(57)【要約】【課題】一般に処方されるこの疾患へのフロントライン治療に対して耐性があるまたはその結果として有害事象を経験した個体において、疾病の悪性表現型の原因である腫瘍前駆細胞を標的とする骨髄増殖性疾患または腫瘍、および骨髄異形成症候群に対する新規の処置を提供する。【解決手段】本発明は、上記疾病に特有の腫瘍前駆細胞を標的とすることによる、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、骨髄線維症（ＭＦ）、および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの骨髄増殖性腫瘍に伴う症状を処置および軽減するためにテロメラーゼ阻害剤化合物を使用する方法を提供する。【選択図】図１Ａ
2020041001.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
図面に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年１２月７日に出願された米国仮特許出願第６１／７３４，９４１号、２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９９，０６９号、２０１３年３月１５日に出願された米国特許出願第１３／８４１，７１１号、および２０１３年１１月５日に出願された米国仮特許出願第６１／９００，３４７号に対する優先権を主張し、それらの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、本態性血小板血症（ＥＴ）などの骨髄増殖性疾患または骨髄増殖性腫瘍に伴う症状を処置するまたは予防するためのテロメラーゼ阻害剤化合物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血液系悪性腫瘍は、骨髄などの血液形成組織の細胞内、または免疫系の細胞内で始まる癌の形態である。血液の癌の例としては、急性白血病および慢性白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫および骨髄異形成症候群が挙げられる。
【０００４】
骨髄増殖性腫瘍またはＭＰＮは、赤血球、血小板および顆粒球の前駆細胞などの、骨髄の腫瘍性造血骨髄前駆細胞から生じる血液腫瘍である。腫瘍前駆細胞の増殖は、疾患に依存して、白血球、赤血球および／または血小板の任意の組み合わせの過剰産生をもたらす。これらの過剰に産生された細胞は、異常でもあり得、さらなる臨床合併症をもたらし得る。種々のタイプの慢性骨髄増殖性疾患がある。ＭＰＮ疾病スペクトラムに含まれるものとしては、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄線維症（ＭＦ）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）が挙げられる。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、血液および骨髄の癌を含む症状の集合体である。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）などの疾病を含む。
【０００５】
本態性血小板血症
循環血液血小板は、少量の巨核球由来のｍＲＮＡおよび完全に機能的なタンパク質の生合成能力を保持するが、無核である。（Ｇｎａｔｅｎｋｏら、Ｂｌｏｏｄ１０１，２２８５−２２９３（２００３））。本態性血小板血症（ＥＴ）は、巨核球の腫瘍性増殖の増加、循環血小板の数の上昇、および考慮すべき血栓性および出血性イベント、しばしば神経症状によって特徴づけられる骨髄増殖性疾患のサブタイプである（Ｎｉｍｅｒ，Ｂｌｏｏｄ９３，４１５−４１６（１９９９））。ＥＴは、男女に等しい頻度で見られるが、３０歳での付加的な女性の発生率のピークにより、この年齢以降の女性の明らかに高い疾病有病率が説明され得る。ＥＴの分子基盤は確立されたままであるが、歴史的に「クローナルな」疾患であると考えられてきた。（Ｅｌ−Ｋａｓｓａｒら、Ｂｌｏｏｄ８９，１２８（１９９７）；「Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ＥＴ  ｉｓ  ａ  ｃｌｏｎａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｗｉｔｈ  ｏｒｉｇｉｎ  ｉｎ  ａ  ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ」ＰＪ  Ｆｉａｌｋｏｗ，Ｂｌｏｏｄ１９８１  ５８：９１６−９１９）。ＥＴ血小板のサブセットに明白な血小板容積の誇張の他には、細胞は、それらの正常な対応物から形態学的に区別がつかないままである。ＥＴについて現在利用可能な機能的または診断的試験はなく、他の起こり得る血液疾患の排除によって診断されるままである。年間１００，０００件中２〜３件の発病率推定は、他のタイプの白血病と矛盾しないが、有病率は、ＥＴに伴う低死亡率のために、少なくとも１０倍高い。
【０００６】
ＥＴについての現在の治療は、主に血栓性／出血性出来事の予防に焦点を当て、血液血小板レベルの非特異的減少を必然的に含む。しかしながら、これらの存在する治療法に、病態の原因となる悪性腫瘍を駆り立てる腫瘍前駆細胞に特異的に焦点を当てているものはない。例えば、細胞毒性化学療法を用いたＥＴの処置は、腫瘍細胞を減量させるが、残留前駆細胞を残していく。これは結果として、前駆細胞から新規の腫瘍細胞が生じ、病態の継続がもたらされる。加えて、ＥＴを有する多くの個体が、ヒドロキシウレアなどのフロントライン処置への耐性を生じるか、または有害な副作用のためにこれらの薬物をまとめて使用中止する。
【０００７】
真性多血症
真性多血症（ＰＶ）の患者は、赤血球産生の増加を示す。処置は、赤血球の余剰数を減少させることを対象とする。ＰＶは、血球減少および骨髄低形成および線維症を伴う原発性骨髄線維症に類似するその後期において段階を発展させ得る。ｉｎ−ｖｉｔｒｏで増殖の増加および造血性前駆体の生存を引き起こす、染色体９上のヤヌスキナーゼ２遺伝子（ＪＡＫ２）の遺伝子変異がＰＶを有する患者の大半で同定されている。ＰＶを有する患者は、心血管および血栓性事象および急性骨髄性白血病または原発性骨髄線維症への形質転換のリスクが増大する。ＰＶの処置は、ヘマトクリット値を男性で４５％未満、女性で４０％未満に維持するために間欠的な慢性の瀉血を含む。他の可能な処置としては、ヒドロキシウレア、インターフェロン−α、および低用量アスピリンを含む（ｉｎｃｌｕｄｅｅ）。
【０００８】
骨髄線維症
骨髄線維症またはＭＦ、または原発性骨髄線維症は、ＥＴと同一の疾病スペクトラムの骨髄増殖性腫瘍である。ＭＦを有する患者はしばしば、その骨髄にＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異がある。時折、ＥＴはＭＦへと進展する。ＪＡＫ２阻害は、ヤヌスキナーゼ阻害剤である、ルキソリチニブ（Ｊａｋａｆｉ（登録商標））が承認されている国ではＭＦに対する標準治療であると現在考えられている。Ｊａｋａｆｉ（登録商標）などの、ＪＡＫ２阻害剤が、疾病の原因である白血病性クローンの増殖を選択的に阻害するという証拠はなく、ゆえにそれらは「疾患修飾」ではない可能性がある。
【０００９】
急性骨髄性白血病
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は骨髄系の血球（ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｉｎｅ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）の癌である。ＡＭＬは、成人に影響する最も一般的な急性白血病である。ＡＭＬを有する患者は、骨髄に蓄積し正常な血球の産生を妨害する異常白血球の急速な増殖を有する。正常な骨髄と白血球細胞を置き換えると赤血球、血小板、および正常な白血球を減少させる。ＡＭＬの症状は、疲労、息切れ、青あざや出血が起こりやすくなる、感染のリスクの増加を含む。急性白血病のように、ＡＭＬは急速に進行し、処置せずにいると一般的には数週間または数か月で死に至る。ＡＭＬに対する標準治療は、寛解を誘導することを目指した化学療法を用いる処置であり、患者は造血幹細胞移植を受けることになり得る。
【００１０】
骨髄異形成症候群
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、血液および骨髄の癌を含む症状の集合体である。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病などの疾病を含む。未熟な血液幹細胞（芽球）は、健常な赤血球、白血球または血小板にならない。芽球は、骨髄内または血液へと移動した直後に死亡する。これが、健常な白血球、赤血球および／または血小板を骨髄内で形成するための余地を減らす。
【００１１】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、骨髄クラスの血球（ｍｙｅｌｏｉｄ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）の無効造血を必然的に含む血液学的医学的症状の集合体である。ＭＤＳを有する患者は、しばしば重症貧血症を発症し、頻回の輸血を必要とする。低または機能疾患性の血小板および好中球を要因として、それぞれ、出血および感染のリスクも起こる。疾病が悪化し、患者は進行性の骨髄機能不全によって引き起こされる血球減少症（低血球数）を発症する場合もある。疾病が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）へと形質転換する場合もある。骨髄芽球の全体割合が特定のカットオフ（ＷＨＯについては２０％およびＦＡＢについては３０％）を超えて上昇すれば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）への形質転換が起きたと言われる。
【００１２】
それゆえ、特に一般に処方されるこの疾患へのフロントライン治療に対して耐性があるまたはその結果として有害事象を経験した個体において、疾病の悪性表現型の原因である腫瘍前駆細胞を標的とする、ＥＴ、ＰＶ、ＭＦ、ＣＭＬおよびＡＭＬなどの骨髄増殖性疾患または腫瘍、および骨髄異形成症候群に対する新規の処置が必要とされる。
【００１３】
この明細書全体を通して、種々の特許、特許出願および他のタイプの刊行物（例えば、雑誌記事）が参照される。本明細書に引用するすべての特許、特許出願、および刊行物の開示は全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｅｌ−Ｋａｓｓａｒら、Ｂｌｏｏｄ８９，１２８（１９９７）；「Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ＥＴ  ｉｓ  ａ  ｃｌｏｎａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｗｉｔｈ  ｏｒｉｇｉｎ  ｉｎ  ａ  ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ」ＰＪ  Ｆｉａｌｋｏｗ，Ｂｌｏｏｄ１９８１  ５８：９１６−９１９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本明細書に提供される発明は、特に、これらの疾病に特有の腫瘍前駆細胞を標的とすることによる、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、骨髄線維症（ＭＦ）、および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの骨髄増殖性腫瘍に伴う症状を処置および軽減するためにテロメラーゼ阻害剤化合物を使用するための方法を開示する。本明細書に提供される発明は、特に、これらの疾病に特有の異常に高い数の細胞の産生の原因である腫瘍前駆細胞を標的とすることによる、例えば、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病などの骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）に伴う症状を処置および軽減するためにテロメラーゼ阻害剤化合物を使用するための方法も開示する。
【００１６】
従って、一態様では、それを必要とする個体における、骨髄増殖性腫瘍に伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が骨髄増殖性腫瘍に伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする。いくつかの実施形態では、症状は、頭痛、眩暈または立ちくらみ、胸部痛、脱力感、失神、視力の変化、四肢の痺れまたは刺痛、発赤、四肢のずきずきした痛みまたは灼熱痛（紅痛症）、脾腫、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、血便、または脳卒中を含む。いくつかの実施形態では骨髄増殖性腫瘍は、例えば、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、骨髄線維症（ＭＦ）、および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異（ａｌｌｅｌｉｃ  ｂｕｒｄｅｎ）の割合を低減させる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００１７】
従って、一態様では、それを必要とする個体における、本態性血小板血症に伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が本態性血小板血症に伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする。いくつかの実施形態では、症状は、頭痛、眩暈または立ちくらみ、胸部痛、脱力感、失神、視力の変化、四肢の痺れまたは刺痛、発赤、四肢のずきずきした痛みまたは灼熱痛（紅痛症）、脾腫、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、血便、または脳卒中を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法は、ヒドロキシウレア、アナグレリド、またはインターフェロンα−２Ｂである。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００１８】
別の態様では、骨髄増殖性腫瘍または骨髄異形成症候群を有すると診断されたまたは疑われる個体における、腫瘍前駆細胞の増殖を減少させるための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が個体の腫瘍前駆細胞の増殖を減少させることを特徴とする。いくつかの実施形態では骨髄増殖性腫瘍は、例えば、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、骨髄線維症（ＭＦ）、および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態では、ＥＴについて、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、結果として個体の血液中で約６００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。いくつかの実施形態では、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、結果として個体の血液中で４００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は血栓塞栓症を経験しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、腫瘍細胞の増殖の減少は、結果として、テロメラーゼ阻害剤の投与開始後２か月以内またはそれ以下で、個体の血液中で約４００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、腫瘍細胞の増殖の減少は、結果として、テロメラーゼ阻害剤の投与開始後１か月以内またはそれ以下で、個体の血液中で約４００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、例えばＭＦに対して、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、結果として、個体の血液中で約１００×１０９／Ｌを超える血小板数をもたらす。いくつかの実施形態では、例えばＭＦに対して、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、結果として、少なくとも９０ｇ／Ｌ、または１００ｇ／Ｌまたは１１０ｇ／Ｌまたは１２０ｇ／Ｌの改変されたヘモグロビン値になる。いくつかの実施形態では、例えばＭＦに対して、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、結果として、少なくとも１．０×１０９／Ｌまたは少なくとも２．０×１０９／Ｌの改変された絶対好中球数になる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’��端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００１９】
別の態様では、本態性血小板血症を有すると診断されたまたは疑われる個体における、腫瘍前駆細胞の増殖を減少させるための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が個体の腫瘍前駆細胞の増殖を減少させることを特徴とする。いくつかの実施形態では、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、結果として、個体の血液中で約６００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。いくつかの実施形態では、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、結果として、個体の血液中で約４００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は血栓塞栓症を経験しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、腫瘍細胞の増殖の減少は、結果として、テロメラーゼ阻害剤の投与開始後２か月以内またはそれ以下で、個体の血液中で約４００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、腫瘍細胞の増殖の減少は、結果として、テロメラーゼ阻害剤の投与開始後１か月以内またはそれ以下で、個体の血液中で約４００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法は、ヒドロキシウレア、アナグレリド、またはインターフェロンα−２Ｂである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００２０】
別の態様では、本態性血小板血症を有すると診断されたまたは疑われる個体の血液中、血小板数を約４００×１０３／μＬ未満に維持するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が個体の血小板数を約４００×１０３／μＬ未満に維持することを特徴とする。いくつかの態様では、テロメラーゼ阻害剤は、２週間に１回以下で投与される。他の態様では、テロメラーゼ阻害剤は、個体の血液中、血小板数を約１５０×１０３／μＬから約４００×１０３／μＬ間に維持するために投与される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の��意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法は、ヒドロキシウレア、アナグレリド、またはインターフェロンα−２Ｂである。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００２１】
従って、一態様では、それを必要とする個体における、真性多血症（ＰＶ）に伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が真性多血症に伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする。いくつかの実施形態では、症状は、頭痛、眩暈または立ちくらみ、胸部痛、脱力感、失神、視力の変化、四肢の痺れまたは刺痛、息切れ、脱力感または疲労感、脾腫、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、または血便を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、赤芽球の増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は赤芽球コロニー形成単位を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００２２】
従って、一態様では、それを必要とする個体における、骨髄線維症に伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が骨髄線維症に伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする。いくつかの実施形態では、症状は脾腫および脾臓痛、早期満腹感、貧血症、骨痛、疲労、発熱、盗汗、体重減少、脱力感、失神、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、血便、または脳卒中を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００２３】
別の態様では、骨髄増殖性腫瘍または骨髄異形成症候群を有すると診断されたまたは疑われる個体における、骨髄繊維化を減少させるための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が個体の骨髄繊維化を減少させることを特徴とする。別の態様では、個体の血液中で約１００×１０９／Ｌを超える血小板数を維持するための、ＭＦを有する患者における方法を本明細書に提供し、該方法は臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が血小板数を増加させることを特徴とする。別の態様では、ヘモグロビン値を少なくとも９０ｇ／Ｌ、または１００ｇ／Ｌまたは１１０ｇ／Ｌまたは１２０ｇ／Ｌに維持するための、ＭＦを有する患者における方法を本明細書に提供し、該方法は臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与がヘモグロビン値を増加させることを特徴とする。別の態様では、絶対好中球数を少なくとも１．０×１０９／Ｌまたは少なくとも２．０×１０９／Ｌに維持するための、ＭＦを有する患者における方法を本明細書に提供しを本明細書に提供し、該方法は臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が好中球数を増加させることを特徴とする。いくつかの態様では、テロメラーゼ阻害剤は、２週間に１回以下で投与される。他の態様では、テロメラーゼ阻害剤は、個体の血液中、血小板数を約１５０×１０３／μＬから約４００×１０３／μＬ間に維持するために投与される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラー���阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。
【００２４】
従って、一態様では、それを必要とする個体における、急性骨髄性白血病に伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が急性骨髄性白血病に伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする。いくつかの実施形態では、症状は、脾腫および脾臓痛、貧血症、骨痛、疲労、発熱、盗汗、体重減少、脱力感、失神、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、血便、または脳卒中を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。本明細書のいくつかの実施形態では、個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異がある。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００２５】
従って、一態様では、それを必要とする個体における、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病などの、骨髄異形成症候群に伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が骨髄異形成症候群に伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする。いくつかの実施形態では、症状は息切れ、疲労、脱力感、失神、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、血便、点状出血、または脳卒中を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドはテロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは１０〜２０塩基対の長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分は、リンカーを介してオリゴヌクレオチドの５’および／または３’末端に結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は薬学的に許容され得る賦形剤と共に投与される。明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の投与は、一つ以上の腫瘍前駆細胞とテロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書の任意の実施形態のいくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
それを必要とする個体における、骨髄増殖性腫瘍または骨髄異形成症候群に伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法であって、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を前記個体に投与することを含み、前記テロメラーゼ阻害剤の投与が骨髄増殖性腫瘍または骨髄異形成症候群に伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする、前記方法。
（項目２）
前記骨髄増殖性腫瘍が、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄線維症（ＭＦ）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記症状が、頭痛、眩暈または立ちくらみ、胸部痛、脱力感、失神、視力の変化、四肢の痺れまたは刺痛、発赤、四肢のずきずきした痛みまたは灼熱痛（紅痛症）、脾腫、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、口または歯茎からの出血、血便、または脳卒中を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）が、本態性血小板血症（ＥＴ）または真性多血症（ＰＶ）である、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）が、骨髄線維症（ＭＦ）である、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、項目２に記載の方法。
（項目７）
前記骨髄異形成症候群が、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）が、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）である、項目７に記載の方法。
（項目９）
骨髄増殖性腫瘍または骨髄異形成症候群を有すると診断されるまた疑われる個体の腫瘍前駆細胞の増殖を減少させるための方法であって、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を前記個体に投与することを含み、前記テロメラーゼ阻害剤の投与が前記個体の腫瘍前駆細胞の増殖を減少させることを特徴とする、前記方法。
（項目１０）
前記骨髄増殖性腫瘍が、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄線維症（ＭＦ）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群より選択される、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）が、本態性血小板血症（ＥＴ）または真性多血症（ＰＶ）である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）が、骨髄線維症（ＭＦ）である、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、項目１０に記載の方法。
（項目１４）
前記骨髄異形成症候群が、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）からなる群より選択される、項目９に記載の方法。
（項目１５）
腫瘍前駆細胞の増殖の減少が、前記個体の前記血液中、約６００×１０３／μＬ未満の血小板数をもたらす、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
前記個体が、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法に耐性である、または不耐性である、項目９に記載の方法。
（項目１７）
本態性血小板血症を有すると診断されたまたは疑われる個体の前記血液中で、血小板数を約４００×１０３／μＬ未満間に維持するための方法であって、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を前記個体に投与することを含み、前記テロメラーゼ阻害剤の投与が前記個体の血小板数を約４００×１０３／μＬ未満に維持することを特徴とする、前記方法。
（項目１８）
前記テロメラーゼ阻害剤が、２週間に１回以下で投与される、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
骨髄増殖性腫瘍または骨髄異形成症候群を有すると診断されるまたは疑われる個体の骨髄繊維化を減少させる方法であって、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を前記個体に投与することを含み、前記テロメラーゼ阻害剤の投与が前記個体の骨髄繊維化を減少させることを特徴とする、前記方法。
（項目２０）
前記テロメラーゼ阻害剤が、オリゴヌクレオチドを含む、項目９に記載の方法。
（項目２１）
前記オリゴヌクレオチドが、テロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的である、項目１３に記載の方法。
（項目２２）
前記オリゴヌクレオチドが、１０−２０塩基対の長さである、項目１４に記載の方法。
（項目２３）
前記オリゴヌクレオチドが、配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む、項目１５に記載の方法。
（項目２４）
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む、項目２０に記載の方法。
（項目２５）
前記オリゴヌクレオチドが、複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記オリゴヌクレオチドが、前記オリゴヌクレオチドの前記５’および／または３’末端に結合する脂質部分をさらに含む、項目２０に記載の方法。
（項目２７）
前記脂質部分が、前記オリゴヌクレオチドの前記５’および／または３’末端にリンカーを介して結合する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記リンカーが、グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーである、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記脂質部分が、パルミトイル（Ｃ１６）部分である、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記テロメラーゼ阻害剤がｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである、項目９に記載のいずれかひとつに記載の方法。
（項目３１）
前記テロメラーゼ阻害剤が薬学的に許容され得る賦形剤と投与される、項目９に記載の方法。
（項目３２）
前記テロメラーゼ阻害剤が、経口、静脈内、皮下、筋肉内、局所、腹腔内、鼻腔内、吸入、または眼内投与用に製剤化される、項目９に記載の方法。
（項目３３）
前記治療有効量の前記テロメラーゼ阻害剤の投与が、一つ以上の腫瘍前駆細胞と前記テロメラーゼ阻害剤を接触させることを含む、項目９に記載の方法。
（項目３４）
前記有効量のテロメラーゼ阻害剤が、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
前記有効量のテロメラーゼ阻害剤が、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
前記テロメラーゼ阻害剤の投与がサイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない、項目９に記載の方法。
（項目３７）
前記個体が、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異を有する、項目９に記載の方法。
（項目３８）
前記テロメラーゼ阻害剤の投与が、前記個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記テロメラーゼ阻害剤の投与が、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する、項目９に記載の方法。
（項目４０）
前記テロメラーゼ阻害剤の投与が、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する、項目９に記載の方法。
（項目４１）
ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害が、ＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは独立している、項目４０に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１Ａ】巨核球増殖および分化に与えるＩｍｅｔｅｌｓｔａｔの効果を表す。
【図１Ｂ】巨核球増殖および分化に与えるＩｍｅｔｅｌｓｔａｔの効果を表す。
【図２】巨核球コロニー形成単位（ＣＦＵ−Ｍｅｇａ）の用量反応曲線を表す。
【図３】細胞減少を必要とし既存療法が不成功であったかまたはそれに不耐性である、または標準治療を拒絶した本態性血小板血症を有する患者における、Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ（ＧＲＮ１６３Ｌ）の活性を評価する第ＩＩ相試験から研究主要評価項目（血液学的奏効）についての結果を表す（第ＩＩ相Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ  ＥＴ研究）。ＣＲは、完全寛解であり、ＰＲは部分寛解である。血小板数≦４００×１０３／μＬが最初に発生するまでの時間は、菱形で表され、完全寛解までの時間は円で示される。
【図４Ａ】研究の副次的評価項目（ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異）についての第ＩＩ相Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ  ＥＴ研究の結果を示す。ＰＲは部分寛解である。図４Ａは、ベースラインの時点から月単位の時間関数として、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ％遺伝子変異割合を示す。図４Ｂは、ベースラインの時点からの時間の関数として、遺伝子変異（％）の中央値を示す。
【図４Ｂ】研究の副次的評価項目（ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異）についての第ＩＩ相Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ  ＥＴ研究の結果を示す。ＰＲは部分寛解である。図４Ａは、ベースラインの時点から月単位の時間関数として、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ％遺伝子変異割合を示す。図４Ｂは、ベースラインの時点からの時間の関数として、遺伝子変異（％）の中央値を示す。
【図５】探索的評価項目（ＣＦＵ−Ｍｅｇａ）についての第ＩＩ相Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ  ＥＴ研究結果を示す。
【図６】５日目、７日目、９日目の、健常ドナーから得たＣＤ３４陽性細胞およびＡＭＬ患者からのＣＤ３４陽性細胞の、Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔを用いたｉｎ−ｖｉｔｒｏでの処理後の培養物中での細胞増殖の割合を示す。
【図７】原発性骨髄線維症の患者からの、巨核球増殖および分化に与えるｉｍｅｔｅｌｓｔａｔの効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、特に、腫瘍前駆細胞の増殖を減少させるおよび個体の症状を軽減するための方法を提供する。本明細書に提供する発明は、特に、これらの疾病に特有の腫瘍前駆細胞を標的とすることによる、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症、骨髄線維症、および急性骨髄性白血病などの骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）に伴う症状を処置および軽減するためのテロメラーゼ阻害剤化合物を使用するための方法を開示する。本明細書に提供する発明は、特に、これらの疾病に特有の異常に高い数の細胞の産生の原因である腫瘍前駆細胞を標的とすることによる、例えば、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病などの骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）に伴う症状を処置および軽減するためにテロメラーゼ阻害剤化合物を使用するための方法も提供する。本発明者は、テロメラーゼ阻害剤（ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔなど）が、ＭＰＮおよびＭＤＳを有する個体の循環血液血小板レベルを効果的に減少させることができるという驚くべき発見をなした。加えて、血小板レベルのこの減少は、ヤヌスキナーゼ２遺伝子（ＪＡＫ２）の一般的なＥＴ関連変異（おおよそ５０％のＥＴ症例で見られる）とは独立して見られ、ＥＴに対する一般的なフロントライン治療であるヒドロキシウレアを用いた処置に以前は耐性であった個体において有効である。また、ＥＴを有すると診断されたまたは疑われる個体の血液中で比較的正常な範囲に血小板数を維持するためにテロメラーゼ阻害剤（例えば、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ）を使用するための方法も本明細書に提供する。理論に束縛されることなく、ＭＰＮおよびＭＤＳに対する他の一般的な処置とは異なり、本発明の方法で使用されるテロメラーゼ阻害剤化合物は、具体的にはこの状態の原因である悪性腫瘍を駆り立てる腫瘍前駆細胞を特異的に阻害するとみられる。
【００２８】
Ｉ．一般技術
別段の指示がない限り、本発明の実行は、当業者に周知である、核酸化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学における従来の技術を採用する。かかる技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第二版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第三版（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌ，２００１）、（本明細書では「Ｓａｍｂｒｏｏｋ」としてまとめて言及する）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編，１９８７，２００１年までの増刊を含む）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓら、編，１９９４）などの文献に十分に説明されている。核酸は、例えば、Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８２）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．４７：４１１−４１８；Ａｄａｍｓ（１９８３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０５：６６１；Ｂｅｌｏｕｓｏｖ（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．５  ２５：３４４０−３４４４；Ｆｒｅｎｋｅｌ（１９９５）Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９：３７３−３８０；Ｂｌｏｍｍｅｒｓ（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３３：７８８６−７８９６；Ｎａｒａｎｇ（１９７９）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：９０；Ｂｒｏｗｎ（１９７９）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８：１０９；Ｂｅａｕｃａｇｅ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔ．２２：１８５９；ＫｏｍｂｅｒｇおよびＢａｋｅｒ，ＤＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，第二版．（フリーマン，サンフランシスコ，１９９２）；Ｓｃｈｅｉｔ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｓ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，ニューヨーク，１９８０）；ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，９０：５４３−５８４，１９９０に記載の、周知の化学合成技術によってｉｎ−ｖｉｔｒｏで合成されることができる。
【００２９】
ＩＩ．定義
用語「ヌクレオシド」は、下記に表す一般構造を有する部分を意味し、Ｂは核酸塩基を表し、２’炭素は下記に説明するように置換され得る。オリゴマーまたはポリマーに組み込まれたとき、３’炭素は酸素または窒素原子にさらに結合する。
【化１】
2020041001.tif 000003
【００３０】
この構造は、２’−デオキシおよび２’−ヒドロキシル（すなわちデオキシリボースおよびリボース）形態、および類似体を含む。あまり一般的ではないが、５’−ＮＨ基を５’−酸素に置き換えることができる。「類似体」は、ヌクレオシドに関して、修飾核酸塩基部分（下記の「核酸塩基」の定義を参照）および／または２’−フルオロ糖などの修飾糖部分、およびさらなる類似体を有する合成ヌクレオシドを含む。かかる類似体は、一般的に、結合特性に、例えば安定性、特異性またはその他、に影響するように指定される。用語ヌクレオシドは、例えばＫｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｂａｋｅｒ，ＤＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，第二版（フリーマン，サンフランシスコ，１９９２）に記載されるように２’−デオキシおよび２’−ヒドロキシル形態を含む天然ヌクレオシドおよび類似体を含む。「類似体」は、ヌクレオシドに関して、例えば、Ｓｃｈｅｉｔ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｓ（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ，ニューヨーク，１９８０）によって広く説明されるように、修飾核酸塩基部分（下の「核酸塩基」の定義を参照）および／または修飾糖部分を有する合成ヌクレオシドを含む。かかる類似体は、Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ９０：５４３−５８４，１９９０）によって開示されるように、結合特性、たとえば、安定性、特性またはその他を亢進するように指定された合成ヌクレオシドを含む。かかるヌクレオシドを含有するオリゴヌクレオチド、および合成ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド間結合を一般的に含有するものは、それ自体が「類似体」と言及されてよい。
【００３１】
「ポリヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」は、約２から約２００個の近接サブユニットを有するリボースおよび／またはデオキシリボースヌクレオシドサブユニットポリマーまたはオリゴマーを意味する。ヌクレオシドサブユニットは、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、Ｐ３’→Ｎ５’ホスホロアミデート、Ｎ３’→Ｐ５’ホスホロアミデート、Ｎ３→Ｐ５’チオホスホロアミデート、およびホスホロチオエート結合を含むがこれらに限定されない種々のサブユニット間結合によって連結されることができる。当該用語は、当業者に既知の、糖（例えば、２’置換）、塩基（前出の「ヌクレオシド」の定義を参照）、および３’および５’末端への修飾を有するポリマーまたはオリゴマーも含む。オリゴヌクレオチド部分が複数のサブユニット間結合を含む実施形態では、各結合は同一の化学を使用して形成されてよく、または結合化学物質の混合物が使用されてもよい。オリゴヌクレオチドが「ＡＴＧＵＣＣＴＧ」などの、文字の配列によって表されるとき、ヌクレオチドは左から右に５’→３’の順であることが理解されるだろう。この方法でのオリゴヌクレオチドの塩基配列の表現は、オリゴヌクレオチドに任意の特定のタイプのヌクレオシド間サブユニットの使用を意味するものではない。
【００３２】
「核酸塩基」は（ｉ）天然ＤＮＡおよびＲＮＡ核酸塩基（ウラシル、チミン、アデニン、グアニンおよびシトシン）、（ｉｉ）修飾核酸塩基または核酸塩基類似体（例えば、５−メチルシトシン、５−ブロモウラシル、またはイノシン）および（ｉｉｉ）核酸塩基類似体を含む。核酸塩基類似体は、その分子構造が一般的なＤＮＡまたはＲＮＡ塩基のそれを模倣した化合物である。
【００３３】
用語「脂質」は、有機溶媒に可溶であるが、水では、溶けるとしても難溶性の物質を包含するように本明細書に広く使用される。用語、脂質は、炭化水素、オイル、脂肪（脂肪酸およびグリセリドなど）、ステロール、ステロイドおよびこれらの化合物の誘導体形態を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、脂質は、脂肪酸およびその誘導体、炭化水素およびその誘導体、およびコレステロールなどのステロールである。脂肪酸は通常、偶数の炭素原子（通常１２〜２４個の炭素）を直鎖中に含有し、飽和または不飽和であってよく、種々の置換基を含有することができるまたは含有するように修飾されることができる。簡素化のために、用語「脂肪酸」は、脂肪またはエステルなどの、脂肪酸誘導体も包含する。いくつかの実施形態では、用語「脂質」は、脂質および親水性部分の両方を含有する両親媒性化合物も含む。
【００３４】
「テロメラーゼ阻害剤」は、哺乳類細胞のテロメラーゼ逆転写酵素の活性を減少させるまたは阻害することができる化合物である。かかる阻害剤は、本明細書に記載のような、低分子化合物、または本明細書に記載のような、オリゴヌクレオチドを含むｈＴＲ鋳型阻害剤であってよい。一態様では、テロメラーゼ阻害剤は、ＩｍｅｔｅｌｓｔａｔまたはＩｍｅｔｅｌｓｔａｔナトリウムである。別の態様では、テロメラーゼ阻害剤はＧＲＮ１６３Ｌである。
【００３５】
「ｈＴＲ鋳型阻害剤」は、ヒトテロメラーゼのＲＮＡ成分の鋳型領域を遮断し、それにより酵素の活性を阻害する化合物である。阻害剤は、典型的には、この領域にハイブリダイズすることができるオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列５’−ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ−３’を有する、この領域のさらに特定の部分にハイブリダイズするのに有効な配列を含む。
【００３６】
化合物の存在下での細胞の増殖が化合物の非存在下で観察されるそれ未満である場合、化合物は「細胞の増殖を阻害する」と言われる。つまり、細胞の増殖は、化合物の存在下で減速されるかまたは停止される。癌細胞増殖の阻害は、例えば、細胞の数または細胞の拡大率の減少、腫瘍体積または腫瘍増殖率における減少、または処置を受けている被験体の生存率における増加によって証明されてよい。
【００３７】
「ヌクレアーゼ耐性結合」を有するオリゴヌクレオチドは、体内で共通の細胞外および細胞内ヌクレアーゼによる、ハイブリダイズしていないまたはハイブリダイズした形態で、そのバックボーンが実質的にヌクレアーゼ切断に耐性であるサブユニット結合を有するものを意味する。すなわち、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドが露出されている体内の正常なヌクレアーゼ条件下でほとんどもしくは全くヌクレアーゼ切断を示さない。下記に記載のＮ３’→Ｐ５’ホスホロアミデート（ＮＰ）またはＮ３’→Ｐ５’チオホスホロアミデート（ＮＰＳ）結合は、ヌクレアーゼ耐性である。
【００３８】
「個体」は、任意の一般的な実験室モデル生物などの哺乳類であり得る。哺乳類は、ヒトおよび非ヒト霊長目、家畜、競技用動物、ペット、マウス、ラット、および他のげっ歯類を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００３９】
「有効量」または「治療有効量」または「臨床有効量」は、テロメラーゼ阻害剤などの、単回投与または一連の投与の一部のいずれかとして哺乳類の被検体に投与される、所望の治療効果を生成するのに有効な、治療化合物の量を意味する。
【００４０】
本明細書で使用するとき、「腫瘍細胞」は、相対的に自律的な増殖を呈する細胞を意味し、それゆえそれらは細胞増殖の制御の深刻な喪失を特徴とする異常増殖表現型を呈する。腫瘍細胞は、活発に複製するまたは一時的に非複製休止状態（Ｇ１またはＧ０）であってよい細胞を含み、同様に、腫瘍細胞は、十分に分化した表現型、低分化表現型、または両方のタイプの細胞の混合物を有する細胞を含んでよい。ゆえに、すべての腫瘍細胞が所与の時点で必ずしも細胞を複製しているわけではない。「腫瘍細胞」は、良性腫瘍の細胞および悪性腫瘍の細胞を包含する。
【００４１】
本明細書で使用するとき、「腫瘍前駆細胞」は、腫瘍性になる能力を有する細胞構成の細胞を意味する。
【００４２】
本明細書で使用するとき、用語「腫瘍」または「腫瘍症」または「腫瘍性」は、異常な新規細胞の増殖を意味する。過形成とは異なり、腫瘍性増殖は、根源の刺激がなくても持続する。
【００４３】
本明細書で使用するとき、単数形は、別段の指示がない限り、複数の言及も含む。
【００４４】
本明細書に記載の本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「を含む」、「からなる」、および「から本質的になる」を含むと理解される。
【００４５】
本明細書全体を通じて記載されるあらゆる最大数値限定は、あらゆる低い数値限定を、かかる低い数値限定が本明細書に明確に記載されているかのように含むことが意図される。本明細書全体を通じて記載されるあらゆる最小数値限定は、あらゆるそれより大きい数値限定を、かかるより大きい数値限定が本明細書に明確に記載されているかのように含むだろう。本明細書を通じて記載されるあらゆる数値範囲は、かかるより広い数値範囲内にあるあらゆるより狭い数値範囲を、かかるより狭い数値範囲が全て本明細書に明確に記載されているかのように、含むだろう。
【００４６】
ＩＩＩ．テロメラーゼ阻害剤化合物
テロメラーゼは、染色体端部にテロメア反復配列（ヒトでは配列５’−ＴＴＡＧＧＧ−３’を有する）の付加を触媒するリボ核タンパク質である。例えば、Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，１９９２，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：１１３−１２９を参照。酵素は、大半の癌細胞で発現するが、成熟した体細胞では発現しない。テロメアＤＮＡの喪失は、細胞老化の誘発において役割を果たし得る。Ｈａｒｌｅｙ，１９９１，Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ２５６：２７１−２８２を参照。皮膚、結合組織、脂肪、乳房、肺、胃、膵臓、卵巣、子宮頚、子宮、腎臓、膀胱、結腸、前立腺、中枢神経系（ＣＮＳ）、網膜および血液学的腫瘍（骨髄腫、白血病およびリンパ腫など）の癌からの細胞を含む、種々の癌細胞がテロメラーゼ陽性と示されてきた。テロメラーゼを標的とすることは、分裂細胞を無差別に標的とする化学療法レジメンに付随し得る多くの有害な副作用を回避し、悪性細胞と正常細胞間を高度に識別する処置の提供において有効であり得る。
【００４７】
今日までに同定されているテロメラーゼの阻害剤は、オリゴヌクレオチド（例えば、ヌクレアーゼ耐性結合を有するオリゴヌクレオチド）ならびに低分子化合物を含む。テロメラーゼ阻害剤化合物に関するさらなる情報は米国特許第７，９９８，９３８号に見出すことができ、その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４８】
Ａ．低分子化合物
テロメラーゼの低分子阻害剤は、例えば、ＢＲＡＣＯ１９（（９−（４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニルアミノ）−３，６−ビス（３−ピロロジノ（ｐｙｒｒｏｌｏｄｉｎｏ）プロピオンアミド）アクリジン（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６１（５）：１１５４−６２，２００２を参照）；ＤＯＤＣ（ジエチルオキサジカルボシアニン）、およびテロメスタチンを含む。これらの化合物は、テロメラーゼのＲＮＡ成分において不活性Ｇ４構造の形成を促進する、Ｇ４安定剤として作用し得る。テロメラーゼの他の低分子阻害剤は、ＢＩＢＲ１５３２（２−［（Ｅ）−３−ナフテン−２−イルブタ−２−エノイルアミノ］安息香酸）（Ｗａｒｄ＆Ａｕｔｅｘｉｅｒ，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６８：７７９−７８６，２００５、またＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（１８）：１５５６６−７２，２００２も参照）；ＡＺＴおよび他のヌクレオシド類似体、例えばｄｄＧおよびａｒａ−Ｇ（例えば、米国特許第５，６９５，９３２号および６，３６８，７８９号を参照）、およびＧａｅｔａらによって米国特許第５，７６７，２７８号，５，７７０，６１３号，５，８６３，９３６号，５，６５６，６３８号および５，７６０，０６２号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載される、特定のチオピリジン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、およびピリド［ｂ］チオフェン誘導体を含む。別の例は、米国特許第５，７６０，０６２号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される、３−クロロベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキシ−２’−［（２，５−ジクロロフェニルアミノ）チア］ヒドラジンを含む。
【００４９】
Ｂ．オリゴヌクレオチドをベースとするテロメラーゼ阻害剤：配列および組成
ヒトテロメラーゼのタンパク質およびＲＮＡ成分の両方をコードする遺伝子は、クローニングおよび配列決定されている（それぞれ、米国特許第６，２６１，８３６号および５，５８３，０１６号を参照されたく、その両方が参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドは、テロメラーゼタンパク質成分（そのヒト形態は、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、またはｈＴＥＲＴとして知られる）をコードするｍＲＮＡまたはテロメラーゼホロ酵素（そのヒト形態はヒトテロメラーゼＲＮＡ、またはｈＴＲとして知られる）のＲＮＡ成分に対して標的とされることができる。
【００５０】
ヒトテロメラーゼ（ｈＴＲ）のＲＮＡ成分のヌクレオチド配列は、５’→３’の方向の、下記に記載の配列（配列番号：１）で示される。配列は、リボヌクレオチドについての標準的な略語を用いて示される。当該配列は、ウリジン（Ｕ）はチミジン（Ｔ）によって置き換えられて、リボヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドによって置き換えられる、ｃＤＮＡの配列も表すと当業者は認識するだろう。ＲＮＡ成分の鋳型配列は、１、２、３テロメア反復単位で構成されるテロメア配列に相補的である、ヌクレオチド４６〜５６（５’−ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ−３’）によって定められる領域内に配置される。鋳型領域は、テロメラーゼが染色体端部に付加しテロメラーゼ酵素の活性に必須であるテロメア反復の配列を特定するために機能する（例えば、Ｃｈｅｎら、Ｃｅｌｌ１００：５０３−５１４，２０００；Ｋｉｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９８（１４）：７９８２−７９８７，２００１を参照）。ｍＲＮＡの破壊を阻害するまたは引き起こすためのアンチセンス、リボザイムまたは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）薬剤の指定は周知であり（例えば、Ｌｅｂｅｄｅｖａ，Ｉ，らＡｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，第４１巻：４０３−４１９，２００１年４月；Ｍａｃｅｊａｋ，Ｄ，ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第７３巻（９）：７７４５−７７５１，１９９９年９月、およびＺｅｎｇ，Ｙ．ら、ＰＮＡＳ第１００巻（１７）９７７９−９７８４頁，２００３年８月１９日を参照）、かかる薬剤はｈＴＥＲＴ  ｍＲＮＡを標的とするように指定されてよく、それによって癌細胞などの標的細胞のｈＴＥＲＴタンパク質の産生を阻害する（例えば、米国特許第６，４４４，６５０号および６，３３１，３９９号を参照）。
【００５１】
ｈＴＲ（つまり、酵素のＲＮＡ成分）を標的とするオリゴヌクレオチドは、テロメラーゼ機能のために必要な相互作用である、ｈＴＲとｈＴＥＲＴタンパク質の相互作用を遮断するまたあるいは妨害することによって、テロメラーゼ酵素活性の阻害剤として作用する（例えば、Ｖｉｌｌｅｐｏｎｔｅａｕら、米国特許第６，５４８，２９８号を参照）。
【００５２】
ｈＴＲの好ましい標的領域は鋳型領域であり、配列番号：１（ＧＧＧＵＵＧＣＧＧＡＧＧＧＵＧＧＧＣＣＵＧＧＧＡＧＧＧＧＵＧＧＵＧＧＣＣＡＵＵＵＵＵＵＧＵＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣＵＧＡＧＡＡＧＧＧＣＧＵＡＧＧＣＧＣＣＧＵＧＣＵＵＵＵＧＣＵＣＣＣＣＧＣＧＣＧＣＵＧＵＵＵＵＵＣＵＣＧＣＵＧＡＣＵＵＵＣＡＧＣＧＧＧＣＧＧＡＡＡＡＧＣＣＵＣＧＧＣＣＵＧＣＣＧＣＣＵＵＣＣＡＣＣＧＵＵＣＡＵＵＣＵＡＧＡＧＣＡＡＡＣＡＡＡＡＡＡＵＧＵＣＡＧＣＵＧＣＵＧＧＣＣＣＧＵＵＣＧＣＣＵＣＣＣＧＧＧＧＡＣＣＵＧＣＧＧＣＧＧＧＵＣＧＣＣＵＧＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＧＡＡＣＣＣＣＧＣＣＵＧＧＡＧＣＣＧＣＧＧＵＣＧＧＣＣＣＧＧＧＧＣＵＵＣＵＣＣＧＧＡＧＧＣＡＣＣＣＡＣＵＧＣＣＡＣＣＧＣＧＡＡＧＡＧＵＵＧＧＧＣＵＣＵＧＵＣＡＧＣＣＧＣＧＧＧＵＣＵＣＵＣＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＵＵＣＡＣＣＧＵＵＵＣＡＧＧＣＣＧＣＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＣＧＧＡＧＣＧＡＧＵＣＣＣＧＣＣＧＣＧＧＣＧＣＧＡＵＵＣＣＣＵＧＡＧＣＵＧＵＧＧＧＡＣＧＵＧＣＡＣＣＣＡＧＧＡＣＵＣＧＧＣＵＣＡＣＡＣＡＵＧＣＡＧＵＵＣＧＣＵＵＵＣＣＵＧＵＵＧＧＵＧＧＧＧＧＧＡＡＣＧＣＣＧＡＵＣＧＵＧＣＧＣＡＵＣＣＧＵＣＡＣＣＣＣＵＣＧＣＣＧＧＣＡＧＵＧＧＧＧＧＣＵＵＧＵＧＡＡＣＣＣＣＣＡＡＡＣＣＵＧＡＣＵＧＡＣＵＧＧＧＣＣＡＧＵＧＵＧＣＵ）のヌクレオチド３０〜６７にわたる。この領域を標的とするオリゴヌクレオチドは、本明細書で「ｈＴＲ鋳型阻害剤」と呼ばれる（例えば、Ｈｅｒｂｅｒｔら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ２１（４）：６３８−４２（２００２）を参照）。好ましくは、かかるオリゴヌクレオチドは、配列５’−ＣＵＡＡＣＣＣＵＡＡＣ−３’（配列番号：２３）を有する１１ヌクレオチド領域にいくつかの部分に相補的または近相補的な配列を含む。
【００５３】
別の好ましい標的領域は、ｈＴＲのヌクレオチド１３７−１７９にわたる領域である（Ｐｒｕｚａｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３０：５５９−５６８，２００２を参照）。この領域内で、１４１−１５３にわたる配列が好ましい標的である。ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２８４４２には、テロメラーゼを阻害するための少なくとも７ヌクレオチドの長さのオリゴヌクレオチドの使用が記載されており、オリゴヌクレオチドは、ｈＴＲのヌクレオチド１３７−１９６、２９０−３１９、および３５０−３８０を含む、鋳型領域の外にあるｈＴＲ配列の接触可能部分に相補的であるように指定される。好ましいｈＴＲ標的配列は、下記に述べられ、配列番号２〜２２によって同定される。
【００５４】
ｈＴＲ配列を標的とする治療的オリゴヌクレオチドの領域は、好ましくは正確に対応するｈＴＲ配列に相補的である。ある特定の例においてミスマッチは許容されてよいが、得られたオリゴヌクレオチド複合体の特異性および活性を低減してしまうことが予想される。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの塩基配列は、それゆえｈＴＲ標的に正確に相補的な少なくとも５ヌクレオチドの配列を含むように選択され、ｈＴＲ標的に正確に相補的な、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１５ヌクレオチドなど、より増加した長さの相補的配列が採用された場合、亢進されたテロメラーゼ阻害が得られ得る。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドの配列は、ｈＴＲ標的配列に正確に相補的な、少なくとも５から２０、少なくとも８から２０、少なくとも１０から２０または少なくとも１０から１５ヌクレオチドの配列を含む。
【００５５】
最適なテロメラーゼ阻害活性は、オリゴヌクレオチドの全長がｈＴＲ標的配列に相補的であるように選択された場合に得られ得る。しかしながら、オリゴヌクレオチドの全長が標的配列に完全に相補的である必要はなく、オリゴヌクレオチド配列は、標的配列に相補的でない領域を含んでよい。かかる領域は、例えば、精製を促進する配列などの他の特性を化合物に与えるために付加されてよい。あるいは、オリゴヌクレオチドはｈＴＲ標的配列に相補的な配列の多数の反復を含んでよい。
【００５６】
オリゴヌクレオチドが標的配列に相補的でない領域を含む場合、かかる領域は一般的には、５’または３’末端の一つまたは両方に位置する。ヒトテロメラーゼＲＮＡ（ｈＴＲ）を標的とする例示的な配列は以下を含む。
【表Ａ】
2020041001.tif 000004
【００５７】
オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は、任意の利用可能なオリゴヌクレオチド化学物質、例えば、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、Ｐ３’→Ｎ５’ホスホロアミデート、Ｎ３’→Ｐ５’ホスホロアミデート、Ｎ３’→Ｐ５’チオホスホロアミデート、およびホスホロチオエートを含んでよい。一般的に、必須ではないが、オリゴヌクレオチド内の全てのヌクレオシド間結合が同一タイプであるだろうが、オリゴヌクレオチド成分は異なる結合の混合物を使用して合成されてよい。
【００５８】
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つのＮ３’→Ｐ５’ホスホロアミデート（ＮＰ）またはＮ３’→Ｐ５’チオホスホロアミデート（ＮＰＳ）結合を有し、その結合は構造；３’−（−ＮＨ−−Ｐ（＝Ｏ）（−−ＸＲ）−−Ｏ−）−５’（式中ＸはＯまたはＳであり、Ｒは水素、アルキル、およびアリールからなる群より選択される）、およびＸＲがＯＨまたはＳＨであるとき、その薬学的に許容され得る塩によって表されてよい。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは全てのＮＰを含むかまたは、いくつかの実施形態では、すべてのＮＰＳ結合を含む。
【００５９】
一実施形態では、ｈＴＲ鋳型阻害剤オリゴヌクレオチドについての配列は、前述の配列番号：１のヌクレオチド４２−５４に相補的な配列である。この配列（ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ；配列番号：１２）およびＮ３’→Ｐ５’チオホスホロアミデート（ＮＰＳ）結合を有するオリゴヌクレオチドは、本明細書でＧＲＮ１６３として指定される。例えば、Ａｓａｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ６３：３９３１−３９３９（２００３）およびＧｒｙａｚｎｏｖら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ２２（５−８）：５７７−８１（２００３）を参照。
【００６０】
単独で投与されるオリゴヌクレオチドＧＲＮ１６３は、扁平上皮癌腫、乳房上皮、腎臓癌腫、腎臓腺癌、膵臓、脳、結腸、前立腺、白血病、リンパ腫、骨髄腫、表皮、子宮頸部、卵巣および肝臓癌細胞を含む、細胞培養物においてｉｎ−ｖｉｔｒｏで阻害活性を示している。
【００６１】
オリゴヌクレオチドＧＲＮ１６３は、小細胞および非小細胞両方の卵巣癌および肺癌を含む、種々の動物腫瘍モデルにおいて治療的に有効であるとも試験され示された（例えば、米国特許第７，９９８，９３８号を参照されたく、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。）
【００６２】
Ｃ．脂質−オリゴヌクレオチド複合体
いくつかの態様では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドをベースとするテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも一つの共有結合する脂質基を含む（米国公開第２００５／０１１３３２５号を参照されたく、それは参照により本明細書に組み込まれる）。この改変は、改変されていない形態に比べ、少量の複合されたオリゴヌクレオチドを使用して同等の生物学的効果が得られ得るように、より優れた細胞取り込み特性を提供する。ヒトの治療現場に適用した場合、これは毒性リスクの減少に翻訳され得、節約になる。
【００６３】
脂質基Ｌは、一般的には、炭化水素および脂肪酸の誘導体を含む、脂肪族炭化水素または脂肪酸であり、例としては、ミリスチン（テトラデカン）酸、パルミチン（ヘキサデカン）酸、およびステアリン（オクタデカン）酸などの１４〜２０個の炭素を有する飽和直鎖化合物、およびその対応する脂肪族炭化水素形態、テトラデカン、ヘキサデカンおよびオクタデカンが挙げられる。採用されてよい他の好適な脂質基の例としては、コレステロールなどのステロール、および置換脂肪酸および炭化水素、特にこれらの基のポリフッ素化形態が挙げられる。脂質基Ｌの範囲には、アミン、アミド、エステルおよびカルバメート誘導体などの誘導体を含む。誘導体のタイプは、しばしば以下に例示するように、オリゴヌクレオチドへの結合の様式によって決定される
【化２】
2020041001.tif 000005
（式中、Ｒは（ＣＨ２）１４ＣＨ３（パルミトイル）である）。この化合物は本明細書ではＧＲＮ１６３Ｌ（ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ）として指定する。
【００６４】
一例示的構造では、脂質部分はパルミトイルアミド（パルミチン酸に由来する）であり、アミノグリセロールリンカーを通じて、ＮＰＳ結合オリゴヌクレオチドの５’チオリン酸基に複合する。ＧＲＮ１６３について示された配列を有し、この方法（下記に示す）で複合されたＮＰＳオリゴヌクレオチドは、本明細書でＧＲＮ１６３Ｌ（Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ）と指定される。第二の例示的な構造では、パルミトイルアミドとしての脂質は、ＮＰＳオリゴヌクレオチドの末端３’アミノ基を通じて複合される。
【００６５】
Ｄ．医薬組成物
本発明のいくつかの態様では、医薬品として採用されるとき、本明細書に開示のテロメラーゼ阻害剤化合物は、薬学的に許容され得る賦形剤または担体と共に製剤化されることができ、医薬組成物へと製剤化される。
【００６６】
医薬品として採用されるとき、テロメラーゼ阻害剤化合物は医薬組成物の形態で投与され得る。これらの化合物は、経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および鼻腔内を含む種々の経路によって投与されることができる。これらの化合物は、注射および経口組成物のどちらでも有効である。かかる組成物は、薬学分野に周知の方法で調製され、少なくとも一つの活性化合物を含む。経口組成物として採用されるとき、本明細書に開示のテロメラーゼ阻害剤化合物は、薬学的に許容され得る保護剤によって胃での酸消化から保護される。
【００６７】
本発明は、一つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤または担体に伴うテロメラーゼ阻害剤化合物を、有効成分として、含有する医薬組成物も含む。本発明の組成物を作成するとき、有効成分は通常賦形剤または担体と混合されるか、賦形剤または担体によって希釈されるか、またはかかる賦形剤または担体内に封入されてカプセル、サシェ、紙または他の容器の形態をとり得る。賦形剤または担体が希釈剤として機能するとき、それは有効成分のためのビヒクル、担体、または媒体として作用する、個体、半固体、または液体材料であることができる。ゆえに、組成物は、例えば、１０重量％までの活性化合物、軟および硬ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液、および滅菌包装粉末を含有する錠剤、丸剤、散剤、トローチ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒体内で）、軟膏の形態をとり得る。
【００６８】
製剤の調製において、他の成分と組み合わせる前に、適切な粒子サイズを提供するために活性な凍結乾燥化合物を粉砕する必要があり得る。活性化合物が実質的に不溶性である場合、大抵は２００メッシュ未満の粒子サイズに粉砕される。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒子サイズは通常、製剤内で実質的に均一な分布を提供するために、例えば約４０メッシュに、粉砕することによって調整される。
【００６９】
活性化合物の対応する塩、例えば薬学的に許容され得る塩を調整、精製、および／または扱うのに好都合または望ましくあり得る。薬学的に許容され得る塩の例は、Ｂｅｒｇｅら、１９７７，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ」Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，第６６巻，１−１９頁に記載されている。例えば、化合物が陰イオン性である、または陰イオン性であり得る官能基を有する（例えば−ＣＯＯＨが−ＣＯＯ−であり得る）場合、塩は、好適な陽イオンを伴って形成されてよい。好適な無機カチオンの例としては、Ｎａ＋が含まれるが、これに限定されない。好適な有機カチオンの例としては、アンモニウムイオン（すなわち、ＮＨ４＋）および置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）を含むが、これに限定されない。
【００７０】
好適な賦形剤または担体のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースを含む。製剤はさらに、タルク、マグネシウムステアリン酸塩、および鉱物油などの潤滑剤；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピルなどの保存剤；甘味剤；および香味剤を含み得る。本発明の組成物は、当該分野で公知の手順を採用することにより、患者への投与後に有効成分の迅速な、持続または遅延放出を提供するように製剤化され得る。
【００７１】
組成物は、各用量が、約５ｍｇから約１００ｍｇまたはそれ以上、例えば任意の約１ｍｇから約５ｍｇ、１ｍｇから約１０ｍｇ、約１ｍｇから約２０ｍｇ、約１ｍｇから約３０ｍｇ、約１ｍｇから約４０ｍｇ、約１ｍｇから約５０ｍｇ、約１ｍｇから約６０ｍｇ、約１ｍｇから約７０ｍｇ、約１ｍｇから約８０ｍｇ、または約１ｍｇから約９０ｍｇを包括する、これらの値間の任意の範囲を含む、有効成分を含有する、単位剤形に製剤化され得る。用語「単位剤形」は、個人についての単位用量として好適な物理的に別個の単位を意味し、各単位は好適な医薬賦形剤または担体とともに所望の治療効果を生成するように算出された所定の量の活性物質を含有する。
【００７２】
テロメラーゼ阻害剤化合物は、広い用量範囲にわたって有効であり、通常は治療有効量で投与される。しかしながら、実際に投与されるテロメラーゼ阻害剤化合物の量は、処置されるべき状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重症度等を含む関連状況と照らし合わせて、医師によって決定されるだろうことが理解されるだろう。
【００７３】
錠剤などの固体組成物を調製については、本発明の化合物の均一な混合物を含有する固体製剤化前（ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）組成物を形成するために主要有効成分テロメラーゼ阻害剤化合物を医薬賦形剤または担体と混合する。これらの製剤化前組成物を均一と言及する場合、組成物が容易に、例えば錠剤、ピルおよびカプセルなどの等しく有効な単位剤形に細分することができるように有効成分が組成物全体に均一に分散されていることを意味する。
【００７４】
本発明の錠剤または丸剤は、持効性作用の利点を与える剤形を提供するためおよびテロメラーゼ阻害剤化合物を胃での酸加水分解から保護するためにコーティングされ得るか、あるいは配合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部投与成分および外部投与成分を、後者が前者を覆う包みの形で、含むことができる。２つの成分は、胃での崩壊に抵抗し、内部成分が十二指腸に無傷で通過するまたは放出を遅延することができるように機能する腸溶性層によって分離されることができる。種々の材料を、かかる腸溶性層またはコーティングのために使用することができ、かかる材料は、多数のポリマー酸、およびポリマー酸とセラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料の混合物を含む。
【００７５】
本発明の新規組成物が経口または注射による投与用に組み込まれ得る液体形態には、水溶液、好適な風味のシロップ、水性または油性懸濁液、および風味をつけた乳剤が、コーン油、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油などの食用油、ならびにエリキシル剤および類似の医薬ビヒクルとともに含まれる。
【００７６】
吸入またはガス注入用の組成物は、薬学的に許容され得る、水性または有機溶媒、またはそれらの混合物中の溶液および懸濁液、および粉末を含む。液体または固体組成物は、前述のような好適な薬学的に許容され得る賦形剤を含有し得る。組成物は、局所または全身作用のために口または鼻呼吸の経路により投与され得る。薬学的に許容され得る溶媒中の組成物は、不活性ガスを使用して噴霧され得る。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接吸入され得るか、または噴霧デバイスをフェイスマスク・テント、または間欠的陽圧呼吸器に取り付けることができる。溶液、懸濁液、または粉末組成物も、適切な方法で製剤を送達するデバイスから、経口または経鼻投与されることができる。
【００７７】
ＩＶ．本発明の方法
本明細書に提供されるテロメラーゼ阻害剤化合物（医薬組成物のような）は病態を調節するのに有用である。いくつかの実施形態では、細胞増殖性疾患は、テロメラーゼまたは細胞増殖（本態性血小板血症（ＥＴ）における血小板の異常産生に伴う腫瘍前駆細胞）または両方の発現または活性の増加に関連する。
【００７８】
いくつかの態様では、それを必要とする個体における、ＭＰＮに伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供する。いくつかの態様では、それを必要とする個体における、ＭＤＳに伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供する。また、ＭＰＮまたはＭＤＳを有する患者の腫瘍前駆細胞の増殖減少させるための方法、ならびにＭＰＮまたはＭＤＳを有すると診断されたまたは疑われる個体の血小板濃度および／または赤血球濃度および／または白血球濃度を正常レベルに維持するための方法も本明細書に提供する。
【００７９】
骨髄増殖性腫瘍、またはＭＰＮは、赤血球、血小板および顆粒球の前駆細胞などの、骨髄の悪性造血骨髄前駆細胞から生じる血液の癌である。悪性前駆細胞の増殖は、疾病に依存して、白血球、赤血球および／または血小板のいずれかの組み合わせの過剰産生をもたらす。これらの過剰産生された細胞は、異常でもあり得、さらなる臨床合併症をもたらし得る。種々のタイプの慢性骨髄増殖性疾患がある。ＭＰＮ疾病スペクトラムに含まれるものとしては、本態性血小板血症（ＥＴ）、真性多血症（ＰＶ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄線維症（ＭＦ）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病および急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｍｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）（ＡＭＬ）が挙げられる。
【００８０】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、血液および骨髄の癌を含む症状の集合体である。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、不応性貧血、芽球増加型不応性貧血、複数血球系異形成を伴う不応性血球減少症、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症、および慢性骨髄単球性白血病などの疾病を含む。未熟な血液幹細胞（芽球）が健全は赤血球、白血球または血小板にならない。芽球は骨髄内または血液に移動した直後に死亡する。これが、健常な白血球、赤血球および／または血小板を骨髄内で形成するための余地を減らす。
【００８１】
Ａ．本態性血小板血症
巨核球は、正常な血液凝固に必要な血小板の産生を担う骨髄細胞である。巨核球は通常１０，０００のうち１の骨髄細胞を占めているが、特定の疾病の過程で１０倍近くに数を増加させ得る。
【００８２】
巨核球は、骨髄の造血幹細胞前駆細胞に由来する。細胞がひとたび分化を完了し、成熟巨核球になると、血小板を産生するプロセスを開始する。多くのサイトカインが巨核球が血小板を産生するように刺激する役割を果たすと疑われるが、巨核球を誘導して、小さな原血小板プロセスを形成させるのは、サイトカインのトロンボポエチンである。血小板は巨核球の細胞質内でこれらの細胞内膜内に保持される。各々のこれらの原血小板プロセスは、崩壊の際に２０００〜５０００個の新規血小板を生じることができる。全体として、これらの新しく精製された血小板の２／３は循環内に残り、１／３は脾臓によって隔離される。
【００８３】
本態性血小板血症（ＥＴ）は、血液血小板の増加または異常産生に伴う慢性疾患である。ＥＴにおける血小板の形成は、サイトカイン非依存の方法で起こり、巨核球は血小板を未制御に産生する。血小板は血液凝固に関与するため、異常産生は、不適切な血栓の形成または出血をもたらし得、胃腸出血、心臓発作や脳卒中のリスクの増加をもたらす。
【００８４】
多くの場合、ＥＴに罹患する患者の多くは無症状である。一般的には、定期健診の一部として血小板数が高いことが明らかになった後で診断される。ＥＴの症状が存在するとき、それには、疲労が含まれ得、または小規模または大規模な血管障害または出血に関与し得る。小規模な血管障害（しばしば、本来の血管運動と考えられる）は、頭痛、視力障害または頭痛症状のない片頭痛（ｓｉｌｅｎｔ  Ｍｉｇｒａｉｎｅ）、眩暈または立ちくらみ、指または爪先の冷たさや青さ、または燃焼、発赤、および手足の痛みなどを引き起こし得る（ｗｗｗ．ｍｐｎｒｅｓｅａｒｃｈｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ．ｏｒｇ／Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ−Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｈｅｍｉａ）。血栓性合併症は、脳卒中、一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）、心臓発作、深部静脈血栓症または肺塞栓（肺に血餅）を引き起こし、かなり深刻であり得る。出血は、紫斑ができやすくなる、鼻出血、重い生理、胃腸出血または血尿として顕在化し得る（ｗｗｗ．ｍｐｎｒｅｓｅａｒｃｈｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ．ｏｒｇ／Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ−Ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｈｅｍｉａ）。ＥＴに罹患する人々の小数は、後に急性白血病または骨髄線維症を発症し得、それは両方とも命を脅かし得る。急性骨髄性白血病は、急速に進行する血液および骨髄の癌の一種である。骨髄線維症は、骨髄瘢痕化、重度の貧血、肝臓および脾臓の肥大をもたらす進行性の骨髄疾患である。
【００８５】
世界保健機関によると、ＥＴの診断には、Ａ１からＡ４の基準（Ａ１）持続的に４５０×１０９／Ｌを超える血小板数；（Ａ２）骨髄が、大きく成熟した巨核球数の増加を示し、顆粒球形成または赤血球生成の左方移動の有意な増加がないことを示す；（Ａ３）多血症、原発性骨髄線維症、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、または他の骨髄性腫瘍についてのＷＨＯ基準を満たさない；および（Ａ４）血小板増加症についての後天性の変異またはクローナルマーカーを有するまたは反応性の原因を有さない（Ｓｗｅｄｌｏｗら、（２００８）ＷＨＯ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｕｒｓ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｉｄ  Ｔｉｓｓｕｅｓ，Ｌｙｏｎ，ＩＡＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）を満たすことが求められる。ＥＴを診断するとき、臨床医の中には、２００８年のＷＨＯ基準に類似するがいくつかの重要な点で異なる、英国血液学標準化委員会の基準（２０１０年発行）を使用するものもいる（Ｂｅｅｒ，ら、（２０１０）Ｂｌｏｏｄ１１７（５）：１４７２−１４８２）。
【００８６】
ＥＴを診断するために行われ得る試験には、（１）鉄欠乏症および炎症の指標のための試験を含む、高血小板数の他の原因を除外するための血液検査（他の模倣の血液疾病も同様に除外される）；（２）ＪＡＫ２遺伝子変異（症例のおおよそ５０％に発生する）またはＭＰＬ（症例のおおよそ５％までに発生する）についての試験；（３）血小板前駆体の増加を含む、ＥＴの古典的な兆候を探すための骨髄生検が含まれる。ＥＴの診断に関するさらなる情報は、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００６／０１６６２２１号において見出すことができる。
【００８７】
ＥＴは、心疾患危険因子の修飾、抗血小板療法、および細胞減少療法の使用を通じて通常処置される（Ｂｅｅｒら、Ｂｌｏｏｄ１１７（５）：１４７２−１４８２；以降（Ｂｅｅｒら、２０１０））。心疾患危険因子に関しては、患者は、高血圧、糖尿病、喫煙、高コレステロール血症および肥満の存在についてスクリーニングされ、およびこれらの症状についての適切なガイドラインに従って指示される場合に処置される（Ｂｅｅｒら、２０１０）。抗血小板療法には、禁忌でない限りアスピリン、およびクロピドグレルなどの抗血小板薬が含まれるが、これらに限定されない。ＥＴ患者は、血栓性リスクに基づいて階層化されてよく、高リスク患者は６０歳を超える年齢で、以前に血栓性事象があるかまたは１５００×１０９／Ｌを超える血小板数を有する。これらの高リスク患者は、細胞減少療法から利益を得やすいだろう（Ｂｅｅｒら、２０１０）。
【００８８】
ＥＴ患者がヒドロキシカルバミド（ヒドロキシウレア）で処置された時に、白血病性形質転換のリスクが増加する可能性があるにもかかわらず、それは依然として処置を必要とするほとんどの患者のためのフロントライン治療である（Ｂｅｅｒら、２０１０）。他の処置としては、インターフェロン、アナグレリド、ピポブロマン、ブスルファン、および放射性リンを用いた照射を含むが、これらに限定されない。
【００８９】
ＥＴについての現在の薬物療法は、治癒的ではなく、生存に有利な効果を示唆する証拠はほとんどない。これらの現在の戦略はどれも、疾病、疾病の進展、あるいは生活の質に影響を与える患者が苦しんでいる症状の原因となる悪性のクローン細胞のいずれかに取り組んでいないまたは直接標的としていない。現在の治療法の目標は、血栓出血性合併症を防止することである。ＥＴの病因の解明における大きな進歩が、２００５年の、ＥＴ患者の５０〜６０％に存在する、ＪＡＫ２体細胞変異（Ｖ６１７Ｆ）の記述でなされた（Ｊａｍｅｓら、（２００５）Ｎａｔｕｒｅ４３４：１１４４−１１４８；Ｋｒａｌｏｖｉｃｓら、（２００５）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ３５２：１７７９−９０；Ｂａｘｔｅｒら、（２００５）Ｌａｎｃｅｔ３６５：１０５４−６１；Ｌｅｖｉｎｅら、（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ７：３８７−９７）。ＪＡＫ２／Ｖ６１７Ｆ変異の存在および遺伝子変異量に加え、ベースラインの白血球増加が、ＥＴの新しい疾病関連危険因子として最近認識されている（Ｚｉａｋａｓ  ＰＤ．（２００８）Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ９３：１４１２−１４１４；Ｃａｒｏｂｂｉｏら、（２００７）Ｂｌｏｏｄ１０９：２３１０−２３１３）。証拠は、白血球増加が、予後因子としての重要性を有し、血管事象の原因となると考えられ得ることも示唆する（Ｂａｒｂｕｉら、（２００９）Ｂｌｏｏｄ１１４：７５９−６３）。
【００９０】
Ｂ．真性多血症
真性多血症（ＰＶ）に罹患する患者は、赤血球産生の増加をマークしている。処置は、赤血球の過剰な数を減少させることに向けられる。ＰＶは、血球減少および骨髄低形成および線維症を伴う原発性骨髄線維症に類似するその経過の後期で段階を発展させ得る。ｉｎ−ｖｉｔｒｏでの造血前駆細胞の増殖および生存の増大を引き起こす染色体９上のヤヌスキナーゼ２遺伝子（ＪＡＫ２）遺伝子変異は、ＰＶに罹患するほとんどの患者で同定されている。ＰＶに罹患する患者は、心血管および血栓性の事象および急性骨髄性白血病または原発性骨髄線維症への形質転換のリスクが増大する。ＰＶに対する処置には、ヘマトクリット値を男性では４５％未満、女性では４０％未満に維持するための間欠的な慢性の瀉血が含まれる。他の可能な処置には、ヒドロキシウレア、インターフェロン−α、および低用量アスピリンが含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｅ）。
【００９１】
Ｃ．骨髄線維症
骨髄線維症またはＭＦは、ＥＴと同一の疾病スペクトラムにおける骨髄増殖性腫瘍である。ＭＦに罹患する患者は、多くの場合その骨髄にＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ変異を有する。時折、ＥＴはＭＦへと発展する。ＪＡＫ２阻害は、ヤヌスキナーゼ阻害剤である、ルキソリチニブ（Ｊａｋａｆｉ（登録商標））が承認されている国においては、ＭＦに対する標準治療と現在考えられる。Ｊａｋａｆｉ（登録商標）などの、ＪＡＫ２阻害剤が、疾病の原因である白血病性クローンの増殖を選択的に阻害するという証拠はなく、ゆえにそれらは「疾患修飾」ではない可能性がある。
【００９２】
Ｄ．急性骨髄性白血病
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は骨髄系の血球の癌である。ＡＭＬは、成人に影響する最も一般的な急性白血病である。ＡＭＬを有する患者は、骨髄に蓄積し正常な血球の産生を妨害する異常白血球の急速な成長を有する。正常な骨髄と白血球細胞を置き換えると赤血球、血小板、および正常な白血球を減少させる。ＡＭＬの症状は、疲労、息切れ、青あざや出血が起こりやすくなる、感染のリスクの増加を含む。急性白血病のように、ＡＭＬは急速に進行し、処置せずにいると一般的には数週間または数か月で死に至る。ＡＭＬに対する標準治療は、寛解を誘導することを目指した化学療法を用いる処置であり、患者は造血幹細胞移植を受けることになり得る。
【００９３】
Ｅ．骨髄異形成症候群
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、血液（ｇｂｌｏｏｄ）および骨髄の癌を含む症状の集合体である。未熟な血液幹細胞（芽球）は、健常な赤血球、白血球または血小板にならない。芽球は、骨髄内または血液へと移動した直後に死亡する。これが、健常な白血球、赤血球および／または血小板を骨髄内で形成するための余地を減らす。
【００９４】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、骨髄クラスの血球の無効造血を必然的に含む血液学的医学的状態の集合体である。ＭＤＳを有する患者は、しばしば重症貧血症を発症し、頻回の輸血を必要とする。疾病が悪化し、患者は進行性の骨髄機能不全によって引き起こされる血球減少症（低血球数）を発症する場合もある。疾病が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）へと形質転換する場合もある。骨髄芽球の全体割合が特定のカットオフ（ＷＨＯについては２０％およびＦＡＢについては３０％）を超えて上昇すれば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）への形質転換が起きたと言われる。
【００９５】
Ｆ．テロメラーゼ阻害剤を使用したＭＰＮまたはＭＤＳの処置方法
テロメラーゼ阻害剤（本明細書に開示される任意のテロメラーゼ阻害剤など）の投与を介して、ＭＰＮまたはＭＤＳを有すると診断されたまたは考えられる個体における、腫瘍前駆細胞の増殖を減少させるおよび関連する症状を軽減するための方法を本明細書に提供する。
【００９６】
本方法は、アジュバント・セッティングにおいて実施されることができる。「アジュバント・セッティング」は、個体が増殖性疾患の病歴を有しており、外科手術（外科的切除など）、放射線療法、および化学療法を含むがこれらに限定されない治療法に通常（必ずではない）反応するという、臨床背景を意味する。しかしながら、彼らの増殖性疾患の病歴のために、これらの個体は疾病の発生のリスクがあると考えられる。「アジュバント・セッティング」における処置または投与は、後続様式の処置を意味する。リスクの程度（つまりアジュバント・セッティングにおける個体が「高リスク」または「低リスク」と考えられる時）は、いくつかの因子、大体通常は最初に処置されるときの疾病の程度に依存する。
【００９７】
本明細書に提供の方法は、「ネオアジュバント・セッティング」においても実施されることができる。つまり、本方法は主要な／決定的な治療の前に行われることができる。いくつかの実施形態では、個体は以前に処置されている。いくつかの実施形態では、個体は以前に処置されていない。いくつかの実施形態では、処置は第一選択療法である。
【００９８】
１．骨髄増殖性腫瘍および骨髄異形成症候群の症状を軽減するための方法
いくつかの態様では、本発明は、上記に詳細に記載されるように骨髄増殖性腫瘍に伴う症状または状態（能力障害、機能障害）を阻害するための方法に関する。それ自体で、状態の全ての影響が完全に防止または逆転されることは求められていないが、現在開示された方法の効果は、患者にとって有意な治療的利益まで届こうとしている。治療的利益は、それ自体が必ずしも骨髄増殖性腫瘍から生じる特定の状態に対する完全な防止または治療であるわけではないが、むしろ、細胞増殖性疾患がもたらす症状を減少させるまたは防止する、かかる症状の発生を（定量的または定性的に）減少させるまたは防止する、かかる症状の重症度またはその生理学的影響を減少させる、および／または骨髄増殖性腫瘍症状を経験した後の個体の回復を亢進することを含む結果を包含し得る。
【００９９】
いくつかの態様では、本発明は、上記に詳細に記載されるように骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）に伴う症状または状態（能力障害、機能障害）を阻害するための方法に関する。それ自体、状態の全ての影響が完全に防止または逆転されることは求められていないが、現在開示された方法の効果は、患者にとって有意な治療的利益まで届こうとしている。治療的利益は、それ自体が必ずしも骨髄異形成症候群から生じる特定の状態に対する完全な防止または治療であるわけではないが、むしろ、細胞増殖性疾患がもたらす症状を減少させるまたは防止する、かかる症状の発生を（定量的または定性的に）減少させるまたは防止する、かかる症状の重症度またはその生理学的影響を減少させる、および／または骨髄異形成症候群症状を経験した後の個体の回復を亢進することを含む結果を包含し得る。
【０１００】
本明細書で使用するとき、疾患、疾病、または状態（ＭＰＮまたはＭＤＳなど）「に伴う少なくとも一つの症状を軽減する」という語句は、かかる用語が適用される疾患または状態を逆転させる、進行を阻害するまたは防止する、またはかかる用語が適用される疾患または状態の一つ以上の症状を逆転させる、進行を阻害するまたは防止することを示す。具体的には、本発明の組成物（本明細書に開示の任意のテロメラーゼ阻害剤化合物など）は、個体に投与されるとき、ＭＰＮまたはＭＤＳに伴う一つ以上の症状または状態を処置するまたは防止することができ、および／またはこの疾患に伴う症状または状態を減少させるまたは軽減することができる。個体をＭＰＮまたはＭＤＳがもたらす影響または症状から保護することは、それ自体、疾患の影響の発生および／または重症度を防止することまたは減少させること、および疾患の影響がすでに発生しているまたは発生し始めている患者を処置することの両方を含む。有益な効果は、当業者および／または患者を処置している訓練された臨床医によって容易に評価されることができる。好ましくは、本発明の方法を用いた処置を受けた患者は、受けていない患者と比べて、かかる患者を評価するために使用された少なくとも一つの臨床的または生物学的スコア、値、または尺度の重症度または発生率において、正または有益な差異がある。
【０１０１】
従って、いくつかの態様では、それを必要とする個体における、ＭＰＮまたはＭＤＳに伴う少なくとも一つの症状を軽減するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与がＭＰＮまたはＭＤＳに伴う少なくとも一つの症状を軽減することを特徴とする。いくつかの実施形態では、症状は、頭痛、眩暈または立ちくらみ、胸部痛、脱力感、失神、視力の変化、四肢の痺れまたは刺痛、発赤、四肢のずきずきした痛みまたは灼熱痛（紅痛症）、脾腫、鼻出血、紫斑、口または歯茎からの出血、血便、心臓発作（心筋梗塞）または脳卒中を含む。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、テロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的であり得、場合によっては１０〜２０塩基対間の長さであり得るオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。オリゴヌクレオチドは、任意選択的にリンカー（グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーなど）を介して、その５’または３’末端のいずれかの脂質部分に複合することもできる。いくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。なおも別の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。他の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。なおも他の実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異における減少と非依存である。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法（ヒドロキシウレア、アナグレリド、またはインターフェロンα−２Ｂを含むが、これらに限定されない）に耐性である、または不耐性であることができる。他の実施形態では、個体はヒトである。
【０１０２】
いくつかの態様では、患者に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。他の態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも約６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．１ｍｇ／ｋｇ、１０．２ｍｇ／ｋｇ、１０．３ｍｇ／ｋｇ、１０．４ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１０．６ｍｇ／ｋｇ、１０．７ｍｇ／ｋｇ、１０．８ｍｇ／ｋｇ、１０．９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．１ｍｇ／ｋｇ、１１．２ｍｇ／ｋｇ、１１．３ｍｇ／ｋｇ、１１．４ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１１．６ｍｇ／ｋｇ、１１．７ｍｇ／ｋｇ、１１．８ｍｇ／ｋｇ、１１．９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．１ｍｇ／ｋｇ、１２．２ｍｇ／ｋｇ、１２．３ｍｇ／ｋｇ、１２．４ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１２．６ｍｇ／ｋｇ、１２．７ｍｇ／ｋｇ、１２．８ｍｇ／ｋｇ、１２．９ｍｇ／ｋｇ、または１３ｍｇ／ｋｇのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は９．４ｍｇ／ｋｇではない。
【０１０３】
いくつかの態様では、ＭＰＮを有すると診断されたまたは考えられる個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異を有する。個体がこの変異を有するかどうかを測定する、ならびに遺伝子変異を測定するための方法は、多くあり、当分野で周知である（例えば、米国特許出願第２００９／０１６２８４９号、２００７／０２２４５９８号、および２００９／０１６２８４９号を参照されたく、そのそれぞれの開示は参照により組み込まれる。）いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。
【０１０４】
２．腫瘍細胞増殖を減少させるための方法
別の態様では、本態性血小板血症を有すると診断されたまたは疑われる個体における、腫瘍前駆細胞の増殖を減少させるための方法を本明細書に提供し、該方法は臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が個体の腫瘍前駆細胞の増殖を減少させることを特徴とする。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、テロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的であり得、場合によっては１０〜２０塩基対間の長さであり得るオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。オリゴヌクレオチドは、任意選択的にリンカー（グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーなど）を介して、その５’または３’末端のいずれかの脂質部分に複合することもできる。いくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。なおも別の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。他の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。なおも他の実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異における減少と非依存である。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法（ヒドロキシウレア、アナグレリド、またはインターフェロンα−２Ｂを含むが、これらに限定されない）に耐性である、または不耐性であることができる。他の実施形態では、個体はヒトである。
【０１０５】
いくつかの態様では、腫瘍前駆細胞の増殖の減少は、個体の血液中で、包括して、約６００×１０３／μＬ、５７５×１０３／μＬ、５５０×１０３／μＬ、５２５×１０３／μＬ、５００×１０３／μＬ、４７５×１０３／μＬ、４５０×１０３／μＬ、４２５×１０３／μＬ、４００×１０３／μＬ、３７５×１０３／μＬ、３５０×１０３／μＬ×１０３／μＬ、３２５×１０３／μＬ、３００×１０３／μＬ、２７５×１０３／μＬ、２５０×１０３／μＬ、２２５×１０３／μＬ、２００×１０３／μＬ、１７５×１０３／μＬ、または１５０×１０３／μＬのいずれか未満の、これらの数値の間の値も含む、血小板数をもたらす。他の態様では、腫瘍細胞増殖の減少は、テロメラーゼ阻害剤投与の開始後、約２４週間、２３週間、２２週間、２１週間、２０週間、１９週間、１８週間、１７週間、１６週間、１５週間、１４週間、１３週間、１２週間、１１週間、１０週間、９週間、８週間、７週間、６週間、５週間、４週間、３週間、または２週間またはそれ以下のいずれか以内に個体の血液中の血小板数（例えば、上述の任意の血小板数）の減少をもたらす。
【０１０６】
いくつかの態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。他の態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも約６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．１ｍｇ／ｋｇ、１０．２ｍｇ／ｋｇ、１０．３ｍｇ／ｋｇ、１０．４ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１０．６ｍｇ／ｋｇ、１０．７ｍｇ／ｋｇ、１０．８ｍｇ／ｋｇ、１０．９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．１ｍｇ／ｋｇ、１１．２ｍｇ／ｋｇ、１１．３ｍｇ／ｋｇ、１１．４ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１１．６ｍｇ／ｋｇ、１１．７ｍｇ／ｋｇ、１１．８ｍｇ／ｋｇ、１１．９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．１ｍｇ／ｋｇ、１２．２ｍｇ／ｋｇ、１２．３ｍｇ／ｋｇ、１２．４ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１２．６ｍｇ／ｋｇ、１２．７ｍｇ／ｋｇ、１２．８ｍｇ／ｋｇ、１２．９ｍｇ／ｋｇ、または１３ｍｇ／ｋｇのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は９．４ｍｇ／ｋｇではない。
【０１０７】
いくつかの態様では、ＥＴを有すると診断されたまたは考えられる個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異を有する。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。
【０１０８】
３．正常レベルの循環血小板を維持するための方法
他の態様では、本態性血小板血症を有すると診断されたまたは疑われる個体の血液中で、血小板数を約４００×１０３／μＬ未満間に維持するための方法を本明細書に提供し、該方法は、臨床有効量のテロメラーゼ阻害剤を個体に投与することを含み、テロメラーゼ阻害剤の投与が個体の血小板数を約４００×１０３／μＬ未満に維持することを特徴とする。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、テロメラーゼのＲＮＡ成分に相補的であり得、場合によっては１０〜２０塩基対間の長さであり得るオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは配列ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡを含む。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは複数のＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートヌクレオシド間結合を含む。オリゴヌクレオチドは、任意選択的にリンカー（グリセロールまたはアミノグリセロールリンカーなど）を介して、その５’または３’末端のいずれかの脂質部分に複合することもできる。いくつかの実施形態では、脂質部分はパルミトイル（Ｃ１６）部分である。なおも別の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔである。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン依存性巨核球増殖を阻害しない。他の実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、サイトカイン非依存性巨核球増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、ＣＦＵ−ｍｅｇａを阻害する。なおも他の実施形態では、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの阻害は、ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異における減少と非依存である。いくつかの実施形態では、個体は、既存の非テロメラーゼ阻害剤をベースとする治療法（ヒドロキシウレア、アナグレリド、またはインターフェロンα−２Ｂを含むが、これらに限定されない）に耐性である、または不耐性であることができる。他の実施形態では、個体はヒトである。
【０１０９】
いくつかの態様では、テロメラーゼ阻害剤（本明細書に記載の任意のテロメラーゼ阻害剤など）の投与は、血小板数を生理学的に正常なレベルに維持する。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体の血液中で、包括して、約６００×１０３／μＬ、５７５×１０３／μＬ、５５０×１０３／μＬ、５２５×１０３／μＬ、５００×１０３／μＬ、４７５×１０３／μＬ、４５０×１０３／μＬ、４２５×１０３／μＬ、４００×１０３／μＬ、３７５×１０３／μＬ、３５０×１０３／μＬ×１０３／μＬ、３２５×１０３／μＬ、３００×１０３／μＬ、２７５×１０３／μＬ、２５０×１０３／μＬ、２２５×１０３／μＬ、２００×１０３／μＬ、１７５×１０３／μＬ、または１５０×１０３／μＬのいずれか未満の、これらの数値の間の値も含む、血小板数を維持する。他の態様では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体の血液中、約１００〜４００×１０３／μＬ、１５０〜２００×１０３／μＬ、１５０〜２５０×１０３／μＬ、１５０〜３００×１０３／μＬ、１５０〜３５０×１０３／μＬ、１５０〜４００×１０３／μＬ、２００〜２５０×１０３／μＬ、２００〜３００×１０３／μＬ、２００〜３５０×１０３／μＬ、２００〜４００×１０３／μＬ、２５０〜３００×１０３／μＬ、２５０〜３５０×１０３／μＬ、２５０〜４００×１０３／μＬ、３００〜３５０×１０３／μＬ、３００〜４００×１０３／μＬ、または３５０から４００×１０３／μＬのいずれかの間の血小板数を維持する。
【０１１０】
なおも他の態様では、血小板数を生理的に正常なレベルに維持するためには、１日、隔日、３日、１週間、１１日、隔週、３週間、１月、６週間、隔月、またはより長い期間、包括して、これらに含まれるの期間含む、に１回以下のテロメラーゼ阻害剤の投与を必要とする。
【０１１１】
いくつかの態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。他の態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。別の態様では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも約６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．１ｍｇ／ｋｇ、１０．２ｍｇ／ｋｇ、１０．３ｍｇ／ｋｇ、１０．４ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１０．６ｍｇ／ｋｇ、１０．７ｍｇ／ｋｇ、１０．８ｍｇ／ｋｇ、１０．９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．１ｍｇ／ｋｇ、１１．２ｍｇ／ｋｇ、１１．３ｍｇ／ｋｇ、１１．４ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１１．６ｍｇ／ｋｇ、１１．７ｍｇ／ｋｇ、１１．８ｍｇ／ｋｇ、１１．９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．１ｍｇ／ｋｇ、１２．２ｍｇ／ｋｇ、１２．３ｍｇ／ｋｇ、１２．４ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１２．６ｍｇ／ｋｇ、１２．７ｍｇ／ｋｇ、１２．８ｍｇ／ｋｇ、１２．９ｍｇ／ｋｇ、または１３ｍｇ／ｋｇのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は９．４ｍｇ／ｋｇでない。
【０１１２】
いくつかの態様では、ＥＴを有すると診断されたまたは考えられる個体は、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）遺伝子にＶ６１７Ｆ機能獲得型変異を有する。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与は、個体のＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合を低減させる。
【０１１３】
Ｇ．テロメラーゼ阻害剤の投与
いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤（本明細書に開示される任意のテロメラーゼ阻害剤など）は、注射の形態で投与される。注射は、水性の注射可能な賦形剤または担体と組み合わせて化合物を含むことができる。好適な水性の注射可能な賦形剤または担体の非限定的な例は、当業者に周知であり、それら、および製剤を製剤化する方法は、Ａｌｆｏｎｓｏ  ＡＲ：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７編，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，イーストン  ペンシルベニア州，１９８５のような標準的な参考文献に見出すことができる。好適な水性の注射可能な賦形剤または担体は、任意選択的に、１０％のマンニトールまたは他の糖、１０％のグリシン、または他のアミノ酸などの溶解促進剤を含有する、水、食塩水、水性デキストロース溶液、およびその他を含む。組成物は、皮下、腹腔内、静脈内に注射され得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、静脈内投与が使用され、１５分程度など、数分から１時間またはそれ以上の時間にわたる、連続静脈内注入であり得る。投与量は、テロメラーゼ阻害剤のタイプ、単位用量のサイズ、賦形剤または担体の種類、および当業者に周知の他の因子に依存して、広く変動し得る。残りは賦形剤（ｓ）または担体を含んで、テロメラーゼ阻害剤は、例えば、約０．００１％から約１０％（ｗ／ｗ）、約０．０１％から約１％、約０．１％から約０．８％、またはその中の任意の範囲を含み得る。
【０１１５】
経口投与については、テロメラーゼ阻害剤は、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤、または湿潤剤などの薬学的に許容され得る賦形剤または担体とともに、例えば、従来の手段によって調製される錠剤またはカプセルの形態をとることができる。経口投与用の液体製剤は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液の形態をとり得、または使用前に水または他の好適なビヒクルで構成するための乾燥製品として提供され得る。かかる液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アチオンドオイル（ａｔｉｏｎｄ  ｏｉｌ）、油性エステル、エチルアルコールまたは等級別植物油）；および防腐剤（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベンまたはソルビン酸）などの、薬学的に許容され得る添加剤を用いて従来の方法で調製され得る。調製物は、適切な緩衝塩類、香料、および着色剤も含有し得る。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、またはそれらの組み合わせなどの、好適な噴射剤を含み得るエアロゾルスプレーまたはネブライザーを通じた吸入によって投与され得る。一非限定的な実施例において、加圧エアロゾル用の投薬単位は定量弁を通して送達され得る。他の実施形態では、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、例えば、吸入器で使用されることができ、例えばデンプンまたはラクトースなどの好適な粉末ベースと化合物の粉末化混合物を含有するように製剤化されることができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、個体に投与されるテロメラーゼ阻害剤の量は、任意の以下の範囲、約０．５から約５ｍｇ、約５から約１０ｍｇ、約１０から約１５ｍｇ、約１５から約２０ｍｇ、約２０から約２５ｍｇ、約２０から約５０ｍｇ、約２５から約５０ｍｇ、約５０から約７５ｍｇ、約５０から約１００ｍｇ、約７５から約１００ｍｇ、約１００から約１２５ｍｇ、約１２５から約１５０ｍｇ、約１５０から約１７５ｍｇ、約１７５から約２００ｍｇ、約２００から約２２５ｍｇ、約２２５から約２５０ｍｇ、約２５０から約３００ｍｇ、約３００から約３５０ｍｇ、約３５０から約４００ｍｇ、約４００から約４５０ｍｇ、または約４５０から約５００ｍｇに含まれる。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量におけるテロメラーゼ阻害剤の量（例えば単位剤形）は、約３０ｍｇから約３００ｍｇまたは約５０ｍｇから約２００ｍｇなどの、約５ｍｇから約５００ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、個体に投与されるテロメラーゼ阻害剤の濃度は、例えば約０．１から約２００ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１８０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１００ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約８０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１０ｍｇ／ｍｌ、約２から約４０ｍｇ／ｍｌ、約４から約３５ｍｇ／ｍｌ、約６から約３０ｍｇ／ｍｌ、約８から約２５ｍｇ／ｍｌ、約１０から約２０ｍｇ／ｍｌ、約１２から約１５ｍｇ／ｍｌのいずれか、または約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌ、１．７ｍｇ／ｍｌ、１．８ｍｇ／ｍｌ、１．９ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、２．１ｍｇ／ｍｌ、２．２ｍｇ／ｍｌ、２．３ｍｇ／ｍｌ、２．４ｍｇ／ｍｌ、または２．５ｍｇ／ｍｌのいずれかを含んで、希釈される（約０．１ｍｇ／ｍｌ）または濃縮される（約１８０ｍｇ／ｍｌ）。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の濃度は、少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２１ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌ、２３ｍｇ／ｍｌ、２４ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、２６ｍｇ／ｍｌ、２７ｍｇ／ｍｌ、２８ｍｇ／ｍｌ、２９ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３１ｍｇ／ｍｌ、３２ｍｇ／ｍｌ、３３ｍｇ／ｍｌ、３３．３ｍｇ／ｍｌ、３４ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、３６ｍｇ／ｍｌ、３７ｍｇ／ｍｌ、３８ｍｇ／ｍｌ、３９ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、１３０ｍｇ／ｍｌ、１４０ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、１６０ｍｇ／ｍｌ、１７０ｍｇ／ｍｌ、１８０ｍｇ／ｍｌ、１９０ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２１０ｍｇ／ｍｌ、２２０ｍｇ／ｍｌ、２３０ｍｇ／ｍｌ、２４０ｍｇ／ｍｌ、または２５０ｍｇ／ｍｌのいずれかである。
【０１１８】
個体に投与される例示的な有効量のテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも約２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１２５ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１６０ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、１８０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２１０ｍｇ／ｍ２、２２０ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、２６０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、３５０ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、５００ｍｇ／ｍ２、５４０ｍｇ／ｍ２、７５０ｍｇ／ｍ２、１０００ｍｇ／ｍ２、または１０８０ｍｇ／ｍ２のいずれかを含むがこれらに限定されない。種々の実施形態では、個体に投与されるテロメラーゼ阻害剤の量は、約３５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、または３０ｍｇ／ｍ２いずれか未満のテロメラーゼ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、投与毎のテロメラーゼ阻害剤の量は、２５ｍｇ／ｍ２、２２ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、１８ｍｇ／ｍ２、１５ｍｇ／ｍ２、１４ｍｇ／ｍ２、１３ｍｇ／ｍ２、１２ｍｇ／ｍ２、１１ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、９ｍｇ／ｍ２、８ｍｇ／ｍ２、７ｍｇ／ｍ２、６ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、３ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／ｍ２、または１ｍｇ／ｍ２のいずれか未満である。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は、任意の以下の範囲に含まれる。約１から約５ｍｇ／ｍ２、約５から約１０ｍｇ／ｍ２、約１０から約２５ｍｇ／ｍ２、約２５から約５０ｍｇ／ｍ２、約５０から約７５ｍｇ／ｍ２、約７５から約１００ｍｇ／ｍ２、約１００から約１２５ｍｇ／ｍ２、約１２５から約１５０ｍｇ／ｍ２、約１５０から約１７５ｍｇ／ｍ２、約１７５から約２００ｍｇ／ｍ２、約２００から約２２５ｍｇ／ｍ２、約２２５から約２５０ｍｇ／ｍ２、約２５０から約３００ｍｇ／ｍ２、約３００から約３５０ｍｇ／ｍ２、または約３５０から約４００ｍｇ／ｍ２。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は、約２０から約３００ｍｇ／ｍ２、約５０から約２５０ｍｇ／ｍ２、約１００から約１５０ｍｇ／ｍ２、約１２０ｍｇ／ｍ２、約１３０ｍｇ／ｍ２、または約１４０ｍｇ／ｍ２、または約２６０ｍｇ／ｍ２などの、約５から約３００ｍｇ／ｍ２である。
【０１１９】
任意の上記の態様のいくつかの実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇのいずれかを含む。種々の実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は、約３５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇのいずれか未満のテロメラーゼ阻害剤を含む。任意の上記の態様の他の実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は、少なくとも約６．５ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．７ｍｇ／ｋｇ、６．８ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．１ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．３ｍｇ／ｋｇ、７．４ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．６ｍｇ／ｋｇ、７．７ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、７．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、８．２ｍｇ／ｋｇ、８．３ｍｇ／ｋｇ、８．４ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、８．６ｍｇ／ｋｇ、８．７ｍｇ／ｋｇ、８．８ｍｇ／ｋｇ、８．９ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．１ｍｇ／ｋｇ、９．２ｍｇ／ｋｇ、９．３ｍｇ／ｋｇ、９．４ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、９．９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１０．１ｍｇ／ｋｇ、１０．２ｍｇ／ｋｇ、１０．３ｍｇ／ｋｇ、１０．４ｍｇ／ｋｇ、１０．５ｍｇ／ｋｇ、１０．６ｍｇ／ｋｇ、１０．７ｍｇ／ｋｇ、１０．８ｍｇ／ｋｇ、１０．９ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１１．１ｍｇ／ｋｇ、１１．２ｍｇ／ｋｇ、１１．３ｍｇ／ｋｇ、１１．４ｍｇ／ｋｇ、１１．５ｍｇ／ｋｇ、１１．６ｍｇ／ｋｇ、１１．７ｍｇ／ｋｇ、１１．８ｍｇ／ｋｇ、１１．９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１２．１ｍｇ／ｋｇ、１２．２ｍｇ／ｋｇ、１２．３ｍｇ／ｋｇ、１２．４ｍｇ／ｋｇ、１２．５ｍｇ／ｋｇ、１２．６ｍｇ／ｋｇ、１２．７ｍｇ／ｋｇ、１２．８ｍｇ／ｋｇ、１２．９ｍｇ／ｋｇ、または１３ｍｇ／ｋｇのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は９．４ｍｇ／ｋｇではない。他の実施形態では、個体に投与される有効量のテロメラーゼ阻害剤は７．５ｍｇ／ｋｇから９．３ｍｇ／ｋｇである。他の実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。なおも他の実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、９．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、６．５ｍｇ／ｋｇから１１．７ｍｇ／ｋｇである。本明細書のいくつかの実施形態では、有効量のテロメラーゼ阻害剤は、７．５ｍｇ／ｋｇから９．４ｍｇ／ｋｇである。
【０１２０】
医薬組成物（本明細書に開示の任意のテロメラーゼ阻害剤を含有する医薬組成物など）についての例示的な投与頻度は、１日１回；１日おきに１回；週２回；週３回；休みなしに週１回；４週のうち３週、週に１回；３週間に１回；２週間に１回；３週のうち２週、週に１回を含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約週１回、２週に１回、３週に１回、４週に１回、６週に一回、または８週に１回投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約週に１回、２回、３回、４回、５回、６回、または７回（つまり１日１回）、または１日３回、１日２回のいずれかで投与される。いくつかの実施形態では、各投与間の間隔は、約６ヶ月、３ヶ月、１ヶ月、２０日、１５日、１２日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日、または１日のいずれかより少ない。いくつかの実施形態では、各投与間の間隔は約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、または１２ヶ月のいずれかより長い。いくつかの実施形態では、投与スケジュールに中断はない。いくつかの実施形態では、各投与間の間隔は、約１週以下である。
【０１２１】
他の態様では、医薬組成物（本明細書に開示される任意のテロメラーゼ阻害剤を含有する医薬組成物など）は、本態性血小板血症を有すると診断されたまたは疑われる個体の血液中で、血小板数を約１５０×１０３／μＬから４００×１０３／μＬ間に維持するために投与される。これらの条件下で、各投与間の間隔は、１週毎、２週毎、３週毎、または４週毎またはそれ以上であることができる。いくつかの実施形態では、テロメラーゼ阻害剤の投与に対する間隔は、個体の血小板数が個体の血液中で４００×１０３／μＬ未満のままであった場合、継時的に低減されることができる。いくつかの態様では、ａ）個体の血小板数を当分野に公知の任意の方法で測定すること、およびｂ）個体の血小板数が４００×１０３／μＬを超える場合にテロメラーゼ阻害剤を投与することを含む、ＥＴの処置のためのテロメラーゼ阻害剤の投与頻度を決定するための方法を提供する。
【０１２２】
医薬組成物（本明細書に開示される任意のテロメラーゼ阻害剤を含有する医薬組成物など）の投与は、例えば約１か月から約７年までの、長期間（維持療法中など）にわたって延長することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、または８４ヶ月の任意の期間にわたって投与される。他の実施形態では、組成物は、個体の残りの生涯にわたって投与される。
【実施例】
【０１２３】
実施例１：オリゴヌクレオチドＮ３’→Ｐ５’ホスホロアミデート（ＮＰ）またはＮ３’→Ｐ５’チオホスホロアミデート（ＮＰＳ）の調製および脂質複合
本実施例は、脂質複合オリゴヌクレオチドＮ３’→Ｐ５’ホスホロアミデート（ＮＰ）またはＮ３’→Ｐ５’チオホスホロアミデート（ＮＰＳ）を合成する方法を示す。
【０１２４】
材料および方法
出発化合物
これらの化合物は、例えば、ＭｃＣｕｒｄｙら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ３８：２０７−２１０（１９９７）またはＰｏｎｇｒａｃｚ＆Ｇｒｙａｚｎｏｖ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ４９：７６６１−７６６４（１９９９）に記載のように調製されてよい。出発３’−アミノヌクレオシドモノマーを、Ｎｅｌｓｏｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６２：７２７８−７２８７（１９９７）に記載のように、またはＧｒｙａｚｎｏｖら、米国特許出願公開第２００６／０００９６３６号に記載の方法によって調製してよい。
【０１２５】
脂質結合
選択される結合の性質に依存して、脂質部分Ｌをオリゴヌクレオチドに複合させるために種々の合成アプローチが使用され得る。例えば、Ｍｉｓｈｒａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１２６４：２２９−２３７（１９９５）、Ｓｈｅａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：３７７７−３７８３（１９９５）、またはＲｕｍｐら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．９：３４１−３４９（１９９５）を参照。一般的には、好適な官能基のオリゴヌクレオチド末端での使用を通じて複合は達成される。例えば、ＮＰおよびＮＰＳオリゴヌクレオチドの３’末端に存在する３’アミノ基を、好適なカップリング触媒を使用して、アミド結合を形成するために、カルボン酸、酸塩化物、酸無水物、活性エステルと反応させることができる。チオール基もまた官能基として好適である（Ｋｕｐｉｈａｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９：１２４１−１２４７（２００１）を参照）。異なる鎖長の種々のアミノおよびチオール官能化改変物質が、オリゴヌクレオチド合成用に市販されている。
【０１２６】
脂質基をＮＰまたはＮＰＳオリゴヌクレオチドの末端に結合するための具体的なアプローチは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００５／０１１３３２５号に記載のものを含む。上記のアミド結合に加えて、例えば、脂質は、脂質とオリゴヌクレオチドを連結させるホスホロアミデートまたはチオホスホロアミデート結合を生成するために、脂質のホスホルアミダイト誘導体を使用してオリゴヌクレオチド鎖にも結合されてよい。完全に保護された支持体結合オリゴヌクレオチドの遊離３’アミノも、好適な脂質アルデヒドと反応し得、その後シアノホウ水素化ナトリウムで還元され、それはアミノ結合を生成する。
【０１２７】
５’末端への脂質の結合のために、また米国出願公開第２００５／０１１３３２５号に記載されるように、オリゴヌクレオチドは、改変された、脂肪を含有する固体支持体を使用して合成されることができる。第一級アルコールのジメトキシトリチル化および第二級アルコールのスクシニル化が後に続く、３’−アミノ−１，２−プロパンジオールと脂肪酸塩化物（ｆａｔｔｙ  ａｃｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（ＲＣ（Ｏ）Ｃｌ）の反応は、遊離スクシニルカルボキシル基を介して、次いで固体支持体に連結する中間体を提供する。改変された支持体の例を以下に示し、Ｓは長鎖アルキルアミンＣＰＧ支持体を表し、Ｒは脂質を表す。
【化３】
2020041001.tif 000006
【０１２８】
この手順に続いて、例えば、Ｐｏｎｇｒａｃｚ＆Ｇｒｙａｚｎｏｖ（１９９９）に記載のように、ＯＤＭＴ基の脱保護およびホスフィチル化から開始して、５’から３’方向でオリゴヌクレオチドが合成される、。これは、固体支持体からの切断後に、例えば、以下の構造を生成するのに有効である。
【化４】
2020041001.tif 000007
【０１２９】
上記の構造は、Ｒが（ＣＨ２）１４ＣＨ３（パルミトイル）であるとき、本明細書ではＧＲＮ１６３Ｌ（ＩｍｅｔｅｌｓｔａｔまたはＩｍｅｔｅｌｓｔａｔナトリウム）と指定される。
【０１３０】
ＦｌａｓｈＰｌａｔｅ（商標）アッセイ
このアッセイは、本質的にＡｓａｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ６３：３９３１−３９３９（２００３）に記載されるように、実行された。簡単に述べると、本アッセイは、ビオチン化テロメラーゼ基質プライマーへのＴＴＡＧＧＧテロメア反復配列の付加を測定することによりテロメラーゼ活性を検出および／または測定する。ビオチン化生成物は、ストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート上の捕捉であり、３３Ｐで標識した、３．５テロメア反復に相補的なオリゴヌクレオチド・プローブを、テロメラーゼ生成物を測定するために用いる。未結合プローブを洗浄によって除去し、捕捉されたテロメラーゼ生成物にアニールしたプローブの量をシンチレーション計数により定量する。
【０１３１】
実施例２：Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔは、ｉｎ−ｖｉｔｒｏで、本態性血小板血症患者および骨髄線維症（Ｍｙｅｌｏｆｉｖｒｏｓｉｓ）患者からのＣＦＵ−Ｍｅｇの自発性増殖を阻害するが、健常個体からのそれは阻害しない。
本実施例は、ＪＡＫＶ６１７Ｆ変異状態または細胞減少療法とは非依存に、本態性血小板血症（ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｈｒｏｍｂｏｃｙｔｈｅｍｉａ）または骨髄線維症に罹患する患者における、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔによる、巨核球コロニー形成単位（ＣＦＵ−Ｍｅｇａ）の用量依存的な抑制を実証し、悪性の巨核球細胞に対するｉｍｅｔｅｌｓｔａｔの特異性を示す。
【０１３２】
材料および方法
巨核球増殖および分化に及ぼすｉｍｅｔｅｌｓｔａｔの効果を測定するために、以下の方法を使用した。（１）臍帯血（ＣＢ）細胞を、陰性細胞分離装置を使用してＣＤ３４陽性発現細胞について濃縮した；（２）細胞を、巨核球前駆細胞の発達のために指定されたサイトカイン製剤を含有する無血清液体培地であるＳｔｅｍＳｐａｎ（登録商標）ＳＦＥＭにおいて、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ（１〜１５μＭ）でインキュベートした；（３）臍帯血細胞を計１７日間にわたって培養した；（４）フローサイトメトリーにより分化マーカー（ＣＤ４１）についておよびＴＲＡＰアッセイによりテロメラーゼ活性について、種々の時点で、細胞を数えあげて評価した。
【０１３３】
ＣＦＵ−Ｍｅｇａ用量反応曲線を測定するために、３人の健常個体および１１人のＥＴ患者および１人の骨髄繊維性（ＭＦ）患者（ＷＨＯ２００９の基準を使用して決定）からの単核細胞（ＭＮＣ）を、末梢血から分離し、ＩＭＤＭ中に懸濁またはコラーゲン±サイトカイン（ＴＰＯ、ＩＬ３、ＩＬ６、ＳＣＦ、ＥＰＯ）内へとプレートし、０、０．１、１および１０μＭのｉｍｅｔｅｌｓｔａｔまたはミスマッチ対照で処理し、数時間（細胞懸濁液）または１０〜１２日間（コラーゲン＋５％ＣＯ２）にわたって３７℃でインキュベートした。巨核球を染色し、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの数をスコア化した。用量反応解析は、用量に対するＬｏｇ１０（コロニー数）についての４パラメータｌｏｇロジスティックモデルを活用した。テロメラーゼ活性をＭＮＣにおいてＴＲＡＰアッセイにより測定した。
【０１３４】
結果
図１Ａおよび１Ｂは、ｉｍｅｔｅｌｓｔａが、健常ドナーの巨核球増殖または分化を阻害しないことを示す。
【０１３５】
表１は、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの自発性増殖およびｉｍｅｔｅｌｓｔａｔによる阻害を示す。
【表１】
2020041001.tif 000008
【０１３６】
表２は、ＣＦＵ−Ｍｅｇａのサイトカイン刺激性増殖およびｉｍｅｔｅｌｓｔａｔによる阻害がないことを示す。
【表２】
2020041001.tif 000009
【０１３７】
図７は、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔが骨髄線維症患者における巨核球増殖または分化を阻害することを示す。
【０１３８】
図２の用量反応曲線および図７の結果は、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔが腫瘍前駆体増殖を減少させることを示す。末梢血からのＣＦＵ−Ｍｅｇａは、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔがＥＴおよびＭＦに罹患する患者からの腫瘍性（自発性）巨核球増殖を阻害するが、健常個体からの正常（サイトカイン依存性）巨核球増殖を阻害しないことを示す。ＥＴに罹患する患者におけるｉｍｅｔｅｌｓｔａｔによるＣＦＵ−Ｍｅｇａ形成のこの用量依存抑制は、ＪＡＫ  Ｖ６１７Ｆ変異状態または細胞減少療法とは非依存である。
実施例３：細胞減少を必要とし、既存療法に治療不成功したまたは不耐性である、または標準治療を拒絶する本態性血小板血症に罹患するにおけるＩｍｅｔｅｌｓｔａｔ（ＧＲＮ１６３Ｌ）の活性を評価するための第ＩＩ相試験（第ＩＩ相ＩｍｅｔｅｌｓｔａｔＥＴ研究）
【０１３９】
本実施例は、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔが、既存療法に不応性または不耐性である本態性血小板血症（ＥＴ）を有する患者において実質的な血液学的奏効および分子遺伝学的奏効を急速に誘導し維持すると実証する。
材料および方法
【０１４０】
臨床試験計画
既存療法の少なくとも一つに治療不成功したまたは不耐性であり（または標準治療を拒絶した）、細胞減少を必要としたＥＴに罹患する患者に７．５〜１１．７ｍｇ／ｋｇのＩｍｅｔｅｌｓｔａｔを週に２時間の静脈内注入として血小板反応まで滴定した用量で導入した。２５０〜３００×１０３／μＬの血小板数が達成されたら、次いで、維持段階において投与頻度を少なくすることを目標として、血小板反応および毒性に基づいて用量を増減させてｉｍｅｔｅｌｓｔａｔの維持量投与を開始した。
【０１４１】
ＥＴ特異的患者の選択基準は、（１）世界保健機関（ＷＨＯ）の基準によるＥＴの確定診断；（２）細胞減少を必要とする、および既存療法の少なくとも一つに治療不成功したまたは不耐性である（または標準治療を拒絶した）ＥＴに罹患する患者とした。臨床検査基準（最初の臨床試験薬投与の１４日以内）は、（１）血小板が６００，０００／μＬを超える；（２）ＡＮＣが１５００／μＬ以上；（３）ヘモグロビンが１０ｇ／ｄＬ以上であることとした。
【０１４２】
すべての患者についての一般的な基準は、（１）インフォームドコンセントフォームに署名する意思があり、することができる；（２）１８歳以上の男性または女性；（３）０−２のＥＣＯＧパフォーマンスステータスであることとした。すべての患者についての臨床検査基準（最初の臨床試験薬投与の１４日以内）は、（１）ＩＮＲ（またはＰＴ）およびａＰＴＴが、正常値上限（ＵＬＮ）の１．５倍未満である；（２）血清クレアチニンが２ｍｇ／ｄＬ以下である；（３）血清ビリルビンが２．０ｍｇ／ｄＬ未満（ジルベール症候群の患者では、血清ビリルビンがＵＬＮの３倍未満）である；（４）ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）およびＡＬＴ（ＳＧＰＴ）がＵＬＮの２．５倍以下である；（５）アルカリホスファターゼが、２．５ＵＬＮ未満である；（６）臨床試験処置の開始の前に、以前の癌処置および／または大手術からの臨床的に重大な毒性はいずれも、グレード０−１に回復している必要がある、とした。
【０１４３】
任意の以下の基準を満たした患者はスクリーニングおよび臨床試験登録から除外した。（１）妊娠または授乳中の女性；（２）幹細胞移植を以前受けた；（３）最初の臨床試験薬投与の前４週間以内に調査的治療を受けた；（４）（ａ）コントロール不良のうっ血性心不全（ＣＨＦ）；（ｂ）心室性不整脈のための抗不整脈治療の必要がある；（ｃ）臨床試験責任医師の判断による臨床的に重大な重度の伝音障害；（ｄ）治療を必要とする進行中の狭心症；（ｅ）ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）クラスＩＩ，ＩＩＩ，またはＩＶの循環器疾病；（ｆ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）についての血清学的検査で陽性と知られている；（ｇ）活動性または慢性再発性出血，臨床的に関連する進行中の感染，硬変症、および慢性閉塞性または慢性拘束性肺疾を含む、臨床試験責任医師の判断による重度合併症の医学的症状；または（ｈ）プロトコル要件に従い、臨床試験参加または臨床試験薬投与に伴うリスクを増大させ得るかまた臨床試験結果の解釈を妨害し得る、および臨床試験責任医師の判断において、患者を臨床試験に不適当とするだろう、任意の他の重度な、急性の、または慢性な医学的または精神医学的状態、臨床検査値の異常、または困難を含む臨床的に重要な循環器疾患または状態。
【０１４４】
主要評価項目は、最良総合血液学的奏効率（ＲＲ）（完全寛解（ＣＲ）＋部分寛解（ＰＲ））とした。最初の投与（サイクル１の１日目）から臨床試験の終了（最後の参加者が投与された１２か月後）までを時間枠とした。
【０１４５】
副次評価項目は、血液学的奏功の期間の測定、分子遺伝的奏功（ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ／ＭＰＬ  Ｗ５１５ｍｔ患者）の測定、および血液学的毒性、非ヘムグレード（ｎｏｎ−ｈｅｍｅ  Ｇｒａｄｅ）３および４の有害事象（ＡＥ）、および出血性事象を有する複数の患者をモニターすることにより安全性および忍容性を試験することを目的とした。最初の投与（サイクル１の１日目）から臨床試験の終了（最後の参加者が投与された１２か月後）までを時間枠とした。ＣＦＵ−Ｍｅｇａの自発性増殖（選択部位のみ）を探索的目的とした。
【０１４６】
表３は、本臨床試験についての奏効の定義を記す。欧州白血病ネット奏功基準をＢａｒｏｓｉら、Ｂｌｏｏｄ（２００９）から適用した。ヘム応答（Ｈｅｍｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を４週間の最新としてカウントした。
【表３】
2020041001.tif 000010
【０１４７】
患者基本情報を以下の表４に提供する。
【表４】
2020041001.tif 000011
【０１４８】
結果
図３は、１００％の総合血液学的寛解が、従来療法に治療不成功したまたは不耐性であったＥＴに罹患する全１４患者において達成されたことを示す。１４人中１３人（９２．９％）の患者で完全寛解が、１４人中１人（７．１％）の患者で部分寛解が達成された。血液学的ＣＲを得た全患者は処置を継続している。データは、血小板数≦４００×１０３／μＬ（各患者について菱形で示す）が最初に発生するまでの時間は、３．１週間（２．１から２３．１週間）の中央値を有し、一方で完全寛解までの時間は、６．１週間（５．１から１４．１週間）の中央値を有した（図３）。
【０１４９】
血液学的完全寛解し、維持療法を開始した１３患者についての投与頻度のデータを以下の表５に提供する。維持投与頻度は、概して時間とともに減少し（週１回から７週毎までの範囲）、患者の大多数（８４．６％または１１／１４）はｉｍｅｔｅｌｓｔａｔを２週に１回またはより少ない頻度（中央値に基づく）で受けていた。治療の継続に適格であった８５．７％（６／７）の患者は、１年後も維持療法を継続している。
【表５】
2020041001.tif 000012
【０１５０】
図４Ａに示すように、％ＪＡＫ２  Ｖ６１７Ｆ遺伝子変異の割合が全患者において継時的に低減し、一方で図４Ｂは、分子遺伝的奏功（ＰＲ）が、ＪＡＫ２  Ｖ６１７（ＪＡＰＫ２  Ｖ６１７Ｆ）について試験された６／７（８５．７％）の患者において３〜６か月の範囲内で到達されたことを示す。
【０１５１】
表６は、探索的評価項目（ＣＦＵ−Ｍｅｇａ）に関する結果を示す。試験された二人の患者において、ｅｘ−ｖｉｖｏでのＣＦＵ−Ｍｅｇａの自発性増殖の減少（それぞれ、ベースラインから９３％および９６％減少）が実証され、既存のｅｘ−ｖｉｖｏデータを確証した。
【表６】
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【０１５２】
図５は、ＣＦＵ−Ｍｅｇａの自発性増殖が、一患者（患者番号４）のＪＡＫ２遺伝子変異における減少とは相関しないことを示す。
【０１５３】
データは、ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔが、本態性血小板血症などの骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）を駆り立て、疾病の根底にある生物学的特徴を修飾する可能性を有する腫瘍性クローンの増殖に相対的に選択的な阻害効果を及ぼすことを示す。
【０１５４】
表７は、臨床的に重大な頻発非血液有害事象を示す。
【表７】
2020041001.tif 000014
【０１５５】
【表８】
2020041001.tif 000015
【０１５６】
実施例４：ＤＩＰＳＳｐｌｕｓ中間−２リスクまたは高リスク原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、真性多血症から移行した骨髄線維症（ｐｏｓｔ−ＰＶ  ＭＦ）または本態性血小板血症から移行した骨髄線維症（ｐｏｓｔ−ＥＴ  ＭＦ）を有する患者における、Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ（ＧＲＮ１６３Ｌ）の有効性および安全性の非盲検パイロット試験
材料および方法
臨床試験計画
標準治療に活性でなかったＤＩＰＳＳｐｌｕｓ中間−２リスクまたは高リスク原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、真性多血症から移行した骨髄線維症（ｐｏｓｔ−ＰＶ  ＭＦ）または本態性血小板血症から移行した骨髄線維症（ｐｏｓｔ−ＥＴ  ＭＦ）を有する患者を、２１日毎に１度、２時間の静脈内注入として与えられた９．４ｍｇ／ｋｇのＩｍｅｔｅｌｓｔａｔを導入した（コホートＡ）。代替として、患者に週１回を３週間、その後２１日毎に１度の２時間の注入（９．４ｍｇ／ｋｇ）で投与した（コホートＢ）。患者は、最大９サイクルにわたって処置を受けてよい。患者は治療を９サイクルを超えて継続しても良い。
【０１５７】
ＰＭＦ特異的患者の選択基準は、（１）世界保健機関（ＷＨＯ）の基準でＥＴの確定診断；（２）細網繊維および／またはコラーゲン線維化を伴った、巨核球の増殖と異形成があること、または（４）ＣＭＬ、ＰＶ、ＭＤＳまたは他の骨髄腫瘍のＷＨＯ基準を満たさないこと、または（５）反応性骨髄線維症の証拠がないこととした。
【０１５８】
Ｐｏｓｔ−ＰＶ  ＭＦ特異的患者の選択基準は、（１）世界保健機関（ＷＨＯ）の基準でＰＶの確定診断；（２）骨髄繊維化のグレードが２−３（０−３スケール上）またはグレード３−４（０−４スケール上）および（３）（ａ）細胞減少療法の非存在下での、貧血症または瀉血の必要性の持続的な損失または（ｂ）白赤芽球症性の末梢血の画像（ｌｅｕｋｏｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｉｃ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｐｉｃｔｕｒｅ）または（ｃ）５ｃｍ以上の触知可能な脾腫の増大または新しい触知可能な脾腫の出現のいずれかとして定義される脾腫の増大または（ｄ）３つの全身症状（６か月以内に１０％の体重減少、盗汗、原因不明な発熱（３７．５°Ｃ）の内１つ以上の発症、の２つ以上とした。
【０１５９】
Ｐｏｓｔ−ＥＴ  ＭＦ特異的患者の選択基準は、（１）世界保健機関（ＷＨＯ）の基準でＥＴの確定診断；（２）骨髄繊維化のグレードが２−３（０−３スケール上）またはグレード３−４（０−４スケール上）および（３）（ａ）貧血症およびベースラインヘモグロビン値から２ｇ／ｄＬ以上の低減または（ｂ）白赤芽球症性の末梢血の画像または（ｃ）５ｃｍ以上の触知可能な脾腫の増大または新しい触知可能な脾腫の出現のいずれかとして定義される脾腫の増大または（ｄ）キャステートデヒドロゲナーゼ（ｃａｓｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の増大または（ｅ）３つの全身症状（６か月以内に１０％の体重減少、盗汗、原因不明な発熱（３７．５°Ｃ）の内１つ以上の発症、の２つ以上とした。
【０１６０】
全ての患者に対する一般的な基準は、（１）インフォームドコンセントフォームに署名する意思があり、することができる；（２）１８歳以上の男性または女性；（３）０〜２のＥＣＯＧパフォーマンスステータスとした。全ての患者（最初の臨床試験薬投与の１４日以内）に対する検査基準は、（１ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）およびＡＬＴ（ＳＧＰＴ）≦２．５×ＵＬＮ；（２）クレアチン≦３ｍｇ／ｄＬ；（３）絶対好中球数≧１０００／μＬ；（４）血小板数≧５０，０００／μＬ；（５）全身的な抗凝固を伴う活性処置の非存在およびベースラインＰＴおよびａＰＴＴがＵＮＬの１．５倍を超過しないこととした。
【０１６１】
任意の以下の基準を満たした患者は、スクリーニングおよび臨床研究登録から除外した。（１）妊娠または授乳中の女性；（２）登録の１４日以内前に、化学療法、免疫調節薬療法、免疫抑制療法、コルチコステロイド、１０ｍｇ／日のプレドニゾンまたは等価物、成長因子処置またはＪＡＫ阻害剤療法のいずれかを受けた；（４）他の進行中の悪性病変を有する被検体（５）ＨＩＶについて陽性状態と知られている（６）以前の抗癌療法からのグレード２以上に大きい（ｇｒｅａｔｅｒ  ｔｏｒ  ｅｑｕａｌ  ｔｏ）任意の未解決の毒性（６）任意の前の外科手術からの不完全回復（７）抗生物質を必要とする急性の進行中の感染症の存在（８）患者の安全性またはプロトコルのコンプライアンスを危険にさらす、制御されていない併発疾患または任意の同時症状。
【０１６２】
主要評価項目は、最良全奏効率（ＲＲ）（臨床的改善（ＣＩ）または完全寛解（ＣＲ）または部分寛解（ＰＲ））。最初の投与（サイクル１の１日目）から処置の最初の９サイクルまでを時間枠とした。
【０１６３】
副次評価項目の目的は、（ａ）有害事象、（ｂ）脾臓奏効：ベースラインで少なくとも１０ｃｍである脾臓またはベースラインで５ｃｍ以上で触知可能な脾臓の触知可能な脾腫大における最小５０％減少のいずれかとして定義される（ｃ）輸血非依存性：輸血依存性が、臨床的に明白な出血と関連しなかった８５ｇ／Ｌ未満のヘモグロビン値に対して直近の月における少なくとも２単位の赤血球輸血の履歴として定義される場合、を測定することとした。最初の投与（サイクル１の１日目）から臨床試験の終了までを時間枠とした。探索的目的は、（ａ）より低いグレードへの骨髄繊維化の逆転の骨髄組織学的評価および（ｂ）サイクル３、６、９の終了時にその数において少なくとも５０％の減少を達成したベースライン白血球増加症および血小板増加症を有する患者の一部、とした。
【０１６４】
表９は、本臨床試験についての奏効定義を記す。骨髄化生を伴う骨髄線維症における処置奏効についての国際ワーキンググループ（ＩＷＧ）の合意基準を使用した。
【表９】
2020041001.tif 000016
【０１６５】
結果
臨床的有用性が、この臨床試験に登録された患者において観察された。３３人の患者が該当した（ａｃｃｕｒｅｄ）。最初の１８人は登録し、最小３か月間にわたりフォローし、それ以外は中止した。コホートＡに１１人の患者、コホートＢに７人の患者；４４％がＰＭＦ、３３％がポスト−ＰＶ  ＭＦおよび２２％がポスト−ＥＴ  ＭＦであった。年齢中央値は６８歳で、ベースラインリスクは５６％で高リスクであり、４４％で中間−２リスクであった。７人の患者は輸血依存であった。脾臓サイズの中央値は１３ｃｍであり、１１人の患者は全身症状を有した。核型は、７人の患者で異常であり、８９％はＪＡＫ２−変異型であった。１５人（８３％）の患者は、そのうち７人はＪＡＫ阻害剤および３人はポマリドマイドで、以前に処置を受けた。
【０１６６】
毒性
３．２か月の経過観察中央値で、１６人（８９％）の患者は処置を継続した；２件の中止例は、非関連死亡および疾病進行からであった。コホートＡでは、グレード４処置関連有害事象はなく、グレード３事象は２７％における血小板減少症および９％における貧血症に限られた。コホートＢでは、２人（２９％）の患者がグレード４血小板減少症を経験し、グレード３事象は各１人の患者で血小板減少症、好中球減少症および貧血症に限られた。２人（１１％）の患者においてのみ、グレード３または４の骨髄抑制のために投与量の減少が必要であった。
【０１６７】
有効性
全奏効率は４４％であった。これは、完全寛解（ＣＲ）（ｎ＝４）または部分寛解（ＰＲ）（ｎ＝１）についてのＢＭおよび末梢血形態的基準（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ  ｃｒｉｔｅｒｉａ）を満たした５人（２８％）の患者、および臨床的改善、奏効期間のバリデーション中、薬物誘導グレード１血小板減少症の解決を有した３人の患者を含んだ。４人（２２％）のＣＲ患者は、骨髄（ＢＭ）線維症の逆転および正常巨核球形態の回復を経験した。２人のＣＲ患者は、ベースラインでは輸血依存性であったが、輸血非依存性になった。完全分子遺伝的奏功は、２人のＣＲ患者において実証された。一人は１０％のＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆおよび他方は５０％のＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆを有した。白血球増加症に罹患する１３人の患者の間で、１０人（７７％）はその数を正常化させ、または５０％を超える減少を有した。１１人（６１％）の患者は、白赤芽球症の完全または部分解決を有した。
【０１６８】
【表１０】
2020041001.tif 000017
【０１６９】
実施例５：Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔはｉｎ−ｖｉｔｒｏで急性骨髄性白血病患者からのＣＤ３４陽性細胞の自発性増殖を阻害するが、健常個体からのは阻害しない。
この実施例は、急性骨髄性白血病を有する患者におけるｉｍｅｔｅｌｓｔａｔによるＣＤ３４陽性細胞の用量依存性抑制を実証し、悪性のＣＤ３４陽性細胞に対するｉｍｅｔｅｌｓｔａｔの特異性を示唆する。
【０１７０】
材料および方法
ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔの有効性を測定するために以下の方法を使用した。（１）コロニー形成アッセイおよび液体培養物内で、合計１４日間にわたり骨髄細胞をｉｍｅｔｅｌｓｔａｔ（０．１−１０μＭ）とインキュベートし、種々の時点で細胞を数え上げ、評価した。
【０１７１】
ＣＦＵ用量反応曲線を測定するために、４人の健常個体または５人のＡＭＬ患者からの骨髄細胞を、プレートされ、０、０．１、１および１０μＭのｉｍｅｔｅｌｓｔａｔまたはミスマッチ対照で処理した末梢血から分離した。ＣＦＵ−ＧＭ（コロニー形成単位−顆粒球、マクロファージ）およびＢＦＵ−Ｅ（バースト形成単位−赤芽球）を染色し、ＣＦＵ−ＧＭおよびＢＦＵ−Ｅの数をスコア化した。
【０１７２】
結果
Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔは、１４日間のＣＦＵアッセイにおいて健常ドナーの骨髄からのＣＦＵを減少させなかった。
【０１７３】
１４日間のＣＦＵアッセイにおけるｉｍｅｔｅｌｓｔａｔでの処置において、ＡＭＬ患者からの骨髄細胞のＣＦＵの減少が観察された。
【０１７４】
１４日間の液体培養物アッセイにおいて、Ｉｍｔｅｌｓｔａｔは、新しく診断されたＡＭＬ患者の骨髄細胞からの細胞増殖を減少させた。
【０１７５】
Ｉｍｅｔｅｌｓｔａｔは、ＡＭＬ患者の骨髄細胞から由来するＣＤ３４陽性細胞の増殖を減少させたが、正常患者の骨髄からのは減少させなかった。図６は、５日目、７日目、および９日目の、健常ドナーから獲得したＣＤ３４陽性細胞およびＡＭＬ患者からのＣＤ３４陽性細胞のＩｍｅｔｅｌｓｔａｔを用いたｉｎ−ｖｉｔｒｏ処理の後培養物における細胞増殖の割合を表す。
【０１７６】
本発明の単なる例示であることが意図され、したがっていかなる方法においても本発明を限定すると考えるべきではない実施例は、上述の本発明の態様および実施形態を説明し、詳述もする。前述の実施例と詳細な説明は、例示のために提供され、限定するものではない。本明細書で引用した全ての刊行物、特許出願、および特許は、各個々の刊行物、特許出願、または特許が具体的かつ個別に参照により組み込まれることが示されたかのように参照により本明細書に組み込まれる。特に、本明細書に引用される全ての刊行物は、本発明に関連して使用される可能性のある組成物および方法を記載および開示する目的のために、参照により明確に本明細書に組み込まれる。前述の発明は理解を明確にする目的のために例示および実施例によりいくらか詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく特定の変更および修正がそこになされてよいことが本発明の教示に照らして当業者に容易に明らかである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
2020041001.tif 000024
【図６】
2020041001.tif 000025
【図７】
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【配列表】
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【外国語明細書】
2020041001000001.pdf