(57)【要約】      （修正有）【課題】細胞遊走、特に樹状細胞及び腫瘍細胞の遊走を調節するための、特に抗腫瘍ワクチン接種、自己免疫疾患の処置、及び転移防止の方法の提供。【解決手段】リソソームカルシウムチャネルＭｃｏｌｎ−１を調節する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞遊走を調節するための使用のためのＭｃｏｌｎ−１を調節する分子。
【請求項２】
調節分子がＭｃｏｌｎ−１のアクチベータであり、それにより、細胞遊走が増強される、請求項１記載の使用のための分子。
【請求項３】
細胞が、樹状細胞、特に未成熟樹状細胞である、請求項２記載の使用のための分子。
【請求項４】
ワクチン接種、特に抗腫瘍ワクチン接種における使用のための、請求項３記載の使用のための分子。
【請求項５】
自己免疫疾患を処置するための使用のための、請求項３記載の使用のための分子。
【請求項６】
感染症を処置するための使用のための、請求項３記載の使用のための分子。
【請求項７】
Ｍｃｏｌｎ−１を調節する分子が、Ｍｃｏｌｎ−１に対して指向する、アゴニスト活性を有する抗体、及びＭｃｏｌｎ−１を活性化する小分子もしくはペプチド、例えばＭＬ−ＳＡ１、ＳＦ−２２、及びＳＦ−５１などからなる群より選択されるアクチベータである、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用のための分子。
【請求項８】
調節分子がＭｃｏｌｎ−１の阻害剤であり、それにより、細胞遊走が防止又は減少される、請求項１記載の使用のための分子。
【請求項９】
細胞が腫瘍細胞である、請求項８記載の使用のための分子。
【請求項１０】
転移を防止又は減少させるための使用のための、請求項９記載の使用のための分子。
【請求項１１】
Ｍｃｏｌｎ−１を調節する分子が、Ｍｃｏｌｎ−１に対して指向する、アンタゴニスト活性を有する抗体、Ｍｃｏｌｎ−１の発現を阻害又は減少させるオリゴヌクレオチド、例えばアンチセンス、ｓｉＲＮＡ、又はｓｈＲＮＡなど、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的である、アンタゴニスト活性を有するアプタマー、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的であるカルシウムチャネル遮断剤、Ｍｃｏｌｎ−１を阻害又は遮断するペプチド又は小分子、例えばＭＬ−ＳＩ１、ＭＬ−ＳＩ２、及びＭＬ−ＳＩ３、スフィンゴミエリン、又はベラパミルなどからなる群より選択される阻害剤又は遮断剤である、請求項８〜１０のいずれか一項記載の使用のための分子。
【請求項１２】
Ｍｃｏｌｎ１の活性に対する分子の効果を決定すること、及び、細胞がＭｃｏｌｎ１の活性を増加又は減少させる場合、それを選択することを含む、細胞遊走を調節することが可能な分子を同定するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、医学、特に腫瘍学及び自己免疫疾患の処置に関する。
【０００２】
発明の背景
免疫活性化は、樹状細胞の活性化及び成熟を誘導する。樹状細胞（ＤＣ）は、抗原提示細胞として作用する免疫系の一部である。それらは、抗原物質を処理し、それらの細胞表面上にそれを提示する。抗原物質は、微生物（例えばウイルス又は細菌など）から、又は自己抗原からでありうる。
【０００３】
未成熟ＤＣは、微生物抗原を検出した後に活性化される。抗原タンパク質は、ＤＣにより分解され、そのフラグメントが、主要組織適合性分子（ＭＨＣ）との結合において、それらの表面上に提示される。活性化時、ＤＣはリンパ節に遊走し、これらの抗原をＴリンパ球に提示する。これは、適応免疫応答の最初の工程である。
【０００４】
癌免疫療法は、腫瘍抗原に対して向けられた免疫応答を誘発することを目的とする。１つのアプローチは、インビボで治療的Ｔ細胞を誘発するための、アジュバントと一緒での抗原の提供によるワクチン接種を介している。ＤＣは、それらの高い抗原提示特性のため、この状況において使用されてきたが、それによって、それらは、腫瘍関連抗原の送達のための天然薬剤になる。特に、エクスビボで生成されたＤＣは、抗原を載せて、患者に再注入することができる。あるいは、抗原は、エクスビボでの細胞操作を必要とせずに、インビボでＤＣを標的とすることができる（Palucka & Bachereau, Nat Rev Cancer, 2012, 12, 265；Tacken et al, Nat Rev Immunol, 2007, 7, 790）。しかし、１つの限定は、患者に注射されたＤＣが、リンパ器官に非効率的に遊走することである（抗腫瘍免疫を誘発するために要求されるプロセス）。
【０００５】
ＤＣは、自然免疫及び適応免疫において、いくつかの機能を有する。特に、ＤＣは、中枢リンパ器官において、及びその周囲において、抗原特異的な非応答又は寛容を誘導するという証拠が増加している。特に、未成熟ＤＣは、Ｔ細胞枯渇を介して、あるいは調節及び／又はサプレッサーＴ細胞の増殖を誘導することにより、寛容を誘導する。したがって、それらは、自己免疫疾患、例えば糖尿病、関節炎、及び自己免疫性心筋炎などの処置において使用することができる寛容原性特性を有する（Steinman et al, Annu Rev Immunol, 2003, 21, 685-711；Xiao et al, J Immunother, 2006, 29, 465-471；van Duivenvoorde et al, J Immunol, 2007, 1506-1515；Valaperti et al, Vaccine, 2013, 31, 4802-4811；Tbarozzi et al, Clin Exp Immunol, 2012, 171, 135-146）。従って、この状況において、リンパ節へのＤＣの、特に未成熟ＤＣの遊走を増強することが有利でありうる。
【０００６】
ＤＣは、遊走が必須である唯一の細胞ではない。実際に、細胞遊走は、胚発生、創傷治癒、及び転移のための中心的なプロセスである。
【０００７】
細胞が遊走する機構の理解は、例えば、侵襲性腫瘍細胞を制御するための新たな治療戦略の開発に導きうる。例えば、リンパ系への侵入によって、局所及び遠隔リンパ節への、そして、最後には、身体の他の部分への腫瘍細胞の輸送を可能にする。癌細胞は、原発腫瘍の近くのリンパ節に広がり、次に播種しうる。これは、癌についての転移の最も一般的な経路である。従って、転移を回避するために、癌細胞の遊走を減少又は防止することが有利でありうる。しかし、細胞遊走を阻害することにより、癌の拡散を防止する試みは、これまで成功していない。
【０００８】
興味深いことに、癌細胞は、ＤＣと遊走特性を共有する。特に、ポドソーム又はインバドソームは円筒形であり、アクチンリッチ構造は、遊走細胞における分布の分極パターンを呈する。それらの主な目的は、細胞の運動性及び浸潤に関連づけられる。多くの異なる特殊化細胞は、これらの動的構造を示す（例えば侵襲性の癌細胞など、及び特定の免疫細胞、例えばＤＣなど）（Gimona et al, Current opinion in cell biology 20 (2): 235-41）。
【０００９】
発明の概要
本発明者らは、ＤＣ遊走の調節におけるリソソームの予想外の役割を発見した。発明者らは、ＤＣの活性化によって、ＤＣ後部に局在するアクチンケーブルのパッチの形成を誘発することにより、それらの遊走及び持続性が増加すること、そして、リソソームが、遊走ＤＣにおいてこれらのアクチン構造に堅固に並置されていることを見出し、それらが、アクチン動態及びＤＣ遊走の調節において役割を有することを示した。実際に、リソソーム生合成及び分泌を遮断することにより（ＴＦＥＢ、リソソーム生合成を制御する転写因子のサイレンシングにより）、本発明者らは、ＤＣの後部でのアクチン重合の喪失に関連付けられる、ＤＣ遊走の不良を観察し、リソソーム機能及び／又は分泌が、アクチン分布及びＤＣ移行の組織化を制御することを示唆する。特に、本発明者らは、リソソームカルシウムチャネルＭｃｏｌｎ−１が、エキソビボ又はインビボのいずれかで、ＤＣ遊走を制御すること、即ち、ＤＣ遊走が、特に未成熟ＤＣにおいて、Ｍｃｏｌｎ−１が阻害された場合に減少し、反対に、Ｍｃｏｌｎ−１が活性化された場合に増強されることを見出した。Ｍｃｏｌｎ−１は、細胞後部でのアクチン重合のために、並びに、迅速で持続的なＤＣ遊走のために要求される。
【００１０】
本発明は、細胞遊走を調節するための使用のための、Ｍｃｏｌｎ−１を調節する分子に関する。
【００１１】
第１の態様において、調節分子はＭｃｏｌｎ−１のアクチベータであり、それは、従って、細胞遊走を増強する。好ましくは、その細胞はＤＣである。
【００１２】
Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、ワクチン接種、特に抗腫瘍ワクチン接種（特に成熟ＤＣを用いた）において、又は（特に成熟ＤＣを用いて）自己免疫疾患を処置するために、及び（特に成熟ＤＣを用いて）感染症を処置するために使用することができる。
【００１３】
特に、Ｍｃｏｌｎ−１を調節する分子は、Ｍｃｏｌｎ−１に対して向けられた、アゴニスト活性を有する抗体、又はＭｃｏｌｎ−１を活性化する小分子もしくはペプチド（例えばＭＬ−ＳＡ１、ＳＦ−２２、及びＳＦ−５１など）からなる群より選択されるアクチベータでありうる。
【００１４】
第２の態様において、調節分子は、Ｍｃｏｌｎ−１の阻害剤であり、それは、従って、細胞遊走を損なう。好ましくは、その細胞は腫瘍細胞である。
【００１５】
従って、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、癌を処置する、特に転移を防止又は減少させるために使用することができる。
【００１６】
特に、Ｍｃｏｌｎ−１を調節する分子は、Ｍｃｏｌｎ−１に対して向けられ、アンタゴニスト活性を有する抗体、Ｍｃｏｌｎ−１の発現を阻害するか又は減少させるオリゴヌクレオチド（例えばアンチセンス、ｓｉＲＮＡ、又はｓｈＲＮＡなど）、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的であり、アンタゴニスト活性を有するアプタマー、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的であるカルシウムチャネル遮断剤、Ｍｃｏｌｎ−１を阻害又は遮断するペプチド又は小分子（例えばＭＬ−ＳＩ１、ＭＬ−ＳＩ２、及びＭＬ−ＳＩ３、スフィンゴミエリン、又はベラパミルなど）からなる群より選択される阻害剤又は遮断剤である。
【００１７】
最後に、本発明は、細胞遊走を調節することが可能である分子について同定又はスクリーニングするための方法であって、Ｍｃｏｌｎ−１の活性に対する分子の効果を決定すること、及び、分子を選択すること（それが、Ｍｃｏｌｎ−１の活性を増加又は減少させる場合）を含む方法に関する。場合により、それは、細胞遊走又は速度に対する選択された分子の効果を決定する、あるいは、細胞遊走又は速度を増加又は減少させる分子を選択する工程をさらに含んでもよい。
【００１８】
発明の詳細な説明
Ｍｃｏｌｎ−１は、また、現在、ムコリピン１又はＴＲＰＭＬ−１（一過性受容体電位陽イオンチャネル、ムコリピンサブファミリー）と名付けられている。それは、後期エンドソーム及びリソソーム中に局在化するＣａ２＋チャネルである。それは、ＴＲＰＭＬチャネルの小ファミリー（３つのメンバーを含む）（ＴＲＰイオンチャネルの大きなタンパク質ファミリーのサブグループ）に属する。Ｍｃｏｌｎ−１欠損は、ＩＶ型ムコリピドーシスを起こす。
【００１９】
Ｍｃｏｌｎ−１は、いくつかのデータベース（即ち、ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｎｏ  Ｑ９ＧＺＵ１及びＧｅｎｅ  ＩＤ  Ｎｏ  ５７１９２）に記載されている。参照配列が、Ｇｅｎｂａｎｋ  において、ｍＲＮＡについてはＮＭ＿０２０５３３の下に、タンパク質についてはＮＰ＿０６５３９４の下に開示されている。
【００２０】
簡単には、本発明者らは、細胞遊走、特にＤＣ遊走の制御のための重要な因子としてＭｃｏｌｎ−１を同定した。具体的には、細胞遊走は、特に未成熟ＤＣにおいて、Ｍｃｏｌｎ−１が阻害された場合に減少し、反対に、Ｍｃｏｌｎ−１が活性化された場合に増強される。本発明者らは、Ｍｃｏｌｎ−１が、細胞後部のアクチン重合のために、及び、ＤＣの迅速で持続的な遊走のために要求されることを実証した。本発明者らは、また、腫瘍細胞遊走を減少させるＭｃｏｌｎ−１阻害剤の能力を実証する。
【００２１】
従って、Ｍｃｏｌｎ−１は、細胞遊走を制御するための良好な治療標的である。また、Ｍｃｏｌｎ−１は、リソソームに局在するため、その管腔ドメインは、細胞外の化合物に直接アクセスすることができる。したがって、Ｍｃｏｌｎ−１モジュレータが細胞透過性である絶対的な必要性はない。最後に、Ｍｃｏｌｎ１破壊的変異はＩＶ型ムコリピドーシス（これは非致死的なリソソーム蓄積疾患である）を起こすため、Ｍｃｏｌｎ１モジュレータを用いた治療には、毒性がないか、又は限られている。
【００２２】
次に、本発明は、細胞遊走を調節するための使用のためのＭｃｏｌｎ−１モジュレータに、細胞遊走を調節する薬物の調製のためのＭｃｏｌｎ−１モジュレータの使用に、又は、細胞遊走を調節するための方法（それにおいて、Ｍｃｏｌｎ−１モジュレータは、被験者に投与される）に関する。好ましい実施形態において、Ｍｃｏｌｎ−１モジュレータは、Ｍｃｏｌｎ−１に関して選択的でありうる。それは、Ｍｃｏｌｎ−１モジュレータが、ＴＲＰＭＬ−２及び／又はＴＲＰＭＬ−３と比較し、ＴＲＰＭＬ−１に対してより大きな有効性（例えば、少なくとも１０、１００、又は１０００倍）を有することを意味する。
【００２３】
第１の態様において、本発明は、細胞遊走をインビボで増加又は増強することが可能であるＭｃｏｌｎ−１アクチベータに関する。この状況において、本発明は、細胞遊走を増加又は増強するために使用されるＭｃｏｌｎ−１アクチベータ、細胞遊走を増加又は増強する薬物の調製のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータの使用、あるいは、細胞遊走を増加又は増強するための方法（それにおいて、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、被験者に、好ましくは、その治療的に効果的な量で投与される）に関する。
【００２４】
Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータを、増加又は増強された細胞遊走からの治療的利益を有することができる、任意の疾患又は障害を処置するために使用することができる。「増加」又は「増強」により、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータの非存在において測定された細胞遊走と比較した、少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０%だけ増加した細胞遊走を指すことを意図する。細胞遊走により、細胞速度、遊走細胞の割合、又はこれら２つの基準の組み合わせを意図することができる。細胞遊走は、当業者に公知の任意の方法により、例えば、速度を測定するための、Faure-Andreらにより詳述される、マイクロチャネルを使用した方法により決定することができる（Faure-Andre et al, 2008, Science, 322, 1705-10）。
【００２５】
好ましい態様において、細胞はＤＣである。非常に特定の態様において、それは、未成熟ＤＣでありうる。実際に、本発明者らは、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータが、未成熟な状態を保ちながら、成熟ＤＣと同様に遊走する能力を、未成熟ＤＣに与えることができることを明らかに実証している。
【００２６】
ＤＣは免疫系の見張り（センチネル）であり、多くのワクチン接種プロトコールにおいて、特に抗腫瘍ワクチン接種の状況において使用されるため、ＤＣ遊走は、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータを用いて細胞を処置することにより増加されうる。したがって、本発明は、ワクチン接種における使用のための、特に、抗腫瘍ワクチン接種のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータに、又は、ワクチン、好ましくは抗腫瘍ワクチンの調製のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータの使用に関する。ＤＣの遊走を増加させるＭｃｏｌｎ−１アクチベータの能力のため、それによって、抗腫瘍ワクチン接種の間での、リンパ器官への非効率なＤＣ遊走の認められた限定が克服されうる。
【００２７】
本発明は、抗腫瘍ワクチンとの組み合わせにおける、癌を処置するための使用のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータに、又は、抗腫瘍ワクチンとの組み合わせにおいて、癌を処置するための薬物の製造のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータの使用に関する。特に、前記抗腫瘍ワクチンは、腫瘍抗原、特に腫瘍抗原が負荷された、又は、腫瘍抗原をコードするＤＣを含む。それは、また、抗腫瘍ワクチンの治療的な効率を改善するためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータに関する。
【００２８】
これは、抗腫瘍ワクチン接種の状況において特に該当する。この状況において、腫瘍抗原が患者に投与される。それらは、事前にエクスビボでＤＣに負荷されるか、又は直接投与されることができる。
【００２９】
抗腫瘍ワクチン接種のために有用な腫瘍抗原は、当技術分野において周知である。その非網羅的なリストは、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＡＧＥ（即ち、１、２、３、又は１２）、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ、ＧＰ１００、Ｍｅｌａｎ−Ａ／Ｍａｒｔ−１、チロシナーゼ、マンマグロビンＡ、ｐ５３、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ヒト上皮成長因子受容体−２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、リビン、スルビビン、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌抗原又は炭水化物抗原（ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、及びＣＡ１９−９）、βカテニン−ｍ、βアクチン／４／ｍ、ミオシン／ｍ、ＨＳＰ７０−２／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０Ｊ、及びムチン−１（ＭＵＣ−１）を含む。また、腫瘍溶解物又はアポトーシスデブリを抗原として使用することができる。総説については、Even-Desrumeaux et al, 2011, Cancers, 3, 2554-2596；Buonaguro et al, 2011, Clin Vaccine Immunol, 18, 23-34を参照のこと。
【００３０】
いくつかのワクチン戦略が開発されており、以下のグループに要約することができる：腫瘍抗原（場合により、ＤＣ受容体に融合されている）の直接投与、ＤＣに負荷された腫瘍抗原の投与、又は腫瘍抗原をコードする核酸がトランスフェクトしたＤＣの投与。ＤＣベースのワクチンは、最も有望な戦略の１つを表す。総説については、Tacken et al, 2007, Nature Review immunology, 7, 790-802を参照のこと。
【００３１】
特定の態様において、ＤＣは、処置されるべき患者からの自家ＤＣである。従って、本発明は、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータにより処理された自家ＤＣを含む医薬組成物、又はＤＣ及びＭｃｏｌｎ−１アクチベータを含むキットに関する。場合により、それは、ワクチンアジュバントをさらに含んでもよい。
【００３２】
別の特定の態様において、本発明は、腫瘍抗原及びＭｃｏｌｎ−１アクチベータを含む医薬組成物、又は、腫瘍抗原及びＭｃｏｌｎ−１アクチベータを含むキットに関する。場合により、それは、ワクチンアジュバントをさらに含んでもよい。
【００３３】
異なる治療的な使用において、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、自己免疫疾患又は障害を処置又は防止するために使用することができる。実際に、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、それは、共刺激分子をアップレギュレートしないが、ＤＣ遊走を増加又は増強するため、免疫の状況において寛容を誘導することは興味深いであろう。実際に、例えば、糖尿病マウスにおけるＤＣ注射が自己免疫を阻害することが示されている（Richer at al, PLos One, 7, e31153）。同様に、有望な結果が、糖尿病、関節炎、及び自己免疫性心筋炎において観察されている（Steinman et al, Annu Rev Immunol, 2003, 21, 685-711；Xiao et al, J Immunother, 2006, 29, 465-471；van Duivenvoorde et al, J Immunol, 2007, 1506-1515；Valaperti et al, Vaccine, 2013, 31, 4802-4811；Tbarozzi et al, Clin Exp Immunol, 2012, 171, 135-146）。従って、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータを用いた処置によって、未成熟ＤＣの遊走特性を増加させ、それにより、寛容を誘導し、自己免疫反応を低下又は防止することができる。
【００３４】
したがって、本発明は、自己免疫疾患又は障害を処置するための使用のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータ、あるいは、自己免疫疾患又は障害を処置するための薬物の調製のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータの使用に関する。それは、また、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータの治療的に効果的な量を投与することを含む、自己免疫疾患又は障害を処置するための方法に関する。
【００３５】
例えば、自己免疫疾患又は障害は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、自己免疫性心筋症、急性播種性脳脊髄炎、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、バース症候群、クローン病、グレーブス病、自己免疫性溶血性疾患、自己免疫性肝炎、ＩｇＡ腎症、免疫、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、川崎病、全身性エリテマトーデス、顕微鏡的多発性血管炎、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、骨盤内炎症性疾患、天疱瘡、多発筋痛リウマチ、原発性胆汁性肝硬変；原発性硬化性胆管炎、乾癬、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、甲状腺炎、潰瘍性大腸炎、自己免疫性リンパ球増殖症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、ベーチェット病、セリアック病疾患、寒冷凝集素疾患、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、胃腸類天疱瘡、グッドパスチャー症候群、ギランバレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、混合性結合組織病、多発性筋炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、及び血管炎、例えばチャーグ・ストラウス症候群、顕微鏡的多発性血管炎、及びウェゲナー肉芽などを含む非網羅的な群より選択される。特定の態様において、自己免疫疾患は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、及び自己免疫性心筋症からなる群より選択される。
【００３６】
本発明は、また、感染性疾患を処置するための使用のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータに、又は感染性疾患を処置するための薬物の調製のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータの使用に関する。それは、また、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータの治療的に効果的な量を投与することを含む、感染性疾患を処置するための方法に関する。この疾患は、ウイルス感染症又は細菌感染症でありうる。
【００３７】
より一般的な態様において、本発明は、薬物としての使用のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータに、又は薬物の製造のためのＭｃｏｌｎ−１アクチベータの使用、又はＭｃｏｌｎ−１アクチベータを含む医薬的組成物に関する。Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、追加の薬物との組み合わせにおいて使用することができる。
【００３８】
Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、Ｍｃｏｌｎ−１活性を増加させることが可能である任意の分子でありうる。Ｍｃｏｌｎ−１活性は、当業者に公知である任意の方法により、例えば、（Shen et al., 2012, Nat. Comm., 3:731）において決定することができる。好ましくは、Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、分子の非存在下における活性と比較した場合、Ｍｃｏｌｎ−１の活性を少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０%だけ増加させることができる分子である。用語「アクチベータ」及び「アゴニスト」を使用することができ、互換し得る。活性は、例えば、カルシウム透過性を測定することにより測定することができる。
【００３９】
Ｍｃｏｌｎ−１アクチベータは、Ｍｃｏｌｎ−１に対して向けられた、アゴニスト活性を有する抗体、及びＭｃｏｌｎ−１を活性化する小分子又はペプチド（例えばＭＬ−ＳＡ１、ＳＦ−２２、及びＳＦ−５１など）からなる群より選択することができる。
【００４０】
小分子は、特に、分子量が１０００Da未満の小さな有機分子を指す。小分子及び他の薬物候補を、例えば、コンビナトリアルライブラリー及び天然産物ライブラリーから、当技術分野において公知の方法、又はそれらのＭｃｏｌｎ−１アゴナイズ活性についてのスクリーニング方法を使用して容易に得ることができる。合成化合物ライブラリーは、多数の企業（Maybridge Chemical Co.（Trevillet, Cornwall, UK）、Comgenex（Princeton, N. J.）、Brandon Associates（Merrimack, N.H.）、及びMicrosource（New Milford, Conn.）を含む）から商業的に入手可能である。コンビナトリアルライブラリーが、入手可能であるか、又は公知の合成技術に従って調製することができる。あるいは、細菌、真菌、植物、及び動物の抽出物の形態での天然化合物のライブラリーは、例えば、Pan Laboratories（Bothell, Wash.）及びMycoSearch（ＮＣ）から入手可能であるか、又は当技術分野において周知の方法により容易に産生可能である。さらに、固相に付着したか、又は溶液中のアミノ酸の全ての可能な組み合わせからなるランダムペプチドライブラリーも、アゴニストとして作用するペプチドを同定するために使用することができる。
【００４１】
アクチベータは、ＭＬ−ＳＡ１（Sigma-Aldrich Ｃａｔ  ＃  ＳＭＬ０６２７；Tocris Bioscience Ｃａｔ  ＃  ４７４６）、ＳＦ−２２（５−クロロ−Ｎ−（２−ピペリジン−１−イルフェニル）チオフェン−２−スルホンアミド）、及びＳＦ−５１（２−［２−オキソ−２−（２，２，４−トリメチルキノリン−１−イル）エチル］イソインドール−１，３−ジオン）からなる群より選択することができる。
【００４２】
Ｍｃｏｌｎ−１に対して向けられ、アゴニスト活性を有する抗体は、例えば、ヒトＭｃｏｌｎ−１又はその免疫原性フラグメントを含む組成物を用いて非ヒト哺乳動物を免疫化すること；場合により、Ｍｃｏｌｎ−１又はその免疫原性フラグメントに結合する抗体を選択すること、及び、Ｍｃｏｌｎ−１の活性を増加させる抗体を選択することを含む、方法により調製することができる。モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体の調製は、当技術分野において周知であり、多数の利用可能な技術のいずれかを使用することができる（例、Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975)；Kozbor et al., Immunology Today 4: 72 (1983)；Cole et al., pp. 77-96 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985)を参照のこと）。単鎖抗体の産生のための技術（米国特許第４，９４６，７７８号）を、所望のポリペプチドへの抗体を産生するために適応させることができる。また、トランスジェニックマウス、又は他の生物（例えば他の哺乳動物など）を使用し、ヒト化抗体、キメラ抗体、又は同様に改変された抗体を発現させてもよい。あるいは、ファージディスプレイ技術を使用し、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びヘテロマーＦａｂフラグメントを同定することができる（例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)；Marks et al., Biotechnology 10:779-783 (1992)を参照のこと）。
【００４３】
本明細書において使用する通り、用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は、同じ意味を有し、本発明において区別せずに使用される。用語「抗体」は、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、即ち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。抗体は、抗体の任意の種類、好ましくはモノクローナルを含む。それらは、例えば、ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）又はＶＨＨ（ラクダからの重鎖可変ドメイン抗体）でありうる。抗体フラグメント又はそれらの誘導体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄＡｂ、相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、線形抗体、単鎖抗体分子、ミニボディ、ダイアボディ、及び抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含む。
【００４４】
より一般的には、本発明は、さらに、Ｍｃｏｌｎ１の活性に対する分子の効果を決定すること、及び、その分子を選択すること（それが、Ｍｃｏｌｎ１の活性を増加させる場合）を含む、細胞遊走、特にＤＣ遊走を増加又は増強するのに適切である分子を選択又は同定するための方法に関する。この方法は、さらに、ＤＣ遊走に対する選択分子の効果を決定し、その分子を選択する（それが、ＤＣ遊走を増加させる場合）工程を含みうる。そのようなスクリーニング方法は、ＵＳ２００３／０６４３６３において、Ｍｃｏｌｎ−１について開示されている。また、陽イオンチャネルのモジュレータをスクリーニングするための方法が開示されており、Ｍｃｏｌｎ−１に、特にＷＯ  ２００４／０３９９４１におけるＴＲＰＭ４ｂについて；ＷＯ  ２００４／０７６６３２におけるＴＲＰＭ５について；ＷＯ２００７／０４１６８７における、及びＷＯ２０１１／０７２２７５におけるＴＲＰＭ７について；ＷＯ２００７／１４０３０８におけるＴＲＰＭ４について；ＷＯ２００６／０２９１４２におけるＴＲＰＭ８について、当業者により簡単に適応されることができる。
【００４５】
第２の態様において、本発明は、インビボで細胞遊走を減少させることが可能であるＭｃｏｌｎ−１阻害剤又は遮断剤に関する。この状況において、本発明は、細胞遊走を減少させるために使用されるＭｃｏｌｎ−１阻害剤又は遮断剤、細胞遊走を減少させる薬物の調製のためのＭｃｏｌｎ−１阻害剤又は遮断剤の使用、又は細胞遊走を減少させるための方法に関し、ここにおいて、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤又は遮断剤は、被験者に、好ましくは、その治療的に効果的な量で投与される。
【００４６】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、減少した細胞遊走からの治療的利益を有することができる、任意の疾患又は障害を処置するために使用することができる。「減少」により、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤又は遮断剤の非存在において測定された細胞遊走と比較した、少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０%だけ減少した細胞遊走を指すことを意図する。細胞遊走により、細胞速度、遊走細胞の割合、又はこれら二つの基準の組み合わせを意図することができる。細胞遊走は、当業者に公知の任意の方法により、例えば、速度を測定するための、Faure-Andreらにより詳述される、マイクロチャネルを使用した方法により決定することができる（Faure-Andre et al, 2008, Science, 322, 1705-10）。用語「阻害剤」、「遮断剤」、及び「アンタゴニスト」を使用することができ、互換的である。
【００４７】
好ましい態様において、細胞は、癌細胞又は腫瘍細胞である。実際に、癌由来の転移は、高度に遊走性である。癌細胞は、白血球、特にＤＣと遊走特性を共有しているため、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤を、転移及び癌播種を防止するために使用することができる。
【００４８】
この状況において、本発明は、癌を処置するための、特に転移及び癌播種を防止するための使用のためのＭｃｏｌｎ−１阻害剤、又は癌を処置するための、特に転移及び癌播種を防止するための薬物の製造のためのＭｃｏｌｎ−１阻害剤の使用に関する。それは、さらに、被験者にＭｃｏｌｎ−１阻害剤の治療的に効果的な量を投与し、それにより転移及び癌播種を防止することを含む、癌を処置するための方法に関する。
【００４９】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、追加の薬物との組み合わせにおいて使用することができる。したがって、本発明は、以下に関する：
−  特に癌の処置における使用のための、特に転移を防止するための、場合により放射線療法又は抗腫瘍剤と組み合わせられる、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤、及び、場合により、医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物；
−  癌の処置における使用のための、特に転移を防止するための、場合により放射線療法又は抗腫瘍剤と組み合わせられる、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤、及び、場合により、医薬的に許容可能な担体；
−  癌の処置のための、特に転移を防止するための、場合により放射線療法又は抗腫瘍剤と組み合わせられる、医薬の製造のためのＭｃｏｌｎ−１阻害剤の使用；
−  特に転移を防止するための、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤及び場合により医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物の効果的な量を投与することを含む、それを必要とする被験者において癌を処置するための方法；
−  特に癌の処置における、特に転移を防止するための、同時、別々、又は連続使用のための組み合わせ調製物として（ａ）Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤及び（ｂ）抗腫瘍剤を含む組み合わせ調製物、製品、又はキット；
−  Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤を含む医薬組成物の効果的な量、及び抗腫瘍剤を含む医薬組成物の効果的な量を投与することを含む、それを必要とする被験者において、癌を処置するための、特に転移を防止するための方法；並びに；
−  放射線治療と組み合わせられる、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤を含む医薬組成物の効果的な量を投与することを含む、それを必要とする被験者において、癌を処置するための、特に転移を防止するための方法。
【００５０】
特定の実施形態において、癌は、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、芽細胞腫、及び黒色腫、好ましくは、肉腫、癌腫、及び黒色腫より選択される。癌は、好ましくは、固形腫瘍又は造血器悪性腫瘍である。例えば、癌は、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病（Ｐｈ＋  ＡＬＬ）、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、胃腸癌、腎癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、神経芽腫、膵臓癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、乳癌癌、結腸癌、及び頭頸部癌、胃癌、胚細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、又は慢性リンパ性白血病を含む非網羅的リストより選択されうる。より好ましくは、癌は、肺癌、乳癌、黒色腫、結腸及び／又は直腸癌、腎癌、前立腺癌、膵臓癌、並びに子宮頸部／卵巣癌からなるリストより選択される。
【００５１】
好ましい実施形態において、癌は、転移の高い確率又はリスクを伴う癌である。特に、それは、腫瘍細胞によるリンパ節浸潤に関連付けられる原発性癌でありうる。
【００５２】
より一般的な態様において、本発明は、薬物としての使用のためのＭｃｏｌｎ−１阻害剤に、又は薬物の製造のためのＭｃｏｌｎ−１阻害剤の使用、又はＭｃｏｌｎ−１阻害剤を含む医薬組成物に関する。
【００５３】
本発明の状況内で、用語「処置」は、治癒的、対症的、及び予防的治療を表示する。本発明の医薬組成物及び調製物は、既存の癌又は腫瘍を伴う、好ましくは、癌の進行の後期段階のヒトにおいて使用することができる。本発明の医薬組成物及び調製物は、癌を有する患者を必ずしも治癒しないが、しかし、疾患の進行を遅延又は遅らせるか、あるいは疾患のさらなる進行を防止し、それにより、患者の状態を寛解させる。特に、本発明の医薬組成物及び調製物は、腫瘍の発生を低下させる、並びに／或いは転移の発生及び癌の再発を防止する。癌を処置する際、本発明の医薬組成物は、治療的に効果的な量で投与される。
【００５４】
「効果的な量」は、哺乳動物（ヒトを含む）における癌の有害な効果を防止、除去、又は低下させる、本発明の医薬組成物の量を意味する。投与される用量は、患者、病状、投与の様式などに従って、当業者により適応されうることが理解される。特に、「Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤の治療的に効率的な量」は、転移の発生を減少させるのに十分な量を意図する。
【００５５】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、Ｍｃｏｌｎ−１活性を阻害又は減少させることが可能である任意の分子でありうる。Ｍｃｏｌｎ−１活性は、当業者に公知の任意の方法により、例えば、（Shen et al, 2011, Nat. Comm., 3, 731）において決定することができる。好ましくは、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、分子の非存在における活性と比較した場合、Ｍｃｏｌｎ−１の活性を少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０%減少させることが可能である分子である。用語「阻害剤」、「遮断剤」、及び「アンタゴニスト」を使用することができ、互換的である。活性は、例えば、リソソームのカルシウム透過性を測定することにより測定することができる。
【００５６】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、Ｍｃｏｌｎ−１に対して指向する、アンタゴニスト活性を有する抗体、Ｍｃｏｌｎ−１の発現を阻害又は減少させるオリゴヌクレオチド（例えばアンチセンス、ｓｉＲＮＡ、又はｓｈＲＮＡなど）、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的である、アンタゴニスト活性を有するアプタマー、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的であるカルシウムチャネル遮断剤、Ｍｃｏｌｎ−１を阻害又は遮断するペプチド又は小分子（例えばＭＬ−ＳＩ１、ＭＬ−ＳＩ２、及びＭＬ−ＳＩ３、スフィンゴミエリン、又はベラパミルなど）からなる群より選択されうる。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態において、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、Ｍｃｏｌｎ−１発現に特異的に干渉する核酸分子であり、それにより、このタンパク質の発現を減少又は抑制する。そのような核酸は、以下で、より十分に詳述する。好ましくは、この核酸は、ＲＮＡｉ、アンチセンス核酸、又はリボザイムからなる群より選択される。前記核酸は、１５〜５０ヌクレオチド、好ましくは１５〜３０ヌクレオチドの配列を有することができる。発現における「減少」は、例えば、遺伝子発現産物の３０%、４０%、５０%、７０%、８０%、９０%、又は９５%の減少を意味する。
【００５８】
用語「ＲＮＡｉ」又は「干渉ＲＮＡ」は、標的タンパク質の発現を下方調節することが可能である任意のＲＮＡを意味する。それは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及び短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子を包含する。ＲＮＡ干渉は、ｄｓＲＮＡが翻訳後レベルで標的遺伝子の発現を特異的に抑制する現象を表す。通常の条件において、ＲＮＡ干渉は、数千の塩基対長の二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）により開始される。インビボでは、細胞に導入されたｄｓＲＮＡは、ｓｉＲＮＡと呼ばれる短いｄｓＲＮＡ分子の混合物に切断される。切断を触媒する酵素、ダイサーは、ＲＮアーゼＩＩＩドメインを含むエンドリボヌクレアーゼである（Bernstein et al., 2001）。哺乳動物細胞において、ダイサーにより産生されるｓｉＲＮＡは、長さ２１〜２３塩基対であり、１９又は２０ヌクレオチドの二本鎖配列、２ヌクレオチドの３’オーバーハング及び５’−三リン酸末端を伴う（Elbashir et al., 2001a；Elbashir et al., 2001b；Zamore et al., 2000）。多数の特許及び特許出願が、一般的な用語において記載されてきた（遺伝子発現を阻害するためのｓｉＲＮＡ分子の使用、例えば、ＷＯ  ９９／３２６１９、ＵＳ  ２００４００５３８７６、ＵＳ  ２００４０１０２４０８、及びＷＯ  ２００４／００７７１８）。
【００５９】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、サイレンシングオリゴヌクレオチド、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡなど、例えば商業的に入手可能なｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡなどでありうる（即ち、Qiagen  Ｃａｔ  ＃  ＳＩ００１２６８６１、ＳＩ００１２６８６８、ＳＩ０３０５７７４７４、ＳＩ０５００７６８、ＳＩ０５０１０７７５、ＳＩ０３０９５１４８；Sigma-Aldrich  Ｃａｔ  ＃）。特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡは、ＴＲＰＭＬ１  ｓｉ３（配列番号１）又はＴＲＰＭＬ１  ｓｉ５（配列番号２）からなる群より選択することができる。
【００６０】
アンチセンス核酸は、また、Ｍｃｏｌｎ−１の発現を下方調節するために使用することができる。アンチセンス核酸は、Ｍｃｏｌｎ−１をコードするセンス核酸の全て又は部分に相補的であり得、例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的であり得、又は、ｍＲＮＡ配列に相補的であり得、そして、標的ｍＲＮＡの翻訳に干渉すると考えられる。好ましくは、アンチセンス核酸は、Ｍｃｏｌｎ−１をコードする標的ｍＲＮＡに相補的なＲＮＡ分子である。
【００６１】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、小分子でありうる。小分子は、特に、分子量１０００  Ｄａ未満の小さな有機分子を指す。小分子及び他の薬物候補が、例えば、コンビナトリアルライブラリー及び天然産物ライブラリーから、当技術分野において公知の方法、又はそれらのＭｃｏｌｎ−１拮抗活性についてのスクリーニング方法を使用して容易に得ることができる。さらに、固相に付着された、又は溶液中のアミノ酸の全ての可能な組み合わせからなるランダムペプチドライブラリーも、アンタゴニストとして作用するペプチドを同定するために使用してもよい。
【００６２】
例えば、Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、また、ＭＬ−ＳＩ１、ＭＬ−ＳＩ２、及びＭＬ−ＳＩ３（Samie et al, 2013, Developmental Cell, 26, 511-524）、スフィンゴミエリン（Shen et al, 2011, Nat. Comm., 3, 731）、及びベラパミルを含む非網羅的なリストにおいて選択することができる。
【００６３】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、ペプチド、特に阻害効果を有するＭｃｏｌｎ−１阻害剤からのペプチドフラグメントでありうる。
【００６４】
Ｍｃｏｌｎ−１に対して指向する、アンタゴニスト活性を有する抗体は、例えば、ヒトＭｃｏｌｎ−１又はその免疫原性フラグメントを含む組成物を用いて非ヒト哺乳動物を免疫化することを含む、以下の方法により調製することができる；場合により、Ｍｃｏｌｎ−１又はその免疫原性フラグメントに結合する抗体を選択すること、及び、Ｍｃｏｌｎ−１の活性を減少させる抗体を選択すること。
【００６５】
アプタマー及びスピーゲルマーについて、アプタマー及びスピーゲルマーを選択するために、同様の方法を使用することができる。これらの方法は、当業者により周知である。本明細書において使用する通り、用語「アプタマー」は、Ｍｃｏｌｎ−１に結合することができる核酸又はペプチドの分子を意味する。それは、分子認識の点で、抗体の代替物を表す、分子のクラスを指す。アプタマーは、高い親和性及び特異性を伴う、標的分子の任意のクラスを実質的に認識する能力を伴うオリゴヌクレオチド配列又はオリゴペプチド配列である。
そのようなリガンドは、ランダム配列ライブラリーのSystematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment（SELEX）を通じて単離することができる（Tuerk C. and Gold L., Science, 1990, 249(4968):505-10において記載される通り）。ランダム配列ライブラリーは、ＤＮＡのコンビナトリアル化学合成により入手可能である。このライブラリーにおいて、各メンバーは、固有の配列の最後に化学的に修飾された線状オリゴマーである。このクラスの分子の可能な修飾、使用、及び利点が、Jayasena S.D., Clin. Chem., 1999, 45(9): 1628-50において概説されている。
【００６６】
ペプチドアプタマーは、ツーハイブリッド方法（Colas et al., Nature, 1996, 380, 548-50）により、コンビナトリアルライブラリーより選択される、プラットフォームタンパク質（例えば大腸菌チオレドキシンＡなど）により呈される立体構造的に制限された抗体可変領域からなる。
スピーゲルマーは、例えば、ＷＯ  ９８／０８８５６において開示されている。それらは、アプタマーに類似する分子である。しかし、スピーゲルマーは、アプタマーとは対照的に、Ｄ−ヌクレオチドではなく、完全に又は大部分Ｌ−ヌクレオチドからなる。そうでなければ、特にスピーゲルマーの可能な長さに関しては、同じことが、アプタマーに関連して概説される通り、スピーゲルマーに適用される。
【００６７】
より一般的には、本発明は、さらに、Ｍｃｏｌｎ１の活性に対する分子の効果を決定すること、及び、分子を選択すること（それが、Ｍｃｏｌｎ１の活性を減少又は遮断させる場合）を含む、細胞遊走、特にＤＣ遊走を減少又は防止するために適切である分子を選択又は同定するための方法に関する。この方法は、さらに、ＤＣ遊走又は速度に対する選択された分子の効果を決定し、分子を選択する（それが、ＤＣ遊走又は速度を減少又は遮断させる場合）工程を含みうる。そのようなスクリーニング方法は、ＵＳ２００３／０６４３６３において、Ｍｃｏｌｎ−１について開示されている。また、陽イオンチャネルのモジュレータをスクリーニングするための方法が開示されており、Ｍｃｏｌｎ−１に、特にＷＯ  ２００４／０３９９４１におけるＴＲＰＭ４ｂについて；ＷＯ  ２００４／０７６６３２におけるＴＲＰＭ５について；ＷＯ２００７／０４１６８７における、及びＷＯ２０１１／０７２２７５におけるＴＲＰＭ７について；ＷＯ２００７／１４０３０８におけるＴＲＰＭ４について；ＷＯ２０１０／１４９６１４におけるＴＲＰＭ３について；ＷＯ２００６／０２９１４２におけるＴＲＰＭ８について、当業者により容易に適応されることができる。
【００６８】
Ｍｃｏｌｎ−１阻害剤は、別の抗腫瘍処置との組み合わせにおいて使用することができる。抗腫瘍剤は、抗腫瘍化学療法、免疫療法、又はホルモン治療でありうる。本明細書において使用する通り、用語「化学療法」は、化学的又は生化学的物質を使用する、特に１つ又はいくつかの抗腫瘍薬剤を使用する、癌の治療的処置を指す。用語「免疫療法」は、治療的抗体を用いた癌の治療的処置を指す。特に、抗体は、特異的な抗原（例えば腫瘍の表面上に提示される異常な抗原など）に対して指向する。例示的な例として、ＨＥＲ２に対して指向する、乳癌を処置するためにＦＤＡにより承認されたトラスツズマブ又はハーセプチン抗体を引用することができる。好ましくは、治療用抗体は、患者の腫瘍細胞を枯渇させるように機能する。特に、治療用抗体は、例えば、腫瘍細胞の表面上に存在する抗原、例えば、腫瘍細胞上に主に又は排他的に存在する腫瘍特異的抗原に特異的に結合する。あるいは、治療用抗体は、また、特定の細胞受容体を遮断することにより、腫瘍成長を防止しうる。用語「ホルモン治療」は、ホルモンを遮断する、加える、又は除去する目的を有する癌処置を指す。例えば、乳癌において、女性ホルモン、エストロゲン及びプロゲステロンは、いくつかの乳癌細胞の成長を促しうる。そのため、これらの患者において、ホルモン治療は、エストロゲンを遮断するために与えられ、一般に使用される薬物の非網羅的リストは、以下を含む：タモキシフェン、ファレストン、アリミデックス、アロマシン、フェマーラ、ゾラデックス／ルプロン、メゲース、及びハロテスチン。
【００６９】
分子を含む医薬組成物は、当業者により公知である標準的な医薬上の実務（Lippincott Williams & Wilkins, 2000 and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York）に従って製剤化される。
【００７０】
経口投与のために、組成物は、従来の経口剤形（例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤など）並びに液体製剤（例えばシロップ剤、エリキシル剤、及び濃縮ドロップなど）に製剤化することができる。非毒性の固体担体又は希釈剤を使用してもよく、それらは、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、炭酸塩などを含む。圧縮錠剤については、結合剤（粉末材料に粘着性を付与する薬剤である）も必要である。例えば、デンプン、ゼラチン、糖（例えばラクトース又はデキストロースなど）、及び天然又は合成ゴムを結合剤として使用することができる。崩壊剤が、また、錠剤の破壊を促進するために、錠剤中に必要である。崩壊剤は、デンプン、粘土、セルロース、アルギン、ガム、及び架橋ポリマーを含む。さらに、潤滑剤及び流動促進剤も錠剤中に含まれ、製造プロセスにおいて表面への錠剤材料の付着を防止し、製造の間での粉末材料の流動特性を改善する。コロイド状二酸化ケイ素は、流動促進剤として最も一般に使用され、化合物（例えばタルク又はステアリン酸など）が、潤滑剤として最も一般に使用される。
【００７１】
経皮投与のために、組成物は、軟膏、クリーム、又はゲルの形態に製剤化することができ、適当な浸透剤又は界面活性剤を使用し、浸透性を促進することができうる（例えばジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、及びジメチルホルムアミドなど）。
経粘膜投与のために、鼻腔用スプレー、直腸又は膣坐剤を使用することができる。活性化合物は、当技術分野において公知の方法により、公知の坐剤基剤のいずれかに組み込むことができる。そのような基剤の例は、ココアバター、ポリエチレングリコール（カーボワックス）、ポリエチレンソルビタンモノステアレート、及び、融点又は溶解速度を修飾するための他の適合性のある材料を伴う、これらの混合物を含む。
【００７２】
本発明に従った医薬組成物は、投与時に、又は投与後の任意の所定の時間もしくは期間に、実質的に直ちに活性薬物を放出するように製剤化してもよい。
【００７３】
本発明に従った医薬組成物は、医薬的に許容可能な賦形剤及び／又は担体と一緒に、本発明の１つ又は複数の分子を含むことができる。これらの賦形剤及び／又は担体は、上に記載する通り、投与の形態に従って選ばれる。
【００７４】
本発明のさらなる態様及び利点は、以下の実験セクションにおいて開示されており、それらは、例示的であり、本願の範囲を限定するものではないと見なすべきである。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】ＴＲＰＭＬ１（Ｍｃｏｌｎ−１）ノックアウトＤＣは、変化した運動性及び持続性を呈する。未成熟又は成熟（ＬＰＳ処理）ＤＣの運動性を、経時的イメージングにより分析した。細胞速度分析を（Ａ）に、速度変動を（Ｂ）に示す。未成熟ＴＲＰＭＬ１  ＫＯ細胞は、それらのＴＲＰＭＬ１  ＷＴ対応物よりも低い運動性である（約２０%だけ低下した細胞速度）。同じ傾向が、ＬＰＳ活性化細胞について観察され、そこでは、ＴＲＰＭＬ１  ＫＯ  ＬＰＳ細胞は、それらのＷＴ  ＬＰＳ対応物よりも２０%運動性が低かった。ＬＰＳ誘導性成熟によって、ＴＲＰＭＬ１  ＷＴ細胞及びＫＯ細胞の両方において、細胞速度が増加する（ＴＲＰＭＬ１  ＷＴと比較し、ＴＲＰＭＬ１  ＷＴ  ＬＰＳについて３０%；ＴＲＰＭＬ１  ＫＯと比較し、ＴＲＰＭＬ１  ＫＯ  ＬＰＳについて２０%）。一緒に、これらの結果は、ＴＲＰＭＬ１が、速い運動段階のために要求されることを示す。ＬＰＳ処理されたＴＲＰＭＬ１  ＫＯ細胞は、未成熟ＴＲＰＭＬ１  ＷＴ細胞に類似した速度変動を呈し、これらの細胞が、それらのＴＲＰＭＬ１  ＷＴ  ＬＰＳ対応物と比較し、持続性が低いことを示す。（中央値及び１０〜９０パーセンタイルを示すボックスプロット；条件当たり２００〜３００個の細胞、３の内の１つの代表的な実験；＊＊＊Ｐ＜０．０００１、クラスカル・ワリス検定）。（Ｃ）フローサイトメトリー分析は、ＴＲＰＭＬ１  ＫＯ細胞が、ＬＰＳ処理時に活性化されることを示す（ＣＤ８６レベル）。
【図２】ＴＲＰＭＬ１（Ｍｃｏｌｎ１）ノックダウン  ＤＣは、変化した運動性及び持続性を呈する。（Ａ）ＴＲＰＭＬ１の効率的なノックダウン（ＫＤ）に導くＴＲＰＭＬ１  ｓｉＲＮＡのｑＰＣＲ同定。全ての結果を、ＧＡＰＤＨレベルに対して標準化した。ＴＲＰＭＬ１  ｓｉ３及び５の両方が選択された（ＴＲＰＭＬ１遺伝子発現の約６０%低下）。（Ｂ）ヌクレオフェクションは、細胞を活性化せず、また、ＬＰＳ誘導性成熟を防止しない。オールスターネガティブコントロール（ＡＳ）及びＴＲＰＭＬ１  ｓｉ５細胞（未成熟又は成熟（ＬＰＳ処理）いずれか）のＣＤ８６レベルを示す。ｓｉＲＮＡヌクレオフェクト細胞の速度分析を（Ｃ）に、それらの速度変動を（Ｄ）に示す。ＴＲＰＭＬ１  ＫＤ細胞は、ＴＲＰＭＬ１  ＫＯ細胞と同様に挙動する（図１、Ｃ及びＤを参照）。（中央値及び１０〜９０パーセンタイルを示すボックスプロット；条件当たり１００〜３００個の細胞、２つの独立した実験のプール；＊Ｐ＝０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．０００１、クラスカル・ワリス検定）。
【図３】ＴＲＰＭＬ１は、活性化ＤＣにおけるアクチンダイナミクスを調節する。（Ａ）未成熟又は成熟ＡＳ発現（コントロール）細胞及び未成熟又は成熟ＴＲＰＭＬ１  ｓｉ５細胞における重合アクチンの密度マップ。（Ｂ）前部でアクチンを伴う細胞により費やされる時間の割合。コントロール及びＴＲＰＭＬ１サイレンシング未成熟細胞の両方において、重合アクチンは主にＤＣ前部に見出される（両方について時間の約７０%）。成熟コントロール細胞は、細胞中心／細胞後部でのアクチン重合を呈する（アクチンは、細胞前部に時間の３０%だけで検出することができた）；細胞中心／細胞後部でのそのようなアクチン重合が、成熟ＤＣにおける高速運動性のために要求されることが示されている。細胞中心／後部でのこのアクチン重合は、ＴＲＰＭＬ１  ｓｉ５  ＬＰＳ細胞においてあまり観察されず、アクチンは依然として細胞前部で重合されている（時間の５０%）。（条件当たり約２０個の細胞で実現された密度マップ及び定量、２の内の１つの代表的な実験＊＊Ｐ＝０．００５、クラスカル・ウォリス検定）。
【図４】未成熟細胞中でのＭＬＳＡ１を介したＴＲＰＭＬ１活性化は、細胞の運動性を増加させる。未成熟細胞のＭＬＳＡ１処理によって、成熟ＬＰＳの細胞と同様のレベルまで、細胞速度（Ａ）及び持続性（Ｂ）の両方が増加する。この化合物を用いた成熟細胞の処理（ＬＰＳ  ＤＣ）は、細胞速度やそれらの持続性をさらに増加させない。（Ｃ）ＭＬＳＡ１処理によって、未成熟細胞は活性化されず、また、ＬＰＳ誘導性成熟は防止されない。未成熟細胞及びＬＰＳ成熟細胞のＣＤ８６レベルは、ＭＬＳＡ１（５又は１０μM）の２つの用量の存在又は非存在において示される。（Ｄ）ＭＬＳＡ１を用いて処理された、又はされていない未成熟ＤＣにおける、及び成熟ＬＰＳ処理細胞における重合アクチンの密度マップ。（Ｅ）前部でアクチンを伴う細胞により費やされる時間の割合。未成熟ＤＣのＭＬＳＡ１処理によって、細胞中心／細胞後部でのアクチン重合が部分的に誘導される。それらの前部でアクチンを伴うＤＣにより費やされた時間のｔ割合は、未成熟コントロールＤＣと比較して減少しており、ＴＲＰＭＬ１活性化が、細胞後部でのアクチン動員を誘導することを示唆する。（条件当たり約６０個の細胞で実現された密度マップ及び定量化、２の内の１つの代表的な実験、＊Ｐ＝０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．０００１、クラスカル・ウォリス検定）。
【図５】ＴＲＰＭＬ１は、リンパ節への活性化ＤＣの効率的な遊走のために要求される。（Ａ）蛍光標識されたＴＲＰＭＬ１  ＷＴ及びＫＯ  ＬＰＳ  ＤＣを、Ｃ５７ＢＬ／６レシピエントマウスの足蹠中に同時注射した。膝窩リンパ節を回収し、足蹠注射後約１６時間目に分析した。遊走ＤＣの存在を、全ＬＮ細胞の割合として呈する（各点は、一匹のマウスを表す。２つの独立した実験、＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。（Ｂ）ＣＭＴＭＲを用いて標識されたＴＲＰＭＬ１  ＷＴ  ＬＰＳ、及びＣＦＳＥを用いて標識されたＴＲＰＭＬ１  ＫＯ  ＬＰＳを呈する、リンパ節のフローサイトメトリー分析の例。ＷＴ  ＬＰＳ細胞と比較した、より低い数のＴＲＰＭＬ１  ＫＯ欠損ＬＰＳ  ＤＣが、レシピエントマウスのリンパ節中で見出された（約２倍以下）。
【図６】作業モデル。ＴＲＰＭＬ１は膜貫通型Ｃａ２＋チャネルであり、大半がリソソーム中で見出され、それによって、リソソームから細胞質ゾルへのＣａ２＋放出が可能になる。ＬＰＳ成熟ＤＣにおいて、高速運動性は、細胞中心／細胞後部でのフォルミン媒介性アクチン重合に連結されている（Vargasら、準備中）。これらのフォルミンにより生成されるアクチンケーブルは、ミオシンＩＩで修飾され、成熟細胞の増加した運動性が可能になる。本発明者らは、リソソームからのＣａ２＋放出が、局所Ｃａ２＋の増加に導き、故に、（１）細胞後部でのフォルミン媒介性アクチン重合を支持し、及び（２）ミオシンＩＩ活性化を介して細胞収縮性を増加させる、との仮説を立てた。
【図７】蛍光ゼラチン分解アッセイ、ＭＣＯＬＮ１サイレンシングの効果
【００７６】
実施例
結果
【００７７】
ＴＲＰＭＬ１（Ｍｃｏｌｎ１）欠損又はサイレンシング樹状細胞は、変化した運動性と持続性を呈する。
ＴＲＰＭＬ１が、樹状細胞（ＤＣ）遊走において役割を果たしているか否かを研究するために、本発明者らは、ＴＲＰＭＬ１欠損及び十分なマウスの骨髄からＤＣを分化させ、ＬＰＳ処理の前後に、マイクロチャネル（５×５μm）に沿って遊走するそれらの能力を分析した。本発明者らは、ＬＰＳ活性化ＤＣが、本発明者らの以前の知見と一致して、増加した速度及び遊走の持続性を呈すること（図１Ａ及びＢ）を観察した。著しくは、ＴＲＰＭＬ１ノックアウトＤＣの速度及びそれらの遊走の持続性が減少されていたが、このリソソームカルシウムチャネルが、ＤＣがそれらの最高スピードに達し、一方向に遊走するために要求されることを示す。重要なことに、ＤＣ成熟に対するＴＲＰＭＬ１の効果は、正常レベルの表面ＣＤ８６発現により示される通り、観察されなかった（図１Ｃ）。同等の結果が、マイクロチャネルにおいてＴＲＰＭＬ１−サイレンシングＤＣの遊走を解析する際に得られた（図２）。また、野生型レシピエントの足蹠中へのＴＲＰＭＬ１コントロール及びノックアウトＤＣの移行は、２４時間後での足蹠から膝窩リンパ節へのＴＲＰＭＬ１欠損細胞の損なわれた到達を示した（図３）。本発明者らは、ＴＲＰＭＬ１欠損が、エクスビボ及びインビボで損なわれたＤＣ遊走に導くと結論付ける。
【００７８】
ＴＲＰＭＬ１（Ｍｃｏｌｎ１）は、活性化された樹状細胞においてアクチン動態を調節する。
ＴＲＰＭＬ１によるＤＣ遊走の調節に含まれる分子機構を研究するために、本発明者らはＬｉｆｅＡｃｔトランスジェニックマウス由来のＤＣにおいて、それをサイレンシングし（Riedl et al., 2010, Nat. Methods, 7, 168-169）、遊走の間でのそれらのアクチン動態を分析した。以前に観察された通り、本発明者らは、重合アクチンが、未成熟ＤＣにおいて、細胞前部で主に濃縮されたのに対し、それが、活性化ＤＣにおいて、細胞後部でかなり濃縮されたことを見い出した（図４Ａ及びＢ）。顕著には、ＴＲＰＭＬ１サイレンシングによって、野生型の活性化ＤＣにおけるアクチンの局在化が改変されたが、それは、それらの前部で、それらのアクチンの大半を示した。本発明者らは、ＴＲＰＭＬ１が、おそらく、その後部でのアクチン重合を可能にし、そして安定化させることにより、活性化ＤＣの遊走を促す（それは、それらの速く持続的な運動のために要求される）と結論付ける。
【００７９】
未成熟細胞におけるＭＬＳＡ１を介したＴＲＰＭＬ１活性化は、細胞の運動性を増加させる。
これらの結果を強化するために、本発明者らは、ＴＲＰＭＬ１を活性化することが示された薬物ＭＬＳＡ１（Shen et al., 2012, Nat. Comm., 3:731）を用いた処理時でのマイクロチャネルにおけるＤＣ遊走を分析した。注目すべきことに、ＭＬＳＡ１は、未成熟ＤＣのスピード及び持続性を、活性化細胞において測定されたレベルに増加させ、このリソソームカルシウムチャネルが、それらの増強された運動に関与する可能性が最も高いことを示す（図５Ａ及びＢ）。ＤＣ成熟に対するＭＬＳＡ１の効果は観察されなかった（図５Ｃ）。また、ＭＬＳＡ１処理された未成熟ＤＣにおけるアクチン動態の分析によって、アクチンが、それらの後部で濃縮されることが示され、それらの速く持続的な遊走表現型と一致していた（図５Ｄ及びＥ）。故に、ＴＲＰＭＬ１は、それらの細胞の後部で重合アクチンの濃縮を促進することにより（しかし、それらの成熟を変化させることを伴わない）、ＤＣ遊走を促進させる（図６のモデルを参照のこと）。
【００８０】
蛍光ゼラチン分解アッセイ：ＭＣＯＬＮ１サイレンシングの効果
４０．２%のＭＤＡ−ＭＢ−２３１が、コントロールｓｉＲＮＡ（ＮＴ）を用いて処理された場合、ＦＩＴＣゼラチンを分解したのに対し、わずか２．４%のＭＤＡ−ＭＢ−２３１が、ＭＴ１−ＭＭＰ  ｓｉＲＮＡ（ＭＴ１−ＭＭＰは、分解に関与する酵素である）を用いて処理された場合、ＦＩＴＣゼラチンを分解した。細胞を、ＭＣＯＬＮ１  ｓｉＲＮＡを用いて処理した場合、２４．３%のＭＤＡ−ＭＢ−２３１がＦＩＴＣゼラチンを分解した。この結果は、ＭＣＯＬＮ１のサイレンシングによって、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の分解能力の４０%が阻害されることを示唆し、それにより、腫瘍細胞遊走を防止又は減少させるＭＣＯＬＮ１阻害剤の能力を例示する。
【００８１】
材料及び方法
抗体及び試薬
以下の試薬を撮像実験のために使用した：WGA AlexaFluor-647及びヘキスト（両方ともLife Technologiesから）。マイクロチャネルを、フィブロネクチン（Sigma）を用いてコーティングした。細胞活性化は、ＬＰＳ（Sigma）を用いて実施した。フローサイトメトリーのために、次の抗体を使用した：BD biosciencesからの抗ＣＤ８６（ＧＬ１クローン、５５３６９２）及びラットＩｇＧ２ａ，κアイソタイプコントロール（５５３９３０）。
【００８２】
マウス
Ｌｉｆｅａｃｔ−ＧＦＰノックイン（Ｌｉｆｅａｃｔとして言及される）マウス及びＴＲＰＭＬ１ノックアウトマウスは、以前に記載された通りである（Riedl et al., 2010, Nat. Methods, 7, 168-169 Chandra et al., Gastroenterology, 2011, 140, 857-867）。
【００８３】
細胞
マウス骨髄細胞を、以前に記載された通り（Faure-Andre et al, 2008, Science, 322, 1705-10）、ウシ胎児血清、及びトランスフェクトＪ５５８細胞から得られた、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む上清を添加した培地中で１０〜１２日間培養した。遊走又はマッピングアッセイ（下記参照）のために、１０〜１２日目の細胞を、１００ng/mlのＬＰＳ（成熟細胞、ＬＰＳ  ＤＣ）用いて３０分間にわたり活性化させ、次に、完全培地で３回リンスし、チャネル中に入れた。これらの実験のための対応物の未成熟細胞を、同じ条件において、しかし、ＬＰＳの非存在において処理する。
【００８４】
エレクトロポレーション
ｓｉＲＮＡ媒介性遺伝子サイレンシングのために、Ｌｉｆｅａｃｔ細胞を７日間にわたり培養し、次に、マウスＴＲＰＭＬ１に対して指向するｓｉＲＮＡ（ＴＲＰＭＬ１  ｓｉ３として言及されるＭｍ＿Ｍｃｏｌｎ１＿３（標的配列  ５’−ＣＡＣＣＡＴＣＣＡＣＴＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡ−３’（配列番号１）又はＴＲＰＭＬ１  ｓｉ５として言及されるＭｍ＿Ｍｃｏｌｎ１＿５（標的配列：５’−ＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡ−３’（配列番号２）））又はコントロール非標的オールスターｓｉＲＮＡのいずれかをトランスフェクトした（全てがQiagen GmbHから）。
エレクトロポレーションは、製造業者（Lonza）のプロトコールに従い、Amaxa Mouse Dendritic Cell Nucleofector Kit（ＶＰＡ−１０１１）を用いて実施した。簡単には、骨髄由来細胞（３＊１０６）を、１μMのｓｉＲＮＡ  を伴う１００μlのＡＭＡＸＡ添加緩衝液中に再懸濁し、プログラムＹ−００１（Amaxa Nucleofector、Lonza）を使用してヌクレオフェクトした。細胞を、直ちに、予熱した培地を伴う６ウェルプレート中に移した。細胞を、ヌクレオフェクション後３日目に実験のために使用した。
【００８５】
ｑＰＣＲ
樹状細胞（少なくとも１＊１０６個細胞）を実験に先立って回収し、全ｍＲＮＡを、製造業者のプロトコール（Nucleospin RNA II、Macherey-Nagel）に従って抽出した。相補的DNAは、superscript vilo reverse kit（Invitrogen）を使用して、１μgの全ＲＮＡから合成した。ＱＰＣＲは、Taqman遺伝子発現マスターミックス、並びに、それぞれＴＲＰＭＬ１及びＧＡＰＤＨについての最上のカバレッジプライマーセットＭｍ００５２２５５０＿ｍ１及びＭｍ９９９９９９１５＿ｇ１を使用して実施した（全て、Applied Biosystems、Life technologiesから）。全ての実験を、Roche lightcycler（Ｒｏｃｈｅ）で実施した。ＴＲＰＭＬ１遺伝子の発現レベルを、内因性コントロールとしてＧＡＰＤＨ発現レベルを使用する、２−ΔΔＣＴ方法を使用して算出した。
【００８６】
フローサイトメトリー分析
細胞を、染色緩衝液（ＰＢＳ、２%ＢＳＡ）中に再懸濁し、示した抗体を用いて４℃で３０分間染色した。細胞を、次に、３回洗浄し、染色緩衝液中に再懸濁した。全てのＦＡＣＳ実験を、Accuriフローサイトメーター（BD Biosciences）で行った。
【００８７】
マイクロチャネルの調製
マイクロチャネルを、以前に記載された通りに調製した（Faure-Andre et al, 2008, Science, 322, 1705-10；Heuze et al.,2011, Methods Mol Biol., 769, 415-434）。それらを、１０μg/mlフィブロネクチン単独を用いて１時間にわたりインキュベートし、ＰＢＳを用いて洗浄した。
【００８８】
遊走アッセイ
遊走アッセイのために、細胞を、マイクロチャネル（切片５＊５μm）中に添加し、１０×対物を伴う冷却ＣＣＤカメラ（ＨＱ２、Photometrics）を備えた落射蛍光ビデオ顕微鏡Nikon TiE顕微鏡で、少なくとも１６時間にわたり撮像し、１つの透過位相画像を２分毎に撮った。カイモグラフ抽出及び瞬時速度分析を、以前に記載された通りに（Faure-Andre et al, 2008, Science, 322, 1705-10）、自作プログラムを使用して実施した。
【００８９】
マッピングアッセイ
Ｌｉｆｅａｃｔ樹状細胞（ヌクレオフェクトされている、又はされていない）を、２００ng/lヘキスト含有培地中で３０分間にわたりインキュベートし、３回洗浄し、１０５個細胞／ウェルを添加し、４時間から一晩インキュベートし、マイクロチャネル（切片は８×５μm）中へのそれらの侵入を可能にした。侵入後、細胞を、２０倍の対物を用いた、冷却ＣＣＤカメラ（ＨＱ２、Photometrics）を備えた落射蛍光ビデオ顕微鏡Nikon TiE顕微鏡で、少なくとも１６時間にわたり撮像した。画像は３分毎に取得した。画像処理は、ImageJソフトウェア（参照：Rasband WS. ImageJ, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, imagej.nih.gov/ij/, 1997-2012）を用いて実施した。マイクロチャネルにおいて移動する細胞を、アクチンチャネルで、自動閾値化方法（トライアングル）によりセグメント化した。各々の時点について、細胞を含む最小の長方形が規定され、画像をトリミングした。次に、トリミングした画像をサイズにおいて標準化し、各々の細胞の平均アクチン画像（全ての時間点についての平均ピクセル強度）を計算した。全てのアクチン画像を、強度において標準化し、平均化し、実験の平均重合アクチン分布を得た。さらに、各々の細胞について、核の空間座標を測定し、核の前部及び後部での平均アクチン密度の間の比率を計算した。細胞の速度を、これらの空間座標に従って推定した。
【００９０】
足蹠からリンパ節への樹状細胞の遊走
実験を、以前に記載された通りに実現した（Faure-Andre et al, 2008, Science, 322, 1705-10）。
【００９１】
蛍光ゼラチン分解
ヒト乳癌腺癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１に、Lullaby試薬（OZ Biosciences）を使用し、５０nMコントロールＮＴ  ｓｉＲＮＡ、ＭＣＯＬＮ１  ｓｉＲＮＡ（Dharmacon  からのＳｍａｒｔ  ｐｏｏｌ  ｓｉ  ＲＮＡ、Ｌ−００６２８１−００−００１０、ＯＮ−ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓ  Ｈｕｍａｎ  ＭＣＯＬＮ１（５７１９２）ｓｉＲＮＡ−  ＳＭＡＲＴｐｏｏｌ、１０ｎｍｏｌ．  ｓｉＲＮＡ  Ｊ−００６２８１−０５  ＋  ｓｉＲＮＡ  Ｊ−００６２８１−０６  ＋  ｓｉＲＮＡ  Ｊ−００６２８１−０７  ＋  ｓｉＲＮＡ  Ｊ−００６２８１−０８、配列番号３−５の標的配列）又はＭＴ１−ＭＭＰ  ｓｉＲＮＡをトランスフェクトした。処理後７２時間目に、細胞を、以前に記載された通りに（Sakurai-Yageta et al., 2008, J. Cell. Biol., 181, 985-998）、ＦＩＴＣコンジュゲート架橋ゼラチン（Invitrogen）上で５時間にわたりインキュベートし、次に、Ｆアクチン及びコルタクチンについて固定及び染色した。細胞を、広視野顕微鏡（ＤＭ６０００  Ｂ／Ｍ；Leica）の６３×対物を用いて撮像し、ゼラチン分解の定量化を、以前に記載された通りに（Monteiro et al. 2013, J. Cell. Biol., 203, 1063-1079）、MetaMorphを使用して達成した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年4月15日(2020.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
増強された細胞遊走からの治療的利益を有する疾患又は障害の処置における使用のための、Ｍｃｏｌｎ−１を活性化する分子を含む、医薬組成物。
【請求項２】
細胞が、樹状細胞である、請求項１記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３】
細胞が、未成熟樹状細胞である、請求項１記載の使用のための、医薬組成物。
【請求項４】
ワクチン接種における使用のための、請求項２又は３記載の使用のための医薬組成物。
【請求項５】
抗腫瘍ワクチンにおける使用のための、請求項２又は３記載の使用のための、医薬組成物。
【請求項６】
自己免疫疾患を処置するための使用のための、請求項３記載の使用のための医薬組成物。
【請求項７】
感染症を処置するための使用のための、請求項３記載の使用のための医薬組成物。
【請求項８】
Ｍｃｏｌｎ−１を活性化する分子が、Ｍｃｏｌｎ−１に対して指向する、アゴニスト活性を有する抗体、及びＭｃｏｌｎ−１を活性化する小分子もしくはペプチドからなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか一項記載の使用のための医薬組成物。
【請求項９】
Ｍｃｏｌｎ−１を活性化する小分子又はペプチドが、ＭＬ−ＳＡ１、ＳＦ−２２及びＳＦ−５１からなる群より選択される、請求項８記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１０】
減少した細胞遊走からの治療的利益を有する疾患又は障害の処置における使用のための、Ｍｃｏｌｎ−１を阻害する分子を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
細胞が、腫瘍細胞である、請求項１０記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１２】
癌の処置における使用のための、請求項１０記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１３】
転移を防止又は減少させるための使用のための、請求項１０〜１２のいずれか一項記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１４】
Ｍｃｏｌｎ−１を阻害する分子が、Ｍｃｏｌｎ−１に対して指向する、アンタゴニスト活性を有する抗体、Ｍｃｏｌｎ−１の発現を阻害又は減少させるオリゴヌクレオチド、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的である、アンタゴニスト活性を有するアプタマー、Ｍｃｏｌｎ−１に特異的であるカルシウムチャネル遮断剤、Ｍｃｏｌｎ−１を阻害又は遮断するペプチド又は小分子からなる群より選択される阻害剤又は遮断剤である、請求項１０〜１２のいずれか一項記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１５】
Ｍｃｏｌｎ−１の発現を阻害する又は減少させるオリゴヌクレオチドは、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡである、請求項１４記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１６】
Ｍｃｏｌｎ−１を阻害又は遮断する小分子又はペプチドが、ＭＬ−ＳＩ１、ＭＬ−ＳＩ２及びＭＬ−ＳＩ３からなる群より選択される、請求項１４記載の使用のための医薬組成物。
【請求項１７】
Ｍｃｏｌｎ１の活性に対する分子の効果を決定すること、及び、細胞がＭｃｏｌｎ１の活性を増加又は減少させる場合、該分子を選択することを含む、細胞遊走を調節することが可能な分子を同定するための方法。
【外国語明細書】
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