(57)【要約】【課題】ナットウキナーゼを含有し、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を高めることができる血栓溶解剤を提供する。【解決手段】ナットウキナーゼと、炭素数１２〜１８の脂肪酸のうちの少なくとも１つとを含む血栓溶解剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナットウキナーゼと、炭素数１２〜１８の脂肪酸のうちの少なくとも１つとを含むことを特徴とする血栓溶解剤。
【請求項２】
請求項１に記載の血栓溶解剤であって、
前記脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、およびリノール酸のうちの少なくとも１つであることを特徴とする血栓溶解剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の血栓溶解剤であって、
前記ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する前記脂肪酸の含有量が０．２５ｍｇ以上であることを特徴とする血栓溶解剤。
【請求項４】
炭素数１２〜１８の脂肪酸のうち少なくとも１つを含み、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を促進することを特徴とする血栓溶解作用促進剤。
【請求項５】
請求項４に記載の血栓溶解作用促進剤であって、
前記脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、およびリノール酸のうちの少なくとも１つであることを特徴とする血栓溶解作用促進剤。
【請求項６】
請求項４または５に記載の血栓溶解作用促進剤であって、
前記ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する含有量が０．２５ｍｇ以上となる量の前記脂肪酸を添加することを特徴とする血栓溶解作用促進剤。
【請求項７】
ナットウキナーゼと、炭素数１２〜１８の脂肪酸のうちの少なくとも１つとを共存させることにより、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を促進することを特徴とする血栓溶解作用促進方法。
【請求項８】
請求項７に記載の血栓溶解作用促進方法であって、
前記脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、およびリノール酸のうちの少なくとも１つであることを特徴とする血栓溶解作用促進方法。
【請求項９】
請求項７または８に記載の血栓溶解作用促進方法であって、
前記ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する含有量が０．２５ｍｇ以上となる量の前記脂肪酸を共存させることを特徴とする血栓溶解作用促進方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血栓溶解剤、血栓溶解作用促進剤および血栓溶解作用促進方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ナットウキナーゼは、納豆菌（Bacillus subtilis natto）が産生する酵素であり、その構造もよく知られている（例えば、非特許文献１−３参照）。また、ナットウキナーゼは、強力な血栓溶解作用を有することが知られている（例えば、非特許文献４−６参照）。
【０００３】
特許文献１には、納豆粉末とキムチ粉末を混合して成り、粉末、粒体またはペレットの形状をしており、血液の流動性の改善機能を有する血液流動性改善機能食品が記載されている。
【０００４】
特許文献２には、（Ａ）ナットウキナーゼ、（Ｂ）野菜粉砕物、並びに（Ｃ）エイコサペンタエン酸および／またはドコサヘキサエン酸を含有し、血栓溶解剤として使用される経口組成物が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−３０６８２４号公報
【特許文献２】特開２０１６−０１３９７６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】H. Sumi, H. Hamada, H. Tsushima, H. Mihara, H. Muraki, A novel fibrinolytic enzyme （nattokinase） in the vegetable cheese Natto; a typical and popular soybean in food of the Japanese diet, Experientia, 43, 1110-1111, 1987
【非特許文献２】Y. Yanagisawa, T. Chatake, K. Chiba, S. Naito, T. Ohsugi, H. Sumi, I. Yasuda and Y. Morimoto, Purification, crystallization and preliminary X-ray diffraction experiment of nattokinase from Bacillus subtilis natto, Acta. Cryst. F66, 1670-1673, 2010
【非特許文献３】Y. Yanagisawa, T. Chatake, S.Naito, T.Ohsugi, C.Yatagai, H. Sumi, A. Kawaguchi, K. Chiba-Kamosida, M. Ogawa, T. Adachi, and Y. Morimoto, X-ray structure determination and deuteration of nattokinase, J Synchrotron Radiat. 20（Pt 6）: 875-879 （2013）
【非特許文献４】H. Sumi, H. Hamada, H. Nakanishi and H. Hiratani, Enhancement of fibrinolytic activity in plasma by oral administration of nattokinase, Acta. Haematol., 84, 139-143, 1990
【非特許文献５】須見洋行，第4章  納豆の食品機能性に関する研究  1．ナットウキナーゼ，第11章  納豆を利用した新商品開発  3．ナットウキナーゼ製剤，納豆の化学，p.53-57，p.244-245，建帛社，東京，2008
【非特許文献６】須見洋行，大豆と日本人の健康，第1章  納豆，p.66-79，幸書房，東京，2014
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、ナットウキナーゼを含有し、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を高めることができる血栓溶解剤、血栓溶解作用促進剤および血栓溶解作用促進方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ナットウキナーゼと、炭素数１２〜１８の脂肪酸のうちの少なくとも１つとを含む、血栓溶解剤である。
【０００９】
前記血栓溶解剤において、前記脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、およびリノール酸のうちの少なくとも１つであることが好ましい。
【００１０】
前記血栓溶解剤において、前記ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する前記脂肪酸の含有量が０．２５ｍｇ以上であることが好ましい。
【００１１】
本発明は、炭素数１２〜１８の脂肪酸のうち少なくとも１つを含み、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を促進する、血栓溶解作用促進剤である。
【００１２】
前記血栓溶解作用促進剤において、前記脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、およびリノール酸のうちの少なくとも１つであることが好ましい。
【００１３】
前記血栓溶解作用促進剤において、前記ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する含有量が０．２５ｍｇ以上となる量の前記脂肪酸を添加することが好ましい。
【００１４】
本発明は、ナットウキナーゼと、炭素数１２〜１８の脂肪酸のうちの少なくとも１つとを共存させることにより、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を促進する、血栓溶解作用促進方法である。
【００１５】
前記血栓溶解作用促進方法において、前記脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、およびリノール酸のうちの少なくとも１つであることが好ましい。
【００１６】
前記血栓溶解作用促進方法において、前記ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する含有量が０．２５ｍｇ以上となる量の前記脂肪酸を共存させることが好ましい。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、ナットウキナーゼを含有し、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を高めることができる血栓溶解剤、血栓溶解作用促進剤および血栓溶解作用促進方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明の実施例１における、ナットウキナーゼとパルミチン酸とを含む血栓溶解剤を用いた９６  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定の結果を示すグラフである。
【図２】本発明の実施例２における、ナットウキナーゼとステアリン酸とを含む血栓溶解剤を用いた９６  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定の結果を示すグラフである。
【図３】本発明の実施例３における、ナットウキナーゼとリノール酸とを含む血栓溶解剤を用いた９６  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定の結果を示すグラフである。
【図４】本発明の実施例４における、ナットウキナーゼとリノール酸とを含む血栓溶解剤を用いたウシ由来フィブリンの分解についての３８４  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定の結果を示すグラフである。
【図５】本発明の実施例５における、ナットウキナーゼとリノール酸とを含む血栓溶解剤を用いたヒト由来フィブリンの分解についての３８４  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定の結果を示すグラフである。
【図６】本発明の実施例４における、ウシ由来フィブリンの分解速度を示すグラフである。
【図７】本発明の実施例５における、ヒト由来フィブリンの分解速度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の実施の形態について以下説明する。本実施形態は本発明を実施する一例であって、本発明は本実施形態に限定されるものではない。
【００２０】
＜血栓溶解剤＞
本実施形態に係る血栓溶解剤は、ナットウキナーゼと、炭素数１２〜１８の脂肪酸のうちの少なくとも１つとを含む。
【００２１】
［ナットウキナーゼ］
ナットウキナーゼは、納豆菌（学名：Bacillus subtilis natto）が大豆から産生する血栓溶解（線溶）酵素であり、２７５のアミノ酸残基が一本鎖でつながったポリペプチドからなる分子構造を有する（分子量２７，７２４、ｐＩ８．７）。ナットウキナーゼは、血栓の主成分であるフィブリンを溶解するフィブリン溶解作用のほか、血栓溶解酵素であるウロキナーゼの前駆体プロウロキナーゼの活性化作用、血栓溶解酵素プラスミンを産生する組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔ−ＰＡ）の増大作用、血栓溶解阻害物質ＰＡＩ−１の分解作用、オイグロブリン溶解時間の短縮作用等の血栓溶解作用を有することが知られている。
【００２２】
本実施形態で使用されるナットウキナーゼの入手方法は、特に制限されず、例えば、納豆菌の培養によって生産したナットウキナーゼを用いてもよく、また、市販のナットウキナーゼ含有製剤を用いてもよい。本実施形態で使用されるナットウキナーゼとしては、ナットウキナーゼを利用可能である限り、他の成分との混合物であってもよく、例えば、ナットウキナーゼを含有する納豆、および、納豆抽出物等を、本実施形態に係る血栓溶解剤等に用いてもよい。
【００２３】
納豆菌を培養してナットウキナーゼを生産する方法としては、特に制限されず、公知の方法で納豆菌を培養すればよい。納豆菌の培養に用いる培地としては、例えば、乾燥ブイヨン培地、ハイポリペプトンＳ培地等が挙げられる。培地中の主原料に脱脂大豆を使用していることや納豆菌が繁殖しやすいこと等から、ハイポリペプトンＳ培地が好ましい。
【００２４】
培養温度は、例えば、３２℃以上５０℃以下の範囲であり、３７℃以上４５℃以下の範囲が好ましく、３７℃以上４２℃以下の範囲がより好ましい。培養温度が低すぎると、納豆菌の増殖率が低下してナットウキナーゼの生産性に影響を及ぼす場合があり、培養温度が高すぎると、ナットウキナーゼ活性が低下する場合がある。培地のｐＨは、ナットウキナーゼの生産量の観点から、例えば、５．５以上９．５以下の範囲であり、好ましくは、６．５以上８．０以下の範囲である。
【００２５】
培養時間は、例えば、７２時間以上１４４時間以下の範囲であり、９６時間以上１２４時間以下の範囲が好ましい。培養時間が短すぎると、納豆菌の生育が不足する場合があり、培養時間が長すぎると、自己消化によってナットウキナーゼ活性が低下する場合がある。培養は、例えば、振とう培養、静置培養等で行えばよい。次いで、納豆菌の培養により産生したナットウキナーゼを、疎水クロマトグラフィ、陰イオンクロマトグラフィ、または、ゲル濾過クロマトグラフィ等により、精製してもよい。
【００２６】
本実施形態で使用されるナットウキナーゼは、血栓溶解作用を保持している限り、その原料の形態や物性等については特に制限されない。本実施形態では、例えば、ナットウキナーゼの精製物、納豆菌の培養物の粗精製物、当該精製物または粗精製物に賦形剤および必要に応じて添加剤等を添加してなる製剤等を使用してもよい。
【００２７】
本実施形態で使用される市販のナットウキナーゼ含有製剤としては、例えば、オルガノフードテック株式会社製「ナットウキナーゼＨＴＮＫ−Ｊ」等が挙げられるが、これに限定されない。
【００２８】
［脂肪酸］
本実施形態で使用される炭素数１２〜１８の脂肪酸は、炭素数１２〜１８の直鎖または分岐の、飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸であり、炭素数１６〜１８の直鎖または分岐の、飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸であることが好ましい。不飽和脂肪酸である場合、炭化水素部分の不飽和数は、５個以下であることが好ましく、２個以下であることがより好ましい。
【００２９】
脂肪酸としては、パルミチン酸、ステアリン酸、マルガリン酸、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸等の炭素数１２〜１８の直鎖飽和脂肪酸、リノール酸、リノレン酸、ミリストレイン酸、サピエン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、ヘキサデカジエン酸、ピノレン酸、エレオステアリン酸、ペンタデセン酸、ヘプタデセン酸、ステアリドン酸等の炭素数１２〜１８の直鎖不飽和脂肪酸、イソパルミチン酸、アンテイソペンタデカン酸等の炭素数１２〜１８の分岐飽和脂肪酸等が挙げられる。これらのうち、パルミチン酸、ステアリン酸、マルガリン酸等の炭素数１６〜１８の直鎖飽和脂肪酸、リノール酸、リノレン酸、サピエン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、ヘキサデカジエン酸、ピノレン酸、エレオステアリン酸、ヘプタデセン酸、ステアリドン酸等の炭素数１６〜１８の直鎖不飽和脂肪酸、イソパルミチン酸、アンテイソペンタデカン酸等の炭素数１６〜１８の分岐飽和脂肪酸が好ましく、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を高める効果が高い等の点から、パルミチン酸、ステアリン酸、およびリノール酸のうちの少なくとも１つであることがより好ましい。
【００３０】
本実施形態に係る血栓溶解剤に含まれる炭素数１２〜１８の脂肪酸の含有量は、特に制限されないが、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を促進する効果がより一層向上することから、ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する炭素数１２〜１８の脂肪酸の総量（乾燥重量換算）の質量が、０．２５ｍｇ以上であることが好ましく、０．２５ｍｇ〜３０ｍｇの範囲であることがより好ましく、４ｍｇ以上、または４〜１２ｍｇの範囲であることがさらに好ましい。炭素数１２〜１８の脂肪酸の含有量の上限は、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を阻害しない限り、特に制限されないが、血栓溶解剤の総量抑制、炭素数１２〜１８の脂肪酸の多量摂取回避等の観点から、例えば、ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵあたり５ｇ以下であることが好ましく、１ｇ以下であることがより好ましい。
【００３１】
本実施形態に係る血栓溶解剤における炭素数１２〜１８の脂肪酸の含有量は、血栓溶解剤の剤型、用途、服用量、ナットウキナーゼに対する炭素数１２〜１８の脂肪酸の添加量等に応じて適宜設定すればよい。例えば、炭素数１２〜１８の脂肪酸の総量（乾燥重量換算）が、血栓溶解剤の総量に対して、０．１質量％以上９９質量％以下であればよく、０．２質量％以上５０質量％以下であることが好ましく、１質量％以上２５質量％以下であることが好ましい。
【００３２】
［添加剤］
本実施形態に係る血栓溶解剤は、必要に応じて、ナットウキナーゼおよび炭素数１２〜１８の脂肪酸以外の添加剤等を含有していてもよい。添加剤としては、食品や医薬品に使用可能であり、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を阻害しないものであれば特に制限されない。添加剤としては、例えば、水、賦形剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、酸化防止剤、紫外線防止剤、防腐剤、香料、増粘剤、色素、キレート剤、酸味料、ビタミン類、調味料、機能性物質等が挙げられる。これらの添加成分は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。また、添加剤の含有量は、使用する添加剤の種類や用途等に応じて適宜設定すればよい。
【００３３】
本実施形態に係る血栓溶解剤は、ナットウキナーゼ以外に、血栓溶解作用、血小板凝集抑制作用、抗凝固作用等を有する抗血栓剤を含有していてもよく、また、これら抗血栓剤を含有していなくてもよい。
【００３４】
［血栓溶解剤の形態］
本実施形態に係る血栓溶解剤が取り得る形態は、特に制限されず、例えば、単独で製剤化してもよく、単独で調味料として使用してもよく、予め飲食品に配合してもよい。
【００３５】
本実施形態に係る血栓溶解剤を単独で製剤化する場合、ナットウキナーゼおよび炭素数１２〜１８の脂肪酸を、そのままで、または他の添加成分と組み合わせて所望の剤形に調製すればよい。剤形としては、薬剤またはサプリメント等の製剤において公知の形態であればよく、例えば、錠剤、顆粒、粉剤、カプセル剤、液剤、ゼリー剤、シロップ剤等が挙げられる。
【００３６】
また、本実施形態に係る血栓溶解剤は、食品、飲料、調味料組成物等の各種飲食品に予め配合してもよい。本実施形態に係る血栓溶解剤は、飲食品に配合する場合、ナットウキナーゼおよび炭素数１２〜１８の脂肪酸を、そのままで、または他の食品素材や添加成分と組み合わせて所望の形態に調製すればよい。
【００３７】
食品としては、例えば、ポテトチップスおよびクラッカー等のスナック製品、クッキー、ビスケットおよびパン等のベーカリー製品、納豆、漬物およびキムチ等の発酵食品、シチュー、カレー、スープおよび麺類等の調理済み、または半調理済みの食品、それらのチルドおよび冷凍食品、カップラーメン等のインスタント食品等が挙げられる。飲料としては、例えば、栄養ドリンク、炭酸飲料、乳酸飲料、コーヒー、ココア、紅茶、烏龍茶、緑茶および酒類等が挙げられる。調味料組成物としては、例えば、ドレッシング、たれ、めんつゆ、だしつゆ、味噌、醤油、ソース、ブイヨン、ふりかけおよびマヨネーズ等が挙げられる。なお、飲食品には、一般の飲食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品等も含まれる。
【００３８】
本実施形態に係る血栓溶解剤を経口摂取する場合の服用量は、特に制限されないが、例えば、１日当たりのナットウキナーゼの摂取量が５００ＦＵ以上１００００ＦＵ以下となる量であり、１日当たりのナットウキナーゼの摂取量が１０００ＦＵ以上４０００ＦＵ以下となる量が好ましい。なお、「ＦＵ」とは、フィブリン分解ユニットの略であり、ナットウキナーゼの活性を示す単位である。フィブリン分解ユニットは、公知のフィブリン分解法で測定される。
【００３９】
＜血栓溶解作用促進剤／血栓溶解作用促進方法＞
本実施形態に係るナットウキナーゼの血栓溶解作用を促進する血栓溶解作用促進剤（以下、単に「促進剤」ともいう）は、炭素数１２〜１８の脂肪酸を含む。また、本実施形態に係るナットウキナーゼの血栓溶解作用を促進する血栓溶解作用促進方法（以下、単に「促進方法」ともいう）は、ナットウキナーゼと炭素数１２〜１８の脂肪酸とを共存させる。
【００４０】
本実施形態に係る促進剤、および、本実施形態に係る促進方法に用いられる炭素数１２〜１８の脂肪酸としては、前述の血栓溶解剤に含まれる炭素数１２〜１８の脂肪酸を使用すればよい。また、本実施形態に係る促進剤、および、本実施形態に係る促進方法に用いられる炭素数１２〜１８の脂肪酸の説明、例えば、具体的な組成、ナットウキナーゼに対する使用量（添加量）等についても、前述の血栓溶解剤について説明した通りである。
【００４１】
なお、本実施形態に係る促進剤、および、本実施形態に係る促進方法においては、ナットウキナーゼが血栓溶解作用を発揮する際に炭素数１２〜１８の脂肪酸がナットウキナーゼと共存していればよい。そのため、ナットウキナーゼおよび炭素数１２〜１８の脂肪酸の両者を含有する製剤または飲食品等の形態を有することが好ましいが、ナットウキナーゼと炭素数１２〜１８の脂肪酸とを共存させ得る限り、両者を個別に添加してもよい。
【実施例】
【００４２】
以下、実施例および比較例を挙げ、本発明をより具体的に詳細に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。
【００４３】
［材料］
実施例で用いた材料は以下の通りである。
ナットウキナーゼ：ナットウキナーゼＨＴＮＫ−Ｊ（ナットウキナーゼ活性２００００ＦＵ／ｇ以上、オルガノフードテック株式会社）
脂肪酸精製品：パルミチン酸（炭素数１６の直鎖飽和脂肪酸：実施例１）、ステアリン酸（炭素数１８の直鎖飽和脂肪酸：実施例２）、リノール酸（炭素数１８の直鎖不飽和脂肪酸：実施例３）
フィブリノーゲン：ウシ血漿由来（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、米国、Ｆ８６３０）
フィブリノーゲン：ヒト血漿由来（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、米国、Ｆ４８８３）
トロンビン：富士製薬工業
緩衝液：ホウ酸バッファ（以下ＢＳＢ）０．１７Ｍ、ｐＨ７．８（Ｈ３ＢＯ３  ９．９２ｇ／Ｌ、Ｎａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ  ３．８１６ｇ／Ｌ、ＮａＣｌ  ２．３３６ｇ／Ｌとなるよう水に溶解した。）
【００４４】
＜実施例１〜３＞
ナットウキナーゼと、炭素数１２〜１８の脂肪酸としてパルミチン酸（実施例１）、ステアリン酸（実施例２）、リノール酸（実施例３）とをそれぞれ含む血栓溶解剤を調製し、ウシ由来フィブリンについて、下記の方法で血栓溶解活性を評価した。
【００４５】
［試験方法］
（９６  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定）
５ｍｇ／ｍＬとなるようにウシ血漿由来フィブリノーゲンを緩衝液（ＢＳＢ）に溶解し、５０Ｕ／ｍＬのトロンビンをフィブリノーゲン溶液１ｍＬにつき５μＬ加えて速やかに撹拌し、５０μＬずつ９６−ｗｅｌｌ  ｒｏｕｎｄ  ｂｏｔｔｏｍ  ｐｌａｔｅに添加した。室温（２５℃程度）で３０分静置し、フィブリンが凝固したのを確認したのち、ナットウキナーゼ（ナットウキナーゼＨＴＮＫ−Ｊ）１ｍｇ／ｍＬ（ナットウキナーゼ活性２００００ＦＵ／ｇ×０．００１ｇ／ｍＬ＝２０ＦＵ／ｍＬ）と所定の濃度の脂肪酸とを含む酵素液を５μＬずつウェルの端に添加した。その後すぐにマイクロプレートリーダにより３７℃で４０５ｎｍの吸光度を経時的に測定した。フィブリンが溶解すると透明になり吸光度が減少するため、これを指標とした。なお、脂肪酸精製品はすべて、特級エタノールに溶解したのち減圧乾固して、その後ＢＳＢに溶解させた状態で測定に供した。
【００４６】
［結果］
９６  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定の結果を図１（パルミチン酸（実施例１））、図２（ステアリン酸（実施例２））、図３（リノール酸（実施例３））にそれぞれ示す。
【００４７】
このように、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸のいずれもナットウキナーゼの血栓溶解作用を高めることができることがわかった。パルミチン酸については、４０μｇ／ｍＬ以上（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する脂肪酸の含有量が４ｍｇ以上（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０ＦＵに対する脂肪酸の含有量が０．０４ｍｇ以上））が好ましく、８０μｇ／ｍＬ以上（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する脂肪酸の含有量が８ｍｇ以上（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０ＦＵに対する脂肪酸の含有量が０．０８ｍｇ以上））がより好ましく、４０〜１２０μｇ／ｍＬ（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する脂肪酸の含有量が４〜１２ｍｇ（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０ＦＵに対する脂肪酸の含有量が０．０４〜０．１２ｍｇ以上））がさらに好ましいことがわかった。ステアリン酸については、４０μｇ／ｍＬ以上（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する脂肪酸の含有量が４ｍｇ以上（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０ＦＵに対する脂肪酸の含有量が０．０４ｍｇ以上））が好ましいことがわかった。リノール酸については、２．５μｇ／ｍＬを超える量（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する脂肪酸の含有量が０．２５ｍｇを超える量（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０ＦＵに対する脂肪酸の含有量が０．００２５ｍｇ以上））が好ましく、１０μｇ／ｍＬ以上（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する脂肪酸の含有量が１ｍｇ以上）がより好ましいことがわかった。
【００４８】
＜実施例４，５＞
ナットウキナーゼとリノール酸とを含む血栓溶解剤を調製し、ウシ由来フィブリン（実施例４）またはヒト由来フィブリン（実施例５）について、下記の方法で血栓溶解活性を評価した。
【００４９】
［３８４  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定］
５ｍｇ／ｍＬとなるようにウシ血漿由来フィブリノーゲン（実施例４）またはヒト血漿由来フィブリノーゲン（実施例５）を緩衝液（ＢＳＢ）に溶解し、５０Ｕ／ｍＬのトロンビンをウシ血漿由来フィブリノーゲン溶液１ｍＬにつき５μＬ、ヒト血漿由来フィブリノーゲン溶液１ｍＬにつき５０μＬ加えて速やかに撹拌し、５０μＬずつ３８４−ｗｅｌｌ  ｆｌａｔ  ｂｏｔｔｏｍ  ｐｌａｔｅに添加した。３７℃で６０分静置し、フィブリンが凝固したのを確認したのち、ナットウキナーゼ（ナットウキナーゼＨＴＮＫ−Ｊ）１ｍｇ／ｍＬと所定の濃度の脂肪酸とを含む酵素液を５μＬずつウェルの中央に添加した。その後すぐにマイクロプレートリーダにより３７℃で４０５ｎｍの吸光度を経時的に測定した。フィブリンが溶解すると透明になり吸光度が減少するため、これを指標とした。なお、脂肪酸精製品はすべて、特級エタノールに溶解したのち減圧乾固して、その後ＢＳＢに溶解させた状態で測定に供した。
【００５０】
［結果］
３８４  ｗｅｌｌ  ａｓｓａｙによる活性測定の結果を図４（ウシ由来フィブリン（実施例４））、図５（ヒト由来フィブリン（実施例５））にそれぞれ示す。また、図６は、実施例４におけるウシ由来フィブリンの分解速度を示すグラフであり、図７は、実施例５におけるヒト由来フィブリンの分解速度を示すグラフである。
【００５１】
このように、リノール酸はウシ由来フィブリン、ヒト由来フィブリンについてナットウキナーゼの血栓溶解作用を高めることができることがわかった。リノール酸の量については、３０〜３００μｇ／ｍＬ（ナットウキナーゼのナットウキナーゼ活性２０００ＦＵに対する脂肪酸の含有量が３〜３０ｍｇ）が好ましいことがわかった。
【００５２】
以上の通り、ナットウキナーゼと炭素数１２〜１８の脂肪酸とを併用することにより、ナットウキナーゼの血栓溶解作用を高めることができた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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