(57)【要約】      （修正有）【課題】徐放性薬物送達のための注射用組成物およびその製造方法の提供。【解決手段】重量平均分子量が５，０００〜５０，０００ダルトンであり、酸価が３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満である、ラクチド／グリコリドのモル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を、残留ラクチドモノマーの含有量が約０．３重量％未満になるまで精製し、前記精製されたポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を、薬学的に許容される有機溶媒としてＮ−メチル−２−ピロリドン、および、分子構造中にラクチドモノマーと反応してコンジュゲートを形成することができるゴセレリン及び／又はトリプトレリン、又は、それらの塩と、組み合わせることを含み、前記組成物を製造する際に酸添加剤を添加しない、製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
徐放性薬物送達のための注射用組成物の製造方法であって、
重量平均分子量が５，０００〜５０，０００ダルトンであり、酸価が３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満である、ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を、残留ラクチドモノマーの含有量が約０．３重量％未満になるまで精製し、
前記精製されたポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を、
薬学的に許容される有機溶媒としてＮ−メチル−２−ピロリドン、および、
分子構造中にラクチドモノマーと反応してコンジュゲートを形成することができるゴセレリン及び／又はトリプトレリン、又は、それらの塩と、
組み合わせることを含み、
前記組成物を製造する際に酸添加剤を添加しない、
製造方法。
【請求項２】
前記ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）の残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．２重量％未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）の残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．１重量％未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）の酸価は、２ｍｇＫＯＨ／ｇ未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
徐放性薬物送達のための注射用組成物であって、
ａ．重量平均分子量が５，０００〜５０，０００ダルトンであり、酸価が３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満であり、残留ラクチドモノマーの含有量が約０．３重量％未満である、ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）、
ｂ．薬学的に許容される有機溶媒としてＮ−メチル−２−ピロリドン、および、
ｃ．分子構造中にラクチドモノマーと反応してコンジュゲートを形成することができるゴセレリン及び／又はトリプトレリン、又は、それらの塩、
を含み、
前記組成物を製造する際に酸添加剤を添加せず、前記組成物は前記コンジュゲートの形成を減少させる、
注射用組成物。
【請求項６】
前記ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）の酸価は、２ｍｇＫＯＨ／ｇ未満である、請求項５に記載の注射用組成物。
【請求項７】
前記ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）中の残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．２重量％未満である、請求項５に記載の注射用組成物。
【請求項８】
前記ラクチド／グリコリド  モル比が８５／１５のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、又は、前記ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）中の残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．１重量％未満である、請求項５に記載の注射用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野は、生物活性物質の持続放出および徐放性送達のための送達システムに関する。より詳細には、本発明は、生分解性ポリマーによる生物活性物質の持続放出送達のための送達システムの組成物、およびそのような組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物適合性および生分解性ポリマーは、生物活性物質の持続放出または遅延放出を提供するための薬物送達担体としてますます使用されている。送達システムは、液体形態、懸濁液、固体インプラント、マイクロスフェア、マイクロカプセルおよびマイクロ粒子を含む様々な注射用デポー形態で利用可能である。
【０００３】
生体適合性および生分解性ポリマーを使用する持続放出送達システムは、短い半減期を有する非常に強力な薬物に特に有益である。このような送達システムは、投与および疼痛の頻度を低減し、患者コンプライアンスを強化し、患者の便宜性を改善し、コストを低減することができる。多くのペプチド物質、特にホルモンでは、長期間にわたり薬物を制御された速度で連続的に送達する必要があり、それゆえ徐放性送達システムが望ましい。このようなシステムは、生物活性物質を生分解性および生体適合性ポリマーマトリックスに組み込むことによって提供され得る。１つのアプローチでは、ポリマーを有機溶媒に溶解し、次いで、有機溶媒を除去することによって微粒子、マイクロスフェア、マイクロカプセル、微小顆粒または固体インプラントの形態に製造される生物活性物質と混合する。生物活性物質は、固体ポリマーマトリックス内に捕捉される。Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ、Ｚｏｌａｄｅｘ、Ｔｒｅｌｓｔａｒ、Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲなどの微粒子および固体インプラントの形態の生分解性ポリマーを使用することによって、いくつかの製品が成功裏に開発されている。これらの製品は効果的であるように見えるが、マイクロ粒子用の大量の懸濁液や固形インプラント用の外科的挿入などの欠点や制限がある。これらの製品はあまり患者に優しいものではない。さらに、滅菌製品を再現可能に製造するための製造プロセスは複雑であり、製造コストが高くなる。組成物を容易に製造して使用することが非常に望ましい。
【０００４】
別のアプローチでは、生物分解性ポリマーおよび生物活性物質を生体適合性有機溶媒に溶解して、液体または流動性組成物を提供する。液体組成物が体内に注入されると、溶媒は周囲の水性環境中に消散し、ポリマーは固体またはゲルのデポーを形成し、そこから生物活性物質が長期にわたって放出される。以下の文献、特許文献１〜２８は、この分野において代表的であると考えられ、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの成功にもかかわらず、それらの方法は、そのようなアプローチによって効果的に送達されるであろう多数の生物活性物質にとって完全に満足のいくものではない。
【０００５】
ポリエステルはこれまでのところ生分解性持続薬物送達システムで使用される最も一般的なポリマーの１つである。ポリエステルおよびその近縁種であるポリ無水物およびポリカーボネートは周知であり、長年にわたって医薬用途に使用されてきた。例えば、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）またはポリラクチドは、進行した前立腺癌の治療のためにＬｕｐｒｏｎ  ＤｅｐｏｔおよびＥｌｉｇａｒｄ製品に使用されるポリマー材料である。これらのポリエステルは、生体適合性であり、加水分解および酵素分解のような典型的な生化学的経路によって分解され、天然に生じる代謝産物を生じる。ポリエステルの生分解性は、持続放出薬物送達担体としての使用に有益であるが、感受性もまた問題を提示する。
【０００６】
多くの生物活性物質は、しばしば、組成物の生物活性物質と生分解性ポリマーとの間の相互作用を引き起こすことができるアミン基などの１つ以上の求核基を含む。生物活性物質と生分解性ポリマーとを組み合わせると、生物活性物質の求核性基とポリマーのエステル結合との間の反応が起こり得る。そのような反応は、組成物の物理的および／または化学的特性に悪影響を及ぼし、結果として、持続的および制御された送達システムの利点を失うことになる。酸性添加剤、安定化会合物などを使用することにより、この問題に対処するために多くの努力が払われてきた［特許文献１および特許文献２９を参照］。
【０００７】
ポリマーの分解に加えて、別の態様は、薬物送達システムにおける生物活性物質の安定性であり、これもまた非常に重要である。投薬形態の製造プロセス、貯蔵およびｉｎ  ｖｉｖｏ放出中に、相当量の生物活性物質に関連する不純物が生成され得る。例えば、特許文献３の実施例６に開示されているように、ラクチド対グリコリドのモル比が７５／２５のポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒ、Ｉｎｃ．）をＮＭＰに溶解して、４５重量％のポリマーを含む溶液を得る。この溶液を混合し、ロイプロリドアセテートと混合して、流動可能で注射可能な粘性製剤を得た。本出願に示されているように、相当量のロイプロリド関連物質または不純物が、このタイプの製剤から短期間で予期せず観察され、これは薬の品質に悪影響を与え得る。さらに驚くべきことに、発生した主な不純物は、先行技術に開示されているような生物活性物質とポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）との間の反応ではなく、生物活性物質とポリマーの残留または未反応のラクチドモノマーとの間の直接反応である。
【０００８】
ＩＣＨのガイドライン［ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／Ｄｒｕｇｓ／ＧｕｉｄａｎｃｅＣｏｍｐｌｉａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／ｕｃｍ０７３３８９．ｐｄｆ］によると、新薬の０．１％超の不純物（個々の不純物）は、報告されなければならない。最大一日用量に基づいて、０．１％、０．２％、０．５％、または１％を超える不純物が特定されなければならない。新薬の不純物が所与の資格閾値レベルを超える場合、それらの不純物を特定し、それらの有害作用および生物学的安全性について適切に試験すべきである。したがって、対応する資格閾値を超える不純物の生成は、規制遵守の問題を提起するだろう。悪影響および生物学的安全性に関するこれらの不純物の特徴付けおよび資格は、非常に高価で時間がかかる。
【０００９】
特許文献２９は、ミクロスフェア中の不純物を除去または低減するいくつかの方法を開示している。それは、「ミクロスフェア中の不純物を除去または減少させるためのあらゆる努力において、以下の一般的な考慮事項を念頭に置いておくべきである。（ｉ）ＰＬＧＡミクロスフェア中のラクチド含有率が高いほど、関連物質の量が少なくなり、１００％ＰＬＡから調製されたマイクロスフェアは、関連物質の量が最も少なくなる、（ｉｉｉ）ＰＬＧＡ中の抽出可能なオリゴマーのレベルを低下させると、関連物質のレベルが高くなる。疎水性ＰＬＧＡ（末端封鎖ＰＬＧＡ）は、親水性ＰＬＧＡ（遊離酸末端基）と比較してより多くの関連物質を産生することができる。」［特許文献２９、第１１欄第２段落参照］。全体的な教示は、有意な追加量の低ｐＫａ酸添加剤またはオリゴマーを添加した酸末端基を有する低分子量ポリエステルを使用することである。酸添加剤の例には、ＰＬＧＡのためのモノマービルディングブロックである乳酸およびグリコール酸が含まれる。過剰量の酸添加剤は、ジクロロメタンおよびメタノールなどの薬学的に許容されない溶媒中で短時間（２４時間）内に不純物の生成を減少させるためにいくらか限定された成功を収めている。さらに、酸性添加剤は、分散相において低いｐＨを生じる。低ｐＨが組織の刺激を引き起こすことはよく知られている。したがって、このような分散相は、マイクロスフェアの製造に使用することができるが、直接注射による患者への投与には適していない。さらに、特許文献２９は、ロイプロリドアセテートおよびＰＬＧＡ５０：５０を含むミクロスフェア中に観察される不純物が、ロイプロリドのアルギニン基とＰＬＧＡのフラグメントとの付加物であることを明らかにしている［特許文献２９、図１６およびカラム４３および４４参照］。これらの微粒子は、薬学的に許容されない溶媒、例えばジクロロメタンおよびメタノール中のポリマー溶液を用いて調製した。不純物は、溶液中に生成される不純物全体を表すものではない。不純物のいくつかは、微粒子調製プロセス中に水相中に抽出され、ミクロスフェア中で検出することができなかった。さらに、同定されたミクロスフェア中の不純物は、ロイプロリドとポリマーとの反応生成物であり、ラクチドモノマーではない［Ｍｕｒｔｙ  ＳＢ，  Ｔｈａｎｏｏ  ＢＣ，  Ｗｅｉ  Ｑ，  ＤｅＬｕｃａ  ＰＰ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ．  ２００５  Ｊｕｎ  １３；２９７（１−２）：５０−６１．  Ｉｍｐｕｒｉｔｙ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｐｅｐｔｉｄｅ−ｌｏａｄｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ  Ｐａｒｔ  Ｉ．  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ］。驚くべきことに、本発明で生成および記載される主要な不純物は、特許文献２９および他の先行技術において同定されていない。
【００１０】
特許文献３０は、マイクロスフェアにおける放出を調節し、ペプチドの安定性を増加させる方法を開示した。これは、ペプチドの全電荷を変化させることによって、ペプチドの等電点を変化させることを記載しており、マイクロスフェアからのペプチドのバーストを減少させ、安定性を改善することができる。しかしながら、これはペプチド配列中のアミノ酸を変化させることによって行われ、これは新しい化学物質を作る。この新しい化学物質は、同じ有効性と安全性が達成できるかどうかを判断するための追加作業が必要になる。
【００１１】
したがって、生物活性物質に関連する不純物の生成および生分解性ポリマーの望ましくない早期分解を最小または防止する徐放性組成物を開発する必要があり、患者に直接注入してその場で持続放出デポーを形成することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第８，１７３，１４８号明細書
【特許文献２】米国特許第８，３１３，７６３号明細書
【特許文献３】米国特許第６，５６５，８７４号明細書
【特許文献４】米国特許第６，５２８，０８０号明細書
【特許文献５】米国特許第ＲＥ３７，９５０号明細書
【特許文献６】米国特許第６，４６１，６３１号明細書
【特許文献７】米国特許第６，３９５，２９３号明細書
【特許文献８】米国特許第６，３５５，６５７号明細書
【特許文献９】米国特許第６，２６１，５８３号明細書
【特許文献１０】米国特許第６，１４３，３１４号明細書
【特許文献１１】米国特許第５，９９０，１９４号明細書
【特許文献１２】米国特許第５，９４５，１１５号明細書
【特許文献１３】米国特許第５，７９２，４６９号明細書
【特許文献１４】米国特許第５，７８０，０４４号明細書
【特許文献１５】米国特許第５，７５９，５６３号明細書
【特許文献１６】米国特許第５，７４４，１５３号明細書
【特許文献１７】米国特許第５，７３９，１７６号明細書
【特許文献１８】米国特許第５，７３６，１５２号明細書
【特許文献１９】米国特許第５，７３３，９５０号明細書
【特許文献２０】米国特許第５，７０２，７１６号明細書
【特許文献２１】米国特許第５，６８１，８７３号明細書
【特許文献２２】米国特許第５，５９９，５５２号明細書
【特許文献２３】米国特許第５，４８７，８９７号明細書
【特許文献２４】米国特許第５，３４０，８４９号明細書
【特許文献２５】米国特許第５，３２４，５１９号明細書
【特許文献２６】米国特許第５，２７８，２０２号明細書
【特許文献２７】米国特許第５，２７８，２０１号明細書
【特許文献２８】米国特許第４，９３８，７６３号明細書
【特許文献２９】米国特許第８，３４３，５１３号明細書
【特許文献３０】米国特許第８，９５１，９７３号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
ポリマーの酸価が５ｍｇＫＯＨ／ｇよりも大きい場合でさえ、有機溶媒中で求核性生物活性物質を有する注射可能な生分解性ポリマー調合物においてかなりのレベルの不純物がかなり速く生成されることが予想外に発見された。これらの不純物は、求核性生物活性物質と生分解性ポリマーの未反応モノマーまたは残留モノマーとの反応によって形成される。溶液中では、求核性生物活性物質とポリマー／モノマーが密接に接触し、溶媒の選択に応じて不純物／コンジュゲートを生成するのに好ましい反応条件を作り出す。
【００１４】
本発明は、先行技術に対して改良された安定性を有するポリマー組成物を得ることができることを示す。先行技術の組成物中に形成されたコンジュゲートは、実質的に低減または防止され得る。本発明は、求核性生物活性物質の持続放出送達システムのための安定な注射用生分解性ポリマー組成物およびそのようなポリマー組成物の製造方法を提供する。
【００１５】
本発明による組成物は、ａ）求核性生物活性物質、ｂ）薬学的に許容される溶媒、およびｃ）一緒に製剤化されると、不純物または関連物質の形成を減少または防止する、適切な生分解性ポリマー含む。医薬組成物は、注射器を使用して注射することができる粘性または非粘性液体、ゲルまたはクリームであり得る。医薬組成物はより安定しており、すぐに使用できるシステムを提供する単一の注射器に予め充填することができる。
【００１６】
本発明の生物活性物質は、エステル分解を触媒し、ラクテート系ポリマー、オリゴマーまたはモノマーと反応することができる求核基を含有する。生物活性物質は、ペプチド、プロドラッグまたはその塩の形態であり得る。組成物中に生成される不純物は、生物活性物質とラクテート系ポリマーのビルディングブロック（例えば、ラクチドモノマーおよびオリゴマー）との間の付加物である。
【００１７】
本発明によれば、薬学的に許容される有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、２−ピロリドン、メトキシポリエチレングリコール、アルコキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールエステル、グリコフロール、グリセロールホルマール、メチルアセテート、エチルアセテート、メチルエチルケトン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、カプロラクタム、デシルメチルスルホキシド、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、エチルベンゾエート、トリアセチン、ジアセチン、トリブチリン、トリエチルシトレート、トリブチルシトレート、アセチルトリエチルシトレート、アセチルトリブチルシトレート、トリエチルグリセリド、トリエチルホスフェート、ジエチルフタレート、ジエチルタートレート、エチルラクテート、プロピレンカーボネート、エチレンカーボネート、ブチロラクトン、および１−ドデシルアザシクロ−ヘプタン−２−オン、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択され得る。
【００１８】
本発明によれば、生分解性ポリマーは、線状ポリマー、または分枝ポリマー、またはその２つの混合物であってもよい。好ましくは、ポリマーは、ラクテート系ポリマーである。ラクテート系ポリマーとしては、乳酸またはラクチドモノマーのホモポリマー（ポリ（乳酸）またはポリラクチド、ＰＬＡ）、および乳酸（またはラクチド）と他のモノマーとのコポリマー（例えば、グリコール酸、グリコリド（ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ＰＬＧまたはＰＬＧＡ）など）を含む。ポリマーの重量平均分子量は、典型的には５，０００〜５０，０００である。ポリマーは理想的には３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満、好ましくは２ｍｇＫＯＨ／ｇ未満、より好ましくは１ｍｇＫＯＨ／ｇ未満の酸価を有する。
【００１９】
本発明によれば、ラクテート系生分解性ポリマーを溶媒に溶解することができる。次いで、ポリマーは、ラクテート系ポリマーにとっては可溶性ではないが、モノマーおよびオリゴマーにとっては可溶性である貧溶媒（ａｎｔｉ−ｓｏｌｖｅｎｔ）中に沈殿させることができる。得られる沈殿ポリマーは、理想的には０．３％、好ましくは０．２％、より好ましくは０．１％以下の未反応または残留ラクチドモノマーの含有量を有する。５０００未満の分子量を有するオリゴマーの割合は、２０重量％、好ましくは１０重量％、より好ましくは５重量％以下である。このポリマーは、求核性生物活性物質および薬学的に許容される有機溶媒と共に製剤化された場合、安定した溶液を形成し、単一の注射器に予め充填することができる。
【００２０】
本発明によれば、徐放性薬物送達のための注射用組成物は、重量平均分子量が５，０００〜５０，０００ダルトンであり、酸価が３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満であり、ラクテート系ポリマー中の残留ラクチドモノマーが約０．３重量％未満であるラクテート系ポリマーを、薬学的に許容される有機溶媒、およびラクチドモノマーと反応してコンジュゲートを形成することができる生物活性物質またはその塩と組み合わせることを含み、但し、組成物を製造する際に酸添加剤を添加しないことを条件とする、方法により製造され得る。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】３７℃で１時間後のＮＭＰ溶液中の６０％ＰＬＡ−１００ＤＬ２Ｅにおけるロイプロリドアセテートのクロマトグラム
【図２】時間０におけるＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ６０％ＰＬＡ−１００ＤＬ２Ｅのクロマトグラム
【図３】時間０におけるＤＣＭ中のＬＡＡｃｅ６０％ＰＬＡ−１００ＤＬ２Ｅのクロマトグラム
【図４】時間０におけるＤＭＳＯ中のＬＡＡｃｅ６０％ＰＬＡ−１００ＤＬ２Ｅのクロマトグラム
【図５】３７℃で１時間後のＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ６０％ＰＬＡ−１００ＤＬ２Ｅのクロマトグラム
【図６】３７℃で１時間後のＤＭＳＯ中のＬＡＡｃｅ６０％ＰＬＡ−１００ＤＬ２Ｅのクロマトグラム
【図７】３７℃で１時間後のＤＣＭ中のＬＡＡｃｅ６０％ＰＬＡ−１００ＤＬ２Ｅのクロマトグラム
【図８】２５℃で３時間後の２５％Ｄ，Ｌ−ラクチドを含むＮＭＰ中ＦＭＯＣ−ＳＥＲ−ＯＨのクロマトグラム
【図９】２５℃で１日後の２５％Ｄ，Ｌ−ラクチドを含むＮＭＰ中ＦＭＯＣ−ＳＥＲ−ＯＨのクロマトグラム
【図１０】２５℃で３時間後の２５％Ｄ，Ｌ−ラクチドを含むＮＭＰ中ＦＭＯＣ−ＡＲＧ−ＯＨのクロマトグラム
【図１１】２５℃で１日後の２５％Ｄ，Ｌ−ラクチドを含むＮＭＰ中ＦＭＯＣ−ＡＲＧ−ＯＨのクロマトグラム
【図１２】モノマーから生成した不純物を示す１０％Ｌ−ラクチドを含むＮＭＰ中のＬＡＭＳのクロマトグラム
【図１３】ＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．１のクロマトグラム
【図１４】ＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．２のクロマトグラム
【図１５】ＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．３のクロマトグラム
【図１６】ＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．５のクロマトグラム
【図１７】ＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−１．０のクロマトグラム
【図１８】ＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−３．０のクロマトグラム
【図１９】３７℃で２４時間後のＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．１のクロマトグラム
【図２０】３７℃で２４時間後のＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．２のクロマトグラム
【図２１】３７℃で２４時間後のＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．３のクロマトグラム
【図２２】３７℃で２４時間後のＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−０．５のクロマトグラム
【図２３】３７℃で２４時間後のＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−１．０のクロマトグラム
【図２４】３７℃で２４時間後のＮＭＰ中のＬＡＡｃｅ５７．５％ＰＬＡ−３．０のクロマトグラム
【図２５】精製または未精製ポリマーを含む製剤からのＬＡＭＳのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、生物活性物質のための持続放出送達システムを形成するためのポリマー組成物およびそのような組成物の製造方法を提供する。本発明のポリマー組成物は、ａ）生物活性物質またはその塩、ｂ）有機溶媒、ｃ）ラクテート系生分解性ホモポリマーまたはコポリマーを含む。本発明の生物活性物質またはその塩は、典型的に求核性であり、ラクチドモノマーまたはラクテート系オリゴマーと反応して共有結合体または付加物を形成することができる。本発明の有機溶媒は、極性プロトン性液体または非プロトン性液体であり得る。本発明のラクテート系ポリマーは、ポリマー組成物構造中に乳酸、ラクテート、またはラクチドの少なくとも１つのモノマー単位を含む。本発明のポリマー組成物は、ポリマー組成物中に関連する不純物を形成する、生物活性物質とモノマーまたはオリゴマーとの反応を低減または防止することができる。
【００２３】
本発明のポリマー組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製された有機溶媒を除去することによって、微粒子、マイクロスフェア、マイクロカプセル、微粒子または固体インプラントの形態であってもよい。これらの剤形は、注射または外科的介入など、当技術分野で公知の方法によって投与することができる。あるいは、また好ましくは、針、カニューレ、チューブ、腹腔鏡、プローブ、または他の送達装置を介して注射することができるように流体として移動する溶液、エマルジョン、懸濁液、ペースト、クリームまたはゲルの形態であってもよい。対象に投与する場合、そのような注射用組成物は、組成物に依存して生物活性物質の徐放を所望の期間維持することを可能とするデポーをその場で形成する。デポーまたはインプラントは、固体、ゲル、ペースト、半固体、または粘性液体であってもよい。生分解性ポリマーおよび他の成分の選択により、生物活性物質の持続放出の持続時間は、数週間から１年の期間にわたって制御することができる。  
【００２４】
本発明のポリマー組成物はまた、非ポリマー性化合物、および／または放出を制御するための添加剤、例えば、レート放出調整剤、孔形成剤、可塑剤、有機溶媒、生物活性物質をカプセル化するカプセル化剤、熱ゲル化剤、バースト効果低減物質、ヒドロゲル、ポリヒドロキシル物質、浸出剤、組織輸送剤、もしくは他の同様の添加剤またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【００２５】
本明細書で使用する「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」という用語は、「１つ以上」および「少なくとも１つ」と解釈されることを意味する。    
【００２６】
本明細書で定義される「徐放性送達」という用語は、投与後の所望の長期間、好ましくは少なくとも数日から１年にわたるｉｎ  ｖｉｖｏでの生物活性物質の送達を指すものとする。
【００２７】
用語「生物活性物質」は、限定されないが、有機小分子、無機小分子、巨大分子、ペプチド、オリゴペプチド、タンパク質、または酵素、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド、ポリ核酸またはこのような化合物を構成する同様の分子を含む、診断および／または治療特性を有する任意の物質を含むことを意味する。治療特性の非限定的な例は、代謝拮抗性、抗真菌性、抗炎症性、抗腫瘍性、抗感染性、抗生物質、栄養素、アゴニストおよびアンタゴニストのような特性である。  
【００２８】
本発明の生物活性物質は、遊離分子、遊離分子の有機または無機塩の形態であってもよく、またはキャリア剤と複合体化または共有結合していてもよく、プロドラッグであってもよく、または多型生物活性物質（複数の生物活性物質のユニットが一緒に複合化または共有結合している）であってもよい。  
【００２９】
本発明の生物活性物質は、エステル分解を触媒し、ラクテート系ポリマー、オリゴマーまたはモノマーと反応することができる求核基を含有する。「求核性基」は、電子対を求電子基に供与して、原子または極性分子の正の末端の核を求めて反応に関して化学結合を形成する化学種として特徴付けることができる。遊離電子対または少なくとも１つのπ結合を有するすべての分子またはイオンは、求核基である。求核基は電子を供与するので、それらは定義上ルイス塩基である。求核性基は、求核性基（１または複数）として、アミン基、アミジン基、イミン基、窒素複素芳香族基、窒素複素環基、他の窒素含有基またはそれらの任意の組み合わせなどの窒素基を含む。求核性窒素基（１または複数）は、遊離分子のように塩基性であってもよく、または有機または無機酸との塩の形態であってもよい。求核基はまた、水酸化物アニオン、アルコール、アルコキシドアニオン、過酸化水素、およびカルボキシレートアニオンのような酸素基、ならびに硫化水素およびその塩、チオール（ＲＳＨ）、チオレートアニオン（ＲＳ−）、チオールカルボン酸のアニオン（ＲＣ（Ｏ）−Ｓ−）、ジチオカーボネートのアニオン（ＲＯ−Ｃ（Ｓ）−Ｓ−）およびジチオカルバメート（Ｒ２Ｎ−Ｃ（Ｓ）−Ｓ−）のような硫黄基を含み得る。
【００３０】
本発明の生物活性物質は、任意に、１つ以上のカルボン酸、エステル、ラクトン、無水物、カルボネート、カルバメート、尿素、アミド、ラクタム、イミン、アミジン、エナミン、イミド、オキシム、カルボニル、ヒドロキシル、エノール、アミン、エーテル、スルフィド、スルホニル、スルホキシル、スルホン酸、チオアミド、チオール、チオ酸、チオエステル、チオウレア、アセタール、ケタール、ハロゲン化物、エポキシ、ニトロ、ニトロソ、キサンテート、イナミン（ｙｎａｍｉｎｅ）基またはそれらの任意の組み合わせを含む、脂肪族、芳香族、複素芳香族、環式、脂環式、複素環式有機化合物であり得、任意の置換基は生物活性物質の求核性基と互換性がある。
【００３１】
本明細書で使用される用語「ペプチド」は、本明細書において互換的に使用される、通常「ペプチド」、「オリゴペプチド」および「ポリペプチド」または「タンパク質」と一般に呼ばれるポリ（アミノ酸）を含む一般的な意味である。この用語は、生物活性ペプチド類似体、誘導体、アシル化誘導体、グリコシル化誘導体、ＰＥＧ化誘導体、融合タンパク質なども含む。用語「ペプチド」は、抗代謝、抗真菌、抗炎症、抗腫瘍、抗感染、抗生物質、栄養素、アゴニストおよびアンタゴニストの特性を含むが、これらに限定されない診断および／または治療特性を有する生物活性ペプチドを含むものとする。この用語はまた、ペプチドの合成類似体、塩基性官能基を有する非天然アミノ酸、または任意の他の形態の導入された塩基性を含む。本発明のペプチドは、少なくとも１個の求核基を含む。語句「少なくとも１つ」は、１つのペプチドが複数の求核性基も含み得ることを意味する。
【００３２】
具体的には、本発明の生理活性ペプチドには、限定されないが、オキシトシン、バソプレッシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、プロラクチン、黄体形成ホルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、成長ホルモン（ヒト、ブタ、およびウシを含む）、成長ホルモン放出因子、インスリン、エリスロポエチン（赤血球形成活性を有する全てのタンパク質を含む）、ソマトスタチン、グルカゴン、インターロイキン（ＩＬ−２、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２などを含む）、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、ガストリン、テトラガストリン、ペンタガストリン、ウロガストロン、セクレチン、カルシトニン、エンケファリン、エンドルフィン、アンギオテンシン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージ−コロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、ヘパリナーゼ、血管内皮成長因子（ＶＥＧ−Ｆ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、ｈＡＮＰ、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）、エクセナチド、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、レニン、ブラジキニン、バシトラシン、ポリミキシン、コリスチン、チロシジン、グラミシジン、シクロスポリン、酵素、サイトカイン、抗体、ワクチン、抗生物質、抗体、糖タンパク質、卵胞刺激ホルモン、キョートルフィン、タフトシン（ｔａｆｔｓｉｎ）、チモポエチン、チモシン、チモスチムリン、胸腺液性因子、血清胸腺因子、コロニー刺激因子、モチリン、ボンベシン、ジノルフィン、ニューロテンシン、セルレイン、ウロキナーゼ、カリクレイン、サブスタンスＰ類縁体およびアンタゴニスト、アンギオテンシンＩＩ、血液凝固第ＶＩＩ因子および第ＩＸ因子、グラミシジン、メラノサイト刺激ホルモン、甲状腺ホルモン放出ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、パンクレオザイミン、コレシストキニン、ヒト胎盤ラクトゲン、ヒト絨毛性ゴナドトロフィン、タンパク質合成刺激ペプチド、胃抑制ペプチド、血管作用性腸管ペプチド、血小板由来成長因子、ならびにそれらの合成類似体および修飾体および薬理学的に活性な断片が含まれ得る。
【００３３】
本明細書で使用される好ましいペプチドは、ペプチド分子構造中にアミノ酸セリンを含む。本明細書において使用される好ましいペプチドには、ＬＨＲＨ、およびリュープロレリン、ブセレリン、ゴナドレリン、デスロレリン、ファチレリン、ヒストレリン、ルトレリン、ゴセレリン、ナファレリン、トリプトレリン、セトロレリクス、エンフビルチド、チモシンα１、アバレリクスなどのＬＨＲＨアゴニストが含まれる。本明細書で使用される好ましいペプチドには、ソマトスタチン、オクトレオチド、パシレオチド、ＳＯＭ２３０、およびランレオチドなどのペプチドも含まれる。
【００３４】
本発明の生物活性物質はまた、求核能力を有する生物学的に活性な化合物であるヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドおよびポリ核酸を含む。
【００３５】
本発明に用いられる生物活性物質は、それ自体であっても薬学的に許容される塩であってもよい。生物活性物質の薬学的に許容される塩を形成するために使用される酸は、好ましくは５未満のｐＫａを有する。本発明に適した酸は、これらに限定されるものではないが、塩酸、臭化水素酸、硝酸、クロム酸、硫酸、メタンスルホン酸、トリフルロメタンスルホン酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、ブロモ酢酸、クロロ酢酸、シアノ酢酸、２−クロロプロパン酸、２−オキソブタン酸、２−クロロブタン酸、４−シアノブタン酸、パモ酸、過塩素酸、リン酸、ヨウ化水素、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、（＋）−樟脳−１０−スルホン酸、カプリン酸、（デカン酸）、カプロン酸（ヘキサン酸）、カプリル酸（オクタン酸）、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、デカン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクト酸（ｇａｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）、ゲンチシン酸、Ｄ−グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、ＤＬ−マンデル酸、ムチン酸（ｍｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、エンボン酸、プロピオン酸、（−）−Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ウンデシレン酸からなる群から選択され得る。適切な酸の選択は、当業者に周知である。
【００３６】
生物活性物質の薬学的に許容される塩は、単純な酸および塩基滴定または中和によって調製することができる。生物活性物質の薬学的に許容される塩は、その合成および精製プロセス中に調製することができる。あるいは、塩は、遊離塩基の形態の生物活性物質から調製することができる。遊離塩基を適切な液体媒体に溶解する。この生物活性物質の溶液を、濾過、沈殿または凍結乾燥のような適切な手段によって溶媒を除去することによって有益な塩を形成するために酸の溶液と混合する。生物活性物質がその一般的に市販されている塩の形態である場合、凍結乾燥、沈殿または当技術分野で公知の他の方法などの単純な塩交換プロセスまたはイオン交換法を使用することによって異なる塩を得ることができる。例えば、ロイプロリドアセテートは、適切な液体媒体、例えば水に溶解される。このペプチドの溶液を、メタンスルホン酸のような強酸の水溶液と混合する。ロイプロリドアセテートおよびメタンスルホン酸のような強酸が水に溶解すると、強いメタンスルホン酸が弱いカルボン酸を置換しながら、ペプチドはメシル酸イオンと会合する傾向がある。溶媒および遊離した酢酸（または他の弱いが揮発性のカルボン酸）は、真空下で除去することができる。このように、混合溶液を凍結乾燥して水と弱酸を除去し、所望の塩を形成する。生物活性物質が低ｐＨ下で安定でない場合、生物活性物質の薬学的に許容される塩は、非常に低い濃度の酸に対して大量の透析により調製することができる。
【００３７】
本発明のポリマー組成物は、生物活性物質を０．０１〜４０重量％の範囲で含有することができる。一般に、最適薬物負荷量は、所望の放出期間および生物活性物質の効力に依存する。明らかに、低効力およびより長い放出期間の生物活性物質については、より高いレベルの取り込みが必要とされ得る。
【００３８】
用語「有機溶媒」は、ラクテート系ポリマーを溶解することができる任意の有機溶媒を含むことを意味する。本発明のポリマー組成物に使用することができる典型的な溶媒は、水、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル、塩化メチレン、塩化エチレン、四塩化炭素、クロロホルム、ジエチルエーテル、およびメチルエチルエーテル等の低級アルキルエーテル、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、アセトン、エチルアセテート等が挙げられる。カルボン酸およびアリールアルコールのエステル、例えばベンジルベンゾエート；Ｃ４〜Ｃ１０アルキルアルコール；Ｃ１〜Ｃ６アルキルＣ２〜Ｃ６アルカノエート；炭酸とアルキルアルコールのエステル、例えばプロピレンカーボネート、エチレンカーボネートおよびジメチルカーボネート、モノ−、ジ−およびトリカルボン酸のアルキルエステル、例えば２−エトキシエチルアセテート、エチルアセテート、メチルアセテート、エチルブチレート、ジエチルマロネート、ジエチルグルトネート（ｄｉｅｔｈｙｌ  ｇｌｕｔｏｎａｔｅ）、トリブチルシトレート、ジエチルスクシネート、トリブチリン、イソプロピルミリステート、ジメチルアジペート、ジメチルスクシネート、ジメチルオキサレート、ジメチルシトレート、トリエチルシトレート、アセチルトリブチルシトレート、グリセリルトリアセテート；アルキルケトン、例えばメチルエチルケトン；ならびに他のカルボニル、エーテル、カルボン酸エステル、アミド、および水にいくらか溶解するヒドロキシ含有液体有機化合物。プロピレンカーボネート、エチルアセテート、トリエチルシトレート、イソプロピルミリステート、およびグリセリルトリアセテートが、生体適合性および薬学的受容性のため好ましい。所与の系のための適切な溶媒の選択は、本開示の観点から当業者の範囲内である。
【００３９】
好ましくは、本発明の有機溶媒は生体適合性で薬学的に許容される。「生体適合性」という用語は、組成物から分散または拡散する際の有機溶媒が、移植部位を取り囲む実質的な組織刺激または壊死をもたらさないことを意味する。「薬学的に許容される」という用語は、治療を必要とするヒトおよび動物を治療するためにその有機溶媒を医薬品に使用できることを意味する。
【００４０】
本発明の有機溶媒は、房水または体液中で混和性または分散性であってもよい。用語「分散性」は、溶媒が水に部分的に可溶性または混和性であることを意味する。単一の溶媒または溶媒の混合物は、０．１重量％を超える水中での溶解度または混和度を有し得る。好ましくは、溶媒は３重量％を超える水中での溶解度または混和度を有する。好ましくは、溶媒は７重量％を超える水中での溶解度または混和度を有する。適切な有機溶媒は、液体組成物が凝固または固まるように体液中に拡散することができなければならない。このような溶媒の単体および／または混合物を使用することができる。そのような溶媒の適合性は、簡単な実験によって容易に決定することができる。
【００４１】
薬学的に許容される有機溶媒の例は、限定されないが、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、２−ピロリドン、メトキシポリエチレングリコール、アルコキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールエステル、グリコフロール、グリセロールホルマール、メチルアセテート、エチルアセテート、メチルエチルケトン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、カプロラクタム、デシルメチルスルホキシド、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、エチルベンゾエート、トリアセチン、ジアセチン、トリブチリン、トリエチルシトレート、トリブチルシトレート、アセチルトリエチルシトレート、アセチルトリブチルシトレート、トリエチルグリセリド、トリエチルホスフェート、ジエチルフタレート、ジエチルタートレート、エチルラクテート、プロピレンカーボネート、エチレンカーボネート、ブチロラクトン、および１−ドデシルアザシクロ−ヘプタン−２−オン、およびそれらの組み合わせを含む。好ましい有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、エチルラクテート、グリコフロール、グリセロールホルマール、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、メトキシポリエチレングリコール、アルコキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールエステルおよびイソプロピリデングリコールを含む。
【００４２】
種々の有機溶媒中の生分解性ポリマーの溶解度は、ポリマーの特性およびそれらの溶媒との相溶性によって異なる。したがって、同じポリマーは、異なる溶媒中では同程度に可溶ではないだろう。例えば、ＰＬＧＡは、トリアセチン中においてよりもＮ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）中においてはるかに高い溶解度を有する。しかし、ＮＭＰ中のＰＬＧＡ溶液が水溶液と接触すると、ＮＭＰは、その高い水混和性のために非常に急速に拡散して固体ポリマーマトリックスを形成する。溶媒の速い拡散速度は、固体インプラントが迅速に形成される結果になる可能性があるが、高い初期バースト放出をもたらすこともある。トリアセチン中のＰＬＧＡ溶液が水溶液と接触すると、トリアセチンはその低い水混和性のために非常にゆっくり拡散する。溶媒のゆっくりとした拡散速度は、粘性液体から固体マトリックスへの変化に長い時間を要することがある。溶媒が拡散し、ペプチド物質を封入するためにポリマーが凝固するのに最適なバランスが存在し得る。したがって、所望の送達システムを得るために異なる溶媒を組み合わせることが有利であり得る。低および高水混和性の溶媒を組み合わせて、ポリマーの溶解度を改善し、組成物の粘度を改変し、拡散速度を最適化し、初期バースト放出を減少させることができる。      
【００４３】
本発明のポリマー組成物は、典型的には、１０重量％〜９９重量％の範囲の有機溶媒を含有する。本発明のポリマー組成物の粘度は、使用されるポリマーおよび有機溶剤の分子量に依存する。好ましくは、組成物中のポリマーの濃度は、７０重量％未満である。
【００４４】
「ポリマー」は、多数の反復サブユニットから構成された大きな分子または巨大分子である。ポリマーは、ポリスチレンなどの知られている合成プラスチックから、生物学的構造および機能にとって基本的なＤＮＡおよびタンパク質などの天然の生体ポリマーまでさまざまである。天然および合成の両方のポリマーは、モノマーとして知られている多くの小分子の重合によって生成される。重合は、モノマーとして知られている多くの小分子を共有結合した鎖またはネットワークに結合させるプロセスである。小分子化合物と比較してポリマーの大きな分子量は、靭性、粘弾性、ならびに結晶よりもむしろガラスおよび半結晶構造を形成する傾向を含む固有の物理的特性を生じる。
【００４５】
用語「生分解性」は、その場で徐々に分解し、溶解し、加水分解し、および／または侵食される物質を指す。一般に、本明細書の「生分解性ポリマー」は、加水分解および／または酵素分解を経て、その場で加水分解および／または生体内分解するポリマーである。
【００４６】
本明細書で使用する「生分解性ポリマー」という用語は、ｉｎ  ｖｉｖｏで使用することができる任意の生体適合性ならびに／または生分解性の合成および天然ポリマーを含むことを意味する。一般に、本発明の生分解性ポリマーは、線状ポリマー、または分枝もしくは星型ポリマー、あるいは線状ポリマーと分枝状および／または星型ポリマーとの混合物であってもよい。好ましくは、本発明の生分解性ポリマーは、ラクテート系ポリマーである。本明細書で使用する「ラクテート系ポリマー」は、ポリマー中にラクテート単位を含むポリマーである。本明細書で使用される「ラクテート」という用語は、ラクテート系ポリマーの調製において試薬として使用される乳酸またはその塩（ラクテート（乳酸塩））のいずれかを指し、あるいはラクテート系ポリマー分子鎖にエステル結合を介して取り込まれた残基としてのこれらの部分を指す。本明細書で使用される「ラクテート」という用語はまた、ラクテート系ポリマーの調製に使用されるモノマーを指す場合、ラクテート（乳酸エステル）（ラクチド）の環状二量体エステルを指す。ラクチドモノマーは、乳酸（２−ヒドロキシプロパン酸）から製造された天然で再生可能な化合物である。ラクチドは、２つの立体異性体形態（Ｌ（＋）乳酸およびＤ（−）乳酸）を有する乳酸の生成物として、３つの立体異性体形態、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチドおよびメソ−ラクチド、で存在する。
【００４７】
ラクチドは、乳酸のオリゴマー化とその後の環化の２つの合成工程で得られる。最初の酸がＬ−乳酸であればＬ−ラクチドが生成され、最初の酸がＤ−乳酸であればＤ−ラクチドが生成される。Ｌ−乳酸とＤ−乳酸とを使用してメソ−ラクチドが生成される。ＰＬＡへのラクチドの重合のための適切なレベルの純度を得るためには、効率的な精製工程が必要である［Ｓａｖｉｏｌｉ  Ｌｏｐｅｓ  Ｍ．，  Ｊａｒｄｉｎｉ  Ａ．，  Ｍａｃｉｅｌ  Ｆｉｌｈｏ  Ｒ．，  ２０１４，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙ  （ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）  ｂｙ  ｒｉｎｇｏｐｅｎｉｎｇ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，  ３８，  ３３１−３３６  ＤＯＩ：  １０．３３０３／ＣＥＴ１４３８０５６］。
【００４８】
用語「乳酸」、「ラクテート」または「ラクチド」が本明細書で使用される場合、化合物の任意および全てのキラル形態が用語に含まれることが理解される。したがって、「乳酸」には、（Ｒ）−乳酸および（Ｓ）−乳酸またはＤ−乳酸、Ｌ−乳酸、Ｄ，Ｌ−乳酸、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。「ラクチド」には、Ｄ−ラクチド、Ｄ，Ｌ−ラクチド、Ｌ，Ｄ−ラクチド、Ｌ−ラクチド、（Ｒ，Ｒ）−ラクチド、（Ｓ，Ｓ）−ラクチド、およびメソ−ラクチドまたはそれらの任意の組み合わせが含まれる。
【００４９】
ラクテート系ポリマーには、ラクテート、乳酸、またはラクチドモノマーを含む任意のポリマー／コポリマーが含まれる。ラクテート系ポリマーは、重縮合（ＰＣ）、開環重合（ＲＯＰ）、および他の方法（鎖延長、グラフト）によって調製することができる。異なるタイプのポリマー（コポリマーを含む）は、Ｄ，Ｌ−ラクチド、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、グリコリド（ＧＡ）、ε−カプロラクトン（ＣＬ）、トリメチレンカーボネート（ＴＭＣ）、１，５−ジオキセパン−２−オン（ＤＸＯ）、および他の環状類似体からＲＯＰにより調製され得る  
【００５０】
本発明のラクテート系ポリマーとしては、乳酸またはラクチドモノマーのホモポリマー（ポリ（乳酸）またはポリラクチド、ＰＬＡ）、および乳酸（またはラクチド）と他のモノマーとのコポリマー（例えば、グリコール酸（またはグリコリド）（ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ＰＬＧまたはＰＬＧＡ）など）を含む。ラクテート系ポリマーは、同じ末端基を有していてもよく、すなわち、エステル、ヒドロキシルまたはカルボン酸のような全ての末端基が同じであってもよい。ラクテート系ポリマーは、エステル、ヒドロキシルおよび／またはカルボン酸の混在末端基を有し得る。ラクテート系ポリマーは、米国特許第８，４７０，３５９号明細書に開示されている例のような末端ヒドロキシル基を有するジオールコアを有することができる。同様に、ラクテート系ポリマーは、末端ヒドロキシル基を有するグルコースなどのトリオールまたはポリオールコアを有していてもよい。ラクテート系ポリマーは、エステルとして一方の末端基を有し、他方の末端にヒドロキシル基またはカルボン酸基を有することができる。ラクテート系ポリマーはまた、一方の末端にヒドロキシル基を有し、他方の末端はカルボン酸もしくはエステルである、またはその逆であってもよい。
【００５１】
本発明のラクテート系ポリマーの重量平均分子量は、通常５，０００〜５０，０００である。本発明のラクテート系ポリマーは、市販品であってもよいし、公知の方法により製造されたポリマーであってもよい。公知の重合方法としては、例えば、乳酸の縮合重合および他のモノマー、例えばグリコール酸との共重合、触媒、例えばルイス酸、またはジエチル亜鉛、トリエチルアルミニウム、オクチル酸スズのような金属塩を用いたラクチドの開環重合、他の環状モノマー、例えばグリコリドとの共重合、カルボキシル基が保護されたヒドロキシカルボン酸誘導体の更なる存在下でのラクチドの開環重合（例えば、国際公開第００／３５９９０号）、触媒を加熱下でラクチドに添加して開環重合させるラクチドの開環重合（例えば、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １６，  ８９７  （１９７３））、ラクチドとグリコリドおよび／または他のモノマーとの共重合のための他の方法が挙げられる。
【００５２】
重合は、ラクチドおよび他のコモノマーが溶融されるバルク重合によって、またはラクチドおよび他のコモノマーが適切な溶媒に溶解される溶液重合によって行うことができる。溶液重合においてラクチドを溶解させる溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素、デカリン、ジメチルホルムアミドなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
ポリマーの分子量は多くの物理的特性を決定するので重要である。いくつかの例には、液体からワックス、ワックスからゴム、ゴムから固体への転移温度、ならびに剛性、強度、粘弾性、靭性および粘度などの機械的特性が含まれる。特定の用途に適した分子量を有する適切なポリマーを選択することが重要である。
【００５４】
用語「重量平均分子量Ｍｗ」および「数平均分子量Ｍｎ」は、当業者に周知である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈｅｍ．ａｇｉｌｅｎｔ．ｃｏｍ／Ｌｉｂｒａｒｙ／ｔｅｃｈｎｉｃａｌｏｖｅｒｖｉｅｗｓ／Ｐｕｂｌｉｃ／５９９０−７８９０ＥＮ．ｐｄｆを参照）。本明細書で使用される「多分散指数、ＰＤＩ」という用語は、ポリマーの重量平均分子量をポリマーの数平均分子量で割った値（ＰＤＩ＝Ｍｗ／Ｍｎ）として定義される。多分散性指数は、ポリマー中の分子量の分布を特徴付けるためによく知られている。ＰＤＩは、ポリマーの均質性に関するアイデアを提供する。ポリマーの各分子がほぼ同じ分子量を有するポリマーは、単分散ポリマーと呼ばれる。これらの分子については、ＭＷ＝ＭＮであり、したがってＰＤＩは１である。ポリマーの各分子が広い分子量範囲を有するポリマーは、多分散ポリマーと呼ばれる。これらのポリマーについては、ＭＷ＞ＭＮであり、従ってそれらのＰＤＩは１より大きい。ＰＤＩが高いほど、ポリマーの分子量分布が広くなる。本発明のラクテート系ポリマーのＰＤＩは、２．５未満、好ましくは２．０未満、より好ましくは１．８未満であるべきである。
【００５５】
本発明のラクテート系ポリマーは、再沈殿させてもよい。ラクテート系ポリマーを溶解することができる溶媒に、約１０〜４０重量％の、重量平均分子量が５，０００〜５０，０００であるラクテート系ポリマーを添加することができる。溶媒としては、例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、トルエン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、テトラヒドロフラン、アセトン、アセトニトリル、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ＤＭＳＯ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどが挙げられる。次いで、本発明のラクテート系ポリマーを含む有機溶液を、本発明のラクテート系ポリマーが溶解しない貧溶媒中に沈殿させることができる。貧溶媒としては、メタノール、エタノールなどのアルコール、エチルエーテルなどの短鎖エーテル、ヘキサンなどの脂肪族炭化水素、水などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。ラクテート系ポリマーのモノマーおよび小オリゴマーは依然として貧溶媒中で可溶であり、そのため溶液中に留まり沈殿しない。
【００５６】
ラクテート系ポリマーを沈殿させることができる貧溶媒の量は、ラクテート系ポリマー溶液の溶媒に基づき、典型的には０．１〜１０重量倍、好ましくは０．２〜５重量倍である。例えば、本発明のラクテート系ポリマー２０ｇを１００ｇのアセトンに溶解させた際、アセトンに基づいて０．１〜１０重量倍の量の水等の貧溶媒をラクテート系ポリマー溶液と合わせてポリマーを沈殿させる。
【００５７】
沈殿手順は、以下の方法の１つとして実施することができる：１）有機溶媒中のラクテート系ポリマー溶液を一度に貧溶媒中に添加する、２）ラクテート系ポリマー溶液を貧溶媒中に滴下する、３）貧溶媒を一度にラクテート系ポリマー溶液に添加する、４）ラクテート系ポリマー溶液に貧溶媒を滴下する等。
【００５８】
本発明のラクテート系ポリマーは、超臨界流体抽出法（ＳＦＥ）を用いて精製することができる。ＳＦＥは、抽出溶媒として超臨界流体を使用して、ある成分（抽出剤）を別のもの（マトリックス）から分離するプロセスである。抽出は、通常、固体マトリックスからであるが、液体からも可能である。ＳＰＥは、圧力および温度に関して特定の流体組成物のために定義されているような、超臨界状態の流体を使用する。すべての流体材料は、「臨界点」と呼ばれる圧力と温度の特徴的な組み合わせを有し、これらのパラメーターを超過すると、流体は超臨界状態に存在する。超臨界流体抽出に使用される流体または溶媒は、単一の化合物であってもよく、または化合物の混合物であってもよい。流体成分は、周知であり、当業者は、本発明のラクテート系ポリマーを精製するのに適した溶媒および共溶媒を選択するために容易に入手可能である。
【００５９】
本発明のラクテート系ポリマーは、Ａ−Ｂ−Ａブロックコポリマー、Ｂ−Ａ−Ｂブロックコポリマー、および／もしくはＡ−Ｂブロックコポリマーならびに／または分岐コポリマーなどのブロックコポリマーも含む。好ましいブロックコポリマーは、Ａブロックがラクテート系ポリマーを含み、Ｂブロックが、ポリグリコリド、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ酸無水物、ポリ（オルトエステル）、ポリエーテルエステル、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリ（ε−カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシ酪酸）、およびそれらの配合物およびコポリマーから選択されるポリマーを含むコポリマーである。Ｂブロックは、ポリエチレングリコールまたはメトキシポリエチレングリコールのような一官能性誘導体化ポリエチレングリコールであってもよい。これらの組み合わせのいくつかは、許容可能な熱可逆性ゲルを形成し得る。
【００６０】
本発明によれば、徐放性薬物送達のためのポリマー組成物は、溶媒中の求核性薬物およびポリマーの均質溶液である。本明細書でいう不純物または生物活性物質関連物質は、生物活性物質とラクテート系ポリマーのビルディングブロック（例えば、乳酸、ラクテート、ラクチドモノマーおよびオリゴマー）との間の付加物である。不純物の問題は、求核性生物活性物質とポリマーとの均質な溶液が使用される場合によく起こる。溶液中では、求核性生物活性物質およびポリマーは共に、生物活性物質とポリマー／オリゴマー／モノマーとの密接な接触のために、生物活性物質およびポリマー／オリゴマー／モノマーが相互作用／反応するのに好ましい条件を形成する。
【００６１】
生物活性物質関連物質は、ＨＰＬＣ分析によって検出することができる。米国特許第８，３４３，５１３号明細書（第４３および４４欄の表３５および図１６）に開示されているように、４つのロイプロリド関連不純物が、溶媒抽出法を用いて調製されたＰＬＧＡ（ＲＧ５０３Ｈ）ミクロスフェア中のＨＰＬＣおよびＨＰＬＣ−ＭＳによって検出された。ミクロスフェアは、ロイプロリドアセテート、ＰＬＧＡ（ＲＧ５０３Ｈ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）およびメタノールからなる分散相から調製した。両方の溶媒は毒性があり、人間の使用には適していない。本発明の一実施形態では、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のような薬学的に許容される溶媒において、ＤＣＭなどの毒性溶媒においてよりも多くの生物活性物質関連不純物が生成されることが見出された。
【００６２】
米国特許第８，３４３，５１３号明細書におけるＨＰＬＣおよびＨＰＬＣ−ＭＳにより検出された４つのロイプロリド関連不純物は、全て、ロイプロリドのアルギニン残基でのポリマーの断片との反応から形成されたことが判明した。本発明の一実施形態では、ラクチドモノマーをアルギニンまたはセリンと混合し、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、薬学的に許容される溶媒、に溶解すると、ＨＰＬＣによる全く異なる不純物プロファイルが驚くべきことに観察された。セリンは、アルギニンよりもラクチドモノマーとはるかに反応性であることが判明した。ロイプロリドアセテートをＮＭＰ中のＰＬＧＡと混合すると、２つの主要なロイプロリド関連不純物がＨＰＬＣによって検出された。ＨＰＬＣによって見出されたロイプロリド関連物質をＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳにより分析して、そのフラグメントイオンプロファイルを得た。ＭＳ／ＭＳデータに基づいて、４セリンで１４４Ｄａの添加が観察された。結論として、これらの２つの不純物は同じＭＷを含み、ロイプロリドのＭＳフラグメントと比較して４セリンで修飾されるべきである。これらの２つの不純物は、ロイプロリドのセリンとラクチドモノマーとの反応によって形成されるロイプロリド−ラクチドコンジュゲートである。２つの主なコンジュゲートは、［Ｐｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−（Ｓｅｒ−Ｄ−ラクチド）−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ］および［Ｐｙｒ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−（Ｓｅｒ−Ｌ−ラクチド）−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＥｔ］（Ｐｙｒ＝Ｌ−ピログルタミル）であり、米国特許第８，３４３，５１３号明細書に開示されているようには検出されなかった。これは、ラクチドモノマーの存在が、ロイプロリドの安定性に有害であることを示している。
【００６３】
さらに驚くべきことに、これらの不純物の形成およびポリマーの分子量低下は、ＰＬＡ（ＭＷ  １１ｋおよび酸価１２ｍｇＫＯＨ／ｇ）を含有するこれらのポリマー組成物において、高い酸価を有する低分子量ポリマーを使用することによって妨げられなかった。実際、ロイプロリド−ラクチドコンジュゲートは、より高い酸価を有する製剤においてより速く形成された。また、これらのポリマー組成物中に５ｍｇＫＯＨ／ｇの酸価を有するポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ  ５０５０）を使用した場合、溶液中のラクチドモノマーの含量が高いほど不純物生成が多くなることが分かった。これらの知見は、米国特許第８，３４３，５１３号明細書の開示から予期せぬものである。米国特許第８，３４３，５１３号明細書の教示とは対照的に、オリゴマーの存在は減少しなかったが、全体的な不純物の生成を増加させた。
【００６４】
米国特許第８，３４３，５１３号明細書は、不純物生成を減少させるために、高い酸価および有意な量の低ｐＫａ酸添加剤またはオリゴマーを有する低分子量ポリマーを使用しなければならないことをさらに開示する。このような酸性分散相は、低ｐＨからの組織刺激のためにヒトの非経口用途には適していない。本発明の別の実施形態では、塩溶液のｐＨが２．４になるような過剰なメタンスルホン酸を有するオクトレオチドメシレートを、ラクチドモノマーを添加した薬学的に許容される溶媒に溶解させた場合、驚くほど多くの不純物が生成されており、ペプチドは非常に不安定である。実際には、過剰の酸を含む溶液に対しては、含まないものより多くの不純物が生成される。
【００６５】
本発明によれば、不純物の生成は、（１）残留ラクチドモノマーの含有量が低いラクテート系ポリマーを使用すること、（２）抽出性の低いオリゴマーを有するラクテート系ポリマーを使用すること、（３）酸価の低いラクテート系ポリマーを用いること、および（４）酸添加剤の使用を避けることにより低減または防止し得ることが驚くべき且つ予期せず発見された。
【００６６】
本発明によれば、ラクテート系ポリマーの重量平均分子量は、５，０００〜５０，０００、５，０００〜４５，０００、５，０００〜４０，０００、５，０００〜３５，０００、５，０００〜３０，０００、５，０００〜２５，０００、５，０００〜２０，０００、５，０００〜１５，０００、５，０００〜１２，０００、または１０，０００〜４０，０００、または１２，０００〜３５，０００、または１５，０００〜３０，０００ダルトンである。
【００６７】
本発明のラクテート系ポリマーは、０．３％未満、好ましくは０．２％未満、より好ましくは０．１％未満の残留または未反応ラクチドの含有量を有する。
【００６８】
本発明のラクテート系ポリマーは、２０重量％未満、好ましくは１５％未満、好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満である、ＭＷが５０００未満のオリゴマーの画分を有する。本発明のラクテート系ポリマーは、５重量％未満、好ましくは３％未満、好ましくは２％未満、最も好ましくは１％未満である、ＭＷが１０００未満のオリゴマーの画分を有する。
【００６９】
本発明のラクテート系ポリマーの多分散性は、１．１〜２．５である。好ましくは、本発明のラクテート系ポリマーの多分散性は、少なくとも２．０以下である。より好ましくは、本発明のラクテート系ポリマーの多分散性は、少なくとも１．８以下である。
【００７０】
さらに、ラクテート系ポリマーの「酸価」は、不純物の生成に影響を及ぼし得る別の重要な特性である。ポリマーの酸価は、ポリマー１グラム中に存在する酸を中和するのに必要な水酸化カリウムの「ｍｇ」量である。酸末端基を有するポリマーはいくらかの酸価を有する。低分子量ポリマーは、より多くの酸末端基を有し、より高い酸価を有する。ポリマー中の抽出可能なオリゴマー酸も酸価に寄与する。典型的には、酸末端基を有するポリマーの場合、酸価は分子量との関係を示し、数平均分子量により近づく。本発明のラクテート系ポリマーの酸価は、０〜３０ｍｇＫＯＨ／ｇである。本発明のラクテート系ポリマーは、２０未満、好ましくは１０未満、より好ましくは３未満、最も好ましくは２未満の酸価を有する。
【００７１】
本発明の医薬組成物は、５重量％〜７５重量％の範囲のラクテート系ポリマーを含有することができる。本発明の医薬組成物の粘度は、使用されるポリマーおよび有機溶媒の分子量に依存する。典型的には、同じ溶媒が使用される場合、ポリマーの分子量および濃度が高いほど、粘度は高くなる。好ましくは、組成物中のポリマーの濃度は、７０重量％未満である。
【００７２】
ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）およびポリ（Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）を含む、ポリ（乳酸）、および乳酸とグリコール酸とのコポリマー（ＰＬＧＡ）のようなラクテート系ポリマーは、好ましく本発明に用いられる。熱可塑性ポリエステルは、約５０：５０〜約１００：０の乳酸対グリコール酸のモノマー比および約５，０００〜約５０，０００の重量平均分子量を有する。生分解性熱可塑性ポリエステルは、当該分野で公知の方法、例えば、重縮合および開環重合を用いて調製され得る（例えば、米国特許第４，４４３，３４０号明細書、同第５，２４２，９１０号明細書、同第５，３１０，８６５号明細書が参照をもって全て本明細書に組み込まれる）。生分解性ポリマーはまた、ポリマーを溶解および再沈殿など、当技術分野で公知の方法を用いて残留モノマーおよびオリゴマーを除去するために精製することもできる（例えば、米国特許第４，８１０，７７５号明細書、同第５，５８５，４６０号明細書、これらは参照により本明細書に組み込まれる）。ポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）の末端基は、重合方法および末端基修飾に依存して、ヒドロキシル、カルボキシルまたはエステルのいずれかであり得る。適切なポリマーは、単官能アルコールまたはポリオール残基を含み得る。一官能性アルコールの例は、メタノール、エタノール、または１−ドデカノールである。ポリオールは、エチレングリコール、１，６−ヘキサンジオール、ポリエチレングリコール、グリセロール、糖類、グルコース、スクロース、ソルビトールなどの還元糖類などを含むジオール、トリオール、テトラオール、ペンタオールおよびヘキサオールであってもよい。多くの適切なＰＬＧＡが市販されており、特定の組成物のＰＬＧＡは従来技術に従って容易に調製することができる。
【００７３】
組成物中に存在する生分解性ポリマーのタイプ、分子量、および量は、生物活性物質が徐放性インプラントから放出される時間の長さに影響し得る。徐放性インプラントの所望の特性を達成するための、組成物中に存在する生分解性ポリマーのタイプ、分子量および量の選択は、簡単な実験によって決定することができる。  
【００７４】
本発明の１つの好ましい実施形態では、ポリマー組成物は、ロイプロリドメシレートの徐放性送達システムを製剤化するために使用することができる。そのような実施形態では、ラクテート系ポリマーは、好ましくはポリマー鎖中に７５％以上のラクチド、ヒドロキシル末端基およびラウリルエステル末端を含むポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）であり得、約３０重量％〜約６５重量％の組成物中に存在し得、約５，０００〜約５０，０００の平均分子量を有し得る。  
【００７５】
本発明の別の好ましい実施形態では、ポリマー組成物は、ロイプロリドメシレートの徐放性送達システムを製剤化するために使用することができる。そのような実施形態では、ラクテート系ポリマーは、好ましくはポリマー鎖中に７５％以上のラクチド、２つのヒドロキシル末端基を含むポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−グリコリド）で好ましくあり得、約３０重量％〜約６５重量％の組成物中に存在し得、約５，０００〜約５０，０００の平均分子量を有し得る。
【００７６】
本発明のさらに別の好ましい実施形態では、組成物のラクテート系生分解性ポリマーは、０．２％以下の含有量で残留ラクチドを有し、ロイプロリドメシレートで製剤化することができる。そのような実施形態では、生分解性ポリマーは、好ましくは、カルボン酸末端基を有する／有しないポリ（ラクチド−コ−グリコリド）または１００／０ポリ（ＤＬ−ラクチド）であり得、約１０重量％〜約６５重量％の組成物中に存在し得、約５，０００〜約５０，０００の平均分子量を有し得る。ＮＭＰなどの医薬的に許容される有機溶媒で製剤化する場合、セリン部位を介したロイプロリド−ラクチドコンジュゲートの形成は、５％未満、好ましくは２％未満、より好ましくは１％未満、最も好ましくは０．５％未満である。
【００７７】
１つの態様において、本発明は、ａ）生物活性物質またはその塩、ｂ）薬学的に許容される有機溶媒、ｃ）ラクテート系生分解性ホモポリマーまたはコポリマーを含む、経済的、実用的、および効率的な徐放性送達システムを形成するための安定化注射用生分解性ポリマー組成物を提供する。本発明の生物活性物質またはその塩は、典型的に求核性であり、ラクチドモノマーまたはラクテート系オリゴマーと反応して共有結合体または付加物を形成することができる。好ましくは、ポリマー組成物は注射可能であり、すぐに使用できる形態で組成物を注射器に充填する工程を含むキットに包装することができる。キット中の組成物は、制御された保存条件下で適切な貯蔵寿命を有するために、妥当な期間、好ましくは少なくとも１年間安定である。組成物は、その場でインプラントを形成するために対象に注入されることが好ましく、このインプラントから生物活性物質が所望の長期間にわたり治療有効量で放出される。
【００７８】
本発明の好ましい別の実施形態において、重量平均分子量が５，０００〜５０，０００ダルトンであり、酸価が３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満であり、ラクテート系ポリマー中の残留ラクチドモノマーが約０．３重量％未満であるラクテート系ポリマーと、薬学的に許容される有機溶媒と、ラクチドモノマーと反応してコンジュゲートを形成することができる生物活性物質またはその塩とを組み合わせることを含み、但し、組成物を製造する際に酸添加剤を添加しないことを条件とする、徐放性薬物送達のための注射用組成物を製造する方法が提供される。ここで、本明細書で定義される酸添加剤は、ラクテート系ポリマー中に存在する酸ではなく、ラクテート系ポリマーの分解に由来する酸でもない。酸添加剤は、ラクテート系ポリマーに加えて組成物に添加する必要がある物質である。
【００７９】
一態様では、ラクテート系ポリマーは、好ましくは２ｍｇＫＯＨ／ｇ未満、より好ましくは１ｍｇＫＯＨ／ｇ未満の酸価を有する。
【００８０】
別の態様では、ラクテート系ポリマーは、約０．３重量％未満、好ましくは０．２重量％未満、より好ましくは０．１重量％未満の残留ラクチドモノマーをラクテート系ポリマー中に有する。
【００８１】
さらに別の態様では、１０００以下の分子量を有するオリゴマーの含有量が約２重量％以下であるラクテート系ポリマーである。
【実施例】
【００８２】
以下の実施例は、本発明の組成物を例示する。実施例は本発明を限定するものではなく、有用な徐放性薬物送達組成物の製造方法を教示するために提供される。
【００８３】
実施例１：ＮＭＰ中のＰＬＡポリマー溶液中のロイプロリドアセテート
米国特許第６，５６５，８７４号明細書の実施例６に開示されているものと同様の製剤を調製し、評価した。含有量が３．２重量％である残留ラクチドモノマーを有する重量平均分子量１４，０００（１００  ＤＬ  ２Ｅ、Ｅｖｏｎｉｋ）のポリ（ＤＬ−ラクチド）をＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）に溶解し、ポリマーの６０重量％ＮＭＰ溶液を得た。次いで、６１．８ｍｇのロイプロリドアセテート（純度９９．５％）を合わせ、ポリマー溶液６９０．３ｍｇと混合して、液体製剤を得た。製剤を３７℃で１時間保存し、次いでＨＰＬＣで分析した。
【００８４】
分析は、約１０〜２０ｍｇの製剤の画分を１．５ｍＬの遠心チューブに添加することによって行った。３ｍＬのＭｅＯＨと７ｍＬのＡＣＮとの混合物（溶液Ａ）３３３μＬを製剤のアリコートに加え、チューブをボルテックスしてポリマーを溶解させた。次いで、６６７μＬの安定性緩衝液（６ｍＬのトリエチルアミン（ＴＥＡ）および３ｍＬのリン酸対１Ｌの水、ｐＨ３．０）を加え、ついで溶液をＬａｂ−Ｌｉｎｅ  Ｔｉｔｅｒプレートシェーカー上で１０の速度設定で１０分間混合した。サンプルを、０．５ｍＬの溶液をＨＰＬＣバイアルに添加することによって分析し、約１ｍｇ／ｍＬのロイプロリド濃度が達成され、測定され得るようにした。ロイプロリド純度レベルは、勾配逆相ＵＰＬＣまたはＨＰＬＣシステムを用いて測定した。ロイプロリドのピーク面積をピークの総数のピーク面積と比較し、パーセンテージとして表した。
【００８５】
ＨＰＬＣ条件：
装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステム：バイナリポンプ、モデルＬＣ−１０ＡＤＶＰ、可変波長ＵＶ検出器、モデルＳＰＤ−Ｍ１０ＡＶＰ、オートサンプラー、モデルＳＩＬ−１０ＡＤＶＰ
カラム：ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｃ−１８  ４．６ｘ２５０ｍｍ，５μ，１２０Å
移動相：Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ
Ｂ：アセトニトリル中の０．０５％ＴＦＡ
Ｂ：濃度２４％（初期）→２４％（２分）→３０％（３５分）→９５％（３７分）→２４％（３８分）→再平衡（４０分）
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：４０℃
注入体積：１０μＬ
検出：２２０ｎｍ
実行時間：４０分
【００８６】
意外にも、３７℃で１時間の間にかなりの量の不純物が生成されたことが分かった。
【００８７】
図１に示すように、ロイプロリドの保持時間は約１５．０３分であるが、主要なロイプロリド関連不純物は、約１．４０、１．４６、１．５０、１．５２、および１．５５のロイプロリドピークに対する相対保持時間（ＲＲＴ）で現れる。ピーク面積で計算して、３７℃で１時間以内に約１０．８％超のロイプロリド関連不純物が生成された。このような薬物関連不純物のレベルは、ＦＤＡおよびＩＣＨガイドラインに概説されているように、資格閾値を十分に上回るであろう。このような短時間に亘ってこれらのタイプの製剤から生成されるロイプロリド関連不純物のかなりの量は、薬剤製品の品質を悪化させるであろう。
【００８８】
実施例２：異なる溶媒中でＰＬＡポリマーを製剤化したロイプロリドアセテート
製剤は、種々の溶媒中のＰＬＡ（３．２重量％の含有量の残留ラクチドモノマーを有する１００  ＤＬ  ２Ｅ、Ｅｖｏｎｉｋ）溶液（６０％ｗ／ｗ）中のロイプロリドアセテート（ＬＡＡｃｅ）を用いて調製し、ロイプロリド関連不純物の形成を試験した。試験した溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）であった。表１は、製剤の組成を示す。
【表１】
2020147595.tif 000002
【００８９】
製剤を混合し、ガラスバイアルに３７℃で保存した。サンプルを時間ゼロで採取し、ＨＰＬＣにより分析してロイプロリド純度を測定した。図２から図４は、製剤からのロイプロリドの初期クロマトグラムを示す。
【００９０】
クロマトグラムは、時間ゼロ（混合直後）に、ロイプロリドに対する相対保持時間（ＲＲＴ）が１．４６、１．４９、１．５２および１．５５である、いくつかのロイプロリド関連不純物が既に観察されていることを示す。３７℃でのインキュベーション後、製剤を再びロイプロリドについてＨＰＬＣで分析した。図５から図７は、それぞれＮＭＰ、ＤＭＳＯ、およびＤＣＭを含む製剤中、３７℃で１時間後のロイプロリドのクロマトグラムを示す。
【００９１】
約１．４０、１．４６、１．５０、１．５２および１．５５のロイプロリドピークに対してＲＲＴで観察されるロイプロリド関連不純物は、時間ゼロで観察されたものよりかなり多い。結果は、ロイプロリド関連不純物の形成が、ＤＣＭ製剤においてよりもＤＭＳＯおよびＮＭＰ製剤においてはるかに速いことを示している。ＤＣＭ製剤中のロイプロリド関連不純物の形成は、試験期間にわたって変化しなかった。これらの結果は、本出願で観察される不純物が米国特許第８，３４３，５１３号明細書に開示されたものと異なる理由を説明している。さらに、ＤＣＭは水混和性ではなく、注射のための薬学的に許容される溶媒でもない。表２は、ＨＰＬＣで測定した製剤中のロイプロリドの純度を示す。ロイプロリドの純度の低下は、ロイプロリド関連不純物の増加とよく相関する。
【表２】
2020147595.tif 000003
【００９２】
したがって、ロイプロリドが、ＮＭＰおよびＤＭＳＯのような薬学的に許容される水混和性溶媒の存在下にあるとき、かなりの不純物が発生する可能性がある。
【００９３】
実施例３：Ｄ，Ｌ−ラクチドモノマーとのアルギニンおよびセリンの反応
米国特許第８，３４３，５１３号明細書、図１６（第４３〜４４欄）は、ＤＣＭ溶液中のＲＧ５０３Ｈポリマーから製造されたミクロスフェア中のロイプロリドアセテートで生成される不純物の構造を示す。同定されたすべての不純物構造体は、ペプチドのアルギニン基と反応するポリマーを有する。本発明において、ペプチドのセリン基と反応するラクチドモノマーのコンジュゲートは、以前に観察されなかった、より重要な不純物が生成されたことを示している。ラクチドモノマーによるロイプロリドコンジュゲートの生成を試験するために、ＦＭＯＣ−ＡＲＧ−ＯＨまたはＦＭＯＣ−ＳＥＲ−ＯＨをＮＭＰに溶解した。この溶液に、Ｄ，Ｌ−ラクチドモノマーを添加した。溶液をボルテックスしてよく混合した。５μＬの溶液を０．５ｍＬのアセトニトリルおよび０．５ｍＬの安定緩衝液（０．６％ＴＥＡ／０．３％Ｈ３ＰＯ４水溶液、ｐＨ＝３．０）を含むＨＰＬＣバイアルに加えた。次に、サンプルをＨＰＬＣで分析した。残りの溶液をガラスバイアルに２５℃で保存した。特定の時点でサンプルを採取し、ＵＰＬＣで分析した。表３は、製剤組成物を示す。
【表３】
2020147595.tif 000004
【００９４】
３時間および２４時間でのＨＰＬＣクロマトグラムを各製剤について示す。図８は、３時間のインキュベーション後のＦＭＯＣ−ＳＥＲ−ＯＨ溶液のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【００９５】
図８は、ラクチドモノマーと共に３時間インキュベーションした後に生成される不純物はごくわずかであることを示す。主要なセリンピークは２２．５分の保持時間を有する。二重不純物ピークは２９．５分および３０．０分に現れ始めている。図９は、２５℃で１日後のクロマトグラムを示す。
【００９６】
図９は、２９．５および３０．０分でセリンとのｄ，ｌ−ラクチド反応から生じた不純物が存在することを示す。２つのピークはセリンと各モノマー（Ｄ−およびＬ−ラクチド）との反応に由来する。驚くべきことに、この反応は、米国特許第８，３４３，５１３号明細書で同定されていないかなりの量の不純物を生成する。図１０は、３時間後のＮＭＰ中のＦＭＯＣ−ＡＲＧ−ＯＨのクロマトグラムを示す。
【００９７】
アルギニンのピークは１６．８分である。２０．０分で不純物が見られるが、二重不純物ピークは見られない。図１１は、２５℃で１日後の同じサンプルのクロマトグラムを示す。
【００９８】
１日後、２５．５分での不純物を有する場合、２０．０分に見られる不純物が増加した。アルギニンとのセリン形態で見られる二重ピークはない。また、ＮＭＰのような薬学的に許容される水混和性溶媒中に存在する場合、全体的な不純物の生成は、ロイプロリドのセリンが製剤中のＤ，Ｌ−ラクチドモノマーとの反応性が高いことを示唆するセリンで見られるものよりも依然として小さい。
【００９９】
実施例４：ＮＭＰ中における異なる酸価のＰＬＡによるロイプロリド安定性
米国特許第８，３４３，５１３号明細書は、有機溶媒を用いた求核性化合物をクレームしており、ポリマーは追加の酸により安定化することができる。本発明は、より高い酸価を有するポリマーが、水混和性有機溶媒中において求核性化合物とポリマーの残留モノマーとの反応を依然として防止することができないことを示す。ポリマー特性を表４に示す。
【表４】
2020147595.tif 000005
【０１００】
ＰＬＡポリマー、ＰＬＡ１およびＰＬＡ２をＮＭＰに溶解して、それぞれ５７．５％および６０％のポリマー溶液を作製した。ロイプロリドアセテート（ＬＡＡｃｅ）（ＣＳ  Ｂｉｏ、＃ＧＦ１１２２）をポリマー溶液に混合することにより製剤を作製した。表５は、製剤組成を示す。
【表５】
2020147595.tif 000006
【０１０１】
溶液をよく混合し、３７℃で保存した。特定の時点で、溶液の純度をＵＰＬＣで分析し、ポリマー分子量をＧＰＣにより分析した。
【０１０２】
ＵＰＬＣ条件：
装置：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＵＰＬＣシステムバイナリポンプ、モデルＬＣ−３０ＡＤ、可変波長ＵＶ検出器、モデルＳＰＤ−Ｍ３０Ａ、オートサンプラ、モデルＳＩＬ−３０ＡＣ
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム、１３０Å、１．７ｕｍ、３ｍｍ、ｘ１５０ｍｍ
移動相：Ａ：安定性緩衝液（ｐＨを３．０に調整した１リットルの水に対して６ｍＬものトリエチルアミン（ＴＥＡ）および３ｍＬのリン酸）
Ｂ：アセトニトリル
Ｂ：濃度１５％（初期）→２４％（４０分）→２４．９％（４４分）→７０％（４６分）→７０％（４８．５分）→１５％（４９分）→再平衡（５６分）
流速：０．４ｍＬ／分
カラム温度：６０℃
注入体積：２μＬ
検出：２２０ｎｍ
実行時間：５６分
【０１０３】
表６は、特定の時点で製剤で見られるピークの相対保持時間（ＲＲＴ）を示す。
【表６】
2020147595.tif 000007
【０１０４】
ＲＲＴが１．２９および１．３１での全不純物またはラクチド−ロイプロリドコンジュゲートは経時的に増加する。驚くべきことに、全不純物またはラクチド−ロイプロリドコンジュゲートは、より高い酸価を有する製剤についてより速く増加する。
【０１０５】
ポリマーの分子量をＧＰＣにより分析した。表７は、初期の分子量のパーセンテージとしての経時的な分子量の変化を示す。
【表７】
2020147595.tif 000008
【０１０６】
米国特許第８，３４３，５１３号明細書とは対照的に、より高い酸価（ＰＬＡ２）を有する製剤中のポリマーは、より低い酸価を有するポリマーほど安定ではない。
【０１０７】
実施例５：異なる量のＤ，Ｌ−ラクチドモノマーを含むＰＬＧＡによる溶液中でのロイプロリド安定性
米国特許第８，３４３，５１３号明細書は、有機溶媒中の分散相中の求核性化合物をクレームし、少なくとも５の酸価を有するポリマーを安定化することができる。本発明は、より高い酸価が、ロイプロリドに起因する不純物およびラクチドコンジュゲートの形成を妨げないことを示す。異なる量の残留ラクチドモノマーを含有するＰＬＧＡポリマー、ＰＬＧＡ５０５０を使用して、製剤安定性の差を測定した。表８は、このポリマーの特性を示す。
【表８】
2020147595.tif 000009
【０１０８】
異なる量の残留Ｄ，Ｌ−ラクチドを含有するＰＬＧＡの５０％ポリマー溶液を、適切な量のＮＭＰ中にポリマーを溶解することによって調製した。
【０１０９】
ロイプロリドアセテート（ＣＳ  Ｂｉｏ、＃ＧＦ１１２２）をポリマー溶液に混合することにより製剤を作製した。表９に製剤組成を示す。
【表９】
2020147595.tif 000010
【０１１０】
溶液をよく混合し、３７℃で保存した。特定の時点で、溶液の純度をＵＰＬＣで分析し、ポリマー分子量をＧＰＣにより分析した。
【０１１１】
表１０は、特定の時点で製剤で見られるピークの相対保持時間（ＲＲＴ）を示す。
【表１０】
2020147595.tif 000011
【０１１２】
ラクチド−ロイプロリドコンジュゲートは、１．２９７および１．３１２のＲＲＴにおけるものである。繰り返しになるが、不純物は経時的に増加し、より多くのラクチドモノマーを含む製剤の方がより速く増加することが分かる。
【０１１３】
ポリマーの分子量をＧＰＣにより分析した。
【０１１４】
異なる時点での２つの製剤のＭＷに顕著な差はない。
【０１１５】
実施例６：ロイプロリドに起因するＬ−ラクチドモノマー不純物の生成
Ｄ，Ｌ−ラクチドモノマーとの反応から不純物が生成したかどうかを証明するために、Ｌ−ラクチドとロイプロリドメシレート（ＬＡＭＳ）をインキュベートして、形成された不純物が先に見られた二重ピークの代わりに単一のピークのみを示すかどうかを調べた。
【０１１６】
表１１は、この溶液の組成を示す。
【表１１】
2020147595.tif 000012
【０１１７】
図１２は、３７℃で３時間後の１０％Ｌ−ラクチドを含むＮＭＰ中のＬＡＭＳのクロマトグラムを示す。
【０１１８】
図１２は、先に見られた二重ピークは、今や単一ピークであることを示す。二重ピークは、ラクチドの両方の異性体が反応していることを意味する。図１２は、不純物が同じＲＲＴで見られるが、ラクチドの異性体の１つのみとインキュベートした場合には単一のピークのみであるので、それが不純物を生じるラクチドモノマーであることを確認する。
【０１１９】
実施例７：異なる濃度のＤ，Ｌ−ラクチドモノマーを伴うロイプロリド
【０１２０】
溶液は、ロイプロリドの安定性を試験するために、図１２に従って種々の量のＤ，Ｌ−ラクチドを含むＮＭＰ中にロイプロリドアセテート（ＬＡＡｃ）を含めて作製した。
【表１２】
2020147595.tif 000013
【０１２１】
溶液をよく混合し、３７℃で保存した。特定の時点で、少量の溶液をＨＰＬＣバイアルに加え、溶液の純度をＨＰＬＣで分析した。表１３は、ラクチドモノマーから生成された主要な不純物との経時的なこれらの製剤の純度を示す。
【表１３】
2020147595.tif 000014
【０１２２】
表１３は、ロイプロリドの割合が、ラクチド含有量が増加するにつれて減少することを示す。１．０８３および１．０８６の相対保持時間（ＲＲＴ）で見られる不純物もまた、ラクチド含有量の増加につれて増加する。３７℃で４時間の間に存在するラクチドモノマーを含まない試料中にコンジュゲートは形成されないことが観察される。
【０１２３】
実施例８：ラクチド系ポリマーの精製
適量のラクチド系ポリマーＰＬＡ１００ＤＬ２Ｅ（ＮＷ１４ｋ、残留モノマー３．２％）を所定量のアセトンに溶解し、所望の濃度のラクチド系ポリマー溶液を得た。ポリマーの濃度は、５重量％〜５０重量％の範囲であり得る。この実施例では、約２５ｇのポリマーを１００ｍＬのアセトンに溶解して、ビーカーのような適切な容器中に透明な溶液を形成した。この溶液に攪拌しながら約１００ｍＬの水を加えてポリマーを沈殿させた（方法１）、または約４０ｍＬの水を加えてポリマーを沈殿させた（方法２）。上清をデカントした。この手順を４回まで繰り返した。最後のデカンテーションの後、沈殿したポリマーを凍結させ、真空下で約４８時間乾燥させた。得られたポリマーをＧＰＣにより特性決定し、その結果を表１４に示す。
【表１４】
2020147595.tif 000015
【０１２４】
より多くの水を加えることにより、より小さいオリゴマーがより多く沈殿し、ポリマー全体の分子量に変化は生じない。少量の水を加えることにより、より多くのより小さいオリゴマーが除去され、ポリマーの分子量が増加し、多分散性が減少する。
【０１２５】
実施例９：ポリマー精製のロイプロリド安定性の影響
実施例８からのポリマーを使用してポリマー溶液を作製し、ロイプロリドと混合して、精製ポリマーの安定性を未精製ポリマーと比較するための製剤を作製した。８％のロイプロリドアセテートを精製ポリマーおよび未精製ポリマーを用いてＮＭＰ中の６０％のポリマー溶液に混合した。製剤を３７℃で保存し、ＨＰＬＣにより分析してロイプロリド安定性を測定した。表１５は、各製剤の各時点でのロイプロリドの安定性を示す。
【表１５】
2020147595.tif 000016
【０１２６】
表１５は、ポリマーを精製することにより、ロイプロリドの安定性が高まることを示す。未精製ポリマーを伴うロイプロリドは、３７℃で１時間後にすでに１０％を超えて分解されているが、精製ポリマー製剤中のロイプロリドは１時間後でも依然として９９％に近い。２４時間までに、２サイクル対４サイクルで精製されたポリマーを有する製剤の間にはいくらかの違いがあり、分解速度を増加させるいくつかのモノマーが依然として存在することが示されている。従って、より多くの精製工程により、より多くのラクチドモノマーが除去され、ロイプロリド−ラクチドコンジュゲートの形成が減少し、製剤の安定性が増加する。製剤の安定性の点で、精製方法の違いは最小限である。
【０１２７】
実施例１０：精製ＰＬＧＡポリマーによるＬＡＭＳ安定性
未精製ポリマーを、高度に精製されたポリマーと比較した。精製方法は、ポリマーをアセトンに溶解し、次いで実施例８の方法２のようにアセトン／ポリマー溶液に水を加えて沈殿させることを含んでいた。ＰＬＧＡポリマー８５１５ＤＬＧ２ＣＥ−Ｐについて、このプロセスを３回まで繰り返して、ラクチドモノマー含量を大きく減少させた。表１６は、試験したポリマーのモノマー含有量を示す。
【表１６】
2020147595.tif 000017
【０１２８】
表１６は、ＰＬＧＡ  ８５１５ＤＬＧ２ＣＥ−Ｐのその後の精製のたびにモノマー含量が減少することを示す。製剤は、表１７に従ってロイプロリドメシレート（ＬＡＭＳ）を含めて作製した。
【表１７】
2020147595.tif 000018
【０１２９】
製剤をガラスバイアルに３７℃で保存した。特定の時点で、ロイプロリド安定性を測定し、Ｄ，Ｌ−ラクチドモノマーから生成した不純物の合計を、表１８に見られるようにＨＰＬＣクロマトグラムからの全ＡＵＣのパーセンテージとして表にした。
【表１８】
2020147595.tif 000019
【０１３０】
表１８は、モノマーに付随する不純物ピークが、初期モノマー濃度に直接相関することを示す。精製によってモノマー含有量を減少させると、製剤中の不純物を著しく減少させることができる。複数の精製工程により、モノマー含有量をさらに低下させることができ、その結果、製剤の安定性を高めることができる。ラクチドロイプロリドコンジュゲートの形成を著しく減少させるために、少なくとも２つの精製工程が、残留モノマー含量を低下させるために好ましい。
【０１３１】
実施例１１：異なる含有量のラクチドモノマーを含むＰＬＡ製剤中のロイプロリドの不純物形成
ロイプロリドの反応性を試験するために、種々の量のｄ，ｌ−ラクチドを含むＰＬＡと共にＬＡＡｃｅを用いて製剤を調製した。表１９は、製剤の組成を示す。
【表１９】
2020147595.tif 000020
【０１３２】
製剤をガラスバイアルに３７℃で保存した。サンプルを時間ゼロで採取し、ＨＰＬＣで分析してロイプロリド純度を測定した。図１３から図１８は、初期における製剤からのロイプロリドのクロマトグラムを示す。
【０１３３】
１．４９および１．５３のＲＲＴでの不純物は、混合直後でさえ、製剤中のｄ，ｌ−ラクチド含有量が増加するにつれて実質的に増加するようである。サンプルを１時間、４時間および２４時間後に再び分析した。図１９から図２４は、２４時間後のクロマトグラムを示す。
【０１３４】
表２０は、ＨＰＬＣのピーク面積に関して異なる時点での製剤のロイプロリド純度を比較する。
【表２０】
2020147595.tif 000021
【０１３５】
表２１は、ロイプロリドのセリン部位とのｄ，ｌ−ラクチドの反応から生成された２つの主要なロイプロリドラクチドコンジュゲートの合計を示す。
【表２１】
2020147595.tif 000022
【０１３６】
これらの表は、ラクチドから生成した不純物が経時的に増加し、より高いモノマー含有量でより速く増加することを示し、製剤中のモノマー含有量が低いポリマーの必要性を示している。
【０１３７】
実施例１２：製剤安定性に対するポリマー精製効果
Ｄｕｒｅｃｔからの約２５ｇの８５１５ＰＬＧＡポリマー（ＭＷ１７ｋ、残留ラクチド約０．１５重量％）をガラスビーカー中の約１００ｍＬのアセトンに混合しながら溶解した。二回蒸留水を一度に１ｍＬずつ溶液に加えた。全部で４５ｍＬの水を加え、ポリマーを沈殿させ、ビーカーの底に層を形成した。この溶液をデカントし、次いで約１００ｍＬのアセトンに再溶解した。２回蒸留水を再度添加し、一度に１ｍＬを合計４５ｍＬまで加えた。沈殿物をデカントし、遠心分離した。沈殿物を水で２回洗浄し、次いで凍結し、凍結乾燥した。精製されたポリマーの分子量は１７．９ｋから１８．３ｋにわずかに増加した。残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．１５重量％から０．０３重量％未満に減少すると予想された。
【０１３８】
精製および未精製ポリマーをＮＭＰと混合して、５７．５％ポリマーのＮＭＰ溶液を作製した。ロイプロリドメシレート（ＬＡＭＳ）を各ポリマー溶液に添加して、５７．５％のポリマー溶液を含む８％のＬＡＭＳ製剤を作製した。製剤を、Ｗｅｓｔ製の４０２３／５０グレープランジャーを備えるＳｃｈｏｔｔ製の１ｍＬの長いＣＯＣシリンジに充填した。次いで、製剤を含んだ注射器を、２７ｋＧｙの線量でのビーム照射によって滅菌した。
【０１３９】
照射後、製剤を２５℃で保存し、製剤の安定性を測定した。表２２は、製剤中の不純物、ならびにセリン部位（Ｌｅｕｐ−Ｓｅｒｉｎｅ−Ｌａｃ）でのロイプロリドラクチドコンジュゲートの生成を示す。
【表２２】
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【０１４０】
表２２は、精製されていないポリマーでのコンジュゲートの著しい生成が、製剤中の精製されたポリマーを用いたものよりも約８倍多いことを示す。
【０１４１】
分子量も測定され、表２３に見られる。
【表２３】
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【０１４２】
２つの製剤間の分子量には経時的な差がほとんど見られない。また、２つの製剤間の多分散指数にも差はない。
【０１４３】
３７℃でのＰＢＳ中でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出も、２つの製剤について測定され、図２５に示されている。
【０１４４】
図２５は、８５１５ＰＬＧＡ−Ｐを含む製剤が、８５１５ＰＬＧＡを含む製剤よりも数週間長く持続することを示す。両方の製剤中のポリマーの分子量および多分散性が基本的に同じであるので、これは予想外である。放出の差は、おそらくポリマー中の小さなオリゴマーの除去によるものであろう。小さなオリゴマーを除去することにより、この例ではポリマーの分解が遅くなる。これは、驚くべきことであり、先行技術の教示、すなわち、「オリゴマー酸がポリマー−薬剤溶液に組み込まれる場合、ポリマーの分子量低下をかなり低減または排除することができる」［米国特許第８，３４３，５１３号明細書の第３欄、４４−４８行目を参照］と反対である。
【０１４５】
ＧｎＲＨアゴニスト類似体などの特定の治療剤では、高い初期放出が有利であり得る。ＧｎＲＨアゴニストは、ＧｎＲＨ受容体の正常な拍動刺激を中断し、したがって脱感作し、ゴナドトロピン黄体形成ホルモン（ＬＨ）および卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の分泌を間接的にダウンレギュレートし、性腺機能低下症を引き起こし、その結果、両方の性別においてエストラジオールおよびテストステロンレベルが劇的に低下する。初期治療は、テストステロンレベルを抑制するために、より高い用量のＧｎＲＨアゴニストを必要とする。血清去勢レベル（＜０．５ｎｇ／ｍＬ）未満にテストステロンが抑制されると、去勢レベルを維持するのに非常に低用量のＧｎＲＨアゴニストしか必要とされない。したがって、ＧｎＲＨアゴニストのより高い初期バースト放出および延長された送達期間の両方が有益である。
【０１４６】
（付記）
（付記１）
徐放性薬物送達のための注射用組成物の製造方法であって、
重量平均分子量が５，０００〜５０，０００ダルトンであり、酸価が３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満であり、残留ラクチドモノマーの含有量が約０．３重量％未満であるラクテート系ポリマーを、
薬学的に許容される有機溶媒、および、
分子構造中にラクチドモノマーと反応してコンジュゲートを形成することができるアミノ酸セリンを含有する生物活性物質またはその塩と、
組み合わせることを含み、
前記組成物を製造する際に酸添加剤を添加しない、
製造方法。
【０１４７】
（付記２）
前記ラクテート系ポリマー中のラクチドは、Ｄ−ラクチド、Ｄ，Ｌ−ラクチド、Ｌ，Ｄ−ラクチド、Ｌ−ラクチド、（Ｒ，Ｒ）−ラクチド、（Ｓ，Ｓ）−ラクチドおよびメソ−ラクチドまたはこれらの任意の組み合わせのいずれかである、付記１に記載の方法。
【０１４８】
（付記３）
前記ラクテート系ポリマーの残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．２重量％未満である、付記１に記載の方法。
【０１４９】
（付記４）
前記ラクテート系ポリマーの残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．１重量％未満である、付記１に記載の方法。
【０１５０】
（付記５）
前記ラクテート系ポリマーの酸価は、２ｍｇＫＯＨ／ｇ未満である、付記１に記載の方法。
【０１５１】
（付記６）
前記ラクテート系ポリマーは、ポリ（乳酸）またはポリラクチド（ＰＬＡ）である、付記１に記載の方法。
【０１５２】
（付記７）
前記ラクテート系ポリマーは、ラクチド／グリコリドの比が５０／５０〜１００／０であるポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）である、付記１に記載の方法。
【０１５３】
（付記８）
前記生物活性物質は、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ＬＨＲＨ類似体、アゴニストおよびアンタゴニストまたはその塩からなる群より選択される、付記１に記載の方法。
【０１５４】
（付記９）
前記生物活性物質は、ロイプロリドまたはその塩である、付記１に記載の方法。
【０１５５】
（付記１０）
前記薬学的に許容される有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、グリコフロール、メトキシポリエチレングリコール３５０、ポリエチレングリコールエステル、ベンジルベンゾエート、ベンジルアルコール、エチルベンゾエート、クエン酸のエステル、トリアセチン、ジアセチン、トリエチルシトレート、アセチルトリエチルシトレート、およびそれらの混合物の群から選択される、付記１に記載の方法。
【０１５６】
（付記１１）
前記薬学的に許容される有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドンである、付記１に記載の方法。
【０１５７】
（付記１２）
徐放性薬物送達のための注射用組成物であって、
ａ．重量平均分子量が５，０００〜５０，０００ダルトンであり、酸価が３ｍｇＫＯＨ／ｇ未満であり、残留ラクチドモノマーの含有量が約０．３重量％未満であるラクテート系ポリマー、
ｂ．薬学的に許容される有機溶媒、および、
ｃ．分子構造中にラクチドモノマーと反応してコンジュゲートを形成することができるアミノ酸セリンを含有する生物活性物質またはその塩、
を含み、
前記組成物を製造する際に酸添加剤を添加せず、前記組成物は前記コンジュゲートの形成を減少させる、
注射用組成物。
【０１５８】
（付記１３）
前記ラクテート系ポリマー中のラクチドは、Ｄ−ラクチド、Ｄ，Ｌ−ラクチド、Ｌ，Ｄ−ラクチド、Ｌ−ラクチド、（Ｒ，Ｒ）−ラクチド、（Ｓ，Ｓ）−ラクチドおよびメソ−ラクチドまたはこれらの任意の組み合わせである、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１５９】
（付記１４）
前記ラクテート系ポリマーの酸価は、２ｍｇＫＯＨ／ｇ未満である、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６０】
（付記１５）
前記ラクテート系ポリマーの当該ラクテート系ポリマー中の残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．２重量％未満である、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６１】
（付記１６）
前記ラクテート系ポリマーの当該ラクテート系ポリマー中の残留ラクチドモノマーの含有量は、約０．１重量％未満である、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６２】
（付記１７）
前記ラクテート系ポリマーは、ポリ（乳酸）またはポリ（ラクチド）（ＰＬＡ）である、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６３】
（付記１８）
前記ラクテート系ポリマーは、ラクチド／グリコリドの比が５０／５０〜１００／０であるポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）である、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６４】
（付記１９）
前記生物活性物質は、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ＬＨＲＨ類似体、アゴニストおよびアンタゴニストまたはその塩からなる群より選択される、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６５】
（付記２０）
前記生物活性物質は、ロイプロリドまたはその塩である、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６６】
（付記２１）
前記薬学的に許容される有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、グリコフロール、メトキシポリエチレングリコール３５０、ポリエチレングリコールエステル、ベンジルベンゾエート、ベンジルアルコール、エチルベンゾエート、クエン酸のエステル、トリアセチン、ジアセチン、トリエチルシトレート、アセチルトリエチルシトレート、およびそれらの混合物の群から選択される、付記１３に記載の注射用組成物。
【０１６７】
（付記２２）
前記薬学的に許容される有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドンである、付記１３に記載の注射用組成物。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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