(57)【要約】      （修正有）【課題】安全性に優れ、低コストで製造することができ、高い内臓脂肪低減効果を示す、内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物の提供。【解決手段】サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物を含有する内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物。穀物は、米であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物を含有することを特徴とする内臓脂肪低減剤。
【請求項２】
前記穀物は、米であることを特徴とする請求項１に記載の内臓脂肪低減剤。
【請求項３】
前記サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）が、受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８００で特定されるＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株であることを特徴とする請求項１又は２に記載の内臓脂肪低減剤。
【請求項４】
サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物を含有することを特徴とする内臓脂肪低減用食品組成物。
【請求項５】
前記穀物は、米であることを特徴とする請求項４に記載の内臓脂肪低減用食品組成物。
【請求項６】
前記サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）が、受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８００で特定されるＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株であることを特徴とする請求項４又は５に記載の内臓脂肪低減用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物を有効成分とする内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満はさまざまな疾病の発症に関与していることから、日本では、２００８年４月より腹囲等を測定する特定検診・特定保健指導（いわゆる「メタボ検診」）が実施されている。特に、内臓脂肪型肥満は、糖尿病、動脈硬化、高脂血症、高血圧、心血管疾患又は脳卒中等の生活習慣病の発症原因の一つとされていることから、内臓脂肪型肥満と診断された場合には、内臓脂肪を低減させるための治療を行うことが重要である。
【０００３】
内臓脂肪型肥満の治療方法としては、主に、摂取カロリーを制限する食事療法と、運動によって脂肪燃焼を図る運動療法とがあるが、これらの療法の効果を高めるために用いられる内臓脂肪低減剤が種々提案されている。例えば、特許文献１には、セイヨウトチノキの樹皮抽出物を有効成分とする内臓脂肪低減剤が開示され、特許文献２には、温州みかんの搾汁粕の酵素処理物が、内臓脂肪の低減作用を有することが記載されている。
【０００４】
他方、虫草菌とよばれるノムシタケ属（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）は、コウモリガ、セミ、カイコ等の昆虫の幼虫に寄生し、子実体である茸を形成させる特異な菌類である。たとえば、冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）はコウモリガの幼虫に寄生する虫草菌の一種であり、漢方薬の生薬として有名である。また、サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）はカイコの幼虫に寄生する虫草菌である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第４４１５０６３号
【特許文献２】特許第５８３０２１４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述したように、メタボリックシンドロームを解消するため、内臓脂肪を有効かつ迅速に低減させることができ、安全性が高く、安価に入手することができる医薬品や食品等の材料を開発し、提供することが依然として期待されている。
【０００７】
他方、虫草菌であるサナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）を、内臓脂肪型肥満の治療や内臓脂肪低減剤として用いることについての検討はこれまでなされておらず、その有効性はまったく不明であった。
【０００８】
したがって、本発明は上述した点に鑑みてなされたもので、その目的は、安全性に優れ、低コストで製造することができ、高い内臓脂肪低減効果を示す、内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するため、本発明の内臓脂肪低減剤は、サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物を含有する。
【００１０】
この穀物培養物は、後述する実施例で示すように、内臓脂肪量を迅速に減少させることから、内臓脂肪低減剤として用いることができる。さらに、漢方薬の生薬として用いられてきた虫草菌であるサナギタケの菌糸体と食品材料である穀物による培養物を有効成分とするものであるため、安全性が高い。
【００１１】
また、本発明の内臓脂肪低減剤における穀物は、米であることも好ましい。これにより、穀物培養物の原料として好適なものが選択される。
【００１２】
また、上述したサナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）が、受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８００で特定されるＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株であることも好ましい。これにより、本発明の有効成分である穀物培養物をもたらす好適なサナギタケ株が選択される。
【００１３】
また、本発明の内臓脂肪低減用食品組成物は、サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物を含有する。この穀物培養物は、内臓脂肪量を迅速に減少させることから、内臓脂肪低減用食品組成物として用いることができる。さらに、漢方薬の生薬として用いられてきた虫草菌であるサナギタケの菌糸体と食品材料である穀物による培養物を有効成分とするものであるため、安全性が高く、食品として手軽に経口摂取することができる。
【００１４】
また、本発明の内臓脂肪低減用食品組成物における穀物は、米であることも好ましい。これにより、穀物培養物の原料として好適なものが選択される。
【００１５】
また、上述したサナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）が、受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８００で特定されるＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株であることも好ましい。これにより、本発明の有効成分である穀物培養物をもたらす好適なサナギタケ株が選択される。
【００１６】
また、本発明の内臓脂肪低減用食品組成物の製造方法は、穀物原料にサナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体を接種し、培養させて穀物培養物を得ることにより製造される。サナギタケ菌糸体を穀物原料で培養することにより、得られるものであるため、煩雑な工程等を経る必要がなく、比較的低コストで製造することが可能である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、以下のような優れた効果を有する内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物を提供することができる。
（１）内臓脂肪の減少効果に優れる。
（２）漢方薬の生薬として用いられてきた虫草菌であるサナギタケの菌糸体と食品材料である穀物による培養物を有効成分とするものであるため、安全性が高く、経口摂取できる。
（３）サナギタケの菌糸体を穀物原料で培養することにより製造されるものであるため、化学合成や抽出・精製等の煩雑な工程等を経る必要がなく、簡単且つ低コストに得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施形態に係るサナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物の製造方法を概略的に示すフローチャートである。
【図２】実施例３における、（ａ）対照群及びＣＭ−Ｒの３日間連日投与群のマウスの体重変化を示すグラフ、及び（ｂ）対照群及びＣＭ−Ｒの６日間連日投与群のマウスの体重変化を示すグラフである。
【図３】実施例４における対照群及び各投与群のマウスの内臓脂肪量の変化を示すグラフである。
【図４】実施例４における対照群及び各投与群のマウスの体重１０ｇあたりの内臓脂肪量の相対重量変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
まず、図１を参照し、本発明の内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物に有効成分として含有される、サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物の製造方法について説明する。
【００２０】
図１に示すように、本発明の実施形態にかかるサナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の穀物培養物の製造方法は、穀物原料を準備する工程Ｓ０、穀物原料に水を加え吸水させる工程Ｓ１、穀物原料を蒸煮して滅菌する工程Ｓ２、蒸煮された穀物原料にサナギタケ菌糸体を接種する工程Ｓ３、固体培養を行う工程Ｓ４、穀物培養物を得る工程Ｓ５及び穀物培養物を凍結乾燥粉末に加工する工程Ｓ６から概略構成される。
【００２１】
［穀物原料の準備］
まず、図１に示す穀物原料を準備する工程Ｓ０について説明する。本発明における穀物原料としては、デンプン質を主体とする種子原料のことをいい、具体的には、イネ科、マメ科またはその他雑穀類の種子が用いられる。イネ科の植物としては、米、トウモロコシ、小麦、大麦、燕麦及びライ麦等の麦類、キビ、あわ、モロコシ、ヒエ等が挙げられる。また、マメ科の植物としては、大豆、小豆、エンドウマメ、落花生、緑豆等が挙げられ、その他雑穀類の植物としてはソバが挙げられる。これらのうち、本発明に係る穀物原料としては、イネ科の植物の種子が好ましく、内臓脂肪の低減効果及び培養効率等の観点から、米、大麦、及び小麦がより好ましく用いられ、米が特に好ましく用いられる。
【００２２】
米を穀物原料として用いる際には、後述する培養工程Ｓ４での培養効率の観点から、籾殻が除去された状態の米、すなわち、玄米を用いる。また、培養初期の培養速度を向上させる観点から、玄米をさらに精米した精白米を玄米と組み合わせて用いることが好ましい。精白米は玄米よりも速やかにデンプン質からその構成単位のグルコースに分解されるため、米原料に植菌されたばかりの培養初期の微生物をアクティブにし、培養効率を向上させることができる。なお、精白米のみを穀物原料として用いると、栄養成分が除去されすぎているため、培養中期以降の培養効率が低下する傾向にあることから、玄米と精白米を組み合わせて用いることが好ましい。玄米と精白米の配合割合としては、精白米１重量部に対して玄米を１〜１９重量部（すなわち、重量比で、玄米／精白米＝１〜１９）配合することが好ましく、精白米１重量部に対して玄米を１〜９重量部（すなわち、重量比で、玄米／精白米＝１〜９）配合することがより好ましい。なお、精白米には胚芽米及び無洗米などのさらに磨いた米も含まれる。また、玄米及び精白米はそのままの米粒状で用いることができるが、少なくとも一部を粉砕させて粉末状としたものを用いることも可能である。また、米原料には、米以外の他の穀物原料を配合させたり、必要に応じて糠やグルコース、無機塩類、ビタミン類などを添加することも可能である。
【００２３】
［吸水処理］
次に、吸水処理工程Ｓ１について説明する。本工程では、上述した穀物原料に水を加えるか、穀物原料を水に浸漬させて吸水させる処理が行われる。吸水量は、たとえば、米を穀物原料として用いる場合には、水分が２０〜６０％、好ましくは３０〜４５％となるように調整する。また、大豆を穀物原料として用いる場合には、水分が３０〜７０％、好ましくは４０〜６０％となるように調整する。
【００２４】
［蒸煮処理］
次に、蒸煮処理工程Ｓ２について説明する。高圧蒸気滅菌器などを用いて、上述の工程で吸水させた穀物原料に水蒸気を当てて蒸煮する。蒸煮処理の温度及び時間は、１００〜１２１℃で１５分〜６０分程度が好ましく、１５分〜３０分がより好ましく、１２１℃で２０分程度が特に好ましい。本工程を行うことにより、穀物原料中の雑菌が殺菌され、後の培養工程において、サナギタケ菌糸体による穀物原料の分解、消化及び吸収が行われる。また、この蒸煮処理により、穀物原料中のデンプン質がアルファ化されて分解されやすくなるので、後の培養工程において、穀物原料にサナギタケ菌糸体を効率よく繁殖させることができる。蒸煮が終了した穀物原料は、３０〜４０℃程度にまで放冷させる。これにより、サナギタケ菌糸体を穀物原料に接種することが可能となる。
【００２５】
［サナギタケ菌糸体の接種］
次に、サナギタケ菌糸体を穀物原料に接種する工程Ｓ３について説明する。本工程では、上述の蒸煮・殺菌工程を経て冷却された穀物原料に対し、サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体を接種する。サナギタケはカイコの蛹等に寄生するノムシタケ科ノムシタケ属に属するいわゆる虫草菌であり、中国、韓国、日本等に広く分布する子のう菌類の一種である。サナギタケ菌糸体の接種にあたっては、事前に液体種菌を準備しておき、スターターとして用いることが好ましい。液体種菌は、特に限定されないが、一例として次のようにして準備することができる。グルコースが３重量％、赤糠が２重量％、大豆粉が０．５重量％、酵母エキスが０．５重量％及びアスパラギン酸ナトリウムが０．２重量％からなる種菌用液体培地１２０ｍＬを５００ｍＬの三角フラスコに入れ、１２１℃で２０分間滅菌し、放冷する。その後、サナギタケの１ｃｍ×１ｃｍの菌糸体ディスクを接種し、２４℃程度で７日間程度培養することにより液体種菌を得ることができる。
【００２６】
本発明においては、サナギタケとして、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株（受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８００）を用いることが好ましい。これにより、内臓脂肪の低減効果に優れる穀物培養物を得ることができる。Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株は栃木県内山林で発見された子実体から純粋分離されたサナギタケの菌糸体であり、上述した液体種菌培地のほか、固体培地（組成：玄米１００ｇ、酵母エキス３ｇ、水分４０％）で培養温度２３〜２７℃、培養期間２５〜３５日間の培養条件にて好適に培養される。また、このＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株について、ＩＴＳ−５．８Ｓ  ｒＤＮＡ領域の塩基配列解析を行ったところ、アポロンＤＢ−ＦＵに対するＢＬＡＳＴ検索の結果として、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＩＦＯ３０３７７株（アクセッションＮｏ．ＡＢ０７０３７５）との同一性が１００％であり、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＩＦＯ９７８７株（アクセッションＮｏ．ＡＢ０７０３７４）との同一性が９９．８％であることが判明している。また、国際塩基配列データベースに対するＢＬＡＳＴ検索の結果においても、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ種との相同性が９９．６％以上であることが判明している。これらのことから、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株の帰属分類群がＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ（Ｌ．）Ｆｒ．であることが同定されている。
【００２７】
サナギタケ菌糸体の接種にあたっては、穀物原料の１〜５重量％の量のサナギタケの液体種菌を穀物原料に均一に散布して混合する。サナギタケ菌糸体を穀物原料に接種したのち、よく撹拌してサナギタケ菌糸体を穀物原料全体に分散させることが好ましい。
【００２８】
［培養］
次に、穀物原料に接種したサナギタケ菌糸体による培養を行う工程Ｓ４について説明する。本工程では、サナギタケ菌糸体を接種した穀物原料にサナギタケ菌糸体を繁殖させる。サナギタケ菌糸体の培養温度は２０〜３０℃とすることが好ましく、２３〜２５℃とすることがより好ましい。培養期間は２週間〜２ヶ月間程度とすることが好ましく、種菌を接種してから７〜１０日目に混合操作を行って菌糸が均一に全体に蔓延する様にし、培養期間を２１日〜４０日間程度とすることがより好ましい。所定の培養期間が経過し菌糸体が十分に蔓延した時点をサナギタケ菌糸体の穀物原料の培養の終了とする。
【００２９】
［穀物培養物］
得られたサナギタケ菌糸体の穀物培養物Ｓ５は、穀物原料全体にサナギタケ菌糸体が繁殖蔓延している。この穀物培養物を内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物として用いるにあたっては、穀物培養物全体を殺菌処理することが好ましい。殺菌処理は公知の方法で行われ、一例として高圧蒸気滅菌器などを用いて、１２１℃で２０分間加熱することにより殺菌される。また、この加熱殺菌処理を行うことにより、サナギタケ菌糸体の穀物培養物は殺菌されると同時に加熱処理されて熱水抽出効果も得られる。
【００３０】
［凍結乾燥粉末］
次に、サナギタケ菌糸体の穀物培養物を凍結乾燥粉末に加工する工程Ｓ６について説明する。殺菌処理された穀物培養物は、一定の水分を含んだ状態であるが、凍結乾燥させることにより水分が除去され、穀物培養物の乾燥物が得られる。なお、自然乾燥、熱風乾燥又は低温真空乾燥等により乾燥物を得てもよい。得られた穀物培養物の乾燥物を粉砕することにより、取り扱いし易い凍結乾燥粉末を得ることができる。また、得られた粉末を顆粒状や打錠品とすることも可能である。加熱殺菌処理を行い、加熱による水分を除去、または凍結粉砕したものであっても、サナギタケ菌糸体の穀物培養物としての機能は有効に保持されている。このサナギタケ菌糸体の穀物培養物は、このままでも充分な内臓脂肪の低減効果を有している。それゆえ、さらなる抽出や分離精製操作等の煩雑な工程は不要であり、簡単かつ低コストにて完成品を得ることができる。
【００３１】
本発明の内臓脂肪低減剤及び内臓脂肪低減用食品組成物は、上述したサナギタケ菌糸体で培養された穀物培養物を有効成分として含むものであって、経口投与又は摂取することにより、内臓脂肪を迅速に低減する作用を有する。本発明の内臓脂肪低減剤の投与量は、目標とする低減量又は他の運動やカロリー制限等の療法の内容、投与方法、年齢などによって変化するので一概には規定できないが、通常一日の経口投与量は、サナギタケ菌糸体の穀物培養物として約１０〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは約２５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重であり、さらに好ましくは約５０〜３００ｍｇ／ｋｇ体重であり、これを投与開始より１〜３回に分割して投与すればよい。
【００３２】
本発明の内臓脂肪低減剤は、従来慣用されている方法により種々の形態に調製することができる。この場合、通常製剤用の担体や賦形剤など、医薬品の添加剤として許容されている添加剤を用いて製剤化することができる。また、本発明に係るサナギタケ菌糸体の穀物培養物のバイオアベイラビリティーや安定性を向上させるために、マイクロカプセル、微粉末化、シクロデキストリン等を用いた包接化などの製剤技術を含むドラッグデリバリーシステムを用いることもできる。
【００３３】
さらに、上記内臓脂肪低減剤は、錠剤、顆粒剤、カプセル剤又は内服用液剤等の形態で用いることができるが、消化管からの吸収に適した形態で用いることが好ましい。また、流通性、保存性などの理由により所望される形態での製剤を提供する場合にも従来の製剤技術を用いることができる。
【００３４】
また、本発明の内臓脂肪低減用食品組成物は、錠剤やカプセル剤、顆粒剤、シロップ剤などのサプリメント形態、飲料、アメやガム、チョコレート等の菓子、パン、粥、シリアル、麺類、ゼリー、スープ、乳製品、調味料等のあらゆる形態にて食品組成物として用いることができる。このように食品組成物として用いる際には、本発明の有効成分の効能に影響を与えない範囲において、他の有効成分や、ビタミン、ミネラル若しくはアミノ酸等の栄養素等を種々組み合わせることも可能である。本発明の食品組成物から展開される食品には、サプリメント、健康食品、機能性食品、特定保健用食品等が含まれる。また、本発明の食品組成物の１日あたりの摂取量は、上述のサナギタケ菌糸体の穀物培養物として約１０〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重とすることが好ましく、約２５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重とすることがより好ましく、さらに約５０〜３００ｍｇ／ｋｇ体重とすることが好ましく、これを１〜３回に分割して摂取することが好ましい。
【００３５】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例によってなんら限定されるものではない。
【実施例】
【００３６】
［実施例１］
１．サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）の液体種菌の調製
５００ｍＬの三角フラスコに表１に示す液体種菌培地１２０ｍＬを入れ、１２１℃で２０分間加熱して滅菌処理を行った。放冷後、１ｃｍ×１ｃｍの保存用種菌（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株）の菌糸体ディスクを接種し、２４℃で７日間培養して液体種菌とした。このＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株は本発明者（小林文男）により純粋分離されたサナギタケ株であり、受託番号：ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８００として、独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センターに寄託されている。また、このＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株について、ＩＴＳ−５．８Ｓ  ｒＤＮＡ領域の塩基配列解析を行った結果、帰属分類群がＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ（Ｌ．）Ｆｒ．であることが確認されている。
【００３７】
【表１】
2020080708.tif 000002
【００３８】
［実施例２］
２．サナギタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）菌糸体の米培養物の調製
本実施例では、培養原料の穀物として、玄米と精白米を混合した米原料を用いた。玄米と精白米との混合割合は、重量比で玄米：精白米＝９：１とした。流通している市販の米の水分含量は約１２％であるので、米原料の水分含量が約４０％となるように水を加えて吸水させた。具体的には１０００ｇの米原料あたり、４００ｍＬの比率で水を加え吸水させた原料１０００ｇを耐熱性培養袋に計量充填した。その後、１２１℃で２０分間加熱して、米原料の蒸煮処理及び滅菌処理を行った。米原料を放冷したのち、実施例１で得られたＣｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｍｉｌｉｔａｒｉｓ  ＫＴ１６５１４株の液体種菌を米原料の３重量％となるように米原料に無菌的に混合接種した。２４℃で３０日間固体培養した後、１２１℃で２０分間加熱して抽出滅菌処理を行い、更に凍結乾燥し粉砕して粉末化した。このようにして本発明のサナギタケ菌糸体の米培養物が得られた（以下、「ＣＭ−Ｒ」とも表記する。）。この米培養物について、栄養表示成分、重金属及び微生物にかかる分析試験を行った。結果を以下表２に示す。
【００３９】
【表２】
2020080708.tif 000003
【００４０】
［実施例３］
３．サナギタケ菌糸体の米培養物の投与による安全性の検討
サナギタケ菌糸体の米培養物（ＣＭ−Ｒ）の安全性を検証するため、実施例２で得たＣＭ−Ｒをマウスに連日投与し、体重測定及び臓器等の状態を調査した。具体的には、次のようにして試験を行った。７週齢のＩＣＲ雄マウス（日本エスエルシー株式会社）を５０匹入手し、１週間程度馴化させた後、以下表３に示すように、５匹ずつ１０群に分けた。８週齢となったＩＣＲ雄マウスに対し、実施例２で得たＣＭ−Ｒをマウスの体重１ｋｇ当たり２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ及び２００ｍｇ／ｋｇとなるようにそれぞれ蒸留水にて調整し、マウス用の胃ゾンデを用いて各投与群のマウスに経口投与した。投与総量は０．２ｍＬ／回とし、また対照群には同量の蒸留水を投与した。投与期間は１日１回で連日３日間および連日６日間とし、投与期間中、午後２時から４時までのマウス空腹時かつ投与前にマウスの体重測定を行った。また、最終投与２４時間後に動物用吸入麻酔剤（イソフル：ゾエティス・ジャパン株式会社製品）の過剰吸入による安楽死を実施し、マウスの外観を検査した。引き続いて解剖を実施し、各臓器の位置、形状、出血及び癒着の有無を検査した。
【００４１】
【表３】
2020080708.tif 000004
【００４２】
ＣＭ−Ｒの経口投与期間中におけるマウスの体重の変化を図２に示す。図２（ａ）は３日間投与群のグラフであり、図２（ｂ）は６日間投与群のグラフである。３〜６日間の連続投与による顕著な体重の増減は認められず、各投与群において体重の自然増加（１．８％〜４．７％）が認められた。具体的には、ＣＭ−Ｒの３日間投与群では、対照群で１．８％の体重増加がみられ、１００ｍｇ／ｋｇ投与群を除き、２５ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ投与群では４．１〜４．７％の体重増加がみられた。ＣＭ−Ｒの６日間投与群においても対照群で１．８％の体重増加がみられ、２５ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ投与各群では０．９〜３．０％の体重増加がみられた。他方、投与期間中のマウスには投与群及び対照群いずれのマウスも運動性、行動及び食欲に異常がみられず、連日投与後にも体毛の汚れ及び下痢などの異常は認められなかった。また、解剖を行って各臓器の位置、形状、出血、癒着の有無を検査したところ、投与群及び対照群いずれのマウスについても、各臓器の位置、形状、出血及び癒着等の異常はみられなかった。
【００４３】
これらの結果より、ＣＭ−Ｒの２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇおよび２００ｍｇ／ｋｇの３日間投与と６日間投与について特記すべき異常はみられなかった。これにより、サナギタケ菌糸体の米培養物は安全性が高いものであることが確認された。
【００４４】
［実施例４］
４．サナギタケ菌糸体の米培養物による内臓脂肪の低減
実施例３において、サナギタケ菌糸体の米培養物（ＣＭ−Ｒ）を連日３日間投与した試験群及び対照群のマウスの各個体について、安楽死後、精巣周囲脂肪を採取し、各試験群及び対照群ごとの平均値を求めた。精巣周囲脂肪は、腹腔内脂肪の代表的なものとされており、他の組織から独立した脂肪組織として採取可能である。結果を図３及び図４に示す。
【００４５】
図３のグラフの縦軸は測定した脂肪組織の重量（ｍｇ）であり、棒グラフの各バーは、左側から対照群（０ｍｇ／ｋｇ）、ＣＭ−Ｒ ２５ｍｇ／ｋｇ投与群、ＣＭ−Ｒ ５０ｍｇ／ｋｇ投与群、ＣＭ−Ｒ １００ｍｇ／ｋｇ投与群及びＣＭ−Ｒ ２００ｍｇ／ｋｇ投与群を示している。図３に示すように、この結果によれば、対照群と比べて、ＣＭ−Ｒを投与した群では、内臓脂肪量が低減することが示された。具体的には、対照群の精巣周囲脂肪重量の平均値が８０５ｍｇであったのに対して、ＣＭ−Ｒを２５ｍｇ／ｋｇ投与した試験群の精巣周囲脂肪重量の平均値は７９０ｍｇに留まったものの、ＣＭ−Ｒ ５０ｍｇ／ｋｇ投与群の平均値は６３２ｍｇまで減少（対照群の重量の７８．５％にまで減少）し、ＣＭ−Ｒ １００ｍｇ／ｋｇ投与では６９８ｍｇに減少（対照群の重量の８６．７％に減少）、ＣＭ−Ｒ ２００ｍｇ／ｋｇ投与群では５６４ｍｇまで減少（対照群の重量の７０．１％にまで減少）した。このうち、特にＣＭ−Ｒ ２００ｍｇ／ｋｇ投与群は有意差を伴う減少（Ｐ＜０．０５）であった。このように、ＣＭ−Ｒ、すなわち、サナギタケ菌糸体の米培養物の投与によって、内臓脂肪が低減することがわかった。
【００４６】
図４のグラフは、各試験群及び対照群のマウス体重１０ｇあたりの相対重量変化を示している。通常、精巣周囲脂肪組織の重量はマウスの週齢及び体重と相関している。グラフの縦軸はマウス体重１０ｇあたりの精巣脂肪組織の重量（ｍｇ）であり、棒グラフの各バーは、左側から対照群（０ｍｇ／ｋｇ）、ＣＭ−Ｒ ２５ｍｇ／ｋｇ投与群、ＣＭ−Ｒ ５０ｍｇ／ｋｇ投与群、ＣＭ−Ｒ １００ｍｇ／ｋｇ投与群及びＣＭ−Ｒ ２００ｍｇ／ｋｇ投与群を示している。この結果によれば、対照群と比べて、ＣＭ−Ｒを投与した群では、体重に占める内臓脂肪量が低減することが示された。具体的には、マウス体重１０ｇあたりの対照群の精巣周囲脂肪重量の平均値が２０７ｍｇであったのに対して、ＣＭ−Ｒを２５ｍｇ／ｋｇ投与した試験群の平均値は１９３ｍｇに留まったものの、ＣＭ−Ｒ ５０ｍｇ／ｋｇ投与群の平均値は１５６ｍｇまで減少（対照群の重量の７５．４％にまで減少）し、ＣＭ−Ｒ １００ｍｇ／ｋｇ投与では１７９ｍｇに減少（対照群の重量の８７．３％に減少）、ＣＭ−Ｒ ２００ｍｇ／ｋｇ投与群では１４３ｍｇまで減少（対照群の重量の６９．１％にまで減少）した。このうち、特にＣＭ−Ｒ ５０ｍｇ／ｋｇ投与群及び２００ｍｇ／ｋｇ投与群は有意差を伴う減少（Ｐ＜０．０５）であった。この結果より、ＣＭ−Ｒを投与したことにより、体重全体が減少するのではなく、内臓脂肪が選択的に低減されたことがわかった。このように、ＣＭ−Ｒ、すなわち、サナギタケ菌糸体の米培養物の投与によって、内臓脂肪が低減することがわかった。
【００４７】
本発明は、上記の実施形態又は実施例に限定されるものでなく、特許請求の範囲に記載された発明の要旨を逸脱しない範囲内での種々、設計変更した形態も技術的範囲に含むものである。
【受託番号】
【００４８】
ＮＩＴＥ  Ｐ−０２８００
【図１】
2020080708.tif 000005
【図２】
2020080708.tif 000006
【図３】
2020080708.tif 000007
【図４】
2020080708.tif 000008