(57)【要約】【課題】胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する技術を提供する。【解決手段】萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する方法であって、前記胃組織試料におけるＴｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−α（ＴＮＦα）遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量を測定することを含み、前記胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量が、対照における発現量と比較して低いことが、前記胃組織試料が前癌状態であることを示す、方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する方法であって、
前記胃組織試料におけるＴｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−α（ＴＮＦα）遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量を測定することを含み、
前記胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量が、対照における発現量と比較して低いことが、前記胃組織試料が前癌状態であることを示す、方法。
【請求項２】
前記胃組織試料におけるＫｉｔａｋｙｕｓｈｕ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−１（ＫＫ−ＬＣ−１）遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量を測定することを更に含み、
前記胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量が、対照における発現量と比較して高いことが、前記胃組織試料が前癌状態であることを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現量を測定することを含み、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現量が、配列番号１に示す塩基配列からなるプライマー及び配列番号２に示す塩基配列からなるプライマーのセットを用いた遺伝子増幅により測定される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質を検出する試薬を含む、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定するためのキット。
【請求項５】
ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質を検出する試薬を更に含む、請求項４に記載のキット。
【請求項６】
ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子を検出する試薬を含み、前記ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子を検出する試薬が、配列番号１に示す塩基配列からなるプライマー及び配列番号２に示す塩基配列からなるプライマーのセットである、請求項５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する方法及び前癌状態の胃癌検出用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
萎縮性胃炎とは、胃の粘膜に長期間にわたって炎症が生じた結果、粘膜の破壊及び修復が繰り返され、しだいに胃の粘膜が薄くなった状態のことをいう。萎縮性胃炎の原因の１つにヘリコバクター・ピロリ菌の感染が挙げられる。萎縮性胃炎と慢性胃炎は、ほぼ同じ意味として扱われている。萎縮性胃炎の一部は、前癌状態を経た後、胃癌を発症する。したがって、前癌状態の胃を検出することは、胃癌を早期に発見する上で重要である。
【０００３】
ところで、Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−α（ＴＮＦα）は、マウスＬ細胞に対して細胞障害性を示す因子として見出された因子である。（例えば、非特許文献１を参照。）。ＴＮＦαは、サイトカインの１種であり、外傷や感染、抗腫瘍応答等により分泌されるタンパク質であることが知られている。
【０００４】
また、癌／精巣抗原は、癌細胞と精巣以外では発現が認められないタンパク質の総称である。Ｋｉｔａｋｙｕｓｈｕ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−１（ＫＫ−ＬＣ−１）は、癌／精巣抗原の１種であり、様々な癌に発現するマーカーとして使用できることが明らかになりつつある（例えば、特許文献１を参照）。また、特許文献１には、胃癌患者由来の胃組織試料の非腫瘍部においてもＫＫ−ＬＣ−１の発現が検出されることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第６３２０４４７号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Old L. J., Tumor Necrosis Factor (TNF), Science, 230 (4726), 630-632, 1985.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
胃の前癌状態を検出することは、胃癌を早期に発見する上で重要である。しかしながら、従来、胃の前癌状態を検出することは困難である。そこで、本発明は、胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、以下の態様を含む。
［１］萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する方法であって、前記胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量を測定することを含み、前記胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量が、対照における発現量と比較して低いことが、前記胃組織試料が前癌状態であることを示す、方法。
［２］前記胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量を測定することを更に含み、前記胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量が、対照における発現量と比較して高いことが、前記胃組織試料が前癌状態であることを示す、［１］に記載の方法。
［３］前記胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現量を測定することを含み、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現量が、配列番号１に示す塩基配列からなるプライマー及び配列番号２に示す塩基配列からなるプライマーのセットを用いた遺伝子増幅により測定される、［２］に記載の方法。
［４］ＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質を検出する試薬を含む、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定するためのキット。
［５］ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質を検出する試薬を更に含む、［４］に記載のキット。
［６］ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子を検出する試薬を含み、前記ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子を検出する試薬が、配列番号１に示す塩基配列からなるプライマー及び配列番号２に示す塩基配列からなるプライマーのセットである、［５］に記載のキット。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する技術を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実験例１において、胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量を測定した結果を示すグラフである。
【図２】実験例１において、担癌胃正常部由来の胃組織試料（前癌状態の胃組織試料）のうち、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が陰性であった胃組織試料（ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が陽性の胃組織試料よりも前癌状態がより進行した胃組織試料）について、ＴＮＦα遺伝子の発現量を示したグラフである。
【図３】実験例２において、胃組織試料をＫＫ−ＬＣ−１の発現が陽性のものと陰性のものに区分して、ＴＮＦα遺伝子の発現量を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
［萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する方法］
１実施形態において、本発明は、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する方法であって、前記胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量を測定することを含み、前記胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量が、対照におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量と比較して低いことが、前記胃組織試料が前癌状態であることを示す方法を提供する。
【００１２】
実施例において後述するように、発明者らは、本実施形態の方法により、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定することができることを明らかにした。
【００１３】
現在、胃の上部内視鏡検査において萎縮性胃炎が確認された場合、生検組織を用いてヘリコバクター・ピロリ菌に感染しているか否かの検査が実施されている。そこで、本実施形態の方法において、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料としては、上記の生検組織を用いることができる。このような胃組織試料を用いた場合、前癌状態であるか否かの判定のために新たに胃組織試料を採取せずにすむため、患者に対する負担を軽減することができる。また、患者の胃が萎縮性胃炎から前癌状態に進展しているか否かを判明することができる。
【００１４】
本実施形態の方法により、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であると判定された場合、胃癌検診の受診頻度を増やす、ヘリコバクター・ピロリ菌の除菌治療を受ける、抗癌剤を投与する等の対策をとることが可能になる。
【００１５】
実施例において後述するように、発明者らは、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料と比較して、前癌状態の胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量は有意に低く、胃癌に至ると再び有意に高くなることを明らかにした。すなわち、萎縮性胃炎が進行し、胃癌が発症する状態（前癌状態）に移行すると、ＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量が低下する。更に、胃癌が発症すると、ＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量が再び上昇する。以下、ＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量を単にＴＮＦαの発現量という場合がある。
【００１６】
前癌状態の胃組織試料において、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料よりも、ＴＮＦαの発現量が低いことは知られていない。また、ＴＮＦαは抗腫瘍免疫因子であり、かつ、発癌因子として知られている。つまり、前癌状態の胃組織試料では、ＴＮＦαの発現量が上昇するという概念が一般的である。
【００１７】
これに対し、発明者らは、実際にはこれと逆の現象が起きており、前癌状態の胃組織試料では萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料よりもＴＮＦαの発現量が低下することを明らかにした。発明者らはまた、前癌状態の胃組織試料では胃癌腫瘍部由来の胃組織試料よりもＴＮＦαの発現量が低下することを明らかにした。
【００１８】
したがって、本実施形態の方法における対照としては、胃癌でない萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料を用いてもよいし、胃癌腫瘍部由来の胃組織試料を用いてもよい。あるいは、あらかじめ対照におけるＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量を基準値として測定しておき、当該基準値との比較により判定してもよい。
【００１９】
萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料におけるＴＮＦαの発現量が、対照におけるＴＮＦαの発現量と比較して低い場合、前記胃組織試料は前癌状態であると判定することができる。
【００２０】
ＴＮＦα遺伝子の発現量の測定方法は特に限定されず、例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いる方法、定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いる方法、ＤＮＡマイクロアレイを用いる方法等が挙げられる。また、ＴＮＦαタンパク質の発現量の測定方法は特に限定されず、例えば、ＥＬＩＳＡ法、免疫染色法、ウエスタンブロッティング法等により行うことができる。ヒトＴＮＦα遺伝子のＮＣＢＩアクセッション番号はＮＭ＿０００５９４．３であり、ヒトＴＮＦαタンパク質のＮＣＢＩアクセッション番号はＮＰ＿０００５８５．２である。
【００２１】
実施例において後述するように、発明者らは、ＫＫ−ＬＣ−１の発現は、胃癌を発症するような前癌状態の胃組織試料では高頻度に検出されるが、そうでなければ検出されないことを明らかにした。また、実施例において後述するように、ＫＫ−ＬＣ−１の検出を認めた非胃癌症例の中から、後に胃癌を発症した症例が見出された。
【００２２】
本実施形態の方法は、胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量を測定することを更に含んでいてもよい。この場合、胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量が、対照における発現量と比較して高いことが、胃組織試料が前癌状態であることを示す。以下、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量を単にＫＫ−ＬＣ−１の発現量という場合がある。
【００２３】
実施例において後述するように、発明者らは、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料におけるＴＮＦαの発現量とともにＫＫ−ＬＣ−１の発現量を測定することにより、当該胃組織試料が前癌状態であるか否かを更に精度よく判定することができることを明らかにした。
【００２４】
ＫＫ−ＬＣ−１の発現量の測定における対照としては、予めＫＫ−ＬＣ−１の発現量が低いことが確認された胃組織試料を用いることができる。あるいは、あらかじめ対照におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量を基準値として測定しておき、当該基準値との比較により判定してもよい。
【００２５】
ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現量の測定方法は特に限定されず、例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いる方法、定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いる方法、ＤＮＡマイクロアレイを用いる方法等が挙げられる。また、ＫＫ−ＬＣ−１タンパク質の発現量の測定方法は特に限定されず、例えば、ＥＬＩＳＡ法、免疫染色法、ウエスタンブロッティング法等により行うことができる。ヒトＫＫ−ＬＣ−１遺伝子のＮＣＢＩアクセッション番号はＮＭ＿００１０１７９７８．３であり、ヒトＫＫ−ＬＣ−１タンパク質のＮＣＢＩアクセッション番号はＮＰ＿００１０１７９７８．１である。
【００２６】
ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現量は、配列番号１に示す塩基配列からなるプライマー及び配列番号２に示す塩基配列からなるプライマーのセットを用いた遺伝子増幅により測定されることが好ましい。実施例において後述するように、発明者らは、配列番号１及び２に塩基配列を示すプライマーのセットを用いることにより、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現の有無をより感度よく検出することができることを見出している。
【００２７】
［萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定するためのキット］
１実施形態において、本発明は、ＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質を検出する試薬を含む、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定するためのキットを提供する。本実施形態のキットにより、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定することができる。
【００２８】
本実施形態のキットにおいて、ＴＮＦα遺伝子を検出する試薬としては、ＴＮＦα遺伝子のｃＤＮＡを増幅することができるプライマーセット、ＴＮＦα遺伝子の定量的ＲＴ−ＰＣＲに用いることができるＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブ、ＴＮＦα遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするプローブ等が挙げられる。ＴＮＦα遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするプローブは、基板に固定されてＤＮＡマイクロアレイを形成していてもよい。
【００２９】
また、ＴＮＦαタンパク質を検出する試薬としては、ＴＮＦαタンパク質に対する特異的結合物質が挙げられる。また、特異的結合物質としては、抗体、抗体断片、アプタマー等が挙げられる。また、抗体断片としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ等が挙げられる。
【００３０】
本実施形態のキットは、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はＫＫ−ＬＣ−１タンパク質を検出する試薬を更に含むことが好ましい。実施例において後述するように、ＫＫ−ＬＣ−１を検出する試薬を更に含むキットにより、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料が前癌状態であるか否かを更に精度よく判定することができる。
【００３１】
ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子を検出する試薬としては、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子のｃＤＮＡを増幅することができるプライマーセット、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の定量的ＲＴ−ＰＣＲに用いることができるＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブ、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするプローブ等が挙げられる。ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子のｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズするプローブは、基板に固定されてＤＮＡマイクロアレイを形成していてもよい。
【００３２】
ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子のｃＤＮＡを増幅することができるプライマーセットとしては、配列番号１に示す塩基配列からなるプライマー及び配列番号２に示す塩基配列からなるプライマーのセットを好ましく用いることができる。実施例において後述するように、発明者らは、配列番号１及び２に塩基配列を示すプライマーのセットを用いることにより、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現の有無をより感度よく検出することができることを見出している。
【００３３】
また、ＫＫ−ＬＣ−１タンパク質を検出する試薬としては、ＫＫ−ＬＣ−１タンパク質に対する特異的結合物質が挙げられる。また、特異的結合物質としては、抗体、抗体断片、アプタマー等が挙げられる。また、抗体断片としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ等が挙げられる。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３５】
［実験例１］
胃癌腫瘍部由来の胃組織試料、担癌胃正常部由来の胃組織試料、萎縮性胃炎患者由来（胃癌患者ではない）の胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量をそれぞれ測定した。ここで、担癌胃正常部由来の胃組織試料は前癌状態であるということができる。
【００３６】
胃癌腫瘍部由来の胃組織試料（ｎ＝９２）としては、９２症例の胃癌患者より外科的切除術により摘出された胃の腫瘍部から１箇所ずつ採取した試料を用いた。また、担癌胃正常部由来の胃組織試料（ｎ＝２００）としては、上記と同じ９２症例の胃癌患者より摘出された胃の腫瘍部から遠位の非腫瘍部を２〜４箇所ずつ採取した試料を用いた。また、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料（ｎ＝７１）としては、内視鏡検査にて萎縮性胃炎を認め、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が疑われた症例で、迅速ウレアーゼ試験終了後の生検組織を用いた。
【００３７】
各胃組織試料全ＲＮＡを調製し、逆転写反応によりｃＤＮＡを調製した後、定量的ＲＴ−ＰＣＲにより、ＴＮＦα遺伝子の発現量を測定した。定量的ＲＴ−ＰＣＴにおけるＣＴ値として、ＴａｑＭａｎプローブから放出された蛍光色素であるＦＡＭの蛍光強度が０．０２に達した時のサイクル数を用いた。
【００３８】
図１は、ＴＮＦα遺伝子の発現量を測定した結果を示すグラフである。図１中、縦軸は、ＴＮＦα遺伝子のＣＴ値とβ−アクチン遺伝子のＣＴ値との差（ΔＣＴ値）を示す。また、図中の数値は、ΔＣＴ値の平均値±標準誤差を示す。また、「正常」は萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料の結果を示し、「前癌状態」は担癌胃正常部由来の胃組織試料の結果を示し、「胃癌」は胃癌腫瘍部由来の胃組織試料の結果を示す。
【００３９】
その結果、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量と比較して、担癌胃正常部由来の胃組織試料（前癌状態の胃組織試料）におけるＴＮＦα遺伝子の発現量は有意に低く、胃癌腫瘍部由来の胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量は再び有意に上昇することが明らかとなった。この結果は、前癌状態の胃組織試料では、ＴＮＦα遺伝子又はＴＮＦαタンパク質の発現量が上昇するという従来の概念とは逆の結果であり、想定外の結果であった。
【００４０】
図２は、上述した担癌胃正常部由来の胃組織試料のうち、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が陰性であったものについて、ＴＮＦα遺伝子の発現量を示したグラフである。ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が陰性である胃組織試料は、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が陽性の胃組織試料よりも前癌状態がより進行し、ヘリコバクタービロリ菌が定着できなくなった胃組織試料である。また、図２では、比較のために、萎縮性胃炎患者由来（胃癌患者ではない）の胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量を示す。
【００４１】
図２中、縦軸は、ＴＮＦα遺伝子のＣＴ値とβ−アクチン遺伝子のＣＴ値との差（ΔＣＴ値）を示す。また、図中の数値は、ΔＣＴ値の平均値±標準誤差を示す。また、「正常」は萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料の結果を示し、「前癌状態（ＨＰ−）」は担癌胃正常部由来の胃組織試料のうち、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が陰性であったものの結果を示す。また、「＊」はｐ＜０．０５で有意差が存在することを示す。
【００４２】
その結果、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量と比較して、担癌胃正常部由来の胃組織試料（前癌状態の胃組織試料）のうち、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が陰性であった胃組織試料におけるＴＮＦα遺伝子の発現量は有意に低いことが明らかとなった。
【００４３】
また、萎縮性胃炎患者について追跡調査を行ったところ、後述するように、後に胃癌の発症が確認された症例が出現した（ｎ＝１）。図２中、後に胃癌を発症した患者由来の胃組織試料の結果を黒丸で示す。
【００４４】
［実験例２］
実験例１で使用した各胃組織試料について、ＲＴ−ＰＣＲにより、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現を確認した。ＫＫ−ＬＣ−１特異的プライマーとして、配列番号１及び２に塩基配列を示すプライマーを使用し、４０サイクルでの増幅の有無により、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現の有無を判定した。なお、発明者らは、配列番号１及び２に塩基配列を示すプライマーを用いることにより、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現の有無をより感度よく検出することができることを見出している。
【００４５】
図３は、各胃組織試料をＫＫ−ＬＣ−１の発現が陽性のものと陰性のものに区分して、実験例１で測定したＴＮＦα遺伝子の発現量を示したグラフである。図３中、縦軸は、ＴＮＦα遺伝子のＣＴ値とβ−アクチン遺伝子のＣＴ値との差（ΔＣＴ値）を示す。また、図中の数値は、ΔＣＴ値の平均値±標準誤差を示す。また、「正常」は萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料の結果を示し、「前癌状態」は担癌胃正常部由来の胃組織試料の結果を示し、「胃癌」は胃癌腫瘍部由来の胃組織試料の結果を示す。
【００４６】
その結果、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料、担癌胃正常部由来の胃組織試料、胃癌腫瘍部由来の胃組織試料のそれぞれにおいて、ＫＫ−ＬＣ−１の発現が陰性であった胃組織試料と陽性であった胃組織試料との間でＴＮＦαの発現量に有意差があることが明らかとなった。
【００４７】
また、萎縮性胃炎患者について追跡調査を行ったところ、ＫＫ−ＬＣ−１の発現が陽性であった萎縮性胃炎患者の中から、後に胃癌の発症が確認された症例が出現した（ｎ＝１）。図３中、後に胃癌を発症した患者由来の胃組織試料の結果を黒丸で示す。
【００４８】
なお、現在までに、ＫＫ−ＬＣ−１の発現が陰性であった萎縮性胃炎患者の中からは胃癌の発症は確認されていない。この結果から、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現が陽性であると、後に発癌する可能性が高いことが明らかとなった。逆に、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現が陰性であれば、発癌しない傾向にある。
【００４９】
また、正常な胃から胃癌に至る過程で、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子又はタンパク質の発現とＴＮＦα遺伝子又はタンパク質の発現は、次のように変化することが明らかとなった。すなわち、より発癌する可能性が低い萎縮性胃炎患者では、胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現は陰性である。また、より発癌する可能性が高い萎縮性胃炎患者では、胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現が陽性に変化し、ＴＮＦαの発現量が上昇する。そして、萎縮性胃炎が進行し、胃癌が発症する状態（前癌状態）に移行すると、ＴＮＦαの発現量が低下する。更に、胃癌が発症すると、ＴＮＦαの発現量が再び上昇する。
【００５０】
以上の結果は、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料におけるＴＮＦαの発現量とともにＫＫ−ＬＣ−１の発現量を測定することにより、当該胃組織試料が前癌状態であるか否かを更に精度よく判定することができることを示す。
【００５１】
［実験例３］
担癌胃正常部由来の胃組織試料、萎縮性胃炎患者由来（胃癌患者ではない）の胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現の有無をそれぞれ判定した。ここで、担癌胃正常部由来の胃組織試料は前癌状態であるということができる。
【００５２】
具体的には、配列番号１及び２に塩基配列を示すプライマーを使用し、４０サイクルでの増幅の有無により、ＫＫ−ＬＣ−１遺伝子の発現の有無を判定した。
【００５３】
担癌胃正常部由来の胃組織試料（ｎ＝２２）としては、胃癌患者より摘出された胃の胃体下部と胃体中部から非腫瘍領域を１箇所ずつ採取した試料を用いた。また、萎縮性胃炎患者由来の胃組織試料（ｎ＝７１）としては、内視鏡検査にて萎縮性胃炎を認め、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が疑われた症例で、迅速ウレアーゼ試験終了後の胃体下部と胃体中部の生検組織を用いた。
【００５４】
下記表１に、各胃組織試料におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の有無をまとめた。表１中、「前癌状態」は担癌胃正常部由来の胃組織試料の結果を示し、「正常」は萎縮性胃炎患者由来（胃癌患者ではない）の胃組織試料の結果を示す。
【００５５】
【表１】
2020099220.tif 000003
【００５６】
その結果、ＫＫ−ＬＣ−１の発現は、胃癌を発症するような前癌状態の胃組織試料では高頻度に検出されるが、そうでなければ検出されないことが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明によれば、胃組織試料が前癌状態であるか否かを判定する技術を提供することができる。
【図１】
2020099220.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【配列表】
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