(57)【要約】【課題】本開示は、細胞構造体の作製に使用し得る細胞取扱容器において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制する手段を提供することを目的とする。【解決手段】本発明の一態様は、底部と、底部の外縁部に配置された側壁と、底部及び側壁によって形成される細胞収容部とを有する細胞取扱容器であって、側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が細胞接着性を有する、細胞取扱容器に関する。本発明の別の一態様は、細胞構造体の作製方法にも関する。【選択図】図１
2020080722.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
底部と、底部の外縁部に配置された側壁と、底部及び側壁によって形成される細胞収容部とを有する細胞取扱容器であって、側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が細胞接着性を有する、細胞取扱容器。
【請求項２】
底部の外縁部と側壁の下端部との接続部をさらに有し、底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の外縁部における底部の細胞収容部に面する側の表面と側壁の下端部との距離によって定義される接続部の高さが100 μm以下である、請求項1に記載の細胞取扱容器。
【請求項３】
底部と側壁との接続部の高さが10 μm以上且つ50 μm以下の範囲である、請求項2に記載の細胞取扱容器。
【請求項４】
底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部が、曲率を有する形状である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項５】
底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部が、底部に凹部を有する形状である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項６】
底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、側壁の細胞収容部に面する側の表面と底部の細胞収容部に面する側の表面との角度が、30°以上且つ120°以下の範囲である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項７】
側壁の細胞収容部に面する側の表面において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部以外の領域が細胞接着性を有する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項８】
側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が、凹凸構造を有する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項９】
側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が、親水化処理又は細胞接着性薬剤のコーティング処理による細胞接着性を有する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項１０】
親水化処理が、プラズマ処理、紫外線（UV）照射処理、電子線（EB）照射処理、親水性ポリマーの重合処理、及び刺激応答性ポリマーの重合処理からなる群より選択される1種以上の処理である、請求項9に記載の細胞取扱容器。
【請求項１１】
細胞接着性薬剤のコーティング処理が、フィブロネクチン、コラーゲン、及びポリエチレンイミンからなる群より選択される1種以上の処理である、請求項9に記載の細胞取扱容器。
【請求項１２】
底部の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が細胞接着性を有する、請求項1〜11のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項１３】
側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部のみが細胞接着性を有する、請求項1〜11のいずれか一項に記載の細胞取扱容器。
【請求項１４】
請求項1〜13のいずれか一項に記載の細胞取扱容器の細胞収容部で細胞を培養して、底部の細胞収容部に面する側の表面に細胞構造体を形成させる、細胞構造体形成工程；
を含む、細胞構造体の作製方法。
【請求項１５】
細胞構造体形成工程において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部の領域を超える厚さまで細胞構造体を形成させる、請求項14に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、細胞の収縮を抑制できる細胞取扱容器、及び細胞構造体の作製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
幹細胞研究のような細胞生物学の研究分野、並びに再生医療分野及び臨床検査分野等において、細胞培養は必要不可欠な技術である。例えば、再生医療分野では、患者から採取した細胞を生体外で培養し、シート形状の細胞構造体（以下、「細胞シート」とも記載する）を作製した上で、該細胞シートを患者の生体内へ移植する技術が開発されている。
【０００３】
細胞シートのような細胞構造体は、通常は、基材の表面、例えば細胞取扱容器の底面に細胞を播種し、次いで該基材の表面上で該細胞を培養して細胞構造体を形成させることによって作製される。前記作製方法の場合、形成された細胞構造体は、細胞から分泌される接着分子を介して基材の表面と強固に結合する。このため、形成された細胞構造体を回収するために、該細胞構造体を基材の表面から剥離する必要がある。
【０００４】
例えば、特許文献1は、水に対する上限若しくは下限臨界溶解温度が0〜80℃である温度応答性ポリマーで表面を被覆した細胞培養基材上で、軟骨細胞、軟骨前駆細胞、滑膜由来細胞、滑膜幹細胞、骨芽細胞、間葉系幹細胞、脂肪由来細胞、脂肪由来幹細胞から選択される１種類又はそれ以上の種類の細胞を培養し、（1）培養液温度を上限臨界溶解温度以上又は下限臨界溶解温度以下とし、（2）培養した培養細胞シートをキャリアとしての支持膜に密着させ、（3）そのままキャリアと共に剥離し、（4）工程（3）で得られたキャリアに密着した培養細胞シートを、水に対する上限若しくは下限臨界溶解温度が0〜80℃である温度応答性ポリマーで表面を被覆した別の細胞培養基材上で培養された別の細胞シート上に密着させ、（5）前記（1）〜（4）の操作を繰り返すことを特徴とする、積層化培養細胞シートの製造方法を記載する。当該文献に記載の方法では、温度応答性ポリマーで表面を被覆した細胞培養基材上で細胞を培養することによって形成された培養細胞シートをキャリアと密着させた後、該温度応答性ポリマーの上限臨界溶解温度以上又は下限臨界溶解温度以下の温度で処理することによって、該培養細胞シート及びキャリアを該細胞培養基材から剥離する。
【０００５】
特許文献1に記載の方法のように、温度応答性高分子を含む基材を用いて細胞構造体を形成する場合、基材から細胞構造体を剥離するために、通常は、基材の周囲温度を室温にする、又は細胞の培養液を低温に冷却した培養液に置換する等の方法が実施される。
【０００６】
特許文献2は、透明な材質からなり、底面に細胞を接着させて培養可能な培養面を有する培養容器であって、前記培養面の一部に、既知の屈折率および厚さ寸法を有する基準物質が固定されている培養容器を記載する。
【０００７】
特許文献3は、細胞非接着性の表面に複数の細胞接着性領域が所定の間隔で配列された基板を培養液内に配置した状態で細胞の培養を行うための培養容器において、該培養容器の内側面の表面が撥水処理されたことを特徴とする培養容器を記載する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第4921353号公報
【特許文献２】特開2009-106273号公報
【特許文献３】特開平11-290062号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
細胞構造体の作製方法において、基材の表面に播種された細胞は、細胞から分泌される接着分子を介して細胞同士が強固に結合して、細胞構造体を形成する。この細胞構造体の形成の間及び／又は後で、細胞構造体を形成する細胞が収縮する場合がある。このような場合、細胞構造体の観察及び評価において、例えば定量的及び／又は定性的な観点で正確な結果が得られない可能性がある。
【００１０】
それ故、本開示は、細胞構造体の作製に使用し得る細胞取扱容器において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制する手段を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、前記課題を解決するための手段を種々検討した。本発明者らは、細胞取扱容器において、側壁の内部表面の少なくとも一部が細胞接着性を有することにより、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制し得ることを見出した。本発明者らは、前記知見に基づき本発明を完成した。
【００１２】
すなわち、本発明の要旨は、以下の態様及び実施形態を包含する。
（1）  底部と、底部の外縁部に配置された側壁と、底部及び側壁によって形成される細胞収容部とを有する細胞取扱容器であって、側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が細胞接着性を有する、細胞取扱容器。
（2）  底部の外縁部と側壁の下端部との接続部をさらに有し、底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の外縁部における底部の細胞収容部に面する側の表面と側壁の下端部との距離によって定義される接続部の高さが100 μm以下である、前記実施形態（1）に記載の細胞取扱容器。
（3）  底部と側壁との接続部の高さが10 μm以上且つ50 μm以下の範囲である、前記実施形態（2）に記載の細胞取扱容器。
（4）  底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部が、曲率を有する形状である、前記実施形態（1）〜（3）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（5）  底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部が、底部に凹部を有する形状である、前記実施形態（1）〜（3）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（6）  底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、側壁の細胞収容部に面する側の表面と底部の細胞収容部に面する側の表面との角度が、30°以上且つ120°以下の範囲である、前記実施形態（1）〜（5）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（7）  側壁の細胞収容部に面する側の表面において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部以外の領域が細胞接着性を有する、前記実施形態（1）〜（6）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（8）  側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が、凹凸構造を有する、前記実施形態（1）〜（7）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（9）  側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が、親水化処理又は細胞接着性薬剤のコーティング処理による細胞接着性を有する、前記実施形態（1）〜（8）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（10）  親水化処理が、プラズマ処理、紫外線（UV）照射処理、電子線（EB）照射処理、親水性ポリマーの重合処理、及び刺激応答性ポリマーの重合処理からなる群より選択される1種以上の処理である、前記実施形態（9）に記載の細胞取扱容器。
（11）  細胞接着性薬剤のコーティング処理が、フィブロネクチン、コラーゲン、及びポリエチレンイミンからなる群より選択される1種以上の処理である、前記実施形態（9）に記載の細胞取扱容器。
（12）  底部の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部が細胞接着性を有する、前記実施形態（1）〜（11）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（13）  側壁の細胞収容部に面する側の表面の少なくとも一部のみが細胞接着性を有する、前記実施形態（1）〜（11）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
（14）  前記実施形態（1）〜（13）のいずれかに記載の細胞取扱容器の細胞収容部で細胞を培養して、底部の細胞収容部に面する側の表面に細胞構造体を形成させる、細胞構造体形成工程；
を含む、細胞構造体の作製方法。
（15）  細胞構造体形成工程において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部の領域を超える厚さまで細胞構造体を形成させる、前記実施形態（14）に記載の方法。
【発明の効果】
【００１３】
本開示により、細胞構造体の作製に使用し得る細胞取扱容器において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制する手段を提供することが可能となる。
【００１４】
前記以外の、課題、構成及び効果は、以下の実施形態の説明により明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図1は、本態様の細胞取扱容器の好ましい一実施形態を示す図である。
【図２】図2は、本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を示す図である。
【図３】図3は、本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を示す図である。
【図４】図4は、本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を示す図である。
【図５】図5は、本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を示す図である。
【図６】図6は、本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を示す図である。（a）全体の上面図；（b）（6-I）-（6-I’）断面図。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。
【００１７】
＜1. 細胞取扱容器＞
本明細書では、適宜図面を参照して本発明の特徴を説明する。図面では、明確化のために各部の寸法及び形状を誇張しており、実際の寸法及び形状を正確に描写してはいない。それ故、本発明の各態様の技術的範囲は、これら図面に表された各部の寸法及び形状に限定されるものではない。
【００１８】
細胞構造体の作製方法において、基材の表面に播種された細胞は、細胞から分泌される接着分子（例えば、コラーゲン、フィブロネクチン及びビトロネクチン等）を介して細胞同士が強固に結合して、細胞構造体を形成する。この細胞構造体の形成の間及び／又は後で、細胞構造体を形成する細胞が収縮する場合がある。このような場合、細胞構造体の観察及び評価において、例えば定量的及び／又は定性的な観点で正確な結果が得られない可能性がある。
【００１９】
本発明者らは、細胞取扱容器において、側壁の内部表面の少なくとも一部が細胞接着性を有することにより、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制し得ることを見出した。それ故、本発明の一態様は、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制し得る、細胞取扱容器に関する。
【００２０】
本態様の細胞取扱容器の形状は、特に限定されず、当該技術分野で通常使用されるディッシュ型、角形プレート型又はフラスコ型等の各種形状から適宜選択することができる。本態様の細胞取扱容器は、ディッシュ型の形状であることが好ましく、円形ディッシュ型の形状であることがより好ましい。例えば、本態様の細胞取扱容器の形状がディッシュ型の場合、その長径は、通常は35〜150 mmの範囲である。
【００２１】
本態様の細胞取扱容器の材料は、特に限定されず、当該技術分野で通常使用される各種材料から適宜選択することができる。本態様の細胞取扱容器の材料としては、例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリプロピレン樹脂、シリコーン樹脂（例えば、ジメチルポリシロキサン）、ABS樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂及び塩化ビニル樹脂等の樹脂材料、並びにガラス及び石英等の無機材料を挙げることができる。前記樹脂材料は、所望により、1種以上のさらなる樹脂材料を組み合わせて使用してもよい。本態様の細胞取扱容器を形成する材料は、前記群より選択される少なくとも1種の樹脂材料であることが好ましく、ポリスチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂又はシリコーン樹脂（例えば、ジメチルポリシロキサン）であることがより好ましい。前記で例示した樹脂材料を用いる場合、射出成形等の手段によって低コストで本態様の細胞取扱容器を作製することができる。
【００２２】
本態様の細胞取扱容器の好ましい一実施形態を図1に示す。図1に示すように、本態様の細胞取扱容器1は、底部11と、底部11の外縁部に配置された側壁12と、底部11及び側壁12によって形成される細胞収容部13とを有する。本態様の細胞取扱容器1は、側壁12の細胞収容部13に面する側の表面14（以下、「側壁の内表面」とも記載する）の少なくとも一部が細胞接着性を有する。前記特徴を有する本態様の細胞取扱容器を用いて細胞構造体を作製すると、細胞収容部で形成される細胞構造体の端部の少なくとも一部は、少なくとも一部が細胞接着性を有する側壁の内表面に接着し得る。それ故、前記特徴を有することにより、本態様の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００２３】
図1に示すように、本態様の細胞取扱容器1は、底部11の外縁部と側壁12の下端部との接続部16をさらに有する。接続部16は、底部11の外縁部における、底部11の細胞収容部13に面する側の表面15（以下、「底部の内表面」とも記載する）と、側壁12の下端部とを接続する部分である。接続部の高さは、底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の外縁部における底部の内表面と側壁の下端部との距離によって定義される。ここで、底部の重心は、本態様の細胞取扱容器の底部と平行な面に底部を投影した図形における重心を意味する。本態様の細胞取扱容器において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部の形状は特に限定されない。以下において説明するように、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部は、様々な形状であることができる。
【００２４】
接続部の高さは、100 μm以下であることが好ましく、50 μm以下であることがより好ましく、20 μm以下であることがさらに好ましい。接続部の高さは、0 μm以上であることが好ましく、10 μm以上であることがより好ましく、15 μm以上であることがさらに好ましい。接続部の高さは、0 μm以上且つ100 μm以下の範囲であることが好ましく、10 μm以上且つ50 μm以下の範囲であることがより好ましく、15 μm以上且つ20 μm以下の範囲であることがさらに好ましい。接続部の高さが前記上限値を超える場合、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞が収縮する可能性がある。それ故、接続部の高さが前記範囲内である場合、本態様の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００２５】
本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を図2に示す。図2に示すように、本実施形態の場合、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部11の外縁部と側壁12の下端部との接続部16は、細胞収容部13に面する側の表面（以下、「接続部の内表面」とも記載する）が実質的に平面であり、且つ該平面が底部の内表面及び側壁の内表面のいずれに対しても傾斜している形状である。本実施形態において、接続部16の高さH0は、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部11の内表面15から、側壁12の内表面14と接続部16の細胞収容部13に面する側の平面との境界までの最短距離である。
【００２６】
本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を図3に示す。図3に示すように、本実施形態の場合、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部11の外縁部と側壁12の下端部との接続部16の内表面が実質的に曲率を有する形状である。本実施形態において、接続部16の高さH0は、接続部16の曲率半径と同一の値である。すなわち、接続部16の曲率半径は、100 μm以下であることが好ましく、50 μm以下であることがより好ましく、20 μm以下であることがさらに好ましい。接続部16の曲率半径は、0 μm超であることが好ましく、10 μm以上であることがより好ましく、15 μm以上であることがさらに好ましい。接続部16の曲率半径は、0 μm超且つ100 μm以下の範囲であることが好ましく、10 μm以上且つ50 μm以下の範囲であることがより好ましく、15 μm以上且つ20 μm以下の範囲であることがさらに好ましい。前記特徴を有することにより、本実施形態の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００２７】
本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を図4に示す。図4に示すように、本実施形態の場合、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部11の外縁部と側壁12の下端部との接続部16は、底部11の内表面15と実質的に平行な平面の形状である。本実施形態において、底部11の外縁部と側壁12の下端部との接続部16の高さH0は、0である。
【００２８】
本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を図5に示す。図5に示すように、本実施形態の場合、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部11の外縁部と側壁12の下端部との接続部16は、底部11に凹部を有する形状である。本実施形態において、接続部16の高さH0は、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部11の内表面15から凹部の底部までの深さと同一の値である。すなわち、凹部の深さは、100 μm以下であることが好ましく、50 μm以下であることがより好ましく、20 μm以下であることがさらに好ましい。凹部の深さは、0 μm超であることが好ましく、10 μm以上であることがより好ましく、15 μm以上であることがさらに好ましい。凹部の深さは、0 μm超且つ100 μm以下の範囲であることが好ましく、10 μm以上且つ50 μm以下の範囲であることがより好ましく、15 μm以上且つ20 μm以下の範囲であることがさらに好ましい。本実施形態の細胞取扱容器を用いて細胞構造体を作製すると、細胞収容部で形成される細胞構造体の端部の少なくとも一部は、少なくとも一部が細胞接着性を有する側壁の内表面に接着し得るだけでなく、接続部の凹部にも侵入し、嵌合し得る。それ故、前記特徴を有することにより、本実施形態の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００２９】
本態様の細胞取扱容器の別の好ましい一実施形態を図6に示す。図6に示すように、本実施形態の場合、側壁の内表面に少なくとも1個の保持部17を有する。保持部は、本実施形態の細胞取扱容器を用いて細胞構造体を作製する際、細胞構造体のめくれ上がり、皺寄り又は折れ曲がり等によって細胞構造体が部分的に変形又は破損することを実質的に抑制し得る。本実施形態の細胞取扱容器において、保持部の個数は、1〜10個の範囲であることが好ましく、2〜3個の範囲であることがより好ましい。保持部の長さは、通常は、底部の最大長さ（例えば、本実施形態の細胞取扱容器が円形ディッシュ型の形状の場合、長径）の1〜5％の範囲である。保持部の長さは、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、10 μm以上であることが好ましく、100 μm以上であることがより好ましい。また、保持部の長さは、底部11の重心を通り且つ底部11と直交する面における細胞取扱容器の断面において、2000 μm以下であることが好ましく、1000 μm以下であることがより好ましく、500 μm以下であることがさらに好ましい。保持部の形状としては、限定するものではないが、例えば、錐体、錐台、柱体及びランダムな異方性凹凸状等を挙げることができる。保持部の形状は、錐体状、錐台状又は柱体状であることが好ましい。前記特徴を有することにより、本実施形態の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体が部分的に変形又は破損することを実質的に抑制しつつ、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００３０】
本態様の細胞取扱容器において、側壁の内表面の少なくとも一部が、凹凸構造を有することが好ましい。この場合、凹部の深さ及び凸部の高さは、0.1 μm以上であることが好ましく、1 μm以上であることがより好ましく、5 μm以上であることがさらに好ましい。また、凹部の深さ及び凸部の高さは、50 μm以下であることが好ましく、25 μm以下であることがより好ましく、10 μm以下であることがさらに好ましい。凹凸構造の形状としては、限定するものではないが、例えば、錐体、錐台、柱体及びランダムな異方性凹凸状等を挙げることができる。凹凸構造の形状は、錐体状、錐台状又は柱体状であることが好ましい。前記特徴を有することにより、本態様の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００３１】
本態様の細胞取扱容器において、側壁は、底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の内表面に対して垂直に配置されていてもよく、底部の内表面に直交する直線に対して傾斜して配置されていてもよい。側壁は、底部の重心を通り且つ底部と直交する面における細胞取扱容器の断面において、底部の内表面に直交する直線に対して傾斜して配置されていることが好ましい。前記特徴を有することにより、本態様の細胞取扱容器を射出成形等で作製する際に、金型から容易に取り外すことができる。
【００３２】
本態様の細胞取扱容器は、底部の重心を通り且つ底部と直交する面における本態様の細胞取扱容器の断面において、側壁の内表面と底部の内表面との角度は、15°以上であることが好ましく、30°以上であることがより好ましく、90°以上であることがさらに好ましい。側壁の内表面と底部の内表面との角度は、150°以下であることが好ましく、120°以下であることがより好ましく、90°以下であることがさらに好ましい。側壁の内表面と底部の内表面との角度は、15°以上且つ150°以下の範囲であることが好ましく、30°以上且つ120°以下の範囲であることがより好ましい。側壁の内表面と底部の内表面との角度が前記上限値を超える場合、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞が収縮する可能性がある。それ故、側壁の内表面と底部の内表面との角度が前記範囲内である場合、本態様の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００３３】
本態様の細胞取扱容器は、底部の重心を通り且つ底部と直交する面における本態様の細胞取扱容器の断面において、底部の外部に面する側の表面（以下、「底部の外表面」とも記載する）と側壁の外部に面する側の表面（以下、「側壁の外表面」とも記載する）との傾斜角度は、通常は70〜110°の範囲であり、例えば80〜100°の範囲である。底部の内表面と側壁の内表面との傾斜角度、及び底部の外表面と側壁の外表面との傾斜角度は、実質的に同一の値であってもよく、実質的に異なる値であってもよい。本態様の細胞取扱容器において、底部の外表面と側壁の外表面との傾斜角度が前記範囲内である場合、本態様の細胞取扱容器を射出成形等で作製する際に、金型から容易に取り外すことができる。
【００３４】
本態様の細胞取扱容器は、側壁の内表面において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部以外の領域が細胞接着性を有することが好ましい。本実施形態の場合、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部の内表面は、実質的に細胞接着性を有していない。前記特徴を有することにより、本態様の細胞取扱容器は、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００３５】
本態様の細胞取扱容器において、底部の内表面は、細胞接着性を有していてもよく、有していなくてもよい。本態様の細胞取扱容器において、底部の内表面が実質的に細胞接着性を有していない場合、例えば、遠心力の付与等の手段によって、底部の内表面に細胞構造体を形成させることができる。本態様の細胞取扱容器の一実施形態において、底部の内表面の少なくとも一部が、細胞接着性を有することが好ましい。前記特徴を有することにより、細胞構造体の形成の間において、細胞構造体を底部の内表面に実質的に保持することができる。
【００３６】
本態様の細胞取扱容器の特定の一実施形態において、側壁の内表面の少なくとも一部のみが、細胞接着性を有することが好ましい。本実施形態の場合、底部の内表面は、実質的に細胞接着性を有していない。前記特徴を有することにより、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００３７】
本発明の各態様において、細胞構造体を構成する細胞は、特に限定されない。生体に存在するあらゆる組織若しくは器官自体、又はそれに由来する各種の細胞を用いることができる。本発明の各態様に使用される細胞は、接着性の組織又は細胞であることが好ましい。例えば、生体内の各組織、臓器を構成する上皮細胞若しくは内皮細胞、収縮性を示す骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、軟骨細胞、神経系を構成するニューロン若しくはグリア細胞、線維芽細胞、生体の代謝に関係する肝実質細胞、非肝実質細胞、又は脂肪細胞等を使用することができる。或いは、本発明の各態様に使用される細胞は、胚性幹細胞（ES細胞）、多分化能を有する間葉系幹細胞等の多能性幹細胞、単分化能を有する血管内皮前駆細胞等の単能性幹細胞、又は人工多能性幹細胞（iPS細胞）等であってもよく、分化が終了した細胞であってもよい。本発明の各態様に使用される細胞は、前記組織又は器官から直接採取した初代細胞系でもよく、該初代細胞を何代か継代させた継代細胞系であってもよい。前記細胞は、1種類のみを使用してもよく、2種類以上を同時に使用してもよい。細胞が由来する動物も特に限定されず、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ヤギ又はヒツジ等の動物に由来する細胞を使用することができる。
【００３８】
本発明の各態様において、「細胞構造体」は、細胞同士が細胞外マトリクスを介して細胞間接着を形成することによって生じる、複数の細胞からなる細胞の集合体を意味する。本発明の各態様において、細胞構造体は、特定の組織又は器官に分化した形態であってもよく、未分化の形態であってもよい。また、本発明の各態様において、細胞構造体は、本発明の一態様の細胞取扱容器における底部の内表面に複数の細胞が配列することによって形成される二次元構造の一層形態であってもよく、底部の内表面に配列した複数の細胞の上部にさらに複数の細胞が配列することによって形成される三次元構造の多層形態であってもよい。本発明の各態様において、細胞構造体としては、例えば、シート状の形態の細胞シートを挙げることができる。本発明の各態様において、細胞構造体、例えば、シート状の形態の細胞シートの厚さは、通常は10 μm以上であり、例えば20 μm以上であり、特に40 μm以上である。本発明の各態様において、細胞構造体、例えば、シート状の形態の細胞シートの厚さは、通常は200 μm以下であり、例えば100 μm以下であり、特に80 μm以下である。本発明の各態様において、細胞構造体、例えば、シート状の形態の細胞シートの厚さは、通常は10〜200 μmの範囲であり、例えば20〜100 μmの範囲であり、特に40〜80 μmの範囲である。
【００３９】
本発明の各態様において、「細胞接着性」及び「細胞非接着性」は、通常は、一の表面領域と他の表面領域とにおける細胞の接着度合いの相対的な強さを意味し、典型的には、「細胞接着性」は、細胞が接着しやすい表面特性を意味する。細胞接着性は、通常は、表面の化学的性質及び／又は物理的性質等に起因して、細胞の接着及び／又は伸展が起こりやすいか否かに基づき、決定される。本発明の各態様において、細胞取扱容器の側壁の内表面及び底部の内表面の細胞接着性を判断する指標としては、例えば、実際に該内表面で細胞を培養した際の細胞接着伸展率を用いることができる。或いは、対象となる内表面と同一の材質の基材を準備し、該基材の表面で細胞を培養した際の細胞接着伸展率を用いることもできる。本態様の細胞取扱容器において、側壁の内表面及び場合により底部の内表面の少なくとも一部が細胞接着性である場合、側壁の内表面及び場合により底部の内表面の少なくとも一部は、細胞接着伸展率が60％以上であることが好ましく、細胞接着伸展率が80％以上であることがより好ましい。側壁の内表面及び場合により底部の内表面の少なくとも一部の細胞接着伸展率が前記範囲内である場合、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。また、側壁の内表面及び場合により底部の内表面の少なくとも一部が細胞非接着性である場合、側壁の内表面及び場合により底部の内表面の少なくとも一部は、細胞接着伸展率が60％未満であることが好ましく、40％未満であることがより好ましく、5％以下であることがさらに好ましく、2％以下であることが特に好ましい。
【００４０】
本発明の各態様において、細胞接着性の指標となる細胞接着伸展率は、例えば、以下の方法で決定することができる。培養しようとする細胞を、4000〜30000 cells/cm2の範囲の初期播種密度で測定対象表面に播種した後、37℃、5％のCO2濃度の条件下で培養する。培養開始3時間後に、培地交換を行い、接着していない細胞を除去した後、細胞が接着している数箇所を観察する。細胞接着伸展率を、次の式：（｛（接着している細胞数）／（播種した細胞数）｝×100（％））に基づき算出する。
【００４１】
本態様の細胞取扱容器において、側壁の内表面及び場合により底部の内表面は、当該技術分野で通常使用される各種の処理によって、少なくとも一部が細胞接着性を有するように改変することができる。本態様の細胞取扱容器において、側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部の細胞接着性は、親水化処理又は細胞接着性薬剤のコーティング処理によって付与されることが好ましく、親水化処理によって付与されることがより好ましい。前記処理によって側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部に細胞接着性を付与することにより、本態様の細胞取扱容器を用いる細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００４２】
本明細書において、「親水性」は、基材の表面が水に対して高い親和性を有する物理化学的性質を意味する。また、本明細書において、「親水化処理」は、基材の表面を親水性に改変する処理を意味し、特に、基材の表面にヒドロキシル基又はカルボニル基等の親水性官能基を導入する化学反応を意味する。基材の表面の親水性は、限定するものではないが、例えば、常温（例えば23℃）における該材料の表面の水接触角を測定することにより、決定することができる。材料の表面が親水性である場合、該材料の表面の水接触角は、通常は120°以下であり、例えば90°以下であり、特に70°以下、とりわけ50°以下である。また、材料の表面の水接触角は、通常は30°以上であり、例えば40°以上である。当該技術分野において、接着性の細胞を培養する場合、細胞培養に使用する基材の表面は、一定の親水性を有する必要があることが知られている。親水性の基材の表面で接着性の細胞を培養することにより、細胞から分泌される接着分子と基材の表面の親水性官能基とが相互作用して、基材の表面に細胞が接着し得る。本態様の細胞取扱容器において、側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部の細胞接着性が親水化処理によって付与される場合、側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部の常温（例えば23℃）における水接触角は、120°以下であることが好ましく、90°以下であることがより好ましく、70°以下であることがさらに好ましく、50°以下であることが特に好ましい。また、側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部の常温（例えば23℃）における水接触角は、30°以上であることが好ましく、40°以上であることがより好ましい。前記範囲内の水接触角を有するように、側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部が親水化処理されることにより、本態様の細胞取扱容器を用いる細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００４３】
本態様の細胞取扱容器において、親水化処理は、プラズマ処理、紫外線（UV）照射処理、電子線（EB）照射処理、親水性ポリマーの重合処理、及び刺激応答性ポリマーの重合処理からなる群より選択される１種以上の処理であることが好ましく、プラズマ処理又はUV照射処理であることがより好ましい。プラズマ処理又はUV照射処理によって親水化処理する場合、長期に亘って親水化処理の効果を持続し得る。前記処理によって親水化処理を実施する場合、側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部の、常温（例えば23℃）における水接触角が、前記で例示した範囲内となるように各処理を実施することが好ましい。前記処理によって側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部が親水化処理されることにより、本態様の細胞取扱容器を用いる細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００４４】
プラズマ処理としては、不活性ガスを用いたプラズマ処理を挙げることができる。不活性ガスとしては、ヘリウム（He）、ネオン（Ne）、アルゴン（Ar）及びキセノン（Xe）等の希ガス、窒素（N2）、並びに酸素（O2）等を挙げることができる。長期に亘って親水化処理の効果を持続し得ることから、酸素ガス又はアルゴンガスを用いたプラズマ処理が好ましい。また、プラズマ処理に起因する表面の劣化（例えば、分解又はエッチング等）を実質的に抑制し得ることから、大気圧下で発生させる低温プラズマ処理が好ましい。
【００４５】
真空下でプラズマ処理する場合、真空下でのプラズマ発生時の圧力は、1 Pa以下であることが好ましく、また、0.2 Pa以上であることが好ましく、0.4 Pa以上であることがより好ましい。プラズマ発生時のガス総流量は、特に限定されず、通常は5〜50 ml/分の範囲であり、例えば10〜30 ml/分の範囲である。前記範囲内のガス流量でプラズマ処理することにより、プラズマ発生時の圧力の変動を実質的に抑制することができる。プラズマの照射時間は、10分間以下であることが好ましく、5分間以下であることがより好ましく、1分間以下であることがさらに好ましい。また、プラズマの照射時間は、2秒間以上であることが好ましく、10秒間以上であることがより好ましい。プラズマの照射時間が前記下限値未満の場合、プラズマ処理の効果が十分に得られない可能性がある。プラズマの発生のために付与される電力は、100 W以上であることが好ましく、200 W以上であることがより好ましく、300 W以上であることがさらに好ましい。また、プラズマの発生のために付与される電力は、500 W以下であることが好ましい。前記範囲内の電力でプラズマを発生させることにより、プラズマの変動を実質的に抑制することができる。
【００４６】
大気圧下でプラズマ処理する場合、プラズマ発生時のガス総流量は、特に限定されず、例えばアルゴンガスを使用する場合、通常は1〜10 L/分の範囲であり、例えば3〜7 L/分の範囲である。前記範囲内のガス流量でプラズマ処理することにより、プラズマ発生時の圧力の変動を実質的に抑制することができる。プラズマの照射時間は、10分間以下であることが好ましく、5分間以下であることがより好ましく、1分間以下であることがさらに好ましい。また、プラズマの照射時間は、2秒間以上であることが好ましく、10秒間以上であることがより好ましい。前記範囲内の照射時間でプラズマ処理することにより、プラズマ処理による親水化処理を確実に実施することができる。
【００４７】
親水性ポリマーの重合処理としては、例えば、炭素成分を含み、且つポリマーの主鎖又は側鎖に親水性の官能基を含むポリマー、特に、水溶性又は水膨潤性を有する、炭素−酸素結合を含む水溶性ポリマーのような親水性ポリマーの重合処理を挙げることができる。親水性ポリマーとしては、限定するものではないが、例えば、ポリアルキレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリエチレンイミン、ポリアリルアミン、ポリビニルアミン、ポリ酢酸ビニル、ポリアクリル酸、ポリ（メタ）アクリルアミド、及びポリ-N-イソプロピルアクリルアミド等のヒドロゲルポリマー、並びにこれらと他のモノマーとの共重合体又はグラフト重合体等を挙げることができる。様々な分子量の製品が市販されており、且つ生体適合性に優れることから、ポリアルキレングリコールが好ましい。ポリアルキレングリコールとしては、限定するものではないが、例えば、ポリエチレングリコール（PEG）、ポリプロピレングリコール、及びエチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー等を挙げることができ、PEGが好ましい。
【００４８】
本明細書において、「刺激応答性ポリマー」は、温度、光又はpH等の所定の刺激に応答して物理化学的性質が変化するポリマーを意味する。刺激応答性高分子における物理化学的性質の変化は、以下のように説明することができる。但し、本発明の各態様の作用効果は、以下の説明に制限されるものではない。例えば、温度応答性ポリマーの温度を特定の温度未満に変化させることにより、該温度応答性ポリマーの周囲の水分子に対する親和性、すなわち親水性が向上する。これにより、温度応答性ポリマーは、水分子を取り込んで膨張し得る。膨張した温度応答性ポリマーは、該ポリマー間の網目構造が粗となるため、その表面に細胞が接着し難くなる。これに対し、温度応答性ポリマーの温度を特定の温度以上に変化させることにより、該ポリマーの周囲の親水性が低下する。これにより、温度応答性ポリマーは、取り込んでいる水分子を放出して収縮し得る。収縮した温度応答性ポリマーは、該ポリマー間の網目構造が密となるため、その表面に細胞が接着し易くなる。本明細書において、温度応答性ポリマーにおける前記のような変化の閾値となる温度を、「下限臨界溶解温度（Tc）」と記載する。
【００４９】
本発明の各態様において、温度応答性ポリマーの下限臨界溶解温度（Tc）は、細胞培養に通常適用される温度範囲内であることが好ましい。例えば、Tcは、5〜40℃の範囲であることが好ましく、10〜37℃の範囲であることがより好ましく、20〜35℃の範囲であることがさらに好ましい。前記範囲のTcを有する温度応答性ポリマーを用いて重合処理する場合、本態様の細胞取扱容器を用いて細胞を培養する際に、細胞の損傷を可能な限り少なくすることができる。
【００５０】
温度応答性ポリマーとしては、アクリル系ポリマー及びメタクリル系ポリマーを挙げることができ、例えば、ポリ-N-イソプロピルアクリルアミド（PNIPAAm）（Tc=32℃）、ポリ-N-n-プロピルアクリルアミド（Tc=21℃）、ポリ-N-n-プロピルメタクリルアミド（Tc=32℃）、ポリ-N-エトキシエチルアクリルアミド（Tc=約35℃）、ポリ-N-テトラヒドロフルフリルアクリルアミド（Tc=約28℃）、ポリ-N-テトラヒドロフルフリルメタクリルアミド（Tc=約35℃）及びポリ-N,N-ジエチルアクリルアミド（Tc=32℃）等を挙げることができる。温度応答性ポリマーは、前記ポリマーを形成し得るモノマーの2種以上を共重合させることによって形成される共重合体であってもよい。温度応答性ポリマーは、PNIPAAm、ポリ-N-n-プロピルメタクリルアミド又はポリ-N,N-ジエチルアクリルアミドであることが好ましく、PNIPAAmであることがより好ましい。前記で例示した温度応答性ポリマーは、前記で説明した好ましい範囲のTcを有する。それ故、前記温度応答性ポリマーを用いて重合処理する場合、本態様の細胞取扱容器を用いて細胞を培養する際に、細胞の損傷を可能な限り少なくすることができる。
【００５１】
温度応答性ポリマーを形成するためのモノマーとしては、放射線照射によって重合し得るモノマーを用いることが好ましい。前記モノマーとしては、例えば、（メタ）アクリルアミド化合物、N-（若しくはN,N-ジ）アルキル置換（メタ）アクリルアミド誘導体、環状基を有する（メタ）アクリルアミド誘導体及びビニルエーテル誘導体等を挙げることができる。前記モノマーを単独で使用して重合する場合、得られる温度応答性ポリマーはホモポリマーの形態となり、前記モノマーの2種以上を使用して共重合する場合、得られる温度応答性ポリマーは共重合体（コポリマー又はヘテロポリマー）の形態となる。いずれの形態の温度応答性ポリマーであっても、本態様の細胞取扱容器に使用することができる。
【００５２】
前記温度応答性ポリマーは、前記で説明した1種以上のモノマーと、前記以外のさらなるモノマーとを共重合することによって形成される共重合体であってもよい。或いは、前記温度応答性ポリマーは、前記で説明した1種以上のモノマーを重合又は共重合することによって形成される重合体又は共重合体と、さらなる重合体又は共重合体とをグラフト重合又はブロック重合することによって形成される、グラフト共重合体又はブロック共重合体であってもよい。或いは、前記温度応答性ポリマーは、前記で説明した1種以上の重合体又は共重合体の混合物の形態であってもよい。これらの形態の場合、使用される材料を適宜選択することにより、Tcを所望の範囲に調整することができる。
【００５３】
本態様の細胞取扱容器において、細胞接着性薬剤のコーティング処理は、細胞接着分子（例えば、フィブロネクチン及びコラーゲン）、及び正電荷を有する分子（例えば、ポリエチレンイミン）からなる群より選択される1種以上の処理であることが好ましい。フィブロネクチン及びコラーゲンのような細胞接着分子をコーティングすることにより、該細胞接着分子を介して細胞と結合させることができる。また、ポリエチレンイミンのような正電荷を有する分子をコーティングすることにより、側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部の表面を正に帯電させ、通常は負に帯電している細胞の表面と静電的に結合させることができる。それ故、前記細胞接着性薬剤によって側壁の内表面の少なくとも一部及び場合により底部の内表面の少なくとも一部がコーティング処理されることにより、本態様の細胞取扱容器を用いる細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００５４】
＜2. 細胞構造体の作製方法＞
本発明の一態様の細胞取扱容器を用いて細胞構造体を形成することにより、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。それ故、本発明の別の一態様は、細胞構造体の作製方法に関する。
【００５５】
本態様の細胞構造体の作製方法は、細胞構造体形成工程を含む。また、本態様の細胞構造体の作製方法は、場合により細胞構造体剥離工程を含む。本態様の方法に含まれる各工程について、以下において詳細に説明する。
【００５６】
［2-1. 細胞構造体形成工程］
本態様の方法は、本発明の一態様の細胞取扱容器の細胞収容部で細胞を培養して、底部の内表面に細胞構造体を形成させる、細胞構造体形成工程を含む。
【００５７】
本工程において、底部の外縁部と側壁の下端部との接続部の領域を超える厚さまで細胞構造体を形成させることが好ましい。この場合、形成される細胞構造体の厚さは、細胞の種類、細胞構造体の用途、及び使用される本発明の一態様の細胞取扱容器における接続部の高さ等に基づき所望の範囲に設定することができる。例えば、形成される細胞構造体の厚さは、10 μm以上であることが好ましく、20 μm以上であることがより好ましく、40 μm以上であることがさらに好ましい。例えば、形成される細胞構造体の厚さは、200 μm以下であることが好ましく、100 μm以下であることがより好ましく、80 μm以下であることがさらに好ましい。例えば、形成される細胞構造体の厚さは、10〜200 μmの範囲であることが好ましく、20〜100 μmの範囲であることがより好ましく、40〜80 μmの範囲であることがさらに好ましい。本工程において、前記範囲内の厚さまで細胞構造体を形成させることにより、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００５８】
本工程において、本発明の一態様の細胞取扱容器の細胞収容部で細胞を培養する条件、例えば、培地の種類及び外部環境（例えば、温度、湿度、光周期又はCO2濃度）等は、使用される細胞の種類に基づき、当該技術分野で通常使用される培養条件を適宜適用することができる。
【００５９】
前記条件で本工程を実施することにより、本発明の一態様の細胞取扱容器の底部の内表面に、所望の細胞構造体を形成させることができる。本工程において、本発明の一態様の細胞取扱容器を用いて細胞構造体を形成させることにより、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。
【００６０】
［2-2. 細胞構造体形成工程］
本態様の方法は、場合により、形成された細胞構造体を、本発明の一態様の細胞取扱容器の細胞収容部の表面から剥離させる、細胞構造体剥離工程を含む。
【００６１】
本工程において、形成された細胞構造体を細胞収容部の表面から剥離させる手段は特に限定されず、当該技術分野で通常使用される各種の手段から適宜選択することができる。剥離手段としては、限定するものではないが、例えば、物理的刺激の付与（例えば、水流の接触）、刺激応答性ポリマーに対する刺激の付与（例えば、温度変化、pH変化）、並びに酵素等による接着タンパク質の分解（例えば、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、ディスパーゼ、エラスターゼ、及びヒアルロニダーゼ等のタンパク質分解酵素）を挙げることができる。前記手段を用いることにより、形成された細胞構造体に実質的な損傷を生じることなく、該細胞構造体を細胞収容部の表面から剥離させることができる。
【００６２】
以上、詳細に説明したように、本発明の一態様の細胞取扱容器を用いることにより、細胞構造体の形成の間及び／又は後において、細胞構造体を形成する細胞の収縮を実質的に抑制することができる。それ故、本発明の一態様の細胞構造体の作製方法により、細胞構造体の観察及び評価において、定量的及び／又は定性的な観点で正確な結果を得ることができる。
【実施例】
【００６３】
以下、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
【００６４】
＜I：細胞構造体の作製＞
下記表1に記載の特徴を有する円形ディッシュ型（直径：3.5 cm）のジメチルポリシロキサン（PDMS）製容器を準備した。これらの容器の側壁の内表面及び底部の内表面の全体を、大気中でUV照射して、側壁の内表面及び底部の内表面を親水化した（UV照射条件、照射時間：1分間、波長：184.9 nm・253.7 nm、照射装置：ASM1101N（あすみ技研））。これらの容器に、マウス筋芽細胞（C2C12）を、1×106細胞/cm2の細胞密度で播種し、37℃の温度で培養して、約150 μmの厚さの細胞シートを形成させた。1日間培養後、細胞シートを観察して、細胞の収縮による、容器の側壁からの細胞シートの剥離の発生の有無を確認した。
【００６５】
【表１】
2020080722.tif 000003
【００６６】
各試験について、試料の総数に対する剥離が確認されなかった試料の数の百分率を、細胞保持率（％）とした。各試験における剥離の発生数及び細胞保持率の結果を表2に示す。
【００６７】
【表２】
2020080722.tif 000004
【００６８】
なお、本発明は、前記した実施例に限定されるものではなく、様々な変形例が含まれる。例えば、前記した実施例は、本発明を分かりやすく説明するために詳細に説明したものであり、必ずしも説明した全ての構成を備えるものに限定されるものではない。また、各実施例の構成の一部について、他の構成の追加、削除及び／又は置換をすることが可能である。
【符号の説明】
【００６９】
1…本発明の一態様の細胞取扱容器
11…底部
12…側壁
13…細胞収容部
14…側壁の細胞収容部に面する側の表面（側壁の内表面）
15…底部の細胞収容部に面する側の表面（底部の内表面）
16…底部の外縁部と側壁の下端部との接続部
17…保持部
H0…接続部の高さ
【図１】
2020080722.tif 000005
【図２】
2020080722.tif 000006
【図３】
2020080722.tif 000007
【図４】
2020080722.tif 000008
【図５】
2020080722.tif 000009
【図６】
2020080722.tif 000010