(57)【要約】【課題】フィブロネクチン遺伝子発現促進剤の提供。【解決手段】グリコーゲンを有効成分とするフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリコーゲンを有効成分とするフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
【請求項２】
グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである請求項１記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
【請求項３】
フィブロネクチン遺伝子発現が、線維芽細胞におけるフィブロネクチン遺伝子発現である請求項１又は２記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
【請求項４】
グリコーゲンを有効成分とする皮膚損傷治癒促進剤。
【請求項５】
グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである請求項４記載の皮膚損傷治癒促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フィブロネクチン遺伝子発現促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
フィブロネクチンは、細胞接着分子として知られる巨大な糖タンパク質である。フィブロネクチンは、細胞の接着、成長、移動、分化を促進することから、細胞の細胞外マトリックスへの接着、結合組織の形成・保持、創傷治癒促進等の作用を有すると言われている。
【０００３】
かかる観点からフィブロネクチン自体を眼や皮膚の創傷治癒促進に利用する手段（特許文献１〜３）等が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平０５−１９４２５７号公報
【特許文献２】特表２００１−５１０４６３号公報
【特許文献３】特表２００３−５０７４４０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしフィブロネクチンは、巨大な糖タンパク質であり、入手が困難であり、直接投与することは経済的負担が大きい。
従って、本発明の課題は、フィブロネクチン遺伝子の発現を促進することにより、創傷等の皮膚損傷を治癒し得る薬剤や化粧品として利用できる成分を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明者は、アコヤガイに代表される貝類から得られる成分に着目し、フィブロネクチン遺伝子の発現促進作用を有する成分を探索したところ、グリコーゲンが強いフィブロネクチン遺伝子発現促進作用を有し、創傷等の治癒促進剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔５〕を提供するものである。
【０００８】
〔１〕グリコーゲンを有効成分とするフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
〔２〕グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである〔１〕記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
〔３〕フィブロネクチン遺伝子発現が、線維芽細胞におけるフィブロネクチン遺伝子発現である〔１〕又は〔２〕記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
〔４〕グリコーゲンを有効成分とする皮膚損傷治癒促進剤。
〔５〕グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである〔４〕記載の皮膚損傷治癒促進剤。
【発明の効果】
【０００９】
グリコーゲン、特にアコヤガイ等の貝類由来のグリコーゲンは、線維芽細胞におけるフィブロネクチン遺伝子の発現を促進する作用を有する。従って、グリコーゲンを含有する医薬や化粧品は、皮膚創傷等の皮膚損傷治癒促進剤として有用である。なお、貝類由来のグリコーゲンは食品用等として広く使用されており、安全性も確認されている。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】アコヤガイ由来のグリコーゲンによる線維芽細胞のフィブロネクチン遺伝子への影響を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤及び皮膚損傷治癒促進剤の有効成分は、グリコーゲンである。
【００１２】
グリコーゲンは、動物デンプンとも呼ばれるα−Ｄ−グルコースがグリコシド結合によって重合し、枝分かれの多い多糖構造になった高分子である。グリコーゲンは、グルコースの供給源、すなわちエネルギー源として重要であることは知られているが、フィブロネクチン遺伝子発現に対する作用は知られていない。
【００１３】
グリコーゲンとしては、動物由来のグリコーゲンであればよいが、より多く含まれている点から、貝類由来のグリコーゲンが好ましい。グリコーゲンの由来である貝類としては、カキ、アコヤガイ、ホタテ貝、アワビ、イガイ等が挙げられるが、カキ、アコヤガイが好ましく、特にアコヤガイがさらに好ましい。
【００１４】
貝類からグリコーゲンを抽出するには、一般に、貝肉から熱水抽出し、エタノール沈殿後、トリクロロ酢酸、ジメチルホルムアミド等を加えてタンパク質を沈殿させ、さらにプロテアーゼ処理によりタンパク質を分解して除去してグリコーゲンを回収する方法が採用される。なお、グリコーゲンを効率良く回収するため、透析、アルカリ処理によるタンパク質分解、カチオン界面活性剤処理、イオン交換樹脂等によるアミノ酸、アミノ糖除去等を採用することもできる。
【００１５】
グリコーゲンは、後記実施例に示すように、線維芽細胞におけるフィブロネクチン遺伝子の発現を強く促進させる作用を有する。従って、グリコーゲンは、創傷等の皮膚損傷の治癒促進剤として有用である。
【００１６】
本発明のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤及び皮膚損傷治癒促進剤は、グリコーゲンを０．１〜１００質量％含有する組成物として、医薬品、化粧品、飲食品の形態で用いることができる。
【００１７】
医薬品の形態としては、経口用製剤又は皮膚外用剤が好ましく、化粧品の形態としては皮膚外用剤が好ましく、飲食品の形態としては、経口摂取用剤形が好ましい。
【００１８】
経口用製剤、経口摂取用剤形としては、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤等が挙げられる。これらの剤形にするには、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を配合することができる。
【００１９】
皮膚外用剤の形態としては、クリーム、乳液、軟膏剤等の剤形が挙げられる。これらの剤形にするには、種々の油剤、界面活性剤、紫外線吸収剤、粉体、顔料、多価アルコール、増粘剤、酸化防止剤、香料、防腐剤等を配合することができる。
【実施例】
【００２０】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【００２１】
実施例１
アコヤガイ貝肉２ｋｇに二倍量の熱水（８５〜９８℃）を加えて、抽出し、上清を回収し、減圧濃縮した。濃縮液に三倍量のエタノールを加え、グリコーゲン含有画分を沈殿させて回収した。沈殿に水を加えて溶解し、これにトリクロロ酢酸を５重量％濃度になるように加えて、タンパク質を沈殿させて除去した。グリコーゲン含有液（濾液）は水を用いて透析し、低分子不純物及びトリクロロ酢酸を除去した。透析内液（グリコーゲン含有溶液）にプロテアーゼを加えて、共存タンパク質を分解した。次に、グリコーゲン含有溶液に水酸化ナトリウムを０．８質量％になるように加えた後、沸騰浴中で加熱して、残留している酵素及びタンパク質を分解した。得られたグリコーゲン含有溶液に塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）１重量％濃度になるように加えて、共存しているアミノ酸を沈殿させて除去した。濾液に三倍量のエタノールを加えてグリコーゲンを沈殿させて回収し、凍結乾燥してグリコーゲン粉末２．５ｇを得た。
【００２２】
試験例１
正常ヒト新生児表皮由来の線維芽細胞を用いて、フィブロネクチン遺伝子の発現量を試験した。すなわち、線維芽細胞を５０〜７０％コンフルエントになるまで、培養後、作用培地に置き換え、一日培養した後、各濃度のグリコーゲン粉末を加えた作用培地にて二日間培養した。培養後、ＲＮＡ回収試薬を用いて、ＲＮＡを回収し、２μｇのＲＮＡから逆転写酵素を用いて、ｃＤＮＡを合成した。遺伝子発現比較は、Ｒｅａｌｔｉｍｅ  ＰＣＲｓｙｓｔｅｍを用い、ＴａｑＭａｎ  ｐｒｏｂｅ法を用いたΔΔＣＴ法にて、フィブロネクチン遺伝子の発現量を測定した。
【００２３】
結果を図１に示す。図１から、グリコーゲンは、線維芽細胞のフィブロネクチン遺伝子の発現を有意に促進していることがわかる。
【図１】
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