(57)【要約】【課題】Ｓｍａｄ３阻害作用を有し、線維化抑制効果を発揮する医薬品、医薬部外品、化粧料、及び医薬品、医薬部外品、化粧料、食品、飼料等に配合した場合に当該効果を発揮する素材の提供。【解決手段】ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上を有効成分とするＳｍａｄ３阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ライチポリフェノールを有効成分とするＳｍａｄ３阻害剤。
【請求項２】
ライチポリフェノールを有効成分とする線維化抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓｍａｄ３を阻害し、組織の線維化を抑制する、Ｓｍａｄ３阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
組織の線維化は、コラーゲンを中心とする細胞外マトリックスが組織に過剰に産生・蓄積されることにより生じる。組織は、酸化ストレス、低酸素状態、炎症、アポトーシスなどの刺激により損傷を受けた場合、損傷組織を細胞外マトリックスで置換して修復を図るが、損傷が重度の場合や、かかる刺激が慢性化した場合などには細胞外マトリックスの蓄積が過剰となり、組織がその機能を十分に果たせなくなる。線維化は、肝、膵、肺、腎、骨髄、心臓などの各種臓器にみられ、線維芽細胞等のコラーゲン産生細胞が病態に関与していると考えられている。このような組織・器官の線維化は疾患の発症段階又は進行過程で見られ、これを引き起こさないことが、疾患の予防・治療においても重要である。
【０００３】
多くの研究により、ＴＧＦ−βは、その活性化により組織・器官の線維化を促進することがよく知られており、過度のＴＧＦ−βシグナルは、肝臓や腎臓、肺における線維化（非特許文献１〜３）や腎尿細管間質性線維症（非特許文献４）の原因であると考えられている。実際に、ＴＧＦ−βを抑制することで、組織線維化を予防又は治療する薬剤や方法が報告されており、ＴＧＦ−β作用抑制剤の添加等により、αアクチン、コラーゲンの産生の減少、血清ＩＦＮ−βの向上が認められ、また、Ｓｍａｄ３発現の抑制により、線維化が抑制されることが記されている（特許文献１〜３）。
【０００４】
ＴＧＦ−β／Ａｃｔｉｖｉｎは、細胞膜上に存在する特異的な常活性型セリン・スレオニンキナーゼであるＩＩ型受容体にて認識され、リガンド依存的にＩ型受容体（ＡＬＫ４、ＡＬＫ５、ＡＬＫ７）と結合する。それによりリン酸化を受け活性型となったＩ型受容体は、細胞内情報伝達分子であるＲ−Ｓｍａｄ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ
Ｓｍａｄ）の１種であるＳｍａｄ２／３複合体をリン酸化する。リン酸化されたＳｍａｄ２／３複合体は、Ｃｏ−Ｓｍａｄ（ｃｏｍｍｏｎ ｐａｒｔｎｅｒ Ｓｍａｄ）であるＳｍａｄ４とヘテロ複合体を形成し、核内に移行して、ＤＮＡへ直接結合、他の転写因子へ結合、あるいは他の転写共役因子へ結合することで、標的遺伝子の発現を制御している。
Ｒ−ＳｍａｄであるＳｍａｄ３の阻害は、ＴＧＦ−βシグナル経路を抑制し、肝線維化、腎線維化、肺線維化や腎尿細管間質性線維症といった様々な器官・組織の線維化の予防や改善に有用であることが推測される。
【０００５】
一方、ローズマリーは、地中海地方原産のシソ科マンネンロウ属の常緑の小低木で、その葉や花は主に料理用、薬用、香料として幅広く利用されている。ローズマリーにはカルノシン酸、カルノソール、ロスマリン酸などのポリフェノール成分が多く含まれ、優れた抗酸化作用を有することが知られている。
【０００６】
白茶は、ツバキ科チャ属チャノキの葉を微発酵することにより得られるもので、清涼感及びほのかな甘さがあるため、夏バテに効果があることが知られている。
【０００７】
マリアアザミは、キク科マリアアザミ属の植物でオオアザミとも呼ばれ、ヨーロッパでは、古くから民間薬として使用されている。その種子は肝臓、胆嚢、脾臓、消化器の疾患や、母乳不足などに対して広く使用されている。
【０００８】
ウーロン茶は、ツバキ科チャ属チャノキの葉を半発酵して得られるもので、主に中国で産生され、飲用に広く用いられている。ウーロン茶は、血中コレステロール上昇抑制、動脈硬化抑制、抗酸化、抗炎症、抗ストレス、抗アレルギー、抗う蝕作用等の数多くの報告がなされている。
【０００９】
ピーナツは、マメ科ラッカセイ属の植物であり、ポリフェノールの一種であるプロアントシアニジンが含まれ、抗酸化作用や造血機能回復効果があることが知られている。
【００１０】
ログウッド色素は、マメ科ログウッドの心材から、加熱した水で抽出して得られるもので、黒褐色に着色する目的で使用され、主色素であるヘマトキシリンを含む。
【００１１】
ライチポリフェノールは、ムクロジ科レイシ属の果実から抽出されたポリフェノールであり、ロイコシアニジンなどを含み、抗酸化作用を有することが知れている。
【００１２】
リンゴポリフェノールは、バラ科リンゴ属の果実から抽出されたポリフェノールであり、果実ワインを含有する低アルコール飲料の特有の甘さ、酸っぱさ、果実風味をそのままにして口に残る甘さをなくす、キレを良くすることや、静菌作用を有すること、鉄イオン由来の不快な錆味を抑制できることが知られている。
【００１３】
しかしながら、ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツ、ログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールがＳｍａｄ３に対して与える影響については全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開２００４−３５４７５号公報
【特許文献２】特開２００９−２２６０６９号公報
【特許文献３】特表２０１０−５２９０４９号公報
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Schnabl B, et al. (2001) Hepatology. 34 : 89-100
【非特許文献２】Inazaki K, et al. (2004) Kidney Int. 66 : 597-604
【非特許文献３】Zhao Y, Geverd DA. (2002) Biochem Biophys Res Commun. 294 :319-323
【非特許文献４】Lee JM, et al. (2006) J Cell Biol. 172 : 973-981
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、Ｓｍａｄ３阻害作用を有し、線維化抑制効果を発揮する医薬品、医薬部外品又は化粧料、及び医薬品、医薬部外品、化粧料又は食品等に配合した場合に当該効果を発揮する素材を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、線維化の抑制に有効な成分の探索を行った結果、ローズマリー抽出物、白茶抽出物、マリアアザミ抽出物、ウーロン茶抽出物、ピーナツ抽出物、ログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールが、Ｓｍａｄ３阻害作用を有し、ＴＧＦ−βシグナル経路を抑制できることを見出した。
【００１８】
すなわち、本発明は、以下に係るものである。
（１）ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上を有効成分とするＳｍａｄ３阻害剤。
（２）ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上を有効成分とする線維化抑制剤。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、優れたＳｍａｄ３阻害作用を有し、線維化の抑制等のために有用な、医薬品、医薬部外品若しくは化粧料、或いは医薬品、医薬部外品、化粧料若しくは食品に使用される素材及び方法を提供できる。したがって、本発明によれば、Ｓｍａｄ３を阻害し、線維化の抑制の予防又は改善が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】Ｓｍａｄ３リン酸化亢進抑制作用を示す図である（レーン左；低濃度サンプル、レーン右；高濃度サンプル）。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明における「Ｓｍａｄ３阻害」とは、Ｓｍａｄ３が担う細胞内シグナル伝達系を阻害することを言い、詳細には、Ｓｍａｄ３の発現を遺伝子及び／又は蛋白質レベルで低下させる、或いはＳｍａｄ３のリン酸化を抑制することにより、Ｓｍａｄ３が担う細胞内シグナル経路を抑制することであり、その結果、ＴＧＦ−βの作用を抑制することを言う。
【００２２】
本発明における「線維化抑制」とは、線維芽細胞の増殖の抑制や、線維芽細胞の活性化による線維形成の抑制、線維芽細胞のアポトーシスを促進することをいう。線維芽細胞の増殖の抑制又は線維芽細胞の活性化による線維形成の抑制は、線維化マーカーのmRNA発現量やタンパク質発現量の測定や、線維芽細胞におけるストレスファイバーの形成を観察することによって確認することができる。
斯かる線維化抑制により、肝線維化、腎線維化、肺線維化や腎尿細管間質性線維症といった様々な器官・組織の線維化の予防又は改善を行うことができる。
【００２３】
本発明で用いるローズマリーとはシソ科マンネンロウ属のＲｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓを、白茶はツバキ科ツバキ属のＣａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ.を、マリアアザミはキク科マリアアザミ属のＳｉｌｙｂｕｍ ｍａｒｉａｎｕｍを、ウーロン茶はツバキ科チャ属のＣａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓを、ピーナツはマメ科ラッカセイ属のＡｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ Ｌ.を各々意味する。
【００２４】
上記植物は、任意の部位、例えば全草、葉（葉身、葉柄等）、樹皮、木質部、枝、果実、種子、花（花弁、子房等）、根、根茎等、又はそれらの組み合わせを使用することができるが、ローズマリーは葉又は花、白茶は葉、マリアアザミは種子、ウーロン茶は葉、ピーナツは種皮を用いるのが好ましい。
【００２５】
斯かる植物は、そのまま、破砕、粉砕、搾取して用いるか、又はこれらから処理されたものを乾燥若しくは粉末化して用いるか、或いはこれらから抽出して用いることができるが、抽出物として用いるのが好ましい。
当該抽出物は、上記植物をそのまま抽出工程に付すること、或いは粉砕、切断若しくは乾燥した後に抽出工程に付すことにより取得することができる。
【００２６】
上記抽出物としては、市販されているものを利用してもよく、又は常法により得られる各種溶剤抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものであってもよい。一例として、抽出物は、上記植物を一定温度（低温、常温又は加温）下にて抽出、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出すること等の抽出手段により得ることができる。
【００２７】
既知の抽出方法としては、例えば、固液抽出、圧搾抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等が挙げられる。抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。この固液抽出の好適な条件の一例としては、１０〜１００℃下、１００〜４００ｒｐｍ／ｍｉｎで１〜３０分間の攪拌が挙げられる。浸漬の好適な一例として、１０〜５０℃で、１時間〜１４日間の浸漬が挙げられる。また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。
上記抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００２８】
抽出のための溶剤には、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。当該抽出溶剤としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状又は環状のエーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワレン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ピリジン類；二酸化炭素、超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他のオイル等の有機溶剤；ならびにこれらの混合物が挙げられる。これらの溶剤は、単独で又は２種以上混合して混合液として使用することができる。
【００２９】
これらの溶剤のうち、水、アルコール類（より好ましくは炭素数１〜５）、ケトン類、炭化水素類から選ばれる１種以上のものが好ましい。このうち、水、エタノール、水−エタノール混合液、アセトン、ヘキサンがより好ましい。水−エタノール混合液を使用する場合には、混合液中のエタノール濃度（Ｖ／Ｖ）は、好ましくは０．０１容量％以上、より好ましくは２０容量％以上、更に好ましくは４０容量％以上、好ましくは１００容量％未満、より好ましくは９９.５容量％以下である。また、０．０１容量％以上１００容量％未満が好ましく、２０容量％以上１００容量％未満がより好ましく、４０〜９９.５容量％が更に好ましい。
【００３０】
溶剤の使用量としては、上記植物（乾燥質量換算）１質量部に対して、１〜５０質量部が好ましく、２〜３０質量部がより好ましい。抽出温度としては、０〜１００℃が好ましく、４〜８５℃がより好ましく、４〜６０℃が更に好ましい。抽出時間としては、１分〜１５０日間が好ましく、５分〜５０日間がより好ましく、１０分〜３０日間が更に好ましい。
【００３１】
斯くして得られる抽出物は、抽出液や画分を単独で又は混合して、そのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水−エタノール混合液、水−プロピレングリコール混合液、水−ブチレングリコール混合液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００３２】
上記抽出物は、食品上・医薬品上許容し得る規格に適合し本発明の効果を発揮するものであれば粗精製物であってもよく、更に得られた粗精製物を既知の分離精製方法を適宜組み合わせ不活性な夾雑物を除去してこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ、液液分配、ゲルろ過分離、活性炭処理等が挙げられる。
【００３３】
具体的な抽出物として、ローズマリー抽出物は、例えば、葉又は花を、二酸化炭素で置換した環境下で、温時〜熱時含水エタノール若しくはエタノールで抽出、又は温時〜熱時ヘキサン、メタノール若しくは含水メタノールで抽出し、溶媒を除去して得られたものや、市販品の「ＲＭ−２１Ｂベース」（三菱化学フーズ）を使用することができる。ウーロン茶抽出物は、例えば、葉より製した半発酵茶を、熱時、水で抽出したものや、市販品の「ウーロン茶エキス」（三栄源エフエフアイ）を使用することができる。白茶抽出物、マリアアザミ抽出物及びピーナツ抽出物は、後記実施例において示す各種市販品を使用することができる。
【００３４】
本発明で用いるログウッド色素は、マメ科ログウッド属のＨａｅｍａｔｏｘｙｌｏｎ ｃａｍｐｅｃｈｉａｎｕｍの心材を抽出して得られた色素成分を意味する。具体的には、ログウッド心材を、熱時水で抽出して得られたものや、市販品の「ヘマテイン」（一丸ファルコス）を使用することができる。
【００３５】
本発明で用いるライチポリフェノールは、ムクロジ科レイシ属のＬｉｔｃｈｉ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓの果実を抽出して得られたポリフェノールを意味する。具体的には、ライチの果実を含水エタノールで抽出後、緑茶抽出物と混合・加熱により低分子化し製造して得られたものや、市販品の「オリゴノール」（アミノアップ化学）を使用することができる。
【００３６】
本発明で用いるリンゴポリフェノールはバラ科リンゴ属のＭａｌｕｓ ｐｕｍｉｌａの未熟果実を抽出して得られたポリフェノールを意味する。具体的には、リンゴの未熟果実を圧搾抽出後、樹脂精製にて製造して得られたものや、市販品の「アップルフェノンＣ−１００」（アサヒフードアンドヘルスケア）を使用することができる。
【００３７】
後記実施例に示すように、ローズマリー抽出物、白茶抽出物、マリアアザミ抽出物、ウーロン茶抽出物、ピーナツ抽出物、ログウッド色素、ライチポリフェノール、及びリンゴポリフェノールは、Ｓｍａｄ３を阻害する作用を有する。従って、上記ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツ、ログウッド色素、ライチポリフェノール、及びリンゴポリフェノールは、ＴＧＦ−β刺激応答性のＳｍａｄ３のリン酸化亢進を抑制し、Ｓｍａｄ３阻害のために有用である。また、これらにはＳｍａｄ３シグナルを抑制することにより、ＴＧＦ−βシグナルを抑制し、線維化抑制効果が期待できる。
【００３８】
したがって、本発明で用いる上記ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、ログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールは、Ｓｍａｄ３阻害剤又は線維化抑制剤（以下、「Ｓｍａｄ３阻害剤等」とする）として、使用することができ、更にこれらの剤を製造するために使用することができる。
【００３９】
なお、当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
ここで、「非治療的」とは、医療行為を含まない概念、すなわち人間を手術、治療又は診断する方法を含まない概念、より具体的には医師又は医師の指示を受けた者が人間に対して手術、治療又は診断を実施する方法を含まない概念である。
【００４０】
従って、本発明のＳｍａｄ３阻害剤等を含む組成物は、Ｓｍａｄ３の阻害、線維化の抑制の各効果を奏する医薬品、医薬部外品、化粧料又は食品となり、Ｓｍａｄ３阻害剤等は、医薬品、医薬部外品、化粧料若しくは食品へ配合するための素材又は製剤として有用である。
【００４１】
上記医薬品（医薬部外品も含む）の剤形は、例えば注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、各種外用剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等の何れでもよく、投与形態も、経口投与（内用）、非経口投与（外用、注射）の何れであってもよい。このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、例えば本発明の有効成分を、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤、他の薬効成分等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００４２】
上記化粧料（医薬部外品も含む）は、皮膚外用剤、洗浄剤、メイクアップ化粧料等の形態とすることができ、使用方法に応じて、ローション、乳液、ゲル、クリーム、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤型で提供することができる。このような種々の剤型の化粧料は、例えば本発明の有効成分と、皮膚化粧料に配合され得る、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬効成分、香料、樹脂、防菌防黴剤、植物抽出物、アルコール類、ビタミン類等を適宜組み合わせることにより調製することができる。
【００４３】
上記医薬品や化粧料（医薬部外品も含む）における本発明の有効成分（乾燥物換算）の含有量は、特に限定されないが、製剤全質量の０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上、更に好ましくは１．０質量％以上であり、そして９５質量％以下、好ましくは８０質量％以下、更に好ましくは６０質量％以下である。また、０．０１〜９５質量％、好ましくは０．１〜８０質量％、更に好ましくは１．０質量％〜６０質量％が挙げられる。
【００４４】
また、上記食品には、線維化抑制等をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した病者用食品、栄養機能食品又は特定保健用食品等の機能性食品が包含される。
【００４５】
食品の形態は、固形、半固形又は液状であり得る。食品の例としては、パン類、麺類、クッキー等の菓子類、ゼリー類、乳製品、冷凍食品、インスタント食品、でんぷん加工製品、加工肉製品、その他加工食品、お茶やコーヒー飲料、果実飲料、炭酸飲料、ゼリー状飲料等の飲料、スープ類、調味料、栄養補助食品等、及びそれらの原料が挙げられる。
また食品は、サプリメントのように、上記の経口投与製剤と同様、錠剤形態、丸剤形態、カプセル形態、液剤形態、シロップ形態、粉末形態、顆粒形態等であってもよい。
【００４６】
斯かる食品は、任意の飲食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤、固着剤、分散剤、湿潤剤等を適宜組み合わせて配合し、調製することができる。
【００４７】
また、当該食品における本発明の有効成分（乾燥物換算）の含有量は、特に限定されないが、製剤全質量の０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、更に好ましくは０．０１質量％以上であり、そして５０質量％以下、好ましくは２０質量％以下、更に好ましくは１０質量％以下である。例えば、０．０００１％〜５０質量％、好ましくは０．００１〜２０質量％、更に好ましくは０．０１〜１０質量％が挙げられる。
【００４８】
本発明の有効成分を医薬品或いはサプリメントに配合して使用する場合の投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与の場合の成人１人当たりの１日の投与量は、特に限定されないが、当該有効成分（乾燥物換算）として、通常１ｍｇ以上、好ましくは５ｍｇ以上、更に好ましくは１５ｍｇ以上であり、そして１０ｇ以下、好ましくは５ｇ以下、更に好ましくは１ｇ以下である。
【００４９】
また、上記製剤は、任意の投与計画に従って投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数ヶ月間継続して投与することが好ましい。
また、投与又は摂取対象としては、それを必要としている若しくは希望している動物であれば特に限定されないが、Ｓｍａｄ３阻害又は線維化抑制を必要とする若しくは希望するヒトが挙げられる。
【００５０】
上述した実施形態に関し、本発明においては更に以下の態様が開示される。
＜１＞ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上を有効成分とするＳｍａｄ３阻害剤。
＜２＞ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上を有効成分とする線維化抑制剤。
＜３＞Ｓｍａｄ３阻害剤又は線維化抑制剤を製造するための、ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上の使用。
＜４＞Ｓｍａｄ３阻害剤又は線維化抑制剤に使用するための、ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上。
＜５＞ローズマリー、白茶、マリアアザミ、ウーロン茶、ピーナツから選ばれる植物及びそれらの抽出物、並びにログウッド色素、ライチポリフェノール、リンゴポリフェノールからなる群から選ばれる１種以上の有効量を、投与又は摂取することを特徴とするＳｍａｄ３阻害方法又は線維化抑制方法。
＜６＞前記＜３＞において、使用は非治療的使用である。
＜７＞前記＜５＞において、方法は非治療的方法である。
＜８＞前記＜５＞において、投与又は摂取の対象は、線維化抑制を必要とする若しくは希望するヒトである。
【実施例】
【００５１】
（１）Ｓｍａｄ３のリン酸化に与える影響解析
ＨＥＫ２９３細胞を、６ｗｅｌｌ ｄｉｓｈに３×１０５ ｃｅｌｌｓ ／ ｗｅｌｌとなるように播種し、５％ ｃｈａｒｃｏａｌ−ｔｒｅａｔｅｄ ＦＢＳ含有Ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で一晩培養した。翌日、下記素材を終濃度０．００２質量％（低濃度サンプル）又は終濃度０．０１質量％（高濃度サンプル）にてそれぞれ添加した無血清ＤＭＥＭに交換した。２時間後、０．０３μｇ／ｍＬ  ＴＧＦ−β１（和光純薬）を添加し、２０分間インキュベートした細胞について、培地を除去しＰＢＳで洗浄した。
【００５２】
素材としては、ローズマリー抽出物は製品名「ＲＭ−２１Ｂベース」（三菱化学フーズ）を、白茶抽出物はＷｈｉｔｅ ｔｅａ ｅｘｔｒａｃｔ（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｈｅｒｂ Ｉｎｃ.）、マリアアザミ抽出物はマリアアザミエキス（研光通商）、ログウッド色素は製品名「ヘマテイン」（一丸ファルコス）を、ピーナツ抽出物はピーナツ種皮エキス末（常盤植物化学）を、ライチポリフェノールは製品名「オリゴノール」（アミノアップ化学）を、リンゴポリフェノールは製品名「アップルフェノンＣ−１００」（アサヒフードアンドヘルスケア）を、ウーロン茶は製品名「ウーロン茶エキス」（三栄源エフエフアイ）を使用した。
【００５３】
（２）ウエスタンブロッティング
ＰＢＳで洗浄した細胞に下記Ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒを加えよくホモジナイズした。氷上に１５分間静置後、超音波にて破砕し、１２０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心した上清をタンパク質溶液として得た。ＳＤＳ−ＰＡＧＥには、１レーンあたりタンパク質２５μｇ分、４ｘＳＤＳ Ｓａｍｐｌｅ ｂｕｆｆｅｒ （Ｎｏｖａｇｅｎ）を１／４容量含む調製サンプルに対し、９５℃で５分間熱変性をかけたものを用いた。Ｉｍｍｕｎ−ＢｌｏｔＴＭＰＶＤＦ Ｍｅｍｂｒａｎｅ（ＢｉｏＲａｄ）に転写し、以下の手順でブロッキング、抗体反応を行い、ＥＣＬ ｐｒｉｍｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ （Ａｍｅｒｓｈａｍ） を用いてＳｍａｄ３及びリン酸化Ｓｍａｄ３の検出を行った。これによりＴＧＦ−β刺激応答性のＳｍａｄ３リン酸化亢進が、各素材により阻害されるかを評価した。なお、内部標準として、α−ＴｕｂｕｌｉｎとＳｍａｄ３について、併せて検出を行った。図１における（−）は上記ＴＧＦ−β１を添加しなかったもの、（＋）は上記ＴＧＦ−β１を添加したものを示す。
【００５４】
５％ スキムミルク／ＴＢＳ−Ｔ，１時間 （室温）
↓ ＴＢＳ−Ｔにて洗浄
一次抗体 ／ Ｃａｎ Ｇｅｔ ＳｉｇｎａｌＴＭ ｓｏｌｕｔｉｏｎ１ （ＴＯＹＯＢＯ），Ｏ／Ｎ （４℃）
↓ ＴＢＳ−Ｔにて洗浄
二次抗体 ／ Ｃａｎ Ｇｅｔ ＳｉｇｎａｌＴＭ ｓｏｌｕｔｉｏｎ２ （ＴＯＹＯＢＯ）， １時間 （室温）
↓ ＴＢＳ−Ｔにて洗浄
検出
※ ＴＢＳ−Ｔ; ０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０／Ｔｒｉｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ （ＴＢＳ）
【００５５】
Ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ：ＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒ （ＳＩＧＭＡ）
Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｒ ｃｏｃｋｔａｉｌ （１／１０００量、ＳＩＧＭＡ）
Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ １ （１／１００量、ＳＩＧＭＡ）
Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ ２ （１／１００量、ＳＩＧＭＡ）
一次抗体：ａｎｔｉ−Ｓｍａｄ３（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ♯９５１３），１０００倍希釈
ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ Ｓｍａｄ３（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ♯９５２０）,１０００倍希釈
ａｎｔｉ−α−ｔｕｂｕｌｉｎ（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ♯２１４４）,１０００倍希釈
二次抗体： ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ, ＨＲＰ ｌｉｎｋｅｄ（ＧＥヘルスケア）,１０００倍希釈
【００５６】
図１より、ローズマリー抽出物、白茶抽出物、マリアアザミ抽出物、ウーロン茶抽出物、ピーナツ抽出物、ログウッド色素、ライチポリフェノール、及びリンゴポリフェノールは、ＴＧＦ−β刺激応答性のＳｍａｄ３リン酸化亢進が抑制され、高濃度処理群（レーン右側）においてはより顕著な抑制効果が認められた。
【図１】
2020147608.tif 000002