(57)【要約】【課題】血液凝固動態を精度高く評価することができる血液凝固系解析装置を提供すること。【解決手段】一対の電極と、前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する解析部と、を有する、血液凝固系解析装置などを提供する。【選択図】図１
2020041867.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一対の電極と、
前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、
前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、
少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する解析部と、
を有する、血液凝固系解析装置。
【請求項２】
前記２種以上の血液凝固関連アッセイは、血液凝固反応の惹起を行わないアッセイ、内因系凝固経路惹起アッセイ、前記内因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く内因系凝固経路を惹起するアッセイ、外因系凝固経路惹起アッセイ、及び前記外因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く外因系凝固経路を惹起するアッセイからなる群より選ばれるいずれか２種以上のアッセイである、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項３】
前記解析部の解析結果に基づいて、血栓リスク及び／又は出血リスクの程度を出力する出力部を更に含む、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項４】
前記出力部は、前記解析部の解析結果に基づいて、前記血栓リスク及び／又は出血リスクの原因を更に出力する、請求項３に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項５】
前記血栓リスクの原因は、組織因子の血液試料への暴露、アンチトロンビン量又はアンチトロンビン反応速度の低下、及び内因系凝固経路の亢進からなる群より選ばれるいずれか１つ以上によるものである、請求項４に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項６】
前記出血リスクの原因は、外因系凝固因子欠乏及び／又は内因系凝固因子欠乏によるものである、請求項４に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項７】
前記凝固因子は、内因系凝固因子である、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項８】
前記凝固阻害因子は、アンチトロンビンである、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項９】
前記解析の際に、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される特徴点を用いる、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１０】
前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量である、請求項９に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１１】
前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出される、請求項１０に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１２】
前記特徴量は、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合になった際の時間ＣＴ４、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合になった際の時間ＣＴ５からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である、請求項９に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１３】
前記２種以上の血液凝固関連アッセイを含む複数の電気的測定用容器、
を更に有する、請求項１に記載の血液凝固系解析装置。
【請求項１４】
一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加ステップと、
前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定ステップと、
少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する解析ステップと、
を有する、血液凝固系解析方法。
【請求項１５】
交番電圧を印加する印加部に対して、一対の電極に時間間隔で交番電圧を印加させること、
複素誘電率を測定する測定部に対して、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定させること、
血液凝固系を解析する解析部に対して、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析させること、
を実行させる、血液凝固系解析プログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、血液凝固系解析装置、血液凝固系解析方法及び血液凝固系解析プログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、臨床的に行われる血液状態の解析方法として、血液凝固検査がある。一般的な血液凝固検査としては、プロトロンビン時間国際標準化比（ＰＴ−ＩＮＲ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）に代表される、血液凝固検査が知られている。これらの方法は、血液試料を遠心分離して得られる血漿中に含まれ、凝固反応に関与するタンパク質による凝固反応性を分析する方法である。
【０００３】
前述の検査方法は、外因系凝固能及び内因系凝固能の機能検査を評価するために用いられる。これらの検査では、外因系凝固反応と内因系凝固反応とを惹起する物質を大過剰に添加し、短時間で検査結果が得られるようにしている。これらの検査は、血液試料を遠心分離して得られる血漿を用いて行われるが、生体内の血液凝固反応において重要な役割を果たす血小板や赤血球等の細胞成分が遠心分離により除去されてしまうため、検査結果と実際の臨床的病態とで齟齬が生じる場合も多い。
【０００４】
ここで、別の機能検査として、トロンボエラストグラフィーやトロンボエラストメトリーがあり、これらはそれぞれＴＥＧ（登録商標）やＲＯＴＥＭ（登録商標）として製品化されているが、（１）測定が自動化されておらず、検査結果が測定者の手技に依存する、（２）振動の影響を受けやすい、（３）品質管理（ＱＣ）手順が煩雑で、ＱＣ用試薬が高価である、（４）出力信号（トロンボエラストグラム）の解釈に熟練を要する等の理由があり、十分に普及していない。また、外因系や内因系の各凝固因子の欠乏や阻害効果に対して、それほど高い感度を示さないことから、医療現場のニーズを満足できない可能性がある。
【０００５】
また、上述した既存の機能検査では、検査試薬として凝固開始剤を生体内での反応よりも大過剰に用いるのが通常である。そのため、これらの検査は、著しい凝固能の低下、すなわち出血傾向を評価するのに好適であるが、著しい凝固能の亢進、すなわち血栓傾向、或いは血液凝固能の微妙な変化を評価するのには適していない。なお、トロンボエラストメトリーでは、外因系凝固経路や内因系凝固経路を人為的に活性化させる凝固開始剤を用いずにカルシウム再加のみによって測定を行うアッセイも存在するが、当該アッセイでは凝固反応初期に形成されるフィブリンゲルが、測定の際に加えられる回転変位のために破壊されて正しい計測ができず、特に、フィブリノーゲンや血小板が低値の検体では測定の再現性が期待できないという問題があった。
【０００６】
ここで、近年、血液凝固測定を簡便かつ正確に評価することができる別の手法として、血液凝固過程の誘電測定を行う方法も考案されている（例えば、特許文献１及び２）。この手法では、１組の電極対などからなるコンデンサー状の試料部に血液試料を充填し、それに交流電場を印加して血液試料の凝固過程に伴う複素誘電率の変化を測定する方法である。非特許文献１には、この手法を用いることで、簡便に凝固及び線溶反応のプロセスをモニタリングできることが示されている。また、非特許文献２には、当該手法であれば、他の手法では評価が困難であった血液凝固能の亢進についても高い感度で評価可能であることが示されている。しかし、当該手法であっても、複雑な血液凝固動態について正しく評価することは極めて困難であるという問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１０−１８１４００号公報
【特許文献２】特開２０１２−１９４０８７号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Y. Hayashi et al., Analytical Chemistry 87(19), 10072-10079 (2015)
【非特許文献２】I. Uchimura et al., Biorheology 53, 209-219 (2016)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
前述の通り、従来の手法では、複雑な血液凝固動態について正しく評価することは極めて困難であった。
【００１０】
そこで、本技術では、血液凝固動態を精度高く評価することができる血液凝固系解析装置を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
まず、本技術では、一対の電極と、前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する解析部と、を有する、血液凝固系解析装置を提供する。
本技術では、前記２種以上の血液凝固関連アッセイは、血液凝固反応の惹起を行わないアッセイ、内因系凝固経路惹起アッセイ、前記内因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く内因系凝固経路を惹起するアッセイ、外因系凝固経路惹起アッセイ、及び前記外因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く外因系凝固経路を惹起するアッセイからなる群より選ばれるいずれか２種以上のアッセイであってもよい。
また、本技術に係る血液凝固系解析装置は、前記解析部の解析結果に基づいて、血栓リスク及び／又は出血リスクの程度を出力する出力部を更に含むものとすることができる。この場合、前記出力部は、前記解析部の解析結果に基づいて、前記血栓リスク及び／又は出血リスクの原因を更に出力してもよい。また、この場合、前記血栓リスクの原因は、組織因子の血液試料への暴露、アンチトロンビン量又はアンチトロンビン反応速度の低下、及び内因系凝固経路の亢進からなる群より選ばれるいずれか１つ以上によるものであるものとすることができる。更に、この場合、前記出血リスクの原因は、外因系凝固因子欠乏及び／又は内因系凝固因子欠乏によるものであるものとすることができる。
更に、本技術では、前記凝固因子は、内因系凝固因子であってもよく、前記凝固阻害因子は、アンチトロンビンであってもよい。
加えて、本技術では、前記解析の際に、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される特徴点を用いてもよい。この場合、前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量であるものとすることができる。この場合、前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出されるものとすることができる。また、この場合、前記特徴量は、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合になった際の時間ＣＴ４、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合になった際の時間ＣＴ５からなる群より選ばれるいずれか１つ以上であるものとすることができる。
また、本技術では、前記２種以上の血液凝固関連アッセイを含む電気的測定用容器、を更に有していてもよい。
【００１２】
また、本技術では、一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加ステップと、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定ステップと、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する解析ステップと、を有する、血液凝固系解析方法も提供する。
【００１３】
更に、本技術では、交番電圧を印加する印加部に対して、一対の電極に時間間隔で交番電圧を印加させること、複素誘電率を測定する測定部に対して、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定させること、血液凝固系を解析する解析部に対して、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析させること、を実行させる、血液凝固系解析プログラムも提供する。
【００１４】
本技術において、「複素誘電率」の用語は、複素誘電率に等価な電気量をも包含する。複素誘電率に等価な電気量としては、複素インピーダンス、複素アドミッタンス、複素キャパシタンス、複素コンダクタンスなどがあり、これらは単純な電気量変換によって相互に変換可能である。また、「複素誘電率」の測定には、実数部のみ、或いは虚数部のみの測定も含まれる。また、本技術において、「血液試料」とは、赤血球と血漿等の液体成分とを含む試料であればよく、血液自体に限定されるものではない。より具体的には、例えば、全血、血漿、又はこれらの希釈液及び／又は薬剤添加物等の血液成分を含有する液体試料等が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本技術に係る血液凝固系解析装置１００の概念の一例を模式的に示す模式概念図である。
【図２】電気的測定用容器１０１の実施形態の一例を模式的に示す断面図である。
【図３】複素誘電率スペクトル（三次元）の測定例を説明する図面代用グラフである。
【図４】複素誘電率スペクトル（二次元）の測定例を説明する図面代用グラフである。
【図５】複素誘電率スペクトルから抽出される特徴量の例を説明する図面代用グラフである。
【図６】（ａ）〜（ｄ）は、スクリーニング凝固検査及び凝固線溶因子の採血タイミングに伴う変化を示す図面代用グラフである。
【図７】（ｅ）〜（ｈ）は、スクリーニング凝固検査及び凝固線溶因子の採血タイミングに伴う変化を示す図面代用グラフである。
【図８】（ａ）及び（ｂ）は、ＲＯＴＥＭ測定結果の採血タイミングに伴う変化を示す図面代用グラフである。
【図９】（ｃ）〜（ｅ）は、ＲＯＴＥＭ測定結果の採血タイミングに伴う変化を示す図面代用グラフである。
【図１０】（ａ）〜（ｄ）は、ＤＢＣＭ測定解析結果の採血タイミングに伴う変化を示す図面代用グラフである。
【図１１】（ｅ）〜（ｈ）は、ＤＢＣＭ測定解析結果の採血タイミングに伴う変化を示す図面代用グラフである。
【図１２】血栓リスクをもれなく発見することを念頭に置いた血液凝固解析方法の一例を示すブロック図である。
【図１３】外因系弱惹起アッセイと内因系弱惹起アッセイを用いて出血リスクを判定する血液凝固解析方法の一例を示すブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本技術を実施するための好適な形態について図面を参照しながら説明する。
以下に説明する実施形態は、本技術の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。なお、説明は以下の順序で行う。
１．血液凝固系解析装置１００
（１）一対の電極１ａ，１ｂ
（１−１）電気的測定用容器１０１
（１−２）接続部１０２
（１―３）容器保持部１０３
（２）印加部２
（３）測定部３
（４）解析部４
（５）出力部５
（６）表示部６
（７）記憶部７
（８）測定条件制御部８
（９）温度制御部９
（１０）血液試料供給部１０
（１１）薬剤供給部１１
（１２）精度管理部１２
（１３）駆動機構１３
（１４）サンプル待機部１４
（１５）撹拌機構１５
（１６）ユーザーインターフェース１６
（１７）サーバ１７
（１８）その他
２．血液凝固解析方法
（１）印加ステップ
（２）測定ステップ
（３）解析ステップ
【００１７】
１．血液凝固系解析装置１００
血液凝固系解析装置１００は、一対の電極１ａ，１ｂと、印加部２と、測定部３と、解析部４と、を少なくとも有する。また、血液凝固系解析装置１００は、必要に応じて、出力部５、表示部６、記憶部７、測定条件制御部８、温度制御部９、血液試料供給部１０、薬剤供給部１１、精度管理部１２、駆動機構１３、サンプル待機部１４、撹拌機構１５、ユーザーインターフェース１６、サーバ１７等の他の部を備えていてもよい。以下、各部について詳細に説明する。
【００１８】
（１）一対の電極１ａ，１ｂ
一対の電極１ａ，１ｂは、測定時に血液試料Ｂと接触し、血液試料Ｂに必要な電圧を印加する。
【００１９】
一対の電極１ａ，１ｂの配置や形態などは特に限定されず、血液試料Ｂに必要な電圧を印加することができれば適宜自由に設計することができるが、本技術では、一対の電極１ａ，１ｂは、後述する電気的測定用容器１０１に一体成形されていることが好ましい。
【００２０】
電極１ａ，１ｂを構成する素材についても特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂの状態等に影響がない範囲で、公知の電気伝導性素材を１種又は２種以上適宜自由に選択して用いることができる。具体的には、例えば、チタン、アルミニウム、ステンレス、白金、金、銅、黒鉛等が挙げられる。
【００２１】
本技術では、これらの中でも特に、チタンを含む電気伝導性素材で電極１ａ，１ｂを形成することが好ましい。チタンは、血液試料に対して低凝固活性であるという性質を有するため、血液試料Ｂの測定に好適である。
【００２２】
（１−１）電気的測定用容器１０１
図２は、電気的測定用容器１０１の実施形態の一例を模式的に示す断面図である。電気的測定用容器１０１には、解析対象である血液試料Ｂが保持される。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この電気的測定用容器１０１の個数は特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂの量、種類等に応じて、一又は複数の電気的測定用容器１０１を適宜自由に配置することができる。
【００２３】
本技術に係る血液凝固系解析装置１００では、電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを保持した状態で、複素誘電率の測定が行われる。そのため、電気的測定用容器１０１は、血液試料Ｂを保持した状態で密封可能な構成であることが好ましい。ただし、複素誘電率を測定するのに要する時間停滞可能であって、測定に影響がなければ、気密な構成でなくてもよい。
【００２４】
電気的測定用容器１０１への血液試料Ｂの具体的な導入及び密閉方法は特に限定されず、電気的測定用容器１０１の形態等に応じて、適宜自由な方法で導入することができる。例えば、電気的測定用容器１０１に蓋部を設け、ピペット等を用いて血液試料Ｂを導入した後に蓋部を閉じて密閉する方法等が挙げられる。
【００２５】
電気的測定用容器１０１の形態は、解析対象である血液試料Ｂを装置内に保持することができれば特に限定されず、適宜自由に設計することができる。また、電気的測定用容器１０１は、一又は複数の容器からなるものとすることができる。
【００２６】
電気的測定用容器１０１の具体的な形態は特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂを保持可能であれば、円筒体、断面が多角（三角、四角或いはそれ以上）の多角筒体、円錐体、断面が多角（三角、四角或いはそれ以上）の多角錐体、或いはこれらを１種又は２種以上組み合わせた形態など、血液試料Ｂの状態等に応じて、適宜自由に設計することができる。
【００２７】
また、容器１０１を構成する素材についても特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂの状態等に影響のない範囲で、適宜自由に選択することができる。本技術では特に、加工成形のし易さなどの観点から、容器１０１が樹脂により構成されていることが好ましい。本技術において、用いることができる樹脂の種類等も特に限定されず、血液試料Ｂの保持に適用可能な樹脂を、１種又は２種以上適宜自由に選択して用いることができる。例えば、ポリプロピレン、ポリメチルメタクリレート、ポリスチレン、アクリル、ポリサルホン、ポリテトラフルオロエチレンなどの疎水性かつ絶縁性のポリマーやコポリマー、ブレンドポリマー等が挙げられる。
【００２８】
本技術では、これらの中でも特に、ポリプロピレン、ポリスチレン、アクリル、及びポリサルホンから選ばれる一種以上の樹脂で電気的測定用容器１０１を形成することが好ましい。これらの樹脂は、血液試料に対して低凝固活性であるという性質を有するため、血液試料の測定に好適である。
【００２９】
なお、本技術では、電気的測定用容器１０１として、公知の使い捨てカートリッジタイプのものを用いることもできる。
【００３０】
本技術では、後述する２種以上の血液凝固関連アッセイを含む複数の電気的測定用容器１０１を備えていることが好ましい。これにより、後述する解析部４での血栓リスクの程度の解析を効率的に行うことができる。また、本技術において、２種以上の血液凝固関連アッセイを構成する試薬は、予めアッセイ毎に複数の電気的測定用容器１０１にそれぞれ封入されていることが好ましい。
【００３１】
本技術では、このように、薬剤を用いる場合、電気的測定用容器１０１には、予め所定の薬剤を、固体化して、或いは液体のまま収容しておくことも可能である。例えば、抗凝固剤、凝固開始剤、内因系凝固経路開始剤、外因系凝固経路開始剤、カルシウム塩等を予め容器１０１に入れておくことができる。このように、容器１０１に予め薬剤を収容しておくことで、後述する薬剤供給部１１や薬剤を保持する部位が不要となり、装置の小型化やコストの低減が可能である。また、ユーザーの薬剤交換等の手間が不要となり、薬剤供給部１１や薬剤を保持する部位等の装置メンテナンスも不要となるためにユーザビリティを向上させることもできる。
【００３２】
（１−２）接続部１０２
接続部１０２は、後述する印加部２と電極１ａ，１ｂとを、電気的に接続する。接続部１０２の具体的な形態は特に限定されず、印加部３と電極１ａ，１ｂとを電気的に接続することが可能であれば、適宜自由に設計することができる。
【００３３】
（１−３）容器保持部１０３
容器保持部１０３は、電気的測定用容器１０１を保持する。容器保持部１０３の具体的な形態は特に限定されず、解析対象である血液試料Ｂが収容された容器１０１を保持可能であれば、適宜自由に設計することができる。
【００３４】
容器保持部１０３を構成する素材についても特に限定されず、電気的測定用容器１０１の形態等に応じて、適宜自由に選択することができる。
【００３５】
また、本技術では、容器保持部１０３は、電気的測定用容器１０１に備えられた情報記録媒体から、容器１０１に関する情報を、自動的に読み取る機能（バーコードリーターなど）を備えていてもよい。前記情報記憶媒体とは、例えば、ＩＣカード、ＩＣタグ、バーコードやマトリックス型二次元コードを備えるカード、バーコードやマトリックス型二次元コードを印字した紙又はシール等が挙げられる。
【００３６】
（２）印加部２
印加部２は、一対の電極１ａ，１ｂに対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する。より具体的には、例えば、印加部２は、測定を開始すべき命令を受けた時点又は装置１００の電源が投入された時点を開始時点として、一対の電極１ａ，１ｂに交番電圧を印加する。より具体的には、印加部２は、設定された測定間隔又は後述する測定条件制御部８において制御された測定間隔ごとに、一対の電極１ａ，１ｂに対して、設定された周波数又は後述する測定条件制御部８において制御された周波数の交番電圧を印加する。
【００３７】
（３）測定部３
測定部３は、一対の電極１ａ，１ｂ間に配される血液試料の複素誘電率を測定する。測定部３の構成は、血液試料Ｂに対して測定目的である複素誘電率が測定可能となるように構成されていれば、適宜自由に設計することができる。具体的には、例えば、測定部３として、インピーダンスアナライザー、ネットワークアナライザー等を採用できる。
【００３８】
より具体的には、例えば、印加部２により血液試料Ｂに交番電圧が印加されることによって得られる血液試料Ｂのインピーダンスを経時的に測定するように構成され、測定を開始すべき命令を受けた時点又は装置１００の電源が投入された時点を開始時点として、電極１ａ，１ｂ間における血液試料Ｂのインピーダンスを経時的に測定するような構成を採用できる。そして、測定したインピーダンスから、複素誘電率を導出する。この複素誘電率の導出には、インピーダンスと誘電率との関係を示す既知の関数や関係式を用いることができる。
【００３９】
測定部３による測定結果は、周波数、時間、及び誘電率を各座標軸とする三次元の複素誘電率スペクトル（図３）、或いは、周波数、時間、及び誘電率から選択される２つを各座標軸とする二次元の複素誘電スペクトル（図４）として得ることができる。図３中のＺ軸は、各時間及び各周波数における複素誘電率の実数部を示す。
【００４０】
図４は、図３に示す三次元スペクトルを周波数７６０ｋＨｚで切り出した二次元スペクトルに対応する。図４中の符号（Ａ）は赤血球の連銭形成に伴うピークであり、符号（Ｂ）は血液試料凝固過程に伴うピークである。本願発明者らは、上記特許文献１において、血液試料の誘電率の時間的変化が血液試料の凝固過程を反映することを明らかにしている。したがって、測定部３で得られる複素誘電率スペクトルは、血液試料の凝固能を定量的に示す指標となるものであり、その変化に基づけば、血液凝固時間、血液凝固速度、血液凝固強度等の血液試料の凝固能に関する情報を得ることが可能である。
【００４１】
（４）解析部４
解析部４は、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、血液試料Ｂに働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する。なお、本明細書では、「活性」の概念には、反応速度の低下を含む生理的活性も含まれる。
【００４２】
前述の通り、従来の手法では、複雑な血液凝固動態について正しく評価することは極めて困難であることが、本技術について検討する過程で明らかとなった。すなわち、後述する実施例１に示すように、従来の手法では、（i）一部凝固因子の欠乏により凝固能が低下しているが、同時に他の因子等に関連して凝固亢進が見られるような場合や、（ii）凝固亢進の原因が凝固阻害因子（特に、アンチトロンビン）の生理的条件での実行的活性低下によるものである場合などにおいて、血栓リスクを正しく解析できないことが判明した。
【００４３】
上記（i）については、人工心肺を用いた手術後の回復期間にみられ、通常の検査では分からない血栓リスクである。また、上記（ii）については、血栓症予防のために一般的に処方されるビタミンＫ拮抗阻害剤（ワルファリンなど）を用いると、凝固阻害因子であるアンチトロンビン等も減少してしまう。この場合でもＰＴ−ＩＮＲ検査等の凝固検査では、その検査の特徴からアンチトロンビンの減少を反映することができず、凝固延長の検査結果となり、血栓リスクは低減されたと誤判定されてしまうことになる。しかし、実際には、凝固能も生理的条件下での凝固抑制能（主にアンチトロンビンによる）も両方低下しており、血栓リスクは両者のバランスが重要であるので、必ずしも血栓リスクが低減されたとは言えない。このような齟齬を防ぐためには、凝固検査単独ではなく、アンチトロンビン活性測定も行わなければならない。
【００４４】
しかしながら、アンチトロンビン活性測定を行っても、次のような場合には対応できない。すなわち、アンチトロンビンの量（濃度）は減少していないが、その生理的な（動的な）活性が低下している病態が問題である場合である。言い換えれば、アンチトロンビンの量は変化していないが、アンチトロンビンの反応速度が低下しているケースである。既存のアンチトロンビン活性試験や定量試験では、アンチトロンビンの反応速度の微妙な変化を反映することはできない。一方で、生体内で血栓ができるかどうかが問題である場合には、トロンビン生成が加速していく凝固因子活性化反応と、トロンビンを阻害していく反応との競争であり、アンチトロンビンの量だけでなくその反応速度が重要であると言える。これまで、このようなアンチトロンビンの反応速度に関連した血栓リスクは一般的に認識されていなかった。
【００４５】
これに対して、本技術に係る血液凝固系解析装置は、特に、上述したような血栓リスクを有する検体であっても、もれなく発見することができる。すなわち、これまで認識することができなかった血栓リスクをも評価可能となり、血液凝固動態を精度高く評価することができる。その結果、術後の血栓止血管理や凝固異常が問題となる疾患全般にわたって、患者の凝固状態に見合うテーラーメイドの治療が可能となる。
【００４６】
また、凝固因子の低下と凝固阻害因子の活性低下が共存するような病態において、従来の手法では両方のリスクを推定するために、凝固検査だけでなく血液凝固因子等の測定を行う必要があったが、本技術により、これらの両方のリスクを簡単に評価することが可能となり、リスク判定結果に基づいた治療方針の決定が可能となる。更には、本技術を一般的な健康診断等に適応することで、血栓症や脳出血等が起こる前にそのリスクを知ることができる。
【００４７】
本技術において、前記２種以上の血液凝固関連アッセイとしては、血液凝固反応の惹起を行わないアッセイ、内因系凝固経路惹起アッセイ（以下、「内因系強惹起アッセイ」とも称する）、前記内因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く内因系凝固経路を惹起するアッセイ（以下、「内因系弱惹起アッセイ」とも称する）、外因系凝固経路惹起アッセイ（以下、「外因系強惹起アッセイ」とも称する）、及び前記外因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く外因系凝固経路を惹起するアッセイ（以下、「外因系弱惹起アッセイ」とも称する）からなる群より選ばれるいずれか２種以上のアッセイであることが好ましい。
【００４８】
また、本技術においては、前記２種以上の血液凝固関連アッセイに、内因系弱惹起アッセイ及び／又は外因系弱惹起アッセイが含まれることがより好ましい。
【００４９】
前記内因系強惹起アッセイは、例えば、クエン酸による抗凝固作用を解くためのカルシウム塩と内因系を強く惹起する濃度の内因系凝固経路開始剤によって構成される。前記内因系凝固経路開始剤としては、例えば、エラグ酸が挙げられ、この場合、例えば、一般的なＡＰＴＴ検査用試薬の中でエラグ酸を凝固活性化剤として用いているもの（アクチンＳＦＬなど）を用いることができ、エラグ酸の終濃度は、好ましくは血液試料：ＡＰＴＴ検査用試薬の比が１８：１〜２００：１であり、より好ましくは５０：１〜１５０：１であり、最適な終濃度は９０：１である。
【００５０】
前記内因系弱惹起アッセイは、例えば、クエン酸による抗凝固作用を解くためのカルシウム塩と内因系を弱く惹起する濃度の内因系凝固経路開始剤によって構成される。前記内因系凝固経路開始剤としては、例えば、エラグ酸が挙げられ、この場合、エラグ酸の終濃度は、好ましくは血液試料：ＡＰＴＴ検査用試薬の比が２３０：１〜２３００：１であり、より好ましくは４５０：１〜１８００：１あり、最適な終濃度は９００：１である。
【００５１】
前記外因系強惹起アッセイは、例えば、クエン酸による抗凝固作用を解くためのカルシウム塩と外因系を強く惹起する濃度の外因系凝固経路開始剤によって構成される。前記外因系凝固経路開始剤としては、例えば、組織因子（ＴＦ：ｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒ）が挙げられ、この場合、組織因子の終濃度は、好ましくは５ｐＭよりも高濃度であり、より好ましくは１０ｐM以上であり、最適な終濃度は５０ｐＭである。
【００５２】
前記外因系弱惹起アッセイは、例えば、クエン酸による抗凝固作用を解くためのカルシウム塩と外因系を弱く惹起する濃度の外因系凝固経路開始剤によって構成される。前記外因系凝固経路開始剤としては、例えば、組織因子が挙げられ、この場合、組織因子の終濃度は、好ましくは５ｐＭ以下であり、より好ましくは０．２〜２．０ｐＭであり、最適な終濃度は０．６〜０．７ｐＭである。
【００５３】
本技術では、解析部４にて活性を解析する凝固因子は特に限定されないが、後述する実施例２に示す通り、特に、内因系凝固因子とすることができる。また、解析部４にて活性を解析する凝固阻害因子も特に限定されないが、後述する実施例２に示す通り、特に、アンチトロンビンとすることができる。
【００５４】
解析部４では、より具体的には、あるアッセイを用いて測定した前記特定の周波数における複素誘電率のスペクトルにおいて特徴量を抽出し、当該特徴量が、例えば、一定数の健常者及び／又は患者による測定結果に基づいて、予め定められた判定基準を超えるか否かについて判定する。前記判定基準としては、例えば、単に閾値を設定することができるが、好ましくは、強惹起アッセイを用いて測定した血液凝固時間（ｓ）と弱惹起アッセイを用いて測定した血液凝固時間（ｗ）との関数に基づいて定められた値である。
【００５５】
同様に、あるアッセイとは異なる他のアッセイを用いて測定した前記特定の周波数における前記複素誘電率のスペクトルにおいて特徴量を抽出し、当該特徴量について、前記判定基準を用いて判定する。
【００５６】
そして、あるアッセイを用いて得られた判定結果と、他のアッセイを用いて得られた判定結果とを比較し、判定結果による場合分けを行って各検体（各血液試料）の状態、すなわち、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性が正常であるか低下しているかを最終的に判定する。
【００５７】
ここで、前記特徴量としては、血液試料凝固反応に関連する時間的な指標や、該反応の速度に関連する指標等を採用することができる。また、本技術では、あるアッセイにおける特徴量と他のアッセイにおける特徴量とを組み合わせることで新たな特徴量や値を算出し、これを予め定められた判定基準と比較してもよい。
【００５８】
図５は、複素誘電率スペクトルから抽出される特徴量の例を説明する図面代用グラフである。図５において、縦軸は誘電率、横軸は時間を示し、上側のグラフは周波数１ＭＨｚ付近（１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満）での測定結果に基づくものであり、下側のグラフは周波数１０ＭＨｚ付近（３〜３０ＭＨｚ）での測定結果に基づくものである。
【００５９】
本技術において、前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量を用いることができる。また、前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出されるものとすることができる。より具体的には、前記特徴量としては、例えば、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１（不図示）、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合（好ましくは、５０％）になった際の時間ＣＴ４（不図示）、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合（好ましくは、５０％）になった際の時間ＣＴ５（不図示）からなる群より選ばれるいずれか１つ以上を用いることができる。また、これらの特徴量同士の演算値や、測定された複素誘電率等との演算値を用いることもできる。
【００６０】
（５）出力部５
出力部５は、解析部４での解析結果を出力する。本技術において、出力部５の構成は特に限定されず、例えば、測定中に異常な解析結果が得られた場合にのみ、特定の時点で通知信号を発生し、その結果をリアルタイムでユーザーに通知する構成とすることができる。これにより、異常な解析結果が確定された特定の時点でのみユーザーに解析結果が通知されるため、ユーザビリティが向上する。
【００６１】
また、ユーザーへの通知方法も特に限定されず、例えば、後述する表示部６、ディスプレイ、プリンタ、スピーカー、照明等を介して通知することができる。また、例えば、出力部５には、携帯電話、スマートフォン等のモバイル機器へ向け、通知信号が発生したことを知らせるための電子メール等を送信するための通信機能を備える装置も併用することもできる。
【００６２】
また、本技術において、出力部５は、例えば、血栓リスクの程度の解析を行うことが予め装置１００に入力されているにも関わらず、前述した前記２種以上の血液凝固関連アッセイを含む複数の電気的測定用容器１０１が装置１００にセットされていない場合には、ユーザーに対して警告等を通知し、該容器１０１をセットするように促す機能を備えることもできる。
【００６３】
また、本技術では、出力部５は、解析部４の解析結果に基づいて、血栓リスク及び／又は出血リスクの程度を出力してもよい。これにより、血栓リスク及び出血リスクの両方のリスクを有する検体（血液試料）であっても、本技術の血液凝固系解析装置を用いることにより、もれなく発見でき、早期治療に繋がる。
【００６４】
更に、本技術では、出力部５は、解析部４の解析結果に基づいて、前記血栓リスク及び／又は出血リスクの原因を更に出力してもよい。これにより、各リスクの判定のみならず、その原因まで知ることができ、素早さを求められる医療現場のニーズに応えることができる。
【００６５】
ここで、血栓リスクの原因としては、例えば、組織因子の血液試料への暴露、アンチトロンビン量又はアンチトロンビン反応速度の低下、及び内因系凝固経路の亢進からなる群より選ばれるいずれか１つ以上によるものであるとすることができる。また、出血リスクの原因としては、例えば、外因系凝固因子欠乏及び／又は内因系凝固因子欠乏によるものであるとすることができる。すなわち、本技術では、血栓リスクや出血リスクの原因は、複数であってもよいし、一つであってもよい。
【００６６】
（６）表示部６
表示部６は、解析部４での解析結果、測定部３で測定された複素誘電率のデータ、出力部５からの通知結果等を表示する。表示部６の構成は特に限定されず、例えば、表示部６として、ディスプレイ、プリンタ等を採用できる。また、本技術において、表示部６は必須ではなく、外部の表示装置を接続することでもよい。
【００６７】
（７）記憶部７
記憶部７は、解析部４での解析結果、測定部３で測定された複素誘電率のデータ、出力部５からの通知結果等を記憶する。記憶部７の構成は特に限定されず、例えば、記憶部７として、例えば、ハードディスク（Ｈａｒｄ Ｄｉｓｋ Ｄｒｉｖｅ）、フラッシュメモリ、ＳＳＤ（Ｓｏｌｉｄ Ｓｔａｔｅ Ｄｒｉｖｅ）等を採用することができる。また、本技術において、記憶部７は必須ではなく、外部の記憶装置を接続することでもよい。
【００６８】
更に、本技術では、血液凝固系解析装置１００の動作プログラム等が記憶部７に保存されていてもよい。
【００６９】
（８）測定条件制御部８
測定条件制御部８は、測定部３における測定時間及び／又は測定周波数等を制御する。測定時間制御の具体的な方法としては、目的の解析に必要なデータ量等に応じて測定間隔の制御を行ったり、測定値がほぼ横ばいになった場合等に測定終了のタイミングの制御を行ったりすることができる。
【００７０】
また、測定対象である血液試料Ｂの種類や目的の解析に必要な測定値等に応じて、測定周波数の制御を行うことも可能である。測定周波数の制御としては、電極１ａ，１ｂ間に印加する交流電圧の周波数を変化させたり、複数の周波数を重畳させて、複数の周波数でのインピーダンス測定を行ったりする方法等が挙げられる。その具体的な方法としては、複数の単周波数アナライザーを並設する方法、周波数をスイープする方法、周波数を重畳させてフィルターで各周波数の情報を抽出する方法、インパルスに対するレスポンスで測定する方法等が挙げられる。
【００７１】
（９）温度制御部９
温度制御部９は、電気的測定用容器１０１における温度を制御する。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この温度制御部９は必須ではないが、解析対象である血液試料Ｂを測定に最適な状態に保つためには、備えることが好ましい。
【００７２】
また、後述するように、サンプル待機部１４を設ける場合、温度制御部９は、サンプル待機部１４における温度を制御することも可能である。更に、測定時又は測定前に、血液試料Ｂに薬剤を入れる場合、薬剤の温度を制御するために、温度制御部９を備えていてもよい。この場合、温度制御部９は、電気的測定用容器１０１における温度制御、サンプル待機部１４における温度制御、及び薬剤の温度制御のためにそれぞれ設けることもできるし、一つの温度制御部９が全ての温度制御を行ってもよい。
【００７３】
温度制御の具体的な方法は特に限定されないが、例えば、容器保持部１０３に、温度調整機能を持たせることで、容器保持部１０３を温度制御部９として機能させてもよい。
【００７４】
（１０）血液試料供給部１０
血液試料供給部１０は、電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給する。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この血液試料供給部１０は必須ではないが、血液試料供給部８を備えることで、血液凝固系解析の各工程をオートマチックに行うことができる。
【００７５】
血液試料Ｂの具体的な供給方法は特に限定されないが、例えば、ピペッターとその先端に装着するチップを用いて、電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給することができる。この場合、測定誤差等を防止するためにも、前記チップは使い捨てにすることが好ましい。また、血液試料Ｂの貯蔵庫から、ポンプ等を用いて電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給することもできる。更に、常設のノズル等を用いて電気的測定用容器１０１に血液試料Ｂを自動的に供給することも可能である。この場合、ノズルには、測定誤差等を防止するためにも、洗浄機能を付与することが好ましい。
【００７６】
また、本技術では、血液試料供給部１０に、検体である血液試料Ｂの種類等を識別し、自動的に読み取る機能（バーコードリーダーなど）等を備えることも可能である。
【００７７】
（１１）薬剤供給部１１
薬剤供給部１１は、電気的測定用容器１０１に１種又は２種以上の薬剤を自動的に供給する。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この薬剤供給部１１は必須ではないが、薬剤供給部１１を備えることで、血液凝固系解析の各工程をオートマチックに行うことができる。
【００７８】
薬剤の具体的な供給方法は特に限定されず、前述した血液試料供給部１０と同様の方法を用いて行うことができる。特に、薬剤の供給は、電気的測定用容器１０１に接触することなく、一定量の薬剤を供給できる方法が好ましい。例えば、液体状の薬剤であれば、吐出による供給を行うことができる。より具体的には、例えば、予め薬液を吐出管内へ導入しておき、これに接続される管路を介して、別途接続される加圧空気を短時間管路へ吹き込むことにより、容器１０１へ薬液を吐出供給することができる。この際、空気圧とバルブ開閉時間を調整することにより、薬液の吐出量を調整可能とすることもできる。
【００７９】
また、空気を吹き込む以外に、加熱により薬液自体、或いはそれに溶存する空気の気化を利用して、容器１０１へ薬液を吐出供給することもできる。この際、発熱素子等を設置した気化室への印加電圧と時間を調整することにより、発生気泡容積を調整し、薬液の吐出量を調整することもできる。
【００８０】
更に、空気を使わず、圧電素子（ピエゾ素子）等を用いて、管路内に設けられた可動部を駆動し、可動部容積で定まる量の薬液を送出することにより、容器１０１へ薬液を供給することもできる。また、例えば、薬液を微滴化し、所望の容器１０１へ直接吹き付ける、所謂、インクジェット方式を用いることにより、薬剤を供給することも可能である。
【００８１】
また、本技術では、薬剤供給部１１に、撹拌機能、温度制御機能、薬剤の種類等を識別し、自動的に読み取る機能（バーコードリーダーなど）等を備えることも可能である。
【００８２】
（１２）精度管理部１２
精度管理部１２は、測定部３の精度管理を行う。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この精度管理部１２は必須ではないが、精度管理部１２を備えることで、測定部３での測定精度の向上や、ユーザビリティの向上を図ることができる。
【００８３】
具体的な精度管理方法は特に限定されず、公知の精度管理方法を適宜自由に用いることができる。例えば、装置１００内に、ショート用の金属板等を設置しておき、測定開始前に電極と金属板とをショートさせることで測定部３のキャリブレーションを行う方法、キャリブレーション用のジグ等と電極とを接触させる方法、血液試料Ｂを入れる容器１０１と同一の形態の容器に金属板等を設置しておき、測定開始前に電極と金属板とをショートさせることで測定部３のキャリブレーションを行う方法等の測定部３のキャリブレーションを行うことにより、測定部３の精度管理を行う方法等が挙げられる。
【００８４】
また、前述した方法に限らず、実際の測定前に測定部３の状態をチェックし、異常があった時のみ、前述したキャリブレーション等を行って測定部３を校正することで、測定部３の精度管理を行う方法など、適宜自由な方法を選択して用いることができる。
【００８５】
（１３）駆動機構１３
駆動機構１３は、様々な目的に応じて、測定部３中の電気的測定用容器１０１を動かすために用いられる。例えば、容器１０１に保持された血液試料Ｂにかかる重力の方向を変化させる方向へ該容器１０１を動かすことで、血液試料Ｂ中の沈降成分の沈降により、測定値に影響が生じるのを防ぐことができる。
【００８６】
また、例えば、非測定時には、印加部２と電極１ａ、１ｂとを非接続状態とし、測定時には、印加部２と電極１ａ、１ｂとを電気的に接続可能となるように、電気的測定用容器１０１を駆動させることもできる。
【００８７】
更に、例えば、複数の電気的測定用容器１０１を備える場合には、容器１０１を動かすことができるように構成しておけば、容器１０１を必要な部位に移動させることで、測定、血液試料供給、薬剤供給などを行うことができる。即ち、測定部３、血液試料供給部１０、薬剤供給部１１等を目的の電気的測定用容器１０１に移動させる必要がないため、各部を動かすための駆動部などを設ける必要がなく、装置の小型化やコストの低減が可能である。
【００８８】
（１４）サンプル待機部１４
サンプル待機部１４は、分取した血液試料Ｂを測定前に待機させる。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、このサンプル待機部１２は必須ではないが、サンプル待機部１４を備えることで、誘電率の測定を円滑に行うことができる。
【００８９】
本技術では、サンプル待機部１４に、撹拌機能、温度制御機能、電気的測定用容器１０１への移動機構、血液試料Ｂの種類等を識別し、自動的に読み取る機能（バーコードリーダーなど）や、自動開栓機能等を備えることも可能である。
【００９０】
（１５）撹拌機構１５
撹拌機構１５は、血液試料Ｂの撹拌、血液試料Ｂと薬剤との撹拌を行う。本技術に係る血液凝固系解析装置１００において、この撹拌機構１３は必須ではないが、例えば、血液試料Ｂに沈降性成分が含まれる場合や、測定時に血液試料Ｂに薬剤を添加する場合などには、撹拌機構１５を備えることが好ましい。
【００９１】
具体的な撹拌方法は特に限定されず、公知の撹拌方法を適宜自由に用いることができる。例えば、ピペッティングによる撹拌、撹拌棒又は撹拌子等を用いた撹拌、血液試料Ｂや薬剤の入った容器を上下逆転させることによる撹拌等を挙げることができる。
【００９２】
（１６）ユーザーインターフェース１６
ユーザーインターフェース１６は、ユーザーが操作するための部位である。ユーザーは、ユーザーインターフェース１６を通じて、血液凝固系解析装置１００の各部にアクセスすることができる。
【００９３】
（１７）サーバ１７
サーバ１７は、測定部３でのデータ及び／又は解析部４での解析結果を記憶する記憶部を少なくとも備え、ネットワークを介して、少なくとも測定部３及び／又は解析部４と接続されている。
【００９４】
また、サーバ１７では、血液凝固系解析装置１００の各部からアップロードされた各種データの管理や、ユーザーからの指示により表示部６等に各種データを出力することも可能である。
【００９５】
（１８）その他
なお、本技術に係る血液凝固系解析装置１００の各部で行われる機能を、パーソナルコンピュータや、ＣＰＵ等を含む制御部及び記録媒体（不揮発性メモリ（ＵＳＢメモリ等）、ＨＤＤ、ＣＤ等）などを備えるハードウェア資源にプログラムとして格納し、パーソナルコンピュータや制御部によって機能させることも可能である。
【００９６】
２．血液凝固系解析方法
血液凝固系解析方法は、印加ステップと、測定ステップと、解析ステップと、を少なくとも有する。また、必要に応じて、他のステップを有していてもよい。以下、各ステップについて詳細に説明する。
【００９７】
（１）印加ステップ
印加ステップでは、一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する。詳細な方法は、前述した印加部２で行われる方法と同様であるため、ここでは説明を割愛する。
【００９８】
（２）測定ステップ
測定ステップでは、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する。詳細な方法は、前述した測定部３で行われる方法と同様であるため、ここでは説明を割愛する。
【００９９】
（３）解析ステップ
解析ステップでは、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する。詳細な方法は、前述した解析部４で行われる方法と同様であるため、ここでは説明を割愛する。
【０１００】
なお、より具体的な解析方法については、後述する実施例３の図１２、或いは実施例４の図１３に示す。
【実施例】
【０１０１】
以下、実施例に基づいて本技術を更に詳細に説明する。
なお、以下に説明する実施例は、本発明の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本技術の範囲が狭く解釈されることはない。
【０１０２】
＜＜実施例１＞＞
人工心肺を用いる心臓血管手術を受ける成人患者２４名の血液による測定を実施した。
【０１０３】
＜検体＞
採血のタイミングは、下記の通りであり、クエン酸を抗凝固剤として含む採血管に採血した。
（Ａ）麻酔導入後手術開始前
（Ｂ）人工心肺終了後・プロタミンによるヘパリン中和の終了時
（Ｃ）手術終了ＩＣＵ入室時
（Ｄ）手術１週間後
（Ｅ）手術１ヶ月後
【０１０４】
＜測定＞
ＤＢＣＭ（ｄｉｅｌｅｃｔｒｉｃ ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌｏｍｅｔｒｙ）測定の他、トロンボエラストメトリー、スクリーニング血液凝固検査及び凝固因子の定量検査、トロンビン生成試験などを実施した。
【０１０５】
ＤＢＣＭ測定には、誘電コアグロメーター実験用プロトタイプ機（ソニー株式会社製）を使用した。測定システムは、自動血液分注部、３７℃（＋０，−１℃以内）にコントロールされた４連カートリッジホルダー、ディスポーザブルなカートリッジと接続されるインピーダンスアナラーザーボード（周波数域：１００Ｈｚ〜４０ＭＨｚ）、及びＰＣからなる。カートリッジは、ポリプロピレン製で、一対のチタン製電極対がインサートされており、平衡平板コンデンサーとして機能することで血液の複素誘電率を測定することができる。また、血沈の影響を受けにくくなるように電極は配置されている。サンプルカートリッジホルダーに対し、予め試薬が封入されたカートリッジをセットする。なお、今回使用した誘電コアグロメーター実験用プロトタイプ機は、４連サンプルカートリッジホルダーを有しており、４通りの異なる試薬を用いた測定を同時に実施することができる。
【０１０６】
本実施例１で用いた試薬とそれに対応するアッセイ名を、以下に示す。すなわち、組織因子によって外因系凝固経路を活性化させるＥＸ、エラグ酸によって内因系凝固経路を活性化させるＩＮ、サイトカラシンＤによって血小板凝集を阻害した状態で組織因子によって外因系凝固経路を活性化させるＰＩ、及びアプロチニンによって線溶系を阻害した状態で組織因子によって外因系凝固経路を活性化させるＬＩアッセイである。なお、これらの試薬に加え、クエン酸による抗凝固作用を解くために塩化カルシウムも共通して加えた。また、検体は特別な処理は行わずに、全血のまま測定に用いた。
【０１０７】
トロンボエラストメトリー測定は、ＲＯＴＥＭ ｄｅｌｔａ（ＴＥＭ社製）を用いて、メーカー指定の操作に従って実施した。測定したアッセイは、ＤＢＣＭ測定と対応するように次のように選択した。すなわち、組織因子によって外因系凝固経路を活性化させるＥＸＴＥＭ、エラグ酸によって内因系凝固経路を活性化させるＩＮＴＥＭ、サイトカラシンＤによって血小板凝集を阻害した状態で組織因子によって外因系凝固経路を活性化させるＦＩＢＴＥＭ、及びアプロチニンによって線溶系を阻害した状態で組織因子によって外因系凝固経路を活性化させるＡＰＴＥＭアッセイである。なお、検体は特別な処理は行わずに、全血のまま測定に用いられた。
【０１０８】
スクリーニング血液凝固検査及び凝固因子の定量検査は、血液凝固線溶測定装置（ＡＣＬＴＯＰ ３００ ＣＴＳ；ＩＬ社製）により実施した。測定には、血球成分を除いた血漿を用いる必要がある。そのため、検体血液を３０００ｒｐｍ×１０ｍｉｎ（ａｔ２０℃）で遠心分離し、上澄みを回収して、その上澄みを３０００ｒｐｍ×１０ｍｉｎ（ａｔ２０℃）で遠心分離して得られた上澄みを用いた。このようにして得られた血漿は、血小板もほぼ除かれたものであり、乏血小板血漿（ＰＰＰ）とみなせるものである。測定はメーカー指定の手順と専用試薬を用いて実施した。測定項目は、下記表１の通りとした。
【０１０９】
【表１】
2020041867.tif 000003
【０１１０】
＜結果及び考察＞
外因系の凝固検査であるＰＴ−ＩＮＲ（図６の（ａ））とＲＯＴＥＭ ＥＸＴＥＭ（図８の（ａ））では、手術直前の麻酔導入時と比較し、人工心肺終了後は血液凝固時間が延長しているが、手術終了後ＩＣＵ入室時には延長傾向が緩和されていた。特に注目すべき点は、術後１週間及び１ヶ月後の血液凝固時間は手術開始直前と比べて延長したことである。この理由として、術後１週間及び１ヶ月後に外因系凝固経路の上流に位置するＦＶＩＩがかなり減少していることが挙げられる（図６の（ｄ））。
【０１１１】
各凝固因子の変動を見ると、人工心肺終了後に低値となるものが多く（図６の（ｃ），（ｄ），図７の（ｅ））、輸液による血液希釈も一因である。術後１週間及び１ヶ月後については、測定項目によって傾向が異なった。例えば、フィブリノーゲンは手術後の炎症のため、特に、術後１週間後は高値となっていた。一方で、他の因子の変動傾向と比較してＦＶＩＩはかなり低値となったと言える（図６の（ｄ））。線溶指標であるＤＤ（図７の（ｆ））やＦＤＰ（図７の（ｇ））は人工心肺終了後高値となり、術後１ヶ月後でも手術直前よりも高い傾向が続いた。また、ＡＴ（図７の（ｈ））は手術に伴い低下するが、手術後１週間後には回復した。
【０１１２】
一方で、ＤＢＣＭでは、１０ＭＨｚの誘電率変化の特徴点として、極小値を与える時間をＣＴ，血液凝固に伴う誘電率増加の傾きが最大になる（最大勾配を与える）時間をＣＴ３として、アッセイ及び採血タイミング毎に解析しまとめた結果が、図１０及び１１の（ａ）〜（ｈ）である。人工心肺終了後及びＩＣＵ入室時には手術開始直前と比較して総じて延長傾向を示した。こうした変化は、先に示したＰＴ−ＩＮＲやＲＯＴＥＭＥＸＴＥＭの結果と一致する。
【０１１３】
しかし、それ以降（術後１週間、出後１ヶ月）では、外因系の凝固経路を惹起するアッセイ（ＥＸ，ＬＩ，ＰＩ）のＣＴは手術開始直前のレベルまで戻っており、検体によってはむしろ短縮しているものもあった。このことから、ＰＴ−ＩＮＲやＲＯＴＥＭＥＸＴＥＭでは分からなかった血栓リスク（凝固亢進）を評価できたことが分かった。
【０１１４】
一方で、ＣＴ３は、外因系の凝固経路を惹起するアッセイ（ＥＸ，ＬＩ，ＰＩ）では、手術開始直前よりも術後１週間や術後１ヶ月では延長傾向が見られたので、ＰＴ−ＩＮＲやＲＯＴＥＭＥＸＴＥＭの結果と一致するものであった。つまり、ＦＶＩＩ低下に伴う出血リスクを捉えていると言える。
【０１１５】
すなわち、術後１週間や術後１ヶ月では、血栓リスクと出血リスクの両方が存在しているという、これまでの通常の検査では認識することができなかった知見が得られた。通常の検査（ＰＴ−ＩＮＲやＥＸＴＥＭなど）では凝固時間が延長しているので、血栓リスクは見落とされることになるが、実際には、血液が微量な組織因子に暴露されることによる潜在的な血栓リスクが高まっていると考えられる。
【０１１６】
ここで、ＦＶＩＩが低下しているため、凝固反応が加速していくスピードは緩やかであると考えられるが、凝固反応が進行するには十分なＦＶＩＩが残っている。健常者では組織因子の暴露はほとんど無いので健康な血管内で凝固反応が進むリスクはほとんど無いことと比較すると、術後１週間及び１ヶ月後の測定結果は高い血栓リスクを示していると言える。一方で、ひとたび血管が開裂して出血が生じた場合には、ＦＶＩＩの低下により止血に時間を要することになる。最終的には止血に至るとしても、迅速な凝固反応とはならないため、致命的である可能性がある。出血時には、血液は血管外に発現している過剰な量の組織因子に暴露されるので、健常者（ＦＶＩＩ低下が無い場合）には、速やかに凝固反応が進行するが、今回の術後１週間及び１ヶ月後の測定結果に対応する検体では、ＦＶＩＩ低下により過剰な量の組織因子に暴露があっても、止血に時間を要することになる。
【０１１７】
更に、内因系のアッセイＩＮを行うことで内因系に異常が無いことを確認できれば、上述した血栓リスクと出血リスクの両方が外因系、すなわち、微量の組織因子の血液への暴露とそれによるＦＶＩＩの低下、によることが裏付けられる。また、後述する実施例２で述べるアンチトロンビンの活性低下による血栓リスクとも切り分けることができる。
【０１１８】
上記の知見に基づき、改めて各凝固因子の測定結果を見ると、血液が微量の組織因子に暴露されて血栓リスクが高まっているというＤＢＣＭによる評価と矛盾しないことが推察できる。すなわち、術後１週間及び１ヶ月後にＦＶＩＩはかなり減少しているが、他の因子にはほとんどそのような傾向はみられないという結果は、次の点で注目に値する。他の凝固因子と比較してＦＶＩＩの肝臓での合成のみが選択的に低下することは考えにくいため、ＦＶＩＩの低下は消費性のものである可能性が無視できない点である。血栓塞栓症イベントが生じない程度に、ごく低濃度の組織因子が継続的に血液に暴露されていると考えられる。このようなごく低濃度の組織因子では、血栓症や播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）として直ちに顕在化するほどではないが、組織因子はＦＶＩＩやＦＶＩＩａと結合し、消費性のＦＶＩＩ濃度低下を引き起こすと考えられる。
【０１１９】
このようなリスクがＰＴ−ＩＮＲやＲＯＴＥＭ ＥＸＴＥＭアッセイで評価できない理由の１つは、検査に用いられる組織因子濃度が高いことによると考えられる。ＥＸＴＥＭアッセイの組織因子終濃度は、今回実施したＤＢＣＭの濃度の約３０倍であると推定され、ＰＴ−ＩＮＲでの終濃度は約１０００倍であり、血中組織因子量と比較して大過剰の組織因子を検査試薬として投入することになる。そのため、血中組織因子による凝固亢進効果は埋もれることになり、逆に、ＦＶＩＩ因子欠乏傾向が検査に与える影響が支配的になって凝固延長として観測されることになると考えられる。さらにＲＯＴＥＭにおいては、粘弾性測定の特性として、凝固反応初期に見られる柔らかいフィブリンゲルを破壊してしまいそのような初期の凝固反応を検知できないため、本来凝固開始時間は短く凝固亢進状態である検体であっても、ＦＶＩＩが低くいために速やかに硬いゲルに移行しない場合には、その凝固亢進状態を評価できないものと考えられる。
【０１２０】
以上のことから、血栓リスクを精度高く評価するために、以下の要件が推奨されることが示唆された。
【０１２１】
装置としては、ＤＢＣＭのように測定中の血液にはずり応力が加わらず初期のフィブリンゲルを破壊しないものが好ましく、逆に、トロンボエラストメトリー等のように測定に伴って初期のフィブリンゲルを破壊してしまうような手法は好ましくない。また、試薬には、外因系凝固経路をごく弱く惹起する濃度の組織因子を用いる。前記装置の解析部では、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、血栓リスク（好ましくは、血栓リスク及び出血リスク）を評価する。この解析の際には、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される特徴点を用いることが好ましい。
【０１２２】
なお、上述した推定は、本技術の検討に際し、多数の項目の検査を実施してようやく推定できたことであり、本技術によらずに同様の推定をすることは極めて困難である。また、通常の臨床では、医療経済的側面を鑑みると、このような網羅的な検査とそれに基づく推定は困難である。
【０１２３】
＜＜実施例２＞＞
既存の検査では評価困難であるアンチトロンビンの生理的活性に関連し、血栓リスクや出血リスク、及び両リスクが共存する場合についての評価方法について研究を行った。実験１では健常者血液の保存に伴う変化を検証モデルとして用い、実験２では健常者血液にアンチトロンビンを加えると凝固時間が延長することを検証した。
【０１２４】
＜実験方法＞
［実験１］
クエン酸を抗凝固剤として用いた真空採血管によって健常者の静脈血液を採血した。最初の１本は破棄し、２本目と３本目に採血した血液を実験に用いた。実験に用いる２本の採血管のうち、１本目は採血後から１時間以内に実験に用いた。もう１本は室温（２５℃）で未開封のまま２５時間保存し、その後に実験に用いた。測定は、ＤＢＣＭ、ＰＴ−ＩＮＲ、ＡＰＴＴ、及びアンチトロンビン活性について実施した。このうち、ＤＢＣＭ以外の測定は血液を遠心分離することで得た血漿を用いて測定した。また、ＤＢＣＭ測定で用いたアッセイは、ＣＡアッセイ、ＩＮ２アッセイ、ＩＮ４アッセイ、及びＩＮ２０アッセイである。ここで、ＣＡアッセイはカルシウム塩のみを試薬として用いたものである。また、ＩＮ２アッセイ、ＩＮ４アッセイ、及びＩＮ２０アッセイは、カルシウム塩と内因系凝固経路の凝固開始剤であるエラグ酸を試薬として用いた。具体的にエラグ酸はシスメックス社から購入したａｃｔｉｎＦＳＬ（ＡＰＴＴ測定用試薬）をＰＢＳで６倍に希釈したものを、血液２００μＬに対して、それぞれ１．２、２．４、及び１２μＬの分量で用いた。
【０１２５】
［実験２］
実験１と同様に採血した健常者血液に、試薬として購入したアンチトロンビンを加えたものと、コントロールとして生理食塩水を加えたものとを用意して、実験を行った。測定はＤＢＣＭ、ＡＰＴＴ、及びアンチトロンビン活性について実施した。このうち、ＤＢＣＭについては、ＣＡアッセイとＩＮ２０アッセイを実施した。
【０１２６】
＜結果及び考察＞
［実験１］
ＤＢＣＭ測定で得られた応答について、例えば、ＣＴ０（１ＭＨｚで複素誘電率の極大値を与える時間）とＣＴ（１０ＭＨｚで複素誘電率の極小値を与える時間）に注目して解析したところ、下記表２のようになった。ＰＴ−ＩＮＲ、ＡＰＴＴ、及びアンチトロンビン活性の測定結果も併せて下記表２にまとめた。
【０１２７】
【表２】
2020041867.tif 000004
【０１２８】
これまで、文献（Ann Clin Biochem. 2017 Jul;54(4):448-462）によると２４時間程度の血液保存ではアンチトロンビンの活性には変化がないが、ＦＶＩＩＩはプロテインＣによる阻害を受けて低下することが報告されている（文献（Feng et al., Scientific Reports, 2014, 4: 3868））。その他の凝固因子には、やや低下するものと有意に変化しないものがある。すなわち、凝固阻害系であるアンチトロンビン活性は変化せず、凝固系の因子は低下するものがあるので、全体として凝固能はやや低下するというのが、これまでの一般的な認識であった。
【０１２９】
上記表２に示した実験結果の中で、アンチトロンビン活性試験結果は血液保存後も低下しておらず、ＰＴ−ＩＮＲやＡＰＴＴは保存によってやや延長しているので、上記のようなこれまでの一般的な認識と一致している。しかし、ＤＢＣＭの測定結果を見ると、人為的な凝固反応の加速を行わないＣＡアッセイや、内因系凝固経路をごく弱く惹起するＩＮ２アッセイ及びＩＮ４アッセイでは血液の保存によってＣＴもＣＴ０も大幅に短縮した。これは、保存に伴う凝固反応の低下よりもアンチトロンビンの反応速度の低下の方が支配的であることを意味している。生体の血管内で血栓が起こるかどうかという観点では、ごく弱い凝固反応の惹起が血栓形成までつながるかどうかが問題であり、その場合、アンチトロンビンの反応速度低下は極めて重要なファクターであると言える。しかし、このような知見はこれまで持たれていなかった。
【０１３０】
一方で、ＩＮ２０アッセイ程度まで人為的な凝固活性化を強めると、アンチトロンビンの反応速度低下は見えなくなることも分かった。すなわち、凝固反応の惹起が強ければ、凝固因子の活性度が支配的になるということである。
【０１３１】
更に、アンチトロンビンの反応速度低下を定量評価するためには、複数の血液凝固惹起の条件で測定し、惹起の強さによって凝固時間にどれだけ差が出るか見ればよい。例えば、次のような解析を行うことが推奨される。ＩＮ２０アッセイ、或いは、それよりも強く血液凝固反応を惹起するアッセイと、ＣＡアッセイ、若しくは、ＩＮ２アッセイやＩＮ４アッセイのように血液凝固反応を強く惹起しないアッセイ、の両方の測定を行う。そして、強く惹起したアッセイの凝固時間（ＣＴなど）から、血液凝固因子の全体的な活性を評価する。これが基準よりも延長していれば、血液凝固能が低下していることが分かる。次に、弱く惹起したアッセイの凝固時間を評価し、それが強く惹起したアッセイよりも十分延長していれば、アンチトロンビンの活性低下を心配する必要は無いことが分かる。逆に、延長の程度が少ない場合には、血栓リスクの要因として３つの可能性（とそれらの組み合わせ）が考えられる。すなわち、アンチトロンビンの活性低下か、内因系凝固亢進、或いは上記実施例１で示した血液への組織因子の暴露があり、その暴露量が多いために内因系弱惹起アッセイによる反応よりも外因系経路の反応が先に進むほどの場合が考えられ、これらの中のどれか１つ又は複数が該当する場合である。
【０１３２】
図１２は、血栓リスクをもれなく発見することを念頭に置いた血液凝固解析方法の一例を示すブロック図である。なお、図１２中、評価基準１、評価基準２、及び評価基準３は、一定数の健常者及び患者による測定結果をもとにして予め決めることができ、また、これらは単に閾値として設定してもよいが、より好ましくは、強惹起アッセイを用いて測定した血液凝固時間（ｓ）と弱惹起アッセイを用いて測定した血液凝固時間（ｗ）の関数として与えることができる。
【０１３３】
図１２に示すように、印加ステップと測定ステップを経た後、各アッセイについてＣＴを検出する。具体的には、例えば、内因系弱惹起アッセイＣＴ（ｉｎｗ）、内因系強惹起アッセイＣＴ（ｉｎｓ）、外因系弱惹起アッセイＣＴ（ｅｘｗ）をそれぞれ検出する。その後、予め定めた評価基準を用いて判定する。具体的には、例えば、（i）ＣＴ（ｉｎｓ）が評価基準１よりも小さいか否か、（ii）ＣＴ（ｉｎｗ）からＣＴ（ｉｎｓ）を引いた値が評価基準２よりも小さいか否か、（iii）ＣＴ（ｅｘｗ）が評価基準３よりも小さいか否かを判定する。
【０１３４】
そして、これらの判定結果を用い、上記（i）及び（ii）がYesの場合は、アンチトロンビン生理的活性低下（反応速度低下を含む）及び／又は組織因子の暴露等（血栓リスク）と判定し、上記（i）がYesかつ上記（ii）がNoの場合は、内因系及びアンチトロンビンについて異常なしと判定する。この場合において、もし、上記（iii）がYesの場合は、組織因子の暴露等による外因系凝固亢進（血栓リスク）と判定する。
【０１３５】
また、上記（i）がNoかつ上記（ii）がYesの場合は、内因系凝固因子の活性低下（出血リスク）＋アンチトロンビン生理的活性低下（反応速度低下を含む）及び／又は組織因子の暴露等（血栓リスク）と判定し、上記（i）及び（ii）がNoの場合は、内因系凝固因子の活性低下（出血リスク）と判定する。この場合において、もし、上記（iii）がYesの場合は、内因系凝固因子の活性低下（出血リスク）と組織因子の暴露等による外因系凝固亢進（血栓リスク）とが共存していると判定する。
【０１３６】
このように、血液保存によるアンチトロンビンの反応速度の低下をＤＢＣＭのＣＡアッセイや凝固反応をごく弱く惹起するアッセイで評価できることが示された。アンチトロンビンの反応速度の低下は生体内での何らかの原因によって生じることも想定される。このような原因による血栓リスクの増大は、既存の検査やそれらの組み合わせでは評価できない。
【０１３７】
［実験２］
測定結果を下記表３にまとめた。
【０１３８】
【表３】
2020041867.tif 000005
【０１３９】
上記表３に示すように、アンチトロンビンを過剰に添加すると、血液凝固時間が延長することが確認された。
【０１４０】
＜＜実施例３＞＞
これまでに述べたように、実施例１では、組織因子の暴露とそれによるＦＶＩＩ低下により、血栓リスクと出血リスクが両方存在する検体であっても、例えば、ＤＢＣＭ測定による外因系アッセイのＣＴとＣＴ３の評価から、両方のリスクを評価可能であることが示された。また、実施例２では、アンチトロンビンの活性低下等による血栓リスクの評価を行う方法が示され、その判定を図１２に示すように行うことができることが示された。しかし、図１２では、血栓リスク及び／又は出血リスクの要因が外因系にあるのか、内因系にあるのか、ＡＴにあるのかを完全に判定することができない。
【０１４１】
そこで、血栓リスクの原因が組織因子の暴露によるものの場合（ＴＦ＋）と、アンチトロンビンの活性低下によるものの場合（ＡＴ−）とを含め、複数のケースを想定して、ＤＢＣＭの検査結果がどのように変わるかを検証し、下記表４にまとめた。なお、（ＴＦ＋）はＦＶＩＩの低下がそれほど顕著ではないケースも想定して、「ＴＦ＋（ＦＶＩＩ低下を伴わない）」という項目も設定している。
【０１４２】
【表４】
2020041867.tif 000006
【０１４３】
上記表４のように、複数のアッセイを用いることで、血栓リスク及び／又は出血リスクとその要因について、より詳しい分析が可能となる。
【０１４４】
＜＜実施例４＞＞
実施例３の結果から、さらに具体的なケースを想定した測定（評価）パネルを設定した。より具体的には、出血リスクが懸念される場合（周術期や、抗凝固治療中、出血を疑う所見がある時など）を想定した。
【０１４５】
この場合、外因系アッセイと内因系アッセイの両方を実施する必要がある。弱惹起アッセイと強惹起アッセイのどちらを用いてもよいが、ＦＶＩＩ因子低下（組織因子混入に起因）による出血リスクか、外因系因子全般の低下による出血リスクかまで判別したい場合には、外因系アッセイは弱惹起を用いる方がよい。そこまで判別する必要が無く、検査結果を早く知りたい場合には、強惹起アッセイを用いることができる。この一例として、図１３では、外因系弱惹起アッセイと内因系弱惹起アッセイを用いて出血リスクを判定する血液凝固解析方法について、ブロック図で示した。
【０１４６】
図１３に示すように、印加ステップと測定ステップを経た後、各アッセイについて特徴量を検出する。具体的には、例えば、内因系弱惹起アッセイＣＴ（ｉｎ）、外因系弱惹起アッセイＣＴ（ｅｘ）及びＣＴ３（ｅｘ）をそれぞれ検出する。ここで、ＣＴ（ｉｎ）は、ＣＴ３（ｉｎ）やＣＴ１（ｉｎ）、又はこれに準ずるパラメーターであってもよく、ＣＴ（ｅｘ）及びＣＴ３（ｅｘ）も、これに準ずるパラメーターであってもよい。
【０１４７】
その後、予め定めた評価基準を用いて判定する。具体的には、例えば、（i）ＣＴ（ｉｎ）が評価基準Ｂ１よりも大きいか否か、（ii）ＣＴ（ｅｘ）が評価基準Ｂ２よりも大きいか否か、（iii）ＣＴ（ｅｘ）が評価基準Ｂ３よりも小さいか否か、(iv)ＣＴ３（ｅｘ）が評価基準Ｂ４よりも大きいか否かを判定する。
【０１４８】
そして、これらの判定結果を用い、上記（i）がYesの場合は、内因系凝固因子欠乏による出血リスクあり、Noの場合は、内因系凝固因子欠乏による出血リスク無し、上記（ii）がNoの場合は、外因系凝固因子欠乏による出血リスクあり、Noの場合は、外因系凝固因子欠乏による出血リスク無し、と判定する。これら２つの判定結果の組み合わせで、４通りの結論が得られる、例えば、上記（i)及び（ii）がYesの場合は、内因系凝固因子及び外因系凝固因子欠乏による出血リスクがあるという判定となる。
【０１４９】
また、上記（iii）及び（iv）がYesの場合は、組織因子の血中混入による血栓リスクと外因系凝固因子の内FVIIのみの欠乏による出血リスクとが共存していると判定する。ここで、上記（iii）がYesかつ上記(iv)がNoの場合は、外因系凝固亢進による血栓リスクありと判定する。
【０１５０】
なお、本技術では、以下の構成を取ることもできる。
（１）
一対の電極と、
前記一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加部と、
前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定部と、
少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する解析部と、
を有する、血液凝固系解析装置。
（２）
前記２種以上の血液凝固関連アッセイは、血液凝固反応の惹起を行わないアッセイ、内因系凝固経路惹起アッセイ、前記内因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く内因系凝固経路を惹起するアッセイ、外因系凝固経路惹起アッセイ、及び前記外因系凝固経路惹起アッセイよりも弱く外因系凝固経路を惹起するアッセイからなる群より選ばれるいずれか２種以上のアッセイである、（１）に記載の血液凝固系解析装置。
（３）
前記解析部の解析結果に基づいて、血栓リスク及び／又は出血リスクの程度を出力する出力部を更に含む、（１）又は（２）に記載の血液凝固系解析装置。
（４）
前記出力部は、前記解析部の解析結果に基づいて、前記血栓リスク及び／又は出血リスクの原因を更に出力する、（３）に記載の血液凝固系解析装置。
（５）
前記血栓リスクの原因は、組織因子の血液試料への暴露、アンチトロンビン量又はアンチトロンビン反応速度の低下、及び内因系凝固経路の亢進からなる群より選ばれるいずれか１つ以上によるものである、（４）に記載の血液凝固系解析装置。
（６）
前記出血リスクの原因は、外因系凝固因子欠乏及び／又は内因系凝固因子欠乏によるものである、（４）又は（５）に記載の血液凝固系解析装置。
（７）
前記凝固因子は、内因系凝固因子である、（１）から（６）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（８）
前記凝固阻害因子は、アンチトロンビンである、（１）から（７）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（９）
前記解析の際に、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される特徴点を用いる、（１）から（８）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（１０）
前記特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量及び／又は勾配特徴量である、（９）に記載の血液凝固系解析装置。
（１１）
前記勾配特徴量は、前記特定の周波数の複素誘電率スペクトルから抽出される時間特徴量に基づいて抽出される、（１０）に記載の血液凝固系解析装置。
（１２）
前記特徴量は、１００ｋＨｚ以上３ＭＨｚ未満の低周波数で複素誘電率の極大値を与える時間ＣＴ０、低周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ１、低周波数での最大勾配ＣＦＲ、ＣＴ１以降で傾きの絶対値がＣＦＲの所定割合になった際の時間ＣＴ４、３〜３０ＭＨｚの高周波数で複素誘電率の極小値を与える時間ＣＴ、高周波数で最大勾配を与える時間ＣＴ３、高周波数での最大勾配ＣＦＲ２、ＣＴ以降ＣＴ３以前でＣＴ３からＣＦＲ２の傾きで直線を引いた時に複素誘電率の最小値を与える時間ＣＴ２、及びＣＴ３以降で傾きの絶対値がＣＦＲ２の所定割合になった際の時間ＣＴ５からなる群より選ばれるいずれか１つ以上である、（９）から（１１）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（１３）
前記２種以上の血液凝固関連アッセイを含む複数の電気的測定用容器、
を更に有する、（１）から（１２）のいずれかに記載の血液凝固系解析装置。
（１４）
一対の電極に対して交番電圧を所定の時間間隔で印加する印加ステップと、
前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定する測定ステップと、
少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析する解析ステップと、
を有する、血液凝固系解析方法。
（１５）
交番電圧を印加する印加部に対して、一対の電極に時間間隔で交番電圧を印加させること、
複素誘電率を測定する測定部に対して、前記一対の電極間に配される血液試料の複素誘電率を測定させること、
血液凝固系を解析する解析部に対して、少なくとも２種以上の血液凝固関連アッセイを用い、前記血液試料に働いている抗凝固作用が解かれた以後から前記時間間隔で測定される所定期間における特定の周波数の複素誘電率に基づいて、凝固因子の活性及び凝固阻害因子の活性を解析させること、
を実行させる、血液凝固系解析プログラム。
【符号の説明】
【０１５１】
１００：血液凝固系解析装置
１ａ，１ｂ：一対の電極
１０１：電気的測定用容器
１０２：接続部
１０３：容器保持部
２：印加部
３：測定部
４：解析部
５：出力部
６：表示部
７：記憶部
８：測定条件制御部
９：温度制御部
１０：血液試料供給部
１１：薬剤供給部
１２：精度管理部
１３：駆動機構
１４：サンプル待機部
１５：撹拌機構
１６：ユーザーインターフェース
１７：サーバ
【図１】
2020041867.tif 000007
【図２】
2020041867.tif 000008
【図３】
2020041867.tif 000009
【図４】
2020041867.tif 000010
【図５】
2020041867.tif 000011
【図６】
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【図７】
2020041867.tif 000013
【図８】
2020041867.tif 000014
【図９】
2020041867.tif 000015
【図１０】
2020041867.tif 000016
【図１１】
2020041867.tif 000017
【図１２】
2020041867.tif 000018
【図１３】
2020041867.tif 000019