(57)【要約】【課題】本発明は、医薬用組成物、及びがんの治療剤のスクリーニング方法を提供する。【解決手段】ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質を有効成分とし、メラノーマ又はグリオーマの治療又は予防に用いられる、医薬用組成物、及び被験物質をＳＴＡＰ２タンパク質と接触させ、前記被験物質が前記ＳＴＡＰ２タンパク質と結合した場合に、前記被験物質をメラノーマ又はグリオーマの治療剤の候補物質として選抜する、がんの治療剤のスクリーニング方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質を有効成分とし、メラノーマ又はグリオーマの治療又は予防に用いられる、医薬用組成物。
【請求項２】
前記ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質が、前記ＳＴＡＰ２遺伝子の発現を抑制する物質である、請求項１に記載の医薬用組成物。
【請求項３】
前記ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質が、ＳＴＡＰ２タンパク質と結合する物質である、請求項１に記載の医薬用組成物。
【請求項４】
被験物質をＳＴＡＰ２タンパク質と接触させ、前記被験物質が前記ＳＴＡＰ２タンパク質と結合した場合に、前記被験物質をメラノーマ又はグリオーマの治療剤の候補物質として選抜する、がんの治療剤のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの治療又は予防に用いられる医薬用組成物、及びがんの治療剤をスクリーニングする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞の増殖や機能分化は、細胞間で情報を伝達するシグナル分子と呼ばれる分子の緻密な相互作用のもとに成り立っており、細胞の増殖や機能分化メカニズムの異常は細胞のがん化につながる。また、転移などのがんの悪性化にも、シグナル分子の異常が深く関わっている。シグナル分子のなかでもキナーゼ等酵素群の異常はがん化と密接に関与しており、多くのがん治療薬がキナーゼ等酵素群を標的としている。キナーゼ等酵素群を標的とするがん治療薬の多くは、酵素活性中心やその近傍、又は分子内の酵素活性調節領域に対する低分子阻害剤である。しかし、キナーゼの酵素中心は非常に相同性が高いため、特異性の高い低分子阻害剤獲得は難しく、限界もある。
【０００３】
近年、種々の細胞内シグナル伝達系の詳細な解析により、キナーゼ等酵素群の特異的アダプタータンパク質が同定されている。特異的アダプタータンパク質に対する低分子阻害剤、酵素群とアダプタータンパク質の相互作用を標的とした低分子化合物等々が、新たな疾患治療薬の標的として注目されている。
【０００４】
例えば、ＳＴＡＰ（Signal transducing adaptor protein）ファミリーは、リン脂質結合性を持つＰＨ（Pleckstrin homology）ドメインと、リン酸化チロシン結合領域であるＳＨ２（Src homology 2）ドメインを持つアダプタータンパク質である。ＳＴＡＰファミリーは、ＳＴＡＰ１とＳＴＡＰ２が存在する。生体内におけるＳＴＡＰファミリーの機能は未だ明らかになっていないが、他のアダプタータンパク質と同様に、様々なシグナル伝達経路に関与していると推定されている。ＳＴＡＰ２は、Ｎ末端側からＰＨドメイン、ＳＨ２ドメインを含有し、さらにＣ末端側に、ＳＨ３ドメイン含有タンパク質との結合に関与するプロリンリッチ領域を有するアダプタータンパク質である。ＳＴＡＰ２は、これまでに、乳がん特異的チロシンキナーゼＢｒｋと相互作用し、ＳＴＡＴ３の活性化に寄与しており、ＳＴＡＰ２の遺伝子ノックダウンにより乳がん細胞の増殖が抑制されることや（非特許文献１参照。）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の原因遺伝子であるＢＣＲ−ＡＢＬチロシンキナーゼの活性を亢進してＢＣＬ−ＡＢＬ依存的な細胞増殖を増強したり、ＳＴＡＰ２の遺伝子ノックダウンによりヒトＣＭＬがん細胞の腫瘍形成が抑制されること（非特許文献２参照。）が報告されている。また、ＳＴＡＰ２は、がん細胞表面の上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のタンパク質量を調節して前立腺がん細胞の増殖を誘導することや（非特許文献３参照。）、チロシナーゼの量的変化を制御してメラノーマがん細胞の転移を調節すること（非特許文献４参照。）も報告されている。ただし、メラノーマがん細胞の細胞増殖とＳＴＡＰ２との関係についての報告は未だなされていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ikeda, et al., Journal of Biological Chemistry, 2010, vol.285, p.38093-38103.
【非特許文献２】Sekine，et al.，Oncogene，2012，vol.31，p.4384-4396.
【非特許文献３】Kitai, et al., Journal of Biological Chemistry, 2017, vol.292, p.19392-19399.
【非特許文献４】Sekine, et al., Journal of Biological Chemistry, 2015, vol.290, p.17462-17473.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、がん、特にメラノーマ又はグリオーマの治療又は予防に用いられる医薬用組成物、及びメラノーマ又はグリオーマの治療剤をスクリーニングする方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ＳＴＡＰ２がメラノーマ又はグリオーマに由来する細胞株で高発現していること、ＳＴＡＰ２の発現を抑制することによってメラノーマ又はグリオーマに由来するがん細胞の増殖が抑制されることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の医薬用組成物、及びがんの治療剤のスクリーニング方法を提供するものである。
［１］  ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質を有効成分とし、メラノーマ又はグリオーマの治療又は予防に用いられる、医薬用組成物。
［２］  前記ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質が、前記ＳＴＡＰ２遺伝子の発現を抑制する物質である、前記［１］の医薬用組成物。
［３］  前記ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質が、ＳＴＡＰ２タンパク質と結合する物質である、前記［１］の医薬用組成物。
［４］  被験物質をＳＴＡＰ２タンパク質と接触させ、前記被験物質が前記ＳＴＡＰ２タンパク質と結合した場合に、前記被験物質をメラノーマ又はグリオーマの治療剤の候補物質として選抜する、がんの治療剤のスクリーニング方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、メラノーマ又はグリオーマに対する抗がん作用を備える、ＳＴＡＰ２を標的とした新規な医薬用組成物を提供できる。
また、本発明により、メラノーマ又はグリオーマの予防若しくは治療のための医薬品の有効成分となり得る候補物質をスクリーニングすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１において、各細胞のＳＴＡＰ２の相対発現量を測定した結果を示した図である。
【図２】実施例１において、ＳＴＡＰ２特異的なｓｉＲＮＡ（ｓｉＳＴＡＰ２）又はコントロールｓｉＲＮＡ（ｓｉＳｃｒａｍｂｌｅ）を導入した各細胞のＳＴＡＰ２の相対発現量を測定した結果を示した図である。
【図３】実施例１において、ＲＮＡ干渉によりＳＴＡＰ２遺伝子の発現を抑制したヒトグリオーマ由来Ｕ２５１細胞の細胞数（Ａ）、ヒトメラノーマ由来Ｇ３６１細胞の細胞数（Ｂ）、ヒト子宮頸がん由来ＨｅＬａ細胞（Ｃ）、及びヒト肺胞基底上皮腺がん由来Ａ５４９細胞（Ｄ）を経時的に測定した結果を示した図である。
【図４】実施例１において、ＲＮＡ干渉によりＳＴＡＰ２遺伝子の発現を抑制したＵ２５１細胞（Ａ）及びＧ３６１細胞（Ｂ）について、転写因子ＳＴＡＴ３及びそのリン酸化体のウェスタンブロッティングの結果を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
＜医薬用組成物＞
本発明に係る医薬用組成物は、ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する物質（以下、まとめて「ＳＴＡＰ２阻害物質」という。）を有効成分とする。後記実施例に示す通り、ＳＴＡＰ２は、メラノーマ及びグリオーマのがん細胞において高発現しており、ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害することにより、メラノーマ及びグリオーマに対して抗がん効果が得られる。また、ＳＴＡＰ欠損マウス自身では大きな異常が認められないことから、ＳＴＡＰ阻害物質の副作用は軽微であることが予想される。このため、本発明に係る医薬用組成物は、メラノーマ又はグリオーマの治療又は予防に有用である。
【００１２】
ＳＴＡＰ阻害物質としては、ＳＴＡＰ２遺伝子の発現を抑制又は阻害する物質であってもよい。当該物質としては、ＳＴＡＰ２遺伝子のｃＤＮＡの部分領域のアンチセンス鎖や、ＲＮＡ干渉を引き起こす核酸等が挙げられる。ＲＮＡ干渉を引き起こす核酸としては、具体的には、ＳＴＡＰ２遺伝子のｃＤＮＡの部分領域（ＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）標的領域）のセンス鎖とアンチセンス鎖からなる二本鎖構造を有するｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ又はｍｉＲＮＡが挙げられる。また、標的であるがん細胞の細胞内において、ｓｉＲＮＡ等を生産させることができるＲＮＡｉ誘導ベクターであってもよい。ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びＲＮＡｉ誘導ベクターの作製は、標的とするＳＴＡＰ２遺伝子のｃＤＮＡの塩基配列情報から、常法により設計し製造することができる。また、ＲＮＡｉ誘導ベクターは、市販の各種ＲＮＡｉベクターの塩基配列に、ＲＮＡｉ標的領域の塩基配列を挿入することによって作製することもできる。
【００１３】
ＳＴＡＰ阻害物質としては、ＳＴＡＰ２タンパク質と結合する物質であってもよい。当該物質としては、核酸、ペプチド、タンパク質、脂質、糖質、低分子化合物、又はこれらの複合物質等のいずれであってもよい。ＳＴＡＰ２タンパク質と結合する核酸、ペプチド、低分子化合物は、例えば、核酸、ペプチド、低分子化合物等のライブラリーに対して、ＳＳＴＡＰ２の全長タンパク質又は部分タンパク質と結合する物質をスクリーニングすることによって取得できる。スクリーニングを行う核酸、ペプチド、低分子化合物等のライブラリーは、公知の様々なライブラリーを用いることができる。例えば核酸やペプチドの場合には、ＳＥＬＥＸ法を用いることによって、ＳＴＡＰ２タンパク質と特異的に結合するアプタマーを取得できる。
【００１４】
ＳＴＡＰ阻害物質としては、例えば、ＳＴＡＰ２タンパク質と特異的に結合する抗体（抗ＳＴＡＰ２抗体）であってもよい。当該抗体としては、モノクローナル抗体でもよく、ポリクローナル抗体でもよい。また、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体等の人工的に合成された抗体であってもよい。これらの抗体は、常法により製造することができる。
【００１５】
ＳＴＡＰ阻害物質としては、ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害する対象の細胞に、ＳＴＡＰ２遺伝子のドミナントネガティブ体を発現させることができる発現ベクターであってもよい。細胞内に存在するドミナントネガティブ体により、ＳＴＡＰ２による正常なシグナル伝達が阻害される結果、ＳＴＡＰ２遺伝子の機能が抑制又は阻害される。当該ドミナントネガティブ体としては、ＰＨドメイン、ＳＨ２ドメイン、プロリンリッチ領域などのＳＴＡＰ２中の機能ドメインの部分欠失体やＳＴＡＰ２機能に重要なリン酸化部位のチロシン残基を他のアミノ酸残基に変換した変異体が挙げられる。当該変異体としては、例えば、当該チロシン残基をフェニルアラニンに変換したＹＦ変異体が挙げられる。ＳＴＡＰ２遺伝子のドミナントネガティブ体の発現ベクターは、例えば、市販の各種細胞発現用ベクターに、ＳＴＡＰ２遺伝子のドミナントネガティブ体をコードする塩基配列からなるＤＮＡ断片を挿入することによって作製することができる。
【００１６】
本発明に係る医薬用組成物は、ＳＴＡＰ阻害物質の作用を損なわない限り、その他の有効成分を含有していてもよい。その他の有効成分としては、例えば、ＳＴＡＰ２遺伝子以外を標的とする抗がん剤等のように、メラノーマ又はグリオーマに対する治療効果が期待される物質が挙げられる。
【００１７】
本発明に係る医薬用組成物の投与経路は特に限定されるものではなく、標的とする細胞及びそれを含む組織に応じて適宜決定される。例えば、本発明に係る医薬用組成物の投与経路としては、経口投与、関節への直接投与、経皮投与、経静脈投与、腹腔内投与、注腸投与等が挙げられる。
【００１８】
本発明に係る医薬用組成物は、通常の方法によって、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、チュアブル剤、徐放剤などの経口用固形剤、溶液剤、シロップ剤などの経口用液剤、注射剤、注腸剤、スプレー剤、貼付剤、軟膏剤などに製剤化することができる。製剤化は、製剤上の必要に応じて、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、流動化剤、溶剤、溶解補助剤、緩衝剤、懸濁化剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤、防腐剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤、着色剤等を配合して常法により行うことができる。
【００１９】
本発明に係る医薬用組成物をヒトやヒト以外の動物に投与し、ＳＴＡＰ２遺伝子の機能を抑制又は阻害することにより、メラノーマ細胞及びグリオーマ細胞の細胞増殖を抑制することができる。当該動物としては、特に限定されるものではなく、ヒトであってもよく、ヒト以外の動物であってもよい。非ヒト動物としては、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等の哺乳動物や、ニワトリ、ウズラ、カモ等の鳥類等が挙げられる。
【００２０】
＜メラノーマ又はグリオーマにおけるＳＴＡＰ２遺伝子発現量＞
メラノーマ又はグリオーマにおけるＳＴＡＰ２遺伝子の発現量は、正常細胞に比べて多い。このため、ＳＴＡＰ２遺伝子の発現量は、メラノーマ又はグリオーマを検出するための診断マーカーとして有用である。例えば、被検動物から採取された細胞又は組織中のＳＴＡＰ２遺伝子の発現量が、予め設定された所定の閾値以上である場合には、当該被検動物がメラノーマ又はグリオーマを発症している可能性が高いと評価することができる。逆に、ＳＴＡＰ２遺伝子の発現量が予め設定された所定の閾値よりも少ない場合には、当該被検動物はメラノーマ又はグリオーマを発症している可能性が低い、と評価することができる。
【００２１】
当該閾値は、ＳＴＡＰ２遺伝子の発現量の測定方法の種類等を考慮して、また必要な予備検査等を行うことにより、適宜設定することができる。例えば、その他の検査方法の結果から、メラノーマ又はグリオーマを発症していないことが確認されている被検動物から採取された細胞又は組織のＳＴＡＰ２遺伝子の発現量の測定値と、メラノーマ又はグリオーマを発症していることが確認されている被検動物から採取された細胞又は組織のＳＴＡＰ２遺伝子の発現量の測定値とを比較することにより、メラノーマ又はグリオーマを発症している群と発症していない群とを識別するための閾値を適宜設定することができる。
【００２２】
ＳＴＡＰ２遺伝子の発現量は、ｍＲＮＡレベルで測定してもよく、タンパク質レベルで測定してもよい。ＳＴＡＰ２遺伝子の発現量の測定方法としては、細胞中の標的タンパク質量又は標的のｍＲＮＡ量を定量的又は半定量的に測定可能な方法であれば特に限定されるものではなく、検体中のｍＲＮＡやタンパク質の検出に用いられる公知の方法の中から、適宜選択して用いることができる。各方法は常法により行うことができる。
【００２３】
ＳＴＡＰ２遺伝子の発現量を、メラノーマ又はグリオーマを検出するための診断マーカーとして用いる対象の被検動物としては、特に限定されるものではなく、ヒトであってもよく、ヒト以外の動物であってもよい。非ヒト動物としては、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等の哺乳動物や、ニワトリ、ウズラ、カモ等の鳥類等が挙げられる。
【００２４】
＜メラノーマ又はグリオーマの治療剤のスクリーニング方法＞
一般的に、タンパク質の機能は、当該タンパク質に他の分子が結合することにより、当該タンパク質と本来のパートナー分子との相互作用が阻害される結果、低下又は阻害される。すなわち、ＳＴＡＰ２タンパク質と結合する分子の中には、ＳＴＡＰ２タンパク質の機能を阻害することにより、メラノーマ又はグリオーマの細胞増殖を抑制できるものがある。このため、被験物質のＳＴＡＰ２タンパク質との結合能を指標として、メラノーマ又はグリオーマの治療剤をスクリーニングすることができる。
【００２５】
具体的には、被験物質をＳＴＡＰ２タンパク質と接触させ、当該被験物質がＳＴＡＰ２タンパク質と結合した場合に、当該被験物質をメラノーマ又はグリオーマの治療剤の候補物質として選抜する。これにより、メラノーマ又はグリオーマの治療剤のスクリーニングを行うことができる。
【００２６】
被験物質とＳＴＡＰ２タンパク質とを接触させる方法は特に限定されるものではない。例えば、精製した又は粗精製したＳＴＡＰ２タンパク質と被験物質とを適当な溶媒に共に混合した反応液を調製し、当該反応液から両者の結合体を各種の方法で検出することができる。当該方法の場合、予めＳＴＡＰ２タンパク質にペプチドタグを付加しておき、当該ペプチドタグに対する抗体を利用した免疫沈降法を利用して被験物質とＳＴＡＰ２タンパク質との結合の有無を調べることができる。ペプチドタグに代えてビオチンを用い、アビジン又はストレプトアビジンで修飾されたビーズを用いることにより、ＳＴＡＰ２タンパク質と結合した被験物質を回収することができる。
【００２７】
被験物質としては、特に限定されるものではなく、例えば、核酸であってもよく、ペプチドであってもよく、タンパク質であってもよく、低分子化合物であってもよい。
【実施例】
【００２８】
次に実施例等を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２９】
＜細胞培養＞
以降の実験で用いたヒトグリオーマ細胞株（Ｕ２５１細胞）、ヒトメラノーマ細胞株（Ｇ３６１細胞）、ヒト前立腺がん細胞（ＤＵ１４５細胞）、ヒト乳がん細胞（ＭＣＦ７細胞）、ヒト急性単球性白血病細胞（ＴＨＰ１細胞）、ヒト子宮頸がん細胞（ＨｅＬａ細胞）、及びヒト肺胞基底上皮腺がん細胞（Ａ５４９細胞）は１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）含有ＤＭＥＭを用いて、ヒト前立腺がん細胞（ＬＮＣａＰ細胞）は１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩを用いて、それぞれ３７℃、５容量％ＣＯ２の条件下で継代培養した。
【００３０】
＜ｓｉＲＮＡのトランスフェクション＞
以降の実験において、各種細胞へのｓｉＲＮＡのトランスフェクションは、市販のトランスフェクション用試薬（製品名：Lipofectamine（登録商標）2000、Thermo Fisher Scientific社製）を用いて行った。具体的には、siRNA-Lipofectamine2000複合体を、６ウェルプレートで７０％コンフルエントとなった細胞に滴下して４８時間培養した後、解析に用いた。
【００３１】
＜細胞増殖／生存の測定＞
以降の実験において、細胞増殖／生存の測定の測定は、市販の細胞係数用キット（製品名：Cell Counting Kit-8、同仁化学社製）を用いて行った。具体的には、まず、各種細胞に前記の方法でｓｉＲＮＡを導入し、２４時間後にそれらを９６ウェルプレートに１０，０００細胞／ウェルの割合で播き直した。その後、所定時間培養した後、各ウェルに生存する細胞の数を、前記市販キットを用いて計測した。
【００３２】
＜リアルタイムＰＣＲ法＞
以降の実験において、各細胞における各遺伝子の発現量のｍＲＮＡレベルでの測定は、次の通りにして行った。まず、各細胞を細胞溶解用試薬（製品名：「TRI Reagent」、Thermo Fisher Scientific社製）を用いて溶解させた後、ＲＮＡを精製した。得られたＲＮＡと逆転写酵素（製品名：「ReverTra Ace」、TOYOBO社製）を用いて逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを調製した。次に、調製したｃＤＮＡを用いて定量的ＰＣＲ（quantitative real-time PCR）を行い、標的遺伝子の相対的な発現量を定量した。
【００３３】
＜ウェスタンブロット解析＞
以降の実験において、各細胞における各遺伝子の発現量のタンパク質レベルでの測定は、次の通りにして行った。まず、各細胞を細胞溶解液にて処理して細胞可溶化液（total cell lysate sample）を調製した。得られた細胞可溶化液に対してＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、タンパク質を分離した後、ＰＶＤＦ膜に転写した。この転写膜を、各一次抗体液と反応させた後にＨＲＰ標識二次抗体と反応させ、化学発光用試薬（製品名：「Immobilon（登録商標） Western Chemiluminescent HRP Substrate」、Millipore社製）を用いて化学発光させ、タンパク質バンドとして検出した。
【００３４】
［実施例１］
グリオーマ細胞及びメラノーマ細胞におけるＳＴＡＰ２の働きを証明するために、まず、これらの細胞においてＳＴＡＰ２が発現しているかどうかを、定量的ＰＣＲ法によって調べた。
【００３５】
具体的には、ヒトグリオーマ由来Ｕ２５１細胞、ヒトメラノーマ由来Ｇ３６１細胞、ヒト前立腺がん由来ＬＮＣａＰ細胞、ヒト前立腺がん由来ＤＵ１４５細胞、ヒト乳がん由来ＭＣＦ７細胞、ヒト急性単球性白血病由来ＴＨＰ１細胞、ヒト子宮頸がん由来ＨｅＬａ細胞、及びヒト肺胞基底上皮腺がん由来Ａ５４９細胞を培養し、各がん細胞におけるヒトＳＴＡＰ２（ＮＣＢＩアクセッション番号：ＮＭ_００１０１３８４１）の発現量を測定した。測定結果を図１に示す。Ｕ２５１細胞及びＧ３６１細胞においては、これまでＳＴＡＰ２の高発現が報告されている乳がん細胞や前立腺がん細胞と同様に、ＳＴＡＰ２の高発現が観察された。
【００３６】
さらに、ＳＴＡＰ２発現がヒトグリオーマ及びヒトメラノーマの細胞増殖に関与しているかどうかを、Ｕ２５１細胞、Ｇ３６１細胞、ＨｅＬａ細胞、及びＡ５４９細胞にＳＴＡＰ２特異的なｓｉＲＮＡ（ｓｉＳＴＡＰ２）をトランスフェクションして内因性ＳＴＡＰ２発現を低下させることにより検討した。対照として、内因性遺伝子発現に影響しないコントロールｓｉＲＮＡ（ｓｉＳｃｒａｍｂｌｅ）をトランスフェクションした。
【００３７】
図２に、ｓｉＲＮＡのトランスフェクション後、３日間培養した細胞におけるＳＴＡＰ２の相対発現量（ｓｉＳｃｒａｍｂｌｅ導入細胞のＳＴＡＰ２発現量を１とする）を測定した結果を示す。ｓｉＳＴＡＰ２の導入により、内因性のＳＴＡＰ２遺伝子の発現量は０．５以下にまで低下したことが確認された。
【００３８】
次いで、各細胞について、ｓｉＳＴＡＰ２又はｓｉＳｃｒａｍｂｌｅを導入した後、３日間培養し、細胞数を経時的に測定した。測定結果を図３に示す。ＳＴＡＰ２発現低下ヒトグリオーマがん細胞（ｓｉＳＴＡＰ２を導入したＵ２５１細胞）では、コントロールグリオーマ細胞（ｓｉＳｃｒａｍｂｌｅを導入したＵ２５１細胞）に比べて、有意に細胞増殖の低下が観察された（図３（Ａ））。同様に、ＳＴＡＰ２発現低下ヒトメラノーマがん細胞（ｓｉＳＴＡＰ２を導入したＧ３６１細胞）においても、コントロールメラノーマ細胞（ｓｉＳｃｒａｍｂｌｅを導入したＧ３６１細胞）に比べて有意に細胞増殖の低下が観察された（図３（Ｂ））。一方、ＳＴＡＰ２発現低下ヒト子宮頸がん細胞（ｓｉＳＴＡＰ２を導入したＨｅＬａ細胞）及びＳＴＡＰ２発現低下ヒト肺胞基底上皮腺がん細胞（ｓｉＳＴＡＰ２を導入したＡ５４９細胞）においては、コントロールヒト子宮頸がん細胞及びコントロールヒト肺胞基底上皮腺がん細胞と比べて細胞増殖の低下は観察されなかった（図３（Ｃ）及び（Ｄ））。
【００３９】
また、グリオーマ及びメラノーマの増悪化に関与することが報告されている転写因子ＳＴＡＴ３の活性化への影響を、コントロール細胞（ｓｉＳｃｒａｍｂｌｅ導入細胞）とＳＴＡＰ２発現低下細胞（ｓｉＳＴＡＰ２導入細胞）とで比較検討したところ、Ｕ２５１細胞及びＧ３６１細胞のどちらの細胞でも、ＳＴＡＰ２発現低下によってＳＴＡＴ３の活性化の指標となるＳＴＡＴ３チロシンリン酸化の低下が観察された（図４）。
【００４０】
以上の結果から、ＳＴＡＰ２は、グリオーマ及びメラノーマの細胞増殖及び増悪化因子であるＳＴＡＴ３活性化を正に調節する分子であることがわかった。ＳＴＡＰ２は、グリオーマ患者及びメラノーマ患者のための新しい抗がん剤開発の重要な標的である。また、ＳＴＡＰ２を標的とした分子標的治療薬は、既存の抗がん薬との併用によりグリオーマ又はヒトメラノーマ治療の有力な武器になりうる。
【図１】
2020111553.tif 000002
【図２】
2020111553.tif 000003
【図３】
2020111553.tif 000004
【図４】
2020111553.tif 000005