(57)【要約】【課題】特定タンパク質を固定する特異性が高い多孔質ジルコニア粒子を提供する。【解決手段】タンパク質の固定に用いられる多孔質ジルコニア粒子である。ＢＥＴ法により測定された孔径分布において、累積細孔容積が全細孔容積の５０％となる細孔径Ｄ５０が３．２０ｎｍ以上６．５０ｎｍ以下であり、累積細孔容積が全細孔容積の９０％となる細孔径Ｄ９０が１０．５０ｎｍ以上１００．００ｎｍ以下である。全細孔容積は、０．１０ｃｍ３／ｇより大きい。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質の固定に用いられる多孔質ジルコニア粒子であって、
ＢＥＴ法により測定された孔径分布において、
累積細孔容積が全細孔容積の５０％となる細孔径Ｄ５０が３．２０ｎｍ以上６．５０ｎｍ以下であり、
累積細孔容積が全細孔容積の９０％となる細孔径Ｄ９０が１０．５０ｎｍ以上１００．００ｎｍ以下であるとともに、
全細孔容積が０．１０ｃｍ３／ｇより大きいことを特徴とする多孔質ジルコニア粒子。
【請求項２】
前記タンパク質は、免疫グロブリンであることを特徴とする請求項１に記載の多孔質ジルコニア粒子。
【請求項３】
前記免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＤからなる群より選択される少なくとも１種であることを特徴とする請求項２に記載の多孔質ジルコニア粒子。
【請求項４】
表面に、キレート剤が担持されていることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の多孔質ジルコニア粒子。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の多孔質ジルコニア粒子が凝集してなることを特徴とするタンパク質固定用凝集体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は多孔質ジルコニア粒子及びタンパク質固定用凝集体に関する。
【背景技術】
【０００２】
特定のタンパク質を選択的に吸着させることで、特定タンパク質を分離精製するカラムが検討されている。
例えば、特許文献１では、この目的のために多孔質ジルコニア粒子を採用した技術が開示されている。この技術では、多孔質ジルコニア粒子の表面に、タンパク質を吸着させるリガンドとしてのプロテインＡを結合させることで、選択性（特異性）を向上させている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１７−４７３６５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、特許文献１の技術は、プロテインＡを用いているため、コストが高いという課題があった。
本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであり、安価であり、しかも、特定タンパク質を固定する特異性が高い多孔質ジルコニア粒子を提供することを目的とする。本発明は、以下の形態として実現することが可能である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
〔１〕タンパク質の固定に用いられる多孔質ジルコニア粒子であって、
ＢＥＴ法により測定された孔径分布において、
累積細孔容積が全細孔容積の５０％となる細孔径Ｄ５０が３．２０ｎｍ以上６．５０ｎｍ以下であり、
累積細孔容積が全細孔容積の９０％となる細孔径Ｄ９０が１０．５０ｎｍ以上１００．００ｎｍ以下であるとともに、
全細孔容積が０．１０ｃｍ３／ｇより大きいことを特徴とする多孔質ジルコニア粒子。
【０００６】
〔２〕前記タンパク質は、免疫グロブリンであることを特徴とする〔１〕に記載の多孔質ジルコニア粒子。
【０００７】
〔３〕前記免疫グロブリンは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＤからなる群より選択される少なくとも１種であることを特徴とする〔２〕に記載の多孔質ジルコニア粒子。
【０００８】
〔４〕表面に、キレート剤が担持されていることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の多孔質ジルコニア粒子。
【０００９】
〔５〕〔１〕〜〔４〕のいずれか１項に記載の多孔質ジルコニア粒子が凝集してなることを特徴とするタンパク質固定用凝集体。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のタンパク質固定用の多孔質ジルコニア粒子は、リガンドとしてプロテインを用いていないから、低コストである。しかも、本発明の多孔質ジルコニア粒子は、Ｄ５０、Ｄ９０、及び全細孔容積が特定範囲内にあるから、選択性（特異性）が高い。
本発明の多孔質ジルコニア粒子は、固定されるタンパク質が、免疫グロブリンである場合には、選択性が非常に高い。
本発明の多孔質ジルコニア粒子は、固定されるタンパク質が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＤからなる群より選択される少なくとも１種である場合には、選択性が極めて高い。
本発明の多孔質ジルコニア粒子の表面に、キレート剤が担持されていると、選択性がより高まる。
本発明の多孔質ジルコニア粒子が凝集してなるタンパク質固定用凝集体は、安価であり、しかも選択性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】エチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸（ＥＤＴＰＡ）の推定担持構造を示す模式図である。
【図２】実験例３（実施例）の孔径分布（細孔分布）を示すグラフである。
【図３】実験例１３（比較例）の孔径分布（細孔分布）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を詳しく説明する。なお、本明細書において、数値範囲について「〜」を用いた記載では、特に断りがない限り、下限値及び上限値を含むものとする。例えば、「１０〜２０」という記載では、下限値である「１０」、上限値である「２０」のいずれも含むものとする。すなわち、「１０〜２０」は、「１０以上２０以下」と同じ意味である。
【００１３】
１．多孔質ジルコニア粒子
本発明の多孔質ジルコニア粒子は、タンパク質の固定に用いられるタンパク質固定用の多孔質ジルコニア粒子である。
（１）Ｄ５０、Ｄ９０、及び全細孔容積
多孔質ジルコニア粒子は、ＢＥＴ法により測定された孔径分布において、累積細孔容積が全細孔容積の５０％となる細孔径Ｄ５０が３．２０ｎｍ以上６．５０ｎｍ以下であり、累積細孔容積が全細孔容積の９０％となる細孔径Ｄ９０が１０．５０ｎｍ以上１００．００ｎｍ以下である。細孔径Ｄ５０は、３．３５ｎｍ以上６．３０ｎｍ以下であることが好ましく、３．５０ｎｍ以上５．００ｎｍ以下であることがより好ましい。細孔径Ｄ９０は、１０．８０ｎｍ以上５０．００ｎｍ以下であることが好ましく、１１．００ｎｍ以上３０．００ｎｍ以下であることがより好ましい。
多孔質ジルコニア粒子は、全細孔容積が０．１０ｃｍ３／ｇより大きい。全細孔容積は、０．１５ｃｍ３／ｇより大きいことが好ましく、０．３０ｃｍ３／ｇより大きいことがより好ましい。なお、全細孔容積の上限値は、特に限定されないが、通常１０ｃｍ３／ｇである。
Ｄ５０、Ｄ９０、及び全細孔容積が上記範囲内であると、吸着するタンパク質の選択性が高くなる。なお、Ｄ９０を１００．００ｎｍ以下とすることで、タンパク質の単量体が選択的に固定されやすくなる。タンパク質の単量体は１０ｎｍ程度の大きさであり、他方、タンパク質の凝集体は１００ｎｍ程度の大きさである。よって、Ｄ９０を１００．００ｎｍ以下とすることで、タンパク質の凝集体の固定を避けて、タンパク質の単量体のみが固定されやすくなる。
【００１４】
（２）測定装置、及びＤ５０、Ｄ９０の算出方法
孔径分布と細孔容積は、例えば、細孔分布測定装置（マイクロメリティックス  自動比表面積／細孔分布測定装置（ＴｒｉＳｔａｒＩＩ  島津製作所））を用いて測定できる。
ここで、この算出方法について説明する。
Ｄ５０の算出方法を説明する。まず、孔径分布のデータから、累積細孔容積５０％を挟んで、累積細孔容積５０％に最も近い２点であるＡ，Ｂの累積細孔容積（Ｘ（％））及び細孔径（Ｙ（ｎｍ））を読み取る。具体的には、Ａ（Ｘａ（％）、Ｙａ（ｎｍ））、Ｂ（Ｘｂ（％）、Ｙｂ（ｎｍ））を読み取る（但し、Ｘａ＞Ｘｂ，Ｙａ＞Ｙｂである）。そして、これらの値を用いて下記式（１）によりＤ５０が求められる。
式（１）
D50=log(Xb)+（(log(Xa)-log(Xb))*[(50-(Yb))/((Ya)-(Yb))]
同様にして、Ｄ９０を求める。すなわち、まず、孔径分布のデータから、累積細孔容積９０％を挟んで、累積細孔容積９０％に最も近い２点であるＣ，Ｄの累積細孔容積（Ｘ（％））及び細孔径（Ｙ（ｎｍ））を読み取る。具体的には、Ｃ（Ｘｃ（％）、Ｙｃ（ｎｍ））、Ｄ（Ｘｄ（％）、Ｙｄ（ｎｍ））を読み取る（但し、Ｘｃ＞Ｘｄ，Ｙｃ＞Ｙｄである）。そして、これらの値を用いて下記式（２）によりＤ９０が求められる。
式（２）
D90=log(Xd)+((log(Xc)-log(Xd))*[(90-(Yd))/((Yc)-(Yd))]
【００１５】
（３）粒子径
多孔質ジルコニア粒子の粒子径は特に限定されないが、一次粒子は、通常１０ｎｍ〜１００ｎｍであり、好ましくは、１０ｎｍ〜５０ｎｍであり、さらに好ましくは１０ｎｍ〜３０ｎｍである。一次粒子径が、この範囲内であると、多孔質ジルコニア粒子の比表面積が大幅に増大するため、タンパク質の固定量が増加する傾向にある。
【００１６】
２．タンパク質
固定の対象となるタンパク質は、特に限定されない。本発明の多孔質ジルコニア粒子は、免疫グロブリン、特に、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＤからなる群より選択される少なくとも１種を選択的に固定することに優れている。
なお、本発明において、「固定」とは、物理的固定と、化学的固定を含む。本発明の多孔質ジルコニア粒子は、その細孔内でのタンパク質の固定に、毛細管現象によりタンパク質が挿入される物理的固定と、ジルコニア表面に共有結合などの化学結合を利用した化学的固定を利用しており、高いタンパク質固定能を有している。
【００１７】
３．キレート剤
多孔質ジルコニア粒子の表面には、キレート剤が担持されていてもよい。キレート剤を担持することで、選択性がより高まる。
キレート剤は、特に限定されない。キレート剤として、下記一般式（１）で表される化合物、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＥＴＰＡ）、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸（ＤＥＴＰＰＡ）、及びそれらの塩からなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。なお、塩としては、例えば、アルカリ金属(ナトリウム等)の塩が好適に例示される。
【００１８】
【化１】
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（一般式（１）中、Ｒ１は炭素数１〜１０のアルキレン基である。また、Ｒ２〜Ｒ５は炭素数１〜１０のアルキレン基であり、互いに同一であっても異なっていてもよい。）
【００１９】
一般式（１）のＲ１における炭素数１〜１０のアルキレン基としては、例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基、イソブチレン基等が例示される。
また、Ｒ２〜Ｒ５における炭素数１〜１０のアルキレン基としては、例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基、イソブチレン基等が例示される。
【００２０】
キレート剤としては、免疫グロブリンに対する選択性をより高めるという観点から、一般式（１）で表される化合物が好ましい。一般式（１）で表される化合物の中でも、エチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸（ＥＤＴＰＡ；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａｋｉｓ（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ））が特に好ましい。
【００２１】
キレート剤の担持量は、特に限定されない。キレート剤の担持量は、免疫グロブリンに対する選択性をより高めるという観点から、ジルコニア１ｍｇあたり、０．０１μｇ〜１０μｇであることが好ましく、０．０２μｇ〜５μｇであることがより好ましく、０．０５μｇ〜３μｇであることが更に好ましい。
なお、キレート剤の担持量は、ＴＧ−ＤＴＡ（熱重量示差熱分析）の重量減少から算出できる。
【００２２】
キレート剤の担持態様は、明らかではないが、ジルコニウム原子に、キレート剤に由来する配位子が結合しているものと推測される。例えば、キレート剤がエチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸の場合には、図１の構造であると推測される。
【００２３】
４．タンパク質固定用凝集体
タンパク質固定用凝集体は、多孔質ジルコニア粒子が凝集してなる。タンパク質固定用凝集体の径（サイズ）は、特に限定されない。
凝集体の径は、通常５０ｎｍ〜２００００ｎｍであり、好ましくは、１００ｎｍ〜１５０００ｎｍであり、さらに好ましくは５００ｎｍ〜１００００ｎｍである。凝集体の径が、この範囲内であると、遠心法による沈殿分離が容易であり、精製プロセス全体の低コスト化が図れる。また、カラムとして使用する場合は、２０μｍ〜１００μｍに造粒してもよい。
【００２４】
５．多孔質ジルコニア粒子の製造方法
多孔質ジルコニア粒子の製造方法は、特に限定されない。多孔質ジルコニア粒子は、例えば、次の方法によって製造できる。ジルコンを原料として、オキシ塩化ジルコニウム（ＺｒＯＣｌ２・８Ｈ２Ｏ）溶液を得る。そして、加水分解反応により、Ｚｒ（ＯＨ）４微粒子とし、これを焼成して、多孔質ジルコニア粒子とする。
【実施例】
【００２５】
実施例により本発明を更に具体的に説明する。
１．実験Ａ
（１）多孔質ジルコニア粒子
多孔質ジルコニア粒子には、表１に記載の多孔質ジルコニア粒子を用いた。
なお、実験例１〜９が実施例に相当し、実験例１０〜１７は比較例である。比較例については、表１において、実験例の番号を示す数字の後に「１０＊」のように「＊」を付している。
【００２６】
【表１】
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【００２７】
表１において、「新日本電工」は「新日本電工株式会社」、「第一稀元素」は「第一稀元素化学工業株式会社」、「共立マテリアル」は「共立マテリアル株式会社」、「丸美陶料」は「丸美陶料株式会社」、「東ソー」は「東ソー株式会社」、「Ｚｉｒ  Ｃｈｒｏｍ」は「Ｚｉｒ  Ｃｈｒｏｍ  Ｓｅｐｅｒａｔｉｏｎｓ  Ｉｎｃ．」、「アルドリッチ」は「シグマ  アルドリッチ  ジャパン」、「信越化学」は「信越化学工業株式会社」をそれぞれ意味する。
【００２８】
（２）孔径分布と細孔容積
孔径分布と細孔容積（全細孔容積）は、マイクロメリティックス  自動比表面積／細孔分布測定装置（ＴｒｉＳｔａｒＩＩ  島津製作所）を用いて測定した。各多孔質ジルコニア粒子）を５０ｍｇ程度秤量し、８０℃で３時間脱気乾燥した物を試料として用いた。各値は、窒素吸着実験からＢＥＴ法により算出した。
Ｄ５０、Ｄ９０は、「発明を実施するための形態」の欄における「１．（１）Ｄ５０、Ｄ９０、及び全細孔容積」に記載の方法で算出した。
【００２９】
（３）ＩｇＧの固定、及びＩｇＧ量の測定
各多孔質ジルコニア粒子に対して、それぞれ次のようにして、ＩｇＧを固定し、固定されたＩｇＧ量を求めた。
多孔質ジルコニア粒子へのＩｇＧの固定は、以下のように行った。スピッツに５００μＬの１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を入れて、この液に多孔質ジルコニア粒子３ｍｇを加えた。多孔質ジルコニア粒子を十分に分散させた後、ＩｇＧ（５００μｇ／５００μＬ）を５００μＬ加えて、遮光下、４℃で一晩撹拌した。
スピッツを、１２，０００回転で１０分間遠心して、多孔質ジルコニア粒子を沈殿分離した。上澄み溶液に残存する未固定のＩｇＧ量を、プロテインアッセイ染色液（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を用い、マイクロプレートリーダー（ＩｎｆｉｎｉｔｅＦ２００ＰＲＯ，ＴＥＣＡＮ）により定量した。始めに加えたＩｇＧ量と、未固定のＩｇＧ量との差分を固定されたＩｇＧ量とした。
【００３０】
（４）実験結果
図２に実験例３（実施例）の孔径分布（細孔分布）を示す。図３に実験例１３（比較例）の孔径分布（細孔分布）を示す。図２から実験例３では、Ｄ５０が３．２０ｎｍ以上６．５０ｎｍ以下であり、かつＤ９０が１０．５０ｎｍ以上１００．００ｎｍ以下であることが分かる。他方、図３から実験例１３では、Ｄ５０が３．２０ｎｍ以上６．５０ｎｍ以下であり、Ｄ９０が１０．５０ｎｍ未満であることが分かる。
表１に結果を併記する。実施例である実験例１〜９は、次の〔１〕〜〔３〕の全ての要件を満たしている。
〔１〕細孔径Ｄ５０が３．２０ｎｍ以上６．５０ｎｍ以下である。
〔２〕細孔径Ｄ９０が１０．５０ｎｍ以上１００．００ｎｍ以下である。
〔３〕全細孔容積が０．１０ｃｍ３／ｇより大きい。
これに対して、比較例である実験例１０〜１７は以下の要件を満たしていない。
実験例１０では、〔２〕〔３〕の要件を満たしてない。
実験例１１では、〔２〕〔３〕の要件を満たしてない。
実験例１２では、〔２〕〔３〕の要件を満たしてない。
実験例１３では、〔２〕〔３〕の要件を満たしてない。
実験例１４では、〔２〕〔３〕の要件を満たしてない。
実験例１５では、〔２〕の要件を満たしてない。
実験例１６では、〔１〕〔２〕の要件を満たしてない。
実験例１７では、〔２〕〔３〕の要件を満たしてない。
実施例である実験例１〜９は、比較例である実験例１０〜１７と比べて、優れたタンパク質固定能を示した。
【００３１】
２．実験Ｂ
ＩｇＧの最大固定量を測定するため、実施例Ａと同様の操作にて、投入するＩｇＧの量を増したＩｇＧ（７５０μｇ／５００μＬ）を用い、これを５００μＬ加えて、実験Ｂを実施した。実験Ｂは、ＩｇＧの投入量以外は、実験Ａと同様に実施した。
表２に実験結果を示す。
【００３２】
【表２】
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【００３３】
全細孔容積が０．２ｃｍ３／ｇ以上の多孔質ジルコニア粒子（実験例１，２，４，５，７）では、ＩｇＧの仕込み量（投入量）が５００μｇの場合よりも、ＩｇＧの仕込み量（投入量）が７５０μｇの場合の方が、より多くのＩｇＧを固定できることが分かった。
【００３４】
３．実験Ｃ
次に、キレート剤としてのエチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸（ＥＤＴＰＡ）の担持が、タンパク質の選択性に与える影響について検討した。
【００３５】
（１）多孔質ジルコニア粒子
多孔質ジルコニア粒子には、表３に記載の次の多孔質ジルコニア粒子を用いた。
表３において、「ＲＣ１００」は、第一稀元素化学工業株式会社製の多孔質ジルコニア粒子であり、表１の実験例６と同じである。「ＵＥＰ１００」は、第一稀元素化学工業株式会社製の多孔質ジルコニア粒子であり、表１の実験例２と同じである。
表３において、「ＲＣ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）」は、第一稀元素化学工業株式会社製の多孔質ジルコニア粒子（ＲＣ１００、原料）を、０．００１２５ＭのＥＤＴＰＡ溶液で処理して得られたＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子である。
表３において、「ＵＥＰ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）」は、第一稀元素化学工業株式会社製の多孔質ジルコニア粒子（ＵＥＰ１００）を、０．００１２５ＭのＥＤＴＰＡ溶液で処理して得られたＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子である。
なお、「ＲＣ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）」の調製は以下のように行った。予め１００℃で２時間、脱気乾燥した多孔質ジルコニア粒子（ＲＣ１００）２５０ｍｇに対し、０．００１２５ＭのＥＤＴＰＡ溶液を１０ｍＬ加え、１５分脱気後、１７時間、攪拌及び／又は振とうした。その後、更に、４時間還流した後、純水で洗浄し、凍結乾燥して、ＲＣ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）を得た。
「ＵＥＰ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）」の調製も「ＲＣ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）」と同様に行った。すなわち、原料として「ＲＣ１００」の代わりに「ＵＥＰ１００」を用いた以外は、「ＲＣ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）」の場合と同様にして「ＵＥＰ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）」を調製した。
また、ＥＤＴＰＡ溶液の濃度を０．００１２５Ｍ、０．００２５Ｍ、０．００５Ｍ、０．０１Ｍに変化させた以外は、ＲＣ１００−Ｐ（０．００１２５Ｍ）と同様に行い、計４種のＰＣＳ１４０（ＳＤ）Ｐ（ＥＤＴＡ濃度）を調整した。
なお、ＥＤＴＰＡの担持量は、ＴＧ−ＤＴＡ（熱重量示差熱分析）の重量減少から算出した。すなわち、ＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子を１０ｍｇ程度秤量し、常温〜１０００℃までの重量変化を測定しつつ、示差熱分析（ＴＧ−ＤＴＡ；Ｔｈｅｒｍｏ  ｐｌｕｓ  ＴＧ８１２０，リガク）を行った。２００℃〜６００℃での重量減少量から算出した結果、多孔質ジルコニア粒子１ｍｇあたり０．０６μｇ〜２．２μｇのＥＤＴＰＡを担持していた。
【００３６】
【表３】
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【００３７】
（２）タンパク質の選択性試験
多孔質ジルコニア粒子（ＲＣ１００、ＵＥＰ１００）、ＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子（ＲＣ１００−Ｐ、ＵＥＰ１００−Ｐ）を用いて、タンパク質の選択性試験を実施した。
上記４種の各多孔質ジルコニア粒子について、ＩｇＧ、ＨＡＳ（Ａｌｂｕｍｉｎ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ）、Ｔｒｆ（Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｈｕｍａｎ）の３種のタンパク質に対して、それぞれ次の試験を実施した。
スピッツに５００μＬの１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を入れて、この液に多孔質ジルコニア粒子３ｍｇを加えた。多孔質ジルコニア粒子を十分に分散させた後、タンパク質（５００μｇ／５００μＬ）を５００μＬ加えて、遮光下、４℃で一晩撹拌した。
スピッツを、１４，０００回転で５分間遠心して、多孔質ジルコニア粒子を沈殿分離した。上澄み溶液に残存する未固定のタンパク質の量を、プロテインアッセイ染色液（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を用い、マイクロプレートリーダー（ＩｎｆｉｎｉｔｅＦ２００ＰＲＯ，ＴＥＣＡＮ）により定量した。始めに加えたタンパク質の量と、未固定のタンパク質の量との差分を固定されたタンパク質の量とした。
【００３８】
（３）実験結果
表３に結果を示す。
まず、多孔質ジルコニア粒子ＲＣ１００、及びＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子ＲＣ１００−Ｐの結果を考察する。
多孔質ジルコニア粒子ＲＣ１００には、ＩｇＧの他にも、ＨＡＳ、Ｔｒｆが固定されることが確認された。
他方、ＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子ＲＣ１００−Ｐには、ＩｇＧは固定されるが、ＨＡＳ、Ｔｒｆは固定されないことが確認された。
この結果から、多孔質ジルコニア粒子ＲＣ１００にＥＤＴＰＡを担持して、ＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子ＲＣ１００−Ｐとすることで、ＩｇＧの選択特異性が向上することが分かる。
次に、多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００、及びＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００−Ｐの結果を考察する。
多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００には、ＩｇＧの他にも、ＨＡＳ、Ｔｒｆが固定されることが確認された。ＨＡＳの固定量は、６４．３μｇであり、Ｔｒｆの固定量は、２８．５μｇであった。
他方、ＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００−Ｐには、ＩｇＧの他にＨＡＳが固定されるが、ＨＡＳの固定量は４．１μｇであった。このＨＡＳの固定量４．１μｇは、多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００の場合の６４．３μｇよりも格段に少なくなっていた。また、ＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００−Ｐには、Ｔｒｆは固定されないことが確認された。
この結果から、多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００にＥＤＴＰＡを担持して、ＥＤＴＰＡ担持の多孔質ジルコニア粒子ＵＥＰ１００−Ｐとすることで、ＩｇＧの選択特異性が向上することが分かる。
【００３９】
４．実施例の効果
Ｄ５０、Ｄ９０、及び全細孔容積が特定範囲内にある多孔質ジルコニア粒子は、タンパク質の一例としてのＩｇＧを選択的に固定できる。
多孔質ジルコニア粒子の表面に、キレート剤の一例としてのＥＤＴＰＡが担持されていると、選択性がより高まる。
【００４０】
＜他の実施形態（変形例）＞
なお、この発明は上記の実施例や実施形態に限られるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において種々の態様において実施することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明の多孔質ジルコニア粒子は、抗体分離精製に用いる場合に、ジルコニア結晶相が持つ、耐薬品性、高い構造強度、焼成による再生利用可能性など、従来技術にはない有利な効果を奏する。よって、抗体製品の製造プロセスの低コスト化に大きく貢献するものと期待される。抗体医薬を始めとする抗体の精製と分離に利用されるカラム製品としての応用としてのみならず、食品中アレルゲン等の特異的なタンパク質の除去への利用も考えられる。
【図１】
2020116530.tif 000007
【図２】
2020116530.tif 000008
【図３】
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