(57)【要約】      （修正有）【課題】Ｌ−メチオニンの含有量が高い飼料添加剤用組成物を提供する。【解決手段】６０〜９９.９０重量％の高い含有量のＬ−メチオニンとＬ−フェニルアラニン及びＬ−チロシンを含む飼料添加剤用組成物及びそれを含む動物飼料組成物とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
６０〜９９.９０重量％のＬ−メチオニン、０.０５〜５重量％のＬ−フェニルアラニン及び０.０１〜３重量％のＬ−チロシンを含む、飼料添加剤用組成物。
【請求項２】
前記組成物は、前記Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニンおよびＬ−チロシン以外の、０.０１〜１３重量％のその他のアミノ酸をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記その他のアミノ酸は、グルタミン酸を含み、当該グルタミン酸の含有量は、組成物全体の重量に対して０.０１〜１１重量％の範囲である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記その他のアミノ酸は、ホモセリンを含み、当該ホモセリンの含有量は、組成物全体の重量に対して０.０１〜１重量％の範囲である、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記その他のアミノ酸は、Ｏ−アセチルホモセリンを含み、当該Ｏ−アセチルホモセリンの含有量は、組成物全体の重量に対して０.０１〜１重量％の範囲である、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物は、０.０１〜２０重量％のイオンをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物は、０を超え２未満の重量％のアセテートをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
請求項１乃至請求項７のいずれか一項に係る組成物を含む、動物飼料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、飼料添加剤用組成物及びそれを含む動物飼料組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
メチオニンは、生体内の必須アミノ酸の一種であり、動物飼料、食品添加剤、医薬用輸液剤及び医薬品の合成原料等として用いられる。メチオニンは、化学的合成と生物学的合成を介して産生することができる。
【０００３】
化学的合成は、主に５−（β−メチルメルカプトエチル）−ヒダントイン（５−（β−methylmercapto ethyl）−hydantoin）を加水分解させる反応によってＤ，Ｌ−メチオニンを産生するものである。
【０００４】
生物学的合成の例を挙げると、米国登録特許ＵＳ７７４５１９５Ｂ２号には、シスタチオニンシンターゼ（cystathionine synthase）に変異を加えて、微生物がシステインを用いらずに直接Ｈ２ＳまたはＣＨ３ＳＨを用いてホモシステインまたはメチオニンを直接産生する方法が開示されている。また、大韓民国登録特許公報第１０−０９０５３８１号には、微生物発酵によりＬ−メチオニン前駆体を産生し、その後、これを基質として酵素転換反応によりＬ−メチオニンを産生する二段階工法が開示されている。
【０００５】
従来、化学的に産生されたメチオニンは、Ｄ，Ｌ−メチオニンが混合された形で産生されるので、Ｌ−メチオニンのみを収得するためには、高価な追加精製反応を必要とする。一方、生物学的合成により微生物から直接産生されるメチオニンは、Ｌ型であるという長所はあるが、産生量が非常に微量であり、大規模な発酵産生が困難であるだけでなく、均一な状態の発酵物を得るのが難しい。故に、従来の安価の飼料添加剤では、Ｌ−メチオニンは主成分として含まれていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＵＳ７７４５１９５Ｂ２（公開日２０１０．０６．０９）
【特許文献２】ＫＲ１０−０９０５３８１Ｂ１（公告日２００９．０６．３０）
【特許文献３】大韓民国登録特許第１０−０９０５３８１号
【特許文献４】大韓民国登録特許第１０−０９０５３８１号
【特許文献５】大韓民国登録特許第１０−１１３６２８９号
【特許文献６】大韓民国登録特許第１０−１１１７０１２号
【特許文献７】大韓民国登録特許第１０−１２００１７９号
【特許文献８】大韓民国登録特許第１０−１２５０６５１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで、本発明者らは、かかる問題を克服するために研究を重ねた結果、微生物発酵によりＬ−メチオニン前駆体を産生した後、酵素転換反応により大量のＬ−メチオニンを収得した。その後、これに対する精製工程開発により均一な品質のＬ−メチオニン含有量が高い組成物を提供することができ、このような組成物を含有する飼料添加剤が動物で優れた効果を示すことを発見し、本発明を完成するに至った。
したがって、本発明の目的は、Ｌ−メチオニンの含有量が高い飼料添加剤用組成物を提供することである。
本発明の他の目的は、前記組成物を含む動物飼料組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的を達成するための本発明は、６０〜９９.９０重量％のＬ−メチオニン、０.０５〜５重量％のＬ−フェニルアラニン及び０.０１〜３重量％のＬ−チロシンを含む飼料添加剤用組成物を提供する。
本発明は、また、前記組成物を含む動物飼料組成物を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、微生物発酵によるＬ−メチオニン前駆体の産生及びその酵素転換反応によりＬ−メチオニンを大量生産し、これを結晶化することにより、従来の飼料添加剤よりも動物の栄養供給を改善させられるＬ−メチオニンの含有量が高い飼料添加剤用組成物及びそれを含む動物飼料組成物を提供するのに有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１１】
本発明の第１の態様によれば、本発明は、Ｌ−メチオニンの含有量が高い飼料添加剤用組成物を提供する。
前記Ｌ−メチオニンの含有量が高い組成物は、含有量が増大したＬ−メチオニンを含むものであり、具体的にＬ−メチオニンとＬ−フェニルアラニン及びＬ−チロシンを含むことができる。また、前記Ｌ−メチオニンの含有量が高い組成物に、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニンおよびＬ−チロシン以外の一つ以上の栄養成分をさらに含むことができる。ここでは、前記栄養成分は、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニンおよびＬ−チロシン以外のその他のアミノ酸、アセテート、イオンであり得るが、これらに限定されるものではない。
【００１２】
本発明における前記組成物は、多量のＬ−メチオニンを含ませる製造方法であれば制限なく採択することができる。例えば、前記組成物は、従来の特許に開示されている２段階の工程からなるＬ−メチオニン産生方法により、Ｌ−メチオニンを産生した後、結晶化させる工程により製造され得るが、これに限定されるものではない。
【００１３】
具体的には、前記２段階の工程からなるＬ−メチオニン産生方法は、大韓民国登録特許第１０−０９０５３８１号、大韓民国登録特許第１０−０９０５３８１号、大韓民国登録特許第１０−１１３６２８９号、大韓民国登録特許第１０−１１１７０１２号、大韓民国登録特許第１０−１２００１７９号、大韓民国登録特許第１０−１２５０６５１号などに開示されており、これらの特許は、その内容全体が参考として本発明に引用されている。
【００１４】
より具体的には、前記２段階の工程からなるＬ−メチオニン産生方法は、第１段階として、Ｌ−メチオニン前駆体産生菌株を培地で培養してＬ−メチオニン前駆体を産生する段階と；第２段階として、前記段階で産生されたＬ−メチオニン前駆体に硫黄源を添加して酵素反応によりＬ−メチオニンを産生する段階と；からなる。
【００１５】
先ず、Ｌ−メチオニン前駆体は、これを産生することができる微生物変異体または組換え微生物を適正な培地で培養することにより産生することができる。具体的には、Ｌ−メチオニン前駆体は、Ｏ−アシルホモセリン（O-acyl homoserine）、例えば、Ｏ−アセチルホモセリン（O-Acetyl homoserine）、Ｏ−スクシニルホモセリン（O-succinyl homoserine）、プロピオニルホモセリン（Propionyl homoserine）、アセトアセチルホモセリン（Acetoacetyl homoserine）、クマロイルホモセリン（Coumaroyl homoserine）、マロニルホモセリン（Malonyl homoserine）、ヒドロキシメチルグルタリルホモセリン（Hydroxymethylglutaryl homoserine）、ピメリルホモセリン（Pimelyl homoserine）を含むが、これらに限定されるものではない。より具体的には、Ｏ−アセチルホモセリン（O-Acetyl homoserine）またはＯ−スクシニルホモセリン（O-succinyl homoserine）であり得、さらにより具体的には、Ｏ−アセチルホモセリンであり得る。
【００１６】
Ｌ−メチオニン前駆体産生菌株の培養過程は、当業界で知られている適当な培地と培養条件に応じて行われる。このような培養過程は、当業者であれば選ばれる菌株に応じて容易に調整して使用することができる。前記培養方法の例としては、バッチ式、連続式および流加式培養が挙げられるが、これらに限定されるものではない。このような様々な培養方法は、例えば、文献（“Biochemical Engineering”by James M. Lee，Prentice-Hall International Editions，pp138-176）に開示されている。
【００１７】
培養に使用される培地は、特定の菌株の要求条件を適切に満足させなければならない。様々な微生物の培地は、例えば、文献（“Manual of Methods for General Bacteriology” by the American Society for Bacteriology，Washington D.C.，米国，1981年）に開示されている。前記培地は、様々な炭素源、窒素源および微量元素成分を含むことができる。炭素源は、グルコース（glucose）、乳糖（lactose）、ショ糖（sucrose）、乳糖、果糖（fructose）、マルトース（maltose）、でんぷん（starch）及びセルロース（cellulose）のような炭水化物と; 大豆油（soybean oil）、ヒマワリ油（sunflower oil）、ヒマシ油（castor oil）、ウェーバー油（weber oil）及びココナッツ油（coconut oil）のような脂肪と；パルミチン酸（palmitic acid）、ステアリン酸（stearic acid）及びリノール酸（linoleic acid）酸のような脂肪酸と；グリセロール（glycerol）及びエタノール（ethanol）のようなアルコールと；酢酸（acetic acid）のような有機酸（organic acid）と；を含むことができるが、これらに限定されるものではない。これらの炭素源は、単独または組み合わせて用いることができる。窒素源としては、ペプトン（peptone）、酵母エキス（yeast extract）、肉汁（gravy）、麦芽エキス（malt extract）、 コーンスティープリカー （corn steep liquor（CSL））及び豆粉（bean flour）のような有機窒素源及び尿素（urea）、硫酸アンモニウム（ammonium sulfate）、塩化アンモニウム（ammonium chloride）、リン酸アンモニウム（ammonium phosphate）、 炭酸アンモニウム（ammonium carbonate）及び硝酸アンモニウム（ammonium nitrate）のような無機窒素源を含むことができるが、これらに限定されるものではない。これらの窒素源は、単独または組み合わせて用いることができる。前記培地には、リン酸源としてさらにリン酸二水素カリウム（potassium dihydrogen phosphate）、リン酸水素二カリウム（dipotassium hydrogen phosphate）及び対応するナトリウム含有塩（sodium-containing salts）を含むことができるが、これらに限定されるものではない。また、培地は、硫酸マグネシウム（magnesium sulfate）または硫酸鉄（iron sulfate）のような金属を含むことができるが、これらに限定されるものではない。また、アミノ酸、ビタミンおよび適切な前駆体などを添加することができるが、これらに限定されるものではない。これらの培地または前駆体は、培養物にバッチ式または連続式で添加することができる。
【００１８】
また、培養中に水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、アンモニア、リン酸および硫酸のような化合物を培養物に適切な方法で添加して培養物のｐＨを調整することができる。また、培養中に脂肪酸ポリグリコールエステルのような消泡剤を使用して気泡の生成を抑制することができる。また、培養物の好気状態を保持するために、培養物内に酸素または酸素含有気体（例えば、空気）を注入することができる。
【００１９】
培養物の温度は、通常２０℃〜４５℃であり、好ましくは２５℃〜４０℃であり得る。培養期間は、所望のＬ−メチオニン前駆体の生成量が得られるまで続けられるが、好ましくは１０〜１６０時間、より好ましくは１５〜８０時間である。
【００２０】
次に、Ｌ−メチオニン前駆体産生菌株によって産生されたＬ−メチオニン前駆体と硫黄源を基質として用いる転換酵素または転換酵素を含む菌株を用いた酵素転換反応によりＬ−メチオニンおよび有機酸を産生することができる。前記転換酵素は、硫黄源転移酵素であり得、具体的には、シスタチオニンシンターゼ（Cystathionine synthase）またはＯ−スクシニルホモセリンサルフヒドリラーゼ（O-succinyl homoserine sulfhydrylase）またはＯ−アセチルホモセリンサルフヒドリラーゼ（O-acetylhomoserine sulfhydrylase）活性を有する酵素であり得、より具体的には、Ｏ−アセチルホモセリンサルフヒドリラーゼ活性を有する酵素であり得る。前記硫黄源は、硫黄元素を供給する物質であり、具体的にはメチルメルカプタンまたはこの塩であり得、より具体的にはメチルメルカプタンであり得る。
【００２１】
一具現例によれば、微生物発酵により蓄積されたＯ−スクシニルホモセリン（O-succinyl homoserine）またはＯ−アセチルホモセリンとメチルメルカプタンのような硫黄源を基質として用い、シスタチオニンγ合成酵素（cystathionine gamma synthase）またはＯ−スクシニルホモセリンサルフヒドリラーゼ（O-succinyl homoserine sulfhydrylase）またはＯ−アセチルホモセリンサルフヒドリラーゼ（O-acetylhomoserine sulfhydrylase）などの酵素の反応を用いてＬ−メチオニンを産生することができ、具体的には、Ｏ−アセチルホモセリンとメチルメルカプタンを基質として用い、Ｏ−アセチルホモセリンサルフヒドリラーゼ酵素を用いてＬ−メチオニンとアセテートを産生することができる。
【００２２】
前記活性を有する酵素をコードする遺伝子の配列は、米国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ：National Center for Biotechnology Information）および日本のＤＮＡデータバンク（ＫＥＧＧ：Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）のようなデータベースから容易に得ることができる。
【００２３】
前記のような方法で産生されたＬ−メチオニンは、結晶化を介して分離、精製することができ、これにより、本発明のＬ−メチオニン含有量が高い組成物を得ることができる。
【００２４】
具体的には、Ｌ−メチオニンの結晶化方法は、
ａ）メチオニン反応液を濃縮させた後、結晶化されたメチオニンを分離し、その後、母液を回収する段階と；
ｂ）分離されたメチオニン結晶をシードとして用いて顆粒を生成し、生成された顆粒を乾燥させて粉末化する段階と；を含むことができる。
【００２５】
追加的な結晶化変形法によれば、ａ）段階で分離された母液は、
ａ−１）再び濃縮し、結晶化されて、ｂ）で分離されたメチオニン結晶と混合されて洗浄され、乾燥するか、
ａ−２）再び濃縮し、結晶化された後、溶解されて、他のメチオニンの反応液に加えられる。
【００２６】
さらに、前記結晶化方法は、前記ａ）段階の前にメチオニン反応液をｐＨ４.０?５.５に調整する段階を含むことができ、また、ｐＨ調整段階の後、メチオニン反応液を活性炭でろ過する段階を含むことができる。
【００２７】
一具現例において、本発明に係るＬ−メチオニンの含有量が高い組成物は、前記酵素転換反応によって得られたＬ−メチオニンの反応液を、メチオニンの濃度が１５０?２００ｇ／Ｌになるまで濃縮するか、濃縮前に前記反応液に硫酸を投入してｐＨ４.０?５.５に調整して濃縮した後、結晶分離機を用いて結晶を分離して母液（mother liquid、ＭＬ）を回収し、分離されたメチオニン結晶をシード（seed）として用いて造粒機で母液を噴霧乾燥して粉末化することにより得られる。このように得られたＬ−メチオニン組成物中のＬ−メチオニンの含有量は、組成物全体の重量に対して約６０〜７０重量％の範囲であり得る。
【００２８】
他の具現例において、本発明に係るＬ−メチオニン組成物は、前記酵素転換反応によって得られたＬ−メチオニンの反応液を、メチオニンの濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで濃縮するか、濃縮前に前記反応液に硫酸を投入してｐＨ４．０〜５.５に調整して濃縮した後、結晶分離機を用いて第１次で結晶を分離して母液を回収し、分離された母液を再びメチオニンの濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで濃縮して第２次結晶を取得し、得られた第１次結晶及び第２次結晶を混合、洗浄し、これを乾燥させて得られる。このように得られたＬ−メチオニン組成物中のＬ−メチオニンの含有量は、組成物全体の重量に対して約８０〜９５重量％の範囲であり得る。
【００２９】
また他の具現例において、本発明に係るＬ−メチオニン組成物は、前記酵素転換反応によって得られたＬ−メチオニンの反応液に硫酸を投入してｐＨ４.０〜５.５に調整し、メチオニン総量の０.５〜２％の活性炭を添加して５０℃で１〜２時間混合した後、ろ過して活性炭及び不純物を除去し、当該ろ液をメチオニンの濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで濃縮し、結晶分離機を用いて第１次で結晶を回収する。分離された母液を再びメチオニンの濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで濃縮して第２次の結晶を取得し、得られた第２次結晶を溶解させてＬ−メチオニン反応液に再投入して用いることにより得られる。このように得られたＬ−メチオニン組成物中のＬ−メチオニンの含有量は、組成物全体の重量に対して約９５乃至９９.９０質量％の範囲であり得る。
【００３０】
前記分離、精製によって得られた本発明の組成物中のＬ−メチオニンの含有量は、組成物全体の重量に対して６０〜９９.９０重量％の範囲であり得る。一具現例において、前記組成物は、約６０〜７０重量％のＬ−メチオニンを含むことができる。他の具現例において、前記組成物は、約８０〜９５重量％のＬ−メチオニンを含むことができる。また他の具現例において、前記組成物は、約９５〜９９.９０重量％のＬ−メチオニンを含むことができる。
【００３１】
具体的には、前記方法に基づいて精製されたＬ−メチオニンの含有量が高い飼料添加剤用組成物は、６０〜９９.９０重量％のＬ−メチオニンと０.０５〜５重量％のＬ−フェニルアラニン及び０.０１〜３重量％のＬ−チロシンを含むことができる。
【００３２】
前記Ｌ−メチオニンの含有量が高い飼料添加剤用組成物は、前記Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニンおよびＬ−チロシン以外の、０.０１〜１３重量％のその他のアミノ酸を含むことができ、ここで、このアミノ酸は、グルタミン酸、ホモセリンまたはＯ−アセチルホモセリンからなる群から選ばれたいずれか一つ以上であり得る。
【００３３】
前記グルタミン酸の含有量は、組成物全体の重量に対して０.０１〜１１重量％の範囲であり得る。
【００３４】
前記ホモセリンの含有量は、組成物全体の重量に対して０.０１〜１重量％の範囲であり得る。
【００３５】
前記Ｏ−アセチルホモセリンの含有量は、組成物全体の重量に対して０.０１〜１重量％の範囲であり得る。
【００３６】
また、前記Ｌ−メチオニンの含有量が高い組成物は、０.０１〜２０重量％のイオンをさらに含むことができる。
【００３７】
また、前記Ｌ−メチオニンの含有量が高い組成物は、０を超え２未満の重量％のアセテートをさらに含むことができる。
【００３８】
本発明の飼料添加剤用組成物は、上述したように、Ｌ−メチオニンを結晶化を介して分離、精製して得られたＬ−メチオニンの含有量が高い組成物を得ることができるが、これに限定されるものではない。他に記述していなくても本発明の飼料添加剤用組成物は、当業者が予想できる範囲内の他の栄養成分をさらに含むことができる。
【００３９】
本発明の第二の様態によれば、本発明は、前記飼料添加剤用組成物を含む動物飼料組成物を提供する。
【００４０】
前記飼料添加剤用組成物は、当業者が予測可能な範囲で含むことができ、これは用いられる動物の種類、年齢、状態などによって適切なレベルに調整することができる。具体的には、前記飼料添加剤は、０.０１〜０.５重量％の範囲で含むことができる。
【００４１】
本発明のＬ−メチオニン含有量が高い飼料添加剤用組成物は、商業的に通常の動物飼料組成物内に混入でき、例えば、牛、豚、羊、家禽などに供給することができる。このため、本発明の飼料添加剤用組成物は、通常の動物飼料の構成成分と混合してもよく、必要に応じて錠剤形に加工してもよい。
【００４２】
通常の動物飼料の構成成分は、例えば、トウモロコシ、大麦、オート麦、大豆、魚粉、籾殻、大豆油、鉱物、微量元素、アミノ酸およびビタミンである。
【００４３】
以下、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明する。しかし、これらの実施例は、本発明を例示的に説明するためのもので、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４４】
実施例１：Ｌ−メチオニン前駆体産生菌株の発酵
本実施例では、Ｌ−メチオニン前駆体を産生するために発酵槽培養を行った。
メチオニン前駆体産生菌株としてＯ−アセチルホモセリン産生菌株である大腸菌ＫＣＣＭ−１０５６８（大韓民国登録特許第１０−０９０５３８１号）を用いて、メチオニン前駆体（Ｏ−アセチルホモセリン）を大量生産するために５Ｌ発酵槽培養を行った。抗生剤含有の平板ＬＢ培地に前記菌株を接種し、３１℃で一晩培養した。その後、単一コロニーを抗生剤含有の１０ｍｌ ＬＢ培地に接種した後、３１℃で５時間培養し、再び２００ｍｌメチオニン前駆体シード（Seed培地）を含む１０００ｍｌ三角フラスコに１００倍希釈して３１℃、２００ｒｐｍで３〜１０時間培養した後、５Ｌ発酵槽に接種して流加式培養（Fed batch）発酵法により５０〜１００時間培養した。主培養発酵培地の組成を下記表１に示した。
表１：メチオニン前駆体産生発酵槽培地の組成
【表１】
2020031656.tif 000002
【００４５】
実施例２：メチオニン転換反応
前記実施例１で産生された発酵培養液を膜ろ過（membrane filtration）を用いてろ過することにより、Ｏ−アセチルホモセリン培養液と細胞を分離した。０.１μｍの膜を用いて通過した液体、すなわち細胞を分離した残りの部分を透過液（permeate）とし、細胞汚泥（cell sludge）を保持液（retentate）とした。
前記保持液に脱イオン水（deionized water）を添加し、残りのＯ−アセチルホモセリンを再回収した。
前記透過液に、Ｏ−アセチルホモセリンサルフヒドリラーゼ（O-acetylhomoserine sulfhydrylase）活性を有する酵素または前記酵素を含む菌株を用いて、メチプモカプタンとＬ−メチオニン転換酵素であるＯ−アセチルホモセリンサルフヒドリラーゼまたはロドバクター セファロイデス（Rhodobacter sphaeroides）由来のＯ−アセチルホモセリンサルフヒドリラーゼ（O-acetylhomoserine sulfhydrylase）（大韓民国登録特許第１０−１２５０６５１号）を添加して酵素転換反応を行った。
反応中に残存Ｏ−アセチルホモセリンの濃度を測定し、メチルメルカプタンを供給して６時間酵素転換反応を行い、Ｏ−アセチルホモセリンの濃度が測定されないときにその反応を終了した。
【００４６】
実施例３：Ｌ−メチオニンの結晶化工程
Ｌ−メチオニンの含有量が高い組成物を得るために、前記実施例２で製造されたメチオニン反応液を結晶化した。本実施例に係る結晶化方法により、最小６０.００重量％〜最大９９.９０重量％のメチオニンを含有する組成物を取得することができた。
（１）Ａ結晶化方法
実施例２で得られたメチオニンの反応液上にメチオニン濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで反応液を濃縮し、結晶分離機を用いて結晶を分離して母液（mother liquid、ＭＬ）を回収した。分離されたメチオニン結晶をシード（seed）として用い、造粒機で母液を噴射しながら乾燥させて粉末化したメチオニン組成物を得た。
このようにして得られたメチオニン組成物を下記の表２に示した。
【表２】
2020031656.tif 000003
【００４７】
（２）Ｂ結晶化方法
実施例２で得られたメチオニンの反応液を濃縮するか、硫酸を投入してｐＨ４.０〜５.５に調整した後、濃縮した。メチオニン濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで反応液を濃縮し、結晶分離機を用いて第１次結晶を分離して母液を回収した。第１次結晶が分離された母液を、再びメチオニン濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで濃縮して第２次結晶を取得した。第１次結晶と第２次結晶を混合して洗浄し、これを乾燥させて粉末化したメチオニン組成物を製造した。
このようにして得られたメチオニン組成物を下記の表３に示した。
【表３】
2020031656.tif 000004
【００４８】
（３）Ｃ結晶化方法
実施例２で得られたメチオニンの反応液に硫酸を投入してｐＨ４.０〜５.５に調整した。反応液にメチオニン総量の０.５〜２重量％の活性炭（active carbon）を添加して５０℃で１〜２時間混合した後、ろ過して活性炭及び不純物を除去した。ろ液は、メチオニンの濃度が１５０〜２００ｇ／Ｌになるまで濃縮し、結晶分離機を用いて結晶を取得した。結晶を分離して回収された母液は、再び濃縮して第２次結晶を回収し、取得された第２次結晶は溶解させてｐＨ４.０〜５.５に調整したＬ−メチオニン反応液に再投入して前記過程を繰り返して行った。
このようにして得られたメチオニン組成物を下記の表４に示した。
【表４】
2020031656.tif 000005
【００４９】
実施例４：メチオニン組成物の効能確認
前記実施例３で得られたメチオニン組成物の効能を確認するために仕様実験を行った。本実施例では、実施例３のＣ結晶化方法により得られたＬ−メチオニンの含有量が高い組成物（以下、Ｌ−Ｍｅｔと称する）を使用し、対照群としてはＤ，Ｌ−メチオニンを含有する組成物（ここで、Ｄ，Ｌ−メチオニンは、化学的工法により産生された純度９９.９９％以上のものであり、以下、Ｄ，Ｌ−Ｍｅｔと称する）を使用した。
【００５０】
（１）２５週齢の産卵鶏におけるＬ−メチオニン組成物の効能
卵への影響を確認するために、産卵鶏にＬ−ＭｅｔとＤ，Ｌ−Ｍｅｔをそれぞれ処理した。
実験設計
−生後２５週齢の産卵鶏 （２５wk of age、laying hens）
−基礎飼料（basal diet、ＢＤ）にＬ−ＭｅｔまたはＤ，Ｌ−Ｍｅｔをそれぞれ０.１重量％、０.２重量％添加する。
表５  基礎飼料の組成
【表５】
2020031656.tif 000006
【００５１】
結果
【表６】
2020031656.tif 000007
【００５２】
前記結果から分かるように、基礎飼料に比べて、対照群であるＤ，Ｌ−Ｍｅｔ処理群及びＬ−Ｍｅｔ処理群の両方において卵に良い影響を与えることが確認された。そこで、Ｌ−Ｍｅｔ処理群とＤ，Ｌ−Ｍｅｔ処理群を比較すると、Ｌ−Ｍｅｔ処理群において、卵の生産能及び卵の重さは約１％向上し、卵の厚さは約２〜３％増加したことが確認された。
したがって、Ｄ，Ｌ−Ｍｅｔ添加に比べてＬ−Ｍｅｔを添加したとき、産卵鶏に対して肯定的な効果を示すことが確認された。
【００５３】
（２）子豚におけるＬ−メチオニン組成物の効能
子豚におけるＬ−メチオニン組成物の効能を確認するために、Ｌ−ＭｅｔとＤ，Ｌ−Ｍｅｔをそれぞれ処理した後、一日増体量を比較した。
実験設計
−子豚（piglet）
−基礎飼料（basal diet、ＢＤ）にＬ−ＭｅｔまたはＤ，Ｌ−Ｍｅｔをそれぞれ０.０５重量％、０.１１重量％添加する。
表７  基礎飼料の組成
【表７】
2020031656.tif 000008
【００５４】
結果
【表８】
2020031656.tif 000009
＊ＡＤＧ：平均一日増体量（Average daily gain）
【００５５】
前記結果から分かるように、子豚の一日増体量を比較してみると、基礎飼料に比べて、Ｄ，Ｌ−Ｍｅｔ処理群は最高約６０％向上し、Ｌ−Ｍｅｔ処理群は最高１００％向上したことが確認された。そして、Ｄ，Ｌ−Ｍｅｔ処理群とＬ−Ｍｅｔ処理群を比較すると、Ｌ−Ｍｅｔ処理群がＤ，Ｌ−Ｍｅｔ処理群に比べて約５〜４０％の高い増体率を示すことが確認された。
【００５６】
（３） 肉鶏におけるＬ−メチオニン組成物の効能
肉鶏におけるＬ−メチオニン組成物の効能を確認するために、Ｌ−ＭｅｔとＤ，Ｌ−Ｍｅｔをそれぞれ処理した後、増体効率を比較した（Gain：Feed ratio、G：F ratio）。
実験設計
−生後１日の肉鶏（１d of age、ross３０８）
−基礎飼料（basal diet、ＢＤ）にＬ−ＭｅｔまたはＤ，Ｌ−Ｍｅｔをそれぞれ０.１重量％、０.２重量％、０.３重量％添加する。
表  ９  基礎飼料の組成
【表９】
2020031656.tif 000010
【００５７】
結果
【表１０】
2020031656.tif 000011
【００５８】
前記結果から分かるように、基礎飼料にＬ−ＭｅｔまたはＤＬ−Ｍｅｔ添加したすべての群において増体効率が向上することが確認された。Ｌ−Ｍｅｔ処理群とＤ，Ｌ−Ｍｅｔ処理群を比較すると、Ｌ−Ｍｅｔ処理群ではテストの開始時点から終了時点まで０.５％〜５％までの高い増体効率を示すことが確認され、テスト終了時点においてもＬ−Ｍｅｔ処理群では約１〜４％の高い増体効率を示すことが確認された。
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月5日(2019.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物全体の重量に対して各々、６０〜９９.９０重量％のＬ−メチオニン、０.０５〜５重量％のＬ−フェニルアラニン及び０.０１〜３重量％のＬ−チロシン、さらに０.０１〜１重量％のホモセリン及び０.０１〜１重量％のＯ−アセチルホモセリン、０.０１〜１１重量％のグルタミン酸、０.０１〜２０重量％のイオン、及び０を超え２未満の重量％のアセテートを含む、飼料添加剤用組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物を含む、動物飼料組成物。