(57)【要約】      （修正有）【課題】抗腫瘍効果を有する新規化合物及びその製造方法の提供。【解決手段】下記式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。2020094039.tif 000097｛式中、Ｘは−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−ＳＯ−、−Ｓ−ＳＯ２−、−Ｓ−ＣＨ２−Ｓ−及び−Ｓ−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｓ−のいずれかで表される基以外の架橋基を示し、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを表し、ＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離が０．４０ｎｍ未満である。｝【選択図】図２
2020094039.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）
【化１】
2020094039.tif 000083
｛式中、Ｘは−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−ＳＯ−、−Ｓ−ＳＯ２−、−Ｓ−ＣＨ２−Ｓ−及び−Ｓ−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｓ−のいずれかで表される基以外の架橋基を示す。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを示す。
式中、ＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離が０．４０ｎｍ未満であるか、又はＹで示される置換基のそれぞれと結合している炭素原子間の距離が１．３６ｎｍ未満である。｝
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｘが、下記Ｘ１〜Ｘ１６で表される基のいずれかである、請求項１に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化２】
2020094039.tif 000084
（式中、Ｒは、同一又は異なっていてもよく、
（１）水素原子、
（２）水酸基、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、ホルミル基、スルファニル基、(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基及びハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基からなる置換基群Ｚから選択される１又は２以上の置換基で置換されていてもよい、
（２ａ）(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、（２ｂ）（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（２ｃ）（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基若しくは（２ｄ）（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、
（３）Ｒ２（Ｒ３）Ｎ基（式中、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なっても良く、水素原子、及び置換基群Ｚから選択される。）、
（４）Ｒ２Ｓ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（５）Ｒ２ＳＯ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（６）Ｒ２ＳＯ２基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（７）Ｒ２Ｏ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、及び
（８）Ｒ２ＯＣＯ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
のいずれかで表される基を示す。
Ｒ’は、酸素原子、ＮＲ（Ｒは前記と同義を示す）、硫黄原子、スルホニル基又はスルフィニル基を示す。置換基群Ｚは、水酸基、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、ホルミル基、スルファニル基、(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基及びハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基からなる。）
【請求項３】
Ｘが、下記Ｘ１７〜Ｘ３１で表される基のいずれかである、請求項１に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化３】
2020094039.tif 000085
（式中、Ｒは請求項２と同義を示し、Ｒ４及びＲ５はＲと同義である。Ｒ、Ｒ４とＲ５は、異なっていてもよく、同じでもよい。ｎは１〜１０の整数を表す。なお、Ｘ３０において、Ｒ４とＲ５は、４〜１０員の単環又は複環であって、Ｘ１７〜Ｘ２８以外の環を形成してもよい。）
【請求項４】
Ｘが、Ｘ１〜Ｘ５又はＸ１７〜Ｘ３１で表される基のいずれかである請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項５】
２つのＹで示される置換基が、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、６員−６員又は５員−６員の縮合アリール又は縮合ヘテロアリールである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項６】
２つのＹで示される置換基が、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、下記Ｙ１〜Ｙ４で表される基のいずれかである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化４】
2020094039.tif 000086
【請求項７】
２つのＹで示される置換基が、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、前記Ｙ１〜Ｙ４又は下記Ｙ５で表される基のいずれかである、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化５】
2020094039.tif 000087
（Ｒは請求項２と同義を示す。）
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を含有する抗腫瘍剤。
【請求項９】
下記式（２）
【化６】
2020094039.tif 000088
（式中、Ｘは、下記Ｘ１及びＸ２で表される基のいずれかを示す。
【化７】
2020094039.tif 000089
式中、４つのＹ’で示される置換基は、同一又は異なってもよく、そのそれぞれが、アミノ基の保護基を示す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩のカルボキシル基と保護基Ｙ’で保護されているアミノ基とを反応させて、
下記式（３）
【化８】
2020094039.tif 000090
（式中、Ｘ及びＹ’は、式（２）におけるそれらと同義である。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を得る工程を含む、
下記式（４）
【化９】
2020094039.tif 000091
（式中、Ｘは、式（２）におけるそれと同義である。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを表す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の製造方法。
【請求項１０】
下記式（２）
【化１０】
2020094039.tif 000092
（式中、Ｘは、下記Ｘ１〜Ｘ１６で表される基のいずれか
【化１１】
2020094039.tif 000093
（式中、Ｒは請求項２と同義である）、または
下記Ｘ１７〜Ｘ３０で表される基のいずれか
【化１２】
2020094039.tif 000094
（式中、Ｒは請求項２と同義を示し、Ｒ４及びＲ５はＲと同義である。ｎは１〜１０の整数を表す。なお、Ｘ３０において、Ｒ４とＲ５は、４〜１０員の単環又は複環であって、Ｘ１７〜Ｘ２８以外の環を形成してもよい。））
式中、４つのＹ’で示される置換基は、同一又は異なってもよく、そのそれぞれが、アミノ基の保護基を示す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩のカルボキシル基と保護基Ｙ’で保護されているアミノ基とを反応させて、
下記式（３）
【化１４】
2020094039.tif 000095
（式中、Ｘ及びＹ’は、式（２）におけるそれらと同義である。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を得る工程を含む、
下記式（４）
【化１５】
2020094039.tif 000096
（式中、Ｘは、式（２）におけるそれと同義である。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを表す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍効果を有する化合物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
低酸素誘導因子−１α（ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｆａｃｔｏｒ−１：ＨＩＦ−１α）は低酸素環境で強発現してがん細胞を悪性化及び難治化する転写因子である。ＨＩＦ−１阻害作用を有する化合物は、ＨＩＦ−１が活性化した低酸素がん細胞の死を誘導する、がん微小環境を標的とする抗腫瘍薬として注目されている。
【０００３】
ここで、キノマイシン系抗生物質エキノマイシンは、放線菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌａｓａｌｉｅｎｉｓから単離された二環性デプシペプチド化合物であり、ＨＩＦ−１結合領域に選択的に結合するインターカレーターで強力な抗腫瘍効果を有する。
また、エキノマイシンの化学的全合成は未達成である。
【０００４】
エキノマイシンのような二環性デプシペプチド骨格を有するキノマイシン系化合物として、エキノマイシン、キノマイシンＢ、キノマイシンＣ、トリオスチンＡ、トリオスチンＢ、トリオスチンＣ等の類縁体が報告されている。同様の骨格をもつ他の類縁体も見出されているが（特許文献１、非特許文献１）、これらの中でエキノマイシンを上まわる抗腫瘍効果を有するものは報告されていない。
【０００５】
本発明者らは既に、トリオスチンＡの全合成とデプシペプチド環や芳香環の構造展開を行ったが、得られた化合物の、ＨＩＦ−１阻害活性、抗腫瘍効果、及び血管新生阻害効果のいずれも、ｎＭレベルの活性を有するエキノマイシンには及ばず、ワンオーダー低いμＭレベルの活性しか得られなかった。
【０００６】
すなわち、これまでに、培養、合成生物学又は化学合成によって得られた種々のエキノマイシン類縁体の中でエキノマイシンと同等以上の抗腫瘍効果を有するものは報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００４−５１６２５８号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】J. Am. Chem. Soc.,123, 561(2001)
【非特許文献２】Org, Biomol. Chem., 14, 1843(2016)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、抗腫瘍効果を有する新規化合物及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、予想外にもエキノマイシンの架橋構造及び／又はエキノマイシン骨格に含まれる２分子又は１分子のキノキサリンを特定の構造に変換することにより、エキノマイシンと同等以上の抗腫瘍効果を有する化合物が得られることを見出し、この知見に基づいてさらに研究を進め、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は以下の発明に関する。
［１］下記式（１）
【化１】
2020094039.tif 000003
｛式中、Ｘは−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−ＳＯ−、−Ｓ−ＳＯ２−、−Ｓ−ＣＨ２−Ｓ−及び−Ｓ−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｓ−のいずれかで表される基以外の架橋基を示す。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを示す。
式中、ＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離が０．４０ｎｍ未満であるか、又はＹで示される置換基のそれぞれと結合している炭素原子間の距離が１．３６ｎｍ未満である。｝
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【００１２】
［２］Ｘが、下記Ｘ１〜Ｘ１６で表される基のいずれかである、前記［１］に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化２】
2020094039.tif 000004
（式中、Ｒは、同一又は異なっていてもよく、
（１）水素原子、
（２）水酸基、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、ホルミル基、スルファニル基、(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基及びハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基からなる置換基群Ｚから選択される１又は２以上の置換基で置換されていてもよい、
（２ａ）(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、（２ｂ）（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（２ｃ）（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基若しくは（２ｄ）（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、
（３）Ｒ２（Ｒ３）Ｎ基（式中、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なっても良く、水素原子、及び置換基群Ｚから選択される。）、
（４）Ｒ２Ｓ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（５）Ｒ２ＳＯ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（６）Ｒ２ＳＯ２基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（７）Ｒ２Ｏ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、及び
（８）Ｒ２ＯＣＯ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
のいずれかで表される基を示す。
Ｒ’は、酸素原子、ＮＲ（Ｒは前記と同義を示す）、硫黄原子、スルホニル基又はスルフィニル基を示す。置換基群Ｚは、水酸基、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、ホルミル基、スルファニル基、(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基及びハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基からなる。）
【００１３】
［３］Ｘが、下記Ｘ１７〜Ｘ３１で表される基のいずれかである、前記［１］に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化３】
2020094039.tif 000005
（式中、Ｒは［２］と同義を示し、Ｒ４及びＲ５はＲと同義である。Ｒ、Ｒ４とＲ５は、それぞれ異なっていてもよく、同じでもよい。ｎは１〜１０の整数を表し、好ましくは、ｎは２〜６の整数である。なお、Ｘ３０において、Ｒ４とＲ５は、４〜１０員の単環又は複環であって、Ｘ１７〜Ｘ２８以外の環を形成してもよい。）
【００１４】
［４］Ｘが、Ｘ１〜Ｘ５、Ｘ１７〜Ｘ３１で表される基のいずれかである前記［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【００１５】
［５］２つのＹで示される置換基が、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、６員−６員又は５員−６員の縮合アリール又は縮合ヘテロアリールである、前記［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【００１６】
［６］２つのＹで示される置換基が、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、下記Ｙ１〜Ｙ４で表される基のいずれかである、前記［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化４】
2020094039.tif 000006
【００１７】
［７］２つのＹで示される置換基が、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、前記Ｙ１〜Ｙ４又は下記Ｙ５で表される基のいずれかである、前記［１］〜［６］のいずれかに記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化５】
2020094039.tif 000007
(Ｒは［２］と同義を示す)
【００１８】
［８］前記［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を含有する抗腫瘍剤。
【００１９】
［９］下記式（２）
【化６】
2020094039.tif 000008
（式中、Ｘは、下記Ｘ１及びＸ２で表される基のいずれかを示す。
【化７】
2020094039.tif 000009
式中、４つのＹ’で示される置換基は、同一又は異なってもよく、そのそれぞれが、アミノ基の保護基を示す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩のカルボキシル基と保護基Ｙ’で保護されているアミノ基とを反応させて、
下記式（３）
【化８】
2020094039.tif 000010
（式中、Ｘ及びＹ’は、式（２）におけるそれらと同義である。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を得る工程を含む、
下記式（４）
【化９】
2020094039.tif 000011
（式中、Ｘは、式（２）におけるそれと同義である。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを表す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の製造方法。
【００２０】
［１０］下記式（２）
【化１０】
2020094039.tif 000012
（式中、Ｘは、下記Ｘ１〜Ｘ１６で表される基のいずれか
【化１１】
2020094039.tif 000013
（式中、Ｒは［２］と同義である）、または
下記Ｘ１７〜Ｘ３０で表される基のいずれか
【化１２】
2020094039.tif 000014
（式中、Ｒは［２］と同義を示し、Ｒ４及びＲ５はＲと同義である。Ｒ、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ異なっていてもよく、同じでもよい。ｎは１〜１０の整数を表す。なお、Ｘ３０において、Ｒ４とＲ５は、４〜１０員の単環又は複環であって、Ｘ１７〜Ｘ２８以外の環を形成してもよい。）
式中、４つのＹ’で示される置換基は、同一又は異なってもよく、そのそれぞれが、アミノ基の保護基を示す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩のカルボキシル基と保護基Ｙ’で保護されているアミノ基とを反応させて、
下記式（３）
【化１３】
2020094039.tif 000015
（式中、Ｘ及びＹ’は、式（２）におけるそれらと同義である。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を得る工程を含む、
下記式（４）
【化１４】
2020094039.tif 000016
（式中、Ｘは、式（２）におけるそれと同義である。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを表す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の製造方法。
【発明の効果】
【００２１】
本発明により、抗腫瘍効果を有する新規化合物及びその製造方法を提供することができる。
本発明はまた、これら有用な化合物の合成中間体をも提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、ウェスタンブロッティングの結果を示す。
【図２】図２は、ウェスタンブロッティングの結果を示す。
【図３】図３は、単結晶Ｘ線構造解析結果を示す。
【図４】図４は、ウェスタンブロッティングの結果を示す。
【図５】図５は、血管新生阻害試験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
化合物又はその薬理学的に許容される塩
本発明は、下記式（１）
【化１５】
2020094039.tif 000017
｛式中、Ｘは２価の架橋基を示すが、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−ＳＯ−、−Ｓ−ＳＯ２−、−Ｓ−ＣＨ２−Ｓ−及び−Ｓ−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｓ−のいずれかで表される基である場合を除く。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを示す。
式中、ＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離が０．４０ｎｍ未満であるか、又はＹで示される置換基のそれぞれと結合している炭素原子間の距離が１．３６ｎｍ未満である。｝で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩（以下、本発明の化合物ともいう。）を提供する。
Ｘは、ＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離が０．４０ｎｍ未満であるか、又はＹで示される置換基のそれぞれと結合している炭素原子間の距離が１．３６ｎｍ未満であることを満たす、−Ｓ−Ｓ−、−Ｓ−ＳＯ−、−Ｓ−ＳＯ２−、−Ｓ−ＣＨ２−Ｓ−及び−Ｓ−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｓ−のいずれかで表される基以外の置換基であれば特に限定されない。Ｘが当該範囲に属することにより、本発明の化合物は、より優れた抗腫瘍効果を奏しうる。
【００２４】
炭素原子間の距離は、常法に従って測定することできる。具体的には、例えば、単結晶Ｘ線構造解析により得られた３次元構造より測定することによって、測定することができる。
ＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離、又はＹで示される置換基のそれぞれと結合している炭素原子間の距離は、結晶構造上の距離、すなわち、例えば単結晶Ｘ線構造解析等の結晶構造解析の結果における距離であることが好ましい。
【００２５】
Ｘ及び２つのＹで示される基は、それぞれ独立に、この技術分野における通常の１又は複数の置換基で置換されていてもよく、そのような置換基としては、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、ハロゲン（例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子等）、スルホ基、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基等が挙げられる。
【００２６】
用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基」は、例えばメチル基、エチル基、ノルマルプロピル基、イソプロピル基、ノルマルブチル基、イソブチル基、セカンダリーブチル基、ターシャリーブチル基、ノルマルペンチル基、イソペンチル基、ターシャリーペンチル基、ネオペンチル基、２，３−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、ノルマルヘキシル基、イソヘキシル基、２−ヘキシル基、３−ヘキシル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、３，３−ジメチルブチル基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルキル基を示す。
【００２７】
用語「（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基」は、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等の炭素原子数３〜６個の環状のアルキル基を示す。
【００２８】
用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニル基」は、例えば、メチルカルボニル基、エチルカルボニル基、ノルマルプロピルカルボニル基、イソプロピルカルボニル基、ノルマルブチルカルボニル基、イソブチルカルボニル基、セカンダリーブチルカルボニル基、ターシャリーブチルカルボニル基、ノルマルペンチルカルボニル基、イソペンチルカルボニル基、ターシャリーペンチルカルボニル基、ネオペンチルカルボニル基、２，３−ジメチルプロピルカルボニル基、１−エチルプロピルカルボニル基、１−メチルブチルカルボニル基、２−メチルブチルカルボニル基、ノルマルヘキシルカルボニル基、イソヘキシルカルボニル基、２−ヘキシルカルボニル基、３−ヘキシルカルボニル基、２−メチルペンチルカルボニル基、３−メチルペンチルカルボニル基、１，１，２−トリメチルプロピルカルボニル基、３，３−ジメチルブチルカルボニル基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルキルカルボニル基を示す。
【００２９】
用語「（Ｃ１-Ｃ６）アルコキシ基」は、例えば、メトキシ基、エトキシ基、ノルマルプロポキシ基、イソプロポキシ基、ノルマルブトキシ基、セカンダリーブトキシ基、ターシャリーブトキシ基、ノルマルペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ターシャリーペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、２，３‐ジメチルプロピルオキシ基、１‐エチルプロピルオキシ基、１‐メチルブチルオキシ基、ノルマルヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、１，１，２‐トリメチルプロピルオキシ基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルコキシ基を示す。
【００３０】
用語「（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基」は、例えば、エテニル基（ビニル基）、プロペニル基、ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数２〜６個のアルケニル基を示す。
【００３１】
用語「（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基」は、例えば、エチニル基、プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数２〜６個のアルキニル基を示す。
【００３２】
用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基」は、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ノルマルプロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ノルマルブトキシカルボニル基、セカンダリーブトキシカルボニル基、ターシャリーブトキシカルボニル基、ノルマルペンチルオキシカルボニル基、イソペンチルオキシカルボニル基、ターシャリーペンチルオキシカルボニル基、ネオペンチルオキシカルボニル基、２，３‐ジメチルプロピルオキシカルボニル基、１‐エチルプロピルオキシカルボニル基、１‐メチルブチルオキシカルボニル基、ノルマルヘキシルオキシカルボニル基、イソヘキシルオキシカルボニル基、１，１，２‐トリメチルプロピルオキシカルボニル基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルコキシが結合しているカルボニル基を示す。
【００３３】
用語「ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基」は、例えばヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基、ジヒドロキシプロピル基等の１又は２以上の水酸基が置換している直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルキル基を示す。
【００３４】
用語「（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基」は、例えばメチルチオ基、エチルチオ基、ノルマルプロピルチオ基、イソプロピルチオ基、ノルマルブチルチオ基、セカンダリーブチルチオ基、ターシャリーブチルチオ基、ノルマルペンチルチオ基、イソペンチルチオ基、ターシャリーペンチルチオ基、ネオペンチルチオ基、２，３‐ジメチルプロピルチオ基、１‐エチルプロピルチオ基、１‐メチルブチルチオ基、ノルマルヘキシルチオ基、イソヘキシルチオ基、１，１，２‐トリメチルプロピルチオ基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルキルチオ基を示す。
【００３５】
用語「（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基」は、例えば、メチルスルフィニル基、エチルスルフィニル基、ノルマルプロピルスルフィニル基、イソプロピルスルフィニル基、ノルマルブチルスルフィニル基、セカンダリーブチルスルフィニル基、ターシャリーブチルスルフィニル基、ノルマルペンチルスルフィニル基、イソペンチルスルフィニル基、ターシャリーペンチルスルフィニル基、ネオペンチルスルフィニル基、２，３‐ジメチルプロピルスルフィニル基、１‐エチルプロピルスルフィニル基、１‐メチルブチルスルフィニル基、ノルマルヘキシルスルフィニル基、イソヘキシルスルフィニル基、１，１，２‐トリメチルプロピルスルフィニル基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルキルスルフィニル基を示す。
【００３６】
用語「（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基」は、例えば、メチルスルホニル基、エチルスルホニル基、ノルマルプロピルスルホニル基、イソプロピルスルホニル基、ノルマルブチルスルホニル基、セカンダリーブチルスルホニル基、ターシャリーブチルスルホニル基、ノルマルペンチルスルホニル基、イソペンチルスルホニル基、ターシャリーペンチルスルホニル基、ネオペンチルスルホニル基、２，３‐ジメチルプロピルスルホニル基、１‐エチルプロピルスルホニル基、１‐メチルブチルスルホニル基、ノルマルヘキシルスルホニル基、イソヘキシルスルホニル基、１，１，２‐トリメチルプロピルスルホニル基等の直鎖又は分岐鎖状の炭素原子数１〜６個のアルキルスルホニル基を示す。
【００３７】
用語「ハロ」とは「ハロゲン原子」を意味し、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子を示す。上記「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基」、「（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基」、「（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニル基」及び「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基」の水素原子が置換され得る位置において、水素原子が１又は２以上のハロゲン原子によって置換されていても良く、置換するハロゲン原子が２以上の場合は、ハロゲン原子は同一又は異なっても良い。
上記１又は２以上のハロゲン原子が置換された置換基は、それぞれ、「ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基」、「ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基」、「ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボニル基」、「ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基」と示される。
【００３８】
「（Ｃ１−Ｃ６）」、「（Ｃ２−Ｃ６）」、「（Ｃ３−Ｃ６）」等の表現は各種置換基の炭素原子数の範囲を示す。更に、上記置換基が連結した基についても上記定義を示すことができ、例えば、「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基」の場合は直鎖又は分岐鎖状の炭素数１〜６個のアルコキシ基が直鎖又は分岐鎖状の炭素数１〜６個のアルキル基に結合していることを示す。
【００３９】
Ｘは、好ましくは、下記Ｘ１〜Ｘ１６で表される基のいずれかであり、より好ましくは、下記Ｘ１〜Ｘ５で表される基のいずれかであり、さらにより好ましくは、下記Ｘ１〜Ｘ４で表される基のいずれかである。
【００４０】
【化１６】
2020094039.tif 000018
また、別の好ましいＸの例として、フェニル環、ピリジン環、ピラジン環、ピリミジン環、ピリダジン環等の単環、あるいは、ナフチル環等の二環等が挙げられるが、これらに限定されない。また、これらは、後述のＲ基で置換されていてもよく、置換されていなくてもよい。Ｒは１置換であってもよく、例えば、Ｘ１７のようなフェニル基の場合は、２〜４置換であってもよく、Ｘ１８のようなピリジル基の場合は２〜３置換であってもよく、Ｘ２０のようなピラジル基の場合は２置換であってもよい。好ましくは、下記のＸ１７〜Ｘ３１、又は置換もしくは非置換のピリミジン環又はピリダジン環等も挙げられるが、これらに限定されない。Ｘ１７〜Ｘ３１のうち、特に好ましくは、Ｘ１７〜２０又はＸ２９〜Ｘ３１、より好ましくは、Ｘ１７、Ｘ２９又はＸ３０である。
【００４１】
【化１７】
2020094039.tif 000019
（式中、Ｒは、同一又は異なっていてもよく、
（１）水素原子、
（２）同一又は異なっても良く、１又は２以上の、１価の置換基で置換されていてもよい、（２ａ）(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、（２ｂ）（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（２ｃ）（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基若しくは（２ｄ）（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、
（３）Ｒ２（Ｒ３）Ｎ基（式中、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なっても良く、水素原子、又は、１価の置換基である。）、
（４）Ｒ２Ｓ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（５）Ｒ２ＳＯ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（６）Ｒ２ＳＯ２基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
（７）Ｒ２Ｏ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、及び
（８）Ｒ２ＯＣＯ基（式中、Ｒ２は、前記と同義を示す。）、
のいずれかで表される基を示す。
Ｒ’は、酸素原子、ＮＲ（Ｒは前記と同義を示す）、硫黄原子、スルホニル基又はスルフィニル基を示す。
Ｒ４及びＲ５はＲと同義である。Ｒ、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ異なっていてもよく、同じでもよい。ｎは１〜１０、好ましくは２〜６の整数を表す。なお、Ｘ３０において、Ｒ４とＲ５は、４〜１０員の単環又は複環であって、Ｘ２１〜Ｘ２８以外の環を形成してもよい。）
前記１価の置換基の例として、水酸基、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン原子、ホルミル基、スルファニル基、(Ｃ１−Ｃ６)アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３‐Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１‐Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、ハロ（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２-Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基、（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルチオ基、ハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルフィニル基及びハロ（Ｃ１-Ｃ６）アルキルスルホニル基からなる置換基群Ｚから選択される置換基が挙げられる。
【００４２】
用語「アリール」は、例えば、置換されていてもよい、不飽和及び部分的に飽和した、炭素原子からなる６〜１５員環基を意味する。このような不飽和アリールとして、例えば、フェニル、ナフチル、インダニル、インデニル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、及び１，２−ジヒドロナフチルが挙げられ、より好ましくはナフチルが挙げられる。
【００４３】
用語「ヘテロアリール」は、例えば、置換されていてもよい、ヘテロ原子含有５〜１５員の芳香族環を意味する。すなわち、用語「ヘテロアリール」は、例えば、置換されていてもよく、炭素原子、並びに窒素、リン、酸素及び硫黄から選択される１〜５個のヘテロ原子を含有する不飽和及び部分的に飽和していてもよい５〜１５員環基、好ましくは６〜１５員環基を意味する。
このようなヘテロアリールとして、例えば、チオフェニル、チアゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、テトラゾリル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾトリアゾリル、インドリル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピロロピジル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリジル、ピラゾロピリミジニル、イミダゾピリジニル、フロピジル、ベンゾイソオキサゾリル、イミダゾピラジニル、イミダゾピリダジニル、イミダゾピリミジニル、キノリル、イソキノリル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、ピリドピリミジニル、並びにこれらのＮ-オキシド及びＳ-オキシドが挙げられ、より好ましくはキノリル、キノキサリニル、３−ヒドロキシキノリルが挙げられる。
【００４４】
２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、単環基でもよく、縮合環基でもよい。２つのＹで示される置換基が、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、好ましくは、同一又は異なっていてもよく、水酸基で置換されていてもよい、６員−６員又は５員−６員の縮合アリール又は縮合ヘテロアリールである。
【００４５】
２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、より好ましくは、同一又は異なっていてもよく、下記Ｙ１〜Ｙ５で表される基のいずれかである。
【化１８】
2020094039.tif 000020
（Ｒは前記と同義を示す。さらに、Ｒに、アルキル基や、PEG、ポリアミンなどまたはそれらを組み合わせた公知のリンカーを付加等させ、抗体またはフラグメント抗体などとコンジュゲートさせてもよい。)
【００４６】
Ｘ及びＹの好ましい組み合わせは、ＸがＸ１〜Ｘ１６で表される基のいずれかでありかつ、２つのＹで示される置換基が、同一で、Ｙ１〜Ｙ４で表される基のいずれかである組み合わせである。
Ｘ及びＹのより好ましい組み合わせは、ＸがＸ１〜Ｘ５で表される基のいずれかでありかつ、２つのＹで示される置換基が、同一で、Ｙ１〜Ｙ４で表される基のいずれかである組み合わせである。
Ｘ及びＹのさらにより好ましい組み合わせは、ＸがＸ１〜Ｘ４で表される基のいずれかでありかつ、２つのＹで示される置換基が、同一で、Ｙ１〜Ｙ４で表される基のいずれかである組み合わせである。
Ｘ及びＹの別の好ましい組み合わせは、ＸがＸ１７〜Ｘ３１で表される基のいずれかでありかつ、２つのＹで示される置換基が、同一で、Ｙ１〜Ｙ５で表される基のいずれかである組み合わせである。
【００４７】
薬理学的に許容される塩には、酸付加塩が含まれ得る。薬学的に許容される酸付加塩は、所望により有機溶媒などの適当な溶媒中、式（１）の化合物を適当な無機酸または有機酸（例えば、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸またはナフタレンスルホン酸）と反応させ、例えば、結晶化およびろ過により通常単離される塩を得ることにより形成され得る。式（１）の化合物の薬理学的に許容される酸付加塩の例として、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、サッカラート、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、カンシル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩が挙げられる。
また、薬理学的に許容される塩には、例えば、ナトリウム塩若しくはカリウム塩等の一価のアルカリ金属との塩、又はマグネシウム塩若しくはカルシウム塩等の二価のアルカリ土類金属との塩等が含まれ得る。
【００４８】
本発明の化合物は、結晶多形をとり得るが、これも本発明の範囲内である。
【００４９】
製造方法
本発明の化合物は、自体公知のペプチド形成反応やエステル結合形成反応を適宜組み合わせることによって製造される。ペプチド形成に用いられる保護基の種類、導入、除去、ペプチド結合形成のためのカルボキシル基の活性化剤は、十分に知られていて、本発明において、これらの技術に従ってよい。
【００５０】
本発明は、下記式（２）
【化１９】
2020094039.tif 000021
（式中、Ｘは、下記Ｘ１及びＸ２で表される基のいずれか、または下記Ｘ３〜Ｘ１６のいずれか、あるいは、Ｘ１７〜Ｘ３１で表される基のいずれかを示すのが好ましい。
【化２０】
2020094039.tif 000022
【化２１】
2020094039.tif 000023
【化２２】
2020094039.tif 000024
（式中、Ｒ、Ｒ４及びＲ５は前義のとおりである。）
式中、４つのＹ’で示される置換基は、同一又は異なってもよく、そのそれぞれが、アミノ基の保護基を示す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩のカルボキシル基と保護基Ｙ’で保護されているアミノ基とを反応させて、
下記式（３）
【化２３】
2020094039.tif 000025
（式中、Ｘ及びＹ’は、式（２）におけるそれらと同義である。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を得る工程を含む、
下記式（４）
【化２４】
2020094039.tif 000026
（式中、Ｘは、式（２）におけるそれと同義である。
式中、２つのＹで示される置換基は、同一又は異なっていてもよく、そのそれぞれが、置換されていてもよい、アリール又はヘテロアリールを表す。）
で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の製造方法を提供する。
本発明の化合物は、当該製造方法又は後述の実施例を参照することにより、必要に応じて当業者の通常行い得る手段により、製造され得る。
【００５１】
Ｙ’で示されるアミノ基の保護基としては、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル基（Ｚ又はＣｂｚ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ）、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基（Ｔｒｏｃ）又はアリルオキシカルボニル基（Ａｌｌｏｃ）等のカルバメート系の保護基；フタロイル基等のイミド系の保護基；ｐ−トルエンスルホニル基又は２−ニトロベンゼンスルホニル基等のスルホンアミド系の保護基等が例示される。
【００５２】
医薬組成物
本発明は、本発明の化合物、及び１種又は複数の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物（以下、本発明の医薬組成物ともいう。）を提供する。担体、希釈剤又は賦形剤は、処方の他の成分と混合可能であり、そのレシピエントに有害ではないという意味で許容され得る。さらなる実施態様において、本発明はまた、本発明の化合物を１種又は複数の薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合することを含む本発明の医薬組成物の調製法を提供する。
【００５３】
そのような本発明の医薬組成物として、本発明は、本発明の化合物を含有する抗腫瘍剤をも提供する。
本発明において、腫瘍とは、例えば、良性腫瘍であっても、悪性腫瘍であっても良い。腫瘍とは、例えば、臓器に発生した原発性腫瘍であってもよく、臓器に他臓器から転移した転移性腫瘍であってもよい。また腫瘍とは、口腔がん、咽頭がん、食道がん、胃がん、小腸腫瘍、大腸がん、肝臓がん、胆嚢がん、胆管がん、膵臓がん、リンパ腫、喉頭がん、肺がん、腎臓がん、副腎がん、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、膵嚢胞性腫瘍、胆道がん、直腸がん、乳がん、肺がん、各骨軟部腫瘍、腎がん、腎盂尿管がん、陰茎がん、後腹膜腫瘍、頭頸部がん、甲状腺がん、子宮がん、卵巣がん、皮膚がん、肉腫（筋肉や神経や骨等に発生）、白血病、縦隔腫瘍、転移性肺がん、転移性肺腫瘍、転移性肝がん、転移性肝腫瘍、転移性骨腫瘍の悪性腫瘍であってもよく、これらの良性腫瘍であってもよい。
抗腫瘍とは、腫瘍の予防又は治療の意味を包含する。
例えば、後述の代表例である実施例から明らかなように、本発明の化合物は、ＨＩＦ−１阻害活性又はがん細胞増殖抑制活性があり、優れた抗腫瘍活性を有することがわかる。本発明の化合物は、ＨＩＦ−１阻害作用により、血管新生阻害、転移又は腫瘍の再発予防等の予後改善の効果をも奏し得る。
【００５４】
本発明の医薬組成物は、任意の適当な経路、例えば、経口（口腔又は舌下を含む）、直腸、鼻腔、局所（口腔、舌下又は経皮を含む）、膣内又は非経口（皮下、筋肉内、静脈内又は皮内）経路による投与のために処方され得る。したがって、本発明の医薬組成物は、経口又は滅菌非経口溶液若しくは懸濁液等として、例えば、錠剤、カプセル、散剤、顆粒剤、ロゼンジ、クリーム又は液体製剤として処方され得る。かかる医薬処方は、薬学分野にて既知の任意の方法によって、例えば、活性成分を担体又は賦形剤と配合することによって調製され得る。
【００５５】
経口投与用の錠剤及びカプセルは、通常の賦形剤、例えば、結合剤、例えば、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、又はポリビニルピロリドン；充填剤、例えば、ラクトース、シュガー、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール又はグリシン；錠剤化潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレン・グリコール又はシリカ；崩壊剤、例えば、ジャガイモデンプン；又は許容される湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムを含有していてもよい。錠剤は、通常の調剤業務にて既知の方法にしたがってコーティングされ得る。経口液体製剤は、例えば、水性若しくは油性懸濁液、溶液、乳液、シロップ又はエリキシル剤の形態であってもよく、あるいは使用前に水又は他の適当なビヒクルで再生するための乾燥製剤として存在していてもよい。かかる液体製剤は、通常の添加剤、例えば、懸濁化剤、例えば、ソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル又は硬化食用油脂；乳化剤、例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、又はアカシア；非水性ビヒクル（食用油脂を含んでいてもよい）、例えば、アーモンド油、油性エステル、例えば、グリセリン、プロピレン・グリコール、又はエチルアルコール；保存剤、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル若しくはプロピル又はソルビン酸、及び必要に応じて、通常の香味剤又は着色料を含有していてもよい。
【００５６】
本発明の医薬組成物は、局所処方の場合、例えば、軟膏、クリーム、ローション、眼軟膏、点眼薬、点耳薬、含浸包帯、エアロゾルとして存在していてもよく、保存剤、薬物透過を補助する溶媒並びに軟膏及びクリーム中の皮膚軟化剤を含有していてもよい。処方はまた、混合可能な通常の担体、例えば、クリーム又は軟膏基剤及びローション用エタノール又はオレイルアルコールを含有していてもよい。かかる担体は、処方の約１％〜約９８％として存在していてもよい。より一般的には、それらは、処方の最大約８０％を形成し得る。
【００５７】
非経口投与に適した医薬処方には、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬及び処方を対象レシピエントの血液と等張にする溶質を含有していてもよい水性及び非水性滅菌注射溶液；並びに、懸濁化剤及び増粘剤を含んでいてもよい水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。処方は、単位用量又は複数回用量の容器、例えば、密封アンプル及びバイアル中に存在していてもよく、使用直前に、滅菌液体担体、例えば、注射用水を加えることのみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）条件で保存していてもよい。必要に応じて調製される注射溶液及び懸濁液は、滅菌散剤、顆粒剤及び錠剤から調製され得る。
【００５８】
直腸投与に適した医薬処方は、坐剤又は浣腸であってもよい。
【００５９】
担体が固体である、鼻腔投与に適した医薬処方には、鼻の近くに保持される粉末の容器から鼻腔への急速吸入により投与され得る、例えば、２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗粉末が含まれ得る。鼻腔用スプレー又は点鼻薬として投与するための、担体が液体である、適当な処方には、活性成分の水性又は油性溶液が含まれる。
【００６０】
吸入投与に適した医薬処方には、種々の定量加圧エアロゾル、ネプライザー又は吸入器によって生成されうる、微粒子ダスト又はミストが含まれる。
【００６１】
膣内投与に適した医薬処方は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡沫又はスプレー処方であってもよい。
【００６２】
特に上記の成分に加えて、当該分野で慣用の他の薬剤を含んでいてもよい。
【００６３】
本発明の化合物の治療上有効な量は、例えば、ヒト又は他の動物の年齢及び体重、治療を要する明確な病態及びその重篤度、処方の特徴、ならびに投与経路を含む、多数の因子によるものであろうし、最終的にはかかりつけ医師又は獣医師の判断によるものであろう。しかしながら、本発明の化合物の有効量は、一般的には、１日当たり０．１〜１００ｍｇ／レシピエント（哺乳動物）の体重ｋｇの範囲及びより一般的には、１日当たり１〜１０ｍｇ／体重ｋｇであろう。したがって、７０ｋｇの成体哺乳動物について、１日当たりの実際の量は、通常７〜７００ｍｇであり、該量は、１日当たりの総量が同一になるように１日当たり一回量で又はより一般的には、１日当たり複数回（例えば、２回、３回、４回、５回又は６回）の分割量で提供され得る。
【００６４】
本発明の化合物を１種又は複数の他の治療剤と組み合わせて用いる場合、化合物は、任意の都合の良い経路によって連続して又は同時に投与されうる。
【００６５】
上記の組み合わせは、医薬処方の形態で便利に使用するために提示され、したがって、薬学的に許容される担体又は賦形剤と一緒に上記の組み合わせを最適に含む医薬処方は、本発明のさらなる実施態様を含む。かかる組み合わせの個々の成分は、個々の又は配合した医薬処方中に連続して又は同時に投与されうる。
【００６６】
同一処方中に配合した場合、２種の化合物は、安定であり、かつ互いに及び処方の他の成分と混合可能でなければならず、投与のために処方されうることは明らかであろう。個々に処方された場合、それらは、任意の都合の良い処方中に、当該分野においてかかる化合物にて知られているような手法で便利に提供されうる。
【００６７】
化合物を同一疾患に活性な第２の治療剤と組み合わせて用いる場合、各化合物の投与量は、化合物を単独で用いる場合と異なっていてもよい。適当な投与量は、当業者であれば容易に分かるであろう。
【００６８】
本発明の化合物は、特に腫瘍の予防又は治療において、１種の他の薬理学的に活性な化合物又は２種以上の他の薬理学的に活性な化合物と有益に組み合わせてもよい。たとえば、本発明の化合物は、１種又は２種以上の他の抗腫瘍剤と組み合わせて、同時に、連続して、又は別々に投与してもよい。
【００６９】
さらなる実施態様において、本発明は、腫瘍に罹患しているヒトを含む哺乳動物の治療方法であって、本発明の化合物の有効量を該対象に投与することを含む、方法を提供する。
さらなる実施態様において、本発明は、腫瘍の予防方法であって、本発明の化合物の有効量を哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。
【００７０】
さらなる実施態様において、本発明は、腫瘍の予防又は治療のために使用される本発明の化合物を提供する。
【００７１】
さらなる実施態様において、本発明は、腫瘍の予防又は治療のための医薬の製造における、本発明の化合物の使用を提供する。
【００７２】
本発明は、本発明の効果を奏する限り、本発明の技術的範囲内において、上記の構成を含む限り、それらを種々組み合わせた態様、これらの態様に他の構成要件を含んだ態様を含み得る。
【実施例】
【００７３】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の代表例であって、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではなく、多くの変形が本発明の技術的思想内で当分野において通常の知識を有する者により可能である。
【００７４】
尚、本開示において、下記左欄（又は上段）の様な略称又はアルファベット表記を使用することがあるが、これらは下記右欄（又は下段）の様に定義される。
AcOEt: 酢酸エチル
AcOH: 酢酸
Ala: アラニン
All: アリル（allyl）
aq.: 水溶液（aqueous solution）
Boc: tert-ブトキシカルボニル基
Boc2O: 二炭酸ジ−tert−ブチル
ca.; 約（circa）
Cbz: ベンジルオキシカルボニル基
dba: ジベンジリデンアセトン (dibenzylideneacetone)
DMAP: N,N-ジメチル-4-アミノピリジン
DMF: N,N-ジメチルホルムアミド
DMT-MM: 4-(4,6-ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル)４−メチルモルフォリニウムクロリド（4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride）
Ec: エキノマイシン
Ec-S-ether: 化合物番号２６の化合物
Ec-Se-ether: 化合物番号２７の化合物
equiv.: 当量（equivalent）
Et2O: ジエチルエーテル
Gly: グリシン
HOAt: 1-ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
Lan: −ＣＯ（ＮＨ２）ＣＨＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ−
LiBHEt3: トリエチル水素化ホウ素リチウム
Me: メチル
NMM: N-メチルモルフォリン
overnight: 終夜撹拌
PPh3: トリフェニルホスフィン
Qx:
【化２５】
2020094039.tif 000027
quant.: 定量的（quantitative）
r.t.: 室温（room temperature）
Se: セレン
Ser: セリン
TA: トリオスチンＡ
TA-alkane: 化合物番号１０の化合物
TA-alkene: 化合物番号９の化合物
TA-alkene (Qn-3OH): 化合物番号２８の化合物
TA-xylene: 化合物番号３４の化合物
TA-xylene (Qn-3OH): 化合物番号３５の化合物
TBDMSCl: tert-ブチルジメチルシリルクロリド
TFA: トリフルオロ酢酸
THF: テトラヒドロフラン
Ts-Cl: パラトルエンスルホン酸クロリド
Val: バリン
WSC・HCl: 1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
【００７５】
［実施例１］
TA-alkene (9) 及び TA-alkane (10) の合成法
【化２６】
2020094039.tif 000028
【００７６】
N-Cbz-D-Ser[N-Boc-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OAll (3) の合成
【化２７】
2020094039.tif 000029
【００７７】
氷浴下において、4 M 塩酸/AcOEt 20 mL (80 mmol) をN-Cbz-D-Ser(N-Boc-N-Me-L-Val)-OAll (1) 5.44 g (11.0 mmol、 1.1等量) のAcOEt 溶液 (30 mL) に加えた。反応溶液を室温まで昇温し、室温において3時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮後、得られた残渣にAcOEt (200 mL) と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 (200 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (200 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (200 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣と N-Boc-N-Me-L-Gly(All)-OH 2 2.3 g (10.0 mmol、 1当量) のAcOEt溶液 (50 mL) にDMT-MM 4.16 g (15.0 mmol、 1.5 当量)を加え、室温において終夜撹拌した。反応混合物をろ別し、ろ液にAcOEt (200 mL) と水 (200 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (200 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (200 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (150 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 9:1、 8:2各容量比) により精製し、目的化合物 (3) 5.43 g (9.0 mmol、 2工程82%収率) を淡黄色オイルで得た。
【００７８】
N-Cbz-D-Ser[N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OAll (4) の合成
【化２８】
2020094039.tif 000030
【００７９】
氷浴下において、4 M 塩酸/AcOEt 20 mL (80 mmol) をN-Cbz-D-Ser[N-Boc-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OAll (3) 5.43 g (9.0 mmol) のAcOEt 溶液 (20 mL) に加えた。反応溶液を室温まで昇温し、室温において3時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮後、得られた残渣のDMF 溶液 (30 mL) を N-Boc-L-Ala-OH 2.04 g (10.8 mmol、 1.2 当量)、N-メチルモルフォリン 1.4 mL (13.5 mmol、 1.5 等量) 及びDMT-MM 3.73 g (13.5 mmol、 1.5 当量)のDMF溶液 (10 mL) に加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にAcOEt (300 mL) と水 (300 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (300 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (300 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (150 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 8:2、 7:3、 6:4各容量比) により精製し、目的化合物 (4) 3.33 g (4.9 mmol、 2工程52%収率) を淡黄色オイルで得た。
【００８０】
N-Cbz-D-Ser[N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OH (5) の合成
【化２９】
2020094039.tif 000031
【００８１】
アルミホイルにより遮光したN-Cbz-D-Ser[N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OAll (4) 1.83 g (2.7 mmol)、 PPh3 28.5 mg (0.11 mmol、 4 mol%) とN-メチルアニリン 0.35 mL (3.3 mmol、 1.2 当量) のTHF 溶液 (15 mL) にPd2(dba)3 12.4 mg (0.014 mmol、 0.5 mol%) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にAcOEt (100 mL) と飽和塩化アンモニウム水溶液 (100 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (100 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (100 g、 CH2Cl2:MeOH=10:0、 200:1、 100:1、 50:1各容量比) により精製し、目的化合物 (5) 1.56 g (2.5 mmol、 91%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【００８２】
N-Cbz-D-Ser[N-Cbz-D-Ser(N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val)-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OAll (6) の合成
【００８３】
【化３０】
2020094039.tif 000032
【００８４】
氷浴下において、4 M 塩酸/AcOEt 5 mL (20 mmol) をN-Cbz-D-Ser[N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OAll (4) 1.50 g (2.2 mmol、 1.1 当量) のAcOEt 溶液 (5 mL) に加えた。反応溶液を室温まで昇温し、室温において終夜撹拌した。反応溶液を減圧濃縮後、得られた残渣にAcOEt (100 mL) と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 (100 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (100 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた濃縮残渣と N-Cbz-D-Ser[N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OH (5) 1.28 g (2.0 mmol) のAcOEt 溶液 (10 mL) にDMT-MM 0.67 g (2.4 mmol、 1.2 当量)を加え、室温において終夜撹拌した。反応混合物をろ別し、ろ液にAcOEt (100 mL) と水 (100 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (100 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (150 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 6:4、 5:5、 4:6各容量比) により精製し、目的化合物 (6) 756.0 mg (0.63 mmol、 2工程31%収率) を無色アモルファスで得た。
【００８５】
N-Cbz-D-Ser[N-Cbz-D-Ser(N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Gry(All)-N-Me-L-Val)-L-Ala-N-Me-L-Gly(All)-N-Me-L-Val]-OH (7) の合成
【化３１】
2020094039.tif 000033
【００８６】
アルミホイルにより遮光したオクタデプシペプチド (6) 750 mg (0.63 mmol)、PPh3 13.2 mg (0.050 mmol、 8 mol%) とN-メチルアニリン 0.082 mL (0.76 mmol、 1.2 当量) のTHF 溶液 (10 mL) にPd2(dba)3 5.8 mg (0.0063 mmol、 1 mol%) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にAcOEt (100 mL) と飽和塩化アンモニウム水溶液 (100 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (100 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (100 g、 CH2Cl2:MeOH=10:0、 100:1、 50:1、 20:1各容量比) により精製し、目的化合物 (7) 631.9 mg (0.55 mmol、 87%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【００８７】
二環性オクタデプシペプチド（アルケン）（Bicyclic octadepsipeptide (alkene)） (8)の合成
【００８８】
【化３２】
2020094039.tif 000034
【００８９】
Grubbs 第2世代触媒18.4 mg (0.022 mmol、 4 mol%) をオクタデプシペプチド (7) 630 mg (0.55 mmol) のCH2Cl2 溶液 (300 mL、 0.002 M) に加え、アルゴン雰囲気下、加熱還流条件において終夜撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。氷浴下において、得られた濃縮残渣のAcOEt 溶液 (5 mL) に4 M 塩酸/AcOEt 5 mL (20 mmol) を加えた。反応溶液を室温まで昇温し、室温において終夜撹拌した。反応溶液を減圧濃縮後、得られた残渣、 N-メチルモルフォリン0.28 mL (2.7 mmol、 5等量) とHOAt 372.4 mg (2.7 mmol、 5 当量) のCH2Cl2 溶液 (500 mL、 0.001 M) にWSC・HCl 524.5 mg (2.7 mmol、 5 当量) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液に水 (100 mL) を加え抽出した。有機層を飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (50 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 6:4、 4:6、 2:8、 1:9、 1:20、 0:10各容量比) により精製し、目的化合物 (8) 213.3 mg (0.21 mmol、 3工程31%収率) を淡黄色固体で得た。
【００９０】
TA-alkene (9) の合成
【００９１】
【化３３】
2020094039.tif 000035
【００９２】
水酸化パラジウム-活性炭素 (Pd 20%) 20 mg (10 wt%) を二環性オクタデプシペプチド(8) 200 mg (0.20 mmol) のメタノール溶液 (5 mL) に加え、水素雰囲気下、室温において4時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた濃縮残渣及び2-キノキサリンカルボン酸 140.2 mg (0.80 mmol、 4 当量) のDMF 溶液 (5 mL) にDMT-MM 330.4 mg (1.2 mmol、 6 当量) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にCH2Cl2 (50 mL) と水 (50 mL) を加え抽出した。有機層を飽和食塩水 (50 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (10 g、 CH2Cl2:MeOH=10:0、 200:1、 100:1、 50:1) により精製し、目的化合物 TA-alkene (9) 116.1 mg (0.11 mmol、 2工程55%収率) を淡褐色固体で得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.64 (s, 2H), 8.69 (br, d, J = 5.7 Hz, 2H), 8.20 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.85-7.88 (m, 2H), 7.79 (m, J = 7.4 Hz, 2H), 6.88 (br, 2H), 6.09 (br, 2H), 5.49-5.55 (m, 2H), 5.19 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 4.92 (m, 2H), 4.79 (m, 2H), 4.70 (br, 4H), 3.14 (s, 6H), 3.02 (s, 6H), 2.24-2.36 (m, 2H), 1.38 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.10 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 0.90 (d, J = 6.9 Hz, 6H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 172.5, 171.2, 170.1, 167.4, 164.1, 144.2, 143.6, 142.3, 140.1, 132.1, 131.1, 129.7, 129.3, 64.5, 62.0, 54.3, 52.8, 46.5, 31.3, 30.0, 27.7, 20.4, 18.8, 17.6
【００９３】
TA-alkane (10) の合成
【００９４】
【化３４】
2020094039.tif 000036
【００９５】
水酸化パラジウム-活性炭素 (Pd 20%) 8.0 mg (40 wt%) を二環性オクタデプシペプチド(8) 20 mg (0.020 mmol) のメタノール溶液 (5 mL) に加え、水素雰囲気下 (3 atm)、室温において1日撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた濃縮残渣及び2-キノキサリンカルボン酸 14.0 mg (0.080 mmol、 4 当量) のDMF 溶液 (5 mL) にDMT-MM 33.0 mg (0.12 mmol、 6 当量) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にCH2Cl2 (50 mL) と水 (50 mL) を加え抽出した。有機層を飽和食塩水 (50 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (10 g、 CH2Cl2:MeOH=10:0、 200:1、 100:1、 50:1各容量比) により精製し、目的化合物 TA-alkane (10) 17.1 mg (0.016 mmol、 2工程81%収率) を淡褐色固体で得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.55 (s, 2H), 9.07 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.39 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 8.15 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 8.10 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.87-7.93 (m, 4H), 5.72 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 5.19-5.21 (m, 2H), 5.13 (dd, J = 11.2, 3.7 Hz, 2H), 5.05-5.09 (m, 2H), 4.45 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 3.93 (d, J = 10.3 Hz, 3H), 3.41 (s, 6H), 2.95 (s, 6H), 2.35-2.40 (br, 4H), 1.66-1.72 (m, 2H), 1.55-1.62 (m, 2H), 1.43-1.48 (m, 2H), 1.01-1.02 (br, 12H), 0.19 (d, J = 6.9 Hz, 6H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 173.2, 172.0, 170.3, 168.1, 163.9, 143.9, 143.8, 142.8, 140.3, 132.0, 131.3, 130.0, 129.4, 64.7, 64.2, 52.9, 51.3, 44.2, 32.2, 28.9, 28.6, 28.5, 24.1, 19.9, 19.3, 17.4
【００９６】
［実施例２］
Ec-S-ether (26) 及び Ec-Se-ether (27) の合成法
【００９７】
【化３５】
2020094039.tif 000037
【００９８】
N-Boc-N-Me-L-Ser-OAll (12) の合成
【００９９】
【化３６】
2020094039.tif 000038
【０１００】
氷浴下において、L-セリン (11) 10 g (95.2 mmol) を1,4-dioxane (150 mL) と2 M 水酸化ナトリウム水溶液 (200 mL) の混合溶液に溶解後、二炭酸ジ-tert-ブチル 22.84 g (104.7 mmol、 1.1 当量) の1,4-dioxane溶液 (50 mL) を加え、反応混合物を室温まで昇温し、室温において撹拌した。3時間後、二炭酸ジ-tert-ブチル 11.42 g (52.3 mmol、 0.55 当量) の1,4-dioxane溶液 (15 mL) を追加し、室温において終夜撹拌した。反応混合物を2 M 硫酸水素カリウム水溶液 (300 mL) によりクエンチ後、AcOEt (300 mL) により抽出した。水層をAcOEt (300 mL) によりさらに2度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (300 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。溶媒を減圧濃縮して得られた無色オイルとイミダゾール 19.43 g (285.5 mmol、 3当量) を THF (300 mL) に溶解し、氷浴下において、TBDMSCl 17.21 g (114.2 mmol、 1.2 当量) のTHF溶液 (100 mL) を加え、反応混合物を室温まで昇温し、室温において終夜撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液にAcOEt (300 mL) と1 M 硫酸水素カリウム水溶液 (300 mL) を加え、抽出した。水層をAcOEt (300 mL) によりさらに2度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (300 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。溶媒を減圧濃縮して得られた無色オイルを無水THF溶液 (300 mL)に溶解し、氷浴下において、水素化ナトリウム 11.42 g (約60%純度、 285.5 mmol、 3当量) を加え、そのまま30分間撹拌した。続いて、ヨウ化メチル 29.6 mL (475.8 mmol、 5 当量) を加え、反応混合物を室温まで昇温後、室温において撹拌した。2時間後、水素化ナトリウム 3.81 g (約60%純度、 95.2 mmol、 1当量) とヨウ化メチル 9.9 mL (158.6 mmol、 1.7 当量) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液を氷水浴下、2 M 硫酸水素カリウム水溶液 (300 mL)によりクエンチ後、AcOEt (300 mL) により抽出した。水層をAcOEt (300 mL) によりさらに2度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (300 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥後し、ろ過した。溶媒を減圧濃縮して得られた残渣をDMF (300 mL) に溶解後、臭化アリル 10.5 mL (123.7 mmol、 1.3当量) と炭酸カリウム 14.47 g (104.7 mmol、 1.1当量) を加え、室温において2時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣にAcOEt (300 mL) と水 (300 mL) を加え、抽出した。水層をAcOEt (300 mL) によりさらに2度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (300 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。溶媒を減圧濃縮して得られた黄褐色オイルを酢酸 (150 mL)、THF (75 mL) と水 (75 mL) の混合溶液に溶かし、50 ℃において終夜撹拌した。反応溶液にAcOEt (300 mL) と水 (300 mL) を加え、抽出した。水層をAcOEt (300 mL) により更に2度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (300 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。溶媒を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (200 g、 n-hexane: AcOEt=10:0、 9:1、 8:2、 7:3、 6:4各容量比) により精製し、目的化合物(12) 15.43 g (59.5 mmol、 5工程63%収率) を黄色オイルで得た。
【０１０１】
N-Boc-N-Me-L-Ser(Ts)-OAll (13) の合成
【０１０２】
【化３７】
2020094039.tif 000039
【０１０３】
N-Boc-N-Me-L-Ser-OAll (12) 3 g (11.6 mmol) 、4-(N,N-ジメチルアミノ)ピリジン 282.7 mg (2.3 mmol、 0.2 等量)とピリジン 4.8 mL (46.3 mmol、 4 当量) のCH2Cl2 溶液 (40 mL) にパラトルエンスルホン酸クロリド 6.62 g (34.7 mmol、 3 等量) を加え、室温において4時間撹拌した。反応溶液にAcOEt (300 mL) と水 (150 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (300 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (100 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 20:1、 9:1、 8:2各容量比) により精製し、目的化合物 (13) 2.97 g (約 7.2 mmol、 62%収率) を淡黄色オイルで得た。
【０１０４】
N-Boc-N-Me-L-Lan-OAll (14) の合成
【０１０５】
【化３８】
2020094039.tif 000040
【０１０６】
硫黄 125.8 mg (3.9 mmol、 0.55 等量) のTHF 溶液(20 mL) に1.0 M トリエチル水素化ホウ素リチウム-THF 溶液 8.6 mL (8.6 mmol、 1.2 等量) を加え、室温で10分間撹拌後、アルゴン雰囲気下、加熱還流条件において15 分撹拌した。反応液を室温まで冷却させ、N-Boc-N-Me-L-Ser(Ts)-OAll (13) 2.97 g (7.2 mmol) の THF 溶液 (20 mL) を加え、室温において終夜撹拌した。反応液を濾過し、減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (100 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 9:1、 8:2各容量比) により精製し、目的化合物 (14) 1.34 g (約 2.6 mmol、 72%収率) を無色オイルで得た。
【０１０７】
N-Boc-N-Me-L-Lan-OH (16) の合成
【０１０８】
【化３９】
2020094039.tif 000041
【０１０９】
アルミホイルにより遮光したN-Boc-N-Me-L-Lan-OAll (14) 1.35 g (2.6 mmol)、PPh3 54.9 mg (0.050 mmol、 8 mol%) とN-メチルアニリン 0.62 mL (5.8 mmol、 2.2 当量) のTHF 溶液 (10 mL) にPd2(dba)3 23.9 mg (0.026 mmol、 1 mol%) を加え、室温において1時間撹拌した。反応溶液にEt2O (150 mL) と 1 M 水酸化ナトリウム水溶液 (50 mL) を加え抽出した。有機層に 1 M 水酸化ナトリウム水溶液 (50 mL) を加え再度抽出した。水層を一つにまとめ、AcOEt (200 mL) と 2 M 硫酸水素カリウム水溶液 (100 mL) を加え抽出した。有機層を飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
【０１１０】
N-Boc-N-Me-L-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (18) の合成
【０１１１】
【化４０】
2020094039.tif 000042
【０１１２】
氷浴下において、4 M 塩酸/AcOEt 10 mL (40 mmol) をN-Cbz-D-Ser(N-Boc-N-Me-L-Val)-OAll (1) 2.81 g (5.7 mmol、 2.2 等量) のAcOEt 溶液 (10 mL) に加えた。反応溶液を室温まで昇温し、室温において1時間撹拌した。反応溶液をAcOEt (100 mL) と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 (100 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (100 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣と N-Boc-N-Me-L-Lan-OH 15 1.13 g (2.6 mmol、 1当量) のAcOEt溶液 (20 mL) にDMT-MM 1.79 g (6.5 mmol、 2.5 当量)を加え、室温において終夜撹拌した。反応混合物をろ別し、ろ液にAcOEt (100 mL) と水 (100 mL) を加え抽出した。水層をAcOEt (100 mL) により再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (150 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 8:2、 7:3、 6:4各容量比) により精製し、目的化合物 (18) 2.62 g (約 2.2 mmol、 2工程85%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【０１１３】
N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (20) の合成
【０１１４】
【化４１】
2020094039.tif 000043
【０１１５】
TFA 10 mLをN-Boc-N-Me-L-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (18) 2.62 g (2.2 mmol) に加え、室温において1.5時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮後、得られた残渣の DMF 溶液 (15 mL) をN-Boc-L-Ala-OH 0.92 g (4.9 mmol、 2.2 当量) 、N-メチルモルフォリン 2.2 mL (22.1 mmol、 10 等量) 及びDMT-MM 1.53 g (5.5 mmol、 2.5 当量)のDMF溶液 (5 mL) に加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にAcOEt (300 mL) と水 (300 mL) を加え抽出した。有機層を飽和食塩水 (200 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (150 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 7:3、 6:4、 5:5各容量比) により精製し、目的化合物 (20 1.59 g (約 1.3 mmol、 2工程61%収率) を淡黄色オイルで得た。
【０１１６】
N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OH) (22) の合成
【０１１７】
【化４２】
2020094039.tif 000044
【０１１８】
アルミホイルにより遮光したN-Boc-L-Ala-N-Me-L-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (20) 1.59 g (1.2 mmol) 、 PPh3 50.3 mg (0.19 mmol、 16 mol%) とN-メチルアニリン 0.29 mL (2.6 mmol、 2.2 当量) のTHF 溶液 (10 mL) にPd2(dba)3 21.9 mg (0.24 mmol、 2 mol%) を加え、室温において１時間撹拌した。反応溶液にAcOEt (200 mL) と1 M 硫酸水素カリウム水溶液 (150 mL) を加え抽出した。有機層を飽和食塩水 (100 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー (KANTO Silicagel 120 (Spherical) RP-18 40-50 mm、 60 mL、 0.1% TFA in MeCN and H2O) により精製し、目的化合物 (22) 1.33 g (約 1.1 mmol、 89%収率) を黄色アモルファスで得た。
【０１１９】
二環性オクタデプシペプチド（硫化物）（Bicyclic octadepsipeptide (sulfide)） (24)の合成
【０１２０】
【化４３】
2020094039.tif 000045
【０１２１】
TFA 10 mLをN-Boc-L-Ala-N-Me-L-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OH) (22) 1.33 g (1.1 mmol) に加え、室温において1.5時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮後、得られた残渣と N-メチルモルフォリン 1.1 mL (10.7 mmol、 10 等量)の DMF 溶液 (1100 mL、 0.001 M) にDMT-MM 2.95 g (10.7 mmol、 10 当量)を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液を減圧濃縮後、得られた残渣にAcOEt (150 mL) と水 (300 mL) を加え抽出した。水層にAcOEt (150 mL) を加え、再度抽出した。有機層を一つにまとめ、飽和食塩水 (200 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (100 g、 CH2Cl2:MeOH=10:0、 100:1、 50:1、 20:1各容量比) により精製し、目的化合物 (24) 820.2 mg (異性体混合物、約 0.81 mmol、 2工程74%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【０１２２】
Ec-S-ehter (26) の合成
【０１２３】
【化４４】
2020094039.tif 000046
【０１２４】
二環性オクタデプシペプチド (24) 100 mg (0.10 mmol) とチオアニソール 0.12 mL (1.0 mmol、 10 当量) のTFA溶液 (5 mL) を50 ℃において終夜撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。得られた濃縮残渣、N-メチルモルフォリン 0.060 mL (0.59 mmol、 6 当量) 及び2-キノキサリンカルボン酸 69.7 mg (0.40 mmol、 4 当量) のDMF 溶液 (5 mL) にDMT-MM 164.2 mg (0.59 mmol、 6 当量) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にCH2Cl2 (50 mL) と水 (50 mL) を加え抽出した。有機層を飽和食塩水 (50 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (20 g、 CH2Cl2:MeOH=10:0、 200:1、 100:1、 50:1、 20:1、 10:1各容量比) により精製した。得られた粗生成物を、Et2O、 CH2Cl2、 MeOHを用いて結晶化させ、目的化合物 Ec-S-ether (26) 6.9 mg (0.0065 mmol、化合物 (24) からの 2工程6.5%収率、化合物 (12) からの 12工程1.0%総収率) を淡褐色結晶で得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.62 (s, 2H), 8.71 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 8.18 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.91 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.85-7.88 (m, 2H), 7.78-7.81 (m, 2H), 6.84 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 6.27 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 5.14 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 4.87-4.89 (m, 2H), 4.79-4.84 (m, 4H), 4.68 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.38 (dd, J = 14.6, 6.6 Hz, 2H), 3.17 (s, 5H), 2.95 (s, 6H), 2.52 (dd, J = 14.9, 6.9 Hz, 2H), 2.29-2.35 (m, 2H), 1.36 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.10 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 0.90 (d, J = 6.9 Hz, 6H) 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 173.0, 171.4, 169.9, 167.5, 164.3, 144.2, 143.6, 142.1, 140.0, 132.1, 131.1, 129.7, 129.3, 64.1, 62.0, 54.9, 53.5, 46.3, 36.1, 31.3, 30.1, 27.7, 20.4, 19.0, 17.5
【０１２５】
N-Boc-N-Me-L-Se-Lan-OAll (15) の合成
【０１２６】
【化４５】
2020094039.tif 000047
【０１２７】
Ec-S-etherの合成を参考に、硫黄から化合物１４の製造と同様にして、セレン 240.5 mg (3.0 mmol、 0.55 等量)、 THF (20 mL)、 1.0 M トリエチル水素化ホウ素リチウム-THF 溶液 6.6 mL (6.6 mmol、 1.2 等量) 、 N-Boc-N-Me-L-Ser(Ts)-OAll (13) 2.29 g (5.5 mmol) 、 THF (30 mL) を用いて、目的化合物 (15) 1.10 g (約 2.0 mmol、 70%収率) を黄色オイルで得た。
【０１２８】
N-Boc-N-Me-L-Se-Lan-OH (17) の合成
【０１２９】
【化４６】
2020094039.tif 000048
【０１３０】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物１４から化合物１６の製造と同様にして、N-Boc-N-Me-L-Se-Lan-OAll (15) 1.10 g (2.0 mmol)、PPh3 81.9 mg (0.31 mmol、 16 mol%)、 N-メチルアニリン 0.46 mL (4.3 mmol、 2.2 当量) THF (10 mL)、 Pd2(dba)3 35.7 mg (0.039 mmol、 2 mol%) を用いて反応を行い、得られた粗生成物をそのまま次の反応に用いた。
【０１３１】
N-Boc-N-Me-L-Se-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (19) の合成
【０１３２】
【化４７】
2020094039.tif 000049
【０１３３】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物１から化合物１８の製造と同様にして、4 M 塩酸/AcOEt 10 mL (40 mmol) 、 N-Cbz-D-Ser(N-Boc-N-Me-L-Val)-OAll (1) 2.07 g (4.2 mmol、 2.2 等量) 、 AcOEt (10 mL) (1段階目)、 N-Boc-N-Me-L-Se-Lan-OH (17) 940.0 mg (1.9 mmol、 1当量)、 AcOEt (20 mL) 、 DMT-MM 1.32 g (4.8 mmol、 2.5 当量) (2段階目)を用いて、目的化合物 (19) 1.56 g (約 1.3 mmol、 2工程67%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【０１３４】
N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (21) の合成
【０１３５】
【化４８】
2020094039.tif 000050
【０１３６】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物１８から化合物２０の製造と同様にして、TFA 10 mL、 N-Boc-N-Me-L-Se-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (19) 1.45 g (1.2 mmol) (1段階目)、 N-Boc-L-Ala-OH 489.8 mg (2.6 mmol、 2.2 当量)、N-メチルモルフォリン 1.2 mL (11.8 mmol、 10 等量) 、 DMT-MM 814.0 mg (2.9 mmol、 2.5 当量) 、 DMF (5 mL) (2段階目) を用いて、目的化合物 (21) 890.1 mg (約 0.69 mmol、 2工程54%収率) を淡黄色オイルで得た。
【０１３７】
N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Se-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OH) (23) の合成
【０１３８】
【化４９】
2020094039.tif 000051
【０１３９】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２０から化合物２２の製造と同様にして、 N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Se-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (21) 890 mg (0.65 mmol) 、 PPh3 135.9 mg (0.52 mmol、 80 mol%)、 N-メチルアニリン 0.15 mL (1.4 mmol、 2.2 当量) 、 THF (5 mL) 、 Pd2(dba)3 59.3 mg (0.065 mmol、 10 mol%) を用いて、目的化合物 (23) 696.5 mg (約 0.54 mmol、 83%収率) を黄色アモルファスで得た。
【０１４０】
二環性オクタデプシペプチド（セレン化物）（Bicyclic octadepsipeptide (selenide)） (25)の合成
【０１４１】
【化５０】
2020094039.tif 000052
【０１４２】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２２から化合物２４の製造と同様にして、TFA 5 mL、 N-Boc-L-Ala-N-Me-L-Se-Lan-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OH) (23) 500 mg (0.39 mmol) (1段階目)、 N-メチルモルフォリン 0.39 mL (3.9 mmol、 10 等量)、 DMF (400 mL、 0.001 M)、 DMT-MM 1.07 g (3.9 mmol、 10 当量)を用いて(2段階目)、目的化合物 (25) 344.0 mg (異性体混合物、約 0.32 mmol、 2工程83%収率) を黄色アモルファスで得た。
【０１４３】
Ec-Se-ehter (27) の合成
【０１４４】
【化５１】
2020094039.tif 000053
【０１４５】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２４から化合物２６の製造と同様にして、二環性オクタデプシペプチド (25) 50 mg (0.047 mmol)、 チオアニソール 0.055 mL (0.47 mmol、 10 当量)、 TFA (5 mL) (1段階目)、 N-メチルモルフォリン 0.029 mL (0.28 mmol、 6 当量)、 2-キノキサリンカルボン酸 33.3 mg (0.19 mmol、 4 当量)、 DMF (5 mL)、 DMT-MM 78.5 mg (0.28 mmol、 6 当量) を用いて、目的化合物 Ec-Se-ether (27) 5.1 mg (0.0047 mmol、化合物 (25) からの 2工程10%収率、化合物 (12) からの 12工程1.1%総収率) を淡褐色結晶で得た。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.63 (s, 2H), 8.71 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 8.19 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.86-7.89 (m, 2H), 7.79-7.83 (m, 2H), 6.81 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 6.30 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 5.15 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 4.88-4.90 (m, 2H), 4.80-4.84 (m, 2H), 4.77-4.80 (m, 2H), 4.68 (dd, J = 11.5, 1.1 Hz, 2H), 3.38 (dd, J = 13.7, 6.9 Hz, 2H), 3.17 (s, 6H), 2.95 (s, 6H), 2.49 (dd, J = 13.7, 6.9 Hz, 2H), 2.29-2.37 (m, 2H), 1.37 (d, J = 7.4 Hz, 6H), 1.10 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 0.90 (d, J = 6.3 Hz, 6H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 172.9, 171.3, 170.1, 167.5, 164.2, 144.2, 143.6, 142.1, 140.1, 132.1, 131.2, 129.7, 129.3, 64.1, 62.0, 55.0, 53.3, 46.4, 31.4, 30.0, 27.7, 27.0, 20.4 19.0, 17.5
【０１４６】
［実施例３］
TA-alkene (28)、TA-xylene (34) 及び TA-xylene (Qn-3OH) (35) の合成法
【０１４７】
【化５２】
2020094039.tif 000054
【０１４８】
TA-alkene (Qn-3OH) (28) の合成
【０１４９】
【化５３】
2020094039.tif 000055
【０１５０】
二環性オクタデプシペプチド (8'(cis-isomer)) 50 mg (0.050 mmol) とチオアニソール 0.058 mL (0.50 mmol、 10 当量) のTFA溶液 (5 mL) を50 ℃において終夜撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。得られた濃縮残渣のDMF溶液(2 mL)を、3-ヒドロキシキノリン-2-カルボン酸 37.6 mg (0.20 mmol, 4 当量)、HOAt 27.1 mg (0.20 mmol, 4 等量)、炭酸水素ナトリウム 41.8 mg (0.50 mmol, 10 等量)及びWSC・HCl 38.1 mg (0.20 mmol, 4 等量)のDMF溶液 (3 mL)に加え、5時間撹拌した。反応溶液にAcOEt (50 mL) と水 (50 mL) を加え抽出した。有機層を1 M 塩酸水溶液 (30 mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30 mL)、飽和食塩水 (30 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (20 g、CH2Cl2:MeOH=10:0、 200:1、 100:1、 50:1、 30:1、 20:1 各容量比) 及び YAMAZEN ULTRA PACK ODS-SM-50B (26 x 300 mm, 粒子径50 μm, 0.1% TFA in MeCN/H2O)により精製し、目的化合物 TA-alkene (Qn-3OH) (28) 25.2 mg (0.023 mmol、2工程47%収率) を淡黄色固体で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 11.26 (s, 2H), 9.07 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.78-7.81 (m, 2H), 7.67-7.70 (m, 2H), 7.64 (s, 2H), 7.45-7.48 (m, 4H), 6.75 (s, 2H), 6.08 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 5.48-5.54 (m, 2H), 5.17 (d, J = 10.3 Hz, 2H), 4.84-4.87 (m, 2H), 4.76-4.82 (m, 2H), 4.66-4.73 (m, 4H), 3.18 (s, 6H), 3.01 (s, 6H), 2.69 (brs, 2H), 2.47 (brs, 2H), 2.29-2.37 (m, 2H), 1.36 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.10 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 0.89 (d, J = 6.3 Hz, 6H)
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 172.5, 171.1, 170.4, 169.2, 167.3, 153.8, 141.6, 134.0, 132.4, 129.3, 128.9, 128.1, 127.5, 126.6, 120.9, 64.2, 62.2, 54.4, 52.7, 46.5, 31.5, 30.0, 27.9, 26.6, 20.4, 18.9, 17.6
HRMS (ESI) calcd for C56H66N12NaO12+ [M+Na]+ 1121.4815, found: 1121.4799
【０１５１】
化合物(30) の合成
【０１５２】
【化５４】
2020094039.tif 000056
【０１５３】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物1から化合物18の製造と同様にして、4M塩酸/AcOEt lO mL (40 mmol) 、N-Cbz-D-Ser(N-Boc-N-Me-L-Val)-0All (1) 3.38 g (4.2 mmol、2.2 等量）、AcOEt (10 mL) (1段階目)、ジカルボン酸 (29) 1.50 g (3.1 mmol、1当量)、AcOEt (20mL) 、DMT-MM 2.16 g (7.8 mmol、2.5当量) (2段階目)を用いて、目的化合物(30) 1.25 g (1.0 mmol、2工程33%収率）を無色アモルファスで得た。
【０１５４】
化合物 (31) の合成
【０１５５】
【化５５】
2020094039.tif 000057
【０１５６】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物１８から化合物２０の製造と同様にして、TFA 10 mL、 化合物３０ 1.25 g (1.0 mmol) (1段階目)、 N-Boc-L-Ala-OH 0.42 g (2.2 mmol、 2.2 当量)、N-メチルモルフォリン 0.51 mL (5.1 mmol、 5 等量) 、 DMT-MM 0.70 g (2.5 mmol、 2.5 当量) 、 DMF (15 mL) (2段階目) を用いて、目的化合物 (31)  508.9 mg (0.37 mmol、 2工程37%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【０１５７】
化合物 (32) の合成
【０１５８】
【化５６】
2020094039.tif 000058
【０１５９】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２０から化合物２２の製造と同様にして、 化合物３１ 500 mg (0.36 mmol) 、 PPh3 7.6 mg (0.029 mmol、 8 mol%)、 N-メチルアニリン 0.087 mL (0.80 mmol、 2.2 当量) 、 THF (5 mL) 、 Pd2(dba)3 3.3 mg (0.0036 mmol、 1 mol%) を用いて、目的化合物 (32) 468.2 mg (0.36 mmol、 定量的収率) を黄色アモルファスで得た。
【０１６０】
化合物 (33) の合成
【０１６１】
【化５７】
2020094039.tif 000059
【０１６２】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２２から化合物２４の製造と同様にして、TFA 5  mL、 化合物３２ 450 mg (0.35 mmol) (1段階目)、 N-メチルモルフォリン 0.35 mL (3.5 mmol、 10 等量)、 DMF (350 mL、 0.001 M)、 DMT-MM 0.96 g (3.5 mmol、 10 当量)を用いて(2段階目)、目的化合物 (33) 181.8 mg (0.17 mmol、 2工程49%収率) を無色アモルファスで得た。
【０１６３】
TA xylene (34) の合成
【０１６４】
【化５８】
2020094039.tif 000060
【０１６５】
水酸化パラジウム-活性炭素 (Pd 20%) 5.0 mg (10 wt%) を二環性オクタデプシペプチド(33) 50 mg (0.047 mmol) のメタノール溶液 (5 mL) に加え、水素雰囲気下、室温において1時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた濃縮残渣及び2-キノキサリンカルボン酸 33.4 mg (0.19 mmol、4 当量) のDMF 溶液 (5 mL) にDMT-MM 78.7 mg (0.28 mmol、6 当量) を加え、室温において終夜撹拌した。反応溶液にAcOEt (50 mL) と水 (50 mL) を加え抽出した。有機層を1 M 塩酸水溶液 (30 mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30 mL)、飽和食塩水 (30 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (15 g、CH2Cl2:MeOH=10:0、200:1、100:1、50:1、30:1、各容量比)により精製し、目的化合物 TA-xylene (34) 34.6 mg (0.031 mmol、2工程 67%収率) を無色固体で得た。
【０１６６】
TA-xylene (Qn-3OH) (35) の合成
【０１６７】
【化５９】
2020094039.tif 000061
【０１６８】
水酸化パラジウム-活性炭素 (Pd 20%) 10.0 mg (20 wt%) を二環性オクタデプシペプチド(33) 50 mg (0.047 mmol) のメタノール溶液 (5 mL) に加え、水素雰囲気下、室温において6時間撹拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた濃縮残渣及び反応溶液を減圧濃縮した。得られた濃縮残渣のDMF溶液(2 mL)を、3-ヒドロキシキノリン-2-カルボン酸 35.9 mg (0.19 mmol, 4 当量)、HOAt 25.8 mg (0.19 mmol, 4 等量)、炭酸水素ナトリウム 39.8 mg (0.47 mmol, 10 等量)及びWSC・HCl 36.3 mg (0.19 mmol, 4 等量)のDMF溶液 (3 mL)に加え、終夜撹拌した。反応溶液にAcOEt (50 mL) と水 (50 mL) を加え抽出した。有機層を1 M 塩酸水溶液 (30 mL)、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30 mL)、飽和食塩水 (30 mL) により洗浄後、硫酸マグネシウムにより乾燥し、ろ過した。減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (15 g、 n-hexane:AcOEt=10:0、 8:2、 6:4、 5:5、 4:6、 3:7、 2:8、各容量比) 及び YAMAZEN ULTRA PACK ODS-SM-50B (26 x 300 mm, 粒子径50 μm, 0.1% TFA in MeCN/H2O)により精製し、目的化合物 TA-xylene (Qn-3OH) (35) 16.4 mg (0.015 mmol、2工程31%収率) を無色固体で得た。
HRMS (ESI) calcd for C58H68N10NaO14+ [M+Na]+ 1151.4809, found: 1151.4833
【０１６９】
TA-alkyne (41b) 及びEc-methylene (41c)の合成
【０１７０】
【化６０】
2020094039.tif 000062
【０１７１】
(N-Boc-N-Me-(2S,7S)-2,7-diamino-4-octenedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (37a)の合成
【０１７２】
【化６１】
2020094039.tif 000063
【０１７３】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物1から化合物18の製造と同様にして、4M塩酸/AcOEt 15 mL (60 mmol) 、N-Cbz-D-Ser(N-Boc-N-Me-L-Val)-0All (1) 3.78 g (7.7 mmol、2.2 等量)、AcOEt (15 mL) (1段階目)、ジカルボン酸 (36a) 1.50 g (3.5 mmol、1当量)、AcOEt (30mL) 、DMT-MM 2.41 g (8.7 mmol、2.5当量) (2段階目)を用いて、目的化合物(37a) 1.60 g (1.4 mmol、2工程39%収率)を無色アモルファスで得た。
【０１７４】
N-Boc-L-Ala-(N-Boc-N-Me-(2S,7S)-2,7-diamino-4-octenedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (38a)の合成
【０１７５】
【化６２】
2020094039.tif 000064
【０１７６】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物１８から化合物２０の製造と同様にして、TFA 10 mL、化合物37a 1.60 g (1.4 mmol) (1段階目)、N-Boc-L-Ala-OH 0.56 g (3.0 mmol、2.2 当量)、N-メチルモルフォリン 00.69 mL (6.8 mmol、5 等量)、DMT-MM 0.94 g (3.4 mmol、2.5 当量)、DMF (15 mL) (2段階目) を用いて、目的化合物 (38a) 740.7 mg（0.56 mmol、2工程41%収率) を無色アモルファスで得た。
【０１７７】
N-Boc-L-Ala-(N-Boc-N-Me-(2S,7S)-2,7-diamino-4-octenedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OH) (39a)の合成
【０１７８】
【化６３】
2020094039.tif 000065
【０１７９】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２０から化合物２２の製造と同様にして、化合物38a 730 mg (0.55 mmol)、PPh3 11.6 mg (0.044 mmol、8 mol%)、N-メチルアニリン 0.132 mL (1.2 mmol、2.2 当量)、THF (5 mL)、Pd2(dba)3 5.1 mg (0.0055 mmol、1 mol%) を用いて、目的化合物 (39a) 666.6 mg (0.54 mmol, 98%収率) を黄色アモルファスで得た。
【０１８０】
Cbz-bicyclicpeptide (cis-alkene) (8’ (cis-isomer))（別名：Bicyclic octadepsipeptide (alkene)の合成
【０１８１】
【化６４】
2020094039.tif 000066
【０１８２】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２２から化合物２４の製造と同様にして、TFA 5 mL、化合物39a 660 mg (0.53 mmol) (1段階目)、N-メチルモルフォリン 0.54 mL (5.3 mmol、10 等量)、DMF (500 mL、0.001 M)、DMT-MM 1.47 g (5.3 mmol、10 当量)を用いて(2段階目)、目的化合物 (8' (cis-isomer)) 361.6 mg（0.36 mmol、2工程68%収率) を無色アモルファスで得た。
【０１８３】
(N-Boc-N-Me-(2S,7S)-2,7-diamino-4-octynedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (37b) の合成
【０１８４】
【化６５】
2020094039.tif 000067
【０１８５】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物1から化合物18の製造と同様にして、4M塩酸/AcOEt 5 mL (20 mmol)、N-Cbz-D-Ser(N-Boc-N-Me-L-Val)-0All (1) 935.7 mg (1.9 mmol、2.2 等量)、AcOEt (5 mL) (1段階目)、ジカルボン酸 (36b) 1.50 g (3.5 mmol、1当量)、AcOEt (10mL)、DMT-MM 597.4 mg (2.2 mmol、2.5当量) (2段階目)を用いて、目的化合物 (37b) 943.7 mg (0.80 mmol、2工程93%収率)を淡黄色アモルファスで得た。
【０１８６】
N-Boc-L-Ala-(N-Me-(2S,7S)-2,7-diamino-4-octynedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (38b) の合成
【０１８７】
【化６６】
2020094039.tif 000068
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物１８から化合物２０の製造と同様にして、TFA 5 mL、化合物37b 498.7 mg (0.77 mmol) (1段階目)、N-Boc-L-Ala-OH 321.7 mg (1.7 mmol、2.2 当量)、N-メチルモルフォリン 0.78 mL (7.7 mmol、5 等量)、DMT-MM 0.94 g (3.4 mmol、2.5 当量)、DMF (5 mL) (2段階目) を用いて、目的化合物 (38b) 498.7 mg （0.38 mmol、2工程48%収率）を淡黄色アモルファスで得た。
【０１８８】
N-Boc-L-Ala-(N-Me-(2S,7S)-2,7-diamino-4-octynedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OH) (39b) の合成
【０１８９】
【化６７】
2020094039.tif 000069
【０１９０】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２０から化合物２２の製造と同様にして、化合物38b 500 mg (0.38 mmol)、PPh3 8.0 mg (0.030 mmol、8 mol%)、N-メチルアニリン 0.090 mL (0.83 mmol、2.2 当量)、THF (5 mL)、Pd2(dba)3 3.5 mg (0.0038 mmol、1 mol%) を用いて、目的化合物 (39b) 438.9 mg (0.35 mmol, 93%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【０１９１】
Cbz-bicyclicpeptide (alkyne) (40b)の合成
【０１９２】
【化６８】
2020094039.tif 000070
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２２から化合物２４の製造と同様にして、TFA 5 mL、化合物39b 440 mg (0.36 mmol) (1段階目)、N-メチルモルフォリン 0.36 mL (3.6 mmol、10 等量)、DMF (360 mL、0.001 M)、DMT-MM 982.4 mg (3.6 mmol、10 当量)を用いて(2段階目)、目的化合物 (40b) 107.6 mg （0.11 mmol、 2工程30%収率) を無色アモルファスで得た。
【０１９３】
TA-alkyne (41b)の合成
【０１９４】
【化６９】
2020094039.tif 000071
【０１９５】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２４から化合物２６の製造と同様にして、二環性オクタデプシペプチド (40b) 100 mg (0.10 mmol)、チオアニソール 0.117 mL (1.0 mmol、10 当量)、TFA (5 mL) (1段階目)、N-メチルモルフォリン 0.061 mL (0.60 mmol、6 当量)、2-キノキサリンカルボン酸 70.2 mg (0.40 mmol、4 当量)、DMF (5 mL)、DMT-MM 165.5 mg (0.60 mmol、6 当量) を用いて、目的化合物 (41b) 62.2 mg (0.059 mmol、2工程59%収率)を無色結晶で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.54 (s, 2H), 9.06 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 8.13-8.16 (m, 4H), 7.95 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.86-7.90 (m, 4H), 5.71 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 5.13 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.96-5.01 (m, 2H), 4.82-4.89 (m, 2H), 4.57 (d, J = 10.9 Hz, 2H), 3.85 (d, J = 10.9 Hz, 2H), 3.31 (s, 6H), 2.97 (s, 6H), 2.75-2.83 (m, 2H), 2.58 (d, J = 17.2 Hz, 2H), 2.38-2.45 (m, 2H), 1.04 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 1.00 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 0.20 (d, J = 6.3 Hz, 6H)
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 172.8, 170.4, 169.7, 168.2, 164.5, 144.0, 143.8, 143.1, 140.4, 131.9, 131.1, 130.1, 129.4, 78.1, 65.3, 64.6, 54.8, 53.2, 45.4, 32.1, 28.4, 19.7, 19.6, 18.9, 17.7
【０１９６】
(N-Boc-N-Me-(2S,6S)-2,6-diaminoheptanedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (37c)の合成
【０１９７】
【化７０】
2020094039.tif 000072
【０１９８】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物1から化合物18の製造と同様にして、4M塩酸/AcOEt 10 mL (40 mmol)、N-Cbz-D-Ser(N-Boc-N-Me-L-Val)-0All (1) 1.27 g (2.6 mmol、2.2 等量)、AcOEt (10 mL) (1段階目)、ジカルボン酸 (36c) 490.0 mg (1.2 mmol、1当量)、AcOEt (20mL)、DMT-MM 0.81 g (2.9 mmol、2.5当量) (2段階目)を用いて、目的化合物 (37c) 1.09 g (0.93 mmol、2工程78%収率)を淡黄色アモルファスで得た。
【０１９９】
N-Boc-L-Ala-(N-Me-(2S,6S)-2,6-diaminoheptanedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OAll) (38c) の合成
【０２００】
【化７１】
2020094039.tif 000073
【０２０１】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物１８から化合物２０の製造と同様にして、TFA 5 mL、化合物37c 1.09 g (0.93 mmol) (1段階目)、N-Boc-L-Ala-OH 388.7 mg (2.1 mmol、2.2 当量)、N-メチルモルフォリン 0.94 mL (9.3 mmol、5 等量)、DMT-MM 646.0 mg (2.3 mmol、2.5 当量)、DMF (10 mL) (2段階目) を用いて、目的化合物 (38c) 625.5 mg（0.48 mmol、2工程51%収率）を無色アモルファスで得た。
【０２０２】
N-Boc-L-Ala-(N-Me-(2S,6S)-2,6-diaminoheptanedioic acid)-N-Me-L-Val-O-(N-Cbz-D-Ser-OH) (39c) の合成
【０２０３】
【化７２】
2020094039.tif 000074
【０２０４】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２０から化合物２２の製造と同様にして、化合物38c 600 mg (0.46 mmol)、PPh3 9.6 mg (0.037 mmol、8 mol%)、N-メチルアニリン 0.109 mL (1.0 mmol、2.2 当量)、THF (5 mL)、Pd2(dba)3 4.2 mg (0.0046 mmol、1 mol%) を用いて、目的化合物 (39c) 556.6 mg (0.45 mmol, 98%収率) を淡黄色アモルファスで得た。
【０２０５】
Cbz-bicyclicpeptide (methylene) (40c)の合成
【０２０６】
【化７３】
2020094039.tif 000075
【０２０７】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２２から化合物２４の製造と同様にして、TFA 5 mL、化合物39c 500 mg (0.41 mmol) (1段階目)、N-メチルモルフォリン 0.41 mL (4.1 mmol、10 等量)、DMF (410 mL、0.001 M)、DMT-MM 1.13 g (4.1 mmol、10 当量)を用いて(2段階目)、目的化合物 (40c) 282.6 mg, 0.28 mmol、2工程69%収率) を無色アモルファスで得た。
【０２０８】
Ec-methylene (41c)の合成
【０２０９】
【化７４】
2020094039.tif 000076
【０２１０】
Ec-S-etherの合成を参考に、化合物２４から化合物２６の製造と同様にして、Cbz-bicyclicpeptide (methylene) (40c) 100 mg (0.10 mmol)、チオアニソール 0.12 mL (1.0 mmol、10 当量)、TFA (5 mL) (1段階目)、N-メチルモルフォリン 0.061 mL (0.60 mmol、6 当量)、2-キノキサリンカルボン酸 71.0 mg (0.40 mmol、4 当量)、DMF (5 mL)、DMT-MM 167.2 mg (0.60 mmol、6 当量) を用いて、目的化合物 (41c) 52.2 mg (0.050 mmol、2工程50%収率)を淡褐色結晶で得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.64 (s, 2H), 8.65-8.70 (m, 2H), 8.19-8.26 (m, 2H), 7.86-7.95 (m, 4H), 7.73-7.81 (m, 2H), 6.78 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 6.04 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 5.04-5.16 (m, 2H), 4.98 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.76-4.83 (m, 2H), 4.71-4.76 (m, 4H), 3.19-3.25 (m, 6H), 3.05 (s, 6H), 2.25-2.33 (m, 2H), 2.20 (td, J = 14.6, 6.3 Hz, 2H), 1.52-1.57 (m, 2H), 1.34 (d, J = 7.4 Hz, 2+6H), 1.09 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 0.91 (d, J = 6.9 Hz, 6H)
13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 173.2, 171.6, 171.3, 167.7, 164.3, 144.3, 143.6, 142.1, 140.0, 132.1, 131.1, 129.8, 129.2, 63.7, 62.0, 53.2, 52.9, 46.2, 31.5, 30.4, 29.2, 27.8, 20.3, 19.2, 16.8
【０２１１】
［試験例］化合物の活性評価法
【０２１２】
（１）検定化合物溶液の調整
検定化合物をジメチルスルホキシド (DMSO；Wako、インフィニティ−ピュア) で溶解し、-20 ℃で保存した。生理活性評価において、DMSOの最終濃度がルシフェラーゼアッセイ及びMTTアッセイでは1% (v/v)になるように調整した。
【０２１３】
（２）細胞培養用培地
（２−１）HEK293細胞用培地
1 W/V% イーグル最小必須培地 (MEM)用非必須アミノ酸 (NEAA；GIBCO)、 10 W/V% ウシ胎児血清 (fetal bovine serum；FBS；GIBCO)、1 mmol/L ピルビン酸ナトリウム (GIBCO)、50 units/mL ベンジルペニシリンカリウム (ペニシリン；Meiji)、50 μg/mL 硫酸ストレプトマイシン (ストレプトマイシン；Meiji) 及び50 μg/mL 硫酸カナマイシン (カナマイシン；Meiji)を含むイーグル最小必須培地(EMEM；Wako)
【０２１４】
（２−２）MCF-7細胞（ヒト乳腺がん細胞）及びA549細胞（ヒト肺胞基低上皮腺がん細胞）用培地
1% NEAA、1 mmol/L ピルビン酸ナトリウム、10 W/V% FBS (HyClone) 、50 units/mLペニシリン、50 μg/mLストレプトマイシン及び50 μg/mLカナマイシンを含むEMEM
【０２１５】
（２−３）HT29細胞（ヒト結腸腺がん細胞）用培地
10 W/V% FBS (CCB) 、50 units/mLペニシリン、50 μg/mLストレプトマイシン及び50 μg/mLカナマイシンを含むRPMI-1640培地(RPMI；Wako)
【０２１６】
（２−４）MDA-MB-231細胞（ヒト乳腺がん細胞）用培地
1 mmol/L ピルビン酸ナトリウム、10% FBS (SIGMA) 、50 units/mLペニシリン、50 μg/mLストレプトマイシン及び50 μg/mLカナマイシンを含むRPMI
【０２１７】
（３）ＨＩＦ−１ルシフェラーゼアッセイ
報告例（H.Hattori et al., Bioorg. Med. Chem. 2011, 19, 5392-5401） に従い、ＨＩＦ−１転写応答性プロモーターを有するルシフェラーゼをHEK293細胞に遺伝子導入して得られた安定発現株HEK293p2.1#3を用いて以下の実験を行った。
HEK293p2.1#3細胞を24-well plate (TPP Techno Plastic Product AG) に 8.0 x 104 cells/well となるように播種し、24時間培養した (37℃、5% CO2)。そして、コントロールとしてDMSOのみ及び検定化合物（TA-alkene、TA-alkane、Ec-S-ether、Ec-Se-ether、Ec及びTA）を所望の濃度になるように調整した培地と培地交換し1時間培養 (37℃、5% CO2) 後、低酸素チャンパーへと移した。低酸素ガス (94% N2、 5% CO2、 1% O2) で10分間処理後、系を閉じさらに24時間培養した (37℃)。培地の除去後、PBS (500 μL) により洗浄し、Lysis buffer (100 μL、 Luciferase Reporter Gene Assay、 high sensitivity、 Roche) にて溶解し、液体窒素にて凍結させた。室温に昇温後、マイクロチューブに移し、遠心処理 (15000 rpm、 4℃、 1 min) した。遠心処理後の上清 (10 μL) を 発光基質溶液(100 μL、 Luciferase Reporter Gene Assay、 high sensitivity、 Roche)と反応させ、その発光を測定した (測定波長：570 nm、 FB12 Luminometer、 Titertek-Berthold)。また、細胞溶解液のタンパク質濃度を以下の操作で求めた。遠心処理後の上清 (10 μL) 及び牛血清アルブミン (0.1、 0.2、 0.4、 0.5、 0.8、 1.0 mg/mL、 各10 μL) にBCAアッセイキット (Thermo Fisher Scientific) で調整した試薬 200 μL を加え、37℃にて30分放置後、GloMax（登録商標）-Multi+ (Promega) にて570 nm の吸光度を測定した。牛血清アルブミンのデータで検量線を作成し、細胞溶解液のタンパク質濃度を算出した。最後に、測定した発光量 (RLU値) をタンパク質濃度で除することでルシフェラーゼ活性データを得た。そして、得られたデータを低酸素下でのコントロールを基準として正規化を行った。
【０２１８】
下記表１及び表２の通り、TA-alkene、TA-alkane、Ec-S-ether、Ec-Se-ether、TA-xylene、TA-alkene (Qn-3OH) 及びTA-xylene (Qn-3OH) は、TA と比較して顕著に優れた、Ecと同等の、ＨＩＦ−１阻害活性を示した。尚、表１及び表２中の結果を表す数値は、平均値±標準誤差を示す（ｎ≧３）。
【０２１９】
【表１】
2020094039.tif 000077
【０２２０】
【表２】
2020094039.tif 000078
【０２２１】
（４）MTTアッセイ
96-well plate (TPP Techno Plastic Product AG) に MCF-7細胞；4.0 x 103 cells/well、 A549細胞；3.0 x 103 cells/well、 HT29細胞；5.0 x 103 cells/well、 MDA-MB-231細胞；4.0 x 103 cells/wellとなるように播種し、24時間培養した (37 ℃、5% CO2)。そして、コントロールとしてDMSOのみ及び所望の濃度に調整した検定化合物を加え、 72時間培養した (37 ℃、5% CO2)。その後、新規の培地に交換し、MTT (3-(4,5-ジメチル-2-チアゾリル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド) 溶液 (5 mg / mL) を10 μL ずつ各wellに添加し、4時間培養 (37 ℃)した。培地を除去後、DMSO (100 μL/wells) で生成したホルマザン産物を溶解した。そして、GloMax（登録商標）-Multi+ (Promega) にて570 nm の吸光度を測定した。最後にコントロールの吸光度を基準に正規化した。
【０２２２】
下記表３〜５の通り、TA-alkene、TA-alkane、Ec-S-ether、Ec-Se-ether、TA-xylene、TA-alkene (Qn-3OH) 及びTA-xylene (Qn-3OH) は、TA と比較して顕著に優れた、Ecと同等の、がん細胞増殖抑制活性を示した。尚、表３〜５中の結果を表す数値は、平均値±標準誤差（ｎ≧３）又はｎ数：１の測定結果の数値を示す。
【０２２３】
【表３】
2020094039.tif 000079
【０２２４】
【表４】
2020094039.tif 000080
【０２２５】
【表５】
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【０２２６】
（５）ウェスタンブロッティング
MCF-7細胞を直径10 dish (TPP Techno Plastic Product AG) に2.5 x 106 cells/well となるように播種し、24時間培養した (37℃、5% CO2)。コントロールとしてDMSOのみ、及び検定化合物を所望の濃度になるように調整した培地 (DMSO濃度：0.25%) と培地交換し1時間培養 (37℃、5% CO2) 後、低酸素チャンバーへと移した。低酸素ガス (94% N2、 5% CO2、 1% O2) で10分間処理後、系を閉じさらに16時間培養した (37℃)。培地除去後、氷冷したPBS 約10 mL により細胞を洗浄した。そして、氷冷したPBS 10 mL を加えセルスクレーパーを用いて細胞を物理的に剥がした。得られた細胞懸濁液を遠心処理 (1500 rpm、 4℃、 3 min) し、上清を除去、液体窒素により凍結後、-80℃ (冷凍庫) にて保存した。氷上にて、冷凍庫より取り出した凍結細胞にすばやくRIPA buffer (50 mM Tris-HCl buffer (pH 8)、150 mM 塩化ナトリウム、0.1% (v/v) ドデシル硫酸ナトリウム、1% (v/v) Tergetol NP-40、5 mM エチレンジアミン四酢酸、0.5(w/v) デオキシコール酸ナトリウム、0.1 mM ジチオトレイトール、1 mM フッ化フェニルメチルスルホニル、1 mM オルトバナジン(V)酸ナトリウム、10 mM フッ化ナトリウム、cOmplete （登録商標；Roche) 半錠) を細胞ペレットの体積の約4倍量を見積もって加え、激しくピペッティングした。氷浴中で30分間静置後、遠心処理 (14000 rpm、 4℃、 10 min) し、上清を得た (この細胞抽出液は場合によっては-80℃にて保存した)。得られた細胞抽出液をBCAアッセイにてタンパク定量し、120 μg となるよう50%(v/v) グリセロール、8%(w/v) ドデシル硫酸ナトリウム、1%(w/v) ブロモフェノールブルー、5%(v/v) 2-メルカプトエタノールを含む0.25 M Tris-HCl buffer (pH 6.8) で調整した。タンパク質濃度調整したサンプルを105℃(ヒーティングブロック) で5分間加熱後、8% SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、ニトロセルロース膜に転写した。得られた転写膜を 0.1% ポンソーS で染色し、130〜100 kDa及び40〜55 kDaの辺りを切り出した。切り出した転写膜 (2枚) を脱色後、ブロッキング液 (5% スキムミルク粉末を含むTBST (1%(v/v) ツイン 20の20 mM Tris-HCl buffer (pH 7.5)溶液) に浸し、室温において1時間振盪した。抗ＨＩＦ−１α 一次抗体 (Monoclonal Anti-HIF-1α antibody produced in mouse (Novus) 、 1000倍希釈) と抗β-アクチン一次抗体 (Monoclonal Anti-β-actin antibody produced in mouse (sigma-aldrich)、 3000倍希釈) をそれぞれに加え、室温において1.5時間以上反応させ、TBST にて2回15分間洗浄した。次に、抗マウスIgG(全分子) 二次抗体 (Anti-Mouse IgG (whole molecule)?Peroxidase antibody produced in goat (sigma-aldrich) 、 1000及び3000倍希釈) で室温において1時間処理し、TBST にて2回10分間洗浄した。抗体処理後の転写膜を、ＨＩＦ−１αに対してはImmobilonTM Western Chemiluminescent HRP Substrate (Millipore) 、β-アクチンに対してはPierce（登録商標） Western Blotting Substrate (Thermo Scientific)で処理することで発光させ、ルミノイメージアナライザー (ChemiDoc Touch、 BIO-RAD) で検出した。
【０２２７】
図１及び２の通り、TA-alkene、Ec-S-ether、Ec-Se-ether及びTA-alkene (Qn-3OH) は、TA と比較して顕著に優れた、Ecと同等の、ＨＩＦ−１阻害活性を示した。ウェスタンブロッティングの結果である図１、２及び４に示されるように、低濃度の化合物により、ＨＩＦ−１タンパク質の発現を抑制することは、注目に値する。
【０２２８】
（６）構造活性相関の確認
検定化合物（TA-alkene、Ec-S-ether 及びEc-Se-ether）の、本開示における式（１）で示されるＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離、及びＹで示される置換基のそれぞれと結合している炭素原子間の距離、並びに、Ec及びTAにおいてそれらに対応する距離を単結晶Ｘ線構造解析により得られた３次元構造より測定することにより測定した。TA-alkene、Ec-S-ether 及びEc-Se-etherの単結晶Ｘ線構造解析結果を図３に示す。
【０２２９】
上記結果及び下記表６の結果から、ＨＩＦ−１阻害活性及びがん細胞増殖抑制活性に関して、本開示における式（１）中、ＣＨ２ＸＣＨ２と結合している２つの炭素原子間の距離が０．４０ｎｍ未満であるか、又はＹで示される置換基のそれぞれと結合している炭素原子間の距離が１．３６ｎｍ未満であるTA-alkene、Ec-S-ether 及びEc-Se-etherは、そうでないTAと比較して、顕著に優れたＨＩＦ−１阻害活性及びがん細胞増殖抑制活性を示し、TA-alkene、Ec-S-ether 及びEc-Se-etherのＨＩＦ−１阻害活性及びがん細胞増殖抑制活性はEc（エキノマイシン）と同等であることを確認した。
【０２３０】
【表６】
2020094039.tif 000082
【０２３１】
例えば、がん細胞の種類やその発症部位等の多様性に有効に対処するために、TAより顕著に優れたEc（エキノマイシン）と同程度の抗がん作用を有することは、医療技術の豊富化に役立ち、人類の医療にとって有用である。
【０２３２】
（７）血管新生阻害試験
さらに、血管新生阻害作用の指標として、網膜血管内皮細胞（以下、HRMECとも呼ぶ）のVEGF存在または非存在下における細胞の増殖阻害について検討した。本試験には、Ec(エキノマイシン)、TA-xylene及びTA-alkene (Qn-3OH)のいずれかを試験化合物として用いた。
ヒト網膜毛細血管内皮細胞 (Human retinal microvascular endothelial cells; HRMEC, Cell systems) を96wellプレートに3.0 ｘ 103 cells/wellとなるように播種し、37℃、5％ CO2条件下で24時間培養した。細胞培養には、Culture boostを含むCS-C Complete Medium (Cell systems) を使用した。10% FBS培地 (Culture boost不含) へ培地交換し、さらに24時間培養した。試験化合物をそれぞれ添加し、1時間後にPBS溶解したrecombinant human VEGF 10ng/ml (R&D systems) (VEGF存在群) を添加した後、さらに、48時間培養した。また、VEGFを添加しない群に関しては、PBSを添加した (VEGF非存在群)。さらに、Cell Counting Kit-8 (Dojindo) 10μL添加後、2時間インキュベートした。マイクロプレートリーダーを用いて、測定波長450nm及びブランク値650nmの吸光度を測定し、細胞生存性を算出した。結果は図５の通り。
試験した二つの化合物TA-xylene及びTA-alkene (Qn-3OH)は、Ecよりもかなり低い濃度でHRMECの増殖及びVEGFによる増殖誘導を阻害した。
【産業上の利用可能性】
【０２３３】
本発明の抗腫瘍効果を有する化合物、及びその合成中間体並びにそれらの製造方法は医薬品産業の分野において有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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