(57)【要約】【課題】非転移性乳癌の被験体のより有効な医療を提供する。【解決手段】本発明は、非転移性の高リスクの乳癌を有するヒト被験体におけるＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）の補助的使用の臨床研究において得られる結果に関する。補助療法の方法であって、該方法は、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に対して、根治手術の後に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する有効量の抗体と少なくとも１種の化学療法剤とを投与して、該被験体における無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を伸長させる工程、を包含し、該ＤＦＳまたは該ＯＳを、処置開始の約２年間後〜５年間後に評価する、方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を使用する非転移性乳癌の補助療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（ＨＥＲレセプターおよびＨＥＲレセプターに対する抗体）
レセプターチロシンキナーゼのＨＥＲファミリーは、細胞の増殖、分化および生存の重要なメディエーターである。これらのレセプターファミリーは、上皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１、またはＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２またはｐ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４またはｔｙｒｏ２）を含む、４つの異なるメンバーを包含する。
【０００３】
ＥＧＦＲ（これは、ｅｒｂＢ１遺伝子によってコードされる）は、ヒト悪性疾患（ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ）において原因として影響を与えている。特に、ＥＧＦＲの増大した発現が、乳癌、膀胱癌、肺癌、頭部の癌、頸部の癌および胃癌、ならびに多形膠芽腫において観察された。増大したＥＧＦＲレセプター発現は、しばしば、ＥＧＦＲリガンドの増大した生成、オートクライン刺激経路によるレセプター活性化を生じる同じ腫瘍細胞によるトランスホーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）と関連する。ＢａｓｅｌｇａおよびＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６４：１２７−１５４（１９９４）。ＥＧＦＲまたはそのリガンド、ＴＧＦ−αおよびＥＧＦに対するモノクローナル抗体は、このような悪性疾患の処置における治療剤として評価されてきた。例えば、ＢａｓｅｌｇａおよびＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎ．，前出；Ｍａｓｕｉら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４４：１００２−１００７（１９８４）；ならびにＷｕら．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：１８９７−１９０５（１９９５）を参照のこと。
【０００４】
ＨＥＲファミリーの第２のメンバーであるｐ１８５ｎｅｕは、もともと、化学的に処置したラットの神経芽腫からの形質転換遺伝子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｅｎｅ）の生成物として同定された。ｎｅｕ原癌遺伝子の活性化された形態は、コードされたタンパク質の膜貫通領域における点変異（バリンからグルタミン酸へ）から生じる。ｎｅｕのヒトホモログの増幅は、乳癌および卵巣癌において観察され、乏しい予後と相関する（Ｓｌａｍｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１７７−１８２（１９８７）；Ｓｌａｍｏｎら．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：７０７−７１２（１９８９）；ならびに米国特許第４，９６８，６０３号）。現在まで、ｎｅｕ原癌遺伝子における点変異に類似の点変異は、ヒト腫瘍において報告されたことはない。ＨＥＲ２の過剰発現（遺伝子増幅に起因して、頻繁ではあるものの、一様ではない）もまた、他の癌腫（胃、子宮内膜、唾液腺、肺、腎臓、結腸、甲状腺、膵臓および膀胱の癌腫を含む）において観察された。とりわけ、Ｋｉｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：９７４（１９８５）；Ｙｏｋｏｔａら，Ｌａｎｃｅｔ：１：７６５−７６７（１９８６）；Ｆｕｋｕｓｈｉｇｅら，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，６：９５５−９５８（１９８６）；Ｇｕｅｒｉｎら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｒｅｓ．，３：２１−３１（１９８８）；Ｃｏｈｅｎら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，４：８１−８８（１９８９）；Ｙｏｎｅｍｕｒａら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５１：１０３４（１９９１）；Ｂｏｒｓｔら，Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．，３８：３６４（１９９０）；Ｗｅｉｎｅｒら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：４２１−４２５（１９９０）；Ｋｅｒｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：５１８４（１９９０）；Ｐａｒｋら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４９：６６０５（１９８９）；Ｚｈａｕら，Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．，３：２５４−２５７（１９９０）；Ａａｓｌａｎｄら．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５７：３５８−３６３（１９８８）；Ｗｉｌｌｉａｍｓら．Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５９：４６−５２（１９９１）；ならびにＭｃＣａｎｎら，Ｃａｎｃｅｒ，６５：８８−９２（１９９０）を参照のこと。ＨＥＲ２は、前立腺癌において過剰発現され得る（Ｇｕら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．９９：１８５−９（１９９６）；Ｒｏｓｓら．Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．２８：８２７−３３（１９９７）；Ｒｏｓｓら．Ｃａｎｃｅｒ  ７９：２１６２−７０（１９９７）；ならびにＳａｄａｓｉｖａｎら．Ｊ．Ｕｒｏｌ．１５０：１２６−３１（１９９３））。
【０００５】
ＨＥＲ２増幅／過剰発現は、侵襲性疾患（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）および乏しい予後と関連する、乳癌における初期の事象である。ＨＥＲ２遺伝子増幅は、原発性乳房腫瘍の２０〜２５％において見いだされる（Ｓｌａｍｏｎら．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：７０７-１２（１９８９）；Ｏｗｅｎｓら．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅ
ｓ  Ｔｒｅａｔ  ７６：Ｓ６８  要旨  ２３６（２００２））。ＨＥＲ２陽性疾患は、減少した再発なしの全体的生存（Ｓｌａｍｏｎら．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３５：１７７-８２
（１９８７）；Ｐａｕｌｅｔｔｉら．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １８：３６５１-６４
（２０００））と関連している。ＨＥＲ２遺伝子の増幅は、結節陽性疾患における再発および乏しい生存（Ｓｌａｍｏｎら（１９８７）；Ｐａｕｌｅｔｔｉら（２０００））および結節陰性疾患における乏しい結果（Ｐｒｅｓｓら．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９９７；１５：２８９４-９０４（１９９７）；Ｐａｕｌｅｔｔｉら（２０００））に対する
有意に減少した時間と関連する。
【０００６】
ラットｐ１８５ｎｅｕおよびヒトＨＥＲ２タンパク質生成物に対する抗体が、記載されてきた。
【０００７】
Ｄｒｅｂｉｎおよび共同研究者は、ラットｎｅｕ遺伝子生成物であるｐ１８５ｎｅｕに対する抗体を惹起した。例えば、Ｄｒｅｂｉｎら，Ｃｅｌｌ  ４１：６９５−７０６（１９８５）；Ｍｙｅｒｓら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１９８：２７７−２９０（１９９１）；およびＷＯ９４／２２４７８を参照のこと。Ｄｒｅｂｉｎら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２：２７３−２７７（１９８８）は、ｐ１８５ｎｅｕの２つの異なる領域と反応性の抗体の混合物が、ヌードマウスに移植したｎｅｕ形質転換ＮＩＨ−３Ｔ３細胞に対する相乗的な抗腫瘍効果を生じることを報告する。米国特許第５，８２４，３１１号（１９９８年１０月２０日発行）もまた参照のこと。
【０００８】
Ｈｕｄｚｉａｋら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９（３）：１１６５−１１７２（１９８９）は、ヒト乳房腫瘍細胞株ＳＫ−ＢＲ−３を使用して特徴づけられたＨＥＲ２抗体のパネルの生成を記載する。これらの抗体に曝露した後のＳＫ−ＢＲ−３細胞の相対的細胞増殖を、７２時間後の単層のクリスタルバイオレット染色によって決定した。このアッセイを用いて、最大阻害を、４Ｄ５といわれる抗体を用いて得、この抗体は、細胞増殖を５６％阻害した。そのパネルにおける他の抗体は、このアッセイにおいてより低い程度まで細胞増殖を減少させた。抗体４Ｄ５は、ＴＮＦ−αの細胞傷害性効果に対して、ＨＥＲ２を過剰発現している乳房腫瘍細胞株を感作させることをさらに見いだした。米国特許第５，６７７，１７１号（１９９７年１０月１４日発行）もまた参照のこと。Ｈｕｄｚｉａｋらにおいて議論されたＨＥＲ２抗体は、Ｆｅｎｄｌｙら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８（１９９０）；Ｋｏｔｔｓら．Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ２６（３）：５９Ａ（１９９０）；Ｓａｒｕｐら．Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  １：７２−８２（１９９１）；Ｓｈｅｐａｒｄら．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１（３）：１１７−１２７（１９９１）；Ｋｕｍａｒら．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１（２）：９７９−９８６（１９９１）；Ｌｅｗｉｓら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３７：２５５−２６３（１９９３）；Ｐｉｅｔｒａｓら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ９：１８２９−１８３８（１９９４）；Ｖｉｔｅｔｔａら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５４：５３０１−５３０９（１９９４）；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２０）：１４６６１−１４６６５（１９９４）；Ｓｃｏｔｔら．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１４３００−５（１９９１）；Ｄ’ｓｏｕｚａら．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：７２０２−７２０６（１９９４）；Ｌｅｗｉｓら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５６：１４５７−１４６５（１９９６）；ならびにＳｃｈａｅｆｅｒら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５−１３９４（１９９７）においてさらに特徴づけられている。
【０００９】
マウスＨＥＲ２抗体４Ｄ５の組換えヒト化バージョン（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）またはＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）；米国特許第５，８２１，３３７号）は、徹底的な以前の抗癌治療を受けた、ＨＥＲ２過剰発現転移性乳癌を有する患者において臨床的に活性である（Ｂａｓｅｌｇａら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：７３７−７４４（１９９６））。トラスツズマブは、転移性乳癌を有する患者の処置に、１９９８年９月２５日に食品医薬品局から販売の認可を受けた。彼らの腫瘍は、ＨＥＲ２タンパク質を過剰発現する。トラスツズマブは、パクリタキセルと組み合わせた第１選択肢（ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ）の治療、ならびに第２選択肢および第３選択肢の治療における単一薬剤の両方として、患者の１週間に１回の処置について示される。
【００１０】
臨床試験において、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、転移性乳癌患者における化学療法と組み合わせて使用した場合、生存の利益を示した。２００１年１２月において、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈは、ＦＤＡの認可を受けて、化学療法単独と比較して、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）および化学療法で最初に処置したＨＥＲ２陽性転移性乳癌を有する女性のメジアン完全生存において、２４％の増加を示したデータを含めた（メジアンは、２０．３ヶ月と比較して、２５．１ヶ月）。
【００１１】
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、種々の化学療法剤と組み合わせて使用されてきており、これらの化学療法剤としては、タキソイド（例えば、パクリタキセル（Ｓｌａｍｏｎら．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ  ３４４：７８３−７９２（２００１）；Ｌｅｙｌａｎｄ−Ｊｏｎｅｓら．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１（２１）：３９６５−３９７１（２００３））、およびドセタキセル（Ｅｓｔｅｖａら．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０（７）：１８００−１８０８（２００２）；（Ｅｘｔｒａら．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ８２（補遺  １）：２１７（２００３））；タキソイドおよび白金化合物（Ｐｅｇｒａｍら．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９６（１０）：７５９−６９（２００４）；Ｙａｒｄｌｅｙら．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ７６：Ｓ１１３  要約  ４３９（２００２））；白金化合物（例えば、シスプラチンまたはカルボプラチン）（Ｒｏｂｅｒｔら．，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．，１５（補遺  ３）：３９（要約  １４４Ｐ）；（２００４）；Ｐｅｇｒａｍら．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １６：２６５９-７１（１９９８））；ビンカ（例えば、ビノレ
ルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））（Ｂｕｒｓｔｅｉｎら．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９（１０）；２７２２−２７３０（２００１））；アロマターゼインヒビター（例えば、レトロゾールおよびアナストラゾール（Ｊｏｎｅｓ，Ａ．，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １４：１６９７−１７９４（２００３）；Ｗｏｎｇら．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ８２（補遺  １）：４４４（２００３））；抗エストロゲン（例えば、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））（Ｊｏｎｅｓ，Ａ．，前出）；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））（Ｍｉｌｌｅｒら．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １５（２）：３８−４０（２００１）；Ｏ’Ｓｈａｕｇｈｎｅｓｓｙら．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ６９：３０２  要約  ５２３（２００１））；リポソーム性ドキソルビシン（Ｔｈｅｏｄｏｕｌｏｕら．Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２１：２１６  要約  ２１６（２００２））；ドセタキセル／ビノレルビン（Ｇ−ＣＳＦおよびキノロンの予防とともに）  Ｌｉｍｅｎｔａｎｉら．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｔｒｅａｔ  ７６：要約  １６２（２００２））；エピルビシンおよびシクロホスファミド（Ｕｎｔｃｈら．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４０：９８８−９７（２００４ｂ）を含む）が挙げられる。トラスツズマブを含む種々の組み合わせ療法については、Ｐｅｇｒａｍら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｓｔ．９６（１０）：７３９−４９（２００４）もまた参照のこと。
【００１２】
トラスツズマブ臨床試験を記載する他の参考文献としては、Ｂｅｎｄｅｌｌら、Ｃａｎｃｅｒ  ９７：２９７２−７（２００３）；Ｃｌａｙｔｏｎら．Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．９１：６３９−４３（２００４）；Ｓｅｉｄｍａｎら．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：１２１５−２１（２００２）；およびＥｗｅｒら．Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（ａｂｓｔｒ．４８９）（２００２）が挙げられる。
【００１３】
種々の特性を有する他のＨＥＲ２抗体は、Ｔａｇｌｉａｂｕｅら．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：９３３−９３７（１９９１）；ＭｃＫｅｎｚｉｅら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ４：５４３−５４８（１９８９）；Ｍａｉｅｒら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：５３６１−５３６９（１９９１）；Ｂａｃｕｓら．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３：３５０−３６２（１９９０）；Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉら．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１−８６９５（１９９１）；Ｂａｃｕｓら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：２５８０−２５８９（１９９２）；Ｘｕら．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５３：４０１−４０８（１９９３）；ＷＯ９４／００１３６；Ｋａｓｐｒｚｙｋら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：２７７１−２７７６（１９９２）；Ｈａｎｃｏｃｋら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：４５７５−４５８０（１９９１）；Ｓｈａｗｖｅｒら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：１３６７−１３７３（１９９４）；Ａｒｔｅａｇａら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：３７５８−３７６５（１９９４）；Ｈａｒｗｅｒｔｈら．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１５１６０−１５１６７（１９９２）；米国特許第５，７８３，１８６号；ならびにＫｌａｐｐｅｒら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４：２０９９−２１０９（１９９７）において記載されてきた。
【００１４】
ホモロジースクリーニングは、２つの他のＨＥＲレセプターファミリーメンバー；ＨＥＲ３（米国特許第５，１８３，８８４号および同第５，４８０，９６８号ならびにＫｒａｕｓら．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８６：９１９３−９１９７（１９８９））およびＨＥＲ４（ＥＰ特許出願番号５９９，２７４；Ｐｌｏｗｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１７４６−１７５０（１９９３）；ならびにＰｌｏｗｍａｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３６６：４７３−４７５（１９９３））の同定を生じた。これらのレセプターはともに、少なくともいくつかの乳癌細胞株上で増大した発現を示す。
【００１５】
そのＨＥＲレセプターは、一般に、細胞において種々の組み合わせで見いだされ、ヘテロダイマー化は、種々のＨＥＲリガンドに対する細胞応答の多様性を増大させると考えられる（Ｅａｒｐら．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ３５：１１５−１３２（１９９５））。ＥＧＦＲは、６つの異なるリガンド；上皮増殖因子（ＥＧＦ）、トランスホーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）、アンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）、ヘパリン結合上皮増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、ベータセルリンおよびエピレグリン（Ｇｒｏｅｎｅｎら．Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  １１：２３５−２５７（１９９４））、によって結合される。単一の遺伝子の選択的スプライシングから生じるヒレグリンタンパク質のファミリーは、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４についてのリガンドである。このヒレグリンファミリーは、αヒレグリン、βヒレグリンおよびγヒレグリン（Ｈｏｌｍｅｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１２０５−１２１０（１９９２）；米国特許第５，６４１，８６９号；およびＳｃｈａｅｆｅｒら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５−１３９４（１９９７））；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）、グリア増殖因子（ＧＧＦ）；アセチルコリンレセプター誘導活性（ＡＲＩＡ）；および感覚ニューロンおよび運動ニューロン由来因子（ＳＭＤＦ）を含む。総説については、Ｇｒｏｅｎｅｎら．Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  １１：２３５−２５７（１９９４）；Ｌｅｍｋｅ，Ｇ．Ｍｏｌｅｃ．＆Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７：２４７−２６２（１９９６）およびＬｅｅら．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．４７：５１−８５（１９９５）を参照のこと。最近、３つのさらなるＨＥＲリガンドが同定された；ＨＥＲ３またはＨＥＲ４のいずれかを結合することが報告されているニューレグリン−２（ＮＲＧ−２）（Ｃｈａｎｇら．Ｎａｔｕｒｅ  ３８７  ５０９−５１２（１９９７）；およびＣａｒｒａｗａｙら  Ｎａｔｕｒｅ  ３８７：５１２−５１６（１９９７））；ＨＥＲ４を結合するニューレグリン−３（Ｚｈａｎｇら．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９４（１８）：９５６２−７（１９９７））；およびＨＥＲ４を結合するニューレグリン−４（Ｈａｒａｒｉら．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２６８１−８９（１９９９））、ＨＢ−ＥＧＦ、ベタセルリンおよびエピレグリンもまたＨＥＲ４に結合する。
【００１６】
ＥＧＦおよびＴＧＦαは、ＨＥＲ２に結合しないが、ＥＧＦは、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２を刺激して、ヘテロダイマーを形成し、このヘテロダイマーはＥＧＦＲを活性化し、このヘテロダイマーにおけるＨＥＲ２のトランスリン酸化を生じる。ダイマー化および／またはトランスリン酸化は、ＨＥＲ２チロシンキナーゼを活性化するようである。Ｅａｒｐら，前出を参照のこと。同様に、ＨＥＲ３がＨＥＲ２と同時発現される場合、活性なシグナル伝達複合体が形成され、ＨＥＲ２に対する抗体は、この複合体を破壊し得る（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９（２０）：１４６６１−１４６６５（１９９４））。さらに、ヒレグリン（ＨＲＧ）に対するＨＥＲ３の親和性は、ＨＥＲ２と同時発現される場合に、より高い親和性状態に増大される。ＨＥＲ２−ＨＥＲ３タンパク質複合体に関しては、Ｌｅｖｉら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １５：１３２９−１３４０（１９９５）；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：１４３１−１４３５（１９９５）；およびＬｅｗｉｓら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６：１４５７−１４６５（１９９６）もまた参照のこと。ＨＥＲ４は、ＨＥＲ３と同様に、ＨＥＲ２との活性なシグナル伝達複合体を形成する（ＣａｒｒａｗａｙおよびＣａｎｔｌｅｙ，Ｃｅｌｌ  ７８：５−８（１９９４））。
【００１７】
ＨＥＲ抗体に関する特許公報としては、以下が挙げられる：
【００１８】
【数１】
2020094061.tif 000002
ＨＥＲ２抗体トラスツズマブで処置した患者は、ＨＥＲ２過剰発現／増幅に基づく治療のために選択され得る。例えば、ＷＯ９９／３１１４０（Ｐａｔｏｎら）、ＵＳ２００３／０１７０２３４Ａ１（Ｈｅｌｌｍａｎｎ，Ｓ．）、およびＵＳ２００３／０１４７８８４（Ｐａｔｏｎら）；ならびにＷＯ０１／８９５６６、ＵＳ２００２／００６４７８５、およびＵＳ２００３／０１３４３４４（Ｍａｓｓら）を参照のこと。ＨＥＲ２過剰発現および増幅を検出するための免疫組織化学（ＩＨＣ）および蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）に関して、ＵＳ２００３／０１５２９８７、Ｃｏｈｅｎらもまた参照のこと。
【００１９】
ＷＯ２００４／０５３４９７およびＵＳ２００４／０２４８１５Ａ１（Ｂａｃｕｓら）、ならびにＵＳ２００３／０１９０６８９（ＣｒｏｓｂｙおよびＳｍｉｔｈ）は、トラスツズマブ治療に対する応答を決定することまたは推定することに言及する。ＵＳ２００４／０１３２９７Ａ１（Ｂａｃｕｓら）は、ＡＢＸ０３０３  ＥＧＦＲ抗体治療に対する応答を決定することまたは推定することに関する。ＷＯ２００４／００００９４（Ｂａｃｕｓら）は、ＧＷ５７２０１６、低分子、ＥＧＦＲ−ＨＥＲ２チロシンキナーゼインヒビターに対する応答を決定することに関する。ＷＯ２００４／０６３７０９（Ａｍｌｅｒら）は、ＥＧＦＲインヒビター、エルロチニブＨＣｌに対する感受性を決定するための生体マーカーおよび方法に言及する。ＵＳ２００４／０２０９２９０（Ｃｏｂｌｅｉｇｈら）は、乳癌予後についての遺伝子発現マーカーに関する。
【００２０】
ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）で処置される患者は、ＨＥＲ活性化またはダイマー化に基づいて、治療について選択され得る。ペルツズマブおよびこれを用いた治療のための患者の選択に関する特許公報としては、以下が挙げられる：ＷＯ０１／００２４５（Ａｄａｍｓら）；ＵＳ２００３／００８６９２４（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．）；ＵＳ２００４／００１３６６７Ａ１（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．）；ならびにＷＯ２００４／００８０９９Ａ２、およびＵＳ２００４／０１０６１６１（Ｂｏｓｓｅｎｍａｉｅｒら）。
【００２１】
Ｃｒｏｎｉｎら．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１６４（１）：３５−４２（２００４）は、保存用（ａｒｃｈｉｖａｌ）パラフィン包埋組織において遺伝子発現の測定を記載する。Ｍａら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：６０７−６１６（２００４）は、保存された原発性生検から採取された腫瘍組織切片から単離されたＲＮＡを用いる、遺伝子オリゴヌクレオチドマイクロアレイによる遺伝子プロファイリングを記載する。
【００２２】
（補助療法）
補助療法は、その最も広い意味において、たとえ、その拡大が放射線医学試験または実験的試験によって検出することができないとしても、拡大している可能性がある任意の癌細胞を殺傷する一次治療（ｐｒｉｍａｒｙ  ｔｈｅｒａｐｙ）に加えて与えられる処置である。同時の臨床試験により、乳癌補助療法のための化学療法剤の効力を評価した（すなわち、ＢＣＩＲＧ  ００１（パクリタキセル、ドキソルビシン、およびシクロホスファミド（ＴＡＣ）を、フルオロウラシル、ドキソルビシン、およびシクロホスファミド（ＦＡＣ）と比較する）；ＣＡＬＧＢ  ９７４１（用量密度治験）；およびＣＡＬＧＣ  ９３４４（アントラサイクリン＋シクロホスファミド（ＡＣ）を、ＡＣ＋パクリタキセル（ＡＣ／Ｔ）と比較した）。
【００２３】
ＢＣＲＩＧ  ００１治験において、無疾患生存（ＤＦＳ）危険比は、０．７２（ｐ＝０．００１０）であり、ＴＡＣについての５年ＤＦＳは７５％であり、ＦＡＣについては、６８％であった。全体的生存（ＯＳ）危険比は、０．７０（ｐ＝０．００８０）であり、ＴＡＣについての５年ＯＳは、８７％であり、ＦＡＣについては、８１％であった。この治験において、ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）被験体（ｎ＝３２８）について、ＤＦＳ危険比は、０．６０（ｐ＝０．００８８）であった。
【００２４】
ＣＡＬＧＢ  ９７４１は、ＡＣ×４とＴ×４；逐次的Ａ×４とＴ×４とＣ×４；用量密度逐次的Ａ×４とＴ×４とＣ×４；および用量密度ＡＣ×４とＴ×４（Ａ＝アントラサイクリン；Ｃ＝シクロホスファミド；Ｔ＝パクリタキセル）を比較する用量密度治験であった。ＤＦＳ危険比（用量密度  対  標準）は、０．７４（ｐ＝０．０１０）であった；４年ＤＦＳは、８２％  対  ７５％であった。ＯＳ危険比（用量密度  対  標準）は、０．６９（ｐ＝０．０１３）であった。
【００２５】
ＣＡＬＧＢ  ９３４４は、ＡＣの効力とＡＣ／Ｔとの効力を比較した。ＤＦＳ危険比は、０．８３（ｐ＝０．００２）であり、５年ＤＦＳは、ＡＣについて６５％であり、ＡＣ／Ｔについて７０％であった。ＯＳ危険比は、０．８２（ｐ＝０．００６４）であり、５年ＯＳは、ＡＣについて７７％であり、ＡＣ／Ｔについて８０％であった。
【００２６】
アメリカ癌学会によれば、推定２１１，０００名の女性が、乳癌を有すると診断されており、約４０，０００名の女性が、米国において２００５年にこの疾患で死亡すると思われる。乳癌は、米国の女性の中で癌の最も一般的な原因であり、３分に１名、米国において女性が乳癌と診断される。乳癌と診断された女性の約３０％が、リンパ節陽性乳癌を有する。
【００２７】
補助療法に関連した刊行物またはセミナーとしては、以下が挙げられる：Ｐａｉｋら．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（２４）：１９９１−１９９８（２０００）；Ｐａｉｋら．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９４：８５２−８５４（２００２）；Ｐａｉｋら：Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ｑｕａｌｉｔｙ  ａｓｓｕｒａｎｃｅ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  ＨＥＲ２  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＮＳＡＢＰ  Ｔｒｉａｌ  ｆｏｒ  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ．Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，２００２；Ｒｏｃｈｅ  ＰＣら．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９４（１１）：８５５−７（２００２）；Ａｌｂａｉｎら．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｔｈｉｒｔｙ−Ｅｉｇｈｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，２００２年５月１８日〜２１日，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ，要約  １４３；Ｔｈｅ  ＡＴＡＣ（Ａｒｉｍｉｄｅｘ，Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  Ａｌｏｎｅ  ｏｒ  ｉｎ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）Ｔｒｉａｌｉｓｔｓ’  Ｇｒｏｕｐ．Ｌａｎｃｅｔ  ３５９：２１３１−３９（２００２）；Ｇｅｙｅｒら，２６ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ（ＳＡＢＣＳ），２００３年１２月，要約
１２；Ｐｅｒｅｚら．Ｐｒｏｃ．ＡＳＣＯ  ２００５，要約  ５５６。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２８】
本発明は、以下を提供する。
（項目１）  補助療法の方法であって、上記方法は、
非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に対して、根治手術の後に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する有効量の抗体と少なくとも１種の化学療法剤とを投与して、上記被験体における無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を伸長させる工程
を包含し、上記ＤＦＳまたは上記ＯＳを、処置開始の約２年間後〜５年間後に評価する、方法。
（項目２）  項目１に記載の方法であって、上記抗体は、ＨＥＲ２に対するトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））の結合をブロックする、方法。
（項目３）  項目１に記載の方法であって、上記抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を含む、方法。
（項目４）  項目１に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイド、ビンカ、白金化合物、アロマターゼインヒビター、抗エストロゲン、エトポシド、チオテパ、シクロホスファミド、メトトレキサート、リポソームドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、カペシタビン、およびゲンシタビンからなる群より選択される、方法。
（項目５）  項目４に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目６）  項目５に記載の方法であって、上記タキソイドは、パクリタキセルまたはドセタキセルである、方法。
（項目７）  項目６に記載の方法であって、上記パクリタキセルと上記抗体とを、アントラサイクリンおよびシクロホスファミドの投与後に投与する、方法。
（項目８）  項目７に記載の方法であって、上記抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を含む、方法。
（項目９）  項目１に記載の方法であって、上記抗体と化学療法との投与は、被験体集団において３年目の疾患再発を、化学療法単独で処置した被験体と比較して約５０％減少させる、方法。
（項目１０）  項目７に記載の方法であって、上記パクリタキセルと上記抗体との投与は、被験体集団において３年目の疾患再発を、上記抗体を用いずにパクリタキセルで処置した被験体と比較して約５０％減少させる、方法。
（項目１１）  項目１に記載の方法であって、上記被験体は、高い癌再発リスクを有する、方法。
（項目１２）  項目１１に記載の方法であって、上記被験体は、約５０歳未満である、方法。
（項目１３）  項目１１に記載の方法であって、上記被験体は、直径２ｃｍを超える腫瘍を有する、方法。
（項目１４）  項目１１に記載の方法であって、上記癌は、リンパ節陽性癌である、方法。
（項目１５）  項目１４に記載の方法であって、上記被験体は、４〜９個の浸潤されたリンパ節を有する、方法。
（項目１６）  項目１５に記載の方法であって、上記被験体は、１０個以上の浸潤されたリンパ節を有する、方法。
（項目１７）  項目１１に記載の方法であって、上記被験体は、エストロゲンレセプター（ＥＲ）陰性である、方法。
（項目１８）  項目１１に記載の方法であって、上記被験体は、プロゲステロンレセプター（ＰＧ）陰性である、方法。
（項目１９）  項目１に記載の方法であって、上記抗体は、インタクトな裸の抗体である、方法。
（項目２０）  項目１に記載の方法であって、上記ＤＦＳまたは上記ＯＳを、処置開始の４年後に評価する、方法。
（項目２１）  非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体の集団において非転移性乳癌を治癒する方法であって、上記方法は、
根治手術の後の上記被験体集団に対して、有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイドを投与する工程；ならびに
約４年間後に上記被験体集団を評価して、疾患再発が上記集団のうちの少なくとも約８０％において生じていないことを確認する工程；
を包含する、方法。
（項目２２）  項目２１に記載の方法であって、上記集団は、３０００人以上のヒト被験体を含む、方法。
（項目２３）  非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体集団において疾患の再発を減少する方法であって、上記方法は、
有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイドを上記被験体に対して、根治手術の後に投与する工程、
を包含し、約３年目における疾患再発は、タキソイド単独で処置した被験体と比較して少なくとも約５０％減少される、方法。
（項目２４）  補助療法の方法であって、上記方法は、
非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に対して、根治手術の後に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体と少なくとも１種の化学療法剤とを、治療標準である化学療法と比較して無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を伸長させるに有効な量で投与する工程
を包含し、上記ＤＦＳまたは上記ＯＳを、処置開始の少なくとも約３年間、１年間当たり少なくとも１回評価し、上記ＤＦＳは、上記患者が生存したままであり少なくとも１年間癌の再発がない場合に伸長し、上記ＯＳは、処置開始から少なくとも１年間生存したままである場合に伸長する、方法。
（項目２５）  項目２４に記載の方法であって、上記抗体は、ＨＥＲ２に対するトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））の結合をブロックする、方法。
（項目２６）  項目２４に記載の方法であって、上記抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を含む、方法。
（項目２７）  項目２４に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目２８）  項目２７に記載の方法であって、上記タキソイドは、パクリタキセルまたはドセタキセルである、方法。
（項目２９）  項目２４に記載の方法であって、上記抗体および化学療法剤の投与は、被験体集団において３年目における疾患再発を、上記化学療法剤単独で処置した被験体と比較して約５０％減少させる、方法。
（項目３０）  根治手術の後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性を有すると同定された非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体を指示する方法であって、上記ヒト被験体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と少なくとも１種の化学療法剤とでの処置を受容する治療標準である化学療法によってのみ処置されている、方法。
（項目３１）  項目３０に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目３２）  項目３０に記載の方法であって、上記被験体を、指示される通りに処置する、方法。
（項目３３）  項目３２に記載の方法であって、上記処置は、少なくとも６ヶ月間継続する、方法。
（項目３４）  根治手術後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性であると同定されるヒト被験体においてＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するための宣伝方法であって、上記方法は、
（ａ）トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせた化学療法剤；または
（ｂ）化学療法剤と組み合わせた、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体；
を宣伝する工程；
を包含する、方法。
（項目３５）  項目３４に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目３６）  項目３４に記載の方法であって、上記宣伝は、上記化学療法剤または上記抗体の商業的処方物が付随する包装挿入物による、方法。
（項目３７）  項目３４に記載の方法であって、上記宣伝は、医師または健康管理供給者への文書による伝達または口頭での伝達による、方法。
（項目３８）  項目３４に記載の方法であって、上記宣伝の後に、上記化学療法剤と上記抗体との組み合わせを用いて上記被験体を処置することを行う、方法。
（項目３９）  ビジネス方法であって、上記方法は、
トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせた根治手術の後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性であると同定されるヒト被験体においてＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するための化学療法剤を販売して、上記被験体の癌再発可能性を減少するかまたは上記被験体の生存可能性を増加する工程；
を包含する、方法。
（項目４０）  項目３９に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目４１）  項目３９に記載の方法であって、上記販売の後に、上記化学療法剤と上記抗体との組み合わせを用いて上記被験体を処置することを行う、方法。
（項目４２）  ビジネス方法であって、上記方法は、
化学療法剤と組み合わせた根治手術の後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性であると同定されるヒト被験体においてＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するためのトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を販売して、上記被験体の癌再発可能性を減少するかまたは上記被験体の生存可能性を増加する工程；
を包含する、方法。
（項目４３）  項目４２に記載の方法であって、上記販売の後に、上記化学療法剤と上記抗体との組み合わせを用いて上記被験体を処置することを行う、方法。
（項目４４）  補助療法の方法であって、上記方法は、  非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に対して、根治手術の後に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体を、単一薬剤として、無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を伸長させるに有効な量で投与する工程；
を包含し、上記ＤＦＳまたは上記ＯＳを、上記抗体の初期投与後の少なくとも約１年目に確認する、方法。
（項目４５）  補助療法のための組成物であって、上記組成物は、
非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体において、根治手術の後に、無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を伸長させるに有効な量の、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体と、少なくとも１種の化学療法剤とを、含み、上記ＤＦＳまたは上記ＯＳは、上記処置開始の約２年後〜約５年後に評価される、組成物。
（項目４６）  項目４５に記載の組成物であって、上記抗体は、ＨＥＲ２に対するトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））の結合をブロックする、組成物。
（項目４７）  項目４５に記載の組成物であって、上記抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を含む、組成物。
（項目４８）  項目４５に記載の組成物であって、上記化学療法剤は、タキソイド、ビンカ、白金化合物、アロマターゼインヒビター、抗エストロゲン、エトポシド、チオテパ、シクロホスファミド、メトトレキサート、リポソームドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、カペシタビン、およびゲンシタビンからなる群より選択される、組成物。
（項目４９）  項目４８に記載の組成物であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、組成物。
（項目５０）  項目４９に記載の組成物であって、上記タキソイドは、パクリタキセルまたはドセタキセルである、組成物。
（項目５１）  項目５０に記載の組成物であって、上記パクリタキセルと上記抗体とは、アントラサイクリンおよびシクロホスファミドの投与後に投与されるように処方されている、組成物。
（項目５２）  項目５１に記載の組成物であって、上記抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を含む、組成物。
（項目５３）  項目４５に記載の組成物であって、上記抗体と化学療法との投与は、被験体集団において３年目の疾患再発を、化学療法単独で処置した被験体と比較して約５０％減少させる、組成物。
（項目５４）  項目５１に記載の組成物であって、上記パクリタキセルと上記抗体との投与は、被験体集団において３年目の疾患再発を、上記抗体を用いずにパクリタキセルで処置した被験体と比較して約５０％減少させる、組成物。
（項目５５）  項目４５に記載の組成物であって、上記被験体は、高い癌再発リスクを有する、組成物。
（項目５６）  項目５５に記載の組成物であって、上記被験体は、約５０歳未満である、組成物。
（項目５７）  項目５５に記載の組成物であって、上記被験体は、直径２ｃｍを超える腫瘍を有する、組成物。
（項目５８）  項目５５に記載の組成物であって、上記癌は、リンパ節陽性癌である、組成物。
（項目５９）  項目５８に記載の組成物であって、上記被験体は、４〜９個の浸潤されたリンパ節を有する、組成物。
（項目６０）  項目５９に記載の組成物であって、上記被験体は、１０個以上の浸潤されたリンパ節を有する、組成物。
（項目６１）  項目５５に記載の組成物であって、上記被験体は、エストロゲンレセプター（ＥＲ）陰性である、組成物。
（項目６２）  項目５５に記載の組成物であって、上記被験体は、プロゲステロンレセプター（ＰＧ）陰性である、組成物。
（項目６３）  項目４５に記載の組成物であって、上記抗体は、インタクトな裸の抗体である、組成物。
（項目６４）  項目４５に記載の組成物であって、上記ＤＦＳまたは上記ＯＳを、処置開始の４年後に評価する、組成物。
（項目６５）  根治手術を行った、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体の集団において非転移性乳癌を治癒するための組成物であって、上記組成物は、
有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイド
を含む、組成物。
（項目６６）  項目６５に記載の組成物であって、上記集団は、３０００人以上のヒト被験体を含む、組成物。
（項目６７）  根治手術を行った、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体集団において疾患の再発を減少するための組成物であって、上記組成物は、
有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイド
を含む、組成物。
（項目６８）  補助療法のための組成物であって、上記組成物は、
根治手術の後の、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体の治療標準である化学療法と比較して無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を伸長させるに有効な量で、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体と少なくとも１種の化学療法剤とを含み、
上記ＤＦＳまたは上記ＯＳは、処置開始の少なくとも約３年間、１年間当たり少なくとも１回評価され、上記ＤＦＳは、上記患者が生存したままであり少なくとも１年間癌の再発がない場合に伸長し、上記ＯＳは、処置開始から少なくとも１年間生存したままである場合に伸長する、組成物。
（項目６９）  項目６８に記載の組成物であって、上記抗体は、ＨＥＲ２に対するトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））の結合をブロックする、組成物。
（項目７０）  項目６８に記載の組成物であって、上記抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を含む、組成物。
（項目７１）  項目６８に記載の組成物であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、組成物。
（項目７２）  項目７１に記載の組成物であって、上記タキソイドは、パクリタキセルまたはドセタキセルである、組成物。
（項目７３）  項目６８に記載の組成物であって、上記抗体および化学療法剤の投与は、被験体集団において３年目における疾患再発を、上記化学療法剤単独で処置した被験体と比較して約５０％減少させる、組成物。
（項目７４）  根治手術の後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性を有すると同定されかつ治療標準である化学療法によってのみ処置されている非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体を指示するための、コンピュータにより実施される方法であって、上記ヒト被験体に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と少なくとも１種の化学療法剤とでの処置を受容するように、指示手段によって指示する工程、を包含する、方法。
（項目７５）  項目７４に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目７６）  項目７４に記載の方法であって、上記被験体を、指示される通りに処置する、方法。
（項目７７）  項目７６に記載の方法であって、上記処置は、少なくとも６ヶ月間継続する、方法。
（項目７８）  化学療法剤を宣伝するための、コンピュータにより実施される方法であって、上記方法は、  根治手術後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性であると同定されるヒト被験体におけるＨＥＲ２陽性非転移性乳癌の処置を、宣伝手段によって宣伝する工程、
を包含し、上記処置は、
（ａ）トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせた化学療法剤；または
（ｂ）化学療法剤と組み合わせた、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体；
を包含する、方法。
（項目７９）  項目７８に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目８０）  項目７８に記載の方法であって、上記宣伝は、上記化学療法剤または上記抗体の商業的処方物が付随する包装挿入物による、方法。
（項目８１）  項目７８に記載の方法であって、上記宣伝は、医師または健康管理供給者への文書による伝達または口頭での伝達による、方法。
（項目８２）  項目７８に記載の方法であって、上記宣伝の後に、上記化学療法剤と上記抗体との組み合わせを用いて上記被験体を処置することを行う、方法。
（項目８３）  化学療法剤を開発するための、コンピュータにより実施される方法であって、上記方法は、
トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせた根治手術の後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性であると同定されるヒト被験体においてＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するための化学療法剤を、販売手段によって販売して、上記被験体の癌再発可能性を減少するかまたは上記被験体の生存可能性を増加する工程；
を包含する、方法。
（項目８４）  項目８３に記載の方法であって、上記化学療法剤は、タキソイドである、方法。
（項目８５）  項目８３に記載の方法であって、上記販売する工程の後に、上記化学療法剤と上記抗体との組み合わせを用いて上記被験体を処置することを行う、方法。
（項目８６）  化学療法剤を開発するための、コンピュータにより実施される方法であって、上記方法は、
化学療法剤と組み合わせた根治手術の後に高い癌再発リスクまたは低い生存可能性であると同定されるヒト被験体においてＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するためのトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を、販売手段によって販売して、上記被験体の癌再発可能性を減少するかまたは上記被験体の生存可能性を増加する工程；
を包含する、方法。
（項目８７）  項目８６に記載の方法であって、上記販売する工程の後に、上記化学療法剤と上記抗体との組み合わせを用いて上記被験体を処置することを行う、方法。
（項目８８）  補助療法のための組成物であって、上記組成物は、
非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体において、根治手術の後に、無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を伸長させるに有効な量の、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２のドメインＩＶに結合する抗体を、単一薬剤中に含み、上記ＤＦＳまたは上記ＯＳは、上記抗体の投与開始の少なくとも約１年間後に評価される、組成物。
（項目８９）  項目７４〜８７のうちのいずれか１項に記載の方法を、コンピュータにおいて実施するためのコンピュータプログラム。
（項目９０）  コンピュータ読出し可能な記憶媒体であって、上記媒体は、上記媒体中に記録されたプログラムを有し、上記プログラムは、項目７４〜８７に記載の方法をコンピュータに実施させる、媒体。
（項目９１）  項目７４〜８７のうちのいずれか１項に記載の方法をコンピュータにおいて実施するためのコンピュータプログラムを含む、通信媒体。
【００２９】
本発明は、本明細書において、非転移性の危険性が高い乳癌を有するヒト被験体におけるＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）の補助的使用の臨床試験において得られた結果に関する。無疾患生存（ＤＦＳ）および全体的生存（ＯＳ）により評価される効力は、特に、補助的設定において使用するために、臨床試験において最近試験された化学療法剤についてのＤＦＳデータおよびＯＳデータに比較した場合、顕著であった。驚くべきことに、アントラサイクリン（ドキソルビシン）／シクロホスファミド（ＡＣ）化学療法の後に、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）をパクリタキセルと組み合わせて受けている臨床試験中の被験体は、ＡＣに続いて、パクリタキセル単独で処置した被験体と比較して、３年目に、疾患再発（第１の乳癌事象）において５２％減少を有した。この差は、非常に有意であった。
【００３０】
結果は、特に印象的であり、被験体がＨＥＲ２陽性であり、従って再発の危険性が高いことを考慮すれば、驚くべきことであった。なぜなら、ＨＥＲ２増幅または過剰発現は、より侵襲性の疾患およびより高い再発の危険性と関連しているからである。さらに、彼らのＨＥＲ２陽性は別にすると、治験に含められた被験体は、彼らの再発の危険性のさらなる増大（浸潤されたリンパ節の数、原発性腫瘍の大きさなどが挙げられる）という基準によって選択された。化学療法単独を超える有意な改善は、特に、このような被験体においては予測外である。
【００３１】
本発明は、非転移性乳癌の被験体のより有効な医療を提供する、大きな医療的前進を構成する。
【００３２】
一局面において、本発明は、補助療法の方法に関し、この方法は、根治手術（ｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ  ｓｕｒｇｅｒｙ）後に非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に、この被験体における無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を延ばすように、有効量の、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））によって結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体および少なくとも１種の化学療法剤を投与する工程を包含する。ここでこのＤＦＳまたはＯＳは、処置の開始から約２〜５年後に評価される。
【００３３】
別の局面において、本発明は、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体の集団において非転移性乳癌を治癒する方法に関し、この方法は、有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイドを、根治手術後の被験体の集団に投与する工程、および約４年後にこの被験体の集団を評価して、この集団の少なくとも約８０％において疾患再発が起こらなかったことを確認する工程を包含する。
【００３４】
なお別の局面において、本発明は、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体の集団における疾患再発を減少させる方法に関し、この方法は、有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイドを、根治手術後の被験体に投与する工程を包含し、ここで約３年目の疾患再発は、タキソイド単独で処置した被験体に比較して、少なくとも約５０％減少している。
【００３５】
これらの方法の特定の実施形態において、この抗体および化学療法剤の投与は、化学療法で処置した被験体（例えば、アントラサイクリン／シクロホスファミドに続いて、パクリタキセル単独で）に比較して、被験体の集団において疾患癌再発を約５０％減少させる。別の実施形態において、この被験体は、高い癌再発の危険性を有する。別の実施形態において、この集団は、３０００名以上のヒト被験体を含む。
【００３６】
さらなる局面において、本発明は、補助療法の方法に関し、この方法は、根治手術後に、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体および少なくとも１種の化学療法剤を、医療の標準である化学療法に対して無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を延ばすに有効な量で投与する工程を包含する。ここでこのＤＦＳまたはこのＯＳは、処置の開始後少なくとも約３年にわたって、少なくとも１年に１回評価される。ここでＤＦＳは、少なくとも１年にわたって患者が癌を再発することなく生存し続けている場合に延びており、ＯＳは、処置の開始から少なくとも１年にわたって患者が生存し続けている場合に延びている。
【００３７】
なおさらなる局面において、本発明は、根治手術後に高い癌再発の危険性（癌再発する危険性が高い）または低い生存可能性（生存する可能性が低い）を有すると同定され、かつ治療標準である化学療法単独で処置されている、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体および少なくとも１種の化学療法剤での処置を受けるように指示する方法に関する。
【００３８】
異なる局面において、本発明は、宣伝方法に関し、この方法は、根治手術後に癌再発の危険性が高いかまたは生存の可能性が低いと同定されたヒト被験体におけるＨＥＲ２陽性非転移性乳癌の処置のために：（ａ）化学療法剤を、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせて；または（ｂ）トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を、化学療法剤と組み合わせて、宣伝する工程を包含する。
【００３９】
なお別の局面において、本発明は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせた根治手術後に癌再発の危険性が高いかまたは生存の可能性が低いと同定されたヒト被験体においてＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するために、被験体の癌再発の可能性を減少するかまたは被験体の生存の可能性を増大させるように、化学療法剤を販売する工程を包含する、ビジネスメソッドに関する。
【００４０】
さらなる局面において、本発明は、化学療法剤と組み合わせた根治手術後に癌再発の危険性が高いかまたは生存の危険性が低いと同定されたヒト被験体においてＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するために、被験体の癌再発の可能性を減少するかまたは被験体の生存の可能性を増大させるように、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を販売する工程を包含する、ビジネスメソッドに関する。
【００４１】
本発明はまた、補助療法の方法に関し、この方法は、根治手術後に、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を、単一薬剤として、無疾患生存（ＤＦＳ）または全体的生存（ＯＳ）を延ばすに有効な量で投与する工程を包含する。ここでこのＤＦＳまたはＯＳは、この抗体の最初の投与の少なくとも約１年後に確認される。
【００４２】
全ての局面において、好ましい抗体は、ＨＥＲ２に対するトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））の結合をブロックする。より好ましくは、この抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））を包む。この化学療法剤は、タキソイド、ビンカ、白金化合物、アロマターゼインヒビター、抗エストロゲン、エトポシド、チオテパ、シクロホスファミド、メトトレキセート、リポソーム性ドキソルビシン、ペグ化リポソーム性ドキソルビシン、カペシタビン、およびゲムシタビンからなる群より選択され得るが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、この化学療法剤はタキソイド（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）であり、最も好ましくは、パクリタキセルである。
【００４３】
全ての局面において、好ましくは、この化学療法剤（例えば、タキソイド）および抗体は、同時に投与される。
【００４４】
全ての局面において、この化学療法剤（例えば、タキソイド）および抗体は、好ましくは、手術後に施される他の標準的な化学療法の後に投与される。好ましい実施形態において、この標準的な化学療法は、アントラサイクリン（ドキソルビシン）およびシクロホスファミドの投与である。
【００４５】
全ての局面において、この被験体は、好ましくは、比較的若く、例えば、約５０歳未満であるか、または約４５歳未満であるか、または約４０歳未満である。
【００４６】
全ての局面において、この方法は、直径２ｃｍを超える腫瘍を有する被験体および／またはリンパ節陽性癌を有する被験体（４〜９個、または１０個以上の浸潤されたリンパ節を有する）、ならびに／あるいはエストロゲンレセプター（ＥＲ）陰性被験体、および／またはプロゲステロンレセプター（ＰＧ）陰性被験体の処置を包含する。
【００４７】
全ての局面において、この抗体は、例えば、インタクトな裸の抗体であり得る。
【００４８】
特定の実施形態において、ＤＦＳまたはＯＳは、処置の開始の５年後に評価される。
【００４９】
さらなる実施形態において、この抗体および化学療法剤の投与は、抗体なしで、化学療法剤で処置された被験体に比較して、被験体の集団における疾患再発を約５０％減少させる。
【００５０】
本出願は、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を使用する非転移性乳癌の補助療法を記載する。
【００５１】
本発明のさらなる局面において、本発明は、根治手術後に癌再発の危険性が高いかまたは生存の可能性が低いと同定され、かつ治療標準である化学療法でのみ処置されている、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体を指示するためのコンピューター実行方法を提供し、この方法は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体および少なくとも１種の化学療法剤での処置を受けるように、この被験体に、指示手段により指示する工程を包含する。この局面において、この化学療法剤は、タキソイドであり得る。さらに、この局面において、この被験体は、指示されるように処置され得る。ここでこの処置は、好ましくは、少なくとも６ヶ月間継続される。さらに、この局面において、本発明はまた、コンピューターで、上記の方法を実行するためのコンピュータープログラム；記録されたプログラムを有するコンピューター読み取り可能な記憶媒体（ここでこのプログラムは、コンピューターに上記の方法を実行させる）；およびコンピューターで上記の方法を実行するためのコンピュータープログラムを含む伝送媒体に関する。
【００５２】
本発明のさらなる局面において、本発明は、化学療法剤を宣伝するためのコンピューター実行方法を提供し、この方法は、根治手術後に癌再発の危険性が高いかまたは生存の可能性が低いと同定されたヒト被験体におけるＨＥＲ２陽性非転移性乳癌の処置を、宣伝手段により、宣伝する工程を包含し、この処置は、（ａ）トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせた、化学療法剤；または（ｂ）化学療法剤と組み合わせた、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を包含する。この局面において、この化学療法剤はタキソイドであり得る。さらに、この局面において、この宣伝は、化学療法剤または抗体の市販用処方物に付随した包装挿入物によって、あるいは医師または医療介護機関に対する書面による伝達または口頭による伝達によって、であり得る。この局面において、この宣伝の後に、化学療法剤および抗体の組み合わせでの被験体の処置が行われ得る。さらに、この局面において、本発明はまた、コンピューターで上記の方法を実行するためのコンピュータープログラム；記録されたプログラムを有するコンピューター読み取り可能な記憶媒体（ここでこのプログラムは、上記の方法をコンピュータに実行させる）；およびコンピューターにおいて上記の方法を実行するためのコンピュータープログラムを含む伝送媒体に関する。
【００５３】
本発明のなお別の局面において、本発明は、化学療法剤を開発するためのコンピューター実行方法を提供し、この方法は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体と組み合わせた根治手術後に癌再発の危険性が高いかまたは生存の可能性が低いと同定されたヒト被験体において、被験体の癌再発の可能性を減少させるかまたは被験体の生存の可能性を増大させるように、ＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するために、化学療法剤を販売手段によって販売する工程を包含する。この局面において、この化学療法剤は、タキソイドであり得る。この局面において、この販売に続いて、化学療法剤および抗体の組み合わせでの被験体の処置が行われ得る。さらにこの局面において、本発明はまた、コンピューターで、上記の方法を実行するためのコンピュータープログラム；記録されたプログラムを有するコンピューター読み取り可能な記憶媒体（ここでこのプログラムは、上記の方法をコンピュータに実行させる）；およびコンピューターにおいて上記の方法を実行するためのコンピュータープログラムを含む伝送媒体に関する。
【００５４】
本発明のなおさらなる局面において、本発明は、化学療法剤を開発するためのコンピューター実行方法を提供し、この方法は、化学療法剤と組み合わせた根治手術後に癌再発の危険性が高いかまたは生存の可能性が低いと同定されたヒト被験体において、被験体の癌再発の可能性を減少させるかまたは被験体の生存の可能性を増大させるように、ＨＥＲ２陽性非転移性乳癌を処置するために、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を販売手段によって販売する工程を包含する。この局面において、この販売に続いて、化学療法剤および抗体の組み合わせでの被験体の処置が行われ得る。さらにこの局面において、本発明はまた、コンピューターで、上記の方法を実行するためのコンピュータープログラム；記録されたプログラムを有するコンピューター読み取り可能な記憶媒体（ここでこのプログラムは、上記の方法をコンピュータに実行させる）；およびコンピューターにおいて上記の方法を実行するためのコンピュータープログラムを含む伝送媒体に関する。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は、ＨＥＲ２タンパク質構造の概略図、およびその細胞外ドメインのドメインＩ−ＩＶについてのアミノ酸配列（配列番号１〜４、それぞれ）を提供する。
【図２Ａ】図２Ａおよび図２Ｂは、トラスツズマブの軽鎖（図２Ａ；配列番号５）および重鎖（図２Ｂ：配列番号６）それぞれのアミノ酸配列を示す。
【図２Ｂ】図２Ａおよび図２Ｂは、トラスツズマブの軽鎖（図２Ａ；配列番号５）および重鎖（図２Ｂ：配列番号６）それぞれのアミノ酸配列を示す。
【図３】図３は、２つの異なるＨＥＲ２抗体（トラスツズマブおよびペルツズマブ）の機能の間の違いを示す。
【図４Ａ】図４Ａは、それぞれ、ＮＳＡＢＰ  Ｂ−３１およびＮＣＣＴＧ  Ｎ９８３１（Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ）研究についての研究設計を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＮＳＡＢＰ  Ｂ−３１およびＮＣＣＴＧ  Ｎ９８３１（Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ）研究結果のジョイント分析のために使用される研究設計を示す。ＡＣ＝アントラサイクリン／シクロホスファミドの組み合わせ。本明細書中の実施例１の効力データは、ＮＳＡＢＰ  Ｂ−３１からの全ての被験体から含むが、ＴＡＸＯＬ（登録商標）と同時のＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（集団２）を開始しなかったＩｎｔｅｒｇｒｏｕｐからの患者を排除する。
【図５】図５は、Ｂ−３１およびＮ９８３１研究のＡＣ→パクリタキセルおよびＡＣ→パクリタキセル＋トラスツズマブ集団についての患者および腫瘍の特性を示す。その結果は、患者の年齢、陽性リンパ節の数、ホルモンレセプター状態、および腫瘍サイズによってグループ分けされている。
【図６】図６は、Ｂ３１／Ｎ９８３１研究についての疾患の無い生存を示す。
【図７】図７は、疾患の無い生存についてのＦｏｒｅｓｔプロットであり、ここで、患者は、年齢、ホルモン状態、腫瘍サイズ、および陽性節の数によって群に分けられている。
【図８】図８は、Ｂ３１研究（左パネル）およびＮ９８３１研究（右パネル）のＡＣ→Ｔ集団およびＡＣ→ＴＨ集団についての疾患の無い生存を示す。
【図９】図９は、Ｂ３１／Ｎ９８３１研究のＡＣ→Ｔ集団およびＡＣ→ＴＨ集団についての遠位再発の時間を示す。
【図１０】図１０は、Ｂ３１／Ｎ９８３１研究のＡＣ→Ｔ集団およびＡＣ→ＴＨ集団についての遠位再発の危険性を示す。
【図１１】図１１は、Ｂ３１／Ｎ９８３１研究のＡＣ→Ｔ集団およびＡＣ→ＴＨ集団についての生存データを示す。
【図１２】図１２は、効力終端分析の要約である。
【図１３】図１３は、評価可能なコホート（ＮＳＡＰＢ  Ｂ−３１研究のみについて）の心臓事象の累積発生率を示す。
【図１４Ａ】図１４Ａおよび１４Ｂは、ペルツズマブの軽鎖（図１４Ａ；配列番号７）および重鎖（図１４Ｂ；配列番号８）のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲを太字で示す。軽鎖および重鎖の計算された分子量は、２３，５２６．２２Ｄａおよび４９，２１６．５６Ｄａ（還元された形態のシステイン）である。炭水化物部分は、重鎖のＡｓｎ２９９に結合される。
【図１４Ｂ】図１４Ａおよび１４Ｂは、ペルツズマブの軽鎖（図１４Ａ；配列番号７）および重鎖（図１４Ｂ；配列番号８）のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲを太字で示す。軽鎖および重鎖の計算された分子量は、２３，５２６．２２Ｄａおよび４９，２１６．５６Ｄａ（還元された形態のシステイン）である。炭水化物部分は、重鎖のＡｓｎ２９９に結合される。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
本明細書において「補助療法」とは、疾患再発の危険性を減少するように、根治手術後に与えられる治療をいい、ここで、疾患が残っている証拠は何ら検出することはできない。補助療法の目的は、癌の再発を防止し、従って、癌に関連する死亡の可能性を減少させることである。本明細書において補助療法とは、新補助療法（例えば、被験体が、根治手術前に化学療法剤および／またはＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）で処置されている場合）を特に除外する。
「根治手術」とは、腫瘍および周辺組織、ならびに全ての浸潤されたリンパ節の完全な除去をいう。このような手術としては、ランペクトミー、乳房切除術（例えば、単純乳房切除術と腋窩切除、両側乳房切除術（ｄｏｕｂｌｅ  ｍａｓｔｅｃｔｏｍｙ）など）が挙げられる。
【００５７】
「乳癌」とは、本明細書において、乳房細胞または組織に浸潤している癌をいう。
【００５８】
「転移性」乳癌とは、乳房および局所リンパ節以外の身体の一部に拡がった癌をいう。
【００５９】
「非転移性」乳癌は、乳房および／または局所リンパ節に限られている癌である。
【００６０】
「生存」とは、患者が生き続けていることをいい、無疾患生存（ＤＦＳ）および全体的生存（ＯＳ）を包含する。
【００６１】
「無疾患生存（ＤＦＳ）」とは、処置の開始からまたは最初の診断から、規定された期間（例えば、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年など）の間、癌が再発することなく患者が生き続けていることをいう。本発明の基礎になった研究において、ＤＦＳを、処置目的の本質に従って分析した（すなわち、患者を彼らの割り当てられた治療に基づいて評価した）。ＤＦＳの分析に使用した事象には、これまでの事象（乳癌再発または二次的な原発性癌）なしに、癌の局部的、局所的および離れた場所での再発、続発性の癌の発生、患者における何らかの原因による死亡を含めた。
【００６２】
「全体的生存」とは、処置の開始からまたは最初の診断から、規定された期間（例えば、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年など）の間、患者が生き続けていることをいう。本発明の基礎になった研究において、生存分析のために使用した事象は、何らかの原因による死亡であった。
【００６３】
用語「有効量」とは、患者における癌を処置するために有効な薬物または薬物の組み合わせの量をいう。その薬物の有効量は、癌細胞数を減少させ得る；腫瘍の大きさを縮小させ得る；周辺器官への癌細胞浸潤を阻害し得る（すなわち、ある程度遅らせる、そして好ましくは停止させる）；腫瘍転移を阻害し得る（すなわち、ある程度遅らせ得る、そして好ましくは停止させ得る）；腫瘍増殖をある程度阻害し得る；ならびに／あるいは癌と関連した症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。薬物が存在する癌細胞の増殖を阻害し得、そして／または殺傷し得る程度に、その有効量は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性であり得る。その有効量は、無疾患生存（ＤＦＳ）を改善し得るか、全体的生存（ＯＳ）を改善し得るか、再発の可能性を低下させ得るか、再発までの時間を延ばし得るか、離れた場所で再発（すなわち、乳房以外の場所での再発）するまでの時間を延ばし得るか、癌を治癒し得るか、乳癌の症状を改善し得るか（例えば、乳癌特異的調査を用いて判断される）、対側性乳癌を縮小させ得るか、二次的な原発性癌の出現を減少させ得るなどである。
【００６４】
「生存が延びる（生存を延ばす、伸長する）」とは、処置していない患者に対して（すなわち、ＨＥＲ２抗体、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）で処置されていない患者に対して）、あるいはコントロール処置プロトコル（例えば、パクリタキセルのような化学療法剤のみを用いる処置）に対して、処置された患者におけるＤＦＳおよび／またはＯＳを増すことを意味する。生存は、処置の開始後または最初の診断後、少なくとも約６ヶ月、または少なくとも約１年、または少なくとも約２年、または少なくとも約３年、または少なくとも約４年、または少なくとも約５年、または少なくとも約１０年などにわたってモニターされる。
【００６５】
生存分析における「危険比」は、追跡間にわたって、コントロールと比較して、処置に対する死亡の危険性の減少を示す、２つの生存曲線の間の差異の概略（ｓｕｍｍａｒｙ）である。危険比は、事象の比率についての統計学的定義である。本発明の目的のために、危険比は、任意の特定の時点での、（実験集団（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｒｍ）における事象の可能性）／（コントロール集団（ｃｏｎｔｒｏｌ  ａｒｍ）における事象の可能性）を表すとして規定される。
【００６６】
用語「同時に」とは、２種以上の治療剤の投与であって、投与の少なくとも一部分が、時間的に重なっている投与に言及するために本明細書で使用される。従って、同時の投与は、１種以上の薬剤の投与が１種以上の他の薬剤の投与を中断した後に継続する場合の投薬レジメンを包含する。
【００６７】
本発明の方法に関して、用語被験体に「指示する」とは、何らかの手段によって、しかし好ましくは、書面において（例えば、包装挿入物または他の書面の宣伝用の資料の形態において）、適用可能な治療、薬物療法（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）、処置、処置レジメンなどのための指示を提供することを意味する。
【００６８】
本発明の方法に関して、用語「宣伝する」とは、何らかの手段（書面（例えば、包装挿入物の形態で）を含む）によって、特定の薬物、薬物の組み合わせ、または処置様式を提案する、広告する、販売する、または記載することを意味する。本明細書において、宣伝とは、適応症（例えば、乳癌）のための補助的治療剤（例えば、ＨＥＲ２抗体または化学療法剤）の宣伝をいい、ここでこのような宣伝は、被験体の集団において統計学的に有意な治療効力および許容できる安全性と関連していると実証されているとして、食品医薬品局（ＦＤＡ）によって認可されている。
【００６９】
用語「販売」は、製品（例えば、薬物）の宣伝、売り込みまたは流通を記載するために本明細書において使用される。販売は、具体的には、製品を商品化する目的での、包装、広告および任意のビジネス活動を包含する。
【００７０】
「被験体」とは、本明細書において、ヒト被験体である。
【００７１】
被験体の「集団」とは、臨床試験におけるような、または特定の適応症（例えば、乳癌補助療法）についてのＦＤＡ認可の後に腫瘍遺伝学者によって調べられるような、乳癌を有する被験体の群をいう。一実施形態において、その集団は、少なくとも３０００名の被験体を含む。
【００７２】
「節陽性乳癌」とは、局所リンパ節（通常は、腕の下にあるリンパ節）に拡がった乳癌である。本明細書において、節陽性乳癌を有する被験体は、１〜３個の浸潤された節；４〜９個の浸潤された節；および１０個以上の浸潤された節を有する被験体を含めた。４個以上の浸潤された節を有する被験体は、浸潤された節がより少ないまたは全くない被験体よりも再発の危険性が高い。
【００７３】
「癌再発」とは、本明細書において、処置の後に癌が再発することをいい、乳房における癌の再発、および離れた場所での再発（この場合、癌は、乳房以外の場所で再発する）を包含する。
【００７４】
「癌再発の危険性が高い（高い癌再発リスクにある）」被験体とは、癌の再発を経験する可能性がより高い被験体（例えば、比較的若い被験体（例えば、約５０歳未満））、陽性リンパ節（特に、４個以上の浸潤されたリンパ節（４〜９個の浸潤されたリンパ節、および１０個以上の浸潤されたリンパ節を含む））を有する被験体、直径２ｃｍを超える腫瘍を有する被験体、ＨＥＲ２陽性乳癌を有する被験体、およびホルモンレセプター陰性乳癌（すなわち、エストロゲンレセプター（ＥＲ）陰性およびプロゲステロンレセプター（ＰＲ）陰性）を有する被験体である。被験体の危険性レベルは、熟練した医師によって決定され得る。一般に、このような高危険性の被験体は、リンパ節浸潤を有する（例えば、４個以上の浸潤されたリンパ節を有する）；しかし、リンパ節浸潤がない被験体もまた、例えば、彼らの腫瘍が、２ｃｍ以上である場合は、危険性が高い。
【００７５】
「エストロゲンレセプター（ＥＲ）陽性」癌は、ＥＲの発現について試験陽性である癌である。逆に言えば、「ＥＲ陰性」癌は、このような発現について陰性であると判断される。ＥＲ状態の分析は、当該分野で公知の任意の方法によって行われ得る。本明細書において研究の目的で、ＥＲ陽性腫瘍は、デキストランコーティング炭またはスクロース密度勾配法により、≧１０ｆｍｏｌ／ｍｇ  サイトゾルタンパク質として、あるいは酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）方法により、または免疫組織化学アッセイにより（個々の実験基準を使用して）陽性であると規定される。
【００７６】
「プロゲステロンレセプター（ＰＲ）陽性」癌は、ＰＲの発現について試験陽性である癌である。逆にいうと、「ＰＲ陰性」癌は、このような発現について陰性であると判断される。ＰＲ状態の分析は、当該分野で公知の任意の方法によって行われ得る。本明細書において研究の目的で、受け入れられている方法としては、デキストランコーティング炭またはスクロース密度勾配法、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）技術、および免疫組織化学アッセイが挙げられる。
【００７７】
本明細書において、「処置の開始」とは、腫瘍の外科的除去の後の処置レジメンの開始をいう。一実施形態において、このようなことは、手術後のＡＣの投与に言及し得る。あるいは、このことは、ＨＥＲ２抗体および／または化学療法剤の最初の投与に言及し得る。
【００７８】
ＨＥＲ２抗体および化学療法剤の「最初の投与」とは、処置スケジュールの一部としてのＨＥＲ２抗体または化学療法剤の最初の投薬を意味する。
【００７９】
本明細書において癌の「治癒」とは、補助療法を開始して約４年後または約５年後に癌再発がないことを意味する。
【００８０】
「ＨＥＲレセプター」は、ＨＥＲレセプターファミリーに属するレセプタープロテインチロシンキナーゼであり、ＥＧＦＲレセプター、ＨＥＲ２レセプター、ＨＥＲ３レセプターおよびＨＥＲ４レセプターを含む。このＨＥＲレセプターは、一般に、細胞外ドメインを含み、この細胞外ドメインは、ＨＥＲリガンドを結合し得、そして／または別のＨＥＲレセプター分子；親油性膜貫通ドメイン；保存された細胞内チロシンキナーゼドメイン；およびリン酸化され得るいくつかのチロシン残基を含むカルボキシ末端シグナル伝達ドメインと二量体化し得る。このＨＥＲレセプターは、ＨＥＲレセプターにおけるネイティブな配列またはそのアミノ酸配列改変体であり得る。好ましくは、このＨＥＲレセプターは、ネイティブ配列のヒトＨＥＲレセプターである。
【００８１】
「ＨＥＲ活性化」は、いずれか１以上のＨＥＲレセプターの活性化、またはリン酸化をいう。一般に、ＨＥＲ活性化は、シグナル伝達（例えば、ＨＥＲレセプターまたは基質ポリペプチドにおけるＨＥＲレセプターリン酸化チロシン残基の細胞内キナーゼドメインにより引き起こされる）を生じる。ＨＥＲ活性化は、目的のＨＥＲレセプターを含むＨＥＲ二量体に結合するＨＥＲリガンドによって媒介され得る。ＨＥＲ二量体に結合するＨＥＲリガンドは、二量体におけるＨＥＲレセプターの１つ以上のキナーゼドメインを活性化し得、それにより、ＨＥＲレセプターの１つ以上におけるチロシン残基のリン酸化および／またはさらなる基質ポリペプチド（例えば、ＡｋｔまたはＭＡＰＫ細胞内キナーゼ）におけるチロシン残基のリン酸化を生じる。
【００８２】
「ＥｒｂＢ２」および「ＨＥＲ２」の発現は、本明細書において交換可能に使用され、例えば、Ｓｅｍｂａら，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８２：６４９７−６５０１（１９８５）およびＹａｍａｍｏｔｏら．Ｎａｔｕｒｅ  ３１９：２３０−２３４（１９８６）（Ｇｅｎｅｂａｎｋ登録番号Ｘ０３３６３）に記載されるヒトＨＥＲ２タンパク質をいう。この用語「ｅｒｂＢ２」とは、ヒトＥｒｂＢ２をコードする遺伝子をいい、およびｎｅｕとは、ラットｐ１８５ｎｅｕをコードする遺伝子をいう。好ましいＨＥＲ２は、ネイティブ配列のヒトＨＥＲ２である。
【００８３】
本明細書において、「ＨＥＲ２細胞外ドメイン」または「ＨＥＲ２  ＥＣＤ」とは、細胞膜に固定されているかまたは循環中にあるかのいずれかである、細胞の外部に存在するＨＥＲ２のドメイン（そのフラグメントを包含する）をいう。一実施形態において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインは、以下の４つのドメインを含み得る：ドメインＩ（およそ１〜１９５のアミノ酸残基；配列番号１）、ドメインＩＩ（およそ１９６〜３１９のアミノ酸；配列番号２）、ドメインＩＩＩ（およそ３２０〜４８８のアミノ酸残基；配列番号３）、およびドメインＩＶ（およそ４８９〜６３０のアミノ酸残基；配列番号４）（残基の番号付けは、シグナルペプチドを含まない）。Ｇａｒｒｅｔｔら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．１１：４９５〜５０５（２００３）、Ｃｈｏら、Ｎａｔｕｒｅ  ４２１：７５６〜７６０（２００３）、Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４）、およびＰｌｏｗｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１７４６〜１７５０（１９９３）ならびに本明細書中の図１を参照のこと。
【００８４】
「トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する」抗体は、ＨＥＲ２  ＥＣＤのおよそ４８９〜６３０の残基（配列番号４）を含むエピトープに結合する。好ましいそのような抗体は、トラスツズマブまたはその親和性成熟改変体であり、かつ／または改変体Ｆｃ領域（例えば、改善したエフェクター機能を有する）を含む。
【００８５】
「ＨＥＲ２に対するトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））の結合をブロックする」抗体とは、ＨＥＲ２に対するトラスツズマブの結合をブロックするかまたはＨＥＲ２に対する結合についてトラスツズマブと競合することが示され得る、抗体である。そのような抗体は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ  Ｌａｎｅ  編（１９８８）、またはＦｅｎｄｌｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８（１９９０）に記載されるような交差ブロックアッセイを使用して同定され得る。
【００８６】
本明細書における「トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））エピトープ」とは、抗体４Ｄ５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０４６３）またはトラスツズマブが結合する、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン中の領域である。そのエピトープは、ＨＥＲ２の膜貫通ドメインに近く、かつＨＥＲ２のドメインＩＶ内にある。このエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ  Ｌａｎｅ編（１９８８）、またはＦｅｎｄｌｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０−１５５８（１９９０）に記載されるような交差ブロックアッセイが、実施され得る。あるいは、エピトープマッピングが、その抗体がＨＥＲ２のトラスツズマブエピトープ（例えば、ＨＥＲ２  ＥＣＤを含むおよそ残基５２９〜およそ残基６２５の領域中の任意の１つ以上の残基（残基番号付けはシグナルペプチドを含む））に結合するか否かを評価するために実施され得る。ＨＥＲ２のどのエピトープがこの抗体により結合されるかを知るために、抗体−ＨＥＲ２構造がまた、研究され得る（Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７−３２８（２００４））。
【００８７】
本明細書における目的のため、「トラスツズマブ」、「ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）」および「ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８」とは、それぞれ、配列番号５および６における軽鎖アミノ酸配列および重鎖アミノ酸配列を含む抗体をいう。
【００８８】
本明細書における目的のため、「ＨＥＲ２陽性」癌または「ＨＥＲ２陽性」腫瘍は、正常な乳房細胞または乳房組織に見出されるレベルを超えるレベルでＨＥＲ２を発現する、癌または腫瘍である。このようなＨＥＲ２陽性は、ＨＥＲ２遺伝子増幅、ならびに／または増加した転写および／もしくは翻訳によって、引き起こされ得る。ＨＥＲ２陽性腫瘍は、種々の方法によって、例えば、（例えば、ＤＡＫＯ  ＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（登録商標）を使用して）タンパク質の発現／過剰発現免疫組織化学アッセイを評価することにより；（例えば、Ｖｙｓｉｓ  ＰＡＴＨＶＩＳＩＯＮ（登録商標）ＦＩＳＨアッセイを含む蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）（１９９８年１０月に公開されたＷＯ９８／４５４７９を参照のこと）を介してか；サザンブロッティングを介してか；またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術（定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を含む）を介して）細胞中のＨＥＲ２核酸を評価することにより；血清のような生物学的流体におけるｓｈｅｄ抗原（例えば、ＨＥＲ細胞外ドメイン）を測定することにより（例えば、１９９０年６月１２日に登録された米国特許第４，９３３，２９４号；１９９１年４月１８日に公開されたＷＯ９１／０５２６４；１９９５年３月２８日に登録された米国特許第５，４０１，６３８号；およびＳｉａｓらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １３２：７３−８０（１９９０）を参照のこと）；あるいは、検出可能な標識（例えは、放射性同位体）を用いて必要に応じて標識された抗体に患者の体内の細胞を曝すことにより；同定され得る。そして患者中の細胞に対する抗体の結合が、例えば、放射能について外部スキャンすることによってか、または予めその抗体に曝した患者から採取した生検材料を分析することによって、評価され得る。さらに、ＨＥＲ２陽性の癌サンプルまたはＨＥＲ２陽性腫瘍サンプルは、例えば、ＨＥＲ２レセプターを介して媒介される下流のシグナル伝達、遺伝子発現プロフィールなどを評価することによって、間接的に同定され得る。
【００８９】
用語「ＥｒｂＢ１」、「ＨＥＲ１」、「上皮増殖因子レセプター」および「ＥＧＦＲ」は、本明細書において互換可能に使用され、そして例えば、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：８８１−９１４（１９８７）において開示されるようなＥＧＦＲ（天然に存在するその改変体形態（例えば、Ｈｕｍｐｈｒｅｙら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）  ８７：４２０７−４２１１（１９９０）における欠失改変体ＥＧＦＲ）を含む）をいう。
【００９０】
「ＥｒｂＢ３」および「ＨＥＲ３」とは、例えば、米国特許第５，１８３，８８４号および同第５，４８０，９６８号、ならびにＫｒａｕｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）  ８６：９１９３−９１９７（１９８９）において開示される、レセプターポリペプチドをいう。
【００９１】
本明細書において用語「ＥｒｂＢ４」および「ＨＥＲ４」とは、例えば、欧州特許出願第５９９，２７４号；Ｐｌｏｗｍａｎ  ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：１７４６−１７５０（１９９３）；およびＰｌｏｗｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３６６：４７３−４７５（１９９３）において開示されるレセプターポリペプチドをいい、例えば１９９９年４月２２日に公開されたＷＯ９９／１９４８８において開示されるような、そのアイソフォームを含む。
【００９２】
「ＨＥＲリガンド」によって、ＨＥＲレセプターに結合し、そして／またはＨＥＲレセプターを活性化するポリペプチドが、意味される。本明細書における特に目的とされるＨＥＲリガンドは、以下のもののような、ネイティブ配列のヒトＨＥＲリガンドである：上皮増殖因子（ＥＧＦ）（Ｓａｖａｇｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４７：７６１２−７６２１（１９７２））；トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）（Ｍａｒｑｕａｒｄｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２３：１０７９−１０８２（１９８４））；シュワノーマオートクライン増殖因子またはケラチノサイトオートクライン増殖因子としても公知である、アンフィレグリン（Ｓｈｏｙａｂら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：１０７４−１０７６（１９８９）；Ｋｉｍｕｒａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：２５７−２６０（１９９０）；およびＣｏｏｋら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１：２５４７−２５５７（１９９１））；βセルリン（Ｓｈｉｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６０４−１６０７（１９９３）；およびＳａｓａｄａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９０：１１７３（１９９３））；ヘパリン結合性上皮増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）（Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：９３６−９３９（１９９１））；エピレグリン（Ｔｏｙｏｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７４９５−７５００（１９９５）；およびＫｏｍｕｒａｓａｋｉら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：２８４１−２８４８（１９９７））；ヒレグリン（以下を参照のこと）；ニューレグリン−２（ＮＲＧ−２）（Ｃａｒｒａｗａｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３８７：５１２−５１６（１９９７））；ニューレグリン−３（ＮＲＧ−３）（Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：９５６２−９５６７（１９９７））；ニューレグリン−４（ＮＲＧ−４）（Ｈａｒａｒｉら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２６８１−８９（１９９９））；ならびにクリプト（ＣＲ−１）（Ｋａｎｎａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（６）：３３３０−３３３５（１９９７））。ＥＧＦＲを結合するＨＥＲリガンドとしては、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、アンフィレグリン、βセルリン、ＨＢ−ＥＧＦおよびエピレグリンが挙げられる。ＨＥＲ３を結合するＨＥＲリガンドとしては、ヒレグリンが挙げられる。ＨＥＲ４を結合し得るＨＥＲリガンドとしては、βセルリン、エピレグリン、ＨＢ−ＥＧＦ、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４およびヒレグリンが挙げられる。
【００９３】
本明細書において使用される「ヒレグリン」（ＨＲＧ）とは、米国特許第５，６４１，８６９号またはＭａｒｃｈｉｏｎｎｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：３１２−３１８（１９９３）において開示される、ヒレグリン遺伝子産物によってコードされるポリペプチドをいう。ヒレグリンの例としては、以下が挙げられる：ヒレグリン−α、ヒレグリン−β１、ヒレグリン−β２およびヒレグリン−β３（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６：１２０５−１２１０（１９９２）；および米国特許第５，６４１，８６９号）；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）（Ｐｅｌｅｓら、Ｃｅｌｌ  ６９：２０５−２１６（１９９２））；アセチルコリンレセプター誘導活性（ＡＲＩＡ）（Ｆａｌｌｓら、Ｃｅｌｌ  ７２：８０１−８１５（１９９３））；グリア細胞増殖因子（ＧＧＦ）（Ｍａｒｃｈｉｏｎｎｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：３１２−３１８（１９９３））；感覚および運動ニューロン由来因子（ｓｅｎｓｏｒｙ  ａｎｄ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ）（ＳＭＤＦ）（Ｈｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１４５２３−１４５３２（１９９５））；γ−ヒレグリン（Ｓｃｈａｅｆｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１５：１３８５−１３９４（１９９７））。
【００９４】
本明細書において、「ＨＥＲ二量体」は、少なくとも２つのＨＥＲレセプターを含む、非共有結合した二量体である。このような複合体は、２つ以上のＨＥＲレセプターを発現する細胞がＨＥＲリガンドに曝される場合に形成され得、そして免疫沈降法により単離され得、そして例えば、Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２０）：１４６６１−１４６６５（１９９４）に記載されるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、分析され得る。他のタンパク質（例えば、サイトカインレセプターサブユニット（例えば、ｇｐ１３０））は、この二量体と会合し得る。好ましくは、ＨＥＲ二量体は、ＨＥＲ２を含む。
【００９５】
本明細書において、「ＨＥＲヘテロ二量体」は、非共有結合的に会合したヘテロ二量体であり、少なくとも２つの異なるＨＥＲレセプター（例えば、ＥＧＦＲ−ＨＥＲ２ヘテロ二量体、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３ヘテロ二量体またはＨＥＲ２−ＨＥＲ４ヘテロ二量体）を含む。
【００９６】
「ＨＥＲインヒビター」は、ＨＥＲの活性化またはＨＥＲの機能を妨げる薬剤である。ＨＥＲインヒビターの例としては、以下が挙げられる；ＨＥＲ抗体（例えば、ＥＧＦＲ抗体、ＨＥＲ２抗体、ＨＥＲ３抗体またはＨＥＲ４抗体）；ＥＧＦＲ標的化薬物；低分子ＨＥＲアンタゴニスト；ＨＥＲチロシンキナーゼインヒビター；ＨＥＲ２およびＥＧＦＲの二重チロシンキナーゼインヒビター（例えば、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）／ＧＷ５７２０１６）；アンチセンス分子（例えば、ＷＯ２００４／８７２０７を参照のこと）；ならびに／または、下流シグナル伝達分子（例えば、ＭＡＰＫまたはＡｋｔ）に結合するかまたはその機能を妨げる、薬剤。好ましくは、ＨＥＲインヒビターは、ＨＥＲレセプターに結合する、抗体または低分子である。
【００９７】
「ＨＥＲ２ヘテロ二量体化インヒビター」は、ＨＥＲ２を含むヘテロ二量体の形成を阻害する薬剤である。好ましくは、ＨＥＲ２ヘテロ二量体化インヒビターは抗体であり、例えば、そのヘテロ二量体の結合部位に結合する抗体である。本明細書において最も好ましいＨＥＲ２ヘテロ二量体化インヒビターは、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）またはＭＡｂ  ２Ｃ４である。ＨＥＲ２ヘテロ二量体化インヒビターの他の例としては、ＥＧＦＲに結合しそしてこれとＨＥＲ２との二量体化を阻害する抗体（例えば、活性化ＥＧＦＲもしくは非連結ＥＧＦＲに結合するＥＧＦＲモノクローナル抗体８０６（ＭＡｂ８０６）；Ｊｏｈｎｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５−３０３８４（２００４）を参照のこと）；ＨＥＲ３に結合しそしてこれとＨＥＲ２との二量体化を阻害する抗体；ＨＥＲ４に結合しそしてこれとＨＥＲ２との二量体化を阻害する抗体；ペプチド二量体化インヒビター（米国特許第６，４１７，１６８号）；アンチセンス二量体化インヒビター；など。
【００９８】
ＨＥＲ２のヘテロ二量体結合部位に結合するＨＥＲ２抗体は、ドメインＩＩ中の残基に結合し（そして必要に応じて、ＨＥＲ２の細胞外ドメインのうちの他のドメイン（例えば、ドメインＩまたはＩＩＩ）中の残基にも結合する）、そして少なくともある程度まで、ＨＥＲ２−ＥＧＦＲヘテロ二量体、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３へテロ二量体またはＨＥＲ２−ＨＥＲ４ヘテロ二量体の形成を立体的に妨げ得る。Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７−３２８（２００４）は、ＨＥＲ２−ペルツズマブの結晶構造を特徴付け、ＲＣＳＢタンパク質データバンクに登録した（ＩＤコード  ＩＳ７８）。これは、ＨＥＲ２のヘテロ二量体結合部位に結合する例示的な抗体を示す。
【００９９】
タンパク質「発現」とは、遺伝子中にコードされる情報がメッセンジャーＲＮＡへと変換され、次いでタンパク質へと変換されることをいう。
【０１００】
本明細書において、目的のタンパク質（例えばＨＥＲ２）を「発現する」サンプルまたは細胞とは、このタンパク質をコードするｍＲＮＡもしくはこのタンパク質（そのフラグメントを含む）が、そのサンプルもしくはその細胞中に存在することが決定される、サンプルまたは細胞である。
【０１０１】
「ネイティブ配列」ポリペプチドは、天然に由来するポリペプチド（例えば、ＨＥＲレセプターまたはＨＥＲリガンド）と同じアミノ酸配列を有するポリペプチドであり、天然に存在する改変体または対立遺伝子改変体を含む。このようなネイティブ配列ポリペプチドは、天然から単離され得るか、または組換え手段もしくは合成手段により生成され得る。従って、ネイティブ配列ポリペプチドは、天然に存在するヒトポリペプチドのアミノ酸配列、マウスポリペプチドのアミノ酸配列、または任意の他の哺乳動物種由来のポリペプチドのアミノ酸配列を有し得る。
【０１０２】
本明細書中の用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、そして具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）および抗体フラグメントを、それが所望の生物学的活性を示す限り包含する。
【０１０３】
本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団由来の抗体をいう。すなわち、その集団を含む個々の抗体は同一であり、そして／または同じエピトープを結合するが、モノクローナル抗体の生成の間に発生し得る可能性ある改変体（このような改変体は一般に少量で存在し得る）を除く。このようなモノクローナル抗体としては、代表的に、標的を結合するポリペプチド配列を含む抗体が挙げられる。ここで、標的結合性ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの、単一の標的結合性ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって、取得された。例えば、この選択プロセスは、複数のクローン（例えば、ハイブリドーマクローンのプール、ファージクローンのプール、または組換えＤＮＡクローンのプール）からの、独特のクローンの選択であり得る。選択された標的結合性配列は、例えば、標的に対する親和性を向上させるため、標的結合性配列をヒト化させるため、細胞培養物におけるこの配列の生成を向上させるため、インビボでのその免疫原性を低減させるため、多重特異的尾抗体を作出するためなどのため、さらに改変され得ること、そしてその変更された標的結合性配列を含む抗体もまた本発明のモノクローナル抗体であることが、理解されるべきである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を代表的に含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体調製物のうちの各々のモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。これらの特異性に加え、モノクローナル抗体調製物は、これらが代表的には他の免疫グロブリンに混入されていないという点において、有利である。修飾句「モノクローナル」は、実質的に均一の抗体集団から取得される場合の抗体の特徴を示し、そして何らかの特定の方法による抗体の生成を必要とするものとして解釈されるべきでない。例えば、本発明に従って使用されるためのモノクローナル抗体は、以下を含めた、種々の技術によって作製され得る：例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１、（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；およびＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）を参照のこと）、ならびにヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリンの遺伝子座または遺伝子のうちの一部または全てを有する動物においてヒト抗体またはヒト様抗体を生成するための技術（例えば、以下を参照のこと：ＷＯ  １９９８／２４８９３；ＷＯ  １９９６／３４０９６；ＷＯ  １９９６／３３７３５；ＷＯ  １９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．、７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６；同第５，５６９，８２５号；同第５，５９１，６６９号（ａｌｌ  ｏｆ  ＧｅｎＰｈａｒｍの全て）；米国特許第５，５４５，８０７号；ＷＯ  １９９７／１７８５２；米国特許第５，５４５，８０７；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；および同第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３：６５−９３（１９９５））。
【０１０４】
本明細書中のモノクローナル抗体は、特に「キメラ」抗体ならびにそのような抗体のフラグメント（これらが、所望の生物学的活性を示す限り）を含み、ここでは、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同であり、一方、その鎖の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同である（米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書中で目的とするキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界サル、サルなど）由来の可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む霊長類化抗体、ならびに「ヒト化」抗体を含む。
【０１０５】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含むキメラ抗体である。たいていは、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類）（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基により置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある場合では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基により置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つそして代表的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応する超可変ループのうちの全てまたは実質的に全てと、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、必要に応じて免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（代表的にはヒト免疫グロブリンの定常領域）の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。
【０１０６】
ヒト化ＨＥＲ２抗体としては、以下が挙げられる：ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７抗体およびｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８抗体またはトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ７）（特に本明細書において参考として援用される、米国特許第５，８２１，３３７号の表３において記載される通り）；ヒト化５２０Ｃ９抗体（ＷＯ９３／２１３１９）；ならびにヒト化２Ｃ４抗体（例えば、本明細書中に記載されるペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ））。
【０１０７】
本明細書において、「ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）」および「ＯＭＮＩＴＡＲＧ」とは、それぞれ、配列番号７および８における軽鎖アミノ酸配列および重鎖アミノ酸配列を含む抗体をいう。
【０１０８】
本明細書において、「インタクトな」抗体とは、２つの抗原結合領域とＦｃ領域とを含む抗体をいう。好ましくは、インタクトな抗体は、機能性Ｆｃ領域を有する。
【０１０９】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部を含み、好ましくは、この抗体の抗原結合領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；二重特異的抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖状抗体；単鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【０１１０】
「ネイティブ抗体」は、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる。各々の軽鎖は、共有結合性のジスルフィド結合によって重鎖に結合されるが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動する。各々の重鎖および軽鎖はまた、規則性に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各々の重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いて多くの定常ドメインを有する。各々の軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）、そして他方の末端に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第一の定常ドメインと整列され、そして軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の境界面を形成すると考えられる。
【０１１１】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で広範にわたって配列が異なり、そして特定の抗体各々のその特定の抗原に対する結合および特異性において使用されるという事実をいう。しかし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたり均等には分布しない。可変性は、軽鎖および重鎖の可変ドメインの両方における超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブ重鎖および軽鎖の可変ドメインの各々は、４つのＦＲを含み、それらのＦＲは、大部分がβシート構造をとり、３つの超可変領域により連結され、これらの超可変領域は、βシート構造に連結するループを形成し、そして場合によっては、このβシート構造の一部を形成する。各鎖中の超可変領域は、ＦＲによって互いに近位に保持され、そして、他の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接には関与しないが、種々のエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与）を示す。
【０１１２】
本明細書中で使用される場合、用語「超可変領域」は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、残基５０〜５６（Ｌ２）および残基８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈｌ）、残基５０〜６５（Ｈ２）および残基９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））ならびに／または「超可変ループ」からのアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌｌ）、残基５０〜５２（Ｌ２）および残基９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、残基５３〜５５（Ｈ２）および残基９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で規定するような超可変領域の残基以外の、可変ドメイン残基である。
【０１１３】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント（各々、単一の抗原結合部位を有する）および残りの「Ｆｃ」フラグメント（この名前は、その容易に結晶化する能力を反映する）を生成する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じ、そしてこれは、依然として抗原を架橋し得る。
【０１１４】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む、最小限の抗体フラグメントである。この領域は、密接に非共有結合した、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの二量体からなる。この立体配置において、各可変ドメインの３つの超可変領域は、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定するために相互作用する。集団的に、この６つの可変領域は、抗体に抗原結合特異性を与える。しかし、１つの可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有する。
【０１１５】
Ｆａｂフラグメントもまた、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数残基の付加によって、Ｆａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１つの遊離したチオール基を有するＦａｂ’についての、本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々、間にヒンジシステインを有する一対のＦａｂ’フラグメントとして生成された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングもまた、公知である。
【０１１６】
任意の脊椎動物種由来の抗体の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に区別される型（カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる）のうちの１つに割り当てられ得る。
【０１１７】
本明細書において「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用され、ネイティブ配列のＦｃ領域および改変体Ｆｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位またはＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基からそのＣ末端までに広がるように規定される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムに従った残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖コード核酸を組換え操作することによって、取り除かれ得る。従って、インタクトな抗体の組成物は、全てＫ４４７残基が除かれた抗体集団、Ｋ４４７が除かれていない抗体集団、およびＫ４４７残基を有する抗体とＫ４４７残基を有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。
【０１１８】
他に示されない場合、免疫グロブリン重鎖における残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）（これは、本明細書中で参考として大いに援用される）におけるＥＵ指数の番号付けである。この「ＫａｂａｔにおけるＥＵ指数」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けをいう。
【０１１９】
「機能性Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列のＦｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」としては、以下が挙げられる：Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害性；Ｆｃレセプター結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター；ＢＣＲ）の下方制御、など。このようなエフェクター機能は、一般的に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）とＦｃ領域とが結合されることを必要とし、そして例えば、本明細書において開示される種々のアッセイを使用して評価され得る。
【０１２０】
「ネイティブ配列のＦｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列のヒトＦｃ領域としては、ネイティブ配列のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非ＡアロタイプおよびＡアロタイプ）；ネイティブ配列のヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；ネイティブ配列のヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；およびネイティブ配列のヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびに天然に存在するこれらの改変体が、挙げられる。
【０１２１】
「改変体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変（好ましくは、１つ以上のアミノ酸置換）によってネイティブ配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なる、アミノ酸配列を含む。好ましくは、改変体Ｆｃ領域は、ネイティブ配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に対して比較すると、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、ネイティブ配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域において、約１〜約１０個のアミノ酸置換、そして好ましくは、約１〜約５個のアミノ酸置換）を有する。本明細書において、改変体Ｆｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列のＦｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と、少なくとも約８０％の相同性を有し、そして最も好ましくはそれらと少なくとも約９０％の相同性を有し、より好ましくはそれらと少なくとも約９５％の相同性を有する。
【０１２２】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、インタクトな抗体は、異なる「クラス」に分類され得る。５つの主なクラスのインタクトな抗体（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ）が存在し、そしてそれらのいくつかは、さらに「サブクラス」（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２）に分類され得る。それらの異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、各々、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元立体配置は、周知である。
【０１２３】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識しそして引き続きその標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応をいう。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実施され得る。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ（例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６（１９９８）において開示されるような動物モデルにおいて）で評価され得る
「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現しそしてエフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、そしてＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が挙げられ；ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、そのネイティブな供給源から（例えば、本明細書中に記載されるように血液またはＰＢＭＣから）単離され得る。
【０１２４】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するために使用される。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γレセプター）を結合するＦｃＲであり、そしてこれらとしては、ＦｃγＲＩサブクラスのレセプター、ＦｃγＲＩＩサブクラスのレセプターおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプター（これらのレセプターの対立遺伝子改変体および選択的スプライシングされた形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩレセプターとしては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられ、これらは、そのレセプターの細胞質ドメイン中で主に異なる、類似するアミノ酸配列を有する。活性化レセプター（ＦｃγＲＩＩＡ）は、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプター（ＦｃγＲＩＩＢ）は、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）中の総説Ｍ．を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１（１９９５）に概説される。他のＦｃＲ（将来同定されるＦｃＲを含む）が、本明細書中の用語「ＦｃＲ」により包含される。この用語はまた、胎児への母性ＩｇＧの移行を担い、免疫グロブリンのホメオスタシスを調節する、新生児レセプター（ＦｃＲｎ）を含む（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９（１９９４））。
【０１２５】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力をいう。補体活性化経路は、同族抗原と複合体化された分子（例えば、抗体）への、補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）の結合により開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイが行われ得る。
【０１２６】
「単鎖Ｆｖ」抗体フラグメントまたは「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、ここでこれらのドメインは、一本のポリペプチド鎖中に存在する。好ましくは、このＦｖポリペプチドは、このｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２６９−３１５頁（１９９４）中のＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎを参照のこと。ＨＥＲ２抗体のｓｃＦｖフラグメントは、ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５８号に記載される。
【０１２７】
用語「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントをいい、このフラグメントは、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中に可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に連結されている可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上のこの２つのドメイン間で対形成させるには短すぎるリンカーを使用して、これらのドメインを別の鎖の相補ドメインと対形成させ、そして２つの抗原結合部位を作製する。二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）は、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に、より完全に記載される。
【０１２８】
本明細書において、裸の抗体は、細胞傷害性部分とも放射性標識とも結合体化されていない、抗体である。
【０１２９】
「単離（された）」抗体は、その天然の環境の成分から同定されそして分離および／または回収された抗体である。その天然の環境の混入物成分は、その抗体についての診断的用途または治療的用途を妨害する物質であり、そしてこれらとしては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様の溶質または非タンパク質様の溶質が挙げられ得る。好ましい実施形態において、抗体は、（１）ローリー法によって測定した場合に、９５重量％を超える抗体にまで、そして最も好ましくは、９９重量％を超えるまでに精製されるか、（２）スピニングカップ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ）配列決定装置の使用により、少なくとも１５残基のＮ末端アミノ酸配列または内部アミノ酸配列を得るに十分な程度に精製されるか、または（３）クーマシーブルー染色または好ましくは銀染色を使用する、還元条件下または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一なまでに精製される。単離された抗体は、組換え細胞内においてインサイチュであるその抗体を含む。なぜなら、その抗体の天然環境の少なくとも１つの成分は存在していないからである。しかし、通常には、単離された抗体は、少なくとも１回の精製工程によって調製される。
【０１３０】
「親和性成熟した」抗体とは、その１つ以上の超可変領域中に１つ以上の変異を有する抗体であって、このことが、これら変異を有しない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらしている。好ましい親和性成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当該分野で公知である手順によって生成される。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟を記載する。ＣＤＲ残基および／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発が、以下によって記載される：Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）。
【０１３１】
本明細書において用語「主要種の抗体」とは、組成物中で量的に優勢な抗体分子である、組成物中の抗体構造をいう。一実施形態において、主要種の抗体はＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合されるＨＥＲ２  ＥＣＤのドメインＩＶを結合する抗体）である。本明細書における、主要種の抗体の好ましい実施形態は、配列番号５および配列番号６（トラスツズマブ）の軽鎖アミノ酸配列および重鎖アミノ酸配列を含むものである。
【０１３２】
本明細書において、「アミノ酸配列改変体」抗体は、主要種の抗体とは異なるアミノ酸配列を有する抗体である。通常、アミノ酸配列改変体は、少なくとも約７０％の相同性を主要種の抗体と有し、そして好ましくは、これらは主要種との抗体と、約８０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９０％の相同性を有する。アミノ酸配列改変体は、主要種の抗体のアミノ酸配列内の特定の位置またはそのアミノ酸配列に近接する特定の位置に、置換、欠失、および／または付加を有する。本明細書におけるアミノ酸配列改変体の例としては、酸性改変体（例えば、脱アミノ化抗体改変体）、塩基性改変体、その抗体の１つまたは２つの重鎖においてＣ末端リジン残基を有する抗体、などが挙げられ、そして重鎖および／または軽鎖のアミノ酸配列に対する改変の組み合わせが挙げられる。
【０１３３】
本明細書における「グリコシル化改変体」抗体は、主要種の抗体に対して結合された１つ以上の炭水化物部分と異なる、この抗体に対して結合された１つ以上の炭水化物部分を有する抗体である。本明細書におけるグリコシル化改変体の例としては、この抗体のＦｃ領域に結合されたＧ０オリゴ糖構造の代わりにＧ１オリゴ糖構造またはＧ２オリゴ糖構造を有する抗体、抗体の１つまたは２つの軽鎖に結合された１つまたは２つの炭水化物部分を有する抗体、抗体の１つまたは２つの重鎖に結合される炭水化物を有さない抗体、など、ならびにグリコシル化改変の組み合わせが、挙げられる。
【０１３４】
抗体がＦｃ領域を有する場合、オリゴ糖構造が、その抗体の１つまたは２つの重鎖に（例えば、残基２９９（残基のＥｕ番号付けで２９８）において）結合され得る。
【０１３５】
「脱アミノ化」抗体は、その抗体の１つ以上のアスパラギン残基が、例えば、アスパラギン酸、スクシンイミド、またはイソアスパラギン酸になるように誘導体化されているものである。
【０１３６】
本明細書における「腫瘍サンプル」は、患者の腫瘍に由来するサンプルまたは患者の腫瘍由来の細胞を含むサンプルである。本明細書における腫瘍サンプルの例としては、腫瘍生検、循環中の腫瘍細胞、循環中の血漿タンパク質、腹水、腫瘍由来であるかまたは腫瘍様特性を提示する初代細胞培養物または細胞株、ならびに保存された腫瘍サンプル（例えば、ホルマリン固定化腫瘍サンプル、パラフィン包埋腫瘍サンプルまたは凍結腫瘍サンプル）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３７】
「固定（された）」腫瘍サンプルは、固定化剤を使用して組織学的に保存されたものである。
【０１３８】
「ホルマリン固定（された）」腫瘍サンプルは、固定化剤としてホルマリンを使用して保存されたものである。
【０１３９】
「包埋（された）」腫瘍サンプルは、フィルム（ｆｉｒｍ）または一般的に硬い媒体（例えば、パラフィン、蝋、セロイジンまたは樹脂）によって囲まれたものである。包埋は、顕微鏡検査のためまたは組織マイクロアレイ（ＴＡＭ）の調製のための薄い切片の切削を可能にする。
【０１４０】
「パラフィン包埋（された）」腫瘍サンプルは、石油由来の固体炭化水素の精製混合物によって囲まれたものである。
【０１４１】
本明細書において、「凍結（された）」腫瘍サンプルとは、凍結されるかまたは凍結されている腫瘍サンプルをいう。
【０１４２】
本明細書における「遺伝子発現プロフィール」とは、ＨＥＲ２レセプター発現を直接的に決定するための代用としての、１つ以上の遺伝子の発現の評価をいう。
【０１４３】
本明細書における「リン−ＥＬＩＳＡアッセイ」は、１つ以上のＨＥＲレセプター（特にＨＥＲ２）のリン酸化が、試薬（通常は、抗体）を使用して酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）において評価され、リン酸化ＨＥＲレセプター、基質、または下流シグナル伝達分子が検出されるアッセイである。好ましくは、リン酸化ＨＥＲ２を検出する抗体が使用される。このアッセイは、好ましくは新鮮な生物学的サンプルまたは凍結された生物学的サンプル由来の細胞溶解物において、実施され得る。
【０１４４】
本明細書中で使用される場合、「増殖阻害薬剤」とは、インビトロまたはインビボのいずれかで、細胞（特に、ＨＥＲ発現癌細胞）の増殖を阻害する化合物または組成物をいう。従って、増殖阻害薬剤は、Ｓ期にあるＨＥＲ発現細胞の割合を有意に減少させる薬剤であり得る。増殖阻害薬剤の例としては、（Ｓ期以外で）細胞周期進行をブロックする薬剤（例えば、Ｇ１阻止およびＭ期阻止を誘導する薬剤）が挙げられる。古典的なＭ期ブロッカーとしては、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキソイド、およびトポＩＩインヒビター（例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシドおよびブレオマイシン）が挙げられる。Ｇ１を阻止する薬剤はまた、Ｓ期阻止をももたらし、例えば、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルおよびａｒａ−Ｃ）が挙げられる。さらなる情報は、Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編、第１章、Ｍｕｒａｋａｍｉらによる表題「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ、ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ、ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」（ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）（特に、１３頁）に見出され得る。
【０１４５】
「増殖阻害」抗体の例は、ＨＥＲ２に結合してＨＥＲ２を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する抗体である。好ましい増殖阻害抗ＨＥＲ２抗体は、細胞培養物中のＳＫ−ＢＲ−３乳癌細胞の増殖を、約０．５〜３０μｇ／ｍｌの抗体濃度で、２０％よりも高く、好ましくは、５０％よりも高く（例えば、約５０％〜約１００％）阻害する。ここでは、この増殖阻害を、ＳＫ−ＢＲ−３細胞の抗体への曝露の６日間後に測定する（米国特許第５，６７７，１７１号（１９９７年１０月１４日発行）を参照のこと）。このＳＫ−ＢＲ−３細胞増殖阻害アッセイは、この特許および本明細書以下により詳細に記載される。好ましい増殖阻害抗体は、モノクローナル抗体４Ｄ５のヒト化改変体（例えば、トラスツズマブ）である。
【０１４６】
「アポトーシスを誘導する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡのフラグメント化、細胞収縮、小胞体の拡大、細胞のフラグメント化および／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成によって決定されるような、プログラムされた細胞死を誘導する抗体である。この細胞は、通常、ＨＥＲ２レセプターを過剰発現する細胞である。好ましくは、この細胞は、腫瘍細胞（例えば、乳房腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、子宮内膜腫瘍細胞、唾液腺腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞または膀胱腫瘍細胞）である。インビトロでは、この細胞は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞、ＢＴ４７４細胞、Ｃａｌｕ３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１細胞またはＳＫＯＶ３細胞であり得る。種々の方法が、アポトーシスに関連する細胞事象を評価するために利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）トランスロケーションが、アネキシン結合によって測定され得；ＤＮＡのフラグメント化が、ＤＮＡのラダー形成によって評価され得；そしてＤＮＡのフラグメント化に伴う核／クロマチンの圧縮が、低二倍体細胞の何らかの増加によって評価され得る。好ましくは、アポトーシスを誘導する抗体は、ＢＴ４７４細胞を使用するアネキシン結合アッセイにおいて、非処理細胞と比較して、約２〜５０倍、好ましくは、約５〜５０倍、そして最も好ましくは、約１０〜５０倍のアネキシン結合の誘導を生じる抗体である（以下を参照のこと）。アポトーシスを誘導するＨＥＲ２抗体の例は、７Ｃ２および７Ｆ３である。特に、ＷＯ９８／１７７９７を参照のこと。
【０１４７】
「処置」とは、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）手段または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方をいう。処置を必要とする患者は、すでに癌を患う患者、ならびに癌が予防されるべき患者が挙げられる。従って、本明細書において処置されるべき患者は、癌を患っていると診断され得たか、または癌に対する素因があり得るかまたは癌に対する感受性があり得る。
【０１４８】
本明細書中で使用される場合、用語「細胞傷害性薬剤」とは、細胞の機能を阻害するかもしくは防止し、そして／または細胞の崩壊を引き起こす、物質をいう。この用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、および毒素（例えば、細菌起源、真菌起源、植物起源または動物起源の低分子毒素または酵素活性な毒素（それらのフラグメントおよび／または改変体を含む））を包含することが、意図される。
【０１４９】
「化学療法剤」は、癌の処置に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、以下が挙げられる：アルキル化剤（例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））；アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン、イムプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ））；エチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；アセトゲニン（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎ）（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；δ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトセシン、スコポレクチン、および９−アミノカンプトセシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ズオカルミシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成アナログ、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラティスタチン；サルコディクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード）；ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン）；エネジン抗生物質のような抗生物質（例えば、カリチェアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特に、カリチェアマイシンγ１ＩおよびカリチェアマイシンωＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照のこと））；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；エスパラミシン；ならびに、ネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エネジン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルチノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩ��（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン）；代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフル（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポシロン、および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン）；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌｓ）（例えば、アミノグルテチミド、ミトーテン、トリロスタン）；葉酸補助剤（例えば、フロリニン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラムブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）（例えば、マイタンシンおよびアンサミトシン）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド（例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、パクリタキセルのアルブミンを操作したナノ粒子処方物（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）））；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金物質（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン）；微小管形成からのチューブリン重合を妨げるビンカ（ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、およびビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む）；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ロイコボビン；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸のようなレチノイド（例えば、ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標）））；クロドロネートのようなビスホスホネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ(登録商標)またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（特に、異常な細胞増殖に関連するシグナル伝達系における遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、および上皮細胞成長因子レセプター（ＥＧＦ−Ｒ）））；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）および遺伝子治療ワクチンのようなワクチン（例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮＥ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン）；トポイソメラーゼ１インヒビター（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ−２インヒビター（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソームインヒビター（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））のようなＢｃｌ−２インヒビター；ピクサントロン；ＥＧＦＲインヒビター（以下の定義を参照のこと）；チロシンキナーゼインヒビター（以下の定義を参照のこと）；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸もしくは誘導体；ならびに、上記の２種以上の組み合わせ（例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミドの併用療法についての略語）、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニソロン、ならびにＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵおよびロイコボビンと併用されるオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）による処置レジメンについての略語））。
【０１５０】
本明細書中において、化学療法剤としては、「抗ホルモン治療剤」または「内分泌物治療剤」が挙げられる。これらの「抗ホルモン治療剤」または「内分泌物治療剤」は、癌の増殖を促進し得るホルモンの効果を、調節、低減、ブロックまたは阻害するように作用する。これらは、ホルモン自体であってもよく、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：アゴニスト／アンタゴニストの混合型プロファイルを有する抗エストロゲン（タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）およびＳＥＲＭ３のような選択的エストロゲンレセプターモジュレータ（ＳＥＲＭ）が含まれる）；アゴニスト特性を有さない純粋な抗エストロゲン（例えば、フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ；ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、およびＥＭ８００（このような薬剤は、エストロゲンレセプター（ＥＲ）二量体化をブロックし得、ＤＮＡ結合を阻害し得、ＥＲ代謝回転を増大させ得、そして／またはＥＲレベルを抑制し得る）；アロマターゼインヒビター（フォルメスタンおよびエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）のようなステロイド系アロマターゼインヒビター、ならびに、アナストラゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ；ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ；ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））およびアミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）のような非ステロイド系アロマターゼインヒビター、ならびに他のアロマターゼインヒビター（ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、および４（５）−イミダゾールを含む））；黄体化ホルモン放出ホルモンアゴニスト（ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）およびＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、およびトリプテレリンを含む）；性ステロイド（プロゲスチン（例えば、酢酸メゲストロールおよび酢酸メドロキシプロゲステロン）、エストロゲン（例えば、ジエチルスチルベストロールおよびプレマリン）、およびアンドロゲン／レチノイド（例えば、フルオキシメステロン、すべてのトランスレチノイン酸およびフェンレチニド）を含む）；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲンレセプターダウンレギュレーター（ＥＲＤ）；抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミドおよびビカルタミド）；ならびに上記のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ。
【０１５１】
本明細書中において、「タキソイド」は、微小管の脱重合を阻害するように機能する化学療法剤である。例としては、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミンを操作したナノ粒子処方物（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））、およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））が挙げられる。好ましいタキソイドは、パクリタキセルである。
【０１５２】
本明細書中で使用される場合、用語「ＥＧＦＲインヒビター」とは、ＥＧＦＲに結合するかそうでなければＥＧＦＲと直接相互作用し、そのシグナル伝達活性を妨げるかもしくは減少させる化合物をいい、代替的に、「ＥＧＦＲアンタゴニスト」と称される。そのような因子の例としては、ＥＧＦＲに結合する抗体および低分子が挙げられる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例としては、ＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０６）、ＭＡｂ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ８５０８）、ＭＡｂ  ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ８５０９）（米国特許第４，９４３，５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎら、を参照のこと）、およびそれらの改変体（例えば、キメラ化２２５（Ｃ２２５またはＣｅｔｕｘｉｍａｂ；ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標））、新形態ヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ９６／４０１２０、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．、を参照のこと））；ＩＭＣ−１１Ｆ８、完全なヒトのＥＧＦＲ標的化抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；ＩＩ型変異体ＥＧＦＲ（米国特許第５，２１２，２９０号）に結合する抗体；米国特許第５，８９１，９９６号に記載されるようなＥＧＦＲに結合するヒト化抗体およびキメラ抗体；ならびにＥＧＦＲに結合するヒト抗体（例えば、ＡＢＸ−ＥＧＦまたはパニツムマブ（ＷＯ９８／５０４３３、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照のこと））；ＥＭＤ  ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３２Ａ：６３６−６４０（１９９６））；ＥＭＤ  ７２００（マツズマブ）ＥＧＦＲ結合に関してＥＧＦおよびＴＧＦ−αの両方と競合するＥＧＦＲに対して向けられたヒト化ＥＧＦＲ抗体（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３およびＥ７．６．３として公知でありＵＳ  ６，２３５，８８３に記載される、完全なヒト抗体；ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ）；ならびにｍＡｂ  ８０６またはヒト化ｍＡｂ
８０６（Ｊｏｈｎｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５−３０３８４８（２００４））が挙げられる。抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞傷害性因子に結合し得、従って、免疫複合体を生成する（例えば、ＥＰ６５９，４３９Ａ２、Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨを参照のこと）。ＥＧＦＲアンタゴニストとしては、米国特許第５，６１６，５８２号、同第５，４５７，１０５号、同第５，４７５，００１号、同第５，６５４，３０７号、同第５，６７９，６８３号、同第６，０８４，０９５号、同第６，２６５，４１０号、同第６，４５５，５３４号、同第６，５２１，６２０号、同第６，５９６，７２６号、同第６，７１３，４８４号、同第５，７７０，５９９号、同第６，１４０，３３２号、同第５，８６６，５７２号、同第６，３９９，６０２号、同第６，３４４，４５９号、同第６，６０２，８６３号、同第６，３９１，８７４号、同第６，３４４，４５５号、同第５，７６０，０４１号、同第６，００２，００８号および同第５，７４７，４９８号、ならびに以下のＰＣＴ公報：ＷＯ９８／１４４５１、ＷＯ９８／５００３８、ＷＯ９９／０９０１６およびＷＯ９９／２４０３７に記載される化合物のような低分子が挙げられる。特定の低分子ＥＧＦＲアンタゴニストとしては、ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ  １８３８０５（ＣＩ  １０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−，ジジヒドロクロリド、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）；ＺＤ  １８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡＪ）４−（３’−クロロ−４’−フルオロアニリノ）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；ＺＭ  １０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチナミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテナミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｓｕｇｅｎ）；ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）；ラパチニブ（ＧＷ  ５７２０１６またはＮ−［３−クロロ−４−［（３フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］６［５［［［２メチルスルホニリル）エチル］アミノ］メチル］２−フラニル］−４−キナゾリンアミン；Ｇｌａｘ��−ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）のようなデュアルＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼインヒビターが挙げられる。
【０１５３】
「チロシンキナーゼインヒビター」とは、チロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性を阻害する分子（例えば、ＨＥＲレセプター）である。そのようなインヒビターの例としては、上記の段落に記載されるＥＧＦＲ標的化薬物；低分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼインヒビター（例えば、Ｔａｋｅｄａから入手可能なＴＡＫ１６５）；ＥｒｂＢ２レセプターチロシンキナーゼの経口選択的インヒビターであるＣＰ−７２４，７１４（ＰｆｉｚｅｒおよびＯＳＩ）；優先的にＥＧＦＲに結合するが、ＨＥＲ２およびＥＧＦＲの両方を過剰に発現する細胞を阻害するデュアルＨＥＲインヒビター（例えば、ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈから入手可能））；経口ＨＥＲ２およびＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターであるラパチニブ（ＧＷ５７２０１６；Ｇｌａｘｏ−ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）；ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能）；パンＨＥＲインヒビター（例えば、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３；Ｐｈａｒｍａｃｉａ））；Ｒａｆ−１シグナル伝達を阻害するＩＳＩＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なＲａｆ−１インヒビター（例えば、アンチセンス因子ＩＳＩＳ−５１３２）；  非ＨＥＲ標的化ＴＫインヒビター（例えば、Ｇｌａｘｏから入手可能なメシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＡＣＪ））；ＭＡＰＫ細胞外調節キナーゼＩインヒビターＣＩ−１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）；キナゾリン（例えば、ＰＤ  １５３０３５、４−（３−クロロアニリノ）キナゾリン）；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン、ピロロピリミジン（例えば、ＣＧＰ
５９３２６、ＣＧＰ  ６０２６１およびＣＧＰ  ６２７０６）；ピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分含有チロホスチン；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲをコードする核酸に結合するアンチセンス）；キノキサリン（米国特許第５，８０４，３９６号）；トリホスチン（米国特許第５，８０４，３９６号）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；パンＨＥＲインヒビター（例えば、ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ））；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ  ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖａｃ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＫＩ  １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｓｕｇｅｎ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；または以下の特許公報のいずれかに記載されるもの：米国特許第５，８０４，３９６号；ＷＯ９９／０９０１６（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ９８／４３９６０（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；ＷＯ９７／３８９８３（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ９９／０６３７８（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ９９／０６３９６（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；ＷＯ９６／３０３４７（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）；ＷＯ９６／３３９７８（Ｚｅｎｅｃａ）；ＷＯ９６／３３９７（Ｚｅｎｅｃａ）；およびＷＯ９６／３３９８０（Ｚｅｎｅｃａ）が、挙げられる。
【０１５４】
本明細書中において、「治療標準（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｏｆ  ｃａｒｅ）」である化学療法とは、特定の癌を処置するために日常的に使用される化学療法剤をいう。例えば、手術可能な乳癌（結節陽性な乳癌を含む）について、治療標準の補助療法は、アントラサイクリン／シクロホスファミド（ＡＣ）化学療法、シクロホスファミド、メトトレキセート、フルオロウラシル（ＣＭＦ）化学療法、フルオロウラシル、アントラサイクリンおよびシクロホスファミド（ＦＡＣ）化学療法、またはＡＣの後のパクリタキセル（Ｔ）（ＡＣ→Ｔ）であり得る。本明細書中の実施例で記載される患者について、「治療標準」は、ＡＣ→Ｔ処置である。
【０１５５】
ここで、抗癌剤（例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））が「単一薬剤」として投与される場合、癌を処置するために処置レジメンの間に被験体に投与される唯一の薬剤である、すなわち、その薬剤は、他の抗癌剤と組み合わせて提供されない。しかし、そのような処置は、実質的にその抗癌剤の投与前または投与後に、他の抗癌剤の投与を含む。
【０１５６】
「抗脈管形成剤」とは、血管の発生をある程度までブロックするかまたは妨げる、化合物をいう。抗脈管形成因子は、例えば、新脈管形成の促進に関与する増殖因子または増殖因子レセプターと結合する、低分子または抗体であり得る。本明細書中の好ましい抗脈管形成因子は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）と結合する抗体（例えば、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ７））である。
【０１５７】
用語「サイトカイン」とは、細胞内媒介因子として別の細胞に対して作用する、ある細胞集団により放出されるタンパク質についての包括的用語である。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンである。このサイトカインの中に包含されるのは、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン）；．副甲状腺ホルモン；サイロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン（例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）；甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）；および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β；ミューラー阻害物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；脈管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子（例えば、ＮＧＦ−β）；血小板増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（例えば、ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）；インスリン様増殖因子Ｉおよびインスリン様増殖因子ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン（例えば、インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ）；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えば、マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ））；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２）；腫瘍壊死因子（例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β）；ならびに他のポリペプチド因子（ＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ））である。本明細書中で使用される場合、用語「サイトカイン」とは、天然供給源由来のタンパク質、または組換え細胞培養物由来のタンパク質、およびネイティブ配列のサイトカインの生物活性等価物を包含する。
【０１５８】
「負荷」用量は、本明細書中において一般に、患者に投与される治療剤の初回量を含み、その１以上の維持用量が続く。一般的に、単一の負荷用量が投与されるが、複数の負荷用量が本明細書中で意図される。通常は、投与される負荷用量の量は、投与される維持用量の量を上回り、そして／または負荷用量は、維持用量が達成し得るよりも早く治療剤の所望の定常濃度を達成するように、維持用量よりも頻繁に投与される。
【０１５９】
「維持」用量とは、本明細書中において、処置期間にわたって患者に投与される治療剤の１以上の用量をいう。通常は、維持用量は、間のあいた処置間隔（例えば、およそ毎週、およそ２週間毎、およそ３週間毎、またはおよそ４週間毎）で投与される。
【０１６０】
（ＩＩ．抗体の産生）
本発明に従って使用されるＨＥＲ２抗体の産生についての例示的な技術に関して、以下に説明する。抗体の産生のために使用されるＨＥＲ２抗原は、例えば、所望のエピトープを含むＨＥＲ２レセプターの細胞外ドメインまたはその一部分の可溶性形態であり得る。あるいは、細胞表面でＨＥＲ２を発現する細胞（例えば、ＨＥＲ２を過剰発現するように形質転換されたＮＩＨ−３Ｔ３細胞；またはＳＫ−ＢＲ−３細胞のような癌細胞株、例えば、Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１−８６９５（１９９１））が、抗体を生成するために使用され得る。抗体を生成するのに有用なＨＥＲ２の他の形態は、当業者に明らかである。
【０１６１】
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連抗原およびアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物において惹起される。関連抗原を、二官能剤または誘導化剤（例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介する結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ここで、ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である）を使用して、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシサイログロブリンまたはダイズトリプシンインヒビター）と結合体化させることは有用であり得る。
【０１６２】
動物を、例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質もしくは結合体（それぞれウサギまたはマウスに対して）を３容量のフロイント完全アジュバントと組み合わせて、そして複数の部位にその溶液を皮内注射することによって、抗原、免疫原性結合体、または誘導体に対して免疫化する。一ヶ月後、その動物を、フロイント完全アジュバント中の初めの量のペプチドまたは結合体の１／５〜１／１０の量で複数の部位での皮下注射によりブーストする。７日〜１４日後、その動物から採血し、そしてその血清を抗体力価についてアッセイする。動物を、その力価がプラトーになるまでブーストする。好ましくは、その動物を、同じ抗原の結合体（ただし、異なるタンパク質と結合および／または異なる架橋試薬により結合させた）でブーストする。結合体はまた、タンパク質融合物として組換え細胞培養において作製され得る。また、凝集剤（ａｇｇｒｅｇａｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、ミョウバン）を適切に使用して、免疫応答を増強させる。
【０１６３】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
本明細書中におけるモノクローナル抗体を作製するための種々の方法が、当該分野で利用可能である。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）を使用して、作製され得る。
【０１６４】
ハイブリドーマ法において、マウスまたは他の適切な宿主動物（例えば、ハムスター）は、本明細書中上記のように免疫化されて、免疫化のために使用されるタンパク質と特異的に結合する抗体を産生するか、または産生し得るリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。次いで、リンパ球を、適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）を使用してミエローマ細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成させ得る（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９〜１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０１６５】
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは、未融合の親ミエローマ細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含む適切な培養培地中に播種され、そして増殖される。例えば、親ミエローマ細胞が酵素であるヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠損している場合、ハイブリドーマのための培養培地は、代表的に、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防ぐ。
【０１６６】
好ましいミエローマ細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞により抗体の安定な高レベルの産生を支持し、そして培地（例えば、ＨＡＴ培地）に対して感受性である細胞である。とりわけ好ましいミエローマ細胞株は、マウスミエローマ細胞株（例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するミエローマ細胞株、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ  ＵＳＡより入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞）である。ヒトミエローマ細胞株およびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；およびＢｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，５１−６３頁（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０１６７】
ハイブリドーマ細胞が増殖する培養培地は、抗原に指向されたモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ（例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ））によって決定される。
【０１６８】
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により決定され得る。
【０１６９】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、そのクローンは、限界希釈手順によりサブクローン化され得、そして標準的な方法により増殖され得る（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９−１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的のための適切な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、このハイブリドーマ細胞は動物の腹水腫瘍としてインビボで増殖され得る。
【０１７０】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、従来の抗体精製手順（例えば、プロテインＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィーなど）によって培養培地、腹水または血清から適切に分離される。
【０１７１】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離されて、そして配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として役に立つ。一旦単離されると、そのＤＮＡは、発現ベクターの中に配置され得、次いでその発現ベクターは、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を獲得するために、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または別の状況では抗体タンパク質を産生しないミエローマ細胞）にトランスフェクトされる。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する概説論文としては、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）およびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．，１３０：１５１−１８８（１９９２）が挙げられる。
【０１７２】
さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体フラグメントは、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載される技術を使用して作製された抗体ファージライブラリーから単離され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれ、ファージライブラリーを使用する、マウス抗体およびヒト抗体の単離を記載している。引き続く出版物は、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２））ならびに非常に大規模なファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしての組み合わせ感染およびインビボ組換えによる高い親和性の（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生を記載している（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３））。従って、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替技術である。
【０１７３】
ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインをコードする配列に置換することによってか（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４）、または免疫グロブリンコード配列を非免疫グロブリンポリペプチドをコードする配列の全てまたは一部に共有結合させることによって改変され得る。
【０１７４】
代表的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗原に対する特異性を有する一つの抗原結合部位および異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製するために、抗体の定常ドメインに対して置換されるか、またはそれらは、抗体の一つの抗原結合部位の可変ドメインに対して置換される。
【０１７５】
（ｉｉｉ）ヒト化抗体
非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該分野において記載されてきた。好ましくは、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からその抗体に導入された一つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「輸入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と称される。この残基は、代表的に「輸入」可変ドメインから得られる。ヒト化は、超可変領域配列をヒト抗体のその対応配列に置換することによって、本質的にはＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者ら（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法に従って実施され得る。従って、そのような「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、ここで実質的にあまりインタクトでないヒト可変ドメインは、非ヒト種由来の対応配列によって、置換されている。実際には、ヒト化抗体は、代表的に、いくつかの超可変領域残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基が、げっ歯動物抗体の類似部位に由来する残基によって置換されている、ヒト抗体である。
【０１７６】
ヒト化抗体を作製する際に使用されるヒト可変ドメイン（軽鎖および重鎖の両方）の選択は、抗原性を減少させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」方法に従って、げっ歯動物抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次いで、げっ歯動物の配列に最も類似しているヒト配列が、ヒト化抗体のためにヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として受容される（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定小群の全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用され得る（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３））。
【０１７７】
抗体が、抗原に対する高い親和性の維持および他の有利な生物学的特性を有することがさらに重要である。この目的を達成するために、好ましい方法に従って、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列および種々の概念のヒト化産物の分析のプロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に利用可能であり、そして当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の有望な三次元コンホメーション構造を例示し、そして表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の綿密な調査は、候補免疫グロブリン配列の機能決定（ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ）する際に、残基の適切な役割を分析すること（すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析）を可能にする。この方法において、ＦＲ残基は、レシピエントおよび輸入配列から選択されて、そして組み合わせられ得、その結果、所望の抗体特徴（例えば、標的抗原に対する増大した親和性）が達成される。一般的に、超可変領域残基は、抗原結合に影響を及ぼす際に、直接的かつ最も実質的に関与する。
【０１７８】
ヒト化抗体または親和性成熟抗体の種々の形態が意図される。例えば、ヒト化抗体または親和性成熟抗体は、Ｆａｂのような抗体フラグメントであり得、これは、必要に応じて、免疫複合体を生成するために、１以上の細胞傷害性因子に結合される。あるいは、ヒト化抗体または親和性成熟抗体は、インタクトなＩｇＧ１抗体のようなインタクトな抗体であり得る。
【０１７９】
マウス４Ｄ５抗体のヒト化改変体（トラスツズマブが挙げられる）を生成するためのヒト化は、米国特許第５，８２１，３３７号、同第６，０５４，２９７号、同第６，４０７，２１３号、同第６，６３９，０５５号、同第６，７１９，９７１号および同第６，８００，７３８号、ならびにＣａｒｔｅｒら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８９：４２８５−４２８９（１９９２）に記載されている。ＨｕＭＡｂ４Ｄ５−８（トラスツズマブ）は、ＨＥＲ２抗原に、マウス４Ｄ５抗体よりも３倍強く結合し、ヒト効果細胞の存在下でヒト化細胞の指定の細胞傷害活性を可能にする二次免疫機能（ＡＤＣＣ）を有した。ＨｕＭＡｂ４Ｄ５−８は、ＶＬκサブグループＩコンセンサスフレームワーク（ｃｏｎｓｅｎｓｕｓｅ  ｆｒａｍｅｗｏｒｋ）に取り込まれた可変軽（ＶＬ）ＣＤＲ残基、およびＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークに取り込まれた可変重（ＶＨ）ＣＤＲ残基を含んだ。その抗体はさらに、ＶＨの位置７１、７３、７８および９３（ＦＲ残基のＫａｂａｔナンバリング）にフレームワーク領域（ＦＲ）置換；およびＶＬの位置６６（ＦＲ残基のＫａｂａｔナンバリング）にＦＲ置換を含んだ。トラスツズマブは、非Ａアロタイプヒトγ１Ｆｃ領域を含む。
（ｉｖ）ヒト抗体
ヒト化の代替として、ヒト抗体が生成され得る。例えば、トランスジェニック動物（例えば、マウス）であって、免疫の際に内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の充分なレパートリーを生成し得るものを作製することが今や可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全阻害を生じることが記載されている。そのような生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子のアレイの移入は、抗原攻撃（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に際しヒト抗体の産生を生じる。例えば、以下を参照のこと：Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号および同第５，５４５，８０７号。あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０））を使用して、免疫していないドナーから免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリー由来のヒト抗体および抗体フラグメントをインビトロで生成し得る。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子は、糸状バクテリオファージ（例えば、Ｍ１３またはｆｄ）の主要コートタンパク質遺伝子またはマイナーなコートタンパク質遺伝子のいずれか中にインフレームでクローニングされ、そしてファージ粒子の表面上に機能的な抗体フラグメントとして提示される。糸状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むことから、その抗体の機能的特性に基づく選択もまた、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択を生じる。従って、そのファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、種々の形式で行われ得る；それらの概説については以下を参照のこと：Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ
Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ
ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１（１９９３）。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源をファージディスプレイのために使用し得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫したマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーからの抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。免疫していないヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリーが構築され得、そして多様なアレイの抗原（自己抗原を含む）に対する抗体は、以下に記載される技術に本質的に従って単離され得る：Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ
Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）。また、米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号を参照のこと。
【０１８０】
上記のように、ヒト抗体はまた、インビトロで活性化したＢ細胞により生成され得る（米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照のこと）。
【０１８１】
ヒトＨＥＲ２抗体は、以下に記載される：米国特許第５，７７２，９９７号（１９９８年６月３０日発行）およびＷＯ  ９７／００２７１（１９９７年１月３日公開）。
【０１８２】
（ｖ）抗体フラグメント
種々の技術が、１以上の抗原結合領域を含む抗体フラグメントの産生のために開発されてきた。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、以下を参照のこと：Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５））。しかし、これらのフラグメントは、今や、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。例えば、その抗体フラグメントは、上記の抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、化学的に結合されて、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成し得る（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体フラグメントの産生のための他の技術は、当業者に明白である。他の実施形態において、選り抜きの抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。以下を参照のこと：ＷＯ  ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８号。この抗体フラグメントはまた、「線状抗体」（ｌｉｎｅａｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）であり得る（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるとおり）。そのような線状抗体フラグメントは、単一特異性または二重特異性であり得る。
（ｖｉ）二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープについての結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＨＥＲ２タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＨＥＲ２結合部位と、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３および／またはＨＥＲ４についての結合部位とを組み合わせ得る。あるいは、ＨＥＲ２アームは、細胞防御機構をＨＥＲ２発現細胞へと集中させるために、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）のような白血球上のトリガー分子、あるいはＩｇＧについてのＦｃレセプター（ＦｃγＲ（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）））に結合するアームと組み合わされ得る。二重特異性抗体はまた、ＨＥＲ２を発現する細胞に対して細胞傷害性因子を局在化させるために使用され得る。これらの抗体は、ＨＥＲ２結合アーム、および細胞傷害性因子に結合するアーム（例えば、サポリン、抗インターフェロンα、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサートまたは放射性同位体ハプテン）を有する。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。
【０１８３】
ＷＯ  ９６／１６６７３は、二重特異性ＨＥＲ２／ＦｃγＲＩＩＩ抗体を記載し、そして米国特許第５，８３７，２３４号は、二重特異性ＨＥＲ２／ＦｃγＲＩ抗体ＩＤＭ１（Ｏｓｉｄｅｍ）を開示する。二重特異性ＨＥＲ２／Ｆｃα抗体は、ＷＯ９８／０２４６３に示されている。米国特許第５，８２１，３３７号は、二重特異性ＨＥＲ２／ＣＤ３抗体を教示する。ＭＤＸ−２１０は二重特異性ＨＥＲ２−ＦｃγＲＩＩＩ  Ａｂである。
【０１８４】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該分野において公知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づく。ここでは、その２つの鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖のランダムな組み合わせのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａ））は、１０の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生する。このうち、たった１つが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製（これは、通常、アフィニティークロマトグラフィー工程によってなされる）は、かなり煩雑であり、そしてその産物の収率は低い。類似の手順がＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０１８５】
異なるアプローチに従って、所望の結合特異性（抗体−抗原組み合わせ部位）を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合する。この融合物は、好ましくは、免疫グロブリン重鎖定常ドメインを伴い、少なくともヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３の領域の部分を含む。これらの融合物の少なくとも１つに存在する、軽鎖結合に必要な部位を含む、第一の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物、および所望であれば免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別個の発現ベクターに挿入され、そして適切な宿主生物中に同時トランスフェクトされる。これは、その構築において使用される不等の比率の３つのポリペプチド鎖が最適な収率を提供する実施形態において３つのポリペプチドフラグメントの相対比率の調整においてかなりの柔軟性を提供する。しかし、２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖についてコード配列を１つの発現ベクター中に挿入することは、等価な比での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率を生じる場合またはその比率が特に重要ではない場合に可能である。
【０１８６】
このアプローチの好ましい実施形態において、その二重特異性抗体は、一方のアームにおいて第一の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアームにおいてハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖の対（第二の結合特異性を提供する）から構成される。この非対称性の構造は、所望ではない免疫グロブリン鎖組み合わせから所望の二重特異性化合物の分離を容易にすることが見出された。なぜなら、二重特異性分子の半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在が分離の容易な方法を提供するからである。このアプローチは、ＷＯ  ９４／０４６９０に開示される。例えば、二重特異性抗体を生成するさらなる詳細については、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０１８７】
米国特許第５，７３１，１６８号において記載される別のアプローチに従って、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーの百分率を最大化するように操作され得る。この好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部分を含む。この方法において、第一の抗体分子の界面からの１つ以上の低アミノ酸側鎖は、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）に置き換えられる。その大きな側鎖と同一または類似のサイズの代償的な「溝」は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）に置き換えることによって第二の抗体分子の界面上に作製される。これは、ホモダイマーのような他の所望されない最終産物よりもヘテロダイマーの収率を増加するための機構を提供する。
【０１８８】
二重特異性抗体は、架橋抗体または「ヘテロ結合体」抗体を包含する。例えば、ヘテロ結合体における抗体のうちの一方は、アビジンと結合され得、他方はビオチンに結合され得る。そのような抗体は、例えば、所望されない細胞に免疫系細胞を標的化させることが提唱され（米国特許第４，６７６，９８０号）、そしてＨＩＶ感染の処置について提唱された（ＷＯ  ９１／００３６０、ＷＯ  ９２／２００３７３およびＥＰ  ０３０８９）。ヘテロ結合体抗体は、任意の従来の架橋方法を用いて作製され得る。適切な架橋剤は当該分野において周知であり、そして米国特許第４，６７６，９８０号において、多数の架橋技術とともに開示される。
【０１８９】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成するための技術もまた、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学的結合を用いて調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）は、インタクト抗体がタンパク質分解的に開裂してＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成する手順を記載する。これらのフラグメントは、ジチオール錯化剤亜砒酸ナトリウムの存在下で還元されて、隣接するジチオールが安定化され、そして分子間のジスルフィド形成が妨害される。次いで、生成されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体へと変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の一つは、メルカプトエチルアミンを用いた還元によりＦａｂ’−チオールへと再変換され、そして等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて、二重特異性抗体を形成する。生成された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用され得る。
【０１９０】
最近の進展により、Ｅ．ｃｏｌｉからのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接の回収を容易にした。このＦａｂ’−ＳＨフラグメントは、化学的に結合されて、二重特異性抗体を形成し得る。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載する。各々のＦａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別個に分泌され、そしてインビトロでの指向された化学的結合に供されて、二重特異性抗体を形成する。このように形成された二重特異性抗体は、ＨＥＲ２レセプターを過剰発現する細胞および正常なヒトＴ細胞に結合し得、そしてヒト胸部腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の分解性活性をトリガーし得た。
【０１９１】
組換え細胞培養物から二重特異性抗体フラグメントを直接作製し、単離するための種々の技術もまた、記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを用いて産生された。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎのタンパク質からのロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合された。その抗体ホモダイマーは、ヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、そして次いで再度酸化されて抗体へテロダイマーを形成した。この方法はまた、抗体ホモダイマーの生成のためにも利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）により記載された「二重特異的抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替機構を提供した。このフラグメントは、リンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。このリンカーは、同じ鎖の上の２つのドメインの間を対合させるには短すぎる。従って、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬのドメインは、別のフラグメントの相補的ＶＬおよびＶＨのドメインと対合されるように強制され、それにより、２つの抗原結合部位を形成する。二重特異性抗体フラグメントを単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用によって作製するための別の戦略もまた、報告されている。以下を参照のこと：Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）。
【０１９２】
２つを超える価数を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０１９３】
（ｖｉｉ）他のアミノ酸配列改変
本明細書中に記載される抗体のアミノ酸配列改変が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが好ましくあり得る。この抗体のアミノ酸配列改変体は、適切なヌクレオチド変化を抗体核酸に導入することによるか、またはペプチド合成により調製される。そのような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、および／または挿入および／または置換を包含する。欠失、挿入および置換の任意の組合せは、最終構築物に達するように作製されるが、ただし、その最終構築物は所望の特性を有する。そのアミノ酸変化はまた、その抗体の翻訳後プロセシングを変更してもよい（例えば、グリコシル化部位の数または位置の変化）。
【０１９４】
変異誘発についての好ましい位置である、抗体の特定の残基または領域の同定のための有用な方法は、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）に記載される。本明細書において、標的残基の残基または基（例えば、荷電された残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ）が同定され、そして中性または陰性に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）により置換され、抗原とアミノ酸との相互作用に影響を与える。次いで、置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置は、さらにまたは他の改変体を置換の部位またはそれにわたって導入することによって再度調整される。従って、アミノ酸配列バリエーションを導入するための部位が予め決定されるものの、その変異自体の性質は、予め決定される必要はない。例えば、所定の部位での変異の性能を分析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発が、標的コドンまたは領域に施され、そして発現された抗体改変体が、所望の活性についてスクリーニングされる。
【０１９５】
アミノ酸配列挿入としては、１つの残基から百以上の残基を有するポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシ末端の融合物、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端の挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体、または細胞傷害性ポリペプチドに対して融合された抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入改変体としては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドに対する抗体のＮ末端もしくはＣ末端への融合物が挙げられる。
【０１９６】
改変体の別の型は、アミノ酸置換改変体である。これらの改変体は、異なる残基によって置換された抗体分子における少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換変異誘発のために最も関心ある部位としては、超可変領域が挙げられるが、ＦＲ改変もまた企図される。保存的置換は、「好ましい置換」の見出しの以下の表１に示される。そのような置換が生物学的活性における変化を生じる場合、より実質的な変化（「例示的置換」と表１において称するか、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載される）は、導入され得そしてその産物がスクリーニングされ得る。
【０１９７】
【表１】
2020094061.tif 000003
抗体の生物学的特性における実質的な改変は、（ａ）置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造（例えば、シートまたはヘリックスコンホメーション）、（ｂ）標的部位における分子の電荷または疎水性）、または（ｃ）側鎖のかさ高さ、を維持することに対するそれらの効果において有意に異なる置換を選択することによって達成される。アミノ酸は、側鎖の特性の類似点に従って以下のような群に分類される（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、７３〜７５頁、Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７５））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）無電荷極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。
【０１９８】
あるいは、天然に存在する残基は、一般的な側鎖の特性に基づいて以下の群に分類され得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖方向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１９９】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのものに交換することを包含する。
【０２００】
この抗体の適切なコンホメーションの維持に関与しない任意のシステイン残基はまた、一般にセリンに置換されて、その分子の酸化に対する安定性を改善し得、そして異常な架橋を妨害し得る。逆に、システイン結合は、その抗体に付加されて、その安定性（特に、その抗体がＦｖフラグメントのような抗体フラグメントである場合）を改善し得る。
【０２０１】
特に好ましい型の置換改変体は、親の抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを包含する。一般に、さらなる開発のために選択された得られた改変体は、それらが生成される親の抗体と比較して改善された生物学的特性を有する。そのような置換改変体を生成するための簡便な方法は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟を包含する。手短には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６から７の部位）を変異させてすべての可能なアミノ置換を各部位に生成する。このように生成された抗体改変体は、糸状ファージ粒子から一価の様式で、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合物としてディスプレイされる。次いで、ファージディスプレイされた改変体は、本明細書において開示されるように、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変について候補となる超可変領域部位を同定するために、アラニンスキャニング変異誘発を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定し得る。あるいはまたはさらに、抗原−抗体結合体の結晶構造を分析して抗体とヒトＨＥＲ２との間の接触点を同定することも有利であり得る。そのような接触残基および隣接する残基は、本明細書において説明される技術に従う置換のための候補である。一旦そのような改変体が生成されると、改変体のパネルが、本明細書において記載されるスクリーニングに供され、そして１つ以上の関連するアッセイにおいて優越した特性を有する抗体を、さらなる開発のために選択し得る。
【０２０２】
本明細書中の例示的なトラスツズマブ改変体としては、以下のＶＬ位置の１つ以上の置換：Ｑ２７、Ｄ２８、Ｎ３０、Ｔ３１、Ａ３２、Ｙ４９、Ｆ５３、Ｙ５５、Ｒ６６、Ｈ９１、Ｙ９２および／もしくはＴ９４；および／またはＶＨ位置の１つ以上の置換：Ｗ９５、Ｄ９８、Ｆ１００、Ｙ１００ａおよび／もしくはＹ１０２が挙げられる。
【０２０３】
この抗体の別の型のアミノ酸改変は、この抗体の元のグリコシル化パターンを変化させる。変化させることによって、抗体に見出される１つ以上の炭水化物部分を欠失すること、および／またはその抗体には存在しないグリコシル化部位を１つ以上付加することが意味される。
【０２０４】
抗体のグリコシル化は、代表的には、Ｎ結合またはＯ結合のどちらかである。Ｎ結合は、アスパラギン残基の側鎖に炭水化物部位を取りつけることをいう。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（ここで、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖に炭水化物部位を酵素的に取りつけるための認識配列である。従って、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のどちらかの存在は、潜在的なグリコシル化部位を作製する。Ｏ結合のグリコシル化は、Ｎ−アセチルガラクトサミン（Ｎ−ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトースまたはキシロースの糖の１つを、ヒドロキシアミノ酸（５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンもまた使用され得るが、最も一般的にはセリンまたはトレオニン）への付着をいう。
【０２０５】
グリコシル化部位の抗体への付加は、好都合なことに、上記の１つ以上のトリペプチド配列を含むように、アミノ酸配列を変化させることにより達成される（Ｎ結合型グリコシル化部位について）。この変化はまた、元の抗体の配列に、１つ以上のセリンまたはトレオニン残基を付加することによるか、またはこれらにより置換することによって、なされ得る（Ｏ結合型グリコシル化部位について）。
【０２０６】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物は、変化され得る。例えば、抗体のＦｃ領域に結合したフコースを欠如する成熟炭水化物構造を有する抗体は、米国特許出願ＵＳ２００３／０１５７１０８  Ａ１、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌに記載される。またＵＳ２００４／００９３６２１  Ａ１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）も参照のこと。抗体のＦｃ領域に結合した炭水化物中の二分するＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、ＷＯ０３／０１１８７８、Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔらおよび米国特許第６，６０２，６８４号、Ｕｍａｎａらに参照される。抗体のＦｃ領域に結合したオリゴ糖の少なくとも一つのガラクトース残基を有する抗体は、ＷＯ９７／３００８７、Ｐａｔｅｌらに報告されている。抗体のＦｃ領域に結合した変化した炭水化物を有する抗体に関するＷＯ９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）およびＷＯ９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）もまた参照のこと。
【０２０７】
エフェクター機能（例えば、抗体の抗原依存細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存細胞傷害性（ＣＤＣ）を増強するために）に関して、本発明の抗体を改変することが所望され得る。このことは、抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成され得る。あるいはまたはさらに、システイン残基は、Ｆｃ領域に導入され得、これにより、この領域の鎖間ジスルフィド結合形成を可能とする。従って、産生されたホモ二量体抗体は、内部移行能力を改善し得そして／または補体媒介細胞死滅および抗体依存細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を増加させ得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。増強された抗腫瘍活性を有するホモダイマー抗体はまた、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されるように、ヘテロ二官能性の架橋剤を使用して調製され得る。あるいは、二重Ｆｃ領域を有する抗体が操作され得、そして、それによって、補体溶解およびＡＤＣＣ能力を増強し得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。
【０２０８】
ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）は、ヒトエフェクター細胞の存在下で、改善されたＡＤＣＣ機能を有する抗体を記載し、ここで、この抗体は、そのＦｃ領域にアミノ酸置換を含む。好ましくは、改善されたＡＤＣＣを有する抗体は、ＦＣ領域の位置２９８、３３３および／または３３４（残基のＥｕ番号付け）に置換を含む。好ましくは、変化したＦｃ領域は、これらの位置の１つ、２つまたは３つにおける置換を含むか、またはそれらからなるヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域である。このような置換は、必要に応じてＣ１ｑ結合および／またはＣＤＣを増加させる置換と合わされる。
【０２０９】
変化したＣ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を有する抗体は、ＷＯ９９／５１６４２、米国特許第６，１９４，５５１  Ｂ１号、米国特許第６，２４２，１９５  Ｂ１号、米国特許第６，５２８，６２４  Ｂ１号および米国特許第６，５３８，１２４号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）に記載される。この抗体は、そのＦｃ領域のアミノ酸位置２７０、３２２、３２６、３２７、３２９、３１３、３３３および／または３３４（残基のＥｕ番号付け）の１つ以上でアミノ酸置換を含む。
【０２１０】
抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているように、サルベージレセプター結合エピトープを抗体（特に抗体フラグメント）に組み込み得る。本明細書中で使用される場合、用語「サルベージレセプター結合エピトープ」とは、インビボでのＩｇＧ分子の血清半減期を増加させることを担うＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープをいう。
【０２１１】
新生児のＦｃレセプター（ＦｃＲｎ）への結合が改善され、半減期が増加した抗体は、ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）およびＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載される。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。例えば、Ｆｃ領域は、位置２３８、２５０、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１４、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８または４３４（残基のＥｕ番号付け）の１つ以上に置換を有し得る。改善されたＦｃＲｎ結合を有する好ましいＦｃ領域を含む抗体改変体は、そのＦｃ領域の位置３０７、３８０および４３４（残基のＥｕ番号付け）の１つ、２つまたは３つにアミノ酸置換を含む。
【０２１２】
３つ以上の（好ましくは４つ）の機能性抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、企図される（米国特許出願番号ＵＳ２００２／０００４５８７  Ａ１、Ｍｉｌｌｅｒら）。
【０２１３】
抗体のアミノ酸配列改変体をコードする核酸分子は、当該分野で公知の種々の方法によって調製される。これらの方法としては、天然の供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列改変体の場合）、またはオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、以前に調製した改変体または抗体の非改変バージョンのカセット変異誘発が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１４】
（ｖｉｉｉ）所望の特質を有する抗体についてのスクリーニング
抗体を産生するための技術は、上記されている。所望である場合、特定の生物学的特徴を有する抗体をさらに選択し得る。
【０２１５】
トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合したＨＥＲ２ドメインＩＶに結合するＨＥＲ２抗体を同定するために、単離されたドメインＩＶペプチド、ＨＥＲ２  ＥＣＤに存在するか、またはインタクトなＨＥＲ２レセプター（ここで、ＥＣＤまたはレセプターは、単離され得るか、または細胞の表面に存在し得る）に存在するなどのドメインＩＶに結合する能力を評価し得る。必要に応じて、目的のＨＥＲ２抗体が、トラスツズマブもしくは４Ｄ５エピトープに結合するか、またはトラスツズマブもしくは４Ｄ５のＨＥＲ２に対する結合をブロックするかもしくは競合するかを評価し得；このような抗体は、必ずトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））により結合したＨＥＲ２ドメインＩＶに結合すると考えられる。目的の抗体により結合したＨＥＲ２上のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、抗体が抗体の結合（例えば、トラスツズマブまたは４Ｄ５のＨＥＲ２に対する結合）をブロックするか否かを評価する慣用的な交差ブロック（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイ（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ  Ｌａｎｅ編（１９８８）に記載されるアッセイ）を行い得る。また、Ｆｅｎｄｌｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０〜１５５８（１９９０）を参照のこと、この文献では、架橋ブロック研究は、インタクトなＨＥＲ２陽性細胞に対する直接蛍光によりＨＥＲ２抗体になされた。ＨＥＲ２モノクローナル抗体は、それぞれが、互いの結合を、無関係のモノクローナル抗体コントロールと比較して５０％以上ブロックする場合、エピトープを共有すると考えた。Ｆｅｎｄｌｙらの研究において、３Ｈ４および４Ｄ５は、同一のエピトープに結合した。あるいは、またはさらに、エピトープマッピングが、当該分野で公知の方法により行なわれ得、そして／またはＨＥＲ２のどのドメインまたはエピトープが、抗体により結合されるかを知るために、抗体−ＨＥＲ２構造（Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４））が研究され得る。
【０２１６】
トラスツズマブは、インビトロアッセイおよび動物の両方において、ＨＥＲ２を過剰発現するヒト腫瘍細胞の増殖を阻害することが示された。Ｈｕｄｚｉａｋら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．９：１１６５〜１１７２（１９８９）；米国特許第５，６７７，１７１号；Ｌｅｗｉｓら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３７：２５５〜２６３（１９９３）；Ｐｉｅｔｒａｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９９８；１７：２２３５〜４９（１９９８）；およびＢａｓｅｌｇａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２８２５〜２８３１（１９９８）。ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、ＨＥＲ２陽性腫瘍細胞株に対する細胞増殖抑制効果および細胞傷害効果の両方を有する（Ｌｅｗｉｓら、（１９９３））。
【０２１７】
この特性を有する別の増殖阻害ＨＥＲ２抗体を選択するために、インビトロアッセイまたはインビボアッセイが増殖阻害生物学的活性に関してＨＥＲ２抗体をスクリーニングするために使用され得る。特に、増殖阻害ＨＥＲ２抗体を同定するために、インビトロでＨＥＲ２を過剰発現する癌細胞の増殖を阻害する抗体をスクリーニングし得る。一実施形態において、最適な増殖阻害抗体は、細胞培養において、約０．５〜３０μｇ／ｍｌの抗体濃度で、約２０〜１００％、好ましくは約５０〜１００％まで、ＳＫ−ＢＲ−３細胞の増殖を阻害し得る。このような抗体を同定するために、米国特許第５，６７７，１７１号に記載されるＳＫ−ＢＲ−３アッセイが行われ得る。このアッセイに従って、ＳＫ−ＢＲ−３細胞は、Ｆ１２と１０％ウシ胎仔血清、グルタミンおよびペニシリン、ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ培地との１：１混合物中で増殖される。ＳＫ−ＢＲ−３細胞は、３５ｍｍの細胞培養ディッシュに２０，０００細胞で（２ｍｌ／３５ｍｍ皿）でプレーティングされる。１つのディッシュあたり０．５〜３０μｇ／ｍｌのＨＥＲ２抗体が添加される。６日後、未処理の細胞と比較した細胞の数を、電子ＣＯＵＬＴＥＲ  Ｊ細胞計数機を用いて計数する。ＳＫ−ＢＲ−３細胞の増殖を約２０〜１００％または約５０〜１００％阻害する抗体が、増殖阻害抗体として選択され得る。増殖阻害抗体（例えば、４Ｄ５および３Ｅ８）をスクリーニングするアッセイについては、米国特許第５，６７７，１７１号を参照のこと。
【０２１８】
インビボにおいてＨＥＲ２陽性腫瘍の増殖を阻害するＨＥＲ２抗体を選択するために、異種移植研究（例えば、Ｐｉｅｔｒａｓら（１９９８）およびＢａｓｅｌｇａら（１９９８）に記載される研究）が、この性質に関してＨＥＲ２抗体をスクリーニングするために使用され得る。
【０２１９】
トラスツズマブは、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）のメディエーターである。Ｈｏｔａｌｉｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３７：４７１（１９９６）、要約３２１５；Ｐｅｇｒａｍら、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ３８：６０２（１９９７）、要約４０４４；米国特許第５，８２１，３３７号、同第６，０５４，２９７号、同第６，４０７，２１３号、同第６，６３９，０５５号、同第６，７１９，９７１号および同第６，８００，７３８号；Ｃａｒｔｅｒら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８９：４２８５〜４２８９（１９９２）；およびＣｌｙｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ６：４４３〜６（２０００）。ＡＤＣＣを媒介する他のＨＥＲ２抗体が、種々のアッセイ（これらの参考文献に記載されるアッセイを含む）を用いて同定され得る。
【０２２０】
トラスツズマブはまた、ＨＥＲ２外部ドメイン切断を阻害することが報告されている（Ｍｏｌｉｎａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４７４４〜４７４９（２００１））。この機能を有する他のＨＥＲ２抗体が、例えば、Ｍｏｌｉｎａらにより使用された方法を用いて同定され得る。
【０２２１】
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）はまた、脈管形成因子の効果を調節することによりＨＥＲ２陽性ヒト乳房腫瘍における腫瘍脈管構造の標準化および回帰を誘導すると報告されている（Ｉｚｕｍｉら、Ｎａｔｕｒｅ  ４１６：２７９〜８０（２００２））。この特性を有する他のＨＥＲ２抗体は、Ｉｚｕｍｉらに記載される実験を用いて同定され得る。
【０２２２】
（ｉｘ）ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）組成物
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）組成物は概して、主要な種の抗体の混合物（配列番号５および６それぞれの軽鎖配列および重鎖配列）、およびこれらの改変形態（特に、脱アミド化した改変体を含む酸改変体）を含有する。好ましくは、組成物中のこのような酸改変体の量は、約２５％未満である。米国特許第６，３３９，１４２号を参照のこと。また、カチオン交換クロマトグラフィーにより分離可能なトラスツズマブの形態（ピークＡ（両方の軽鎖のＡｓｐに脱アミド化したＡｓｎ３０）；ピークＢ（一方の重鎖のイソＡｓｐに脱アミド化したＡｓｎ５５）；ピーク１（一方の軽鎖のイソＡｓｐに脱アミド化されたＡｓｎ３０）；ピーク２（一方の軽鎖のＡｓｐに脱アミド化したＡｓｐ３０、および一方の重鎖のイソＡｓｐに異性化されたＡｓｐ１０２）；ピーク３（主要なピーク形態または主要な種の抗体）；ピーク４（一方の重鎖のイソＡｓｐに異性体化されたＡｓｐ１０２）およびピークＣ（一方の重鎖のＡｓｐ１０２スクシンイミド（Ａｓｕ）を含む）に関しては、Ｈａｒｒｉｓら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｂ  ７５２：２３３〜２４５（２００１）を参照のこと。このような改変形態および組成物は、本明細書の本発明に包含される。
【０２２３】
（ｘ）免疫結合体
別の局面において、本発明は、細胞傷害性薬剤（例えば、化学療法剤、薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素またはそれらのフラグメント））に結合体化した抗体、または放射性同位体に結合体化した抗体（すなわち、放射性結合体）を含む免疫結合体、または抗体−薬物結合体（ＡＤＣ）を提供する。
【０２２４】
細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤（すなわち、癌の処置において腫瘍細胞を殺傷するかまたは阻害する薬物）の局所送達のための抗体−薬物結合体の使用（ＳｙｒｉｇｏｓおよびＥｐｅｎｅｔｏｓ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：６０５〜６１４（１９９９）；Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−ＤｕｖａｚおよびＳｐｒｉｎｇｅｒ  Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１〜１７２（１９９７）；米国特許第４，９７５，２７８号）は、薬物部分の腫瘍への標的化送達、およびその細胞内蓄積を可能にし、ここで、これらの非結合体化薬剤の全身投与は、正常な細胞への受け入れられないレベルの毒性を生じ得、腫瘍細胞は、除去されることが求められる。それにより、最小限の毒性での最大限の有効性が、求められる。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方が、これらの方法において有用であることが報告されている（Ｒｏｗｌａｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２１：１８３〜８７（１９８６））。これらの方法に使用される薬物としては、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサートおよびビンデシンが挙げられる。抗体−毒素結合体に使用される毒素としては細菌性毒素（例えば、ジフテリア毒素、リシンなどの植物毒素、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）などの低分子毒素（Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｊｏｕｒ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３〜１５８１（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０：１０２５〜１０２８（２０００）；Ｍａｎｄｌｅｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６〜７９１（２００２））、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）（ＥＰ  １３９１２１３；Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８〜８６２３（１９９６））、およびカリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）（Ｌｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２８（１９９８）；Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６〜３３４２（１９９３））が挙げられる。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはトポイソメラーゼ阻害を含む機構により細胞傷害性効果および細胞増殖抑制性効果に影響し得る。いくつかの細胞傷害性薬物は、大きい抗体またはタンパク質レセプターリガンドに結合体化される場合、不活性であるかまたはあまり活性ではない傾向がある。
【０２２５】
免疫結合体の産生に有用な化学療法剤は、上に記載される。使用され得る酵素学的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ，ＰＡＰＩＩ，およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｉｔａインヒビター、カーシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、マイトジェリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。
【０２２６】
抗体および細胞傷害性薬剤の結合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ）（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピン酸ＨＣＬ）、活性化エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベリン酸）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように、調製され得る。炭素１４標識した１−イソチオシアネートベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの結合体化についての例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。
【０２２７】
抗体および一種以上の低分子毒素（例えば、カリケアミシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチン、トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）およびＣＣ１０６５）ならびに毒性活性を有するこれらの毒素の誘導体の結合体もまた、本明細書中に企図される。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、免疫結合体は、一種以上のメイタンシノイド分子に結合体化した本発明の抗体（全長またはフラグメント）を含む。
【０２２９】
メイタンシノイドは、チューブリンポリマー化を阻害することにより作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは、最初に、東アフリカの低木Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａから単離された（米国特許際３，８９６，１１１号）。その後、特定の微生物もまた、メイタンシノイド（例えば、メイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステル）を産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成メイタンシノールならびにその誘導体およびそのアナログが、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号、同第４，２４８，８７０号、同第４，２５６，７４６号、同第４，２６０，６０８号、同第４，２６５，８１４号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３０８，２６８号、同第４，３０８，２６９号、同第４，３０９，４２８号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３１７，８２１号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４２４，２１９号、同第４，４５０，２５４号、同第４，３６２，６６３号および同第４，３７１，５３３号に開示される。
【０２３０】
メイタンシノイド薬物部分は、抗体薬物接結合体における魅力的な薬物部分である。なぜならば、それらは、以下：
（ｉ）発酵または発酵産物の化学的改変、誘導体化により比較的調製しやすく、（ｉｉ）抗体に対する非ジスルフィドリンカーを介した結合に適した官能基の誘導体化を受けやすく、（ｉｉｉ）血漿中で安定であり、そして（ｉｖ）種々の腫瘍細胞株に対して有効であるからである。
【０２３１】
メイタンシノイド薬物部分の例示的な実施形態としては、以下の構造を有するＤＭ１；ＤＭ３；およびＤＭ４が挙げられ：
【０２３２】
【化１】
2020094061.tif 000004
ここで、波線は、上記薬物の硫黄原子の、抗体薬物結合体のリンカー（Ｌ）に対する共有結合を示す。ＳＭＣＣによりＤＭ１に結合したＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）が報告されている（ＷＯ  ２００５／０３７９９２）。
【０２３３】
他の例示的なメイタンシノイド抗体薬物結合体は、以下の構造および略称を有する（ここで、Ａｂは、抗体であり、ｐは、１〜約８である）：
【０２３４】
【化２】
2020094061.tif 000005
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを介して上記抗体のチオール基に結合する例示的な抗体薬物結合体は、以下の構造および略称を有し：
【０２３５】
【化３】
2020094061.tif 000006
ここで、Ａｂは、抗体であり、ｎは、０、１または２であり、そしてｐは、１、２、３または４である。
【０２３６】
メイタンシノイドを含む免疫結合体、それを作製する方法およびそれらの治療的用途は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号および欧州特許ＥＰ０  ４２５  ２３５  Ｂ１に開示され、その開示は、本明細書中で参考として明白に援用される。Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８〜８６２３（１９９６）は、ヒト結腸直腸癌に対するモノクローナル抗体Ｃ２４２に結合するＤＭ１と名付けられたメイタンシノイドを含む免疫結合体を記載する。この結合体は、培養結腸癌細胞に対して高い細胞毒性であることが見出されていて、そして、インビトロ腫瘍増殖アッセイにおいて抗腫瘍活性を示した。Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７〜１３１（１９９２）は、メイタンシノイドが、ヒト結腸癌細胞株に対する抗原に結合するマウス抗体Ａ７、または、ＨＥＲ２に結合する別のマウスモノクローナル抗体ＴＡ．１にジスルフィドリンカーを介して結合体化した免疫結合体を記載する。抗体−メイタンシノイド結合体は、抗体またはメンタンシノイド分子のどちらかの生物学的活性を有意に減少させることなく、抗体をメイタンシノイド分子に化学的に結合することにより調製される。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号を参照のこと。毒素／抗体の一分子は、元の抗体の使用に対して細胞毒性を増すことが予測されたが、抗体１分子あたり平均３〜４個結合体化したメイタンシノイド分子は、抗体の機能または溶解性にネガティブに影響することなく、標的細胞の細胞毒性の増強において効果を示した。メイタンシノイドは、当該分野で周知であって、公知の技術によって合成され得るか、天然の供給源から単離され得る。適切なメイタンシノイドは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号ならびに上に参照した他の特許文献および非特許出版物に開示される。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノールおよび芳香環またはメイタンシノール分子の他の位置が改変されたメイタンシノールアナログ（例えば、種々のメイタンシノールエステル）である。
【０２３７】
抗体−メイタンシノイド結合体を作製するための当該分野で公知の多数の結合基が存在し、それらは、例えば、米国特許第５２０８０２０号または欧州特許０４２５２３５  Ｂ１、Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７〜１３１（１９９２）に開示される。リンカー構成要素ＳＭＣＣを含む抗体メイタンシノイド結合体がまた調製され得る。上記結合基は、上で特定した特許に開示されるジスルフィド基、チオエステル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基またはエステラーゼ不安定基が挙げられ、ジスルフィド基およびチオエステル基が好ましい。さらなる結合基は、本明細書中に開示され、例示される。
【０２３８】
抗体とメイタンシノイドとの結合体は、種々の二官能性タンパク質結合剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオレン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作製され得る。ジスルフィド結合を提供するための特に好ましい結合剤としては、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．１７３：７２３〜７３７（１９７８））およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）が挙げられる。
【０２３９】
上記リンカーは、その結合の型に依存して種々の位置でメイタンシノイド分子に結合し得る。例えば、エステル結合は、従来の結合技術を用いてヒドロキシル基との反応により形成され得る。上記反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで改変されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で改変されたＣ−１５位、およびヒドロキシル基を有するＣ−２０位で生じ得る。好ましい実施形態において、上記結合は、メイタンシノールまたはメイタンシノールアナログのＣ−３位で形成される。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、上記免疫結合体は、ドラスタチンまたはドロスタチンのペプチドアナログおよびペプチド誘導体ならびにアウリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号および同第５，７８０，５８８号）に結合体化した本発明の抗体を含む。ドラスタチンおよびアウリスタチンは、微小管動力学、ＧＴＰ加水分解ならびに核分裂および細胞分裂（Ｗｏｙｋｅら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ４５（１２）：３５８０〜３５８４（２００１））を干渉し、抗癌活性（米国特許第５，６６３，１４９号）および抗菌活性（Ｐｅｔｔｉｔら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ４２：２９６１〜２９６５（１９９８））を有することが示されている。ドラスタチンまたはアウリスタチンの薬物部分は、ペプチドの薬物部分のＮ（アミノ）末端またはＣ（カルボキシル）末端を介して抗体に結合し得る（ＷＯ
０２／０８８１７２）。
【０２４１】
例示的なアウリスタチン実施形態は、Ｎ末端結合型モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥおよびＤＦを含み、このことは、Ｓｅｎｔｅｒら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第４５巻、要約番号６２３（２００４年３月２８日）に開示される。
【０２４２】
例示的なアウリスタチン実施形態は、ＭＭＡＥである（ここで、波線は、抗体薬物結合体のリンカー（Ｌ）に対する共有結合を示す）。
【０２４３】
【化４】
2020094061.tif 000007
別の例示的なアウリスタチン実施形態は、ＭＭＡＦである（ここで、波線は、抗体薬物結合体のリンカー（Ｌ）に対する共有結合を示す）。
【０２４４】
【化５】
2020094061.tif 000008
ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦおよび種々のリンカー構成要素（さらに本明細書中に記載される）を含むさらなる例示的な実施形態は、以下の構造および略称を有する（ここで、Ａｂは、抗体を意味し、ｐは、１〜約８である）。
【０２４５】
【化６】
2020094061.tif 000009
【０２４６】
【化７】
2020094061.tif 000010
代表的に、ペプチドベースの薬物部分は、二つ以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントの間にペプチド結合を形成することにより調製され得る。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野では周知の液相合成法に従って調製され得る（Ｅ．ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｅｂｋｅ、「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、第１巻、７６〜１３６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９６５））。アウリスタチン／ドラスチン薬物部分は、ＵＳ  ５６３５４８３；ＵＳ  ５７８０５８８；Ｐｅｔｔｉｔら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３〜５４６５（１９８９）およびＰｅｔｉｔら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３：２４３〜２７７（１９９８）の方法に従って調製され得る。
【０２４７】
他の実施形態において、上記免疫結合体は、一つ以上のカリケアミシンに結合体化した本発明の抗体を含む。抗体のカリケアミシンファミリーは、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡの切断を生じ得る。カリケアミシンファミリーの結合体の調製については、米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、同第５，８７７，２９６号を参照のこと（これらは全てＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ  Ｃｏｍｐａｎｙに譲渡される）。使用され得るカリケアミシンの構造アナログとしては、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧおよびθ１Ｉ（Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６〜３３４２（１９９３）、Ｌｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５〜２９２８（１９９８）および前述のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄの米国特許）が挙げられるが、これらに限定されない。抗体が結合体化され得る別の抗腫瘍薬物は、葉酸拮抗薬であるＱＦＡである。カリチェミアシンおよびＱＦＡは両方とも細胞内作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。従って抗体に媒介される内在化を介したこれらの物質の細胞摂取は、それらの細胞毒性効果を大きく増強する。
【０２４８】
本発明の抗体に結合され得る他の抗腫瘍物質としては、ＢＣＮＵ、ストレプトゾイシン、ビンクリスチンおよび５−フルオロウラシル、米国特許第５，０５３，３９４号、同第５，７７０，７１０号に記載される集合的にＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として公知の物質およびエスペラマイシン（米国特許第５，８７７，２９６号）のファミリーが挙げられる。
【０２４９】
使用され得る酵素的に活性な毒素およびそれらのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、エキソトキシンＡ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰ  Ｉ、ＰＡＰ  ＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｒｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、カーチン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテセンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日に公開されたＷＯ  ９３／２１２３２を参照のこと。
【０２５０】
本発明はさらに、抗体と核酸溶解活性（例えば、リボヌクレアーゼまたはデオキシリボヌクレアーゼなどのＤＮＡエンドヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）を有する化合物との間に形成される免疫結合体を企図する。
【０２５１】
腫瘍の選択的破壊のために、抗体は、高い放射性原子を含み得る。種々の放射性同位体は、放射性結合（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）抗体の生成のために利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。結合体が検出のために使用される場合、この結合体は、シンチグラフィー研究のための放射性原子（例えば、Ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３）または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化、ｍｒｉとしても公知）のためのスピン標識（例えば、ヨウ素−１２３再び、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガンまたは鉄）を含み得る。
【０２５２】
放射性標識または他の標識は、公知の方法で結合体に組み込まれ得る。例えば、ペプチドは、生合成され得るか、または適切なアミノ酸前駆体（例えば、水素の代わりにフッ素−１９を含む）を使用して化学アミノ酸合成によって合成され得る。標識（例えば、Ｔｃ９９ｍまたはＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８およびＩｎ１１１）は、ペプチド中のシステイン残基を介して結合され得る。イットリウム−９０は、リジン残基を介して結合され得る。Ｆｒａｎｋｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９０５７（１９８７）に開示される方法が、ヨウ素−１２３を組み込むために使用され得る。
【０２５３】
抗体および細胞傷害剤の結合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピイミデートＨＣｌ）、活性化エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように、調製され得る。炭素１４標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの結合体化についての例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。そのリンカーは、細胞中の細胞傷害剤の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【０２５４】
本発明の化合物は、明らかに、架橋試薬：ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、およびスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を用いて調製されたＡＤＣ（これらに限定されない）を企図する。これらの試薬は、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）。２００３−２００４  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｏｇの４６７〜４９８頁を参照のこと。
【０２５５】
本発明の抗体薬物結合体（ＡＤＣ）において、抗体（Ａｂ）は、リンカー（Ｌ）を介して、１つ以上の薬物部分（Ｄ）に結合される（例えば、抗体当たり約１〜約２０個の薬物部分）。式ＩのＡＤＣは、種々の経路によって、当業者に公知の有機化学反応、条件および試薬を使用して、調製され得る。これには、以下が挙げられる：（１）抗体の求核基と二価リンカー試薬とが反応して、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて、薬物部分Ｄと反応すること；（２）薬物部分の求核基と二価リンカー試薬とが反応して、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて、抗体の求核基と反応すること。ＡＤＣを調製するためのさらなる方法は、本明細書中に記載される。
【０２５６】
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ      Ｉ
リンカーは、１つ以上のリンカー成分から構成され得る。例示的なリンカー成分としては、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＳＭＣＣ」）、およびＮ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（「ＳＩＡＢ」）が挙げられる。さらなるリンカー成分は、当該分野において公知であり、いくつかが本明細書中に記載される。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、リンカーは、アミノ酸残基を含み得る。例示的なアミノ酸リンカー成分としては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、またはペンタペプチドが挙げられる。例示的なジペプチドとしては、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）が挙げられる。例示的なトリペプチドとしては、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）およびグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が挙げられる。アミノ酸リンカー成分を含むアミノ酸残基としては、天然に存在する残基、ならびに少量のアミノ酸および非天然のアミノ酸アナログ（例えば、シトルリン）が挙げられる。アミノ酸リンカー成分は、特定の酵素（例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、カテプシンＣおよびカテプシンＤ、またはプラスミンプロテアーゼ）による酵素的切断のために設計され得、それらの選択性が最適化され得る。
【０２５８】
例示的なリンカー成分構造は、以下に示される（ここで、波線は、ＡＤＣの他の成分への共有結合の部位を示す）：
【０２５９】
【化８】
2020094061.tif 000011
さらなる例示的なリンカー成分および省略形としては以下が挙げられる（ここで、抗体（Ａｂ）およびリンカーが示され、ｐが１〜８である）：
【０２６０】
【化９】
2020094061.tif 000012
抗体上の求核基としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基（例えば、リジン）、（ｉｉｉ）側鎖チオール基（例えば、システイン）、および（ｉｖ）糖ヒドロキシル基またはアミノ基（ここで、抗体は、グリコシル化されている）。アミン基、チオール基、およびヒドロキシル基は、求核性であり、リンカー部分およびリンカー試薬上の求電子剤と共有結合を形成するように反応し得る：これには、以下が挙げられる：（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物のような活性エステル；（ｉｉ）ハロアセトアミドのようなハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル；（ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基、およびマレイミド基。特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド（すなわち、システイン架橋）を有する。抗体は、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）のような還元剤での処理によってリンカー試薬との結合のために反応性にされ得る。このように、各システイン架橋は、理論的に、２つの反応性チオール求核剤を形成する。さらなる求核基は、リジンと２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）とが反応してアミンをチオールに変化することによって、抗体に導入され得る。反応性チオール基は、１つ、２つ、３つ、４つまたはそれより多いシステイン残基を導入する（例えば、１つ以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異抗体を調製する）ことによって、抗体（またはそのフラグメント）に導入され得る。
【０２６１】
本発明の抗体薬物結合体はまた、求電子部分（リンカー試薬または薬物上の求核置換基と反応し得る）を導入するために、抗体の改変によって作製され得る。グリコシル化抗体の糖部分は、例えば、ペリオデート酸化試薬を用いて酸化されて、アルデヒド基またはケトン基を形成し得、これは、リンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応し得る。得られたイミンシッフ塩基の基は、安定な結合を形成し得るか、または例えば、ホウ水素化試薬によって還元されて、安定なアミン結合を形成し得る。１つの実施形態において、グリコシル化抗体の炭水化物部分とガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応によって、薬物上の適切な基と反応し得るタンパク質中のカルボニル（アルデヒドおよびケトン）基を生じ得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）。別の実施形態において、Ｎ末端セリン残基またはスレオニン残基を含むタンパク質は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応して、第１アミノ酸の代わりにアルデヒドの生成を生じ得る（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ  ＆  Ｓｔｒｏｈ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６（１９９２）；米国特許第５，３６２，８５２号）。このようなアルデヒドは、薬物部分またはリンカー求核剤と反応し得る。
【０２６２】
同様に、薬物部分上の求核基としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：リンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基と共有結合を形成するように反応し得る、アミン基、チオール基、ヒドロキシル基、ヒドラジド基、オキシム基、ヒドラジン基、チオセミカルバゾン基、ヒドラジンカルボキシレート基、およびアリールヒドラジド基；以下が挙げられる：（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物のような活性エステル；（ｉｉ）ハロアセトアミドのようなハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル；（ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基、およびマレイミド基。
【０２６３】
あるいは、抗体および細胞傷害剤を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技術またはまたはペプチド合成によって作製され得る。ＤＮＡの長さは、互いに隣接するかまたは結合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離されるかのいずれかである、結合体の２つの部分をコードするそれぞれの領域を含み得る。
【０２６４】
なお別の実施形態において、抗体は、腫瘍プレ標的化（ｐｒｅ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）において利用するための「レセプター」（例えば、ストレプトアビジン）に結合され得（ここで、この抗体−レセプター結合体は、患者に投与される）、続いて、クリアリング（ｃｌｅａｒｉｎｇ）剤を使用して循環から未結合の結合体が除去され、次いで、細胞傷害剤（例えば、放射性ヌクレオチド）に結合される「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。
【０２６５】
他の免疫結合体が、本明細書中で企図される。例えば、抗体または抗体フラグメントは、種々の非タンパク質ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールのコポリマー）のうちの１つに連結され得る。抗体はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ（メチレンメタクリレート）マイクロカプセル）中、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中、またはマクロエマルジョン中に閉じ込められ得る。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）に開示される。
【０２６６】
本明細書中に開示される抗体はまた、イムノリポソームとして処方され得る。抗体を含むリポソームは、当該分野において公知の方法によって調製され、例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号；ならびにＷＯ９７／３８７３１（１０月２３日，１９９７年に公開された）に記載される。向上した循環時間を有するリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。
【０２６７】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いる逆相エバポレーション方法によって作製され得る。リポソームは、規定孔サイズのフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームを生じる。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントは、ジスルフィド交換反応によってＭａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されるようにリポソームに結合され得る。化学療法剤は、必要に応じて、リポソーム内に含まれる。Ｇａｂｉｚｏｎら、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８１（１９）１４８４（１９８９）を参照のこと。
【０２６８】
（ＩＩＩ．治療のための患者の選択）
本明細書中の患者は、一般的に、ＨＥＲ２陽性被験体を同定するために、治療の前に診断試験に供される。例えば、診断試験は、ＨＥＲ２発現（過剰発現を含む）、増幅および／または活性化（リン酸化またはダイマー化を含む）を評価し得る。
【０２６９】
一般的に、診断試験が実行される場合、サンプルは、治療の必要な患者から得られ得る。被験体が癌を有する場合、サンプルは、一般的に、腫瘍サンプルである。好ましい実施形態において、腫瘍サンプルは、乳癌生検由来である。本明細書中の生物学的サンプルは、固定化サンプル、例えば、ホルマリン固定、パラフィン埋め込み（ＦＦＰＥ）サンプル、または凍結サンプルであり得る。
【０２７０】
癌におけるＨＥＲ２発現または増幅を決定するために、種々の診断／予後アッセイが利用可能である。１つの実施形態において、ＨＥＲ２過剰発現は、例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（登録商標）（Ｄａｋｏ）を使用して、ＩＨＣによって分析され得る。腫瘍生検由来のパラフィン埋め込み組織切片は、ＩＨＣアッセイに供され得、以下のＨＥＲ２タンパク質染色強度基準に一致され得る：
スコア０  染色が観察されないか、または膜染色が、腫瘍細胞の１０％未満において観察される。
スコア１＋  わずかな／かすかに認識可能な膜染色が、腫瘍細胞の１０％より多くにおいて検出される。細胞は、それらの膜の一部においてのみ染色される。
スコア２＋  弱い〜中程度の完全な膜の染色が、腫瘍細胞の１０％より多くにおいて観察される。
スコア３＋  中程度〜強い完全な膜の染色が、腫瘍細胞の１０％より多くにおいて観察される。
【０２７１】
ＨＥＲ２過剰発現評価についての０または１＋のスコアの腫瘍は、ＨＥＲ２を過剰発現しないと特徴付けられ得、２＋または３＋のスコアの腫瘍が、ＨＥＲ２を過剰発現するとして特徴付けられ得る。
【０２７２】
ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍は、細胞当たりで発現されるＨＥＲ２のコピー数に対応する免疫組織化学スコアによって評価され得、生化学的に決定され得る：
０＝０〜１０，０００コピー／細胞、
１＋＝少なくとも約２００，０００コピー／細胞、
２＋＝少なくとも約５００，０００コピー／細胞、
３＋＝少なくとも約２，０００，０００コピー／細胞。
【０２７３】
３＋レベルでのＨＥＲ２の過剰発現（チロシンキナーゼのリガンド非依存性活性化を導く（Ｈｕｄｚｉａｋら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：７１５９−７１６３（１９８７）））は、乳癌の約３０％において生じ、これらの患者において、再発のない生存および全体的な生存が減少する（Ｓｌａｍｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：７０７−７１２（１９８９）；Ｓｌａｍｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１７７−１８２（１９８７））。
【０２７４】
あるいは、またはさらに、ＩＮＦＯＲＭＴＭ（Ｖｅｎｔａｎａ，Ａｒｉｚｏｎａによって販売される）またはＰＡＴＨＶＩＳＩＯＮＴＭ（Ｖｙｓｉｓ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）のようなＦＩＳＨアッセイは、腫瘍におけるＨＥＲ２増幅の程度（存在する場合）を決定するために、ホルマリン固定、パラフィン埋め込み腫瘍組織で実行され得る。
【０２７５】
ＨＥＲ２陽性はまた、例えば、検出される分子を結合し、検出可能な標識（例えば、放射性同位体）でタグ化される分子（例えば、抗体）を投与し、そして標識の局在化について患者を外部から走査することによって、インビボ診断アッセイを使用して評価され得る。
【０２７６】
ＨＥＲ２陽性腫瘍を同定するための他の方法が、本明細書中において企図され、これには、遊出（ｓｈｅｄ）抗原の測定、およびＨＥＲ２レセプターによって媒介される下流シグナル伝達を評価するような間接的なＨＥＲ２陽性腫瘍の検出、遺伝子発現プロファイリングなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７７】
好ましくは、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって評価されるようにＨＥＲ２を過剰発現し、そして／またはＦＩＳＨによって評価されるようにＨＥＲ２遺伝子を増幅しているＨＥＲ２陽性腫瘍またはサンプルを有する被験体が、選択される。
【０２７８】
（ＩＶ．薬学的処方物）
本発明に従って使用されたＨＥＲ２抗体の治療的処方物は、所望の程度の純度を有する抗体を、任意の薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と、一般的に凍結乾燥処方物または水溶液の形態で混合することによって、保存のために調製される。抗体結晶もまた企図される（米国特許出願２００２／０１３６７１９を参照のこと）。受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤は、使用される投薬量および濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、これには、以下が挙げられる：リン酸、クエン酸および他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンズアルコニウムクロリド、ベンズエトニウムクロリド；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベンのようなアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンのようなアミノ酸；単糖類、二糖類、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属複合体（例えば、亜鉛−タンパク質複合体）；および／またはＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性物質が挙げられる。
【０２７９】
凍結乾燥された抗体処方物は、明確に本明細書中に参考として援用される米国特許第６，２６７，９５８号、同第６，６８５，９４０号および同第６，８２１，５１５号に記載される。好ましいＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）処方物は、静脈内（ＩＶ）投与のための、滅菌、白色〜淡黄色、保存剤を含まない凍結乾燥粉末であり、これは、４４０ｍｇトラスツズマブ、４００ｍｇ  α，α−トレハロース二水和物、９．９ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン−ＨＣｌ、６．４ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン、および１．８ｍｇポリソルベート  ２０，ＵＳＰを含む。２０ｍＬの注射のための静菌水（ＢＷＦＩ）（保存剤として１．１％ベンジルアルコールを含む）の再構成は、約６．０のｐＨで、２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含む多用量溶液を生じる。
【０２８０】
治療的使用のための好ましいペルツツマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）処方物は、２０ｍＭヒスチジンアセテート、１２０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０（ｐＨ６．０）中に３０ｍｇ／ｍｌペルツズマブを含む。代替のペルツツマブ処方物は、２５ｍｇ／ｍＬペルツツマブ、１０ｍＭヒスチジン−ＨＣｌ緩衝液、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ポリソルベート２０（ｐＨ６．０）を含む。
【０２８１】
本明細書中の処方物はまた、処置される特定の適応症に必要な１つより多くの活性化合物（好ましくは、互いに有害に影響しない相補的な活性を有するもの）を含み得る。ＨＥＲ２抗体と組み合わされ得る種々の薬物が、以下の補助療法の節に記載されている。このような分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせで適切に存在する。
【０２８２】
活性成分はまた、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中か、またはマクロエマルジョン中に、例えば、コアセルベーション技術によるかまたは界面重合（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタキシレート）マイクロカプセル）によって調製されたマイクロカプセル中に閉じ込められ得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｌｏ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）において開示される。
【０２８３】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の適切な例は、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、そのマトリックスは、例えば、フィルム、またはミクロカプセルなどの成形品の形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注入可能なミクロスフェア）のような分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０２８４】
インビボ投与で使用される処方物は、滅菌されていなければならない。これは、滅菌濾過膜を通す濾過により容易に達成される。
【０２８５】
（Ｖ．補助療法）
本発明は、根治手術に続いて、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体に、疾患を含まない生存（ＤＦＳ）または全体的な生存（ＯＳ）を延長するのに有効な量で、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））に結合したＨＥＲ２ドメインＩＶに結合する抗体を投与する工程を包含する補助療法の方法を提供する。ここで、ＤＦＳまたはＯＳは、抗体の最初の投与の約２〜５年後に評価される。好ましくは、被験体のＤＦＳまたはＯＳは、処置の開始後または最初の診断後、約３〜５年、約４〜５年、または少なくとも約４年、または少なくとも約５年で評価される。好ましくは、抗体は、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））である。
【０２８６】
本明細書中で処置される被験体は、一般的に、高い再発の危険性がある。被験体の腫瘍がＨＥＲ２陽性である場合、これは、より攻撃的であることが公知であり、より高い再発の可能性に関連づけられている。さらに、被験体は、より若い年齢に起因して危険が増加し得（例えば、被験体が約５０才未満である場合）：大きな原発性腫瘍を有していた可能性があり（例えば、２センチメートルの直径より大きい腫瘍）；リンパ節陽性であり得（例えば、４個以上の関連するリンパ節（４〜９個の関連するリンパ節、および１０個以上の関連するリンパ節を含む）を有する）；エストロゲンレセプター（ＥＲ）ネガティブであり得；そして／またはプロゲステロンレセプター（ＰＧ）ネガティブであり得る。
【０２８７】
ＨＥＲ２抗体は、公知の方法（静脈内投与（例えば、ボーラス投与）、または一定の期間にわたる継続的な注入（筋内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、関節内経路、滑液包内経路、髄腔内経路、経口経路、局所経路、または吸入経路）などによる）に従って、ヒト患者に投与される。抗体の静脈内投与が、好ましい。
【０２８８】
ＨＥＲ２抗体の好ましい投薬量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは、約２ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの範囲である。トラスツズマブの好ましい投薬量レジメンとしては、９０分注入として投与される４ｍｇ／ｋｇトラスツズマブ、続く、２ｍｇ／ｋｇトラスツズマブの毎週の維持用量（これは、初期負荷用量が十分耐性である場合、３０分の注入として投与され得る）が挙げられる。しかし、トラスツズマブについての他の投薬量レジメンが企図され、これには、毎週未満の投薬、例えば、３週間毎の投与、例えば、６ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇまたは１２ｍｇ／ｋｇの用量が挙げられ；そして８ｍｇ／ｋｇの初期用量、続いて、３週間毎の６ｍｇ／ｋｇが挙げられる（米国特許第６，６２７，１９６号Ｂ１，Ｂａｕｇｈｍａｎら；Ｌｅｙｌａｎｄ−Ｊｏｎｅｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．  ２１：３９６５−７１（２００３）を参照のこと）。投与されるトラスツズマブの用量の数は、少なくとも２０以上、好ましくは、少なくとも５０、例えば、５２用量（この抗体は、毎週投与される）であり得る。トラスツズマブのより少ない頻度の投薬（例えば、３週間毎の投薬）が使用される場合、より少ない用量が投与され得る。一般的に、被験体は、少なくとも約１年間、トラスツズマブを受容し、そして被験体の進行は、その時間の後に続く。
【０２８９】
ＨＥＲ２抗体が単一の薬剤として投与され得るものの、患者は、好ましくは、ＨＥＲ２抗体と、一種以上の化学療法剤との組み合わせで処置される。好ましくは、化学療法剤の少なくとも一種がタキソイドである。組み合わせ投与としては、別々の処方物または単一の薬学的処方物を使用する同時投与（ｃｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）または同時投与（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、ならびにいずれかの順での連続投与を含み、ここで、好ましくは、両方（または全て）の活性剤が、同時にそれらの生物学的活性を発揮する時間が存在する。従って、化学療法剤は、ＨＥＲ２抗体の投与の前、または後に投与され得る。この実施形態において、化学療法剤の少なくとも１つの投与とＨＥＲ２抗体の少なくとも１つの投与との間のタイミングは、好ましくは、約１ヶ月以下、最も好ましくは、約２週間以下である。あるいは、化学療法剤およびＨＥＲ２抗体は、単一の処方物でまたは別々の処方物で患者に同時に投与される。化学療法剤（例えば、タキソイド）およびＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）の組み合わせでの処置は、患者に対して、相乗的または相加的よりも大きな治療的利点を生じ得る。
【０２９０】
化学療法剤は、投与される場合、通常、それについての公知の投薬量で、または薬物の組み合わせ作用もしくは抗代謝物化学療法剤の投与に起因するネガティブな副作用に起因して必要に応じて下げられる。このような化学療法剤についての調製および投薬スケジュールは、製造業者の指示に従って使用され得るか、または当業者によって経験的に決定され得る。化学療法剤がパクリタキセルである場合、好ましくは毎週（例えば、８０ｍｇ／ｍ２）または３週間毎（例えば、１７５ｍｇ／ｍ２または１３５ｍｇ／ｍ２）に投与される。適切なドセタキセル投薬量としては、６０ｍｇ／ｍ２、７０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２（３週間毎）；または３５ｍｇ／ｍ２もしくは４０ｍｇ／ｍ２（毎週）が挙げられる。
【０２９１】
組み合わされ得る種々の化学療法剤が上に開示される。ＨＥＲ２抗体と組み合わされる好ましい化学療法剤は、以下からなる群より選択される：タキソイド（ドセタキセルおよびパクリタキセルを含む）、ビンカ（例えば、ビノレルビンまたはビンブラスチン）、白金化合物（例えば、カルボプラチンまたはシスプラチン）、アロマターゼインヒビター（例えば、レトロゾール、アナストラゾールまたはエキセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ））、抗エストロゲン（例えば、フルベストラント、またはタモキシフェン）、エトポシド、チオテパ、シクロホスファミド、メトトレキサート、リポソームドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、カペシタビン、ゲムシタビン、ＣＯＸ−２インヒビター（例えば、セレコキシブ）、またはプロテオソームインヒビター（例えば、ＰＳ３４２）。
【０２９２】
最も好ましくは、ＨＥＲ２抗体は、トキソイド（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）と、必要に応じて、少なくとも一種の他の化学療法剤（例えば、白金化合物（例えば、カルボプラチンまたはシスプラチン））と組み合わせて、組み合わされる。
【０２９３】
アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシンまたはエピルビシン）が被験体に投与される場合、好ましくは、これは、例えば、以下の実施例１に開示されるプロトコルで、ＨＥＲ２抗体の投与の前および／または後に与えられ、ここで、アントラサイクリン／シクロホスファミドの組み合わせは、手術の後で、ＨＥＲ２抗体およびトキソイドの投与の前に被験体に投与されていた。しかし、心臓毒性の減少した、改変アントラサイクリン（例えば、リポソームドキソルビシン（ＴＬＣＤ−９９；（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、またはエピルビシン）は、ＨＥＲ２抗体と組み合わされ得る。
【０２９４】
抗体の投与および化学療法は、化学療法（例えば、パクリタキセルのようなタキソイド）単独で処置された被験体と比較して、３年で約５０％（ここで、「約５０％」は、本明細書中では、約４５％〜約７０％の範囲を含む）、被験体の集団で、疾患の再発（乳房での癌の再発および／または遠位の再発）を減少させ、例えば、３年で約５２％、乳房での再発を減少させ、そして／または３年で約５３％遠位の再発を減少させ得る。
【０２９５】
本明細書中において、本発明は、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体の集団において非転位性乳癌を処置する方法を提供し、この方法は、根治手術に続いて、有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイドを被験体に投与する工程、および４年（またはそれ以上）後に被験体を評価して、少なくとも約８０％（好ましくは、少なくとも８５％）の被験体で疾患の再発が無いことを確認する工程を包含する。この集団は、３０００以上のヒト被験体を含み得る。
【０２９６】
本発明はさらに、非転移性ＨＥＲ２陽性乳癌を有するヒト被験体の集団において疾患の再発を減少させる方法に関し、この方法は、根治手術に続いて、有効量のトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））およびタキソイドを被験体に投与する工程を包含し、ここで、疾患の再発は、タキソイド単独で処置される被験体と比較して、３年で少なくとも約５０％減少する。
【０２９７】
ＨＥＲ２抗体および化学療法剤の他に、他の治療レジメンがこれらと組み合わされ得る。例えば、第２（第３、第４など）の化学療法剤が、投与され得、ここで、この第２化学療法剤は、別の異なるタキソイド化学療法剤、またはタキソイドではない化学療法剤のいずれかである。例えば、第２の化学療法剤は、タキソイド（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）、ビンカ（例えば、ビノレルビン）、白金化合物（例えば、シスプラチンまたはカルボプラチン）、抗ホルモン剤（例えば、アロマターゼインヒビター、または抗エストロゲン）、ゲムシタビン、カペシタビンなどであり得る。例示的な組み合わせとしては、トキソイド／白金化合物、ゲムシタビン／タキソイド、ゲムシタビン／ビノレルビン、ビノレルビン／タキソイド、カペシタビン／タキソイドなどが挙げられる。異なる化学療法剤の「カクテル」が投与され得る。例示的な化学療法カクテルとしては、以下が挙げられる：ＴＡＣ（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、シクロホスファミド）；ＣＥＦ（経口投与されるシクロフホスファミド、エピルビシン、５−ＦＵ）；ＣＭＦ（シクロホスファミド、メトトレキサート、５−ＦＵ）；用量密な（ｄｏｓｅ  ｄｅｎｓｅ）ＡＣＴ（サイトカイン支持体とともに２週間毎に投与されるＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、Ｇ−ＣＳＦ、シクロホスファミド、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、ＡＣ（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、シクロホスファミド）；ＦＥＣ（５−ＦＵ、エピルビシン、シクロホスファミド、全ての薬物が静脈内投与される）；ＦＡＣ（５−ＦＵ、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、シクロホスファミド）。
【０２９８】
本明細書中の好ましい処置レジメンは、乳腺腫瘍摘除／乳房切除および病理学的に関連するリンパ節を有する腋窩（ａｘｉｌｌｉａｒｙ）の切開、続く、アントラサイクリン＋シクロホスファミド（ＡＣ）を例えば、４サイクル、続いて、約１年間、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）を伴うタキソイドの投与を含む。
【０２９９】
ＨＥＲ２抗体と組み合わされ得る他の治療剤としては、以下の任意の１つ以上が挙げられる：第２の異なるＨＥＲ２抗体（例えば、ペルツツマブのようなＨＥＲ２ヘテロダイマー化インヒビター、または７Ｃ２、７Ｆ３またはそのヒト化改変体のようなＨＥＲ２過剰発現細胞のアポトーシスを誘導するＨＥＲ２抗体）；ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４のような異なる腫瘍関連抗原に指向された抗体；抗ホルモン化合物または内分泌治療剤（例えば、タモキシフェンのような抗エストロゲン化合物、またはアロマターゼインヒビター）；心臓保護剤（治療と関連する任意の心筋機能不全を妨げるかまたは減少させるため）；サイトカイン；ＥＧＦＲインヒビター（例えば、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）またはセツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ））；抗脈管形成剤（特に、商品名ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）でＧｅｎｅｎｔｅｃｈから販売されるベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ））；チロシンキナーゼインヒビター；ＣＯＸインヒビター（例えば、ＣＯＸ−１インヒビターまたはＣＯＸ−２インヒビター）；非ステロイド抗炎症薬、セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター（例えば、Ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ／ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（登録商標）  Ｒ１１５７７７（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎから入手可能）またはＬｏｎａｆａｒｎｉｂ  ＳＣＨ６６３３６（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈから入手可能））；ＨＥＲ２ワクチン（例えば、ＨＥＲ２  ＡｕｔｏＶａｃワクチン（Ｐｈａｒｍｅｘｉａ製）、またはＡＰＣ８０２４タンパク質ワクチン（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ製）、またはＨＥＲ２ペプチドワクチン（ＧＳＫ／Ｃｏｒｉｘａ製））；別のＨＥＲ標的化治療（例えば、トラスツズマブ、セツキシマブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ、ＥＭＤ７２００、ゲフィチニブ、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ＣＰ７２４７１４、ＣＩ１０３３、ＧＷ５７２０１６、ＩＭＣ−１１Ｆ８、ＴＡＫ１６５など）；Ｒａｆおよび／またはｒａｓインヒビター（例えば、ＷＯ  ２００３／８６４６７を参照のこと）；ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注入（ＤＯＸＩＬ（登録商標））；トポイソメラーゼＩインヒビター（例えば、トポテカン）；タキソイド；ＨＥＲ２およびＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼインヒビター（例えば、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）／ＧＷ５７２０１６；ＴＬＫ２８６（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標））；ＥＭＤ−７２００；ＡＢ１００７（第ＸＩＩ因子重鎖抗体、Ｂ７Ｃ９）；エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｉｓ）（ＣＥＲＴＩＣＡＮ（登録商標））；シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）（ラパマイシン、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；体温低下医薬（例えば、アセトアミノフェン、ジフェンヒドラミン、またはメペリジン；造血増殖因子など。
【０３００】
任意の上記の同時に投与される薬剤の適切な投薬量は、現在使用される量であり、薬剤およびＨＥＲ２抗体の組み合わせ作用（相乗作用）に起因して低下され得る。
【０３０１】
上記治療レジメンに加えて、患者は、放射線療法に供され得る。
【０３０２】
好ましくは、投与されるＨＥＲ２抗体は、インタクトな裸の抗体である。しかし、ＨＥＲ２抗体は、細胞傷害剤と結合され得る。好ましくは、結合抗体および／またはその結合抗体が結合する抗原は、細胞によって内在化され、結合する癌細胞を殺傷する際に結合体の治療効力を増加する。好ましい実施形態において、細胞傷害剤は、癌細胞内の核酸を標的とするかまたは妨害する。このような細胞傷害剤の例としては、メイタシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ）、カリチアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎｓ）、リボヌクレアーゼおよびＤＮＡエンドヌクレアーゼが挙げられる。
【０３０３】
（ＶＩ．材料の寄託）
以下のハイブリドーマ細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡ（ＡＴＣＣ）に寄託された：
抗体名称      ＡＴＣＣ番号                    寄託日
７Ｃ２        ＡＴＣＣ  ＨＢ−１２２１５      １９９６年１０月１７日
７Ｆ３        ＡＴＣＣ  ＨＢ−１２２１６      １９９６年１０月１７日
４Ｄ５        ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１０４６３      １９９０年  ５月２４日
２Ｃ４        ＡＴＣＣ  ＨＢ−１２６９７      １９９９年  ４月  ８日
本発明のさらなる詳細は、以下の非限定的な実施例によって説明される。本明細書中の全ての引用文献の開示は、本明細書中において参考として明確に援用される。
【実施例】
【０３０４】
（実施例１）
本実施例は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｂｒｅａｓｔ
ａｎｄ  Ｂｏｗｅｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔ（ＮＳＡＢＰ  Ｂ−３１）およびＮｏｒｔｈ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｇｒｏｕｐ（ＮＣＣＴＧ）Ｉｎｔｅｒｇｒｏｕｐ  Ｎ９８３１乳癌臨床試験において処置されたヒト乳癌被験体において得られた結果のジョイントインターム（ｊｏｉｎｔ  ｉｎｔｅｒｍ）分析に関する。ＮＣＣＴＧ研究は、２０００年６月にその最初の患者を登録し、現在まで３，４０６人の患者を登録している；ＮＳＡＢＰ研究は、２０００年３月に登録を始め、現在まで２，０８５人の患者を登録している。本実施例の合間（ｉｎｔｅｒｉｍ）分析は、３，３００人の患者からの情報に基づいた。これらの試験は、高い危険の手術可能な乳癌に対する補助療法としてのトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））の効力を評価した。
【０３０５】
（研究設計）
ＮＳＡＢＰ  Ｂ−３１研究およびＮＣＣＴＧ  Ｎ９８３１研究の設計は、図４Ａに示される。
【０３０６】
ＮＳＡＢＰ  Ｂ−３１試験において、被験体は、アントラサイクリン（６０ｍｇ／ｍ２）およびシクロホスファミド（６００ｍｇ／ｍ２）で、３週間毎に４サイクル（ｑ  ３ｗｋ×４）で処置され、次いで、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））（１７５ｍｇ／ｍ２）、３週間毎に４サイクル（ｑ  ３ｗｋ×４）（集団  １）またはパクリタキセル（１７５ｍｇ／ｍ２）３週間毎に４サイクルおよびトラスツズマブ（４ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ負荷用量（ＬＤ）、４週間）、続いて、５１週間、２ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ維持用量（集団  ２）のいずれかを受容した。
【０３０７】
ＮＣＣＴＧ  Ｎ９８３１試験（これは、ＮＳＡＢＰ  Ｂ−３１試験の修正版である）において、以下の処置プロトコルを使用した：
集団  Ａ：アントラサイクリン（６０ｍｇ／ｍ２）およびシクロホスファミド（６００ｍｇ／ｍ２）、３週間毎に４サイクル（ｑ  ３ｗｋ×４）、続いて、パクリタキセル（８０ｍｇ／ｍ２／ｗｋ）１２週間。
【０３０８】
集団  Ｂ：アントラサイクリン（６０ｍｇ／ｍ２）およびシクロホスファミド（６００ｍｇ／ｍ２）、３週間毎に４サイクル（ｑ  ３ｗｋ×４）、続いて、パクリタキセル（８０ｍｇ／ｍ２／ｗｋ）１２週間、続いて、トラスツズマブ（４ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ負荷用量（ＬＤ）、４週間および２ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ維持用量、５１週間）。
【０３０９】
集団  Ｃ：アントラサイクリン（６０ｍｇ／ｍ２）およびシクロホスファミド（６００ｍｇ／ｍ２）、３週間毎に４サイクル（ｑ  ３ｗｋ×４）、続いて、パクリタキセル（８０ｍｇ／ｍ２／ｗｋ）１２週間、およびトラスツズマブ（４ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ負荷用量（ＬＤ）、４週間および２ｍｇ／ｋｇ／ｗｋ維持用量、５１週間）。
【０３１０】
２つの研究設計のジョイント分析において使用されるアームは、図４Ｂに示される。
【０３１１】
ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、静脈内（ＩＶ）投与のための滅菌、白色〜淡黄色保存剤を含まない凍結乾燥粉末である。それぞれのＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）バイアルの名目内容量は、４４０ｍｇトラスツズマブ、４００ｍｇ  α，α−トレハロース二水和物、９．９ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン−ＨＣｌ、６．４ｍｇ  Ｌ−ヒスチジン、および１．８ｍｇポリソルベート  ２０，ＵＳＰである。２０ｍＬの注射のための静菌水（ＢＷＦＩ）（保存剤として１．１％ベンジルアルコールを含む）の再構成は、約６．０のｐＨで、２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含む多用量溶液を生じる。ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）は、４ｍｇ／ｋｇの負荷用量、続く、毎週の２ｍｇ／ｋｇの維持用量として投与された。
【０３１２】
これらの試験に適するために、患者は、侵襲性乳癌、乳腺腫瘤摘出または全体的な乳房切除のいずれかおよび病理学的に関連するリンパ節を有する腋窩（ａｘｉｌｌｉａｒｙ）の切開を有することが必要であった。プロトコル（Ｎ９８３１において修正した）は、高い危険の節ネガティブ患者の協力を可能にした。患者は、局所的に進行した疾患または遠位の疾患を有することが可能でなく、正常な血液学的機能、肝臓機能および腎臓機能を有し、以前のアントラサイクリン治療もタキサン治療も受けておらず、有意な感覚神経障害／運動神経障害を有さなかった。患者は、中心的に確証された（Ｎ９８３１）かまたは認証された参照ラボ（Ｂ３１）によって、ＦＩＳＨによりＨＥＲ２陽性または免疫組織化学（ＩＨＣ）により＋＋＋であった。
【０３１３】
これらの研究における被験体についての患者の特性および腫瘍の特性を図５に示す。ジョイント分析集団は、アジュバント臨床試験に含まれるより典型的な被験体と比較して、再発および死の非常に高い危険の群を示す。特に、被験体は、より若く（中央値年齢＝４８）；より大きな腫瘍を有し（６０％が２ｃｍより大きい）；より関連したリンパ節を有し（１４〜１５％が１０より多くの関連するリンパ節を有した）；そして全てが、ＨＥＲ２陽性（ＨＥＲ２＋）であった。処置集団の結果は、現在利用可能な化学療法で非常に悪いことが予期された。
【０３１４】
（結果）
これらの試験の最初の終点は、処置の意図の原理に従って分析して、疾患を含まない生存（ＤＦＳ）であった。すなわち、患者は、割り当てられた治療に基づいて評価された。第２の終点は、全般的な生存（ＯＳ）および第１の遠位の再発の時間であった。明確な分析は、７１０のＤＦＳ事象後にスケジュールされた。最初のインターム分析は、３５５のＤＦＳ事象後、次いで、６ヶ月毎の後にスケジュールされた；両方の試験での３９５の事象の合計を本明細書中に報告する。試験は、等価物がｐ＝０．０００５（２ｐ＝０．００１）で拒絶された場合のみ、停止されるべきであった。
【０３１５】
合わせたＢ３１およびＮ９８３１研究についてのＤＦＳを図６に示す。
【０３１６】
図７は、全てのデータ（両方の研究から）に対しての、年齢、ホルモンレセプター状態、腫瘍サイズ、および陽性な節の数に基づいて分類された種々の患者群についてのＤＦＳデータを表し、ハザード比として表現される。２つの研究（Ｎ９８３１およびＢ０３１、それぞれ）についての個々の結果を、プロットの底部に示す。
【０３１７】
図８は、個々に、Ｎ９８３１試験およびＢ−３１試験についてのＤＦＳの結果を示す。
【０３１８】
Ｎ９８３１およびＢ−３１の組み合わせた結果についての最初の遠位再発の時間を図９に示す。
【０３１９】
図１０は、アントラサイクリンおよびシクロホスファミド（ＡＣ）、続く、パクリタキセルおよびトラスツズマブ（ＴＨ）処置で処置された患者と比較した、アントラサイクリンおよびシクロホスファミド（ＡＣ）、続く、パクリタキセル（Ｔ）で処置された患者についての、ランダム化試験Ｂ３１／Ｎ９８３１についての遠位再発の危険を示す。この図は、ＴＨ処置を受けた群において、遠位再発の危険の劇的な減少を示す。
【０３２０】
同様に、図１１に示す生存データは、ＴＨ処置群の患者の生存が、Ｔ処置群の患者の生存を有意に超えたことを示す。ランダム化から３年で、ＡＣ＋ＴＨ群は、ＡＣ＋Ｔ群の９２％に対して、９４％であった。差異は、４年においてさらに大きかった：ＡＣ＋ＴＨ群で９１％  対  ＡＣ＋Ｔ群で８７％。
【０３２１】
２つの研究についての効力終点分析を、図１２に要約する。
【０３２２】
評価可能なコホートにおける心臓事象の累積の発生率を、図１３に示し、要約する。
【０３２３】
（結論）
節陽性ＨＥＲ２陽性乳癌について、ＡＣ化学療法に続くパクリタキセルで同時に与えられたトラスツズマブは、最初の乳癌事象の危険を３年で５２％減少させた。
【０３２４】
相対的な危険の減少の利益は、分析される患者の全てのサブセットにおいて存在し、類似の大きさである。
【０３２５】
トラスツズマブの添加は、３年で５３％、遠位の再発の可能性を減少させ、遠位の転移を発生する危険性を時間にわたって減少するようであった。
【０３２６】
２年の中央値フォローアップの結果は、３３％の相対的危険の減少という統計的に有意な生存の利点を示す。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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