(57)【要約】【課題】光線による障害から細胞を保護できる眼科組成物を提供すること。【解決手段】亜硫酸塩類、ビタミンＥ類及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの細胞保護用眼科組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
亜硫酸塩類、ビタミンＥ類及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの細胞保護用眼科組成物。
【請求項２】
光線がブルーライトである、請求項１に記載の眼科組成物。
【請求項３】
細胞が幹細胞である、請求項１又は２に記載の眼科組成物。
【請求項４】
幹細胞が角膜上皮幹細胞である、請求項３に記載の眼科組成物。
【請求項５】
亜硫酸塩類、ビタミンＥ類及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの角膜組織再生剤。
【請求項６】
幹細胞にブルーライトを照射する工程、及び該幹細胞の細胞生存率を測定する工程を含む、該ブルーライトによる障害からの該幹細胞の保護効果を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光線による障害からの細胞保護用眼科組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、パソコン、スマートフォン、ＬＥＤの普及により、ブルーライトの曝露量が増えている。ブルーライトは強いエネルギーを有しているため、ブルーライトに曝露されると目の疲れ、目の痛み、目の炎症などの症状を引き起こすことが知られている（例えば、非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ａｓｉａ−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，４（２），ｐ８０−８５，２０１５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
今後ブルーライトの曝露量が一層増加することが予測される中で、本発明者らは、眼部に存在する細胞をブルーライトによる障害から保護することができれば、上述した各症状の緩和につながる可能性があるとの知見を得た。本発明は、ブルーライト等の光線による障害から細胞を保護できる眼科組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、亜硫酸塩類、ビタミンＥ類及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種の成分が、角膜上皮幹細胞をブルーライトによる障害から保護できることを見出した。
【０００６】
本発明は、例えば、以下の各発明を提供する。
［１］
亜硫酸塩類、及びビタミンＥ類からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの細胞保護用眼科組成物。
［１］
光線がブルーライトである、［１］に記載の眼科組成物。
［３］
細胞が幹細胞である、［１］又は［２］に記載の眼科組成物。
［４］
幹細胞が角膜上皮幹細胞である、［３］に記載の眼科組成物。
［５］
亜硫酸塩類、及びビタミンＥ類からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの角膜組織再生剤。
［６］
幹細胞にブルーライトを照射する工程、及び該幹細胞の細胞生存率を測定する工程を含む、該ブルーライトによる障害からの該幹細胞の保護効果を評価する方法。
【０００７】
本発明はまた、例えば、以下の各発明を提供する。
［２−１］
亜硫酸塩類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、フラビンアデニンジヌクレオチド及びその塩、ピリドキシン及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、ナファゾリン及びその塩、アスパラギン酸及びその塩、硫酸亜鉛、並びにビタミンＡ類からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの細胞保護用眼科組成物。
［２−２］
光線がブルーライトである、［２−１］に記載の眼科組成物。
［２−３］
細胞が幹細胞である、［２−１］又は［２−２］に記載の眼科組成物。
［２−４］
幹細胞が角膜上皮幹細胞である、［２−３］に記載の眼科組成物。
［２−５］
亜硫酸塩類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、フラビンアデニンジヌクレオチド及びその塩、ピリドキシン及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、ナファゾリン及びその塩、アスパラギン酸及びその塩、硫酸亜鉛、並びにビタミンＡ類からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの角膜組織再生剤。
【０００８】
本発明はまた、例えば、以下の各発明を提供する。
［３−１］
亜硫酸塩類、及びビタミンＥ類及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの細胞保護用眼科組成物。
［３−２］
光線がブルーライトである、［３−１］に記載の眼科組成物。
［３−３］
細胞が幹細胞である、［３−１］又は［３−２］に記載の眼科組成物。
［３−４］
幹細胞が角膜上皮幹細胞である、［３−３］に記載の眼科組成物。
［３−５］
亜硫酸塩類、ビタミンＥ類及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種を含有する、光線による障害からの角膜組織再生剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、光線による障害から細胞を保護できる眼科組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
【００１１】
本明細書において、特に記載のない限り、含有量の単位「％」は「ｗ／ｖ％」を意味し、「ｇ／１００ｍＬ」と同義である。
【００１２】
〔１．光線による障害からの細胞保護用眼科組成物〕
本実施形態に係る眼科組成物は、亜硫酸塩類、ビタミンＥ類及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種（「（Ａ）成分」ともいう。）を含有する。
【００１３】
本明細書において「光線」とは、紫外線、可視光線、赤外線等を含む、あらゆる波長の光を意味する。本実施形態に係る眼科組成物は、光線の中でも波長が３８０〜５００ｎｍであるブルーライト（青色光）による障害からの細胞保護用に好適に用いることができる。
【００１４】
本実施形態に係る眼科組成物が光線による障害から保護することのできる細胞としては、光線の照射により障害を生じる可能性のある細胞であれば特に制限されず、例えば、角膜上皮細胞、網膜上皮細胞が挙げられる。また、本実施形態に係る眼科組成物は、自己複製能と異なる種類の細胞に分化する能力を併せ持つ幹細胞の保護のために用いることが好ましく、このような幹細胞として、角膜上皮幹細胞が例示される。
【００１５】
［（Ａ）成分］
〔亜硫酸塩類〕
亜硫酸塩類は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００１６】
亜硫酸塩類としては、例えば、亜硫酸の塩、ピロ亜硫酸の塩等が挙げられる。亜硫酸の塩、ピロ亜硫酸の塩としては、例えば、無機塩基との塩［例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）、鉄等の金属との塩］が挙げられる。亜硫酸塩類の具体例としては、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素カリウム、ピロ亜硫酸カリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸カルシウム、亜硫酸アンモニウム、亜硫酸鉄等が例示される。
【００１７】
亜硫酸塩類としては、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸カリウムが好ましく、ピロ亜硫酸ナトリウムがより好ましい。
【００１８】
亜硫酸塩類は、市販されているものを使用することもできる。亜硫酸塩類は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１９】
本実施形態に係る眼科組成物における亜硫酸塩類の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、亜硫酸塩類の総含有量が、０．０００１〜０．５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０００５〜０．１ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．００１〜０．０５ｗ／ｖ％であることが更に好ましい。
【００２０】
〔ビタミンＥ類〕
ビタミンＥ類は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。ビタミンＥ類の具体例としては、例えば、トコフェロール、トコトリエノール及びこれらの誘導体、並びにこれらの塩が挙げられる。トコフェロール及びトコトリエノールは、α−、β−、γ−、及びδ−のいずれであってもよく、またｄ体及びｄｌ体のいずれであってもよい。
【００２１】
ビタミンＥ類の誘導体としては、例えば、酢酸トコフェロール、コハク酸トコフェロール、ニコチン酸トコフェロール、リノレン酸トコフェロール等の有機酸とのエステルが挙げられる。
【００２２】
ビタミンＥ類の塩としては、例えば、有機酸塩（乳酸塩、酢酸塩、酪酸塩、トリフルオロ酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等）、無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩等）、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、アミノ酸、トリピリジン、ピコリンなどの有機アミンとの塩等）、無機塩基との塩（例えば、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、アルミニウムなどの金属との塩等）が挙げられる。
【００２３】
ビタミンＥ類としては、ｄ−α−トコフェロール、ｄｌ−α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、ビタミンＥ酢酸エステル（例えば、酢酸トコフェロール）、ビタミンＥニコチン酸エステル、ビタミンＥコハク酸エステル、ビタミンＥリノレン酸エステルが好ましく、酢酸トコフェロール（例えば、酢酸ｄ−α−トコフェロール、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール等）がより好ましい。
【００２４】
ビタミンＥ類は、天然品、合成品のいずれであってもよい。ビタミンＥ類として、市販されているものを使用することもできる。ビタミンＥ類は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２５】
本実施形態に係る眼科組成物におけるビタミンＥ類の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ビタミンＥ類の総含有量が、０．０００１〜０．５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．００２５〜０．１５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０１〜０．０５ｗ／ｖ％であることが更に好ましい。
【００２６】
〔硫酸亜鉛〕
硫酸亜鉛は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００２７】
本実施形態に係る眼科組成物における硫酸亜鉛の含有量は特に限定されず、他の配合成分の種類及び含有量、製剤形態等に応じて適宜設定される。硫酸亜鉛の含有量としては、例えば、眼科組成物の総量を基準として、硫酸亜鉛の総含有量が、０．００１〜１ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．００５〜０．５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０１〜０．２５ｗ／ｖ％であることが特に好ましい。
【００２８】
別の実施形態では、本実施形態に係る眼科組成物は、亜硫酸塩類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、フラビンアデニンジヌクレオチド及びその塩、ピリドキシン及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、ナファゾリン及びその塩、アスパラギン酸及びその塩、硫酸亜鉛、並びにビタミンＡ類からなる群より選択される少なくとも１種（「（Ａ’）成分」ともいう。）を含有する。なお、本実施形態における亜硫酸塩類、ビタミンＥ類及び硫酸亜鉛については、［（Ａ）成分］で説明したとおりである。
【００２９】
［（Ａ’）成分］
〔アミノエチルスルホン酸及びその塩〕
アミノエチルスルホン酸（タウリン）及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００３０】
アミノエチルスルホン酸の塩としては、例えば、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン等の有機アミンとの塩）、無機塩基との塩［例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）、アルミニウム等の金属との塩］が挙げられる。
【００３１】
アミノエチルスルホン酸及びその塩としては、アミノエチルスルホン酸が好ましい。
【００３２】
アミノエチルスルホン酸及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。アミノエチルスルホン酸及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３３】
本実施形態に係る眼科組成物におけるアミノエチルスルホン酸及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、アミノエチルスルホン酸及びその塩の総含有量が、０．００１〜１０ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．１〜１.０ｗ／ｖ％であることが更に好ましい。
【００３４】
〔フラビンアデニンジヌクレオチド及びその塩〕
フラビンアデニンジヌクレオチド（ビタミンＢ２）及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００３５】
フラビンアデニンジヌクレオチドの塩としては、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩が挙げられ、好ましくはアルカリ金属塩、特に好ましくはナトリウム塩（フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム）が挙げられる。
【００３６】
本実施形態に係る眼科組成物におけるフラビンアデニンジヌクレオチド及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、フラビンアデニンジヌクレオチド及びその塩の総含有量が、０．００１〜１．０ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜０．５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０３〜０．１ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．０３〜０．０５ｗ／ｖ％であることが更により好ましい。
【００３７】
〔ピリドキシン及びその塩〕
ピリドキシン（ビタミンＢ６）及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
【００３８】
ピリドキシンの塩としては、例えば、有機酸塩（例えば、乳酸塩、酢酸塩、酪酸塩、トリフルオロ酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等）、無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩等）が挙げられる。
【００３９】
ピリドキシン及びその塩としては、ピリドキシン及びその無機酸塩が好ましく、塩酸ピリドキシンがより好ましい。
【００４０】
ピリドキシン及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。ピリドキシン及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００４１】
本実施形態に係る眼科組成物におけるピリドキシン及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ピリドキシン及びその塩の総含有量が、０．００１〜１．０ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜０．５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０２〜０．２ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．０５〜０．１ｗ／ｖ％であることが更により好ましい。
【００４２】
〔ネオスチグミン及びその塩〕
ネオスチグミン及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。ネオスチグミンの塩としては、例えば、メチル硫酸ネオスチグミンが挙げられる。ネオスチグミン及びその塩としては、メチル硫酸ネオスチグミンが好ましい。
【００４３】
ネオスチグミン及びその塩として、市販されているものを使用することもできる。ネオスチグミン及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００４４】
本実施形態に係る眼科組成物におけるネオスチグミン及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ネオスチグミン及びその塩の総含有量が、０．００００５〜０．０５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０００１〜０．０１ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０００５〜０．００５ｗ／ｖ％であることが更に好ましく、０．００１〜０．００５ｗ／ｖ％であることが更により好ましい。
【００４５】
〔ナファゾリン及びその塩〕
ナファゾリン及びその塩は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。ナファゾリンの塩としては、例えば、ナファゾリン塩酸塩、ナファゾリン硝酸塩が挙げられる。ナファゾリン及びその塩としては、ナファゾリン塩酸塩が好ましい。ナファゾリン及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００４６】
本実施形態に係る眼科組成物におけるナファゾリン及びその塩の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ナファゾリン又はその塩の総含有量が約０．００００１〜０．１ｗ/ｖ％が好ましく、約０．０００１〜０．０１ｗ/ｖ％がより好ましく、約０．０００３〜０．００３ｗ/ｖ％がさらにより好ましい。
【００４７】
〔アスパラギン酸及びその塩〕
アスパラギン酸は、２−アミノブタン二酸とも称される酸性アミノ酸として公知の化合物である。アスパラギン酸及びその塩としては、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。アスパラギン酸は、Ｌ体、Ｄ体、ＤＬ体のいずれであってもよいが、好ましくはＬ体である。
【００４８】
アスパラギン酸の塩としては、例えば、無機塩基との塩（例えば、アンモニウム塩；アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）、アルミニウム等の金属との塩等）、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン等の有機アミンとの塩等）等が挙げられる。アスパラギン酸及びその塩としては、アスパラギン酸の無機塩基との塩が好ましく、アスパラギン酸のアルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩がより好ましく、アスパラギン酸カリウム、アスパラギン酸マグネシウム及びアスパラギン酸マグネシウム・カリウムが更に好ましい。アスパラギン酸及びその塩は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００４９】
本実施形態に係る眼科組成物におけるアスパラギン酸及びその塩の含有量は特に限定されず、他の配合成分の種類及び含有量、製剤形態等に応じて適宜設定される。アスパラギン酸又はそれらの塩の含有量としては、例えば、眼科組成物の総量を基準として、アスパラギン酸又はそれらの塩の総含有量が、０．０１〜２０ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜５．０ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．２〜２．０ｗ／ｖ％であることが更に好ましい。
【００５０】
〔ビタミンＡ類〕
ビタミンＡ類は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。ビタミンＡ類の具体例としては、例えば、レチノール（ビタミンＡ１）、３−デヒドロレチノール（ビタミンＡ２）及びこれらの誘導体、並びにこれらの塩が挙げられる。
【００５１】
ビタミンＡ類の誘導体としては、例えば、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール、酪酸レチノール、プロピオン酸レチノール、オクチル酸レチノール、ラウリル酸レチノール、オレイン酸レチノール及びリノレン酸レチノール等の１価のカルボン酸とのエステルが挙げられる。
【００５２】
ビタミンＡ類の塩としては、例えば、有機酸塩［例えば、モノカルボン酸塩（酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酪酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等）、多価カルボン酸塩（フマル酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩等）、オキシカルボン酸塩（乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等）、有機スルホン酸塩（メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩等）等］、無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩等）、有機塩基との塩（例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン等の有機アミンとの塩等）、無機塩基との塩［例えば、アンモニウム塩；アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）、アルミニウム等の金属との塩等］が挙げられる。
【００５３】
ビタミンＡ類としては、レチノールの誘導体が好ましく、レチノールと１価のカルボン酸とのエステルがより好ましく、パルミチン酸レチノール及び酢酸レチノールが更に好ましく、パルミチン酸レチノールが更により好ましい。
【００５４】
ビタミンＡ類としては、合成物を使用してもよいし、又は天然物から得られる抽出物（例えば、ビタミンＡ油など）を使用してもよい。ビタミンＡ油とは、レチノールを含有する動物の組織等から得られる脂肪油、若しくはその濃縮物、又はそれらに植物油を適宜添加したものである。ビタミンＡ類として、市販されているものを使用することもできる。ビタミンＡ類は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００５５】
本実施形態に係る眼科組成物におけるビタミンＡ類の含有量は、眼科組成物の総量を基準として、ビタミンＡ類の総含有量が、０．５万〜２０万ＩＵ／１００ｍＬであることが好ましく、１万〜１０万ＩＵ／１００ｍＬであることがより好ましく、１．５万〜６万ＩＵ／１００ｍＬであることが更に好ましく、２万〜５.５万ＩＵ／１００ｍＬであることが更により好ましく、４万〜５．５万ＩＵ／１００ｍＬであることが更によりまた好ましく、４．５万〜５．５万ＩＵ／１００ｍＬであることが特に好ましい。
【００５６】
「ＩＵ」とは、第十七改正日本薬局方ビタミンＡ定量法等に記載の手法により求められる国際単位を意味する。例えば、第十七改正日本薬局方の医薬品各条において、酢酸レチノールの場合、１ｇにつきビタミンＡ２５０万単位以上を含むこと、パルミチン酸レチノールの場合、１ｇにつきビタミンＡ１５０万単位以上を含むことが記載されている。
【００５７】
〔（Ａ）成分又は（Ａ’）成分の組み合わせ〕
本実施形態に係る眼科組成物は、上述した（Ａ）成分又は（Ａ’）成分を２種以上組み合わせて含むものであってもよい。これにより、光線による障害からの細胞保護効果がより顕著に発揮される。（Ａ）成分又は（Ａ’）成分の組み合わせの具体例としては、これに限られるものではないが、亜硫酸塩類（特に、ピロ亜硫酸ナトリウム）とビタミンＡ類（特に、パルミチン酸レチノール）との組み合わせ、亜硫酸塩類（特に、ピロ亜硫酸ナトリウム）とビタミンＥ類（特に酢酸トコフェロール）との組み合わせ、硫酸亜鉛とアミノエチルスルホン酸（タウリン）との組み合わせ、硫酸亜鉛とビタミンＥ類（特に酢酸トコフェロール）との組み合わせ等を挙げることができる。
【００５８】
本実施形態に係る眼科組成物のｐＨは、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容される範囲内であれば特に限定されるものではない。本実施形態に係る眼科組成物のｐＨとしては、例えば、４．０〜９．５であってよく、４．０〜９．０であることが好ましく、４．５〜９．０であることがより好ましく、４．５〜８．５であることが更に好ましく、５．０〜８．５であることが更により好ましく、５．０〜８．０であることが特に好ましい。
【００５９】
本実施形態に係る眼科組成物は、必要に応じて、生体に許容される範囲内の浸透圧比に調節することができる。適切な浸透圧比は、眼科組成物の用途、製剤形態、使用方法等に応じて適宜設定され得るが、例えば、０．４〜５．０とすることができ、０．６〜３．０とすることが好ましく、０．８〜２．２とすることがより好ましく、０．８〜２．０とすることが更に好ましい。浸透圧比は、第十七改正日本薬局方に基づき、２８６ｍＯｓｍ（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液の浸透圧）に対する試料の浸透圧の比とし、浸透圧は日本薬局方記載の浸透圧測定法（凝固点降下法）を参考にして測定する。なお、浸透圧比測定用標準液（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液）は、塩化ナトリウム（日本薬局方標準試薬）を５００〜６５０℃で４０〜５０分間乾燥した後、デシケーター（シリカゲル）中で放冷し、その０．９００ｇを正確に量り、精製水に溶かし正確に１００ｍＬとして調製するか、市販の浸透圧比測定用標準液（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液）を用いることができる。
【００６０】
本実施形態に係る眼科組成物の粘度は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容される範囲内であれば、特に限定されるものではない。本実施形態に係る眼科組成物の粘度としては、例えば、回転粘度計（ＲＥ５５０型粘度計、東機産業社製、ローター；１°３４’×Ｒ２４）で測定した２０℃における粘度が１〜１００００ｍＰａ・ｓであることが好ましく、１〜８０００ｍＰａ・ｓであることがより好ましく、１〜１０００ｍＰａ・ｓであることが更に好ましく、１〜１００ｍＰａ・ｓであることが更により好ましく、１〜２０ｍＰａ・ｓであることが特に好ましい。
【００６１】
本実施形態に係る眼科組成物は、本発明の効果を損なわない範囲であれば、上記成分の他に種々の薬理活性成分及び生理活性成分から選択される成分を組み合わせて適当量含有していてもよい。当該成分は特に制限されず、例えば、要指導・一般用医薬品  製造販売承認基準・申請実務の手引き  ２０１７（一般社団法人  レギュラトリーサイエンス学会監修）に記載された眼科用薬における有効成分を例示することができる。眼科用薬において用いられる成分として、具体的には、例えば、以下の成分が挙げられる。
抗アレルギー剤：例えば、クロモグリク酸ナトリウム、トラニラスト、ペミロラストカリウム等。
抗ヒスタミン剤：例えば、イプロヘプチン、塩酸ジフェンヒドラミン、マレイン酸クロルフェニラミン、フマル酸ケトチフェン、塩酸オロパタジン、塩酸レボカバスチン等。
アミノ酸：例えば、グリシン、アラニン、アミノ酪酸、アミノ吉草酸、アミノカプロン酸等のモノアミノモノカルボン酸；アスパラギン酸、グルタミン酸等のモノアミノジカルボン酸又はそれらの塩；アルギニン、リジン等のジアミノモノカルボン酸又はそれらの塩等。
ステロイド剤：例えば、プロピオン酸フルチカゾン、フランカルボン酸フルチカゾン、フランカルボン酸モメタゾン、プロピオン酸ベクロメタゾン、フルニソリド等。
充血除去剤：例えば、塩酸テトラヒドロゾリン、硝酸テトラヒドロゾリン、エピネフリン、塩酸エピネフリン、塩酸エフェドリン、塩酸フェニレフリン、ｄｌ−塩酸メチルエフェドリン等。
眼筋調節薬剤：例えば、アセチルコリンと類似した活性中心を有するコリンエステラーゼ阻害剤、具体的にはトロピカミド、ヘレニエン、硫酸アトロピン等。
消炎剤：例えば、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸二カリウム、プラノプロフェン、サリチル酸メチル、サリチル酸グリコール、アラントイン、トラネキサム酸、ε−アミノカプロン酸、塩化ベルベリン、硫酸ベルベリン、アズレンスルホン酸ナトリウム、リゾチーム、甘草等。
収斂剤：例えば、亜鉛華、乳酸亜鉛等。
脂溶性ビタミン類（ビタミンＥ類を除く）：例えば、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール等。
水溶性ビタミン類：例えば、シアノコバラミン、パンテノール、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウム等。
局所麻酔剤：例えば、リドカイン、プロカイン等。
その他：例えば、スルファメトキサゾール、スルファメトキサゾールナトリウム等。
【００６２】
本実施形態に係る眼科組成物には、本発明の効果を損なわない範囲であれば、その用途及び製剤形態に応じて、常法に従い、様々な添加物を適宜選択し、１種又はそれ以上を併用して適当量含有させてもよい。このような添加物として、例えば、医薬品添加物事典２００７（日本医薬品添加剤協会編集）に記載された各種添加物が例示できる。代表的な成分として次の添加物が挙げられる。
担体：例えば、水、含水エタノール等の水性溶媒。
キレート剤：例えば、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、エチレンジアミン三酢酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）等。
基剤：例えば、オクチルドデカノール、酸化チタン、臭化カリウム、プラスチベース等。
ｐＨ調節剤：例えば、塩酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン等。
界面活性剤：例えば、チロキサポール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ステアリン酸ポリオキシル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポロクサマー類等の非イオン界面活性剤；ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、Ｎ−アシルタウリン塩等の陰イオン界面活性剤；ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン等の両性イオン界面活性剤等。
清涼化剤：例えば、メントール、メントン、カンフル、ボルネオール、ゲラニオール、シネオール、シトロネロール、カルボン、アネトール、オイゲノール、リモネン、リナロール、酢酸リナリル、チモール、シメン、テルピネオール、ピネン、カンフェン、イソボルネオール、フェンチェン、ネロール、ミルセン、ミルセノール、酢酸リナロール、ラバンジュロール、ユーカリ油、ベルガモット油、ペパーミント油、クールミント油、スペアミント油、ハッカ油、ウイキョウ油、ケイヒ油、ローズ油、樟脳油等。
増粘剤：例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース系高分子化合物；ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等のポリビニル系高分子化合物；カルボキシビニルポリマー；グアーガム；ヒドロキシプロピルグアーガム；アラビアゴム；カラヤガム；キサンタンガム；寒天；アルギン酸及びその塩（ナトリウム塩等）；ヘパリン類似物質、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリノイド、ヒアルロン酸及びその塩（ナトリウム塩等）、コンドロイチン硫酸及びその塩（ナトリウム塩等）のムコ多糖類；デンプン；キチン及びその誘導体；キトサン及びその誘導体；カラギーナン；ブドウ糖等の単糖類等。
緩衝剤：例えば、ホウ酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、乳酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、ＡＭＰＤ緩衝剤等。
安定化剤：例えば、エデト酸、エデト酸塩類（エデト酸二ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、エデト酸四ナトリウム）、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート（ロンガリット）、モノステアリン酸アルミニウム、モノステアリン酸グリセリン、シクロデキストリン、モノエタノールアミン、ジブチルヒドロキシトルエン等。
防腐剤：例えば、アルキルポリアミノエチルグリシン類第四級アンモニウム塩（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等）、グルコン酸クロルヘキシジン、塩化ポリドロニウム、塩化亜鉛、安息香酸ナトリウム、エタノール、クロロブタノール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、硫酸オキシキノリン、フェネチルアルコール、ベンジルアルコール、ビグアニド化合物（具体的には、塩酸ポリヘキサニド（ポリヘキサメチレンビグアニド）、アレキシジン等）、グローキル（ローディア社製  商品名）等。
等張化剤：例えば、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、グリセリン、プロピレングリコール等。
糖アルコール類：例えば、キシリトール、ソルビトール、マンニトール等。これらはｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれでもよい。
油類：例えば、ゴマ油、ヒマシ油、ダイズ油、オリーブ油等の植物油；スクワラン等の動物油；流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油等。
【００６３】
本実施形態に係る眼科組成物が水を含有する場合、水の含有量としては、本発明による効果をより顕著に奏する観点から、例えば、眼科組成物の総量を基準として、水の含有量が、８０ｗ／ｖ％以上１００ｗ／ｖ％未満であることが好ましく、８５ｗ／ｖ％以上９９．５ｗ／ｖ％以下であることがより好ましく、９０ｗ／ｖ％以上９９．２ｗ／ｖ％以下であることが更に好ましい。
【００６４】
本実施形態に係る眼科組成物に使用される水は、医薬上、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容されるものであればよい。このような水として、例えば、蒸留水、常水、精製水、滅菌精製水、注射用水及び注射用蒸留水等を挙げることができる。それらの定義は第十七改正日本薬局方に基づく。
【００６５】
本実施形態に係る眼科組成物は、所望量の（Ａ）成分（又は（Ａ’）成分）、及び必要に応じて他の成分を所望の濃度となるように添加及び混和することにより調製することができる。例えば、精製水でそれらの成分を溶解又は分散させ、所定のｐＨ及び浸透圧に調整し、濾過滅菌等により滅菌処理することで調製できる。
【００６６】
本実施形態に係る眼科組成物は、目的に応じて種々の製剤形態をとることができる。製剤形態として、例えば、液剤、ゲル剤、半固形剤（軟膏等）等が挙げられる。
【００６７】
本実施形態に係る眼科組成物は、例えば、点眼剤（点眼液又は点眼薬ともいう。また、点眼剤にはコンタクトレンズ装用中に点眼可能な点眼剤を含む。）、人工涙液、洗眼剤（洗眼液又は洗眼薬ともいう。また、洗眼剤にはコンタクトレンズ装用中に洗眼可能な洗眼剤を含む。）、コンタクトレンズ用組成物［コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズケア用組成物（コンタクトレンズ消毒剤、コンタクトレンズ用保存剤、コンタクトレンズ用洗浄剤、コンタクトレンズ用洗浄保存剤）等］として用いることができる。なお、「コンタクトレンズ」は、ハードコンタクトレンズ、ソフトコンタクトレンズ（イオン性及び非イオン性の双方を包含し、シリコーンハイドロゲルコンタクトレンズ及び非シリコーンハイドロゲルコンタクトレンズの双方を包含する）を含む。
【００６８】
本実施形態に係る眼科組成物は、本発明による効果をより顕著に発揮できることから、点眼剤（コンタクトレンズ装用中に点眼可能な点眼剤を含む。）であることが好ましい。本実施形態に係る眼科組成物が点眼剤である場合、その用法・用量としては、効果を奏し、副作用の少ない用法・用量であれば特に限定されないが、例えば成人（１５歳以上）及び７歳以上の小児の場合、１回１〜３滴、１〜２滴、又は２〜３滴を１日５〜６回点眼して用いる方法を例示できる。
【００６９】
本実施形態に係る眼科組成物は、任意の容器に収容して提供される。本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器については特に制限されず、例えば、ガラス製であってもよく、またプラスチック製であってもよい。好ましくはプラスチック製である。プラスチックとしては、例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリアリレート、ポリエチレンナフタレート、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリイミド及びこれらを構成するモノマーの共重合体、並びにこれら２種以上を混合したものが挙げられる。好ましくは、ポリエチレンテレフタレートである。また、本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器は、容器内部を視認できる透明容器であってもよく、容器内部の視認が困難な不透明容器であってもよい。好ましくは透明容器である。ここで、「透明容器」とは、無色透明容器及び有色透明容器の双方が含まれる。
【００７０】
本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器には、ノズルが装着されてもよい。ノズルの材質については特に制限されず、例えば、ガラス製であってもよく、またプラスチック製であってもよい。好ましくはプラスチック製である。プラスチックとしては、例えば、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート及びこれらを構成するモノマーの共重合体、並びにこれら２種以上を混合したものが挙げられる。ノズルの材質としては、本発明の効果をより一層高めるという観点から、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレートが好ましく、ポリエチレンがより好ましい。
【００７１】
本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器は、複数回の使用量が収容されるマルチドーズ型であってもよく、単回の使用量が収容されるユニットドーズ型であってもよい。
【００７２】
本実施形態に係る眼科組成物は、内容積が４〜３０ｍＬである容器に充填されてなることが好ましく、内容積が５〜２０ｍＬである容器に充填されてなることがより好ましく、内容積が６〜１６ｍＬである容器に充填されてなることが更に好ましく、内容積が１０〜１５ｍＬである容器に充填されてなることが更により好ましい。
【００７３】
本実施形態に係る眼科組成物は、亜硫酸塩類、ビタミンＥ類、及び硫酸亜鉛からなる群より選択される少なくとも１種を含有することで、角膜上皮幹細胞を光線による障害から保護することができる。また、本実施形態に係る眼科組成物は、亜硫酸塩類、ビタミンＥ類、アミノエチルスルホン酸及びその塩、フラビンアデニンジヌクレオチド及びその塩、ピリドキシン及びその塩、ネオスチグミン及びその塩、ナファゾリン及びその塩、アスパラギン酸及びその塩、硫酸亜鉛、並びにビタミンＡ類からなる群より選択される少なくとも１種を含有することで、角膜上皮幹細胞を光線による障害から保護することができる。ここで、角膜上皮幹細胞が光線による障害から保護されることにより、角膜上皮細胞及び当該角膜上皮細胞から構成される角膜組織が再生されることから、本実施形態に係る眼科組成物は、光線による障害からの角膜組織再生剤としても好適に使用することができる。また、角膜上皮幹細胞が光線による障害から保護されることにより、角膜上皮細胞及び当該角膜上皮細胞から構成される角膜組織が回復することから、本実施形態に係る眼科組成物は、光線による障害からの角膜組織回復剤としても好適に使用することができる。さらに、角膜上皮幹細胞が光線による障害から保護されることにより、角膜上皮細胞及び当該角膜上皮細胞から構成される角膜組織が修復されることから、本実施形態に係る眼科組成物は、光線による障害からの角膜組織修復剤としても好適に使用することができる。
【００７４】
〔２．ブルーライトによる障害からの幹細胞の保護効果を評価する方法〕
本実施形態に係るブルーライトによる障害からの幹細胞の保護効果を評価する方法（単に「本実施形態に係る評価方法」とも表記する。）は、幹細胞にブルーライトを照射する工程（単に、「照射工程」とも表記する）、及び該幹細胞の細胞生存率を測定する工程（単に、「測定工程」とも表記する）を含む。
【００７５】
照射工程では、所定の時間、幹細胞にブルーライトを照射する。
【００７６】
幹細胞に照射するブルーライトとしては、波長が３８０〜５００ｎｍの範囲内にあるブルーライトを用いることができる。また、幹細胞へのブルーライトの照射時間は、例えば、１〜１５時間の範囲で適宜設定することができる。
【００７７】
幹細胞としては、ブルーライトの照射により障害を生じる可能性のある幹細胞であれば特に制限されず、例えば、角膜上皮幹細胞が挙げられる。
【００７８】
測定工程では、被験物質の非存在下及び存在下における幹細胞の細胞生存率を測定する。
【００７９】
本明細書において「細胞生存率」とは、コントロールの生細胞数を１００％としたときの、ブルーライト照射後に被験物質が存在する又は存在しない試験溶液において測定された生細胞数の割合（％）を意味する。ここで、コントロールとは、ブルーライトを照射せず、かつ被験物質が存在しない試験溶液を意味する。なお、幹細胞として角膜上皮幹細胞を用いる場合、生細胞数の測定は、各試験溶液にブルーライトを照射した後、細胞数測定試薬を添加し、所定の条件で培養を行い、所定の波長での吸光度を測定することで行うことができる。
【００８０】
本実施形態に係る評価方法において、測定工程は上記測定した細胞生存率をもとに細胞保護率を算出する工程を更に含んでもよい。ここで、「細胞保護率」は以下の式で算出される数値を意味する。
（式）細胞保護率（％）＝｛（被験物質存在下における細胞生存率−被験物質非存在下における細胞生存率）／被験物質非存在下における細胞生存率｝×１００
【００８１】
本実施形態に係る評価方法は、上記測定工程で得られた幹細胞の細胞生存率の変化に基づいて、ブルーライトによる障害からの幹細胞の保護効果を評価する工程（単に、「評価工程」とも表記する）を含むことが好ましい。
【００８２】
評価工程では、上記測定工程で得られた被験物質の非存在下及び存在下における幹細胞の細胞生存率の変化に基づいて、ブルーライトによる障害からの幹細胞の保護作用を評価する。具体的には、被験物質の存在下における細胞生存率が被験物質の非存在下における細胞生存率と比較して増加した場合に、当該被験物質はブルーライトによる障害からの幹細胞の保護効果を有していると評価できる。
【００８３】
本実施形態に係る評価方法において、測定工程が細胞保護率を算出する工程を含む場合、評価工程では上記算出した細胞保護率に基づいてブルーライトによる障害からの幹細胞の保護作用を評価する。具体的には、細胞保護率が正の値である場合に、当該被験物質はブルーライトによる障害からの幹細胞の保護効果を有していると評価できる。
【実施例】
【００８４】
以下、試験例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００８５】
〔試験例１：ブルーライト照射によるマウス角膜上皮幹細胞の細胞保護率（１）〕
表１に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。表１における各成分の単位はｗ／ｖ％である。
【００８６】
マウス角膜上皮幹細胞（ＴＫＥ２）を、培養プレート（１２ｗｅｌｌ、日本コーニング社製）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９０％の条件下でコンフルエントになるまで培養した。培養培地には、ＫＳＦＭ（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｅｘｔｒａｃｔ，ＥＧＦ含有），Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）培地を用いた。
【００８７】
各ウェルから培養培地を吸引除去し、各試験溶液をそれぞれ１ｍＬずつ各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１時間インキュベートした。次に、３７℃、５％ＣＯ２の条件下でブルーライト（波長４７０ｎｍ）を１４時間照射した後に、各ウェルの生細胞数を測定した。
【００８８】
生細胞数の測定は、各ウェルに細胞数測定試薬Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ社製）を添加し、１時間、３７℃、５％ＣＯ２で培養を行った後、４５０ｎｍの吸光度を測定することによって行った。コントロールの生細胞数を１００％としたときの各試験溶液に対して測定された生細胞数の割合を細胞生存率（％）とした。なお、コントロールは、ブルーライトを照射しなかったこと以外は、比較例１−１と同様に処理したものである。
【００８９】
次いで、下記（式１）に従い各実施例の細胞保護率（％）を求めた。
（式１）細胞保護率（％）＝｛（実施例の細胞生存率−比較例１−１の細胞生存率）／比較例１−１の細胞生存率｝×１００
結果を表１に示す。
【００９０】
【表１】
2020094036.tif 000002
【００９１】
ピロ亜硫酸ナトリウムを添加することにより、ブルーライトによる障害から角膜上皮幹細胞が保護されることが確認された。
【００９２】
〔試験例２：ブルーライト照射によるマウス角膜上皮幹細胞の細胞保護率（２）〕
表２に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。表２における各成分の単位はｗ／ｖ％である。
【００９３】
マウス角膜上皮幹細胞（ＴＫＥ２）を、培養プレート（１２ｗｅｌｌ、日本コーニング社製）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９０％の条件下でコンフルエントになるまで培養した。培養培地には、ＫＳＦＭ（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｅｘｔｒａｃｔ，ＥＧＦ含有），Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）培地を用いた。
【００９４】
各ウェルから培養培地を吸引除去し、各試験溶液をそれぞれ１ｍＬずつ各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１時間インキュベートした。次に、３７℃、５％ＣＯ２の条件下でブルーライト（波長４７０ｎｍ）を１４時間照射した後に、各ウェルの生細胞数を測定した。
【００９５】
生細胞数の測定は、各ウェルに細胞数測定試薬Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ社製）を添加し、１時間、３７℃、５％ＣＯ２で培養を行った後、４５０ｎｍの吸光度を測定することによって行った。コントロールの生細胞数を１００％としたときの各試験溶液に対して測定された生細胞数の割合を細胞生存率（％）とした。なお、コントロールは、ブルーライトを照射しなかったこと以外は、比較例２−１と同様に処理したものである。
【００９６】
次いで、下記（式２）に従い各実施例の細胞保護率（％）を求めた。
（式２）細胞保護率（％）＝｛（実施例の細胞生存率−比較例２−１の細胞生存率）／比較例２−１の細胞生存率｝×１００
結果を表２に示す。
【００９７】
【表２】
2020094036.tif 000003
【００９８】
酢酸トコフェロールを添加することにより、ブルーライトによる障害から角膜上皮幹細胞が保護されることが確認された。
【００９９】
〔試験例３：ブルーライト照射によるマウス角膜上皮幹細胞の細胞保護率（３）〕
表３に示す組成で、常法に従い、各水性組成物を調製し、試験溶液とした。表３における各成分の単位はｗ／ｖ％である。
【０１００】
マウス角膜上皮幹細胞（ＴＫＥ２）を、培養プレート（１２ｗｅｌｌ、日本コーニング社製）に播種し、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９０％の条件下でコンフルエントになるまで培養した。培養培地には、ＫＳＦＭ（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｅｘｔｒａｃｔ，ＥＧＦ含有），Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）培地を用いた。
【０１０１】
各ウェルから培養培地を吸引除去し、各試験溶液をそれぞれ１ｍＬずつ各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で６時間インキュベートした。次に、３７℃、５％ＣＯ２の条件下でブルーライト（波長４７０ｎｍ）を１４時間照射した後に、各ウェルの生細胞数を測定した。
【０１０２】
生細胞数の測定は、各ウェルに細胞数測定試薬Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＤＯＪＩＮＤＯ社製）を添加し、１時間、３７℃、５％ＣＯ２で培養を行った後、４５０ｎｍの吸光度を測定することによって行った。コントロールの生細胞数を１００％としたときの各試験溶液に対して測定された生細胞数の割合を細胞生存率（％）とした。なお、コントロールは、ブルーライトを照射しなかったこと以外は、比較例３−１と同様に処理したものである。
【０１０３】
次いで、下記（式３）に従い各実施例の細胞保護率（％）を求めた。
（式３）細胞保護率（％）＝｛（実施例の細胞生存率−比較例３−１の細胞生存率）／比較例３−１の細胞生存率｝×１００
結果を表３に示す。
【０１０４】
【表３】
2020094036.tif 000004
【０１０５】
硫酸亜鉛を添加することにより、ブルーライトによる障害から角膜上皮幹細胞が保護されることが確認された。
【０１０６】
〔製剤例〕
下記表４及び表５に記載の処方で、常法により点眼剤又はソフトコンタクトレンズ用点眼剤（処方例１〜１６）が調製される。なお、下記表４及び表５における各成分量の単位は、表中に明記したもの以外はｗ／ｖ％である。また、表４及び表５中、パルミチン酸レチノールは、１００ｍＬあたりの配合量を示す。
【０１０７】
【表４】
2020094036.tif 000005
【０１０８】
【表５】
2020094036.tif 000006