(57)【要約】      （修正有）【課題】ＧＡＢＡを豊富に含むネギ属植物を原料とし、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率を向上させることのできる組成物等を提供する。【解決手段】ＧＡＢＡ（γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）分解酵素阻害用ノルメコニン（Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ；６，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）を有する組成物とする。当該組成物は下記＜Ａ＞、＜Ｂ＞に列挙されたネギ属植物を原料として得ることができる。＜Ａ＞タマネギ、エシャロット、ニンニク、ラッキョウ、ツリーオニオン、アサツキ、ネギ（ナガネギ、青ネギ）、ワケギ、チャイブ、ニラ、ヤグラネギ、白ネギ、リーキ、ノビル、ギョウジャニンニク＜Ｂ＞＜Ａ＞に列挙した各植物の加工物；例．黒ニンニク【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＡＢＡ（γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ）分解酵素阻害用ノルメコニン（Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ  ６，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）。 
【請求項２】
「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨の表示が付されていることを特徴とする、請求項１に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
【請求項３】
ネギ属植物由来であることを特徴とする、請求項１、２のいずれかに記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
【請求項４】
前記ネギ属植物は下記＜Ａ＞、＜Ｂ＞に列挙されたもののいずれかであることを特徴とする、請求項３に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
＜Ａ＞  タマネギ、エシャロット、ニンニク、ラッキョウ、ツリーオニオン、アサツキ、ネギ（ナガネギ、青ネギ）、ワケギ、チャイブ、ニラ、ヤグラネギ、白ネギ、リーキ、ノビル、ギョウジャニンニク 
＜Ｂ＞  ＜Ａ＞に列挙した各植物の加工物 
【請求項５】
前記ネギ属植物は発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物であることを特徴とする、請求項３、４のいずれかに記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
【請求項６】
「黒」、「琥珀」、「発酵」、「熟成」、またはその他の発酵処理・加熱処理・メイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来である旨を示す表示が付されていることを特徴とする、請求項５に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
【請求項７】
ノルメコニンを用いることを特徴とする、ＧＡＢＡ分解酵素阻害方法。
【請求項８】
前記ノルメコニンがネギ属植物由来であることを特徴とする、請求項７に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害方法。 
【請求項９】
発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来であって、下記＜Ｚ＞を除くことを特徴とする、ＧＡＢＡ摂取用組成物（「組成物」には「固体状または液体状のエキス（抽出物）」も含まれる。以下同じ）。 
＜Ｚ＞  「黒」、「琥珀」、「発酵」、「熟成」、またはその他の発酵処理・加熱処理・メイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来である旨を示す表示が付されているもの
【請求項１０】
ノルメコニンを一有効成分とすることを特徴とする、請求項９に記載のＧＡＢＡ摂取用組成物。 
【請求項１１】
「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨、または「ＧＡＢＡを摂取できる」旨の表示が付されている、下記＜Ｆ＞列記のいずれかであることを特徴とする、請求項９、１０のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用組成物。 
＜Ｆ＞  固体状のエキス、液体状のエキス、食品
【請求項１２】
ネギ属植物を原料とすることを特徴とする、ＧＡＢＡ摂取用食品。
【請求項１３】
ノルメコニンを一有効成分とすることを特徴とする、請求項１２に記載のＧＡＢＡ摂取用食品。 
【請求項１４】
前記ネギ属植物は発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物であることを特徴とする、請求項１２、１３のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用食品。 
【請求項１５】
「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨、または「ＧＡＢＡを摂取できる」旨の少なくともいずれかの表示が付されていることを特徴とする、請求項１２、１３、１４のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用食品。 
【請求項１６】
ノルメコニンを有効成分とするＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物（「組成物」には「固体状または液体状のエキス（抽出物）」も含まれる。以下同じ）、 
請求項９、１０、１１のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用組成物、 
または請求項１２、１３、１４、１５のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用食品 
（以上をまとめて「ＧＡＢＡ摂取用物」と言う。）のいずれかを製造する方法であって、 
原料ネギ属植物に対する発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理過程、およびその後の濃縮処理過程を含んで行われることを特徴とする、ＧＡＢＡ摂取用物製造方法。 
【請求項１７】
ＡＧＥｓ（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ、終末糖化産物）もしくはその中間体の生成を阻害する作用、またはＡＧＥｓのＲＡＧＥ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ＡＧＥｓ、ＡＧＥｓ受容体）への接着を阻害する作用（以下、まとめて「ＡＧＥｓ等阻害作用」という。）と、およびＧＡＢＡ分解酵素阻害作用のいずれの作用をも有することを特徴とする、ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物（「組成物」には「固体状または液体状のエキス（抽出物）」も含まれる。以下同じ）。 
【請求項１８】
前記ネギ属植物は発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物であることを特徴とする、請求項１７に記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物。 
【請求項１９】
下記＜Ｄ１＞〜＜Ｄ４＞の中から少なくともいずれかと、および下記＜Ｅ１＞〜＜Ｅ４＞の中から少なくともいずれかの表示が併せて付されている、下記＜Ｆ＞列記のいずれかであることを特徴とする、請求項１７、１８のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物。 
＜Ｄ１＞  ＡＧＥｓ生成阻害用である旨 
＜Ｄ２＞  ＡＧＥｓの中間体の生成阻害用である旨 
＜Ｄ３＞  ＡＧＥｓのＲＡＧＥへの接着阻害用である旨 
＜Ｄ４＞  固形分として原料とするネギ属植物以外のものが含まれていない旨 
＜Ｅ１＞ＧＡＢＡ分解酵素阻害用である旨 
＜Ｅ２＞ＧＡＢＡ摂取可能である旨 
＜Ｆ＞固体状のエキス、液体状のエキス、食品
【請求項２０】
請求項１７、１８、１９のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物を製造する方法であって、原料ネギ属植物に対する発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理過程、およびその後の濃縮処理過程を含んで行われることを特徴とする、ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物製造方法。 
【請求項２１】
請求項１７、１８、１９のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物、または請求項２０に記載の方法により得られるＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物を用いていることを特徴とする、食品。
【請求項２２】
ＡＧＥｓ等およびＧＡＢＡ分解酵素の阻害用ノルメコニン。 
【請求項２３】
ネギ属植物由来であることを特徴とする、請求項２２に記載のＡＧＥｓ等およびＧＡＢＡ分解酵素の阻害用ノルメコニン。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニンニクなどのネギ属植物を原料とするＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン、ＧＡＢＡ分解酵素阻害方法等に関するものである。 
【背景技術】
【０００２】
ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）は、古来より滋養強壮に用いられる食品としても親しまれているだけではなく、殺菌作用１）、抗炎症作用２）、抗腫瘍作用３）、抗糖尿病作用４）、抗酸化活性５）など多くの生理活性も有していることが報告されている。ニンニクを湿度６０〜９０％、温度４０〜９０℃の環境下で段階的に熟成させる発酵処理や、メイラード反応（アミノカルボキシル反応）処理して製造されるのが黒ニンニク（琥珀ニンニク等と言われることもあるが、以下、単に「黒ニンニク」と言う）である。なかでも、青森県産黒ニンニクは、品質、機能性ともに注目されている機能性食品のうちのひとつである。 
〔参照文献〕 
1) Idris AR, Afegbua SL., Trans. R．Soc．Trop．Med．Hyg., 111, 478 (2017)． 
2) Baluchnejadmojarad T, Kiasalari Z, Afshin-Majd S, Ghasemi Z, Roghani M., Ｅｕｒ．J．Pharmacol., 5, 69-76 (2017)． 
3) Block E, Bechand B, Gundala S, Vattekkatte A, Wang K, Mousa SS, Godugu K, Yalcin M, Mousa SA., Molecules., 22(12). pii: E2081. doi: 10.3390/molecules22122081. 
4) Oboh G, Ademiluyi AO, Agunloye OM, Ademosun AO, Ogunsakin BG., J Diet Suppl. 16, 105-118(2019). 
5) Zhang H, Wang P, Xue Y, Liu L, Li Z, Liu Y., Tissue Cell. 50, 89-95(2018). 
【０００３】
黒ニンニクについては従来、さまざまな技術的提案もなされている。たとえば後掲特許文献１には、ニンニク原料の湿度管理等を要しない簡便な手段で高生理活性物質（Ｓ−アリルシステイン、シクロアリイン等）が保持された黒ニンニクエキスを製造する技術として、ニンニク原料（乾燥ニンニク、生ニンニク等）を水抽出して得られる抽出物を、９０℃以上の温度で加熱熟成させる方法が開示されている。また特許文献２には、生ニンニクが本来有していないミネラル成分を含有した黒ニンニクを、食味を損うことなく製造する技術として、生ニンニクを６０℃の温泉水に６時間以内、より好ましくは略３時間浸漬させて温泉水処理生ニンニクとし、これを発酵させて黒ニンニクを得る方法が開示されている。 
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−４５６９３号公報「黒ニンニクエキスの製造およびその用途」
【特許文献２】特開２０１７−２３００３号公報「黒にんにくの製造方法」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
さて、青森県産のものを初めとして黒ニンニクでは、熟成過程においてＳ−ａｌｌｙｌ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ、  Ｃｙｃｌｏ−ａｌｌｉｉｎ、Ｐｙｒｏｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄなどの多くの機能性成分が増加することが報告されており、とりわけＧＡＢＡ（γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ）においては８倍程度もの増加が認められている。既に、ＧＡＢＡを効率良く摂取することは血圧低下６）、中性脂肪の抑制７）、精神の安定８）に寄与することが知られているが、特に近年は、腸管ＧＡＢＡ受容体への刺激が中枢神経系を介して脳に作用する腸脳相関が注目されている。 
〔参照文献〕 
6）Vemulapalli S, Barletta M., Arch. Int. Pharmacodyn. Ther., 267, 46-58(1984). 
7）Ho XL, Tsen SY, Ng MY, Lee WN, Low A, Loke WM., J. Med. Food., Published Online:1 Oct 2016https://doi.org/10.1089/jmf.2016.3693（2016）. 
8）堀江健二, 東口伸二,  横越英彦，Food Style 21,7, 64-68(2003). 
【０００６】
しかし、ＧＡＢＡは生体内では極めて分解されやすく、経口的に摂取したＧＡＢＡのほとんどはＧＡＢＡ−Ｔ（ＧＡＢＡ  ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ）やＳＳＡＤＨ（ｓｕｃｃｉｎｉｃ  ｓｅｍｉａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）などのＧＡＢＡ代謝系の酵素群により分解されてしまう。だが、翻せばこのことは、これらの酵素群に対して阻害作用を有する化合物さえあれば、それによって生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率を向上させられることを示すものである。これは、多くの疾患予防の観点から注目すべきことである。 
【０００７】
したがって、ＧＡＢＡを豊富に含むとされる機能性食品である、青森県産のものを初めとする黒ニンニクの、ＧＡＢＡ代謝酵素系の酵素であるＧＡＢＡ−Ｔ、およびＳＳＡＤＨの混合酵素ＧＡＢａｓｅに対する阻害作用についての検討は大いに有意義であるが、この問題をターゲットとした黒ニンニクの研究は未だなされていない。もし、かかる研究において一定の成果が得られた場合には、それは黒ニンニクのさらなる普及拡大に資するのみならず、広くニンニク以外のネギ属植物にも敷衍できる可能性がある。 
【０００８】
そこで本発明が解決しようとする課題は、このような従来技術の状況を踏まえ、ＧＡＢＡを豊富に含むネギ属植物をターゲットとし、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率向上を可能ならしめる成分の存否を研究によって明らかにし、それに基づいて、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率を向上させることのできる組成物や食品等を提供することである。 
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願発明者は上記課題について検討を行った。その結果、ＧＡＢＡを豊富に含むとされる黒ニンニクには、ＧＡＢＡ代謝酵素系の酵素であるＧＡＢＡ−ＴおよびＳＳＡＤＨの混合酵素ＧＡＢａｓｅに対する阻害作用があることを見出し、さらに、その活性成分をノルメコニン（Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ  ６  ，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）と同定することができた。そして、これらを基に本願発明は完成された。すなわち、上記課題を解決するための手段として本願で特許請求される発明、もしくは少なくとも開示される発明は、以下の通りである。 
【００１０】
〔１〕  ＧＡＢＡ（γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ）分解酵素阻害用ノルメコニン（Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ  ６，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）。 
〔２〕  「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨の表示が付されていることを特徴とする、〔１〕に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
〔３〕  ネギ属植物由来であることを特徴とする、〔１〕、〔２〕のいずれかに記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
〔４〕  前記ネギ属植物は下記＜Ａ＞、＜Ｂ＞に列挙されたもののいずれかであることを特徴とする、〔３〕に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
＜Ａ＞  タマネギ、エシャロット、ニンニク、ラッキョウ、ツリーオニオン、アサツキ、ネギ（ナガネギ、青ネギ）、ワケギ、チャイブ、ニラ、ヤグラネギ、白ネギ、リーキ、ノビル、ギョウジャニンニク 
＜Ｂ＞  ＜Ａ＞に列挙した各植物の加工物 
〔５〕  前記ネギ属植物は発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物であることを特徴とする、〔３〕、〔４〕のいずれかに記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
〔６〕  「黒」、「琥珀」、「発酵」、「熟成」、またはその他の発酵処理・加熱処理・メイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来である旨を示す表示が付されていることを特徴とする、〔５〕に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン。 
〔７〕  ノルメコニンを用いることを特徴とする、ＧＡＢＡ分解酵素阻害方法。 
〔８〕  前記ノルメコニンがネギ属植物由来であることを特徴とする、〔７〕に記載のＧＡＢＡ分解酵素阻害方法。 
【００１１】
〔９〕  発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来であって、下記＜Ｚ＞を除くことを特徴とする、ＧＡＢＡ摂取用組成物（「組成物」には「固体状または液体状のエキス（抽出物）」も含まれる。以下同じ）。
＜Ｚ＞  「黒」、「琥珀」、「発酵」、「熟成」、またはその他の発酵処理・加熱処理・メイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来である旨を示す表示が付されているもの
〔１０〕  ノルメコニンを一有効成分とすることを特徴とする、〔９〕に記載のＧＡＢＡ摂取用組成物。 
〔１１〕  「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨、または「ＧＡＢＡを摂取できる」旨の表示が付されている、下記＜Ｆ＞列記のいずれかであることを特徴とする、〔９〕、〔１０〕のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用組成物。 
＜Ｆ＞  固体状のエキス、液体状のエキス、食品
【００１２】
〔１２〕  ネギ属植物を原料とすることを特徴とする、ＧＡＢＡ摂取用食品。
〔１３〕  ノルメコニンを一有効成分とすることを特徴とする、〔１２〕に記載のＧＡＢＡ摂取用食品。 
【００１３】
〔１４〕  前記ネギ属植物は発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物であることを特徴とする、〔１２〕、〔１３〕のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用食品。 
〔１５〕  「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨、または「ＧＡＢＡを摂取できる」旨の少なくともいずれかの表示が付されていることを特徴とする、〔１２〕、〔１３〕、〔１４〕のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用食品。 
【００１４】
〔１６〕  ノルメコニンを有効成分とするＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物（「組成物」には「固体状または液体状のエキス（抽出物）」も含まれる。以下同じ）、 
〔９〕、〔１０〕、〔１１〕のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用組成物、 
または〔１２〕、〔１３〕、〔１４〕、〔１５〕のいずれかに記載のＧＡＢＡ摂取用食品 
（以上をまとめて「ＧＡＢＡ摂取用物」と言う。）のいずれかを製造する方法であって、 
原料ネギ属植物に対する発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理過程、およびその後の濃縮処理過程を含んで行われることを特徴とする、ＧＡＢＡ摂取用物製造方法。 
【００１５】
〔１７〕  ＡＧＥｓ（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ、終末糖化産物）もしくはその中間体の生成を阻害する作用、またはＡＧＥｓのＲＡＧＥ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ＡＧＥｓ、ＡＧＥｓ受容体）への接着を阻害する作用（以下、まとめて「ＡＧＥｓ等阻害作用」という。）と、およびＧＡＢＡ分解酵素阻害作用のいずれの作用をも有することを特徴とする、ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物（「組成物」には「固体状または液体状のエキス（抽出物）」も含まれる。以下同じ）。 
〔１８〕  前記ネギ属植物は発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物であることを特徴とする、〔１７〕に記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物。 
【００１６】
〔１９〕  下記＜Ｄ１＞〜＜Ｄ４＞の中から少なくともいずれかと、および下記＜Ｅ１＞〜＜Ｅ４＞の中から少なくともいずれかの表示が併せて付されている、下記＜Ｆ＞列記のいずれかであることを特徴とする、〔１７〕、〔１８〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物。 
＜Ｄ１＞  ＡＧＥｓ生成阻害用である旨 
＜Ｄ２＞  ＡＧＥｓの中間体の生成阻害用である旨 
＜Ｄ３＞  ＡＧＥｓのＲＡＧＥへの接着阻害用である旨 
＜Ｄ４＞  固形分として原料とするネギ属植物以外のものが含まれていない旨 
＜Ｅ１＞ＧＡＢＡ分解酵素阻害用である旨 
＜Ｅ２＞ＧＡＢＡ摂取可能である旨 
＜Ｆ＞固体状のエキス、液体状のエキス、食品
【００１７】
〔２０〕  〔１７〕、〔１８〕、〔１９〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物を製造する方法であって、原料ネギ属植物に対する発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理過程、およびその後の濃縮処理過程を含んで行われることを特徴とする、ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物製造方法。 
〔２１〕  〔１７〕、〔１８〕、〔１９〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物、または請求項２０に記載の方法により得られるＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物を用いていることを特徴とする、食品。
【００１８】
〔２２〕  ＡＧＥｓ等およびＧＡＢＡ分解酵素の阻害用ノルメコニン。 
〔２３〕  ネギ属植物由来であることを特徴とする、〔２２〕に記載のＡＧＥｓ等およびＧＡＢＡ分解酵素の阻害用ノルメコニン。 
【発明の効果】
【００１９】
本発明のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン、ＧＡＢＡ分解酵素阻害方法、ＧＡＢＡ摂取用組成物、ＧＡＢＡ摂取用食品、ＧＡＢＡ摂取用組成物等製造方法、およびＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物は上述のように構成されるため、これらによれば、ＧＡＢＡを豊富に含むネギ属植物を原料として、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率向上を可能ならしめる成分であるところのノルメコニンを得ることができ、またそれを含む組成物や食品を得ることができ、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率を向上させることができる。すなわち、ＧＡＢＡを豊富に含有し、なおかつＧＡＢａｓｅ阻害作用を示すノルメコニンも有する黒ニンニクを摂取することは、ＧＡＢＡを効率的に摂取できることに繋がり、多くの疾患の予防策への寄与が期待できる。また、本発明は、黒ニンニク以外のネギ属植物またはその加工物における応用も期待できる。 
【００２０】
また、ノルメコニンがかかるＧＡＢＡ分解酵素阻害作用を有することは、本発明において初めて明らかにされた。上述の通り、ＧＡＢＡおよびその分解酵素阻害作用のあるノルメコニンをいずれも含有することにより、黒ニンニク自体や黒ニンニクからの抽出物・組成物、あるいはそれらを用いた加工物は、従来にはない有効なＧＡＢＡ摂取手段（方法）となる。しかし他方、由来の如何に関わらず、あるいはまた化学合成されたものであれ、ノルメコニン自体をＧＡＢＡ分解酵素阻害用として用いることもできる。 
【００２１】
なお、出願人は本願に先立って、ニンニクなどのネギ属植物を原料とする組成物等において、従来未知の機能・作用を研究によって明らかにし、それに基づいて、高機能の組成物、およびその製造方法を提供するという課題に取り組んだ。その結果、ＡＧＥｓ（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ、終末糖化産物）の生成を阻害する作用、ＡＧＥｓの中間体の生成を阻害する作用、またはＡＧＥｓのＲＡＧＥ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ＡＧＥｓ、ＡＧＥｓ受容体）への接着を阻害する作用、といったＡＧＥｓ等阻害性のうち、少なくともいずれかを有するＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物を発明するに至り、これを開示した（特願２０１８−１５２１４７「ＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物、その製造方法、飲食品、およびＡＧＥｓ阻害用Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ」  遡及効による本願出願時に未公開）。 
【００２２】
このＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物等発明では、ＡＧＥｓの中間体の生成を阻害する作用は、３−ＤＧ（３−デオキシグルコソン）産生阻害作用とすることができ、また、組成物はエキスまたは飲食品の形態をとることができる。この発明によれば、黒ニンニクがカルボニルストレスを抑制できること、それによりＡＧＥｓ関連疾患の予防・治療に効果が期待でき、したがってＡＧＥｓ関連疾患の効果的な予防・治療を実現できるとともに、黒ニンニクの付加価値向上、普及拡大に資することができる。またこれらの効果は、広くニンニクなどのネギ属植物を原料とする組成物等に敷衍できると考えられ、ネギ属植物の付加価値向上、普及拡大に資することも期待できる。そしてこの発明においては特に、黒ニンニク含有成分の一つがノルメコニンであることを明らかにし、そのＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性を初めて確認でき、黒ニンニク等の付加価値等拡大のみならず、ＡＧＥｓ阻害というノルメコニンの新たな用途をした。 
【００２３】
今回、本願においてさらに、ノルメコニンの新たな用途すなわちＧＡＢＡ分解酵素阻害用途を開示することにより、ノルメコニンはＡＧＥｓ阻害作用およびＧＡＢＡ分解酵素阻害作用（生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率向上作用）の両方を併せ持つことが明らかとなった。また、ノルメコニンとＧＡＢＡをともに含有する、黒ニンニクに代表されるネギ属植物加工物は、ＡＧＥｓ阻害作用およびＧＡＢＡ分解酵素阻害作用（生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率向上作用）の両方を併せ持つ、極めて有用性の高い素材であることが明らかとなった。 
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】本発明のＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物の基本構成を示す概念図である。
【図２】本発明のＧＡＢＡ摂取用組成物の基本構成を示す概念図である。
【図３】本発明のＧＡＢＡ摂取用組成物製造方法の基本構成を示すフロー図である。
【図３−２】本発明のＧＡＢＡ摂取用組成物製造方法の別の構成を示すフロー図である。
【図４】本発明のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物の基本構成を示す概念図である。
【００２５】
以下は実施例（第１部）に係る図である。 
【図５】グルコースおよび牛血清アルブミンにおけるメイラード反応において産生するＡＧＥｓに対する黒ニンニクエキスの阻害作用検討結果を示すグラフである。
【図６】ＡＧＥｓ産生経路における中間体である３−ＤＧに対する黒ニンニクエキスの阻害作用検討結果を示すグラフである。
【図７】黒ニンニクエキスのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性に対する阻害作用検討結果を示すグラフである。
【図８】分液ロートによる分画操作後の黒ニンニクエキス分画図である。
【図９】黒ニンニクエキスの酢酸エチル層における分画・精製図である。
【図１０】同定された５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｆｕｒｆｕｒａｌの構造式である。
【図１１】同定された５−ＨＭＦＡ（５−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−２−ｆｕｒａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）の構造式である。
【図１２】同定されたノルメコニン（Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ  ６  ，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）の構造式である。
【図１３】５−ＨＭＦに関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。
【図１４】５−ＨＭＦＡに関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。
【図１５】ノルメコニンに関して１３Ｃ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。
【図１６】ノルメコニンに関してＥＩ−ＭＳによる解析結果を示すグラフである。
【図１７】ノルメコニンに関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。
【図１８】ノルメコニンに関してＮＯＥ−１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである
【図１９】ノルメコニンのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性に対する阻害作用を示すグラフである。
【００２６】
以下は実施例（第２部）に係る図である。 
【図２０】化合物Ｘに関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。
【図２１】化合物Ｘに関して１３Ｃ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。
【図２２】化合物Ｘに関してＥＩ−ＭＳによる解析結果を示すグラフである。
【図２３】化合物Ｘに関してＮＯＥ−１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。
【図２４】測定されたノルメコニンの阻害様式の速度論的な解析結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
以下、本発明を図面も用いつつより詳細に説明する。 
上述の通り本願が最も基本とする発明は、ＧＡＢＡ（γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ）分解酵素阻害用ノルメコニン（Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ  ６  ，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）である。そして本分解酵素阻害用ノルメコニンは、ネギ属植物由来、すなわちネギ属植物を原料として得られるものとすることができる。この場合、用いるネギ属植物は、下記＜Ａ＞、＜Ｂ＞に列挙されたものの少なくともいずれかとすることができる。 
＜Ａ＞  タマネギ、エシャロット、ニンニク、ラッキョウ、ツリーオニオン、アサツキ、ネギ（ナガネギ、青ネギ）、ワケギ、チャイブ、ニラ、ヤグラネギ、白ネギ、リーキ、ノビル、ギョウジャニンニク 
＜Ｂ＞  ＜Ａ＞に列挙した各植物の加工物  例．黒ニンニク 
【００２８】
原料として用いるネギ属植物としては特に、発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物、たとえば黒ニンニクを好適に用いることができる。実施例（第１部）に後述するように、黒ニンニクの場合、発酵処理やメイラード反応処理を含む黒ニンニク製造過程を経たものにおいてノルメコニン生成が確認された。したがってノルメコニン生成機作としては、発酵処理またはメイラード反応処理による効果が挙げられる。これに加え、グルコースやフルクトースの加熱処理によるノルメコニン生成の機作も大いに可能性が示唆されるため、ここに開示するものである。 
【００２９】
なお、「黒」、「琥珀」、「発酵」、「熟成」のような黒ニンニク等のネギ属加工物製品に見られる表示、あるいはその他、発酵処理・加熱処理・メイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来である旨が示されていると認められる表示が付されているＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニンも、本発明の範囲内である。また、「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨の表示が付されているＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニンも、同様である。 
【００３０】
本願発明者は、ノルメコニンにＧＡＢＡ分解酵素阻害機能があることを明らかにした。かかる作用を有するノルメコニンを用いて行うＧＡＢＡ分解酵素阻害方法もまた、本発明の範囲内である。そして、このノルメコニンの製造原料として上記＜Ａ＞、＜Ｂ＞記載のネギ属植物を用いることができる。すなわち、ネギ属植物を原料としたノルメコニンを用いて行うＧＡＢＡ分解酵素阻害方法もまた、本発明の範囲内である。 
【００３１】
図１は、本発明のＧＡＢＡ摂取用組成物の基本構成を示す概念図である。図示するように本ＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物３は、ノルメコニン１を有効成分とすることを最も基本的な構成とする。なお、本願において「組成物」には固体状または液体状のエキス（抽出物）も、食品も含まれる。すなわち組成物とは、複数の成分や構成要素により組成されているものである。また、「食品」は飲料を含む。なお、組成物の一類型である食品については、以降の説明において特に取り上げて述べることがある。 
【００３２】
図示するように本ＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物３には表示部２が付されていて、その表示部２が「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨の表示であるものとすることができる。また、ネギ属植物由来、すなわち原料としてネギ属植物を用いるものとすることができ、たとえば下記の少なくともいずれかを使用できる点は、上記ノルメコニン発明と同様である。 
＜Ａ＞  タマネギ、エシャロット、ニンニク、ラッキョウ、ツリーオニオン、アサツキ、ネギ（ナガネギ、青ネギ）、ワケギ、チャイブ、ニラ、ヤグラネギ、白ネギ、リーキ、ノビル、ギョウジャニンニク 
＜Ｂ＞  ＜Ａ＞に列挙した各植物の加工物 
【００３３】
本ＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物３の原料とするネギ属植物は、発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物とすることができる。なお、表示部２として、「黒」、「琥珀」、「発酵」、「熟成」、またはその他の発酵処理・加熱処理・メイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来である旨が、上述「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨の表示と併せて、あるいは単独で、示されていてもよい。 
【００３４】
図２は、本発明のＧＡＢＡ摂取用組成物の基本構成を示す概念図である。本ＧＡＢＡ摂取用組成物６は、発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みのネギ属植物由来であり、すなわち、かかる処理済みのネギ属植物を原料として組成されているものである。そして、図示するように本ＧＡＢＡ摂取用組成物６はＧＡＢＡ４を含有しており、さらにノルメコニン１を一つの有効成分として含有する構成である。 
【００３５】
すなわち本発明ＧＡＢＡ摂取用組成物６には、ＧＡＢＡ４が含まれているともに、これが生体内に摂取された際におけるＧＡＢＡ分解酵素による分解を阻害する作用を有するノルメコニン１もが含まれている。したがって本ＧＡＢＡ摂取用組成物６を体内に摂取した場合、摂取されたＧＡＢＡ４のＧＡＢＡ分解酵素による分解がノルメコニン１によって阻害されるため、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率を向上させることができる。 
【００３６】
図示するように本発明ＧＡＢＡ摂取用組成物６には、「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨、または「ＧＡＢＡを摂取できる」旨の少なくともいずれかの表示が付された表示部５が設けられている構成とすることができる。表示部５にはまた、かかる表示に併せて、または単独で、「黒」、「琥珀」、「発酵」、「熟成」、またはその他の発酵処理・加熱処理・メイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物由来である旨を示す表示が付されているものとすることもできる。 
【００３７】
上述の通り、本願発明での「組成物」には食品も含まれる。したがって、ネギ属植物を原料とするＧＡＢＡ摂取用食品、そのネギ属植物が上記＜Ａ＞、＜Ｂ＞であるＧＡＢＡ摂取用食品、ネギ属植物としての発酵処理・加熱処理・またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物の使用、さらにはノルメコニンを一有効成分とするＧＡＢＡ摂取用食品もまた、本発明の範囲内である。また、「ＧＡＢＡ分解酵素を阻害する」旨、または「ＧＡＢＡを摂取できる」旨の少なくともいずれかの表示が付されているＧＡＢＡ摂取用食品も、同様である。 
【００３８】
なお、食品は組成物であり、すなわち原料ネギ属植物が生のままではなく何らかの加工処理をなされてなる加工物である。しかしながら、その加工の程度や処理過程の数は問われない。たとえば生の原料に対して所定の発酵処理がなされたのみの物でも、有効成分を含む抽出物、その抽出物を添加した物、分離された有効成分を添加した物など、全て食品に該当する。また、固形・半固形・粉末状・液状など食品としての形態も限定されない。
【００３９】
図３は、本発明のＧＡＢＡ摂取用組成物製造方法の基本構成を示すフロー図である。図示するように本ＧＡＢＡ摂取用組成物等製造方法は、以上説明したいずれかのＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物１１０ａ、ＧＡＢＡ摂取用組成物１１０ｂ、またはＧＡＢＡ摂取用食品１１０ｃ（以上をまとめて、ＧＡＢＡ摂取用組成物等１１０ｘ）のいずれかを製造する方法であって、原料ネギ属植物１１に対する発酵処理Ｐ０、加熱処理Ｐ１、またはメイラード反応処理Ｐ２の少なくともいずれかの処理過程、およびその後の濃縮処理過程Ｐ３を含んで行われることを、主たる構成とする。 
【００４０】
かかる構成により本ＧＡＢＡ摂取用組成物製造方法によれば、原料ネギ属植物１１が発酵処理Ｐ０、加熱処理Ｐ１、またはメイラード反応処理Ｐ２の少なくともいずれかの処理過程に供されて発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理され、得られた処理物はついで濃縮処理過程Ｐ３によって濃縮され、最終的にＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物１１０ａ、ＧＡＢＡ摂取用組成物１１０ｂ、またはＧＡＢＡ摂取用食品１１０ｃ（ＧＡＢＡ摂取用組成物等１１０ｘ）のいずれかが得られる。 
【００４１】
図３−２は、本発明のＧＡＢＡ摂取用組成物製造方法の別の構成を示すフロー図である。図示するように本製造方法は、図３に示したフローに加えて、濃縮処理過程Ｐ３の後に乾燥処理過程Ｐ４を設けたフローとすることができる。かかるフローによれば、原料ネギ属植物１１は濃縮処理過程Ｐ３までの各過程による処理を経た後、乾燥処理過程Ｐ４にて乾燥処理され、最終的にＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物１１４ａ、ＧＡＢＡ摂取用組成物１１４ｂ、またはＧＡＢＡ摂取用食品１１４ｃ（ＧＡＢＡ摂取用組成物等１１４ｘ）のいずれかが得られる。 
【００４２】
乾燥処理過程Ｐ４における乾燥処理としては、温風乾燥、熱風乾燥、フリーズドライ（凍結乾燥処理）など任意の乾燥方法を用いることができる。なお図３、図３−２により説明したＧＡＢＡ摂取用組成物製造方法は、後述するＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物製造方法にも用いることができるが、その場合は、スプレードライ（噴霧乾燥処理）を除外するものとすることができる。スプレードライではシクロデキストリン等のホスト分子を用いてゲスト分子であるＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物を包摂する必要があり、その分純度が低くなってしまう。そこで、この乾燥法を用いないことで、純度の高い、あるいは固形分として原料ネギ属植物以外を含まない組成物を得ることができるからである。 
【００４３】
図４は、本発明のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物の基本構成を示す概念図である。図示するように本ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物２２０は、ＡＧＥｓ（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ、終末糖化産物）の生成（産生）を阻害する作用（ＡＧＥｓ産生阻害作用）Ｆ１、ＡＧＥｓの中間体の生成（産生）を阻害する作用（ＡＧＥｓ中間体産生阻害作用）Ｆ２、またはＡＧＥｓのＲＡＧＥ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ＡＧＥｓ、ＡＧＥｓ受容体）への接着を阻害する作用（ＡＧＥ−ＲＡＧＥ接着阻害作用）Ｆ３の少なくともいずれかを有し、かつ、およびＧＡＢＡ分解酵素阻害作用Ｆ５をも有することを、主たる構成とする。なお、ＡＧＥｓ産生阻害作用Ｆ１、ＡＧＥｓ中間体産生阻害作用Ｆ２、ＡＧＥ−ＲＡＧＥ接着阻害作用Ｆ３をまとめて、ＡＧＥｓ等阻害作用Ｆ４とも言う。 
【００４４】
すなわち本ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物２２０は、これらの少なくともいずれかのＡＧＥｓ等阻害作用Ｆ４とＧＡＢＡ分解酵素阻害作用Ｆ５とを兼ね備えた極めて有用な組成物である。なおＡＧＥｓ等阻害作用に関しては追って、その概要および実施例にて補足する。 
【００４５】
本ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物２２０の原料ネギ属植物は、発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みの加工物とすることができる。また、下記＜Ｄ１＞〜＜Ｄ４＞の中から少なくともいずれかと、および下記＜Ｅ１＞〜＜Ｅ４＞の中から少なくともいずれかの表示が併せて付された表示部２２５が設けられた構成としてもよい。 
＜Ｄ１＞  ＡＧＥｓ生成阻害用である旨 
＜Ｄ２＞  ＡＧＥｓの中間体の生成阻害用である旨 
＜Ｄ３＞  ＡＧＥｓのＲＡＧＥへの接着阻害用である旨 
＜Ｄ４＞  固形分として原料とするネギ属植物以外のものが含まれていない旨 
＜Ｅ１＞ＧＡＢＡ分解酵素阻害用である旨 
＜Ｅ２＞ＧＡＢＡ摂取可能である旨 
【００４６】
以上説明したいずれかのＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物を製造する方法であって、原料ネギ属植物に対する発酵処理、加熱処理、またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理過程、およびその後の濃縮処理過程を含んで行われるＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物製造方法もまた、本発明の範囲内である（前出図３、図３−２参照）。同じく、本発明ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物、または上記製造方法により得られるＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物を用いてなる食品もまた、本発明の範囲内である。 
【００４７】
さらに、本項の冒頭に説明した本発明ノルメコニンについて補足する。ＡＧＥｓ等およびＧＡＢＡ分解酵素の阻害用ノルメコニンも本発明の範囲内である。また、ネギ属植物由来である、すなわちネギ属植物を原料としてなるＡＧＥｓ等およびＧＡＢＡ分解酵素の阻害用ノルメコニンも、本発明の範囲内である。 
【００４８】
上述のＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物発明の補足説明として、出願人による「ＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物、その製造方法、飲食品、およびＡＧＥｓ阻害用Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ」出願（特願２０１８−１５２１４７  本願出願時に未公開）に記載された発明の概要を、若干の追記や表記変更を含めて下記の通り転記する。
【００４９】
〔１８−１〕  ＡＧＥｓ（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ、終末糖化産物）もしくはその中間体の生成を阻害する作用、またはＡＧＥｓのＲＡＧＥ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ＡＧＥｓ、ＡＧＥｓ受容体）への接着を阻害する作用（以下、まとめて「ＡＧＥｓ等阻害性」という。）の少なくともいずれかを有することを特徴とする、ＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−２〕  前記ＡＧＥｓ等阻害性の少なくとも一つが、ＡＧＥｓ産生阻害作用に係ることを特徴とする、〔１８−１〕に記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−３〕  前記ＡＧＥｓ等阻害性の少なくとも一つが、３−ＤＧ（３−デオキシグルコソン）産生阻害作用に係ることを特徴とする、〔１８−１〕または〔１８−２〕に記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−４〕  前記ＡＧＥｓ等阻害性の少なくとも一つが、ＡＧＥ−ＲＡＧＥ接着阻害作用に係ることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−３〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−５〕  飲食品であることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−４〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
【００５０】
〔１８−６〕  固体状または液体状のエキス（抽出物）であることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−５〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−７〕  前記ネギ属植物は下記＜１８−Ａ＞のいずれかであることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−６〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
＜１８−Ａ＞タマネギ、エシャロット、ニンニク、ラッキョウ、ツリーオニオン、アサツキ、ネギ（ナガネギ、青ネギ）、ワケギ、チャイブ、ニラ、ヤグラネギ、白ネギ、リーキ、ノビル、ギョウジャニンニク 
〔１８−８〕  前記ネギ属植物は発酵処理、加熱処理（追記）またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みネギ属植物であることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−７〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−９〕  前記ネギ属植物は発酵処理またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理済みニンニクであり、「黒」、「琥珀」、「発酵」または「熟成」の少なくともいずれかの語を「ニンニク」の語に付した表示が付されていることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−７〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−１０〕  固形分として原料ネギ属植物以外のものが含まれていないことを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−９〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
【００５１】
〔１８−１１〕  有効成分としてノルメコニンが含有されていることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−１０〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。
〔１８−１２〕  有効成分として５−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｆｕｒｆｕｒａｌ（５−ＨＭＦ）が含有されていることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−１１〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−１３〕  ＡＧＥｓ生成阻害用であることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−１２〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−１４〕  ＡＧＥｓの中間体の生成阻害用であることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−１３〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−１５〕  ＡＧＥｓのＲＡＧＥへの接着阻害用であることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−１４〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。
【００５２】
〔１８−１６〕  飲食品用組成物であることを特徴とする、〔１８−１〕ないし〔１８−１５〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
〔１８−１７〕  〔１８−１〕ないし〔１８−１６〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物、または請求項１１ないし１３のいずれかに記載の方法により得られるＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物であって、下記＜１８−Ｄ１＞〜＜１８−Ｄ４＞の少なくともいずれかの旨の表示が付されていることを特徴とする、ＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物。 
＜１８−Ｄ１＞  ＡＧＥｓ生成阻害用である旨 
＜１８−Ｄ２＞  ＡＧＥｓの中間体の生成阻害用である旨 
＜１８−Ｄ３＞  ＡＧＥｓのＲＡＧＥへの接着阻害用である旨 
＜１８−Ｄ４＞  固形分として原料とするネギ属植物以外のものが含まれていない旨 
〔１８−１８〕  〔１８−１〕ないし〔１８−１７〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物を製造する方法であって、原料ネギ属植物を発酵処理、加熱処理（追記）またはメイラード反応処理の少なくともいずれかの処理をし、その後濃縮処理を行なうことを特徴とする、ＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物製造方法。 
〔１８−１９〕  前記濃縮処理後、乾燥処理を行なうことを特徴とする、〔１８−１８〕に記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物製造方法。 
〔１８−２０〕  前記乾燥処理は任意の乾燥方法（ただし、スプレードライを除く）により行なうことを特徴とする、〔１８−１９〕に記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物製造方法。 
【００５３】
〔１８−２１〕  〔１８−１〕ないし〔１８−１７〕のいずれかに記載のＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物、または〔１８〕ないし〔２０〕のいずれかに記載の方法により得られるＡＧＥｓ等阻害性ネギ属植物製組成物を用いた、飲食品。 
〔１８−２２〕  〔１８−２１〕に記載の飲食品であって、下記＜１８−Ｄ１＞〜＜１８−Ｄ４＞の少なくともいずれかの内容の表示が付されていることを特徴とする、飲食品。
＜１８−Ｄ１＞  ＡＧＥｓ生成阻害用である旨 
＜１８−Ｄ２＞  ＡＧＥｓの中間体の生成阻害用である旨 
＜１８−Ｄ３＞  ＡＧＥｓのＲＡＧＥへの接着阻害用である旨 
＜１８−Ｄ４＞  固形分として原料とするネギ属植物以外のものが含まれていない旨 
〔１８−２３〕  下記＜１８−Ｎ１＞〜＜１８−Ｎ３＞の少なくともいずれかに用いられることを特徴とする、ＡＧＥｓ阻害用ノルメコニン。 
＜１８−Ｎ１＞  ＡＧＥｓ生成阻害用 
＜１８−Ｎ２＞  ＡＧＥｓの中間体の生成阻害用 
＜１８−Ｎ３＞  ＡＧＥｓのＲＡＧＥへの接着阻害用 
〔１８−２４〕  ネギ属植物由来であることを特徴とする、〔１８−２３〕に記載のＡＧＥｓ阻害用ノルメコニン。 
【実施例】
【００５４】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明がかかる実施例に限定されるものではない。なお、本発明完成に至る研究過程の一部を説明することによって、実施例に替える。また、本説明は第１部と第２部に分かれるが、両部を通しての章立てとする。 
＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊ 
研究テーマ：黒ニンニクに含まれる有用成分の探索 
第１部  黒ニンニクに含まれるＲＡＧＥ阻害活性成分について 
第１章  黒ニンニクエキスのＡＧＥｓ産生阻害活性の検討 
第１節  黒ニンニクエキスのＡＧＥｓ産生阻害活性の検討 
（１）  黒ニンニクエキスの抽出と結果 
青森県産黒ニンニク２００ｇにエタノール５００ｍＬを加え、黒ニンニクが浸る状態で２４時間冷浸を行った後、ろ過および濃縮した。この操作を３回繰り返した後、ろ過、濃縮し乾燥させたものを黒ニンニクエキスとした。この時黒ニンニクエキスは６２．４６ｇ得られ、収率は６２．４６ｇ／２００ｇ×１００＝３１．２％であった。 
（２）  実験方法 
Ｄ−グルコース（Ｇｌｕ、和光純薬株式会社）および牛血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．，ＬＴＤ．）を各々１０％、１％となるように１ｘＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水  ｐＨ７．０）に溶解したものをＢＳＡ−Ｇｌｕ溶液とした。また、１０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）含有１ｘＰＢＳにて４８３μｇ／μＬ、４８．３μｇ／μＬ、４．８３μｇ／μＬ、０．４８３μｇ／μＬに調製した黒ニンニクエキスを試料とした。無菌操作下において、ＢＳＡ−Ｇｌｕ溶液９００μＬとサンプル溶液１００μＬを混合し、６０℃、湿度１００％にて４週間インキュベーションした。 
【００５５】
産生されたＡＧＥｓ量は蛍光強度法（励起波長：３７５ｎｍ、吸収波長：４４０ｎｍ）にて、１０倍希釈した混合溶液を１週間ごとに測定し、下記の計算式により阻害率を算出した。 
阻害率（％）＝［１−（Ｆsample−Ｆsample Blank）／（Ｆcontrol−Ｆnormal）］ｘ１００ 
Ｆcontrol：ＰＢＳ 
Ｆsample：試料溶液を加えたｇｌｕｃｏｓｅ−ＢＳＡ溶液 
Ｆsample Blank：試料溶液（インキュベーション無し） 
Ｆnormal：Ｇｌｕｃｏｓｅ−ＢＳＡ溶液（インキュベーション無し） 
【００５６】
（３）結果・考察 
グルコースおよび牛血清アルブミンにおけるメイラード反応において産生するＡＧＥｓに対する黒ニンニクエキスの阻害作用について検討した結果を図５に示す。これは、黒ニンニクエキスのＡＧＥｓ産生阻害活性の阻害率推移を吸光度により示したグラフである。図示するように、陽性対照薬として用いた３００μＭケルセチンの抑制作用は、反応開始時から添加していた場合、１週間後では４．２％、２週間後では１３．９％、３週間後では１２．４％、４週間後では１３．４％の阻害作用を認めた。一方、かかる対照群のＡＧＥｓ産生量に比較して、黒ニンニクエキス４８３μｇ／μＬを反応開始時から添加していた場合には、反応開始の１週間後で８３％、２週間後からは１００％の極めて強いＡＧＥｓ産生阻害作用が認められた。 
【００５７】
この阻害作用は用量依存的であり、４８．３μｇ／μＬでは反応開始１週間後で３７％、２週間後からは５０％程度の阻害作用を認めたが、４．８３μｇ／μＬでは反応開始１週間後では抑制は認められなかった。そして反応開始２週間後で１６％の阻害作用が認められたが、反応開始３週間後からは阻害作用はほとんど認められなかった。また、０．４８３μｇ／μＬではいずれの測定時間においても阻害は認められなかった。以上の通り、黒ニンニクエキスは用量依存的にＡＧＥｓ産生に対する強い阻害活性があることが認められた。 
【００５８】
第２節  黒ニンニクエキスの３−デオキシグルコソン産生阻害活性の検討＿ＨＰＬＣによる中間生成物３−デオキシグルコソンの定量 
（１）  試料調製方法 
上記第１節と同様の反応条件において、各濃度に調整した黒ニンニクエキス試料１００μおよびＰＢＳ９００μＬに内標準物質として０．００５％  ２，３−ｂｕｔａｎｅｄｉｏｎｅ（ジアセチル）５μＬを加えた後、３−デオキシグルコソン（３−ＤＧ）を誘導体化するために、０．１％ジアミノナフタレン（ＤＡＮ）１０μＬを加え、４℃で１４時間反応させた。これに酢酸エチル４ｍＬを加えて、１５分間振とう、静置させて反応生成物を抽出、上清３．５ｍＬを蒸発乾固した後、メタノール１５０μＬにて再溶解したものをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）サンプルとした。 
【００５９】
（２）装置および分析条件 
検出器；  ＳＰＤ−２０ＡＤ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ） 
送液ポンプ；  ＬＣ−２０ＡＤ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ） 
脱気ユニット；  ＤＧＵ−２０Ａ３Ｒ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ） 
カラム；  ＣＯＳＵＭＯＳＩＬ（登録商標）５ＰＥ−ＭＳ  ４．６×２５０ｍｍ（Ｎａｋａｌａｉ  Ｔｅｓｑｕｅ，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ） 
移動相；  アセトニトリル：メタノール：５０ｍＭリン酸水溶液＝２０：２０：６０   
流速；  １．０ｍＬ／ｍｉｎ 
検出波長；  ２６８ｎｍ 
【００６０】
（３）結果・考察 
グルコースおよび牛血清アルブミンにおけるメイラード反応において産生するＡＧＥｓ産生経路における中間体である３−ＤＧに対する黒ニンニクエキスの阻害作用について検討した結果を図６に示す。これは、３−ＤＧ産生阻害活性を、３−ＤＧ産生量の推移により示したグラフである。図示するように、黒ニンニクエキス無添加の対照群では反応開始１週間後に１２７μＭの３−ＤＧの生成が認められたのに対し、黒ニンニクエキス４８３μｇ／μＬを反応開始時から添加していた場合には、反応開始の１週間後で０．０８μＭ、２週間後からは１．０μＭ以下の極めて強いＡＧＥｓ産生阻害作用が認められた。 
【００６１】
この阻害作用は用量依存的であり、４８．３μｇ／μＬでは反応開始１週間後で２６．５μＭ、２週間後からは１６μＭ程度の阻害作用を認めた。また、４．８３μｇ／μＬおよび０．４８３μｇ／μＬでは反応開始１週間後で約８０μＭ程度の産生量であった。しかし、反応開始４週間後には対照群での３−ＤＧ産生量は低下してきたため、用量依存的な阻害は認められなかった。これは、３−ＤＧは反応開始１週間後をピークとし産生されるが、その後、反応中間体として消費されてＡＧＥｓに変換されたためと考えられる。本結果は、第１節で得られた阻害率の結果とも相関性が認められたため、黒ニンニクエキスには３−ＤＧの産生を抑制することでＡＧＥｓの生成を阻害する作用があると結論付けられた。 
【００６２】
第３節  黒ニンニクエキスのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性＿ＥＬＩＳＡ法によるＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性の検討 
ＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性を測定するにあたり、コスモバイオ社（ＣＯＳＭＯ  ＢＩＯ  Ｃｏ．，ＬＴＤ．）製の「Ａｇｉｎｇ／Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  Ｓｅｒｉｅｓ，ＲＡＧＥ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  ＡＧＥｓ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ，Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ」を使用した。 
【００６３】
（１）  実験方法 
（ｉ）  試料の調製 
付属の検体希釈液を用いて試料を溶解し、０．４５μｍメンブランフィルター（Ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ．Ｉｎｃ．，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）を用いてろ過した後、検体希釈液で黒ニンニクエキスは４８３μｇ／μＬ、４８．３μｇ／μＬ、４．８３μｇ／μＬ、０．４８３μｇ／μＬに、陽性対照薬であるアミノグアニジンは２０ｍＭに調製した。 
【００６４】
（ｉｉ）  洗浄液の調製 
付属の洗浄液を超純水にて１０倍希釈して使用した。 
（ｉｉｉ）  発色液の調製 
発色用タブレット１個を発色液調製用緩衝液５ｍＬに入れ、完全に溶解させた。なお、この操作は発色液添加直前に調製を行った。 
【００６５】
（ｉｖ）  ＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓの測定 
１）２０ｍＭアミノグアニジン溶液、および試験試料液（ｃｏｎｔｒｏｌは検体希釈液）を５０μＬ／ｗｅｌｌ用いた。 
２）１００ｍＭグリセルアルデヒド（ＧＡ）溶液を５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、ＢＳＡ固層化プレートにシールし密封した。 
３）湿潤状態下の３７℃インキュベーターにて２４時間静置し、固相化ＢＳＡ  を糖化させた。 
４）反応溶液を捨て、洗浄液２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。 
５）ブロッキング液１００μＬ／ｗｅｌｌを添加して室温にて１時間静置した。 
６）ブロッキング液を捨て、洗浄液２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。 
【００６６】
７）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｆ  ＡＧＥｓ  Ｆｃ（ＲＡＧＥ−ＦＣ）溶液５０μＬ／ｗｅｌｌを添加して室温にて１時間静置した。 
８）ＲＡＧＥ−ＦＣ溶液を捨て、洗浄液２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。 
９）ＡＬＰ標識プロテインＡ／Ｇを５０μＬ／ｗｅｌｌを添加して室温にて１時間静置した。 
１０）ＡＬＰ標識プロテインＡ／Ｇを捨て、洗浄液２００μＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した。
１１）．発色液を１００μＬ／ｗｅｌｌを添加して３０分間室温にて静置後、波長４０５ｎｍにて吸光度を測定（Ｉｍｍｕｎｏ  Ｍｉｎｉ  ＮＪ−２３００，  ＢＩＯ  ＴＥＫ，ＬＴＤ．）した。 
（ｖ）  統計処理 
有意差の検定は、Ｓｉｇｍａ  Ｓｔａｔ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒ．２．０３（ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，ＩＬ，Ｕ．Ｓ．Ａ）を用いて行った。測定値は平均値±標準誤差で示し、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ  ＡＮＯＶＡ  Ｒａｎｋ  Ｔｅｓｔ（ｐ＜０．０５）により有意差を検討した。 
【００６７】
（２）結果・考察 
黒ニンニクエキスのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性に対する阻害作用について検討した結果を、図７に示す。これは、ＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ産生量を吸光度により示したグラフである（＊Ｐ＝０．００２）。図示するように、対照群でのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ産生量は０．５５４であったが、陽性対照薬のアミノグアニジンではその産生量は０．４４２であり、約２０％の阻害を認めた。一方、黒ニンニクエキス４８３μｇ／μＬでは、その産生量は０．３３５であり、約４０％の強い阻害が認められ、陽性対照薬のアミノグアニジンに比較して２倍もの強い阻害活性が認められた。 
【００６８】
この阻害作用は用量依存的であり、４８．３μｇ／μＬではＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓの産生量は０．５０９５であって阻害は約１０％と減弱し、４．８３μｇ／μＬでも同様の結果であった。以上の結果より、黒ニンニクエキスはＡＧＥｓとＲＡＧＥの結合を阻害することを介して、もしくはグリセルアルデヒドがタンパク質中のアミノ酸残基との結合を阻害することを介して、ＡＧＥｓ産生を抑制し、結合を抑制するという機序が考えられた。
【００６９】
第２章  黒ニンニクエキスの分画と精製 
（１）  実験方法 
第１章第１節で述べた黒ニンニクエキスの調製方法にて得られた黒ニンニクエキス５９．２３ｇを精製水２００ｍＬに溶解した。この溶液を分液ロートに入れ、ジエチルエーテル２００ｍＬを加えた後、１５分間振とうし、得られたエーテル溶液を黒ニンニクエーテル層分画（収率：３．９９％）とした。この操作を順番に酢酸エチル、ブタノールでも繰り返し行い、各々得られた分画を黒ニンニク酢酸エチル層分画（収率：１．９０％）、黒ニンニクブタノール層分画（収率：２．３６％）とし、最終的に残った水溶液を黒ニンニク水層分画（収率：９１．７３％）とした。図８に分液ロートによる分画操作後の黒ニンニクエキス分画図を示す。得られた各サンプルは、濃縮し乾燥させた。また、４層に分画したものを各移動相で順次ＨＰＬＣを用いて分離・精製（パックドカラム５Ｃ１８−ＡＲ−II：コスモシール株式会社，Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ（登録商標）ＧＰ２５０−１０：関東化学株式会社，Ｃ３０−ＵＧ：野村化学株式会社，ＴＯＳＯＨ（登録商標）−ＯＤＳ１２０−Ｔ：東ソー株式会社）した。 
【００７０】
（２）結果・考察 
ＡＧＥｓ阻害活性成分の探索を目的として、黒ニンニク原末から図８に示したエーテル層、酢酸エチル層、ブタノール層および水層を分離・精製し、１９３の分画画分を得た。
【００７１】
第３章  黒ニンニク含有成分の同定 
（１）実験方法 
各種分析方法、すなわち、１Ｈ−ＮＭＲ（プロトン各磁気共鳴）、１３Ｃ−ＮＭＲ（炭素１３各磁気共鳴）、ＥＩ−ＭＳ（電子イオン化質量分析）、ＮＯＥ（オーバーハウザー効果差スペクトル）を用いて、各種サンプルの重さを測定後調製し、計測した（重メタノール、重クロロホルム等を使用した）。 
【００７２】
（２）結果・考察 
第２章（２）の結果・考察に示す化合物群を得た酢酸エチル層における分画・精製図を図９に示す。今回の分画により得た化合物群について、ＡＧＥｓ産生阻害活性によりスクリーニングを行い、活性が認められた画分を単離・精製し、構造決定を行った。このうち、同定できた化合物は下記の３つであった。 
５−ＨＭＦ（５−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ  ｆｕｒｆｕｒａｌ）  （図１０） 
５−ＨＭＦＡ（５−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙ−ｌ−２−ｆｕｒａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）  （図１１） 
Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ（６  ，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）  （図１２） 
以下、順に構造決定方法について考察した。 
【００７３】
初めに、１Ｈ−ＮＭＲデータを参考に比較することで、化学構造の基本構造について推定した。図１３は、５−ＨＭＦに関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである（２７０．０５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）。図示するように、９．５２ｐｐｍからアルデヒド基を同定、δ７．３７３から７．３６０ｐｐｍ、およびδ６．５７５から６．５６１ｐｐｍにかけて見られる１Ｈ分のｓｉｎｇｌｅｔシグナルが２つ観測されていることからフラン環を同定、４．５９８ｐｐｍからメチレン基を同定し、５−ＨＭＦに代表的な構造が同定された。これらの結果とマススペクトルによる分子量等の結果とを合わせて、下記２文献９）、１０）における文献値を比較し、５−ＨＭＦであると決定した。 
文献： 
9)  Liang T., Wei F., Lu Y., Kodani Y., Nakada M., Miyakawa T., Tanokura M., J. Agric. Food. Chem., 63, 683-691 (2015). 
10)  Matsui T., Kudo A., Tokuda S., Matsumoto K., Hosoyama H., J. Agric. Food. Chem. 58, 10876-10879 (2010). 
【００７４】
次に、図１４は、５−ＨＭＦＡ（５−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−２−ｆｕｒａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）に関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである（３９９．６５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）。図示する構造と下記文献１１）の文献値を比較し、これが５−ＨＭＦに類似の構造であり、図１３に示したグラフと比較して９．５２ｐｐｍのアルデヒド基特有のピークがなくなったことから、５−ＨＭＦが酸化されたことにより生成した５−ＨＭＦＡ（５−Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−２−ｆｕｒａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）であると決定した。 
文献： 
11)  Murai N., Yonaga M., Tanaka K., Org. Lett., 14, 1278-1281 (2014). 
【００７５】
最後に、図１５は、ノルメコニン（６  ，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）に関して１３Ｃ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである（６７．８０ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）。図示するように、ノルメコニンについてはＭＳスペクトルを用いて解析を行なった結果、ピークがｍ／ｚ１６６に観測された。このことから、推定した化合物の分子量は１６６であり，ＭＳスペクトルの結果と合致した。 
【００７６】
また、図１６は、ノルメコニンに関してＥＩ−ＭＳによる解析結果を示すグラフである（Ｌｏｗ，ＭｅＯＨ）。図示するように、炭素数は８個であり、１７２．９ｐｐｍのピークからエステル基、また、７０．７ｐｐｍのピークからメチレン基の構造があることがわかり、フタリド骨格を有する化合物であることが推定された。 
【００７７】
次に、図１７は、ノルメコニンに関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである（２７０．０５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）。図示するように、芳香族領域に認められるδ７．１４２から７．１１３、δ６．８３７から６．８０８、の２Ｈ分のｄｏｕｂｌｅｔシグナルが８Ｈｚでカップリングしたことから、これらがオルト位の関係にあることがわかった。 
【００７８】
最後に、図１８は、ノルメコニンに関してＮＯＥ−１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである（２７０．０５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）。図示するように、５．２ｐｐｍ付近に照射して測定したところ、６位にプロトンが付くことがわかった。以上より、下記各文献１２）、１３）の文献値と比較して、ノルメコニン（６  ，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）であると決定した。 
文献： 
12) Andrew M., Norma T., Mark F., Scott C., David M., J. Am. Chem. Soc., 119, 6084-6094 (1997). 
13) Thomas P., Olof T . Acta. Chem. Scand., B30, 397-402 (1976) 
【００７９】
第４章  黒ニンニク含有成分のＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性の検討 
（１）実験方法 
同定された黒ニンニク含有成分について、第１章第３節（ＥＬＩＳＡ法によるＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性の検討）における「（ｉｖ）ＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓの測定」に示した方法の通りに検討した。 
【００８０】
（２）結果・考察 
ノルメコニンのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性に対する阻害作用について検討した。図１９は、ノルメコニンのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性に対する阻害作用を示すグラフである（＊Ｐ＝０．０４３）。同一濃度にて陽性対照薬の１０ｍＭアミノグアニジンとノルメコニンとを比較した。その結果、図示するように対照群での吸光度は０．３９であった。それに対して陽性対照薬１０ｍＭアミノグアニジンでは０．３１となり、対照群よりも強い阻害作用、対照群と比較して２０％の阻害作用が確認された。 
【００８１】
一方、１０ｍＭ  ノルメコニンでは０．２７であり、陽性対照薬の１０ｍＭアミノグアニジンよりも強い阻害作用、対照群と比較して３０％の阻害作用が認められた。すなわちノルメコニンの阻害作用は、１０ｍＭアミノグアニジンの１．５倍であった。以上より、黒ニンニクエキスがＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性を示す活性本体のうちの一つが、ノルメコニンであることが明らかとなった。 
【００８２】
ノルメコニンのＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性を示した機序について考察する。本化合物は、フタリド骨格により非常に安定な構造であることに加え、分子内に窒素原子を含んでいないことから、グリセルアルデヒドとの直接的な求核反応等によりクロスリンカー的役割を果たし、それによって活性を示す、という機序は考えにくい。しかし、カテコール骨格を部分構造に含んでいることから、一般的にフェノール類よりも酵素やたんぱく質との吸着、結合性が強い傾向にある。このため、ＲＡＧＥのリガンド結合部位やサブユニット中の疎水性ポケット等と相互作用することで、受容体のコンフォメーション変化を起こし、そのことがＡＧＥｓとの結合を阻害する機序となっている可能性がある。また、タンパク質中のアミノ酸残基とノルメコニンの構造に含まれるヒドロキシ基や酸素原子との相互作用により、グリセルアルデヒドとの結合が円滑に進行しない環境を作り出すことで、反応を抑制するという可能性も考えられる。 
【００８３】
第５章  総括 
蛍光強度法によるＡＧＥｓ産生阻害活性、および３−ＤＧの定量の結果から、黒ニンニクエキスは、３−ＤＧ産生を用量依存的に産生阻害することでＡＧＥｓ産生を抑制すると考えられた。加えて、ＥＬＩＳＡ法によるＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性の結果より、黒ニンニクエキスは用量依存的な阻害作用を示し、陽性対象薬のアミノグアニジンよりも強い阻害作用を示したことから、ＲＡＧＥとの結合を阻害できた、もしくはＡＧＥｓとグリセルアルデヒドのアミノ酸残基との結合を阻害した可能性もある。 
【００８４】
また、黒ニンニク含有成分の分画・精製を行い、構造決定に至った３つの化合物のうち、ノルメコニンにおいてＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性が認められた。このことから、本化合物は黒ニンニクエキスに含まれるＲＡＧＥ反応性ＡＧＥｓ阻害活性を示す活性本体の１つであることが分かった。その他、５−ＨＭＦについては、ＰＩ３−Ａｃｔ系（ＰＩ３Ｋ  ／  Ａｋｔ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、ＰＩ３Ｋ  ／  Ａｋｔ  シグナル伝達系）の活性化によるｅＮＯＳ（内皮型一酸化窒素合成酵素）の産生に続くＮＯ（一酸化窒素）産生に起因する血管拡張作用も報告されている（下記文献１４））が、これは、黒ニンニクに期待される冷え、肩こり、疲労回復効果を示す活性物質の一つであると考えられる。 
文献： 
14) O'Donnell G., Poeschl R., Zimhony O., Gunaratnam M., Moreira JB., Neidle S., Evangelopoulos D., Bhakta S., Malkinson JP., Boshoff HI., Lenaerts A., Gibbons S.,  J . Nat. Prod., 72, 360-365 (2009). 
【００８５】
第２部  黒ニンニクに含まれるＧＡＢＡおよび関連成分について 
第６章  黒ニンニク抽出エキスおよびその含有成分のＧＡＢＡ代謝酵素阻害作用 
第１節  黒ニンニク抽出エキスおよびその含有成分のＧＡＢＡ代謝酵素阻害作用 
（１）  研究の目的 
ＧＡＢＡを豊富に含むとされる機能性食品である黒ニンニクの、ＧＡＢＡ代謝酵素系の酵素であるＧＡＢＡ−ＴおよびＳＳＡＤＨの混合酵素ＧＡＢａｓｅに対する阻害作用について検討した。 
【００８６】
（２）  実験方法 
青森県産黒ニンニク２ｋｇを粉砕し、アセトン：水（４：１）で加温抽出を行った。この操作を２回繰り返し、減圧濃縮し、黒ニンニク抽出エキスとした。その収量は４００．５５ｇであった。抽出エキスは水：ジエチルエーテル（２：１）に溶解後、イオン交換樹脂（ダイヤイオン（商標）ＨＰ２０（三菱ケミカル）に水層を吸着させた。その後、水：ＭｅＯＨ（０：１００〜１００：０）で段階的に溶出し、表１に示す各画分（１Ａ〜１Ｆ）を得た。 
【００８７】
【表１】
2020147559.tif 000002
【００８８】
（３）ＧＡＢＡｓｅ阻害活性成分の特定 
得られた画分は、（４）に後述するＧＡＢＡｓｅ阻害活性測定法によりその阻害活性を比較した結果、１Ｃ画分に最も強い阻害を認めた。このため、以下の条件でその活性成分の検索を行った。その結果、その活性成分として化合物Ｘを得た。 
【００８９】
図２２は、化合物Ｘに関して１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。また、 
図２３は化合物Ｘに関して１３Ｃ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフ、図２４は化合物Ｘに関してＥＩ−ＭＳによる解析結果を示すグラフ、図２５は化合物Ｘに関してに関してＮＯＥ−１Ｈ−ＮＭＲから得られたスペクトルを示すグラフである。本化合物Ｘは、各図に示した各種スペクトル分析値を文献値１５）、１６）と比較した結果、ノルメコニン（Ｎｏｒｍｅｃｏｎｉｎ  ６，７−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）と同定された。また、（５）に後述するＨＰＬＣによる測定の結果、黒ニンニク原末中にノルメコニンは０．００８％含有されている結果が得られた。 
文献： 
15) Andrew M., Norma T., Mark F., Scott C., David M., J. Am. Chem. Soc., 119, 6084-6094 (1997). 
16) Thomas P., Olof T., Acta. Chem. Scand., B30, 397-402 (1976). 
【００９０】
（４）ＧＡＢＡｓｅ阻害活性の検討方法（文献１７）） 
得られたノルメコニンのＧＡＢＡｓｅ阻害活性検討は次のように行った。 
ノルメコニンを、１．４ｍＭ  ＮＡＤＰ＋（和光純薬工業）、７５０ｍＭ  Ｎａ２ＳＯ４、２．０ｍＭ  α−ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ（和光純薬工業）を含む８０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０）に溶解したものを反応液とした。反応液６０μＬ／ｗｅｌｌ、被験画分の１０％メタノール溶液１０μＬ／ｗｅｌｌ、ＷＳＴ−８（テトラゾリウム塩：ナカライテスク）１０μＬ／ｗｅｌｌ、ＧＡＢａｓｅ（４−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  Ａｃｉｄ：東京化成工業）０．０１Ｕ／１０μＬ（ｗｅｌｌ）、ＧＡＢＡ（４−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  Ａｃｉｄ：東京化成工業）溶液（５００μＭ、２００μＭ、１００μＭ、６０μＭ、５０μＭ）１０μＬ／ｗｅｌｌを順に混合し、全量１００μＬ／ｗｅｌｌとした。 
【００９１】
その後、３７℃でインキュベートしながら、１０分間隔で吸光度を測定（測定波長：４５０ｎｍ）した。なお、対照にはエタノール１μＬ／ｗｅｌｌ、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０）９μＬ／ｗｅｌｌを添加した。その後、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ｍｏｄｕｌｅ１．１（Ｖｅｒ．６．１，ＳＰＳＳ  Ｉｎｃ．，２００２）を用いて反応速度の解析を行った。 
文献： 
17) Tsukatani T, Higuchi T, Matsumoto K., Analytica Chimica Acta, 540, 293-297(2005). 
【００９２】
（５）ノルメコニンの精製方法 
ノルメコニンは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を繰り返すことで精製した。その装置条件は、カラム；ＵＬＴＲＡ  ＰＡＫ  ＯＤＳ−ＳＭ−５０Ｃ−Ｍ（山善株式会社）、Ｃａｐｃｅｌ  Ｐａｋ  Ｃ８（資生堂）、ＴＯＳＯＨ  ＴＳＫｇｅｌ（登録商標）  １２０Ｔ−ＯＤＳ（東ソー株式会社）、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（登録商標）ＡＲ−ＩＩ（ナカライテスク株式会社）。移動相；１０％ＣＨ３ＣＮ＋ＴＦＡ  、２０％ＭｅＯＨ、２０％ＣＨ３ＣＮ。測定波長（検出波長）；２１０ｎｍである。 
【００９３】
（６）実験結果 
ノルメコニンのＧＡＢＡｓｅ阻害活性を測定した結果、濃度依存性のＧＡＢＡｓｅ阻害活性が認められた。図２６は、測定されたノルメコニンの阻害様式の速度論的な解析結果を示すグラフである。解析結果から、ノルメコニンのＧＡＢＡｓｅ阻害様式は非競合性であり、そのパラメータ値（μＭ）はそれぞれＶｍａｘ：８０．２，Ｋｍ：１６３．７，Ｋｉ：１７０．７であった。ＧＡＢＡｓｅ阻害薬として知られているバルプロ酸は、本来ＳＳＡＤＨに対し競合的阻害を示し、ＧＡＢＡ−Ｔに対してはアロステリックな阻害を示すことが報告されている（文献１８））。 
【００９４】
本研究結果より、ノルメコニンのＧＡＢＡｓｅ阻害様式も同様にＧＡＢＡ−Ｔへの影響が大きいため、アロステリックな阻害様式が強くモニタリングされ、非競合的阻害が確認できたと考えられる。 
18） Piplani S, Verma PK, Kumar A., Biomed Pharmacother., 81, 402-410, (2016). 
【００９５】
（７）結論 
ＧＡＢＡを豊富に含有し、なおかつＧＡＢａｓｅ阻害作用を示すノルメコニンも有する黒ニンニクを摂取することは、ＧＡＢＡを効率的に摂取できることに繋がり、したがって多くの疾患の予防に寄与することが期待される。 
＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊ 
【産業上の利用可能性】
【００９６】
本発明のＧＡＢＡ分解酵素阻害用ノルメコニン、ＧＡＢＡ分解酵素阻害方法、ＧＡＢＡ摂取用組成物、ＧＡＢＡ摂取用食品、ＧＡＢＡ摂取用組成物等製造方法、およびＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物によれば、ＧＡＢＡを豊富に含むネギ属植物を原料として、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率向上を可能ならしめる成分であるところのノルメコニンを得ることができ、またそれを含む組成物や食品を得ることができ、生体内におけるＧＡＢＡの有効利用率を向上させることができる。 
【００９７】
また、ノルメコニンがかかるＧＡＢＡ分解酵素阻害作用を有することは本発明において初めて明らかにされた。先に出願人による別出願にて開示されたＡＧＥｓ等阻害用（本願出願時未公開）とも相俟って、ノルメコニンの利用価値が新たに開拓された。 
【００９８】
本願発明では特に、黒ニンニクにおける生体内摂取ＧＡＢＡ利用率向上効果、カルボニルストレスの抑制効果とそれによるＡＧＥｓ関連疾患の予防・治療に効果が大いに期待できることが示された。したがって本発明は、機能性の高い素材としての黒ニンニクの付加価値向上、普及拡大に資することができるものでもある。また以上の効果は、広くニンニクなどのネギ属植物を原料とする組成物等に敷衍できると考えられ、ネギ属植物の付加価値向上、普及拡大に資することも期待される。したがって本発明は、農産加工分野、食品製造分野、健康産業分野、その他関連する全分野において、産業上利用性が高い発明である。 
【符号の説明】
【００９９】
１…ノルメコニン 
２、５…表示部 
３…ＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物 
４…ＧＡＢＡ 
６…ＧＡＢＡ摂取用組成物 
１１…原料ネギ属植物 
１１０ａ、１１４ａ…ＧＡＢＡ分解酵素阻害用組成物 
１１０ｂ、１１４ｂ…ＧＡＢＡ摂取用組成物 
１１０ｃ、１１４ｃ…ＧＡＢＡ摂取用食品 
１１０ｘ、１１４ｘ…ＧＡＢＡ摂取用組成物等 
２２０…ＡＧＥｓ等阻害用兼ＧＡＢＡ摂取用ネギ属植物製組成物 
２２５…表示部 
【０１００】
Ｆ１…ＡＧＥｓ産生阻害作用 
Ｆ２…ＡＧＥｓ中間体産生阻害作用 
Ｆ３…ＡＧＥ−ＲＡＧＥ接着阻害作用 
Ｆ４…ＡＧＥｓ等阻害作用 
Ｆ５…ＧＡＢＡ分解酵素阻害作用 
Ｐ０…発酵処理 
Ｐ１…加熱処理 
Ｐ２…メイラード反応処理 
Ｐ３…濃縮処理過程 
Ｐ４…乾燥処理過程 
【図１】
2020147559.tif 000003
【図２】
2020147559.tif 000004
【図３】
2020147559.tif 000005
【図３−２】
2020147559.tif 000006
【図４】
2020147559.tif 000007
【図５】
2020147559.tif 000008
【図６】
2020147559.tif 000009
【図７】
2020147559.tif 000010
【図８】
2020147559.tif 000011
【図９】
2020147559.tif 000012
【図１０】
2020147559.tif 000013
【図１１】
2020147559.tif 000014
【図１２】
2020147559.tif 000015
【図１３】
2020147559.tif 000016
【図１４】
2020147559.tif 000017
【図１５】
2020147559.tif 000018
【図１６】
2020147559.tif 000019
【図１７】
2020147559.tif 000020
【図１８】
2020147559.tif 000021
【図１９】
2020147559.tif 000022
【図２０】
2020147559.tif 000023
【図２１】
2020147559.tif 000024
【図２２】
2020147559.tif 000025
【図２３】
2020147559.tif 000026
【図２４】
2020147559.tif 000027