(57)【要約】      （修正有）【課題】認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病または多発性硬化症の、予防、リスク低減または治療に有用な、哺乳動物ＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２等のＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体。【解決手段】ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、前記単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導し、前記単離抗体が、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進する、またはＩＬ−６の発現を増加する、前記単離抗体。【選択図】図１６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、前記単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導し、前記単離抗体が、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進する、またはＩＬ−６の発現を増加する、前記単離抗体。
【請求項２】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、前記単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害し、前記単離抗体が、１つ以上の自然免疫細胞の生存を減少させる、前記単離抗体。
【請求項３】
前記１つ以上の自然免疫細胞が、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１または請求項２に記載の単離抗体。
【請求項４】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、前記単離抗体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４、または配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０、または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９、または配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６、または配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００、または配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘ．配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８、または配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｖ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及び、
ｘｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基、からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、前記単離抗体。
【請求項５】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０、または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項６】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項７】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項８】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項９】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項１０】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項１１】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項１２】
前記単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する、請求項４に記載の単離抗体。
【請求項１３】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１４】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、野生型タンパク質である、請求項１３に記載の単離抗体。
【請求項１５】
前記ＴＲＥＭ２タンパク質が、天然多様体である、請求項１３に記載の単離抗体。
【請求項１６】
前記抗体が、アゴニスト抗体であり、前記抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１７】
前記単離抗体が、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成を誘導または保持する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１８】
前記１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、
ｉ．ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；
ｉｉ．ＤＡＰ１２リン酸化；
ｉｉｉ．マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１クロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の生存を増加させること；
ｉｖ．Ｓｙｋリン酸化；
ｖ．樹状細胞上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；
ｖｉ．マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させること；
ｖｉｉ．任意に、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、前記１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させること；ならびに、
ｖｉｉｉ．Ｌ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のメディエーターの発現を増加させること、からなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１９に記載の単離抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、請求項１９に記載の単離抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、請求項２１に記載の単離抗体。
【請求項２３】
前記ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、請求項２２に記載の単離抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、Ｆｃ受容体への結合とは独立して、前記１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２６】
前記阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、請求項２５に記載の単離抗体。
【請求項２７】
ｉ．前記単離抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｉｉ．前記単離抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、前記ヒトＩｇＧ２が、定常領域を含み、前記ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｉｉｉ．前記単離抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｉｖ．前記単離抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意に、前記ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含み、任意に、前記抗体Ｆｃ領域が、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、ならびに／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｖ．前記単離抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；あるいは、
ｖｉ．前記単離抗体が、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意に、前記抗体が、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる、請求項２６に記載の単離抗体。
【請求項２８】
前記単離抗体が、不活性抗体である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項２９】
前記単離抗体が、アンタゴニスト抗体である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３０】
前記単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する、請求項２８または請求項２９に記載の単離抗体。
【請求項３１】
前記１つ以上のＴＲＥＭ２活性の阻害が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させること；１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子の活性を減少させること；マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２ミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の前記生存を減少させること；ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のメディエーターの発現の減少；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項３０に記載の単離抗体。
【請求項３２】
前記単離抗体が、ＴＲＥＭ２及び１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３３】
前記抗体が、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合することができない、請求項２８〜３２のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３４】
ｉ．前記単離抗体が、ヒト若しくはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けにより、任意に、前記Ｆｃ領域が、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置に、アミノ酸欠失をさらに含む；
ｉｉ．前記単離抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる；または、
ｉｉｉ．前記単離抗体が、ヒト若しくはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる、請求項３３に記載の単離抗体。
【請求項３５】
前記Ｆｃ領域が、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付けによる、請求項２７（ｉｉｉ．）または３４（ｉ．）に記載の単離抗体。
【請求項３６】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む、請求項２７（ｖ．）または３４（ｉｉｉ．）に記載の単離抗体。
【請求項３７】
前記Ｆｃ領域が、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付けによる、請求項２７〜３６のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３８】
前記単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、前記抗体フラグメントが、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項３９】
前記単離抗体が、抗体フラグメントであり、前記抗体フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４０】
前記単離抗体が、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４１】
前記１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドが、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、アニオン性脂質、双性イオン性脂質、負に荷電した脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオリピド、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドからなる群から選択される、請求項４０に記載の単離抗体。
【請求項４２】
前記単離抗体が、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４３】
前記単離抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４４】
前記単離抗体が、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４５】
前記第１の抗原が、ヒトＴＲＥＭ２若しくはその天然多様体であり、前記第２の抗原が、アミロイドベータ若しくはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される病原性タンパク質；または、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、ＬＲＰ−１、及びＬＲＰ１からなる群から選択されるタンパク質を標的とする血液脳関門である、請求項４４に記載の単離抗体。
【請求項４６】
前記単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、前記抗体が、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される病原性タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４７】
前記単離抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４８】
前記単離抗体が、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２に結合する二重特異性抗体である、請求項１〜４７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項４９】
前記単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインが、
（ｄ）配列番号３〜２４、３９８、及び４０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｅ）配列番号２５〜４９、３９９、及び４０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；ならびに、
（ｆ）配列番号５０〜１１９、４００、及び４０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、
前記軽鎖可変ドメインが、
（ｄ）配列番号１２０〜１３７、４０１、及び４０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号１３８〜１５２、４０２、及び４０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；ならびに、
（ｆ）配列番号１５３〜２３６、４０３、及び４０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項５０】
前記単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号３〜２４、３９８、及び４０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号２５〜４９、３９９、及び４０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；ならびに、
（ｃ）配列番号５０〜１１９、４００、及び４０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、
前記軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１２０〜１３７、４０１、及び４０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号１３８〜１５２、４０２、及び４０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；ならびに、
（ｃ）配列番号１５３〜２３６、４０３、及び４０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【請求項５１】
Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【請求項５２】
ＴＲＥＭ２への結合について、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体と競合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【請求項５３】
前記抗体が、アゴニスト抗体であり、前記抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項５４】
前記単離抗体が、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成を誘導または保持する、請求項５３に記載の単離抗体。
【請求項５５】
前記１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；ＤＡＰ１２リン酸化；マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１クロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の生存を増加させること；ＩＬ−６の発現の増加；Ｓｙｋリン酸化の増加；樹状細胞上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食の増加；任意に、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、前記１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させること；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項５３または請求項５４に記載の単離抗体。
【請求項５６】
前記抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、請求項５３〜５５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項５７】
前記抗体が、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項５６に記載の単離抗体。
【請求項５８】
前記抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、請求項５７に記載の単離抗体。
【請求項５９】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、請求項５８に記載の単離抗体。
【請求項６０】
前記ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、請求項５９に記載の単離抗体。
【請求項６１】
前記抗体が、Ｆｃ受容体への結合とは独立して、前記１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６２】
前記抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６３】
前記阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、請求項６２に記載の単離抗体。
【請求項６４】
ｉ．前記単離抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｉｉ．前記単離抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、前記ヒトＩｇＧ２が、定常領域を含み、前記ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｉｉｉ．前記単離抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｉｖ．前記単離抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意に前記ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含み、任意に、前記抗体Ｆｃ領域が、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、ならびに／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；
ｖ．前記単離抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；あるいは、
ｖｉ．前記単離抗体が、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意に、前記抗体が、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる、請求項６３に記載の単離抗体。
【請求項６５】
前記単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、前記抗体フラグメントが、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される、請求項５０〜６４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６６】
前記単離抗体が、抗体フラグメントであり、前記抗体フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、請求項５０〜６５のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６７】
前記単離抗体が、不活性抗体である、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６８】
前記単離抗体が、アンタゴニスト抗体である、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項６９】
前記単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する、請求項６７または請求項６８に記載の単離抗体。
【請求項７０】
前記１つ以上のＴＲＥＭ２活性の阻害が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させること；１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子の活性を減少させること；マクロファージ、ミクログリア細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の前記生存を減少させること；ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のメディエーターの発現の減少；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項６９に記載の単離抗体。
【請求項７１】
前記単離抗体が、ＴＲＥＭ２及び１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である、請求項６８〜７０のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７２】
前記抗体が、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合することができない、請求項６７〜７１のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７３】
ｉ．前記単離抗体が、ヒト若しくはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けにより、任意に、前記Ｆｃ領域が、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置に、アミノ酸欠失をさらに含む；
ｉｉ．前記単離抗体が、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる；または、
ｉｉｉ．前記単離抗体が、ヒト若しくはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、前記Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、前記残基の番号付けが、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる、請求項７２に記載の単離抗体。
【請求項７４】
前記単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである、請求項６７〜７３のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７５】
前記単離抗体が、抗体フラグメントであり、前記抗体フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、請求項６７〜７４のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７６】
前記Ｆｃ領域が、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付けによる、請求項６４（ｉｉｉ．）または７３（ｉ．）に記載の単離抗体。
【請求項７７】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む、請求項６４（ｖ．）または７３（ｉｉｉ．）に記載の単離抗体。
【請求項７８】
前記Ｆｃ領域が、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、前記残基の番号付けが、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付けによる、請求項６４〜７７のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項７９】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である、請求項５０〜７８のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８０】
前記抗体が、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、請求項５０〜７９のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８１】
前記単離抗体が、モノクローナル抗体である、請求項５０〜８０のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８２】
前記単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８３】
前記単離抗体が、約５．７５ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲のヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８４】
前記単離抗体が、約１．５１ｎＭ未満〜約０．３５ｎＭ未満の範囲のヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８５】
前記単離抗体が、約５．７５ｎＭ未満〜約１．１５ｎＭ未満の範囲のヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８６】
前記単離抗体が、約０．２３ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲のマウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の単離抗体。
【請求項８７】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離核酸。
【請求項８８】
請求項８７に記載の核酸を含むベクター。
【請求項８９】
請求項８８に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
【請求項９０】
前記抗体が産生されるように、請求項８９に記載の宿主細胞を培養することを含む抗体を産生する方法。
【請求項９１】
前記細胞により産生される前記抗体を回収することをさらに含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
請求項９０または請求項９１に記載の方法により産生される単離抗体。
【請求項９３】
請求項１〜８６のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物及び薬学的に許容される担体。
【請求項９４】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する治療的有効量の単離抗体を、個体に投与することを含む、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療する方法。
【請求項９５】
前記単離抗体が、請求項１〜８６のいずれか１項に記載の単離抗体である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、前記多様体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン酸；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換；及び
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換、からなる群から選択される１つ以上の置換を含む、請求項９４または請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、前記多様体が、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；またはその両方を含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記個体が、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型多様体を有し、前記多様体が、
ｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換；
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換；
ｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内の欠失；
ｉｖ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入；及び
ｖ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失、からなる群から選択される１つ以上の多様体を含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
方法であって、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を誘導または促進し、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する治療的有効量の単離アゴニスト抗体を、前記個体に投与することを含む、前記方法。
【請求項１００】
前記単離アゴニスト抗体が、請求項１、３、４〜２７、３８〜６６、及び７６〜８６のいずれか１項に記載の単離抗体である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
方法であって、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を低減し、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する治療的有効量の単離アンタゴニスト抗体を、前記個体に投与することを含む、前記方法。
【請求項１０２】
前記単離アンタゴニスト抗体が、請求項２〜１５、２８〜５２、及び６７〜８６のいずれか１項に記載の単離抗体である、請求項１０１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連相互出願
本出願は、２０１４年８月８日に出願された米国仮特許出願第６２／０３５，３３６号、２０１５年３月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／１３５，１１０号、及び２０１５年３月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／１３５，１２２号の利益を主張し、これらのそれぞれは、全体として本明細書で参照により組み込まれる。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの次の提出の内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：７３５０２２０００４４０ＳＥＱＬＩＳＴＩＮＧ．ＴＸＴ、記録日：２０１５年８月７日、サイズ：２４０ＫＢ）。
【０００３】
本発明は、抗ＴＲＥＭ２及び抗ＤＡＰ１２抗体ならびにこのような抗体の治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
骨髄細胞上に発現されるトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）は、主に、マクロファージ、樹状細胞、単球、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、破骨細胞、及びミクログリアなどの骨髄系細胞に発現する免疫グロブリン様受容体であり、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナル伝達の調節（例えば、抑制）、炎症性サイトカインの調節に、及び正常な破骨細胞の発生に必要とされる。ＴＲＥＭ２は、単一の免疫グロブリン可変（ＩｇＶ）ドメイン受容体ファミリーに属するＴＥＲＭ膜貫通型糖タンパク質のメンバーとして発見された。ヒト及びマウスＴＲＥＭをコードする遺伝子は、それぞれヒト染色体６ｐ２１．１及びマウス染色体１７Ｃ３に位置する。ＴＲＥＭクラスターは、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ４、及びＴＲＥＭ５をコードする遺伝子、ならびにヒト及びマウスの両方におけるＴＲＥＭ様遺伝子を含む。さらに、ＴＥＲＭ３及び形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）ＴＲＥＭがマウスにおいて同定された。ＴＲＥＭ様遺伝子である、ヒトのＴＲＥＭＬ１及びＴＲＥＭＬ２、ならびにマウスのＴＲＥＭＬ１及びＴＲＥＭＬ２は、それぞれＴＬＴ−１及びＴＬＴ−２をコードする。これらの受容体の最も特徴的な２つであるＴＲＥＭ１及びＴＲＥＭ２は、ＮＫ細胞受容体を活性化するなどのＩｇ−ＳＦの他のメンバーといくらかの配列相同性（ＮＫｐ４４と２０％の同一性）を示し、シグナル伝達のためのＤＡＰ１２媒介経路との会合を通じて作用する。
【０００５】
ＴＲＥＭ２は元々、ＴＲＥＭ１ホモログをコードするｃＤＮＡとしてクローニングされた（Ｂｏｕｃｈｏｎ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  ２００１．  １９４（８）：  ｐ．  １１１１−２２）。この受容体は、約４０ｋＤａの糖タンパク質であり、これはＮ−脱グリコシル化後に２６ｋＤａに低減する。ＴＲＥＭ２遺伝子は、細胞外ドメイン、細胞膜貫通領域、及び短い細胞質尾部を含む２３０アミノ酸長のタンパク質をコードする。エクソン２によってコードされる細胞外領域は、３つの潜在的なＮ−グリコシル化部位を含有する単一のＶ型Ｉｇ−ＳＦドメインからなる。推定上の細胞膜貫通領域は荷電したリシン残基を含有する。ＴＲＥＭ２の細胞質尾部にはシグナル伝達モチーフがなく、シグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２／ＴＲＹＲＯＢＰを介してシグナル伝達すると考えられている。
【０００６】
シグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２は、ミクログリア、マクロファージ、顆粒球、ＮＫ細胞、及び樹状細胞（ＤＣ）を含む自然免疫応答に関与する種々の細胞の表面にホモ二量体として発現される。ＤＡＰ１２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）関連ＣＤ３鎖及びＦｃ受容体（ＦｃＲ）γ鎖との相同性に基づいたＩ型膜貫通型アダプタータンパク質ファミリーのメンバーである（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，  ＩＲ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｎｎａ，  Ｍ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００７．  ７（２）：  ｐ．  １５５−６１）。これらのタンパク質は、それらの細胞質ドメイン中の１つ以上のＩＴＡＭモチーフ、（パートナー鎖との相互作用に重要である）細胞膜貫通領域の荷電した酸性残基、及びチロシンリン酸化後のＳｒｃホモロジードメイン２（ＳＨ２）含有タンパク質をリクルートする能力を含む多くの構造的及び機能的特徴を共有する。ＩＴＡＭモチーフは、ＺＡＰ７０またはＳｙｋチロシンキナーゼの活性化により、シグナル伝播を媒介する。両方のキナーゼはいくつかの基質をリン酸化し、それによって細胞の活性化をもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進する。興味深いことに、いくつかのＢ細胞及びＴ細胞はまた、炎症状態下でＤＡＰ１２を発現する。ヒトにおいて、このタンパク質を発現するＣＤ４＋ＣＤ２８−Ｔ細胞、αβＴＣＲ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞のサブセットは、自己免疫性Ｔ細胞との関連で、慢性炎症性疾患に罹患している患者で説明されている（Ｓｃｈｌｅｉｎｉｔｚ，  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，  ４  （２００９），  ｐ．  ｅ６２６４）。マウス腹腔マクロファージにおけるＤＡＰ１２発現の有意なレベルを考慮して、このタンパク質は、骨髄中の破骨細胞、肝臓中のクッパー細胞、肺の肺胞マクロファージ、皮膚ランゲルハンス細胞、及び脳のミクログリア細胞などの他のマクロファージ関連細胞で発現されると考えられている（Ｔａｋａｋｉ，  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ，  ２００６．  ２１４：  ｐ．  １１８−２９）。
【０００７】
ＴＲＥＭ２は、ヒト単球由来樹状細胞の表面上に発現されたものとして、及び、マウスマクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４のｍＲＮＡ転写物として同定されている（Ｂｏｕｃｈｏｎ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  ２００１．  １９４（８）：  ｐ．  １１１１−２２）。ヒトＴＲＥＭ２は、ＤＣの表面上に記載されている最初のＤＡＰ１２会合受容体であった。研究により、ＤＡＰ１２欠損骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）及びＤＡＰ１２欠損マクロファージにおけるＴＲＥＭ２細胞表面発現が、野生型細胞と比較して低減することが実証されている（Ｉｔｏ，  Ｈ  ａｎｄ  Ｈａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４２（１）：  ｐ．  １７６−８５；  Ｈａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００６．  １７７（４）：  ｐ．  ２０５１−５、及びＨａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００５．  ６（６）：  ｐ．  ５７９−８６）。これは、ＴＲＥＭ２表面発現が最大になるために、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体の形成が必要であることを示す。
【０００８】
最近の研究は、循環系から組織に浸潤するマクロファージ、及び、ＩＬ−４またはＩＬ−１３により活性化されるマクロファージ上のＴＲＥＭ２の細胞表面発現も明らかにしている（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，  ＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００６．  １７７（６）：  ｐ．  ３５２０−４）。しかし、ＴＲＥＭ２発現は必ずしも、他の細胞集団、例えば、組織常在マクロファージ、循環単球、または骨髄中の対応する前駆細胞、に見出されるとは限らず、ＴＲＥＭ２発現が、中枢ではないが、組織浸潤中に局所的に、またはサイトカイン媒介活性化により誘導されることを示唆した。さらに、ＩＦＮ−γ及びＬＰＳが、ＴＲＥＭ２発現を低減させる、または別途排除することも観察されている。さらに、ＴＲＥＭ２が、実験的自己免疫性脳脊髄炎またはアルツハイマー病に、中枢神経系におけるミクログリア及び浸潤マクロファージで高度に発現されることが最近報告されている（Ｐｉｃｃｉｏ，  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００７．  ３７（５）：  ｐ．  １２９０−３０１、及びＷａｎｇ  Ｙ，  Ｃｅｌｌ．  ２０１５  Ｍａｒ  １２；  １６０（６）：１０６１−７１）。
【０００９】
ＴＲＥＭ２が、ＤＡＰ１２を介してシグナル伝達することが明らかになっている。下流で、これにより、Ｓｙｋ／Ｚａｐ７０チロシンキナーゼファミリー、ＰＩ３Ｋ、及び他の細胞内シグナルの活性化がもたらされる。骨髄細胞では、ＴＬＲシグナルは、感染の応答などによる活性化に重要であるが、マクロファージ及び樹状細胞などによる病理学的炎症性応答において鍵となる役割を果たす（Ｈａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００６）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７７：  ２０５１−２０５５；  Ｉｔｏ，  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４２：  １７６−１８５；  Ｎｅｕｍａｎｎ，  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：  ９２−９９；  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１：  ６４７−６５７；及びＴａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ４：  ｅ１２４）。ＴＲＥＭ２またはＤＡＰ１２のいずれかの欠損は、前炎症性シグナル伝達の増加をもたらすと考えられている。インビトロでのＴＲＥＭ２欠損の影響は、ＬＰＳ、ＣｐＧ  ＤＮＡ、及びザイモサンなどの代表的なＴＬＲリガンドでの刺激との関連で明らかになっている。ＴＲＥＭ２欠損樹状細胞は、刺激の存在下では、ＩＬ−１２ｐ７０、ＴＮＦ、ＩＬ−６、及びＩｌ−１０の放出の増加を示すが、刺激の不存在下では示さない。
【００１０】
いくつかの最近の研究では、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２経路の活性化により誘導される細胞内シグナル伝達イベントが探究されている。例えば、ＴＲＥＭ２は、細胞生存（例えば、タンパク質キナーゼＢ−Ａｋｔ）、細胞活性化及び分化（例えば、Ｓｙｋ、ＥＲＫ１／２、ＰＬＣ−γなど）、ならびにアクチン細胞骨格の制御（例えば、Ｓｙｋ、Ｖａｖなど）に関与するシグナル伝達経路を活性化すると考えられる（Ｐｅｎｇ，  Ｑ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．  ３（１２２）：  ｐ．  ｒａ３８、及びＷｈｉｔｔａｋｅｒ，  ＧＣ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２８５（５）：  ｐ．  ２９７６−８５）。ＴＲＥＭ２がライゲーションした後、ＤＡＰ１２のＩＴＡＭチロシンは、ＳＲＣファミリーキナーゼによりリン酸化されて、Ｓｙｋキナーゼ及び／またはＺＡＰ７０キナーゼのリクルート及び活性化をもたらす。マウスでは、Ｓｙｋが、関与する優勢なキナーゼであることがある一方、ヒトでは、Ｓｙｋ及びＺＡＰ７０の両方が、このようなＩＴＡＭ含有サブユニットと効率的に連結させて、タンデムＳＨ２ドメインを介してそれらを結合させるように見える。
【００１１】
ＴＲＥＭ２シグナル伝達おける研究は、ＴＲＥＭ１と同様に、ＤＡＰ１２を介したＴＲＥＭ２媒介シグナル伝達が、細胞内カルシウムイオンレベル及びＥＲＫ１／２のＥＲＫ１／２リン酸化の増加を、さらにもたらすことを明らかにしている（Ｂｏｕｃｈｏｎ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  ２００１．  １９４（８）：  ｐ．  １１１１−２２、及びＳｈａｒｉｆ，  Ｏ  ａｎｄ  Ｋｎａｐｐ，  Ｓ，  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，  ２００８．  ２１３（９−１０）：  ｐ．  ７０１−１３）。重要なことに、ＴＲＥＭ２受容体ライゲーションは、ＩｋＢ−ａの分解及びその後のＮＦ−ｋＢの核移行を誘導せず、これは、ＴＲＥＭ２シグナル伝達及びＴＲＥＭ１シグナル伝達の間の起こりうる差を指し示す（Ｂｏｕｃｈｏｎ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  ２００１．  １９４（８）：  ｐ．  １１１１−２２）。未成熟樹状細胞におけるＴＲＥＭ２の受容体架橋は、ＣＤ８６、ＣＤ４０、及びＭＨＣクラスＩＩなどのＴ細胞共刺激、ならびにケモカイン受容体ＣＣＲ７の上方制御に関与する分子の上方制御を誘発する（Ｂｏｕｃｈｏｎ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  ２００１．  １９４（８）：  ｐ．  １１１１−２２）。ＴＲＥＭ２はまた、ミクログリアで発現され、受容体架橋はＥＲＫ１／２リン酸化及びＣＣＲ７の増加をもたらすが、ＣＤ８６またはＭＨＣクラスＩＩ発現の増加をもたらさず、ＴＲＥＭ２シグナル伝達の可能な細胞型特異的差異を示唆している。さらに、骨髄細胞におけるＴＲＥＭ２の過剰発現は、変性ミエリンの貪食の増加をもたらした（Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ，  ２００７．  ４（４）：  ｐ．  ｅ１２４、及びＮｅｕｍａｎｎ，  Ｈ  ａｎｄ  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ，  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００７．  １８４（１−２）：  ｐ．  ９２−９）。
【００１２】
ｓｈＲＮＡｉディスプレイを使用してＴＲＥＭ２についてサイレンシングされている骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）は、非特異的ｓｈＲＮＡｉで処理された対照ＢＭＤＭ細胞と比較して、ＴＬＲ２／６リガンドザイモサン及びＴＬＲ９リガンドＣｐＧに応答してＴＮＦの分泌を増加させて、ＴＲＥＭ２がマクロファージにおけるサイトカイン合成を負に制御することを示していることも明らかになっている（Ｉｔｏ，  Ｈ  ａｎｄ  Ｈａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ，  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４２（１）：  ｐ．  １７６−８５；  Ｈａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００６．  １７７（４）：  ｐ．  ２０５１−５；及びＨａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００５．  ６（６）：  ｐ．  ５７９−８６）。これらの結果は、ＴＲＥＭ２ノックアウトマウス由来のＢＭＤＭ細胞を使用して確認されており、ＴＲＥＭ２−／−ＢＭＤＭ細胞におけるＴＮＦ及びＩＬ−６のレベルも、野生型ＢＭＤＭ細胞と比較して、より高かったことをさらに明らかにしている。（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，  ＩＲ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００６．  １７７（６）：  ｐ．  ３５２０−４、及びＴｕｒｎｂｕｌｌ，  ＩＲ  ａｎｄ  Ｃｏｌｏｎｎａ，  Ｍ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００７．  ７（２）：  ｐ．  １５５−６１）。さらに、ミクログリアにおけるＴＲＥＭ２の過剰発現は、アポトーシスニューロンでこれらの細胞を培養した後、ＴＮＦ及び誘導性一酸化窒素（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡの減少をもたらすことが実証されている一方、ＴＲＥＭ２ノックダウンは、ＴＮＦ及びｉＮＯＳ  ｍＲＮＡレベルに中程度の増加をもたらした。このことは、サイトカイン合成の正の制御因子であるＴＲＥＭ１とは対照的に、ＴＲＥＭ２はサイトカイン合成の負の制御因子であることを示している。ＴＲＥＭ２の炎症へのこの影響は、ミクログリア細胞及びＢＭＤＭ細胞の両方で生じるので、マクロファージの種類とは無関係であることがある。
【００１３】
中枢神経系の常在性骨髄細胞において、ミクログリアの活性化は炎症を引き起こす可能性があることが明らかになっている（Ｎｅｕｍａｎｎ，  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：  ９２−９９；  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１：  ６４７−６５７；  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ４：  ｅ１２４；及びＨｓｉｅｈ，  ＣＬ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００９）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  １０９：  １１４４−１１５６）。さらに、ミクログリア活性化は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、アルツハイマー病、パーキンソン病、脳卒中／虚血性脳障害、及び多発性硬化症にも関与している。ＴＲＥＭ２活性化の低減は、骨髄細胞のＮＯＳ２遺伝子の転写などの特定の活性化及び炎症マーカーの増加をもたらしたが、ＴＲＥＭ２活性化の増加は、ＮＯＳ２転写の低減をもたらす。瀕死のニューロンは、ＴＲＥＭ２に対する内因性リガンドを発現すると考えられている。ＨＳＰ６０は、神経芽腫細胞上のＴＲＥＭ２のリガンドとして関与している（Ｓｔｅｆａｎｉ，  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００９）  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  １１０：  ２８４−２９４）。ＴＲＥＭ２過剰発現は、ミクログリアによる瀕死のニューロンの貪食の増加ももたらし、同様に他の骨髄系細胞による貪食を増加させる。
【００１４】
ヒトにおいて、ＴＲＥＭ２の完全な欠如は、晩発性認知症、脱髄、及び脳萎縮を伴うまれな神経変性疾患である那須−ハコラ病を引き起こすことが明らかになっている（Ｐａｌｏｎｅｖａ，  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００２）  Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  ７１：  ６５６−６６２、及びＰａｌｏｎｅｖａ，  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００３）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９８：  ６６９−６７５）。那須−ハコラ病は、ＤＡＰ１２欠損によっても引き起こされる可能性がある。
【００１５】
ＴＲＥＭ２遺伝子発現は、アルツハイマー病モデルであるＡＰＰ２３トランスジェニックマウスにおいて増加することも明らかになっており、このモデルでは、マウスは、家族性アルツハイマー病と関連するアミロイド前駆体タンパク質の変異型を発現する（Ｍｅｌｃｈｉｏｒ，  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ＡＳＮ  Ｎｅｕｒｏ  ２：  ｅ０００３７）。アミロイド１−４２の取り込みは、ＴＲＥＭ２を過剰発現するＢＶ−２ミクログリア細胞株において増加することも明らかになっている。
【００１６】
ＴＲＥＭ２は、多発性硬化症のＥＡＥマウスモデルにおいて上方制御されることがさらに明らかになっている（Ｎｅｕｍａｎｎ，  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １８４：  ９２−９９；  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１：  ６４７−６５７；及びＴａｋａｈａｓｈｉ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ４：  ｅ１２４）。インビトロでのＴＲＥＭ２による骨髄由来骨髄前駆細胞（ＢＭ−ＤＣ）の形質導入は、変性ミエリンの貪食の増加をもたらす。ＬＰＳに応答して、これらの細胞は、ＩＬ−１０の増加及びＩＬ−１βの減少を示す。ＴＲＥＭ２を過剰発現する骨髄細胞の静脈内移植は、インビボでＥＡＥを抑制できる。
【００１７】
さらに、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）症状を有する個体のエクソーム配列決定により、ＴＲＥＭ２におけるホモ接合型変異が同定されている（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ，  ＲＪ  ｅｔ  ａｌ．，  ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ  ７０：  ７８−８４、及びＧｕｅｒｒｅｉｒｏ，  ＲＪ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ：  １−７）。これらの変異のいくつかは、ＴＲＥＭ２の切断及び可能性がある機能喪失をもたらす。これらの同じＴＲＥＭ２変異はまた、一部の個体において那須−ハコラ病を引き起こす可能性がある。ＴＲＥＭ２ホモ接合型変異を有する特定の個体におけるイメージング解析は、脱髄の証拠も示している。
【００１８】
那須−ハコラ病及びＦＴＤを引き起こす変異と同じであるＴＲＥＭ２のヘテロ接合型変異は、アルツハイマー病のリスクも増加させる（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ，  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６８：  １１７−１２７；  Ｊｏｎｓｓｏｎ，  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６８：  １０７−１１６；及びＮｅｕｍａｎｎ，  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６８：  １８２−１８４）。これらのＴＲＥＭ２変異は、アルツハイマー病の既知のリスク多様体（例えば、ＡＰＯＥ４）よりもまれであるが、これらの変異を保有する影響は、同様に深刻であり、アルツハイマー病を発症するリスクの約３倍の増加である。さらに、ヘテロ接合型ＴＲＥＭ２変異を保有する、アルツハイマー病を有していない個体でさえも、２つの正常なＴＲＥＭ２対立遺伝子を有する個体と比較して、より悪い認知を示す。さらに、最も一般的なＴＲＥＭ２変異（２００個体中多くとも１個）であるＴＲＥＭ２のＲ４７Ｈ多様体（ＴＲＥＭ２の４７位でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換）は、ＴＲＥＭ２の免疫グロブリンドメイン内に位置し、それにより、リガンド結合を変更し得ることが明らかになっている（Ｗａｎｇ  Ｙ，  Ｃｅｌｌ．  ２０１５  Ｍａｒ  １２；１６０（６）：１０６１−７１）。
【００１９】
さらに、晩発性進行性発達アルツハイマー病（ＬＯＡＤ）に関連する遺伝子発現の分子ネットワークの順位付けされた組織化構造への統合的ネットワークベースのアプローチは、ＴＹＲＯＢＰ／ＤＡＰ１２を、ＬＯＡＤに関連する免疫／ミクログリア遺伝子モジュールの鍵となる制御因子としてのＴＲＥＭ２のシグナル伝達分子として同定した。ＴＹＲＯＢＰは、ＴＲＥＭ２が制御する他の遺伝子の数及び制御喪失の大きさならびにＬＯＡＤ脳における差次的発現に基づいて順位付けされる場合、最も高いスコアリングの免疫／ミクログリアモジュールの原因の制御因子であることが判明した。ＴＹＲＯＢＰは、ＬＯＡＤ脳において有意に上方制御され、多くの場合ＬＯＡＤに先行する軽度認知障害（ＭＣＩ）全体でＴＹＲＯＢＰ発現変化の進展があった（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｃｅｌｌ  １５３，  ７０７−７２０）。正常な状態に戻す方法で、このような原因となるネットワークを標的とすることは、病気を治療する手段となることがある。
【００２０】
従って、細胞表面上のＴＲＥＭ２及び／またはそのシグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２／ＴＲＹＲＯＢＰに特異的に結合し、減少したＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性と関連する１つ以上の疾患、障害、及び状態、ならびに好ましくないＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性と関連する状態を治療するために、１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性を調節する（例えば、活性化するまたは阻害する）抗体が必要とされている。
【００２１】
さらに、腫瘍の微小環境は、Ｔリンパ球、マクロファージ、及び骨髄／顆粒球系統の細胞を含む異種免疫浸潤物からなる。免疫細胞の特定のサブセットを調節する治療アプローチは、ケアの基準を変えている。Ｔ細胞（例えば、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ−１）上に発現される免疫調節分子を標的とする「チェックポイントブロッキング」抗体は、種々の腫瘍型に対する臨床活性を実証している（Ｎａｉｄｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１４）  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １１１，  ２２１４−２２１９）。
【００２２】
腫瘍関連マクロファージ（例えば、Ｍ２型マクロファージ）を標的とする癌免疫療法は、重大な研究分野である。腫瘍におけるＭ２マクロファージの存在は、予後不良と関連する。したがって、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に特異的に結合し、マクロファージ、樹状細胞、ミエロイド／顆粒球細胞、Ｔ細胞、及び単球などの腫瘍関連免疫細胞の１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性を調節する（例えば、活性化する、または阻害する）抗体が必要とされている。
【００２３】
特許出願及び刊行物を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、全体として本明細書で参照により組み込まれる。
【発明の概要】
【００２４】
本発明は一般に、野生型タンパク質及びそれらの天然多様体を含む、哺乳動物ＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２、哺乳動物ＤＡＰ１２、またはヒトＤＡＰ１２などのＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはそのシグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２に特異的に結合する、例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメントなど、の抗体を含む方法及び組成物に関する。本開示の抗体は、アゴニスト抗体、不活性抗体、及び／またはアンタゴニスト抗体を含んでも良い。本明細書で提供される方法は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、若しくは多発性硬化症を有する個体を予防すること、リスク低減させること、若しくは治療することに；それを必要とする個体における自然免疫細胞の生存の誘導若しくは促進することに、；及び／またはそれを必要とする個体における自然免疫細胞の生存を減少させることに、使用を見出す。
【００２５】
本開示の特定の態様は、異なるクラスの抗ＴＲＥＭ２抗体に関する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２に結合する、かつ、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、１つ以上の自然免疫細胞の生存、及び／またはＩＬ−６の発現を活性化する、誘導する、促進する、刺激する、または別途増加させるアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞表面上に発現されるＴＲＥＭ２への結合について、ＴＲＥＭ２リガンドと競合する。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞表面上に発現されるＴＲＥＭ２への結合について、ＴＲＥＭ２リガンドと競合しない。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２に結合し、かつ、１つ以上のＴＲＥＭ２活性及び／または１つ以上の自然免疫細胞の生存を減少させる、阻害する、または別途低減させる不活性またはアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の不活性またはアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞表面上に発現されるＴＲＥＭ２に結合するリガンドをブロックする、または別途阻害する。
【００２６】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方に結合する単離アゴニスト抗体に関し、抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する。
【００２７】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方は、野生型タンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方は、天然多様体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方は、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト皮膚ランゲルハンス細胞、ヒトクッパー細胞、及び／またはヒトミクログリア上に発現される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成、ＤＡＰ１２クラスター形成、またはその両方を、誘導または保持する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性は、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合することを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＤＡＰ１２活性は、ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２に結合することを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＤＡＰ１２リン酸化、ＴＲＥＭ２リン酸化、またはその両方を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＤＡＰ１２リン酸化、ＴＲＥＭ２リン酸化、またはその両方は、１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼにより誘導される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼは、Ｓｙｋキナーゼを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＰＩ３Ｋ活性化を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現の増加を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上の抗炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン）の発現の増加を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、発現の増加は、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、１つ以上の前炎症性サイトカインの発現の低減を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−βメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰからなる群から選択される１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、またはその両方の発現の低減を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減は、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導を含む。 先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強、正常化、またはその両方を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、マクロファージ、ミクログリア細胞、またはその両方の生存を増加させることを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、マクロファージ、ミクログリア細胞、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の機能を増加させることを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、マクロファージは、Ｍ１マクロファージ及び／若しくはミクログリア、Ｍ２マクロファージ及び／若しくはミクログリア、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリアは、活性化Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリアである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組��破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病原性タンパク質クリアランス、病原性ペプチドクリアランス、及び病原性核酸クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの誘導を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、または病原性核酸のうちの１つ以上の貪食の誘導を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、病原性タンパク質は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、病原性核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのリクルートを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、Ｓｙｋリン酸化を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、樹状細胞、マクロファージ、及び／または単球上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上の炎症性サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、 ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、１つ以上の炎症性受容体の発現の低減を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上の炎症性受容体は、ＣＤ８６を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させることを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させることを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させることを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に
結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、１つ以上の修飾を含むＦｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。 先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含む。 先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２���７Ｑアミノ酸置換を含み、ＩｇＧ１上の残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ４定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントは、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。
【００２８】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離不活性抗体に関する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アンタゴニスト抗体に関する。
【００２９】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方は、野生型タンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方は、天然多様体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を阻害する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させることを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２ミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させることを含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２及び１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施��態では、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。
【００３０】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、アニオン性脂質、双性イオン性脂質、負に荷電した脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオリピド、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、またはキメラ抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、第１の抗原は、ヒトＴＲＥＭ２若しくはその天然多様体であり、第２の抗原は、アミロイドベータ若しくはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される病原性タンパク質；トランスフェリン受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、ＬＲＰ−１、及びＬＲＰ１からなる群から選択されるタンパク質を標的とする血液脳関門；または、免疫細胞上に発現されるリガンド及び／若しくはタンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される病原性タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わされて使用される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００３１】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２上の線状エピトープに結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２上の線状エピトープは、ＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン内に位置する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２上の線状エピトープは、ＴＲＥＭ２の細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン内に位置する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合し、単離抗体は、ｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４、または配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９、または配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６、または配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００、または配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及びｘ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８、または配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０、または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７、またはＡｓｐ８７；ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４；ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６；及びｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号２のアミノ残基２２〜４０、または配列番号２のアミノ酸残基２２〜４０に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ｉ．配列番号１の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸残基に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及びｉｉ．配列番号２の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号２のアミノ酸残基に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸に結合する二重特異性抗体である。
【００３２】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号３９８のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号４００のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号４０１のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号４０２のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０３のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号３９８のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３９９のアミノ酸配列、若しくは、配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び／または、（ｃ）配列番号４００のアミノ酸配列、若しくは配列番号４００のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／あるいは、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４０１のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び／または、（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列、若しくは、配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４０４のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号４０６のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号４０７のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号４０８のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４０４のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４０５のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び／または、（ｃ）配列番号４０６のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／あるいは、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４０７のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４０８のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び／または、（ｃ）配列番号４０９のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００３３】
本開示の他の態様は、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関し、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号３９８のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号４００のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号４０１のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号４０２のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０３のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、配列番号３９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号４００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、配列番号４０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号４０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００３４】
本開示の他の態様は、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関し、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号３９８のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３９９のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び／または、（ｃ）配列番号４００のアミノ酸配列、若しくは配列番号４００のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／あるいは、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４０１のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び／または、（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００３５】
本開示の他の態様は、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関し、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号４０４のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号４０６のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号４０７のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号４０８のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、配列番号４０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号４０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、配列番号４０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号４０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００３６】
本開示の他の態様は、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関し、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４０４のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４０５のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び／または、（ｃ）配列番号４０６のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／あるいは、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号４０７のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号４０８のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び／または、（ｃ）配列番号４０９のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００３７】
本開示の他の態様は、抗体Ａｂ５２と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関する。本開示の他の態様は、抗体Ａｂ２１と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関する。
【００３８】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、アゴニスト抗体であり、抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成、ＤＡＰ１２クラスター形成、またはその両方を、誘導または保持する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２に結合すること；ＴＲＥＭ２リン酸化；ＤＡＰ１２リン酸化；ＰＩ３Ｋ活性化；ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上の抗炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン）の発現の増加；ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰからなる群から選択される１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減；ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、またはその両方の発現の低減；細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加；ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増加、正常化、またはその両方；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；樹状細胞、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、活性化Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、ならびにクッパー細胞のうちの１つ以上の生存及び／または機能を増加させること；アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病原性タンパク質クリアランス、病原性ペプチドクリアランス、及び病原性核酸クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの誘導；アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、または病原性核酸のうちの１つ以上の貪食の誘導；破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方のＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体へのリクルート；Ｓｙｋリン酸化；樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／またはミクログリア上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−βメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳ���、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰからなる群から選択される１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させること；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させること；１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させること；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩ��Ｂ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、 Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２のア��ノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ４定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントは、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、不活性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、アンタゴニスト抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性は、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させること；１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子の活性を減少させること；マクロファージ、ミクログリア細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させること；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２及び１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。先行実
施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００３９】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体に関し、単離抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体に関し、単離抗体は、ＩＬ−６の発現を増加させる。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体に関し、単離抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進しまたはＩＬ−６の発現を増加する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体に関し、単離抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進し及びＩＬ−６の発現を増加する。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、マクロファージである。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、ミクログリア細胞である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、Ｍ１ミクログリア細胞である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、活性化Ｍ１ミクログリア細胞である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、Ｍ２ミクログリア細胞である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、樹状細胞（ＤＣ）である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、Ｍ１マクロファージである。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、活性化Ｍ１マクロファージである。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、Ｍ２マクロファージである。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、単球である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、破骨細胞である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、皮膚ランゲルハンス細胞である。特定の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞は、クッパー細胞である。
【００４０】
本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体に関し、単離抗体は、ｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４、または配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０、または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖ．配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９、または配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６、または配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００、または配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｘ．配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８、または配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｘｖ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；ｘｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及びｘｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０、または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。特定の実施形態では、単離抗体は、配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する。
【００４１】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、野生型タンパク質である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、天然多様体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、アゴニスト抗体であり、抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成を誘導または保持する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性は、ｉ．ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；ｉｉ．ＤＡＰ１２リン酸化；ｉｉｉ．マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１クロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の生存を増加させること；ｉｖ．Ｓｙｋリン酸化；ｖ．樹状細胞上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；ｖｉ．マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させること；ｖｉｉ．任意に、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させること；ならびに、ｖｉｉｉ．Ｌ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のメディエーターの発現を増加させることからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ｉ．単離抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれら��任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｉｉ．単離抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、ヒトＩｇＧ２は、定常領域を含み、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｉｉｉ．単離抗体が、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｉｖ．単離抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意にＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含み、任意に、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、ならびに／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｖ．単離抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；あるいは、ｖｉ．単離抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意に、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、不活性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、アンタゴニスト抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性の阻害は、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させること；１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子の活性を減少させること；マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２ミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少���せること；ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のメディエーターの発現の減少；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２及び１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ｉ．単離抗体は、ヒト若しくはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けにより、任意に、Ｆｃ領域は、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置に、アミノ酸欠失をさらに含む；ｉｉ．単離抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる；または、ｉｉｉ．単離抗体は、ヒト若しくはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントは、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、抗体フラグメントであり、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、アニオン性脂質、双性イオン性脂質、負に荷電した脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオリピド、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、 第１の抗原は、ヒトＴＲＥＭ２若しくはその天然多様体であり、第２の抗原は、アミロイドβ若しくはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ
）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される病原性タンパク質；または、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、ＬＲＰ−１、及びＬＲＰ１からなる群から選択されるタンパク質を標的とする血液脳関門である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり；抗体は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される病原性タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２に結合する二重特異性抗体である。
【００４２】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号３〜２４、３９８、及び４０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；配列番号２５〜４９、３９９、及び４０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；ならびに、（ｃ）配列番号５０〜１１９、４００、及び４０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／あるいは、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１２０〜１３７、４０１、及び４０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１３８〜１５２、４０２、及び４０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；ならびに、（ｃ）配列番号１５３〜２３６、４０３、及び４０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００４３】
本開示の他の態様は、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関し、単離抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号３〜２４、３９８、及び４０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；配列番号２５〜４９、３９９、及び４０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；ならびに、（ｃ）配列番号５０〜１１９、４００、及び４０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／あるいは、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１２０〜１３７、４０１、及び４０７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１３８〜１５２、４０２、及び４０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；ならびに、（ｃ）配列番号１５３〜２３６、４０３、及び４０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。本開示の他の態様は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２への結合について、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体と競合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体に関する。
【００４４】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、アゴニスト抗体であり、抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成を誘導または保持する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性は、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；ＤＡＰ１２リン酸化；マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１クロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の生存を増加させること；ＩＬ−６の発現の増加；Ｓｙｋリン酸化；樹状細胞上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させること；ならびに、任意に、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させること；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、かつ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ｉ．単離抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｉｉ．単離抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、ヒトＩｇＧ２は、定常領域を含み、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｉｉｉ．単離抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ��６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｉｖ．単離抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意にＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含み、任意に、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、ならびに／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；ｖ．単離抗体は、ヒトまたはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる；あるいは、ｖｉ．単離抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意に、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントは、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、抗体フラグメントであり、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、不活性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、アンタゴニスト抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性の阻害は、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させること；１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子の活性を減少させること；マクロファージ、ミクログリア細���、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させること；ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のメディエーターの発現の減少；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ＴＲＥＭ２及び１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、ｉ．単離抗体は、ヒト若しくはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けにより、任意に、Ｆｃ領域は、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置に、アミノ酸欠失をさらに含む；ｉｉ．単離抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる；または、ｉｉｉ．単離抗体は、ヒト若しくはマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びヒトＴＲＥＭ２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、抗体フラグメントであり、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００４５】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約５．７５ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲の、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２に対する解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約１．５１ｎＭ未満〜約０．３５ｎＭ未満の範囲の、ヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約５．７５ｎＭ未満〜約１．１５ｎＭ未満の範囲の、ヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約０．２３ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲の、マウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約６．７０ｎＭ未満〜約０．２３ｎＭ未満の範囲のヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２に対する解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約０．７１ｎＭ未満〜約０．２３ｎＭ未満の範囲の、ヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約６．７０ｎＭ未満〜約０．６６ｎＭ未満の範囲の、ヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、約４．９０ｎＭ未満〜約０．３５ｎＭ未満の範囲の、マウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【００４６】
本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載の抗体をコードする単離核酸に関する。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載の核酸を含むベクターに関する。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載のベクターを含む宿主細胞に関する。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載のベクターを含む単離宿主細胞に関する。本開示の他の態様は、抗体が産生されるように、先行実施形態のいずれか１つに記載の細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法に関する。特定の実施形態では、方法は、細胞より産生される抗体を回収することをさらに含む。本開示の他の態様は、抗体を産生する先行方法のいずれかにより産生される単離抗体に関する。本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載の抗体を含む医薬組成物及び薬学的に許容される担体に関する。
【００４７】
本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載の治療的有効量の単離アゴニスト抗体を、個体に投与することを含む、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療する方法に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を予防すること、リスク低減させること、または治療することに使用される、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療するための薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離アゴニスト抗体の使用に関する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、個体は、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体は、ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン酸；ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン；ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換；ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換；ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換；及びｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換からなる群から選択される１つ以上の置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、個体は、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体は、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；またはその両方を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、個体は、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体は、ｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換；ｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換；ｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内の欠失；ｉｖ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入；及びｖ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失からなる群から選択される１つ以上の多様体を含む。
【００４８】
本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載の治療的有効量の単離アゴニスト抗体を、個体に投与することを含む、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を誘導または促進する方法に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を誘導または促進することに使用される先行実施形態のいずれか１つに記載の単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を誘導または促進するための薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離アゴニスト抗体の使用に関する。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する治療的有効量の単離アゴニスト抗体を、個体に投与することを含む、それを必要とする個体の創傷治癒を誘導または促進する方法に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体の創傷治癒を誘導または促進することに使用されるＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体の創傷治癒を誘導または促進するための薬品の製造における、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体の使用に関する。
【００４９】
本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載の治療的有効量の単離アンタゴニスト抗体を、個体に投与することを含む、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を減少させる方法に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を減少させることに使用される、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離アンタゴニスト抗体に関する。本開示の他の態様は、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を減少させるための薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離アンタゴニスト抗体の使用に関する。
【００５０】
本開示の他の態様は、先行実施形態のいずれか１つに記載の治療的有効量の単離抗体を、個体に投与することを含む、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療する方法に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、及び癌からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防すること、リスク低減させること、または治療することに使用される、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体に関する。本開示の他の態様は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、及び癌からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療するための薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体の使用に関する。
【００５１】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、（ａ）アゴニスト抗体；（ｂ）不活性抗体；または（ｃ）アンタゴニスト抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、（ａ）抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、若しくはＩｇＡクラスのものである、及び／または、（ｂ）抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４アイソタイプを有する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、抗体は、（ａ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；（ｂ）Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；（ｃ）Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；（ｄ）Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；（ｅ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；または、（ｆ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付けによる。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０若しくは配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、または、（ｂ）配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７若しくは配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体は、（ａ）抗体Ａｂ５２と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する；（ｂ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む；（ｃ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、配列番号３９８のアミノ酸配列若しくは配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３９９のアミノ酸配列若しくは配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び、配列番号４００のアミノ酸配列、若しくは、配列番号４００のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、配列番号４０１のアミノ酸配列若しくは配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０２のアミノ酸配列若しくは配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号４０３のアミノ酸配列若しくは配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、（ｄ）抗体Ａｂ２１と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する；（ｅ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む；あるいは、（ｆ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインは、配列番号４０４のアミノ酸配列若しくは配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４０５のアミノ酸配列若しくは配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び配列番号４０６のアミノ酸配列若しくは配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、配列番号４０７のアミノ酸配列若しくは配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０８のアミノ酸配列若しくは配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び配列番号４０９のアミノ酸配列若しくは配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離抗体が、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、単離アゴニスト抗体は、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離アゴニスト抗体である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、個体は、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体は、ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン酸；ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン；ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換；ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換；ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換；及びｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換からなる群から選択される１つ以上の置換を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、個体は、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体は、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；またはその両方を含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、個体は、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体は、ｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換；ｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換；ｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内の欠失；ｉｖ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入；及びｖ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失からなる群から選択される１つ以上の多様体を含む。
【００５２】
先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、癌は、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌からなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、方法は、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、個体に投与すること、及び／または、別の標準若しくは治験抗癌療法をさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、ならびに抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、標準または治験抗癌療法は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される１つ以上の治療法である。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、方法は、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、個体に投与することをさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、方法は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を、個体に投与することをさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを、個体に投与することをさらに含む。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、単離抗体と組み合わせて投与される。先行実施形態のいずれかと組み合わせ得る特定の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１Ａ】２つのタンパク質間の相同性を示す、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号４２６）及びヒトＮＣＴＲ２タンパク質（配列番号４２７）の間のアミノ酸配列アライメントを示す。コンセンサス配列は、配列番号４４６である。
【図１Ｂ】いくつかのＴＲＥＭタンパク質及びＩｇＶファミリーである、ＴＲＥＭ１＿ヒト（配列番号４２９）、ＴＲＥＭ２＿ヒト（配列番号４３０）、ＴＲＥＭ１＿マウス（配列番号４３１）、ＴＲＥＭ２＿マウス（配列番号４３２）、ＴＲＥＭ３＿マウス（配列番号４３３）、ＮＫｐ４４（配列番号４３４）、ａＴＣＲ＿ヒト（配列番号４３５）、ｂＴＣＲ＿ヒト（配列番号４３６）、ｇＴＣＲ＿ヒト（配列番号４３７）、ｄＴＣＲ＿ヒト（配列番号４３８）、Ｖｄ＿ヒト（配列番号４３９）、ｈＩＧＧ１＿マウス（配列番号４４０）、ｌＩＧＧ１＿マウス（配列番号４４１）、ＣＤ８＿ヒト（配列番号４４２）、及びＣＴＬＡ４＿ヒト（配列番号４４３）の他のメンバーとの間の構造ベースの配列アラインメントを示す。アミノ酸残基の番号付けは、ヒトＴＲＥＭ１タンパク質の成熟配列と一致している。ＴＲＥＭ１の二次構造要素は、β鎖の場合、矢印、αヘリックスの場合、シリンダーとして図示されている。ホモ二量体及びヘテロ二量体形成に関与するアミノ酸残基は、黒の背景上に示される。ジスルフィド結合を形成し、Ｖ型Ｉｇフォールドために保存されているシステイン残基は、太字で示されており、アスタリスクでマークされている。ギャップは、「−」で示される。抗体様二量体形成モードを妨害するＭ−１残基は、（例えば、Ｒａｄａｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００３）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．  １１（１２）：１５２７−１５３５）として黒三角形でマークされている。
【図２Ａ】２つのタンパク質間の相同性を示す、ヒトＴＲＥＭ１タンパク質（配列番号４２８）及びヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号４２６）の間のアミノ酸配列アライメントを示す。コンセンサス配列は、配列番号４４７である。
【図２Ｂ】抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２Ｃ】抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図３Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１、Ａｂ５２、Ａｂ１６、Ａｂ２０、Ａｂ６６、及びＡｂ６８の、組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するマウス細胞株（ＢＷＺ  Ｔ２）への結合を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。
【図３Ｂ】ＷＴ（Ｔｒｅｍ＋／＋）及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）骨髄由来マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ）に結合する抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２を示す。網掛けのヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陰性集団を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陽性集団を表す。
【図４Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１、Ａｂ５２、Ａｂ４３、及びＡｂ６０の、組換えヒトＴＲＥＭ２−ＤＡＰ１２融合タンパク質を発現するヒト細胞株（２９３）への結合を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。網掛けヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陰性集団を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陽性集団を表す。
【図４Ｂ】初代ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）に結合する抗体Ａｂ２１、Ａｂ５２、Ａｂ４３、及びＡｂ６０を示す。網掛けヒストグラムは、二次抗体単独の陰性対照を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陽性集団を表す。
【図５Ａ】プレート結合ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１またはＡｂ５２とインキュベーションした後の、ヒト樹状細胞（ＤＣ）上の細胞表面マーカーＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を実証するＦＡＣＳのドットプロットを示す。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。プロットを、ＣＤ１１ｃ＋  ＨＬＡ−ＤＲ＋  ＬＩＮ−  ＤＣにゲーティングした。ＣＤ８３＋ＣＤ８６＋ゲート内の細胞の割合は、各プロット上に表示される。
【図５Ｂ】架橋されたＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１またはＡｂ５２とインキュベーションした後の、ヒト樹状細胞（ＤＣ）上の細胞表面マーカーＣＤ８６の発現を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。抗体は、抗ヒト二次抗体と架橋されていた。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。
【図６Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２とインキュベーションした後の、野生型及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウス（左及び中央パネル）ならびにヒト（右パネル）マクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＳｙｋリン酸化を示す。抗体Ａｂ８９及びＡｂ９２は、非アゴニスト陰性対照である。
【図６Ｂ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２とインキュベーションした後の、初代ヒト樹状細胞におけるウェスタンブロットで測定した時のＳｙｋリン酸化を示す。
【図７Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２とインキュベーションした後の、マウスマクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＤＡＰ１２リン酸化を示す。
【図７Ｂ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１とインキュベーションした後の、野生型及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＤＡＰ１２リン酸化を示す。
【図８】ＴＲＥＭ２抗体と推定上のＴＲＥＭ２リガンドを発現するＥ．ｃｏｌｉ細菌との間の、ＴＲＥＭ２を発現するマウス及びヒト細胞株への競合的結合を示す。細菌結合は、対照の割合として表現される。２つの独立した実験の平均；黒のバー：アイソタイプ対照との差はない、赤のバー：アイソタイプ対照と有意に異なる（ＡＮＯＶＡ）。
【図９Ａ】炎症性メディエーターＬＰＳまたはザイモサンを用いた、ＷＴ及びＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージの刺激に応答して分泌される炎症性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＭＣＰ−１のタンパク質レベルを示す。
【図９Ｂ】サイトカインＩＬ−４またはＩＦＮｇを用いた、ＷＴ、ＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（Ｈｅｔ）、及びＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージの刺激に応答して分泌される炎症性サイトカインＩＬ−６及びＴＮＦａのタンパク質レベルを示す。
【図１０Ａ】サイトカインＩＬ−４またはＩＦＮｇで刺激した後の、ＷＴ、ＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（Ｈｅｔ）、及びＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージ上の細胞表面マーカーＣＤ８６及びＣＤ２０６の発現を実証するＦＡＣＳデータを示す。
【図１０Ｂ】炎症性メディエーターＬＰＳまたはザイモサンで刺激した後の、ＷＴ及びＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージ上の細胞表面マーカーＣＤ８６の発現を示す。
【図１１Ａ】示された日数の間、成長因子Ｍ−ＣＳＦ中で培養した後の、生きたＷＴ、ＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（ＴＲＥＭ２＋／−）、及びＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージの数を示す。
【図１１Ｂ】６日間Ｍ−ＣＳＦ中（＋Ｍ−ＣＳＦ）、または、４日間Ｍ−ＣＳＦ中で、続いて、３６時間Ｍ−ＣＳＦなし（−Ｍ−ＣＳＦ）で培養した後の、ＷＴ、ＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（ＴＲＥＭ２＋／−）、及びＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージの染色を実証するＦＡＣＳプロットを示す。ＣＤ１１ｂ＋ＤＡＰＩ−ゲート内の生きたマクロファージの割合は、各プロット上に示される。
【図１１Ｃ】成長因子ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、またはＭ−ＣＳＦ＋ＩＬ−４中でそれぞれ、ＷＴ及びＴＲＥＭ２  ＫＯ樹状細胞、Ｍ１マクロファージ、ならびにＭ２マクロファージを培養した後の、ルシフェラーゼ生存率アッセイで検出される発光レベルを示す。
【図１１Ｄ】炎症性メディエーターＩＦＮｇ、ＬＰＳ、またはザイモサン中で培養した後の、生きたＷＴ、ＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（Ｈｅｔ）、及びＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋）の頻度を示す。
【図１２】Ｍ−ＣＳＦなしで培養された野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）骨髄由来マクロファージ（ＢＭｍａｃｓ）によるアポトーシス細胞及びＥ．ｃｏｌｉの貪食を示す。
【図１３】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２のエピトープマップを示す。
【図１４】ＴＲＥＭ２抗体ＭＡＢ１７２９１（ＲＤ）または７８．１８とインキュベーションした後の、野生型及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＳｙｋリン酸化を示し、抗体７８．１８がＳｙｋリン酸化またはＴＲＥＭ２シグナル伝達を誘導しないことを実証する。
【図１５Ａ】抗体ＭＡＢ１７２９１及び抗体Ａｂ２１の、ＴＲＥＭ２−Ｆｃへの同時結合を実証するＦｏｒｔｅｂｉｏ分析を示す。
【図１５Ｂ】抗体ＭＡＢ１７２９１及び抗体Ａｂ５２の、ＴＲＥＭ２−Ｆｃへの同時結合を実証するＦｏｒｔｅｂｉｏ分析を示す。
【図１６】プレート結合架橋ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１またはＡｂ５２のＦａｂ及びＭ−ＣＳＦの存在下で培養された野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス骨髄由来マクロファージの増加した生存率を示す。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。
【図１７Ａ】可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１またはＡｂ５２のＦａｂ及びＭ−ＣＳＦの存在下で培養されたマウス骨髄由来マクロファージの発光生存率アッセイを示す。抗体Ａｂ９９は、陰性アイソタイプ対照を表す。
【図１７Ｂ】可溶性の全長ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１またはＡｂ５２及びＭ−ＣＳＦの存在下で培養されたマウス骨髄由来マクロファージの発光生存率アッセイを示す。抗体Ａｂ９１は、陰性アイソタイプ対照を表す。「ＮＴ」の点線は、未処理のマクロファージ（抗体を加えない）で得られた平均生存率を示す。「Ｍ−ＣＳＦなし」の点線は、マクロファージをＭ−ＣＳＦの不存在下で培養する時に得られる平均生存率を示す。
【図１８Ａ】細胞ベースのアッセイで、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用する、プレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２によるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導を示す。
【図１８Ｂ】プレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）によるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導を示す。
【図１８Ｃ】プレート結合Ｆａｂ抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２のＦａｂによるマウスマクロファージのＴＲＥＭ２依存性遺伝子ＩＬ−６の活性化を示す。
【図１８Ｄ】プレート結合Ｆａｂ抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２のＦａｂによるマウスマクロファージのＴＲＥＭ２依存性遺伝子ＭＣＰ−１の活性化を示す。図１８Ｃ及び１８Ｄのデータは、平均値±ＳＤとして示されており、１グループあたりｎ＝３マウスである。図１８Ｃ及び１８Ｄでは、「Ａｂなし」は、抗体処理のない陰性対照を示し、「２１」は、Ａｂ２１のＦａｂでの処理を示し、「５２」は、Ａｂ５２のＦａｂでの処理を示し、「ｃｔｒ」は、対照抗体のＦａｂでの処理を示す。
【図１９】細胞ベースのアッセイで、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用する、可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２によるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の阻害を示す。
【図２０Ａ−１】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−２】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−３】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−４】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−５】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−６】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−７】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−８】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ａ−９】ＴＲＥＭ２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−１】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−２】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−３】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−４】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−５】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−６】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−７】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−８】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２０Ｂ−９】ＴＲＥＭ２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ配列は、各配列に下線が引かれている。各下線付きのＣＤＲ配列の間の配列領域は、フレームワーク領域に対応する。
【図２１Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５の、組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するマウス細胞株（ＢＷＺ  Ｔ２）への結合を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。
【図２１Ｂ】ＷＴ（Ｔｒｅｍ＋／＋）及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）骨髄由来マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ）に結合する抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５を示す。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。網掛けのヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陰性集団を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陽性集団を表す。
【図２２Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４３、Ａｂ４５、Ａｂ６０、及びＡｂ６５の、組換えヒトＴＲＥＭ２−ＤＡＰ１２融合タンパク質を発現するヒト細胞株（２９３）への結合を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。網掛けヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陰性集団を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陽性集団を表す。
【図２２Ｂ】初代ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）に結合する抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４３、Ａｂ４５、Ａｂ６０、及びＡｂ６５を示す。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。網掛けヒストグラムは、二次抗体単独の陰性対照を表す。黒輪郭のヒストグラムは、ＴＲＥＭ２抗体陽性集団を表す。
【図２３Ａ】プレート結合ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５とインキュベーションした後の、ヒト樹状細胞（ＤＣ）上の細胞表面マーカーＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を実証するＦＡＣＳのドットプロットを示す。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。プロットを、ＣＤ１１ｃ＋  ＨＬＡ−ＤＲ＋  ＬＩＮ−  ＤＣにゲーティングした。ＣＤ８３＋ＣＤ８６＋ゲート内の細胞の割合は、各プロット上に表示される。
【図２３Ｂ】架橋ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５とインキュベーションした後の、ヒト樹状細胞（ＤＣ）上の細胞表面マーカーＣＤ８６の発現を実証するＦＡＣＳヒストグラムを示す。抗体は、抗ヒト二次抗体と架橋されていた。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。
【図２４Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、またはＡｂ４５とインキュベーションした後の、野生型及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＳｙｋリン酸化を示す。抗体Ａｂ８９及びＡｂ９２は、陰性アイソタイプ対照である。
【図２４Ｂ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５とインキュベーションした後の、ヒトマクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＳｙｋリン酸化を示す。抗体Ａｂ１６及びＡｂ７７は、非アゴニスト陰性対照である。
【図２４Ｃ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ５、Ａｂ９、Ａｂ２２、Ａｂ４５、またはＡｂ６５とインキュベーションした後の、初代ヒト樹状細胞におけるウェスタンブロットで測定した時のＳｙｋリン酸化を示す。
【図２５】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、Ａｂ６５、Ａｂ６６、及びＡｂ６８と推定上のＴＲＥＭ２リガンドを発現するＥ．ｃｏｌｉ細菌との間の、ＴＲＥＭ２を発現するマウス及びヒト細胞株への競合的結合を示す。細菌結合は、対照の割合として表現される。２つの独立した実験の平均；黒のバー：アイソタイプ対照との差はない、赤のバー：アイソタイプ対照と有意に異なる（ＡＮＯＶＡ）。
【図２６Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ４５またはＡｂ６５とインキュベーションした後の、マウスマクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＤＡＰ１２リン酸化を示す。
【図２６Ｂ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ２２、またはＡｂ４５とインキュベーションした後の、野生型及びＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージにおけるウェスタンブロットで測定した時のＤＡＰ１２リン酸化を示す。
【図２７Ａ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１及びＡｂ９のエピトープマップを示す。
【図２７Ｂ】ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ４５及びＡｂ６５のエピトープマップを示す。
【図２８】抗体ＭＡＢ１７２９１及び抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５の、ＴＲＥＭ２−Ｆｃへの同時結合を実証するＦｏｒｔｅｂｉｏ分析を示す。対照抗体Ａｂ６３及びＡｂ８７は、ＴＲＥＭ２−Ｆｃに同時結合しなかった。
【図２９】プレート結合架橋ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２２、Ａｂ４５、またはＡｂ６５のＦａｂ及びＭ−ＣＳＦの存在下で培養された野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス骨髄由来マクロファージの増加した生存率を示す。抗体Ａｂ８８は、陰性アイソタイプ対照を表す。
【図３０Ａ】可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂ及びＭ−ＣＳＦの存在下で培養されたマウス骨髄由来マクロファージの発光生存率アッセイを示す。抗体Ａｂ９９は、陰性アイソタイプ対照を表す。
【図３０Ｂ】可溶性の全長ＴＲＥＭ２抗体及びＭ−ＣＳＦの存在下で培養されたマウス骨髄由来マクロファージの発光生存率アッセイを示す。抗体Ａｂ９１は、陰性アイソタイプ対照を表す。「ＮＴ」の点線は、未処理のマクロファージ（抗体を加えない）で得られた平均生存率を示す。「Ｍ−ＣＳＦなし」の点線は、マクロファージをＭ−ＣＳＦの不存在下で培養する時に得られる平均生存率を示す。
【図３１Ａ】細胞ベースのアッセイで、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用する、プレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体によるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導を示す。
【図３１Ｂ】細胞ベースのアッセイで、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用する、プレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体によるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導を示す。
【図３１Ｃ】プレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）によるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導を示す。
【図３２】細胞ベースのアッセイで、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用する、可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体によるＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の阻害を示す。
【図３３】ＴＲＥＭ２を発現するマウス及びヒト細胞株における、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２２及びＡｂ４５とホスファチジルセリン（ＰＳ）またはスフィンゴミエリン（ＳＭ）との間の競合的相互作用を示す。
【図３４Ａ】プレート結合Ｆａｂ抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２２及びＡｂ６５のＦａｂによるマウスマクロファージのＴＲＥＭ２依存性遺伝子ＩＬ−６の活性化を示す。
【図３４Ｂ】プレート結合Ｆａｂ抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２２及びＡｂ６５のＦａｂによるマウスマクロファージのＴＲＥＭ２依存性遺伝子ＭＣＰ−１の活性化を示す。図３４Ａ及び３４Ｂのデータは、平均値±ＳＤとして示されており、１グループあたりｎ＝３マウスである。図３４Ａ及び３４Ｂでは、「Ａｂなし」は、抗体処理のない陰性対照を示し、「２２」は、Ａｂ２２のＦａｂでの処理を示し、「６５」は、Ａｂ６５のＦａｂでの処理を示し、「ｃｔｒ」は、対照抗体のＦａｂでの処理を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
一般的な技術
当業者らによる従来の方法論、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （２００１）  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌ，  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．，  （２００３））；  ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．）：  ＰＣＲ  ２：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｍ．Ｊ．  ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ，  Ｂ．Ｄ．  Ｈａｍｅｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｒ．  Ｔａｙｌｏｒ  ｅｄｓ．  （１９９５）），  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  ｅｄｓ．  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ａｎｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｒ．Ｉ．  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，  ｅｄ．  （１９８７））；  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  （Ｍ．Ｊ．  Ｇａｉｔ，  ｅｄ．，  １９８４）；  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ  （Ｊ．Ｅ．  Ｃｅｌｌｉｓ，  ｅｄ．，  １９９８）  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｒ．Ｉ．  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ），  ｅｄ．，  １９８７）；  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  （Ｊ．Ｐ．  Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．  Ｒｏｂｅｒｔｓ，  １９９８）  Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  （Ａ．  Ｄｏｙｌｅ，  Ｊ．Ｂ．  Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，  ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．  Ｎｅｗｅｌｌ，  ｅｄｓ．，  １９９３−８）  Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｄ．Ｍ．  Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，  ｅｄｓ．）；  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  （Ｊ．Ｍ．  Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．  Ｃａｌｏｓ，  ｅｄｓ．，  １９８７）；  ＰＣＲ：  Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，  （Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  １９９４）；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｊ．Ｅ．  Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  １９９１）；  Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  １９９９）；  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｃ．Ａ．  Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｔｒａｖｅｒｓ，  １９９７）；  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｐ．  Ｆｉｎｃｈ，  １９９７）；  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｄ．  Ｃａｔｔｙ．，  ｅｄ．，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８−１９８９）；  Ｍｏｎｏ��ｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  （Ｐ．  Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．  Ｄｅａｎ，  ｅｄｓ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０００）；  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  （Ｅ．  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．  Ｌａｎｅ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９９）；  Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｍ．  Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｄ．  Ｃａｐｒａ，  ｅｄｓ．，  Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  １９９５）；及びＣａｎｃｅｒ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  （Ｖ．Ｔ．  ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  Ｊ．Ｂ．  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９３）に記載されている、広く利用されている方法論などを使用する、本明細書に記載または参照される技術及び手順は、一般によく理解されており、一般的に用いられる。
【００５５】
定義
本明細書で使用される場合、用語「予防する」は、個体における特定の疾患、障害、または状態の発生または再発に関する予防法の提供を含む。個体は、特定の疾患、障害、若しくは状態に罹患しやすい、かかりやすい、またはこのような疾患、障害、若しくは状態を発症するリスクがあることがあるが、まだ疾患、障害、若しくは状態と診断されていない。
【００５６】
本明細書で使用される場合、特定の疾患、障害、または状態を発症する「リスクがある」個体は、本明細書に記載の治療方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を有しても良く、または有しなくても良く、かつ、検出可能な疾患または疾患の症状を示しても良く、または示なくても良い。「リスクがある」は、個体が、当技術分野で知られている通り、特定の疾患、障害、または状態の発症と相関する測定可能なパラメータである１つ以上のリスク因子を有することを表す。これらのリスクファクターのうちの１つ以上を有する個体は、これらのリスクファクターのうちの１つ以上を有しない個体よりも、特定の疾患、障害、または状態を発症する確率が高い。
【００５７】
本明細書で使用される場合、用語「治療」は、臨床病理の経過中に治療される個体の自然経過を変更するように設計された臨床的介入を指す。望ましい治療効果は、進行速度を減少させること、病理学的状態を改善すること、または軽減させること、及び特定の疾患、障害、または状態の寛解または予後の改善を含む。個体は、例えば、特定の疾患、障害、または状態に関連する１つ以上の症状が緩和または排除される場合、うまく「治療される」。
【００５８】
「有効量」は、所望の治療または予防結果を達成するための、必要な用量及び期間での、少なくとも有効である量を指す。有効量は、１回以上の投与で提供できる。
【００５９】
「治療的有効量」は、特定の疾患、障害、または状態の測定可能な改善を生じるのに少なくとも必要とされる最小濃度である。本明細書の治療的有効量は、患者の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の、個体において所望の応答を誘発する能力などの因子に従い、変化することがある。治療的有効量は、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の有毒または有害な任意の影響よりも、治療上の有益な効果が上回る量でもある。
【００６０】
本明細書で使用される場合、別の化合物または組成物と「共に」投与することは、同時投与及び／または異なる時における投与を含む。共に投与することは、異なる投薬頻度または間隔のもの、及び同じ投与経路または異なる投与経路を使用するものを含む、共製剤としての投与または別の組成物としての投与も包含する。
【００６１】
治療、予防、またはリスクの低減のための「個体」は、ヒト、飼育動物及び家畜、ならびに、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどの動物園、スポーツ、またはペットの動物を含む哺乳動物に分類される任意の動物を指す。好ましくは、個体は、ヒトである。
【００６２】
用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書の「抗体」と同じ意味で使用される。本明細書の用語「抗体」は、広い意味で使用され、具体的には、それらが所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成された多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントをカバーする。
【００６３】
基本的な４鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＶＨ及びＶＬのペアリングは共に、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性の場合、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ８ｔｈ  Ｅｄ．，  Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．  Ｓｔｉｔｅｓ，  Ａｂｂａ  Ｉ．  Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．  Ｐａｒｓｌｏｗ  （ｅｄｓ．），  Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，  Ｎｏｒｗａｌｋ，  ＣＴ，  １９９４，  ｐａｇｅ  ７１  ａｎｄ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６を参照のこと。
【００６４】
任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる、２つの明らかに異なる種類のうちの１つに割り当てることができる。重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。それぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）、イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）及びミュー（「μ」）と呼ばれる重鎖を有する、免疫グロブリンの５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがある。γクラス及びαクラスは、ＣＨ配列及び機能における比較的小さな差異を基準にしてサブクラス（アイソタイプ）にさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２を発現する。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は、よく知られており、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  ４ｔｈ  ｅｄ．  （Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．，  ２０００）に一般に記載されている。
【００６５】
「天然抗体」は通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により、重鎖に結合されているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖によって異なる。各重鎖及び軽鎖はまた、鎖内ジスルフィド架橋を、規則的に間隔を置いて配置する。各重鎖は、一端に、多数の定常ドメインが続く可変ドメイン（ＶＨ）を有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、その他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列しており、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの間のインターフェースを形成すると考えられている。
【００６６】
本開示の単離抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの「単離」抗体は、（例えば、天然または組換えでの）産生環境の構成成分から、同定、分離、及び／または回収されている抗体である。好ましくは、単離ポリペプチドは、産生環境からの他の全ての汚染構成成分との関連性がない。組換えトランスフェクションされた細胞から生じるような、産生環境からの汚染構成成分は通常、抗体に対する研究、診断、または治療用途に支障を来すことになる材料であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質溶質または非タンパク質溶質を含むことがある。好ましい実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えば、Ｌｏｗｒｙ法により測定される時、９５重量％を超えるまで、一部の実施形態では、９９重量％を超えるまで、（２）Ｎ末端の少なくとも１５残基、若しくはスピニングカップシーケンサーの使用により内部アミノ酸配列を得るために十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー若しくは好ましくは、銀染色を使用して、非還元若しくは還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、均一になるまで精製されることになる。単離抗体は、組換えＴ細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕ抗体を含む。それは、抗体の自然環境の少なくとも１つの構成成分は、存在しないからである。しかし、通常は、単離ポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程により調製されるであろう。
【００６７】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と称されることがある。これらのドメインは一般に、（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も可変な部分であり、抗原結合部位を含有する。
【００６８】
用語「可変」は、可変ドメインの特定のセグメントが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体間の配列において広範囲にわたって異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、特定の抗原に対する特異性を規定する。しかし、可変性は、可変ドメインのスパン全体にわたって均一に分布しない。その代わりに、可変性は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方の超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインの、より高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、主にベータシート立体配置をとり、ベータシート構造を連結させるループを形成し、一部の場合では、ベータシート構造の一部を形成する、３つのＨＶＲにより連結される４つのＦＲ領域を含む。各鎖のＨＶＲは、ＦＲ領域により、共に近接して保たれ、他の鎖のＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ  （１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性への関与などの種々のエフェクター機能を示す。
【００６９】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２モノクローナル抗体などの抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化など）を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して向けられる。通常は異なる決定基（エピトープ）に対して向けられる異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンで汚染されていない、ハイブリドーマ培養により合成される点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるような抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従い使用されるべきモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５−９７  （１９７５）；  Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，  １４  （３）：２５３−２６０  （１９９５），  Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  ２ｄ  ｅｄ．  １９８８）；  Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ：  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１  （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）；  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：５８１−５９７  （１９９２）；  Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３３８（２）：  ２９９−３１０  （２００４）；  Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ３４０（５）：１０７３−１０９３  （２００４）；  Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−４７２  （２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２  （２００４））、ならびにヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全部を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：２５５１  （１９９３）；  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８  （１９９３）；  Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７：３３  （１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号；  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３  （１９９２）；  Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９  （１９９４）；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３  （１９９４）；  Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １４：８４５−８５１  （１９９６）；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １４：８２６  （１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３：６５−９３  （１９９５）を参照のこと）を含む種々の技術で作製されることがある。
【００７０】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」、または「完全抗体」は、抗体フラグメントとは対照的に、実質的にインタクト形態の、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体を指すのと同じ意味で使用される。具体的には、完全抗体は、Ｆｃ領域を含む、重鎖及び軽鎖を有する抗体を含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列多様体であって良い。一部の場合では、インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有することがある。
【００７１】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部、好ましくは、抗原結合及び／またはインタクト抗体の可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号の実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８（１０）：１０５７−１０６２  （１９９５）を参照のこと）；一本鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００７２】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、及び残りの「Ｆｃ」フラグメント（名称が容易に結晶化する能力を反映している）を産生する。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と共にＬ鎖全体、及び１つの重鎖の第１定常領域（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合されたＦａｂフラグメントにおおよそ対応し、依然として抗原を架橋できる単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に、いくつかのさらなる残基を有する点で、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が、遊離チオール基を持つＦａｂ’のための本明細書での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ′フラグメントのペアとして産生された。抗体フラグメントの他の化学的連結も、知られている。
【００７３】
Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドで共に保持される両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列により決定され、領域は、特定種類の細胞に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される。
【００７４】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含有する最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、緊密に非共有結合的に会合した、１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折りたたみから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与して、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（それぞれＨ鎖及びＬ鎖から３ループ）が出ている。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）は、結合部位全体よりも親和性が低いが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００７５】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略記される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするＶＨドメイン及びＶＬドメインとの間に、ポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ｖｏｌ．  １１３，  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ２６９−３１５  （１９９４）を参照のこと。
【００７６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体の「機能的フラグメント」は、インタクト抗体の抗原結合若しくは可変領域またはＦｃＲ結合能を保持する、若しくは修飾している抗体のＦ領域を一般に含むインタクト抗体の一部を含む。抗体フラグメントの例としては、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
用語「ダイアボディ」は、Ｖドメインの鎖間ペアリングではなく鎖内ペアリングが達成され、それにより２価のフラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメント、を生じるように、ＶＨドメイン及びＶＬドメインとの間の短いリンカー（約５〜１０残基）を有するｓＦｖフラグメント（先行段落を参照のこと）を構築することにより調製された小さな抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８  （１９９３）で、より詳細に記載されている。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、所望の生物学的活性を示す限り、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の種に由来する、または特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残部が別の種に由来する、または別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である本開示のキメラ抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体（免疫グロブリン）、ならびに、このような抗体のフラグメントを指す（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８１：６８５１−５５  （１９８４））。本明細書の目的のキメラ抗体は、抗体の抗原結合領域が、例えば、目的の抗原をマカクザルに免疫することにより産生される抗体に由来するＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含む。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００７９】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体のヒト化形態などの非ヒト（例えばネズミ）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基により交換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基により交換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見出されない残基を含むことがある。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能をさらに改良するために行われることがある。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたはほぼ全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたはほぼ全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つの及び通常は２つの可変ドメインのほぼ全てを含むであろう。但し、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を改善する１つ以上の個々のＦＲ残基置換を含んでも良い。ＦＲのこれらのアミノ酸置換の数は通常、Ｈ鎖では６以下であり、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体は任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、通常は、ヒト免疫グロブリンのものを含むであろう。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５  （１９８６）；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９  （１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２：５９３−５９６  （１９９２）を参照のこと。さらに、例えば、Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，  Ａｎｎ．  Ａｌｌｅｒｇｙ，  Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １：１０５−１１５  （１９９８）；  Ｈａｒｒｉｓ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８  （１９９５）；  Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ５：４２８−４３３  （１９９４）；及びＵ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏｓ．  ６，９８２，３２１  ａｎｄ  ７，０８７，４０９を参照のこと。
【００８０】
「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される、及び／または、本明細書で開示されるように、ヒト抗体を作成するための技術のいずれかを使用して作製されている、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体の配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は特に、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特異的に排除する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む、種々の当該技術分野において既知の技術を使用して産生できる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２７：３８１  （１９９１）；  Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１  （１９９１）。さらに、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  ｐ．  ７７  （１９８５）；  Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４７（１）：８６−９５  （１９９１）に記載されている方法は、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ５：３６８−７４  （２００１）も参照のこと。ヒト抗体は、抗原暴露に応答してこのような抗体を産生するために修飾されているが、その内因性の遺伝子座は無効化されているトランスジェニック動物（例えば、免疫化ゼノマウス）に、抗原を投与することにより調製できる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号、及び同第６，１５０，５８４号を参照のこと）。さらに、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されたヒト抗体に関するＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １０３：３５５７−３５６２  （２００６）を参照のこと。
【００８１】
用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」は、本明細書で使用される場合、配列中で超可変である、及び／または、構造的に規定されたループを形成する、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体のような抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲ；ＶＨの３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬの３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は、６つのＨＶＲのほとんどの多様性を示し、Ｈ３は特に、抗体に細かい特異性を付与することにおいて、独特の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５  （２０００）；  Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｕ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１−２５  （Ｌｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，  ２００３））を参照のこと。実に、天然のラクダ抗体は、軽鎖の非存在下では機能的で安定な重鎖のみからなる。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８  （１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ３：７３３−７３６  （１９９６）を参照のこと。
【００８２】
多数のＨＶＲの図が使用されており、本明細書に包含されている。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（上記Ｋａｂａｔら）。その代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７  （１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用される。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいている。これらのＨＶＲのそれぞれからの残基は、以下に表される。
【００８３】
2020063268.tif 000003
【００８４】
ＨＶＲは、次のように「拡張ＨＶＲ」を含んでも良い：ＶＬの２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ならびに、ＶＨの２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（好ましい実施形態）（Ｈ２）、及び９３〜１０２、９４〜１０２、または９５〜１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの拡張ＨＶＲの定義のそれぞれについて、上記Ｋａｂａｔらに従って番号付けがされる。
【００８５】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に規定されたようなＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００８６】
語句「Ｋａｂａｔのような可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置番号付け」及びその変形物は、上記Ｋａｂａｔらの抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮、または、これへの挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有しても良い。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、ならびに重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含んでも良い。所与の抗体に対する残基のＫａｂａｔ番号付けは、抗体の配列の、「標準」Ｋａｂａｔ番号付けされた配列との相同性の領域で整列させることにより決定されても良い。
【００８７】
Ｋａｂａｔ番号付けシステムは一般に、可変ドメインの残基（およそ軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）を指す場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  （１９９１））。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵインデックス」は一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域の残基を指す場合に使用される（例えば、上記Ｋａｂａｔらで報告されるＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。抗体の定常領域における残基番号への言及は、ＥＵ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する（例えば、米国特許公報第２０１０−２８０２２７号を参照のこと）。
【００８８】
本明細書で使用される「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいても良く、または既存のアミノ酸配列変化を含有しても良い。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましいこれらの変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ、及び７８Ｈの３つ、２つ、または１つのみで生じ、例えば、これらの位置のアミノ酸残基は、７１Ａ、７３Ｔ、及び／または７８Ａであって良い。一実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列が、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００８９】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ  （１９９１）のようなサブグループである。ＶＬの例としては、サブグループは、上記ＫａｂａｔらのようなサブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ、またはカッパＩＶであって良い。さらに、ＶＨの場合、サブグループは、上記ＫａｂａｔらのようなサブグループＩ、サブグループＩＩ、またはサブグループＩＩＩであって良い。
【００９０】
例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の、特定の位置での「アミノ酸修飾」は、特定の残基の置換若しくは欠失、または特定の残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接している」挿入は、その１〜２残基内の挿入を意味する。挿入は、特定の残基のＮ末端またはＣ末端であって良い。本明細書の好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
【００９１】
本開示の親和性成熟抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの「親和性成熟」抗体は、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の改変を有する抗体であり、これらは、これらの改変（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗体の抗原に対する親和性に改善をもたらす。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対するナノモルまたはさらにピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当該技術分野で既知の手順により産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３  （１９９２）は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載する。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異導入は、例えば、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３  （１９９４）；  Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５  （１９９５）；  Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：１９９４−２００４  （１９９５）；  Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４（７）：３３１０−９  （１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２６：８８９−８９６  （１９９２）により記載されている。
【００９２】
本明細書で使用される場合、用語「特異的に認識する」または「特異的に結合する」は、生物学的分子を含む分子の異種集団の存在下で、標的の存在を決定づける、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体及びＴＲＥＭ２の間、または抗ＤＡＰ１２抗体及びＤＡＰ１２の間などの標的及び抗体の間の引力または結合などの測定可能で再現性のある相互作用を指す。例えば、標的またはエピトープに特異的または優先的に結合する、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体は、他の標的または標的の他のエピトープに結合するよりも、より高い親和性、結合活性を有し、より容易に、及び／または、より長い期間、この標的またはエピトープに結合する抗体である。例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分）は、第２の標的に特異的または優先的に結合することがある、または結合しないことがあることが、この定義を読むことによっても理解される。そのようなものであるから、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含むことができるが）必ずしも必要とはしない。標的に特異的に結合する抗体は、少なくとも約１０３Ｍ−１若しくは１０４Ｍ−１の、時によると、約１０５Ｍ−１若しくは１０６Ｍ−１、他の場合、約１０６Ｍ−１若しくは１０７Ｍ−１、約１０８Ｍ−１〜１０９Ｍ−１、または１０１０Ｍ−１〜１０１１Ｍ−１以上の結合定数を有しても良い。種々のイムノアッセイフォーマットは、特定のタンパク質と特異的免疫反応性のある抗体を選択するために使用できる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的免疫反応性のあるモノクローナル抗体を選択するために日常的に使用される。特異的免疫反応性を決定するために使用できるイムノアッセイフォーマット及び条件については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。
【００９３】
本明細書で使用される場合、ＴＲＥＭ２タンパク質またはＤＡＰ１２タンパク質及び第２のタンパク質の間の「相互作用」は、タンパク質−タンパク質相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及びイオン結合を包含するが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、抗体が、２つのタンパク質間の相互作用を、破壊、低減、または完全に排除する時、抗体は、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。本開示の抗体またはそのフラグメントは、抗体またはそのフラグメントが、２つのタンパク質の１つに結合する時、２つのタンパク質間の「相互作用を阻害する」。
【００９４】
「アゴニスト」抗体または「活性化」抗体は、抗体が抗原に結合した後に、抗原の１つ以上の活性または機能を誘導する（例えば、増加させる）、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体またはアゴニスト抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体である。
【００９５】
「アンタゴニスト」抗体または「ブロッキング」抗体は、抗体が抗原に結合した後に、１つ以上のリガンドに結合する抗原を低減させ、または排除する（例えば、減少させる）、及び／または、抗体が抗原に結合した後に、抗原の１つ以上の活性または機能を低減させる、または排除する（例えば、減少させる）、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体またはアンタゴニスト抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体である。
【００９６】
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列多様体Ｆｃ領域）に起因する生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって異なる。
【００９７】
本明細書の用語「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域及び多様体Ｆｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、変化することがあるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位またはＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端に伸びると規定される。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵ番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生若しくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え遺伝子操作することにより、除去されても良い。従って、インタクト抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、ならびにＫ４４７残基を有する抗体及びＫ４４７残基を有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含んでも良い。本発明の抗体に使用されるのに好適な天然配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。
【００９８】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａアロタイプ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然多様体を含む。
【００９９】
「多様体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）のために天然配列Ｆｃ領域のものと異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、多様体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に、約１〜約１０のアミノ酸置換、好ましくは、約１〜約５のアミノ酸置換、を有する。本明細書の多様体Ｆｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を有することになる。
【０１００】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体について記載する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合し、これらの受容体の対立遺伝子多様体及び選択的スプライシング形態を含むＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むものであり、ＦｃγＲＩＩ受容体は、主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含有する。（例えば、Ｍ．  Ｄａｅｒｏｎ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５：２０３−２３４  （１９９７）参照のこと）。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ９：４５７−９２  （１９９１）；  Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４  （１９９４）；及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｌａｂ．  Ｃｌｉｎ．  Ｍｅｄ．  １２６：  ３３０−４１  （１９９５）で概説される。将来同定されるべきものを含む他のＦｃＲは、本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。ＦｃＲはまた、抗体の血清半減期を増加させることができる。
【０１０１】
インビボでのＦｃＲｎへの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウス若しくはトランスフェクションされたヒト細胞株において、または多様体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類において、アッセイできる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合が改善されたまたは減少する抗体多様体について記載する。さらに、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ９（２）：６５９１−６６０４  （２００１）を参照のこと。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及びペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関する「相同性」は、必要に応じて最大パーセント配列同一性を達成するために、配列を整列させ、ギャップを導入した後の、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の割合を指し、任意の保存的置換を、配列同一性の一部として考慮しない。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮＴＭ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の範囲内の種々の手段で達成できる。当業者らは、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる、当該分野で既知の任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定できる。
【０１０３】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体をコードする「単離」核酸分子は、同定され、それが産生された環境に通常関連する少なくとも１つの汚染核酸分子から分離される核酸分子である。好ましくは、単離核酸は、産生環境に関連する全ての構成成分との関連がない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離核酸分子は、天然に見出される形態または状況以外の形態である。それ故、単離核酸分子は、細胞中に天然に存在する、本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。
【０１０４】
本明細書で使用される用語「ベクター」は、それが結合されている別の核酸を輸送できる核酸分子を指すものとする。１つの種類のベクターは、「プラスミド」であり、これは、付加的なＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡを指す。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別の種類のベクターは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得るウイルスベクターである。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）において自律的複製が可能である。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に、宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に結合されている遺伝子の発現を指示できる。このようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」または単に「発現ベクター」と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術における実益のある発現ベクターは多くの場合、プラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、「プラスミド」及び「ベクター」は、同じ意味で使用されることがある。
【０１０５】
本明細書で同じ意味で使用される「ポリヌクレオチド」、または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド若しくは塩基、及び／またはそれらの類似体、あるいは、ＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼにより、または合成反応により、ポリマーに取り込むことができる任意の基質である可能性がある。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含んでも良い。存在する場合、ヌクレオチド構造の修飾は、ポリマーの構築の前または後に付与されることがある。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成成分により割り込まれても良い。ポリヌクレオチドは、標識へのコンジュゲートなどの、合成後に行われる修飾（複数可）を含むことがある。他の種類の修飾は、例えば、「キャップ」、天然ヌクレオチドのうちの１つ以上の、類似体との置換、例えば、電荷のない結合を有するもの（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）及び電荷を持つ結合を有するもの（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、例えば、タンパク質などのペンダント部分を含有するもの（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リシンなど）、インターカレーターを有するもの（例えば、アクリジン、ソラレンなど）、キレート化剤を含有するもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）、アルキル化剤を含有するもの、結合が修飾されたもの（例えば、アルファアノマー核酸など）、未修飾形態のポリヌクレオチド（複数可）などのヌクレオチド間の修飾を含む。さらに、糖類に通常存在するヒドロキシル基のいずれかは、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基と交換され、標準的な保護基で保護され、若しくはさらなるヌクレオチドへのさらなる結合を調製するために活性化されても良く、または、固体若しくは半固体の支持体にコンジュゲートされても良い。５′末端及び３′末端ＯＨは、リン酸化またはアミン若しくは１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部分で置換できる。他のヒドロキシルはまた、標準的な保護基に誘導体化されても良い。ポリヌクレオチドはまた、例えば、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−アリルリボース、２’−フルオロリボース、または２’−アジドリボース；炭素環式糖類似体；α−アノマー糖；アラビノース、キシロース、またはリキソースなどのエピマー糖類；ピラノース糖；フラノース糖；セドヘプツロース；非環式類似体；及びメチルリボシドなどの塩基性ヌクレオシド類似体を含む、当技術分野で一般に既知の類似体形態のリボースまたはデオキシリボース糖を含有する可能性がある。１つ以上のリン酸ジエステル結合は、代替結合基により交換されても良い。これらの代替結合基は、ホスフェートが、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）またはＯＲ′、ＣＯ、またはＣＨ２（「ホルムアセタール」）により交換され、各ＲまたはＲ’は独立して、Ｈ、または、任意に、エーテル（−Ｏ−）結���、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはアルラルジルを含有する置換若しくは非置換アルキル（１〜２０Ｃ）である、実施形態を含むが、これらに限定されない。ポリヌクレオチド中の全ての結合が同一である必要はない。先行記載は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【０１０６】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートの取り込みのためのベクター（複数可）のレシピエントである可能性がある、またはこれであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、自然の、偶然の、または故意の変異のために元の親細胞とは必ずしも（形態学的に、またはゲノムＤＮＡ相補的に）完全に同一でないことがある。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチド（複数可）を、インビボでトランスフェクトされた細胞を含む。
【０１０７】
本明細書で使用される「担体」は、用いられる投薬量及び濃度で、それに曝露される細胞または哺乳動物に対して非毒性である薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、若しくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトール若しくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／または、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１０８】
本明細書で使用される用語「約」は、当業者に容易に知られているそれぞれの値に対する通常の誤差範囲を指す。本明細書の「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータそれ自体に関する実施形態を含む（及び記載する）。
【０１０９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明示しない限り、複数の言及を含む。例えば、「抗体」への言及は、モル量などの１つの抗体から多くの抗体までの言及であり、当業者らに既知のそれらの等価物などを含む。
【０１１０】
本明細書に記載されている本発明の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むと理解されている。
【０１１１】
概要
本開示は、１つ以上のアゴニストまたはアンタゴニスト活性を有する抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体；このような抗体の製造及び使用方法；このような抗体を含有する医薬組成物；このような抗体をコードする核酸；ならびに、このような抗体をコードする核酸を含有する宿主細胞に関する。
【０１１２】
一部の実施形態では、理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体のアゴニスト活性が、少なくとも部分的には、抗体の、細胞表面上にＴＲＥＭ２受容体クラスター形成を誘導または保持する能力に起因すると考えられている。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＴＲＥＭ２に特異的に結合するだけでなく、隣接する細胞上のＦｃ受容体にも結合することにより、インビボでＴＲＥＭ２受容体クラスター形成を誘導または保持でき、これは、次にＴＲＥＭ２を凝集させる抗体凝集をもたらすと考えられている。有利には、ＩｇＧ２及びＩｇＭを含むがこれらに限定されない特定の免疫グロブリンアイソタイプは、隣接する細胞上のＦｃ受容体に結合することなく標的抗原（例えば、ＴＲＥＭ２）のクラスター形成を誘導または保持する固有の能力を有する。一部の実施形態では、アゴニストＴＲＥＭ２活性は、ＴＲＥＭ２及び架橋抗ＴＲＥＭ２抗体に曝露された抗体の密度を増加させるためのプレート結合全長抗ＴＲＥＭ２抗体を含むがこれらに限定されない、本明細書で開示されるいくつかの技術（例えば、実施例２３〜２６、３４〜３７、４１〜４４、５２〜５５、及び６７〜６８を参照のこと）のいずれかにより、インビトロで測定または試験できる。
【０１１３】
従って、本開示の特定の態様は、少なくとも部分的には、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に高親和性で結合でき（例えば、実施例１及び４０を参照のこと）；ヒト及びマウスＴＲＥＭ２上のリガンド結合部位への結合についてＴＲＥＭ２リガンドと競合し（例えば、実施例２６及び４３参照のこと）；ＣＤ８３＋ＣＤ８６＋樹状細胞の誘導（例えば、実施例２３及び４１を参照のこと）、マクロファージ及び樹状細胞のＴＲＥＭ２下流シグナル伝達分子Ｓｙｋの誘導（例えば、実施例２４及び４２を参照のこと）、マクロファージのＴＲＥＭ２シグナル伝達アダプター分子ＤＡＰ１２の誘導（例えば、実施例２５及び４４を参照のこと）、マクロファージなどの自然免疫細胞の細胞生存の誘導（例えば、実施例３４及び５２を参照のこと）、ならびに、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の活性化（例えば、実施例３６、３８、５４、５６、及び６８を参照のこと）を含むがこれらに限定されない１つ以上のアゴニストＴＲＥＭ２活性を示す、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の同定に基づいている。
【０１１４】
本開示のさらなる態様は、少なくとも部分的には、抗体が、ＴＲＥＭ２受容体クラスター形成を誘導または保持することができないように産生される、または別途フォーマットされる時、本開示のＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体が、アンタゴニスト活性も誘導できるという驚くべき発見に基づいている。一部の実施形態では、本開示のＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、自然免疫細胞の細胞生存の阻害を含むがこれらに限定されない１つ以上のアンタゴニストＴＲＥＭ２活性（例えば、実施例３５及び５３を参照のこと）ならびにＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の阻害（例えば、実施例３７、５５、及び６７を参照のこと）を示す。
【０１１５】
ＴＲＥＭ２タンパク質
一態様では、本発明は、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に結合し、細胞で発現されたＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する抗体を提供する。
【０１１６】
本開示のＴＲＥＭ２タンパク質は、哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＺＣ２）、マウスＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９ＮＨ８）、ラットＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｄ３ＺＺ８９）、アカゲザルＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ６ＱＶＦ２）、ウシＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０５Ｂ５９）、ウマＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ７Ｄ６Ｌ０）、ブタＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｈ２ＥＺＺ３）、及びイヌＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｅ２ＲＰ４６）を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「ＴＲＥＭ２タンパク質」は、野生型配列及び天然多様体配列の両方を指す。
【０１１７】
骨髄細胞２（ＴＲＥＭ２）上に発現されるトリガー受容体は、骨髄系細胞−２ａ上に発現する受容体を誘発するＴＲＥＭ−２、Ｔｒｅｍ２ａ、Ｔｒｅｍ２ｂ、Ｔｒｅｍ２ｃ、及び単球２上に発現されるトリガー受容体と様々に称される。ＴＲＥＭ２は、２３０アミノ酸の膜タンパク質である。ＴＲＥＭ２は、マクロファージ、樹状細胞、破骨細胞、ミクログリア、単球、皮膚のランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞を含むがこれらに限定されない、骨髄系細胞上に主に発現される免疫グロブリン様受容体である。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２は、ＤＡＰ１２との受容体シグナル伝達複合体を形成する。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２は、ＤＡＰ１２（ＩＴＡＭドメインアダプタータンパク質）を介して、リン酸化してシグナル伝達する。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２シグナル伝達は、ＰＩ３Ｋまたは他の細胞内シグナルの下流の活性化をもたらす。骨髄細胞上で、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナルは、例えば、感染応答との関連で、ＴＲＥＭ２活性の活性化に重要である。ＴＬＲ、例えば、マクロファージ及び樹状細胞で発現されたＴＬＲはまた、病理学的炎症性応答において鍵となる役割を果たす。
【０１１８】
一部の実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２アミノ酸配列の例は、配列番号１として以下に示す：
【０１１９】
2020063268.tif 000004
【０１２０】
一部の実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２は、シグナルペプチドを含むプレタンパク質である。一部の実施形態では、ヒトＴＲＥＭ２は、成熟タンパク質である。一部の実施形態では、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質は、シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質は、細胞上に発現される。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１〜１８に位置するシグナルペプチド；ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基２９〜１１２に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン；ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１３〜１７４に位置する追加の細胞外配列；ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１７５〜１９５に位置する膜貫通ドメイン；及びヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１９６〜２３０に位置する細胞内ドメインを含有する。
【０１２１】
ヒトＴＲＥＭ２の膜貫通ドメインは、ＤＡＰ１２のアスパラギン酸と相互作用できるアミノ酸残基１８６にリシンを含有し、これは、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及び他の関連するＩｇＶファミリーメンバーからのシグナル伝達を変換する重要なアダプタータンパク質である。
【０１２２】
ヒトＴＲＥＭ２のホモログには、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体ＮＫ−ｐ４４（ＮＣＴＲ２）、多量体免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００Ａ、ＣＤ３００Ｃ、及びＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ１を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ＮＣＴＲ２は、ＩｇＶドメイン内のＴＲＥＭ２と類似性を有する。
【０１２３】
ＤＡＰ１２タンパク質
一態様では、本発明は、本開示のＤＡＰ１２タンパク質に結合し、細胞で発現されたＤＡＰ１２に結合した後に、１つ以上のＤＡＰ１２活性を調節する抗体を提供する。
【０１２４】
本開示のＤＡＰ１２タンパク質は、哺乳動物ＤＡＰ１２タンパク質、ヒトＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｏ４３９１４）、マウスＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｏ５４８８５）、ラットＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ６Ｘ９Ｔ７）、アカゲザルＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ８ＷＮＱ８）、ウシＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９５Ｊ８０）、及びブタＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＴＵ４５）を含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「ＤＡＰ１２タンパク質」は、野生型配列及び天然多様体配列の両方を指す。
【０１２５】
ＤＮＡＸ活性化タンパク質１２（ＤＡＰ１２）は、キラー活性化受容体関連タンパク質、ＫＡＲ関連タンパク質（ＫＡＲＡＰ）、ＰＬＯＳＬ、ＰＬＯ−ＳＬ、ＴＹＲＯタンパク質、及びチロシンキナーゼ結合タンパク質と様々に称される。ＤＡＰ１２は、１１３アミノ酸の膜タンパク質である。一部の実施形態では、ＤＡＰ１２は、細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する膜貫通型シグナル伝達ポリペプチドとして機能する。それは、キラー細胞阻害性受容体（ＫＩＲ）ファミリーの膜糖タンパク質に会合することがあり、活性化シグナル伝達要素として作用することがある。他の実施形態では、ＤＡＰ１２タンパク質は、ゼータ鎖（ＴＣＲ）関連タンパク質キナーゼ７０ｋＤａ（ＺＡＰ−７０）及び脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）に結合し、シグナル伝達、骨形成、脳ミエリン形成、及び炎症に関与する。
【０１２６】
ＤＡＰ１２をコードする遺伝子内の変異は、那須−ハコラ病としても知られている硬化性白質脳症を伴う脂肪膜性多発嚢胞性骨異形成症（ＰＬＯＳＬ）と関連する。理論に拘束されることを望むものではないが、ＤＡＰ１２受容体は、ＰＬＯＳＬも引き起こすＴＲＥＭ２であると考えられている。異なるアイソフォームのＤＡＰ１２をコードする複数の代替転写物多様体が同定されている。ＤＡＰ１２は、ＣＤ３００ファミリーの活性化レセプターと非共有結合的に会合する。ＣＤ３００−ＴＹＲＯＢＰ／ＤＡＰ１２複合体の架橋は、インテグリンにより媒介される好中球活性化などの細胞活性化をもたらす。ＤＡＰ１２は、ホモ二量体：ジスルフィド結合タンパク質である。一部の実施形態では、ＤＡＰ１２は、類似性により、かつＩＴＡＭドメイン介して、ＳＩＲＰＢ１、ＴＲＥＭ１、ＣＬＥＣＳＦ５、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ３００Ｅ、及びＣＤ３００Ｄと相互作用し、ＳＨ２ドメインを介して、ＳＹＫと相互作用する。他の実施形態では、ＤＡＰ１２は、好中球及びマクロファージインテグリン媒介活性化を媒介するＳＹＫを活性化する。他の実施形態では、ＤＡＰ１２は、ＫＬＲＣ２及びＫＩＲ２ＤＳ３と相互作用する。
【０１２７】
一部の実施形態では、ヒトＤＡＰ１２アミノ酸配列の例は、配列番号２として以下に示す。
【０１２８】
2020063268.tif 000005
【０１２９】
一部の実施形態では、ヒトＤＡＰ１２は、シグナルペプチドを含むプレタンパク質である。一部の実施形態では、ヒトＤＡＰ１２は、成熟タンパク質である。一部の実施形態では、成熟ＤＡＰ１２タンパク質は、シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、成熟ＤＡＰ１２タンパク質は、細胞上に発現される。ＤＡＰ１２は、シングルパスＩ型膜タンパク質である。それは、ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基２２〜４０に位置する細胞外ドメイン；ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基４１〜６１に位置する膜貫通ドメイン；及びヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基６２〜１１３に位置する細胞内ドメインを含有する。免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインは、ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基８０〜１１８に位置する。
【０１３０】
一部の実施形態では、ＤＡＰ１２のアスパラギン酸残基は、アミノ酸残基１８６にリシンを含有するヒトＴＲＥＭ２の膜貫通ドメインと相互作用し、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及び他の関連するＩｇＶファミリーメンバータンパク質からのシグナル伝達を変換する。
【０１３１】
抗ＴＲＥＭ２及び抗ＤＡＰ１２抗体
本開示の特定の態様は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に特異的に結合する抗体に関する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合し、成熟ＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質は、細胞上に発現される。一部の実施形態では、本開示の抗体は、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト皮膚ランゲルハンス細胞、ヒトクッパー細胞、ヒトミクログリア、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のヒト細胞上に発現されるＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗体は、アゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗体は、不活性抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０１３２】
アゴニスト抗体
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は一般に、細胞上で発現された１つ以上のＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合する。抗体の１つのクラスは、アゴニスト抗体である。例えば、ＴＲＥＭ２受容体は、シグナルを伝達するために、細胞表面上でクラスター形成することを必要とすると考えられている。従って、アゴニスト抗体は、例えば、ＴＲＥＭ２受容体を刺激する独特の特徴を有することがある。例えば、それらは、受容体活性化に適合する適切なエピトープ特異性、ならびに、細胞表面上で受容体クラスター形成を誘導または保持する能力を有することがある。
【０１３３】
インビボで、抗体は、複数の潜在的機序により、受容体をクラスター形成することがある。ＩｇＧ２などのヒト抗体の一部のアイソタイプは、ユニークな構造のために、受容体をクラスター形成し、またはクラスター形成された立体配置で受容体を保持し、それにより、Ｆｃ受容体に結合することなくＴＲＥＭ２などの受容体を活性化する固有の能力を有する（例えば、Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  １３８−１４８）。
【０１３４】
他の抗体は、隣接した細胞上のＦｃｇ受容体に結合することにより、受容体（例えば、ＴＲＥＭ２）をクラスター形成する。Ｆｃｇ受容体に対する抗体の定常ＩｇＧ  Ｆｃ部分の結合は、抗体の凝集をもたらし、抗体は、次に、それらが可変領域を介して結合する受容体を凝集させる（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ  （２００８）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ，  ４５：３９２６−３９３３；  ａｎｄ  Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，  １０１−１１３）。ＦｃｇＲＩＩＢに結合することが、免疫の有害作用と関連していないので、サイトカイン分泌、酸化的バースト、食作用の増加、及び抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増強を誘発しない阻害性Ｆｃｇ受容体ＦｃｇＲ（ＦｃｇＲＩＩＢ）に結合することは多くの場合、抗体をインビボでクラスター形成する好ましい手段である。
【０１３５】
他のメカニズムも、受容体（例えば、ＴＲＥＭ２）をクラスター形成するために使用されても良い。例えば、共に架橋される抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）は、上記のように、Ｆｃｇ受容体に結合するＦｃ領域を有する抗体に類似した仕方で受容体（例えば、ＴＲＥＭ２）をクラスター形成するために使用されても良い。理論に拘束されることを望むものではないが、架橋抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント）は、細胞表面上に受容体クラスター形成を誘導し、標的上の適切なエピトープ（例えば、ＴＲＥＭ２）に結合する場合、アゴニスト抗体として機能することがあると考えられている。
【０１３６】
それ故、一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合する抗体は、エピトープ特異性により、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に結合し、１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性を活性化するアゴニスト抗体を含むことがある。理論に拘束されることを望むものではないが、このような抗体は、標的抗原（例えば、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２）上のリガンド結合部位に結合し、天然リガンドの作用を模倣する、または、リガンド結合部位ではなない１つ以上のドメインに結合することにより、シグナルを伝達するために、標的抗原を刺激することがある。このような抗体は、リガンド結合と干渉しないことになり、天然リガンドと相加的または相乗的に作用することがある。
【０１３７】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、１つ以上のＤＡＰ１２活性、または１つ以上のＴＲＥＭ２活性及び１つ以上のＤＡＰ１２活性を誘導するアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗体は、細胞に発現されるＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２の１つ以上の活性を誘導する。特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、１つ以上のＤＡＰ１２活性、またはその両方は、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２に結合すること；ＤＡＰ１２リン酸化反応；ＴＲＥＭ２リン酸化；ＰＩ３Ｋ活性化；１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現の増加；ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０から選択される１つ以上の抗炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン）の発現の増加；１つ以上の前炎症性サイトカイン発現の低減；ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、ＴＮＧ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ｍＣＰ−１、及びＣＲＰからなる群から選択される１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減；ＴＮＦ−αの発現の低減；ＩＬ−６の発現の低減；細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加；ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強、正常化、またはその両方；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、活性化Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、ならびにクッパー細胞のうちの１つ以上の生存及び／または機能を増加させること；アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病原性タンパク質クリアランス、病原性ペプチドクリアランス、及び病原性核酸クリアランスから選択される１種以上のクリアランスの誘導；アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性タンパク質、病原性ペプチド、または病原性核酸（例えば、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡ）のうちの１つ以上の貪食の誘導；破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方のＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体へのリクルート；Ｓｙｋリン酸化；樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／またはミクログリア上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減；ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ−８��ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、及びＩＬ−１８から選択される１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させること；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下で、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させること；１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子（例えば、活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ファミリー転写因子の転写因子）の活性を増加させることから選択される。
【０１３８】
標的受容体を活性化するＦｃｇＲ受容体への結合に依存する抗体は、ＦｃｇＲ結合を排除するように遺伝子操作される場合、そのアゴニスト活性を失うことがある（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １９，  １０１−１１３；  Ａｒｍｏｕｒ  ａｔ  ａｌ．，  （２００３）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０  （２００３）  ５８５−５９３）；及びＷｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  １３８−１４８を参照のこと）。そのようなものであるから、適切なエピトープ特異性を有する本開示の抗体は、抗体がヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１及びヒンジ領域）由来のＦｃドメイン若しくは阻害性ＦｃｇＲＩＩＢ受容体に優先的に結合できる別の種類のＦｃドメインまたはそれらの変形物を有する時、アゴニスト抗体であり、標的抗原を最小限の有害作用で活性化できると考えられている。
【０１３９】
例示的なアゴニスト抗体Ｆｃアイソタイプ及び修飾は、以下の表２で提供される。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、以下の表２に記載されているＦｃアイソタイプを有する。
【０１４０】
2020063268.tif 000006
【０１４１】
表２に記載されているアイソタイプに加えて、理論に拘束されることを望むものではないが、ヒトの活性化Ｆｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＣ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ならびに／またはマウスのＦｃｇ受容体Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶに結合するヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ及びそれらの変異体（例えば、Ｓｔｒｏｈｌ  （２００９）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２００９，  ２０：６８５−６９１）を有する抗体は、インビボでアゴニスト抗体としても作用することがあるが、ＡＤＣＣと関連する有害な影響と関連することがあると考えられている。しかし、このような受容体は、阻害Ｆｃｇ受容体ＦｃｇＲＩＩＢと比較して、インビボでの抗体結合にはあまり利用されないようである（例えば、Ｗｈｉｔｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ６２，  ９４１−９４８；及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１１）  ＩＳｃｉｅｎｃｅ  ３３３（６０４５）：１０３０−１０３４．を参照のこと）。
【０１４２】
一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する。
【０１４３】
特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、Ｆｃ受容体への結合とは関係なく、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．  ３１；  Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０００）  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ６８：５６３−５７１）、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（ＵＳ２００７／０１４８１６７；  Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：  ２６１３−２６２４；  Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７；  Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｔｈｅ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １（Ｓｕｐｐｌ．１）：２７）、Ｃ２３２Ｓ、及び／若しくはＣ２３３Ｓ（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  １３８−１４８）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ４５：３９２６−３９３３）、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、ならびに／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則による。
【０１４４】
一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、Ｃ１２７Ｓアミノ酸置換を含有する重鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則による（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  １３８−１４８；  Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２；及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０１４５】
一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含有するκ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則による（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  １３８−１４８；  Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ  １９：７５３−７６２；及びＷＯ２００８０７９２４６）。
【０１４６】
特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６，  ６５９１−６６０４）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ９２：１１９８０−１１９８４；  Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．  ３１；  Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０００）  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００：１６−２６）、Ｇ２３７Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７：１５３７−１５４３．  ３１；  Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ２００：１６−２６）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｂｌｏｏｄ，  １０９：１１８５−１１９２）、Ｐ３３１Ｓ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００８，  １０５：２０１６７−２０１７２）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則による。
【０１４７】
一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１５）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  １３８−１４８）。特定の実施形態では、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含有する。一部の実施形態では、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則による。
【０１４８】
特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施形態では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０００）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３）、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則による。
【０１４９】
特定の実施形態では、アゴニスト抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、アゴニスト抗体は、ヒトＩｇＧ２のＫａｂａｔ番号付け規則によるアミノ酸１１８〜２６０、及びヒトＩｇＧ４のＥＵまたはＫａｂａｔの番号付けによるアミノ酸２６１〜４４７を含有するアミノ酸配列を含む（ＷＯ１９９７／１１９７１；ＷＯ２００７／１０６５８５）。
【０１５０】
特定の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ４定常領域を含有する（Ｂａｒｔｈｏｌｏｍａｅｕｓ，  ｅｔ  ａｌ．  （２０１４）．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９２，  ２０９１−２０９８）。
【０１５１】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則による。
【０１５２】
不活性抗体
本開示の抗体の別のクラスは、不活性抗体を含む。本明細書で使用される場合、「不活性」抗体は、標的抗原に特異的に結合するが、抗原機能を調節（例えば、低減／阻害または活性化／誘導）しない抗体を指す。例えば、ＴＲＥＭ２の場合、不活性抗体は、リガンド結合及び／またはＴＲＥＭ２活性を調節しない。理論に拘束されることを望むものではないが、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２をクラスター形成する能力を有しない抗体は、受容体活性化と適合するエピトープ特異性を有する場合でさえ、不活性抗体であることがあると考えられている。
【０１５３】
一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合する抗体は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２を結合するが、エピトープ特異性のために、タンパク質機能を調節しない抗体を含んでも良い。このような機能上の不活性抗体は、（Ｍｙｌｏｔａｒｇとして販売されている）ＣＤ３３抗体ゲムツズマブ・オゾガマイシンについて記載されているように、毒素を輸送するためのカーゴとして使用でき、これは、カリケアマイシンのクラスの細胞傷害性剤にコンジュゲートされ、急性骨髄性白血病腫瘍を標的化及び死滅させるために使用される。（Ｎａｉｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０００），  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，  １４，  １４３６−１４４３；  Ｒｉｃａｒｔ  （２０１１）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １７；  ６４１７−６４３６；  Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００２）  Ｊｏｕｒｎａｌ：  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ，  １３，  ４７−５８；及びＢｅｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００１）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７  ；  １４９０−６．）。それ故、一部の実施形態では、本開示の抗体は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に結合するが、１つ以上のＴＲＥＭ２活性（例えば、本明細書に記載のＴＲＥＭ２活性）及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、本明細書に記載のＤＡＰ１２活性）を誘導することができない不活性抗体である。
【０１５４】
例示的不活性抗体のＦｃアイソタイプ及び修飾は、以下の表３で提供される。一部の実施形態では、不活性抗体は、以下の表３に記載されているＦｃアイソタイプを有する。
【０１５５】
アンタゴニスト抗体
本開示の抗体の第３のクラスは、アンタゴニスト抗体を含む。一部の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合する抗体は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に結合し、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２とそのリガンド（複数可）の間の相互作用を防止すること、または、リガンドの存在下で、シグナルの、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２の細胞外ドメインから細胞質への伝達を防止することのいずれかにより、１つ以上のＴＲＥＭ２活性及び／またはＤＡＰ１２活性を阻害するアンタゴニスト抗体を含んでも良い。一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗体は、本開示のアゴニスト抗体のエピトープ特異性を有するが、Ｆｃｇ受容体に結合することができず、それにより、例えば、ＤＡＰ１２及び／またはＴＲＥＭ２受容体をクラスター形成することが不可能なＦｃドメインを有することがある。
【０１５６】
一部の実施形態では、本開示の抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性を阻害する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させる。一部の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子は、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２ミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させる。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２と、１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２リガンドとの間の相互作用を阻害する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２シグナル伝達を阻害する。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２と、１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２リガンドとの間の相互作用を阻害し、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２シグナル伝達を阻害する。
【０１５７】
一部の実施形態では、抗体架橋は、アゴニスト抗体機能に必要とされる。抗体架橋は、インビトロでの二次抗体への結合を介して、またはインビボでのＦｃ受容体への結合を介して、生じる可能性がある。例えば、アンタゴニスト抗体は、ビオチン／ストレプトアビジン架橋、またはインビトロでの二次抗体結合を介して、アゴニスト抗体に転化できる（例えば、Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １８４：６７５−６８５；  Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７：５５１−５５７を参照のこと）。アゴニスト抗体は、受容体リガンドの生物活性を模倣することにより、または受容体凝集を増強することにより、活性を発揮し、それにより、受容体シグナル伝達を活性化することがある。一部の実施形態では、抗体架橋の不存在は、アンタゴニスト活性に必要である。アンタゴニスト抗体は、受容体リガンド相互作用をブロックすることにより、活性を発揮することがある。
【０１５８】
例示的アンタゴニスト抗体Ｆｃアイソタイプ及び修飾は、以下の表３で提供される。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、以下の表３に記載されているＦｃアイソタイプを有する。
【０１５９】
不活性及びアンタゴニスト抗体Ｆｃアイソタイプ
一部の実施形態では、本開示の不活性及び／またはアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ抗体は、表３に記載されているＦｃアイソタイプ及び修飾のうちの１つ以上を含む。
【０１６０】
2020063268.tif 000007
【０１６１】
特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ（Ｂｏｌｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３：４０３−４１１）、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｂｌｏｏｄ，  １０９：１１８５−１１９２）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｂｌｏｏｄ，  １０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ｓ（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，  ３４：２２０４−２２１０）、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｂｌｏｏｄ，  １０９：１１８５−１１９２）、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ．  ｅｔ  ａｌ．，  （２００１）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７６（９）：６５９１−６０４）、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（Ｈｅｚａｒｅｈ，ｅｔ  ａｌ．，  （２００１）  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５，  １２１６１−１２１６８；  Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）．  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，  ７００−７０４）、Ｐ３３１Ｓ（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  ６４，  ７００−７０４）、Ｔ３９４Ｄ（Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（３）：  ４０６−４１７）、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則による。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則によるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む。
【０１６２】
一部の実施形態では、抗体は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則によるＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含有する重鎖定常領域を有するＩｇＧ１アイソタイプを有する。
【０１６３】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵまたはＫａｂａｔの番号付け規則により、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓから選択される１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含有する。
【０１６４】
特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則による。
【０１６５】
特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含有する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、１つ以上の修飾を含有する。例えば、一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）１つ以上のアミノ酸置換を含有する。一部の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ（Ｈｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  ９２：１１９８０−１１９８４）、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０００）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６４：１９２５−１９３３；  Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３０（１）：１０５−８；  ＵＳ  ８６１４２９９  Ｂ２）、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、及び／またはＮ２９７Ｑから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則による。
【０１６６】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅから選択される１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含有し、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則による。
【０１６７】
さらなるＩｇＧ変異
一部の実施形態では、本明細書に記載されているＩｇＧ１多様体のうちの１つ以上は、補体活性化を排除するために、Ａ３３０Ｌ変異（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００６）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  １０３：４００５−４０１０）、またはＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／またはＰ３３１Ｓ変異（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，  １０５：２０１６７−２０１７２）のうちの１つ以上と組み合わされても良く、アミノ酸位置は、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則による。一部の実施形態では、本明細書に記載されているＩｇＧ多様体は、ヒト血清の抗体半減期を増加させるために、１つ以上の変異と組み合わされても良い（例えば、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、２５６Ｅ変異）（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００６）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２８１：２３５１４−２３５２４；及びＳｔｒｏｈｌ  ｅ  ａｌ．，  （２００９）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２０：６８５−６９１）。
【０１６８】
一部の実施形態では、本開示のＩｇＧ４多様体は、抗体の安定性を増強するために、ＥＵまたはＫａｂａｔ番号付け規則によるＳ２２８Ｐ変異（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３）  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ３０：１０５−１０８）、及び／または、Ｐｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１２）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  １３；２８７（２９）：２４５２５−３３に記載されている１つ以上の変異と組み合わされても良い。
【０１６９】
抗ＴＲＥＭ２抗体
本開示の特定の態様は、抗ＴＲＥＭ２抗体に関する。
【０１７０】
特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導するアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進するアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の生存を促進する。一部の実施形態では、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進することは、細胞生存を延長すること、または別途細胞死を遅延させることを包含する。従って、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の細胞生存を延長させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の細胞死を遅延させる。一部の実施形態では、細胞生存を促進すること、及び／または細胞生存を延長することは、抗ＴＲＭＥ２抗体の不存在下での対応する１つ以上の自然免疫細胞の細胞生存と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体の存在下での１つ以上の自然免疫細胞の細胞生存を測定することにより決定される。一部の実施形態では、細胞死の遅延は、抗ＴＲＭＥ２抗体の不存在下での対応する１つ以上の自然免疫細胞の細胞死と比較して、抗ＴＲＥＭ２抗体の存在下での１つ以上の自然免疫細胞の細胞死を測定することにより決定される。当該技術分野で既知の及び本明細書で開示される、細胞生存または細胞死を測定する任意の好適な方法が使用されても良い（例えば、実施例３０、３４、３５、３８、５２、５３、及び５６を参照のこと）。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＩＬ−６発現を増加させるアゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進し、ＩＬ−６の発現を増加させるアゴニスト抗体である。細胞におけるＩＬ−６発現を測定するための、当該技術分野で既知の及び本明細書で開示される任意の好適な方法が使用されても良い（例えば、実施例２８、３８、及び６８を参照のこと）。
【０１７１】
特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する不活性またはアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の自然免疫細胞の生存を減少させる不活性またはアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２ミクログリア細胞、樹状細胞、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の生存を減少させる。一部の実施形態では、細胞生存を減少させることは、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の不存在下での対応する１つ以上の自然免疫細胞の細胞生存と比較して、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の存在下で、１つ以上の自然免疫細胞の細胞生存を測定することにより決定される。当該技術分野で既知の及び本明細書で開示される細胞生存または細胞死を測定する任意の好適な方法が使用されても良い（例えば、実施例３０、３４、３５、３８、５２、５３、及び５６を参照のこと）。
【０１７２】
一部の実施形態では、本開示の単離抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である。このような抗体の例示的説明は、本開示の全体にわたって見出される。一部の実施形態では、抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である。
【０１７３】
特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２タンパク質は、細胞表面上に発現される。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）。抗ＴＲＥＭ２抗体により調節される（例えば、導入される、または阻害される）ＴＲＥＭ２活性は、ＤＡＰ１２リン酸化；ＴＲＥＭ２リン酸化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのリクルート；ＰＩ３Ｋ活性化；抗炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン）の発現の増加；前炎症性メディエーターの発現の低減；ＥＲＫリン酸化；ＣＣＲ７の発現の増加、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強、正常化、またはその両方；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；ミクログリア細胞及び／若しくはマクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞、活性化Ｍ１マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞、ならびに／またはＭ２マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞）、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、ならびに／またはクッパー細胞の生存及び機能の増加；アポトーシスニューロンクリアランスの誘導；ＴＮＦ−αの発現の低減；ＳＹＫリン酸化；樹状細胞、単球、マクロファージ、及び／またはミクログリア上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；１つ以上の炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、及び／またはＭＣＰ−１）の分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体（例えば、ＣＤ８６）の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食の増加；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食の低減；ならびに／あるいは１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子（例えば、活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ファミリー転写因子の転写因子）の活性の増加を含んでも良いが、これらに限定されない。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌を予防する、リスク低減させる、または治療するために使用できる。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、高度な創傷治癒にも使用され��も良い。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体である。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、当該技術分野で既知の及び／または本明細書に記載されている任意の好適な方法を使用して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＴＲＥＭ２自己リン酸化；ＤＡＰ１２リン酸化；Ｓｙｋリン酸化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方のＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体へのリクルート；ＰＩ３Ｋ活性化；サイトカインの発現の増加；前炎症性メディエーターの発現の低減；ＥＲＫリン酸化；ＣＣＲ７の発現の増加、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；骨髄由来樹状細胞の成熟；骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強または正常化；樹状細胞、単球、ミクログリア、及び／またはマクロファージの、Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増加；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの生存及び機能の増加；１種以上のクリアランスの誘導；アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、病原性核酸、または腫瘍細胞のうちの１つ以上の貪食の誘導；１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリア細胞による貪食の増加；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状、単球、及び／またはミクログリア細胞による貪食の低減；破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化；１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の増加）を誘導することについて試験されても良い。例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋ及び／若しくはＺＡＰ７０の、ＤＡＰ１２へのリクルートについてアッセイすることにより、ＰＩ３Ｋ活性化についてアッセイすることにより、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０）若しくはＣＣＲ７の発現の誘導についてアッセイすることにより、または、ＴＬＲ刺激（例えば、ＬＰＳ、ＣｐＧ  ＤＮＡ、若しくはザイモサン）を用いて、前炎症性メディエーター（例えば、ＩＬ１−β及びＴＮＦ）の発現の低減についてアッセイすることにより、ＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、Ｓｙｋ、及び／若しくはＥＲＫのチロシンリン酸化について、インビトロでアッセイできる。有用なアッセイは、ウェスタンブロット（例えば、チロシン−リン酸化ＤＡＰ１２若しくはトレオニン／セリン−リン酸化ＰＩ３Ｋキナーゼ基質について）、ＥＬＩＳＡ（例えば、分泌されたインターロイキン若しくはサイトカイン分泌について）、ＦＡＣＳ（例えば、ＴＲＥＭ２に結合する抗ＴＲＥＭ２について）、免疫細胞化学（例えば、チロシン−リン酸化ＤＡＰ１２若しくはトレオニン／セリン−リン酸化ＰＩ３Ｋキナーゼ基質について）、レポーター遺伝子アッセイ（例えば、ＴＬＲ活性化、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／若しくはミクログリアの生存及び／若しくは機能の増���、マクロファージ、樹状細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、単球、破骨細胞、及び／若しくはミクログリア細胞による、アポトーシスニューロン、損傷シナプス、アミロイドベータ若しくはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、病原性核酸、若しくは腫瘍細胞の貪食の増加、細胞骨格再構成の増加、及びミクログリア前炎症性応答の減少について）、または当該技術分野で既知の他のアッセイを含んでも良い。
【０１７４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンバ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、及びＩＬ−１８）の発現及び／または分泌を調節する（すなわち、増加させる、または減少させる）。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の炎症性サイトカインの発現及び／または分泌を増加させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の炎症性サイトカインの発現及び／または分泌を減少させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の炎症性受容体（例えば、ＣＤ８６）の発現及び／または分泌を調節する（すなわち、増加させる、または減少させる）。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の炎症性受容体の発現及び／または分泌を増加させる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の炎症性受容体の発現及び／または分泌を減少させる。
【０１７５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、哺乳動物ＴＲＥＭ２タンパク質、マウスＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９ＮＨ８）、ラットＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｄ３ＺＺ８９）、アカゲザルＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ６ＱＶＦ２）、ウシＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０５Ｂ５９）、ウマＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ７Ｄ６Ｌ０）、ブタＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｈ２ＥＺＺ３）、及びイヌＴＲＥＭ２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｅ２ＲＰ４６）を含むが、これらに限定されない、ヒトＴＲＥＭ２またはそのホモログに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、マウスＴＲＥＭ２に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、少なくとも１つのＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）。一部の実施形態では、少なくとも１つのＴＲＥＭ２活性は、ＤＡＰ１２リン酸化、ＴＲＥＭ２リン酸化、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン）の発現の増加、１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減、ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／若しくはクッパー細胞の生存及び／若しくは機能の増加；ＴＮＦ−αの発現の増加、ＳＹＫリン酸化；樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／若しくはマクロファージ上のＣＤ８３及び／若しくはＣＤ８６の発現の増加；１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／若しくはミクログリアによる貪食の増加；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食の低減；ならびに／あるいは１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子（例えば、活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ファミリー転写因子の転写因子）の活性の増加である。
【０１７６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質及び／または天然多様体に結合する。特定の好ましい実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２に結合する。
【０１７７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞の表面上に発現される本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に結合し、表面発現されたＴＲＥＭ２タンパク質に結合した後に、本開示の少なくとも１つのＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、不活性抗体である。
【０１７８】
特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基２９〜１１２内の、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基２９〜４１内の、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４７〜６９内の、または配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基７６〜８６内の、または配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基９１〜１００内の、または配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基９９〜１１５内の、または配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１０４〜１１２内の、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１４〜１１８内の、または配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３０〜１７１内の、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３９〜１５３内の、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３９〜１４６内の、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３０〜１４４内の、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１５８〜１７１内の、または配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【０１７９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４３〜５０内の、または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４９〜５７内の、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１３９〜１４６内の、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１４０〜１５３内の、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【０１８０】
本開示のＴＲＥＭ２タンパク質は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４０〜４４に対応するアミノ酸残基に位置する相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基６７〜７６に対応するアミノ酸残基に位置する相補性決定領域２（ＣＤＲ２）；及びヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するアミノ酸残基に位置する相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む。従って、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４０〜４４内の、または配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基６７〜７６内の、または配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１４〜１１８内の、または配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【０１８１】
他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＥＲＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基Ａｒｇ４７またはＡｓｐ８７を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＥＲＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４０〜４４を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＥＲＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基６７〜７６を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＥＲＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基１１４〜１１８を含むエピトープに結合する。
【０１８２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表１及び／または表８に記載されている抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される少なくとも１つの抗体の結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、次の抗ＴＲＥＭ２抗体：Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５のうちの少なくとも１つの結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表１及び／または表８に記載されている抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体により結合されたＴＲＥＭ２エピトープと同じ、または共通部分があるヒトＴＲＥＭ２のエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される少なくとも１つの抗体により結合されたＴＲＥＭ２のエピトープと同じ、または共通部分があるヒトＴＲＥＭ２のエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、次の抗ＴＲＥＭ２抗体：Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５のうちの少なくとも１つにより結合されたＴＲＥＭ２エピトープと同じ、または共通部分があるヒトＴＲＥＭ２のエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表１及び／または表８に記載されている抗体のいずれかから選択される少なくとも１つの抗体により結合された本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される少なくとも１つの抗体により結合された本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、次の抗ＴＲＥＭ２抗体：Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５のうちの少なくとも１つにより結合された本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法が、Ｍｏｒｒｉｓ  （１９９６）  “Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．  ６６  （Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ）で提供される。
【０１８３】
例示的な競合アッセイでは、細胞表面上の固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２（例えば、ヒト、または非ヒト霊長類）を発現する細胞は、ＴＲＥＭ２に結合する標識一次抗体及びＴＲＥＭ２への結合について一次抗体と競合する能力について試験されている非標識二次抗体を含む溶液中でインキュベーションされる。二次抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在することがある。対照として、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞は、標識一次抗体を含むが、非標識二次抗体を含まない溶液中でインキュベーションされる。一次抗体のＴＲＥＭ２への結合を許容する条件下でインキュベーションした後、過剰の非結合抗体が除去され、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が測定される。固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が、対照サンプルと比較して試験サンプル中で実質的に低減する場合、その時、それは、二次抗体が、ＴＲＥＭ２への結合について、一次抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ）を参照のこと。
【０１８４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体のいずれか１つのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む重鎖可変領域、ならびに／あるいは、（ｂ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体のいずれか１つのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３は、表１及び／若しくは表８に示されるような、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体に由来するＫａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、または接触ＣＤＲ配列を含む。
【０１８５】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ１配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ２配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｈ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｉｖ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ１配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ２配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；ならびに、（ｖｉ）表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体に由来するＨＶＲ−Ｌ３配列のいずれかのアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１８６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、（ａ）配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、（ｃ）配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３のうちの１つ以上を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインは、（ａ）配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｃ）配列番号１５３〜２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３のうちの１つ以上を含む。
【０１８７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体のいずれか１つの重鎖可変領域、ならびに／あるいは、表１及び／若しくは表８に記載されている、またはＡｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗体のいずれか１つの軽鎖可変領域を含む。
【０１８８】
本開示の抗体のいずれかは、細胞株により産生されても良い。一部の実施形態では、細胞株は、酵母細胞株であって良い。他の実施形態では、細胞株は、哺乳動物細胞株であって良い。特定の実施形態では、細胞株は、ハイブリドーマ細胞株であって良い。抗体産生に適する当該技術分野で既知の任意の細胞株は、本開示の抗体を産生するために使用されても良い。抗体産生のための例示的細胞株は、本開示の全体にわたって記載されている。
【０１８９】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２１、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５２、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７から選択される抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０１９０】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体Ａｂ１である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ１と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列、または配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列、または配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１２０のアミノ酸配列、または配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１３８のアミノ酸配列、または配列番号１３８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１５３のアミノ酸配列、または配列番号１５３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９１】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体Ａｂ９である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ９と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ９の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ９の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ９の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列、または配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列、または配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列、または配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１２４のアミノ酸配列、または配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１４４のアミノ酸配列、または配列番号１４４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列、または配列番号１６１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９２】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体Ａｂ１４である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ１４と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ１４の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ１４の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ１４の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列、または配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３６のアミノ酸配列、または配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列、または配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１２２のアミノ酸配列、または配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１４６のアミノ酸配列、または配列番号１４６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列、または配列番号１６６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９３】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体Ａｂ２２である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ２２と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ２２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ２２の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ２２の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列、または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列、または配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列、または配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１２３のアミノ酸配列、または配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１４１のアミノ酸配列、または配列番号１４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１７３のアミノ酸配列、または配列番号１７３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９４】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体Ａｂ４５である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ４５と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ４５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ４５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ４５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列、または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列、または配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号８７のアミノ酸配列、または配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１２０のアミノ酸配列、または配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１３８のアミノ酸配列、または配列番号１３８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列、または配列番号１９６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９５】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体Ａｂ６５である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ６５と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ６５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ６５の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ６５の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列、または配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列、または配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列、または配列番号１０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号１２４のアミノ酸配列、または配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号１４４のアミノ酸配列、または配列番号１４４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号２１５のアミノ酸配列、または配列番号２１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９６】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４３〜５０内の、または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４９〜５７内の、または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＥＲＭ２（配列番号１）のアミノ酸酸残基４３〜５０内に１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＥＲＭ２（配列番号１）のアミノ酸残基４９〜５７内に１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、次の抗ＴＲＥＭ２抗体：Ａｂ２１及びＡｂ５２のうちの少なくとも１つの結合を競合的に阻害する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、次の抗ＴＲＥＭ２抗体：Ａｂ２１及びＡｂ５２のうちの少なくとも１つにより結合されたＴＲＥＭ２エピトープと同じ、または共通部分があるヒトＴＲＥＭ２のエピトープに結合する。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２のいずれか１つのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、２つ、若しくは３つのＨＶＲを含む重鎖可変領域；ならびに／または、（ｂ）抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２のいずれか１つのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、若しくは３つのＨＶＲを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３は、表１及び／または表８に示されるようなＫａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ、または接触ＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２のいずれか１つの重鎖可変領域；ならびに／または、抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２のいずれか１つの軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２モノクローナル抗体Ａｂ５２またはＡｂ２１である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ａｂ５２またはＡｂ２１と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗体である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０１９７】
一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ５２またはＡｂ２１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ５２またはＡｂ２１の軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体Ａｂ５２またはＡｂ２１の重鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む単離抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号３９８のアミノ酸配列、または配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３９９のアミノ酸配列、または配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４００のアミノ酸配列、または配列番号４００のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４０１のアミノ酸配列、または配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４０２のアミノ酸配列、または配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号４０３のアミノ酸配列、または配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）配列番号４０４のアミノ酸配列、または配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０５のアミノ酸配列、または配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号４０６のアミノ酸配列、または配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号４０７のアミノ酸配列、または配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号４０８のアミノ酸配列、または配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、（ｖｉ）配列番号４０９のアミノ酸配列、または配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【０１９８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、表１及び／若しくは表８に記載されているものから選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、若しくは３つのＨＶＲ配列を含み、及び／または、軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域は、表１及び／若しくは表８に記載されているものから選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、若しくは３つのＨＶＲ配列を含む。
【０１９９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する。好適なＴＲＥＭ２リガンドの例としては、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、アニオン性脂質、双性イオン性脂質、負に荷電したリン脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオリピド、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドにより発現されるＴＲＥＭ２リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。従って、特定の実施形態では、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、アニオン性脂質、双性イオン性脂質、負に荷電したリン脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオリピド、脂質化ペプチド、及び／または脂質化アミロイドベータペプチドを含む。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０２００】
抗ＴＲＥＭ２抗体の、ヒトＴＲＥＭ２（例えば、ヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質及びヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質）ならびにマウスＴＲＥＭ２（例えば、マウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質）に対する解離定数（ＫＤ）は、１０ｎＭ未満、９．５ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８．５ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７．５ｎＭ未満、７ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６．９ｎＭ未満、６．８ｎＭ未満、６．７ｎＭ未満、６．６ｎＭ未満、６．５ｎＭ未満、６．４ｎＭ未満、６．３ｎＭ未満、６．２ｎＭ未満、６．１ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５．９ｎＭ未満、５．８ｎＭ未満、５．７５ｎＭ未満、５．７ｎＭ未満、５．６ｎＭ未満、５．５ｎＭ未満、５．４ｎＭ未満、５．３ｎＭ未満、５．２ｎＭ未満、５．１ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４．５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３．５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１．５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９５ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８５ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７５ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６５ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５５ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３５ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２９ｎＭ未満、０．２８ｎＭ未満、０．２７ｎＭ未満、０．２６ｎＭ未満、０．２５ｎＭ未満、０．２４ｎＭ未満、０．２３ｎＭ未満、０．２２ｎＭ未満、０．２１ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１５ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０９５ｎＭ未満、０．０９ｎＭ未満、０．０８５ｎＭ未満、０．０８ｎＭ未満、０．０７５ｎＭ未満、０．０７ｎＭ未満、０．０６５ｎＭ未満、０．０６ｎＭ未満、０．０５５ｎＭ未満、または０．０５ｎＭ未満であって良い。一部の実施形態では、解離定数は、約５．７５ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の、ヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数は、約１．５１ｎＭ未満〜約０．３５ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の、ヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質に対する解離定数は、約５．７５ｎＭ未満〜約１．１５ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の、マウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数は、約０．２３ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、解離定数は、約６．７０ｎＭ未満〜約０．２３ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の、ヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数は、約０．７１ｎＭ未満〜約０．２３ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の、ヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質に対する解離定数は、約６．７０ｎＭ未満〜約０．６６ｎＭ未満の範囲である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体の、マウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数は、約４．９０ｎＭ未満〜約０．３５ｎＭ未満の範囲である。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＯｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍを参照のこと）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップトフロー分析、及び比色分析または蛍���タンパク質融解分析などの任意の生化学的または生物物理学的技術を含む任意の分析技術により決定されても良い。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アゴニスト抗体である。他の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０２０１】
さらなる抗ＴＲＥＭ２抗体、例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、当該技術分野で既知の種々のアッセイにより、物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、同定、スクリーニング、及び／または特性決定されても良い。
【０２０２】
抗ＤＡＰ１２抗体
本開示の特定の態様は、抗ＤＡＰ１２抗体に関する。
【０２０３】
本開示の抗ＤＡＰ１２抗体は一般に、細胞で発現された１つ以上のＤＡＰ１２タンパク質に結合する。特定の実施形態では、ＤＡＰ１２タンパク質は、細胞表面上に発現される。
【０２０４】
一部の実施形態では、本開示の抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞の表面上に発現される本開示のＤＡＰ１２タンパク質に結合し、表面発現されたＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、本開示の少なくとも１つのＤＡＰ１２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体である。一部の実施形態では、本開示の抗ＤＡＰ１２抗体は、不活性抗体である。
【０２０５】
特定の実施形態では、ＤＡＰ１２タンパク質は、細胞表面上に発現される。一部の実施形態では、本開示の抗ＤＡＰ１２抗体は、１つ以上のＤＡＰ１２活性を調節する（例えば、誘導する、または阻害する）。抗ＤＡＰ１２抗体により調節される（例えば、誘導される、または阻害される）ＤＡＰ１２活性は、ＴＲＥＭ２に結合すること；ＤＡＰ１２リン酸化；ＴＲＥＭ２リン酸化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方のＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体へのリクルート；ＰＩ３Ｋ活性化；抗炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン）の発現の増加；前炎症性メディエーターの発現の低減；ＥＲＫリン酸化；ＣＣＲ７の発現の増加、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強、正常化、またはその両方；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；ミクログリア細胞及び／若しくはマクロファージ（例えば、Ｍ１マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞、活性化Ｍ１マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞、ならびに／またはＭ２マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞）、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、ならびに／またはクッパー細胞の生存及び機能の増加；アポトーシスニューロンクリアランスの誘導；ＴＮＦ−αの発現の低減；ＳＹＫリン酸化；樹状細胞、単球、マクロファージ、及び／またはミクログリア上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；１つ以上の炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、及び／またはＭＣＰ−１）の分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体（例えば、ＣＤ８６）の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食の増加；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食の低減；ならびに／あるいは１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子（例えば、活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ファミリー転写因子の転写因子）の活性の増加を含んでも良いが、これらに限定されない。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症を予防する、リスク低減させる、または治療するために使用できる。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、モノクローナル抗体である。本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、当該技術分野で既知の及び／または本明細書に記載されている任意の好適な方法を使用して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の、ＤＡＰ１２へのリクルート；ＰＩ３Ｋ活性化；抗炎症性メディエーターの発現の増加；前炎症性メディエーターの発現の低減；ＥＲＫリン酸化；ＣＣＲ７の発現の増加、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強、正常化、またはその両方；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；アポトーシスニューロンクリアランスの誘導；ＴＮＦ−αの発現の低減；ＳＹＫリン酸化；樹状細胞上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体の発現の低減；樹状細胞、マクロファージ、及び／またはミクログリア細胞の生存及び／または機能の増加；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはミクログリアによる貪食の増加；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはミクログリアによる貪食の低減；ならびに、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性の増加（例えば、活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ファミリー転写因子の転写因子）を誘導することについて試験されても良い。例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋ及び／若しくはＺＡＰ７０の、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのリクルートについてアッセイすることにより、ＰＩ３Ｋ活性化についてアッセイすることにより、抗炎症性メディエーター（例えば、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０）若しくはＣＣＲ７の発現の誘導についてアッセイすることにより、または、ＴＬＲ刺激（例えば、ＬＰＳ、ＣｐＧ  ＤＮＡ、若しくはザイモサン）を用いて、前炎症性メディエーター（例えば、ＩＬ１−β及びＴＮＦ）の発現の低減についてアッセイすることにより、ＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／若しくはＥＲＫのチロシンリン酸化について、インビトロでアッセイできる。有用なアッセイは、ウェスタンブロット（例えば、チロシン−リン酸化ＤＡＰ１２若しくはトレオニン／セリン−リン酸化ＰＩ３Ｋキナーゼ基質について）、ＥＬＩＳＡ（例えば、分泌されたインターロイキン若しくはサイトカイン分泌について）、ＦＡＣＳ（例えば、ＴＲＥＭ２に結合する抗ＴＲＥＭ２について）、免疫細胞化学（例えば、チロシン−リン酸化ＤＡＰ１２若しくはトレオニン／セリン−リン酸化ＰＩ３Ｋキナーゼ基質について）、レポーター遺伝子アッセイ（例えば、ＴＬＲ活性化、ミクログリア細胞、樹状細胞、単球、及び／若しくはマクロファージの生存及び／若しくは機能の増加、マクロファージ、樹状細胞、破骨細胞、及び／若しくはミクログリア細胞によるアポトーシスニューロン、損傷シナプス、Ａベータ、及び／若しくは他の細胞破片の貪食の増加、細胞骨格再構成の増加、ならびにミクログリア前炎症性応答の減少について）、または当該技術分野で既知の他のアッセイを含んでも良い。
【０２０６】
本開示の特定の態様は、ヒトＤＡＰ１２、または哺乳動物ＤＡＰ１２タンパク質、マウスＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９ＮＨ８）、ラットＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｄ３ＺＺ８９）、アカゲザルＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ６ＱＶＦ２）、ウシＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ０５Ｂ５９）、ウマＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｆ７Ｄ６Ｌ０）、ブタＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｈ２ＥＺＺ３）、及びイヌＤＡＰ１２タンパク質（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｅ２ＲＰ４６）を含むがこれらに限定されないそのホモログに結合する抗ＤＡＰ１２抗体を提供し、少なくとも１つのＤＡＰ１２活性を誘導する。一部の実施形態では、少なくとも１つのＤＡＰ１２活性は、ＤＡＰ１２リン酸化、ＴＲＥＭ２リン酸化、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、及び／または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減である。
【０２０７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＤＡＰ１２抗体は、本開示のＤＡＰ１２タンパク質及び／または天然多様体に結合する。特定の好ましい実施形態では、抗ＤＡＰ１２抗体は、ヒトＤＡＰ１２に結合する。
【０２０８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞の表面上に発現された本開示のＤＡＰ１２タンパク質に結合し、表面発現されたＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、本開示の少なくとも１つのＤＡＰ１２活性を誘導する。
【０２０９】
特定の実施形態では、本開示の抗ＤＡＰ１２抗体は、ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基２２〜４０内の、または配列番号２のアミノ酸残基２２〜４０に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する。
【０２１０】
抗ＤＡＰ１２抗体の、ヒトＤＡＰ１２及びマウスＤＡＰ１２に対する解離定数（ＫＤ）は、１０ｎＭ未満、９．５ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８．５ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７．５ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６．５ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５．９ｎＭ未満、５．８ｎＭ未満、５．７５ｎＭ未満、５．７ｎＭ未満、５．６ｎＭ未満、５．５ｎＭ未満、５．４ｎＭ未満、５．３ｎＭ未満、５．２ｎＭ未満、５．１ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４．５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３．５ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１．５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９５ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８５ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７５ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６５ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５５ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３５ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２５ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１５ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０９５ｎＭ未満、０．０９ｎＭ未満、０．０８５ｎＭ未満、０．０８ｎＭ未満、０．０７５ｎＭ未満、０．０７ｎＭ未満、０．０６５ｎＭ未満、０．０６ｎＭ未満、０．０５５ｎＭ未満、または０．０５ｎＭ未満であって良い。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＯｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍを参照のこと）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円偏光二色性（ＣＤ）、ストップトフロー分析、及び比色分析または蛍光タンパク質融解分析などの任意の生化学的または生物物理学的技術を含む任意の分析技術により決定されても良い。
【０２１１】
さらなる抗ＤＡＰ１２抗体、例えば、本開示のＤＡＰ１２タンパク質に特異的に結合する抗体は、当該技術分野で既知の種々のアッセイにより、物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、同定、スクリーニング、及び／または特性決定されても良い。
【０２１２】
二重特異性抗体
本開示の特定の態様は、本開示のＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２タンパク質の両方に結合する二重特異性抗体に関する。二重特異性抗体を生成する方法は、当該技術分野において周知であり、本明細書に記載されている。一部の実施形態では、本開示の二重特異性抗体は、ヒトＴＲＥＭ２（配列番号１）の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸残基に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。他の実施形態では、本開示の二重特異性抗体はまた、ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号２のアミノ酸残基に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基に結合する。
【０２１３】
一部の実施形態では、本開示の二重特異性抗体は、第１の抗原及び第２の抗原を認識する。一部の実施形態では、第１の抗原は、ヒトＴＲＥＭ２若しくはその天然多様体、またはヒトＤＡＰ１２若しくはその天然多様体である。一部の実施形態では、第２の抗原は、アミロイドβまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、α−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択される病原性タンパク質である。一部の実施形態では、第２の抗原は、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、ＬＲＰ−１、及びＬＲＰ１から選択されるタンパク質を標的とする血液脳関門、または免疫細胞上に発現されたリガンド及び／またはタンパク質であり、リガンド及び／またはタンパク質は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、及びホスファチジルセリンからなる群から選択される。あるいは、第２の抗原は、１つ以上の腫瘍細胞上に発現されたタンパク質であって良いが、これらに限定されない。
【０２１４】
抗体フラグメント
本開示の特定の態様は、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２のその天然多様体、ヒトＴＲＥＭ２の疾患多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２のその天然多様体から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントに関する。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、プロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、及びそれらの任意の組み合わせから選択される病原性タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体、ならびに／またはＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ホスファチジルセリン、及びそれらの任意の組み合わせから選択される癌関連タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される。
【０２１５】
抗体フレームワーク
本明細書に記載されている抗体のいずれかは、フレームワークをさらに含む。一部の実施形態では、フレームワークは、ヒト免疫グロブリンフレームワークである。例えば、一部の実施形態では、抗体（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体）は、上記実施形態のいずれかのようなＨＶＲを含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ヒト免疫グロブリンフレームワークは、ヒト抗体の一部であっても良く、または、非ヒト抗体は、１つ以上の内因性のフレームワークを、ヒトフレームワーク領域（複数可）と交換することによりヒト化されても良い。ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域は、「ベストフィット」法（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：２２９６  （１９９３）を参照のこと）を使用して選択されるフレームワーク領域；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８９：４２８５  （１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １５１：２６２３  （１９９３）を参照のこと）；ヒト成熟（体細胞成熟）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域；（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，  Ｆｒｏｎｔ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  １３：１６１９−１６３３  （２００８）を参照のこと）；ならびにスクリーニングＦＲライブラリに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２：１０６７８−１０６８４  （１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１：２２６１１−２２６１８  （１９９６）を参照のこと）を含むが、これらに限定されない。
【０２１６】
一部の実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに図２Ｂ及び／または図２０Ａに示されるような重鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、または４つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに図２Ｃ及び／または図２０Ｂに示されるような軽鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、４つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本開示のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに図２Ｂ及び／または図２０Ａに示されるような重鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、または４つを含み、本開示のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、ならびに図２Ｃ及び／または図２０Ｂに示されるような軽鎖フレームワーク領域の１つ、２つ、３つ、または４つをさらに含む。
【０２１７】
ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２結合ならびにリン酸化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＴＲＥＭ２のＤＡＰ１２への結合及び／またはＤＡＰ１２のＴＲＥＭ２への結合を誘導することがある。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、ＴＲＥＭ２リン酸化を誘導することがある。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、ＤＡＰ１２リン酸化を誘導することがある。他の実施形態では、ＴＲＥＭ２媒介ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２リン酸化は、１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼにより誘導される。ＳＲＣファミリーチロシンキナーゼの例としては、Ｓｒｃ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｆｇｒ、Ｌｃｋ、Ｈｃｋ、Ｂｌｋ、Ｌｙｎ、及びＦｒｋが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１８】
ＤＡＰ１２は、ＴＹＲＯプロテインチロシンキナーゼ結合タンパク質、ＴＹＲＯＢＰ、ＫＡＲＡＰ、及びＰＬＯＳＬと様々に称される。ＤＡＰ１２は、細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する膜貫通型シグナル伝達タンパク質である。特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＩＴＡＭモチーフに、ＤＡＰ１２リン酸化を誘導することがある。ＤＡＰ１２リン酸化などのタンパク質リン酸化を決定するための当該技術分野で既知の任意の方法が使用されても良い。
【０２１９】
一部の実施形態では、ＤＡＰ１２は、ＳＲＣファミリーキナーゼによりリン酸化されて、Ｓｙｋキナーゼ、ＺＡＰ７０キナーゼ、またはその両方の、ＤＡＰ１２へのリクルート及び活性化がもたらされる。従って、特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方を、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へリクルートすることがある。
【０２２０】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、ＤＡＰ１２活性のレベルの減少、ＤＡＰ１２リン酸化、またはＳｙｋ、ＺＡＰ７０、若しくはその両方の、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのリクルートと関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有用であると考えられている。
【０２２１】
ＰＩ３Ｋ活性化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、ＰＩ３Ｋ活性化を誘導することがある。
【０２２２】
ＰＩ３Ｋは、ホスファチジルイノシトール（ＰｔｄＩｎｓ）のイノシトール環の３位水酸基をリン酸化できる関連細胞内シグナル伝達物質キナーゼのファミリーである。ＰＩ３Ｋファミリーは、一次構造、制御、及びインビトロで脂質基質特異性に基づいて、３つの異なるクラス（クラスＩ、クラスＩＩ、及びクラスＩＩＩ）に分けられる。
【０２２３】
活性化ＰＩ３Ｋは、ＰｔｄＩｎｓ３Ｐ、ＰｔｄＩｎｓ（３，４）Ｐ２、ＰｔｄＩｎｓ（３，５）Ｐ２、及びＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３を含むがこれらに限定されない種々の３−リン酸化ホスホイノシチドを産生する。これらの３−リン酸化ホスホイノシチドは、シグナル伝達タンパク質が種々の細胞膜にリクルートされる機序で機能する。これらのシグナル伝達タンパク質は、ＰＸドメイン、プレクストリン相同ドメイン（ＰＨドメイン）、及びＦＹＶＥドメインを含むがこれらに限定されないホスホイノシチド結合ドメインを含有する。ＰＩ３Ｋ活性化を決定するための当該技術分野で既知の任意の方法が使用されても良い。
【０２２４】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、ＰＩ３Ｋ活性のレベルの減少と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２２５】
抗炎症性メディエーターの発現の増加
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞表面上に発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、脳において抗炎症性活性を有する。最近、ＴＲＥＭ２は、脳において抗炎症の役割を有することが報告されている。特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、抗炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン）の発現を増加させ、及び／または前炎症性メディエーターの発現を低減させる。
【０２２６】
炎症は、血管組織の、病原体、損傷細胞、及び刺激物などの有害な刺激に対する複雑な生物学的応答の一部である。急性炎症の典型的な徴候は、痛み、熱、発赤、腫脹、及び機能の喪失である。炎症は、有害な刺激を除去し、治癒プロセスを開始させる生体による防御的試行である。炎症は、急性炎症または慢性炎症のいずれかに分類できる。急性炎症は、身体の、有害な刺激に対する最初の応答であり、血漿及び白血球（特に顆粒球）の、血液から損傷組織への移動の増加により達成される。生化学的イベントのカスケードは、損傷した組織内の局所血管系、免疫系、及び種々の細胞に関する炎症性応答を伝播して成熟させる。慢性炎症は、炎症の部位に存在する細胞の種類に、漸進的な変化をもたらす長期炎症であり、炎症プロセスからの組織を同時に破壊及び治癒することを特徴とする。
【０２２７】
本明細書で使用される場合、抗炎症性メディエーターは、炎症性応答を減少させる、阻害する、または不活性化する機序において、（例えば、抗炎症性シグナル伝達経路を介して）直接または間接のいずれかで関与するタンパク質である。抗炎症性メディエーターを同定し特徴付けるための当該技術分野で既知の任意の方法が使用されても良い。抗炎症性メディエーターの例としては、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０などのサイトカインが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２８】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０などの抗炎症性メディエーターの発現を増加させることがある。特定の実施形態では、抗炎症性メディエーターの発現の増加は、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはミクログリア細胞で生じる。発現の増加は、遺伝子発現の増加、転写発現の増加、またはタンパク質発現の増加を含んでも良いが、これらに限定されない。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質発現を決定するための当該技術分野で既知の任意の方法が使用されても良い。例えば、ノーザンブロット分析は、抗炎症性メディエーター遺伝子発現レベルを決定するために使用されても良く、ＲＴ−ＰＣＲは、抗炎症性メディエーター転写のレベルを決定するために使用されても良く、ウェスタンブロット分析は、抗炎症性メディエータータンパク質レベルを決定するために使用されても良い。
【０２２９】
本明細書で使用される場合、抗炎症性メディエーターは、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理された対象の１つ以上の細胞における発現が、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞で発現された同じ抗炎症性メディエーターの発現よりも多い場合に、発現を増加させていることがある。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の細胞における抗炎症性メディエーター発現を、例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞における抗炎症性メディエーター発現と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させることがある。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の細胞における抗炎症性メディエーター発現を、例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞における抗炎症性メディエーター発現と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させる。
【０２３０】
理論に拘束されることを望むものではないが、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、１つ以上の抗炎症性メディエーターのレベルの減少と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有用であると考えられている。
【０２３１】
前炎症性メディエーターの発現の低減
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、前炎症性メディエーターの発現を減少させることがある。
【０２３２】
本明細書で使用される場合、前炎症性メディエーターは、炎症性応答を誘導する、活性化する、促進する、または別途増加させる機序において、（例えば、前炎症性シグナル伝達経路を介して）直接または間接のいずれかで関与するタンパク質である。前炎症性メディエーターを同定し特徴付けるための当該技術分野で既知の任意の方法が使用されても良い。前炎症性メディエーターの例としては、ＩＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＴＮＦ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰなどのサイトカインが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β及びＴＮＦ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー，ＩＬ−２０ファミリーメンバーＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ならびにＣＲＰなどの前炎症性メディエーターの機能的発現及び／または分泌を減少させることがある。特定の実施形態では、前炎症性メディエーターの発現の減少は、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリア細胞で生じる。発現の減少は、遺伝子発現の減少、転写発現の減少、またはタンパク質発現の減少を含んでも良いが、これらに限定されない。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質発現を決定するための当該技術分野で既知の任意の方法が使用されても良い。例えば、ノーザンブロット分析は、前炎症性メディエーター遺伝子発現レベルを決定するために使用されても良く、ＲＴ−ＰＣＲは、前炎症性メディエーター転写のレベルを決定するために使用されても良く、ウェスタンブロット分析は、前炎症性メディエータータンパク質レベルを決定するために使用されても良い。
【０２３４】
特定の実施形態では、前炎症性メディエーターは、炎症性サイトカインを含む。従って、特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌を低減させることがある。分泌が本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体により低減し得る炎症性サイトカインの例としては、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバーＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、及びＩＬ−１８が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３５】
特定の実施形態では、前炎症性メディエーターは、炎症性受容体を含む。従って、特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、１つ以上の炎症性サイトカインの発現を低減させることがある。発現が本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体により低減し得る炎症性受容体の例としては、ＣＤ８６が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３６】
本明細書で使用される場合、前炎症性メディエーターは、本開示のアゴニス抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理された対象の１つ以上の細胞における発現が、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞で発現された同じ前炎症性メディエーターの発現よりも少ない場合に、発現を減少させていることがある。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の細胞における前炎症性メディエーター発現を、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞における前炎症性メディエーター発現と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％減少させることがある。他の実施形態では、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の細胞における前炎症性メディエーター発現を、例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞における前炎症性メディエーター発現と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍減少させることがある。
【０２３７】
理論に拘束されることを望むものではないが、いくつかの本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、１つ以上の前炎症性メディエーターのレベルの増加と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有用であることがあると考えられている。
【０２３８】
ＥＲＫリン酸化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化を誘導することがある。
【０２３９】
細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）は、例えば、分化細胞における減数分裂、有糸分裂、及び有糸分裂後の機能の制御に関与する、広く発現されたタンパク質キナーゼ細胞内シグナル伝達キナーゼである。成長因子、サイトカイン、ウイルス感染、ヘテロ三量体Ｇタンパク質共役受容体のリガンド、形質変換薬、及び発癌物質などの種々の刺激は、ＥＲＫ経路を活性化する。ＥＲＫのリン酸化は、それらのキナーゼ活性の活性化をもたらす。
【０２４０】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、ＥＲＫリン酸化のレベルの減少と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２４１】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７の発現の増加
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現を増加させることがある。発現の増加は、遺伝子発現の増加、転写発現の増加、またはタンパク質発現の増加を含んでも良いが、これらに限定されない。遺伝子、転写物（例えば、ｍＲＮＡ）、及び／またはタンパク質発現を決定するための当該技術分野で既知の任意の方法が使用されても良い。例えば、ノーザンブロット分析は、抗炎症性メディエーター遺伝子発現レベルを決定するために使用されても良く、ＲＴ−ＰＣＲは、抗炎症性メディエーター転写のレベルを決定するために使用されても良く、ウェスタンブロット分析は、抗炎症性メディエータータンパク質レベルを決定するために使用されても良い。
【０２４２】
Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーである。ＣＣＲ７は、種々のリンパ組織に発現され、Ｂ細胞及びＴ細胞を活性化できる。一部の実施形態では、ＣＣＲ７は、メモリーＴ細胞の、リンパ節などの二次リンパ器官への移動を調節することがある。他の実施形態では、ＣＣＲ７は、樹状細胞の成熟を刺激することがある。ＣＣＲ７は、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンドＣＣＬ１９／ＥＬＣ及びＣＣＬ２１に結合できる受容体タンパク質である。
【０２４３】
本明細書で使用される場合、ＣＣＲ７は、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理された対象の１つ以上の細胞における発現が、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞で発現された同じＣＣＲ７の発現よりも多い場合に、発現を増加させていることがある。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現を、例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させることがある。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現を、例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の細胞におけるＣＣＲ７発現と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させる。
【０２４４】
一部の実施形態では、ＣＣＲ７の発現の増加は、マクロファージ、樹状細胞、及び／またはミクログリア細胞で生じる。ＣＣＲ７の発現の増加は、ケモカインＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１を発現する細胞へのミクログリア細胞の走化性を誘導することがある。従って、特定の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性を誘導することがある。
【０２４５】
理論に拘束されることを望むものではないが、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、ＣＣＲ７のレベルの減少と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有用であると考えられている。
【０２４６】
骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強または正常化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力を増強及び／または正常化することがある。
【０２４７】
一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力を、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増強及び／または正常化することがある。他の実施形態では、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力を、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象の１つ以上の骨髄由来樹状細胞における、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増強及び／または正常化することがある。
【０２４８】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、骨髄由来樹状細胞の抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増加または無制御（ｄｉｓｒｅｇｕｌａｔｅｄ）と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２４９】
破骨細胞産生
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、破骨細胞産生を誘導する、及び／または破骨細胞形成速度を増加させることがある。
【０２５０】
本明細書で使用される場合、破骨細胞は、石灰化した基質を除去し、生体骨を分解すること（例えば、骨吸収）により、骨組織を除去できる骨細胞の１種である。破骨細胞は、単球−マクロファージ細胞株の細胞の融合により形成できる。一部の実施形態では、破骨細胞は、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）及びカテプシンＫの高発現により特徴付けられることがある。
【０２５１】
本明細書で使用される場合、破骨細胞形成速度は、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理された対象における破骨細胞形成速度が、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象における破骨細胞形成速度よりも大きい場合に、増加することがある。一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象における破骨細胞形成速度を、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させることがある。他の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象における破骨細胞形成速度を、例えば、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させることがある。
【０２５２】
本明細書で使用される場合、破骨細胞形成速度は、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理された対象における破骨細胞形成速度が、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象における破骨細胞形成速度よりも小さい場合、減少することがある。一部の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象における破骨細胞形成速度を、例えば、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％減少させることがある。他の実施形態では、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象における破骨細胞形成速度を、例えば、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象における破骨細胞形成速度と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍減少させることがある。
【０２５３】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、破骨細胞産生及び／若しくは破骨細胞形成速度の減少と関連する、または骨密度の病理学的減少と関連する骨粗鬆症及び骨密度の病理学的増加と関連する骨粗鬆症性疾患を含む異常な骨形成及び維持と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２５４】
マクロファージ、ミクログリア細胞、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞の増殖及び生存
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、マクロファージ、ミクログリア細胞（ミクログリア）、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及びクッパー細胞の増殖、生存、及び／または機能を増加させることがある。
【０２５５】
ミクログリア細胞は、脳及び脊髄の常在マクロファージであるグリア細胞の１種であり、従って、中枢神経系（ＣＮＳ）における、最初の及び主要な形態の能動的免疫防御として作用する。ミクログリア細胞は、脳内の全グリア細胞集団の２０％を構成する。ミクログリア細胞は常に、ＣＮＳからプラーク、損傷ニューロン、及び感染性因子を取り除く。脳及び脊髄は、それらが、ほとんどの感染が脆弱な神経組織に到達するのを防止する血液脳関門として知られている一連の内皮細胞により身体の残部から分離されている「免疫特権」臓器と考えられている。感染性因子が脳に直接導入される、または血液脳関門を通過する場合、ミクログリア細胞は、炎症を減少させるために迅速に反応し、感染性因子が敏感な神経組織を損傷する前に、それらを破壊しなければならない。身体の残部から抗体を利用できない（血液脳関門を通過するのに十分に小さい抗体はほとんどない）ために、ミクログリアは、異物を認識し、それらを飲み込み、Ｔ細胞を活性化する抗原提示細胞として作用することができなければならない。このプロセスは、致命的な損傷を潜在的に防止するために、迅速に行われなければならないので、ミクログリア細胞は、ＣＮＳの小さな病理学的変化にさえ極めて感受性が高い。それらは、細胞外カリウムの小さな変化にさえ応答する独特なカリウムチャネルを有することにより、この感受性を部分的に達成する。
【０２５６】
本明細書で使用される場合、本開示のマクロファージは、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、及びＭ２マクロファージを含むが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、本開示のミクログリア細胞は、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、及びＭ２ミクログリア細胞を含むが、これらに限定されない。
【０２５７】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、樹状細胞、単球、及び／またはマクロファージ上におけるＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現を増加させることがある。
【０２５８】
本明細書で使用される場合、マクロファージ、ミクログリア、単球、及び／または樹状細胞の増殖速度、生存、及び／または機能は、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理された対象のマクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の増殖速度、生存、及び／または機能が、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象のマクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の増殖速度、生存、及び／または機能よりも多い場合に、発現の増加を含むことがある。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象のマクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の増殖速度、生存、及び／または機能を、例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象のマクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の増殖速度、生存、及び／または機能と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１１５％、少なくとも１２０％、少なくとも１２５％、少なくとも１３０％、少なくとも１３５％、少なくとも１４０％、少なくとも１４５％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、少なくとも１８０％、少なくとも１９０％、または少なくとも２００％増加させることがある。他の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対象のマクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の増殖速度、生存、及び／または機能を、例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体で処理されていない対応する対象のマクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の増殖速度、生存、及び／または機能と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、少なくとも１．８倍、少なくとも１．９倍、少なくとも２．０倍、少なくとも２．１倍、少なくとも２．１５倍、少なくとも２．２倍、少なくとも２．２５倍、少なくとも２．３倍、少なくとも２．３５倍、少なくとも２．４倍、少なくとも２．４５倍、少なくとも２．５倍、少なくとも２．５５倍、少なくとも３．０倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４．０倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５．０倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６．０倍、少なくとも６．５倍、少なくとも７．０倍、少なくとも７．５倍、少なくとも８．０倍、少なくとも８．５倍、少なくとも９．０倍、少なくとも９．５倍、または少なくとも１０倍増加させることがある。
【０２５９】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、マクロファージ、ミクログリア、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞増殖、生存、及び／または機能の低減と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２６０】
クリアランス及び貪食
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、アポトーシスニューロン、神経系の神経組織破片、神経系の非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、及び／または病原性核酸のうちの１つ以上の細胞で発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、クリアランス及び／または貪食を誘導することがある。特定の実施形態では、病原性タンパク質は、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドを含むが、これらに限定されない。特定の実施形態では、病原性核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡを含むが、これらに限定されない。
【０２６１】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病原性タンパク質クリアランス、病原性ペプチドクリアランス、病原性核酸クリアランス、及び腫瘍細胞クリアランスを含むがこれらに限定されない１種以上のクリアランスを誘導することがある。
【０２６２】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、病原性核酸、及び／または腫瘍細胞のうちの１つ以上の貪食を誘導することがある。
【０２６３】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、低減したレベルのマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）の条件下で、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させることがある。あるいは、一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、正常レベルのマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）の存在下で、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させることがある。
【０２６４】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、アポトーシスニューロン、神経系の神経組織破片、神経系の非神経組織破片、細菌、他の異物、または病原性タンパク質と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２６５】
Ｓｙｋリン酸化
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、細胞に発現されたＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合した後に、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）リン酸化を誘導することがある。
【０２６６】
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、いくつかの基質リン酸化し、それにより、細胞活性化及び炎症プロセスをもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進することにより、ＴＲＥＭ２の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子である。
【０２６７】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、Ｓｙｋリン酸化のレベルの減少と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２６８】
ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現
一部の実施形態では、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ファミリー転写因子のうちの１つ以上の転写因子などのＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性及び／または発現を増加させることがある。あるいは、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＮＦＡＴファミリーの転写因子のうちの１つ以上の転写因子などのＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性及び／または発現を阻害することがある。
【０２６９】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、及び／または多発性硬化症を含む、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子のレベルの減少と関連する状態及び／または疾患を予防すること、リスク低下させること、または治療することに有益であると考えられている。
【０２７０】
抗体の調製
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化及びキメラ抗体、ヒト抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及びＦ（ａｂ′）２）、二重特異性及び多特異性抗体、多価抗体、ライブラリ由来抗体、修飾されたエフェクター機能を有する抗体、抗体部分を含有する融合タンパク質、ならびに抗体のグリコシル化多様体、抗体のアミノ酸配列多様体、及び共有結合的に修飾された抗体を含む、本開示のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質のアミノ酸残基を有するエピトープなどの抗原認識部位を含む、他の任意の修飾された立体配置の免疫グロブリン分子を包含する可能性がある。抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ヒト、マウス、ラット、または（キメラ若しくはヒト化抗体を含む）他の任意の起源のものであって良い。
【０２７１】
（１）ポリクローナル抗体
抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２ポリクローナル抗体などのポリクローナル抗体は一般に、関連する抗原及びアジュバントの複数の皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射により、動物中で生成される。二官能性または誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲート）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介した）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（Ｒ及びＲ１は独立して、低級アルキル基である）を使用して、免疫されるべき種、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン、ウシチログロブリン、または大豆トリプシン阻害剤、に免疫原性があるタンパク質に、関連する抗原（例えば、本開示の精製または組換えＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質）をコンジュゲートすることは有用であることがある。用いられ得るアジュバントの例としては、完全フロイントアジュバント及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート（ｄｉｃｏｒｙｎｏｍｙｃｏｌａｔｅ））が挙げられる。免疫化プロトコールは、過度な実験をすることなく、当業者により選択されても良い。
【０２７２】
動物は、例えば、１００μｇ（ウサギの場合）または５μｇ（マウスの場合）のタンパク質またはコンジュゲートを、３倍量の完全フロイントアジュバントと組み合わせ、溶液を複数の部位に皮内注射することにより、所望の抗原、免疫原性コンジュゲート、または誘導体に対し免疫される。１ヶ月後、動物は、複数の部位での皮下注射により、完全フロイントアジュバント中のペプチドまたはコンジュゲートの元の量の１／５〜１／１０でブーストされる。７〜１４日後、動物は採血され、血清は、抗体力価についてアッセイされる。動物は、力価がプラトーに達するまで、ブーストされる。コンジュゲートはまた、タンパク質融合体として組換え細胞培養で行うことができる。さらに、ミョウバンなどの凝集剤は、免疫応答を増強することに適している。
【０２７３】
（２）モノクローナル抗体
抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２モノクローナル抗体などのモノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られ、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化など）を除いて同一である。従って、修飾語「モノクローナル」は、別々の抗体の混合物ではないような抗体の特徴を指す。
【０２７４】
例えば、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５  （１９７５）により最初に記載されているハイブリドーマ法を使用して作製されても良く、または、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）により作製されても良い。
【０２７５】
ハイブリドーマ法では、マウスまたはハムスターなどの他の適切な宿主ホスト動物は、免疫化のために使用されるタンパク質（例えば、本開示の精製または組換えＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質）に特異的に結合することになる抗体を産生するまたは産生できるリンパ球を誘発するために、上述のように免疫される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫されても良い。次に、リンパ球は、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して、骨髄腫細胞と融合されて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  ｐｐ．５９−１０３  （Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８６））。
【０２７６】
免疫化剤は通常、抗原タンパク質（例えば、本開示の精製若しくは組換えＴＲＥＭ２及び／若しくはＤＡＰ１２タンパク質）またはその融合多様体を含むことになる。一般に、末梢血リンパ球（「ＰＢＬｓ」）は、ヒト起源の細胞が所望される場合に使用される一方、脾臓またはリンパ節細胞は、非ヒト哺乳動物供給源が所望される場合に使用される。次に、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して、不死化細胞株と融合される。Ｇｏｄｉｎｇ，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８６），  ｐｐ．  ５９−１０３。
【０２７７】
不死化細胞株は通常、形質転換された哺乳動物細胞、特に、齧歯動物、ウシ、またはヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞株が用いられる。このように調製されたハイブリドーマ細胞は、播種され、未融合の親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の基質を含有する好適な培地で成長する。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培地は通常、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含むことになる（ＨＡＴ培地）。
【０２７８】
好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞により抗体の安定した高レベルの産生をサポートし、ＨＡＴ培地などの培地に感受性が高い。これらの中でも、ＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、米国カリフォルニア州サンディエゴ、から入手可能）に由来するようなマウス骨髄腫株、ならびに、ＳＰ−２細胞及びそれらの誘導体（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８−６５３）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、米国バージニア州マナッサス、から入手可能）は好ましい。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株も、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １３３：３００１  （１９８４）；  Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｐｐ．  ５１−６３  （Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８７））。
【０２７９】
ハイブリドーマ細胞が成長している培地は、抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質）に対して向けられるモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降により、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイにより決定される。
【０２８０】
ハイブリドーマ細胞が培養される培地は、所望の抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質）に対して向けられるモノクローナル抗体の存在についてアッセイできる。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性及び特異性は、免疫沈降により、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイにより決定できる。このような技術及びアッセイは、当該技術分野で既知である。例えば、結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  １０７：２２０  （１９８０）のスキャッチャード分析により決定されても良い。
【０２８１】
所望の特異性、親和性、及び／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が、同定された後に、クローンは、限界希釈法によりサブクローニングされ、標準的な方法（上記Ｇｏｄｉｎｇ）により成長させても良い。この目的に好適な培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。加えて、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物の腫瘍としてインビボで成長させても良い。
【０２８２】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロースクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、アフィニティークロマトグラフィー、及び上記のような他の方法などの従来の免疫グロブリン精製手順により、培地、腹水液、または血清から適切に分離される。
【０２８３】
抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２モノクローナル抗体はまた、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような及び上記のような組換えＤＮＡ法により作製されても良い。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、容易に単離され、（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを使用することによる）従来の手順を使用して配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに入れられても良く、次に、これらは、このような組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体を合成するために、免疫グロブリンタンパク質を別途産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクションされる。抗体をコードするＤＮＡの、細菌における組換え発現に関する概説としては、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ５：２５６−２６２  （１９９３）及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １３０：１５１−１８８  （１９９２）が挙げられる。
【０２８４】
特定の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４８：５５２−５５４  （１９９０）に記載されている技術を使用して生成された抗体ファージライブラリから単離できる。マウス及びヒト抗体の、それぞれファージライブラリからの単離は、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１−５９７  （１９９１）に記載されている。後続の刊行物は、鎖シャッフリングによる高親和性（ナノモル（「ｎＭ」）レンジ）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １０：７７９−７８３  （１９９２））、ならびに非常に大きなファージライブラリを構築するための方策としてコンビナトリアル感染及びインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２１：２２６５−２２６６  （１９９３））について記載する。従って、このような技術は、所望の特異性のモノクローナル抗体（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質に結合するもの）の単離のための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替物である。
【０２８５】
抗体またはそれらのフラグメントをコードするＤＮＡはまた、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインに対するコード配列で、相同なマウス配列を置換する（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８１：６８５１  （１９８４））ことにより、または非免疫グロブリンポリペプチドに対するコード配列の全部若しくは一部を、免疫グロブリンコード配列に共有結合的に連結させることにより、修飾されても良い。概して、このような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインと置換される、または、それらは、抗原について特異性を有する１つの抗原結合部位及び異なる抗原について特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作成するために、抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインと交換される。
【０２８６】
本明細書に記載されているモノクローナル抗体（例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／若しくは抗ＤＡＰ１２抗体またはそれらのフラグメント）は、一価であることがあり、その調製が当該技術分野において周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖及び修飾された重鎖の組換え発現を含む。重鎖は一般に、重鎖架橋を防止するために、Ｆｃ領域の任意の点で切断される。あるいは、関連するシステイン残基は、架橋を防止するために、別のアミノ酸残基で置換されても良く、または欠失する。インビトロの方法はまた、一価抗体を調製することに適する。それらのフラグメント、特に、Ｆａｂフラグメント、を産生するため抗体の消化は、当該技術分野において既知の所定の技術を使用して達成できる。
【０２８７】
キメラまたはハイブリッド抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体はまた、架橋剤に関するものを含む、合成タンパク質化学の既知の方法を使用して、インビトロで調製されても良い。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することにより構築されても良い。この目的に好適な試薬の例としては、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデートが挙げられる。
【０２８８】
（３）ヒト化抗体
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／若しくは抗ＤＡＰ１２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、ヒト化またはヒト抗体をさらに含んでも良い。ヒト化形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ′）２または抗体の他の抗原結合配列）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基により交換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基により交換される。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、インポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基も含んでも良い。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたはほぼ全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたはほぼ全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つの及び通常の２つの可変ドメインのほぼ全てを含むであろう。ヒト化抗体は最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常は、ヒト免疫グロブリンのものも含むであろう。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：  ５２２−５２５  （１９８６）；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：  ３２３−３２９  （１９８８）及びＰｒｅｓｔａ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２：  ５９３−５９６  （１９９２）。
【０２８９】
非ヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野において周知である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からそれに導入される１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は多くの場合、通常は「インポート」可変ドメインから取り込まれる「インポート」残基と称される。ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者の方法、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５  （１９８６）；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７  （１９８８）；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６  （１９８８）に従って、または齧歯動物のＣＤＲ若しくはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列で置換することにより、実質的に実施できる。従って、このような「ヒト」抗体は、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）であり、インタクトヒト可変ドメインよりも実質的に少なく、非ヒト由来の対応する配列で置換されている。実際には、ヒト化抗体は通常、いくつかのＣＤＲ残基及び場合によってはいくつかのＦＲ残基が、齧歯動物抗体の類似部位由来の残基により置換されているヒト抗体である。
【０２９０】
ヒト化抗体の作製に使用されるべきヒト可変ドメインの選択は、軽鎖及び重鎖の双方ともに、抗原性を低減させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法によれば、齧歯動物抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングされる。次に、齧歯動物のものに最も近いヒト配列は、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受け入れられる。Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １５１：２２９６  （１９９３）；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６：９０１  （１９８７）。別の方法は、特定のサブグループの軽鎖または重鎖の全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体に使用されても良い。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９：４２８５  （１９９２）；  Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：２６２３  （１９９３）
【０２９１】
さらに、抗体が、抗原に対する高い親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持してヒト化されることが重要である。この目標を達成するために、好ましい方法に従い、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び種々の概念的ヒト化産物を分析するプロセスにより調製される。三次元免疫グロブリンモデルは一般に、利用可能であり、当業者らによく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の予想されるコンフォメーション構造を例示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検査により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンの、抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析、が可能になる。このように、ＦＲ残基は、標的抗原または抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質）に対する増加した親和性などの所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント及びインポート配列から選択して組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接かつ最も実質的に関与する。
【０２９２】
ヒト化抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の様々な形態が検討される。例えば、ヒト化抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、任意にＨＳＰ６０などの１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとコンジュゲートされるＦａｂなどの抗体断片であって良い。あるいは、ヒト化抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、インタクトＩｇＧ１抗体などのインタクト抗体であって良い。
【０２９３】
（４）ヒト抗体
代わりに、ヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体が生成できる。例えば、内在性免疫グロブリン産生の不存在下で、ヒト抗体の完全なレパートリーを免疫化時に産生可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが目下可能である。キメラ及び生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらす。このような生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原暴露時にヒト抗体の産生をもたらすであろう。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：２５５１  （１９９３）；  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３６２：２５５−２５８  （１９９３）；  Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ７：３３  （１９９３）；  米国特許第５，５９１，６６９号及びＷＯ９７／１７８５２を参照のこと。
【０２９４】
あるいは、ファージディスプレイ技術は、免役されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体ならびに抗体フラグメントを産生するために使用できる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３  （１９９０）；  Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：  ３８１  （１９９１）。この技術に従い、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの繊維状バクテリオファージの主要または副コートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能性抗体フラグメントとして提示される。繊維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有するので、抗体の機能的特性に基づく選択はまた、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択をもたらす。従って、ファージは、Ｂ細胞のいくつかの性質を模倣する。ファージディスプレイは、種々の形式で実施することができ、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．  ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，  Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ３：５６４−５７１  （１９９３）に概説される。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源をファージディスプレイに使用できる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）により、免疫されたマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。免疫されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイに対する抗体は、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：５８１−５９７  （１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １２：７２５−７３４  （１９９３）により記載されている技術に従って、実質的に単離できる。米国特許第５，５６５，３３２号及び同第５，５７３，９０５号を参照のこと。さらに、酵母ディスプレイ技術は、インビトロでヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体ならびに抗体フラグメント産生するために使用できる（例えば、ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０／１０５２５６；ＷＯ２０１２／００９５６８；ＵＳ２００９／０１８１８５５；ＵＳ２０１０／００５６３８６；及びＦｅｌｄｈａｕｓ  ａｎｄ  Ｓｉｅｇｅｌ  （２００４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：６９−８０）。他の実施形態では、リボソームディスプレイ技術は、インビトロで、ヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体ならびに抗体フラグメントを産生するために使用できる（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ  （１９９７）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９４：１２２９７−１２３０２；  Ｓｃｈａｆｆｉｔｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１９−１３５；  Ｌｉｐｏｖｓｅｋ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  （２００４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈ��ｄｓ  ２９０：５１−６７）。
【０２９５】
Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の技術はまた、ヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２モノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  ｐ．  ７７  （１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７（１）：  ８６−９５  （１９９１）。同様に、ヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物、例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されているマウス、に導入することにより作製できる。暴露すると、遺伝子再構成、アセンブリ、及び抗体レパートリーを含む、全ての点でヒトに見られるものに非常に似ているヒト抗体産生が観察される。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、ならびに次の化学刊行物：Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：  ７７９−７８３  （１９９２）；  Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：  ８５６−８５９  （１９９４）；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：  ８１２−１３  （１９９４），  Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：  ８４５−５１  （１９９６），  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：  ８２６  （１９９６）及びＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，  Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３：  ６５−９３  （１９９５）に記載されている。
【０２９６】
最終的に、ヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体はまた、活性化Ｂ細胞によりインビトロで生成されても良い（米国特許第５，５６７，６１０号及び同第５，２２９，２７５号を参照のこと）。
【０２９７】
（５）抗体フラグメント
特定の実施形態では、完全抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体ではなく、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体フラグメントを使用することに利点がある。一部の実施形態では、より小さいフラグメントサイズは、迅速なクリアランス及び良好な脳の浸透を可能にする。
【０２９８】
抗体フラグメントの産生のための種々の技術が開発されている。元来、これらのフラグメントは、インタクト抗体のタンパク質分解消化により得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｍｅｔｈｏｄ．  ２４：１０７−１１７  （１９９２）；及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１  （１９８５）を参照のこと）。しかし、これらのフラグメントは目下、例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体をコードする核酸を使用して、組換え宿主細胞により直接産生できる。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体フラグメントは全て、Ｅ．ｃｏｌｉで発現及び分泌される可能性があり、それにより、大量のこれらのフラグメントの直接的な産生が可能になる。抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体フラグメントはまた、上述のように抗体ファージライブラリから単離できる。あるいは、Ｆａｂ′−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され、化学的に結合されて、Ｆ（ａｂ′）２フラグメントを形成できる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７  （１９９２））。別のアプローチに従い、Ｆ（ａｂ′）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離できる。インビボ半減期が増加するＦａｂ及びＦ（ａｂ′）２抗体フラグメントの産生は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。他の実施形態では、選択される抗体は、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号、及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと。抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体フラグメントはまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているような「線状抗体」であって良い。このような線状抗体フラグメントは、単一特異性または二重特異性であって良い。
【０２９９】
（６）二重特異性及び多特異性抗体
二重特異性抗体（ＢｓＡｂｓ）は、同じまたは別のタンパク質上のものを含む、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である（例えば、本開示の１つ以上のＴＲＥＭ２タンパク質）。あるいは、ＢｓＡｂの一部分は、標的ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２抗原に結合するために備えることができ、もう一部分は、第２のタンパク質に結合するアームと組み合わせることができる。このような抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ′）２二重特異性抗体）に由来できる。
【０３００】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野で既知である。全長二重特異性抗体の従来の産生は、２つの鎖が異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアの同時発現に基づく。Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３０５：５３７−５３９  （１９８３）。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな組み合わせのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生し、そのうちの１つだけが正しい二重特異性構造を有する。通常アフィニティークロマトグラフィー工程により行われる、適切な分子の精製は、むしろ扱いにくく、産生物収率が低い。類似した手順は、ＷＯ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  １０：３６５５−３６５９  （１９９１）に開示されている。
【０３０１】
異なるアプローチに従い、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。融合物の少なくとも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体、及び、所望される場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時トランスフェクションされる。これは、構築に使用される３つのペプチド鎖の不当比率が、最適収率を提供する時、実施形態の３つのポリペプチドフラグメントの相互比率の調整に、大きな柔軟性を提供する。しかし、等しい比率の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が、高収率をもたらす時、または比率が特に重要でない時、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖に対するコード配列を、１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０３０２】
このアプローチの好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、１つのアームの第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び残りのアームの（第２の結合特異性を提供する）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアからなる。免疫グロブリン軽鎖が二重特異性分子の半分のみに存在することにより、分離の簡単な手段を提供するので、この非対称構造は、所望の二重特異性化合物の、不必要な免疫グロブリン鎖の組み合わせからの分離を促進することが判明した。このアプローチは、ＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体を生成するさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：  ２１０  （１９８６）；及びＧａｒｂｅｒ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １３，  ７９９−８０１  （２０１４）を参照のこと。
【０３０３】
ＷＯ９６／２７０１１または米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている別のアプローチに従い、一対の抗体分子間のインターフェースは、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にするように遺伝子操作できる。好ましいインターフェースは、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。本方法では、一次抗体分子のインターフェースの１つ以上の小さいアミノ酸側鎖は、大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）と交換されている。大きな側鎖（複数可）と同一または類似のサイズの補償的「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）と交換することにより、二次抗体分子のインターフェースに作成される。これは、ホモ二量体などの他の不必要な最終産生物よりも、ヘテロ二量体の収率を増加させるための機序を提供する。
【０３０４】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を生成する技術は、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製できる。Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１  （１９８５）は、インタクト抗体が、Ｆ（ａｂ′）２フラグメントを生成するために、タンパク質分解的に切断される手順について記載する。これらのフラグメントは、近接ジチオールを安定化させるために、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元され、分子間ジスルフィド形成を防止する。次に、生成されたＦａｂ′フラグメントは、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に転化される。次に、Ｆａｂ′−ＴＮＢ誘導体の１つは、二重特異性抗体を形成するためにＦａｂ′−ＴＮＢ誘導体に再転化される。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用できる。
【０３０５】
Ｆａｂ′フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され、二重特異性抗体を形成するために、化学的に連結されても良い。Ｓｈａｌａｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７５：  ２１７−２２５  （１９９２）は、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ′）２分子の産生について記載する。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌され、インビトロで配向性化学連結を受けて、二重特異性抗体を形成した。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体及び正常ヒトＴ細胞を過剰発現する細胞に結合し、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発できた。
【０３０６】
組換え細胞培養から直接的に、二価抗体フラグメントを作製及び単離するための種々の技術も記載されている。例えば、二価ヘテロ二量体は、ロイシンジッパーを使用して産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４８（５）：１５４７−１５５３  （１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合により、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合された。抗体ホモ二量体は、ヒンジ領域で還元されて単量体を形成し、次に、再酸化されて抗体ヘテロ二量体を形成した。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：  ６４４４−６４４８  （１９９３）により記載されている「ダイアボディ」技術は、二重特異性／二価抗体フラグメントを作製するための、代替の機序を提供している。フラグメントは、同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎるリンカーにより、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、１つのフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的なＶＬ及びＶＨドメインとペアリングさせられ、それにより、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用による、二重特異性／二価抗体フラグメントを作製する別の方策も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １５２：５３６８  （１９９４）を参照のこと。
【０３０７】
二重特異性抗体を生成する別の方法は、制御されたＦａｂアーム交換（ｃＦＡＥ）であり、これは、二重特異性ＩｇＧ１（ｂｓＩｇＧ１）を生成する使いやすい方法である。プロトコールは、次の：（ｉ）ＣＨ３ドメインに単一マッチの点変異を含有する２つの親ＩｇＧ１の別々の発現；（ｉｉ）半分子の組換えを可能にするために、インビトロの許容レドックス条件下での親ＩｇＧ１の混合；（ｉｉｉ）鎖間ジスルフィド結合の再酸化を可能にするための還元剤の除去；ならびに（ｉｖ）クロマトグラフィーベースの方法または質量分析（ＭＳ）ベースの方法を使用した交換効率及び最終産生物の分析を含む。プロトコールは、ベンチスケール（マイクログラム〜ミリグラム）及び大規模製造（キログラム）をモデル化するために設計されたミニバイオリアクタースケール（ミリグラム〜グラム）の両方で、規則的なＩｇＧアーキテクチャ、特徴、及び品質属性を有するｂｓＡｂを生成する。良質の精製タンパク質から出発して、≧９５％の交換効率は、２〜３日以内に得ることができる（品質管理を含む）。Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ９，  ２４５０−２４６３  （２０１４）；及びＧａｒｂｅｒ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １３，  ７９９−８０１  （２０１４）を参照のこと。
【０３０８】
３価以上の抗体も検討される。例えば、三重特異性抗体が調製できる。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：６０  （１９９１）。
【０３０９】
例示的な二重特異性抗体は、所与の分子（例えば、本開示のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質）上の２つの異なるエピトープに結合することがある。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、本開示のＴＲＥＭ２またはＤＡＰ１２タンパク質などの第１の抗原、及び血液脳関門を越える輸送を促進する第２の抗原に結合する。血液脳関門を越える輸送を促進する多数の抗原は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ  Ｒ．，  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｂｒａｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  Ｄｉｓ．  ３７  （２０１０）  ４８−５７を参照のこと）。このような第２の抗原は、トランスフェリン受容体（ＴＲ）；インスリン受容体（ＨＩＲ）；インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）；低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）；ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性変異体）を含むジフテリア毒素受容体；ＴＭＥＭ３０（Ａ）（Ｆｌｉｐｐａｓｅ）などのラマ単一ドメイン抗体；ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、またはペネトラチンなどのタンパク質形質導入ドメイン；ポリアルギニンまたは一般的に正電荷を有するペプチド；ＡＮＧ１００５（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ、２０１０を参照のこと）などのＡｎｇｉｏｐｅｐペプチド；ならびに血液脳関門内皮細胞上に豊富にある他の細胞表面タンパク質（例えば、Ｄａｎｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．  ２０１０  Ｏｃｔ  ２９；５（１０）：ｅ１３７４１を参照のこと）を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２抗体に対する第２の抗原は、本開示のＤＡＰ１２抗原を含んでも良いが、これらに限定されない。他の実施形態では、抗ＤＡＰ１２抗体に対する第２の抗原は、本開示のＴＲＥＭ２抗原を含んでも良いが、これらに限定されない。他の実施形態では、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２の両方に結合する二重特異性抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性を促進及び増強することがある。他の実施形態では、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２抗体に対する第２の抗原は、Ａベータペプチド抗原；またはアルファシヌクレインタンパク質抗原；またはＴａｕタンパク質抗原；またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原；またはプリオンタンパク質抗原；またはハンチンチンタンパク質抗原；またはＲＡＮ；グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、若しくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）からなるジペプチドリピートを含む翻訳産物抗原（ＤＰＲペプチド）を含んでも良いが、これらに限定されない。
【０３１０】
（７）多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により、二価抗体よりも速く内在化され（及び／または異化され）ることがある。本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／若しくは抗ＤＡＰ１２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、３つ以上の抗原結合部位を有する（ＩｇＭクラス以外のものである）多価抗体（例えば、四価抗体）である可能性があり、これらは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現により容易に産生できる。多価抗体は、二量化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましい二量化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む。このシナリオでは、抗体は、Ｆｃ領域及びＦｃ領域のアミノ末端に３つ以上の抗原結合部位を含むであろう。本明細書の好ましい多価抗体は、３つ〜約８つ、好ましくは４つの抗原結合部位を含有する。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（好ましくは、２つのポリペプチド鎖）を含有し、ポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含んでも良く、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは、０または１である。同様に、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＨ−ＣＨ１−柔軟なリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含んでも良い。本明細書の多価抗体は好ましくは、少なくとも２つの（好ましくは、４つの）軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含む。本明細書の多価抗体は、例えば、約２つ〜約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含んでも良い。本明細書で検討される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意に、ＣＬドメインをさらに含む。多価抗体は、ＴＲＥＭ２抗原及びＡベータペプチド抗原；またはαシヌクレインタンパク質抗原；またはＴａｕタンパク質抗原；またはＴＤＰ−４３タンパク質抗原；またはプリオンタンパク質抗原；またはハンチンチンタンパク質抗原；またはＲＡＮ；グリシン−アラニン（ＧＡ）、グリシン−プロリン（ＧＰ）、グリシン−アルギニン（ＧＲ）、プロリン−アラニン（ＰＡ）、若しくはプロリン−アルギニン（ＰＲ）からなるジペプチドリピートを含む翻訳産物抗原（ＤＰＲペプチド）；インスリン受容体；インスリン様成長因子受容体を含むが、これらに限定されない、さらなる抗原を認識することがある。トランスフェリン受容体または他の任意の抗原は、血液脳関門を越える抗体移動を促進する。
【０３１１】
（８）エフェクター機能の遺伝子操作
エフェクター機能を修飾する、及び／または抗体の血清半減期を増加させるために、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を修飾することがさらに望ましいことがある。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／またはＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体に対する結合親和性を除去する、または低減させるために（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を低減させるために）、修飾され、または変異しても良い。一部の実施形態では、エフェクター機能は、抗体の（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメインの）Ｆｃ領域のＮ−グリコシル化を除去することにより損なわれる。一部の実施形態では、エフェクター機能は、ＰＣＴ  ＷＯ９９／５８５７２及びＡｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：  ５８５−５９３  （２００３）；  Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１９２５−１９３３  （２０００）に記載されているように、ヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７、及び／または３２７〜３３１などの領域を修飾することにより損なわれる。一部の実施形態では、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害及び抗体依存性細胞貪食を含む体液性応答を活性化させることなく、隣接細胞上の抗体のクラスター形成を増加させるための、ＩＴＩＭ含有ＦｃｇＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する選択性を増加させるために、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を修飾することが、さらに望ましいことがある。
【０３１２】
抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、エピトープに結合するサルベージ受容体を、抗体（特に、抗体フラグメント）に取り込むことがある。本明細書で使用される場合、用語「エピトープに結合するサルベージ受容体」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加させる役割を果たす、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０３１３】
（９）他のアミノ酸配列の修飾
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／若しくは抗ＤＡＰ１２抗体またはそれらの抗体フラグメントのアミノ酸配列修飾も検討される。例えば、抗体または抗体フラグメントの結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することは、望ましいことがある。抗体または抗体フラグメントのアミノ酸配列多様体は、抗体または抗体フラグメントをコードする核酸に、適切なヌクレオチド変化を導入することにより、またはペプチド合成により調製される。このような修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそれらの挿入、及び／またはそれらの置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物に到達するために行われる。但し、最終構築物は、所望の特徴（すなわち、本開示のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質に結合する能力またはこれと物理的に相互作用する能力）を有する。さらに、アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置を変化させることなどの抗体の翻訳後プロセスを改変することがある。
【０３１４】
変異導入に好ましい位置の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の特定の残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４４：１０８１−１０８５  （１９８９）により記載されているような「アラニンスキャニング変異導入」と呼ばれる。ここで、残基または標的残基のグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの電荷を持つ残基）が同定され、アミノ酸の標的抗原との相互作用に影響を与えるために、中性または負に荷電したアミノ酸（最も好ましくは、アラニンまたはポリアラニン）により交換される。次に、置換に対する機能的感受性を示すそれらのアミノ酸位置は、置換の部位に、またはそれらに対し、さらなるまたは他の多様体を導入することにより改良される。従って、アミノ酸配列変化を導入するための部位が予め決定されているが、変異それ自体の性質を予め決定する必要はない。例えば、所与の部位での変異の性能を分析するために、アラニンスキャニングまたはランダム変異導入は、標的コドンまたは領域で行われ、発現した抗体多様体は、所望の活性についてスクリーニングされる。
【０３１５】
アミノ酸配列挿入は、長さが１残基〜１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲のアミノ（「Ｎ」）末端融合及び／またはカルボキシ（「Ｃ」）末端融合、ならびに、単一または複数のアミノ酸残基の配列間挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端眼チオニル残基を有する抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合した抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入多様体は、抗体の血清半減期を増加させる酵素またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合を含む。
【０３１６】
別の種類の多様体は、アミノ酸置換多様体である。これらの多様体は、異なる残基により交換された抗体分子の少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換変異導入にとって最大の関心のある部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ改変も検討される。保存的置換は、「好ましい置換」の見出しの下の以下の表Ａに示される。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表Ａの「例示的置換」と呼ばれる、またはアミノ酸クラスに関して以下にさらに記載されるような、より実質的な変化が導入され、産物はスクリーニングされても良い。
【０３１７】
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【０３１８】
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）例えば、シート若しくはヘリックスコンフォメーションとしての、置換の領域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷若しくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さ、を維持することに及ぼす影響が著しく異なる置換を選択することにより達成される。天然残基は、一般的な側鎖特性に基づくグループに分けられる。
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０３１９】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスに交換することを伴う。
【０３２０】
抗体の適切なコンフォメーションを維持することに関与しない任意のシステイン残基はまた、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止するために、一般にセリンで置換されても良い。逆に、システイン結合（複数可）は、（特に抗体がＦｖフラグメンなどの抗体フラグメントである場合、）安定性を改善するために抗体に添加されても良い。
【０３２１】
特に好ましい種類の置換多様体は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる開発のために選択された得られる多様体（複数可）は、それらが生成される親抗体と比較して、改善された生物学的特性を有するであろう。そのような置換多様体を生成するための便利な手段は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟を含む。要約すると、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）は、各部位で全ての可能なアミノ酸置換を生成するために変異する。このようにして生成された抗体多様体は、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合物として、繊維状ファージ粒子から一価様式でディスプレイされる。次に、ファージディスプレイされた多様体は、本明細書に開示されるように、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。修飾に対する候補超可変領域部位を同定するためには、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定するアラニンスキャニング変異導入が実施できる。あるいは、または加えて、抗体及び抗原（例えば、本開示のＴＲＥＭ２タンパク質）の接触点を同定するために、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析することが有益であることがある。このような接触残基及び隣接残基は、本明細書で詳述される技術による置換の候補である。このような多様体が生成されると、多様体のパネルは、本明細書に記載されているように、スクリーニングを受け、１つ以上の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体が、さらなる開発のために選択されることがある。
【０３２２】
抗体の別の種類のアミノ酸多様体は、抗体の元のグリコシル化パターンを変更する。改変とは、抗体に見出される１つ以上の炭水化物部分を欠失させること、及び／または抗体に存在しない１つ以上のグリコシル化部位を付加することを意味する。
【０３２３】
抗体のグリコシル化は通常、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、炭化水素部分のアスパラギン残基の側鎖への付加を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−トレオニン（Ｘはプロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部分のアスパラギン側鎖への酵素的付加のための認識配列である。従って、ポリペプチドのこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在すると、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合型グリコシル化は、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの付加を指す。但し、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも使用されても良い。
【０３２４】
グリコシル化部位の抗体への付加は、抗体が、（Ｎ結合型グリコシル化部位のための）上述のトリペプチド配列のうちの１つ以上を含有するように、アミノ酸配列を改変することにより、都合よく達成される。改変はまた、元の抗体（Ｏ結合型グリコシル化部位のための）の配列に、１つ以上のセリンまたはトレオニン残基を付加することにより、またはこれらにより置換することにより、行われても良い。
【０３２５】
抗ＩｇＥ抗体のアミノ酸配列多様体をコードする核酸分子は、当該技術分野で既知の種々の方法により調製される。これらの方法は、天然供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列多様体の場合）またはオリゴヌクレオチド媒介性（若しくは部位特異的）変異導入による調製、ＰＣＲ変異導入、ならびに、先に調製された多様体または非多様体バージョンの抗体（例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体）または抗体フラグメントのカセット変異導入を含むが、これらに限定されない。
【０３２６】
（１０）他の抗体修飾
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／若しくは抗ＤＡＰ１２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能である、さらなる非タンパク質性部分を含有するように、または当該技術分野で既知であり、容易に入手可能である異なる種類の薬物コンジュゲートを含有するように、さらに修飾できる。好ましくは、抗体の誘導体化に適する部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性に起因する製造における利点を有することがある。ポリマーは、任意の分子量のものであって良く、分枝状または非分枝状であって良い。抗体に付着するポリマーの数は、変化しても良く、複数のポリマーが付着する場合、それらは、同一のまたは異なる分子とすることができる。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善されるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が、規定された条件下での治療に使用されるかどうかなどを含むが、これらに限定されない考察に基づいて決定できる。このような技術及び他の好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  Ｅｄ．，  Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄ．，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （２０００）に開示されている。
【０３２７】
薬物コンジュゲーションは、生物学的活性細胞傷害性（抗癌）ペイロードまたは薬物の、特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には、腫瘍細胞内または腫瘍細胞上にのみ見出されるべきタンパク質）を特異的に標的とする抗体への連結を含む。抗体は、体内でこれらのタンパク質を追跡し、癌細胞の表面に付着する。抗体及び標的タンパク質（抗原）の間の生化学反応は、腫瘍細胞にシグナルを誘発し、次に、腫瘍細胞は、細胞毒素と共に抗体を吸収または内在化する。ＡＤＣが内在化された後、細胞傷害性薬物が放出され、癌を死滅させる。この標的化のために、理想的には、薬物は、より低い副作用を有し、他の化学療法剤より広い治療ウインドウを与える。抗体をコンジュゲートする技術は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｊａｎｅ  ｄｅ  Ｌａｒｔｉｇｕｅ，  ＯｎｃＬｉｖｅ  Ｊｕｌｙ  ５，  ２０１２；  ＡＤＣ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；及びＤｕｃｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）．  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２１  （１）：  ５−１３を参照のこと）。
【０３２８】
結合アッセイ及び他のアッセイ
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体の抗体活性）は、例えば、放射性標識イムノアッセイ、光学アッセイ、タンパク質結合アッセイ、生化学スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、蛍光アッセイ、及び／または細胞生存アッセイなどの、当該分野で既知の種々のアッセイ、または本明細書の実施例に記載されているアッセイにより、物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について、同定、スクリーニング、及び／または特性決定されても良い。
【０３２９】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法により、抗原結合活性について試験されても良い。
【０３３０】
一部の実施形態では、競合アッセイは、ＴＲＥＭ２への結合について、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７、ならびに／またはヒト及び／またはヒト化ＭＡＢ１７２９１から選択される、表１及び／または表８に記載されている抗体のいずれかと競合する抗体を同定するために使用されても良い。特定の実施形態では、このような競合抗体は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７、ならびに／またはヒト及び／若しくはヒト化ＭＡＢ１７２９１から選択される、表１及び／または表８に記載されている抗体のいずれかに結合されるものと同じエピトープ（例えば、線状またはコンフォメーションエピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法が、Ｍｏｒｒｉｓ  （１９９６）  “Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．  ６６  （Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ）で提供される。
【０３３１】
例示的な競合アッセイでは、細胞表面上の固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞は、ＴＲＥＭ２に結合する標識一次抗体（例えば、ヒト、または非ヒト霊長類）及びＴＲＥＭ２への結合について一次抗体と競合する能力について試験されている非標識二次抗体を含む溶液中でインキュベーションされる。二次抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在することがある。対照として、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞は、標識一次抗体を含むが、非標識二次抗体を含まない溶液中でインキュベーションされる。一次抗体のＴＲＥＭ２への結合を許容する条件下でインキュベーションした後、過剰の非結合抗体が除去され、固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が測定される。固定化ＴＲＥＭ２またはＴＲＥＭ２を発現する細胞と会合した標識の量が、対照サンプルと比較して試験サンプル中で実質的に低減する場合、その時、それは、二次抗体が、ＴＲＥＭ２への結合について、一次抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ）を参照のこと。
【０３３２】
一部の実施形態では、アッセイは、生物活性を有する本開示のアゴニスト抗ＴＲＭＥ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を同定するために提供される。生物活性は、例えば、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２のもう１つの活性を、誘導する、促進する、刺激する、または別途増加させることを含むことがある。インビボ及び／またはインビトロでのこのような生物活性を有するアゴニスト抗ＴＲＭＥ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体も提供される。
【０３３３】
当該技術分野で既知の及び本明細書に記載されている（例えば、実施例２３〜２７、３３〜３８、４１〜４４、５２〜５５、及び６７〜６８を参照のこと）アッセイは、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２のもう１つの活性を誘導する、促進する、刺激する、または別途増加させる抗ＴＲＭＥ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の生物活性を同定及び試験するために使用できる。一部の実施形態では、アゴニスト抗ＴＲＭＥ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体１つ以上の活性を試験するためのアッセイが提供される。生物活性についての例示的試験は、例えば、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２タンパク質への結合及び活性化を可能にするために、十分な時間、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２を発現する自然免疫細胞などの免疫細胞の集団を、アゴニスト抗ＴＲＭＥ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体候補で処理すること、ならびに、抗体候補の不存在下での対応する集団の細胞生存（または細胞死）と比較して、細胞生存（または細胞死）を測定することを含んでも良い。細胞生存または細胞死を測定するための方法は、当技術分野で周知であり、本明細書に記載されている。アゴニスト抗ＴＲＭＥ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、対照細胞集団、例えば、アゴニスト抗体候補で処理されなかった細胞集団、と比較して、細胞集団における細胞生存を促進若しくは延長する、または細胞死を遅延させる能力により同定されても良い。本開示の特定の態様は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に特異的に結合する候補アゴニスト抗体を同定するための方法を提供する。特定の実施形態では、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に特異的に結合する候補アゴニスト抗体を同定するための方法は、ａ．候補アゴニスト抗体が自然免疫細胞集団における細胞生存を促進するのに十分な期間、表面上にＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２を発現する自然免疫細胞集団を、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に特異的に結合する候補アゴニスト抗体と接触させること、ならびに、ｂ．接触した自然免疫細胞集団の接触した細胞の細胞生存を、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２と特異的に結合する候補アゴニスト抗体と接触していない対応する自然免疫細胞集団の細胞生存と比較すること、を含み、接触した自然免疫細胞集団の細胞生存の増加は、候補抗体がアゴニストであることを示す。本開示の他の態様は、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に特異的に結合する抗体を同定するための開示された方法のいずれかにより同定されるＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２に特異的に結合する単離抗体を提供する。
【０３３４】
核酸、ベクター、及び宿主細胞
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているような組換え方法及び組成物を使用して、産生されても良い。一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離核酸が提供される。このような核酸は、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）のＶＬを含有するアミノ酸配列及び／またはＶＨを含有するアミノ酸配列をコードしても良い。一部の実施形態では、このような核酸を含有する１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。一部の実施形態では、このような核酸を含有する宿主細胞も提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、単離宿主細胞である。本明細書で使用される場合、「単離細胞」は、同定され、それが産生された環境に通常関連する少なくとも１つの汚染細胞から分離される細胞である。一部の実施形態では、単離細胞は、産生環境に関連する全ての構成成分と関連がない。単離細胞は、それが自然界に見出される形態または状況以外の形態である。単離細胞は、組織、器官、または個体に自然に存在する細胞と区別される。一部の実施形態では、単離細胞は、本開示の宿主細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有するベクター、または、（２）抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第１のベクター及び抗体のＶを含有するアミノ酸配列をコードする核酸を含有する第２のベクターを含有する（例えば、これらを形質導入されている）。一部の実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞はまた、単離細胞、インビトロ培養細胞、及びエクスビボ培養細胞を含むが、これらに限定されない。
【０３３５】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を作製する方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、抗体の発現に適する条件下で、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体をコードする核酸を含有する本開示の宿主細胞を培養することを含む。一部の実施形態では、続いて、抗体は、宿主細胞（または宿主細胞培地）から回収される。
【０３３６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の組換え産生のために、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体をコードする核酸は、単離され、宿主細胞でのさらなるクローニング及び／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、配列決定されても良い。
【０３３７】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体のいずれかをコードする核酸配列、または本明細書に記載されているそれらのフラグメントポリペプチド（抗体を含む）を含有する好適なベクターは、クローニングベクター及び発現ベクターを含むが、これらに限定されない。好適なクローニングベクターは、標準的な技術に従い構成できる、または当該技術分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択されても良い。選択されたクローニングベクターは、使用されることを意図される宿主細胞に従い変化することがあるが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を有しても良く、及び／またはベクターを含有するクローンを選択することに使用できるマーカーの遺伝子を保有しても良い。好適例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これら及び他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの販売業者から入手可能である。
【０３３８】
発現ベクターは一般に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームまたは染色体ＤＮＡの不可欠な部分のいずれかとして、宿主細胞において複製可能であることがある。好適な発現ベクターは、プラスミド、アデノウイルスを含むウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、コスミド及び国際公開特許第ＷＯ８７／０４４６２号に開示されている発現ベクター（複数可）を含むが、これらに限定されない。ベクター構成成分は一般に、次の：シグナル配列；複製起点；１つ以上のマーカー遺伝子；好適な転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、及びターミネーター）のうちの１つ以上を含むことがあるが、これらに限定されない。発現（すなわち、翻訳）のために、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、及び終止コドンなどの１つ以上の翻訳制御エレメントもまた通常必要とされる。
【０３３９】
目的の核酸を含有するベクターは、電気穿孔法；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、または他の物質を用いるトランスフェクション；マイクロプロジェクタイルボンバードメント；リポフェクション；及び感染（例えば、ベクターは、ワクシニアウイルスなどの感染性因子である）を含む多くの適切な手段のいずれかにより、宿主細胞内に導入できる。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は多くの場合、宿主細胞の特徴に依存するであろう。一部の実施形態では、ベクターは、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体をコードする１つ以上のアミノ酸配列を含有する核酸を含有する。
【０３４０】
ベクターをコードする抗体のクローニングまたは発現に好適な宿主細胞は、原核細胞または真核細胞を含む。例えば、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない時、細菌において産生されても良い。細菌における抗体フラグメント及びペプチドの発現については、（例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号；ならびに、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ２４８  （Ｂ．Ｋ．Ｃ．  Ｌｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ，  ２００３），  ｐｐ．  ２４５−２５４，  ｄｅｓｃｒｉｂｉｎｇ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｅ．  ｃｏｌｉ．）。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離されても良く、さらに精製できる。
【０３４１】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物はまた、グルコシル化経路が「ヒト化」されて、部分的または完全なヒトグルコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌及び酵母株を含む抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である（例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２２：１４０９−１４１４  （２００４）；及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２４：２１０−２１５  （２００６））。
【０３４２】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する可能性がある。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と共に使用され得る多数のバキュロウイルス株が同定されている。植物細胞培養物はまた、宿主として利用できる（例えば、トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号）。
【０３４３】
脊椎動物細胞はまた、宿主として使用されても良い。例えば、懸濁液中で成長するように構成される哺乳動物細胞株が有用であることがある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．  ３６：５９  （１９７７）に記載されている２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，  Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．  ２３：２４３−２５１  （１９８０）に記載されているようなＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ３８３：４４−６８  （１９８２）に記載されているようなＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７：４２１６  （１９８０））、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適する特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  ２４８  （Ｂ．Ｋ．Ｃ．  Ｌｏ，  ｅｄ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｔｏｔｏｗａ，  ＮＪ），  ｐｐ．  ２５５−２６８  （２００３）を参照のこと。
【０３４４】
医薬組成物
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、抗体を適切な薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わせることにより、治療的投与のための種々の製剤に組み込むことができ、固体、半固体、液体または気体の形態の製剤に製剤化されても良い。このような製剤の例としては、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア、及びエアゾール剤が挙げられるが、これらに限定されない。医薬組成物は、所望の製剤に応じて、動物またはヒト投与のための医薬組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルである、薬学的に許容される非毒性担体または希釈剤を含むことができる。希釈剤は、組み合わせの生物活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例としては、蒸留水、緩衝水、生理食塩水、ＰＢＳ、リンガー液、デキストロース溶液、及びハンクス溶液が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の医薬組成物または製剤は、他の担体、アジュバント、または非毒性、非治療的、非免疫原性安定剤、賦形剤などをさらに含むことができる。組成物はまた、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤、湿潤剤、ならびに洗浄剤などの生理学的条件に近づける追加の物質を含むことができる。
【０３４５】
本開示の医薬組成物はまた、例えば酸化防止剤などの種々の安定剤のいずれかを含むことができる。医薬組成物が、ポリペプチドを含む時、ポリペプチドは、ポリペプチドのインビボ安定性を増強する、または別途薬理学的性質を増強する（例えば、ポリペプチドの半減期を増加させ、その毒性を低下させ、溶解性または取り込みを増強する）種々の周知の化合物と複合体化できる。このような修飾または複合化剤の例としては、スルフェート、グルコネート、シトレート、及びホスフェートが挙げられるが、これらに限定されない。組成物のポリペプチドはまた、インビボ属性を増強する分子と複合体化できる。このような分子としては、炭化水素、ポリアミン、アミノ酸、他のペプチド、イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン）及び脂質が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３４６】
様々な種類の投与に適する製剤のさらなる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ，  １７ｔｈ  ｅｄ．  （１９８５）に見出すことができる。薬物送達のための方法の簡単な概説については、Ｌａｎｇｅｒ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３  （１９９０）を参照のこと。
【０３４７】
経口投与の場合、活性成分は、カプセル剤、錠剤、及び散剤などの固体剤形、または、エリキシル剤、シロップ剤、及び懸濁剤などの液体剤形で投与できる。活性成分（複数可）は、グルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロースまたはセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ナトリウムサッカリン、タルカム、炭酸マグネシウムなどの不活性成分及び粉末担体と共に、ゼラチンカプセルにカプセル化できる。所望の色、味、安定性、緩衝能、分散、または他の既知の望ましい特徴を提供するために添加され得る追加の不活性成分の例は、ベンガラ、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、及び食用白色インクである。類似の希釈剤は、圧縮錠剤を作製するために使用できる。錠剤及びカプセルの両方は、数時間にわたり薬物の連続放出を提供するための持続放出製品として製造できる。圧縮錠剤は、不快な味を隠し、錠剤を大気から保護するために、糖衣を施す若しくはフィルムコーティングする、または胃腸管における選択的崩壊のために腸溶コーティングすることができる。経口投与のための液体剤形は、患者の容認を増加させるための着色剤及び香味料を含有できる。
【０３４８】
非経口投与に適する製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び目的のレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含有できる水性及び非水性の等張滅菌注射溶液、ならびに、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤を含むことができる水性及び非水性滅菌懸濁液を含む。
【０３４９】
医薬組成物を製剤化するために使用される成分は、好ましくは高純度であり、潜在的に有害な汚染物質を実質的に含まない（例えば、少なくともＮａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｏｄ（ＮＦ）グレード、一般に少なくとも分析グレード、より典型的には少なくとも医薬品グレード）。さらに、インビボでの使用を意図される組成物は通常、無菌である。所与の化合物を使用前に合成しなければならない程度、得られる製品は通常、合成または精製プロセス中に存在し得る任意の潜在的な毒物、特に任意のエンドトキシンを実質的に含まない。非経口投与のための組成物はまた、無菌で、実質的に等張性があり、ＧＭＰ条件下で作製される。
【０３５０】
製剤は、脳または中枢神経系での保持及び安定化のために最適化されても良い。薬剤が頭蓋区画に投与される場合、薬剤が区画に保持され、血液脳関門に拡散しない、または別途これを越えないことが望ましい。安定化技術は、分子量の増加を達成するために、架橋、多量体化、またはポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への結合を含む。
【０３５１】
保持を増加させるための他の方策は、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体などの抗体の、生分解性または生体侵食性インプラントへの封入を含む。治療的に活性な薬剤の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送及びインプラントの生分解の速度により制御される。薬剤のポリマーバリアを介した輸送はまた、ポリマーバリアを、薬物、インプラントの形状などに対してより透過性にするために、化合物の溶解性、ポリマーの親水性、ポリマー架橋の程度、吸水時のポリマーの膨張により影響を受けるであろう。インプラントは、移植部位として選択された領域のサイズ及び形状に相応する大きさのものである。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセルなどであって良く、選択された挿入部位に適合する任意のサイズまたは形状のものであって良い。
【０３５２】
インプラントは、モノリシックであって良い、すなわち、活性薬が、ポリマーマトリックスを介して均一に分布している、またはカプセル化されており、活性薬のリザーバは、ポリマーマトリックスによりカプセル化されている。用いられるべきポリマー組成物の選択は、投与部位、所望の治療期間、患者の耐性、治療されるべき疾患の性質などにより変わるであろう。ポリマーの特性は、移植部位での生分解性、目的の薬剤との適合性、カプセル化の容易さ、生理学的環境における半減期を含むであろう。
【０３５３】
用いられ得る生分解性ポリマー組成物は、分解された時に、モノマーを含む生理学的に許容される分解生成物をもたらす有機エステルまたはエーテルを含むが、これらに限定されない。単独のまたは他のモノマーと組み合わせた無水物、アミド、オルトエステルなどは、用途を見出すことがある。ポリマーは、縮合ポリマーとなるであろう。ポリマーは、架橋されていても、または架橋されていなくても良い。特に興味深いのは、ヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、ホモポリマーまたはコポリマーのいずれか、及び多糖類である。目的のポリエステルの中には、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン、及びそれらの組み合わせのポリマーが含まれる。Ｌ−ラクテートまたはＤ−ラクテートを用いることにより、ポリマーの遅い生物分解が達成される一方、分解は、ラセミ体で実質的に増強される。グリコール酸及び乳酸のコポリマーは、特定の目的のものであり、生分解速度はグリコール酸と乳酸との比により制御される。最も急速に分解されたコポリマーは、おおよそ同量のグリコール酸及び乳酸を有し、ホモポリマーのいずれかが分解に対してより耐性がある。グリコール酸と乳酸との比はまた、インプラントの脆性に影響を与えることになり、より柔軟なインプラントが、より大きな形状にとって望ましい。目的の多糖類の中には、非水溶性、約５ｋＤ〜５００ｋＤの分子量などであることを特徴とするアルギン酸カルシウム、及び官能化セルロース、特にカルボキシメチルセルロースエステルがある。生分解性ヒドロゲルも、本発明のインプラントに用いられても良い。ヒドロゲルは通常、液体を吸収する能力を特徴とするコポリマー材料である。用いられ得る例示的な生分解性ヒドロゲルは、Ｈｅｌｌｅｒ  ｉｎ：  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｎ．  Ａ．  Ｐｅｐｐｅｓ  ｅｄ．，  Ｖｏｌ．  ＩＩＩ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌａ．，  １９８７，  ｐｐ  １３７−１４９に記載されている。
【０３５４】
薬学的投薬量
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を含有する本開示の医薬組成物は、ボーラスとしての、または一定期間にわたる連続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、大脳脊髄内（ｉｎｔｒａｃｅｒｏｂｒｏｓｐｉｎａｌ）、頭蓋内、脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、経口、局所、または吸入経路によるものなどの既知の方法に従い、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体での治療を必要とする個体、好ましくは、ヒトに投与されても良い。
【０３５５】
本開示の医薬組成物の投薬量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて変わることがある。適切な投与量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。動物実験は、ヒトの治療に有効な用量を決定するための信頼できる指針を提供する。有効な用量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，  Ｗ．  “Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”  Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ，  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，  ｐｐ．４２−４６に記載されている原理に従って実施できる。
【０３５６】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体のいずれかのインビボ投与の場合、通常の投薬量は、投与の経路に応じて、１日当たり、個体の体重の１ｋｇ当たり約１０ｎｇ〜約１００ｍｇまたはそれ以上、好ましくは、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で変わることがある。治療されるべき疾患、障害、または状態の重症度に応じて、数日間またはそれ以上にわたる反復投与の場合、治療は、症状の所望の抑制が達成されるまで持続される。
【０３５７】
例示的な投薬レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の初期用量を、その後、約１ｍｇ／ｋｇの毎週の維持用量を、隔週で投与することを含んでも良い。他の投薬量レジメンは、医師が達成したい薬物動態減衰パターンに応じて、有用であることがある。例えば、個体に１週間に１回〜２１回投薬することが本明細書で検討される。特定の実施形態では、約３μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、及び約２／ｍｇ／ｋｇ）の範囲の投薬が使用されても良い。特定の実施形態では、投薬頻度は１日３回、１日２回、１日１回、１日おきに１回、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、若しくは１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、またはそれ以上である。治療の進行は、従来の技術及びアッセイにより容易に監視される。投与される抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を含む投薬レジメンは、使用される用量とは関係なく、時間が経つにつれて変わる可能性がある。
【０３５８】
特定の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の投薬量は、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の１回以上の投与を与えられている個体において経験的に決定されても良い。個体は、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の徐々に増加する用量が与えられる。抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の有効性を評価するために、本開示の任意の疾患、障害、または状態の臨床症状（例えば、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症）が監視できる。
【０３５９】
本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態に応じて、連続的または断続的である可能性があり、投与の目的は、治療的または予防的、及び熟練した実践者に知られている他の要因である。抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体の投与は、予め選択された期間にわたり本質的に連続的であって良く、または一連の間隔を介した投薬であって良い。
【０３６０】
特定の投薬量及び送達方法に関するガイダンスは、文献で提供されている。例えば、米国特許第４，６５７，７６０号、同第５，２０６，３４４号、または同第５，２２５，２１２号を参照のこと。異なる製剤が、異なる治療及び異なる障害に有効であろうこと、ならびに、特定の器官または組織を治療することを意図される投与が、別の器官または組織のものとは異なる仕方の送達を要することがあることは、本発明の範囲内である。さらに、投薬量は、１回以上の別々の投与より、または連続注入により投与されても良い。状態に応じた数日間またはそれ以上にわたる反復投与の場合、治療は、疾患の症状の所望の抑制が生じるまで持続される。しかし、他の投薬量レジメンが有用であることがある。この療法の進行は、従来の技術及びアッセイにより容易に監視される。
【０３６１】
治療的使用
本開示のさらなる態様は、個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性を調節する（例えば、誘導する、若しくは阻害する）ために、本開示の治療的有効量の抗ＴＲＥＭ２及び／若しくは抗ＤＡＰ１２抗体を、個体に投与することにより、それを必要とする個体において、ＴＲＥＭ２を調節する（例えば、活性化する、若しくは阻害する）、ＤＡＰ１２を調節する（例えば、活性化する、若しくは阻害する）、ＰＩ３Ｋを調節する（例えば、活性化する、若しくは阻害する）、１つ以上の抗炎症性メディエーター（例えば、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０）の発現を調節する（例えば、増加させる、若しくは低減させる）、または１つ以上の前炎症性メディエーター（例えば、Ｌ−１β及びＴＮＦ）の発現を調節する（例えば、増加させる、若しくは低減させる）ための方法を提供する。
【０３６２】
本明細書で開示される場合、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに／または癌（例えば、膀胱癌、乳癌、結腸及び直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、ならびに甲状腺癌）を予防する、リスク低減させる、または治療するために使用されても良い。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、アゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、不活性抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、アンタゴニスト抗体である。
【０３６３】
一部の実施形態では、本開示は、ＤＡＰ１２リン酸化、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーター（例えば、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０）の発現、または１つ以上の前炎症性メディエーター（例えば、Ｌ−１β及びＴＮＦ）の発現を含むがこれらに限定されない、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、誘導するまたは阻害する）、本開示の治療的有効量の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を、個体に投与することにより、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、ならびに癌を有する個体を予防する、リスク低減させる、または治療する方法を提供する。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、アゴニスト抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、不活性抗体である。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、アンタゴニスト抗体である。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン酸を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基３３をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミンを有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基４４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファンを有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基４７に、アルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基７８をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファンを有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴ���ＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。特定の実施形態では、個体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質（配列番号１）のアミノ酸残基１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。
【０３６４】
一部の実施形態では、個体は、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１のアミノ酸残基Ｔｈｒ６６に対応するアミノ酸でのトレオニンからメチオニンへのアミノ酸置換；及び／または、配列番号１のアミノ酸残基Ｓｅｒ１１６に対応するアミノ酸でのセリンからシステインへのアミノ酸置換を有するヘテロ接合型ＴＲＥＭ２多様体対立遺伝子を有する。
【０３６５】
一部の実施形態では、個体は、配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換；配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換；配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内の欠失；配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入；及び／または、配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失を有するヘテロ接合型ＤＡＰ１２多様体対立遺伝子を有する。
【０３６６】
本明細書で開示されるように、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体はまた、自然免疫細胞の生存を誘導及び／または促進するために使用されても良い。一部の実施形態では、本開示は、本開示の治療的有効量のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を、個体に投与することにより、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を誘導または促進する方法を提供する。
【０３６７】
本明細書で開示されるように、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体はまた、損傷後などの創傷治療を誘導及び／または促進するために使用されても良い。一部の実施形態では、創傷治癒は、損傷後の結腸の創傷治癒であって良い。一部の実施形態では、本開示は、本開示の治療的有効量のアゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を、個体に投与することにより、それを必要とする個体の創傷治癒を誘導または促進する方法を提供する。
【０３６８】
本明細書で開示されるように、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体はまた、自然免疫細胞の生存を阻害するために使用されても良い。一部の実施形態では、本開示は、本開示の治療的有効量のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を、個体に投与することにより、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を阻害する方法を提供する。
【０３６９】
一部の実施形態では、本開示の方法は、抗ＴＲＥＭ２及び／若しくは抗ＤＡＰ１２抗体またはＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２の両方に結合する二重特異性抗体の、ＴＬＲアンタゴニストまたはＴＬＲアゴニストを中和する（例えば、サイトカインまたはインターロイキン抗体を中和する）薬剤との共投与を含んでも良い。
【０３７０】
一部の実施形態では、本開示の方法は、ＨＳＰ６０などのＴＲＥＭ２リガンドと共に本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を含むキメラ構築物の投与を含んでも良い。
【０３７１】
認知症
認知症は、正常な老化から予測され得るものを超えて、予め損なわれていないヒトの全体的な認知能力の重大な喪失として現れる非特異的な症候群（すなわち、徴候及び症状のセット）である。独特の全体的な脳損傷の結果としての認知症は、変化しないことがある。あるいは、認知症は、進行性であり、身体の損傷または疾患に起因する長期的な衰退をもたらすことがある。認知症は、高齢者集団においてはるかに一般的であるが、６５歳までに発症する可能性もある。認知症の影響を受ける認知領域は、記憶、注意持続、言語、及び問題解決を含むが、これらに限定されない。一般に、症状は、個体が認知症と診断される前に、少なくとも６ヶ月間存在しなければならない。
【０３７２】
認知症の例示的形態としては、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味性認知症、及びレビー小体を伴う認知症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３７３】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、認知症を予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、認知症を有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３７４】
前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉の進行性の変性から生じる状態である。時間が経つにつれて、変性は、側頭葉に進むことがある。患者数で、アルツハイマー病（ＡＤ）次ぐ２番目であるが、ＦＴＤは初老期認知症の２０％を占める。ＦＴＤの臨床特徴は、記憶障害、行動異常、人格変化、及び言語障害を含む（Ｃｒｕｔｓ，  Ｍ．  ＆  Ｖａｎ  Ｂｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，  Ｃ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．  ２４：１８６−１９４  （２００８）；  Ｎｅａｒｙ，  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５１：１５４６−１５５４  （１９９８）；  Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，  Ｅ．，  Ｂｒａｙｎｅ，  Ｃ．，  Ｄａｗｓｏｎ，  Ｋ．  ＆  Ｈｏｄｇｅｓ，  Ｊ．  Ｒ．，  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８：１６１５−１６２１  （２００２））。
【０３７５】
ＦＴＤ症例のかなりの部分は、常染色体優性様式で遺伝するが、たとえ１つのファミリーであっても、症状は、行動障害を伴うＦＴＤから原発性進行性失語症、大脳皮質基底核神経節変性症に及ぶ可能性がある。ＦＴＤは、大部分の神経変性疾患と同様に、罹患した脳における特定のタンパク質凝集体の病理学的存在を特徴とすることができる。歴史的に、ＦＴＤの最初の記載により、神経原線維変化またはピック体における高リン酸化Ｔａｕタンパク質の神経細胞内蓄積の存在が認識された。微小管関連タンパク質Ｔａｕの因果的役割は、いくつかのファミリーにおいてＴａｕタンパク質をコードする遺伝子における変異の同定によりサポートされた（Ｈｕｔｔｏｎ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７０２−７０５  （１９９８）。しかし、ＦＴＤ脳の大部分は、高リン酸化Ｔａｕの蓄積を示さないが、ユビキチン（Ｕｂ）及びＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ４３）に対する免疫反応性を示す（Ｎｅｕｍａｎｎ，  Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ６４：１３８８−１３９４  （２００７））。それらのＵｂ封入対を伴うＦＴＤ症例（ＦＴＤ−Ｕ）の大部分は、プログラニュリン遺伝子に変異を保有することが示された。
【０３７６】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、ＦＴＤを予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、ＦＴＤを有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３７７】
アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。疾患に対する治療はなく、この疾患は、進行するにつれて悪化し、最終的に死をもたらす。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳超の人々において診断される。しかし、あまり一般的ではない早期発症型アルツハイマー病が、かなり早い時期に発症する可能性がある。
【０３７８】
アルツハイマー病の一般的な症状は、最近の出来事を覚えることが困難、認知症状、混乱、過敏性及び攻撃性、気分変動、言語に伴う障害、ならびに長期記憶喪失などの行動徴候を含む。疾患が進行するにつれて、身体機能は失われ、最終的には死をもたらす。アルツハイマー病は、完全に明らかになる前の未知で不定の期間の間に発症し、何年もの間、診断未確定で進行する可能性がある。
【０３７９】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、アルツハイマー病を予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、アルツハイマー病を有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３８０】
那須−ハコラ病
代わりに硬化性白質脳症を伴う脂肪膜性多発嚢胞性骨異形成症（ＰＬＯＳＬ）と称されることがある那須−ハコラ病（ＮＨＤ）は、下肢及び上肢の多嚢胞性骨嚢胞に起因する再発性骨折を伴う進行性初老認知症を特徴とする稀な遺伝性ロイコジストロフィーである。ＮＨＤ疾患の経過は一般に、４期：潜伏期、骨症状期、初期神経症状期、及び後期神経症状期に分けられる。幼児期（潜伏期）の正常な発達の後、ＮＨＤは、手、手首、足首、及び足に痛みを伴って青年期または若年成人期（典型的な発症年齢２０〜３０歳）に現れ始める。その後、患者は、四肢の骨の多嚢胞性骨病変及び骨粗鬆症病変（骨症状期）に起因する再発性骨折に罹患し始める。人生の３０年または４０年（初期神経症状期）において、患者は、前頭葉症候群に特徴的な顕著な人格変化（例えば、多幸感、集中力の欠如、判断の喪失、及び社会的抑制）を呈する。患者は通常、進行性の記憶障害にも罹患する。てんかん発作も頻繁に観察される。最終的に（後期神経症状期）、患者は、深刻な認知症に進行し、話すこと及び動くことができず、通常５０歳までに死亡する。
【０３８１】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、那須−ハコラ病（ＮＨＤ）を予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、ＮＨＤを有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３８２】
パーキンソン病
特発性若しくは原発性パーキンソン症候群、低運動性硬直症候群（ＨＲＳ）、または振戦麻痺と称されることがあるパーキンソン病は、運動系制御に影響を与える神経変性脳障害である。脳におけるドーパミン産生細胞の漸進的死により、パーキンソン病の主要な症状がもたらされる。多くの場合、パーキンソン病は、５０歳以上の人々において診断されている。パーキンソン病は、ほとんどの人々において特発性（既知の原因を有さない）である。しかし、遺伝的要因も、この疾患に関与している。
【０３８３】
パーキンソン病の症状は、手、腕、脚、顎、及び顔面の振戦、四肢及び胴体の筋硬直、運動の緩慢（運動緩慢）、姿勢の不安定性、歩行困難、神経精神障害、発語または行動の変化、うつ病、不安、痛み、精神病、認知症、幻覚、ならびに睡眠障害を含むが、これらに限定されない。
【０３８４】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与すると、パーキンソン病を予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、パーキンソン病を有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３８５】
筋萎縮性側索硬化症
本明細書で使用される場合、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または運動ニューロン疾患、またはルーゲーリック病は、同じ意味で使用され、急速な進行性脱力、筋萎縮及び線維束攣縮、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、ならびに呼吸困難（呼吸困難症）を特徴とする様々な病因を有する消耗性疾患を指す。
【０３８６】
プログラニュリンは、ＡＬＳに関与し（Ｓｃｈｙｍｉｃｋ，  ＪＣ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．；７８：７５４−６）、ＴＤＰ−４３などのＡＬＳ原因タンパク質により引き起こされる損傷を再び防ぐことが示されている（Ｌａｉｒｄ，  ＡＳ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）．  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５：  ｅ１３３６８）。ｐｒｏ−ＮＧＦは、脊髄損傷後のオリゴデンドロサイト及び皮質脊髄ニューロンのｐ７５媒介死を誘導することも実証された（Ｂｅａｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｎ  （２００２），３６，  ｐｐ．  ３７５−３８６；  Ｇｉｅｈｌ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  （２００４），  １０１，  ｐｐ  ６２２６−３０）。
【０３８７】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与すると、ＡＬＳを予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、ＡＬＳを有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３８８】
ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、ハンチントン遺伝子（ＨＴＴ）の常染色体優性変異により引き起こされる遺伝性の神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内のサイトカイン−アデニン−グアニン（ＣＡＧ）トリプレットリピートの伸長は、遺伝子によりコードされる変異型のハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の産生をもたらす。この変異体ハンチントンタンパク質（ｍＨｔｔ）は、毒性があり、ニューロン死の原因となる。ハンチントン病の症状は、任意の年齢で現れる可能性があるが、３５歳及び４４歳の間で最も一般的に現れる。
【０３８９】
ハンチントン病の症状は、運動制御障害、痙攣、不規則運動（舞踏病）、異常な眼球運動、平衡障害、てんかん発作、咀嚼困難、嚥下困難、認知障害、発語変化、記憶障害、思考困難、不眠症、疲労、認知症、人格変化、うつ病、不安、及び強迫行動を含むが、これらに限定されない。
【０３９０】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与すると、ハンチントン病（ＨＤ）を予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、ＨＤを有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３９１】
タウオパチー病
タウオパチー病またはタウ異常症は、脳内の微小管関連タンパク質Ｔａｕの凝集により引き起こされる神経変性疾患のクラスである。アルツハイマー病（ＡＤ）は、最もよく知られているタウオパチー病であり、不溶性形態での、ニューロン内のＴａｕタンパク質の蓄積である神経原線維変化（ＮＦＴ）を含む。他のタウオパチー病及び障害としては、進行性核上性麻痺、ボクサー認知症（慢性外傷性脳症）、前頭側頭型認知症、及び１７番染色体に関連するパーキンソン症候群、リティコ−ボディグ病（グアムのパーキンソン認知症複合）、神経原線維変化型老年期認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性脳硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病、リポフスチン沈着症、ピック病、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、前頭側頭型認知症、ならびに前頭側頭葉変性症が挙げられる。
【０３９２】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体を投与すると、タウオパチー病を予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、タウオパチー病を有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、または１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３９３】
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、散在性硬化症または散在性脳脊髄炎とも称することができる。ＭＳは、脳及び脊髄の軸索周囲の脂肪ミエリン鞘が損傷し、脱髄及び瘢痕化ならびに広範囲の徴候及び症状をもたらす炎症性疾患である。ＭＳは、脳及び脊髄内の神経細胞の、相互に効果的に伝達する能力に影響を及ぼす。神経細胞は、ミエリンと呼ばれる絶縁物質内に含有される軸索と呼ばれる長い繊維の下に活動電位と呼ばれる電気信号を送ることにより伝達する。ＭＳでは、身体の免疫系が、ミエリンを攻撃して損傷する。ミエリンが失われると、軸索は、もはや効果的にシグナルを伝導できない。ＭＳ発症は通常、若年成人で生じ、女性においてより一般的である。
【０３９４】
ＭＳの症状は、感度の低下または刺痛感などの感覚の変化；感覚減退及び感覚異常などの穿刺またはしびれ；筋力低下；クローヌス；筋痙攣；移動困難；運動失調などの協調及び平衡障害；構音障害などの発語困難または嚥下障害などの嚥下困難；眼振などの視覚障害；閃光感覚及び複視を含む視神経炎；疲労；急性または慢性疼痛；ならびに膀胱直腸障害；様々な程度の認知障害；うつ病または不安な気分の感情的な症状；通常の周囲温度よりも高い温度に曝されることに起因する現存の症状の悪化であるＵｈｔｈｏｆｆ現象；ならびに首を曲げる時に背中に走る電気的感覚であるＬｈｅｒｍｉｔｔｅ徴候を含むが、これらに限定されない。
【０３９５】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、多発性硬化症を予防し、リスク低減させ、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を投与すると、多発性硬化症を有する個体において１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化反応、ＰＩ３Ｋ活性化、１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加、及び１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減）を誘導することがある。
【０３９６】
癌
本開示のさらなる態様は、本開示の治療的有効量の単離抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を、個体に投与することを含む、癌を有する個体を予防する、リスク低減する、または治療するための方法を提供する。本開示の単離抗体のいずれかは、これらの方法において使用されても良い。一部の実施形態では、単離抗体は、本開示のアゴニスト抗体である。他の実施形態では、単離抗体は、本開示のアンタゴニスト抗体である。
【０３９７】
上記のように、腫瘍微小環境は、Ｔリンパ球、マクロファージ、及び骨髄系／顆粒球系統の細胞を含む不均一免疫浸潤物を含有することが知られている。特に、腫瘍におけるＭ２マクロファージの存在は、予後不良と関連する。ＣＳＦ１Ｒブロック剤などの腫瘍中のこれらの細胞の数を低減させる治療法は、前臨床モデル及び初期の臨床研究において有益な効果を示している。ＴＲＥＭ２は、インビトロでマクロファージの生存を促進するためにＣＳＦ１と相乗作用すること、及び、この効果は、他の種類の食細胞と比較して、Ｍ２型マクロファージにおいて特に顕著であること、が示されている。有力な前臨床研究はまた、腫瘍関連マクロファージ（例えば、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒブロッキング抗体）を標的とする薬剤及びＴ細胞を標的とするチェックポイントブロッキング抗体の間の相乗作用を示しており、両方の細胞型を操作することにより、個々の治療法が効果的でない腫瘍モデルにおける有効性を示すことが明らかにされている（Ｚｈｕ  Ｙ；  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１４  Ｓｅｐ  １５；  ７４（１８）：５０５７−６９）。それ故、理論に拘束されることを望むものではないが、腫瘍関連マクロファージにおけるＴＲＥＭ２シグナル伝達をブロックすることは、腫瘍微小環境における免疫応答の抑制を阻害して、治療的抗腫瘍免疫応答をもたらすことがあると考えられている。
【０３９８】
ＴＲＥＭ２及びＣＳＦ１の間の相乗作用、ならびに腫瘍関連マクロファージ及び標的化Ｔ細胞の間の相乗作用のために、一部の実施形態では、癌を有する個体を予防する、リスク低減させる、または治療するための方法は、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、個体に投与することをさらに含む。阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する抗体の例としては、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、ならびにそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体と組み合わせて投与される。
【０３９９】
一部の実施形態では、本開示の方法により予防または治療されるべき癌は、扁平上皮癌（例えば、上皮性扁平上皮癌）；小細胞肺癌非小細胞肺癌、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌及び胃腸間質癌を含む胃癌または胃癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在性拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端部黒子様黒色腫、結節性黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；ならびに移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症と関連する異常血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、メイグス症候群、脳及び頭頸部癌、ならびに関連する転移を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、癌は、結腸直腸癌である。一部の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、腎細胞癌、膀胱癌、卵巣癌、黒色腫、乳癌、胃癌、及び肝癌から選択される。一部の実施形態では、癌は、トリプルネガティブ乳癌である。一部の実施形態では、癌は、初期癌または後期癌であって良い。一部の実施形態では、癌は、原発性腫瘍であって良い。一部の実施形態では、癌は、上記の種類の癌のいずれかに由来する第２の部位の転移性腫瘍であって良い。
【０４００】
一部の実施形態では、本開示の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体は、膀胱癌、乳癌、結腸及び直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、ならびに甲状腺癌を含むがこれらに限定されない癌を予防する、リスク低減させる、または治療するために使用されても良い。
【０４０１】
一部の実施形態では、本開示は、本開示の治療的有効量の抗ＴＲＥＭ２及び／または抗ＤＡＰ１２抗体を、個体に投与することにより、癌を有する個体を予防する、リスク低減させる、または治療する方法を提供する。
【０４０２】
一部の実施形態では、方法は、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、個体に投与すること、及び／または、別の標準若しくは治験抗癌療法をさらに含む。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される。一部の実施形態では、標準または治験抗癌療法は、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、及びサイトカイン療法から選択される１つ以上の治療法である。
【０４０３】
一部の実施形態では、方法は、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、個体に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４０４】
一部の実施形態では、方法は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を、個体に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４０５】
一部の実施形態では、方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを、個体に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、単離抗体と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。
【０４０６】
製造のキット／物品
本開示はまた、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２若しくは抗ＤＡＰ１２抗体）またはその機能的フラグメントを含有するキットを提供する。本開示のキットは、本開示の精製された抗体を含む１つ以上の容器を含んでも良い。一部の実施形態では、キットは、本開示の方法に従い、使用のための使用説明書をさらに含む。一部の実施形態では、これらの使用説明書は、本開示の任意の方法に従い、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症から選択される疾患、障害、または損傷を有する個体を予防する、リスク低減させる、または治療するための、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）の投与の記載を含む。
【０４０７】
一部の実施形態では、使用説明書は、例えば、個体、組織サンプル、または細胞において、ＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２を検出する方法の記載を含む。キットは、その個体が疾患及び疾患の段階を有するかどうかを識別することに基づいて、治療に適する個体を選択する記載をさらに含んでも良い。
【０４０８】
一部の実施形態では、キットは、本開示の別の抗体（例えば、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／若しくは、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体）、ならびに／または少なくとも１つの刺激性サイトカインをさらに含んでも良い。一部の実施形態では、キットは、本開示の任意の方法に従い、抗体及び／若しくは刺激性サイトカインを本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体）と組み合わせて使用するための使用説明書、本開示の単離抗体を、抗体及び／若しくは刺激性サイトカインと組み合わせて使用するための使用説明書、または本開示の単離抗体及び抗体及び／若しくは刺激性サイトカインを使用するための使用説明書をさらに含んでも良い。
【０４０９】
使用説明書は一般に、目的の治療のための投薬量、投薬スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用量パッケージ）またはサブユニット用量であっても良い。本開示のキットで供給される使用説明書は通常、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた使用説明書であるが、機械で読み取ることができる使用説明書（例えば、磁気または光学記憶ディスク上に担持される使用説明書）も許容される。
【０４１０】
ラベルまたは添付文書は、組成物が、例えば、本開示の疾患を治療するために使用されることを示す。使用説明書は、本明細書で記載される方法のいずれかを実行するために提供されても良い。
【０４１１】
本開示のキットは、好適なパッケージングに中にある。好適なパッケージングは、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージング（例えば、密封マイラーまたはプラスチックバッグ）などを含むが、これらに限定されない。吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）、またはミニポンプなどの注入デバイスなどの特定のデバイスと組み合わせて使用するためのパッケージも検討される。キットは、滅菌アクセスポートを有しても良い（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により穿刺可能な栓を有するバイアルであって良い）。容器はまた、滅菌アクセスポートを有しても良い（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により穿刺可能な栓を有するバイアルであって良い）。組成物中の少なくとも１つの活性薬は、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）である。容器は、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含んでも良い。
【０４１２】
キットは任意に、緩衝剤及び説明情報などの追加のコンポーネントを提供しても良い。通常、キットは、容器及び容器上のまたは容器に伴うラベルまたは添付文書（複数可）を含む。
【０４１３】
診断用途
本開示の分離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）は、診断実用性も有する。それ故、本開示は、個体または個体に由来する組織サンプルでのＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２の検出などの診断目的のための本開示の抗体またはそれらの機能的フラグメントを使用する方法を提供する。
【０４１４】
一部の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、個体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、多発性硬化症、または癌に罹患する、またはこれを発症するリスクのあるヒト患者である。一部の実施形態では、診断方法は、生検標本、組織、または細胞などの生体サンプルにおいてＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２を検出することを含む。本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）は、生体サンプルと接触し、抗原結合抗体が検出される。例えば、組織サンプル（例えば、生検標本）は、疾患関連マクロファージ（例えば、Ｍ２型マクロファージ）を検出及び／または定量化する、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体で染色されても良い。検出方法は、抗原結合抗体の定量化を含んでも良い。生体サンプルにおける抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡検査、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ解析、免疫沈降、またはマイクロ陽電子放出断層撮影を含む当該技術分野で既知の任意の方法により生じることがある。特定の実施形態では、抗体は、例えば、１８Ｆで放射性標識され、続いて、マイクロ陽電子放出断層撮影を利用して検出される。抗体結合はまた、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影、単一光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、及びコンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲的技術により、患者において定量化されても良い。
【０４１５】
他の実施形態では、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）は、例えば、前臨床疾患モデル（例えば、非ヒト疾患モデル）から得られる脳標本のミクログリアを検出及び／または定量化するために使用されても良い。そのようなものであるから、本開示の単離抗体（例えば、本明細書に記載されている抗ＴＲＥＭ２または抗ＤＡＰ１２抗体）は、対照と比較して、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、または多発性硬化症などの神経系疾患または損傷のためのモデルにおける治療後の治療的応答を評価することに有用であることがある。
【０４１６】
列挙された実施形態
次の列挙された実施形態は、本発明の一部の態様を代表している。
１．抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方に結合する単離アゴニスト抗体。
【０４１７】
２．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、実施形態１に記載の単離抗体。
【０４１８】
３．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、野生型タンパク質である、実施形態２に記載の単離抗体。
【０４１９】
４．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、天然多様体である、実施形態２に記載の単離抗体。
【０４２０】
５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合することを含む、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４２１】
６．１つ以上のＤＡＰ１２活性が、ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２に結合することを含む、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４２２】
７．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＤＡＰ１２リン酸化を含む、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４２３】
８．ＤＡＰ１２リン酸化が、１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼにより誘導される、実施形態７に記載の単離抗体。
【０４２４】
９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＰＩ３Ｋ活性化を含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４２５】
１０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加を含む、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４２６】
１１．１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加が、マクロファージ、樹状細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる、実施形態１０に記載の単離抗体。
【０４２７】
１２．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、及びＴＮＦからなる群から選択される１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減を含む、実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４２８】
１３．１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減が、マクロファージ、樹状細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる、実施形態１２に記載の単離抗体。
【０４２９】
１４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化を含む、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３０】
１５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加を含む、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３１】
１６．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導を含む、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３２】
１７．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の低減、正常化、またはその両方を含む、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３３】
１８．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導を含む、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３４】
１９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、マクロファージ、ミクログリア細胞、またはその両方の生存を増加させることを含む、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３５】
２０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、マクロファージ、ミクログリア細胞、またはその両方の機能を増加させることを含む、実施形態１〜１９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３６】
２１．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、炎症を伴わないアポトーシスニューロンクリアランス、炎症を伴わない神経組織破片クリアランス、炎症を伴わない非神経組織破片クリアランス、炎症を伴わない細菌または他の異物クリアランス、及び炎症を伴わない病原性タンパク質クリアランスからなる群から選択される、炎症を伴わない１種以上のクリアランスの誘導を含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３７】
２２．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、炎症を伴わないアポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、または病原性タンパク質のうちの１つ以上の、炎症を伴わない貪食の誘導を含む、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４３８】
２３．病原性タンパク質が、Ａベータペプチド、アルファシヌクレインタンパク質、Ｔａｕタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、プリオンタンパク質、及びハンチンチンタンパク質からなる群から選択される、実施形態２１または実施形態２２に記載の単離抗体。
【０４３９】
２４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化を含む、実施形態１〜２３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４０】
２５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の、ＤＡＰ１２へのリクルートを含む、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４１】
２６．ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４、または配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９、または配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６、または配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００、または配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及び、
ｘ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８、または配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４２】
２７．ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７またはＡｓｐ８７；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６；及び、
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４３】
２８．ＤＡＰ１２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体が、配列番号２のアミノ酸残基２２〜４０または配列番号２のアミノ酸残基２２〜４０に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４４】
２９．単離アゴニスト抗体が、
ｉ．配列番号１の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸残基に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及び、
ｉｉ．配列番号２の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号２のアミノ酸残基に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸に結合する二重特異性抗体である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４５】
３０．抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４６】
３１．抗体が、モノクローナル抗体である、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４７】
３２．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４４８】
３３．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態３２に記載の単離抗体。
【０４４９】
３４．先行実施形態のいずれか１つに記載の抗体をコードする単離核酸。
【０４５０】
３５．実施形態３４に記載の核酸を含むベクター。
【０４５１】
３６．実施形態３５に記載のベクターを含む宿主細胞。
【０４５２】
３７．抗体が産生されるように、実施形態３６に記載の宿主細胞を培養することを含む抗体を産生する方法。
【０４５３】
３８．宿主細胞により産生された抗体を回収することをさらに含む、実施形態３７に記載の方法。
【０４５４】
３９．実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の抗体を含む医薬組成物及び薬学的に許容される担体。
【０４５５】
４０．実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の治療的有効量の単離抗体を、個体に投与することを含む、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療する方法。
【０４５６】
４１．個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン酸；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換；及び、
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換からなる群から選択される１つ以上の置換を含む、実施形態４０に記載の方法。
【０４５７】
４２．個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；またはその両方を含む、実施形態４０に記載の方法。
【０４５８】
４３．個体が、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、
ｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換；
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換；
ｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内の欠失；
ｉｖ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入；及び、
ｖ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失からなる群から選択される１つ以上の多様体を含む、実施形態４０に記載の方法。
【０４５９】
４４．抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する、ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方に結合する単離アゴニスト抗体。
【０４６０】
４５．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、実施形態４４に記載の単離抗体。
【０４６１】
４６．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、野生型タンパク質である、実施形態４５に記載の単離抗体。
【０４６２】
４７．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、天然多様体である、実施形態４５に記載の単離抗体。
【０４６３】
４８．単離抗体が、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成、ＤＡＰ１２クラスター形成、またはその両方を誘導または保持する、実施形態４４〜４７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４６４】
４９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合することを含む、実施形態４４〜４８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４６５】
５０．１つ以上のＤＡＰ１２活性が、ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２に結合することを含む、実施形態４４〜４８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４６６】
５１．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＤＡＰ１２リン酸化、ＴＲＥＭ２リン酸化、またはその両方を含む、実施形態４４〜５０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４６７】
５２．ＤＡＰ１２リン酸化、ＴＲＥＭ２リン酸化、またはその両方が、１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼにより誘導される、実施形態５１に記載の単離抗体。
【０４６８】
５３．１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼが、Ｓｙｋキナーゼを含む、実施形態５２に記載の単離抗体。
【０４６９】
５４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＰＩ３Ｋ活性化を含む、実施形態４４〜５３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７０】
５５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現の増加を含む、実施形態４４〜５４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７１】
５６．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加を含む、実施形態４４〜５４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７２】
５７．発現の増加が、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる、実施形態５５または実施形態５６に記載の単離抗体。
【０４７３】
５８．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、１つ以上の前炎症性サイトカインの発現の低減を含む、実施形態４４〜５７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７４】
５９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、ＴＮＦ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰからなる群から選択される１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減を含む、実施形態４４〜５７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７５】
６０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、またはその両方の発現の低減を含む、実施形態４４〜５８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７６】
６１．１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減が、マクロファージ、樹状細胞、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる、実施形態５８または実施形態６０に記載の単離抗体。
【０４７７】
６２．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化を含む、実施形態４４〜６０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７８】
６３．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加を含む、実施形態４４〜６２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４７９】
６４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導を含む、実施形態４４〜６３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４８０】
６５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強、正常化、またはその両方を含む、実施形態４４〜６４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４８１】
６６．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導を含む、実施形態４４〜６５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４８２】
６７．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、マクロファージ、ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の生存を増加させることを含む、実施形態４４〜６６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４８３】
６８．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、マクロファージ、ミクログリア細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、及び／またはクッパー細胞の機能を増加させることを含む、実施形態４４〜６７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４８４】
６９．マクロファージ及び／またはミクログリア細胞が、Ｍ１マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ及び／若しくはミクログリア細胞、またはその両方である、実施形態６７または実施形態６８に記載の単離抗体。
【０４８５】
７０．Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞が、活性化Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞である、実施形態６９に記載の単離抗体。
【０４８６】
７１．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病原性タンパク質クリアランス、病原性ペプチドクリアランス、及び病原性核酸クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの誘導を含む、実施形態４４〜６８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４８７】
７２．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、または病原性核酸のうちの１つ以上の貪食の誘導を含む、実施形態４４〜７１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４８８】
７３．病原性タンパク質が、アミロイドベータ、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される、実施形態７１または実施形態７２に記載の単離抗体。
【０４８９】
７４．病原性核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡである、実施形態７１または実施形態７２に記載の単離抗体。
【０４９０】
７５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化を含む、実施形態４４〜７４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４９１】
７６．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方の、ＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのリクルートを含む、実施形態４４〜７５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４９２】
７７．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、Ｓｙｋリン酸化を含む、実施形態４４〜７６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４９３】
７８．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、樹状細胞上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加を含む、実施形態４４〜７７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４９４】
７９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減を含む、実施形態４４〜７８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４９５】
８０．１つ以上の炎症性サイトカインが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、及びＩＬ−１８からなる群から選択される、実施形態７９に記載の単離抗体。
【０４９６】
８１．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、１つ以上の炎症性受容体の発現の低減を含む、実施形態４４〜７９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４９７】
８２．１つ以上の炎症性受容体が、ＣＤ８６を含む、実施形態８１に記載の単離抗体。
【０４９８】
８３．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させることを含む、実施形態４４〜８２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０４９９】
８４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させることを含む、実施形態４４〜８２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５００】
８５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させることを含む、実施形態４４〜８４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５０１】
８６．１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、実施形態８５に記載の単離抗体。
【０５０２】
８７．抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、実施形態４４〜８６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５０３】
８８．抗体が、ＩｇＧクラスであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、実施形態８７に記載の単離抗体。
【０５０４】
８９．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態８７に記載の単離抗体。
【０５０５】
９０．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態８９に記載の単離抗体。
【０５０６】
９１．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態９０に記載の単離抗体。
【０５０７】
９２．抗体が、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する、実施形態８９〜９１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５０８】
９３．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態８９〜９１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５０９】
９４．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態９３に記載の単離抗体。
【０５１０】
９５．ヒトＩｇＧ２定常領域が、１つ以上の修飾を含むＦｃ領域を含む、実施形態９３または実施形態９４に記載の単離抗体。
【０５１１】
９６．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態９５に記載の単離抗体。
【０５１２】
９７．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態９６に記載の単離抗体。
【０５１３】
９８．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態９０に記載の単離抗体。
【０５１４】
９９．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態８７に記載の単離抗体。
【０５１５】
１００．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態９９に記載の単離抗体。
【０５１６】
１０１．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態１００に記載の単離抗体。
【０５１７】
１０２．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態９９〜１０１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５１８】
１０３．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態１０２に記載の単離抗体。
【０５１９】
１０４．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態１０１〜１０３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５２０】
１０５．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態１０４に記載の単離抗体。
【０５２１】
１０６．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１０５に記載の単離抗体。
【０５２２】
１０７．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む、実施形態１０１〜１０３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５２３】
１０８．ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含む、実施形態１０７に記載の単離抗体。
【０５２４】
１０９．抗体Ｆｃ領域が、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１０７または実施形態１０８に記載の単離抗体。
【０５２５】
１１０．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態９９に記載の単離抗体。
【０５２６】
１１１．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを含む、実施形態８７に記載の単離抗体。
【０５２７】
１１２．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態１１１に記載の単離抗体。
【０５２８】
１１３．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態１１２に記載の単離抗体。
【０５２９】
１１４．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態１１１〜１１３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５３０】
１１５．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態１１４に記載の単離抗体。
【０５３１】
１１６．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態１１３〜１１５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５３２】
１１７．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態１１６に記載の単離抗体。
【０５３３】
１１８．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１１７に記載の単離抗体。
【０５３４】
１１９．抗体が、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する、実施形態８７に記載の単離抗体。
【０５３５】
１２０．抗体が、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１１９に記載の単離抗体。
【０５３６】
１２１．抗体が、マウスＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態１１１に記載の単離抗体。
【０５３７】
１２２．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントが、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される、実施形態１〜１２１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５３８】
１２３．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態１２２に記載の単離抗体。
【０５３９】
１２４．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方に結合する、単離不活性抗体。
【０５４０】
１２５．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方に結合する、単離アンタゴニスト抗体。
【０５４１】
１２６．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、実施形態１２４または実施形態１２５に記載の単離抗体。
【０５４２】
１２７．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、野生型タンパク質である、実施形態１２６に記載の単離抗体。
【０５４３】
１２８．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方が、天然多様体である、実施形態１２６に記載の単離抗体。
【０５４４】
１２９．単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を阻害する、実施形態１２５〜１２８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５４５】
１３０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させることを含む、実施形態１２９に記載の単離抗体。
【０５４６】
１３１．１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、実施形態１３０に記載の単離抗体。
【０５４７】
１３２．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２ミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させることを含む、実施形態１２９〜１３１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５４８】
１３３．単離抗体が、ＴＲＥＭ２と、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である、実施形態１２５〜１３２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５４９】
１３４．抗体が、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない、実施形態１２４〜１３３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５５０】
１３５．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態１３４に記載の単離抗体。
【０５５１】
１３６．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態１３５に記載の単離抗体。
【０５５２】
１３７．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態１３６に記載の単離抗体。
【０５５３】
１３８．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態１３７に記載の単離抗体。
【０５５４】
１３９．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態１３８に記載の単離抗体。
【０５５５】
１４０．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１３９に記載の単離抗体。
【０５５６】
１４１．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む、実施形態１４０に記載の単離抗体。
【０５５７】
１４２．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態１３５に記載の単離抗体。
【０５５８】
１４３．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態１３４に記載の単離抗体。
【０５５９】
１４４．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態１４３に記載の単離抗体。
【０５６０】
１４５．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態１４４に記載の単離抗体。
【０５６１】
１４６．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態１４５に記載の単離抗体。
【０５６２】
１４７．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態１４６に記載の単離抗体。
【０５６３】
１４８．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１４７に記載の単離抗体。
【０５６４】
１４９．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを含む、実施形態１３４に記載の単離抗体。
【０５６５】
１５０．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態１４９に記載の単離抗体。
【０５６６】
１５１．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態１５０に記載の単離抗体。
【０５６７】
１５２．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態１５１に記載の単離抗体。
【０５６８】
１５３．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態１５２に記載の単離抗体。
【０５６９】
１５４．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１５３に記載の単離抗体。
【０５７０】
１５５．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである、実施形態１２４〜１５４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５７１】
１５６．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態１５５に記載の単離抗体。
【０５７２】
１５７．Ｆｃ領域が、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態１０６、実施形態１４０、または実施形態１４１に記載の単離抗体。
【０５７３】
１５８．Ｆｃ領域が、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態９５〜１５７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５７４】
１５９．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む、実施形態１１８または実施形態１５４に記載の単離抗体。
【０５７５】
１６０．単離抗体が、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する、実施形態４４〜１５９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５７６】
１６１．１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドが、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、アニオン性脂質、双性イオン性脂質、負に荷電した脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオリピド、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドからなる群から選択される、実施形態１６０に記載の単離抗体。
【０５７７】
１６２．単離抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である、実施形態４４〜１６１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５７８】
１６３．単離抗体が、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、実施形態４４〜１６２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５７９】
１６４．第１の抗原が、ヒトＴＲＥＭ２若しくはその天然多様体、またはヒトＤＡＰ１２若しくはその天然多様体であり、第２の抗原が、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される病原性タンパク質；あるいは、トランスフェリン受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、ＬＲＰ−１、及びＬＲＰ１からなる群から選択されるタンパク質を標的とする血液脳関門である、実施形態１６３に記載の単離抗体。
【０５８０】
１６５．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体が、アミロイドベータまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される病原性タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される、実施形態４４〜１６１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５８１】
１６６．抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態４４〜１６５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５８２】
１６７．単離抗体が、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合し、単離抗体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１、または配列番号１のアミノ酸残基２９〜４１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４、または配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９、または配列番号１のアミノ酸残基４７〜６９に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６、または配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６、または配列番号１のアミノ酸残基７６〜８６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００、または配列番号１のアミノ酸残基９１〜１００に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５、または配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２、または配列番号１のアミノ酸残基１０４〜１１２に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及び、
ｘ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８、または配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態４４〜１６６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５８３】
１６８．単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０または配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態１６７に記載の単離抗体。
【０５８４】
１６９．単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７または配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態１６７に記載の単離抗体。
【０５８５】
１７０．単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する、実施形態４４〜１６７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５８６】
１７１．単離抗体が、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する、実施形態４４〜１６７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５８７】
１７２．単離抗体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７またはＡｓｐ８７；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６；及び、
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する、実施形態４４〜１６７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５８８】
１７３．単離抗体が、配列番号２のアミノ酸残基２２〜４０または配列番号２のアミノ酸残基２２〜４０に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態４４〜１６７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５８９】
１７４．単離抗体が、
ｉ．配列番号１の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号１のアミノ酸残基に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及び、
ｉｉ．配列番号２の１つ以上のアミノ酸残基、または配列番号２のアミノ酸残基に対応するＤＡＰ１２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸に結合する二重特異性抗体である、実施形態４４〜１６７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９０】
１７５．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態４４〜１７４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９１】
１７６．ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号３９８のアミノ酸配列を含む、実施形態１７５に記載の単離抗体。
【０５９２】
１７７．ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む、実施形態１７５または実施形態１７６に記載の単離抗体。
【０５９３】
１７８．ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号４００のアミノ酸配列を含む、実施形態１７５〜１７７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９４】
１７９．ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号４０１のアミノ酸配列を含む、実施形態１７５〜１７８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９５】
１８０．ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号４０２のアミノ酸配列を含む、実施形態１７５〜１７９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９６】
１８１．ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４０３のアミノ酸配列を含む、実施形態１７５〜１８０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９７】
１８２．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号３９８のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号３９９のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、
（ｃ）配列番号４００のアミノ酸配列、若しくは配列番号４００のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、
軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４０１のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、
（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態４４〜１７４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９８】
１８３．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態４４〜１７４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０５９９】
１８４．ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号４０４のアミノ酸配列を含む、実施形態１８３に記載の単離抗体。
【０６００】
１８５．ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む、実施形態１８３または１８４に記載の単離抗体。
【０６０１】
１８６．ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号４０６のアミノ酸配列を含む、実施形態１８３〜１８５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６０２】
１８７．ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号４０７のアミノ酸配列を含む、実施形態１８３〜１８６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６０３】
１８８．ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号４０８のアミノ酸配列を含む、実施形態１８３〜１８７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６０４】
１８９．ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む、実施形態１８３〜１８８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６０５】
１９０．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４０４のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号４０５のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、
（ｃ）配列番号４０６のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、
軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４０７のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号４０８のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、
（ｃ）配列番号４０９のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態４４〜１７４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６０６】
１９１．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０６０７】
１９２．ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号３９８のアミノ酸配列を含む、実施形態１９１に記載の単離抗体。
【０６０８】
１９３．ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号３９９のアミノ酸配列を含む、実施形態１９１または実施形態１９２に記載の単離抗体。
【０６０９】
１９４．ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号４００のアミノ酸配列を含む、実施形態１９１〜１９３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６１０】
１９５．ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号４０１のアミノ酸配列を含む、実施形態１９１〜１９４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６１１】
１９６．ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号４０２のアミノ酸配列を含む、実施形態１９１〜１９５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６１２】
１９７．ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４０３のアミノ酸配列を含む、実施形態１９１〜１９６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６１３】
１９８．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、配列番号３９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号４００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、配列番号４０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号４０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態１９１に記載の単離抗体。
【０６１４】
１９９．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号３９８のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号３９９のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、
（ｃ）配列番号４００のアミノ酸配列、若しくは配列番号４００のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、
軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４０１のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号４０２のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、
（ｃ）配列番号４０３のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０６１５】
２００．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０６１６】
２０１．ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号４０４のアミノ酸配列を含む、実施形態２００に記載の単離抗体。
【０６１７】
２０２．ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む、実施形態２００または実施形態２０１に記載の単離抗体。
【０６１８】
２０３．ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号４０６のアミノ酸配列を含む、実施形態２００〜２０２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６１９】
２０４．ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号４０７のアミノ酸配列を含む、実施形態２００〜２０３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６２０】
２０５．ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号４０８のアミノ酸配列を含む、実施形態２００〜２０４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６２１】
２０６．ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む、実施形態２００〜２０５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６２２】
２０７．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、配列番号４０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号４０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、配列番号４０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号４０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態２００に記載の単離抗体。
【０６２３】
２０８．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４０４のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号４０５のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、
（ｃ）配列番号４０６のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、
軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号４０７のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号４０８のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、
（ｃ）配列番号４０９のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０６２４】
２０９．抗体Ａｂ５２と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０６２５】
２１０．抗体Ａｂ２１と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０６２６】
２１１．抗体が、アゴニスト抗体であり、抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する、実施形態１９１〜２１０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６２７】
２１２．単離抗体が、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成、ＤＡＰ１２クラスター形成、またはその両方を誘導または保持する、実施形態２１１に記載の単離抗体。
【０６２８】
２１３．１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方が、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２に結合すること；ＴＲＥＭ２リン酸化；ＤＡＰ１２リン酸化；ＰＩ３Ｋ活性化；１つ以上の抗炎症性メディエーターの発現の増加；１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減；ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、またはその両方の発現の低減；細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加；ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増加、正常化、またはその両方；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；樹状細胞、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、活性化Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ及び／またはミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、ならびにクッパー細胞のうちの１つ以上の生存及び／または機能を増加させること；アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病原性タンパク質クリアランス、病原性ペプチドクリアランス、及び病原性核酸クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの誘導；アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、または病原性核酸のうちの１つ以上の貪食の誘導；破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方のＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体へのリクルート；Ｓｙｋリン酸化；樹状細胞上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減：１つ以上の炎症性受容体の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させること；正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、マクロファージ、樹状細胞、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させること；１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させること；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態２１１または実施形態２１２に記載の単離抗体。
【０６２９】
２１４．抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、実施形態２１１〜２１３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６３０】
２１５．抗体が、ＩｇＧクラスであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、実施形態２１４に記載の単離抗体。
【０６３１】
２１６．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態２１５に記載の単離抗体。
【０６３２】
２１７．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態２１６に記載の単離抗体。
【０６３３】
２１８．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態２１７に記載の単離抗体。
【０６３４】
２１９．抗体が、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、ＤＡＰ１２活性、またはその両方を誘導する、実施形態２１６〜２１８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６３５】
２２０．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態２１６〜２１８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６３６】
２２１．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態２２０に記載の単離抗体。
【０６３７】
２２２．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態２２０または実施形態２２１に記載の単離抗体。
【０６３８】
２２３．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態２２２に記載の単離抗体。
【０６３９】
２２４．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２２３に記載の単離抗体。
【０６４０】
２２５．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２１７に記載の単離抗体。
【０６４１】
２２６．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態２１５に記載の単離抗体。
【０６４２】
２２７．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態２２６に記載の単離抗体。
【０６４３】
２２８．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態２２７に記載の単離抗体。
【０６４４】
２２９．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態２２６〜２２８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６４５】
２３０．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態２２９に記載の単離抗体。
【０６４６】
２３１．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態２２８〜２３０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６４７】
２３２．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態２３１に記載の単離抗体。
【０６４８】
２３３．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２３２に記載の単離抗体。
【０６４９】
２３４．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む、実施形態２２８〜２３０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６５０】
２３５．ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含む、実施形態２３４に記載の単離抗体。
【０６５１】
２３６．抗体Ｆｃ領域が、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２３４または実施形態２３５に記載の単離抗体。
【０６５２】
２３７．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態２２６に記載の単離抗体。
【０６５３】
２３８．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを含む、実施形態２１５に記載の単離抗体。
【０６５４】
２３９．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態２３８に記載の単離抗体。
【０６５５】
２４０．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態２３９に記載の単離抗体。
【０６５６】
２４１．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態２３８〜２４０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６５７】
２４２．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態２４１に記載の単離抗体。
【０６５８】
２４３．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態２４０〜２４２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６５９】
２４４．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態２４３に記載の単離抗体。
【０６６０】
２４５．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２４４に記載の単離抗体。
【０６６１】
２４６．抗体が、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する、実施形態２１４に記載の単離抗体。
【０６６２】
２４７．抗体が、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２４６に記載の単離抗体。
【０６６３】
２４８．抗体が、マウスＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態２３９に記載の単離抗体。
【０６６４】
２４９．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントが、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される、実施形態２１１〜２４８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６６５】
２５０．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態２４９に記載の単離抗体。
【０６６６】
２５１．単離抗体が、不活性抗体である、実施形態１９１〜２１０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６６７】
２５２．単離抗体が、アンタゴニスト抗体である、実施形態１９１〜２１０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６６８】
２５３．単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する、実施形態２５２に記載の単離抗体。
【０６６９】
２５４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させること；１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子の活性を減少させること；マクロファージ、ミクログリア細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させること；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態２５３に記載の単離抗体。
【０６７０】
２５５．単離抗体が、ＴＲＥＭ２と、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である、実施形態２５２〜２５４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６７１】
２５６．抗体が、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない、実施形態２５１〜２５５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６７２】
２５７．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態２５６に記載の単離抗体。
【０６７３】
２５８．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態２５７に記載の単離抗体。
【０６７４】
２５９．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態２５８に記載の単離抗体。
【０６７５】
２６０．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態２５９に記載の単離抗体。
【０６７６】
２６１．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態２６０に記載の単離抗体。
【０６７７】
２６２．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２６１に記載の単離抗体。
【０６７８】
２６３．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む、実施形態２６２に記載の単離抗体。
【０６７９】
２６４．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態２５７に記載の単離抗体。
【０６８０】
２６５．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態２５６に記載の単離抗体。
【０６８１】
２６６．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態２６４に記載の単離抗体。
【０６８２】
２６７．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態２６６に記載の単離抗体。
【０６８３】
２６８．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態２６７に記載の単離抗体。
【０６８４】
２６９．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態２６８に記載の単離抗体。
【０６８５】
２７０．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２６９に記載の単離抗体。
【０６８６】
２７１．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを含む、実施形態２５６に記載の単離抗体。
【０６８７】
２７２．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態２７１に記載の単離抗体。
【０６８８】
２７３．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態２７２に記載の単離抗体。
【０６８９】
２７４．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態２７３に記載の単離抗体。
【０６９０】
２７５．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態２７４に記載の単離抗体。
【０６９１】
２７６．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２７５に記載の単離抗体。
【０６９２】
２７７．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである、実施形態２０８〜２７６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６９３】
２７８．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態２７７に記載の単離抗体。
【０６９４】
２７９．Ｆｃ領域が、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２３３、実施形態２６２、または実施形態２６３に記載の単離抗体。
【０６９５】
２８０．Ｆｃ領域が、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態２２３〜２７９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６９６】
２８１．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む、実施形態２４５または実施形態２７６に記載の単離抗体。
【０６９７】
２８２．抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である、実施形態１９１〜２８１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６９８】
２８３．抗体が、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、実施形態１９１〜２８２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０６９９】
２８４．抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態１９１〜２８３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７００】
２８５．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７０１】
２８６．単離抗体が、約５．７５ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲のヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７０２】
２８７．単離抗体が、約１．５１ｎＭ未満〜約０．３５ｎＭ未満の範囲のヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７０３】
２８８．単離抗体が、約５．７５ｎＭ未満〜約１．１５ｎＭ未満の範囲のヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７０４】
２８９．単離抗体が、約０．２３ｎＭ未満〜約０．０９ｎＭ未満の範囲のマウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７０５】
２９０．先行実施形態のいずれか１つに記載の抗体をコードする単離核酸。
【０７０６】
２９１．実施形態２９０に記載の核酸を含むベクター。
【０７０７】
２９２．実施形態２９１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【０７０８】
２９３．抗体が産生されるように、実施形態２９２に記載の細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
【０７０９】
２９４．細胞により産生された抗体を回収することをさらに含む、実施形態２９３に記載の方法。
【０７１０】
２９５．実施形態４４〜２８９のいずれか１つに記載の抗体を含む医薬組成物及び薬学的に許容される担体。
【０７１１】
２９６．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方に結合する治療的有効量の単離抗体を、個体に投与することを含む、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、那須−ハコラ病、及び多発性硬化症からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療する方法。
【０７１２】
２９７．単離抗体が、実施形態４４〜２８９のいずれか１つに記載の単離抗体である、実施形態２９６に記載の方法。
【０７１３】
２９８．個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン酸；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換；
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換；及び、
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換からなる群から選択される１つ以上の置換を含む、実施形態２９６または実施形態２９７に記載の方法。
【０７１４】
２９９．個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；またはその両方を含む、実施形態２９６に記載の方法。
【０７１５】
３００．個体が、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、
ｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換；
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換；
ｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内の欠失；
ｉｖ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入；及び、
ｖ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失からなる群から選択される１つ以上の多様体を含む、実施形態２９６に記載の方法。
【０７１６】
３０１．ＴＲＥＭ２タンパク質、ＤＡＰ１２タンパク質、またはその両方に結合する治療的有効量の単離アゴニスト抗体を、個体に投与することを含む、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存を誘導または促進する方法。
【０７１７】
３０２．単離アゴニスト抗体が、実施形態４４〜１２３、１５７〜２５０、及び２７７〜２８９のいずれか１つに記載の単離抗体である、実施形態３０１に記載の方法。
【０７１８】
３０３．抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離アゴニスト抗体。
【０７１９】
３０４．ＴＲＥＭ２タンパク質が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、実施形態３０３に記載の単離抗体。
【０７２０】
３０５．ＴＲＥＭ２タンパク質が、野生型タンパク質である、実施形態３０４に記載の単離抗体。
【０７２１】
３０６．ＴＲＥＭ２タンパク質が、天然多様体である、実施形態３０４に記載の単離抗体。
【０７２２】
３０７．ＴＲＥＭ２タンパク質が、ヒト樹状細胞、ヒトマクロファージ、ヒト単球、ヒト破骨細胞、ヒト皮膚ランゲルハンス細胞、ヒトクッパー細胞、及び／またはヒトミクログリア上に発現される、実施形態３０３〜３０６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７２３】
３０８．単離抗体が、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成を誘導または保持する、実施形態３０３〜３０７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７２４】
３０９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合することを含む、実施形態３０３〜３０８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７２５】
３１０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＴＲＥＭ２自己リン酸化を含む、実施形態３０３〜３０９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７２６】
３１１．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＤＡＰ１２リン酸化を含む、実施形態３０３〜３１０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７２７】
３１２．ＴＲＥＭ２自己リン酸化、ＤＡＰ１２リン酸化、またはその両方が、１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼにより誘導される、実施形態３１０または実施形態３１１に記載の単離抗体。
【０７２８】
３１３．１つ以上のＳＲＣファミリーチロシンキナーゼが、Ｓｙｋキナーゼを含む、実施形態３１２に記載の単離抗体。
【０７２９】
３１４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＰＩ３Ｋ活性化を含む、実施形態３０３〜３１３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３０】
３１５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上の抗炎症性サイトカインの発現の増加を含む、実施形態３０３〜３１４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３１】
３１６．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のサイトカインの発現の増加を含む、実施形態３０３〜３１４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３２】
３１７．発現の増加が、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる、実施形態３１５または実施形態３１６に記載の単離抗体。
【０７３３】
３１８．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上の前炎症性サイトカインの発現の低減を含む、実施形態３０３〜３１７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３４】
３１９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−ガンマ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰからなる群から選択される１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減を含む、実施形態３０３〜３１７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３５】
３２０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、またはその両方の発現の低減を含む、実施形態３０３〜３１８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３６】
３２１．１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減が、マクロファージ、樹状細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及びミクログリア細胞からなる群から選択される１つ以上の細胞で生じる、実施形態３１９または実施形態３２０に記載の単離抗体。
【０７３７】
３２２．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化を含む、実施形態３０３〜３２０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３８】
３２３．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加を含む、実施形態３０３〜３２２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７３９】
３２４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導を含む、実施形態３０３〜３２２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４０】
３２５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、樹状細胞、単球、ミクログリア、及び／またはマクロファージの、Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増加を含む、実施形態３０３〜３２４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４１】
３２６．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増強、正常化、またはその両方を含む、実施形態３０３〜３２４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４２】
３２７．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導を含む、実施形態３０３〜３２６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４３】
３２８．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、樹状細胞、マクロファージ、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／またはミクログリアの生存を増加させることを含む、実施形態３０３〜３２７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４４】
３２９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、樹状細胞、マクロファージ、及び／またはミクログリアの機能を増加させることを含む、実施形態３０３〜３２８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４５】
３３０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させることを含む、実施形態３０３〜３２９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４６】
３３１．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、正常レベルのＭ−ＣＳＦの存在下での、樹状細胞、マクロファージ、単球、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させることを含む、実施形態３０３〜３３０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４７】
３３２．マクロファージ及び／またはミクログリアが、Ｍ１マクロファージ及び／若しくはミクログリア、Ｍ２マクロファージ及び／若しくはミクログリア、またはその両方である、実施形態３２８〜３３１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７４８】
３３３．Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリアが、活性化Ｍ１マクロファージ及び／またはミクログリアである、実施形態３３２に記載の単離抗体。
【０７４９】
３３４．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、病原性タンパク質クリアランス、及び腫瘍細胞クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの誘導を含む、実施形態３０３〜３３３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７５０】
３３５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、病原性ペプチド、病原性核酸、または腫瘍細胞のうちの１つ以上の貪食の誘導を含む、実施形態３０３〜３３４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７５１】
３３６．病原性核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡである、実施形態３３５に記載の単離抗体。
【０７５２】
３３７．病原性タンパク質が、アミロイドβまたはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される、実施形態３３４または実施形態３３５に記載の単離抗体。
【０７５３】
３３８．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化を含む、実施形態３０３〜３３７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７５４】
３３９．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方のＤＡＰ１２／ＴＲＥＭ２複合体へのリクルートを含む、実施形態３０３〜３３８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７５５】
３４０．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、Ｓｙｋリン酸化を含む、実施形態３０３〜３３９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７５６】
３４１．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、樹状細胞、単球、マクロファージ、またはその両方上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加を含む、実施形態３０３〜３４０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７５７】
３４２．樹状細胞が、骨髄由来樹状細胞である、実施形態３４１に記載の単離抗体。
【０７５８】
３４３．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減を含む、実施形態３０３〜３４２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７５９】
３４４．１つ以上の炎症性サイトカインが、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−βメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＣＲＰ、及びＭＣＰ−１からなる群から選択される、３４３に記載の単離抗体。
【０７６０】
３４５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上の炎症性受容体の発現の低減を含む、実施形態３０３〜３４４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７６１】
３４６．１つ以上の炎症性受容体が、ＣＤ８６を含む、実施形態３４５に記載の単離抗体。
【０７６２】
３４７．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性化を増加させることを含む、実施形態３０３〜３４６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７６３】
３４８．１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、実施形態３４７に記載の単離抗体。
【０７６４】
３４９．抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、実施形態３０３〜３４８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７６５】
３５０．抗体が、ＩｇＧクラスであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、実施形態３４９に記載の単離抗体。
【０７６６】
３５１．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態３４９に記載の単離抗体。
【０７６７】
３５２．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態３５１に記載の単離抗体。
【０７６８】
３５３．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態３５２に記載の単離抗体。
【０７６９】
３５４．抗体が、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、実施形態３５１〜３５３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７７０】
３５５．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態３５１〜３５３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７７１】
３５６．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態３５５に記載の単離抗体。
【０７７２】
３５７．ヒトＩｇＧ２定常領域が、１つ以上の修飾を含むＦｃ領域を含む、実施形態３５５または実施形態３５６に記載の単離抗体。
【０７７３】
３５８．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態３５７に記載の単離抗体。
【０７７４】
３５９．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３５８に記載の単離抗体。
【０７７５】
３６０．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３５２に記載の単離抗体。
【０７７６】
３６１．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態３４９に記載の単離抗体。
【０７７７】
３６２．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態３６１に記載の単離抗体。
【０７７８】
３６３．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態３６２に記載の単離抗体。
【０７７９】
３６４．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態３６１〜３６３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７８０】
３６５．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態３６４に記載の単離抗体。
【０７８１】
３６６．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態３６３〜３６５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７８２】
３６７．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態３６６に記載の単離抗体。
【０７８３】
３６８．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３６７に記載の単離抗体。
【０７８４】
３６９．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む、実施形態３６３〜３６５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７８５】
３７０．ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含む、実施形態３６９に記載の単離抗体。
【０７８６】
３７１．抗体Ｆｃ領域が、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３６９または実施形態３７０に記載の単離抗体。
【０７８７】
３７２．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態３６１に記載の単離抗体。
【０７８８】
３７３．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを含む、実施形態３４９に記載の単離抗体。
【０７８９】
３７４．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態３７３に記載の単離抗体。
【０７９０】
３７５．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態３７４に記載の単離抗体。
【０７９１】
３７６．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態３７３〜３７５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７９２】
３７７．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態３７６に記載の単離抗体。
【０７９３】
３７８．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態３７５〜３７７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０７９４】
３７９．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態３７８に記載の単離抗体。
【０７９５】
３８０．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３７９に記載の単離抗体。
【０７９６】
３８１．抗体が、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する、実施形態３４９に記載の単離抗体。
【０７９７】
３８２．抗体が、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３８１に記載の単離抗体。
【０７９８】
３８３．抗体が、マウスＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態３７３に記載の単離抗体。
【０７９９】
３８４．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、及びヒトＴＲＥＭ２の疾患多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントが、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、及びヒトＴＲＥＭ２の疾患多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される、実施形態１〜３８３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８００】
３８５．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態３８４に記載の単離抗体。
【０８０１】
３８６．ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する、単離不活性抗体。
【０８０２】
３８７．ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する、単離アンタゴニスト抗体。
【０８０３】
３８８．ＴＲＥＭ２タンパク質が、哺乳動物タンパク質またはヒトタンパク質である、実施形態３８６または実施形態３８７に記載の単離抗体。
【０８０４】
３８９．ＴＲＥＭ２タンパク質が、野生型タンパク質である、実施形態３８８に記載の単離抗体。
【０８０５】
３９０．ＴＲＥＭ２タンパク質が、天然多様体である、実施形態３８８に記載の単離抗体。
【０８０６】
３９１．ＴＲＥＭ２タンパク質が、疾患多様体である、実施形態３８８に記載の単離抗体。
【０８０７】
３９２．単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する、実施形態３８７〜３９１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８０８】
３９３．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させることを含む、実施形態３９２に記載の単離抗体。
【０８０９】
３９４．１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子が、１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子を含む、実施形態３９３に記載の単離抗体。
【０８１０】
３９５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、マクロファージ、ミクログリア細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１ミクログリア細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２ミクログリア細胞、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させることを含む、実施形態３９２〜３９４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８１１】
３９６．単離抗体が、ＴＲＥＭ２と、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である、実施形態３８７〜３９５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８１２】
３９７．抗体が、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない、実施形態３８６〜３９６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８１３】
３９８．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態３９７に記載の単離抗体。
【０８１４】
３９９．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態３９８に記載の単離抗体。
【０８１５】
４００．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態３９９に記載の単離抗体。
【０８１６】
４０１．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態４００に記載の単離抗体。
【０８１７】
４０２．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態４０１に記載の単離抗体。
【０８１８】
４０３．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４０２に記載の単離抗体。
【０８１９】
４０４．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む、実施形態４０３に記載の単離抗体。
【０８２０】
４０５．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態３９８に記載の単離抗体。
【０８２１】
４０６．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態３９７に記載の単離抗体。
【０８２２】
４０７．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態４０６に記載の単離抗体。
【０８２３】
４０８．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態４０７に記載の単離抗体。
【０８２４】
４０９．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態４０８に記載の単離抗体。
【０８２５】
４１０．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態４０９に記載の単離抗体。
【０８２６】
４１１．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４１０に記載の単離抗体。
【０８２７】
４１２．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを有する、実施形態３９７に記載の単離抗体。
【０８２８】
４１３．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態４１２に記載の単離抗体。
【０８２９】
４１４．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態４１３に記載の単離抗体。
【０８３０】
４１５．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態４１４に記載の単離抗体。
【０８３１】
４１６．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態４１５に記載の単離抗体。
【０８３２】
４１７．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４１６に記載の単離抗体。
【０８３３】
４１８．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、及びＴＲＥＭ２の疾患多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである、実施形態３８６〜４１７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８３４】
４１９．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態４１８に記載の単離抗体。
【０８３５】
４２０．Ｆｃ領域が、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３６８、実施形態４０３、または実施形態４０４に記載の単離抗体。
【０８３６】
４２１．Ｆｃ領域が、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態３５７〜４２０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８３７】
４２２．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによるＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む、実施形態３８０または実施形態４１７に記載の単離抗体。
【０８３８】
４２３．抗体が、ＴＲＥＭ２の、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合する、実施形態３０３〜４２２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８３９】
４２４．１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドが、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、アポトーシス細胞、核酸、アニオン性脂質、双性イオン性脂質、負に荷電した脂質、ホスファチジルセリン、スルファチド、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、膜リン脂質、脂質化タンパク質、プロテオリピド、脂質化ペプチド、及び脂質化アミロイドベータペプチドからなる群から選択される、実施形態４２３に記載の単離抗体。
【０８４０】
４２５．抗体が、ＴＲＥＭ２の、ＴＲＥＭ２リガンドとの結合について競合しない、実施形態３０３〜４２２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８４１】
４２６．抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、コンジュゲート抗体、またはキメラ抗体である、実施形態３０３〜４２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８４２】
４２７．抗体が、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、実施形態３０３〜４２６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８４３】
４２８．第１の抗原が、ヒトＴＲＥＭ２若しくはその天然多様体であり、第２の抗原が、アミロイドベータ若しくはそのフラグメント、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドからなる群から選択される病原性タンパク質；トランスフェリン受容体、インスリン受容体、インスリン様成長因子受容体、ＬＲＰ−１、及びＬＲＰ１からなる群から選択されるタンパク質を標的とする血液脳関門；または、免疫細胞上に発現されるリガンド及び／若しくはタンパク質であり、リガンド及び／若しくはタンパク質が、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、及びホスファチジルセリンからなる群から選択される、実施形態４２７に記載の単離抗体。
【０８４４】
４２９．第１の抗原が、ヒトＴＲＥＭ２またはその天然多様体であり、第２の抗原が、１つ以上の腫瘍細胞上に発現されるタンパク質である、実施形態４２７に記載の単離抗体。
【０８４５】
４３０．抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、ヒトＤＡＰ１２、及びヒトＤＡＰ１２の天然多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体が、アミロイドベータ、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、β２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチド、ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される病原性タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体、または、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ、ホスファチジルセリン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される癌関連タンパク質に特異的に結合する１つ以上の抗体と組み合わせて使用される、実施形態３０３〜４２４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８４６】
４３１．抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態３０３〜４３０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８４７】
４３２．抗体が、
ｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３、または配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及び、
ｘｖ．配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態３０３〜４３１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８４８】
４３３．抗体が、
ｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１５３に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６、または配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；
ｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４、または配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基；及び、
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１、または配列番号１のアミノ酸残基１５８〜１７１に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基
からなる群から選択されるアミノ酸残基内に１つ以上のアミノ酸を含むエピトープに結合する、実施形態３０３〜４３１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８４９】
４３４．抗体が、
ｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７またはＡｓｐ８７；
ｖｉ．配列番号１のアミノ酸残基４０〜４４；
ｖｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基６７〜７６；及び、
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基１１４〜１１８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基をさらに含むエピトープに結合する、実施形態４３２または実施形態４３３に記載の単離抗体。
【０８５０】
４３５．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態３０３〜４３３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８５１】
４３６．ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４３５に記載の単離抗体。
【０８５２】
４３７．ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４３５または実施形態４３６に記載の単離抗体。
【０８５３】
４３８．ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４３５〜４３７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８５４】
４３９．ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４３５〜４３８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８５５】
４４０．ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４３５〜４３９のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８５６】
４４１．ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号１５３〜２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４３５〜４４０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８５７】
４４２．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、
（ｃ）配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、
軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、
（ｃ）配列番号１５３〜２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態３０３〜４３３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８５８】
４４３．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０８５９】
４４４．ＨＶＲ−Ｈ１が、配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４４３に記載の単離抗体。
【０８６０】
４４５．ＨＶＲ−Ｈ２が、配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４４３または実施形態４４４に記載の単離抗体。
【０８６１】
４４６．ＨＶＲ−Ｈ３が、配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４４３〜４４５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８６２】
４４７．ＨＶＲ−Ｌ１が、配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４４３〜４４６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８６３】
４４８．ＨＶＲ−Ｌ２が、配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４４３〜４４７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８６４】
４４９．ＨＶＲ−Ｌ３が、配列番号１５３〜２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４４３〜４４８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８６５】
４５０．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１５３〜２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態４４３に記載の単離抗体。
【０８６６】
４５１．Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１６、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ１９、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２３、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２６、Ａｂ２７、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ３０、Ａｂ３１、Ａｂ３２、Ａｂ３３、Ａｂ３４、Ａｂ３５、Ａｂ３６、Ａｂ３７、Ａｂ３８、Ａｂ３９、Ａｂ４０、Ａｂ４１、Ａｂ４２、Ａｂ４３、Ａｂ４４、Ａｂ４５、Ａｂ４６、Ａｂ４７、Ａｂ４８、Ａｂ４９、Ａｂ５０、Ａｂ５１、Ａｂ５３、Ａｂ５４、Ａｂ５５、Ａｂ５６、Ａｂ５７、Ａｂ５８、Ａｂ５９、Ａｂ６０、Ａｂ６１、Ａｂ６２、Ａｂ６３、Ａｂ６４、Ａｂ６５、Ａｂ６６、Ａｂ６７、Ａｂ６８、Ａｂ６９、Ａｂ７０、Ａｂ７１、Ａｂ７２、Ａｂ７３、Ａｂ７４、Ａｂ７５、Ａｂ７６、Ａｂ７７、Ａｂ７８、Ａｂ７９、Ａｂ８０、Ａｂ８１、Ａｂ８２、Ａｂ８３、Ａｂ８４、Ａｂ８５、Ａｂ８６、及びＡｂ８７からなる群から選択されるモノクローナル抗体と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合する単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０８６７】
４５２．単離抗体が、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号３〜２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号２５〜４９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び、
（ｃ）配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号５０〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、
軽鎖可変ドメインが、
（ａ）配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１２０〜１３７からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び、
（ｃ）配列番号１５３〜２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列、若しくは配列番号１３８〜１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離抗ヒトＴＲＥＭ２抗体。
【０８６８】
４５３．抗体が、アゴニスト抗体であり、抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、実施形態４４３〜４５２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８６９】
４５４．単離抗体が、細胞表面上に、ＴＲＥＭ２クラスター形成を誘導または保持する、実施形態４５３に記載の単離抗体。
【０８７０】
４５５．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、ＴＲＥＭ２がＤＡＰ１２に結合すること；ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２に結合すること；ＴＲＥＭ２リン酸化；ＤＡＰ１２リン酸化；ＰＩ３Ｋ活性化；ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、及びＩＬ−１０からなる群から選択される１つ以上のサイトカインの発現の増加；ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、及びＣＲＰからなる群から選択される１つ以上の前炎症性メディエーターの発現の低減；ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、またはその両方の発現の低減；細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）リン酸化；Ｃ−Ｃケモカイン受容体７（ＣＣＲ７）の発現の増加；ＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１発現細胞へのミクログリア細胞の走化性の誘導；樹状細胞、単球、ミクログリア、及び／またはマクロファージの、Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増加；骨髄由来樹状細胞の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の増加、正常化、またはその両方；破骨細胞産生、破骨細胞形成速度の増加、またはその両方の誘導；樹状細胞、マクロファージ、Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１マクロファージ、Ｍ２マクロファージ、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、ミクログリア細胞、Ｍ１ミクログリア細胞、活性化Ｍ１ミクログリア細胞、及びＭ２ミクログリア細胞のうちの１つ以上の生存及び／または機能を増加させること；癌細胞クリアランス、アポトーシスニューロンクリアランス、神経組織破片クリアランス、非神経組織破片クリアランス、細菌または他の異物クリアランス、及び病原性タンパク質クリアランスからなる群から選択される１種以上のクリアランスの誘導；アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、病原性タンパク質、または腫瘍細胞のうちの１つ以上の貪食の誘導；破壊されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２依存性遺伝子発現の正常化；Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、またはその両方のＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２複合体へのリクルート；Ｓｙｋリン酸化；樹状細胞、ミクログリア、単球、またはマクロファージ上のＣＤ８３及び／またはＣＤ８６の発現の増加；ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＣＲＰ、及びＭＣＰ−１からなる群から選択される１つ以上の炎症性サイトカインの分泌の低減；１つ以上の炎症性受容体の発現の低減；低減したレベルのＭ−ＣＳＦの条件下での、マクロファージ、単球、樹状細胞、及び／またはミクログリアによる貪食を増加させること；正常レベルのＭーＣＳＦの存在下での、マクロファージ、単球、樹状細胞、及び／またはミクログリアによる貪食を減少させること；１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を増加させること；な���びに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態４５３または実施形態４５４に記載の単離抗体。
【０８７１】
４５６．抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、またはＩｇＡクラスのものである、実施形態４５３〜４５５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８７２】
４５７．抗体が、ＩｇＧクラスであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプを有する、実施形態４５６に記載の単離抗体。
【０８７３】
４５８．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態４５７に記載の単離抗体。
【０８７４】
４５９．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態４５８に記載の単離抗体。
【０８７５】
４６０．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態４５９に記載の単離抗体。
【０８７６】
４６１．抗体が、Ｆｃ受容体への結合と独立して、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導する、実施形態４５８〜４６０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８７７】
４６２．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態４５８〜４６１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８７８】
４６３．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態４６２に記載の単離抗体。
【０８７９】
４６４．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態４６２または実施形態４６３に記載の単離抗体。
【０８８０】
４６５．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態４６４に記載の単離抗体。
【０８８１】
４６６．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４６５に記載の単離抗体。
【０８８２】
４６７．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｃ２１４Ｓアミノ酸置換を含む軽鎖定常領域を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４５９に記載の単離抗体。
【０８８３】
４６８．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態４５７に記載の単離抗体。
【０８８４】
４６９．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態４６８に記載の単離抗体。
【０８８５】
４７０．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態４６９に記載の単離抗体。
【０８８６】
４７１．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態４６８〜４７０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８８７】
４７２．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態４７１に記載の単離抗体。
【０８８８】
４７３．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態４７０〜４７２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８８９】
４７４．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態４７３に記載の単離抗体。
【０８９０】
４７５．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４７４に記載の単離抗体。
【０８９１】
４７６．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む、実施形態４７０〜４７２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８９２】
４７７．ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域が、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫ  ＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴ  ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号３９７）のアミノ酸配列を含む、実施形態４７６に記載の単離抗体。
【０８９３】
４７８．抗体Ｆｃ領域が、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／または、Ｎ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４７６または実施形態４７７に記載の単離抗体。
【０８９４】
４７９．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態４６８に記載の単離抗体。
【０８９５】
４８０．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを含む、実施形態４５７に記載の単離抗体。
【０８９６】
４８１．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態４８０に記載の単離抗体。
【０８９７】
４８２．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態４８１に記載の単離抗体。
【０８９８】
４８３．抗体が、阻害性Ｆｃ受容体に結合する、実施形態４８０〜４８２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０８９９】
４８４．阻害性Ｆｃ受容体が、阻害性Ｆｃγ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、実施形態４８３に記載の単離抗体。
【０９００】
４８５．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態４８２〜４８４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９０１】
４８６．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態４８５に記載の単離抗体。
【０９０２】
４８７．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４８６に記載の単離抗体。
【０９０３】
４８８．抗体が、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する、実施形態４５６に記載の単離抗体。
【０９０４】
４８９．抗体が、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４８８に記載の単離抗体。
【０９０５】
４９０．抗体が、マウスＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態４８１に記載の単離抗体。
【０９０６】
４９１．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、及びＴＲＥＭ２の疾患多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントであり、抗体フラグメントが、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、及びＴＲＥＭ２の疾患多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する二次抗体フラグメントに架橋される、実施形態４５１〜４９０のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９０７】
４９２．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態４９１に記載の単離抗体。
【０９０８】
４９３．単離抗体が、不活性抗体である、実施形態４４３〜４５２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９０９】
４９４．単離抗体が、アンタゴニスト抗体である、実施形態４４３〜４５２のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９１０】
４９５．単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する、実施形態４９４に記載の単離抗体。
【０９１１】
４９６．１つ以上のＴＲＥＭ２活性が、１つ以上のＴＲＥＭ２依存性遺伝子の活性を減少させること；１つ以上の活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）転写因子の活性を減少させること；マクロファージ、ミクログリア細胞、単球、破骨細胞、皮膚ランゲルハンス細胞、クッパー細胞、及び／または樹状細胞の生存を減少させること；ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態４９５に記載の単離抗体。
【０９１２】
４９７．単離抗体が、ＴＲＥＭ２と、１つ以上のＴＲＥＭ２リガンドとの間の相互作用を阻害する、ＴＲＥＭ２シグナル伝達を阻害する、またはその両方である、実施形態４９４〜４９６のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９１３】
４９８．抗体が、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合できない、実施形態４９３〜４９７のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９１４】
４９９．抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプを含む、実施形態４９８に記載の単離抗体。
【０９１５】
５００．抗体が、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態４９９に記載の単離抗体。
【０９１６】
５０１．ヒトＩｇＧ１定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態５００に記載の単離抗体。
【０９１７】
５０２．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態５０１に記載の単離抗体。
【０９１８】
５０３．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態５０２に記載の単離抗体。
【０９１９】
５０４．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態５０３に記載の単離抗体。
【０９２０】
５０５．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによるグリシン２３６に対応する位置にアミノ酸欠失をさらに含む、実施形態５０４に記載の単離抗体。
【０９２１】
５０６．抗体が、マウスＩｇＧ１定常領域を含む、実施形態４９９に記載の単離抗体。
【０９２２】
５０７．抗体が、ＩｇＧ２アイソタイプを有する、実施形態４９８に記載の単離抗体。
【０９２３】
５０８．抗体が、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む、実施形態５０７に記載の単離抗体。
【０９２４】
５０９．ヒトＩｇＧ２定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態５０８に記載の単離抗体。
【０９２５】
５１０．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態５０９に記載の単離抗体。
【０９２６】
５１１．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態５１０に記載の単離抗体。
【０９２７】
５１２．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態５１１に記載の単離抗体。
【０９２８】
５１３．抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプを含む、実施形態４９８に記載の単離抗体。
【０９２９】
５１４．抗体が、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む、実施形態５１３に記載の単離抗体。
【０９３０】
５１５．ヒトＩｇＧ４定常領域が、Ｆｃ領域を含む、実施形態５１４に記載の単離抗体。
【０９３１】
５１６．Ｆｃ領域が、１つ以上の修飾を含む、実施形態５１５に記載の単離抗体。
【０９３２】
５１７．Ｆｃ領域が、１つ以上のアミノ酸置換を含む、実施形態５１６に記載の単離抗体。
【０９３３】
５１８．Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置にあり、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態５１７に記載の単離抗体。
【０９３４】
５１９．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２、ヒトＴＲＥＭ２の天然多様体、及びＴＲＥＭ２の疾患多様体からなる群から選択される１つ以上のヒトタンパク質に結合する抗体フラグメントである、実施形態４４３〜５１８のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９３５】
５２０．フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、実施形態５１９に記載の単離抗体。
【０９３６】
５２１．Ｆｃ領域が、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４７５、実施形態５０４、または実施形態５０５に記載の単離抗体。
【０９３７】
５２２．Ｆｃ領域が、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置に、１つ以上の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態４６５〜５２１のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９３８】
５２３．Ｆｃ領域が、ＥＵ番号付けによる２２８位にセリンからプロリンへのアミノ酸置換をさらに含む、実施形態４８７または実施形態５１８に記載の単離抗体。
【０９３９】
５２４．抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、またはキメラ抗体である、実施形態４４３〜５２３のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４０】
５２５．抗体が、第１の抗原及び第２の抗原を認識する二重特異性抗体である、実施形態４４３〜５２４のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４１】
５２６．抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態４４３〜５２５のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４２】
５２７．単離抗体が、ヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２の両方に特異的に結合する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４３】
５２８．単離抗体が、約６．７０ｎＭ未満〜約０．２３ｎＭ未満の範囲のヒトＴＲＥＭ２及びマウスＴＲＥＭ２に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４４】
５２９．単離抗体が、約０．７１ｎＭ未満〜約０．２３ｎＭ未満の範囲のヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４５】
５３０．単離抗体が、約６．７０ｎＭ未満〜約０．６６ｎＭ未満の範囲のヒト単量体ＴＲＥＭ２タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４６】
５３１．単離抗体が、約４．９０ｎＭ未満〜約０．３５ｎＭ未満の範囲のマウスＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合タンパク質に対する解離定数（ＫＤ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の単離抗体。
【０９４７】
５３２．先行実施形態のいずれか１つに記載の抗体をコードする単離核酸。
【０９４８】
５３３．実施形態５３２に記載の核酸を含むベクター。
【０９４９】
５３４．実施形態５３３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【０９５０】
５３５．抗体が産生されるように、実施形態５３４に記載の細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
【０９５１】
５３６．細胞により産生された抗体を回収することをさらに含む、実施形態５３５に記載の方法。
【０９５２】
５３７．実施形態３０３〜５３１のいずれか１つに記載の抗体を含む医薬組成物及び薬学的に許容される担体。
【０９５３】
５３８．ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する治療的有効量の単離抗体を、個体に投与することを含む、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、正常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー病、那須−ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満症、マラリア、本態性振戦、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核神経節変性症、急性散在性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性症、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、大理石骨病、骨のパジェット病、及び癌からなる群から選択される、疾患、障害、または損傷を有する個体を、予防する、リスク低減させる、または治療する方法。
【０９５４】
５３９．ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する治療的有効量の単離アゴニスト抗体を、個体に投与することを含む、それを必要とする個体の自然免疫細胞の生存または創傷治癒を誘導または促進する方法。
【０９５５】
５４０．単離抗体が、
ｉ．（ａ）アゴニスト抗体；
（ｂ）不活性抗体；または、
（ｃ）アンタゴニスト抗体である、実施形態５３８または実施形態５３９に記載の方法。
【０９５６】
５４１．  ｉ．（ａ）抗体が、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、若しくはＩｇＡクラスのものであり；及び／または、
ｉｉ．（ｂ）抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４アイソタイプを有する、実施形態５４０に記載の方法。
【０９５７】
５４２．抗体が、
ｉ．（ａ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；
ｉｉ．（ｂ）Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；
ｉｉｉ．（ｃ）Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；
ｉｖ．（ｄ）Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；
ｖ．（ｅ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせ；または、
ｖｉ．（ｆ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される残基位置に、Ｆｃ領域の１つ以上のアミノ酸置換を含み、
ｖｉｉ．残基の番号付けが、ＥＵ番号付けによる、実施形態５４１に記載の方法。
【０９５８】
５４３．単離抗体が、
ｉ．（ａ）配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０若しくは配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する；または、
ｉｉ．（ｂ）配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７若しくは配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応するＴＲＥＭ２タンパク質上のアミノ酸残基内の１つ以上のアミノ酸に結合する、実施形態５３８〜５４２のいずれか１つに記載の方法。
【０９５９】
５４４．単離抗体が、
ｉ．（ａ）抗体Ａｂ５２と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合し；
ｉｉ．（ｂ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ５２のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含み；
ｉｉｉ．（ｃ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、配列番号３９８のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３９９のアミノ酸配列、若しくは配列番号３９９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び、配列番号４００のアミノ酸配列、若しくは配列番号４００のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、配列番号４０１のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０２のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び、配列番号４０３のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、
ｉｖ．（ｄ）抗体Ａｂ２１と本質的に同一のＴＲＥＭ２エピトープに結合し；
ｖ．（ｅ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｈ３を含み；ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、モノクローナル抗体Ａｂ２１のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及び／若しくはＨＶＲ−Ｌ３を含み；あるいは、
ｖｉ．（ｆ）重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、重鎖可変ドメインが、配列番号４０４のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４０５のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び、配列番号４０６のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、ならびに／または、軽鎖可変ドメインが、配列番号４０７のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４０８のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び、配列番号４０９のアミノ酸配列、若しくは配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％の相同性を有するアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施形態５３８〜５４３のいずれか１つに記載の方法。
【０９６０】
５４５．単離抗体が、実施形態３０３〜５３１のいずれか１つに記載の単離抗体である、実施形態５３８に記載の方法。
【０９６１】
５４６．単離アゴニスト抗体が、実施形態３０３〜３８５、４２０〜４９２、及び５１９〜５３１のいずれか１つに記載の単離抗体である、実施形態５３９に記載の方法。
【０９６２】
５４７．個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｕ１４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン酸；
ｉｘ．配列番号１のアミノ酸残基Ｇｌｎ３３をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるグルタミン；
ｘ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ４４をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｘｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｒｇ４７に対応するアミノ酸でのアルギニンからヒスチジンへのアミノ酸置換；
ｘｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｔｒｐ７８をコードする核酸配列におけるコドン置換を停止させるトリプトファン；
ｘｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｖａｌ１２６に対応するアミノ酸でのバリンからグリシンへのアミノ酸置換；
ｘｉｖ．配列番号１のアミノ酸残基Ａｓｐ１３４に対応するアミノ酸でのアスパラギン酸からグリシンへのアミノ酸置換；及び
ｖｉｉｉ．配列番号１のアミノ酸残基Ｌｙｓ１８６に対応するアミノ酸でのリシンからアスパラギンへのアミノ酸置換からなる群から選択される１つ以上の置換を含む、実施形態５３８及び５４０〜５４５に記載の方法。
【０９６３】
５４８．個体が、ＴＲＥＭ２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ３１３に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；配列番号１をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ２６７に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失；またはその両方を含む、実施形態５３８、５４０〜５４５、及び５４７のいずれか１つに記載の方法。
【０９６４】
５４９．個体が、ＤＡＰ１２のヘテロ接合型多様体を有し、多様体が、
ｖｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｍｅｔ１に対応するアミノ酸でのメチオニンからトレオニンへの置換；
ｖｉｉ．配列番号２のアミノ酸残基Ｇｌｙ４９に対応するアミノ酸でのグリシンからアルギニンへのアミノ酸置換；
ｖｉｉｉ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン１〜４内の欠失；
ｉｘ．配列番号２をコードする核酸配列のエクソン３での１４アミノ酸残基の挿入；及び、
ｘ．配列番号２をコードする核酸配列のヌクレオチド残基Ｇ１４１に対応するヌクレオチドでのグアニンヌクレオチド欠失からなる群から選択される１つ以上の多様体を含む、実施形態５３８、５４０〜５４５、及び５４７〜５４８のいずれか１つに記載の方法。
【０９６５】
５５０．癌が、膀胱癌、脳癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、白血病、肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、線維肉腫、及び甲状腺癌からなる群から選択される、実施形態５３８及び５４０〜５４５のいずれか１つに記載の方法。
【０９６６】
５５１．阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、個体に投与すること、及び／または、別の標準若しくは治験抗癌療法をさらに含む、実施形態５３８及び５４０〜５４５、ならびに５５０のいずれか１つに記載の方法。
【０９６７】
５５２．阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、単離抗体と組み合わせて投与される、実施形態５５１に記載の方法。
【０９６８】
５５３．阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂリンパ球及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、ならびに、それらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態５５１または実施形態５５２に記載の方法。
【０９６９】
５５４．標準または治験抗癌療法が、放射線療法、細胞傷害性化学療法、標的療法、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、養子細胞移入（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される１つ以上の治療法である、実施形態５５１に記載の方法。
【０９７０】
５５５．阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を、個体に投与することをさらに含む、実施形態５３８、５４０〜５４５、及び５５０のいずれか１つに記載の方法。
【０９７１】
５５６．阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、単離抗体と組み合わせて投与される、実施形態５５５に記載の方法。
【０９７２】
５５７．阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態５５５または実施形態５５６に記載の方法。
【０９７３】
５５８．刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を、個体に投与することをさらに含む、実施形態５３８、５４０〜５４５、及び５５０のいずれか１つに記載の方法。
【０９７４】
５５９．刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体が、単離抗体と組み合わせて投与される、実施形態５５８に記載の方法。
【０９７５】
５６０．刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体が、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態５５８または実施形態５５９に記載の方法。
【０９７６】
５６１．少なくとも１つの刺激性サイトカインを、個体に投与することをさらに含む、実施形態５３８、５４０〜５４５、及び５５０のいずれか１つに記載の方法。
【０９７７】
５６２．少なくとも１つの刺激性サイトカインが、単離抗体と組み合わせて投与される、実施形態５６１に記載の方法。
【０９７８】
５６３．少なくとも１つの刺激性サイトカインが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ケモカインタンパク質ファミリーのＴＧＦ−ベータメンバー、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＩＬ−３３、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、実施形態５６１または実施形態５６２に記載の方法。
【０９７９】
本発明は、次の実施例を参照することにより、より完全に理解されるであろう。しかし、それらは、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示の全体にわたる全ての引用は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０９８０】
実施例１：アゴニスト抗ＴＲＥＭ２及び抗ＤＡＰ１２抗体の産生、同定、及び特性評価
緒言
ヒトＴＲＥＭ２プレタンパク質のアミノ酸配列を、以下で配列番号１に示す。ヒトＴＲＥＭ２は、配列番号１のアミノ残基１〜１８に位置するシグナルペプチドを含有する。ヒトＴＲＥＭ２は、配列番号１のアミノ残基２９〜１１２に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン；配列番号１のアミノ残基１１３〜１７４に位置するさらなる細胞外配列；配列番号１のアミノ残基１７５〜１９５に位置する膜貫通ドメイン；及び配列番号１のアミノ残基１９６〜２３０に位置する細胞内ドメインを含有する。
【０９８１】
ＴＲＥＭ２アミノ酸配列（配列番号１）：
【０９８２】
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【０９８３】
ヒトＴＲＥＭ２の既知の特徴は、膜貫通ドメインが、ＤＡＰ１２中のアスパラギン酸と相互作用できるリシン（ａａ１８６）；ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及び他の関連するＩｇＶファミリーメンバーからのシグナル伝達を変換する、鍵となるアダプタータンパク質を含有することである。
【０９８４】
ヒトＴＲＥＭ２のＢＬＡＳＴ分析により、１８の関連するホモログを同定した。これらのホモログは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体ＮＫ−ｐ４４（ＮＣＴＲ２）、多量体免疫グロブリン受容体（ｐＩｇＲ）、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００Ａ、ＣＤ３００Ｃ、及びＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ１を含んでいた。最も近いホモログを、ＩｇＶドメイン内のＴＲＥＭ２と類似性を有するＮＣＴＲ２と同定した（図１Ａ）。ＢＬＡＳＴ分析により、ＴＲＥＭタンパク質を他のＩｇＶファミリータンパク質とさらに比較した（図１Ｂ）。
【０９８５】
ＴＲＥＭ２はまた、ＴＲＥＭ１と密接に関連する。ＴＲＥＭ１及びＴＲＥＭ２のアミノ酸配列のアライメントを、双方向ｂｌａｓｔにより生成した（図２Ａ）。これは、ＩｇＶドメインにも限定される。
【０９８６】
ＴＲＥＭ１、ＮＫ−ｐ４４、及びこのファミリーの他のメンバーに対するアゴニスト抗体は、以前に記載されている。ＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン、特にＩｇＶドメイン（配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２）に結合する抗体を、マウスハイブリドーマ技術、ファージディスプレイ技術、及び酵母ディスプレイ技術を使用して生成する。次に、以下の実施例２〜３９に記載されているように、細胞及びインビボでの完全な動物におけるＴＲＥＭ２シグナル伝達及び機能を活性化する能力について、抗体をスクリーニングする。
【０９８７】
例えば、ＩｇＶドメイン（アミノ酸残基２９〜１１２）を標的とするアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体を産生できる。ＩｇＶドメインは、標的に結合し、ＩｇＧ自体またはＮＫｐ４４などの受容体の多量体化を通して、活性化をもたらす。従って、これらのドメインはアゴニスト抗体の合理的な標的である。それらはまた、高度に分岐している。
【０９８８】
ヒトＴＲＥＭ２のアミノ酸残基９９〜１１５を標的とするアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体も産生できる。マウスＴＲＥＭ１（アミノ酸残基８３〜９９）における対応するペプチドが、ＴＲＥＭ１の、その内因性標的への結合をブロックするので、アミノ酸残基９９〜１１５は、ＴＲＥＭ２の、その内因性標的への結合をブロックするペプチドに対応すると考えられている（Ｇｉｂｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００４）。マウスＴＲＥＭ１ペプチドは、ＬＰ１７（ＬＱＶＴＤＳＧＬＹＲＣＶＩＹＨＰＰ（配列番号４１４））と呼ばれている。ヒトＴＲＥＭ２の同等の領域は、ＣＤ３ドメイン内に位置し、配列番号１のアミノ酸残基９９〜１１５（ＬＱＰＨＤＡＧＬＹＱＣＱＳＬＨＧ）に位置する。リガンド結合をブロックする抗体は、リガンド自体と同様に、受容体を活性化できた。
【０９８９】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質内の関連部位（例えば、アゴニスト部位）を予測するための別のアプローチは、アルツハイマー病（例えば、Ｒ４７Ｈ）、硬化性白質脳症を伴う脂肪膜性多発嚢胞性骨異形成症（ＰＬＯＳＬ）、または那須−ハコラ病における変異が見出される部位を標的とすることによる。さらに、一般にＩｇＶドメイン内に見出されるヒト疾患に関連する主要な変異の部位が関連する。
【０９９０】
ＴＲＥＭ１のＴＲＥＭ２関連構造の結晶構造（Ｋｅｌｋｅｒ，  ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  ２００４．  ３４４（５）：  ｐ．  １１７５−８１；  Ｋｅｌｋｅｒ，  ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  ２００４．  ３４２（４）：  ｐ．  １２３７−４８；及びＲａｄａｅｖ，  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ２００３．  １１（１２）：  ｐ．  １５２７−３５）、ＴＬＴ１（Ｇａｔｔｉｓ，  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２００６．  ２８１（１９）：  ｐ．  １３３９６−４０３）、ならびにＮＫｐ４４は、記載されており、従って、天然アゴニストとの相互作用において中心的な役割を果たす可能性が特に高いＩｇＶドメイン内の構造領域／特徴を同定する。これらの研究は、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）がリガンド結合において主要な役割を果たすという考えをサポートする。ＴＲＥＭ１は、無細胞条件下のインビトロで単量体（Ｇａｔｔｉｓ，  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２００６．  ２８１（１９）：  ｐ．  １３３９６−４０３）または二量体（Ｒａｄａｅｖ，  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ２００３．  １１（１２）：  ｐ．  １５２７−３５）のいずれかであると報告されているが、インビボでのオリゴマー状態は、ＴＲＥＭ２のものと同様に、依然として不明である。
【０９９１】
ヒトＤＡＰ１２のアミノ酸配列は、以下に配列番号２として示す。
【０９９２】
2020063268.tif 000010
【０９９３】
ＤＡＰ１２は、シングルパスＩ型膜タンパク質である。それは、ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基２２〜４０に位置する細胞外ドメイン；ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基４１〜６１に位置する膜貫通ドメイン；及びヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基６２〜１１３に位置する細胞内ドメインを含有する。ＤＡＰ１２の免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインは、ヒトＤＡＰ１２（配列番号２）のアミノ酸残基８０〜１１８に位置する。ＤＡＰ１２のアスパラギン酸は、アミノ酸残基１８６にリシンを含有するヒトＴＲＥＭ２の膜貫通ドメインと相互作用し、ＴＲＥＭ２、ＴＲＥＭ１、及び他の関連するＩｇＶファミリーメンバータンパク質からのシグナル伝達を変換する。
【０９９４】
ヒトＤＡＰ１２のアミノ酸残基２２〜４０を標的とするアゴニスト抗ＤＡＰ１２抗体を産生できる。ＤＡＰ１２は、ＴＲＥＭ２と会合するジスルフィド結合二量体であり、アミノ酸残基２２〜４０を包含する細胞外ドメインに対する抗体で、ＤＡＰ１２を二量体化すると、１つ以上のＴＲＥＭ２及び／またはＤＡＰ１２活性を活性化することになると考えられている。
【０９９５】
本明細書で検討される研究は、ＴＲＥＭ２に結合するアゴニスト抗体の生成を記載する。ＴＲＥＭ２発現細胞への結合ならびにＴＲＥＭ２シグナル伝達及び機能性を活性化するそれらの能力について、抗体をスクリーニングした。
【０９９６】
結果
抗ＴＲＥＭ２抗体の産生
次の手順を使用して、ＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン、特にＩｇＶドメイン（配列番号１のアミノ酸残基２９〜１１２）に結合する抗体を生成した。それぞれ約１０９の多様性を有する８つのナイーブヒト合成酵母ライブラリを、上述のように、設計し、生成し、増殖させた（例えば、ＷＯ２００９０３６３７９；  ＷＯ２０１０１０５２５６；  ＷＯ２０１２００９５６８；  Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｐｒｏｔｅｉｎ．  Ｅｎｇ．  Ｄｅｓ．  Ｓｅｌ．  ２６（１０）：６６３−６７０を参照のこと）。本明細書で使用されるＡＤＩＭＡＢ酵母ベースの抗体発見プラットフォームは、エピトープの範囲が広い完全ヒト全長モノクローナルＩｇＧ１抗体の同定を可能にした。分泌経路を介して高品質な全ＩｇＧを輸送し、次に、それらを表面上に提示する、または、それらを培地中に直接分泌するように、ＡＤＩＭＡＢ酵母を遺伝子操作する。
【０９９７】
選択の最初のラウンドでは、上述したように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣｓシステムを利用した磁気ビーズ選別技術を実施した（Ｓｉｅｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８６（１−２）：１４１−５３）。要約すると、０．１％ＢＳＡを含むＦＡＣＳ洗浄緩衝液ＰＢＳ中、室温で１５分間、３ｍｌの２００ｎＭのビオチン化ＴＲＥＭ２抗原または１０ｎＭのビオチン化ＴＲＥＭ２−Ｆｃ融合抗原と、酵母細胞（約１０１０細胞／ライブラリ）をインキュベーションした。ビオチン化は、ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ビオチン化キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１４２５）を使用して行った。５０ｍｌの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを４０ｍＬの洗浄緩衝液で再懸濁し、５００μｌのストレプトアビジンマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、ドイツ、ベルギッヒグラヂバッハ、カタログ番号１３０−０４８−１０１）を酵母に加え、４℃で１５分間インキュベーションした。次に、酵母をペレット化し、５ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁し、ＭＡＣＳ  ＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、ドイツ、ベルギッヒグラヂバッハ、カタログ番号１３０−０４２−４０１）にロードした。５ｍＬをロードした後に、カラムを３ｍｌのＦＡＣＳ洗浄緩衝液で３回洗浄した。次に、カラムを磁場から取り出し、５ｍＬの成長培地で酵母を溶出させ、次に、一晩成長させた。フローサイトメトリーを使用して、次の３ラウンドの選別を実施した。約１×１０８酵母をペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、それぞれ、室温で１０分間、２００ｎＭ、１００ｎＭまたは１０ｎＭのビオチン化ＴＲＥＭ２とインキュベーションした。次に、酵母を２回洗浄し、４℃で１５分間、１：１００に希釈されたヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２カッパ−ＦＩＴＣ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、アラバマ州バーミンガム、カタログ番号２０６２−０２）及び１：５００に希釈されたストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６３３（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ニューヨーク州グランドアイランド、カタログ番号Ｓ２１３７５）または１：５０に希釈されたエクストラビジン−フィコエリトリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、セントルイス、カタログ番号Ｅ４０１１）のいずれかの二次試薬で染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬ洗浄緩衝液に再懸濁し、ストレーナーでキャップした選別管に移した。ＦＡＣＳ  ＡＲＩＡソーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、選別を実施し、ソートゲートを第２ラウンドのクローンに結合するＴＲＥＭ２のみを選択するように決定し、第３ラウンドは、試薬結合剤を減少させるネガティブ選別であった。選別の最終ラウンドの後に、酵母をプレーティングし、個々のコロニーを特性評価のために採取した。
【０９９８】
酵母クローンを飽和まで増殖させ、次に、振とうしながら３０℃で４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、上清を精製のために採取した。ＩｇＧを、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａカラムを使用して精製し、酢酸、ｐＨ２．０で溶出させた。Ｆａｂフラグメントをパパイン消化により生成し、ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号１７−５４５８−０１）で精製した。２つの抗体（Ａｂ２１及びＡｂ５２）を、さらなる分析のために選択した。
【０９９９】
抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、抗体Ａｂ２１及び抗体Ａｂ５２の重鎖可変ドメイン（図２Ｂ）及び軽鎖可変ドメイン（図２Ｃ）をコードするアミノ酸配列を決定した。
【１０００】
抗体Ａｂ２１及び抗体Ａｂ５２のＫａｂａｔ  ＣＤＲ配列を、表１に示す。
【１００１】
抗体Ａｂ２１の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＴＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＡＧＨＹＤＧＧＨＬＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４１０）であり、抗体Ａｂ２１の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＥＩＶＭＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＤＤＳＡＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号４１１）である。
【１００２】
抗体Ａｂ５２の重鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＡＤＤＳＳＧＹＰＬＧＬＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号４１２）であり、抗体Ａｂ５２の軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列は、ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＶＮＳＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号４１３）である。
【１００３】
2020063268.tif 000011
【１００４】
2020063268.tif 000012
【１００５】
Ａｂ２１及びＡｂ５２結合の特性評価
ＴＲＥＭ２抗体の最初の特性評価は、樹状細胞及び他の初代ヒトまたはマウス免疫細胞上で発現されたＴＲＥＭ２に結合する能力を決定することを含む。細胞を採取し、９６ウェルプレートに１０５／ｍｌでプレーティングし、洗浄し、氷中で１時間、１０〜５０ｕｇ／ｍｌのＭａｂを含有する１００ｕｌのＰＢＳ及びＦｃブロッキング試薬中でインキュベーションした。次に、細胞を２回洗浄し、氷中で３０分間、５ｕｇ／ｍｌのＰＥコンジュゲート二次抗体を含有する１００ｕｌのＰＢＳ中でインキュベーションした。細胞を冷ＰＢＳ中で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏで得た。ＭＦＩ値のデータ分析及び計算を、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で実施した。
【１００６】
抗体Ａｂ２１、Ａｂ５２、Ａｂ１６、Ａｂ２０、Ａｂ６６、及びＡｂ６８は、ＦＡＣＳ解析により検出された陽性ＴＲＥＭ２抗体染色が示すように、組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するマウス細胞株（ＢＷＺ  Ｔ２）に結合することを実証した（黒輪郭のヒストグラム）（図３Ａ）。抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、抗体が、ＷＴ（ＴＲＥＭ２＋／＋）骨髄由来マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ、ｍＭａｃ）に結合するが、ＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ、ｍＭａｃｓ）に結合しないことを実証した（図３Ｂ）。抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、組換えヒトＴＲＥＭ２を発現するヒト細胞株（２９３）（図４Ａ）及び初代ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）（図４Ｂ）の両方に結合することを実証した。逆に、抗体Ａｂ４３及びＡｂ６０は、組換えヒトＴＲＥＭ２を発現するヒト細胞株に結合した（図４Ａ）が、初代ヒト樹状細胞に結合しなかった（図４Ｂ）。
【１００７】
ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２により結合された細胞型に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を表４に記載する。結合を、親マウス細胞株（親ｍＴＲＥＭ２細胞株ＢＷＺ）、初代ヒト細胞株（ｈＴＲＥＭ２親細胞株（２９３））、ＴＲＥＭ２欠損の初代マウスマクロファージ（ｍＭａｃｓ  ＫＯ  ＭＦＩ）、及びＴＲＥＭ２欠損の初代マウス樹状細胞（ｍＤＣ  ＫＯ  ＭＦＩ）と比較する。
【１００８】
2020063268.tif 000013
【１００９】
各抗ＴＲＥＭ２抗体の結合親和性を、ＦｏｒｔｅＢｉｏまたはＭＳＤ−ＳＥＴによりＫＤを測定することによって決定した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、上述したように実施した（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，  （２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８）。要約すると、ＩｇＧをＡＨＱセンサー上にオンラインでロードすることにより、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を実施した。センサーを、３０分間アッセイ緩衝液中、オフラインで平衡化し、次に、ベースライン確立のために６０秒間オンラインで監視した。ロードされたＩｇＧを有するセンサーを、５分間１００ｎＭの抗原に曝露し、次に、オフレート測定のために、５分間アッセイ緩衝液に移した。１：１結合モデルを使用して、動態を解析した。
【１０１０】
平衡親和性測定を、上述したように実施した（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，  （２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８）。５０ｐＭで一定に保たれた抗原を含むＰＢＳ＋０．１％ＩｇＧ不含ＢＳＡ（ＰＢＳＦ）中で、溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を実施し、１０ｎＭで開始する抗体の３〜５倍の連続希釈物とインキュベーションした。抗体（ＰＢＳ中の２０ｎＭ）を、４℃で一晩、または、３０分間室温で、標準的な結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレート上にコーティングした。次に、プレートを７００ｒｐｍで振とうしながら３０分間ブロックし、続いて、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄を行った。ＳＥＴサンプルを適用し、７００ｒｐｍで振とうしながら、１５０秒間プレート上でインキュベーションし、続いて、１回洗浄を行った。プレート上で捕捉された抗原を、３分間プレート上でインキュベーションすることにより、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍＬのスルホタグ標識ストレプトアビジンで検出した。プレートを、洗浄緩衝液で３回洗浄し、次に、界面活性剤を含む１×のＲｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔを使用して、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで読み取った。パーセント遊離抗原を、Ｐｒｉｓｍで滴定された抗体の関数としてプロットし、二次方程式に適合させてＫＤを得た。スループットを向上させるために、ＳＥＴ試料調製を含むＭＳＤ−ＳＥＴ実験を通して、自動液体分注機を使用した。
【１０１１】
表５は、抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の、ヒトＴＲＥＭ２Ｆｃ融合タンパク質（ｈＴＲＥＭ２−Ｆｃ）、ヒト単量体ＨｉｓタグＴＲＥＭ２タンパク質（ｈＴＲＥＭ２−ＨＩＳ）、マウスＴＲＥＭ２Ｆｃ融合タンパク質（ｍＴＲＥＭ２−Ｆｃ）への結合親和性（ＫＤ）を表す値を記載する。
【１０１２】
2020063268.tif 000014
【１０１３】
実施例２：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２の二重特異性抗体による樹状細胞におけるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）応答の正常化及び低減
骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を、ＬＰＳ、ＣｐＧ  ＤＮＡ、及びザイモサンなどのＴＬＲリガンドで１６時間培養することにより刺激する。サイトカインＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、及びＴＮＦの分泌を評価するために、馴化培地を収集し、ＥＬＩＳＡアッセイを実施する。活性ＴＲＥＭ２を有さないＢＭＤＣ細胞は、刺激後にＴＲＥＭ２を活性化したＢＭＤＣ細胞よりも有意に多くのＩＬ−１２ｐ７０及びＴＮＦを分泌することがあると考えられている。さらに、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体はＩＬ−１２ｐ７０及びＴＮＦの発現レベルを低減させることになると考えられている。部分的に不活性なＴＲＥＭ２を有することになる野生型由来及びＴＲＥＭ２−ヘテロ接合型マウス由来の骨髄由来樹状細胞は、サイトカインＩＬ−１２ｐ７０及びＴＮＦの発現レベルならびにアゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体によるそれらの調節を決定するための陽性対照として機能するであろう。
【１０１４】
製造者のプロトコールに従い、マウスＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＴＮＦ、ならびにＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及びＶｅｒｉＫｉｎｅ  Ｍｏｕｓｅ  ＩＦＮ−ｂ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（ＰＢＬ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｓｏｕｒｃｅ）を使用して、培養上清中のサイトカイン濃度を決定する。定量的ＲＴ−ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）により、これらのサイトカインに対するｍＲＮＡのレベルも測定する。製造者のプロトコールに従い、ＲＮｅａｓｙ  ｐｌｕｓ  ｍｉｎｉ  ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用することにより、全ＲＮＡを調製し、オリゴｄＴプライマーを使用してＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で逆転写する。製造者のプロトコールに従い、Ｐｏｗｅｒ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及び７９００ＨＴ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、定量的ＰＣＲを実施する。ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、及びＴＮＦプライマーの配列は、記載されている通りである。（例えば、Ｈａｍｅｒｍａｎ，  ＪＡ，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１２．  ４２：  １７６−１８５）
【１０１５】
実施例３：ＢＭＤＣの、アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体により抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力の正常化及び低減
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体は、骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）の、抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導する能力を低減及び正常化させることがあると考えられている。
【１０１６】
ＢＭＤＣにより誘導されるオボアルブミン（ＯＶＡ）特異的Ｔ細胞応答は、ＣＦＳＥ希釈により決定できる。培養の６日後に、ＭＡＣＳによりＢＭＤＣを単離し、４時間、ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、ＯＶＡ（２または０．５ｍｇ／ｍＬ）及びＣｐＧ  ＤＮＡ（１００または２５ｎＭ）を含む丸底９６ウェルプレートの１ウェル当たり１×１０４細胞でプレーティングする。Ｄｙｎａｌ  Ｍｏｕｓｅ  ＣＤ４  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用することにより、ＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウスの脾臓及びリンパ節由来のＣＤ４Ｔ細胞を単離し、ＣＦＳＥ（最終０．８ｍＭ）で染色する。４時間のＤＣ培養の後、１×１０５のＣＦＳＥ標識ＣＤ４  ＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞を、各ウェルに添加し、７２時間インキュベーションする。培養後、細胞を、抗ＣＤ４モノクローナル抗体で染色し、ゲーティングされるＣＤ４  ＯＴ−ＩＩ  Ｔ細胞のＣＦＳＥ希釈を検出するために、フローサイトメトリーを実施する。分裂の割合及び分裂指数を計算するデータ解析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）で実施する（Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１２．  ４２：  １７６−１８５）。
【１０１７】
実施例４：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体によるマクロファージにおけるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）応答の正常化及び低減
骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）または初代腹腔マクロファージ応答は、ＴＲＥＭ２の欠損により、ＴＬＲシグナル伝達に変わる（Ｔｕｒｎｂｕｌｌ，  ＩＲ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６；  １７７：３５２０−３５２４）。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体は、マクロファージのＴＬＲ応答を低減及び正常化することがあると考えられている。
【１０１８】
初代マクロファージを誘発するために、マウスを、腹腔内注射により１．５ｍｌの２％のチオグリコレート培地で処理し、次に、細胞を、腹腔洗浄により単離する。ＢＭＤＭを生成するために、１０％の仔ウシ血清、５％のウマ血清、及び６ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＣＳＦ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）が補充されたＤＭＥＭで、全骨髄を培養する。細胞を５〜６日間培養し、接着細胞を、ＰＢＳ中の１ｍＭのＭＥＤＴＡで分離する。細胞を市販の抗体：抗ＣＤ１１ｂ、抗ＣＤ４０、抗ＧＲ１（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、及びＦ４／８０（Ｃａｌｔａｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で染色する。
【１０１９】
ＢＭＤＭをリプレーティングし、３７℃で４時間接着させた、次に、ＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）、ザイモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、及びＣｐＧ  １８２６  ＤＮＡ（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入）などのＴＬＲアゴニストを添加する。刺激の２４時間後に、細胞培養上清を収集し、ＩＦＮ−ａ４、ＩＦＮ−ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ７０、及びＴＮＦサイトカインのレベルを、ＥＬＩＳＡまたはサイトメトリービーズアレイ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｋｉｔ）により測定する。
【１０２０】
実施例５：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体による骨髄由来骨髄前駆細胞における抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の誘導
骨髄由来骨髄前駆細胞は、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体での処理及び１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）での刺激後に、アポトーシス細胞で共培養することにより、または、同様の刺激により、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の増加を示すことがあると考えられている。
【１０２１】
骨髄由来骨髄前駆細胞の単離を、次のように実施する。後肢の脛骨及び大腿骨の髄腔由来の骨髄細胞を、成体６〜８週齢雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ、スルツフェルド）から単離する。赤血球の除去を、低張溶液での溶解により実施する。７５ｃｍ２の培養フラスコ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）中の、１０％のウシ胎児血清（Ｐａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）及び１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を含有するＤＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で、細胞を培養する。２４時間後に、非接着細胞を収集し、新しい７５ｃｍ２の培養フラスコに再播種する。培地を５日後に交換し、細胞をさらに１０〜１１日間培養する。残りの細胞は、骨髄由来骨髄前駆細胞であり、ＴＲＥＭ２ウイルスを形質導入される。次に、形質導入された細胞を、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体及びＬＰＳの存在下及び不存在下の両方で、馴化培地中のＩＬ−１０のレベルについて試験する。上清を２４時間後に収集し、細胞から放出されるＩＬ−１０のレベルを、製造者の使用説明書に従い、ＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡ（ＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＭ  ｍｏｕｓｅ  ＩＬ−１０、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により決定する（ＪＥＭ（２００５），  ２０１；  ６４７−６５７；及びＰＬｏＳ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  （２００４），  ４  ｜  Ｉｓｓｕｅ  ４  ｜  ｅ１２４）。
【１０２２】
実施例６：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体による、骨髄細胞系列由来の細胞中のアポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、及び病原性タンパク質の貪食の誘導
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体は、単球及びミクログリアなどの骨髄細胞系列由来の細胞中で、アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、ならびに、Ａベータペプチド、アルファシヌクレインタンパク質、Ｔａｕタンパク質、ＴＤＰ−４３タンパク質、プリオンタンパク質、及びハンチンチンタンパク質などの病原性タンパク質の貪食を誘導することがあると考えられている。
【１０２３】
単球を、成体Ｃ５７ＢＬ／６マウスから収集した末梢血から単離する。低張溶解緩衝液により赤血球を枯渇させる。培養ディッシュ上、１０％ウシ胎児血清（Ｐａｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に、細胞をプレーティングする。細胞を、１０％のＣＯ２中３７℃で数時間培養する。トリプシン処理後、接着細胞を収集し、貪食実験に使用する。
【１０２４】
ミクログリア細胞を、生後３日目〜５日目（Ｐ３〜Ｐ５）のＣ５７ＢＬ／６マウスの脳から調製する。簡単に言うと、髄膜を機械的に除去し、細胞を粉砕によって解離し、コンフルエントなグリア単層を形成するために、１４日間、１０％のＦＣＳ（ＰＡＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ）、１％のグルコース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、１％のＬ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）、及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）が補充された基礎培地（ＢＭＥ；ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）で培養する。ミクログリア細胞を収集するために、培養物を２時間ロータリーシェーカー（２００ｒｐｍ）で振とうする。付着したアストロサイトを、免疫組織化学に使用する。分離されたミクログリア細胞を、１時間通常の培養ディッシュに播種し、次に、全ての非接着細胞を取り出して廃棄する。単離されたミクログリア細胞の純度は、ＣＤ１１ｂに対する抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いるフローサイトメトリー分析で測定した時、約９５％である。ミクログリア細胞を基礎培地で培養する。
【１０２５】
オリゴデンドロサイト（すなわち、ニューロン）及びニューロン富化細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス胚（Ｅ１５−１６）の脳から調製する。簡単に言うと、脳組織を、単離して機械的に分散し、０．０１ｍｇ／ｍｌのポリ−Ｌ−オルニチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）及び１０μｇ／ｍｌのラミニン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でプレコーティングされた培養ディッシュに播種する。２％のＢ−２７サプリメント（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）、１％のグルコース（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、及び１％のＦＣＳ（ＰＡＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ）が補充されたニューロン馴化培地（ＢＭＥ；ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）で、細胞を培養する。形態学的に成熟したオリゴデンドロサイトを得るために、細胞を５〜１０日間培養する。
【１０２６】
アポトーシスニューロン、神経組織破片、非神経組織破片、細菌、他の異物、及び病原性タンパク質の貪食アッセイを行うために、ミクログリアに、ｓｈ−ＴＲＥＭ２  ＲＮＡ、ｓｈ−対照ＲＮＡ、ｗＴＲＥＭ２、ＧＦＰ１対照、ｍｔＤＡＰ１２−ＧＦＰ、及びＧＦＰ２対照ベクターを形質導入する。形質導入後、ＲＮＡ干渉によるＴＲＥＭ２の効果的なノックダウンを達成するために、ミクログリアを７２時間培養する。ニューロンを５〜１０日間培養し、次に、アポトーシスを誘導するために、オカダ酸を３時間かけて３０ｎＭの終濃度で添加する。神経細胞膜をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ  ＣＭ−ＤｉＩ膜色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で標識する。インキュベーション後、アポトーシスニューロンまたは貪食の他の標的を２回洗浄し、１：２０のエフェクター／標的比の形質導入されたミクログリア培養物に添加する。アポトーシスニューロンの添加の１及び２４時間後に、貪食されたニューロン細胞膜を有するミクログリアの数を、共焦点蛍光顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）で計数する。アポトーシス細胞を、倍率６０倍で、３つの異なる領域において計数する。貪食量を、フローサイトメトリーで確認する。さらに、アポトーシスニューロンの添加の２４、４８、または７２時間後に、細胞を収集し、サイトカインのＲＴ−ＰＣＲに使用する。
【１０２７】
マイクロスフェアビーズまたは細菌貪食アッセイを行うために、ミクログリアに、ＴＲＥＭ２発現ベクターまたはＧＦＰ対照ベクターを形質導入する。次に、細胞を、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体で処理する。２４時間後に、１．００μｍの赤色蛍光マイクロスフェアビーズ（Ｆｌｕｏｒｅｓｂｒｉｔｅ  Ｐｏｌｙｃｈｒｏｍａｔｉｃ  Ｒｅｄ  Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．）または蛍光標識細菌を、１時間かけて添加する。ミクログリアによるマイクロスフェアビーズまたは蛍光標識細菌の貪食を蛍光顕微鏡で分析する。さらに、ミクログリアを培養プレートから収集し、フローサイトメトリーにより分析する。貪食ビーズを有するミクログリアの割合を決定する。貪食が実験毎に異なるので、貪食の相対的な変化も決定する。アゴニスト抗体と培養されたミクログリア及び対照抗体と培養されたミクログリアの間の貪食との相対的変化として、データを示す。
【１０２８】
炎症性遺伝子転写物の分析用のＲＴ−ＰＣＲを行うために、ミクログリアに、ＴＲＥＭ２ベクターまたはＧＦＰ１対照ベクターを形質導入する。次に、細胞を、ディッシュ上で培養し、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体で処理する。２４、４８、及び７２時間後に、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して、ＲＮＡをミクログリアから単離する。ｓｈ−ＴＲＥＭ２  ＲＮＡ、ｓｈ−対照ＲＮＡ、ｗＴＲＥＭ２、ＧＦＰ２、ｍｔＤＡＰ１２−ＧＦＰ、及びＧＦＰ１ベクターを形質導入したミクログリアから、ＲＮＡをさらに収集し、４８時間、アポトーシスニューロンと共培養する。
【１０２９】
次に、ＲＮＡの逆転写を実施する。ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎによる定量的ＲＴ−ＰＣＲを、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ５７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で実施する。ＧＡＰＤＨの増幅を、サンプルの正規化に使用する。増幅プロトコールは、ＧｅｎｅＡｍｐ  ５７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン１．３）に従った。ＧＡＰＤＨ、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１、ＮＯＳ２、及びＴＧＦ−ベータ転写物の検出のために、次のフォワードプライマー及びリバースプライマーを終濃度２００ｎＭで使用した。
ＧＡＰＤＨフォワードプライマー：５’−ＣＴＣＣＡＣＴＣＡＣＧＧＣＡＡＡＴＴＣＡＡ−３’（配列番号４１６）、及びＧＡＰＤＨリバースプライマー：５’−ＧＡＴＧＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＡＴＴＣＴＣＧ−３’（配列番号４１７）；
ＴＮＦ−αフォワードプライマー：５’−ＣＣＧＴＣＡＧＣＣＧＡＴＴＴＧＣＴＡＴＣＴ−３’（配列番号４１８）、及びＴＮＦ−αリバースプライマー：５’−ＡＣＧＧＣＡＧＡＧＡＧＧＡＧＧＴＴＧＡＣＴＴ−３’（配列番号４１９）；
ＩＬ−１αフォワードプライマー：５’−ＡＣＡＡ−ＣＡＡＡＡＡＡＧＣＣＴＣＧＴＧＣＴＧ−３’（配列番号４２０）、及びＩＬ−１αリバースプライマー：５’−ＣＣＡＴＴＧＡＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＴＴＴＣＡ−３’（配列番号４２１）；
ＮＯＳ２フォワードプライマー：５’−ＧＧＣＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＴＣＴＡＣＧＴＴＣ−３’（配列番号４２２）、ＮＯＳ２リバースプライマー：５’−ＴＡＣＣＴＣＡＴＴＧＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴ−３’（配列番号４２３）；ならびに、
ＴＧＦ−β１フォワードプライマー：５’−ＡＧＧＡＣＣＴＧＧＧＴＴＧＧＡＡＧＴＧＧ−３’（配列番号４２４）、及びＴＧＦ−β１リバースプライマー：５’−ＡＧＴＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＧＣＣＣＴＴＧ−３’（配列番号４２５）。
【１０３０】
アミロイド貪食アッセイを行うために、ＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒ（商標）  ６４７（Ａｎａｓｐｅｃ）−Ａｂｅｔａ−（１−４０）を、Ｔｒｉｓ／ＥＤＴＡ（ｐＨ８．２）に２０ｍＭで再懸濁し、次に、凝集を促進するために、３７℃、３日間、暗所でインキュベーションした。凝集した蛍光標識ベータペプチドの添加に先立って、低血清（インスリンが補充された０．５％のＦＢＳ）、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＦＮｃ（１００ユニット／ｍｌ）、及び抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体で、ミクログリア細胞を２４時間前処理する。１００ｎＭの凝集したＨｉＬｙｔｅＦｌｕｏｒ（商標）  ６４７−Ａｂ−（１−４０）の添加の５時間後に、フローサイトメトリー分析により、アミロイド貪食及びＴＲＥＭ２の表面発現を決定する（ＡＳＮ  ＮＥＵＲＯ  （２０１０）  ２（３）：  １５７−１７０）。他の病原性タンパク質の貪食を、同様の仕方で行う。
【１０３１】
実施例７：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体によるＥＲＫ活性化の誘導
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体は、ＥＲＫ活性化を誘導することがあると考えられている。
【１０３２】
ミクログリアに、ＴＲＥＭ２ベクターを形質導入し、２×１０５の細胞を、１時間、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体に曝露する。刺激後、ウェスタンブロット分析のために、細胞を還元サンプル緩衝液に溶解させる。ＥＲＫのリン酸化及びＥＲＫの総量を、それぞれウェスタンブロット分析による抗ホスホ−ＥＲＫ抗体及び抗−ＥＲＫ抗体（両方ともＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製）を用いる免疫検出により決定する（ＪＥＭ  （２００５），  ２０１，  ６４７−６５７）。
【１０３３】
実施例８：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体による、ミクログリア、マクロファージ、及び樹状細胞における、ＣＣＲ７、ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走、の誘導
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体が、ミクログリア細胞、マクロファージ、及び樹状細胞において、ＣＣＲ７、ならびにＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１への遊走、を誘導することがあると考えられている。
【１０３４】
ミクログリア細胞に、ＴＲＥＭ２ベクターまたはＧＦＰ１対照ベクターを形質導入する。次に、形質導入されたミクログリア細胞を、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／若しくはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体または対照抗体のいずれかと培養する。７２時間後に細胞を収集し、ＣＣＲ７特異的抗体で免疫標識し、フローサイトメトリーで分析する。
【１０３５】
増加したＣＣＲ７発現の任意の機能的結果を決定するために、走化性アッセイを実施する。ミクログリア細胞を、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体で、ＴＲＥＭ２を介して刺激し、２チャンバーシステムに入れる。ケモカインリガンドＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１へ遊走するミクログリア細胞の数を定量化する（ＪＥＭ  （２００５），  ２０１，  ６４７−６５７）。
【１０３６】
走化性アッセイのために、ミクログリア細胞を、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体に曝露し、１μｇ／ｍｌのＬＰＳで処理する。下部チャンバー内に１００ｎｇ／ｍｌのＣＣＬ１９またはＣＣＬ２１（両方ともＰｅｐｒｏＴｅｃｈ製）を含む４５０μｌの培地を含有するトランスウェルシステム（３μｍのポアフィルター；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の上部チャンバーに、ミクログリアを移す。１時間のインキュベーション期間の後、下部チャンバーへ遊走しているミクログリア細胞の数を、顕微鏡で３つの独立した領域で計数する（ＪＥＭ  （２００５），  ２０１，  ６４７−６５７）。
【１０３７】
実施例９：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体による、ミクログリア、マクロファージ、及び樹状細胞におけるＦ−アクチンの誘導
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体は、ミクログリア細胞、マクロファージ、及び樹状細胞において、Ｆ−アクチンを誘導することがあると考えられている。
【１０３８】
ＴＲＥＭ２を形質導入されるまたはＴＲＥＭ２を発現するミクログリア及び目的の他の細胞を、培養ディッシュに添加し、次に、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／若しくはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体または対照抗体に曝露する。細胞を固定し、ブロックし、次に、１時間後にＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６コンジュゲートファロイジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で染色し、Ｆ−アクチンを蛍光色素で標識する。４０×の対物レンズを備えた共焦点レーザー走査顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）により、イメージを収集する（ＪＥＭ  （２００５），  ２０１，  ６４７−６５７）。
【１０３９】
実施例１０：アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体による、破骨細胞産生の誘導及び破骨細胞形成速度の増加
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体は、破骨細胞産生を誘導し、破骨細胞形成速度の増加することがあると考えられている。
【１０４０】
破骨細胞または骨髄由来単球／マクロファージ（ＢＭＭ）前駆細胞を産生するＲＡＷ２６４．７細胞を、１０％のＦＢＳ（Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、米国ジョージア州アトランタ）及びペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）が補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）または別の適切な培地で維持する。ＦＬＡＧエピトープがＮ末端に付加されたＴＲＥＭ２Ｂ  ｃＤＮＡを、ＩＲＥＳの上流のレトロウイルスベクターｐＭＸｐｉｅに挿入し、続いて、ｅＧＦＰ  ｃＤＮＡ配列を挿入する。製造者のプロトコールに従い、Ｆｕｇｅｎｅ  ６（Ｒｏｃｈｅ）を使用して、細胞にｐＭＸｐｉｅ−ＦＬＡＧ  ＴＲＥＭ２Ｂをトランスフェクションする。細胞を、２μｇ／ｍｌのピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ）で選択する。フローサイトメトリーを使用することにより、安定なピューロマイシン耐性クローンを、抗ＦＬＡＧ  Ｍ２モノクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ）についてスクリーニングし、次に、サブクローニングし、ピューロマイシン選択培地で維持する。
【１０４１】
ＴＲＥＭ２Ｂを発現するＲＡＷ２６４．７細胞を、１０％のＦＢＳ、ペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミン、５０ｎｇ／ｍｌのＲＡＮＫＬ、及び２０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦが補充されたα−ＭＥＭ培地中に３０００細胞／ウェルを含む９６ウェルプレートに播種する。培地を３日毎に交換し、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体に曝露し、多核性（少なくとも３つの核）ＴＲＡＣＰ＋破骨細胞を、光学顕微鏡で計数してスコアリングする。複雑性及びサイズを決定するために、破骨細胞を、核の数により計数する（＞１０または３〜１０の核）。Ｉｍａｇｅ  Ｊ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＩＨ）を使用することにより、破骨細胞の表面積も測定する。加えて、破骨細胞遺伝子の発現レベルを決定する。ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、全ＲＮＡを、異なる時点で破骨細胞形成培養物から抽出する。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用する第一鎖ｃＤＮＡ合成の後、Ｎｆａｔｃ１、Ａｃｐ５、Ｃｔｓｋ、Ｃａｌｃｒ、及びＣｃｎｄ１に対し、リアルタイム定量ＰＣＲ反応を実施する。標的ｍＲＮＡ発現の相対定量を計算し、シクロフィリンの発現に対して正規化し、（標的遺伝子のｍＲＮＡ／シクロフィリンのｍＲＮＡ）３×１０６として表す（Ｊ．  ＯＦ  ＢＯＮＥ  ＡＮＤ  ＭＩＮＥＲＡＬ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ  （２００６），  ２１，  ２３７−２４５；  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１２；  １８８：２６１２−２６２１）。
【１０４２】
実施例１１：全動物におけるＥＡＥ及びクプリゾンからのインビボ保護
成体７〜９週齢雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手）に、不完全フロイントアジュバント（Ｄｉｆｃｏ）中の１００μｇのミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチド３５〜５５（アミノ酸ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号４１５）；Ｓｅｑｌａｂ）及び１ｍｇのヒト型結核菌Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ）を含有する２００μｌの接種物を尾の付け根の両側に注射する。百日咳毒素（２００ｎｇ；Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、免疫後０日目及び２日目に注射する。臨床徴候を、次のようにスコアリングする。０，臨床徴候なし；１，完全な跛行；２，完全な跛行及び異常歩行；３，片方の後肢不全対麻痺；４，完全な後肢不全対麻痺；ならびに、５，前肢及び後肢の麻痺または瀕死。
【１０４３】
１４日目に疾患発症したマウス（１以上の臨床スコア）のみを実験に使用する。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体を、最初の臨床症状の日または他の任意の所望の時に、ＥＡＥ罹患マウスに腹腔内または静脈内注射する（ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  （２００７）  ４（４）：  ｅ１２４）。
【１０４４】
若年または老年の野生型（ＷＴ）マウスに、４、６または１２週間、０．２％のクプリゾン（ＣＰＺ）粉末シュウ酸ビス（シクロヘキシリデンヒドラジド）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する標準食餌（Ｈａｒｌａｎ）を与える。組織学的及び免疫組織化学分析のために、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）でマウスを灌流した後に、脳を取り出し、２４時間、４％のＰＦＡ中で固定し、続いて、２４〜４８時間、３０％のスクロース中に浸漬する。ミエリンの完全性及び損傷ならびに細胞増殖を評価するため、炎症部またはマウス脳を、抗ＭＢＰ（１：１００；Ａｂｃａｍ、ａｂ７３４９）、−ｄＭＢＰ（１：２０００；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ａｂ５８６４）、−βＡＰＰ（１：１００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、５１−２７００）、−ＳＭＩ−３１（１：１０００；Ｃｏｖａｎｃｅ、ｓｍｉ−３１Ｒ）、−Ｉｂａ１（１：６００；和光純薬工業株式会社、０１９−１９７４１）、−ＢｒｄＵ（１：２５０；Ａｂｃａｍ、ａｂ１８９３）、−ＧＦＡＰ（１：２００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１３−０３００）、−ｉＮＯＳ（１：１００；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、６１０３２９）、−ＬＰＬ（１：４００、Ｇ．Ｏｌｉｖｅｃｒｏｎａ博士より）及び−ＭＨＣ  ＩＩ（１：１００；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、５５３５４９）で染色する。抗体の行動への影響では、透明なポリスチレンエンクロージャー及びコンピュータ化されたフォトビーム測定器を使用して、マウスを、歩行活動について分析する。経過時間、移動距離、及びエントリーを含む情動性の指標共に、一般的な活動変数（全歩行運動、垂直立ち上がり）を分析する。バランス（棚及び台）、強度（反転スクリーン）、強調（ポール及び傾斜スクリーン）、ならびに動きの開始（歩行開始）を評価するために、一連の感覚運動試験を実施する。ロータロッドプロトコールを使用して、運動強調及びバランスを研究する（Ｃａｎｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  （２０１５）１２９（３）：４２９−４７）。
【１０４５】
実施例１２：外傷性脳損傷の樹立された動物モデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的使用の特性評価
外傷性脳損傷の樹立された動物モデルにおいて、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的有用性を試験する（Ｔａｎａｋａ，  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２３１  ４９−６０）。
【１０４６】
例えば、ミクログリア及びアストロサイトの活性化を誘導する外傷性脳損傷のモデルを使用する。８または９週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ  ＷＴマウスまたはプログラニンヘテロ接合マウスを使用する（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓまたはＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入）。滅菌生理食塩水中の塩酸キシラジン（８ｍｇ／ｋｇ）及び抱水クロラール（３００ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により、マウスを麻酔し、続いて、定位固定装置に入れる（Ｎａｒｉｓｈｉｇｅ，  Ｔｏｋｙｏ，  Ｊａｐａｎ）。頭皮に切開を入れ、頭蓋骨を露出させる。骨膜を頭蓋から取り、歯科用ドリルで右大脳半球上に穴をあけ、硬膜を針先で取り出す。０．５ｍｍの外径を有するステンレススチール製のカニューレを、右半球に縦方向の刺し傷を作るために使用する。カニューレを、正中線の１．３ｍｍ外側及び前頂部の１ｍｍ後方に配置し、先端が２ｍｍの深さに達するまで、脳に導入する。次に、カニューレを２ｍｍ尾方（前頂部３ｍｍ）に移動し、次に、最初の位置に対し２ｍｍ吻方に戻す。最終的に、カニューレを脳から取りはずし、頭皮の創傷を縫合する。次に、マウスを、標準的な手順に従い、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体で処理し、次に、組織学及び免疫蛍光染色ならびに行動試験によって分析する。
【１０４７】
実施例１３：毒素誘発損傷後の神経炎症及びニューロン損失のモデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的使用の特性評価
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的有用性を、毒素誘発損傷後の神経炎症及びニューロン損失のモデルにおいて試験する（Ｍａｒｔｅｎｓ，  ＬＨ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１２）  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，  １２２，  ３９５５）。
【１０４８】
３ヵ月齢マウスを、２日間、１日当たりＭＰＴＰ（１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン）（体重１ｇ当たり４μｇ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）またはＰＢＳの４回の腹腔内注射で処理する。マウスを、記載されているように、標準プロトコールに従い、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体で処理し、次に、黒質緻密部（ＳＮｐｃ）におけるドーパミンニューロン及びミクログリアを定量化するために立体解析学的計数を使用して分析する。
【１０４９】
実施例１４：老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病の動物モデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的使用の特性評価
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的有用性を、老化、発作、脊髄損傷、網膜ジストロフィー、前頭側頭型認知症、及びアルツハイマー病の動物モデルにおいて試験する（例えば、Ｂｅａｔｔｉｅ，  ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００２）  Ｎｅｕｒｏｎ  ３６，  ３７５−３８６；  Ｖｏｌｏｓｉｎ，  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００６）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２６，  ７７５６−７７６６；  Ｎｙｋｊａｅｒ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  １５，  ４９−５７；  Ｊａｎｓｅｎ，  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｎａｔ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  １０，  １４４９−１４５７；  Ｖｏｌｏｓｉｎ，  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２８，  ９８７０−９８７９；  Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００１）  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  １８，  ２１０−２２０；  Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ．  Ｄｉｆｆｅｒ．  １４，  １５５２−１５５４；  Ｙｕｎｅ，  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  １１８３，  ３２−４２；  Ｗｅｉ，  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  Ｌｅｔｔ．  ４２９，  １６９−１７４；  Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，  ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ  １１８，  ８７−９３；  Ｎｙｋｊａｅｒ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ｎａｔｕｒｅ  ４２７，  ８４３−８４８；  Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  ＡＷ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０１，  ６２２６−６２３０；  Ｔｅｎｇ，  ＨＫ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００５）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２５，  ５４５５−５４６３；  Ｊａｎｓｅｎ，  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００７）  Ｎａｔ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  １０，  １４４９−１４５７；  Ｖｏｌｏｓｉｎ，  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２８，  ９８７０−９８７９；  Ｆａｎ，  ＹＪ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２７，  ２３８０−２３９０；  Ａｌ−Ｓｈａｗｉ，  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２７，  ２１０３−２１１４；及びＹａｎｏ，  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００９）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２９，  １４７９０−１４８０２）。
【１０５０】
実施例１５：アテローム性動脈硬化症のモデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的使用の特性評価
上述したように、アテローム性動脈硬化症のモデルにおける、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的有用性を試験する（例えば、Ｌａｎｃｅ，  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１１）  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，  ６０，  ２２８５、及びＫｊｏｌｂｙ，  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１２）  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  １２，  ２１３−２２３）。
【１０５１】
実施例１６：感染モデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的使用の特性評価
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的有用性を、感染モデルにおいて試験する。例えば、正常マウスまたはプログラヌリン（ｐｒｏｇｒａｎｕｌｉｎ）ヘテロ接合マウスにおける、リステリアモノサイトゲネスまたは他の感染症を、上述したように使用できる（例えば、Ｙｉｎ，  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００９）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ，  ２０７，  １１７−１２８）。
【１０５２】
実施例１７：炎症性疾患のモデルにおける、アゴニストＴＲＥＭ２、ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的使用の特性評価
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体の治療的有用性を、炎症性疾患のモデルにおいて試験する。例えば、関節リウマチまたは別の炎症性疾患の樹立されたモデルにおいて（Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ  （２０１２）  Ｐｒｏｇ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｓｃｉ．，１０５：２６３−３２０、及びＡｓｑｕｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００９）  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３９：２０４０−４）。
【１０５３】
実施例１８：ＰＩ３Ｋ経路の活性化を示すＤＡＰ１２、ＥＲＫ、及びＡＫＴのリン酸化を誘導する抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体のスクリーニング
細胞（Ｊ７７４、ＲＡＷ２６４．７、ＢＭＭ細胞、または破骨細胞）をＰＢＳ−ＥＤＴＡを含む組織培養ディッシュから取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。Ｊ７７４（４０×１０６）またはＲＡＷ２６４．７細胞（１０×１０６のＢＭＭまたは破骨細胞）を、氷上または他の条件下で２０分間、１０６細胞当たり１μｇの抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／若しくはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体またはアイソタイプ適合対照抗体とインキュベーションする。２０分間、氷冷放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液［５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＴｒｉｔｏｎ−１００、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオライド、１ｍＭのＮａＶＯ、０．２５％のデオキシコール酸ナトリウム、アプロチニン（１μｇ／ｍｌ）、ロイペプチン（１μｇ／ｍｌ）、ペプスタチン（１μｇ／ｍｌ）］に、細胞を溶解させ、続いて、不溶性物質を除去するために、４℃で１０分間、１６，０００ｘｇで遠心分離する。得られる上清を、示された抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫ、またはＡＫＴ）及びプロテインＡアガロースまたはプロテインＧアガロース（Ｓｉｇｍａ）と免疫沈降反応にかける。ビーズを、ＲＩＰＡ緩衝液で広範囲に洗浄し、タンパク質をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分離する。次いで、タンパク質を、記載されるように、ウェスタンブロッティングによりニトロセルロース膜に移し、適切な抗体（リン酸化形態のＤＡＰ１２、ＥＲＫ、またはＡＫＴを特異的に認識する抗体）とインキュベーションし、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（Ｐｉｅｒｃｅ）で視覚化する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，  ３（１２２）：  ｒａ３８）。
【１０５４】
実施例１９：カルシウム流入を誘導する抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体のスクリーニング
ＨＥＰＥＳ含有緩衝液［２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３）、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＣａＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、グルコース（１ｍｇ／ｍｌ）、ウシ血清アルブミン（１ｍｇ／ｍｌ）］で、ＢＭＭ細胞を２回洗浄し、続いて、３７℃で２０分間、０．０５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び１μＭのＩｎｄｏ−１  ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中でインキュベーションする。細胞を、ＨＥＰＥＳ緩衝液で２回洗浄し、次に、抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／若しくはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体（１６μｇ／ｍｌ）または対照抗体（１６μｇ／ｍｌ）で刺激し、分光光度計（ＰＴＬ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）により監視する。Ｉｎｄｏ−１蛍光発光を、製造者の使用説明書に従い、カルシウム（Ｃａ２＋）に変換する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，  ３（１２２）：  ｒａ３８）。
【１０５５】
実施例２０：アポトーシスを予防する抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体のスクリーニング
成熟破骨細胞培養物を、ＲＡＮＫＬ及びＭ−ＣＳＦを含む２４ウェルディッシュで分化させる。４日後、アポトーシスを誘導するために、完全培地を、無血清培地と取り替える。一晩の血清飢餓の間に、ＲＡＮＫＬ、ＰＢＳ、ならびに抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／若しくはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体、またはアイソタイプ適合対照抗体で、細胞を処理する。細胞を、１％のパラホルムアルデヒドで固定し、製造者の使用説明書に従い、ＴＵＮＥＬ−ｂａｓｅｄ  ｋｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で染色する。２０×の倍率を有する、株式会社ニコン  ＴＥ２０００−Ｅ顕微鏡で、アポトーシス核を計数する。結果を、記載されているように、２つのウェルの６つのランダムに選択されたフィールドにおける、アポトーシス細胞の総細胞数に対する割合として表す（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，  ３（１２２）：  ｒａ３８）。同様のアッセイを、初代ミクログリア細胞で実施する。
【１０５６】
実施例２１：破骨細胞分化を誘導する抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体のスクリーニング
ＢＭＭ細胞を、３連ウェルのプレート上に播種し、ＲＡＮＫＬ、Ｍ−ＣＳＦ、ならびに、抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／若しくはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体、またはアイソタイプ適合対照モノクローナル抗体で処理する。大きい多核細胞が見えるようになるまで、培地を３日毎に交換する。培養３〜５日後、細胞を、１０分間、ＰＢＳ中の３．７％のホルムアルデヒドで固定する。次に、プレートをＰＢＳ中で２回洗浄し、５０％のアセトン及び５０％のエタノールの溶液中で３０秒間インキュベーションし、ＰＢＳで洗浄する。Ｓｉｇｍａ製キット（製品４３５）を用いて、酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）について、細胞を染色する。次に、多核（２つ以上の核）ＴＲＡＰ陽性細胞を、記載されているように、光学顕微鏡で計数する（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，  ３（１２２）：  ｒａ３８）。
【１０５７】
実施例２２：免疫／ミクログリア制御モジュール内の遺伝子発現におけるＴＲＥＭ２／ＴＹＲＯＢＰに依存する変化を正常化する抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体のスクリーニング
双方ともに細胞内免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）モチーフを欠いている、全長バージョンのＴｙｒｏｂｐまたは短縮型バージョンのＴｙｒｏｂｐのいずれかを過剰発現するために、マウス胚性幹細胞由来のミクログリア細胞を、レンチウイルスベクターで遺伝子修飾する。ミクログリア細胞はまた、ＴＲＥＭ２に関しヘテロ接合性であるマウス胚性幹細胞に由来する。ＴｙｒｏｂｐまたはＴＲＥＭ２の摂動に応答したゲノム全体の遺伝子発現変化を評価するために、遺伝子発現データを、（１）ビヒクル、（２）全長Ｔｙｒｏｂｐ、若しくは（３）ドミナントネガティブな短縮型Ｔｙｒｏｂｐ、を過剰発現する、または、（４）ｓｉＲＮＡなどのＴＲＥＭ２に対するノックダウン構築物を過剰発現する、マウスミクログリア細胞株、及びＴＲＥＭ２に関しヘテロ接合である細胞のＲＮＡ配列決定から得る。全長Ｔｙｒｏｂｐ及び短縮型Ｔｙｒｏｂの過剰発現のための約２，６３８及び３，４１５の差次的に発現される遺伝子をそれぞれ同定する（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｃｅｌｌ  １５３，  ７０７−７２０）。完全なＴｙｒｏｂｐを過剰発現するミクログリア由来の差次的に発現される遺伝子の約９９％を、対照ビヒクルと比較して下方制御する。例えば、液胞／自己貪食に関連する６５８の遺伝子、ならびにＲＮＡ代謝及び細胞周期の有糸分裂に関与する遺伝子を、活性Ｔｙｒｏｂｐにより下方制御するが、ドミナントネガティブな短縮型Ｔｙｒｏｂｐを発現する細胞において上方制御する。逆に、ドミナントネガティブな短縮型Ｔｙｒｏｂｐを発現するミクログリアにおいて、液胞／自己貪食経路及びミトコンドリアのためのおよそ２，８５６の遺伝子を選択的に上方制御する。
【１０５８】
ドミナントネガティブな短縮型Ｔｙｒｏｂｐを発現する細胞（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｃｅｌｌ  １５３，  ７０７−７２０），、ＴＲＥＭ２に対するノックダウン構築物を発現する細胞、または、ＴＲＥＭ２に関しヘテロ接合性である細胞において、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２、抗ＤＡＰ１２、及び／またはＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２二重特異性抗体を、正常なミクログリア細胞及び完全なＴｙｒｏｂｐを過剰発現するミクログリア細胞で観察されるものに類似する遺伝子発現プロファイルを引き出す能力に関し、スクリーニングする。遺伝子発現ネットワークを変化させることができる抗体を選択する。
【１０５９】
実施例２３：ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト樹状細胞（ＤＣ）上にＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を誘導する
抗ＴＲＥＭ２抗体の、ＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を修飾する能力を評価するために、プレート結合抗体及び可溶性抗体の両方を、樹状細胞（ＤＣ）とインキュベーションし、ＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を測定した。
【１０６０】
ＰＢＳ中の２または５ｕｇ／ｍｌの抗体を、１２ウェルプレート中、４℃で一晩培養した。ウェルを、翌日ＰＢＳで３回洗浄した。５日目に、未成熟ヒトＤＣを採取し、１ウェル当たり１００万細胞でプレーティングし、サイトカインの不存在下、５％のＣＯ２、３７℃でインキュベーションした。４８時間後に、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏで、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＬＩＮ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＦＡＣＳ解析を実施した。ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７を用いて、データ解析を実施した。ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ−ＤＲ＋ＬＩＮ−細胞集団上のＣＤ８３及びＣＤ８６のレベルを評価した。
【１０６１】
あるいは、５日目の未成熟ヒト樹状細胞を、サイトカインを含まない培地のＵ底非ＴＣ処理９６ウェルプレートに、１ウェル当たり１００，０００細胞でプレーティングした。２０ｕｇ／ｍｌのＬＰＳ除去抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いるまたは用いない５ｕｇ／ｍｌの抗体を添加した。ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＬＩＮ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対するＦＡＣＳ解析を、上述したように抗体添加の４８時間後に実施した。
【１０６２】
プレート結合ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、アイソタイプ対照抗体Ａｂ８８と比較して、ＣＤ８３＋ＣＤ８６＋ＤＣの頻度を増加させた（図５Ａ）。双方ともに単独の及び抗ヒト二次抗体と架橋している可溶性抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、アイソタイプ対照抗体（Ａｂ８８）と等価な、ＤＣ上のＣＤ８６の発現を誘導した（図５Ｂ）。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、ヒト樹状細胞上の炎症性表面マーカーＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を誘導するアゴニストとして機能する。
【１０６３】
実施例２４：ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、Ｓｙｋリン酸化を誘導する
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、いくつかの基質をリン酸化し、それにより細胞活性化及び炎症プロセスをもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進することにより、ＴＲＥＭ２の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子である。ヒト及びマウスマクロファージならびに初代ヒト樹状細胞を培養し、細胞抽出物中のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することにより、アゴニストＴＲＥＭ２抗体の、Ｓｙｋ活性化を誘導する能力を決定した。
【１０６４】
骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）、ＷＴマウスＢＭＤＭ、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウスＢＭＤＭ、及び初代ヒト樹状細胞を、１％の血清ＲＰＭＩで４時間飢餓状態にし、次に、ＰＢＳ−ＥＤＴＡで組織培養ディッシュから取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数した。氷上で１５分間、全長アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２、または対照抗体（Ａｂ８９若しくはＡｂ９２）で、細胞をコーティングした。冷ＰＢＳで洗浄した後、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下、示された期間、３７℃で、細胞をインキュベーションした。刺激後、溶解緩衝液（１％（体積／体積）のＮＰ−４０％、５０ＭｍのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％のグリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で、細胞を溶解させ、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｘｇで遠心分離して、不溶性物質を除去した。次に、溶解物を、抗Ｓｙｋ  Ａｂ（ＢＭＤＭの場合Ｎ−１９またはヒトＤＣの場合４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で免疫沈降させた。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で探索した。全ての基質が十分に免疫沈降したことを確認するために、免疫ブロットを抗Ｓｙｋ  Ａｂ（Ａｂｃａｍ、ＢＭＤＭ用）または抗Ｓｙｋ（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣ用）で再探索した。記載されているように、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、視覚化を実施した（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，  ３（１２２）：  ｒａ３８）。
【１０６５】
ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５１は、ＷＴ  ＴＲＥＭ２マウスＢＭＤＭにおいてＳｙｋリン酸化を誘導したが、ＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）細胞において、リン酸化を誘導しなかった（図６Ａ）。抗体Ａｂ２１及びＡｂ５１はまた、ヒトＢＭＤＭ（図６Ａ、右パネル）及び初代ヒト樹状細胞（図６Ｂ）の両方においてＳｙｋリン酸化を誘導した。対照抗体Ａｂ８９及びＡｂ９２は、Ｓｙｋリン酸化を誘導しなかった。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、マクロファージ及び樹状細胞においてＳｙｋリン酸化を誘導するアゴニストとして機能する。
【１０６６】
実施例２５：ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、マウスマクロファージにおいてＤＡＰ１２リン酸化を誘導する
ＴＲＥＭ２は、ＤＡＰ１２を介してシグナル伝達し、下流でＰＩ３Ｋ及び他の細胞内シグナルの活性化をもたらす。マウスマクロファージを培養し、細胞抽出物中のＤＡＰ１２タンパク質のリン酸化状態を測定することにより、アゴニストＴＲＥＭ２抗体の、ＤＡＰ１２活性化を誘導する能力を決定した。
【１０６７】
抗体で刺激する前に、マウス野生型（ＷＴ）骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）ＢＭＤＭを、１％の血清ＲＰＭＩで４時間飢餓状態にした。１５×１０６の細胞を、全長アゴニスト抗体または対照抗体と、１５分間氷中でインキュベーションした。細胞を洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下で、示された期間３７℃でインキュベーションした。刺激後、溶解緩衝液（１％（体積／体積）のＮＰ−４０％、５０ＭｍのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％のグリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で、細胞を溶解させ、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｘｇで遠心分離して、不溶性物質を除去した。細胞溶解物を、第２のＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で免疫沈降させた。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で探索した。膜を剥がし、抗ＤＡＰ１２抗体（Ｃｅｌｌｓ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｄ７Ｇ１Ｘ）で再探索した。ＴＲＥＭ２免疫沈降に使用された各細胞溶解物は、対照Ａｂ（抗アクチン、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）が示すように、同量のタンパク質を含有した。
【１０６８】
ＤＡＰ１２は、ＴＲＥＭ２と共沈し、アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２（図７Ａ）及びＡｂ２１（図７Ｂ）とインキュベーションされたＷＴマクロファージにおいてリン酸化された。逆に、ＤＡＰ１２リン酸化は、抗体Ａｂ２１とインキュベーションされたＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージにおいて観察されなかった（図７Ｂ）。これらの結果は、ＤＡＰ１２がＴＲＥＭ２タンパク質と関連すること、及びアゴニストＴＲＥＭ２抗体がインビトロでＤＡＰ１２リン酸化を誘導できることを実証している。
【１０６９】
実施例２６：ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２への結合について、ＴＲＥＭ２リガンドと競合する
推定上のＴＲＥＭ２リガンドを発現するＥ．ｃｏｌｉ細胞を用いた競合結合アッセイにより、アゴニストＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２上のリガンド結合部位を認識する能力を評価した。
【１０７０】
Ｅ．ｃｏｌｉを、１０ｍｌのＬＢ培地Ｏ／Ｎ中で成長させ、遠心分離により採取し、１０ｍｌのＰＢＳ中で２回洗浄した。次に、Ｅ．ｃｏｌｉを、３０分間７０℃の水浴中でインキュベーションすることにより加熱不活性化した。Ｅ．ｃｏｌｉを、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ  ＤｅｅｐＲｅｄ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１ｕＭの終濃度）で標識し、続いて、１０ｍｌのＰＢＳで３回洗浄し、１ｍｌのＰＢＳ中に１０８／ｍｌの濃度で再懸濁した。競合結合のために、細菌を、１０μｇ／ｍｌの全長アゴニストＴＲＥＭ２抗体と共に、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２発現細胞株（ＢＷＺ）に、またはヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２融合タンパク質を発現するＢＷ細胞株に添加し、氷上で１時間インキュベーションした。ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ標識細菌の、細胞株への結合について、細胞をＦＡＣＳにより分析した。
【１０７１】
ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、Ｅ．ｃｏｌｉ細菌の、ヒト細胞及びマウス細胞の両方への結合を阻害して、抗体のＴＲＥＭ２上のリガンド結合部位への競合的結合を示した（図８）。非アゴニスト対照ＴＲＥＭ２抗体（Ａｂ６６及びＡｂ６８）は、ＴＲＥＭ２を発現するヒト細胞への細菌結合を阻害したが、マウスＴＲＥＭ２への結合を阻害しなかった。
【１０７２】
実施例２７：ＴＲＥＭ２抗体機能研究の要旨
表６は、上記実施例２４〜２６に記載されている機能的研究の結果をまとめたものである。抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）、マウス樹状細胞（ｍＤＣ）、及びマウスマクロファージ（ｍＭａｃ）におけるＳｙｋリン酸化の誘導を実証した。しかし、抗体Ａｂ５２は、ヒト及びマウスＤＣにおける抗体Ａｂ２１と比較して、より高いレベルのリン酸化Ｓｙｋを誘導した。抗体Ａｂ２１がより効果的な結合を実証したが、両方の抗体は、細菌結合のより大きな減少が示すように、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２に結合するリガンドを模倣できた（上記実施例２６を参照のこと）。
【１０７３】
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【１０７４】
実施例２８：ＴＲＥＭ２は、マウスマクロファージからの炎症性サイトカインの分泌を減少させる
炎症性サイトカイン産生におけるＴＲＥＭ２の役割を決定するために、マウス野生型（ＷＴ）、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）、及びＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（Ｈｅｔ）マクロファージを、種々の炎症性メディエーターと培養し、サイトカインレベルを培養上清中で測定した。
ＢＭＤＭを生成するために、野生型（ＷＴ）、ＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＫＯ）、及びＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（Ｈｅｔ）マウス由来の全骨髄を、１０％の仔ウシ血清、５％のウマ血清、及び５０ｎｇ／ｍｌの組換えマウスＣＳＦ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）が補充されたＲＰＭＩで培養した。細胞を５日間培養し、接着細胞をＰＢＳ中の１ｍＭのＥＤＴＡで分離した。ＢＭＤＭを、１０５細胞／ウェルで、９６ウェルプレート上にプレーティングし、３７℃で４時間接着させた。次に、細胞を、０．０１〜１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＰＳ）または０．０１〜１００μｇ／ｍｌ（ザイモサン）の範囲の濃度のＴＬＲアゴニストＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂまたはｔｕｓ  ｅｑｕｉ）またはザイモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）で刺激した。あるいは、ＷＴ、ＫＯ、及びＨｅｔマウスから単離したマクロファージを、１０ｎｇ／ｍｌのサイトカインＩＬ−４または５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γの存在下で培養した。細胞培養上清を、刺激の２４または４８時間後に収集し、製造者のプロトコールに従い、サイトメトリービーズアレイＭｏｕｓｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＤ）を使用することにより、ＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＭＣＰ−１サイトカインのレベルを測定した。
【１０７５】
炎症性メディエーターＬＰＳまたはザイモサンで刺激された野生型（ＷＴ）マクロファージは、ＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージと比較して、より少ない炎症性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＭＣＰ−１を分泌した（図９Ａ）。同様に、メディエーターＩＦＮγで処理されたＷＴ及びＨｅｔ（ＴＲＥＭ２＋／−）マクロファージは、ＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージと比較して、より少ない炎症性サイトカインＩＬ−６及びＴＮＦを産生した（図９Ｂ）。サイトカインＩＬ−４の存在下で培養されたＷＴ、Ｈｅｔ、及びＫＯマクロファージは、同様の低レベルのＩＬ−６及びＴＮＦａを産生した（図９Ｂ）。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージからの炎症性サイトカインの分泌を低減させることがある。
【１０７６】
実施例２９：ＴＲＥＭ２は、マウスマクロファージ上の炎症細胞表面マーカーの発現を減少させる
炎症マーカー発現におけるＴＲＥＭ２の役割を決定するために、マウス野生型（ＷＴ）、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）、及びＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（Ｈｅｔ）マクロファージを、種々の炎症性メディエーターと培養し、表面マーカーＣＤ８６及びＣＤ２０６の発現を測定した。
【１０７７】
ＷＴ、ＫＯ、及びＨｅｔマウスから単離されたマクロファージをプレーティングし、３７℃で４時間接着させ、ＴＬＲアゴニストＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ  ｅｑｕｉ）及びザイモサン（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を、０．０１〜１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＰＳ）または０．０１〜１０μｇ／ｍｌ（ザイモサン）の範囲の濃度で加えた。あるいは、ＷＴ、ＫＯ、及びＨｅｔマウスから単離したマクロファージを、サイトカインＩＬ−４（１０ｎｇ／ｍｌ）またはＩＦＮ−γ（０．５〜５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で培養した。ＣＤ８６及びＣＤ２０６のＦＡＣＳ解析を、４８時間後にＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏで実施した。ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７を用いて、データ解析を実施した。
【１０７８】
炎症性メディエーターＩＦＮ−γ（図１０Ａ）、ＬＰＳ、またはザイモサン（図１０Ｂ）で処理された野生型（ＷＴ）マクロファージは、ＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージと比較して、より低いレベルの炎症性受容体ＣＤ８６を発現したが、より低いレベルの受容体ＣＤ２０６は発現しなかった。同様に、ＩＦＮ−γで処理されたＨｅｔ（ＴＲＥＭ２＋／−）マクロファージは、ＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージと比較して、より低いレベルのＣＤ８６を発現したが、より低いレベルのＣＤ２０６を発現しなかった（図１０Ａ）。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体は、マクロファージ上の炎症性受容体の発現を低減させることがある。
【１０７９】
実施例３０：ＴＲＥＭ２は、マクロファージ及び樹状細胞の生存を増加させる
細胞生存におけるＴＲＥＭ２の役割を評価するために、野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マクロファージ及び樹状細胞を、炎症性メディエーターの存在下で培養し、細胞生存を測定した。
【１０８０】
ＴＲＥＭ２  ＷＴ、Ｈｅｔ、及びＫＯマウス由来のマウス骨髄前駆細胞を、脛骨及び大腿骨髄細胞を冷ＰＢＳでフラッシュすることにより得た。ＰＢＳで１回洗浄した後、ＡＣＫ  Ｌｙｓｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｏｎｚａ）を使用して、赤血球を溶解し、ＰＢＳで２回洗浄し、マクロファージを産生するために５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦまたは樹状細胞を産生するために１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦを示された量含む完全なＲＰＭＩ培地（１０％のＦＣＳ、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、Ｇｌｎ、ｎｅＡＡ）中に０．５×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。Ｍ２型マクロファージでは、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４を、培養された細胞に添加した。Ｍ１型マクロファージでは、５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γを添加した。いくつかの実験では、ＬＰＳまたはザイモサンを、１μｇ／ｍｌ−０．０１ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で５日目に細胞培養物に添加した。組換えサイトカインを、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈから購入した。
【１０８１】
骨髄由来マクロファージの生存率を分析するために、細胞を、上記のように調製し、Ｍ−ＣＳＦで培養した。細胞を、非組織培養処理プレートの、（ルシフェラーゼベースアッセイを使用した生存率分析の場合）９６ウェルプレートに１０５／２００μｌ、または、（トリパンブルー色素排除細胞計数の場合）６ウェルプレートに０．５×１０６／１ｍｌのいずれかでプレーティングした。新しいＭ−ＣＳＦを含有する培地を、３日目に加えた。示された時点で、細胞を、３ｍＭのＥＤＴＡを含むプレートから静かに分離させ、Ｂｕｒｋｅｒチャンバーを使用して計数した。生存細胞のＦＡＣＳ解析のために、マクロファージを、６日間、５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ（＋Ｍ−ＣＳＦ）中で、または、Ｍ−ＣＳＦをさらに３６時間かけて取り除く前の４日間、５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ（−Ｍ−ＣＳＦ）中でのいずれかで培養した。ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して、細胞を染色した。ルシフェラーゼ生存率アッセイのために、段階的濃度の成長因子ＧＭ−ＣＳＦ（樹状細胞）、Ｍ−ＣＳＦ（Ｍ１マクロファージ）、またはＭＣＳＦ＋ＩＬ−４（Ｍ２マクロファージ）において、培養の５日目に、細胞生存率を測定した。細胞を、ＴｏｘＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）と直接インキュベーションし、ルシフェラーゼ活性（発光）を、ＸＹリーダーを使用して読み取った。炎症メディエーターＩＦＮ−γ、ＬＰＳ、またはザイモサンの存在下で培養された生存可能なマクロファージのＦＡＣＳ解析のために、細胞を、５日目に収集し、ＣＤ１１ｂ抗体及びＤＡＰＩを使用して染色した。
【１０８２】
Ｍ−ＣＳＦで７日間培養した後、ＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージよりも、有意に高い数の生存可能な（トリパンブルー色素排除）ＴＲＥＭ２  ＷＴ及びＨｅｔ（ＴＲＥＭ２＋／−）マクロファージを観察した（図１１Ａ）。ＦＡＣＳ解析は、生きた（ＣＤ１１ｂ＋ＤＡＰＩ−）細胞のより高い割合が示すように、６日（＋Ｍ−ＣＳＦ）または４日（−Ｍ−ＣＳＦ）のいずれかの間、Ｍ−ＣＳＦで処理されたＷＴマクロファージが、Ｈｅｔ及びＫＯマクロファージと比較して、生存の増加を示したことを明らかにした（図１１Ｂ）。ルシフェラーゼアッセイのために、成長因子ＧＭ−ＣＳＦ（樹状細胞）、Ｍ−ＣＳＦ（Ｍ１マクロファージ）、またはＭ−ＣＳＦ＋ＩＬ−４（Ｍ２マクロファージ）の存在下で培養されたＷＴ細胞は、成長因子濃度の範囲にわたる、より高い発光度が示すように、ＫＯ細胞よりも生存した（図１１Ｃ）。炎症性メディエーター（ＩＦＮ−γ、ＬＰＳ、またはザイモサン）と培養された野生型マクロファージは、ＣＤ１１ｂ＋生存細胞のより高い割合が示すように、ＴＲＥＭ２  Ｈｅｔ及びＫＯマクロファージよりも高い生存率を有した（図１１Ｄ）。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体は、マクロファージ及び樹状細胞の生存を増加させることがあるが、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体は細胞生存を減少させる可能性がある。
【１０８３】
実施例３１：ＴＲＥＭ２は貪食を調節する
ＴＲＥＭ２シグナル伝達は、肺からの細菌クリアランス及びアポトーシスニューロンの貪食を含む貪食経路に関与する。野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウスマクロファージの、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞及びアポトーシス細胞を貪食する能力を測定することにより、貪食におけるＴＲＥＭ２の役割を評価した。
【１０８４】
ＷＴ及びＴＲＥＭ２  ＫＯ  ＢＭＤＭを、１％の血清ＲＰＭＩで飢餓状態にした、または一晩Ｍ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で培養し続けた。翌日、細胞を、Ｍ−ＣＳＦの存在下または不存在下で、９６ウェルプレート（丸底非組織培養）に２×１０５でプレーティングした。標的細胞（ＣＣＬ１１９）を、０．５μＭのスタウロスポリンと一晩培養して、アポトーシスを誘導した。翌日、細胞を洗浄し、２０ｎｇ／ｍｌのｐＨｒｏｄｏ−ＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した。アポトーシス細胞または生体粒子Ｅ．ｃｏｌｉ（ｐＨｒｏｄｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を加え、細胞を１時間３０分３７℃でインキュベーションした。アッセイを氷上停止させた。冷ＰＢＳで洗浄した後、細胞をＣＤ１１ｂ（ｐａｃｉｆｉｃ  ｂｌｕｅ−ＣＤ１１ｂ、ＢＤ）について染色し、ＦＡＣＳにより解析した。全てのサンプルにおいて、ＢＭＤＭを、ＣＤ１１ｂ染色によりアポトーシス細胞及びビーズと区別し、ゲートを、標的細胞なしで培養されたエフェクター細胞に基づいて設定した。陰性対照では、エフェクター細胞を、サイトカラシンＤ（２μＭ、ＳＩＧＭＡ）を用いた全アッセイ中にインキュベーションした。貪食を、（ＰｈＲｏｄｏ陽性細胞のパーセントまたはＭＦＩ）−（ＰｈＲｏｄｏ陽性サイトカラシンＤ処理陰性対照細胞のパーセントまたはＭＦＩ）として定量化した。
【１０８５】
Ｍ−ＣＳＦと培養された野生型（ＷＴ）マクロファージは、ｐＨｒｏｄｏ＋細胞のより低い割合が示すように、ＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージと比較して、アポトーシス細胞及びＥ．ｃｏｌｉ細胞の貪食をより少なく示した（図１２）。逆に、Ｍ−ＣＳＦなしで培養されたＷＴマクロファージは、ｐＨｒｏｄｏ＋細胞のより高い割合が示すように、ＴＲＥＭ２  ＫＯマクロファージと比較して、アポトーシス細胞及びＥ．ｃｏｌｉ細胞の貪食の増加を示した（図１２）。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体は、Ｍ−ＣＳＦの不存在下での貪食を増強し、Ｍ−ＣＳＦの存在下での貪食を低減することがある。逆に、ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体は、Ｍ−ＣＳＦの存在下での貪食を増強し、Ｍ−ＣＳＦの不存在下での貪食を低減させることができると考えられている。
【１０８６】
実施例３２：ＴＲＥＭ２抗体のエピトープマッピング
ＴＲＥＭ２抗体を、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２全体に及ぶ１５−ｍｅｒまたは２５−ｍｅｒペプチドに結合する能力について試験した。
【１０８７】
直鎖１５−ｍｅｒペプチドを、１４残基の重複を有するヒトまたはマウスＴＲＥＭ２の配列に基づいて合成した。加えて、直鎖２５−ｍｅｒペプチドを、１残基転移のヒトまたはマウスＴＲＥＭ２の配列に基づいて合成した。ＴＲＥＭ２抗体の、合成されたペプチドのそれぞれへの結合を、ＥＬＩＳＡをベースとした方法で試験した。このアッセイでは、ペプチドアレイを、（４℃で一晩）一次抗体溶液とインキュベーションした。洗浄後、ペプチドアレイを、２５℃で１時間、抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ、カタログ番号２０１０−０５）の１／１０００希釈物とインキュベーションした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％のＨ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色現象を測定した。発色現象を、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量化した。
【１０８８】
抗体Ａｂ５２は、全てのペプチドセットにおいて、信頼できる結合を実証した。抗体Ａｂ５２は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２のアミノ酸残基４９〜５７（４９ＡＷＣＲＱＬＧＥＫ５７（配列番号４４４））の間に、Ｎ末端ペプチド領域を認識することが見出された（図１３）。Ａｂ５２により認識されたエピトープ領域は、配列番号１のアミノ酸残基４９〜５７に対応し、ＡＷＣＲＱＬＧＥＫ（配列番号４４４）のアミノ酸配列を有する。
【１０８９】
抗体Ａｂ２１は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２のアミノ酸残基４３〜５０（４３ＨＷＧＲＲＡＷ５０（配列番号４４５））の間に、Ｎ末端ペプチド領域を認識することが見出された。Ａｂ２１により認識されたエピトープ領域は、配列番号１のアミノ酸残基４３〜５０に対応し、ＨＷＧＲＲＡＷ（配列番号４４５）のアミノ酸配列を有する。
【１０９０】
実施例３３：アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２及びＡｂ２１の参照ＴＲＥＭ２抗体との比較
Ｓｙｋリン酸化を誘導する能力を評価すること、及びそれらのＴＲＥＭ２結合領域を決定することにより、参照ＴＲＥＭ２抗体を、アゴニスト抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２と比較した。
【１０９１】
細胞を、細胞１０６個当たり１μｇのＴＲＥＭ２抗体ＭＡＢ１７２９１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはモノクローナルラットＩｇＧ１抗体７８．１８（カリフォルニア大学サンフランシスコ校から入手）でコーティングし、二次抗体（ヤギ抗ラット細胞１０６個当たり１．５μｇ）で架橋することにより刺激した。Ｓｙｋリン酸化を、上記実施例２４に記載されている方法に従い評価した。
【１０９２】
抗体結合領域を評価するために、ヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃを、固定化全長アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１またはＡｂ５２とインキュベーションし、続いて、ＴＲＥＭ２抗体ＭＡＢ１７２９１または７８．１８を加えた。標準サンドイッチフォーマットビニングアッセイ（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，  （２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８を参照のこと）を使用して、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ３８４  ｓｙｓｔｅｍ  （Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州メンロパーク）で、抗体のエピトープビニングを実施した。対照抗標的ＩｇＧを、ＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を非関連ヒトＩｇＧ１抗体でブロックした。次に、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露し、続いて、第２の抗標的抗体に曝露した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのデータ解析ソフトウェア７．０を使用して、データを処理した。抗原会合後の二次抗体によるさらなる結合は、非占有エピトープ（非競合体）を示すが、結合はエピトープブロッキング（競合体）を示さない。
【１０９３】
参照ＴＲＥＭ２抗体ＭＡＢ１７２９１は、ＷＴにおいてＳｙｋリン酸化を誘導したが、ＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）細胞において誘導しなかった。しかし、参照ＴＲＥＭ２抗体７８．１８は、使用された実験条件下で、Ｓｙｋリン酸化を誘導しなかった（図１４）。これは、双方ともにＷＴ  ＴＲＥＭ２マウスＢＭＤＭにおいてＳｙｋリン酸化を誘導できたＡｂ２１及びＡｂ５２と対照的である（図６）。
【１０９４】
参照抗体ＭＡＢ１７２９１は、抗体Ａｂ２１（図１５Ａ）または抗体Ａｂ５２（図１５Ｂ）と、ＴＲＥＭ２に同時結合できた。これらの結果は、アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２が、参照抗体ＭＡＢ１７２９１が結合するのとは異なるＴＲＥＭ２タンパク質領域に結合することを実証する。
【１０９５】
実施例３４：ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂの、自然免疫細胞の生存率を促進する能力の分析
自然免疫細胞（例えば、マクロファージ）における抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２に由来するプレート結合架橋抗ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂフラグメントのアゴニスト機能を評価した。
【１０９６】
野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス骨髄由来マクロファージを、Ｍ−ＣＳＦ及びプレート結合ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂの存在下で培養し、細胞生存率を測定した。
【１０９７】
ＷＴ及びＫＯマウスの骨髄から単離されたマクロファージを、１２．５ｎＭまたは１００ｎＭのいずれかの架橋Ａｂ２１またはＡｂ５２のＦａｂでプレコーティングされた非組織培養処理９６ウェルプレート上にプレーティングした。細胞を、１０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦの存在下で、４８時間培養した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、生存率の分析を実施した。ＧＥＮ５  ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒでプレートを読み取った。
【１０９８】
抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２に由来する架橋ＴＲＥＭ２のＦａｂフラグメントは、生存のより高い増加率が示すように、アイソタイプ対照Ａｂ８８のＦａｂと比較して、生存可能なマウス骨髄由来マクロファージの数を増加させた（図１６）。細胞生存率におけるこの増強は、ＫＯマウスマクロファージでは観察されなかった。これらのデータは、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の生物活性が、ＴＲＥＭ２特異的であること、ならびに、プレート結合架橋Ａｂ２１及びＡｂ５２のＦａｂフラグメントが、Ｍ−ＣＳＦで培養されたマクロファージの生存を増加させるアゴニストとして機能することを示す。
【１０９９】
実施例３５：ＴＲＥＭ２抗体の、自然免疫細胞の生存を減少させる能力の分析
自然免疫細胞（例えば、マクロファージ）における抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２に由来する可溶性の非架橋抗ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂフラグメントならびに可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の両方のアンタゴニスト機能を評価した。
【１１００】
野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス骨髄由来マクロファージを、Ｍ−ＣＳＦ及び可溶性のＴＲＥＭ２抗体のＦａｂまたは可溶性の全長抗体の存在下で培養し、細胞生存率を測定した。
【１１０１】
ＷＴ及びＫＯマウスの骨髄から単離されたマクロファージを、２０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ及び増加する量の可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂまたは可溶性の全長抗体の存在下の非組織培養処理９６ウェルプレート上にプレーティングした。各条件を、３回プレーティングした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、生存率の分析を３日後に実施した。ＧＥＮ５  ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒでプレートを読み取った。
【１１０２】
図１７では、「ＮＴ」の点線は、未処理のマクロファージ（抗体を加えない）で得られた平均細胞生存率を示す。「Ｍ−ＣＳＦなし」の点線は、マクロファージをＭ−ＣＳＦの不存在下で培養した時に得られる平均細胞生存率を示す。
【１１０３】
マクロファージ細胞生存率を可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂで評価した時、結果は、抗体Ａｂ５２に由来する可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２のＦａｂフラグメントが、細胞生存率を減少させることを示した（図１７Ａ）。対照的に、抗体Ａｂ２１に由来する可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２のＦａｂフラグメントは、生存率を抑制せず、アイソタイプ対照Ａｂ９９に匹敵する結果を有した（図１７Ａ）。結果は、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２に由来する可溶性の非架橋Ｆａｂが、アンタゴニストとして機能し、インビトロでのマクロファージの生存を阻害する可能性があることを実証する。
【１１０４】
マクロファージ細胞生存率を可溶性の全長抗体で評価した時、抗体Ａｂ５２は、Ａｂ２１よりも、より強力に細胞生存率を減少させた（図１７Ｂ）。実に、可溶性の全長抗体Ａｂ２１は、細胞に、アイソタイプ対照Ａｂ９１のものに匹敵する影響を与えた（図１７Ｂ）。結果は、可溶性の全長ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２が、架橋またはクラスター形成されていない場合、アンタゴニストとして機能し、マクロファージの生存を阻害する可能性があることを実証する。
【１１０５】
これらの実験の結果は、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２が、クラスター形成のない場合、マクロファージなどの自然免疫細胞の生存を阻害する可能性があることを示す。対照的に、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１は、クラスター形成のない場合でさえ、マクロファージなどの自然免疫細胞の生存を阻害しない。
【１１０６】
実施例３６：ＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を誘導する能力の分析
ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核因子）プロモーターの制御下のルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、プレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化する能力を評価した。
【１１０７】
マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））由来の細胞株を、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２ならびにＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。全長抗ＴＲＥＭ２抗体を、４℃一晩、組織培養処理透明底白色９６ウェルプレート（１００ｕｌ／ウェル）上に、ＤＰＢＳ中の１０ｕｇ／ｍｌで、プレートに結合させた。ウェルをＤＰＢＳで３回リンスし、続いて、１％の血清を含む培地に、１００，０００細胞／ウェルでプレーティングした。シグナル伝達のための陽性対照として、ＰＭＡ（０．０５ｕｇ／ｍｌ）及びイオノマイシン（０．２５ｕＭ）を共に添加した。細胞を６時間インキュベーションし、ＯｎｅＧｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上、室温で３分インキュベーションすることにより、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼシグナルを測定した。
【１１０８】
図１８Ａに示されるように、抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、ルシフェラーゼ活性を増加させて、抗体がＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を誘導できたことを示した。
【１１０９】
図１８Ｂに示されるように、プレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）は、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を誘導する。ＰＳは、ＴＲＥＭ２の天然リガンドと考えられている。従って、図１８の結果は、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドを模倣できることを示す。
【１１１０】
初代マウスマクロファージを使用して、プレート結合抗ＴＲＥＭ２Ｆａｂ抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化する能力を評価した。骨髄由来マクロファージ（ＢＭＭ）を、５日間Ｍ−ＣＳＦで生成した。ＢＭＭ（１０５／ウェル）を、抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２のＦａｂ部分（５０ｎＭ）で予めコーティングされている９６ウェルプレート上に播種した。プレートを１２００ｒｐｍで１分間回転させた後、超高純度のＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ０１１１：Ｂ４）を添加した。ＬＰＳで１８時間刺激した後、細胞上清中に存在するサイトカインを、サイトメトリービーズアレイ（ＣＢＡ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＢＡ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｋｉｔ）で測定した。
【１１１１】
図１８Ｃ及び１８Ｄに示されるように、プレート結合抗ＴＲＥＭ２Ｆａｂ抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、ＩＬ−６及びＭＣＰ−１のレベルを増加させて、抗体が初代免疫細胞においてＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化できたことを示した。
【１１１２】
実施例３７：ＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を阻害する能力の分析
ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核因子）プロモーターの制御下のルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を阻害する能力を評価した。
【１１１３】
マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））由来の細胞株を、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２ならびにＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１またはＡｂ５２を、細胞に、増加する濃度で添加した。細胞を、３７℃で６時間インキュベーションし、ＯｎｅＧｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）使用して、ルシフェラーゼ活性を測定した。
【１１１４】
これらの細胞は、内因性リガンドの存在または自発的受容体凝集のいずれかに起因する持続的なＴＲＥＭ２依存性シグナル伝達を示し、これは、ＴＲＥＭ２シグナル伝達をもたらす。
【１１１５】
図１９の点線は、刺激なしのＴＲＥＭ２活性のレベルを示す。
【１１１６】
図１９に示されるように、可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ５２は、持続的なＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を阻害できた。可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２１は、持続的なＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を部分的に阻害できた。しかし、遺伝子発現のレベルは、刺激なしのＴＲＥＭ２活性のレベルとほぼ同じであった（図１９）。
【１１１７】
実施例３８：ＴＲＥＭ２抗体アゴニスト及びアンタゴニスト活性の要旨
表７は、上記実施例３５〜３７に記載されている機能的研究の結果をまとめたものである。抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子（図１８）またはベータ−ＧＡＬレポーター遺伝子（表７）のいずれかを使用して、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を活性化させることにおけるアゴニスト活性を実証した。表７に記載されるように、Ａｂ２１は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用した時、Ａｂ５２と比較して、遺伝子誘導のレベルの増加を示した。しかし、Ａｂ５２は、ベータ−ＧＡＬレポーター遺伝子を使用した時、Ａｂ２１と比較して、遺伝子誘導のレベルの増加を示した（表７）。抗体Ａｂ２１及びＡｂ５２は、自然免疫細胞の細胞生存を促進することにおいてアゴニスト活性も実証した（図１６）。表７は、自然免疫細胞の細胞生存を阻害することにおける、可溶性の非架橋抗体Ａｂ５２のアンタゴニスト効果を実証する結果をさらにまとめたものである（図１７）。対照的に、可溶性の非架橋抗体Ａｂ２１は、細胞生存を阻害することにおいて最小限のアンタゴニスト活性を有した（図１７）。
【１１１８】
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【１１１９】
実施例３９：アゴニストＴＲＥＭ２抗体の抗アルツハイマー病効果の分析
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の、アルツハイマー病（ＡＤ）の進行を遅延させる、予防する、または後退させる能力を評価するために、５ＸＦＡＤマウスを使用する。５ＸＦＡＤマウスは、２つのＦＡＤ変異Ｍ１４６Ｌ及びＬ２８６Ｖを含むヒトＰＳ１と共に、スウェーデン（Ｋ６７０Ｎ、Ｍ６７１Ｌ）、フロリダ（Ｉ７１６Ｖ）、及びロンドン（Ｖ７１７Ｉ）家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）変異を有する変異体ヒトＡＰＰ（６９５）を過剰発現する。両方の導入遺伝子を、マウスＴｈｙ１プロモーターで制御して、脳における過剰発現を引き起こし、ＡＤの主要な特徴を再現する。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体または対照抗体で処理されたマウスを、免疫組織化学で、及び組織抽出物のＥＬＩＳＡにより、Ａベータプラーク負荷について試験する。それらを、脳におけるミクログリアの数について、ならびに、モリス水迷路、空間学習及び記憶課題、放射状迷路、空間学習及び記憶課題、Ｙ迷路（空間認知の尺度として自発的交替を定量化する）、オープンフィールドでの新奇選好、学習及び記憶を評価するオペラントの学習、ならびに恐怖条件付けを使用して、認知欠損の低減について、さらに試験する（ｍｏｕｓｅｂｉｏｌｏｇｙ．ｏｒｇ  ｗｅｂｓｉｔｅ；  Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）  Ｃｅｌｌ．  ｐｉｉ：  Ｓ００９２−８６７４（１５）００１２７−０）。
【１１２０】
実施例４０：アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の産生、同定、及び特性評価
緒言
上記実施例１に記載されている方法に従い、マウスハイブリドーマ技術、ファージディスプレイ技術、及び酵母ディスプレイ技術を使用して、ＴＲＥＭ２の細胞外ドメイン、特に細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸残基１９〜１７４）に結合する抗体を生成する。次に、抗体を、以下の実施例４１〜６７に記載されているように、インビボで、ＴＲＥＭ２を発現する細胞に結合する能力ならびに、ＴＲＥＭ２シグナル伝達ならびに細胞中の及び動物全体の機能を活性化する能力についてスクリーニングした。
【１１２１】
結果
抗ＴＲＥＭ２抗体の産生
実施例１に記載されている手順を使用して、特に配列番号１のアミノ残基１１３〜１７４に位置する細胞外配列内のＴＲＥＭ２の細胞外ドメインに結合する抗体を生成した。
【１１２２】
合計８７の抗体を生成した。次に、抗体を、ＴＲＥＭ２結合についてスクリーニングした。初代細胞への結合について陽性であった抗体を、アゴニスト活性について試験した。８７の抗体から、特定の抗体（例えば、Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５）を、さらなる分析のために選択した。
【１１２３】
抗体重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、生成された抗体の重鎖可変部（図２０Ａ）及び軽鎖可変部（図２０Ｂ）ドメインをコードするアミノ酸配列を決定した。抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ配列を、表８に記載する。
【１１２４】
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【１１２５】
Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５結合の特性評価
ＴＲＥＭ２抗体の最初の特性評価は、樹状細胞及び他の初代ヒトまたはマウス免疫細胞上で発現されたＴＲＥＭ２に結合する能力を決定することを含む。細胞を採取し、９６ウェルプレートに１０５／ｍｌでプレーティングし、洗浄し、氷中で１時間、１０〜５０ｕｇ／ｍｌのＭａｂを含有する１００ｕｌのＰＢＳ及びＦｃブロッキング試薬中でインキュベーションした。次に、細胞を２回洗浄し、氷中で３０分間、５ｕｇ／ｍｌのＰＥコンジュゲート二次抗体を含有する１００ｕｌのＰＢＳ中でインキュベーションした。細胞を冷ＰＢＳ中で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏで得た。ＭＦＩ値のデータ分析及び計算を、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で実施した。
【１１２６】
抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、ＦＡＣＳ解析により検出された陽性ＴＲＥＭ２抗体染色が示すように、組換えマウスＴＲＥＭ２を発現するマウス細胞株（ＢＷＺ  Ｔ２）に結合することを実証した（黒輪郭のヒストグラム）（図２１Ａ）。陰性アイソタイプ対照（抗体Ａｂ８８）は結合を示さなかった。抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、抗体が、ＷＴ（Ｔｒｅｍ＋／＋）骨髄由来マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ、ｍＭａｃ）に結合するが、ＴＲＥＭ２欠損（ＴＲＥＭ２−／−）マウスマクロファージ（ＢＭＭａｃ、ｍＭａｃｓ）に結合しないことを実証した（図２１Ｂ）。抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、組換えヒトＴＲＥＭ２を発現するヒト細胞株（２９３）（図２２Ａ）及び初代ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）（図２２Ｂ）の両方に結合することを実証した。逆に、抗体Ａｂ４３及びＡｂ６０は、組換えヒトＴＲＥＭ２を発現するヒト細胞株に結合した（図２２Ａ）が、初代ヒト樹状細胞には結合しなかった（図２２Ｂ）。
【１１２７】
ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５により結合された細胞型に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を表９に記載する。結合を親マウス細胞株（親ｍＴＲＥＭ２細胞株ＢＷＺ）、初代ヒト細胞株（ｈＴＲＥＭ２親細胞株（２９３））、ＴＲＥＭ２欠損の初代マウスマクロファージ（ｍＭａｃｓ  ＫＯ  ＭＦＩ）、及びＴＲＥＭ２欠損の初代マウス樹状細胞（ｍＤＣ  ＫＯ  ＭＦＩ）と比較する。表９の結果は、Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５が、細胞膜上にヒト及びマウスＴＲＥＭ２を過剰発現する細胞株に特異的に結合するが、ＴＲＥＭ２を発現しない対照細胞株には特異的に結合しないことを示す。抗体はまた、初代ヒトマクロファージ及び初代マウスマクロファージならびに樹状細胞に結合する。マウス初代細胞への結合は、ＴＲＥＭ２  ＫＯマウス由来の初代細胞上で検出されないので、特異的である。
【１１２８】
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【１１２９】
ＦｏｒｔｅＢｉｏまたはＭＳＤ−ＳＥＴでＫＤを測定することにより、各抗ＴＲＥＭ２抗体の結合親和性を決定した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を、上述したように実施した（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，  （２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８）。要約すると、ＩｇＧをＡＨＱセンサー上にオンラインでロードすることにより、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定を実施した。センサーを、３０分間アッセイ緩衝液中オフラインで平衡化し、次に、ベースライン確立のために６０秒間オンラインで監視した。ロードされたＩｇＧを有するセンサーを、５分間１００ｎＭの抗原に曝露し、次に、オフレート測定のために、５分間アッセイ緩衝液に移した。１：１結合モデルを使用して、動態を解析した。
【１１３０】
平衡親和性測定を、上述したように実施した（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，  （２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８）。５０ｐＭで一定に保たれた抗原を含むＰＢＳ＋０．１％ＩｇＧ不含ＢＳＡ（ＰＢＳＦ）中で、溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を実施し、１０ｎＭで開始する抗体の３〜５倍の連続希釈物とインキュベーションした。抗体（ＰＢＳ中の２０ｎＭ）を、４℃で一晩、または、３０分間室温で、標準的な結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレート上にコーティングした。次に、プレートを７００ｒｐｍで振とうしながら３０分間ブロックし、続いて、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄を行った。ＳＥＴサンプルを適用し、７００ｒｐｍで振とうしながら、１５０秒間プレート上でインキュベーションし、続いて、１回洗浄を行った。プレート上で捕捉された抗原を、３分間プレート上でインキュベーションすることにより、ＰＢＳＦ中の２５０ｎｇ／ｍＬのスルホタグ標識ストレプトアビジンで検出した。プレートを、洗浄緩衝液で３回洗浄し、次に、界面活性剤を含む１×のＲｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔを使用して、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで読み取った。パーセント遊離抗原を、Ｐｒｉｓｍで滴定された抗体の関数としてプロットし、二次方程式に適合させてＫＤを引き出した。スループットを向上させるために、ＳＥＴ試料調製を含むＭＳＤ−ＳＥＴ実験を通して、自動液体分注機を使用した。
【１１３１】
表１０は、抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５の、ヒトＴＲＥＭ２Ｆｃ融合タンパク質（ｈＴＲＥＭ２−Ｆｃ）、ヒト単量体ＨｉｓタグＴＲＥＭ２タンパク質（ｈＴＲＥＭ２−ＨＩＳ）、マウスＴＲＥＭ２Ｆｃ融合タンパク質（ｍＴＲＥＭ２−Ｆｃ）への結合親和性（ＫＤ）を表す値を記載する。
【１１３２】
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【１１３３】
実施例４１：ＴＲＥＭ２抗体は、ヒト樹状細胞（ＤＣ）上にＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を誘導し、Ｔ細胞増殖を誘導する
抗ＴＲＥＭ２抗体の、ＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を修飾する能力を評価するために、プレート結合抗体及び可溶性抗体の両方を、樹状細胞（ＤＣ）とインキュベーションし、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＣＲ７、及びリン酸化ＥＲＫの発現を測定した。抗ＴＲＥＭ２抗体の、Ｔ細胞増殖を調節する能力を評価するために、ＤＣを、Ｔ細胞及び抗ＴＲＥＭ２抗体とインキュベーションし、Ｔ細胞増殖のレベルを測定した。
【１１３４】
ＰＢＳ中の２または５ｕｇ／ｍｌの抗体を、１２ウェルプレート中、４℃で一晩培養した。ウェルを、翌日ＰＢＳで３回洗浄した。５日目に、未成熟ヒトＤＣを採取し、１ウェル当たり１００万細胞でプレーティングし、サイトカインの不存在下、５％のＣＯ２、３７℃でインキュベーションした。４８時間後に、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏで、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＬＩＮ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＦＡＣＳ解析を実施した。ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７を用いて、データ解析を実施した。ＣＤ８３、ＣＤ８６、及びＣＣＲ７のレベルを、ＣＤ１１ｃ＋ＨＬＡ−ＤＲ＋ＬＩＮ−細胞集団について評価した。細胞内ＥＲＫリン酸化では、細胞を１％のホルムアルデヒドで固定し、ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ  ｋｉｔ（ＢＤ）で透過処理し、細胞内ＥＲＫリン酸化を、ＰＥ−ＥＲＫ抗体（ＢＤ）で染色した後にフローサイトメトリーを用いて決定した。
【１１３５】
あるいは、５日目の未成熟ヒト樹状細胞を、サイトカインを含まない培地のＵ底非ＴＣ処理９６ウェルプレートに、１ウェル当たり１００，０００細胞でプレーティングした。２０ｕｇ／ｍｌのＬＰＳ除去抗ヒト二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を用いるまたは用いない５ｕｇ／ｍｌの抗体を添加した。ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１１ｃ、ＨＬＡ−ＤＲ、及びＬＩＮ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対するＦＡＣＳ解析を、上述したように抗体添加の４８時間後に実施した。
【１１３６】
さらに、５日目の未成熟樹状細胞（ＣＤ１４−ＣＤ１１ｃ＋ＬＩＮ−）を、２μｇの抗体で前日にコーティングされた１２ウェルディッシュにプレーティングした。Ｔ細胞の添加前に、プレートをＰＢＳで３回洗浄した。非自己ドナー由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を単離し、ＤＣに１：１０、１：５０、または１：２５０の比で添加する前に、ＣＦＳＥで標識した。ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｌビーズは、陽性対照として機能する。共培養後５日目に、細胞を、ＣＦＳＥ希釈についてＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩでのフローサイトメトリーにより分析した。ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を用いて各条件に対してＣＦＳＥｌｏ細胞と比較したパーセントＣＦＳＥｈｉを計算した。
【１１３７】
プレート結合ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、アイソタイプ対照抗体Ａｂ８８と比較して、ＣＤ８３＋ＣＤ８６＋ＤＣの頻度を増加させた（図２３Ａ）。可溶性抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、抗ヒト二次抗体で架橋される時、ＤＣ上にＣＤ８６の発現を誘導した。逆に、架橋抗体Ａｂ２２及び非架橋可溶性抗体は、ＣＤ８６発現を誘導しなかった（図２３Ｂ）。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、ヒト樹状細胞上の炎症性表面マーカーＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を誘導するアゴニストとして機能する。
【１１３８】
実施例４２：ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、Ｓｙｋリン酸化を誘導する
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、いくつかの基質をリン酸化し、それにより細胞活性化及び炎症プロセスをもたらすシグナル伝達複合体の形成を促進することにより、ＴＲＥＭ２の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子である。ヒト及びマウスマクロファージならびに初代ヒト樹状細胞を培養し、細胞抽出物中のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することにより、アゴニストＴＲＥＭ２抗体の、Ｓｙｋ活性化を誘導する能力を決定した。
【１１３９】
骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）、ＷＴマウスＢＭＤＭ、ＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウスＢＭＤＭ、及び初代ヒト樹状細胞を、１％の血清ＲＰＭＩで４時間飢餓状態にし、次に、ＰＢＳ−ＥＤＴＡで組織培養ディッシュから取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数した。氷上で１５分間、全長アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ４５、Ａｂ６５、非アゴニスト抗体（Ａｂ１６、Ａｂ７７）、または対照抗体（Ａｂ８９若しくはＡｂ９２）で、細胞をコーティングした。冷ＰＢＳで洗浄した後、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下、示された期間、３７℃で、細胞をインキュベーションした。刺激後、溶解緩衝液（１％（体積／体積）のＮＰ−４０％、５０ＭｍのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％のグリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で、細胞を溶解させ、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｘｇで遠心分離して、不溶性物質を除去した。次に、溶解物を、抗Ｓｙｋ  Ａｂ（ＢＭＤＭの場合Ｎ−１９またはヒトＤＣの場合４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で免疫沈降させた。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で探索した。全ての基質が十分に免疫沈降したことを確認するために、免疫ブロットを抗Ｓｙｋ  Ａｂ（Ａｂｃａｍ、ＢＭＤＭ用）または抗Ｓｙｋ（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣ用）で再探索した。記載されているように、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、視覚化を実施した（例えば、Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１０）  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．，  ３（１２２）：  ｒａ３８）。
【１１４０】
ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、ＢＭＤＭにおいてＴＲＥＭ２媒介Ｓｙｋリン酸化を誘導した（図２４Ａ）。ＴＲＥＭ２  ＫＯ  ＢＭＤＭを対照として使用する時にＳｙｋリン酸化が誘導されないので、抗体Ａｂ１、Ａｂ９、及びＡｂ４５により誘導されるＳｙｋリン酸化は、ＴＲＥＭ２特異的である（図２４Ｂ）。ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、初代ヒト樹状細胞においてＳｙｋリン酸化を誘導する（図２４Ｃ）。非アゴニスト抗体（Ａｂ１６及びＡｂ７７）または対照抗体（Ａｂ８９及びＡｂ９２）は、Ｓｙｋリン酸化を誘導しなかった。これらの結果に基づいて、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ４５、Ａｂ６５は、マクロファージ及び樹状細胞においてＳｙｋリン酸化を誘導するアゴニストとして機能する。
【１１４１】
実施例４３：ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２への結合について、ＴＲＥＭ２リガンドと競合する
アゴニストＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２上のリガンド結合部位を認識する能力を、推定上のＴＲＥＭ２リガンドを発現するＥ．ｃｏｌｉ細胞を用いた競合結合アッセイにより評価した。
【１１４２】
Ｅ．ｃｏｌｉを、１０ｍｌのＬＢ培地Ｏ／Ｎ中で成長させ、遠心分離により採取し、１０ｍｌのＰＢＳ中で２回洗浄した。次に、Ｅ．ｃｏｌｉを、３０分間７０℃の水浴中でインキュベーションすることにより加熱不活性化した。Ｅ．ｃｏｌｉを、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ  ＤｅｅｐＲｅｄ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１ｕＭの終濃度）で標識し、続いて、１０ｍｌのＰＢＳで３回洗浄し、１ｍｌのＰＢＳ中に１０８／ｍｌの濃度で再懸濁した。競合結合のために、細菌を、１０μｇ／ｍｌの全長アゴニストＴＲＥＭ２抗体と共に、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２発現細胞株（ＢＷＺ）に、またはヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２融合タンパク質を発現するＢＷ細胞株に添加し、氷上で１時間インキュベーションした。ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ標識細菌の、細胞株への結合について、細胞をＦＡＣＳにより分析した。
【１１４３】
ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、Ｅ．ｃｏｌｉ細菌の、ヒト細胞及びマウス細胞の両方への結合を阻害して、抗体の、ＴＲＥＭ２上のリガンド結合部位への競合的結合を示した（図２５）。非アゴニスト対照ＴＲＥＭ２抗体（Ａｂ６６及びＡｂ６８）は、ＴＲＥＭ２を発現するヒト細胞への細菌結合を部分的に阻害したが、マウスＴＲＥＭ２への結合を阻害せず、それらがリガンド結合のより弱い競合体であることを示した。
【１１４４】
実施例４４：ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、マウスマクロファージにおいてＤＡＰ１２リン酸化を誘導する
ＴＲＥＭ２は、ＤＡＰ１２を介してシグナル伝達し、下流でＰＩ３Ｋ及び他の細胞内シグナルの活性化をもたらす。マウスマクロファージを培養し、細胞抽出物中のＤＡＰ１２タンパク質のリン酸化状態を測定することにより、アゴニストＴＲＥＭ２抗体の、ＤＡＰ１２活性化を誘導する能力を決定した。
【１１４５】
ｍＡｂで刺激する前に、マウス野生型（ＷＴ）骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）ＢＭＤＭを、１％の血清ＲＰＭＩで４時間飢餓状態にした。１５×１０６の細胞を、全長アゴニスト抗体または対照抗体と、１５分間氷中でインキュベーションした。細胞を洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下で、示された期間３７℃でインキュベーションした。刺激後、溶解緩衝液（１％（体積／体積）のＮＰ−４０％、５０ＭｍのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１０％のグリセロール、＋プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で、細胞を溶解させ、続いて、４℃で１０分間、１６，０００ｘｇで遠心分離して、不溶性物質を除去した。細胞溶解物を、第２のＴＲＥＭ２抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で免疫沈降させた。沈殿したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシンＡｂ（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で探索した。膜を剥がし、抗ＤＡＰ１２抗体（Ｃｅｌｌｓ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｄ７Ｇ１Ｘ）で再探索した。ＴＲＥＭ２免疫沈降に使用された各細胞溶解物は、対照Ａｂ（抗アクチン、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）が示すように、同量のタンパク質を含有した。
【１１４６】
ＤＡＰ１２は、ＴＲＥＭ２と共沈し、アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５（図２６Ａ及び２６Ｂ）とインキュベーションされたＷＴマクロファージにおいてリン酸化された。逆に、ＤＡＰ１２リン酸化は、抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ２２、またはＡｂ４５とインキュベーションされたＴＲＥＭ２  ＫＯ（ＴＲＥＭ２−／−）マクロファージにおいて観察されなかった（図２６Ｂ）。これらの結果は、ＤＡＰ１２リン酸化がＴＲＥＭ２欠損ＢＭＤＭには存在しないので、アゴニスト抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ２２、及びＡｂ４５が、ＴＲＥＭ２特異的な仕方で、ＴＲＥＭ２会合ＤＡＰ１２のリン酸化を誘導することを実証する。
【１１４７】
実施例４５：ＴＲＥＭ２抗体のエピトープマッピング及びＴＲＥＭ２抗体の参照ＴＲＥＭ２抗体との比較
ＴＲＥＭ２抗体を、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２全体に及ぶ１５−ｍｅｒまたは２５−ｍｅｒペプチドに結合する能力について試験した。ＴＲＥＭ２抗体を、ＴＲＥＭ２結合領域を決定することにより、参照ＴＲＥＭ２抗体とさらに比較した。
【１１４８】
直鎖１５−ｍｅｒペプチドを、１４残基の重複を有するヒトまたはマウスＴＲＥＭ２の配列に基づいて合成した。加えて、直鎖２５−ｍｅｒペプチドを、１残基転移のヒトまたはマウスＴＲＥＭ２の配列に基づいて合成した。ＴＲＥＭ２抗体の、合成ペプチドのそれぞれへの結合を、ＥＬＩＳＡベースとした方法で試験した。このアッセイでは、ペプチドアレイを、（４℃で一晩）一次抗体溶液とインキュベーションした。洗浄後、ペプチドアレイを、２５℃で１時間、抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ、カタログ番号２０１０−０５）の１／１０００希釈物とインキュベーションした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）及び２μｌ／ｍｌの３％のＨ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色現象を測定した。発色現象を、電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムで定量化した。
【１１４９】
抗体結合領域を評価するために、ヒトＴＲＥＭ２−Ｆｃを、固定化全長アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、Ａｂ６３、Ａｂ６５、またはＡｂ８７とインキュベーションし、続いて、ＴＲＥＭ２抗体ＭＡＢ１７２９１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加えた。標準サンドイッチフォーマットビニングアッセイ（Ｅｓｔｅｐ  ｅｔ  ａｌ，  （２０１３）  ＭＡｂｓ  ５（２）：２７０−８を参照のこと）を使用して、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ３８４  ｓｙｓｔｅｍ  （Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州メンロパーク）で、抗体のエピトープビニングを実施した。対照抗標的ＩｇＧを、ＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を非関連ヒトＩｇＧ１抗体でブロックした。次に、センサーを１００ｎＭの標的抗原に曝露し、続いて、第２の抗標的抗体に曝露した。ＦｏｒｔｅＢｉｏのデータ解析ソフトウェア７．０を使用して、データを処理した。抗原会合後の二次抗体によるさらなる結合は、非占有エピトープ（非競合体）を示すが、結合はエピトープブロッキング（競合体）を示さない。
【１１５０】
抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ２８、及びＡｂ２９は、ヒトＴＲＥＭ２の配列に由来するＳｅｔ１及びＳｅｔ２からのペプチド対し排他的な、強く堅牢な結合を生じた。全ての４つの抗体は、ヒトＴＲＥＭ２のアミノ酸残基１３９〜１４６（１３９ＧＤＬＷＦＰＧＥ１４６（配列番号２３７））の間の領域を含有するペプチドに結合した（図２７Ａ）。Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ２８、及びＡｂ２９により認識されるエピトープ領域は、配列番号１のアミノ酸残基１３９〜１４６に対応し、ＧＤＬＷＦＰＧＥ（配列番号２３７）のアミノ酸配列を有する。
【１１５１】
抗体Ａｂ４５及びＡｂ６５は、Ｓｅｔ２及びＳｅｔ４からの２５−ｍｅｒペプチドのみに結合した。両方の抗体は、ヒトＴＲＥＭ２のアミノ酸残基１４０〜１５３（１４０ＤＬＷＦＰＧＥＳＥＳＦＥＤＡ１５３（配列番号２３８））及びマウスＴＲＥＭ２（１４０ＤＬＷＶＰＥＥＳＳＳＦＥＧＡ１５３（配列番号２３９））の間のＣ末端の付近の、ＴＲＥＭ２の高度に保存されている領域を認識した（図２７Ｂ）。Ａｂ４５及びＡｂ６５により認識されるエピトープ領域は、配列番号１のアミノ酸残基１４０〜１５３に対応し、ＤＬＷＦＰＧＥＳＥＳＦＥＤＡ（配列番号２３８）のアミノ酸配列を有する。
【１１５２】
参照抗体ＭＡＢ１７２９１により認識されるエピトープ領域も決定した。参照抗体ＭＡＢ１７２９１は、ヒトＴＲＥＭ２（１３０ＡＤＰＬＤＨＲＤＡＧＤＬＷＦＰ１４４（配列番号２４０））のアミノ酸残基１３０〜１４４の間の領域を含有する第１のペプチド及びヒトＴＲＥＭ２アミノ酸残基１５８〜１７０（１５８ＳＩＳＲＳＬＬＥＧＥＩＰＦ１７０（配列番号２４１））の間の領域を含有する第２のペプチドを認識することが見出された。ＭＡＢ１７２９１により認識されるエピトープ領域は、配列番号１のアミノ酸残基１３０〜１４４及び１５８〜１７０に対応し、ＡＤＰＬＤＨＲＤＡＧＤＬＷＦＰ（配列番号２４０）及びＳＩＳＲＳＬＬＥＧＥＩＰＦ（配列番号２４１）のアミノ酸残基を有する。
【１１５３】
参照抗体ＭＡＢ１７２９１は、抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、またはＡｂ６５と、ＴＲＥＭ２に同時結合できたが、抗体Ａｂ６３またはＡｂ８７とはできなかった（図２８）。これらの結果は、アゴニストＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５が、参照抗体ＭＡＢ１７２９１が結合するのとは異なるＴＲＥＭ２タンパク質領域に結合することを実証する。
【１１５４】
実施例４６：ＴＲＥＭ２抗体機能研究の要旨
表１１は、上記実施例４１〜４５に記載されている機能的研究の結果をまとめたものである。抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）上のＣＤ８３及びＣＤ８６の誘導を実証し、架橋可溶性抗体と比較して、プレート結合抗体でより高い誘導が観察された（表中の値はＣＤ８３＋ＣＤ８６＋細胞の割合を表す）。抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、ヒト樹状細胞（ｈＤＣ）、マウス樹状細胞（ｍＤＣ）、及びマウスマクロファージ（ｍＭａｃ）において、可変レベルのＳｙｋリン酸化を誘導し、ヒト及びマウスＴＲＥＭ２に対するリガンド結合（細菌結合をブロックする）を模倣できた。
【１１５５】
2020063268.tif 000034
【１１５６】
実施例４７：ＴＲＥＭ２欠損マウスにおける腫瘍増殖の解析
１０匹のＴＲＥＭ２野生型（ＷＴ）、ＴＲＥＭ２ヘテロ接合型（ＨＥＴ）、及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス（性別及び年齢が一致する同腹仔、８週齢（±２週））のグループの皮下に、１００ｕｌのＰＢＳ中に懸濁された腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６のＭＣ３８結腸癌、ルイス肺癌、またはＢ１６黒色腫細胞）で挑戦する。移植前に、動物にイソフルランで麻酔する。４日目に開始する腫瘍成長を測定するために、腫瘍成長を、隔週でノギスを用いて監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３または６０日間の腫瘍体積である。腫瘍成長及び生存率は、結果判定法である。腫瘍の取り込み及び成長速度の低減、ならびに腫瘍浸潤免疫抑制マクロファージの数の低減は、ＴＲＥＭ２  ＫＯマウスの腫瘍へのエフェクターＴ細胞の流入の増加を示す。
【１１５７】
浸潤腫瘍関連免疫抑制マクロファージ及びＴ細胞の数を決定するために、６〜８の性別及び年齢の一致した同腹仔のグループを使用する。８週齢（±２週）ＷＴ−ＨＥＴ−ＫＯ同腹仔の皮下に、２００ｕｌのマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｄｕｃｅｄ；ＢＤ）に懸濁される腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６のＭＣ３８、ルイス肺、またはＢ１６細胞）で挑戦する。移植前に、動物にイソフルランで麻酔する。腫瘍注射の７及び１０日後、マトリゲルプラグを切除し、１ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＤ（Ｓｉｇｍａ）で３７℃１時間インキュベーションし、単一細胞懸濁液を得るために解離し、セルストレーナーに通して濾過する。腫瘍にリクルートされたＴ細胞の量ならびにエフェクターＴ細胞と制御性Ｔ細胞との比を決定するために、５×１０６の細胞を、抗ＣＤ４５．２  ＰｅｒｃｐＣｙ５．５、抗ＣＤ３−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ８−ＰＥＣＹ７、抗ＣＤ４−ＡＰＣ、抗ＦｏｘＰ３−ＰＥ（ＢＤ）、及びＤＡＰＩで染色する。腫瘍にリクルートされた単球／マクロファージ系細胞の量を決定するために、５×１０６の細胞を、抗ＣＤ４５．２ＰｅｒｃｐＣｙ５．５、抗ＣＤ１１ｂ−ＰＥＣＹ７、抗Ｆ４／８０−ＦＩＴＣ、抗Ｌｙ６Ｃ／Ｇ−ＡＰＣ、抗ＣＤ８６−ＰＥ、及びＤＡＰＩで染色する。細胞を、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏで得る。ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７を用いたデータ解析を実施する。
【１１５８】
実施例４８：ＴＲＥＭ２アンタゴニスト抗体の抗癌効果の分析
８週齢（±２週）の１０匹のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスのグループの皮下に、１００ｕｌのＰＢＳ中に懸濁された腫瘍細胞（例えば、１×１０５〜１×１０６のＭＣ３８、ルイス肺、またはＢ１６細胞）で挑戦する。移植前に、動物にイソフルランで麻酔する。２日目に開始して、実施例３８及び４０に記載されているように、２００ｕｇのアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体のそれぞれを４用量３日毎に、マウスのグループに腹腔内注射する。４日目に開始する腫瘍成長を測定するために、腫瘍成長を、隔週でノギスを用いて監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３または６０日間の腫瘍体積である。腫瘍成長及び生存率は、結果判定法である。腫瘍の取り込み及び成長速度の低減、腫瘍浸潤免疫抑制マクロファージの数の低減、ならびに腫瘍へのエフェクターＴ細胞の流入の増加は、抗ＴＲＥＭ２抗体をブロックする抗癌効果を示す。
【１１５９】
実施例４９：ＴＲＥＭ２抗体を、阻害性チェックポイントタンパク質または阻害性サイトカイン／ケモカイン及びそれらの受容体に対する抗体と組み合わせる併用療法の付加的抗腫瘍効果の分析
８週齢（±２週）の１５匹のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスのグループの皮下に、実施例３５に記載されるように、腫瘍細胞で挑戦する。移植前に、動物にイソフルランで麻酔する。２日目に開始して、単独でまたはチェックポイントタンパク質に対する抗体（例えば、抗ＰＤＬ１  ｍＡｂ  ｃｌｏｎｅ  １０Ｆ．９Ｇ２及び／または抗ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ  ｃｌｏｎｅ  ＵＣ１０−４Ｆ１０−１１）と組み合わせた２００ｕｇの抗ＴＲＥＭ２抗体を４用量、３、６、及び９日目の３日毎に、マウスに腹腔内注射する。処理グループは、抗ＴＲＥＭ２；抗ＣＴＬＡ４；抗ＰＤＬ１；抗ＴＲＥＭ２＋抗ＣＴＬＡ４；抗ＴＲＥＭ２＋抗ＰＤＬ１；及びアイソタイプ対照を含む。４日目に開始する腫瘍成長を測定するために、腫瘍成長を、隔週でノギスを用いて監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３または６０日間の腫瘍体積である。腫瘍成長及び生存率は、結果判定法である。併用療法を用いた腫瘍成長の減少及び生存率の増加は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、抗チェックポイント抗体と付加的または相乗的治療効果を有することを示す。チェックポイント分子に対するアンタゴニスト抗体は、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンに対する抗体を含む。阻害性サイトカインに対するアンタゴニスト抗体は、ＣＣＬ２、ＣＳＦ−１、及びＩＬ−２に対する抗体を含む。
【１１６０】
実施例５０：ＴＲＥＭ２抗体を、刺激性チェックポイントタンパク質を活性化する抗体と組み合わせる併用療法の付加的抗腫瘍効果の分析
８週齢（±２週）の１５匹のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスのグループの皮下に、実施例３５に記載されるように、腫瘍細胞で挑戦する。移植前に、動物にイソフルランで麻酔する。２日目に開始して、単独でまたは刺激性チェックポイントタンパク質（例えば、ＯＸ４０またはＩＣＯＳ  ｍＡｂ）を活性化するアゴニスト抗体と組み合わせた２００ｕｇの抗ＴＲＥＭ２抗体を４用量、３、６、及び９日目の３日毎に、マウスに腹腔内注射する。４日目に開始する腫瘍成長を測定するために、腫瘍成長を、隔週でノギスを用いて監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３または６０日間の腫瘍体積である。腫瘍成長及び生存率は、結果判定法である。併用療法を用いた腫瘍成長の減少及び生存率の増加は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、刺激性チェックポイント抗体と付加的または相乗的治療効果を有することを示す。刺激性チェックポイント抗体は、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０、及びＧＩＴＲに対するアゴニスト／刺激性抗体を含む。
【１１６１】
実施例５１：ＴＲＥＭ２抗体を、刺激性サイトカインと組み合わせる併用療法の付加的抗腫瘍効果の分析
８週齢（±２週）の１５匹のＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスのグループの皮下に、実施例３５に記載されるように、腫瘍細胞で挑戦する。移植前に、動物にイソフルランで麻酔する。２日目に開始して、単独でまたは刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−ａ）と組み合わせた２００ｕｇの抗ＴＲＥＭ２抗体を４用量、３日毎に、マウスに腹腔内注射する。４日目に開始する腫瘍成長を測定するために、腫瘍成長を、隔週でノギスを用いて監視する。実験の終点は、２０００ｍｍ３または６０日間の腫瘍体積である。腫瘍成長及び生存率は、結果判定法である。併用療法を用いた腫瘍成長の減少及び生存率の増加は、抗ＴＲＥＭ２抗体が、免疫刺激性サイトカインと付加的または相乗的治療効果を有することを示す。刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−ａ／ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦを含む。
【１１６２】
実施例５２：ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂの、自然免疫細胞の生存率を促進する能力の分析
自然免疫細胞（例えば、マクロファージ）における抗体Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５に由来するプレート結合架橋抗ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂフラグメントのアゴニスト機能を評価した。
【１１６３】
野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス骨髄由来マクロファージを、Ｍ−ＣＳＦ及びプレート結合ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂの存在下で培養し、細胞生存率を測定した。
【１１６４】
ＷＴ及びＫＯマウスの骨髄から単離されたマクロファージを、１２．５ｎＭまたは１００ｎＭのいずれかの架橋Ａｂ２２、Ａｂ４５、またはＡｂ６５のＦａｂでプレコーティングされた非組織培養処理９６ウェルプレート上にプレーティングした。細胞を、１０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦの存在下で、４８時間培養した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、生存率の分析を実施した。ＧＥＮ５  ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒでプレートを読み取った。
【１１６５】
抗体Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５から誘導された架橋ＴＲＥＭ２のＦａｂフラグメントは、生存のより高い増加率が示すように、アイソタイプ対照抗体Ａｂ８８のＦａｂと比較して、生存可能なマウス骨髄由来マクロファージの数を増加させた（図２９）。細胞生存率におけるこの増強は、Ａｂ６５を除くＫＯマウスマクロファージでは観察されなかった。これらのデータは、Ａｂ２２及びＡｂ４５の生物活性が、ＴＲＥＭ２特異的であること、ならびに、プレート結合架橋Ａｂ２２及びＡｂ４５のＦａｂフラグメントが、Ｍ−ＣＳＦで培養されたマクロファージの生存を増加させるアゴニストとして機能することを示す。
【１１６６】
実施例５３：ＴＲＥＭ２抗体の、自然免疫細胞の生存を減少させる能力の分析
自然免疫細胞（例えば、マクロファージ）における抗体に由来する可溶性の非架橋抗ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂフラグメント及び可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体の両方のアンタゴニスト機能を評価した。
【１１６７】
野生型（ＷＴ）及びＴＲＥＭ２ノックアウト（ＫＯ）マウス骨髄由来マクロファージを、Ｍ−ＣＳＦ及び可溶性のＴＲＥＭ２抗体のＦａｂまたは可溶性の全長抗体の存在下で培養し、細胞生存率を測定した。
【１１６８】
ＷＴ及びＫＯマウスの骨髄から単離されたマクロファージを、２０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦならびに増加する量の抗体Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５または可溶性の全長抗体Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５に由来する、示された可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂの存在下の非組織培養処理９６ウェルプレート上にプレーティングした。各条件を、３回プレーティングした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、生存率の分析を３日後に実施した。ＧＥＮ５  ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒでプレートを読み取った。
【１１６９】
図３０Ａ及び３０Ｂでは、「ＮＴ」の点線は、未処理のマクロファージ（抗体を加えない）で得られた平均細胞生存率を示す。「Ｍ−ＣＳＦなし」の点線は、マクロファージをＭ−ＣＳＦの不存在下で培養した時に得られる平均細胞生存率を示す。
【１１７０】
マクロファージ細胞生存率を、可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂで評価した時、結果は、抗体Ａｂ４５に由来する可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２のＦａｂフラグメントが、細胞生存率を減少させることを示した（図３０Ａ）。対照的に、抗体Ａｂ２２に由来する可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２のＦａｂフラグメントは、生存率を抑制せず、アイソタイプ対照Ａｂ９９に匹敵する結果を有した（図３０Ａ）。抗体Ａｂ６５に由来する可溶性の非架橋ＴＲＥＭ２のＦａｂフラグメントは、細胞生存率を部分的に抑制する（図３０Ａ）。結果は、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ４５及びＡｂ６５に由来する可溶性の非架橋Ｆａｂが、アンタゴニストとして機能し、インビトロでのマクロファージの生存を阻害する可能性があることを実証した。
【１１７１】
マクロファージ細胞生存率を可溶性の全長抗体で評価した時、抗体Ａｂ１４、Ａｂ４５、Ａｂ６５、及びＡｂ９は、細胞生存率を減少させた（図３０Ｂ）。可溶性の全長抗体Ａｂ２２は、細胞生存率に、アイソタイプ対照Ａｂ９１のものにほぼ匹敵する影響を与えた（図３０Ｂ）。結果は、可溶性の全長ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１４、Ａｂ４５、Ａｂ６５、及びＡｂ９が、架橋またはクラスター形成されていない場合、アンタゴニストとして機能し、マクロファージの生存を阻害する可能性があることを実証する。
【１１７２】
これらの実験の結果は、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ４５、Ａｂ６５、及びＡｂ９が、クラスター形成のない場合、マクロファージなどの自然免疫細胞の生存を阻害する可能性があることを示す。対照的に、ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２２は、クラスター形成のない場合でさえ、マクロファージなどの自然免疫細胞の生存を阻害しない。
【１１７３】
実施例５４：ＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を誘導する能力の分析
ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核因子）プロモーターの制御下のルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、プレート結合抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１７、Ａｂ１８、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ２４、Ａｂ２５、Ａｂ２８、Ａｂ２９、Ａｂ４５、Ａｂ５４、Ａｂ５１、Ａｂ６４、Ａｂ６５、及びＡｂ６６の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化する能力を評価した。
【１１７４】
マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））由来の細胞株を、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２ならびにＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させた。全長抗ＴＲＥＭ２抗体を、４℃一晩、組織培養処理透明底白色９６ウェルプレート（１００ｕｌ／ウェル）上に、ＤＰＢＳ中の１０ｕｇ／ｍｌで、プレートに結合させた。ウェルをＤＰＢＳで３回リンスし、続いて、１％の血清を含む培地に、１００，０００細胞／ウェルでプレーティングした。シグナル伝達のための陽性対照として、ＰＭＡ（０．０５ｕｇ／ｍｌ）及びイオノマイシン（０．２５ｕＭ）を共に添加した。細胞を６時間インキュベーションし、ＯｎｅＧｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上、室温で３分インキュベーションすることにより、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢｉｏＴｅｋプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼシグナルを測定した。
【１１７５】
図３１Ａ及び図３１Ｂに示されるように、抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１４、Ａｂ１５、Ａｂ１７、Ａｂ２０、Ａｂ２２、Ａｂ４５、Ａｂ５４、Ａｂ６４、Ａｂ６５、及びＡｂ６６は、ルシフェラーゼ活性を増加させて、抗体がＴＲＥＭ２依存性遺伝子転写を誘導できたことを示した。図３１Ｃに示されるように、プレート結合ホスファチジルセリン（ＰＳ）は、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を誘導する。ＰＳは、ＴＲＥＭ２の天然リガンドと考えられている。従って、図３１Ａ−Ｃの結果は、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体が、ＴＲＥＭ２の天然リガンドを模倣できることを示す。
【１１７６】
実施例５５：ＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を阻害する能力の分析
ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞核因子）プロモーターの制御下のルシフェラーゼレポーター遺伝子を使用して、可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を阻害する能力を評価した。
【１１７７】
マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））由来の細胞株に、マウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２ならびにＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）を感染させた。可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体を、細胞に、増加する濃度で添加した。細胞を、３７℃で６時間インキュベーションし、ＯｎｅＧｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ルシフェラーゼ活性を測定した。
【１１７８】
これらの細胞は、内因性リガンドの存在または自発的受容体凝集のいずれかに起因する持続的なＴＲＥＭ２依存性シグナル伝達を示し、これは、ＴＲＥＭ２シグナル伝達をもたらす。
【１１７９】
図３２の点線は、刺激なしのＴＲＥＭ２活性のレベルを示す。
【１１８０】
図３２に示されるように、可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、持続的なＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を阻害できた。対照的に、可溶性の全長抗ＴＲＥＭ２抗体Ａｂ２２は、持続的なＴＲＥＭ２シグナル伝達をブロックしないようであった（図３２）。
【１１８１】
実施例５６：ＴＲＥＭ２抗体アゴニスト及びアンタゴニスト活性の要旨
表１２は、上記実施例５２〜５５に記載されている機能的研究の結果をまとめたものである。抗体Ａｂ１、Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子（図３１Ａ）またはベータ−ＧＡＬレポーター遺伝子（表１２）のいずれかを使用して、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現を活性化させることにおけるアゴニスト活性を実証した。表１２に記載されるように、Ａｂ１及びＡｂ６５は、β−ＧＡＬレポーター遺伝子を使用した時、Ａｂ９、Ａｂ２２、及びＡｂ４５と比較して、遺伝子誘導のレベルの増加を示した（表１２）。抗体Ａｂ２２、Ａｂ４５、及びＡｂ６５は、自然免疫細胞の細胞生存を促進することにおいてアゴニスト活性も実証した（図２９）。表１２は、自然免疫細胞の細胞生存を阻害することにおける、可溶性の非架橋抗体Ａｂ９、Ａｂ１４、Ａｂ４５、及びＡｂ６５のアンタゴニスト効果を実証する結果をさらにまとめたものである（図３０）。対照的に、可溶性の非架橋抗体Ａｂ２２は、細胞生存を阻害することにおいて最小限のアンタゴニスト活性を有した（図３０）。
【１１８２】
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【１１８３】
実施例５７：さらなるＴＲＥＭ２抗体に対する結合及び機能研究の要旨
表１３は、実施例４０に記載されるように生成された、さらなる全長ＴＲＥＭ２抗体に対する結合及び機能研究の結果をまとめたものである。実施例４０及び４２に記載されている方法を使用して、下記の結果を得た。
【１１８４】
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【１１８５】
実施例５８：アゴニストＴＲＥＭ２抗体の抗脳卒中効果の解析
中大脳動脈（ＭＣＡＯ）の一過性閉塞−ヒト脳卒中に非常に似たモデルが、マウスの脳梗塞を誘導するために使用される。モノフィラメント（７０ＳＰＲｅ、Ｄｏｃｃｏｌ  Ｃｏｒｐ、ＵＳＡ）を、右総頸動脈の切開を通して内頸動脈に導入する。中大脳動脈を、再灌流時間の範囲で３０分間閉塞する（６時間、１２時間、２４時間、２日間、７日間、及び２８日間）。１２時間及び７日目、擬似動物を使用して、手術の効果を制御する。中大脳動脈の閉塞のない擬似動物は、同じ外科手術を受ける。アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体または対照抗体で処理したＭＣＡＯ動物を、梗塞体積測定、急性炎症性応答（１２時間の再灌流）；前炎症性サイトカインＴＮＦａ、ＩＬ−１ａ、及びＩＬ−１ｂの転写；ミクログリア活性（ＣＤ６８、Ｉｂａ１）；ケモカインＣＣＬ２（ＭＣＰ１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ、及びケモカイン受容体ＣＸ３ＣＲ１）の転写；ならびにＣＤ３陽性Ｔ細胞の浸潤について試験する（Ｓｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（１）：  ｅ５２９８２．  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００５２９８２．）。
【１１８６】
実施例５９：気道感染症におけるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
アンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の、細菌性気道感染症を遅延させる、予防する、または治療する能力を評価するために、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを用いたＣ５７Ｂｌ６マウスのチャレンジを含む前臨床マウスモデルを使用する。このモデルは、記載されているように、１０５ＣＦＵのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型３（ＡＴＣＣ  ６３０３）の経鼻（ｉ．ｎ．）投与を含む（例えば、Ｓｈａｒｉｆ  Ｏ  ｅｔ  ａｌ，  ２０１４  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．  ２０１４  Ｊｕｎ；  １０（６）：  ｅ１００４１６７、及びＳｃｈａｂｂａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ，  ２０１０  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８５：  ４６８−４７６を参照のこと）。このモデルでは、約９０％のＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスは、感染後６日以内に、感染で死亡する。
【１１８７】
１０〜１５匹のマウス／グループに、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅで挑戦し、付随して、０日目から開始して、１日おきにアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で治療する。抗ＴＲＥＭ２抗体の最初の用量は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａで挑戦するする３時間前に投与する。死亡事象をチェックするために、マウスを、毎日１５日間監視する。細菌挑戦で生き残ったマウスの％を決定する。
【１１８８】
別の実験では、血液及び肺における細菌負荷及びサイトカイン発現の数も決定する。感染の２４または４８時間後、血液をＥＤＴＡ含有チューブに収集し、アガープレート上にプレーティングして、血漿中の細菌性ＣＦＵを列挙する。血漿を、ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために−２０℃で保存する。細菌ＣＦＵを計数するために、肺を採取し、均質化し、アガープレート上にプレーティングする、または溶解緩衝液中で３０分間インキュベートし、上清をサイトカイン測定のために分析する。
【１１８９】
別の実験では、肺を、細菌感染の４０時間後に収集し、１０％ホルマリンで固定し、Ｈ＆Ｅ病理分析のためにパラフィンに包埋する。
【１１９０】
実施例６０：敗血症におけるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
アンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の、敗血症を遅延させる、予防する、または治療する能力を評価するために、ＬＰＳを用いたＣ５７Ｂｌ６マウスの全身挑戦を含む前臨床マウスモデルを使用する。このモデルは、記載されているように、３７ｍｇ／ｍｌのＬＰＳ腹腔内（ｉ．ｐ．）投与を含む（例えば、Ｇａｗｉｓｈ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ，  ２０１４  ＦＡＳＥＢ  Ｊを参照のこと）。このモデルでは、＞９５％のＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスは、ＬＰＳ感染後４０時間以内に、感染で死亡する。
【１１９１】
マウスのコホートにＬＰＳで挑戦し、付随して、０日目から開始して毎日、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処理する。抗ＴＲＥＭ２抗体の第１の用量を、ＬＰＳで挑戦する３時間前に投与する。死亡事象を確認するために、マウスを日中の４時間毎に監視する。ＬＰＳ挑戦で生き残ったマウスの割合を決定する。
【１１９２】
別の実験では、腹腔洗浄液（ＰＬＦ）を収集する。上清を、ＥＬＩＳＡによるサイトカイン分析のために−２０℃で保存し、腹膜腔にリクルートされた炎症細胞を定量化するために、ペレット化細胞を計数する。感染の他のモデルにおけるＴＲＥＭ２抗体の有効性を試験するために、同様の研究を行うことができる（例えば、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  １７；５４（５）：３４５１−６２を参照のこと）。
【１１９３】
実施例６１：急性及び慢性大腸炎におけるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の、大腸炎の遅延させる、予防する、または治療する能力を評価するために、急性または慢性大腸炎の前臨床マウスモデルを使用する。ＤＳＳ誘導性大腸炎では、マウスは、８日間自由に飲料水中の３％のＤＳＳを摂取する。ＴＮＢＳ誘導性大腸炎の場合、マウスを麻酔し、２０％のエタノール（体積／体積）中の３ｍｇのＴＮＢＳまたは対照としてのビヒクル単独の直腸内注射で処理する。慢性大腸炎モデルでは、全てのマウスを、５日間は３サイクルの２％のＤＳＳで処理し、続いて、１０日間の回復期間をとる。全てのモデルでは、体重減少、便の硬さ、及び便潜血の存在を、毎日監視し、記載されているように、疾患活動指数を計算するために使用する（例えば、Ｃｏｒｒｅａｌｅ  Ｃ，  ２０１３，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１３，  ｐｐ．  ３４６−３５６．ｅ３を参照のこと）。
【１１９４】
マウスのコホートを、０日目から開始して毎日、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＤＳＳまたはＴＮＢＳ投与を受けさせる。マウスを、体重減少、便の硬さ、及び便潜血の存在をチェックするために毎日監視し、記載されているように、疾患活動指数を計算するために使用した（例えば、Ｓ．  Ｖｅｔｒａｎｏ，  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，  １３５  （２００８），  ｐｐ．  １７３−１８４を参照のこと）。
【１１９５】
別の実験では、炎症性細胞浸潤及び粘膜損傷を評価するために、粘膜損傷の内視鏡画像及び組織学的画像を収集する。クローン病、炎症性腸疾患、及び潰瘍性大腸炎を含む自己免疫の他のモデルにおけるＴＲＥＭ２抗体の有益性を試験するために、同様の研究を行うことができる（例えば、Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  Ｄｅｖｅｌ  Ｔｈｅｒ．；  ７：  １３４１−１３５７、及びＳｏｌｌｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  ＰＬｏＳ  Ｍｅｄ  ５（９）：  ｅ１９８を参照のこと）。
【１１９６】
実施例６２：創傷治癒におけるアゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の、損傷後の結腸の創傷修復を増加させる能力を評価するために、結腸における生検損傷のマウスモデルを使用する。このモデルでは、外側の手術シースを有する内視鏡を、下行結腸の中央に挿入し、肛門直腸接合部まで、粘膜を調査する。次に、粘膜及び粘膜下組織全体の単一の全層領域を、３フレンチの直径を有する柔軟な生検鉗子で除去し、筋固有層の貫入を回避する。各マウスは、結腸の背側に沿って３〜５箇所に生検で損傷させる（例えば、Ｓｅｎｏ  Ｈ，  ２００８，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．  ２００９  Ｊａｎ  ６；  １０６（１）：  ２５６−２６１を参照のこと）。
【１１９７】
生検損傷の２または３日後、マウスのコホートを、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体で処理する。体重減少及び創傷治癒をチェックするために、病変の表面積を測定することにより、体重減少及び創傷治癒をチェックするために、マウスを、１５日間毎日監視する。
【１１９８】
実施例６３：網膜変性におけるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
アンタゴニストＴＲＥＭ２抗体は、炎症性マクロファージの蓄積及び／または機能を減少させ、結果として、加齢関連黄斑変性症（ＡＭＤ）を遅延させる、予防する、及び／または治療する。
【１１９９】
ＡＭＤは、外網膜の変性疾患である。炎症、特に、炎症性サイトカイン及びマクロファージが、ＡＭＤ疾患進行の原因となると考えられている。
【１２００】
ドルーゼン、ブルッフ膜、脈絡膜、及び網膜におけるＡＭＤ病変の近傍のマクロファージの存在を証明する。マクロファージは組織因子（ＴＦ）及び血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）を放出し、これは、脈絡膜血管新生を示す患者において、新しい血管形成の拡大を引き起こす。
【１２０１】
黄斑のある脈絡膜に存在するマクロファージの種類は、年齢と共に変化し、若年の眼と比較して、老年の眼においてＭ２マクロファージのレベルの上昇を示す。しかし、進行したＡＭＤの黄斑は、ほぼ同年齢の正常な剖検された眼と比較して、Ｍ１とＭ２の比がより高かった。（例えば、Ｃａｏ  Ｘ  ｅｔ  ａｌ，  （２０１１），  Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ  ６１（９）：  ｐｐ５２８−３５を参照のこと）。これは、晩発性ＡＭＤ進行における眼の典型的なＭ１マクロファージ活性化の間の関連を示唆する。
【１２０２】
網膜ミクログリア細胞は、通常は内網膜にも存在する組織常在マクロファージである。損傷の場合、ミクログリアを活性化でき、炎症のメディエーターとして作用する。活性化ミクログリアは、ＡＭＤ組織サンプルにおいて検出されており、ＡＭＤ病因をもたらす炎症プロセスの１つの潜在的な要因として提案されている（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００３）  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．，  ７６（４）：４６３−７１．）。アンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の、ＡＭＤを予防する、遅延させる、または後退させる能力を、１つ以上のＡＭＤモデルで試験する（例えば、Ｐｅｎｎｅｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１２）  Ｍｏｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  Ｍｅｄ．；  ３３（４）：  ４８７−５０９を参照のこと）。
【１２０３】
全体的な炎症性マクロファージ（Ｍ１及び／または活性化ミクログリアのいずれか）は、ＡＭＤ疾患の進行と相関し、それ故、アンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の治療標的であることが証明される。緑内障及び網膜色素変性症などの遺伝型または網膜変性において、同様の治療効果を達成できる。
【１２０４】
アンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の、緑内障における網膜神経節細胞変性を予防する、遅延させる、または後退させる能力を、緑内障モデルにおいて試験する（例えば、Ｅｌ−Ｄａｎａｆ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１５）  ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  １１；３５（６）：２３２９−４３を参照のこと）。同様に、遺伝的に誘導された網膜変性及び色素性網膜炎におけるＲＥＭ２の治療効果を、Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００２）  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓ．；  ４２（４）：５１７−２５、及び“Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｐ２３Ｈ  ａｎｄ  Ｓ３３４ｔｅｒ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒａｔｓ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｉｎｂｒｅｄ  ａｎｄ  ＲＣＳ  Ｃｏｎｇｅｎｉｃ  Ｓｔｒａｉｎｓ  ｏｆ  Ｒａｔｓ，”  ＭＭ  ＬａＶａｉｌ，  Ｊｕｎｅ  ３０，  ２０１１に記載されているように試験する。
【１２０５】
実施例６４：脂質生成及び食餌誘導性肥満におけるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
脂肪生成及び肥満におけるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の効果を試験するために、高脂肪食餌（ＨＦＤ）のマウスモデルを使用する（例えば、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１５）  Ｄｉａｂｅｔｅｓ．  ６４（１）：１１７−２７を参照のこと）。
【１２０６】
実施例６５：マラリアにおけるＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
非実質性肝細胞におけるＴＲＥＭ２発現は、マラリア原虫Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｂｅｒｇｈｅｉでの肝細胞期感染に対する耐性と密接に相関する（Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ２６；１１０（４８）：１９５３１−６）。理論に拘束されることを望むものではないが、ＴＲＥＭ２抗体は、Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉによる肝細胞期感染に対する耐性を増加させると考えられている。
【１２０７】
ＴＲＥＭ２抗体の、マラリア感染に対する耐性を増加させる能力を、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１３）  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ２６；１１０（４８）：１９５３１−６に記載されているように試験する。要約すると、ＧＦＰを発現するＰ．ｂｅｒｇｈｅｉ  ＡＮＫＡスポロゾイトを、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｓｔｅｐｈｅｎｓｉ蚊由来の感染した唾液腺を切開することにより得る。ＲＰＭＩ培地中のスポロゾイト懸濁液を、１マウス当たり１０４スポロゾイトを含有する接種物１００μＬで、腹腔内注射する。肝臓を、注射または生存の４０時間後に収集し、寄生虫血症を、２８日間追跡する。実験的な脳マラリアスコアリングのために、注射後５日目から、神経学的症状を監視する。
【１２０８】
実施例６６：骨粗鬆症におけるアンタゴニストＴＲＥＭ２抗体の防御効果の分析
骨は、カルシウムホメオスタシス及び構造的ニーズをサポートするために、常に作り変えられる動的器官である。破骨細胞は、骨の有機及び無機構成成分の両方を除去することに関与している細胞である。破骨細胞は、マクロファージ系統の造血前駆細胞に由来し、ＮＦκＢリガンドの腫瘍壊死因子ファミリーのサイトカイン受容体アクチベーターに応答して分化する。唯一の骨吸収細胞である破骨細胞は、骨粗鬆症及び大理石骨病の病因の中心である（Ｎｏｖａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ．，  ３：４５７−８４）。
【１２０９】
骨粗鬆症は、骨折のリスクの増加をもたらす可能性がある、骨量及び密度の減少を特徴とする進行性骨疾患である。それは、骨代謝回転が亢進し、破骨細胞及び骨芽細胞の両方の活動性が増加する閉経後の最初の年に顕著に現れる。しかし、再吸収及び合成のプロセスの不均衡のために、正味の効果は、骨量減少であり、これは、大部分が骨梁である。従って、骨粗鬆症における骨折の最もよく見られる部位は、骨梁構造が骨強度全体にとって鍵となる手首、大腿骨頚部、及び椎体である。骨粗鬆症をもたらす破骨細胞分化の亢進及び骨吸収能力の増加は、ＴＲＥＭ２の発現を欠く動物モデルで説明されている（Ｏｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ  （２０１２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １８８，  ２６１２−２６２１）。
【１２１０】
ＤＡＰ１２  ＩＴＡＭシグナル伝達アダプターを欠き、破骨細胞様細胞の分化に重大な欠陥をもたらす動物モデルで観察されるように、破骨細胞機能の低減は、骨量が増加し、骨髄腔が消失する大理石骨病をもたらす（Ｋｏｇａ，  ｅｔ  ａｌ．，  （２００４）  Ｎａｔｕｒｅ  ４２８：  ７５８−７６３）。
【１２１１】
理論に拘束されることを望むものではないが、本開示のアンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、骨粗鬆症を予防する、リスク低減させる、及び／または治療することができると考えられている。一部の実施形態では、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体を投与することは、大理石骨病（例えば、ＤＡＰ１２リン酸化、Ｓｙｋ活性化、及び破骨細胞への分化の亢進）を有する個体に、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導することがある（Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ  （２０１０）．  Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．  ２０１０  １８；３  １２２、及びＨｕｍｐｈｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００６）  Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．，２１（２）：２３７−４５）。
【１２１２】
実施例６７：Ａｂ２２及びＡｂ４５ＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導をブロックする能力
ルシフェラーゼレポーター系を使用して、抗体Ａｂ２２及びＡｂ４５を、脂質リガンドによりＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導をブロックする能力について試験した。
【１２１３】
ホスファチジルセリン（ＰＳ、Ａｖａｎｔｉ  Ｌｉｐｉｄｓ）及びスフィンゴミエリン（ＳＭ、Ａｖａｎｔｉ  Ｌｉｐｉｄｓ）を、メタノールに溶解させ、Ｉｍｍｕｌｏｎ９６ウェルプレート上にプレーティングした。メタノールを、室温で一晩蒸発させ、細胞を翌日添加した。ＮＦＡＴ：ルシフェラーゼレポーター（Ｑｉａｇｅｎ）と共にマウスＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２を発現するＢＷＺ細胞を採取し、ＤＭＥＭ＋１％のＦＢＳ中に、１００，０００細胞／ウェルで添加した。細胞を、単独で、または、５０若しくは５ｎＭのヒトＩｇＧとの組み合わせのいずれかで、プレーティングした。製造者の使用説明書に従い、６時間後、Ｏｎｅ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びＢｉｏｔｅｋプレートリーダーを使用して、ルシフェラーゼ活性を測定した。
【１２１４】
発光の減少が示すように、Ａｂ４５は、ＰＳ及びＳＭの両方により、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子発現の誘導をブロックした（図３３）。
【１２１５】
実施例６８：ＴＲＥＭ２抗体の、ＴＲＥＭ２依存性サイトカイン遺伝子を誘導する能力の分析
初代マウスマクロファージを使用して、プレート結合抗ＴＲＥＭ２Ｆａｂ抗体Ａｂ２２及びＡｂ６５の、ＴＲＥＭ２依存性遺伝子を活性化する能力を評価した。
【１２１６】
骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）を、５日間Ｍ−ＣＳＦで生成した。ＢＭＤＭ（１０５／ウェル）を、抗体Ａｂ２２及びＡｂ６５のＦａｂ部分（５０ｎＭ）で予めコーティングされている９６ウェルプレート上に播種した。プレートを１２００ｒｐｍで１分間回転させた後、超高純度のＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ０１１１：Ｂ４）を添加した。ＬＰＳで１８時間刺激した後、細胞上清中に存在するサイトカインを、サイトメトリービーズアレイ（ＣＢＡ；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＢＡ  ｍｏｕｓｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｋｉｔ）で測定した。
【１２１７】
図３４Ａ及び３４Ｂに示されるように、プレート結合抗ＴＲＥＭ２Ｆａｂ抗体Ａｂ２２は、ＩＬ−６及びＭＣＰ−１のレベルを増加させて、抗体が初代免疫細胞においてＴＲＥＭ２依存性サイトカイン遺伝子を活性化できたことを示した。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
2020063268.tif 000069
【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
2020063268.tif 000072
【図１７Ｂ】
2020063268.tif 000073
【図１８Ａ】
2020063268.tif 000074
【図１８Ｂ】
2020063268.tif 000075
【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１９】
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【図２０Ａ−１】
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【図２０Ａ−２】
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【図２０Ａ−３】
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【図２０Ａ−４】
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【図２０Ａ−５】
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【図２０Ａ−６】
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【図２０Ａ−７】
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【図２０Ａ−８】
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【図２０Ａ−９】
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【図２０Ｂ−１】
2020063268.tif 000088
【図２０Ｂ−２】
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【図２０Ｂ−３】
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【図２０Ｂ−４】
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【図２０Ｂ−５】
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【図２０Ｂ−６】
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【図２０Ｂ−７】
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【図２０Ｂ−８】
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【図２０Ｂ−９】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月26日(2019.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＲＥＭ２タンパク質に結合する単離抗体であって、前記単離抗体が、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を誘導し、前記単離抗体が、１つ以上の自然免疫細胞の生存を促進する、またはＩＬ−６の発現を増加する、前記単離抗体。
【外国語明細書】
2020063268000001.pdf