(57)【要約】【課題】細胞自体を処理する必要がなく、細胞に傷害を与えることなしに、細胞を移送することを可能にする細胞移送デバイスとその用途を提供する。【解決手段】タンパク質を含有する母材と磁性部材とを有してなる本体部の表面に細胞捕捉部を設け、細胞移送デバイスとする。該細胞捕捉部は、接触した細胞と脱離可能に結合する結合用官能基を有する。当該デバイスと磁石とによって、細胞移送システムを構成する。また、本体部の細胞移送方法は、移動させるべき細胞を当該デバイスに固定する細胞固定工程と、細胞が固定された当該デバイスを外部の移動可能な磁石によって移動させる細胞移動工程とを有し、好ましい態様では、所定の位置において、当該デバイスから細胞を脱離させる。【選択図】図１
2020108362.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
母材と磁性部材とを有してなる本体部と、
該本体部の表面に設けられた細胞捕捉部とを有し、
該細胞捕捉部は、接触した細胞と脱離可能に結合する結合用官能基を有する、
細胞移送デバイス。
【請求項２】
本体部の母材がタンパク質を含有する、請求項１に記載の細胞移送デバイス。
【請求項３】
タンパク質が架橋された水溶性タンパク質である、請求項２に記載の細胞移送デバイス。
【請求項４】
水溶性タンパク質がアルブミンである、請求項３に記載の細胞移送デバイス。
【請求項５】
磁性部材が磁性粒子であって、該磁性粒子は本体部の母材中に分散している、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞移送デバイス。
【請求項６】
細胞捕捉部が、
結合用官能基として細胞膜と相互作用し得る鎖状の疎水性基と、
本体部の母材に含まれたタンパク質と結合し得る活性基とが、
親水性ポリマーに結合した構造を有する、
請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞移送デバイス。
【請求項７】
親水性ポリマーが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンランダム共重合体およびポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体からなる群より選択される１種または２種以上である、請求項６に記載の細胞移送デバイス。
【請求項８】
細胞膜と相互作用し得る鎖状の疎水性基が、飽和または不飽和の鎖状の炭化水素基である、請求項６または７に記載の細胞移送デバイス。
【請求項９】
飽和または不飽和の鎖状の炭化水素基が、炭素数５〜３６のアルキル基またはアルケニル基である、請求項８に記載の細胞移送デバイス。
【請求項１０】
タンパク質と結合し得る活性基が、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドナトリウム、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールおよび２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノールからなる群より選択される１種または２種以上である、請求項６〜９のいずれか１項に記載の細胞移送デバイス。
【請求項１１】
本体部が、シート状またはフィルム状である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞移送デバイス。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の細胞移送デバイスと、
前記細胞移送デバイス中の磁性部材に磁気的な牽引力を作用させて、該細胞移送デバイスを移動させるための移動可能な磁石と
を有する、細胞移送システム。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の細胞移送デバイスの結合用官能基を移送すべき細胞に結合させることによって、該細胞を細胞移送デバイスに固定する細胞固定工程と、
細胞が固定された前記細胞移送デバイス中の磁性部材に、外部の移動可能な磁石から磁気的な牽引力を作用させることによって、該細胞移送デバイスを細胞と共に移動させる、細胞移動工程とを有する、
細胞移送方法。
【請求項１４】
細胞が動物細胞である、請求項１３に記載の細胞移送方法。
【請求項１５】
細胞固定工程における結合用官能基と細胞との結合が、液体中に細胞が浮遊してなる懸濁液に前記細胞移送デバイスを浸漬し、前記細胞に結合用官能基を接触させることによって行われるか、または、
液体を収容した容器の内部の底面上に位置する細胞に対し、前記細胞移送デバイスを該液体中で沈降させ、前記細胞に結合用官能基を接触させることによって行われる、
請求項１３または１４に記載の細胞移送方法。
【請求項１６】
前記液体が、無血清培地、および、血清を含有しない細胞培養用塩類溶液からなる群より選択される１種または２種以上の液体である、請求項１５に記載の細胞移送方法。
【請求項１７】
細胞移動工程における細胞移送デバイスの移動が、磁性粒子に外部の磁石から磁気的な牽引力を作用させながら該磁石を移動させることによって行われる、請求項１３〜１６のいずれか１項に記載の細胞移送方法。
【請求項１８】
細胞移動工程の後に、さらに、結合用官能基から細胞を脱離する細胞脱離工程を有する、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の細胞移送方法。
【請求項１９】
細胞脱離工程における結合用官能基からの細胞の脱離が、
血清もしくは血清タンパク質を含有する細胞培養用培地および血清もしくは血清タンパク質を含有する細胞培養用塩類溶液からなる群より選択される１種または２種以上に、結合用官能基に細胞が固定された細胞移送デバイスを浸漬して行われる、請求項１８に記載の細胞移送方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、磁力によって細胞を移送することを可能にするデバイス、該デバイスを用いた細胞移送システム、および、該デバイスを用いて細胞を移送する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、細胞生物学の進歩により、体外において様々な種類の細胞を取扱うことが可能になった。それに伴い、細胞を生体内外の特定の場所に移送する技術の重要性が増している。細胞を自在に操作することで、２次元、または、３次元で細胞を特定の位置に配置することや生体組織を模倣した擬似の組織の作製が可能となる。また、生体内の特定部に細胞を移送し、疾患部に治療用の細胞を補充することで、組織の再生を促し、病気の治療を行うことができる。
細胞を特定の場所に移送する方法としては、例えば、磁性粒子であるマグネタイト粒子を包埋させたカチオニックリポソームを用いたエンドサイトーシス等により、細胞内に磁性粒子を内包させ、磁力により細胞を遠隔操作する方法（非特許文献１）、ゲル内に細胞と磁性粒子を分散させて、磁力により遠隔操作する方法（非特許文献２）、レーザー光の放射圧を用いて細胞を捕捉する、いわゆる光ピンセットを利用する方法（非特許文献３）、誘電泳動を用いて細胞を集積する方法（非特許文献４）等が報告されている。
【０００３】
しかし、細胞内に磁性粒子を内包させて磁力により遠隔操作する方法は、細胞に磁性粒子を取り込ませることから、細胞傷害等、細胞の正常な機能に対する影響が懸念される。
ゲル内に細胞と磁性粒子を分散させて、磁力により遠隔操作する方法は、細胞がゲル内に分散されて存在することから、細胞同士が直接接触することができず、細胞間の接触が必要な組織の構築には応用することができない。
光ピンセットを利用する方法は、レーザー光による細胞の傷害が懸念される。また、操作できる細胞は１個の細胞であり、操作が可能な範囲も狭いため、多量の細胞を広範囲にわたり自在に移送する場合には、利用できない。
誘電泳動による方法も、電場による細胞への影響が懸念され、操作可能な範囲が狭いという問題点がある。
さらに、光ピンセットを利用する方法や誘電泳動による方法は、レーザー光や電場を発生させるための装置を導入する必要があり、かかる技術を生体内に適用することは困難である。
【０００４】
それゆえ、細胞に悪影響を与えるような処理を施す必要がなく、また、特殊な装置を必要としない細胞の移送方法が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】An effective strategy of magnetic stem cell delivery for spinal cord injury therapy; Nanoscale (2015), 7, 3954-8
【非特許文献２】Guided and magnetic self-assembly of tunable magnetoceptive gels; Nat Commun. (2014), 5, 4702
【非特許文献３】Microfabrication and laser manipulation of functional microtool using in-situ photofabrication; Journal of robotics and mechatronics (2005), 17, 335-341
【非特許文献４】Cellular dielectrophoresis: applications to the characterization, manipulation, separation and patterning of cells; Electrophoresis (2011), 32, 2466-87
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、細胞自体を処理する必要がなく、細胞に傷害を与えることなしに、細胞を移送することを可能にする細胞移送デバイス、および該デバイスを用いた細胞移送システム、および該デバイスを用いた細胞移送方法を提供することを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、タンパク質を含有する母材と磁性部材とを組み合わせてデバイスの本体部を構成し、さらに該本体部の表面に細胞を捕捉し得るよう構成された細胞捕捉部を設けることにより、細胞に傷害等のダメージを与えることなく該細胞を捕捉し得、しかも、離れた位置から磁力によってデバイスと細胞とを移動させることが可能となることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は以下に関する。
［１］母材と磁性部材とを有してなる本体部と、
該本体部の表面に設けられた細胞捕捉部とを有し、
該細胞捕捉部は、接触した細胞と脱離可能に結合する結合用官能基を有する、
細胞移送デバイス。
［２］本体部の母材がタンパク質を含有する、上記［１］に記載の細胞移送デバイス。
［３］タンパク質が架橋された水溶性タンパク質である、上記［２］に記載の細胞移送デバイス。
［４］水溶性タンパク質がアルブミンである、上記［３］に記載の細胞移送デバイス。
［５］磁性部材が磁性粒子であって、該磁性粒子は本体部の母材中に分散している、上記［１］〜［４］のいずれかに記載の細胞移送デバイス。
［６］細胞捕捉部が、
結合用官能基として細胞膜と相互作用し得る鎖状の疎水性基と、
本体部の母材に含まれたタンパク質と結合し得る活性基とが、
親水性ポリマーに結合した構造を有する、
上記［１］〜［５］のいずれかに記載の細胞移送デバイス。
［７］親水性ポリマーが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンランダム共重合体およびポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体からなる群より選択される１種または２種以上である、上記［６］に記載の細胞移送デバイス。
［８］細胞膜と相互作用し得る鎖状の疎水性基が、飽和または不飽和の鎖状の炭化水素基である、上記［６］または［７］に記載の細胞移送デバイス。
［９］飽和または不飽和の鎖状の炭化水素基が、炭素数５〜３６のアルキル基またはアルケニル基である、上記［８］に記載の細胞移送デバイス。
［１０］タンパク質と結合し得る活性基が、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドナトリウム、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールおよび２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノールからなる群より選択される１種または２種以上である、上記［６］〜［９］のいずれかに記載の細胞移送デバイス。
［１１］本体部が、シート状またはフィルム状である、上記［１］〜［１０］のいずれかに記載の細胞移送デバイス。
［１２］上記［１］〜［１１］のいずれかに記載の細胞移送デバイスと、
前記細胞移送デバイス中の磁性部材に磁気的な牽引力を作用させて、該細胞移送デバイスを移動させるための移動可能な磁石と
を有する、細胞移送システム。
［１３］上記［１］〜［１１］のいずれかに記載の細胞移送デバイスの結合用官能基を移送すべき細胞に結合させることによって、該細胞を細胞移送デバイスに固定する細胞固定工程と、
細胞が固定された前記細胞移送デバイス中の磁性部材に、外部の移動可能な磁石から磁気的な牽引力を作用させることによって、該細胞移送デバイスを細胞と共に移動させる、細胞移動工程とを有する、
細胞移送方法。
［１４］細胞が動物細胞である、上記［１３］に記載の細胞移送方法。
［１５］細胞固定工程における結合用官能基と細胞との結合が、液体中に細胞が浮遊してなる懸濁液に前記細胞移送デバイスを浸漬し、前記細胞に結合用官能基を接触させることによって行われるか、または、
液体を収容した容器の内部の底面上に位置する細胞に対し、前記細胞移送デバイスを該液体中で沈降させ、前記細胞に結合用官能基を接触させることによって行われる、
上記［１３］または［１４］に記載の細胞移送方法。
［１６］前記液体が、無血清培地、および、血清を含有しない細胞培養用塩類溶液からなる群より選択される１種または２種以上の液体である、上記［１５］に記載の細胞移送方法。
［１７］細胞移動工程における細胞移送デバイスの移動が、磁性粒子に外部の磁石から磁気的な牽引力を作用させながら該磁石を移動させることによって行われる、上記［１３］〜［１６］のいずれかに記載の細胞移送方法。
［１８］細胞移動工程の後に、さらに、結合用官能基から細胞を脱離する細胞脱離工程を有する、上記［１３］〜［１７］のいずれかに記載の細胞移送方法。
［１９］細胞脱離工程における結合用官能基からの細胞の脱離が、
血清もしくは血清タンパク質を含有する細胞培養用培地および血清もしくは血清タンパク質を含有する細胞培養用塩類溶液からなる群より選択される１種または２種以上に、結合用官能基に細胞が固定された細胞移送デバイスを浸漬して行われる、上記［１８］に記載の細胞移送方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、細胞に悪影響を与えるような処理を施すことなく、また、特殊な装置を用いることなく、細胞を磁力によって遠隔的に移動させることが可能になる。
また、本発明の好ましい態様では、生体内で利用することも可能な生体適合性の高いデバイスが提供される。
また、本発明の好ましい態様では、目的に応じて、１個の細胞から多数の細胞までを広い範囲で移動させることができる。
また、本発明の好ましい態様では、従来の方法では送達が困難であった部位でも、細胞を送達することが可能となり、また、細胞の２次元的または３次元的なパターニングや、生体組織の再構築を自在に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、本発明による細胞移送デバイスの一例を模式的に示す図である。図１（ａ）は、当該細胞移送デバイス全体の構成を示す図であり、説明のために細胞を描き加えている。当該細胞移送デバイスと細胞との間の大きさの関係は、実際とは異なっている。図では、説明のために、１つの結合用官能基が１つの細胞を捕捉しているように描いているが、実際には多数の結合用官能基によって１つの細胞が捕捉される。以下の模式図も同様である。図１（ｂ）は、細胞捕捉部の部分拡大図であって、結合用官能基が細胞膜と結合している状態の一例を示す図である。
【図２】図２は、本発明による細胞移送デバイスの使用状態を模式的に示す図である。また、図２は、本発明の細胞移送方法の一例を示す模式図であり、本発明の細胞移送システムの構成の一例を示す模式図でもある。
【図３】図３は、本発明の細胞移送デバイスに対して、磁石から印加される磁界の様子を示した模式図である。図では、磁石の周囲の磁界を表すために、磁力線を破線で示している。
【図４】図４は、本発明の好ましい作用、機能または用途を例示した模式図である。
【図５】図５は、本発明の好ましい他の作用、機能または用途を例示した模式図である。
【図６】図６は、本発明の好ましい他の作用、機能または用途を例示した模式図である。
【図７】図７は、本発明の細胞移送デバイスの好ましい用途、または、本発明の細胞移送システムの好ましい構成例を示した模式図である。
【図８】図８は、実施例１において、細胞移送デバイスを作製するために、まず作製した本体部を示す写真図である。図中（Ａ）は、磁性粒子を含有するアルブミンフィルムを示す図である。図中（Ｂ）は、円形状に成形された本体部を示した顕微鏡写真図である。
【図９】図９は、実施例２の細胞の固定についての検討結果を示す図である。図中（Ａ）は、本発明の実施例１のデバイスを用いた場合を示し、（Ｂ）は、細胞捕捉部を導入していない本体部を用いた場合を示す。
【図１０】図１０は、実施例３の細胞の脱離についての検討結果を示す図である。図中（Ａ）は、ＴＨＰ−１細胞が固定された実施例１のデバイスから、細胞が脱離する様子を示す図である。図中（Ｂ）は、生細胞染色用蛍光色素（Ｃａｌｃｅｉｎ−ＡＭ）により染色した結果を示す。図中（Ｃ）は、死細胞染色用蛍光色素（ＰＩ）による染色結果を示す。
【図１１】図１１は、実施例４における細胞移送の結果を示す顕微鏡写真図である。
【図１２】図１２は、実施例５における操作手順および円形の細胞培養用ディッシュの内部底面の様子を示した模式図であって、該細胞培養用ディッシュを上から見た図である。
【図１３】図１３は、実施例５の基板への細胞の転写の結果を示す顕微鏡写真図である。図中（Ａ）は、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞が転写された基板の状態を示す図である。図中（Ｂ）は、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞を基板に転写した後の当該細胞移送デバイスの表面の状態を示す図である。
【図１４】図１４は、実施例６の細胞の３次元積層の結果を示す顕微鏡写真図である。図中（Ａ）は、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞が積層された後の、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞シートの状態を示す図である。図中（Ｂ）は、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞を積層した後の当該細胞移送デバイスの表面の状態を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
先ず、本発明による細胞移送デバイス（以下、本明細書にて「本発明のデバイス」または「当該デバイス」ともいう）の構成を詳細に説明する。
図１（ａ）に構成の一例を示すように、本発明のデバイス１は、本体部１０と、該本体部の表面に設けられた細胞捕捉部２０とを有して構成される。本体部１０は、該本体部自体を構成する構造用材料である母材１１と磁性部材１２とを有してなる一種の複合材料であるということができる。図１の例では、磁性部材１２は磁性粒子であって、母材中に分散している。該本体部１０は、磁性部材１２を有することによって、外部から印可される磁界による磁気的な牽引力で引っ張られて移動する。細胞捕捉部２０は、外側に露出する位置に結合用官能基２１を有している。該結合用官能基２１は、移送すべき細胞１００に接触すると、該細胞と脱離可能に結合する性質を持っている。細胞捕捉部２０は、この結合用官能基を用いて、接触した細胞を捕捉することができる。以上の構成によって、図２（ａ）〜（ｄ）に示すように、移送すべき細胞１００は、ダメージを受けるような処理を施されることなく、結合用官能基２１を介して当該デバイス１に脱離可能に固定され、当該デバイスへの外部の磁石２からの磁力３０ｆによって、当該デバイス１に固定された状態で、所定の目的部位２２０へと運搬され得る。細胞１００を結合用官能基２１から脱離させる方法については後述する。
【００１２】
本発明のデバイスにおいて、本体部１０の母材は、特に限定はされないが、細胞に対して低毒性である、細胞捕捉部を結合させ得る反応性基を有する、細胞が接着しにくい、成形加工が容易である、といった性質を有する材料が好ましい。前記性質を有する材料であれば、有機材料であっても無機材料であってもよい。
反応性基を有し、成形加工が容易であるという性質を有する点からは合成高分子材料が好ましく用いられる。
さらに、反応性基を有することおよび成形加工性に加えて、細胞が接着しにくい性質を有する材料としては、水を多く含有し、細胞非接着性を示すハイドロゲルの形態の高分子材料が好ましい。
かかる材料としては、例えば、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（ＰＨＥＭＡ）ゲルなどが挙げられる。
また上記の要件（反応性基を有すること、成形加工性および細胞非接着性）に加えて、生体適合性が高く、細胞に対して低毒性である点においては、細胞非接着性のタンパク質、特に生体の構成成分であるタンパク質（ただし、タンパク質毒素等、生体に有害なタンパク質を除く）を主成分とする材料が好ましい。
細胞非接着性のタンパク質は、水溶性のタンパク質であっても、後述するように、例えば架橋処理を施し、架橋処理後のタンパク質水溶液を乾燥することにより、水に不溶性のフィルム状とすることができるため、取扱い性の点でも好ましい。
以下の説明では、母材がタンパク質を主成分として含有する材料である場合について詳細に説明するが、有機高分子材料などタンパク質以外の材料を母材として適宜用いてもよい。
【００１３】
本発明のデバイスの好ましい上記態様において、本体部１０の母材１１に含有されるタンパク質としては、生体成分に含まれるタンパク質であって、細胞が接着しにくいものであれば特に限定されないが、水溶性のタンパク質が好ましく、なかでも、脊椎動物の血液の血漿に含まれる血清アルブミンがより好ましく用いられる。
血清アルブミンとしては、ヒト、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ等の哺乳動物の血清より分離精製されたアルブミンが好ましく用いられるが、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）として市販されている製品がより好ましく用いられる。また、遺伝子組換え技術により微生物もしくは培養細胞に産生させたリコンビナントの血清アルブミンであってもよい。
【００１４】
水溶性のタンパク質を含有する母材が、水に不溶性のフィルム状の母材として調製されることが好ましいことや、本体部の母材としての機械的な強度や取扱い性等を考慮すると、血清アルブミン等のタンパク質は、架橋剤や架橋酵素により架橋されたものであることが好ましい。
かかる架橋剤としては、架橋反応後に親水性が付与される架橋剤が好ましく、ソルビトールポリグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル、ジグリセロールポリグリシジルエーテル、グリセロールポリグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル等のポリエポキシ化合物が好適な例として挙げられる。
なかでも、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル（ｎ＝２〜８）を用いて架橋させることが特に好ましい。
架橋酵素としては、トランスグルタミナーゼが好ましい例として挙げられる。トランスグルタミナーゼ（タンパク質−グルタミンγ−グルタミルトランスフェラーゼ）は、タンパク質上のグルタミン残基のアミノ基と第１級アミンを縮合させ、アミン上の置換基をグルタミン残基に転移させて、アンモニアが生成する反応を触媒する転移酵素である。
トランスグルタミナーゼとしては、微生物により生産されるカルシウム非依存性のトランスグルタミナーゼが好ましく、食品添加物等として市販されている製剤を利用することができる。
【００１５】
本発明のデバイスにおいて、本体部１０の母材は、単一材料のみならず、任意の材料（有機材料、無機材料）を組み合わせた複合材料または混合材料であってもよい。また、本体部１０の構造は、前記任意の材料からなる部分をそれとは異なる他の材料で被覆した構造、前記任意の材料からなる層を複数有する多層構造、任意の材料からなる複数の部分が１つに結合した複合構造、これらを組み合わせた構造などであってもよい。例えば、後述の細胞捕捉部を導入する点からは、本体部１０の好ましい母材としてはタンパク質が挙げられるが、該母材が全てタンパク質からなる単一材料であるという態様は、好ましい態様の１つであって、細胞捕捉部が導入されるように、少なくとも表層の一部または全部がタンパク質からなる部分であってもよい。
本体部が複数の材料からなる複合構造である場合、磁性部材は、一方のまたは両方の材料中に含まれていてもよく、または、両方の材料の間に位置していてもよい。
被覆に用いられる材料（被覆材）としては、上記したように、細胞に対して低毒性で、細胞捕捉部を結合させ得る反応性基を有し、細胞接着性が低く、成形加工が容易であるものが好ましく用いられる。
材料の被覆は、通常の方法で行うことができ、好ましくは、被覆される材料（基材）を、被覆材（たとえば水溶性タンパク質、水溶性ポリマー等）の水溶液に浸漬させる、基材上で被覆材を形成するモノマーを重合させる、基材上で被覆材のゲルを形成させる等の方法により行うことができる。
【００１６】
磁性部材を母材全体に均等に分散させず、特定部分だけに偏在させることで、磁界を作用させたときの本体部の姿勢を所定の向きに変化させることも可能である。また、状況に応じて、磁性部材に強い磁界を作用させて着磁し磁石としてもよく、さらには、着磁の後、所定の位置で消磁を行ってもよい。
【００１７】
磁性部材の形態は、特に限定はされず、フィルム状、線材状、網状、粒子状が挙げられる。これらの形態の磁性部材は、母材中に含まれてもよいし、母材の表面に設けられてもよい。例えば、フィルム状や網状の磁性部材であれば、（母材層／磁性部材層）の２層構造や、（母材層／磁性部材層／母材層）の３層構造が例示される。また、粒子状の磁性部材（磁性粒子）であれば、該磁性粒子が母材中に分散した態様や、母材の表面の一部に付着した態様が例示される。
前記の形態の中でも、磁性粒子は、水溶液への高い分散性を示す点で好ましい形態である。
【００１８】
磁性粒子の粒子径は、特に限定はされないが、超常磁性（磁場のない状態では磁化がゼロとなる）を示す点から、光分子相関スペクトル法（日本工業規格（ＪＩＳ）  Ｚ８８２８：２０１３に規定された動的光散乱法）によって測定された平均粒子径（累積平均値（Z-Average））が５ｎｍ〜１００ｎｍであることが好ましく、１０ｎｍ〜３０ｎｍであることがより好ましい。
タンパク質を含有する母材中に良好に分散させることができ、またはタンパク質を含有する母材に良好に付着させることができるという観点からは、上記した磁性粒子は、多糖類等の親水性ポリマーで表面が被覆されていてもよく、また、アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシル基等の官能基が導入されていてもよい。
【００１９】
磁性粒子は、市販の製品を利用してもよく、例えば、「ナノマグ（nanomag）（登録商標）−Ｄ−ｓｐｉｏ」 (79-01-201；マイクロモッド（Micromod）社製)など、市販の磁性粒子を利用することができる。
【００２０】
上記した磁性粒子を、タンパク質を含有する母材に含有させる方法として、例えば、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ程度の磁性粒子の水分散液を調製し、架橋されたタンパク質等の母材に含有されるタンパク質の２（ｗ／ｖ）％〜５（ｗ／ｖ）％水溶液と、９９：１〜９：１の体積比（タンパク質水溶液：磁性粒子の水分散液）で混合した後、シリコーンゴム製等の成形枠中に流し込み、４℃〜３７℃、相対湿度２０％〜６０％にて１８時間〜２４時間乾燥する方法が挙げられる。
なお、乾燥によるひび割れ防止の観点から、磁性粒子の水分散液と架橋されたタンパク質の水溶液との混合液には、グリセリン、糖（グルコース、スクロース等）、ポリエチレングリコール等の可塑剤を５ｍＭ〜２００ｍＭ程度の終濃度となるように添加することが好ましい。
【００２１】
本体部の形態は、特に限定はされず、塊状（立方体状、直方体状、球状）や細長い棒状であってもよいが、デバイスで移送した細胞を基板へ転写する際の効率および操作性等の観点からは、シート状（フィルム状）とすることが好ましい。該シート状の本体部の外形は、円形、正方形、長方形など、所望の大きさおよび形状に成形することができる。細胞捕捉部が微小であるため、本体部の形態が実質的には当該デバイスの形態である。
本体部をシート状とする場合、厚さは特に限定はされないが、操作性の観点からは、１０ｎｍ〜１ｍｍ程度が好ましく、１００ｎｍ〜２００μｍ程度がより好ましい。また、シート状の本体部の外形を円形とする場合、その直径は特に限定はされないが、細胞の直径（約１０μｍ）を考慮すると、１０μｍ〜２ｍｍ程度が好ましく、５００μｍ〜１０００μｍ程度がより好ましい。シート状の本体部の外形を円形以外の形状とする場合、前記の円形の面積と同等の面積を持った形状としてよい。
【００２２】
本発明の目的を好ましく達成するには、磁性粒子は、母材中のタンパク質１ｇあたり、好ましくは２ｍｇ〜４００ｍｇ含有され、より好ましくは１０ｍｇ〜１００ｍｇ含有される。
【００２３】
本発明のデバイスの好ましい態様において、細胞捕捉部２０は、接触した細胞と脱離可能に結合する結合用官能基２１を有するものが例示される。好ましい態様では、細胞捕捉部は、その先端部（本体部から離れた外側の端部）に結合用官能基２１を有する。また好ましい態様では、細胞捕捉部は、本体部の母材に含まれるタンパク質と結合し得る活性基を有し、該活性基によって母材に導入される。細胞捕捉部のより具体的な好ましい態様は、親水性ポリマーに、細胞膜と相互作用し得る鎖状の疎水性基と、母材のタンパク質と結合し得る活性基が結合した構造を有するものが例示される。図１（ｂ）は、結合用官能基２１としての疎水性基が細胞膜１０１と相互作用し、脱離可能に結合している状態を模式的に表している。
【００２４】
細胞捕捉部を構成する前記親水性ポリマーとしては、分子内に親水性基を有し、水に混和しまたは溶解し得るポリマーであれば特に限定されないが、生体適合性および細胞非接着性等の観点から、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンランダム共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体等が好ましく用いられ、ポリエチレングリコールがより好ましく用いられる。
本発明のデバイスに導入される細胞捕捉部において、サイズ排除クロマトグラフィー等により測定される親水性ポリマーの平均分子量は、通常２００〜５０，０００であり、好ましくは１，０００〜１０，０００であり、より好ましくは２，０００〜８，０００である。
【００２５】
細胞膜と相互作用し得る鎖状の疎水性基としては、炭素数５〜３６の飽和または不飽和の炭化水素基が挙げられ、炭素数１２〜２５のアルキル基またはアルケニル基が好ましく、炭素数１５〜２０のアルケニル基がより好ましい。かかる炭化水素基は、直鎖の炭化水素基であってもよく、分岐の炭化水素基であってもよいが、直鎖のものが好ましい。
具体的には、ミリスチル、パルミチル、ステアリル、イソステアリル、ベヘニル、パルミトレイル、オレイル、リノレイル、リノレニル等が挙げられ、オレイルが好ましく用いられる。
かかる疎水性基は、常法に従い、該当する基を有する脂肪族アルコールと親水性ポリマーとをエーテル化すること等により、親水性ポリマーに結合させることができる。
【００２６】
細胞捕捉部において、タンパク質と結合し得る活性基としては、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ））、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドナトリウム（スルホ−ＮＨＳ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェノール等が挙げられる。
上記した活性基は、親水性ポリマーにカルボキシル基を導入した後、常法に従って、該カルボキシル基との間にエステル結合を形成して導入することができる。
【００２７】
細胞捕捉部は、疎水性基および活性基を親水性ポリマーに結合させて製造して用いてもよいが、細胞膜修飾剤として市販されている化合物を用いることもできる。かかる市販の化合物としては、サンブライト（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ）（登録商標）ＯＥシリーズ（日油株式会社製）等が挙げられる。
【００２８】
上記した細胞捕捉部は、活性基を介して、母材表面のタンパク質のアミノ基と結合させることにより、本体部に導入（結合）することができる。
細胞捕捉部を、タンパク質を含有する本体部の母材の表面に効率的に導入するには、磁性部材を有する母材を、タンパク質を溶解させた緩衝塩類溶液等に一定時間浸漬し、タンパク質を母材表面に吸着させた後に、細胞捕捉部を結合させることが好ましい。
上記タンパク質溶液への浸漬は、１（ｗ／ｖ）％〜５（ｗ／ｖ）％のタンパク質濃度で、ｐＨ＝５〜８、４℃〜３７℃にて、３０分間〜一晩行うことが好ましい。
細胞捕捉部の活性基と、母材表面のタンパク質のアミノ基との反応は、ＮＨＳエステル等の活性エステル体の通常の架橋反応の条件および方法に従って行わせることができ、例えば、活性基としてＮＨＳを有する場合、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、ＨＥＰＥＳ（4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid）、ホウ酸緩衝液等を用い、ｐＨ＝７．２〜８．５、好ましくは７．２〜７．９にて、４℃〜３７℃で０．５時間〜４時間行わせる。
具体的には、磁性粒子等の磁性部材を含んだタンパク質を含有する母材を円形状等に成形した後、タンパク質を溶解させた緩衝塩類溶液等に浸漬し、次いで細胞捕捉部を溶解させた緩衝液に浸漬して、該母材に細胞捕捉部を導入することができる。
なお、母材をタンパク質溶液に浸漬させるのは、母材の表面が疎水性で容器などに付着し易い性質を有するため、それを防止するためでもある。母材自体もタンパク質を含有するので、細胞捕捉部の官能基は、母材に含有されるタンパク質、および、母材表面に吸着したタンパク質の両方と反応すると考えられる。
【００２９】
母材がタンパク質を含有しない材料である場合には、細胞捕捉部の活性基は、母材を構成する材料と結合し得る基であることが好ましい。例えば、母材を構成する材料がアミノ基を有する高分子化合物を含有する場合、細胞捕捉部は、活性基としてカルボキシル基、アルデヒド基、エポキシ基等を有する化合物等を用いることができる。
【００３０】
細胞捕捉部は本体部の表面全体に設けられてもよいし、表面の一部に設けられてもよい。例えば本体部がシート状の場合、細胞捕捉部は、図１に例示するように、本体部の片面のみに設けられてもよく、図４に例示するように、本体部の両面に設けられてもよく、また、側面のみに設けられてもよく、両面と側面とを含んだ全面に設けられてもよい。細胞を転写する際の操作性等の観点からは、本体部の片面のみに設けられる態様が好ましい。
【００３１】
本発明のデバイスにおける細胞捕捉部の導入量は、タンパク質を含有する母材の単位面積(１ｃｍ２)あたり好ましくは ０．００５ｎｍｏｌ〜 ０．３ｎｍｏｌであり、より好ましくは ０．０２ｎｍｏｌ〜０．０５ｎｍｏｌである。
【００３２】
磁力による移送のしやすさや取扱い性を考慮すると、本発明のデバイスは、上記したように、ゲルのような半固形状の形態、またはフィルム、シート等の固形状の形態で提供されることが好ましい。
【００３３】
調製した本発明のデバイスは、たとえば、リン酸緩衝生理食塩水等で洗浄した後、リン酸緩衝生理食塩水中にて冷蔵保存することができる。
【００３４】
本発明のデバイスは、磁気応答性を有し、図２（ｃ）に示すように、外部の磁石２から作用する磁気的な牽引力３０ｆにより移動させることができる。
当該デバイスに磁気的な牽引力を作用させるための磁石は、電磁石であっても、永久磁石であってもよい。
電磁石は、磁界の印加のオン／オフの制御が容易であり、磁気的な牽引力の強度の調節が容易であり、永久磁石よりも強い磁界が容易に得られるといった利点がある。
一方、永久磁石は、安価であり、電源を必要としない単純でコンパクトな磁力源となり得るといった利点がある。永久磁石としては、アルニコ磁石、フェライト磁石、希土類磁石（例えば、ネオジム磁石など）が挙げられ、特に、希土類磁石は小型であっても強い磁界を発生するので好ましい。希土類磁石の大きさおよび形状は、例えば直径１７．５ｍｍ、厚さ２０ｍｍの円筒型である。
【００３５】
該磁石によって当該デバイスに印加される磁界は、静磁界であっても交番磁界であってもよいが、磁石を近づけるまたは遠ざける操作でデバイスを移送させる点からは、静磁界が好ましい。
図３は、磁石から当該デバイスに作用させる磁界の様子を説明した図である。図３（ａ）は、磁石のＳ極からＮ極へ向かう方向が水平方向であり、図３（ｂ）は、磁石のＳ極からＮ極へ向かう方向が鉛直方向である。Ｓ極とＮ極は互いに入れ替わった位置であってもよい。磁石２から当該デバイス１に磁界が印加され、当該デバイス１には磁石２に向かおうとする磁力が作用する。この状態で磁石２を移動させると、該磁力が牽引力となって、当該デバイスも磁石２に追従して移動する。このときの磁界の方向または当該デバイスに対する磁石の磁極の向きは、水底から水面へデバイスを引き上げるために必要な磁束密度を考慮すると、垂直方向に有効に磁力を及ぼすことができ、かつデバイスの操作性がよい点で、図３（ｂ）の向きが好ましい。
磁界の強さは、液体中の当該デバイスを移動させ得る牽引力を磁性部材に作用させ得る程度であればよく、当該デバイスの重量やサイズ、本体部に含まれる磁性部材の性質や量によっても異なるが、上記した本体部の形状に対しては、表面磁束密度が１００ｍＴ〜６００ｍＴ程度であることが好ましく、５００ｍＴ〜６００ｍＴ程度であることがより好ましい。
本発明のデバイスを移動させる際、磁石は、その大きさや表面磁束密度の程度、当該デバイスの大きさや当該デバイスにおける磁性部材の含有量にもよるが、通常当該デバイスから１ｍｍ〜２０ｍｍ程度に近付けて操作される。
また、磁石の移動速度は、本発明のデバイスを移動させる速度に応じて定められる。
【００３６】
本発明のデバイスは、好ましい態様において、図１（ｂ）に示すように、細胞捕捉部の疎水性基が、疎水性相互作用を介して細胞膜に挿入される結果、細胞を固定することができる。
さらに、細胞捕捉部の疎水性基と細胞膜との間の相互作用は弱い結合であるため、培地中で一定時間静置する等により、本発明のデバイスに固定された細胞を脱離させることができる。
その結果、本発明のデバイスは、細胞を固定させ、磁気的な牽引力により所望の場所に移動させて細胞を脱離させることにより、細胞の移送に好適に用いることができる。
図４は、血管や消化器管など磁界が透過し得る性質を有する管内に、細胞１００が固定された当該デバイス１を送り込み、管外の磁石２から管壁越しに磁界を作用させ、目的の部位まで移動させている様子を例示している。当該デバイスを用いれば、図４（ａ）に例示するように、管Ｐ１内部の下向きの面（天井面）Ｐ１ｓに細胞を送達することも可能になり、また、図４（ｂ）に例示するように、管Ｐ２内部の垂直面（内部の側壁面）Ｐ２ｓに細胞を送達することも可能になる。図４の例では、磁石２は管外に位置するが、カテーテルなどの挿通器具を用いれば、当該デバイスを直接的に吸着した磁石を管内に挿入することも可能である。
【００３７】
本発明のデバイスは、細胞接着性を有する箇所に細胞を移送し、当該箇所にて細胞を脱離させて接着させることにより、細胞の転写に用いることができる。さらにかかる操作を繰り返し、転写した部位にて細胞を培養することにより、細胞の２次元パターニングおよび３次元パターニングに用いることができる。
【００３８】
図５は、当該デバイスによる細胞の２次元パターニングの概念を示す平面図である。当該デバイスを用いれば、図５（ａ）に示すように、基板面２３０の所定位置に第１種類目の細胞１１０を配置し、図５（ｂ）に示すように、他の所定位置に第２種類目の細胞１２０を配置し、図５（ｃ）に示すように、さらに他の所定位置に第３種類目の細胞１３０を配置することが容易に達成される。このように、互いに異なる種類の細胞を、互いに異なる位置や領域に他の細胞が混在することなしに独立的に配置することは、従来の技術では容易ではなかった。
例えば、従来の刺激応答性材料を用いたパターニングの方法では、細胞が接着しない基板の表面の一部の領域を細胞接着性表面に変換し、この位置に第１種類目の細胞１１０を配置する。その後、さらに、別の領域を細胞接着性表面に変換し、その位置に第２種類目の細胞１２０を配置するために、基板全面に細胞を播種し、新たに作り出した接着性領域に細胞を接着させる、という方法を行うため、すでに存在する細胞１１０の上に、細胞１２０が接着することを防ぐことができなかった。
本発明のデバイスを用いることにより、好ましくない細胞の混入を防ぎつつ、多種類の細胞を、任意のパターンにて基板上に配置することが可能となる。
【００３９】
図６は、当該デバイスによる細胞の３次元パターニングの概念を示す斜視図である。当該デバイスを用いれば、図６に例示するように、基板面２４０の所定位置に第１種類目の細胞を多数配置して細胞層１１０ａを形成し、その真上に、第２種類目の細胞を多数配置して細胞層１２０ａを形成し、さらにその真上に、第３種類目の細胞を多数配置して細胞層１３０ａを形成するといったように、異なる種類の細胞が予め定められたパターンに従って積層されてなる立体的な細胞塊を容易に構築することができる。前記の例は、各細胞層が単一の種類の細胞だけからなる単純な積層構造であったが、任意の層に複数の種類の細胞を任意のパターンにて配置することもできる。これによって、例えば、立体的な細胞塊の中心部分（コア部分）は第１種類目の細胞からなり、その上下外周を全面的にとりまく外殻部分は第２種類目の細胞からなるといった配置も可能である。
【００４０】
本発明のデバイスは、母材がたんぱく質を含有してなるものであるから、高い生体適合性を有するものとなり得、細胞に対する傷害性が低減され得る。さらに、細胞を脱離させた後のデバイスは、磁気的な牽引力により回収し、再利用することができる。
また、生体内で細胞の移送に用いた場合、本発明のデバイスは、生体内で自然に分解されるため、安全性にも優れる。
【００４１】
次に、本発明による細胞移送システム（以下、「本発明の移送システム」または「当該移送システム」ともいう）を説明する。
本発明の移送システムは、図２（ｃ）、図２（ｄ）、図７に示すように、本発明のデバイス１と、磁石２とを有して構成される。該磁石２は、当該デバイス１の本体部に含まれる磁性部材に磁気的な牽引力を作用させて、当該デバイス１を移動させるために、移動させることができる。磁石２の移動は、人間の手を用いた手動的なものであってもよいし、マイクロメータヘッドや、産業用ロボットなど、手動や自動の装置を用いたものであってよい。
磁石が当該デバイスを牽引する際には、該磁石は、当該デバイスと共に液体中を移動させてもよいし、液体の外（液面上）や容器の外を移動ささせてもよい。本発明において、「磁石を移動させる」とは、磁石と、細胞が存在する液体を収容する容器、または、液体中の移動目的となる部位とを相対的に変動させることであってもよい。例えば、磁石自体を静止させておき、液体を収容する容器を移動させ、その結果、磁石に牽引された細胞が容器内を移動することになる態様であってもよい。
ただし、磁石を正確に移動させ、細胞の移送を緻密に行う点においては、コンピューターで制御されたロボット技術を活用し、磁石の動きを制御することが望ましい。
【００４２】
図７は、当該移送システムの一応用例を示している。該移送システムは、磁石２の動きを制御する磁石駆動装置３００をさらに有する。該磁石駆動装置３００は、磁石を移動させるための搬送装置３１０と、該搬送装置の動作を制御する制御部（例えば、コンピューター）３３０とを有する。破線３２０は、搬送装置３１０と制御部３３０とを結ぶ信号配線を示唆している。基板面２５０は液体中にあり、当該デバイス１は液体中で移動させる。搬送装置３１０は、磁石を、水平方向（例えば、ｘ方向）または水平面の方向（ｘ−ｙ方向）、さらには垂直方向（ｚ−方向）に移動させるように構成されてもよい。制御部は、搬送装置に命令し、予め定められた順序と場所に従って、磁石２を移動させる。これにより、予め定められた順序にて、予め定められた場所に、予め定められた細胞が送達され、基板面２５０には、任意の位置に任意の細胞が積層された３次元的な構造体（１４０、１５０、１６０）が全自動で形成される。
【００４３】
次に、本発明による細胞移送方法（以下、「本発明の移送方法」または「当該移送方法」ともいう）を説明する。
本発明の移送方法は、図２に示すように、本発明のデバイス１を用い、当該デバイス１に移送すべき細胞１００を固定し、外部の磁石２から牽引力３０ｆを作用させて当該デバイス１を移動させ、よって、該細胞１００を移送する方法である。
より詳細には、図２（ａ）に示すように、当該デバイス１は、移送すべき細胞１００が存在する液体中に浸漬される。図の例では、細胞１００は液体が収容された容器の底面２１０上に位置しているが、液体中に浮遊していてもよい。次に、図２（ｂ）に示すように、当該デバイスの結合用官能基２１が移送すべき細胞１００に結合し、それにより、該細胞１００は当該デバイスに固定される（細胞固定工程）。次に、図２（ｃ）に示すように、細胞１００が固定された当該デバイス１中の磁性部材に、外部に存在する移動可能な磁石２から、磁気的な牽引力３０ｆを作用させる。この状態で、磁石２を太い矢印で例示する方向に移動させることによって、当該デバイス１は液体中を移動し、細胞１００も当該デバイスに捕捉された状態で液体中を移動する（細胞移動工程）。
当該移送方法の好ましい一態様では、図２（ｄ）に示すように、細胞１００は、液体中を移動させ、所定の位置において、当該デバイスから液体中に脱離させる。この場合の細胞の脱離は、所定の時間が経過した後の結合用官能基２１と細胞膜との間の相互作用の低減による自然な脱離であってもよいし、血清などの脱離を促進する物質の付与によるものであってもよい。
また、当該移送方法の好ましい他の態様では、細胞１００は、当該デバイスに固定された状態のまま、当該デバイスと共に移動目的の場所に供給されてもよい。
以上のように、当該デバイスに対する細胞の固定、当該デバイスによる細胞の移送、当該デバイスからの細胞の脱離は、全て液体中において行われるが、これら各工程における液体は、互いに異なる容器内や互いに連通しない部位内の液体であってもよい。また、細胞に悪影響を与えない範囲において、当該デバイスは細胞と共に液体外に取り出されてもよい。また、当該デバイスは細胞と共に、シリンジやピペットによって、異なる容器や場所に移されてもよい。
【００４４】
本発明において、移送すべき細胞としては、本発明のデバイスの細胞捕捉部の鎖状の疎水性基と相互作用し得る細胞膜を有する細胞であれば特に限定されず、動物由来の正常細胞、幹細胞および前駆細胞、ならびに動物細胞に由来する細胞株が挙げられる。細胞は、単一の細胞であってもよいし、複数の細胞が集合した細胞塊であってもよい。
【００４５】
動物由来の正常細胞としては、精子、卵子等の生殖細胞や、線維芽細胞、骨髄細胞、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、好酸球、好中球、好塩基球、赤血球、血小板、マクロファージ、単球、骨細胞、周皮細胞、樹状細胞、脂肪細胞、間葉細胞、上皮細胞、表皮細胞（例えば、角化細胞（ケラチノサイト）、角質細胞等）、内皮細胞、血管内皮細胞、肝実質細胞、軟骨細胞、卵丘細胞、神経細胞、グリア細胞、オリゴデンドロサイト（希突起膠細胞）、マイクログリア（小膠細胞）、アストロサイト（星状膠細胞）、心臓細胞、食道細胞、筋肉細胞（例えば、平滑筋細胞、骨格筋細胞）、膵臓ベータ細胞、メラニン細胞、単核細胞等の生体を構成する体細胞が挙げられる。
上記体細胞には、例えば皮膚、腎臓、脾臓、副腎、肝臓、肺、卵巣、膵臓、子宮、胃、結腸、小腸、大腸、膀胱、前立腺、精巣、胸腺、筋肉、結合組織、骨、軟骨、血管組織、血液（臍帯血を含む）、骨髄、心臓、眼、脳または神経組織などの任意の組織から採取される細胞が含まれる。
【００４６】
幹細胞とは、自己複製能と、別の種類の細胞に分化する能力を持ち、際限なく増殖できる細胞であり、例えば、造血幹細胞、衛星細胞、神経幹細胞、間葉系幹細胞、乳腺幹細胞、嗅粘膜幹細胞、神経冠幹細胞、肝幹細胞、膵幹細胞、筋幹細胞、生殖幹細胞、腸管幹細胞、毛包幹細胞等の成体幹細胞；胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、胚性腫瘍細胞、胚性生殖幹細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）等の多能性幹細胞；癌幹細胞等が挙げられる。
【００４７】
前駆細胞とは、前記幹細胞から特定の体細胞や生殖細胞に分化する途中の段階にある細胞であり、衛星細胞、膵前駆細胞、血管前駆細胞、血管内皮前駆細胞、造血前駆細胞等が挙げられる。
【００４８】
細胞株とは、長期間にわたって体外で維持され、一定の安定した性質を有するに至った細胞であり、チャイニーズハムスターの卵巣由来のＣＨＯ細胞、ヒト胎児腎臓由来のＨＥＫ２９３細胞、ヒト白血病細胞由来のＨＬ−６０細胞、ヒト子宮頸癌由来のＨｅＬａ細胞、ヒト急性単球性白血病由来のＴＨＰ−１細胞、イヌの腎臓上皮由来のＭＤＣＫ細胞、マウス胎児の皮膚由来のＮＩＨ／３Ｔ３細胞、ラット副腎髄質由来のＰＣ１２細胞、アフリカミドリザル腎臓由来のＶｅｒｏ細胞等が挙げられる。
【００４９】
本発明の移送方法は、リンパ球、好酸球、好中球、好塩基球、赤血球、血小板、マクロファージ、単球等の血液細胞、その他浮遊培養に適応化された細胞等の浮遊細胞、前記血液細胞等を除く多くの脊椎動物細胞に見られる接着細胞のいずれにも用いることができる。
また、本発明の移送方法は、初代培養細胞、継代培養細胞のいずれにも用いることができる。
【００５０】
本発明のデバイスへの細胞の固定は、目的とする細胞に適する培地を用いて培養した細胞、または保存した細胞を、無血清培地または血清を含有しない細胞培養用の各種塩類溶液に懸濁し、次いで、前記細胞懸濁液に本発明のデバイスを浸漬し、本発明のデバイスと細胞を接触させることにより、行うことができる。本発明のデバイスを浸漬した細胞懸濁液は、適宜転倒、撹拌、振とう等を行って混和し、本発明のデバイスとの接触効率を向上させることが好ましい。
細胞懸濁液の細胞濃度は、通常１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬ〜１×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ程度であり、５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬ〜１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ程度とすることが好ましく、細胞懸濁液への本発明のデバイスの浸漬処理は、通常４℃〜４０℃で５分間〜１２０分間程度行い、好ましくは２０℃〜３７℃で１０分間〜６０分間程度行う。
【００５１】
上記目的に用い得る無血清培地としては、哺乳動物細胞由来の正常細胞および細胞株の場合、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）、ハムＦ１２培地（Ｈａｍ’ｓ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘｔｕｒｅ Ｆ１２）、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地、マッコイ５Ａ培地（ＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ ｍｅｄｉｕｍ）、最小必須培地（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＭＥＭ）、イーグル最小必須培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＥＭＥＭ）、α改変型イーグル最小必須培地（ａｌｐｈａ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（αＭＥＭ）、ロズウェルパーク記念研究所（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＲＰＭＩ）１６４０培地、イスコフ改変ダルベッコ培地（Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＩＭＤＭ）、ＭＣＤＢ１３１培地、ウィリアム培地Ｅ（Ｗｉｌｌｉａｍ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｅ）、フィッシャー培地（Ｆｉｓｃｈｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）等が挙げられる。
【００５２】
また、幹細胞の場合は、ＳＴＥＭＰＲＯ（登録商標）  ｈＥＳＣ  ＳＦＭ培地（ライフテクノロジーズ（Life Technologies）社製）、ｍＴｅＳＲ１培地（ステムセルテクノロジーズ（STEMCELL Technologies）社製）、ＴｅＳＲ２培地（ステムセルテクノロジーズ（STEMCELL Technologies）社製）、ＴｅＳＲ−Ｅ８培地（ステムセルテクノロジーズ（STEMCELL Technologies）社製）、Ｅｓｓｅｎｃｉａｌ  ８培地（ライフテクノロジーズ（Life Technologies）社製）、ＨＥＳｃＧＲＯ（商標）  Ｓｅｒｕｍ−Ｆｒｅｅ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｆｏｒ  ｈＥＳ  ｃｅｌｌｓ（ミリポア（Millipore）社製）、ＰｌｕｒｉＳＴＥＭ（商標）  Ｈｕｍａｎ  ＥＳ／ｉＰＳ  Ｍｅｄｉｕｍ（イーエムディー  ミリポア（EMD Millipore）社製）、ＮｕｔｒｉＳｔｅｍ（登録商標）  ｈＥＳＣ  ＸＦ培地（バイオロジカル インダストリーズ  イスラエル  ベイト−ヘメク（Biological Industries Israel Beit-Haemek）株式会社製）、ＮｕｔｒｉＳｔｅｍ（商標）  ＸＦ／ＦＦ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ステムジェント（Stemgent）社製）、ＡＦ  ＮｕｔｒｉＳｔｅｍ（登録商標）  ｈＥＳＣ  ＸＦ培地（バイオロジカル インダストリーズ  イスラエル  ベイト−ヘメク（Biological Industries Israel Beit-Haemek）株式会社製）、Ｓ−ｍｅｄｉｕｍ（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）等が挙げられる。
【００５３】
細胞培養用の塩類溶液としては、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）、アールの平衡塩溶液（ＥＢＳＳ）、ハンクスの平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）等が挙げられる。
接着系細胞の懸濁に用いる場合には、細胞間の接着を防ぐために、１ｍＭ〜１０ｍＭ程度のキレート剤（エチレンジアミン四酢酸等）を含有する塩類溶液を用いることが好ましい。
【００５４】
本発明の移送方法において、本発明のデバイスを所望の箇所まで移動させた後、細胞が固定された本発明のデバイスから細胞を脱離させるには、本発明のデバイスが懸濁された培地を、血清もしくは血清タンパク質を含有する培地および血清もしくは血清タンパク質を含有する細胞培養用の塩類溶液からなる群より選択される１種以上に交換することが好ましい。血清もしくは血清タンパク質は、本発明のデバイスにおける細胞捕捉部の鎖状の疎水性基と、細胞膜との間の疎水性相互作用を弱めるため、本発明のデバイスの細胞捕捉部に固定された細胞を良好に脱離させ得る。
本発明のデバイスにおける細胞捕捉部から細胞を脱離させるには、血清もしくは血清タンパク質は１０（ｗ／ｖ）％程度の濃度となるように、上記した無血清培地または細胞培養用の塩類溶液に含有させることができる。
なお、血清としては、ウシ胎仔血清等が、また、血清タンパク質としては、ウシ血清アルブミン等が好ましく用いられる。
本発明のデバイスに固定された細胞を脱離するための上記処理は、４℃〜３７℃、５体積％程度の二酸化炭素の存在下にて、４時間〜２４時間静置して行うことが好ましい。
【００５５】
細胞を脱離させた後の本発明のデバイスは、磁力等を用いて容易に回収することができ、リン酸緩衝生理食塩水等により洗浄した後、本発明の操作に再度用いることができる。
【００５６】
本発明の移送方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、目的とする部位または場所に細胞を移送するために好適に用いることができる。
例えば、培地上または基板上の特定の部位への細胞の移送や、生体内の特定の器官、組織等への細胞の移送が可能となる。
【００５７】
本発明の移送方法を用いた細胞の移送により、基板上の特定の部位に細胞を転写することができる。
具体的には、細胞非接着性の基板上に細胞接着性の部位を作製し、当該部位に、本発明の移送方法により接着性細胞を移送して脱離させれば、移送された細胞は当該接着性部位に接着する。その結果、基板上の特定の部位に細胞を転写することができる。
細胞を転写させる基板としては、ガラス製、プラスチック製等のプレートやディッシュ等が挙げられる。
細胞非接着性の基板は、上記したガラス製、プラスチック製等の基板に、アルブミン、アガロース、ポリ−（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン）、ポリ（２−メトキシエチルアクリレート）、ポリ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミドのハイドロゲル等、細胞の接着を阻害する高分子物質で表面被覆処理を施すことにより、作製することができる。
また、細胞接着性の部位は、上記した細胞非接着性の基板上の所定の部位を、Ｉ型〜ＸＩＸ型コラーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、ラミニン−１〜１２、テネイシン、トロンボスポンジン、オステオポンチン、フィブリノーゲン、各種エラスチン、各種プロテオグリカン、各種カドヘリン、デスモコリン、デスモグレイン、各種インテグリン、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、マトリゲル、ポリ−Ｄ−リジン、ポリ−Ｌ−リジン、キチン、キトサン、セファロース、アルギン酸ゲル等の被覆材で被覆することにより、作製することができる。
【００５８】
上記したように、本発明の移送方法により基板に転写された細胞上に、本発明の移送方法を用いて、さらに同種または異種の細胞を移送し、当該細胞上にて脱離させて接着させることにより、基板上にて細胞を積層することができる。
転写された細胞は、当該転写部位にて増殖させることができ、２次元的または３次元的なパターニングを行うことができる。
それゆえ、本発明の移送方法を用いて、基板上にて、細胞を３次元的に積層させることにより、生体組織の再構築を行うことが可能となる。
【００５９】
従って、本発明の移送方法は、ドラッグデリバリーシステム、再生医療等の分野において好適に利用され得、有用である。
【実施例】
【００６０】
以下、実施例により本発明について詳細に説明するが、本発明はこれら実施例により限定されない。
【００６１】
［実施例１］細胞移送デバイスの作製
（１）本体部の作製
牛血清アルブミン（シグマ−アルドリッチ（Sigma-Aldrich）社製）とエチレングリコールジグリシジルエーテル（富士フィルム和光純薬株式会社製）をそれぞれ３（ｗ／ｖ）％と２１５ｍＭの濃度で２０ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ，ｐＨ＝７．４）に溶解し、２５℃にて２４時間攪拌することで架橋反応を行なった。その後、混合溶液を透析膜（分画分子量＝１２００ダルトン）に加え、超純水中で室温にて３日間透析を行うことで、未反応のエチレングリコールジグリシジルエーテルを取り除いた。透析した混合溶液について、２８０ｎｍにおける吸光度を測定して溶液中のアルブミン濃度を算出し、２（ｗ／ｖ）％の濃度となるように超純水でメスアップした。
上記の架橋処理を施したアルブミンの水溶液と、直径２０ｎｍの酸化鉄ナノ粒子の水分散液（マイクロモッド（Micromod）社製, ５ｍｇ／ｍＬ）を、（架橋処理アルブミン水溶液）：（酸化鉄ナノ粒子の水分散液）＝９：１の体積比で混合し、可塑剤としてグリセリン水溶液を終濃度が０．４７５（ｗ／ｖ）％となるように加えた。このようにして調製した混合溶液を、シリコーンゴム製の枠内に２．０ｍＬ加え、恒温槽内（温度＝３７℃、相対湿度＝５０％）にて一晩乾燥させることにより、フィルムを作製した（図８（Ａ）参照）。その後、作製したフィルムを直径０．５ｍｍ〜２．０ｍｍの生検トレパン（カイインダストリーズ株式会社製）を用いてくり抜き、直径０．５ｍｍ〜２．０ｍｍの円板状のフィルムを回収し、本体部を得た（図８（Ｂ）参照）。
なお、架橋処理を施していないアルブミンを用いて作製した本体部は水に溶解したが、架橋処理を施したアルブミンを用いて作製した本体部は水に不溶であった。
【００６２】
上記にて調製した本体部の機能を調べるために、ＰＢＳで満たした細胞培養用ディッシュに該本体部を浸漬し、その状態でネオジム磁石を近づけた。その際、操作性（液中での移動性）を良くするために、ＰＢＳ中に界面活性剤（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Tween 80），０．００５重量％）を加えた。
ディッシュの底からネオジム磁石を近づけた場合、本体部は磁石の位置へ速やかに平行移動した。また、水面からネオジム磁石を近づけた場合、ディッシュの底に沈んでいた本体部は磁力によって水面へ引き上げられ、磁石の方向へ水面で平行移動した。
一方、酸化鉄ナノ粒子を加えずに作製した本体部では、磁石を近づけてもその位置は変化しなかった。
このように、磁気的な牽引力によって遠隔的に移動させることが可能な磁気応答性デバイス（本体部）を作製することに成功した。
【００６３】
（２）本体部への細胞捕捉部の導入
上記（１）に記載した方法で作製した本体部を、１（ｗ／ｖ）％のウシ血清アルブミンＰＢＳ溶液に浸漬し、室温で３０分間静置した。その後、ＰＢＳで前記デバイスを３回洗浄し、細胞捕捉部としてサンブライト（SUNBRIGHT）  ＯＥ−０４０ＣＳ（日油株式会社製;下記式（Ｉ）参照）を１００μＭ含むＰＢＳ溶液に浸漬して、室温で３０分間反応させた。この際、サンブライト  ＯＥ−０４０ＣＳのＮ−ヒドロキシスクシンイミド基（ＮＨＳ基）が、本体部表面のアルブミンに由来するアミノ基と共有結合を形成して、前記細胞捕捉部が本体部に導入され、本体部とそれに固定された細胞捕捉部を有する当該デバイス（以下、「実施例１のデバイス」と表記する）が作製された。
実施例１のデバイスにおいて、細胞捕捉部であるサンブライト  ＯＥ−０４０ＣＳの末端には、鎖状の疎水性基（オレイル基）が存在し、該疎水性基が疎水性相互作用を介して細胞膜に挿入されるため、実施例１のデバイスにおいて細胞の固定が可能となる。
【００６４】
【化１】
2020108362.tif 000003
【００６５】
［実施例２］実施例１のデバイスへの細胞の固定
上記にて作製した実施例１のデバイスをＰＢＳで３回洗浄し、浮遊系細胞であるヒト急性単球性白血病由来細胞株（ＴＨＰ−１）３．０×１０5ｃｅｌｌｓを無血清培地（ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ）１６４０培地）に懸濁させた細胞懸濁液と混合し、１０分おきに転倒混和しながら室温で６０分間静置し、実施例１のデバイスと細胞とを接触させた。その後、細胞と接触させた実施例１のデバイスをＰＢＳで３回洗浄し、先端を一部切断したピペットチップにより、前記無血清培地で満たした細胞培養用ディッシュへ移動させ、顕微鏡（「ＩＸ７０」、オリンパス株式会社製、倍率＝１０倍）にて観察した。
実施例１のデバイスでは、細胞がデバイス全面に固定されていた（図９（Ａ）参照）。
一方、細胞捕捉部を導入していないデバイスでは、細胞の固定化はほとんど見られなかった（図９（Ｂ）参照）。
また、細胞種を接着系細胞であるマウス線維芽細胞株（ＮＩＨ／３Ｔ３）に変更して、同様の実験を行った。その結果、実施例１のデバイスでは、デバイス全面に細胞が固定されたことが認められた。
以上の通り、細胞捕捉部を有する実施例１のデバイスに、細胞が固定されることが確認された。
【００６６】
［実施例３］実施例１のデバイスに固定した細胞の脱離
上記実施例２において、実施例１のデバイスに固定した浮遊系細胞ＴＨＰ−１をデバイスから脱離させるために、ＴＨＰ−１を固定した実施例１のデバイスを、ピペットチップを用いて、血清を含有する培地（１０（ｗ／ｖ）％の牛胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地）で満たした細胞培養用ディッシュへ移した。その後、３７℃、５体積％ＣＯ２の条件にて静置した。６時間静置した後に顕微鏡（「ＩＸ７０」、オリンパス株式会社製、倍率＝１０倍）にて観察したところ、大多数の細胞がデバイス表面から脱離したことが認められた（図１０（Ａ）参照）。実施例１のデバイスにおいて、細胞は、細胞捕捉部のオレイル基と細胞膜との疎水性相互作用を介して弱く結合しているだけであるため、容易に脱離するものと考えられる。
次に、脱離した細胞を回収し、セルステイン細胞二重染色キット（Cellstain（登録商標） Double Staining Kit）（株式会社同仁化学研究所製）を用いて生細胞と死細胞の染色を行った。
その結果、生細胞染色用蛍光色素であるアセトキシメチル化カルセイン（Ｃａｌｃｅｉｎ−ＡＭ）により大多数の細胞が染色される（図１０（Ｂ））が、死細胞染色用蛍光色素であるヨウ化プロピジウム（ＰＩ）によってはほとんど染色されない（図１０（Ｃ））ことが認められた。
上記実施例３の結果から、本発明のデバイスに固定した細胞を容易に脱離させることができ、さらに、本発明のデバイスによる細胞の固定および脱離の一連の操作が、細胞に傷害を与えないことが示された。
【００６７】
［実施例４］実施例１のデバイスの磁気遠隔操作による細胞移送
直径３．５ｃｍの細胞培養用ディッシュ（ティーピーピー（TPP）社製）にシリコーンシートをカットして作製した囲い（内径８．５ｍｍ）を設置し、３．０ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＨａｎｋｓ液で、シリコーンシート製の枠を含むディッシュ全体を満たした。その後、接着系細胞であるＮＩＨ／３Ｔ３の懸濁液を、シリコーンシート製の枠内に静かに加え、枠内の底全面に前記細胞を配置した。この際、ＥＤＴＡの効果により、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞の細胞間の接着は阻害される。
上記ディッシュのＥＤＴＡ含有Ｈａｎｋｓ液中に、実施例１のデバイスを浸漬し、ネオジム磁石を用いて、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞が存在するシリコーンシート製の枠の内部に移動させ、前記細胞と実施例１のデバイスとを接触させた。室温で１０分間静置した後、再びネオジム磁石を用いて、実施例１のデバイスをシリコーン製の枠外へ移動させた。
シリコーン製の枠外に移動させたデバイスを顕微鏡（「ＩＸ７０」、オリンパス株式会社製、倍率＝４倍）により観察したところ、デバイス全面にＮＩＨ／３Ｔ３細胞が固定化されていることが確認された（図１１参照）。
本実施例により、磁気を利用して実施例１のデバイスを遠隔操作し、細胞の捕捉や、捕捉した細胞の移送を行うことができることが示された。
【００６８】
［実施例５］実施例１のデバイスの磁気遠隔操作による接着系細胞の基板への転写
図１２（ａ）に示すように、直径３．５ｃｍの細胞培養用ディッシュ（ティーピーピー（TPP）社製）４００にシリコーンシートをカットして作製した２つの囲い（シリコーン枠）４１０、４２０を設置した。両シリコーン枠の内径は８．５ｍｍである。１つ目のシリコーン枠４１０内に１００μｇ／ｍＬのポリエチレンイミン水溶液（シグマ−アルドリッチ（Sigma-Aldrich）社製）を加え、室温で３０分間静置した。ＰＢＳで３回洗浄した後、１０μg／ｍＬのフィブロネクチン水溶液（インヴィトロージェン（Invitrogen）社製）を加え、４℃で一晩静置し、細胞接着性タンパク質であるフィブロネクチンが吸着した細胞接着性の表面（図１２（ｂ）に破線で示した領域４１１）を作製した。
フィブロネクチン水溶液の上清と一個目のシリコーン枠を取り除いた後、３．０ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＨａｎｋｓ液でディッシュ全体を満たした。その後、接着系細胞であるＮＩＨ／３Ｔ３細胞の懸濁液（培養したＮＩＨ／３Ｔ３細胞をトリプシン処理で剥離させ、遠心分離して回収した細胞を再懸濁させて調製した）を２つ目のシリコーン枠４２０内に静かに加え、枠内全面を覆う十分量の細胞を配置した。
図１２（ｂ）に示すように、実施例１のデバイスを、ＥＤＴＡを含有するＨａｎｋｓ液中に浸漬し、ネオジム磁石を用いて、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞を配置したシリコーン枠４２０内に移動させ、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞とデバイス１を接触させた。室温で１０分間静置してデバイス１にＮＩＨ／３Ｔ３細胞を固定した後、ネオジム磁石を用いて、図１２（ｃ）に示すように、前記デバイス１をフィブロネクチン被覆面４１１に移動させた。
次いで、ディッシュ内の培地を血清を含有する培地（１０（ｗ／ｖ）％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ）に置換し、３７℃、５体積％ＣＯ２の条件にて静置した。５時間後にデバイスを取り出し（図１２（ｄ））、デバイスおよび基板表面の状態を顕微鏡（「ＩＸ７０」、オリンパス株式会社製、倍率＝４倍）により観察した。その結果を図１３に示した。
図１３に示されるように、デバイスに固定された細胞の大多数がデバイス表面から脱離し（図１３（Ｂ））、フィブロネクチンを被覆した細胞接着性表面に、デバイスの形状を保ったまま接着したことが認められた（図１３（Ａ））。
その後一晩培養したところ、基板上に転写された細胞の増殖が認められた。
実施例５の上記結果から、本発明のデバイスを用いた細胞移送方法により、細胞を基板上に転写することができ、さらに、本発明における一連の操作を施しても、細胞が生存することが確認された。
【００６９】
［実施例６］実施例１のデバイスによる細胞の三次元積層
上記実施例５の場合と同様に、細胞培養用ディッシュ内にシリコーンシート製の枠を２個設け、その１個目のシリコーン枠内に、１．０ ｍｇ／ｍＬのゼラチン水溶液（シグマ（Sigma）社製）を加え、室温で３０分間静置した。ゼラチン水溶液の上清を取り除いた後、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞を播種（９０，０００ｃｅｌｌｓ）し、細胞が枠内の底全面を覆うまで培養し、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞シートを形成させた。
次いで、実施例５と同様の手順により、実施例１のデバイスにＮＩＨ／３Ｔ３細胞を固定させ、前記デバイスをＮＩＨ／３Ｔ３細胞シート上に配置した。ディッシュ内の培地を血清を含有する培地（１０（ｗ／ｖ）％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ）に置換し、３７℃、５体積％ＣＯ２の条件にて静置した。４時間後のデバイスおよび基板表面の状態を顕微鏡（「ＩＸ７０」、オリンパス株式会社製、倍率＝４倍）により観察した。その結果を図１４に示した。
図１４に示されるように、デバイスに固定された細胞の大多数がデバイス表面から脱離し（図１４（Ｂ））、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞シートの表面に、デバイスの形状を保ったまま接着したことが認められた（図１４（Ａ））。
実施例６の上記結果から、本発明のデバイスを用いた細胞の移送方法により、細胞の上にさらに細胞を接着させて、三次元的に積層できることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
上記した通り、本発明により、生体適合性が高く、特別な装置を用いることなく、細胞の移送、転写、パターニング等に用い得る、磁気応答性のタンパク質デバイスを提供することができる。
また、本発明により、細胞自体を処理する必要がないため細胞に傷害を与えるおそれがなく、目的に応じて、１個の細胞から多数の細胞までを広い範囲で操作することができ、特殊な装置が不要で、生体内においても好適に適用することのできる細胞移送方法を提供することができる。
本発明の細胞移送方法により、従来の方法では移送が困難であった部位でも、細胞の移送が可能となり、細胞の２次元的または３次元的なパターニングや、生体組織の再構築を自在に行うことができる。
【符号の説明】
【００７１】
１      細胞移送デバイス
１０    本体部
１１    母材
１２    磁性部材
２０    細胞捕捉部
２１    結合用官能基
１００  細胞
１０１  細胞膜
【図１】
2020108362.tif 000004
【図２】
2020108362.tif 000005
【図３】
2020108362.tif 000006
【図４】
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【図５】
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【図６】
2020108362.tif 000009
【図７】
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【図８】
2020108362.tif 000011
【図９】
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【図１０】
2020108362.tif 000013
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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