(57)【要約】【課題】試薬を撹拌した際に発生する泡沫を速やかに消去することができる補体価測定用試薬及び泡沫の消去方法を提供すること。【解決手段】補体価測定用試薬は、緩衝液中に懸濁された感作赤血球または感作リポソームを含む補体価測定用試薬において、ポリアルキレングリコールを含むことを特徴とする。緩衝液中に懸濁された感作赤血球または感作リポソームを含む補体価測定用試薬に生じる泡沫の泡沫の消去方法は、消泡剤としてポリアルキレングリコールを緩衝液に添加することから成る。【選択図】図１
2020020639.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
緩衝液中に懸濁された感作赤血球または感作リポソームを含む補体価測定用試薬において、ポリアルキレングリコールを含むことを特徴とする補体価測定用試薬。
【請求項２】
前記ポリアルキレングリコールがポリオキシプロピレングリコールである請求項１記載の試薬。
【請求項３】
前記ポリアルキレングリコールの濃度が、試薬全量（感作赤血球または感作リポソームを除く）を基準として０．０００５重量％以上である請求項１又は２記載の試薬。
【請求項４】
消泡剤としてポリアルキレングリコールを緩衝液に添加することから成る、緩衝液中に懸濁された感作赤血球または感作リポソームを含む補体価測定用試薬に生じる泡沫の消去方法。
【請求項５】
前記ポリアルキレングリコールがポリオキシプロピレングリコールである請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記ポリアルキレングリコールの濃度が試薬全量（感作赤血球または感作リポソームを除く）を基準として０．０００５重量％以上である請求項４又は５記載の方法。
【請求項７】
緩衝液中にポリアルキレングリコールを含んでなる、補体価測定用検体希釈液。
【請求項８】
前記ポリアルキレングリコールがポリオキシプロピレングリコールである請求項７記載の検体希釈液。
【請求項９】
前記ポリアルキレングリコールの濃度が、検体希釈液全量を基準として０．０００５重量％以上である請求項７又は８記載の検体希釈液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、補体価測定用試薬及び補体価測定用試薬に生じる泡沫の消去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ウイルス、細菌等の病原体に対する補体結合性抗体は、病原体が感染するとその補体価は上昇又は下降する。補体価の測定は、各種疾患における診断や治療効果の判断及び免疫能力の指標として重要なものとなっている。
【０００３】
従来の補体価測定方法では、ヒツジ赤血球に抗ヒツジ赤血球抗体を結合させた感作ヒツジ赤血球、および至適倍数に段階希釈した補体を含む溶液（血清など）とを混合して３７℃６分間反応させ、補体の作用によって赤血球が破裂した結果溶液中に漏出する赤血球中のヘモグロビンを吸光度法により測定することによって、赤血球の溶血率をグラフより計算し補体価を求めるメイヤー法が一般的であった。近年では、ヘモグロビンを測定する替わりに、残存赤血球の濁度を光学的に測定することにより赤血球の溶血率を計算し補体価を求める自動化学分析装置で測定するオート法が一般的になってきている（特許文献１）。オート法では自動化学分析装置に予め撹拌した試薬をセットして測定するが、試薬をセットしてから測定までの時間が長い場合には、試薬中の赤血球が徐々に沈降する。その結果、そのまま自動分析装置が試薬を採取すると、測定に必要な所定量の赤血球を採取できず正確に測定することができなかった。したがって、正確な測定を行うためには測定直前に、又は測定の間隔が空いた場合に、その都度試薬を撹拌する必要があり、測定作業が煩雑であった。
【０００４】
測定の都度に試薬を撹拌すると、試薬に泡沫が発生する。その結果、試薬を採取する際に液面に泡沫が発生することで自動化学分析装置が試薬の液面を正しく感知できず、測定に必要な所定量の試薬を正確に採取できないことがある。また分析用セルに泡沫が残留することで検出感度や再現性の低下を生じるという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開2004-301612号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、試薬を撹拌した際に発生する泡沫を速やかに消去することができる補体価測定用試薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、従来の補体価測定用試薬にポリアルキレングリコールを配合することにより試薬を撹拌して泡沫が発生しても速やかに消去されることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本願発明は、以下のものを提供する。
(1)  緩衝液中に懸濁された感作赤血球または感作リポソームを含む補体価測定用試薬において、ポリアルキレングリコールを含むことを特徴とする補体価測定用試薬。
(2)  前記ポリアルキレングリコールがポリオキシプロピレングリコールである(1)記載の試薬。
(3)  前記ポリアルキレングリコールの濃度が、試薬全量（感作赤血球または感作リポソームを除く）を基準として０．０００５重量％以上である(1)又は(2)記載の試薬。
(4)  消泡剤としてポリアルキレングリコールを緩衝液に添加することから成る、緩衝液中に懸濁された感作赤血球または感作リポソームを含む補体価測定用試薬に生じる泡沫の消去方法。
(5)  前記ポリアルキレングリコールがポリオキシプロピレングリコールである(4)記載の方法。
(6)  前記ポリアルキレングリコールの濃度が試薬全量（感作赤血球または感作リポソームを除く）を基準として０．０００５重量％以上である(4)又は(5)記載の方法。
(7)   緩衝液中にポリアルキレングリコールを含んでなる、補体価測定用希釈液。
(8)  前記ポリアルキレングリコールがポリオキシプロピレングリコールである(7)記載の検体希釈液。
(9)  前記ポリアルキレングリコールの濃度が、検体希釈液全量を基準として０．０００５重量％以上である(7)又は(8)記載の検体希釈液。
【発明の効果】
【０００９】
下記実施例及び比較例により実験的に示された通り、本発明の補体価測定用試薬を用いると、試薬を撹拌した際に発生する泡沫を速やかに消去することができる。従って、本発明の試薬を用いると、液面に泡沫が発生することで自動化学分析装置が試薬の液面を正しく感知できず、測定に必要な所定量の試薬を正確に採取できない問題を回避することができ、また分析用セルに泡沫が残留しないため、泡沫に起因する検出感度や再現性の低下を防止することができるので、補体価の自動測定に有利である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】下記実施例５において得られた検量線を示す。
【図２】下記実施例６において得られた検量線を示す。
【図３】下記実施例７において得られた検量線を示す。
【図４】下記実施例８において得られた検量線を示す。
【図５】下記実施例９において得られた検量線を示す。
【図６】下記実施例１０において得られた検量線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
上記の通り、本発明の補体価測定用試薬は、試薬を測定直前に撹拌して泡沫が発生しても、速やかに消去することを可能とするために、試薬中にポリアルキレングリコールを含むことを特徴とする。ポリアルキレングリコールとしては、ポリオキシプロピレングリコールが好ましい。ポリオキシプロピレングリコール自体は周知であり、市販されているので、市販品を好ましく用いることができる。例えば、「カラリン」の商品名で三洋化成工業から市販されており、中でも「カラリン１０２」（商品名）を好ましい例として挙げることができる。
【００１２】
配合するポリアルキレングリコールの濃度は泡沫を速やかに消去する効果を考慮すると、緩衝液中に感作赤血球又は感作リポソームを含まない試薬全量を基準として、０．０００５重量％以上であることが好まく、さらに著しい消泡効果を求めるのであれば０．００２５重量％以上が好ましい。一方、試薬の性能への影響を考慮すると、０．０１重量％未満が好ましく、０．００９５重量％以下がさらに好ましく、０．００９重量％以下がさらに好ましい。これらの好ましい範囲の下限値と上限値は、どれとどれを組み合わせてもよい。
【００１３】
上記したポリアルキレングリコールを含むこと以外は、試薬の組成及びそれを用いた測定方法は従来から使用されているものと同じでよい。すなわち、補体を含む検体を希釈液で希釈した後、感作赤血球を緩衝液中に懸濁させた試薬を希釈した検体を添加し反応させる。検体中の補体価に依存した数の赤血球が溶血するので、遠心処理後、上清の吸光度を測定するか、又は、溶血した赤血球は検体中の補体価に比例し濁度を失うため、波長６００〜７００ｎｍにおける濁度を測定することにより、検体中の補体価を測定することができる。自動化学分析装置では、後者の濁度を測定する方法が広く採用されている。なお、感作赤血球懸濁緩衝液としては、特に限定されないが、アルブミン及びグルコースを含むリン酸緩衝液が用いられており、本発明でもこの緩衝液を好ましく用いることができる。なお、感作赤血球に代えて感作リポソームを用いてもよい。感作リポソームを用いる方法もこの分野において周知である。
【００１４】
上記した本発明の補体価測定用試薬を用いて検体中の補体価を測定すると、試薬（赤血球懸濁液）中の赤血球の均一に混和するために試薬を激しく攪拌して泡沫が発生しても、速やかに消去される。上記ポリアルキレングリコールを配合することにより、試薬に生じる泡沫が消去される。従って、本発明は、また、消泡剤としてポリアルキレングリコールを緩衝液に添加することから成る、緩衝液中に懸濁された感作赤血球または感作リポソームを含む補体価測定用試薬に生じる泡沫の消去方法をも提供するものである。
【００１５】
さらに、下記実施例に具体的に示されるように、ポリアルキレングリコールを含む緩衝液を希釈液として用いると上記本発明の方法を容易に実施できるので、本発明は、緩衝液中にポリアルキレングリコールを含んでなる、補体価測定用希釈液をも提供するものである。
【実施例】
【００１６】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。なお、「％」は全て重量％を意味する。
【００１７】
実施例１〜４、比較例１
検体希釈液としてゼラチン０．１％、カルシウムイオン及びマグネシウムイオンを含むベロナール緩衝液（濃度：カルシウム０．００２２％、マグネシウム０．０１１％）にカラリン１０２（商品名）を、下記表１に示す終濃度に添加した。次に各検体希釈液をプラスチックのボトルに分注した後、密栓した。各ボトルを手で激しく振り、泡沫を発生させた後、泡が消えるまでの時間を経過観察した。
【００１８】
【表１】
2020020639.tif 000003
×：消泡性なし、○：消泡性良好、◎：消泡性極めて良好
【００１９】
カラリン１０２（商品名）の濃度が０．０００５％以上のときに消泡効果が得られた。特にカラリン１０２（商品名）の濃度が０．００２５％以上のときの効果は消泡するまでの時間が短かった。
【００２０】
実施例５〜１０、比較例２
アルブミン（濃度０．５％）、グルコース（濃度１％）を含むリン酸緩衝液にヒツジ赤血球に抗体を結合させた感作ヒツジ赤血球（濃度約2％）を懸濁させた。この感作ヒツジ赤血球懸濁液を撹拌した後に自動化学分析装置（日立７１８０型）にセットし、オートCH50-Lの標準液である標準補体HC「生研」を用い、試料１．５μｌに実施例１の試料希釈液を１９５μｌ加え試料を希釈し、更に上記赤血球懸濁液２３μｌを加え、３７℃で６分間反応させた後波長６６０ｎｍにおける濁度を測定し、検量線を描いた。
【００２１】
試料希釈液のカラリン１０２（商品名）の濃度が０％のとき（比較例２）は泡沫が消えずに残っていたため、自動化学分析装置が試薬の液面を正しく感知できずエラーとなり測定不能であった。一方、カラリン１０２（商品名）濃度が０．０００５％（実施例５）、０．００２５％（実施例６）、０．００９％（実施例７）、０．００９５％（実施例８）、０．０１％（実施例９）又は０．０１５％（実施例１０）の場合には、泡沫が消え、自動化学分析装置による測定が可能であった。なお、カラリン１０２（商品名）の濃度が０．０９５％からやや反応性に影響が表れ、０．０１％から測定値に影響が現れた。これはカラリン１０２（商品名）が高濃度含まれる場合、補体溶血反応を阻害する働きが生じたためと考えられ、またカラリン１０２（商品名）自体が白濁した液体であることから、高濃度で添加することで希釈液に濁りが生じ、濁度測定に影響を与えたためと考えられる。
【図１】
2020020639.tif 000004
【図２】
2020020639.tif 000005
【図３】
2020020639.tif 000006
【図４】
2020020639.tif 000007
【図５】
2020020639.tif 000008
【図６】
2020020639.tif 000009