(57)【要約】      （修正有）【課題】細菌多糖類を精製するため、特に、多糖類を産生する細菌の細胞溶解物から不純物を除去するための方法の提供。【解決手段】夾雑物と莢膜多糖等の細菌多糖を含む溶液に対して、ミョウバン等の凝集剤を酸性ｐＨ条件下で用いる凝集ステップを含む精製方法であり、凝集の後の懸濁液を遠心分離等で清澄化し、深層濾過を行い、その濾液を限外濾過及び透析濾過によってさらに処理し、サイジングによってホモジナイズ後に滅菌濾過する精製方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細菌多糖を、夾雑物と一緒に前記多糖を含む溶液から精製するための方法であって、凝集ステップを含む方法。
【請求項２】
凝集剤が、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される多価陽イオンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
凝集剤が、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される薬剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
凝集剤が、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
凝集剤の濃度が、約０．１〜約２０％（ｗ／ｖ）である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
溶液が、下流のプロセシングの前にフロックの沈降を可能にするためにいくらかの時間にわたって保持される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記凝集ステップが、酸性ｐＨで実施される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
存在する場合、沈降ステップが、約４℃〜約３０℃の温度で実施される、請求項６から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
存在する場合、沈降ステップが、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される、請求項６から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
凝集の後に、懸濁液がデカンテーション、沈降化、濾過または遠心分離によって清澄化される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
多糖含有溶液が、濾過される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記濾過が深層濾過である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
濾液が、精密濾過にかけられる、請求項１１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
濾液が、限外濾過および透析濾過によってさらに処理される、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記限外濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
置換液が、キレート剤を含む、請求項１４から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記透析濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
多糖を含有する溶液が、活性炭濾過ステップによって処理される、請求項１０から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
濾液が、精密濾過にかけられる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
濾液が、限外濾過および透析濾過によってさらに清澄化される、請求項１８から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
置換液が、キレート剤を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記透析濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、請求項２０から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記精製された多糖の溶液が、サイジングによってホモジナイズされる、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記精製された多糖の溶液が、滅菌濾過される、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記細菌多糖が、莢膜多糖である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法によって得られた精製された細菌多糖の糖コンジュゲート。
【請求項２７】
請求項２６に記載の糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌多糖類を精製するため、特に、多糖類を産生する細菌の細胞溶解物から不純物を除去するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌多糖類、特に、莢膜多糖類は、様々な細菌疾患に関与する細菌の表面上に見出される重要な免疫原である。このため、それらはワクチンの設計における重要な成分となっている。それらは、特に、担体タンパク質に連結された場合、免疫応答を惹起するのに有用であることがわかっている。
【０００３】
細菌多糖類は、典型的には、細菌（例えば、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）（例えば、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）またはＣ＆Ｇ群連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ））、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）（例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ））、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ））、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）（例えば、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））およびエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）（例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）））の発酵によって産生される。
【０００４】
典型的には、細菌多糖類は、複合培地中でのバッチ式培養、フェドバッチ式培養または連続式培養を使用して産生される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００７／０５２１６８
【特許文献２】ＷＯ２００９／０８１２７６
【特許文献３】ＷＯ２０１０１５１５４４
【特許文献４】ＷＯ２０１１／０５１９１７
【特許文献５】ＷＯ２００７０８４８５６
【特許文献６】ＷＯ２００８／１１８７５２
【特許文献７】ＷＯ２００６／１１０３８１
【特許文献８】ＷＯ２００７１１６０２８
【特許文献９】ＷＯ２０１５１１０９４１
【特許文献１０】ＷＯ２０１５１１０９４０
【特許文献１１】ＷＯ２０１４０９７０９９
【特許文献１２】ＷＯ９３／１５７６０
【特許文献１３】ＷＯ９５／０８３４８
【特許文献１４】ＷＯ９６／１２９０９４
【特許文献１５】ＷＯ２０１１０４１００３
【特許文献１６】ＷＯ２０１４０２７３０２
【特許文献１７】ＷＯ２０１５１２１７８３
【特許文献１８】ＷＯ００／１０５９９
【特許文献１９】米国特許第４，６７３，５７４号
【特許文献２０】米国特許第４，８０８，７００号
【特許文献２１】米国特許第４，４５９，２８６号
【特許文献２２】米国特許第４，７０９，０１７号
【特許文献２３】米国特許第４，９５０，７４０号
【特許文献２４】米国特許第５，９１７，０１７号
【特許文献２５】米国特許第６，４５５，６７３号
【特許文献２６】米国特許第５，８４３，７１１号
【特許文献２７】ＷＯ２００４／０８１５１５
【特許文献２８】ＷＯ２００６／０３２４９９
【特許文献２９】ＷＯ００／３７１０５
【特許文献３０】ＷＯ００／３９２９９
【特許文献３１】ＷＯ０１／９８３３４
【特許文献３２】ＷＯ０３／０５４００７
【特許文献３３】ＷＯ２００９／０００８２６
【特許文献３４】ＥＰ０３７２５０１
【特許文献３５】ＥＰ０５９４６１０Ｂ
【特許文献３６】ＥＰ０３７８８８１
【特許文献３７】ＥＰ０４２７３４７
【特許文献３８】ＷＯ９３／１７７１２
【特許文献３９】ＷＯ９４／０３２０８
【特許文献４０】ＷＯ９８／５８６６８
【特許文献４１】ＥＰ０４７１１７７
【特許文献４２】ＷＯ９１／０１１４６
【特許文献４３】ＷＯ０２／０９１９９８
【特許文献４４】ＷＯ０１／７２３３７
【特許文献４５】ＷＯ００／６１７６１
【特許文献４６】ＷＯ２００４／０８３２５１
【特許文献４７】ＷＯ０１／９８３３４
【特許文献４８】ＷＯ０３／０５４００７
【特許文献４９】ＥＰ０５９４６１０Ｂ
【特許文献５０】米国特許第５，６１４，３８２号
【特許文献５１】ＣＮ１０３４９５１６１
【特許文献５２】ＷＯ００／０７６２１
【特許文献５３】ＷＯ９９／４４６３６
【特許文献５４】ＧＢ−２２２０２２１
【特許文献５５】ＥＰ０６８９４５４
【特許文献５６】ＷＯ００／５６３５８
【特許文献５７】ＥＰ０８３５３１８
【特許文献５８】ＥＰ０７３５８９８
【特許文献５９】ＥＰ０７６１２３１
【特許文献６０】ＷＯ９９／５２５４９
【特許文献６１】ＷＯ０１／２１２０７
【特許文献６２】ＷＯ０１／２１１５２
【特許文献６３】ＷＯ００／６２８００
【特許文献６４】ＷＯ００／２３１０５
【特許文献６５】ＷＯ９９／１１２４１
【特許文献６６】ＷＯ９８／５７６５９
【特許文献６７】ＥＰ２１２９６９３
【特許文献６８】ＷＯ２０１５１１０９４２
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｆａｔｔｏｍら（１９９０）Ｉｎｆｅｃｔ  ｌｍｍｕｎ．５８（７）：２３６７〜７４
【非特許文献２】Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８〜３８４４
【非特許文献３】ＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔｏｘｉｎｓ、Ｅｄ：Ｆｒａｎｋｅｌ、Ｍａｅｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ．（１９９２）
【非特許文献４】Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ  ｌｍｍｕｎ  ６３：２７０６〜２７１３
【非特許文献５】Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３１：３８１６〜３８２４
【非特許文献６】Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ  ｌｍｍｕｎ  ７２：４８８４〜４８８７
【非特許文献７】Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  １６９（１１）：４９６７〜４９７１
【非特許文献８】Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２３３：８−１１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発酵後に細菌多糖類の大規模生産において使用することができるロバストで有効な精製プロセスが必要である。
【０００８】
多くのプロセスは、莢膜多糖類の沈降のステップ（例えば、アルコールによる沈降または陽イオン洗剤処理）を含む。上清からの沈降物のその後の分離（例えば、遠心分離による）および再溶解は労力を要し、また多糖の損失をもたらし、それにより、収量を低減させ得る。
【０００９】
さらに、多くの精製プロセスは、クロマトグラフィーおよび複数膜分離などの、多くの高価な、労働集約的な、技術的に要求の多い操作を含む、いくつかのステップを必要とする。これらのプロセスにおける不純物の除去は、多くの労働集約的な費用のかかるステップにおいて行われる。タンパク質レベルは、可溶性タンパク質の物理的および化学的特性のため、最も満たすことが困難な仕様である。
【００１０】
かくして、ワクチンへの組込みにとって好適な実質的に精製された細菌糖類を産生するためには、細菌溶解物中の可溶性タンパク質レベルを低減し、現在の精製プロセスの非効率性を除去するための単純化された精製プロセスが必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、多糖の精製のためのプロセスの流れ図である。
【図２】図２は、様々な時点でのタンパク質除去および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８発酵ブロスの透明度に対する２％ｗ／ｖミョウバンのｐＨの効果の図である。１時間後（左バー）、４時間後（中央バー）、２４時間（右バー）。
【図３】図３は、様々な時点でのタンパク質除去および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８発酵ブロスの透明度に対するｐＨ３．５のミョウバンの％の効果の図である。１．０％ミョウバン（左バー）、２．０％ミョウバン（中央バー）、３．０％ミョウバン（右バー）。
【図４】図４は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ発酵ブロスの酸滴定の図である。
【図５】図５は、ｐＨ３．５での肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆのミョウバン凝集の図である。
【図６】図６は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆの凝集ブロスの粒径に対する加熱の効果の図である。実験のために、凝集温度を、室温（ＲＴ）（小さい方の粒径分布曲線（９．８μｍでピーク））および／または４５℃（大きい方の粒径分布曲線（６５μｍでピーク））で保持した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
１．細菌多糖類の精製プロセス
１．１  出発材料
本発明の方法を使用して、夾雑物と一緒に細菌多糖類を含む溶液から前記多糖類を精製することができる。
【００１４】
１．１．１  細菌細胞
本発明に従って精製される細菌多糖の供給源は、細菌細胞、特に、病原性細菌である。
【００１５】
本発明による使用のためのグラム陽性細菌の非限定例は、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）（例えば、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）またはＣ＆Ｇ群連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ））、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）（例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ））、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、エリジペロスリックス（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ）、およびクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）である。本発明と共に使用するためのグラム陰性細菌の非限定例は、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ））、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）（例えば、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ））およびエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）（例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ））である。
【００１６】
ある実施形態では、本発明による使用のための細菌多糖類の供給源は、エロモナス・ハイドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）および他の種（ｓｐｐ．）；バチルス・アントラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）；バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）；クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）のボツリヌス菌（Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）神経毒産生種；ブルセラ・アボルタス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ）；ブルセラ・メリテンシス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）；ブルセラ・スイス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ）；バークホルデリア・マレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ）（以前は、シュードモナス・マレイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｌｅｉ））；バークホルデリア・シュードマレイ（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）（以前は、シュードモナス・シュードマレイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ））；カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）；クラミジア・シッタシ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）；クラミジア・トラコマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、クロストリジウム・ボツリナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）；クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｉｃｉｌｅ）；クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）；コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）；コクシジオイデス・ポサダシイ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｐｏｓａｄａｓｉｉ）；コウドリア・ルミナンチウム（Ｃｏｗｄｒｉａ  ｒｕｍｉｎａｎｔｉｕｍ）（心水病）；コクシエラ・バーネッティ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ）；エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）；腸管毒素産生性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＴＥＣ）、病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＰＥＣ）、腸管出血性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）−Ｏ１５７：Ｈ７（ＥＨＥＣ）、および腸管細胞侵入性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＩＥＣ）などの腸毒性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）；エールリヒア・シャフェンシス（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｊｆｅｅｎｓｉｓ）などのエールリヒア種（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｓｐｐ．）；野兎病菌（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）；レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）；リベロバクター・アフリカヌス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｆｒｉｃａｎｕｓ）；リベロバクター・アジアティクス（Ｌｉｂｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｓｉａｔｉｃｕｓ）；リステリア・モノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）；クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、アエロバクター（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）、およびセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）などの雑多な腸内細菌；マイコバクテリウム・ボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ）；マイコバクテリウム・ツベルクロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；マイコプラズマ・カプリコルム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｒｉｃｏｌｕｍ）；マイコプラズマ・ミコイデス亜種ミコイデス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｍｙｃｏｉｄｅｓ  ｓｓｐ  ｍｙｃｏｉｄｅｓ）；ペロノスクレロスポラフィリピネシス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ）；さび病菌（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）；プレシオモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ  ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）；ラルストニア・ソラナセラム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）レース３、次亜種２；リケッチア・プロワゼキイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ）；リケッチア・リケッチイ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）；サルモネラ種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．）；スクレロフトラ・レイジア・バル・ゼア（Ｓｃｈｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ  ｒａｙｓｓｉａｅ  ｖａｒ  ｚｅａｅ）；シゲラ種（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐｐ．）；黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）；連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）；ジャガイモがんしゅ病菌（Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ）；ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）ｎｏｎ−０１；ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）０１；  ビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）および他のビブリオ属；ビブリオ・バルニフィカス（Ｖｉｂｒｉｏ  ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ）；キサントモナス・オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚａｅ）；ピアス病菌（Ｘｙｌｅｌｌａ  ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）（柑橘類の斑入り萎黄病菌株）；エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）およびエルシニア・シュードツベルクローシス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；ならびにエルシニア・ペスティス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）からなる群から選択される。
【００１７】
精製にとって望ましい多糖を、細胞壁などの細胞成分と結合させることができる。細胞壁との結合とは、多糖が、細胞壁自体の成分である、および／または直接的、もしくは中間分子を介して間接的に、細胞壁に付着する、または細胞壁の一過的なコーティングである（例えば、ある特定の細菌株は、当業界では「エキソ多糖類」としても知られる、莢膜多糖類を発散する）ことを意味する。
【００１８】
一部の実施形態では、細菌から抽出される多糖は、莢膜多糖、莢膜下多糖、またはリポ多糖である。
【００１９】
好ましい実施形態では、多糖は、莢膜多糖である。
【００２０】
ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）５型または黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）８型である。
【００２１】
さらなる実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）である。さらなる実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、ｂ型ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）である。
【００２２】
さらなる実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ１３５）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ（ＭｅｎＸ）または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ１３５）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ（ＭｅｎＸ）である。
【００２３】
さらなる実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）である。さらなる実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）である。
【００２４】
さらなる実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、溶血性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ））である。一部の実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、ＧＢＳ  Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ型からなる群から選択される。一部の実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、ＧＢＳ  Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＶ型からなる群から選択される。
【００２５】
さらなる実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、腸管毒素産生性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＴＥＣ）、病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＰＥＣ）、腸管出血性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）−Ｏ１５７：Ｈ７（ＥＨＥＣ）、または腸管細胞侵入性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＩＥＣ）などの腸毒性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）部分である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、尿路病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）である（ＵＰＥＣ）。
【００２６】
ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、血清型Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ２６：Ｈ１１、Ｏ１１１：Ｈ−およびＯ１０３：Ｈ２からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、血清型Ｏ６：Ｋ２：Ｈ１およびＯ１８：Ｋ１：Ｈ７からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、血清型Ｏ４５：Ｋ１、Ｏ１７：Ｋ５２：Ｈ１８、Ｏ１９：Ｈ３４およびＯ７：Ｋ１からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１０４：Ｈ４である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、尿路病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１：Ｋ１２：Ｈ７である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１２７：Ｈ６である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１３９：Ｈ２８である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１２８：Ｈ２である。
【００２７】
好ましい実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）である。好ましくは、細菌莢膜多糖類の供給源は、血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｂ、２４Ｆ、２９、３１、３３Ｆ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、３８、７２および７３からなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、２９、３１、３３Ｆ、３５Ｂ、３５Ｆ、３８、７２および７３からなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型５である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｖである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍ��ｎｉａｅ）血清型１０Ａである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１４である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０Ａである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０Ｂである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２４Ｂである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２４Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２９である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖��の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆである。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７２である。ある実施形態では、細菌莢膜多糖類の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７３である。
【００２８】
本発明において使用されるそれぞれの多糖類を精製するために使用される細菌株を、確立された菌株保存機関または臨床標本から取得することができる。
【００２９】
１．１．２  細菌細胞の増殖
典型的には、多糖類を、細菌を培地（例えば、固体または好ましくは、液体培地）中で増殖させることによって産生させる。次いで、細菌細胞を処理することによって、多糖類を調製する。
【００３０】
したがって、ある実施形態では、本発明の方法のための出発材料は、細菌培養物、好ましくは、液体細菌培養物（例えば、発酵ブロス）である。
【００３１】
細菌培養物は、典型的には、バッチ式培養、フェドバッチ式培養または連続式培養によって得られる（例えば、ＷＯ２００７／０５２１６８またはＷＯ２００９／０８１２７６を参照されたい）。連続培養中に、新鮮な培地を、固定速度で培養物に添加し、細胞および培地を、一定の培養物容量を維持する速度で除去する。
【００３２】
生物の集団は、種バイアルから種ボトルへとスケールアップされることが多く、生産規模の発酵容量に達するまで、容量を増加させる１または複数の種発酵器を通過させる。
【００３３】
１．１．３  出発材料を得るための細菌細胞の予備処理
一般には、少量の多糖が、細菌増殖中に培養培地中に放出され、したがって、出発材料は、遠心分離された細菌培養物に由来する上清であってもよい。
【００３４】
しかしながら、典型的には、出発材料は、多糖が放出されるように、細菌自体を処理することによって調製されるであろう。
【００３５】
必要に応じて、細胞増殖後、細菌細胞を不活化する。これは、特に、病原性細菌が使用される場合に当てはまる。不活化のための好適な方法は、例えば、Ｆａｔｔｏｍら（１９９０）Ｉｎｆｅｃｔ  ｌｍｍｕｎ．５８（７）：２３６７〜７４に記載されたような、例えば、フェノール：エタノールを用いた処理である。以下の実施形態では、細菌細胞を予め不活化するか、または不活化しなくてもよい。
【００３６】
多糖類を、化学的、物理的または酵素的処理を含む様々な方法によって、細菌から放出させることができる（例えば、ＷＯ２０１０１５１５４４、ＷＯ２０１１／０５１９１７またはＷＯ２００７０８４８５６を参照されたい）。
【００３７】
ある実施形態では、細菌細胞（不活化された、または不活化されていない）を、その元の培養培地中の懸濁液中で処理する。プロセスは、したがって、その元の培養培地中の懸濁液中の細胞から始まってもよい。
【００３８】
別の実施形態では、細菌細胞を、莢膜多糖の放出の前に遠心分離する。プロセスは、したがって、湿った細胞ペーストの形態にある細胞から始まってもよい。あるいは、細胞を、乾燥形態で処理する。しかしながら、典型的には、遠心分離後、細菌細胞を、プロセスにおける次のステップにとって好適である水性媒体、例えば、緩衝剤または蒸留水中に再懸濁する。細胞を、再懸濁の前にこの媒体で洗浄してもよい。
【００３９】
ある実施形態では、細菌細胞（例えば、その元の培養培地中の懸濁液中にある、湿った細胞ペーストの形態にある、乾燥形態にある、または遠心分離後に水性媒体中に再懸濁された）を、溶解剤で処理する。
【００４０】
「溶解剤」は、細胞壁破壊を助ける任意の薬剤である。
【００４１】
ある実施形態では、溶解剤は、洗剤である。本明細書で使用される用語「洗剤」とは、細菌細胞の溶解を誘導することができる任意の陰イオン性または陽イオン性洗剤を指す。本発明の方法の中での使用のためのそのような洗剤の代表的な例としては、デオキシコール酸ナトリウム（ＤＯＣ）、Ｎ−ラウリルサルコシン（ＮＬＳ）、ケノデオキシコール酸ナトリウム、およびサポニンが挙げられる（ＷＯ２００８／１１８７５２、１３頁、１４行〜１４頁、１０行を参照されたい）。本発明の一実施形態では、細菌細胞を溶解するために使用される溶解剤は、ＤＯＣである。
【００４２】
ある実施形態では、溶解剤は、非動物由来溶解剤である。一実施形態では、非動物由来溶解剤は、デカンスルホン酸、ｔｅｒｔ−オクチルフェノキシ５ポリ（オキシエチレン）エタノール（例えば、Ｉｇｅｐａｌ（登録商標）ＣＡ−６３０、カタログ番号９００２−９３−１、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから入手可能）、オクチルフェノールエチレンオキシド凝縮物（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから入手可能）、Ｎ−ラウリルサルコシンナトリウム（ＮＬＳ）、ラウリルイミノジプロピオン酸、ドデシル硫酸ナトリウム、ケノデオキシコレート、ヒオデオキシコレート、グリコデオキシコレート、タウロデオキシコレート、タウロケノデオキシコレート、およびコレートからなる群から選択される。ある実施形態では、非動物由来溶解剤は、ＮＬＳである。
【００４３】
ある実施形態では、細菌細胞（例えば、その元の培養培地中の懸濁液中にある、湿った細胞ペーストの形態にある、乾燥形態にある、または遠心分離後に水性媒体中に再懸濁された）を、多糖が放出されるように酵素的に処理する。ある実施形態では、細菌細胞を、リソスタフィン、ムタノリシン、β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼおよびムタノリシンと、β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼとの組合せからなる群から選択される酵素によって処理する。これらのものは、細菌ペプチドグリカンに作用して、本発明と共に使用するための莢膜糖を放出させるが、群特異的炭水化物抗原の放出をももたらす。ある実施形態では、細菌細胞を、ＩＩ型ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ２）によって処理する。
【００４４】
必要に応じて、多糖の放出後、酵素を不活化する。不活化のための好適な方法は、例えば、熱処理または酸処理である。
【００４５】
ある実施形態では、細菌細胞（例えば、その元の培養培地中の懸濁液中にある、湿った細胞ペーストの形態にある、乾燥形態にある、または遠心分離後に水性媒体中に再懸濁された）を、多糖が放出されるようにオートクレーブする。
【００４６】
さらなる実施形態では、細菌細胞（例えば、その元の培養培地中の懸濁液中にある、湿った細胞ペーストの形態にある、乾燥形態にある、または遠心分離後に水性媒体中に再懸濁された）を、多糖が放出されるように化学的に処理する。そのような実施形態では、化学的処理は、例えば、塩基または酸を使用する加水分解であってもよい（例えば、ＷＯ２００７０８４８５６を参照されたい）。
【００４７】
ある実施形態では、細菌細胞の化学的処理は、塩基抽出（例えば、水酸化ナトリウムを使用する）である。塩基抽出は、莢膜糖と、ペプチドグリカン骨格との間のホスホジエステル結合を切断することができる。ある実施形態では、塩基は、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、Ｈ２Ｎ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔおよびＫＯｔＢｕからなる群から選択される。塩基処理後、反応混合物を中和することができる。これを、酸の添加によって達成することができる。ある実施形態では、塩基処理後、反応混合物を、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される酸によって中和する。
【００４８】
ある実施形態では、細菌細胞の化学的処理は、酸処理（例えば、硫酸）である。ある実施形態では、酸は、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される。酸処理後、反応混合物を中和することができる。これを、塩基の添加によって達成することができる。ある実施形態では、酸処理後、反応混合物を、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＬｉＯＨ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＫＣＮ、Ｅｔ３Ｎ、ＮＨ３、Ｈ２Ｎ２Ｈ２、ＮａＨ、ＮａＯＭｅ、ＮａＯＥｔおよびＫＯｔＢｕからなる群から選択される塩基によって中和する。
【００４９】
１．２  凝集
本発明の方法は、凝集ステップを含む。本発明者らは、プロセスが、夾雑物が少ない精製された多糖をもたらすことを見出した。
【００５０】
本発明者らのプロセスは、迅速かつ単純であり得る。
【００５１】
したがって、本発明の方法では、上記のセクション１．１の方法のいずれかによって得られた溶液を、凝集によって処理する。
【００５２】
本発明では、用語「凝集」とは、コロイドが、凝集剤の添加のため、フロックまたはフレークの形態で懸濁液から出てくるプロセスを指す。
【００５３】
凝集ステップは、「凝集剤」を、夾雑物と共に細菌多糖類を含む溶液に添加することを含む。ある実施形態では、夾雑物は、細菌細胞の破片、細菌細胞のタンパク質および核酸を含む。ある実施形態では、夾雑物は、細菌細胞のタンパク質および核酸を含む。
【００５４】
以下にさらに開示されるように、凝集ステップは、凝集剤の添加の前または後に、ｐＨの調整をさらに含んでもよい。特に、溶液を酸性化することができる。
【００５５】
さらに、凝集剤の添加および／またはｐＨの調整を、所望のレベルに調整された温度で実施することができる。
【００５６】
これらのステップを、任意の順序で実施することができる：
−凝集剤の添加、次いで、ｐＨの調整、次いで、温度の調整または；
−凝集剤の添加、次いで、温度の調整、次いで、ｐＨの調整または；
−ｐＨの調整、次いで、凝集剤の添加、次いで、温度の調整または；
−ｐＨの調整、次いで、温度の調整、次いで、凝集剤の添加または；
−温度の調整、次いで、凝集剤の添加、次いで、ｐＨの調整または；
−温度の調整、次いで、ｐＨの調整、次いで、凝集剤の添加。
【００５７】
さらに、凝集剤の添加および／またはｐＨの調整の後、溶液を、いくらかの時間にわたって保持して、下流のプロセシングの前にフロックを沈降させることができる。
【００５８】
本発明では、「凝集剤」とは、夾雑物と一緒に目的の多糖を含む溶液中で、目的の多糖を、溶液中に有意に留まらせながら、コロイドおよび他の懸濁された粒子の、フロックまたはフレークの形態での凝集を引き起こすことによって凝集を促進させることができる薬剤を指す。
【００５９】
本発明のある実施形態では、凝集剤は、多価陽イオンを含む。ある実施形態では、凝集剤は、多価陽イオンである。好ましい実施形態では、前記多価陽イオンは、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される。ある実施形態では、凝集剤は、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される少なくとも２つの多価陽イオンの混合物である。ある実施形態では、凝集剤は、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される少なくとも３つの多価陽イオンの混合物である。ある実施形態では、凝集剤は、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される４つの多価陽イオンの混合物である。
【００６０】
ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される薬剤を含む。ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される。ある実施形態では、凝集剤は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である。ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバンを含む。ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバンである。ある実施形態では、凝集剤は、カリウムミョウバンを含む。ある実施形態では、凝集剤は、カリウムミョウバンである。ある実施形態では、凝集剤は、ナトリウムミョウバンを含む。ある実施形態では、凝集剤は、ナトリウムミョウバンである。ある実施形態では、凝集剤は、アンモニウムミョウバンを含む。ある実施形態では、凝集剤は、アンモニウムミョウバンである。
【００６１】
ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される薬剤の混合物（例えば、２、３または４つの薬剤）である。ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される。
【００６２】
ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される２つの薬剤の混合物である。ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される少なくとも３つの薬剤の混合物である。
【００６３】
ある実施形態では、凝集剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（Ｍｏｒｉｎｇａ  ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（ワサビノキ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ  ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアーガムおよびアルギネート（例えば、ワカメ抽出物）からなる群から選択される薬剤を含む。ある実施形態では、凝集剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（Ｍｏｒｉｎｇａ  ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（ワサビノキ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ  ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアーガムおよびアルギネート（例えば、ワカメ抽出物）からなる群から選択される。
【００６４】
凝集剤の濃度は、使用される薬剤、目的の多糖および凝集ステップのパラメータ（例えば、温度など）に依存し得る。
【００６５】
凝集剤がミョウバンを含むか、またはミョウバンである実施形態では、約０．１〜２０％（ｗ／ｖ）の凝集剤濃度を使用することができる。好ましくは、約０．５〜１０％（ｗ／ｖ）の凝集剤濃度を使用する。さらにより好ましくは、約１〜５％（ｗ／ｖ）の凝集剤濃度を使用する。
【００６６】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【００６７】
ある実施形態では、約０．１、約０．２５、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５または約１０％（ｗ／ｖ）の凝集剤濃度が使用される。ある実施形態では、約１０．５、約１１．０、約１１．５、約１２．０、約１２．５、約１３．０、約１３．５、約１４．０、約１４．５、約１５．０、約１５．５、約１６．０、約１６．５、約１７．０、約１７．５、約１８．０、約１８．５、約１９．０、約１９．５または約２０．０％（ｗ／ｖ）の凝集剤濃度が使用される。ある実施形態では、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５または約５．０％（ｗ／ｖ）の凝集剤濃度が使用される。ある実施形態では、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５または約４．０％（ｗ／ｖ）の凝集剤濃度が使用される。
【００６８】
本発明の一部の実施形態では、凝集剤は、ある特定の期間にわたって添加される。本発明の一部の実施形態では、凝集剤は、数秒（例えば、１〜１０秒）〜約１カ月の期間にわたって添加される。本発明の一部の実施形態では、凝集剤は、約２秒〜約２週間の期間にわたって添加される。本発明の一部の実施形態では、凝集剤は、約１分〜約１週間の期間にわたって添加される。一部の実施形態では、凝集剤は、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間または約２４時間〜約２日の期間にわたって添加される。
【００６９】
したがって、ある特定の実施形態では、凝集剤は、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日の期間にわたって添加される。
【００７０】
好ましくは、凝集剤は、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日の期間にわたって添加される。
【００７１】
ある特定の実施形態では、凝集剤は、約１５分〜約３時間の期間にわたって添加される。ある特定の実施形態では、凝集剤は、約３０分〜約１２０分の期間にわたって添加される。
【００７２】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【００７３】
凝集剤を、約２秒、約１０秒、約３０秒、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約３．５時間、約４時間、約４．５時間、約５時間、約５．５時間、約６時間、約６．５時間、約７時間、約７．５時間、約８時間、約８．５時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日または約１５日の期間にわたって添加してもよい。
【００７４】
ある実施形態では、凝集剤は、撹拌せずに添加される。別の実施形態では、凝集剤は、撹拌下で添加される。別の実施形態では、凝集剤は、穏やかな撹拌下で添加される。別の実施形態では、凝集剤は、激しい撹拌下で添加される。
【００７５】
本発明者らはさらに驚くべきことに、凝集が酸性ｐＨで実施した場合に改善されることに気付いた。
【００７６】
したがって、本発明のある実施形態では、凝集ステップは、７．０、６．０、５．０または４．０より下のｐＨで実施される。本発明の特定の実施形態では、凝集ステップは、７．０〜１．０のｐＨで実施される。ある実施形態では、凝集ステップは、５．５〜２．５、５．０〜２．５、４．５〜２．５、４．０〜２．５、５．５〜３．０、５．０〜３．０、４．５〜３．０、４．０〜３．０、５．５〜３．５、５．０〜３．５、４．５〜３．５または４．０〜３．５のｐＨで実施される。ある実施形態では、凝集ステップは、約５．５、約５．０、約４．５、約４．０、約３．５、約３．０、約２．５、約２．０、約１．５または約１．０のｐＨで実施される。ある実施形態では、凝集ステップは、約４．０、約３．５、約３．０または約２．５のｐＨで実施される。ある実施形態では、凝集ステップは、約３．５のｐＨで実施される。
【００７７】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【００７８】
ある実施形態では、前記酸性ｐＨは、上記のセクション１．１の方法のいずれかによって得られたか、または酸を用いてセクション１．２に開示されたようにさらに清澄化された溶液を酸性化することによって得られる。ある実施形態では、前記酸は、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される。ある実施形態では、前記酸は、アミノ酸である。ある実施形態では、前記酸は、グリシン、アラニンおよびグルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸である。ある実施形態では、前記酸は、ＨＣｌ（塩酸）である。ある実施形態では、前記酸は、硫酸である。
【００７９】
ある実施形態では、酸は、撹拌せずに添加される。好ましくは、酸は、撹拌下で添加される。ある実施形態では、酸は、穏やかな撹拌下で添加される。ある実施形態では、酸は、激しい撹拌下で添加される。
【００８０】
本発明の一部の実施形態では、凝集剤の添加（および任意選択の酸性化）の後、溶液を、いくらかの時間にわたって保持して、下流のプロセシングの前にフロックを沈降させる。
【００８１】
本発明の一部の実施形態では、凝集ステップは、数秒（例えば、２〜１０秒）〜約１分の沈降時間を用いて実施される。好ましくは、沈降時間は、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１１５、少なくとも約１２０、少なくとも約１２５、少なくとも約１３０、少なくとも約１３５、少なくとも約１４０、少なくとも約１４５、少なくとも約１５０、少なくとも約１５５または少なくとも約１６０分である。好ましくは、沈降時間は、１週間未満であるが、沈降時間は、より長くてもよい。
【００８２】
したがって、ある特定の実施形態では、沈降時間は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０、約１４４０分、約２日、約３日、約４日、約５日または約６日〜１週間である。
【００８３】
本発明の一部の実施形態では、沈降時間は、数秒（例えば、１〜１０秒）〜約１カ月である。一部の実施形態では、沈降時間は、約２秒〜約２週間である。本発明の一部の実施形態では、沈降時間は、約１分〜約１週間である。一部の実施形態では、沈降時間は、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間または約２４時間〜約２日である。
【００８４】
したがって、ある特定の実施形態では、沈降時間は、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日である。
【００８５】
好ましくは、沈降時間は、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日である。
【００８６】
ある特定の実施形態では、沈降時間は、約１５分〜約３時間である。ある特定の実施形態では、沈降時間は、約３０分〜約１２０分である。
【００８７】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【００８８】
ある特定の実施形態では、沈降時間は、約２秒、約１０秒、約３０秒、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約３．５時間、約４時間、約４．５時間、約５時間、約５．５時間、約６時間、約６．５時間、約７時間、約７．５時間、約８時間、約８．５時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日または約１５日である。
【００８９】
好ましくは、沈降時間は、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０または約１４４０分〜約２日である。ある特定の実施形態では、沈降時間は、約５分〜約１日である。ある特定の実施形態では、沈降時間は、約５分〜約１２０分である。
【００９０】
沈降時間は、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分または約１６０分であってもよい。
【００９１】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【００９２】
ある実施形態では、任意選択の沈降ステップは、撹拌せずに行われる。ある実施形態では、任意選択の沈降ステップは、撹拌下で行われる。別の実施形態では、任意選択の沈降ステップは、穏やかな撹拌下で行われる。別の実施形態では、任意選択の沈降ステップは、激しい撹拌下で行われる。
【００９３】
本発明のある実施形態では、凝集剤の添加、溶液の沈降および／またはｐＨの調整は、約４℃〜約３０℃の温度で実施される。ある実施形態では、凝集剤の添加、溶液の沈降および／またはｐＨの調整は、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃または約３０℃の温度で実施される。ある実施形態では、凝集剤の添加、溶液の沈降および／またはｐＨの調整は、約２０℃の温度で実施される。本発明者らは驚くべきことに、凝集が、高温で実施した場合にさらに改善され得ることに気付いた。したがって、本発明の特定の実施形態では、凝集剤の添加、溶液の沈降および／またはｐＨの調整は、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される。ある実施形態では、凝集剤の添加、溶液の沈降および／またはｐＨの調整は、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。ある実施形態では、凝集剤の添加、溶液の沈降および／またはｐＨの調整は、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される。ある実施形態では、凝集剤の添加、溶液の沈降および／またはｐＨの調整は、約５０℃の温度で実施される。
【００９４】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【００９５】
ある実施形態では、凝集剤の添加は、上記の温度のいずれかで実施される。
【００９６】
ある実施形態では、凝集剤の添加後の溶液の沈降は、上記の温度のいずれかで実施される。
【００９７】
ある実施形態では、ｐＨの調整は、上記の温度のいずれかで実施される。
【００９８】
ある実施形態では、凝集剤の添加および凝集剤の添加後の溶液の沈降は、上記温度のいずれかで実施される。
【００９９】
ある実施形態では、凝集剤の添加およびｐＨの調整は、上記の温度のいずれかで実施される。
【０１００】
ある実施形態では、凝集剤の添加、凝集剤の添加後の溶液の沈降およびｐＨの調整は、上記の温度のいずれかで実施される。
【０１０１】
ある実施形態では、凝集ステップは、ｐＨを調整せずに凝集剤を添加すること（上記で開示されたように）を含む。
【０１０２】
ある実施形態では、凝集ステップは、ｐＨを調整せずに、凝集剤を添加すること、および溶液を沈降させること（上記で開示されたように）を含む。
【０１０３】
ある実施形態では、凝集ステップは、凝集剤を添加すること、ｐＨを調整すること、および溶液を沈降させること（上記で開示されたように）を含む。ある実施形態では、凝集剤は、ｐＨを調整する前に添加される。別の実施形態では、ｐＨは、凝集剤を添加する前に調整される。
【０１０４】
ある実施形態では、凝集ステップは、凝集剤を添加すること、溶液を沈降させること、およびｐＨを調整すること（上記で開示されたように）を含む。ある実施形態では、凝集剤の添加および溶液の沈降は、ｐＨを調整する前に行われる。別の実施形態では、ｐＨは、凝集剤を添加し、溶液を沈降させる前に調整される。ある実施形態では、凝集剤の添加およびｐＨの調整は、溶液を沈降させる前に行われる。別の実施形態では、ｐＨは、凝集剤を添加し、溶液を沈降させる前に調整される。
【０１０５】
ある実施形態では、凝集ステップは、凝集剤を添加すること、ｐＨを調整すること、および温度を調整すること（上記で開示されたように）を含む。
【０１０６】
これらのステップを、任意の順序で実施することができる：
−凝集剤の添加、次いで、ｐＨの調整、次いで、温度の調整または；
−凝集剤の添加、次いで、温度の調整、次いで、ｐＨの調整または；
−ｐＨの調整、次いで、凝集剤の添加、次いで、温度の調整または；
−ｐＨの調整、次いで、温度の調整、次いで、凝集剤の添加または；
−温度の調整、次いで、凝集剤の添加、次いで、ｐＨの調整または；
−温度の調整、次いで、ｐＨの調整、次いで、凝集剤の添加。
【０１０７】
さらに、凝集剤の添加および／またはｐＨの調整の後、溶液を、いくらかの時間にわたって保持して、下流のプロセシングの前にフロックを沈降させることができる。
【０１０８】
１．３  固体／液体の分離
凝集した材料を、任意の好適な固体／液体分離法によって目的の多糖から分離することができる。
【０１０９】
したがって、本発明のある実施形態では、凝集後、懸濁液（上記のセクション１．２で得られたもの）を、デカンテーション、沈降化、濾過または遠心分離によって清澄化する。ある実施形態では、次いで、多糖含有溶液を、保存および／またはさらなるプロセシングのために収集する。
【０１１０】
本発明のある実施形態では、凝集後、懸濁液（上記のセクション１．２で得られたもの）を、デカンテーションによって清澄化する。フロックを沈降させるために液体間に十分な密度差がある場合、液体を分離するためにデカンターが使用される。操作するデカンターにおいて、３つの異なるゾーンが存在するであろう：透明な重い液体、分離している分散した液体（分散ゾーン）、および透明な軽い液体。清浄な溶液を産生するために、一般的には、少量の溶液を容器中に残す必要がある。デカンターを、連続的操作のために設計することができる。
【０１１１】
本発明のある実施形態では、凝集後、懸濁液（上記のセクション１．２で得られたもの）を、沈降化によって清澄化する（沈降）。沈降化は、重力沈降による液体混合物から透明な流体およびより高い固体含量のスラリーへの懸濁された固体粒子の分離である。沈降化を、増粘剤、清澄化剤または分級器中で行うことができる。増粘および清澄化は、大量の液体の処理のために使用される場合、比較的安価なプロセスであるため、それらを、濾過に対する供給原料の予備濃縮のために使用することができる。
【０１１２】
本発明のある実施形態では、凝集後、懸濁液（上記のセクション１．２で得られたもの）を、遠心分離によって清澄化する。ある実施形態では、前記遠心分離は、連続遠心分離である。ある実施形態では、前記遠心分離は、バケット遠心分離である。ある実施形態では、次いで、多糖含有上清を、保存および／またはさらなるプロセシングのために収集する。
【０１１３】
一部の実施形態では、懸濁液を、約１，０００ｇ、約２，０００ｇ、約３，０００ｇ、約４，０００ｇ、約５，０００ｇ、約６，０００ｇ、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇ、約２５，０００ｇ、約３０，０００ｇ、約３５，０００ｇ、約４０，０００ｇ、約５０，０００ｇ、約６０，０００ｇ、約７０，０００ｇ、約８０，０００ｇ、約９０，０００ｇ、約１００，０００ｇ、約１２０，０００ｇ、約１４０，０００ｇ、約１６０，０００ｇまたは約１８０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇまたは約２５，０００ｇで遠心分離する。
【０１１４】
一部の実施形態では、懸濁液を、約５，０００ｇ〜約２５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を、約８，０００ｇ〜約２０，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を、約１０，０００ｇ〜約１５，０００ｇで遠心分離する。一部の実施形態では、懸濁液を、約１０，０００ｇ〜約１２，０００ｇで遠心分離する。
【０１１５】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１１６】
一部の実施形態では、懸濁液を、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１０５、少なくとも１１０、少なくとも１１５、少なくとも１２０、少なくとも１２５、少なくとも１３０、少なくとも１３５、少なくとも１４０、少なくとも１４５、少なくとも１５０、少なくとも１５５または少なくとも約１６０分、遠心分離する。好ましくは、遠心分離時間は、２４時間未満である。
【０１１７】
したがって、ある特定の実施形態では、懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０または約１３８０分〜１４４０分、遠心分離する。
【０１１８】
好ましくは、懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、または約５４０分〜約６００分、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を、約５分〜約３時間、遠心分離する。ある特定の実施形態では、懸濁液を、約５分〜約１２０分、遠心分離する。
【０１１９】
懸濁液を、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分または約１５５分〜約１６０分、遠心分離してもよい。
【０１２０】
懸濁液を、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分または約５５分〜約６０分、遠心分離してもよい。
【０１２１】
懸濁液を、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０分または約１４４０分、遠心分離してもよい。
【０１２２】
懸濁液を、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分または約１６０分、遠心分離してもよい。
【０１２３】
懸濁液を、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分または約６０分、遠心分離してもよい。
【０１２４】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１２５】
本発明のある実施形態では、遠心分離は、連続遠心分離である。前記実施形態では、供給速度は、５０〜５０００ｍｌ／分、１００−４０００ｍｌ／分、１５０−３０００ｍｌ／分、２００−２５００ｍｌ／分、２５０−２０００ｍｌ／分、３００−１５００ｍｌ／分、３００−１０００ｍｌ／分、２００−１０００ｍｌ／分、２００−１５００ｍｌ／分、４００−１５００ｍｌ／分、５００−１５００ｍｌ／分、５００−１０００ｍｌ／分、５００−２０００ｍｌ／分、５００−２５００ｍｌ／分または１０００〜２５００ｍｌ／分であってもよい。
【０１２６】
ある実施形態では、供給速度は、約１０、約２５、約５０、約７５、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、約１０００、約１０５０、約１１００、約１１５０、約１２００、約１２５０、約１３００、約１３５０、約１４００、約１４５０、約１５００、約１６５０、約１７００、約１８００、約１９００、約２０００、約２１００、約２２００、約２３００、約２４００、約２５００、約２６００、約２７００、約２８００、約２９００、約３０００、約３２５０、約３５００、約３７５０、約４０００、約４２５０、約４５００または約５０００ｍｌ／分であってもよい。
【０１２７】
本発明のある実施形態では、凝集後、懸濁液（上記のセクション１．２で得られたもの）を、濾過によって清澄化する。濾過においては、粒子を保持し、透明な濾液を通過させる多孔性媒体に混合物を通過させることによって、液体中の懸濁された固体粒子を除去する。濾過は、重力によりスクリーン上または真空、圧力もしくは遠心分離によりフィルター上で実施される。固体を、脱水濾過である、フィルター媒体の表面上に保持するか、または深層濾過である、フィルター媒体内に捕捉することができる。ある実施形態では、凝集後、懸濁液（上記のセクション１．２で得られたもの）を、精密濾過によって清澄化する。ある実施形態では、精密濾過は、接線流精密濾過である。別の実施形態では、精密濾過は、デッドエンド濾過（垂直濾過）である。ある実施形態では、精密濾過は、ＤＥダイアトマイトとしても知られる、珪藻土（ＤＥ）をフィルター補助剤として使用して、固体／液体分離を容易にし、その効率を増強するデッドエンド濾過である。したがって、ある実施形態では、凝集後、懸濁液（上記のセクション１．２で得られたもの）を、珪藻土（ＤＥ）を含むデッドエンド精密濾過によって清澄化する。ＤＥを、深層フィルターの不可欠な部分としてデッドエンドフィルター中に含浸させる（または含有させる）ことができる。
【０１２８】
別の形式では、ＤＥを、凝集溶液（セクション１．２の後に得られたもの）に粉末形態で添加することができる。後者の場合、ＤＥで処理された凝集溶液を、深層濾過によってさらに清澄化することができる。
【０１２９】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．４５〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、または約１．７５〜２ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３０】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．４５〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３１】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１３２】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１、約０．０５、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．４５、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９または約２ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３３】
ある実施形態では、フィルターが約０．４５ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３４】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜５０００Ｌ／ｍ２、２００〜５０００Ｌ／ｍ２、３００〜５０００Ｌ／ｍ２、４００〜５０００Ｌ／ｍ２、５００〜５０００Ｌ／ｍ２、７５０〜５０００Ｌ／ｍ２、１０００〜５０００Ｌ／ｍ２、１５００〜５０００Ｌ／ｍ２、２０００〜５０００Ｌ／ｍ２、３０００〜５０００Ｌ／ｍ２または４０００〜５０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３５】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜２５００Ｌ／ｍ２、２００〜２５００Ｌ／ｍ２、３００〜２５００Ｌ／ｍ２、４００〜２５００Ｌ／ｍ２、５００〜２５００Ｌ／ｍ２、７５０〜２５００Ｌ／ｍ２、１０００〜２５００Ｌ／ｍ２、１５００〜２５００Ｌ／ｍ２、または２０００〜２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３６】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜１５００Ｌ／ｍ２、２００〜１５００Ｌ／ｍ２、３００〜１５００Ｌ／ｍ２、４００〜１５００Ｌ／ｍ２、５００〜１５００Ｌ／ｍ２、７５０〜１５００Ｌ／ｍ２または１０００〜１５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３７】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜１２５０Ｌ／ｍ２、２００〜１２５０Ｌ／ｍ２、３００〜１２５０Ｌ／ｍ２、４００〜１２５０Ｌ／ｍ２、５００〜１２５０Ｌ／ｍ２、７５０〜１２５０Ｌ／ｍ２または１０００〜１２５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３８】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜１０００Ｌ／ｍ２、２００〜１０００Ｌ／ｍ２、３００〜１０００Ｌ／ｍ２、４００〜１０００Ｌ／ｍ２、５００〜１０００Ｌ／ｍ２または７５０〜１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１３９】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜７５０Ｌ／ｍ２、２００〜７５０Ｌ／ｍ２、３００〜７５０Ｌ／ｍ２、４００〜７５０Ｌ／ｍ２または５００〜７５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１４０】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜６００Ｌ／ｍ２、２００〜６００Ｌ／ｍ２、３００〜６００Ｌ／ｍ２、４００〜６００Ｌ／ｍ２または４００〜６００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１４１】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜５００Ｌ／ｍ２、２００〜５００Ｌ／ｍ２、３００〜５００Ｌ／ｍ２または４００〜５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１４２】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１４３】
ある実施形態では、フィルターが、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、約１０００、約１０５０、約１１００、約１１５０、約１２００、約１２５０、約１３００、約１３５０、約１４００、約１４５０、約１５００、約１５５０、約１６００、約１６５０、約１７００、約１７５０、約１８００、約１８５０、約１９００、約１９５０、約２０００、約２０５０、約２１００、約２１５０、約２２００、約２２５０、約２３００、約２３５０、約２４００、約２４５０または約２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１４４】
上記の固体／液体分離法を、独立形式で、または任意の順序で２つの組合せで、または任意の順序で３つの組合せで使用することができる。
【０１４５】
１．４  濾過（例えば、深層濾過）
一度、上記のセクション１．２の凝集ステップおよび／または上記のセクション１．３の固体／液体分離ステップによって溶液を処理したら、多糖含有溶液（例えば、上清）を、必要に応じてさらに清澄化することができる。
【０１４６】
ある実施形態では、溶液を濾過し、それによって、さらに清澄化された溶液を産生する。ある実施形態では、濾過を、上記のセクション１．２の方法のいずれかによって得られた溶液に直接適用する。ある実施形態では、濾過を、上記のセクション１．３に記載の固体／液体分離ステップによってさらに清澄化された溶液に適用する。
【０１４７】
ある実施形態では、深層濾過、活性炭を通す濾過、サイズ濾過、透析濾過および限外濾過からなる群から選択される濾過ステップによって、溶液を処理する。ある実施形態では、透析濾過ステップ、特に、接線流濾過によって、溶液を処理する。ある実施形態では、深層濾過ステップによって溶液を処理する。
【０１４８】
深層フィルターは、多孔性濾過媒体を使用して、媒体の表面上だけというよりもむしろ、媒体全体にわたって粒子を保持する。濾過媒体の複雑かつチャネル様の性質のため、粒子は、表面上とは反対に、その構造内で媒体全体にわたって保持される。
【０１４９】
ある実施形態では、深層フィルター設計が、カセット、カートリッジ、ディープベッド（例えば、サンドフィルター）およびレンズ状フィルターからなる群から選択される深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５０】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜１００ミクロン、約０．０５〜１００ミクロン、約０．１〜１００ミクロン、約０．２〜１００ミクロン、約０．３〜１００ミクロン、約０．４〜１００ミクロン、約０．５〜１００ミクロン、約０．６〜１００ミクロン、約０．７〜１００ミクロン、約０．８〜１００ミクロン、約０．９〜１００ミクロン、約１〜１００ミクロン、約１．２５〜１００ミクロン、約１．５〜１００ミクロン、約１．７５〜１００ミクロン、約２〜１００ミクロン、約３〜１００ミクロン、約４〜１００ミクロン、約５〜１００ミクロン、約６〜１００ミクロン、約７〜１００ミクロン、約８〜１００ミクロン、約９〜１００ミクロン、約１０〜１００ミクロン、約１５〜１００ミクロン、約２０〜１００ミクロン、約２５〜１００ミクロン、約３０〜１００ミクロン、約４０〜１００ミクロン、約５０〜１００ミクロンまたは約７５〜１００ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５１】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜７５ミクロン、約０．０５〜７５ミクロン、約０．１〜７５ミクロン、約０．２〜７５ミクロン、約０．３〜７５ミクロン、約０．４〜７５ミクロン、約０．５〜７５ミクロン、約０．６〜７５ミクロン、約０．７〜７５ミクロン、約０．８〜７５ミクロン、約０．９〜７５ミクロン、約１〜７５ミクロン、約１．２５〜７５ミクロン、約１．５〜７５ミクロン、約１．７５〜７５ミクロン、約２〜７５ミクロン、約３〜７５ミクロン、約４〜７５ミクロン、約５〜７５ミクロン、約６〜７５ミクロン、約７〜７５ミクロン、約８〜７５ミクロン、約９〜７５ミクロン、約１０〜７５ミクロン、約１５〜７５ミクロン、約２０〜７５ミクロン、約２５〜７５ミクロン、約３０〜７５ミクロン、約４０〜７５ミクロンまたは約５０〜７５ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５２】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜５０ミクロン、約０．０５〜５０ミクロン、約０．１〜５０ミクロン、約０．２〜５０ミクロン、約０．３〜５０ミクロン、約０．４〜５０ミクロン、約０．５〜５０ミクロン、約０．６〜５０ミクロン、約０．７〜５０ミクロン、約０．８〜５０ミクロン、約０．９〜５０ミクロン、約１〜５０ミクロン、約１．２５〜５０ミクロン、約１．５〜５０ミクロン、約１．７５〜５０ミクロン、約２〜５０ミクロン、約３〜５０ミクロン、約４〜５０ミクロン、約５〜５０ミクロン、約６〜５０ミクロン、約７〜５０ミクロン、約８〜５０ミクロン、約９〜５０ミクロン、約１０〜５０ミクロン、約１５〜５０ミクロン、約２０〜５０ミクロン、約２５〜５０ミクロン、約３０〜５０ミクロン、約４０〜５０ミクロンまたは約５０〜５０ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５３】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜２５ミクロン、約０．０５〜２５ミクロン、約０．１〜２５ミクロン、約０．２〜２５ミクロン、約０．３〜２５ミクロン、約０．４〜２５ミクロン、約０．５〜２５ミクロン、約０．６〜２５ミクロン、約０．７〜２５ミクロン、約０．８〜２５ミクロン、約０．９〜２５ミクロン、約１〜２５ミクロン、約１．２５〜２５ミクロン、約１．５〜２５ミクロン、約１．７５〜２５ミクロン、約２〜２５ミクロン、約３〜２５ミクロン、約４〜２５ミクロン、約５〜２５ミクロン、約６〜２５ミクロン、約７〜２５ミクロン、約８〜２５ミクロン、約９〜２５ミクロン、約１０〜２５ミクロン、約１５〜２５ミクロンまたは約２０〜２５ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５４】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜１０ミクロン、約０．０５〜１０ミクロン、約０．１〜１０ミクロン、約０．２〜１０ミクロン、約０．３〜１０ミクロン、約０．４〜１０ミクロン、約０．５〜１０ミクロン、約０．６〜１０ミクロン、約０．７〜１０ミクロン、約０．８〜１０ミクロン、約０．９〜１０ミクロン、約１〜１０ミクロン、約１．２５〜１０ミクロン、約１．５〜１０ミクロン、約１．７５〜１０ミクロン、約２〜１０ミクロン、約３〜１０ミクロン、約４〜１０ミクロン、約５〜１０ミクロン、約６〜１０ミクロン、約７〜１０ミクロン、約８〜１０ミクロンまたは約９〜１０ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５５】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜８ミクロン、約０．０５〜８ミクロン、約０．１〜８ミクロン、約０．２〜８ミクロン、約０．３〜８ミクロン、約０．４〜８ミクロン、約０．５〜８ミクロン、約０．６〜８ミクロン、約０．７〜８ミクロン、約０．８〜８ミクロン、約０．９〜８ミクロン、約１〜８ミクロン、約１．２５〜８ミクロン、約１．５〜８ミクロン、約１．７５〜８ミクロン、約２〜８ミクロン、約３〜８ミクロン、約４〜８ミクロン、約５〜８ミクロン、約６〜８ミクロンまたは約７〜８ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５６】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜５ミクロン、約０．０５〜５ミクロン、約０．１〜５ミクロン、約０．２〜５ミクロン、約０．３〜５ミクロン、約０．４〜５ミクロン、約０．５〜５ミクロン、約０．６〜５ミクロン、約０．７〜５ミクロン、約０．８〜５ミクロン、約０．９〜５ミクロン、約１〜５ミクロン、約１．２５〜５ミクロン、約１．５〜５ミクロン、約１．７５〜５ミクロン、約２〜５ミクロン、約３〜５ミクロンまたは約４〜５ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５７】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、約１．７５〜２ミクロン、約２〜２ミクロン、約３〜２ミクロンまたは約４〜２ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５８】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１５９】
ある実施形態では、深層フィルターが、約０．０５〜５０ミクロン、０．１〜２５ミクロン、０．２〜１０ミクロン、０．１〜１０ミクロン、０．２〜５ミクロンまたは０．２５〜１ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６０】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１６１】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜２５００Ｌ／ｍ２、５〜２５００Ｌ／ｍ２、１０〜２５００Ｌ／ｍ２、２５〜２５００Ｌ／ｍ２、５０〜２５００Ｌ／ｍ２、７５〜２５００Ｌ／ｍ２、１００〜２５００Ｌ／ｍ２、１５０〜２５００Ｌ／ｍ２、２００〜２５００Ｌ／ｍ２、３００〜２５００Ｌ／ｍ２、４００〜２５００Ｌ／ｍ２、５００〜２５００Ｌ／ｍ２、７５０〜２５００Ｌ／ｍ２、１０００〜２５００Ｌ／ｍ２、１５００〜２５００Ｌ／ｍ２または２０００〜２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６２】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜１０００Ｌ／ｍ２、５〜１０００Ｌ／ｍ２、１０〜１０００Ｌ／ｍ２、２５〜１０００Ｌ／ｍ２、５０〜１０００Ｌ／ｍ２、７５〜１０００Ｌ／ｍ２、１００〜１０００Ｌ／ｍ２、１５０〜１０００Ｌ／ｍ２、２００〜１０００Ｌ／ｍ２、３００〜１０００Ｌ／ｍ２、４００〜１０００Ｌ／ｍ２、５００〜１０００Ｌ／ｍ２または７５０〜１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６３】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜７５０Ｌ／ｍ２、５〜７５０Ｌ／ｍ２、１０〜７５０Ｌ／ｍ２、２５〜７５０Ｌ／ｍ２、５０〜７５０Ｌ／ｍ２、７５〜７５０Ｌ／ｍ２、１００〜７５０Ｌ／ｍ２、１５０〜７５０Ｌ／ｍ２、２００〜７５０Ｌ／ｍ２、３００〜７５０Ｌ／ｍ２、４００〜７５０Ｌ／ｍ２または５００〜７５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６４】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜５００Ｌ／ｍ２、５〜５００Ｌ／ｍ２、１０〜５００Ｌ／ｍ２、２５〜５００Ｌ／ｍ２、５０〜５００Ｌ／ｍ２、７５〜５００Ｌ／ｍ２、１００〜５００Ｌ／ｍ２、１５０〜５００Ｌ／ｍ２、２００〜５００Ｌ／ｍ２、３００〜５００Ｌ／ｍ２または４００〜５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６５】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜４００Ｌ／ｍ２、５〜４００Ｌ／ｍ２、１０〜４００Ｌ／ｍ２、２５〜４００Ｌ／ｍ２、５０〜４００Ｌ／ｍ２、７５〜４００Ｌ／ｍ２、１００〜４００Ｌ／ｍ２、１５０〜４００Ｌ／ｍ２、２００〜４００Ｌ／ｍ２または３００〜４００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６６】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜３００Ｌ／ｍ２、５〜３００Ｌ／ｍ２、１０〜３００Ｌ／ｍ２、２５〜３００Ｌ／ｍ２、５０〜３００Ｌ／ｍ２、７５〜３００Ｌ／ｍ２、１００〜３００Ｌ／ｍ２、１５０〜３００Ｌ／ｍ２または２００〜３００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６７】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜２００Ｌ／ｍ２、５〜２００Ｌ／ｍ２、１０〜２００Ｌ／ｍ２、２５〜２００Ｌ／ｍ２、５０〜２００Ｌ／ｍ２、７５〜２００Ｌ／ｍ２、１００〜２００Ｌ／ｍ２または１５０〜２００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６８】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜１００Ｌ／ｍ２、５〜１００Ｌ／ｍ２、１０〜１００Ｌ／ｍ２、２５〜１００Ｌ／ｍ２、５０〜１００Ｌ／ｍ２または７５〜１００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１６９】
ある実施形態では、深層フィルターが、１〜５０Ｌ／ｍ２、５〜５０Ｌ／ｍ２、１０〜５０Ｌ／ｍ２または２５〜５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１７０】
上記の範囲のいずれかの中の任意の全数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１７１】
ある実施形態では、供給速度が１〜１０００ＬＭＨ（リットル／ｍ２／時間）、１０〜１０００ＬＭＨ、２５〜１０００ＬＭＨ、５０〜１０００ＬＭＨ、１００〜１０００ＬＭＨ、１２５〜１０００ＬＭＨ、１５０〜１０００ＬＭＨ、２００〜１０００ＬＭＨ、２５０〜１０００ＬＭＨ、３００〜１０００ＬＭＨ、４００〜１０００ＬＭＨ、５００〜１０００ＬＭＨ、６００〜１０００ＬＭＨ、７００〜１０００ＬＭＨ、８００〜１０００ＬＭＨまたは９００〜１０００ＬＭＨである深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１７２】
ある実施形態では、供給速度が１〜５００ＬＭＨ、１０〜５００ＬＭＨ、２５〜５００ＬＭＨ、５０〜５００ＬＭＨ、１００〜５００ＬＭＨ、１２５〜５００ＬＭＨ、１５０〜５００ＬＭＨ、２００〜５００ＬＭＨ、２５０〜５００ＬＭＨ、３００〜５００ＬＭＨまたは４００〜５００ＬＭＨである深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１７３】
ある実施形態では、供給速度が１〜４００ＬＭＨ、１０〜４００ＬＭＨ、２５〜４００ＬＭＨ、５０〜４００ＬＭＨ、１００〜４００ＬＭＨ、１２５〜４００ＬＭＨ、１５０〜４００ＬＭＨ、２００〜４００ＬＭＨ、２５０〜４００ＬＭＨまたは３００〜４００ＬＭＨである深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１７４】
ある実施形態では、供給速度が１〜２５０ＬＭＨ、１０〜２５０ＬＭＨ、２５〜２５０ＬＭＨ、５０〜２５０ＬＭＨ、１００〜２５０ＬＭＨ、１２５〜２５０ＬＭＨ、１５０〜２５０ＬＭＨまたは２００〜２５０ＬＭＨである深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１７５】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１７６】
ある実施形態では、供給速度が約１、約２、約５、約１０、約２５、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２１０、約２２０、約２３０、約２４０、約２５０、約２６０、約２７０、約２８０、約２９０、約３００、約３１０、約３２０、約３３０、約３４０、約３５０、約３６０、約３７０、約３８０、約３９０、約４００、約４２５、約４５０、約４７５、約５００、約５２５、約５５０、約５７５、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０または約１０００ＬＭＨである深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１７７】
１．５  任意選択のさらなる濾過
一度、上記のセクション１．４の濾過ステップによって溶液を処理したら、得られた溶液（すなわち、濾液）を、必要に応じてさらに清澄化することができる。
【０１７８】
ある実施形態では、溶液を、精密濾過にかける。ある実施形態では、精密濾過は、デッドエンド濾過（垂直濾過）である。ある実施形態では、精密濾過は、接線流精密濾過である。
【０１７９】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．４５〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、または約１．７５〜２ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８０】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．４５〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目保持範囲を有する深層濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８１】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１８２】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１、約０．０５、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．４５、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９または約２ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８３】
ある実施形態では、フィルターが約０．４５ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８４】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜５０００Ｌ／ｍ２、２００〜５０００Ｌ／ｍ２、３００〜５０００Ｌ／ｍ２、４００〜５０００Ｌ／ｍ２、５００〜５０００Ｌ／ｍ２、７５０〜５０００Ｌ／ｍ２、１０００〜５０００Ｌ／ｍ２、１５００〜５０００Ｌ／ｍ２、２０００〜５０００Ｌ／ｍ２、３０００〜５０００Ｌ／ｍ２または４０００〜５０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８５】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜２５００Ｌ／ｍ２、２００〜２５００Ｌ／ｍ２、３００〜２５００Ｌ／ｍ２、４００〜２５００Ｌ／ｍ２、５００〜２５００Ｌ／ｍ２、７５０〜２５００Ｌ／ｍ２、１０００〜２５００Ｌ／ｍ２、１５００〜２５００Ｌ／ｍ２、または２０００〜２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８６】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜１５００Ｌ／ｍ２、２００〜１５００Ｌ／ｍ２、３００〜１５００Ｌ／ｍ２、４００〜１５００Ｌ／ｍ２、５００〜１５００Ｌ／ｍ２、７５０〜１５００Ｌ／ｍ２または１０００〜１５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８７】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜１２５０Ｌ／ｍ２、２００〜１２５０Ｌ／ｍ２、３００〜１２５０Ｌ／ｍ２、４００〜１２５０Ｌ／ｍ２、５００〜１２５０Ｌ／ｍ２、７５０〜１２５０Ｌ／ｍ２または１０００〜１２５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８８】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜１０００Ｌ／ｍ２、２００〜１０００Ｌ／ｍ２、３００〜１０００Ｌ／ｍ２、４００〜１０００Ｌ／ｍ２、５００〜１０００Ｌ／ｍ２または７５０〜１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１８９】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜７５０Ｌ／ｍ２、２００〜７５０Ｌ／ｍ２、３００〜７５０Ｌ／ｍ２、４００〜７５０Ｌ／ｍ２または５００〜７５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１９０】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜６００Ｌ／ｍ２、２００〜６００Ｌ／ｍ２、３００〜６００Ｌ／ｍ２、４００〜６００Ｌ／ｍ２または４００〜６００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１９１】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜５００Ｌ／ｍ２、２００〜５００Ｌ／ｍ２、３００〜５００Ｌ／ｍ２または４００〜５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１９２】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０１９３】
ある実施形態では、フィルターが、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、約１０００、約１０５０、約１１００、約１１５０、約１２００、約１２５０、約１３００、約１３５０、約１４００、約１４５０、約１５００、約１５５０、約１６００、約１６５０、約１７００、約１７５０、約１８００、約１８５０、約１９００、約１９５０、約２０００、約２０５０、約２１００、約２１５０、約２２００、約２２５０、約２３００、約２３５０、約２４００、約２４５０または約２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０１９４】
１．６  限外濾過および／または透析濾過
一度、上記のセクション１．４に記載の方法のいずれかによって、および／または上記のセクション１．５に記載の濾過ステップによって溶液を濾過したら、得られた溶液（すなわち、濾液）を、必要に応じて、限外濾過および／または透析濾過によってさらに清澄化してもよい。
【０１９５】
限外濾過（ＵＦ）は、薄い生成物流を濃縮するためのプロセスである。ＵＦは、膜の孔径または分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）に基づいて溶液中の分子を分離する。
【０１９６】
本発明のある実施形態では、溶液（例えば、上記のセクション１．５または１．６で得られた濾液）を、限外濾過によって処理する。
【０１９７】
ある実施形態では、限外濾過によって溶液を処理し、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜７５０ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜５０ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜３０ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜１０００ｋＤａまたは約７５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある。
【０１９８】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜５００ｋＤａまたは約４００ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある。
【０１９９】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜３００ｋＤａまたは約２００ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲にある。
【０２００】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１００ｋＤａまたは約７５ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある。
【０２０１】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約７５０ｋＤａまたは約１０００ｋＤａである。
【０２０２】
ある実施形態では、限外濾過ステップの濃縮係数は、約１．５〜１０である。ある実施形態では、濃縮係数は、約２〜８である。ある実施形態では、濃縮係数は、約２〜５である。
【０２０３】
ある実施形態では、濃縮係数は、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５または約１０．０である。ある実施形態では、濃縮係数は、約２、約３、約４、約５または約６である。
【０２０４】
本発明のある実施形態では、溶液（例えば、上記のセクション１．４または１．５で得られた濾液）を、透析濾過によって処理する。
【０２０５】
本発明のある実施形態では、本セクションの上記に開示された限外濾過（ＵＦ）後に得られた溶液を、透析濾過によってさらに処理する（ＵＦ／ＤＦ処理）。
【０２０６】
透析濾過（ＤＦ）は、生成物を、所望の緩衝溶液（または水のみ）中で交換するために使用される。ある実施形態では、透析濾過は、一定の容量下で保持された溶液の化学的特性を変化させるために使用される。望ましくない粒子は膜を通過するが、供給原料流の組成は、置換液（緩衝溶液、塩水溶液、緩衝塩水溶液または水）の添加によって、より望ましい状態に変化する。
【０２０７】
ある実施形態では、置換液は、水である。
【０２０８】
ある実施形態では、置換液は、塩水である。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。一実施形態では、置換液は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭまたは約５００ｍＭの塩化ナトリウムである。１つの特定の実施形態では、置換液は、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭまたは約３００ｍＭの塩化ナトリウムである。
【０２０９】
ある実施形態では、置換液は、緩衝溶液である。ある実施形態では、置換液は、緩衝剤が、Ｎ−（２−アセトアミド）−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、酢酸の塩（酢酸塩）、Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、２−アミノエタンスルホン酸（ＡＥＳ、タウリン）、アンモニア、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（ＡＭＰ）、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ、アメジオール）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ビス−（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、炭酸水素ナトリウム（重炭酸塩）、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−グリシン（ビシン）、［ビス−（２−ヒドロキシエチル）−イミノ］−トリス−（ヒドロキシメチルメタン）（ビス−トリス）、１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］プロパン（ビス−トリス−プロパン）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジル酸塩）、３−（シクロヘキシルアミノ）−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、炭酸ナトリウム（炭酸塩）、シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、３−［Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、グリシン、グリシルグリシン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ、ＥＰＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、イミダゾール、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、２−（Ｎ−モルホリノ）−エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、リン酸の塩（リン酸塩）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、ピリジン、コハク酸の塩（コハク酸塩）、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、２−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン（トリシン）およびトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）からなる群から選択される、緩衝溶液である。
【０２１０】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤は、酢酸の塩（酢酸塩）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤は、クエン酸の塩（クエン酸塩）である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤は、コハク酸の塩（コハク酸塩）である。ある実施形態では、前記塩は、ナトリウム塩である。ある実施形態では、前記塩は、カリウム塩である。
【０２１１】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約４．０〜１１．０、約５．０〜１０．０、約５．５〜９．０、約６．０〜８．０、約６．０〜７．０、約６．５〜７．５、約６．５〜７．０または約６．０〜７．５である。上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２１２】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５、約１０．０、約１０．５または約１１．０である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５または約９．０である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約６．５、約７．０または約７．５である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約７．０である。
【０２１３】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１ｍＭ〜１００ｍＭ、約２ｍＭ〜１００ｍＭ、約３ｍＭ〜１００ｍＭ、約４ｍＭ〜１００ｍＭ、約５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６ｍＭ〜１００ｍＭ、約７ｍＭ〜１００ｍＭ、約８ｍＭ〜１００ｍＭ、約９ｍＭ〜１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜１００ｍＭ、約１１ｍＭ〜１００ｍＭ、約１２ｍＭ〜１００ｍＭ、約１３ｍＭ〜１００ｍＭ、約１４ｍＭ〜１００ｍＭ、約１５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１６ｍＭ〜１００ｍＭ、約１７ｍＭ〜１００ｍＭ、約１８ｍＭ〜１００ｍＭ、約１９ｍＭ〜１００ｍＭ、約２０ｍＭ〜１００ｍＭ、約２５ｍＭ〜１００ｍＭ、約３０ｍＭ〜１００ｍＭ、約３５ｍＭ〜１００ｍＭ、約４０ｍＭ〜１００ｍＭ、約４５ｍＭ〜１００ｍＭ、約５０ｍＭ〜１００ｍＭ、約５５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６０ｍＭ〜１００ｍＭ、約６５ｍＭ〜１００ｍＭ、約７０ｍＭ〜１００ｍＭ、約７５ｍＭ〜１００ｍＭ、約８０ｍＭ〜１００ｍＭ、約８５ｍＭ〜１００ｍＭ、約９０ｍＭ〜１００ｍＭまたは約９５ｍＭ〜１００ｍＭである。
【０２１４】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１ｍＭ〜５０ｍＭ、約２ｍＭ〜５０ｍＭ、約３ｍＭ〜５０ｍＭ、約４ｍＭ〜５０ｍＭ、約５ｍＭ〜５０ｍＭ、約６ｍＭ〜５０ｍＭ、約７ｍＭ〜５０ｍＭ、約８ｍＭ〜５０ｍＭ、約９ｍＭ〜５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜５０ｍＭ、約１１ｍＭ〜５０ｍＭ、約１２ｍＭ〜５０ｍＭ、約１３ｍＭ〜５０ｍＭ、約１４ｍＭ〜５０ｍＭ、約１５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１６ｍＭ〜５０ｍＭ、約１７ｍＭ〜５０ｍＭ、約１８ｍＭ〜５０ｍＭ、約１９ｍＭ〜５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜５０ｍＭ、約３０ｍＭ〜５０ｍＭ、約３５ｍＭ〜５０ｍＭ、約４０ｍＭ〜５０ｍＭ、約４５ｍＭ〜５０ｍＭである。
【０２１５】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１ｍＭ〜２５ｍＭ、約２ｍＭ〜２５ｍＭ、約３ｍＭ〜２５ｍＭ、約４ｍＭ〜２５ｍＭ、約５ｍＭ〜２５ｍＭ、約６ｍＭ〜２５ｍＭ、約７ｍＭ〜２５ｍＭ、約８ｍＭ〜２５ｍＭ、約９ｍＭ〜２５ｍＭ、約１０ｍＭ〜２５ｍＭ、約１１ｍＭ〜２５ｍＭ、約１２ｍＭ〜２５ｍＭ、約１３ｍＭ〜２５ｍＭ、約１４ｍＭ〜２５ｍＭ、約１５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１６ｍＭ〜２５ｍＭ、約１７ｍＭ〜２５ｍＭ、約１８ｍＭ〜２５ｍＭ、約１９ｍＭ〜２５ｍＭまたは約２０ｍＭ〜２５ｍＭである。
【０２１６】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１５ｍＭ、約１ｍＭ〜１５ｍＭ、約２ｍＭ〜１５ｍＭ、約３ｍＭ〜１５ｍＭ、約４ｍＭ〜１５ｍＭ、約５ｍＭ〜１５ｍＭ、約６ｍＭ〜１５ｍＭ、約７ｍＭ〜１５ｍＭ、約８ｍＭ〜１５ｍＭ、約９ｍＭ〜１５ｍＭ、約１０ｍＭ〜１５ｍＭ、約１１ｍＭ〜１５ｍＭ、約１２ｍＭ〜１５ｍＭ、約１３ｍＭ〜１５ｍＭまたは約１４ｍＭ〜１５ｍＭである。
【０２１７】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１０ｍＭ、約１ｍＭ〜１０ｍＭ、約２ｍＭ〜１０ｍＭ、約３ｍＭ〜１０ｍＭ、約４ｍＭ〜１０ｍＭ、約５ｍＭ〜１０ｍＭ、約６ｍＭ〜１０ｍＭ、約７ｍＭ〜１０ｍＭ、約８ｍＭ〜１０ｍＭまたは約９ｍＭ〜１０ｍＭである。
【０２１８】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２１９】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである。
【０２２０】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭである。
【０２２１】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約１０ｍＭである。
【０２２２】
ある実施形態では、置換液は、キレート剤を含む。ある実施形態では、置換液は、ミョウバンキレート剤を含む。一部の実施形態では、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（ＥＤＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＤＰＴＡ−ＯＨ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジプロピオン酸ジヒドロクロリド（ＥＤＤＰ）、エチレンジアミン−テトラキス（メチレンスルホン酸）（ＥＤＴＰＯ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）（ＮＴＰＯ）、イミノ−二酢酸（ＩＤＡ）、ヒドロキシイミノ−二酢酸（ＨＩＤＡ）、ニトリロ−三酢酸（ＮＴＰ）、トリエチレンテトラミン−六酢酸（ＴＴＨＡ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、アルファリポ酸（ＡＬＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、チアミンテトラヒドロフルフリルジスルフィド（ＴＴＦＤ）、ジメルカプロール、ペニシラミン、デフェロキサミン（ＤＦＯＡ）、デフェラシロクス、ホスホネート、クエン酸の塩（クエン酸塩）およびこれらの組合せからなる群から選択される。
【０２２３】
一部の実施形態では、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（ＥＤＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＤＰＴＡ−ＯＨ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、クエン酸の塩（クエン酸塩）およびこれらの組合せからなる群から選択される。
【０２２４】
一部の実施形態では、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である。
【０２２５】
一部の実施形態では、キレート剤は、クエン酸の塩（クエン酸塩）である。一部の実施形態では、キレート剤は、クエン酸ナトリウムである。
【０２２６】
一般に、キレート剤は、１〜５００ｍＭの濃度で用いられる。ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、２〜４００ｍＭである。ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、１０〜４００ｍＭである。ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、１０〜２００ｍＭである。ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、１０〜１００ｍＭである。ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、１０〜５０ｍＭである。ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、１０〜３０ｍＭである。
【０２２７】
ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５または約１００ｍＭである。
【０２２８】
ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである。
【０２２９】
ある実施形態では、置換液中のキレート剤の濃度は、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである。
【０２３０】
ある実施形態では、透析濾過緩衝溶液は、塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。ある実施形態では、透析濾過緩衝溶液は、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０または約５００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。１つの特定の実施形態では、透析濾過緩衝溶液は、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０または約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
【０２３１】
本発明のある実施形態では、透析容量の数は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０である。本発明のある実施形態では、透析容量の数は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３１、約３２、約３３、約３４、約３５、約３６、約３７、約３８、約３９、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５、約４６、約４７、約４８、約４９、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５または約１００である。本発明のある実施形態では、透析容量の数は、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。
【０２３２】
本発明のある実施形態では、限外濾過ステップおよび透析濾過ステップは、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過ステップおよび透析濾過ステップは、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。
【０２３３】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２３４】
ある実施形態では、限外濾過ステップおよび透析濾過ステップは、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過ステップおよび透析濾過ステップは、約５０℃の温度で実施される。
【０２３５】
本発明のある実施形態では、透析濾過ステップは、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される。ある実施形態では、透析濾過ステップは、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。
【０２３６】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２３７】
ある実施形態では、透析濾過ステップは、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される。ある実施形態では、透析濾過ステップは、約５０℃の温度で実施される。
【０２３８】
本発明のある実施形態では、限外濾過ステップは、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過ステップは、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２３９】
ある実施形態では、限外濾過ステップは、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過ステップは、約５０℃の温度で実施される。
【０２４０】
１．７  活性炭濾過
一度、上記のセクション１．２の凝集ステップによって溶液を処理したら、多糖を含有する溶液を、必要に応じて、活性炭濾過ステップによってさらに清澄化することができる。
【０２４１】
ある実施形態では、セクション１．３のステップの固体／液体分離によってさらに処理されたセクション１．３の溶液（例えば、上清）を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄化する。ある実施形態では、上記のセクション１．４に記載の方法のいずれかによって、および／または上記のセクション１．５に記載の濾過ステップによってさらに濾過された溶液を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄化する。ある実施形態では、上記のセクション１．６に記載の限外濾過ステップおよび／または透析濾過ステップによってさらに清澄化された溶液を、活性炭濾過ステップによってさらに清澄化する。
【０２４２】
活性炭濾過のステップは、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のさらなる除去を可能にする（ＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。
【０２４３】
ある実施形態では、活性炭（アクティブチャコールとも呼ばれる）を、タンパク質および核酸の夾雑物の大部分を吸着させるのに十分な量で溶液に添加した後、夾雑物が活性炭上に吸着されたら、それを除去する。ある実施形態では、活性炭を、粉末の形態で、顆粒炭素層として、圧縮炭素ブロックまたは押出し炭素ブロックとして添加する（例えば、Ｎｏｒｉｔのアクティブチャコールを参照されたい）。ある実施形態では、活性炭を、約０．１〜２０％（重量）、１〜１５％（重量）、１〜１０％（重量）、２〜１０％（重量）、３〜１０％（重量）、４〜１０％（重量）、５〜１０％（重量）、１〜５％（重量）または２〜５％（重量）の量で添加する。次いで、混合物を撹拌し、静置する。ある実施形態では、混合物を、約５、１０、１５、２０、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０、２４０分またはそれより長く静置する。次いで、活性炭を除去する。活性炭を、例えば、遠心分離または濾過によって除去することができる。
【０２４４】
好ましい実施形態では、溶液を、マトリックス中に固定された活性炭を介して濾過する。マトリックスは、溶液にとって浸透性の任意の多孔性フィルター媒体であってもよい。マトリックスは、支持材料および／または結合剤材料を含んでもよい。支持材料は、合成ポリマーまたは天然起源のポリマーであってもよい。好適な合成ポリマーは、ポリスチレン、ポリアクリルアミドおよびポリメチルメタクリレートを含んでもよいが、天然起源のポリマーは、セルロース、多糖およびデキストラン、アガロースを含んでもよい。典型的には、ポリマー支持材料は、機械的剛性を提供するための繊維ネットワークの形態にある。結合剤材料は、樹脂であってもよい。マトリックスは、膜シートの形態を有してもよい。ある実施形態では、マトリックス中に固定された活性炭は、フロースルー炭素カートリッジの形態にある。カートリッジは、マトリックス中に固定され、膜シートの形態で調製された粉末状活性炭を含有する自己含有性実体である。膜シートをプラスチック製の浸透性支持体中に捕捉して、ディスクを形成することができる。
【０２４５】
あるいは、膜シートを、らせん状に巻いてもよい。フィルター表面積を増大させるために、いくつかのディスクを互いに積み重ねることができる。特に、互いに積み重ねられたディスクは、フィルターから炭素処理された試料を収集し、除去するための中心コアパイプを有する。積み重ねられたディスクの構成は、レンズ状であってもよい。
【０２４６】
炭素フィルター中の活性炭は、様々な生材料、例えば、泥炭、褐炭、木材またはヤシ殻に由来するものであってもよい。
【０２４７】
蒸気または化学処理などの、当業界で公知の任意のプロセスを使用して、炭を活性化することができる（例えば、木材ベースのリン酸活性炭）。
【０２４８】
本発明では、マトリックス中に固定された活性炭を、筺体中に入れて、独立フィルターユニットを形成させることができる。それぞれのフィルターユニットは、精製しようとする溶液のためのそれ自身の注入口および排水口を有する。本発明において使用可能であるフィルターユニットの例は、Ｃｕｎｏ  Ｉｎｃ．（Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＵＳＡ）またはＰａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌ、ＵＳＡ）からの炭素カートリッジである。特に、ＣＵＮＯ  ｚｅｔａｃａｒｂｏｎフィルターは、本発明における使用にとって好適である。これらの炭素フィルターは、活性炭粉末が所定の位置に捕捉され、樹脂に結合したセルロースマトリックスを含む。
【０２４９】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜１００ミクロン、約０．０５〜１００ミクロン、約０．１〜１００ミクロン、約０．２〜１００ミクロン、約０．３〜１００ミクロン、約０．４〜１００ミクロン、約０．５〜１００ミクロン、約０．６〜１００ミクロン、約０．７〜１００ミクロン、約０．８〜１００ミクロン、約０．９〜１００ミクロン、約１〜１００ミクロン、約１．２５〜１００ミクロン、約１．５〜１００ミクロン、約１．７５〜１００ミクロン、約２〜１００ミクロン、約３〜１００ミクロン、約４〜１００ミクロン、約５〜１００ミクロン、約６〜１００ミクロン、約７〜１００ミクロン、約８〜１００ミクロン、約９〜１００ミクロン、約１０〜１００ミクロン、約１５〜１００ミクロン、約２０〜１００ミクロン、約２５〜１００ミクロン、約３０〜１００ミクロン、約４０〜１００ミクロン、約５０〜１００ミクロンまたは約７５〜１００ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５０】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜５０ミクロン、約０．０５〜５０ミクロン、約０．１〜５０ミクロン、約０．２〜５０ミクロン、約０．３〜５０ミクロン、約０．４〜５０ミクロン、約０．５〜５０ミクロン、約０．６〜５０ミクロン、約０．７〜５０ミクロン、約０．８〜５０ミクロン、約０．９〜５０ミクロン、約１〜５０ミクロン、約１．２５〜５０ミクロン、約１．５〜５０ミクロン、約１．７５〜５０ミクロン、約２〜５０ミクロン、約３〜５０ミクロン、約４〜５０ミクロン、約５〜５０ミクロン、約６〜５０ミクロン、約７〜５０ミクロン、約８〜５０ミクロン、約９〜５０ミクロン、約１０〜５０ミクロン、約１５〜５０ミクロン、約２０〜５０ミクロン、約２５〜５０ミクロン、約３０〜５０ミクロン、約４０〜５０ミクロンまたは約５０〜５０ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５１】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜２５ミクロン、約０．０５〜２５ミクロン、約０．１〜２５ミクロン、約０．２〜２５ミクロン、約０．３〜２５ミクロン、約０．４〜２５ミクロン、約０．５〜２５ミクロン、約０．６〜２５ミクロン、約０．７〜２５ミクロン、約０．８〜２５ミクロン、約０．９〜２５ミクロン、約１〜２５ミクロン、約１．２５〜２５ミクロン、約１．５〜２５ミクロン、約１．７５〜２５ミクロン、約２〜２５ミクロン、約３〜２５ミクロン、約４〜２５ミクロン、約５〜２５ミクロン、約６〜２５ミクロン、約７〜２５ミクロン、約８〜２５ミクロン、約９〜２５ミクロン、約１０〜２５ミクロン、約１５〜２５ミクロンまたは約２０〜２５ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５２】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜１０ミクロン、約０．０５〜１０ミクロン、約０．１〜１０ミクロン、約０．２〜１０ミクロン、約０．３〜１０ミクロン、約０．４〜１０ミクロン、約０．５〜１０ミクロン、約０．６〜１０ミクロン、約０．７〜１０ミクロン、約０．８〜１０ミクロン、約０．９〜１０ミクロン、約１〜１０ミクロン、約１．２５〜１０ミクロン、約１．５〜１０ミクロン、約１．７５〜１０ミクロン、約２〜１０ミクロン、約３〜１０ミクロン、約４〜１０ミクロン、約５〜１０ミクロン、約６〜１０ミクロン、約７〜１０ミクロン、約８〜１０ミクロンまたは約９〜１０ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５３】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜８ミクロン、約０．０５〜８ミクロン、約０．１〜８ミクロン、約０．２〜８ミクロン、約０．３〜８ミクロン、約０．４〜８ミクロン、約０．５〜８ミクロン、約０．６〜８ミクロン、約０．７〜８ミクロン、約０．８〜８ミクロン、約０．９〜８ミクロン、約１〜８ミクロン、約１．２５〜８ミクロン、約１．５〜８ミクロン、約１．７５〜８ミクロン、約２〜８ミクロン、約３〜８ミクロン、約４〜８ミクロン、約５〜８ミクロン、約６〜８ミクロンまたは約７〜８ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５４】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜５ミクロン、約０．０５〜５ミクロン、約０．１〜５ミクロン、約０．２〜５ミクロン、約０．３〜５ミクロン、約０．４〜５ミクロン、約０．５〜５ミクロン、約０．６〜５ミクロン、約０．７〜５ミクロン、約０．８〜５ミクロン、約０．９〜５ミクロン、約１〜５ミクロン、約１．２５〜５ミクロン、約１．５〜５ミクロン、約１．７５〜５ミクロン、約２〜５ミクロン、約３〜５ミクロンまたは約４〜５ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５５】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、約１．７５〜２ミクロン、約２〜２ミクロン、約３〜２ミクロンまたは約４〜２ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５６】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５７】
ある実施形態では、上記に開示された活性炭フィルターは、約０．０５〜５０ミクロン、０．１〜２５ミクロン、０．２〜１０ミクロン、０．１〜１０ミクロン、０．２〜５ミクロンまたは０．２５〜１ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する。
【０２５８】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２５９】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップは、１〜５００ＬＭＨ、１０〜５００ＬＭＨ、１５〜５００ＬＭＨ、２０〜５００ＬＭＨ、２５〜５００ＬＭＨ、３０〜５００ＬＭＨ、４０〜５００ＬＭＨ、５０〜５００ＬＭＨ、１００〜５００ＬＭＨ、１２５〜５００ＬＭＨ、１５０〜５００ＬＭＨ、２００〜５００ＬＭＨ、２５０〜５００ＬＭＨ、３００〜５００ＬＭＨまたは４００〜５００ＬＭＨの供給速度で行われる。
【０２６０】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップは、１〜２００ＬＭＨ、１０〜２００ＬＭＨ、１５〜２００ＬＭＨ、２０〜２００ＬＭＨ、２５〜２００ＬＭＨ、３０〜２００ＬＭＨ、４０〜２００ＬＭＨ、５０〜２００ＬＭＨ、１００〜２００ＬＭＨ、１２５〜２００ＬＭＨまたは１５０〜２００ＬＭＨの供給速度で行われる。
【０２６１】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップは、１〜１５０ＬＭＨ、１０〜１５０ＬＭＨ、１５〜１５０ＬＭＨ、２０〜１５０ＬＭＨ、２５〜１５０ＬＭＨ、３０〜１５０ＬＭＨ、４０〜１５０ＬＭＨ、５０〜１５０ＬＭＨ、１００〜１５０ＬＭＨまたは１２５〜１５０ＬＭＨの供給速度で行われる。
【０２６２】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップは、１〜１００ＬＭＨ、１０〜１００ＬＭＨ、１５〜１００ＬＭＨ、２０〜１００ＬＭＨ、２５〜１００ＬＭＨ、３０〜１００ＬＭＨ、４０〜１００ＬＭＨ、または５０〜１００ＬＭＨの供給速度で行われる。
【０２６３】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップは、１〜７５ＬＭＨ、５〜７５ＬＭＨ、１０〜７５ＬＭＨ、１５〜７５ＬＭＨ、２０〜７５ＬＭＨ、２５〜７５ＬＭＨ、３０〜７５ＬＭＨ、３５〜７５ＬＭＨ、４０〜７５ＬＭＨ、４５〜７５ＬＭＨ、５０〜７５ＬＭＨ、５５〜７５ＬＭＨ、６０〜７５ＬＭＨ、６５〜７５ＬＭＨ，または７０〜７５ＬＭＨの供給速度で行われる。
【０２６４】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップは、１〜５０ＬＭＨ、５〜５０ＬＭＨ、７〜５０ＬＭＨ、１０〜５０ＬＭＨ、１５〜５０ＬＭＨ、２０〜５０ＬＭＨ、２５〜５０ＬＭＨ、３０〜５０ＬＭＨ、３５〜５０ＬＭＨ、４０〜５０ＬＭＨまたは４５〜５０ＬＭＨの供給速度で行われる。
【０２６５】
上記の範囲のいずれかの中の任意の全数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２６６】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップは、約１、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２２５、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約７００、約８００、約９００、約９５０または約１０００ＬＭＨの供給速度で行われる。
【０２６７】
ある実施形態では、フィルターが、５〜１０００Ｌ／ｍ２、１０〜７５０Ｌ／ｍ２、１５〜５００Ｌ／ｍ２、２０〜４００Ｌ／ｍ２、２５〜３００Ｌ／ｍ２、３０〜２５０Ｌ／ｍ２、４０〜２００Ｌ／ｍ２または３０〜１００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する活性炭フィルターによって、溶液を処理する。
【０２６８】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２６９】
ある実施形態では、フィルターが約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２２５、約２５０、約２７５、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、または約１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する活性炭フィルターによって、溶液を処理する。
【０２７０】
夾雑物の含量が、１回目の活性炭濾過ステップの後に固定閾値よりも上である場合、前記ステップを反復してもよい。本発明のある実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回の活性炭濾過ステップを実施する。本発明のある実施形態では、１、２、または３回の活性炭濾過ステップを実施する。本発明のある実施形態では、１または２回の活性炭濾過ステップを実施する。
【０２７１】
ある実施形態では、溶液を、活性炭フィルターによって連続的に処理する。ある実施形態では、溶液を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の活性炭フィルターによって連続的に処理する。ある実施形態では、溶液を、２、３、４または５個の活性炭フィルターによって連続的に処理する。ある実施形態では、溶液を、２個の活性炭フィルターによって連続的に処理する。ある実施形態では、溶液を、３個の活性炭フィルターによって連続的に処理する。ある実施形態では、溶液を、４個の活性炭フィルターによって連続的に処理する。ある実施形態では、溶液を、５個の活性炭フィルターによって連続的に処理する。
【０２７２】
ある実施形態では、活性炭濾過ステップを、１回通過モードで実施する。
【０２７３】
別の実施形態では、活性炭濾過ステップを、再循環モードで実施する。前記実施形態（再循環モード）では、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０サイクルの活性炭濾過を実施する。別の実施形態では、２、３、４、５、６、７、８、９または１０サイクルの活性炭濾過を実施する。ある実施形態では、２または３サイクルの活性炭濾過を実施する。ある実施形態では、２サイクルの活性炭濾過を実施する。
【０２７４】
１．８  任意選択のさらなる濾過
一度、上記のセクション１．７の活性炭ステップによって溶液を処理したら、得られた溶液（すなわち、濾液）を、必要に応じてさらに濾過することができる。
【０２７５】
ある実施形態では、溶液を、精密濾過にかける。ある実施形態では、精密濾過は、デッドエンド濾過（垂直濾過）である。
【０２７６】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．４５〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、または約１．７５〜２ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２７７】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．４５〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２７８】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２７９】
ある実施形態では、フィルターが約０．０１、約０．０５、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．４５、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９または約２．０ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２８０】
ある実施形態では、フィルターが約０．２ミクロンの名目保持範囲を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２８１】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜６０００Ｌ／ｍ２、２００〜６０００Ｌ／ｍ２、３００〜６０００Ｌ／ｍ２、４００〜６０００Ｌ／ｍ２、５００〜６０００Ｌ／ｍ２、７５０〜６０００Ｌ／ｍ２、１０００〜６０００Ｌ／ｍ２、１５００〜６０００Ｌ／ｍ２、２０００〜６０００Ｌ／ｍ２、３０００〜６０００Ｌ／ｍ２または４０００〜６０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２８２】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜４０００Ｌ／ｍ２、２００〜４０００Ｌ／ｍ２、３００〜４０００Ｌ／ｍ２、４００〜４０００Ｌ／ｍ２、５００〜４０００Ｌ／ｍ２、７５０〜４０００Ｌ／ｍ２、１０００〜４０００Ｌ／ｍ２、１５００〜４０００Ｌ／ｍ２、２０００〜４０００Ｌ／ｍ２、２５００〜４０００Ｌ／ｍ２、３０００〜４０００Ｌ／ｍ２、３０００〜４０００Ｌ／ｍ２または３５００〜４０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２８３】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜３７５０Ｌ／ｍ２、２００〜３７５０Ｌ／ｍ２、３００〜３７５０Ｌ／ｍ２、４００〜３７５０Ｌ／ｍ２、５００〜３７５０Ｌ／ｍ２、７５０〜３７５０Ｌ／ｍ２、１０００〜３７５０Ｌ／ｍ２、１５００〜３７５０Ｌ／ｍ２、２０００〜３７５０Ｌ／ｍ２、２５００〜３７５０Ｌ／ｍ２、３０００〜３７５０Ｌ／ｍ２、３０００〜３７５０Ｌ／ｍ２または３５００〜３７５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２８４】
ある実施形態では、フィルターが、１００〜１２５０Ｌ／ｍ２、２００〜１２５０Ｌ／ｍ２、３００〜１２５０Ｌ／ｍ２、４００〜１２５０Ｌ／ｍ２、５００〜１２５０Ｌ／ｍ２、７５０〜１２５０Ｌ／ｍ２または１０００〜１２５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２８５】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０２８６】
ある実施形態では、フィルターが約１００、約２００、約３００、約４００、約５５０、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１１００、約１２００、約１３００、約１４００、約１５００、約１６００、約１７００、約１８００、約１９００、約２０００、約２１００、約２２００、約２３００、約２４００、約２５００、約２６００、約２７００、約２８００、約２９００、約３０００、約３１００、約３２００、約３３００、約３４００、約３５００、約３６００、約３７００、約３８００、約３９００、約４０００、約４１００、約４２００、約４３００、約４４００、約４５００、約４６００、約４７００、約４８００、約４９００、約５０００、約５２５０、約５５００、約５７５０または約６０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０２８７】
１．９  限外濾過／透析濾過
一度、上記のセクション１．７に記載の活性炭濾過ステップによって、および／または上記のセクション１．８に記載のさらなる濾過ステップによって溶液を処理したら、得られた溶液（すなわち、濾液）を、必要に応じて、限外濾過および／または透析濾過によってさらに清澄化してもよい。
【０２８８】
本発明のある実施形態では、溶液（例えば、上記のセクション１．７または１．８で得られたもの）を、限外濾過によって処理する。
【０２８９】
ある実施形態では、限外濾過によって溶液を処理し、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜７５０ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜５０ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約１０ｋＤａ〜３０ｋＤａの範囲にある。ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜１０００ｋＤａまたは約７５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある。
【０２９０】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜５００ｋＤａまたは約４００ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある。
【０２９１】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜３００ｋＤａまたは約２００ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲にある。
【０２９２】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１００ｋＤａまたは約７５ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある。
【０２９３】
ある実施形態では、膜の分子量カットオフは、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約７５０ｋＤａまたは約１０００ｋＤａである。
【０２９４】
ある実施形態では、限外濾過ステップの濃縮係数は、約１．５〜１０．０である。ある実施形態では、濃縮係数は、約２．０〜８．０である。ある実施形態では、濃縮係数は、約２．０〜５．０である。
【０２９５】
ある実施形態では、濃縮係数は、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５または約１０．０である。ある実施形態では、濃縮係数は、約２．０、約３．０、約４．０、約５．０または約６．０である。
【０２９６】
本発明の実施形態では、溶液（例えば、上記のセクション１．７または１．８で得られた濾液）を、透析濾過によって処理する。
【０２９７】
本発明の実施形態では、本セクションの上記に開示された限外濾過（ＵＦ）後に得られた溶液を、透析濾過によってさらに処理する（ＵＦ／ＤＦ処理）。
【０２９８】
透析濾過（ＤＦ）は、生成物を、所望の緩衝溶液（または水のみ）中で交換するために使用される。ある実施形態では、透析濾過は、一定の容量下で保持された溶液の化学的特性を変化させるために使用される。望ましくない粒子は膜を通過するが、供給原料流の組成は、置換液（緩衝溶液、塩水溶液、緩衝塩水溶液または水）の添加によって、より望ましい状態に変化する。
【０２９９】
ある実施形態では、置換液は、水である。
【０３００】
ある実施形態では、置換液は、塩水である。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。ある実施形態では、置換液は、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０または約５００ｍＭの塩化ナトリウムである。１つの特定の実施形態では、置換液は、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０またはまたは約３００ｍＭの塩化ナトリウムである。１つの特定の実施形態では、置換液は、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０または約１００ｍＭの塩化ナトリウムである。
【０３０１】
ある実施形態では、置換液は、緩衝溶液である。ある実施形態では、置換液は、緩衝剤が、Ｎ−（２−アセトアミド）−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、酢酸の塩（酢酸塩）、Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、２−アミノエタンスルホン酸（ＡＥＳ、タウリン）、アンモニア、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（ＡＭＰ）、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ、アメジオール）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ビス−（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、炭酸水素ナトリウム（重炭酸塩）、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−グリシン（ビシン）、［ビス−（２−ヒドロキシエチル）−イミノ］−トリス−（ヒドロキシメチルメタン）（ビス−トリス）、１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］プロパン（ビス−トリス−プロパン）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジル酸塩）、３−（シクロヘキシルアミノ）−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、炭酸ナトリウム（炭酸塩）、シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、３−［Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、グリシン、グリシルグリシン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ、ＥＰＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、イミダゾール、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、２−（Ｎ−モルホリノ）−エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、リン酸の塩（リン酸塩）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、ピリジン、コハク酸の塩（コハク酸塩）、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、２−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン（トリシン）およびトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）からなる群から選択される、緩衝溶液である。
【０３０２】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤は、酢酸の塩（酢酸塩）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤は、クエン酸の塩（クエン酸塩）である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤は、コハク酸の塩（コハク酸塩）である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤は、リン酸の塩（リン酸塩）である。ある実施形態では、前記塩は、ナトリウム塩である。ある実施形態では、前記塩は、カリウム塩である。
【０３０３】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約４．０〜１１．０、約５．０〜１０．０、約５．５〜９．０、約６．０〜８．０、約６．０〜７．０、約６．５〜７．５、約６．５〜７．０または約６．０〜７．５である。上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３０４】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５、約１０．０、約１０．５または約１１．０である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５または約９．０である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約６．５、約７．０または約７．５である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約６．０である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約６．５である。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤のｐＨは、約７．０である。
【０３０５】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１ｍＭ〜１００ｍＭ、約２ｍＭ〜１００ｍＭ、約３ｍＭ〜１００ｍＭ、約４ｍＭ〜１００ｍＭ、約５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６ｍＭ〜１００ｍＭ、約７ｍＭ〜１００ｍＭ、約８ｍＭ〜１００ｍＭ、約９ｍＭ〜１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜１００ｍＭ、約１１ｍＭ〜１００ｍＭ、約１２ｍＭ〜１００ｍＭ、約１３ｍＭ〜１００ｍＭ、約１４ｍＭ〜１００ｍＭ、約１５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１６ｍＭ〜１００ｍＭ、約１７ｍＭ〜１００ｍＭ、約１８ｍＭ〜１００ｍＭ、約１９ｍＭ〜１００ｍＭ、約２０ｍＭ〜１００ｍＭ、約２５ｍＭ〜１００ｍＭ、約３０ｍＭ〜１００ｍＭ、約３５ｍＭ〜１００ｍＭ、約４０ｍＭ〜１００ｍＭ、約４５ｍＭ〜１００ｍＭ、約５０ｍＭ〜１００ｍＭ、約５５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６０ｍＭ〜１００ｍＭ、約６５ｍＭ〜１００ｍＭ、約７０ｍＭ〜１００ｍＭ、約７５ｍＭ〜１００ｍＭ、約８０ｍＭ〜１００ｍＭ、約８５ｍＭ〜１００ｍＭ、約９０ｍＭ〜１００ｍＭまたは約９５ｍＭ〜１００ｍＭである。
【０３０６】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１ｍＭ〜５０ｍＭ、約２ｍＭ〜５０ｍＭ、約３ｍＭ〜５０ｍＭ、約４ｍＭ〜５０ｍＭ、約５ｍＭ〜５０ｍＭ、約６ｍＭ〜５０ｍＭ、約７ｍＭ〜５０ｍＭ、約８ｍＭ〜５０ｍＭ、約９ｍＭ〜５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜５０ｍＭ、約１１ｍＭ〜５０ｍＭ、約１２ｍＭ〜５０ｍＭ、約１３ｍＭ〜５０ｍＭ、約１４ｍＭ〜５０ｍＭ、約１５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１６ｍＭ〜５０ｍＭ、約１７ｍＭ〜５０ｍＭ、約１８ｍＭ〜５０ｍＭ、約１９ｍＭ〜５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜５０ｍＭ、約３０ｍＭ〜５０ｍＭ、約３５ｍＭ〜５０ｍＭ、約４０ｍＭ〜５０ｍＭ、約４５ｍＭ〜５０ｍＭである。
【０３０７】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１ｍＭ〜２５ｍＭ、約２ｍＭ〜２５ｍＭ、約３ｍＭ〜２５ｍＭ、約４ｍＭ〜２５ｍＭ、約５ｍＭ〜２５ｍＭ、約６ｍＭ〜２５ｍＭ、約７ｍＭ〜２５ｍＭ、約８ｍＭ〜２５ｍＭ、約９ｍＭ〜２５ｍＭ、約１０ｍＭ〜２５ｍＭ、約１１ｍＭ〜２５ｍＭ、約１２ｍＭ〜２５ｍＭ、約１３ｍＭ〜２５ｍＭ、約１４ｍＭ〜２５ｍＭ、約１５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１６ｍＭ〜２５ｍＭ、約１７ｍＭ〜２５ｍＭ、約１８ｍＭ〜２５ｍＭ、約１９ｍＭ〜２５ｍＭまたは約２０ｍＭ〜２５ｍＭである。
【０３０８】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１５ｍＭ、約１ｍＭ〜１５ｍＭ、約２ｍＭ〜１５ｍＭ、約３ｍＭ〜１５ｍＭ、約４ｍＭ〜１５ｍＭ、約５ｍＭ〜１５ｍＭ、約６ｍＭ〜１５ｍＭ、約７ｍＭ〜１５ｍＭ、約８ｍＭ〜１５ｍＭ、約９ｍＭ〜１５ｍＭ、約１０ｍＭ〜１５ｍＭ、約１１ｍＭ〜１５ｍＭ、約１２ｍＭ〜１５ｍＭ、約１３ｍＭ〜１５ｍＭまたは約１４ｍＭ〜１５ｍＭである。
【０３０９】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１０ｍＭ、約１ｍＭ〜１０ｍＭ、約２ｍＭ〜１０ｍＭ、約３ｍＭ〜１０ｍＭ、約４ｍＭ〜１０ｍＭ、約５ｍＭ〜１０ｍＭ、約６ｍＭ〜１０ｍＭ、約７ｍＭ〜１０ｍＭ、約８ｍＭ〜１０ｍＭまたは約９ｍＭ〜１０ｍＭである。
【０３１０】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３１１】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである。
【０３１２】
ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭである。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約３０ｍＭである。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約２５ｍＭである。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約２０ｍＭである。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約１５ｍＭである。ある実施形態では、透析濾過緩衝剤の濃度は、約１０ｍＭである。
【０３１３】
ある実施形態では、透析濾過緩衝溶液は、塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。１つの特定の実施形態では、透析濾過緩衝溶液は、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０または約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
【０３１４】
本発明の実施形態では、透析容量の数は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０である。本発明の実施形態では、透析容量の数は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３１、約３２、約３３、約３４、約３５、約３６、約３７、約３８、約３９、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５、約４６、約４７、約４８、約４９、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５または約１００である。本発明の実施形態では、透析容量の数は、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。
【０３１５】
本発明の実施形態では、限外濾過および透析濾過ステップは、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過および透析濾過ステップは、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３１６】
ある実施形態では、限外濾過および透析濾過ステップは、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過および透析濾過ステップは、約５０℃の温度で実施される。
【０３１７】
本発明の実施形態では、透析濾過ステップは、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される。ある実施形態では、透析濾過ステップは、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３１８】
ある実施形態では、透析濾過ステップは、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される。ある実施形態では、透析濾過ステップは、約５０℃の温度で実施される。
【０３１９】
ある実施形態では、限外濾過ステップは、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過ステップは、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される。上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３２０】
ある実施形態では、限外濾過ステップは、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される。ある実施形態では、限外濾過ステップは、約５０℃の温度で実施される。
【０３２１】
１．１０  ホモジナイゼーション／サイジング
多糖は、精製手順の間にサイズがわずかに減少するようになってもよい。
【０３２２】
ある実施形態では、本発明の精製された多糖の溶液（例えば、セクション１．９に記載の限外濾過および／または透析濾過によって得られた）は、サイジングされない。
【０３２３】
ある実施形態では、多糖を、サイジング技術によってホモジナイズすることができる。機械的または化学的サイジングを用いることができる。化学的加水分解を、例えば、酢酸を使用して行うことができる。機械的サイジングを、高圧ホモジナイゼーション剪断を使用して行うことができる。
【０３２４】
したがって、ある実施形態では、セクション１．９に記載の限外濾過および／または透析濾過によって得られた精製された多糖の溶液を、標的分子量にサイジングする。
【０３２５】
本明細書で使用される場合、多糖の「分子量」という用語は、例えば、多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって計算される分子量を指す。
【０３２６】
一部の実施形態では、精製された多糖は、約５ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる。他のそのような実施形態では、精製された多糖は、約１０ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる。他のそのような実施形態では、精製された多糖は、約５０ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる。さらなるそのような実施形態では、精製された多糖は、約５０ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約２，２５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約２，２５０ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；または約２００ｋＤａ〜約５００ｋＤａの分子量にサイジングされる。さらなるそのような実施形態では、精製された多糖は、約２５０ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約３００ｋＤａおよび約３，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａおよび約２，５００ｋＤａ；約３００ｋＤａおよび約２，２５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約２，２５０ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；または約５００ｋＤａ〜約６００ｋＤａの分子量にサイジングされる。
【０３２７】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３２８】
一部の実施形態では、精製された多糖は、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約７５ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約３５０ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約４５０ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約５５０ｋＤａ、約６００ｋＤａ、約６５０ｋＤａ、約７００ｋＤａ、約７５０ｋＤａ、約８００ｋＤａ、約８５０ｋＤａ、約９００ｋＤａ、約９５０ｋＤａ、約１０００ｋＤａ、約１２５０ｋＤａ、約１５００ｋＤａ、約１７５０ｋＤａ、約２０００ｋＤａ、約２２５０ｋＤａ、約２５００ｋＤａ、約２７５０ｋＤａ、約３０００ｋＤａ、約３２５０ｋＤａ、約３５００ｋＤａ、約３７５０ｋＤａまたは約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる。
【０３２９】
好ましい実施形態では、精製された多糖類は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆまたは３３Ｆに由来する莢膜多糖であり、莢膜多糖は、上記の範囲の１つの中にあるか、またはおよその上記のサイズを有する分子量を有する。
【０３３０】
１．１１  滅菌濾過
ある実施形態では、本発明の精製された多糖の溶液は、滅菌濾過される。
【０３３１】
したがって、ある実施形態では、セクション１．９に記載の限外濾過および／または透析濾過の後、必要に応じて、滅菌濾過ステップを行ってもよい。
【０３３２】
ある実施形態では、セクション１．１０に記載のホモジナイゼーション／サイジングステップが行われる場合、その後、必要に応じて、滅菌濾過ステップを行ってもよい。
【０３３３】
ある実施形態では、セクション１．２〜１．８に記載のステップのいずれかの後、必要に応じて、滅菌濾過ステップを行ってもよい。
【０３３４】
ある実施形態では、滅菌濾過は、デッドエンド濾過（垂直濾過）である。ある実施形態では、滅菌濾過は、接線流濾過である。
【０３３５】
ある実施形態では、フィルターが、約０．０１〜０．２ミクロン、約０．０５〜０．２ミクロン、約０．１〜０．２ミクロンまたは約０．１５〜０．２ミクロンの名目保持範囲を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３３６】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３３７】
ある実施形態では、フィルターが約０．０５、約０．１、約０．１５または約０．２ミクロンの名目保持範囲を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３３８】
ある実施形態では、フィルターが約０．２ミクロンの名目保持範囲を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３３９】
ある実施形態では、フィルターが、約２５〜１５００Ｌ／ｍ２、５０〜１５００Ｌ／ｍ２、７５〜１５００Ｌ／ｍ２、１００〜１５００Ｌ／ｍ２、１５０〜１５００Ｌ／ｍ２、２００〜１５００Ｌ／ｍ２、２５０〜１５００Ｌ／ｍ２、３００〜１５００Ｌ／ｍ２、３５０〜１５００Ｌ／ｍ２、４００〜１５００Ｌ／ｍ２、５００〜１５００Ｌ／ｍ２、７５０〜１５００Ｌ／ｍ２、１０００〜１５００Ｌ／ｍ２または１２５０〜１５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３４０】
ある実施形態では、フィルターが、約２５〜１０００Ｌ／ｍ２、５０〜１０００Ｌ／ｍ２、７５〜１０００Ｌ／ｍ２、１００〜１０００Ｌ／ｍ２、１５０〜１０００Ｌ／ｍ２、２００〜１０００Ｌ／ｍ２、２５０〜１０００Ｌ／ｍ２、３００〜１０００Ｌ／ｍ２、３５０〜１０００Ｌ／ｍ２、４００〜１０００Ｌ／ｍ２、５００〜１０００Ｌ／ｍ２または７５０〜１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３４１】
ある実施形態では、フィルターが、２５〜５００Ｌ／ｍ２、５０〜５００Ｌ／ｍ２、７５〜５００Ｌ／ｍ２、１００〜５００Ｌ／ｍ２、１５０〜５００Ｌ／ｍ２、２００〜５００Ｌ／ｍ２、２５０〜５００Ｌ／ｍ２、３００〜５００Ｌ／ｍ２、３５０〜５００Ｌ／ｍ２または４００〜５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３４２】
ある実施形態では、フィルターが、２５〜３００Ｌ／ｍ２、５０〜３００Ｌ／ｍ２、７５〜３００Ｌ／ｍ２、１００〜３００Ｌ／ｍ２、１５０〜３００Ｌ／ｍ２、２００〜３００Ｌ／ｍ２または２５０〜３００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３４３】
ある実施形態では、フィルターが、２５〜２５０Ｌ／ｍ２、５０〜２５０Ｌ／ｍ２、７５〜２５０Ｌ／ｍ２、１００〜２５０Ｌ／ｍ２、または１５０〜２５０Ｌ／ｍ２、２００〜２５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３４４】
ある実施形態では、フィルターが、２５〜１００Ｌ／ｍ２、５０〜１００Ｌ／ｍ２または７５〜１００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する滅菌濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３４５】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３４６】
ある実施形態では、フィルターが約２５、約５０、約７５、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１１００、約１２００、約１３００、約１４００または約１５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する精密濾過ステップによって、溶液を処理する。
【０３４７】
１．１２  最終材料
多糖を、最終的に液体溶液として調製することができる。
【０３４８】
多糖を、さらにプロセシングすることができる（例えば、乾燥粉末として凍結乾燥する、ＷＯ２００６／１１０３８１を参照されたい）。したがって、ある実施形態では、多糖は、乾燥粉末である。
【０３４９】
ある実施形態では、多糖は、凍結乾燥ケーキである。
【０３５０】
２  精製された多糖類の使用
本発明の方法によって精製された多糖を、抗原として使用することができる。プレーン多糖類を、ワクチンにおける抗原として使用する（２３価非コンジュゲート化肺炎球菌多糖ワクチンＰｎｅｕｍｏｖａｘを参照されたい）。
【０３５１】
本発明の方法によって精製された多糖を、担体タンパク質にコンジュゲートして、糖コンジュゲートを得ることもできる。
【０３５２】
２．１  糖コンジュゲート
本発明の方法によって精製された多糖を、担体タンパク質にコンジュゲートして、糖コンジュゲートを得ることができる。
【０３５３】
本発明の目的のために、用語「糖コンジュゲート」は、担体タンパク質に共有的に連結された糖を示す。一実施形態では、糖は、担体タンパク質に直接連結される。第２の実施形態では、糖は、スペーサー／リンカーを介して担体タンパク質に連結される。
【０３５４】
一般に、糖類の担体への共有的コンジュゲーションは、それが、それらをＴ細胞非依存的抗原からＴ細胞依存的抗原に変換するため、糖類の免疫原性を増強し、かくして、免疫記憶のプライミングを可能にする。コンジュゲーションは、特に、小児用ワクチンにとって有用である。
【０３５５】
本発明の方法によって精製された多糖類を活性化（例えば、化学的に活性化）して、それらが反応することができるように（例えば、リンカーを用いて、または担体タンパク質を用いて直接的に）した後、本明細書にさらに記載されるように、糖コンジュゲート中に組み込むことができる。
【０３５６】
精製された多糖を、例えば、上記のセクション１．１１に開示された方法によって、コンジュゲーションの前に標的分子量にサイジングすることができる。したがって、ある実施形態では、精製された多糖は、コンジュゲーションの前にサイジングされる。ある実施形態では、本明細書に開示される精製された多糖を、コンジュゲーションの前にサイジングして、オリゴ糖を得ることができる。オリゴ糖は、少数の反復単位（典型的には、５〜１５の反復単位）を有し、典型的には、多糖のサイジング（例えば、加水分解）によって誘導される。
【０３５７】
しかし好ましくは、コンジュゲーションのために使用される糖は、多糖である。高分子量の多糖類は、抗原性表面上に存在するエピトープのため、ある特定の抗体免疫応答を誘導することができる。高分子量の多糖類の単離および精製は、好ましくは、本発明のコンジュゲートにおける使用のために企図される。
【０３５８】
したがって、ある実施形態では、多糖は、サイジングされるが、多糖のままである。
【０３５９】
ある実施形態では、多糖は、サイジングされない。
【０３６０】
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の精製された多糖（サイジング後またはサイジングされない）は、５ｋＤａ〜４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、精製された多糖は、１０ｋＤａ〜４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、精製された多糖は、５０ｋＤａ〜４，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、多糖は、５０ｋＤａ〜３，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ〜３，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ〜２，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ〜１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ〜１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ〜１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ〜７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜４，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜３，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜２，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ〜１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ〜７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ〜５００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜４，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜３，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜２，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜２，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ〜１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ〜７５０ｋＤａ；または２００ｋＤａ〜５００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、多糖は、２５０ｋＤａ〜３，５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜３，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜２，５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜１，７５０ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜１，２５０ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜７５０ｋＤａ；２５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜４，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜３，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜３，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜２，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜２，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ〜１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ〜７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ〜５００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜３，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜２，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ〜１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ〜１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ〜７５０ｋＤａ；または５００ｋＤａ〜６００ｋＤａの分子量を有する。
【０３６１】
上記の範囲のいずれかの中の任意の数が、本開示の実施形態として企図される。
【０３６２】
一部の実施形態では、精製された多糖は、約５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、２５ｋＤａ、３０ｋＤａ、３５ｋＤａ、４０ｋＤａ、４５ｋＤａ、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、９０ｋＤａ、１００ｋＤａ、１５０ｋＤａ、２００ｋＤａ、２５０ｋＤａ、３００ｋＤａ、３５０ｋＤａ、４００ｋＤａ、４５０ｋＤａ、５００ｋＤａ、５５０ｋＤａ、６００ｋＤａ、６５０ｋＤａ、７００ｋＤａ、７５０ｋＤａ、８００ｋＤａ、８５０ｋＤａ、９００ｋＤａ、９５０ｋＤａ、１０００ｋＤａ、１２５０ｋＤａ、１５００ｋＤａ、１７５０ｋＤａ、２０００ｋＤａ、２２５０ｋＤａ、２５００ｋＤａ、２７５０ｋＤａ、３０００ｋＤａ、３２５０ｋＤａ、３５００ｋＤａ、３７５０ｋＤａまたは４，０００ｋＤａの分子量を有する。
【０３６３】
ある実施形態では、精製された多糖は、莢膜糖（多糖またはオリゴ糖）である。
【０３６４】
ある実施形態では、精製された多糖は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）５型または８型莢膜多糖である。
【０３６５】
さらなる実施形態では、精製された多糖は、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、ｂ型ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）に由来する莢膜多糖である。
【０３６６】
さらなる実施形態では、精製された多糖は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ１３５）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ（ＭｅｎＸ）または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）に由来する莢膜多糖である。
【０３６７】
さらなる実施形態では、精製された多糖は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、腸管毒素産生性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＴＥＣ）、病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＰＥＣ）、腸管出血性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）−Ｏ１５７：Ｈ７（ＥＨＥＣ）、または腸管細胞侵入性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＩＥＣ）などの腸毒性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）部分に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、尿路病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＵＰＥＣ）に由来する莢膜多糖である。
【０３６８】
ある実施形態では、精製された多糖は、血清型Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ２６：Ｈ１１、Ｏ１１１：Ｈ−およびＯ１０３：Ｈ２からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、血清型Ｏ６：Ｋ２：Ｈ１およびＯ１８：Ｋ１：Ｈ７からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、血清型Ｏ４５：Ｋ１、Ｏ１７：Ｋ５２：Ｈ１８、Ｏ１９：Ｈ３４およびＯ７：Ｋ１からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１０４：Ｈ４に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１：Ｋ１２：Ｈ７に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１２７：Ｈ６に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１３９：Ｈ２８に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１２８：Ｈ２に由来する莢膜多糖である。
【０３６９】
さらなる実施形態では、精製された多糖は、溶血性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ））に由来する莢膜多糖である。一部の実施形態では、精製された多糖は、ＧＢＳ  Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ型の莢膜多糖類からなる群から選択される莢膜多糖である。一部の実施形態では、精製された多糖は、ＧＢＳ  Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＶ型の莢膜多糖類からなる群から選択される莢膜多糖である。
【０３７０】
好ましい実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する莢膜多糖である。ある実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型５に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｖに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１４に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉ��ｅ）血清型１５Ｃに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０Ａに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０Ｂに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２４Ｂに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２４Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２９に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆに由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７２に由来する莢膜多糖である。さらなる実施形態では、精製された多糖は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７３に由来する莢膜多糖である。
【０３７１】
任意の好適なコンジュゲーション反応を、必要に応じて任意の好適なリンカーと共に使用することができる。例えば、ＷＯ２００７１１６０２８、１７〜２２頁を参照されたい。
【０３７２】
本明細書に記載の精製されたオリゴ糖または多糖類を化学的に活性化して、担体タンパク質と反応することができる糖類を作製することができる。
【０３７３】
ある実施形態では、糖コンジュゲートを、還元的アミノ化を使用して調製する。
【０３７４】
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）精製された糖の酸化（活性化）、（２）糖コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元（例えば、ＷＯ２０１５１１０９４１、ＷＯ２０１５１１０９４０を参照されたい）。
【０３７５】
上記のように、酸化の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への多糖のサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。ある実施形態では、精製された多糖のサイズを、機械的ホモジナイゼーションによって減少させる。
【０３７６】
ある実施形態では、精製された多糖またはオリゴ糖を、
（ａ）前記精製された多糖またはオリゴ糖を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）必要に応じて、クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチするステップ；
（ｃ）ステップ（ａ）または（ｂ）の活性化された多糖またはオリゴ糖を、担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された、活性化された多糖またはオリゴ糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせる。
【０３７７】
酸化ステップ（ａ）の後、糖は、活性化されると言われ、「活性化された多糖またはオリゴ糖」と呼ばれる。
【０３７８】
酸化ステップ（ａ）は、過ヨウ素酸塩との反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸（ＩＯ４−）とオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ６５−）の両方および過ヨウ素酸の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
【０３７９】
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。ある実施形態では、酸化のために使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
【０３８０】
酸化ステップ（ａ）は、アルデヒド基を含有する活性化された糖を産生するための、前記多糖またはオリゴ糖の一次ヒドロキシルを選択的に酸化する酸化剤の存在下での、ピペリジン−Ｎ−オキシまたはピロリジン−Ｎ−オキシ化合物などの、安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物との反応を含んでもよい（ＷＯ２０１４０９７０９９を参照されたい）。ある態様では、前記安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物は、ＷＯ２０１４０９７０９９の３頁、１４行〜４頁、７行に開示された任意のものであり、酸化剤は、ＷＯ２０１４０９７０９９の４頁、８〜１５行に開示された任意のものである。ある態様では、前記安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物は、２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）であり、酸化剤は、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である。
【０３８１】
一実施形態では、クエンチング剤は、ＷＯ２０１５１１０９４１（３０頁、３〜２６行を参照されたい）に開示されたものである。
【０３８２】
ある実施形態では、還元反応（ｄ）は、水性溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｄ）は、非プロトン性溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｄ）は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。
【０３８３】
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄもしくはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムもしくは亜鉛、ピリジンボラン、２−ピコリンボラン、２，６−ジボラン−メタノール、ジメチルアミン−ボラン、ｔ−ＢｕＭｅｉＰｒＮ−ＢＨ３、ベンジルアミン−ＢＨ３または５−エチル−２−メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
【０３８４】
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
【０３８５】
担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖−タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
【０３８６】
ある実施形態では、糖コンジュゲートを、シアニル化化学を使用して調製する。
【０３８７】
ある実施形態では、精製された多糖またはオリゴ糖を、臭化シアンを用いて活性化する。活性化は、多糖またはオリゴ糖のヒドロキシル基のシアニル化に対応する。かくして、活性化された多糖またはオリゴ糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングする。
【０３８８】
ある実施形態では、精製された多糖またはオリゴ糖を、シアン酸エステルを形成するための１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて活性化する。かくして、活性化された多糖またはオリゴ糖を、担体タンパク質上のアミノ基に直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングする。
【０３８９】
ある実施形態では、スペーサーは、マレイミド活性化された担体タンパク質（例えば、Ｎ−［γ−マレイミドブチリロキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を使用する）またはハロアセチル化担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、Ｎ−スクシンイミジルブロモ酢酸（ＳＢＡ；ＳＩＢ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸（ＳＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸（スルホ−ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）もしくはスクシンイミジル３−［ブロモアセトアミド］プロピオン酸（ＳＢＡＰ））との反応後に得られるチオエーテル結合によって担体にカップリングすることができるチオール化された多糖またはオリゴ糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製してもよい）を、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングし、アミノ誘導体化された糖を、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）にコンジュゲートする。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。
【０３９０】
ある実施形態では、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）またはカルボニルジトリアゾール（ＣＤＴ）などのビス求電子試薬を使用することにより、糖コンジュゲートを調製する。そのような実施形態では、コンジュゲーション反応は、好ましくは、直接的経路により、または二属リンカー（例えば、ＷＯ２０１１０４１００３を参照されたい）を使用して、ＤＭＦまたはＤＭＳＯなどの非プロトン性溶媒中で行われる。
【０３９１】
ある実施形態では、ＷＯ２０１４０２７３０２に開示された糖コンジュゲートを作製する方法により、糖コンジュゲートを調製する。得られる糖コンジュゲートは、二価、ヘテロ二官能性スペーサー（２−（（２−オキソエチル）チオ）エチル）カルバメート（ｅＴＥＣ）を介して担体タンパク質に共有的にコンジュゲートされた糖を含む。あるいは、ＷＯ２０１５１２１７８３に開示された糖コンジュゲートを作製する方法により、糖コンジュゲートを調製する。
【０３９２】
他の好適なコンジュゲーション技術は、カルボジイミド（例えば、ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド）、ＥＤＣ＋スルホＮＨＳ、ＣＭＣ（１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド）、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド）、またはＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド））を使用する。
【０３９３】
ある実施形態では、多糖またはオリゴ糖を、リンカー、例えば、二官能性リンカーを介して担体タンパク質にコンジュゲートする。リンカーは、例えば、反応性アミノ基と反応性カルボン酸基、２つの反応性アミノ基または２つの反応性カルボン酸基を有する、ヘテロ二官能性またはホモ二官能性であってもよい。リンカーは、例えば、４〜２０個、４〜１２個、５〜１０個の炭素原子を有する。あり得るリンカーは、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）である。他のリンカーとしては、Ｂ−プロピオンアミド（ＷＯ００／１０５９９）、ニトロフェニル−エチルアミン、ハロアルキルハライド、グリコシド結合（米国特許第４，６７３，５７４号、米国特許第４，８０８，７００号）、ヘキサンジアミンおよび６−アミノカプロン酸（米国特許第４，４５９，２８６号）が挙げられる。
【０３９４】
担体タンパク質
糖コンジュゲートの成分は、精製された多糖またはオリゴ糖がコンジュゲートされる担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書では互換的に使用することができる。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順に適しているべきである。
【０３９５】
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド）またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性的であるが、抗原的に同一のバリアント）、他のＤＴ変異体（ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８〜３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３またはＣＲＭ１０７；ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔｏｘｉｎｓ、Ｅｄ：Ｆｒａｎｋｅｌ、Ｍａｅｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ．（１９９２）により記載された他の突然変異；Ｇｌｕ−１４８からＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒおよび／またはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失または突然変異ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および第４，９５０，７４０号に開示された他の突然変異；Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／またはＬｙｓ５３４の少なくとも１つまたは複数の残基の突然変異ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および第６，４５５，６７３号に開示された他の突然変異；または米国特許第５，８４３，７１１号に開示された断片、一部の様式で解毒されたｐｌｙ、例えば、ｄＰＬＹ−ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５、ＷＯ２００６／０３２４９９）またはｄＰＬＹ−ホルモル、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥを含むＰｈｔＸ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤまたはＰｈｔＥの配列は、ＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９に開示されている）およびＰｈｔタンパク質の融合物、例えば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、ＰｈｔＡ−Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）を含む、肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ  ｌｍｍｕｎ  ６３：２７０６〜２７１３）、通常、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）（ＥＰ０３７２５０１）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）、またはその免疫学的機能等価物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、増殖因子またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、様々な病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３１：３８１６〜３８２４）、例えば、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ  ｌｍｍｕｎ  ７２：４８８４〜４８８７）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素Ａ���たはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（特に、その毒性変異体（グルタミン酸５５３に置換を担持する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  １６９（１１）：４９６７〜４９７１））からなる群から選択される。オブアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはツベルクリンの精製されたタンパク質誘導体（ＰＰＤ）などの他のタンパク質も、担体タンパク質として使用することができる。他の好適な担体タンパク質としては、コレラトキソイド（例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１に記載されている）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に由来する外毒素Ａなどの不活化細菌毒素が挙げられる。
【０３９６】
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（ＣＲＭ１９７など）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物（特に、ＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／０５４００７に記載のもの）、解毒されたニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢおよびＰｓａＡからなる群から独立に選択される。
【０３９７】
ある実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）である。
【０３９８】
別の実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）である。
【０３９９】
好ましい実施形態では、精製された多糖またはオリゴ糖を、ＣＲＭ１９７タンパク質にコンジュゲートする。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素の非毒性形態であるが、ジフテリア毒素と免疫学的に識別不可能である。ＣＲＭ１９７は、毒素原性コリネファージベータ（Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２３３：８−１１）のニトロソグアニジン突然変異誘発によって創出された非毒素原性ファージβ１９７ｔｏｘ−により感染したコリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって産生される。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素と同じ分子量を有するが、構造遺伝子中の単一の塩基変化（グアニンからアデニンへの）によってそれと異なる。この単一の塩基変化は、成熟タンパク質中のアミノ酸置換（グルタミン酸からグリシンへの）を引き起こし、ジフテリア毒素の有毒性を除去する。ＣＲＭ１９７タンパク質は、糖類のための安全かつ有効なＴ細胞依存的担体である。ＣＲＭ１９７およびその産生に関するさらなる詳細は、例えば、米国特許第５，６１４，３８２号に見出すことができる。
【０４００】
ある実施形態では、精製された多糖またはオリゴ糖を、ＣＲＭ１９７タンパク質またはＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。ある実施形態では、精製された多糖またはオリゴ糖を、遺伝子組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による発現を介して得られるＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。
【０４０１】
好ましくは、糖コンジュゲート中の、担体タンパク質の多糖またはオリゴ糖に対する比は、１：５〜５：１；例えば、１：０．５〜４：１、例えば、１：１〜３．５：１、１．２：１〜３：１、１．５：１〜２．５：１；例えば、１：２〜２．５：１または１：１〜２：１（ｗ／ｗ）である。ある実施形態では、糖コンジュゲート中の、担体タンパク質の多糖またはオリゴ糖に対する比は、約１：１、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１または１．６：１である。
【０４０２】
担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖−タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
【０４０３】
組成物は、少量の遊離担体を含んでもよい。所与の担体タンパク質が本発明の組成物中で遊離形態とコンジュゲート化形態の両方で存在する場合、非コンジュゲート化形態は、好ましくは、全体として組成物中の担体タンパク質の総量の５％以下であり、より好ましくは、２重量％未満で存在する。
【０４０４】
２．２  免疫原性組成物
ある実施形態では、本発明は、本明細書に開示される精製された多糖および／または糖コンジュゲートのいずれかを含む免疫原性組成物に関する。
【０４０５】
ある実施形態では、本発明は、本明細書に開示される糖コンジュゲートのいずれかを含む免疫原性組成物に関する。
【０４０６】
ある実施形態では、本発明は、セクション２．１に開示された１〜２５種の異なる糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
【０４０７】
ある実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の異なる血清型に由来する１〜２５種の糖コンジュゲート（１〜２５種の肺炎球菌コンジュゲート）を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５種の異なる血清型に由来する糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１６または２０種の異なる血清型に由来する糖コンジュゲートを含む。ある実施形態では、免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は１４、１５、１６、１７、１８、または１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【０４０８】
ある実施形態では、前記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲートを含む。
【０４０９】
ある実施形態では、前記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１０】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１１】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１２】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１３】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆおよび１５Ｂに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１４】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２に由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１５】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１６】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１７】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０に由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４１８】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆおよび３３Ｆに由来する糖コンジュゲートを含む。
【０４１９】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２に由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４２０】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４２１】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４２２】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０に由来する糖コンジュゲートをさらに含む。
【０４２３】
しかし、好ましい実施形態では、糖は、タンパク質担体の異なる分子にそれぞれ個別にコンジュゲートされる（タンパク質担体の各分子は、それにコンジュゲートされた１つの型の糖だけを有する）。前記実施形態では、莢膜糖類は、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされると言われる。好ましくは、上記免疫原性組成物の全ての糖コンジュゲートを、担体タンパク質に個別にコンジュゲートする。
【０４２４】
上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。
【０４２５】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかの糖コンジュゲートを、全て個別にＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。
【０４２６】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＰＤに個別にコンジュゲートする。
【０４２７】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する糖コンジュゲートを、ＴＴにコンジュゲートする。
【０４２８】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＤＴにコンジュゲートする。
【０４２９】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＰＤに個別にコンジュゲートし、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する糖コンジュゲートを、ＴＴにコンジュゲートし、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＤＴにコンジュゲートする。
【０４３０】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の８〜２０種の異なる血清型を含む。
【０４３１】
ある実施形態では、本発明は、異なる髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群に由来する１〜５種の糖コンジュゲート（１〜５種の髄膜炎菌コンジュゲート）を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、本発明は、１、２、３、４または５種の異なる髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群に由来する糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、４または５種の異なる髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含む。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１、２、３、４または５価の髄膜炎菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２価の髄膜炎菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、４価の髄膜炎菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、５価の髄膜炎菌コンジュゲート組成物である。
【０４３２】
ある実施形態では、免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）を含む。
【０４３３】
ある実施形態では、免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）を含む。
【０４３４】
ある実施形態では、免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）を含む。
【０４３５】
ある実施形態では、免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ莢膜糖（ＭｅｎＸ）を含む。
【０４３６】
一部の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１、２または３つのアジュバントをさらに含んでもよい。一部の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、１つのアジュバントをさらに含んでもよい。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として、主に免疫モジュレーターとして作用するか、または両方の強力な特徴を有してもよい。好適なアジュバントとしては、ヒトを含む哺乳動物中での使用にとって好適なものが挙げられる。
【０４３７】
ヒトにおいて使用することができる公知の好適な送達系型アジュバントの例としては、限定されるものではないが、ミョウバン（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．５％ｗ／ｖポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、０．５％ｗ／ｖソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８５））などの水中油エマルジョン、モンタニドなどの油中水エマルジョン、およびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）マイクロ粒子またはナノ粒子が挙げられる。
【０４３８】
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてアルミニウム塩（ミョウバン）（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）を含む。好ましい実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。
【０４３９】
本明細書に開示される免疫原性組成物の有効性を増強するためのさらなる例示的なアジュバントとしては、限定されるものではないが、（１）例えば、（ａ）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％プルロニック遮断ポリマーＬ１２１、およびマイクロメートル以下のエマルジョンにマイクロ流体化された、またはより大きい粒径のエマルジョンを生成するためにボルテックスされたｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ、ならびに（ｂ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））などの１つまたは複数の細菌細胞壁成分を含有するＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）などの、水中油エマルジョン製剤（ムラミルペプチド（以下を参照されたい）または細菌細胞壁成分などの他の特定の免疫刺激剤を含む、または含まない）；（２）ＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）、ＡＢＩＳＣＯ（登録商標）（Ｉｓｃｏｎｏｖａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、または使用することができるＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）もしくはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）などの、それから生成される粒子（ＩＳＣＯＭはさらなる洗剤を含まなくてもよい（例えば、ＷＯ００／０７６２１を参照されたい））などのサポニンアジュバント；（３）完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント（ＣＦＡ）および不完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント（ＩＦＡ）；（４）インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２（例えば、ＷＯ９９／４４６３６を参照されたい））、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカイン；（５）必要に応じて、肺炎球菌糖類（例えば、ＷＯ００／５６３５８を参照されたい）と共に使用した場合、ミョウバンの実質的な非存在下にある、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、ＧＢ−２２２０２２１、ＥＰ０６８９４５４を参照されたい）；（６）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油エマルジョンとの組合せ（例えば、ＥＰ０８３５３１８、ＥＰ０７３５８９８、ＥＰ０７６１２３１を参照されたい）；（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ９９／５２５４９を参照されたい）；（８）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１２０７）またはオクトキシノールなどの少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１１５２）；（９）サポニンおよび免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（例えば、ＷＯ００／６２８００）；（１���）免疫刺激剤および金属塩の粒子（例えば、ＷＯ００／２３１０５を参照されたい）；（１１）サポニンおよび水中油エマルジョン（例えば、ＷＯ９９／１１２４１）；（１２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（必要に応じて、＋ステロール）（例えば、ＷＯ９８／５７６５９）；（１３）組成物の効能を増強するための免疫刺激剤として作用する他の物質が挙げられる。ムラミルペプチドとしては、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−２５アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ノル−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）などが挙げられる。
【０４４０】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
【０４４１】
免疫原性組成物を、液体形態（すなわち、溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で製剤化することができる。有利には、液体製剤を、その包装形態から直接投与することができ、かくして、それらは、そうでなければ凍結乾燥された本発明の組成物にとって必要とされる水性媒体中での復元が必要とされず、注射にとって理想的である。
【０４４２】
本開示の免疫原性組成物の製剤化を、当業界で認識された方法を使用して達成することができる。例えば、個々の多糖類および／またはコンジュゲートを、生理的に許容されるビヒクルと共に製剤化して、組成物を調製することができる。そのようなビヒクルの例としては、限定されるものではないが、水、緩衝塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）およびデキストロース溶液が挙げられる。
【０４４３】
本開示は、本明細書に開示される多糖または糖コンジュゲートの組合せのいずれかと、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む免疫原性組成物を提供する。
【０４４４】
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、液体形態、好ましくは、水性液体形態にある。
【０４４５】
本開示の免疫原性組成物は、緩衝剤、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結防止剤、およびフリーラジカルスカベンジャーもしくはキレート剤などの酸化防止剤のうちの１つもしくは複数、またはそれらの任意の複数の組合せを含んでもよい。
【０４４６】
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、緩衝剤を含む。ある実施形態では、前記緩衝剤は、約３．５〜約７．５のｐＫａを有する。一部の実施形態では、緩衝剤は、リン酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤またはクエン酸緩衝剤である。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、１ｍＭ〜１０ｍＭの最終濃度のコハク酸緩衝剤である。１つの特定の実施形態では、コハク酸緩衝剤の最終濃度は、約５ｍＭである。
【０４４７】
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。１つの特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
【０４４８】
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、界面活性剤を含む。ある実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｎ−１０１、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００、オクトキシノール４０、ノノキシノール−９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン−６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ−１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ  Ｈ１５）、ポリオキシエチレン−３５−リシノレエート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、大豆レシチンおよびポロキサマーからなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％〜１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。
【０４４９】
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％〜１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。
【０４５０】
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート４０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％〜１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート４０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート４０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート４０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート４０である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート４０である。
【０４５１】
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート６０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％〜１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６０である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６０である。
【０４５２】
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート６５である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％〜１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６５である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６５である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６５である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６５である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート６５である。
【０４５３】
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８５である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％〜１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８５である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８５である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％〜１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８５である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８５である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８５である。
【０４５４】
ある特定の実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、５．５〜７．５のｐＨ、より好ましくは、５．６〜７．０のｐＨ、さらにより好ましくは、５．８〜６．０のｐＨを有する。
【０４５５】
一実施形態では、本開示は、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかを充填した容器を提供する。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵器、バイオリアクター、バッグ、ジャー、アンプル、カートリッジおよび使い捨てペンからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、容器はシリコン処理される。
【０４５６】
ある実施形態では、本開示の容器は、ガラス、金属（例えば、スチール、ステンレススチール、アルミニウムなど）および／またはポリマー（例えば、熱可塑性物質、エラストマー、熱可塑性物質−エラストマー）製である。ある実施形態では、本開示の容器は、ガラス製である。
【０４５７】
一実施形態では、本開示は、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかを充填したシリンジを提供する。ある特定の実施形態では、シリンジは、シリコン処理される、および／またはガラス製である。
【０４５８】
注射のための免疫原性組成物の典型的な用量は、０．１ｍＬ〜２ｍＬ、より好ましくは、０．２ｍＬ〜１ｍＬ、さらにより好ましくは、約０．５ｍＬの容量を有する。
【０４５９】
２．３  抗原としての使用
本発明の方法によって精製された多糖または本明細書に開示されるコンジュゲートを、抗原として使用することができる。例えば、それらはワクチンの一部であってもよい。
【０４６０】
したがって、ある実施形態では、本発明の方法によって精製された多糖類または前記多糖類を使用して得られた糖コンジュゲートは、対象における免疫応答を生成するのに使用するためのものである。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシまたはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象は、ヒトである。
【０４６１】
ある実施形態では、本発明の方法によって精製された多糖類、前記多糖類を使用して得られた糖コンジュゲートまたは本明細書に開示される免疫原性組成物は、ワクチンにおける使用のためのものである。
【０４６２】
ある実施形態では、本発明の方法によって精製された多糖類、前記多糖類を使用して得られた糖コンジュゲートまたは本明細書に開示される免疫原性組成物は、薬剤としての使用のためのものである。
【０４６３】
本明細書に記載の免疫原性組成物を、対象における細菌感染、疾患または状態を防止する、処置するまたは改善するための様々な治療または予防方法において使用することができる。特に、本明細書に記載の免疫原性組成物を使用して、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）または溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染、疾患または状態を防止、処置または改善することができる。
【０４６４】
かくして、一態様では、本開示は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）または溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）と関連する感染、疾患または状態を防止する、処置する、または改善する方法であって、対象に、免疫学的有効量の本開示の免疫原性組成物（特に、その対応する多糖または糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物）を投与することを含む方法を提供する。
【０４６５】
ある実施形態では、本開示は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）または溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）に対する免疫応答を誘導する方法であって、対象に、免疫学的有効量の本開示の免疫原性組成物（特に、その対応する多糖または糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物）を投与することを含む方法を提供する。
【０４６６】
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ワクチンとしての使用のためのものである。そのような実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物を使用して、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）または溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染を防止することができる。かくして、一態様では、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）または溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）による感染を防止する方法であって、対象に、免疫学的有効量の本開示の免疫原性組成物を投与することを含む方法を提供する。
【０４６７】
一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシまたはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象は、ヒトである。
【０４６８】
本開示の免疫原性組成物を使用して、全身または粘膜経路を介して免疫原性組成物を投与することによって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）または溶血性連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）感染に感受性のヒトを保護または処置することができる。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物を、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下経路によって投与する。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物を、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下注射によって投与する。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物を、筋肉内または皮下注射によって投与する。
【０４６９】
一部の場合、本開示による免疫原性組成物のわずか１用量が必要とされるが、より高い免疫欠損の状態などの一部の環境下では、第２、第３または第４の用量を与えてもよい。初回ワクチン接種の後、対象は、十分に間隔を空けた１回または数回の追加免疫を受けてもよい。
【０４７０】
ある実施形態では、本開示による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、単回用量である。
【０４７１】
ある実施形態では、本開示による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、複数回用量スケジュールである。
【０４７２】
３  本発明の特定の実施形態を、以下の番号付き段落に記載する。
【０４７３】
１．細菌多糖を、夾雑物と一緒に前記多糖を含む溶液から精製するための方法であって、凝集ステップを含む方法。
【０４７４】
２．凝集剤が多価陽イオンを含む、段落１に記載の方法。
【０４７５】
３．前記多価陽イオンが、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される、段落２に記載の方法。
【０４７６】
４．前記凝集剤が、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される少なくとも２つの多価陽イオンの混合物である、段落２に記載の方法。
【０４７７】
５．前記凝集剤は、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる群から選択される少なくとも３つの多価陽イオンの混合物である、段落２に記載の方法。
【０４７８】
６．前記凝集剤が、アルミニウム、鉄、カルシウムおよびマグネシウムからなる少なくとも４つの多価陽イオンの混合物である、段落２に記載の方法。
【０４７９】
７．凝集剤が、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される薬剤を含む、段落１に記載の方法。
【０４８０】
８．凝集剤が、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される、段落１に記載の方法。
【０４８１】
９．凝集剤がポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である、段落１に記載の方法。
【０４８２】
１０．凝集剤がミョウバンを含む、段落１に記載の方法。
【０４８３】
１１．凝集剤がミョウバンである、段落１に記載の方法。
【０４８４】
１２．凝集剤がカリウムミョウバンを含む、段落１に記載の方法。
【０４８５】
１３．凝集剤がカリウムミョウバンである、段落１に記載の方法。
【０４８６】
１４．凝集剤がナトリウムミョウバンを含む、段落１に記載の方法。
【０４８７】
１５．凝集剤がナトリウムミョウバンである、段落１に記載の方法。
【０４８８】
１６．凝集剤がアンモニウムミョウバンを含む、段落１に記載の方法。
【０４８９】
１７．凝集剤がアンモニウムミョウバンである、段落１に記載の方法。
【０４９０】
１８．凝集剤が、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される２つの薬剤の混合物である、段落１に記載の方法。ある実施形態では、凝集剤は、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される。
【０４９１】
１９．凝集剤が、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される３つの薬剤の混合物である、段落１に記載の方法。
【０４９２】
２０．凝集剤が、ミョウバン（例えば、カリウムミョウバン、ナトリウムミョウバンまたはアンモニウムミョウバン）、アルミニウムクロロハイドレート、硫酸アルミニウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウム、硫酸鉄（ＩＩ）（硫酸鉄）、塩化鉄（ＩＩＩ）（塩化鉄）、ポリアクリルアミド、改変ポリアクリルアミド、ポリＤＡＤＭＡＣ、アルミン酸ナトリウムおよびケイ酸ナトリウムからなる群から選択される４つの薬剤の混合物である、段落１に記載の方法。
【０４９３】
２１．凝集剤が、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（Ｍｏｒｉｎｇａ  ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（ワサビノキ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ  ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアーガムおよびアルギネート（例えば、ワカメ抽出物）からなる群から選択される薬剤を含む、段落１に記載の方法。ある実施形態では、凝集剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（Ｍｏｒｉｎｇａ  ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（ワサビノキ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ  ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアーガムおよびアルギネート（例えば、ワカメ抽出物）からなる群から選択される。
【０４９４】
２２．凝集剤が、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（Ｍｏｒｉｎｇａ  ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（ワサビノキ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ  ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアーガムおよびアルギネート（例えば、ワカメ抽出物）からなる群から選択される薬剤である、段落１に記載の方法。ある実施形態では、凝集剤は、キトサン、アイシングラス、ワサビノキ（Ｍｏｒｉｎｇａ  ｏｌｅｉｆｅｒａ）種子（ワサビノキ）、ゼラチン、ストリクノス・ポタトルム（Ｓｔｒｙｃｈｎｏｓ  ｐｏｔａｔｏｒｕｍ）種子（ニルマリナッツの木）、グアーガムおよびアルギネート（例えば、ワカメ抽出物）からなる群から選択される。
【０４９５】
２３．凝集剤の濃度が、約０．１〜約２０％（ｗ／ｖ）である、段落１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０４９６】
２４．凝集剤の濃度が、約０．５〜約１０％（ｗ／ｖ）である、段落１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０４９７】
２５．凝集剤の濃度が、約１〜約５％（ｗ／ｖ）である、段落１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０４９８】
２６．凝集剤の濃度が、約０．１、約０．２５、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５または約１０％（ｗ／ｖ）である、段落１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０４９９】
２７．凝集剤の濃度が、約１０．５、約１１．０、約１１．５、約１２．０、約１２．５、約１３．０、約１３．５、約１４．０、約１４．５、約１５．０、約１５．５、約１６．０、約１６．５、約１７．０、約１７．５、約１８．０、約１８．５、約１９．０、約１９．５または約２０．０％（ｗ／ｖ）である、段落１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０５００】
２８．凝集剤の濃度が、約０．５、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５または約５．０％（ｗ／ｖ）である、段落１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０５０１】
２９．凝集剤の濃度が、約１．０、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５または約４．０％（ｗ／ｖ）である、段落１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０５０２】
３０．凝集剤が、数秒（例えば、１〜１０秒）〜約１カ月の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０３】
３１．凝集剤が、約２秒〜約２週間の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０４】
３２．凝集剤が、約１分〜約１週間の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０５】
３３．凝集剤が、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間または約２４時間〜約２日の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０６】
３４．凝集剤が、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０７】
３５．凝集剤が、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０８】
３６．凝集剤が、約１５分〜約３時間の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０９】
３７．凝集剤が、約３０分〜約１２０分の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５１０】
３８．凝集剤が、約２秒、約１０秒、約３０秒、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分、約１６０分、約１７０分、約３．０時間、約３．５時間、約４．０時間、約４．５時間、約５．０時間、約５．５時間、約６．０時間、約６．５時間、約７．０時間、約７．５時間、約８．０時間、約８．５時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日または約１５日の期間にわたって添加される、段落１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５１１】
３９．凝集剤が、撹拌せずに添加される、段落１〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０５１２】
４０．凝集剤が、撹拌下で添加される、段落１〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０５１３】
４１．凝集剤が、穏やかな撹拌下で添加される、段落１〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０５１４】
４２．凝集剤が、激しい撹拌下で添加される、段落１〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０５１５】
４３．溶液が、下流のプロセシングの前にフロックの沈降を可能にするためにいくらかの時間にわたって保持される、段落１〜４２のいずれか１つに記載の方法。
【０５１６】
４４．凝集ステップが、数秒（例えば、２〜１０秒）〜約１分の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５１７】
４５．凝集ステップが、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、少なくとも約１００、少なくとも約１０５、少なくとも約１１０、少なくとも約１１５、少なくとも約１２０、少なくとも約１２５、少なくとも約１３０、少なくとも約１３５、少なくとも約１４０、少なくとも約１４５、少なくとも約１５０、少なくとも約１５５または少なくとも約１６０分の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５１８】
４６．沈降時間が１週間未満である、段落１〜４３に記載の方法。
【０５１９】
４７．凝集ステップが、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０、約１４４０分、約２日、約３日、約４日、約５日または約６日〜１週間の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２０】
４８．凝集ステップが、数秒（例えば、１〜１０秒）〜約１カ月の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２１】
４９．凝集ステップが、約２秒〜約２週間の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２２】
５０．凝集ステップが、約１分〜約１週間の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２３】
５１．凝集ステップが、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間または約２４時間〜約２日の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２４】
５２．凝集ステップが、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２５】
５３．凝集ステップが、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１１０分、約１２０分、約１３０分、約１４０分、約１５０分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間または約１２時間〜約１日の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２６】
５４．凝集ステップが、約１５分〜約３時間の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２７】
５５．凝集ステップが、約３０分〜約１２０分の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２８】
５６．凝集ステップが、約１０秒、約３０秒、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分、約１６０分、約１７０分、約３時間、約３．５時間、約４時間、約４．５時間、約５時間、約５．５時間、約６時間、約６．５時間、約７時間、約７．５時間、約８時間、約８．５時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日または約１５日の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２９】
５７．凝集ステップが、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０または約１４４０分および２日の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５３０】
５８．凝集ステップが、約５分〜約１日の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５３１】
５９．凝集ステップが、約５分〜約１２０分の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５３２】
６０．凝集ステップが、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分または約１６０分の沈降時間を用いて実施される、段落１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５３３】
６１．沈降ステップが、撹拌せずに行われる、段落４３〜６０のいずれか１つに記載の方法。
【０５３４】
６２．沈降ステップが、撹拌下で行われる、段落４３〜６０のいずれか１つに記載の方法。
【０５３５】
６３．沈降ステップが、穏やかな撹拌下で行われる、段落４３〜６０のいずれか１つに記載の方法。
【０５３６】
６４．沈降ステップが、激しい撹拌下で行われる、段落４３〜６０のいずれか１つに記載の方法。
【０５３７】
６５．前記凝集ステップが、酸性ｐＨで実施される、段落１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０５３８】
６６．前記凝集ステップが、７．０、６．０、５．０または４．０より下のｐＨで実施される、段落１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０５３９】
６７．前記凝集ステップが、７．０〜１．０のｐＨで実施される、段落１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０５４０】
６８．前記凝集ステップが、５．５〜２．５、５．０〜２．５、４．５〜２．５、４．０〜２．５、５．５〜３．０、５．０〜３．０、４．５〜３．０、４．０〜３．０、５．５〜３．５、５．０〜３．５、４．５〜３．５または４．０〜３．５のｐＨで実施される、段落１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０５４１】
６９．前記凝集ステップが、約５．５、約５．０、約４．５、約４．０、約３．５、約３．０、約２．５、約２．０、約１．５または約１．０のｐＨで実施される、段落１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０５４２】
７０．前記凝集ステップが、約４．０、約３．５、約３．０または約２．５のｐＨで実施される、段落１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０５４３】
７１．前記凝集ステップが、約３．５のｐＨで実施される、段落１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０５４４】
７２．前記酸性ｐＨが、酸を用いて溶液を酸性化することによって得られる、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５４５】
７３．前記酸性ｐＨが、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、クエン酸、酢酸、亜硝酸、および硫酸からなる群から選択される酸を用いて溶液を酸性化することによって得られる、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５４６】
７４．前記酸性ｐＨが、アミノ酸を用いて溶液を酸性化することによって得られる、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５４７】
７５．前記酸性ｐＨが、グリシン、アラニンおよびグルタミン酸からなる群から選択されるアミノ酸を用いて溶液を酸性化することによって得られる、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５４８】
７６．前記酸性ｐＨが、硫酸を用いて溶液を酸性化することによって得られる、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５４９】
７７．酸が、撹拌下で添加される、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５５０】
７８．酸が、穏やかな撹拌下で添加される、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５５１】
７９．酸が、激しい撹拌下で添加される、段落６５〜７１のいずれか１つに記載の方法。
【０５５２】
８０．凝集剤の添加が、約４℃〜約３０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５５３】
８１．凝集剤の添加が、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃または約３０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５５４】
８２．凝集剤の添加が、約２０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５５５】
８３．凝集剤の添加が、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５５６】
８４．凝集剤の添加が、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５５７】
８５．凝集剤の添加が、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５５８】
８６．凝集剤の添加が、約５０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５５９】
８７．存在する場合、沈降ステップが、約４℃〜約３０℃の温度で実施される、段落４３〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０５６０】
８８．存在する場合、沈降ステップが、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃または約３０℃の温度で実施される、段落４３〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０５６１】
８９．存在する場合、沈降ステップが、約２０℃の温度で実施される、段落４３〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０５６２】
９０．存在する場合、沈降ステップが、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される、段落４３〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０５６３】
９１．存在する場合、沈降ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落４３〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０５６４】
９２．存在する場合、沈降ステップが、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落４３〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０５６５】
９３．存在する場合、沈降ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落４３〜８６のいずれか１つに記載の方法。
【０５６６】
９４．存在する場合、酸性化ステップが、約４℃〜約３０℃の温度で実施される、段落７２〜９３のいずれか１つに記載の方法。
【０５６７】
９５．存在する場合、酸性化ステップが、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃または約３０℃の温度で実施される、段落７２〜９３のいずれか１つに記載の方法。
【０５６８】
９６．存在する場合、酸性化ステップが、約２０℃の温度で実施される、段落７２〜９３のいずれか１つに記載の方法。
【０５６９】
９７．存在する場合、酸性化ステップが、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される、段落７２〜９３のいずれか１つに記載の方法。
【０５７０】
９８．存在する場合、酸性化ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落７２〜９３のいずれか１つに記載の方法。
【０５７１】
９９．存在する場合、酸性化ステップが、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落７２〜９３のいずれか１つに記載の方法。
【０５７２】
１００．存在する場合、酸性化ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落７２〜９３のいずれか１つに記載の方法。
【０５７３】
１０１．存在する場合、凝集剤の添加および沈降ステップが、約４℃〜約３０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５７４】
１０２．存在する場合、凝集剤の添加および沈降ステップが、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃または約３０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５７５】
１０３．存在する場合、凝集剤の添加および沈降ステップが、約２０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５７６】
１０４．存在する場合、凝集剤の添加および沈降ステップが、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５７７】
１０５．存在する場合、凝集剤の添加および沈降ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５７８】
１０６．存在する場合、凝集剤の添加および沈降ステップが、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５７９】
１０７．存在する場合、凝集剤の添加および沈降ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落１〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８０】
１０８．凝集剤の添加および酸性化ステップが、約４℃〜約３０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８１】
１０９．凝集剤の添加および酸性化ステップが、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃または約３０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８２】
１１０．凝集剤の添加および酸性化ステップが、約２０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８３】
１１１．凝集剤の添加および酸性化ステップが、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８４】
１１２．凝集剤の添加および酸性化ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８５】
１１３．凝集剤の添加および酸性化ステップが、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８６】
１１４．凝集剤の添加および酸性化ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８７】
１１５．凝集剤の添加、沈降および酸性化ステップが、約４℃〜約３０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８８】
１１６．凝集剤の添加、沈降および酸性化ステップが、４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃または約３０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５８９】
１１７．凝集剤の添加、沈降および酸性化ステップが、約２０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５９０】
１１８．凝集剤の添加、沈降および酸性化ステップが、約３０℃〜約９５℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５９１】
１１９．凝集剤の添加、沈降および酸性化ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５９２】
１２０．凝集剤の添加、沈降および酸性化ステップが、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５９３】
１２１．凝集剤の添加、沈降および酸性化ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落７２〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０５９４】
１２２．凝集ステップが、ｐＨ調整なしに凝集剤を添加することを含む、段落１〜７１、８０〜９３または１０１〜１０７のいずれか１つに記載の方法。
【０５９５】
１２３．凝集ステップが、凝集剤を添加すること、ｐＨを調整すること、および溶液を沈降させることを含む、段落１〜１２２のいずれか１つに記載の方法。
【０５９６】
１２４．凝集剤が、ｐＨを調整する前に添加される、段落１２３に記載の方法。
【０５９７】
１２５．ｐＨが、凝集剤を添加する前に調整される、段落１２３に記載の方法。
【０５９８】
１２６．ｐＨが、凝集剤を添加し、溶液を沈降させる前に調整される、段落１２３に記載の方法。
【０５９９】
１２７．ｐＨを調整する前に、凝集剤が添加され、溶液が沈降される、段落１２３に記載の方法。
【０６００】
１２８．凝集の後に、懸濁液がデカンテーション、沈降化、濾過または遠心分離によって清澄化される、段落１〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０６０１】
１２９．凝集の後に、懸濁液がデカンテーションによって清澄化される、段落１〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０６０２】
１３０．凝集の後に、懸濁液が液体遠心分離によって清澄化される、段落１〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０６０３】
１３１．凝集の後に、懸濁液が沈降化によって清澄化される、段落１〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０６０４】
１３２．凝集の後に、懸濁液がフローテーションによって清澄化される、段落１〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０６０５】
１３３．凝集の後に、懸濁液が濾過によって清澄化される、段落１〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０６０６】
１３４．凝集の後に、懸濁液が遠心分離によって清澄化される、段落１〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０６０７】
１３５．多糖含有溶液が、保存のために収集される、段落１２７〜１３４のいずれか１つに記載の方法。
【０６０８】
１３６．多糖含有溶液が、さらなるプロセシングのために収集される、段落１２７〜１３４のいずれか１つに記載の方法。
【０６０９】
１３７．多糖含有溶液が、保存された後、さらにプロセシングされる、段落１２７〜１３４のいずれか１つに記載の方法。
【０６１０】
１３８．前記遠心分離が、連続遠心分離である、段落１３４〜１３７のいずれか１つに記載の方法。
【０６１１】
１３９．前記遠心分離が、バケット遠心分離である、段落１３４〜１３７のいずれか１つに記載の方法。
【０６１２】
１４０．懸濁液が、約１，０００ｇ、約２，０００ｇ、約３，０００ｇ、約４，０００ｇ、約５，０００ｇ、約６，０００ｇ、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇ、約２５，０００ｇ、約３０，０００ｇ、約３５，０００ｇ、約４０，０００ｇ、約５０，０００ｇ、約６０，０００ｇ、約７０，０００ｇ、約８０，０００ｇ、約９０，０００ｇ、約１００，０００ｇ、約１２０，０００ｇ、約１４０，０００ｇ、約１６０，０００ｇまたは約１８０，０００ｇで遠心分離される、段落１３４〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
【０６１３】
１４１．懸濁液が、約８，０００ｇ、約９，０００ｇ、約１０，０００ｇ、約１１，０００ｇ、約１２，０００ｇ、約１３，０００ｇ、約１４，０００ｇ、約１５，０００ｇ、約１６，０００ｇ、約１７，０００ｇ、約１８，０００ｇ、約１９，０００ｇ、約２０，０００ｇまたは約２５，０００ｇで遠心分離される、段落１３４〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
【０６１４】
１４２．懸濁液が、約５，０００ｇ〜約２５，０００ｇで遠心分離される、段落１３４〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
【０６１５】
１４３．懸濁液が、約８，０００ｇ〜約２０，０００ｇで遠心分離される、段落１３４〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
【０６１６】
１４４．懸濁液が、約１０，０００ｇ〜約１５，０００ｇで遠心分離される、段落１３４〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
【０６１７】
１４５．懸濁液が、約１０，０００ｇ〜約１２，０００ｇで遠心分離される、段落１３４〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
【０６１８】
１４６．懸濁液が、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１０５、少なくとも１１０、少なくとも１１５、少なくとも１２０、少なくとも１２５、少なくとも１３０、少なくとも１３５、少なくとも１４０、少なくとも１４５、少なくとも１５０、少なくとも１５５または少なくとも約１６０分、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６１９】
１４７．懸濁液が、２４時間未満、遠心分離される、段落１４６に記載の方法。
【０６２０】
１４８．懸濁液が、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０または約１３８０分〜１４４０分、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２１】
１４９．好ましくは、懸濁液は、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、または約５４０分〜約６００分、遠心分離される。
【０６２２】
１５０．懸濁液が、約５分〜約３時間、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２３】
１５１．懸濁液が、約５分〜約１２０分、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２４】
１５２．懸濁液が、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分または約１５５分〜約１６０分、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２５】
１５３．懸濁液が、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分または約５５分〜約６０分、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２６】
１５４．懸濁液が、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２０、約１４０、約１６０、約１８０、約２２０、約２４０、約３００、約３６０、約４２０、約４８０、約５４０、約６００、約６６０、約７２０、約７８０、約８４０、約９００、約９６０、約１０２０、約１０８０、約１１４０、約１２００、約１２６０、約１３２０、約１３８０分または約１４４０分、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２７】
１５５．懸濁液が、約５分、約１０分、約１５分、約２０分、約２５分、約３０分、約３５分、約４０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約６５分、約７０分、約７５分、約８０分、約８５分、約９０分、約９５分、約１００分、約１０５分、約１１０分、約１１５分、約１２０分、約１２５分、約１３０分、約１３５分、約１４０分、約１４５分、約１５０分、約１５５分または約１６０分、遠心分離される、段落１３４〜１４５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２８】
１５６．前記遠心分離が連続遠心分離であり、供給速度が５０〜５０００ｍｌ／分、１００〜４０００ｍｌ／分、１５０〜３０００ｍｌ／分、２００〜２５００ｍｌ／分、２５０〜２０００ｍｌ／分、３００〜１５００ｍｌ／分、３００〜１０００ｍｌ／分、２００〜１０００ｍｌ／分、２００〜１５００ｍｌ／分、４００〜１５００ｍｌ／分、５００〜１５００ｍｌ／分、５００〜１０００ｍｌ／分、５００〜２０００ｍｌ／分、５００〜２５００ｍｌ／分または１０００〜２５００ｍｌ／分である、段落１３４〜１３８または１４０〜１５５のいずれか１つに記載の方法。
【０６２９】
１５７．前記遠心分離が連続遠心分離であり、供給速度が約１０、約２５、約５０、約７５、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、約１０００、約１０５０、約１１００、約１１５０、約１２００、約１２５０、約１３００、約１３５０、約１４００、約１４５０、約１５００、約１６５０、約１７００、約１８００、約１９００、約２０００、約２１００、約２２００、約２３００、約２４００、約２５００、約２６００、約２７００、約２８００、約２９００、約３０００、約３２５０、約３５００、約３７５０、約４０００、約４２５０、約４５００または約５０００ｍｌ／分である、段落１３４〜１３８または１４０〜１５５のいずれか１つに記載の方法。
【０６３０】
１５８．多糖含有溶液が、濾過される、段落１〜１５７のいずれか１つに記載の方法。
【０６３１】
１５９．前記濾過が、深層濾過、活性炭を通す濾過、サイズ濾過、透析濾過および限外濾過からなる群から選択される、段落１５８に記載の方法。
【０６３２】
１６０．前記濾過が透析濾過である、段落１５８に記載の方法。
【０６３３】
１６１．前記濾過が接線流濾過である、段落１６０に記載の方法。
【０６３４】
１６２．前記濾過が深層濾過である、段落１５８に記載の方法。
【０６３５】
１６３．深層フィルター設計が、カセット、カートリッジ、ディープベッド（例えば、サンドフィルター）およびレンズ状フィルターからなる群から選択される、段落１６２に記載の方法。
【０６３６】
１６４．深層フィルターが、約０．０１〜１００ミクロン、約０．０５〜１００ミクロン、約０．１〜１００ミクロン、約０．２〜１００ミクロン、約０．３〜１００ミクロン、約０．４〜１００ミクロン、約０．５〜１００ミクロン、約０．６〜１００ミクロン、約０．７〜１００ミクロン、約０．８〜１００ミクロン、約０．９〜１００ミクロン、約１〜１００ミクロン、約１．２５〜１００ミクロン、約１．５〜１００ミクロン、約１．７５〜１００ミクロン、約２〜１００ミクロン、約３〜１００ミクロン、約４〜１００ミクロン、約５〜１００ミクロン、約６〜１００ミクロン、約７〜１００ミクロン、約８〜１００ミクロン、約９〜１００ミクロン、約１０〜１００ミクロン、約１５〜１００ミクロン、約２０〜１００ミクロン、約２５〜１００ミクロン、約３０〜１００ミクロン、約４０〜１００ミクロン、約５０〜１００ミクロンまたは約７５〜１００ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６３７】
１６５．深層フィルターが、約０．０１〜７５ミクロン、約０．０５〜７５ミクロン、約０．１〜７５ミクロン、約０．２〜７５ミクロン、約０．３〜７５ミクロン、約０．４〜７５ミクロン、約０．５〜７５ミクロン、約０．６〜７５ミクロン、約０．７〜７５ミクロン、約０．８〜７５ミクロン、約０．９〜７５ミクロン、約１〜７５ミクロン、約１．２５〜７５ミクロン、約１．５〜７５ミクロン、約１．７５〜７５ミクロン、約２〜７５ミクロン、約３〜７５ミクロン、約４〜７５ミクロン、約５〜７５ミクロン、約６〜７５ミクロン、約７〜７５ミクロン、約８〜７５ミクロン、約９〜７５ミクロン、約１０〜７５ミクロン、約１５〜７５ミクロン、約２０〜７５ミクロン、約２５〜７５ミクロン、約３０〜７５ミクロン、約４０〜７５ミクロンまたは約５０〜７５ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６３８】
１６６．深層フィルターが、約０．０１〜５０ミクロン、約０．０５〜５０ミクロン、約０．１〜５０ミクロン、約０．２〜５０ミクロン、約０．３〜５０ミクロン、約０．４〜５０ミクロン、約０．５〜５０ミクロン、約０．６〜５０ミクロン、約０．７〜５０ミクロン、約０．８〜５０ミクロン、約０．９〜５０ミクロン、約１〜５０ミクロン、約１．２５〜５０ミクロン、約１．５〜５０ミクロン、約１．７５〜５０ミクロン、約２〜５０ミクロン、約３〜５０ミクロン、約４〜５０ミクロン、約５〜５０ミクロン、約６〜５０ミクロン、約７〜５０ミクロン、約８〜５０ミクロン、約９〜５０ミクロン、約１０〜５０ミクロン、約１５〜５０ミクロン、約２０〜５０ミクロン、約２５〜５０ミクロン、約３０〜５０ミクロン、約４０〜５０ミクロンまたは約５０〜５０ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６３９】
１６７．深層フィルターが、約０．０１〜２５ミクロン、約０．０５〜２５ミクロン、約０．１〜２５ミクロン、約０．２〜２５ミクロン、約０．３〜２５ミクロン、約０．４〜２５ミクロン、約０．５〜２５ミクロン、約０．６〜２５ミクロン、約０．７〜２５ミクロン、約０．８〜２５ミクロン、約０．９〜２５ミクロン、約１〜２５ミクロン、約１．２５〜２５ミクロン、約１．５〜２５ミクロン、約１．７５〜２５ミクロン、約２〜２５ミクロン、約３〜２５ミクロン、約４〜２５ミクロン、約５〜２５ミクロン、約６〜２５ミクロン、約７〜２５ミクロン、約８〜２５ミクロン、約９〜２５ミクロン、約１０〜２５ミクロン、約１５〜２５ミクロンまたは約２０〜２５ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４０】
１６８．深層フィルターが、約０．０１〜１０ミクロン、約０．０５〜１０ミクロン、約０．１〜１０ミクロン、約０．２〜１０ミクロン、約０．３〜１０ミクロン、約０．４〜１０ミクロン、約０．５〜１０ミクロン、約０．６〜１０ミクロン、約０．７〜１０ミクロン、約０．８〜１０ミクロン、約０．９〜１０ミクロン、約１〜１０ミクロン、約１．２５〜１０ミクロン、約１．５〜１０ミクロン、約１．７５〜１０ミクロン、約２〜１０ミクロン、約３〜１０ミクロン、約４〜１０ミクロン、約５〜１０ミクロン、約６〜１０ミクロン、約７〜１０ミクロン、約８〜１０ミクロンまたは約９〜１０ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４１】
１６９．深層フィルターが、約０．０１〜８ミクロン、約０．０５〜８ミクロン、約０．１〜８ミクロン、約０．２〜８ミクロン、約０．３〜８ミクロン、約０．４〜８ミクロン、約０．５〜８ミクロン、約０．６〜８ミクロン、約０．７〜８ミクロン、約０．８〜８ミクロン、約０．９〜８ミクロン、約１〜８ミクロン、約１．２５〜８ミクロン、約１．５〜８ミクロン、約１．７５〜８ミクロン、約２〜８ミクロン、約３〜８ミクロン、約４〜８ミクロン、約５〜８ミクロン、約６〜８ミクロンまたは約７〜８ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４２】
１７０．深層フィルターが、約０．０１〜５ミクロン、約０．０５〜５ミクロン、約０．１〜５ミクロン、約０．２〜５ミクロン、約０．３〜５ミクロン、約０．４〜５ミクロン、約０．５〜５ミクロン、約０．６〜５ミクロン、約０．７〜５ミクロン、約０．８〜５ミクロン、約０．９〜５ミクロン、約１〜５ミクロン、約１．２５〜５ミクロン、約１．５〜５ミクロン、約１．７５〜５ミクロン、約２〜５ミクロン、約３〜５ミクロンまたは約４〜５ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４３】
１７１．深層フィルターが、約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、約１．７５〜２ミクロン、約２〜２ミクロン、約３〜２ミクロンまたは約４〜２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４４】
１７２．深層フィルターが、約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４５】
１７３．深層フィルターが、約０．０５〜５０ミクロン、０．１〜２５ミクロン、０．２〜１０ミクロン、０．１〜１０ミクロン、０．２〜５ミクロンまたは０．２５〜１ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４６】
１７４．深層フィルターが、１〜２５００Ｌ／ｍ２、５〜２５００Ｌ／ｍ２、１０〜２５００Ｌ／ｍ２、２５〜２５００Ｌ／ｍ２、５０〜２５００Ｌ／ｍ２、７５〜２５００Ｌ／ｍ２、１００〜２５００Ｌ／ｍ２、１５０〜２５００Ｌ／ｍ２、２００〜２５００Ｌ／ｍ２、３００〜２５００Ｌ／ｍ２、４００〜２５００Ｌ／ｍ２、５００〜２５００Ｌ／ｍ２、７５０〜２５００Ｌ／ｍ２、１０００〜２５００Ｌ／ｍ２、１５００〜２５００Ｌ／ｍ２または２０００〜２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４７】
１７５．深層フィルターが、１〜１０００Ｌ／ｍ２、５〜１０００Ｌ／ｍ２、１０〜１０００Ｌ／ｍ２、２５〜１０００Ｌ／ｍ２、５０〜１０００Ｌ／ｍ２、７５〜１０００Ｌ／ｍ２、１００〜１０００Ｌ／ｍ２、１５０〜１０００Ｌ／ｍ２、２００〜１０００Ｌ／ｍ２、３００〜１０００Ｌ／ｍ２、４００〜１０００Ｌ／ｍ２、５００〜１０００Ｌ／ｍ２または７５０〜１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６４８】
１７６．深層フィルターが、１〜７５０Ｌ／ｍ２、５〜７５０Ｌ／ｍ２、１０〜７５０Ｌ／ｍ２、２５〜７５０Ｌ／ｍ２、５０〜７５０Ｌ／ｍ２、７５〜７５０Ｌ／ｍ２、１００〜７５０Ｌ／ｍ２、１５０〜７５０Ｌ／ｍ２、２００〜７５０Ｌ／ｍ２、３００〜７５０Ｌ／ｍ２、４００〜７５０Ｌ／ｍ２または５００〜７５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５５〜１５６または１５９〜１７０のいずれか１つに記載の方法。
【０６４９】
１７７．深層フィルターが、１〜５００Ｌ／ｍ２、５〜５００Ｌ／ｍ２、１０〜５００Ｌ／ｍ２、２５〜５００Ｌ／ｍ２、５０〜５００Ｌ／ｍ２、７５〜５００Ｌ／ｍ２、１００〜５００Ｌ／ｍ２、１５０〜５００Ｌ／ｍ２、２００〜５００Ｌ／ｍ２、３００〜５００Ｌ／ｍ２または４００〜５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６５０】
１７８．深層フィルターが、１〜４００Ｌ／ｍ２、５〜４００Ｌ／ｍ２、１０〜４００Ｌ／ｍ２、２５〜４００Ｌ／ｍ２、５０〜４００Ｌ／ｍ２、７５〜４００Ｌ／ｍ２、１００〜４００Ｌ／ｍ２、１５０〜４００Ｌ／ｍ２、２００〜４００Ｌ／ｍ２または３００〜４００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６５１】
１７９．深層フィルターが、１〜３００Ｌ／ｍ２、５〜３００Ｌ／ｍ２、１０〜３００Ｌ／ｍ２、２５〜３００Ｌ／ｍ２、５０〜３００Ｌ／ｍ２、７５〜３００Ｌ／ｍ２、１００〜３００Ｌ／ｍ２、１５０〜３００Ｌ／ｍ２または２００〜３００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６５２】
１８０．深層フィルターが、１〜２００Ｌ／ｍ２、５〜２００Ｌ／ｍ２、１０〜２００Ｌ／ｍ２、２５〜２００Ｌ／ｍ２、５０〜２００Ｌ／ｍ２、７５〜２００Ｌ／ｍ２、１００〜２００Ｌ／ｍ２または１５０〜２００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６５３】
１８１．深層フィルターが、１〜１００Ｌ／ｍ２、５〜１００Ｌ／ｍ２、１０〜１００Ｌ／ｍ２、２５〜１００Ｌ／ｍ２、５０〜１００Ｌ／ｍ２または７５〜１００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６５４】
１８２．深層フィルターが、１〜５０Ｌ／ｍ２、５〜５０Ｌ／ｍ２、１０〜５０Ｌ／ｍ２または２５〜５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１５８〜１５９または１６２〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
【０６５５】
１８３．供給速度が１〜１０００ＬＭＨ（リットル／ｍ２／時間）、１０〜１０００ＬＭＨ、２５〜１０００ＬＭＨ、５０〜１０００ＬＭＨ、１００〜１０００ＬＭＨ、１２５〜１０００ＬＭＨ、１５０〜１０００ＬＭＨ、２００〜１０００ＬＭＨ、２５０〜１０００ＬＭＨ、３００〜１０００ＬＭＨ、４００〜１０００ＬＭＨ、５００〜１０００ＬＭＨ、６００〜１０００ＬＭＨ、７００〜１０００ＬＭＨ、８００〜１０００ＬＭＨまたは９００〜１０００ＬＭＨである、段落１５８〜１５９または１６２〜１８２のいずれか１つに記載の方法。
【０６５６】
１８４．供給速度が１〜５００ＬＭＨ、１０〜５００ＬＭＨ、２５〜５００ＬＭＨ、５０〜５００ＬＭＨ、１００〜５００ＬＭＨ、１２５〜５００ＬＭＨ、１５０〜５００ＬＭＨ、２００〜５００ＬＭＨ、２５０〜５００ＬＭＨ、３００〜５００ＬＭＨまたは４００〜５００ＬＭＨである、段落１５８〜１５９または１６２〜１８２のいずれか１つに記載の方法。
【０６５７】
１８５．供給速度が１〜４００ＬＭＨ、１０〜４００ＬＭＨ、２５〜４００ＬＭＨ、５０〜４００ＬＭＨ、１００〜４００ＬＭＨ、１２５〜４００ＬＭＨ、１５０〜４００ＬＭＨ、２００〜４００ＬＭＨ、２５０〜４００ＬＭＨまたは３００〜４００ＬＭＨである、段落１５８〜１５９または１６２〜１８２のいずれか１つに記載の方法。
【０６５８】
１８６．供給速度が１〜２５０ＬＭＨ、１０〜２５０ＬＭＨ、２５〜２５０ＬＭＨ、５０〜２５０ＬＭＨ、１００〜２５０ＬＭＨ、１２５〜２５０ＬＭＨ、１５０〜２５０ＬＭＨまたは２００〜２５０ＬＭＨである、段落１５８〜１５９または１６２〜１８２のいずれか１つに記載の方法。
【０６５９】
１８７．供給速度が、約１、約２、約５、約１０、約２５、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２１０、約２２０、約２３０、約２４０、約２５０、約２６０、約２７０、約２８０、約２９０、約３００、約３１０、約３２０、約３３０、約３４０、約３５０、約３６０、約３７０、約３８０、約３９０、約４００、約４２５、約４５０、約４７５、約５００、約５２５、約５５０、約５７５、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０または約１０００ＬＭＨである、段落１５８〜１５９または１６２〜１８２のいずれか１つに記載の方法。
【０６６０】
１８８．濾液が、精密濾過にかけられる、段落１５８〜１８７のいずれか１つに記載の方法。
【０６６１】
１８９．前記精密濾過が、デッドエンド濾過である、段落１８８に記載の方法。
【０６６２】
１９０．前記精密濾過が、接線流精密濾過である、段落１８８に記載の方法。
【０６６３】
１９１．精密濾過フィルターが、約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．４５〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、または約１．７５〜２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１８８〜１９０のいずれか１つに記載の方法。
【０６６４】
１９２．精密濾過フィルターが、約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．４５〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１８８〜１９０のいずれか１つに記載の方法。
【０６６５】
１９３．精密濾過フィルターが、約０．０１、約０．０５、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．４５、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９または約２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落１８８〜１９０のいずれか１つに記載の方法。
【０６６６】
１９４．精密濾過フィルターが、約０．４５ミクロンの名目保持を有する、段落１８８〜１９０のいずれか１つに記載の方法。
【０６６７】
１９５．精密濾過フィルターが、１００〜５０００Ｌ／ｍ２、２００〜５０００Ｌ／ｍ２、３００〜５０００Ｌ／ｍ２、４００〜５０００Ｌ／ｍ２、５００〜５０００Ｌ／ｍ２、７５０〜５０００Ｌ／ｍ２、１０００〜５０００Ｌ／ｍ２、１５００〜５０００Ｌ／ｍ２、２０００〜５０００Ｌ／ｍ２、３０００〜５０００Ｌ／ｍ２または４０００〜５０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６６８】
１９６．精密濾過フィルターが、１００〜２５００Ｌ／ｍ２、２００〜２５００Ｌ／ｍ２、３００〜２５００Ｌ／ｍ２、４００〜２５００Ｌ／ｍ２、５００〜２５００Ｌ／ｍ２、７５０〜２５００Ｌ／ｍ２、１０００〜２５００Ｌ／ｍ２、１５００〜２５００Ｌ／ｍ２または２０００〜２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６６９】
１９７．精密濾過フィルターが、１００〜１５００Ｌ／ｍ２、２００〜１５００Ｌ／ｍ２、３００〜１５００Ｌ／ｍ２、４００〜１５００Ｌ／ｍ２、５００〜１５００Ｌ／ｍ２、７５０〜１５００Ｌ／ｍ２または１０００〜１５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６７０】
１９８．精密濾過フィルターが、１００〜１２５０Ｌ／ｍ２、２００〜１２５０Ｌ／ｍ２、３００〜１２５０Ｌ／ｍ２、４００〜１２５０Ｌ／ｍ２、５００〜１２５０Ｌ／ｍ２、７５０〜１２５０Ｌ／ｍ２または１０００〜１２５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６７１】
１９９．精密濾過フィルターが、１００〜１０００Ｌ／ｍ２、２００〜１０００Ｌ／ｍ２、３００〜１０００Ｌ／ｍ２、４００〜１０００Ｌ／ｍ２、５００〜１０００Ｌ／ｍ２または７５０〜１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６７２】
２００．精密濾過フィルターが、１００〜７５０Ｌ／ｍ２、２００〜７５０Ｌ／ｍ２、３００〜７５０Ｌ／ｍ２、４００〜７５０Ｌ／ｍ２または５００〜７５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６７３】
２０１．精密濾過フィルターが、１００〜６００Ｌ／ｍ２、２００〜６００Ｌ／ｍ２、３００〜６００Ｌ／ｍ２または４００〜６００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６７４】
２０２．精密濾過フィルターが、１００〜５００Ｌ／ｍ２、２００〜５００Ｌ／ｍ２、３００〜５００Ｌ／ｍ２または４００〜５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６７５】
２０３．精密濾過フィルターが、１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、約１０００、約１０５０、約１１００、約１１５０、約１２００、約１２５０、約１３００、約１３５０、約１４００、約１４５０、約１５００、約１５５０、約１６００、約１６５０、約１７００、約１７５０、約１８００、約１８５０、約１９００、約１９５０、約２０００、約２０５０、約２１００、約２１５０、約２２００、約２２５０、約２３００、約２３５０、約２４００、約２４５０または約２５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落１８８〜１９４のいずれか１つに記載の方法。
【０６７６】
２０４．濾液が、限外濾過および／または透析濾過によってさらに処理される、段落１５８〜２０３のいずれか１つに記載の方法。
【０６７７】
２０５．濾液が、限外濾過によってさらに処理される、段落１５８〜２０３のいずれか１つに記載の方法。
【０６７８】
２０６．限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６７９】
２０７．限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜７５０ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８０】
２０８．限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８１】
２０９．限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８２】
２１０．限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８３】
２１１．限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜５０ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８４】
２１２．限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜３０ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８５】
２１３．限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜１０００ｋＤａまたは約７５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８６】
２１４．限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜５００ｋＤａまたは約４００ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８７】
２１５．分子が５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜３００ｋＤａまたは約２００ｋＤａ〜３００ｋＤａである、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８８】
２１６．限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１００ｋＤａまたは約７５ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６８９】
２１７．限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約７５０ｋＤａまたは約１０００ｋＤａである、段落２０４〜２０５のいずれか１つに記載の方法。
【０６９０】
２１８．限外濾過ステップの濃縮係数が、約１．５〜約１０である、段落２０４〜２１７のいずれか１つに記載の方法。
【０６９１】
２１９．濃縮係数が、約２〜約８である、段落２０４〜２１７のいずれか１つに記載の方法。
【０６９２】
２２０．濃縮係数が、約２〜約５である、段落２０４〜２１７のいずれか１つに記載の方法。
【０６９３】
２２１．濃縮係数が、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５または約１０．０である、段落２０４〜２１７のいずれか１つに記載の方法。
【０６９４】
２２２．濃縮係数が、約２、約３、約４、約５または約６である、段落２０４〜２１７のいずれか１つに記載の方法。
【０６９５】
２２３．前記限外濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、段落２０４〜２２２のいずれか１つに記載の方法。
【０６９６】
２２４．前記限外濾過ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落２０４〜２２２のいずれか１つに記載の方法。
【０６９７】
２２５．前記限外濾過ステップが、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落２０４〜２２２のいずれか１つに記載の方法。
【０６９８】
２２６．前記限外濾過ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落２０４〜２２２のいずれか１つに記載の方法。
【０６９９】
２２７．限外濾過の濾液が、透析濾過によって処理される、段落１５８〜２２６のいずれか１つに記載の方法。
【０７００】
２２８．置換液が水である、段落２２７に記載の方法。
【０７０１】
２２９．置換液が塩水である、段落２２７に記載の方法。
【０７０２】
２３０．塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される、段落２２９に記載の方法。
【０７０３】
２３１．塩が、塩化ナトリウムである、段落２２９に記載の方法。
【０７０４】
２３２．置換液が、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭまたは約５００ｍＭの塩化ナトリウムである、段落２２９に記載の方法。
【０７０５】
２３３．置換液が、緩衝溶液である、段落２２７に記載の方法。
【０７０６】
２３４．置換液が、緩衝剤がＮ−（２−アセトアミド）−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、酢酸の塩（酢酸塩）、Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、２−アミノエタンスルホン酸（ＡＥＳ、タウリン）、アンモニア、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（ＡＭＰ）、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ、アメジオール）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ビス−（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、炭酸水素ナトリウム（重炭酸塩）、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−グリシン（ビシン）、［ビス−（２−ヒドロキシエチル）−イミノ］−トリス−（ヒドロキシメチルメタン）（ビス−トリス）、１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］プロパン（ビス−トリス−プロパン）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジル酸塩）、３−（シクロヘキシルアミノ）−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、炭酸ナトリウム（炭酸塩）、シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、３−［Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、グリシン、グリシルグリシン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ、ＥＰＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、イミダゾール、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、２−（Ｎ−モルホリノ）−エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、リン酸の塩（リン酸塩）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、ピリジン、コハク酸の塩（コハク酸塩）、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、２−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン（トリシン）およびトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）からなる群から選択される、緩衝溶液である、段落２２７に記載の方法。
【０７０７】
２３５．置換液が、緩衝剤が酢酸の塩（酢酸塩）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される緩衝溶液である、段落２２７に記載の方法。
【０７０８】
２３６．置換液が、緩衝剤がクエン酸の塩（クエン酸塩）である緩衝溶液である、段落２２７に記載の方法。
【０７０９】
２３７．置換液が、緩衝剤がコハク酸の塩（コハク酸塩）である緩衝溶液である、段落２２７に記載の方法。
【０７１０】
２３８．前記塩が、ナトリウム塩である、段落２３４〜２３７のいずれか１つに記載の方法。
【０７１１】
２３９．前記塩が、カリウム塩である、段落２３４〜２３７のいずれか１つに記載の方法。
【０７１２】
２４０．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約４．０〜１１．０、約５．０〜１０．０、約５．５〜９．０、約６．０〜８．０、約６．０〜７．０、約６．５〜７．５、約６．５〜７．０または約６．０〜７．５である、段落２３３〜２３９のいずれか１つに記載の方法。
【０７１３】
２４１．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５、約１０．０、約１０．５または約１１．０である、段落２３３〜２３９のいずれか１つに記載の方法。
【０７１４】
２４２．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５または約９．０である、段落２３３〜２３９のいずれか１つに記載の方法。
【０７１５】
２４３．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約６．５、約７．０または約７．５である、段落２２６〜２３１のいずれか１つに記載の方法。
【０７１６】
２４４．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約７．０である、段落２３３〜２３９のいずれか１つに記載の方法。
【０７１７】
２４５．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１ｍＭ〜１００ｍＭ、約２ｍＭ〜１００ｍＭ、約３ｍＭ〜１００ｍＭ、約４ｍＭ〜１００ｍＭ、約５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６ｍＭ〜１００ｍＭ、約７ｍＭ〜１００ｍＭ、約８ｍＭ〜１００ｍＭ、約９ｍＭ〜１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜１００ｍＭ、約１１ｍＭ〜１００ｍＭ、約１２ｍＭ〜１００ｍＭ、約１３ｍＭ〜１００ｍＭ、約１４ｍＭ〜１００ｍＭ、約１５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１６ｍＭ〜１００ｍＭ、約１７ｍＭ〜１００ｍＭ、約１８ｍＭ〜１００ｍＭ、約１９ｍＭ〜１００ｍＭ、約２０ｍＭ〜１００ｍＭ、約２５ｍＭ〜１００ｍＭ、約３０ｍＭ〜１００ｍＭ、約３５ｍＭ〜１００ｍＭ、約４０ｍＭ〜１００ｍＭ、約４５ｍＭ〜１００ｍＭ、約５０ｍＭ〜１００ｍＭ、約５５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６０ｍＭ〜１００ｍＭ、約６５ｍＭ〜１００ｍＭ、約７０ｍＭ〜１００ｍＭ、約７５ｍＭ〜１００ｍＭ、約８０ｍＭ〜１００ｍＭ、約８５ｍＭ〜１００ｍＭ、約９０ｍＭ〜１００ｍＭまたは約９５ｍＭ〜１００ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７１８】
２４６．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１ｍＭ〜５０ｍＭ、約２ｍＭ〜５０ｍＭ、約３ｍＭ〜５０ｍＭ、約４ｍＭ〜５０ｍＭ、約５ｍＭ〜５０ｍＭ、約６ｍＭ〜５０ｍＭ、約７ｍＭ〜５０ｍＭ、約８ｍＭ〜５０ｍＭ、約９ｍＭ〜５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜５０ｍＭ、約１１ｍＭ〜５０ｍＭ、約１２ｍＭ〜５０ｍＭ、約１３ｍＭ〜５０ｍＭ、約１４ｍＭ〜５０ｍＭ、約１５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１６ｍＭ〜５０ｍＭ、約１７ｍＭ〜５０ｍＭ、約１８ｍＭ〜５０ｍＭ、約１９ｍＭ〜５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜５０ｍＭ、約３０ｍＭ〜５０ｍＭ、約３５ｍＭ〜５０ｍＭ、約４０ｍＭ〜５０ｍＭまたは約４５ｍＭ〜５０ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７１９】
２４７．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１ｍＭ〜２５ｍＭ、約２ｍＭ〜２５ｍＭ、約３ｍＭ〜２５ｍＭ、約４ｍＭ〜２５ｍＭ、約５ｍＭ〜２５ｍＭ、約６ｍＭ〜２５ｍＭ、約７ｍＭ〜２５ｍＭ、約８ｍＭ〜２５ｍＭ、約９ｍＭ〜２５ｍＭ、約１０ｍＭ〜２５ｍＭ、約１１ｍＭ〜２５ｍＭ、約１２ｍＭ〜２５ｍＭ、約１３ｍＭ〜２５ｍＭ、約１４ｍＭ〜２５ｍＭ、約１５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１６ｍＭ〜２５ｍＭ、約１７ｍＭ〜２５ｍＭ、約１８ｍＭ〜２５ｍＭ、約１９ｍＭ〜２５ｍＭまたは約２０ｍＭ〜２５ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７２０】
２４８．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１５ｍＭ、約１ｍＭ〜１５ｍＭ、約２ｍＭ〜１５ｍＭ、約３ｍＭ〜１５ｍＭ、約４ｍＭ〜１５ｍＭ、約５ｍＭ〜１５ｍＭ、約６ｍＭ〜１５ｍＭ、約７ｍＭ〜１５ｍＭ、約８ｍＭ〜１５ｍＭ、約９ｍＭ〜１５ｍＭ、約１０ｍＭ〜１５ｍＭ、約１１ｍＭ〜１５ｍＭ、約１２ｍＭ〜１５ｍＭ、約１３ｍＭ〜１５ｍＭまたは約１４ｍＭ〜１５ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７２１】
２４９．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１０ｍＭ、約１ｍＭ〜１０ｍＭ、約２ｍＭ〜１０ｍＭ、約３ｍＭ〜１０ｍＭ、約４ｍＭ〜１０ｍＭ、約５ｍＭ〜１０ｍＭ、約６ｍＭ〜１０ｍＭ、約７ｍＭ〜１０ｍＭ、約８ｍＭ〜１０ｍＭまたは約９ｍＭ〜１０ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７２２】
２５０．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７２３】
２５１．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７２４】
２５２．透析濾過緩衝剤の濃度が、約１０ｍＭである、段落２３３〜２４４のいずれか１つに記載の方法。
【０７２５】
２５３．置換液が、キレート剤を含む、段落２３３〜２５２のいずれか１つに記載の方法。
【０７２６】
２５４．置換液が、ミョウバンキレート剤を含む、段落２３３〜２５２のいずれか１つに記載の方法。
【０７２７】
２５５．置換液が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（ＥＤＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＤＰＴＡ−ＯＨ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジプロピオン酸ジヒドロクロリド（ＥＤＤＰ）、エチレンジアミン−テトラキス（メチレンスルホン酸）（ＥＤＴＰＯ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）（ＮＴＰＯ）、イミノ−二酢酸（ＩＤＡ）、ヒドロキシイミノ−二酢酸（ＨＩＤＡ）、ニトリロ−三酢酸（ＮＴＰ）、トリエチレンテトラミン−六酢酸（ＴＴＨＡ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、アルファリポ酸（ＡＬＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、チアミンテトラヒドロフルフリルジスルフィド（ＴＴＦＤ）、ジメルカプロール、ペニシラミン、デフェロキサミン（ＤＦＯＡ）、デフェラシロクス、ホスホネート、クエン酸の塩（クエン酸塩）およびこれらの組合せからなる群から選択されるキレート剤を含む、段落２３３〜２５２のいずれか１つに記載の方法。
【０７２８】
２５６．置換液が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（ＥＤＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＤＰＴＡ−ＯＨ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、クエン酸の塩（クエン酸塩）およびこれらの組合せからなる群から選択されるキレート剤を含む、段落２３３〜２５５のいずれか１つに記載の方法。
【０７２９】
２５７．置換液が、キレート剤としてエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む、段落２３３〜２５４のいずれか１つに記載の方法。
【０７３０】
２５８．置換液が、キレート剤としてクエン酸の塩（クエン酸塩）を含む、段落２３３〜２５４のいずれか１つに記載の方法。
【０７３１】
２５９．置換液が、キレート剤としてクエン酸ナトリウムを含む、段落２３３〜２５４のいずれか１つに記載の方法。
【０７３２】
２６０．置換液中のキレート剤の濃度が、１〜５００ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７３３】
２６１．置換液中のキレート剤の濃度が、２〜４００ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７３４】
２６２．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜４００ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７３５】
２６３．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜２００ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７３６】
２６４．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜１００ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７３７】
２６５．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜５０ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７３８】
２６６．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜３０ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７３９】
２６７．置換液中のキレート剤の濃度が、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７４０】
２６８．置換液中のキレート剤の濃度が、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７４１】
２６９．置換液中のキレート剤の濃度が、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである、段落２５３〜２５８のいずれか１つに記載の方法。
【０７４２】
２７０．置換液が、塩を含む、段落２３３〜２６９のいずれか１つに記載の方法。
【０７４３】
２７１．塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される、段落２７０に記載の方法。
【０７４４】
２７２．塩が、塩化ナトリウムである、段落２７０に記載の方法。
【０７４５】
２７３．置換液が、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０または約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む、段落２７０〜２７２のいずれか１つに記載の方法。
【０７４６】
２７４．透析容量の数が、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０である、段落２２７〜２７３のいずれか１つに記載の方法。
【０７４７】
２７５．透析容量の数が、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３１、約３２、約３３、約３４、約３５、約３６、約３７、約３８、約３９、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５、約４６、約４７、約４８、約４９、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５または約１００である、段落２２７〜２７３のいずれか１つに記載の方法。
【０７４８】
２７６．透析容量の数が、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である、段落２２７〜２７３のいずれか１つに記載の方法。
【０７４９】
２７７．前記限外濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、段落２２７〜２７６のいずれか１つに記載の方法。
【０７５０】
２７８．前記透析濾過ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落２２７〜２７６のいずれか１つに記載の方法。
【０７５１】
２７９．前記透析濾過ステップが、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落２２７〜２７６のいずれか１つに記載の方法。
【０７５２】
２８０．前記透析濾過ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落２２７〜２７６のいずれか１つに記載の方法。
【０７５３】
２８１．前記限外濾過ステップおよび透析濾過ステップが、両方とも行われる場合、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、段落２０４〜２７７のいずれか１つに記載の方法。
【０７５４】
２８２．前記限外濾過ステップおよび透析濾過ステップが、両方とも行われる場合、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落２０４〜２７７のいずれか１つに記載の方法。
【０７５５】
２８３．前記限外濾過ステップおよび透析濾過ステップが、両方とも行われる場合、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落２０４〜２７７のいずれか１つに記載の方法。
【０７５６】
２８４．前記限外濾過ステップおよび透析濾過ステップが、両方とも行われる場合、約５０℃の温度で実施される、段落２０４〜２７７のいずれか１つに記載の方法。
【０７５７】
２８５．多糖を含有する溶液（例えば、上清、濾液または保持液）が、活性炭濾過ステップによって処理される、段落１〜２８４のいずれか１つに記載の方法。
【０７５８】
２８６．活性炭が、粉末の形態で、顆粒炭素層として、圧縮炭素ブロックまたは押出し炭素ブロックとして添加される（例えば、Ｎｏｒｉｔのアクティブチャコールを参照されたい）、段落２８５のいずれか１つに記載の方法。
【０７５９】
２８７．活性炭が、約０．１〜２０％（重量）、１〜１５％（重量）、１〜１０％（重量）、２〜１０％（重量）、３〜１０％（重量）、４〜１０％（重量）、５〜１０％（重量）、１〜５％（重量）または２〜５％（重量）の量で添加される、段落２８６に記載の方法。
【０７６０】
２８８．混合物が撹拌され、静置される、段落２８６〜２８７のいずれか１つに記載の方法。
【０７６１】
２８９．混合物が撹拌され、約５、約１０、約１５、約２０、約３０、約４５、約６０、約９０、約１２０、約１８０、約２４０分またはそれより長く静置される、段落２８６〜２８７のいずれか１つに記載の方法。
【０７６２】
２９０．活性炭がその後除去される、段落２８６〜２８９のいずれか１つに記載の方法。
【０７６３】
２９１．活性炭が、遠心分離または濾過によって除去される、段落２８６〜２９０のいずれか１つに記載の方法。
【０７６４】
２９２．溶液が、マトリックス中に固定された活性炭を介して濾過される、段落２８５に記載の方法。
【０７６５】
２９３．前記マトリックスが、溶液にとって透過性の多孔性フィルター媒体である、段落２８５に記載の方法。
【０７６６】
２９４．前記マトリックスが、支持材料を含む、段落２９２〜２９３のいずれか１つに記載の方法。
【０７６７】
２９５．前記マトリックスが、結合剤材料を含む、段落２９２〜２９３のいずれか１つに記載の方法。
【０７６８】
２９６．前記支持材料が、合成ポリマーである、段落２９４〜２９５のいずれか１つに記載の方法。
【０７６９】
２９７．前記支持材料が、天然起源のポリマーである、段落２９４〜２９５のいずれか１つに記載の方法。
【０７７０】
２９８．前記合成ポリマーが、ポリスチレン、ポリアクリルアミドまたはポリメチルメタクリレートのいずれか１つを含む、段落２９６に記載の方法。
【０７７１】
２９９．前記合成ポリマーが、ポリスチレン、ポリアクリルアミドおよびポリメチルメタクリレートからなる群から選択される、段落２９６に記載の方法。
【０７７２】
３００．天然起源の前記ポリマーが、セルロース、多糖、デキストランまたはアガロースのいずれか１つを含む、段落２９７に記載の方法。
【０７７３】
３０１．前記天然のポリマーが、セルロース、多糖、デキストランおよびアガロースからなる群から選択される、段落２９７に記載の方法。
【０７７４】
３０２．前記ポリマー支持材料が、存在する場合、機械的剛性を提供するための繊維ネットワークの形態にある、段落２９４〜３０１のいずれか１つに記載の方法。
【０７７５】
３０３．前記結合材材料が、存在する場合、樹脂である、段落２９４〜３０２のいずれか１つに記載の方法。
【０７７６】
３０４．前記マトリックスが、膜シートの形態を有する、段落２９２〜３０３のいずれか１つに記載の方法。
【０７７７】
３０５．マトリックス中に固定された活性炭が、フロースルー炭素カートリッジの形態にある、段落２９２〜３０４のいずれか１つに記載の方法。
【０７７８】
３０６．膜シートがらせん状に巻かれる、段落３０４のいずれか１つに記載の方法。
【０７７９】
３０７．いくつかのディスクが互いに積み重ねられる、段落２９２〜３０６のいずれか１つに記載の方法。
【０７８０】
３０８．積み重ねられたディスクの構成がレンズ状である、段落３０７に記載の方法。
【０７８１】
３０９．炭素フィルター中の活性炭が、泥炭、褐炭、木材またはヤシ殻に由来する、段落２９２〜３０８のいずれか１つに記載の方法。
【０７８２】
３１０．マトリックス中に固定された活性炭が、筺体中に入れられて、独立フィルターユニットを形成する、段落２９２〜３０９のいずれか１つに記載の方法。
【０７８３】
３１１．活性炭フィルターが、活性炭粉末が所定の位置に捕捉され、樹脂に結合したセルロースマトリックスを含む、段落２９２〜３１０のいずれか１つに記載の方法。
【０７８４】
３１２．活性炭フィルターが、約０．０１〜１００ミクロン、約０．０５〜１００ミクロン、約０．１〜１００ミクロン、約０．２〜１００ミクロン、約０．３〜１００ミクロン、約０．４〜１００ミクロン、約０．５〜１００ミクロン、約０．６〜１００ミクロン、約０．７〜１００ミクロン、約０．８〜１００ミクロン、約０．９〜１００ミクロン、約１〜１００ミクロン、約１．２５〜１００ミクロン、約１．５〜１００ミクロン、約１．７５〜１００ミクロン、約２〜１００ミクロン、約３〜１００ミクロン、約４〜１００ミクロン、約５〜１００ミクロン、約６〜１００ミクロン、約７〜１００ミクロン、約８〜１００ミクロン、約９〜１００ミクロン、約１０〜１００ミクロン、約１５〜１００ミクロン、約２０〜１００ミクロン、約２５〜１００ミクロン、約３０〜１００ミクロン、約４０〜１００ミクロン、約５０〜１００ミクロンまたは約７５〜１００ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７８５】
３１３．活性炭フィルターが、約０．０１〜５０ミクロン、約０．０５〜５０ミクロン、約０．１〜５０ミクロン、約０．２〜５０ミクロン、約０．３〜５０ミクロン、約０．４〜５０ミクロン、約０．５〜５０ミクロン、約０．６〜５０ミクロン、約０．７〜５０ミクロン、約０．８〜５０ミクロン、約０．９〜５０ミクロン、約１〜５０ミクロン、約１．２５〜５０ミクロン、約１．５〜５０ミクロン、約１．７５〜５０ミクロン、約２〜５０ミクロン、約３〜５０ミクロン、約４〜５０ミクロン、約５〜５０ミクロン、約６〜５０ミクロン、約７〜５０ミクロン、約８〜５０ミクロン、約９〜５０ミクロン、約１０〜５０ミクロン、約１５〜５０ミクロン、約２０〜５０ミクロン、約２５〜５０ミクロン、約３０〜５０ミクロン、約４０〜５０ミクロンまたは約５０〜５０ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７８６】
３１４．活性炭フィルターが、約０．０１〜２５ミクロン、約０．０５〜２５ミクロン、約０．１〜２５ミクロン、約０．２〜２５ミクロン、約０．３〜２５ミクロン、約０．４〜２５ミクロン、約０．５〜２５ミクロン、約０．６〜２５ミクロン、約０．７〜２５ミクロン、約０．８〜２５ミクロン、約０．９〜２５ミクロン、約１〜２５ミクロン、約１．２５〜２５ミクロン、約１．５〜２５ミクロン、約１．７５〜２５ミクロン、約２〜２５ミクロン、約３〜２５ミクロン、約４〜２５ミクロン、約５〜２５ミクロン、約６〜２５ミクロン、約７〜２５ミクロン、約８〜２５ミクロン、約９〜２５ミクロン、約１０〜２５ミクロン、約１５〜２５ミクロンまたは約２０〜２５ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７８７】
３１５．活性炭フィルターが、約０．０１〜１０ミクロン、約０．０５〜１０ミクロン、約０．１〜１０ミクロン、約０．２〜１０ミクロン、約０．３〜１０ミクロン、約０．４〜１０ミクロン、約０．５〜１０ミクロン、約０．６〜１０ミクロン、約０．７〜１０ミクロン、約０．８〜１０ミクロン、約０．９〜１０ミクロン、約１〜１０ミクロン、約１．２５〜１０ミクロン、約１．５〜１０ミクロン、約１．７５〜１０ミクロン、約２〜１０ミクロン、約３〜１０ミクロン、約４〜１０ミクロン、約５〜１０ミクロン、約６〜１０ミクロン、約７〜１０ミクロン、約８〜１０ミクロンまたは約９〜１０ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７８８】
３１６．活性炭フィルターが、約０．０１〜８ミクロン、約０．０５〜８ミクロン、約０．１〜８ミクロン、約０．２〜８ミクロン、約０．３〜８ミクロン、約０．４〜８ミクロン、約０．５〜８ミクロン、約０．６〜８ミクロン、約０．７〜８ミクロン、約０．８〜８ミクロン、約０．９〜８ミクロン、約１〜８ミクロン、約１．２５〜８ミクロン、約１．５〜８ミクロン、約１．７５〜８ミクロン、約２〜８ミクロン、約３〜８ミクロン、約４〜８ミクロン、約５〜８ミクロン、約６〜８ミクロンまたは約７〜８ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７８９】
３１７．活性炭フィルターが、約０．０１〜５ミクロン、約０．０５〜５ミクロン、約０．１〜５ミクロン、約０．２〜５ミクロン、約０．３〜５ミクロン、約０．４〜５ミクロン、約０．５〜５ミクロン、約０．６〜５ミクロン、約０．７〜５ミクロン、約０．８〜５ミクロン、約０．９〜５ミクロン、約１〜５ミクロン、約１．２５〜５ミクロン、約１．５〜５ミクロン、約１．７５〜５ミクロン、約２〜５ミクロン、約３〜５ミクロンまたは約４〜５ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７９０】
３１８．活性炭フィルターが、約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、約１．７５〜２ミクロン、約２〜２ミクロン、約３〜２ミクロンまたは約４〜２ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７９１】
３１９．活性炭フィルターが、約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７９２】
３２０．活性炭フィルターが、約０．０５〜５０ミクロン、０．１〜２５ミクロン、０．２〜１０ミクロン、０．１〜１０ミクロン、０．２〜５ミクロンまたは０．２５〜１ミクロンの名目ミクロンレーティングを有する、段落２８５〜３１１のいずれか１つに記載の方法。
【０７９３】
３２１．活性炭フィルターが、１〜５００ＬＭＨ、１０〜５００ＬＭＨ、１５〜５００ＬＭＨ、２０〜５００ＬＭＨ、２５〜５００ＬＭＨ、３０〜５００ＬＭＨ、４０〜５００ＬＭＨ、５０〜５００ＬＭＨ、１００〜５００ＬＭＨ、１２５〜５００ＬＭＨ、１５０〜５００ＬＭＨ、２００〜５００ＬＭＨ、２５０〜５００ＬＭＨ、３００〜５００ＬＭＨまたは４００〜５００ＬＭＨの供給速度で行われる、段落２８５〜３２０のいずれか１つに記載の方法。
【０７９４】
３２２．活性炭フィルターが、１〜２００ＬＭＨ、１０〜２００ＬＭＨ、１５〜２００ＬＭＨ、２０〜２００ＬＭＨ、２５〜２００ＬＭＨ、３０〜２００ＬＭＨ、４０〜２００ＬＭＨ、５０〜２００ＬＭＨ、１００〜２００ＬＭＨ、１２５〜２００ＬＭＨまたは１５０〜２００ＬＭＨの供給速度で行われる、段落２８５〜３２０のいずれか１つに記載の方法。
【０７９５】
３２３．活性炭フィルターが、１〜１５０ＬＭＨ、１０〜１５０ＬＭＨ、１５〜１５０ＬＭＨ、２０〜１５０ＬＭＨ、２５〜１５０ＬＭＨ、３０〜１５０ＬＭＨ、４０〜１５０ＬＭＨ、５０〜１５０ＬＭＨ、１００〜１５０ＬＭＨまたは１２５〜１５０ＬＭＨの供給速度で行われる、段落２８５〜３２０のいずれか１つに記載の方法。
【０７９６】
３２４．活性炭フィルターが、１〜１００ＬＭＨ、１０〜１００ＬＭＨ、１５〜１００ＬＭＨ、２０〜１００ＬＭＨ、２５〜１００ＬＭＨ、３０〜１００ＬＭＨ、４０〜１００ＬＭＨ、または５０〜１００ＬＭＨの供給速度で行われる、段落２８５〜３２０のいずれか１つに記載の方法。
【０７９７】
３２５．活性炭フィルターが、１〜７５ＬＭＨ、５〜７５ＬＭＨ、１０〜７５ＬＭＨ、１５〜７５ＬＭＨ、２０〜７５ＬＭＨ、２５〜７５ＬＭＨ、３０〜７５ＬＭＨ、３５〜７５ＬＭＨ、４０〜７５ＬＭＨ、４５〜７５ＬＭＨ、５０〜７５ＬＭＨ、５５〜７５ＬＭＨ、６０〜７５ＬＭＨ、６５〜７５ＬＭＨ、または７０〜７５ＬＭＨの供給速度で行われる、段落２８５〜３２０のいずれか１つに記載の方法。
【０７９８】
３２６．活性炭フィルターが、１〜５０ＬＭＨ、５〜５０ＬＭＨ、７〜５０ＬＭＨ、１０〜５０ＬＭＨ、１５〜５０ＬＭＨ、２０〜５０ＬＭＨ、２５〜５０ＬＭＨ、３０〜５０ＬＭＨ、３５〜５０ＬＭＨ、４０〜５０ＬＭＨまたは４５〜５０ＬＭＨの供給速度で行われる、段落２８５〜３２０のいずれか１つに記載の方法。
【０７９９】
３２７．活性炭フィルターが、約１、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２２５、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約７００、約８００、約９００、約９５０または約１０００ＬＭＨの供給速度で行われる、段落２８５〜３２０のいずれか１つに記載の方法。
【０８００】
３２８．フィルターが、５〜１０００Ｌ／ｍ２、１０〜７５０Ｌ／ｍ２、１５〜５００Ｌ／ｍ２、２０〜４００Ｌ／ｍ２、２５〜３００Ｌ／ｍ２、３０〜２５０Ｌ／ｍ２、４０〜２００Ｌ／ｍ２または３０〜１００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する活性炭フィルターによって、溶液が処理される、段落２８５〜３２７のいずれか１つに記載の方法。
【０８０１】
３２９．フィルターが約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２２５、約２５０、約２７５、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、または約１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する活性炭フィルターによって、溶液が処理される、段落２８５〜３２７のいずれか１つに記載の方法。
【０８０２】
３３０．１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回の活性炭濾過ステップが実施される、段落２８５〜３２９のいずれか１つに記載の方法。
【０８０３】
３３１．１、２または３回の活性炭濾過ステップが実施される、段落２８５〜３２９のいずれか１つに記載の方法。
【０８０４】
３３２．１または２回の活性炭濾過ステップが実施される、段落２８５〜３２９のいずれか１つに記載の方法。
【０８０５】
３３３．溶液が、活性炭フィルターによって連続的に処理される、段落２８５〜３３２のいずれか１つに記載の方法。
【０８０６】
３３４．溶液が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の活性炭フィルターによって連続的に処理される、段落２８５〜３３２のいずれか１つに記載の方法。
【０８０７】
３３５．溶液が、２、３、４または５個の活性炭フィルターによって連続的に処理される、段落２８５〜３３２のいずれか１つに記載の方法。
【０８０８】
３３６．溶液が、２個の活性炭フィルターによって連続的に処理される、段落２８５〜３３２のいずれか１つに記載の方法。
【０８０９】
３３７．溶液が、３個の活性炭フィルターによって連続的に処理される、段落２８５〜３３２のいずれか１つに記載の方法。
【０８１０】
３３８．溶液が、４個の活性炭フィルターによって連続的に処理される、段落２８５〜３３２のいずれか１つに記載の方法。
【０８１１】
３３９．溶液が、５個の活性炭フィルターによって連続的に処理される、段落２８５〜３３２のいずれか１つに記載の方法。
【０８１２】
３４０．活性炭濾過ステップが、１回通過モードで実施される、段落２８５〜３３９のいずれか１つに記載の方法。
【０８１３】
３４１．活性炭濾過ステップが、再循環モードで実施される、段落２８５〜３３９のいずれか１つに記載の方法。
【０８１４】
３４２．２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０サイクルの活性炭濾過が実施される、段落３４１に記載の方法。
【０８１５】
３４３．２、３、４、５、６、７、８、９または１０サイクルの活性炭濾過が実施される、段落３４１に記載の方法。
【０８１６】
３４４．２または３サイクルの活性炭濾過が実施される、段落３４１に記載の方法。
【０８１７】
３４５．２サイクルの活性炭濾過が実施される、段落３４１に記載の方法。
【０８１８】
３４６．濾液が、さらに濾過される、段落２８５〜３４５のいずれか１つに記載の方法。
【０８１９】
３４７．濾液が、精密濾過にかけられる、段落２８５〜３４５のいずれか１つに記載の方法。
【０８２０】
３４８．前記精密濾過が、デッドエンド濾過（垂直濾過）である、段落３４７に記載の方法。
【０８２１】
３４９．前記精密濾過が、接線流精密濾過である、段落３４７に記載の方法。
【０８２２】
３５０．前記精密濾過フィルターが、約０．０１〜２ミクロン、約０．０５〜２ミクロン、約０．１〜２ミクロン、約０．２〜２ミクロン、約０．３〜２ミクロン、約０．４〜２ミクロン、約０．４５〜２ミクロン、約０．５〜２ミクロン、約０．６〜２ミクロン、約０．７〜２ミクロン、約０．８〜２ミクロン、約０．９〜２ミクロン、約１〜２ミクロン、約１．２５〜２ミクロン、約１．５〜２ミクロン、または約１．７５〜２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落３４７〜３４９のいずれか１つに記載の方法。
【０８２３】
３５１．前記精密濾過フィルターが、約０．０１〜１ミクロン、約０．０５〜１ミクロン、約０．１〜１ミクロン、約０．２〜１ミクロン、約０．３〜１ミクロン、約０．４〜１ミクロン、約０．４５〜１ミクロン、約０．５〜１ミクロン、約０．６〜１ミクロン、約０．７〜１ミクロン、約０．８〜１ミクロンまたは約０．９〜１ミクロンの名目保持範囲を有する、段落３４７〜３４９のいずれか１つに記載の方法。
【０８２４】
３５２．前記精密濾過フィルターが、約０．０１、約０．０５、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．４５、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９または約２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落３４７〜３４９のいずれか１つに記載の方法。
【０８２５】
３５３．前記精密濾過フィルターが、約０．２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落３４３〜３４５のいずれか１つに記載の方法。
【０８２６】
３５４．前記精密濾過フィルターが、１００〜６０００Ｌ／ｍ２、２００〜６０００Ｌ／ｍ２、３００〜６０００Ｌ／ｍ２、４００〜６０００Ｌ／ｍ２、５００〜６０００Ｌ／ｍ２、７５０〜６０００Ｌ／ｍ２、１０００〜６０００Ｌ／ｍ２、１５００〜６０００Ｌ／ｍ２、２０００〜６０００Ｌ／ｍ２、３０００〜６０００Ｌ／ｍ２または４０００〜６０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落３４７〜３５３のいずれか１つに記載の方法。
【０８２７】
３５５．前記精密濾過フィルターが、１００〜４０００Ｌ／ｍ２、２００〜４０００Ｌ／ｍ２、３００〜４０００Ｌ／ｍ２、４００〜４０００Ｌ／ｍ２、５００〜４０００Ｌ／ｍ２、７５０〜４０００Ｌ／ｍ２、１０００〜４０００Ｌ／ｍ２、１５００〜４０００Ｌ／ｍ２、２０００〜４０００Ｌ／ｍ２、２５００〜４０００Ｌ／ｍ２、３０００〜４０００Ｌ／ｍ２、３０００〜４０００Ｌ／ｍ２または３５００〜４０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落３４７〜３５３のいずれか１つに記載の方法。
【０８２８】
３５６．前記精密濾過フィルターが、１００〜３７５０Ｌ／ｍ２、２００〜３７５０Ｌ／ｍ２、３００〜３７５０Ｌ／ｍ２、４００〜３７５０Ｌ／ｍ２、５００〜３７５０Ｌ／ｍ２、７５０〜３７５０Ｌ／ｍ２、１０００〜３７５０Ｌ／ｍ２、１５００〜３７５０Ｌ／ｍ２、２０００〜３７５０Ｌ／ｍ２、２５００〜３７５０Ｌ／ｍ２、３０００〜３７５０Ｌ／ｍ２、３０００〜３７５０Ｌ／ｍ２または３５００〜３７５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落３４７〜３５３のいずれか１つに記載の方法。
【０８２９】
３５７．前記精密濾過フィルターが、１００〜１２５０Ｌ／ｍ２、２００〜１２５０Ｌ／ｍ２、３００〜１２５０Ｌ／ｍ２、４００〜１２５０Ｌ／ｍ２、５００〜１２５０Ｌ／ｍ２、７５０〜１２５０Ｌ／ｍ２または１０００〜１２５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落３４７〜３５３のいずれか１つに記載の方法。
【０８３０】
３５８．前記精密濾過フィルターが、約１００、約２００、約３００、約４００、約５５０、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１１００、約１２００、約１３００、約１４００、約１５００、約１６００、約１７００、約１８００、約１９００、約２０００、約２１００、約２２００、約２３００、約２４００、約２５００、約２６００、約２７００、約２８００、約２９００、約３０００、約３１００、約３２００、約３３００、約３４００、約３５００、約３６００、約３７００、約３８００、約３９００、約４０００、約４１００、約４２００、約４３００、約４４００、約４５００、約４６００、約４７００、約４８００、約４９００、約５０００、約５２５０、約５５００、約５７５０または約６０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落３４７〜３５３のいずれか１つに記載の方法。
【０８３１】
３５９．濾液が、限外濾過および／または透析濾過によってさらに清澄化される、段落２８５〜３５９のいずれか１つに記載の方法。
【０８３２】
３６０．濾液が、限外濾過によってさらに清澄化される、段落２８５〜３５９のいずれか１つに記載の方法。
【０８３３】
３６１．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８３４】
３６２．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜７５０ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８３５】
３６３．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８３６】
３６４．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８３７】
３６５．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８３８】
３６６．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜５０ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８３９】
３６７．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約１０ｋＤａ〜３０ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８４０】
３６８．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約４００ｋＤａ〜１０００ｋＤａ、約５００ｋＤａ〜１０００ｋＤａまたは約７５０ｋＤａ〜１０００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８４１】
３６９．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約２００ｋＤａ〜５００ｋＤａ、約３００ｋＤａ〜５００ｋＤａまたは約４００ｋＤａ〜５００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８４２】
３７０．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約７５ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１００ｋＤａ〜３００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ〜３００ｋＤａまたは約２００ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８４３】
３７１．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約１０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約２０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約３０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約４０ｋＤａ〜１００ｋＤａ、約５０ｋＤａ〜１００ｋＤａまたは約７５ｋＤａ〜１００ｋＤａの範囲にある、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８４４】
３７２．前記限外濾過膜の分子量カットオフが、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約７５０ｋＤａまたは約１０００ｋＤａである、段落３５９または３６０に記載の方法。
【０８４５】
３７３．前記限外濾過ステップの濃縮係数が、約１．５〜約１０．０である、段落３５９〜３７１のいずれか１つに記載の方法。
【０８４６】
３７４．前記限外濾過ステップの濃縮係数が、約２．０〜約８．０である、段落３５９〜３７１のいずれか１つに記載の方法。
【０８４７】
３７５．前記限外濾過ステップの濃縮係数が、約２．０〜約５．０である、段落３５９〜３７１のいずれか１つに記載の方法。
【０８４８】
３７６．前記限外濾過ステップの濃縮係数が、約１．５、約２．０、約２．５、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５または約１０．０である、段落３５９〜３７１のいずれか１つに記載の方法。ある実施形態では、濃縮係数は、約２．０、約３．０、約４．０、約５．０または約６．０である。
【０８４９】
３７７．前記限外濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、段落３５９〜３７６のいずれか１つに記載の方法。
【０８５０】
３７８．前記限外濾過ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落３５９〜３７６のいずれか１つに記載の方法。
【０８５１】
３７９．前記限外濾過ステップが、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落３５９〜３７６のいずれか１つに記載の方法。
【０８５２】
３８０．前記限外濾過ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落３５９〜３７６のいずれか１つに記載の方法。
【０８５３】
３８１．限外濾過の濾液が、透析濾過によって処理される、段落３５９〜３８０のいずれか１つに記載の方法。
【０８５４】
３８２．置換液が水である、段落３８１に記載の方法。
【０８５５】
３８３．置換液が塩水である、段落３８１に記載の方法。
【０８５６】
３８４．塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される、段落３８３に記載の方法。
【０８５７】
３８５．塩が、塩化ナトリウムである、段落３８３に記載の方法。
【０８５８】
３８６．置換液が、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭまたは約５００ｍＭの塩化ナトリウムである、段落３８３に記載の方法。
【０８５９】
３８７．置換液が、緩衝溶液である、段落３８１に記載の方法。
【０８６０】
３８８．置換液が、緩衝剤がＮ−（２−アセトアミド）−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）、酢酸の塩（酢酸塩）、Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、２−アミノエタンスルホン酸（ＡＥＳ、タウリン）、アンモニア、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（ＡＭＰ）、２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール（ＡＭＰＤ、アメジオール）、Ｎ−（１，１−ジメチル−２−ヒドロキシエチル）−３−アミノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ビス−（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、炭酸水素ナトリウム（重炭酸塩）、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−グリシン（ビシン）、［ビス−（２−ヒドロキシエチル）−イミノ］−トリス−（ヒドロキシメチルメタン）（ビス−トリス）、１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］プロパン（ビス−トリス−プロパン）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジル酸塩）、３−（シクロヘキシルアミノ）−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、３−（シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）、炭酸ナトリウム（炭酸塩）、シクロヘキシルアミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、３−［Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、グリシン、グリシルグリシン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳ、ＥＰＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、イミダゾール、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、２−（Ｎ−モルホリノ）−エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、リン酸の塩（リン酸塩）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）、ピリジン、コハク酸の塩（コハク酸塩）、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−アミノ｝−プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、２−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチルアミノ］−エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）−メチル］−グリシン（トリシン）およびトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）からなる群から選択される、緩衝溶液である、段落３８１に記載の方法。
【０８６１】
３８９．置換液が、緩衝剤が酢酸の塩（酢酸塩）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される緩衝溶液である、段落３８１に記載の方法。
【０８６２】
３９０．置換液が、緩衝剤がクエン酸の塩（クエン酸塩）である緩衝溶液である、段落３８１に記載の方法。
【０８６３】
３９１．置換液が、緩衝剤がコハク酸の塩（コハク酸塩）である緩衝溶液である、段落３８１に記載の方法。
【０８６４】
３９２．置換液が、緩衝剤がリン酸の塩（リン酸塩）である緩衝溶液である、段落３８１に記載の方法。
【０８６５】
３９３．前記塩が、ナトリウム塩である、段落３８８〜３９２のいずれか１つに記載の方法。
【０８６６】
３９４．前記塩が、カリウム塩である、段落３８８〜３９２のいずれか１つに記載の方法。
【０８６７】
３９５．置換液が、緩衝剤がリン酸カリウムである緩衝溶液である、段落３８１に記載の方法。
【０８６８】
３９６．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約４．０〜１１．０、約５．０〜１０．０、約５．５〜９．０、約６．０〜８．０、約６．０〜７．０、約６．５〜７．５、約６．５〜７．０または約６．０〜７．５である、段落３８１〜３９５のいずれか１つに記載の方法。
【０８６９】
３９７．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約４．０、約４．５、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、約９．０、約９．５、約１０．０、約１０．５または約１１．０である、段落３８１〜３９５に記載の方法。
【０８７０】
３９８．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５または約９．０である、段落３８１〜３９５のいずれか１つに記載の方法。
【０８７１】
３９９．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約６．５、約７．０または約７．５である、段落３８１〜３９５のいずれか１つに記載の方法。
【０８７２】
４００．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約６．０である、段落３８１〜３９５のいずれか１つに記載の方法。
【０８７３】
４０１．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約６．５である、段落３８１〜３９５のいずれか１つに記載の方法。
【０８７４】
４０２．透析濾過緩衝剤のｐＨが、約７．０である、段落３８１〜３９５のいずれか１つに記載の方法。
【０８７５】
４０３．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１００ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１ｍＭ〜１００ｍＭ、約２ｍＭ〜１００ｍＭ、約３ｍＭ〜１００ｍＭ、約４ｍＭ〜１００ｍＭ、約５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６ｍＭ〜１００ｍＭ、約７ｍＭ〜１００ｍＭ、約８ｍＭ〜１００ｍＭ、約９ｍＭ〜１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜１００ｍＭ、約１１ｍＭ〜１００ｍＭ、約１２ｍＭ〜１００ｍＭ、約１３ｍＭ〜１００ｍＭ、約１４ｍＭ〜１００ｍＭ、約１５ｍＭ〜１００ｍＭ、約１６ｍＭ〜１００ｍＭ、約１７ｍＭ〜１００ｍＭ、約１８ｍＭ〜１００ｍＭ、約１９ｍＭ〜１００ｍＭ、約２０ｍＭ〜１００ｍＭ、約２５ｍＭ〜１００ｍＭ、約３０ｍＭ〜１００ｍＭ、約３５ｍＭ〜１００ｍＭ、約４０ｍＭ〜１００ｍＭ、約４５ｍＭ〜１００ｍＭ、約５０ｍＭ〜１００ｍＭ、約５５ｍＭ〜１００ｍＭ、約６０ｍＭ〜１００ｍＭ、約６５ｍＭ〜１００ｍＭ、約７０ｍＭ〜１００ｍＭ、約７５ｍＭ〜１００ｍＭ、約８０ｍＭ〜１００ｍＭ、約８５ｍＭ〜１００ｍＭ、約９０ｍＭ〜１００ｍＭまたは約９５ｍＭ〜１００ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８７６】
４０４．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜５０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１ｍＭ〜５０ｍＭ、約２ｍＭ〜５０ｍＭ、約３ｍＭ〜５０ｍＭ、約４ｍＭ〜５０ｍＭ、約５ｍＭ〜５０ｍＭ、約６ｍＭ〜５０ｍＭ、約７ｍＭ〜５０ｍＭ、約８ｍＭ〜５０ｍＭ、約９ｍＭ〜５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜５０ｍＭ、約１１ｍＭ〜５０ｍＭ、約１２ｍＭ〜５０ｍＭ、約１３ｍＭ〜５０ｍＭ、約１４ｍＭ〜５０ｍＭ、約１５ｍＭ〜５０ｍＭ、約１６ｍＭ〜５０ｍＭ、約１７ｍＭ〜５０ｍＭ、約１８ｍＭ〜５０ｍＭ、約１９ｍＭ〜５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜５０ｍＭ、約２５ｍＭ〜５０ｍＭ、約３０ｍＭ〜５０ｍＭ、約３５ｍＭ〜５０ｍＭ、約４０ｍＭ〜５０ｍＭまたは約４５ｍＭ〜５０ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８７７】
４０５．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜２５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１ｍＭ〜２５ｍＭ、約２ｍＭ〜２５ｍＭ、約３ｍＭ〜２５ｍＭ、約４ｍＭ〜２５ｍＭ、約５ｍＭ〜２５ｍＭ、約６ｍＭ〜２５ｍＭ、約７ｍＭ〜２５ｍＭ、約８ｍＭ〜２５ｍＭ、約９ｍＭ〜２５ｍＭ、約１０ｍＭ〜２５ｍＭ、約１１ｍＭ〜２５ｍＭ、約１２ｍＭ〜２５ｍＭ、約１３ｍＭ〜２５ｍＭ、約１４ｍＭ〜２５ｍＭ、約１５ｍＭ〜２５ｍＭ、約１６ｍＭ〜２５ｍＭ、約１７ｍＭ〜２５ｍＭ、約１８ｍＭ〜２５ｍＭ、約１９ｍＭ〜２５ｍＭまたは約２０ｍＭ〜２５ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８７８】
４０６．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１５ｍＭ、約１ｍＭ〜１５ｍＭ、約２ｍＭ〜１５ｍＭ、約３ｍＭ〜１５ｍＭ、約４ｍＭ〜１５ｍＭ、約５ｍＭ〜１５ｍＭ、約６ｍＭ〜１５ｍＭ、約７ｍＭ〜１５ｍＭ、約８ｍＭ〜１５ｍＭ、約９ｍＭ〜１５ｍＭ、約１０ｍＭ〜１５ｍＭ、約１１ｍＭ〜１５ｍＭ、約１２ｍＭ〜１５ｍＭ、約１３ｍＭ〜１５ｍＭまたは約１４ｍＭ〜１５ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８７９】
４０７．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜１０ｍＭ、約１ｍＭ〜１０ｍＭ、約２ｍＭ〜１０ｍＭ、約３ｍＭ〜１０ｍＭ、約４ｍＭ〜１０ｍＭ、約５ｍＭ〜１０ｍＭ、約６ｍＭ〜１０ｍＭ、約７ｍＭ〜１０ｍＭ、約８ｍＭ〜１０ｍＭまたは約９ｍＭ〜１０ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８０】
４０８．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８１】
４０９．透析濾過緩衝剤の濃度が、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８２】
４１０．透析濾過緩衝剤の濃度が、約３０ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８３】
４１１．透析濾過緩衝剤の濃度が、約２５ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８４】
４１２．透析濾過緩衝剤の濃度が、約２０ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８５】
４１３．透析濾過緩衝剤の濃度が、約１５ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８６】
４１４．透析濾過緩衝剤の濃度が、約１０ｍＭである、段落３８７〜４０２のいずれか１つに記載の方法。
【０８８７】
４１５．置換液が、キレート剤を含む、段落３８１〜４１４のいずれか１つに記載の方法。
【０８８８】
４１６．置換液が、ミョウバンキレート剤を含む、段落３８１〜４１４のいずれか１つに記載の方法。
【０８８９】
４１７．置換液が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（ＥＤＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＤＰＴＡ−ＯＨ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジプロピオン酸ジヒドロクロリド（ＥＤＤＰ）、エチレンジアミン−テトラキス（メチレンスルホン酸）（ＥＤＴＰＯ）、ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）（ＮＴＰＯ）、イミノ−二酢酸（ＩＤＡ）、ヒドロキシイミノ−二酢酸（ＨＩＤＡ）、ニトリロ−三酢酸（ＮＴＰ）、トリエチレンテトラミン−六酢酸（ＴＴＨＡ）、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、アルファリポ酸（ＡＬＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、チアミンテトラヒドロフルフリルジスルフィド（ＴＴＦＤ）、ジメルカプロール、ペニシラミン、デフェロキサミン（ＤＦＯＡ）、デフェラシロクス、ホスホネート、クエン酸の塩（クエン酸塩）およびこれらの組合せからなる群から選択されるキレート剤を含む、段落３８１〜４１４のいずれか１つに記載の方法。
【０８９０】
４１８．置換液が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸（ＥＤＴＡ−ＯＨ）、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、エチレングリコール−ビス（２−アミノエチルエーテル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，３−ジアミノプロパン−２−オール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＤＰＴＡ−ＯＨ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、クエン酸の塩（クエン酸塩）およびこれらの組合せからなる群から選択されるキレート剤を含む、段落３８１〜４１４のいずれか１つに記載の方法。
【０８９１】
４１９．置換液が、キレート剤としてエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む、段落３８１〜４１４のいずれか１つに記載の方法。
【０８９２】
４２０．置換液が、キレート剤としてクエン酸の塩（クエン酸塩）を含む、段落３８１〜４１４のいずれか１つに記載の方法。
【０８９３】
４２１．置換液が、キレート剤としてクエン酸ナトリウムを含む、段落３８１〜４１４のいずれか１つに記載の方法。
【０８９４】
４２２．置換液中のキレート剤の濃度が、１〜５００ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０８９５】
４２３．置換液中のキレート剤の濃度が、２〜４００ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０８９６】
４２４．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜４００ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０８９７】
４２５．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜２００ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０８９８】
４２６．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜１００ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０８９９】
４２７．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜５０ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０９００】
４２８．置換液中のキレート剤の濃度が、１０〜３０ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０９０１】
４２９．置換液中のキレート剤の濃度が、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０９０２】
４３０．置換液中のキレート剤の濃度が、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭまたは約１００ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０９０３】
４３１．置換液中のキレート剤の濃度が、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭまたは約５０ｍＭである、段落４１５〜４２１のいずれか１つに記載の方法。
【０９０４】
４３２．置換液が、塩を含む、段落３８７〜４３１のいずれか１つに記載の方法。
【０９０５】
４３３．塩が、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される、段落４３２に記載の方法。
【０９０６】
４３４．塩が、塩化ナトリウムである、段落４３２に記載の方法。
【０９０７】
４３５．置換液が、約１、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約２５０または約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む、段落４３２〜４３４のいずれか１つに記載の方法。
【０９０８】
４３６．透析容量の数が、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０である、段落３８１〜４３５のいずれか１つに記載の方法。
【０９０９】
４３７．透析容量の数が、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３１、約３２、約３３、約３４、約３５、約３６、約３７、約３８、約３９、約４０、約４１、約４２、約４３、約４４、約４５、約４６、約４７、約４８、約４９、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５または約１００である、段落３８１〜４３５のいずれか１つに記載の方法。
【０９１０】
４３８．透析容量の数が、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である、段落３８１〜４３５のいずれか１つに記載の方法。
【０９１１】
４３９．前記限外濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、段落３８１〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１２】
４４０．前記透析濾過ステップが、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落３８１〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１３】
４４１．前記透析濾過ステップが、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落３８１〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１４】
４４２．前記透析濾過ステップが、約５０℃の温度で実施される、段落３８１〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１５】
４４３．前記限外濾過ステップが、約２０℃〜約９０℃の温度で実施される、段落３５９〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１６】
４４４．前記限外濾過および透析濾過ステップが、両方とも行われる場合、約３５℃〜約８０℃の温度、約４０℃〜約７０℃の温度、約４５℃〜約６５℃の温度、約５０℃〜約６０℃の温度、約５０℃〜約５５℃の温度、約４５℃〜約５５℃の温度または約４５℃〜約５５℃の温度で実施される、段落３５９〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１７】
４４５．前記限外濾過ステップおよび透析濾過ステップが、両方とも行われる場合、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、約６０℃、約６１℃、約６２℃、約６３℃、約６４℃、約６５℃、約６６℃、約６７℃、約６８℃、約６９℃、約７０℃、約７１℃、約７２℃、約７３℃、約７４℃、約７５℃、約７６℃、約７７℃、約７８℃、約７９℃または約８０℃の温度で実施される、段落３５９〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１８】
４４６．前記限外濾過および透析濾過ステップが、両方とも行われる場合、約５０℃の温度で実施される、段落３５９〜４３８のいずれか１つに記載の方法。
【０９１９】
４４７．前記精製された多糖の溶液が、サイジングによってホモジナイズされる、段落３５９〜４４６のいずれか１つに記載の方法。
【０９２０】
４４８．前記精製された多糖の溶液が、機械的サイジングにかけられる、段落３５９〜４４６のいずれか１つに記載の方法。
【０９２１】
４４９．前記精製された多糖の溶液が、高圧ホモジナイゼーション剪断にかけられる、段落３５９〜４４６のいずれか１つに記載の方法。
【０９２２】
４５０．前記精製された多糖の溶液が、化学的加水分解にかけられる、段落３５９〜４４６のいずれか１つに記載の方法。
【０９２３】
４５１．前記精製された多糖の溶液が、標的分子量にサイジングされる、段落３５９〜４５０のいずれか１つに記載の方法。
【０９２４】
４５２．前記精製された多糖の溶液が、約５ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる、段落３５９〜４５１のいずれか１つに記載の方法。
【０９２５】
４５３．前記精製された多糖の溶液が、約１０ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる、段落３５９〜４５１のいずれか１つに記載の方法。
【０９２６】
４５４．前記精製された多糖の溶液が、約５０ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる、段落３５９〜４５１のいずれか１つに記載の方法。
【０９２７】
４５５．前記精製された多糖の溶液が、約５０ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約２，２５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約１００ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約２，２５０ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約２００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；または約２００ｋＤａ〜約５００ｋＤａの分子量にサイジングされる、段落３５９〜４５１のいずれか１つに記載の方法。さらなるそのような実施形態では、精製された多糖は、約２５０ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約２５０ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約３００ｋＤａおよび約３，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａおよび約２，５００ｋＤａ；約３００ｋＤａおよび約２，２５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；約３００ｋＤａ〜約５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約４，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約３，５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約３，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約２，５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約２，２５０ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約２，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，７５０ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，５００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，２５０ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約１，０００ｋＤａ；約５００ｋＤａ〜約７５０ｋＤａ；または約５００ｋＤａ〜約６００ｋＤａの分子量にサイジングされる。
【０９２８】
４５６．前記精製された多糖の溶液が、約５ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約７５ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約２００ｋＤａ、約２５０ｋＤａ、約３００ｋＤａ、約３５０ｋＤａ、約４００ｋＤａ、約４５０ｋＤａ、約５００ｋＤａ、約５５０ｋＤａ、約６００ｋＤａ、約６５０ｋＤａ、約７００ｋＤａ、約７５０ｋＤａ、約８００ｋＤａ、約８５０ｋＤａ、約９００ｋＤａ、約９５０ｋＤａ、約１０００ｋＤａ、約１２５０ｋＤａ、約１５００ｋＤａ、約１７５０ｋＤａ、約２０００ｋＤａ、約２２５０ｋＤａ、約２５００ｋＤａ、約２７５０ｋＤａ、約３０００ｋＤａ、約３２５０ｋＤａ、約３５００ｋＤａ、約３７５０ｋＤａまたは約４，０００ｋＤａの分子量にサイジングされる、段落３５９〜４５１のいずれか１つに記載の方法。
【０９２９】
４５７．前記精製された多糖の溶液が、滅菌濾過される、段落１〜４５６のいずれか１つに記載の方法。
【０９３０】
４５８．前記滅菌濾過が、デッドエンド濾過である、段落４５７に記載の方法。
【０９３１】
４５９．前記滅菌濾過が、接線流濾過である、段落４５７に記載の方法。
【０９３２】
４６０．フィルターが、約０．０１〜０．２ミクロン、約０．０５〜０．２ミクロン、約０．１〜０．２ミクロンまたは０．１５〜０．２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落４５７〜４５９のいずれか１つに記載の方法。
【０９３３】
４６１．フィルターが、約０．０５、約０．１、約０．１５または約０．２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落４５７〜４５９のいずれか１つに記載の方法。
【０９３４】
４６２．フィルターが、約０．２ミクロンの名目保持範囲を有する、段落４５７〜４５９のいずれか１つに記載の方法。
【０９３５】
４６３．フィルターが、約２５〜１５００Ｌ／ｍ２、５０〜１５００Ｌ／ｍ２、７５〜１５００Ｌ／ｍ２、１００〜１５００Ｌ／ｍ２、１５０〜１５００Ｌ／ｍ２、２００〜１５００Ｌ／ｍ２、２５０〜１５００Ｌ／ｍ２、３００〜１５００Ｌ／ｍ２、３５０〜１５００Ｌ／ｍ２、４００〜１５００Ｌ／ｍ２、５００〜１５００Ｌ／ｍ２、７５０〜１５００Ｌ／ｍ２、１０００〜１５００Ｌ／ｍ２または１２５０〜１５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落４５７〜４６２のいずれか１つに記載の方法。
【０９３６】
４６４．フィルターが、２５〜１０００Ｌ／ｍ２、５０〜１０００Ｌ／ｍ２、７５〜１０００Ｌ／ｍ２、１００〜１０００Ｌ／ｍ２、１５０〜１０００Ｌ／ｍ２、２００〜１０００Ｌ／ｍ２、２５０〜１０００Ｌ／ｍ２、３００〜１０００Ｌ／ｍ２、３５０〜１０００Ｌ／ｍ２、４００〜１０００Ｌ／ｍ２、５００〜１０００Ｌ／ｍ２または７５０〜１０００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落４５７〜４６２のいずれか１つに記載の方法。
【０９３７】
４６５．フィルターが、２５〜５００Ｌ／ｍ２、５０〜５００Ｌ／ｍ２、７５〜５００Ｌ／ｍ２、１００〜５００Ｌ／ｍ２、１５０〜５００Ｌ／ｍ２、２００〜５００Ｌ／ｍ２、２５０〜５００Ｌ／ｍ２、３００〜５００Ｌ／ｍ２、３５０〜５００Ｌ／ｍ２または４００〜５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落４５７〜４６２のいずれか１つに記載の方法。
【０９３８】
４６６．フィルターが、２５〜３００Ｌ／ｍ２、５０〜３００Ｌ／ｍ２、７５〜３００Ｌ／ｍ２、１００〜３００Ｌ／ｍ２、１５０〜３００Ｌ／ｍ２、２００〜３００Ｌ／ｍ２または２５０〜３００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落４５７〜４６２のいずれか１つに記載の方法。
【０９３９】
４６７．フィルターが、２５〜２５０Ｌ／ｍ２、５０〜２５０Ｌ／ｍ２、７５〜２５０Ｌ／ｍ２、１００〜２５０Ｌ／ｍ２または１５０〜２５０Ｌ／ｍ２、２００〜２５０Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落４５７〜４６２のいずれか１つに記載の方法。
【０９４０】
４６８．フィルターが、２５〜１００Ｌ／ｍ２、５０〜１００Ｌ／ｍ２または７５〜１００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落４５７〜４６２のいずれか１つに記載の方法。
【０９４１】
４６９．フィルターが、約２５、約５０、約７５、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１１００、約１２００、約１３００、約１４００または約１５００Ｌ／ｍ２のフィルター能力を有する、段落４５７〜４６２のいずれか１つに記載の方法。
【０９４２】
４７０．得られた精製された多糖が、液体溶液である、段落１〜４６９のいずれか１つに記載の方法。
【０９４３】
４７１．得られた精製された多糖が、乾燥粉末である、段落１〜４６９のいずれか１つに記載の方法。
【０９４４】
４７２．得られた精製された多糖溶液が、凍結乾燥される、段落１〜４６９のいずれか１つに記載の方法。
【０９４５】
４７３．得られた精製された多糖溶液が、凍結乾燥ケーキである、段落１〜４６９または４７２のいずれか１つに記載の方法。
【０９４６】
４７４．前記細菌多糖が、莢膜多糖、莢膜下多糖、またはリポ多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９４７】
４７５．前記細菌多糖が、莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９４８】
４７６．前記細菌多糖が、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９４９】
４７７．前記細菌多糖が、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）５型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５０】
４７８．前記細菌多糖が、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）８型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５１】
４７９．前記細菌多糖が、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５２】
４８０．前記細菌多糖が、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５３】
４８１．前記細菌多糖が、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５４】
４８２．前記細菌多糖が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ１３５）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｘ（ＭｅｎＸ）または髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５５】
４８３．前記細菌多糖が、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５６】
４８４．前記細菌多糖が、溶血性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ））に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５７】
４８５．前記細菌多糖が、ＧＢＳ  Ｉａ、Ｉｂ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ型に由来する莢膜多糖からなる群から選択される莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５８】
４８６．前記細菌多糖が、腸毒性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）株部分に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９５９】
４８７．前記細菌多糖が、腸管毒素産生性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＴＥＣ）、病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＰＥＣ）、腸管出血性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）−Ｏ１５７：Ｈ７（ＥＨＥＣ）、または腸管細胞侵入性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＥＩＥＣ）などの腸毒性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）群（ＥＥＣ群）の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）株部分に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。ある実施形態では、細菌莢膜多糖の供給源は、尿路病原性大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＵＰＥＣ）である。
【０９６０】
４８８．前記細菌多糖が、血清型Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ２６：Ｈ１１、Ｏ１１１：Ｈ−およびＯ１０３：Ｈ２からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６１】
４８９．前記細菌多糖が、血清型Ｏ６：Ｋ２：Ｈ１およびＯ１８：Ｋ１：Ｈ７からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６２】
４９０．前記細菌多糖が、血清型Ｏ４５：Ｋ１、Ｏ１７：Ｋ５２：Ｈ１８、Ｏ１９：Ｈ３４およびＯ７：Ｋ１からなる群から選択される大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６３】
４９１．前記細菌多糖が、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１０４：Ｈ４に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６４】
４９２．前記細菌多糖が、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１：Ｋ１２：Ｈ７に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６５】
４９３．前記細菌多糖が、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１２７：Ｈ６に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６６】
４９４．前記細菌多糖が、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１３９：Ｈ２８に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６７】
４９５．前記細菌多糖が、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）血清型Ｏ１２８：Ｈ２に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６８】
４９６．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６９】
４９７．前記細菌多糖が、血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｂ、２４Ｆ、２９、３１、３３Ｆ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、３８、７２および７３からなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７０】
４９８．前記細菌多糖が、血清型１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、１６Ｆ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、２９、３１、３３Ｆ、３５Ｂ、３５Ｆ、３８、７２および７３からなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７１】
４９９．前記細菌多糖が、血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７２】
５００．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７３】
５０１．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７４】
５０２．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７５】
５０３．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７６】
５０４．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型５に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７７】
５０５．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７８】
５０６．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９７９】
５０７．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｃに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８０】
５０８．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８１】
５０９．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８２】
５１０．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｖに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８３】
５１１．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８４】
５１２．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８５】
５１３．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８６】
５１４．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８７】
５１５．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１４に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８８】
５１６．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９８９】
５１７．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９０】
５１８．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｃに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９１】
５１９．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１６Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９２】
５２０．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９３】
５２１．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９４】
５２２．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９５】
５２３．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９６】
５２４．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９７】
５２５．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０Ａに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９８】
５２６．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０Ｂに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【０９９９】
５２７．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１０００】
５２８．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００１】
５２９．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００２】
５３０．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００３】
５３１．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２４Ｂに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００４】
５３２．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２４Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００５】
５３３．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２９に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００６】
５３４．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３１に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００７】
５３５．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００８】
５３６．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３４に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１００９】
５３７．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１０１０】
５３８．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｆに由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１０１１】
５３９．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３８に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１０１２】
５４０．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７２に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１０１３】
５４１．前記細菌多糖が、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型７３に由来する莢膜多糖である、段落１〜４７３のいずれか１つに記載の方法。
【１０１４】
５４２．段落１〜５４１のいずれか１つに記載の方法によって得られた精製された細菌多糖。
【１０１５】
５４３．段落１〜５４１のいずれか１つに記載の方法によって得られる精製された細菌多糖。
【１０１６】
５４４．抗原としての使用のための段落１〜５４１のいずれか１つに記載の方法によって得られた精製された細菌多糖。
【１０１７】
５４５．担体タンパク質にコンジュゲートされた、段落１〜５４１のいずれか１つに記載の方法によって得られた精製された細菌多糖。
【１０１８】
５４６．担体タンパク質にさらにコンジュゲートされた、段落１〜５４１のいずれか１つに記載の方法によって得られた精製された細菌多糖。
【１０１９】
５４７．段落１〜５４１のいずれか１つに記載の方法によって得られた精製された細菌多糖の糖コンジュゲート。
【１０２０】
５４８．段落５４２〜５４３のいずれか１つに記載の精製された多糖のいずれかを含む免疫原性組成物。
【１０２１】
５４９．段落５４６〜５４７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
【１０２２】
５５０．本明細書に開示される糖コンジュゲートのいずれかを含む免疫原性組成物。
【１０２３】
５５１．本明細書に開示される糖コンジュゲートの組合せのいずれかを含む免疫原性組成物。
【１０２４】
本明細書で使用される場合、用語「約」は、記述された濃度範囲、時間枠、分子量、温度またはｐＨなどの、統計的に意味のある値の範囲内にあることを意味する。そのような範囲は、所与の値または範囲の１桁分以内、典型的には、２０％以内、より典型的には、１０％以内、さらにより典型的には、５％以内または１％以内であってもよい。時には、そのような範囲は、所与の値または範囲の測定および／または決定のために使用される標準的な方法に典型的な実験誤差以内であってもよい。用語「約」によって包含される許容可能な変動は、試験下の特定の系に依存し、当業者であれば容易に理解できる。本出願内である範囲が記載される場合はいつでも、その範囲内の全ての数も、本開示の実施形態として企図される。
【１０２５】
本明細書における用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、全ての例において、それぞれ、用語「本質的にからなる（Ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｏｆ）」と置換可能であってもよいことが本発明者らによって意図される。
【１０２６】
本明細書でそれぞれ互換的に使用される、「免疫原性量」、「免疫学的有効量」、「治療有効量」、「予防有効量」、または「用量」は、一般的には、当業者には公知の標準的なアッセイによって測定した場合、細胞性（Ｔ細胞）または体液性（Ｂ細胞もしくは抗体）応答のいずれかである免疫応答を惹起するのに十分な抗原または免疫原性組成物の量を指す。
【１０２７】
本文献の範囲のいずれかの中の任意の全数が、本開示の実施形態として企図される。
【１０２８】
本特許明細書内で引用される全ての参考文献または特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
【１０２９】
本発明は、添付の実施例に例示される。以下の実施例は、そうでなければ詳細に説明される場合を除いて、当業者には周知であり、日常的である標準的な技術を使用して実行される。実施例は、例示的であるが、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【１０３０】
（実施例１）
肺炎球菌多糖血清型８の精製
精製のためのプロセスの流れ図を、図１に示す。プロセスは、ＮＬＳ不活化発酵ブロス（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）から始まり、回収ユニット操作（凝集、遠心分離および深層濾過）、次いで、精製ユニット操作（限外濾過、および炭素濾過）を含む。
【１０３１】
１．出発材料
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型８のＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まる。培養物を、Ｈｙ−Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物を、ＮＬＳで不活化した（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）。
【１０３２】
２．凝集
このステップの主な目的は、細胞破片、宿主細胞のタンパク質および核酸を沈降させることである。それはまた、下流の清澄化ユニット操作にも役立つ。ＮＬＳの添加によって溶解された発酵ブロスを使用して、凝集を実施した。
【１０３３】
２．１  ｐＨおよびミョウバンの効果
実験を行って、ｐＨ、ミョウバンのパーセント、および保持時間の効果を検査した。
【１０３４】
予め設定された量の発酵ブロスを、異なる容器中にアリコートし、１０％（ｗ／ｗ）ストックミョウバン溶液（硫酸カリウムアルミニウム十二水和物および脱イオン水を使用して調製される）を、２％（ｗ／ｖ）の最終濃度となるように添加した。
【１０３５】
次いで、ｐＨを所望のレベルに調整した。次いで、様々な保持時点の後、容器を１２，０００ｇで１５分間、遠心分離した。上清を、タンパク質、多糖および透明度についてアッセイした。１、４および２４時間の保持時間での２％ミョウバンの存在下でのタンパク質除去および透明度に対するｐＨの効果を、図２に示す。このデータは、ｐＨ２．５〜４．０および２％ミョウバンでのタンパク質除去が非常に有効であったことを示す。８０％を超えるタンパク質不純物が、この単一のステップにおいて除去された。分離液（ｃｅｎｔｒａｔｅ）の透明度は、ｐＨと保持時間の両方によって影響された。図２は、３．５のｐＨが最も高い分離液の透明度を与えたことを示す。
【１０３６】
ｐＨ３．５でのタンパク質除去および分離液透明度に対するミョウバン濃度および保持時間の効果を、図３に示す。保持時間試験を、周囲温度（２０±２℃）で行った。その結果は、タンパク質除去または分離液の清澄化において、１．０％のミョウバンでは十分ではなかったことを示す。２％と３％ミョウバンの差異は、有意ではなかった。
【１０３７】
２．２  温度の効果
凝集したブロス（ｐＨ３．５および２％ミョウバン）を、５０℃に加熱し、３０および６０分間保持した。周囲温度に冷却した後、試料を１２，０００ｇで遠心分離した。分離液の透明度を、周囲温度で実施した凝集に由来する分離液と比較して測定した。周囲温度の凝集に由来する分離液のＯＤ６００は、０．９９であった。５０℃で３０分後、ＯＤ６００は０．１３に減少し、５０℃で６０分後、ＯＤ６００は０．０４にさらに低下した。これは、より高い温度で凝集を実施することによって、分離液の透明度を有意に改善することができることを明確に示している。
【１０３８】
２．３  凝集に影響する変数の効果
血清型８の凝集プロセスに対して影響する変数の効果をより良好に定義するために、試験を行った。本発明者らは、多糖の回収、透明度および不純物除去に関するミョウバン濃度、ｐＨ、温度、および保持時間の因子を検査した。
【１０３９】
特定量のミョウバンを、室温でブロスに添加した後、５Ｎ  Ｈ２ＳＯ４または５Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨを調整した。試料を、所望の温度に設定した水浴中に入れ、それぞれの時点で、試料を分析のために採取した後、１２，０００ｘｇで遠心分離した。上清を、多糖濃度、タンパク質および濁度（ＯＤ６００）について分析した。
【１０４０】
【表１】
2020146032.tif 000003
【１０４１】
結果の分析により、凝集ユニット操作のための望ましいｐＨ、ミョウバンのパーセントおよび保持時間が、かなり広く、ｐＨ：２．７５〜３．７５；ミョウバン：１．５〜３．０％ｗ／ｖ；および保持時間：１．５〜３時間であることが示された。望ましい温度範囲は、約４５〜６０℃であった。
【１０４２】
３．遠心分離
遠心分離を行って、分離液を合理的な能力で濾過することができるように、それを清澄化した。遠心分離速度を、１２，０００ｘｇに設定した。
【１０４３】
４．深層濾過
遠心分離は主要な固体／液体分離ユニット操作であるが、それは供給流から全ての粒子を除去するわけではなく、深層濾過ユニット操作を、遠心分離ユニット操作と、１回目の限外濾過ユニット操作との間に組み込んだ。
【１０４４】
初期試験を、０．２５〜１．０ミクロンの名目保持範囲を有するフィルターを使用して行った。分離液の透明度は、フィルター能力に影響した。
【１０４５】
特に、凝集を約２０℃で実施した場合、分離液の透明度はそれほど良好ではなく、ＯＤ６００は０．８〜１．４の範囲であり、フィルター能力は影響を受けた。より高温の凝集条件を使用した場合、深層濾過プロセスは、よりロバストで一貫した能力を示し、フィルター能力は４００Ｌ／ｍ２より高く、さらに分離液のＯＤ６００は０．０４〜０．２の範囲であった。
【１０４６】
５．任意選択の０．４５ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、深層濾過後に０．４５ミクロンのフィルターを使用した。
【１０４７】
６．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精製は、深層濾液から始まる（上記のステップ４または５に由来する）。
【１０４８】
この操作は、低分子量の宿主細胞不純物および残留凝集剤（アルミニウム）のレベルを低下させながら、消費した発酵媒体を、緩衝剤で置き換えるものである。
【１０４９】
１回目のＵＦＤＦの前に、深層濾液を、５Ｎ水酸化ナトリウムを使用して７．０に調整した。あるいは、透析濾過緩衝剤としてクエン酸ナトリウム／リン酸ナトリウム、ｐＨ７．０（例えば、１０ｍＭリン酸塩／２５ｍＭクエン酸塩、ｐＨ７．０）に対してＵＦＤＦ透析濾過を行う前に、ｐＨを調整しない。
【１０５０】
７．炭素濾過
このユニット操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のレベルを低下させるものである（ＷＯ２００８１１８７５２を参照されたい）。
【１０５１】
炭素フィルターによりタンパク質不純物を除去する有効性を試験した。３つの７’’直径のＲ３２ＳＰ炭素フィルターを、連続して使用した。ＵＦＤＦ−１に由来する保持液を、４０ＬＭＨの流量で濾過し、炭素濾液のＵＶ２８０を記録した。
【１０５２】
保持液に関するＵＶ２８０シグナルは、炭素濾過前に４６０−ｍＡｕに過ぎず、水洗浄のベースラインと比較してかなり低かった（３８０−ｍＡｕ）。これは、多くのタンパク質関連不純物が以前のユニット操作によって既に除去されていることを示唆していた。しかしながら、炭素フィルターは、残存する残留不純物を非常に効率的に依然として除去した。これは、フィルターを一列に置いた後のＵＶ２８０シグナルの低下において示され、そこで、ＵＶシグナルはベースラインまで低下した。このデータは、タンパク質関連不純物が、炭素フィルターを通す１回の通過によって除去されることを示していた。
【１０５３】
８．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
このユニット操作は、生成物を所望の濃度に濃縮し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を、コンジュゲーションのための補正緩衝剤で置き換えるものである。このステップは、３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して実施される。
【１０５４】
残留クエン酸塩の存在は、コンジュゲーション化学反応を妨げ得る。透析濾過緩衝剤として、様々な溶液を使用した：５０ｍＭ  ＮａＣｌと水、または透析濾過緩衝剤としての２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．０との組合せ。
【１０５５】
クエン酸塩除去に対する２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．０の効果を評価した。この実験において、炭素濾液を、２．６倍に濃縮した後、２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．０に対して透析濾過した。試料を除去し、透析濾過の様々な点で残留クエン酸塩について分析した。
【１０５６】
０．１３の拒絶係数が得られた。６−ｌｏｇの低下に達するためには、７倍透析容量未満の２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．０が必要である。
【１０５７】
９．稠度
上記の回収および精製プロセスが、再現可能な結果をもたらし得ることを証明するために、３つの稠度バッチを製造した。発酵バッチ全体を、上記のプロセスを使用して凝集させ、遠心分離した。
【１０５８】
３つの稠度バッチに関するステップおよび全体の収率を表２に示す。全てのステップの収率は、約７７〜９９％であり、非常に再現性が高く、ロバストである。
【１０５９】
【表２】
2020146032.tif 000004
【１０６０】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表３に示す。３つの稠度バッチは、予め定義された許容基準の全てを満たした。
【１０６１】
【表３】
2020146032.tif 000005
【１０６２】
（実施例２）
肺炎球菌多糖血清型３３Ｆの精製
肺炎球菌多糖３３Ｆの精製のためのプロセスの流れ図を、図１に示す。プロセスは、ＮＬＳ処理された発酵ブロスから始まり、回収ユニット操作（凝集、遠心分離および深層濾過）、次いで、精製ユニット操作（限外濾過、および炭素濾過）を含む。
【１０６３】
１．出発材料
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型３３ＦのＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まる。培養物を、Ｈｙ−Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物を、ＮＬＳで処理した（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）。
【１０６４】
２．凝集
このステップの主な目的は、細胞破片、宿主細胞のタンパク質および核酸を沈降させることである。それはまた、下流の清澄化ユニット操作にも役立つ。ＮＬＳの添加によって溶解された発酵ブロスを使用して、凝集を実施した。
【１０６５】
２．１  ｐＨの効果
実験を行って、ｐＨの効果を検査した。
【１０６６】
血清型３３Ｆの凝集のための最適ｐＨを決定するために、不活化３３Ｆ発酵ブロス上で酸滴定試験を実施した。その試験の結果を、図４に示す。不純物除去対ｐＨのグラフは、最大不純物除去がｐＨ３．５で／ｐＨ３．５より下で達成されることを示している。
【１０６７】
以前の実験で同定されたｐＨを使用して、ミョウバン凝集試験を行った。その試験の結果を、図５に示す。ＯＤ６００によって測定された沈降速度は、１．０％より高いミョウバン濃度で大きく不変である。最も高い不純物除去は、１．５％ミョウバンであるが、１〜３％ミョウバンでは有意差は認められない。滴定範囲にわたって多糖濃度に有意な変化はなかった。
【１０６８】
２．２  他のパラメータの効果
ミョウバン添加の速度の効果を決定するために、発酵バッチを２つに分割し、ストックミョウバン溶液を３分または６０分かけて添加した。遠心分離後の透明度または深層濾過能力に対する有意な効果はなかった。これは、ミョウバン添加速度が有意なプロセスパラメータではないことを示している。
【１０６９】
凝集条件をさらに改良するために、多糖回収率、透明度およびタンパク質除去に対するミョウバン濃度、ｐＨ、温度、および保持時間の効果を検査する実験設計（ＤＯＥ）を設定した。検査した因子を、表４に示す。
【１０７０】
【表４】
2020146032.tif 000006
【１０７１】
全ての条件が９５％より高い回収率を与えたため、多糖回収率は、試験したいずれの条件下でも有意に影響されなかった。同様に、タンパク質除去は、試験した全ての条件について９０％より高かった。ミョウバンの濃度は、ＯＤ６００によって測定した場合、透明度に対して最も大きな影響を有する。低いミョウバン濃度では、ＯＤ６００は増大した。また、温度が低下し、ｐＨが増大するにつれて、透明度がわずかに増加した。
【１０７２】
凝集条件が清澄化ユニット操作に対して有する効果を決定するために、５０℃で凝集させた発酵ブロス上で連続遠心分離試験を行った。
【１０７３】
２０℃で凝集したブロスについて観察されるように、５０℃で凝集したブロスについて、４００〜１２００ｍＬ／分の供給速度では分離液の透明度の有意な増加はなかった。しかしながら、分離液の透明度と、深層フィルター能力は両方とも、２０℃での凝集と比較して有意に増加した。新しい凝集条件を使用した場合、深層フィルター能力は、４００Ｌ／ｍ２より高い。
【１０７４】
凝集温度の２０℃から５０℃への上昇が、分離液の透明度およびかくして、深層フィルターの能力を改善したことを確認すること（以下を参照されたい）。分離液の透明度および深層濾液を測定した（表５を参照されたい）。
【１０７５】
【表５】
2020146032.tif 000007
【１０７６】
３．遠心分離
遠心分離を行って、分離液を合理的な能力で濾過することができるように、それを清澄化した。遠心分離速度を、１２，０００ｘｇに設定した。
【１０７７】
４．深層濾過
遠心分離は主要な固体／液体分離ユニット操作であるが、それは供給流から全ての粒子を除去するわけではなく、深層濾過ユニット操作を、遠心分離ユニット操作と、１回目の限外濾過ユニット操作との間に組み込んだ。
【１０７８】
５．任意選択の０．４５ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、深層濾過後に０．４５ミクロンのフィルターを使用した。
【１０７９】
６．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精製は、深層濾液から始まる（上記のステップ４または５に由来する）。
【１０８０】
この操作は、低分子量の宿主細胞不純物および残留凝集剤（アルミニウム）のレベルを低下させながら、消費した発酵媒体を、緩衝剤で置き換えるものである。
【１０８１】
初期実験において、深層濾液のｐＨを、５Ｎ水酸化ナトリウムを使用して３．５から７．０に調整した。これは多糖の分子量に影響しなかったが、３３Ｆ上のＯ−アセチル基の部分的な脱アセチル化をもたらした。
【１０８２】
脱アセチル化は、５Ｎ水酸化ナトリウムを用いた中和の間にもたらされた高い局部ｐＨに起因するものであると提唱された。したがって、深層濾液を管理可能な容量に濃縮した後、透析濾過の間に３３Ｆ溶液のｐＨを調整することが決定された。
【１０８３】
クエン酸ナトリウム／リン酸ナトリウム、ｐＨ７．０（例えば、１０ｍＭリン酸塩／２５ｍＭクエン酸塩ｐＨ７．０）に対して、透析濾過を実施した。
【１０８４】
あるいは、２５ｍＭ  ＥＤＴＡを、クエン酸塩の代わりに使用することもできた。
【１０８５】
７．炭素濾過
このユニット操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のレベルを低下させるものである（ＷＯ２００８１１８７５２を参照されたい）。
【１０８６】
炭素濾過ステップを、１回通過モードまたは再循環モードで実施することができる。血清型３３Ｆについて、どの操作モードが最も良く機能するかを決定するために、再循環炭素濾過試験を実施した。この実験では、ＵＦＤＦ−１に由来する保持液を、１７０ＬＭＨで、４７ｍｍのＣｕｎｏ  Ｒ３２ＳＰディスクを順次２回通して濾過し（合計面積３５ｃｍ２）、不純物レベルを各サイクルの後に決定した（合計５サイクル）。不純物除去は、約３０Ｌ／ｍ２の最も低い供給負荷で最良であった。１より多いサイクルでのさらなる不純物除去は有意でなく、再循環モードを使用するのはほとんど、または全く有益ではないことを示していた。
【１０８７】
８．任意選択の０．２ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、炭素濾過後に０．２ミクロンのフィルターを使用した。
【１０８８】
９．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
このユニット操作は、生成物を所望の濃度に濃縮し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を、コンジュゲーションのための補正緩衝剤で置き換えるものである。このステップは、３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して実施される。
【１０８９】
残留クエン酸塩の存在は、コンジュゲーション化学反応を妨げ得る。クエン酸塩のレベルを高度に低下させるために、様々な緩衝剤を使用して透析濾過実験を実施した。
【１０９０】
これらの実験において、炭素濾液を、４倍に濃縮した後、様々な緩衝剤に対して透析濾過した。試料を除去し、残留クエン酸塩について分析した。
【１０９１】
水は５０％の最も高い拒絶係数を有し、標的低下を達成するには約２２倍透析容量を必要としたであろう。
【１０９２】
１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０と、１０ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．５は両方とも、約２０％の類似する拒絶係数を有し、６−ｌｏｇの標的低下を達成するには、１０倍透析容量を必要としたであろう。
【１０９３】
２５ｍＭの塩化ナトリウムは、８％の最も低い拒絶係数を有し、７倍透析容量で標的低下に達したであろう。塩化ナトリウム濃度を１０ｍＭに低下させることにより、拒絶係数は２８％に増大した。
【１０９４】
残留クエン酸塩レベルが達成されたことを確保するために、塩化ナトリウムの濃度を、５０ｍＭに増加させた。５０ｍＭ塩化ナトリウムの６倍透析容量後、保持液を、さらに６倍透析容量の水に対して透析濾過した。
【１０９５】
１０．滅菌濾過
保存ボトルへの充填前の最終ユニット操作は、滅菌濾過（０．２ミクロン濾過）である。
【１０９６】
１１．稠度
上記の回収および精製プロセスが、再現可能な結果をもたらし得ることを証明するために、３つの稠度バッチを製造した。発酵バッチを、上記のプロセスを使用して凝集させ、遠心分離した。
【１０９７】
３つの稠度バッチに関するステップおよび全体の収率を表６に示す。全てのステップの収率が、約９０％またはそれより高く、非常に再現性が高い。全体の収率の平均は、７３％である。
【１０９８】
【表６】
2020146032.tif 000008
【１０９９】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表３に示す。３つの稠度バッチは、予め定義された許容基準の全てを満たした。
【１１００】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表７に示す。
【１１０１】
【表７】
2020146032.tif 000009
【１１０２】
凝集を、２０℃の代わりに５０℃で実施した以外は、同じ手順を使用して、さらに２つのバッチを製造した。稠度バッチに由来する平均の結果と共に、これらのバッチに由来する分析結果を、表８に示す。これらの結果は、凝集温度の上昇が、生成物の品質にいかなる影響も有しなかったことを明確に示している。
【１１０３】
【表８】
2020146032.tif 000010
【１１０４】
（実施例３）
肺炎球菌多糖血清型１５Ｂの精製
肺炎球菌多糖１５Ｂの精製のためのプロセスの流れ図を、図１に示す。プロセスは、ＮＬＳ処理された発酵ブロスから始まり、回収ユニット操作（凝集、遠心分離および深層濾過）、次いで、精製ユニット操作（限外濾過、および炭素濾過）を含む。
【１１０５】
１．出発材料
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１５ＢのＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まる。培養物を、Ｈｙ−Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物を、ＮＬＳで不活化した（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）。
【１１０６】
２．凝集
このステップの主な目的は、細胞破片、宿主細胞のタンパク質および核酸を沈降させることである。それはまた、下流の清澄化ユニット操作にも役立つ。ＮＬＳの添加によって溶解された発酵ブロスを使用して、凝集を実施した。
【１１０７】
実施例１および２と同様に、実験を行って、凝集に対する様々なパラメータの効果を検査した。
【１１０８】
変数の効果は、ｐＨ、ミョウバンのパーセントおよび保持時間であった。
【１１０９】
このデータは、ｐＨ２．５〜４．０および１〜３％のミョウバンでのタンパク質除去が非常に有効であり、この単一ステップで９０％を超えるタンパク質不純物が除去されたことを示していた。不純物除去のこの効率は、保持時間（１、４または２４時間）によって影響されなかった。
【１１１０】
１５Ｂについて開発された凝集条件を確認するために、ＤＯＥ試験を実施して、多糖回収率、透明度および不純物除去に対するミョウバン濃度、ｐＨおよび保持時間の効果を検査した。ｐＨ、ミョウバンのパーセントおよび保持時間に関する因子の範囲は、それぞれ、２〜４、０〜４％ｗ／ｖ、および１〜４時間である。
【１１１１】
このＤＯＥに関する実験データを、表９に示す。合計２０回の実験を、設計空間の範囲内で実施した。
【１１１２】
【表９】
2020146032.tif 000011
【１１１３】
結果は、設計空間内で、凝集ユニット操作のための望ましいｐＨ、ミョウバンのパーセントおよび保持時間が、かなり広く、ｐＨ：２．７〜３．８；ミョウバン：１〜２．５％（ｗ／ｖ）；および保持時間：１．５〜３時間であることを示唆していた。同様の結果が、他の血清型のＤＯＥ試験において観察された。
【１１１４】
上記実験は、２０℃で行った。
【１１１５】
凝集条件が清澄化ユニット操作に対して有する効果をさらに決定するために、５０℃で凝集させた発酵ブロス上で連続遠心分離試験を行った。
【１１１６】
２０℃で凝集したブロスについて観察されるように、５０℃で凝集したブロスについて、４００〜８００ｍＬ／分の供給速度では分離液の透明度の有意な増加はなかった。
【１１１７】
３．遠心分離
遠心分離を行って、分離液を合理的な能力で濾過することができるように、それを清澄化した。遠心分離速度を、１２，０００ｘｇに設定した。
【１１１８】
４．深層濾過
遠心分離は主要な固体／液体分離ユニット操作であるが、それは供給流から全ての粒子を除去するわけではなく、深層濾過ユニット操作を、遠心分離ユニット操作と、１回目の限外濾過ユニット操作との間に組み込んだ。
【１１１９】
５．任意選択の０．４５ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、深層濾過後に０．４５ミクロンのフィルターを使用した。
【１１２０】
６．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精製は、深層濾液から始まる（上記のステップ４または５に由来する）。
【１１２１】
この操作は、低分子量の宿主細胞不純物および残留凝集剤（アルミニウム）のレベルを低下させながら、消費した発酵媒体を、緩衝剤で置き換えるものである。
【１１２２】
初期実験において、深層濾液のｐＨを、５Ｎ水酸化ナトリウムを使用して３．５から７．０に調整した。しかしながら、これは、１５Ｂ上のＯ−アセチル基の部分的な脱アセチル化をもたらし得る。
【１１２３】
したがって、深層濾液を管理可能な容量に濃縮した後、透析濾過の間に１５Ｂ溶液のｐＨを調整することが決定された。
【１１２４】
１５Ｂに関する緩衝剤選択試験において、１０〜５０ｍＭのクエン酸塩濃度を、様々な濃度のリン酸ナトリウムと共に試験した。
【１１２５】
クエン酸ナトリウム／リン酸ナトリウム、ｐＨ７．０（例えば、１０ｍＭリン酸塩／２５ｍＭクエン酸塩ｐＨ７．０）に対して、透析濾過を実施した。
【１１２６】
７．炭素濾過
このユニット操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のレベルを低下させるものである（ＷＯ２００８１１８７５２を参照されたい）。
【１１２７】
３つの７’’直径のＣｕｎｏ  Ｒ３２ＳＰ炭素フィルターを、連続して使用した。ＵＦＤＦ−１に由来する保持液を、最初にフィルターを通過させて、２８０ｎｍでのＵＶシグナルを、出発溶液について記録した。その後、保持液を３２ＬＭＨの流量で濾過し、炭素濾液に関するＵＶ２８０を記録し、保持液のものと比較した。ＵＶ２８０シグナルの約９５％の減少は、タンパク質関連不純物が、炭素フィルターの１回通過によって除去されることを示していた。
【１１２８】
炭素濾過ステップを、１回通過モードまたは複数回通過モードまたは再循環モードで実施することができる。炭素を通す付加が血清型１５Ｂに関する利益を追加するかどうかを決定するために、ＵＦＤＦ−１に由来する保持液を、６４ＬＭＨで連続して３つの７インチのＣｕｎｏ  Ｒ３２ＳＰディスクを通して濾過する実験を行った。不純物レベル、ＵＶ２８０レベルおよびタンパク質に関するホウ酸ローリーアッセイを、それぞれの通過後に決定した。結果は、多くの不純物を除去するには、１回通過で十分であることを示していた。１回通過濾液および第２の通過濾液に関するタンパク質濃度は、それぞれ、２５．２および２０．６μｇ／ｍＬであった。フィルターの洗浄に起因する希釈をファクタリングする場合、第１の通過濾液および第２の通過濾液中のタンパク質の量は、ほぼ同じであった。
【１１２９】
８．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
このユニット操作は、生成物を所望の濃度に濃縮し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を、コンジュゲーションのための補正緩衝剤で置き換えるものである。このステップは、３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して実施される。
【１１３０】
残留クエン酸塩の存在は、コンジュゲーション化学反応を妨げ得る。クエン酸塩のレベルを高度に低下させるために、様々な緩衝剤を使用して透析濾過実験を実施した（実施例１および２を参照されたい）。
【１１３１】
９．ホモジナイゼーション
精製された１５Ｂ多糖類を、ホモジナイズ、例えば、機械的にサイジングすることができる（例えば、ＷＯ２０１５１１０９４２を参照されたい）。
【１１３２】
１０．滅菌濾過
保存ボトルへの充填前の最終ユニット操作は、滅菌濾過（０．２ミクロン濾過）である。
【１１３３】
１１．稠度
上記の回収および精製プロセスが、再現可能な結果をもたらし得ることを証明するために、３つの稠度バッチを製造した。発酵バッチを、上記のプロセスを使用して凝集させ、遠心分離した。
【１１３４】
３つの稠度バッチに関するステップおよび全体の収率を表１０に示す。全てのステップの収率は、約７５〜９８％であり、非常に再現性が高く、ロバストである。全体の収率の平均は、６０％である。
【１１３５】
【表１０】
2020146032.tif 000012
【１１３６】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表１１に示す。３つの稠度バッチは、予め定義された許容基準の全てを満たした。
【１１３７】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表１１に示す。
【１１３８】
【表１１】
2020146032.tif 000013
【１１３９】
凝集を、２０℃の代わりに５０℃で実施した以外は、同じ手順を使用して、さらに２つのバッチを製造した。稠度バッチに由来する平均の結果と共に、これらのバッチに由来する分析結果を、表８に示す。これらの結果は、凝集温度の上昇が、生成物の品質にいかなる影響も有しなかったことを明確に示している。
【１１４０】
【表１２】
2020146032.tif 000014
【１１４１】
（実施例４）
肺炎球菌多糖血清型２２Ｆの精製
肺炎球菌多糖２２Ｆの精製のためのプロセスの流れ図を、図１に示す。プロセスは、ＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まり、回収ユニット操作（凝集、遠心分離および深層濾過）、次いで、精製ユニット操作（限外濾過、および炭素濾過）を含む。
【１１４２】
１．出発材料
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型２２ＦのＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まる。培養物を、Ｈｙ−Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物を、ＮＬＳで処理した（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）。
【１１４３】
２．凝集
このステップの主な目的は、細胞破片、宿主細胞のタンパク質および核酸を沈降させることである。それはまた、下流の清澄化ユニット操作にも役立つ。ＮＬＳの添加によって溶解された発酵ブロスを使用して、凝集を実施した。
【１１４４】
２．１  ｐＨおよびミョウバンの効果
実施例１および２と同様に、実験を行って、凝集に対する様々なパラメータの効果を検査した。
【１１４５】
このデータは、ｐＨ２．５〜４．０および１．５〜３％のミョウバンでのタンパク質除去が非常に有効であり、この単一ステップで９０％を超えるタンパク質不純物が除去されたことを示していた。
【１１４６】
２２Ｆについて開発された凝集条件を確認するために、ＤＯＥ試験を実施して、多糖回収率、透明度および不純物除去に対するミョウバン濃度、ｐＨの効果を検査した。
【１１４７】
タンパク質除去効率は、低いｐＨで非常に高かった。ミョウバンとｐＨとの組合せが有効であった。
【１１４８】
２．２  温度の効果
試験を行って、凝集したブロスの粒径に対する温度の効果を検査した。２０℃での凝集（２％ｗ／ｖミョウバン、ｐＨ３．５）後、凝集したブロスを所望の温度に加熱し、１時間保持した。周囲温度（１５〜２５℃）に冷却した後、凝集したブロスを１２，０００ｘｇで遠心分離し、透明度（ＯＤ６００）を決定した。
【１１４９】
結果を、表１３に示す。
【１１５０】
【表１３】
2020146032.tif 000015
【１１５１】
高い温度で、分離液のＯＤ６００は有意に減少した。
【１１５２】
以前の実験において、凝集したブロスの粒径がより高い温度でより大きいことが観察された。凝集温度と共に粒径の変化を示す視覚的比較を、図６に示す。１回目の実験のために、凝集温度を室温（ＲＴ）で保持し、２回目の実験のために、それを１ｈにわたって４５℃に上昇させた。
【１１５３】
図６において、室温で保持し、４５℃に加熱した１ｈ後の凝集したブロスの平均粒径は、それぞれ、９．８μｍおよび６５μｍであった。４５℃に加熱した凝集したブロスの粒径は有意に増大した。粒径がより大きいことに加えて、微細な粒子（１μｍ未満）の量も減少している。大きい粒子の形成および微細な粒子の減少は、さらなるステップ（例えば、遠心分離および深層濾過）に役立ち、より透明な分離液をもたらす。
【１１５４】
唯一の変化が凝集温度（２０℃または５０℃）である、２つのさらなる２２Ｆバッチを製造した。これらのバッチに由来する分離液（遠心分離後）および深層濾過後（以下を参照されたい）の透明度を、表１４に示す。
【１１５５】
【表１４】
2020146032.tif 000016
【１１５６】
３．遠心分離
遠心分離を行って、分離液を合理的な能力で濾過することができるように、それを清澄化した。遠心分離速度を、１２，０００ｘｇに設定した。
【１１５７】
４．深層濾過
遠心分離は主要な固体／液体分離ユニット操作であるが、それは供給流から全ての粒子を除去するわけではなく、深層濾過ユニット操作を、遠心分離ユニット操作と、１回目の限外濾過ユニット操作との間に組み込んだ。
【１１５８】
５．任意選択の０．４５ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、深層濾過後に０．４５ミクロンのフィルターを使用した。
【１１５９】
６．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精製は、深層濾液から始まる（上記のステップ４または５に由来する）。
【１１６０】
この操作は、低分子量の宿主細胞不純物および残留凝集剤（アルミニウム）のレベルを低下させながら、消費した発酵媒体を、緩衝剤で置き換えるものである。
【１１６１】
炭素濾過を実施する前に、２２Ｆ多糖のｐＨを、７．０±０．５に調整した。上記に示されたように、ｐＨを調整するためのＮａＯＨの使用は、Ｏ−アセチル基の部分的な脱アセチル化をもたらし得る。２２Ｆ多糖もＯ−アセチル基を含有するため、深層濾液を管理可能な容量に濃縮した後、透析濾過の間に２２Ｆ溶液のｐＨを調整することが決定された。
【１１６２】
血清型２２Ｆに関する緩衝剤選択試験において、０〜４０ｍＭのクエン酸塩濃度を、様々な濃度のリン酸ナトリウムと共に試験した。
【１１６３】
最も高い透析濾過流動は、２０ｍＭを超えるクエン酸塩濃度および１０ｍＭまたはそれ未満のリン酸塩濃度の場合に得られる。
【１１６４】
７．炭素濾過
このユニット操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のレベルを低下させるものである（ＷＯ２００８１１８７５２を参照されたい）。
【１１６５】
ＵＦＤＦ１保持液を、連続して積み重ねられた３つまたは４つの７’’直径のＲ３２ＳＰ炭素フィルターを通して濾過した。一連の実験を実施して、ＵＦＤＦ１保持液から残留するＵＶおよびＲＩ不純物を除去する際のＲ３２ＳＰ炭素フィルターの有効性を測定した。ＵＶ２６０／２８０ｎｍでの吸光度の少なくとも９５％の低下があった。これは、ＵＦＤＦ１保持液からのタンパク質および核酸に関連する不純物の有意な除去を示している。結果は、炭素がタンパク質関連不純物除去のための優れた能力を有することを示す。
【１１６６】
８．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
このユニット操作は、生成物を所望の濃度に濃縮し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を、コンジュゲーションのための補正緩衝剤で置き換えるものである。このステップは、３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して実施される。
【１１６７】
残留クエン酸塩の存在は、コンジュゲーション化学反応を妨げ得る。クエン酸塩のレベルを高度に低下させるために、様々な緩衝剤を使用して透析濾過実験を実施した（実施例１および２を参照されたい）。
【１１６８】
９．ホモジナイゼーション
精製された２２Ｆ多糖類を、ホモジナイズ、例えば、機械的にサイジングすることができる（例えば、ＷＯ２０１５１１０９４２を参照されたい）。
【１１６９】
１０．滅菌濾過
保存ボトルへの充填前の最終ユニット操作は、滅菌濾過（０．２ミクロン濾過）である。
【１１７０】
１１．稠度
上記の回収および精製プロセスが、再現可能な結果をもたらし得ることを証明するために、３つの稠度バッチを製造した（凝集温度２０℃）。発酵バッチを、上記のプロセスを使用して凝集させ、遠心分離した。
【１１７１】
３つの稠度バッチに関するステップおよび全体の収率を、表１４に示す。全てのステップの収率が、約９０％またはそれより高く、非常に再現性が高い。全体の収率の平均は、５８％である。
【１１７２】
【表１５】
2020146032.tif 000017
【１１７３】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表１５に示す。
【１１７４】
【表１６】
2020146032.tif 000018
【１１７５】
凝集を、２０℃の代わりに５０℃で実施した以外は、同じ手順を使用して、さらに２つのバッチを製造した。稠度バッチに由来する平均の結果と共に、これらのバッチに由来する分析結果を、表１６に示す。これらの結果は、凝集温度の上昇が、生成物の品質にいかなる影響も有しなかったことを明確に示している。
【１１７６】
【表１７】
2020146032.tif 000019
【１１７７】
（実施例５）
肺炎球菌多糖血清型１０Ａの精製
肺炎球菌多糖１０Ａの精製のためのプロセスの流れ図を、図１に示す。プロセスは、ＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まり、回収ユニット操作（凝集、遠心分離および深層濾過）、次いで、精製ユニット操作（限外濾過、および炭素濾過）を含む。
【１１７８】
１．出発材料
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１０ＡのＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まる。培養物を、Ｈｙ−Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物を、ＮＬＳで不活化した（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）。
【１１７９】
２．凝集
このステップの主な目的は、細胞破片、宿主細胞のタンパク質および核酸を沈降させることである。それはまた、下流の清澄化ユニット操作にも役立つ。ＮＬＳの添加によって溶解された発酵ブロスを使用して、凝集を実施した。
【１１８０】
血清型１０Ａの凝集のための最適ｐＨを、ＤＯＥによって決定した（例えば、実施例１および３を参照されたい）。
【１１８１】
Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒに基づくと、望ましさは、ｐＨ３．５および２％ミョウバンでほぼ最適である。それはまた、３．５よりわずかに低いｐＨは、多糖収率のわずかな減少と共に、タンパク質除去および分離液の透明度の少しの改善に役立つが、同時に、ピーク純度はわずかにより高い場合があることを示す。
【１１８２】
他の血清型に関する開発研究は、凝集の間の温度上昇が、より高い深層濾過能力をもたらすことを示した。しかしながら、ブロスの加熱は、多糖分子量に対する効果を有し得る。１０Ａに対して実験を行って、温度の上昇が分子量の減少をもたらすかどうかを決定した。第１の実験においては、凝集したブロスを、２０、５０、６０および７０℃の温度ならびに１、４および２２時間の保持時間でインキュベートした。それぞれの温度で４時間の保持時間に由来する試料のみを精製した。全ての試料が、同じ１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示したが、６０℃および７０℃の試料は、分子量の有意な低下を示した。第２の実験においては、凝集したブロスを、２０、３５、４５および５５℃の温度ならびに１、２および４時間の保持時間でインキュベートし、全ての試料を精製した。この試験により、４５℃で最大４時間にわたって分子量の非常に小さな変化が示された。５５℃で最初の１時間の曝露において分子量のわずかな減少が観察されたが、その差異はアッセイの誤差の範囲内であった。
【１１８３】
３．遠心分離
遠心分離を行って、分離液を合理的な能力で濾過することができるように、それを清澄化した。遠心分離速度を、１２，０００ｘｇに設定した。
【１１８４】
４．深層濾過
遠心分離は主要な固体／液体分離ユニット操作であるが、それは供給流から全ての粒子を除去するわけではなく、深層濾過ユニット操作を、遠心分離ユニット操作と、１回目の限外濾過ユニット操作との間に組み込んだ。
【１１８５】
５．任意選択の０．４５ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、深層濾過後に０．４５ミクロンのフィルターを使用した。
【１１８６】
６．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精製は、深層濾液から始まる（上記のステップ４または５に由来する）。
【１１８７】
この操作は、低分子量の宿主細胞不純物および残留凝集剤（アルミニウム）のレベルを低下させながら、消費した発酵媒体を、緩衝剤で置き換えるものである。
【１１８８】
炭素濾過を実施する前に、２２Ｆ多糖のｐＨを、７．０±０．５に調整した。
【１１８９】
最初に、透析濾過を、１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．０に対して実施した。これは、ｐＨを所望の値に調整するのに成功した。しかしながら、リン酸ナトリウムだけを使用する透析濾過の間に、白色の沈降物が形成された。白色の固体が単離され、リン酸アルミニウムを含有することが決定された。リン酸アルミニウムは、中性ｐＨで水に不溶性であり、凝集ステップ後に存在する残留アルミニウムに起因して形成される。リン酸アルミニウムの形成を防止するために、透析濾過緩衝剤にキレート剤を添加することが決定された。他の血清型に関する研究に基づいて、クエン酸ナトリウムを選択した。１０ｍＭより高いクエン酸塩濃度が、時間と共にかすみが形成されるのを防止するのに有効であった。２５ｍＭのクエン酸塩濃度は、残留アルミニウムを１ｐｐｍ未満まで除去することが示された。
【１１９０】
７．炭素濾過
このユニット操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のレベルを低下させるものである（ＷＯ２００８１１８７５２を参照されたい）。
【１１９１】
ＵＦＤＦ１保持液を、Ｒ３２ＳＰディスク炭素フィルターを通して濾過した。結果は、炭素がタンパク質関連不純物除去のための優れた能力を有することを示す。
【１１９２】
８．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
このユニット操作は、生成物を所望の濃度に濃縮し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を、コンジュゲーションのための補正緩衝剤で置き換えるものである。このステップは、３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して実施される。
【１１９３】
残留クエン酸塩の存在は、コンジュゲーション化学反応を妨げ得る。クエン酸塩のレベルを高度に低下させるために、様々な緩衝剤を使用して透析濾過実験を実施した（実施例１および２を参照されたい）。
【１１９４】
９．滅菌濾過
保存ボトルへの充填前の最終ユニット操作は、滅菌濾過（０．２ミクロン濾過）である。
【１１９５】
１０．稠度
上記の回収および精製プロセスが、再現可能な結果をもたらし得ることを証明するために、３つの稠度バッチを製造した（凝集温度４５℃）。発酵バッチを、上記のプロセスを使用して凝集させ、遠心分離した。
【１１９６】
３つの稠度バッチに関するステップおよび全体の収率を、表１７に示す。全てのステップの収率が、７２％より高く、非常に再現性が高い。全体の収率の平均は、６８％である。
【１１９７】
【表１８】
2020146032.tif 000020
【１１９８】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表１８に示す。
【１１９９】
【表１９】
2020146032.tif 000021
【１２００】
（実施例６）
肺炎球菌多糖血清型１１Ａの精製
肺炎球菌多糖１１Ａの精製のためのプロセスの流れ図を、図１に示す。プロセスは、ＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まり、回収ユニット操作（凝集、遠心分離および深層濾過）、次いで、精製ユニット操作（限外濾過、および炭素濾過）を含む。
【１２０１】
１．出発材料
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１１ＡのＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まる。培養物を、Ｈｙ−Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物を、ＮＬＳで不活化した（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）。
【１２０２】
２．凝集
このステップの主な目的は、細胞破片、宿主細胞のタンパク質および核酸を沈降させることである。それはまた、下流の清澄化ユニット操作にも役立つ。ＮＬＳの添加によって溶解された発酵ブロスを使用して、凝集を実施した。
【１２０３】
他の血清型のための精製プロセスに関する以前の研究は、清澄化ユニット操作が、溶液のｐＨおよび添加されるミョウバンの濃度によって影響されることを示した。血清型１１Ａの凝集に対するこれらの因子の影響を理解するために、ＤＯＥ試験を行ったが、これは、別の因子である、凝集プロセスに対する影響を有し得る凝集時間も含む。
【１２０４】
それぞれのパラメータの範囲を、表１９に列挙する。
【１２０５】
【表２０】
2020146032.tif 000022
【１２０６】
これらの３つのパラメータを変化させる一連の２０回の実験を行った。
【１２０７】
凝集プロセスの間のそれぞれの変数（ミョウバン濃度、ｐＨおよび凝集時間）と、応答（ＰＳ回収、ＯＤ６００およびタンパク質除去）との関係を、Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒによって分析した。重要性が最も低い変数は、ミョウバン濃度およびｐＨをその中央点に設定した場合に、タンパク質除去または透明度に対する影響がほぼなく、多糖回収に対する影響が非常に小さい凝集時間である。ミョウバン濃度は、主に透明度に影響する。最適ミョウバン濃度は、約２．５％であり、最良の透明度をもたらした。しかし、ミョウバン濃度が１．５％〜３％である場合、ＯＤ６００の差異は小さい。他方、凝集ｐＨは、主にタンパク質除去に影響し、ｐＨが低いほど、タンパク質除去は高い。ｐＨ３．５およびそれより下で、最大不純物除去が達成される。
【１２０８】
さらなる実験を設計して、凝集温度の上昇が、下流の操作をさらに改善するかどうかを決定した。
【１２０９】
血清型１１Ａの凝集に対する温度の効果を決定するために、３つの異なる温度で実験を行った。温度に加えて、凝集中の２つの異なる撹拌速度を検査した。１１Ａの発酵ブロスを、様々な温度で１時間、２％ミョウバン、ｐＨ３．５を使用して凝集させた。凝集後、ブロスを遠心分離し、分離液の透明度を測定した。次いで、分離液を、深層フィルターを通して濾過し、フィルター能力を決定した。実験条件および結果を、表２０に示す。深層フィルター濾液を、Ｖｍａｘモデルを使用して０．４５ミクロンのデッドエンドフィルターを通してさらに濾過した。
【１２１０】
全て４００Ｌ／ｍ２より高かったため、４つ全ての条件について深層フィルター能力に差異はなかった。しかしながら、０．４５ミクロンのＶｍａｘの結果には有意差があった。５０℃での凝集は、約１３００Ｌ／ｍ２のＶｍａｘを有し、これは他の条件よりも約８倍高かった。同様に、１０℃での凝集は、最も低いＶｍａｘを有していた。
【１２１１】
【表２１】
2020146032.tif 000023
【１２１２】
上昇した温度での凝集に関する潜在的な関心は、１１Ａの分子構造および分子量に対する温度上昇の影響である。血清型１１Ａは、３個のＯ−アセチル基、およびリン酸を介して多糖反復単位に接続された１個のグリセロール基を有する。これらの基は全て、低いｐＨおよび上昇した温度で凝集中に潜在的に切断除去され得る。分子に対する上昇した温度の他の影響は、分子量に対するものである。この条件（ｐＨ３．５）での凝集中に、より長い鎖の多糖類は、より短い鎖に分解し、より低い分子量をもたらし得る。本発明者らの実験は、生成物が室温での凝集後に精製された元の１１Ａと同一であることを示す（表２４を参照されたい）。
【１２１３】
３．遠心分離
遠心分離を行って、分離液を合理的な能力で濾過することができるように、それを清澄化した。遠心分離速度を、１２，０００ｘｇに設定した。
【１２１４】
４．深層濾過
遠心分離は主要な固体／液体分離ユニット操作であるが、それは供給流から全ての粒子を除去するわけではなく、深層濾過ユニット操作を、遠心分離ユニット操作と、１回目の限外濾過ユニット操作との間に組み込んだ。
【１２１５】
深層フィルター能力に対するブロスの保持時間の効果を決定するために、２％ミョウバンおよびｐＨ３．５を使用する２０℃での凝集に由来する分離液を、２〜８℃で最大３日間保持した。次いで、分離液を、深層フィルターを使用して濾過し、フィルター能力を決定した。２日間の保持にわたって深層フィルター能力に有意差はなかった（表２１）。
【１２１６】
【表２２】
2020146032.tif 000024
【１２１７】
５．任意選択の０．４５ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、深層濾過後に０．４５ミクロンのフィルターを使用した。
【１２１８】
６．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精製は、深層濾液から始まる（上記のステップ４または５に由来する）。
【１２１９】
この操作は、低分子量の宿主細胞不純物および残留凝集剤（アルミニウム）のレベルを低下させながら、消費した発酵媒体を、緩衝剤で置き換えるものである。
【１２２０】
他の血清型に関する開発研究において（上記を参照されたい）、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０が、ＵＦ／ＤＦプロセスにおける使用にとって良好な緩衝剤であることが見出された。リン酸塩緩衝剤は、ｐＨを中性に調整するために使用される。クエン酸塩緩衝剤は、アルミニウムを除去するためのキレート剤として使用される。
【１２２１】
７．炭素濾過
このユニット操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のレベルを低下させるものである（ＷＯ２００８１１８７５２を参照されたい）。
【１２２２】
ＵＦＤＦ１保持液を、Ｒ３２ＳＰディスク炭素フィルターを通して濾過した。結果は、炭素がタンパク質関連不純物除去のための優れた能力を有することを示す。
【１２２３】
８．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
このユニット操作は、生成物を所望の濃度に濃縮し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を、コンジュゲーションのための補正緩衝剤で置き換えるものである。このステップは、３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して実施される。
【１２２４】
残留クエン酸塩の存在は、コンジュゲーション化学反応を妨げ得る。クエン酸塩のレベルを高度に低下させるために、様々な緩衝剤を使用して透析濾過実験を実施した（実施例１および２を参照されたい）。
【１２２５】
９．ホモジナイゼーション
精製された１１Ａ多糖類を、ホモジナイズ、例えば、機械的にサイジングすることができる（例えば、ＷＯ２０１５１１０９４２を参照されたい）。
【１２２６】
１０．滅菌濾過
保存ボトルへの充填前の最終ユニット操作は、滅菌濾過（０．２ミクロン濾過）である。
【１２２７】
１１．稠度
上記の回収および精製プロセスが、再現可能な結果をもたらし得ることを証明するために、３つの稠度バッチを製造した。発酵バッチを、上記のプロセスを使用して凝集させ、遠心分離した。
【１２２８】
３つの稠度バッチに関するステップおよび全体の収率を、表１７に示す。
【１２２９】
【表２３】
2020146032.tif 000025
【１２３０】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表２３に示す。
【１２３１】
【表２４】
2020146032.tif 000026
【１２３２】
様々な温度での凝集を行った。１つの凝集を、５０℃で実施し、この材料の一部を、上記のプロセスを使用して精製した。稠度バッチに由来する平均の結果と共に、この精製に由来する分析結果を、表２４に示す。これらの結果は、凝集温度の上昇が、生成物の品質にいかなる影響も有しなかったことを明確に示している。
【１２３３】
【表２５】
2020146032.tif 000027
【１２３４】
（実施例７）
肺炎球菌多糖血清型１２Ｆの精製
肺炎球菌多糖１２Ｆの精製のためのプロセスの流れ図を、図１に示す。プロセスは、ＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まり、回収ユニット操作（凝集、遠心分離および深層濾過）、次いで、精製ユニット操作（限外濾過、および炭素濾過）を含む。
【１２３５】
ホモジナイゼーションステップは、任意選択である。
【１２３６】
１．出発材料
プロセスは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型１２ＦのＮＬＳ不活化発酵ブロスから始まる。培養物を、Ｈｙ−Ｓｏｙ培地中で増殖させた。増殖の終わりに（光密度のさらなる増加がないことによって示される）、培養物を、ＮＬＳで処理した（ＥＰ２１２９６９３を参照されたい）。
【１２３７】
２．凝集
このステップの主な目的は、細胞破片、宿主細胞のタンパク質および核酸を沈降させることである。それはまた、下流の清澄化ユニット操作にも役立つ。ＮＬＳの添加によって溶解された発酵ブロスを使用して、凝集を実施した。
【１２３８】
他の血清型のための精製プロセスに関する以前の研究は、清澄化ユニット操作が、溶液のｐＨおよびミョウバンの濃度によって影響されるが、凝集撹拌時間からは影響されないことを示した。血清型１２Ｆの凝集に対するこれらの因子の影響を理解するために、ＤＯＥ試験を行った。
【１２３９】
それぞれのパラメータの範囲を、表２５に列挙する。
【１２４０】
【表２６】
2020146032.tif 000028
【１２４１】
これらの３つのパラメータを変化させる一連の１６回の実験を行った（室温で）。
【１２４２】
凝集プロセスの間のそれぞれの変数（ミョウバン濃度、ｐＨおよび凝集時間）と、応答（ＰＳ回収、ＯＤ６００およびタンパク質除去）との関係を、Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒによって分析した。重要性が最も低い変数は、ミョウバン濃度およびｐＨをその中央点に設定した場合に、タンパク質除去または多糖回収に対する影響がほぼなく、透明度に対する影響が非常に小さい凝集時間である。
【１２４３】
ミョウバン濃度は、主に透明度に影響する。最適ミョウバン濃度は、約２．７％であり、最良の透明度をもたらした。しかし、ミョウバン濃度が１．５％〜３．５％である場合、ＯＤ６００の差異は小さい。ミョウバン濃度は、多糖回収に対するいくらかの影響を有する。それが約４％に増加する場合、多糖回収はわずかにより低い。他方、凝集ｐＨは、主にタンパク質除去に影響し、ｐＨが低いほど、タンパク質除去は高い。ｐＨ３．５およびそれより下で、最大不純物除去が達成される。
【１２４４】
他の血清型に関する研究は、凝集の間の温度上昇が、より高い深層濾過能力をもたらすことを示した。凝集温度を５０℃に上昇させた場合、分離液の透明度は劇的に増大し（ＯＤ６００が０．３３８（２０℃で）から０．０７３（５０℃で）に減少した）、フィルター能力は８倍より大きく増加した。凝集のためにより高い温度を使用した場合、粒径は大きい粒径範囲に劇的にシフトし、次いで、遠心分離をより容易にした。
【１２４５】
凝集プロセスに対する凝集温度の影響を理解するために、その他の実験も実施した。血清型１２Ｆの発酵ブロスを、２つの異なる温度で１時間、２％ミョウバン、ｐＨ３．５を使用して凝集させた。凝集後、ブロスを遠心分離し、分離液の透明度を測定した（ＯＤ６００）。次いで、分離液を、深層フィルターを通して濾過し、フィルター能力を決定した。深層フィルター濾液を、Ｖｍａｘモデルを使用して０．４５ミクロンのデッドエンドフィルターを通してさらに濾過した。これらの実験の結果を、図２６に示す。
【１２４６】
【表２７】
2020146032.tif 000029
【１２４７】
凝集温度として５０℃を使用した場合、ＯＤ６００がより低いことが表２６から見られる。全ての条件についてフィルターの能力に達しなかったため、全ての条件について深層フィルター能力に差異はなかった。しかしながら、０．４５ミクロンのＶｍａｘデータは、より高い温度での凝集がはるかにより良好であることを依然として示している。
【１２４８】
３．遠心分離
遠心分離を行って、分離液を合理的な能力で濾過することができるように、それを清澄化した。遠心分離速度を、１２，０００ｘｇに設定した。
【１２４９】
４．深層濾過
遠心分離は主要な固体／液体分離ユニット操作であるが、それは供給流から全ての粒子を除去するわけではなく、深層濾過ユニット操作を、遠心分離ユニット操作と、１回目の限外濾過ユニット操作との間に組み込んだ。
【１２５０】
５．任意選択の０．４５ミクロンでの濾過
任意選択であるが、一部の試料中で、深層濾過後に０．４５ミクロンのフィルターを使用した。
【１２５１】
６．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精製は、深層濾液から始まる（上記のステップ４または５に由来する）。
【１２５２】
この操作は、低分子量の宿主細胞不純物および残留凝集剤（アルミニウム）のレベルを低下させながら、消費した発酵媒体を、緩衝剤で置き換えるものである。
【１２５３】
他の血清型に関する開発研究において（上記を参照されたい）、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．０が、ＵＦ／ＤＦプロセスにおける使用にとって良好な緩衝剤であることが見出された。リン酸塩緩衝剤は、ｐＨを中性に調整するために使用される。クエン酸塩緩衝剤は、アルミニウムを除去するためのキレート剤として使用される。
【１２５４】
７．炭素濾過
このユニット操作は、タンパク質および核酸などの宿主細胞不純物ならびに着色不純物のレベルを低下させるものである（ＷＯ２００８１１８７５２を参照されたい）。
【１２５５】
ＵＦＤＦ１保持液を、Ｒ３２ＳＰディスク炭素フィルターを通して濾過した。結果は、炭素がタンパク質関連不純物除去のための優れた能力を有し、炭素濾過からの生成物回収が非常に良好であることを示す。
【１２５６】
一部の試料については、炭素濾過後の０．２μｍでの濾過を実施した（任意選択）。
【１２５７】
８．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
このユニット操作は、生成物を所望の濃度に濃縮し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０を、コンジュゲーションのための補正緩衝剤で置き換えるものである。このステップは、３０ｋＤａの分子量カットオフフィルターを使用して実施される。
【１２５８】
残留クエン酸塩の存在は、コンジュゲーション化学反応を妨げ得る。クエン酸塩のレベルを高度に低下させるために、様々な緩衝剤を使用して透析濾過実験を実施した（実施例１および２を参照されたい）。
【１２５９】
９．滅菌濾過
保存ボトルへの充填前の最終ユニット操作は、滅菌濾過（０．２ミクロン濾過）である。
【１２６０】
１０．稠度
上記の回収および精製プロセスが、再現可能な結果をもたらし得ることを証明するために、３つの稠度バッチを製造した。発酵バッチを、上記のプロセスを使用して凝集させ、遠心分離した。
【１２６１】
３つの稠度バッチに関するステップおよび全体の収率を、表２７に示す。
【１２６２】
【表２８】
2020146032.tif 000030
【１２６３】
３つの稠度バッチに関する分析結果を、表２８に示す。
【１２６４】
【表２９】
2020146032.tif 000031
【１２６５】
（実施例８）
黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃｐ５およびＣｐ８多糖類の精製
本実施例は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に由来する莢膜多糖類５型（Ｃｐ５）および８型（Ｃｐ８）の単離のための精製プロセスを記載する。
【１２６６】
１．出発材料
精製プロセスのための出発材料は、全細胞（非溶解）黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）発酵収集物であった。
【１２６７】
２．酸加水分解
黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）発酵物の収集後、強酸（例えば、硫酸）の添加によって全細胞ブロスを酸性ｐＨに調整し、加熱した後、一定期間にわたってインキュベートした（ＷＯ２０１１０４１００３を参照されたい）。加水分解後、ブロスを冷却した後、水酸化ナトリウム溶液の添加によって中和した。
【１２６８】
３．凝集
撹拌しながら、１０％（ｗ／ｖ）水性ミョウバン（リン酸アルミニウムナトリウム）溶液を、冷却した（２０〜３０℃）中和ブロス（上記のステップ２のもの）に添加することによって凝集を実施して、ブロス中の最終２％（ｗ／ｖ）ミョウバン溶液を生成した。水酸化ナトリウム溶液（１〜１０Ｎ）の添加によって、ブロスを中和した（ｐＨ６．９〜７．１）。中和後、凝集したブロスを、室温で少なくとも１０分間インキュベートした後、精密濾過によって清澄化した。
【１２６９】
４．ブロスの清澄化（精密濾過または遠心分離）
０．２μｍ孔径の中空繊維膜を使用する接線流精密濾過によって、凝集したブロスを清澄化した。この清澄化の所望の生成物は、濃縮段階と透析濾過段階の両方に由来する浸透液であった；保持液は、最終的に廃棄される。４０００〜８０００ｓ−１の剪断速度での一定の流動条件下で、凝集したブロスを約４倍に濃縮した。濃縮後、一定容量透析濾過（５倍透析容量）を、脱イオン水に対して実施した。一定の流動条件下でも透析濾過を実施する。
【１２７０】
透析濾過後、濃縮段階と透析濾過段階の両方に由来する合わせた浸透液は、次の操作のための供給原料として役立つ。
【１２７１】
５．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−１）
精密濾過浸透液を、中空繊維接線流限外濾過膜を使用して濃縮および透析濾過した。保持液を生成物として収集した；浸透液を廃棄物として廃棄した。供給原料（精密濾過浸透液）を、約８〜１５倍に濃縮した。濃縮後、保持液を、少なくとも１０倍透析容量の１２５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５に対して透析濾過した（一定容量）。
【１２７２】
透析濾過後、保持液を、フィルター装置から排水することによって回収した。
【１２７３】
あるいは、凝集したブロス中の沈降した細胞破片を液体から分離するための清澄化方法として、遠心分離を使用することもできる。次いで、その後の炭素濾過ステップによって、上清をプロセシングすることができる。
【１２７４】
６．炭素濾過
次に、限外濾過／透析濾過保持液を、炭素濾過を使用して濾過した。Ｃｐ５精製とＣｐ８精製の両方のために、Ｃｕｎｏ  Ｒ３２ＳＰ等級の炭素フィルターを使用した。保持液を、典型的には、１回通過操作において炭素フィルターを通して供給した。炭素濾液を、生成物として収集した。生成物濾過の後、炭素を１２５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）緩衝剤で洗浄した。この洗浄液を、生成物濾液と合わせ、過ヨウ素酸塩酸化を開始する。
【１２７５】
７．過ヨウ素酸塩酸化
次に、合わせた炭素濾液とフィルター洗浄液とを、過ヨウ素酸塩を用いる酸化反応にかける。室温で、過ヨウ素酸の１．０Ｍ溶液を、以前の精製ステップに由来する炭素濾液／洗浄液に添加する（５０ｍＭの最終濃度の過ヨウ素酸塩を生成する）。この反応混合物を、室温で３０分間インキュベートした。次いで、モル過剰のプロピレングリコールを、反応混合物に添加して、反応をクエンチした。クエンチ後、反応生成物を、水酸化ナトリウムの添加によって中和した（ｐＨ６．９〜７．１）。次いで、反応生成物の溶液に、最後の限外濾過／透析濾過操作を開始する。
【１２７６】
８．限外濾過／透析濾過−（ＵＦＤＦ−２）
過ヨウ素酸塩酸化生成物の混合物を、中空繊維接線流限外濾過膜を使用して濃縮および透析濾過した。一定のＴＭＰ条件下および一定の剪断速度で、材料を２〜４倍濃縮した（約４〜８ｇ／ＬのＣｐ５／Ｃｐ８に）。次に、保持液を、少なくとも１０倍透析容量のＤＩ水に対して透析濾過した（一定容量）。
【１２７７】
透析濾過後、保持液を回収した後、フィルターを、最小容量のＤＩ水を使用して洗浄した。洗浄液を排水し、保持液と共に収集した；次いで、合わせた材料を滅菌濾過した。
【１２７８】
９．滅菌濾過
合わせた保持液および洗浄液を、適切にサイジングされたデッドエンド滅菌等級フィルター（０．２μｍ孔径）を通して、滅菌容器中に濾過した。次いで、この濾液を４℃で保存した。
【１２７９】
本明細書に記載された全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する当業者のレベルを示す。全ての刊行物および特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物または特許出願が、参照により組み込まれると具体的かつ個別的に示されたのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【１２８０】
前記発明を明確に理解するために図表および例によっていくらか詳細に記載してきたが、ある特定の変化および改変を、添付の特許請求の範囲内で実施することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【外国語明細書】
2020146032000001.pdf