(57)【要約】      （修正有）【課題】コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体で疾患を治療する方法の提供。【解決手段】コロニー刺激因子１（ＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体の有効量を関節リウマチを有するヒト被験者に投与し、有効量が０．２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、又は１から１０ｍｇ／ｋｇの間、又は１から５ｍｇ／ｋｇの間である、方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
コロニー刺激因子１（ＣＳＦ１Ｒ）を結合する抗体の有効量を関節リウマチを有するヒト被験者に投与することを含む関節リウマチを治療する方法であって、抗体はコロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、かつＩＬ−３４のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、有効量は被験者におけるＣＤ１６＋単球の数を２回投与後少なくとも４週間で少なくとも５０％減少させるのに十分である、方法。
【請求項２】
有効量が０．２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、又は１から１０ｍｇ／ｋｇの間、又は１から５ｍｇ／ｋｇの間である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗体が２週間又はそれ以上の期間に１回の投与頻度で投与される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体を関節リウマチを有するヒト被験者に投与することを含む関節リウマチを治療する方法であって、抗体はコロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、かつＩＬ−３４のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、０．２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間の用量で２週間又はそれ以上の期間に１回の投与頻度で投与される、方法。
【請求項５】
投与頻度が２週間に１回未満、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回又は年に４回である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
１用量の抗体を投与することを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
２用量の抗体を投与することを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記用量が少なくとも１週間間隔で投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記用量が少なくとも２週間間隔で投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
用量が１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
用量が３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１用量の抗体の投与後、ＣＤ１６＋単球の数が被験者において少なくとも５０％減少する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＣＤ１６−単球の数が減少しないか又は２０％未満減少する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＣＤ１６＋単球の数が被験者において少なくとも７５％減少する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＣＤ１６＋単球の数が少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間又は少なくとも８週間で少なくとも５０％減少する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＤ１６＋単球がＣＤ１６＋末梢血単球である、請求項２から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
骨吸収の少なくとも一つのマーカーのレベルが少なくとも１用量の抗体の投与後に減少する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
骨吸収の少なくとも一つのマーカーのレベルが少なくとも２０％減少する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
骨吸収の少なくとも一つのマーカーのレベルが少なくとも５０％減少する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
骨吸収の少なくとも一つのマーカーがＣＴｘ及びＴＲＡＰ５ｂから選択される、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
骨吸収の少なくとも一つのマーカーがＣＴｘである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が、
ａ）  配列番号３９の配列を含む重鎖及び配列番号４６の配列を含む軽鎖を含む抗体；
ｂ）  配列番号１５の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、配列番号１６の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号１７の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３を有する重鎖と、配列番号１８の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号１９の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号２０の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３を有する軽鎖とを含む抗体；並びに
ｃ）  配列番号５３の配列を含む重鎖及び配列番号６０の配列を含む軽鎖を含む抗体
から選択される、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
抗体がヒト化抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
抗体がＦａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項２２又は請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
抗体が用量投与後少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも６週間又は少なくとも２ヶ月間、被験者からの血清中に検出可能である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
抗体が用量投与後少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも６週間又は少なくとも２ヶ月間、被験者からの血清中に検出可能である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
用量が３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
被験者における抗体の半減期が２日を超える、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
抗体の半減期が４日を超える、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
抗体の半減期が１５日を超える、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
抗体の半減期が２８日を超える、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
抗体の半減期が４２日を超える、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
用量が３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である、請求項２８から３２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１４年６月２３日出願の米国仮出願第６２／０１５７１０号の利益を主張するものであり、該出願は、あらゆる目的で参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
技術分野
コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体で疾患を治療する方法が提供される。そのような方法は、関節リウマチを治療する方法が含むが、これに限定されない。
【背景技術】
【０００３】
コロニー刺激因子１受容体（本明細書においてＣＳＦ１Ｒと称され、当該技術分野においてはＦＭＳ、ＦＩＭ２称される）は、Ｎ末端細胞外ドメイン（ＥＣＤ）とチロシンキナーゼ活性を有するＣ末端細胞内ドメインとを有する１回膜貫通型受容体である。ＣＳＦ１又はインターロイキン３４リガンド（本明細書においてＩＬ３４とする；Lin et al.,Science 320:807?11(2008))のＣＳＦ１Ｒへのリガンド結合は、受容体二量体化、ＣＳＦ１Ｒタンパク質チロシンキナーゼ活性の上昇、ＣＳＦ１Ｒチロシン残基のリン酸化、及び下流シグナル伝達事象をもたらす。ＣＳＦ１及びＩＬ３４の両者は、単球の生存、増殖、及びマクロファージへの分化、並びに破骨細胞、樹状細胞、及びミクログリアなどの他の単球細胞系列を刺激する。
【０００４】
多くの腫瘍細胞が、ＣＳＦ１Ｒを介して単球／マクロファージ細胞を活性化するＣＳＦ１を分泌することが見出されている。腫瘍におけるＣＳＦ１のレベルは、腫瘍における腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）のレベルと相関することが示されている。高レベルのＴＡＭは、患者の予後不良と相関することが見出されている。さらに、ＣＳＦ１は、例えばマウスにおけるヒト乳がん異種移植片において、腫瘍の成長及び転移への進行を促進することがわかっている。例として、Paulus et al., Cancer Res. 66: 4349-56 (2006)を参照されたい。さらに、ＣＳＦ１Ｒは骨転移における溶骨性骨破壊に関与している。例として、Ohno et al., Mol. Cancer Ther. 5: 2634-43 (2006)を参照されたい。
【０００５】
ＣＳＦ１及びその受容体は、種々の炎症性疾患及び自己免疫疾患に関与していることもわかっている。例として、Hamilton, Nat. Rev. 8: 533-44 (2008)を参照されたい。例えば、関節リウマチ罹患関節の滑膜内皮細胞は、ＣＳＦ１を産生することがわかっており、関節リウマチにおけるＣＳＦ１とその受容体の役割を示唆している。抗体によるＣＳＦ１Ｒ活性のブロックは、関節炎のマウスモデルにおいて、骨及び軟骨の破壊の減少及びマクロファージ数の減少などの好ましい臨床効果をもたらす。例として、Kitaura et al., J. Clin. Invest. 115: 3418-3427 (2005)を参照されたい。
【０００６】
成熟した分化骨髄系細胞、例えばマクロファージ、ミクログリア細胞、及び破骨細胞は、種々の疾患、例えば関節リウマチ、多発性硬化症、及び骨量減少疾患の病理の一因となっている。分化骨髄系細胞は、末梢血単球中間体から誘導される。ＣＳＦ１Ｒ刺激は、骨髄前駆体からの単球の発生、単球の増殖及び生存、ならびに末梢血単球の分化骨髄系細胞、例えばマクロファージ、ミクログリア細胞、及び破骨細胞への分化に寄与する。ＣＳＦ１Ｒ刺激は、このように分化骨髄系細胞の増殖、生存、活性化、及び成熟に寄与し、また病的な状態においては、ＣＳＦ１Ｒ刺激は、分化骨髄系細胞が疾病病理を媒介する能力に寄与している。
【発明の概要】
【０００７】
いくつかの実施態様では、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）を結合する抗体の有効量を関節リウマチを有するヒト被験者に投与することを含む関節リウマチを治療する方法が提供され、この場合抗体はコロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、かつＩＬ−３４のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、有効量は被験者におけるＣＤ１６＋単球の数を２回投与後少なくとも４週間で少なくとも５０％減少させるのに十分である。いくつかの実施態様では、有効量は０．２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ，の間、又は１から１０ｍｇ／ｋｇの間、又は１から５ｍｇ／ｋｇの間である。いくつかの実施態様では、抗体は、２週間又はそれ以上の期間に１回の投与頻度で投与される。
【０００８】
いくつかの実施態様では、関節リウマチを治療する方法が提供される。いくつかの実施態様では、本方法は、コロニー刺激因子１受容体（ＣＳＦ１Ｒ）に結合する抗体を関節リウマチを有する被験者に投与することを含み、この場合抗体はコロニー刺激因子１（ＣＳＦ１）のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、かつＩＬ−３４のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、また抗体は０．２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間の用量で、２週間又はそれ以上の期間に１回の投与頻度で投与される。いくつかの実施態様では、投与頻度は２週間に１回未満、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回又は年に４回である。いくつかの実施態様では、用量は、１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。いくつかの実施態様では、用量は、３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。いくつかの実施態様では、本方法は、１用量の抗体を投与することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、２用量の抗体を投与することを含む。いくつかの実施態様では、これらの用量は、少なくとも１週間間隔で、又は少なくとも２週間間隔で投与される。
【０００９】
いくつかの実施態様では、少なくとも１用量の抗体の投与後、ＣＤ１６＋単球の数は、被験者において少なくとも５０％減少する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６−単球の数は減少しないか又は２０％未満減少する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６＋単球の数は、被験者において少なくとも７５％減少する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６＋単球の数は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間又は少なくとも８週間で少なくとも５０％減少する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６＋単球は、ＣＤ１６＋末梢血単球である。
【００１０】
いくつかの実施態様では、骨吸収の少なくとも一つのマーカーのレベルは、少なくとも１用量の抗体の投与後に減少する。いくつかの実施態様では、骨吸収の少なくとも一つのマーカーのレベルは、少なくとも２０％減少する。いくつかの実施態様では、骨吸収の少なくとも一つのマーカーのレベルは、少なくとも５０％減少する。いくつかの実施態様では、骨吸収の少なくとも一つのマーカーは、ＣＴｘ及びＴＲＡＰ５ｂ．から選択される。いくつかの実施態様では、骨吸収の少なくとも一つのマーカーは、ＣＴｘである。
【００１１】
いくつかの実施態様では、抗体は、用量投与後少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも６週間又は少なくとも２ヶ月間、被験者からの血清中に検出可能である。いくつかの実施態様では、抗体は、用量投与後少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも６週間又は少なくとも２ヶ月間、被験者からの血清中に検出可能である。いくつかの実施態様では、用量は、３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。いくつかの実施態様では、被験者における抗体の半減期は、２日を超える。いくつかの実施態様では、抗体の半減期はは、４日を超える。いくつかの実施態様では、抗体の半減期はは、１５日を超える。いくつかのそのような実施態様では、用量は、３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。
【００１２】
本明細書に記載される方法の実施形態のいずれかにおいて、抗体重鎖及び／又は抗体軽鎖は、以下の構造を有し得る。
【００１３】
いくつかの実施態様では、重鎖は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む。いくつかの実施態様では、軽鎖は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む。いくつかの実施態様では、重鎖は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含み、また軽鎖は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む。
【００１４】
いくつかの実施態様では、ＨＣ  ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１５、１６、及び１７；（ｂ）配列番号２１、２２、及び２３；並びに（ｃ）配列番号２７、２８、及び２９より選択される配列のセットを含む。いくつかの実施態様では、ＬＣ  ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１８、１９、及び２０；（ｂ）配列番号２４、２５、及び２６；並びに（ｃ）配列番号３０、３１、及び３２より選択される配列のセットを含む。
【００１５】
いくつかの実施態様では、重鎖は、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３を含み、ここでＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１５、１６、及び１７；（ｂ）配列番号２１、２２、及び２３；並びに（ｃ）配列番号２７、２８、及び２９より選択される配列のセットを含み；また軽鎖は、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３を含み、ここでＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３は、（ａ）配列番号１８、１９、及び２０；（ｂ）配列番号２４、２５、及び２６；並びに（ｃ）配列番号３０、３１及び３２９より選択される配列のセットを含む。
【００１６】
いくつかの実施態様では、抗体は重鎖及び軽鎖含み、この場合抗体は、（ａ）配列番号９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号１０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｂ）配列番号１１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号１２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｃ）配列番号１３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号１４と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｄ）配列番号３９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４６と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｅ）配列番号４０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４６と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｆ）配列番号４１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４６と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｇ）配列番号３９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４７と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｈ）配列番号４０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４７と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｉ）配列番号４１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４７と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；及び（ｊ）配列番号４２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４８と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｋ）配列番号４２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｌ）配列番号４２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号５０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｍ）配列番号４３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４８と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｎ）配列番号４３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号４９と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｏ）配列番号４３と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号５０と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｐ）配列番号４４と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号５１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｑ）配列番号４４と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号５２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；（ｒ）配列番号４５と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号５１と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖；あるいは（ｓ）配列番号４５と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む重鎖と、配列番号５２と少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、又は１００％同一である配列を含む軽鎖を含む。
【００１７】
いくつかの実施態様では、抗体は重鎖及び軽鎖含み、この場合抗体は、（ａ）配列番号１５の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、配列番号１６の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号１７の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３を含む重鎖、並びに配列番号１８の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号１９の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号２０の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３を含む軽鎖；（ｂ）配列番号２１の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、配列番号２２の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号２３の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３を含む重鎖、並びに配列番号２４の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号２５配列番号１９の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号２６の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３を含む軽鎖；又は（ｃ）配列番号２７の配列を有する重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、配列番号２８の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号２９の配列を有するＨＣ  ＣＤＲ３を含む重鎖、並びに配列番号３０の配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、配列番号３１の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ２、及び配列番号３２の配列を有するＬＣ  ＣＤＲ３を含む軽鎖を含む。
【００１８】
いくつかの実施態様では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、この場合抗体は、（ａ）配列番号５３の配列を含む重鎖及び配列番号６０の配列を含む軽鎖；（ｂ）配列番号５３の配列を含む重鎖及び配列番号６１の配列を含む軽鎖；又は（ｃ）配列番号５８の配列を含む重鎖及び配列番号６５の配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、この場合抗体は、（ａ）配列番号５３の配列からなる重鎖及び配列番号６０の配列からなる軽鎖；（ｂ）配列番号５３の配列からなる重鎖及び配列番号６１の配列からなる軽鎖；又は（ｃ）配列番号５８の配列からなる重鎖及び配列番号６５の配列からなる軽鎖を含む。
【００１９】
いくつかの実施態様において、抗体はヒト化抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２より選択される。いくつかの実施態様において、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施態様において、抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤより選択される。いくつかの実施態様において、抗体は、ＩｇＧである。いくつかの実施態様において、抗体は、ＩｇＧ４である。いくつかの実施態様において、抗体は、少なくとも一つのＩｇＧ４重鎖定常領域にＳ２４１Ｐ変異を含むＩｇＧ４である。
【００２０】
いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトＣＳＦ１Ｒに結合し、かつ／又はカニクイザルＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様において、抗体は、ＣＳＦ１Ｒに結合するリガンドをブロックする。いくつかの実施態様において、抗体は、ＣＳＦ１及び／又はＩＬ−３４のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックする。いくつかの実施態様において、抗体は、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４双方のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックする。いくつかの実施態様において、抗体は、リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を阻害する。いくつかの実施態様において、抗体は、ＣＳＦ１及び／又はＩＬ−３４誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を阻害する。いくつかの実施態様において、抗体は、１ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）を有するヒトＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様において、抗体は、ＣＳＦ１又はＩＬ−３４の存在下での単球増殖及び／又は生存応答を阻害する。
【００２１】
いくつかの実施態様において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む薬学的組成物が提供される。
【００２２】
いくつかの実施態様において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む組成物は、ヒト又は動物の治療方法における使用のために提供される。いくつかの実施態様において、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体及びＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を含む組成物は、ヒト又は動物において関節リウマチを治療する方法における使用のために提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１Ａ−Ｃ】実施例１で論じている、ヒト化抗体ｈｕＡｂ１〜ｈｕＡｂ１６の各々に対するヒト化重鎖可変領域のアライメントを示す。四角で囲った残基は、対応するマウス残基に戻されたヒトアクセプター配列中のアミノ酸である。
【図２Ａ−Ｃ】実施例１で論じている、ヒト化抗体ｈｕＡｂ１〜ｈｕＡｂ１６の各々に対するヒト化軽鎖可変領域のアライメントを示す。四角で囲ったアミノ酸は、対応するマウス残基に戻されたヒトアクセプター配列中の残基である。
【図３】実施例２に記載の通り、表示の用量での単回投与後のヒトにおける血清ｈｕＡｂ１（「ＦＰＡ００８」）のクリアランスを示す。
【図４】実施例２に記載の用量での単回投与後のカニクイザル及びヒトにおける血清ｈｕＡｂ１（「ＦＰＡ００８」）のクリアランスを示す。
【図５】実施例３に記載の通り、表示の用量での単回投与後に、（Ａ）プラセボを受けた可能性が高いＣＳＦ１の低い被験者及び（ｂ）ｈｕＡｂ１を受けた可能性が高いＣＳＦ１の高い被験者における血清ＣＴｘレベルを示す。
【図６】実施例３に記載の通り、表示の用量での単独投与後に、（Ａ）プラセボを受けた可能性が高いＣＳＦ１の低い被験者及び（ｂ）ｈｕＡｂ１を受けた可能性が高いＣＳＦ１の高い被験者における血清ＴＲＡＰ５ｂレベルを示す。
【図７】実施例４に記載の通り、表示の用量の単独投与後の各投薬コホート（プラセボ及びｈｕＡｂ１の両方を含む）における被験者における非古典的ＣＤ１６＋単球の抑制を示す。
【図８】実施例４に記載の通り、表示の用量の単独投与後の各投薬コホート（プラセボ及びｈｕＡｂ１の両方を含む）における被験者における古典的ＣＤ１６−単球を示す。
【図９】ｈｕＡｂ１を受けた可能性の高い被験者における（Ａ）血清ＣＳＦ１レベル及び（Ｂ）血清ＩＬ３４レベルを示す。
【図１０】２週間の間隔を置いて２回投与した後の健常ボランティア（三角）及びＲＡ患者（白抜きの円）における経時的なｈｕＡｂ１の血清濃度を示す。
【図１１】ｈｕＡｂ１（「ＦＰＡ００８」）の２回投与後の健常ボランティアにおける非古典的ＣＤ１６＋単球の減少を示す。
【図１２】ｈｕＡｂ１の２回投与後のＲＡ患者における非古典的ＣＤ１６＋単球の減少を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体を投与することを含む、疾患を治療する方法が提供される。本明細書に記載のように、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体は、関節リウマチの治療に有効である。本発明者らは、このような抗体をヒトに投与することにより、カニクイザルにおけるＣＤ１６＋末梢血単球の数は減少したが、ＣＤ１６−末梢血単球数には影響しないことを見出した。ＣＤ１６＋末梢血単球は、高度に炎症性の単球である。例として、Ziegler-Heitbrock, J. Leukocyte Biol., 2007, 81: 584-59２を参照されたい。このような抗体をカニクイザルに投与するとＣＤ１６＋単球の数が減少することは以前から判明していたが、今回ヒトにおいて観察された効果は、カニクイザルにおける効果と比較して、実質的かつ予想外に延長されている。実際、わずか１ｍｇ／ｋｇの単回投与で、ＣＤ１６＋単球数は少なくとも１週間は実質的に抑制された。３ｍｇ／ｋｇ，の用量では、ＣＤ１６＋単球数は少なくとも４週間は実質的に抑制された一方、１０ｍｇ／ｋｇの単回投与はＣＤ１６＋単球数を少なくとも８週間抑制した。さらに、このような抗体をヒトに投与すると、血清ＣＴｘレベルも低下し、また血清ＴＲＡＰ５ｂレベル（両方とも骨吸収のマーカーである）も低下傾向を示した。まとめると、これらの結果は、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体が低頻度の投薬で関節リウマチに有効な治療法であることを示唆している。
【００２５】
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のみのものであって、記載される内容を制限するものとして解釈されない。特許出願及び特許公開を含む、本明細書に引用されるすべての参照文献は、その全体が参照により援用される。
【００２６】
定義
他に定義されない限り、本発明と関連して使用される科学技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって特に要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００２７】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質転換（例えばエレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応及び精製技術に関連して使用される代表的な技術は、当技術分野で周知である。そのような技術及び手順の多くは、例えばSambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))他に記載されている。加えて、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤及び送達、並びに患者の治療のための代表的な技術もまた、当技術分野で周知である。
【００２８】
本願において、別途記載のない限り、「又は（ｏｒ）」の使用は、「及び／又は（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。複数従属クレームの文脈において、「又は」の使用は、選択肢においてのみ、複数の先行する独立又は従属クレームを戻って参照する。また、「要素」又は「成分」などの用語は、特に断らない限り、一つのユニットを含む要素及び成分と、複数のサブユニットを含む要素及び成分の両方を包含する。
【００２９】
本開示に従って利用される場合、以下の用語は、別途指定のない限り，以下の意味を有すると理解されたい。
【００３０】
「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」という用語は互換的に使用することができ、ヌクレオチドのポリマーを指す。そのようなヌクレオチドのポリマーは、天然及び／又は非天然のヌクレオチドを含んでもよく、また限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡを含む。「核酸配列」は、核酸分子又はポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの直鎖状配列を指す。
【００３１】
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換的に使用され、最小の長さに限定されない。このようなアミノ酸残基のポリマーは、天然又は非天然のアミノ酸残基を含んでもよく、また限定されないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体、及び多量体を含む。完全長タンパク質及びその断片の両方が、この定義に包含される。これらの用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化等を含む。さらに、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する修飾、例えば欠失、付加、及び置換（通常、本質的に保存的である）を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発のように計画的であってもよいし、又はタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅に起因する誤差のように偶発的であってもよい。
【００３２】
「ＣＳＦ１Ｒ」という用語は、本明細書では、Ｎ末端ＥＣＤ、膜貫通ドメイン、及び細胞内チロシンキナーゼドメインを含む全長ＣＳＦ１Ｒを指し、Ｎ末端リーダー配列を伴うか又は伴わない。いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒは、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を有するヒトＣＳＦ１Ｒである。
【００３３】
本明細書で使用する用語「ＣＳＦ１Ｒ細胞外ドメイン」（「ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ」）は、細胞内及び膜貫通ドメインを欠くＣＳＦ１Ｒポリペプチドを指す。ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤは、ＣＳＦ１Ｒ及び／又はＩＬ−３４に結合することができる全長ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ及びＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ断片を含む。ヒト全長ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤは、本明細書において、配列番号２のアミノ酸１から５１２（すなわちリーダー配列を含む）又はアミノ酸２０〜５１２（すなわちリーダー配列を欠く）のいずれかを含むものとして定義される。いくつかの実施態様では、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ断片は、配列番号２のアミノ酸２０から５０６を含む（配列番号５参照）。いくつかの実施態様では、ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ断片は、アミノ酸５０７、５０８、５０９、５１０又は５１１で終結する。いくつかの実施態様では、ｃｙｎｏ  ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤは、配列番号７の配列（リーダー配列を有する）又は配列番号７のアミノ酸２０〜５０６（リーダー配列を含まない）を含む。
【００３４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体に関して、「活性の」又は「活性」又は「機能」という用語及びその文法上の変化形は、前述の活動の少なくとも一つを阻害（遮断抗体又はアンタゴニスト抗体）あるいは模倣する（アゴニスト抗体）能力を指すために使用される。「機能的」と呼ばれる抗体及び抗体断片は、そのような特性を有することを特徴とする。
【００３５】
「免疫学的」活性は、天然又は天然に存在するＣＳＦ１Ｒポリペプチドが有する抗原性エピトープに対する抗体の産生を誘導する能力のみを指す。
【００３６】
本明細書で使用する用語「抗体」は、重鎖の少なくとも相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３並びに軽鎖の少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む分子を指し、分子は抗原に結合することができる。抗体という用語は、抗原に結合することができる断片、例えば、限定されないが、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２を含む。抗体という用語は、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザル等の様々な種の抗体を含む。
【００３７】
いくつかの実施態様では、抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも一の重鎖、並びに軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも一の軽鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、各重鎖が重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む二の重鎖、並びに各軽鎖が軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも二の軽鎖を含む。本明細書で使用される場合、単鎖Ｆｖ又は、例えば６つすべてのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一ポリペプチド鎖を含む任意の他の抗体は、重鎖及び軽鎖を有すると考えられる。いくつかのそのような実施態様では、重鎖は、３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は、３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。
【００３８】
本明細書で使用される「重鎖可変領域」という用語は、重鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様では、重鎖可変領域はまた、ＦＲ１の少なくとも一部及び／又はＦＲ４の少なくとも一部を含む。いくつかの実施態様では、重鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基２６から３５に対応し、重鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０から６５に対応し、重鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基９５から１０２に対応する。例として、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987及び1991, NIH, Bethesda, Md.)；及び図１を参照されたい。いくつかの実施態様では、重鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基３１から３５に対応し、重鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０から６５に対応し、重鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基９５から１０２に対応する。ＩＤを参照のこと。
【００３９】
本明細書で使用する「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的重鎖定常領域は、γ、δ、及びαを含む。また、非限定的な例示的重鎖定常領域は、ε及びμも含む。各重鎖定常領域は抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体である。また、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。特定のアイソタイプは、サブクラスにさらに細かく分けることができる。例えば、ＩｇＧ抗体は、限定されないが、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体を含み；ＩｇＡ抗体は、限定されないが、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体を含み；ＩｇＭ抗体は、限定されないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含む。
【００４０】
いくつかの実施態様では、重鎖定常領域は、抗体に所望の特性を付与する一又は複数の変異（又は置換）、付加又は欠失を含む。非限定的な例示的突然変異は、ＩｇＧ４モチーフＣＰＳＣＰをＣＰＰＣＰに変化させるＩｇＧ４ヒンジ領域（定常ドメインＣＨ１とＣＨ２との間）におけるＳ２４１Ｐ突然変異であり、ＩｇＧ１における対応するモチーフに類似している。いくつかの実施態様では、この突然変異は、より安定なＩｇＧ４抗体を生じる。例として、Angal et al., Mol. Immunol. 30: 105-108 (1993); Bloom et al., Prot. Sci. 6: 407-415 (1997); Schuurman et al., Mol. Immunol. 38: 1-8 (2001)を参照されたい。
【００４１】
本明細書で使用される「重鎖」という用語は、リーダー配列を伴うか又は伴わない、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用される「全長重鎖」という用語は、リーダー配列を伴うか又は伴わない、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００４２】
本明細書で使用する「軽鎖可変領域」という用語は、軽鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様では、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１及び／又はＦＲ４を含む。いくつかの実施態様では、軽鎖ＣＤＲ１はＫａｂａｔ残基２４から３４に対応し、軽鎖ＣＤＲ２はＫａｂａｔ残基５０から５６に対応し、軽鎖ＣＤＲ３はＫａｂａｔ残基８９から９７に対応する。例として、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987及び1991, NIH, Bethesda, Md.)；及び図１を参照されたい。
【００４３】
本明細書で使用する「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を指す。また、非限定的な例示的軽鎖定常領域は、λ及びκも含む。
【００４４】
本明細書で使用される「軽鎖」という用語は、リーダー配列を伴うか又は伴わない、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用される「全長軽鎖」という用語は、リーダー配列を伴うか又は伴わない、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００４５】
本明細書で使用される「キメラ抗体」は、第一の種（マウス、ラット、カニクイザル等）由来の少なくとも一つの可変領域及び第二の種（例えばヒト、カニクイザルなど）由来の少なくとも一つの定常領域を含む抗体を指す。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも一つのマウス可変領域及び少なくとも一つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも一つのカニクイザル可変領域及び少なくとも一つのヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも一つのラット可変領域及び少なくとも一つのマウス定常領域を含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体の可変領域のすべてが第一の種由来であり、キメラ抗体の定常領域のすべてが第二の種由来である。
【００４６】
本明細書で使用される「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域の少なくとも一のアミノ酸がヒト可変領域の対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも一のヒト定常領域又はその断片を含む。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２等である。
【００４７】
本明細書で使用される「ＣＤＲ移植抗体」とは、第一（非ヒト）の種の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第二（ヒト）の種のフレームワーク領域（ＦＲ）上に移植されているヒト化抗体を指す。
【００４８】
本明細書で使用される「ヒト抗体」は、ヒトにおいて産生される抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物において産生される抗体、例えばＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）、及びファージディスプレイなどのインビトロ方法を用いて選択される抗体を指し、抗体レパートリーはヒト免疫グロブリン配列に基づく。
【００４９】
「リーダー配列」という用語は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を促進するポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。リーダー配列は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの排出の際に切断され得、成熟タンパク質を形成する。リーダー配列は、天然又は合成であってもよく、それが結合しているタンパク質に対して異種又は相同であってもよい。例示的リーダー配列は、限定されないが、抗体リーダー配列、例えばヒト軽鎖及び重鎖リーダー配列にそれぞれ対応する配列番号３及び４のアミノ酸配列などを含む。非限定的な例示的リーダー配列は、異種タンパク質由来のリーダー配列も含む。いくつかの実施態様において、抗体は、リーダー配列を欠く。いくつかの実施態様では、抗体は、天然抗体リーダー配列及び異種リーダー配列から選択され得る少なくとも一のリーダー配列を含む。
【００５０】
用語「ベクター」は、宿主細胞中で増殖し得るクローン化ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドを含むように操作され得るポリヌクレオチドを説明するために使用される。ベクターは、一又は複数の次の要素：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する一又は複数の制御配列（例えばプロモーター及び／又はエンハンサーなど）、及び／又は一以上の選択マーカー遺伝子（例えば抗生物質耐性遺伝子及び比色アッセイで使用され得る遺伝子、例えばβ−ガラクトシダーゼ）を含む。「発現ベクター」という用語は、宿主細胞において目的のポリペプチドを発現させるために使用されるベクターを指す。
【００５１】
「宿主細胞」は、ベクター又は単離ポリヌクレオチドのレシピエントであり得る細胞、又はレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であり得る。例示的な真核細胞は、哺乳動物細胞、例えば霊長類又は非霊長類の動物細胞；真菌細胞、例えば酵母；植物細胞；及び昆虫細胞を含む。非限定的な例示的哺乳動物細胞は、限定されないが、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、並びに２９３及びＣＨＯ細胞とそれらの誘導体、例えば、それぞれ２９３−６Ｅ及びＤＧ４４細胞を含む。
【００５２】
本明細書で使用される「単離された」という用語は、通常天然に見出される成分の少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離される場合、「単離された」と呼ばれる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、それを産生した細胞からポリペプチドを含む上清を物理的に分離することが、ポリペプチドを「単離する」と考えられる。同様に、ポリヌクレオチドは、通常天然に見出される比較的大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合はゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡなど）の一部ではない場合、「単離された」と呼ばれ、又は、例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合には、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離される。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドがそのベクター中に天然には見出されない限り、「単離された」と称され得る。
【００５３】
「被験者」及び「患者」という用語は、本明細書では、ヒトを指すために互換的に使用される。いくつかの実施態様では、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳動物実験動物、哺乳類の家畜、哺乳類の競技用動物、及び哺乳類のペットを含むがこれらに限定されない他の哺乳動物を治療する方法も提供される。
【００５４】
本明細書中で使用される場合、「関節リウマチ」又は「ＲＡ」は、ＲＡの分類ついての２０００年改訂Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎの基準または任意の類似の基準に従って診断され得る確認された疾患状態を指す。いくつかの実施態様では、「関節リウマチ」という用語は、慢性痛、機能喪失、及び障害をもたらす関節損傷をもたらしうる、関節の裏層（滑膜）の炎症によって主に特徴付けられる慢性自己免疫疾患を指す。ＲＡは、皮膚、肺、及び目を含む身体の複数の器官に影響を及ぼし得るため、全身性疾患と呼ばれる。
【００５５】
「関節リウマチ」という用語は、次に定義するように、活動性ＲＡ及び初期ＲＡだけでなく、初発ＲＡも含む。ＲＡの生理学的指標は、ＲＡにおいて不変ではないが特徴的である対称性関節腫脹を含む。手の近位指節間関節（ＰＩＰ）並びに中手指節（ＭＣＰ）、手首、肘、膝、足首、及び中足指節の（ＭＴＰ）の関節の紡錘状腫脹が一般に発症し、容易に検出される。受動運動痛は、関節炎症の最も高感度な検査であり、炎症及び構造変形はしばしば、患部関節の可動域を制限する。典型的な目に見える変化としては、ＭＣＰ関節における指の尺骨のずれ、ＭＣＰ及びＰＩＰ関節の過伸展又は過屈曲、肘の屈曲拘縮、並びに手根骨及びつま先の亜脱臼を含む。ＲＡを有する被験者は、疾患改変抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）及び／又は非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に対して耐性であり得る。非限定的な例示的「ＤＭＡＲＤ」は、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、スルファサラジン、メトトレキサート（ＭＴＸ）、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ（経口及び皮下ＭＴＸ併用）、アザチオプリン、Ｄ−ペニシラミン、金塩（経口）、金塩（筋肉内）、ミノサイクリン、シクロスポリンＡ及び局所シクロスポリンを含むシクロスポリン、ブドウ球菌プロテインＡ（Goodyear and Silverman, J. Exp. Med., 197(9):1125-1139 (2003)）、並びにそれらの塩及び誘導体等を含む。本発明による療法のさらなる候補は、毒性又は不適切な有効性のために、エタネルセプト、インフリキシマブ、及び／又はアダリムマブ等のＴＮＦ阻害剤での以前または現在の治療に対する不適切な応答を経験した患者を含む。
【００５６】
「活動性関節リウマチ」を有する患者は、ＲＡの潜活発で非潜在的な症状を有する患者を意味する。「早期活動性関節リウマチ」を有する被験者は、ＲＡの分類に関する１９８７年改訂のＡＣＲ基準にしたがって、活動性関節リウマチと診断されて少なくとも８週間であるが４年は超えない被験者である。
【００５７】
「早期関節リウマチ」を有する被験者は、ＲＡの分類に関する１９８７年改訂のＡＣＲ基準にしたがって、関節リウマチと診断されて少なくとも８週間であるが４年は超えない被験者である。ＲＡは、例えば若年発症ＲＡ、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）又は若年性ＲＡ（ＪＲＡ）を含む。
【００５８】
「初発関節リウマチ」を有する患者は、抗ＣＣＰ及び共有エピトープなどのＲＡ特異的予後バイオマーカーの存在に関連して、ＲＡの診断のためのＡＣＲ基準を完全に満たさない初期の多発性関節炎を有する。それには、多発性関節炎を呈するがＲＡの診断はまだなく、真のＡＣＲ基準ＲＡを発症する危険性が高い（確率９５％）陽性抗ＣＣＰ抗体患者が含まれる。
【００５９】
「関節損傷」は、最も広い意味で使用され、損傷が如何なる原因の構造的及び／又は機能的損傷をも含み、関節痛／麻痺を引き起こすか又は引き起こさない可能性がある、結合組織及び軟骨を含む一又は複数の関節の任意の部分に対する損傷又は部分的若しくは完全な破壊を指す。これは、限定されないが、炎症性関節疾患及び非炎症性関節疾患に関連するか又はそれらに起因する関節損傷を含む。この損傷は、自己免疫疾患、特に関節炎、とりわけＲＡのような任意の疾患によって引き起こされ得る。そのような症状の例は、急性及び慢性関節炎、関節リウマチ（若年発症ＲＡ、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、及び若年性関節リウマチ（ＪＲＡ））、並びにリウマチ性滑膜炎、痛風又は痛風性関節炎、旧制免疫性関節炎、慢性炎症性関節炎、変形性関節炎、ＩＩ型コラーゲン誘導性関節炎、感染性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、増殖性関節炎、乾癬性関節炎、スティル病、脊椎関節炎、変形性関節症、進行性慢性関節炎、変形関節炎、初期慢性多発関節炎、反応性関節炎、閉経関節炎、エストロゲン枯渇性関節炎、及び強直性脊椎炎／リウマチ性脊椎炎）等の病期、ＲＡ以外のリウマチ性自己免疫疾患、またＲＡに続発する顕著な全身症状（脈管炎、肺線維症又はフェルティ症候群を含むがこれらに限定されない）を含む。本明細書の目的のために、関節は、（動物などの脊椎動物の）骨格の要素と、それを取り囲んで支持する部分との間の接触点であり、例えば、限定されないが、股関節、脊椎と椎骨の間の関節、脊椎と骨盤の間の関節（仙腸関節）、腱と靭帯が骨に付着する関節、肋骨と脊椎の間の関節、肩、膝、足、肘、手、指、足首、及びつま先、特に手足の関節を含む。
【００６０】
「ＣＤ１６＋障害」という用語は、哺乳動物のＣＤ１６＋単球が哺乳動物における病的状態を引き起こすか、媒介するか、又はそれに関与する疾患を意味する。ＣＤ１６＋単球の減少が疾患の進行に対する改善効果を有する疾患も含まれる。この用語には、ＣＤ１６＋炎症性疾患、感染症、免疫不全疾患、異常増殖等が含まれる。特定の実施態様では、ＣＤ１６＋炎症性疾患は、メトトレキサート療法に反応しない炎症性疾患を含む。特定の実施態様では、ＣＤ１６＋炎症性疾患は、メトトレキサート耐性関節リウマチ、メトトレキサート耐性多発性硬化症、メトトレキサート耐性狼瘡、メトトレキサート耐性炎症性腸疾患、メトトレキサート耐性クローン病、メトトレキサート耐性喘息、及びメトトレキサート耐性乾癬を含む。特定の実施態様では、メトトレキサート耐性関節リウマチなどのメトトレキサート耐性疾患を有する患者は、メトトレキサート不完全応答者又はメトトレキサート不十分応答者と呼ばれる。
【００６１】
本発明に従って治療することができるＣＤ１６＋障害の例は、限定されないが、全身性紅斑性狼瘡、関節リウマチ、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症（強皮症）、特発性炎症ミオパシー（皮膚筋炎、多発性筋炎）、シェーグレン症候群、全身性脈管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間色素尿症）、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫介在性血小板減少症）、甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性ｌリンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）、糖尿病、免疫介在性腎疾患（糸球体腎炎、間質性腎炎）、例えば多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー又はギランバレー症候群、及び慢性炎症脱髄性多発ニューロパチーなどの中枢及び末梢神経系の脱髄疾患、例えば感染性肝炎（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ型肝炎及び他の非肝臓指向性ウイルス）、自己免疫性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎などの肝胆道疾患、潰瘍性大腸炎：クローン病、グルテン過敏性腸症、及びウィップル病を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、水疱性皮膚症、多形性紅斑、及び接触性皮膚炎、乾癬を含む自己免疫性又は免疫介在性皮膚病、例えば喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、及びじん麻疹などのアレルギー疾患、例えば好酸球性肺炎、特発性肺線維症、及び過敏性肺炎などの肺の免疫性疾患、移植片拒絶反応及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患；腎臓線維症及び肝線維症を含む線維症、アテローム性動脈硬化症及び冠動脈疾患、慢性腎臓疾患、心筋梗塞、及びうっ血性心不全に関連する心血管イベントを含む心血管疾患、ＩＩ型糖尿病を含む糖尿病、器質性肺炎を伴う閉塞性細気管支炎（ＢＯＯＰ）、血球貪食症候群、マクロファージ活性化症候群、サルコイドーシス、及び歯周炎を含む。ＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染）、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、及びＥ型肝炎、ヘルペス等のウイルス性疾患、細菌感染症、真菌感染症、原生動物感染症、並びに寄生虫感染症を含む感染症。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「治療」は、治療的処置及び予防又は予防的手段の両方を指し、この場合、目的は標的の病的状態若しくは障害を予防するか又は緩徐化する（軽減する）ことである。特定の実施態様では、用語「治療」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患用の治療剤の任意の投与又は適用を包含し、疾患又は疾患の進行を阻害若しくは遅延させること；例えば退行を引き起こすこと、あるいは喪失、欠如若しくは欠損した機能を回復又は修復することによって疾患を部分的に又は完全に緩和すること；非効率的な過程を刺激すること；あるいは疾患がプラトーなるようにして重症度を低下させることを含む。用語「治療」はまた、任意の表現型特徴の重症度を低下させること、及び／又はその特徴の発生率、程度又は尤度を減少させることを含む。治療を必要とする者は、すでに障害を有する者及び障害を有する傾向がある者又は障害を予防すべき者を含む。
【００６３】
「慢性」投与とは、最初の治療効果（活性）を長期間維持するために、急性モードとは対照的に、連続モードで薬剤を投与することを指す。「断続的」投与は、中断することなく連続的に行われるのではなく、本質的に周期的な治療である。
【００６４】
用語「有効量」又は「治療的有効量」は、被験者における疾患又は障害の治療に有効な薬物の量を指す。特定の実施態様において、「有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な用量及び期間における有効な量を指す。本発明の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の治療剤の治療的有効量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を引き出す抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の能力等の要因によって変わり得る。また、治療的有効量とは、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の毒作用又は有害効果よりも治療上有益な作用の方が勝る量を含む。
【００６５】
「予防的有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、有効な量を指す。必ずではないが、通常、予防的用量は、疾病の前又は初期の段階で被験者に使用されるため、予防的有効量は治療的有効量よりも少量となろう。
【００６６】
一又は複数のさらなる治療剤と「組み合わせて」投与することは、同時（併用）及び任意の順序での連続投与を含む。
【００６７】
「薬学的に許容される担体」とは、被験者への投与のための「薬学的組成物」を併せて含む治療剤と共に使用するための当該技術分野において慣用の非毒性固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、処方助剤又は担体を指す。薬学的に許容される担体は、用られる投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適している。例えば、治療剤が経口投与される場合、担体はゲルカプセルであってもよい。治療剤が皮下投与される場合、担体は、理想的には皮膚に対し刺激性がなく、注射部位反応を引き起こさない。
【００６８】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、限定されないが、本明細書に記載のヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ヒト抗体並びに重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲを含む抗体を含む。
【００６９】
例示的なヒト化抗体
いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合するヒト化抗体が提供される。ヒト化抗体は、抗体治療剤に対する免疫応答及び治療剤の有効性の低下をもたらし得る非ヒト抗体に対するヒト免疫応答（ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答など）を低減又は排除することから、治療分子として有用である。
【００７０】
非限定的な例示的ヒト化抗体は、本明細書に記載のｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６を含む。非限定的な例示的ヒト化抗体は、ｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体の重鎖可変領域及び／又はｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体の軽鎖可変領域を含む抗体も含む。非限定的な例示的ヒト化抗体は、配列番号３９から４５より選択される重鎖可変領域及び／又は配列番号４６から５２より選択される軽鎖可変領域含む抗体を含む。例示的なヒト化抗体はまた、０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに／又は軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むヒト化抗体も含むが、これらに限定されない。
【００７１】
いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３並びに／又は軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。非限定的な例示的ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１５、１６、及び１７；配列番号２１、２２、及び２３；並びに配列番号２７、２８、及び２９より選択される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む抗体を含む。非限定的な例示的ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、配列番号１８、１９、及び２０；配列番号２４、２５、及び２６；並びに配列番号３０、３１、及び３２より選択される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む抗体も含む。
【００７２】
非限定的な例示的ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、表１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセット、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む抗体を含む（記載の配列については表８を参照）。表１の各列は、例示的な抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を示す。
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【００７３】
さらなる例示的なヒト化抗体
いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み；また配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。
【００７４】
本明細書で使用される場合、特定のポリペプチドが例えばアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるかどうかは、例えばコンピュータープログラムを使用して決定することができる。特定の配列が、例えば参照配列と９５％同一であるかどうかを決定する場合、同一性のパーセンテージは、参照アミノ酸配列の全長にわたって計算される。
【００７５】
いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載のＣＤＲの少なくとも一を含む。すなわち、いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ２、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ３、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ２、及び本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ３を含む。さらに、いくつかの実施態様では、ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載のＣＤＲに基づく少なくとも一の突然変異ＣＤＲを含み、この突然変異ＣＤＲは、本明細書に記載のＣＤＲに対して１、２、３又は４のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、アミノ酸置換の一又は複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して一又は複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、ここで適切な保存的アミノ酸置換は、突然変異ＣＤＲを含む抗体の結合特性を有意に変化させるとは予測されない。
【００７６】
例示的なヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、ＣＳＦ１Ｒへの結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗体も含む。したがって、いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒへの結合についてＦａｂ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体並びにこれらのＦａｂの二価（すなわち二つの重鎖と二つの軽鎖を有する）抗体バージョンと競合するヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が提供される。
【００７７】
例示的なヒト化抗体定常領域
いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト化抗体は、一又は複数のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。そのようないくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【００７８】
重鎖定常領域の選択は、抗体がインビボでエフェクター機能を有するか否かを決定することができる。そのようなエフェクター機能は、いくつかの実施態様において、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合している細胞を死滅させる可能性がある。いくつかのがんを治療する方法を含めたいくつかの治療方法において、例えば抗体が腫瘍の維持又は増殖を支える細胞に結合する場合、細胞死滅が望ましい場合がある。腫瘍の維持又は増殖を助長し得る例示的な細胞は、限定されないが、腫瘍細胞それ自体、腫瘍への脈管構造の動員を助ける細胞、腫瘍増殖又は腫瘍生存を助長若しくは促進するリガンド、増殖因子又は対抗受容体を提供する細胞を含む。いくつかの実施態様において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖又はヒトＩｇＧ３重鎖を含む抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【００７９】
治療のいくつかの方法において、エフェクター機能が望ましくないこともある。例えば、いくつかの実施態様では、ＲＡの治療において使用される抗体がエフェクター機能を有しないことが望ましい場合がある。したがって、いくつかの実施態様では、がんの治療のために開発された抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が、ＲＡの治療における使用に適していない可能性がある。したがって、いくつかの実施態様では、有意なエフェクター機能を欠く抗ＣＳＦ１Ｒ抗体がＲＡの治療において使用される。いくつかの実施態様では、ＲＡの治療のための抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ突然変異を含む。
【００８０】
抗体は、如何なる方法によってもヒト化され得る。ヒト化の非限定的な例示的な方法は、例えば、米国特許第５５３０１０１号；第５５８５０８９号；第５６９３７６１号；第５６９３７６２号；第６１８０３７０号；Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986):Riechmann et al., Nature 332: 323-27 (1988);Verhoeyen et al., Science 239: 1534-36 (1988)；及び米国特許出願公開第２００９／０１３６５００号に記載の方法を含む。
【００８１】
上述の通り、ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域の少なくとも一のアミノ酸がヒトフレームワーク領域の対応する位置のアミノ酸で置換されている抗体を指す。いくつかの実施態様では、非ヒト可変領域のフレームワーク領域の少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１５又少なくとも２０のアミノ酸が、一又は複数のヒトフレームワーク領域の一又は複数の対応する位置のアミノ酸で置換されている。
【００８２】
いくつかの実施態様では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸のいくつかは、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域由来である。すなわち、いくつかのそのような実施態様において、一又は複数の非ヒトアミノ酸は、第一のヒト抗体のヒトフレームワーク領域由来の対応するアミノ酸で置換されていてもよく、又は第一のヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされてもよく、一又は複数の非ヒトアミノ酸は、第二のヒト抗体のヒトフレームワーク領域由来の対応するアミノ酸で置換されていてもよく、又は第二のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされていてもよく、一又は複数の非ヒトアミノ酸は、第三のヒト抗体のヒトフレームワーク領域由来の対応するアミノ酸で置換されていてもよく、又は第三のヒト免疫グロブリン遺伝子等によってコードされていてもよい。さらに、いくつかの実施態様において、単一のフレームワーク領域、例えばＦＲ２における置換に使用される対応するヒトアミノ酸のすべてが、同じヒトフレームワーク由来である必要はない。ただし、いくつかの実施態様では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸のすべてが同じヒト抗体に由来するか、又は同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる。
【００８３】
いくつかの実施態様では、抗体は、一又は複数の全フレームワーク領域を対応するヒトフレームワーク領域で置換することによってヒト化される。いくつかの実施態様では、置換される非ヒトフレームワーク領域に対して最高レベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。いくつかの実施態様では、そのようなヒト化抗体は、ＣＤＲ移植抗体である。
【００８４】
いくつかの実施態様では、ＣＤＲ移植に続いて、一又は複数のフレームワークアミノ酸がマウスフレームワーク領域の対応するアミノ酸に戻される。いくつかの実施態様では、そのような「逆突然変異」は、ＣＤＲの一又は複数の構造に寄与すると思われる、かつ／又は抗原接触に関与し得る、且つ／又は抗体の全体的な構造的完全性に関与していると思われる一又は複数のマウスフレームワークアミノ酸を保持するためになされる。いくつかの実施態様では、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、１又は０の逆突然変異がＣＤＲ移植に続いて抗体のフレームワーク領域に対しなされる。
【００８５】
いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、ヒト重鎖定常領域及び／又はヒト軽鎖定常領域も含む。
【００８６】
例示的なキメラ抗体
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、少なくとも一の非ヒト可変領域及び少なくとも一のヒト定常領域を含む。いくつかのそのような実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の可変領域のすべてが非ヒト可変領域であり、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の定常領域のすべてがヒト定常領域である。いくつかの実施態様では、キメラ抗体の一又は複数の可変領域は、マウス可変領域である。キメラ抗体のヒト定常領域は、それが置換する非ヒト定常領域がもし存在したとしても、非ヒト定常領域と同じアイソタイプである必要はない。キメラ抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55 (1984)で論じられている。
【００８７】
非限定的な例示的なキメラ抗体は、０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖及び／又は軽鎖可変領域を含むキメラ抗体を含む。さらなる非限定的な例示的キメラ抗体は、０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに／又は軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含むキメラ抗体を含む。
【００８８】
非限定的な例示的キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域の次の対、すなわち配列番号９と１０；配列番号１１と１２；及び配列番号１３と１４を含む抗体を含む。
【００８９】
非限定的な例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、上の表１に示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセット、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む抗体を含む。
【００９０】
さらなる例示的なキメラ抗体
いくつかの実施態様では、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み；また配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。
【００９１】
いくつかの実施態様では、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載のＣＤＲの少なくとも一を含む。すなわち、いくつかの実施態様では、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ２、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ３、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ２、及び本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ３を含む。さらに、いくつかの実施態様では、キメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載のＣＤＲに基づく少なくとも一の突然変異ＣＤＲを含み、この突然変異ＣＤＲは、本明細書に記載のＣＤＲに対して１、２、３又は４のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、アミノ酸置換の一又は複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して一又は複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、ここで適切な保存的アミノ酸置換は、突然変異ＣＤＲを含む抗体の結合特性を有意に変化させるとは予測されない。
【００９２】
例示的なキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、ＣＳＦ１Ｒへの結合について本明細書に記載の抗体と競合するキメラ抗体も含む。したがって、いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒへの結合についてＦａｂ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体並びにこれらのＦａｂの二価（すなわち二つの重鎖と二つの軽鎖を有する）抗体バージョンと競合するキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が提供される。
【００９３】
例示的なキメラ抗体定常領域
いくつかの実施態様では、本明細書に記載のキメラ抗体は、一又は複数のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。そのようないくつかの実施態様では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【００９４】
上記のように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体を被験者とした特定の治療方法に依存し得る。したがって、いくつかの実施態様において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域又はヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。いくつかの実施態様において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域を含むキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【００９５】
例示的なヒト抗体
ヒト抗体は、任意の適切な方法によって作製することができる。非限定的な例示的方法は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することを含む。例として、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551-55 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-8 (1993); Lonberg et al., Nature 368: 856-9 (1994)；並びに米国特許第５５４５８０７号；第６７１３６１０号；；第６６７３９８６号；第６１６２９６３号；第５５４５８０７号；第，３００１２９号；第６２５５４５８号；第５８７７３９７号；第５８７４２９９号；及び第５５４５８０６号を参照されたい。
【００９６】
非限定的な例示的方法はまた、ファージディスプレイライブラリーを用いたヒト抗体の作製を含む。例として、Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227. 381-8 (1992); Marks et al., J. Mol. Biol. 222. 581-97 (1991)；及び国際公開第９９／１０４９４号を参照されたい。
【００９７】
いくつかの実施態様では、ヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１の配列を有するポリペプチドに結合する。例示的なヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、ＣＳＦ１Ｒへの結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗体も含む。したがって、いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒへの結合についてＦａｂ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体並びにこれらのＦａｂの二価（すなわち二つの重鎖と二つの軽鎖を有する）抗体バージョンと競合するヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が提供される。
【００９８】
いくつかの実施態様では、ヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、一又は複数のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。そのようないくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【００９９】
いくつかの実施態様において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域又はヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含むヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。いくつかの実施態様において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域を含むヒト抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【０１００】
さらなる例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体
例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、限定されないが、例えば本明細書に記載のＣＤＲ配列の一又は複数を含むマウス、ヒト化、ヒト、キメラ、及び操作された抗体も含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖可変領域及び本明細書に記載の軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
【０１０１】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖可変領域を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、ヒト化抗体ｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体の重鎖可変領域を含む抗体を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列を含む重鎖可変領域を含む抗体を含む。
【０１０２】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、及び３１１より選択される抗体の軽鎖可変領域を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、ヒト化抗体ｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体の軽鎖可変領域を含む抗体を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を含む。
【０１０３】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、ヒト化抗体ｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗体を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域の次の対、すなわち配列番号９と１０；配列番号１１と１２；及び配列番号１３と１４；配列番号３９と４０；配列番号４１と４２；配列番号４３と４４；配列番号４５と４６；配列番号４７と４８；配列番号４９と５０；及び配列番号５１と５２を含む抗体を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、重鎖及び軽鎖の次の対、すなわち配列番号３３と３４；配列番号３５と３６；及び配列番号３７と３８を含む抗体も含む。
【０１０４】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ  ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１５、１６、及び１７；配列番号２１、２２、及び２３；並びに配列番号２７、２８、及び２９より選択される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む抗体を含む。
【０１０５】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ  ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１８、１９、及び２０；配列番号２４、２５、及び２６；並びに配列番号３０、３１、及び３２より選択される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む抗体を含む。
【０１０６】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、Ｆａｂ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。
【０１０７】
非限定的な例示的抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、上の表１に示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセット、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む抗体を含む。
【０１０８】
さらなる例示的な抗体
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む重鎖を含み；また配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含む軽鎖を含み、この場合抗体はＣＳＦ１Ｒに結合する。
【０１０９】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載のＣＤＲの少なくとも一を含む。すなわち、いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ２、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ３、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ２、及び本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ３を含む。さらに、いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、本明細書に記載のＣＤＲに基づく少なくとも一の突然変異ＣＤＲを含み、この突然変異ＣＤＲは、本明細書に記載のＣＤＲに対して１、２、３又は４のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、アミノ酸置換の一又は複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して一又は複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、ここで適切な保存的アミノ酸置換は、突然変異ＣＤＲを含む抗体の結合特性を有意に変化させるとは予測されない。
【０１１０】
例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ抗体はまた、ＣＳＦ１Ｒへの結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗体も含む。したがって、いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒへの結合についてＦａｂ０３０１、０３０２、及び０３１１より選択される抗体並びにこれらのＦａｂの二価（すなわち二つの重鎖と二つの軽鎖を有する）抗体バージョンと競合する抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が提供される。
【０１１１】
例示的な抗体定常領域
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、一又は複数のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。そのようないくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【０１１２】
上記のように、エフェクター機能が望ましいかどうかは、抗体を被験者とした特定の治療方法に依存し得る。したがって、いくつかの実施態様において、エフェクター機能が望ましい場合、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域又はヒトＩｇＧ３重鎖定常領域を含む抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。いくつかの実施態様において、エフェクター機能が望ましくない場合、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域を含む抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が選択される。
【０１１３】
例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖可変領域
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域が提供される。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、マウス可変領域、ヒト可変領域又はヒト化可変領域である。
【０１１４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、重鎖ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、重鎖ＦＲ１及び／又はＦＲ４をさらに含む。非限定的な例示的重鎖可変領域は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含むが、これに限定されない。
【０１１５】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、配列番号１５、２１、及び２７より選択される配列を含むＣＤＲ１を含む。
【０１１６】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、配列番号１６、２２、及び２８より選択される配列を含むＣＤＲ２を含む。
【０１１７】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖可変領域は、配列番号１７、２３、及び２９より選択される配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０１１８】
非限定的な例示的重鎖可変領域は、配列番号１５、１６、及び１７；配列番号２１、２２、及び２３；並びに配列番号２７、２８、及び２９より選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む重鎖可変領域を含むが、これに限定されない。
【０１１９】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、配列番号９、１１、１３、及び３９から４５より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含み、この場合重鎖は、軽鎖と共に、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を形成することができる。
【０１２０】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、本明細書に記載のＣＤＲの少なくとも一を含む。すなわち、いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ２、及び本明細書に記載の重鎖ＣＤＲ３より選択される少なくとも一のＣＤＲを含む。さらに、いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体重鎖は、本明細書に記載のＣＤＲに基づく少なくとも一の突然変異ＣＤＲを含み、この突然変異ＣＤＲは、本明細書に記載のＣＤＲに対して１、２、３又は４のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、アミノ酸置換の一又は複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して一又は複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、ここで適切な保存的アミノ酸置換は、突然変異ＣＤＲを含む重鎖の結合特性を有意に変化させるとは予測されない。
【０１２１】
いくつかの実施態様では、重鎖は、重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、重鎖は、ヒト重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤより選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＧ定常領域である。いくつかの実施態様では、重鎖は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのそのような実施態様では、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域は、Ｓ２４１Ｐ突然変異を含む。
【０１２２】
いくつかの実施態様では、エフェクター機能が望ましい場合、重鎖はヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、エフェクター機能が比較的望ましくない場合、重鎖はヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。
【０１２３】
例示的な抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖可変領域
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域が提供される。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、マウス可変領域、ヒト可変領域又はヒト化可変領域である。
【０１２４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、軽鎖ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、軽鎖ＦＲ１及び／又はＦＲ４をさらに含む。非限定的な例示的軽鎖可変領域は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１２５】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、配列番号１８、２４、及び３０より選択される配列を含むＣＤＲ１を含む。
【０１２６】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、配列番号１９、２５、及び３１より選択される配列を含むＣＤＲ２を含む。
【０１２７】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖可変領域は、配列番号２０、２６、及び３２より選択される配列を含むＣＤＲ３を含む。
【０１２８】
非限定的な例示的軽鎖可変領域は、配列番号１８、１９、及び２０；配列番号２４、２５、及び２６；並びに配列番号３０、３１、及び３２より選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む軽鎖可変領域を含むが、これに限定されない。
【０１２９】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、配列番号１０、１２、１４、及び４６から５２より選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である可変領域配列を含み、この場合軽鎖は、重鎖と共に、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体を形成することができる。
【０１３０】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、本明細書に記載のＣＤＲの少なくとも一を含む。すなわち、いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ１、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ２、及び本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲ３より選択される少なくとも一のＣＤＲを含む。さらに、いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体軽鎖は、本明細書に記載のＣＤＲに基づく少なくとも一の突然変異ＣＤＲを含み、この突然変異ＣＤＲは、本明細書に記載のＣＤＲに対して１、２、３又は４のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、アミノ酸置換の一又は複数は、保存的アミノ酸置換である。当業者は、特定のＣＤＲ配列に対して一又は複数の適切な保存的アミノ酸置換を選択することができ、ここで適切な保存的アミノ酸置換は、突然変異ＣＤＲを含む軽鎖の結合特性を有意に変化させるとは予測されない。
【０１３１】
いくつかの実施態様では、軽鎖は、ヒト軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、ヒトκ及びヒトλ軽鎖定常領域より選択される。
【０１３２】
例示的なさらなるＣＳＦ１Ｒ結合分子
いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合するさらなる分子が提供される。そのような分子は、限定されないが、例えば抗ｃａｌｉｎ、アドネクチン、アンキリンリピート等の非標準的足場を含む。例として、Hosseら Prot. Sci. 15:14 (2006); Fiedler, M. 及びSkerra, A., 「Non-Antibody Scaffolds」 467-499頁, Handbook of Therapeutic Antibodies, Dubel, S.編., Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2007を参照のこと。
【０１３３】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の例示的な特性
いくつかの実施態様では、上記の構造を有する抗体は、１ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）でＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１Ｒ及び／又はＩＬ−３４のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックし、かつＣＳＦ１Ｒ及び／又はＩＬ−３４により誘発されるリン酸化を阻害する。
【０１３４】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒ（ＣＳＦ１Ｒ−ＥＣＤ）の細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満又は０．０５ｎＭ未満のＣＳＦ１Ｒに対する結合親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、０．０１から１ｎＭの間、０．０１から０．５ｎＭの間、０．０１から０．１ｎＭの間、０．０１から０．０５ｎＭの間又は０．０２から０．０５ｎＭの間ＫＤを有する。
【０１３５】
いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１Ｒに結合するリガンドをブロックする。いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックする。いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＩＬ−３４のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックする。いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４双方のＣＳＦ１Ｒへの結合をブロックする。いくつかの実施態様では、リガンド結合をブロックする抗体は、ＣＳＦ１Ｒの細胞外ドメインに結合する。抗体は、実施例７に記載のアッセイを用いて、ＣＳＦ１Ｒへのリガンドの検出可能な結合量を少なくとも５０％減少させる場合、「ＣＳＦ１Ｒへのリガンド結合をブロックする」と考えられる。いくつかの実施態様では、抗体は、実施例７に記載のアッセイを用いて、ＣＳＦ１Ｒへのリガンドの検出可能な結合量を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％減少させる。いくつかのそのような実施態様では、抗体は、リガンド結合を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％等ブロックすると言われている。
【０１３６】
いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を阻害する。いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を阻害する。いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＩＬ−３４誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化を阻害する。いくつかの実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、ＣＳＦ１誘導性及びＩＬ−３４誘導性のＣＳＦ１Ｒのリン酸化の両方を阻害する。抗体は、実施例６に記載のアッセイを用いて、リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化の検出可能な量を少なくとも５０％減少させる場合、「リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を阻害する」と考えられる。いくつかの実施態様では、抗体は、実施例６に記載のアッセイを用いて、リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化の検出可能な量を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％減少させる。いくつかのそのような実施態様では、抗体は、リガンド誘導性のＣＳＦ１Ｒリン酸化を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％等阻害すると言われている。
【０１３７】
いくつかの実施態様において、抗体は、ＣＳＦ１及び／又はＩＬ−３４の存在下での単球増殖及び／又は生存応答を阻害する。抗体は、実施例１０に記載のアッセイを用いて、ＣＳＦ１及び／又はＩＬ−３４の存在下での単球増殖及び／又は生存応答の量を少なくとも５０％減少させる場合、「単球増殖及び／又は生存応答を阻害する」と考えられる。いくつかの実施態様では、抗体は、実施例１０に記載のアッセイを用いて、ＣＳＦ１及び／又はＩＬ−３４の存在下での単球増殖及び／又は生存応答の量を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％減少させる。このようないくつかの実施態様では、抗体は、単球増殖及び／又は生存応答を少なくとも少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％等阻害すると言われている。
【０１３８】
例示的な抗体コンジュゲート
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、標識及び／又は細胞傷害性剤にコンジュゲートされる。本明細書で使用される場合、標識は、抗体の検出を容易にし、かつ／又は抗体が結合する分子の検出を容易にする部分である。非限定的な例示的標識は、放射性同位体、蛍光団、酵素団、化学発光団、ビオチン、エピトープタグ、金属結合タグ等を含むが、これらに限定されない。当業者は、意図する用途に応じて適切な標識を選択することができる。
【０１３９】
本明細書で使用される場合、細胞傷害性剤は、一又は複数の細胞の増殖能を低下させる部分である。例えば、細胞がアポトーシスを受けるか又は他の方法で死に至る、細胞が細胞周期を経て進行しない、かつ／又は分裂しない、細胞が分化する等の理由で細胞が増殖しにくくなると、細胞は増殖能力を低下させる。例示的な細胞傷害性剤は、放射性同位体、毒素、及び化学療法剤を含むが、これらに限定されない。当業者は、意図する用途に応じて適切な細胞傷害性を選択することができる。
【０１４０】
いくつかの実施態様では、標識及び／又は細胞傷害性剤は、化学的方法を用いてインビトロで抗体にコンジュゲートしている。コンジュゲーションの非限定的な例示的化学的方法は、当該技術分野で知られており、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｅｓ（イリノイ州ロックフォード；前社名Ｐｉｅｒｃｅ）、Ｐｒｏｚｙｍｅ（カリフォルニア州ヘイワード）、ＳＡＣＲＩ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（カナダ、カルガリー）、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（ノースカロライナ州ローリー）等から市販されているサービス、方法、及び／又は試薬を含む。いくつかの実施態様では、標識及び／又は細胞傷害剤がポリペプチドである場合、標識及び／又は細胞傷害剤は、少なくとも一の抗体鎖を有する同じ発現ベクターから発現され、抗体鎖に融合する標識及び／又は細胞傷害性剤を含むポリペプチドを生成し得る。当業者であれば意図とする用途に応じて、標識抗体及び／又は細胞傷害性剤を抗体にコンジュゲートさせるための適切な方法を選択することができる。
【０１４１】
例示的なリーダー配列
いくつかの分泌タンパク質が大量に発現及び分泌するためには、異種タンパク質由来のリーダー配列が望ましい可能性がある。いくつかの実施態様では、リーダー配列は、軽鎖及び重鎖リーダー配列である配列番号３及び４からそれぞれ選択される。いくつかの実施態様では、異種リーダー配列を用いることは、リーダー配列が分泌プロセスの際にＥＲにおいて除去されることから、結果として生じる成熟ポリペプチドが変化しないままであり得るという点で有利であり得る。異種のリーダー配列の付加は、いくつかのタンパク質を発現及び分泌するために必要とされ得る。
【０１４２】
特定の例示的なリーダー配列は、例えばシンガポール国立大学の生化学部によって維持されているオンラインリーダー配列データベースに記載されている。Choo et al., BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005)；及び国際公開第２００６／０８１４３０号を参照のこと。
【０１４３】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体をコードする核酸分子  
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の一又は複数の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子が提供される。いくつかの実施態様では、核酸分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様では、核酸分子は、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施態様では、第一の核酸分子は、重鎖をコードする第一のポリヌクレオチドを含み、第二の核酸分子は、軽鎖をコードする第二のポリヌクレオチドを含む。
【０１４４】
そのようないくつかの実施態様において、重鎖及び軽鎖は、二の別個のポリペプチドとして、一の核酸分子から、又は二の別個の核酸分子から発現される。抗体がｓｃＦｖである場合などのいくつかの実施態様では、単一のポリヌクレオチドは、連結された重鎖及び軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。
【０１４５】
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されると重鎖又は軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上述のように、リーダー配列は、天然の重鎖又は軽鎖リーダー配列であってもよく、あるいは別の異種リーダー配列であってもよい。
【０１４６】
核酸分子は、当技術分野で一般的な組換えＤＮＡ技術を用いて構築することができる。いくつかの実施態様では、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクターである。
【０１４７】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の発現及び産生
ベクター
抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖及び／又は抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。また、抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖及び／又は抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。そのようなベクターは、限定されないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター等を含む。いくつかの実施態様では、ベクターは、重鎖をコードする第一のポリヌクレオチド配列及び軽鎖をコードする第二のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施態様では、重鎖及び軽鎖は、二の別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施態様では、重鎖及び軽鎖は、例えば抗体がｓｃＦｖである場合などに、単一のポリペプチドの一部として発現される。
【０１４８】
いくつかの実施態様では、第一のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第二のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様では、第一のベクター及び第二のベクターは、同様の量（同様のモル量又は同様の質量量など）で宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施態様では、モル比又は質量比５：１から１：５の間の第一のベクターと第二のベクターが宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施態様では、質量比１：１から１：５の間の重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターが使用される。いくつかの実施態様では、質量比１：２の重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターが使用される。
【０１４９】
いくつかの実施態様では、ＣＨＯ若しくはＣＨＯ由来細胞又はＮＳ０細胞におけるポリペプチドの発現が最適化されているベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えばRunning Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)に記載されている。
【０１５０】
いくつかの実施態様では、ヒトを含む動物における抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖及び／又は抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖のインビボ発現のためにベクターが選択される。いくつかのそのような実施態様では、ポリペプチドの発現は、組織特異的に機能するプロモーターの制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターは、例えば国際公開第２００６／０７６２８８号に記載されている。
【０１５１】
宿主細胞
様々な実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖及び／又は抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞においてか、又は真菌細胞（例えば酵母）、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳細胞等の真核細胞において発現され得る。そのような発現は、例えば当技術分野で既知の手順に従って実施することができる。ポリペプチドを発現させるために使用され得る例示的な真核細胞は、限定されないが、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ７細胞を含む）；２９３細胞（２９３−６Ｅ細胞を含む）；ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−Ｓ及びＤＧ４４細胞を含む）；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；及びＮＳ０細胞を含む。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖及び／又は抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖は、酵母において発現され得る。例として、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５号を参照されたい。いくつかの実施態様では、特定の真核宿主細胞は、抗ＣＳＦ１Ｒ重鎖及び／または抗ＣＳＦ１Ｒ軽鎖に対する所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。いくつかの実施態様では、例えばＣＨＯ細胞は、２９３細胞において生成された同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを生成する。
【０１５２】
所望の宿主細胞への一又は複数の核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染等を含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成され得る。非限定的な例示的方法は、例えばSambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 第3版. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞において一過性に又は安定にトランスフェクトされ得る。
【０１５３】
いくつかの実施態様では、任意の適切な方法に従って、ポリペプチドをコードする一又は複数の核酸分子で操作又はトランスフェクトされた動物において、一又は複数のポリペプチドをインビボで生成することができる。
【０１５４】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の精製
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、任意の適切な方法によって精製することができる。そのような方法は、限定されないが、親和性マトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用を含む。適切な親和性リガンドは、ＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤ及び抗体定常領域に結合するリガンドを含む。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ又は抗体アフィニティーカラムを使用して、定常領域に結合し、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を精製することができる。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えばブチル又はフェニルカラムも、いくつかのポリペプチドを精製するのに適している。ポリペプチドを精製する多くの方法が、当該分野で知られている。
【０１５５】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の無細胞産生
いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、無細胞系において産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えばSitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)に記載されている。
【０１５６】
治療用組成物及び方法
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を用いた疾患の治療方法
本明細書では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体でＣＤ１６＋障害を治療する方法が提供される。本明細書では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体で関節リウマチを治療する方法が提供される。
【０１５７】
いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体、例えばｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体を関節リウマチを有する被験者に投与することを含む、関節リウマチを治療する方法が提供される。いくつかの実施態様では、抗体ｈｕＡｂ１を関節リウマチを有する被験者に投与することを含む、関節リウマチを治療する方法が提供される。いくつかの実施態様では、方法は、抗体の少なくとも１用量を投与することを含み、ここで用量は０．２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間、例えば１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。いくつかの実施態様では、抗体は、約２週間で１ｍｇ／ｋｇの単回投与した後、約６週間後に３ｍｇ／ｋｇで単回投与した後、及び約１２週間後に１０ｍｇ／ｋｇで単回投与した後に血清から除去される。ｈｕＡｂ１の単回用量を投与されたヒトの血清からのクリアランスは、同じ用量を投与されたカニクイザルの血清からのクリアランスよりも有意にかつ予想外に遅かった。いくつかの実施態様では、遅いクリアランス速度は、抗体の低頻度の投与を可能にする。いくつかの実施態様では、抗体は、２週間に１回又はそれより少ない頻度で投与され得る。例えば、いくつかの実施態様では、抗体は、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回又は年に４回投与され得る。
【０１５８】
いくつかの実施態様では、ヒト被験者への投与後のｈｕＡｂ１の半減期は、２日を超える。いくつかの実施態様では、ヒト被験者への投与後のｈｕＡｂ１の半減期は、４日を超える。いくつかの実施態様では、ヒト被験者への投与後のｈｕＡｂ１の半減期は、１５日を超える。いくつかの実施態様では、約１．０ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕＡｂ１のヒト被験者への投与後の半減期は、２日を超える。いくつかの実施態様では、約３．０ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕＡｂ１のヒト被験者への投与後の半減期は、４日を超える。いくつかの実施態様では、約１０ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕＡｂ１のヒト被験者への投与後の半減期は、１５日を超える。いくつかの実施態様では、約１０ｍｇ／ｋｇ用量のｈｕＡｂ１のヒト被験者への投与後の半減期は、１８日を超える。いくつかの実施態様では、１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間の用量のｈｕＡｂ１のヒト被験者への投与後の半減期は、２日から２５日の間である。いくつかの実施態様では、３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間の用量のｈｕＡｂ１のヒト被験者への投与後の半減期は、４日から２５日の間である。
【０１５９】
いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体、例えばｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体をＣＤ１６＋単球の増加を有する被験者に投与することを含む、ＣＤ１６＋単球数を減少させる方法が提供される。いくつかの実施態様では、被験者は関節リウマチを有する。いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体を投与することが、ＣＤ１６−単球の数を減少させない。いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体が被験者に投与される場合、ＣＤ１６＋単球の数が、ＣＤ１６−単球の数よりも大幅に減少する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６＋単球の数は、少なくとも１用量のｈｕＡｂ１などの抗体の投与後、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％減少する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６−単球の数は、３０％未満、２０％未満又は１０％未満減少する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６＋単球の数の減少は、１用量の抗体の投与後少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間又は少なくとも８週間持続する。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６＋単球は、ＣＤ１６＋末梢血単球である。いくつかの実施態様では、ＣＤ１６−単球は、ＣＤ１６−末梢血単球である。
【０１６０】
いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする抗体、例えばｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６より選択される抗体を関節リウマチを有する被験者に投与することを含む、関節リウマチに伴う骨吸収を治療する方法が提供される。いくつかの実施態様では、抗体ｈｕＡｂ１を関節リウマチを有する被験者に投与することを含む、関節リウマチも伴う骨吸収を減少させる方法が提供される。いくつかの実施態様では、骨吸収を減少させることは、関節リウマチに冒された関節における破骨細胞の数を減少させることを含む。
【０１６１】
いくつかの実施態様では、被験者からの血漿中のＣＴｘ及び／又はＴＲＡＰ５ｂのレベルを決定することによって骨吸収を決定することができ、この場合ＣＴｘ及び／又はＴＲＡＰ５ｂのレベルの上昇は被験者における骨吸収の増加を示す。したがって、いくつかの実施態様では、ＣＴｘ及び／又はＴＲＡＰ５ｂのレベルの低下は、骨吸収の減少を示す。ＣＴｘ及び／又はＴＲＡＰ５ｂレベルは、特定の場合、骨損失を減少させる治療の有効性をモニターするために、ＣＳＦ１Ｒに結合する抗体での治療の前後に決定されてもよく、及び／又は治療の経過を通じて定期的に決定されてもよい。ＣＴｘ及び／又はＴＲＡＰ５ｂレベルは、限定されないが、ＥＬＩＳＡ（ＦＡＩＣＥＡすなわちフラグメント吸収免疫捕捉酵素アッセイを含む；例えばスイスはジサッハのＴＥＣＯｍｅｄｉｃａｌ  Ｇｒｏｕｐ，Ｑｕｉｄｅｌ（登録商標）ＴＲＡＰ５ｂアッセイを参照されたい）を含めた当該技術分野における任意の方法を使用して決定することができる。いくつかの実施態様では、ＣＳＦ１Ｒに結合し、ＣＳＦ１及びＩＬ−３４リガンド結合をブロックする、ｈｕＡｂ１などの抗体の投与は、例えばＣＴｘ及び／又はＴＲＡＰ５ｂなど、骨吸収の少なくとも一のマーカーを減少させる。いくつかの実施態様では、骨吸収のマーカーである血清レベルは、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも７５％減少する。いくつかの実施態様では、骨吸収のマーカーである血清レベルの低下は、１用量の抗体の投与後少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間又は少なくとも８週間持続する。
【０１６２】
投与経路及び担体
様々な実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、限定されないが、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、舌下、直腸、腹腔内、皮内、局所、経皮、及び髄腔内を含む種々の経路により、又は移植若しくは吸入によりインビボ投与することができる。本発明の主題の組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、浣腸剤、注射剤、吸入剤、及びエアロゾルを含むがこれらに限定されない固体、半固体、液体又は気体の形態の調製物に製剤化することができる。抗ＣＳＦ１Ｒ抗体をコードする核酸分子を金微粒子上にコーティングし、文献に記載されているように粒子衝撃装置又は「遺伝子銃」によって皮内送達することができる（例えば、Tang et al., Nature356:152-154 (1992)を参照）。適切な製剤及び投与経路は、意図する用途に応じて選択することができる。
【０１６３】
様々な実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を含む組成物は、種々の薬学的に許容される担体を含む製剤で提供される（例えば、Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 第7版, Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients,第3版., Pharmaceutical Press (2000)参照）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む種々の薬学的に許容される担体が利用可能である。さらに、種々の薬学的に許容される補助剤、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、安定化剤、湿潤剤等も利用可能である。非限定的な例示的担体は、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びそれらの組み合わせを含む。
【０１６４】
様々な実施態様において、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を含む組成物は、水性又は非水性溶媒、例えば植物油若しくは他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪族酸のエステル又はプロピレングリコール中に；また所望であれば、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤等の通常の添加剤とともに、溶解、懸濁又は乳化することにより皮下投与を含む注射用に製剤化することができる。様々な実施態様において、組成物は、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧された許容可能な噴射剤を使用して、吸入用に製剤化されてもよい。組成物はまた、様々な実施態様において、生分解性又は非生分解性ポリマーなどを用いた徐放性マイクロカプセルに製剤化することもできる。非限定的な例示的生分解性製剤は、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーを含む。非限定的な例示的非生分解性製剤は、ポリグリセリン脂肪酸エステルを含む。そのような製剤を製造する特定の方法は、例えば欧州特許出願公開第１１２５５８４号に記載されている。
【０１６５】
１又は複数用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体をそれぞれ収容する一又は複数の容器を含む医薬パック及びキットも提供される。いくつかの実施態様では、一又は複数のさらなる薬剤を含むか又は含まない、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を含む組成物の所定量を含有する単位用量が提供される。いくつかの実施態様では、そのような単位用量は、注射用の使い捨てのプレフィルドシリンジで供給される。様々な実施態様において、単位用量に含有される組成物は、生理食塩水、スクロース等；リン酸塩などの緩衝液を含んでもよく、かつ／又は安定で有効なｐＨ範囲内で製剤化され得る。あるいは、いくつかの実施態様では、組成物は、適切な液体（例えば滅菌水）の添加時に再構成され得る凍結乾燥粉末として提供され得る。いくつかの実施態様では、組成物は、スクロース及びアルギニンを含むがこれらに限定されないタンパク質凝集を阻害する一又は複数の物質を含む。いくつかの実施態様では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／又はプロテオグリカンを含む。
【０１６６】
薬学的組成物は、特定の適応症の治療又は予防に有効な量で投与される。治療有効量は、典型的には、治療される被験者の体重、被験者の身体若しくは健康状態、治療される状態の広範さ、又は治療される被験者の年齢に依存する。一般に、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、約１０μｇ／ｋｇ体重から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、約５０μｇ／ｋｇ体重から約５ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、約１００μｇ／ｋｇ体重から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、約１００μｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲の量で投与され得る。
【０１６７】
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体組成物は、必要に応じて被験者に投与することができる。投与頻度の決定は、治療される状態の考慮事項、治療される被験者の年齢、治療される状態の重篤度、治療される被験者の全般的な健康状態等に基づいて主治医などの当業者によってなされ得る。いくつかの実施態様では、有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が、１回以上被験者に投与される。様々な実施態様において、有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、年に４回又はそれ以下の頻度で被験者に投与される。有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、少なくとも１回被験者に投与される。いくつかの実施態様では、有効用量の抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、少なくとも１ヶ月、少なくとも６ヶ月又は少なくとも１年の期間を含めて、複数回投与され得る。
【０１６８】
併用療法
抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、単独又は他の治療法との併用で投与され得る。抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、例えば手術、化学療法、放射線療法又は別の治療用抗体などの生物学的製剤の投与といった他の治療法の前に、実質的に同時に又は後に提供され得る。関節リウマチの治療のために、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体は、他の治療剤、例えばメトトレキサート、レミケード（インフリキシマブ）、ヒュミラ（アダリムマブ）、シンポニー（ゴリムバム）、及びエンブレル（エタネルセプト）などの抗ＴＮＦ薬剤；プレドニゾンなどのグルココルチコイド；レフルノミド；アゾチオプリン；ＣＰ５９０６９０などのＪＡＫ阻害剤；Ｒ７８８などのＳＹＫ阻害剤；抗ＩＬ−６抗体；トシリズマブなどの抗ＩＬ−６Ｒ抗体；リツキシマブなどの抗ＣＤ−２０抗体；抗ＣＤ１９抗体；抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体；抗ＧＭ−ＣＳＦ−Ｒ抗体；アナキンラなどのＩＬ−１受容体アンタゴニスト；アバタセプトなどのＣＴＬＡ−４アンタゴニスト；シクロスポリンなどの免疫抑制剤とともに投与されてもよい。
【実施例】
【０１６９】
以下に記載の実施例は、単に本発明の例示であることが意図されており、決して本発明を限定するものと考えられるべきではない。実施例は、以下の実験が実施された実験のすべて又は唯一の実験であることを表すのを意図するものではない。使用される数値（例えば量、温度など）に関して正確さを保つための努力がなされているが、いくらかの実験誤差及び偏差は斟酌されるべきである。特に記載のない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧又はそれに近い。
【０１７０】
実施例１：  ヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体
種々のヒト化抗ＣＳＦ１Ｒ抗体が以前に開発された。例として、国際公開第２０１１／１４０２４９号を参照されたい。
【０１７１】
親キメラ抗体可変領域の配列及びヒトアクセプター可変フレームワーク領域の配列と整列させたヒト化重鎖可変領域及びヒト化軽鎖可変領域のそれぞれの配列を図１（重鎖）及び２（軽鎖）に示す。ヒトアクセプター可変フレームワーク領域配列と比較したヒト化可変領域配列の変化を四角で囲んでいる。各可変領域の各ＣＤＲは、四角で囲まれた領域に示され、四角で囲まれた配列の上に「ＣＤＲ」と表示されている。
【０１７２】
下記の表６は、抗体ｈｕＡｂ１からｈｕＡｂ１６のヒト化重鎖及びヒト化軽鎖の完全な配列を示す。これらの各抗体のヒト化重鎖及びヒト化軽鎖の名称及び配列番号を表３に示す。
2020169179.tif 000003
【０１７３】
前述のように、１６のヒト化抗体を、ヒト、カニクイザル、及びマウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合について試験した。例として、国際公開第２０１１／１４０２４９号を参照されたい。抗体は、ヒト及びカニクイザルＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤの両方に結合するが、マウスＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤには結合しないことが見出された。ヒト化抗体はまた、ヒト及びマウスＣＳＦ１Ｒの両方に対するＣＳＦ１及びＩＬ−３４の結合をブロックすること、及びＣＨＯ細胞中で発現されるヒトＣＳＦ１ＲのＣＳＦ１誘導性及びＩＬ−３４誘導性リン酸化を阻害することも見出された。例として、国際公開第２０１１／１４０２４９号を参照されたい。
【０１７４】
ヒトＣＳＦ１Ｒ  ＥＣＤへの結合に対するｋａ、ｋｄ、及びＫＤは、先に決定され、表４に示されている。例として、国際公開第２０１１／１４０２４９号を参照されたい。
2020169179.tif 000004
【０１７５】
実施例２：  カニクイザル及びヒトにおけるＨｕＡｂ１の薬物動態
ｈｕＡｂ１の薬物動態（ＰＫ）は、カニクイザルでの３の静脈内（ＩＶ）試験で調査されている。試験した用量範囲は、単回投与後３〜１５０ｍｇ／ｋｇ、及び反復投与後３〜１５０ｍｇ／ｋｇであった。注入液の持続時間は３０分であった。反復投与試験における投薬間隔は１週間に１回であり、各動物は合計４回の投薬を受けた。
【０１７６】
カニクイザルにおけるｈｕＡｂ１の１回の３０分間静脈内注入後のＰＫプロファイルは、急速な分布、続いて、標的介在のクリアランスと一致して、血漿からのｈｕＡｂ１の枯渇が加速して終わった比較的遅い終末過程によって特徴付けられた。
【０１７７】
急速な減少は、標的介在性のクリアランスに加えて、抗ｈｕＡｂ１抗体に一部起因し得る。しかしながら、ＡＤＡ応答を開始する能力がないＳＣＩＤマウスにおける類似のキメラ抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の単回用量投与は、同様のプロファイルを示した。観察された最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）は、低用量群については注入終了時、１５０ｍｇ／ｋｇ投与群については注入終了の０．５〜１時間後のものである。加速される終末低下前の半減期（ｔ１／２）は、１〜１２日の範囲であった。Ｃｍａｘ及びＡＵＣ∞は、用量の増加に伴って増加し、Ｃｍａｘは試験したすべての用量レベルで用量に比例して増加した。ＡＵＣ∞の増加は、３ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇと釣り合った用量よりも大きく、１０ｍｇ／ｋｇから１５０ｍｇ／ｋｇと釣り合った用量であった。
【０１７８】
ｈｕＡｂ１又はプラセボを、２０ｍＭのＬ−ヒスチジン、１４２ｍＭのＬ−アルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含有するｐＨ６．３の緩衝液中に２０ｍｇ／ｍｌの濃度で調製した。成人の健常ボランティアの被験者を各用量コホートに対してランダム化した（コホート当たり被験者８名、６名が薬物を受け、２名がプラセボを受けた）。用量コホートは、０．２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇのｈｕＡｂ１又はプラセボの単回用量であった。ＨｕＡｂ１又はプラセボをＩＶ注入により３０分かけて投与し、観察期間がそれに続いた。試験薬物投与後、被験者を７２時間拘束して評価を行い、アルコール制限及び激しい運動に関するプロトコル固有のガイダンスの遵守を確実にした。
【０１７９】
注入の開始はゼロ時間とみなされた。注入の開始に対する以下の時点でのｈｕＡｂ１の血清濃度を決定するために血液試料を採取した。
ｔ＝０時間（ｈ）（投与前６０分まで収集することができる）
ｔ＝２５（注入の開始から２５分後）、ｔ＝３０分（注入の終了）
ｔ＝３５分（注入開始から３５分、注入終了から５分に相当）
ｔ＝４５（注入開始から４５分、注入終了から１５分に相当）
ｔ＝６０（注入開始から６０分、注入終了から３０分に相当）
その後、採取は、注入の開始に対して２時間、４時間、８時間、２４時間、３６時間、４８時間、及び７２時間で、次いで試験８、１５、２２、２９、５７、及び８５日目に行った。
【０１８０】
被験者におけるｈｕＡｂ１の平均血清濃度は、以下のようにＥＬＩＳＡにより決定された。試料をアッセイ希釈剤（１％ウシγグロブリン、０．３Ｍ  ＮａＣｌ、及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）中に最小限の１：３０に希釈した。ヒトＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃに対するヒトＣＳＦ１受容体細胞外ドメインの融合タンパク質）をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。凍結血清試料由来のＨｕＡｂ１をプレート上に捕捉し、標準的な方法を用い、西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートマウス抗ヒトＩｇＧ４抗体を用いて検出した。その分析結果を図３に示す。図３Ａは、週単位の血清ｈｕＡｂ１対時間のログプロットを示す。図３Ｂは、同じデータの線形プロットを示す。これらのデータは、ｈｕＡｂ１が１３週後に１０ｍｇ／ｋｇコホートの被験者から排出されることを示唆している。非線形ＰＫプロファイルは、標的介在性のクリアランスと一致する。表５は、各用量におけるｈｕＡｂ１の計算されたクリアランス（ＣＬ）及び半減期を示す。値は、６名の被験者における平均±標準偏差である。
2020169179.tif 000005
【０１８１】
ヒトにおいて観察された薬物動態は、カニクイザルにおいて観察された薬物動態とは実質的かつ予想外に異なっていた。図４に示すように、ヒトにおけるｈｕＡｂ１のクリアランスは、カニクイザルのクリアランスよりもはるかに低かった。
【０１８２】
実施例３：  ｈｕＡｂ１は、骨吸収のＣＴｘ及びＴＲＡＰ５ｂマーカーを抑制する。
ｈｕＡｂ１の投与は、ＣＳＦ１ＲリガンドであるＣＳＦ１及びＩＬ−３４を劇的に増加させることが示されている。その増加を利用して、市販のＥＬＩＳＡ（ミネソタ州ミネアポリスのＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して被験者由来の血清中のＣＳＦ１及び／又はＩＬ−３４のレベルを決定することにより、盲検試料をｈｕＡｂ１コホートである可能性が高いコホート及びプラセボコホートである可能性が高いコホートに分類した。図９を参照。試料を可能性の高いコホートに分割した後、血清ＣＴｘを測定して、ｈｕＡｂ１がこの骨吸収のマーカーを抑制するのに有効かどうかを決定した。血清ＣＴｘも、市販のＥＬＩＳＡ（ＩＤＳ  Ｓｅｒｕｍ  ＣｒｏｓｓＬａｐｓ  ＥＬＩＳＡ）を用いて測定した。血清試料は、前もって凍結させた。
【０１８３】
その実験の結果を図５に示す。ＣＳＦ１の低い被験者であり、したがってプラセボコホートの可能性が高い図５Ａにおいて、表示の３用量での血清ＣＴｘレベルは実質的に変化しない（図中のｎ＝２はコホート当たり２名の被験者が存在することを意味する）。ＣＳＦ１の高い被験者であり、したがってｈｕＡｂ１コホートの可能性が高い図５Ｂにおいて、血清ＣＴＸレベルが用量依存的に抑制された。これは、ｈｕＡｂ１が骨吸収を抑制し得ることを示唆する（図中のｎ＝６は、コホート当たり６名の被験者が存在することを意味する）。
【０１８４】
ｈｕＡｂ１が骨吸収のマーカーでもあるＴＲＡＰ５ｂレベルを抑制するのに有効かどうかを決定するために、血清ＴＲＡＰ５ｂレベルも測定した。市販のＥＬＩＳＡ（ＭｉｃｒｏＶｕｅ  Ｂｏｎｅ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｔｒａｐ５ｂ  Ａｓｓａｙ、ＲＥＦ８０３３、Ｑｕｉｄｅｌ）を用いて血清ＴＲＡＰ５ｂを測定した。血清試料は、前もって凍結させた。その実験の結果を図６に示す。ＣＳＦ１の低い被験者であり、したがってプラセボコホートの可能性が高い図６Ａにおいて、表示の３用量での血清ＴＲＡＰ５ｂレベルは実質的に変化しない（図中のｎ＝２は、コホート当たり２名の被験者が存在することを意味する）。ＣＳＦ１の高い被験体であり、したがってｈｕＡｂ１の可能性が高いコホートである図６Ｂにおいて、血清ＴＲＡＰ５ｂレベルが低下傾向であった。これは、ｈｕＡｂ１がこの骨吸収のマーカーを抑制し得ることを示唆する（図中のｎ＝６は、コホート当たり６名の被験者が存在することを意味する）。
【０１８５】
実施例４：  ｈｕＡｂ１は、ヒトのＣＤ１６＋単球を抑制する。
ｈｕＡｂ１は、ＣＤ１６−単球レベルを実質的に変化させずに残しながら、カニクイザルのＣＤ１６＋単球レベルを抑制することが以前に示された。以下の通り、フローサイトメトリーにより用量レベル当たり８名の被験者（ｈｕＡｂ１を受けた６名の被験者及びプラセボを受けた２名の被験者）のそれぞれにおいてＣＤ１６＋単球レベルを測定した。Ｃｙｔｏ−Ｃｈｅｘ（登録商標）採血管（Ｓｔｒｅｃｋ）に全血を採取し、採取から４８時間以内に分析した。７５μＬの血液を抗ＣＤ４５、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ１６（すべてＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及び抗ＨＬＡ−ＤＲ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）モノクローナル抗体で染色した。ＡｃｃｕＣｈｅｃｋ（登録商標）Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｂｅａｄｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を細胞の絶対数の決定のために加えた。試料をＦＡＣＳＣａｎｔｏＴＭＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で試験し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ  Ｉｎｃ．）を用いて分析した。ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＤＲ＋ＳＳＣｉｎｔＣＤ１４＋細胞として同定された単球を、古典的単球（ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６−）、中間単球（ＣＤ１４＋＋ＣＤ１６＋）、及び非古典的単球（ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋＋）と同定され、かつ血液１μＬにつき計数された３つの単球サブセットに細分した。
【０１８６】
その実験の結果を図７に示す。実質的に減少した非古典的ＣＤ１６＋単球レベルが、各コホートにおいて様々な期間について観察された。０．２ｍｇ／ｋｇでは、非古典的ＣＤ１６＋単球レベルは、６名のｈｕＡｂ１被験者である可能性が高い被験者において１週間未満で減少した。１ｍｇ／ｋｇでは、非古典的ＣＤ１６＋単球レベルは、６名のｈｕＡｂ１被験者である可能性が高い被験者において少なくとも１週間で減少した。３ｍｇ／ｋｇでは、非古典的ＣＤ１６＋単球レベルは、６名のｈｕＡｂ１被験者である可能性が高い被験者において少なくとも４週間で減少した。最後に１０ｍｇ／ｋｇでは、非古典的ＣＤ１６＋単球レベルは、６名のｈｕＡｂ１被験者である可能性が高い被験者において試験中の８週間で減少した。これらの結果は、ｈｕＡｂ１の低頻度の投与がＣＤ１６＋単球を長期持続抑制し得ることを示唆している。中間ＣＤ１６＋単球の同様の減少もまた認められた（データは示されていない）。
【０１８７】
古典的ＣＤ１６−単球レベルもまた決定された。図８に示すように、ＣＤ１６−単球レベルの変化は、すべての投与レベルで、６名のｈｕＡｂ１被験者である可能性が高い被験者とプラセボ被験者である可能性が高い被験者の間に差がなかった。
【０１８８】
実施例５：  健常ボランティア及びＲＡ患者におけるＨｕＡｂ１の薬物動態
ｈｕＡｂ１を、２０ｍＭのＬ−ヒスチジン、１４２ｍＭのＬ−アルギニン、及び０．０１％のポリソルベート２０を含有するｐＨ６．３の緩衝液中に２０ｍｇ／ｍｌの濃度で調製した。２名の成人健常ボランティア及び３名のＲＡ患者が、３ｍｇ／ｋｇのｈｕＡｂ１の２回投与を、１４日の間隔を空けて受けた。ｈｕＡｂ１を静脈内注入により３０分かけて投与し、観察期間がそれに続いた。注入の開始はゼロ時間とみなされた。
【０１８９】
健常ボランティアにおけるｈｕＡｂ１の血清濃度は、[０１７９]に記載されているように、ＥＬＩＳＡにより決定された。同じアッセイを用いて、異なるコーティング剤を使用しＲＡ患者のｈｕＡｂ１の血清濃度を測定した。ＲＡ患者由来の試料のコーティング剤であるヒトＣＳＦ１Ｒ−Ｆｃタンパク質は、マウスＩｇＧ１  Ｆｃに融合したヒトＣＳＦ１受容体細胞外ドメインであった。健常ボランティア及びＲＡ患者の両方からの分析結果を図１０に示す。白丸と黒三角は、それぞれ健常ボランティアとＲＡ患者のデータを表す。破線と実線は、それぞれ健常ボランティアとＲＡ患者の群平均である。定量下限（ＬＬＯＱ）を下回るデータは、図形表示のための群平均の計算のためにゼロと見なされた。３ｍｇ／ｋｇの二重投与（ｄｕａｌ  ｄｏｓｅ）コホートにおけるｈｕＡｂ１血清濃度は、健常ボランティアについては約１２週間まで測定可能であり、ＲＡ患者については初回用量の投与後８週間まで、場合によっては８週間よりも長く測定可能であった（これまでに測定されたデータポイントに基づく）。
【０１９０】
実施例６：  ｈｕＡｂ１は、ＲＡ患者のＣＤ１６＋単球を減少させる。
ＣＤ１６＋単球レベルを、３ｍｇ／ｋｇ、１４日間隔で２回のｈｕＡｂ１投与を受けた２名の健常ボランティアのそれぞれにおいて決定した。ＣＤ１６＋単球レベルを、３ｍｇ／ｋｇ、１４日間隔で２回のｈｕＡｂ１投与を受けた３名のＲＡ患者のそれぞれにおいても決定した。Ｃｙｔｏ−Ｃｈｅｘ（登録商標）採血管に全血を採取し、実施例４に記載の通り分析した。
【０１９１】
この実験の結果を図１１及び１２に示す。健常ボランティアでは、ｈｕＡｂ１（「ＦＰＡ００８」）の初回投与後６週間まで、実質的に減少した非古典的ＣＤ１６＋単球レベルが観察された。図１１を参照。ＲＡ患者では、ｈｕＡｂ１の初回投与後２週間まで、実質的に非典型的ＣＤ１６＋単球レベルの低下が観察された。図１２を参照。
【０１９２】
配列表
表６は、本明細書に記載の特定の配列を提供する。すべてのポリペプチド及び抗体配列は、別途記載がない限り、リーダー配列なしで示される。
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月2日(2020.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
発明の詳細な説明に記載の発明。
【外国語明細書】
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