(57)【要約】【課題】ヒト免疫不全ウイルス中和抗体の提供。【解決手段】本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の処置および予防のための抗体およびその抗原結合性断片に関する。特に、本発明は、広範に中和する抗ＨＩＶ抗体およびその抗原結合性断片を含む新規抗ＨＩＶ抗体およびその抗原結合性断片、かかる抗体およびその断片を含有する医薬組成物、ならびにＨＩＶ複製を低減させるためにならびにＨＩＶ感染の処置および予防において、これらの抗体およびその断片を使用するための方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１５年１２月１５日に出願された米国仮出願第６２／２６７，６５２号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
配列表に関する陳述
本出願に関連する配列表は、紙でのコピーの代わりにテキストフォーマットで提供され、参照によって本明細書に組み込まれる。配列表を含有するテキストファイルの名称は、ＧＩＬＥ＿１１２＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。２０１６年１２月１３日に作成されたテキストファイルは６４０ＫＢであり、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
【０００３】
本発明は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の処置および予防のための抗体およびその抗原結合性断片に関する。特に、本発明は、広範に中和する抗ＨＩＶ抗体およびその抗原結合性断片を含む新規抗ＨＩＶ抗体およびその抗原結合性断片、かかる抗体およびその断片を含有する医薬組成物、ならびにＨＩＶ複製を低減させるためにならびにＨＩＶ感染の処置および予防において、これらの抗体およびその断片を使用するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染および関連疾患は、世界中で主要な公衆衛生上の問題である。ＨＩＶ感染のために最も新しく認可された治療は、ウイルスの逆転写酵素、プロテアーゼ酵素およびインテグラーゼを標的化するが、これらの既存の薬物に対するＨＩＶの耐性、長期毒性、および毎日の投薬レジメンへの患者の順守の欠如が、これらの治療に関連する問題であることが証明されている。従って、新たなＨＩＶ薬物を発見および開発することが重要である。
ＷＯ２０１２／０３０９０４は、複数のクレード由来のＨＩＶ−１種による感染を阻害することが可能な、ＨＩＶ感染ドナーのメモリーＢ細胞に由来するヒト抗ＨＩＶ抗体を記載している。しかし、これらの抗体の治療的使用は、免疫原性、薬物動態、抗原特異性、エフェクター機能および製造に関連する問題に起因して限定されている。従って、治療的使用のための有利な特性を有する新規抗ＨＩＶ抗体が、当該分野で必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１２／０３０９０４号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、とりわけ、ＨＩＶを処置または予防するための組成物および方法を提供する。
【０００７】
一実施形態では、本発明は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６抗体の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）のうち１つまたは複数および軽鎖ＣＤＲのうち１つまたは複数を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの番号付けを使用する）を含む。一部の実施形態では、本開示は、配列番号３６２、３６４および３６７に示される重鎖相補性決定領域１〜３（ＣＤＲ１〜３）ならびに配列番号３９５、３９６および３９７に示される軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む抗体またはその抗原結合性断片であって、ＣＤＲ内に０〜８個（または０〜４個）のアミノ酸置換を含み、以下のうち１つまたは複数：ＩｇＧ１ｍ１７アロタイプ重鎖；ラムダ２軽鎖；以下のアミノ酸置換：２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒ（ＥＵ番号付けを使用する）のうち１つまたは複数を含む重鎖定常領域；ならびに８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、ＨｉｓまたはＴｈｒのいずれか１つ、２位におけるＬｅｕ、３２位におけるＡｌａ、および９５位におけるＡｌａ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）のうち１つまたは複数を含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６抗体の２つまたはそれよりも多くの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および２つまたはそれよりも多くの軽鎖ＣＤＲ（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの番号付けを使用する）を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６抗体の３つ全ての重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つ全ての軽鎖ＣＤＲ（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの番号付けを使用する）を含む。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１ｍ１７アロタイプ重鎖を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、２１４位におけるＬｙｓ、３５６位におけるＧｌｕ、３５８位におけるＭｅｔ、および４３１位におけるＡｌａ（ＥＵ番号付けを使用する）を含む。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、以下の抗体のうちいずれか１つの重鎖定常領域（Ｆｃ）を含む：ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．４３、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１、ＰＧＴ１２１．５４、ＰＧＴ１２１．５５、ＰＧＴ１２１．６４およびＰＧＴ１２１．６５。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖定常領域（Ｆｃ）は、配列番号２５２、２５５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７２および２７３のいずれかに示される。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、ラムダ２軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖は、以下のアミノ酸置換：６７ｂ位におけるＡｒｇ、６７ｃ位におけるＰｒｏ、および１０３位におけるＬｙｓのうち１つまたは複数（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む。一実施形態では、軽鎖は、以下のアミノ酸置換：６７ｂ位におけるＡｒｇ、６７ｃ位におけるＰｒｏ、および１０３位におけるＬｙｓのうち１つまたは複数（図１のＫａｂａｔ番号付けスキームを使用する）を含む。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、以下の抗体のうちいずれか１つの軽鎖を含む：ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．４３、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１、ＰＧＴ１２１．５４、ＰＧＴ１２１．５５、ＰＧＴ１２１．６４およびＰＧＴ１２１．６５。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、軽鎖は、配列番号３３８、３４１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５８および３５９のいずれかに示される。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、以下のアミノ酸置換：２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒのうち１つまたは複数（ＥＵ番号付けを使用する）を含む重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、および３３２位におけるＧｌｕを含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、４２８位におけるＬｅｕおよび４３４位におけるＳｅｒを含む。ある特定の実施形態では、重鎖定常領域は、２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒ（ＥＵ番号付けを使用する）を含む。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、以下の抗体のうちいずれか１つの重鎖定常領域を含む：ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．４３、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１、ＰＧＴ１２１．５４、ＰＧＴ１２１．５５、ＰＧＴ１２１．６４およびＰＧＴ１２１．６５。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、以下のアミノ酸置換：８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、ＨｉｓまたはＴｈｒのいずれか１つ、２位におけるＬｅｕ、３２位におけるＡｌａ、および９５位におけるＡｌａ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）のうち１つまたは複数を含む重鎖可変領域（Ｆａｂ）を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、および１０５位におけるＬｙｓ、ＨｉｓまたはＴｈｒ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域（Ｆａｂ）は、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、および１０５位におけるＬｙｓ、ＴｈｒまたはＨｉｓ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、表１に提供される重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、表１に提供される重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、表１に提供される軽鎖またはその可変領域を含む。
【０００８】
関連の実施形態では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、またはモノクローナル抗体の重鎖もしくは軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドを含む。
【０００９】
さらなる関連の実施形態では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを含む。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、本発明のポリヌクレオチドまたはベクターを含む細胞を含む。特定の実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞、細菌細胞または酵母細胞である。
【００１１】
さらに別の実施形態では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体もしくはその断片、本発明のポリヌクレオチド、または本発明のベクターを含む、医薬組成物を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む。
【００１２】
別の関連の実施形態では、本発明は、それを必要とする被験体においてヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を処置または予防する方法であって、有効量の本発明の医薬組成物を被験体に提供するステップを含む、方法を含む。特定の実施形態では、第２の治療剤もまた被験体に提供される。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は抗ウイルス剤である。
【００１３】
さらなる実施形態では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法であって、本発明の細胞において、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を組換え的に発現させるステップを含む、方法を含む。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
配列番号３６２、３６４および３６７に示される重鎖相補性決定領域１〜３（ＣＤＲ１〜３）ならびに配列番号３９５、３９６および３９７に示される軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片は、前記ＣＤＲ内に０個から４個の間のアミノ酸置換を含み、かつ以下：
ａ．ＩｇＧ１ｍ１７アロタイプ重鎖；
ｂ．ラムダ２軽鎖；
ｃ．以下のアミノ酸置換：２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒ（ＥＵ番号付けを使用する）のうち１つまたは複数を含む重鎖定常領域；ならびに
ｄ．８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、ＨｉｓまたはＴｈｒのいずれか１つ、２位におけるＬｅｕ、３２位におけるＡｌａ、および９５位におけるＡｌａ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）のうち１つまたは複数を含む重鎖可変領域
のうち１つまたは複数を含む、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２）
前記ＩｇＧ１ｍ１７アロタイプ重鎖を含む、項目１に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３）
前記重鎖定常領域が、２１４位におけるＬｙｓ、３５６位におけるＧｌｕ、３５８位におけるＭｅｔ、および４３１位におけるＡｌａ（ＥＵ番号付けを使用する）を含む、項目２に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４）
配列番号２５２、２５５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７２および２７３のいずれかに示される重鎖定常領域（Ｆｃ）を有する、項目３に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５）
前記軽鎖がラムダ２である、項目１〜４のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６）
前記軽鎖が、以下のアミノ酸置換：６７ｂ位におけるＡｒｇ、６７ｃ位におけるＰｒｏ、および１０３位におけるＬｙｓのうち１つまたは複数（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む、項目１〜５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７）
配列番号３３８、３４１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５８、３５９のいずれかに示される軽鎖を有する、項目１〜６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目８）
前記重鎖定常領域が、以下のアミノ酸置換：２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒのうち１つまたは複数（ＥＵ番号付けを使用する）を含む、項目１〜７のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目９）
前記重鎖定常領域が、２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、および３３２位におけるＧｌｕを含む、項目１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０）
前記重鎖定常領域が、４２８位におけるＬｅｕおよび４３４位におけるＳｅｒを含む、項目１〜９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１）
前記重鎖定常領域が、２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒ（ＥＵ番号付けを使用する）を含む、項目１〜１０のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１２）
配列番号２５２、２５５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７２および２７３のいずれかに示される重鎖定常領域を有する、項目１〜１１のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１３）
前記重鎖可変領域（Ｆａｂ）が、以下のアミノ酸置換：８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、ＨｉｓまたはＴｈｒのいずれか１つ、２位におけるＬｅｕ、３２位におけるＡｌａ、および９５位におけるＡｌａ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）のうち１つまたは複数を含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１４）
前記重鎖可変領域が、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む、項目１３に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１５）
前記重鎖可変領域が、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、および１０５位におけるＬｙｓ、ＨｉｓまたはＴｈｒ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む、項目１３または１４に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１６）
前記重鎖可変領域（Ｆａｂ）が、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−ＶａｌまたはＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、および１０５位におけるＬｙｓ、ＴｈｒまたはＨｉｓ（Ｋａｂａｔ番号付けを使用する）を含む、項目１〜１５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１７）
表１に提供される重鎖可変領域を有する、項目１〜１５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１８）
表１に提供される重鎖定常領域を有する、項目１７に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１９）
表１に提供される軽鎖を有する、項目１７または１８に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２０）
項目１〜１９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記モノクローナル抗体の重鎖もしくは軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
（項目２１）
項目２０に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
（項目２２）
項目２０に記載のポリヌクレオチドまたは項目２１に記載のベクターを含む細胞。
（項目２３）
哺乳動物細胞、細菌細胞または酵母細胞である、項目２２に記載の細胞。
（項目２４）
項目１〜１９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体もしくはその断片、項目２０に記載のポリヌクレオチド、または項目２１に記載のベクターを含む、医薬組成物。
（項目２５）
項目１〜１９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその断片と、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む、項目２４に記載の医薬組成物。
（項目２６）
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の処置または予防を必要とする被験体においてヒト免疫不全ウイルスを処置または予防する方法であって、有効量の項目２４または２５に記載の医薬組成物を前記被験体に提供するステップを含む、方法。
（項目２７）
第２の治療剤が前記被験体に提供される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記第２の治療剤が抗ウイルス剤である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
項目１〜１９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法であって、項目２２または２３に記載の細胞において、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を組換え的に発現させるステップを含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を、各アミノ酸の下に示される対応するＫａｂａｔの番号付け注釈と共に示す。アミノ酸欠失は「−」で示される。アミノ酸挿入は、アミノ酸番号の次に小文字で示される。
【００１５】
【図２】図２は、ＰＧＴ１２１  ＷＴおよび選択されたバリアントに関するＤＳＦによって決定されたＦａｂドメインのＴｍを示すグラフである。試験した全てのバリアントは、より高いＴｍによって示されるように、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して改善された熱安定性を有する。
【００１６】
【図３】図３は、示されるアミノ酸においてのみ異なる独自のバリアントの対合分析を示すグラフであり、両方ともＦａｂドメインを安定化する、または脱安定化する変異を示す。ＰＧＴ１２１  ＷＴのＴｍと比較した種々のＰＧＴ１２１変異体のＴｍの変化が示される。
【００１７】
【図４】図４は、ＤＳＣによって決定された選択されたＰＧＴ１２１バリアントのＦａｂドメインのＦａｂ融点を示すグラフである。
【００１８】
【図５】図５は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴと比較した、選択されたＰＧＴ１２１バリアントに関するｇｐ１２０  ＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０の倍数変化（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）を示すグラフである。１のＥＣ５０比での点線は、親和性の変化がないことを示す。ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴは囲みで示される。所与のｇｐ１２０株（示されるようなｇｐ１２０ＢａＬまたはｇｐ１２０ＴＲＯ）について１より大きいＥＣ５０比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して改善された抗原結合親和性を有するが、所与のｇｐ１２０株について１より小さいＥＣ５０比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して減少した抗原結合親和性を有する。
【００１９】
【図６】図６は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴと比較した、ＰＧＴ１２１バリアントに関するｇｐ１４０  ＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０の倍数変化を示すグラフである。１のＥＣ５０比での点線は、親和性の変化がないことを示す。ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴは囲みで示される。所与のｇｐ１４０株（ｇｐ１４０  ＢａＬおよびｇｐ１４０  ＳＨＩＶ  ＳＦ１６２Ｐ３が示される）について１より大きいＥＣ５０比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴと比較して改善された抗原結合親和性を有するが、所与のｇｐ１２０株について１より小さいＥＣ５０比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴと比較して減少した抗原結合親和性を有する。
【００２０】
【図７】図７は、７種の独自のＨＩＶ株（ＢａＬ、ｐＲＨＰＡ４２５９、ｑｈ０６９２、６５３５、ｐＣＡＡＮ５３４２、ｐＷＩＴＯ４１６０、およびＡＣ１０．０）に由来する組換えｇｐ１２０に対して決定されたＰＧＴ１２１バリアントに関するＥＣ５０（ｎＭ）を示すグラフである。ＰＧＴ１２１  ＷＴとは対照的に、特定のバリアントＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１、およびＰＧＴ１２１．６５の間にｇｐ１２０結合の統計的有意差はない。
【００２１】
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｈは、種々の組換えヒトＦｃγＲ細胞外ドメインおよびＰＧＴ１２１  ＷＴならびにＦｃおよびＦａｂバリアント（８Ａ、ＦｃγＲＩ；８Ｂ、ＦｃγＲＩＩＩ−１７６Ｆ；８Ｃ、ＦｃγＲＩＩＩ−１７６Ｖ；８Ｄ、ＦｃγＲＩＩ−１６７Ｈ；８Ｅ、ＦｃγＲＩＩＡ−１６７Ｒ；８Ｆ、ＦｃγＲＩＩＢ；８Ｇ、ＦｃγＲＩＩＩＢ−ＮＡ１；８Ｈ、ＦｃγＲＩＩＩＢ−ＮＡ２）を使用するＥＬＩＳＡの結果を示すグラフを提供する。ビオチン化ヒトＦｃγＲ細胞外ドメインを、０．５μｇ／ｍＬのニュートラアビジン被覆３８４ウェルプレート上に捕捉した。１２点ＥＬＩＳＡ滴定を、示された抗体を用いて行い、データを、４パラメーター用量応答曲線を用いて適合させ、ＥＣ５０値を算出した。灰色の線は、複数の独自の実験において決定されたＥＣ５０値の幾何平均である（それぞれのデータ点は２連で行われた独自の実験を表す）。
【図８Ｂ】同上
【図８Ｃ】同上
【図８Ｄ】同上
【図８Ｅ】同上
【図８Ｆ】同上
【図８Ｇ】同上
【図８Ｈ】同上
【００２２】
【図９】図９は、ＰＧＴ１２１  ＷＴおよびＦａｂバリアントが、トランスフェクトされたヒト細胞中の組換えＨＩＶ  Ｅｎｖに結合することを示す。組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ  ＢａＬを、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞中にトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を、異なる濃度の示された抗体と共にインキュベートした。フローサイトメトリーの後、収集されたＭＦＩを、非線形回帰用量応答曲線に適合させた。
【００２３】
【図１０】図１０は、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較したＰＧＴ１２１バリアントに関する組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ結合のＥＣ５０の倍数変化を示す。１のＥＣ５０比での点線は、親和性の変化がないことを示す。所与の組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ株（示されるようなＢａＬまたはＵＳ６５７）について１より大きいＥＣ５０比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して改善された抗原結合親和性を有するが、所与の組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ株について１より小さいＥＣ５０比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して減少した抗原結合親和性を有する。
【００２４】
【図１１】図１１は、ＷＴ  ＦｃバックグラウンドにおけるＰＧＴ１２１およびバリアントに関するｐＨ保持スクリーニングの結果を示す。プロテインＡ樹脂からの溶出後、ｐＨ３．５で１時間の低ｐＨ保持後のＳＥＣにより示された単量体の％変化（単量体は単一の全ＩｇＧ分子と定義される）を、示されるような異なるＮａＣｌ含量を有する緩衝液中の各抗体についてプロットする。０％より下の値は、低ｐＨ保持スクリーニング中の抗体単量体の低減および凝集物含量の対応する増加を示す。点線および破線は、それぞれ、０ｍＭおよび１０ｍＭのＮａＣｌを含有する緩衝液中のＰＧＴ１２１  ＷＴ（囲み）に関する値を示す。ＰＧＴ１２１  ＬＯ６と比較して改善された、または減少した性能を有するバリアントが示される。
【００２５】
【図１２】図１２は、ＤＥＡＬＬＳ  ＦｃバックグラウンドにおけるＰＧＴ１２１バリアント上でのｐＨ保持スクリーニングを示す。ＤＥＡＬＬＳ  Ｆｃ構築物は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６と比較して以下のアミノ酸置換：Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓを含む。製剤化緩衝液中、ｐＨ３．５で１時間の低ｐＨ保持後のＳＥＣにより示された単量体の％変化を、示されるような異なるＮａＣｌ含量を有する緩衝液中の各抗体についてプロットする。０％より下の値は、低ｐＨ保持スクリーニング中の抗体単量体の低減および凝集物含量の対応する増加を示す。点線および破線は、それぞれ、０ｍＭおよび４０ｍＭのＮａＣｌを含有する緩衝液中のＰＧＴ１２１  ＷＴ（囲み）に関する平均値を示す。ＷＴ  Ｆｃを有するＰＧＴ１２１  ＷＴ（囲み）を、ＰＧＴ１２１．５６（ＤＥＡＬＬＳ  Ｆｃと組み合わせてＰＧＴ１２１  ＷＴ  Ｆａｂを含有する）と一緒に参照のために示す。試験した他のバリアントは、可変ドメイン変異を含有し、このスクリーニングにおいて改善された低ｐＨ安定性を示す。
【００２６】
【図１３】図１３は、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して以下のアミノ酸置換（ＥＵ番号付け）：Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ（ＤＥ）；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ（ＤＥＡ）；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ（ＤＥＬ）；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ（ＤＥＡＬ）；ならびにＳ２３９Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＩ３３２Ｅ（ＦＴＤＥ）を有するものを含む、ＰＧＴ１２１  ＷＴおよびＦｃバリアントによるエフェクター細胞活性化を示す。組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ  ９２ＨＴ５９３を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞中にトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を、異なる濃度の示された抗体およびＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターにカップリングされたヒトＦｃｇＲＩＩＩＡを発現する操作されたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と共にインキュベートした。抗体によるエフェクター細胞の活性化を、ルシフェラーゼ活性として測定した。
【００２７】
【図１４】図１４は、図１３に示されたもの、ならびにＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して以下のアミノ酸置換（ＥＵ番号付け）：Ｇ２３６Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＩ３３２Ｅ（ＥＦＴＥＡ）を含む別のものを含む、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較したＰＧＴ１２１  Ｆｃバリアントに関する抗体依存性エフェクター細胞活性化の倍数変化を示すグラフである。抗体依存性エフェクター細胞活性化を、図１４に示される非回帰用量応答曲線のＡＵＣによって表した。１の比での点線は、抗体活性の変化がないことを示す。所与の組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ株（示されるようなＢａＬまたは９２ＨＴ５９３）について１より大きいＡＵＣ比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して改善された活性を有するが、所与の組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ株について１より小さいＡＵＣ比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較して減少した活性を有する。
【００２８】
【図１５】図１５は、ＤＥＡＬ  Ｆｃ変異を有するＰＧＴ１２１  ＷＴ  Ｆａｂバリアントと比較したＤＥＡＬ  Ｆｃ変異を有するＰＧＴ１２１  Ｆａｂバリアントに関する抗体依存性エフェクター細胞活性化の倍数変化を示すグラフである。抗体依存性エフェクター細胞活性化を、所与の抗体の非回帰用量応答曲線のＡＵＣによって表した。１の比での点線は、抗体活性の変化がないことを示す。所与の組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ株（示されるようなＵＳ６５７または９２ＨＴ５９３）について１より大きいＡＵＣ比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴ  Ｆａｂと比較して改善された活性を有するが、所与の組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ株について１より小さいＡＵＣ比を有するバリアントは、ＰＧＴ１２１  ＷＴ  Ｆａｂバリアントと比較して減少した活性を有する。注目すべきことに、本発明のある特定の抗体の活性は、曲線下面積（ＡＵＣ）によって定量した場合、ＰＧＴ−１２１抗体のものよりも１０倍増強された。
【００２９】
【図１６】図１６は、ＰＧＴ１２１．４２変異体と比較した、ＰＧＴ１２１．６０およびＰＧＴ１２１．６１変異体のＥｎｖ  ＨＴ５９３をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を使用するエフェクター細胞活性化アッセイにおけるＡＵＣの倍数変化を示すグラフである。
【００３０】
【図１７】図１７は、ＰＧＴ１２１．４２によるＨＩＶに感染した標的ＣＤ４＋Ｔ細胞の増強されたＡＤＣＣを示すグラフである。エフェクター増強されたＰＧＴ１２１．４２およびＷＴ  ＰＧＴ１２１によるウイルス単離物ＵＳ６５７に感染した初代ＣＤ４＋Ｔ細胞のＡＤＣＣに関する代表的な用量応答曲線である。アッセイを、１０ｍｇ／ｍＬの血清ＩｇＧの存在下で実施する。
【００３１】
【図１８】図１８Ａおよび１８Ｂは、１ｍｇ／ｍＬの血清ＩｇＧの存在下でＰＧＴ１２１．４２によるＨＩＶに感染した標的ＣＤ４＋Ｔ細胞の増強された単球およびＰＢＭＣ媒介性死滅を示すグラフである。単離された自己ＰＢＭＣ（Ａ）または自己単球（Ｂ）のいずれかを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏでウイルス単離物ＵＳ６５７に感染させたＰＧＴ１２１．４２およびＰＧＴ１２１ドナーＣＤ４＋Ｔ細胞の代表的な用量応答曲線である。
【００３２】
【図１９】図１９Ａおよび１９Ｂは、Ｍｏｎｏｇｒａｍ  ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅ中和アッセイを使用する、二重および／もしくは混合指向性（ＤＭおよびＸ４単離物、１９Ａ）またはＲ５指向性（Ｒ５単離物；１９Ｂ）を有する単離物のパネルに対するＰＧＴ１２１およびバリアントの中和活性を示すグラフである。各抗体バリアントについて、任意の所与の単離物に対する活性を、ＰＧＴ１２１と比較して表す（バリアントのＩＣ５０／ＩＣ５０  ＰＧＴ１２１）。各ドットは、単一の単離物を表す。バーは、単離物のメジアンＩＣ５０を四分位範囲と共に表す。
【００３３】
【図２０】図２０は、Ｍｏｎｏｇｒａｍ  ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅ中和アッセイを使用する、臨床単離物の大きいパネルに対するバリアントの中和活性を示すグラフである。各円は、単一の単離物を表す。各抗体について、所与の単離物に対する活性を、ＰＧＴ１２１（ＩＣ９５  ＰＧＴ１２１／ＩＣ９５バリアント）と比較して示す。
【００３４】
【図２１】図２１は、ＣＥＭ−ＮＫｒ−ＣＣＲ５−Ｌｕｃレポーター細胞株に基づくアッセイを使用する、５つのＨＩＶ−１単離物のパネルに対するＰＧＴ１２１バリアントの中和を示すグラフである。水平の線は、５つの単離物のそれぞれに関するＩＣ５０の幾何平均を示す。特定のバリアントは、必ずしも試験した全ての単離物ではないが、いくつかの単離物に対する、ＰＧＴ１２１を超える改善された中和効力（最大２倍）を有することが観察された。
【００３５】
【図２２】図２２は、５０のドナーのパネルに由来する初代細胞上で試験されたＰＧＴ１２１  ＷＴおよび選択されたバリアントの全分子免疫原性評価を示すグラフである。ＶＲＣＯ１は抗ＨＩＶ抗体であり、Ａ３３は第Ｉ相治験において抗薬物抗体応答を示した陽性対照である（Ｗｅｌｔら、２００３年、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９巻：１３３８〜１３４６頁）。
【００３６】
【図２３】図２３Ａおよび２３Ｂは、ＰＧＴ１２１  ＷＴ（２３Ｂ）および選択されたバリアント（２３Ａおよび２３Ｂ）に関するＦｃＲｎ  ＥＬＩＳＡ  ｐＨ６．０のＥＣ５０値を示すグラフである。
【００３７】
【図２４】図２４は、ナイーブなカニクイザル（ｎ＝２）への１ｍｇ／ｋｇのＩＶボーラス投与後のＰＧＴ１２１．１（三角）およびＰＧＴ１２１．４２（丸）に関する血清濃度−時間プロファイルを示すグラフである。各記号は、それぞれ個々の動物に由来する測定された濃度であり、線は２つの被験体の平均を表す。
【００３８】
【図２５】図２５は、ナイーブなカニクイザル（ｎ＝３）への１０ｍｇ／ｋｇのＩＶ投与後のＰＧＴ１２１．１（三角）、ＰＧＴ１２１．４２（丸）、ＰＧＴ１２１  ＬＳ（白丸）、およびＰＧＴ１２１．６０（白四角）に関する血清濃度−時間プロファイルを示すグラフである。各記号は、それぞれ個々の動物に由来する測定された濃度であり、線は３つの被験体の平均を表す。
【００３９】
【図２６】図２６は、Ｅｎｖ  ＨＴ５９３をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を使用するエフェクター細胞活性化アッセイにおけるＰＧＴ１２１（白丸）および変異体ＰＧＴ１２１．６０（黒丸）によるエフェクター細胞活性化を示すグラフである。
【００４０】
【図２７】図２７は、ＰＧＴ１２１バリアントの選択されたセットによるＨＩＶに感染した標的ＣＤ４＋Ｔ細胞のＡＤＣＣ活性を示すグラフである。代表的なＡＤＣＣ用量応答曲線を、エフェクターにより増強されたＰＧＴ１２１バリアントによる、ウイルス単離物ＵＳ６５７に感染した初代ＣＤ４＋Ｔ細胞の死滅について示す。
【００４１】
【図２８】図２８は、５ｍｇ／ｍＬの競合ヒト血清ＩｇＧの存在下でのＰＧＴ１２１と比較したＰＧＴ１２１バリアントＰＧＴ１２１．６０の増強されたＡＤＣＣ活性を示すグラフである。２人の健康なドナーに由来する初代ヒトＮＫ細胞を使用する、ＨＩＶ−１単離物ＵＳ６５７に感染したＣＥＭ．ＮＫｒ．ＣＣＲ５．Ｌｕｃ  ＣＤ４レポーター細胞株の死滅を示す。
【００４２】
【図２９Ａ】図２９Ａおよび２９Ｂは、Ｒ５、Ｘ４およびＤ／Ｍウイルスに対するＰＧＴ１２１バリアントの増大した効力を示す。図２９Ａ：Ｒ５ウイルスおよびＸ４＆Ｄ／Ｍウイルスに関する個々のＰＧＴ１２１  Ｆａｂバリアント対ＰＧＴ１２１  ＷＴの効力における倍数増加。図２９Ｂ：Ｒ４ウイルスまたはＲ５ウイルスに対するＰＧＴ１２１  ＷＴを超えるＰＧＴ１２１バリアントの倍数単位での効力（ｆｏｌｄ  ｍｏｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ）または倍数変化（ＩＣ５０）。Ｒ５ウイルス＝Ｒ５指向性ウイルスは、ＣＣＲ５受容体を優先的に使用する；Ｘ４＝Ｒ４指向性ウイルスは、ＣＸＣＲ４受容体を優先的に使用する；Ｄ／Ｍウイルス＝二重／混合は、Ｒ５とＸ４指向性の両方を示す。
【図２９Ｂ】図２９Ａおよび２９Ｂは、Ｒ５、Ｘ４およびＤ／Ｍウイルスに対するＰＧＴ１２１バリアントの増大した効力を示す。図２９Ａ：Ｒ５ウイルスおよびＸ４＆Ｄ／Ｍウイルスに関する個々のＰＧＴ１２１  Ｆａｂバリアント対ＰＧＴ１２１  ＷＴの効力における倍数増加。図２９Ｂ：Ｒ４ウイルスまたはＲ５ウイルスに対するＰＧＴ１２１  ＷＴを超えるＰＧＴ１２１バリアントの倍数単位での効力（ｆｏｌｄ  ｍｏｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ）または倍数変化（ＩＣ５０）。Ｒ５ウイルス＝Ｒ５指向性ウイルスは、ＣＣＲ５受容体を優先的に使用する；Ｘ４＝Ｒ４指向性ウイルスは、ＣＸＣＲ４受容体を優先的に使用する；Ｄ／Ｍウイルス＝二重／混合は、Ｒ５とＸ４指向性の両方を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本発明は、治療的使用のための有利な特性を有する新規中和抗ＨＩＶ抗体の同定に一部基づく。本発明は、これらの抗体およびその抗原結合性断片、ならびに関連の医薬組成物、ならびに例えば、ＨＩＶならびに関連の疾患および障害の処置および予防のためのそれらの使用の方法を提供する。
【００４４】
定義および略号
単語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、具体的に示さない限り、１つまたは複数を示す。
【００４５】
「約」とは、参照の分量（ｑｕａｎｔｉｔｙ）、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さに対して、３０、２５、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１％も、変動する、分量、レベル、値、数、頻度、百分率、寸法、サイズ、量、重量、または長さを意味する。用語「約」と併せて使用される数値に関して議論される任意の実施形態では、用語約を省くことができることが具体的に企図される。
【００４６】
文脈上他の意味に解すべき場合を除き、本明細書および特許請求の範囲全体を通して、語「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」およびその変化形、例えば「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等は、オープンで包括的な意味に、すなわち、「を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）がこれらに限定されない」として解釈されるべきである。用語「含む」または「含むこと」が本明細書で使用される場合、本発明は、これらの用語が「〜からなる」または「〜から本質的になる」または「〜からなること」または「〜から本質的になること」で置き換えられる実施形態をさらに含むことが理解される。
【００４７】
「〜からなる」とは、語句「〜からなる」の後に続く全てを含み、それらに限定されることを意味する。従って、語句「〜からなる」は、列挙された要素が必要とされるまたは義務的であること、および他の要素が存在することができないことを示す。
【００４８】
「〜から本質的になる」とは、語句の後に列挙された任意の要素を含み、列挙された要素について本開示において特定された活性または作用を妨害することもそれらに寄与することもない他の要素に限定されることを意味する。従って、語句「〜から本質的になる」は、列挙された要素が必要とされるまたは義務的であることを示すが、他の要素は任意選択であり、列挙された要素の活性または作用にそれらが影響を与えるか否かに依存して、他の要素が存在してもしなくてもよいことを示す。
【００４９】
本明細書を通じて、「一実施形態」または「実施形態」に対する言及は、実施形態と関連して記載される特定の特色、構造または特徴が、本発明の少なくとも１つの実施形態中に含まれることを意味する。従って、本明細書を通じた種々の場所における語句「一実施形態では」または「実施形態では」の出現は、必ずしも全てが同じ実施形態に言及しているわけではない。さらに、特定の特色、構造または特徴は、１つまたは複数の実施形態において、任意の適切な様式で組み合わされ得る。
【００５０】
「増加した」または「増強された」量は、典型的には、「統計的に有意な」量であり、本明細書に記載の量またはレベルの１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０または５０倍のまたはそれを超える（例えば、１００、５００、１０００倍）（それらの間および１を超える全ての整数および小数点、例えば、２．１、２．２、２．３、２．４などを含む）増加を含み得る。それはまた、本明細書に記載の量またはレベルの少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも５００％または少なくとも１０００％の増加を含み得る。
【００５１】
「減少した」または「低減された」または「より少ない」量は典型的に、「統計的に有意な」量であり、本明細書に記載される量またはレベルの約１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０もしくは５０分の１であるかまたはそれよりも少ない（例えば、１００、５００、１０００分の１）（それらの間および１を超える全ての整数および小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）減少を含み得る。それはまた、本明細書に記載の量またはレベルの少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも５００％または少なくとも１０００％の減少を含み得る。
【００５２】
「組成物」は、活性薬剤、例えば、造影剤および担体、不活性なまたは活性な、例えば、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含み得る。組成物は、医薬組成物であり得る。特定の実施形態では、組成物は、無菌であり、内毒素を実質的に含まず、または用いられる投薬量もしくは濃度においてレシピエントにとって非毒性である。
【００５３】
「薬学的に許容される担体、希釈剤または添加剤」は、限定されないが、米国食品医薬品局により、ヒトまたは家畜において使用するために許容されるとして承認された、あらゆるアジュバント、担体、添加剤、流動促進剤、甘味剤、賦形剤、保存剤、色素／着色剤、調味料、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、等張剤、溶媒または乳化剤を含む。
【００５４】
用語「哺乳動物」および「被験体」には、ヒトおよび非ヒト哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サル、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、イヌおよびネコなどが含まれる。
【００５５】
用語「緩衝液」は、本明細書で使用する場合、医薬調製物のｐＨを安定化する、薬学的に許容される賦形剤を示す。適切な緩衝液は、当該分野で周知である。適切な薬学的に許容される緩衝液には、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、ｔｒｉｓ緩衝液およびリン酸緩衝液が含まれるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、緩衝液の濃度は、約０．０１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約０．１〜約２００ｍＭ、約０．１〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２ｍＭ〜約６０ｍＭ、約４ｍＭ〜約６０ｍＭ、または約４ｍＭ〜約４０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２０ｍＭまたは約５ｍＭ〜約２５ｍＭである。
【００５６】
「任意選択の」または「任意選択で」とは、状況に引き続いて記載される事象が起きても起きなくてもよいこと、ならびに記載が、前記事象または状況が生じる場合および生じない場合を含むことを意味する。
【００５７】
「医薬組成物」とは、哺乳動物、例えばヒトへの生物学的に活性な化合物の送達のための、当該分野で一般に受容された化合物および媒体の製剤を指す。従って、かかる媒体には、任意の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤が含まれ得る。
【００５８】
「有効量」または「治療有効量」とは、細胞、組織または被験体に単独で、または別の治療剤と組み合わせて投与される場合に、被験体において処置または有益な結果をもたらすのに十分である、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の量を指す。「有効量」を構成する量は、抗体またはその抗原結合性断片およびその具体的な使用、ならびに潜在的には状態およびその重症度、投与の様式、ならびに処置される被験体の年齢にも依存して変動するが、当業者自身の知識および本開示を考慮して、当業者によって慣用的に決定され得る。治療有効用量とは、さらに、感染もしくは疾患状態または感染もしくは疾患の進行を処置する、予防するまたは好転させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）のに十分な抗体またはその抗原結合性断片の量、およびかかる状態の処置、治癒、予防または好転の速度における増加をもたらすのに十分な量を指す。単独で投与される個々の抗体またはその抗原結合性断片に適用する場合、治療有効用量とは、その活性成分単独を指す。組み合わせに適用される場合、治療有効用量とは、組み合わせて投与されるのであれ、逐次的に投与されるのであれ、同時に投与されるのであれ、治療効果を生じる、活性成分の組み合わされた量を指す。
【００５９】
「処置する」、「処置すること」または「処置」は、本明細書で使用する場合、目的の疾患または状態を有する被験体、例えば、ヒトなどの哺乳動物における、目的の疾患、傷害または状態、例えばＨＩＶ−１感染の処置を包含し、これには、（ｉ）疾患、傷害もしくは状態の進行を阻害すること、即ち、その発症を抑止すること；（ｉｉ）疾患、傷害もしくは状態を低減することもしくは軽減すること、即ち、疾患もしくは状態の退縮を引き起こすこと；または（ｉｉｉ）疾患、傷害もしくは状態から生じる症状を軽減することが含まれる。本明細書で使用する場合、用語「疾患」、「障害」および「状態」は、相互交換可能に使用され得る。本明細書で使用する場合、「阻害」、「処置」、「処置すること」、および「好転させること」は、相互交換可能に使用され、例えば、症状の停滞、生存の延長、症状の部分的または完全な好転、および状態、疾患または障害の部分的または完全な根絶を指す。
【００６０】
本明細書で使用する場合、「予防する」または「予防」は、（ｉ）特に、かかる被験体が、状態の素因があるが、それを有するとはまだ診断されていない場合に、被験体において疾患、傷害もしくは状態が生じるのを予防もしくは阻害すること；または（ｉｉ）疾患、傷害もしくは状態が被験体において生じる可能性を低減させることを含む。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」とは、抗原性エピトープに特異的に結合する必要な可変領域配列を含む、単離されたまたは組換えの結合性作用物質を意味する。従って、抗体は、所望の生物学的活性を示す、例えば、特異的標的抗原を結合する、抗体またはその断片の任意の形態である。従って、それは、その最も広い意味で使用され、それらが所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ならびにｓｃＦｖ、ＦａｂおよびＦａｂ２が含まれるがこれらに限定されない抗体断片を、具体的に包含する。
【００６２】
用語「ヒト抗体」とは、可能な非ヒトＣＤＲ領域を除いて、ヒト起源の配列を含有する抗体を指し、Ｉｇ分子の完全構造が存在することを含意せず、抗体がヒトにおいて最小の免疫原性効果を有することのみを含意する。
【００６３】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、例えば、インタクトな抗体の抗原結合性領域または可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体（例えば、Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁（１９９５年））；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、各々が単一の抗原結合性部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合性断片、ならびに、容易に結晶化する能力を反映する名称である残りの「Ｆｃ」断片を生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、抗原を架橋することがなおも可能なＦ（ａｂ’）２断片を生じる。
【００６４】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合性部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインが緊密に非共有結合で会合した二量体からなる。この構成では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが典型的には相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合性部位を規定する。一般に、６つのＣＤＲが集合的に、抗体に抗原結合特異性を付与するが、例えば、アミノ酸挿入、欠失または置換によって、例えば、１つまたはそれより多くのＣＤＲのアミノ酸配列を変更することによって、６つのＣＤＲのうちの１つまたはそれより多くが欠失または改変される場合、抗原結合特異性が維持される例がある。さらに、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識および結合する能力を有するが、完全結合部位のものよりも低い親和性においてである。ＣＤＲ中に存在する残基以外の残基もまた、軽鎖フレームワーク３中の残基を使用してｇｐ１２０抗原と相互作用するＰＧＴ１２１および密接に関連する体細胞バリアントについて示されるように、抗原結合および／もしくは特異性にとって重要である、または抗原結合および／もしくは特異性において役割を果たし得る（Ｊｕｌｉｅｎら  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４２巻：１４７７〜８３頁（２０１３年）；Ｊｕｌｉｅｎら  ＰＬＯＳ  Ｐａｔｈｏｇ．  ９巻：ｅ１００３３４２頁（２０１３年））。これらの残基は、ＬＣ  ＣＤＲ２とＬＣ  ＣＤＲ３との間のＰＧＴ１２１軽鎖中のさらなる（例えば、第４の）相補性決定領域（ＣＤＲ）ループを効果的に形成する、ＨＩＶ  Ｅｎｖ上のＮ３３２結合したグリカンおよびタンパク質残基の両方と接触するＰＧＴ１２１および関連の体細胞バリアント（例えば、ＰＧＴ１２２、ＰＧＴ１２３、ＰＧＴ１２４、ＰＧＴ１３３、ＰＧＴ１３４）中の他の短い表面ループを伸長させる、まれな３アミノ酸の挿入から一部生じる。
【００６５】
用語「超可変領域」とは、抗原結合を典型的には担う、抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けした場合、ＶＬ中のおおよそ残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）の周辺、ならびにＶＨ中の約３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）の周辺；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年））；ならびに／または「超可変ループ」由来の残基（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従って番号付けした場合、ＶＬ中の残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、ならびにＶＨ中の２６〜３２（Ｈ１）、５２〜５６（Ｈ２）および９５〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年））；ならびに／または「超可変ループ」ＶＣＤＲ由来の残基（例えば、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従って番号付けした場合、ＶＬ中の残基２７〜３８（Ｌ１）、５６〜６５（Ｌ２）および１０５〜１２０（Ｌ３）、ならびにＶＨ中の２７〜３８（Ｈ１）、５６〜６５（Ｈ２）および１０５〜１２０（Ｈ３）；Ｌｅｆｒａｎｃ，  Ｍ．Ｐ．ら  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２７巻：２０９〜２１２頁（１９９９年）、Ｒｕｉｚ，  Ｍ．ら  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２８巻：２１９〜２２１頁（２０００年））を含む。任意選択で、抗体は、以下の点のうち１つまたは複数において対称的な挿入を有する：ＡＨｏに従って番号付けした場合、ＶＬ中の２８、３６（Ｌ１）、６３、７４〜７５（Ｌ２）および１２３（Ｌ３）、ならびにＶＨ中の２８、３６（Ｈ１）、６３、７４〜７５（Ｈ２）および１２３（Ｈ３）；Ｈｏｎｎｅｇｅｒ，  Ａ．およびＰｌｕｎｋｔｈｕｎ，  Ａ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３０９巻：６５７〜６７０頁（２００１年））。
【００６６】
「Ｆａｂ」断片は、抗原に結合する抗体上の領域である。これは、重鎖および軽鎖の各々の１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメインから構成される。これらのドメインが、単量体のアミノ末端において、パラトープ、即ち抗原結合部位を形づくる。２つの可変ドメインが、それらの特異的抗原上のエピトープを結合する。Ｆａｂ断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端におけるいくつかの残基の付加によって、Ｆａｂ’断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’についての本明細書での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた公知である。
【００６７】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの可変ドメインまたは定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に別個の型のうち１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンの５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２へとさらに分割され得る。
【００６８】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。一部の実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓＦｖが抗原結合のために望ましい構造を形成するのが可能になる。
【００６９】
用語「ダイアボディ」とは、２つの抗原結合性部位を有する小さい抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖中に、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。同じ鎖上の２つのドメイン間での対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対合するように強いられ、２つの抗原結合性部位を創出する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）により完全に記載されている。
【００７０】
「単離された」抗体またはその抗原結合性断片は、同定され、かつその天然環境の構成要素から分離および／または回収された抗体である。その天然環境の混入物構成要素は、抗体の診断または治療的使用に介入し得る材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が含まれ得る。一部の実施形態では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定されるように、抗体の９５重量％超、例えば、９９重量％超まで、（２）例えば、スピニングカップシーケネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を取得するのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルーもしくは銀染色を用いて、還元条件もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質まで、精製される。抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないので、「単離された抗体」には、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体が含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１回の精製ステップによって調製される。
【００７１】
特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープ「に特異的に結合する」または「に特異的な」抗体またはその抗原結合性断片は、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなしに、その特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗体は、約４℃、２５℃、３７℃または４２℃の温度で測定された、モノクローナル抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂまたは他の形態の抗体の形態で；１００ｎＭと等しいもしくはそれ未満の、任意選択で１０ｎＭ未満の、任意選択で１ｎＭ未満の、任意選択で０．５ｎＭ未満の、任意選択で０．１ｎＭ未満の、任意選択で０．０１ｎＭ未満の、または任意選択で０．００５ｎＭ未満の解離定数（Ｋｄ）で、標的、例えば、ＨＩＶ−１  ｇｐ１２０ポリペプチドに特異的に結合する。抗体の親和性は、従来の技術、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら（Ａｎｎ．  Ｎ．  Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ５１巻：６６０頁（１９４９年）に記載されるもの、ＥＬＩＳＡアッセイ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ；ｂｉｏｌａｙｅｒ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）アッセイおよび表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ）を使用して容易に決定され得る。抗原、細胞またはその組織への抗体の結合特性は、一般に、例えば、免疫蛍光ベースのアッセイ、例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）および／または蛍光活性化細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む免疫検出法を使用して、決定および評価され得る。
【００７２】
本明細書で使用する場合、「内在化する」抗体は、哺乳動物細胞上の抗原（例えば、細胞表面ポリペプチドまたは受容体）への結合の際に、細胞によって取り込まれる（即ち、細胞に侵入する）抗体である。内在化する抗体には、当然、抗体断片、ヒトまたはキメラ抗体、および抗体コンジュゲートが含まれる。ある特定の治療適用のために、ｉｎ  ｖｉｖｏでの内在化が企図される。内在化される抗体分子の数は、細胞、特に感染細胞を死滅させるまたはその成長を阻害するのに十分または適切である。抗体または抗体コンジュゲートの効力に依存して、一部の場合には、細胞中への単一の抗体分子の取込みが、抗体が結合する標的細胞を死滅させるのに十分である。例えば、ある特定の毒素は、抗体にコンジュゲートされた１つの分子の毒素の内在化が感染細胞を死滅させるのに十分であるように、死滅において高度に強力である。
【００７３】
用語「アンタゴニスト」抗体は、最も広い意味で使用され、これには、それが特異的に結合するエピトープ、ポリペプチドまたは細胞の生物学的活性を部分的または完全に遮断、阻害または中和する抗体が含まれる。アンタゴニスト抗体を同定するための方法は、候補アンタゴニスト抗体が特異的に結合するポリペプチドまたは細胞を、候補アンタゴニスト抗体と接触させるステップ、およびポリペプチドまたは細胞と通常関連する１つまたは複数の生物学的活性における検出可能な変化を測定するステップを含み得る。
【００７４】
「感染細胞の成長を阻害する抗体」または「成長阻害」抗体は、抗体が結合するＨＩＶ１エピトープを発現しているまたは発現することが可能な感染細胞に結合し、その細胞の測定可能な成長阻害をもたらす抗体である。好ましい成長阻害抗体は、適切な対照と比較して、２０％よりも大きく、好ましくは約２０％〜約５０％、さらにより好ましくは、５０％よりも大きく（例えば、約５０％〜約１００％）、感染細胞の成長を阻害し、対照は、典型的には、試験されている抗体で処置されていない感染細胞である。成長阻害は、細胞培養物中約０．１〜約３０μｇ／ｍｌまたは約０．５ｎＭ〜約２００ｎＭの抗体濃度で測定され得、成長阻害は、抗体への感染細胞の曝露の１〜１０日後に決定される。感染細胞のｉｎ  ｖｉｖｏでの成長阻害は、当該分野で公知の種々の方法で決定され得る。抗体は、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重での抗体の投与が、抗体の最初の投与から約５日〜３ヶ月以内、好ましくは約５〜３０日以内に、感染細胞のパーセントまたは感染細胞の総数の低減を生じる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで成長阻害的である。
【００７５】
「アポトーシスを誘導する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞萎縮、小胞体の拡張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成によって決定されるプログラム細胞死を誘導する抗体である。好ましくは、細胞は感染細胞である。種々の方法が、アポトーシスと関連する細胞事象を評価するために利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）トランスロケーションは、アネキシン結合によって測定され得る；ＤＮＡ断片化は、ＤＮＡラダリングを介して評価され得る；およびＤＮＡ断片化を伴う核／クロマチン凝縮は、低二倍体細胞における任意の増加によって評価され得る。好ましくは、アポトーシスを誘導する抗体は、アネキシン結合アッセイにおいて、未処置の細胞と比較して、約２〜５０倍、好ましくは約５〜５０倍、最も好ましくは約１０〜５０倍のアネキシン結合の誘導を生じる抗体である。
【００７６】
抗体「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰せられ得る生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって変動する。抗体エフェクター機能の例には、Ｃｌｑ結合および補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用（例えば、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ））；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節；ならびにＢ細胞活性化が含まれる。
【００７７】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した、分泌されたまたは外因的に投与されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、引き続いて細胞毒で標的細胞を死滅させるのを可能にする、細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装させ」、かかる死滅に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）の４６４頁の表４にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または米国特許第５，８２１，３３７号に記載されるようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイが実施され得る。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、抗体またはその抗原結合性断片のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  （ＵＳＡ）  ９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されたものなどの動物モデルにおいて評価され得る。
【００７８】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述する。ある特定の実施形態では、ＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲ（ガンマ受容体）であり、これには、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシングされた形態を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれる。ＦＣγＲＩＩ受容体には、その細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）、ならびに活性化細胞質領域に融合したＦｃγＲＩＩＢ細胞外ドメインを含むＦｃγＲＩＩＣが含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｄａｅｒｏｎ  Ｍ．、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５巻：２０３〜２３４頁（１９９７年）の概説を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４巻：２５〜３４頁（１９９４年）；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．  Ｌａｂ．  Ｃｌｉｎ．  Ｍｅｄ．  １２６巻：３３０〜４１頁（１９９５年）に概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書で用語「ＦｃＲ」によって包含される。用語は、胎仔への母体ＩｇＧの移行を担い（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１７巻：５８７頁（１９７６年）およびＫｉｍら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４巻：２４９頁（１９９４年））、エンドサイトーシス後のＦｃＲｎ依存性リサイクルによってリソソーム分解からＩｇＧをサルベージすることにおいて役割を果たす、新生仔受容体ＦｃＲｎもまた含む。内皮細胞におけるピノサイトーシス後のＦｃＲｎ結合は、抗体の延長された薬物動態学的半減期を持続するのに重要であることが示されている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗体のｐＨ依存性ヒトＦｃＲｎ結合の評価が、好ましい臨床的薬物動態の可能性の予測を提供するために実施され得る（Ｄａｔｔａ−ＭａｎｎａｎおよびＷｒｏｂｌｅｗｓｋｉ、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．  Ｄｉｓｐｏｓ．  ４２巻：１８６７〜１８７２頁（２０１４年））。
【００７９】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つまたは複数のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、ＰＢＭＣ、ＮＫ細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が含まれる；ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、ネイティブ供給源から、例えば血液から単離され得る。
【００８０】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、その同族抗原に結合した（適切なサブクラスの）抗体への、補体系の第１の構成要素（Ｃｌｑ）の結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２巻：１６３頁（１９９６年）に記載されるようなＣＤＣアッセイが実施され得る。
【００８１】
感染を処置することを目的とした「哺乳動物」とは、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）および農場動物（ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ）、研究動物、例えば、マウス、ラットおよび霊長類、ならびに動物園、スポーツまたはペット動物、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含む、任意の哺乳動物を指す。特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００８２】
「中和抗体」は、宿主におけるおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏの標的細胞における感染を開始および／または永続化する病原体の能力を中和できる抗体である。本発明は、中和モノクローナルヒト抗体およびその抗原結合性断片であって、ＨＩＶ由来の抗原、例えばｇｐ１２０ポリペプチドを認識する、抗体およびその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、「中和抗体」は、中和指数（ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）＞１．５または＞２．０で、ＨＩＶ−１ウイルス、例えば、ＳＦ１６２および／またはＪＲ−ＣＳＦの侵入を阻害し得る（Ｋｏｓｔｒｉｋｉｓ  ＬＧら／Ｖｉｒｏｌ．  １９９６年；７０巻（１号）：４４５〜４５８頁）。「広範に中和する抗体」とは、中和アッセイにおいて１つよりも多いＨＩＶ−１ウイルス種（多様なクレードおよびクレード内の異なる株由来）を中和する抗体を意味する。広範に中和する抗体は、ＨＩＶ−１の少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つまたはそれよりも多くの異なる株を中和し得、株は、同じまたは異なるクレードに属する。特定の実施形態では、広範に中和する抗体は、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの異なるクレードに属する複数のＨＩＶ−１種を中和し得る。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体の阻害濃度は、中和アッセイにおいて、入力ウイルスの約５０％を中和するのに約０．０００１μｇ／ｍｌ未満、約０．００１μｇ／ｍｌ未満、約０．０１μｇ／ｍｌ未満、約０．１μｇ／ｍｌ未満、約０．５μｇ／ｍｌ未満、約１．０μｇ／ｍｌ未満、約５μｇ／ｍｌ未満、約１０μｇ／ｍｌ未満、約２５μｇ／ｍｌ未満、約５０μｇ／ｍｌ未満または約１００μｇ／ｍｌ未満であり得る。
【００８３】
ＨＩＶウイルスは、特定のグループＭ、Ｎ、ＯおよびＰへと分割され、そのうちＭは、「主要な」グループであり、世界的にＨＩＶ／ＡＩＤＳの大部分の原因である。それらの遺伝子配列に基づいて、グループＭは、別個の地理的場所における有病率によって、サブタイプ（クレードとも呼ばれる）へとさらに下位分割される。
【００８４】
グループＭの「サブタイプ」または「クレード」は、遺伝子配列データによって規定されるＨＩＶ−１グループＭのサブタイプである。グループＭサブタイプの例には、サブタイプＡ〜Ｋが含まれる。サブタイプの一部は、より毒性が高いことが公知であり、または異なる薬物療法に対して耐性である。各々番号が与えられた、異なるサブタイプのウイルス間の組換えに由来する「循環組換え形態」またはＣＲＦもまた存在する。例えば、ＣＲＦ１２＿ＢＦは、サブタイプＢとＦとの間の組換えである。サブタイプＡは、西アフリカにおいて一般的である。サブタイプＢは、ヨーロッパ、アメリカ、日本、タイおよびオーストラリアにおいて支配的な形態である。サブタイプＣは、南アフリカ、東アフリカ、インド、ネパール、および中国の一部において支配的な形態である。サブタイプＤは一般に、東および中央アフリカにおいてのみ見られる。サブタイプＥは、ＣＲＦ０１＿ＡＥとしてサブタイプＡと組み換えられたものに限られ、非組換え体として同定されたことはない。サブタイプＦは、中央アフリカ、南アメリカおよび東ヨーロッパにおいて見出されている。サブタイプＧ（およびＣＲＦ０２＿ＡＧ）は、アフリカおよび中央ヨーロッパにおいて見出されている。サブタイプＨは、中央アフリカに限定される。サブタイプＩは、現在はＣＲＦ０４＿ｃｐｘと説明される株を記述するために元々使用され、ｃｐｘは、いくつかのサブタイプの「複雑な」組換えを意味する。サブタイプＪは、北、中央および西アフリカ、ならびにカリブ海地域において主に見出される。サブタイプＫは、コンゴ民主共和国およびカメルーンに限定される。これらのサブタイプは、サブ−サブタイプ、例えば、Ａ１およびＡ２またはＦ１およびＦ２へとさらに分割される場合がある。２０１５年には、サブタイプＤプロテアーゼを有するサブタイプＡ、サブタイプＤおよびサブタイプＧの組換え体である株ＣＲＦ１９が、キューバにおいてＡＩＤＳへの迅速な進行と強く関連することが見出された。
【００８５】
「ＨＩＶ指向性」とは、ウイルス表面構造と宿主細胞の表面上に存在する受容体との相互作用によって一部決定される、特定の宿主細胞に対するＨＩＶウイルスの特異性を指す。患者のウイルスのＨＩＶ指向性は、Ｔｒｏｆｉｌｅアッセイによって測定され得る。
【００８６】
ＨＩＶは、それらの表面上にＣＤ４分子を発現する種々の細胞、例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞およびマクロファージに感染できる。マクロファージおよびＴヘルパー細胞へのＨＩＶ−１の侵入は、ビリオンエンベロープ糖タンパク質（例えば、ｇｐ１２０）と標的細胞上のＣＤ４分子との相互作用だけでなく、そのケモカイン共受容体との相互作用も介して媒介される。ＨＩＶ−１のマクロファージ（Ｍ指向性）株、または非合胞体誘導性株（ＮＳＩ）は、侵入のためにベータ−ケモカイン受容体ＣＣＲ５を使用し、従って、マクロファージおよびＣＤ４＋Ｔ細胞中で複製することができる。これらの株は、Ｒ５ウイルスと呼ばれる。このＣＣＲ５共受容体は、ウイルス遺伝子サブタイプとは関係なく、ほとんど全ての主要なＨＩＶ−１単離物によって使用される。Ｔ指向性単離物または合胞体誘導性（ＳＩ）株は、初代ＣＤ４＋Ｔ細胞中ならびにマクロファージ中で複製し、侵入のためにアルファ−ケモカイン受容体ＣＳＣＲ４を使用する。これらの株は、Ｘ４ウイルスと呼ばれる。ＣＣＲ５受容体のみを使用するウイルスはＲ５と呼ばれ、ＣＸＣＲ４のみを使用するウイルスはＸ４と呼ばれ、両方を使用するウイルスは、Ｘ４Ｒ５または二重／混合指向性と呼ばれる。しかし、全てのＲ５ウイルスが増殖性感染のためにマクロファージ上のＣＣＲ５を使用できるわけではないので、共受容体単独の使用は、ウイルス指向性を説明しない。
【００８７】
本発明は、ある特定の実施形態では、ウイルスの１つまたは複数の株に結合するがウイルスを中和しない抗体である、「非中和抗体」にも関する。しかし、Ｆｃ媒介性の死滅に関して、非中和抗体は、抗体によって結合されるが中和されないウイルス抗原を発現する細胞をなおも排除できる。従って、ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ウイルス抗原を結合し、ウイルスを中和することなくウイルス感染細胞を排除できる。
【００８８】
用語「核酸分子」とは、ヌクレオチドのポリマー形態を指し、これには、ＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ならびに上記の合成形態および混合ポリマーが含まれる。特定の実施形態では、ヌクレオチドとは、リボヌクレオチド、デオキシヌクレオチドまたはいずれかの型のヌクレオチドの改変形態、およびそれらの組み合わせを指す。用語には、ＤＮＡの一本鎖形態および二本鎖形態もまた含まれるがこれらに限定されない。さらに、ポリヌクレオチド、例えば、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡは、天然に存在するおよび／または天然に存在しないヌクレオチド連結によって一緒に連結された、天然に存在するヌクレオチドおよび改変型ヌクレオチドのいずれかまたは両方を含み得る。核酸分子は、当業者によって容易に理解されるように、化学的もしくは生化学的に改変され得、または非天然のもしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含有し得る。かかる改変には、例えば、標識、メチル化、アナログによる１つまたは複数の天然に存在するヌクレオチドの置換、ヌクレオチド間改変、例えば、無荷電連結（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カルバメートなど）、荷電連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、ペンダント部分（例えば、ポリペプチド）、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレンなど）、キレーター、アルキル化剤、および改変型連結（例えば、アルファアノマー核酸など）が含まれる。上記用語は、一本鎖、二本鎖、部分的二重鎖、三重鎖、ヘアピン、環状および南京錠（ｐａｄｌｏｃｋｅｄ）コンフォメーションを含む、任意のトポロジカルコンフォメーションを含むこともまた意図する。核酸配列に対する言及は、特記しない限り、その相補体を包含する。従って、特定の配列を有する核酸分子に対する言及は、その相補的配列を有するその相補鎖を包含すると理解すべきである。用語は、コドン最適化された核酸もまた含む。
【００８９】
用語「作動可能に連結した」とは、通常は物理的に連結された、互いに機能的な関係にある２つまたはそれよりも多くの核酸配列エレメントを指す。例えば、プロモーターが、コード配列の転写または発現を開始または調節できる場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結しており、この場合、コード配列は、プロモーター「の制御下」にあると理解すべきである。
【００９０】
「置換」とは、本明細書で使用する場合、それぞれ、異なるアミノ酸またはヌクレオチドによる１つまたは複数のアミノ酸またはヌクレオチドの置き換えを示す。
【００９１】
「単離された」核酸とは、その天然の環境の構成要素から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、その核酸分子を元々含有する細胞中に含有される核酸分子が含まれるが、核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００９２】
「抗体またはその断片をコードする単離された核酸」とは、単一のベクターまたは別々のベクター中のかかる核酸分子（複数可）、および宿主細胞中の１つまたは複数の位置に存在するかかる核酸分子（複数可）を含む、抗体の重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つまたは複数の核酸分子を指す。
【００９３】
用語「ベクター」とは、本明細書で使用する場合、それが連結された別の核酸を伝播させることが可能な核酸分子を指す。用語には、自己複製性核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノム中に取り込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、それらが動作可能に連結した核酸の発現を指示することが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と呼ばれる。
【００９４】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」および「宿主細胞培養物」は、相互交換可能に使用され、かかる細胞の子孫を含む、外因性核酸が導入された細胞を指す。宿主細胞には、形質転換された初代細胞および継代の数にかかわらずそれらに由来する子孫を含む、「形質転換体」および「形質転換された細胞」が含まれる。子孫は、核酸含量が親細胞と完全に同一でなくてもよいが、変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたのと同じ機能または生物学的活性を有する変異体子孫が、本明細書に含まれる。
【００９５】
ポリヌクレオチド「バリアント」は、この用語が本明細書で使用される場合、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入において、本明細書に具体的に開示されるポリヌクレオチドとは典型的には異なる、ポリヌクレオチドである。かかるバリアントは、天然に存在していてもよく、あるいは例えば、本発明のポリヌクレオチド配列のうち１つもしくは複数を改変し、本明細書に記載されるコードされるポリペプチドの１つもしくは複数の生物学的活性を評価すること、および／または当該分野で周知のいくつかの技術のいずれかを使用することによって、合成により生成され得る。
【００９６】
ポリペプチド「バリアント」は、この用語が本明細書で使用される場合、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入において、本明細書に具体的に開示されるポリペプチドとは典型的には異なる、ポリペプチドである。かかるバリアントは、天然に存在していてもよく、あるいは例えば、上記本発明のポリペプチド配列のうち１つもしくは複数を改変し、本明細書に記載されるポリペプチドの１つもしくは複数の生物学的活性を評価すること、および／または当該分野で周知のいくつかの技術のいずれかを使用することによって、合成により生成され得る。
【００９７】
用語「バリアント」とは、任意の天然に存在する、または１つもしくは複数のヌクレオチドもしくはアミノ酸変異を含む操作された分子もまた指し得る。一実施形態では、分子は抗体である。例えば、体細胞バリアントは、同じＢ細胞系統の一部であるまたはそれに由来する全ての関連する天然に存在する抗体を包含し得る。操作されたバリアントは、抗体に対してなされた、全ての単一の変異またはコンビナトリアル変異を包含し得る。
【００９８】
用語「ＰＧＴ１２１」、「ＰＧＴ−１２１」、「ＰＧＴ１２１  ＷＴ」、「ＰＧＴ−１２１  ＷＴ」、「ＰＧＴ１２１−ＷＴ」、「ＰＧＴ１２１．ＷＴ」、「ＰＧＴ１２１．１」、「ＰＧＴ１２１  ＬＯ６」、「ＰＧＴ１２１  Ｌ０６」、「ＰＧＴ１２１  Ｌ０６  ＷＴ」、「ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴ」などは、本明細書で相互交換可能に使用され、重鎖および軽鎖を含む抗体を指し、重鎖は、配列番号１９０に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖は、配列番号２７６に示されるアミノ酸配列を有する。
【００９９】
改変は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造中でなされ、望ましい特徴を有するバリアントまたは誘導体ポリペプチドをコードする機能的分子をなおも得ることができる。
【０１００】
本発明のポリペプチドの等価物、またはさらには改善されたバリアントもしくは部分を創出するためにポリペプチドのアミノ酸配列を変更することが所望される場合、当業者は、典型的には、コードＤＮＡ配列のコドンのうち１つまたは複数を変化させる。
【０１０１】
例えば、ある特定のアミノ酸は、他のポリペプチド（例えば、抗原）または細胞に結合するその能力の感知できる喪失なしに、タンパク質構造中で他のアミノ酸の代わりに使用され得る。そのタンパク質の生物学的な機能的活性を規定するのは、タンパク質の結合能および性質であるので、ある特定のアミノ酸配列置換が、タンパク質配列および当然その根底にあるＤＮＡコード配列においてなされ、それにもかかわらず、同様の特性を有するタンパク質が得られ得る。従って、それらの生物学的有用性または活性の感知できる喪失なしに、種々の変化が、開示された抗体およびその抗原結合性断片のポリペプチド配列、または前記ポリペプチドをコードする対応するＤＮＡ配列においてなされ得ることが企図される。
【０１０２】
多くの場合、ポリペプチドバリアントは、１つまたは複数の保存的置換を含有する。「保存的置換」は、ペプチド化学の当業者が、ポリペプチドの二次構造およびヒドロパシー的性質が実質的に変化しないことを予想するように、アミノ酸が類似の特性を有する別のアミノ酸の代わりに使用される、置換である。
【０１０３】
ポリヌクレオチド配列およびポリペプチド配列を比較する場合、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載するように最大の対応のためにアラインメントされたときに同じである場合、２つの配列は「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、配列類似性の局所的な領域を同定および比較するために、比較ウインドウにわたって配列を比較することによって実施される。「比較ウインドウ」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも約２０連続する位置、通常、３０〜約７５、４０〜約５０連続する位置のセグメントを指し、ここで、配列が、２つの配列を最適にアラインメントした後に、同数の連続する位置の参照配列と比較され得る。
【０１０４】
比較のための配列の最適なアラインメントは、デフォルトパラメーターを使用して、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅスイートのバイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中のＭｅｇａｌｉｇｎプログラムを使用して実施され得る。このプログラムは、以下の参考文献に記載されるいくつかのアラインメントスキームを具体化する：Ｄａｙｈｏｆｆ，  Ｍ．Ｏ．（１９７８年）Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  −  Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．、Ｄａｙｈｏｆｆ，  Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  ５巻、補遺３、３４５〜３５８頁；Ｈｅｉｎ  Ｊ．（１９９０年）Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ  ６２６〜６４５頁  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，  Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，  Ｐ．Ｍ．（１９８９年）ＣＡＢＩＯＳ  ５巻：１５１〜１５３頁；Ｍｙｅｒｓ，  Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．（１９８８年）ＣＡＢＩＯＳ  ４巻：１１〜１７頁；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  Ｅ．Ｄ．（１９７１年）Ｃｏｍｂ．  Ｔｈｅｏｒ  ７７巻：１０５頁；Ｓａｎｔｏｕ，  Ｎ．  Ｎｅｓ，  Ｍ．（１９８７年）Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｅｖｏｌ．  ４巻：４０６〜４２５頁；Ｓｎｅａｔｈ，  Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，  Ｒ．Ｒ．（１９７３年）Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  −  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，  Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，  Ｄ．Ｊ．（１９８３年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．，  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８０巻：７２６〜７３０頁。
【０１０５】
あるいは、比較のための配列の最適なアラインメントは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１年）Ａｄｄ．  ＡＰＬ．  Ｍａｔｈ  ２巻：４８２頁の局所同一性アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８巻：４４３頁の同一性アラインメントアルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５巻：２４４４頁の類似性についての検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピューター実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）によって、または点検によって、実施され得る。
【０１０６】
パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適切なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７年）Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５巻：３３８９〜３４０２頁およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：４０３〜４１０頁に記載されている。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０は、例えば、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドについてのパーセント配列同一性を決定するために、本明細書に記載されるパラメーターと共に使用され得る。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを介して公に入手可能である。
【０１０７】
例示的な一例では、累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメーターＭ（マッチする残基の対についての報酬スコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチする残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を使用して計算され得る。各方向でのワードヒットの伸長は、累積アラインメントスコアが、その達成された最大値から分量Ｘ低下する場合；１つもしくは複数の負のスコアの残基アラインメントの蓄積に起因して、累積スコアがゼロもしくはそれ未満になる場合；またはいずれかの配列の末端に達した場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、ＴおよびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、１１のワード長（Ｗ）、および１０の期待値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９巻：１０９１５頁を参照のこと）アラインメント、５０の（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、ならびに両方の鎖の比較を、デフォルトとして使用する。
【０１０８】
アミノ酸配列について、スコアリングマトリクスは、累積スコアを計算するために使用され得る。各方向でのワードヒットの伸長は、累積アラインメントスコアが、その達成された最大値から分量Ｘ低下する場合；１つもしくは複数の負のスコアの残基アラインメントの蓄積に起因して、累積スコアがゼロもしくはそれ未満になる場合；またはいずれかの配列の末端に達した場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、ＴおよびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。
【０１０９】
１つのアプローチでは、「配列同一性の百分率」は、少なくとも２０個の位置の比較のウインドウにわたって２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって決定され、比較ウインドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのための参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して、２０パーセントまたはそれ未満、通常５〜１５パーセントまたは１０〜１２パーセントの付加または欠失（即ち、ギャップ）を含み得る。百分率は、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、マッチした位置の数を得、マッチした位置の数を、参照配列中の位置の総数（即ち、ウインドウサイズ）によって除算し、結果に１００を乗算して配列同一性の百分率を得ることによって計算される。
【０１１０】
「相同性」とは、配列をアラインメントし、最大のパーセント相同性を達成するために必要に応じてギャップを導入した後に、非バリアント配列と同一である、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列バリアント中の残基の百分率を指す。
【０１１１】
「発展可能性（ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ）」は、商業的製造および治療的使用にとってそれを適切なものにする、抗体の固有の化学的および生物物理学的特性を指す。これらの特性には、熱安定性（例えば、融点）、低ｐＨ安定性（例えば、ＧＭＰ産生の間に必要とされるウイルス不活性化手順の間の）、溶解度、粘度、産物均質性および化学的安定性（例えば、酸化、脱アミド、異性化、切断、グリコシル化、糖化、ヒドロキシル化）が含まれ得る。
【０１１２】
「結合親和性」とは、結合解離定数（Ｋｄ）または見かけの親和性（例えば、ＥＣ５０）値を指し得る。
【０１１３】
「パーセント凝集」とは、ＳＥＣによって決定される可溶性タンパク質単量体のパーセント喪失を指し得る。従って、負の値を有する単量体含量におけるパーセント変化は、単量体の喪失および凝集における増加を示すが、正の値を有する単量体含量におけるパーセント変化は、単量体における増加および凝集における対応する減少を示す。
【０１１４】
抗体およびその抗原結合性断片、核酸、ベクターおよび宿主細胞
本発明は、新規抗体およびその抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、これらの抗体およびその抗原結合性断片は、ＨＩＶ−１、例えば、無細胞ＨＩＶ−１ウイルスに結合しそれを中和する。ある特定の実施形態では、これらの抗体およびその抗原結合性断片は、細胞表面上に発現されるＨＩＶ−１抗原に結合し、細胞を排除するまたは死滅させる。種々の実施形態では、抗体は、エフェクター細胞、例えば、ＦｃγＲＩＩＡを発現するＴ細胞を活性化する。ある特定の実施形態では、抗体のＦｃドメインは、自然免疫細胞上で発現されるＦＣγＲを結合する。特定の実施形態では、これらは、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して、ＨＩＶ−１感染細胞のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介性の抗体依存性細胞死滅を誘導する。特定の実施形態では、これらは、例えば、抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）ならびに／またはグランザイム媒介性およびパーフォリン媒介性の細胞傷害もしくはＡＤＣＣを介して、単球媒介性および末梢血単核球（ＰＢＭＣ）媒介性の抗体依存性細胞死滅を誘導する。
【０１１５】
特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１２／０３０９０４中にＰＧＴ−１２１  ＬＯ６として以前に記載された抗体に関する。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴまたはＣｈｏｔｈｉａの抗体番号付けスキームのうち１つまたは複数によって規定される、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体中に存在する６つのＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体中に存在するＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたは少なくとも５つを含む。ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６  ＣＤＲは、表１に提供される。特定の実施形態では、本発明は、本発明の抗体の軽鎖（またはその抗原結合性断片）または重鎖（またはその抗原結合性断片）を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体でもその抗原結合性断片でもない。
【０１１６】
特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、例えば、表１に示される配列を有する、本明細書に記載されるＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のバリアントまたは誘導体のいずれかに関する。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴまたはＣｈｏｔｈｉａの抗体番号付けスキームのうち１つまたは複数によって規定される、表１に示される抗体のいずれか中に存在する６つのＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、表１に提供される抗体のいずれか中に存在するＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたは少なくとも５つを含む。
【０１１７】
特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、１つまたは複数のアミノ酸改変、例えば、挿入、欠失または置換を含む、ＣＤＲ、重鎖および／または軽鎖を含む。種々の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸改変は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、抗体またはその抗原結合性断片に、１つまたは複数の改善された特性（例えば、治療特性）を付与する。限定なしに、１つまたは複数のアミノ酸改変の特定の実施形態は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、優れた薬物動態学的特性、増加した血清安定性（例えば、増加した血清半減期）、増加したＣｍａｘ、増加した結合親和性、増加したエフェクター機能、ＨＩＶ−１の増加した中和、低減された免疫原性、および／または増加した効率もしくは製造の容易さを有する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。種々の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸改変は、改善された発展可能性（例えば、増加したＴｍ、低ｐＨウイルス不活性化手順の間の増加した安定性、および／または不均一なＮ−結合型グリカンの除去）を付与する。種々の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸改変は、実験的に同定されたＴ細胞エピトープの（例えば、部位特異的変異誘発を介した）除去を介して、低減された免疫原性（例えば、ｅｘ  ｖｉｖｏ  Ｔ細胞活性化ドナー応答率における低減）を付与する。限定なしに、１つまたは複数のアミノ酸改変の特定の実施形態は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、優れた薬物動態学的特性、増加した血清安定性（例えば、増加した血清半減期）、増加したＣｍａｘ、増加した結合親和性、増加したエフェクター機能、ＨＩＶ−１の増加した中和、低減された免疫原性、および／または増加した効率もしくは製造の容易さを有する抗体またはその抗原結合性断片を提供する。種々の実施形態では、上に列挙した特性（例えば、低減された免疫原性、増強された治療特性および／もしくは抗原結合、または増強された発展可能性特性）のいずれかを増強するために導入される変異は、ＣＤＲ領域、フレームワーク領域中、または抗原と直接相互作用すると予測されるフレームワーク領域（例えば、ＣＤＲと機能的に等価なフレームワーク領域）中に存在し得る。
【０１１８】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体（即ち、ＰＧＴ−１２２）と高度に関連する抗体の結晶構造および実験的分析により、それが、（ＣＤＲと一緒に）抗原を結合するためにＣＤＲの外側のアミノ酸残基を利用していることが明らかになった。例えば、この抗体は、抗原と接触するフレームワーク領域中のさらなる領域を有するようである（例えば、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ＰＧＴ１２１  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｓｏｋら  ２０１３年．  ＰＬＯＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  ９巻、ｅ１００３７５４頁を参照のこと）。Ｅｎｖウイルス抗原に結合したＰＧＴ１２２の高解像度の構造が決定されている（例えば、Ｊｕｌｉｅｎ，  Ｊ．Ｐ．ら、２０１３年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４２巻、１４７７７〜１４７８３頁およびＰａｎｃｅｒａ，  Ｍ．ら、２０１４年、Ｎａｔｕｒｅ  ５１４巻、４５５〜４６１頁を参照のこと）。ＰＧＴ１２１の構造は、Ｊｕｌｉｅｎ  ＪＰら  ２０１３年、ＰＬＯＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  ９巻、ｅ１００３３４２頁およびＭｏｕｑｕｅｔ  Ｈら  ２０１２年、ＰＮＡＳ  １０９巻、Ｅ３２６８〜Ｅ３２７７頁に記載されている。ＰＧＴ１２２の構造は、Ｊｕｌｉｅｎ  ＪＰら  ２０１３年．  ＰＬＯＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  ９巻、ｅ１００３３４２頁に記載されている。ＰＤＢ  ＩＤ  ４ＪＹ５；およびＰＧＴ１２３の構造は、Ｊｕｌｉｅｎ  ＪＰら  ２０１３年、ＰＬＯＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ  ９巻、ｅ１００３３４２頁に記載されている。ＰＧＴ１２２およびＰＧＴ１２３抗体は、ＰＧＴ１２１抗体と密接に関連しており、従って、ＰＧＴ１２２／Ｅｎｖ構造は、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２２およびＰＧＴ１２３構造の知識と一緒に、Ｅｎｖに結合したＰＧＴ１２１の構造を非常に正確にモデル化し、Ｅｎｖへの結合に関与するＰＧＴ１２１の残基を高い信頼度で予測するために使用され得る。ＰＧＴ１２２およびＰＧＴ１２２／Ｅｎｖ構造（Ｋａｂａｔ番号付け）に対する類似性に基づいて予測されたＰＧＴ１２１接触残基は、太字で示されるフレームワーク残基と共に以下に提供される：
【０１１９】
ＨＣ（Ｋａｂａｔ番号）：３３、５６、５８、９９、１００、１００Ａ、１００Ｂ、１００Ｃ、１００Ｄ、１００Ｅ、１００Ｇ、１００Ｉ、１００Ｊ、１００Ｋ、１００Ｌ；および
【０１２０】
ＬＣ（Ｋａｂａｔ番号）：２８、２９、３０、５０、５１、５２、６６、６７、６７Ａ、６７Ｃ、９１、９２、９３、９４、９５、９５Ａ、９５Ｂ。
【０１２１】
さらに、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体は、上に列挙したものに加えて、未知のアミノ酸位置において抗体と接触し得る抗原の多くの異なるバリアント、例えば、異なるウイルス株に結合することが示されている。異なるウイルス株は、異なるＥｎｖ（即ち、抗原）配列および異なるグリコシル化パターンを有し、単一のＥｎｖ配列でさえ、不均一なグリコシル化パターンを有し得、異なるＨＩＶ−１バリアントのＥｎｖタンパク質またはさらには同じＥｎｖタンパク質上の異なるグリコシル化パターンを認識するために、広範に結合するまたは中和する抗体を必要とする。例えば、ＰＧＴ１２１のエピトープは、Ｅｎｖ  Ｖ３ループ、特に、Ｎ３３２位におけるＮ−結合型グリカンから構成される。Ｖ３ループは、細胞指向性およびウイルスクレードの主要な決定因子である。複数のクレードの１１７個のＣＣＲ５指向性ウイルスの中で、Ｎ３３２グリカンをコードするウイルスＤＮＡ配列中の潜在的Ｎ−結合型グリコシル化（ＰＮＧ）モチーフの存在は、クレードＢ、Ｇ、Ａ、ＡＣおよびＡＥのウイルスの中で、ＰＧＴ１２１による中和に対する感受性と、統計的に有意に関連した。Ｇｉｌｅａｄが出資した臨床試験に参加している患者から単離された５０のクレードＢ  Ｅｎｖ配列のうち、Ｎ３３２  ＰＮＧモチーフを有するＣＣＲ５指向性Ｅｎｖの９４％が、ＰＧＴ１２１による中和に対して感受性であったことと比較すると、ＣＣＲ５指向性、Ｎ３３２  ＰＮＧ陽性ではないウイルスはたった２６％であった（Ｐ＜０．０００１）。従って、Ｅｎｖクレード、指向性、およびＮ３３２  ＰＮＧモチーフの存在の遺伝的決定は、ＰＧＴ１２１による中和感受性を高度に予測し、ＰＧＴ１２１およびその誘導体による中和に対するウイルス感受性を予測するためのマーカーとして有用であり得る。
【０１２２】
それにもかかわらず、異なる抗原バリアントのアミノ酸配列における多様性を考慮すると、抗体可変領域中のどのアミノ酸残基が種々の抗原バリアントへの結合に必要とされるかを予測することは困難であり得、従って、抗体のどのアミノ酸残基が、抗体に改善された特性、例えば、低減されたグリコシル化、低減された免疫原性、低減された異性化、増強されたエフェクター機能、増強された中和活性、または増強された組換え産生を付与するために変更され得るかを事前に正確に予測することもまた、困難または不可能であり得る。本発明は、複数の抗原バリアントを結合するそれらの能力、およびある特定の実施形態では、それらの関連する広範に中和する特性に実質的に影響を与えることなしに、特許請求された抗体およびその抗原結合性断片の治療特性を効果的に増強する特定のアミノ酸改変およびそれらの組み合わせの同定に関する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、中和抗体、例えば、広範に中和する抗体であるが、他の実施形態では、本発明の抗体は、抗体によって結合されるが中和されないウイルス抗原を発現する細胞を排除することが可能な非中和抗体である。
【０１２３】
特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、例えば、哺乳動物への投与後に、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、より良い血清薬物動態（例えば、増加した血清半減期）を有する。他の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、匹敵する血清薬物動態（例えば、増加した血清半減期）を有する。本発明の特定の実施形態では、血清薬物動態（例えば、濃度−時間曲線下の面積（ＡＵＣ）、クリアランス（ＣＬ）、容量（Ｖ）、半減期（ｔ１／２）、最大濃度（Ｃｍａｘ）または最小濃度（Ｃｍｉｎ））は、試験被験体への投与後の種々の時点における、抗体の測定された血清レベルから決定される。血清抗体レベルを測定するためのアッセイおよび得られた薬物動態を計算するための方法は、当該分野で公知である。血清中に存在する抗体の量は、標準的な技術、例えば、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、ＢＬＩ、ＥＣＬ（ＭＳＤ）、アルファ−ＬＩＳＡまたはＨＴＲＦ、例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１２／０４０９０４の実施例３に記載されるように、組換えｇｐ１２０タンパク質を使用するＥＬＩＳＡによって決定され得る。ある特定の実施形態では、抗体血清濃度は、組換えＢＡＬ  ｇｐ１２０またはＳＨＩＶ  ｇｐ１４０を使用して捕捉することによって決定され得、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームを用いる電気化学発光（ＥＣＬ）検出を用いて抗ヒトＩｇＧ１コンジュゲートを用いて検出され得る。薬物動態は、得られた抗体血清濃度−時間プロファイルからの標準的なノンコンパートメントまたはマルチコンパートメント薬物動態学的分析を使用して決定され得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、哺乳動物（例えば、ヒト、ラットまたはサル）への投与後に、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６抗体と比較して、無変化のまたは改善された薬物動態を有する。改善された薬物動態は、増加した曝露（ＡＵＣ）、低減されたクリアランス、および増加した半減期、増加したＣｍａｘ、または増加したＣｍｉｎのいずれかによって規定される。ある特定の実施形態では、薬物動態は、少なくとも０％、１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％または少なくとも１０００％だけ改善される。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、例えば、哺乳動物への投与後に、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、増加した血清安定性（例えば、増加した血清半減期）を有する。血清安定性または抗体半減期を測定するためのアッセイは、当該分野で公知である。一実施形態では、血清安定性または血清半減期は、被験体、例えば、ヒトまたは試験動物への投与後の種々の時点において、抗体の血清レベルを測定することによって決定され得る。血清中に存在する抗体の量は、標準的な技術、例えば、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、ＢＬＩ、ＥＣＬ（ＭＳＤ）、アルファ−ＬＩＳＡまたはＨＴＲＦ、例えば、ＷＯ２０１２／０４０９０４に記載されるような組換えｇｐ１２０タンパク質を使用するＥＬＩＳＡによって決定され得る。一部の実施形態では、血清安定性または血清半減期は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％または少なくとも１０００％だけ増加し得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも４時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間、少なくとも１６時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間または少なくとも２カ月間の血清半減期を有する。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、約４℃、約５℃、約１０℃、約１５℃、約２０℃、約２５℃、約３０℃、約３７℃またはそれより高温において、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較した場合に、増大した血清安定性を有し得る。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、例えば、ＨＩＶの少なくとも１つの株に対して、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、等しいまたは増加したまたはより高い抗原結合親和性を有する。特定の実施形態では、抗原は、本明細書に記載されるＨＩＶ−１株のいずれか由来の、細胞表面もしくはウイルスエンベロープのいずれか上で発現される完全膜結合型ＨＩＶ  Ｅｎｖ三量体、Ｅｎｖの可溶性ｇｐ１４０断片、Ｅｎｖの可溶性ｇｐ１２０断片、またはＰＧＴ１２１結合に必要な全ての必要なエピトープ決定残基および構造を含有するＥｎｖの任意のより小さいサブドメインもしくは操作された部分である。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、ＢＬＩまたはフローサイトメトリーなどの、当該分野で公知であり利用可能なアッセイを使用して容易に決定され得る。
【０１２６】
特定の実施形態では、見かけの結合親和性は、例えば、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１２／０３０９０４の実施例３に記載されるように、または本明細書に記載されるように、組換えｇｐ１２０またはｇｐ１４０タンパク質を使用して、ＥＬＩＳＡなどの標準的な技術によって決定される。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＨＩＶ株に対する結合親和性は、例えば、少なくとも０％、１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも１５００％、少なくとも２０００％、少なくとも２５００％、少なくとも３０００％、少なくとも５０００％または少なくとも１０，０００％だけ増大している。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の株には、ＢａＬ、ＴＲＯ、ＳＨＩＶ、ＳＦ１６２  Ｐ３、ｐＲＨＰＡ４２５９、ｑｈ０６９２、６５３５、ｐＣＡＡＮ５３４２、ｐＷＩＴＯ４１６０、ＡＣ１０．０、ＵＳ９２ＨＴ５９３またはＵ９２ＵＳ６５７が含まれる。一部の実施形態では、１つまたは複数の株には、ＢａＬ、ＴＲＯ、ＳＨＩＶ  ＳＦ１６２  Ｐ３、ｐＲＨＰＡ４２５９、ｑｈ０６９２、６５３５、ｐＣＡＡＮ５３４２、ｐＷＩＴＯ４１６０、ＡＣ１０．０、ＵＳ９２ＨＴ５９３またはＵ９２ＵＳ６５７が含まれる。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその断片は、本明細書に記載の直接ＥＬＩＳＡアッセイにおいて決定した場合に、＜２０．０ｎＭ、＜１０ｎＭまたは＜１ｎＭのＥＣ５０でＨＩＶ  ｇｐ１２０  ＢａＬに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体およびその断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６より低い、例えば、２倍、１．６倍、１．４倍、１．２倍、１倍、０．８倍、０．６倍低いＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０値でＨＩＶ  ｇｐ１２０  ＢａＬ、ｇｐ１４０  ＢａＬ、ｇｐ１４０  ＳＨＩＶ  ＳＦ１６２Ｐ３またはｇｐ１２０  ＴＲＯに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体およびその断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６より３倍、２．５倍、２倍、１．５倍、１倍または０．５倍低いＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０値でＨＩＶ  ｇｐ１２０  ＢａＬ、ｇｐ１２０  ｐＲＨＰＡ４２５９、ｇｐ１２０  ｑｈ０６９２、ｇｐ１２０  ６５３５、ｇｐ１２０  ｐＣＡＡＮ５３４２、ｇｐ１２０  ｐＷＩＴＯ４１６０またはｇｐ１２０  ＡＣ１０．０に結合する。
【０１２７】
他の実施形態では、結合親和性は、組換えＨＩＶ  Ｅｎｖを発現するヒト細胞株を使用するＦＡＣＳによって決定される。１つまたは複数の株には、ＢａＬ、ＵＳ６５７、ＨＴ５９３またはＳＨＩＶ  ＳＦ１６２  Ｐ３が含まれる。特定の実施形態では、少なくとも１つの株に対する結合親和性は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも１５００％、少なくとも２０００％、少なくとも２５００％、少なくとも３０００％、少なくとも５０００％または少なくとも１０，０００％だけ増大している。ある特定の実施形態では、本発明の抗体およびその断片は、ＥＬＩＳＡによって決定した場合、＜１．０ｎＭまたは＜０．８ｎＭのＩＣ５０で、少なくとも１つの株のＨＩＶ  Ｅｎｖに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体およびその断片は、ＥＬＩＳＡによって決定した場合、約０．１ｕＭ〜約１０ｎＭまたは約０．１ｕＭ〜約２０ｎＭのＩＣ５０で、少なくとも１つの株のＨＩＶ  Ｅｎｖに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体およびその断片は、＜２０ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜５ｎＭ、＜２ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．５ｎＭ、＜０．２ｎＭまたは＜０．１ｎＭのＥＣ５０で、少なくとも１つの株のＨＩＶ  ｇｐ１２０（ＢａＬ）に結合する。特定の実施形態では、少なくとも１つの株は、２つもしくはそれよりも多くの、３つもしくはそれよりも多くの、４つもしくはそれよりも多くの、または５つもしくはそれよりも多くの株、例えば、本明細書に記載される株のいずれかを含む。
【０１２８】
特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、ＦｃγＲに対する増加した結合親和性を有する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲまたはＢＬＩなどの、当該分野で公知であり利用可能なアッセイを使用して容易に決定され得る。特定の実施形態では、結合親和性は、例えば、本明細書に記載されるように、ＥＬＩＳＡなどの標準的な技術によって決定される。特定の実施形態では、結合親和性は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍または少なくとも１０００倍だけ増大している。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ＥＬＩＳＡによって決定した場合に、以下：＜０．１ｎＭ、＜０．２ｎＭ、＜０．３ｎＭ、＜０．５ｎＭ、＜１．０ｎＭ、＜１．５ｎＭ、＜２．０ｎＭ、＜２．５ｎＭ、＜３．０ｎＭ、＜３．５ｎＭ、＜５ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜２０ｎＭ、＜２５ｎＭ、＜３０ｎＭ、＞４０ｎＭ、＜５０ｎＭ、＜１００ｎＭ、＜２００ｎＭ、＜２５０ｎＭ、＜５００ｎＭ、＜１μＭ、＜２μＭ、＜５μＭまたは１０μＭより大きいまたはこれと等しいＥＣ５０のいずれかで、ｐＨ７．０においてヒトＦｃγＲＩ、ヒトＦｃγＲＩＩＡ−１６７Ｈ、ヒトＦｃγＲＩＩＡ−１６７Ｒ、ヒトＦｃγＲＩＩＢ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ−１７６Ｖ、ヒトＦｃγＲＩＩＩ−１７６Ｆ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＢ−ＮＡ１、ヒトＦｃγＲＩＩＩＢ−ＮＡ２、ヒトＦｃＲｎのいずれかに、またはｐＨ６．０においてヒトＦｃＲｎに結合する。特定の実施形態では、０．１〜１μＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩに結合する。特定の実施形態では、０．１〜１０ｎＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩＩＩＡ−１７６Ｆに結合する。特定の実施形態では、１〜０．１ｎＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩＩＩＡ−１７６Ｖに結合する。特定の実施形態では、１００〜１ｎＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩＩＡ−１６７Ｈに結合する。特定の実施形態では、５０〜１ｎＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩＩＡ−１６７Ｒに結合する。特定の実施形態では、１μＭ〜１０ｎＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩＩＢに結合する。特定の実施形態では、１ｎＭ〜５０ｎＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩＩＩＢ−ＮＡ１に結合する。特定の実施形態では、１ｎＭ〜５０ｎＭのＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩＩＩＢ−ＮＡ２に結合する。ある特定の実施形態では、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６について決定したＥＣ５０の０．５倍〜１．５倍のＥＣ５０で本発明の抗体またはその断片は、ヒトＦｃｇＲＩに結合する。特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ＰＧＴ１��１  ＬＯ６と比較して変わらないＥＣ５０でヒトＦｃγＲＩに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６について決定したものより０．５倍、２倍、４倍、１０倍、１５倍、２０倍、５０倍または１００倍低いＥＣ５０でヒトＦｃｇＲＩＩＩＡ−１７６Ｆに結合する。特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６より１０〜２０倍低いＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０でヒトＦｃｇＲＩＩＩＡ−１７６Ｆに結合する。
【０１２９】
特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較した場合、ｐＨ６．０で、ＦｃＲｎに対する増加した結合親和性を有する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較した場合、ｐＨ６．０で、ＦｃＲｎに対する増加した結合親和性を有し、ｐＨ７．４またはｐＨ７．０で、減少したまたは類似の結合を有する。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、ＳＰＲまたはＢＬＩなどの、当該分野で公知であり利用可能なアッセイを使用して容易に決定され得る。特定の実施形態では、結合親和性は、例えば、本明細書に記載されるように、ＥＬＩＳＡなどの標準的な技術によって決定される。特定の実施形態では、ＦｃＲｎに対する結合親和性は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍または少なくとも１０００倍だけ増大する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ｐＨ６．０：＜１０ｎＭ、＜２．０ｎＭまたは＜１．０ｎＭでヒトＦｃＲｎに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ＥＬＩＳＡによって決定した場合に、ｐＨ７．０で、以下：＜０．１ｎＭ、＜０．２ｎＭ、＜０．３ｎＭ、＜０．５ｎＭ、＜１．０ｎＭ、＜１．５ｎＭ、＜２．０ｎＭ、＜２．５ｎＭ、＜３．０ｎＭ、＜３．５ｎＭ、＜５ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜２０ｎＭ、＜２５ｎＭ、＜３０ｎＭ、＜４０ｎＭ、＜５０ｎＭ、＜１００ｎＭ、＜２００ｎＭ、＜２５０ｎＭ、＜５００ｎＭ、＜１μＭ、＜２μＭ、＜５μＭ、＜１０μＭ、＜５０μＭ、＜１００μＭまたは１００μＭより大きいまたはこれに等しいＥＣ５０のいずれかでヒトＦｃＲｎに結合する。
【０１３０】
生物治療薬（ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）のための製造プロセスは、抗体を産生するために使用される細胞培養プロセス中に存在し得る任意の潜在的なウイルス混入物を除去するための安全措置として設計されたウイルス不活性化（ＶＩ）手順を必要とする。このＶＩ手順は、典型的には、延長された時間（１〜３時間である場合が多い）の間、低いｐＨ（３．５のｐＨまたはその近傍である場合が多い）において精製された抗体溶液を保持することによって達成される。ある特定の抗体は、このプロセスの間に可溶性または不溶性のいずれかの凝集物（１０〜２０％またはそれよりも高い凝集物含量）を形成し、製造に不向きになることが公知である。従って、低いｐＨ（例えば、ｐＨ３．５）での抗体の安定性は、重要な製造属性であり、低ｐＨ安定性の改善は、治療的使用のためのある特定の抗体の製造および産生を可能にし得る。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ１２１  Ｌ０６と比較した場合、％凝集によって測定したとき、低いｐＨにおいて増加した安定性を有する、即ち、これは、種々の抗体貯蔵および溶出緩衝液中で低いｐＨ、例えば、ｐＨ３．５で貯蔵した場合、低減された凝集を示す。特定の実施形態では、これは、ｐＨ３．５で１時間保持した場合、８０％未満、５０％未満、１０％未満の凝集を示す。特定の実施形態では、これは、ｐＨ３．５で１時間保持した場合、１０％未満、５％未満、２％未満または１％未満または０％の測定可能な凝集を示す。特定の実施形態では、これは、ｐＨ３．５で１時間保持した場合、１％、２％、５％または１０％の、単量体含量における改善（即ち、凝集物含量における低減）を示す。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、増加したまたはより高いエフェクター機能を有する。特定の実施形態では、エフェクター機能は、例えば、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも５％，少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍または少なくとも１０，０００倍だけ増大する。特定の実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣであるが、他の実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＰである。特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片のエフェクター機能は、１００μｇ／ｍｌ（約６６７ｎＭ）で観察された応答なし（検出限界を下回る）から、０．１ｎＭ〜１μＭの範囲または０．１ｎＭ〜１ｎＭの範囲の効力までの範囲である。
【０１３３】
エフェクター機能は、例えば、添付の実施例に記載されるものを含む、当該分野で公知であるまたは利用可能なアッセイを使用して測定され得る。ある特定の実施形態では、ＡＤＣＣは、操作された細胞、例えば、ＨＩＶの種々の株に感染したドナー細胞を使用して、ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＡＤＣＣレポーターアッセイにおいて測定される；そしてＡＤＣＰは、ＨＩＶの種々の株に感染したドナー細胞を使用して、ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＡＤＣＰアッセイにおいて測定される。ある特定の実施形態では、ＡＤＣＣは、健康なドナー由来の初代ＮＫエフェクター細胞およびＨＩＶの種々の株に感染した操作されたＣＤ４＋ルシフェラーゼレポーターＴ細胞株を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイにおいて測定される；ならびにＡＤＣＰは、ＨＩＶの種々の株に感染したドナー細胞を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰアッセイにおいて測定される。ある特定の実施形態では、抗体依存性エフェクター細胞活性化は、Ｅｎｖ発現細胞と共培養された、ＮＦＡＴ連結レポーター遺伝子にカップリングされたヒトＦｃγＲＩＩＩＡを発現する細胞、例えば、Ｔ細胞を使用して決定される。ある特定の実施形態では、抗体依存性エフェクター細胞活性化は、ＨＩＶ  Ｅｎｖ発現細胞と共培養された、ＮＦＡＴ連結レポーター遺伝子にカップリングされたヒトＦｃγＲＩＩＩＡを発現する操作された細胞、例えば、Ｔ細胞を使用して決定される。特定の実施形態では、ＡＤＣＣは、例えば、添付の実施例に記載されるように、ＦｃγＲＩＩＩＡを発現し、グランザイム媒介性およびパーフォリン媒介性の細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介した感染細胞の抗体媒介性の死滅を媒介する、ＨＩＶ−１感染初代ＣＤ４＋Ｔ細胞および健康なドナー由来の自己エフェクターＮＫ細胞を使用する細胞ベースのアッセイで決定される。ある特定の実施形態では、単球媒介性およびＰＢＭＣ媒介性の抗体依存性細胞死滅は、例えば、添付の実施例に記載されるように、標的細胞としてのＨＩＶ−１感染ＣＤ４＋Ｔ細胞およびエフェクター細胞としての初代自己ＰＢＭＣまたは単離された単球を使用して決定される。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、ＨＩＶ−１の増加したまたはより高い中和を示す。中和は、当該分野で公知の技術を使用して決定され得る。特定の実施形態では、ＨＩＶ−１は、１つの特定の株、例えば、本明細書に記載される株のいずれか、例えば、ＨＩＶサブタイプＢ単離物である。特定の実施形態では、中和は、例えば、いくつかのまたは多くの異なる株の平均として、複数の異なる株について決定される。例えば、中和活性は、ＣＥＭ−ＮＫｒ−ＣＣＲ５−ＬｕｃＲ（改変型ＣＤ４  Ｔ細胞株）またはＪＣ５３−ＢＬ（ＴＺＭ−ｂｌ、改変型ＨｅＬａ細胞株とも呼ばれる）ルシフェラーゼレポーター細胞ベースの感染力アッセイを使用して、ウイルスまたはウイルスのパネルに対して決定され得る（Ｌｉら、２００５年  ＪＶｉｒ、７９巻（１６号）、１０１０８〜２５頁）。アッセイは、使用したウイルス（シュードタイプ化ウイルスまたは複製能のあるウイルス）に依存して、単回またはマルチサイクルのウイルス複製アッセイとして実行され得る。あるいは、中和活性は、患者ＨＩＶエンベロープタンパク質でシュードタイプ化した組換えルシフェラーゼレポーターウイルスを使用して、Ｕ８７．ＣＣＲ５．ＣＸＣＲ４細胞株（改変型ＣＤ４  Ｔ細胞株）ベースの感染力アッセイを使用して決定され得る（Ｒｉｃｈｍａｎら、２００３年  ＰＮＡＳ、１００巻（７号）、４１４４〜９頁）。使用され得るウイルスの例には、実験室適応されたＨＩＶ−１  ＢａＬ株ならびにサブタイプＢ臨床単離物９３ＨＴ５９３、９２ＵＳ６５７、９２ＵＳ７１２および９２ＵＳ７２７（ＮＩＨ  ＡＩＤＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ）が含まれるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態では、中和は、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２０１２／０３０９０４の実施例４に記載されるように、または添付の実施例に記載されるように、測定される。特定の実施形態では、いずれかの特定の株の中和、または異なる株の平均中和は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも４００％、少なくとも５００％、少なくとも１０００％、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１０００倍または少なくとも１０，０００倍だけ増大する。ある特定の実施形態では、中和は、１つまたはいくつかの株については増加するが、試験した複数の株についての平均中和には顕著な改善は存在しない。特定の実施形態では、抗体またはその断片は、ＢａＬの中和について＜０．０２もしくは≦０．０１５のＩＣ５０；ＨＴ５９３の中和について＜０．２もしくは＜０．１６のＩＣ５０；ＵＳ６５７の中和について＜０．１のＩＣ５０；ＵＳ７１２の中和について＜０．２５もしくは≦０．２０のＩＣ５０；および／またはＵＳ７２７の中和について＜０．１もしくは＜０．０２もしくは≦０．０１５のＩＣ５０を有する。一実施形態では、抗体またはその断片は、ＢａＬの中和について＜０．０２μｇ／ｍｌもしくは≦０．０１５μｇ／ｍｌのＩＣ５０；ＨＴ５９３の中和について＜０．２μｇ／ｍｌもしくは＜０．１６μｇ／ｍｌのＩＣ５０；ＵＳ６５７の中和について＜０．１μｇ／ｍｌのＩＣ５０；ＵＳ７１２の中和について＜０．２５μｇ／ｍｌもしくは≦０．２０μｇ／ｍｌのＩＣ５０；および／またはＵＳ７２７の中和について＜０．１μｇ／ｍｌもしくは＜０．０２μｇ／ｍｌもしくは≦０．０１５μｇ／ｍｌのＩＣ５０を有し得る。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、サブタイプＢ単離物について、０．０００５μｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬの範囲の中和ＩＣ５０を有し得る。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、サブタイプＢ  ＤＭおよびＸ４単離物について、０．００１μｇ／ｍＬ〜３．３μｇ／ｍＬの範囲の中和ＩＣ５０を有し得る。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、低減されたまたはより低い免疫原性を有する。ある特定の実施形態では、免疫原性は、当該分野で公知であり利用可能なアッセイを使用して、または添付の実施例に記載されるように、決定される。特定の実施形態では、Ｔ細胞エピトープの位置は、記載されるような（Ｂａｋｅｒら  ２００７年．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １０巻（２号）：２１９〜２２７頁）、５０ドナーｅｘ−ｖｉｖｏペプチド走査Ｔ細胞活性化アッセイを含むＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）Ｔ細胞エピトープマッピングを使用して決定される。特定の実施形態では、操作された抗体バリアントの相対的免疫原性は、記載されるような（Ｊａｂｅｒら  ２００７年．  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｎａｌ．  ４３巻（４号）：１２５６〜１２６１頁）、臨床的免疫原性を予測し得る５０ドナーｅｘ−ｖｉｖｏ全分子Ｔ細胞活性化およびサイトカイン放出アッセイを使用して決定される。特定の実施形態では、ドナー応答比は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較した場合に、例えば、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％または少なくとも８０％だけ減少する。特定の実施形態では、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎドナー応答は、＜１０％、＜１５％、＜２０％、＜２５％、＜３０％または＜３５％である。
【０１３６】
特定の実施形態では、Ｅｎｖタンパク質への本発明の抗体およびその断片の結合には、以下の残基中またはその周囲のＥｎｖの領域が関与すると予測される（ＨＩＶ  Ｅｎｖ  ＨＸＢ２番号付け）：Ｖ３ループ（３２４〜３２８、３３０）および関連するＮ３３２グリカンならびにＶ１ループの一部分（１３５〜１３７）および関連するＮ１３７グリカン、残基４１５〜４１７。Ｅｎｖ結合のための抗体パラトープには、ＰＧＴ−１２２−Ｅｎｖ結晶構造において抗原と直接接触する以下の領域中の残基が関与すると予測される（Ｋａｂａｔ番号付け）：ＣＤＲＨ１（３３）、ＣＤＲＨ２（５０、５６、５８）、ＣＤＲＨ３（９９、１００、１００Ａ〜Ｅ、１００Ｇ、１００Ｉ、１００Ｌ）、ＣＤＲＬ１（２８〜３０）、ＣＤＲＬ２（５０〜５２）、ＬＦＲ３（６６、６７  ６７Ａ〜Ｃ）およびＣＤＲＬ３（９３、９４、９５Ａ〜９５Ｂ）。
【０１３７】
一部の態様では、本明細書に提供される抗体は、治療的および／または画像化／検出可能な部分にコンジュゲートまたは連結され得る。抗体をコンジュゲートまたは連結するための方法は、当該分野で周知である。抗体と標識との間の関連は、共有結合的および非共有結合的相互作用が含まれるがこれらに限定されない、当該分野で公知の任意の手段を含む。非限定的な一実施形態では、抗体は、毒素、放射性核種、鉄関連化合物、色素、画像化試薬、蛍光標識またはがん細胞に送達された場合に毒性である化学療法剤と関連し得る。あるいは、抗体は、標的抗原の免疫検出のための検出可能な標識、例えば、放射性核種、鉄関連化合物、色素、画像化剤または蛍光剤（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ａｇｅｎｔ）と関連し得る。放射性標識の非限定的な例には、例えば、３２Ｐ、３３Ｐ、４３Ｋ、５２Ｆｅ、５７Ｃｏ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６７Ｃｕ、６８Ｇａ、７１Ｇｅ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、７７Ａｓ、７７Ｂｒ、８１Ｒｂ／８１ＭＫｒ、８７ＭＳｒ、９０Ｙ、９７Ｒｕ、９９Ｔｃ、１００Ｐｄ、１０１Ｒｈ、１０３Ｐｂ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１９Ｓｂ、１２１Ｓｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｃｓ、１２８Ｂａ、１２９Ｃｓ、１３１Ｉ、１３１Ｃｓ、１４３Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９１Ｏｓ、１９３Ｐｔ、１９４Ｉｒ、１９７Ｈｇ、１９９Ａｕ、２０３Ｐｂ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉおよび２１３Ｂｉが含まれる。毒素の非限定的な例には、例えば、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、トリコテシン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）、ウシ膵臓リボヌクレアーゼ（ＢＰＲ）、抗ウイルスタンパク質（ＰＡＰ）、アブリン、コブラ毒因子（ＣＶＦ）、ゲロニン（ＧＥＬ）、サポリン（ＳＡＰ）、ビスキュミン（ｖｉｓｃｕｍｉｎ）が含まれる。鉄関連化合物の非限定的な例には、例えば、磁性酸化鉄粒子、第二鉄または第一鉄粒子、Ｆｅ２０３およびＦｅ３０４が含まれる。鉄関連化合物、ならびにポリペプチド、タンパク質およびペプチドを標識する方法は、例えば、米国特許第４，１０１，４３５号および同第４，４５２，７７３号ならびに米国特許出願公開第２００２００６４５０２号および同第２００２０１３６６９３号において見出され得、これらは全て、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、対象抗���は、その薬剤の送達を腫瘍細胞に局在化するために、細胞毒または他の細胞増殖阻害化合物に共有結合的にまたは非共有結合的にカップリングされ得る。例えば、薬剤は、薬剤、酵素阻害剤、増殖阻害剤、溶解剤、ＤＮＡまたはＲＮＡ合成阻害剤、膜透過性改変剤、ＤＮＡ代謝物、ジクロロエチルスルフィド誘導体、タンパク質産生阻害剤、リボソーム阻害剤、アポトーシスの誘導剤、および神経毒からなる群から選択され得る。ある特定の実施形態では、対象抗体は、腫瘍を画像化する際に有用な薬剤とカップリングされ得る。かかる薬剤には、金属；金属キレーター；ランタニド；ランタニドキレーター；放射性金属；放射性金属キレーター；陽電子放出原子核；マイクロバブル（超音波について）；リポソーム；リポソームまたはナノスフェア中にマイクロカプセル化された分子；単結晶酸化鉄ナノ化合物；磁気共鳴画像化造影剤；光吸収剤、光反射剤および／または光散乱剤；コロイド粒子；フルオロフォア、例えば、近赤外フルオロフォアが含まれる。多くの実施形態では、かかる二次的官能基／部分は、比較的大きく、例えば、サイズが少なくとも２５ａｍｕであり、多くの場合には、サイズが少なくとも５０、１００または２５０ａｍｕであり得る。ある特定の実施形態では、二次的官能基は、金属をキレート化するためのキレート部分、例えば、放射性金属または常磁性イオンに対するキレーターである。さらなる実施形態では、これは、放射線療法または画像化手順に有用な放射性核種に対するキレーターである。本発明内で有用な放射性核種には、ガンマエミッター、陽電子エミッター、オージェ電子エミッター、Ｘ線エミッターおよび蛍光エミッターが含まれ、治療的使用にはベータエミッターまたはアルファエミッターが好ましい。放射線療法における毒素として有用な放射性核種の例には、３２Ｐ、３３Ｐ、４３Ｋ、５２Ｆｅ、５７Ｃｏ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６７Ｃｕ、６８Ｇａ、７１Ｇｅ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、７７Ａｓ、７７Ｂｒ、８１Ｒｂ／８１ＭＫｒ、８７ＭＳｒ、９０Ｙ、９７Ｒｕ、９９Ｔｃ、１００Ｐｄ、１０１Ｒｈ、１０３Ｐｂ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１９Ｓｂ、１２１Ｓｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｃｓ、１２８Ｂａ、１２９Ｃｓ、１３１Ｉ、１３１Ｃｓ、１４３Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９１Ｏｓ、１９３Ｐｔ、１９４Ｉｒ、１９７Ｈｇ、１９９Ａｕ、２０３Ｐｂ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉおよび２１３Ｂｉが含まれる。好ましい放射性核種には、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、２０３Ｐｂ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、１０９Ｐｄ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、７７Ｂｒ、２１１Ａｔ、９７Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１９８Ａｕおよび１９９Ａｇ、１６６Ｈｏまたは１７７Ｌｕが含まれる。キレーターが金属に配位する条件は、例えば、その各々が参照によって本明細書に組み込まれる、Ｇａｓｎｏｗらの米国特許第４，８３１，１７５号、同第４，４５４，１０６号および同第４，４７２，５０９号に記載されている。本発明内では、「放射性核種」および「放射性標識」は、相互交換可能である。９���Ｔｃは、全ての核医学部門にとって容易に入手可能であり、安価であり、最小の患者照射線量を与え、理想的な核画像化特性を有するので、診断適用のための特に魅力的な放射性同位体である。９９Ｔｃは、６時間の半減期を有し、これは、テクネチウム標識された抗体の迅速な標的化が望ましいことを意味する。従って、ある特定の好ましい実施形態では、改変された抗体は、テクネチウム（ｔｅｃｈｎｉｕｍ）に対するキレート剤を含む。なお他の実施形態では、二次的官能基は、放射線増感剤、例えば、照射に対する細胞の感受性を増加させる部分であり得る。放射線増感剤の例には、ニトロイミダゾール、メトロニダゾールおよびミソニダゾールが含まれる（参照によって本明細書に組み込まれるＤｅＶｉｔａ，  Ｖ．  Ｔ．、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、６８頁、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏ．、ＮＹ、１９８３年を参照のこと）。活性部分として放射線増感剤を含む改変された抗体が投与され、標的細胞に局在化する。照射への個体の曝露の際に、放射線増感剤は「励起」され、細胞の死を引き起こす。
【０１３８】
抗体配列
本発明の抗体は、本明細書に記載される種々の抗体のガンマ重鎖およびラムダ軽鎖の、１つまたは複数のポリペプチド配列、ならびにそのバリアントおよび抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体（ならびにそのバリアントおよびその抗原結合性断片）は、本明細書に記載される種々の抗体のいずれかの重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体、その可変領域、およびその抗原結合性断片は、野生型ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、１つまたは複数のアミノ酸配列改変を含む。表１は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６および本発明の例示的な抗体についての、以下のアミノ酸配列を提供する：重鎖、重鎖ＣＤＲ１〜３（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＨｏｎｅｇｇｅｒ）、軽鎖、軽鎖ＣＤＲ１〜３（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＨｏｎｅｇｇｅｒ）。表１に示されるＰＧＴ１２１バリアント抗体は、例えばＰＧＴ１２１．１５などのＰＧＴ番号によっておよび／またはＰＧＴ  ＬＯ６と比較した改変の記述によって同定される。ＰＧＴ１２１  ＬＯ６は、ＰＧＴ１２１  ＷＴ（野生型）とも呼ばれ得る。表１は、本発明の例示的なＰＧＴ１２２抗体についてのアミノ酸配列もまた提供する：重鎖、重鎖ＣＤＲ１〜３（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＨｏｎｅｇｇｅｒ）、軽鎖、軽鎖ＣＤＲ１〜３（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＨｏｎｅｇｇｅｒ）。表１は、本発明の例示的なＰＧＴ１２３抗体についてのアミノ酸配列もまた提供する：重鎖、重鎖ＣＤＲ１〜３（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＨｏｎｅｇｇｅｒ）、軽鎖、軽鎖ＣＤＲ１〜３（Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＨｏｎｅｇｇｅｒ）。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかは、１つまたは複数のタグを含むように改変される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のタグは、アビジンタグを含む。
【０１３９】
特定の実施形態では、本明細書に記載される重鎖または軽鎖のいずれかは、Ｎ末端にシグナルペプチドをさらに含む。種々の実施形態では、使用されるシグナルペプチドは、「ネイティブ」である（抗体に由来する）、内因性である（即ち、天然に分泌されたタンパク質、例えば、アルブミンによって使用される）または操作される（例えば、タンパク質の分泌をコードするようにｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで設計される）。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、以下の配列のうちいずれかを有する：ＭＤＰＫＧＳＬＳＷＲＩＬＬＦＬＳＬＡＦＥＬＳＹＧ（配列番号１）またはＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号２）。特定の実施形態では、重鎖は、シグナル配列：ＭＤＰＫＧＳＬＳＷＲＩＬＬＦＬＳＬＡＦＥＬＳＹＧ（配列番号１）を含み、軽鎖は、シグナル配列：ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号２）を含む。
【０１４０】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかは、グリコシル化される。特定の実施形態では、グリコシル化は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体中に存在するネイティブグリコシル化である。他の実施形態では、グリコシル化は、例えば、翻訳後にまたは遺伝子操作を介して導入され得る改変されたグリコシル化である。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、抗体またはその抗原結合性断片中に存在するグリコシル化部位において、脱フコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅ）される。最も承認されたモノクローナル抗体は、２つのＮ−結合型二分岐複合体型オリゴ糖がＦｃ領域に結合される、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。Ｆｃ領域は、ＦｃγＲファミリーの白血球受容体とのその相互作用を介して、ＡＤＣＣのエフェクター機能を働かせる。脱フコシル化モノクローナル抗体は、抗体のＦｃ領域中のオリゴ糖がいずれのフコース糖単位も有さないように操作されたモノクローナル抗体である。抗体が脱フコシル化される場合、それらは、改善されたＦｃγＩＩＩａ結合および増加した抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有し得る。特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は脱フコシル化され、そのＦｃ領域中にＤＥＡＬ改変（即ち、ＥＵ番号付けによってＳ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６ＡおよびＡ３３０Ｌ）を含む。
【０１４１】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体は、表１に示されるアミノ酸配列を有するガンマ重鎖を含む。ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体のガンマ重鎖の可変領域は、表１で下線を付される。重鎖の定常領域（Ｆｃ）は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６について表１に示されるような下線を引いていない配列を構成する。ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６ならびに本発明の例示的な抗体およびその抗原結合性断片のガンマ重鎖ＣＤＲもまた、表１に提供される。表１に提供される全ての例示的な抗体およびその抗原結合性断片の重鎖および軽鎖の可変領域には下線が付される。表１に提供される全ての例示的な抗体およびその抗原結合性断片の重鎖および軽鎖の定常領域は、下線を引いていない配列を構成する。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの抗体番号付けスキームのいずれかによって規定されるような、１つまたは複数のＰＧＴ−１２１  ＬＯ６ガンマ重鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、２つまたはそれよりも多くの、または３つ全てのこれらのガンマ重鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、３つ全てのこれらのガンマ重鎖ＣＤＲを含み、ＣＤＲは、（ＰＧＴ１２１  ＬＯ６の対応する配列と比較して）１つまたは複数の、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つまたは８つのアミノ酸改変、例えば、アミノ酸の置換、欠失または挿入を集合的に含む。さらなる実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの抗体番号付けスキームのいずれかによって規定されるような、１つまたは複数のＰＧＴ−１２２ガンマ重鎖ＣＤＲを含む。なおさらなる実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの抗体番号付けスキームのいずれかによって規定されるような、１つまたは複数のＰＧＴ−１２３ガンマ重鎖ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、表１に示される抗体のいずれかの配列を有する、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性もしくは相同性を有する、重鎖、重鎖可変領域または重鎖定常領域を含む。
【０１４２】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のガンマ重鎖をコードするポリヌクレオチド配列のコード配列は、以下に示される：
【化１−１】
2020120689.tif 000002
【化１−２】
2020120689.tif 000003
【０１４３】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のガンマ重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドのコード領域は、以下に示される：
【化２】
2020120689.tif 000004
【０１４４】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体は、表１に示されるアミノ酸配列を有するラムダ軽鎖を含む。ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体のラムダ軽鎖可変領域アミノ酸配列は、表１中で影付きにされる。表１中の他の抗体の可変領域は、比較によって決定され得る。ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６ならびに本発明の例示的な抗体およびその抗原結合性断片のラムダ軽鎖Ｋａｂａｔ  ＣＤＲは、表１に示される。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの抗体番号付けスキームのいずれかによって規定されるような、１つまたは複数のＰＧＴ−１２１  ＬＯ６ラムダ軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、２つまたはそれよりも多くの、または３つ全てのこれらの軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、３つ全てのこれらの軽鎖ＣＤＲを含み、ＣＤＲは、（ＰＧＴ１２１  ＬＯ６の対応する配列と比較して）、１つまたは複数の、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つまたは８つのアミノ酸改変、例えば、アミノ酸の置換、欠失または挿入を集合的に含む。さらなる実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの抗体番号付けスキームのいずれかによって規定されるような、１つまたは複数のＰＧＴ−１２２軽鎖ＣＤＲを含む。なおさらなる実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの抗体番号付けスキームのいずれかによって規定されるような、１つまたは複数のＰＧＴ−１２３軽鎖ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、表１に示される抗体のいずれかの配列を有する、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性もしくは相同性を有する、軽鎖または軽鎖可変領域を含む。
【０１４５】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のラムダ軽鎖をコードするポリヌクレオチドのコード領域は、以下に示される：
【化３】
2020120689.tif 000005
【０１４６】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のラムダ軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドのコード領域は、以下に示される：
【化４−１】
2020120689.tif 000006
【化４−２】
2020120689.tif 000007
【０１４７】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＨｏｎｅｇｇｅｒの番号付けスキームのいずれかによって規定されるような、１つもしくは複数の、２つもしくはそれよりも多くの、３つもしくはそれよりも多くの、４つもしくはそれよりも多くの、５つもしくはそれよりも多くの、または６つ全ての、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体中に存在するＣＤＲを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体および抗原結合性断片は、６つ全てのこれらのＣＤＲを含み、ＣＤＲは、１つまたは複数の、例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つまたは８つのアミノ酸改変、例えば、アミノ酸の置換、欠失または挿入を集合的に含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、表１に示される抗体のいずれか中に存在する、１つもしくは複数の、２つもしくはそれよりも多くの、３つもしくはそれよりも多くの、４つもしくはそれよりも多くの、５つもしくはそれよりも多くの、または６つ全てのＣＤＲを含む。他の実施形態では、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６  ＣＤＲのうち１つまたは複数は、例えば、別の抗ＨＩＶ抗体の１つまたは複数の対応するＣＤＲによって置き換えられる。特定の実施形態では、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６  ＣＤＲのうち１つまたは複数は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１２／０３０９０４に記載されるＰＧＴ−１２２、ＰＧＴ−１２３、ＰＧＴ−１２４、ＰＧＴ−１３３またはＰＧＴ−１３４抗体由来の１つまたは複数の対応するＣＤＲによって置き換えられる。対応するＣＤＲは、他の抗体中の同じ位置におけるＣＤＲ、例えば、重鎖ＣＤＲ１、２および３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、２および３であり、従って、対応するＣＤＲによる置き換えは、異なる重鎖ＣＤＲ１による重鎖ＣＤＲ１の置き換え、異なるＣＤＲ１による軽鎖ＣＤＲ１の置き換えなどを示す。これらの抗体のＣＤＲ配列は、以下に提供される：
【表２−１】
2020120689.tif 000008
【表２−２】
2020120689.tif 000009
【０１４８】
本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、１つまたは複数のアミノ酸改変を含む。これらは、例えば、アロタイプ改変、Ｆｃ改変、Ｆａｂ改変、グリコシル化部位などの選択された残基の改変を含む、種々の異なる型の改変のいずれかを含み得る。本発明の抗体およびその抗原結合性断片の、ある特定の実施形態において存在する改変の非限定的な例は、本明細書に記載され、表１に示される配列で示される。
【０１４９】
ｉ．アロタイプ改変
ＩｇＧ抗体は、種々のアロタイプおよびイソアロタイプ（ｉｓｏａｌｌｏｔｙｐｅ）で存在する。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、Ｇ１ｍ１；ｎＧ１ｍ２；Ｇ１ｍ３；Ｇ１ｍ１７，１；Ｇ１ｍ１７，１，２；Ｇ１ｍ３，１；またはＧ１ｍ１７のアロタイプを有するＩｇＧ１重鎖を含む。これらのアロタイプまたはイソアロタイプの各々は、ＩｇＧ１重鎖定常領域（Ｆｃ）内の示された位置（ＥＵ番号付け）における以下のアミノ酸残基によって特徴付けられる：
Ｇ１ｍ１：Ｄ３５６、Ｌ３５８；
ｎＧ１ｍ１：Ｅ３５６、Ｍ３５８；
Ｇ１ｍ３：Ｒ２１４、Ｅ３５６、Ｍ３５８、Ａ４３１；
Ｇ１ｍ１７，１：Ｋ２１４、Ｄ３５６、Ｌ３５８、Ａ４３１；
Ｇ１ｍ１７，１，２：Ｋ２１４、Ｄ３５６、Ｌ３５８、Ｇ４３１；
Ｇ１ｍ３，１：Ｒ２１４、Ｄ３５６、Ｌ３５８、Ａ４３１；および
Ｇ１ｍ１７：Ｋ２１４、Ｅ３５６、Ｍ３５８、Ａ４３１。
【０１５０】
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体は、ＩｇＧ１ｍ３アロタイプを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１ｍ３アロタイプを含むが、他の実施形態では、アロタイプは、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して改変される。特定の実施形態では、アロタイプは、ｎＧ１ｍ１、Ｇ１ｍ３；Ｇ１ｍ１７，１；Ｇ１ｍ１７，１，２；Ｇ１ｍ３，１；またはＧ１ｍ１７である。ある特定の実施形態では、アロタイプはＧ１ｍ１７である。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下のアミノ酸配列のうち１つを含むＩｇＧ１重鎖定常領域を含み、代表的なアロタイプ決定残基は、太字で示される：
【化５−１】
2020120689.tif 000010
【化５−２】
2020120689.tif 000011
【０１５１】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、アロタイプＩｇＧ１ｍ１７の以下のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖を含む：
【化６】
2020120689.tif 000012
【０１５２】
特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、Ｋｍ１；Ｋｍ１，２；またはＫｍ３から選択されるアロタイプを有するカッパ軽鎖を含む。これらのアロタイプの各々は、ＩｇＧ１軽鎖内の示された位置（ＥＵ番号付け）における以下のアミノ酸残基によって特徴付けられる：
Ｋｍ１：Ｖ１５３、Ｌ１９１；
Ｋｍ１，２：Ａ１５３、Ｌ１９１；および
Ｋｍ３：Ａ１５３、Ｖ１９１。
【０１５３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下のアミノ酸配列のうち１つを含むＩｇＧ１カッパ軽鎖を含み、代表的なアロタイプ決定残基は、太字で示される：
【化７】
2020120689.tif 000013
【０１５４】
各個々のヒトは、ラムダ１、ラムダ２、ラムダ３、ラムダ４、ラムダ５、ラムダ６およびラムダ７から選択される軽鎖をコードする、７個から１１個の間の異なるラムダ軽鎖遺伝子を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、ラムダ１、ラムダ２、ラムダ３、ラムダ４、ラムダ５、ラムダ６およびラムダ７から選択されるラムダ軽鎖を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、ラムダ１、ラムダ２、ラムダ３およびラムダ７から選択されるラムダ軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下のアミノ酸配列のうち１つを含むＩｇＧ１ラムダ軽鎖を含み、代表的なラムダ決定残基は、太字で示される：
【化８】
2020120689.tif 000014
【０１５５】
特定の実施形態では、軽鎖は、アミノ酸配列：
【化９】
2020120689.tif 000015
を含む。
【０１５６】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、表１に示される軽鎖配列のいずれか、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。
【０１５７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１ｍ１７アロタイプを有するＩｇＧ１重鎖とラムダ２軽鎖とを含む。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、軽鎖は、（図１のＫａｂａｔ番号付けスキームを使用して、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６と比較して）以下のアミノ酸置換：６７ｂ位におけるＡｒｇ、６７ｃ位におけるＰｒｏ、および１０３位におけるＬｙｓのうち１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖は、（図１のＫａｂａｔ番号付けスキームを使用して、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６と比較して）以下のアミノ酸置換：６７ｂ位におけるＡｒｇおよび６７ｃ位におけるＰｒｏを含む。
【０１５９】
ｉｉ．Ｆｃ改変
ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、重鎖定常領域（Ｆｃ）中に１つまたは複数のアミノ酸配列改変を含む。特定の実施形態では、これらの改変は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、改変された抗体またはその抗原結合性断片の安定性を増加させるまたは結合親和性を増加させる。特定の実施形態では、これらの改変のうちある特定のもの、またはそれらの組み合わせは、抗体のエフェクター機能または中和活性を驚くべきことに増加させる。１つまたは複数のＦｃ改変を含むある特定の例示的な重鎖配列、およびかかる改変された重鎖配列を含む抗体の配列は、表１に示される。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の改変は、以下のＦｃアミノ酸置換（ＰＧＴ１２１  ＬＯ６と比較して；ＥＵ番号付け）またはその組み合わせ：Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ；Ｇ２３６Ａ；Ｓ２３９Ｄ；Ｆ２４３Ｌ；Ｄ２６５Ｅ；Ｓ２６７Ｅ；Ｈ２６８Ｆ；Ｒ２９２Ｐ；Ｎ２９７Ｑ；Ｓ２９８Ａ；Ｓ３２４Ｔ；Ｉ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ；Ａ３３０Ｌ；Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ；Ｐ３３１Ｓ；Ｆ２４３Ｌ；Ｙ３００Ｌ；Ｖ３０５Ｉ；Ｐ３９６Ｌ；Ｓ２９８Ａ；Ｅ３３３Ａ；Ｋ３３４Ａ；Ｅ３４５Ｒ；Ｌ２３５Ｖ；Ｆ２４３Ｌ；Ｒ２９２Ｐ；Ｙ３００Ｌ；Ｐ３９６Ｌ；Ｍ４２８Ｌ；Ｅ４３０Ｇ；Ｎ４３４Ｓ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４ＴおよびＩ３３２Ｅ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ；Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５ＥおよびＰ３３１Ｓ；Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５ＩおよびＰ３９６Ｌ；Ｇ２３６Ａ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４ＴおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４ＴおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３ＡおよびＫ３３４Ａ；Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ；Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２９８ＡおよびＩ３３２Ｅ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ；Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６ＡおよびＡ３３０Ｌ；Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４３Ｓ；Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０ＬおよびＩ３３２Ｅ；ならびにＧ２３６ＡおよびＩ３３２Ｅから選択される。
【０１６１】
特定の実施形態では、抗体および抗原結合性断片は、２つもしくはそれよりも多くの、３つもしくはそれよりも多くの、４つもしくはそれよりも多くの、５つもしくはそれよりも多くの、または６つもしくはそれよりも多くの改変されたＦｃアミノ酸残基を含む。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、ＤＥＡＬと集合的に呼ばれる、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６ＡおよびＡ３３０Ｌ変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、ＬＳと集合的に呼ばれる、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含む。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異（ＤＥＡＬＬＳ）を含む。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、表１に示される抗体のいずれか中に存在する重鎖定常領域配列のうちの１つ、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性もしくは相同性を有するそれらのバリアントを含む。
【０１６２】
特定の実施形態では、抗体および抗原結合性断片は、脱フコシル化される。一部の実施形態では、抗体および抗原結合性断片は、１つまたは複数のタグを含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のタグは、アビジンタグを含む。
【０１６３】
ｉｉｉ．Ｆａｂ改変
ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、重鎖可変領域または軽鎖可変領域（Ｆａｂ）中に１つまたは複数のアミノ酸配列改変を含む。特定の実施形態では、これらの改変は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、改変された抗体またはその抗原結合性断片の安定性を増加させるまたは結合親和性を増加させる。ある特定の実施形態では、これらの改変は、抗体またはその抗原結合性断片の免疫原性、異性化、グリコシル化または酸化を低減させる。特定の実施形態では、改変は、抗体またはその抗原結合性断片からの、異性化、グリコシル化または酸化の潜在的部位の除去を生じる。ある特定の実施形態では、アミノ酸置換は、抗体またはその抗原結合性断片の増加した翻訳を生じる。ある特定の実施形態では、これらの改変は、低ｐＨウイルス不活性化手順からの単量体ＩｇＧの％回収を増加させる。ある特定の実施形態では、これらの改変は、単一のＨＩＶ株または関連のＨＩＶ株のサブセットのいずれかに対して測定した場合、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体と比較して、抗体またはその抗原結合性断片のＨＩＶ中和効力を増加させる。
【０１６４】
特定の実施形態では、改変は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体中に位置する１つまたは複数の潜在的グリコシル化部位内にアミノ酸置換を含む。Ｎ−結合型グリコシル化部位は、配列ＮＸ（Ｓ／Ｔ）を含み得、式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸残基であり、Ｎはグリコシル化される。特定の実施形態では、グリコシル化部位は、ＰＧＴ−１２１  Ｌ０６重鎖可変領域配列の残基５８、６８および１０５（Ｋａｂａｔ番号付け）に位置する。特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＮＸ（Ｓ／Ｔ）グリコシル化コンセンサス配列を排除する、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、重鎖Ｆａｂの残基５８〜６０、６８〜７０および１０５〜１０７（Ｋａｂａｔ番号付け）内に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換が、６０位、６８位または１０５位（Ｋａｂａｔ番号付け）に存在する。特定の実施形態では、アミノ酸置換は、改変された位置においてグリコシル化部位を除去または破壊する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、これらのグリコシル化部位において、２つもしくはそれよりも多くのまたは３つもしくはそれよりも多くのアミノ酸置換を含む。一実施形態では、これらは、３つ全てのこれらのグリコシル化部位を除去または破壊するアミノ酸置換を含む。
【０１６５】
特定の実施形態では、改変は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体中に位置する１つまたは複数の潜在的に免疫原性の領域内にアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、潜在的免疫原性領域は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６重鎖可変領域の残基８２ａ〜８２ｃに位置する。特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、重鎖Ｆａｂの残基８２ａ〜８２ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）内に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、重鎖Ｆａｂの８２ａ〜８２ｃ位（Ｋａｂａｔ番号付け）に存在する。特定の実施形態では、アミノ酸置換は、抗体またはその抗原結合性断片の免疫原性を低減させる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、この免疫原性領域中に、２つもしくはそれよりも多くのまたは３つもしくはそれよりも多くのアミノ酸置換を含む。一実施形態では、これらは、この免疫原性領域中に３残基のアミノ酸置換、例えば、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６中に存在するＶＡＡの、例えばＳＳＶ、ＴＳＶまたはＴＧＶによる置換を含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、グリコシル化部位を除去する１つまたは複数のアミノ酸置換を含み、このとき、免疫原性は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６の免疫原性より低いかまたはそれと等しい。ある特定の実施形態では、抗体は、表１４〜１６のいずれかに示されるＰＧＴ−１２１  ＬＯ６の領域のいずれかに対応する決定または予測された免疫原性領域内に、１つまたは複数のアミノ酸改変、例えば置換を含む。
【０１６６】
特定の実施形態では、抗体は、重鎖残基２、３２、６０、６８、８２ａ〜８２ｃ、９５もしくは１０５および／または軽鎖残基６７ｂ、６７ｃもしくは１０３において任意の組み合わせで改変を含み、本明細書に記載される全分子Ｔ細胞活性化アッセイにおいて、低減されたドナー応答を生じる。
【０１６７】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、翻訳を増強するために、１つまたは複数のアミノ酸改変、例えば置換を含む。例えば、置換は、稀なコドンによってコードされる、またはタンパク質が発現される細胞中に、対応するｔＲＮＡが限定された量でしか存在しないアミノ酸の置換であり得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、１つもしくは複数のかかる改変、またはアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６抗体の重鎖可変領域中に、Ｍ２、Ａ２８、Ｒ３９、Ｎ６８、Ｓ８１、Ｖ８２ａ、Ａ８２ｂ、Ａ８２ｃまたはＮ１０５（Ｋａｂａｔ番号付け）のうち１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態では、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のＲ３９は、例えばＱによって置換される。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、融点によって測定したときにＦａｂドメインの安定性を増強するために、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖中に、以下のアミノ酸置換：Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０ＮおよびＶＡＡ（８２ａ〜８２ｃ）ＳＳＶ（Ｋａｂａｔ番号付け）のうち１つまたは複数を含む。添付の実施例に示されるように、本発明の抗体は、ＤＳＦによって決定されるＦａｂドメインのＴｍにおける増加によって測定したときに、ＰＴＧ−１２１  ＬＯ６と比較して増強された熱安定性を示す。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０ＮおよびＶＡＡ（８２ａ−８２ｃ）ＴＧＶ（Ｋａｂａｔ番号付け）のうちの重鎖におけるアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＡＡ（８２ａ−８２ｃ）ＳＳＶ（Ｋａｂａｔ番号付け）の重鎖におけるアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＶＡＡ（８２ａ−８２ｃ）ＴＧＶ（Ｋａｂａｔ番号付け）の重鎖におけるアミノ酸置換を含む。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、低いｐＨにおけるＦａｂドメインの安定性を増強するために、１つまたは複数のアミノ酸置換を含み、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６などの抗体の精製の間に哺乳動物細胞培養物から誘導される潜在的ウイルスを不活性化するために使用される低「ｐＨ保持」手順の間の凝集を防止する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下の重鎖変異：Ｑ１Ｅ、Ｍ２Ｖ、Ｍ２Ｌ、Ａ２７Ｇ、Ｓ３２Ａ、Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｔ、Ｎ６８Ｈ、Ｓ８１Ｋ、ＶＡＡ（８２ａ〜８２ｃ）ＳＳＶ、ＶＡＡ（８２ａ〜８２ｃ）ＴＳＶ、ＶＡＡ（８２ａ〜８２ｃ）ＴＧＶ、Ｋ８９Ｔ、Ｔ９５Ａ、Ｎ１０５Ｋ、Ｎ１０５Ｈ、Ｎ１０５Ｑ、Ｎ１０５Ｔ；軽鎖変異：Ｋ９５ｃＮもしくはＳ４５Ｖ；または重鎖変異Ｒ３９Ｑ＋軽鎖変異Ｈ３８Ｑの組み合わせのうち１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、軽鎖のＮ末端へのＳＹＶＬＴＱＰまたはＳＳＶＴＳＹＶのいずれかの付加、ならびにこれらの付加と上述の置換のいずれかとの組み合わせを含む。添付の実施例に記載されるように、本発明の抗体は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、低いｐＨにおいて増強された安定性を示し、これらの分子のＧＭＰ産生を可能にする。これは、ＷＨＯ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ、シリーズ番号９２４、２００４年；ＪａｃｏｂおよびＦｒｅｃｈ．  ２００４年．  Ｓｃａｌｅ  ｕｐ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：  ｆｒｏｍ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｓｃａｌｅ  ｔｏ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ、１０１〜１３２頁、Ｇ．  Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  （編）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１巻、Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．  Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ／Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹにおいて見出され得る。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＩＶの中和効力および幅を増強するために、１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。添付の実施例に示されるように、本発明のある特定の抗体は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６または他の抗体と比較して、幅および中和効力の両方における統計的に有意な改善（約２〜３倍）を示す。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、１つまたは複数の改変は、以下の重鎖Ｆａｂ変異（Ｋａｂａｔ番号付け）またはその組み合わせ（ＰＧＴ１２１  ＬＯ６と比較して）：Ｑ１Ｅ；Ｍ２Ｖ；Ｍ２Ｌ；Ａ２７Ｇ；Ｓ３２Ａ；Ｒ３９Ｑ；Ｓ６０Ｎ；Ｎ６８Ｔ；Ｎ６８Ｈ；Ｓ８１Ｋ；Ｖ８２ａＴ；Ｖ８２ａＳ；Ａ８２ｂＧ；Ａ８２ｂＳ；Ａ８２ｃＶ；Ｋ８９Ｔ；Ｔ９５Ａ；Ｗ１００ｊＡ；Ｗ１００ｊＬ；Ｎ１０５Ｋ；Ｎ１０５Ｑ；Ｎ１０５Ｔ；Ｎ１０５Ｈ；Ｓ６０Ａ；Ｎ６８Ａ；Ｎ１０５Ａ；Ｎ１０５Ｈ；Ｎ１０５Ｔ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＴおよびＮ１０５Ｋ；Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＴおよびＮ１０５Ｋ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＴおよびＮ１０５Ｋ；Ｖ８２ａＳ；Ａ８２ｂＳ；Ａ８２ｃＶ；Ｖ８２ａＴ、Ａ８２ｂＧ；ならびにＡ８２ｃＶから選択される。ある特定の実施形態では、重鎖Ｆａｂは、以下の変異（Ｋａｂａｔ番号付け）：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶおよびＮ１０５Ｔを含む。ある特定の実施形態では、重鎖Ｆａｂは、以下の変異（Ｋａｂａｔ番号付け）：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｋを含む。ある特定の実施形態では、重鎖Ｆａｂは、以下の変異（Ｋａｂａｔ番号付け）：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｈを含む。ある特定の実施形態では、重鎖Ｆａｂは、以下の変異（Ｋａｂａｔ番号付け）：Ｍ２Ｌ、Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｔ９５ＡおよびＮ１０５Ｔを含む。ある特定の実施形態では、重鎖Ｆａｂは、以下の変異（Ｋａｂａｔ番号付け）：Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｋを含む。
【０１７２】
特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、重鎖Ｆａｂにおいて１つもしくは複数、２つもしくはそれよりも多く、３つもしくはそれよりも多く、または４つもしくはそれよりも多くのアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、以下の置換の組み合わせ（ＥＵ番号付け）：Ｖ８２ａＳ  Ａ８２ｂＳ、Ａ８２ｃＶおよびＮ１０５Ｋ；Ｎ６８Ｈ、Ｖ８２ａＳ、Ａ８２ｂＳおよびＡ８２ｃＶ；Ｎ６８Ｈ、Ｖ８２ａＳ  Ａ８２ｂＳ、Ａ８２ｃＶおよびＮ１０５Ｋ；Ｓ６０Ｎ、Ｖ８２ａＳ  Ａ８２ｂＳおよびＡ８２ｃＶ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ１０５Ｋ；Ｓ６０ＮおよびＮ６８Ｈ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＨおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９Ｑ；Ｒ３９Ｑ、Ｎ６８ＨおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９ＱおよびＮ６８Ｈ；Ｒ３９ＱおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９ＱおよびＳ６０Ｎ；Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０ＮおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０ＮおよびＮ６８Ｈ；Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＨおよびＮ１０５Ｋ；Ｖ８２ａＳ、Ａ８２ｂＳおよびＡ８２ｃＶ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶおよびＮ１０５Ｔ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｋ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｈ；Ｍ２Ｌ、Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｔ９５ＡおよびＮ１０５Ｔ；ならびにＲ３９Ｑ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｋから選択される。一部の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、重鎖Ｆａｂにおいて１つもしくは複数、２つもしくはそれよりも多く、３つもしくはそれよりも多く、４つもしくはそれよりも多く、５つもしくはそれよりも多く、または６つもしくはそれよりも多くのアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、下の置換の組み合わせ（ＥＵ番号付け）：Ｖ８２ａＳ  Ａ８２ｂＳ、Ａ８２ｃＶおよびＮ１０５Ｋ；Ｎ６８Ｈ、Ｖ８２ａＳ、Ａ８２ｂＳおよびＡ８２ｃＶ；Ｎ６８Ｈ、Ｖ８２ａＳ  Ａ８２ｂＳ、Ａ８２ｃＶおよびＮ１０５Ｋ；Ｓ６０Ｎ、Ｖ８２ａＳ  Ａ８２ｂＳおよびＡ８２ｃＶ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ１０５Ｋ；Ｓ６０ＮおよびＮ６８Ｈ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＨおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９Ｑ；Ｒ３９Ｑ、Ｎ６８ＨおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９ＱおよびＮ６８Ｈ；Ｒ３９ＱおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９ＱおよびＳ６０Ｎ；Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０ＮおよびＮ１０５Ｋ；Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０ＮおよびＮ６８Ｈ；Ｒ３９Ｑ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＨおよびＮ１０５Ｋ；Ｖ８２ａＳ、Ａ８２ｂＳおよびＡ８２ｃＶ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶおよびＮ１０５Ｔ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｋ；Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｈ；Ｍ２Ｌ、Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｔ９５ＡおよびＮ１０５Ｔ；ならびにＲ３９Ｑ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶおよびＮ１０５Ｋから選択される。特定の実施形態では、これらの抗体またはその抗原結合性断片のいずれかは、以下のＦｃ変異（ＥＵ番号付け）のうち１つもしくは複数、２つもしくはそれよりも多く、３つもしくはそれよりも多く、４つもしくはそれよりも多く、または５つもしくはそれよりも多くをさらに含む：Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ。特定の実施形態では、これらは、重鎖Ｆａｂ中にこれらのアミノ酸置換のうち４つ、５つ、６つまたは７つを含む。特定の実施形態では、これらは、以下のＦｃ変異（ＥＵ番号付け）の全てをさらに含む：Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ。特定の実施形態では、これらは、Ｇ１ｍ１７アロタイプをさらに含む。一部の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、６つの重鎖可変ドメイン変異を含む。他の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、２つの軽鎖可変ドメイン変異を含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、６つの重鎖可変ドメイン変異および２つの軽鎖可変ドメイン変異を含む。本発明の実施形態は、本明細書に記載される変異のいずれかに由来する任意のコンビナトリアルバリアントを含む。
【０１７３】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６と比較して、軽鎖中に１つまたは複数のアミノ酸改変を含む。特定の実施形態では、１つまたは複数の改変は、以下の軽鎖変異から選択される：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰおよびＴ１０３Ｋ（Ｋａｂａｔ番号付け）。一実施形態では、１つまたは複数の改変は、以下の軽鎖アミノ酸置換から選択される：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰおよびＴ１０３Ｋ（Ｋａｂａｔ番号付け）。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下の軽鎖変異を含む：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰおよびＴ１０３Ｋ。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の改変は、以下の軽鎖Ｆａｂ変異（Ｋａｂａｔ番号付け）またはそれらの組み合わせから選択される：Ｎ末端におけるＳＹＶＬＴＱＰ；Ｎ末端におけるＳＳＶＴＳＹＶ；Ｓ４５Ｔ；またはＫ９５ｃＮ。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の改変は、以下の軽鎖Ｆａｂ変異（Ｋａｂａｔ番号付け）またはそれらの組み合わせから選択される：Ｎ末端におけるＳＹＶＬＴＱＰ；Ｎ末端におけるＳＳＶＴＳＹＶ；Ｓ４５Ｔ；またはＫ９５ｃＮ。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下の重鎖Ｆａｂ変異および軽鎖Ｆａｂ変異の組み合わせ（Ｋａｂａｔ番号付け）：ＨＣ：Ｒ３９ＱおよびＬＣ：Ｈ３８Ｑ；ＨＣ：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＴおよびＮ１０５ＫならびにＬＣ：Ｎ末端におけるＳＹＶＬＴＰＱ；ＨＣ：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲおよびＦ６７ｃＰ；ＨＣ：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰおよびＴ１０３Ｋ；ＨＣ：Ｍ２Ｌ、Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲおよびＦ６７ｃＰ；またはＨＣ：Ｍ２Ｌ、Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰおよびＴ１０３Ｋから選択される１つまたは複数の改変を含む。一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下の重鎖Ｆａｂ変異および軽鎖Ｆａｂ変異の組み合わせ（Ｋａｂａｔ番号付け）：ＨＣ：Ｒ３９ＱおよびＬＣ：Ｈ３８Ｑ；ＨＣ：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８ＴおよびＮ１０５ＫならびにＬＣ：Ｎ末端におけるＳＹＶＬＴＰＱ；ＨＣ：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲおよびＦ６７ｃＰ；ＨＣ：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰおよびＴ１０３Ｋ；ＨＣ：Ｍ２Ｌ、Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲおよびＦ６７ｃＰ；ＨＣ：Ｍ２Ｌ、Ｓ３２Ａ、Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＴＧＶ、Ｎ１０５ＴならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰおよびＴ１０３Ｋ；ＨＣ：Ｓ６０Ｎ、Ｎ６８Ｈ、ＶＡＡ８２ａ−ｃＳＳＶ、Ｎ１０５ＫならびにＬＣ：Ｐ６７ｂＲおよびＦ６７ｃＰから選択される１つまたは複数の改変を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６抗体の対応する領域に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。さらなる実施形態では、これは、Ｋａｂａｔ番号付けによる、ＰＴＧ１２１  ＬＯ６抗体中に存在する６つ全てのＣＤＲを含む。
【０１７５】
特定の実施形態では、抗体および抗原結合性断片は、本明細書に記載される、または表１に提供されるＰＧＴ１２１  ＬＯ６変異体配列のいずれかにおいて示されるＦａｂ変異のいずれかのうち、２つもしくはそれよりも多く、３つもしくはそれよりも多く、４つもしくはそれよりも多く、５つもしくはそれよりも多く、または６つもしくはそれよりも多くを含む。ある特定の実施形態では、任意のこれらの抗体およびその抗原結合性断片は、以下の重鎖定常領域変異：Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６ＡおよびＡ３３０Ｌ（ＥＵ番号付け）のうちの１つまたは複数をさらに含む。ある特定の実施形態では、任意のこれらの抗体およびその抗原結合性断片は、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含む。ある特定の実施形態では、任意のこれらの抗体およびその抗原結合性断片は、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ変異を含む。
【０１７６】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、表１に示される、重鎖配列、その定常領域もしくはその可変領域、または軽鎖配列、その定常領域もしくはその可変領域のいずれか、あるいはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するバリアントを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、表１中で下線によって示される重鎖Ｆａｂまたは可変ドメイン配列のうち１つを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、表１に示される重鎖のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、表１に示される抗体のいずれか中に存在する重鎖配列および軽鎖配列の両方、即ち、クローン名のいずれか中に存在する組み合わせを含む。特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合性断片は、表１に示される配列を有する重鎖（またはその断片）および表１に示される配列を有する軽鎖（またはその断片）を含み、重鎖および軽鎖は、表１中の同じ抗体中には存在しない。表１に示される重鎖（またはその断片）のいずれかは、表１に示される軽鎖（またはその断片）のいずれかと組み合わされ得る。
【０１７７】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６と比較して、軽鎖可変領域中に１つまたは複数の改変を含む。ある特定の実施形態では、改変は、以下のアミノ酸置換：Ｐ６７ｂＲ、Ｆ６７ｃＰまたはＴ１０３Ｋから選択される。
【０１７８】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、表１中で下線で示されるまたは以下に示される軽鎖可変領域のうち１つを含む：
【化１０】
2020120689.tif 000016
【０１７９】
ある特定の実施形態では、本発明は、抗体の抗原結合性断片を含む。ある特定の状況では、抗体全体ではなく抗体断片を使用することが有利である。例えば、より小さいサイズの断片は、迅速なクリアランスを可能にし、固形腫瘍などのある特定の組織への改善されたアクセスをもたらし得る。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖状抗体；単鎖抗体；ナノボディ、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
【０１８０】
他の実施形態では、最適な抗体は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８号を参照のこと。ＦｖおよびｓＦｖは、定常領域を欠くインタクトな結合部位を有する唯一の種である。従って、これらは、ｉｎ  ｖｉｖｏ使用の間の低減された非特異的結合のために適切である。ｓＦｖ融合タンパク質は、ｓＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかにおいてエフェクタータンパク質の融合を生じるように構築され得る。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編、上記を参照のこと。抗体断片はまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号などに記載されるように、直鎖状抗体であり得る。かかる直鎖状抗体断片は、単一特異性または二重特異性であり得る。
【０１８１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および軽鎖ＣＤＲ（任意の番号付けスキームによって規定される）を含み、抗体またはその抗原結合性断片は、１つもしくは複数の、２つもしくはそれよりも多くの、３つもしくはそれよりも多くの、または４つ全ての以下の特色を含む：
（Ａ）重鎖は、ＩｇＧ１ｍ３以外のアロタイプ（例えば、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１、ｎＧ１ｍ１、Ｇ１ｍ２、ｎＧ１ｍ２、Ｇ１ｍ１７，１、Ｇ１ｍ１７，１，２またはＧ１ｍ３，１）であり、特定の実施形態では、アロタイプは、ＩｇＧ１ｍ１７アロタイプである；
（Ｂ）軽鎖はラムダ２である；
（Ｃ）重鎖定常領域（Ｆｃ）は、２３６位、２３９位、３３０位、３３２位、４２８位および４３４位のうち１つまたは複数において、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のＦｃと比較して、１つまたは複数のアミノ酸置換を含み、特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、２３６位におけるＡｌａ、２３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒから選択される；ならびに
（Ｄ）重鎖可変領域（Ｆａｂ）は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のＦａｂ中に存在するグリコシル化部位またはＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のＦａｂ中の免疫原性領域の、１つまたは複数のアミノ酸置換を含み、特定の実施形態では、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のＦａｂ中に存在するグリコシル化部位は、５８〜６０、６８〜７０および１０５〜１０７位に位置し、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６のＦａｂ中の免疫原性領域は、８２ａ〜８２ｃ位に位置し、ある特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ、８２ａ〜８２ｃ位におけるＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、１０５位におけるＴｈｒ、および１０５位におけるＨｉｓから選択される。
【０１８２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、上で同定された特色の以下の組み合わせのいずれかを含む：ＡおよびＢ；ＡおよびＣ；ＡおよびＤ；ＢおよびＣ；ＢおよびＤ；ＣおよびＤ；Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢおよびＤ；Ａ、ＣおよびＤ；Ｂ、ＣおよびＤ；またはＡ、Ｂ、ＣおよびＤ。
【０１８３】
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖は、ＩｇＧ１ｍ１７アロタイプである。
【０１８４】
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖定常領域（Ｆｃ）は、２３６位におけるＡｌａ、３３９位におけるＡｓｐ、３３０位におけるＬｅｕ、３３２位におけるＧｌｕ、４２８位におけるＬｅｕ、および４３４位におけるＳｅｒを含む。
【０１８５】
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖定常領域（Ｆｃ）は、２１４位におけるＬｙｓ、３５６位におけるＧｌｕ、３５８位におけるＭｅｔ、および４３１位におけるＡｌａを含む。
【０１８６】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖定常領域（Ｆｃ）は、ＰＧＴ１２１．３３の重鎖配列を含む。
【０１８７】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの一実施形態では、重鎖定常領域（Ｆｃ）は、ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．４３、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１、ＰＧＴ１２１．５４、ＰＧＴ１２１．５５、ＰＧＴ１２１．６４およびＰＧＴ１２１．６５の重鎖配列を含む。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの別の実施形態では、重鎖定常領域（Ｆｃ）は、配列番号２５２、２５５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７２および２７３のいずれかに示される。
【０１８８】
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、軽鎖はラムダ２である。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、軽鎖は、６位におけるＡｌａ、８位におけるＳｅｒ、３０位におけるＩｌｅ、４６位におけるＳｅｒ、４９位におけるＶａｌ、５位におけるＡｌａ、５７位におけるＴｈｒ、８３位におけるＡｒｇ、８８位におけるＧｌｎおよび１０３位におけるＴｈｒを含む。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、軽鎖は、表１に示される軽鎖配列またはその可変領域のいずれかを含む。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの一部の実施形態では、軽鎖領域は、ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．４３、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１、ＰＧＴ１２１．５４、ＰＧＴ１２１．５５、ＰＧＴ１２１．６４およびＰＧＴ１２１．６５の軽鎖配列を含む。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかのある特定の実施形態では、軽鎖は、配列番号３３８、３４１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５８および３５９のいずれかに示される。
【０１８９】
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖可変領域（Ｆａｂ）は、ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６中に存在する２つもしくはそれよりも多くのまたは３つ全てのグリコシル化部位において、アミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域（Ｆａｂ）は、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ、８２ａ〜８２ｃ位におけるＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、１０５位におけるＴｈｒおよび１０５位におけるＨｉｓのうち１つまたは複数を含む。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖可変領域（Ｆａｂ）は、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｖａｌまたは８２ａ〜８２ｃ位におけるＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌを含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域（Ｆａｂ）は、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、１０５位におけるＴｈｒおよび１０５位におけるＨｉｓを含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域（Ｆａｂ）は、８２ａ〜８２ｃ位におけるＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ、８２ａ〜８２ｃ位におけるＴｈｒ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ、３９位におけるＧｌｎ、６０位におけるＡｓｎ、６８位におけるＨｉｓ、１０５位におけるＬｙｓ、１０５位におけるＴｈｒおよび１０５位におけるＨｉｓを含む。本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの特定の実施形態では、重鎖可変領域は、表１に示される重鎖可変領域のいずれかを含む。
【０１９０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表１に示される配列を有する重鎖（またはその断片）および／または軽鎖（またはその断片）を含む。特定の実施形態では、これは、表１に示される任意の重鎖および任意の軽鎖の組み合わせを有する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４０４、４２３、４２５、４２７、４２９および４４９に示される重鎖（またはその断片）を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４１５、４２４、４２６、４２８、４３０および４５０に示される軽鎖（またはその断片）を含む。一部の実施形態では、本発明は、配列番号３６３、４０５および４０６に示される重鎖相補性決定領域１〜３（ＣＤＲ１〜３）、および配列番号４１６、４１７および４１８に示される軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号３６２、３６４および３６７に示される重鎖相補性決定領域１〜３（ＣＤＲ１〜３）、および配列番号３９５、３９６および３９７に示される軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号３６２、３６６および３６７に示される重鎖相補性決定領域１〜３（ＣＤＲ１〜３）、および配列番号３９５、３９６および３９７に示される軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、本発明は、配列番号４３１、４３２および４３３に示される重鎖相補性決定領域１〜３（ＣＤＲ１〜３）、および配列番号４４２、４４３および４４４に示される軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０１９１】
本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子もまた含む。特定の実施形態では、核酸分子は、抗体軽鎖（またはその断片）もしくは抗体軽鎖（またはその断片）、またはその両方をコードする。ある特定の実施形態では、核酸は、二価抗体またはその断片をコードする。特定の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡである。特定の実施形態では、核酸分子は、宿主細胞における発現を増強するために、コドン最適化される。
【０１９２】
本発明は、例えば、インタクトな抗体、ｓｃＦｖ、重鎖、軽鎖、ＶＨ領域およびＶＬ領域を含む、本明細書に開示される抗体およびその抗原結合性断片のポリペプチドバリアントをさらに含む。ある特定の実施形態では、本発明は、表１に示されるもののいずれかを含む本明細書に記載のポリペプチドと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性を有するポリペプチドバリアントを含む。
【０１９３】
本発明は、本明細書に開示される抗体およびその抗原結合性断片のポリペプチドバリアントをコードする核酸分子、ならびに本発明の抗体またはその抗原結合性断片、例えば、インタクトな抗体、ｓｃＦｖ、重鎖、軽鎖、ＶＨ領域およびＶＬ領域などをコードする核酸分子のポリヌクレオチドバリアントをさらに含む。ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性を有するポリヌクレオチドバリアントを含む。
【０１９４】
核酸分子のある特定の実施形態では、これら（またはその部分もしくは下位領域）は、コドン最適化され得る。コドン最適化法は、当該分野で公知であり、例えば、標的および宿主生物におけるコドン頻度を一致させるため、適切なフォールディングを確実にするため、ｍＲＮＡ安定性を増加させるもしくは二次構造を低減させるためにＧＣ含量にバイアスをかけるため、遺伝子の構築もしくは発現を損ない得るタンデム反復コドンもしくは連続する塩基（ｂａｓｅ  ｒｕｎ）を最小化するため、転写および翻訳制御領域をカスタマイズするため、タンパク質輸送配列を挿入もしくは除去するため、リボソーム結合部位およびｍＲＮＡ分解部位を改変するため、タンパク質の種々のドメインが適切にフォールディングするのを可能にするために翻訳速度を調整するため、またはポリヌクレオチド内の問題となる二次構造を低減させるもしくは排除するために使用され得る。コドン最適化ツール、アルゴリズムおよびサービスは、当該分野で公知であり、非限定的な例には、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ  ＣＡ）からのサービスおよび／または所有権のある方法が含まれる。一実施形態では、核酸配列は、最適化アルゴリズムを使用して最適化される。各アミノ酸についてのコドン選択肢の例は、表３に与えられる。
【表３】
2020120689.tif 000017
【０１９５】
本発明は、本発明の核酸分子を含むベクターもまた含む。ベクターは、任意の型のもの、例えば、組換えベクター、例えば発現ベクターであり得る。ベクターには、プラスミド、コスミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）および酵母人工染色体（ＹＡＣ）、ならびにバクテリオファージまたは植物もしくは動物（ヒトを含む）ウイルスに由来するベクターが含まれるがこれらに限定されない。ベクターは、提案された宿主細胞によって認識される複製起点を含み得、発現ベクターの場合、宿主細胞によって認識されるプロモーターおよび他の調節領域を含み得る。特定の実施形態では、ベクターは、プロモーターおよび任意選択でさらなる調節エレメントに作動可能に連結した、本発明の抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主における自律的複製が可能である（例えば、細菌複製起点を有するベクターは、細菌中で複製できる）。他のベクターは、宿主中への導入の際に宿主のゲノム中に組み込まれ得、それによって、宿主ゲノムと一緒に複製される。本発明の抗体またはその抗原結合性断片を被験体に提供するために、ベクターには、本発明の抗体およびその抗原結合性断片の組換え産生に適切なベクター、ならびにそれを必要とする被験体またはその細胞中に導入するのに適切なベクターが含まれるがこれらに限定されない。
【０１９６】
ベクターの選択は、続く組換え手順および使用される宿主に依存する。宿主細胞中へのベクターの導入は、とりわけ、リン酸カルシウムトランスフェクション、ウイルス感染、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、リポフェクタミントランスフェクションまたはエレクトロポレーションによってもたらされ得る。ベクターは、自律的に複製し得る、またはそれらが組み込まれた染色体と一緒に複製し得る。ある特定の実施形態では、ベクターは、１つまたは複数の選択マーカーを含有する。マーカーの選択は、最適な宿主細胞に依存し得る。これらには、カナマイシン、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ｚｅｏｃｉｎ、単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ−ＴＫ）、およびマウス由来のジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子（ｄｈｆｒ）が含まれるがこれらに限定されない。抗体およびその断片を単離するために使用され得るタンパク質またはペプチドをコードする１つまたは複数の核酸分子に作動可能に連結した、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合性断片をコードする１つまたは複数の核酸分子を含むベクターもまた、本開示によって包含される。これらのタンパク質またはペプチドには、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、マルトース結合タンパク質、金属結合性ポリヒスチジン、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼおよびベータ−ガラクトシダーゼが含まれるがこれらに限定されない。
【０１９７】
特定の実施形態では、ベクターは、以下の配列を有するｐｃＤＮＡ（商標）３．１＋（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＭＡ）である：
【化１１−１】
2020120689.tif 000018
【化１１−２】
2020120689.tif 000019
【化１１−３】
2020120689.tif 000020
【化１１−４】
2020120689.tif 000021
【０１９８】
特定の実施形態では、重鎖および軽鎖コード配列は、ＮｈｅＩおよびＥｃｏＲＩ切断されたベクター骨格中にクローニングされる。発現された抗体がヒスチジンでタグ付けされるある特定の場合には、以下のコード配列が、重鎖定常領域の最後のコドンの３’末端に付加される：−ＣＡＣ  ＣＡＴ  ＣＡＣ  ＣＡＴ  ＣＡＣ  ＣＡＴ  ＣＡＣ  ＣＡＴ（配列番号６０）−終止コドン。
【０１９９】
本発明は、本発明の核酸またはベクターを含む宿主細胞もまた提供する。種々の宿主細胞のいずれかが使用され得る。一実施形態では、宿主細胞は、原核生物細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉである。別の実施形態では、宿主細胞は、真核生物細胞、例えば、哺乳動物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＨＫ細胞、ＮＳＯ細胞またはＢｏｗｅｓ黒色腫細胞である。ヒト宿主細胞の例は、とりわけ、ＨｅＬａ、９１１、ＡＴ１０８０、Ａ５４９、２９３およびＨＥＫ２９３Ｔ細胞である。
【０２００】
本発明は、抗体およびその抗原結合性断片を産生する方法を含む。ある特定の実施形態では、これらは、組換え的に、または化学合成によって産生される。例えば、抗体およびその断片は、合成により、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生され得、あるいはこれらは、組換えＤＮＡ技術によって遺伝子操作され得る。産生のかかる方法は、当該分野で周知であり、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、  Ｅ．  ＨａｒｌｏｗおよびＤ．  Ｌａｎｅ編（１９８８年）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．に記載されている。抗体および抗原結合性断片は、合成により、またはインタクトな免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生され得、あるいはこれらは、組換えＤＮＡ技術によって遺伝子操作され得る。産生の例示的な方法は、当該分野で周知であり、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｅ．  ＨａｒｌｏｗおよびＤ．  Ｌａｎｅ編（１９８８年）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．に記載されている。種々の技術が、抗体断片の産生のために開発されている。伝統的には、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク分解性消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４巻：１０７〜１１７頁（１９９２年）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照のこと）。しかし、これらの断片は、現在、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。Ｆａｂ、ＦｖおよびｓｃＦｖ抗体断片は全て、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現されＥ．ｃｏｌｉから分泌され得、そうして、大量のこれらの断片の容易な産生を可能にする。Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成するために化学的にカップリングされ得る（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：１６３〜１６７頁（１９９２年））。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、増加したｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有するＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片が、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体および抗体断片の産生のための他の技術は、当業者に明らかである。
【０２０１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片をコードする発現ベクターを含む宿主細胞から、抗体またはその抗原結合性断片を単離することによって産生される。ある特定の実施形態では、方法は、抗体もしくはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で宿主細胞を培養するステップをさらに含み、および／または抗体もしくはその抗原結合性断片をコードする発現ベクターを宿主細胞中に導入するステップをさらに含む。
【０２０２】
医薬組成物
本発明は、本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドと、薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤とを含む医薬組成物もまた含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の、抗体、その抗原結合性断片またはポリヌクレオチドを含む。
【０２０３】
種々の薬学的に許容される希釈剤、担体および賦形剤、ならびに医薬組成物の調製および使用のための技術は、本開示に照らせば、当業者に公知である。例示的な医薬組成物ならびに薬学的に許容される希釈剤、担体および賦形剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ２００３年）にも記載されている。特定の実施形態では、各担体、希釈剤または賦形剤は、医薬組成物の他の成分と適合性であり、被験体にとって傷害性でないという意味で、「許容される」。しばしば、薬学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤として機能し得る材料の一部の例には、水；緩衝液、例えば、リン酸緩衝食塩水；糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびセルロースアセテート；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えば、カカオバターおよび坐剤ワックス；油、例えば、ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；ならびに医薬製剤において用いられる他の非毒性の適合性の物質が含まれる。湿潤剤、乳化剤および滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、ならびに着色剤、離型剤（ｒｅｌｅａｓｅ  ａｇｅｎｔ）、コーティング剤、甘味剤、矯味矯臭剤および芳香剤、防腐剤ならびに抗酸化剤もまた、組成物中に存在し得る。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は滅菌である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、４．５〜８．５、４．５〜６．５、６．５〜８．５の範囲のｐＨ、あるいは約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、約７．０、約７．５、約８．０または約８．５のｐＨを有する。一実施形態では、医薬組成物は、２４０〜２６０または２５０〜３３０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌの範囲のオスモル濃度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、等張性またはほぼ等張性である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与のために製剤化され、１０〜１００ｍｇ／ｍｌ、１０〜５０ｍｇ／ｍｌ、２０〜４０ｍｇ／ｍｌまたは約３０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその断片の濃度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、皮下注射のために製剤化され、５０〜５００ｍｇ／ｍｌ、５０〜２５０ｍｇ／ｍｌまたは１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその断片の濃度、および５０ｃＰ未満、３０ｃＰ未満、２０ｃＰ未満または約１０ｃＰの粘度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、液体または固体である。特定の実施形態では、医薬組成物は、非経口、例えば、静脈内、皮下または経口投与のために製剤化される。
【０２０５】
医薬組成物の製剤化および送達の方法は、一般に、処置される部位および疾患に従って適合される。例示的な製剤には、ミセル、リポソームまたは薬物放出カプセル中にカプセル化された製剤（低速放出のために設計された生体適合性コーティング内に取り込まれた活性薬剤）；摂取可能な製剤；外用使用のための製剤、例えば、クリーム剤、軟膏剤およびゲル剤；ならびに他の製剤、例えば、吸入剤、エアロゾル剤およびスプレー剤が含まれる、非経口投与、例えば、静脈内、動脈内、筋内または皮下投与に適切なものが含まれるがこれらに限定されない。
【０２０６】
使用の方法
本発明は、それを必要とする被験体においてＨＩＶ感染または関連の疾患もしくは障害を処置および予防するための方法であって、有効量の、本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体もしくはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを、それを必要とする被験体に提供するステップを含む、方法を提供する。ポリヌクレオチドは、ベクター、例えば、ウイルスベクター中に存在し得る。特定の実施形態では、関連の疾患または障害は、ＨＩＶによる感染によって引き起こされる。特定の実施形態では、これは、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）である。特定の実施形態では、被験体は、ウイルス学的に抑制されたＨＩＶ感染哺乳動物であるが、他の実施形態では、被験体は、処置を経験していないＨＩＶ感染哺乳動物である。ある特定の実施形態では、処置を経験していない被験体は、１０３コピー／ｍｌから１０５コピー／ｍｌの間のウイルス量を有し、ある特定の実施形態では、ウイルス学的に抑制された被験体は、５０コピー／ｍｌ未満のウイルス量を有する。特定の実施形態では、被験体は、哺乳動物、例えばヒトである。ある特定の実施形態では、被験体は、ＨＩＶ、例えば、ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２感染または関連の疾患もしくは障害、例えば、ＡＩＤＳと診断されており、あるいはＨＩＶ、例えば、ＨＩＶ−１もしくはＨＩＶ−２感染または関連の疾患もしくは障害、例えば、ＡＩＤＳを発症するリスクがあるとみなされる。ＨＩＶ関連の疾患または障害のリスクがある被験体には、感染した人と接触した患者、またはいくつかの他の方法でＨＩＶに曝露された患者が含まれる。予防剤の投与は、疾患または障害が予防され、あるいはその進行が遅延されるように、ＨＩＶ関連の疾患または障害に特徴的な症状の顕在化の前に行われ得る。
【０２０７】
本発明は、被験体において、ＨＩＶウイルス力価、ウイルス複製、ウイルス増殖、またはＨＩＶウイルスＤＮＡ、ＨＩＶプロウイルスＤＮＡもしくはＨＩＶウイルスタンパク質の量における増加を予防または阻害するための方法をさらに提供する。一実施形態では、方法は、被験体において、１つまたは複数のＨＩＶ株または単離物のＨＩＶ力価、ウイルス複製、またはＨＩＶタンパク質の量における増加を予防するのに有効な量の、本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体もしくはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを、それを必要とする被験体に提供するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、１つまたは複数の時点で、例えば、本発明の抗体または抗体結合性断片が被験体に提供される前および提供された後に、ＨＩＶウイルスまたはプロウイルスのＤＮＡまたはタンパク質の量を測定するステップをさらに含む。被験体においてＨＩＶウイルスまたはプロウイルスのＤＮＡまたはタンパク質の量を決定するための方法およびバイオマーカーは、当該分野で公知であり利用可能であり、例えば、それら各々、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Ｓｉｌｉｃｉａｎｏ，  Ｊ．Ｄ．ら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ．  ＨＩＶ  ＡＩＤＳ（２０１０年）５巻（６号）：４９１〜７頁およびＲｏｕｚｉｏｕｘ，  Ｃ．ら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  ＨＩＶ  ＡＩＤＳ（２０１３年）８巻（３号）：１７０〜５頁に記載されている。
【０２０８】
ある特定の態様では、本開示の抗体は、例えば、本明細書に記載されるＨＩＶ単離物などのある特定のウイルスを阻害する方法、本明細書に記載されるＨＩＶ単離物などのある特定のウイルスの感染の予防的な阻害または防止、試料中の本明細書に記載されるＨＩＶ単離物などのある特定のウイルスの検出、本明細書に記載されるＨＩＶ単離物などのある特定のウイルスの阻害、本明細書に記載されるＨＩＶ単離物などのある特定のウイルスの診断において使用され得る。
【０２０９】
哺乳動物被験体、例えばヒトのｉｎ  ｖｉｖｏ処置のために、被験体には、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物が投与または提供され得る。ｉｎ  ｖｉｖｏ治療に使用される場合、本発明の抗体およびその抗原結合性断片は、典型的には、治療有効量（即ち、患者のウイルス負荷および／またはウイルスレザバ（ｖｉｒａｌ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）を排除するまたは低減させる量）で患者に投与または提供される。抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ある期間にわたるボーラスとしてのもしくは持続注入による静脈内投与、筋内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、髄腔内、経口、外用または吸入経路によるものなどであるがこれらに限定されない公知の方法に従って、哺乳動物被験体、例えばヒトに投与または提供される。抗体またはその抗原結合性断片は、可能な場合には標的細胞部位において非経口、または静脈内投与され得る。抗体またはその抗原結合性断片の静脈内または皮下投与は、ある特定の実施形態では好ましい。特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、患者または被験体に、全身、非経口、または局所投与される。
【０２１０】
非経口投与のための特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、薬学的に許容される非経口ビヒクルと関連して、注射可能な単位投薬形態（溶液、懸濁物、エマルジョン）で製剤化される。かかるビヒクルの例は、水、食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液および５％ヒト血清アルブミンである。不揮発性油およびオレイン酸エチルなどの非水性ビヒクルもまた使用され得る。リポソームは、担体として使用され得る。ビヒクルは、等張性および化学的安定性を増強する物質、例えば、緩衝液および防腐剤などの添加剤を微量で含有し得る。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、例えば、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ約２５ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１５０ｍｇ／ｍｌまたは約２００ｍｇ／ｍｌの濃度でそのようなビヒクル内で製剤化される。
【０２１１】
用量および投薬レジメンは、医師によって容易に決定される種々の因子、例えば、感染の性質、被験体の特徴、および被験体の病歴に依存する。特定の実施形態では、被験体に投与または提供される抗体またはその抗原結合性断片の量は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲である。感染の型および重症度に依存して、ある特定の実施形態では、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重（例えば、約０．１〜１５ｍｇ／ｋｇ／用量）の抗体またはその抗原結合性断片が、例えば、１回または複数の別々の投与によってであれ持続注入によってであれ、初回候補投薬量として患者に提供され得る。治療の進行は、従来の方法およびアッセイによって、医師または他の当業者に公知の基準に基づいて、容易にモニタリングされる。
【０２１２】
特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、≦０．１μｇ／ｍＬ、≦０．５μｇ／ｍｌ、≦１μｇ／ｍｌ、≦１０μｇ／ｍｌ、≦２０μｇ／ｍｌ、≦３０μｇ／ｍｌ、≦４０μｇ／ｍｌ、≦５０μｇ／ｍｌ、≦７５μｇ／ｍｌ、≦１００μｇ／ｍｌ、≦２００μｇ／ｍｌ、≦３００μｇ／ｍｌまたは≦５００μｇ／ｍＬのＣｔｒｏｕｇｈレベルを達成するのに十分な量で被験体に提供され得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌのＣｔｒｏｕｇｈレベルを達成するのに十分な量で被験体に提供され得る。特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、≧１μｇ／ｍｌ、≧５μｇ／ｍｌ、≧１０μｇ／ｍｌ、≧５０μｇ／ｍｌ、≧１００μｇ／ｍｌ、≧２００μｇ／ｍｌ、≧３００μｇ／ｍｌ、≧４００μｇ／ｍｌ、≧５００μｇ／ｍｌまたは≧１０００μｇ／ｍＬのＣｍａｘレベルを達成するのに十分な量で被験体に提供され得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、１００μｇ／ｍｌ〜１０００μｇ／ｍｌのＣｍａｘレベルを達成するのに十分な量で被験体に提供され得る。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＩＶ感染または関連の疾患もしくは障害を処置するために使用される１つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わせて被験体に提供される。ある特定の実施形態では、感染を有するまたは感染を有するリスクがある哺乳動物、例えばヒトにおいてＨＩＶ感染を処置または予防するための方法であって、治療有効量の１つまたは複数の（例えば、１つの、２つの、３つの、１つもしくは２つの、または１〜３つの）さらなる治療剤と組み合わせて、治療有効量の本明細書に開示される抗体もしくはその断片、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与するステップを含む、方法が提供される。一実施形態では、感染を有するまたは感染を有するリスクがあるヒトにおいてＨＩＶ感染を処置するための方法であって、治療有効量の１つまたは複数の（例えば、１つの、２つの、３つの、１つもしくは２つの、または１〜３つの）さらなる治療剤と組み合わせて、治療有効量の本明細書に開示される抗体もしくはその断片、またはその薬学的に許容される塩をヒトに投与するステップを含む、方法が提供される。
【０２１４】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＨＩＶ感染を処置するための方法であって、処置を必要とする患者に、治療有効量の、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片またはその薬学的に許容される塩を、治療有効量の、ＨＩＶ感染を処置するために好適な、１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与する工程を包含する、方法を提供する。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、２つもしくはそれよりも多くの本明細書に開示される抗体もしくはその断片、またはその薬学的に許容される塩が、被験体に提供され得る。特定の実施形態では、２つまたはそれよりも多くの抗体またはその断片は、異なる特異性を有し得、例えば、各々、互いと比較して、異なるＨＩＶ株または株の組み合わせを優先的に結合、阻害または中和し得る。ある特定の実施形態では、抗体は、以下のうちいずれかを含み得る：ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６、または体細胞バリアントＰＧＴ１２２、ＰＧＴ１２３、ＰＧＴ１２４、１０−１０７４、ＰＧＴ１３３もしくはＰＧＴ１３４（または本明細書に記載されるバリアントのいずれか）を含むそのバリアントのうち１つ；ＰＧＴ１４５もしくはそのバリアントのうち１つ；ＰＧ１６もしくはそのバリアントのうち１つ、ＰＧ９もしくはそのバリアントのうち１つ；ＰＧＴ１５１もしくはそのバリアントのうち１つ；あるいは補完的な結合、中和もしくは感染細胞死滅活性を提供するｂＮＡｂの任意の他の組み合わせ。特定の実施形態では、ＨＩＶ株は、クレードＢ株である。
【０２１６】
本明細書に開示される抗体またはその断片は、任意の投薬量の抗体またはその断片（例えば、５０ｍｇ〜１０００ｍｇの化合物）で、１つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わされ得る。また、本明細書に開示される抗体またはその断片は、任意の投薬量の抗体またはその断片（例えば、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ、または５０ｍｇ〜４０００ｍｇの化合物）で、１つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わされ得る。
【０２１７】
一実施形態では、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片またはその薬学的に許容される塩を、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、１つもしくは２つ、または１つから３つ）の追加の治療剤および薬学的に許容される担体、希釈剤または添加剤と組み合わせて含有する、医薬組成物が提供される。
【０２１８】
一実施形態では、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片またはその薬学的に許容される塩を、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、１つもしくは２つ、または１つから３つ）の追加の治療剤と組み合わせて備える、キットが提供される。
【０２１９】
上記の実施形態では、追加の治療剤は、抗ＨＩＶ剤であってよい。例えば、一部の実施形態では、追加の治療剤は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶ非ヌクレオシドまたは非ヌクレオチド阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤、ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤、ＨＩＶ非触媒部位（またはアロステリック）インテグラーゼ阻害剤、ＨＩＶ侵入阻害剤（例えば、ＣＣＲ５阻害剤、ｇｐ４１阻害剤（すなわち、融合阻害剤）およびＣＤ４結合阻害剤）、ＣＸＣＲ４阻害剤、ｇｐ１２０阻害剤、Ｇ６ＰＤおよびＮＡＤＨ−オキシダーゼ阻害剤、ＨＩＶワクチン、ＨＩＶ成熟阻害剤、潜伏逆転剤（ｌａｔｅｎｃｙ  ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（例えば、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）活性化因子およびＢＲＤ４阻害剤）、ＨＩＶカプシドを標的とする化合物（「カプシド阻害剤」；例えば、カプシド重合阻害剤またはカプシド破壊化合物、ＨＩＶヌクレオカプシドｐ７（ＮＣｐ７）阻害剤、ＨＩＶ  ｐ２４カプシドタンパク質阻害剤）、薬物動態学的エンハンサー、免疫ベースの療法（例えば、Ｐｄ−１モジュレーター、Ｐｄ−Ｌ１モジュレーター、トール様受容体モジュレーター、ＩＬ−１５アゴニスト）、ＨＩＶ  ｇｐ１２０またはｇｐ４１を標的とするものを含む、ＨＩＶ抗体、二重特異性抗体および「抗体様」治療用タンパク質（例えば、ＤＡＲＴｓ（登録商標）、Ｄｕｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ｂｉｔｅｓ（登録商標）、ＸｍＡｂｓ（登録商標）、ＴａｎｄＡｂｓ（登録商標）、Ｆａｂ誘導体）、ＨＩＶのための併用薬物、ＨＩＶ  ｐ１７マトリクスタンパク質阻害剤、ＩＬ−１３アンタゴニスト、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼＡモジュレーター、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ阻害剤、補体Ｃ５ａ受容体アンタゴニスト、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、ＨＩＶ  ｖｉｆ遺伝子モジュレーター、Ｖｉｆ二量体化アンタゴニスト、ＨＩＶ−１ウイルス感染性因子（ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆａｃｔｏｒ）阻害剤、ＴＡＴタンパク質阻害剤、ＨＩＶ−１  Ｎｅｆモジュレーター、Ｈｃｋチロシンキナーゼモジュレーター、混合系統キナーゼ−３（ｍｉｘｅｄ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｋｉｎａｓｅ−３）（ＭＬＫ−３）阻害剤、ＨＩＶ−１スプライシング阻害剤、Ｒｅｖタンパク質阻害剤、インテグリンアンタゴニスト、核タンパク質阻害剤、スプライシング因子モジュレーター、ＣＯＭＭドメイン含有タンパク質１モジュレーター、ＨＩＶリボヌクレアーゼＨ阻害剤、レトロサイクリンモジュレーター、ＣＤＫ−９阻害剤、樹状ＩＣＡＭ−３結合ノンインテグリン１阻害剤（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ＩＣＡＭ−３  ｇｒａｂｂｉｎｇ  ｎｏｎｉｎｔｅｇｒｉｎ  １  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ＨＩＶ  ＧＡＧタンパク質阻害剤、ＨＩＶ  ＰＯＬタンパク質阻害剤、補体因子Ｈモジュレーター、ユビキチンリガーゼ阻害剤、デオキシシチジンキナーゼ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤プロタンパク質転換酵素ＰＣ９刺激因子、ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ３Ｘ阻害剤、逆トランスクリプターゼプライミング複合体阻害剤、ＨＩＶ遺伝子療法、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＷＯ２０１３／００６７３８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＵＳ２０１３／０１６５４８９（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、ＷＯ２０１３／０９１０９６Ａ１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ２００９／０６２２８５（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＵＳ２０１４０２２１３８０（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）、ＵＳ２０１４０２２１３７８（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）、ＷＯ２０１０／１３００３４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ２０１３／１５９０６４（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１２／１４５７２８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１２／００３４９７（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１４／１００３２３（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１２／１４５７２８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１３／１５９０６４（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＷＯ２０１２／００３４９８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＷＯ２０１３／００６７９２（Ｐｈａｒｍａ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）において開示されているもの等の化合物、ならびにＨＩＶを処置するための他の薬物、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０２２０】
ある特定の実施形態では、追加の治療薬は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶ非ヌクレオシドまたは非ヌクレオチド阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤、ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤、ＨＩＶ非触媒部位（またはアロステリック）インテグラーゼ阻害剤、薬物動態学的エンハンサー、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０２２１】
特定の実施形態では、さらなる治療剤は、潜伏逆転剤（ｌａｔｅｎｃｙ  ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（ＬＲＡ）、例えば、ＴＬＲ７アゴニストである。他の実施形態では、さらなる治療剤は、潜伏逆転剤（ＬＲＡ）、例えば、ＴＬＲ８アゴニストである。ＴＬＲアゴニストの例には、ベサトリモド（Ｖｅｓａｔｏｌｉｍｏｄ）が含まれるがこれに限定されない。さらなる例には、米国特許第８，３６７、６７０号に記載される化合物および米国特許出願公開番号２０１６−０２８９２２９に記載される化合物が含まれるがこれらに限定されない。一実施形態では、本発明の抗体は、ベサトリモドなどのＴＬＲ７アゴニストと組み合わされ得る。別の実施形態では、本発明の抗体は、ＴＬＲ８アゴニストと組み合わされ得る。一実施形態では、さらなる治療剤は、ＴＬＲモジュレーターである。ＴＬＲモジュレーターには、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２およびＴＬＲ１３のモジュレーターが含まれ得る。ＴＬＲ３モジュレーターの例には、リンタトリモド（ｒｉｎｔａｔｏｌｉｍｏｄ）、ポリ−ＩＣＬＣ、ＲＩＢＯＸＸＯＮ（登録商標）、Ａｐｏｘｘｉｍ、ＲＩＢＯＸＸＩＭ（登録商標）、ＩＰＨ−３３、ＭＣＴ−４６５、ＭＣＴ−４７５およびＮＤ−１．１が含まれる。ＴＬＲ７モジュレーターの例には、ＧＳ−９６２０、ＧＳＫ−２２４５０３５、イミキモド、レシキモド、ＤＳＲ−６４３４、ＤＳＰ−３０２５、ＩＭＯ−４２００、ＭＣＴ−４６５、ＭＥＤＩ−９１９７、３Ｍ−０５１、ＳＢ−９９２２、３Ｍ−０５２、Ｌｉｍｔｏｐ、ＴＭＸ−３０Ｘ、ＴＭＸ−２０２、ＲＧ−７８６３、ＲＧ−７７９５、ならびにＵＳ２０１００１４３３０１（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＵＳ２０１１００９８２４８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＵＳ２００９００４７２４９（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に開示される化合物が含まれる。ＴＬＲ８モジュレーターの例には、モトリモド、レシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）、３Ｍ−０５１、３Ｍ−０５２、ＭＣＴ−４６５、ＩＭＯ−４２００、ＶＴＸ−７６３、ＶＴＸ−１４６３、ならびにＵＳ２０１４００４５８４９（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＵＳ２０１４００７３６４２（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＷＯ２０１４／０５６９５３（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＷＯ２０１４／０７６２２１（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＷＯ２０１４／１２８１８９（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＵＳ２０１４０３５００３１（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＷＯ２０１４／０２３８１３（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＵＳ２００８０２３４２５１（Ａｒｒａｙ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２００８０３０６０５０（Ａｒｒａｙ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２０１０００２９５８５（Ｖｅｎｔｉｒｘ  Ｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２０１１００９２４８５（Ｖｅｎｔｉｒｘ  Ｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２０１１０１１８２３５（Ｖｅｎｔｉｒｘ  Ｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２０１２００８２６５８（Ｖｅｎｔｉｒｘ  Ｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２０１２０２１９６１５（Ｖｅｎｔｉｒｘ  Ｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２０１４００６６４３２（Ｖｅｎｔｉｒｘ  Ｐｈａｒｍａ）、ＵＳ２０１４００８８０８５（Ｖｅｎｔｉｒｘ  Ｐｈａｒｍａ��、ＵＳ２０１４０２７５１６７（Ｎｏｖｉｒａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）およびＵＳ２０１３０２５１６７３（Ｎｏｖｉｒａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）に開示される化合物が含まれる。ＴＬＲ９モジュレーターの例には、ＢＢ−００１、ＢＢ−００６、ＣＹＴ−００３、ＩＭＯ−２０５５、ＩＭＯ−２１２５、ＩＭＯ−３１００、ＩＭＯ−８４００、ＩＲ−１０３、ＩＭＯ−９２００、アガトリモド、ＤＩＭＳ−９０５４、ＤＶ−１０７９、ＤＶ−１１７９、ＡＺＤ−１４１９、レフトリモド（ｌｅｆｔｏｌｉｍｏｄ）（ＭＧＮ−１７０３）、リテニモド（ｌｉｔｅｎｉｍｏｄ）およびＣＹＴ−００３−ＱｂＧ１０が含まれる。
【０２２２】
いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、ＬＲＡは、本発明の抗体によって増強されたエフェクター機能を介して、細胞表面Ｅｎｖ発現を増加させ得、従って、潜伏細胞の死滅を増強すると考えられる。ある特定の実施形態では、さらなる治療剤は、１つまたは複数の抗レトロウイルス治療（ＡＲＴ）を含む。特定の実施形態では、ＡＲＴは、組み合わせＡＲＴ（ｃＡＲＴ）、例えば、高活性ＡＲＴ（ＨＡＡＲＴ）である。特定の実施形態では、ＡＲＴは、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）、プロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）、侵入阻害剤またはＨＩＶインテグラーゼ阻害剤のうち１つまたは複数を含む。ＮＲＴＩの例には、ジドブジン（Ｒｅｔｒｏｖｉｒ、ＡＺＴ）；ジダノシン（Ｖｉｄｅｘ、Ｖｉｄｅｘ  ＥＣ、ｄｄＩ）；スタブジン（Ｚｅｒｉｔ、ｄ４Ｔ）；ラミブジン（Ｅｐｉｖｉｒ、３ＴＣ）；テノホビル、ヌクレオチドアナログ（Ｖｉｒｅａｄ、ＴＤＦ）；Ｃｏｍｂｉｖｉｒ（ジドブジンおよびラミブジンの組み合わせ）；Ｔｒｉｚｉｖｉｒ（ジドブジン、ラミブジンおよびアバカビルの組み合わせ）；エムトリシタビン（Ｅｍｔｒｉｖａ、ＦＴＣ）；Ｔｒｕｖａｄａ（エムトリシタビンおよびテノホビルの組み合わせ）；およびＥｐｚｉｃｏｍ（アバカビルおよびラミブジンの組み合わせ）が含まれるがこれらに限定されない。ＮＮＲＴＩの例には、ネビラピン（Ｖｉｒａｍｕｎｅ、ＮＶＰ）；デラビルジン（Ｒｅｓｃｒｉｐｔｏｒ、ＤＬＶ）；エファビレンツ（ＳｕｓｔｉｖａまたはＳｔｏｃｒｉｎ、ＥＦＶ、Ａｔｒｉｐｌａの一部でもある）；エトラビリン（Ｉｎｔｅｌｅｎｃｅ、ＥＴＲ）；およびリルピビリン（Ｅｄｕｒａｎｔ、ＲＰＶ、ＣｏｍｐｌｅｒａまたはＥｐｉｖｌｅｒａの一部でもある）が含まれるがこれらに限定されない。ＰＩの例には、サキナビル（Ｉｎｖｉｒａｓｅ、ＳＱＶ）；インジナビル（Ｃｒｉｘｉｖａｎ、ＩＤＶ）；リトナビル（Ｎｏｒｖｉｒ、ＲＴＶ）；ネルフィナビル（Ｖｉｒａｃｅｐｔ、ＮＦＶ）；アンプレナビル（Ａｇｅｎｅｒａｓｅ、ＡＰＶ）；ロピナビル／リトナビル（ＫａｌｅｔｒａまたはＡｌｕｖｉａ、ＬＰＶ／ＲＴＶ）；アタザナビル（Ｒｅｙａｔａｚ、ＡＴＺ）；ホスアンプレナビル（Ｌｅｘｉｖａ、Ｔｅｌｚｉｒ、ＦＰＶ）；チプラナビル（Ａｐｔｉｖｕｓ、ＴＰＶ）；およびダルナビル（Ｐｒｅｚｉｓｔａ、ＤＲＶ）が含まれるがこれらに限定されない。侵入阻害剤の例には、エンフビルチド（Ｆｕｚｅｏｎ、ＥＮＦ、Ｔ−２０）およびマラビロク（ＳｅｌｚｅｎｔｒｙまたはＣｅｌｓｅｎｔｒｉ、ＭＶＣ）が含まれるがこれらに限定されない。ＨＩＶインテグラーゼ（ｉｎｔｅｇｒａｓ）阻害剤の例には、ラルテグラビル（Ｉｓｅｎｔｒｅｓｓ、ＲＡＬ）；エルビテグラビル（ＥＶＧ、組み合わせＳｔｒｉｂｉｌｄの一部）およびドルテグラビル（Ｔｉｖｉｃａｙ、ＤＴＧ）が含まれるがこれらに限定されない。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、錠剤として製剤化され、これは、ＨＩＶを処置するために有用な１つまたは複数の化合物を任意選択で含有してよい。ある特定の実施形態では、錠剤は、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶ非ヌクレオシドまたは非ヌクレオチド阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤、ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤、ＨＩＶ非触媒部位（またはアロステリック）インテグラーゼ阻害剤、薬物動態学的エンハンサー、およびそれらの組み合わせ等、ＨＩＶを処置するための別の活性成分を含有することができる。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、そのような錠剤は、１日１回の投薬に好適である。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、
（１）ＡＴＲＩＰＬＡ（登録商標）（エファビレンツ＋テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン）、ＣＯＭＰＬＥＲＡ（登録商標）（ＥＶＩＰＬＥＲＡ（登録商標）、リルピビリン＋テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン）、ＳＴＲＩＢＩＬＤ（登録商標）（エルビテグラビル＋コビシスタット＋テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン）、ドルテグラビル＋アバカビルサルフェート＋ラミブジン、ＴＲＩＵＭＥＱ（登録商標）（ドルテグラビル＋アバカビル＋ラミブジン）、ラミブジン＋ネビラピン＋ジドブジン、ドルテグラビル＋リルピビリン、ドルテグラビル＋塩酸リルピビリン、アタザナビルサルフェート＋コビシスタット、アタザナビル＋コビシスタット、ダルナビル＋コビシスタット、エファビレンツ＋ラミブジン＋テノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルアラフェナミドヘミフマレート＋エムトリシタビン＋コビシスタット＋エルビテグラビル、テノホビルアラフェナミドヘミフマレート＋エムトリシタビン、テノホビルアラフェナミド＋エムトリシタビン、テノホビルアラフェナミドヘミフマレート＋エムトリシタビン＋リルピビリン、テノホビルアラフェナミド＋エムトリシタビン＋リルピビリン、Ｖａｃｃ−４ｘ＋ロミデプシン、ダルナビル＋テノホビルアラフェナミドヘミフマレート＋エムトリシタビン＋コビシスタット、ＡＰＨ−０８１２、ラルテグラビル＋ラミブジン、ＫＡＬＥＴＲＡ（登録商標）（ＡＬＵＶＩＡ（登録商標）、ロピナビル＋リトナビル）、アタザナビルサルフェート＋リトナビル、ＣＯＭＢＩＶＩＲ（登録商標）（ジドブジン＋ラミブジン、ＡＺＴ＋３ＴＣ）、ＥＰＺＩＣＯＭ（登録商標）（Ｌｉｖｅｘａ（登録商標）、アバカビルサルフェート＋ラミブジン、ＡＢＣ＋３ＴＣ）、ＴＲＩＺＩＶＩＲ（登録商標）（アバカビルサルフェート＋ジドブジン＋ラミブジン、ＡＢＣ＋ＡＺＴ＋３ＴＣ）、ＴＲＵＶＡＤＡ（登録商標）（テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン、ＴＤＦ＋ＦＴＣ）、ドラビリン（ｄｏｒａｖｉｒｉｎｅ）＋ラミブジン＋テノホビルジソプロキシルフマレート、ドラビリン＋ラミブジン＋テノホビルジソプロキシル、テノホビル＋ラミブジンおよびラミブジン＋テノホビルジソプロキシルフマレートからなる群より選択される、併用薬物；
（２）アンプレナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、ホスアンプレナビルカルシウム、インジナビル、インジナビルサルフェート、ロピナビル、リトナビル、ネルフィナビル、ネルフィナビルメシレート、サキナビル、サキナビルメシレート、チプラナビル、ブレカナビル、ダルナビル、ＤＧ−１７、ＴＭＢ−６５７（ＰＰＬ−１００）およびＴＭＣ−３１０９１１からなる群より選択される、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤；
（３）デラビルジン、デラビルジンメシレート、ネビラピン、エトラビリン、ダピビリン、ドラビリン、リルピビリン、エファビレンツ、ＫＭ−０２３、ＶＭ−１５００、レンチナンおよびＡＩＣ−２９２からなる群より選択される、逆トランスクリプターゼのＨＩＶ非ヌクレオシドまたは非ヌクレオチド阻害剤；
（４）ＶＩＤＥＸ（登録商標）およびＶＩＤＥＸ（登録商標）ＥＣ（ジダノシン、ｄｄｌ）、ジドブジン、エムトリシタビン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ラミブジン、センサブジン、アバカビル、アバカビルサルフェート、エルブシタビン、アロブジン、ホスファジド、ホジブジンチドキシル（ｆｏｚｉｖｕｄｉｎｅ  ｔｉｄｏｘｉｌ）、アプリシタビン（ａｐｒｉｃｉｔａｂｉｎｅ）、ＫＰ−１４６１、ホサルブジンチドキシル（ｆｏｓａｌｖｕｄｉｎｅ  ｔｉｄｏｘｉｌ）、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレート、テノホビルアラフェナミド、テノホビルアラフェナミドヘミフマレート、テノホビルアラフェナミドフマレート、アデホビル、アデホビルジピボキシルならびにフェスティナビル（ｆｅｓｔｉｎａｖｉｒ）からなる群より選択される、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤；
（５）クルクミン、クルクミンの誘導体、チコリ酸、チコリ酸の誘導体、３，５−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸の誘導体、アウリントリカルボン酸、アウリントリカルボン酸の誘導体、カフェイン酸フェネチルエステル、カフェイン酸フェネチルエステルの誘導体、チロホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）、チロホスチンの誘導体、ケルセチン、ケルセチンの誘導体、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビルおよびカボテグラビルからなる群より選択される、ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤；
（６）ＣＸ−０５１６８、ＣＸ−０５０４５およびＣＸ−１４４４２からなる群より選択される、ＨＩＶ非触媒部位、またはアロステリック、インテグラーゼ阻害剤（ＮＣＩＮＩ）；
（７）エンフビルチド（ｅｎｆｕｖｉｒｔｉｄｅ）、シフビルチド（ｓｉｆｕｖｉｒｔｉｄｅ）およびアルブビルチド（ａｌｂｕｖｉｒｔｉｄｅ）からなる群より選択される、ＨＩＶ  ｇｐ４１阻害剤；
（８）セニクリビロック（ｃｅｎｉｃｒｉｖｉｒｏｃ）からなる群より選択される、ＨＩＶ侵入阻害剤；
（９）Ｒａｄｈａ−１０８（レセプトール（Ｒｅｃｅｐｔｏｌ））およびＢＭＳ−６６３０６８からなる群より選択される、ＨＩＶ  ｇｐ１２０阻害剤；（１０）アプラビロック（ａｐｌａｖｉｒｏｃ）、ビクリビロック（ｖｉｃｒｉｖｉｒｏｃ）、マラビロック（ｍａｒａｖｉｒｏｃ）、セニクリビロック、ＰＲＯ−１４０、アダプタビル（Ａｄａｐｔａｖｉｒ）（ＲＡＰ−１０１）、ニフェビロック（ｎｉｆｅｖｉｒｏｃ）（ＴＤ−０２３２）、ＴＤ−０６８０およびｖＭＩＰ（ハイミプ（Ｈａｉｍｉｐｕ））からなる群より選択される、ＣＣＲ５阻害剤；
（１１）ＣＤ４結合阻害剤、例えば、フォステムサビル（ＢＭＳ−６６３０６８）；
（１２）イバリズマブからなる群より選択される、侵入に要求される結合後イベントの阻害剤；
（１２）プレリキサホル、ＡＬＴ−１１８８、ｖＭＩＰおよびハイミプからなる群より選択される、ＣＸＣＲ４阻害剤；
（１３）コビシスタットおよびリトナビルからなる群より選択される、薬物動態学的エンハンサー；
（１４）デルマビル（ｄｅｒｍａＶｉｒ）、インターロイキン−７、プラケニル（ヒドロキシクロロキン）、プロロイキン（アルデスロイキン、ＩＬ−２）、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファ−ｎ３、ペグ化インターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、ヒドロキシ尿素、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＰＡ）およびそのエステル誘導体ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、ＷＦ−１０、リバビリン、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ポリマーポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ゲポン（Ｇｅｐｏｎ）、ＶＧＶ−１、ＭＯＲ−２２、ＢＭＳ−９３６５５９、トール様受容体モジュレーター（ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２およびＴＬＲ１３）、リンタトリモドならびにＩＲ−１０３からなる群より選択される、免疫ベースの療法；
（１５）ペプチドワクチン、組換えサブユニットタンパク質ワクチン、生ベクターワクチン、ＤＮＡワクチン、ウイルス様粒子ワクチン（偽ウイルス粒子ワクチン）、ＣＤ４由来ペプチドワクチン、ワクチン組み合わせ物、ｒｇｐ１２０（ＡＩＤＳＶＡＸ）、ＡＬＶＡＣ  ＨＩＶ（ｖＣＰ１５２１）／ＡＩＤＳＶＡＸ  Ｂ／Ｅ（ｇｐ１２０）（ＲＶ１４４）、単量体ｇｐ１２０  ＨＩＶ−１サブタイプＣワクチン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、レミューン（Ｒｅｍｕｎｅ）、ＩＴＶ−１、コントレビル（Ｃｏｎｔｒｅ  Ｖｉｒ）、Ａｄ５−ＥＮＶＡ−４８、ＤＣＶａｘ−００１（ＣＤＸ−２４０１）、ＰＥＰ−６４０９、Ｖａｃｃ−４ｘ、Ｖａｃｃ−Ｃ５、ＶＡＣ−３Ｓ、マルチクレード（ｍｕｌｔｉｃｌａｄｅ）ＤＮＡ組換えアデノウイルス−５（ｒＡｄ５）、ペンバックス（Ｐｅｎｎｖａｘ）−Ｇ、ＶＲＣ−ＨＩＶ  ＭＡＢ０６０−００−ＡＢ、ＡＶＸ−１０１、ＡＶＸ−２０１、ＨＩＶ−ＬＡＭＰ−ｖａｘ、Ａｄ３５、Ａｄ３５−ＧＲＩＮ、ＮＡｃＧＭ３／ＶＳＳＰ  ＩＳＡ−５１、ポリ−ＩＣＬＣアジュバント化ワクチン、ＴａｔＩｍｍｕｎｅ、ＧＴＵ−ｍｕｌｔｉ  ＨＩＶ（ＦＩＴ−０６）、ＡＧＳ−００４、ｇｐ１４０［デルタ］Ｖ２．ＴＶ１＋ＭＦ−５９、ｒＶＳＶＩＮ  ＨＩＶ−１  ｇａｇワクチン、ＳｅＶ−Ｇａｇワクチン、ＡＴ−２０、ＤＮＫ−４、Ａｄ３５−ＧＲＩＮ／ＥＮＶ、ＴＢＣ−Ｍ４、ＨＩＶＡＸ、ＨＩＶＡＸ−２、ＮＹＶＡＣ−ＨＩＶ−ＰＴ１、ＮＹＶＡＣ−ＨＩＶ−ＰＴ４、ＤＮＡ−ＨＩＶ−ＰＴ１２３、ｒＡＡＶ１−ＰＧ９ＤＰ、ＧＯＶＸ−Ｂ１１、ＧＯＶＸ−Ｂ２１、ＴｈＶ−０１、ＴＵＴＩ−１６、ＶＧＸ−３３００、ＴＶＩ−ＨＩＶ−１、Ａｄ−４（Ａｄ４−ｅｎｖ  クレードＣ（Ｃｌａｄｅ  Ｃ）＋Ａｄ４−ｍＧａｇ）、ＥＮ４１−ＵＧＲ７Ｃ、ＥＮ４１−ＦＰＡ２、ＰｒｅＶａｘＴａｔ、ＴＬ−０１、ＳＡＶ−００１、ＡＥ−Ｈ、ＭＹＭ−Ｖ１０１、ＣｏｍｂｉＨＩＶｖａｃ、ＡＤＶＡＸ、ＭＹＭ−Ｖ２０１、ＭＶＡ−ＣＭＤＲ、ＭＶＡＴＧ−１７４０１、ＥＴＶ−０１、ＣＤＸ−１４０１、ｒｃＡｄ２６．ＭＯＳ１．ＨＩＶ−ＥｎｖおよびＤＮＡ−Ａｄ５  ｇａｇ／ｐｏｌ／ｎｅｆ／ｎｅｖ（ＨＶＴＮ５０５）からなる群より選択される、ＨＩＶワクチン；
（１６）ＢＭＳ−９３６５５９、ＴＭＢ−３６０、ならびに、バビツキシマブ、ＵＢ−４２１、Ｃ２Ｆ５、Ｃ２Ｇ１２、Ｃ４Ｅ１０、Ｃ２Ｆ５＋Ｃ２Ｇ１２＋Ｃ４Ｅ１０、３−ＢＮＣ−１１７、ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１２１、ＭＤＸ０１０（イピリムマブ）、ＶＲＣ０１、Ａ３２、７Ｂ２、１０Ｅ８、ＶＲＣ−０７−５２３およびＶＲＣ０７からなる群より選択されるＨＩＶ  ｇｐ１２０またはｇｐ４１を標的とするものを含む、ＨＩＶ抗体、二重特異性抗体および「抗体様」治療用タンパク質（ＤＡＲＴｓ（登録商標）、Ｄｕｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ｂｉｔｅｓ（登録商標）、ＸｍＡｂｓ（登録商標）、ＴａｎｄＡｂｓ（登録商標）、Ｆａｂ誘導体等）；
（１７）ロミデプシン、ボリノスタット、パノビノスタット等のヒストンデアセチラーゼ阻害剤；ベルケイド等のプロテアソーム阻害剤；インドラクタム、プロストラチン、インゲノールＢおよびＤＡＧ−ラクトン、イオノマイシン、ＧＳＫ−３４３、ＰＭＡ、ＳＡＨＡ、ＢＲＤ４阻害剤、ＩＬ−１５、ＪＱ１、ジスルフラム、ならびにアンホテリシンＢ等のタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）活性化因子からなる群より選択される、潜伏逆転剤；（１８）アゾジカルボンアミドからなる群より選択される、ＨＩＶヌクレオカプシドｐ７（ＮＣｐ７）阻害剤；
（１９）ＢＭＳ−９５５１７６およびＧＳＫ−２８３８２３２からなる群より選択される、ＨＩＶ成熟阻害剤；
（２０）イデラリシブ（ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ）、ＡＺＤ−８１８６、ブパルリシブ（ｂｕｐａｒｌｉｓｉｂ）、ＣＬＲ−４５７、ピクチリシブ（ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ネラチニブ、リゴサチブ（ｒｉｇｏｓｅｒｔｉｂ）、リゴサチブナトリウム、ＥＮ−３３４２、ＴＧＲ−１２０２、アルペリシブ（ａｌｐｅｌｉｓｉｂ）、デュベリシブ（ｄｕｖｅｌｉｓｉｂ）、ＵＣＢ−５８５７、タセリシブ（ｔａｓｅｌｉｓｉｂ）、ＸＬ−７６５、ゲダトリシブ（ｇｅｄａｔｏｌｉｓｉｂ）、ＶＳ−５５８４、コパンリシブ、ＣＡＩオロテート、ペリホシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、ＲＧ−７６６６、ＧＳＫ−２６３６７７１、ＤＳ−７４２３、パヌリシブ（ｐａｎｕｌｉｓｉｂ）、ＧＳＫ−２２６９５５７、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＣＵＤＣ−９０７、ＰＱＲ−３０９、ＩＮＣＢ−０４００９３、ピララリシブ（ｐｉｌａｒａｌｉｓｉｂ）、ＢＡＹ−１０８２４３９、プキチニブメシレート（ｐｕｑｕｉｔｉｎｉｂ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）、ＳＡＲ−２４５４０９、ＡＭＧ−３１９、ＲＰ−６５３０、ＺＳＴＫ−４７４、ＭＬＮ−１１１７、ＳＦ−１１２６、ＲＶ−１７２９、ソノリシブ（ｓｏｎｏｌｉｓｉｂ）、ＬＹ−３０２３４１４、ＳＡＲ−２６０３０１およびＣＬＲ−１４０１からなる群より選択される、ＰＩ３Ｋ阻害剤；
（２１）ＷＯ２００４／０９６２８６（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２００６／１１０１５７（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２００６／０１５２６１（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１３／００６７３８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＵＳ２０１３／０１６５４８９（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、ＵＳ２０１４０２２１３８０（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）、ＵＳ２０１４０２２１３７８（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）、ＷＯ２０１３／００６７９２（Ｐｈａｒｍａ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）、ＷＯ２００９／０６２２８５（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ２０１０／１３００３４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ２０１３／０９１０９６Ａ１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＷＯ２０１３／１５９０６４（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１２／１４５７２８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１２／００３４９７（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１４／１００３２３（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１２／１４５７２８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＷＯ２０１３／１５９０６４（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＷＯ２０１２／００３４９８（Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）において開示されている化合物；ならびに
（２２）バンレック（ＢａｎＬｅｃ）、ＭＫ−８５０７、ＡＧ−１１０５、ＴＲ−４５２、ＭＫ−８５９１、ＲＥＰ９、ＣＹＴ−１０７、アリスポリビル（ａｌｉｓｐｏｒｉｖｉｒ）、ＮＯＶ−２０５、ＩＮＤ−０２、メトエンケファリン（ｍｅｔｅｎｋｅｆａｌｉｎ）、ＰＧＮ−００７、アセマンナン（Ａｃｅｍａｎｎａｎ）、ガミミューン（Ｇａｍｉｍｕｎｅ）、プロラスチン（Ｐｒｏｌａｓｔｉｎ）、１，５−ジカフェオイルキナ酸、ＢＩＴ−２２５、ＲＰＩ−ＭＮ、ＶＳＳＰ、Ｈｌｖｉｒａｌ、ＩＭＯ−３１００、ＳＢ−７２８−Ｔ、ＲＰＩ−ＭＮ、ＶＩＲ−５７６、ＨＧＴＶ−４３、ＭＫ−１３７６、ｒＨＩＶ７−ｓｈｌ−ＴＡＲ−ＣＣＲ５ＲＺ、ＭａｚＦ遺伝子療法、ブロックエイド（ＢｌｏｃｋＡｉｄｅ）、ＡＢＸ−４６４、ＳＣＹ−６３５、ナルトレキソン、ＡＡＶ−ｅＣＤ４−Ｉｇ遺伝子療法、ＴＥＶ−９０１１０、ＴＥＶ−９０１１２、デフェリプロンおよびＰＡ−１０５００４０（ＰＡ−０４０）からなる群より選択される、ＨＩＶを処置するための他の薬物
の１つまたは複数から選択される。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片またはその薬学的に許容される塩は、１つ、２つ、３つ、４つまたはそれより多い追加の治療剤と組み合わされる。ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、２つの追加の治療剤と組み合わされる。他の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、３つの追加の治療剤と組み合わされる。さらなる実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、４つの追加の治療剤と組み合わされる。１つ、２つ、３つ、４つまたはそれより多い追加の治療剤は、同じクラスの治療剤から選択される異なる治療剤であってよく、および／または異なるクラスの治療剤から選択されてよい。具体的な実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤および逆トランスクリプターゼのＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤と組み合わされる。別の具体的な実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤およびＨＩＶプロテアーゼ阻害化合物と組み合わされる。さらなる実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、およびＨＩＶプロテアーゼ阻害化合物と組み合わされる。追加の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、逆トランスクリプターゼのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤、逆トランスクリプターゼのＨＩＶ非ヌクレオシド阻害剤、および薬物動態学的エンハンサーと組み合わされる。ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、逆トランスクリプターゼの少なくとも１つのＨＩＶヌクレオシド阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、および薬物動態学的エンハンサーと組み合わされる。別の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、逆トランスクリプターゼの２つのＨＩＶヌクレオシドまたはヌクレオチド阻害剤と組み合わされる。
【０２２６】
特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、Ｔｒｉｕｍｅｑ（登録商標）（ドルテグラビル＋アバカビル＋ラミブジン）、ドルテグラビル＋アバカビルサルフェート＋ラミブジン、ラルテグラビル、ラルテグラビル＋ラミブジン、Ｔｒｕｖａｄａ（登録商標）（テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン、ＴＤＦ＋ＦＴＣ）、マラビロック、エンフビルチド、Ｅｐｚｉｃｏｍ（登録商標）（Ｌｉｖｅｘａ（登録商標）、アバカビルサルフェート＋ラミブジン、ＡＢＣ＋３ＴＣ）、Ｔｒｉｚｉｖｉｒ（登録商標）（アバカビルサルフェート＋ジドブジン＋ラミブジン、ＡＢＣ＋ＡＺＴ＋３ＴＣ）、アデホビル、アデホビルジピボキシル、Ｓｔｒｉｂｉｌｄ（登録商標）（エルビテグラビル＋コビシスタット＋テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン）、リルピビリン、リルピビリン塩酸塩、Ｃｏｍｐｌｅｒａ（登録商標）（Ｅｖｉｐｌｅｒａ（登録商標）、リルピビリン＋テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン）、コビシスタット、アタザナビルサルフェート＋コビシスタット、アタザナビル＋コビシスタット、ダルナビル＋コビシスタット、Ａｔｒｉｐｌａ（登録商標）（エファビレンツ＋テノホビルジソプロキシルフマレート＋エムトリシタビン）、アタザナビル、アタザナビルサルフェート、ドルテグラビル、エルビテグラビル、Ａｌｕｖｉａ（登録商標）（Ｋａｌｅｔｒａ（登録商標）、ロピナビル＋リトナビル）、リトナビル、エムトリシタビン、アタザナビルサルフェート＋リトナビル、ダルナビル、ラミブジン、プロラスチン、ホスアンプレナビル、ホスアンプレナビルカルシウム、エファビレンツ、Ｃｏｍｂｉｖｉｒ（登録商標）（ジドブジン＋ラミブジン、ＡＺＴ＋３ＴＣ）、エトラビリン、ネルフィナビル、ネルフィナビルメシレート、インターフェロン、ジダノシン、スタブジン、インジナビル、インジナビルサルフェート、テノホビル＋ラミブジン、ジドブジン、ネビラピン、サキナビル、サキナビルメシレート、アルデスロイキン、ザルシタビン、チプラナビル、アンプレナビル、デラビルジン、デラビルジンメシレート、Ｒａｄｈａ−１０８（レセプトール）、Ｈｌｖｉｒａｌ、ラミブジン＋テノホビルジソプロキシルフマレート、エファビレンツ＋ラミブジン＋テノホビルジソプロキシルフマレート、ホスファジド、ラミブジン＋ネビラピン＋ジドブジン、アバカビル、アバカビルサルフェート、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジソプロキシルフマレート、ダルナビル＋コビシスタット、アタザナビルサルフェート＋コビシスタット、アタザナビル＋コビシスタット、テノホビルアラフェナミドおよびテノホビルアラフェナミドヘミフマレートから選択される、１つ、２つ、３つ、４つまたはそれより多い追加の治療剤と組み合わされる。一部の実施形態では、本明細書に開示される化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＡＴＲＩＰＬＡ（登録商標）（エファビレンツ、テノホビルジソプロキシルフマレートおよびエムトリシタビン）；ＣＯＭＰＬＥＲＡ（登録商標）（ＥＶＩＰＬＥＲＡ（登録商標）；リルピビリン、テノホビルジソプロキシルフマレートおよびエムトリシタビン）；ＳＴＲＩＢＩＬＤ（登録商標）（エルビテグラビル、コビシスタット、テノホビルジソプロキシルフマレートおよびエムトリシタビン）；ＴＲＵＶＡＤＡ（登録商標）（テノホビルジソプロキシルフマレートおよびエムトリシタビン；ＴＤＦ＋ＦＴＣ）；ＤＥＳＣＯＶＹ（登録商標）（テノホビルアラフェナミドおよびエムトリシタビン）；ＯＤＥＦＳＥＹ（登録商標）（テノホビルアラフェナミド、エムトリシタビンおよびリルピビリン）；ＧＥＮＶＯＹＡ（登録商標）（テノホビルアラフェナミド、エムトリシタビン、コビシスタットおよびエルビテグラビル）；アデホビル；アデホビルジピボキシル；コビシスタット；エムトリシタビン；テノホビル；テノホビルジソプロキシル；テノホビルジソプロキシルフマレート；テノホビルアラフェナミド；テノホビルアラフェナミドヘミフマレート；ＴＲＩＵＭＥＱ（登録商標）（ドルテグラビル、アバカビルおよびラミブジン）；ドルテグラビル、アバカビルサルフェートおよびラミブジン；ラルテグラビル；ラルテグラビルおよびラミブジン；マラビロク；エンフビルチド；ＡＬＵＶＩＡ（登録商標）（ＫＡＬＥＴＲＡ（登録商標）；ロピナビルおよびリトナビル）；ＣＯＭＢＩＶＩＲ（登録商標）（ジドブジンおよびラミブジン；ＡＺＴ＋３ＴＣ）；ＥＰＺＩＣＯＭ（登録商標）（ＬＩＶＥＸＡ（登録商標）；アバカビルサルフェートおよびラミブジン；ＡＢＣ＋３ＴＣ）；ＴＲＩＺＩＶＩＲ（登録商標）（アバカビルサルフェート、ジドブジンおよびラミブジン；ＡＢＣ＋ＡＺＴ＋３ＴＣ）；リルピビリン；リルピビリン塩酸塩；アタザナビルサルフェートおよびコビシスタット；アタザナビルおよびコビシスタット；ダルナビルおよびコビシスタット；アタザナビル；アタザナビルサルフェート；ドルテグラビル；エルビテグラビル；リトナビル；アタザナビルサルフェートおよびリトナビル；ダルナビル；ラミブジン；プロラスチン；ホスアンプレナビル；ホスアンプレナビルカルシウム；エファビレンツ；エトラビリン；ネルフィナビル；ネルフィナビルメシレート；インターフェロン；ジダノシン；スタブジン；インジナビル；インジナビルサルフェート；テノホビルおよびラミブジン；ジドブジン；ネビラピン；サキナビル；サキナビルメシレート；アルデスロイキン；ザルシタビン；チプラナビル；アンプレナビル；デラビルジン；デラビルジンメシレート；Ｒａｄｈａ−１０８（レセプトール）；ラミブジンおよびテノホビルジソプロキシルフマレート；エファビレンツ、ラミブジンおよびテノホビルジソプロキシルフマレート；ホスファジド；ラミブジン、ネビラピンおよびジドブジン；アバカビル；ならびにアバカビルサルフェートから選択される１つ、２つ、３つ、４つまたはそれよりも多くのさらなる治療剤と組み合わされる。上に列挙したさらなる治療剤は、上に列挙したクラスのうち１つよりも多くに含まれ得ることが、当業者によって理解される。特定のクラスは、それらのクラス中に列挙された化合物の機能性を限定することが意図されない。
【０２２７】
特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、アバカビルサルフェート、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレート、テノホビルアラフェナミドまたはテノホビルアラフェナミドヘミフマレートと組み合わされる。
【０２２８】
特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルアラフェナミドまたはテノホビルアラフェナミドヘミフマレートと組み合わされる。
【０２２９】
特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、アバカビルサルフェート、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルアラフェナミドおよびテノホビルアラフェナミドヘミフマレートからなる群より選択される第１の追加の治療剤、ならびにエムトリシタビンおよびラミブジンからなる群より選択される第２の追加の治療剤と組み合わされる。
【０２３０】
特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルアラフェナミドおよびテノホビルアラフェナミドヘミフマレートからなる群より選択される第１の追加の治療剤、ならびに第２の追加の治療剤と組み合わされ、ここで、第２の追加の治療剤は、エムトリシタビンである。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、５〜３０ｍｇのテノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレートまたはテノホビルジソプロキシルおよび２００ｍｇのエムトリシタビンと組み合わされる。ある特定の実施形態では、ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、５〜１０；５〜１５；５〜２０；５〜２５；２５〜３０；２０〜３０；１５〜３０；または１０〜３０ｍｇのテノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレートまたはテノホビルジソプロキシルおよび２００ｍｇのエムトリシタビンと組み合わされる。ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、１０ｍｇのテノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレートまたはテノホビルジソプロキシルおよび２００ｍｇのエムトリシタビンと組み合わされる。ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、２５ｍｇのテノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレートまたはテノホビルジソプロキシルおよび２００ｍｇのエムトリシタビンと組み合わされる。本明細書において開示されている通りの化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物）を、本明細書において提供される作用物質と、投薬量の各組み合わせが具体的にかつ個々に列挙されている場合と同じ化合物の任意の投薬量で（例えば、５０ｍｇから５００ｍｇまでの化合物）、組み合わせてよい。本明細書において開示されている通りの化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物）を、本明細書において提供される作用物質と、投薬量の各組み合わせが具体的にかつ個々に列挙されている場合と同じ化合物の任意の投薬量で（例えば、１ｍｇから５００ｍｇまでの化合物）、組み合わせてよい。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、２００〜４００ｍｇのテノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレートまたはテノホビルジソプロキシルおよび２００ｍｇのエムトリシタビンと組み合わされる。ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、２００〜２５０、２００〜３００、２００〜３５０、２５０〜３５０、２５０〜４００、３５０〜４００、３００〜４００または２５０〜４００ｍｇのテノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレートまたはテノホビルジソプロキシルおよび２００ｍｇのエムトリシタビンと組み合わされる。ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物またはその薬学的に許容される塩は、３００ｍｇのテノホビルジソプロキシルフマレート、テノホビルジソプロキシルヘミフマレートまたはテノホビルジソプロキシルおよび２００ｍｇのエムトリシタビンと組み合わされる。本明細書において開示されている通りの抗体またはその断片を、本明細書において提供される作用物質と、投薬量の各組み合わせが具体的にかつ個々に列挙されている場合と同じ抗体またはその断片の任意の投薬量で（例えば、５０ｍｇから５００ｍｇまでの抗体またはその断片）、組み合わせてよい。本明細書において開示されている通りの化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物）を、本明細書において提供される作用物質と、投薬量の各組み合わせが具体的にかつ個々に列挙されている場合と同じ化合物の任意の投薬量で（例えば、１ｍｇから５００ｍｇまでの化合物）、組み合わせてよい。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片が、上述した通りの１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わされる場合、組成物の成分は、同時または逐次レジメンとして投与される。逐次投与される場合、組み合わせ物は、２回またはそれより多い投与で投与されてよい。
【０２３４】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片は、１つまたは複数の追加の治療剤と、患者への同時投与のための単位剤形で、例えば、経口投与用の固体剤形として、組み合わされる。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片は、１つまたは複数の追加の治療剤とともに投与される。本明細書において開示されている抗体もしくはその断片の、１つまたは複数の追加の治療剤との共投与は、概して、治療有効量の本明細書において開示されている抗体もしくはその断片および１つまたは複数の追加の治療剤が両方とも患者の体内に存在するような、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片および１つまたは複数の追加の治療剤の同時または逐次投与を指す。
【０２３６】
共投与は、単位投薬量の１つまたは複数の追加の治療剤の投与の前または後の、単位投薬量の本明細書において開示されている抗体もしくはその断片の投与、例えば、１つまたは複数の追加の治療剤の投与の数秒、数分または数時間以内の、本明細書において開示されている抗体もしくはその断片の投与を含む。例えば、一部の実施形態では、単位用量の本明細書において開示されている抗体もしくはその断片が最初に投与され、続いて、数秒または数分以内に、単位用量の１つまたは複数の追加の治療剤が投与される。代替として、他の実施形態では、単位用量の１つまたは複数の追加の治療剤が最初に投与され、続いて、数秒または数分以内に、単位用量の本明細書において開示されている抗体もしくはその断片が投与される。一部の実施形態では、単位用量の本明細書において開示されている抗体もしくはその断片が最初に投与され、続いて、数時間（例えば、１〜１２時間）後に、単位用量の１つまたは複数の追加の治療剤が投与される。他の実施形態では、単位用量の１つまたは複数の追加の治療剤が最初に投与され、続いて、数時間（例えば、１〜１２時間）後に、単位用量の本明細書において開示されている抗体もしくはその断片が投与される。
【０２３７】
組み合わされた投与は、別々の医薬組成物もしくは単一の医薬組成物を使用する共投与、またはいずれかの順序での連続投与であり得、このとき、任意選択で、両方（または全て）の治療剤がそれらの生物学的活性を同時に発揮する期間が存在する。かかる組み合わされた治療は、相乗的治療効果を生じ得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体の投与を、感染性因子と関連する別の抗原に対する別の抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせることが望ましい。
【０２３８】
被験体への抗体またはその抗原結合性断片タンパク質の投与とは別に、本発明は、遺伝子治療によって抗体を提供する方法もまた提供する。抗体をコードする核酸のかかる投与は、表現「有効量の抗体またはその抗原結合性断片を投与する」によって包含される。例えば、細胞内抗体を生成するための遺伝子治療の使用に関する、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ９６／０７３２１を参照のこと。特定の実施形態では、核酸は、抗体またはその抗原結合性断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｓｃＦｖをコードする。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡを含む。ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ベクター、例えばウイルスベクター中に存在する。
【実施例】
【０２３９】
本出願は、本出願の例示的な実施形態として提供される、以下の非限定例を参照することによってより良好に理解され得る。以下の実施例は、本発明の実施形態をより完全に例示するために提示されるものであるが、いかなる意味でも、本出願の広い範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本出願のある特定の実施形態がここに示され、記載されてきたが、そのような実施形態は単なる一例として提供されるものであることが明らかである。当業者であれば、ここで本発明から逸脱することなくいくつかの変更、変化、および置換を思いつくであろう。例えば、一部のアッセイは異なる条件で行われ、一般的には、報告される値の範囲内の結果をもたらし得る。本明細書に記載される実施形態に対する種々の代替物を、記載される方法を実施する際に使用することができることが理解されるべきである。
【０２４０】
（実施例１：抗体を合成する方法）
本明細書に記載の全ての抗体について、それぞれのシグナルペプチドおよびＫｏｚａｋ配列を含む、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）の可変領域のコード配列を、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓでの発現のためにコドン最適化し、ＧｅｎｅＡｒｔ（商標）によってｄｅ  ｎｏｖｏ合成した。マウス重鎖のシグナルペプチド（ｍｅｗｓｒｖｆｉｆｌ  ｌｓｖｔａｇｖｈｓｑ  ｖｑｌｑｑｓｇａｅｌ  ｖｒｐｇｔｓｖｋｖｓ  ｃｋａｓｇｙａｆｔｎ  ｙｌｉｅｗｖｋｑｒｐ  ｇｑｇｌｅｗｉｇｖｉ  ｎｐｇｓｇｇｔｎｙｎ  ｅｋｆｋｇｋａｔｌｔ  ａｄｋｓｓｓｔａｙｍ  ｑｌｓｓｌｔｓｅｄｓ  ａｖｙｆｃａｒｓｙｙ  ｇｙｄｗｆａｙｗｇｑ  ｇｔｌｖｔｖｓａ（配列番号６１）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０４５５０２．１）およびマウス軽鎖のシグナルペプチド（
【化１２】
2020120689.tif 000022
；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＤＫ９７５０３．１）を、それぞれ、重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）のためのそれぞれのシグナルペプチドとして使用した。ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ断片を、Ｉｎｆｕｓｉｏｎ（登録商標）クローニングにより、そのそれぞれの定常領域と共に哺乳動物発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１中にクローニングした。
【０２４１】
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞中での抗体の一過的発現のために、製造業者のプロトコールに従った。簡単に述べると、１リットルのＥｘｐｉ２９３培地中の２．５×１０９個の細胞に、２．７ｍｌのＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅトランスフェクション試薬を使用して、０．６ミリグラムの軽鎖および０．４ミリグラムの重鎖プラスミドをトランスフェクトした。培養物を、トランスフェクション後５〜６日間、加湿インキュベータ中、８％ＣＯ２と共に３７℃でインキュベートした。生存度が約６０％に達した時、精製のために無細胞上清を収穫した。
【０２４２】
発現されたＩｇＧの精製を、プロテインＡ親和性、次いで、透析によって実施した。ＰｒｅＳａｎｉｔｉｚｅｄ  ＧＥ  ｍａｂｓｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ（登録商標）樹脂を、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中で平衡化させ、使用した樹脂の容量は、２０ｍｇ／ｍｌの能力の予想される発現と一致していた。０．２μｍの濾過された収穫馴化培地を、０．７倍のカラム容量／分で樹脂を通過させた。ローディングが完了した時、１０倍のカラム容量のＰＢＳ  ｐＨ７．４の洗浄ステップを実施した。この後、ｐＨ３．６での溶出ステップを行い、次いで、ｐＨ５．５にすぐに中和した。このプールを、ＰＢＳ  ｐＨ７．４または２０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％スクロースおよび０．０２％Ｔｗｅｅｎ  ２０  ｐＨ５．５中で透析し、０．２μｍで濾過し、４℃で保存した。
【０２４３】
本明細書に記載の抗体を生成するために、国際出願公開番号ＷＯ２０１２／０３０９０４に記載のものなどの、他の同様の方法を使用することもできる。
【０２４４】
（実施例２：中和抗ＨＩＶ−１抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの特徴付け）
抗体を、その融点、低いｐＨ保持手順の間の凝集に対する耐性、標的結合およびＨＩＶ中和活性および幅、ＦｃＲｎおよびＦｃｇＲへのその直接的結合、エフェクター細胞活性化および死滅活性、ならびに免疫原性に関する潜在能力を決定するための様々なアッセイを使用して特徴付けた。
【０２４５】
融点
ＰＧＴ−１２１  ＬＯ６および本発明の抗体の熱安定性を、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）または示差走査熱量測定（ＤＳＣ）（Ｎｉｅｓｅｎ  ＦＨら、２００７年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ２巻：２２１２〜２２２１頁、Ｇａｒｂｅｒ  ＥおよびＤｅｍａｒｅｓｔ  ＳＪ、２００７年、Ｂｉｏｃｈｅｍ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３５５巻：７５１〜７５７頁）を使用して決定した。両アッセイにおいて、Ｆａｂドメインのアンフォールディング転移の変化をモニタリングして、ＰＧＴ１２１  ＷＴに導入された種々の点変異の影響を決定した。
【０２４６】
ＤＳＦは、環境的に感受性の色素ＳＹＰＲＯ  Ｏｒａｎｇｅの蛍光強度の変化に基づいて、タンパク質の熱アンフォールディング転移の温度（Ｔｍ）を測定する。ＤＳＦを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４または２０  酢酸ナトリウム、９％スクロース、ｐＨ５．５を含有する製剤化緩衝液中、ＶｉｉＡ７  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ装置（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を使用して９６ウェルＭｉｃｒｏＡｍｐ  Ｆａｓｔ反応プレート中で実行した。１ｍｇ／ｍＬ濃度の抗体を、ウェル当たり２５μＬ容量中、１：１０００希釈されたＳｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ蛍光プローブ（全ての濃度は混合後の最終濃度である）と合わせた。１℃／分の速度で、温度を２０℃から９５℃に増加させることによって、色素添加の５〜１０分以内に熱変性を実行した。蛍光強度データを０．０７℃間隔で収集し（４９０ｎｍでの励起および６００〜６３０ｎｍのＲＯＸフィルターを使用した発光）、一次導関数アプローチを使用するＰｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｈｉｆｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて分析して、Ｔｍを算出した。この方法では、Ｔｍは、ＤＳＦ融解曲線の一次導関数の最大値に対応する温度である。複数の融解転移を有する抗体については、Ｔｍ１およびＴｍ２は、それぞれ、第１および第２の個別の融解転移についての融点を指す。ＤＳＦ分析の結果を、図２および図３に示す。
【０２４７】
ＭｉｃｒｏＣａｌ  ＶＰ−Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＤＳＣ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して、ＤＳＣ実験を実施した。試料を、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％スクロースｐＨ５．５製剤化緩衝液に緩衝液交換し、１ｍｇ／ｍＬの最終濃度に希釈した。各測定について、製剤化緩衝液を参照溶液として使用した。１分当たり１℃の走査速度で、タンパク質溶液の温度を２５℃から９５℃まで増加させることによって、試料の熱変性を達成した。データを、参照緩衝液の減算および線形ベースライン減算の後に分析した。Ｏｒｉｇｉｎ  ７ソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ  ｖ７．０５５２）を使用して、３つの転移を有する非２状態モデルに各サーモグラムを適合させた後、各試料について３つの転移融点が得られた。図４は、選択されたＰＧＴ１２１バリアントに関するＤＳＣによって決定されたＦａｂドメインのＴｍを示す。
【０２４８】
表４は、本発明のＰＧＴ１２１抗体の熱安定性を増加させる例示的変異をまとめる。
【表４】
2020120689.tif 000023
【０２４９】
ＰＧＴ１２１およびバリアントの翻訳後改変
ＰＧＴ１２１  ＬＯ６は、重鎖可変領域中に３つのコンセンサスグリコシル化部位を有する。第３の部位（Ｎ１０５結合、Ｋａｂａｔ番号付け）でのグリコシル化の存在は以前に確認されているが（Ｍｏｕｑｕｅｔら、２０１２年、ＰＮＡＳ  １０９巻：Ｅ３２６８〜Ｅ３２７７頁）、他の部位のグリコシル化状態は未知である。ＦｃまたはＦａｂドメイン上のものを含むグリコシル化は不均一であり得、ＰＫ、薬物安定性および免疫原性に対する影響を有する（Ｊｏｎｅｓら、２００７年、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １７巻：５２９〜５４０頁、Ａｌｅｓｓａｎｄｒｉら、２０１２年、ｍＡｂｓ  ４巻：５０９〜５２０頁、Ｇｏｅｔｚｅら、２０１１年、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２１巻：９４９〜９５９頁、Ｃｈｕｎｇら、２００８年、ＮＥＪＭ  ３５８巻：１１０９〜１１１７頁）。ＰＧＴ１２１および選択されたバリアント中のＦａｂグリカン含量を、記載されたもの（Ｚｈａｎｇ  Ｚ．  ２００９年、Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．  ８１巻：８３５４〜８３６４頁、Ｓｈａｈら、２０１４年、Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．  ２５巻：９９９〜１０１１頁）と類似する質量分析ペプチドマッピングアッセイにおいて分析した。このアッセイの結果により、表５および表６に示されるように、Ｎ６８（５．５％がグリコシル化される）およびＮ１０５（９２．４％がグリコシル化される）の両方において検出可能かつ不均一なグリコシル化が示された。ＰＧＴ１２１  ＷＴに関するＮ６８グリコシル化のペプチドマッピング分析により、Ｎ６８が約３．７％グリコシル化され、表６に示されるように、複数のグリコフォームが存在する（命名はＩＭＧＴ慣例と一致する、−Ｎ＝ＧｌｃＮＡｃの喪失；ｂＮ＝二分岐ＧｌｃＮＡｃ）ことが示された。ＰＧＴ１２１  ＷＴに関するＮ１０５グリコシル化のペプチドマッピング分析により、Ｎ１０５が１００％グリコシル化され、示されるように複数のグリコフォームが存在する（命名はＩＭＧＴ慣例と一致する、−Ｎ＝ＧｌｃＮＡｃの喪失；ｂＮ＝二分岐ＧｌｃＮＡｃ）ことが示された。弱い薬物動態特性に関与していたＭａｎ５含有グリカンは影付きで示される（Ｇｏｅｔｚｅら、２０１１年、Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２１巻：９４９〜９５９頁）。
【表５】
2020120689.tif 000024
【表６】
2020120689.tif 000025
【０２５０】
ｇｐ１２０抗原およびＦｃ受容体への結合
抗原（ＨＩＶ  ｇｐ１２０）とＦｃ結合受容体（ＦｃγＲ、ＦｃＲｎ）の両方に対する抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの結合特性を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して決定した。ｇｐ１２０／ｇｐ１４０  ＥＬＩＳＡアッセイについては、２５μＬの組換えｇｐ１２０タンパク質を、穏やかに揺動しながら、４℃で一晩、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中１μｇ／ｍＬで３８４ウェルＮＵＮＣ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレート上に被覆し、プレートを、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中の５％ＢＳＡで１時間ブロックし、プレートをＰＢＳ  ｐＨ７．４＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳＴ）で４回洗浄した。３００ｎＭの最大抗体濃度を含む、ＰＢＳ  ｐＨ７．４＋１％ＢＳＡ中の抗体の３倍希釈系列２５μＬを、室温で６００ＲＰＭにて振盪しながら１時間、ウェル中でインキュベートし、プレートをＰＢＳＴで４回洗浄した。ＰＢＳ中で１：１０，０００に希釈された２５μＬのＨＲＰコンジュゲート化Ｔｈｅｒｍｏヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ポリクローナルを、室温で６００ＲＰＭにて振盪しながら１時間、ウェルと共にインキュベートし、プレートをＰＢＳＴで４回洗浄した。２５μＬのＴＭＢ基質をウェルに添加し、プレートを室温で１２０秒間インキュベートし、２５μＬの１Ｍ  ＨＣｌをウェルに添加し、４５０ｎＭでの吸光度をＳｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー上で読み取り、得られた点を、非線形回帰を使用して適合させて、ＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０値を決定した。
【０２５１】
ＢａＬ、ＴＲＯ、ＳＨＩＶ、ＳＦ１６２  Ｐ３、ｐＲＨＰＡ４２５９、ｑｈ０６９２、６５３５、ｐＣＡＡＮ５３４２、ｐＷＩＴＯ４１６０、およびＡＣ１０．０を含む、複数のＥｎｖ配列を使用して、ｇｐ１２０および／またはｇｐ１４０形式のいずれかにおける結合を評価した。これらのアッセイに由来する見かけのＥＣ５０値は、ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴ、ならびに本明細書に記載の選択されたＰＧＴ１２１バリアントについて下に示され、それらの相対的結合親和性を示す（表７および表８を参照されたい）。図５および図６は、他の理由のため、例えば、低いｐＨ安定性を改善するため、免疫原性を改善するため、グリコシル化部位を除去するためなどに作製された単一部位のＰＧＴ１２１バリアントの一部が、標的結合親和性の低減をもたらしたが、他のものはそれを改善したことを示す。図７は、選択されたＰＧＴ１２１バリアントのｇｐ１２０を示す。これらの結果は、ある特定の変異のみが、ｇｐ１２０結合親和性に負に影響しないことを示す。
【表７−１】
2020120689.tif 000026
【表７−２】
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【表８−１】
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【表８−２】
2020120689.tif 000029
【０２５２】
ＦｃγＲ  ＥＬＩＳＡアッセイについては、使用された抗原は、細菌ＢｉｒＡタンパク質によってコンジュゲートされた単一ビオチンと共に、Ｃ末端Ａｖｉｔａｇ（商標）を含有するヒトＦｃγＲの細胞外ドメインであった。このアッセイを行うために、ＰＢＳ  ｐＨ７．４＋１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）中に希釈された０．５μｇ／ｍＬのＦｃγＲ  ２５μＬを、６００ＲＰＭで振盪しながら、室温で１時間、３８４ウェルＮｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ（商標）被覆ＥＬＩＳＡプレート（Ｐｉｅｒｃｅ（商標））のウェル中でインキュベートし、プレートをＰＢＳＴで５回洗浄した。５０００ｎＭの最大抗体濃度を含む、ＰＢＳ  ｐＨ７．４＋１％ＢＳＡ中の抗体の３．５倍希釈系列２５μＬを、室温で６００ＲＰＭにて振盪しながら１時間、ウェル中でインキュベートし、プレートをＰＢＳ  ｐＨ７．４＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳＴ）で５回洗浄した。ＰＢＳ  ｐＨ７．４＋１％ＢＳＡ中で１：５，０００に希釈された２５μＬの西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート化ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＦ（ａｂ’）２ポリクローナル（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、室温で６００ＲＰＭにて振盪しながら３０分間、ウェルと共にインキュベートし、プレートをＰＢＳＴで５回洗浄した。２５μＬのＴＭＢ基質をウェルに添加し、プレートを室温で１２０秒間インキュベートし、２５μＬの１Ｍ  ＨＣｌをウェルに添加し、４５０ｎＭでの吸光度をＳｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー上で読み取り、得られた点を、非線形回帰を使用して適合させて、当該分野で公知の方法を使用してＥＬＩＳＡ  ＥＣ５０値を決定した。ＰＧＴ１２１  ＷＴおよびバリアントのためのこれらのアッセイにおいて決定されたＥＣ５０値を、図８Ａに示す。同様の実験を行って、他の組換えヒトＦｃγＲを使用して、ＰＧＴ１２１  ＷＴおよび種々の点変異を含むバリアントのＥＣ５０を決定し、その結果を、図８Ｂ〜８Ｈに示す。
【０２５３】
トランスフェクトされたヒト細胞株における組換えＨＩＶ  Ｅｎｖへの結合
トランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞株の表面上に発現される組換えＨＩＶ  Ｅｎｖへの抗体の結合を、フローサイトメトリーを使用して評価した。ＢａＬ、ＵＳ９２ＨＴ５９３およびＵ９２ＵＳ６５７を含む３つのＥｎｖ配列を、結合試験のために使用した。結合アッセイのために、組換えＨＩＶ  Ｅｎｖ構築物を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞中にトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後に細胞を収穫し、４℃で１時間、系列希釈物中の抗体と共にインキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、二次ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ａｌｅｘａ４８８コンジュゲート化抗体と共にインキュベートした。次いで、結合を検出し、フローサイトメトリーによって定量した。測定されたＭＦＩ値を非線形回帰用量応答曲線に対して適合させて、ＥＣ５０値を決定した。ＰＧＴ１２１  ＬＯ６  ＷＴおよび本明細書に記載の代表的なＰＧＴ１２１バリアントに関するこれらのアッセイに由来する見かけのＥＣ５０値を、図９に示すが、図１０は、相対的結合親和性を示す。
【０２５４】
低ｐＨにより誘導される凝集
抗体産生中の工業的ウイルス不活化手順によって誘導されるものなどの、低ｐＨにより誘導されるタンパク質凝集についてスクリーニングするために、２つの異なる手順を使用して、抗体をｐＨ３．５で１時間保持した。第１の手順では、タンパク質を最初に、１０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ５を含む、または含まない、２５ｍＭ  ＮａＯＡｃ中で透析し、１６ｍｇ／ｍＬに濃縮した後、１０ｍＭ  ＮａＣｌを含む、または含まない０．５Ｍ酢酸を用いて、試料をｐＨ３．５に滴定し、１０ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度を目指した。次いで、試料を室温で１時間インキュベートし、２Ｍ  Ｔｒｉｓを用いてｐＨ５に中和し、室温でさらに２時間保持した後、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析した。ＮａＣｌの存在下または非存在下での選択されたＰＧＴ１２１変異体に対して行われた第１の手順の結果を、図１１に示す。第２の手順では、２０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．５、９％スクロース中、９ｍｇ／ｍＬの抗体溶液の２組の試料を、１０％ｖ／ｖの２０ｍＭ  ＮａＯＡｃ、９％スクロース、０．４４Ｍ  ＮａＣｌの添加によって、０または４０ｍＭ  ＮａＣｌに滴定する。次に、標的ｐＨが３．５になるまで、４０ｍＭ  ＮａＣｌの存在下または非存在下で０．５Ｍ酢酸を添加し、試料を室温で１時間インキュベートし、２０％ｖ／ｖの２Ｍ  Ｔｒｉｓ塩基で中和し、室温でさらに２時間保持した後、ＳＥＣによって分析した。ＳＥＣ上の単量体ピークの百分率を、低ｐＨ保持手順の前後で分析し、単量体含量の変化を分析して、凝集が増加した／単量体含量が低減した抗体バリアントを同定した。第２の手順の結果を、図１２に示す。
【０２５５】
抗体依存性エフェクター細胞活性化
ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーターにカップリングしたヒトＦｃγＲＩＩＩＡを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を活性化する抗体の能力を、Ｅｎｖを発現するＨＥＫ２９３細胞を使用して決定した。９２ＨＴ５９３、９２ＵＳ６５７およびＢａＬを含む、３つのＥｎｖ配列を、レポーターアッセイのために使用した。トランスフェクトされた細胞を、トランスフェクションの４８時間後に収穫し、３７℃で６時間、抗体および記載されたエフェクター細胞と共にインキュベートした。エフェクター細胞の活性化を、ルシフェラーゼシグナルとして表し、測定した。収集されたデータを、非線形回帰用量応答曲線に対して適合し、曲線下面積（ＡＵＣ）によって活性を定量した。結果を、図１３〜１６に示す。本発明のある特定の抗体の活性は、曲線下面積（ＡＵＣ）によって定量した場合、ＰＧＴ−１２１抗体のものよりも１０倍増強された。
【０２５６】
ＮＫ媒介性抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞による抗体依存性死滅を、感染した初代ＣＤ４＋Ｔ細胞および健康なドナーから得られた精製自己エフェクターＮＫ細胞を用いる初代細胞に基づくアッセイ系を使用して評価した。ＮＫ細胞は、活性化ＦｃγＲＩＩＩＡを発現し、グランザイムおよびパーフォリン媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）により感染細胞の抗体依存性死滅を媒介する。細胞表面抗原発現が非常に低いと予測される、潜在性ＣＤ４＋Ｔ細胞レザバを模倣するために、休止初代ＣＤ４＋Ｔ細胞をスピンフェクションにより感染させることによって、標的細胞を生成した。さらに、生理的条件を再現するために、ＦｃγＲ結合についてエフェクターＡｂと競合する１０ｍｇ／ｍｌの非特異的ヒト血清ＩｇＧの存在下で、ＡＤＣＣを評価した。ＮＫ細胞による抗体依存性死滅を、フローサイトメトリーを使用してＣＤ４ｌｏｗＴ細胞を発現するｐ２４の％の低減によって測定した。
【０２５７】
ＰＧＴ−１２１は、競合する非特異的血清ＩｇＧの非存在下で感染したＣＤ４＋Ｔ細胞の死滅を媒介したが、その死滅の全体的な規模は、競合する非特異的血清ＩｇＧの存在によって実質的に低減した。対照的に、本発明の抗体は、競合する非特異的ＩｇＧの存在下でＵＳ６５７に感染した標的細胞の死滅を媒介した。ある特定の抗体のＡＤＣＣ活性は、ＡＤＣＣ用量応答についての算出された曲線下面積（ＡＵＣ）によって定量された場合、ＰＧＴ−１２１のものよりも１０倍を超えて改善された。ＢａＬに感染した標的細胞を使用した場合、同様のレベルの増強が観察された。競合する非特異的ヒト血清ＩｇＧの存在下では、本発明の抗体は、エフェクター細胞上のＦｃγＲＩＩＩへのその増強された結合のため、ＰＧＴ１２１よりも活性が高かった。これらの結果を、図１７および表９〜１１に示す。表９〜１１では、アッセイを、１０ｍｇ／ｍＬの非特異的ヒト血清ＩｇＧの存在下で実施した。１μｇ／ｍＬのエフェクターｍＡｂ＝６．７ｎＭ。追加の結果を、図２６、２７および２８ならびに表２０〜２１に示す。
【表９】
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【表１０】
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【表１１−１】
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【表１１−２】
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【０２５８】
単球およびＰＢＭＣ媒介性抗体依存性細胞死滅
抗体依存性細胞死滅を媒介する抗体の能力を、標的細胞としてのＨＩＶ−１に感染した初代休止ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびエフェクター細胞としての初代自己ＰＢＭＣまたは単離された単球を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで調査した。ＰＢＭＣ、特に、ＣＤ１４＋単球およびＣＤ５６＋ＮＫ細胞は、活性化ＦｃγＲＩ、ＩＩＡおよびＩＩＩＡを発現し、貪食作用による感染細胞の抗体依存性死滅（抗体依存性細胞貪食作用；ＡＤＣＰ）ならびにグランザイムおよびパーフォリン媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することができる。アッセイにおいて使用された標的ＣＤ４＋Ｔ細胞、初代ＣＤ１４＋単球エフェクター細胞およびＰＢＭＣは、健康なドナーから得られたものであった。
【０２５９】
本発明の抗体は、２つの独立したウイルス単離物にｉｎ  ｖｉｔｒｏで感染させた２つのドナー中のＰＧＴ−１２１と比較して、ＨＩＶ−１に感染したＣＤ４  Ｔ細胞の単球媒介性死滅の有意な改善を示し、これは、ＰＧＴ−１２１よりも有意に有効であった。それらはまた、ウイルス単離物ＵＳ６５７を使用して検査された４つのドナーにおけるＰＢＭＣエフェクターアッセイにおけるＰＧＴ−１２１と比較して、ＨＩＶ−１に感染した細胞の効力および最大死滅の有意な改善も示した。２つのドナーについて、それらは、ＰＧＴ−１２１が不活性である場合、死滅を示した。他の２つのドナーにおいては、それらはＰＧＴ−１２１よりも高いＥｍａｘを示した。観察された効力の改善は、ＰＧＴ−１２１が活性であったドナーについての約２〜２５倍から、ＰＧＴ−１２１が不活性であったドナーについての２０００を超える範囲であった。データを、図１８ならびに表１２、２４および２５に示す。
【表１２】
2020120689.tif 000034
【０２６０】
ウイルス中和活性
ＰＧＴ１２１は、ＨＩＶサブタイプＢ単離物の広範な適用範囲（ｃｏｖｅｒａｇｅ）を有する非常に強力な中和抗体である（ＩＣ５０  ０．０３μｇ／ｍｌ、８０％の幅）。本明細書に記載のＥｎｖに基づく結合試験により、ＰＧＴ−１２１と本発明の抗体の同等の活性が示された。ＰＧＴ１２１およびそのバリアントの中和の効力（ＩＣ５０またはＩＣ９５として測定される）および幅（試験したパネルから中和された単離物の％）を、２つの異なる公開されたアッセイ形式：ｉ）シュードタイプ化された、ならびに複製能のあるＨＩＶ単離物に対する抗体のスクリーニングに適合する、ＣＥＭ−ＮＫｒ−ＣＣＲ５−Ｌｕｃレポーター細胞株に基づくアッセイ（Ｌｉら、２００５年、Ｊ  Ｖｉｒ  ７９巻（１６号）：１０１０８〜１０１２５頁）；およびｉｉ）目的のＨＩＶ  Ｅｎｖバリアントでシュードタイプ化されたルシフェラーゼレポーターウイルスを使用するＭｏｎｏｇｒａｍ  ＨＩＶ  ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅ中和アッセイ（Ｍｏｎｏｇｒａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）（Ｒｉｃｈｍａｎら、２００３年、ＰＮＡＳ  １００巻（７号）：４１４４〜４１４９頁）を使用して検査した。レポーター細胞株に基づくＣＥＭ−ＮＫｒ−ＣＣＲ５−ＬｕｃＲ中和アッセイ、マルチサイクルウイルス複製アッセイ（Ｓｐｅｎｌｅｈａｕｅｒら、２００１年、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、ｄｏｉ：１０．１００６／ｖｉｒｏ．２０００．０７８０）では、患者血漿試料（ＮＩＨ  ＡＩＤＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ）から増幅された、実験室に適合されたＨＩＶ−１  ＢａＬ株ならびにサブタイプＢ単離物９３ＨＴ５９３、９２ＵＳ６５７、９２ＵＳ７１２および９２ＵＳ７２７を含む、５つの複製能のある臨床単離物のパネルに対して、抗体をスクリーニングした。
【０２６１】
本発明の抗体の中和効力は、試験した５つのウイルスについてＰＧＴ−１２１のものと同等であることが観察されたが、これは、これらの抗体中に存在する改変が、ＰＧＴ−１２１と比較して、抗原認識および結合の決定因子に対する最小限の影響を有していたことを示唆している（以下の表１３は、ＣＥＭ−ＮＫｒ−ＣＣＲ５−Ｌｕｃ細胞に関するものである）。他のバリアント（例えば、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１）は、ＰＧＴ１２１と比較して、この限定されたウイルスに対する中和効力において２〜３倍の増加を示した。
【表１３】
2020120689.tif 000035
【０２６２】
Ｍｏｎｏｇｒａｍ中和アッセイでは、Ｅｎｖ（ｇｐ１６０）コード領域を、ＨＩＶ＋ＡＲＴナイーブウイルス血症患者から単離された血漿ウイルスＲＮＡから増幅し、発現ベクター中にクローニングして、患者血漿試料中に存在するウイルス擬似種分布を維持する。次いで、発現ベクターを使用して、患者由来Ｅｎｖタンパク質を発現するＨＩＶ−１偽ウイルス群を生成する。クレードＢの臨床単離物の２つのパネルを、Ｍｏｎｏｇｒａｍ中和アッセイのために生成した：パネル１（Ｍｏｎｏｇｒａｍ臨床単離物パネル）は、Ｍｏｎｏｇｒａｍライブラリーコレクションに由来する６３の単離物を含み、３３種またはそれよりも多くのＣＣＲ５指向性ウイルス、１５種またはそれよりも多くのＣＸＣＲ４指向性（Ｘ４）および１５種またはそれよりも多くの二重混合（ＤＭ）指向性のウイルスを含んでおり；ならびにパネル２（Ｇｉｌｅａｄ臨床単離物パネル）は、臨床試験に登録されたＡＲＴナイーブＨＩＶ患者に由来するプレＡＲＴベースライン血漿試料から単離された１４２のサブタイプＢのウイルスを含み、１１３のＣＣＲ５指向性（Ｒ５）ウイルス、２８の二重または混合指向性（ＤＭ）のウイルスおよび１つのＣＸＣＲ４指向性（Ｘ４）ウイルスを含んでいた。ＨＩＶ−１  Ｅｎｖが、クレード間、ならびにクレード内で、患者単離物間で有意な多様性を示すことを考慮すると、ＰＧＴ１２１およびバリアントの中和活性も、Ｍｏｎｏｇｒａｍのライブラリーコレクションに由来するウイルスのパネルを使用して、非Ｂクレードを表すウイルスに対してプロファイリングした。Ｍｏｎｏｇｒａｍ  ＨＩＶ  ＰｈｅｎｏＳｅｎｓｅ  Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙを使用して、患者単離物の大きいコレクションをプロファイリングすることによって、生成されたＰＧＴ１２１およびバリアントの幅と効力の両方のより精密なプロファイリングを可能にした。その結果を、図１９〜２１、２９〜３０および表２２〜２５を示す。結果は、ＰＧＴ１２１．６０などのＰＧＴ１２１のバリアントが選択されたウイルスに対する中和活性の増強を示すことを示していた。
【０２６３】
これらの実験により、Ｆｃ増強されたＰＧＴ１２１によるＸ４指向性ＨＩＶ中和の予想外の改善が示された。ＨＩＶは、Ｔ細胞への進入のために、ＣＤ４に加えて、ＣＸＣＲ４またはＣＣＲ５の２つの共受容体を使用することができる。共受容体の結合は、本明細書に記載の広範に中和する抗体の標的であるＥｎｖによって媒介される。かくして、異なる配列を有するＨＩＶの異なる株は、ＣＸＣＲ４（Ｘ４指向性として公知である）、ＣＣＲ５（Ｒ５指向性として公知である）、またはその両方（Ｘ４／Ｒ５もしくは二重指向性として公知である）を優先的に使用する。Ｒ５とＸ４指向性の両方を示すウイルスプール（二重混合またはＤＭと呼ばれる）は、Ｒ５、Ｘ４および／または二重指向性の株の混合物を含有し得る。ＰＧＴ１２１は一般に、Ｘ４単離物に対する弱い感度（低い効力および幅）を示し、Ｒ５指向性ウイルスを優先的に中和する。Ｆｃ変異ＤＥＡＬ＋ＬＳのＰＧＴ１２１への付加（ＰＧＴ１２１．５６）は、ＤＭおよびＸ４指向性ウイルスに対するその中和活性を特異的に増強した（少なくとも１つの単離物について、メジアンＩＣ５０の２倍および最大で約２０倍の増強）。一部のＰＧＴ１２１  Ｆａｂバリアント（例えば、ＰＧＴ１２１．１３およびＰＧＴ１２１．２２）はＲ５  ＤＭおよびＸ４ウイルスに対する中和効力の低減を示したが、ＷＴ  Ｆａｂを含むＰＧＴ１２１．５６などの、ＤＥＡＬ＋ＬＳ  Ｆｃ変異を担持する操作されたＰＧＴ１２１  Ｆａｂバリアントのいくつかは、Ｒ５ウイルスと比較してＤＭおよびＸ４ウイルスを中和する際により強力であった（Ｐ＜０．０００１）（図２９Ａ〜２９Ｂ）。このことは非常に予想外である。なぜなら、ＨＩＶ中和はＦｃドメインよりもむしろＦａｂドメインによって専ら媒介されると考えられるからである。Ｒ５単離物のうち、中和の２〜３倍の増強が、試験した単離物の約４６％において観察された。ＤＥＡＬ＋ＬＳ変異は、本発明のある特定の抗体およびその断片中に存在する。ＰＧＴ１２１．５６に導入された追加の改変は、必ずしも全てではないが、選択されたバリアント（ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．６０など）の中和活性をさらに改善した。
【０２６４】
適用範囲の幅を、≦１５μｇ／ｍｌのＩＣ９５で中和されたウイルスの百分率として算出した。≦１５μｇ／ｍｌのＩＣ９５を有するウイルスにわたってメジアンＩＣ９５値を算出することによって、効力を決定した（図２０および表２４）。合計で８９のクレードＢの単離物を含む、ＨＩＶ−１単離物の両パネルに対して試験した場合、本発明の抗体は、ＰＧＴ１２１と比較して中和活性の喪失を示さなかった（データは示さない）。ある特定の抗体の効力は、ＰＧＴ１２１とほぼ同一であり、中和の幅をわずかに改善した。中和プロファイリングはまた、広い範囲のＨＩＶ−１臨床単離物に由来する多様なＥｎｖ抗原を認識し、これに結合する、ＰＧＴ−１２１と比較した抗体の能力の代理評価としても役立った。種々の抗体のプロファイリングに由来するデータにより、中和効力が低減した抗体は、ＡＤＣＣ活性の低減も示すことが示され（データは示さない）、抗体の中和活性とＡＤＣＣ活性との間の正の相関を示唆し、ＡＤＣＣ幅の評価のための代用物としての中和幅の使用を支持している。
【０２６５】
免疫原性
３つの方法を使用して免疫原性を評価し、ＰＧＴ１２１中の免疫原性モチーフを除去するための操作を導いた。ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ予測ツールを使用して、ＰＧＴ１２１抗体中の免疫原性の潜在的なリスクの部位を同定し、また、新規Ｔ細胞エピトープの導入を防止しながら、製造可能性を改善するための操作努力（例えば、グリコシル化部位の除去、低ｐＨ保持安定性の改善）を導いた。この分析に基づいて、機能的活性に影響するリスクが低いフレームワーク領域の改変を、本発明の抗体中で行って、免疫原性を低減させた。さらに、本発明のある抗体の可変ドメイン内の潜在的に免疫原性のモチーフをさらに同定するために、ｅｘ  ｖｉｖｏでのヒトＴ細胞活性化アッセイであるＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）（Ａｎｔｉｔｏｐｅ，Ｌｔｄ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を使用した。抗体に由来する重複１５アミノ酸ペプチド、およびＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン、陽性対照）に応答する、様々なＨＬＡハプロタイプを表す、５０人の健康なドナーにおいて誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞応答を、Ｈ−チミジン取込みアッセイを使用して評価して、Ｔ細胞増殖を測定した。このアッセイは、抗体操作を導くための一次抗体配列中の特異的Ｔ細胞エピトープの局在化を可能にした。それは、試験した抗体に関するＴ細胞エピトープの相対的免疫原性の順位付けも提供した。これらのアッセイにおいて同定された予測された免疫原性エピトープまたは実際の免疫原性エピトープを、表１４〜１６に示す（Ｔ細胞エピトープのｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでの予測を灰色で示し、Ｔ細胞エピトープを低減するように設計されたアミノ酸バリアントを白色で示す）。ドナー細胞を使用するデータは、ある特定の変異がこれらのアッセイにおいて免疫原性を低減するが、他のものはそうではないことを示す。
【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１４−３】
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【表１５】
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【表１６】
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【０２６６】
選択された抗体バリアントの臨床免疫原性のリスクを評価するために、ＥｐｉＳｃｒｅｅｎ（商標）時間経過Ｔ細胞アッセイ（Ａｎｔｉｔｏｐｅ，Ｌｔｄ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を使用して、インタクトな抗体により誘導されるＴ細胞活性化を測定した。全分子アッセイを、記載のように行った（ＢａｋｅｒおよびＪｏｎｅｓ  ２００７年、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｄｅｖｅｌ．  １０巻：２１９〜２２７頁）。かくして、このアッセイは、Ｔ細胞エピトープ含量だけでなく、ネイティブＩｇＧのプロセシングも考慮に入れる。ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでのアッセイおよびペプチド走査アッセイと違って、全分子のｅｘ  ｖｉｖｏ  Ｔ細胞活性化アッセイは、所与の抗体の相対的臨床リスクの評価を提供することができ、ある特定の事例では、記載のように臨床免疫原性の比率を予測するために使用することができる（ＢａｋｅｒおよびＪｏｎｅｓ  ２００７年、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｄｅｖｅｌ．  １０巻：２１９〜２２７頁）。
【０２６７】
多くの臨床段階の抗体がこのアッセイで試行され、臨床免疫原性をほとんど示さないか、全く示さない抗体は、このアッセイにおいて１０％（点線）に近いか、またはそれ未満のスコアを有するが、アレムツズマブおよびインフリキシマブなどの高い臨床免疫原性を示す抗体は、２５〜４０％の範囲のスコアを示す（ＢａｋｅｒおよびＪｏｎｅｓ  ２００７年、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  Ｄｅｖｅｌ．  １０巻：２１９〜２２７頁）。ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６１およびＰＧＴ１２１．６５は、ＰＧＴ１２１  ＷＴと比較した場合、低減したドナー応答率を示したが、これは、これらのバリアントに関する臨床免疫原性のリスクの低減を支持している（図２２）。
【０２６８】
ＦｃＲｎ結合
新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、ヒトおよび前臨床種におけるＩｇＧ分子の薬物動態を調節する際に主要な役割を果たすことが示されているＦｃ受容体である。エンドサイトーシスの後、酸性ｐＨ（＜６．５）で、ＦｃＲｎは高い親和性でＩｇＧのＦｃ部分に結合する。ＦｃＲｎに結合したＩｇＧは、リサイクルされて細胞外空間に戻り、生理的ｐＨで、ＩｇＧ結合親和性が低減され、ＩｇＧが放出されて循環中に戻る。ＦｃＲｎ経路によってサルベージされない遊離ＩｇＧは、リソソーム中で内因性アミノ酸に分解される。ｐＨ６．０／７．０でのＦｃＲｎへのＩｇＧの相対的結合親和性特徴は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＩｇＧの半減期を順位付けるために十分に確立された相関物（ｃｏｒｒｅｌａｔｅ）および薬物動態最適化のための設計特色になっている。
【０２６９】
異なるｐＨでの様々な種のＦｃＲｎへの抗体の結合を決定した。９６ウェルのＭａｘｉｓｏｒｐプレートを、１００μｌの５μｇ／ｍｌのＦｃＲｎで被覆した。プレートを４℃で一晩インキュベートした後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０洗浄緩衝液で３回洗浄した後、室温で２時間、４％スキムミルクでブロックした。プレートを室温で１時間、一次抗体の３倍系列希釈物と共にインキュベートした。次いで、プレートを３回洗浄し、４％スキムミルク中で希釈された１００μＬのＦａｂ−抗ヒトＦａｂ−ＨＲＰまたはヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ二次抗体を添加した。次いで、プレートを室温で５０分インキュベートし、３回洗浄し、１００μＬの新鮮なＴＭＢ基質を添加した。プレートを、穏やかに振盪しながらベンチ上で３分間発色（ｄｅｖｅｌｏｐ）させた。プレートを１００μＬの１Ｍ  ＨＣｌでクエンチし、軽く振盪し、ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  ｍ５プレートリーダー上、Ａ４５０で読み取った。
【０２７０】
ＰＧＴ−１２１と比較して、ＦｃＲｎと相互作用するＩｇＧのＦｃ部分中にＬＳ変異を含む本発明の抗体は、ヒトＦｃＲｎに関するｐＨ７．０／６．０の比によって表されるように、ｐＨ６．０でＦｃＲｎ結合の有意な改善を示し、７．０の中性ｐＨでは結合にあまり影響しなかった。結合の改善は、ＬＳ変異の存在に起因するものであり、ＰＧＴ−１２１と比較してヒトにおける長い半減期を提供すると予測される。データを、表１７ならびに図２３Ａおよび２３Ｂに示す。
【表１７】
2020120689.tif 000041
【０２７１】
このデータは、ＰＧＴ１２１．５６またはＰＧＴ１２１．４２を超える、ＰＧＴ１２１．６０および６１の有意な改善を示す。ＰＧＴ１２１．５６は、ＤＥＡＬ＋ＬＳ  Ｆｃを有するＷＴ  Ｆａｂである。これは、ＰＧＴ１２１．６０および６１中のＦａｂ変異がＦｃＲｎ結合を改善することを示唆する。ＰＧＴ１２１．６４およびＰＧＴ１２１．６５は、この改善を示さないが、これは、これらの２つのバリアント中のＦａｂ改変が実際にＦｃＲｎ結合を低減させ得ることを示唆している。
【０２７２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのプロファイリング
ＰＧＴ１２１および本出願に由来するいくつかの抗体をアッセイして、その基本的な薬物動態プロファイルを特徴付けて、本発明の抗体中に存在するＦａｂ／Ｆｃ改変が、ＰＧＴ１２１の固有の薬物動態挙動を増強し、それを有意に摂動させないことを確実にした。ＰＧＴ１２１および本発明のいくつかの他の抗体のｉｎ  ｖｉｖｏでの処分を、２匹のオスのナイーブなカニクイザル（ｎ＝２）において単回静脈内（ＩＶ）１．０ｍｇ／ｋｇ用量後に特徴付けた。血清試料をサルから収集し、生物分析学的方法（本明細書に記載される）を使用して分析して、非コンパートメント薬物動態分析（ＮＣＡ）により、血清濃度−時間プロファイルおよび平均血清薬物動態パラメーターを決定した。本発明の例示的抗体であるＰＧＴ１２１．４２と比較した、ＰＧＴ１２１に関する薬物動態濃度−時間プロファイルを、図２４に記載する。
【０２７３】
別の試験では、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２１  ＬＳ、ならびにＰＧＴ１２１．４２およびＰＧＴ１２１．６０の新しいロットの固有の薬物動態挙動を、３匹のオスのナイーブなカニクイザル（ｎ＝３）において単回ＩＶ  １０．０ｍｇ／ｋｇ用量後に特徴付けた。血清試料を収集し、生物分析学的方法（本明細書に記載される）を使用して分析して、非コンパートメント薬物動態分析（ＮＣＡ）により、血清濃度−時間プロファイルおよび平均血清薬物動態パラメーターを決定した。１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ用量のＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２１  ＬＳ、ＰＧＴ１２１．４２およびＰＧＴ１２１．６０に関する薬物動態濃度−時間プロファイルを、図２５に記載する。
【０２７４】
ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２１．４２、ＰＧＴ１２１．４３、ＰＧＴ１２１．６０およびＰＧＴ１２１．６１の平均血清薬物動態パラメーターを、濃度−時間プロファイルの非コンパートメント薬物動態分析から決定し、表１８に記載する。ｉｎ  ｖｉｖｏで試験した本発明の全ての抗体は、ＰＧＴ１２１と比較して、同等であるか、または改善された薬物動態（本明細書で定義される）を有していた。
【表１８】
2020120689.tif 000042
【０２７５】
ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２１  ＬＳ、ＰＧＴ１２１．４２、およびＰＧＴ１２１．６０の平均血清薬物動態パラメーターを、濃度−時間プロファイルの非コンパートメント薬物動態分析から決定し、表１９に記載する。ｉｎ  ｖｉｖｏで試験した本発明の全ての抗体は、ＰＧＴ１２１と比較して、同等であるか、または改善された薬物動態（本明細書で定義される）を有していた。追加の特徴付けの結果を、表２０〜２７に示した。表２３は、ＰＧＴ１２１．６０が、ＰＧＴ１２１と比較して、試験したウイルスに対する増大した効力を示したことを示している。表２４は、ＰＧＴ１２１．６０、ＰＧＴ１２１．６４およびＰＧＴ１２１．６５などの一部のＰＧＴ１２１バリアントが、試験した全てのウイルス単離物にわたって改善された効力を示したことを示す（図２０も参照されたい）。これは、なされた改変（おそらくＣＤＲの外側の抗原接触残基に対してなされた改変）が中和効力を改善したことを示唆する。表２５は、ＰＧＴ１２１．６０が、ＰＧＴ１２１と比較して、Ｂおよび非Ｂサブタイプであるウイルスに対するほぼ増大した中和活性を示したことを示す。
【表１９】
2020120689.tif 000043
【表２０】
2020120689.tif 000044
【表２１】
2020120689.tif 000045
【表２２】
2020120689.tif 000046
【表２３】
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【表２４−１】
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【表２４−２】
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【表２５−１】
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【表２５−２】
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【表２５−３】
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【表２６】
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【表２７】
2020120689.tif 000054
【０２７６】
本明細書で言及された、および／または出願データシートに列挙された、上記の米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２７７】
本発明を、本明細書に広く記載され、以降で特許請求されるその構造、方法、または他の本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化することができる。記載された実施形態は、あらゆる点で例示としてのみ解釈されるべきであり、限定と解釈されるべきではない。従って、本発明の範囲は、前記説明によってというよりもむしろ、添付の特許請求の範囲によって示される。特許請求の範囲の等価性の意味および範囲内にある全ての変化は、その範囲内に包含されるべきである。
【表１−１】
2020120689.tif 000055
【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
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【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
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【表１−２１】
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【表１−２２】
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【表１−２３】
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【表１−２４】
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【表１−２５】
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【表１−２６】
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【表１−２７】
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【表１−２８】
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【表１−２９】
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【表１−３０】
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【表１−３１】
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【表１−３２】
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【表１−３３】
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【表１−３４】
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【表１−３５】
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【表１−３６】
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【表１−３７】
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【表１−３８】
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【表１−３９】
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【表１−４０】
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【表１−４１】
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【表１−４２】
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【表１−４３】
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【表１−４４】
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【表１−４５】
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【表１−４６】
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【表１−４７】
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【表１−４８】
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【表１−４９】
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【表１−５０】
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【表１−５１】
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【表１−５２】
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【表１−５３】
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【表１−５４】
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【表１−５５】
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【表１−５６】
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【表１−５７】
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【表１−５８】
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【表１−５９】
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【表１−６０】
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【表１−６１】
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【表１−６２】
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【表１−６３】
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【表１−６４】
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【表１−６５】
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【表１−６６】
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【表１−６７】
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【表１−６８】
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【表１−６９】
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【表１−７０】
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【表１−７１】
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【表１−７２】
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【表１−７３】
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【表１−７４】
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【表１−７５】
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【表１−７６】
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【表１−７７】
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【表１−７８】
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【表１−７９】
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【表１−８０】
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【表１−８１】
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【表１−８２】
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【表１−８３】
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【表１−８４】
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【表１−８５】
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【表１−８６】
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【表１−８７】
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【表１−８８】
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【表１−８９】
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【表１−９０】
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【表１−９１】
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【表１−９２】
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【表１−９３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
2020120689.tif 000156
【図８Ｃ】
2020120689.tif 000157
【図８Ｄ】
2020120689.tif 000158
【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
2020120689.tif 000181
【図２８】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【配列表】
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【外国語明細書】
2020120689000001.pdf