(57)【要約】【課題】  フタル酸エステル類を簡易に分析する方法を提供すること【解決手段】  前記課題は、以下の（１）〜（３）の工程を含む、被験物質中のフタル酸エステル類の測定方法によって解決される：（１）被験物質を準備する工程、（２）前記被験物質中のフタル酸エステル類を有機合成的な手法で色素に変換する工程、および（３）得られた色素を検知する工程。【選択図】  図４
2020041927.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（１）〜（３）の工程を含む、被験物質中のフタル酸エステル類の測定方法：
（１）被験物質を準備する工程、
（２）前記被験物質中のフタル酸エステル類を有機合成的な手法で色素に変換する工程、および
（３）得られた色素を検知する工程。
【請求項２】
前記フタル酸エステル類が下記の一般式（Ｉ）で表される、請求項１に記載の測定方法
【化１】
2020041927.tif 000028
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルコキシ基、炭素数５〜２０のアリール基、又はベンジル基を表す）。
【請求項３】
前記工程（１）と（２）の間に、前記被験物質中のフタル酸エステル類を溶媒で抽出する工程をさらに含む、請求項１または２に記載の測定方法。
【請求項４】
前記抽出工程における溶媒が、炭素数１〜４の低級アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、ｎ−ヘキサンおよびクロロホルムからなる群から選択される、請求項３に記載の測定方法。
【請求項５】
前記工程（２）におけるフタル酸エステル類から色素への変換が、以下の（２−１）および（２−２）の工程を含む工程によって行われる、請求項１〜４のいずれか１つに記載の測定方法：
（２−１）被験物質中のフタル酸エステル類を加水分解してフタル酸を得、当該フタル酸の分子内脱水により無水フタル酸を得る工程、および
（２−２）得られた無水フタル酸を、ヒドロキシ芳香族化合物と、任意選択的に触媒の存在下において、反応させることにより、色素に変換する工程。
【請求項６】
前記ヒドロキシ芳香族化合物が、
一般式（ＩＩ）
【化２】
2020041927.tif 000029
［式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表されるフェノール類、
一般式（ＩＩ’）
【化３】
2020041927.tif 000030
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される１−ナフトール類、および
一般式（ＩＩ’’）
【化４】
2020041927.tif 000031
［式中、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される２−ナフトール類、
からなる群から選択される、請求項５に記載の測定方法。
【請求項７】
前記工程（２−２）における反応が、酸性条件下で行われる、請求項５または６に記載の測定方法。
【請求項８】
前記フェノール類が以下の式（ＩＩＩ）〜（Ｖ）からなる群から選択される、請求項６または７に記載の測定方法。
【化５】
2020041927.tif 000032
【請求項９】
前記色素が、可視領域に吸収帯または発光帯を有する発色団を含むフェノール誘導体である、請求項１〜８のいずれか１つに記載の測定方法。
【請求項１０】
前記フェノール誘導体が、以下の式（ＶＩ）〜（ＶＩＩＩ）からなる群から選択される、請求項９に記載の測定方法。
【化６】
2020041927.tif 000033
【請求項１１】
電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック中、塗料コーティング中もしくは接着剤などの高分子材料中にまたは環境中に存在するフタル酸エステル類を測定するための、請求項１〜１０のいずれか１つに記載の測定方法。
【請求項１２】
以下：
−  フタル酸エステル類をフタル酸に加水分解するための加水分解用試薬、および
−  無水フタル酸と反応させて色素を得るための一般式（ＩＩ）：
【化７】
2020041927.tif 000034
［式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表されるフェノール類、一般式（ＩＩ’）：
【化８】
2020041927.tif 000035
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される１−ナフトール類、および一般式（ＩＩ’’）：
【化９】
2020041927.tif 000036
［式中、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される２−ナフトール類からなる群から選択されるヒドロキシ芳香族化合物、および、任意選択的に前記反応のための触媒、
を含む、フタル酸エステル測定キット。
【請求項１３】
前記加水分解用試薬が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩酸、硝酸、硫酸およびこれらのうちの２種以上の組み合わせからなる群から選択され、前記フェノール類が以下の式（ＩＩＩ）〜（Ｖ）からなる群から選択され、前記触媒が硫酸および塩化亜鉛からなる群から選択される、請求項１２に記載のキット。
【化１０】
2020041927.tif 000037
【請求項１４】
−  被験物質中のフタル酸エステルを抽出するための溶媒、
をさらに含む、請求項１２または１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記溶媒が、炭素数１〜４の低級アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、ｎ−ヘキサンおよびクロロホルムからなる群から選択される、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
−  フタル酸を分子内脱水により無水フタル酸にするための分子内脱水用試薬、
をさらに含み、当該分子内脱水用試薬が濃硫酸である、請求項１２〜１５のいずれか１つに記載のキット。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれか１つに記載の方法を用いてフタル酸エステルを測定するための、請求項１２〜１６のいずれか１つに記載のキット。
【請求項１８】
電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック中、塗料コーティング中もしくは接着剤などの高分子材料中にまたは環境中に存在するフタル酸エステルを測定するための、請求項１２〜１７のいずれか１つに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体中に含まれるフタル酸エステル類の検出方法、ならびに検体中に含まれるフタル酸エステル類の検出キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、フタル酸エステル類は、ヒトへの有害性への懸念から多くの国で様々な規制を受けており、フタル酸エステル類を検出・測定できる方法に対するニーズが存在している。サンプル中のフタル酸エステル類を検出する方法として種々の方法が提案されている。例えば、非特許文献１には、ソックスレー抽出及び熱分解抽出したフタル酸エステル類をガスクロマトマトグラフィーと質量分析機を使用して検出する方法が記載されている。しかし、これらの方法は、高価で大型の装置が求められる。そのため、オンサイト分析には適していない上、高いランニングコストも求められる。非特許文献２には、エステル結合をヒドロキサム酸鉄（ＩＩＩ）法と呼ばれる呈色反応を用いて検出する方法が報告されている。大型の装置も必要としない方法であるが、この呈色方法ではフタル酸エステル類だけでなく全てのエステルを呈色してしまう。そのため、母体がポリエステル系プラスチックである場合、判別が困難である欠点がある。また、特許文献１には、フタル酸エステルを加水分解し、精製し、精製後の上層水溶液を採取して、そこに塩酸溶液、ＰＢＳ溶液、硝酸銅溶液、二酸化炭素溶液を順次加え、蛍光を発するヒドロキシフタル酸塩に転化し、反応後に二酸化マンガンおよび強塩基溶液を添加して放置するかまたは遠心分離を行い、上澄み水溶液を被験液とし、最後に蛍光法を用いて被験液を試験する方法が記載されている。この方法では、前記ヒドロキシフタル酸塩はリガンドとして使用されるものであり、これがＣｕやＺｎと錯体を形成することによって初めて蛍光が得られ、検出・測定が可能になると考えられる。このような方法では、他の妨害金属が存在する場合および／またはより強い他のリガンド（例えばＥＤＴＡ）が存在する場合、蛍光性が低減してしまうおそれがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】ＣＮ１０５８６６０８９Ａ
【特許文献２】ＥＰ０４６８８２１Ａ１
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１３，Ｖｏｌｕｍｅ  ６８，Ｉｓｓｕｅ１１，ｐｐ９５９−９６０
【非特許文献２】水溶液中の呈色反応によるエステルの検出  −ヒドロキサム酸鉄（ＩＩＩ）法における陽イオン界面活性剤の活用−  化学と教育  巻：６０  号：３  ページ：１２４−１２７
【非特許文献３】Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ  Ａ．  Ｍａｌａｐｉｔ，“ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ  ＯＦ  ＦＬＵＯＲＥＳＣＥＩＮ，  ａ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｄｙｅ”，［ｏｎｌｉｎｅ］，インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｃｈｉｍｉｑｕｅ．ｆｉｌｅｓ．ｗｏｒｄｐｒｅｓｓ．ｃｏｍ／２０１０／１１／ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−ｏｆ−ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ．ｐｄｆ＞
【非特許文献４】Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  （ＣＥＪ），  Ｖｏｌ．  １３，  Ｎｏ．  １  ／Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  １３−１１／Ｒｅｃｅｉｖｅｄ  Ｊｕｌｙ  ２９，  ２００９（ｈｔｔｐ：／／ｃｈｅｍ．ｓｃｉ．ｕｔｓｕｎｏｍｉｙａ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ｃｅｊｒｎｌＥ．ｈｔｍｌ）
【非特許文献５】無水フタル酸と芳香族化合物のフリーデル・クラフツ反応による縮合成物に関する研究（第１０報）  α‐ナフトールとの縮合生成物の異性体について，有機合成化学協会誌  １９５４年１２巻１１号  ｐ．４６４−４６５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、簡易にフタル酸エステル類を検出可能な色素に変換する事で評価する方法またはそのためのキットを提供することにある。
【０００６】
本発明のさらなる目的は、高価で大型の装置を使用することなく、低コストでフタル酸エステル類を検出できる方法またはキットを提供することである。
【０００７】
本発明の別の目的は、フタル酸エステル類のみを特異的に検出することができる方法またはキットを提供することである。
【０００８】
本発明の他の目的は、以下の記載から明らかとなろう。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、フタル酸エステル類を簡易に分析する方法として、フタル酸エステル自体を色素に変換する方法が最適であるとの知見を得て本発明をなすに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下に関する
１．以下の（１）〜（３）の工程を含む、被験物質中のフタル酸エステル類の測定方法：
（１）被験物質を準備する工程、
（２）前記被験物質中のフタル酸エステル類を有機合成的な手法で色素に変換する工程、および
（３）得られた色素を検知する工程。
２．前記フタル酸エステル類が下記の一般式（Ｉ）で表される、上記１に記載の測定方法
【００１１】
【化１】
2020041927.tif 000003
【００１２】
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルコキシ基、炭素数５〜２０のアリール基、又はベンジル基を表す）。
３．前記工程（１）と（２）の間に、前記被験物質中のフタル酸エステル類を溶媒で抽出する工程をさらに含む、上記１または２に記載の測定方法。
４．前記抽出工程における溶媒が、炭素数１〜４の低級アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、ｎ−ヘキサンおよびクロロホルムからなる群から選択される、上記３に記載の測定方法。
５．前記工程（２）におけるフタル酸エステル類から色素への変換が、以下の（２−１）および（２−２）の工程を含む工程によって行われる、上記１〜４のいずれか１つに記載の測定方法：
（２−１）被験物質中のフタル酸エステル類を加水分解してフタル酸を得、当該フタル酸の分子内脱水により無水フタル酸を得る工程、および
（２−２）得られた無水フタル酸を、ヒドロキシ芳香族化合物と、任意選択的に触媒の存在下において、反応させることにより、色素に変換する工程。
６．前記ヒドロキシ芳香族化合物が、
一般式（ＩＩ）
【００１３】
【化２】
2020041927.tif 000004
【００１４】
［式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表されるフェノール類、
一般式（ＩＩ’）
【００１５】
【化３】
2020041927.tif 000005
【００１６】
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される１−ナフトール類、および
一般式（ＩＩ’’）
【００１７】
【化４】
2020041927.tif 000006
【００１８】
［式中、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される２−ナフトール類、
からなる群から選択される、上記５に記載の測定方法。
７．前記工程（２−２）における反応が、酸性条件下で行われる、上記５または６に記載の測定方法。
８．前記フェノール類が以下の式（ＩＩＩ）〜（Ｖ）からなる群から選択される、上記６または７に記載の測定方法。
【００１９】
【化５】
2020041927.tif 000007
【００２０】
９．前記色素が、可視領域に吸収帯または発光帯を有する発色団を含むフェノール誘導体である、上記１〜８のいずれか１つに記載の測定方法。
１０．前記フェノール誘導体が、以下の式（ＶＩ）〜（ＶＩＩＩ）からなる群から選択される、上記９に記載の測定方法。
【００２１】
【化６】
2020041927.tif 000008
【００２２】
１１．電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック中、塗料コーティング中もしくは接着剤などの高分子材料中にまたは環境中に存在するフタル酸エステル類を測定するための、上記１〜１０のいずれか１つに記載の測定方法。
１２．以下：
−  フタル酸エステル類をフタル酸に加水分解するための加水分解用試薬、および
−  無水フタル酸と反応させて色素を得るための一般式（ＩＩ）：
【００２３】
【化７】
2020041927.tif 000009
【００２４】
［式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表されるフェノール類、一般式（ＩＩ’）：
【００２５】
【化８】
2020041927.tif 000010
【００２６】
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される１−ナフトール類、および一般式（ＩＩ’’）：
【００２７】
【化９】
2020041927.tif 000011
【００２８】
［式中、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される２−ナフトール類からなる群から選択されるヒドロキシ芳香族化合物、および、任意選択的に前記反応のための触媒、
を含む、フタル酸エステル測定キット。
１３．前記加水分解用試薬が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩酸、硝酸、硫酸およびこれらのうちの２種以上の組み合わせからなる群から選択され、前記フェノール類が以下の式（ＩＩＩ）〜（Ｖ）からなる群から選択され、前記触媒が硫酸および塩化亜鉛からなる群から選択される、上記１２に記載のキット。
【００２９】
【化１０】
2020041927.tif 000012
【００３０】
１４．−  被験物質中のフタル酸エステルを抽出するための溶媒、
をさらに含む、上記１２または１３に記載のキット。
１５．前記溶媒が、炭素数１〜４の低級アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、ｎ−ヘキサンおよびクロロホルムからなる群から選択される、上記１４に記載のキット。
１６．−  フタル酸を分子内脱水により無水フタル酸にするための分子内脱水用試薬、
をさらに含み、当該分子内脱水用試薬が濃硫酸である、上記１２〜１５のいずれか１つに記載のキット。
１７．上記１〜１１のいずれか１つに記載の方法を用いてフタル酸エステルを測定するための、上記１２〜１６のいずれか１つに記載のキット。
１８．電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック中、塗料コーティング中もしくは接着剤などの高分子材料中にまたは環境中に存在するフタル酸エステルを測定するための、上記１２〜１７のいずれか１つに記載のキット。
【発明の効果】
【００３１】
上述のような本発明の方法またはキットを用いると、フタル酸エステルの検出が、溶媒で抽出したフタル酸エステル類の溶液に、複数の試薬を加え加熱し、フェノール類化合物を加える操作により、簡便かつ効率的に行える。
【００３２】
本発明によれば、抽出した溶液におけるフタル酸エステルの存在を、高価で大型の装置を使用せずに、目視で簡便に検出することができる。したがって、電子電気機器などの管理や、環境（ヘルスケアを含む）に関わる全ての分野における、フタル酸エステルのモニタリングのための核心的な技術として極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、実施例１において、（Ａ）無水フタル酸からフルオレセインを合成した際に得られた吸収スペクトル、および（Ｂ）無水フタル酸とレゾシノールを酸性条件またはアルカリ条件で反応させた結果を示す。
【図２】図２は、各種有機溶媒を用いた場合の色素の合成結果を示す。
【図３】図３は、様々な量のＤＥＨＰ（エタノール中）をフルオレセインに変換し測定した結果を示す。
【図４】図４は、本発明の実施形態の測定を示すフロー図（Ａ）とフタル酸エステルから色素（フルオレセイン）が生成されるまでの反応工程図（Ｂ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
上記のように、本発明の方法またはキットを使用することにより、１つまたは複数のフタル酸エステル類を検出することができる。なお、本明細書では、被験物質（サンプル／検体）中に含まれるフタル酸エステル類の存在の有無および／または当該エステル類の量を確認および／または評価することを表す際に、「検出」、「分析」、「測定」および「検知」といった用語を用いるが、これらは互換的に使用することができる。  
【００３５】
本明細書において、「フタル酸エステル類」とは、フタル酸とアルコールとのエステルの総称であり、モノエステルおよびジエステルが含まれる。フタル酸エステル類の例としては、フタル酸ジブチル（ＤＢＰ）、フタル酸ブチルベンジル（ＢＢＰ）、フタル酸ジ−２−エチルヘキシル（ＤＥＨＰ）、フタル酸ジイソノニル（ＤＩＮＰ）、フタル酸ジイソデシル（ＤＩＤＰ）、フタル酸ジノルマルオクチル（ＤＮＯＰ）、ジメチルフタレート（ＤＭＰ）、ジエチルフタレート（ＤＥＰ）、フタル酸ジイソブチル（ＤＩＢＰ）等が挙げられる。また、前記フタル酸エステル類は、オルト−フタル酸部分とアルコール部分からなるエステル構造を基本骨格として有しているエステルであればよく、例えばトリメリット酸エステルおよびピロメリット酸エステルも含まれる。本発明の１つの実施態様において、前記フタル酸エステル類は、フタル酸エステル（オルト体）、トリメリット酸エステルおよびピロメリット酸エステルからなる群から選択される。
【００３６】
本発明では、前記フタル酸エステル類のオルト位の部分が、有機合成的な手法による色素への変換のための反応に大きく寄与しており、当該オルト位に関する選択性が非常に高いものであることが見出された。従って、本発明の方法またはキットを用いると、フタル酸エステルやトリメリット酸エステルおよびピロメリット酸エステルのようなフタル酸エステル類を包括的に検出できる一方で、これらのフタル酸エステル類を非常に高い特異性で検出することもできる。例えばＰＥＴ製品の分析の場合、分析系中にＰＥＴ由来のテレフタル酸モノマーが生じてしまう可能性があるが、本発明では、このようなテレフタル酸モノマーから区別して、前記フタル酸エステル類だけを特異的に検出することができる。
【００３７】
本発明では、上記のようなフタル酸エステル類を幅広く測定することができるが、本発明の１つの好ましい実施態様において、測定対象は、フタル酸エステル、すなわちフタル酸（オルト−フタル酸）とアルコールとの脱水反応から得ることができるエステルである。フタル酸エステルは、モノエステルまたはジエステルであることができる。
【００３８】
本発明の１つの実施態様において、上記フタル酸エステル類は、下記の一般式（Ｉ）で表されるフタル酸エステルである：
【００３９】
【化１１】
2020041927.tif 000013
【００４０】
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数１〜３０のアルコキシ基、炭素数５〜２０のアリール基又はベンジル基を表す）。
【００４１】
前記一般式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ２は同一であっても、異なっていてもよい。Ｒ１およびＲ２は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０、好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１５の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数１〜３０、好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１５のアルコキシ基、炭素数５〜２０、炭素数６〜１５、より好ましくは炭素数６〜１０のアリール基、またはベンジル基を表す。好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、炭素数１〜２０の直鎖もしくは分岐のアルキル基、またはベンジル基を表す。好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、同時にＨではない。
【００４２】
本発明の１つの好ましい実施態様において、一般式（Ｉ）におけるＲ１およびＲ２は、互いに独立にそれぞれ、炭素数１〜１５、好ましくは炭素数４〜１０の直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、より好ましくは、２−エチルヘキシル、イソノニル、ブチル、イソブチル、イソデシル、ｎ−オクチル、エチルおよびメチルからなる群から選択される。本発明のさらなる実施態様において、一般式（Ｉ）におけるＲ１およびＲ２は同一であり、Ｒ１およびＲ２はいずれも、炭素数１〜１５、好ましくは炭素数４〜１０の直鎖もしくは分岐のアルキル基であり、より好ましくは、２−エチルヘキシル、イソノニル、ブチル、イソブチル、イソデシル、ｎ−オクチル、エチルおよびメチルからなる群から選択される。
【００４３】
本発明の別の好ましい実施態様において、一般式（Ｉ）におけるＲ１およびＲ２は異なっており、Ｒ１は、炭素数１〜１５、好ましくは炭素数４〜１０の直鎖もしくは分岐のアルキル基、例えばブチルを表し、Ｒ２はベンジル基を表す。
【００４４】
上記のようなフタル酸エステルの例としては、フタル酸ジブチル（ＤＢＰ）、フタル酸ブチルベンジル（ＢＢＰ）、フタル酸ジ−２−エチルヘキシル（ＤＥＨＰ）、フタル酸ジイソノニル（ＤＩＮＰ）、フタル酸ジイソデシル（ＤＩＤＰ）、フタル酸ジノルマルオクチル（ＤＮＯＰ）、ジメチルフタレート（ＤＭＰ）、ジエチルフタレート（ＤＥＰ），フタル酸ジイソブチル（ＤＩＢＰ）等が挙げられる。
【００４５】
本発明の１つの実施態様において、本発明は、以下の（１）〜（３）の工程を含む、被験物質中のフタル酸エステル類の測定方法に関する：
（１）被験物質を準備する工程、
（２）前記被験物質中のフタル酸エステル類を有機合成的な手法で色素に変換する工程、および
（３）得られた色素を検知する工程。
【００４６】
前記の（１）の工程において、被験物質を準備する。被験物質（サンプル／検体）は、そこにおけるフタル酸エステル類の有無（および必要に応じて当該エステル類の量）を確認すべき物質（サンプル／検体）、例えばフタル酸エステル類を含むことが推測される物質（サンプル／検体）である。被験物質は、例えば固体、液体または気体の形態にあることができる。被験物質は特に限定されないが、工程（２）に直接付すことができる物質、またはそこにフタル酸エステル類が含まれている場合に、溶媒を用いて当該エステル類を抽出できる物質が好ましい。フタル酸エステル類は、多様な用途において多種多様な製品中、例えば電気電子部品、床材、壁材、テーブルクロス、人工皮革、園芸用ホース、プラスチック、玩具、塗料コーティング、食品包装材料、接着剤中において使用されており、本発明では、これらの中に存在するフタル酸エステル類を測定することも可能である。特に、フタル酸エステル類はプラスチック製品の製造における可塑剤として広く使用されており、従って、前記の被験物質はプラスチック、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタラート、ＡＢＳ樹脂、ポリカーボネート樹脂であることができる。従って、本発明の１つの実施態様において、電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック中、塗料コーティング中もしくは接着剤などの高分子材料中に存在するフタル酸エステル類を測定することができる。
【００４７】
また、本発明の方法では、環境中、例えば、水、大気または空気中に存在するフタル酸エステル類を測定することも可能であり、従って、前記被験物質は、水（例えば海水、河川水、工業用水、工業排水）、大気または空気であってもよい。
【００４８】
なお、被験物質は、その種類、形状および形状に応じて、直接、工程（２）に付すこともできるし、または前記被験物質中のフタル酸エステル類を予め溶媒で抽出してから、工程（２）に付すこともできる。当業者であれば、被験物質ごとに、例えばその種類、形状および形状に応じて、当該抽出工程の要否を判断することが可能である。例えば、通常、被験物質が液体（例えば、フタル酸エステル類の溶液または懸濁液、好ましくは溶液）である場合には直接工程（２）に付すことができるが、被験物質が固体または気体の場合には予め溶媒で抽出した後に工程（２）に付すことが好ましい。
【００４９】
従って、本発明の１つの実施態様において、本発明は、前記工程（１）と（２）の間に、前記被験物質中のフタル酸エステル類を溶媒で抽出する工程をさらに含む、前記測定方法に関する。この場合、前記測定方法は少なくとも以下の工程を含む：
−  被験物質を準備する工程；
−  前記被験物質中のフタル酸エステル類を溶媒で抽出する工程；
−  抽出したフタル酸エステル類を有機合成的な手法で色素に変換する工程；および
−  得られた色素を検知する工程。
【００５０】
前記の被験物質は、工程（２）に適切な容器、例えばガラス製試験管中に入れて、工程（２）に付すことができる。
【００５１】
また、前記測定方法が溶媒での抽出工程を含む場合、前記の被験物質は、例えば、溶媒での抽出を実施できる容器、例えばガラス製試験管中に入れて、前記抽出工程に付すことができる。被験物質が前記容器よりも大きい場合には、例えば小片にしてから当該容器に入れることができる。また、被験物質をそのまま前記容器に入れられる場合であっても、例えば溶媒での抽出を容易にするために、小片にしてから当該容器に入れてもよい。例えば、塩化ビニル樹脂を被験物質と使用する場合には、ハサミで細かく刻んだサンプル小片を試験管に入れて後続の工程に付してもよい。
【００５２】
被験物質中のフタル酸エステル類を溶媒で抽出するための方法は当業者に知られており、従ってそのような公知の抽出方法を使用することができる。例えば、適当な容器、例えばガラス製試験管中の前記被験物質に溶媒を添加し、５分〜１日、１０分〜１２時間、１５分〜６時間、例えば２０分〜２時間の間両者を接触させることにより、フタル酸エステル類の抽出を行うことができる。添加する溶媒の量は、当業者であれば適切に決定することができる。例えば被験物質として１００ｍｇのプラスチック樹脂を用いる場合には、使用する溶媒にもよるが、通常、１００μ〜２０ｍｌ、好ましくは５００μｌ〜１０ｍｌ、より好ましくは１ｍｌ〜５ｍｌの溶媒を添加することができる。抽出は、例えば、４〜５０℃、好ましくは１０〜３０℃の温度、例えば室温で行うことができる。簡易性およびコスト低下の観点から、室温で抽出を行うことが好ましい。また、抽出は、加圧下または減圧下で行うこともできるが、簡易性およびコスト低下の観点から常圧下／大気圧下で行うことが好ましい。抽出の効率を上げるために、抽出の間、被験物質を含む溶媒を超音波処理に付してもよい。
【００５３】
フタル酸エステル類を抽出可能な溶媒についても、当業者には知られている。例えば、水、有機溶媒およびそれらの混合物を使用することができ、前記有機溶媒の例としては、炭素数１〜４の低級アルコール、例えばメタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールおよびｎ−ブタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、ｎ−ヘキサン、クロロホルムを挙げることができる。本発明の１つの実施態様において、前記溶媒は、炭素数１〜４、好ましくは炭素数１〜３の低級アルコールである。
【００５４】
本発明では、フタル酸エステル類にも加水分解用試薬、例えば水酸化ナトリウムにも溶解しやすい溶媒、例えば前記の低級アルコール、好ましくはメタノール、エタノール、２−プロパノールまたはブタノール、特にエタノールまたは２−プロパノールを溶媒として用いた場合に、他の溶媒と比較して、最終的に合成される色素の効率が特に良いことが見出された。
【００５５】
上記のような抽出工程で抽出したフタル酸エステル類（好ましくは当該溶媒における溶液として存在）を、任意選択的に被験物質から単離した後に、工程（２）に付すことができる。当該単離は、当業者に公知の方法によって行うことができ、例えば、遠心分離、ろ過、デカンテーション、ピペッティング等によって行うことができる。
【００５６】
前記（２）の工程において、前記被験物質中のフタル酸エステル類を有機合成的な手法で色素に変換する。なお、上記のように抽出工程を含む態様の場合には、被験物質から抽出したフタル酸エステル類を有機合成的な手法で色素に変換する。工程（２）および（３）は、前記方法が抽出工程を含むか否かにかかわらずに実質的に同じなので、以下では主に、抽出工程を含まない実施態様について説明する。
【００５７】
本明細書において、有機合成的な手法とは、有機化合物との反応または当該反応を含むプロセスによってフタル酸エステル類を色素に変換することを意味する。これは、フタル酸エステル類を有機化合物との反応を経て色素化合物に変換することを意図するものであって、当該反応において無機化合物が存在してはならないことを意味しない。本明細書において、有機化合物とは、炭素を成分とする化合物を意味するが、簡単な炭素化合物、例えば酸化物（ＣＯ、ＣＯ２等）、シアンもしくはシアン化物（ＫＣＮ等）、炭化物（ＣａＣ２等）、炭酸塩（Ｋ２ＣＯ３等）は除く。無機化合物とは、有機化合物以外の化合物を意味する。好ましくは、前記の有機合成的な手法は、錯化反応を含まない。また、好ましくは、前記の有機合成的な手法は、遷移金属を反応系に含む反応を含まず、例えば、前記の有機合成的な手法は、銅（Ｃｕ）および／または亜鉛（Ｚｎ）を反応系に含む反応を含まない。
【００５８】
本発明の１つの好ましい実施態様において、前記の有機化合物との反応はフリーデルクラフツ（Ｆｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓ）反応である。
【００５９】
ＧＣＭＳを使用しない本発明のようなフタル酸エステル類の簡易分析の構築は、プラスチック、玩具、塗料コーティング、食品包装材料などの検査法などの応用面で重要である。フタル酸エステルの簡易分析法を開発する際に二つの観点からの考察が必要であった。一つは、検出法自体の高いＳ/Ｎの達成、もう一つは従来の方法よりも簡易であることである。前者については、フタル酸エステルそのものを色素に変換することで高いＳ/Ｎ比を達成することができた。仮にフタル酸エステルのある特定の波長Ｘｎｍの吸光度が０．００１とすると、得られる色素のＸｎｍの吸光度が１．０だった場合、Ｓ／Ｎは１０００倍になる。フタル酸エステルから色素への反応が化学量論的に１：１で起こるようにデザインできれば、定量的かつ高いＳ/Ｎが達成できる。また、蛍光測定に応用すれば、蛍光そのものを検出できる蛍光光度法の方が原理的には吸光光度法よりも高感度になり、従来法であるＧＣＭＳと同等に近い感度が得られると考えられる。後者は、有機合成的な手法を積極的に取り入れることが有用であると考えた。これらの理由により、有機化合物との反応を利用することで、簡便で高感度な簡易分析を達成することができる。
【００６０】
また、例えば特許文献１に記載のようなヒドロキシフタル酸塩を用いる方法では、上記のように、他の妨害金属やより強い他のリガンドが存在する場合に、蛍光性が低下してしまうという問題がある。しかしながら、本発明では、フタル酸エステル類を有機化合物との反応を経て色素化合物そのものに変換するため、金属を使用せずに検出できる利点がある。そのため、上記のような問題も生じない。さらに、複雑な合成経路を必要とする上記のようなヒドロキシ化よりも、本発明のような有機合成的手法、好ましくはフリーデルクラフツ反応を用いる方法の方が、反応系がシンプルであり、必要に応じて反応対象や反応条件を変更することも容易である。 
【００６１】
前記工程（２）において、有機合成的な手法により、フタル酸エステル類から色素（色素化合物）が得られるが、本発明の１つの実施態様において、前記色素は錯塩ではない。ここで、錯塩とは、金属イオンが他の原子(団)と結合した形で存在する塩を意味する。また、本発明のさらなる実施態様において、前記色素は遷移金属を含まず、例えば、前記色素は銅（Ｃｕ）および／または亜鉛（Ｚｎ）を含まない。さらに、前記色素は、フリーデルクラフツ反応生成物であることができる。
【００６２】
本発明の１つの実施態様において、前記工程（２）におけるフタル酸エステル類の色素への変換は、以下の（２−１）および（２−２）の工程を含む工程によって行われる：
（２−１）被験物質中のフタル酸エステル類を加水分解してフタル酸を得、当該フタル酸の分子内脱水により無水フタル酸を得る工程、および
（２−２）得られた無水フタル酸を、ヒドロキシ芳香族化合物、例えば前記一般式（ＩＩ）で表されるフェノール類と、任意選択的に触媒の存在下において、反応させることにより、色素に変換する工程。
【００６３】
前記の工程（２−１）において、被験物質中のフタル酸エステル類（溶媒での抽出を行った場合には、抽出したフタル酸エステル類）を加水分解してフタル酸とし、当該フタル酸を分子内脱水に付すことにより、無水フタル酸を得る。
【００６４】
このようにフタル酸エステル類から無水フタル酸を加水分解および分子内脱水により得る方法は、当業者に公知である。
【００６５】
前記加水分解は、公知の方法により、例えば、フタル酸エステル類を水の存在下で酸性や塩基性環境下に、５分〜１日、１０分〜１２時間、１５分〜６時間、例えば２０分〜２時間の間置くことにより行うことができる。本明細書においては、このようにフタル酸エステル類を水の存在下で酸性または塩基性にして加水分解するための物質を「加水分解用試薬」（または「第１試薬」）とも呼ぶ。加水分解用試薬の例としては、任意選択的に水溶液の形態にある、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩酸、硝酸、硫酸またはこれらのうちの２種以上の組み合わせ（例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸ナトリウムのうちの２種以上の組み合わせ、または塩酸、硝酸および硫酸のうちの２種以上の組み合わせ）が挙げられる。従って、加水分解は、典型的には加水分解用試薬、例えば水酸化ナトリウム水溶液（１Ｍ水酸化ナトリウム）をフタル酸エステル類に添加することによって行うことができる。添加する加水分解用試薬の量は、当業者であれば適切に決定することができる。例えば、被験物質中のフタル酸エステル類（または抽出したフタル酸エステル類）の量が１００ｍｇである場合には、使用する加水分解用試薬の種類にもよるが、通常、１００μｌ〜１０ｍｌ、好ましくは５００μｌ〜５ｍｌ、より好ましくは１ｍｌ〜３ｍｌの加水分解用試薬（水溶液）を添加することができる。加水分解は、４〜５０℃、好ましくは１０〜３０℃の温度、例えば室温で行うことができる。簡易性およびコスト低下の観点から、加水分解は室温で行うことが好ましい。また、加水分解は、加圧下または減圧下で行うこともできるが、簡易性およびコスト低下の観点から常圧下／大気圧下で行うことが好ましい。加水分解の効率を上げるために、フタル酸エステル類と加水分解用試薬の混合物を超音波処理に付してもよい。
【００６６】
このような加水分解によりフタル酸エステル類からフタル酸を得ることができる。なお、得られた反応生成物は、中和するかもしくは酸性にしてもよい。中和または酸性化は、当業者であれば、使用した加水分解用試薬の種類や量等に応じて適宜行うことが可能である。例えば、塩基性環境下で加水分解を行った場合には、酸、例えば塩酸（または濃塩酸）を添加することにより、得られた反応生成物を中和するかもしくは酸性にしてもよい。      
【００６７】
濃塩酸が使用される場合、例えば３０％以上または３８％以上のものが使用される。添加する酸の量は、当業者であれば適切に決定することができる。例えば加水分解用試薬として１Ｍ水酸化ナトリウム１．５ｍｌを使用した場合には、通常、１０μｌ〜５ｍｌ、好ましくは５０μｌ〜１ｍｌ、より好ましくは１００μｌ〜５００μｌの酸を添加することができる。このような酸の添加は、４〜５０℃、好ましくは１０〜３０℃の温度、好ましくは室温で行うことができる。またはこのような酸の添加は、加圧下または減圧下で行うこともできるが、簡易性およびコスト低下の観点から常圧下／大気圧下で行うことが好ましい。
【００６８】
引き続き、加水分解によって得られたフタル酸を分子内脱水閉環に付すことにより無水フタル酸を得ることができる。このような分子内脱水の方法に関しても当業者に公知であり、従ってそのような公知の方法を使用することができる。例えば、フタル酸の分子内脱水は、フタル酸の加熱によりおよび／または濃硫酸の添加により行うことができる。加熱の場合、例えば、８０〜２００℃、好ましくは１００〜１５０℃、より好ましくは１２０〜１３０℃にフタル酸を加熱することができる。加熱時間は、例えば、１分〜６時間、好ましくは３分〜１時間、より好ましくは５分〜３０分間である。このような加熱によりフタル酸が脱水され、無水フタル酸が得られる。濃硫酸が使用される場合、例えば６５％以上または７２％以上のものが使用される。当業者であれば、濃硫酸の添加条件、例えば濃硫酸の添加量、温度、圧力、時間を、適切に設定することにより無水フタル酸を得ることが可能である。本明細書では、前記濃硫酸のようなフタル酸の分子内脱水のために使用する物質を「分子内脱水用試薬」（または「第５試薬」）とも呼ぶ。
【００６９】
前記分子内脱水により得られた生成物は乾燥することができる。乾燥は、当業者に公知の装置・方法を用いて行うことができる。例えば、乾燥は、８０〜２００℃、好ましくは１００〜１５０℃、より好ましくは１２０〜１３０℃の温度で行うことができる。また、乾燥時間は、例えば、１分〜６時間、好ましくは３分〜１時間、より好ましくは５分〜３０分間である。好ましくは、当該乾燥により、固体形態の無水フタル酸が得られる。
【００７０】
なお、本発明の１つの実施態様では、前記の加熱と乾燥は別々の工程として行わずに、１つの統合された工程として行ってもよい。すなわちこの実施態様では、フタル酸を１回の加熱工程に付すことにより、当該加熱がフタル酸の脱水用加熱と生成物の乾燥の両方としての役割を果たし、従って、前記の加熱と乾燥を別々に行わなくとも、１回の加熱工程により、フタル酸から固体の無水フタル酸を得ることが可能である。
【００７１】
前記の工程（２−２）において、上記のように得られた無水フタル酸を、１つまたは複数のヒドロキシ芳香族化合物と、任意選択的に触媒の存在下において、反応させることにより、色素に変換する。
【００７２】
ここで、ヒドロキシ芳香族化合物とは、芳香環に結合している１〜４個、好ましくは１または２個、より好ましくは１個の水酸基を有する単環、多環（例えば二環もしくは三環）または縮合環芳香族化合物を意味する。
【００７３】
ここで芳香族化合物は、５つ以上の原子から構成される芳香族性を有する環状構造（芳香環）を有し、その芳香環を構成する原子上に少なくとも１つの水素原子を有する。芳香族化合物は、炭素環芳香族化合物（芳香族炭化水素）であっても、複素環芳香族化合物であってもよいが、好ましくは、炭素環芳香族化合物である。
【００７４】
芳香族炭化水素の単環芳香族化合物としては、例えば、ベンゼン；トルエン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、１，３，５−トリメチルベンゼン、エチルベンゼン等のアルキルベンゼン類を挙げることができる。
【００７５】
芳香族炭化水素の多環芳香族化合物としては、例えば、ビフェニル、ジフェニルメタン、トリフェニルメタン、テトラフェニルメタン等が挙げられる。
【００７６】
芳香族炭化水素の縮合環芳香族化合物としては、ナフタレン、アントラセン、フェナントレン、ピレン、クリセン、トリフェニレン、インデン、アズレン、フルオレン、ナフタセン、ピレン、トリフェニレンなどが挙げられる。
【００７７】
好ましくは、前記ヒドロキシ芳香族化合物は、単環式、多環式（例えば二環式もしくは三環式）または縮合環式のヒドロキシ芳香族化合物、より好ましくはモノヒドロキシ芳香族化合物（芳香環に結合している１個の水酸基を有する芳香族化合物）である。本発明の１つの好ましい実施態様において、前記ヒドロキシ芳香族化合物は、フェノール類およびナフトール類からなる群から選択され、より好ましくは、前記式（ＩＩ）で表されるフェノール類、前記式（ＩＩ’）で表される１−ナフトール類および前記式（ＩＩ’’）で表される２−ナフトール類からなる群から選択される。
【００７８】
また、前記触媒に関して、当業者であれば、無水フタル酸と反応させる化合物の種類に応じて適宜適切な触媒を選択することが可能であり、例えば、濃硫酸、塩化亜鉛を触媒として使用することができる。
【００７９】
本発明の１つの実施態様では、前記の工程（２−２）において、上記のように得られた無水フタル酸を、一般式（ＩＩ）で表される１つまたは複数のフェノール類と、任意選択的に触媒の存在下において、反応させることにより、色素に変換する。
【００８０】
【化１２】
2020041927.tif 000014
【００８１】
［式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］。
【００８２】
本発明の１つの好ましい実施態様において、当該（２−２）の工程は、無水フタル酸と１つまたは複数のフェノール類とを触媒の存在下で反応させるフリーデルクラフツ反応である。
【００８３】
好ましくは、前記フェノール類としては、無水フタル酸との反応後に可視領域（例えば３６０ｎｍ〜８３０ｎｍ、好ましくは４００〜７６９ｎｍ）に吸収帯または発光体を有する発色団を含むフェノール誘導体を色素としてもたらすようなものが選択される。当業者であれば、無水フタル酸と種々のフェノール類との間の公知の反応を考慮することにより、そのようなフェノール類を適宜選択することが可能である。
【００８４】
本発明の１つの実施態様において、前記一般式（ＩＩ）におけるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、同一であっても、異なっていてもよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０、好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１５の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０、炭素数６〜１５、より好ましくは炭素数６〜１０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す。
【００８５】
本発明の１つの好ましい実施態様において、一般式（ＩＩ）におけるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、水酸基、ジメチルアミノ基およびジエチルアミノ基からなる群から選択される。
【００８６】
本発明の１つの実施態様では、前記フェノール類は以下の一般式（ＩＩＩ）で表される化合物（レゾルシノール）である。
【００８７】
【化１３】
2020041927.tif 000015
【００８８】
この化合物は、一般式（ＩＩ）において、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７がＨであり、Ｒ４が水酸基である化合物に相当する。この場合、以下の一般式（ＶＩ）で表されるフルオレセインを色素として得ることができる。このように無水フタル酸と一般式（ＩＩＩ）で表される化合物からフルオレセインを得る反応は、当業者に知られており、例えば非特許文献３に記載されている。
【００８９】
【化１４】
2020041927.tif 000016
【００９０】
本発明の別の実施態様では、前記フェノール類は以下の一般式（ＩＶ）で表される化合物である。
【００９１】
【化１５】
2020041927.tif 000017
【００９２】
この化合物は、一般式（ＩＩ）において、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７がＨであり、Ｒ４がジエチルアミノ基である化合物に相当する。この場合、以下の一般式（ＶＩＩ）で表されるローダミンを色素として得ることができる。このように無水フタル酸と一般式（ＩＶ）で表される化合物からローダミンを得る反応は、当業者に知られており、例えばＥＰ０４６８８２１Ａ１に記載されている。
【００９３】
【化１６】
2020041927.tif 000018
【００９４】
本発明のさらに別の実施態様では、前記フェノール類は以下の一般式（Ｖ）で表される化合物である。
【００９５】
【化１７】
2020041927.tif 000019
【００９６】
この化合物は、一般式（ＩＩ）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７が全てＨである化合物に相当する。この場合、以下の一般式（ＶＩＩＩ）で表されるフェノールフタレインを色素として得ることができる。このように無水フタル酸と一般式（Ｖ）で表される化合物からフェノールフタレインを得る反応は、当業者に知られており、例えば非特許文献４（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  （ＣＥＪ），  Ｖｏｌ．  １３，  Ｎｏ．  １  ／Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  １３−１１／Ｒｅｃｅｉｖｅｄ  Ｊｕｌｙ  ２９，  ２００９）に記載されている。
【００９７】
【化１８】
2020041927.tif 000020
【００９８】
上記以外にも、無水フタル酸とフェノール類との反応により色素を得る方法は、種々のフェノール類に関しておよび従って種々の色素に関して当業者に知られている。
【００９９】
本発明の別の実施態様では、前記の工程（２−２）において、上記のように得られた無水フタル酸を、一般式（ＩＩ’）で表される１つまたは複数の１−ナフトール類と、任意選択的に触媒の存在下において、反応させることにより、色素に変換する。
【０１００】
【化１９】
2020041927.tif 000021
【０１０１】
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］。
【０１０２】
本発明の１つの好ましい実施態様において、当該（２−２）の工程は、無水フタル酸と１つまたは複数の１−ナフトール類とを触媒の存在下で反応させるフリーデルクラフツ反応である。
【０１０３】
好ましくは、前記１−ナフトール類としては、無水フタル酸との反応後に可視領域（例えば３６０ｎｍ〜８３０ｎｍ、好ましくは４００〜７６９ｎｍ）に吸収帯または発光体を有する発色団を含む１−ナフトール誘導体を色素としてもたらすようなものが選択される。当業者であれば、無水フタル酸と種々の１−ナフトール類との間の公知の反応を考慮することにより、そのような１−ナフトール類を適宜選択することが可能である。
【０１０４】
本発明の１つの実施態様において、前記一般式（ＩＩ’）におけるＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、同一であっても、異なっていてもよい。Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０、好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１５の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０、炭素数６〜１５、より好ましくは炭素数６〜１０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す。
【０１０５】
本発明の１つの好ましい実施態様において、一般式（ＩＩ’）におけるＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、水酸基、ジメチルアミノ基およびジエチルアミノ基からなる群から選択される。
【０１０６】
本発明の１つの実施態様では、前記ヒドロキシ芳香族化合物は１−ナフトール（Ｒ８〜Ｒ１４が全てＨである一般式（ＩＩ’）の化合物に相当）であり、この場合、２−（１’−オキシ−２’−ナフトイル）安息香酸（ＩＩ）を色素として得ることができる。このように無水フタル酸と１−ナフトールから２−（１’−オキシ−２’−ナフトイル）安息香酸（ＩＩ）を得る反応は、当業者に知られており、例えば非特許文献５に記載されている。
【０１０７】
本発明の別の実施態様では、前記の工程（２−２）において、上記のように得られた無水フタル酸を、一般式（ＩＩ’’）で表される１つまたは複数の２−ナフトール類と、任意選択的に触媒の存在下において、反応させることにより、色素に変換する。
【０１０８】
【化２０】
2020041927.tif 000022
【０１０９】
［式中、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］。
【０１１０】
本発明の１つの好ましい実施態様において、当該（２−２）の工程は、無水フタル酸と１つまたは複数の２−ナフトール類とを触媒の存在下で反応させるフリーデルクラフツ反応である。
【０１１１】
好ましくは、前記２−ナフトール類としては、無水フタル酸との反応後に可視領域（例えば３６０ｎｍ〜８３０ｎｍ、好ましくは４００〜７６９ｎｍ）に吸収帯または発光体を有する発色団を含む２−ナフトール誘導体を色素としてもたらすようなものが選択される。当業者であれば、無水フタル酸と種々の２−ナフトール類との間の公知の反応を考慮することにより、そのような２−ナフトール類を適宜選択することが可能である。
【０１１２】
本発明の１つの実施態様において、前記一般式（ＩＩ’’）におけるＲ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、同一であっても、異なっていてもよい。Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０、好ましくは炭素数１〜２０、より好ましくは炭素数１〜１５の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０、炭素数６〜１５、より好ましくは炭素数６〜１０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す。
【０１１３】
本発明の１つの好ましい実施態様において、一般式（ＩＩ’’）におけるＲ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、水酸基、ジメチルアミノ基およびジエチルアミノ基からなる群から選択される。本発明の１つの実施態様では、前記ヒドロキシ芳香族化合物は２−ナフトールである。
【０１１４】
上記以外にも、無水フタル酸と１−ナフトール類または２−ナフトール類との反応により色素を得る方法は、種々の１−ナフトール類または２−ナフトール類に関しておよび従って種々の色素に関して当業者に知られている。
【０１１５】
このように、本発明では、工程（２−２）におけるように、無水フタル酸と芳香族化合物（好ましくはヒドロキシ芳香族化合物）のフリーデル・クラフツ反応による縮合反応を用いることにより得られた化合物を色素として使用することが可能である。
【０１１６】
以下、工程（２−２）を、無水フタル酸を前記フェノール類としてのレゾシノールと反応させて色素フルオレセインに変換する反応を例として説明する。当業者であればこれらの説明や関連の公知技術を参照することにより、他のフェノール類（または１−もしくは２−ナフトール類）を用いて他の色素を得る他の実施態様についても適切に理解することが可能であろう。
【０１１７】
上述のように、無水フタル酸とレゾシノールとの反応は当業者に知られている。無水フタル酸とレゾシノールとの反応は、好ましくは、触媒の存在下で行うことができる。触媒としては、例えば、濃硫酸、塩化亜鉛を使用することができる。濃硫酸が使用される場合、例えば６５％以上または７２％以上のものが使用される。例えば、前記反応は、適切な容器（例えばガラス製試験管）に、フタル酸、レゾシノールおよび前記触媒を入れ、混合物を加熱することにより行われる。この際、レゾシノールは固体の形態で添加することもできる。反応温度は、例えば、８０〜２００℃、好ましくは、１００〜１５０℃、より好ましくは１１０〜１４０℃、例えば１２０〜１３０℃である。反応時間は例えば、１分〜６時間、好ましくは３分〜１時間、より好ましくは５分〜３０分間である。前記反応は加圧下または減圧下で行うこともできるが、簡易性およびコスト低下の観点から常圧下／大気圧下で行うことが好ましい。好ましくは、前記反応後に、当該反応混合物は室温まで冷却される。例えば、無水フタル酸の量が２０ｍｇである場合、２０〜１２０ｍｇ、好ましくは２０〜６０ｍｇ、例えば２０ｍｇ〜３０ｍｇの量のレゾシノールと反応させることができる。この場合、無水フタル酸とレゾシノールのモル比は、１：１〜１：８、好ましくは１：１〜１：４、例えば１：１〜１：２となる。また、前記触媒の量は、例えば１０μ〜１ｍｌ、好ましくは５０μｌ〜５００μｌ、より好ましくは８０〜１５０μｌであることができる。
【０１１８】
このような反応により、無水フタル酸からフルオレセインを得ることができる。
【０１１９】
上述のように、無水フタル酸とヒドロキシ芳香族化合物、例えばフェノール類との反応により色素を得る種々の方法が当業者には知られており、従って当業者は、無水フタル酸を前記以外の種々のヒドロキシ芳香族化合物、例えばフェノール類と組み合わせることにより、種々の色素を適宜得ることが可能である。当該色素の例としては、可視領域（例えば３６０ｎｍ〜８３０ｎｍ、好ましくは４００〜７６９ｎｍ）に吸収帯または発光体を有する発色団を含むフェノール誘導体（または１−もしくは２−ナフトール誘導体）が挙げられる。なお、好ましくは、前記色素は錯塩ではない。また、本発明の１つの実施態様において、前記色素は遷移金属を含まず、例えば、前記色素は銅（Ｃｕ）および／または亜鉛（Ｚｎ）を含まない。本発明のさらなる実施態様において、前記色素は、フリーデルクラフツ反応生成物であることができる。好ましくは、前記色素は、式（ＶＩ）〜（ＶＩＩＩ）で表される化合物から選択される。    
【０１２０】
なお、本発明では、無水フタル酸と前記ヒドロキシ芳香族化合物、例えば前記フェノール類との反応を酸性条件下、好ましくは５．０以下、より好ましくは４．０以下、さらに好ましくは３．５以下、より一層好ましくは３．０以下のｐＨで行うことにより、最終的な色素の測定をより高い精度で定量的に行えることが見出された。当業者であれば、例えば無水フタル酸およびヒドロキシ芳香族化合物、例えば前記フェノール類の量比の調節および／または触媒の選択や当該触媒の量の調節等により、このような反応系を酸性にすることが可能である。
【０１２１】
上記のような反応により得られた色素を、工程（３）に付すことができる。
【０１２２】
前記（３）の工程において、上記のように得られた色素を検知する。色素の検知は、色素の検出・測定に関して当業者に公知の手法で、色素の検出・測定のための公知の装置を適宜用いて行うことができる。
【０１２３】
色素の検知は、例えば目視でまたは装置を用いて行うことができる。簡易化およびコスト低下の観点から、色素の検出においては目視が好ましいが、必ずしもこの限りではない。
【０１２４】
例えば、上記のようにして色素を作成し、判別対象物を蛍光光度計などと言った蛍光検出装置で、色素特有の励起光を照射して得られる蛍光を装置および目視で判別することができる。
【０１２５】
あるいは、上記のようにして色素を作成し、判別対象物を薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）展開後、前記判別対象物に光エネルギーまたは薬剤を接触させ、判別対象物を検出することができる。
【０１２６】
また、本発明の別の実施態様では、上記のようにして色素を作成し、判別対象物をガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）を応用して判別対象物を検出することができる。本発明のさらに別の実施態様では、上記のようにして色素を作成し、核磁気共鳴（ＮＭＲ）を使用して判別対象物を検出することができる。
【０１２７】
上記のような手法により、色素を定性的または定量的に検知することができる。
【０１２８】
本発明の１つの実施態様では、色素を目視または光学的手法により検知する。目視による場合、例えば、色素による呈色の有無または濃淡を検出することができる。本明細書において、「光学的手法」とは、光学的な計測を利用して化学物質の定性的または定量的分析を行うことを意味し、例えば分光光度計または蛍光光度計を用いる方法や、共焦点レーザー顕微鏡やＣＣＤを用いて撮像された画像を処理することにより色の濃淡の差を検出する方法が挙げられる。特に、上記のような装置を用いた場合や、上記の光学的手法を用いた場合には、色素の定量的な検出が高い精度で可能となる。
【０１２９】
なお、前記検知は、例えば、工程（２）で得られた色素（色素を含む反応混合物）にエタノールを添加し、次いで上清を回収し、その後それを１Ｍの水酸化ナトリウムに溶解した溶液を目視することにより、またはそれを光学的手法に付すことにより行うことができる。
【０１３０】
本発明の１つの好ましい実施態様において、前記色素は吸光光度計を用いて測定される。当業者であれは、得られた色素の吸収帯または発光帯に応じて、適切に測定を行うことが可能である。例えば、前記色素がフルオレセインである場合には、２００〜６００ｎｍの吸収スペクトルを測定することにより、色素の検出を行うことができる。
【０１３１】
また、本発明のさらなる実施態様において、本発明は、以下を含む、フタル酸エステル測定キットに関する：
−  フタル酸エステル類をフタル酸に加水分解するための加水分解用試薬（「第１試薬」とも呼ぶ）、および
−  無水フタル酸と反応させて色素を得るための一般式（ＩＩ）：
【０１３２】
【化２１】
2020041927.tif 000023
【０１３３】
［式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表されるフェノール類、一般式（ＩＩ’）：
【０１３４】
【化２２】
2020041927.tif 000024
【０１３５】
［式中、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される１−ナフトール類、および一般式（ＩＩ’’）：
【０１３６】
【化２３】
2020041927.tif 000025
【０１３７】
［式中、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０およびＲ２１は、互いに独立にそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、炭素数１〜３０の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル基、炭素数５〜２０のアリール基、スルホン酸基、水酸基、アミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基またはニトロ基を表す］
で表される２−ナフトール類からなる群から選択されるヒドロキシ芳香族化合物（「第２試薬」とも呼ぶ）、および、任意選択的に前記反応のための触媒（「第３試薬」とも呼ぶ）。
【０１３８】
上記キットは、被験物質中のフタル酸エステルを抽出するための溶媒（「第４試薬」とも呼ぶ）をさらに含むことができる。当該溶媒は、前記キットの任意要素である。上述のように被験物質中のフタル酸エステル類を予め溶媒で抽出する場合に有用である。
【０１３９】
上記キットは、フタル酸を分子内脱水により無水フタル酸にするための分子内脱水用試薬（「第５試薬」とも呼ぶ）をさらに含むことができる。当該分子内脱水用試薬は、前記キットの任意要素である。上記のようなフタル酸の分子内脱水を濃硫酸の添加によって行う場合に有用である。濃硫酸を用いなくとも、加熱によりフタル酸の脱水により無水フタル酸を得ることができるのは上述のとおりである。
【０１４０】
ここで、加水分解用試薬、分子内脱水用試薬、フェノール類（または１−もしくは２−ナフトール類）、触媒および溶媒は、上記で述べたようなものを使用することができる。例えば、前記加水分解用試薬は、任意選択的に水溶液の形態にある、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩酸、硝酸、硫酸およびこれらのうちの２種以上の組み合わせからなる群から選択される。前記分子内脱水用試薬は、例えば濃硫酸である。前記フェノール類は、例えば、上記式（ＩＩＩ）〜（Ｖ）からなる群から選択され、および／または前記１−もしくは２−ナフトール類は、１−ナフトールである。前記触媒は、例えば、硫酸および塩化亜鉛からなる群から選択される。
【０１４１】
好ましくは、前記キットは、前記の加水分解用試薬、分子内脱水用試薬（任意）、フェノール類（または１−もしくは２−ナフトール類）、触媒（任意）および溶媒（任意）を、それぞれ別々の容器において含む。
【０１４２】
また、前記キットは、前記方法を用いてフタル酸エステルを測定するために使用することができる。前記キットを用いると、上述のような被験物質中におけるフタル酸エステル類を測定することが可能である。さらに、上記のようなキットを用いることにより、簡易にかつ低いコストで被験物質中のフタル酸エステル類を測定することが可能である。
【０１４３】
さらに、本発明の１つの実施態様において、本発明は、フタル酸エステル類（例えば電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック中、塗料コーティング中もしくは接着剤などの高分子材料中にまたは環境中に存在するフタル酸エステル類）を測定するための、好ましくは前記方法を用いてフタル酸エステル類を測定するための、前記キットの使用に関する。
【０１４４】
本発明の方法またはキットを用いることにより、フタル酸エステルを特異的かつ包括的に検出することができる。従って、例えば、前記方法またはキットはそれぞれ、種々の製品（例えば電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック；塗料コーティング；もしくは接着剤などの高分子材料）をフタル酸エステル類の存在（および必要に応じて当該エステル類の存在）に関してスクリーニングするための方法またはキット、例えば種々の製品（例えば電機電子部品、自動車部品、玩具、文具、工具、建築資材、食品包装材料のプラスチック；塗料コーティング；もしくは接着剤などの高分子材料）をスクリーニングして、フタル酸エステル類を含まない製品、またはフタル酸エステル類の含有量が一定の基準量以下である製品を得るための方法またはキットとして使用することも可能である。なお、実際の測定では、例えば簡単な予備試験を経ることにより、被験物質中のフタル酸エステル量の大凡の量を把握した上で、上記の各工程の説明を参照しながら、抽出溶液の希釈および／または各試薬の量の調節等を行うことにより、種々の被験物質中のフタル酸エステル類を測定することが可能がある。
【０１４５】
また、上述のように、本発明は、大型の装置を使用せずに、簡易にかつ低コストでフタル酸エステルを検出する方法の提供を目的とするものあり、従って前記方法またはキットは十分にその目的を達成するものであるが、もし必要であれば、検出されたフタル酸エステルに含まれる個々のエステルの種類についても、例えばガスクロマトグラフ−質量分析計（ＧＣ−ＭＳ）を用いることにより同定することが可能である。
【０１４６】
本発明を、以下の実施例でさらに詳細に説明する。これらの実施例は、当該実施例により本発明を限定することを決して意図しない。
【実施例】
【０１４７】
実施例１  
無水フタル酸からのフルオレセインの合成
フタル酸エステルから加水分解で得られる、無水フタル酸から色素（フルオレセイン）が定量的に合成できるように、以下の操作を行った。無水フタル酸（０〜２０ｍｇ、０〜１３５μｍｏｌ）とレゾルシノール（３０ｍｇ、２７０μｍｏｌ）と１００μｌの濃硫酸を試験管に入れ１２５℃で１０分間加熱した。混合物を室温に冷却し、２．０ｍｌのエタノールを添加した。１０μｌの上清を回収し、１Ｍの水酸化ナトリウム２．０ｍｌに溶解し、溶液の吸光スペクトルを分光光度計で測定した。測定時には２００〜６００ｎｍまで走査させ、走査速度は６００ｎｍ／ｍｉｎで行った。合成されたフルオレセインの濃度は、４９４ｎｍにおけるモル吸光係数（ε＝６８０００  ｍｏｌ・ｃｍ／Ｌ）で評価した。すべての試料は、６００ｎｍでゼロ較正を行った後に測定した。実際に得られた吸収スペクトルを図１−Ａに示す。無水フタル酸とレゾシノールを反応させる際、酸性条件とアルカリ条件で反応させた結果を図１−Ｂに示す。酸性条件（ｐＨ  ３．０以下）の場合、４９４ｎｍに特定のピークが得られ、定量的に無水フタル酸を検出できる。
【０１４８】
実施例２
効率良く、フタル酸エステルを加水分解する為に、様々な有機溶媒中のＤＥＨＰ（１００ｍｇ、２５μｍｏｌ）を試験管に添加した。加水分解のために、１Ｎの水酸化ナトリウム１．５ｍｌを添加し、３０分間超音波処理を行った。その後、２５０μｌの濃塩酸で酸性溶液として、１２５℃で完全に乾燥させた。次に、レゾルシノール（１５ｍｇ、１３０μｍｏｌ）および濃硫酸１００μｌを添加し、１２５℃で１０分間加熱した。その後、実施例１と同じ操作で溶液の吸光度を測定し、フタル酸エステルの量を見積もった。他の有機溶媒でも抽出と加水分解が可能であるが、図２に示すように、エタノールやイソプロパノールのような、フタル酸エステルにも水酸化ナトリウムにも溶解しやすい溶媒の方が、最終的に合成される色素の効率が良かった。なお、このような溶媒としては、メタノールやブタノールも挙げられる。
【０１４９】
実施例３
フタル酸エステルの依存性（ＤＥＨＰ）
様々な量のＤＥＨＰ（エタノール中）を実施例２と同様の操作で色素（フルオレセイン）に変換し測定した結果を図３に示す。フタル酸エステルと色素特有の吸光度（４９４ｎｍ）には相関があり、ＤＥＨＰを定量的に検出できる。装置による色素の吸光度測定が望ましいが、目視での判定も濃度によっては十分可能である。検体中に存在する、フタル酸エステルを抽出さえできれば、０．１μｍｏｌ程度の分析が可能であった。本法は吸光光度法で行ったが、検体その物のシグナルを検出できる、蛍光光度計、共焦点レーザー顕微鏡などを使用することでさらに少ない量のフタル酸エステルの定量が期待できる。また、ＤＥＨＰのみならず、また、他のフタル酸エステルやトリメリット酸エステルの検出も可能であった。
【０１５０】
【表１】
2020041927.tif 000026
【０１５１】
実施例４
実試料から抽出したフタル酸エステルとフタル酸エステルの定量
本実施例では、フタル酸エステルから加水分解で得られる、無水フタル酸から色素（フルオレセイン）が定量的に合成できるように、以下の操作を行った。
【０１５２】
実際の試料中のフタル酸エステル類の測定例を以下に示す。まず、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ、１００ｍｇ）、ポリエチレン（ＰＥ：１００ｍｇ）などの試料を試験管に入れ、エタノール２．０ｍｌを加え、超音波処理を３０分間行った。溶液のみを取り出した後、水酸化ナトリウム（１  Ｍ，１．５ｍｌ，３０分間）で加水分解を行った。塩酸で中和し、乾燥させた後に、レゾルシノール（３０ｍｇ、２７０μｍｏｌ）と濃硫酸１００μｌを添加し、試験管を１２５℃で１０分間加熱した。混合物を室温に冷却し、２．０ｍｌのエタノールを添加した。フルオレセインの濃度は、４９４ｎｍでの吸光度を測定し、一般的な吸光光度計で吸光度の測定を行った。また、吸光度Ａ＝１．０の値を１４．７ｍｏｌ／ｌとして判定した。フタル酸エステルの濃度が濃い場合は、希釈して、その希釈倍率から濃度を見積もった。ポリエチレンとＰＶＣ中に含まれるフタル酸エステルの総量を、従来法であるＰｙ−ＧＣＭＳ法比較した結果を、表２に示す。従来法と比較としてほぼ同様の傾向が得られた。
【０１５３】
【表２】
2020041927.tif 000027
【０１５４】
以上のように、本発明によれば、被験物質（サンプル）におけるフタル酸エステルの存在を、高価で大型の装置を使用せずに、目視で簡便に検出することができる。また、分光光度計のような小型でかつランニングコストのあまり高くない装置を用いることにより、高い精度でフタル酸エステルの定量的な測定を行うことも可能であり、具体的には１μｍｏｌ以下、好ましくは０．１μｍｏｌ程度のフタル酸エステルを測定することが可能である。したがって、本発明の方法およびキットは、オンサイト分析にも適したものであり、電子電気機器などの管理や、環境（ヘルスケアを含む）に関わる全ての分野における、フタル酸エステルのモニタリングのための核心的な技術として極めて有用である。
【図１】
2020041927.tif 000038
【図２】
2020041927.tif 000039
【図３】
2020041927.tif 000040
【図４】
2020041927.tif 000041