(57)【要約】      （修正有）【課題】炎症ならびに結合組織の疾患及び障害、例えば、線維症、腹膜炎、及び肝臓損傷の治療における、セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物及びそれを含む医薬組成物の使用の提供。【解決手段】腹膜炎の治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を前記対象に投与することを含む、腹膜炎の治療方法。急性肝臓損傷の治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を前記対象に投与することを含む、急性肝臓損傷の治療方法。【選択図】図１
2020111586.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書または図面に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１５年２月１０日に出願された米国出願第６２／１１４，３０４号の利益を主張する。その内容は、参照することによって全体として本明細書に組み込まれる。
分野
本開示は、セニクリビロック、その塩または溶媒和物、それを含む医薬組成物、その調製方法、ならびに、炎症ならびに結合組織の疾患及び障害、とりわけ線維症、腹膜炎、及び肝臓損傷の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
セニクリビロック（ＣＶＣとしても知られる）は、（Ｓ，Ｅ）−８−（４−（２−ブトキシエトキシ）フェニル）−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ−（４−（（（１−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル）スルフィニル）フェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロベンゾ［ｂ］アゾシン−５−カルボキサミドの一般名である。セニクリビロックメシル酸塩の化学構造は図１に示される。セニクリビロックは、ＣＣケモカイン受容体タイプ２（ＣＣＲ２）及びＣＣケモカイン受容体タイプ５（ＣＣＲ５）受容体に結合し、その活性を阻害する（２４）。これらの受容体は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）等のウイルスの細胞内への侵入に関与するだけでなく、免疫細胞の損傷部位への動員に重要でもある。この受容体の活性の阻害は、抗炎症効果がありうる。ごく最近、線維症の発症において炎症が果たす役割が調べられた［３０］。ＣＣケモカイン受容体タイプ２（ＣＣＲ２）及びＣＣＲ５が、肝線維症の進行に関与する可能性があることが分かった［３、４、５、３１、３２］。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｕａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＣＲ２  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２００９；１７４：１７６６−１７７５．
【非特許文献２】Ｓｅｋｉ  Ｅ，  Ｄｅ  Ｍｉｎｉｃｉｓ  Ｓ，  Ｇｗａｋ  ＧＹ，  Ｋｌｕｗｅ  Ｊ，  Ｉｎｏｋｕｃｈｉ  Ｓ，  Ｂｕｒｓｉｌｌ  ＣＡ，  Ｌｌｏｖｅｔ  ＪＭ，  Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＤＡ，  Ｓｃｈｗａｂｅ  ＲＦ．  ＣＣＲ１  ａｎｄ  ＣＣＲ５  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００９；１１９：１８５８−１８７０．
【非特許文献３】Ｓｅｋｉ  Ｅ，  ｄｅ  Ｍｉｎｉｃｉｓ  Ｓ，  Ｉｎｏｋｕｃｈｉ  Ｓ，  Ｔａｕｒａ  Ｋ，  Ｍｉｙａｉ  Ｋ，  ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊｅｎ  Ｎ，  Ｓｃｈｗａｂｅ  ＲＦ，  Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＤＡ．  ＣＣＲ２  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ２００９；５０：１８５−１９７．
【非特許文献４】Ｍｉｕｒａ  Ｋ，  Ｙａｎｇ  Ｌ，  ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊｅｎ  Ｎ，  Ｏｈｎｉｓｈｉ  Ｈ，  Ｓｅｋｉ  Ｅ．  Ｈｅｐａｔｉｃ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＣＣＲ２．  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２０１２；３０２：Ｇ１３１０−１３３１．
【非特許文献５】Ｂｅｒｒｅｓ  Ｍ−Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｃｃｌ５  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１０；  １２０（１１）：  ４１２９−４１４０
【非特許文献６】Ｂｅｎｙｏｎ，  ＲＣ  ａｎｄ  ＭＪ  Ａｒｔｈｕｒ，  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｓｅｍｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．  ２００１  Ａｕｇ；２１（３）：３７３−８４．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
１つの実施形態において、本発明は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療方法を提供する。別の実施形態では、該線維症または線維性の疾患もしくは状態は肝線維症または腎線維症である。さらに別の実施形態では、該肝線維症は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と関連している。さらに別の実施形態では、該肝線維症は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）と関連している。さらに別の実施形態では、該肝線維症は、新生肝硬変と関連している。別のさらなる実施形態では、該肝線維症は、非肝硬変肝線維症を含む。さらなる実施形態では、該対象はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している。さらなる実施形態では、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物は、セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物及びフマル酸を含む医薬組成物として処方される。さらなる実施形態では、該対象は、アルコール性肝疾患、ＨＩＶとＨＣＶの重感染、ＨＣＶ感染、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、メタボリック症候群（ＭＳ）、及びそれらの組合せからなる群から選択される疾患または状態を有する。
【０００５】
１つの実施形態において、本発明は、ＮＡＳＨの治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、ＮＡＳＨの治療方法を提供するとともに、該ＮＡＳＨまたはＮＡＳＨに関連する肝線維症は、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）と関連している。
【０００６】
１つの実施形態において、本発明は、ＮＡＳＨの治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、ＮＡＳＨの治療方法を提供するとともに、該ＮＡＳＨまたはＮＡＳＨに関連する肝線維症は、メタボリック症候群（ＭＳ）と関連している。
【０００７】
１つの実施形態において、本発明は、ＮＡＳＨの治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、ＮＡＳＨの治療方法を提供するとともに、肝線維症は、ＨＩＶとＨＣＶの重感染と関連している。
【０００８】
１つの実施形態において、本発明は、ＮＡＳＨの治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、ＮＡＳＨの治療方法を提供するとともに、肝線維症は、ＨＣＶ感染と関連している。
【０００９】
１つの実施形態において、本発明は、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が経口組成物として処方される治療方法を提供する。
【００１０】
１つの実施形態において、本発明は、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が１日１回または１日２回投与される治療方法を提供する。
【００１１】
１つの実施形態において、本発明は、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を１つ以上の追加の活性薬剤と併用する治療方法を提供する。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の活性薬剤は、侵入阻害剤、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ鎖移転阻害剤、成熟阻害剤、及びそれらの組合せからなる群から選択される１つ以上の抗レトロウイルス剤である。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の抗レトロウイルス剤は、ラミブジン、エファビレンツ、ラルテグラビル、ビベコン（ｖｉｖｅｃｏｎ）、ベビリマット（ｂｅｖｉｒｉｍａｔ）、アルファインターフェロン、ジドブジン、アバカビル、ロピナビル、リトナビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルのプロドラッグ、エムトリシタビン、エルビテグラビル、コビシスタット、ダルナビル、アタザナビル、リルピビリン、ドルテグラビル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【００１２】
さらなる実施形態において、該１つ以上の追加の活性薬剤は、１つ以上の免疫系抑制剤である。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の活性薬剤は、シクロスポリン、タクロリムス、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、シロリムス、エベロリムス、アザチオプリン、ミコフェノール酸、メトトレキサート、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン、及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【００１３】
さらなる実施形態において、該１つ以上の追加の活性薬剤は、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（ＮＡＣ）ならびにアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＴ  ＩＩアンタゴニスト、オベチコール酸（ＯＣＡ）、ＧＦＴ５０５、シムツズマブ（ｓｉｍｔｕｚｕｍａｂ）、またはそれらの組合せ等の薬剤が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の抗線維化剤である。
【００１４】
１つの実施形態において、本発明は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を受ける対象における１つ以上の生体分子のレベルを検出すること、及び該１つ以上の生体分子のレベルの増減に基づいて治療計画を決めることを含む治療方法を提供するとともに、該生体分子は、リポ多糖（ＬＰＳ）、ＬＰｓ結合タンパク質（ＬＢＰ）、１６Ｓ  ｒＤＮＡ、ｓＣＤ１４、腸の脂肪酸結合タンパク質（Ｉ−ＦＡＢＰ）、ゾヌリン−１、コラーゲン１ａ１及び３ａ１、ＴＧＦ−β、フィブロネクチン−１、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される。
【００１５】
１つの実施形態において、本発明は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を受ける対象における１つまたは生体分子のレベルを検出することを含む治療方法を提供するとともに、所定の標準レベルと比較した該１つ以上の生体分子のレベルの増減は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療効果の予測となり、該生体分子は、リポ多糖（ＬＰＳ）、ＬＰｓ結合タンパク質（ＬＢＰ）、１６Ｓ  ｒＤＮＡ、ｓＣＤ１４、腸の脂肪酸結合タンパク質（Ｉ−ＦＡＢＰ）、ゾヌリン−１、コラーゲン１ａ１及び３ａ１、ＴＧＦ−β、フィブロネクチン−１、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される。
【００１６】
さらなる実施形態において、該１つ以上の生体分子は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を受ける対象由来の生体サンプルで測定される。さらに別の実施形態では、該生体サンプルは、血液、皮膚、毛包、唾液、口腔粘膜、膣粘膜、汗、涙、上皮組織、尿、精液（ｓｅｍｅｎ、ｓｅｍｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ）、精漿、前立腺液、尿道球腺液（カウパー腺液）、排泄物、生検、腹水、脳脊髄液、リンパ液、脳、及び組織抽出サンプルまたは生検サンプルから選択される。
【００１７】
１つの実施形態において、本発明は、腹膜炎の治療を必要とする対象において、治療有
効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、腹膜炎の治療方法を提供する。１つの実施形態では、本発明は、腹膜炎の治療を必要とする対象における腹膜炎の治療用のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を提供する。１つの実施形態では、本発明は、腹膜炎の治療を必要とする対象での腹膜炎の治療用の薬剤の製造のための治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物の使用を提供する。さらなる実施形態では、該腹膜炎は、感染性または非感染性である。さらなる実施形態では、該腹膜炎は、消化管の穿孔と関連している。別のさらなる実施形態では、該腹膜炎は、腹膜への体液の漏出と関連している。別のさらなる実施形態では、該腹膜炎は、異物と関連している。
【００１８】
１つの実施形態において、本発明は、感染性腹膜炎の治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、感染性腹膜炎の治療方法を提供する。
【００１９】
１つの実施形態において、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物は、１つ以上の追加の腹膜炎の治療及び／または薬剤と併用して投与される。さらなる実施形態では、該追加の活性薬剤は、１つ以上の抗生物質である。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の抗生物質は、ペニシリン類、セファロスポリン類、マクロライド類、フルオロキノロン類、スルホンアミド類、テトラサイクリン類、及びアミノグリコシド類またはそれらの組合せからなる群から選択される。
【００２０】
１つの実施形態において、本発明は、肝臓障害の治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を該対象に投与することを含む、肝臓障害の治療方法を提供する。１つの実施形態では、本発明は、急性肝臓損傷の治療を必要とする対象における急性肝臓損傷の治療用のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を提供する。１つの実施形態では、本発明は、急性肝臓損傷の治療を必要とする対象での急性肝臓損傷の治療用の薬剤の製造のための治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物の併用使用を提供する。１つの実施形態では、該肝臓障害は、アセトアミノフェン誘発性急性肝臓損傷である。１つの実施形態では、該肝臓障害は、薬物誘発性肝臓損傷である。１つの実施形態では、該肝臓障害は、アルコール性肝臓損傷である。１つの実施形態では、該肝臓障害は、化学物質誘発性肝臓損傷である。１つの実施形態では、該肝臓障害は、毒素誘発性肝臓損傷である。１つの実施形態では、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物は、肝臓障害に対する１つ以上の追加の治療及び／または薬剤との併用で投与される。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の活性薬剤は、ｎ−アセチルシステイン（アセチルシステイン；ＮＡＣ）である。１つの実施形態では、該ＮＡＣは、静脈内投与される。別の実施形態では、該ＮＡＣは経口投与される。１つの実施形態では、該１つ以上の追加の薬剤は、グルココルチコイドである。１つの実施形態では、該１つ以上の追加の薬剤は、ホスホジエステラーゼ阻害剤である。
【００２１】
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
腹膜炎の治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を前記対象に投与することを含む、腹膜炎の治療方法。
（項目２）
前記腹膜炎が、感染性または非感染性である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が、セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物及びフマル酸を含む医薬組成物として処方される、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記腹膜炎が、消化管の穿孔と関連している、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記腹膜炎が、腹膜への体液の漏出と関連している、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記腹膜炎が、異物と関連している、項目１に記載の方法。
（項目７）
急性肝臓損傷の治療を必要とする対象において、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を前記対象に投与することを含む、急性肝臓損傷の治療方法。
（項目８）
前記急性肝臓損傷が、アルコール誘発性、アセトアミノフェン誘発性、毒素誘発性、及び／または化学物質誘発性肝臓損傷である、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が、セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物及びフマル酸を含む医薬組成物として処方される、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が、経口組成物として処方される、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が、１日１回または１日２回投与される、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が、１つ以上の追加の活性薬剤または治療と併用して投与される、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記１つ以上の追加の活性薬剤または治療が、１つ以上の抗生物質、グルココルチコイド、コルチコステロイド、ペントキシフィリン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、抗ＴＮＦα剤、及び抗酸化剤である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記１つ以上の抗生物質が、ペニシリン類、セファロスポリン類、マクロライド類、フルオロキノロン類、スルホンアミド類、テトラサイクリン類、及びアミノグリコシド類またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記１つ以上の追加の活性薬剤または治療が、ｎ−アセチルシステイン（アセチルシステイン；ＮＡＣ）である、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記ＮＡＣが静脈内投与される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ＮＡＣが経口投与される、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
腹膜炎の治療を必要とする対象の腹膜炎の治療用のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物。
（項目１９）
急性肝臓損傷の治療を必要とする対象の急性肝臓損傷の治療用のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物。
（項目２０）
腹膜炎の治療を必要とする対象の腹膜炎の治療用薬剤製造のための、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物の使用。
（項目２１）
急性肝臓損傷の治療を必要とする対象の急性肝臓損傷の治療用薬剤製造のための、治療有効量のセニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物の併用使用。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】セニクリビロックメシル酸塩の化学式である。
【図２】経口液剤として配合されたセニクリビロックメシル酸塩の絶対的バイオアベイラビリティと、湿式造粒により調製し、各種酸可溶化剤の賦形剤と混合したセニクリビロックメシル酸塩のそれとをビーグル犬で比較するグラフである。
【図３】乾燥剤とともに包装された場合の、４０℃及び相対湿度７５％での加速安定性試験に供した異なるセニクリビロック処方の全不純物及び分解物含量のグラフである。
【図４】異なるセニクリビロック処方に対する動的蒸気収着等温線である。
【図５】ビーグル犬における３つの前処理段階での異なる処方からのセニクリビロックの吸収を示す。
【図６】配合剤内のセニクリビロックとラミブジンのビーグル犬での絶対的バイオアベイラビリティを示す。
【図７】図７Ａ〜Ｂは、試験２０２の参加者のＰＢＭＣにおける２４週目の細胞内ＨＩＶ  ＤＮＡレベルを示す。ベースラインと２４週の間の細胞内ＨＩＶ  ＤＮＡレベルの発現比を示す、処理群で区別される散布図。線とエラーバーは、それぞれ平均と標準誤差の測定結果を表す。発現比は、ＨＩＶ／ＧＡＰＤＨ多重ｑＰＣＲ反応におけるΔΔＣＴを用い、各患者のベースラインサンプルを較正として計算した。Ａ）完全長ＨＩＶ  ＤＮＡ（後期逆転写）、Ｂ）ストロングストップＨＩＶ  ＤＮＡ（初期逆転写）。
【図８】図８Ａ〜Ｂは、培養液中でのＲ５指向性ウイルスＲＮＡ及びｐ２４に対するＣＶＣ及びＭＶＣの効果。Ａ）対照または感染の４時間後にＣＶＣまたはＭＶＣで処理した細胞の培養液中でのウイルス量レベル。エラーバーは標準偏差を表す。独立した２実験を表す。Ｂ）対照または感染の４時間後にＣＶＣまたはＭＶＣで処理した細胞の培養液中での平均ｐ２４抗原レベル。エラーバーは標準偏差を表す。独立した２実験を表す。
【図９】Ｒ５指向性細胞内ＨＩＶ  ＤＮＡレベルに対するＣＶＣ及びＭＶＣの影響を示す。４時間後無薬物対照と比較したＣＶＣまたはＭＶＣ処理細胞の細胞内ストロングストップＤＮＡレベルの平均発現比。エラーバーは標準偏差を表す。発現比は、ＨＩＶ／ＧＡＰＤＨ多重ｑＰＣＲ反応におけるΔΔＣＴを用い、４時間での無薬物対照を較正として計算した。独立した２実験を表す。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜Ｂは、ＣＶＣのＣＣＲ５への多重結合様式を示す。ＣＣＲ５の座標は、結合ポケット内のマラビロクに結合したＣＣＲ５の結晶構造（ＰＤＢ  ＩＤ：４ＭＢＳ）から生成した。ＣＶＣの結合部位は、ＣＶＣのドッキング後に調べた。ＣＶＣのドッキングポーズは着色した細線で示される。７つの膜貫通（７ＴＭ）ａ−ヘリックスは、らせんで表され、アミノ酸配列の順序に従って番号付け（１〜７）されている。（Ａ）丸で囲まれた３つの潜在的結合部位（部位１（白）、部位２（黒）、及び部位３（薄いピンク））の受容体の細胞外側からの上面図。（Ｂ）ＣＣＲ５の膜貫通キャビティの側面図。細胞外ループ２（ＥＣＬ２）が標識されている。二次構造は素描構造として表されている。すべての画像はＰｙＭＯＬソフトウェアを用いて加工した。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜Ｂは、ＣＶＣのＣＣＲ５への多重結合様式を示す。ＣＣＲ５の座標は、結合ポケット内のマラビロクに結合したＣＣＲ５の結晶構造（ＰＤＢ  ＩＤ：４ＭＢＳ）から生成した。ＣＶＣの結合部位は、ＣＶＣのドッキング後に調べた。ＣＶＣのドッキングポーズは着色した細線で示される。７つの膜貫通（７ＴＭ）ａ−ヘリックスは、らせんで表され、アミノ酸配列の順序に従って番号付け（１〜７）されている。（Ａ）丸で囲まれた３つの潜在的結合部位（部位１（白）、部位２（黒）、及び部位３（薄いピンク））の受容体の細胞外側からの上面図。（Ｂ）ＣＣＲ５の膜貫通キャビティの側面図。細胞外ループ２（ＥＣＬ２）が標識されている。二次構造は素描構造として表されている。すべての画像はＰｙＭＯＬソフトウェアを用いて加工した。
【図１１】ＣＣＲ５／マラビロクとＣＣＲ５／セニクリビロック間のリガンド結合ポケットとの比較を示す。リガンド結合ポケット内のＣＶＣ（左）及びＭＶＣのドッキングポーズ、着色した細線、黄色スティック、（右）を示すＣＣＲ５の上面図。ＣＣＲ５は、分子表面表現で示す。ｇｐ１２０結合に関与するキー残基：Ｔｙｒ３７、Ｔｒｐ８６、Ｔｒｐ９４、Ｌｅｕ１０４、Ｔｙｒ１０８、Ｐｈｅ１０９、Ｐｈｅ１１２、Ｔｈｒ１７７、Ｉｌｅ１９８、Ｔｒｐ２４８、Ｔｙｒ２５１、Ｌｅｕ２５５、及びＧｌｕ２８３は、ポケット内の奥深くにあり、赤く着色されている。
【図１２】腎線維症のマウスＵＵＯモデルにおけるＣＶＣの評価の試験概略を示す。媒体対照及びＣＶＣ投与ＢＩＤ；抗ＴＧＦ−β１抗体、化合物１Ｄ１１（陽性対照）投与ＱＤ  ＢＩＤ、１日２回；ＣＶＣ、セニクリビロック；ｉｐ、腹腔内；ＰＢＳ、リン酸緩衝生理食塩水；ＱＤ、１日１回；ＴＧＦ、トランスフォーミング増殖因子；ＵＵＯ、片側尿管結紮。
【図１３】腎線維症のマウスＵＵＯモデルにおける各処理群の体重変化（５日目）を示す。
【図１４】腎線維症のマウスＵＵＯモデルにおける各処理群のコラーゲン体積分率（ＣＶＦ；面積％）スコアを示す。示されたデータは、ＣＶＣ２０ｍｇ／ｋｇ／日群内の動物から、該群内の他の動物より標準偏差が＞２高いＣＶＦ値を有した１つの外れ値を除いている。
【図１５Ａ】疑似手術の腎皮質組織由来のｍＲＮＡ発現を示す。
【図１５Ｂ】疑似手術の腎皮質組織由来のｍＲＮＡ発現を示す。
【図１６】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物における第９週までの体重変化を示す。
【図１７Ａ】図１７Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物における第９週までの肝重量及び体重の変化を示す。パネルＡは体重の変化を示し、パネルＢは肝重量の変化を示し、パネルＣは体重に対する肝重量比の変化を示す。
【図１７Ｂ】図１７Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物における第９週までの肝重量及び体重の変化を示す。パネルＡは体重の変化を示し、パネルＢは肝重量の変化を示し、パネルＣは体重に対する肝重量比の変化を示す。
【図１７Ｃ】図１７Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物における第９週までの肝重量及び体重の変化を示す。パネルＡは体重の変化を示し、パネルＢは肝重量の変化を示し、パネルＣは体重に対する肝重量比の変化を示す。
【図１８Ａ−Ｄ】図１８Ａ〜Ｆは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での全血及び生化学を示す。パネルＡは全血グルコースを示し、パネルＢは血漿ＡＬＴを示し、パネルＣは血漿ＭＣＰ−１を示し、パネルＤは血漿ＭＩＰ−１βを示し、パネルＥは肝臓トリグリセリドを示し、パネルＦは肝臓ヒドロキシプロリンを示す。
【図１８Ｅ−Ｆ】図１８Ａ〜Ｆは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での全血及び生化学を示す。パネルＡは全血グルコースを示し、パネルＢは血漿ＡＬＴを示し、パネルＣは血漿ＭＣＰ−１を示し、パネルＤは血漿ＭＩＰ−１βを示し、パネルＥは肝臓トリグリセリドを示し、パネルＦは肝臓ヒドロキシプロリンを示す。
【図１９】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＨＥ染色肝臓切片を示す。
【図２０】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＮＡＦＬＤ活動性スコアを示す。
【図２１】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのシリウスレッド染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図２２】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＦ４／８０免疫染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図２３】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での炎症面積の割合を示す。
【図２４】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＦ４／８０及びＣＤ２０６二重免疫染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図２５】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＦ４／８０陽性細胞のＦ４／８０及びＣＤ２０６二重陽性細胞の割合を示す。
【図２６】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＦ４／８０及びＣＤ１６／３２二重免疫染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図２７】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＦ４／８０陽性細胞のＦ４／８０及びＣＤ１６／３２二重陽性細胞の割合を示す。
【図２８】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＭ１／Ｍ２比を示す。
【図２９】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのオイルレッド染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図３０】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での脂肪沈着面積の割合を示す。
【図３１】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での肝臓のＴＵＮＥＬ陽性細胞の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図３２】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週でのＴＵＮＥＬ陽性細胞の割合を示す。
【図３３Ａ−Ｂ】図３３Ａは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲを示す。ＴＮＦ−αのレベルを測定した。図３３Ｂは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲを示す。ＭＣＰ−１のレベルを測定した。
【図３３Ｃ−Ｄ】図３３Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲを示す。コラーゲン１型のレベルを測定した。図３３Ｄは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲを示す。ＴＩＭＰ−１のレベルを測定した。
【図３４Ａ】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲの生データを示す。３６Ｂ４のレベルを示す。
【図３４Ｂ】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲの生データを示す。ＴＮＦ−αのレベルを示す。
【図３４Ｃ】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲの生データを示す。ＴＩＭＰ−１のレベルを示す。
【図３４Ｄ】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲの生データを示す。コラーゲン１型のレベルを示す。
【図３４Ｅ】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲの生データを示す。３６Ｂ４のレベルを示す。
【図３４Ｆ】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第９週での定量ＲＴ−ＰＣＲの生データを示す。ＭＣＰ−１のレベルを示す。
【図３５】セニクリビロック（低または高用量）で６〜１８週間処理した動物の体重変化を示す。
【図３６】セニクリビロック（低または高用量）で６〜１８週間処理した動物の生存曲線を示す。
【図３７Ａ−Ｂ】図３７Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週での体重及び肝重量を示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは肝重量を示し、パネルＣは体重に対する肝重量比を示す。
【図３７Ｃ】図３７Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週での体重及び肝重量を示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは肝重量を示し、パネルＣは体重に対する肝重量比を示す。
【図３８Ａ】図３８Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週での肝臓の肉眼的外観を示す。パネルＡは媒体のみで処理した動物の肝臓を示し、パネルＢは低用量セニクリビロックで処理した動物の肝臓を示し、パネルＣは高用量セニクリビロックで処理した動物の肝臓を示す。
【図３８Ｂ】図３８Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週での肝臓の肉眼的外観を示す。パネルＡは媒体のみで処理した動物の肝臓を示し、パネルＢは低用量セニクリビロックで処理した動物の肝臓を示し、パネルＣは高用量セニクリビロックで処理した動物の肝臓を示す。
【図３８Ｃ】図３８Ａ〜Ｃは、セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週での肝臓の肉眼的外観を示す。パネルＡは媒体のみで処理した動物の肝臓を示し、パネルＢは低用量セニクリビロックで処理した動物の肝臓を示し、パネルＣは高用量セニクリビロックで処理した動物の肝臓を示す。
【図３９】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週での目に見える腫瘍小結節の数を示す。
【図４０】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週での目に見える腫瘍小結節の最大径を示す。
【図４１】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週でのＨＥ染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図４２】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週でのＧＳ免疫染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図４３】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週でのＣＤ３１免疫染色肝臓切片の代表的な顕微鏡写真を示す。
【図４４】セニクリビロック（低または高用量）で処理した動物の第１８週でのＣＤ３１陽性面積の割合を示す。
【図４５】コホート及び試験日によるベースラインからのＨＩＶ−１  ＲＮＡレベルの変化の中央値を示す−試験２０１。
【図４６】第４８週までの経時的なＨＩＶ−１  ＲＮＡ＜５０コピー／ｍＬの被験者の割合−スナップショットアルゴリズム−ＩＴＴ−試験２０２。
【図４７】第４８週までの経時的なｓＣＤ１４レベル（１０６ｐｇ／ｍＬ）のベースラインからの変化のＬＳ平均を示す−ＩＴＴ。
【図４８】ベースライン、第２４週、及び第４８週でのＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４線維症指数スコアに従って分類したＣＶＣ（統合データ）及びＥＦＶ処理被験者を示す。
【図４９】ベースラインＡＰＲＩからの変化対ベースラインｓＣＤ１４からの変化の散布図を示す−第４８週（ＩＴＴ）。
【図５０】ベースラインＦＩＢ−４からの変化対ベースラインｓＣＤ１４からの変化の散布図を示す−第４８週（ＩＴＴ）。
【図５１】第４８週までの経時的なクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）のベースラインからの変化の平均を示す−安全性の解析対象。
【図５２】重症度グレード対ｃａｖｇ（ｎｇ／ｍＬ）によるＣＰＫ上昇のドット密度表示を示す−第４８週。
【図５３】重症度グレード対ｃａｖｇ（ｎｇ／ｍＬ）によるＡＬＴ上昇のドット密度表示を示す−第４８週。
【図５４】重症度グレード対ｃａｖｇ（ｎｇ／ｍＬ）によるＡＳＴ上昇のドット密度表示を示す−第４８週。
【図５５】重症度グレード対ｃａｖｇ（ｎｇ／ｍＬ）によるビリルビン上昇のドット密度表示を示す−第４８週。
【図５６Ａ】図５６Ａ〜Ｂは、第４８週までの経時的な空腹時総コレステロール、計算ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、及びトリグリセリドのベースラインからの変化の平均（ｍｇ／ｄＬ）を示す。
【図５６Ｂ】図５６Ａ〜Ｂは、第４８週までの経時的な空腹時総コレステロール、計算ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、及びトリグリセリドのベースラインからの変化の平均（ｍｇ／ｄＬ）を示す。
【図５７Ａ−１】図５７Ａ、Ｂ、及びＣは、チオリコレート（ｔｈｉｏｌｙｃｏｌｌａｔｅ）誘発性腹膜炎モデルマウスのＣＶＣまたはデキサメタゾンでの処理後の個体の体重データを示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは腹膜細胞数（細胞／μＬ）を示し、パネルＣは末梢血球数を示す。
【図５７Ａ−２】図５７Ａ、Ｂ、及びＣは、チオリコレート（ｔｈｉｏｌｙｃｏｌｌａｔｅ）誘発性腹膜炎モデルマウスのＣＶＣまたはデキサメタゾンでの処理後の個体の体重データを示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは腹膜細胞数（細胞／μＬ）を示し、パネルＣは末梢血球数を示す。
【図５７Ｂ−１】図５７Ａ、Ｂ、及びＣは、チオリコレート（ｔｈｉｏｌｙｃｏｌｌａｔｅ）誘発性腹膜炎モデルマウスのＣＶＣまたはデキサメタゾンでの処理後の個体の体重データを示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは腹膜細胞数（細胞／μＬ）を示し、パネルＣは末梢血球数を示す。
【図５７Ｂ−２】図５７Ａ、Ｂ、及びＣは、チオリコレート（ｔｈｉｏｌｙｃｏｌｌａｔｅ）誘発性腹膜炎モデルマウスのＣＶＣまたはデキサメタゾンでの処理後の個体の体重データを示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは腹膜細胞数（細胞／μＬ）を示し、パネルＣは末梢血球数を示す。
【図５７Ｃ−１】図５７Ａ、Ｂ、及びＣは、チオリコレート（ｔｈｉｏｌｙｃｏｌｌａｔｅ）誘発性腹膜炎モデルマウスのＣＶＣまたはデキサメタゾンでの処理後の個体の体重データを示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは腹膜細胞数（細胞／μＬ）を示し、パネルＣは末梢血球数を示す。
【図５７Ｃ−２】図５７Ａ、Ｂ、及びＣは、チオリコレート（ｔｈｉｏｌｙｃｏｌｌａｔｅ）誘発性腹膜炎モデルマウスのＣＶＣまたはデキサメタゾンでの処理後の個体の体重データを示す。パネルＡは体重を示し、パネルＢは腹膜細胞数（細胞／μＬ）を示し、パネルＣは末梢血球数を示す。
【図５８】マウスのチオグリコール酸誘発性腹膜炎モデルでのマクロファージ／単球動員に対するＣＶＣの効果を示すグラフである；Ｎ＝８の第２群以外はすべての群でＮ＝６。
【図５９】マウスのチオグリコール酸誘発性腹膜炎モデルでの総白血球動員に対するＣＶＣの効果を示すグラフである；Ｎ＝８の第２群以外はすべての群でＮ＝６。
【図６０】マウスのチオグリコール酸誘発性腹膜炎モデルでの総白血球及びマクロファージ／単球動員に対するＣＶＣの効果を示すグラフである；Ｎ＝８の第２群以外はすべての群でＮ＝６。
【図６１】マウスのチオグリコール酸誘発性腹膜炎モデルでのすべての用量群に対するＣＶＣの血漿レベルの個別値を示す。
【図６２】図６２Ａは、ＡＬＴによって測定されるアセトアミノフェン誘発性肝臓損傷が、ＷＴマウスと比較してｃｃｒ２−／−において顕著に減少することを示すグラフである。図６２Ｂは、組織学的に測定されるアセトアミノフェン誘発性肝臓損傷が、ＷＴマウスと比較してｃｃｒ２−／−において顕著に減少することを示すグラフである。
【図６３】図６３Ａは、ＡＬＴによって測定されるアセトアミノフェン誘発性肝臓損傷が、野生型マウスと比較してＣＣＲ２−／−マウスにおいて顕著に減少することを示す。図６３Ｂは、組織学的に測定されるアセトアミノフェン誘発性肝臓損傷が、野生型マウスと比較してＣＣＲ２−／−マウスにおいて顕著に減少することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
詳細な説明
「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」等の単数形は、本出願を通して便宜上使用されるが、文脈上または明確な記述で別段に指示される場合を除き、これらの単数形は複数形を含むことが意図されることを理解されたい。さらに、本明細書で言及するすべての雑誌論文、特許、特許出願、刊行物等は、すべての目的のため、参照することによって全体として本明細書に組み込まれることを理解されたい。すべての数値範囲は、該数値範囲内のありとあらゆる数値点を含むことを理解されるものとするとともに、ありとあらゆる数値点を個別に記載しているものとして解釈されるものとする。同じ成分または性質に関するすべての範囲の端点は含まれ、独立して組合せ可能であることが意図される。
【００２４】
定義：
以下に論じる用語を除き、本出願で使用されるすべての用語は、本発明の時点で当業者がそれらに帰するであろう意味を有するものとする。
【００２５】
「約」は、基準値と実質的に同じ効果を有する、または実質的に同じ結果をもたらすすべての値を含む。従って、「約」という用語によって包含される範囲は、該用語が用いられる文脈、例えば、該基準値が関連付けられているパラメータ次第で変化する。従って、文脈によっては、「約」は、例えば、±１５％、±１０％、±５％、±４％、±３％、±２％、±１％、または±１％未満を意味することができる。重要なことには、「約」という用語に先行される基準値の記述のすべては、該基準値単独の記述でもあることが意図される。前述にかかわらず、本出願において「約」という用語は、曲線下面積（ＡＵＣ、ＡＵＣｔ、及びＡＵＣ∞を含む）Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ等の薬物動態パラメータに関して特別
な意味を有する。薬物動態パラメータに関する値と関連して使用される場合、「約」という用語は、当該基準パラメータの８０％〜１２５％を意味する。
【００２６】
「セニクリビロック」とは、化合物（Ｓ）−８−［４−（２−ブトキシエトキシ）フェニル］−１−イソブチル−Ｎ−（４−｛［（１−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］スルフィニル｝フェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ベンザゾシン−５−カルボキサミドを指す（構造を下記に示す）。セニクリビロックの組成物の詳細は、米国特許出願公開第２０１２／０２３２０２８号に開示されており、これは全ての目的のために参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。関連処方の詳細は、米国出願第６１／８２３，７６６号に開示されており、これは全ての目的のために参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。
【化１】
2020111586.tif 000003
【００２７】
「本発明の化合物」または「本化合物」とは、セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を指す。
【００２８】
「実質的に同様の」とは、基準の組成物または処方と、該組成物または処方の固有性及び量の両方において大部分が似た組成物または処方を意味する。
【００２９】
「医薬的に許容される」とは、獣医学用途を含め、医学または薬学で、例えば、対象に対する投与において、使用することができる材料または方法を指す。
【００３０】
「塩」及び「医薬的に許容される塩」は、酸付加塩及び塩基付加塩の両方を含む。「酸付加塩」とは、生物学的にも他の面でも不適切ではなく、無機酸及び有機酸で形成される、当該遊離塩基の生物学的有効性及び特性を保持する塩を指す。「塩基付加塩」とは、生物学的にも他の面でも不適切ではなく、無機塩基または有機塩基の遊離酸への付加から調製される、当該遊離酸の生物学的有効性及び特性を保持する塩を指す。医薬的に許容される塩の例としては、アミン等の塩基性残基の鉱酸もしくは有機酸付加塩；酸性残基のアルカリもしくは有機付加塩等、または１つ以上の上記塩を含む組合せが挙げられるがこれらに限定されない。該医薬的に許容される塩には、活性薬剤の塩及び４級アンモニウム塩が含まれる。例えば、酸性塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等の無機酸由来のものが挙げられ；他の許容される無機塩としては、金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩等；及びアルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩等、または１つ以上の上記塩を含む組合せが挙げられる。医薬的に許容される有機塩としては、有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、メシル酸、エシル酸、ベシル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、ｎが０〜４であるＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ等から調製される塩；有機
アミン塩、例えば、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等；及びアミノ酸塩、例えば、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等；または１つ以上の上記塩を含む組み合わせが挙げられる。
【００３１】
１つの実施形態において、セニクリビロックの酸付加塩はセニクリビロックメシル酸塩、例えば、（Ｓ）−８−［４−（２−ブトキシエトキシ）フェニル］−１−イソブチル−Ｎ−（４−｛［（１−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］スルフィニル｝フェニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ベンザゾシン−５−カルボキサミドモノメタンスルホン酸塩である。１つの実施形態では、該セニクリビロックメシル酸塩は、淡緑黄色結晶性粉末等の結晶性物質である。１つの実施形態では、該セニクリビロックメシル酸塩は、氷酢酸、メタノール、ベンジルアルコール、ジメチルスルホキシド、及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶けやすく；ピリジン及び無水酢酸に溶解し；９９．５％エタノールにやや溶けにくく；アセトニトリル、１−オクタノール、及びテトラヒドロフランに溶けにくく；酢酸エチル及びジエチルエーテルにほとんど溶けない。１つの実施形態では、該セニクリビロックメシル酸塩は、ｐＨ１〜２の水溶液に溶けやすく；ｐＨ３でやや溶けにくく、ｐＨ４〜１３で、及び水にほとんど溶けない。
【００３２】
「溶媒和物」とは、溶媒和によって形成される複合体（溶媒分子と本発明の活性薬剤の分子もしくはイオンの組合せ）、または溶質イオンもしくは分子（本発明の活性薬剤）と１つ以上の溶媒分子からなる会合体を意味する。本発明では、好ましい溶媒和物は水和物である。
【００３３】
「医薬組成物」とは、本開示の化合物と、哺乳類、例えば、ヒトへの生物活性化合物の送達用に当技術分野で一般に認められている媒体との処方を指す。かかる媒体としては、そのためのすべての医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤が挙げられる。
【００３４】
「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療すること）」には、疾患もしくは状態の事例、または疾患もしくは状態の症状を改善、緩和、及び縮小させることが含まれる。
【００３５】
「ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ（投与すること）」には、任意の投与方法、例えば、経口、皮下、舌下、経粘膜、非経口、静脈内、動脈内、口腔、舌下、局所、膣、直腸、点眼、経耳、経鼻、吸入、及び経皮が含まれる。「ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ」にはまた、特定の化合物を含む剤形に対する処方箋に指示したり、処方箋を書いたりすることが含まれる場合がある。「ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ」にはまた、特定の化合物または該化合物を含む剤形に関与する方法を行うための指示を与えることが含まれる場合がある。
【００３６】
「治療有効量」とは、疾患、障害、または他の望ましくない医学的状態を治療するために対象に投与された場合に、その疾患、障害、または状態に関して有益な効果を発揮するのに十分な活性物質の量を意味する。該治療有効量は、該活性物質の化学的同一性及び処方形態、当該疾患もしくは状態及びその重症度、ならびに治療される患者の年齢、体重、及び他の関連する特徴に応じて変化する。所与の活性物質の治療有効量の決定は、当業者が備えている技能の範囲内であり、一般的には通常の実験以上のものを必要としない。
【００３７】
線維症：
線維症とは、修復または反応過程での器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成である。これは、反応性、良性、または病的状態である場合がある。該器官及び／または組織での結合組織の沈着は、下部の器官または組織の構造及び機能を失わせる場合がある。線維症は、線維性組織のこの病的状態の過剰沈着であるとともに、治癒における結合組織沈着の過程である。
【００３８】
線維症は、ともにコラーゲン及びグリコサミノグリカン等の結合組織を蓄える刺激細胞を含むという点において、瘢痕化の過程と類似している。多くの免疫及び炎症反応を媒介するサイトカインが線維症の発症に関与している。脂肪蓄積、ウイルス性因子、アルコールの過剰摂取、ヘパトキシン（ｈｅｐａｔｏｘｉｎ）等の要因に由来する肝細胞障害は、必然的に炎症性免疫反応を引き起こす。肝臓内でのサイトカイン及びケモカインの産生の増加は、後に成熟して炎症性マクロファージになる炎症性単球（前駆細胞）の動員につながる。炎症性マクロファージは、本来線維形成性であり、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の沈着を主に担う肝星細胞（ＨＳＣ）の活性化に最終的につながる。
【００３９】
炎症をもたらす各種免疫細胞集団の浸潤は、急性及び慢性肝臓損傷後の中心的な病原性の特徴である。慢性肝炎は、連続的な肝細胞傷害につながり、これが線維症、肝硬変、ＥＳＬＤ、及びＨＣＣにつながる場合がある。肝内免疫細胞間相互作用は、クッパー細胞ならびにＨＳＣの活性化及び遊走の増加につながり、肝線維症の発症に対して危機的事象である。さらに、ＣＣＲ２及びＣＣＲ５の肝線維症の発症における役割の証拠が増えている［１〜７、９、３１］。これらのＣＣケモカインファミリーのメンバーは、炎症性単球及びマクロファージ、クッパー細胞、ならびにＨＳＣを含めた線維形成性細胞によって発現される［１〜４］。ＣＣＲ２シグナル伝達は、骨髄由来線維芽細胞の調節を通して腎線維症の発症において重要な役割を果たす［８］。ＣＣＲ２及びＣＣＲ５陽性単球ならびにＣＣＲ５陽性Ｔリンパ球は、局所的に放出されるＭＣＰ−１及びＲＡＮＴＥＳによって引き付けられ、腎臓において慢性間質性炎症に寄与する場合がある［１０、１１］。げっ歯類では、ＣＶＣは、腸肝軸とも言われる肝臓、腸間膜リンパ節、及び腸に高度に分布している。腸内細菌叢の破壊及び腸肝軸に対するその下流効果は、ともに肥満、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）等の代謝障害において重要な役割を果たす［１６、２３］。
【００４０】
表１に、肝臓細胞によって発現されるケモカインを記載する［３０］。
【表１】
2020111586.tif 000004
【００４１】
肝星細胞（ＨＳＣ）の活性化は、肝線維症の発症に重要な役割を果たす。肝臓損傷後、肝星細胞（ＨＳＣ）は、活性化され、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）及びそれらの特異的組織阻害剤（ＴＩＭＰ）の組合せを発現する［３２］。肝臓損傷の初期段階では、ＨＳＣは一時的にＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１３、及びウロプラスミノーゲン（ｕｒｏｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）活性化因子（ｕＰＡ）を発現し、マトリクス分解表現型を呈する。細胞外マトリクスの分解は、ＣＣＲ２またはＣＣＲ５依存性であるとは思われない。
【００４２】
活性化ＨＳＣは、単核白血球及び多形核白血球の浸潤の誘導によって炎症反応を増幅する場合がある。浸潤単球及びマクロファージは、サイトカイン分泌の増加及び酸化的ストレス関連産物の生成を含めたいくつかの機序を介して線維症の発症に関与する。活性化ＨＳＣは、ＣＣＲ２及びＣＣＲ５を発現することができ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、及びＲＡＮＴＥＳを含むケモカインを産生することができる。ＣＣＲ２はＨＳＣの走化性及び肝線維症の発症を促進する。ヒト肝臓疾患では、ＭＣＰ−１の増加はマクロファージ動員ならびに肝線維症及び原発性胆汁性肝硬変の重症度に関連する。ＣＣＲ５はＨＳＣの遊走及び増殖を刺激する。
【００４３】
肝臓損傷の後期及びＨＳＣ活性化において、パターンは変化し、細胞は正常な肝臓マトリクスを分解する能力を有するＭＭＰの組合せを発現する一方、肝線維症に蓄積する線維状コラーゲンの分解を阻害する。このパターンは、プロＭＭＰ−２及び膜１型（ＭＴ１）ＭＭＰの発現の組合せを特徴とし、これが細胞周囲の活性ＭＭＰ−２生成及び正常な肝臓
マトリクスの局所的分解を推進する。さらに、間質コラゲナーゼ（ＭＭＰ−１／ＭＭＰ−１３）による線維状肝臓コラーゲン分解のより広範な阻害につながるＴＩＭＰ−１の発現の顕著な増加がある。慢性アルコール性肝疾患を伴う肝臓損傷では、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ならびにケモカインＩＬ−８／ＣＸＣＬ８の産生が増加する。ＴＮＦ−αはまた、非アルコール性脂肪肝疾患の重要なメディエータでもある。これらの経路は、肝線維症の進行において重大な役割を果たす。ＨＳＣの活性化を阻害し、活性化ＨＳＣのクリアランスを促進することが、肝線維症の解消のための効果的な方法である可能性がある。
【００４４】
ケモカインファミリーは炎症において重要な調節的役割を果たす。このファミリーのメンバーとしては、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＲ８、ＣＸＣＲ９、ＣＸＣＲ１０、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、及びＣＸＣＬ１７が挙げられるがこれらに限定されないＣＸＣ受容体及びリガンド；ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ、及びＣＣＲ１０が挙げられるがこれに限定されないＣＣケモカイン及び受容体；ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、及びＸＣＲ１が挙げられるがこれらに限定されないＣケモカイン；ならびにＣＳ３ＣＬ１及びＣＸ３ＣＲ１が挙げられるがこれらに限定されないＣＸ３Ｃケモカインが挙げられるがこれらに限定されない。これらの分子は、線維化した器官または組織で上方制御されうる。さらなる実施形態では、これらの分子は線維化した器官または組織で下方制御されうる。さらなる実施形態では、これらのケモカインのシグナル伝達経路における該分子は、線維化した器官または組織で上方制御されうる。さらなる実施形態では、これらのケモカインのシグナル伝達経路における該分子は、線維化した器官または組織で下方制御されうる。
【００４５】
線維症は、肺、肝臓、骨髄、関節、皮膚、消化管、リンパ節、血管、または心臓を含むがこれらに限定されない体内の多くの組織で生じる可能性があり、通常は炎症または損傷の結果である。非限定的な例としては、肺線維症、特発性肺線維症、嚢胞性線維症、肝硬変、心内膜心筋線維症、心筋梗塞、心房線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症、じん肺症からの合併症、腎性全身性線維症、クローン病、ケロイド、強皮症／全身性硬化症、関節線維症、ペイロニー病、デュプイトラン拘縮、アテローム性動脈硬化症に伴う線維症、リンパ節線維症、及び癒着性関節包炎が挙げられる。
【００４６】
腹膜炎
腹膜炎（腹膜の炎症）は、限局性の場合も全身性の場合もあり、感染（多くの場合、腹部外傷もしくは炎症を起こした虫垂で生じることがあるように、腹部管腔器官の破裂による）由来の場合も非感染過程由来の場合もある。腹膜炎の症状は、炎症性因子の当該部位への動員によって生じる。
【００４７】
感染性腹膜炎の種類としては、消化管の一部の穿孔によって生じる腹膜炎（例えば、ブールハーフェ症候群、消化性潰瘍、胃がん、消化性潰瘍、虫垂炎、憩室炎、メッケル憩室、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、腸梗塞、腸絞扼、結腸直腸がん、胎便性腹膜炎）、もしくは胆嚢の穿孔によって生じる腹膜炎（胆嚢炎、腹部外傷、鋭い異物の摂取、内視鏡またはカテーテルによる穿孔、及び吻合部漏出）；中空臓器の穿孔がないにもかかわらず、腹膜の破壊（例えば、外傷、外科的創傷、持続的携帯型腹膜透析、及び腹腔内化学療法）；突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）；または全身感染症（例えば結核）が挙げられるがこれらに限
定されない。
【００４８】
非感染性腹膜炎の種類としては、例えば、腹膜内への無菌の体液、例えば血液（例えば、子宮内膜症、鈍的腹部外傷）、胃液（例えば、消化性潰瘍、胃がん）、胆汁（例えば、肝生検）、尿（骨盤外傷）、メンストリウム（例えば、卵管炎）、膵液（膵炎）、または破裂類皮嚢胞の内容物の漏出；無菌的開腹手術（例えば、異物反応及び／または線維性癒着または手術後腹部に不注意で残される無菌異物を残す場合がある、限局性または最小全身性腹膜炎を引き起こす外科手術）；家族性地中海熱、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群、ポルフィリン症、ならびに全身性エリテマトーデスによって引き起こされる腹膜炎が挙げられるがこれらに限定されない。
【００４９】
急性肝臓損傷
多くの化合物が肝臓を損傷する可能性がある。周知の肝臓損傷剤としては、アルコール、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、グルココルチコイド、抗生物質（例えば、イソニアジド、ニトロフラントイン、アモキシシリン／クラブラン酸）、ヒドラジン誘導体薬物、工業毒、例えば、ヒ素、四塩化炭素、及び塩化ビニル、植物薬、例えば、アキーフルーツ、八角蓮（Ｂａｊｉａｏｌｉａｎ）、ショウノウ、Ｃｏｐａｌｔｒａ、サイカシン、ガルシニア、カバの葉、ピロリジジンアルカロイド、マロニエの葉、バレリアン、コンフリー、ビタミンＡ、ジャーマンダー（ｇｅｒｍａｎｄｅｒ）、シャパラルの葉、Ａｍａｎｉｔａ  ｐｈｙｌｌｏｉｄｅｓ、漢方薬（例えば金不換（Ｊｉｎ  Ｂｕ  Ｈｕａｎ）、麻黄、首烏片（Ｓｈｏｕ  Ｗｕ  Ｐｉａｎ）、白鮮皮（Ｂａｉ  Ｘｉａｎ  Ｐｉ））、アセトアミノフェン、スタチン、ニコチン酸（Ｎｉａｃｉｎ（商標））、アミオダロン（Ｃｏｒｄａｒｏｎｅ（商標））、メトトレキサート（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（商標）、Ｔｒｅｘａｌｌ（商標））、タクリン（Ｃｏｇｎｅｘ（商標））、およびジスルフィラム（Ａｎｔａｂｕｓｅ（商標））が挙げられるがこれらに限定されない。
【００５０】
アルコールの過剰摂取による肝臓損傷は、肝疾患の主因である。男性で１日当たり６０〜８０ｇ（約７５〜１００ｍｌ／日）を２０年以上、または女性で２０ｇ／日（約２５ｍｌ／日）の摂取で、肝炎及び線維症のリスクが７から４７％に大幅に増加すると推定されている。
【００５１】
アセトアミノフェン中毒に続く肝臓損傷は、急性肝不全（ＡＬＦ）の主因の１つである。重症アセトアミノフェン肝毒性は、しばしば急性肝不全（ＡＬＦ）をもたらす。肝臓に対する損傷または肝毒性は、アセトアミノフェン自体ではなく、その代謝産物の１つであるＮ−アセチル−ｐ−ベンゾキノンイミン（ＮＡＰＱＩ）（Ｎ−アセチルイミドキノンとしても知られる）に起因し、この代謝産物は、肝臓の天然抗酸化剤であるグルタチオンを枯渇させ、肝臓内の細胞を直接損傷し、肝不全を引き起こす。アセトアミノフェン中毒に続く肝臓損傷は、肝細胞の壊死を引き起こし、その後常在免疫細胞（例えば、クッパー細胞（ＫＣ）、肝細胞、類洞内皮細胞、及び肝星細胞）の活性化、各種ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２）の放出、ならびに免疫細胞浸潤（例えば、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）、ＮＫＴ細胞、及びＴ細胞）が続く。
【００５２】
急性肝臓損傷に関与するケモカインとしては、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、及びＣＸＣＬ１２が挙げられるがこれらに限定されない［１］。例えば、理論に拘束されるものではないが、損傷されると、肝細胞及びクッパー細胞等の肝臓細胞はＣＣＬ２を分泌し、これが肝臓内への単球及びマクロファージの浸潤につながる。さらに、ＣＣＬ２は骨髄内での単球造血を促進し、循環血液中の単球／マクロファージのプールを増す。肝臓内の該マクロファージはその後炎症性サイトカイン、例えば、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γを分泌する［１］。
【００５３】
治療的用途の実施形態：
本発明は、線維症の治療方法を提供する。動物実験におけるＣＶＣの抗線維化効果は、肝臓損傷の発現時（ＴＡＡ）またはその直後（ＴＡＡ；ＨＦＤ）にＣＶＣ処理を開始した場合には観察されたが、肝硬変の確立後（ＴＡＡ）では観察されなかった。このことは、ＣＶＣの抗線維化効果が、確立された肝線維症かつ疾患の進行の重大なリスクにある集団において、より増している可能性があることを示唆している。これらは：２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）及びメタボリック症候群（ＭＳ）を伴う非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）；ＨＩＶとＨＣＶの重感染、またはＨＣＶ感染を含む。
【００５４】
ＮＡＳＨ
本発明の組成物は、アメリカ人の２〜５％が罹患している一般的な肝疾患である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に起因する肝線維症の治療に使用されうる。ＮＡＳＨによる肝臓障害はアルコール性肝疾患の特徴の一部を有するが、それはアルコールをほとんどまたは全く飲まない人々で生じる。ＮＡＳＨの主な特徴は、炎症及び肝細胞障害（バルーニング）に加えて肝臓内脂肪である。ＮＡＳＨは、重症化する場合があり、肝硬変に至ることがあり、その場合、肝臓は回復不能な損傷を受け瘢痕化し、もはや正常に機能することができなくなる。非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、一般的で、しばしば「サイレント」な肝疾患であり、肥満関連疾患、例えば、２型糖尿病及びメタボリック症候群を伴い、アルコールをほとんどまたは全く飲まない人々で生じ、肝臓内の脂肪蓄積を特徴とし、他の明らかな原因がない［３２〜４３］。ＮＡＦＬＤ初期のスペクトルは単一の脂肪変性であり、これは肝臓内での脂肪の構築で特徴づけられる。炎症を伴わない肝臓脂肪変性は、通常良性であり、進行が遅いか、非進行性である。ＮＡＳＨは、より進行したＮＡＦＬＤの重症亜型であり、線維症の有無にかかわらず、脂肪変性が肝細胞損傷及び炎症で悪化している。
【００５５】
肥満関連疾患の患者数の増加がＮＡＳＨの患者数の急速な上昇の一因となっている。ＮＡＦＬＤの対象のおよそ１０％〜２０％がＮＡＳＨに進行する［４４］。
【００５６】
ＮＡＦＬＤは、慢性肝疾患の最も一般的な原因である［４５］。ほとんどの米国の研究は、ＮＡＦＬＤの罹患率１０％〜３５％を報じているが、これらの率は試験対象母集団及び診断方法で異なる［４６］。米国人口のおよそ３分の１が肥満であると考えられているため、米国人口のＮＡＦＬＤの罹患率は、約３０％である可能性が高い［４６］。ある研究で、ＮＡＦＬＤはアメリカ人のおよそ２７％〜３４％、すなわち推定８６００万〜１億８００万人の患者を侵していることが分かった［４４］。ＮＡＦＬＤは米国に特有ではない。ブラジル、中国、インド、イスラエル、イタリア、日本、韓国、スリランカ、及び台湾を含む世界の他の国からの報告では、該罹患率は、６％〜３５％（中央値２０％）に及ぶことを示唆している［４６］。オーストラリア消化器学会の肝臓学会（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ／Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）による研究では、ＮＡＦＬＤは５０歳以上の全成人の４０％を含めて、推定５５０万人のオーストラリア人を侵していることが分かった［４７］。オーストラリアの重度肥満患者の研究で、これらの患者の２５％がＮＡＳＨを有することがわかった［４８］。
【００５７】
肝生検は、ＮＡＳＨの診断を確定するために必要とされる。米国の中年者の研究では、組織学的に確認されたＮＡＳＨの罹患率は１２．２％であった［４９］。現在の推定は、ＮＡＳＨの罹患率を米国でおよそ９００〜１５００万人（米国人口の３％〜５％）としており、ＥＵ及び中国での罹患率と同様である［４６、５０］。肥満人口におけるＮＡＳＨの罹患率は、１０％〜５６％（中央値３３％）に及ぶ［４６］。カナダの痩身者の剖検シリーズでは、脂肪性肝炎及び線維症の罹患率はそれぞれ３％及び７％であった［４６］。ＮＡＳＨの罹患率は、発展途上地域でも増加しており、これは、より座りがちな生活様式
ならびに高脂肪及び糖／果糖含量の加工食品からなる西洋式の食事［５１］を摂り始めているこれらの地域の人々に起因している［５２］。
【００５８】
ＮＡＳＨは、線維症の有無にかかわらず、肝脂肪変性及び肝細胞損傷による炎症の存在によって定義される重篤な慢性肝疾患である［３４］。慢性肝炎は、肝硬変、末期肝疾患、及び肝細胞がんへと進行する可能性がある線維症の前兆である。インスリン抵抗性に加えて、脂肪貯蔵及び代謝の変更、肝臓内のコレステロールの蓄積、肝損傷の増加をもたらす酸化ストレス、ならびに腸内微生物叢の破壊（高果糖含量の食事と関連する）に続発する細菌転位［３４、５３〜５６］はすべて、ＮＡＳＨの進行に寄与する重要な補因子であることが示唆されている［５７〜６０］。高まる肥満及び糖尿病の蔓延のため、ＮＡＳＨは、進行した肝臓疾患の最も一般的な原因及び肝移植の最も一般的な適応となることが予測される［４６、６１〜６３］。承認された治療的介入がないことと相まったＮＡＳＨの負担は、満たされない医学的必要性を表す。
【００５９】
さらなる実施形態において、肝線維症は新生肝硬変と関連している。いくつかの実施形態では、該肝硬変はアルコール障害と関連している。さらなる実施形態では、該肝硬変は、Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎感染が挙げられるがこれらに限定されない肝炎感染、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎、または脂肪性肝疾患に関連している。いくつかの実施形態では、本発明は肝線維症または肝硬変を発症するリスクがある対象の治療方法を提供する。
【００６０】
別の実施形態において、該線維症は非肝硬変肝線維症を含む。別のさらなる実施形態では、該対象はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している。さらに別の実施形態では、該対象は、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）が挙げられるがこれに限定されない肝炎ウイルスに感染している。さらなる実施形態では、該対象は糖尿病である。さらなる実施形態では、該対象は２型糖尿病である。さらなる実施形態では、該対象は１型糖尿病である。さらなる実施形態では、該対象はメタボリック症候群（ＭＳ）である。さらなる実施形態では、該対象はこれらの疾患または障害のうちの１つ以上を有する。さらなる実施形態では、該対象は、これらの疾患のうちの１つ以上を発症するリスクがある。さらなる実施形態では、該対象はインスリン抵抗性である。さらなる実施形態では、該対象は、高血糖濃度、高血圧、コレステロール高値、トリグリセリド高値を有するか、または肥満である。さらなる実施形態では、該対象は、多嚢胞性卵巣症候群である。
【００６１】
１つの実施形態において、本発明は、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物を１つ以上の追加の活性薬剤と併用する治療方法を提供する。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の活性薬剤は、侵入阻害剤、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ鎖移転阻害剤、成熟阻害剤、及びそれらの組合せから選択される１つ以上の抗レトロウイルス剤である。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の抗レトロウイルス剤は、ラミブジン、エファビレンツ、ラルテグラビル、ビベコン（ｖｉｖｅｃｏｎ）、ベビリマット（ｂｅｖｉｒｉｍａｔ）、アルファインターフェロン、ジドブジン、アバカビル、ロピナビル、リトナビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルのプロドラッグ、エムトリシタビン、エルビテグラビル、コビシスタット、ダルナビル、アタザナビル、リルピビリン、ドルテグラビル、及びそれらの組合せからなる群から選択される。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の活性薬剤は、１つ以上の免疫系抑制剤である。さらなる実施形態では、該１つ以上の追加の活性薬剤は、シクロスポリン、タクロリムス、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、シロリムス、エベロリムス、アザチオプリン、ミコフェノール酸、メトトレキサート、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン、及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【００６２】
特定の実施形態には、本明細書に記載の本治療の治療効果の観察及び／または予測方法が含まれる。かかる方法には、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を受ける対象中（または該対象由来の生体サンプル中）の１つ以上の生体分子、例えばバイオマーカーのレベルを検出することが含まれ、その場合、所定の標準レベルと比較した１つ以上の生体分子のレベルの増減が本治療の治療効果を示すか、または、その予測となる。
【００６３】
１つの実施形態において、本発明は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を受ける対象における１つ以上の生体分子のレベルを検出すること、及び該１つ以上の生体分子のレベルの増減に基づいて治療計画を決めることを含む治療方法を提供するとともに、該生体分子は、リポ多糖（ＬＰＳ）、ＬＰＳ結合タンパク質（ＬＢＰ）、１６Ｓ  ｒＤＮＡ、ｓＣＤ１４、腸の脂肪酸結合タンパク質（Ｉ−ＦＡＢＰ）、ゾヌリン−１、コラーゲン１ａ１及び３ａ１、ＴＧＦ−β、フィブロネクチン−１、ｈｓ−ＣＲＰ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−３３、フィブリノゲン、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α及び−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ｓＣＤ１６３、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−α、ＣＫ−１８（カスパーゼ切断及び全長）等の肝細胞アポトーシスのバイオマーカー、またはＬＰＳ、ＬＢＰ、ｓＣＤ１４、及びＩ−ＦＡＢＰ等の細菌転位のバイオマーカー、またはそれらの組合せからなる群から選択される。
【００６４】
１つの実施形態において、本発明は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を受ける対象における１つ以上の生体分子のレベルを検出することを含む治療方法を提供するとともに、所定の標準レベルと比較した該１つ以上の生体分子のレベルの増減は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療効果の予測となる。
【００６５】
さらなる実施形態において、該１つ以上の生体分子は、線維症または線維性の疾患もしくは状態の治療を受ける対象由来の生体サンプルで測定される。さらに別の実施形態では、該生体サンプルは、血液、皮膚、毛包、唾液、口腔粘膜、膣粘膜、汗、涙、上皮組織、尿、精液（ｓｅｍｅｎ、ｓｅｍｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ）、精漿、前立腺液、尿道球腺液（カウパー腺液）、排泄物、生検、腹水、脳脊髄液、リンパ液、脳、及び組織抽出サンプルまたは生検サンプルから選択される。
【００６６】
１つの実施形態において、該方法は、セニクリビロックを腹膜炎の治療のために投与することを含む。さらなる実施形態では、該腹膜炎は、感染性腹膜炎である。別のさらなる実施形態では、該感染性腹膜炎は、消化管の一部の穿孔によって（例えば、ブールハーフェ症候群、消化性潰瘍、胃がん、消化性潰瘍、虫垂炎、憩室炎、メッケル憩室、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、腸梗塞、腸絞扼、結腸直腸がん、胎便性腹膜炎）、もしくは胆嚢の穿孔によって（胆嚢炎、腹部外傷、鋭い異物の摂取、内視鏡またはカテーテルによる穿孔、及び吻合部漏出）；中空臓器の穿孔がないにもかかわらず、腹膜の破壊によって（例えば、外傷、外科的創傷、持続的携帯型腹膜透析、及び腹腔内化学療法）；突発性細菌性腹膜炎（ＳＢＰ）によって；または全身感染症（例えば結核）によって引き起こされる。さらなる実施形態では、該腹膜炎は、非感染性腹膜炎である。別のさらなる実施形態では、該非感染性腹膜炎は、例えば、無菌の体液、例えば血液（例えば、子宮内膜症、鈍的腹部外傷）、胃液（例えば、消化性潰瘍、胃がん）、胆汁（例えば、肝生検）、尿（骨盤外傷）、メンストリウム（例えば、卵管炎）、膵液（膵炎）、またはさらに破裂類皮嚢胞の内容物の腹膜内への漏出；無菌的開腹手術（例えば、異物反応及び／または線維性癒着または手術後腹部に不注意で残される無菌異物を残す場合がある、限局性または最小全身性腹膜炎を引き起こす外科手術；家族性地中海熱、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群、ポルフィリン症、ならびに全身性エリテマトーデスによって引き起こされる腹膜炎である。別のさらなる実施形態では、ＣＶＣは、抗生物質、点滴による水分補給と電解質バランスの補正、及び／または外科手術が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の腹膜炎治療または薬
剤と併用して投与される。
【００６７】
１つの実施形態において、該方法は、セニクリビロックを急性肝臓損傷の治療のために投与することを含む。１つの実施形態では、該肝臓損傷は、アセトアミノフェン、アルコール、化学物質、及び／または毒素によって誘発される。さらなる実施形態では、該肝臓損傷は、ＣＣＲ２及び／またはＣＣＬ２の発現を伴う。別のさらなる実施形態では、該ＣＣＲ２及び／またはＣＣＬ２の発現は阻害される。さらに別のさらなる実施形態では、該ＣＣＲ２及び／またはＣＣＬ２の発現は、ＣＶＣによって阻害される。別のさらなる実施形態では、該ＣＶＣは、ｎ−アセチルシステイン（アセチルシステイン；ＮＡＣ）、グルココルチコイド、コルチコステロイド、ペントキシフィリン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、抗ＴＮＦα、抗酸化剤の静脈内もしくは経口投与、または肝移植などの外科手術が挙げられるがこれらに限定されない急性肝臓損傷の治療または薬剤の１つ以上と併用して投与される。
【００６８】
用量及び投与：
特定の対象の用量は、該対象の年齢、体重、全身健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、排出速度、及び治療される特定の病状の程度に応じて、これら及び他の要因を考慮に入れて決定することができる。
【００６９】
本発明は、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が経口組成物として処方される治療方法を提供する。
【００７０】
本発明は、該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物が例えば、１日１回または１日２回投与される治療方法を提供する。該剤形は、該線維性の疾患または状態を治療するのに十分な期間投与することができる。
【００７１】
経口投与の場合、１日の用量は、体重５０ｋｇの成人１人当たり、活性成分として（すなわち、本発明の化合物として）約５〜１０００ｍｇ、好ましくは約１０〜６００ｍｇ、より好ましくは約１０〜３００ｍｇ、最も好ましくは約１５〜２００ｍｇの範囲内であり、該薬剤は、例えば、１日１回、または２〜３分割用量で投与されうる。
【００７２】
該セニクリビロックまたはその塩もしくは溶媒和物は、経口または注射投与に適する任意の剤形に処方されうる。該化合物が経口投与される場合、それは経口投与用の固体剤形、例えば、錠剤、カプセル剤、丸薬、顆粒等に処方することができる。それはまた、経口投与用の液体剤形、例えば、経口液剤、経口懸濁液、シロップ等に処方することもできる。本明細書で用いられる「錠剤」という用語は、該化合物と適切な補助材料を均質に混合し、圧縮して円形または不規則なトローチ、主に口腔錠、舌下錠、口腔ウェハー、チュアブル錠、分散錠、可溶錠、発泡錠、徐放錠、制御放出錠、腸溶錠等も含めた経口投与用の一般的な錠剤にすることによって調製される固体製剤を指す。本明細書で用いられる「カプセル剤」という用語は、該化合物もしくは該化合物と適切な補助材料を一緒に中空のカプセル内に充填することによって、または軟質カプセル材料内に密封することによって調製される固体製剤を指す。溶解性と放出特性に応じて、カプセル剤は硬カプセル剤（正規のカプセル剤）、軟カプセル剤（軟殻カプセル剤）、徐放性カプセル剤、制御放出カプセル剤、腸溶性カプセル剤等に分類することができる。本明細書で用いられる「丸薬」という用語は、該化合物と適切な補助材料を適切な方法で混合することによって調製される球形またはほぼ球形固体製剤を指し、滴丸剤、糖衣錠、小丸薬等を含む。本明細書で用いられる「顆粒」という用語は、該化合物と適切な補助材料を混合することによって調製され、特定の粒径を有する乾燥粒状製剤を指す。顆粒は、可溶性顆粒（一般に顆粒と呼ばれる）、懸濁顆粒、発泡性顆粒、腸溶性顆粒、徐放性顆粒、制御放出顆粒等に分類することができる。本明細書で用いられる「経口液剤」という用語は、該化合物を経口投与に適切な
溶媒に溶解することによって調製される安定した液体製剤を指す。本明細書で用いられる「経口懸濁液」という用語は、経口投与用の懸濁液を指し、これは不溶性の化合物を液体溶媒に分散することによって調製され、乾燥懸濁液または濃縮懸濁液も含む。本明細書で用いられる「シロップ剤」という用語は、該化合物を含む濃縮スクロース水溶液を指す。該注射用剤形は、製剤分野の従来の方法で製造することができ、水性溶媒または非水性溶媒が選択されうる。最も一般的に用いられる水性溶媒は、注射用水ならびに０．９％塩化ナトリウム溶液または他の適切な水溶液である。一般的に使用される非水性溶媒は、植物油、主に注射用大豆油、及び他のアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の水溶液である。
【００７３】
１つの実施形態において、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、該セニクリビロックまたはその塩は、セニクリビロックメシル酸塩である。
【００７４】
さらなる実施形態において、セニクリビロックまたはその塩とフマル酸の重量比は約７：１０〜約１０：７、例えば、約８：１０〜約１０：８、約９：１０〜約１０：９、または約９５：１００〜約１００：９５である。他のさらなる実施形態では、該フマル酸は、該組成物の約１５重量％〜約４０重量％、例えば、約２０重量％〜約３０重量％、または約２５重量％の量で含まれる。他のさらなる実施形態では、該セニクリビロックまたはその塩は、該組成物の約１５重量％〜約４０重量％、例えば、約２０重量％〜約３０重量％、または約２５重量％の量で含まれる。
【００７５】
他のさらなる実施形態において、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸からなる該組成物はさらに、１つ以上の充填剤を含む。より具体的な実施形態では、該１つ以上の充填剤は、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム、セルロース、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、デンプン、及び炭酸カルシウムから選択される。例えば、特定の実施形態では、該１つ以上の充填剤は微結晶性セルロースである。特定の実施形態では、該１つ以上の充填剤の該セニクリビロックまたはその塩に対する重量比は、約２５：１０〜約１０：８、例えば、約２０：１０〜約１０：１０、または約１５：１０である。他の特定の実施形態では、該１つ以上の充填剤は、該組成物の約２５重量％〜約５５重量％、例えば、約３０重量％〜約５０重量％、または約４０重量％の量で含まれる。他のさらなる実施形態では、該組成物はさらに、１つ以上の崩壊剤を含む。より具体的な実施形態では、該１つ以上の崩壊剤は、架橋ポリビニルピロリドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びデンプングリコール酸ナトリウムから選択される。例えば、特定の実施形態では、該１つ以上の崩壊剤は、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムである。特定の実施形態では、該１つ以上の崩壊剤の該セニクリビロックまたはその塩に対する重量比は、約１０：１０〜約３０：１００、例えば約２５：１００である。他の特定の実施形態では、該１つ以上の崩壊剤は、該組成物の約２重量％〜約１０重量％、例えば、約４重量％〜約８重量％、または約６重量％の量で含まれる。他のさらなる実施形態では、該組成物はさらに１つ以上の滑沢剤を含む。より具体的な実施形態では、該１つ以上の滑沢剤は、タルク、シリカ、ステアリン、ステアリン酸マグネシウム、及びステアリン酸から選択される。例えば、特定の実施形態では、該１つ以上の滑沢剤はステアリン酸マグネシウムである。特定の実施形態では、該１つ以上の滑沢剤は、該組成物の約０．２５重量％〜約５重量％、例えば、約０．７５重量％〜約３重量％、または約１．２５重量％の量で含まれる。
【００７６】
他のさらなる実施形態において、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸からなる該組成物は、表２のそれと実質的に同様である。他のさらなる実施形態では、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸からなる該組成物は、表３及び４のそれと実質的に同様である。他のさらなる実施形態では、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸からな
る該組成物のいずれかは、乾式造粒を含む方法で製造される。他のさらなる実施形態では、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸からなる該組成物のいずれかは、乾燥剤とともに包装された場合、相対湿度約７５％で約４０℃に６週間曝露後の含水量が約４重量％以下、例えば、２重量％以下である。他のさらなる実施形態では、上記組成物のいずれかは、乾燥剤とともに包装された場合、相対湿度７５％で４０℃に１２週間曝露後の総不純物レベルが約２．５％以下、例えば１．５％以下である。他のさらなる実施形態では、上記組成物のいずれかの該セニクリビロックまたはその塩は、経口投与後の平均絶対的バイオアベイラビリティが、該セニクリビロックまたはその塩の溶液の経口投与後のバイオアベイラビリティと実質的に同様である。さらに別の実施形態では、該セニクリビロックまたはその塩は、ビーグル犬における絶対的バイオアベイラビリティが約１０％〜約５０％、例えば、約２７％である。
【００７７】
別の実施形態において、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸からなる組成物を含む医薬製剤を提供する。さらなる実施形態では、該製剤中の該組成物は、顆粒状である場合がある。他のさらなる実施形態では、該製剤中の該組成物は、カプセル殻内に配置される。他のさらなる実施形態では、該製剤の該組成物は、サッシェに配置される。他のさらなる実施形態では、該製剤の該組成物は、錠剤または錠剤の成分である。さらなる他の実施形態では、該製剤の該組成物は、多層錠の１層以上である。他のさらなる実施形態では、該製剤は１つ以上の追加の医薬的に不活性な成分を含む。他のさらなる実施形態では、該製剤は、表９のそれと実質的に同様である。他のさらなる実施形態では、表９のものと実質的に同様の組成物を有する錠剤を提供する。他のさらなる実施形態では、上記実施形態のいずれかは、被覆された基質である。別の実施形態では、上記実施形態のいずれかの調製方法を提供する。さらなる実施形態では、該方法は、セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸を混合して混和剤を形成し、該混和剤を乾式造粒することを含む。他のさらなる実施形態では、該方法はさらに、１つ以上の充填剤と該セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸を混合して該混和剤を形成することを含む。他のさらなる実施形態では、該方法はさらに、１つ以上の崩壊剤と該セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸を混合して該混和剤を形成することを含む。他のさらなる実施形態では、該方法はさらに、１つ以上の滑沢剤と該セニクリビロックまたはその塩及びフマル酸を混合して該混和剤を形成することを含む。他のさらなる実施形態では、該方法はさらに、該乾式造粒された混和剤を圧縮して錠剤にすることを含む。他のさらなる実施形態では、該方法は、該乾式造粒された混和剤でカプセルを充填することを含む。
【００７８】
さらに、本発明の化合物は、輸血用血液または血液製剤と組み合わせて取り入れても使用してもよい。１つの実施形態では、本発明の化合物は、潜在ＨＩＶ保有宿主を除去する１つ以上の薬剤と組み合わせて取り入れても使用してもよく、輸血用血液または血液製剤に添加してもよい。通常、輸血用血液または血液製剤は、複数人から採取した血液を混合して製造し、場合によっては、未感染細胞がＨＩＶウイルスに感染した細胞で汚染される。そのような場合には、未感染細胞はＨＩＶウイルスに感染する可能性が高い。本発明の化合物が、潜在ＨＩＶ保有宿主を除去する１つ以上の薬剤とともに輸血用血液または血液製剤に添加される場合、該ウイルスの感染及び増殖を防止または制御することができる。特に、血液製剤の保存時、該ウイルスの感染及び増殖は、本発明の化合物の添加によって効果的に防止または制御される。さらに、ＨＩＶウイルスで汚染された輸血用血液または血液製剤が人に投与された場合、その人の体内での該ウイルスの感染及び増殖は、本発明の化合物を、潜在ＨＩＶ保有宿主を除去する１つ以上の薬剤と併用して該血液または血液製剤に添加することによって防止することができる。例えば、通常、血液または血液製剤を用いる際に経口投与によってＨＩＶ感染性疾患を防ぐためには、投与量は、ＣＣＲ５／ＣＣＲ２アンタゴニストとして、体重約６０ｋｇの成人で、約０．０２〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０５〜３０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり、該薬剤は１日１回でも２〜３回の投与でもよい。当然のことながら、該用量
範囲は、１日用量を分割するために必要な単位用量に基づいて制御することができ、上記の通り、特定の対象の用量は、該対象の年齢、体重、全身健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、排出速度、及び治療される特定の病状の程度に応じて、これら及び他の要因を考慮に入れて決定することができる。この場合、投与経路もまた適切に選択され、ＨＩＶ感染性疾患を防ぐための本発明の薬剤は、輸血前または血液製剤の使用前に輸血用血液または血液製剤に直接加えてもよい。そのような場合、望ましくは、本発明の薬剤は、輸血または血液製剤の使用の直前から２４時間前まで、好ましくは直前から１２時間前まで、より好ましくは直前から６時間前までに血液または血液製剤と混合される。
【００７９】
輸血用血液または血液製剤はさておき、本発明の組成物が該輸血用血液または血液製剤及び／または他の活性薬剤とともに投与される場合、該薬剤は好ましくは輸血または血液製剤の使用と同時から１時間前までに投与される。より好ましくは、例えば、該薬剤を１日当たり１回から３回投与し、該投与を４週間続ける。
【００８０】
併用療法：
本発明の化合物は、単独で使用してもよいし、１つ以上の追加の活性薬剤と併用して使用してもよい。該１つ以上の活性薬剤は、それを必要とする対象に治療効果を及ぼすことができる任意の化合物、分子、または物質でよい。該１つ以上の追加の活性薬剤は、「併用」、すなわち、別々の医薬組成物として、または単一の医薬組成物に混合されるかのどちらかで、対象に対して協調的に一緒に投与されうる。「併用」では、該１つ以上の追加の活性薬剤はまた、本化合物と同時に投与しても、異なる時点及び異なる頻度を含めて本化合物と別々に投与してもよい。該１つ以上の追加の活性薬剤は、任意の既知の経路、例えば、経口、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、膣内、直腸内等で投与してよく；該治療薬はまた任意の従来の経路で投与してよい。多くの実施形態では、少なくとも１つ及び任意に該１つ以上の追加の活性薬剤の両方を経口投与してもよい。
【００８１】
これら１つ以上の追加の活性薬剤としては、１つ以上の抗線維化剤、抗レトロウイルス剤、免疫系抑制剤、ＣＣＲ２及び／またはＣＣＲ５阻害剤または治療、ｎ−アセチルシステイン（アセチルシステイン；ＮＡＣ）、グルココルチコイド、コルチコステロイド、ペントキシフィリン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、抗ＴＮＦα剤、抗酸化剤、及び抗生物質が挙げられるがこれらに限定されない。２つ以上の薬剤が組み合わせて用いられる場合、各薬剤の用量は、独立して用いられる場合の該薬剤の用量と通常は同一であるが、薬剤が他の薬剤の代謝を妨げる場合、各薬剤の用量は適切に調整される。各薬剤は、同時に投与しても、例えば、１２時間、２４時間、及び３６時間未満の時間間隔で別々に投与してもよい。本明細書に記載の剤形、例えばカプセル剤は、適切な間隔で投与することができる。例えば、１日１回、１日２回、１日３回等。具体的には、該剤形は例えば、１日１回または２回投与される。さらにより具体的には、該剤形は１日１回投与される。１つの実施形態では、該１つ以上の抗レトロウイルス剤としては、侵入阻害剤、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、成熟阻害剤、及びそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。１つの実施形態では、該１つ以上の追加の抗レトロウイルス剤としては、ラミブジン、エファビレンツ、ラルテグラビル、ビベコン（ｖｉｖｅｃｏｎ）、ベビリマット（ｂｅｖｉｒｉｍａｔ）、アルファインターフェロン、ジドブジン、アバカビル、ロピナビル、リトナビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、テノホビルのプロドラッグ、エムトリシタビン、エルビテグラビル、コビシスタット、ダルナビル、アタザナビル、リルピビリン、ドルテグラビル、及びそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８２】
１つの実施形態において、該１つ以上の免疫系抑制剤としては、シクロスポリン、タクロリムス、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、シロリムス、エベロリムス、アザチオプ
リン、ミコフェノール酸、メトトレキサート、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン、及びそれらの組合せが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８３】
１つの実施形態において、該１つ以上の抗生物質としては、ペニシリン類（例えば、ペニシリン及びアモキシシリン）；セファロスポリン類（例えば、セファレキシン）；マクロライド類（例えば、エリスロマイシン、クラリスロマイシン、及びアジスロマイシン）；フルオロキノロン類（例えば、オフロキサシン、レボフロキサシン、及びオフロキサシン）；スルホンアミド類（例えば、コトリモキサゾール及びトリメトプリム）；テトラサイクリン類（例えば、テトラサイクリン及びドキシサイクリン）；アミノグリコシド類（例えば、ゲンタマイシン及びトブラマイシン）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８４】
１つの実施形態において、該１つ以上のグルココルチコイドとしては、トリアムシノロン、メチルプレドニゾロン全身、ベタメタゾン、ブデソニド、プレドニゾロン、プレドニゾン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、及び／またはコルチゾンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８５】
１つの実施形態において、該１つ以上の抗ＴＮＦα剤としては、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、セルトリズマブ、及び/またはゴリムマブが挙げられるが
これらに限定されない。
【００８６】
１つの実施形態において、該１つ以上のホスホジエステラーゼ阻害剤としては、シルデナフィル、タダラフィル、及び/またはバルデナフィルが挙げられるがこれらに限定され
ない。
【００８７】
以下、実施例で本発明をさらに詳細に説明するが、これらの実施例はその範囲を限定すると解釈されるものではない。
【実施例】
【００８８】
実施例１−セニクリビロックメシル酸塩組成物
酸可溶化剤の固有性以外は同一の一連のセニクリビロックメシル酸塩組成物は、Ｋｅｙの１Ｌのボウル造粒機で湿式造粒法によって調製し、その後トレイ乾燥、ふるい分け、混合し、カーバープレスで打錠した。これらの処方の組成を表２に示す。
【表２】
2020111586.tif 000005
【００８９】
これらの錠剤をビーグル犬に投与した。対照として、経口液剤も投与した。これらの製剤及びこの経口液剤の絶対的バイオアベイラビリティを測定したとともに、これらを図２に示す。この結果は、フマル酸を含むセニクリビロックメシル酸塩が、試験した他の可溶化剤のいずれよりも有意に高いバイオアベイラビリティを有することを示している。
【００９０】
実施例２：セニクリビロックメシル酸塩組成物
セニクリビロックメシル酸塩、フマル酸、微結晶性セルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムを混合し、乾式造粒し、粉砕し、粒外の微結晶性セルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムとブレンドし、圧縮して、硬度が１０ｋＰより高く、摩損度が０．８％ｗ／ｗ未満の錠剤にした。得られた錠剤は表３に示す組成を有していた。
【表３】
2020111586.tif 000006
【００９１】
例として、実施例２ｂの成分の濃度割合及び１錠あたりの質量を表４に示す。
【表４】
2020111586.tif 000007
【００９２】
実施例３：セニクリビロックメシル酸塩組成物
セニクリビロックメシル酸塩、微結晶性セルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムを混合し、乾式造粒し、乾燥し、粉砕し、粒外の微結晶性セルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、フマル酸、コロイド状二酸化ケイ素、及びステアリン酸マグネシウムとブレンドし、圧縮して、硬度が１０ｋＰより高く、摩損度が０．８％ｗ／ｗ未満の錠剤にした。得られた錠剤は表５に示す組成を有していた。
【表５】
2020111586.tif 000008
【００９３】
とりわけ、表５の製剤は表３ｂのものと同じ成分比を有し、各錠剤に使用される成分の合計量のみ異なる。このように、表４はセニクリビロック１５０ｍｇ（遊離塩基に基づいて）の錠剤を示しているが、表ＣＣ−１は、表４に示す実施例２ｂの１５０ｍｇの錠剤と同じ成分比の、セニクリビロック２５ｍｇ（遊離塩基に基づいて）の錠剤を示す。
【００９４】
実施例４−参照
表６のクエン酸系製剤は以下のように調製した。セニクリビロック、ヒドロキシプロピルセルロース、マンニトール、及び架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムを混合し、湿式造粒し、乾燥し、粉砕し、微結晶性セルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、及びステアリン酸マグネシウムとブレンドした。得られたブレンドを圧縮して、硬度が１０ｋＰより高く、摩損度が０．８％ｗ／ｗ未満の錠剤にした。これらの錠剤をヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール８０００、二酸化チタン、及び鉄黄で被覆した。このようにして製造された被覆錠剤は、米国特許出願公開第２００８／０３１９４２号に開示のもの（例えば、表３参照）と実質的に同一であった。
【表６】
2020111586.tif 000009
【００９５】
実施例５−参照
セニクリビロック及びヒプロメロース酢酸エステルコハク酸エステルをメタノールに溶解し、噴霧乾燥してセニクリビロックを２５重量％（セニクリビロックの遊離塩基の重量に基づいて）含む微粉にした。この粉体をコロイド状二酸化ケイ素、微結晶性セルロース、マンニトール、ラウリル硫酸ナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、及びステアリン酸マグネシウムと混合した。この混合剤を圧縮して、硬度が１０ｋＰより高く、摩損度が０．８％ｗ／ｗ未満の錠剤にした。これら錠剤の最終組成を表７に示す。
【表７】
2020111586.tif 000010
【００９６】
実施例６：ＣＶＣ製剤のバイオアベイラビリティ
ビーグル犬における実施例３の錠剤の絶対的バイオアベイラビリティを、実施例４及び５の錠剤のもの、ならびにセニクリビロックメシル酸塩の経口液剤及びセニクリビロックメシル酸塩粉末を含むゼラチンカプセルの両方と比較した。これらの結果を表８に示す。
【表８】
2020111586.tif 000011
【００９７】
本実施例は、フマル酸を含む（実施例３）乾式造粒錠剤中のセニクリビロックのバイオアベイラビリティが、経口液剤のそれと実質的に同様であること、フマル酸（実施例１ｂ
）またはクエン酸（実施例４）を含む湿式造粒錠剤中のセニクリビロックのバイオアベイラビリティより有意に高いこと、及びＨＰＭＣ−ＡＳ（実施例５）を含む噴霧乾燥分散体中の非晶性セニクリビロックの錠剤中のセニクリビロックのそれの倍以上であることを示している。これらの結果は、結晶性のＡＰＩの乾式造粒が、湿式造粒及び非晶性噴霧乾燥分散体よりバイオアベイラビリティを有意に増加させるのではないかと疑う理由がなかったため、驚くべきことである。これは特に、非晶性噴霧乾燥分散体はしばしば水に溶けにくい薬物のバイオアベイラビリティを向上させるために用いられるからである。これらの結果はまた、フマル酸がクエン酸より溶解時間がかかること、及び、より小さい酸のＣＶＣ  ＡＰＩに対する質量比で使用した（クエン酸：ＡＰＩは３：１に対してフマル酸：ＡＰＩは１．０６：１）ことからも驚くべきことである。従って、ＣＶＣに対して、フマル酸がクエン酸より有効な可溶化剤であることが判明したことはそれ故驚くべきことであった。
【００９８】
実施例７：ＣＶＣ処方の促進安定性
実施例２ｂの錠剤の促進安定性を、実施例１ｂ、４、及び５の錠剤のそれと、４０℃で相対湿度７５％の環境に曝露することによって比較した。すべての錠剤は、試験中、乾燥剤とともに包装した。図３に示す通り、実施例２ｂの錠剤は、意外にも他の湿式造粒錠剤よりもはるかに安定であったとともに、噴霧乾燥分散体錠剤と同様に安定であった。実施例２ｂ及び実施例４の錠剤間のこの安定性の差は、この２つの間の有意な差が、これら製剤の製造方法（乾式造粒対湿式造粒）だけであることから特に驚くべきことである。これらの結果はまた、造粒方法がセニクリビロックのバイオアベイラビリティと安定性の両方に影響を及ぼす可能性があることがこれまで知られていなかったことからも驚くべきことである。
【００９９】
実施例８：ＣＶＣ製剤の安定性
実施例２及び３の錠剤の安定性を、これらの錠剤を４０℃で相対湿度７５％の環境に６週間暴露することによって試験した。すべての錠剤は、試験中、乾燥剤とともに包装した。これらの結果を表９に示す。表９には、これらの錠剤がこれらの条件下で極めて安定であることが示されている。
【表９】
2020111586.tif 000012
【０１００】
実施例９：ＣＶＣ製剤の安定性
２５℃での動的蒸気収着等温線は、セニクリビロックメシル酸塩のものとともに実施例３及び４の錠剤の安定性と相関する。収着は、相対湿度０％から相対湿度９０％まで、５％の間隔で行った。各間隔で、各サンプルを１０分以上３０分以下の間、平衡化した。平衡化は、質量増加率が毎分０．０３％ｗ／ｗ以下になった時点または３０分後のどちらか早い方で停止した。図４に示す結果は、実施例２ｂの錠剤が実施例４のものよりも有意に安定であることを示している。この結果は、実施例４よりも吸湿性が有意に低い実施例３と一致する。実施例２ｂと比較して高い実施例４の吸湿性は、次に実施例４の部分的なゲル化及びその後の安定性の低下を引き起こすことができる移動水の高含量と関連している可能性がある。
【０１０１】
実施例１０：ＣＶＣ製剤のバイオアベイラビリティ
実施例３の錠剤のバイオアベイラビリティを、異なる胃の状態のビーグル犬において、実施例５のそれ及びゼラチンカプセル内のセニクリビロックメシル酸塩粉末のそれと比較した。このバイオアベイラビリティは、各々胃のｐＨを変化させた異なる前処理状態下で試験した。具体的には、ペンタガストリン前処理は最も低いｐＨを与え、無処理は中間ｐＨを与え、ファモチジン処理は最も高いｐＨを与える。
【０１０２】
図５に示す結果は、実施例３の錠剤が試験したすべての条件下でより高いバイオアベイラビリティを有することを示す。実施例３のバイオアベイラビリティは、ペンタガストリン処理及び未処理のイヌ間での差が少なかったが、実施例４は、絶食、無処理のイヌ（胃のｐＨが中間）で、ペンタガストリン処理のイヌ（胃ｐＨが最も低い）と比較してバイオアベイラビリティの有意な低下を示した。Ｈ２受容体アゴニストであり、胃の酸性度を抑制し、胃のｐＨを上げるファモチジンでの前処理は、すべてのサンプルでバイオアベイラビリティを低下させたが、実施例３に対する低下は実施例４に対するそれよりもずっと低かった。
【０１０３】
これらの結果は、フマル酸を含む乾式造粒セニクリビロック組成物のさらなる予期しない利益を実証する。具体的には、かかる処方の薬物動態は、ヒトの胃の可能なｐＨ条件の全範囲にわたって投与する場合、噴霧乾燥分散体（実施例４）のものほど変動しない。この結果は、アタザナビル等の他の弱塩基性抗レトロウイルス薬のバイオアベイラビリティが胃のｐＨによって大いに影響されることから、予期されず驚くべきことである。かかる薬物については、無酸症（ａｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒｉｃ）患者等の疾患や医学的状態によって、または制酸剤、プロトンポンプ阻害薬、もしくはＨ２受容体アゴニスト等の薬物の併用によって引き起こされる胃のｐＨ変化は、そのバイオアベイラビリティを治療量以下のレベルに下げる場合がある。実施例３の乾式造粒フマル酸系セニクリビロックメシル酸塩製剤が胃のｐＨ変化につれてバイオアベイラビリティを変化させにくいことを示すこれらの結果は、実施例３がより堅固な処方であって、胃のｐＨレベルが様々である、またはその可能性が高い患者で使用することができることを示す。
【０１０４】
実施例１１ａ−１１ｃ：セニクリビロックメシル酸塩とラミブジンを含む製剤の調製
表１０のセニクリビロックメシル酸塩とラミブジンを含む製剤を以下のように調製した。第一に、粒内成分を混合し、乾式造粒して組成物を乾式造粒混合剤として形成した。この乾式造粒混合剤を次にさらに粒外成分と混合して混合物を形成した。この混合物を打錠した。ビーグル犬においてこのセニクリビロック（ＣＶＣ）及びラミブジン（３ＴＣ）のＣＶＣ強度１５０ｍｇの錠剤（実施例１１ｂ及び１１ｃ）の絶対的バイオアベイラビリティを測定した。これらの結果を図６に示す。
【表１０】
2020111586.tif 000013
【０１０５】
実施例１２：ＮＡＳＨのマウスモデルでのＣＣＲ２及びＣＣＲ５の二重アンタゴニストであるセニクリビロックの抗線維化及び抗炎症活性
背景：非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、脂肪蓄積、慢性炎症（炎症性単球及びマクロファージを含む）を特徴とし、線維症が存在する場合、それは肝硬変または肝細胞がんに至る場合がある。現在ＮＡＳＨに対して承認された治療はない。ＣＣケモカイン受容体（ＣＣＲ）タイプ２及びその主なリガンド、単球走化性タンパク質−１が、肝臓内の炎症性単球の動員に寄与することをエビデンスが示唆している。セニクリビロック（ＣＶＣ）は、経口の強力な二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストであり、１４３人のＨＩ
Ｖ−１に感染した成人での４８週間の第２ｂ相試験で満足な安全性と耐容性を示した（ＮＣＴ０１３３８８８３）。ＣＶＣを、肝細胞がんに至る食餌性ＮＡＳＨのマウスモデルで評価した。このモデルの第一の線維化段階からのデータを示す。
【０１０６】
方法：ＮＡＳＨは、雄マウスにおいて、生後２日でストレプトゾシン２００μｇの単回注射（グルコースの制御障害を引き起こす）と、その後４週齢からの高脂肪食によって誘発した。６〜９週齢の３群の動物（ｎ＝６／群）に、ＣＶＣ用量０（媒体）、２０（低用量）、または１００（高用量）ｍｇ／ｋｇ／日を１日２回強制経口投与した。動物は９週齢で殺処分し、肝臓の生化学、遺伝子発現、及び組織学的評価を行った。
【０１０７】
結果：ＣＶＣ処理は、体重または肝重量にも、全血グルコースにも、肝臓トリグリセリドにも影響を及ぼさなかった。平均（±ＳＤ）アラニンアミノトランスフェラーゼレベルは、両方のＣＶＣ処理群で、対照と比べて有意に減少し（低用量、高用量、及び媒体についてそれぞれ、５８±１２、５１±１３、及び１３３±８０Ｕ／Ｌ；ｐ＜０．０５）、肝臓ヒドロキシプロリンは処理群で減少する傾向があった。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲでは、全肝臓溶解物中のコラーゲン１型のｍＲＮＡがＣＶＣ処理で２７〜３７％減少した。線維症の面積率（シリウスレッド染色による）は、ＣＶＣ処理によって対照と比較して有意に減少した（ｐ＜０．０１）：血管周囲腔を含めた場合、２０ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日、及び対照についてそれぞれ、０．６６％±０．１６、０．６４％±０．１９、及び１．１０％±０．３１；血管周囲腔を除いた場合、それぞれ０．２９％±０．１４、０．２０％±０．０６、及び０．６１％±０．２３。重要なことには、この組織学的非アルコール性脂肪肝疾患活動性スコア（本モデルの未処理マウスのスコアが０）は、主に炎症及びバルーニングスコアの減少によって、ＣＶＣ処理で有意に減少した（低用量、高用量、及び媒体についてそれぞれ、４．０±０．６、３．７±０．８、及び５．３±０．５；ｐ＜０．０５）。ヒトにおいて以前に示されたように、血漿単球走化性タンパク質−１レベルのＣＶＣ用量依存的な代償性増加は、ＣＣＲ２の拮抗作用と一致してマウスにおいて認められた（低用量及び高用量についてそれぞれ１．１倍及び１．５倍の増加）。
【０１０８】
結論：これらのデータにより、ＨＩＶ−１に対してヒトで現在治験中の治験薬であるＣＶＣが、ＮＡＳＨのマウスモデルにおいて抗線維性及び抗炎症活性を有することが示唆され、臨床試験を正当化する。これらの知見は、ＣＣＲ２／単球走化性タンパク質−１軸を破壊することがＮＡＳＨの新規な治療方法になる可能性があるというさらなるエビデンスを与える。
【０１０９】
実施例１３：チオアセトアミド誘発性肝線維症及び肝硬変のラットモデルにおける二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストであるセニクリビロックの顕著な抗線維化活性
背景：ＣＣケモカイン受容体（ＣＣＲ）タイプ２及び５は、炎症性単球及びマクロファージ、クッパー細胞、ならびに肝星細胞（ＨＳＣ）上で発現し、肝臓内の炎症及び線維成長に寄与する。セニクリビロック（ＣＶＣ；新規で強力な経口の二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニスト）は、１４３人のＨＩＶ−１に感染した成人での４８週間の第２ｂ相試験で満足な安全性／耐容性を有した（ＮＣＴ０１３３８８８３）。この試験は、ＣＶＣのインビボでの抗線維化効果及び疾患発症に対する治療介入のタイミングを、チオアセトアミド（ＴＡＡ）誘発性損傷が原因の新生肝線維症のラットにおいて評価する。
【０１１０】
方法：線維症は、雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいて、ＴＡＡ１５０ｍｇ／ｋｇを３回／週で８週間腹腔内投与することによって誘発した。ラット（ｎ＝４〜８／群）は、最初の８週間ＴＡＡと同時（第１群；早期介入）、ＴＡＡの投与の終了後第４〜８週（第２群；新生線維症）または第８〜１２週（第３群；肝硬変反転）にＣＶＣを３０ｍｇ／ｋｇ／日（ａ）、ＣＶＣを１００ｍｇ／ｋｇ／日（ｂ）、または媒体対照（ｃ）を受けた。肝臓の生化学、遺伝子発現、及び組織学的評価を行った。
【０１１１】
結果：ＴＡＡと同時に開始した場合（第１群）、コラーゲン形態計測で評価して、ＣＶＣ３０ｍｇ（第１ａ群）及び１００ｍｇ（第１ｂ群）で有意に線維症が低下した（それぞれ４９％及び３８％；ｐ＜０．００１）。コラーゲン１型のタンパク質レベルは、第１ａ群及び１ｂ群でそれぞれ、３０％及び１２％減少し、α−ＳＭＡはそれぞれ１７％及び２２％減少した。ＴＡＡ誘発性損傷の４週間後に処理を始めた場合（第２群）、統計的に有意な抗線維化効果はＣＶＣ３０ｍｇ（第２ａ群、コラーゲン３６％減少；ｐ＜０．００１）で認められたが、ＣＶＣ１００ｍｇ（第２ｂ群）では認められなかった。処理を第８週（肝硬変あり）に始めて４週間継続した場合（第３群）、線維形成遺伝子発現にも線維症にもＣＶＣの有意な効果はなかった。
【０１１２】
結論：ＣＶＣは、ＴＡＡに起因する非肝硬変肝線維症において強力な抗線維化剤である。この薬物は、早期介入（第１群）及び新生線維症（第２ａ群）で有効であったが、肝硬変がすでに確立している場合（第３群）には有効ではなかった。
【０１１３】
実施例１４：セニクリビロックは低ナノモル濃度において高ＣＣＲ５受容体占有を達成する
背景：セニクリビロック（ＣＶＣ）は、新規な、１日１回の強力なＣＣＲ５及びＣＣＲ２のアンタゴニストであり、治療を受けていない成人のＨＩＶ−１感染症治療に対する第２ｂ相評価を完了している（ＮＣＴ０１３３８８８３）。この試験の目的は、ＣＶＣ、ＢＭＳ−２２（ＴＯＣＲＩＳ、ＣＣＲ２アンタゴニスト）、及び承認済みのＣＣＲ５アンタゴニストであるマラビロク（ＭＶＣ）での処理後のインビトロでの受容体占有及び生物学を評価することであった。
【０１１４】
方法：５人のＨＩＶ＋及び５人のＨＩＶ−被験者由来のＰＢＭＣをＣＶＣ、ＢＭＳ−２２、またはＭＶＣとインキュベート後、非処理にしたか、またはＲＡＮＴＥＳ（ＣＣＲ５リガンド）もしくはＭＣＰ−１（ＣＣＲ２リガンド）で処理した。各薬物のＣＣＲ５またはＣＣＲ２の内在化阻害能を評価した。ＣＣＲ５及びＣＣＲ２の細胞表面発現をフローサイトメトリーで評価し、蛍光値を１細胞当たりの蛍光分子数（ＭＥＳＦ）に変換した。
【０１１５】
結果：ＲＡＮＴＥＳの非存在下で、ＣＶＣ及びＭＶＣはともにＣＣＲ５の細胞表面発現を増加させた。この効果は、ＨＩＶ陰性被験者（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞）においてかなり見られた。ＣＶＣは、ＲＡＮＴＥＳ誘発性ＣＣＲ５内在化をＭＶＣより低い有効濃度で抑えた。ＣＣＲ５が飽和状態に達する有効濃度は、ＣＶＣでは、ＣＤ４＋Ｔ細胞に対して３．１ｎＭ、及びＣＤ８＋Ｔ細胞に対して２．３ｎＭであった（それぞれ約９１％及び約９０％の受容体占有）。ＭＶＣは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方に対して１２．５ｎＭで飽和状態に達し、それぞれ約８６％及び約８７％の受容体占有を表した。ＣＶＣ及びＭＶＣは、高いが不完全なＣＣＲ５の飽和状態を達成し、これは、ＲＡＮＴＥＳの非存在下で両方の薬剤で増加したＣＣＲ５発現の観察によって説明されうる効果である。ＭＣＰ−１の非存在下で、ＣＶＣはＣＣＲ２の内在化を誘導し、単球上での細胞表面発現を低下させた。ＢＭＳ−２２はＣＣＲ２の細胞表面発現をわずかに増加させた。ＣＶＣは、ＭＣＰ−１誘発性のＣＣＲ２内在化をＢＭＳ−２２より低い濃度で抑えた。ＣＶＣ６ｎＭで単球ＣＣＲ２は飽和状態に達し、約９８％のＣＣＲ２占有を表した。＞８０％の受容体占有に達するためには、ＣＶＣの１．８ｎＭに対して平均１８ｎＭのＢＭＳ−２２が必要であった。
【０１１６】
結論：ＣＶＣは、インビトロにおいてＭＶＣより容易に（より低い濃度で）ＲＡＮＴＥＳ誘発性のＣＣＲ５内在化を抑え、ＣＶＣがインビボでＭＶＣよりＲＡＮＴＥＳによる細胞活性化の抑制により有効であることを示した。処理対象におけるベースラインＣＣＲ５発現レベルは、インビボでのＣＣＲ５アンタゴニスト活性の決定要因でありうる。ＣＶＣ
は、単球上でのＣＣＲ２の約９８％受容体占有をインビトロにおいて低ナノモル濃度で達成し、ＭＣＰ−１の非存在下で単球上のＣＣＲ２の発現を低下させた。発現の低下と組み合わせたＣＶＣによるＣＣＲ２の高飽和状態は、臨床でのＣＶＣで観察される強力なＣＣＲ２阻害を説明しうる。ＣＶＣはインビトロで強力な免疫調節活性を有し、慢性ＨＩＶ感染症において重要な免疫治療及び抗レトロウイルスの複合でありうる。
【０１１７】
実施例１５：ＣＶＣはＨＩＶの侵入を遮断するが、ＭＶＣのように細胞外空間へのＨＩＶの再分配を引き起こさない
背景：インビボにおいて、ＣＶＣは、ＣＣＲ５指向性ウイルス７を有する治療経験のある個体の単剤療法で有効性を示している。第ＩＩｂ相臨床試験（６５２−２−２０２；ＮＣＴ０１３３８８８３）において、ＣＶＣは、２４週（一次解析）で非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）エファビレンツ（ＥＦＶ）と同様の有効性ならびに非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）エファビレンツ（ＥＦＶ）より優れた毒性プロファイルを、各々ともにエムトリシタビン（ＦＴＣ）とテノホビル（ＴＤＦ）との併用で投与した場合に満足な安全性と耐容性で実証した。我々は、ＣＶＣの試験２０２（実施例２２）における抗レトロウイルス効果が、ＭＶＣで観察されたリバウンド現象の結果として過小評価された可能性があると仮定した。従って、我々は、この試験の第２４週でウイルス学的成功を収めた３０対象由来の保存ＰＢＭＣにおける細胞内ＨＩＶ  ＤＮＡの減少を測定することによって、試験２０２（実施例２２）のエキソビボでのサブ解析を行った。我々はまた、インビトロアッセイを行って、ＣＶＣまたはＭＶＣが引き起こした可能性があるすべての無細胞ビリオン再分配の程度を測定及び比較した。
【０１１８】
我々はここで、ＣＶＣがウイルス粒子のリバウンドを誘発しないことを示す。実際、細胞内ＤＮＡの同等の減少がＣＶＣまたはＥＦＶのいずれかで処理された個体で見られ、血漿ウイルス量がＣＶＣ治療の成功の正確な評価基準であることを示唆した。構造モデリングは、ＭＶＣとＣＶＣで得られる結果間の違いの潜在的な説明をする。
【０１１９】
方法：細胞。ＣＤ４、ＣＣＲ５、及びＣＸＣＲ４を発現するＰＭ−１細胞は、ウシ胎児血清１０％を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｒ１０培地）にて、３７Ｃ、５％ＣＯ２で維持した。トランスフェクションに用いる２９３Ｔ細胞は、ＤＭＥＭ中、１０％ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン、及び抗生物質（Ｄ１０培地）にて３７Ｃ、５％ＣＯ２で維持した。ウイルスストック。ＨＩＶ−１  ＢａＬウイルスは、２９３Ｔ細胞をプラスミドｐＷＴ／ＢａＬでトランスフェクトして産生した。リポフェクタミン２０００をトランスフェクション剤として使用した。培養上清をトランスフェクションの４８時間後に回収し、０．４５μｍ孔のフィルターを通して濾過し、３７Ｃでウイルスストック１ｍｌ当たり５０単位のベンゾナーゼで２０分間処理して混入したプラスミドＤＮＡを除去した。ウイルスストックを−８０Ｃで凍結し、ベンゾナーゼ活性を停止させた。ベンゾナーゼ処理ウイルスストックは、臍帯血単核細胞（ＣＢＭＣ）中で増殖させた。ＣＢＭＣは、ＨＩＶ−１  ＢａＬでの感染に先立って、Ｒ１０培地中、フィトヘマグルチニン（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｌｕｔｔｉｎｉｎ）（ＰＨＡ−Ｍ）で７２時間刺激した。このウイルス増幅培養物を、その後インターロイキン２（ＩＬ−２）を補充したＲ１０で成長させ、３７Ｃ、５％ＣＯ２でインキュベートした。
【０１２０】
感染：我々は、ＰＭ−１細胞を阻害濃度のＣＶＣ（２０ｎＭ）及びＭＶＣ（５０ｎＭ）の存在下、ＨＩＶ−１  ＢａＬに曝露した。両方の薬物をウイルスの添加に先立って３７Ｃで１時間ＰＭ−１細胞とともにインキュベートした。１ｍｌのＲ１０培地中、５×１０５細胞当たり５００ｎｇのＨＩＶ−１  ＢａＬのｐ２４抗原をインキュベートした。本文で「無細胞」と記載されるウイルスのみの対照を用いてウイルスの減衰を測定した。ウイルス吸着は、薬物処理をせずに３７Ｃで１時間予備インキュベートした５×１０５のＰＭ−１細胞あたり５００ｎｇのＨＩＶ−１  Ｂａｌのｐ２４Ａｇを加えた無薬物対照で測定
した。各薬物処理及び対照は、二重で行った。ウイルスＲＮＡは、ＱＩＡａｍｐウイルスＲＮＡミニキットを業者の指示に従って用い、１４０μｌの上清液から抽出した。サンプルは分析するまで−８０Ｃで保存した。上清のウイルス量は、プライマーＵＳ１ＳＳＦ（５’−ＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡ−３’）、ＵＳ１ＳＳＲ（５’−ＴＧＡＧＧＧＡＴＣＴＣＴＡＧＴＴＡＣＣＡＧＡＧＴＣＡ−３’）、及びＵＳ１ＳＳプローブ（５’−（ＦＡＭ）ＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡ）での定量リアルタイム逆転写ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）ならびにＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのｑＲＴ−ＰＣＲ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘキットを用いて測定した。サイクリングパラメータは：５０℃で１５分間、９５℃で１０分間、その後９５℃で１５秒間及び６０℃で１分間を５０サイクルであった。すべての値は、２回以上の独立した実験の反復試験の結果である。ＲＮＡのコピー数は、ｐＢａＬ／ｗｔの１０倍連続希釈を用いて定量化し、各アッセイ用の標準曲線を生成し、先行研究の既知のコピー数のサンプルに対して較正した。
【０１２１】
患者サンプル：末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）サンプルは、ＣＣＲ５指向性ウイルスを有し、治療を受けていないＨＩＶ−１感染患者において、エムトリシタビン／テノホビルジスプロキシル（ｄｉｓｐｒｏｘｉｌ）フマル酸塩（ＦＴＣ／ＴＤＦ）との併用でＣＶＣ（１００ｍｇもしくは２００ｍｇ）またはＥＦＶの有効性、安全性、及び耐容性を比較する試験２０２の第ＩＩｂ相臨床試験において第２４週でウイルス学的成功を収めた３０人の患者（ＣＶＣ１００ｍｇ、ＣＶＣ２００ｍｇ、及びＥＦＶでそれぞれ１０、１３、及び７人）から採取した。ベースライン及び２４週のサンプルは、ベースラインウイルス量が、＜１００，０００で＞１，０００のウイルスＲＮＡコピー／ｍｌであり、ＣＤ４数≧２００細胞／μｌの、ＣＶＣまたはＥＦＶのいずれかを受けるようにランダムに割り付けられた参加者から採取した。
【０１２２】
細胞内ＤＮＡ  ｑＰＣＲ。全ＤＮＡを抽出し、定量化し、−８０Ｃで保存した。細胞内ストロングストップＤＮＡレベルは、上記のＵＳ１ＳＳプライマー／プローブのセットで定量化した。細胞内完全長ＤＮＡレベルは、ＵＳ１ＦＬプライマー／プローブのセット（フォワード：５’−ＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡ；リバース：５’−ＣＧＡＧＴＣＣＴＧＣＧＴＣＧＡＧＡＧＡ；プローブ：５’−［ＦＡＭ］−ＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡ）を用いて定量化した。両方のＤＮＡレベルをＧＡＰＤＨプライマー／プローブのセット（フォワード：５’−ＡＣＣＧＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＡＡＴＧＧ；リバース：５’−ＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＧＧＴＴＡＧＴ；プローブ：５’−（ＶＩＣ）−ＡＣＣＧＧＣＡＧＧＣＴＴＴＣＣＴＡＡＣＧＧＣＴ）で多重化し、ＤＮＡインプットを正規化し、サンプルの完全性を検証した。
【０１２３】
統計分析：マンホイットニー検定を用い、３つのすべての処理群についてインビトロでの細胞内ＨＩＶ  ＤＮＡレベルを分析した。すべてのデータはＰｒｉｓｍ５ソフトウェアを用いて分析した。
【０１２４】
ＣＣＲ５におけるセニクリビロックの分子ドッキング
ＣＣＲ５ケモカイン受容体の結晶構造（蛋白質構造データバンク識別番号［ＰＤＢ  ＩＤ］４ＭＢＳ）は、構造バイオインフォマティクス研究共同体（ＲＣＳＢ）の蛋白質構造データバンクから入手し、ドッキング用標的として使用した。ＣＣＲ５受容体アンタゴニストであるセニクリビロック（かつてはＴＡＫ−６５２／ＴＢＲ−６５２）の構造は、ＰｕｂＣｈｅｍから入手し、リガンドとして使用した。リガンドドッキング構造の最小化は、ＣＣＲ５の７つの膜貫通（７ＴＭ）α−ヘリックス受容体キャビティ内のリガンドの配向を予測するＤＯＣＫ計算用インプットとしてのＣＣＲ５及びＣＶＣを用意するＵＣＳＦ
Ｃｈｉｍｅｒａを使用して支援した。ドッキングの計算を行い、最大サイズのグリッドボックスを用いてすべての可能なドッキング部位をＣＣＲ５内に含めた。この結合部位は、７ＴＭキャビティ（Ｇｌｕ２８３及びＴｙｒ１０残基周辺）からの１５Å未満のすべて
の残基からなる。ドッキングの結果を、分子間相互作用を特定するように加工した。これら試験の９つのポーズをさらなる分析用に保持した。このドッキングシステムの精度を検証するため、同じ方法を用いてＭＶＣをＣＣＲ５にドッキングさせ、結晶構造に関してその配向を測定した。ＰｙＭＯＬを用いて計算した、観察された結晶構造とＡｕｔｏＤｏｃｋ  Ｖｉｎａから得た予測コンフォメーション間の平均平方根偏差（ＲＭＳＤ）は０．２７５Åで、このプロトコルが正しかったことを示した。
【０１２５】
結果
第一に、我々はＨＩＶ細胞内ＤＮＡを、試験２０２の臨床試験で得られたウイルス量の評価基準を検証するために定量化した。本臨床試験の参加者から単離したＰＢＭＣにおける完全長細胞内ＨＩＶ  ＤＮＡレベル（早期逆転写を示す）のエキソビボ分析は、第２４週ですべての群（ＣＶＣ１００ｍｇ、ＣＶＣ２００ｍｇ、ＥＦＶ６００ｍｇ）にわたって同様であった（図７Ａ）。ベースラインからの平均発現比は、ＣＶＣ群１００ｍｇ（ｎ＝１０）及びＣＶＣ２００ｍｇ（ｎ＝１１）でそれぞれ０．６４３及び０．７８７であった。ＥＦＶ６００ｍｇ群（ｎ＝７）は、ベースラインからの平均発現比は２４週で０．８２５であった。これらの差は、統計的に有意ではなかった。
【０１２６】
次に、ストロングストップ細胞内ＨＩＶ  ＤＮＡレベル（後期逆転写を示す）を２４週で完全長レベルと同時に測定した（図７Ｂ）。ベースラインからの平均発現比は、ＣＶＣ１００ｍｇ群で０．４９、ＣＶＣ２００ｍｇ群で０．６３、及びＥＦＶ６００ｍｇ群で１．０１であった。これらの平均は統計的に有意ではなかった。
【０１２７】
ＣＶＣ及びＭＶＣ曝露後の細胞外ウイルスレベルを測定するインビトロ実験も行った。培養液中のウイルスレベルは、侵入阻害剤に曝露した細胞の感染の４時間後にｑＲＴ−ＰＣＲ及びＰ２４  ＥＬＩＳＡで測定した。４時間後、ＭＶＣ処理細胞からの培養液は、ベースラインと比べたＲＮＡレベル（ベースライン：１．１９×１０１０コピー／ｍｌ、４時間：１．６７×１０１０コピー／ｍｌ）（図８Ａ）がＣＶＣ処理細胞（ベースライン：５０６ｎｇ／ｍｌ、４時間：５２０ｎｇ／ｍｌ）（図８Ｂ）よりも高かった。ＣＶＣ処理細胞からの培養液中のウイルスＲＮＡは、４時間後に著しくは変化しなかった（ベースライン：１．１９×１０１０コピー／ｍｌ、４時間：１．２６×１０１０コピー／ｍｌ）（図８Ａ）。Ｐ２４レベルは、ＣＶＣ処理で４時間後にベースラインから低下し（ベースライン：５０６ｎｇ／ｍｌ、４時間：１９２ｎｇ／ｍｌ）（図８Ｂ）、これらの無細胞及び無薬物対照に対するウイルスＲＮＡの低下は、４時間後類似しており、それぞれ１．１４×１０１０コピー／ｍｌ及び１．１×１０１０コピー／ｍｌであった（図８Ａ）。ベースラインのｐ２４レベル５０６ｎｇ／ｍｌに続いて、無細胞対照に対する４時間後のｐ２４抗原レベルは１３８ｎｇ／ｍｌであった。ｐ２４の無薬物対照レベルは２４４ｎｇ／ｍｌであった（図８Ｂ）。
【０１２８】
ＣＶＣ及びＭＶＣ処理後のこれらの細胞外ウイルスレベルの差は、ＨＩＶ−１  ＢａＬでの感染前の１時間ＣＶＣまたはＭＶＣのいずれかに曝露されたＰＭ−１細胞における細胞内ストロングストップＨＩＶ  ＤＮＡレベルを調べることを我々に促した。全ＤＮＡを４時間後細胞ペレットから抽出した。ＣＶＣまたはＭＶＣ処理細胞の細胞内ストロングストップＨＩＶ  ＤＮＡレベルを無薬物対照と比較した（図９）。我々は、ＭＶＣ処理細胞の無薬物対照と比較した相対ＤＮＡレベル０．０２を認めた一方で、ＣＶＣ処理細胞は相対細胞内ＤＮＡレベルが０．１だけであった。ＭＶＣ及びＣＶＣ処理細胞の相対ＤＮＡレベル間の差は有意であった。
【０１２９】
ＭＶＣと複合化したＣＣＲ５  ７ＴＭの結晶構造（ＰＤＢ  ＩＤ  ４ＭＢＳ）は存在し、これを用いてＣＶＣが結合ポケットにドッキングしたＣＣＲ５のモデルを生成した。我々は、ドッキングポーズを予測し、これもまたＣＣＲ５にＭＲＶを再ドッキングして評価
した。最も有利なエネルギーのトップポーズは、適切な配向及びコンフォメーションとの重なりを結晶構造内で有した（ＲＭＳＤ＜０．３Å）。インシリコでのＣＣＲ５のドッキングシミュレーションでは、ＣＶＣがリガンド結合ポケットとしても知られるＣＣＲ５構造の疎水性ポケットでのみ結合することが示された（図１０）。トップの９ポーズのみをさらなる分析用に残した。ＣＶＣがＣＣＲ５へのドッキング後に呈する３つの異なるコンフォメーションがあり、それらは３部位にクラスター化される（図１０Ａ、Ｂ）。第一の部位（部位１）はこの疎水性ポケット内に深く広がり、大きな容積を占める（図１０Ａ）。第二の部位（部位２）は、このポケットの中央に一部配置されるが、ＣＣＲ５からＴＭ１及びＴＭ７間で外側に突き出てもいる（図１０Ａ）。第三の部位（部位３）では、受容体キャビティの入り口近くにわずかのＣＶＣポーズしか位置しない。
【０１３０】
ＣＣＲ５の細胞外ループ及び膜貫通ドメイン内の残基の部位特異的突然変異誘発は、ｇｐ１２０結合に関与するキー残基を特定した。異なる位置での突然変異は、ｇｐ１２０のＣＣＲ５に対する結合を無効にしたか、損なったか、またはこれに影響を与えた。ＣＣＲ５内でｇｐ１２０の結合に重要であることが特定された１３のキー残基は、Ｔｙｒ３７、Ｔｒｐ８６、Ｔｒｐ９４、Ｌｅｕ１０４、Ｔｙｒ１０８、Ｐｈｅ１０９、Ｐｈｅ１１２、Ｔｈｒ１７７、Ｉｌｅ１９８、Ｔｒｐ２４８、Ｔｙｒ２５１、Ｌｅｕ２５５、及びＧｌｕ２８３である。図１１は、結合ポケット内のＣＶＣ（左）及びＭＶＣ（右）のドッキングポーズのＣＣＲ５の分子表面描写を示す。ＣＶＣ及びＭＶＣは、それぞれ、分子の表面積が約１２８５及び１７９０Å２（ＰｙＭＯＬを用いて計算）である。ＭＶＣはこの結合ポケットの中央を占める。ｇｐ１２０の結合に重要であると判定された１３残基のすべては、ＰｙＭＯＬで測定してＭＶＣから４Å以内である（静電及び／または疎水性相互作用に対してこの試験ではカットオフ距離を使用）。対照的に、ドッキングＣＶＣポーズは、同じポケットを占めるが、ＭＶＣで見られるような中央ではない（図１１）。むしろ、ＣＶＣはこのポケットの片側にずれ（図１２Ａ／Ｂ）、ＣＶＣの４Å以内でＣＣＲ５内の残基のコンセンサスが決定された。ＣＶＣはＭＶＣより大きな表面積を占めるにもかかわらず、ｇｐ１２０の結合に重要な１３残基のうちの７残基、すなわち、Ｔｙｒ３７、Ｔｒｐ８６、Ｔｙｒ１０８、Ｐｈｅ１０９、Ｉｌｅ１９８、Ｌｅｕ２５５、及びＧｌｕ２８３のみがＣＶＣの４Å以内である。全般的に見れば、これらのシミュレーションは、ＣＶＣがＣＣＲ５の結合ポケット内でＭＶＣと同様の領域を占めることを示唆している。
【０１３１】
考察：この試験で我々は、ともにＨＩＶの侵入を防ぐＣＣＲ５のアンタゴニストであるＣＶＣ及びＭＶＣが、細胞外ウイルスレベルに差別効果を有することを認める。
【０１３２】
治療を受けていない対照での、ＣＶＣとＥＦＶを、ともにＦＴＣ／ＴＤＦで比較する第ＩＩｂ相の二重盲検、ダブルダミー試験で、ＣＶＣ２００ｍｇを受けた患者の７３％及びＥＦＶを受けた患者の７１％と比較して、ＣＶＣ１００ｍｇを受けた患者の７６％がウイルス学的成功（ＨＩＶ  ＲＮＡ＜５０コピー／ｍｌ）を２４週で収めた。我々は、先に、無細胞ビリオンがＭＶＣの存在下で侵入に失敗した後、当該標的細胞から跳ね返される可能性があるために、ＭＶＣは人工的にウイルス量を増加させうることを示した。今回の試験は、同じ効果がＣＶＣに対して生じうるかどうか、ならびに、侵入及び逆転写酵素阻害剤を比較する際、細胞内ＤＮＡの測定結果が抗ウイルス効果をより正確に表現するものになりうるかどうかに対処するために計画された。
【０１３３】
実際、試験２０２の治療群にわたって、細胞内ＤＮＡレベルは、選択したサンプルにおいて２４週で同様であり（図７）、治療意図に基づく（ＩＴＴ）解析中に観察された傾向を反映していた。完全長ＨＩＶ−ＤＮＡレベルもまた、第２４週ですべての群について同様であり、ＣＶＣ及びＥＦＶの両方について同様の抗ウイルス効果を示唆した。ストロングストップＨＩＶ  ＤＮＡレベルの差は、ＣＶＣ及びＥＦＶ群間で認められたが、両方のＣＶＣ群は、ＥＦＶと比較してウイルス量により急激な低下を示した。ストロングストッ
プＨＩＶ  ＤＮＡレベルは侵入阻害剤によって直接影響を受けるため、この結果は予測通りであった。ウイルス学的成功及び細胞内のＨＩＶ  ＤＮＡレベルに関するＥＦＶとＣＶＣ間の類似性は、このＣＣＲ５及びＣＣＲ２の二重阻害剤の抗ウイルス力が、ウイルス量の測定結果によって目立たなくなることがないことを示唆する。
【０１３４】
我々はまた、ＭＶＣについてインビトロで見られるように、ＣＶＣがウイルスの反発をもたらしうるかどうかも求めた。２つの別々のウイルス定量、すなわちｑＲＴ−ＰＣＲ及びｐ２４  ＥＬＩＳＡの測定結果は、ＭＶＣ処理では、感染の４時間後まで細胞外ウイルスレベルが維持されることを示した。対照的に、ＣＶＣでの処理では、４時間でのウイルスレベル低下における低下をもたらし、無薬物または無細胞対照に相当した（図８）。表面上類似した抗ウイルス機序にもかかわらず、無細胞ウイルス及びＣＣＲ５間の相互作用に関しては、ＣＶＣとＭＶＣの間には差があると思われる。
【０１３５】
インビトロでのさらなる細胞内ストロングストップＤＮＡ実験で、ＣＶＣが、ＭＶＣと比較してわずかであるが有意なレベルの増加を引き起こすことが示された（図９）。これは、ＣＣＲ５に対する両阻害剤の差別効果による可能性があり、これは、同様に、ウイルスと受容体間の解離速度に影響する。このことは、ｇｐ１２０が、ＭＶＣと比較してＣＶＣ結合ＣＣＲ５とより耐久的に会合しうる可能性を上げる。
【０１３６】
我々はまた、ＣＣＲ５の結合部位を調べることによって、ＣＶＣがどのように標的細胞内へのＨＩＶの侵入を阻害するかを理解することを目標とした。操作したヒトＣＣＲ５構築物は先に、２．７Åの解像度でＭＶＣと複合化して結晶化されている。これはＣＣＲ５の完全長結晶構造ではないが、インシリコでのドッキングアッセイでＣＶＣとＣＣＲ５との相互作用をより良く理解するために利用された。ＣＶＣについてのすべてのドッキングモデルといわれるものは、ＭＶＣでも見られる通り、ＣＣＲ５の７ＴＭキャビティ内への該薬物の深い侵入を暗示する。しかしながら、これらのＣＶＣのドッキングポーズは、細胞外ループ２にごく接近しておらず、ＥＣＬ２はドッキング後に接近可能なままであった。他のグループは、ＣＣＲ５のＮ末端及びＥＣＬ２ドメインはともにＨＩＶ−１とＣＣＲ５の相互作用において重要な役割を果たすことを報告している。さらに、ｇｐ１２０のＶ３ループのステム領域は、ＣＣＲ５のＮ末端に結合するとともに、Ｖ３のクラウンは、ＥＣＬ２及び結合ポケット内の残基と相互作用することが報告されている。我々のモデルに基づいて、ＥＣＬ２はこのモデルでは露出されていると思われるため、我々は、ＣＶＣがこのｇｐ１２０のＶ３ループとＥＣＬ２との相互作用を直接は妨害しないと推測することができる。
【０１３７】
ＣＣＲ５が不活性状態のままである場合、ＣＶＣがＣＣＲ５の活性化を阻害することができると考えられる。７ＴＭ領域の２つの残基、Ｔｙｒ３７及びＴｒｐ２４８は、ケモカインリガンドの結合時にＣＣＲ５の活性化にとって重要であることが示されており、このことはまた、ＭＶＣの結合にとっても重要であることが示されている。ＭＶＣと同様、ＣＶＣの異なるドッキングポーズは、疎水性結合部位に埋め込まれている。我々のモデルは、Ｔｒｐ２４８へのアクセスがＣＶＣによって阻害されることを示しており；Ｔｒｐ２４８がＣＣＲ５の活性化に重要であることが示され、ケモカイン受容体の不活性化を説明している。第二の仮説は、ＣＣＲ５に対するＭＶＣの結合は、ＣＣＲ５を包括的に構造変化させうるが、これはＣＶＣの存在下では変化が少ない可能性がある。
【０１３８】
他のグループによる部位特異的突然変異誘発実験ならびに本試験に含まれる組織培養実験及びドッキングシミュレーションに基づいて、我々は、ＭＶＣが疎水性ポケットの中央を占め、ｇｐ１２０の結合に重要なＣＣＲ５のいくつかの残基の接近不可能性につながる可能性があるという仮説を立てた。これらの残基はまた、直接静電もしくは疎水性相互作用及び／または水が介在する水素結合を介したｇｐ１２０の結合に重要である可能性があ
る。対照的に、ＣＶＣはこの結合部位を占め、それは、ｇｐ１２０が、ドッキングしたＣＶＣの存在下でもＣＣＲ５の結合にとって重要ないくつかの残基になおアクセスできる可能性があるものである。この仮説は、ｇｐ１２０がこの受容体キャビティの一部を充填するとともに、ＥＣＬ２の全体を占めることを示唆する部位特異的突然変異誘発試験によって支持される。しかしながら、ｇｐ１２０のＶ３ループがＣＣＲ５の７ＴＭに侵入する程度は依然として不明である。ＣＣＲ５からのｇｐ１２０の解離速度は、ＭＶＣの存在下で促進され、これは、後者がＥＣＬ２とＶ３ループ間の強固な会合を妨害するためである。これらの試験に基づいて、ＣＶＣはＥＣＬ２／Ｖ３相互作用に対する異なる効果をＭＶＣより有する可能性がある。解離及び表面プラズマ共鳴研究ならびにＣＣＲ５のＣＶＣとの複合化における結晶化は、このトピックに価値ある情報を提供する。
【０１３９】
部位特異的突然変異誘発及び生化学試験は、ＣＣＲ５とＣＶＣの相互作用にとって重要な残基を解明するために必要である。ＣＣＲ５のＮ末端の近位の場所の決定もまた目的のものである。
【０１４０】
この試験で我々は、ウイルス量の定量がＣＶＣの抗ウイルス効果の正確な評価基準であること、及びＣＶＣによるウイルスの侵入の阻害が、細胞表面から細胞外環境へのウイルス粒子のリバンドにつながらないことを実証した。我々のインシリコでの構造モデリングは、ＣＶＣとＭＶＣの間の機能差の潜在的な説明を与える。ＣＶＣがどのようにしてｇｐ１２０のＣＣＲ５に対する結合に影響を与えるかを理解するためにさらなる試験が必要である。
【０１４１】
実施例１６：腎線維症のマウスモデルにおける二重ＣＣＲ５／ＣＣＲ２アンタゴニストであるセニクリビロックの抗線維化活性
背景：セニクリビロック（ＣＶＣ）は、新規な、経口の１日１回の二重ＣＣＲ５／ＣＣＲ２アンタゴニストであり、第２ｂ相のＨＩＶの展開を完了している（試験２０２；ＮＣＴ０１３３８８８３）。ＣＶＣは、４８週間にわたってＣＶＣで処理された１１５人のＨＩＶ−１感染成人を含めて、少なくとも１投与で処理された５５５人の被験者で満足な安全性プロファイルを有する。近年、ＣＶＣは、食餌性非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のマウスモデル及びチオアセトアミド誘発性線維症のラットモデルにおいて、有意な抗線維化活性を実証した。ここで、我々は、片側尿管結紮（ＵＵＯ）によって誘発された腎線維症の十分に確立されたマウスモデルにおいてＣＶＣを評価した。
【０１４２】
方法：実験動物は、外科手術の前日（−１日目）に体重を合わせた処理群に割り当てた。雄のＣＤ−１マウス（Ｎ＝５１；７〜８週齢）は、無菌開腹による疑似手術または右尿管の全結紮、すなわちＵＵＯを受けた（図１２）。０〜５日目：疑似手術を受けたマウスは、１日２回の強制経口投与を介して媒体対照（０．５％メチルセルロース＋１％Ｔｗｅｅｎ−８０）を受け；永久ＵＵＯマウスは、媒体対照、ＣＶＣ７ｍｇ／ｋｇ／日、またはＣＶＣ２０ｍｇ／ｋｇ／日を１日２回のいずれかを強制経口投与を介して受けた。別の群は、抗トランスフォーミング増殖因子ＴＧＦ−β１抗体、化合物１Ｄ１１（陽性対照）を３ｍｇ／ｋｇ／日で−１〜４日目に１日１回腹腔内注射、及び媒体対照を０〜５日目に受けた。ＣＶＣ１００ｍｇ／ｋｇ／日群（Ｎ＝９）は、この試験に最初は含まれていたが、瀕死のために早期に終了した（５日目まで達した動物がいなかったために分析は行わなかった）。ＣＶＣ用量２０００ｍｇ／ｋｇ／日までが、外科手術を含まないマウスの毒性試験で良好な耐容性を示した。５日目に動物を麻酔し、殺処分の前に血液と組織を採取した。
【０１４３】
試験のエンドポイント：試験のエンドポイントには以下を含めた：ａ）体重及び腎臓重量；ｂ）ピクロシリウスレッド染色の組織学的定量的画像解析（腎臓皮質領域の６０〜７０％の採取を可能にするために光学顕微鏡［２００×］を用いて盲検式に採取及び評価し
た１０画像／深度／腎臓）によって評価され、閉塞した腎臓からの３つの解剖学的に異なる（２００〜２５０μＭ離れた）組織切片の平均陽性染色または深度として表される複合コラーゲン体積分率（ＣＶＦ［全画像化面積％］）スコアで定量化される閉塞した腎臓における線維症；ｃ）生化学分析によって評価される凍結腎臓皮質組織生検のヒドロキシプロリン含量；ｄ）線維性及び炎症性バイオマーカーのｍＲＮＡ発現（ＭＣＰ−１、コラーゲン１ａ１、コラーゲン３ａ１、ＴＧＦ−β１、フィブロネクチン−１、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）、及び結合組織増殖因子１（ＣＴＧＦ−１）を含む；ＨＰＲＴ（ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ）に相対発現を正規化したＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）、米国、カリフォルニア州カールスバッド）アッセイを介して評価される。
【０１４４】
統計分析：データは、平均±標準誤差（ＳＥＭ）として表す。統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．，米国、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて行った。疑似手術＋媒体対照及びＵＵＯ＋媒体対照群間、ならびにＵＵＯ＋媒体対照及びＵＵＯ＋化合物１Ｄ１１（陽性対照）群間の治療差は、対応のないｔ検定で分析した。ＵＵＯ＋媒体対照及びＣＶＣ投与群間の治療差は、一元配置ＡＮＯＶＡ（分散分析）によってダネット検定（事後）で分析した。
【０１４５】
方法：ＣＶＣは、十分に確立された腎線維症マウスＵＵＯモデルでのコラーゲン体積分率またはＣＶＦ（組織学的閉塞腎臓切片中のコラーゲンに対して陽性染色された面積％）の減少が特徴の有意な抗線維化効果を実証した。閉塞した腎臓においてコラーゲン１ａ１、コラーゲン３ａ１、ＴＧＦ−β１、及びフィブロネクチン−１ｍＲＮＡ発現の減少の傾向が認められたが、これらは統計的に有意ではなかった。これらを基に、ＣＶＣの作用機序、動物モデル（腎臓及び肝臓）における抗線維化活性、及び広範囲に及ぶ安全性データベースが線維性疾患におけるさらなる評価を支持する。ＮＡＳＨ及び肝線維症の非ＨＩＶ感染患者における概念実証試験が計画されている。ＨＩＶ−１感染患者の第ＩＩＩ相試験もまた、ガイドラインが推奨する第三の薬剤と併用した場合にテノホビルジソプロキシルフマル酸塩／エムトリシタビン（ＴＤＦ／ＦＴＣ）に対する新規な「骨格」としての固定用量のＣＶＣ／ラミブジン（３ＴＣ）の組合せを評価するために計画されている。
【０１４６】
結果：体重及び閉塞した腎臓の重量：ＣＶＣ７ｍｇ／ｋｇ／日及び化合物１Ｄ１１（陽性対照）は、体重に影響を及ぼさなかった一方、ＣＶＣ２０ｍｇ／ｋｇ／日は、５日目で、ＵＵＯ＋媒体対照群のものと比較してわずかであるが有意な体重減少（５％）に至った（ｐ＜０．０５）（図１３；体重変化はグラム［ｇ］で示す）。ＵＵＯ＋媒体対照群に対する閉塞したまたは対側の腎臓重量もしくは腎臓重量指数において有意な治療効果（ＣＶＣまたは化合物１Ｄ１１［陽性対照］）は認められなかった（データは示さず）。組織学：複合尺度のＣＶＦ（３つの深度にわたる平均面積％［±ＳＥＭ］）は、疑似手術群のものと比較してＵＵＯ＋媒体対照群で有意に高かった（１１．４±１．０倍；ｐ＜０．０５）（図１４）。ＣＶＣ７及び２０ｍｇ／ｋｇ／日ならびに化合物１Ｄ１１（陽性対照）はＵＵＯ＋媒体対照群のものに対して、複合尺度のＣＶＦ（３つの深度にわたる平均［±ＳＥＭ］）において、ＵＵＯによる増加を有意に減衰させた（それぞれ、２８．６±８．８％、３１．８±６．８％、及び５０．３±７．３％減少；ｐ＜０．０５）。
【０１４７】
ヒドロキシプロリン含量：ＵＵＯ＋媒体対照群由来の閉塞した腎臓におけるヒドロキシプロリン含量（タンパク質％）は、疑似手術群に対して有意に増加した（０．２７％に対して０．７２％；ｐ＜０．０５）（データは示さず）。試したいずれのＣＶＣ用量も、ＵＵＯ＋媒体対照群に対する閉塞した腎臓のヒドロキシプロリン含量のＵＵＯによる増加に影響を与えなかったが、化合物１Ｄ１１（陽性対照）群は、有意に低いレベルを有した（０．７２％に対して０．５５％；ｐ＜０．０５）（データは示さず）。
【０１４８】
線維性及び炎症性バイオマーカーのｍＲＮＡ発現：評価したバイオマーカーの各々（ＭＣＰ−１、コラーゲン１ａ１、コラーゲン３ａ１、ＴＧＦ−β１、フィブロネクチン−１、α−ＳＭＡ、及びＣＴＧＦ−１）について、ＵＵＯ＋媒体対照群におけるｍＲＮＡ発現は、疑似手術群のものと比較して有意に増加した（ｐ＜０．０５）（図１５）。ＣＶＣ７及び２０ｍｇ／ｋｇ／日は、コラーゲン１ａ１、コラーゲン３ａ１、ＴＧＦ−β１、及びフィブロネクチン−１のｍＲＮＡ発現においてＵＵＯによる増加を減衰させた。しかしながら、ＵＵＯ＋媒体対照群と比較したこれらの減少は、統計的有意に達しなかった。化合物１Ｄ１１（陽性対照）は、コラーゲン１ａ１、コラーゲン３ａ１、ＴＧＦ−β１、及びフィブロネクチン−１のｍＲＮＡ発現において、ＵＵＯによる増加をＵＵＯ＋媒体対照群に対して有意に減少させた（ｐ＜０．０５）。ＣＶＣ７及び２０ｍｇ／ｋｇ／日ならびに化合物１Ｄ１１（陽性対照）は、閉塞した腎臓皮質のＭＣＰ−１、α−ＳＭＡ、及びＣＴＧＦ−１のｍＲＮＡ発現におけるＵＵＯによる増加に対しては、ＵＵＯ＋媒体対照群と比較して有意な効果がなかった（α−ＳＭＡ及びＣＴＧＦ−１のｍＲＮＡについてのデータは示さず）。
【０１４９】
結論：ＣＶＣは、十分に確立された腎線維症マウスＵＵＯモデルでのコラーゲン体積分率またはＣＶＦ（組織学的閉塞腎臓切片中のコラーゲンに対して陽性染色された面積％）の減少が特徴の有意な抗線維化効果を実証した。閉塞した腎臓においてコラーゲン１ａ１、コラーゲン３ａ１、ＴＧＦ−β１、及びフィブロネクチン−１のｍＲＮＡ発現の減少の傾向が認められたが、これらは統計的に有意ではなかった。これらを基に、ＣＶＣの作用機序、動物モデル（腎臓及び肝臓）における抗線維化活性、及び広範囲に及ぶ安全性データベースが線維性疾患におけるさらなる評価を支持する。ＮＡＳＨ及び肝線維症の非ＨＩＶ感染患者における概念実証試験が計画されている。ＨＩＶ−１感染患者の第ＩＩＩ相試験もまた、ガイドラインが推奨する第三の薬剤と併用した場合にテノホビルジソプロキシルフマル酸塩／エムトリシタビン（ＴＤＦ／ＦＴＣ）に対する新規な「骨格」としての固定用量のＣＶＣ／ラミブジン（３ＴＣ）の組合せを評価するために計画されている。
【０１５０】
実施例１７：ＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４線維症スコアの改善は、セニクリビロックを４８週間にわたって受けたＨＩＶ−１感染成人におけるｓＣＤ１４の減少と相関する
背景及び目的：セニクリビロック（ＣＶＣ）は、新規な、経口の１日１回のＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストであり、臨床試験において満足な安全性と抗ＨＩＶ活性を実証している。ＣＶＣは、２つの肝疾患の動物モデルにおいて抗線維化活性を実証した。試験２０２（ＮＣＴ０１３３８８８３）における事後解析をＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４スコアに関して行った。
【０１５１】
方法：ＣＣＲ５指向性ＨＩＶ−１を有し、ＢＭＩ≦３５ｋｇ／ｍ２であり、明確な肝疾患がない（すなわち、ＡＬＴ／ＡＳＴグレード≦２、総ビリルビン≦ＵＬＮ、ＨＢＶなし、ＨＣＶなし、活動性もしくは慢性肝疾患なし、肝硬変なし）１４３人の成人を４：１にＣＶＣまたはエファビレンツ（ＥＦＶ）に対してランダム化した。ＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４スコアを計算した。ベースライン（ＢＬ）から第２４週及び第４８週までのスコアのカテゴリーの変化を欠測データのない患者で評価した。ＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４スコアにおけるＢＬからの変化と、ＭＣＰ−１（ＣＣＲ２リガンド）及びｓＣＤ１４（炎症のバイオマーカー）レベルの間の相関を評価した。
【０１５２】
結果：ＢＬにおいて、ＥＦＶよりＣＶＣでより多くの患者がＡＰＲＩ≧０．５及びＦＩＢ−４≧１．４５を有し；これらの閾値を超えるＣＶＣ患者の割合は第２４週及び第４８週で減少した（表）。有意な相関は、第２４週で、ＡＰＲＩスコアの変化及びＭＣＰ−１レベルの間（ｐ＝０．０１４）、ならびにＦＩＢ−４スコアとｓＣＤ１４レベルの間（ｐ＝０．０１１）、ならびに第４８週で、ＡＰＲＩ（ｐ＝０．０２８）及びＦＩＢ−４スコア（ｐ＝０．００７）の変化ならびにｓＣＤ１４レベル間で認められた（表１１）。
【表１１】
2020111586.tif 000014
【０１５３】
結論：明確な肝疾患がないこの集団において、ＣＶＣ処理はＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４スコアの改善に関係しており、第４８週では、ＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４スコアの変化とｓＣＤ１４レベル間で相関が認められた。証明されたＣＣＲ２／ＣＣＲ５の拮抗作用、動物モデルにおける抗線維化効果、及び広範囲な臨床安全性データのすべてが、肝線維症におけるＣＶＣの臨床試験を支持する。
【０１５４】
実施例１８：非アルコール性脂肪性肝炎のＳＴＡＭモデルにおけるセニクリビロックのインビボ有効性試験
このインビボ有効性試験は、非アルコール性脂肪性肝炎のＳＴＡＭ（商標）マウスモデルにおけるセニクリビロックの効果を調べるために行った。
【０１５５】
材料及び方法
実験計画及び処理
試験群
第１群−媒体：１８匹のＮＡＳＨマウスに、６週齢から１日２回（９：００及び１９：００）、体積１０ｍＬ／ｋｇの媒体を経口投与した。
【０１５６】
第２群−セニクリビロック２０ｍｇ／ｋｇ（低ＣＶＣ）：１８匹のＮＡＳＨマウスに、６週齢から、セニクリビロックを補充した媒体を１日２回（９：００及び１９：００）１０ｍｇ／ｋｇの用量（２０ｍｇ／ｋｇ／日）で経口投与した。
【０１５７】
第３群−セニクリビロック１００ｍｇ／ｋｇ（高ＣＶＣ）：１８匹のＮＡＳＨマウスに、６週齢から、セニクリビロックを補充した媒体を１日２回（９：００及び１９：００）５０ｍｇ／ｋｇの用量（１００ｍｇ／ｋｇ／日）で経口投与した。
【０１５８】
表１２にこの処理スケジュールを要約する：
【表１２】
2020111586.tif 000015
【０１５９】
結果
パート１：ＣＶＣの抗ＮＡＳＨ／線維症効果の評価試験
第９週までの体重変化及び全身状態（図１６）
【０１６０】
体重は処理期間中徐々に増加した。処理期間中、媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で平均体重の有意な差はなかった。本試験では処理期間を通して全身状態の悪化を示した動物はいなかった。
【０１６１】
第９週での殺処分日の体重（図１７Ａ及び表１３）
【０１６２】
媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で平均体重の有意な差はなかった（媒体：１８．９±３．３ｇ、低ＣＶＣ：１９．５±２．０ｇ、高ＣＶＣ：１８．７±０．９ｇ）。
【表１３】
2020111586.tif 000016
【０１６３】
第９週での肝重量及び体重に対する肝重量比（図１７Ｂ及びＣならびに表１３）
【０１６４】
媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で平均肝重量の有意な差はなかった（媒体：１２７０±３２６ｍｇ、低ＣＶＣ：１３３４±９９ｍｇ、高ＣＶＣ：１３０７±１１９ｍｇ）。
【０１６５】
媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で体重に対する肝重量比平均の有意な差はなかった（媒体：６．６±０．８％、低ＣＶＣ：６．９±１．０％、高ＣＶＣ：７．０±０．８％）。
【０１６６】
第９週での全血及び生化学
全血グルコースデータを図１８Ａ〜Ｄ及び表１４に示す。
【０１６７】
媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で血中グルコースレベルの有意な差はなかった（媒体：５９０±１０８ｍｇ／ｄＬ、低ＣＶＣ：５８５±９１ｍｇ／ｄＬ、高ＣＶＣ：５８５±９１ｍｇ／ｄＬ）。４．４．２．血漿ＡＬＴ（図１８Ｂ、表１４）。低ＣＶＣ及び高ＣＶＣ群は、媒体群と比較して血漿ＡＬＴレベルの有意な低下を示した（媒体：１３３±８０Ｕ／Ｌ、低ＣＶＣ：５８±１２Ｕ／Ｌ、高ＣＶＣ：５２±１３Ｕ／Ｌ）。
【表１４】
2020111586.tif 000017
【０１６８】
血漿ＭＣＰ−１データを図１８Ｃ及び表１４に示す。高ＣＶＣ群は、媒体群と比較して血漿ＭＣＰ−１レベルの有意な増加を示した。媒体群及び低ＣＶＣ群間で血漿ＭＣＰ−１レベルの有意な差はなかった（媒体：６０±４ｐｇ／ｍＬ、低ＣＶＣ：６８±１６ｐｇ／ｍＬ、高ＣＶＣ：９１±１４ｐｇ／ｍＬ）。
【０１６９】
血漿ＭＩＰ−１βデータを図１８Ｄ、表１４に示す。媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で血漿ＭＩＰ−１βレベルの有意な差はなかった（媒体：１８±５ｐｇ／ｍＬ、低ＣＶＣ：１８±２ｐｇ／ｍＬ、高ＣＶＣ：２０±４ｐｇ／ｍＬ）。
【０１７０】
第９週での肝臓の生化学
肝臓のトリグリセリド含量データを図１８Ｄ及び表１４に示す。媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で肝臓のトリグリセリド含量の有意な差はなかった（媒体：４０．８±２０．４ｍｇ／ｇ肝臓、低ＣＶＣ：４８．５±１６．１ｍｇ／ｇ肝臓、高ＣＶＣ：５１．７±１４．１ｍｇ／ｇ肝臓）。
【０１７１】
肝臓のヒドロキシプロリン含量を図１８Ｅ及び表１４に示す。肝臓のヒドロキシプロリン含量は、媒体群と比較して低ＣＶＣ及び高ＣＶＣ群で減少する傾向にあった（媒体：０．７５±０．１８μｇ／ｍｇ、低ＣＶＣ：０．６３±０．０５μｇ／ｍｇ、高ＣＶＣ：０．６２±０．０９μｇ／ｍｇ）。
【０１７２】
第９週での組織学的分析
ＨＥ染色及びＮＡＦＬＤ活動性スコアデータを図１９及び２０、ならびに表１５に示す。媒体群由来の肝臓切片は、重度の小滴性及び大滴性の脂肪沈着、肝細胞のバルーニング、及び炎症性細胞浸潤を呈した。低ＣＶＣ及び高ＣＶＣ群は、炎症性細胞浸潤及び肝細胞のバルーニングにおいて中等度の改善を示し、媒体群と比較して有意なＮＡＳの低下を伴った（媒体：５．３±０．５、低ＣＶＣ：４．０±０．６、高ＣＶＣ：３．７±０．８）。ＨＥ染色切片の代表的な顕微鏡写真を図１９に示す。
【表１５】
2020111586.tif 000018
【０１７３】
シリウスレッド染色データを図２１、２２、２３、及び表１６に示す。媒体群由来の肝臓切片は、肝小葉の中心周辺領域にコラーゲンの沈着を示した。媒体群と比較して、この中心周辺領域のコラーゲン沈着は低ＣＶＣ及び高ＣＶＣ群で著しく減少した。線維症の面積（シリウスレッド陽性面積）は媒体群と比較して低ＣＶＣ及び高ＣＶＣ群で有意に減少した（媒体：１．１０±０．３１％、低ＣＶＣ：０．６６±０．１６％、高ＣＶＣ：０．６４±０．１９％）。変性線維症面積もまた、媒体群と比較して低ＣＶＣ及び高ＣＶＣ群で有意に減少した（媒体：０．６１±０．２３％、低ＣＶＣ：０．２９±０．１４％、高ＣＶＣ：０．２０±０．０６％）。
【表１６−１】
2020111586.tif 000019
【表１６−２】
2020111586.tif 000020
【表１６−３】
2020111586.tif 000021
【０１７４】
肝臓のシリウスレッド染色切片の代表的な顕微鏡写真を図２１に示す。
【０１７５】
Ｆ４／８０免疫組織化学データを図２２及び２３、ならびに表１６に示す。媒体群由来の肝臓切片のＦ４／８０免疫染色で、肝小葉におけるＦ４／８０＋細胞の蓄積が実証された。媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で、炎症面積（Ｆ４／８０陽性面積）の割合と同様、Ｆ４／８０＋細胞の数とサイズに有意な差はなかった（媒体：４．９９±１．１０％、低ＣＶＣ：４．７７±１．０２％、高ＣＶＣ：４．９６±０．６０％）。
【０１７６】
Ｆ４／８０免疫染色切片の代表的な顕微鏡写真を図２２に示す。
【０１７７】
Ｆ４／８０＋ＣＤ２０６＋及びＦ４／８０＋ＣＤ１６／３２＋の免疫組織化学データを図２４、２５、２６、２７、２８、及び表１６に示す）。媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間でマクロファージにおけるＦ４／８０＋ＣＤ２０６＋細胞の割合に有意な差はなかった（媒体：３４．３±４．２％、低ＣＶＣ：３４．７±６．３％、高ＣＶＣ：３３．１±３．０％）。媒体群と低ＣＶＣ群間でマクロファージにおけるＦ４／８０＋ＣＤ１６／３２＋細胞の割合に有意な差はなかった。Ｆ４／８０＋ＣＤ１６／３２＋細胞の割合は、媒体と比べて高ＣＶＣ群で増加する傾向にあった（媒体：３３．５±３．７％、低ＣＶＣ：３８．７±７．６％、高ＣＶＣ：４１．５±８．２％）。媒体群と低ＣＶＣ群間でＭ１／Ｍ２比に有意な差はなかった。高ＣＶＣ群では、Ｍ１／Ｍ２比は媒体と比較して増加す
る傾向にあった（媒体９９．６±２０．２％、低ＣＶＣ：１１２．３±１７．０％、高ＣＶＣ：１２５．１±２１．９％）。
【０１７８】
Ｆ４／８０とＣＤ２０６、Ｆ４／８０とＣＤ１６／３２の二重免疫染色切片の代表的な顕微鏡写真を図２４及び２６に示す。
【０１７９】
オイルレッド染色データを図２９、３０、及び表１６に示す。媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で、脂肪沈着面積（オイル陽性面積）の割合と同様、脂肪沈着に有意な差はなかった（媒体：９．６６±５．０２％、低ＣＶＣ：６．５１±３．８８％、高ＣＶＣ：７．２３±３．５９％）。
【０１８０】
オイルレッド染色切片の代表的な顕微鏡写真を図２９に示す。
【０１８１】
ＴＵＮＥＬ染色データを図３１、３２、及び表１６に示す。ＴＵＮＥＬ陽性細胞の割合は、媒体群と比較して低ＣＶＣ群で有意に増加した。媒体群と高ＣＶＣ群間で、ＴＵＮＥＬ陽性細胞の割合に有意な差はなかった（媒体：３６．０±３．７％、低ＣＶＣ：４３．３±２．９％、高ＣＶＣ：３９．０±５．３％）。
【０１８２】
肝臓のＴＵＮＥＬ陽性細胞の代表的な顕微鏡写真を図３１に示す。
【０１８３】
第９週での遺伝子発現分析データを図３３及び表１７〜１８に示す。
【表１７】
2020111586.tif 000022
【表１８】
2020111586.tif 000023
【０１８４】
ＴＮＦα
媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間でＴＮＦα  ｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった（媒体：１．００±０．２４、低ＣＶＣ：１．１６±０．３９、高ＣＶＣ：１．０９±０．２３）。
【０１８５】
ＭＣＰ−１
媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間でＭＣＰ−１  ｍＲＮＡに有意な差はなかった（媒体：１．００±０．３１、低ＣＶＣ：１．０５±０．５０、高ＣＶＣ：１．００±０．５３）。
【０１８６】
コラーゲン１型
コラーゲン１型ｍＲＮＡ発現レベルは、媒体群と比較して低ＣＶＣ群で有意に下方制御された。コラーゲン１型ｍＲＮＡ発現レベルは、媒体群と比較して高ＣＶＣ群で下方制御される傾向にあった（媒体：１．００±０．４２、低ＣＶＣ：０．６３±０．１０、高ＣＶＣ：０．７３±０．０４）。
【０１８７】
ＴＩＭＰ−１
媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間でＴＩＭＰ−１  ｍＲＮＡ発現レベルに有意な差はなかった（媒体：１．００±０．４６、低ＣＶＣ：０．７５±０．３２、高ＣＶＣ：０．８０±０．２０）。
【０１８８】
パート２：ＣＶＣの抗ＨＣＣ効果の評価試験
第１８週までの体重変化（図３５）
体重は処理期間中徐々に増加した。処理期間中、媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で平均体重の有意な差はなかった。
【０１８９】
生存率分析データを図３６に示す。媒体群では、１２匹のマウスのうち４匹が５９日目（ＩＤ１１２）、７５日目（ＩＤ１１３、１１５）、及び８４日目（ＩＤ１１６）に死亡した（投与の初日を０日目として計画した）。低ＣＶＣ群では、１２匹のマウスのうち６匹が６２日目（ＩＤ２０９）、６４日目（ＩＤ２１７）、７５日目（ＩＤ２１２）、７６日目（ＩＤ２１３）、８４日目（ＩＤ２１５）、及び８６日目（ＩＤ２０８）に死亡した。高ＣＶＣ群では、１２匹のマウスのうち５匹が６２日目（ＩＤ３１７）、６５日目（ＩＤ３１２）、７０日目（ＩＤ３１６）、７８日目（ＩＤ３１４）、及び８５日目（ＩＤ３０９）に死亡した。死亡した動物において、ＮＡＳＨの典型的な肝臓障害を除いては異常な剖検所見はなかった。媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で生存率に有意な差はなかった。委託者の指示により、残りの動物は予定したよりも早く１８週齢で殺処分した（予定した殺処分は２０週齢）。
【０１９０】
第１８週での殺処分日の体重データを図３７Ａ及び表１９に示す。体重は、媒体群と比較して高ＣＶＣ群で減少する傾向にあった。媒体群と低ＣＶＣ群間で平均体重に有意な差はなかった（媒体：２３．０±２．３ｇ、低ＣＶＣ：２２．９±３．５ｇ、高ＣＶＣ：２０．８±２．７ｇ）。
【表１９】
2020111586.tif 000024
【０１９１】
第１８週での肝重量及び体重に対する肝重量比を図３７Ｂ及びＣならびに表１９に示す。媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で平均肝重量の有意な差はなかった（媒体：１７８２±５５８ｍｇ、低ＣＶＣ：１８３７±４１０ｍｇ、高ＣＶＣ：１８１７±４４６ｍｇ）。媒体群及び低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で体重に対する肝重量比の平均に有意な差はなかった（媒体：７．７±２．２％、低ＣＶＣ：８．３±２．８％、高ＣＶＣ：８．８±２．３％）。
【０１９２】
第１８週での肝臓の肉眼的分析
肝臓の肉眼的外観を図３８Ａ〜Ｃに示す。
【０１９３】
肝臓表面に生じた目に見える腫瘍小結節の数を図３９及び表２０に示す。媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で、マウス個体あたりの肝腫瘍小結節数に有意な差はなかった（媒体：２．４±４．１、低ＣＶＣ：１．５±１．９、高ＣＶＣ：３．６±２．５）。
【表２０】
2020111586.tif 000025
【０１９４】
肝臓表面に生じた目に見える腫瘍小結節の最大径を図４０及び表２０に示す。媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で、肝腫の最大径に有意な差はなかった（媒体：４．０±４．７ｍｍ、低ＣＶＣ：４．８±５．４ｍｍ、高ＣＶＣ：５．３±５．１ｍｍ）。
【０１９５】
第１８週での組織学的分析
ＨＥ染色データを図４１に示す。ＨＥ染色によって、媒体群での炎症性細胞浸潤、大滴性及び小滴性の脂肪沈着、肝細胞のバルーニング、変化した病巣、及び結節性病変が明らかになった。媒体群の８匹のマウスのうち６匹がＨＣＣ病変を呈した。ＨＣＣ病変は、低ＣＶＣ群の６匹のマウスのうち５匹及び高ＣＶＣ群の７匹のマウスのうち６匹で検出された。媒体群と低ＣＶＣまたは高ＣＶＣ群間で明らかな差は見られなかった。
【０１９６】
ＨＥ染色切片の代表的な顕微鏡写真を図４１に示す。
【０１９７】
ＧＳ免疫組織化学データを図４２に示す。切片内のＧＳ陽性小結節は、媒体群の８匹のマウスのうち６匹、低ＣＶＣ群の６匹のマウスのうち５匹、及び高ＣＶＣ群の７匹のマウ
スのうち７匹でそれぞれ検出された。
【０１９８】
ＧＳ染色切片の代表的な顕微鏡写真を図４２に示す。
【０１９９】
ＣＤ３１免疫組織化学データを図４３及び４４ならびに表２１に示す。ＣＤ３１陽性面積は、媒体群と比較して低ＣＶＣ群で減少する傾向にあった。ＣＤ３１陽性面積は、媒体群と比較して高ＣＶＣ群で増加する傾向にあった（媒体：２．７１±１．３６％、低ＣＶＣ：１．４７±１．１０％、高ＣＶＣ：３．６８±１．３７％）。
【０２００】
ＣＤ３１染色切片の代表的な顕微鏡写真を図４３に示す。
【表２１】
2020111586.tif 000026
【表２２】
2020111586.tif 000027
【０２０１】
要約及び考察
第９週での分析では、低用量及び高用量のＣＶＣ処理は、用量依存的様式で線維症面積を有意に減少させ、本試験でのＣＶＣの抗線維化効果を実証した。低用量及び高用量のＣＶＣ処理はまた、コラーゲン１型のｍＲＮＡ発現レベル及び肝臓のヒドロキシプロリン含量を低下させ、その抗線維性を支持した。ＣＶＣ処理群は、媒体群と比較して用量依存的様式で血漿ＡＬＴレベル及びＮＡＳを有意に減少させた。ＮＡＳの改善は、小葉の炎症及び肝細胞のバルーニングの減少に起因した。肝細胞のバルーニングは酸化ストレス誘発性肝細胞傷害に由来し、ＮＡＳＨの疾患進行と関連している［２６；２７］ため、ＣＶＣが肝細胞傷害及びバルーニングを阻害することによってＮＡＳＨの病変を改善したことが強く示唆される。総合して、この試験においてＣＶＣは潜在的な抗ＮＡＳＨ及び肝防御作用を有する。
【０２０２】
ヒトで示される通り、本試験において血漿ＭＣＰ−１レベルはＣＶＣ処理によって増加し、ＣＣＲ２のＣＶＣによる用量依存性拮抗作用を示したが、血漿ＭＩＰ−１βレベルはこの処理によって有意な変化を示さなかった。ＣＶＣの作用機序を調べるため、我々は、マクロファージ集団に対するＣＶＣの影響を評価した。予備段階の結果では、ＣＶＣは媒体群と比較してＭ１／Ｍ２比が高い傾向を示すことを実証し、ＣＶＣが炎症を起こした肝臓でマクロファージの亜集団のバランスを調節することによって線維成長を阻害した可能性があることを示唆した。このことは将来さらに研究されるであろう。
【０２０３】
第１８週での分析では、ＮＡＳＨに由来するＨＣＣに対する影響は、ＣＶＣ処理群では認められなかった。結論として、本試験でＣＶＣは抗ＮＡＳＨ、肝臓防御、及び抗線維化効果を示した。
【０２０４】
実施例１９：ＣＶＣ及び代謝産物の受容体結合特性
ＣＶＣは、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）が５．９ｎｍｏｌ／ＬのＣＣＲ２アンタゴニストである特有のインビトロ特性を有する。ＣＶＣは用量依存的にＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、及びＭＩＰ−１βの、ＣＣＲ５発現チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に対する結合をＩＣ５０がそれぞれ３．１、２．３、及び２．３ｎｍｏｌ／Ｌで阻害した。ＣＶＣは、ヒトにおいてエキソビボで、ＣＤ４＋Ｔ細胞については３．１ｎＭ、及びＣＤ８＋Ｔ細胞については２．３ｎＭの濃度で、ＣＣＲ５に対して≧９０％の受容体占有を達成した［４］。ＣＶＣは、ＭＣＰ−１のＣＣＲ２ｂに対する結合をＩＣ５０が５．９ｎｍｏｌ／Ｌで阻害した。ＣＶＣは、ヒトにおいてエキソビボで、６ｎＭで単球上のＣＣＲ２に対して約９８％の受容体占有を達成し、ＭＣＰ−１の非存在下で単球上のＣＣＲ２の発現を低下させた。ＣＶＣはＣＣＲ３及びＣＣＲ４に対するリガンド結合をわずかに阻害したのみであった。ＣＶＣは、ＣＣＲ１に対してもＣＣＲ７に対してもリガンド結合を阻害しなかった。ＣＶＣは、ＲＡＮＴＥＳ誘発性Ｃａ２＋動員を阻害した。
【０２０５】
ＣＶＣの２種の代謝産物（Ｍ−Ｉ及びＭ−ＩＩ）が動物実験で検出された（実施例２０参照）；Ｍ−ＩＩは、サル及びイヌにおいて主な代謝産物であったとともに、Ｍ−Ｉはすべての種で微量の代謝産物であった。Ｍ−ＩはＲＡＮＴＥＳのＣＣＲ５発現細胞に対する結合をＩＣ５０が６．５ｎｍｏｌ／Ｌで阻害したが、これはＣＶＣのＩＣ５０のおよそ２倍であった。Ｍ−ＩＩはＲＡＮＴＥＳの結合に影響を及ぼさなかった。
【０２０６】
実施例２０：代謝産物の特定
給餌動物に対して［１４Ｃ］−ＣＶＣの３ｍｇ／ｋｇでの単回経口投与後、不変のＣＶＣがラット及びイヌの血漿中で検出された主な成分であり、全１４Ｃに対するＣＶＣのＡＵＣ０−２４比は、それぞれ５８．９％及び４７．４％であった［４４］。サルでは、この比は１２．９％に過ぎなかったが、相対的に大量の代謝産物Ｍ−ＩＩが検出され、全１４Ｃに対するＭ−ＩＩのＡＵＣ０−２４比は３４．３％であった。とりわけイヌ及びサルでは、Ｍ−ＩＩ量はＩＶ投与後よりも経口投与後で有意に多かった。これらの結果によって、ＣＶＣは体循環に到達する前にＭ−ＩＩに代謝されうることが示唆される。Ｍ−Ｉ、Ｔ−１１８４８０３，及びＴ−１１６９５１８を含めた微量の代謝産物もまたラット、イヌ、及びサルの血漿中で検出された。代謝産物Ｍ−Ｉは、ＣＶＣのスルフィニル部分の酸化によって形成されること、及びＭ−ＩＩは、それに続く［（１−プロピル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］スルフィニル基のＣ−Ｓ結合の開裂を伴うこのスルフィニル部分の還元と、その後のＳ−メチル化によって形成されると仮定される。
【０２０７】
臨床試験
実施例２１：ＨＩＶ−１感染成人被験者における短期有効性データ
方法
ＣＣＲ５指向性ＨＩＶ−１感染被験者において１０日間、ＣＶＣの単剤療法の抗ウイルス活性、ＰＫ、安全性、及び耐容性を評価する第２ａ相二重盲検、ランダム化、プラセボ対照、用量漸増試験。参加者には、抗レトロウイルス治療を経験済みであること、ＣＣＲ５アンタゴニストを受けていないこと、ＨＩＶ−１ＲＮＡレベル少なくとも５０００コピー／ｍＬかつＣＤ４＋細胞数少なくとも２５０細胞／ｍｍ３であることが要求され、施行された。１０人の被験者の群をその後コホートごとに４：１の被験者の比で、ＣＶＣ（２５、５０、７５、１００、もしくは１５０ｍｇ）または対応するプラセボを受けるように登録した。すべての被験者は１日１回ＣＶＣまたはプラセボの投与を１０日間受け、４０日目まで観察した。
【０２０８】
デモグラフィック及び他のベースライン特性
合計５４人の被験者をこの試験に登録した。デモグラフィックは概して用量群間で同様であった。各用量群で被験者の大半は男性（６６．７％〜１００％）であり、年齢の中央値は３３．５歳（プラセボ群）から４５．０歳（１５０ｍｇ群）に及んだ。ほとんどの被験者が白人またはアフリカ系アメリカ人であった。ＢＭＩの中央値は２２．９ｋｇ／ｍ２（１００ｍｇ群）から２７．４ｋｇ／ｍ２（２５ｍｇ群）に及んだ。ＨＩＶ−１ＲＮＡ値の中央値は、４．００ｌｏｇ１０コピー／ｍＬ（１５０ｍｇ群）から４．６０ｌｏｇ１０コピー／ｍＬ（７５ｍｇ群）に及んだ。ＣＤ４＋細胞数の中央値は、１５０ｍｇ群で最も高く（５０８．０細胞／ｍｍ３）、残りの群間では４０２．０から４６０．０細胞／ｍｍ３に及んだ。
【０２０９】
有効性及び安全性の結果
ＣＶＣは、ＨＩＶ−１ＲＮＡレベルに対して強力な効果を示し、これは治療後も続いた。ＣＣＲ５アンタゴニストを受けていない、治療経験のあるＨＩＶ−１感染被験者での２５、５０、７５、及び１５０ｍｇ投与について、ベースラインからの変化の最下点中央値はそれぞれ、−０．７、−１．６、−１．８、及び−１．７ｌｏｇ１０コピー／ｍＬであった。これらの結果により、ＣＶＣの強力な拮抗ＣＣＲ５活性が実証される。ＨＩＶ−１ＲＮＡレベルの平均変化を図４５に示す。
【０２１０】
ＭＣＰ−１（ＣＣＲ２のリガンド、これは炎症促進性単球上で発現されるケモカイン共受容体であり、ＣＣＬ２としても知られる）、ｈｓ−ＣＲＰ、及びＩＬ−６の変化率の探索的評価を行い、ＭＣＰ−１の有意な用量依存的増加が認められた（表２３）。
【０２１１】
１０日目では、最小二乗平均ＭＣＰ−１レベルは、プラセボ群でのわずかな減少と比較して、２５、５０、７５、及び１５０ｍｇ用量群で、ベースラインにおけるよりそれぞれ５６．３、９４．２、３４．４、及び３３４．３ｐｇ／ｍＬ高かった。５０及び１５０ｍｇ投与では、これらの結果は統計的に有意であった（それぞれ、ｐ＝０．０２４及びｐ＜０．００１）。これらの結果により、ＣＶＣの強力な拮抗ＣＣＲ２活性が実証される。ＣＶＣは、この１０日間の試験全体で、ｈｓ−ＣＲＰレベルにもＩＬ−６レベルにも影響を与えなかった。
【表２３】
2020111586.tif 000028
【０２１２】
有害事象
セニクリビロックは、概して、試験用量で良好な耐容性を示し、安全性に対する懸念は確認されなかった。死亡も、ＳＡＥも、他の重篤なＡＥもなかったとともに、ＡＥによる中断もなかった。治療中に発生した多くのＡＥは重症度が軽度または中程度であった。ＣＶＣ１５０ｍｇ（すなわち、最も高い試験用量）を受けた被験者では、他の用量群の被験者と比較してより多くのＡｅがあったものの、ＡＥの重症度は、すべての用量群にわたって同等であった。最も一般的（≧１０％）なこの試験での治療中に発生したＡＥは、悪心（１８．５％）、下痢（１６．７％）、頭痛（１４．８％）、及び疲労（１１．０％）であった。
【０２１３】
実験の安全性
観察期間中、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴが上昇した６人の被験者が、用量群２５ｍｇ（２人）、５０ｍｇ（２人）、１００ｍｇ（１人）、及び１５０ｍｇ（１人）であり、プラセボ群でＡＳＴが上昇した１人の被験者があった。すべての上昇はグレード１であり、単独だけではない上昇があった２人（ともに５０ｍｇ用量群）以外は隔離し、後遺症なく消散した。単独だけではない上昇があったこれら２人は、５０ｍｇ用量群であり、これらの被験者のうちの１人はベースラインでグレード１のＡＳＴ上昇を有していた。治療中、１００ｍｇ及び１５０ｍｇ用量群で被験者に認められたＡＳＴ上昇（各用量群で１人に認められた）は、治療の継続中に正常値まで回復した。この試験中、ＡＬＴにもＡＳＴにもグレード２〜４の上昇は生じなかった。
【０２１４】
グレード３以上の検査所見の異常は、投与の前から存在していた２５ｍｇ用量群でのグレード３の低リン酸血症、ベースラインでグレード３のトリグリセリドを有していた被験者の５０ｍｇ用量群でのグレード４のトリグリセリド上昇、ならびに膵炎の既往歴のある
被験者でのそれぞれグレード３及び４のアミラーゼ及びリパーゼのみであった。
【０２１５】
心血管安全性及び理学的検査
ベースラインでグレード２の収縮期血圧上昇を有していた１５０ｍｇ用量群の被験者において、グレード３の収縮期高血圧が認められた。臨床的に意義のある理学的検査所見もＥＣＧ所見もなかった。
【０２１６】
前述のように、ＣＶＣはＣＣＲ５及びＣＣＲ２のアンタゴニストとして二重の活性を有する。ＭＣＰ−１（ＣＣＲ２のリガンド、ＣＣＬ２としても知られる）、ｈｓ−ＣＲＰ、及びＩＬ−６の変化率の探索評価を行い、ＭＣＰ−１の有意な用量依存的増加が認められた（表２４参照）。１０日目では、最小二乗平均ＭＣＰ−１レベルは、プラセボ群のわずかな低下に対し、２５、５０、７５、及び１５０ｍｇ用量群で、ベースラインにおけるよりそれぞれ５６．３、９４．２、３４．４、及び３３４．３ｐｇ／ｍＬ高かった。５０及び１５０ｍｇ投与では、これらの結果は統計的に有意であった（それぞれ、ｐ＝０．０２４及びｐ＜０．００１）。これらの結果により、ＣＶＣの強力な拮抗ＣＣＲ２活性が実証される。ＣＶＣは、この１０日間の試験全体で、ｈｓ−ＣＲＰレベルにもＩＬ−６レベルにも影響を与えなかった。
【表２４】
2020111586.tif 000029
【０２１７】
耐性データ
試験２０１では、ベースライン、７日目、及び４０日目（または該当する場合、「早期終了」来院時）で薬剤耐性試験を行った。評価可能サンプルを有するすべての被験者はＣ
ＶＣに対して十分な感受性を持ったままであった。
【０２１８】
ウイルス親和性
試験２０１のすべての被験者は、彼らのウイルスがＣＸＣＲ４指向性または二重／混合であるということを排除するため、ウイルス親和性について試験した。すべての被験者は、スクリーニング時ＣＣＲ５指向性ウイルスを有していた（感度増強プロファイルアッセイに基づいて）。合計３９人のＣＶＣでの被験者が治療後に評価可能なサンプルを有し、これらの被験者のうち１人（ＣＶＣ１５０ｍｇ用量群）が１０日目に二重／混合指向性ウイルスを有することが分かった。さらなる試験（別の実験室で異なるアッセイを用いて）によって、この被験者が主にＣＸＣＲ４指向性ウイルスをベースラインで有していたことが明らかになり、それ故、この被験者は、試験対象者基準に従って、この試験に登録されるべきではなかった。この被験者はＣＶＣ治療に反応しなかった。この被験者のＨＩＶ−１ＲＮＡにおける最大の低下は、ベースライン値から０．１３ｌｏｇ１０コピー／ｍＬ下であった。
【０２１９】
薬物動態／薬力学関係
試験２０１で試したすべての用量について、曝露の用量に比例した増加以上が、１００ｍｇ用量コホートの他すべてに用いられた「処方Ｆ１」に対して認められた。
【０２２０】
薬物反応は、以下の最大効果（Ｅｍａｘ）モデルを用いて特徴づけられる：
【数１】
2020111586.tif 000030
ここで、Ｅは効果であり、Ｅ０はベースライン効果（０に固定）であり、Ｉｍａｘは最大阻害であり、ＣはＰＫ変数（ＡＵＣ０−２４、Ｃｍａｘ、または定常状態濃度［Ｃｓｓ］）を示し、ＩＣ５０は、最大阻害の５０％に相当するＰＫ変数の値であり、γはシグモイド曲線性の程度を示す形状パラメータである。
【０２２１】
ＰＫ／ＰＤモデルにおけるＣＶＣのＥｍａｘは−１．４３ｌｏｇ１０コピー／ｍＬであった。Ｅｍａｘモデルに基づいて、２５、５０、７５、及び１５０ｍｇ投与のＣＶＣの平均Ｃｓｓは、この薬物の最大阻害効果の５４．９％、７９．８％、８５．９％、及び９５．９％になると予想された。従って、用量レベル７５及び１５０ｍｇＱＤでは、ＰＤ効果がＨＩＶ−１感染被験者でＣＶＣのＥｍａｘの８０％を超える強力な抗ウイルス活性を示した。
【０２２２】
実施例２２：ＨＩＶ−１感染成人被験者における長期有効性データ
試験２０２の有効性結果
試験計画及び目的
これは、承認済みの抗レトロウイルス剤エファビレンツ（ＥＦＶ、Ｓｕｓｔｉｖａ（登録商標））と比較したＣＶＣ１００ｍｇ及びＣＶＣ２００ｍｇの有効性と安全性を評価するランダム化、二重盲検、ダブルダミー、４８週の比較試験であって、ＨＩＶ−１に感染しており、抗レトロウイルス治療を受けていない、ＣＣＲ５指向性ウイルスのみを有する成人被験者において、全員に承認済みの抗レトロウイルス剤エムトリシタビン／テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＦＴＣ／ＴＤＦ）との併用で投与した。ＨＩＶ−２、Ｂ型及び／またはＣ型肝炎、肝硬変、または任意の既知の活動性もしくは慢性活動性肝疾患の既往歴のある被験者はこの試験から排除した。
【０２２３】
およそ１５０人の被験者を、全員が非盲検試験薬として多剤混合薬処方（ＴＲＵＶＡＤ
Ａ（登録商標））で提供された承認済みの抗ウイルス剤エムトリシタビン／テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＦＴＣ／ＴＤＦ）との併用で、２：２：１の比でＣＶＣ１００ｍｇ＋プラセボ、ＣＶＣ２００ｍｇ＋プラセボ、または承認済みの抗ウイルス剤エファビレンツ（ＥＦＶ）＋プラセボにランダム化されるように計画した（実際には１４３人の被験者がランダム化された）。薬物動態的評価を最初の２５人の試験の被験者で行い、試験対象母集団の残りを登録する前に、選択された用量であるＣＶＣ１００ｍｇ及びＣＶＣ２００ｍｇで適切なＣＶＣの血漿曝露が達成されたことを確認した。
【０２２４】
デモグラフィック及びベースライン特性
被験者の大半は男性（９４％）及び白人（６２％）であり、平均年齢は３５歳、平均ボディ・マス・インデックスは２６．２ｋｇ／ｍ２であった。全体で、被験者の３２％は黒人／アフリカ系アメリカ人であった。加えて、ランダム化被験者の２４％がヒスパニック系の民族性であった。
【０２２５】
ベースラインでは、ＨＩＶ−１の感染期間（すなわち、最初のＨＩＶ−１検査陽性からインフォームドコンセント日までの期間［月］）の中央値は８か月であり、平均ＨＩＶ−１ＲＮＡは４．５０ｌｏｇ１０コピー／ｍＬであり（８０％の被験者はウイルス量＜１００，０００コピー／ｍＬを有していた）、平均ＣＤ４＋細胞数は４０２細胞／ｍｍ３であった（５８％の被験者はＣＤ４＋細胞数≧３５０細胞／ｍｍ３を有していた）。
【０２２６】
主要有効性結果
主要有効性エンドポイントは、ＦＤＡのスナップショットアルゴリズムを用いてＨＩＶ−１ＲＮＡ＜５０コピー／ｍＬで定義される、第２４週でのウイルス学的反応であった。ウイルス学的成功（反応）を収めた被験者の割合は、３つの治療群間で同等であった（ＣＶＣ１００ｍｇで７６％、ＣＶＣ２００ｍｇで７３％、及びＥＦＶで７１％）。ＣＶＣ１００ｍｇ治療群（５９人中１７人、２９％）及びＣＶＣ２００ｍｇ治療群（５６人中１５人、２７％）より多くのＥＦＶ治療群の被験者（２８人中１１人、３９％）が、時期を早めてこの試験を打ち切った。
【０２２７】
第４８週のデータは、第２４週で観察されたデータと一致した。経時的なウイルス学的成功を収めた被験者の割合は、概して３つの治療群間で同等であったが、第４８週でＥＦＶ治療群と比較してＣＶＣ治療群でより高かった（ＣＶＣ１００ｍｇで６８％、ＣＶＣ２００ｍｇで６４％、及びＥＦＶで５０％）。
【０２２８】
二次的及び探索的分析
炎症のバイオマーカー
探索的分析として、炎症のバイオマーカーＭＣＰ−１、ｓＣＤ１４、高感度Ｃ反応性タンパク質［ｈｓ−ＣＲＰ］、インターロイキン−６［ＩＬ−６］、Ｄ−ダイマー、及びフィブリノゲン）のレベルを測定した。ＭＣＰ−１、ｓＣＤ１４、ｈｓ−ＣＲＰ、ＩＬ−６、Ｄ−ダイマー、及びフィブリノゲンのベースライン値ならびに第２４週及び第４８週でのベースラインからの変化を表２５に要約する。
表２５
【表２５−１】
2020111586.tif 000031
【表２５−２】
2020111586.tif 000032
Ｎ＝被験者数
注：ベースラインは、試験治療の開始前、最後の非欠測評価と定義した。
＊治療、ベースライン、及びベースラインでのＨＩＶ−１ＲＮＡについての因子でのＡＮＣＯＶＡモデルに基づくＬＳ平均を用いたＥＦＶ治療群との一対比較がｐ値＜０．００１を示した。
＃ベースラインＨＩＶ−１ＲＮＡを調整するファン・エルターレン検定で評価した治療群間の差が統計的に有意である（ｐ値：０．０４８）。
【０２２９】
用量反応は、ＣＣＲ２のリガンドであるＭＣＰ−１の経時的な増加がＣＶＣで認められたが、ＥＦＶ治療群ではＭＣＰ−１はベースライン値のままであった（図４６参照）。ＥＦＶならびにＣＶＣ１００ｍｇ及びＣＶＣ２００ｍｇ治療群間の血漿ＭＣＰ−１のベースラインからの変化の差は、第２４週及び第４８週で統計的に有意であった（ｐ＜０．００１）（表２５参照）。
【０２３０】
さらに、両方のＣＶＣ治療群で、４８週間の治療を通してｓＣＤ１４について低下が認められた（反復ｓＣＤ１４分析の線形混合モデル分析、下記参照）が、同じ観察期間で、ＥＦＶ治療群ではｓＣＤ１４について増加が認められた（図４７参照）。可溶性ＣＤ１４は、単球活性化のバイオマーカーであり、独立して、ＨＩＶ感染患者の大規模な長期コホート試験での罹患率及び死亡率、ならびに慢性ウイルス性肝炎患者及び重症肝線維症の患者での臨床転帰の悪化と関連している。
【０２３１】
ｓＣＤ１４のサンプルは、最初は２つの別々のバッチで分析し：バッチ１には、第２４週の第一の分析に至るまでのサンプルを含め、バッチ２には第３２週及び第４８週（試験終点）のサンプルを含めた。この２バッチ分析でのｓＣＤ１４のベースラインからの変化の結果を表２５に示す。時点間での分析の一貫性のため、１つのバッチですべて分析された保存サンプルの反復分析を行った。共変量効果を制御するため、線形混合モデル反復測定分析を、ｓＣＤ１４におけるベースラインからの変化について行った（２０１３年９月付け分析）。ＣＶＣ２００ｍｇ治療群での第３２週までのベースラインからの変化を除き、４８週間の治療を通してＣＶＣでの両用量（１００及び２００ｍｇ）で認められたｓＣＤ１４レベルの低下（ＬＳ平均）は、ＥＦＶで認められた増加と比較して統計的に有意であった（ｐ＜０．０５）（表２６及び図４７参照）。
【表２６】
2020111586.tif 000033
【０２３２】
他の炎症のバイオマーカー（ｈｓ−ＣＲＰ、ＩＬ−６、Ｄ−ダイマー）の変化は、ＣＶＣ及びＥＦＶ治療群で同様であった。
【０２３３】
ＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４スコア
さらに、厳密な資格基準（ＨＩＶ−１感染症で、かつ、ＡＬＴ／ＡＳＴグレード≧２、総ビリルビン＞ＵＬＮ、ＨＢＶ及び／またはＨＣＶ、活動性もしくは慢性肝疾患、肝硬変、ＢＭＩ＞３５ｋｇ／ｍ２以外）による明らかな肝疾患のない被験者を登録した本試験か
らのデータの事後解析において、標準的生化学的数値、血小板、ＡＬＴ、ＡＳＴ、及び年齢（ＦＩＢ−４）スコアと組み合わせたＡＳＴ対血小板比指数（ＡＰＲＩ）及び非侵襲性肝線維症指数スコアの改善が、すべてのＣＶＣ治療被験者（ＣＶＣ１００ｍｇ及びＣＶＣ２００ｍｇに対する統合データ）の≧１０％で経時的に認められた（図４８）。ＥＦＶ治療群では、第２４週において被験者の５％及び第４８週において被験者の６％で、ＡＰＲＩスコアにおいてベースラインから１カテゴリー低下した。ＦＩＢ−４スコアが１カテゴリー低下したＥＦＶ治療被験者はなく、ここでは、すべての被験者がベースラインでスコア＜１．４５であった。
【０２３４】
上述した通り、この試験では、ＣＶＣは単球活性化の重要なマーカーであるｓＣＤ１４に対しても同様に有意な効果があった。上述の同じ事後解析において、第２４週でのＣＶＣ治療被験者においてＦＩＢ−４スコア及びｓＣＤ１４レベルの変化の間、ならびに第４８週でのＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４スコアならびにｓＣＤ１４レベルの変化の間で統計的に有意な相関が認められた。第４８週の結果を図４９及び図５０に示す。
【０２３５】
安全性結果
曝露の程度
試験薬（ＣＶＣまたはＥＦＶ）の平均摂取期間は、ＥＦＶ治療群におけるよりもＣＶＣ治療群において長かった（ＣＶＣ１００ｍｇ及び２００ｍｇでそれぞれ４１．２及び４０．９週間に対してＥＦＶでは３６．２週間）が、これは、ＥＦＶ治療群でのより高い中断率によるものであった。
【０２３６】
全有害事象の概要
合計で、ＣＶＣ１００ｍｇ、ＣＶＣ２００ｍｇ、及びＥＦＶ治療群でそれぞれ５１人（８８％）、４８人（８４％）、及び２７人（９６％）の被験者に少なくとも１つのＡＥがあった。最も多く報告されたＡＥ（３つの治療群のいずれかで≧１０％の被験者における基本語）は、悪心、上気道感染症、下痢、頭痛、発疹事象、疲労、浮動性めまい、鼻咽頭炎、異常な夢、不眠症、リンパ節症、うつ病、及び梅毒であった（表２７）。これらの最も多く報告されたＡＥから、頭痛、疲労、及び上気道感染症は、ＥＦＶ治療群におけるよりもＣＶＣ治療群において多く報告され；浮動性めまい、異常な夢、不眠症、リンパ節症、うつ病、及び梅毒はＣＶＣ治療群におけるよりもＥＦＶ治療群において多く報告された。
【表２７】
2020111586.tif 000034
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
注：有害事象はＭｅｄＤＲＡバージョン１３．１を用いてコード化した。試験薬の最初の投与日から、試験薬の中断から３０日以内の発症日の有害事象のみ報告する。同じコード化事象を２回以上経験した被験者については、重症度が最も高い事象のみを示す。
ａ曝露はＩＴＴ解析対象に基づくことに注意。
ｂ発疹、斑点状丘疹、掻痒性皮疹、全身性発疹、及び丘疹を含む。
【０２３７】
ほとんどのＡＥは軽度または中等度（グレード１またはグレード２）であった。グレード３または４のＡＥを表２９に要約する。グレード≧３のＡＥを経験した被験者の割合は、ＥＦＶ治療群における（１５％）よりもＣＶＣ治療群において（合計４％）低かった。ＥＦＶ治療群で１人の被験者（被験者０６００７）がグレード４のＡＥの自殺念慮を有し、これは重篤と見なした。ＣＶＣ治療被験者においてはグレード４のＡＥは報告されなかった。２人以上の被験者で報告されたグレード≧３のＡＥ（基本語）はなかった。表２８は、死亡、ＳＡＥ、ＡＥ、重症度によるＡＥ、試験薬に関連しているＡＥ、及び中断に至ったＡＥの要約を示す。
【表２８】
2020111586.tif 000035
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
注：有害事象はＭｅｄＤＲＡバージョン１３．１を用いてコード化した。試験薬の最初の投与日から、試験薬の中断から３０日以内の発症日の有害事象のみ報告する。同じコード化事象を２回以上経験した被験者については、重症度が最も高い事象のみを示す。
ａ曝露はＩＴＴ解析対象に基づくことに注意。
ｂ治験責任医師の所見で、試験薬（すなわち、ＣＶＣ、ＥＦＶ、またはＦＴＣ／ＴＤＦ）に関連する少なくとも可能性があると見なされたＡＥ。
【表２９】
2020111586.tif 000036
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
注：有害事象はＭｅｄＤＲＡバージョン１３．１を用いてコード化した。試験薬の最初の投与日から、試験薬の中断から３０日以内の発症日の有害事象のみ報告する。同じコード化事象を２回以上経験した被験者については、重症度が最も高い事象のみを示す。
ａ曝露はＩＴＴ解析対象に基づくことに注意。
ｂＣＶＣ１００ｍｇ治療群における被験者１０００４及び５４００１。
ｃＣＶＣ２００ｍｇ治療群における被験者０６００９、４２００１、及び４５００５。
ｄＥＦＶ治療群における被験者０６００５、０６００７、４６００３、及び４８００１。ｅ注：これ（ＥＦＶ治療群における自殺念慮）はグレード４の事象であり；他のすべての事象はグレード３であった。
【０２３８】
重篤な有害事象を表３０に要約する。
表３０−４８週間中、重篤な有害事象を有した被験者数（％）−安全性の解析対象
【表３０】
2020111586.tif 000037
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
注：有害事象はＭｅｄＤＲＡバージョン１３．１を用いてコード化した。試験薬の最初の投与日から、試験薬の中断から３０日以内の発症日の有害事象のみ報告する。同じコード化事象を２回以上経験した被験者については、重症度が最も高い事象のみを示す。
ａ曝露はＩＴＴ解析対象に基づくことに注意。
【０２３９】
中断に至った有害事象
試験薬の中断に至ったＡＥを表３１に要約する。合計で、試験薬の中断に至ったＡｅは、ＣＶＣ２００ｍｇ治療群で１人（２％）及びＥＦＶ治療群で６人（２１％）の被験者に生じた。２人以上の被験者で報告された試験薬の中断に至ったＡＥ（基本語）は、ＥＦＶ治療群でそれぞれ３人及び２人の被験者で報告された不眠症及び浮動性めまい、ならびにＣＶＣ２００ｍｇ治療群で１人及びＥＦＶ治療群で１人の被験者で報告されたうつ病であった（不眠症、浮動性めまい、及びうつ病はすべてＥＦＶで一般的なＡＥである）。
表３１−４８週間中、試験薬の中断に至った有害事象を有した被験者数（％）−安全性の解析対象
【表３１】
2020111586.tif 000038
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
注：有害事象はＭｅｄＤＲＡバージョン１３．１を用いてコード化した。試験薬の最初の投与日から、試験薬の中断から３０日以内の発症日の有害事象のみ報告する。同じコード化事象を２回以上経験した被験者については、重症度が最も高い事象のみを示す。
ａ曝露はＩＴＴ解析対象に基づくことに注意。
ｂＣＶＣ２００ｍｇ治療群における被験者０６００１。
ｃＥＦＶ治療群における被験者０２０１６、１６０３１、２０００４、２６００１、４６００３、及び４８００１。
【０２４０】
グレードが付けられた治療中に発生した検査所見の異常があった被験者数の要約を表３２に示す。
【表３２】
2020111586.tif 000039
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
ａパーセンテージは、既定の検査評価を有する被験者数に基づく。
【０２４１】
グレード３または４（最も悪い毒性グレード）の治療中に発生した検査所見の異常を表３３に要約する。ＣＶＣ２００ｍｇ治療群でより多く認められたＣＰＫの異常を除いて、治療群間でグレード３または４の検査所見の異常があった被験者の割合に差はなかった。表３３−４８週間中、治療中に発生したグレード３またはグレード４（最も悪いグレード；ＤＡＩＤＳ）の検査パラメータ−安全性の解析対象
【表３３】
2020111586.tif 000040
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
ａパーセンテージは、既定の検査評価を有する被験者数に基づく。
【０２４２】
クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）におけるグレード３または４の増加は、ＣＶＣ２００ｍｇ治療群で他の２つの治療群におけるよりも多く認められた。ＣＶＣ治療群でのＣＰＫのグレード３または４の増加があった１２人の被験者（ＣＶＣ１００ｍｇで３人及びＣＶＣ２００ｍｇで９人）から、１１人が、ある単一時点で観察されたＣＰＫ上昇を有した（８人がグレード３、３人がグレード４の上昇を有した）（注：これら１１人のうち１人［被験者４８０１５］は、第８週と第３６週で分離したグレード３のＣＰＫ上昇を有した）。１２番目の被験者（被験者４２００１）は、２つの連続したＣＰＫ上昇（グレード３に続いてグレード４）を有したが、これはその後の来院で治療を継続する間に正常値に戻った。これらのＣＰＫ上昇のうち、臨床症状を伴うものはなかった。ＣＰＫ上昇のため
に中断した被験者はなく、ＣＶＣとＥＦＶ治療群間で筋骨格障害に関連するＡＥの差はなかった。
【０２４３】
ＣＰＫのベースラインからの変化を図５１に示す。いずれの治療群においても、ＣＰＫの経時的な実際の値またはベースラインからの変化について明らかな傾向は認められなかった。
【０２４４】
選択した目的の肝臓パラメータで、グレードを付けられた治療中に発生した検査所見の異常があった被験者数を表３４に示す。グレード４のＡＬＴ上昇もＡＳＴ上昇も認められなかった。１つのグレード３のＡＳＴ上昇を除き、すべてのＡＬＴ及びＡＳＴ上昇は、グレード１またはグレード２であった。１人の被験者（ＣＶＣ１００ｍｇ治療群の４８０１５）におけるグレード３のＡＳＴ上昇は、ある単一時点で観察され、無症候性であった。この被験者はこのグレード３のＡＳＴ上昇のための試験薬の中断はしなかったとともに、このＡＳＴ上昇に関連するＡＥを報告しなかった。さらに、グレード３のＡＳＴ上昇があったこの被験者には、グレードが付けられるビリルビン上昇がなかったが、このグレード３のＡＳＴ上昇と同じ試験の来院時に、単一のグレード３のＣＰＫ上昇があった。ビリルビンの異常はすべてグレード１またはグレード２であった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、及びビリルビン上昇の大半は一時的で、継続的治療でその後の来院の際にベースライン値に戻り、いかなる臨床症状も伴わず、中断とはならなかった。
表３４−４８週間中、選択した肝臓パラメータにおける、治療中に発生した最も悪いグレード（ＤＡＩＤＳ）の検査所見の異常−安全性の解析対象
【表３４】
2020111586.tif 000041
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
ａパーセンテージは、既定の検査評価を有する被験者数に基づく。
【０２４５】
第２４週及び第４８週で探索的分析を行い、治療中に発生した検査有害事象があった被験者でのＣＶＣ曝露を評価した。特に重要なのは、ＣＶＣ２００ｍｇ治療群でＣＰＫの異常の発生率が増加したとすると、ＣＰＫ上昇、ならびに目的の肝臓パラメータ（ＡＳＴ、ＡＬＴ、及びビリルビン）であった。両曝露パラメータ（Ｃａｖｇ及びＣｍｉｎ）は、検査所見の異常との関係の可能性を探索するために妥当であると考えられたが；Ｃａｖｇは、それがＣＶＣ曝露全体を反映することを考慮すれば、最適であると考えられた。
【０２４６】
試験治療群間の差によって、ＣＰＫ上昇の用量反応関係の可能なシグナルがあるにもかかわらず、これらの広範囲にわたる探索的分析のうちで、いずれの曝露反応関係も明らかにすることができたものはなかった。Ｌｎ曝露対ＣＰＫ重症度グレード＞２の確率を評価するロジスティック回帰分析の出力は、ＣＶＣ曝露とＣＰＫ上昇間の関連性を特定しなかった。ＣＶＣ曝露に対するＣＰＫ上昇の頻度の増加にも重症化にも傾向はなかった。
【０２４７】
同様の分析をＡＬＴ、ＡＳＴ、及びビリルビン上昇に対しても行ったが、同様にＣＶＣ曝露と肝臓の検査所見の異常の間に明らかな関係を明かさなかった（図５２〜図５５）。
【０２４８】
代謝パラメータ
空腹時の来院での、グレードが付けられた治療中に発生した空腹時検査所見の異常があった被験者数を表３５に示す。総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、トリグリセリド、またはグルコースの異常のすべてはグレード１またはグレード２であった。総コレステロール及びＬＤＬコレステロールに異常のあった被験者の割合は、ＥＦＶ治療群におけるよりもＣＶＣ治療群で低く、ＣＶＣ治療の際のコレステロールの経時的な低下と一致している（図５６）。
表３５−４８週間中、空腹時の来院での治療中に発生した最も悪いグレード（ＤＡＩＤＳ）の空腹時検査所見の異常
【表３５】
2020111586.tif 000042
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
注：（ＬＤＬ）コレステロールのグレード４の異常及びトリグリセリドのグレード１の異常は、ＤＡＩＤＳの評価尺度を利用できない。
ａパーセンテージは、既定の検査評価を有する被験者数に基づく。
【０２４９】
ＨｂＡ１ｃ、ＨＯＭＡ−ＩＲ、空腹時ＬＤＬ、空腹時ＨＤＬ、空腹時総コレステロール、空腹時総コレステロール／ＨＤＬ比、及び空腹時トリグリセリドにおける平均のベースライン値及びベースラインからの変化を表３６に示す。代謝パラメータにおけるベースラインからの変化の平均は図５６に示す。主にＬＤＬコレステロールの減少のため、ＣＶＣ治療（ＣＶＣ１００ｍｇ及び２００ｍｇの両方）で総コレステロールの減少が認められた（表３６参照）。対照的に、ＥＦＶ治療でＬＤＬコレステロール及びＨＤＬコレステロールの増加が認められた。すべての治療群で空腹時総コレステロール／ＨＤＬ比の軽度及び同等の減少が認められた。グルコース、インスリン、ＨＯＭＡ−ＩＲ、ＨｂＡｌｃ、及びトリグリセリドでは経時的な顕著な変化は認められなかった（表３６参照）。
表３６−４８週間中、空腹時代謝検査パラメータにおけるベースラインからの変化の平均−安全性の解析対象
【表３６−１】
2020111586.tif 000043
【表３６−２】
2020111586.tif 000044
ＨｂＡｌｃ＝ヘモグロビンＡ１ｃ型；ＨＤＬ＝高密度リポタンパク質；ＨＯＭＡ−ＩＲ＝ホメオスタシスモデル評価−インスリン抵抗性；ＬＤＬ＝低密度リポタンパク質；Ｎ＝被験者数。
注：ベースラインは、試験治療の開始前、最後の非欠測評価と定義した。
【０２５０】
いずれの治療群においても第２４週及び第４８週でのウエスト・ヒップ比にベースラインからの顕著な変化は認められなかった。
【０２５１】
心血管安全性
この治療期間で、最も悪い治療中に発生したＥＣＧの異常を表３７に要約する。＞３０〜６０ミリ秒のＱＴｃ増加があった被験者の割合は、ＥＦＶ治療群と比較してＣＶＣ治療群で低かった。ＣＶＣ１００ｍｇ治療群で１人の被験者のみに＞６０ミリ秒のＱＴｃ増加があった。ＱＴｃの延長または病的な延長があった被験者はなかった。
【０２５２】
これらの治療群のいずれにおいてもこの治療期間でＥＣＧパラメータにおいて臨床的に意義のある変化は認められなかった。
表３７−４８週間の治療期間中、最も悪い治療中に発生したＥＣＧ異常
【表３７】
2020111586.tif 000045
Ｎ＝被験者数；ｎ＝観察数。
注：パーセンテージは、既定のＥＣＧパラメータを有する被験者数に基づく。
ａＱＴｃＦ：正常＜４５０ｍｓ≦ボーダーライン≦４８０ｍｓ＜延長≦５００ｍｓ＜病的。
ｂＱＴｃＢ：正常＜４５０ｍｓ≦ボーダーライン≦４８０ｍｓ＜延長≦５００ｍｓ＜病的。
ｃ異常ＱＲＳ：異常に低い≦５０ｍｓ＜正常＜１２０ｍｓ≦異常に高い。
ｄこの被験者（被検者０６００４）は、第２４週でＱＲＳ値が１２０ｍｓであり、スクリーニング値が１２５ｍｓ及びベースライン値が＜１２０ｍｓであった（すなわち、１１１ｍｓ；Ｌｉｓｔｉｎｇ１６．２．８．７参照）。
ｅ異常ＰＲ：正常＜２１０ｍｓ≦異常に高い。
ｆ異常ＨＲ：異常に低い≦５０ｂｐｍ＜正常＜１２０ｂｐｍ≦異常に高い。
【０２５３】
バイタルサイン
いずれの治療群においても、バイタルサインパラメータ（収縮期及び拡張期血圧、心拍数）のいずれに対しても臨床的に意義のある平均変化は認められなかった。第２相治験のＭＣＰ−１タンパク質及び遺伝子発現からのＭＣＰ−１に関するデータ観察は、肝障害及び線維症の程度が異なる慢性肝疾患の患者の肝組織において上方制御されることが示された。以前に示したように、血漿ＭＣＰ−１レベルの代償的増加が、非臨床及び臨床試験でのＣＶＣ処理後に認められ、強力なＣＣＲ２阻害が示唆された。ヒトでのＣＶＣによるＣＣＲ２拮抗作用に続発するＭＣＰ−１レベルの代償的増加の延長の影響は現在知られていないが、入手可能なデータは、４８週間の安全性データに基づいて肝胆汁性疾患または肝臓パラメータの異常のリスクの増加を示唆していない。
【０２５４】
慢性（３か月及び９ヶ月）サル毒性試験における血漿ＭＣＰ−１レベルが対照の約５倍であった１０００ｍｇ／ｋｇ／日の高用量での顕微鏡的評価では、炎症の兆候は、臨床病理学パラメータにおいても、肝臓を含むいかなる組織においても見られなかった。
【０２５５】
実際、ＮＡＳＨのマウスモデルで認められた１００ｍｇ／ｋｇ／日投与でのＣＶＣの抗線維化効果は、有意に増加した血漿ＭＣＰ−１レベルとともに見られた。さらに、４８週間にわたってＣＶＣ処理された被験者で観察されたＡＰＲＩ及びＦＩＢ−４線維症指数スコアの改善は、有意かつ持続的なＭＣＰ−１の上昇にもかかわらず起こった。また、この試験では、ＣＶＣは概して、ＣＶＣ１００ｍｇ及び２００ｍｇで治療された１１５人の被験者において、最大４８週間、良好な耐容性を示した。
【０２５６】
ＮＡＳならびに肝線維症のステージ（ＮＡＳＨ  ＣＲＮシステム及びＩｓｈａｋ）の１年目及び２年目の変化は組織学によって評価する。肝生検でのコラーゲンの形態学的定量的評価の変化もまた評価される。ＣＶＣ治療で認められたＭＣＰ−１の増加の延長が、ＮＡＳＨによる肝線維症の被験者における潜在的リスクをもたらすかどうかを判断するため、有効性エンドポイントとＭＣＰ−１の血漿レベル間の相関が評価されるであろう。
【０２５７】
実施例２３：炎症及び免疫機能のバイオマーカー
単球上で見出されるケモカインレセプターであるＣＣＲ２のリガンド、ＭＣＰ−１の経時的な増加における用量反応がＣＶＣで認められた一方、ＥＦＶ治療群ではＭＣＰ−１はベースライン値にとどまった。ＥＦＶならびにＣＶＣ１００ｍｇ及びＣＶＣ２００ｍｇ治療群間の血漿ＭＣＰ−１のベースラインからの変化の差は、第２４週及び第４８週で統計的に有意（ｐ＜０．００１）であり、ＣＶＣによる強力かつ用量依存的なＣＣＲ２阻害を示唆した。さらに、単球活性化のバイオマーカーでありかつＨＩＶ感染症における死亡率の独立した予測因子であるｓＣＤ１４について、両ＣＶＣ治療群で最初の２４週間に減少が認められた一方、同じ観察期間にＥＦＶ治療群ではｓＣＤ１４について増加が認められた。ＣＶＣ治療被験者では、第２４週と第４８週の間でｓＣＤ１４レベルはベースライン値に戻ったが、ＥＦＶ治療被験者では上昇し続けた。ＣＶＣ治療群及びＥＦＶ治療群間のベースラインからの変化の差は、第２４週及び第４８週、ならびに繰り返し分析における第４８週で統計的に有意（ｐ＜０．００１）であった。これらの結果は、単球活性化の低減に対するＣＶＣの潜在的影響を示している。
【０２５８】
他の炎症のバイオマーカー（ｈｓ−ＣＲＰ、フィブリノゲン、ＩＬ−６、及びＤ−ダイマー）ならびに免疫機能のバイオマーカー（ＣＤ４＋Ｔ細胞上またはＣＤ８＋Ｔ細胞上での総ＣＤ３８＋発現及び総ＨＬＡ  ＤＲ＋発現）において、ベースラインからの変化に治療群間の有意義な差は認められなかった。
【０２５９】
実施例２４：細菌転位と関連するバイオマーカーの測定
ＣＶＣ治療被験者におけるｓＣＤ１４レベルの低下は、ＨＩＶ感染症［１５］の患者と同様にＮＡＳＨ［１６−１８］、アルコール性肝疾患［１７、１９］ＨＩＶ／ＨＣＶ重感染［２０］、及び肝硬変［２１］の患者によく見られる現象である細菌転位の減少と同等と見なすことができる。細菌転位は、腸粘膜関門を侵す、一般に腸管壁浸漏と言われている現象である腸細胞の密着結合（ＴＪ）の破壊の結果として生じる。腸管の完全性の低下は、免疫不全及び／または腸内微生物叢の著しい変化と関連しており、腸内毒素症及び細菌異常増殖とも呼ばれている。それに続くリポ多糖（ＬＰＳ）及び１６ＳリボソームＤＮＡ（１６Ｓ  ｒＤＮＡ）等の微生物産物のトランスロケーションは、免疫活性化に寄与する。グラム陰性細菌の細胞壁の成分であるＬＰＳは、膜または可溶性ＣＤ１４（ｓＣＤ１４：単球のＬＰＳ活性化で生じる）と骨髄分化−２（ＭＤ−２）−ＴＬＲ４複合体を結びつける［１４］。
【０２６０】
リポ多糖は、単球及びマクロファージにおける炎症性サイトカイン、特にＴＮＦ−αの最も強力な誘導物質である。血漿ｓＣＤ１４の高レベルは、肝炎、線維症、及び疾患進行の他のマーカーと無関係にＨＢＶ及びＨＣＶ感染症の増悪を予測した［２０］。腸内発生
細菌産物、とりわけＬＰＳを含む内毒素への曝露は、肝炎、肝細胞傷害、及び肝線維症につながる［２２］。ＴＬＲ４依存性の機序を介したクッパー細胞の活性化及びそれに続く肝星細胞の活性化は、ともに線維成長の強力なドライバーである［１９］。
【０２６１】
この仮説は、試験６５２−２−２０２からの保存サンプル、次回の肝障害試験６５２−１−１２１及び肝線維症ＰｏＣ試験６５２−２−２０３における細菌転位のバイオマーカーを分析することによって評価されるであろう。これらのバイオマーカーは、ＬＰＳ、ＬＰＳ結合タンパク質（ＬＢＰ）、ｓＣＤ１４、腸型脂肪酸結合タンパク質（Ｉ−ＦＡＢＰ）を含むであろう。
【０２６２】
実施例２５：ＣＶＣ臨床第１相データ及び第２相に基づく結論
ＨＩＶ感染被験者のＣＶＣでのデータは、健常志願者（ｎ＝３９０）での１４の単回投与及び複数回投与のバイオアベイラビリティ試験ならびにＤＤＩ試験、ならびにＣＶＣで最大４８週間治療された１１５人を含むＨＩＶ感染被験者（ｎ＝１５９）での２つの第２相試験で評価した。
【０２６３】
ＣＶＣを単独で投与した第１相試験で最も多く観察された有害事象は、第１相試験単位で一般に報告されている状態と一致した。全体としては、この有害事象のパターンは、ＣＶＣが概して最大８００ｍｇのＣＶＣ単回投与及び１０日間の複数回１日最大用量２００ｍｇを評価するこれら第１相試験で良好な耐容性を示したことを示唆している。これらの試験で観察されたトランスアミナーゼ上昇の頻度と程度は、科学文献に記載されている第１相試験のパターンと一致した。ＣＶＣは、２５〜１５０ｍｇ用量（ｎ＝４４）での第２ａ相１０日間ＣＶＣ単剤療法試験ならびにＣＶＣ１００ｍｇ及びＣＶＣ２００ｍｇ（ｎ＝１１５）の用量での第２ｂ相４８週間有効性ならびに安全性試験で評価した。両試験及びすべての用量で、ＣＶＣは好ましい有害事象プロファイルを示した。第２ｂ相試験からの４８週のデータに基づいて、ＣＶＣは肝胆汁性疾患のリスクの増加ともトランスアミナーゼ上昇のリスクの増加とも関連しなかった。この試験では、ＣＶＣ治療被験者において総コレステロール及びＬＤＬコレステロールの減少が認められた。この４８週間の治療期間中、ＥＣＧパラメータにも、いかなるバイタルサインパラメータにも、臨床的に意義のある変化を認めなかった。有害事象に対しても、検査所見の異常（ＣＰＫ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、及びビリルビン上昇を含む）に対しても、用量制限毒性に対しても明らかな用量の関係も曝露の関係も認めなかった。
【０２６４】
第１相プログラムからのデータ及びＨＩＶ感染被験者の試験からの第２相データに基づいて、我々は、２年間にわたって試験６５２−２−２０３（初期試験エンドポイントは１年目）でＮＡＳＨによる肝線維症の被験者の治療において１日１回摂取されるＣＶＣ１５０ｍｇを評価する予定である。この試験のクロスオーバー計画は、２年連続のＣＶＣ治療ならびに１年間のプラセボ治療に続く１年間のＣＶＣ治療の安全性及び有効性を評価する。ＮＡＳＨによる肝線維症に対するＣＶＣ治療の影響の標準評価は、肝生検からの組織学的データ及び他の組織学的改善の評価基準を基に行う。安全性及び耐容性を評価し、独立データモニタリング委員会による定期的なデータ審査を含めた肝毒性または他の臓器毒性の兆候の注意深い監視を行う。この試験では、ＣＶＣの抗炎症及び抗線維化活性ならびにＮＡＳＨによる肝線維症に対するその影響を明らかにすること、ならびにＣＶＣ１５０ｍｇの安全性及び耐容性の評価のためのさらなるデータを提供することが期待される。
【０２６５】
実施例２６−ＮＡＳＨにおける肝組織所見の改善を評価するためのＣＶＣ試験
ＣＶＣが抗炎症及び抗線維化活性を有し、概して耐容性が良好であることを示す非臨床及び臨床データに基づいて、Ｔｏｂｉｒａ社は、ＮＡＳＨによる肝線維症の被験者の第２相試験でＣＶＣを試験する予定である。この第２相試験は、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、少なくとも１つの全米コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ）によって定義されるメタ
ボリック症候群（ＭＳ）の基準の高ボディー・マス・インデックス（ＢＭＩ）（＞２５ｋｇ／ｍ２）、架橋線維化、及び／または明確なＮＡＳＨ（ＮＡＳ≧５）を含めた１つ以上の要因の存在によって疾患進行のリスクがある肝線維症の成人被験者におけるＮＡＳＨ治療のためのＣＶＣの有効性を評価する。
【０２６６】
この第２相試験は、この重篤な状態を治療し、ＮＡＳＨによる肝線維症の患者の深刻な満たされない医学的必要性に対処するため、ＣＶＣの可能性を評価する目的で計画される。この試験は、ＮＡＳＨによる肝線維症の被験者でプラセボと比較した場合のＣＶＣ１５０ｍｇの有効性と安全性を評価する目的で計画される、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照試験である。この試験対象母集団は、疾患進行のリスクがあるＮＡＳＨ（ＮＡＳ≧４）による肝線維症（ＮＡＳＨ臨床研究ネットワーク［ＣＲＮ］ステージ１〜３）の被験者からなる。
【０２６７】
ＣＶＣ１５０ｍｇ（ＤＰ７処方）の用量は、試験６５２−２−２０３で、肝線維症の被験者のＮＡＳＨの治療のため、以下の検討事項に基づいて評価される：
【０２６８】
ＣＶＣは、主にそのＣＣＲ２とＣＣＲ５の共受容体の拮抗作用ならびに肝臓損傷部位への炎症性単球の動員、遊走、及び浸潤にもたらされる影響のため、抗炎症及び抗線維化活性の両方を与えると期待されている。従って、この試験で使用する用量の選択のための第一の検討事項は、ＣＶＣの血漿曝露がＣＣＲ２とＣＣＲ５のほぼ最大の拮抗作用を与えるのに十分であるということを保証することである。
【０２６９】
ＣＶＣによるＣＣＲ２とＣＣＲ５の拮抗作用は、インビトロ及びエキソビボでの試験、ならびにＨＩＶ−１感染症の治療におけるＣＶＣの２つの臨床試験（第２ａ相試験６５２−２−２０１及び第２ｂ相試験６５２−２−２０２）にて評価された。各場合で、強力で濃度依存性のＣＣＲ２とＣＣＲ５の拮抗作用が認められた。ＣＣＲ２とＣＣＲ５の拮抗作用の臨床的証拠は、それぞれ、血漿ＭＣＰ−１（ＣＣＲ２のリガンド）濃度のベースラインからの変化及び血漿ＨＩＶ−ＲＮＡ（ＨＩＶの侵入に必要なＣＣＲ５共受容体）の変化をこれらの２つの第２相試験で測定することで確立された。
【０２７０】
試験６５２−２−２０２では、ＣＶＣ１００ｍｇ及びＣＶＣ２００ｍｇ（ＤＰ６処方）の用量は、最大４８週間（ＣＶＣ摂取期間の平均［ＳＥ］：４１．１［１．３３］週間）、１１５人のＨＩＶ−１感染被験者で評価され、ＨＩＶ感染症の治療において有効であること及び良好な耐容性を示すことが見出された。ＣＶＣの血漿濃度の増加がウイルス学的転帰の改善と関連することを示した曝露反応分析に基づいて、ＣＶＣ２００ｍｇが、第３相試験でＨＩＶ感染症の治療用の抗ウイルス剤としてのＣＶＣのさらなる評価に適切な用量であると考えられた。
【０２７１】
ＣＶＣの血漿曝露はしかしながら、ＣＶＣを同じ投与条件（試験６５２−１−１１１、６５２−１−１１０、６５２−２−２０２）下で投与する場合に、ＨＩＶ感染被験者と比較して、非ＨＩＶ感染健常志願者でより高いように思われる。ＣＶＣ１５０ｍｇの用量は、試験６５２  ２  ２０３で肝線維症の被験者におけるＮＡＳＨの治療について評価される。参照された有効データに基づいて、この用量は、治療上意味のある範囲であると考えられ、ＮＡＳＨ及び肝線維症の被験者で、試験６５２−２−２０２で評価され、強力なＣＣＲ２とＣＣＲ５の拮抗作用をもたらすことが見出されたＣＶＣ２００ｍｇの曝露に匹敵する曝露を与えることが期待される。
【０２７２】
合計２５０人の被験者（治療群当たり１２５人）を予定し、合計試験治療期間は２年になる。試験対象母集団は、以下の１つ以上の要因の存在のために疾患進行のリスクが増加しているＮＡＳＨ（ＮＡＳ≧４）及び肝線維症（ステージ１〜３［ＮＡＳＨ  ＣＲＮシス
テム］）の被験者を含む：
【０２７３】
文書証拠での２型糖尿病
【０２７４】
少なくとも１つの以下のＮＣＥＰによって定義されるメタボリック症候群の基準の高ＢＭＩ（＞２５ｋｇ／ｍ２）：
【０２７５】
中心性肥満：ウエスト周り≧１０２ｃｍまたは４０インチ（男性）、≧８８ｃｍまたは３５インチ（女性）
【０２７６】
脂質異常症：ＴＧ≧１．７ｍｍｏｌ／Ｌ（１５０ｍｇ／ｄＬ）
【０２７７】
脂質異常症：ＨＤＬコレステロール＜４０ｍｇ／ｄＬ（男性）、＜５０ｍｇ／ｄＬ（女性）
【０２７８】
血圧≧１３０／８５ｍｍＨｇ（または高血圧の治療を受ける）
【０２７９】
空腹時血漿グルコース≧６．１ｍｍｏｌ／Ｌ（１１０ｍｇ／ｄＬ）；または
【０２８０】
架橋線維化（ＮＡＳＨ  ＣＲＮステージ３）及び／または明確なＮＡＳＨ（ＮＡＳ≧５）。
【０２８１】
２つの治療期間がある。治療期間１は、１年間の二重盲検ランダム化治療（ＣＶＣ１５０ｍｇまたは対応プラセボ）からなる。被験者及び治験責任医師には、期間１の間は治療の割付けは見えない。治療期間２の間は、元々ＣＶＣ１５０ｍｇにランダム化された被験者はさらに１年間その治療を受け続け、元々プラセボにランダム化された被験者はプラセボからＣＶＣ１５０ｍｇに移る。
【０２８２】
被験者は試験薬を１日１回（ＱＤ）、２年間受ける。この試験は２つの治療期間：治療期間１（１年目）及び治療期間２（２年目）を含む。的確被験者は、治療の１年目（治療期間１）の間、ＣＶＣ（ｎ＝１２６）または対応プラセボ（ｎ＝１２６）を受けるように割り付けられる。治療期間２では、治療の２年目、プラセボ治療被験者の半分（ベースラインでランダム化される）がＣＶＣに移り、残りの半分はプラセボにとどまる。ベースライン（１日目）で、スクリーニング評価の後、的確被験者は、スクリーニング時のＮＡＳ（４または≧５）及び線維症ステージ（≦２または＞２）によって層別化される置換ブロックランダム化を用いて治療群に割り付けられる。的確被験者は、以下の３つの治療群の１つに２：１：１の比でランダム化される：
【表３８】
2020111586.tif 000046
【０２８３】
ＣＶＣ及び対応プラセボは、二重盲検試験薬として投与される。試験薬（ＣＶＣ／対応プラセボ）は、毎朝食事とともに摂取するものとする。
【０２８４】
主要エンドポイント（１年目）の生検は、治療期間１の終了前１か月以内で治療期間２
の開始前に実施しなくてはならない。最後（２年目）の生検は、試験薬での治療の終了前１か月以内に実施しなくてはならない。
【０２８５】
登録は、最大２０人の被験者がランダム化されて治療され、安全性データがデータモニタリング委員会（ＤＭＣ）によって審査されるまで、限られた数の場所で開始される。最初のＤＭＣの審査は、最初の被験者が登録されてから３か月以内、または、最大２０人の被験者がランダム化され、少なくとも１０人が１か月治療された時点のいずれか早い方でなされる。試験被験者の残りのそれに続く登録は、ＤＭＣがこれら最初の１０〜２０人についての安全性データを評価し、この試験を続けてもよいと判断した時点でなされる。
【０２８６】
治療期間１では、すべての被験者は１か月目の第２週及び第４週で安全性評価を受ける。加えて、最初の２０人の被験者は１か月目の第１週及び第３週で安全性評価を受ける。すべての被験者は、２か月の間は２週間ごとに試験来院評価を受け、３〜６か月目、ならびに８、１０、及び１２か月目には月に１度来院する。治療期間２では、被験者は、１３〜１５か月目、ならびに１８、２１、及び２４か月目、月に１度来院する。
【０２８７】
主要評価
試験期間中：
【０２８８】
肝生検は、スクリーニング時、主要エンドポイント時（１年目：治療期間１の終了前１か月以内でかつ治療期間２の開始前）、及び２年時（治療終了前１か月以内）に行う。
【０２８９】
炎症性サイトカイン、炎症のバイオマーカー、肝細胞アポトーシスのバイオマーカー、細菌転位のバイオマーカー、空腹時代謝パラメータ、腎臓パラメータ、及びｅＧＦＲをベースラインならびに３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目で測定する。
【０２９０】
利用可能な場所で、非侵襲的な肝撮像評価（例えば、超音波トランジェントエラストグラフィー［ＴＥ］、２次元磁気共鳴エラストグラフィー［ＭＲＥ］、音響放射力インパルス［ＡＲＦＩ］）をベースラインならびに６、１２、１８、及び２４か月目で行う。
【０２９１】
ＣＶＣに対する薬物動態サンプルをベースライン（治療開始直前の投与前サンプル）、０．５、３、及び１５か月目（投与前及び投与後少なくとも１時間）、ならびに６、１２、１８、及び２４か月目（投与前）に採取する。
【０２９２】
体重、ウエスト周り、ヒップ周り、腕周り、及び三頭筋皮下脂肪をベースラインならびに３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目で行う。身長は、スクリーニング時及び１２か月目で行う。
【０２９３】
理学的検査及び検査所見の分析は、各来院時に行う。ＥＣＧは、ベースラインならびに３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目で行う。
【０２９４】
有害事象及び併用薬は、各来院時に評価される。
【０２９５】
ＮＡＳＨ、肝線維症、ならびに肝生検手順に関するインフォームドコンセント及び患者教育教材は、スクリーニング来院時に見直す。
【０２９６】
試験薬日記は、試験薬が調剤されると同時に各被験者に提供される。この日記は、すべての治療上の来院時及び早期中断の来院時に見直される。
【０２９７】
被験者は、試験終了の追跡評価のため、最後の治療を受けてから１か月後に再び受診す
る。
【０２９８】
この試験の主要評価項目は、スクリーニング時の生検と比較して１年目で、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコア（ＮＡＳ）での肝組織所見の改善を評価することであって、この改善は、少なくとも１点の改善が小葉の炎症及びバルーニングの両方のカテゴリーにある最低２点のＮＡＳでの改善と、同時に線維症のステージの悪化（架橋線維化または肝硬変への進行として定義される悪化を伴う）がないことで定義される。
【０２９９】
副次評価項目としては、２年目での同時に線維症のステージの悪化（架橋線維化または肝硬変への進行として定義される悪化）を伴わないＮＡＳＨの消散の評価；１年目での同時に線維症のステージの悪化（架橋線維化または肝硬変への進行として定義される悪化）を伴わないＮＡＳＨの消散；肝線維症の成人被験者でのＮＡＳＨの１年及び２年の治療にわたるＣＶＣの安全性ならびに耐容性；母集団ＰＫ解析でのＣＶＣの血漿ＰＫの特性化；２年目での、少なくとも１点の改善が２つ以上のカテゴリーにある最低２点のＮＡＳでの改善と、同時に線維症のステージの悪化（架橋線維化または肝硬変への進行として定義される悪化）がないことで定義される、ＮＡＳでの肝組織所見の改善の評価；１年目及び２年目での肝生検において形態計測定量的コラーゲンの変化によって測定される肝線維症の成人被験者におけるプラセボに対するＣＶＣの有効性の評価；１年目及び２年目での組織学的線維症のステージ（非アルコール性脂肪性肝炎臨床研究ネットワーク［ＮＡＳＨ  ＣＲＮ］システム及びＩｓｈａｋ）の変化の評価；１年目及び２年目での肝組織線維形成性タンパク質（アルファ平滑筋アクチン［α−ＳＭＡ］）における変化の評価；非侵襲性肝線維症マーカー（ＡＰＲＩ、ＦＩＢ−４、ヒアルロン酸、ＦｉｂｒｏＴｅｓｔ（ＦｉｂｒｏＳｕｒｅ）、ＮＡＦＬＤ線維症スコア［ＮＦＳ］、及び改良肝線維症試験（ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｅｓｔ）［ＥＬＦ］）におけるベースラインからの変化の３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目での評価；肝細胞アポトーシスのバイオマーカーにおけるベースラインからの変化の１年目及び２年目での評価；肝臓パラメータ及び空腹時代謝パラメータにおけるベースラインからの変化の３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目での評価；体重、ＢＭＩ、ウエスト周り、ウエスト・ヒップ比、腕周り、及び三頭筋皮下脂肪におけるベースラインからの変化の３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目での評価が挙げられる。
【０３００】
三次評価項目としては、非侵襲性肝撮像法（例えば、超音波トランジェントエラストグラフィー［ＴＥ］、２次元磁気共鳴エラストグラフィー［ＭＲＥ］、音響放射力インパルス［ＡＲＦＩ］）におけるベースラインからの変化の６、１２、１８、及び２４か月目での評価（利用可能な場所で）；３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目での炎症性サイトカイン及び炎症のバイオマーカーにおけるベースラインからの変化；３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目での推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）及び腎臓パラメータにおけるベースラインからの変化；ならびに３、６、１２、１５、１８、及び２４か月目での細菌転位に関連するバイオマーカーにおけるベースラインからの変化が挙げられる。
【０３０１】
実施例２７−マウスのチオグリコール酸誘発性腹膜炎モデルにおけるセニクリビロックの効果
概要：マウスのチオグリコール酸誘発性腹膜炎モデルは、抗炎症性細胞の動員を評価するため、及びマクロファージの活性化を評価するために一般に用いられる前臨床モデルである。この試験の目的は、マウスのチオグリコール酸誘発性腹膜炎（ＴＩＰ）モデルにおけるセニクリビロック（ＣＶＣ）の効果を評価するためであった。１日目から５日目まで、動物は媒体、ＣＶＣ、または陽性対照を、投与体積１０ｍＬ／ｋｇで強制経口投与された。第２群から第５群における１日２回（ＢＩＤ）の投与は、およそ１２時間あけた。４日目に、媒体、ＣＶＣ、または陽性対照の投与の２時間後（ＢＩＤ群では最初の投与の２時間後）、動物は生理食塩水（第１群）または３．８５％チオグリコール酸（ＴＧ）を１
ｍＬ／動物の体積で腹腔内注射された。
表３９−実験計画
【表３９】
2020111586.tif 000047
ＴＧ＝チオグリコール酸
ａ対照動物は、ＣＶＣ用の媒体（０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース、１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（ｐＨ約１．３）の脱イオン水溶液）を受けた。
【０３０２】
以下のパラメータ及びエンドポイントをこの試験で評価した：臨床兆候、体重、腹腔洗浄細胞数、末梢血球数、及び薬物動態学的評価。体重に対しては、治療に関連した臨床兆候も影響もなかった。循環血球数に明らかな変化は認められなかった。このマウスのチオグリコール酸腹膜炎モデルでのＣＶＣ投与後、明らかな用量依存性の減少が、腹膜の炎症細胞動員において、総白血球及び単核細胞集団の両方で認められた。これら３つの用量レベルで、ＣＶＣの血漿曝露において用量依存性の増加があった。ＣＶＣは、ＢＩＤ投与で達成されるより高い血漿濃度及びマウスで知られている短い半減期（約２時間）と一致して、ＱＤと比較してＢＩＤで投与した場合により有効であると思われた。
【０３０３】
試験計画：１日目から５日目まで、動物は媒体（０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース、１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（ｐＨ約１．３）の脱イオン水溶液、ＣＶＣ、または陽性対照（デキサメタゾン（Ｄｅｘ）、ロット０７１Ｍ１１８０Ｖ）を、投与体積１０ｍＬ／ｋｇで強制経口投与された。第２群から第５群でのＢＩＤ投与はおよそ１２時間あけた。これらの処方は一度全試験用に調製し、毎日の投与用に等分した。
【０３０４】
４日目に、媒体、ＣＶＣ、または陽性対照の投与の２時間後（ＢＩＤ群では最初の投与の２時間後）、動物は生理食塩水（第１群）または３．８５％チオグリコール酸を１ｍＬ／動物の体積（第２〜７群）で腹腔内注射された。この実験では、デキサメタゾンを、これが様々な動物モデルで炎症を減少させることが知られているコルチコステロイドであるために陽性対照として用いた。マウスの炎症モデルは、デキサメタゾンの有効量範囲は、経口投与の場合、０．３〜３ｍｇ／ｋｇ  ＱＤであると示している。これに基づいて、この特定の試験には、中間用量の１ｍｇ／ｋｇを選択した。
【０３０５】
生存中の処置、観察、及び測定：病的状態／死亡のチェックは少なくとも１日１回行った。体重は投与の前及び剖検前に記録した。
【０３０６】
終末処置：すべての動物は、チオグリコール酸の注入の４８時間後、ＣＯ２での窒息状態によって安楽死させ、ＥＤＴＡ０．０１Ｍを含む氷冷した滅菌Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋フリ
ーＰＢＳ２．５ｍＬで腹腔洗浄を行った。この洗浄を、最初の穿刺部位を介して第二の２．５ｍＬの注入で繰り返し、これらのサンプルを各動物について統合した。
【０３０７】
この洗浄液は、Ａｄｖｉａ分析機を用いた全細胞数及び白血球細胞百分率の処理の間、氷上に配置した。この洗浄回収の後、血液サンプル（０．７ｍＬ）を各マウスから心臓内穿刺によって、または大静脈から回収した（回収時間を記録した）。血液０．５ｍＬをＥＤＴＡチューブに入れ、臨床病理に移し、Ａｄｖｉａ分析機を用いて白血球細胞百分率について分析した。血液０．２ｍＬをＫ２ＥＤＴＡチューブに入れ、血漿まで処理した。この血漿を遠心分離（４℃にて３０００ｒｐｍで１０分間）で回収し、ドライアイス上に配置した。これらのサンプルを分析し、ＣＶＣの血漿レベルを確定した。採血後、これらの動物を続いて腹部大動脈の切断によって放血させた。
【０３０８】
統計分析：事後ダネット統計分析での一元配置ＡＮＯＶＡを、洗浄及び血液サンプルから得た白血球細胞百分率で行った。この分析は、第２群に比較して行った。
【０３０９】
結果
死亡：本試験実施中、死亡は生じなかった。
【０３１０】
臨床観察：本試験実施中、異常な臨床兆候は見られなかった。
【０３１１】
体重：ＣＶＣの投与後、体重の顕著な変化はなかった（１日目から６日目）。デキサメタゾン群（第７群）の体重は、１日目から６日目でわずかに減少した。この体重データを図５７Ａ、Ｂ、及びＣに示す。
【０３１２】
腹腔洗浄：チオグリコール酸で誘発したすべての群で単球／マクロファージ及び総白血球の増加が認められた。ＴＧ対照（第２群）と比較して、ＣＶＣの明らかな用量依存性効果が認められ、用量≧２０ｍｇ／ｋｇで統計的有意性（ｐ＜０．０５）を獲得した。また、ＣＶＣは、２０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ（１０ｍｇ／ｋｇ／投与）で観察された動員の減少が、２０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤで観察されたものより大きかったため、ＱＤと比較して、ＢＩＤで投与された場合により効果的であると思われた。チオグリコール酸対照（第２群）と比較して、総白血球の減少は、第３群〜第６群でそれぞれ、０．８、２２．２、５７．６、及び１４．２％であった一方、単球の減少は、第３群〜第６群でそれぞれ、５．７、４５．２、７６．５、及び２６．０％であった。デキサメタゾンは、全白血球数を２６．６％及び単球を３８．１％減少させた。このデータを図５７〜６０に示す。
【０３１３】
血球評価：循環血球数に明らかな変化は認められなかった。総白血球及び単球について群平均にわずかな差が認められたが；この差は個体差に関連すると考えられたとともに、総白血球は、このマウス株の歴史的範囲内（２８０〜３８７０細胞／μＬ）であった。この群平均の概要を表４０に、及び個々のデータを図５７に示す。
【０３１４】
ＰＫ解析：ＢＩＤ投与後、ほぼトラフ（投与後１４時間）のＣＶＣの血漿レベルは、用量依存的に増加した。２０ｍｇ／ｋｇ／日では、ＢＩＤ投与と比較してＱＤ投与で血漿レベルが低かった。このデータを表４０に要約する。
表４０−循環血球数（平均±標準誤差）
【表４０】
2020111586.tif 000048
【０３１５】
動物に表４１に要約する通りに投与した。
表４１−実験計画
【表４１】
2020111586.tif 000049
ＴＧ＝チオグリコール酸；ａ対照動物は、ＣＶＣ用の媒体（０．５％（ｗ／ｖ）メチルセルロース、１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０（ｐＨ約１．３）の脱イオン水溶液）を受けた。
【０３１６】
動物は１日目から５日目まで被験物質を強制経口投与された。第２群から第５群での１日２回（ＢＩＤ）の投与はおよそ１２時間あけた。血液サンプルは、血漿レベルの評価用に６日目に採取した。サンプルを心臓内穿刺によって、または大静脈から採取し、Ｋ２ＥＤＴＡチューブに入れ、血漿まで処理した。サンプルは分析まで−７０から−９０°で凍結保存した。主要エンドポイントによって決められる殺処分時間（チオグリコール酸投与の４８時間後）のため、サンプルは第２〜５群については投与後およそ１４時間で、残りの群については投与後２６時間で採取した。動物１０５、２０１、３０３、及び５０３については、サンプルを採取しなかった。
【０３１７】
血漿ＣＶＣレベルは、先に検証されたＬＣ／ＭＳ／ＭＳサルプラズマ法（５０μＬアッセイ、範囲１０．０〜１９２０ｎｇ／ｍＬ）を用い、ＫＣＡＳ（カンザス州ショーニー）によって測定された。
【０３１８】
表４２は、ＣＶＣを受けた各用量群について平均血漿レベルを示す。全用量群についての個別の値は、図６１に示す。第１、２、及び７群では、検出可能なＣＶＣは認められなかった。
表４２−６日目でのマウスにおけるＣＶＣの血漿レベル（平均及び標準偏差）
【表４２】
2020111586.tif 000050
＊公称時間；実際の採取時間は、１４．５時間（第３群）、１５時間（第４群）、１５．５時間（第５群）、及び２８時間（第６群）であった。
＊＊５つのうち３つのサンプルがＬＬＯＱ（１０ｎｇ／ｍＬ）以下。
【０３１９】
ＢＩＤ投与後、ほぼトラフ（投与後約１４〜１６時間）のＣＶＣの血漿レベルは、用量依存的に増加した。２０ｍｇ／ｋｇ／日では、ＢＩＤ投与と比較してＱＤ投与で血漿レベルが低かった。
【０３２０】
結論：ＣＶＣ投与後のマウスチオグリコール酸腹膜炎モデルでは、腹膜炎症細胞動員において明らかな用量依存性の減少が総白血球及び単核細胞集団の両方で認められた。これら３つの用量レベルで、ＣＶＣの血漿曝露において用量依存性の増加があった。ＣＶＣは、ＢＩＤ投与で達成されるより高い血漿濃度及びマウスで知られている短い半減期（約２時間）と一致して、ＱＤと比較してＢＩＤで投与した場合により有効であると思われた。
【０３２１】
実施例２８−ＣＣＲ２＋浸潤単球は、アセトアミノフェン誘発性急性肝臓損傷を助長する−ＣＣＲ２及びＣＣＬ２の阻害と治療との関連
背景及び目的：アセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）中毒に続く肝臓損傷は、急性肝不全（ＡＬＦ）の主要なコースの１つである。ＡＰＡＰは、肝細胞の壊死を引き起こし、その後クッパー細胞（ＫＣ）のような常在免疫細胞の活性化、各種ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２）の放出、及び免疫細胞浸潤（例えば、単球）が続く。ＣＣＲ２＋単球がＡＰＡＰ誘発性損傷を助長するとすれば、ＣＣＲ２またはＣＣＬ２のいずれかを薬理学的に阻害することの治療可能性を調べた。
【０３２２】
方法：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ＷＴ）及びＣｃｒ２−／−マウスを、ＡＰＡＰの静脈注射（２５０ｍｇ／ｋｇ体重）によってＡＬＦにした。肝臓損傷と免疫細胞表現型は、Ｃｃｒ２−／−及びＷＴマウス、ならびに強力なＣＣＬ２阻害剤であるｍＮＯＸ−Ｅ３６を皮下注射された、または、経口ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストのセニクリビロック（ＣＶＣ）で処理されたＷＴマウスで分析した。
【０３２３】
結果：Ｃｃｒ２−／−マウスは、ＡＰＡＰ注射の１２時間後、ＷＴマウスと比較して、組織学及びＡＬＴ値の低下によって判断される肝臓損傷の有意な減少を示した（ｐ＜０．０５、図６２）。フローサイトメトリー分析によって、Ｃｃｒ２−／−マウスの肝臓において炎症性Ｌｙ６Ｃ＋単球由来のマクロファージの数が有意に減少したことが分かった一方、好中球や他の免疫細胞のサブセットはＷＴマウスと同様のままであった。肝臓のＩＬ１β、ＴＮＦ−α、及びＣＣＬ２はＷＴ及びＣｃｒ２−／−マウスの両方で同様に増加したが、肝マクロファージでの差次的マーカー発現（ＣＤ１ｄ、ＣＤ６８）と一緒に、ＩＬ１０はＣｃｒ２−／−マウス由来の肝臓でより高かった（ｐ＜０．０５）。ともに薬理学的阻害剤であるｍＮＯＸ−Ｅ３６またはＣＶＣは、ＡＰＡＰ損傷肝での単球蓄積を有意に減少させることができ、肝臓障害からの著しい防御をもたらした（ＡＬＴレベル、ｍＮＯＸではｐ＜０．０５及びＣＶＣではｐ＜０．０１）。
【０３２４】
結論：ケモカイン受容体ＣＣＲ２またはそのリガンドＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）のいずれかを阻害することによる炎症性単球の有害な作用を標的にすることは、アセトアミノフェンの過剰摂取後の肝臓損傷を制限するための有望な治療選択肢である。
【０３２５】
実施例２９：二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストであるセニクリビロックは、実験的急性肝臓損傷における炎症性ＣＣＲ２＋単球浸潤の強力かつ有意な減少をもたらす
試験の目的：急性肝不全（ＡＬＦ）は、肝機能の急速な悪化を伴い、治療法の選択肢が限られた生命にかかわる状態である。マウスモデルでは、四塩化炭素（ＣＣｌ４）やアセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）のような毒物による肝臓損傷がＣＣＲ２−ＣＣＬ２（別名ＭＣＰ−１）ケモカイン経路を介した肝臓への急速な炎症性単球浸潤につながる。セニクリビロック（ＣＶＣ）は、現在ＮＡＳＨ及び肝線維症の成人での第２ｂ相臨床試験で評価されている、経口の１日１回のＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストである。ＣＣｌ４及びＡＰＡＰによる急性肝臓損傷における単球浸潤の阻害についてインビボでＣＶＣを評価した。
【０３２６】
方法：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ＷＴ）及びＣＣＲ２欠損マウスを、ＣＣｌ４（０．６ｍｌ／ｋｇ腹腔内）またはＡＰＡＰ（２５０ｍｇ／ｋｇ静脈内）のいずれかによってＡＬＦにした。両方のモデルで、マウスはＣＶＣ（１００ｍｇ／ｋｇ）または媒体を強制経口投与された。肝臓損傷及び免疫細胞の表現型を分析した。機構研究のため、単球由来のマクロファージのサブセット及び常在マクロファージ（クッパー細胞）は、損傷した肝臓からＦＡＣＳによって選別し、アレイベースのＮａｎｏｓｔｒｉｎｇ遺伝子発現解析に供した。
【０３２７】
結果：ＣＣｌ４及びＡＰＡＰはともに、ケモカイン受容体ＣＣＲ２に依存する単球由来のマクロファージであるＬｙ６Ｃ＋の急速かつ大量の蓄積を、損傷した肝臓でもたらした。ＣＶＣの経口投与は、ＣＣｌ４及びＡＰＡＰ誘発性急性肝臓損傷のいずれに対しても、血中の炎症性Ｌｙ６Ｃ＋単球（ｐ＜０．０１）及び肝臓内の単球由来のマクロファージを有意に減少させた。ＣＶＣ処理では、肝臓内のＬｙ６Ｃ＋単球由来マクロファージをＣＣｌ４の３６時間後、５．４９％±０．４９（肝臓白血球の）から０．９５％±０．１４まで、また、ＡＰＡＰの１２時間後、６．０１％±０．６６から０．９５％±０．１１まで低下させた（両モデルについてｐ＜０．００１、８３〜８４％低下）。ＣＶＣによる浸潤単球の阻害は、ＡＬＴの４３６５Ｕ／Ｌ±９５１から１０８８Ｕ／Ｌ±４８６まで（ｐ＜０．０１、７５％低下）及び壊死部分の割合の２７．９％±４．０５から１０．９％±３．５０まで（ｐ＜０．０１、６１％低下）の低下による、ＡＰＡＰ誘発性肝臓損傷からの有意な防御を伴った。さらに、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ遺伝子解析で、急性肝臓損傷では、Ｌｙ６Ｃ＋ＣＣＲ２＋単球由来マクロファージにおけるケモカイン、ケモカイン受容体、及びトール様受容体の発現が、それらのＬｙ６Ｃ−ＣＣＲ２−の対応するものと比較して上方制御されていることが明らかになった。次に、骨髄由来単球の養子移入がＡＰＡＰ誘発性肝臓損傷を悪化させ、ＡＬＦにおけるＣＣＲ２＋単球の炎症性表現型をさらに裏付けた。
【０３２８】
結論：ＣＶＣは、急性肝臓損傷のモデルにおける肝臓への炎症性単球の浸潤の強力な阻害剤である。さらに、ＣＶＣは、アセトアミノフェンの過剰摂取後の肝臓損傷を制限するための有望な治療選択肢であると見なされうる。
【０３２９】
実施例３０：ＣＣＲ２＋浸潤単球は、アセトアミノフェン誘発性急性肝臓損傷を助長する−ＣＣＲ２及びＣＣＬ２の阻害と治療との関連
背景及び目的：アセトアミノフェン（ＡＰＡＰ）中毒に続く肝臓損傷は、急性肝不全（ＡＬＦ）の主要なコースの１つである。ＡＰＡＰは、肝細胞の壊死を引き起こし、その後クッパー細胞（ＫＣ）のような常在免疫細胞の活性化、各種ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２）の放出、及び免疫細胞浸潤（例えば、単球）が続く。我々は、ＣＣＲ２＋単球がＡＰ
ＡＰ誘発性損傷を助長すると仮定し、ＣＣＲ２またはＣＣＬ２のいずれかを薬理学的に阻害することの治療可能性を調べた。
【０３３０】
方法：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ（ＷＴ）及びＣｃｒ２−／−マウスを、ＡＰＡＰの静脈注射（２５０ｍｇ／ｋｇ体重）によってＡＬＦにした。肝臓損傷と免疫細胞表現型は、Ｃｃｒ２−／−及びＷＴマウス、ならびに強力なＣＣＬ２阻害剤であるｍＮＯＸ−Ｅ３６を皮下注射された、または、経口ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストのセニクリビロック（ＣＶＣ）で処理されたＷＴマウスで分析した。両薬剤のヒトでの対応は、現在異なる適応症（それぞれ、糖尿病性腎症またはＮＡＳＨ）の第ＩＩ相治験で試験されている。
【０３３１】
結果：Ｃｃｒ２−／−マウスは、ＡＰＡＰ注射の１２時間後、ＷＴマウスと比較して、組織学及びＡＬＴ値の低下によって判断される肝臓損傷の有意な減少を示した（ｐ＜０．０５、図６３）。フローサイトメトリー分析によって、Ｃｃｒ２−／−マウスの肝臓において炎症性Ｌｙ６Ｃ＋単球由来のマクロファージの数が有意に減少したことが分かった一方、好中球や他の免疫細胞のサブセットはＷＴマウスと同様のままであった。肝臓のＩＬ１β、ＴＮＦ−α、及びＣＣＬ２はＷＴ及びＣｃｒ２−／−マウスの両方で同様に増加したが、肝マクロファージでの差次的マーカー発現（ＣＤ１ｄ、ＣＤ６８）と一緒に、ＩＬ１０はＣｃｒ２−／−マウス由来の肝臓でより高かった（ｐ＜０．０５）。ともに薬理学的阻害剤であるｍＮＯＸ−Ｅ３６またはＣＶＣは、ＡＰＡＰ損傷肝での単球蓄積を有意に減少させることができ、肝臓障害からの著しい防御をもたらした（ＡＬＴレベル、ｍＮＯＸではｐ＜０．０５及びＣＶＣではｐ＜０．０１）。
【０３３２】
結論：ケモカイン受容体ＣＣＲ２またはそのリガンドＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）のいずれかを阻害することによる炎症性単球の有害な作用を標的にすることは、アセトアミノフェンの過剰摂取後の肝臓損傷を制限するための有望な治療選択肢である。
【０３３３】
実施例３１：肝及び腎線維症の動物モデルにおける二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストであるセニクリビロックの抗線維化効果
背景及び目的：ＣＣケモカイン受容体タイプ２（ＣＣＲ２）及び５（ＣＣＲ５）ならびにＣＣＬ２及びＣＣＬ５を含むそれらのリガンド間の相互作用は、単球／マクロファージ動員及び組織浸潤の促進、ならびに肝星細胞活性化によって線維形成を媒介する。セニクリビロック（ＣＶＣ）は、両方の受容体に対してナノモル効力を有する経口の二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５アンタゴニストである。ＣＶＣの抗炎症及び抗線維化効果を、炎症及び線維症の前臨床モデルの範囲で評価した。
【０３３４】
方法：単球／マクロファージ動員は、チオグリコール酸誘発性腹膜炎のマウスモデルにおいて、インビボで評価した。ＣＣＬ２誘発走化性は、マウス単球にてエキソビボで評価した。ＣＶＣの抗線維化効果は、チオアセトアミド誘発性肝線維症のラットモデルならびに食餌性非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）及び腎線維症のマウスモデルで評価した。試験評価には、体重及び肝／腎重量、肝機能検査、肝／腎の形態学及びコラーゲン沈着、線維形成遺伝子及びタンパク質発現、ならびに薬物動態解析を含めた。
【０３３５】
結果：ＣＶＣは、インビボでの単球／マクロファージ動員及びエキソビボでの単球遊走をともに減少させた。ＣＶＣは、３つの線維症の動物モデルにわたって、コラーゲン沈着（ｐ＜０．０５）、ならびにコラーゲン１型タンパク質及びｍＲＮＡ発現の有意な減少で抗線維化効果を示した。ＮＡＳＨモデルでは、ＣＶＣは非アルコール性脂肪肝疾患の活動性スコアを有意に減少させた（対照に対してｐ＜０．０５）。ＣＶＣ処理は、体重または肝／腎重量に顕著な影響を与えなかった。
【０３３６】
結論：ＣＶＣは、動物の線維症モデルの範囲内で抗炎症及び抗線維化活性を示し、ヒト
の線維症試験を支持した。ＮＡＳＨ及び肝線維症の成人での第２ｂ相試験は現在進行中である（ＣＥＮＴＡＵＲ試験６５２−２−２０３；ＮＣＴ０２２１７４７５）。
【０３３７】
本明細書における詳細な説明は、本発明の様々な態様及び実施形態を説明するが、別段の指示がない限り、これらはいずれも限定することを意図しない。実際、本開示を読んだ当業者は、別段の指示がない限り、すべてが本発明の一部であると見なすべきである、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなくなされうる変形、変更、ならびに修正を想定するであろう。出願者らは、従って、本明細書に記載の本発明は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることを想定する。
参考文献：
１.Ｓａｉｍａｎ  Ｙ，  Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ＳＬ．  Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｈ
ｅｍｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｉｖｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ．  ２０１２；３：２１３．
２.Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ  ＨＷ，  Ｔａｃｋｅ  Ｆ．  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  
ｏｆ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｅｌｌ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｉｎ  ｌｉｖｅｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ．  ２０１１；１０：５０９−５３６．
３.Ｓｅｋｉ  Ｅ，  Ｄｅ  Ｍｉｎｉｃｉｓ  Ｓ，  Ｇｗａｋ  ＧＹ，  Ｋｌｕｗｅ  
Ｊ，  Ｉｎｏｋｕｃｈｉ  Ｓ，  Ｂｕｒｓｉｌｌ  ＣＡ，  Ｌｌｏｖｅｔ  ＪＭ，  Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＤＡ，  Ｓｃｈｗａｂｅ  ＲＦ．  ＣＣＲ１  ａｎｄ  ＣＣＲ５  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００９；１１９：１８５８−１８７０．
４.Ｓｅｋｉ  Ｅ，  ｄｅ  Ｍｉｎｉｃｉｓ  Ｓ，  Ｉｎｏｋｕｃｈｉ  Ｓ，  Ｔａｕ
ｒａ  Ｋ，  Ｍｉｙａｉ  Ｋ，  ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊｅｎ  Ｎ，  Ｓｃｈｗａｂｅ  ＲＦ，  Ｂｒｅｎｎｅｒ  ＤＡ．  ＣＣＲ２  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ２００９；５０：１８５−１９７．
５.Ｍｉｕｒａ  Ｋ，  Ｙａｎｇ  Ｌ，  ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊｅｎ  Ｎ，  Ｏｈｎｉｓ
ｈｉ  Ｈ，  Ｓｅｋｉ  Ｅ．  Ｈｅｐａｔｉｃ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＣＣＲ２．  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２０１２；３０２：Ｇ１３１０−１３３１．
６.Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｃ，  Ｃｏｕｔｏｎ  Ｄ，  Ｃｏｕｔｙ  ＪＰ，  Ａｎｓｏｎ
Ｍ，  Ｃｒａｉｎ  ＡＭ，  Ｂｉｚｅｔ  Ｖ，  Ｒｅｎｉａ  Ｌ，  Ｐｏｌ  Ｓ，  Ｍａｌｌｅｔ  Ｖ，  Ｇｉｌｇｅｎｋｒａｎｔｚ  Ｈ．  Ｄｕａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＣＲ２  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２００９；１７４：１７６６−１７７５．
７.Ｘｉａ  Ｙ，  Ｅｎｔｍａｎ  ＭＬ，  Ｗａｎｇ  Ｙ．  ＣＣＲ２  ｒｅｇｕｌａ
ｔｅｓ  ｔｈｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ  ｉｎ  ｒｅｎａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ２０１３；  ８（１０）：  ｅ７７４９３．  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００７７４９３
８.Ｋａｒｌｍａｒｋ  ＫＲ，  Ｗａｓｍｕｔｈ  ＨＥ，  Ｔｒａｕｔｗｅｉｎ  Ｃ，
Ｔａｃｋｅ  Ｆ．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｅｌｌ
ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｉｖｅｒ
ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ
Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．  ２００８；  ２：  ２３３−２４２
９.Ｖｉｅｌｈａｕｅｒ  Ｖ，  Ａｎｄｅｒｓ  Ｈ−Ｊ，  Ｍａｃｋ  Ｍ，  Ｃｉｈａ
ｋ  Ｊ，  Ｓｔｒｕｔｚ  Ｆ，  Ｓｔａｎｇａｓｓｉｎｇｅｒ  Ｍ，  Ｌｕｃｋｏｗ  Ｂ，  Ｇｒｏｎｅ  Ｈ−Ｊ，  Ｓｃｈｌｏｎｄｏｒｆｆ  Ｄ．  Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ：  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＣ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２−  ａｎｄ  ５−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ．  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ２００１；１２：１１７３−１１８７．
１０.Ｓｅｇｅｒｅｒ  Ｓ，  Ｍａｃｋ  Ｍ，  Ｒｅｇｅｌｅ  Ｈ，  Ｋｅｒｊａｓｃ
ｈｋｉ  Ｄ，  Ｓｃｈｌｏｎｄｏｒｆｆ  Ｄ．  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃ−Ｃ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｋｉｄｎｅｙ
ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  １９９９；  ５６：５２−６４．
１１.Ｗａｉ  Ｃ−Ｔ，  Ｇｒｅｅｎｓｏｎ  Ｊ，  Ｆｏｎｔａｎａ  Ｒ，  Ｋａｌｂ
ｆｌｅｉｓｃｈ  Ｊ，  Ｍａｒｒｅｒｏ  Ｊ，  Ｃｏｎｊｅｅｖａｒａｍ  Ｈ，  Ｌｏｋ
Ａ．  Ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ  ｉｎｄｅｘ  ｃａｎ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｂｏｔｈ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ．
Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００３；３８：５１８−５２６．
１２.Ｖａｌｌｅｔ−Ｐｉｃｈａｒｄ  Ａ，  Ｍａｌｌｅｔ  Ｖ，  Ｎａｌｐａｓ  Ｂ
，  Ｖｅｒｋａｒｒｅ  Ｖ，  Ｎａｌｐａｓ  Ａ，  Ｄｈａｌｌｕｉｎ−Ｖｅｎｉｅｒ  Ｖ，  Ｆｏｎｔａｉｎｅ  Ｈ，  Ｐｏｌ  Ｓ．  ＦＩＢ−４：  ａｎ  ｉｎｅｘｐｅｎｓｉｖｅ  ａｎｄ  ａｃｃｕｒａｔｅ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ＨＣＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｔｈ  ｌｉｖｅｒ  ｂｉｏｐｓｙ  ａｎｄ  ＦｉｂｒｏＴｅｓｔ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００７；４６：３２−３６．
１３.Ｓａｎｄｌｅｒ  ＮＧ，  Ｗａｎｄ  Ｈ，  Ｒｏｑｕｅ  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．  
Ｐｌａｓｍａ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＤ１４  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ＨＩＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  ＪＩＤ  ２０１１；２０３：７８０−７９０．
１４.Ｂｒｅｎｃｈｌｅｙ  Ｊ，  Ｐｒｉｃｅ  ＤＡ，  Ｓｃｈａｃｋｅｒ  ＴＷ，  
Ａｓｈｅｒ  ＴＥ，  Ｓｉｌｖｅｓｔｒｉ  Ｇ，  Ｒａｏ  Ｓ，  Ｋａｚｚａｚ  Ｚ，  Ｂｏｒｎｓｔｅｉｎ  Ｅ，  Ｌａｍｂｏｔｔｅ  Ｏ，  Ａｌｔｍａｎｎ  Ｄ，  Ｂｌａｚａｒ  ＢＲ，  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｂ，  Ｔｅｉｘｅｉｒａ−Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｌ，  Ｌａｎｄａｙ  Ａ，  Ｍａｒｔｉｎ  ＪＮ，  Ｈｅｃｈｔ  ＦＭ，  Ｐｉｃｋｅｒ  ＬＪ，  Ｌｅｄｅｒｍａｎ  ＭＭ，  Ｄｅｅｋｓ  ＳＧ，  Ｄｏｕｅｋ  ＤＣ．  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｓ  ａ  ｃａｕｓｅ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ＨＩＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００６；１２：１３６５−１３７１．
１５.Ｖａｊｒｏ  Ｐ，  Ｐａｏｌｅｌｌａ  Ｇ，  Ｆａｓａｎｏ  Ａ．  Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｔａ  ａｎｄ  Ｇｕｔ−Ｌｉｖｅｒ  Ａｘｉｓ：  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ  ｏｎ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  Ｏｂｅｓｉｔｙ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ＪＰＧＮ  ２０１３；５６：  ４６１−４６８．
１６.Ｒｏｈ  ＹＳ，  Ｓｅｋｉ  Ｅ．  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  
ｉｎ  ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２０１３；  ２８：  ３８−４２．
１７.Ｉｌａｎ  Ｙ．  Ｌｅａｋｙ  ｇｕｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｌｉｖｅｒ：  Ａ  ｒ
ｏｌｅ  ｆｏｒ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２０１２  Ｊｕｎｅ  ７；  １８：  ２６０９−２６１８．
１８.Ｐｅｔｒａｓｅｋ  Ｊ，  Ｍａｎｄｒｅｋａｒ  Ｐ，  Ｓｚａｂｏ  Ｇ．  Ｔｏ
ｌｌ−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ
Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ２０１０，  Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ７１０３８１，  １２  ｐａｇｅｓ．  ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１０／７１０３８１．
１９.Ｓａｎｄｌｅｒ  Ｎ，  Ｋｏｈ  Ｃ，  Ｒｏｑｕｅ  Ａ，  Ｅｃｃｌｅｓｔｏｎ
Ｊ，  Ｓｉｅｇｅｌ  Ｒ，  Ｄｅｍｉｎｏ  Ｍ，  Ｋｌｅｉｎｅｒ  Ｄ，  Ｄｅｅｋｓ
Ｓ，  Ｌｉａｎｇ  Ｔ−Ｊ，  Ｈｅｌｌｅｒ  Ｔ，  Ｄｏｕｅｋ  Ｄ．  Ｈｏｓｔ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｐｒｅｄｉｃｔｓ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  ＨＢＶ  ｏｒ  ＨＣＶ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２０１１；１４１：１２２０−１２３０．  ｄｏｉ：１０．１０５３／ｊ．ｇａｓｔｒｏ．２０１１．０６．０６３．
２０.Ｗｉｅｓｔ  Ｒ，  Ｌａｗｓｏｎ  Ｍ，  Ｇｅｕｋｉｎｇ  Ｍ．  Ｐａｔｈｏｌ
ｏｇｉｃａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｌｉｖｅｒ  ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ．  Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２０１４；  ６０（１）：１９７−２０９．
２１.Ｓｈａｎａｂ  ＡＡ，  Ｓｃｕｌｌｙ  Ｐ，  Ｃｒｏｓｂｉｅ  Ｏ，  Ｂｕｃｋ
ｌｅｙ  Ｍ，  Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ  Ｌ，  Ｓｈａｎａｈａｎ  Ｆ，  Ｇａｚａｒｅｅｎ  Ｓ，  Ｍｕｒｐｈｙ  Ｅ，  Ｑｕｉｇｌｅｙ  ＥＭ．  Ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｏｖｅｒｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ８．  Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  Ｓｃｉ  ２０１１；  ５６：  １５２４−１５３４
２２.Ｈｅｎａｏ−Ｍｅｊｉａ  Ｊ，  Ｅｌｉｎａｖ  Ｅ，  Ｊｉｎ  Ｃ，  Ｈａｏ  
Ｌ，  Ｍｅｈａｌ  ＷＺ，  Ｓｔｒｏｗｉｇ  Ｔ，  Ｔｈａｉｓｓ  ＣＡ，  Ｋａｕ  ＡＬ，  Ｅｉｓｅｎｂａｒｔｈ  ＳＣ，  Ｊｕｒｃｚａｋ  ＭＪ，  Ｃａｍｐｏｒｅｚ  Ｊ−Ｐ，  Ｓｈｕｌｍａｎ  ＧＩ，  Ｇｏｒｄｏｎ  ＪＩ，  Ｈｏｆｆｍａｎ  ＨＭ；  Ｆｌａｖｅｌｌ  ＲＡ．  Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＮＡＦＬＤ  ａｎｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ２０１２；  ４９２：  １７９−１８５．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１０８０９．
２３.Ｋｌｉｂａｎｏｖ，  Ｏｌｇａ  Ｍ．；  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  Ｓｈａｎｎｏｎ
Ｈ．；  Ｉｌｅｒ，  Ｃａｍｅｒｏｎ  Ａ  （２０１０）．  ”Ｃｅｎｉｃｒｉｖｉｒｏｃ，  ａｎ  ｏｒａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ＣＣＲ５  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｆｏｒ
ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＨＩＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  １１  （８）：  ９４０−９５０．
２４.Ｋｌｅｉｎｅｒ  ＤＥ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  Ｄｅｓｉ
ｇｎ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ；  ２００５；４１：１３１３−１３２１．
２５.Ｆｕｊｉｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍ
ｂ．  ２００９；１６：８９３．
２６.Ｒａｎｇｗａｌａ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  ２０１１；  ２
２４：４０１．
２７.Ｓｅｋｉ  ｅｔ  ａｌ．ＣＣＲ１  ａｎｄ  ＣＣＲ５  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｈｅｐ
ａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００９；  １１９（７）：１８５８−１８７０．
２８.Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ
ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｌｉｖｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ．  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ＆  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；  ２０１２；  ９：２９６−３０１．
２９.Ｋａｒｌｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎ
ｔｅｒｏｌ．  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ２（２），  ２３３−２４２  （２００８）．
３０.Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｕａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＣＲ２
ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２００９；１７４：１７６６−１７７５．
３１.Ｂｅｒｒｅｓ  Ｍ−Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｈｅ
ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｃｃｌ５  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎ
Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１０；  １２０（１１）：  ４１２９−４１４０
３２.Ｂｅｎｙｏｎ，  ＲＣ  ａｎｄ  ＭＪ  Ａｒｔｈｕｒ，  Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕ
ｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅｌｌａｔｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｓｅｍｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．  ２００１  Ａｕｇ；２１（３）：３７３−８４．
３３.Ｓｈｅｔｈ  ＳＧ，  Ｃｈｏｐｒａ  Ｓ．  Ｎａｔｕｒａｌ  ｈｉｓｔｏｒｙ  
ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ａｄｕｌｔｓ，  ＵｐＴｏＤａｔｅ；  ２０１４
３４.Ｃｈａｌａｓａｎｉ  Ｎ，  Ｙｏｕｎｏｓｓｉ  Ｚ，  Ｌａｖｉｎｅ  ＪＥ，  
Ｄｉｅｈｌ  ＡＭ，  Ｂｒｕｎｔ  ＥＭ，  Ｃｕｓｉ  Ｋ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ
ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ
ｂｙ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ
２０１２；５５：２００５−２３．
３５.ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ  ＡＪ．  Ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｆｅａｔｕｒｅｓ
，  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｎａｔｕｒａｌ  ｈｉｓｔｏｒｙ  ｏｆ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｌｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ  ２００４；８（３）：５２１−３３．
３６.Ｌｏｏｍｂａ  Ｒ，  Ｓｉｒｌｉｎ  ＣＢ，  Ｓｃｈｗｉｍｍｅｒ  ＪＢ，  Ｌ
ａｖｉｎｅ  ＪＥ．  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００９；５０（４）：１２８２−９３．
３７.Ｔｏｒｒｅｓ  ＤＭ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＣＤ，  Ｈａｒｒｉｓｏｎ  ＳＡ．
Ｆｅａｔｕｒｅｓ，  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０１２；１０（８）：８３７−５８．
３８.Ｓｃｈｗｅｎｇｅｒ  ＫＪ，  Ａｌｌａｒｄ  ＪＰ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐ
ｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２０１４；２０（７）：１７１２−２３．
３９.Ｋｏｏ  ＳＨ．  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓ
ｅａｓｅ：  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ．  Ｃｌｉｎ  Ｍｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０１３；１９（３）：２１０−５．
４０.Ａｔｔａｒ  ＢＭ，  Ｖａｎ  Ｔｈｉｅｌ  ＤＨ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｏｎｃ
ｅｐｔｓ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｉｎ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２０１３；２０１３：４８１８９３
４１.Ｂａｓａｒａｎｏｇｌｕ  Ｍ，  Ｂａｓａｒａｎｏｇｌｕ  Ｇ，  Ｓｅｎｔｕｒ
ｋ  Ｈ．  Ｆｒｏｍ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｔｏ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：  ａ  ｔａｌｅ  ｏｆ  ”ｓｅｃｏｎｄ  ｈｉｔ”．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ
２０１３；１９（８）：１１５８−６５．
４２.Ｃｏｈｅｎ  ＪＣ，  Ｈｏｒｔｏｎ  ＪＤ，  Ｈｏｂｂｓ  ＨＨ．  Ｈｕｍａｎ
ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ｏｌｄ  ｑｕｅｓｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１１；３３２（６０３７）：１５１９−２３．
４３.Ｍａｔｔｅｏｎｉ  ＣＡ，  Ｙｏｕｎｏｓｓｉ  ＺＡ，  Ｇｒａｍｌｉｃｈ  Ｔ
，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：  Ａ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １９９９；１１６（６）：１４１３−１４１９
４４.Ｗｏｒｌｄ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ  
Ｇｌｏｂａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ｊｕｎｅ  ２０１２．
４５.Ａｈｍｅｄ  ＭＨ，  Ａｂｕ  ＥＯ，  Ｂｙｒｎｅ  ＣＤ．  Ｎｏｎ−Ａｌｃｏ
ｈｏｌｉｃ  Ｆａｔｔｙ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  （ＮＡＦＬＤ）：  ｎｅｗ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ  ａｎｄ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｂｕｒｄｅｎ  ｆｏｒ  ｈｅａｌｔｈ  ａｕｔｈｏｒｉｔｉｅｓ？  Ｐｒｉｍ  Ｃａｒｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ．  ２０１０；４：１２９−３７．
４６.Ｖｅｒｎｏｎ  Ｇ，  Ｂａｒａｎｏｖａ  Ａ，  Ｙｏｕｎｏｓｓｉ  ＺＭ．  Ｓ
ｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ：  ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｎａｔｕｒａｌ  ｈｉｓｔｏｒｙ  ｏｆ  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔｓ．  Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１１；３４：２７４−８５．
４７.Ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａ
ｕｓｔｒａｌｉａ／Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｊａｎｕａｒｙ  ２０１３．  ｈｔｔｐ：／／ｓｔａｔｉｃ．ｓｑｕａｒｅｓｐａｃｅ．ｃｏｍ／ｓｔａｔｉｃ／５０ｆｆ０８０４ｅ４ｂ００７ｄ５ａ９ａｂｅ０ａ５／ｔ／５３３２１ａａｅｅ４ｂ０９ｆ９６７ｅｂ０ｃ７ｅ５／１３９５７９２５５８６８４／ｇｅｓａ２０１３＿ｒｅｖｉｓｅｄ％５Ｂ１％５Ｄ．ｐｄｆ
４８.Ｄｉｘｏｎ  ＪＢ，  Ｂｈａｔｈａｌ  ＰＳ，  Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ＰＥ．  Ｎｏ
ｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｌｉｖｅｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｖｅｒｅｌｙ  ｏｂｅｓｅ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  ２００１；１２１：９１−１００．
４９.Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＣＤ，  Ｓｔｅｎｇｅｒ  Ｊ，  Ａｓｉｋｅ  ＭＩ，  Ｔｏ
ｒｒｅｓ  ＤＭ，  Ｓｈａｗ  Ｊ，  Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ｏｆ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅ
ａｓｅ  ａｎｄ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ａｍｏｎｇ  ａ  ｌａｒｇｅｌｙ  ｍｉｄｄｌｅ−ａｇｅｄ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ａｎｄ  ｌｉｖｅｒ  ｂｉｏｐｓｙ：  ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２０１１；１４０：１２４−１３１．
５０.Ｓｃｈａｔｔｅｎｂｅｒｇ  ＪＭ，  Ｓｃｈｕｐｐａｎ  Ｄ．  Ｎｏｎａｌｃｏ
ｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：  ｔｈｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｏｆ  ａ  ｇｌｏｂａｌ  ｅｐｉｄｅｍｉｃ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ
Ｌｉｐｉｄｏｌ  ２０１１；２２：４７９−８８．
５１.Ｂａｈｒａｍｉ  Ｈ．  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  
ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ
Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２００５；１１：３８０８−３８０９．
５２.Ｔｉｎｉａｋｏｓ  ＤＧ，  Ｖｏｓ  ＭＢ，  Ｂｒｕｎｔ  ＥＭ．  Ｎｏｎａｌ
ｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐａｔｈｏｌ  ２０１０；５：１４５−７１．
５３.Ｖａｊｒｏ  Ｐ，  Ｐａｏｌｅｌｌａ  Ｇ，  Ｆａｓａｎｏ  Ａ．  Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｔａ  ａｎｄ  ｇｕｔ−ｌｉｖｅｒ  ａｘｉｓ：  ｔｈｅｉｒ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ  ｏｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｂｅｓｉｔｙ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｎｕｔｒ  ２０１３；５６：４６１−８．
５４.Ｒｏｈ  ＹＳ，  Ｓｅｋｉ  Ｅ．  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  
ｉｎ  ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０１３；２８  Ｓｕｐｐｌ  １：３８−４２．
５５.Ｉｌａｎ  Ｙ．  Ｌｅａｋｙ  ｇｕｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｌｉｖｅｒ：  ａ  ｒ
ｏｌｅ  ｆｏｒ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２０１２；１８：２６０９−１８．
５６.Ｍｏｓｃｈｅｎ  ＡＲ，  Ｋａｓｅｒ  Ｓ，  Ｔｉｌｇ  Ｈ．  Ｎｏｎ−ａｌｃ
ｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：  ａ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ−ｄｒｉｖｅｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ２０１３；２４：５３７−４５．
５７.Ｓａｎｙａｌ  ＡＪ，  Ｃａｍｐｂｅｌｌ−Ｓａｒｇｅｎｔ  Ｃ，  Ｍｉｒｓｈ
ａｈｉ  Ｆ，  Ｒｉｚｚｏ  ＷＢ，  Ｃｏｎｔｏｓ  ＭＪ，  Ｓｔｅｒｌｉｎｇ  ＲＫ，
ｅｔ  ａｌ．  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００１；１２０：１１８３−９２．
５８.ＭｃＣｌａｉｎ  ＣＪ，  Ｍｏｋｓｈａｇｕｎｄａｍ  ＳＰ，  Ｂａｒｖｅ  Ｓ
Ｓ，  Ｓｏｎｇ  Ｚ，  Ｈｉｌｌ  ＤＢ，  Ｃｈｅｎ  Ｔ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ａｌｃｏｈｏｌ  ２００４；３４：６７−７９．
５９.Ｄａｙ  ＣＰ，  Ｓａｋｓｅｎａ  Ｓ．  Ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅ
ａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ．  ２００２；１７  Ｓｕｐｐｌ  ３：Ｓ３７７−Ｓ８４．
６０.Ｍａｒｒａ  Ｆ，  Ｇａｓｔａｌｄｅｌｌｉ  Ａ，  Ｓｖｅｇｌｉａｔｉ  Ｂａ
ｒｏｎｉ  Ｇ，  Ｔｅｌｌ  Ｇ，  Ｔｉｒｉｂｅｌｌｉ  Ｃ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂ
ａｓｉｓ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２００８；１４：７２−８１
６１.Ｃｈａｒｌｔｏｎ  ＭＲ，  Ｂｕｒｎｓ  ＪＭ，  Ｐｅｄｅｒｓｏｎ  ＲＡ，  
Ｗａｔｔ  ＫＤ，  Ｈｅｉｍｂａｃｈ  ＪＫ，  Ｄｉｅｒｋｈｉｓｉｎｇ  ＲＡ．  Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ａｎｄ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｏｆ  ｌｉｖｅｒ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  ２０１１；１４１：１２４９−５３．
６２.Ｖａｔｃｈｅ  Ｇ．  Ａｇｏｐｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｌｉｖｅｒ  Ｔｒａｎｓ
ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ２０１２；  ２５６（４）；  ６２４−６３３．
６３.ＭｃＣｕｌｌｏｕｇｈ  ＡＪ．  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍ
ｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＵＳＡ．  Ｊ  Ｄｉｇ  Ｄｉｓ．
２０１１；１２：３３３−４０．
【図１】
2020111586.tif 000051
【図２】
2020111586.tif 000052
【図３】
2020111586.tif 000053
【図４】
2020111586.tif 000054
【図５】
2020111586.tif 000055
【図６】
2020111586.tif 000056
【図７】
2020111586.tif 000057
【図８】
2020111586.tif 000058
【図９】
2020111586.tif 000059
【図１０Ａ】
2020111586.tif 000060
【図１０Ｂ】
2020111586.tif 000061
【図１１】
2020111586.tif 000062
【図１２】
2020111586.tif 000063
【図１３】
2020111586.tif 000064
【図１４】
2020111586.tif 000065
【図１５Ａ】
2020111586.tif 000066
【図１５Ｂ】
2020111586.tif 000067
【図１６】
2020111586.tif 000068
【図１７Ａ】
2020111586.tif 000069
【図１７Ｂ】
2020111586.tif 000070
【図１７Ｃ】
2020111586.tif 000071
【図１８Ａ−Ｄ】
2020111586.tif 000072
【図１８Ｅ−Ｆ】
2020111586.tif 000073
【図１９】
2020111586.tif 000074
【図２０】
2020111586.tif 000075
【図２１】
2020111586.tif 000076
【図２２】
2020111586.tif 000077
【図２３】
2020111586.tif 000078
【図２４】
2020111586.tif 000079
【図２５】
2020111586.tif 000080
【図２６】
2020111586.tif 000081
【図２７】
2020111586.tif 000082
【図２８】
2020111586.tif 000083
【図２９】
2020111586.tif 000084
【図３０】
2020111586.tif 000085
【図３１】
2020111586.tif 000086
【図３２】
2020111586.tif 000087
【図３３Ａ−Ｂ】
2020111586.tif 000088
【図３３Ｃ−Ｄ】
2020111586.tif 000089
【図３４Ａ】
2020111586.tif 000090
【図３４Ｂ】
2020111586.tif 000091
【図３４Ｃ】
2020111586.tif 000092
【図３４Ｄ】
2020111586.tif 000093
【図３４Ｅ】
2020111586.tif 000094
【図３４Ｆ】
2020111586.tif 000095
【図３５】
2020111586.tif 000096
【図３６】
2020111586.tif 000097
【図３７Ａ−Ｂ】
2020111586.tif 000098
【図３７Ｃ】
2020111586.tif 000099
【図３８Ａ】
2020111586.tif 000100
【図３８Ｂ】
2020111586.tif 000101
【図３８Ｃ】
2020111586.tif 000102
【図３９】
2020111586.tif 000103
【図４０】
2020111586.tif 000104
【図４１】
2020111586.tif 000105
【図４２】
2020111586.tif 000106
【図４３】
2020111586.tif 000107
【図４４】
2020111586.tif 000108
【図４５】
2020111586.tif 000109
【図４６】
2020111586.tif 000110
【図４７】
2020111586.tif 000111
【図４８】
2020111586.tif 000112
【図４９】
2020111586.tif 000113
【図５０】
2020111586.tif 000114
【図５１】
2020111586.tif 000115
【図５２】
2020111586.tif 000116
【図５３】
2020111586.tif 000117
【図５４】
2020111586.tif 000118
【図５５】
2020111586.tif 000119
【図５６Ａ】
2020111586.tif 000120
【図５６Ｂ】
2020111586.tif 000121
【図５７Ａ−１】
2020111586.tif 000122
【図５７Ａ−２】
2020111586.tif 000123
【図５７Ｂ−１】
2020111586.tif 000124
【図５７Ｂ−２】
2020111586.tif 000125
【図５７Ｃ−１】
2020111586.tif 000126
【図５７Ｃ−２】
2020111586.tif 000127
【図５８】
2020111586.tif 000128
【図５９】
2020111586.tif 000129
【図６０】
2020111586.tif 000130
【図６１】
2020111586.tif 000131
【図６２】
2020111586.tif 000132
【図６３】
2020111586.tif 000133