(57)【要約】【課題】刺激感が抑制された眼科組成物、眼科組成物用の刺激抑制剤、眼科組成物の刺激を抑制する方法及び眼刺激の評価方法を提供すること。【解決手段】充血除去成分と、任意で（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストを含有することを特徴とする、刺激感が抑制された眼科組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）充血除去成分を含有することを特徴とする、刺激感が抑制された眼科組成物。
【請求項２】
（Ａ）充血除去成分と、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストとを含有することを特徴とする、刺激感が抑制された眼科組成物。
【請求項３】
（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストがｌ−メントールである請求項２に記載の眼科組成物。
【請求項４】
（Ａ）充血除去成分が、テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の眼科組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の眼科組成物であって、刺激がドライアイに由来する疼痛である眼科組成物。
【請求項６】
（Ａ）充血除去成分を含有することを特徴とする、眼科組成物用の刺激抑制剤。
【請求項７】
請求項６に記載の眼科組成物用の刺激抑制剤であって、ドライアイに由来する疼痛を抑制するための剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、刺激感が抑制された眼科組成物、眼科組成物用の刺激抑制剤、眼科組成物の刺激を抑制する方法及び眼刺激の評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＴＲＰ（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）チャネルは膜貫通領域を有する陽イオンチャネルであり、４量体として機能すると考えられている。ＴＲＰチャネルは感覚受容のさまざまな局面で機能する陽イオンチャネルファミリーであり、多様な刺激に応答する多くのＴＲＰチャネル分子が存在する（非特許文献１）。ＴＲＰＭ８は清涼感、ＴＲＰＡ１は痛み、ＴＲＰＶ１は灼熱感に関与する細胞センサである。眼においてもＴＲＰＡ１及びＴＲＰＶ１が不快感や痛みに関与していることが報告されている（非特許文献２）。
【０００３】
ｌ−メントールは、点眼剤等において清涼化剤として用いられるが、ＴＲＰＡ１アゴニストでもあるため、眼に清涼感とともに刺激感を与えることが知られている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】生化学、第81巻、第11号，pp.962-983, 2009
【非特許文献２】Curr. Ophthalmol. Rep. (2015), 3: 111-121
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、刺激感が抑制された眼科組成物、眼科組成物用の刺激抑制剤、眼科組成物の刺激を抑制する方法及び眼刺激の評価方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、鋭意研究を重ねた結果、特定の成分を含有する眼科組成物が、ｌ−メントール等のＴＲＰＡ１アゴニストによる、眼への刺激感を抑制出来ること、さらに、上記課題を解決できることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、以下の各発明を包含する。
［１］  以下の（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする、刺激感が抑制された眼科組成物：
（Ａ−１）充血除去成分、
（Ａ−２）抗ヒスタミン剤、
（Ａ−３）カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、及びメチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種、及び
（Ａ−４）局所麻酔成分。
［２］  以下の（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される少なくとも１種と、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストとを含有することを特徴とする、刺激感が抑制された眼科組成物：
（Ａ−１）充血除去成分、
（Ａ−２）抗ヒスタミン剤、
（Ａ−３）カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、及びメチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種、及び
（Ａ−４）局所麻酔成分。
［３］  （Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストがｌ−メントールである前記［２］に記載の眼科組成物。
［４］  （Ａ−１）充血除去成分が、テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である、前記［１］〜［３］のいずれかに記載の眼科組成物。
［５］  （Ａ−２）抗ヒスタミン剤が、クロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である、前記［１］〜［３］のいずれかに記載の眼科組成物。
［６］  （Ａ−４）局所麻酔成分が、クロロブタノールである、前記［１］〜［３］のいずれかに記載の眼科組成物。
［７］［１］〜［６］に記載の眼科組成物であって、刺激がドライアイやアレルギー等に由来する疼痛である眼科組成物。
［８］  以下の（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする、眼科組成物用の刺激抑制剤：
（Ａ−１）充血除去成分、
（Ａ−２）抗ヒスタミン剤、
（Ａ−３）カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、及びメチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種、及び
（Ａ−４）局所麻酔成分。
［９］  前記［８］に記載の眼科組成物用の刺激抑制剤であって、ドライアイやアレルギー等に由来する疼痛を抑制するための剤。
［１０］  （Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストを含有する眼科組成物に、さらに、以下の（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される少なくとも１種を含有させることを特徴とする、(Ｂ)ＴＲＰＡ１アゴニストに由来する眼科組成物の刺激を抑制する方法：
（Ａ−１）充血除去成分、
（Ａ−２）抗ヒスタミン剤、
（Ａ−３）カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、及びメチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種、及び
（Ａ−４）局所麻酔成分。
［１１］  被験試料を、ＴＲＰＡ１発現細胞と接触させ、前記被験試料によりＴＲＰＡ１を介して引き起こされる細胞内カルシウムイオン濃度の変化量を測定することを特徴とする、被験試料による眼刺激の評価方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の眼科組成物は、以下の（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される少なくとも１種を含有することを特徴とし、さらに、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストを含んでも含まなくてもよく、刺激感が抑制されるという効果を奏する：（Ａ−１）充血除去成分、（Ａ−２）抗ヒスタミン剤、（Ａ−３）カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、及びメチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種、及び（Ａ−４）局所麻酔成分。
好ましくは、当該刺激感は、眼科組成物中に含まれる（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストに由来するものであるが、眼科組成物中に（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストが含まれない場合は、眼科組成物を投与されるヒト等の動物がドライアイやアレルギー等による疼痛症状を示しているか、又は当該動物の刺激受容体ＴＲＰＡ１が活性化されていることが好ましい。
また、本発明では、眼科組成物の刺激を抑制する方法及び被験試料による眼刺激の評価方法も提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、本発明の眼科組成物を構成する成分による、ＴＲＰＡ１アゴニスト（ｌ−メントール）に対する刺激抑制確認試験の結果を示す。
【図２】図２は、ＴＲＰＡ１阻害効果を可視化したものであり、ボルネオール（参考例）、テトラヒドロゾリン塩酸塩及びペパーミントオイル（実施例）による結果を示す。
【図３】図３は、ｌ−メントール（比較例）とｌ−メントール及びテトラヒドロゾリン塩酸塩の併用（実施例）による、ヒトでの清涼感及び刺激感確認試験の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の眼科組成物は、以下の（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される少なくとも１種を含む：（Ａ−１）充血除去成分、（Ａ−２）抗ヒスタミン剤、（Ａ−３）カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、及びメチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種、及び（Ａ−４）局所麻酔成分。好ましくは、さらに、本発明の眼科組成物は、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストを含む。
【００１１】
〔（Ａ−１）充血除去成分〕
充血除去成分としては、例えば、テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、オキシメタゾリン、又はそれらの塩酸塩、硝酸塩などの、イミダゾリン系の充血除去成分、エピネフリン、エフェドリン、メチルエフェドリン、フェニレフリン及びこれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種を用いることが好ましいが、これらに限定されない。
これら充血除去成分のうち、好ましくは、例えば、イミダゾリン系充血除去成分、より好ましくは、テトラヒドロゾリン、ナファゾリン及びその薬学上許容される塩、さらに好ましくは、テトラヒドロゾリン及びその薬学上許容される塩、特に好ましくは、テトラヒドロゾリン塩酸塩（塩酸テトラヒドロゾリン）である。
【００１２】
本発明の眼科組成物が（Ａ−１）成分を含む場合、（Ａ−１）成分の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、下限が０．０００１ｗ／ｖ％以上、０．０００３ｗ／ｖ％以上、０．０００５ｗ／ｖ％以上であってもよい。また、０．０１ｗ／ｖ％以上であってもよい。また、本発明の眼科組成物が（Ａ−１）成分を含む場合、（Ａ−１）成分の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、上限が０．５ｗ／ｖ％以下、０．３ｗ／ｖ％以下、０．１ｗ／ｖ％以下、０．０５ｗ／ｖ％以下であってもよい。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
【００１３】
本発明の眼科組成物が（Ａ−１）成分を含む場合、（Ａ−１）成分の割合は、（Ｂ）成分が１である場合に対して、例えば、下限が通常０．００１以上であり、０．０１以上であり、０．１以上が好ましく、０．２以上であることがより好ましく、０．５以上であることが特に好ましい。また、（Ａ−１）成分の割合は、（Ｂ）成分１に対して、例えば、上限が、１０００以下であることが好ましく、８００以下であることがより好ましく、５０以下であることがさらに好ましく、１０以下であることが特に好ましい。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
【００１４】
〔（Ａ−２）抗ヒスタミン剤〕
抗ヒスタミン剤としては、例えば、クロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン、ケトチフェン、イプロヘプチン、レボカバスチン、オロパタジン及びこれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種を用いることが好ましいが、これらに限定されない。
これら抗ヒスタミン剤のうち、好ましくは、ケトチフェンフマル酸塩、イプロヘプチン、ジフェンヒドラミン塩酸塩、クロルフェニラミンマレイン酸塩（マレイン酸クロルフェンラミン）、レボカバスチン塩酸塩、オロパタジン塩酸塩等が挙げられ、より好ましくは、ケトチフェンフマル酸塩、ジフェンヒドラミン塩酸塩、クロルフェニラミンマレイン酸塩、レボカバスチン塩酸塩、オロパタジン塩酸塩等が挙げられ、更に好ましくは、ジフェンヒドラミン塩酸塩、クロルフェニラミンマレイン酸塩が挙げられ、更により好ましくはクロルフェニラミンマレイン酸塩が挙げられる。
【００１５】
本発明の眼科組成物が（Ａ−２）成分を含む場合、（Ａ−２）成分の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、下限が０．００１ｗ／ｖ％以上、０．００３ｗ／ｖ％以上、０．００５ｗ／ｖ％以上、０．０１ｗ／ｖ％以上であってもよい。また、上限が０．５ｗ／ｖ％以下、０．３ｗ／ｖ％以下、０．０５ｗ／ｖ％以下、０．０３ｗ／ｖ％以下であってもよい。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
【００１６】
本発明の眼科組成物が（Ａ−２）成分を含む場合、（Ａ−２）成分の割合は、（Ｂ）成分が１である場合に対して、例えば、下限が、０．０１以上であることが好ましく、０．０５以上であることが更に好ましく、０．１以上であることが特に好ましい。また、（Ａ−２）成分の割合は、（Ｂ）成分１に対して、例えば、上限が、１０００以下であることが好ましく、８００以下であることがより好ましく、５００以下であることが更に好ましく、１００以下が更により好ましく、１０以下であることが特に好ましい。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
【００１７】
〔（Ａ−３）成分〕
本発明の眼科組成物は、（Ａ−３）成分として、カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、メチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種を含む。これらは、ｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれであってもよい。
【００１８】
また、本発明の（Ａ−３）成分は、精油に含有された状態で使用することが出来る。（Ａ−３）成分を含有する精油としては、例えば、ハッカ油、クールミント油、スペアミント油、ペパーミント油、ウイキョウ油、ケイヒ油、ベルガモット油、ユーカリ油、シナモン油、ローズ油等の１種以上が挙げられ、中でもハッカ油またはクールミント油が特に好ましい。
【００１９】
本発明の眼科組成物が（Ａ−３）成分を含む場合、（Ａ−３）成分の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、下限が０．００００１ｗ／ｖ％以上、０．００００５ｗ／ｖ％以上、０．０００１ｗ／ｖ％以上、０．０００３ｗ／ｖ％以上、０．０００５ｗ／ｖ％以上、０．０００７ｗ／ｖ％以上、０．０００８ｗ／ｖ％以上、０．０００９ｗ／ｖ％以上、０．００１ｗ／ｖ％以上であってもよい。
また、本発明の眼科組成物が（Ａ−３）成分を含む場合、（Ａ−３）成分の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、上限が５ｗ／ｖ％以下、３ｗ／ｖ％以下、２ｗ／ｖ％以下、１．５ｗ／ｖ％以下、１．２ｗ／ｖ％以下、１ｗ／ｖ％以下、０．９ｗ／ｖ％以下、０．８ｗ／ｖ％以下、０．７ｗ／ｖ％以下、０．６ｗ／ｖ％以下、０．５ｗ／ｖ％以下、０．３ｗ／ｖ％以下、０．１ｗ／ｖ％以下であってもよい。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
特に、さらに、（Ａ−３）成分の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、合計で０．００００１ｗ／ｖ％〜２ｗ／ｖ％（例えば、合計で０．００００５〜１ｗ／ｖ％）、好ましくは、合計で０．０００１〜０．１ｗ／ｖ％（例えば、０．０００３〜０．０５ｗ／ｖ％）、さらに好ましくは、合計で０．０００５〜０．０２ｗ／ｖ％（例えば、合計で０．００１〜０．０１ｗ／ｖ％）程度であってもよい。さらに、（Ａ−３）成分の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、下限が０．０００００００５％以上、０．００００００５％以上、０．０００００１％以上であっても良い。
【００２０】
眼科組成物中に（Ａ−３）成分を含む精油が使用される場合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、精油中の（Ａ−３）成分の下限が、０．０００１ｗ／ｖ％以上、０．０００５ｗ／ｖ％以上、０．００１ｗ／ｖ％以上、０．００１５ｗ／ｖ％以上であってもよい。また、眼科組成物の全量に対して、例えば、精油中の（Ａ−３）成分の上限が、０．２ｗ／ｖ％以下、０．１ｗ／ｖ％以下、０．０５ｗ／ｖ％以下、０．０２ｗ／ｖ％以下であってもよい。また、上限が９０ｗ／ｖ％以下、８０ｗ／ｖ％以下、６０ｗ／ｖ％以下、３０ｗ／ｖ％以下、１０ｗ／ｖ％以下、１ｗ／ｖ％以下であっても良い。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
特に、さらに、（Ａ−３）成分を含む精油の割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、合計で０．００００１ｗ／ｖ％〜２ｗ／ｖ％（例えば、合計で０．００００５〜１ｗ／ｖ％）、好ましくは、合計で０．０００１〜０．１ｗ／ｖ％（例えば、０．０００３〜０．０５ｗ／ｖ％）、さらに好ましくは、合計で０．０００５〜０．０２ｗ／ｖ％（例えば、合計で０．００１〜０．０１ｗ／ｖ％）程度であってもよい。
なお、眼科組成物中に（Ａ−３）成分を含む精油が使用される場合は、当該精油は、精油中の（Ａ−３）成分の含有量が、上記割合を満たすように適宜調整される。
【００２１】
本発明の眼科組成物が（Ａ−３）成分を含む場合、（Ａ−３）成分の割合は、（Ｂ）成分が１である場合に対して、例えば、下限が、０．０００００１以上、０．００００１以上、０．０００１以上、０．００１以上、０．００５以上、０．０１以上、０．１、１以上であってもよい。また、（Ａ−３）成分の割合は、（Ｂ）成分１に対して、例えば、上限が、８００以下、５００以下、１００以下、１０以下であってもよい。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
【００２２】
〔（Ａ−４）成分〕
局所麻酔成分としては、クロロブタノールが好ましい。また、本発明においては、クロロブタノールの他、塩酸プロカイン又は塩酸リドカイン等の当分野で公知の局所麻酔成分をクロロブタノールの代わりに、又はクロロブタノールと併用してよい。
【００２３】
特に、本発明の眼科組成物が（Ａ−４）成分を含む場合、この割合は、眼科組成物の全量に対して、例えば、０．００１〜２．５ｗ／ｖ％が好ましく、０．０１〜１ｗ／ｖ％がより好ましく、０．０５〜０．５ｗ／ｖ％が更に好ましく、０．１〜０．２５％が特に好ましい。
【００２４】
本発明の眼科組成物が（Ａ−４）成分を含む場合、（Ａ−４）成分の割合は、（Ｂ）成分が１である場合に対して、例えば、下限が、０．０１以上、０．１以上、１以上であってもよい。また、（Ａ−３）成分の割合は、（Ｂ）成分１に対して、例えば、上限が、５０００以下、３５００以下、１０００以下、５００以下、１００以下、５０以下、１０以下であってもよい。
また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
【００２５】
〔（Ａ）成分〕
本明細書において、（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分をまとめて、（Ａ）成分と総称することもある。また、（Ａ）成分は複数成分を組み合わせて使用することが好ましく、（Ａ−１）〜（Ａ−４）からなる群より選択される２群以上を組み合わせて使用することがより好ましく、３群以上を組み合わせて使用することが更に好ましい。
【００２６】
〔（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニスト〕
本発明の眼科組成物は、ＴＲＰＡ１アゴニストを含むことが好ましい。ＴＲＰＡ１アゴニストは、眼に刺激感を与える。ＴＲＰＡ１アゴニストとしては、メントールが好ましい。
メントールは、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されず、ｄ体、ｌ体、ｄｌ体のいずれであってもよいが、ｌ−メントールが好ましい。
【００２７】
また、メントールとして、メントールを含有する精油を使用してもよい。このような精油としては、例えば、ペパーミント油、ハッカ油、クールミント油、スペアミント等の精油が挙げられる。メントールとして、市販されているものを使用することもできる。メントール及び精油は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００２８】
本発明の眼科組成物におけるメントールの含有量は、眼科組成物の全量に対して、０．００００１〜０．５ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０００１〜０．２５ｗ／ｖ％であることがより好ましく、０．０００５〜０．１ｗ／ｖ％であることがさらに好ましく、０．００１〜０．０８ｗ／ｖ％であることが更に好ましい。なお、（Ａ−３）成分として、メントールを含む精油と（Ｂ）成分としてメントールを使用する場合は、精油中に含まれるメントール量と（Ｂ）成分のメントール量の総和が上記割合を満たすように設定される。
また、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストと、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストを含む精油が併用される場合は、配合される所望の（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストと精油中の所望の（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストの合計の含有量が上記割合を満たすように設定される。
【００２９】
本発明の眼科組成物は、（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される少なくとも１種を含むことにより、刺激感が抑制され得る。さらに、本発明の眼科組成物が、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストを含む場合、眼科組成物中に含まれるＴＲＰＡ１アゴニストによる刺激感を抑制することが出来るため、特に好ましい。眼科組成物を投与されるヒト等の動物がドライアイやアレルギー等による疼痛症状を示しているか、又は当該動物の刺激受容体ＴＲＰＡ１が活性化されていることも好ましい。
【００３０】
本発明の眼科組成物は、上記した成分の他に、更に非イオン界面活性剤を含んでもよい。非イオン界面活性剤は、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。非イオン界面活性剤の具体例としては、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー付加物、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルが挙げられる。
【００３１】
非イオン界面活性剤のより具体的な例として、例えば、ポリオキシエチレン（以下、ＰＯＥともいう。）−ポリオキシプロピレン（以下、ＰＯＰともいう。）グリコール（例えば、ポロクサマー４０７、ポロクサマー２３５、ポロクサマー１８８等のポロクサマー類）；ポロキサミンなどのエチレンジアミンのＰＯＥ−ＰＯＰブロックコポリマー付加物；モノラウリル酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート２０）、モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート８０）、ＰＯＥソルビタンモノステアレート（ポリソルベート６０）、ＰＯＥソルビタントリステアレート（ポリソルベート６５）等のＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類；ＰＯＥ（５）硬化ヒマシ油、ＰＯＥ（１０）硬化ヒマシ油、ＰＯＥ（２０）硬化ヒマシ油、ＰＯＥ（４０）硬化ヒマシ油、ＰＯＥ（５０）硬化ヒマシ油、ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油、ＰＯＥ（１００）硬化ヒマシ油などのＰＯＥ硬化ヒマシ油；ＰＯＥ（３）ヒマシ油、ＰＯＥ（１０）ヒマシ油、ＰＯＥ（３５）ヒマシ油などのＰＯＥヒマシ油；ＰＯＥ（９）ラウリルエーテルなどのＰＯＥアルキルエーテル類；ＰＯＥ（２０）ＰＯＰ（４）セチルエーテルなどのＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類；ＰＯＥ（１０）ノニルフェニルエーテルなどのＰＯＥアルキルフェニルエーテル類；ステアリン酸ポリオキシル４０などのモノステアリン酸ポリエチレングリコール類などが挙げられる。なお、括弧内の数字はＰＯＰ又はＰＯＥの平均付加モル数を示す。
【００３２】
これらの非イオン界面活性剤の中でも、本発明の効果を顕著に奏する観点から、ＰＯＥ−ＰＯＰグリコール、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類、ＰＯＥ硬化ヒマシ油、ＰＯＥヒマシ油、及びモノステアリン酸ポリエチレングリコール類が好ましく、ポロクサマー４０７、モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン（ポリソルベート８０）、ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０）、ＰＯＥ（４０）硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０）、ＰＯＥ（３）ヒマシ油（ポリオキシエチレンヒマシ油３）、ＰＯＥ（１０）ヒマシ油（ポリオキシエチレンヒマシ油１０）、ＰＯＥ（３５）ヒマシ油（ポリオキシエチレンヒマシ油３５）、ステアリン酸ポリオキシル４０がより好ましく、モノオレイン酸ＰＯＥ（２０）ソルビタン、ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油が特に好ましい。
【００３３】
これらの非イオン界面活性剤は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。非イオン界面活性剤は、１種単独で用いてもよく、２種以上を任意に組み合わせて用いてもよい。
非イオン界面活性剤の含有量は、非イオン界面活性剤の種類、他の成分の種類や量、眼科組成物の用途等に応じて適宜設定できる。
【００３４】
また、本発明の眼科組成物は、非イオン界面活性剤以外の界面活性剤を含んでいてもよい。そのような界面活性剤は、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されないが、具体例としては、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、Ｎ−アシルタウリン塩等の陰イオン界面活性剤等、あるいは、例えば、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン等の両性界面活性剤等が挙げられる。
【００３５】
一例として、眼科組成物の全量に対する界面活性剤の総含有量は、限定はされないが、例えば、下限について、好ましくは、０．０００１ｗ／ｖ％以上であり、より好ましくは０．０００５ｗ／ｖ％以上、さらに好ましくは０．００１ｗ／ｖ％以上、特に好ましくは０．００５ｗ／ｖ％以上であり、最も好ましくは０．０１ｗ／ｖ％以上である。また、上限について、限定はされないが、好ましくは１０ｗ／ｖ％以下であり、より好ましくは５ｗ／ｖ％以下、さらに好ましくは１ｗ／ｖ％以下、特に好ましくは０．５ｗ／ｖ％以下である。また、上記した下限と上限が任意に組み合わせられてもよい。
【００３６】
本発明において、眼科組成物は、上記した成分の他に、更に増粘剤を含有していてもよい。増粘剤として、具体的には、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ヒプロメロース）、カルボキシメチルセルロース及びその塩、カルボキシエチルセルロース及びその塩等のセルロース系高分子化合物、コンドロイチン硫酸及びその塩並びにヒアルロン酸及びその塩等のグリコサミノグリカン、ポリビニルアルコール（完全又は部分ケン化物）、ポリビニルピロリドン（Ｋ１７、Ｋ２５、Ｋ３０、Ｋ９０など）、カルボキシビニルポリマー及びその塩等のビニル系高分子、デキストラン、マクロゴール６０００、マクロゴール４０００、マクロゴール４００等のマクロゴール（ポリエチレングリコール）、ジェランガム、アルギン酸及びその塩が挙げられる。ここで、その塩とは、特に限定はされないが、ナトリウム塩が好ましい。
本発明の効果を顕著に奏する観点から、グリコサミノグリカン、セルロース系高分子、又はビニル系高分子が好ましく、グルコサミノグリカンがより好ましく、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸及びそれらの塩がより好ましく、コンドロイチン硫酸ナトリウム（コンドロイチン硫酸エステルナトリウム）及びヒアルロン酸ナトリウムが更に好ましい。これらの増粘剤は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。これらの増粘剤は、１種を単独で使用してもよく、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３７】
増粘剤の総含有量は、使用する増粘剤の種類、他の配合成分の種類や配合量、眼科組成物の用途等に応じて適宜設定できる。眼科組成物の全量に対して、増粘剤の総含有量は、限定はされないが、好ましくは０．０００１ｗ／ｖ％以上であり、より好ましくは０．０００５ｗ／ｖ％以上、さらに好ましくは０．００１ｗ／ｖ％以上、さらに好ましくは０．００５ｗ／ｖ％以上、さらにより好ましくは０．０１ｗ／ｖ％以上、最も好ましくは０．０５ｗ／ｖ％以上である。また、眼科組成物の全量に対して、増粘剤の総含有量は、限定はされないが、好ましくは５ｗ／ｖ％以下であり、より好ましくは３ｗ／ｖ％以下、さらに好ましくは１ｗ／ｖ％以下、更により好ましくは０．５ｗ／ｖ％以下、最も好ましくは０．３ｗ／ｖ％以下である。眼科組成物の全量に対して、増粘剤の総含有量は、限定はされないが、好ましくは０．０００１〜５ｗ／ｖ％、より好ましくは、０．０００５〜３ｗ／ｖ％、さらに好ましくは０．００１〜１ｗ／ｖ％、さらにより好ましくは、０．００５〜０．５ｗ／ｖ％、特に好ましくは、０．０１〜０．５ｗ／ｖ％、最も好ましくは０．０５〜０．３ｗ／ｖ％である。
【００３８】
本発明において、眼科組成物は、上記した成分の他に、更に緩衝剤を含有していてもよい。緩衝剤としては、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。このような緩衝剤の一例として、ホウ酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、トリス緩衝剤、アスパラギン酸、アスパラギン酸塩、イプシロン−アミノカプロン酸等が挙げられる。緩衝剤としては、ホウ酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤が好ましい。
【００３９】
より具体的な例として、限定はされないが、ホウ酸緩衝剤として、ホウ酸又はその塩（ホウ酸ナトリウム、テトラホウ酸カリウム、メタホウ酸カリウム、ホウ酸アンモニウム、ホウ砂等）；リン酸緩衝剤として、リン酸又はその塩（リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸一水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム等）；炭酸緩衝剤として、炭酸又はその塩（炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸アンモニウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸水素カリウム、炭酸マグネシウム等）；クエン酸緩衝剤として、クエン酸又はその塩（クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸カルシウム、クエン酸二水素ナトリウム、クエン酸二ナトリウム等）；酢酸緩衝剤として、酢酸又はその塩（酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、酢酸カルシウム、酢酸ナトリウム等）；アスパラギン酸又はその塩（アスパラギン酸ナトリウム、アスパラギン酸マグネシウム、アスパラギン酸カリウム、アスパラギン酸マグネシウム・カリウム混合物等）が例示できる。また、緩衝剤の製造の原料として、各塩の水和物を用いてもよい。
【００４０】
これらの緩衝剤は、公知の方法により合成して使用しても、市販品を入手して使用してもよい。これらの緩衝剤は、１種単独で用いてもよく、２種以上を任意に組み合わせて用いてもよい。
【００４１】
本発明の眼科組成物における緩衝剤の含有量は、使用する緩衝剤の種類、他の配合成分の種類や配合量、眼科組成物の用途等に応じて適宜設定できる。一例として、眼科組成物の全量に対する緩衝剤の総含有量は、限定はされないが、好ましくは０．０１ｗ／ｖ％以上、より好ましくは０．０５ｗ／ｖ％以上、さらに好ましくは０．１ｗ／ｖ％以上、特に好ましくは０．３ｗ／ｖ％以上である。眼科組成物の全量に対する緩衝剤の総含有量は、限定はされないが、好ましくは１０ｗ／ｖ％以下、より好ましくは５ｗ／ｖ％以下、さらに好ましくは３ｗ／ｖ％以下、特に好ましくは２ｗ／ｖ％以下である。眼科組成物の全量に対する緩衝剤の総含有量は、限定はされないが、好ましくは０．０１〜１０ｗ／ｖ％、より好ましくは０．０５〜５ｗ／ｖ％、さらに好ましくは０．１〜３ｗ／ｖ％、特に好ましくは０．３〜２ｗ／ｖ％である。
【００４２】
本発明において、眼科組成物は、上記した成分の他に、更に等張化剤を含有していてもよい。等張化剤としては、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容されるものであれば、特に制限されない。
等張化剤として、具体的には、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、チオ硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、グリセリン、プロピレングリコール等が挙げられる。これらの等張化剤の中でも、本発明の効果を顕著に奏させるという観点から、好ましくは、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、グリセリン、及びプロピレングリコールが挙げられる。これらの等張化剤は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。
【００４３】
本発明の眼科組成物における等張化剤の含有量については、使用する等張化剤の種類、他の配合成分の種類や配合量、眼科組成物の用途等に応じて適宜設定できる。一例として、眼科組成物の全量に対する緩衝剤の総含有量は、限定はされないが、好ましくは０．０１〜１０ｗ／ｖ％、好ましくは０．０５〜５ｗ／ｖ％、更に好ましくは０．１〜３ｗ／ｖ％である。
【００４４】
本発明の眼科組成物は、本発明の効果を損なわない範囲であれば、その用途及び製剤形態に応じて、常法に従い、様々な添加物を適宜選択し、１種又はそれ以上を併用して適当量含有させてもよい。このような添加物として、例えば、医薬品添加物事典２０１６（日本医薬品添加剤協会編集）又は一般用医薬品製造販売承認基準２０１２年版（一般社団法人  レギュラトリーサイエンス学会）に記載された有効成分（薬理活性成分や生理活性成分等）等に記載された各種添加物が例示できる。代表的な成分として次の添加物が挙げられる。
担体：例えば、水、含水エタノール等の水性溶媒。
キレート剤：例えば、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、エチレンジアミン三酢酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）等。
基剤：例えば、オクチルドデカノール、酸化チタン、臭化カリウム、プラスチベース等。
【００４５】
ｐＨ調節剤：例えば、塩酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン等。
安定化剤：例えば、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート（ロンガリット）、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、モノステアリン酸アルミニウム、モノステアリン酸グリセリン、シクロデキストリン、モノエタノールアミン等。
防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤：例えば、塩化亜鉛、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、安息香酸ナトリウム、エタノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、デヒドロ酢酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、硫酸オキシキノリン、フェネチルアルコール、ベンジルアルコール、ビグアニド化合物（具体的には、塩酸ポリヘキサニド等）、グローキル（ローディア社製  商品名）等。
【００４６】
糖類：例えば、グルコース、シクロデキストリン、アルファ−シクロデキストリン等。
糖アルコール類：例えば、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、グリセリン等。これらはｄ体、ｌ体又はｄｌ体のいずれでもよい。
【００４７】
また、本実施形態に係る刺激感が抑制された眼科用組成物は、本発明の効果を妨げない限り、上記成分の他に種々の薬理活性成分や生理活性成分を組み合わせて適当量含有していてもよい。成分は特に制限されず、例えば、一般用医薬品製造販売承認基準２０１２年版（一般社団法人レギュラトリーサイエンス学会監修）に記載された各種医薬における有効成分が例示できる。例えば、眼科用薬において用いられる成分として、具体的には、次のような成分が挙げられる。
眼筋調節薬剤：例えば、ネオスチグミンメチル硫酸塩、トロピカミド、ヘレニエン硫酸アトロピン等のコリンエステラーゼ阻害剤等。
ビタミン類：例えば、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム、ピリドキシン塩酸塩、シアノコバラミン、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、パンテノール、アスコルビン酸、酢酸トコフェロール、酢酸ｄ−α−トコフェロール、コハク酸トコフェロール、ニコチン酸トコフェロール、リノレン酸トコフェロール等。
アミノ酸類：例えば、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸カリウム、Ｌ−アスパラギン酸マグネシウム・カリウム、アミノエチルスルホン酸（タウリン）等。
消炎剤：例えば、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸二カリウム、グリチルレチン、サリチル酸メチル、サリチル酸グリコール、アズレンスルホン酸、アズレンスルホン酸ナトリウム、アラントイン、トラネキサム酸、ベルベリン、リゾチーム、塩化リゾチーム、塩化ベルベリン、ベルベリン硫酸塩、ベルベリン硫酸塩水和物、イプシロン−アミノカプロン酸、インドメタシン、プラノプロフェン、イブプロフェン、イブプロフェンピコノール、ケトプロフェン、ジクロフェナクナトリウム、ブロムフェナクナトリウム、フェルビナク、ベンダザック、ピロキシカム、ブフェキサマク、フルフェナム酸ブチル、硫酸亜鉛水和物等。
収斂剤：例えば、酸化亜鉛、乳酸亜鉛、硫酸亜鉛等。これらは水和物であってもよい。
スイッチ成分：例えば、クロモグリク酸ナトリウム、プラノプロフェン等。
【００４８】
その他：例えば、スルファメトキサゾール、スルファメトキサゾールナトリウム、スルフイソキサゾール、スルフイソミジンナトリウム、紫根、セイヨウトチノキ、及びこれらの塩、クレアチニン、チロキサポール、ゴマ油、ヒマシ油、ジブチルヒドロキシトルエン、フェニルエチルアルコール等。
【００４９】
本発明の眼科組成物が水を含有する場合、水の含有量としては、本発明による効果をより顕著に奏する観点から、例えば、眼科組成物の全量を基準として、水の含有量が、８０ｗ／ｖ％以上１００ｗ／ｖ％未満であることが好ましく、８５ｗ／ｖ％以上９９．５ｗ／ｖ％以下であることがより好ましく、９０ｗ／ｖ％以上９９．２ｗ／ｖ％以下であることが更に好ましい。
【００５０】
本発明の眼科組成物に使用される水は、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容されるものであればよい。このような水として、例えば、蒸留水、常水、精製水、滅菌精製水、注射用水及び注射用蒸留水等を挙げることができる。それらの定義は第十七改正日本薬局方に基づく。
【００５１】
本発明の眼科組成物は、所望量の（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分及び（Ａ−４）成分からなる群より選択される１種以上、及び任意で（Ｂ）ＴＲＰＡアゴニスト、さらに、必要に応じて他の成分を、所望の濃度となるように添加及び混和することにより調製することができる。例えば、精製水でそれらの成分を溶解又は分散させ、所定のｐＨ及び浸透圧に調整し、濾過滅菌等により滅菌処理することで調製できる。
【００５２】
本発明の眼科組成物のｐＨは、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容される範囲内であれば、特に限定されるものではない。例えば、眼科組成物のｐＨは、眼科組成物の用途、製剤形態、使用方法等に応じて適宜設定され得るが、例えば、４．０〜９．５であってよく、４．０〜９．０であることが好ましく、４．５〜９．０であることがより好ましく、４．５〜８．５であることが更に好ましく、５．０〜８．５であることが更により好ましい。
【００５３】
本発明の眼科組成物は、必要に応じて、生体に許容される範囲内の浸透圧比に調節することができる。適切な浸透圧比は、眼科組成物の用途、製剤形態、使用方法等に応じて適宜設定され得るが、例えば、０．４〜５．０とすることができ、０．６〜３．０とすることが好ましく、０．８〜２．２とすることがより好ましく、０．８〜２．０とすることが更に好ましい。浸透圧比は、第十七改正日本薬局方に基づき、２８６ｍＯｓｍ（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液の浸透圧）に対する試料の浸透圧の比とし、浸透圧は日本薬局方記載の浸透圧測定法（凝固点降下法）を参考にして測定する。なお、浸透圧比測定用標準液（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液）は、塩化ナトリウム（日本薬局方標準試薬）を５００〜６５０℃で４０〜５０分間乾燥した後、デシケーター（シリカゲル）中で放冷し、その０．９００ｇを正確に量り、精製水に溶かし正確に１００ｍＬとして調製するか、市販の浸透圧比測定用標準液（０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウム水溶液）を用いることができる。
【００５４】
本発明の眼科組成物の粘度は、医薬上、薬理学的に又は生理学的に許容される範囲内であれば、特に限定されるものではない。例えば、回転粘度計（ＲＥ５５０型粘度計、東機産業社製、ローター；１°３４‘×Ｒ２４）で測定した２０℃における粘度が０．１〜１００００ｍＰａ・ｓであることが好ましく、０．１〜８０００ｍＰａ・ｓであることがより好ましく、０．１〜１０００ｍＰａ・ｓであることが更に好ましく、０．１〜１００ｍＰａ・ｓであることが更により好ましく、１〜２０ｍＰａ・ｓであることが特に好ましい。
【００５５】
本発明の眼科組成物は、目的に応じて種々の製剤形態をとることができる。そのような製剤形態として、例えば、液剤、ゲル剤、半固形剤（軟膏等）等が挙げられる。
【００５６】
本発明の眼科組成物は、例えば、点眼剤（点眼液又は点眼薬ともいう。また、点眼剤にはコンタクトレンズ装用中に点眼可能な点眼剤を含む。）、人工涙液、洗眼剤（洗眼液又は洗眼薬ともいう。また、洗眼剤にはコンタクトレンズ装用中に洗眼可能な洗眼剤を含む。）、コンタクトレンズ用組成物［コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズケア用組成物（コンタクトレンズ消毒剤、コンタクトレンズ用保存剤、コンタクトレンズ用洗浄剤、コンタクトレンズ用洗浄保存剤）等］として用いることができる。
なお、「コンタクトレンズ」は、ハードコンタクトレンズ、ソフトコンタクトレンズ（イオン性及び非イオン性の双方を包含し、シリコーンハイドロゲルコンタクトレンズ及び非シリコーンハイドロゲルコンタクトレンズの双方を包含する）を含む。
【００５７】
本発明の眼科組成物は、本発明の効果をより顕著に発揮できることから、点眼剤（コンタクトレンズ装用中に点眼可能な点眼剤を含む。）であることが好ましい。本実施形態に係る眼科組成物が点眼剤である場合、その用法・用量としては、効果を奏し、副作用の少ない用法・用量であれば特に限定されないが、例えば成人（１５歳以上）及び７歳以上の小児の場合、１回１〜７滴が好ましく、１回１〜３滴、１〜２滴、又は２〜３滴がより好ましい。点眼回数は、１回１〜３滴、１〜２滴、又は２〜３滴の場合、１日５〜６回点眼して用いる方法を例示できる。また、１回４〜６滴を１日３〜６回点眼しても良い。
【００５８】
本発明の眼科組成物は、任意の容器に収容して提供される。本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器については特に制限されず、例えば、ガラス製であってもよく、またプラスチック製であってもよい。好ましくはプラスチック製である。プラスチックとしては、例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリアリレート、ポリエチレンナフタレート、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリイミド及びこれらを構成するモノマーの共重合体、並びにこれら２種以上を混合したものが挙げられる。好ましくは、ポリエチレンテレフタレートである。また、本実施形態に係る眼科組成物を収容する容器は、容器内部を視認できる透明容器であってもよく、容器内部の視認が困難な不透明容器であってもよい。好ましくは透明容器である。ここで、「透明容器」とは、無色透明容器及び有色透明容器の双方が含まれる。
【００５９】
本発明の眼科組成物を収容する容器には、ノズルが装着されてもよい。ノズルの材質については特に制限されず、例えば、ガラス製であってもよく、またプラスチック製であってもよい。好ましくはプラスチック製である。プラスチックとしては、例えば、
ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート及びこれらを構成するモノマーの共重合体、並びにこれら２種以上を混合したものが挙げられる。
【００６０】
本発明の眼科組成物を収容する容器は、複数回の使用量が収容されるマルチドーズ型であってもよく、単回の使用量が収容されるユニットドーズ型であってもよい。
【００６１】
〔眼科組成物用の刺激抑制剤〕
また、本発明は、眼科組成物用の刺激抑制剤も提供する。刺激抑制剤の配合や形態としては、上記した眼科組成物と同様のものを用いることが出来る。
本発明の刺激抑制剤はＴＲＰＡ１アゴニストがメントールの場合、清涼感を保持しつつ、眼科組成物の刺激を抑制することができる。また、本発明の刺激抑制剤は、ＴＲＰＡ１アゴニストに由来する眼科組成物の刺激を抑制することが出来るため、ドライアイに由来する疼痛を抑制することが出来る。これは、ＴＲＰＡ１がドライアイによる疼痛にも関与することが報告されていることに基づく（例えば、Neuroscience. 2015 Apr 2;290:204-13 参照）。また、疼痛はドライアイ由来の他、アレルギー由来であってもよい。なお、ドライアイとは、ドライアイ診断基準によるドライアイの他、目の乾きなども含む。
【００６２】
〔眼科組成物の刺激を抑制する方法〕
また、本発明は、眼科組成物の刺激を抑制する方法も提供する。具体的には、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストを含有する眼科組成物に、さらに、（Ａ−１）充血除去成分、（Ａ−２）抗ヒスタミン剤、（Ａ−３）カンフル、メントン、イソメントール、シネオール、メントフラン、ピネン、リモネン、ネオメントール、及びメチルアセテートからなる群より選択される少なくとも１種、及び（Ａ−４）クロロブタノールからなる群より選択される少なくとも１種を含有させることを特徴とする、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストに由来する眼科組成物の刺激を抑制する方法、である。
【００６３】
〔眼刺激の評価方法〕
また、本発明は、眼刺激の評価方法も提供する。例えば、被験試料を、ＴＲＰＡ１発現細胞と接触させ、前記被験試料によりＴＲＰＡ１を介して引き起こされる細胞内カルシウムイオン濃度の変化量を測定することを特徴とする、被験試料による眼刺激の評価方法、である。
本発明の評価方法に用いられる被験試料として、例えば、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストと、眼科組成物の分野で通常用いられる成分との組み合わせを用いることが出来る。例えば、そのような成分としては、上記した（Ａ−１）成分、（Ａ−２）成分、（Ａ−３）成分、又は（Ａ−４）成分であってもよく、界面活性剤、増粘剤、緩衝剤、等張化剤、担体、キレート剤、基剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、殺菌剤又は抗菌剤、糖類、糖アルコール類、眼筋調節薬剤、ビタミン類、アミノ酸類、消炎剤、収斂剤等であってもよい。
また、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストは、被験試料との対照（対照試料）として用いられてもよい。
ＴＲＰＡ１発現細胞は、安定的にｈＴＲＰＡ１遺伝子を保持することが出来る細胞であれば特に限定されないが、例えば、T-REｘ−293細胞、HEK293T細胞等が好ましい。
上記方法における、細胞内カルシウムイオン濃度の変化は、例えば、公知のＣａ２＋濃度指示薬、Fluo-4、Fluo-8又はFluo-2等を用いて、市販のマイクロプレートリーダーや、蛍光顕微鏡等により測定、観察することが出来る。
本発明においては、細胞内カルシウムイオン濃度の変化量を測定することで、眼刺激の有無、眼刺激の強さ等の情報を得ることが出来る。また、被験試料や対照試料をＴＲＰＡ１発現細胞と接触させる時間を調整すること等により、細胞内カルシウムイオン濃度を経時観察して、被験試料の、ＴＲＰＡ１発現細胞に対する親和性に関する情報（例えば、被験試料のＬｏｇＰ値（分配係数）等との相関）等も得ることが出来る。
また、被験試料を、ＴＲＰＡ１発現細胞と接触させる方法としては、例えば、被験試料又はその希釈液、あるいは、被験試料を含む人工涙液等を、培養されたＴＲＰＡ１発現細胞やヒト等の動物に添加、点眼する方法等が挙げられる。
【００６４】
以下に実施例を示し、本発明をより具体的に説明するが、本発明は実施例に何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００６５】
＜使用細胞＞
ｈＴＲＰＡ１遺伝子を保持するT-REｘ−293細胞株の調製
ｈＴＲＰＡ１のmRNAを、ヒトWI38細胞から抽出した。安定的にｈＴＲＰＡ１を発現させたHEK細胞は、Invitrogen社のテトラサイクリン制御T-REx発現システムを用いて作成した。ｈＴＲＰＡ１  mRNAを鋳型としてRT-PCRにより増幅させたｈＴＲＰＡ１のcDNAを、哺乳類細胞用遺伝子発現ベクターであるpcDNA4／TO（invitrogen社製）へ組み込み、invitrogen社の遺伝子導入試薬であるLipofectamin 2000 reagentを用いてT-REｘ−293細胞に導入した。pcDNA4/TOにはZeocinが組み込まれており、T-REｘ−293細胞にT-Rexシステムを維持するためのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子）が保持されている。抗生物質であるZeocin５００μｇ／ｍＬ及びブラストサイジン１０μｇ／ｍＬを用いて安定的にｈＴＲＰＡ１遺伝子を保持するT-REｘ−293細胞株を樹立した。
【００６６】
＜細胞培養＞
ｈＴＲＰＡ１を保持するT-REｘ−293細胞は１０％ＦＢＳ，１００ｕｎｉｔ／ｍＬ penicillin，１００ｍｇ／ｍＬ streptomysin，２５０ｎｇ／ｍＬ amphotericin Bを含むDMEM培地を用いて、５％二酸化炭素存在下で培養した。継代の際には２００μｇ／ｍＬ Zeocin，５μｇ／ｍＬ ブラストサイジンを加え、最大継代数は５０以下で行った。
具体的には前培養として60 mm dishにセミコンフルエントになるようにT-REｘ−293細胞を培養した後、PBS(-)で洗浄した。1×Trypsin／EDTA処理によりdishから細胞を剥がし、DMEM培地を加えた。その後、15 mLチューブに移し、800 rpmにて室温で4分間、遠心分離した。DMEM培地のみを吸引除去し、タッピングにより細胞をほぐした後、新たなDMEM培地を加え、約４０×１０４〜５０×１０４ｃｅｌｌ／ｍＬになるように細胞数を調整した細胞懸濁液を作成した。この時、受容体発現のために１μｇ／ｍＬtetracyclineを加えた。作成した細胞懸濁液を９６ウェルプレートに１００μＬずつ分注し、３７℃、５％CO2インキュベーターで一晩インキュベートして試験に使用した。
【００６７】
［試験例１］ｌ−メントールによる刺激感抑制確認試験
メントールは、刺激受容体ＴＲＰＡ１を活性化して刺激を与えることが知られている。そこでｌ−メントールと被験試料（実施例）を上記した細胞に投与し、被験試料によって、ｌ−メントールによるＴＲＰＡ１活性が阻害されるかどうかを確認した。
Ｃａ２＋濃度指示薬（Fluo-4若しくはFluo-8（AAT Bioquest, Inc.社製）を用いて、ＴＲＰ活性が変化するかを観察した。Ｃａ２＋濃度指示薬を予めｈＴＲＰＡ１を保持したT-REｘ−293細胞内に取り込ませておき、マイクロプレートリーダーにて蛍光量を測定した。
具体的には以下のプロトコールに従って実施した。前日に準備（上記した細胞培養）を行っていた９６ウェルプレートをインキュベーターより取り出し、DMEM培地をデカンテーションで除去した。１００μＬ／ウェルの緩衝液（pH 7.4、5.37 mM KCl、0.44 mM KH2PO4、137 mM NaCl、0.34 mM Na2HPO4、5.56 mM D-glucose、20 mM HEPES、1 mM CaCl2、0.1% bovine serum albumin、2.5 mM probenecid.、残余  精製水）で優しく洗浄し、１．５μＭ Fluo-8で溶解した同上の緩衝液を５０μＬずつウェルに添加した後、３７℃、５％CO2インキュベーターで１時間処理した。インキュベーター処理後、Fluo-8が入った同上の緩衝液をデカンテーションで除去し、１００μＬ／ウェルの同上の緩衝液で優しく洗浄した。さらに、１８０μＬ／ウェルの同上の緩衝液を添加して、Flexstation II (レジスタードトレードマーク) 又はFlexstation III (レジスタードトレードマーク) マイクロプレートリーダー（Molecular Devices、Sunnyvale、CA、USA）で測定を開始した。マイクロプレートリーダー測定開始３０秒後に被験試料を２０μＬ／ウェル添加し、添加後５秒〜１２０秒間における蛍光量の最大値を測定し、この値を蛍光量とした。
【００６８】
なお、ＴＲＰ活性（％）は以下の式に基づき、算出した。
【数１】
2020147557.tif 000002
【００６９】
比較例２（ｌ−メントール単独投与時）は１００％となる。
下記表１に記載の被験試料のＴＲＰ活性の算出結果を図１に示す。なお、比較例１はコントロール（ｌ−メントール非添加緩衝液（pH 7.4、5.37 mM KCl、0.44 mM KH2PO4、137 mM NaCl、0.34 mM Na2HPO4、5.56 mM D-glucose、20 mM HEPES、1 mM CaCl2、0.1% bovine serum albumin、2.5 mM probenecid.、残余  精製水））であり、比較例２は、比較例１と同様の緩衝液にｌ−メントール（ＴＲＰＡ１アゴニスト）を６６．７μＭの濃度で溶解させたものである。そして、実施例は、比較例１と同様の緩衝液に、ｌ−メントール(６６．７μＭ)と表１に記載の成分を、表２に記載の濃度で溶解させたものである。
【００７０】
【表１】
2020147557.tif 000003
【００７１】
【表２】
2020147557.tif 000004
【００７２】
図１の結果から、本発明の（Ａ−１）充血除去成分である、テトラヒドロゾリン塩酸塩、ナファゾリン塩酸塩、（Ａ−２）抗ヒスタミン剤である、クロルフェニラミンマレイン酸塩、ジフェンヒドラミン塩酸塩、（Ａ−３）成分であるｄ−カンフル、ｄｌ−カンフル、（−）−メントン、（＋）−イソメントール、１，８−シネオール、メントフラン、α-ピネン、β-ピネン、（Ｒ）−（＋）−リモネン、（Ｓ）−（−）−リモネン、ネオメントール、メチルアセテート、及び（Ａ−４）成分である、クロロブタノールを含む眼科組成物は、ＴＲＰＡ１アゴニストによる刺激感を抑制できた。また、（Ａ−３）成分を含む精油である、ペパーミントオイル及びユーカリ油を含む眼科組成物においても、同様にＴＲＰＡ１アゴニストによる刺激感を抑制できた。
【００７３】
［試験例２］ｌ−メントールのＴＲＰＡ１活性化の可視化、経時観察及び結合能力評価
上記試験例１と同様の原理に基づき、Ｃａ２＋濃度に応じて蛍光量が増すＣａ２＋濃度指示薬Fluo-8を用いてＴＲＰの活性化度を測定した。Ｃａ２＋濃度指示薬を予めｈＴＲＰＡ１遺伝子を保持したT-REｘ−293細胞内に取り込ませておき、蛍光顕微鏡システム（Leica, LAS AF6000）にて蛍光量を可視化した。
【００７４】
カバーガラス上に約６０×１０４ｃｅｌｌ／ｍＬのｈＴＲＰＡ１遺伝子を保持したT-REｘ−293細胞DMEM懸濁液をスライドガラス１枚あたり２０μＬ滴下して、３７℃、５％CO2インキュベーターで一晩インキュベートした。インキュベートしたカバーガラスをインキュベーターより取り出し、培地をデカンテーションで除去した。カバーガラスを緩衝液 (pH 7.4、5.37 mM KCl、0.44 mM KH2PO4、137 mM NaCl、0.34 mM Na2HPO4、5.56 mM D-glucose、20 mM HEPES、1 mM CaCl2、残余  精製水)で優しく洗浄した後、蛍光指示薬Fluo-8／緩衝液を添加し、３７℃、５％CO2インキュベーターで１時間処理した。インキュベーター処理後、カバーガラスをチャンバー上に設置し、蛍光顕微鏡システム（Leica, LAS AF6000）にて蛍光量を可視化及び経時観察した。
【００７５】
本試験の流れは以下の通りである。
（１）緩衝液中で蛍光試薬の発光量が安定しているのを確認した後に、緩衝液をｌ−メントール(６６．７μＭ)を含有する緩衝液に替え、ＴＲＰＡ１を活性させる。
（２）ＴＲＰＡ１の活性化が確認できた後に、ｌ−メントール(６６．７μＭ)を含有する緩衝液を、さらに同濃度のｌ−メントールと各被験試料(テトラヒドロゾリン塩酸塩  ０．００３１２５ｗ／ｖ％、ペパーミントオイル０．０１５ｗ／ｖ％)との組み合わせに替え、ＴＲＰＡ１活性が阻害されるか確認を行う。
（３）ＴＲＰＡ１活性の阻害効果が確認できた後に、ｌ−メントールと各被験試料を含有する緩衝液を、(１)で用いたｌ−メントールを含有する緩衝液に戻し、ＴＲＰＡ１が再び活性化されるか確認を行う。
【００７６】
ｌ−メントールによるＴＲＰＡ１活性化を蛍光顕微鏡にて可視化した結果を図２に示す。ボルネオールを被験試料として用いたものはＴＲＰＡ１活性阻害効果を示した後に、試験液をｌ−メントールに戻すと再度、ＴＲＰＡ１活性を示した（図２の参考例参照）。一方、（Ａ−１）充血除去成分であるテトラヒドロゾリン塩酸塩及び（Ａ−３）成分を含む精油であるペパーミントオイルを被験試料として用いたものは、ＴＲＰＡ１活性阻害効果を示した後に、試験液をメントールのみのものに戻すと阻害効果が見られないか、再活性化が弱かった（図２の実施例参照）。
すなわち、本発明の（Ａ−１）成分及び（Ａ−３）成分は、それぞれ、ＴＲＰＡ１受容体に対する阻害効果をしばらくの間、持続出来たと考えられる。
【００７７】
［試験例３］ヒトにおけるテトラヒドロゾリン塩酸塩による刺激感抑制確認試験
人工涙液(ロート製薬(株)製  「ロート  ソフトワン点眼」  塩化カリウム０．１ｗ／ｖ％、塩化ナトリウム０．４ｗ／ｖ％、ホウ酸、ｐＨ調節剤含有)にｌ−メントール(０．０１ｗ／ｖ％)及びポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(０．１ｗ／ｖ％)を溶解させたもの（比較例）、同上の人工涙液にｌ−メントール(０．０１ｗ／ｖ％)、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(０．１ｗ／ｖ％)及びテトラヒドロゾリン塩酸塩(０．０５ｗ／ｖ％)を溶解させたもの（実施例）を同じ被験者の左右の眼にそれぞれ点眼し、清涼感及び刺激感を評価した結果を図３に示す。なお、被験者は裸眼若しくは眼鏡着用の８名の成人男性であり、評価はＶＡＳスケール（最大目盛：２０）を用いて数値化して行った。
【００７８】
結果、メントールと（Ａ−１）充血除去成分であるテトラヒドロゾリン塩酸塩を組み合わせることで、ｌ−メントールの清涼感は維持しつつ、ｌ−メントールの刺激感を抑制出来ることが示された。すなわち本発明の（Ａ−１）充血除去成分によって、ＴＲＰＡ１アゴニストによる刺激感を抑制出来ることがヒトにおいても確認された。
【００７９】
［製剤例］
下記表４及び表５に記載の処方例を調製した。精製水は各液剤の全量が１００ｍＬとなるよう加えられた。
【００８０】
【表４】
2020147557.tif 000005
【００８１】
【表５】
2020147557.tif 000006
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明は、刺激感が抑制された眼科組成物、眼科組成物用の刺激抑制剤、眼科組成物の刺激を抑制する方法及び眼刺激の評価方法に関する。本発明の剤は、医薬品の分野において有用である。
【図１】
2020147557.tif 000007
【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年7月18日(2019.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である充血除去成分と、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストとを含有することを特徴とする、ＴＲＰＡ１アゴニストによる刺激感が抑制された眼科組成物（但し、５００００単位以上のレチノールパルミチン酸エステル、塩化ベンザルコニウム又はカフェイン若しくはその塩を含む場合を除く）。
【請求項２】
ＴＲＰＡ１アゴニストがｌ−メントールである請求項１に記載の眼科組成物。
【請求項３】
テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である充血除去成分を含有することを特徴とする、眼科組成物用のＴＲＰＡ１アゴニストの刺激抑制剤（但し、５００００単位以上のレチノールパルミチン酸エステル、塩化ベンザルコニウム又はカフェイン若しくはその塩を含む場合を除く）。
【請求項４】
ＴＲＰＡ１アゴニストがｌ−メントールである請求項３に記載の刺激抑制剤。
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月8日(2019.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である充血除去成分を含有する、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストであるｌ−メントールを含有する眼科組成物用の、ｌ−メントールによる清涼感を維持しつつ刺激感を抑制するための組成物（但し、塩化ベンザルコニウム又はカフェイン若しくはその塩を含む場合を除く）。
【請求項２】
（Ａ）成分の割合が（Ｂ）成分が１である場合に対して０．００１以上１０００以下である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストであるｌ−メントールを含有する眼科組成物に、さらに（Ａ）テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である充血除去成分を配合することにより、（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストであるｌ−メントールによる清涼感は維持しながらも刺激感を抑制する方法（但し、眼科組成物が塩化ベンザルコニウム又はカフェイン若しくはその塩を含む場合を除く）。
【請求項４】
眼科組成物において、（Ａ）成分の割合が（Ｂ）成分が１である場合に対して０．００１以上１０００以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
（Ａ）テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である充血除去成分の、
（Ａ）テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種である充血除去成分と（Ｂ）ＴＲＰＡ１アゴニストであるｌ−メントールとを含有する、ｌ−メントールによる清涼感は維持しながらも刺激感が抑制された眼科組成物製造のための使用（但し、眼科組成物が塩化ベンザルコニウム又はカフェイン若しくはその塩を含む場合を除く）。
【請求項６】
眼科組成物において、（Ａ）成分の割合が（Ｂ）成分が１である場合に対して０．００１以上１０００以下である、請求項５に記載の使用。
【手続補正書】
【提出日】令和2年2月25日(2020.2.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｂ）ｌ−メントールを含有する眼科組成物に、（Ａ）テトラヒドロゾリン、ナファゾリン、及びそれらの薬学上許容される塩からなる群より選択される少なくとも１種を配合することにより、（Ｂ）ｌ−メントールによる清涼感を維持しながらも刺激感を抑制する方法（但し、眼科組成物が塩化ベンザルコニウム又はカフェイン若しくはその塩を含む場合を除く）。
【請求項２】
眼科組成物において、（Ａ）成分の割合が（Ｂ）成分が１である場合に対して０．０１以上８００以下である、請求項１に記載の方法。