(57)【要約】【課題】アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療のための経口投与用医薬やアレルギー性鼻炎の発症を予防し、及び／又は症状を改善するための食品を提供すること。【解決手段】本発明は、少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）を含むコラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬を提供する。本発明は、また、前記コラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）を含むコラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
【請求項２】
前記コラーゲン加水分解物に含まれる少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙが、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌy−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐからなる群から選択されるいずれかである、請求項１に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項３】
前記コラーゲン加水分解物がジペプチドをさらに含む、請求項１又は２に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項４】
前記コラーゲン加水分解物中のトリペプチド及びジペプチドの含有率が少なくとも１０質量％である、請求項１〜３の何れか一項に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項５】
アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニの何れかである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載のコラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項７】
アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニの何れかである、請求項６に記載のアレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬に関する。より詳しくは、本発明は、コラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬に関する。さらに本発明は、コラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー性鼻炎は、鼻腔粘膜にＩ型のアレルギー反応が生じる疾患である。通年性アレルギー性鼻炎と季節性アレルギー性鼻炎（花粉症）に大別され、いずれも反復性のくしゃみ、水様性鼻漏、及び鼻閉を３主徴とする。日本におけるアレルギー性鼻炎の罹患率は３０〜４０％とも言われ、その高い有病率より「国民病」とも称される。アレルギー性鼻炎の症状（くしゃみ、水様性鼻漏、鼻閉）は、嗅覚障害、睡眠障害、集中力の低下等を引き起こし、患者の生活に少なからず支障をきたす。
【０００３】
一方、コラーゲンたんぱく質は、生体中の全たんぱく質の３割を占める主要な成分である。そのアミノ酸配列は、グリシン（Ｇｌｙ）が３残基ごとに繰り返す特徴をもつ。動物や魚に含まれるコラーゲンを、加熱・抽出・精製することによって得られたゼラチンを、さらに加水分解することでコラーゲン加水分解物を製造することができる。あるいは、生体原料を直接的に酵素処理する手法で製造される場合もある。また、加水分解の方法や程度によって分子量のコントロールが可能であることから、市場には多様な分子量のコラーゲン加水分解物が流通している。コラーゲン加水分解物は、加水分解コラーゲン、ゼラチン加水分解物、コラーゲンペプチドなどとも呼ばれている。
【０００４】
コラーゲン加水分解物やコラーゲン由来のペプチド類の経口摂取による薬理効果が報告されている。例えば、コラーゲンペプチドが血液流動性改善効果を示すこと（特許文献１）、コラーゲンやゼラチンをブロメラインなどの蛋白質分解酵素で処理して得られる分解物が骨組織の機能維持および骨折の予防に有効であること（特許文献２）、並びにコラーゲン加水分解物が新陳代謝促進作用を有することが報告されている（特許文献３）。
【０００５】
更に、特許文献４は、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）5、（Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ）2、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ａｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｓｅｒ−Ｈｙｐ−ＧｌｙおよびＰｈｅ−Ｈｙｐからなる群から選択されるペプチドまたはその薬学上許容される塩を含有する、美白促進剤またはアトピー性皮膚炎改善剤を開示する。また、白田ら（非特許文献１）は、コラーゲン由来トリペプチドがアトピー性皮膚炎の炎症を抑制する作用を有することを記載する。さらに、特許文献５は、コラーゲン由来ペプチド類を有効成分として含有するキマーゼ阻害用組成物を開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００２−３７１０１１号公報
【特許文献２】特開平１１−１２１９２号公報
【特許文献３】特開平７−２７８０１２号公報
【特許文献４】ＷＯ２０１４／１７５００１
【特許文献５】特開２０１８−３９７３７号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Hakuta A. et al. Journal of Dermatological Science, 2017, Vol.88, No.3, 357-364.
【非特許文献２】鼻アレルギー診療ガイドライン  ２０１６年版（改定第８版）、株式会社ライフ・サイエンス社発行
【非特許文献３】アトピー性皮膚炎診療ガイドライン２０１８、アレルギー  Ｖｏｌ．６７、Ｎｏ．１２８、１２９７−１３６７、２０１８年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
アレルギー性鼻炎を引き起こす抗原として、ダニ、花粉などが挙げられる。感作陽性者の鼻粘膜上に抗原が吸入され、鼻粘膜表層に分布するマスト細胞表面のＩｇＥ抗体と結合すると、抗原抗体反応が起こる。その結果放出されたヒスタミン、ロイコトエリンなどの様々な化学伝達物質が鼻粘膜の知覚神経終末や血管と反応することで、アレルギー性鼻炎の症状（くしゃみ、水様性鼻漏、鼻閉（鼻粘膜腫脹））が引き起こされる。その後、ＩＬ−５、ＩＬ−４、ＩＬ−１３などのＴｈ２サイトカイン、種々のケミカルメディエーター等によって、好酸球をはじめとするさまざまな炎症細胞の浸潤が起こる。鼻粘膜のアレルギー性炎症の進行と同時に様々な刺激に対する鼻粘膜の反応性が亢進するといわれる。アレルギー性鼻炎の原因抗原の特定には、血清中特異的ＩｇＥ抗体値検査が用いられる。
【０００９】
アレルギー性鼻炎の主要な治療法は、抗原回避、薬物療法、手術療法、及び免疫療法の４つである（非特許文献２）。抗原回避は、患者の行動が制限されるという問題がある。薬物療法は広く用いられているが対症療法に留まり、投与を中止すれば短期間で再発する。手術療法は、薬物療法への抵抗性症例に用いられるが、患者の負担は小さくなく、再発の可能性がある。また、根治的な治療を目指して開発されたアレルゲンエキスの舌下免疫療法は、安全性が高く、長期寛解が可能であると言われている。しかし、国内において治療対象となるのはスギ花粉又はダニへのアレルギーに限られる上、長期間（３年から５年の継続が望ましい）の治療が必要である。従って、患者の負担がより小さく、より短期に、アレルギー性鼻炎を予防及び／又は治療できる治療法が求められている。
【００１０】
上記特許文献４は、特定のコラーゲンペプチドがフィラグリン遺伝子発現を促進させ皮膚バリア機能を高めることにより、アトピー性皮膚炎が改善されることを記載する。非特許文献１は、コラーゲン由来トリペプチドがアトピー性皮膚炎の炎症を抑制する作用を有する可能性があること、及びアトピー性皮膚炎様の炎症を生じているヒトケラチノサイトにおいて、コラーゲン由来トリペプチド処理により、ＴＡＲＣの発現が抑制されたことを記載する。
【００１１】
アトピー性皮膚炎は、強いかゆみ、皮膚バリアの破たん、免疫暴走の３つの病態が関連する皮膚疾患であり、その定義ではアレルギーの存在は必須ではなく、診断にアレルギーの証明が必須となるアレルギー性鼻炎とは異なる（非特許文献３）。アトピー性皮膚炎の発症に特に重要であるのは皮膚の乾燥による皮膚バリア機能の破たんであることが知られている。特許文献４に記載のペプチドは、皮膚バリアの改善によりアトピー性皮膚炎の発症の可能性を低減するものであるため、皮膚に生じるアレルギーにのみ有効であると考えられる。
【００１２】
また、特許文献４には、ＯＶＡ腹腔内投与したマウスにコラーゲンペプチド投与した結果、血中ＩｇＥが低下したことが記載されている。特許文献４の実施例で測定しているＩｇＥは「総ＩｇＥ」と呼ばれるもので、ＯＶＡ抗原に限らず、皮膚から入るハウスダストやダニなどあらゆるものに反応して上昇しうるため、抗体活性が明確ではないＩｇＥといえる。そのため、特許文献４に記載のコラーゲンペプチド混合物の摂取による体内のＩｇＥ値の抑制については、皮膚バリアが高まり、皮膚内にアレルゲンが侵入しなくなることで、結果的に血中のＩｇＥ値低下が生じている可能性がある。なお、アトピー性皮膚炎の診断では血中のＩｇＥ値は参考にされる程度である。
【００１３】
アトピー性皮膚炎では、血清中のＴＡＲＣ（thymus and activation-regulated chemokine）値が重症度を反映するため、重症度評価に用いられている。一方で、アレルギー性鼻炎では、鼻粘膜等局所的にＴＡＲＣ値が上昇することが知られるのみであり、血清中ＴＡＲＣ値はアレルギー性鼻炎の重症度を反映するとは考えられていない。
【００１４】
アレルギー性鼻炎とアトピー性皮膚炎は同じＩ型アレルギーに分類されるが、両者は抗原の種類、抗原との感作の起こる部位が異なっている。また、以上のように、アレルギー性鼻炎とアトピー性皮膚炎は、発生部位、症状の種類が異なっており、検査方法も治療薬も異なる。従って、特許文献４に記載のコラーゲンペプチド及び非特許文献１に記載のコラーゲン由来トリペプチドが、アレルギー性鼻炎の治療等に有用であるかは知られていない。
【００１５】
上記特許文献５は、コラーゲン由来ペプチド類を有効成分として含有するキマーゼ阻害用組成物を開示し、キマーゼに由来する疾患の予防・治療に用いられることが記載されている。キマーゼに由来する疾患として鼻炎が挙げられているが、特許文献５に記載のキマーゼ阻害用組成物はキマーゼによって発症した全身的な諸症状の一つとして発生する鼻炎を、キマーゼの阻害を通して改善するものである。特許文献５に記載のキマーゼ阻害用組成物が、アレルギー性鼻炎の症状の改善に有効であるかは知られていない。
【００１６】
以上のように、従来のコラーゲン加水分解物において、アレルギー性鼻炎の予防、治療、症状改善などに効果があるものは報告されていない。そこで本発明の目的は、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療のための経口投与用医薬やアレルギー性鼻炎の発症を予防し、及び／又は症状を改善するための食品を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙを含むコラーゲン加水分解物を投与したアレルギー性鼻炎モデルマウス（ＣＴＰ投与群）では、くしゃみや鼻掻きの回数が減少し、アレルギー性鼻炎の症状が改善されることを見出した。また、ＣＴＰ投与群では、抗原を鼻腔に連日投与しても、くしゃみ回数や鼻掻き回数が増加しなかったことから、アレルギー性鼻炎の発症が予防されたと考えられた。また、ＣＴＰ投与群では、血中の抗原特異的ＩｇＥ値の増加の抑制も観察され、アレルギー反応そのものが抑制されていることが判明した。このような知見に基づいて本発明は完成された。
【００１８】
本発明によれば以下の発明が提供される。
［１］少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）を含むコラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
［２］前記コラーゲン加水分解物に含まれる少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙが、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌy−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐからなる群から選択されるいずれかである、［１］に記載の予防及び／又は治療薬。
［３］前記コラーゲン加水分解物がジペプチドをさらに含む、［１］又は［２］に記載の予防及び／又は治療薬。
［４］前記コラーゲン加水分解物中のトリペプチド及びジペプチドの含有率が少なくとも１０質量％である、［１］〜［３］の何れか一に記載の予防及び／又は治療薬。
［５］アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニの何れかである、［１］〜［４］のいずれか一に記載のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
［６］［１］〜［４］のいずれかに記載のコラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
［７］アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニの何れかである、［６］に記載のアレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、アレルギー性鼻炎の新たな予防及び／又は治療薬、並びにアレルギー性鼻炎の発症の予防、症状の改善、又は症状の増悪を抑制するための新たな食品を提供することができる。アレルギー性鼻炎の症状の改善とＩｇＥ値の増加抑制の２つの効果を従来の薬物療法で得ようとする場合、最低でも２種類の投薬が必要になる。たとえば、症状の改善のためにはケミカルメディエーター遊離抑制薬あるいはケミカルメディエーター受容体拮抗薬を投与する必要があり、ＩｇＥ値の増加抑制のためにはＴｈ２サイトカイン阻害剤の２種を投薬する必要がある。本発明によれば、異なる薬理作用をもつ複数の処方薬を服用したのに匹敵する効果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、アレルギー性鼻炎モデルマウスのくしゃみ回数（上図）及び鼻掻き回数（下図）を示すグラフである。水道水１００ｍＬにＣＴＰを５０ｍｇ（ＬＤ  ▲）および１８０ｍｇ（ＨＤ  ■）を溶解し、Ｄａｙ０からＤａｙ３５まで給水瓶よりマウスに自由摂取させた。コントロール（●）には、水道水のみを摂取させた。卵白アルブミン溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）は、Ｄａｙ１４からＤａｙ３５まで連日点鼻投与した。くしゃみ（上図）および鼻掻き（下図）回数は、週１回、卵白アルブミン溶液を点鼻した直後に１０分間計測した。データは、平均値±標準誤差（ｎ＝６）を示す。＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１はコントロールとの比較である。
【図２】図２は、血漿中の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抗体濃度の変化を示すグラフである。Ｄａｙ０とＤａｙ３５にマウス尾静脈より血漿を採取し、卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抗体濃度を測定した。データは、平均値±標準誤差（ｎ＝６）を示す。＊Ｐ＜０．０５はコントロールとの比較である。
【図３】図３は、アレルギー性鼻炎モデルマウスの体重のグラフである。グラフは、Ｄａｙ０を基準としたＤａｙ３５のマウス体重の変化率を示す。データは，平均値±標準誤差（ｎ＝６）を示す。＊＊Ｐ＜０．０１はコントロールとの比較である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下に記載する本発明の説明は、代表的な実施形態や具体例に基づいてなされることがあるが、本発明はそのような実施形態に限定されるものではない。なお、本明細書において「〜」を用いて表される数値範囲は「〜」の前後に記載される数値を下限値および上限値として含む範囲を意味する。また、本明細書において、特に記載しない限り、「％」等は質量基準であり、数値範囲はその端点を含むものとして記載される。
【００２２】
本発明は、少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）を含むコラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬を提供する。本明細書中、常法に従って、ペプチドのアミノ酸配列をそのＮ末端のアミノ酸残基が左側に位置し、Ｃ末端のアミノ酸残基が右側に位置するように示す。
【００２３】
本明細書の「アレルギー性鼻炎」は、鼻腔粘膜にＩ型のアレルギー反応、すなわちＩｇＥ依存型反応が生じる疾患である。アレルギー性鼻炎の症状は、反復性のくしゃみ、水様性鼻漏、鼻閉などである。アレルギー性鼻炎は、純粋にＩｇＥに依存するアレルギーであり、アレルゲンが付着した局所（鼻付近）のみに症状が現れる。本発明によれば、アレルギー性鼻炎を予防及び／又は治療することができる。
【００２４】
少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙを含むコラーゲン加水分解物は、特に製造方法が限定されるものではなく、例えば、タンパク質加水分解法、化学合成法、酵素法、発酵法などによって製造することができる。具体的には、ゼラチンまたはコラーゲンの酵素消化精製物であってもよいし、ゼラチンまたはコラーゲンの酵素消化精製物に化学合成したペプチドを添加したものであってよい。コラーゲン加水分解物は、例えば特許第３１４６２５１号公報に記載の方法で調製でき、ある程度精製したコラーゲンあるいは変性コラーゲン（ゼラチン）などを原材料として、プロテアーゼ、ペプチダーゼ等の酵素で加水分解することによって得られる。
【００２５】
少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙを含むコラーゲン加水分解物は、Ｉ型コラーゲンのペプチド結合をグリシンのアミノ末端で切断する細菌コラゲナーゼを用いて加水分解することによって得てもよい。コラーゲン加水分解物に含まれるアミノ酸配列：Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙからなるトリペプチドの種類は、加水分解の原料となるコラーゲンの種類や加水分解に使用するコラゲナーゼの種類や加水分解条件等により変化しうる。上記コラーゲン加水分解物は、アミノ酸配列：Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙからなるトリペプチドを、少なくとも１質量％、少なくとも２質量％、少なくとも３質量％、少なくとも４質量％、少なくとも５質量％、少なくとも１０質量％、少なくとも１５質量％、少なくとも２０質量％、少なくとも２５質量％、少なくとも３０質量％、又は少なくとも３５質量％含むことができる。コラーゲン加水分解物中上記トリペプチドの含有率は、例えば１〜４０質量％、１〜３５質量％、１〜３０質量％、１〜２５質量％、１〜２０質量％、２〜２０質量％、又は５〜２０質量％の範囲であってもよい。コラーゲン加水分解物中のトリペプチド含有率は、例えば特許第４０９９５４１号公報に記載の方法を用いて、高めることができる。
【００２６】
上記コラーゲン加水分解物に含まれる少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙは、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌy−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐからなる群から選択されるいずれかであってもよい。
【００２７】
本発明のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬に含まれるコラーゲン加水分解物は、例えば５００〜３０００の範囲の平均分子量を有することができ、分子量が４００より大きい高分子画分を５０〜９５％と、分子量４００以下の低分子画分を５〜５０％含むことができる。低分子画分の主成分はトリペプチド類及びジペプチド類である。分子量が８００より大きい高分子画分は、アミノ酸残基４個以上からなるペプチドからなり、最大でも分子量が１００００程度である。
【００２８】
上記コラーゲン加水分解物は、トリペプチド類及びジペプチド類を合わせて、コラーゲン加水分解物中に少なくとも１０質量％、少なくとも１５質量％、少なくとも２０質量％、少なくとも２５質量％、少なくとも３０質量％、又は少なくとも３５質量％含むことができる。コラーゲン加水分解物中トリペプチド類及びジペプチド類の含有率は、例えば１０〜５０質量％、１０〜４５質量％、１０〜４０質量％、１０〜３５質量％、１０〜３０質量％、１０〜２５質量％、又は１０〜２０質量％の範囲であってもよい。
【００２９】
上記コラーゲン加水分解物は、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ以外に、任意のコラーゲン由来トリペプチド又はジペプチドを含んでもよい。例えば、上記コラーゲン加水分解物は、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、及びＣｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）からなる群から選択されるいずれかをさらに含むことができる。Ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）は、Ｇｌｙ−Ｐｒｏが環状化したものである。
【００３０】
本発明の一態様では、トリペプチドのアミノ酸配列：Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙにおいて、Ｘはアミノ酸残基Ｐｒｏ又はＡｌａを示し、ＹはＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示すトリペプチドであってもよい。コラーゲンのアミノ酸組成は、グリシン（Ｇｌｙ）が全アミノ酸残基の約１／３を占め、次にプロリン（Ｐｒｏ）とアラニン（Ａｌａ）が多いため、上記アミノ酸配列の位置Ｘのアミノ酸残基は、プロリン（Ｐｒｏ）又はアラニン（Ａｌａ）であることが多い。
【００３１】
上記アミノ酸配列：Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙにおいて、Ｘはアミノ酸残基Ｐｒｏ又はＡｌａを示し、ＹはＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示し、トリペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、及びＧｌy−Ａｌａ−Ｐｒｏからなる群から選択されるいずれかであってもよい。
【００３２】
上記コラーゲン加水分解物は、本願明細書に具体的に列挙したコラーゲン由来トリペプチド又はジペプチドの他に、任意のコラーゲン由来トリペプチド又はジペプチドを含むことができる。
【００３３】
コラーゲン加水分解物に含まれる高分子画分および低分子画分の含有率は、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）によるサイズ排除クロマトグラフィーで分析することができる。分析条件の例を以下に記載する。例えば、カラムとしてＳｕｐｅｒｄｅｘ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ＨＲ  １０／３０（ＧＥヘルスケア）を用いることができ、１．５Ｍの塩化ナトリウムおよび５０ｍＭの塩化カルシウムを含む０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．４）水溶液を１．０ｍＬ／ｍｉｎの速度で流すことができる。これに、０．１％濃度で溶媒に溶解したコラーゲン加水分解物溶液を注入し、２１４ｎｍの吸収を検出することで得られるクロマトグラムの面積値から高分子画分および低分子画分の含有率を算出することができる。
【００３４】
コラーゲン加水分解物に含まれるトリペプチド又はジペプチドの同定は、特に限定されないが、例えば、ＨＰＬＣ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して行うことができる。
【００３５】
本発明のコラーゲン加水分解物は、非抗原性および低アレルゲン性コラーゲン加水分解物であるが、さらに種々の方法による精製処理に供することもできる。（Shinmoto H. et al., 2001, Food Sci. Technol. Res., Vol 7, No. 4, 331-332）。
【００３６】
本発明によるアレルギー性鼻炎の予防、治療及び／又は症状の改善効果は、上記コラーゲン加水分解物の摂取によって血中に出現するペプチドのうち、１種、又は２種以上の複合での薬理作用によると考えられる。コラーゲン由来の配列を保有するトリペプチド類やジペプチド類を摂取した場合、トリペプチド類やジペプチド類が高い血中移行性を示すことに加えて、摂取されたトリペプチド類の消化分解により生成した代謝物ジペプチドも高濃度で血中に出現することが報告されている（Yamamoto S. et al., 2015, Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, Vol. 79, No. 12, 2026-2033; Yamamoto S. et al., 2016, Biol. Pharm. Bull. 39, 428-434; Sontakke S. B. et al., 2016, J. Agric. Food Chem. 64, 7127-7133）。
【００３７】
すなわち、コラーゲン加水分解物を摂取すると、血中代謝物としてトリペプチド類及びジペプチド類が出現し、次にそれらが組織へと移行して生理活性を発揮することで薬理作用が現れることから、はじめからトリペプチド類などを含有するコラーゲン加水分解物では、トリペプチド類及びジペプチド類の吸収性がより向上することで、より高い薬理活性が得られると考えられる。
【００３８】
更には、平均分子量５０００のゼラチン加水分解物を摂取した場合、血中には多様なトリペプチド類、あるいはジペプチド類が代謝物として出現することが報告されている（Iwai K. et al., J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 6531-6536; Ichikawa S. et al., International Journal of Food Sciences and Nutrition, February 2010; 61(1): 52-60）。それらの代謝物はゼラチン加水分解物中の高分子画分のペプチドから生成したものであると考えられる。このことから、本発明のコラーゲン加水分解物の高分子画分のペプチドも薬理活性を有する成分の前駆体として重要な成分であると考えられる。
【００３９】
本発明のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬は、種々の剤型とすることができる。例えば、経口投与剤としては錠剤、顆粒剤、散材、カプセル剤、ソフトカプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳化剤等の液剤、凍結乾燥剤等が挙げられる。局所薬としては、噴霧剤が挙げられる。トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙは鼻粘膜から吸収されるためである。本発明のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬は、コラーゲン加水分解物の他に、医薬として許容される添加物を含むことができる。医薬として許容される添加物は、例えば安定化剤、滑剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、ｐＨ調整剤、保存剤等である。
【００４０】
本発明のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬は、有効成分であるコラーゲン加水分解物を、コラーゲン加水分解物に含まれるトリペプチド類及びジペプチド類の濃度によっても異なるが、例えば、トリペプチド類及びジペプチド類を１５質量％含有するコラーゲン加水分解物の場合、１日につき体重１ｋｇあたり１０〜１０００ｍｇ、好ましくは１００〜１０００ｍｇ、より好ましくは３００〜１０００ｍｇ、１日１回または数回に分けて投与することができる。投与量は、ペプチドの特性、罹患者の年齢、体重、症状の違い、症状の程度、剤型等により適宜調節することができる。
【００４１】
また、コラーゲン加水分解物、あるいは上記のトリペプチド類、ジペプチド類は生体構成成分であると共に、すでに長年の使用経験があるコラーゲン加水分解物に含有されている成分であることから、安全性が高いと考えられる。
【００４２】
アレルギー性鼻炎の原因物質（アレルゲン、抗原）として、花粉、室内塵、ダニ等が知られている。花粉症は、花粉を原因物質とする季節性アレルギー性鼻炎である。春のスギやヒノキの花粉症の罹患者は非常に多く、そのほか、夏のイネ科の植物や秋のブタクサなどの花粉症がある。花粉症を引き起こす花粉の例としては、スギ、ヒノキ、アカマツ、イチョウ、ネズ、ケヤキ、シラカンバ、オオヤシャブシ、コナラ、クリ、オリーブ、ハンノキ、カモガヤなどのイネ科、ヨモギやブタクサなどのキク科の花粉などがある。室内塵、ダニ等は、季節を問わず現れる通年性アレルギー性鼻炎の原因物質となる。室内塵は、ハウスダストともいい、ダニの死骸やフン、ペットの毛、花粉、真菌などを含むほこりである。通年性アレルギー性鼻炎の原因となる主なダニの例は、コナヒョウヒダニやヤケヒョウヒダニなどである。本発明の予防及び／又は治療薬は、原因物質が花粉、室内塵及びダニの何れかであるアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療に有効である。
【００４３】
[食品、機能性表示食品、特定保健用食品]
本発明は、上記のコラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品を包含する。前述のように、日本におけるアレルギー性鼻炎の罹患率は３０〜４０％と非常に高い。本発明の食品は、アレルギー性鼻炎の発症の予防及び症状の改善に有効であり、アレルギー性鼻炎の発症の予防及び症状の改善を必要とする多くの人々に用いることができる。
【００４４】
本発明の食品に含まれるコラーゲン加水分解物は、上記のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬に含まれるものと同様である。具体的には、本発明のアレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品に含まれるコラーゲン加水分解物は、少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）を含むことができる。
【００４５】
上記コラーゲン加水分解物に含まれる少なくとも１種類のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙは、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌy−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐからなる群から選択されるいずれかであってもよい。
【００４６】
上記コラーゲン加水分解物は、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ以外に、任意のコラーゲン由来トリペプチド又はジペプチドを含んでもよい。例えば、上記コラーゲン加水分解物は、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ａｌａ、及びＣｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）からなる群から選択されるいずれかをさらに含むことができる。
【００４７】
上記トリペプチドのアミノ酸配列：Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙにおいて、Ｘはアミノ酸残基Ｐｒｏ又はＡｌａを示し、ＹはＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示すアミノ酸配列からなるものであってもよく、具体的には、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、及びＧｌy−Ａｌａ−Ｐｒｏからなる群から選択されるいずれかであってもよい。
【００４８】
本発明において食品は、経口摂取可能な任意の形態であればよく、例えば、溶液、懸濁液、粉末、固体成形物などであってもよい。本発明の食品としては、上記コラーゲン加水分解物を含む錠剤、顆粒剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤及びドリンク剤等のサプリメント、あるいは上記コラーゲン加水分解物を配合した食品（飲料を含む）を挙げることができる。本発明の一態様において食品は、機能性食品または特定保健用食品である。本発明の食品は、アレルギー性鼻炎の発症の予防及び症状の改善に有効であることから、アレルギー性鼻炎の発症の予防及び症状の改善を必要とする多くの人々に用いることができる。
【００４９】
本発明の食品に含まれるコラーゲン加水分解物は、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙを、少なくとも１質量％、少なくとも２質量％、少なくとも３質量％、少なくとも４質量％、少なくとも５質量％、少なくとも１０質量％、少なくとも１５質量％、少なくとも２０質量％、少なくとも２５質量％、少なくとも３０質量％、又は少なくとも３５質量％含むことができる。コラーゲン加水分解物中上記トリペプチドの含有率は、例えば１〜４０質量％、１〜３５質量％、１〜３０質量％、１〜２５質量％、１〜２０質量％、２〜２０質量％、又は５〜２０質量％の範囲であってもよい。
【００５０】
トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙの濃度が低いコラーゲン加水分解物では、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ以外の成分、特に、加水分解の程度が低い高分子量の成分が多くなり、食品への添加に支障をきたす場合もある。そこで、所望の効能とコスト（費用）、さらには食品への添加のし易さ等を考慮して、使用するトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙを含有するコラーゲン加水分解物の純度を決めることが適当である。例えば、機能性食品においては、価格をある程度抑制したい場合があり、そのような場合には、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙの含有率は、好ましくは１０〜２５質量％であることが適当である。但し、特定保健用食品では、効果の発現をより確実にしたい場合があり、そのような場合には、トリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙの含有率は、好ましくは２５〜４０質量％であることが適当である。
【００５１】
本発明の食品に含まれるコラーゲン加水分解物は、トリペプチド類及びジペプチド類を合わせて、コラーゲン加水分解物中に少なくとも１０質量％、少なくとも１５質量％、少なくとも２０質量％、少なくとも２５質量％、少なくとも３０質量％、又は少なくとも３５質量％含むことができる。コラーゲン加水分解物中トリペプチド類及びジペプチド類の含有率は、例えば１０〜５０質量％、１０〜４５質量％、１０〜４０質量％、１０〜３５質量％、１０〜３０質量％、１０〜２５質量％、又は１０〜２０質量％の範囲であってもよい。
【００５２】
本発明の食品は、コラーゲン加水分解物を、コラーゲン加水分解物に含まれるトリペプチド類及びジペプチド類の濃度によっても異なるが、例えば、トリペプチド類及びジペプチド類を１５質量％含有するコラーゲン加水分解物の場合、１日につき体重１ｋｇあたり１０〜１０００ｍｇ、好ましくは１００〜１０００ｍｇ、より好ましくは３００〜１０００ｍｇ、１日１回または数回に分けて経口摂取することができる。
【００５３】
コラーゲン加水分解物、あるいは上記のトリペプチド類、ジペプチド類は生体構成成分であると共に、すでに長年の使用経験があるコラーゲン加水分解物に含有されている成分であることから、安全性が高いと考えられる。
【００５４】
本発明の食品は、原因物質が花粉、室内塵及びダニの何れかであるアレルギー性鼻炎の発症の予防及び症状の改善にも有効であることから、アレルギー性鼻炎の発症の予防及び症状の改善を必要とする多くの人々に用いることができる。
【００５５】
以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除および置換を行うことができる。
【実施例】
【００５６】
実施例１
（１）試験溶液の調製
試験物質としてコラーゲン加水分解物「コラーゲン・トリペプチド」（ゼライス株式会社にて作成）を使用した。上記コラーゲン加水分解物の平均分子量は約１５００であり、トリペプチド類及びジペプチド類が主成分である低分子画分を約１５％と、トリペプチドよりも分子量が大きい、アミノ酸４個以上の加水分解物からなる高分子画分を約８５％含む。
ＬＣ−ＭＳ法により、上記コラーゲン加水分解物に含まれるペプチドを分析した。実験条件は以下のとおりである。装置としてＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＹＰＬＣ  Ｈ−Ｃｌａｓｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｗｉｔｈ  ＳＱ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ２（ウォーターズ社）、カラムとしてＡＣＣＱ−ＴＡＧ  ＵＬＴＡ  Ｃ１８（ウォーターズ社、直径２．１×１００ｍｍ、粒子径１．７μｍ）を用いた。溶媒Ａに０．１％ギ酸水溶液を、溶媒Ｂとして０．１％ギ酸を含む５０％アセトニトリル水溶液を用い、カラム温度４５℃の条件で０．６ｍＬ／ｍｉｎの速度で溶媒を流した。グラジエント条件として、０〜５分まで溶媒Ａを１００％、５〜１０分まで溶媒Ｂを徐々に２５％まで上昇させた。これに０．１％で溶媒Ａに溶解したコラーゲン加水分解物水溶液を注入し、各トリペプチドの質量を検出することで分析した。
【００５７】
ＬＣ−ＭＳ法により、表１に記載のトリペプチド類及びジペプチド類が検出された。
【表１】
2020169134.tif 000003
【００５８】
表１に記載のペプチドほか、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙが、各々０．００１％〜０．０５％の範囲で検出された。
【００５９】
上記コラーゲン加水分解物において検出されたトリペプチド類及びジペプチド類の合計は、コラーゲン加水分解物中約１５質量％であった。そのうち、トリペプチド類は、コラーゲン加水分解物中約１３質量％であった。上記コラーゲン加水分解物を水道水１００ｍＬあたり、５０ｍｇ（以下、ＬＤ（Ｌｏｗ  Ｄｏｓｅ）溶液）又は１８０ｍｇ（以下、ＨＤ（Ｈｉｇｈ  Ｄｏｓｅ）溶液）溶解したものを、試験溶液として、以下の実施例で用いた。
【００６０】
実施例２
＜アレルギー性鼻炎モデルマウス（アレルゲン感作マウス）による試験＞
（１）アレルギー性鼻炎モデルマウスの作成
６週齢のＢＡＬＢ／ｃ  雌性マウス（日本クレア株式会社）を、室温２４±２℃、湿度５１±１３％、明暗サイクル（明期７：００−１９：００）の条件下である動物飼育室で飼育した。餌および水は自由摂取とし、餌は固形飼料ＣＥ−２（日本クレア株式会社）を使用した。
【００６１】
マウス購入から１週間後をＤａｙ０とし、卵白アルブミン（Ｇｒａｄｅ Ｖ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）１μｇと水酸化アルミニウムゲル（ＡＬＵＭ、ＬＳＬ）１００μｇを、２００μＬの生理食塩水に溶解し、Ｄａｙ０とＤａｙ５に腹腔内投与することにより全身感作を行った。その後、Ｄａｙ１４からＤａｙ３５まで卵白アルブミン溶液（１００ｍｇ／ｍＬ  生理食塩水）を両鼻腔に２μＬずつ、マイクロピペットを用いて連日投与した。
【００６２】
（２）試験溶液の投与
実施例１で調製した試験溶液を、Ｄａｙ０からＤａｙ３５まで給水瓶からマウスに自由摂取させた。なお、ＬＤ溶液を投与した群をＬＤ群、ＨＤ溶液を投与した群をＨＤ群とした。以下、両群を合わせてＣＴＰ投与群と記載する。コントロール群には水道水を摂取させた。試験溶液は毎日新しいものに取り替えた。マウス１匹の体重を約２３ｇ、１日の飲水量を約４．５ｍＬとすると、試験物質の一日投与量は、体重１ｋｇあたりＬＤ群で約９８ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、ＨＤ群で約３５２ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙとなる。
【００６３】
（３）鼻炎症状の観察
鼻炎症状の観察前に、マウスを観察用ケージ（２１×３１×１３ｃｍ3）に１０分間放置して馴化した。その後、卵白アルブミン溶液（１００ｍｇ/ｍＬ 生理食塩水）を２μＬずつ両鼻腔に点鼻投与後、観察用ケージに戻し、くしゃみと鼻掻き回数を１０分間計測した。鼻炎症状の観察はＤａｙ０から実験終了まで、週に１回行った。
【００６４】
（４）卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抗体の測定
Ｄａｙ０とＤａｙ３５にマウスの尾静脈より、ヘパリン処理したヘマトクリット毛細管を用いて血液を採取した。ヘマトクリット遠心機（ＫＵＢＯＴＡ３２００）を用いて血液を遠心分離（12000 rpm、５分間）し、血漿を−３０℃で保存した。その後、ＥＩＡキット（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）を用いて、卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抗体の濃度を測定した。
【００６５】
（５）統計方法
データは平均値±標準誤差で表示し、統計処理として、一元配置分散分析とTukey-Kramer法による多重比較を行った。有意差の基準は、Ｐ＜０．０５とした。
【００６６】
結果を、図１に示す。結果から示されるように、コントロール群ではアレルギー性鼻炎症状が経時的に増悪しているが、コントロール群に比較し、ＣＴＰ投与群ではアレルギー性鼻炎症状の増悪が抑制された。特に、ＨＤ群は、くしゃみ回数や鼻掻き回数がともに、コントロール群に比較し、有意に少ないことが示された。Ｄａｙ１４からＤａｙ３５まで卵白アルブミン溶液を連日投与しているが、ＨＤ群では、Ｄａｙ０からＤａｙ７までと比較して、Ｄａｙ１４以降も、くしゃみ回数や鼻掻き回数が増加していないことから、アレルギー性鼻炎の発症が予防されたと解釈することができる。
【００６７】
さらに、図２に示すように、コントロール群のマウスでは、Ｄａｙ３５において、血漿中の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抗体濃度が顕著に増加したのに対し、ＣＴＰ投与群のマウスは、コントロール群に比較し、その濃度の増加が抑制されていた。特にＨＤ群はより優れた抑制効果を示した。また、ＣＴＰ投与群では、Ｄａｙ１４からＤａｙ３５まで卵白アルブミン溶液を連日投与しても、血漿中の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抗体濃度の増加が抑制されることが示された。ＣＴＰ投与群における血漿中の卵白アルブミン特異的ＩｇＥ抗体濃度の増加の抑制は、ＣＴＰ投与群におけるくしゃみや鼻掻きのアレルギー性鼻炎症状の増悪の抑制と一致する結果である。
【００６８】
図３に示すように、コントロール群ではＤａｙ０と比較してＤａｙ３５のマウス体重が減少したのに対し、ＣＴＰ群ではＤａｙ０と比較してＤａｙ３５のマウス体重の増加が見られた。７週齢の雌性マウスは、３５日間で通常１４％程度体重が増加する。くしゃみはヒトにおいても１回で２ｋｃａｌを消費するほどの、非常に消耗性の強い症状であり、正常な体重の増加を阻害する。ＣＴＰ投与群でも正常な体重増加のレベルには戻らなかったものの、減少から増加に転じていることから、くしゃみ等による体力の消耗が抑えられたと考えられる。
以上の試験結果から、トリペプチドを含むコラーゲン加水分解物は、アレルギー性鼻炎の症状の改善及び／治療効果を有することが示された。
【図１】
2020169134.tif 000004
【図２】
2020169134.tif 000005
【図３】
2020169134.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】令和1年7月11日(2019.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬であって、前記コラーゲン加水分解物はトリペプチドおよびジペプチドを含み、前記コラーゲン加水分解物中のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）の含有率が１０質量％以上である、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
【請求項２】
アレルギー性鼻炎の発症予防及び／又は発症抑制に用いられる、請求項１に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項３】
前記コラーゲン加水分解物に含まれるトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙが、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐからなる群から選択されるいずれかである、請求項１又は２に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項４】
前記コラーゲン加水分解物が１日につき体重１ｋｇあたり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ投与される、請求項１から３のいずれか一項に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項５】
経口投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項６】
アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニのいずれかである、請求項１から５のいずれか一項に記載のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
【請求項７】
コラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品であって、前記コラーゲン加水分解物はトリペプチドおよびジペプチドを含み、前記コラーゲン加水分解物中のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）の含有率が１０質量％以上である、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項８】
アレルギー性鼻炎の発症予防及び／又は発症抑制に用いられる、請求項７に記載の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項９】
前記コラーゲン加水分解物に含まれるトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙが、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐからなる群から選択されるいずれかである、請求項７又は８に記載の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項１０】
前記コラーゲン加水分解物が１日につき体重１ｋｇあたり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ摂取される、請求項７から９のいずれか一項に記載の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項１１】
アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニのいずれかである、請求項７から１０のいずれか一項に記載のアレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月6日(2019.12.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬であって、前記コラーゲン加水分解物がＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）、Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ及びＰｒｏ−Ａｌａを含み、前記コラーゲン加水分解物中のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）の含有率が１０質量％以上であり、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐの含有率が５質量％以上である、アレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
【請求項２】
アレルギー性鼻炎の発症予防及び／又は発症抑制に用いられる、請求項１に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項３】
前記コラーゲン加水分解物が、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、及びＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群から選択されるいずれかを更に含む、請求項１又は２に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項４】
前記コラーゲン加水分解物が１日につき体重１ｋｇあたり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ投与される、請求項１から３のいずれか一項に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項５】
経口投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の予防及び／又は治療薬。
【請求項６】
アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニのいずれかである、請求項１から５のいずれか一項に記載のアレルギー性鼻炎の予防及び／又は治療薬。
【請求項７】
コラーゲン加水分解物を含む、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品であって、前記コラーゲン加水分解物がＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、Ｃｙｃｌｏ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）、Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ、Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ及びＰｒｏ−Ａｌａを含み、前記コラーゲン加水分解物中のトリペプチドＧｌｙ−Ｘ−Ｙ（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙはアミノ酸配列であり、Ｘ及びＹは独立にＧｌｙ以外のアミノ酸残基を示す）の含有率が１０質量％以上であり、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐの含有率が５質量％以上である、アレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項８】
アレルギー性鼻炎の発症予防及び／又は発症抑制に用いられる、請求項７に記載の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項９】
前記コラーゲン加水分解物が、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｈｙｐ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｓｐ、Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｈｙｐ、Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ、及びＡｌａ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙからなる群から選択されるいずれかを更に含む、請求項７又は８に記載の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項１０】
前記コラーゲン加水分解物が１日につき体重１ｋｇあたり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ摂取される、請求項７から９のいずれか一項に記載の発症予防用及び／又は症状改善用食品。
【請求項１１】
アレルギー性鼻炎のアレルゲンが花粉、室内塵及びダニのいずれかである、請求項７から１０のいずれか一項に記載のアレルギー性鼻炎の発症予防用及び／又は症状改善用食品。