(57)【要約】      （修正有）【課題】歯周病の予防及び／又は治療（特に歯周病進行抑制）のため、ジンジパイン活性を抑制する手段を提供する。【解決手段】歯周病進行抑制のための抗歯周病口腔組成物であって、銅クロロフィリンナトリウム及び塩化セチルピリジニウムを質量比１：１．２〜１００又は１．２〜２０：１で含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
銅クロロフィリンナトリウム及び塩化セチルピリジニウムを質量比１：１．２〜１００又は１．２〜２０：１で含有する、口腔用組成物。
【請求項２】
抗歯周病のための口腔用組成物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
抗歯周病が、歯周病進行抑制である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
銅クロロフィリンナトリウムを０．００１〜０．１質量％含有する、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
塩化セチルピリジニウムを０．００５〜０．１質量％含有する、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、口腔用組成物等に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（Ｐ．ｇ菌）は歯周炎の発症・進行において最重要視されている歯周病源菌である。
【０００３】
Ｐ．ｇ菌の産生する代表的な病原性因子として、ジンジパインが知られている。ジンジパインはプロテアーゼの１種で、ペプチド切断部位特異性の異なるＬｙｓ−ジンジパイン（Ｋｇｐ）とＡｒｇ−ジンジパイン（Ｒｇｐ）とが存在する。これらは相互に作用しながら歯肉上皮細胞間の結合の破壊性や上皮細胞そのものに対する傷害及び／又は増殖阻害、ひいては上皮バリアの破壊及び修復阻害を引き起こす。また、ジンジパインは、貪食細胞による貪食及び細胞内で消化を抑制する効果、並びに、補体系の破壊や上皮細胞内への侵入を助ける効果等も有するとされており、これによってＰ．ｇ菌の免疫系からの回避にも関与している。さらに、最近では、ジンジパインによる免疫系の抑制効果が、口腔内細菌叢のＤｙｓｂｉｏｓｉｓにつながることが報告されており、これらジンジパインの作用は、歯周病の進行と難治化につながっている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１６／１０４５２４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
以上のような事情のため、歯周病の予防及び／又は治療（特に歯周病進行抑制）のためには、ジンジパイン活性を抑制することが重要である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、ジンジパイン活性を抑制する手法を見出すことを目的に研究を行ったところ、銅クロロフィリンナトリウムが効率よくジンジパイン活性を抑制することを見出した。
【０００７】
そこで、次にジンジパイン活性を抑制し、且つＰ．ｇ菌の殺菌効果をも備えた口腔用組成物を調製するため、殺菌効果を奏する成分である塩化セチルピリジニウムと銅クロロフィリンナトリウムとを組み合わせて用いることを検討した。ところが、検討を進めたところ、銅クロロフィリンナトリウムと塩化セチルピリジニウムとを組み合わせて用いると、期待されたほどのジンジパイン活性抑制効果が得られない場合があることが見出された。
【０００８】
そこで、銅クロロフィリンナトリウム及び塩化セチルピリジニウムを組み合わせて用いる場合において、効率よくジンジパイン活性を抑制することが可能な手法を見出すことを目的に、さらに検討を重ねた。
【０００９】
その結果、本発明者らは、銅クロロフィリンナトリウムと塩化セチルピリジニウムとを特定の割合で組み合わせて用いることにより、効率よくジンジパイン活性を抑制でき、且つ、銅クロロフィリンナトリウムを単独で用いる場合に比べて殺菌効果も向上した口腔用組成物を調製できる可能性を見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。
【００１０】
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
銅クロロフィリンナトリウム及び塩化セチルピリジニウムを質量比１：１．２〜１００又は１．２〜２０：１で含有する、口腔用組成物。
項２．
抗歯周病のための口腔用組成物である、項１に記載の組成物。
項３．
抗歯周病が、歯周病進行抑制である、項２に記載の組成物。
項４．
銅クロロフィリンナトリウムを０．００１〜０．１質量％含有する、項１〜３のいずれかに記載の組成物。
項５．
塩化セチルピリジニウムを０．００５〜０．１質量％含有する、項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【発明の効果】
【００１１】
効率よくジンジパイン活性を抑制でき、且つ、銅クロロフィリンナトリウムを単独で用いる場合に比べて殺菌効果も向上した口腔用組成物が提供される。当該口腔用組成物は、抗歯周病（特に歯周病進行抑制）のために特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】銅クロロフィリンナトリウムによるジンジパイン（Ｋｇｐ及びＲｇｐ）の活性の抑制効果を検討した結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。本発明は、口腔用組成物及びその用途等を好ましく包含するが、これらに限定されるわけではなく、本発明は本明細書に開示され当業者が認識できる全てを包含する。
【００１４】
本発明に包含される口腔用組成物は、銅クロロフィリンナトリウムと塩化セチルピリジニウムとを含有する。以下、本発明に包含される当該口腔用組成物を「本発明の口腔用組成物」ということがある。また、本明細書においては、銅クロロフィリンナトリウムをＳＣＣと略記することがあり、また塩化セチルピリジニウムをＣＰＣと略記することがある。銅クロロフィリンナトリウム及び塩化セチルピリジニウムは、いずれも口腔用組成物分野において用いられる公知の成分である。これらの成分は、市販品を購入して用いることもできる。
【００１５】
本発明の口腔用組成物は、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１．２〜１００又は１．２〜２０：１で含有する。
【００１６】
なお、ＣＰＣによる殺菌効果は、ＳＣＣにより弱められる可能性があることも、今回の検討において見出された。ＳＣＣ単独で用いる場合に比べれば、ＳＣＣとＣＰＣとを組み合わせて用いる場合の方が殺菌効果は高まるが、ＣＰＣ本来の殺菌効果が奏され難いということである。殺菌効果が、より効率的に奏されるという観点から、ＣＰＣ含有量はＳＣＣ含有量と同量若しくはそれ以上であることが好ましい。このため、本発明の口腔用組成物においては、ＣＰＣによる殺菌効果が、より効率的に奏されるという観点からは、ＳＣＣとＣＰＣとの含有質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）は１：１．２〜１００であることがより好ましい。
【００１７】
本発明の口腔用組成物における、当該ＳＣＣ及びＣＰＣ含有質量比（すなわち、１：１．２〜１００又は１．２〜２０：１）のうち、ＳＣＣの含有比率が小さい比（すなわち、１：１．２〜１００）を質量比（ｉ）ということがある。また、当該質量比のうち、ＳＣＣの含有比率が大きい比（すなわち、１．２〜２０：１）を質量比（ｉｉ）ということがある。
【００１８】
質量比（ｉ）におけるＣＰＣ含有比率範囲（すなわち、１．２〜１００）の下限は、例えば１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３であってもよい。また、質量比（ｉ）におけるＣＰＣ含有比率範囲の上限は、例えば９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５０、４５、４０、３５、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、又は２であってもよい。
【００１９】
質量比（ｉｉ）におけるＳＣＣ含有比率範囲（すなわち、１．２〜２０）の下限は、例えば１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、又は３であってもよい。また、質量比（ｉｉ）におけるＳＣＣ含有比率範囲の上限は、例えば１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、又は２であってもよい。
【００２０】
本発明の口腔用組成物は、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．２〜１．２：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．２及び１．２：１で含有する組成物は除かれない）、口腔用組成物ということもできる。意外にも、ＳＣＣとＣＰＣの含有質量が１：１に近づくにつれ、ＳＣＣ単独により奏されるジンジパイン活性抑制効果に比べて、ＳＣＣ及びＣＰＣを組み合わせて得られるジンジパイン抑制効果が急激に低下する。このため、前記の質量比範囲（１：１．２〜１．２：１）でＳＣＣとＣＰＣとを含有する口腔用組成物は本発明の口腔用組成物からは除かれる（但し、好ましくは１：１．２及び１．２：１で含有する組成物は除かれない）。
【００２１】
なお、この「除く」記載方法であれば、例えば、本発明の口腔用組成物は、より好ましくは、例えば、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．３〜１．３：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．３及び１．３：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．４〜１．４：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．４及び１．４：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．５〜１．５：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．５及び１．５：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．６〜１．６：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．６及び１．６：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．７〜１．７：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．７及び１．７：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．８〜１．８：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．８及び１．８：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：１．９〜１．９：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：１．９及び１．９：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物、あるいは、ＳＣＣとＣＰＣとを質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）１：１００〜２０：１で含有する組成物であって、但し１：２〜２：１で含有する組成物を除く（但し、好ましくは１：２及び２：１で含有する組成物は除かれない）口腔用組成物であるということができる。また、このＳＣＣとＣＰＣとの質量比（１：１００〜２０：１）の「１：１００」及び「２０：１」についても、上述した「質量比（ｉ）におけるＣＰＣ含有比率範囲の上限」の記載、及び「質量比（ｉｉ）におけるＳＣＣ含有比率範囲の上限」の記載が、それぞれ、そのまま当てはまる。
【００２２】
本発明の口腔用組成物におけるＳＣＣの含有量は、好ましくは０．００１〜０．１質量％程度である。当該範囲の下限は、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０１１、０．０１２、０．０１３、０．０１４、又は０．０１５質量％程度であってもよい。また、当該範囲の上限は、０．０９、０．０８、０．０７、０．０６、又は０．０５質量％程度であってもよい。
【００２３】
また、本発明の口腔用組成物におけるＣＰＣの含有量は、好ましくは０．００５〜０．１質量％程度である。当該範囲の下限は、０．０１、０．０１５、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０３５、０．０４、０．０４５、又は０．０５質量％程度であってもよい。また、当該範囲の上限は、０．０９、０．０８、０．０７、０．０６、又は０．０５質量％程度であってもよい。
【００２４】
なお、ＣＰＣの含有量が、０．０２５質量％以上であると、ＣＰＣ含有量がＳＣＣ含有量と同量若しくはそれ以上でなくても、ＣＰＣによる殺菌効果が効率的に奏される。このため、ＣＰＣによる殺菌効果が、より効率的に奏されるという観点からは、ＣＰＣ含有量は、０．０２５質量％以上であることがさらに好ましい。
【００２５】
また、本発明の口腔用組成物が、特に液状口腔用組成物（液体口腔用組成物の他、ジェル状、クリーム状等の濃度が観念可能な組成物を含む）である場合、本発明の口腔用組成物におけるＳＣＣの濃度は、好ましくは１０〜１０００μｇ／ｍｌである。当該範囲の下限は２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、又は１５０μｇ／ｍｌであってもよい。また、当該範囲の上限は、９００、８００、７００、６００、又は５００μｇ／ｍｌであってもよい。
【００２６】
さらにまた、本発明の口腔用組成物が、特に液状口腔用組成物（液体口腔用組成物の他、ジェル状、クリーム状等の濃度が観念可能な組成物を含む）である場合、本発明の口腔用組成物におけるＣＰＣの濃度は、好ましくは５０〜１０００μｇ／ｍｌである。当該範囲の下限は１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００μｇ／ｍｌであってもよい。また、当該範囲の上限は、９００、８００、７００、６００、又は５００μｇ／ｍｌであってもよい。
【００２７】
なお、ＣＰＣの濃度が、２５０μｇ／ｍｌ以上であると、ＣＰＣ含有量がＳＣＣ含有量と同量若しくはそれ以上でなくても、ＣＰＣによる殺菌効果が効率的に奏される。このため、ＣＰＣによる殺菌効果が、より効率的に奏されるという観点からは、ＣＰＣ濃度は、２５０μｇ／ｍｌ以上であることがさらに好ましい。
【００２８】
なお、特に制限はされないが、ジンジパイン活性を特に効率よく抑制し、且つＣＰＣの殺菌効果も特に効率よく得られるという観点からは、本発明の口腔用組成物において、ＣＰＣの含有量が０．０２５〜０．１質量％程度、ＳＣＣ含有量が０．０１２〜０．１質量％であって、その含有質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）が１：２．５〜８又は１．２〜４：１程度であることが特に好ましい。特に、本発明の口腔用組成物が液状組成物である場合には、当該観点からは、ＣＰＣの含有濃度が２５０〜１０００μｇ／ｍｌ程度、ＳＣＣ含有濃度が１２０〜１０００μｇ／ｍｌ程度であって、その含有質量比（ＳＣＣ：ＣＰＣ）が１：２．５〜８又は１．２〜４：１程度であることが特に好ましい。
【００２９】
本発明の抗歯周病口腔用組成物は、固形組成物、液体組成物でありえる。当該抗歯周病口腔用組成物は、例えば医薬品、医薬部外品として用いることができる。また、本発明の抗歯周病口腔用組成物の形態は、特に限定するものではないが、常法に従って例えば軟膏剤、ペースト剤、パスタ剤、ジェル剤、液剤、スプレー剤、洗口液剤、液体歯磨剤、練歯磨剤、ガム剤等の形態（剤形）にすることができる。なかでも、洗口液剤、液体歯磨剤、練歯磨剤、軟膏剤、ペースト剤、液剤、ジェル剤であることが好ましい。
【００３０】
本発明の抗歯周病口腔用組成物は、本発明の効果を損なわない範囲で、口腔用組成物に配合し得る任意成分を単独で又は２種以上さらに含有してもよい。
【００３１】
例えば、界面活性剤として、ノニオン界面活性剤、アニオン界面活性剤または両性界面活性剤を配合することができる。具体的には、例えば、ノニオン界面活性剤としてはショ糖脂肪酸エステル、マルトース脂肪酸エステル、ラクトース脂肪酸エステル等の糖脂肪酸エステル；脂肪酸アルカノールアミド類；ソルビタン脂肪酸エステル；脂肪酸モノグリセライド；ポリオキシエチレン付加係数が８〜１０、アルキル基の炭素数が１３〜１５であるポリオキシエチレンアルキルエーテル；ポリオキシエチレン付加係数が１０〜１８、アルキル基の炭素数が９であるポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル；セバシン酸ジエチル；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油；脂肪酸ポリオキシエチレンソルビタン等が挙げられる。アニオン界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム等の硫酸エステル塩；ラウリルスルホコハク酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテルスルホコハク酸ナトリウム等のスルホコハク酸塩；ココイルサルコシンナトリウム、ラウロイルメチルアラニンナトリウム等のアシルアミノ酸塩；ココイルメチルタウリンナトリウム等が挙げられる。両性イオン界面活性剤としては、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルジメチルアミノ酢酸ベタイン等の酢酸ベタイン型活性剤；Ｎ−ココイル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルエチレンジアミンナトリウム等のイミダゾリン型活性剤；Ｎ−ラウリルジアミノエチルグリシン等のアミノ酸型活性剤等が挙げられる。これらの界面活性剤は、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。その配合量は、通常、組成物全量に対して０．１〜５質量％である。
【００３２】
また、香味剤として、例えば、メントール、カルボン酸、アネトール、オイゲノール、サリチル酸メチル、リモネン、オシメン、ｎ−デシルアルコール、シトロネール、α−テルピネオール、メチルアセタート、シトロネニルアセタート、メチルオイゲノール、シネオール、リナロール、エチルリナロール、チモール、スペアミント油、ペパーミント油、レモン油、オレンジ油、セージ油、ローズマリー油、珪皮油、シソ油、冬緑油、丁子油、ユーカリ油、ピメント油、ｄ−カンフル、ｄ−ボルネオール、ウイキョウ油、ケイヒ油、シンナムアルデヒド、ハッカ油、バニリン等の香料を用いることができる。これらは、単独または２種以上を組み合わせて組成物全量に対して例えば０.００１〜１．５質量％配合することができる。
【００３３】
また、甘味剤として、例えば、サッカリンナトリウム、アセスルファームカリウム、ステビオサイド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、ペリラルチン、タウマチン、アスパラチルフェニルアラニルメチルエステル、ｐ−メトキシシンナミックアルデヒド等を用いることができる。これらは、組成物全量に対して例えば０.０１〜１質量％配合することができる。
【００３４】
さらに、湿潤剤として、ソルビット、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１，３―ブチレングリコール、ポリプロピレングリコール、キシリット、マルチット、ラクチット、ポリオキシエチレングリコール等を単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。
【００３５】
防腐剤として、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン等のパラベン類、安息香酸ナトリウム、フェノキシエタノール、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン等を配合することができる。
【００３６】
着色剤として、青色１号、黄色４号、赤色２０２号、緑３号等の法定色素、群青、強化群青、紺青等の鉱物系色素、酸化チタン等を配合してもよい。
【００３７】
ｐＨ調整剤として、クエン酸、リン酸、リンゴ酸、ピロリン酸、乳酸、酒石酸、グリセロリン酸、酢酸、硝酸、またはこれらの化学的に可能な塩や水酸化ナトリウム等を配合してもよい。これらは、組成物のｐＨが４〜８、好ましくは５〜７の範囲となるよう、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。ｐＨ調整剤の配合量は例えば０．０１〜２重量％であってよい。
【００３８】
なお、本発明の口腔用組成物には、さらに、薬効成分として酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、コハク酸トコフェロール、またはニコチン酸トコフェロール等のビタミンＥ類、ドデシルジアミノエチルグリシン等の両性殺菌剤、トリクロサン、イソプロピルメチルフェノール等の非イオン性殺菌剤、デキストラナーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、ムタナーゼ、リゾチーム、溶菌酵素（リテックエンザイム）等の酵素、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウム等のアルカリ金属モノフルオロフォスフェート、フッ化ナトリウム、フッ化第一錫等のフッ化物、トラネキサム酸やイプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレステロール、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸、グリセロフォスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、カロペプタイド、アラントイン、カルバゾクロム、ヒノキチオール、硝酸カリウム、パラチニット等を、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。
【００３９】
また、基剤として、アルコール類、シリコン、アパタイト、白色ワセリン、パラフィン、流動パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、プラスチベース等を添加することも可能である。 
【００４０】
また、本発明の口腔用組成物は、公知の方法または公知の方法から容易に想到する方法により調製することができる。例えば、ＳＣＣ及びＣＰＣ並びに必要に応じてその他の成分を適宜混合することによって調製することができる。
【００４１】
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。また、本発明は、本明細書に説明した構成要件を任意の組み合わせを全て包含する。
【００４２】
また、上述した本発明の各実施形態について説明した各種特性（性質、構造、機能等）は、本発明に包含される主題を特定するにあたり、どのように組み合わせられてもよい。すなわち、本発明には、本明細書に記載される組み合わせ可能な各特性のあらゆる組み合わせからなる主題が全て包含される。
【実施例】
【００４３】
以下、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。なお、以下薬剤（銅クロロフィリンナトリウム（ＳＣＣ）、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、及びその混合物）の量については濃度（μｇ／ｍＬ）で示すが、用いた液の１ｍｌあたりの質量は１ｇより若干大きいものの、およそ１ｍｌ≒１ｇと考えることもできる。
【００４４】
ＳＣＣによるジンジパイン活性の抑制効果の検討
Ｐ．ｇ菌（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ  Ｗ８３）をＧＡＭ培地にて培養し、吸光度（Ｏ．Ｄ（６００））＝１．０に調整した。当該菌液を１００００ｒｐｍで遠心分離し、上清を回収した。回収した上清中にジンジパインが含まれる。各濃度に調整した銅クロロフィリンナトリウム（ＳＣＣ）を、回収した上清と混合し、３分間放置した。３分後、ＰＢＳで１００倍希釈したジンジパインの基質（Ｚ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＭＣＡ又はＺ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＭＣＡ；株式会社ペプチド研究所）と混合し、遮光して３７℃１時間静置した。なお、Ｚ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＭＣＡはBenzyloxycarbonyl-L-Histidyl-L-Glutamyl-L-Lysine 4-methylcoumaryl-7-amide (Hydrochloride Form)であり、Ｌｙｓ−ジンジパイン（Ｋｇｐ）活性により切断されて蛍光を発する試薬である。また、Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＭＣＡはBenzyloxycarbonyl-L-phenylalanyl-L-arginine 4-methylcoumaryl-7-amide (Hydrochloride Form)であり、Ａｒｇ−ジンジパイン（Ｒｇｐ）活性により切断されて蛍光を発する試薬である。１時間後、蛍光プレートリーダー（Ｇｅｍｉｎｉ  ＸＰＳ）にて蛍光強度（励起光：３８０ｎｍ、放出光：４４０ｎｍ）を測定した。薬剤濃度が０μｇ／ｍＬでの蛍光強度を１００％になるように換算し、各濃度のＳＣＣを処理した際のジンジパイン活性を算出した。なお、各濃度について検討はｎ＝２で行い、算出する値は平均値とした。算出された値が小さいほど、ジンジパイン活性が抑制されたことを示す。結果を図１に示す。
【００４５】
ＳＣＣ及びＣＰＣによるＰ．ｇ菌のジンジパイン活性の抑制効果の検討
上記と同様にして、ＳＣＣ及びＣＰＣを組み合わせて用いた際のＰ．ｇ菌のジンジパイン活性の抑制効果を検討した。すなわち、次のようにして検討した。Ｐ．ｇ菌（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ  Ｗ８３）をＧＡＭ培地にて培養し、吸光度（Ｏ．Ｄ（６００））＝１．０に調整した。当該菌液を１００００ｒｐｍで遠心分離し、上清を回収した。回収した上清中にジンジパインが含まれる。各濃度に調整した薬剤（銅クロロフィリンナトリウム（ＳＣＣ）、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、及びその混合物）を、回収した上清と混合し、３分間放置した。３分後、ＰＢＳで１００倍希釈したＬｙｓ−ジンジパイン（Ｋｇｐ）の基質（Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＭＣＡ；株式会社ペプチド研究所）と混合し、遮光して３７℃１時間静置した。１時間後、蛍光プレートリーダー（Ｇｅｍｉｎｉ  ＸＰＳ）にて蛍光強度（励起光：３８０ｎｍ、放出光：４４０ｎｍ）を測定した。薬剤濃度が０μｇ／ｍＬでの蛍光強度を１００％になるように換算し、各濃度の薬剤を処理した際のジンジパイン活性を算出した。なお、各濃度について検討はｎ＝２で行い、算出する値は平均値とした。算出された値が小さいほど、ジンジパイン活性が抑制されたことを示す。結果を表１にまとめて示す。
【００４６】
【表１】
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【００４７】
ＳＣＣ及びＣＰＣによるＰ．ｇ菌殺菌効果の検討
Ｐ．ｇ菌（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ  Ｗ８３）をＧＡＭ培地にて培養し、吸光度（Ｏ．Ｄ（６００））＝１．０に調整した。各処理濃度の倍の濃度に調整した薬剤（銅クロロフィリンナトリウム（ＳＣＣ）、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、及びその混合物）を、調整した菌液と等量混合し、３分間放置した。３分後、当該薬剤及び菌液の混合液に、殺菌剤不活化ＰＢＳ（０．０７％レシチン＋０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０）を１／１０量加え、殺菌効果を停止させた。その後、ＧＡＭ培地にの当該混合液を１０倍量加え、３７℃嫌気条件下で１６時間培養した。培養後、吸光プレートリーダー（ｘＭａｒｋ  マイクロプレートリーダー）にて培地の吸光度（Ｏ．Ｄ（６００））を測定し、濁度を測定して殺菌効果を確認した。吸光度が小さいほど菌が増殖していないことから、吸光度が小さいほど殺菌効果が高いということができる。結果を表２にまとめて示す。
【００４８】
【表２】
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【図１】
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