 270-274, 2012
【非特許文献１４】Leah W., et al.: Alcohol Clin Exp Res, 38: 354-366, 2014
【非特許文献１５】Flegel C., et al. : PLoS One, 8 : e55368, 2013
【非特許文献１６】Li Z., et al.: Oncotarget, 6: 26411-26423, 2015
【非特許文献１７】Joel D Mainland, et al : Nat Neurosci, 17: 114-120, 2014
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、ヒト嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰとその機能との関係はほとんど明らかになっていないのが現状である。
【０００６】
嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰと味覚、嗅覚、温冷感覚等の感覚特性などの個人の体質や健康状態との関係を明らかにすることにより、個人に最適な生活空間、食事、医療等を提供することができると考えられる。
【０００７】
本明細書は、個体の嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰ及び／又は嗅覚受容体のにおい成分に対する応答性を検出することにより、個人の感覚特性や体質等にも関連する有用な嗅覚受容体に関する情報の取得及び利用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、嗅覚受容体は、個体の嗅覚のみならず、種々の感覚特性や体質や健康状態も反映しうることから、嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰ及び／又は嗅覚受容体の応答性を嗅覚受容体関連情報として取得し、個人毎に最適な生活環境や医療等の提供を可能できるという知見を得た。本明細書は、かかる知見に基づき以下の手段を提供する。
【０００９】
［１］以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上の一塩基多型を検出する工程、
を備える、体質の評価方法。
［２］前記１種又は２種以上の一塩基多型は、前記ＯＲ１Ａ１におけるＰ２８５Ｓ（以下、ＯＲ１Ａ１−Ｐ２８５Ｓという。以下、同じ。）、
ＯＲ２ＡＫ２−Ｓ８４Ｎ、ＯＲ２ＡＫ２−Ｖ１８８Ｍ、ＯＲ２ＡＫ２−Ｖ１５Ａ及びＯＲ２ＡＫ２−Ｒ２７０Ｗ、
ＯＲ２Ｊ２−Ｋ３１２Ｍ、ＯＲ２Ｊ２−Ｙ７４Ｈ、ＯＲ２Ｊ２−Ｖ１４６Ａ及びＯＲ２Ｊ２−Ｔ２１８Ａ、
ＯＲ２Ｌ３−Ｉ３９Ｔ、ＯＲ２Ｌ３−Ｐ７８Ｌ、ＯＲ２Ｌ３−Ｓ１０４Ｌ及びＯＲ２Ｌ３−Ｍ１３９Ｖ、
ＯＲ２Ｗ１−Ｄ２９６Ｎ、
ＯＲ８Ｄ１−Ｃ１２７Ｗ及びＯＲ８Ｄ１−Ｌ１９４Ｐ、
ＯＲ８Ｈ１−Ｇ２Ｓ、
ＯＲ１０Ｇ３−Ｓ７３Ｇ及びＯＲ１０Ｇ３−Ｒ２９２Ｑ、
ＯＲ５１Ｉ２−Ｔ１３４Ａ、ＯＲ５１Ｉ２−Ｒ１５１Ｐ及びＯＲ５１Ｉ２−Ｒ２６３Ｈ、
ＯＲ５１Ｌ１−Ｔ１９６Ｉ及びＯＲ５１Ｌ１−Ｉ２８１Ｍ、並びに
ＯＲ５１Ｖ１−Ｌ３６Ｆ
からなる群から選択される、請求項１に記載の評価方法。
［３］前記１種又は２種以上の一塩基多型の検出工程は、前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子の少なくとも前記１種又は２種以上の一塩基多型を規定する領域を含むポリヌクレオチド領域を増幅し、前記ポリヌクレオチド領域を含む増幅断片について前記１種又は２種以上の一塩基多型の存在を検出する工程である、［１］又は［２］に記載の評価方法。
［４］前記体質は、嗅覚に関する応答性である、［１］〜［３］のいずれかに記載の評価方法。
［５］［１］〜［４］のいずれかに記載の評価方法に用いるキットであって、
前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子の前記１種又は２種以上の一塩基多型を規定する領域を含むポリヌクレオチド領域を増幅するためのプライマーセットと、
前記プライマーセットによって増幅された増幅断片を検出するための１種又は２種以上のプローブと、
を備える、キット。
［６］さらに、前記１種又は２種以上のプローブを備える固相担体を、備える、［５］に記載のキット。
［７］以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子によってコードされる１種又は２種以上の嗅覚受容体の応答性に関する嗅覚受容体応答性情報に基づいて、前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上の一塩基多型の存在可能性を予測する工程、
とを備える、遺伝子多型の予測方法。
［８］前記嗅覚受容体応答性情報は、ヒト個体の嗅覚受容体を利用した応答性評価結果から得られた情報である、［７］に記載の予測方法。
［９］前記嗅覚受容体応答性情報は、異なる強度のにおい成分をヒト個体の嗅覚受容体に作用させてヒト個体における知覚程度に基づく情報である、［７］又は［８］に記載の予測方法。
［１０］ヒト個体についての体質関連情報の取得方法であって、
以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子によってコードされる１種又は２種以上の嗅覚受容体の応答性に関する嗅覚受容体応答性情報、及び／又は
前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上の一塩基多型に関する嗅覚受容体遺伝子多型情報を取得する、方法。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＯＲ１Ａ１及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図２】ＯＲ２ＡＫ２及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図３】ＯＲ２Ｊ２及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図４】ＯＲ２Ｌ３及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図５Ａ】ＯＲ２Ｗ１及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図５Ｂ】ＯＲ２Ｗ１及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図６】ＯＲ８Ｄ１及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図７】ＯＲ８Ｈ１及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図８】ＯＲ１０Ｇ３及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図９】ＯＲ５１Ｉ２及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図１０】ＯＲ５１Ｌ１及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図１１】ＯＲ５１Ｖ１及びそのＳＮＰのにおい成分応答性評価結果を示す図である。
【図１２】ＯＲ１Ａ１−Ｐ２８５Ｓの遺伝子配列を示す図（ただし、コード領域に加えて５'側に制限酵素ＳｇｆＩサイト（gcgatcgc）＋ｃ、３’側にＰｍｅＩサイト（gtttaaac）＋ｇを含む。図１３〜図２８に示す嗅覚受容体の遺伝子配列において同じ。）である。
【図１３】ＯＲ２ＡＫ２−Ｓ８４Ｎの遺伝子配列を示す図である。
【図１４】ＯＲ２ＡＫ２−Ｖ１８８Ｍの遺伝子配列を示す図である。
【図１５】ＯＲ２ＡＫ２−Ｖ１５Ａ/Ｓ８４Ｍ/Ｒ２７０Ｗの遺伝子配列を示す図である。
【図１６】ＯＲ２Ｊ２−Ｋ３１２Ｍの遺伝子配列を示す図である。
【図１７】ＯＲ２Ｊ２−Ｙ７４Ｈ/Ｖ１４６Ａ/Ｔ２１８Ａの遺伝子配列を示す図である。
【図１８】ＯＲ２Ｌ３−Ｉ３９Ｔ/Ｐ７８Ｌ/Ｓ１０４Ｌ/Ｍ１３９Ｖの遺伝子配列を示す図である。
【図１９】ＯＲ２Ｗ１−Ｄ２９６Ｎの遺伝子配列を示す図である。
【図２０】ＯＲ８Ｄ１−Ｃ１２７Ｗ/Ｌ１９４Ｐの遺伝子配列を示す図である。
【図２１】ＯＲ８Ｈ１−Ｇ２Ｓの遺伝子配列を示す図である。
【図２２】ＯＲ１０Ｇ３−Ｓ７３Ｇの遺伝子配列を示す図である。
【図２３】ＯＲ１０Ｇ３−Ｒ２９２Ｑの遺伝子配列を示す図である。
【図２４】ＯＲ５１Ｉ２−Ｔ１３４Ａの遺伝子配列を示す図である。
【図２５】ＯＲ５１Ｉ２−Ｒ１５１Ｐ/Ｒ２６３Ｈの遺伝子配列を示す図である。
【図２６】ＯＲ５１Ｌ１−Ｔ１９６Ｉの遺伝子配列を示す図である。
【図２７】ＯＲ５１Ｌ１−Ｉ１２８Ｍの遺伝子配列を示す図である。
【図２８】ＯＲ５１Ｖ１−Ｌ３６Ｆの遺伝子配列を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書の開示は、嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰの検出及びその利用に関する。本明細書に開示される嗅覚受容体遺伝子の１種又は２種以上のＳＮＰを検出して嗅覚受容体遺伝子多型情報を取得することにより、その嗅覚受容体の機能、すなわち、におい成分に対する応答性の相違などの体質やその変化に関する体質関連情報を取得できる。また、嗅覚受容体のにおい成分に関する応答性に関する嗅覚受容体応答性情報を取得することで、嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰを推測することができ、ひいては、体質やその変化などの体質関連情報についても類推することができる。
【００１２】
なお、一塩基多型（single nucleotide polymorphism：ＳＮＰ）は、一般的には、遺伝子の塩基配列において一つの塩基だけ異なる状態およびその部位をいう。また、遺伝子多型とは、一般的には、母集団中１％以上の頻度で存在する２以上の対立遺伝子（アレル）をいう。本明細書において、ＳＮＰは、好ましくは、当業者が自由に利用可能な公開されたデータベースに登録されたＳＮＰであって、そのリファレンス番号から特定できるＳＮＰである。
【００１３】
以下、本明細書に開示される嗅覚受容体のＳＮＰの検出及びその利用に関する実施形態について以下に詳細に説明する。
【００１４】
（体質の評価方法）
本明細書に開示される体質の評価方法は、以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子の１種又は２種以上のＳＮＰを検出する工程、を備えることができる。
【００１５】
これらの嗅覚受容体遺伝子は、ヒトの嗅覚受容体のうち、本発明者らが知得している主たる受容体又はその組合せとリガンド（におい成分）との組合せから選択されたものである。これらの嗅覚受容体の遺伝子については、後述するようなＳＮＰが既に知られており、これらのＳＮＰが嗅覚受容体の応答性に影響することがわかっている。したがって、これらの嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰ又はその組合せの有無に関する情報（以下、嗅覚受容体遺伝子多型情報ともいう。）が、嗅覚受容体の応答性、すなわち、嗅覚を含む体質の良好な指標になるものと考えられる。これらの嗅覚受容体遺伝子とリガンドとの関係を表１に示す。
【００１６】
【表１】
2020108370.tif 000002
【００１７】
表１に示すように、これらの嗅覚受容体遺伝子は、１種又は２種以上のにおい成分に応答することができる。
【００１８】
これらの嗅覚受容体遺伝子の塩基配列及びアミノ酸配列については、例えば、ＮＣＢＩ（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene）のほか、HUGO Gene Nomenclature Committee ( HYPERLINK "https://www.genenames.org/" https://www.genenames.org/)において取得できる。また、これらの嗅覚受容体のＳＮＰやその頻度情報については、The Human Olfactory Data Explorer （https://genome.weizmann.ac.il/horde/）や東北メディカル・メガバンク統合データベースdbTMMカタログ（http://www.dist.megabank.tohoku.ac.jp/about/data/index.html）等を参照することができる。
【００１９】
例えば、本発明者においてリガンドが判明している嗅覚受容体遺伝子とそのＳＮＰ（表２においては、嗅覚受容体遺伝子によってコードされる嗅覚受容体タンパク質のアミノ酸配列におけるＳＮＰに基づくアミノ酸変化（例えば、ＯＲ１Ａ１−Ｐ２８５Ｓ（２８５位のＰ（プロリン）がＳ（セリン）に変化））として表す。）又はその組合せとｒｓ番号のリスト並びに出現割合（％）を表２に示す。表２からも明らかであるように、嗅覚受容体遺伝子においては、ＳＮＰの現れる割合（％）が高い傾向にあり、嗅覚受容体遺伝子は多様性に富む傾向があるといえる。なお、表２中、東北メディカルメガバンクdataの遺伝子型の割合（％）は、メジャーホモ又はそれぞれの遺伝子多型をマイナーホモで持つ確率を表す。例えば、OR1A1については、当該遺伝子型をホモで持っている人の割合を示し、OR1A1-P285Sについては、当該ＳＮＰをホモで持っている人の割合を示す。また、表２中、1000 Genomes Project data（allele frequency）における遺伝子型の割合（％）は、対立遺伝子頻度を表す。例えば、ひとつの遺伝子座に対して、複数の対立遺伝子が存在する場合、それぞれの対立遺伝子の集団中における頻度を表す。
【００２０】
【表２】
2020108370.tif 000003
【００２１】
本評価方法において検出対象とすることができる嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰ又はその組合せが表２に例示されている。すなわち、例えば、ＯＲ１Ａ１に関してＰ２８５Ｓ、ＯＲ２ＡＫ２に関してＳ８４Ｎ、Ｖ１８８Ｍ、Ｖ１５Ａ、Ｒ２７０Ｗ、ＯＲ２Ｊ２に関してＫ３１２Ｍ、Ｙ７４Ｈ、Ｖ１４６Ａ及びＴ２１８Ａ、ＯＲ２Ｌ３に関してＩ３９Ｔ、Ｐ７８Ｌ、Ｓ１０４Ｌ及びＭ１３９Ｖ、ＯＲ２Ｗ１に関してＤ２９６Ｎ、ＯＲ８Ｄ１に関してＣ１２７Ｗ及びＬ１９４Ｐ、ＯＲ８Ｈ１に関してＧ２Ｓ、ＯＲ１０Ｇ３に関してＳ７３Ｇ及びＲ２９２Ｑ、ＯＲ５１Ｉ２に関してＴ１３４Ａ、Ｒ１５１Ｐ及びＲ２６３Ｈ、ＯＲ５１Ｌ１に関してＴ１９６Ｉ及びＩ２８１Ｍ、並びにＯＲ５１Ｖ１に関してＬ３６Ｆが挙げられる。
【００２２】
これらの嗅覚受容体遺伝子についての上記ＳＮＰ又はその組合せは、嗅覚受容体が応答することがわかっているにおいにおい成分のうち１種又は２種以上のにおい成分について天然型の嗅覚受容体とは異なる（すなわち、応答強度が天然型に比較して強い又は弱いなど）応答性を示すことができる。嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰ（アミノ酸変異）による嗅覚応答性の表現型は、その嗅覚受容体が応答するにおい成分に対して同様の応答性変化を必ずしも示すわけではなく、１種又は２種以上のにおい成分については応答強度が増大し、及び／又は、他の１種又は２種以上のにおい成分については応答強度が低下し、及び／又は、更に他の１種又は２種以上のにおい成分については応答強度が変化しない場合がありうる。また、特定の嗅覚受容体遺伝子における複数のＳＮＰｓのにおい成分に対する反応性が、互いに異なる場合もある。このような場合、特定の嗅覚受容体遺伝子におけるＳＮＰｓを相互に識別することも可能となる。
【００２３】
こうした種々のＳＮＰを１種又は２種以上組みあわせて検出対象とすることができる。例えば、後段にて開示する表４の内容によれば、ＯＲ１Ａ１に関しては、Ｐ２８５Ｓを単独で検出対象とすることができる。例えば、（−）−カルボン及び／又は３−オクタノンに対する嗅覚応答性が観察されたとき、Ｐ２８５ＳというＳＮＰを有している可能性を肯定することができ、ひいては嗅覚を含む体質の変化や特異性までも評価することができる。また、ＯＲ２ＡＫ２に関しては、Ｓ８４Ｎを単独で検出対象とすることができる。例えば、４−メチル−３−ヘキセン酸及び／又は３−オクタノンに対する嗅覚応答性が観察されたとき、Ｓ８４ＮというＳＮＰを有している可能性等を肯定することができる。
【００２４】
同様に、例えばＯＲ２Ｊ２―Ｙ７４Ｈ／Ｖ１４６Ａ／Ｔ２１８Ａ（以下、ＯＲ２Ｊ２についてのこれらのＳＮＰｓの組合せを意味する。以下、他のＯＲ及びＳＮＰｓについて同様である。）を、検出対象とすることができる。この組合せは、例えば、バニリン及び／又はγ−ウンデカラクトンに対する嗅覚応答性が減弱又は応答性がないとき、これら全てのＳＮＰｓを有している可能性等を肯定できるという組合せを意味している。同様の観点から、例えば、ＯＲ２Ｌ３−Ｉ３９Ｔ／Ｐ７８Ｌ／Ｓ１０４Ｌ／Ｍ１３９Ｖを検出対象とすることができる。また例えば、ＯＲ８Ｄ１−Ｃ１２７Ｗ／Ｌ１９４Ｐを検出対象とすることができる。また例えば、ＯＲ５１Ｉ２−Ｒ１５１Ｐ／Ｒ２６３Ｈを検出対象とすることができる。
【００２５】
これらのＳＮＰを検出対象とすることで得られる嗅覚受容体遺伝子多型情報から、嗅覚受容体のにおい成分に対する応答性の相違、嗅覚を含む体質を明確に判別することができる。
【００２６】
本評価方法で検出対象とするＳＮＰは、上記したｒｓ番号で特定されている。ｒｓ番号を参照することで、検出すべきＳＮＰ及びその近傍の塩基配列を確認できる。
【００２７】
嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰを検出する方法は特に限定するものではない。ヒト遺伝子のＳＮＰを検出するのに用いられる公知の方法を適宜用いることができる。例えば、ダイレクトシーケンス法、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ハイブリダイゼーション法、ＰＣＲ−一本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析（ＳＳＣＰ）法、制限酵素切断断片長多型（ＲＦＬＰ）法、定量的リアルタイムＰＣＲ検出法、インベーダ法、ＴＤＩ（Template-directed Dye-terminator Incorporation）法、ＡＲＭＳ（Amplification Refracting Mutation System）法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）法、ＲＮＡ分解酵素（ＲＮａｓｅＡ）切断法、化学切断法、ＤＯＬ（Dye-labeled Oligonucleotide Ligation）法、および質量分析を用いた遺伝子多型検出法等などから適宜選択して実施することができる。
【００２８】
例えば、１種又は２種以上のＳＮＰの検出は、上記嗅覚受容体遺伝子の１種又は２種以上のＳＮＰを規定する領域を含むポリヌクレオチド領域を増幅し、前記ポリポリヌクレオチド領域を含む増幅断片について前記１種又は２種以上のＳＮＰの存在を検出することができる。前記ポリヌクレオチド領域の増幅は、いわゆるＰＣＲに基づく種々の方法を採用することができ、一般的には、前記ポリヌクレオチド領域を増幅するように設定された塩基配列を有するプライマーセットを用いて、前記ポリヌクレオチド領域を増幅して二本鎖ＤＮＡ断片を取得し、当該二本鎖ＤＮＡ断片につき、例えば、特異的にＳＮＰを検出できるプローブを用いたハイブリダイゼーション等を用いてＳＮＰを検出することができる。
【００２９】
上記嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上のＳＮＰは、嗅覚受容体のリガンドであるにおい成分に対する応答性（感受性）、すなわち、嗅覚に関する応答性を変化させる。すなわち、応答性を増強する場合もあり応答性を低減する場合もある。したがって、上記嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上のＳＮＰを検出することで、その嗅覚受容体の応答性に関する情報（以下、嗅覚受容体応答性情報ともいう。）を取得することができる。嗅覚受容体応答性情報は、嗅覚受容体のリガンドであるにおい成分に対する当該嗅覚受容体の応答性に関する情報である。かかる情報は、個体の嗅覚に関連する特性であるほか、他の知覚（味覚等）にも関連し、ひいては体質に関連すると考えられる。したがって、嗅覚受容体遺伝子の１種又は２種以上のＳＮＰを検出することで、個体の体質を評価することができる。
【００３０】
（評価方法に用いるキット）
本明細書に開示されるキットは、本明細書に開示される上記評価方法を実施するためのキットである。本キットは、上記した１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子の１種又は２種以上のＳＮＰを規定する領域を含むポリヌクレオチド領域を増幅するためのプライマーセットと、前記プライマーセットによって増幅された増幅断片を検出するための１種又は２種以上のプローブと、を備えることができる。かかるキットによれば、ヒト個体の嗅覚の応答性などの体質に関する情報を取得できる。
【００３１】
本キットにおけるプライマーの塩基配列は、当業者であれば、検出すべき１種又は２種以上のＳＮＰを含む塩基配列を取得することができれば、ＳＮＰの検出態様に応じて適切なプライマーセットの各プライマーによる識別配列（ハイブリダイズ配列）を適宜決定することができる。また、かかるプライマーセットによって増幅されたＤＮＡ断片の塩基配列を取得できるため、ＳＮＰの検出態様に応じて、当該ＤＮＡ断片を特異的に捕捉するプローブの構成や塩基配列も当業者であれば適宜決定できる。
【００３２】
さらに、本キットは、プローブが固定された固相担体を備えていてもよい。プライマーセットにより増幅されたＤＮＡ断片を捕捉するプローブは、必要に応じて適当な固相担体に固定されていてもよい。固相担体は、当該分野において周知であり、例えば、球状のビーズであり、例えば、平板状のチップであり、ウェルを有するプレート状であり、ストリップ状であり、スティック状である。なお、プローブハイブリダイゼーションは、種々の態様で実施できる。ハイブリダイゼーション液中に固相担体を浸漬した状態であってもよいし、ハイブリダイゼーション液で多孔質性のストリップ状やスティック状等の固相担体を毛細管現象等で移動させるクロマトグラフィー形態であってもよい。
【００３３】
（遺伝子多型の予測方法）
本明細書に開示される遺伝子多型の予測方法は、以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；
ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ａ６、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子によってコードされる１種又は２種以上の嗅覚受容の応答性に関する嗅覚受容体応答性情報に基づいて、前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における１種又は２種以上のＳＮＰの存在可能性を予測する工程、を備えることができる。この方法によれば、嗅覚受容体応答性情報から、簡易に、嗅覚受容体遺伝子におけるＳＮＰの存在可能性を予測できる。もしくは、ＳＮＰに対応する遺伝子領域における何らかの異常を予測できる。
【００３４】
嗅覚受容体応答性情報を得るための嗅覚受容体の応答性評価は、特に限定するものではなく、ヒト個体の嗅覚受容体を利用した応答性評価結果から得ることができる。嗅覚受容体応答性情報は、例えば、異なる強度のにおい成分をヒト個体の嗅覚受容体に作用させてヒト個体における知覚程度に基づく情報とすることができる。こうした嗅覚受容体応答性情報は、対象となるヒト個体に対する官能評価によって得ることができる。
【００３５】
官能評価は、例えば、評価しようとする嗅覚受容体のリガンド（におい成分）について異なるにおい強度となるようににおい成分の濃度を異ならせた被験体（ガス又は液体）を、直接的又は間接的（例えば、繊維状体や多孔質体に含浸させた状態）でヒト個体の鼻腔に導入するようにして、当該におい成分を検知するか否かの閾値濃度で評価することができる。そのほか、官能評価は、公知の香料、臭気の官能評価方法を適宜採用して実施することができる。例えば、代表的な検査装置やキットとしては、Ｔ&Ｔオルファクトメーター（例えば、第一薬品産業株式会社製）、静脈性嗅覚検査（アリナミンテスト）、においスティック（Oder Stick Identification Test for Japanese; OSIT-J、例えば、第一薬品産業株式会社製）、Open Essence(例えば、和光純薬工業株式会社製)などを適宜選択することができる。
【００３６】
嗅覚受容体のにおい成分に対する応答性の大小は、例えば、評価しようとする嗅覚受容体の遺伝子につきＳＮＰを有しない個体群における特定におい成分に対する平均的な知覚閾値を基準として判断してもよい。また例えば、なんら特定されない個体群についての特定におい成分対する平均的な知覚閾値を基準として判断してもよい。また例えば、一般に、ヒトがにおいを知覚できる平均的な閾値を基準として判断してもよい。また例えば、上記した商業的に入手可能な検査装置やキットを用いる場合には、当該装置等のプロトコール等に記載される基準を採用することもできる。
【００３７】
評価しようとする嗅覚受容体のリガンドとなるにおい成分が複数ある場合には、これらのうち１種又は２種以上のにおい成分につき実施すればよい。全てのにおい成分について実施してもよい。
【００３８】
異なる嗅覚受容体が同一のにおい成分をリガンドとする場合もある。この場合は、このにおい成分についての応答性は、異なる複数の嗅覚受容体におけるＳＮＰの存在可能性を示す有効な指標となる。
【００３９】
（ヒト個体についての体質関連情報の取得方法）
本明細書に開示されるヒト個体の体質関連情報の取得方法は、以下のヒト嗅覚受容体遺伝子；ＯＲ１Ａ１、ＯＲ２ＡＫ２、ＯＲ２Ｊ２、ＯＲ２Ｗ１、ＯＲ２Ｌ３、ＯＲ８Ｄ１、ＯＲ８Ｈ１、ＯＲ１０Ｇ３、ＯＲ５１Ｉ２、ＯＲ５１Ｌ１及びＯＲ５１Ｖ１からなる群から選択される１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子によってコードされる１種又は２種以上の嗅覚受容体の応答性に関する嗅覚受容体応答性情報、及び／又は前記１種又は２種以上の嗅覚受容体遺伝子における嗅覚受容体遺伝子多型情報を取得する方法である。かかる方法によれば、におい成分が最初に接触する嗅覚受容体に関連する情報から、個体の体質や体質の変化についての情報を得ることができる。
【００４０】
ヒト個体の嗅覚受容体応答性情報は、既に説明した方法により取得することができるし、嗅覚受容体遺伝子多型情報についても既に説明した方法により取得できる。これらの一方又は双方を取得することにより、ヒト個体の嗅覚特性を含む体質に関する情報を得ることができる。
【００４１】
嗅覚受容体の応答性は、ヒト個体において変化する場合もある。すなわち、例えば年齢により、また例えば生活環境により、また例えば健康状態により、また例えば疾患により変化しうる。嗅覚受容体応答性情報をモニタリングすることで、嗅覚を含んだ体質の変化、関連ある嗅覚受容体遺伝子の異常、関連ある嗅覚受容体遺伝子が関連する疾患の予兆等のヒト個体の体質関連情報を取得することができる。
【実施例】
【００４２】
以下、本明細書の開示をより具体的に説明するために具体例としての実施例を記載する。以下の実施例は、本明細書の開示を説明するためのものであって、その範囲を限定するものではない。
【００４３】
表２に示したヒト嗅覚受容体遺伝子多型を含むＤＮＡ（コード領域）を含む遺伝子を合成した。合成した各遺伝子を、Ｆｌｅｘｉ Ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に常法に従って組み込み、ＳｇｆＩとＰｍｅＩサイトを利用して、ｐＦ５Ｋ ＣＭＶ−ｎｅｏ Ｆｌｅｘｉ ＶｅｃｔｏｒーＯＲを作製した。
【００４４】
ＨＥＫ２９３細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）−ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＤＭＥ培地にて培養後、表３に示す組成の反応液を調製し、クリーンベンチ内で３０分放置した後、３８４ウェル（ポリーＬ−リジンコート・ホワイトプレート）の各ウェルに添加した。次いで、ＨＥＫ２９３細胞を３．０×１０5／ｃｍ2の割合で各ウェルに播種し、ＣＯ2インキュベータ内で２４時間培養した。
【００４５】
【表３】
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【００４６】
ＣＲＥ応答の測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモーター下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたものを同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。
【００４７】
２４時間培養後、培地を取り除き、無血清培地で調製した対象におい成分を種々の濃度で添加し、４時間ＣＯ2インキュベータ内に放置した。ルシフェラーゼ活性はＤｕａｌ−Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）の添付プロトコールに準じて測定した。におい成分刺激により誘導されたホタルルシフェラーゼ由来の発光値をコントロール群（におい成分非処理群）の発光値で割った値をＦｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅとして、応答強度の指標とした。４−メチル−３−ヘキセン酸等の各種におい成分に対する応答性評価結果を、図１〜１１に示す。また、図１２〜２８に、表２に示すＳＮＰを含む嗅覚受容体遺伝子の塩基配列を（配列番号１〜１７）示す。また、嗅覚受容体の応答強度を表４に示す。
【００４８】
【表４】
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【００４９】
表４には、応答強度が２以下を「―」とし、２〜１０を「＋」とし、１０〜５０を「＋＋＋」と表記している。また、この表記には該当しないが、明らかに応答強度に変化がある場合には、「↑」（強度向上）又は「↓」（強度低下）を示した。なお、図５Ａ、図５Ｂに示すように、ＯＲ２Ｗ１については、３種の溶媒（４−メチル−３−ヘキセン酸、１−オクテン−３−オール及び３−オクタノン）のうち、（１）−オクテン−３−オールにつては、天然及びＳＮＰにおいて応答強度がほぼ同等であったが、他の２種の溶媒については、応答強度が低下していた。したがって、図１〜１１及び表４の結果から、これらに示す嗅覚受容体遺伝子の１種又は２種以上のＳＮＰで、嗅覚受容体応答性の強度変化が認められた。このことから、こうしたＳＮＰｓを備えるヒト個体における嗅覚の感受性（応答性）が異なることが予測される。
【００５０】
このようにこれらの嗅覚受容体遺伝子のＳＮＰと嗅覚受容体応答性が大きく関連付けられた。嗅覚受容体はヒトが最も早く外来物質と接触しうる受容体である。かかる受容体遺伝子におけるＳＮＰｓの解析によって、ヒト個体における嗅覚感受性のほか、種々の体質に関連する情報を取得できることがわかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【配列表】
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