(57)【要約】【課題】長期間にわたって安定的に細胞を培養できる細胞培養用積層体を提供する。【解決手段】細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、上記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備え、２３℃、０％ＲＨの条件で測定される、上記基材の酸素透過度が、１００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、ＪＩＳ  Ｋ７１６１に準拠し、２３℃、引張速度１０ｍｍ／ｍｉｎの条件で測定される、上記基材の引張強度が１０ＭＰａ以上１００ＭＰａ以下である細胞培養用積層体。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、
前記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備え、
２３℃、０％ＲＨの条件で測定される、前記基材の酸素透過度が、１００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、
ＪＩＳ  Ｋ７１６１に準拠し、２３℃、引張速度１０ｍｍ／ｍｉｎの条件で測定される、前記基材の引張強度が１０ＭＰａ以上１００ＭＰａ以下である細胞培養用積層体。
【請求項２】
請求項１に記載の細胞培養用積層体において、
前記コラーゲンゲル膜の目付け量が、０．０１ｍｇ／ｃｍ２以上、０．４ｍｇ／ｃｍ２以下である細胞培養用積層体。
【請求項３】
請求項１または２に記載の細胞培養用積層体において、
前記基材がフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体。
【請求項４】
請求項３に記載の細胞培養用積層体において、
前記フッ素含有環状オレフィンポリマーが下記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有する細胞培養用積層体。
【化１】
2020000176.tif 000007
（前記一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち少なくとも１つが、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル基、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ基およびフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択されるフッ素含有基であり、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基および炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択される有機基であり、Ｒ１〜Ｒ４は同一でも異なっていてもよく、またＲ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよく、ｎは０または１の整数を表す。）
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか一項に記載の細胞培養用積層体において、
前記基材の厚みが１０μｍ以上、１０００μｍ以下である細胞培養用積層体。
【請求項６】
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、
前記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備え、
前記基材がフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体。
【請求項７】
請求項６に記載の細胞培養用積層体において、
前記フッ素含有環状オレフィンポリマーが下記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有する細胞培養用積層体。
【化２】
2020000176.tif 000008
（前記一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち少なくとも１つが、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル基、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ基およびフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択されるフッ素含有基であり、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基および炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択される有機基であり、Ｒ１〜Ｒ４は同一でも異なっていてもよく、またＲ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよく、ｎは０または１の整数を表す。）
【請求項８】
請求項６または７に記載の細胞培養用積層体において、
前記コラーゲンゲル膜の目付け量が、０．０１ｍｇ／ｃｍ２以上、０．４ｍｇ／ｃｍ２以下である細胞培養用積層体。
【請求項９】
請求項６乃至８のいずれか一項に記載の細胞培養用積層体において、
前記基材の厚みが１０μｍ以上、１０００μｍ以下である細胞培養用積層体。
【請求項１０】
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、前記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備える細胞培養用積層体に用いられる前記基材であって、
２３℃、０％ＲＨの条件で測定される、前記基材の酸素透過度が、１００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、
ＪＩＳ  Ｋ７１２７：１９９９に準拠し、２３℃、引張速度１０ｍｍ／ｍｉｎの条件で測定される、前記基材の引張強度が１ＭＰａ以上１００ＭＰａ以下である細胞培養用積層体用基材。
【請求項１１】
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、前記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備える細胞培養用積層体に用いられる前記基材であって、
前記基材がフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体用基材。
【請求項１２】
請求項１１に記載の細胞培養用積層体用基材において、
前記フッ素含有環状オレフィンポリマーが下記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体用基材。
【化３】
2020000176.tif 000009
（前記一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち少なくとも１つが、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル基、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ基およびフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択されるフッ素含有基であり、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基および炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択される有機基であり、Ｒ１〜Ｒ４は同一でも異なっていてもよく、またＲ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよく、ｎは０または１の整数を表す。）
【請求項１３】
請求項１乃至９のいずれか一項に記載の細胞培養用積層体を備え、細胞培養に用いられる医療器具。
【請求項１４】
請求項１３に記載の医療器具において、
当該医療器具が容器であり、
前記細胞培養用積層体における前記基材が前記容器の底面に位置している医療器具。
【請求項１５】
請求項１３または１４に記載の医療器具を使用するための方法であって、
前記コラーゲンゲル膜を再水和する工程を含む医療器具の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞培養用積層体、細胞培養用積層体用基材、医療器具および医療器具の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
創薬および動物実験代替法の研究には、様々な機能細胞を用いて生体を反映した３次元組織モデルを簡便に構築できる培養システムの開発が長く求められてきた。特にコラーゲンゲルを細胞の培養担体に用いる３次元培養技術は、血管新生モデル、癌浸潤モデル、上皮間充織モデルなどを再構築するのに有用であるが、幅広く普及するには至っていなかった。
その理由としては、従来のコラーゲンゲルは、低密度の線維で構成されるため柔らかく取り扱いが困難であること、また、不透明であるため培養細胞の位相差顕微鏡観察は必ずしも容易でないこと等が考えられてきた。
【０００３】
このような問題を解決するためにコラーゲンゲルの物性を、強度と透明性に優れた薄膜に再現性良く変換する技術が開示されている（特許文献１）。この中で、低温でゲル化に至適な塩濃度と水素イオン濃度（ｐＨ）を付与したコラーゲンのゾルを培養シャーレ内に注入して、さらに至適な温度に保温することでコラーゲンのゾルをゲル化した後、低温で十分に乾燥させることで自由水のみならず結合水も徐々に除去してガラス化し、さらに再水和することで、所望の物性を有するコラーゲンゲルを調整する方法が開示されている。
【０００４】
また、ハイドロゲルであればコラーゲン以外の成分からなるゲルでも、ガラス化した後に再水和することで、ゲルを安定化した新しい物性状態に変換することができる特徴から、このガラス化工程を経て作製された新しい物性状態のゲルをビトリゲル（ｖｉｔｒｉｇｅｌ）と称し（非特許文献１）、広く、医療、創薬などの細胞を取り扱う分野への展開を意図して、このコラーゲンビトリゲル薄膜に関する技術がさらに発展している。
【０００５】
これらは、例えば、コラーゲンビトリゲル薄膜の透明性、作製再現性を向上させるための技術（特許文献２）や、コラーゲンビトリゲルを膜形状ではなく糸状あるいは管状の形状に作製する技術（特許文献３）や、磁気を利用してコラーゲンビトリゲルを固定あるいは移動する技術（特許文献４）などであり、細胞を固定化する為の培養床として、培養した細胞の観察手法の拡張や、特定の利用法に応じたコラーゲンビトリゲル、及びそのシステムの最適化が検討されている。
【０００６】
従来のコラーゲンビトリゲル膜を枠状支持体の片側に固定化した容器（コラーゲンビトリゲル膜チャンバーと称す。）の作製法では、特定の形状で作製された治具の底面に平面状コラーゲンビトリゲル膜乾燥体（特許文献５）を貼り付けた後に、不要部分を切除して作製されている。この方法では、培養シャーレの底面に固定化されたコラーゲンビトリゲル膜とは異なり、治具の形状により様々な形態のコラーゲンビトリゲル膜チャンバーを作製することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平８−２２８７６８号公報
【特許文献２】国際公開第２００５／０１４７７４号
【特許文献３】特開２００７−２０４８８１号公報
【特許文献４】特開２００７−１８５１０７号公報
【特許文献５】特開２０１２−１１５２６２号公報
【特許文献６】特開２０１７−１７６８２９号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｔａｋｅｚａｗａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１３：４６３−４７３，２００４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、上記のチャンバーを構成するコラーゲンビトリゲル膜では、膜強度を維持するために単位面積あたり０．５ｍｇ／ｃｍ２のコラーゲンビトリゲル膜を使用する必要があり、製造コストの削減には限界があった。また、ビトリゲル膜底面（裏面とも称す）からの酸素供給を可能にする、当該ビトリゲル膜単層での液相気相の界面培養では、コラーゲンビトリゲル膜が撓む欠点があり、実質、例えば、ＨｅｐＧ２細胞の培養において、コラーゲンビトリゲル膜の撓みを許容できるレベルでは単層膜状態で５?７日程度しか培養に適応できないことを知見した。
【００１０】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、長期間にわたって安定的に細胞を培養できる細胞培養用積層体を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明によれば、以下に示す細胞培養用積層体、細胞培養用積層体用基材、医療器具および医療器具の使用方法が提供される。
【００１２】
［１］
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、
上記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備え、
２３℃、０％ＲＨの条件で測定される、上記基材の酸素透過度が、１００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、
ＪＩＳ  Ｋ７１６１に準拠し、２３℃、引張速度１０ｍｍ／ｍｉｎの条件で測定される、上記基材の引張強度が１０ＭＰａ以上１００ＭＰａ以下である細胞培養用積層体。
［２］
上記［１］に記載の細胞培養用積層体において、
上記コラーゲンゲル膜の目付け量が、０．０１ｍｇ／ｃｍ２以上、０．４ｍｇ／ｃｍ２以下である細胞培養用積層体。
［３］
上記［１］または［２］に記載の細胞培養用積層体において、
上記基材がフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体。
［４］
上記［３］に記載の細胞培養用積層体において、
上記フッ素含有環状オレフィンポリマーが下記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有する細胞培養用積層体。
【化１】
2020000176.tif 000002
（上記一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち少なくとも１つが、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル基、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ基およびフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択されるフッ素含有基であり、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基および炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択される有機基であり、Ｒ１〜Ｒ４は同一でも異なっていてもよく、またＲ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよく、ｎは０または１の整数を表す。）
［５］
上記［１］乃至［４］のいずれか一つに記載の細胞培養用積層体において、
上記基材の厚みが１０μｍ以上、１０００μｍ以下である細胞培養用積層体。
［６］
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、
上記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備え、
上記基材がフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体。
［７］
上記［６］に記載の細胞培養用積層体において、
上記フッ素含有環状オレフィンポリマーが下記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有する細胞培養用積層体。
【化２】
2020000176.tif 000003
（上記一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち少なくとも１つが、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル基、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ基およびフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択されるフッ素含有基であり、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基および炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択される有機基であり、Ｒ１〜Ｒ４は同一でも異なっていてもよく、またＲ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよく、ｎは０または１の整数を表す。）
［８］
上記［６］または［７］に記載の細胞培養用積層体において、
上記コラーゲンゲル膜の目付け量が、０．０１ｍｇ／ｃｍ２以上、０．４ｍｇ／ｃｍ２以下である細胞培養用積層体。
［９］
上記［６］乃至［８］のいずれか一つに記載の細胞培養用積層体において、
上記基材の厚みが１０μｍ以上、１０００μｍ以下である細胞培養用積層体。
［１０］
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、上記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備える細胞培養用積層体に用いられる上記基材であって、
２３℃、０％ＲＨの条件で測定される、上記基材の酸素透過度が、１００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、
ＪＩＳ  Ｋ７１２７：１９９９に準拠し、２３℃、引張速度１０ｍｍ／ｍｉｎの条件で測定される、上記基材の引張強度が１ＭＰａ以上１００ＭＰａ以下である細胞培養用積層体用基材。
［１１］
細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、上記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備える細胞培養用積層体に用いられる上記基材であって、
上記基材がフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体用基材。
［１２］
上記［１１］に記載の細胞培養用積層体用基材において、
上記フッ素含有環状オレフィンポリマーが下記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む細胞培養用積層体用基材。
【化３】
2020000176.tif 000004
（上記一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち少なくとも１つが、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル基、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ基およびフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択されるフッ素含有基であり、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基および炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択される有機基であり、Ｒ１〜Ｒ４は同一でも異なっていてもよく、またＲ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよく、ｎは０または１の整数を表す。）
［１３］
上記［１］乃至［９］のいずれか一つに記載の細胞培養用積層体を備え、細胞培養に用いられる医療器具。
［１４］
上記［１３］に記載の医療器具において、
当該医療器具が容器であり、
上記細胞培養用積層体における上記基材が上記容器の底面に位置している医療器具。
［１５］
上記［１３］または［１４］に記載の医療器具を使用するための方法であって、
上記コラーゲンゲル膜を再水和する工程を含む医療器具の使用方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、長期間にわたって安定的に細胞を培養できる細胞培養用積層体を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例２に記載の２１日間培養後ＨｅｐＧ２細胞の位相差顕微鏡写真を示す図である。
【図２】比較例１に記載の２１日間培養後ＨｅｐＧ２細胞の位相差顕微鏡写真を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明の実施形態について、詳細に説明する。
【００１６】
本明細書中、数値範囲の説明における「ａ〜ｂ」との表記は、特に断らない限り、ａ以上ｂ以下のことを表す。例えば、「１〜５質量％」とは「１質量％以上５質量％以下」の意である。また、「−ｃ以上ｄ以下」との表記は、特に断らない限り、ゼロを含むことを表す。
【００１７】
本明細書における基（原子団）の表記において、置換か無置換かを記していない表記は、置換基を有しないものと置換基を有するものの両方を包含するものである。例えば「アルキル基」とは、置換基を有しないアルキル基（無置換アルキル基）のみならず、置換基を有するアルキル基（置換アルキル基）をも包含するものである。
【００１８】
（積層体）
本実施形態に係る細胞培養用積層体は、細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、上記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備え、２３℃、０％ＲＨの条件で測定される、上記基材の酸素透過度が、１００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、ＪＩＳ  Ｋ７１６１に準拠し、２３℃、引張速度１０ｍｍ／ｍｉｎの条件で測定される、上記基材の引張強度が１０ＭＰａ以上１００ＭＰａ以下である。
また、本実施形態に係る細胞培養用積層体は、細胞培養床として用いられるコラーゲンゲル膜と、上記コラーゲンゲル膜を支持するための基材と、を備え、上記基材がフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む構成であってもよい。
本実施形態に係る細胞培養用積層体によれば、上記構成を備えることによって、長期間にわたって安定的に細胞を培養することができる。
また、本実施形態に係る細胞培養用積層体に用いられる上記基材は酸素透過性および強度のバランスに優れているため、コラーゲンゲル膜の底面からの酸素供給を良好に保ちながら、コラーゲンゲル膜の厚みを薄くすることができ、さらにコラーゲンゲル膜の撓みを抑制することができる。そのため、コラーゲンビトリゲル膜等のコラーゲンゲル膜を上記基材上に配置することで単位面積あたりのコラーゲンゲル膜の使用量を削減し、撓みの無い積層体を提供することができる。さらに、細胞の培養用の容器として長期間の培養に適応できる、当該積層体を具備した医療器具を提供することができる。
【００１９】
以下、本実施形態に係る細胞培養用積層体を構成するコラーゲンゲル膜の好ましい形態であるコラーゲンビトリゲル膜およびコラーゲンビトリゲル膜乾燥体（両者をまとめてコラーゲンビトリゲル膜と呼ぶこともある。）について説明する。なお、以下の説明では、コラーゲンゲル膜として、コラーゲンビトリゲル膜乾燥体やコラーゲンビトリゲル膜に焦点を当てて説明しているが、本実施形態に係る細胞培養用積層体は酸素透過性および強度のバランスに優れる基材に主な特徴があるためコラーゲンゲル膜としてはコラーゲンビトリゲル膜乾燥体やコラーゲンビトリゲル膜に限定されず、本実施形態に係るコラーゲンゲル膜にはビトリゲル膜ではないコラーゲンゲル膜やコラーゲンゲル膜の乾燥体も使用することが可能である。ただし、本実施形態に係るコラーゲンゲル膜としては、ゲル物性に優れる観点から、コラーゲンビトリゲル膜およびコラーゲンビトリゲル膜乾燥体が好ましい。
創薬および動物実験代替法の研究では、様々な機能細胞を用いて生体を反映した３次元組織モデルと評価システムを構築し、生体を構成する組織や器官の機能を外挿する研究が広く行われている。細胞を培養する際の足場として、これまでにも様々な生体高分子が研究されている。中でもコラーゲンゲルは、安全性とその取扱いの容易さから広く利用されてきた。
【００２０】
「ビトリゲル（Ｖｉｔｒｉｇｅｌ）（登録第５６０２０９４号商標）」とは竹澤らにより命名された新しい学術用語で、従来の細胞外マトリックス成分等のハイドロゲルをガラス化（ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）した後に再水和して得られる安定した状態にあるゲルと定義されている（非特許文献１）。細胞外マトリックス成分の一つであるコラーゲンから作製されるコラーゲンビトリゲルは、高密度のコラーゲン線維網で構成される。なお、「ハイドロゲル」とは、高分子鎖が化学結合によって網目状構造をとり、その網目に多量の水を保有した物質を示し、より具体的には、天然物由来の高分子や合成高分子の人工素材に架橋を導入してゲル化させたものをいう。
また、「ハイドロゲル膜乾燥体」とは、ハイドロゲルから自由水を完全に除去した後、膜状にガラス化が進行しているものをいう。さらに、「ビトリゲル膜」とは、このハイドロゲル膜乾燥体を再水和させたものをいう。そして、「ビトリゲル膜乾燥体」とは、このビトリゲル膜を再びガラス化したものをいう。ビトリゲル膜乾燥体は、必要なときに再水和することで、ビトリゲル膜に変換することができる。
しかしながら、通常のビトリゲル膜乾燥体は再水和して使用する際に、生体高分子材料としての高分子鎖が網目構造を有し、水和された状態のゲルであることから担体としての形状保持に乏しく、ガラス、プラスチックなどの支持体を必要とし、また、ビトリゲル膜乾燥体自体も膜としての厚みは比較的厚く用いる必要があった。
【００２１】
さらには、通常用いられてきた支持体としての材料は、あくまでビトリゲル膜の形状を保持する目的で適応されており、細胞増殖や培養した細胞の機能発現などをサポートする基材の機能についてはこれまで目を向けられなかった。また、本発明者らの検討によって、従来の支持体では、細胞の増殖が困難である場合が有ることが分かってきた。
【００２２】
上記の状況下、ビトリゲル膜乾燥体の支持基材として、酸素透過度および引張強度が上記範囲内である基材、あるいは一般式（１）に示す構造単位を含むフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む基材を用いると、例えば、後述するＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝がん細胞株）の培養において、長期に渡り良好な生存率を維持して細胞が増殖するのみならず、薬物代謝酵素ＣＹＰ３Ａ４の活性が高い状態で、毛細胆管様構造を形成して長期間にわたり維持できることを知見した。
【００２３】
上記の結果が得られるのは、コラーゲンビトリゲル膜乾燥体の支持基材が、再水和したコラーゲンビトリゲル膜を撓ませない程度の強度を有し、かつ、優れた酸素透過性を示すことにより、コラーゲンビトリゲル膜の支持基材の裏面から細胞が生存し単層で均一に増殖するために必要な酸素が供給されることで上記の機能が発現していると本発明らは考えている。
【００２４】
コラーゲンビトリゲル膜が撓まない程度の基材強度とは、ＪＩＳ  Ｋ７１６１に準拠し、２３℃、引張速度１０ｍｍ／ｍｉｎの条件で測定される、上記基材の引張強度が、好ましくは１０ＭＰａ以上、１００ＭＰａ以下であり、より好ましくは１２ＭＰａ以上、９０ＭＰａ以下であり、さらに好ましくは１５ＭＰａ以上、８０ＭＰａ以下である。この範囲の強度を有する材料をコラーゲンビトリゲル膜乾燥体の支持基材に用いることで、再水和した際のコラーゲンビトリゲル膜の撓みが抑制され、高い平坦性を維持した培養床としてのコラーゲンビトリゲル膜の適応が可能になる。
【００２５】
また、細胞を培養する際の容器底面からの酸素供給について、本実施形態の積層体としての基材の酸素透過度（２３℃、０％ＲＨの条件で測定）は、好ましくは１００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上、２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、より好ましくは１２００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上、２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下であり、さらに好ましくは２０００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以上、２００００ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）以下である。この範囲の酸素透過度を有する材料をコラーゲンビトリゲル膜乾燥体の支持基材に用いることで、細胞直下のコラーゲンビトリゲル膜層のさらに下方に配置された基材の裏面（細胞方向を表面とする。）から、より効率的に酸素を培養系内に提供することができ細胞はより一層長期に渡り生存し、細胞種に応じた機能が発現する。
【００２６】
さらに、本実施形態の積層体は上記の強度を有する材料を、コラーゲンビトリゲル膜の支持基材とすることで、膜強度を持たせる必要性からのコラーゲン使用量を低減でき、かつ、使用形態によっては基材裏面からの酸素供給能により、さらにコラーゲン使用量を低減することができる。この際のコラーゲンビトリゲル膜乾燥体のコラーゲン使用量（目付け量とも呼ぶ。）は単位面積あたり、好ましくは０．０１ｍｇ／ｃｍ２以上、０．４ｍｇ／ｃｍ２以下であり、より好ましくは０．０２ｍｇ／ｃｍ２以上、０．３ｍｇ／ｃｍ２以下であり、さらに好ましくは０．０３ｍｇ／ｃｍ２以上、０．２ｍｇ／ｃｍ２以下である。この範囲で調整されたコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を用いることで、細胞の培養床としての機能をより効果的に発揮でき、また、本実施形態の積層体を具備した医療器具を作製する際のコスト低減に寄与する。
ここで、本実施形態において、コラーゲンゲル膜の目付け量は、コラーゲンゲル膜乾燥体の目付け量をいう。
【００２７】
（フッ素含有環状オレフィンポリマー）
本実施形態に係る細胞培養用積層体において、コラーゲンゲル膜を支持するための基材は、生体に対して安全な材料であれば特に限定されないが、好ましくはフッ素含有環状オレフィンポリマーを含み、より好ましくは下記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを含む。
【００２８】
【化４】
2020000176.tif 000005
【００２９】
一般式（１）中、Ｒ１〜Ｒ４のうち少なくとも１つは、フッ素、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルキル基、フッ素を含有する炭素数１〜１０のアルコキシ基およびフッ素を含有する炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択されるフッ素含有基であり、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４は、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基および炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基からなる群より選択される有機基であり、Ｒ１〜Ｒ４は同一でも異なっていてもよく、またＲ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよく、ｎは０または１の整数を表す。
【００３０】
一般式（１）に示す本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマーは、ＩＳＯ１０９９３「医療機器の生物学的評価」に準拠した評価で、その安全性を確認している生体適合性材料である（詳細は特許文献６を参照）。また、主鎖に炭化水素構造を有し、側鎖の主鎖との反対側にフッ素原子、またはフッ素原子を有する置換基を有する。これにより、環状ポリマーとしての非晶質な特性を有し成型性に優れ、環状構造に起因した独特な分極構造を持つことで、フィルムやシート状に加工した部材は優れた酸素、炭酸ガスなどのガス透過性を示す。さらに、自家蛍光を発する物質を含有せず、フッ素樹脂の特性としての低屈折率、高透明な特徴を有する。例えば、培養した細胞の位相差顕微鏡、蛍光顕微鏡などによる形態観察を、細胞をガラス媒体に移すことなく、直接、一般式（１）に示すフッ素含有環状オレフィンポリマーからなる基材の上で実施することができる。
【００３１】
さらに、プラスチック材料の酸素透過性と膜強度に目を向ければ、優れた酸素透過性材料であるポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）は、高強度銘柄であっても数ＭＰａ程度の強度であり、コラーゲンビトリゲル膜の支持体として好適ではない。また、古くから細胞培養容器の材料として使用されているポリスチレンは、酸素透過性に乏しく良好な酸素透過性を発現させるためには加工品の厚みを１０μｍ以下程度まで薄くする必要があり、再水和したコラーゲンビトリゲル膜の撓みを抑制することができなくなるばかりか、基材としても脆くなり医療器具としての積層体を作製できない。
【００３２】
一般式（１）に示すフッ素含有環状オレフィンポリマーは、５０℃以上のガラス転移温度を有する非晶質な樹脂である。通常、細胞培養で用いられる３７℃の温度領域においては固体としての特性を示す。また、上記したように優れた酸素透過性を示すことで、コラーゲンビトリゲル膜を支持するのに十分な強度を発現可能な厚みのフィルムやシートの加工が可能となる。
【００３３】
一般式（１）において、Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基である場合、具体的には、フッ素；フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロエチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、ヘプタフルオロイソプロピル基、ヘキサフルオロ−２−メチルイソプロピル基、ペルフルオロ−２−メチルイソプロピル基、ｎ−ペルフルオロブチル基、ｎ−ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロシクロペンチル基等のアルキル基の水素の一部または全てがフッ素で置換された炭素数１〜１０のアルキル基；フルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基、トリフルオロエトキシ基、ペンタフルオロエトキシ基、ヘプタフルオロプロポキシ基、ヘキサフルオロイソプロポキシ基、ヘプタフルオロイソプロポキシ基、ヘキサフルオロ−２−メチルイソプロポキシ基、ペルフルオロ−２−メチルイソプロポキシ基、ｎ−ペルフルオロブトキシ基、ｎ−ペルフルオロペントキシ基、ペルフルオロシクロペントキシ基等のアルコキシ基の水素の一部または全てがフッ素で置換された炭素数１〜１０のアルコキシ基；フルオロメトキシメチル基、ジフルオロメトキシメチル基、トリフルオロメトキシメチル基、トリフルオロエトキシメチル基、ペンタフルオロエトキシメチル基、ヘプタフルオロプロポキシメチル基、ヘキサフルオロイソプロポキシメチル基、ヘプタフルオロイソプロポキシメチル基、ヘキサフルオロ−２−メチルイソプロポキシメチル基、ペルフルオロ−２−メチルイソプロポキシメチル基、ｎ−ペルフルオロブトキシメチル基、ｎ−ペルフルオロペントキシメチル基、ペルフルオロシクロペントキシメチル基等のアルコキシアルキル基の水素の一部または全てがフッ素で置換された炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基等が挙げられる。
【００３４】
また、Ｒ１〜Ｒ４は互いに結合して環構造を形成していてもよい。例えば、ペルフルオロシクロアルキル、酸素を介したペルフルオロシクロエーテル等の環を形成してもよい。
【００３５】
Ｒ１〜Ｒ４がフッ素含有基ではない場合、Ｒ１〜Ｒ４として具体的には、水素；メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、２−メチルイソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル、シクロペンチル基等の炭素数１〜１０のアルキル基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペントキシ基等の炭素数１〜１０のアルコキシ基；メトキシメチル基、エトキシメチル基、プロポキシメチル基、ブトキシメチル基、ペントキシメチル基等の炭素数２〜１０のアルコキシアルキル基等が挙げられる。
【００３６】
一般式（１）のＲ１〜Ｒ４としては、フッ素；フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロエチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ヘキサフルオロイソプロピル基、ヘプタフルオロイソプロピル基、ヘキサフルオロ−２−メチルイソプロピル基、ペルフルオロ−２−メチルイソプロピル基、ｎ−ペルフルオロブチル基、ｎ−ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロシクロペンチル基等のアルキル基の水素の一部または全てがフッ素で置換された炭素数１〜１０のフルオロアルキル基；が好ましい。
【００３７】
フッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（１）で表される構造単位一種のみからなるものでもよく、一般式（１）のＲ１〜Ｒ４の少なくとも１つが互いに異なる二種以上の構造単位からなるものであってもよい。また、フッ素含有環状オレフィンポリマーは、一般式（１）で表される構造単位の一種または二種以上と、一般式（１）で表される構造単位とは異なる構造単位とを含むポリマー（共重合体）であってもよい。
以下、本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマーの具体例を挙げるが、フッ素含有環状オレフィンポリマーはこれらのみに限定されるものではない。
【００３８】
ポリ（１−フルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−１−フルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ジフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロエチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，３ａ，６ａ−オクタフルオロシクロペンチル−４，６−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，４，４，３ａ，７ａ−デカフルオロシクロヘキシル−５，７−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロエチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（１−トリフルオロメチル−２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロ−シクロペンチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（（１，１，２−トリフルオロ−２−ペルフルオロブチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−ペルフルオロエチル−２，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペルフルオロプロパニル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ヘキシル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−オクチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘプチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロオクチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロデカニル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロブチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロヘキシル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メトキシ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，３，３，３ａ，６ａ−ヘキサフルオロフラニル−３，５−シクロペンチレンエチレン）等。
【００３９】
ポリ（１−フルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−１−フルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ジフルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ヘプタフルオロ−ｉｓｏ―プロピル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロエトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロプロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロプロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロプロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロエトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（（１，１，２−トリフルオロ−２−ペルフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−ペルフルオロエトキシ−２，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペルフルオロプロポキシ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペンタフルオロエチル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ヘキシル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−オクチル−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘプトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロオクトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロデトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロペントキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロブトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−ペルフルオロヘトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロへトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メトキシ−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２’，２’，２’，−トリフルオロエトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−（２’，２’，２’−トリフルオロエトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−（２’，２’，２’，−トリフルオロエトキシ）−２，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−２−トリフルオロメトキシ−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ヘキシル−２−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−オクチル−２−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，７’−トリデカフルオロヘプトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，８’，８’，８’−ペンタデカフルオロオクトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，８’，８’，９’，９’，９’−ヘプタデカフルオロデトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメトキシ−２−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−３，５−シクロペンチレンエチレン）等。
【００４０】
ポリ（３−フルオロ−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−フルオロ−３−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−３−フルオロ−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３−ジフルオロ−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロエチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３−ビス（トリフルオロメチル）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビストリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロプロピル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−ペルフルオロプロピル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−ペルフルオロプロピル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−９−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３，４−ビス（トリフルオロメチル）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（２，３，３，４，４，５，５，６−オクタフルオロ−９，１１−テトラシクロ［５．５．１．０２，６．０８，１２］トリデカニレンエチレン）、ポリ（２，３，３，４，４，５，５，６，６，７−デカフルオロ−１０，１２−テトラシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３］テトラデカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジメチル−３−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−４−ペルフルオロブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメチル−４−ペルフルオロブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−フルオロ−３−ペルフルオロエチル−４，４−ビス（トリフルオロメチル）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−ペルフルオロプロパニル−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロヘキシル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−ペルフルオロヘキシル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−ペルフルオロヘキシル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ヘキシル−４−ペルフルオロヘキシル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−オクチル−４−ペルフルオロヘキシル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロヘプチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロデカニル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−４−ペルフルオロペンチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメチル−４−ペルフルオロブチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−３−ペルフルオロヘキシル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメチル−４−ペルフルオロペンチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビス（ペルフルオロブチル）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビス（ペルフルオロヘキシル）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メトキシ−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−４−トリフルオロメチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（４−フルオロ−５−トリフルオロメチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−フルオロ−５−トリフルオロメチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４−ジフルオロ−５−トリフルオロメチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロエチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４−ビス（トリフルオロメチル）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−５−トリフルオロメチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ビス（トリフルオロメチル）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロプロピル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロプロピル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロプロピル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−ペルフルオロプロピル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４，５−ビス（トリフルオロメチル）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（３，４，４，５，５，６，６，７−オクタフルオロ−１２，１４−ヘキサシクロ［７．７．０．１２，８．１１０，１６．０３，７．０１１，１５］オクタデカニレンエチレン）、ポリ（３，４，４，５，５，６，６，７，７，８−デカフルオロ−１３，１５−ヘキサシクロ［８．７．０．１２，９．１１１，１７．０３，８．０１２，１６］ノナデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−ｔｅｒｔ−ブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−メチル−４−ｔｅｒｔ−ブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−６−ペルフルオロブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，６−ジフルオロ−４−トリフルオロメチル−５−ペルフルオロブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−フルオロ−４−ペルフルオロエチル−５，５−ビス（トリフルオロメチル）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−ペルフルオロプロパニル−５−トリフルオロメチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロへキシル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロヘキシル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−
５−ペルフルオロヘキシル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ヘキシル−５−ペルフルオロヘキシル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−オクチル−５−ペルフルオロヘキシル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロヘプチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロオクチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロデカニル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−６−ペルフルオロペンチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメチル−６−ペルフルオロブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−１２−ペルフルオロヘキシル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメチル−５−ペルフルオロペンチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリス（トリフルオロメチル）−５−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ビス（ペルフルオロヘキシル）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メトキシ−５−トリフルオロメチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（３−フルオロ−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−フルオロ−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−３−フルオロ−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロエトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビス（トリフルオロメトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロプロポキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−ペルフルオロプロポキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−ペルフルオロプロポキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３，４−ビス（トリフルオロメトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロブトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメトキシ−４−ペルフルオロエトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（（３，３，４−トリフルオロ−４−ペルフルオロブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメトキシ−４−ペルフルオロブトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−フルオロ−３−ペルフルオロエトキシ−２，２−ビス（トリフルオロメトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−ペルフルオロプロポキシ−４−トリフルオロメトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロヘトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−ペルフルオロヘトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−ペルフルオロヘトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ヘキシル−４−ペルフルオロヘトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−オクチル−４−ペルフルオロヘトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロヘプトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロオクトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ペルフルオロデトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−ペルフルオロペントキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメトキシ−４−ペルフルオロブトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−４−ペルフルオロヘトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメトキシ−４−ペルフルオロペンチル−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビス（ペルフルオロブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビス（ペルフルオロへトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メトキシ−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（２’，２’，２’，−トリフルオロエトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメトキシ−４−（２’，２’，２’−トリフルオロエトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメトキシ−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−フルオロ−３−（２’，２’，２’，−トリフルオロエトキシ）−４，４−ビス（トリフルオロメトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−４−トリフルオロメトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−メチル−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフル
オロヘトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ブチル−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−ヘキシル−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−オクチル−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，７’−トリデカフルオロヘプトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，８’，８’，８’−ペンタデカフルオロオクトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，８’，８’，９’，９’，９’−ヘプタデカフルオロデトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−４−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ジフルオロ−３−トリフルオロメトキシ−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，３，４−トリフルオロ−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビス（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（３，４−ビス（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（４−フルオロ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−フルオロ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−４−フルオロ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４−ジフルオロ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロエトキシ−７，９−トリシクロ［４．３．０．１２，５］デカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ビス（トリフルオロメトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロプロポキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロプロポキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−ペルフルオロプロポキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４，５−ビス（トリフルオロメトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロブトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−５−ペルフルオロエトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（（４，４，５−トリフルオロ−５−ペルフルオロブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−５−ペルフルオロブトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−フルオロ−４−ペルフルオロエトキシ−５，５−ビス（トリフルオロメトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−ペルフルオロプロポキシ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロヘトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−ペルフルオロヘトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−ペルフルオロヘトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ヘキシル−５−ペルフルオロヘトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−オクチル−５−ペルフルオロヘトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロヘプトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロオクトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ペルフルオロデトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−ペルフルオロペントキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−５−ペルフルオロブトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−５−ペルフルオロヘトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−５−ペルフルオロペンチル−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ビス（ペルフルオロブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ビス（ペルフルオロへトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メトキシ−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−５−トリフルオロメトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（２’，２’，２’，−トリフルオロエトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６
］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−ブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−５−（２’，２’，２’−トリフルオロエトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−５−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−フルオロ−４−（２’，２’，２’，−トリフルオロエトキシ）−５，５−ビス（トリフルオロメトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−（２’，２’，３’，３’，３’−ペンタフルオロプロポキシ）−５−トリフルオロメトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−メチル−５−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ブチル−５−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−ヘキシル−５−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−オクチル−５−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，７’−トリデカフルオロヘプトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，８’，８’，８’−ペンタデカフルオロオクトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，７’，７’，８’，８’，９’，９’，９’−ヘプタデカフルオロデトキシ−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−５−（１’，１’，１’−トリフルオロ−ｉｓｏ−プロポキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ジフルオロ−４−トリフルオロメトキシ−５−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，４，５−トリフルオロ−（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ビス（２’，２’，３’，３’，４’，４’，４’−ヘプタフルオロブトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）、ポリ（４，５−ビス（２’，２’，３’，３’，４’，４’，５’，５’，６’，６’，６’−ウンデカフルオロヘトキシ）−１０，１２−ペンタシクロ［６．５．１．０２，７．０９，１３．１３，６］ペンタデカニレンエチレン）等。
【００４１】
フッ素含有環状オレフィンポリマーとして、特に好ましくは、以下を挙げることができる。
ポリ（１−フルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−１−フルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ジフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ヘプタフルオロ−ｉｓｏ―プロピル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペンタフルオロエチル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロエチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロプロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−プロピル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，３ａ，６ａ−オクタフルオロシクロペンチル−４，６−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２，２，３，３，４，４，３ａ，７ａ−デカフルオロシクロヘキシル−５，７−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロ−ｔｅｒｔ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロ−ｉｓｏ−ブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロエチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−（１−トリフルオロメチル−２，２，３，３，４，４，５，５−オクタフルオロ−シクロペンチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（（１，１，２−トリフルオロ−２−ペルフルオロブチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−フルオロ−１−ペルフルオロエチル−２，２−ビス（トリフルオロメチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−ペルフルオロプロパニル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ブチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ヘキシル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−オクチル−２−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロヘプチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロオクチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ペルフルオロデカニル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロブチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−ペルフルオロヘキシル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ジフルオロ−１−トリフルオロメチル−２−ペルフルオロペンチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロブチル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，２−ビス（ペルフルオロヘキシル）−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−メトキシ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１−ｔｅｒｔ−ブトキシメチル−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）、ポリ（１，１，３，３，３ａ，６ａ−ヘキサフルオロフラニル−３，５−シクロペンチレンエチレン）等。
【００４２】
フッ素含有環状オレフィンポリマーの、示差走査熱量分析によるガラス転移温度は、好ましくは５０〜２５０℃、より好ましくは６０〜２００℃、さらに好ましくは７０〜１６０℃である。
【００４３】
ガラス転移温度が上記下限値以上であると、本実施形態に係る細胞培養用積層体を具備した医療器具を使用する現場の使用環境において、熱による変形等を抑制しながら使用できる。また、ガラス転移温度が上記上限値以下であると、例えば、射出成型等の方法でフィルムやシート、プレート状のコラーゲンビトリゲル膜支持基材を作製する際に溶融流動しやすくなり、加熱処理温度を低くすることができ、黄変等起こさず良好な成型性での基材作製が可能になる。
【００４４】
フッ素含有環状オレフィンポリマーを、例えば試料濃度３．０〜９．０ｍｇ／ｍｌでゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定したポリスチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）は、好ましくは５，０００〜１，０００，０００、より好ましくは１０，０００〜３００，０００である。
【００４５】
重量平均分子量（Ｍｗ）が上記範囲内であると、フッ素含有環状オレフィンポリマーの溶剤溶解性や医療器具を作製する際に、接着剤を用いる場合、良好な接着性を示し、また、生物内に取り込まれるオリゴマー等を生じず、生物学的に安全な材料として医療現場で使用することができる。
【００４６】
フッ素含有環状オレフィンポリマーの分子量分布は、良好な加熱成型性の観点から、ある程度広い方が好ましい。重量平均分子量（Ｍｗ）と数平均分子量（Ｍｎ）との比である分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は、好ましくは１．０〜５．０、より好ましくは１．２〜５．０、さらに好ましくは１．４〜３．０である。
【００４７】
・フッ素含有環状オレフィンポリマーの製造方法
フッ素含有環状オレフィンポリマーの製造方法、より具体的には、一般式（１）で表される構造単位を含むポリマーの製造方法（重合方法）について説明する。
フッ素含有環状オレフィンポリマーは、例えば、下記の一般式（２）で表わされるフッ素含有環状オレフィンモノマーを、開環メタセシス重合触媒によって重合し、得られた重合体の主鎖のオレフィン部を水素添加することによって製造することができる。より具体的には、本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマーは、例えば、国際公開第２０１１／０２４４２１号の段落００７５〜００９９に記載の方法に準じて製造することができる。
【００４８】
【化５】
2020000176.tif 000006
一般式（２）中、Ｒ１〜Ｒ４およびｎの定義や具体例等は一般式（１）と同じである。
【００４９】
フッ素含有環状オレフィンポリマーの製造に際しては、一般式（２）で表されるフッ素含有環状オレフィンモノマーを１種のみ用いてもよいし、２種以上を用いてもよい。
【００５０】
フッ素含有環状オレフィンポリマーのオレフィン部の水素添加率は、好ましくは５０モル％以上１００モル％以下であり、より好ましくは７０モル％以上１００モル％以下、さらに好ましくは９０モル％以上１００モル％以下である。水素添加率が上記下限値以上であると、放射線照射によって発生するラジカルによる材料の劣化を抑制でき、また、オレフィン部の酸化や光の吸収劣化を抑制することができる。
【００５１】
（コラーゲンビトリゲル膜支持基材の製造方法）
本実施形態に係る細胞培養用積層体に用いる基材は、生体に対して安全な材料であれば特に限定されないが、好ましくはフッ素含有環状オレフィンポリマーを含み、より好ましくは上記一般式（１）で表される繰り返し構造単位を有するフッ素含有環状オレフィンポリマーを含んでいる。この場合、基材は、フッ素含有環状オレフィンポリマーのみであってもよいが、本発明の目的を損なわない範囲で、他のポリマーや安定剤などの他の成分が含まれていてもよい。基材に含まれるフッ素含有環状オレフィンポリマーの含有量は、好ましくは５０質量％上、より好ましくは６０質量％以上、さらに好ましくは７０質量％以上、特に好ましくは８０質量％以上である。フッ素含有環状オレフィンポリマーの含有量の好ましい上限値は勿論１００質量％であるが、例えば、好ましくは９８質量％以下、より好ましくは９６％以下、さらに好ましくは９３質量％以下であることが好ましい場合がある。
【００５２】
他の重合体としては、フッ素を含まない環状オレフィン共重合体や(メタ)アクリル酸エステル重合体などの公知の重合体を好ましい例として挙げることができる。また、耐熱安定剤などの公知の添加剤も状況に合わせて使用してよい。その場合の含有率は、基材全体の好ましくは２質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下である。
【００５３】
基材の形状は使用目的により好適に選ばれ、特に限定されない。好ましくは、フィルム、シート、プレート状に加工され、形状は正方形、長方形、円形、三角形、平行四辺形などの様々な形態で用いられる。基材の厚みは、対象とする細胞の酸素に対する好気性や嫌気性などの指標を元に必要な酸素量と材料の酸素透過度から厚みを設定してもよいが、好ましくは１０μｍ以上、１０００μｍ以下、より好ましくは２０μｍ以上、５００μｍ以下、さらに好ましくは３０μｍ以上、２００μｍ以下の範囲で適応できる。この範囲の厚みであれば、コラーゲンビトリゲル膜乾燥体の再水和後の撓みをより抑制し、より一層良好な支持基材としての強度および酸素透過性が発現する。さらには、基材の厚みはコラーゲンビトリゲル膜乾燥体の直下の厚みが上記範囲であればよく、目的に応じて周囲に厚みを持たせるなどの設計を取り入れてもよい。
【００５４】
溶融成型法によりコラーゲンビトリゲル膜乾燥体の支持基材を作製する方法としては、上記において例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを溶融混練機で加熱溶融しＴダイを経てフィルム化する方法が挙げられる。Ｔダイによる溶融押出しフィルム製造においては、例えば、必要に応じて添加剤を配合したフッ素含有環状オレフィンポリマーを押出機に投入し、ガラス転移温度よりも好ましくは５０℃〜２００℃高い温度、より好ましくは８０℃〜１５０℃高い温度で溶融混練し、Ｔダイから押出し、冷却ロールで送りながら、巻取りロールへ送りフィルムに加工する。
【００５５】
また、目的に応じて筒状形状のダイスから押し出された樹脂を金型で挟み込み、金型の空気の抽入口から空気を吹き込み樹脂を膨らませ、冷却した後に金型から離脱させるブロー成型により、丸底形状等の成型物を加工することもできる。
【００５６】
射出成型により医療器具を構成する部材を作製する方法としては、上記において例示したフッ素含有環状オレフィンポリマーを溶融混練機で加熱溶融し、プランジャー、またはスクリューを介して、金型に充填し所望の形状の部材を得る方法が挙げられる。この際に用いられる樹脂を溶融する温度は、上記したガラス転移温度よりも高い温度で行われ、射出圧力は好ましくは１ＭＰａ〜１００ＭＰａ、より好ましくは５〜９０ＭＰａ、さらに好ましくは１０ＭＰａ〜８０ＭＰａの範囲で行われ、射出速度は成型体の形状、または生産性を考慮して好適に選ばれる。
【００５７】
さらに、射出成型による成型を行う際に、あらかじめ金型の中に、例えば、金属や樹脂等からなる部材を充填（インサート）しておき、加熱溶融した樹脂をプランジャー、またはスクリューを介して、金型に充填し、所望の形状で金属や樹脂と本実施形態のフッ素含有環状オレフィンポリマーを一体成型したインサート成型法を用いてもよい。
【００５８】
溶融押出し成型法、射出成型法、インサート成型法等の何れの成型法においても、本実施形態の効果を損なわない範囲で、紫外線吸収剤、酸化防止剤、難燃剤、帯電防止剤、着色剤等の添加剤を添加してもよい。
【００５９】
他の方法としては、溶液キャスト法によるフィルム・シート成型が挙げられる。本実施形態に係るフッ素含有環状オレフィンポリマーは、有機溶剤を使用して溶液化し、上記した金属等の無機材料や樹脂等の有機材料に塗工、乾燥し、コートした形態の複合部材を作製することができる。また、コートした後、剥離工程を設け単層のフィルムやシート、プレート等の形態で用いてもよい。
【００６０】
用いられる有機溶剤としては、例えば、ペルフルオロ−２−ブチルテトラヒドロフラン等のフッ素含有エーテル類；テトラヒドロフラン、ジブチルエーテル、１,２−ジメトキシエタン、ジオキサン等のエーテル類；酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類；または、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類等を挙げることができる。これらのうちから、溶解性や製膜性を考慮して選択することができる。また、これらは単独で用いてもよく、二種類以上を組み合わせて用いてもよい。特に、製膜性の観点からは、大気圧下で７０℃以上の沸点をもつ溶剤が好ましい。これにより、蒸発速度が速くなりすぎることを確実に抑えることができ、膜表面におけるムラの発生を抑制でき、また、製膜時における膜厚精度の向上にも資することができる。
【００６１】
また、溶液化に使用した溶剤を乾燥により除去するための加熱の温度は、好ましくは５０℃〜３００℃であり、より好ましくは６０〜２８０℃であり、さらに好ましくは７０〜２５０℃である。段階的に加熱温度を変化させる多段のプロセスを用いてもよい。加熱の温度は、複合化させる有機・無機材料の特性や生産性を考慮して好適に選ばれ、乾燥時の時間は、医療器具として用いる際に許容される安全性を考慮した下限以下となる残留溶剤の量を確認しながら適時設定される。
【００６２】
さらに、例えば、コラーゲンビトリゲル膜乾燥体、およびコラーゲンビトリゲル膜との強固な密着性を発現させる、表面積の増大効果で酸素透過度を上げるなどの目的に応じて、本実施形態の医療器具を構成する部材の表面に凹凸構造を形成させてもよい。凹凸構造の形成は、スクリーン印刷、エンボス加工、サブミクロンインプリント、ナノインプリント等の様々な方法が適用でき、凹凸構造の形状、サイズにより好適に選ばれる。特に、サブミクロンインプリント、およびナノインプリントは、凹凸構造の形状の自由度が高く、また、サイズはマイクロからナノオーダーまで、広く適用できるため好ましく用いられる。
【００６３】
（細胞培養用積層体の製造方法）
本実施形態に係る細胞培養用積層体を製造する方法としての一例として、予め、一般式（１）で表されるフッ素含有環状オレフィンポリマーからなる基材を容器枠と複合化した容器を作製し、その容器底部に具備した基材上にコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を配置する方法について説明するが、本法になんら限定されるものでは無い。例えば、以下の工程（１）〜（５）を経ることによって作製することができる。
【００６４】
工程（１）：例えば、容器枠が筒状のポリスチレンからなり、底部にフッ素含有環状オレフィンポリマーからなる基材を具備した容器を準備する。この際の具備とは、容器枠と基材とを接着剤等により接着した形態、クリップ等で挟み固定した形態、溶融圧着等により密着させた形態など何れの形態であってもよいが、生産性、形状自由度を勘案すると、好ましくは接着剤等で接着した形態がよい。
【００６５】
工程（２）：コラーゲンビトリゲル膜乾燥体の支持体となる基材上にゾルを注入してゲル化した後、ハイドロゲル内の自由水の一部をシリンジ等で抜き出す。
ハイドロゲルの作製に用いられる原料としての天然物由来高分子は、例えば、コラーゲン（Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、Ｖ型、ＸＩ型など）、マウスＥＨＳ腫瘍抽出物（ＩＶ型コラーゲン、ラミニン、ヘパラン硫酸プロテオグリカンなどを含む）より再構成された基底膜成分（商品名：マトリゲル）、ゼラチン、寒天、アガロース、フィブリン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、プロテオグリカンなどを例示することができる。それぞれのゲル化に至適な塩等の成分、その濃度、ｐＨなどを選択しハイドロゲルを作製することが可能である。原料を組み合わせることで、様々な生体内組織を模倣したビトリゲル膜を得ることができる。
【００６６】
また、ハイドロゲルの作製に用いられる合成高分子としては、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ポリエチレンオキシド、ｐｏｌｙ（１、１−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）／ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅなどが挙げられる。また、これらの高分子を２種以上用いてハイドロゲルを作製することも可能である。ハイドロゲルの量は、作製するビトリゲル膜の厚さを考慮して調節することができる。
【００６７】
なかでも、ハイドロゲルの原料はコラーゲンが好ましく、コラーゲンゲルを用いる場合には、コラーゲンゾルを、基材上に配置された壁面鋳型に注入し、インキュベーターでゲル化させたものを使用することができる。
【００６８】
コラーゲンゾルを使用する場合を例に説明すると、コラーゲンゾルは、至適な塩濃度を有するものとして、生理食塩水、ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ）、ＨＢＳＳ（Ｈａｎｋ‘ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、基礎培養液、無血清培養液、血清含有培養液あるいは血清含有培養液などで調製することができる。また、コラーゲンゲル化の際の溶液のｐＨは、６から８程度が好ましい。
【００６９】
ここで、コラーゲンゾルの調製は４℃で行うのが望ましい。その後、ゲル化する際の保温は、用いるコラーゲンの動物種に依存したコラーゲンの変性温度より低い温度でなければならないが、一般的には３７℃以下の温度で数分から数十分でゲル化できる温度に保温して行うことができる。
【００７０】
また、コラーゲンゾルはコラーゲンの濃度が０．１％以下になると希薄すぎてゲル化が弱く、０．３％以上になると濃厚すぎて均一化が困難になる。したがって、コラーゲンゾルのコラーゲンの濃度は０．１〜０．３％が好ましく、より好ましくは０．１２５〜０．２５％程度である。
【００７１】
このように調整されたコラーゲンゾルを壁面鋳型内部に注入する。上記濃度のコラーゲンゾルは粘性を有しているため、コラーゲンゾルを壁面鋳型内部に注入して迅速に保温すれば、コラーゲンゾルは基材と壁面鋳型との間隙から流出することなく数分以内にゲル化することができる。
【００７２】
そして、形成されたコラーゲンゲルは基材と壁面鋳型に密着するが、所定の時間放置した後に、シリンジ等でコラーゲンゲル内の自由水の一部を抜き出すことでコラーゲンゲルを基材上に定着させることができる。
【００７３】
工程（３）：ハイドロゲルを乾燥させて残留する自由水を除去し、ガラス化したハイドロゲル乾燥体を作製する。
乾燥により、完全にハイドロゲル内の自由水を除去しガラス化する。このガラス化工程の期間を長くするほど、再水和した際には透明度、強度に優れたビトリゲル膜を得ることができる。なお、必要に応じて短期間のガラス化後に再水和して得たビトリゲル膜をＰＢＳ等で洗浄し、再度ガラス化することもできる。
乾燥方法としては、例えば、風乾、密閉容器内で乾燥（容器内の空気を循環させ、常に乾燥空気を供給する）、シリカゲルを置いた環境下で乾燥する等、種々の方法を用いてよい。例えば、風乾の方法としては、１０℃、４０％湿度で無菌に保たれたインキュベーターで２日間乾燥させる、もしくは無菌状態のクリーンベンチ内で一昼夜、室温で乾燥する等の方法を例示することができる。
【００７４】
工程（４）：ハイドロゲル乾燥体を再水和してビトリゲル膜を作製する。
ハイドロゲル乾燥体をＰＢＳや使用する培養液などで再水和することでビトリゲル膜を作製する。ここで、再水和する液体には、生理活性物質などの各種の成分が含まれていてもよく、例えば、生理活性物質としては、抗生物質をはじめとする各種医薬品、細胞増殖因子、分化誘導因子、細胞接着因子、抗体、酵素、サイトカイン、ホルモン、レクチン、またはゲル化しない細胞外マトリックス成分としてファイブロネクチン、ビトロネクチン、エンタクチン、オステオポエチン等が挙げられる。また、これらを複数含有させることも可能である。
【００７５】
工程（５）：ビトリゲル膜を再乾燥させて自由水を除去し、ガラス化したビトリゲル膜乾燥体を作製する。
乾燥方法は、工程（３）と同様に、風乾、密閉容器内で乾燥（容器内の空気を循環させ、常に乾燥空気を供給する）、シリカゲルを置いた環境下で乾燥する等、種々の方法を用いることができる。
【００７６】
ビトリゲル膜を再乾燥させることで、ガラス化したビトリゲル膜乾燥体を作製することができる。このビトリゲル膜乾燥体は、必要な時に再水和することで、再度ビトリゲル膜
に変換することができる。
【００７７】
なお、「ハイドロゲル乾燥体」と「ビトリゲル膜乾燥体」に含まれる成分は必ずしも同じではない。「ハイドロゲル乾燥体」は、ハイドロゲルの成分を含んでいるが、「ビトリゲル膜乾燥体」は、ハイドロゲル乾燥体を再水和した際の水溶液で平衡化されたビトリゲル膜に残存する成分を含んでいる。
【００７８】
また、工程（５）のビトリゲル膜乾燥体を再水和することで得られるビトリゲル膜は、工程（４）で得られるビトリゲル膜と比較して、ガラス化の期間が長いため、強度および透明性に優れている。
【００７９】
さらに、ガラス化の期間は「ハイドロゲル乾燥体」の状態で長くすることも可能であるが、「ハイドロゲル乾燥体」はハイドロゲル作製時の成分が全て共存している状態であり、ハイドロゲル乾燥体を維持し続ける際あるいはビトリゲル膜を利用する際には不必要となる成分も混在している。一方、「ハイドロゲル乾燥体」を再水和して不必要な混在成分を除去した後のビトリゲル膜については、その乾燥体においても不必要な成分は除去されている。したがって、ガラス化の期間を長く維持する必要がある時は、このビトリゲル膜乾燥体の状態で維持し続けることが好ましく、ビトリゲル膜乾燥体を再水和して得られるビトリゲル膜には不必要な成分が混在しない点で優れている。
さらに、ビトリゲル膜乾燥体は、例えば、ゲル化する前のゾル溶液に、含有させたい生理活性物質を混合し、その後、ゲル化・ガラス化等のビトリゲル膜の作製工程を経て作製することもできる。
生理活性物質を含有するビトリゲル膜乾燥体は、細胞の接着・増殖・分化などに必要な因子をビトリゲル膜側から供給することができるので、より良い培養環境を実現することができる。また、含有させた生理活性物質の細胞に対する影響を調べる試験を行うのに非常に有用である。
【００８０】
以上の方法によれば、所望の形状の容器底面にビトリゲル膜層を形成でき、工程（３）、または工程（５）のビトリゲル膜乾燥体の状態で長期間保管し、必要な時に再水和することでビトリゲル膜としての利用が可能なことから生産性良く、ビトリゲル膜乾燥体を具備した細胞培養容器を作製することができる。
なお、上記のように特定の容器底面にビトリゲル膜乾燥体を形成した積層体を作製する方法は、積層体の形成が完了した時点で、本実施形態に係る医療器具となる。
【００８１】
一方で、他の方法として、ビトリゲル膜乾燥体を支持する基材として、例えば、シートやフィルムの形態に加工された基材上に、基本的には上記の工程（１）から（５）による方法で、本実施形態に係る細胞培養用積層体を作製し、その後、例えば、２４個、９６個の貫通穴が開いた容器枠を別途作製し、接着剤、粘着剤等を介して上記の積層体を複合化してもよく、特に、限定されない。
【００８２】
ここで用いられる容器枠の材料としては、無機材料、有機材料に関わらず様々な種類の材料を使用することができる。例えば、ニッケル、鉄、ステンレス鋼、ゲルマニウム、チタン、シリコン、ガラス、石英、アルミナ等の無機材料；ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の樹脂材料；ダイヤモンド、黒鉛等の炭素材料等が挙げられる。成型の自由度、透明性などから好ましくは、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリイミド、ポリアミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアリレート、エポキシ樹脂、シリコーン樹脂等の有機材料が用いられ、より好ましくはポリスチレン、ポリプロピレンが用いられる。
【００８３】
工程（１）から（５）において説明した積層体、および医療器具の作製法とは異なり、ビトリゲル膜乾燥体および基材からなる積層体と、容器枠とを最終的に複合化してビトリゲル膜乾燥体を具備した容器を作製した場合、積層体と容器枠との複合化が完了した時点で、本実施形態に係る医療器具となる。
【００８４】
（医療器具）
本実施形態に係る医療器具は本実施形態に係る細胞培養用積層体を備え、細胞培養に用いられるものである。また、本実施形態に係る医療器具は、全体の形状が容器であり、本実施形態に係る細胞培養用積層体における基材が容器の底面に位置している構成が好ましい。
本実施形態に係る医療器具とは、上記した方法で作製した医療器具の他にも、細胞の３次元モデルを構築するための目的であれば広く適応でき、その用途、医療器具としての形態は特に限定されない。
【００８５】
（細胞培養方法）
本実施形態に係る医療器具を用いた医療現場での適応の一例として、細胞培養について説明するが、本法に医療器具の形態、使用法は何ら限定されない。なお、ここでの医療現場とは、製薬メーカーでの創薬開発、企業、大学での基礎、臨床研究（応用）、再生医療などの広く細胞を扱う分野を意味する。
【００８６】
本実施形態に係るコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を具備した医療器具の使用では、準備工程でＰＢＳや使用する培養液などで再水和する工程を設ける。これにより、コラーゲンビトリゲル膜乾燥体は水和したコラーゲンビトリゲル膜としての機能が発現する。次いで、必要に応じて適切な培地等に交換し、所望の細胞を播種して、目的に応じた方法や条件で細胞を培養する。次いで、細胞の増殖や機能発現因子の観察、細胞機能としての薬剤代謝活性能などを評価する。
【００８７】
本実施形態に係る医療器具で取扱うことができる細胞の種類としては、特に限定されないが、動物細胞の場合で浮遊系細胞、接着系細胞に関わらず、例えば、線維芽細胞、間葉系幹細胞、造血幹細胞、神経幹細胞、神経細胞、角膜上皮細胞、口腔粘膜上細胞、網膜色素上細胞、歯根膜幹細胞、筋繊維芽細胞、心筋細胞、肝細胞、脾内分泌細胞、皮膚角化細胞、皮膚繊維芽細胞、皮下脂肪由来前駆細胞、腎臓細胞、底部毛根鞘細胞、鼻粘膜上皮細胞、血管内皮前駆細胞、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、骨格筋細胞、不死化細胞、がん細胞、角化細胞、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）等が例示され、より具体的にはＨｅＬａ細胞、ＣＨＯ細胞、Ｃｏｓ細胞、ＨＬ−６０細胞、Ｈｓ−６８細胞、ＭＣＦ７細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＰＣ−１２細胞、Ｋ５６２細胞、Ｌ細胞、２９３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｕ−９３７細胞、Ｃａｃｏ−２細胞、ＨＴ−２９細胞、Ａ５４９細胞、Ｂ１６細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＢＡＬＢ／３Ｔ３細胞、Ｖ７９細胞、３Ｔ３−Ｌ１細胞、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞、Ｒａｊｉ細胞、ＮＳＣＬＣ細胞、Ａ４３１細胞、Ｓｆ９細胞、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞、ＢＨＫ−２１細胞、Ｊ７７４細胞、Ｃ２Ｃ１２細胞、３Ｔ３−Ｓｗｉｓｓ  ａｌｂｉｎｏ細胞、ＭＯＬＴ−４細胞、ＣＶ−１細胞、Ｆ９細胞、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞、ＨａＣａＴ細胞、Ｌ５１７８Ｙ細胞、ＨｕＨ−７細胞、Ｒａｔ１細胞、Ｓａｏｓ−２細胞、ＴＩＧ細胞、ＣＨＬ細胞、ＷＩ−３８細胞、ＭＲＣ−５細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、ＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞、ＭＩＮ６細胞、ＫＡＴＯ細胞、Ｃ３Ｈ／１０Ｔ１／２細胞、ＤＴ４０細胞、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５細胞、ＩＭＲ−９０細胞、ＦＭ３Ａ細胞、等が例示される。初代細胞あるいは継代された細胞のいずれであってもよい。
【００８８】
これらの細胞の由来としては各種生物、例えば、ヒト、イヌ、ラット、マウス、トリ、ブタ、ウシ、昆虫等の細胞、または、これらが集合して形成された組織、器官、微生物、ウイルス等が挙げられ、より具体的には、ヒト子宮頚部癌由来、Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ卵巣由来、ＣＶ−１細胞由来、ヒト骨髄性白血病由来、ヒト乳癌由来、ヒトＴ細胞白血病由来、Ａｆｒｉｃａ  ｇｒｅｅｎ  ｍｏｎｋｅｙ腎由来、ヒト副腎髄褐色細胞種由来、ヒト骨髄性白血病由来、Ｃ３Ｈマウス皮下組織由来、ヒト胎児腎由来、ヒト肝癌由来、ヒト組織球性白血病由来、ヒト大腸癌由来、ヒト肺癌由来、マウスメラノーマ由来、イヌ腎臓由来、Ｂａｌｂ／ｃマウス胎仔由来、Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ肺由来、Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３由来、ＮＩＨ  Ｓｗｉｓｓマウス胎仔由来、ヒトバーキットリンパ腫由来、ヒト肺非小細胞癌由来、ヒト皮膚Ｅｐｉｄｅｒｍｏｉｄ  Ｃａｒｃｉｎｏｉｄ由来、蛾の幼虫卵巣由来、Ｓｙｒｉａｎ  ｇｏｌｄｅｎ  ｈａｍｓｔｅｒ腎由来、マウスマクロファージ由来、マウス筋組織由来、雑系Ｓｗｉｓｓマウス胎仔由来、ヒト急性Ｔ細胞白血病由来、マウスＥＣ細胞ＯＴＴ６０５０由来、マウスｃａｌｖａｒｉａ由来、ヒト表皮角化細胞由来、ＤＢＡ／２マウス胸腺腫瘍由来、ヒト幹細胞癌由来、ラット結合組織由来、ヒト骨肉腫由来、ヒト胎児肺由来、ヒト神経芽細胞腫由来、マウスインスリノーマ由来、ヒト胃癌由来、Ｃ３Ｈマウス胎仔由来、ニワトリＢ細胞白血病由来、マウス自然発生乳癌由来、等が例示される。
【００８９】
また、細胞培養床として本実施形態に係るコラーゲンゲル膜（好ましくはコラーゲンビトリゲル膜）が用いられる場合、コラーゲン以外の細胞外マトリックス成分でコーティングして用いることもできる。このような細胞外マトリックス成分としては、コラーゲンビトリゲル膜に親和性を有する細胞外マトリックス分子が好ましく、例えばラミニン、エラスチン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フィブリノゲン等の細胞外マトリックス分子が挙げられる。
【実施例】
【００９０】
以下、本実施形態を、実施例を参照して詳細に説明する。なお、本実施形態は、これらの実施例の記載に限定されるものではない。なお、実施例におけるポリマー分析値測定方法およびフィルムの分析方法は以下に記載した通りである。
【００９１】
［重量平均分子量（Ｍｗ）、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）］
下記の条件下でゲルパーミュエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）を使用して、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）またはトリフルオロトルエン（ＴＦＴ）に溶解したポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）および数平均分子量（Ｍｎ）を、ポリスチレンスタンダードによって分子量を較正して測定した。
検出器：日本分光社製ＲＩ−２０３１および８７５−ＵＶまたはＶｉｓｃｏｔｅｃ社製Ｍｏｄｅｌ２７０、直列連結カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  Ｋ−８０６Ｍ、８０４、８０３、８０２．５、カラム温度：４０℃、流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、試料濃度：３．０〜９．０ｍｇ／ｍｌ
【００９２】
［ガラス転移温度］
島津製作所社製ＤＳＣ−５０を用い、測定試料を窒素雰囲下で１０℃／分の昇温速度で加熱し測定した。
【００９３】
［水素添加率測定］
ポリマー試料を重水素化アセトンに溶解し、２７０ＭＨｚ、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフトδ＝５．０〜７．０ｐｐｍ範囲で二重結合炭素の水素に帰属するピークの積分値で測定した。
【００９４】
［フィルムの引張強度試験］
ＪＩＳ  Ｋ７１６１に準拠し、株式会社島津製作所社製「引張試験機（ＡＧ−Ｘ−５）を用い、幅１０ｍｍ、長さ１８０ｍｍのダンベル状に切り出したサンプルをチャック間１５０ｍｍの幅で固定し、試験ｎ数３の条件で、２３℃の温度で、１０ｍｍ／ｍｉｎの速度で破断するまで引張り、破断時の強度を測定した。
【００９５】
［酸素透過度試験］
東洋精機社製「差圧法ガス透過試験機」を使用して、２５ｃｍ２に切り出したサンプルの中心付近の有効面積を５ｃｍ２として、試験温度２３℃、試験湿度０％、試験ｎ数３の条件で測定した。
【００９６】
［実施例１］(フッ素含有環状オレフィンポリマーの合成および基材用フィルムの作製)
５，５，６−トリフルオロ−６−（トリフルオロメチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプト−２−エン（１００ｇ）と１−ヘキセン（０．２６８ｇ）のテトラヒドロフラン溶液に、Ｍｏ（Ｎ−２，６−Ｐｒｉ２Ｃ６Ｈ３）（ＣＨＣＭｅ２Ｐｈ）（ＯＢｕt）２（５０ｍｇ）のテトラヒドロフラン溶液を添加し、７０℃で開環メタセシス重合をモノマーが完全に消費するように行った。得られたポリマーのオレフィン部を、パラジウム５％担持カーボン触媒（５ｇ）存在下１２０℃で水素添加反応を行い、ポリ（１，１，２−トリフルオロ−２−トリフルオロメチル−３，５−シクロペンチレンエチレン）のテトラヒドロフラン溶液を得た。
【００９７】
得られた溶液を孔径０．１μｍのフィルターで加圧ろ過し、パラジウム担持カーボン触媒を除去した溶液をメタノールに加え、白色のポリマーをろ別、溶剤を完全に除去乾燥し、９９ｇのポリマー１を得た。
【００９８】
得られたポリマー１は、上記一般式（１）により表される構造単位を含有していた。また、水素添加率は１００％、重量平均分子量（Ｍｗ）は７８０００、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．７０、ガラス転移温度は１１０℃であった。
【００９９】
次いで、ポリマー１の濃度を３５質量％に調整したメチルイソブチルケトン溶液を調製し、ガラス基板上にアプリケーターを用いて塗膜を形成し、その後、１３０℃で５時間乾燥した。乾燥後、ガラス基板から剥離して厚み５０μｍのポリマー１からなる無色透明のフィルム１を得た。フィルム１のＴＧＡから、３０℃から３００℃の解析範囲において重量減少は見られず、残留溶剤が無いことを確認した。
作製したフィルム１を幅１０ｍｍ、長さ１８０ｍｍのダンベル状に３枚切り出し引張強度試験を実施した。同様にフィルム１を５０ｍｍ×５０ｍｍのサイズに３枚切り出し酸素透過度試験を実施した。フィルムの引張り強度は５０．０ＭＰａ、５０．４ＭＰａ，および５０．０ＭＰａであり平均値は５０．１ＭＰａであった。フィルムの酸素透過度は３６６０ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）、３６１０ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）、３６９０ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）であり平均値は３６５３ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）であった。
【０１００】
［実施例２］（細胞培養用積層体の製造とＨｅｐＧ２細胞の培養１）
実施例１で得られたポリマー１からなる厚み５０μｍのフィルム１を、２４個の貫通穴が開いたポリスチレン製の容器枠に貼り合わせ、容器底部にポリマー１からなるフィルムを具備した２４穴マルチウェルプレートを作製し、ガンマ線による滅菌処理した。
【０１０１】
次いで、２４穴マルチウェルプレートの１つの穴（ウェルとも称す：面積：１．９ｃｍ２）あたりに、ウシ由来ネイティブコラーゲン溶液（高研社製、Ｉ−ＡＣ、コラーゲン濃度０．５質量％）と培養液とを等量混合した０．２５％コラーゲンゾルを４０μＬ注入した後、ゲル化、ガラス化および再水和の工程を経て、容器底部のポリマー１上にコラーゲンビトリゲル薄膜を重層した。コラーゲンビトリゲル膜乾燥体の目付け量は１ウェルあたり０．０５３ｍｇ／ｃｍ２である。
【０１０２】
このコラーゲンビトリゲル薄膜上にＨｅｐＧ２細胞を播種（密度：５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２）し、３７℃のＣＯ２インキュベーター内で培養し、各培養日数に応じて、モデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄、死細胞の確認、ＣＹＰ３Ａ４活性測定を以下のような方法で行った。
【０１０３】
（モデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄）
培養後の２４ウェル容器の各ウェルの培養液を除去後、モデル薬物としてＦｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ（以下、ＦＤとする）を含む培養液を添加した。その後、３７℃で６０分間培養した。ＦＤを含む培養液を除去して新鮮な培養液に交換し６０分培養した後、ハンクス平衡塩溶液（以下、ＨＢＳＳとする）で２回洗浄し、次いで、蛍光顕微鏡で観察した。
【０１０４】
（死細胞の確認）
培養後の２４ウェル容器の各ウェルの培養液を除去後、ダルベッコＰＢＳ（−）で２回洗浄した後、Ｅｔｈｉｄｕｍ  ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ−１を含むハンクス平衡塩溶液（以下、ＨＢＳＳとする）を添加し、１０分間培養して、蛍光顕微鏡で観察した。
【０１０５】
（ＣＹＰ３Ａ４活性）
各培養期間におけるＣＹＰ３Ａ４活性測定は、Ｐ４５０−ＧｌｏＴＭ  ＣＹＰ３Ａ４  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。培養後の２４ウェル容器の各ウェルの培養液を除去して培養液で２回洗浄した後、培養液で希釈したＬｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡを添加して６０分間培養した。培養後の２４ウェル容器の各ウェルから９６ウェルプレートにＬｕｃｉｆｅｒｉｎ−ＩＰＡを含む培養液を移した後、Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＲｅｇｅｎｔとＲｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒの混合液を添加して、室温で遮光して２０分間反応させた。２０分後、ルミノメーターで発光量（Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｌｉｇｈｔ  Ｕｎｉｔ、ＲＬＵ）を測定した。
【０１０６】
ＣＹＰ３Ａ４活性は、各培養期間における発光量を播種細胞数で除して、算出した。
【０１０７】
培養したＨｅｐＧ２細胞は、コラーゲンビトリゲル膜に良好に接着し、高い生存率を維持したまま最長２１日間の評価において増殖していた（２１日間培養後の細胞の様子、図１参照）。また、形態観察から、細胞は緻密構造を形成し、モデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄も良好に観察された。培養７日後のＣＹＰ３Ａ４活性は１２，６８７±２，２４１（ＲＬＵ／１０６ｃｅｌｌｓ）であり、最長２１日間の評価において減衰しなかった。
【０１０８】
本結果から、ＨｅｐＧ２細胞の毛細胆管様構造と肝特異的機能（ＣＹＰ３Ａ４活性）は、コラーゲンビトリゲル薄膜の支持体として、上記一般式（１）で示されるフッ素含有環状オレフィンポリマーからなる基材を用いることで、長期に渡り安定に維持できることが確認できた。
【０１０９】
［実施例３］（細胞培養用積層体の製造とＨｅｐＧ２細胞の培養２）
２４穴マルチウェルプレートの１つの穴（ウェルとも称す：面積：１．９ｃｍ２）あたりに、ウシ由来ネイティブコラーゲン溶液（高研社製、Ｉ−ＡＣ、コラーゲン濃度０．５質量％）と培養液とを等量混合した０．２５％コラーゲンゾルの注入量を８０μＬに変更したこと以外は、実施例２と同様な方法でＨｅｐＧ２細胞を３７℃の恒温下培養し、各培養日数に応じて、モデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄、死細胞の確認、ＣＹＰ３Ａ４活性測定を行った。
【０１１０】
培養したＨｅｐＧ２細胞は、コラーゲンビトリゲル膜に良好に接着し、高い生存率を維持したまま最長２１日間の評価において増殖していた。また、形態観察から、細胞は緻密構造を形成し、モデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄も良好に観察された。培養７日後のＣＹＰ３Ａ４活性は１５，９６１±１，９６２（ＲＬＵ／１０６ｃｅｌｌｓ）であり、最長２１日後のＣＹＰ３Ａ４活性は１３，３７７±１，４８９（ＲＬＵ／１０６ｃｅｌｌｓ）であり、評価期間において高い活性を維持した。
【０１１１】
本結果から、ＨｅｐＧ２細胞の毛細胆管様構造と肝特異的機能（ＣＹＰ３Ａ４活性）は、コラーゲンビトリゲル薄膜の支持体として、上記一般式（１）で示されるフッ素含有環状オレフィンポリマーからなる基材を用いることで、長期に渡り安定に維持できることが確認できた。
【０１１２】
［比較例１］（従来の基材を用いた積層体の製造とＨｅｐＧ２細胞の培養）
容器底部の厚みが２ｍｍであり、底部を切り出して測定した引張強度が４０ＭＰａ、酸素透過度が６０ｃｍ３／（ｍ２・２４ｈ・ａｔｍ）であるコーニング社製２４マルチウェルプレートを使用し、実施例２と同様な方法でＨｅｐＧ２細胞を播種、培養してモデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄、死細胞の確認、ＣＹＰ３Ａ４活性測定を行った。
コラーゲンビトリゲル膜乾燥体の目付け量は１ウェルあたり０．０５３ｍｇ／ｃｍ２である。培養したＨｅｐＧ２細胞は凝集塊を形成し、凝集塊内には多くの死細胞が観察され、最長２１日後の細胞ではその殆どが死細胞として観察された（２１培養の細胞凝集塊の様子、図２参照）。また、培養７日後のＣＹＰ３Ａ４活性は１２，３８１±１，３００（ＲＬＵ／１０６ｃｅｌｌｓ）であり、最長２１日間の評価において活性は９，６１２±７１１（ＲＬＵ／１０６ｃｅｌｌｓ）であり活性は低く、活性の長期安定性は４／５以下に減衰した。
【０１１３】
本比較例から、酸素透過度が低い基材上に形成したコラーゲンビトリゲル薄膜上でのＨｅｐＧ２細胞の培養では、基材からの酸素供給が無いことに起因すると思われる現象で、多くの細胞が死滅することが分かった。
【０１１４】
［比較例２］（コラーゲンビトリゲル膜単独層（コラーゲンビトリゲル膜チャンバー）でのＨｅｐＧ２細胞の培養）
コラーゲンビトリゲル膜乾燥体の目付け量が１ウェルあたり０．５ｍｇ／ｃｍ２である、市販のコラーゲンビトリゲル膜チャンバー（関東化学製、ａｄ−ＭＥＤ  Ｖｉｔｒｉｇｅｌ、以下、ａｄ−Ｍｅｄ容器とする）をプラスチック製支持基板上に固定してａｄ−Ｍｅｄ容器内にＨｅｐＧ２細胞を播種（密度：５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２）し、３７℃のＣＯ２インキュベーター内で２日間にわたり液相固相の界面培養を行った。その後、培養３日目よりａｄ−Ｍｅｄ容器をプラスチック製支持基板より外して、実質的にコラーゲンビトリゲル膜が単層の状態となるように液相気相の界面培養を開始した。
【０１１５】
実施例２と同様に、モデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄、死細胞の確認、ＣＹＰ３Ａ４活性評価した。その結果、３日目までの培養では高い細胞生存率を示し、７日目でもモデル薬物代謝物の毛細胆管様構造への排泄も良好に観察され、ＣＹＰ３Ａ４活性は７日目でも２８，９１３±８，３４４（ＲＬＵ／１０６ｃｅｌｌｓ）と高い活性を示した。しかしながら、実質、単層膜状態のコラーゲンビトリゲル膜で培養した９日目において、容器底部の撓みが許容できないレベルで増大し、ＨｅｐＧ２細胞の培養ができず、培養９日目以降のモデル薬物の代謝物の毛細胆管構造への排泄、細胞生存率の確認、ＣＹＰ３Ａ４活性測定をできなかった。
【０１１６】
本比較例から、コラーゲンビトリゲル単層膜の状態では、例えば、実施例２と比較して単面積当たり１０倍量のコラーゲンビトリゲル膜乾燥体を使用しても、コラーゲンビトリゲル単層膜の担体では膜強度を維持できず大きな撓みを生じ、ＣＹＰ３Ａ４の初期活性には優れていても長期培養には利用できないことが分かった。
【図１】
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【図２】
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