(57)【要約】【課題】新規ＣＳＵ重症度マーカー、並びに前記ＣＳＵ重症度マーカーを利用した検査キット、ＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価試薬、及びＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価方法を提供する。【解決手段】７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ、及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される慢性特発性蕁麻疹の重症度マーカー。７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質からなる群より選択される少なくとも１種を含む、検査キット。また、慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、慢性特発性蕁麻疹の重症度の評価方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
７，１７−ジヒドロキシ−４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ−ドコサヘキサエン酸（７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ）、及び８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸（８−ＨＥＰＥ）からなる群より選択される慢性特発性蕁麻疹の重症度マーカー。
【請求項２】
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質からなる群より選択される少なくとも１種を含む、検査キット。
【請求項３】
前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び前記８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質を含む、請求項２に記載の検査キット。
【請求項４】
前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質が、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する抗体であり、
前記８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質が、８−ＨＥＰＥに対する抗体である、
請求項２又は３に記載の検査キット。
【請求項５】
前記検査キットが、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果を評価するためのキットである、請求項２〜４のいずれか一項に記載の検査キット。
【請求項６】
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質を含む、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果の評価試薬。
【請求項７】
前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質が、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する抗体である、請求項６に記載の評価試薬。
【請求項８】
８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質を含む、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果の評価試薬。
【請求項９】
前記８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質が、８−ＨＥＰＥに対する抗体である、請求項８に記載の評価試薬。
【請求項１０】
慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、
慢性特発性蕁麻疹の重症度の評価方法。
【請求項１１】
前記慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの濃度を測定する工程を含む、
請求項１０に記載の慢性特発性蕁麻疹の重症度の評価方法。
【請求項１２】
治療を受けた慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、
前記治療による慢性特発性蕁麻疹の治療効果の評価方法。
【請求項１３】
前記治療を受けた慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの濃度を測定する工程を含む、
請求項１２に記載の慢性特発性蕁麻疹の治療効果の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、慢性特発性蕁麻疹の重症度マーカー、及びその使用に関する。特に、前記慢性特発性蕁麻疹の重症度マーカーを利用した検査キット、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果の評価試薬、慢性特発性蕁麻疹の重症度の評価方法、及び慢性特発性蕁麻疹の治療効果の評価方法に関する。前記検査キットは、特に、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果を評価するために用いられる。
【背景技術】
【０００２】
蕁麻疹とは、そう痒を伴った一過性の紅斑と膨疹が出没を繰り返す皮膚疾患である。蕁麻疹は、明らかな外部誘因がない特発性蕁麻疹と、特定刺激や負荷により誘発される刺激誘発性蕁麻疹とに分類される。また、特発性蕁麻疹は、６週間以上症状が継続する慢性のものと、症状の継続が６週間未満である急性のものとに分類される。慢性特発性蕁麻疹（chronic spontaneous urticaria：ＣＳＵ）は、明らかな外部誘因がなく、症状が６週間以上継続する蕁麻疹である。日本では、ＣＳＵは、蕁麻疹全体の５３．５％を占めている。ＣＳＵでは、症状が毎日またはほぼ毎日出現し、痒みや膨疹が繰り返されるため、患者のＱＯＬの低下や労働生産性の低下に繋がっている。
【０００３】
ＣＳＵの治療には、一般的に抗ヒスタミン剤が使用される。また、最近、抗ＩｇＥモノクローナル抗体製剤であるオマリズマブが、ＣＳＵの症状を軽減することが認められた。オマリズマブは、ヒトＩｇＥ分子のＣε３に特異性を有するマウスモノクローン抗体ベースとして、９５％をヒトＩｇＧ１分子構造に置換したヒト化抗体であり、元々、気管支喘息に対して効能が認められた抗体製剤である。日本では、オマリズマブは、既存治療に抵抗性のＣＳＵに対して、適用が認められている。
【０００４】
ＣＳＵの治療方法の選択には、ＣＳＵの重症度を把握する必要がある。ＣＳＵの重症度の評価方法としては、過去１週間の蕁麻疹の数や期間から重症度を算定する７−ｄａｙ  ｕｒｔｉｃａｒｉａ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｓｃｏｒｅ（ＵＳＡ７）（非特許文献１）、及び過去４週間のＱＯＬを所定の質問に対する患者の回答で評価するｕｒｔｉｃａｒｉａ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｔｅｓｔ（ＵＣＴ）（非特許文献２）の２種類が、広く用いられている。しかしながら、これらの評価方法は、患者の自己申告によるものであり、ＣＳＵの重症度を客観的に評価できるバイオマーカーは知られていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Zuberbier T et al., EAACI/GA(2)LEN/EDF/WAO guideline: definition, classification and diagnosis of urticaria. Allergy. 2009 Oct;64(10):1417-26.
【非特許文献２】Weller K et al., Development and validation of the Urticaria Control Test: a patient-reported outcome instrument for assessing urticaria control. J Allergy Clin Immunol. 2014 May;133(5):1365-72.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記のように、ＣＳＵの重症度の評価は、現在、患者の自己申告に基づいて行われており、患者が病状を記録していない場合には、評価を行うことができない。また、患者の自己申告によるため、客観性に欠ける面がある。そのため、ＣＳＵの重症度を客観的に評価可能なバイオマーカーが求められている。
【０００７】
本発明は上記事情に鑑みて為されたものであり、新規ＣＳＵ重症度マーカー、並びに前記ＣＳＵ重症度マーカーを利用した検査キット、ＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価試薬、及びＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は以下の態様を含む。
［１］７，１７−ジヒドロキシ−４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ−ドコサヘキサエン酸（７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ）、及び８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸（８−ＨＥＰＥ）からなる群より選択される慢性特発性蕁麻疹の重症度マーカー。
［２］７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質からなる群より選択される少なくとも１種を含む、検査キット。
［３］前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び前記８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質を含む、［２］に記載の検査キット。
［４］前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質が、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する抗体であり、前記８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質が、８−ＨＥＰＥに対する抗体である、［２］又は［３］に記載の検査キット。
［５］前記検査キットが、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果を評価するためのキットである、［２］〜［４］のいずれか一項に記載の検査キット。
［６］７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質を含む、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果の評価試薬。
［７］前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質が、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する抗体である、［６］に記載の評価試薬。
［８］８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質を含む、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果の評価試薬。
［９］前記８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質が、８−ＨＥＰＥに対する抗体である、［８］に記載の評価試薬。
［１０］慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、慢性特発性蕁麻疹の重症度の評価方法。
［１１］前記慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの濃度を測定する工程を含む、［１０］に記載の慢性特発性蕁麻疹の重症度の評価方法。
［１２］治療を受けた慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、前記治療による慢性特発性蕁麻疹の治療効果の評価方法。
［１３］前記治療を受けた慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの濃度を測定する工程を含む、［１２］に記載の慢性特発性蕁麻疹の治療効果の評価方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、新規ＣＳＵ重症度マーカー、並びに前記ＣＳＵ重症度マーカーを利用した検査キット、ＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価試薬、及びＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度と、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）の重症度との相関を示す。（Ａ）は、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度とＵＡＳ７スコアとの相関を示す。（Ｂ）は、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度とＵＣＴスコアとの相関を示す。
【図２】血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度と、ＣＳＵの重症度との相関を示す。（Ａ）は、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度とＵＡＳ７スコアとの相関を示す。（Ｂ）は、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度とＵＣＴスコアとの相関を示す。
【図３】血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度と、アトピー皮膚炎（ＡＤ）の重症度とが相関しないことを示す。（Ａ）は、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度とＰＯＥＭスコアとが相関しないことを示す。（Ｂ）は、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度とＥＡＳＩスコアとが相関しないことを示す。
【図４】血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度と、ＡＤの重症度とが相関しないことを示す。（Ａ）は、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度とＰＯＥＭスコアとが相関しないことを示す。（Ｂ）は、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度とＥＡＳＩスコアとが相関しないことを示す。
【図５】ＣＳＵ患者に対するオマリズマブ投与と血漿採取のスケジュールを示す。
【図６】オマリズマブ投与前と投与後のＣＳＵ重症度の変化を示す。（Ａ）は、ＵＡＳ７スコアの変化を示す。（Ｂ）は、ＵＣＴスコアの変化を示す。
【図７】オマリズマブ投与前と投与後の血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度の変化を示す。
【図８】オマリズマブ投与前と投与後の血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度の変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
［ＣＳＵ重症度マーカー］
本発明の第１の態様は、７，１７−ジヒドロキシ−４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ−ドコサヘキサエン酸（７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ）、及び８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸（８−ＨＥＰＥ）からなる群より選択される慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）の重症度マーカーである。
【００１２】
後述の実施例で示すように、ＣＳＵ患者の血漿のリピドミクス解析を行った結果、ＣＳＵの重症度と相関のある酸化脂肪酸として、７，１７−ジヒドロキシ−４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ−ドコサヘキサエン酸（７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ）、及び８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸（８−ＨＥＰＥ）が見出された。７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血漿中濃度は、ＵＡＳ７及びＵＣＴによる重症度と相関し、ＣＳＵの重症度が高くなるほど、これらの酸化脂肪酸の血漿中濃度は高くなる。
【００１３】
７，１７−ジヒドロキシ−４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ−ドコサヘキサエン酸（7,17-dihydroxy-4Z,8E,10Z,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid：７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ）は、ドコサヘキサエン酸の代謝産物である。
８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ−エイコサペンタエン酸（8-hydroxy-5Z, 9E, 11Z, 14Z, 17Z-eicosapentaenoic acid：８−ＨＥＰＥ）は、エイコサペンタエン酸の代謝産物である。
【００１４】
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥは、ＣＳＵの重症度が高くなるほど、血中濃度が高くなるため、これらの酸化脂肪酸の血中濃度を測定することにより、ＣＳＵの重症度を評価することができる。したがって、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥは、ＣＳＵの重症度を評価するための重症度マーカーとして用いることができる。
【００１５】
また、後述する実施例で示すように、オマリズマブ投与によりＣＳＵの症状が改善した患者では、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血漿濃度が低下することが確認された。この結果は、投薬等の治療によりＣＳＵの症状が改善することに伴い、これらの酸化脂肪酸の血中濃度が低下することを示している。したがって、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥは、ＣＳＵの治療効果を評価するための治療効果評価マーカーとしても用いることができる。
【００１６】
以下、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥおよび８−ＨＥＰＥをまとめて「マーカー酸化脂肪酸」ということがある。
【００１７】
［検査キット］
本発明の第２の態様は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質からなる群より選択される少なくとも１種を含む、検査キットである。
【００１８】
本態様の検査キットは、試料中の、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の酸化脂肪酸を検出するために用いられる。本態様の検査キットは、特に、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の酸化脂肪酸の血中濃度を測定するために用いられる。７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度は、ＣＳＵの重症度と相関しており、これらの酸化脂肪酸の血中濃度を測定することにより、ＣＳＵの重症度を評価することができる。また、１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度は、投薬等の治療によりＣＳＵの症状が改善すると低下する。したがって、本態様の検査キットは、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果を評価するための検査キットであることが好ましい。
【００１９】
＜特異的結合物質＞
本態様に係る検査キットは、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質からなる群より選択される少なくとも１種を含む。
【００２０】
本明細書において、「特異的結合物質」とは、特定の物質に対する特異的結合性を有する物質を意味する。物質Ａに対する特異的結合物質は、物質Ａに対して高い結合親和性を有するが、他の物質に対しては結合親和性が低い物質である。したがって、「７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質」は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合性を有する物質を意味し、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対して高い結合親和性を有するが、他の物質に対しては結合親和性が低い物質である。また、「８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質」は、８−ＨＥＰＥに対する特異的結合性を有する物質を意味し、８−ＨＥＰＥに対して高い結合親和性を有するが、他の物質に対しては結合親和性が低い物質である。
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質の具体例としては、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに特異的結合性を有する抗体（７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する抗体；以下、「抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体」という）、又は７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに特異的結合性を有するアプタマー（７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対するアプタマー；以下、「抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥアプタマー」という）が挙げられる。
８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質の具体例としては、８−ＨＥＰＥに特異的結合性を有する抗体（８−ＨＥＰＥに対する抗体；以下、「抗８−ＨＥＰＥ抗体」という）、又は８−ＨＥＰＥに特異的結合性を有するアプタマー（８−ＨＥＰＥに対するアプタマー；以下、「抗８−ＨＥＰＥアプタマー」という）が挙げられる。
【００２１】
抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥを抗原として、公知の方法（ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ法など）により作製することができる。抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体は、必ずしもインタクトな抗体である必要はなく、抗体断片であってもよい。抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体は、改変抗体（キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体等）であってもよく、抗体断片（ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ等）であってもよい。抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体は、ポリクローナルであってもよく、モノクローナルであってもよい。本明細書において、「抗体」という用語は、インタクトな抗体に加えて、改変抗体、及び抗体断片を包含する。
抗８−ＨＥＰＥ抗体は、８−ＨＥＰＥを抗原として、公知の方法（ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ法など）により作製することができる。抗８−ＨＥＰＥ抗体は、必ずしもインタクトな抗体である必要はなく、抗体断片であってもよい。抗８−ＨＥＰＥ抗体は、改変抗体（キメラ抗体等）であってもよく、抗体断片（ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ等）であってもよい。抗８−ＨＥＰＥ抗体は、ポリクローナルであってもよく、モノクローナルであってもよい。
【００２２】
アプタマーとは、標的物質に対する特異的結合性を有する物質であり、核酸アプタマー、ペプチドアプタマー等が挙げられる。
抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥアプタマーは、核酸アプタマーであってもよく、ペプチドアプタマーであってもよい。抗８−ＨＥＰＥアプタマーは、核酸アプタマーであってもよく、ペプチドアプタマーであってもよい。核酸アプタマーは、例えば、systematic evolution of ligand by exponentialenrichment（ＳＥＬＥＸ）法等により選別することができる。また、ペプチドアプタマーは、例えば酵母を用いたＴｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ法等により選別することができる。
【００２３】
本態様の検査キットは、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質のいずれを含むものであってもよく、両方を含むものであってもよい。好ましくは、本態様の検査キットは、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質、及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質の両方を含む。
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合性を有する限り特に限定されないが、抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体又は抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥアプタマーが好ましく、抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体がより好ましい。
８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質は、８−ＨＥＰＥに対する特異的結合性を有する限り特に限定されないが、抗８−ＨＥＰＥ抗体又は抗８−ＨＥＰＥアプタマーが好ましく、抗８−ＨＥＰＥ抗体がより好ましい。
【００２４】
本態様の検査キットにおいて、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質（以下、両者をまとめて「マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質」という）は、支持体に固定化されていてもよい。支持体は、本態様の検査キットを適用する方法に応じて、適宜選択することができる。支持体としては、例えば、ウェルプレート（例、９６ウェルマイクロプレートなど）、メンブレン（例、ニトロセルロース膜、ポリフッ化ビニリデン膜など）、スライドガラス、磁気ビーズ、ラテックス粒子等が挙げられる。マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質を支持体に固定化する方法は、支持体の材質に応じて、適宜、公知の方法を選択することができる。
マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質が、支持体に固定化されている場合、Ｂ／Ｆ分離により、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥを、試料中から分離することができる。
【００２５】
マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質が支持体に固定されている場合、本態様の検査キットは、前記支持体に固定された特異的結合物質（一次特異的結合物質）とは異なるエピトープに結合するマーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質（二次特異的結合物質）を含んでいてもよい。例えば、本態様の検査キットが、支持体に固定された抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体（一次抗体）を含む場合、さらに、前記一次抗体とは異なるエピトープに結合する抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体（二次抗体）を含んでいてもよい。また、例えば、本態様の検査キットが、支持体に固定された抗８−ＨＥＰＥ抗体（一次抗体）を含む場合、さらに、前記一次抗体とは異なるエピトープに結合する抗８−ＨＥＰＥ抗体（二次抗体）を含んでいてもよい。
【００２６】
また、マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質は、標識化されたものであってもよい。標識化のための標識物質は、特に限定されず、公知のものを用いればよい。標識物質としては、例えば、ペルオキシダーゼ（例、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、アルカリホスファターゼなどの酵素標識；カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、６−カルボキシ−４’,５’−ジクロロ２’ ,７’−ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テトラクロロフルオレセイン（ＴＥＴ）、５'−ヘキサクロロ−フルオレセイン−ＣＥホスホロアミダイト（ＨＥＸ）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ａｌｅｘａ５６８、Ａｌｅｘａ６４７などの蛍光標識；ヨウ素１２５などの放射性同位体標識；ルテニウム錯体などの電気化学発光標識；ビオチン；金属ナノ粒子等が挙げられる。マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質の標識化は、標識物質の種類に応じて、適宜、公知の方法を選択して行うことができる。なお、標識物質としてビオチンを用いる場合には、本態様の検査キットは、さらに、標識化されたアビジンを含んでいてもよい。アビジンの標識物質としては、上記例示した標識物質のうちビオチン以外の標識物質が例示される。
本態様の検査キットが二次特異的結合物質を含む場合、当該二次特異的結合物質は、標識化されていることが好ましい。
【００２７】
＜他の要素＞
本実施形態のキットは、マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質に加えて、他の要素を含んでいてもよい。他の要素としては、例えば、酸化脂肪酸の検出試薬、標識物質の検出試薬、マーカー酸化脂肪酸の標準試料、血液試料調製試薬、脂質抽出試薬、希釈液、バッファー類、支持体、使用説明書等が挙げられる。
【００２８】
酸化脂肪酸の検出試薬は、例えば、支持体に固定されたマーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質により、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥを支持体に捕捉した後、捕捉された７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥを検出するために用いることができる。酸化脂肪酸の検出試薬は、特に限定されないが、例えば、Ｓｕｌｆｏ−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｖａｎｉｌｌｉｎ法に用いる試薬（バニリン、硫酸）等が挙げられる。
【００２９】
標識物質の検出試薬は、マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質又は二次特異的結合物質の標識化に用いた標識物質を検出するための試薬である。例えば、標識物質が酵素標識である場合、検出試薬は当該酵素の基質を含む。例えば、酵素標識がペルオキシダーゼである場合、検出試薬としては、ＴＭＢ（3,3',5,5'-tetramethylbenzidine）、ＯＰＤ（o-phenylenediamine dihydrochloride）、ＡＢＴＳ（2,2'-azino-di-[3-ethyl-benzothiazoline-6 sulfonic acid] diammonium salt）等が挙げられる。また、酵素標識がアルカリホスファターゼである場合、検出試薬としては、ｐＮＰＰ（p-Nitrophenyl-phosphate；ニトロフェニルリン酸）等が挙げられる。
【００３０】
マーカー酸化脂肪酸の標準試料は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥの標準曲線を作成するための試薬である。マーカー酸化脂肪酸の標準試料としては、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの精製品、及び８−ＨＥＰＥの精製品が挙げられる。
【００３１】
血液試料調製試薬は、患者から採取した血液から血液試料を調製するための試薬である。本態様の検査キットに適用する血液試料としては、例えば、血漿が挙げられる。そのため、血液試料調製試薬としては、患者から採血した血液から血漿試料を調製するための試薬が挙げられる。そのような試薬としては、例えば、ヘパリン、ＥＤＴＡ、及びクエン酸ナトリウム等が挙げられる。また、血液試料調製試薬としては、例えば、血液又は血漿の希釈液等が挙げられる。希釈液としては、リン酸緩衝液、トリス緩衝液（Ｔｒｉ−ＨＣｌなど）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などの公知の緩衝液等が例示される。
【００３２】
脂質抽出試薬は、血漿試料等から脂質を抽出するための試薬である。脂質の抽出試薬としては、例えば、Ｂｌｉｇｈ  ＆  Ｄｙｅｒ法に用いる試薬等が挙げられる。そのような試薬としては、クロロホルム、及びメタノールが挙げられる。また、脂質抽出試薬は、脂質抽出用のカラム等であってもよい。
【００３３】
バッファー類としては、マーカー酸化脂肪酸とマーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質との結合反応に用いられるバッファー、及びマーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質に結合する標識物質を検出するための反応に用いられるバッファー等が挙げられる。バッファー類の具体例としては、例えば、ブロッキングバッファー、洗浄バッファー等が挙げられる。これらのバッファー類は、イムノアッセイ等に一般的に用いられるものを特に制限なく用いることができる。
【００３４】
支持体は、マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質を固定化するために用いられる。支持体としては、上記に例示したものが挙げられる。
【００３５】
本態様の検査キットは、ＥＬＩＳＡキットであってもよい。本態様の検査キットがＥＬＩＳＡキットである場合、例えば、支持体に固定化されたマーカー酸化脂肪酸に対する一次特異的結合物質、標識化されたマーカー酸化脂肪酸に対する二次特異的結合物質、及び二次特異的結合物質に結合する標識の検出試薬等を含み得る、ＥＬＩＳＡキットは、さらに、血液試料調製試薬、脂質抽出試薬、希釈液、マーカー酸化脂肪酸の標準試料、及びバッファー類（ブロッキングバッファー、洗浄バッファー等）等を含んでいてもよい。
【００３６】
本態様の検査キットは、後述の「［慢性特発性蕁麻疹の重症度の評価方法］」及び「［慢性特発性蕁麻疹の治療効果の評価方法］」に記載の方法に用いることができる。
【００３７】
［評価試薬］
本発明の第３の態様は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質を含む、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）の重症度又は治療効果の評価試薬である。
本発明の４の態様は、８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質を含む、慢性特発性蕁麻疹の重症度又は治療効果の評価試薬である。
【００３８】
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質は、上記「［検査キット］」に記載したものと同様である。７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質としては、抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体又は抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥアプタマーが好ましく、抗７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ抗体がより好ましい。
８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質は、上記「［検査キット］」に記載したものと同様である。８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質としては、抗８−ＨＥＰＥ抗体又は抗８−ＨＥＰＥアプタマーが好ましく、抗８−ＨＥＰＥ抗体がより好ましい。
【００３９】
第３の態様の評価試薬は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの血中濃度を測定するために使用することができる。７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの血中濃度は、ＣＳＵの重症度と正の相関を示すため、第３の態様の評価試薬は、ＣＳＵの重症度を評価するための試薬として用いることができる。また、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの血中濃度は、投薬等の治療によりＣＳＵの症状が改善すると低下する。そのため、第３の態様の評価試薬は、ＣＳＵの治療効果を評価するための試薬として用いることができる。
【００４０】
第４の態様の評価試薬は、８−ＨＥＰＥの血中濃度を測定するために使用することができる。８−ＨＥＰＥの血中濃度は、ＣＳＵの重症度と正の相関を示すため、第４の態様の評価試薬は、ＣＳＵの重症度を評価するための試薬として用いることができる。また、８−ＨＥＰＥの血中濃度は、投薬等の治療によりＣＳＵの症状が改善すると低下する。そのため、第４の態様の評価試薬は、ＣＳＵの治療効果を評価するための試薬として用いることができる。
【００４１】
［ＣＳＵ重症度の評価方法］
本発明の第５の態様は、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）の重症度の評価方法である。
【００４２】
＜ＣＳＵ患者の血液試料＞
本態様の評価方法で用いる試料は、ＣＳＵ患者の血液試料である。「血液試料」とは、血液成分の少なくとも一部を含む試料を意味し、全血、血清、及び血漿のいずれであってもよく、これらを希釈したものであってもよい。血液試料は、好ましくは血清又は血漿であり、より好ましくは血漿である。
ＣＳＵ患者の血液試料は、ＣＳＵ患者から採取された血液成分を含む試料であり、好ましくはＣＳＵ患者から採取された血液から調製された血漿である。血液から血漿を調製する方法は、特に限定されず、公知の方法を用いればよい。血液からの血漿の分離方法としては、例えば、血液にヘパリン、ＥＤＴＡ、クエン酸ナトリウム等を添加して、遠心分離する方法等が挙げられる。前記遠心分離は、マーカー酸化脂肪酸の分解を抑制する観点から、冷却下（例えば、４℃）で行うことが好ましい。
【００４３】
マーカー酸化脂肪酸は不安定な物質であるため、マーカー酸化脂肪酸の分解を抑制する観点から、ＣＳＵ患者から血液を採取後すぐに、前記血液から血漿を調製することが好ましい。また、調製した血漿は、調整後すぐに、マーカー脂肪酸の測定を行うか、急速凍結（例えば、−２０℃）にて保存することが好ましい。
【００４４】
＜測定工程：工程（ａ１）＞
本態様の評価方法では、ＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの濃度を測定してもよく、８−ＨＥＰＥの濃度を測定してもよく、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの両方の濃度を測定してもよい。好ましくは、ＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの両方の濃度を測定する。
【００４５】
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの測定方法は、特に限定されず、公知の方法を用いればよい。７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの測定方法としては、例えば、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質及び８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質を用いる方法、質量分析（ＥＳＩ−ＭＳなど）による方法、薄層クロマトグラフィーによる方法、及び液体高速クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による方法等が挙げられる。
【００４６】
上記の中でも、簡便に行えることから、マーカー酸化脂肪酸に対する特異的結合物質を用いる方法が好ましい。当該方法は、上記第２の態様の検査キット、又は第３の態様若しくは第４の態様の評価試薬を用いて行うことができる。
例えば、支持体結合させた７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する特異的結合物質に、ＣＳＵ患者の血液試料を接触させる。これにより、前記結合物質に、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥが結合して、前記支持体に７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥが捕捉される。次いで、前記支持体に、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに対する標識化された二次特異的結合物質を接触させる。これにより、支持体に捕捉された７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥに前記二次特異的結合物質が結合する。次いで、前記二次特異的結合物質に結合する標識物質を測定することにより、血液試料中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの測定を行うことができる。
また、例えば、支持体結合させた８−ＨＥＰＥに対する特異的結合物質に、ＣＳＵ患者の血液試料を接触させる。これにより、前記結合物質に、８−ＨＥＰＥが結合して、前記支持体に８−ＨＥＰＥが捕捉される。次いで、前記支持体に、８−ＨＥＰＥに対する標識化された二次特異的結合物質を接触させる。これにより、支持体に捕捉された８−ＨＥＰＥに前記二次特異的結合物質が結合する。次いで、前記二次特異的結合物質に結合する標識物質を測定することにより、血液試料中の８−ＨＥＰＥの測定を行うことができる。
【００４７】
７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥを、これらに対する特異的結合物質を用いて測定する方法の具体例としては、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ）、放射免測定法（ＲＩＡ）、蛍光酵素免疫測定法（ＦＬＥＩＡ）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、電気化学発光免疫測定法（ＥＣＬＩＡ）、蛍光抗体法（ＦＡ）等が挙げられる。
【００４８】
ＣＳＵ患者の血液試料は、マーカー酸化脂肪酸の測定を行う前に、脂質の抽出を行ってもよい。マーカー脂肪酸の分解を抑制する観点からは、マーカー酸化脂肪酸の測定を行う前に、脂質の抽出を行うことが好ましい。脂質の抽出は、Ｂｌｉｇｈ  ＆  Ｄｙｅｒ法等の公知の方法により行うことができ、市販の脂質抽出キット等を使用してもよい。
【００４９】
＜他の工程＞
本態様の評価方法は、上記測定工程（工程（ａ１））に加えて他の工程を含んでいてもよい。他の工程としては、例えば、前記測定工程で測定された、７１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥの濃度に基づいて、ＣＳＵの重症度を評価する工程、及び前記評価されたＣＳＵの重症度に基づいて、ＣＳＵ患者に治療を実施する工程等が挙げられる。
【００５０】
≪評価工程：工程（ｂ１）≫
後述する実施例で示すように、ＣＳＵ患者において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度は、ＣＳＵの重症度と正の相関を示す。すなわち、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度は、ＣＳＵの重症度が高いほど高くなる。これにより、本態様の評価方法では、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥの血中濃度とＣＳＵの重症度とを相関させて、ＣＳＵ患者におけるＣＳＵの重症度を評価することができる。そのため、本態様の評価方法は、上記測定工程で測定された、７１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度に基づいて、ＣＳＵの重症度を評価する工程を含んでいてもよい。
【００５１】
具体的には、上記測定工程において測定された７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度の少なくとも一方を、ＣＳＵの重症度と相関させて、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度の少なくとも一方を、予め定めたＣＳＵの重症度基準値と比較する。そして、前記比較結果に基づいて、ＣＳＵの重症度を評価する。ＣＳＵの重症度の評価は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥのいずれの血中濃度に基づいてもよいが、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの両方の血中濃度に基づくことが好ましい。
【００５２】
予め定めたＣＳＵの重症度基準値は、例えば、ＣＳＵの重症度が既知である患者のマーカー酸化脂肪酸の濃度に基づいて、定められた値とすることができる。例えば、ＵＡＳ７又はＵＳＴの各スコア区分の患者群における７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度に基づいて、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥのＣＳＵ重症度基準値をそれぞれ設定してもよい。あるいは、オマリズマブを投与してＣＳＵの症状が改善した患者における７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度に基づいて、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥのＣＳＵ重症度基準値をそれぞれ設定してもよい。前記ＣＳＵ重症度基準値は、複数の患者の血中濃度値を統計処理して算出されたカットオフ値であることが好ましい。
【００５３】
また、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度を複数の患者で測定した場合には、当該患者間の前記血中濃度を比較して、前記血中濃度が高い順にＣＳＵの重症度が高い、と評価してもよい。
【００５４】
また、１人の患者について、経時的に７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度を測定した場合には、各測定時点における前記血中濃度の変化に基づいて、ＣＳＵの重症度の変化を評価してもよい。例えば、前回測定時よりも前記血中濃度が高くなった場合には、ＣＳＵの重症度が高くなったと評価することができ、前記測定時よりも前記血中濃度が低くなった場合には、ＣＳＵの重症度が低くなったと評価することができる。
【００５５】
≪治療工程：工程（ｃ１）≫
本態様の評価方法は、前記評価工程（工程（ｂ１））において評価されたＣＳＵの重症度に基づいて、ＣＳＵ患者に治療を実施する工程を含んでいてもよい。
例えば、評価工程においてＣＳＵの重症度が高いと評価された患者に対しては、オマリズマブ投与等の治療を実施することができる。また、例えば、評価工程においてＣＳＵの重症度が低いと評価された患者に対しては、抗ヒスタミン剤投与等の治療を実施することができる。本工程において選択される治療は、前記のものに限定されず、ＣＳＵの重症度に応じて、適切な治療方法を選択して実施することができる。
【００５６】
本態様の評価方法によれば、ＣＳＵの重症度を、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度に基づいて、客観的に評価することができる。そのため、従来、患者の自己申告に基づいて評価されていたＣＳＵの重症度を客観的に評価することができ、適切な治療法を選択するためのデータを提供することができる。
【００５７】
［ＣＳＵの治療効果の評価方法］
本発明の第６の態様は、治療を受けた慢性特発性蕁麻疹患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、前記治療による慢性特発性蕁麻疹の治療効果の評価方法である。
【００５８】
＜治療を受けたＣＳＵ患者の血液試料＞
本態様の評価方法で用いる試料は、治療を受けたＣＳＵ患者の血液試料である。「治療を受けたＣＳＵ患者」とは、ＣＳＵの症状を改善するための医療処置を受けた患者を意味する。前記医療処置は、ＣＳＵの症状を改善するために行われるものであれば、特に限定されないが、例えば、抗ヒスタミン剤、及びオマリズマブ等のＣＳＵ治療薬の投与等が挙げられる。「血液試料」については、上記「［ＣＳＵの重症度の評価方法］」で説明したとおりである。治療を受けたＣＳＵ患者の血液試料は、治療を受けたＣＳＵ患者から採取された血液成分を含む試料であり、好ましくは治療を受けたＣＳＵ患者から採取された血液から調製された血漿である。
【００５９】
＜測定工程：工程（ａ２）＞
本態様の評価方法では、治療を受けたＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの濃度を測定してもよく、８−ＨＥＰＥの濃度を測定してもよく、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの両方の濃度を測定してもよい。好ましくは、治療を受けたＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの両方の濃度を測定する。
測定工程は、上記第５の態様の評価方法における測定工程（工程（ａ１））と同様に行うことができる。
本態様の評価方法では、ＣＳＵに対する治療開始後に、定期的に、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度を測定してもよい。血中濃度の測定頻度としては、特に限定されないが、例えば、１週間に１度、２週間に１度、又は１カ月に１度等が挙げられる。
【００６０】
＜他の工程＞
本態様の評価方法は、上記測定工程（工程（ａ２））に加えて他の工程を含んでいてもよい。他の工程としては、例えば、前記測定工程で測定された、７１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥの濃度と、ＣＳＵの重症度とを相関させる工程等が挙げられる。
【００６１】
＜他の工程＞
本態様の評価方法は、上記測定工程（工程（ａ２））に加えて他の工程を含んでいてもよい。他の工程としては、例えば、前記測定工程で測定された、７１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥの濃度に基づいて、ＣＳＵの治療効果を評価する工程、及び前記評価されたＣＳＵの治療効果に基づいて、ＣＳＵ患者に治療を実施する工程等が挙げられる。
【００６２】
≪評価工程：工程（ｂ２）≫
後述する実施例で示すように、オマリズマブ投与の治療を受けたＣＳＵ患者において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度は、ＣＳＵの重症度の改善に伴い低下する。すなわち、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度は、治療によるＣＳＵの重症度の低下に伴い、低下する。これにより、本態様の評価方法では、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ又は８−ＨＥＰＥの血中濃度とＣＳＵの治療効果とを相関させて、治療を受けたＣＳＵ患者におけるＣＳＵの治療効果を評価することができる。そのため、本態様の評価方法は、上記測定工程で測定された、７１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度に基づいて、治療によるＣＳＵの治療効果を評価する工程を含んでいてもよい。
【００６３】
具体的には、上記測定工程（ａ２）において測定された７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度の少なくとも一方を、治療によるＣＳＵの治療効果と相関させて、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの血中濃度の少なくとも一方を、治療開始前の血中濃度と比較する。そして、治療開始前の血中濃度と比較して、治療を受けた後の血中濃度が低下している場合には、当該治療の治療効果があると評価することができる。一方、治療開始前の血中濃度と比較して、治療を受けた後の血中濃度が同じか又は高くなっている場合には、当該治療の治療効果がないと評価することができる。ＣＳＵの治療効果の評価は、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥのいずれの血中濃度に基づいてもよいが、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの両方の血中濃度に基づくことが好ましい。
【００６４】
また、ＣＳＵに対する治療開始後に、定期的に７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度を測定した場合には、前回測定時の血中濃度と比較して、治療効果を評価してもよい。例えば、前回測定時の血中濃度と比較して、血中濃度が低下している場合には、当該治療の治療効果があると評価することができる。一方、前回測定時の血中濃度と比較して、血中濃度が同じか高くなっている場合には、当該治療の治療効果がない、又は治療効果がなくなったと評価することができる。
さらに、ＣＳＵに対する治療開始後に、定期的に７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度を測定した場合には、治療開始後の血中濃度の変動に基づいて、ＣＳＵの治療効果を評価してもよい。例えば、治療開始後に、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度が低下傾向にある場合には、当該治療によるＣＳＵの治療効果がある、と評価することができる。一方、治療開始後に、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度が変動しないか高くなる傾向にある場合には、当該治療によるＣＳＵの治療効果がない、と評価することができる。
【００６５】
≪治療工程：工程（ｃ２）≫
本態様の評価方法は、前記評価工程（工程（ｂ２））において評価されたＣＳＵの治療効果に基づいて、ＣＳＵ患者に治療を実施する工程を含んでいてもよい。
例えば、前記評価工程においてＣＳＵの治療効果があると評価された患者に対しては、同様の治療を継続して実施することができる。また、例えば、前記評価工程においてＣＳＵの治療効果がないと評価された患者に対しては、前記治療効果がないと評価された治療とは異なる治療を実施することができる。例えば、抗ヒスタミン剤による治療を受けたＣＳＵ患者において、前記治療による治療効果がないと評価された場合には、オマリズマブによる治療を実施してもよい。
【００６６】
本態様の評価方法によれば、ＣＳＵの治療効果を、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの少なくとも一方の血中濃度に基づいて、客観的に評価することができる。そのため、現状の治療を継続するか、変更するかを客観的に判断するためのデータを提供することができる。
【００６７】
［他の態様］
他の態様において、本発明は、ＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、ＣＳＵの重症度の検査方法を提供する。
他の態様において、本発明は、ＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、ＣＳＵの重症度の高い血液試料を特定する方法を提供する。
他の態様において、本発明は、ＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、ＣＳＵの重症度を診断するためのデータの収集方法を提供する。
他の態様において、本発明は、治療を受けたＣＳＵ患者の血液試料において、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程を含む、前記治療によるＣＳＵの治療効果を診断するためのデータの収集方法を提供する。
他の態様において、本発明は、ＣＳＵ重症度マーカーとしてのｇｅｌＥ遺伝子又はその遺伝子産物を提供する。
他の態様において、本発明は、肝臓がん発症リスクマーカーとしての、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の使用を提供する。
他の態様において、本発明は、ＣＳＵ患者の血液試料の検査方法であって、前記血液試料の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程と、前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度とＣＳＵの重症度とを相関させる工程とを含む方法を提供する。
他の態様において、本発明は、治療を受けたＣＳＵ患者の血液試料の検査方法であって、前記血液試料の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度を測定する工程と、前記７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥからなる群より選択される少なくとも１種の濃度と前記治療によるＣＳＵの治療効果とを相関させる工程とを含む方法を提供する。
【実施例】
【００６８】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００６９】
＜リピドミクス解析によるＣＳＵ重症度マーカーの探索＞
≪対象者≫
慢性特発性蕁麻疹（ＣＳＵ）患者４３人、健常人（ＮＣ）２２人、及びアトピー性皮膚炎（ＡＤ）患者１５人をリピドミクス解析の対象とした。ＣＳＵ患者については、採血前４週間以内に免疫抑制剤（コルチコステロイド、シクロスポリン）を使用した患者を除外した。ＮＣは、アトピー素因及び慢性蕁麻疹の既往がなく、現在も蕁麻疹を発症していない人を対象とした。対象者の内訳を表１に示す。
【００７０】
【表１】
2020193938.tif 000002
【００７１】
ＣＳＵ患者の背景を表２に示す。
【００７２】
【表２】
2020193938.tif 000003
【００７３】
≪ＣＳＵの重症度評価≫
ＣＳＵの重症度の評価は、７−ｄａｙ  Ｕｒｔｉｃａｒｉａ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｓｃｏｒｅ（ＵＡＳ７）及びＵｒｔｉｃａｒｉａ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｔｅｓｔ（ＵＣＴ）により行った。
【００７４】
（ＵＡＳ３７）
ＵＡＳ７は、ＣＳＵ患者自身が、表３に示す基準に従って１日毎に膨疹とかゆみの点数をつけ、７日分の点数を合計したスコアにより重症度を評価する方法である。前記スコアに基づく重症度は、以下のように評価される。スコアの点数が高いほど、病勢のコントロールは不良とされる。
スコア  ２８〜４２：重症
スコア  １６〜２７：中等症
スコア  ７〜１５：軽症
スコア  ０〜６：コントロールされている
【００７５】
【表３】
2020193938.tif 000004
【００７６】
（ＵＣＴ）
ＵＣＴは、ＣＳＵ患者が、表４に示す４つの質問に回答することで、過去４週間の疾患の状態の点数をつけ、４つの質問の回答点数を合計したスコアにより重症度を評価する方法である。スコアの点数が低いほど、病勢のコントロールは不良とされる。
【００７７】
【表４】
2020193938.tif 000005
【００７８】
≪ＡＤの重症度評価≫
ＡＤの重症度評価は、ＰＯＥＭ及びＥＡＳＩ（Ｅｃｚｅｍａ  Ａｒｅａ  ａｎｄ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）により行った。
【００７９】
ＰＯＥＭは、患者自身によるＡＤの症状の評価指標の１つである。ＡＤ患者は、アトピー性の湿疹の症状を評価するための７項目の質問に回答する。各項目の回答による点数を合計した総合得点により、ＡＤの重症度が評価される。スコアが高いほど状態が良くないことを表す。
【００８０】
≪リピドミクス解析≫
エレクトロスプレーイオン化−タンデム質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）を、既報の方法に従って行った（Murase R et al., Sci Rep. 2017 Sep 25;7(1):12261.）。簡単に説明すると、リン脂質の検出のために、対象者から得た血漿を１０容量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）で希釈した。次いで、Ｂｌｉｇｈ及びＤｙｅｒの方法（Bligh EG, Dyer WJ. Can. J. Biochem. Physiol. 1959; 37: 911-917.）により脂質を抽出した。得られた脂質について、液体クロマトグラフィー（ＬＣ；ＮｅｘｅｒａＸ２システム；島津製作所）を備えた４０００Ｑ−ＴＲＡＰ四重極−線形イオントラップハイブリッド質量分析計（ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ）を用いて質量分析した。
脂質試料を、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳに連結したＫｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８カラム（内径１×１５０ｍｍ、１．７μｍ粒子）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）にアプライした。オートサンプラーにより注入されたサンプル（１０μＬ）を、移動相Ａ（アセトニトリル／メタノール／水＝１：１：１［ｖ／ｖ／ｖ］；５μＭリン酸及び１ｍＭギ酸アンモニウム含有）及び移動相Ｂ（２−プロパノール；５μＭリン酸及び１ｍＭギ酸アンモニウム含有）を用いた段階勾配によって、５０℃、０．２ｍＬ／分の流速で分離した。
【００８１】
脂肪酸及びそれらの酸化代謝物を検出するために、血漿を１０倍量のメタノールで希釈した。−２０℃で一晩インキュベートした後、混合物に水を加えてメタノールの最終濃度が１０％（ｖ／ｖ）となるようにした。１０％メタノール中の試料を、Ｏａｓｉｓ  ＨＬＢカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ）にアプライし、１０ｍＬのヘキサンで洗浄し、３ｍＬのギ酸メチルで溶出し、Ｎ２ガス下で乾燥し、６０％メタノールに溶解した。次いで、試料を上記のようにＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳに連結したＫｉｎｅｔｅｘ  Ｃ１８カラム（内径１×１５０ｍｍ、１．７μｍ粒子）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）にアプライした。オートサンプラーにより注入された試料（１０μＬ）を、移動相Ｃ（水；０．１％酢酸含有）及び移動相Ｄ（アセトニトリル／メタノール＝４：１［ｖ／ｖ］）の段階勾配によって、４５℃、０．２ｍＬ／分の流速で分離した。
同定は、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）トランジション及びリテンションタイムを用いて行い、定量化は、ＭＲＭトランジションのピーク面積及び各化合物の標品を用いて得られた検量線に基づいて行った。内部標準として、ｄ５−標識ＥＰＡ及び１７：０ＬＰＣ（１ｎｍｏｌ；Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を各試料に添加した。
【００８２】
≪統計学的解析≫
統計学的解析には、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ７（ＭＤＦ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を使用した。群間の比較は、Ｋｒｕｓｋａｌ−ｗａｌｌｉｓ  ｔｅｓｔを用いた。相関の評価には、Ｓｐｅａｒｍａｎの順位相関係数を用いた。ｐ値が０．０５未満の場合を、統計学的に有意な差が認められると判断した。
【００８３】
≪結果≫
リピドミクス解析の結果、ＣＳＵの重症度と相関する脂質分子として、７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ（７，１７−ジヒドロキシ−４Ｚ，８Ｅ，１０Ｚ，１３Ｚ，１５Ｅ，１９Ｚ−ドコサヘキサエン酸：7,17-dihydroxy-4Z,8E,10Z,13Z,15E,19Z-docosahexaenoic acid）及び８−ＨＥＰＥ（８−ヒドロキシ−５Ｚ，９Ｅ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７−エイコサペンタエン酸：8-hydroxy-5Z, 9E, 11Z, 14Z, 17Z-eicosapentaenoic acid）の２つの脂質分子が検出された。血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥの量と、ＵＡＳ７及びＵＣＴとの相関を、図１（Ａ）及び図１（Ｂ）にそれぞれ示す。血漿中の８−ＨＥＰＥの量と、ＵＡＳ７及びＵＣＴとの相関を、図２（Ａ）及び図２（Ｂ）にそれぞれ示す。
【００８４】
図１（Ａ）に示すように、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度は、ＵＡＳ７のスコアと有意に相関し、ＵＡＳ７のスコアが高い（重症度が高い）ほど、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度が高くなった。また、図１（Ｂ）に示すように、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ量は、ＵＣＴのスコアと有意に相関し、ＵＣＴのスコアが低い（重症度が高い）ほど、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度が高くなった。これらの結果は、ＣＳＵの重症度が高いほど、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度が高くなることを示す。
【００８５】
図２（Ａ）に示すように、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度は、ＵＡＳ７のスコアと有意に相関し、ＵＡＳ７のスコアが高い（重症度が高い）ほど、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度が高くなった。また、図２（Ｂ）に示すように、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度は、ＵＣＴのスコアと有意に相関し、ＵＣＴのスコアが低い（重症度が高い）ほど、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度が高くなった。これらの結果は、ＣＳＵの重症度が高いほど、血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度が高くなることを示す。
【００８６】
一方、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度及び８−ＨＥＰＥ濃度は、ＡＤの重症度とは相関を示さなかった（図３（Ａ）、３（Ｂ）、４（Ａ）、４（Ｂ））。
【００８７】
＜オマリズマブ投与によるマーカー酸化脂肪酸の変動評価＞
≪対象者≫
上記表１に示すＣＳＵ患者４３例のうち、オマリズマブの投与が行われた１４例を対象とした。ＣＳＵ患者１４例には、オマリズマブ３０ｍｇを、初回投与から４週間隔で皮下注射により投与した。オマリズマブ投与前と３回目投与時の直前に、患者から血漿を採取した（図５参照）。
【００８８】
≪ＣＳＵの重症度評価≫
ＣＳＵの重症度の評価は、ＵＡＳ７及びＵＣＴにより行った。
≪マーカー酸化脂肪酸の定量≫
ＣＳＵ患者の血漿試料における７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ及び８−ＨＥＰＥの定量は、上記と同様に、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳを用いて行った。
【００８９】
≪結果≫
（オマリズマブ投与による重症度の変化）
オマリズマブ投与前後のＵＡＳ７及びＵＣＴの変化を、図６（Ａ）及び図６（Ｂ）にそれぞれ示す。オマリズマブ投与前と投与後のＵＡＳ７及びＵＣＴの図６（Ａ）に示すように、オマリズマブ投与後のＵＡＳ７は、投与前よりも低くなった。また、図６（Ｂ）に示すように、オマリズマブ投与後のＵＣＴは、投与前よりも高くなった。これらの結果は、オマリズマブの投与により、ＣＳＵの症状が改善したことを示す。
オマリズマブの投与前と投与後のＵＡＳ７及びＵＣＴの平均値を表５に示す。
【００９０】
【表５】
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【００９１】
（オマリズマブ投与によるマーカー酸化脂肪酸の変動）
オマリズマブ投与前後の血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度及び８−ＨＥＰＥ濃度の変化を、図７及び図８にそれぞれ示す。図７に示すように、オマリズマブ投与後の血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度は、投与前よりも低くなった。また、図８に示すように、オマリズマブ投与後の血漿中の８−ＨＥＰＥ濃度は、投与前よりも低くなった。これらの結果により、血漿中の７，１７−ｄｉＨＤｏＨＥ濃度及び８−ＨＥＰＥ濃度は、オマリズマブの投与によるＣＳＵの症状改善に伴って低下することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００９２】
本発明によれば、新規ＣＳＵ重症度マーカー、並びに前記ＣＳＵ重症度マーカーを利用した検査キット、ＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価試薬、及びＣＳＵ重症度若しくは治療効果の評価方法が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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