(57)【要約】      （修正有）【課題】少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペン化合物を含むサンゴ複合エキスであって、有効成分として、例えば、皮膚外用組成物、化粧料組成物又は医薬組成物に添加され得るサンゴ複合エキス、それを含む組成物、及びその製造方法を提供する。【解決手段】サンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるサンゴ複合エキスであって、前記サンゴ出発原料は、ムラサキハナヅタ、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム及びブリアレウム・ステケイからなる群から選ばれ、前記サンゴ複合エキスは少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物を含み、前記ブリアラン型ジテルペノイド化合物は、エクスカバトリドＢ、エクスカバトリドＣ、エクスカバトリドＺ、ブリアノリド、ブリアレノリドＸ及びブリアレノリドＷからなる群から選ばれる、サンゴ複合エキスにより、上記課題を解決する。【選択図】図１
2020094027.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるサンゴ複合エキスであって、前記サンゴ出発原料は、ムラサキハナヅタ（Ｂｒｉａｒｅｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム（Ｂ．ｅｘｃａｖａｔｕｍ）及びブリアレウム・ステケイ（Ｂ．ｓｔｅｃｈｅｉ）からなる群から選ばれ、前記サンゴ複合エキスは少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド（ｂｒｉａｒａｎｅ−ｔｙｐｅ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ）化合物を含み、前記ブリアラン型ジテルペノイド化合物は、エクスカバトリドＢ（ｅｘｃａｖａｔｏｌｉｄｅ  Ｂ；ＥＸＣ−Ｂ）、エクスカバトリドＣ（ＥＸＣ−Ｃ）、エクスカバトリドＺ（ＥＸＣ−Ｚ）、ブリアノリド（ｂｒｉａｎｏｌｉｄｅ；ＢＲ）、ブリアレノリドＸ（ＢＲ−Ｘ）及びブリアレノリドＷ（ＢＲ−Ｗ）からなる群から選ばれる、サンゴ複合エキス。
【請求項２】
請求項１に記載のサンゴ複合エキスを有効成分とする組成物。
【請求項３】
皮膚外用組成物、化粧料組成物、及び医薬組成物を含む請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
第１の溶剤でサンゴ出発原料に粗抽出工程を行うことで粗エキスを得ること、及び粗エキスに、前記粗エキスに勾配溶離処理を行うカラムクロマトグラフィー工程を行うことで、サンゴ複合エキスを得ることを含む、サンゴ複合エキスの製造方法であって、
前記第１の溶剤は水、アルコール系溶剤、エステル系溶剤、アルカン系溶剤及びケトン系溶剤を含み、前記サンゴ出発原料は、ムラサキハナヅタ、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム及びブリアレウム・ステケイからなる群から選ばれ、
前記勾配溶離処理は第２の溶剤で行い、前記第２の溶剤は前記エステル系溶剤及び／又は前記アルカン系溶剤を含み、前記サンゴ複合エキスは少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物を含み、前記ブリアラン型ジテルペノイド化合物はエクスカバトリドＢ、エクスカバトリドＣ、エクスカバトリドＺ、ブリアノリド、ブリアレノリドＸ及びブリアレノリドＷからなる群から選ばれる、サンゴ複合エキスの製造方法。
【請求項５】
前記サンゴ出発原料は、乾燥処理されたものである、請求項４に記載のサンゴ複合エキスの製造方法。
【請求項６】
前記粗抽出処理は、溶剤抽出処理又は超臨界抽出処理を含む、請求項４に記載のサンゴ複合エキスの製造方法。
【請求項７】
前記溶剤抽出処理は、さらに超音波処理及び／又はマイクロ波抽出処理との併用を含む、請求項６に記載のサンゴ複合エキスの製造方法。
【請求項８】
前記アルコール系溶剤と超臨界流体とを混合して、前記超臨界抽出処理を行う、請求項６に記載のサンゴ複合エキスの製造方法。
【請求項９】
前記アルコール系溶剤は、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールを含み、炭素数１〜３のアルコールである短鎖アルコール類であり、前記エステル系溶剤は、酢酸エチル（ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、エチレングリコールメチルエーテルアセテート（ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）及びエチレングリコールエチルエーテルアセテート（ｅｔｈｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）を含み、前記アルカン系溶剤はｎ−ヘキサン（ｎ−ｈｅｘａｎｅ）を含み、前記ケトン系溶剤はアセトン（ａｃｅｔｏｎｅ）を含む、請求項４に記載のサンゴ複合エキスの製造方法。
【請求項１０】
前記第２の溶剤の前記エステル系溶剤は酢酸エチルを含み、前記第２の溶剤の前記アルカン系溶剤はｎ−ヘキサンを含み、前記勾配溶離工程を行う際、前記第２の溶剤の前記ｎ−ヘキサンと前記酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、１００：０ないし０：１００である、請求項４に記載のサンゴ複合エキスの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海洋性天然エキスに関し、特にサンゴ複合エキス、それを含む組成物、及びその製造方法、並びにその適用に関する。
【背景技術】
【０００２】
海は地球の表面積の約７０％を占め、地球の生命を生み育てる起源である。海洋生物は、進化の過程で、高塩、高圧、酸素欠乏などの過酷な環境に適応することでその生存と競争に有利になるために、生成される二次代謝産物が陸源性の天然化合物と異なり、独特の構造を持つ。
【０００３】
しかし、最近、一部の海洋環境は過剰開発及び人為的な破壊によって、海洋資源と自然の生態環境がさまざまな程度の被害を受けている。海洋環境の生態を保全する前提において、海洋資源を如何に活用するかは現在の研究のポイントの一つである。
【０００４】
台湾の海域のサンゴ礁生態系は、発達しており、多くの生物種があり、サンゴによって生成される二次代謝産物についてのさらなる研究に非常に好適である。このことを鑑みて、台湾の大量にサンゴを養殖する経験を運用する必要がある。海洋生態系を保全し、海洋生物資源への衝撃を軽減させるのみならず、活性天然成分を開発することで海洋生物資源の適用を促進することができる。
【発明の概要】
【０００５】
そのため、本発明の一態様では、サンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるサンゴ複合エキスであって、少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド（ｂｒｉａｒａｎｅ−ｔｙｐｅ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ）化合物を含むサンゴ複合エキスを提供する。
【０００６】
本発明の別の態様では、ムラサキハナヅタに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるサンゴ複合エキスであって、エクスカバトリドＢ（ｅｘｃａｖａｔｏｌｉｄｅ  Ｂ；ＥＸＣ−Ｂ）とエクスカバトリドＺ（ＥＸＣ−Ｚ）を含むサンゴ複合エキスを提供する。
【０００７】
本発明のさらに別の態様では、ブリアレウム・エクスカヴァトゥムに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるサンゴ複合エキスであって、エクスカバトリドＢ（ＥＸＣ−Ｂ）とエクスカバトリドＣ（ＥＸＣ−Ｃ）を含むサンゴ複合エキスを提供する。
【０００８】
本発明のさらに別の態様では、ブリアレウム・ステケイに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるサンゴ複合エキスであって、ブリアノリド（ｂｒｉａｎｏｌｉｄｅ；ＢＲ）とブリアレノリドＸ（ｂｒｉａｒｅｎｏｌｉｄｅ  Ｘ；ＢＲ−Ｘ）とブリアレノリドＷ（ＢＲ−Ｗ）を含むサンゴ複合エキスを提供する。
【０００９】
本発明のさらに別の態様では、上記サンゴ複合エキスを有効成分とする組成物を提供する。
【００１０】
本発明のさらに別の態様では、サンゴ出発原料に粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程を行ったことで、サンゴ複合エキスを得ることを含むサンゴ複合エキスの製造方法を提供する。
【００１１】
本発明の上記態様によれば、サンゴ複合エキスが提案される。一実施例において、このサンゴ複合エキスは、サンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものであり、前記サンゴ出発原料は、ムラサキハナヅタ（Ｂｒｉａｒｅｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム（Ｂｒｉａｒｅｕｍ  ｅｘｃａｖａｔｕｍ；Ｂ．ｅｘｃａｖａｔｕｍ）及びブリアレウム・ステケイ（Ｂｒｉａｒｅｕｍ  ｓｔｅｃｈｅｉ；Ｂ．ｓｔｅｃｈｅｉ）を含んでもよいが、これらに限定されない。前記サンゴ複合エキスは、少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物を含むものであり、ブリアラン型ジテルペノイド化合物は、例えば、エクスカバトリドＢ（ＥＸＣ−Ｂ）、エクスカバトリドＣ（ＥＸＣ−Ｃ）、エクスカバトリドＺ（ＥＸＣ−Ｚ）、ブリアノリド（ＢＲ）、ブリアレノリドＸ（ＢＲ−Ｘ）及びブリアレノリドＷ（ＢＲ−Ｗ）であってもよい。
【００１２】
本発明の上記態様によれば、別にサンゴ複合エキスが提案される。一実施例において、このサンゴ複合エキスは、ムラサキハナヅタに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものであり、前記サンゴ複合エキスは、例えば、エクスカバトリドＢ及びエクスカバトリドＺを含んでもよい。
【００１３】
本発明の上記態様によれば、さらにサンゴ複合エキスが提案される。一実施例において、このサンゴ複合エキスは、ブリアレウム・エクスカヴァトゥムに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものであり、前記サンゴ複合エキスは、例えば、エクスカバトリドＢ及びエクスカバトリドＣを含んでもよい。
【００１４】
本発明の上記態様によれば、さらにサンゴ複合エキスが提案される。一実施例において、このサンゴ複合エキスは、ブリアレウム・ステケイに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものであり、前記サンゴ複合エキスは、少なくとも２種類のブリアノリド、ブリアレノリドＸ及びブリアレノリドＷを含んでもよい。
【００１５】
本発明の上記態様によれば、さらに、上記サンゴ複合エキスを有効成分とする組成物が提供される。
【００１６】
本発明の上記態様によれば、さらにサンゴ複合エキスの製造方法が提供される。一実施例において、この方法は、まず第１の溶剤でサンゴ出発原料に粗抽出工程を行うことにより粗エキスを得る。上記実施例において、サンゴ出発原料は、例えば、ムラサキハナヅタ、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム及びブリアレウム・ステケイであってもよく、第１の溶剤は、水、アルコール系溶剤、エステル系溶剤、アルカン系溶剤及びケトン系溶剤を含んでもよい。
【００１７】
次いで、粗エキスにカラムクロマトグラフィー工程を行う（クロマトグラフィーカラムで上記粗エキスに勾配溶離処理を行う）ことにより、サンゴ複合エキスを得ることを含む。上記実施例において、勾配溶離処理は第２の溶剤で行ってもよい。第２の溶剤は上記エステル系溶剤及び／又はアルカン系溶剤を含んでもよく、サンゴ複合エキスは少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物を含んでもよい。また、ブリアラン型ジテルペノイド化合物はエクスカバトリドＢ、エクスカバトリドＣ、エクスカバトリドＺ、ブリアノリド、ブリアレノリドＸ及びブリアレノリドＷを含んでもよい。
【００１８】
本発明の一実施例において、上記サンゴ出発原料は、凍結乾燥処理されたものであってもよい。
【００１９】
本発明の一実施例において、上記粗抽出工程は、さらに超音波処理及び／又はマイクロ波抽出処理を併用してもよい。
【００２０】
本発明の一実施例において、上記アルコール系溶剤は、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールであってもよい。
【００２１】
本発明の一実施例において、上記エステル系溶剤は、例えば、酢酸エチル（ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、エチレングリコールメチルエーテルアセテート（ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）及びエチレングリコールエチルエーテルアセテート（ｅｔｈｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）であってもよい。
【００２２】
本発明の一実施例において、上記ケトン系溶剤は、例えば、アセトン（ａｃｅｔｏｎｅ）であってもよい。
【００２３】
本発明の一実施例において、上記第２の溶剤のエステル系溶剤は、例えば、酢酸エチルであってもよく、第２の溶剤のアルカン系溶剤は、例えば、ｎ−ヘキサンであってもよい。
【００２４】
本発明の一実施例において、上記勾配溶離工程を行う際、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、例えば、１００：０ないし０：１００であってもよい。
【００２５】
本発明のサンゴ複合エキス、それを含む組成物及びその製造方法を適用する場合、サンゴ複合エキスは、少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物を含み、有効成分として組成物に添加され得る。
下記添付図面の説明は、以下のように、本発明の上記又は他の目的、特徴、メリット、及び実施例をより分かりやすくするためのものである。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】本発明の一実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法を示す部分的なフローチャートである。
【図２】本発明の別の実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法を示す部分的なフローチャートである。
【図３】本発明のさらに別の実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法を示す部分的なフローチャートである。
【図４】本発明のさらに別の実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法を示す部分的なフローチャートである。
【図５】表１における異なる粗抽出処理により得られる粗エキスの抽出率を示す棒グラフである。図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明で言及された単数形の「一」、「一つ」及び「前記」は、文脈に別途規定されていない限り、複数形を含む。数値範囲（例えば、１０％〜１１％のＡ）は、特に説明されていない限り、上限値、下限値を含む（即ち、１０％≦Ａ≦１１％）。数値範囲は、下限値が規定されていない場合（例えば、０．２％未満のＢ、又は０．２％以下のＢ）、下限値が０である可能性があることを意味する。上記用語は、本発明を制限するものではなく、本発明を説明及び理解するためのものである。
【００２８】
本発明は、サンゴ原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるサンゴ複合エキスであって、少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド（ｂｒｉａｒａｎｅ−ｔｙｐｅ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ）化合物を含むサンゴ複合エキスを提供する。
【００２９】
ここでいう本発明の「サンゴ複合エキス」とは、サンゴ原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものである。一実施例において、前記サンゴ出発原料は、ムラサキハナヅタ（Ｂｒｉａｒｅｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム（Ｂ．ｅｘｃａｖａｔｕｍ）及びブリアレウム・ステケイ（Ｂ．ｓｔｅｃｈｅｉ）を含んでもよいが、これらに限定されない。
【００３０】
この実施例において、これにより得られるサンゴ複合エキスは、少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物を含んでもよい。ここでいう少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物とは、サンゴ複合エキスにおける含有量の上位２位のものであるが、サンゴ複合エキスは２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物のみを含むものに制限されるものではない。上記実施例において、ブリアラン型ジテルペノイド化合物は、例えば、エクスカバトリドＢ（ｅｘｃａｖａｔｏｌｉｄｅ  Ｂ；ＥＸＣ−Ｂ）、エクスカバトリドＣ（ＥＸＣ−Ｃ）、エクスカバトリドＺ（ＥＸＣ−Ｚ）、ブリアノリド（ｂｒｉａｎｏｌｉｄｅ；ＢＲ）、ブリアレノリドＸ（ＢＲ−Ｘ）及びブリアレノリドＷ（ＢＲ−Ｗ）であってもよい。
【００３１】
一例において、上記サンゴ複合エキスは、ムラサキハナヅタに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものであってもよく、このサンゴ複合エキスは、エクスカバトリドＢとエクスカバトリドＺを含む。
【００３２】
別の例において、上記サンゴ複合エキスは、ブリアレウム・エクスカヴァトゥムに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものであってもよく、このサンゴ複合エキスは、エクスカバトリドＢとエクスカバトリドＣを含む。
【００３３】
さらに別の例において、上記サンゴ複合エキスは、ブリアレウム・ステケイに由来するサンゴ出発原料から粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により得られるものであってもよく、このサンゴ複合エキスは、ブリアノリドとブリアレノリドＸとブリアレノリドＷを含む。
【００３４】
図１を参照されたい。図１は本発明の一実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法１００を示す部分的なフローチャートである。まず、工程１０１に示されるように、サンゴ出発原料を提供する。一実施例において、前記サンゴ出発原料は、ムラサキハナヅタ（Ｂ．  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム（Ｂ．ｅｘｃａｖａｔｕｍ）及びブリアレウム・ステケイ（Ｂ．ｓｔｅｃｈｅｉ）を含んでもよいが、これらに限定されない。前記サンゴ出発原料は、サンゴ出発原料を除去するために、前処理、例えば、常圧乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥、減圧凍結乾燥等の周知の乾燥処理が選択的に行われてもよいが、サンゴ複合エキスの含有量及び活性は影響されず、損なわれない。
【００３５】
次に、工程１０３に示されるように、第１の溶剤でサンゴ出発原料に行うことで粗エキスを得る粗抽出工程を行う。一実施例において、第１の溶剤の種類は特に制限されないが、好ましくは極性パラメータＰ’がサンゴ複合エキスの極性パラメータＰ’と近いものである。例えば、エクスカバトリドＢの分配係数（ｐａｒｔｉｔｉｏｎ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ；ｌｏｇ  Ｐ）は約０．９であり、オクタノール／水の分配係数の対数値（Ｃｌｏｇ  Ｐ）は約３．５５６８であれば、第１の溶剤の極性パラメータＰ’は０．１ないし６．０であってもよく、好ましくは１．０ないし５．４である。
【００３６】
上記実施例において、第１の溶剤の具体例は、水、アルコール系溶剤、エステル系溶剤、アルカン系溶剤及びケトン系溶剤を含んでもよいが、これらに限定されない。アルコール系溶剤は、短鎖アルコール、例えば、炭素数１ないし３のアルコールであり、その具体例は、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロパノールであってもよい（ただし、アリルアルコール（ａｌｌｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）及びプロパルギルアルコール（ｐｒｏｐａｒｇｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ）を除く）。エステル系溶剤は、酢酸エチル（ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、エチレングリコールメチルエーテルアセテート（ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）及びエチレングリコールエチルエーテルアセテート（ｅｔｈｏｘｙｅｔｈａｎｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）を含んでもよいが、これらに限定されない。アルカン系溶剤はｎ−ヘキサン（ｎ−ｈｅｘａｎｅ）を含んでもよいが、これに限定されない。ケトン系溶剤はアセトン（ａｃｅｔｏｎｅ）、メチルエチルケトン（ｍｅｔｈｙｌ  ｅｔｈｙｌ  ｋｅｔｏｎｅ；ＭＥＫ）を含んでもよいが、これらに限定されない。
【００３７】
上記実施例において、上記サンゴ出発原料と第１の溶剤との固液比は特に制限されない。一例において、上記サンゴ出発原料と第１の溶剤との固液比（ｇ：ｍＬ）は、例えば、１：１ないし１：２０であってもよいが、好ましくは１：１ないし１：１５であり、より好ましくは１：１ないし１：１０である。
【００３８】
上記実施例において、粗抽出工程は、単独で第１の溶剤で溶剤抽出処理を行うか、又は溶剤抽出処理と超音波処理及び／又はマイクロ波抽出処理とを併用するか、もしくは上記アルコール系溶剤と超臨界流体とを混合し、超臨界抽出処理を行ってもよい。上記超臨界流体は、例えば、二酸化炭素であってもよい。
【００３９】
一般的には、上記第１の溶剤の沸点はサンゴ複合エキスの融点（約２２４℃）よりも低いため、超音波処理及び／又はマイクロ波処理は、第１の溶剤の沸点の温度で粗抽出工程を行うことが好適である。一具体例において、粗抽出工程は、例えば、１５６℃未満の温度、１４５℃未満の温度、１００℃未満の温度、７８℃の温度、又は７７℃の温度で行ってもよいが、上記挙げられるものに限定されず、使用される抽出溶剤に応じて決める。
【００４０】
上記実施例において、粗抽出工程を行う回数は特に制限されず、１回行ってもよく、又は粗エキスの産量を高めるために複数回を繰り返してもよい。一例において、粗抽出工程は、１回ないし１０回を繰り返してもよいが、１回ないし６回を繰り返すことが好ましい。
【００４１】
上記実施例において、サンゴ出発原料は、ムラサキハナヅタ、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム及びブリアレウム・ステケイを含んでもよいが、これらに限定されない。一例において、サンゴ出発原料は、未処理のもの又は凍結乾燥処理されたものであってもよい
【００４２】
そして、図１の工程１０７に示されるように、一実施例において、上記粗抽出工程の後に、クロマトグラフィーカラムで粗エキスに勾配溶離処理を行うクロマトグラフィーカラムカラムクロマトグラフィー工程を行うことで、工程１０９に示されるように、サンゴ複合エキスを含有する画分を得ることができる。
【００４３】
上記実施例において、前記クロマトグラフィーカラムは、市販のシリカゲルカラムを用いて行ってもよく、前記勾配溶離処理は、第２の溶剤で行ってもよく、第２の溶剤は上記エステル系溶剤及び／又はアルカン系溶剤を含む。一例において、第２の溶剤のエステル系溶剤は、例えば、酢酸エチルであってもよく、第２の溶剤のアルカン系溶剤は、例えば、ｎ−ヘキサンであってもよい。勾配溶離工程を行う際、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、例えば、１００：０ないし０：１００であってもよいが、好ましくは8０：２０ないし４０：６０である。
【００４４】
いくつかの具体例において、ムラサキハナヅタ（Ｂ．ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）から得られる粗エキスに勾配溶離工程を行う際、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、例えば、６０：４０ないし５０：５０であってもよい。別のいくつかの具体例において、ブリアレウム・エクスカヴァトゥム（Ｂ．ｅｘｃａｖａｔｕｍ）から得られる粗エキスに勾配溶離工程を行う際、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、例えば、８０：２０ないし７０：３０であってもよい。他の具体例において、ブリアレウム・ステケイ（Ｂ．ｓｔｅｃｈｅｉ）から得られる粗エキスに勾配溶離工程を行う際、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、例えば、７０：３０であってもよい。
【００４５】
補充説明であるが、他の実施例において、本発明のサンゴ複合エキスの製造方法１００は、脂質除去の工程を選択的に行ってもよく、脂質除去の工程は、上記粗抽出工程（例えば、図１の工程１０３）の後及び／又はカラムクロマトグラフィー工程（例えば、図１の工程１０７）と同時に行ってもよい。上記粗抽出工程（例えば、図１の工程１０３）の後に脂質除去の工程を行う例において、粗エキスをエステル系溶剤に冷浸し、エステル系溶剤で脂質を沈降させて、粗エキスの脂質の大部分を除去してもよい。別の方法は、カラムクロマトグラフィー工程で脂質除去の工程を行う例において、粗エキスをクロマトグラフィーカラムに注入し、勾配溶離処理において、極性が低いアルカン系溶剤（例えば、ｎ−ヘキサン）及び／又はエステル系溶剤（例えば、酢酸エチル）で溶離することで粗エキスの脂質の大部分を除去することができ、アルカン系溶剤（例えば、ｎ−ヘキサン）及び／又はエステル系溶剤（例えば、酢酸エチル）の体積比は、例えば、１００：０ないし９５：５であってもよい。
【００４６】
いくつかの実施例において、上記得られるサンゴ複合エキスを含有する各画分を、それぞれ単独で又は合併した後、周知の脱水方法（例えば、減圧濃縮法、凍結真空乾燥法、スプレー乾燥法等）で第２の溶剤を除去することで、サンゴ複合エキスを得ることができる。その後、周知の分析方法、例えば、薄層クロマトグラフィー法（ｔｈｉｎ−ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ＴＬＣ）、核磁気共鳴分光法（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ；ＮＭＲ）、赤外分光法（ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ；ＩＲ）、質量分析法（ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ；ＭＳ）等で分析した後、得られるサンゴ複合エキスは、ブリアラン型ジテルペノイド化合物、例えば、エクスカバトリドＢ、エクスカバトリドＣ、エクスカバトリドＺ、ブリアノリド、ブリアレノリドＸ及びブリアレノリドＷを少なくとも２種類含む。
【００４７】
補充説明であるが、上記特定の品種のサンゴ出発原料を用いていない場合又は上記の粗抽出工程及びカラムクロマトグラフィー工程により抽出していない場合、得られるサンゴ複合エキスは、上記少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペノイド化合物を有しない。
【００４８】
適用される場合、上記サンゴ複合エキスは、有効成分として、例えば、皮膚外用組成物、化粧料組成物、医薬組成物等の組成物に添加され得る。一例において、上記組成物は、例えば、塗抹、被覆等の手法で、局所的に試験部位に付与してもよく、適用される剤型は、例えば、乳液、クリーム、ハイドロゲル、ゼリー、ゼリー状ドレッシング、スポンジ状ドレッシング、膜状ドレッシング、又はこれらの任意の組み合わせであってもよい。適用される場合、サンゴ複合エキスの上記組成物における有効量は、例えば、０．００１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬであってもよい。
【００４９】
以下、本発明の適用についていくつかの実施例で説明するが、それらは本発明を限定するためのものではなく、当業者は、本発明の要旨及び範囲を逸脱しない限り、各種の変更及び修飾を行うことができる
実施例一：サンゴ複合エキスの製造
１．ムラサキハナヅタからサンゴ複合エキスを製造する
【００５０】
本実施例は、サンゴ出発原料としてムラサキハナヅタ（Ｂｒｉａｒｅｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ；ＢＶ）を選択し使用し、サンゴ複合エキスを得る。図２を参照されたい。図２は、本発明の別の実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法２００を示す部分的なフローチャートである。まず、工程２０１に示されるように、ＢＶサンゴ凍結乾燥材料を提供する。ＢＶサンゴ材料は、初期湿重量が２３１ｇであり、凍結乾燥後の乾燥重量が９５ｇである。次に、工程２０３に示されるように、第１の溶剤として酢酸エチル（１０００ｍＬ）で、ＢＶサンゴ凍結乾燥材料に、溶剤抽出処理で２０回繰り返す粗抽出工程を行うことにより、酢酸エチル層から粗エキス（３．３ｇ）を得る。その後、粗エキス（即ち、酢酸エチル層）にカラムクロマトグラフィー工程を行う。市販のクロマトグラフィーカラム（その充填物はシリカゲル（７０〜２３０メッシュ、Ｍｅｒｃｋ）である）で粗エキスに勾配溶離処理を行い、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルとを混合した第２の溶剤を溶離液とし、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、順に１００：０〜９５：５（即ち、純ｎ−ヘキサン）（ＢＶ１、０．１１ｇ）、９０：１０（ＢＶ２、０．５５ｇ）、８０：２０（ＢＶ３、０．２０ｇ）、７０：３０（ＢＶ４、０．２３ｇ）、６０：４０（ＢＶ５、０．８３ｇ）、５０：５０（ＢＶ６、０．２２ｇ）及び４０：６０〜０：１００（即ち、純酢酸エチル）（ＢＶ７、１．０４  ｇ）であることで、ＢＶ１ないしＢＶ７の７つの画分を得る。
【００５１】
上記で得られる画分をＴＬＣ、ＮＭＲ、ＩＲ、ＭＳ等で分析したところ、画分ＢＶ１は脂質を含み、画分ＢＶ６及び画分ＢＶ７はサンゴ複合エキスを含有し、工程２０９に示されるように、そのうち画分ＢＶ６は０．０２ｇのエクスカバトリドＺ（ＥＸＣ−Ｚ）を含み、画分ＢＶ７は０．６ｇのエクスカバトリドＢ（ＥＸＣ−Ｂ）を含む。
２．ブリアレウム・エクスカヴァトゥムからサンゴ複合エキスを製造する
【００５２】
本実施例は、サンゴ出発原料としてブリアレウム・エクスカヴァトゥム（Ｂ．ｅｘｃａｖａｔｕｍ；ＢＥ）を選択し使用し、サンゴ複合エキスを得る。図３を参照されたい。図３は、本発明の別の実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法３００を示す部分的なフローチャートである。まず、工程３０１に示されるように、ＢＥサンゴ凍結乾燥材料を提供する。ＢＶサンゴ材料は、凍結乾燥重量が１９００ｇである。次に、工程３０３に示されるように、第１の溶剤として酢酸エチル（２０００ｍＬ）で、ＢＥサンゴ凍結乾燥材料に、溶剤抽出処理又は溶剤抽出処理と超音波処理との併用を含む粗抽出工程を２０回繰り返すことにより、酢酸エチル層から粗エキス（９６．１ｇ）を得る。
【００５３】
その後、粗エキス（９６．１ｇ）を酢酸エチル（８００ｍＬ）に冷浸し、酢酸エチルで脂質を沈降させて、粗エキスの脂質の大部分（５．６ｇ）を除去する。その後、工程３０７に示されるように、粗エキス（即ち、酢酸エチル層、９０．５ｇ）にカラムクロマトグラフィー工程を行う。上記と同じ市販のクロマトグラフィーカラムで粗エキスに勾配溶離処理を行い、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルとを混合した第２の溶剤を溶離液とし、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、順に１００：０（即ち、純ｎ−ヘキサン）（ＢＥ１）、９５：５（ＢＥ２）、９０：１０（ＢＥ３）、８０：２０（ＢＥ４）、７０：３０（ＢＥ５）、６０：４０（ＢＥ６）、５０：５０（ＢＥ７）及び４０：６０〜０：１００（即ち、純酢酸エチル）（ＢＥ８）であることで、ＢＥ１ないしＢＥ８の８つの画分を得る。
【００５４】
上記で得られる画分をＴＬＣ、ＮＭＲ、ＩＲ、ＭＳ等で分析したところ、画分ＢＥ１及び画分ＢＥ２は脂質を含み、画分ＢＥ４及び画分Ｂ５はサンゴ複合エキスを含有し、工程３０９に示されるように、そのうち画分ＢＥ４は１６．２ｇのエクスカバトリドＢ（ＥＸＣ−Ｂ）を含み、画分ＢＥ５は３．４ｇのエクスカバトリドＣ（ＥＸＣ−Ｃ）を含む。
【００５５】
なお、異なる抽出方法の抽出効果を評価するために、上記溶剤抽出処理は、さらに、市販の攪拌設備、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ社のホットマグネチックスターラー（直接溶剤抽出ともいう）を使用してもよい。        回転速度は約１５０ｒｐｍであり、毎回の抽出を室温で連続して２時間行い、ろ過してから、第１の溶剤を加えて抽出を繰り返すことを５回繰り返す。
【００５６】
上記溶剤抽出処理と超音波処理との併用は、市販の超音波設備、例えば、超音波設備Ａ（ＳＯＮＩＣＳ社の製品、消費電力１３０Ｗ、周波数２０ｋＨｚ、出力１００％）及び超音波設備Ｂ（ＤＥＬＴＡ社の製品ＤＣ９００Ｈ、消費電力９００Ｗ、周波数４０ｋＨｚ、出力１００％）を用いてもよい。超音波設備Ａを用いて処理（超音波破砕抽出ともいう）を行う場合、１０秒間処理する度に１秒間停止するように、連続して２時間行い、ろ過してから、第１の溶剤を加えて溶剤抽出処理を行い、抽出を繰り返すことを５回繰り返す。超音波設備Ｂを用いて処理（超音波洗浄抽出ともいう）を行う場合、毎回の処理を連続して２時間行い、ろ過してから、第１の溶剤を加えて溶剤抽出処理を行い、抽出を繰り返すことを５回繰り返す。上記異なる粗抽出方法による抽出率を表１及び図５に示す。
【００５７】
【表１】
2020094027.tif 000003
【００５８】
同時に表１及び図５を参照されたい。これらは、粗抽出処理で得られる粗エキスの抽出率（表１）及びその棒グラフ（図５）を示す。図５において、縦軸はＢＥサンゴ材料の凍結乾燥重量を１００％とした時に得られる粗エキスの抽出率（％）を示す。
【００５９】
表１及び図５の結果からわかるように、溶剤抽出処理と超音波処理との併用は、確かに粗抽出物の抽出率を増加させることができ、かつ超音波破砕抽出の抽出効率は、超音波洗浄抽出及び直接溶剤抽出の抽出効率よりも優れる。
３．ブリアレウム・ステケイからサンゴ複合エキスを製造する
【００６０】
本実施例は、サンゴ出発原料としてブリアレウム・ステケイ（Ｂ．ｓｔｅｃｈｅｉ；ＢＳ）を選択し使用し、サンゴ複合エキスを得る。図４を参照されたい。図４は、本発明の別の実施例にかかるサンゴ複合エキスの製造方法４００を示す部分的なフローチャートである。まず、工程４０１に示されるように、ＢＳサンゴ凍結乾燥材料を提供する。ＢＶサンゴ材料は、初期湿重量が６３２０ｇであり、凍結乾燥後の乾燥重量が２７８０ｇである。次に、工程４０３に示されるように、第１の溶剤として酢酸エチル（３０００ｍＬ）で、ＢＳサンゴ凍結乾燥材料に、溶剤抽出処理で２０回繰り返す粗抽出工程を行うことにより、酢酸エチル層から粗エキス（１２６．９６ｇ）を得る。その後、粗エキス（即ち、酢酸エチル層）にカラムクロマトグラフィー工程を行う。上記と同じ市販のクロマトグラフィーカラムで粗エキスに勾配溶離処理を行い、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルとを混合した第２の溶剤を溶離液とし、第２の溶剤のｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの濃度勾配（体積比）は、順に１００：０（即ち、純ｎ−ヘキサン）〜９５：５（ＢＳ１、４２．０９ｇ）、９０：１０〜８０：２０（ＢＳ２、３．８１ｇ）、７０：３０〜６０：４０（ＢＳ３、４．６３ｇ）、５０：５０〜４０：６０（ＢＳ４、１４．７１ｇ）、３０：７０〜０：１００（即ち、純酢酸エチル）（ＢＳ５、２５．８９ｇ）、９０：１０〜７０：３０（ＢＳ６、２．３３ｇ）、５０：５０（ＢＳ７、７．２３ｇ）及び３０：７０〜０：１００（即ち、純メタノール）（ＢＳ８、２４．７８ｇ）であることで、ＢＳ１ないしＢＳ８の８つの画分を得る。
【００６１】
上記で得られる画分をＴＬＣ、ＮＭＲ、ＩＲ、ＭＳ等で分析したところ、画分ＢＳ１及びＢＳ２は脂質を含み、画分ＢＶ５はサンゴ複合エキスを含有し、３．７９ｇのブリアノリド（ＢＲ、式１に示される）、０．０１ｇのブリアレノリドＸ（ＢＲ−Ｘ、式２に示される）及び０．０２ｇのブリアレノリドＷ（ＢＲ−Ｗ、式３に示される）を含む。
【化１】
2020094027.tif 000004
【００６２】
補充説明であるが、本発明のサンゴ複合エキスは、有効成分として、例えば、皮膚外用組成物、化粧料組成物、医薬組成物等の組成物に添加され得る。
【００６３】
以上のように、本発明は、特定のサンゴの品種、特定の抽出方法、又は特定の評価方法を例示として、本発明のサンゴ複合エキス、それを含む組成物及びその製造方法、並びにその適用を説明したが、当業者であればわかるように、本発明はこれに限定されなず、本発明の要旨及び範囲を逸脱しない限り、本発明は他のサンゴの品種、他の抽出方法、又は他の評価方法を用いて行うことができる。
【００６４】
上記実施例からわかるように、本発明のサンゴ複合エキス、それを含む組成物及びその製造方法のメリットは、サンゴ複合エキスが少なくとも２種類のブリアラン型ジテルペン化合物を含むものであり、有効成分として組成物に添加され得ることにある。
【００６５】
本発明はいくつかの実施例により開示されたが、それらは本発明を限定するためのものではなく、当業者は、本発明の要旨及び範囲を逸脱しない限り、各種の変更及び修飾を行うことができるため、本発明の保護範囲は添付の特許請求の範囲によって定められたものを基準とする。
【符号の説明】
【００６６】
１００、２００、３００、４００：方法
１０１：サンゴ出発原料を提供する
２０１：ＢＶサンゴ凍結乾燥材料を提供する
３０１：ＢＥサンゴ凍結乾燥材料を提供する
４０１：ＢＳサンゴ凍結乾燥材料を提供する
１０３、２０３、３０３、４０３：粗抽出工程を行う
１０７、２０７、３０７、４０７：カラムクロマトグラフィー工程を行う
１０９、２０９、３０９、４０９：サンゴ複合エキスを得る
【図１】
2020094027.tif 000005
【図２】
2020094027.tif 000006
【図３】
2020094027.tif 000007
【図４】
2020094027.tif 000008
【図５】
2020094027.tif 000009