(57)【要約】【課題】本発明は、難溶性薬物の可溶化剤として、又は、水中で薬物を包摂可能な徐放性材料として有用であって、安全性のより高い高分子を含有する組成物を提供する。【解決手段】多糖類、ポリエチレングリコール、及び、エチレングリコール構造を含むポリマーからなる群より選択される少なくとも一種に由来する親水性部位と、シロキサン部位と、を有する高分子を含有し、前記高分子が、分子全体に対する前記シロキサン部位の重量割合が５質量％〜６５質量％である、高分子組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖類、ポリエチレングリコール、及び、エチレングリコール構造を含むポリマーからなる群より選択される少なくとも一種に由来する親水性部位と、シロキサン部位と、を有する高分子を含有し、
前記高分子が、分子全体に対する前記シロキサン部位の重量割合が５質量％〜６５質量％である、高分子組成物。
【請求項２】
前記シロキサン部位の重量平均分子量が、１５０以上１００，０００以下である、請求項１に記載の高分子組成物。
【請求項３】
前記親水性部位に由来する５０％細胞傷害率（ＩＣ５０）が、１０００ｐｐｍ以上である、請求項１又は２に記載の高分子組成物。
【請求項４】
前記親水性部位の重量平均分子量が、２，０００以上５００，０００以下である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項５】
前記多糖類が、ペクチン、アミロペクチン、アミロース、グリコーゲン、デキストラン、キチン、キトサン、ヘパリン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、アルギン酸、プルラン、マンナン、レバン、イヌリン、キシログルカン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及び、カルボキシメチルセルロースからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項６】
前記エチレングリコール構造を含んだポリマーが、ポリエステル、ポリウレタン、及びポリチオウレタンからなる群より選択される少なくとも一種である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項７】
前記高分子が、生体環境応答崩壊性官能基を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項８】
前記高分子が、さらに、核酸結合部位を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項９】
前記高分子が、平均粒子径が１０〜５００ｎｍである会合体粒子を形成している、請求項１〜８のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項１０】
前記高分子が、多分散指数が０．５以下である会合体粒子を形成している、請求項１〜９のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項１１】
さらに、生理活性物質を含有しており、かつ、医薬用組成物である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の高分子組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の高分子組成物の医薬用添加剤としての使用。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の高分子組成物を含有する、医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、会合体粒子を形成する高分子を含む組成物、当該会合体粒子に生理活性物質を含有させた医薬用組成物、当該組成物の医薬用添加剤としての使用、並びに当該組成物を含有する医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、低分子医薬品の開発において、受容体・標的選択性の高い化合物をスクリーニングする結果、分子量が大きくなる傾向にあり、新規候補化合物の多くが水に難溶性となっている。また、近年の化学合成技術の発展により、タンパク質やペプチド、核酸の様なバイオ医薬品と呼ばれる製剤の実用化例がその数を増やしている。
【０００３】
このような背景において、難溶性薬物の水への溶解性を向上させる可溶化剤や、バイオ医薬品の血中での分解を防ぎ血中滞留性を向上させる徐放基材として使用される医薬品添加剤の開発が強く求められている。また、このような医薬品添加剤においては、その機能を十分に果たすのみならず、高い安全性を示すことも必要とされる。
【０００４】
例えば、特許文献１には、親水性セグメントと疎水性セグメントからなる両親媒性ポリマーに表面改質剤が結合した微粒子が開示されている。当該微粒子は、内部が親水性セグメントからなるために親水性薬物の封入に適しており、かつ表面改質剤により、各種の投与経路に適したＤＤＳ（Drug Delivery System）キャリアとなり得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００６／０９５６６８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１に記載の微粒子は、難溶性薬物を封入するためには、当該薬物をシクロデキストリン等の別の添加物を用いて可溶化する必要があり、そのため、封入可能な難溶性薬物は、シクロデキストリンで包摂可能な分子サイズの薬物に限定されるといった制限がある。また、疎水性セグメントの望ましい安全性に関する記載はあるが、実際の微粒子に関する安全性に関する情報はない。
【０００７】
従来、難溶性薬物の可溶化剤として、又は、バイオ医薬品の徐放性材料として報告されてきたものは、必ずしも安全性の面、機能面、生産性の面で十分な性能を有しているとは言えなかった。特に薬物の多量投与が必要な治療においては、基材も多量投与が必要となり、このような処方の実現に向けたより安全性の高い材料の開発が求められている。
【０００８】
本発明は、難溶性薬物の可溶化剤として、又は、水中で薬物を包摂可能な徐放性材料として有用であって、安全性のより高い高分子を含有する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記目的を達成すべく鋭意研究を行った結果、親水性部位と、シロキサン部位との重量比が一定の比率である高分子組成物が、上記課題を達成できることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の通りである。
【００１０】
［１］  多糖類、ポリエチレングリコール、及び、エチレングリコール構造を含むポリマーからなる群より選択される少なくとも一種に由来する親水性部位と、シロキサン部位と、を有する高分子を含有し、
前記高分子が、分子全体に対する前記シロキサン部位の重量割合が５質量％〜６５質量％である、高分子組成物。
［２］  前記シロキサン部位の重量平均分子量が、１５０以上１００，０００以下である、前記［１］の高分子組成物。
［３］  前記親水性部位に由来する５０％細胞傷害率（ＩＣ５０）が、１０００ｐｐｍ以上である、前記［１］又は［２］の高分子組成物。
［４］  前記親水性部位の重量平均分子量が、２，０００以上５００，０００以下である、前記［１］〜［３］のいずれかの高分子組成物。
［５］  前記多糖類が、ペクチン、アミロペクチン、アミロース、グリコーゲン、デキストラン、キチン、キトサン、ヘパリン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、アルギン酸、プルラン、マンナン、レバン、イヌリン、キシログルカン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及び、カルボキシメチルセルロースからなる群より選択される少なくとも一種である、前記［１］〜［４］のいずれかの高分子組成物。
［６］  前記エチレングリコール構造を含んだポリマーが、ポリエステル、ポリウレタン、及びポリチオウレタンからなる群より選択される少なくとも一種である、前記［１］〜［５］のいずれかの高分子組成物。
［７］  前記高分子が、生体環境応答崩壊性官能基を有する、前記［１］〜［６］のいずれかの高分子組成物。
［８］  前記高分子が、さらに、核酸結合部位を有する、前記［１］〜［７］のいずれかの高分子組成物。
［９］  前記高分子が、平均粒子径が１０〜５００ｎｍである会合体粒子を形成している、前記［１］〜［８］のいずれかの高分子組成物。
［１０］  前記高分子が、多分散指数が０．５以下である会合体粒子を形成している、前記［１］〜［９］のいずれかの高分子組成物。
［１１］  さらに、生理活性物質を含有しており、かつ、医薬用組成物である、前記［１］〜［１０］のいずれかの高分子組成物。
［１２］  前記［１］〜［１１］のいずれかの高分子組成物の医薬用添加剤としての使用。
［１３］  前記［１］〜［１１］のいずれかの高分子組成物を含有する、医薬品。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、安全性がより高く、かつ水中で生理活性物質を包摂可能な高分子組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を実施するための形態（以下、実施の形態）について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施の形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。
【００１３】
また、以下において、「Ｘ１〜Ｘ２（Ｘ１及びＸ２は、Ｘ１＜Ｘ２を満たす実数）」は、「Ｘ１以上、Ｘ２以下」の数値範囲を意味する。
【００１４】
本願発明及び本願明細書において、「親水性部位」とは、ハンセンの溶解度パラメーター（ＳＰ値）が１５超の構造部分を意味する。ＳＰ値は、ＨＳＰｉＰソフトウェアを用いて計算することができる。
【００１５】
本発明に係る高分子組成物は、多糖類、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及び、エチレングリコール構造を含むポリマーからなる群より選択される少なくとも一種に由来する親水性部位と、シロキサン部位と、を有する高分子を含有する組成物である。本発明に係る高分子組成物が含有する高分子（以下、「本発明に係る高分子」ということがある。）は、高分子の構造中に疎水性の強いシロキサン部位が導入されている。当該構造により、本発明に係る高分子は、水中で会合体粒子を形成しやすい。この会合体粒子は、その内部に、核酸、ペプチド、タンパク質、低分子化合物等の様々な物質を包摂することができる。このため、生理活性物質を包摂物とすることにより、当該会合体粒子は、医薬品のＤＤＳキャリアや可溶化剤、溶解補助剤として非常に有用である。
【００１６】
（シロキサン部位）
本発明に係る高分子が備えるシロキサン部位は、ケイ素と酸素によるSi-O-Si結合（シロキサン結合）からなる骨格を主鎖とする部位である。シロキサン部位は、ケイ素原子と２個の水素原子のうち全部又は一部が、他の有機基等に置換されていてもよい。当該置換基としては、例えば、炭素数１〜２０の置換基を有していてもよいアルキル基や、置換基を有していてもよいフェニル基、アミノ基、アルキルエステル基、酸無水物基、エポキシ基、水酸基、メルカプト基、カルボキシル基、アクリル基、メタクリル基等が挙げられる。本発明に係る高分子が備えるシロキサン部位としては、ジメチルポリシロキサン基、フェニルメチルポリシロキサン基、及びこれらのメチル基又はフェニル基の一部が水素原子であるポリシロキサン基が好ましい。
【００１７】
シロキサン部位の重量平均分子量は、１５０〜１００，０００であることが好ましい。シロキサン部位の重量平均分子量が１５０以上であることにより、高分子が水中に溶解した際に会合体粒子を形成して生理活性物質の包摂が可能となる。シロキサン部位の重量平均分子量が１００，０００以下であることにより、水中に均一分散した高分子会合体粒子を得ることができる。本発明に係る高分子が備えるシロキサン部位の重量平均分子量としては、より好ましくは３００〜８０，０００であり、さらに好ましくは５００〜５０，０００である。
【００１８】
本発明に係る高分子は、分子全体に対する前記シロキサン部位の重量割合が５質量％〜６５質量％である。シロキサン部位は非常に疎水性が強い。高分子全体に対するシロキサン部位の重量割合が所定の範囲内であることにより、会合体ナノ粒子の内部でシロキサン部位同士が強く会合する結果、粒子表面がほぼ親水性部位で構成された会合体粒子が安定して形成される。こうして形成された会合体粒子の細胞毒性（細胞傷害性）は、親水性部位による細胞毒性が反映されるようになる。本発明に係る高分子の親水性部位は、比較的細胞毒性の小さい部位であり、このため、本発明に係る高分子は、細胞毒性が低く、ＤＤＳキャリアとして好適である。この傾向は、親水性部位とシロキサン部位の重量比が５質量％〜６５質量％で顕著に現れ、好ましくは５質量％〜６０質量％である。
【００１９】
なお、シロキサン部位の重量割合を計算するに当たり、対象となる高分子組成物の構造式が特定できている場合は、当該構造式からシロキサン部位の分子量を求めることができる。また、高分子の構造式が特定できない場合は、アルカリ融解により高分子組成物中の高分子を完全に分解し、ＩＣＰ測定によってＳｉ元素量を定量することにより、高分子組成物中のシロキサン部位の重量割合を計算することができる。
【００２０】
（親水性部位）
本発明に係る高分子が備える親水性部位は、多糖類、ポリエチレングリコール、及びエチレングリコール構造を含んだポリマーからなる群より選択される少なくとも一種に由来する構造からなる。高分子中の親水性部位は、これらの３種の構造のうち、それぞれを単独で用いることもでき、２種以上の構造を組み合せて用いることもできる。
【００２１】
高分子中の親水性部位を構成する多糖類としては、特に限定されないが、例えば、ペクチン、アミロペクチン、アミロース、グリコーゲン、デキストラン、キチン、キトサン、ヘパリン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、アルギン酸、プルラン、マンナン、レバン、イヌリン、キシログルカン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース等が挙げられる。本発明において、高分子中の多糖類は、本発明の効果を満たす範囲内で化学的な修飾反応によりその構造を変化させたものを用いてもよい。
【００２２】
高分子中の親水性部位を構成するポリエチレングリコールとしては、通常市販されているものから適宜選択して用いることができる。親水性部位を構成するポリエチレングリコールの末端構造は、水酸基に限定されず、アミノ基やＮ−ヒドロキシスクシンイミド基、チオール基、イソシアネート基、カルボキシル基、カルボジイミド基、アクリル基、メタクリル基、アリル基、２−ブロモイソブチラート基、アセチレン基、エポキシ基、トシル基、アジド基、ヒドラジド基、トリアルコキシシリル基等、様々な官能基であってもよい。ポリエチレングリコールの末端構造の官能基を用いて化学的に反応させることにより、本発明に係る高分子を製造することができる。
【００２３】
高分子中の親水性部位を構成するエチレングリコール構造を含んだポリマーは、ポリエチレングリコールと他の化合物とが重付加若しくは重縮合して得られるポリマー、又は、エチレンオキサイドを単独若しくは他のエポキシ化合物と併せて開環重合して得られるポリマーを示す。
【００２４】
ポリエチレングリコールと他の化合物とが重付加若しくは重縮合して得られるポリマーとしては、例えば、ポリエステル、ポリウレタン、ポリチオウレタン等が挙げられる。
【００２５】
ポリエステルは、ポリエチレングリコールとジカルボン酸及び／又はその誘導体との反応により得られる。用いられるジカルボン酸としては、特に限定されないが、例えば、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、グルタミン酸（アミノ基を変性したものも含む）、アスパラギン酸（アミノ基を変性したものも含む）、シスチン、リンゴ酸、酒石酸等が挙げられる。用いられるジカルボン酸の誘導体としては、エステル、酸塩化物、アミド、酸無水物等が挙げられる。
【００２６】
ポリウレタンは、ポリエチレングリコールとジイソシアネートとの反応により得られる。用いられるジイソシアネートとしては、特に限定されないが、例えば、エチレンジアミン、トリメチレンジアミン、テトラメチレンジアミン、ペンタメチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、ヘプタメチレンジアミン、オクタメチレンジアミン、ノナメチレンジアミン、デカメチレンジアミン、シスタミン、オルニチン(カルボキシル基を変性したものも含む)、シスチン(カルボキシル基を変性したものも含む)、リシン(カルボキシル基を変性したものも含む)より誘導されるジイソシアネート等が挙げられる。
【００２７】
ポリチオウレタンは、ポリエチレングリコールとジイソチオシアネートとの反応により得られる。用いられるジイソチオシアネートとしては、特に限定されないが、例えば、エチレンジアミン、トリメチレンジアミン、テトラメチレンジアミン、ペンタメチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、ヘプタメチレンジアミン、オクタメチレンジアミン、ノナメチレンジアミン、デカメチレンジアミン、シスタミン、オルニチン(カルボキシル基を変性したものも含む)、シスチン(カルボキシル基を変性したものも含む)、リシン(カルボキシル基を変性したものも含む)より誘導されるジイソチオシアネート等が挙げられる。
【００２８】
エチレンオキサイドを単独若しくは他のエポキシ化合物と併せて開環重合して得られるポリマーとしては、特に限定されない。当該ポリマーの合成に用いられるエポキシ化合物としては、例えば、メチルグリシジルエーテル、エチルグリシジルエーテル、ｎ−プロピルグリシジルエーテル、イソプロピルグリシジルエーテル、ｎ−ブチルグリシジルエーテル、イソブチルグリシジルエーテル、ｔ−ブチルグリシジルエーテル、アリルグリシジルエーテル、フェニルグリシジルエーテル等が挙げられる。プロピレンオキシド等のアルキレンオキサイド、エピクロルヒドリン、エピブロモヒドリン等も用いることができる。
【００２９】
本発明に係る高分子の親水性部位及びシロキサン部位の末端部の構造は、当該高分子の水中における会合体形成能を損なわない範囲においていずれの構造としてもよい。末端構造としては、例えば、水素原子、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、カルボキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アミノ基、アリール基、ヘテロアリール基等が挙げられる。
【００３０】
本発明に係る高分子において、親水性部位の重量平均分子量は２，０００〜５００，０００であることが好ましい。親水性部位の重量平均分子量が２，０００以上であることにより、水への溶解性を十分に高められる傾向にある。また、当該重量平均分子量が５００，０００以下であることにより、高分子組成物水溶液の粘度が高すぎずに取り扱いが容易となる。本発明に係る高分子の親水性部位の重量平均分子量は、より好ましくは４，０００〜４００，０００であり、さらに好ましくは５，０００〜２００，０００である。
【００３１】
本発明に係る高分子が備える親水性部位は、細胞毒性の低い構造であることが好ましい。本発明に係る高分子の親水性部位としては、当該部位に由来する５０％細胞傷害率（ＩＣ５０）が１０００ｐｐｍ以上であることが好ましい。このような特徴を有する親水性部位を使用することにより、安全性の高い会合体粒子を形成可能な高分子を含む組成物を提供することができる。ここで、ＩＣ５０値は、下記に示す実施例に記載の方法等で測定が可能であるがこの手法に限るものではない。
【００３２】
本発明に係る高分子の親水性部位は、当該高分子の水中における会合体形成能を損なわない範囲において、様々な構造の側鎖を備えることができる。高分子中に導入する側鎖は１個であってもよく、複数であってもよい。側鎖に様々な機能性部位を導入することにより、高分子に各種の機能を付加させることができる。また、側鎖１つあたりに導入される機能性部位は、１個であってもよく、複数であってもよい。
【００３３】
本発明に係る高分子において、親水性部位が高分子主鎖となる場合、シロキサン部位は、親水性部位の側鎖に導入され、高分子１分子当たりに導入されるシロキサン部位を含む側鎖の数を調節することにより、高分子１分子当たりのシロキサン部位の重量割合を所定の範囲内に調節することができる。また、シロキサン部位が高分子主鎖となる場合、親水性部位は、シロキサン部位の側鎖に導入され、高分子１分子当たりに導入される親水性部位を含む側鎖の数を調節することにより、高分子１分子当たりのシロキサン部位の重量割合を所定の範囲内に調節することができる。
【００３４】
高分子中の親水性部位を構成する多糖類、ポリエチレングリコール、又はエチレングリコール構造を含んだポリマーの側鎖、又は、シロキサン部位からなる主鎖の側鎖に、生体環境応答崩壊性官能基を含むことにより、生体内の特定の環境下で分解等の化学反応を生じさせ、会合体の分解促進に伴う包摂物の局所放出が可能となる。生態環境応答崩壊性官能基としては、特に限定されないが、例えば、ジスルフィド結合、エステル結合、イミノ結合、アセタール結合、ホウ酸エステル等が挙げられる。なお、生体環境応答崩壊性官能基は、多糖類、ポリエチレングリコール、又はエチレングリコール構造を含んだポリマーの主鎖に有していてもよい。
【００３５】
また、高分子が形成する会合体粒子に包摂させる目的の物質と結合する構造を、親水性部位の側鎖中に備えることにより、当該高分子の会合体粒子の包摂量を向上させることができる。包摂させる目的の物質が核酸の場合には、核酸結合部位を有する側鎖を親水性部位に導入することが好ましい。特に包摂させる目的の物質が低分子干渉ＲＮＡを含む核酸である場合、当該核酸を本発明に係る高分子と複合体化することによって、当該核酸を標的とする細胞内に効率よく送達させることができる。核酸結合部位としては、一級アミノ基、二級アミノ基、三級アミノ基、四級アンモニウム基、グアニジノ基、イミダゾール基からなる群から選ばれる官能基を１つ以上有する構造であることが好ましい。
【００３６】
その他、高分子中の親水性部位を構成する多糖類、ポリエチレングリコール、又はエチレングリコール構造を含んだポリマーの側鎖に導入される機能性部位としては、例えば、エンドソーム脱出性官能基等が挙げられる。
【００３７】
本発明に係る高分子は、親水性部位の側鎖に、シロキサン部位以外の疎水性部位を有していてもよい。本願明細書において、「疎水性部位」とは、ハンセンの溶解度パラメーター（ＳＰ値）が１５以下の構造体であり、シロキサン部位に該当しない部分をいう。
【００３８】
ＳＰ値が１５以下である疎水性部位としては、特に限定されないが、例えば、ポリヘキサフルオロプロピレン、ポリオキシメチルヒドロシリレン、ポリトリフルオロビニルトリフルオロメチルエーテル、ポリトリフルオロビニルノナフルオロブチルエーテル、ポリオキシジメチルシリレン、ポリオクタフルオロ−４−メチル−１−ブテニレン、ポリテトラフルオロプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリオキシメチルγトリフルオロプロピルシリレン、ポリα、β―ジフルオロビニルトリフルオロメチルエーテル、ポリトリフルオロビニル２，２，２−トリフルオロエチルエーテル、ポリオキシジメチルシリレン、ポリ−１，１，−ビストリフルオロメトキシジフルオロエチレン、ポリオキシジエチルシリレン、ポリジメチルシリレンメチレン、ポリビニルヘプタフルオロイソプロピルエーテル、ポリヘプタフルオロプロピルエチレン、ポリオキシテトラフルオロエチレン、ポリペンタフルオロエチルエチレン、ポリテトラフルオロアレン、ポリ−１−１−ジフルオロ−２−トリフルオロメトキシエチレン、ポリトリフルオロエチレン、ポリ−１−１−ジメチルシラザン、ポリペンタデカフルオロオクチルアクリレート、ポリオキシジプロピルシリレン、ポリジメチルシリレントリメチレン、ポリビニルトリメチルシラン、ポリウンデカフルオロヘキシルアクリレート、ポリビニリデンフルオリド、ポリ−３−３−３−トリフルオロプロピレン、ポリノナフルオロペンチルアクリレート、ポリオキシメチル−ｎ−ヘキシルシリレン、ポリクロロトリフルオロエチレン、ポリエチレン−Ｎ−β−トリメチルシリルエチルイミン、ポリオキシトリフルオロメチルエチレン、ポリヘプタフルオロブチルアクリレート、ポリオキシメチル−ｎ−オクチルシリレン、ポリ１，２−ジフルオロエチレン、ポリオクチルメチルシラン、ポリオキシテトラメチルエチレン、ポリイソブチレン、ポリシクロヘキシルメチルシラン、ポリフェニルメチルシランが挙げられる。
【００３９】
（会合体粒子）
本発明に係る高分子が形成する会合体粒子の大きさは、特に限定されるものではない。輸送効率が良好なＤＤＳキャリアとなり得ることから、本発明に係る高分子が形成する会合体粒子の平均粒子径としては、１０〜５００ｎｍであることが好ましく、１０〜３００ｎｍがより好ましく、１０〜２００ｎｍがさらに好ましい。なお、本発明及び本願明細書において、「平均粒子径」とは、「動的光散乱法により測定される散乱光強度の自己相関関数から算出される平均粒子径」を意味する。会合体粒子の平均粒子径は、動的光散乱装置等により測定が可能である。
【００４０】
本発明に係る高分子が形成する会合体粒子としては、会合体粒子の多分散指数が０．５以下であることが好ましく、０．４以下であることがより好ましく、０．３以下であることがさらに好ましい。散乱光強度の自己相関関数から算出される多分散指数が０．５以下であることにより、粒子径の均一性から、生理活性物質の徐放制御が容易となる。会合体粒子の散乱強度分布は、動的光散乱装置等により測定が可能である。
【００４１】
本発明に係る高分子組成物は、本発明に係る高分子のみからなる組成物であってもよく、その他の成分を含む組成物であってもよい。当該他の成分としては、例えば、賦形剤、結合剤、流動化剤、溶剤、溶解補助剤、緩衝剤、懸濁化剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤、防腐剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤、着色剤等が挙げられる。これらの添加剤は、通常、医薬品、化粧料、飲食品等に使用されるものの中から適宜選択して用いることができる。
【００４２】
（生理活性物質）
本発明に係る高分子組成物は、生理活性物質を含有していることが好ましい。生理活性物質は、本発明に係る高分子により形成された会合体粒子に包摂される。本発明に係る高分子による会合体粒子は、生理活性物質と接触させるだけで包摂することができる。本発明に係る高分子組成物が含有する生理活性物質は、１種類であってもよく、２種類以上であってもよい。
【００４３】
生理活性物質としては、特に限定されないが、例えば、核酸、タンパク質、ペプチド、及びこれら以外の難溶性薬物が挙げられる。なお、本願明細書において、「難溶性薬物」とは、第１４改正日本薬局方において、溶質１ｇを溶かすのに必要な水量が３０ｍＬ以上必要であることをさす。
【００４４】
核酸としては、特に限定されないが、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス、デコイ、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ、ＲＮＡアプタマー、メッセンジャーＲＮＡ等を挙げることができる。また、ｐｈｏｓｐｈｏｔｈｉｏａｔｅ、メトキシメチル体、及びＬＮＡ等の、前記核酸を化学的に処理した核酸誘導体などを挙げることもできる。
【００４５】
タンパク質及びペプチドとしては、特に限定されないが、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、グラニュロサイトコロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、シリアリーニュートロフィクファクター（ＣＮＴＦ）、チューマーネクローシスファクター（ＴＮＦ）、チューマーネクローシスファクター結合タンパク質（ＴＮＦｂｐ）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、ＦＭＳ類似チロシンカイネース（Ｆｌｔ−３）、成長ホルモン（ＧＨ）、インシュリン、インシュリン類似成長因子−１（ＩＧＦ−１）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、ブレイン由来ニューロトロフィクファクター（ＢＤＮＦ）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、メガカリオサイト成長分化因子（ＭＧＤＦ）、オステオプロテゲリン（ＯＰＧ）、レプチン、副甲状腺ホルモン（ＴＰＨ）、塩基性フィブロブラスト成長因子（ｂ−ＦＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、抗体、ダイアボディー、ミニボディー、断片化抗体等を挙げることができる。
【００４６】
難溶性薬物としては、特に限定されないが、例えば、アルキル化剤、退社拮抗剤、パクリタキセル等のアルカロイド等の制癌剤；シクロスポリン等の免疫抑制剤；ステロイド剤、非ステロイド剤系抗炎症剤等の抗炎症剤；抗リウマチ剤；β−ラクタム系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、新キノロン系抗生物質、サルファ剤等の抗菌剤；等を挙げることができる。
【００４７】
本発明に係る高分子組成物は、生理活性物質のＤＤＳキャリア、可溶化剤、溶解補助剤として有用である。このため、本発明に係る高分子組成物は、医薬用添加剤として使用でき、医薬品の原料とすることができる。中でも、本発明に係る高分子組成物が生理活性物質を含む場合には、当該高分子組成物は、医薬用組成物として特に有用である。
【００４８】
本発明に係る高分子組成物、及び生理活性物質を含んだ医薬用組成物は、１種以上の薬学的に許容しうる希釈剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、界面活性剤、脂質、他の薬物包摂基材などを含む医薬用組成物として、目的とする投与経路に応じて適当な任意の形態にして投与することができる。投与経路は、経口経路であってもよく、非経口経路であってもよい。
【実施例】
【００４９】
本発明を、下記の実施例により説明する。ただし、これらは、本発明の範囲を制限するものではない。なお、実施例、比較例における各物性の測定方法は以下の通りである。
【００５０】
＜会合体粒子の平均粒子径［μｍ］及びＰＤＩ（多分散指数）の測定＞
各高分子によって形成された会合体粒子の平均粒子径及びＰＤＩは、動的散乱装置（大塚電子社製、ＥＬＳＺ−２０００）を用い測定した。会合体粒子の平均粒子径は、散乱光強度の自己相関関数から算出される体積頻度粒度分布をもとに算出した。
【００５１】
ガラスバイアルに高分子サンプル濃度が２０００ｐｐｍとなるように注射用水を添加し、撹拌子を入れて１２時間以上撹拌した。サンプルが溶解して均一になっていることを確認した後、２４ｋＨｚの超音波浴を用いて２０分間超音波処理をした。処理後の高分子サンプル液を２０ｍＭのリン酸緩衝液で２倍希釈し、１０００ｐｐｍの溶液とした後に、０．２２μｍフィルターで濾過をした。濾過後の液を、ＤＬＳ装置を用いて測定を行い、キュムラント法にて平均粒子径、多分散指数（ＰＤＩ）を測定した。
【００５２】
＜会合体粒子の薬物包摂量の測定＞
会合体粒子が包摂するシクロスポリン（ＣｙＡ）量を、以下の方法で測定した。
ガラスバイアルにサンプルを２０００ｐｐｍとなるように注射用水を添加し、撹拌子を入れて１２時間以上撹拌した。サンプルが溶解して均一になっていることを確認した後、２４ｋＨｚの超音波を用いて２０分間超音波処理をした。処理後のサンプル液（サンプル濃度２０００ｐｐｍ）をシクロスポリン溶液（３０ｍｇ／ｍＬ濃度となるようにシクロスポリンをエタノールに溶解した溶液）と９８：２（Ｖ／Ｖ）で混合し、１０００ｐｐｍ（０．３ｍｇ／ｍＬ）のシクロスポリンを含むサンプル水溶液を調整した。得られたシクロスポリン含有サンプル水溶液を３６００Ｇ相当で３０分間遠心分離し、上澄み液をアセトニトリルで２倍希釈した後にＨＰＬＣ（日本分光製、ＬＣ−２０００Ｐｌｕｓ）測定を行った。ブランク測定として、サンプルを添加していない注射用水で同様の操作、測定を行い、注射用水での結果を差し引くことで、サンプルのシクロスポリンの包摂量とした。
【００５３】
＜ＨＰＬＣの測定条件＞
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−４  （５μｍ×４．６×２５０ｍｍ）
移動相：アセトニトリル／水／ＴＦＡ＝９０／１０／０．１
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
温度：４０℃
検出：ＵＶ（２１０ｎｍ）
【００５４】
＜タンパク質の包摂量の測定＞
会合体粒子が包摂するＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）量を、以下の方法で測定した。
ガラスバイアルにサンプルを４０００ｐｐｍとなるように注射用水を添加し、１２時間以上撹拌して溶解した。これを２０ｍＭリン酸緩衝液で２倍希釈し、サンプル２０００ｐｐｍの１０ｍＭリン酸緩衝液を調整した。別途、ＢＳＡを４００ｐｐｍとなる様に１０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し、前記サンプル液と等量混合して３７℃で２４時間インキュベートすることによって、サンプル１０００ｐｐｍ、ＢＳＡ２００ｐｐｍの１０ｍＭリン酸緩衝液を調整した。この溶液を３６００Ｇにて３０分間遠心分離し、上澄み液のＧＰＣ（東ソー製、ＨＬＣ−８３２０ＧＰＣ）測定を行った。調整したＢＳＡ全体の濃度から導かれるＢＳＡ量から、クロマトフラフィーより求めた包摂されずに残存するＢＳＡの量を差し引くことで、会合体粒子に包摂されたＢＳＡ量を算出し、サンプル単位重量当たりの会合体に含まれるＢＳＡ量として評価した。
【００５５】
＜ＧＰＣの測定条件＞
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ４０００−ＳＷＸＬ
移動相：１０ｍＭ  ＰＢＳ水溶液（ｐＨ７．４）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
温度：３０℃
検出：ＲＩ
【００５６】
＜細胞毒性の測定＞
下記に示す実施例及び比較例で得られた高分子、並びに高分子の親水性部位の原料となる多糖類、ポリエチレングリコール、又はエチレングリコール構造を含むポリマーのＩＣ５０を、以下の方法で測定した。
【００５７】
細胞株は、チャイニーズハムスター由来細胞株Ｖ７９（ＪＣＲＢ０６０３）を使用した。
細胞培養の培地は、Ｅａｇｌｅ‘ｓＭＥＭ（和光純薬工業製）に、ＭＥＭ 非必須アミノ酸溶液（×１００）（和光純薬工業製）及び１００ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウム溶液（和光純薬工業製）を１％ずつ加え、更に非働化した牛胎児血清（Ｂｉｏｓｅｒａ製）を５％（Ｖ／Ｖ）加えたＭ０５培地を使用した。
【００５８】
試験液は、サンプル濃度が１０，０００ｐｐｍ濃度となるように注射用水にて溶解し、０．２２μｍフィルターで濾過した後、この水溶液を注射用水にて１０〜８，０００ｐｐｍの各濃度に希釈することにより調整した。
【００５９】
培養プレートに播種した細胞の培地に、サンプルの各試験液（培地の１０％容量）を、培地中の最終濃度が所定濃度（１〜１０００ｐｐｍ）になるように添加し（ｎ＝４）、炭酸ガスインキュベーター中で６日間培養した後、細胞をホルマリン固定及びギムザ染色した。染色された細胞を実体顕微鏡で観察し、細胞が５０個以上集まっているコロニーについて数えた。各サンプルのコロニー形成率を求め、コントロール群のコロニー形成を５０％阻害する試験液の濃度をＩＣ５０値とした。
【００６０】
細胞毒性は、ＩＣ５０に基づいてＡ〜Ｅの５段階にランク分けした。すなわち、ＩＣ５０が１０００ｐｐｍ以上のものをＡランク、５００ｐｐｍ以上１０００ｐｐｍ未満のものをＢランク、２００ｐｐｍ以上５００ｐｐｍ未満のものをＣランク、１００ｐｐｍ以上２００ｐｐｍ未満のものをＤランク、１００ｐｐｍ未満のものをＥランクとした。
【００６１】
［製造例１  フェニルメチルシリコーンアミンの調製］
Ｘ−２２−９４０９（信越シリコーン製、アミン当量６７０ｇ／ｍｏｌ）３４０ｇをトルエン２Ｌに溶解し、アミノ基に対して０．６モル当量のフェニルイソシアネートを滴下し室温で１時間撹拌した。反応液を濃縮し、アルミナ（ＭＥＲＣＫ製、中性）を用いたカラム精製（クロロホルム／メタノール＝９／１）で精製し、目的のフェニルメチルシリコーンアミンを取得した。
【００６２】
［製造例２  ＳＳ基含有フェニルメチルシリコーンアミンの調製］
２Ｌ容フラスコに、シスタミン二塩酸塩（２４ｇ、１０７ｍｍｍｏｌ）を測り取り、メタノール１Ｌを加え溶解させた。氷水浴で冷却し、３−クロロ過安息香酸（ｍＣＰＢＡ、約３０％含水、１５．５ｇ、１２８ｍｍｏｌ）を溶解した塩化メチレン溶液を滴下した。４０時間後に溶媒留去し、析出した白色固体をジエチルエーテルで洗浄、減圧乾燥した。得られた固体をメタノール６００ｍＬに溶解させ、３−メルカプトプロピオン酸（９．４ｍＬ、１０８ｍｍｏｌ）を加え室温で１６時間撹拌した。反応液を濃縮し、塩化メチレンで洗浄した。これを蒸留水９００ｍＬに溶かし、炭酸水素ナトリウムを加え、クロロギ酸−９−フルオレニルメチル（３２．５ｇ、１２６ｍｍｏｌ）のジオキサン溶液４５０ｍＬを滴下し、室温で１８時間撹拌した。反応液にジエチルエーテルを加え撹拌し、２層を分離後、水相をさらにジエチルエーテルで２回洗浄した。洗浄後の水相を２Ｍ塩酸によりｐＨ１にした後、酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、硫酸ナトリウムを加え乾燥した。乾燥剤を濾別後、濾液を濃縮してシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝９／１）で精製した。この結果、Ｆｍｏｃアミノ酸１６．７ｇを得た。得られたＦｍｏｃアミノ酸と製造例１で得られたフェニルメチルシリコーンアミンを等モル量測り取り、ジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ及びＤＩＰＥＡを加えて室温で１８時間撹拌した。反応液を水で抽出し、有機層を濃縮後にアルミナ（ＭＥＲＣＫ製、中性）を用いたカラム精製（クロロホルム／メタノール＝９／１）で精製した。得られた生成物をジクロロメタンに溶解し、１０等量のピペリジンを加え反応させ、反応液を水で抽出し、有機層を濃縮後にアルミナ（ＭＥＲＣＫ製、中性）を用いたカラム精製（クロロホルム／メタノール＝９／１）で精製し濃縮し、目的のＳＳ基含有フェニルメチルシリコーンアミンを得た。
【００６３】
［製造例３  シリコーンポリマーの合成］
オクタメチルシクロテトラシロキサン（１モル当量）、ジメトキシ（メチル）シラン（０．１３モル当量）、ヘキサメチルジシロキサン（０．０４モル当量）の混合溶液にトリフルオロメタンスルホン酸（０．０１モル当量）を添加し、３５℃で６時間反応させてシリコーンポリマーを得た。得られたポリマーを下記の条件でＧＰＣ測定（東ソー製、ＨＬＣ−８２２０ＧＰＣ）した結果、ポリマーの平均分子量は１１８００であった。
【００６４】
＜ＧＰＣの測定条件＞
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＨＺＭ−Ｍ
移動相：クロロホルム
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
温度：４０℃
検出：ＲＩ
【００６５】
［製造例４  エチレングリコール構造を含んだポリマーの合成］
シスチンジメチルエステル二塩酸塩（５０ｇ、１４６．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１Ｌに添加し、氷水浴で冷却した。これに炭酸水素ナトリウム水溶液を少量ずつ加えて透明２層溶液とした後に、トリホスゲン（２８．７ｇ、０．６６モル当量）を固体のまま加え、室温に昇温しながら２時間撹拌した。不溶物をセライト濾過し、有機相を抽出して回収し、硫酸ナトリウムで乾燥、濾別後に濃縮して、目的のシスチン誘導ジイソシアネートモノマーを得た。試験管に得られたシスチン誘導ジイソシアネートモノマー（ＮＣＯ基として１モル当量）、ポリエチレングリコール１０００（ＯＨ基のモル比として１モル当量）及びＤＢＵ０．０２モル当量のＴＨＦ溶液を、６０℃で１８時間撹拌した。反応後にメタノールを添加して反応を停止し、得られた溶液をＴＨＦ、超純水の順で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して、目的物を得た。得られたポリマーを超純水で希釈して、下記の条件でＧＰＣ−ＭＡＬＳ測定（東ソー製ＨＬＣ−８３２０ＧＰＣ）した結果、親水性ポリマーの平均分子量は５０，０００であった。
【００６６】
＜ＧＰＣの測定条件＞
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  ＧＭＰＷＸＬ（７．８ｍｍ×３００ｍｍ）
移動相：１０ｍＭ  ＰＢＳ水溶液（ｐＨ７．４）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
温度：３５℃
検出：ＲＩ
屈折率径：Ｏｐｔｉｌａｂ  Ｔ−ｒＥＸ（ＷｙａｔｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
光散乱検出器：ＤＡＷＮ  ＨＥＬＥＯＳＩＩ（ＷｙａｔｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）
【００６７】
［製造例５  ＴＢＡ化したカチオン交換樹脂の調製］
イオン交換樹種（アルドリッチ製、ＤＯＷＥＸ５０ＷＸ−８−４００）を超純水に懸濁させ、デカンテーションにより樹脂を３回程度洗浄した。４０ｗｔ％テトラブチルアンモニウムヒドロキシド水溶液（ＴＢＡ−ＯＨ）（アルドリッチ社製）を樹脂のカチオン交換能に対し約１．５倍モル等量加え、３０分間撹拌した。余剰のＴＢＡ−ＯＨ溶液をデカンテーションにより除去した後、さらに洗浄液のｐＨ変化がなくなるまで過剰の超純水で洗浄することで、ＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂を得た。
【００６８】
［実施例１］
親水性部位として用いた平均分子量１０，０００のヒアルロン酸を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解し、製造例５で得られたＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂をＨＡユニットのモル数に対してイオン交換樹脂の交換能換算で２モル当量を添加した。１５分間撹拌後、濾過により樹脂を除去し、濾液を凍結乾燥することで、ヒアルロン酸のＴＢＡ塩（ＨＡ−ＴＢＡ）を白色固体として得た。
【００６９】
ＨＡ−ＴＢＡをＤＭＳＯ／ＮＭＰ＝７／３の混合溶媒に溶解し、製造例１で得られたフェニルメチルシリコーンアミン（０．１１モル当量）を添加した後に、ＤＭＴ−ＭＭ（０．１５当量）を投入して、室温で２時間撹拌した。得られた溶液を、ＤＭＳＯ、１５０ｍＭ食塩水、超純水の順で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）後、凍結乾燥により目的物を得た。
【００７０】
［実施例２］
実施例１において、製造例１で得られたフェニルメチルシリコーンアミンの添加量を０．２２モル当量に、ＤＭＴ−ＭＭの添加量を０．３０当量に、それぞれ変更した以外は同様にして、目的物を得た。
【００７１】
［実施例３］
実施例１において、ヒアルロン酸の平均分子量を５０，０００のものに、製造例１で得られたフェニルメチルシリコーンアミンの添加量を０．１７モル当量に、ＤＭＴ−ＭＭの添加量を０．２２モル当量に、それぞれ変更した以外は同様にして、目的物を得た。
【００７２】
［実施例４］
実施例１において、製造例１で得られたフェニルメチルシリコーンアミンを製造例２で得られたＳＳ基含有フェニルメチルシリコーンアミンに変更した以外は同様にして、目的物を得た。
【００７３】
［実施例５］
実施例１において、製造例１で得られたフェニルメチルシリコーンアミンを製造例２で得られたＳＳ基含有フェニルメチルシリコーンアミン変え、その添加量を０．２２モル当量に、ＤＭＴ−ＭＭの添加量を０．３０当量に、それぞれ変更した変更した以外は同様にして、目的物を得た。
【００７４】
［実施例６］
ＣＰ−Ａ２Ｈ（エチレンオキサイド−プロピレンオキサイド−アリルグリシジルエーテルの共重合体、平均分子量＝８０，０００、明成化学製）をＩＰＡに溶解し、ＣＰ−Ａ２Ｈのアリル基に対して、Ｓｉ−Ｈ基が０．２モル当量となるように製造例３で得られたシリコーンポリマーを添加し、酢酸カリウム、ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸をさらに加えて、５０℃で３時間反応させた。得られた反応液を超純水で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：１５ｋ）後、凍結乾燥して目的物を得た。
【００７５】
［実施例７］
製造例４で得られたエチレングリコール構造を含んだポリマーをＴＨＦに１ｗｔ％濃度で溶解し、製造例１で得られたフェニルメチルシリコーンアミンをポリマー中のエステル部位に対して０．３当量加え、８０℃で４時間撹拌した。得られた溶液を、ＴＨＦ、超純水の順で透析（スペクトラポア４、分画分子量（ＭＷＣＯ）：１２〜１４ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。
【００７６】
［実施例８］
ＫＦ−６００４（信越シリコーン製ポリエーテル変性シリコーン）をＴＨＦに溶解し、超純水で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。シロキサン部位の重量％を算出するため、得られたサンプル約０．１ｇを測り取り、融剤として炭酸Ｎａを加えて１０００℃で加熱溶融して試料の分解処理を行った。放冷後、塩酸を加えて中和処理を行い、試料が完全に溶解していることを確認した後、ＩＣＰ−ＡＥＳ（島津製作所社製、ＩＣＰＳ−８１００）測定を行い、標準液を用いて作成した検量線からサンプル中のＳｉ量を定量した。得られた結果、シロキサン部位の重量％は６０重量％であった。また、Ｓｉ元素量から算出されるシロキサン部位の分子量は１１，８００であり、ＮＭＲ測定においてポリエチレングリコール由来のピークとＳｉ−Ｍｅ由来のピークの積分比から算出したポリエチレングリコール由来の分子量は７，７００であった。
【００７７】
［実施例９］
製造例３で得られたシリコーンポリマーをＩＰＡに溶解し、酢酸カリウム、ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸、ポリエチレングリコールモノアリルエーテル（ＮＭＲの積分比でＰＥＧ／ＳｉＭｅ＝０．３４）を添加して、５０℃で３時間反応させた。得られた反応液を超純水で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：１５ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。
【００７８】
［実施例１０］
実施例１において、フェニルメチルシリコーンアミンとＤＭＴ−ＭＭを添加後に、ジメチルアミノプロピルアミンを０．１６モル当量、ＤＭＴ−ＭＭを０．２０モル当量を添加し室温で２時間さらに撹拌したこと以外は同様にして目的物を得た。
【００７９】
［実施例１１］
実施例１において、フェニルメチルシリコーンアミンとＤＭＴ−ＭＭを反応後に、シスタミンを１００モル当量、ＰｙＢＯＰ（ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム）を０．５モル当量を添加し室温で４時間さらに撹拌した操作を加えたこと以外は同様にして目的物を得た。
【００８０】
［実施例１２］
実施例１において、フェニルメチルシリコーンアミンとＤＭＴ−ＭＭを反応後に、ジエチレントリアミンを１００モル当量、ＰｙＢＯＰを０．２モル当量添加し室温で４時間さらに撹拌した操作を加えたこと以外は同様にして、目的物を得た。
【００８１】
［比較例１］
平均分子量１０，０００のヒアルロン酸を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解し、製造例５で得られたＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂の懸濁液を、ＨＡユニットのモル数に対しイオン交換樹脂の交換能換算で２倍モル等量添加した。１５分間撹拌した後、０．４５μｍのフィルターを用いて濾過を行い、濾液を凍結乾燥し、ＨＡ−ＴＢＡを白色固体として得た。
ＨＡ−ＴＢＡをＤＭＳＯに１ｗｔ％濃度で溶解し、国際公開２０１０−０５３１４０号を参考にして得られたコレステリル−６−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩（０．１０当量）、ＤＭＴ−ＭＭ（０．１５当量）を投入して、室温で２時間撹拌した。得られた溶液をＤＭＳＯ溶液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。
【００８２】
［比較例２］
比較例１において、コレステリル−６−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩を（０．１５モル当量）に、ＤＭＴ−ＭＭを（０．２２当量）に、それぞれ変更した以外は同様にして目的物を得た。
【００８３】
［比較例３］
実施例１において、ヒアルロン酸の平均分子量が５０，０００のものを使用し、フェニルメチルシリコーンアミンを（０．０１５モル当量）に、ＤＭＴ−ＭＭを（０．０３モル当量）に、それぞれ変更した以外は同様にして目的物を得た。
【００８４】
［比較例４］
フラスコにシスタミン二塩酸塩４ｇ（１７．８ｍｍｍｏｌ）、メタノール１５０ｍＬを加え、氷水浴で冷却した。この溶液にトリエチルアミン５．３９ｇ（５３．３ｍｍｏｌ）を加えて３０分間撹拌後、Ｂｏｃ２Ｏ３．８８ｇ（１７．８ｍｍｏｌ）を滴下し、３時間反応させた。反応液を濃縮し、析出した白色固体をジエチルエーテルで洗浄後、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えて、ジクロロメタンで抽出した。回収した有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。濾液を濃縮してシリカゲルカラムクロマトフラフィー（クロロホルム／メタノール＝９／１）で精製し、片側Ｂｏｃ保護シスタミンを得た。
【００８５】
コレステリルクロロホルメート（３．３７ｇ、７．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下、トリエチルアミン（１．０５ｍＬ）を加えて撹拌した。この溶液に、氷冷下で、得られた片側Ｂｏｃ保護シスタミン（５ｍｍｏｌ分）を滴下して加え、そのまま３０分間攪拌後、室温まで昇温し、一晩撹拌した。反応混合物を、超純水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下で溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／４)で精製し、目的物のフラクションを合わせて溶媒留去した。得られた残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解し、４Ｎ塩酸／酢酸エチル溶液（４０ｍＬ）を加えて室温で一晩撹拌した。生じた沈殿物を濾過し、酢酸エチルにて洗浄後、減圧下で乾燥し、ＳＳ結合含有コレステロールアミン塩酸塩（１．４ｇ）を得た。
【００８６】
平均分子量１０，０００のヒアルロン酸を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解し、製造例３で得られたＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂の懸濁液を、ＨＡユニットのモル数に対しイオン交換樹脂の交換能換算で２倍モル等量添加した。１５分間撹拌した後、濾過を行い、濾液を凍結乾燥し、ＨＡ−ＴＢＡを白色固体として得た。
ＨＡ−ＴＢＡをＤＭＳＯに１ｗｔ％濃度で溶解し、ＳＳ結合含有コレステロールアミン塩酸塩（０．１７モル当量）とＤＭＴ−ＭＭ（０．２６モル当量）を投入して、室温で２時間撹拌した。得られた溶液を、ＤＭＳＯ溶液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。
【００８７】
［比較例５］
比較例１において、コレステリル−６−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩をステアリルアミン（０．２モル当量）に、ＤＭＴ−ＭＭを（０．２２当量）に、それぞれ変更した以外は同様にして目的物を得た。
【００８８】
［比較例６］
平均分子量１０，０００のヒアルロン酸を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解し、製造例３で得られたＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂の懸濁液を、ＨＡユニットのモル数に対しイオン交換樹脂の交換能換算で２倍モル等量添加した。１５分間撹拌した後、濾過を行い、濾液を凍結乾燥し、ＨＡ−ＴＢＡを白色固体として得た。
ＨＡ−ＴＢＡをＤＭＳＯに１ｗｔ％濃度で溶解し、Ｎ，Ｎ，−ジメチルプロピルアミン（０．５５モル当量）、ＤＭＴ−ＭＭ（０．６５モル当量）を投入して、室温で２時間撹拌した。得られた溶液を、ＤＭＳＯ溶液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。
【００８９】
［比較例７］
平均分子量１０，０００のヒアルロン酸を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解し、製造例３で得られたＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂の懸濁液を、ＨＡユニットのモル数に対しイオン交換樹脂の交換能換算で２倍モル等量添加した。１５分間撹拌した後、濾過を行い、濾液を凍結乾燥し、ＨＡ−ＴＢＡを白色固体として得た。
ＨＡ−ＴＢＡをＤＭＳＯに１ｗｔ％濃度で溶解し、国際公開２０１０−０５３１４０号を参考にして得られたコレステリル−６−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩（０．２４モル当量）、ＤＭＴ−ＭＭ（０．３２モル当量）を投入して、室温で２時間撹拌した。その後、Ｎ，Ｎ，−ジメチルプロピルアミン（０．５５モル当量）、ＤＭＴ−ＭＭ（０．６５モル当量）を投入して、室温で２時間撹拌した。得られた溶液を、ＤＭＳＯ溶液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。
【００９０】
［比較例８］
平均分子量１０，０００のヒアルロン酸を１０ｍｇ／ｍＬの濃度で超純水に溶解し、製造例３で得られたＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂の懸濁液を、ＨＡユニットのモル数に対しイオン交換樹脂の交換能換算で２倍モル等量添加した。１５分間撹拌した後、濾過を行い、濾液を凍結乾燥し、ＨＡ−ＴＢＡを白色固体として得た。
ＨＡ−ＴＢＡをＤＭＳＯに１ｗｔ％濃度で溶解し、国際公開２０１０−０５３１４０号を参考にして得られたコレステリル−６−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩（０．１８モル当量）、ＤＭＴ−ＭＭ（０．２７モル当量）を投入して、室温で２時間撹拌した。その後、ジエチレントリアミンを１００モル当量、ＰｙＢＯＰを０．５モル当量添加し、室温で４時間さらに撹拌した。得られた溶液を、ＤＭＳＯ溶液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析（スペクトラポア７、分画分子量（ＭＷＣＯ）：２ｋ）し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物を得た。
【００９１】
実施例１〜１１及び比較例１〜８で製造された高分子の、親水性部位の細胞毒性（ＩＣ５０）、親水性部位の重量平均分子量（Ｍｗ）、シロキサン部位（比較例１、２、４〜８では疎水性部位）のＳＰ値と重量平均分子量（Ｍｗ）、高分子１分子当たりの核酸結合部位の導入率（ｍｏｌ％）、高分子全体に対するシロキサン部位の重量比、及び高分子の細胞毒性（ＩＣ５０）、会合体粒子の平均粒子径、ＰＤＩ、ＣｙＡ包摂量、ＢＳＡ包摂量を測定し、表１〜５に示した。
【００９２】
【表１】
2020169246.tif 000002
【００９３】
【表２】
2020169246.tif 000003
【００９４】
【表３】
2020169246.tif 000004
【００９５】
【表４】
2020169246.tif 000005
【００９６】
【表５】
2020169246.tif 000006
【００９７】
ＩＣ５０が１０００ｐｐｍ超であるヒアルロン酸、ＰＥＧ−ＰＰＯ−アリル、ＰＥＧウレタン、又はＰＥＧからなる親水性部位を備え、当該親水性部位の側鎖にシロキサン部位が導入されており、かつ高分子全体に対するシロキサン部位の重量比が５質量％〜６５質量％の範囲内である実施例１〜１２の高分子から形成された会合体粒子は、いずれもＩＣ５０が１０００ｐｐｍ超であり、細胞毒性が低く、安全性の高いナノ粒子であった。また、ＣｙＡの包摂量も充分であった。一方で、シロキサン部位を備えていない比較例１、２、４〜８の高分子は、いずれも親水性部位は細胞毒性が低いヒアルロン酸等からなるにもかかわらず、会合体粒子の細胞毒性が高かった。また、比較例３の高分子は、シロキサン部位を備えているものの、会合体粒子の細胞毒性が強く、かつＣｙＡの包摂量も非常に少なかった。比較例３の高分子の高い細胞毒性と低い包摂量は、高分子全体に対するシロキサン部位の重量比が大きすぎたためと推察された。