(57)【要約】【課題】ヒトＧＦＲα３に結合する抗体およびこれを使用する方法を提供すること。【解決手段】本明細書で開示されるある実施形態によれば、上記抗体は、ヒトＧＦＲα３に結合する完全ヒト型抗体である。本開示の抗体は、１以上のＧＦＲα３生物学的活性と関連する疾患および障害の処置（急性もしくは慢性の疼痛状態、または炎症状態の処置が挙げられる）に有用である。本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片をコードする、単離された核酸分子もまた提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書および図面に記載の物、方法またはシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ヒトグリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）ファミリー受容体α３（ＧＦＲα３）に特異的に結合するヒト抗体およびヒト抗体の抗原結合性断片、ならびにこれら抗体を使用する治療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連技術の言及
グリア細胞由来神経栄養因子関連ファミリーは、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン（ＮＲＴＮ）、アルテミン（ａｒｔｅｍｉｎ；ＡＲＴＮ）およびパーセフィン（ＰＳＰＮ）から構成される。上記ＧＤＮＦファミリーの各メンバーは、形質膜と会合したグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー受容体に結合する。この受容体ファミリーは、ＧＤＮＦファミリー受容体α（ＧＦＲα）といわれる。この受容体ファミリーは、４つの異なるＧＦＲα受容体であるＧＦＲα１〜４から構成される。ＧＤＮＦは、ＧＦＲα１に優先的に結合し、ＮＲＴＮは、ＧＦＲα２に優先的に結合し、ＡＲＴＮは、ＧＦＲα３に優先的に結合し、ＰＳＰＮは、ＧＦＲα４に優先的に結合する。各ＧＤＮＦファミリーリガンドは、ＲＥＴ（「トランスフェクション時に再編成した（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）」）受容体チロシンキナーゼを介してシグナル伝達し、上記ＲＥＴは、癌原遺伝子として初めて発見された。ＲＥＴは、上記リガンドがそのＧＦＲα受容体に最初に結合される場合のみ、ＧＤＮＦファミリーメンバーによって活性化される（Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  （２００２），  ３：３８３−３９４）。
【０００３】
ＡＲＴＮおよびＧＦＲα３はともに、発生中に高度に発現され、交感神経系発生に関与する。成体では、ＧＦＲα３発現は、後根神経節（ＤＲＧ）の感覚ニューロンに主として限定される（Ｏｒｏｚｃｏ，  Ｏ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  （２００１），  １３：２１７７−２１８２）。成体マウスでは、アルテミンは、精巣、子宮、甲状腺、前立腺、および精巣上体において、嗅球ならびに腸および腸間膜の細動脈においても発現される（Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  （２００２），  ３：３８３−３９４；  Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒａｉｎ，  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，  （２００６），
６８：１８１−１９０）。
【０００４】
痛覚過敏症におけるＧＦＲα３およびアルテミンの考え得る役割は、いくつかの研究で既に示された。例えば、齧歯類の後ろ足へのアルテミンタンパク質の注射は、熱痛覚過敏症を引き起こし、この侵害受容は、アルテミンをＮＧＦと共に注射した場合に増強されることが実証された（Ｍａｌｉｎ，  Ｓ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  （２００６），  ２６（３３）：  ８５８８−８５９９）。他の研究は、アルテミンｍＲＮＡ発現がマウス炎症モデルにおいてアップレギュレートされることを示した（Ｅｌｉｔｔ，  Ｃ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，
（２００６），  ２６（３３）：  ８５７８−８５８７）。さらに、他の研究は、アルテミントランスジェニックマウスがＴＲＰＶ１およびＴＲＰＡ１の発現を上昇させ、熱さおよび冷たさに対する行動感受性を増大させたことを示した（Ｅｌｉｔｔ，  Ｃ．Ｍ．，
ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  （２００６），  ２６（３３）：  ８５７８−８５８７）。さらに、内臓知覚過敏におけるＧＦＲα３の考え得る役割は、ＧＦＲα３ノックアウトマウスにおける研究（これによってこれらマウスは、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスと比較して、ＴＮＢＳ（２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸）での結腸内処置後の内臓知覚過敏の減弱を示した）によって示された（Ｔａｎａｋａ，
Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  （２０１１），  ３００：Ｇ４１８−Ｇ４２４）。膵炎と関連する疼痛におけるアルテミンおよびその受容体ＧＦＲα３の考え得る役割はまた、膵頭切除を受けている患者において行われた研究によって示された（Ｃｅｙｈａｎ，  Ｇ．Ｏ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｕｔ，  （２００７），  ５６：５３４−５４４）。前述に基づいて、さらなる研究によって、疼痛／痛覚過敏症および／もしくは過敏症に苦しんでいる患者がＧＦＲα３活性のインヒビターでの処置によって利益を受け得るか否かを決定することが保証される。
【０００５】
ＧＦＲα３を結合する抗体は、ＵＳ  ６，８６１，５０９に記載される。さらに、ＵＳ
６，６７７，１３５は、全長ＧＦＲα３配列を開示しているのに対して、ＧＦＲα３分子のスプライスバリアントは、ＵＳ  ７，０２６，１３８；  ＵＳ２００７／０２３２５３５およびＵＳ２００６／０２１６２８９に記載される。ＵＳ  ７，１３８，２５１は、全長ＧＦＲα３と９９％同一性を有する配列を開示し、この分子に対するヒト化モノクローナル抗体の調製をこの特許で記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第６，８６１，５０９号明細書
【特許文献２】米国特許第６，６７７，１３５号明細書
【特許文献３】米国特許第７，０２６，１３８号明細書
【特許文献４】米国特許出願公開第２００７／０２３２５３５号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２００６／０２１６２８９号明細書
【特許文献６】米国特許第７，１３８，２５１号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  （２００２），  ３：３８３−３９４
【非特許文献２】Ｏｒｏｚｃｏ，  Ｏ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  （２００１），  １３：２１７７−２１８２
【非特許文献３】Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒａｉｎ，  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，  （２００６），  ６８：１８１−１９０
【非特許文献４】Ｍａｌｉｎ，  Ｓ．Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  （２００６），  ２６（３３）：  ８５８８−８５９９
【非特許文献５】Ｅｌｉｔｔ，  Ｃ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  （２００６），  ２６（３３）：  ８５７８−８５８７
【非特許文献６】Ｔａｎａｋａ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．  Ｌｉｖｅｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  （２０１１），  ３００：Ｇ４１８−Ｇ４２４
【非特許文献７】Ｃｅｙｈａｎ，  Ｇ．Ｏ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｕｔ，  （２００７），  ５６：５３４−５４４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の簡単な概要
第１の態様において、本発明は、ヒトＧＦＲα３に結合し、その活性を阻害もしくはブロックする、例えば、グリア細胞株由来神経栄養因子アルテミンへのＧＦＲα３の結合をブロックする、そしておそらく、ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼのその後の活性化をブロックするおよび／もしくはＲＥＴを介するシグナル伝達をブロックするおよび／もしくはＲＥＴ以外のメディエーターを介するシグナル伝達をブロックする、完全ヒト型（fully
human）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）およびその抗原結合性断片を提供する。上記抗
体もしくはその抗原結合性断片は、任意の感覚刺激（圧力、熱さおよび／もしくは冷たさが挙げられるが、これらに限定されない）に対する痛覚過敏症、アロディニアおよび／もしくは過敏症を処置するために有用であり得る。上記抗体はまた、ＧＦＲα３とアルテミンとの相互作用のブロックが望まれる、広い範囲の状態および障害と関連する疼痛／過敏症を処置するために使用され得る。上記抗体はまた、腫瘍細胞の成長、増殖および／もしくは転移を阻害するために使用され得る。
【０００９】
一実施形態では、本発明は、ヒトＧＦＲα３に特異的に結合し、以下の特徴のうちの１つ以上を有する単離された抗体もしくはその抗原結合性断片を提供する：
（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合に約１０−８Ｍ〜約１０−１３Ｍの範囲に及ぶＫＤを示す；
（ｉｉ）約４０ｐＭ〜約１５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ＧＦＲα３のそのリガンドであるアルテミンへの結合のうちの約５０〜１００％をブロックする能力を示す；
（ｉｉｉ）アルテミンとＲＥＴとの混合物で被覆した固体支持体へのＧＦＲα３の結合のうちの約２０％〜約１００％をブロックする能力を示す；
（ｉｖ）約２００ｐＭ〜約５０ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、ＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する；
（ｖ）骨がん疼痛のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて１つ以上の侵害受容応答を阻害もしくは低減する；
（ｖｉ）アルテミン感作熱痛覚過敏（artemin-sensitized  thermal  hyperalgesia）
をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害もしくは低減する；
（ｖｉｉ）変形性関節症のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいてアロディニアを阻害もしくは低減する；
（ｖｉｉｉ）ＲＥＴに対する他のＧＦＲ共受容体と交差反応しない；
（ｉｘ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む；または
（ｘ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
【００１０】
一実施形態では、上記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体からなる群より選択される。
【００１１】
一実施形態では、上記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片は、ヒトＧＦＲα１ともヒトＧＦＲα２とも交差反応しない。
【００１２】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、
（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、
を含む。
【００１３】
一実施形態では、上記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片は、約４０ｐＭ〜約７５０ｐＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ヒトＧＦＲα３のそのリガンドであるアルテミンへの結合のうちの約５０〜９５％をブロックする能力を示す。
【００１４】
一実施形態では、上記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片は、約４００ｐＭ〜約１５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ヒトＧＦＲα３のそのリガンドであるアルテミンへの結合のうちの約７５〜１００％をブロックする。
【００１５】
一実施形態では、上記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片は、約３００ｐＭ〜約５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、ヒトＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する。
【００１６】
一実施形態では、上記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片は、約０．７ｎＭ〜約２．５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、カニクイザルＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する。
【００１７】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列内に含まれる３種の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列内に含まれる３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）と、を含む。
【００１８】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む。
【００１９】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む。
【００２０】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３８１／３８９および３９７／４０５からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列の対を含む。
【００２１】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５０／５８、１４６／１５４、２１０／２１８および２９０／２９８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列の対を含む。
【００２２】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３８３および３９９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３８５および４０１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３８７および４０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３９１および４０７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３９３および４０９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３９５および４１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと、
を含む。
【００２３】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＧＦＲα３への特異的結合に関して、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６および３５４／３６２、３８１／３８９および３９７／４０５からなる群より選択される重鎖および軽鎖の配列の対を含む抗体または抗原結合性断片と競合する。
【００２４】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＧＦＲα３上の、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６および３５４／３６２、３８１／３８９および３９７／４０５からなる群より選択される重鎖および軽鎖の配列の対を含む抗体によって認識されるのと同じエピトープに結合する。
【００２５】
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）であっても、あるいは抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片）のみを含んでいてもよく、機能性に影響を及ぼすよう、例えば、残存エフェクター機能を排除するよう修飾されていてもよい（Ｒｅｄｄｙら、２０００年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：１９２５〜１９３３頁）。
【００２６】
一実施形態では、ヒトＧＦＲα３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列内に含有される３種の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）を含むＨＣＶＲと、および／または配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列内に含有される３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含むＬＣＶＲとを含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法は、本技術分野において周知のものであり、本明細書に開示されている規定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲの同定に使用することができる。ＣＤＲの境界の同定に使用することのできる例示的な慣例として、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般用語において、Ｋａｂａｔ定義は、配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造的ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａアプローチの折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２７３巻：９２７〜９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６巻：９２６８〜９２７２頁（１９８９年）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を同定するために、公開データベースを利用することもできる。
【００２７】
一実施形態では、ヒトＧＦＲα３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２，２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３８７および４０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｂ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３９５および４１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと、
を含む。
【００２８】
一実施形態では、上記の（ａ）および（ｂ）に記載されるとおりの、ヒトＧＦＲα３に特異的に結合する単離された抗体または抗原結合性断片は、
（ｃ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３８３および３９９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｄ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３８５および４０１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｅ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３９１および４０７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｆ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３９３および４０９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
をさらに含む。
【００２９】
一実施形態では、本発明は、次の特徴のうち１種または複数を示す、ヒトＧＦＲα３に特異的に結合する完全ヒト型モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２，２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３８７および４０３からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３９５および４１１からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３８３および３９９からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３８５および４０１からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３９１および４０７からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、���０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３９３および４０９からなる群より選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む；（ｖ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合に約１０−８Ｍ〜約１０−１３Ｍの範囲に及ぶＫＤを示す；（ｖｉ）約４０ｐＭ〜約１５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ＧＦＲα３のそのリガンドであるアルテミンへの結合のうちの約５０〜１００％をブロックする能力を示す；（ｖｉｉ）アルテミンとＲＥＴとの混合物で被覆された固体支持体へのＧＦＲα３の結合のうちの約２０％〜約１００％をブロックする能力を示す；（ｖｉｉｉ）約２００ｐＭ〜約５０ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、ＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する；（ｉｘ）骨がん疼痛のｉｎ  ｖｉｖｏモデルで１つ以上の侵害受容応答を阻害もしくは低減する；（ｘ）アルテミン感作熱痛覚過敏をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害もしくは低減する；（ｘｉ）変形性関節症のｉｎ  ｖｉｖｏモデルでアロディニアを阻害もしくは低減する；（ｘｉｉ）ＲＥＴに対する他のＧＦＲ共受容体と交差反応しない。
【００３０】
一実施形態では、本発明は、表１に示されるもののうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；ならびに表１に示されるもののうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む抗体もしくは抗体の抗原結合性断片を提供する。
【００３１】
一実施形態では、本発明は、表１に示されるもののうちのいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；表１に示されるもののうちのいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；表１に示されるもののうちのいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに表１に示されるもののうちのいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインをさらに含む抗体もしくはその断片を提供する。
【００３２】
ある実施形態では、ヒトＧＦＲα３に特異的に結合する抗体もしくは抗体の抗原結合部分は、表１に示されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列の対を含む。ある実施形態によれば、上記抗体もしくは抗体の抗原結合部分は、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７２／８０、８８／９６、１０４／１１２、１２０／１２８、１３６／１４４、１５２／１６０、１６８／１７６、１８４／１９２、２００／２０８、２１６／２２４、２３２／２４０、２４８／２５６、２６４／２７２、２８０／２８８、２９６／３０４、３１２／３２０、３２８／３３６、３４４／３５２、３６０／３６８、３８７／３９５および４０３／４１１からなる群より選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列の対を含む。
【００３３】
一実施形態では、上記抗体もしくはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号４、６および８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号１２、１４および１６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００３４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２０、２２および２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号２８、３０および３２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００３５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３６、３８および４０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号４４、４６および４８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００３６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号５２、５４および５６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号６０、６２および６４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００３７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号６８、７０および７２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号７６、７８および８０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００３８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号８４、８６および８８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号９２、９４および９６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００３９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１００、１０２および１０４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号１０８、１１０および１１２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１１６、１１８および１２０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号１２４、１２６および１２８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１３２、１３４および１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号１４０、１４２および１４４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１４８、１５０および１５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号１５６、１５８および１６０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１６４、１６６および１６８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号１７２、１７４および１７６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１８０、１８２および１８４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号１８８、１９０および１９２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号１９６、１９８および２００のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号２０４、２０６および２０８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２１２、２１４および２１６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号２２０、２２２および２２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２２８、２３０および２３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号２３６、２３８および２４０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２４４、２４６および２４８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号２５２、２５４および２５６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００４９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２６０、２６２および２６４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号２６８、２７０および２７２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２７６、２７８および２８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号２８４、２８６および２８８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号２９２、２９４および２９６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号３００、３０２および３０４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３０８、３１０および３１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号３１６、３１８および３２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３２４、３２６および３２８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号３３２、３３４および３３６のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３４０、３４２および３４４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号３４８、３５０および３５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３５６、３５８および３６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号３６４、３６６および３６８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３８３、３８５および３８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号３９１、３９３および３９５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、それぞれ、配列番号３９９、４０１および４０３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにそれぞれ、配列番号４０７、４０９および４１１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の配列を含む。
【００５８】
本発明の特定の非限定的な例示的抗体および抗原結合性断片は、それぞれ、表１に示されるアミノ酸配列のいずれかから選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３のドメインを含む。
【００５９】
第２の態様では、本発明は、抗ＧＦＲα３抗体またはその断片をコードする核酸分子を提供する。本発明の核酸を保有する組換え発現ベクターと、係るベクターが導入された宿主細胞もまた、本発明によって包含されており、抗体の産生を可能にする条件下で該宿主細胞を培養し、産生された抗体を回収することにより抗体を産生する方法も同様である。
【００６０】
一実施形態では、本発明は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３８０および３９６からなる群より選択される核酸配列またはその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同性を有する実質的に同一の配列によってコードされるＨＣＶＲを含む抗体またはその断片を提供する。一実施形態では、ＨＣＶＲは、配列番号４９、１４５、２０９および２８９からなる群より選択される核酸配列によってコードされる。
【００６１】
一実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３８８および４０４からなる群より選択される核酸配列またはその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％相同性を有する実質的に同一の配列によってコードされるＬＣＶＲをさらに含む。一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号５７、１５３、２１７および２９７からなる群より選択される核酸配列にコードされる。
【００６２】
一実施形態では、本発明はまた、表１に示される抗体のいずれかからの可変領域内に位置するヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＨＣＤＲ３ドメインと、表１に示されるもののいずれかから選択されるヌクレオチド配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＬＣＤＲ３ドメインとを含む、抗体または抗体の抗原結合性断片を提供する。
【００６３】
一実施形態では、本発明は、表１に示されるもののうちのいずれかのヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；表１に示されるもののうちのいずれかのヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；表１に示されるもののうちのいずれかのヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；ならびに表１に示されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列によってコードされるＬＣＤＲ２ドメインをさらに含む抗体もしくはその断片を提供する。
【００６４】
第３の態様では、本発明は、表２に示す組み合わせによる、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨ生殖系列配列に由来するヌクレオチド配列セグメントにコードされるＨＣＶＲと、ＶＫおよびＪＫ生殖系列配列に由来するヌクレオチド配列セグメントにコードされるＬＣＶＲを含む、ヒト抗ｈＧＦＲα３抗体または抗体の抗原結合断片を特徴とする。
【００６５】
本発明は、修飾されたグリコシル化パターンを有する抗ｈＧＦＲα３抗体を包含する。一部の適用では、望ましくないグリコシル化部位を除去するための修飾、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増加させるためのフコース部分の除去が有用となり得る（Ｓｈｉｅｌｄら、（２００２年）、ＪＢＣ  ２７７巻：２６７３３頁を参照）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を修飾するために、ガラクトシル化の修飾を行うことができる。
【００６６】
第４の態様では、本発明は、ｈＧＦＲα３を特異的に結合する組換えヒト抗体もしくはその断片および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物を特徴とする。一実施形態では、本発明は、本発明の抗体もしくは抗体の抗原結合性断片および第２の治療剤との組合せである組成物を特徴とする。上記第２の治療剤は、有利には本発明の抗体もしくはその断片と組合される任意の薬剤、例えば、疼痛を低減し得る薬剤（例えば、オピオイド、モルフィン、ＣＯＸ−２インヒビター、アスピリン、もしくは他の非ステロイド系抗炎症薬、アセトアミノフェン、デュロキセチン、局所麻酔薬、ＮＭＤＡモジュレーター、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレーター、ＶＲ１アンタゴニスト、およびサブスタンスＰアンタゴニストが挙げられるが、これらに限定されない）であり得る。上記第２の治療剤は、インターロイキン−１（ＩＬ−１）インヒビター、例えば、融合タンパク質（ＵＳ  ６，９２７，０４４）；または抗癲癇薬／抗痙攣薬（例えば、ガバペンチン、プレガバリン、トピラマート）；または三環系抗うつ薬（例えば、アミトリプチリン）；サイトカインインヒビターもしくはアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１８もしくはＩＬ−１８Ｒに対するアンタゴニスト）、または電位開口型ナトリウムチャネルのインヒビター（例えば、Ｎａｖ１．７インヒビター、もしくはＮａｖ１．８インヒビター、もしくはＮａｖ１．９インヒビター）；カリウムチャネルもしくはカルシウムチャネルのインヒビター；あるいはＮＧＦインヒビター（低分子インヒビターもしくは抗ＮＧＦ抗体）、またはＧＦＲα３に対する第２のインヒビターもしくはアンタゴニスト、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）もしくはＴＮＦ受容体インヒビター、ＴＷＥＡＫ（ＴＮＦ関連の弱いアポトーシス誘導物質：ＴＮＦ−ｒｅｌａｔｅｄ  ＷＥＡＫ  ｉｎｄｕｃｅｒ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）のインヒビター、ＲＥＴインヒビター、ＧＤＮＦファミリーリガンドのインヒビター、ＧＦＲα１、ＧＦＲα２もしくはＧＦＲα４のインヒビター、酸感受性イオンチャネル（例えば、ＡＳＩＣ１もしくはＡＳＩＣ３）のインヒビター、または選択的セロトニン再取り込みインヒビター（ＳＳＲＩ）、またはセロトニンノルエピネフリン再取り込みインヒビター（ＳＮＲＩ）、あるいはプロキネティシン（ｐｒｅｋｉｎｅｔｉｃｉｎ）受容体（例えば、ＰＲＯＫ１およびＰＲＯＫ２）のインヒビター、またはカスパーゼインヒビター、ｐ３８インヒビター、ＩＫＫ１／２インヒビター、ＣＴＬＡ−４Ｉｇ、あるいはコルチコステロイドであり得る。上記第２の治療剤は、低分子薬物またはタンパク質／ポリペプチドインヒビターであり得る。上記第２の治療剤は、合成であってもよいし、天然由来であってもよい。上記第２の治療剤は、ＧＦＲα３に対して特異的な第２の抗体、ポリペプチドアンタゴニスト、ＧＦＲα３に対して特異的なｓｉＲＮＡもしくはアンチセンス分子であり得る。本発明の抗体および薬学的に許容され得る組成物を組合せ療法において用いてよいこと、すなわち、抗体および薬学的に許容され得る組成物は、１種または複数の他の所望の治療薬または医学的手順と同時発生的に、その前に、あるいはその後に投与することができることも認められよう。組合せレジメンにおいて用いるための療法（治療薬または手順）の特定の組み合わせは、所望の治療薬および／または手順の適合性ならびに達成されるべき所望の治療効果を考慮に入れるであろう。用いられている療法が、同じ障害に対する所望の効果を達成することができる（例えば、抗体は、同じ障害の処置に使用されている別の薬剤と同時発生的に投与することができる）、あるいは異なる効果を達成することができる（例えば、いずれかの有害効果の制御）ことも認められよう。本明細書において、特定の疾患または状態の処置または防止に通常投与される追加的な治療剤は、処置されている疾患または状態に適切である。
【００６７】
第５の態様では、本発明は、本発明の抗ｈＧＦＲα３抗体もしくは抗体の抗原結合部分を使用してｈＧＦＲα３活性を阻害するための方法を特徴とし、ここで上記方法は、本発明の１種以上の抗体もしくはその抗原結合性断片、または本発明の１種以上の抗体もしくはその抗原結合性断片を含む薬学的組成物の治療上有効な量を投与する工程を包含する。
【００６８】
第６の態様では、本発明は、ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患、または上記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患と関連する疼痛を処置するための方法を特徴とし、上記方法は、本発明の抗ＧＦＲα３抗体もしくは抗体の抗原結合部分、または抗ＧＦＲα３抗体もしくはその断片を含む組成物を、それが必要な患者に投与する工程を包含し、ここで上記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減されるか、または上記状態もしくは疾患と関連した疼痛は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減される。
【００６９】
一実施形態では、本発明は、ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患、または上記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患と関連する疼痛を処置することにおける使用のための、上記単離された抗体もしくはその抗原結合性断片、または本発明の少なくとも１つの抗体もしくはその抗原結合性断片を含む薬学的組成物を提供し、ここで上記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減されるか、または上記状態もしくは疾患と関連した疼痛は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減される。
【００７０】
一実施形態では、本発明は、ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患、または上記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患と関連した疼痛を処置するための医薬の製造における、本発明の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片、または本発明の少なくとも１つの抗体を含む薬学的組成物の使用を提供し、ここで上記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減されるか、または該状態もしくは疾患と関連した疼痛は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減される。
【００７１】
一実施形態では、上記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、機能性疼痛症候群、関節炎、膵炎、変形性関節症、群発頭痛、三叉神経痛、ヘルペス神経痛、全身性神経痛、神経変性性障害、運動障害、神経内分泌障害、運動失調症、内臓痛、急性痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性ニューロパチー、坐骨神経痛、背部痛、頭頚部痛、重篤なもしくは難治性の疼痛、突出痛、術後痛、遺伝性肢端紅痛症、歯痛、鼻炎、がん疼痛、複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病もしくは潰瘍性大腸炎）および膀胱障害からなる群より選択される。
【００７２】
一実施形態では、上記機能性疼痛症候群は、慢性腰痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、線維筋痛症（ＦＭ）、慢性疲労症候群、腹痛、顎関節症（ＴＭＪＤ）、膀胱痛症候群（間質性膀胱炎）、機能性胃腸管障害／症候群、機能性胸痛症候群、片頭痛および緊張型頭痛、慢性骨盤痛症候群、前立腺痛症候群（慢性前立腺炎）、多種化学物質過敏症ならびに湾岸戦争症候群からなる群より選択される。
【００７３】
一実施形態では、上記がん疼痛は、子宮内膜がん、前立腺がん、乳がん、子宮頸がん、肝臓がん、膵臓がん、結腸がん、胃がん、子宮がん、卵巣がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、脳がん、白血病、リンパ腫、骨がんおよびがんの転移と関連する疼痛からなる群より選択されるがんと関連する。
【００７４】
一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、第２の治療剤と組み合わせて患者に投与される。
【００７５】
一実施形態では、上記第２の治療剤は、オピオイド、ＣＯＸ−２インヒビター、局所麻酔薬、ＮＭＤＡモジュレーター、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレーター、ＶＲ１アンタゴニスト、サブスタンスＰアンタゴニスト、第２のＧＦＲα３アンタゴニスト、サイトカインもしくはサイトカイン受容体アンタゴニスト、神経成長因子（ＮＧＦ）インヒビター（低分子インヒビターもしくは抗ＮＧＦ抗体）、アスピリン、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、モルフィン、選択的セロトニン再取り込みインヒビター（ＳＳＲＩ）、セロトニンノルエピネフリン再取り込みインヒビター（ＳＮＲＩ）、三環系抗うつ薬（ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ）、電位開口型ナトリウムチャネル（Ｎａｖ）のインヒビター、カルシウムチャネルインヒビター、カリウムチャネルインヒビター、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）もしくはＴＮＦ受容体インヒビター、ＴＷＥＡＫ（ＴＮＦ関連の弱いアポトーシス誘導物質）のインヒビター、ＲＥＴインヒビター、ＧＤＮＦファミリーリガンドのインヒビター、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１もしくはＡＳＩＣ３）のインヒビター、抗痙攣薬（ガバペンチンもしくはプレガバリン）、プロキネティシン受容体（ＰＲＯＫ１およびＰＲＯＫ２）のインヒビター、カスパーゼインヒビター、ｐ３８インヒビター、ＩＫＫ１／２インヒビター、ＣＴＬＡ−４Ｉｇおよびコルチコステロイドからなる群より選択される。
【００７６】
一実施形態では、上記第２のＧＦＲα３アンタゴニストは、有機低分子、ＧＦＲα３に対して特異的な第２の抗体、ポリペプチドアンタゴニスト、ＧＦＲα３に対して特異的なｓｉＲＮＡもしくはアンチセンス分子である。
【００７７】
一実施形態では、上記サイトカインもしくはサイトカイン受容体アンタゴニストは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）アンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、もしくはＩＬ−１８アンタゴニストである。
【００７８】
上記処置される障害は、ｈＧＦＲα３活性の除去、阻害もしくは低減によって改善されるか、よくなるか、阻害されるかもしくは防止される、任意の疾患もしくは状態である。本発明の治療法によって処置可能な特定の集団としては、急性、慢性、虚血性、ニューロパチー、もしくは炎症性の疼痛、過敏症（例えば、内臓、熱、もしくは機械的刺激（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ）の過敏症）、慢性膵炎、関節炎、片頭痛、群発頭痛、三叉神経痛、ヘルペス神経痛、全身性神経痛、癲癇もしくは癲癇状態、筋緊張症、不整脈、運動障害、神経内分泌障害、運動失調症、炎症性腸疾患、脾臓炎症、胃痛、膀胱三角部炎（ｔｒｉｇｏｎｉｔｉｓ）、類線維腫（ｆｉｂｒｏｉｄｓ）、腹膜炎、便意切迫感（ｆａｅｃａｌ  ｕｒｇｅｎｃｙ）、失禁、直腸過敏症（ｒｅｃｔａｌ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）、内臓痛、変形性関節症疼痛、ヘルペス後神経痛、糖尿病性ニューロパチー、神経根性疼痛、坐骨神経痛、背部痛、頭頚部痛、突出痛、術後痛、がん疼痛、または化学療法誘発性疼痛から選択される疾患、障害、もしくは状態が挙げられる。本発明の治療法によって処置可能な他の状態としては、ヒルシュスプルング病、遺伝性肢端紅痛症、膀胱障害、鼻炎、前立腺がん、乳がん、子宮頸がん、肝臓がん、膵臓がん、結腸がん、胃がん、子宮がん、卵巣がん、腎臓がん、血液の（血液由来の）がん（例えば、白血病もしくはリンパ腫）、骨がん、またはがんの転移と関連する疼痛（例えば、骨へのがんの転移と関連する疼痛）が挙げられる。本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片はまた、以下の状態を処置するために使用され得る：非悪性の急性の、慢性の、もしくは骨折の骨疼痛；関節リウマチ、脊柱管狭窄症；神経障害性腰痛症（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ｌｏｗ  ｂａｃｋ  ｐａｉｎ）；筋筋膜性疼痛症候群；膵臓の疼痛（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ）；慢性頭痛；緊張型頭痛；糖尿病性ニューロパチー；ＨＩＶ関連ニューロパチー；シャルコー・マリー・トゥースニューロパチー（Ｃｈａｒｃｏｔ−Ｍａｒｉｅ  Ｔｏｏｔｈ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）；遺伝性感覚性ニューロパチー；末梢神経損傷；神経腫痛（ｐａｉｎｆｕｌ  ｎｅｕｒｏｍａｓ）；異所性の近位および遠位の分泌（ｐｒｏｘｉｍａｌ  ａｎｄ  ｄｉｓｔａｌ  ｄｉｓｃｈａｒｇｅ）；神経根症；化学療法誘発性神経障害性疼痛；放射線療法誘発性神経障害性疼痛；乳房切除術後疼痛；中枢性疼痛；脊髄損傷疼痛；脳卒中後疼痛；視床痛；複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ、反射性交感神経性ジストロフィーとしても公知）；幻肢痛；難治性疼痛；急性筋骨格性疼痛；関節痛；急性痛風疼痛；機械的刺激による腰痛症（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｌｏｗ  ｂａｃｋ  ｐａｉｎ）；頚部痛；腱炎；損傷性／運動性の疼痛；腹痛；腎盂腎炎；虫垂炎；胆嚢炎；腸閉塞；ヘルニア；他；胸痛（心臓痛を含む）；骨盤痛、腎疝痛、急性の陣痛（ａｃｕｔｅ  ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ  ｐａｉｎ）（陣痛を含む）；帝王切開の疼痛；熱傷および外傷の疼痛；子宮内膜症；帯状疱疹疼痛；鎌状赤血球貧血（ｓｉｃｋｌｅ  ｃｅｌｌ  ａｎｅｍｉａ）；急性膵炎；突出痛；口腔顔面痛（副鼻腔痛、歯痛を含む）；多発性硬化症の疼痛；癩病の疼痛；ベーチェット病の疼痛；有痛脂肪症；静脈炎の���痛；  ギラン・バレー疼痛；痛む足と動く足症候群（ｐａｉｎｆｕｌ  ｌｅｇｓ  ａｎｄ  ｍｏｖｉｎｇ  ｔｏｅｓ）；ハグルンド症候群；ファブリー病の疼痛；膀胱および尿生殖器疾患；ならびに過活動膀胱（ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｌａｄｄｅｒ）が挙げられる。一実施形態において、本発明の抗体は、機能性疼痛症候群を処置するために使用され得、ここで上記機能性疼痛症候群は、慢性腰痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、線維筋痛症（ＦＭ）、慢性疲労症候群、腹痛、顎関節症（ＴＭＪＤ）、膀胱痛症候群（間質性膀胱炎）、機能性胃腸管障害／症候群、機能性胸痛症候群、片頭痛および緊張型頭痛、慢性骨盤痛症候群、前立腺痛症候群（慢性前立腺炎）、多種化学物質過敏症ならびに湾岸戦争症候群からなる群より選択される。
【００７９】
本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片はまた、腫瘍細胞の成長／増殖、または腫瘍細胞の転移を阻害するために使用され得る。ある実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、がん、または「がんと関連する疼痛」もしくは「がん関連疼痛」（例えば、子宮内膜がん、前立腺がん、乳がん、子宮頸がん、肝臓がん、膵臓がん、結腸がん、胃がん、子宮がん、卵巣がん、腎臓がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、脳がん、血液の（血液由来の）がん（例えば、白血病もしくはリンパ腫）、骨がん、またはがんの転移と関連する疼痛（例えば、骨へのがんの転移と関連する疼痛）が挙げられるが、これらに限定されない）を処置するために使用され得る。「がん関連疼痛」としてはまた、がん状態（例えば、腎細胞癌、膵臓癌、頭頸部がん、悪性神経膠腫、骨肉腫、結腸直腸がん、胃がん、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、甲状腺がん、もしくは黒色腫）とより一般に関連する疼痛が挙げられる。本発明の抗体はまた、がん治療もしくは抗がん医療処置によって引き起こされるかもしくはこれらと関連する疼痛（例えば、化学療法誘発性神経障害性疼痛（例えば、パクリタキセル（タキソールＴＭ）、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））；ニトロソウレア、シクロホスファミド、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、トポテカン、イリノテカン、カルムスチン、エストラムスチン、および白金ベースの化学療法化合物（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、およびイプロプラチン）での処置によって引き起こされるかもしくは上記処置と関連する疼痛））を処置もしくは防止するために有用である。
【００８０】
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
以下の特徴：
（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合に約１０−８Ｍ〜約１０−１３Ｍの範囲に及ぶＫＤを示す；
（ｉｉ）約４０ｐＭ〜約１５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ＧＦＲα３のそのリガンドアルテミンへの結合のうちの約５０〜１００％をブロックする能力を示す；
（ｉｉｉ）アルテミンおよびＲＥＴの混合物で被覆した固体支持体へのＧＦＲα３の結合のうちの約２０％〜約１００％をブロックする能力を示す；
（ｉｖ）約２００ｐＭ〜約５０ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、ＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する；
（ｖ）骨がん疼痛のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおける１以上の侵害受容応答を阻害もしくは低減する；
（ｖｉ）アルテミン感作熱痛覚過敏をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害もしくは低減する；
（ｖｉｉ）変形性関節症のｉｎ  ｖｉｖｏモデルでのアロディニアを阻害もしくは低減する；
（ｖｉｉｉ）ＲＥＴの他のＧＦＲ共受容体と交差反応しない；
（ｉｘ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む；または
（ｘ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、
のうちの１つ以上を有する、ＧＦＲα３に特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目２）
前記抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群より選択される、項目１に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。（項目３）
前記抗体は、ヒトＧＦＲα１ともヒトＧＦＲα２とも交差反応しない、項目１または２のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目４）
前記抗体は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、ならびに（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むヒトモノクローナル抗体である、項目１〜３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目５）
前記抗体は、約４０ｐＭ〜約７５０ｐＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ヒトＧＦＲα３のそのリガンドアルテミンへの結合のうちの約５０〜９５％をブロックする能力を示す、項目１〜４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目６）
前記抗体もしくはその抗原結合性断片は、約４００ｐＭ〜約１５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ヒトＧＦＲα３のそのリガンドアルテミンへの結合のうちの約７５〜１００％をブロックする、項目１〜４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目７）
前記抗体もしくはその抗原結合性断片は、約３００ｐＭ〜約５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、ヒトＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する、項目１〜４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目８）
前記抗体もしくはその抗原結合性断片は、約０．７ｎＭ〜約２．５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、カニクイザルＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する、項目１〜４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目９）
ヒトＧＦＲα３に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ここで該抗体は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列内に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）；ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列内に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１０）
前記抗体もしくは抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、項目９に記載される単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１１）
前記抗体もしくは抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、項目９または１０のいずれかに記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１２）
配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３８１／３８９および３９７／４０５からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列の対を含む、項目９〜１１のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１３）
配列番号５０／５８、１４６／１５４、２１０／２１８および２９０／２９８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列の対を含む、項目１２に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１４）
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３８３および３９９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３８５および４０１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３８７および４０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３９１および４０７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３９３および４０９からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３９５および４１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む、項目９〜１２のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１５）
ヒトＧＦＲα３への特異的結合について、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６および３５４／３６２、３８１／３８９および３９７／４０５からなる群より選択される重鎖配列および軽鎖配列の対を含む抗体もしくは抗原結合性断片と競合する、単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１６）
配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６および３５４／３６２、３８１／３８９および３９７／４０５からなる群より選択される重鎖配列および軽鎖配列の対を含む抗体によって認識される、ヒトＧＦＲα３上の同じエピトープを結合する単離された抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目１７）
項目９〜１４のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片をコードする、単離された核酸分子。
（項目１８）
項目１７に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
（項目１９）
抗ＧＦＲα３抗体もしくはその抗原結合性断片を生成する方法であって、該方法は、項目１８に記載の発現ベクターを単離された宿主細胞へと導入する工程、該細胞を該抗体もしくはその断片の生成を可能にする条件下で増殖させる工程、およびそのように生成された該抗体を回収する工程を包含する、方法。
（項目２０）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および薬学的に許容され得るキャリアもしくは希釈剤を含む、薬学的組成物。
（項目２１）
ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患、または該ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患と関連した疼痛を処置するための方法であって、該方法は、項目１〜１６のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片を、その必要な患者に投与する工程を包含し、ここで該ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減されるか、または該状態もしくは疾患と関連した疼痛は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減される、方法。（項目２２）
前記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、機能性疼痛症候群、関節炎、膵炎、変形性関節症、群発頭痛、三叉神経痛、ヘルペス神経痛、全身性神経痛、神経変性性障害、運動障害、神経内分泌障害、運動失調症、内臓痛、痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性ニューロパチー、坐骨神経痛、背部痛、頭頚部痛、重篤なもしくは難治性の疼痛、突出痛、術後痛、遺伝性肢端紅痛症、歯痛、鼻炎、がん疼痛、複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病もしくは潰瘍性大腸炎）および膀胱障害からなる群より選択される、項目２１に記載の方法。（項目２３）
前記機能性疼痛症候群は、慢性腰痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、線維筋痛症（ＦＭ）、慢性疲労症候群、腹痛、顎関節症（ＴＭＪＤ）、膀胱痛症候群（間質性膀胱炎）、機能性胃腸管障害／症候群、機能性胸痛症候群、片頭痛および緊張型頭痛、慢性骨盤痛症候群、前立腺痛症候群（慢性前立腺炎）、多種化学物質過敏症ならびに湾岸戦争症候群からなる群より選択される、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記がん疼痛は、子宮内膜がん、前立腺がん、乳がん、子宮頸がん、肝臓がん、膵臓がん、結腸がん、胃がん、子宮がん、卵巣がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、脳がん、白血病、リンパ腫、骨がんおよびがんの転移と関連する疼痛からなる群より選択されるがんと関連する、項目２２に記載の方法。
（項目２３）
前記抗体もしくは抗原結合性断片は、第２の治療剤と組み合わせて前記患者に投与される、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記第２の治療剤は、オピオイド、ＣＯＸ−２インヒビター、局所麻酔薬、ＮＭＤＡモジュレーター、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレーター、ＶＲ１アンタゴニスト、サブスタンスＰアンタゴニスト、第２のＧＦＲα３アンタゴニスト、サイトカインもしくはサイトカイン受容体アンタゴニスト、神経成長因子（ＮＧＦ）インヒビター（低分子インヒビターもしくは抗ＮＧＦ抗体）、ＢＤＮＦ、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢもしくはｐ７５のインヒビター、アスピリン、ＮＳＡＩＤ、ステロイド、モルフィン、選択的セロトニン再取り込みインヒビター（ＳＳＲＩ）、セロトニンノルエピネフリン再取り込みインヒビター（ＳＮＲＩ）、三環系抗うつ薬、電位開口型ナトリウムチャネル（Ｎａｖ）のインヒビター、カルシウムチャネルインヒビター、カリウムチャネルインヒビター、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）もしくはＴＮＦ受容体インヒビター、ＴＷＥＡＫ（ＴＮＦ関連の弱いアポトーシス誘導物質）のインヒビター、ＲＥＴインヒビター、ＧＤＮＦファミリーリガンドのインヒビター、ＧＦＲα１、ＧＦＲα２もしくはＧＦＲα４のインヒビター、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１もしくはＡＳＩＣ３）のインヒビター、抗痙攣薬（ガバペンチンもしくはプレガバリン）、プロキネティシン受容体（ＰＲＯＫ１およびＰＲＯＫ２）のインヒビター、カスパーゼインヒビター、ｐ３８インヒビター、ＩＫＫ１／２インヒビター、ＣＴＬＡ−４Ｉｇおよびコルチコステロイドからなる群より選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記第２のＧＦＲα３アンタゴニストは、有機低分子、ポリペプチドアンタゴニスト、ＧＦＲα３に対して特異的な第２の抗体、ＧＦＲα３に対して特異的なｓｉＲＮＡもしくはアンチセンス分子である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記サイトカインもしくはサイトカイン受容体アンタゴニストは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）アンタゴニスト、ＩＬ−６アンタゴニスト、もしくはＩＬ−１８アンタゴニストである、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
項目１〜１６のいずれか１項に従う抗体もしくはその抗原結合性断片および項目２４に記載の第２の治療剤および薬学的に許容され得るキャリアもしくは希釈剤を含む、薬学的組成物。
（項目２８）
ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患、または該ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患と関連する疼痛を処置することにおいて使用するための項目１〜１６のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片、または項目２０もしくは項目２７のいずれかに記載の薬学的組成物であって、ここで該ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減されるか、または該状態もしくは疾患と関連した疼痛は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減される、方法。
（項目２９）
項目２８に記載の使用のための単離された抗体もしくはその抗原結合性断片であって、ここで前記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、機能性疼痛症候群、関節炎、膵炎、変形性関節症、群発頭痛、三叉神経痛、ヘルペス神経痛、全身性神経痛、神経変性性障害、運動障害、神経内分泌障害、運動失調症、内臓痛、痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性ニューロパチー、坐骨神経痛、背部痛、頭頚部痛、重篤なもしくは難治性の疼痛、突出痛、術後痛、遺伝性肢端紅痛症、歯痛、鼻炎、がん疼痛、複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病もしくは潰瘍性大腸炎）および膀胱障害からなる群より選択される、抗体もしくはその抗原結合性断片。
（項目３０）
ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患、または該ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患と関連した疼痛を処置するための医薬の製造における項目１〜１６のいずれか１項に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片、または項目２０もしくは２７のいずれかに記載の薬学的組成物の使用であって、ここで該ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減されるか、または該状態もしくは疾患と関連した疼痛は、重篤度もしくは発生の頻度において防止されるか、改善されるか、もしくは低減される、使用。
（項目３１）
前記ＧＦＲα３関連状態もしくは疾患は、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、機能性疼痛症候群、関節炎、膵炎、変形性関節症、群発頭痛、三叉神経痛、ヘルペス神経痛、全身性神経痛、神経変性性障害、運動障害、神経内分泌障害、運動失調症、内臓痛、痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性ニューロパチー、坐骨神経痛、背部痛、頭頚部痛、重篤なもしくは難治性の疼痛、突出痛、術後痛、遺伝性肢端紅痛症、歯痛、鼻炎、がん疼痛、複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ）、炎症性腸疾患（例えば、クローン病もしくは潰瘍性大腸炎）および膀胱障害からなる群より選択される、項目３０に記載の単離された抗体もしくはその抗原結合性断片の使用。
他の実施形態は、次の詳細な説明の総説から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】カプサイシンを受容する２日前（０．５μｇ  アルテミンを受容する１日前）に、マウスＧＦＲα３抗体（間接的ブロッカーＭ１Ｍ６９７７Ｎもしくは直接的ブロッカーＭ１Ｍ６９８６Ｎ，  各々ｎ＝８）もしくはアイソタイプ（陰性）コントロール抗体（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ，  ｎ＝８）を３０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．で注射した動物でのアルテミン感作カプサイシン熱痛覚過敏症の阻害。
【００８２】
【図２】図２Ａおよび２Ｂ。線維肉腫を注射し、アイソタイプ（陰性）コントロール抗体（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ）またはＭ１Ｍ６９７７ＮもしくはＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体（ｎ＝８〜１１／群）で処置した、２つの実験（Ａ  ＆  Ｂ）の動物においてフォンフレイヘアによって測定した接触性アロディニア。同時点でのアイソタイプコントロールと比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１もしくは＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００８３】
【図３】図３Ａおよび３Ｂ。線維肉腫を注射し、アイソタイプ（陰性）コントロール（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ）またはＭ１Ｍ６９７７ＮもしくはＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体（ｎ＝８〜１１／群）で処置した２つの実験（Ａ  ＆  Ｂ）の動物における同側性体重負荷％。
【００８４】
【図４】図４Ａおよび４Ｂ。線維肉腫細胞を注射し、アイソタイプ（陰性）コントロール（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ）またはＭ１Ｍ６９７７ＮもしくはＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体（ｎ＝８〜１１／群）で処置した２つの実験（Ａ  ＆  Ｂ）の動物における防御スコア。同時点でのアイソタイプコントロールと比較して、＊＊ｐ＜０．０１。
【００８５】
【図５】癌を注射し、アイソタイプ（陰性）コントロール（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ）またはＭ１Ｍ６９７７ＮもしくはＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体（ｎ＝９〜１０／群）で処置した動物においてフォンフレイヘアによって測定した接触性アロディニア／同時点でのアイソタイプ（陰性）コントロールと比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１もしくは＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００８６】
【図６】図６Ａおよび６Ｂ。癌を注射し、アイソタイプ（陰性）コントロール（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ）またはＭ１Ｍ６９７７ＮもしくはＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体（ｎ＝９〜１０／群）で処置した２つの時点（Ａ＝１１日  ＆  Ｂ＝１８日）での同側性体重負荷％。事後ダネット分析によってアイソタイプコントロール抗体と比較して、＊ｐ＜０．０５。
【００８７】
【図７】癌を注射し、アイソタイプ（陰性）コントロール（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ）またはＭ１Ｍ６９７７ＮもしくはＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体（ｎ＝９〜１０／群）で処置した動物における防御スコア。同時点でのアイソタイプコントロールと比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００８８】
【図８】ＤＭＭを有し、アイソタイプ（陰性）コントロール（Ｍ２Ｍ１８０Ｎ）またはＭ１Ｍ６９７７ＮもしくはＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体（ｎ＝１０／群）で処置した動物においてフォンフレイヘアによって測定した接触性アロディニア。同時点でのアイソタイプコントロールと比較して、＊＊ｐ＜０．０１もしくは＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００８９】
【図９】ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨへの結合に関する抗ＧＦＲα３抗体の交差競合分析。
【発明を実施するための形態】
【００９０】
詳細な説明
本方法について記載する前に、記載されている特定の方法および実験条件は変動し得るため、本発明が、係る方法および条件に限定されないことを理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることから、本明細書において使用されている用語法が、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、限定を企図しないことも理解されたい。
【００９１】
他に断りがなければ、本明細書において使用されているあらゆる技術および科学用語は、本発明が属する分野における当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有する。本発明の実施または検査において、本明細書に記載されている方法および材料と類似または同等のいかなる方法および材料を使用してもよいが、好ましい方法および材料を次に説明する。
【００９２】
定義
「ＧＦＲα３」もしくは「ｈＧＦＲα３」とは、本明細書において用いられる場合、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）のファミリーに属する、アルテミンのグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカータンパク質受容体をいう。これは、そのリガンドであるアルテミンにいったん結合した後、受容体チロシンキナーゼＲＥＴ（「ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ」）の活性化を媒介するＧＤＮＦファミリー受容体αタンパク質のうちの１つである。ＧＦＲαファミリーの４つのメンバーが今までのところ認識されている（ＧＦＲα−１〜４  （Ｌｉｎｄｓａｙ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｎ，  （１９９６），  １７：５７１−５７４；  Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  ＭＳ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  （１９９９），  １３：３１３−３２５））。ＧＦＲα３は、ＧＤＮＦファミリー受容体α３  ＧＰＩ結合受容体、もしくはグリア細胞株由来神経栄養因子受容体α３としても当該分野で公知である。表現「ＧＦＲα３」もしくは「ｈＧＦＲα３」、またはこれらの断片は、本明細書において用いられる場合、非ヒト種に由来する（例えば、「マウスＧＦＲα３」、「ラットＧＦＲα３」、もしくは「サルＧＦＲα３」）と特定されなければ、ヒトＧＦＲα３タンパク質もしくはその断片をいう。さらに、「ＧＦＲα３」もしくは「ｈＧＦＲα３」は、本明細書において用いられる場合、配列番号３７４（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００１４９６）に示される核酸配列によってコードされ、配列番号３７５（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１４８７．２）に示されるとおりのアミノ酸配列を有するヒトＧＦＲα３、またはその生物学的に活性な断片をいう。そのシグナル配列は、配列番号３７５のアミノ酸残基１〜３１にまたがり、成熟タンパク質は、配列番号３７５のアミノ酸残基３２〜３８２にまたがるのに対して、Ｃ末端プロ領域は、配列番号３７５のアミノ酸残基３８３〜４００にまたがる。ＧＰＩ切断部位は、配列番号３７５のアミノ酸残基３７４（アスパラギン）で見いだされる。ヒトアルテミンのアミノ酸配列は、アクセッション番号Ｑ５Ｔ４Ｗ７としてＧｅｎｂａｎｋで見いだされ、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有する（アクセッション番号Ｑ５Ｔ４Ｗ７のアミノ酸Ａ１０８〜Ｇ２２０由来の）ヒトアルテミンのアミノ酸配列は、配列番号３６９として示される（配列番号３６９のアミノ酸残基１１４〜１４１は、ｍｙｃ−ｍｙｃヘキサヒスチジンタグである）。
【００９３】
ＧＦＲα３は、ＧＦＲαファミリーの他のメンバーに構造的におよび機能的に類似であるが、ＧＦＲα３は、上記４つのファミリーメンバーのうちで最も関連性が遠い。ＧＦＲα１およびＧＦＲα２は、約５０％同一性を共有する（Ｓａｎｉｃｏｌａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＮＡＳ，  ＵＳＡ，  （１９９７），  ９４：６２３８−４３；  Ｋｌｅｉｎ，  ＲＤ，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９７），  Ｎａｔｕｒｅ，  ３８７：７１７−２１；  Ｂｕｊ−Ｂｅｌｌｏ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  （１９９７），
３８７：７２１−４；  Ｂａｌｏｈ，  ＲＨ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｎ，  （１９９７），  １８：７９３−８０２）。その一方で、ＧＦＲα３は、これらタンパク質とそれぞれ、３２％および３７％の同一性を共有するに過ぎない（Ｍａｓｕｒｅ，  Ｓ．
ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  （１９９８），  ２５１：６２２−３０；  Ｎｏｍｏｔｏ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  ，  ＢＢＲＣ，  （１９９８），
２４４：８４９−５３）。マウスＧＦＲα３のアミノ酸配列は、以下のＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号：  ＮＰ＿０３４４１０．３を有する。ヒトＧＦＲα１のアミノ酸配列は、以下のＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号：  ＮＰ＿００５２５５．１を有し、配列番号３７６としても見いだされる。カニクイザルＧＦＲα３のアミノ酸配列は、配列番号３７７に示され、カニクイザルＲＥＴのアミノ酸配列は、配列番号３７８に示される。
【００９４】
用語「抗体」は、本明細書において用いられる場合、ジスルフィド結合によって相互接続された２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖である、４本のポリペプチド鎖からなる免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）と共に、その多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合性断片を指すよう企図されている。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）および重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と命名されたより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名された超可変性の領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、３個のＣＤＲおよび４個のＦＲで構成されており、これらはアミノ末端からカルボキシ末端へと次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される。本発明のある特定の実施形態では、抗ＧＦＲα３抗体（またはその抗原結合性断片）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、あるいは天然にまたは人為的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２種以上のＣＤＲの対比（ｓｉｄｅ−ｂｙ−ｓｉｄｅ）解析に基づき定義することができる。
【００９５】
１個もしくは複数のＣＤＲ残基の置換または１個もしくは複数のＣＤＲの省略も可能である。１個または２個のＣＤＲを結合のために省くことのできる抗体が、科学文献に記載された。Ｐａｄｌａｎら（１９９５年、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９巻：１３３〜１３９頁）は、発表された結晶構造に基づき、抗体とその抗原との間の接触領域を解析し、ＣＤＲ残基のほんの約５分の１から３分の１が、抗原と実際に接触すると結論づけた。Ｐａｄｌａｎは、１個または２個のＣＤＲが抗原と接触するアミノ酸を持たない、多くの抗体も発見した（Ｖａｊｄｏｓら、２００２年、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３２０巻：４１５〜４２８頁も参照）。
【００９６】
抗原と接触していないＣＤＲ残基は、分子モデリングによっておよび／または経験的に、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ外部に位置するＫａｂａｔ  ＣＤＲの領域から、以前の研究に基づき同定することができる（例えば、ＣＤＲＨ２における残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、多くの場合必要とされない）。ＣＤＲまたはその残基（複数可）が省略される場合、これは通常、別のヒト抗体配列または係る配列のコンセンサスにおける相当するポジションを占めるアミノ酸に置換される。ＣＤＲ内の置換のためのポジションおよび置換するためのアミノ酸は、経験的に選択することもできる。経験的な置換は、保存的または非保存的置換となり得る。
【００９７】
本明細書に開示されている、完全ヒト型抗ｈＧＦＲα３抗体は、相当する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１個または複数のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含むことができる。係る変異は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を、例えば、公開抗体配列データベースから入手できる生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示されているアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合性断片を含み、１個または複数のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１個または複数のアミノ酸は、相当する生殖系列残基（複数可）へと、または相当する生殖系列残基（複数可）の（天然または非天然の）保存的アミノ酸置換へと逆変異されている（ｂａｃｋ−ｍｕｔａｔｅｄ）（係る配列変化は、本明細書において、「生殖系列逆変異」と称される）。当業者であれば、本明細書に開示されている重および軽鎖可変領域配列から始めて、１個または複数の個々の生殖系列バック変異またはその組み合わせを含む多数の抗体および抗原結合性断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の全てが、生殖系列配列へと逆変異されている。他の実施形態では、ある特定の残基のみが、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸の内もしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸の内に見出される変異された残基のみが、生殖系列配列へと、またはすべてのフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４内、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３の内に見出される変異された残基のみが生殖系列逆変異へと、逆変異されている。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の２個以上の生殖系列逆変異のいかなる組み合わせを含有することもできる、すなわち、ある特定の個々の残基は、特定の生殖系列配列へと逆変異されるが、生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持される。１個または複数の生殖系列逆変異を含有する抗体および抗原結合性断片を得たら、結合特異性の向上、結合親和性の増加、アンタゴニストまたはアゴニスト性の生物学的特性の向上または増強（場合による）、免疫原性の低下等、１種または複数の所望の特性に関して容易に検査することができる。このような一般的な様式で得られる抗体および抗原結合性断片は、本発明の範囲内に包含される。
【００９８】
用語「ヒト抗体」は、本明細書において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むように企図されている。本発明のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるランダムもしくは部位特異的変異誘発またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける体細胞変異によって導入された変異）を含むことができる。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書において、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトＦＲ配列に移植されたｍＡｂを含むようには企図されていない。本発明の抗ヒトＧＦＲα３抗体は、「抗ｈＧＦＲα３」もしくは「抗ＧＦＲα３」と称され得る。
【００９９】
用語「特異的に結合する」またはその他は、抗体またはその抗原結合性断片が、生理的条件下で相対的に安定的に抗原と複合体を形成することを意味する。特異的な結合は、少なくとも約１×１０−６Ｍ以下（例えば、より小さいＫＤはより密接な結合を示す）の平衡解離定数によって特徴付けることができる。２個の分子が特異的に結合するか否か決定するための方法は、本技術分野において周知のものであり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴法その他が挙げられる。しかし、ｈＧＦＲα３を特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原（例えば、他の種に由来するＧＦＲα３分子）に対する交差反応性を示し得る。さらに、ｈＧＦＲα３および１種もしくは複数の追加的な抗原に結合する多特異的抗体またはｈＧＦＲα３の２種の異なる領域に結合する二重特異性抗体であっても、本明細書において用いられる場合、ｈＧＦＲα３に「特異的に結合する」抗体とみなされる。
【０１００】
本明細書において用いられる場合、指定された標的分子（例えば、特定のＧＦＲα３ペプチド）に「結合しない」という用語は、上記抗体が、プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で上記標的分子への結合について試験された場合に５００ｎＭより大きなＫＤを示すか、または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）において２５℃で上記標的分子への結合について試験された場合に５０ｎＭより大きなＥＣ５０を示すか、またはいずれのタイプのアッセイもしくはその等価物においても何ら結合を示さないことを意味する。
【０１０１】
用語「高親和性」抗体は、表面プラズモン共鳴法、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定される、少なくとも１０−９Ｍ、好ましくは１０−１０Ｍ、より好ましくは１０−１１Ｍ、さらにより好ましくは１０−１２ＭのｈＧＦＲα３に対する結合親和性を有するｍＡｂを指す。
【０１０２】
用語「遅いオフレート」、「Ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」とは、表面プラズモン共鳴法、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって決定される、１×１０−３ｓ−１以下、好ましくは１×１０−４ｓ−１以下の速度定数でｈＧＦＲα３から解離する抗体を意味する。
【０１０３】
用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合性断片」その他は、本明細書において、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、いずれかの天然に存在する、酵素により得ることができる、合成のまたは遺伝子改変したポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。用語、抗体の「抗原結合部分」または「抗体断片」は、本明細書において、ｈＧＦＲα３に特異的に結合する能力を保持する抗体の１種または複数の断片を指す。
【０１０４】
特異的な実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、オピオイド、ＣＯＸ−２インヒビター、局所麻酔薬，サイトカインアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１もしくはＩＬ−６インヒビター）、第２のＧＦＲα３インヒビター、ＮＭＤＡモジュレーター、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレーター、ＶＲ１アンタゴニスト、サブスタンスＰアンタゴニスト、化学療法剤、もしくは放射性同位体等の治療部分にコンジュゲートすることができる（「イムノコンジュゲート」）。
【０１０５】
「単離された抗体」は、本明細書において用いられる場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すように企図されている（例えば、ｈＧＦＲα３に特異的に結合する単離された抗体またはその断片は、ｈＧＦＲα３以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。
【０１０６】
本明細書において用いられる場合、「中和抗体」（または「ＧＦＲα３活性を中和する抗体」）は、それとｈＧＦＲα３との結合が、ＧＦＲα３の少なくとも１種の生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すように企図されている。ＧＦＲα３の生物学的活性のこのよ阻害は、数種の標準ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ（以下の実施例を参照のこと）のうちの１種または複数により、ＧＦＲα３生物学的活性の１種または複数の指標を測定することによって評価することができる。
【０１０７】
用語「表面プラズモン共鳴法」は、本明細書において、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、スウェーデン、ウプサラおよびニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用した、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変更の検出による、リアルタイム生体分子相互作用の解析を可能にする光学的現象を指す。
【０１０８】
用語「ＫＤ」は、本明細書において、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すように企図されている。
【０１０９】
用語「エピトープ」は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２個以上のエピトープを有し得る。よって、異なる抗体は、抗原における異なる区域に結合することができ、異なる生物学的効果を有することができる。用語「エピトープ」はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する、抗原における部位を指す。これはまた、抗体によって結合される抗原の領域を指す。エピトープは、構造的エピトープまたは機能的エピトープと定義され得る。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープはまた、コンフォメーション性であってもよい。すなわち、非直鎖状アミノ酸から構成されてもよい。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基等、分子の化学的に活性を有する表面グループである決定基を含むことができ、ある特定の実施形態では、特異的な三次元構造特徴および／または特異的な電荷特徴を有することができる。
【０１１０】
用語「実質的同一性」または「実質的に同一」は、核酸またはその断片について言及する場合、後述するＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＡＰ等、配列同一性のいずれか周知のアルゴリズムによって測定され、適切なヌクレオチド挿入または欠失を用いて別の核酸（またはその相補ストランド）と最適に整列されたときに、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％においてヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対し実質的同一性を有する核酸分子は、ある特定の事例において、参照核酸分子にコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。
【０１１１】
ポリペプチドに適用する場合、用語「実質的類似性」または「実質的に類似の」は、２種のペプチド配列が、デフォルトギャップ重量を使用してプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴ等により最適に整列されたときに、少なくとも９０％配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９８％または９９％配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基ポジションは、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換される置換である。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させないであろう。２種以上のアミノ酸配列が、保存的置換により互いに異なる場合、類似性のパーセントまたは度合は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整することができる。この調整を行うための手段は、当業者に周知のものである（例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２４巻：３０７〜３３１頁を参照）。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例として、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニンおよびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置き換えは、Ｇｏｎｎｅｔら（Ｇｏｎｎｅｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９２年）２５６巻：１４４３  ４５頁）に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有するいずれかの変化である。「中程度に保存的」置き換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負ではない値を有するいずれかの変化である。
【０１１２】
ポリペプチドの配列類似性は、典型的には、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失および他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、デフォルトパラメータにより使用して、異なる生物種由来の相同ポリペプチド等、密接に関係したポリペプチドの間、あるいは野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の配列相同性または配列同一性を決定することのできるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴ等のプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、デフォルトまたは推奨されるパラメータを用いてＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、アライメントならびに問い合わせおよび検索配列間の最良の重複の領域のパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年）上記参照）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する際の別の好ましいアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用したコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２１５巻：４０３  ４１０頁および（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５巻：３３８９  ４０２頁を参照）。
【０１１３】
特異的な実施形態では、本発明の方法における使用のための抗体または抗体断片は、単一特異性、二重特異性または多特異性となり得る。多重特異性抗体は、１種の標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的となり得る、あるいは２種以上の標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含有し得る。本発明の文脈において使用することのできる例示的な二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用に関与し、第１および第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、少なくとも１個のアミノ酸が互いに異なり、少なくとも１個のアミノ酸差は、アミノ酸差を欠く二重特異性抗体と比較して、プロテインＡへの二重特異性抗体の結合を低下させる。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ）等、プロテインＡ結合を低下または消失させる変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含むことができる。第２のＣＨ３内に見出すことのできるさらなる修飾は、ＩｇＧ１  ｍＡｂの場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７ＭおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７ＭおよびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２  ｍＡｂの場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２ＮおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２ＮおよびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４  ｍＡｂの場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９ＱおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９ＱおよびＶ４２２Ｉ）を含む。上に記載されている二重特異性抗体フォーマットにおけるバリエーションは、本発明の範囲内であるとみなされる。
【０１１４】
語句「治療有効量」とは、これを投与した目的であるところの所望の効果を生じる量を意味する。正確な量は、処置の目的に依存し、当業者であれば、公知の技法を使用して確認することができるであろう（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９年）Ｔｈｅ  Ａｒｔ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照）。
【０１１５】
用語「機能性疼痛症候群」とは、全世界の人口のうちの最大１５％までに影響を及ぼす、慢性的な症状がベースの症候群をいう。それらは、身体の種々の領域に関する慢性疼痛および不快感によって特徴付けられる。上記症状を十分に説明し得る一般的に認められた構造的な、炎症性の、もしくは生化学的な異常は、全く同定されていない。患者は、大いに低下したクオリティー・オブ・ライフを示すが、処置選択肢は限られており、新規な治療アプローチの開発は、期待外れであった。このカテゴリーに入る一般的障害のうちのいくつかとしては、慢性腰痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、線維筋痛症（ＦＭ）、慢性疲労症候群、機能性腹痛症候群、顎関節症（ＴＭＪＤ）、膀胱痛症候群（間質性膀胱炎）、機能性胃腸管障害／症候群、機能性直腸疼痛症候群（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｃｔａｌ
ｐａｉｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、機能性胸痛症候群、片頭痛および緊張型頭痛、慢性骨盤痛症候群、前立腺痛症候群（慢性前立腺炎）、多種化学物質過敏症、ならびに湾岸戦争症候群が挙げられる。
【０１１６】
一般的説明
グリア細胞株由来神経栄養因子関連ファミリーは、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン（ＮＲＴＮ）、パーセフィン（ＰＳＰＮ）、およびアルテミン（ＡＲＴＮ）を含む。ＧＤＮＦファミリータンパク質は、感覚ニューロン、腸ニューロン、交感神経および副交感神経のニューロン、ならびに種々の非神経組織の発生および維持に差次的に関与している（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｃ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６６：１０６２−１０６４；  Ｋｏｔｚｂａｕｅｒ，  Ｐ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６），  Ｎａｔｕｒｅ  ３８４：４６７−４７０；  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｊ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４），  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １２７：１６７−１７０；  Ｓｃｈａａｒ．  Ｄ．Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３），  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １２４：３６８−３７１）。ＧＤＮＦは、ドパミン作動性ニューロン、ノルアドレナリン作動性ニューロン、および脊髄運動ニューロンの特に強力な生存因子である（Ｙａｎ，  Ｑ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５），  Ｎａｔｕｒｅ，  ３７３：３４１−３４４；  Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｃ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４），  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２６６：１０６２−１０６４；  Ｂｕｊ−Ｂｅｌｌｏ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５），  Ｎｅｕｒｏｎ，  １５：８２１−８２８）。他のＧＤＮＦファミリー増殖メンバーは、神経系の外で機能を有する（Ｔｒｕｐｐ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９５），  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １３０：１３７−１４８；  Ｋｏｔｚｂａｕｅｒ，  Ｐ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６），  Ｎａｔｕｒｅ  ３８４：４６７−４７０；  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｊ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４），  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １２７：１６７−１７０；  Ｓｃｈａａｒ．  Ｄ．Ｇ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３），  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １２４：３６８−３７１）。例えば、ＮＲＴＮ、ＡＲＴＮ、およびＰＳＰＮはまた、発生中の腎臓で発現される。ＧＤＮＦはまた、腎臓形態形成および精子形成の調節において神経系の外で重要な役割を有する（Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  （２００２），  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３：３８３−３９２）。
【０１１７】
ＧＤＮＦファミリーの各メンバーは、形質膜と動的に会合したグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカータンパク質受容体に優先的に結合する（すなわち、そのリガンドである）。上記ＧＤＮＦファミリー受容体αファミリーは、４つの異なる受容体：ＧＦＲアルファ１（ＧＦＲα１、ＧＤＮＦＲ−α）；ＧＦＲアルファ２（ＧＦＲα２／ＴｒｎＲ２／ＧＤＮＦＲ−β／ＮＴＮＲ−α／ＲＥＴＬ２）；ＧＦＲアルファ３（ＧＦＲα３）；およびＧＦＲアルファ４（ＧＦＲα４）から構成される。ＧＤＮＦは、ＧＦＲα１に優先的に結合し、ＮＲＴＮは、ＧＦＲα２に優先的に結合し、ＡＲＴＮは、ＧＦＲα３に優先的に結合し、ＰＳＰＮは、ＧＦＲα４に優先的に結合する（Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  （２００２），  ３：３８３−３９４）。
【０１１８】
ＧＦＲα２は、皮質、前脳基底部（ｂａｓａｌ  ｆｏｒｅｂｒａｉｎ）、および嗅球の特定の層では高度に発現され、黒質、小脳、および運動核においては不十分にしか発現されない。ＧＦＲα３は、胎仔および成体のマウス神経、交感神経節および感覚神経節、腸、心臓、脳、肺および心臓で発現される。ＧＦＲα４は、成体の種々の脳領域において、ならびに精巣および心臓を含むいくつかの末梢組織において低レベルで発現される。上記ＧＤＮＦファミリーメンバー結合で優先されるのは、ＧＦＲα１にはＧＤＮＦ；ＧＦＲα２にはニュールツリン；ＧＦＲα３にはアルテミン；およびＧＦＲα４にはパーセフィンであると上記で示されている一方で、リガンド受容体対形成は、厳密ではない（Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ，  Ｍ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  （２００２），  ３：３８３−３９４）。例えば、ＧＤＮＦは、ＧＦＲα１に結合するより低い効率で、ＧＦＲα２およびＧＦＲα３に結合する。
【０１１９】
上記ＧＤＮＦファミリーリガンドは、典型的には、しかし排他的にではなく、それらのシグナルを、リガンド、そのＧＦＲα受容体およびその受容体チロシンキナーゼｃ−Ｒｅｔから構成される多成分複合体を介して伝達する。Ｒｅｔは、これらリガンドシグナル伝達複合体の共通するエレメントである。Ｒｅｔは、ホスホイノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３−Ｋ）／ＰＤＫ／ＡＫＴ（ＰＫＢ）経路およびＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の活性化を介して抗アポトーシスシグナルを強力に活性化する癌原遺伝子である。Ｒｅｔはまた、細胞内カルシウムを上昇させ、従来のおよび新規なプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）ファミリーのメンバーの活性化を促進する、ホスホリパーゼＣγ（ＰＬＣγ）を活性化し得る。ＧＤＮＦファミリーリガンド受容体複合体は、Ｒｅｔを介するシグナル伝達に制限されない。ＧＤＮＦ：ＧＦＲα１は、ＲＥＴを欠いている細胞においてＮＣＡＭに結合し得、ＦｙｎおよびＦＡＫを活性化し得る。いくつかの条件下では、ＧＤＮＦ：ＧＦＲα複合体は、ｓｒｃキナーゼを直接活性化する。
【０１２０】
本発明のある実施形態では、ＧＦＲα３の３つの球状システインリッチドメインのうちのいずれか１つ以上（１つ、２つ、もしくは３つ）、またはそれらの断片は、ＧＦＲα３を結合してその機能を阻害するか、またはそのリガンド（例えば、アルテミン）へ結合する能力を阻害する抗体を調製するために使用され得る。ある実施形態では、ＧＦＲα３に対して特異的な本発明の抗体は、ＧＦＲα３上のリガンド結合ドメインに結合し得、よって、リガンド（アルテミン）−ＧＦＲα３複合体の、ＲＥＴへの結合をブロックし得る。ヒトＧＦＲα３の全長アミノ酸配列は、配列番号３７５として示される。ヒトＧＦＲα３をコードする核酸は、配列番号３７４に示される。ドメイン１は、配列番号３７５の残基４４〜１２４にまたがり；ドメイン２は、配列番号３７５の残基１６２〜２３９にまたがり；ドメイン３は、配列番号３７５の残基２４８〜３４０にまたがる。（配列番号３７５もしくはＧｅｎｂａｎｋ  ＮＰ＿００１４８７．２のいずれかを参照のこと）。
【０１２１】
これらドメイン１、２、もしくは３のうちのいずれか、またはそれらに由来する断片は、ＧＦＲα３に特異的に結合し、その活性を、もしくはＧＦＲα３と関連した少なくとも１つの機能を阻害する抗体を調製するために使用され得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、ＧＦＲα３に特異的に結合し、ＧＦＲα３によって媒介されるシグナル伝達を妨げ得る。ある実施形態では、上記ＧＦＲα３に特異的に結合する抗体は、ＧＦＲα３のそのリガンド（例えば、アルテミン）への結合を妨げ得る（Ｗａｎｇ，  Ｘ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  （２００６），  １４：１０８３−１０９２）。ある実施形態では、上記ＧＦＲα３に特異的に結合する抗体は、ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼの活性化を妨げ得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼの活性化を妨げることなく、ＧＦＲα３に特異的に結合し得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、ＧＦＲα３に特異的に結合し得、ＲＥＴを介するかもしくはＲＥＴ以外のメディエーターを介するシグナル伝達を妨げ得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、腫瘍細胞の成長／増殖を阻害するために使用され得、よって、あるがん／悪性腫瘍、またはそのようながん／悪性腫瘍と関連する疼痛、またはそのようながん／悪性腫瘍の転移と関連する疼痛を処置するために有用であり得る（Ｔａｎｇ，  Ｊ−Ｚ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  （２０１０），  ９（６）：  １６９７−１７０８；  Ｋａｎｇ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  （２００９），  ２８：２０３４−２０４５；  Ｃｅｙｈａｎ，  Ｇ．Ｏ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，  （２００６），  ２４４（２）：２７４−２８１；  Ｂａｎｅｒｊｅｅ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  （２０１１），  １３：Ｒ１１２；  Ｐａｎｄｅｙ，  Ｖ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，  （２０１０），  １５１（３）：９０９−９２０；  Ｋａｎｇ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，
Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  （２０１０），  ２９：３２２８−３２４０；  Ｌｉ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ  （２０１１），  １８：２４を参照のこと）。ある特定の実施形態では、ＧＦＲα３に特異的に結合する抗体は、前述の領域の断片、または本明細書に記載されている領域のＮもしくはＣ末端のいずれか一方もしくは両方から指定の領域を約１０〜約５０アミノ酸残基超えて延長するペプチドを使用して調製することができる。ある特定の実施形態では、ＧＦＲα３特異的抗体の調製において、前述の領域またはその断片のいかなる組み合わせを使用してもよい。上記のように、長さ、すなわちｈＧＦＲα３の３つのドメインを含むアミノ酸残基の数は、抗ｈＧＦＲα３特異的抗体の調製のために、全長ドメインもしくはその断片のＮ末端もしくはＣ末端のいずれか、またはその両方から伸びる約１０〜５０アミノ酸残基が変動し得る。
【０１２２】
抗体の抗原結合性断片
他に特に記されていなければ、用語「抗体」は、本明細書において、２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（すなわち、「完全抗体分子」）ならびにその抗原結合性断片を包含するものと理解されたい。用語、抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合性断片」その他は、本明細書において、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、いずれかの天然に存在する、酵素により得ることができる、合成のまたは遺伝子改変されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。用語、抗体の「抗原結合部分」または「抗体断片」は、本明細書において、ｈＧＦＲα３に特異的に結合する能力を保持する抗体の１種または複数の断片を指す。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含有する断片または単離されたＣＤＲを含むことができる。抗体の抗原結合性断片は、例えば、完全抗体分子に由来することができ、タンパク質分解による消化、または抗体可変および（任意選択で）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子操作技法等、いずれかの適した標準技法を使用する。係るＤＮＡは、公知であるおよび／または例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーを含む）から容易に入手することができる、あるいは合成することができる。ＤＮＡを配列決定し、化学的にまたは分子生物学的技法を使用することにより操作して、例えば、１個または複数の可変および／または定常ドメインを適した構成へと配置する、またはコドンを導入する、システイン残基を作出する、アミノ酸を修飾、付加もしくは欠失させること等ができる。
【０１２３】
抗原結合性断片の非限定例として、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））が挙げられる。ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよびミニボディ等の他の操作された分子も、本明細書における表現「抗原結合性断片」の内に包含されている。
【０１２４】
抗体の抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも１個の可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、いかなるサイズまたはアミノ酸組成のものであってもよく、一般に、１個または複数のフレームワーク配列に隣接した、またはこれとインフレームの少なくとも１個のＣＤＲを含むであろう。ＶＬドメインと会合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片において、ＶＨおよびＶＬドメインは、いずれかの適した配置において互いに対して位置することができる。例えば、可変領域は二量体となり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含有することができる。あるいは、抗体の抗原結合性断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含有することができる。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１個の定常ドメインに共有結合により連結された少なくとも１個の可変ドメインを含有することができる。本発明の抗体の抗原結合性断片内に見出すことのできる可変および定常ドメインの非限定的な例示的構成として、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上に列挙する例示的構成のいずれかを含む、可変および定常ドメインのいずれかの構成において、可変および定常ドメインは、互いに直接的に連結されていても、完全または部分的ヒンジまたはリンカー領域により連結されていてもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個以上）のアミノ酸からなることができ、これにより、単一ポリペプチド分子における隣接する可変および／または定常ドメインの間に可撓性または半可撓性連結がもたらされる。さらに、本発明の抗体の抗原結合性断片は、互いにおよび／または１個または複数の単量体ＶＨまたはＶＬドメインと非共有結合的に会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可）により）、上に列挙する可変および定常ドメイン構成のうちいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含むことができる。
【０１２６】
完全抗体分子と同様に、抗原結合性断片は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）となり得る。抗体の多重特異的抗原結合性断片は、典型的には、少なくとも２個の異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができるであろう。本明細書に開示されている例示的な二重特異性抗体フォーマットを含むいずれかの多重特異的抗体フォーマットは、本技術分野において利用できる慣用的な技法を使用して、本発明の抗体の抗原結合性断片の文脈における使用に適合させることができる。
【０１２７】
ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法は、本技術分野において公知である。本発明の文脈において、いずれかの係る公知の方法を使用して、ヒトＧＦＲα３に特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。
【０１２８】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術またはモノクローナル抗体を生成するための他の任意の公知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＧＦＲα３に対する高親和性キメラ抗体が最初に単離される。後述する実験セクションにおける通り、抗体は、親和性、選択性、エピトープ等を含む望ましい特徴に対して特徴付けされ、選択される。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全ヒト型抗体、例えば、野生型または修飾型ＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は、特定の用途に応じて変動し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に属する。
【０１２９】
一般に、本発明の抗体は、非常に高い親和性を保有し、典型的には、固相に固定化されたまたは溶液相における抗原への結合により測定された場合の、約１０−１３から約１０−８Ｍまで、または約１０−１２から約１０−９ＭまでのＫＤを保有する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全ヒト型抗体を生成する。選択される定常領域は、特定の用途に応じて変動し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性特徴は、可変領域に属する。
【０１３０】
生物学的同等物  本発明の抗ＧＦＲα３抗体および抗体断片は、記載されている抗体のアミノ酸配列から変動するがＧＦＲα３に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。係るバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比較してアミノ酸の１個または複数の付加、欠失または置換を含むが、記載されている抗体の生物学的活性と基本的に同等な生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗ＧＦＲα３抗体コードＤＮＡ配列は、開示されている配列と比較してヌクレオチドの１個または複数の付加、欠失または置換を含むが、本発明の抗ＧＦＲα３抗体または抗ＧＦＲα３抗体断片と基本的に生物学的に同等である抗ＧＦＲα３抗体または抗ＧＦＲα３抗体断片をコードする配列を包含する。
【０１３１】
２種の抗原結合タンパク質または抗体が、例えば、同じモル濃度の用量にて類似の実験条件下、単回用量または複数回用量のいずれかとして投与された際に、その吸収の速度および程度が有意差を示さない薬学的同等物または薬学的代替物である場合、両者は生物学的に同等であるとみなされる。いくつかの抗体が、その吸収の程度において同等であるが、その吸収速度においては同等ではない場合において、これら抗体は、同等物または薬学的代替物であるとみなされ、そして係る吸収速度における差が意図的であり、標識において反映され、例えば慢性使用における有効な体内薬物濃度の到達に必須ではなく、試験される特定の薬物製品にとって医学的に無意味であるとみなされるため、これらが生物学的に同等であると依然としてみなされ得る。
【０１３２】
一実施形態では、２種の抗原結合タンパク質は、その安全性、純度および効力において臨床的に有意義な差がない場合、生物学的に同等である。
【０１３３】
一実施形態では、参照産物および生物学的産物の間で切り替えない継続的療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化または有効性の減弱化を含む有害効果のリスクにおいて増大が予想されずに、患者に対して、参照産物および生物学的産物の間でこのような切り替えを１回または複数回行うことができる場合、２種の抗原結合タンパク質は、生物学的に同等である。
【０１３４】
一実施形態では、２種の抗原結合タンパク質が両者共に、使用条件（単数または複数）に対し共通の作用機序（単数または複数）によって、係る機序が公知の程度まで作用する場合、２種の抗原結合タンパク質は、生物学的に同等である。
【０１３５】
生物学的同等性は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法によって示すことができる。生物学的同等性の測定は、例えば、（ａ）時間の関数として血液、血漿、血清または他の生体液における抗体またはその代謝物の濃度を測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ検査；（ｂ）ヒトｉｎ  ｖｉｖｏバイオアベイラビリティデータと相関され、これを合理的に予測するｉｎ  ｖｉｔｒｏ検査；（ｃ）時間の関数として抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果を測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ  ｖｉｖｏ検査；および（ｄ）抗体の安全性、有効性またはバイオアベイラビリティまたは生物学的同等性を確立する十分に制御された臨床治験における検査を含む。
【０１３６】
本発明の抗ＧＦＲα３抗体の生物学的に同等なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の様々な置換を行うことによりまたは生物学的活性に必要とされない末端もしくは内部残基もしくは配列を欠失させることにより、構築することができる。例えば、生物学的活性に必須ではないシステイン残基を欠失または他のアミノ酸と置き換えて、復元における不要なまたは不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。他の文脈において、生物学的に同等な抗体は、抗体のグリコシル化特徴を修飾するアミノ酸変化、例えば、グリコシル化を排除または除去する変異を含む抗ＧＦＲα３抗体バリアントを含むことができる。
【０１３７】
Ｆｃバリアントを含む抗ＧＦＲα３抗体
本発明のある実施形態によれば、抗ＧＦＲα３抗体が提供され、上記抗ＧＦＲα３抗体は、１以上の変異（これは、（例えば、中性ｐＨと比較した場合、酸性ｐＨで）ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強するかもしくは減少させる）を含むＦｃドメインを含む。例えば、本発明は、上記ＦｃドメインのＣＨ２領域もしくはＣＨ３領域に変異を含む抗ＧＦＲα３抗体を包含し、ここで上記変異は、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５〜約６．０の範囲であるエンドソームにおいて）ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増大させる。このような変異は、動物に投与される場合に、上記抗体の血清半減期の増大を生じ得る。このようなＦｃ改変の非限定的例としては、以下が挙げられる：例えば、２５０位での改変（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位での改変（例えば、ＬもしくはＦ）；２５２位での改変（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷもしくはＴ）、２５４位での改変（例えば、ＳもしくはＴ）、および２５６位での改変（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤもしくはＴ）；または４２８位および／もしくは４３３位での改変（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱもしくはＫ）ならびに／または４３４位での改変（例えば、Ｈ／ＦもしくはＹ）；あるいは２５０位および／もしくは４２８位での改変；あるいは３０７位もしくは３０８位での改変（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、ならびに４３４位での改変。一実施形態では、上記改変は、４２８Ｌの改変（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓの改変（例えば、Ｎ４３４Ｓ）；４２８Ｌ、２５９Ｉの改変（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆの改変（例えば、Ｖ３０８Ｆ）；４３３Ｋの改変（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４の改変（例えば、４３４Ｙ）；２５２、２５４、および２５６の改変（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）；２５０Ｑおよび４２８Ｌの改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７および／もしくは３０８の改変（例えば、３０８Ｆもしくは３０８Ｐ）を含む。
【０１３８】
例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群より選択される変異の１以上の対もしくは群を含むＦｃドメインを含む抗ＧＦＲα３抗体を包含する。前述のＦｃドメイン変異の全てのあり得る組み合わせ、ならびに本明細書で開示される抗体可変ドメイン内の他の変異は、本発明の範囲内であると企図される。
【０１３９】
抗体の生物学的特徴
一般に、本発明の抗体は、ＧＦＲα３の３つの球状システインリッチドメイン（１、２または３）のいずれか１つまたは複数への結合により機能することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ｈＧＦＲα３のシステインリッチドメインのうちの少なくとも１つに位置するエピトープに結合することができる。一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３７５の残基約４４〜残基約１２４の範囲のＧＦＲα３のドメイン１のアミノ酸残基に結合することができる。ある実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３７５の残基約１６２〜残基約２３９の範囲のＧＦＲα３のドメイン２のアミノ酸残基に結合することができる。ある実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３７５の残基約２４８〜残基約３４０の範囲のＧＦＲα３のドメイン３のアミノ酸残基に結合することができる。ある実施形態では、本発明の抗体は、リガンド結合ドメインとして作用するドメインのうちのいずれか１つの中のある領域に結合し、従って、上記リガンド（例えば、アルテミン）のその部位への結合を妨げることによって、ＧＦＲα３活性をブロックもしくは阻害することによって機能し得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、ＧＦＲα３のドメインのうちの１つにあるリガンド結合部位に結合し得、ＲＥＴへのアルテミン−ＧＦＲα３複合体のその後の結合を妨げ得る。一実施形態では、本発明の抗体は、リガンドとＧＦＲα３との間の特異性において役割を決定し得るかもしくは果たし得るアルテミン−ＧＦＲα３複合体の中のエピトープのうちのいずれか１つ以上（例えば、配列番号３７５の残基１６７〜１８４の範囲に及ぶ領域にある）に結合し得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、アルテミンとＧＦＲα３との間の特異性を担うドメイン２の残基のうちの１つ以上（例えば、配列番号３７５の１６７位（ｍｅｔ）、１７６位（ａｓｐ）および／もしくは１８４位（ｇｌｕ）のアミノ酸残基）に結合し得、そのような結合において、その受容体へのリガンド結合を妨げ得、その後、ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼを介するかまたはＲＥＴ以外のシグナル伝達メディエーターもしくはモジュレーターを介するシグナル伝達を妨げ得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、ＧＦＲα３の膜結合形態に、もしくはＧＦＲα３の可溶性形態に結合し得る。ある実施形態では、本発明の抗体は、ＧＦＲα３を結合し得るが、ＧＦＲα１とも、ＧＦＲα２とも、ＧＦＲα４とも交差反応しない。ある実施形態では、本発明の抗体は、二重特異性抗体であり得る。本発明の二重特異性抗体は、１つのドメインの１つのシステインリッチ領域中の１つのエピトープに結合し得、ｈＧＦＲα３の第２のドメインの１つのシステインリッチ領域にも結合し得る。ある実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、同じドメイン内の２つの異なる領域に結合し得る。ある実施形態では、本発明の二重特異性抗体の一方のアームが、ｈＧＦＲα３の１つのドメインの１つのシステインリッチ領域に結合し得、そして他方のアームが、ＲＥＴに、もしくはＲＥＴ以外のモジュレーターに結合し得る。ある実施形態では、上記二重特異性抗体は、ＧＦＲα３の中の１つのドメインおよびＧＦＲα１もしくはＧＦＲα２の中の１つのドメインを結合し得る。
【０１４０】
より具体的には、本発明の抗ＧＦＲα３抗体は、以下の特徴のうちの１つ以上を示し得る：
（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定される場合に、約１０−８Ｍ〜約１０−１３Ｍの範囲に及ぶＫＤを示す；
（ｉｉ）約４０ｐＭ〜約１５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、ＧＦＲα３のそのリガンドであるアルテミンへの結合のうちの約５０〜１００％をブロックする能力を示す；
（ｉｉｉ）アルテミンとＲＥＴとの混合物で被覆した固体支持体へのＧＦＲα３の結合のうちの約２０％〜約１００％をブロックする能力を示す；
（ｉｖ）約２００ｐＭ〜約５０ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０で、ＲＥＴのアルテミン依存性活性化をブロックもしくは阻害する；
（ｖ）骨のがん疼痛のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて１以上の侵害受容応答を阻害もしくは低減する；
（ｖｉ）アルテミン感作熱痛覚過敏をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害もしくは低減する；
（ｖｉｉ）変形性関節症のｉｎ  ｖｉｖｏモデルでアロディニアを阻害もしくは低減する；
（ｖｉｉｉ）ＲＥＴの他のＧＦＲ共受容体と交差反応しない；
（ｉｘ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む；あるいは
（ｘ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
【０１４１】
本発明のある抗ＧＦＲα３抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいてＧＦＲα３活性を阻害もしくは弱め得る。本発明の抗体がＧＦＲα３に結合し、単独のもしくはＲＥＴの存在下のそのリガンドであるアルテミンへの結合を阻害する能力は、当業者に公知の任意の標準的な方法（結合アッセイ、またはＧＦＲα３のその受容体であるアルテミンへの結合を阻害することによって、ＲＥＴの活性化を抗体がブロックするか否かを決定するためのアッセイ（例えば、本明細書で記載されるもの）を含む）を使用して測定され得る。ＧＦＲα３活性を測定するための非限定的な例示的ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、下記の実施例４および５で例証される。
【０１４２】
本発明は、ＧＦＲα３（配列番号３７５に示されるとおり）のシステインリッチ球状ドメイン、もしくは１つ以上のその断片に結合する抗ＧＦＲα３抗体およびその抗原結合性断片を含む。ＧＦＲα３に特異的な抗体は、追加的な標識または部分を含有していなくてもよく、あるいはＮ末端またはＣ末端標識または部分を含有していてもよい。一実施形態では、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイにおいて、標識（あるとすれば）の位置は、ペプチドが結合している表面に対するペプチドの配向性を決定することができる。例えば、表面が、アビジンでコーティングされている場合、Ｎ末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面に対し遠位となるように配向されるであろう。
【０１４３】
一実施形態では、本発明は、ｈＧＦＲα３を特異的に結合しかつｈＧＦＲα３活性を中和する、完全ヒト型モノクローナル抗体もしくはその抗原結合性断片を提供し、ここで上記抗体もしくはその断片は、以下の特徴のうちの１つ以上を示す：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３８１および３９７からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３８９および４０５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む；（ｉｉｉ）表１に示される重鎖もしくは軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列のうちのいずれか１つ以上およびこれらの組み合わせを含む；（ｉｖ）他のＧＦＲα受容体（ＧＦＲα１、ＧＦＲα２およびＧＦＲα４を含む）に結合することなく、および／または上記他のＧＦＲα受容体をブロックすることなく、ＧＦＲα３への結合に、および／またはその活性をブロックするのに特異的である；（ｖ）ＧＦＲα３のシステインリッチ球状ドメインのうちのいずれか１つ以上に対する結合特異性を示す；（ｖｉ）ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼの活性化およびそれを介したシグナル伝達をブロックする；（ｖｉｉ）アルテミン感作熱痛覚過敏をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害もしくは低減する；（ｖｉｉｉ）変形性関節症のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおけるアロディニアを阻害もしくは低減する；または骨のがん疼痛のｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて１以上の侵害受容応答を阻害もしくは低減する。
【０１４４】
エピトープマッピングおよび関連技術
当業者に公知の様々な技法を使用して、抗体が、ポリペプチドまたはタンパク質内の「１個または複数のアミノ酸と相互作用」するか否か決定することができる。例示的な技法として、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．、ＮＹ）に記載されているアッセイ等、慣用的なクロスブロッキングアッセイが挙げられ、この技術が実施され得る。他の方法として、アラニン走査変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８巻：４４３〜６３頁）、ペプチド切断解析結晶学試験およびＮＭＲ解析が挙げられる。加えて、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出および化学修飾等の方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９巻：４８７〜４９６頁）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することのできる別の方法は、質量分析により検出される水素／重水素交換である。一般用語において、水素／重水素交換方法は、目的のタンパク質を重水素標識するステップと、続いて抗体を重水素標識タンパク質に結合させるステップを含む。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移すと、抗体複合体によって保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持することができ、したがって、界面に含まれていないアミノ酸と比較して相対的により高い質量を示す。抗体の解離後に、標的タンパク質を、プロテアーゼ切断および質量分析による解析に付し、これにより、抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に相当する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９年）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７巻（２号）：２５２〜２５９頁；ＥｎｇｅｎおよびＳｍｉｔｈ（２００１年）Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．７３巻：２５６Ａ〜２６５Ａ頁を参照されたい。
【０１４５】
用語「エピトープ」とは、Ｂ細胞および／もしくはＴ細胞が応答する抗原上の部位をいう。Ｂ細胞エピトープは、連続アミノ酸もしくはタンパク質の三次元折りたたみによって並ぶ非連続アミノ酸のいずれからも形成され得る。近接アミノ酸から形成されるエピトープは典型的には、変性溶媒への曝露において保持されるが、一方、三次フォールディングによって形成されるエピトープは典型的には、変性溶媒による処理において失われる。エピトープは典型的には、独特の空間的コンフォメーションにおいて少なくとも３、より一般的には、少なくとも５または８〜１０アミノ酸を含む。
【０１４６】
抗原構造に基づく抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＡＳＡＰ）としても公知の修飾支援プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＭＡＰ）は、化学的にまたは酵素により修飾された抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性に従って、同じ抗原に対する多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をカテゴリー化する方法である（例えば、ＵＳ２００４／０１０１９２０を参照されたい）。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープとは明瞭に異なる、あるいはこれと部分的に重複する独特のエピトープを反映することができる。この技術は、特徴付けが遺伝的に別個の抗体に集中され得るような、遺伝的に同一の抗体の迅速なフィルタリングを可能にする。ハイブリドーマスクリーニングに適用される場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有するｍＡｂを産生する希少なハイブリドーマクローンの同定を容易にすることができる。ＭＡＰを使用して、本発明の抗体を異なるエピトープに結合する抗体の群へと選別することができる。
【０１４７】
特定の実施形態では、上記抗ＧＦＲα３抗体もしくは抗体の抗原結合性断片は、ＧＦＲα３システインリッチドメイン１、２、もしくは３のうちの少なくとも１つ内のエピトープもしくはその断片を結合し、ここでドメイン１は、配列番号３７５の残基番号約４４〜残基番号約１２４の範囲に及び；ドメイン２は、配列番号３７５の残基番号約１６２〜残基番号約２３９の範囲に及び；ドメイン３は、配列番号３７５の残基番号約２４８〜残基番号約３４０の範囲に及ぶ。
【０１４８】
ある実施形態では、上記抗ＧＦＲα３抗体もしくは抗体の抗原結合性断片は、ヒトＧＦＲα３のドメイン１内のエピトープもしくはその断片を結合する。
【０１４９】
特定の実施形態では、上記抗ＧＦＲα３抗体もしくは抗体の抗原結合性断片は、ヒトＧＦＲα３のドメイン２内のエピトープもしくはその断片を結合する。
【０１５０】
特定の実施形態では、上記抗ＧＦＲα３抗体もしくは抗体の抗原結合性断片は、ヒトＧＦＲα３のドメイン３内のエピトープもしくはその断片を結合する。
【０１５１】
特定の実施形態では、上記抗体もしくは抗体断片は、ドメイン１、２、もしくは３内の、および／または２つの異なるドメイン内のＧＦＲα３の挙げられたエピトープのうちの１つより多くを含むエピトープ（例えば、上記ドメイン１およびドメイン２内の、または上記ドメイン２およびドメイン３内の、または上記ドメイン１およびドメイン３内の、エピトープ）を結合する。
【０１５２】
特定の実施形態では、上記抗体は、ＧＦＲα３の１つのドメイン内の１つのエピトープおよびＧＦＲα３の異なるドメイン内の別のエピトープを結合する、二重特異性抗体である。一実施形態では、上記抗体は、ＧＦＲα３のドメイン１における１つのエピトープおよびＧＦＲα３のドメイン２における別のエピトープを結合する、二重特異性抗体である。一実施形態では、上記抗体は、ＧＦＲα３のドメイン１における１つのエピトープおよびＧＦＲα３のドメイン３内の別のエピトープを結合する、二重特異性抗体である。一実施形態では、上記抗体は、ＧＦＲα３のドメイン２における１つのエピトープおよびＧＦＲα３のドメイン３内の別のエピトープを結合する、二重特異性抗体である。
【０１５３】
本発明はまた、本明細書に記載されている特異的な例示的抗体（例えば、Ｈ４Ｈ２２０７Ｎ、Ｈ４Ｈ２２１２Ｎ、Ｈ４Ｈ２２３６Ｎ３、Ｈ４Ｈ２２４３Ｎ２、Ｈ４Ｈ２２１０Ｎ、Ｈ４Ｈ２２３４Ｎ、Ｈ４Ｈ２２９１Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９２Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９３Ｐ、Ｈ４Ｈ２２９４Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９５Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９６Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４１Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４２Ｐ、Ｈ４Ｈ２３４４Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４５Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４６Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５０Ｐ、Ｈ４Ｈ２３５２Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５４Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５５Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５７Ｓ、Ｈ４Ｈ２３６４Ｓ、Ｈ１Ｍ２２４３ＮおよびＨ１Ｍ２２３６Ｎ）のいずれかと同じエピトープに結合する抗ＧＦＲα３抗体を包含する。同様に、本発明はまた、ＧＦＲα３またはＧＦＲα３断片との結合に関して、本明細書に記載されている特異的な例示的抗体のいずれかと競合する抗ＧＦＲα３抗体を包含する。
【０１５４】
本技術分野において公知の慣用的な方法を使用することにより、抗体が、参照抗ＧＦＲα３抗体と同じエピトープに結合するか、またはこれと結合に関して競合するか否か容易に決定することができる。例えば、被験抗体が、本発明の参照抗ＧＦＲα３抗体と同じエピトープに結合するか否か決定するため、飽和条件下で参照抗体をＧＦＲα３タンパク質またはペプチドに結合させる。次に、このＧＦＲα３分子に結合する被験抗体の能力を評価する。被験抗体が、参照抗ＧＦＲα３抗体との飽和結合後のＧＦＲα３に結合することができる場合、被験抗体が、参照抗ＧＦＲα３抗体とは異なるエピトープに結合すると結論づけることができる。他方では、被験抗体が、参照抗ＧＦＲα３抗体との飽和結合後のＧＦＲα３分子に結合することができない場合、被験抗体は、本発明の参照抗ＧＦＲα３抗体によって結合されているエピトープと同じエピトープに結合することができる。
【０１５５】
抗体が、結合に関して参照抗ＧＦＲα３抗体と競合するか否か決定するため、２種の配向性において上に記載されている結合手法を行う。第１の配向性において、参照抗体を飽和条件下でＧＦＲα３分子に結合させ、続いて、ＧＦＲα３分子への被験抗体の結合を評価する。第２の配向性において、被験抗体を飽和条件下でＧＦＲα３分子に結合させ、続いてＧＦＲα３分子への参照抗体の結合を評価する。両方の配向性において、第１の（飽和）抗体のみが、ＧＦＲα３分子に結合することができる場合、被験抗体および参照抗体が、ＧＦＲα３への結合に関して競合すると結論づけられる。当業者に認められる通り、結合に関して参照抗体と競合する抗体は、参照抗体と同一エピトープに必ずしも結合しないが、重複または隣接するエピトープに結合することにより参照抗体の結合を立体的に遮断し得る。
【０１５６】
２種の抗体は、それぞれが抗原への他方の結合を競合的に阻害（遮断）する場合、同じまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１、５、１０、２０または１００倍過剰な一方の抗体は、競合的結合アッセイにおいて測定して、他方の結合を少なくとも５０％だが、好ましくは７５％、９０％またはさらには９９％阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０年５０巻：１４９５〜１５０２頁を参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低下または排除する抗原における基本的にあらゆるアミノ酸変異が、他方の結合を低下または排除する場合、２種の抗体は、同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を低下または排除するいくつかのアミノ酸変異が、他方の結合を低下または排除する場合、２種の抗体は、重複するエピトープを有する。
【０１５７】
続いて、追加の慣用的な実験法（例えば、ペプチド変異および結合解析）を実行して、観察された被験抗体の結合の欠如が、実際に、参照抗体と同じエピトープへの結合によるものであるか、あるいは立体的遮断（または別の現象）が、観察される結合の欠如の原因であるかを確認することができる。このような選別の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴法、フローサイトメトリーまたは本技術分野において利用できる他のいずれかの定量的もしくは定性的抗体結合アッセイを使用して行うことができる。
【０１５８】
種選択性および種交差反応性
本発明の特定の実施形態によれば、上記抗ＧＦＲα３抗体は、ヒトＧＦＲα３に結合するが、他の種に由来するＧＦＲα３には結合しない。あるいは、本発明の抗ＧＦＲα３抗体は、特定の実施形態では、ヒトＧＦＲα３の結合し、１以上の非ヒト種に由来するＧＦＲα３に結合する。例えば、本発明の抗ＧＦＲα３抗体は、ヒトＧＦＲα３に結合し得、場合によっては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザルもしくはチンパンジーのＧＦＲα３のうちの１つ以上に結合してもよいし、結合しなくてもよい。
【０１５９】
イムノコンジュゲート（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）
本発明は、疼痛もしくは炎症を低下させることのできる薬剤、または化学療法薬もしくは放射性同位元素等の治療部分にコンジュゲートされたヒト抗ＧＦＲα３モノクローナル抗体（「イムノコンジュゲート」）を包含する。抗ＧＦＲα３抗体にコンジュゲートすることのできる治療部分の種類は、処置しようとする状態および達成されるべき所望の治療効果を考慮するであろう。例えば、急性もしくは慢性の疼痛を処置するために、ＮＳＡＩＤ、オピオイド、もしくはＣｏｘ−２インヒビターのような薬剤、または局所麻酔剤、または第２のＧＦＲα３インヒビターは、上記ＧＦＲα３抗体にコンジュゲートされ得る。あるいは、所望の治療効果が、疼痛のある状態と関連する炎症を処置することである場合、抗炎症剤を上記抗ＧＦＲα３抗体（例えば、セレコキシブが挙げられるが、これらに限定されない）またはサイトカインアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１もしくはＩＬ−６インヒビター）にコンジュゲートすることは有利であり得る。処置される予定の状態ががん状態である場合、化学療法薬、もしくは放射性同位体を上記ＧＦＲα３抗体にコンジュゲートすることは、有益であり得る。イムノコンジュゲートの形成に適した薬剤の例は、本技術分野において公知であり、例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
【０１６０】
多重特異的抗体
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性または多特異性となり得る。多重特異的抗体は、１種の標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的となり得る、あるいは２種以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有し得る。例えば、Ｔｕｔｔら、１９９１年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７巻：６０〜６９頁；Ｋｕｆｅｒら、２００４年、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２巻：２３８〜２４４頁を参照されたい。本発明の抗ＧＦＲα３抗体は、別の機能分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結するまたはこれと同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片は、別の抗体または抗体断片等、１種または複数の他の分子実体へと機能的に連結して（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合的会合または他の方法により）、第２の結合特異性を有する二重特異性または多特異性抗体を産生することができる。例えば、本発明は、免疫グロブリンの一方の腕が、ヒトＧＦＲα３またはその断片に特異的であり、免疫グロブリンの他方の腕が、第２の治療標的に特異的である、あるいは治療部分にコンジュゲートされている、二重特異性抗体を含む。本発明のある実施形態では、免疫グロブリンの一方のアームは、ｈＧＦＲα３の１つのドメイン上のエピトープもしくはその断片に対して特異的であり、免疫グロブリンの他方のアームは、ｈＧＦＲα３の第２のドメイン上のエピトープに特異的である。ある実施形態では、免疫グロブリンの一方のアームは、ｈＧＦＲα３の１つのドメイン上の１つのエピトープに特異的であり、他方のアームは、ｈＧＦＲα３の同じドメイン上の第２のエピトープに特異的である。
【０１６１】
本発明の文脈において使用することのできる例示的な二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインの使用であって、第１および第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインが、互いに少なくとも１個のアミノ酸が異なり、少なくとも１個のアミノ酸の差異が、アミノ酸の差異を欠く二重特異性抗体と比較してプロテインＡへの二重特異性抗体の結合を低下させる使用を含む。一実施形態では、第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソンナンバリングによる；ＥＵナンバリングによるＨ４３５Ｒ）等、プロテインＡ結合を低下または消失させる変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含むことができる。第２のＣＨ３内に見出すことのできるさらなる修飾は、ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７ＭおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７ＭおよびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２ＮおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２ＮおよびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９ＱおよびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９ＱおよびＶ４２２Ｉ）を含む。上に記載されている二重特異性抗体フォーマットにおけるバリエーションは、本発明の範囲内であるとみなされる。
【０１６２】
治療的投与および製剤
本発明は、本発明の抗ＧＦＲα３抗体またはその抗原結合性断片を含む治療組成物を提供する。本発明に従った治療組成物の投与は、製剤に取り込まれて伝達、送達、寛容性その他の向上をもたらす、適した担体、賦形剤および他の薬剤と共になされる投与であろう。多数の適切な製剤は、あらゆる薬剤師に公知の処方集に見出すことができる：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ。これらの製剤は、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）等）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲルならびにカーボワックスを含有する半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２巻：２３８〜３１１頁も参照されたい。
【０１６３】
抗体の用量は、投与しようとする被験体の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路その他に応じて変動し得る。本発明の抗体が、成体患者において急性または慢性の疼痛、炎症性疼痛、神経障害性疼痛などをもたらす種々の状態および疾患におけるＧＦＲα３活性に伴う疼痛を処置するために使用される場合、通常、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは、約０．０２〜約７、約０．０３〜約５または約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇ体重の単一用量で、本発明の抗体を静脈内投与することが有利である。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続時間を調整することができる。
【０１６４】
様々な送達系が公知であり、本発明の薬学的組成物の投与に使用することができ、例えば、リポソーム中のカプセル化、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、変異体ウイルスを発現することのできる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが挙げられる（例えば、Ｗｕら、（１９８７年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２６２巻：４４２９〜４４３２頁を参照）。導入の方法として、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が挙げられるがこれらに限定されない。組成物は、いずれかの簡便な経路により、例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸管粘膜等）を通した吸収により投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与することができる。投与は、全身性であっても局所性であってもよい。
【０１６５】
薬学的組成物は、小胞、特に、リポソームにおいて送達することもできる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９巻：１５２７〜１５３３頁を参照）。
【０１６６】
ある特定の状況において、薬学的組成物は、放出制御系において送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、放出制御系は、組成物の標的に近接して置くことができ、よって、全身性用量の一部分のみを必要とする。
【０１６７】
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴注入等のための剤形を含むことができる。これらの注射用調製物は、公に知られた方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、注射のために従来から使用されてきた無菌水性媒体または油性媒体において、上に記載されている抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化することにより調製することができる。注射用の水性媒体として、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、水素化ヒマシ油のＨＣＯ−５０（ポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）]等、適切な可溶化剤と
組み合わせて使用することのできる、生理食塩水、グルコースを含有する等張性溶液および他の補助的薬剤等が存在する。油性媒体として、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等、可溶化剤と組み合わせて使用することができる、ゴマ油、ダイズ油等が用いられている。このように調製された注射液は、好ましくは、適切なアンプル内に充填される。
【０１６８】
本発明の薬学的組成物は、標準的な針およびシリンジにより皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達装置（ｐｅｎ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｄｅｖｉｃｅ）は、本発明の薬学的組成物の送達において容易に適用される。係るペン型送達装置は、再使用可能または使い捨てとなり得る。再使用可能なペン型送達装置は、一般に、薬学的組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の薬学的組成物が全て投与され、カートリッジが空となったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、薬学的組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。続いて、ペン型送達装置を再使用することができる。使い捨てペン型送達装置において、交換可能なカートリッジは存在しない。寧ろ、使い捨てペン型送達装置は、装置内のリザーバーに保たれた薬学的組成物を予め充填した状態で届けられる。リザーバーから薬学的組成物が空になったら、装置全体が廃棄される。
【０１６９】
多数の再使用可能なペン型および自動注入送達装置が、本発明の薬学的組成物の皮下送達において適用される。例として、ほんの数例ではあるが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、英国ウッドストック）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、スイス、ブルグドルフ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、インディアナ州インディアナポリス）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、デンマーク、コペンハーゲン）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ニュージャージー州フランクリンレイクス）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、ドイツ、フランクフルト）が挙げられるがこれらに確かに限定されない。本発明の薬学的組成物の皮下送達において適用される使い捨てペン型送達装置の例として、ほんの数例ではあるが、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注入装置（Ａｍｇｅｎ、カリフォルニア州サウザンドオークス）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、ドイツ、シュトゥットガルト）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、イリノイ州アボットパーク）が挙げられるがこれらに確かに限定されない。
【０１７０】
有利には、上に記載されている経口または非経口的使用のための薬学的組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量の剤形へと調製される。単位用量の係る剤形として、例えば、錠剤、丸剤、カプセル、注射（アンプル）、坐剤等が挙げられる。含有されている先述の抗体の量は一般に、単位用量の剤形当たり約５〜約５００ｍｇである；特に注射形態において、先述の抗体は、約５〜約１００ｍｇで、他の剤形では約１０〜約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
【０１７１】
抗体の治療的使用
本発明の抗体は、ＧＦＲα３活性と関連する任意の疾患、障害、もしくは状態の処置、防止、および／もしくは改善のために、または上記疾患、障害、もしくは状態と関連する少なくとも１つの症状の改善のために、またはこのような疾患、障害、もしくは状態と関連する疼痛を軽減するために、有用である。本発明の抗ＧＦＲα３抗体で処置され得る例示的な状態、疾患、および／もしくは障害、ならびに／またはこのような状態、疾患、もしくは障害と関連した疼痛はとしては、以下が挙げられる：急性、慢性、ニューロパチー、もしくは炎症性の疼痛、関節炎、間質性膀胱炎、膵炎、片頭痛、群発頭痛、三叉神経痛、ヘルペス神経痛、全身性神経痛、癲癇もしくは癲癇状態、筋緊張症、不整脈、運動障害、神経内分泌障害、運動失調症、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群、便意切迫感、失禁、直腸過敏症、内臓痛、変形性関節症の疼痛、痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性ニューロパチー、神経根性疼痛、坐骨神経痛、背部痛、頭頚部痛、突出痛、術後痛、がん疼痛（骨がんもしくは膵臓がんと関連した疼痛を含む）。
【０１７２】
本発明の治療法によって処置可能な他の状態としては、遺伝性肢端紅痛症、鼻炎、前立腺がん、乳がん、骨がん、子宮頸がん、もしくは膀胱障害が挙げられた。本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片はまた、以下の状態を処置するために使用され得る：非悪性の急性、慢性、もしくは骨折の骨の疼痛；関節リウマチ、脊柱管狭窄症；神経障害性腰痛症；筋筋膜性疼痛症候群；線維筋痛症；顎関節疼痛；内臓痛（腹痛、膵臓疼痛が挙げられる）；慢性頭痛；緊張型頭痛（群発頭痛を含む）；糖尿病性ニューロパチー；ＨＩＶ関連ニューロパチー；シャルコー・マリー・トゥースニューロパチー；遺伝性感覚性ニューロパチー；末梢神経損傷；神経腫痛；異所性の近位および遠位の分泌；神経根症；化学療法誘発性神経障害性疼痛；放射線療法誘発性神経障害性疼痛；乳房切除術後疼痛；中枢性疼痛；脊髄損傷疼痛；脳卒中後疼痛；視床痛；複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ）；幻肢痛；難治性疼痛；筋骨格系の疼痛；関節痛；急性痛風疼痛；機械的刺激による腰痛症；頚部痛；腱炎；損傷性／運動性の疼痛；腹痛；腎盂腎炎；虫垂炎；胆嚢炎；腸閉塞；ヘルニア；他；胸痛（心臓痛を含む）；骨盤痛、腎疝痛、急性の陣痛（陣痛を含む）；帝王切開の疼痛；熱傷および外傷の疼痛；子宮内膜症；帯状疱疹疼痛；鎌状赤血球貧血；急性膵炎；突出痛；口腔顔面痛（副鼻腔痛、歯痛を含む）；多発性硬化症の疼痛；癩病の疼痛；ベーチェット病の疼痛；有痛脂肪症；静脈炎の疼痛；ギラン・バレー疼痛；痛む足と動く足症候群；ハグルンド症候群；ファブリー病の疼痛；膀胱および尿生殖器疾患；過活動膀胱。
【０１７３】
一実施形態では、本発明の抗体は、機能性疼痛症候群を処置するために使用され得、ここで上記機能性疼痛症候群は、慢性腰痛、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、線維筋痛症（ＦＭ）、慢性疲労症候群（ＣＦＳ）、腹痛、顎関節症（ＴＭＪＤ）、膀胱痛症候群（間質性膀胱炎）、機能性胃腸管障害／症候群、機能性胸痛症候群、片頭痛および緊張型頭痛、慢性骨盤痛症候群、前立腺痛症候群（慢性前立腺炎）、多種化学物質過敏症ならびに湾岸戦争症候群からなる群より選択される。
【０１７４】
本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片はまた、腫瘍細胞の成長／増殖もしくは腫瘍細胞の転移を阻害するために使用され得る。よって、ある実施形態では、本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片は、子宮内膜がん、前立腺がん、乳がん、子宮頸がん、肝臓がん、膵臓がん、結腸がん、胃がん、子宮がん、卵巣がん、腎臓がん、非小細胞肺がん、脳がん、白血病、リンパ腫、骨がん、もしくはがんの転移（例えば、骨へのがんの転移）と関連する疼痛が挙げられるがこれらに限定されないがんを処置するために使用され得る。（Ｔａｎｇ，  Ｊ−Ｚ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  （２０１０），  ９（６）：  １６９７−１７０８；  Ｋａｎｇ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  （２００９），  ２８：２０３４−２０４５；  Ｃｅｙｈａｎ，  Ｇ．Ｏ．
ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，  （２００６），  ２４４（２）：２７４−２８１；  Ｂａｎｅｒｊｅｅ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  （２０１１），  １３：Ｒ１１２；  Ｐａｎｄｅｙ，  Ｖ．  ｅｔ
ａｌ．，  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，  （２０１０），  １５１（３）：９０９−９２０；  Ｋａｎｇ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  （２０１０），  ２９：３２２８−３２４０；  Ｌｉ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ
（２０１１），  １８：２４を参照のこと）。
【０１７５】
本発明の抗体はまた、がん関連疼痛を処置もしくは防止するために有用である。「がん関連疼痛」としては、例えば、骨がん疼痛（骨へ転移したがん（例えば、乳がん、前立腺がん、肺がん、肉腫、腎臓がん、多発性骨髄腫など）に由来する疼痛を含む）が挙げられる。「がん関連疼痛」はまた、がん状態（例えば、腎細胞癌、膵臓癌、乳がん、頭頸部がん、前立腺がん、悪性神経膠腫、骨肉腫、結腸直腸がん、胃がん、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、卵巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、滑膜肉腫、甲状腺がん、もしくは黒色腫）とより一般に関連した疼痛を含む。本発明の抗体はまた、がん治療もしくは抗がん医療処置によって引き起こされるかもしくはこれと関連する疼痛（例えば、化学療法誘発性神経障害性疼痛（例えば、パクリタキセル（タキソールＴＭ）、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））；ニトロソウレア、シクロホスファミド、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、トポテカン、イリノテカン、カルムスチン、エストラムスチン、および白金ベースの化学療法化合物（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、およびイプロプラチン）での処置によって引き起こされるかもしくはこれと関連する疼痛）を処置もしくは防止するために有用である。
【０１７６】
組み合わせ療法
組み合わせ療法は、本発明の抗ｈＧＦＲα３抗体、および例えば、別のＧＦＲα３アンタゴニスト（例えば、抗ＧＦＲα３抗体もしくはＧＦＲα３の低分子インヒビター）；ＣＯＸ−２インヒビター；局所麻酔薬；ＮＭＤＡモジュレーター；カンナビノイド受容体アゴニスト；Ｐ２Ｘファミリーモジュレーター；ＶＲ１アンタゴニスト；サブスタンスＰアンタゴニスト；電位開口型ナトリウムチャネル（Ｎａｖ）のインヒビター（例えば、Ｎａｖ１．７アンタゴニスト、もしくはＮａｖ１．８アンタゴニスト（例えば、抗Ｎａｖ１．７もしくは抗Ｎａｖ１．８抗体または低分子インヒビター））、Ｎａｖ１．９アンタゴニスト（例えば、抗Ｎａｖ１．９抗体もしくはＮａｖ１．９の低分子インヒビター）；カルシウムチャネルインヒビター；カリウムチャネルインヒビター；サイトカインインヒビターもしくはサイトカイン受容体アンタゴニスト（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）インヒビター（例えば、リロナセプト（「ＩＬ−１  ｔｒａｐ」；Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）もしくはアナキンラ（ＫＩＮＥＲＥＴ(R)，  Ａｍｇｅｎ）、低分子ＩＬ−１アンタ
ゴニスト、もしくは抗ＩＬ−１抗体）；ＩＬ−１８インヒビター（例えば、低分子ＩＬ−１８アンタゴニストもしくは抗ＩＬ−１８抗体）；ＩＬ−６もしくはＩＬ−６Ｒインヒビター（例えば、低分子ＩＬ−６アンタゴニスト、抗ＩＬ−６抗体もしくは抗ＩＬ−６受容体抗体）；抗癲癇薬／抗痙攣薬（例えば、ガバペンチン、プレガバリン）；神経成長因子（ＮＧＦ）インヒビター（例えば、低分子ＮＧＦアンタゴニストもしくは抗ＮＧＦ抗体）；ＢＤＮＦ、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢもしくはｐ７５のインヒビター；オピオイド；モルフィン；低用量コルヒチン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）；アスピリン、もしくは別のＮＳＡＩＤ；ステロイド（例えば、プレドニゾン、メトトレキサートなど）；低用量シクロスポリンＡ；選択的セロトニン再取り込みインヒビター（ＳＳＲＩ）；セロトニンノルエピネフリン再取り込みインヒビター（ＳＮＲＩ）；三環系抗うつ薬；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）もしくはＴＮＦ受容体インヒビター（例えば、低分子ＴＮＦもしくはＴＮＦＲアンタゴニストまたは抗ＴＮＦもしくはＴＮＦＲ抗体）；ＴＷＥＡＫ（ＴＮＦ関連の弱いアポトーシス誘導物質）のインヒビター；ＲＥＴインヒビター；ＧＤＮＦファミリーリガンドのインヒビター；ＧＦＲα１、ＧＦＲα２もしくはＧＦＲα４のインヒビター；酸感受性イオンチャネル（例えば、ＡＳＩＣ１もしくはＡＳＩＣ３）のインヒビター；尿酸合成インヒビター（例えば、アロプリノール）；尿酸排出促進因子（例えば、プロベネシド、スルフィンピラゾン、ベンズブロマロンなど）；プロキネティシン受容体（ＰＲＯＫ１およびＰＲＯＫ２）のインヒビター；他の炎症インヒビター（例えば、カスパーゼ−１、ｐ３８、ＩＫＫ１／２、ＣＴＬＡ−４Ｉｇなどのインヒビター）；ならびに／またはコルチコステロイドを含み得る。
【０１７７】
投与レジメン
本発明のある特定の実施形態によると、抗ＧＦＲα３抗体の複数用量は、定義された時間経過にわたって被験体に投与することができる。本発明のこの態様に係る方法は、ＧＦＲα３抗体の複数用量を被験体に逐次的に投与するステップを含む。本明細書において、「逐次的に投与する」は、抗ＧＦＲα３抗体の各用量が、異なる時点において、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間または数ヶ月間）によって隔てられた異なる日に被験体に投与されることを意味する。本発明は、抗ＧＦＲα３抗体の単一の初回用量と、その後の抗ＧＦＲα３抗体の１または複数の二次用量と、任意選択でその後の抗ＧＦＲα３抗体の１または複数の三次用量を患者に逐次的に投与するステップを含む方法を含む。
【０１７８】
用語「初回用量」、「二次用量」および「三次用量」は、抗ＧＦＲα３抗体の投与の時系列を指す。よって、「初回用量」は、処置レジメンの初めに投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）；「二次用量」は、初回用量の後に投与される用量であり；「三次用量」は、二次用量の後に投与される用量である。初回、二次および三次用量は全て、同じ量の抗ＧＦＲα３抗体を含有することができるが、一般に、投与頻度の観点から互いに異なっていてもよい。しかし、ある特定の実施形態では、初回、二次および／または三次用量に含有されている抗ＧＦＲα３抗体の量は、処置過程において互いに変動する（例えば、適宜、上方または下方に調整される）。ある特定の実施形態では、処置レジメンの初めに「負荷用量」として２以上の（例えば、２、３、４または５）用量が投与され、続いてより少ない頻度で投与されるその後の用量（例えば、「維持用量」）が投与される。
【０１７９】
本発明の例示的な一実施形態では、各二次および／または三次用量は、直前の用量から１〜２６（例えば、１、１１／２、２、２１／２、３、３１／２、４、４１／２、５、５１／２、６、６１／２、７、７１／２、８、８１／２、９、９１／２、１０、１０１／２、１１、１１１／２、１２、１２１／２、１３、１３１／２、１４、１４１／２、１５、１５１／２、１６、１６１／２、１７、１７１／２、１８、１８１／２、１９、１９１／２、２０、２０１／２、２１、２１１／２、２２、２２１／２、２３、２３１／２、２４、２４１／２、２５、２５１／２、２６、２６１／２またはそれより長い）週間後に投与される。語句「直前の用量」は、本明細書において、一連の複数の投与において、介在する用量が存在しない順番において丁度次の用量の投与の前に患者に投与される抗ＧＦＲα３抗体の用量を意味する。
【０１８０】
本発明の本態様に係る方法は、抗ＧＦＲα３抗体のいずれかの数の二次および／または三次用量を患者に投与するステップを含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、単一の二次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２もしくはそれより多い（例えば、２、３、４、５、６、７、８もしくはそれより多い）二次用量が、患者に投与される。同様に、ある特定の実施形態では、単一の三次用量のみが、患者に投与される。他の実施形態では、２以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８もしくはそれより多い）三次用量が、患者に投与される。
【０１８１】
複数の二次用量を含む実施形態では、各二次用量は、他の二次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各二次用量は、直前の用量の１〜２週間後に患者に投与することができる。同じく、複数の三次用量を含む実施形態では、各三次用量は、他の三次用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各三次用量は、直前の用量の２〜４週間後に患者に投与することができる。あるいは、二次および／または三次用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの過程にわたって変動し得る。投与の頻度は、医師によって、個々の患者の必要に応じて処置過程の間に調整することもできる。
【０１８２】
抗体の診断的使用
本発明の抗ＧＦＲα３抗体を使用して、例えば、診断目的で、試料におけるＧＦＲα３を検出および／または測定することもできる。例えば、抗ＧＦＲα３抗体またはその断片は、ＧＦＲα３の異常な発現（例えば、過剰発現、過少発現、発現欠除など）によって特徴付けられる状態または疾患を診断するために使用され得る。ＧＦＲα３の例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られた試料を本発明の抗ＧＦＲα３抗体と接触させるステップを含むことができ、抗ＧＦＲα３抗体は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識されている。あるいは、未標識の抗ＧＦＲα３抗体は、それ自体が検出可能に標識されている二次抗体と組み合わせて診断適用において使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓもしくは１２５Ｉ等、放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネートもしくはローダミン等、蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋わさびペルオキシダーゼもしくはルシフェラーゼ等、酵素となり得る。試料におけるＧＦＲα３の検出または測定に使用することのできる特異的な例示的アッセイとして、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）が挙げられる。
【０１８３】
本発明に係るＧＦＲα３診断アッセイにおいて使用することのできる試料は、正常または病的状態における、検出可能な量のＧＦＲα３タンパク質またはその断片を含有する、患者から得ることができるいずれかの組織または流体試料を含む。一般に、健康患者（例えば、異常なＧＦＲα３レベルまたは異常なＧＦＲα３活性に伴う疾患にも状態にも罹患していない患者）から得られる特定の試料におけるＧＦＲα３のレベルを測定して、ＧＦＲα３のベースラインまたは標準レベルを最初に確立するであろう。その後、ＧＦＲα３のこのベースラインレベルは、ＧＦＲα３関連疾患もしくはＧＦＲα３関連状態またはこのような疾患もしくは状態に関連した疼痛を有すると疑われる個体から得られる試料において測定されたＧＦＲα３のレベルに対して比較することができる。
【実施例】
【０１８４】
次の実施例は、本発明の方法および組成物を作製および使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供できるように示されており、本発明者らが自身の発明として考慮する範囲の限定を企図しない。使用された数（例えば、量、温度等）に対する正確度を確保するための努力をしたが、一部の実験誤差および偏差が考慮されるべきである。他に断りがなければ、部は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は大気圧またはその近辺である。
【０１８５】
（実施例１．ヒトＧＦＲα３に対するヒト抗体の生成）
配列番号３７０、３７１、３７２および３７３として示されるアミノ酸配列を有するＧＦＲα３ペプチドのうちのいずれか１つ、またはその断片を含む免疫原は、ヒトＧＦＲα３に対する抗体を生成するために利用され得る。これらのペプチドを、担体（例えば、ＫＬＨ）にコンジュゲートし、次いで、ヒト免疫グロブリン重およびカッパー軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、免疫応答を刺激するためのアジュバントと共に投与した。ＧＦＲα３特異的イムノアッセイにより抗体免疫応答をモニターする。所望の免疫応答が達成されたら、脾細胞を収集し、マウス骨髄腫細胞と融合してその生存能を保ち、ハイブリドーマ細胞株を形成する。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択して、ＧＦＲα３特異的抗体を産生する細胞株を同定する。この技法および上に記載されている様々な免疫原を使用して、数種類の抗ＧＦＲα３キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを保有する抗体）を得た。この方法を用いて生成される抗ＧＦＲα３抗体を、Ｈ１Ｍ２２０７Ｎ、Ｈ１Ｍ２２１２Ｎ、Ｈ１Ｍ２２３６Ｎ、Ｈ１Ｍ２２３６Ｎ３、Ｈ１Ｍ２２４３Ｎ、Ｈ１Ｍ２２４３Ｎ２、Ｈ１Ｍ２２１０ＮおよびＨ１Ｍ２２３４Ｎと命名した。
【０１８６】
抗ＧＦＲα３抗体は、また、Ｕ．Ｓ．２００７／０２８０９４５Ａ１に記載されている通り、骨髄腫細胞に融合することなく抗原陽性Ｂ細胞から直接的に単離した。この方法を使用して、数種類の完全ヒト型抗ＧＦＲα３抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを保有する抗体）を得た。この様式で生成された例示的な抗体を、次の通りに命名した：Ｈ４Ｈ２２０７Ｎ、Ｈ４Ｈ２２１２Ｎ、Ｈ４Ｈ２２３６Ｎ、Ｈ４Ｈ２２４３Ｎ、Ｈ４Ｈ２２１０Ｎ、Ｈ４Ｈ２２３４Ｎ、Ｈ４Ｈ２２９１Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９２Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９３Ｐ、Ｈ４Ｈ２２９４Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９５Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９６Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４１Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４２Ｐ、Ｈ４Ｈ２３４４Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４５Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４６Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５０Ｐ、Ｈ４Ｈ２３５２Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５４Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５５Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５７ＳおよびＨ４Ｈ２３６４Ｓ。
【０１８７】
本実施例の方法に従って生成された例示的な抗ＧＦＲα３抗体の生物学的特性を、下に記す実施例において詳細に説明する。
【０１８８】
（実施例２．重鎖可変領域アミノ酸配列および軽鎖可変領域アミノ酸配列）
表１は、選択された抗ＧＦＲα３抗体の重鎖可変領域アミノ酸配列および軽鎖可変領域アミノ酸配列の対ならびにその相当する抗体識別子を表記する。抗体は、典型的には、本明細書において次の命名法に従って参照される：Ｆｃ接頭語（例えば、「Ｈ４Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」）、続いて数的識別子（例えば、表１に示す通り「２２０７」）、続いて「Ｐ」、「Ｓ」または「Ｎ」接尾語。よって、この命名法に従うと、抗体は、例えば、「Ｈ４Ｈ２２０７Ｎ」と称され得る。本明細書に使用されている抗体名称におけるＨ４Ｈ、Ｈ１ＭおよびＨ２Ｍ接頭語は、抗体の特定のＦｃ領域を示す。例えば、「Ｈ２Ｍ」抗体は、マウスＩｇＧ２  Ｆｃを有し、一方、「Ｈ４Ｈ」抗体は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃを有する。当業者が認識するように、Ｈ１ＭまたはＨ２Ｍ抗体は、Ｈ４Ｈ抗体に変換することができ、逆もまた同様であるが、いずれの場合においても、表１に示す数的識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、そのままであろう。同じ数的抗体名称を有するが、Ｎ、Ｂ、ＳまたはＰの接尾語の文字が異なる抗体は、同一ＣＤＲ配列を有するが、ＣＤＲ配列の外部の領域（すなわち、フレームワーク領域）において配列バリエーションを有する重鎖および軽鎖を有する抗体を指す。よって、特定の抗体のＮ、Ｂ、ＳおよびＰバリアントは、その重鎖可変領域および軽鎖可変領域内に同一ＣＤＲ配列を有するが、そのフレームワーク領域内が互いに異なる。
【表１】
2020031662.tif 000002
【０１８９】
（実施例２．可変遺伝子利用解析）
産生された抗体の構造を解析するために、抗体可変領域をコードする核酸をクローニングして配列決定した。抗体の核酸配列および予測アミノ酸配列から、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）毎に遺伝子使用を同定した。表２は、本発明に従って選択された抗体の遺伝子使用を表記する。
【表２】
2020031662.tif 000003
【０１９０】
（実施例３．ＧＦＲα３抗体の結合親和性）
２５℃および３７℃でのリアルタイム表面プラズモン共鳴法バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００）アッセイを使用して、抗ＧＦＲα３抗体への抗原結合の、結合会合および解離速度定数（それぞれｋａおよびｋｄ）ならびに計算された平衡解離定数および解離半減期（それぞれＫＤおよびｔ１／２）を決定した。Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを伴って発現されたヒトＧＦＲα３（ｈＧＦＲα３−ｍｍｈ；配列番号３７０、Ｃ末端ｈＦｃタグ（ｈＧＦＲα３−ｈＦｃ；配列番号３７１）、もしくはＣ末端ｍＦｃタグを伴って発現されたヒトＧＦＲα３（ｈＧＦＲα３−ｍＦｃ；配列番号３７２）のいずれか、ならびにＣ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを伴って発現されたサルＧＦＲａ３（ＭｆＧＦＲα３−ｍｍｈ；配列番号３７３）への結合について、抗体を試験した。抗ＧＦＲα３抗体を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＣＭ５センサーチップへの直接アミンカップリングを介して作られた、ヤギ抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  ＃  ＢＲ−１００８−３８）もしくはマウス抗ヒトＩｇＧモノクローナル抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  ＃ＢＲ−１００８−３９）いずれかの表面で捕捉した。反応速度論的実験を、泳動緩衝液およびサンプル緩衝液の両方として、ＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  サーファクタントＰ２０、ｐＨ７．４）もしくは０．０５％  ｖ／ｖ  サーファクタントＰ２０を含むＰＢＳ緩衝液を使用して行った。ヒトＧＦＲα３−ｍｍｈもしくはサルＧＦＲα３−ｍｍｈへの結合を、捕捉抗体表面にわたって２００〜７．４ｎＭ（３倍希釈）の範囲のいくつかの濃度を注入することによって評価した。ヒトＧＦＲα３−ｍＦｃもしくはヒトＧＦＲα３−ｈＦｃへの結合を、捕捉抗体表面にわたって１００〜３．７ｎＭ（３倍希釈）の範囲に及ぶいくつかの濃度を注入することによって評価した。抗体−抗原会合を、最大４分間にわたってモニターした一方で、緩衝液中での解離を、最大２０分間にわたってモニターした。反応速度論的な結合速度定数（ｋａ）および解離速度定数（ｋｄ）を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ｃカーブ適合ソフトウェアを使用して、データを処理し、１：１結合モデルに適合させることによって決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２（分）＝［ｌｎ２／（６０＊ｋｄ）］として反応速度論的速度定数から計算した。
【０１９１】
表３に示されるように、２５℃において、全２５種の抗ＧＦＲα３抗体は、８２．０ｐＭ〜２９．７ｎＭの範囲に及ぶＫＤ値でｈＧＦＲα３−ｍｍｈに結合した。３７℃において、全２５種の抗ＧＦＲα３抗体は、１１８ｐＭ〜４７．３ｎＭの範囲に及ぶＫＤ値でｈＧＦＲα３−ｍｍｈに結合した。表４に示されるように、２５℃において、全２３種の抗ＧＦＲα３抗体は、２．９０ｐＭ〜９７．２ｎＭの範囲に及ぶＫＤ値でＭｆＧＦＲα３−ｍｍｈに結合した。３７℃において、全２３種の抗ＧＦＲα３抗体は、１１．７ｐＭ〜１４５ｎＭの範囲に及ぶＫＤ値でＭｆＧＦＲα３−ｍｍｈに結合した。表５に示されるように、２５℃および３７℃において、上記２３種の抗ＧＦＲα３抗体のうちの６種を、ｈＧＦＲα３−ｈＦｃへの結合について試験した一方で、他の１７種の抗体を、ｈＧＦＲα３−ｍＦｃへの結合について試験した。２５℃において、上記６種の抗ＧＦＲα３抗体をｈＧＦＲα３−ｈＦｃへの結合について試験したところ、７．５０ｐＭ〜２２０ｐＭの範囲に及ぶＫＤ値で結合した。３７℃において、上記６種の抗ＧＦＲα３抗体をｈＧＦＲα３−ｈＦｃへの結合について試験したところ、４１．３ｐＭ〜５３１ｐＭの範囲に及ぶＫＤ値で結合した。２５℃において、上記１７種の抗ＧＦＲα３抗体をｈＧＦＲα３−ｍＦｃへの結合について試験したところ、０．４６７ｐＭ〜５８．４ｐＭの範囲に及ぶＫＤ値で結合した。３７℃において、上記１７種の抗ＧＦＲα３抗体をｈＧＦＲα３−ｍＦｃへの結合について試験したところ、１３．２ｐＭ〜１０６ｐＭの範囲に及ぶＫＤ値で結合した。
【表３】
2020031662.tif 000004
【表４】
2020031662.tif 000005
【表５】
2020031662.tif 000006
【０１９２】
（実施例４．抗ＧＦＲα３抗体によるヒトアルテミンへのヒトＧＦＲα３結合のブロック）
抗ＧＦＲα３抗体が、共受容体ヒトＲＥＴの存在下もしくは非存在下でヒトアルテミンへのヒトＧＦＲα３結合をブロックする能力を、２つの異なるブロッキングＥＬＩＳＡ形式を使用して決定した。
【０１９３】
第１の形式では、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有する組換えヒトアルテミンタンパク質（ｈアルテミン−ｍｍＨ；配列番号３６９）を、ＰＢＳ緩衝液中で、９６ウェルマイクロタイタープレートに２μｇ／ｍｌで一晩４℃において被覆し、次いで、０．５％（ｗ／ｖ）  ＢＳＡの溶液でブロックした。１２０ｐＭで一定量のＣ末端ヒトＦｃタグと融合したヒトＧＦＲα３（ｈＧＦＲα３−ｈＦｃ；配列番号３７１）を、種々の量の抗体（連続希釈で０〜約１０ｎＭの範囲に及ぶ）と予め混合し、続いて、室温（ＲＴ）で１時間インキュベートして、抗体−ｈＧＦＲα３−ｈＦｃ結合が平衡に達するようにした。次いで、平衡に達したサンプル溶液を、上記ｈアルテミン−ｍｍＨ被覆プレートに移した。１時間の結合の後、上記プレートを洗浄し、次いで、結合したｈＧＦＲα３−ｈＦｃを、ＨＲＰコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ，  ＃１０９−０３５−０９８）を使用して検出し、比色シグナルを、ＴＭＢ  ＨＲＰ基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ＃５１−２６０６ＫＣおよび＃５１−２６０７ＫＣ）を使用して発色させた。吸光度をＶｉｃｔｏｒ  Ｘ５プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で４５０ｎｍにおいて記録して、ｈアルテミン−ｍｍＨで被覆したプレートに結合し得た予め平衡に達したｈＧＦＲα３−ｈＦｃ−抗体溶液中で遊離ｈＧＦＲα３−ｈＦｃの量を決定した。ＩＣ５０値（一定の濃度のｈＧＦＲα３−ｈＦｃからのシグナルを５０％低下させるために必要な抗体の濃度として定義される）を、ＧｒａｐｈＰａｄのＰｒｉｓｍソフトウェアを使用して、上記データから計算した。抗ＧＦＲα３抗体の非存在下で１２０ｐＭ  ｈＧＦＲα３−ｈＦｃの一定量で測定した吸光度を、０％ブロッキングとして定義し、ｈＧＦＲα３−ｈＦｃ添加なしの吸光度を、１００％ブロッキングとして定義する。最高の抗体濃度を含むウェル中で認められた吸光度を使用して、表中に示される最大ブロッキング％を計算した。結果を表６にまとめる。
【０１９４】
第２のＥＬＩＳＡ形式では、プレート、サンプルおよびデータを、Ｃ末端１０ヒスチジンタグ（ｈＲＥＴ−１０Ｈｉｓ；  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ＃  １１６８−ＣＲ／ＣＦ）を有するｈアルテミン−ｍｍＨおよびヒトＲＥＴの両方をブロッキングＥＬＩＳＡ実験のために被覆したことを除いて、第１の形式と同様に処理した。９６ウェルマイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１．２μｇ／ｍｌ  ｈアルテミン−ｍｍＨおよび６．９μｇ／ｍｌ  ｈＲＥＴ−１０Ｈｉｓタンパク質の混合物で一晩４℃において被覆し、次いで、０．５％（ｗ／ｖ）  ＢＳＡの溶液でブロックした。一定量の、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有するビオチン化ヒトＧＦＲα３（ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ；配列番号３７０）１ｎＭを、種々の量の抗ＧＦＲα３抗体（連続希釈で０〜約１００ｎＭの範囲に及ぶ）と予め混合し、続いて、１時間室温でインキュベートして、抗体−ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ結合が平衡に達するようにした。次いで、平衡に達したサンプルを、被覆したプレートに移した。１時間の結合の後、上記プレートを洗浄し、次いで、結合したビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨを、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ，  ＃Ｎ２００）を使用して検出し、比色シグナルを、ＴＭＢ  ＨＲＰ基質を使用して発色させた。各抗体によるＩＣ５０値および最大ブロッキングを表６に示す。
【０１９５】
表６に示されるように、上記２３種の抗ＧＦＲα３抗体のうちの９種が、第１のＥＬＩＳＡ形式において４３．８ｐＭ〜７２３ｐＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、被覆ｈアルテミン−ｍｍＨへの上記ｈＧＦＲα３−ｈＦｃ結合のうちの５１〜９４％をブロックした。上記２３種の抗ＧＦＲα３抗体のうちの８種は、第１のＥＬＩＳＡ形式において試験したより高い抗体濃度のうちの多くで、ｈＧＦＲα３−ｈＦｃ結合シグナルを増大させた（表６中の「エンハンサー」）。上記第１のＥＬＩＳＡ形式で試験した２３種の抗体のうちの６種は、被覆したｈアルテミン−ｍｍＨへのｈＧＦＲα３−ｈＦｃ結合シグナルをブロックも増強もしなかった。表６に示されるように、第２のＥＬＩＳＡ形式に関しては、上記２３種の抗ＧＦＲα３抗体のうちの１７種が、４０３ｐＭ〜１４．６ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値で、二重被覆ｈアルテミン−ｍｍＨおよびｈＲＥＴ−１０Ｈｉｓへのビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ結合のうちの７５〜１００％をブロックした。また、第２のＥＬＩＳＡ形式において、上記２３種の抗ＧＦＲα３抗体のうちの５種が、より低い抗体濃度でビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ結合シグナルを増大させたが、ｈアルテミン−ｍｍＨおよびｈＲＥＴ−１０Ｈｉｓへの１ｎＭ以上の抗体濃度でビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ結合のうちの２８〜９５％をブロックした（表６中の「エンハンサー」）。１種の抗ＧＦＲα３抗体は、試験したより高い抗体濃度でビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ結合シグナルを増大させた（表６中の「エンハンサー」）。第２のＥＬＩＳＡ形式では、いかなる濃度でもブロッキングはなかった。
【表６】
2020031662.tif 000007
【０１９６】
（実施例５．抗ＧＦＲα３抗体がリガンドアルテミンによるＧＦＲα３およびＲＥＴの活性化をｉｎ  ｖｉｔｒｏでブロックする能力の測定）
抗ＧＦＲα３抗体がそのリガンドアルテミンによるＧＦＲα３およびＲＥＴの活性化をｉｎ  ｖｉｔｒｏでブロックする能力を、細胞ベースのアッセイを使用して決定した。ヒトＧＦＲα３（アクセッション番号  ＮＰ＿００１４８７．２のアミノ酸１〜４００）およびヒトＲＥＴ（アクセッション番号  ＮＰ＿０６５６８１のアミノ酸１〜１０７２）の両方を安定して発現するように改変したＨＥＫ２９３細胞を作り、次いで、ＳＲＥ応答性ルシフェラーゼレポーター（ＳＲＥ−ｌｕｃ；  Ｓａｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ＣＣＳ−０１０Ｌ）で形質導入した（ＨＥＫ２９３／ｈＧＦＲα３／ｈＲＥＴ細胞）。
【０１９７】
２０，０００個のＨＥＫ２９３／ｈＧＦＲα３／ｈＲＥＴ／ＳＲＥ−ｌｕｃ細胞を、０．５％  ＦＢＳを含むＯｐｔｉｍｅｍ（ＧＩＢＣＯ，  ＃３１９８５）の中でポリＤ−リジン被覆９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，  ＃３５−４６２０）に播種し、次いで、３７℃において５％  ＣＯ２で一晩増殖させた。次いで、上記細胞を、５ｐＭ〜３００ｎＭの範囲に及ぶ抗ＧＦＲα３抗体の連続希釈物とともに、１時間室温においてインキュベートした。一定用量（１００ｐＭ）の、Ｃ末端ｍｙｃ  ｍｙｃヘキサヒスチジンタグ（配列番号３６９）を伴って発現させたヒトアルテミンを、次いで上記細胞に添加し、さらに６時間インキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，  ＃Ｅ６０５１）を添加した後に、Ｖｉｃｔｏｒルミノメーター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で相対光単位（ＲＬＵ）として測定した。ＥＣ５０値およびＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍデータ分析ソフトウェアを使用して、１２点応答曲線に対して４パラメーターロジスティック方程式（ｆｏｕｒ−ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｌｏｇｉｓｔｉｃ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）から計算した。
【０１９８】
２３種の抗ＧＦＲα３抗体を、これらが上記ＨＥＫ２９３／ｈＧＦＲα３／ｈＲＥＴ／ＳＲＥ−ｌｕｃ細胞のアルテミン依存性活性化を阻害する能力について試験した。表７に示されるように、試験した全２３種の抗体は、０．２ｎＭ〜４８．３ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値でルシフェラーゼ活性をブロックした。２３種の抗体のうちの１９種は、３００ｎＭの濃度でベースラインまでブロックした。上記２３種の抗体のうちの４種（Ｈ４Ｈ２３４４Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４５Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４６Ｓ、およびＨ４Ｈ２３５４Ｓ−１）は、試験したどの抗体濃度でもベースラインまでブロックしなかった。
【表７】
2020031662.tif 000008
【０１９９】
（実施例６．アルテミン感作カプサイシン熱痛覚過敏症の阻害）
マウスにおいてアルテミン感作熱痛覚過敏を誘発するために、各マウスを、０．５μｇ
マウス組換えアルテミン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  ＃１０８５−ＡＲ）の足底内注射で前処置し、２４時間後に、ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  ＃Ｍ−２０２８）中の１００ｍＭ溶液から０．５μｇ  カプサイシン（最適に及ばない用量）の足底内注射を施した。熱痛覚過敏症を、Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ試験（ここで動物がその足を引っ込めるまで、注射した足に光線を向ける）を使用して評価した。引っ込めるまでの潜時を、侵害受容の行動尺度として記録する。熱痛覚過敏症は、有意に減少した足引っ込め潜時に基づいて、カプサイシン投与の３日後に一貫してアルテミン感作される。これら研究に関して、引っ込め潜時のベースライン値を、アルテミンもしくはカプサイシンのいずれかを投与する前に測定し、続いて、カプサイシン処置の３日後に２回目の測定を行った。これらのアッセイを行う実験者は、動物の処置群に関して盲検で行った。
【０２００】
アルテミン感作痛覚過敏症でのヒト抗ＧＦＲα３抗体の効力を評価する全ての実験に関して、マウスＧＦＲα３の代わりにヒトＧＦＲα３の発現についてホモ接合性の成体マウス（「ヒト化ＧＦＲα３」）を使用した。雄性および雌性両方のマウスを、処置群にわたって性別のバランスをとって各アッセイにおいて使用した（実験群もしくはコントロール群につき合計で８匹のマウス）。ヒト化ＧＦＲα３マウスを、野生型マウスで認められるものに類似のアルテミン誘発性カプサイシン熱痛覚過敏症潜時応答を有することを予め決定した。
【０２０１】
６種の抗ＧＦＲα３抗体（Ｈ４Ｈ２２１２Ｎ、Ｈ４Ｈ２２４３Ｎ２、Ｈ４Ｈ２２９２Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９４Ｓ、Ｈ４Ｈ２３４２Ｐ、およびＨ４Ｈ２３５２Ｓ−１）を、モデルで試験した。全ての抗体をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で希釈し、後ろ足へアルテミン注射をする２４時間前に、１ｍｌ／１００ｇ  体重体積中２５ｍｇ／ｋｇで皮下投与した。各実験では、動物の１群に、アイソタイプコントロール抗体を受けさせた。
【０２０２】
各処置群もしくはコントロール群の疼痛感受性を、ベースライン引っ込め潜時のパーセンテージ（ＢＷＬ％）として定義し、カプサイシン処置なしの彼らのベースライン引っ込め潜時と比較した、カプサイシン処置の３日後の各動物の時間に基づく引っ込め潜時（ＷＬ）の分数変化率（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅ）として計算した：
ＢＷＬ％＝［（ＷＬ（カプサイシン）−ＷＬ（カプサイシンなし））／ＷＬ（カプサイシンなし）］×１００
【０２０３】
ＢＷＬ％を使用すると、より大きな負の値は、より大きな熱痛覚過敏症を示す。
【０２０４】
表８は、カプサイシン注射の３日後に評価したアルテミン感作カプサイシン熱痛覚過敏症モデルでのベースライン引っ込め潜時（ＢＷＬ％）のパーセンテージに関して、群平均（太字）および平均の標準偏差（斜体）のまとめを示す。
【０２０５】
表８に示されるように、抗ｈＧＦＲα３抗体で処置したマウスは、アイソタイプコントロール抗体で処置したマウスと比較して、ＢＷＬ％の増大を示した（より小さい負の値もしくは正の値）。４種の抗体（Ｈ４Ｈ２３５２Ｓ、Ｈ４Ｈ２２４３Ｎ２、Ｈ４Ｈ２２９４Ｓ、およびＨ４Ｈ２３４２Ｐ）は、行った全ての実験にわたって熱痛覚過敏症に対して最高の抵抗性を促進した。
【表８】
2020031662.tif 000009
【０２０６】
（実施例７．ＧＦＲα１およびＧＦＲα２との交差反応性に関する抗ＧＦＲα３抗体の試験）
抗ＧＦＲα３抗体がＧＤＮＦファミリー受容体に結合する能力を、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄバイオセンサ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ，  Ｉｎｃ．）を使用して評価した。抗体を、Ｃ末端ヒトＦｃタグおよびヘキサヒスチジンタグを伴って発現させたヒトＧＦＲα１（ｈＧＦＲα１−ｈＦｃ−６Ｈｉｓ，  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃  ７１４−ＧＲ）、Ｃ末端ヒトＦｃタグのみを伴って発現させたヒトＧＦＲα１（ｈＧＦＲα１−ｈＦｃ；配列番号３７６）、Ｃ末端ヒトＦｃタグおよびヘキサヒスチジンタグを伴って発現させたヒトＧＦＲα２（ｈＧＦＲα２−ｈＦｃ−６Ｈｉｓ，  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃６１３−ＦＲ）、Ｃ末端ヒトＦｃタグを伴って発現させたヒトＧＦＲα３（ｈＧＦＲα３−ｈＦｃ，配列番号３７１）、または無関係のヒトＦｃタグ化タンパク質のいずれかへの結合に関して試験した。抗原を、５分間で１０μｇ／ｍＬ溶液から抗ヒトＦｃセンサーチップ上に捕捉した。次いで、被覆したセンサーチップを、無関係のヒトＦｃ抗体の１００μｇ／ｍＬ溶液で５分間ブロックした。次いで、ブロックしたセンサーチップを、６６７μＭの各抗ＧＦＲα３抗体もしくは緩衝液単独を含むウェルに１０分間にわたって浸漬した。実験を、ＨＢＳＴ＋ＢＳＡ緩衝液（１０  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  ｗ／ｖ  サーファクタントＰ２０、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ，  ｐＨ７．４）を使用して、２５℃において流速１０００ｒｐｍで行った。実験の各工程での結合応答（ｎｍの単位で測定した）をモニターし、記録した。
【０２０７】
試験した抗ＧＦＲα３抗体のうちの６種全てが、上記ｈＧＦＲα３−ｈＦｃタンパク質より１．０ｎｍ高い結合を示したが、表９に示されるように、他のＧＤＮＦファミリー受容体へのもしくは無関係のヒトＦｃタグ化タンパク質への測定可能な結合は全く示さなかった。
【表９】
2020031662.tif 000010
【０２０８】
（実施例８．抗ＧＦＲａ３抗体がＨＥＫ２９３／ＭｆＧＦＲα３／ＭｆＲｅｔ／ＳＲＥ−Ｌｕｃバイオアッセイでアルテミン刺激をブロックする能力の測定）
抗ＧＦＲα３抗体がカニクイザルＧＦＲα３およびカニクイザルＲＥＴのそのリガンドアルテミンによる活性化をｉｎ  ｖｉｔｒｏでブロックする能力を、細胞ベースのアッセイを使用して決定した。カニクイザルＧＦＲα３（ＭｆＧＦＲα３；配列番号３７７）およびカニクイザルＲＥＴ（ＭｆＲＥＴ；配列番号３７８）の両方を安定して発現するように改変したＨＥＫ２９３細胞を生成し、次いで、最小のＣＭＶプロモーターおよび血清応答エレメントのタンデム反復の制御下のホタルルシフェラーゼ遺伝子を発現するＣｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＳＲＥ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ（ＳＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ＃ＣＬＳ−０１０Ｌ）で形質導入して、ＨＥＫ２９３／ＭｆＧＦＲα３／ＭｆＲｅｔ／ＳＲＥ−Ｌｕｃ細胞株を生成した。
【０２０９】
バイオアッセイのために、２０，０００個のＨＥＫ２９３／ＭｆＧＦＲα３／ＭｆＲｅｔ／ＳＲＥ−Ｌｕｃ細胞を、０．５％  ＦＢＳを含むＯｐｔｉｍｅｍ（ＧＩＢＣＯ，  ＃３１９８５）中で、ポリＤ−リジン被覆９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，  ＃３５−４６２０）に播種し、次いで、５％  ＣＯ２で３７℃において一晩増殖させた。次いで、上記細胞を、５ｐＭ〜３００ｎＭの範囲に及ぶ抗ＧＦＲα３抗体の連続希釈物とともに１時間インキュベートした。次いで、一定用量（５００ｐＭ）の、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを伴って発現させたヒトアルテミン（ヒトアルテミン−ＭＭＨ；配列番号３６９）を、上記細胞に添加し、さらに６時間インキュベートした。用量応答曲線からヒトアルテミン−ＭＭＨのＥＣ５０値を決定するために、０．５ｐＭ〜１０ｎＭの範囲に及ぶヒトアルテミン−ＭＭＨの連続希釈物を、抗体なしで上記細胞に添加し、６時間、３７℃でインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，  ＃Ｅ６０５１）を添加した後にＶｉｃｔｏｒルミノメーター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で相対光単位（ＲＬＵ）として測定した。ＥＣ５０値およびＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍデータ分析ソフトウェアを使用して１２点応答曲線に対して４パラメーターロジスティック方程式から計算した。
【０２１０】
６種の抗ＧＦＲα３抗体を、これらがＨＥＫ２９３／ＭｆＧＦＲα３／ＭｆＲＥＴ／ＳＲＥ−ｌｕｃ細胞のアルテミン依存性活性化を阻害する能力について試験した。表１０に示されるように、試験した６種全ての抗体が、０．７ｎＭ〜２．５ｎＭの範囲に及ぶＩＣ５０値でルシフェラーゼ活性を完全にブロックした。ヒトアルテミン−ＭＭＨは、ＥＣ５０値７０ｐＭで、上記ＨＥＫ２９３／ｍｆＧＦＲα３／ｍｆＲｅｔ／ＳＲＥ−ＬＵＣ細胞株におけるＳＲＥ依存性ルシフェラーゼ活性を刺激した。
【表１０】
2020031662.tif 000011
【０２１１】
（実施例９．二重特異性抗ＧＦＲα３抗体の生成）
種々の二重特異性抗体を、本発明の方法を実施するにあたって使用するために生成する。例えば、ＧＦＲα３特異的抗体を、ＧＦＲα３上の別個のエピトープに結合する可変領域が単一の結合分子内に二重のエピトープ特異性を付与するためにいっしょに連結される、二重特異性形式で生成する（「二重特異性因子（ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」）。適切に設計された二重特異性因子は、ＧＦＲα３特異性および結合アビディティーの両方を増大させることによって、ＧＦＲα３ブロッキング効力全体を増強し得る。３つのシステイン反復のうちのいずれかの内の個々の異なるエピトープに対して特異性を有するか、または３つのシステイン反復のうちのいずれかの１つのエピトープ内の異なる領域に結合し得る種々の領域は、各可変領域が、別個のエピトープに、もしくは１つのエピトープ内の異なる領域に同時に結合することを可能にする構造的足場の上で対にされる。二重特異性体に関する一例では、１つのシステイン反復内の１つのエピトープに対して特異性を有するバインダー（ｂｉｎｄｅｒ）に由来する重鎖可変領域（ＶＨ）は、他の２つのシステイン反復のうちのいずれか内の第２のエピトープに対して特異性を有する一連のバインダーに由来する軽鎖可変領域（ＶＬ）と再結合されて、そのＶＨに対する元の特異性を破壊することなく、元のＶＨと対になり得る非コグネイト（ｎｏｎ−ｃｏｇｎａｔｅ）ＶＬパートナーを同定する。このようにして、単一のＶＬセグメント（例えば、ＶＬ１）は、２つの異なるＶＨドメイン（例えば、ＶＨ１およびＶＨ２）と組み合わされて、２つの結合「アーム」（ＶＨ１−ＶＬ１およびＶＨ２−ＶＬ１）から構成される二重特異性体を生成し得る。単一のＶＬセグメントの使用は、システムの複雑性を低減し、それによって、上記二重特異性体を生成するために使用されるクローニング、発現、および精製プロセスを単純化し、その効率を増大させる（例えば、ＵＳＳＮ１３／０２２７５９およびＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照のこと）。
【０２１２】
あるいは、ＧＦＲα３および第２の標的（例えば、ＲＥＴが挙げられるが、これらに限定されない）の両方を結合する抗体は、本明細書で記載される技術、もしくは当業者に公知の他の技術を使用して、二重特異性形式で調製され得る。細胞外に露出された別個のＧＦＲα３領域に結合する抗体可変領域は、例えば、リガンド（アルテミン）、他のＧＦＲα受容体上の関連部位、もしくはＲＥＴに結合する可変領域といっしょに連結されて、単一の結合分子内に二重の抗原特異性を付与する。ＧＦＲα３の個々のエピトープに対する特異性を有する種々の領域は、例えば、アルテミンに対する特異性を有する可変領域と組み合わされ、各可変領域が別個の抗原に結合することを可能にする構造的足場で対にされる。
【０２１３】
上記二重特異性バインダーは、抗体に関して上記に記載されたアッセイのうちのいずれかで、標的抗原（例えば、ＧＦＲα３および／もしくはアルテミン）、他のＧＦＲα受容体、またはＲＥＴの結合および機能的ブロックについて試験される。例えば、可溶性タンパク質結合を測定するための標準的方法は、その抗原との二重特異性相互作用を評価するために使用される（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、サイズ排除クロマトグラフィー、多角度レーザー光散乱、直接走査型熱量測定法、および他の方法）。ＧＦＲα３を発現する細胞への二重特異性抗体の結合は、細胞上の標的抗原を認識する蛍光標識二次抗体を使用して、フローサイトメトリーによって決定される。ペプチドでの結合実験もまた、表面プラズモン共鳴実験（ここで抗体へのペプチドのリアルタイム結合相互作用は、二重特異性体もしくはペプチドそれぞれが捕捉されるセンサー表面にわたってペプチドもしくは二重特異性体を流すことによって測定される）を使用して行われ得る。二重特異性体によるＧＦＲα３受容体の機能的ｉｎ  ｖｉｔｒｏブロッキングは、任意のバイオアッセイ（例えば、本明細書で記載されるもの）を使用して、または適切な動物モデル（例えば、本明細書で記載されるもの）において疼痛に対する反応をｉｎ  ｖｉｖｏで決定することによって、決定される。二重特異性体によるＧＦＲα３もしくはそのリガンドアルテミンの機能的ｉｎ  ｖｉｔｒｏブロッキングは、任意のバイオアッセイ（例えば、ＷＯ２０１０／０７７８５４、もしくはＵＳ２０１０／０１６６７６８に記載されるもの）を使用して、または適切な動物モデル（例えば、本明細書に記載されるもの）での熱刺激への過敏症をｉｎ  ｖｉｖｏで決定することによって、決定される。
【０２１４】
（実施例１０．モノクローナル抗マウスＧＦＲα３抗体の表面プラズモン共鳴によって導かれた結合親和性および反応速度論的定数）
抗マウスＧＦＲα３抗体への抗原結合に関する結合の会合速度定数および解離速度定数（それぞれ、ｋａおよびｋｄ）ならびに計算した平衡解離定数および解離半減期（それぞれ、ＫＤおよびｔ１／２）を、２５℃でリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサー（Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００）アッセイを使用して決定した。抗体を、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを伴って発現させたマウスＧＦＲα３（ｍＧＦＲα３−ＭＭＨ；配列番号３７９）への結合について試験した。抗マウスＧＦＲα３抗体を、Ｂｉａｃｏｒｅ
ＣＭ５センサーチップへの直接アミンカップリングによって作ったヤギ抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  ＃  ＢＲ−１００８−３８）表面上に捕捉した。反応速度論的実験を、泳動緩衝液およびサンプル緩衝液の両方としてＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  サーファクタントＰ２０、ｐＨ７．４）を使用して行った。マウスＧＦＲα３−ＭＭＨへの結合を、捕捉抗体表面にわたって１００ｎＭ〜６．２５ｎＭ（２倍希釈）の範囲に及ぶいくつかの濃度を注入することによって評価した。抗体−抗原会合を、最大５分間にわたってモニターした一方で、緩衝液中での解離は、最大１０分間にわたってモニターした。反応速度論的会合速度定数（ｋａ）および解離速度定数（ｋｄ）を、データを処理しＳｃｒｕｂｂｅｒ  ２．０ｃ曲線適合ソフトウェアを使用して、１：１結合モデルへと適合させることによって決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を以下のとおり反応速度論的速度定数から計算した：ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２（分）＝［ｌｎ２／（６０×ｋｄ）］。
【０２１５】
表１１に示されるように、２種の抗マウスＧＦＲα３抗体（Ｍ１Ｍ６９８６ＮおよびＭ１Ｍ６９７７Ｎ）を試験したところ、それぞれ、２３．１ｐＭおよび１０７ｐＭのＫＤ値で、２５℃でｍＧＦＲα３−ＭＭＨに結合した。
【表１１】
2020031662.tif 000012
【０２１６】
（実施例１１．マウスＧＦＲα３ブロックＥＬＩＳＡ）
抗マウスＧＦＲα３抗体が共受容体マウスＲＥＴの存在下もしくは非存在下でマウスアルテミンへのマウスＧＦＲα３結合をブロックする能力を、２つの異なるブロッキングＥＬＩＳＡ形式を使用して決定した。第１の形式では、組換えマウスアルテミン（Ｒ＆Ｄ  ｃａｔ＃  １０８５−ＡＲ／ＣＦ）タンパク質を、ＰＢＳ緩衝液中で、９６ウェルマイクロタイタープレートに２μｇ／ｍＬ（１６６ｎＭ）で一晩４℃において被覆し、次いで、０．５％（ｗ／ｖ）  ＢＳＡの溶液でブロックした。一定量（３．５ｎＭ）の、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有するビオチン化マウスＧＦＲα３（ビオチン−ｍＧＦＲ□３−ＭＭＨ，配列番号３７９）を、種々の量の抗体（連続希釈で１００ｎＭ〜１．６ｐＭの範囲に及ぶ）と予め混合し、続いて、室温（ＲＴ）で１時間インキュベートして、抗体−ビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨ結合が平衡に達するようにした。次いで、平衡化したサンプル溶液を、ｍアルテミン被覆プレートに移した。１時間の結合の後、上記プレートを洗浄し、次いで、結合したビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨを、ストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ，  ＃Ｎ２００）を使用して検出し、比色シグナルを、ＴＭＢ  ＨＲＰ基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ＃５１−２６０６ＫＣおよび＃５１−２６０７ＫＣ）を使用して発色させた。吸光度を、Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ５プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で４５０ｎｍにおいて記録して、プレートに被覆したｍアルテミンに結合できた予め平衡化したビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨ−抗体溶液中の遊離ビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨの量を決定した。ＩＣ５０値（一定濃度のビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨからのシグナルを５０％低減するために必要とされる抗体濃度と定義される）を、ＧｒａｐｈＰａｄのＰｒｉｓｍソフトウェアを使用してデータから計算した。抗マウスＧＦＲα３抗体の非存在下で一定量のビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨにおいて測定した吸光度は、０％ブロックと定義され、ビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨ添加なしでの吸光度は、１００％ブロックと定義される。最高抗体濃度を含むウェルで認められた吸光度を、表に示される最大ブロッキング％を計算するために使用した。結果を表１２にまとめる。
【０２１７】
第２のＥＬＩＳＡ形式では、プレート、サンプルおよびデータを、Ｃ末端ｈＦｃおよびヘキサヒスチジンタグを伴って発現させたマウスＲＥＴ（ｍＲＥＴ−ｈＦｃ−６Ｈｉｓ；
Ｒ＆Ｄ  ｃａｔ＃  ４８２−ＲＴ／ＣＦ）およびｍアルテミン（Ｒ＆Ｄ  ｃａｔ＃  １０８５−ＡＲ／ＣＦ）の両方が、ブロッキングＥＬＩＳＡ実験のために被覆したことを除いて、第１の形式と同様に処理した。９６ウェルマイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１．２μｇ／ｍＬ（１００ｎＭ）  ｍアルテミンおよび９．５μｇ／ｍＬ  （１００ｎＭ）  ｍＲＥＴ−ｈＦｃ−６Ｈｉｓタンパク質の混合物で４℃において一晩被覆し、次いで、０．５％（ｗ／ｖ）  ＢＳＡの溶液でブロックした。一定量（３５０ｐＭ）の、ビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨを、種々の量の抗マウスＧＦＲα３抗体（連続希釈で１００ｎＭ〜１．６ｐＭの範囲に及ぶ）と予め混合し、続いて、１時間室温でインキュベートして、抗体−ビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨ結合が平衡に達するようにした。次いで、平衡に達したサンプルを、被覆したプレートに移した。１時間の結合の後、上記プレートを洗浄し、次いで、結合したビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨを、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンを使用して検出し、比色シグナルを、ＴＭＢ  ＨＲＰ基質を使用して発色させた。各抗体によるＩＣ５０値および最大ブロッキングを表１２に示す。
【０２１８】
表１２に示されるように、試験した抗マウスＧＦＲα３抗体のうち１つのみ（Ｍ１Ｍ６９８６Ｎ）が、６９．１ｐＭのＩＣ５０値で、ビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨを被覆ｍアルテミンプレートへの結合からブロックする能力を示した。試験した他の抗マウスＧＦＲα３抗体（Ｍ１Ｍ６９７７Ｎ）は、このＥＬＩＳＡ形式では、測定可能なブロックを何ら示さなかった。試験した両方の抗マウスＧＦＲα３抗体（Ｍ１Ｍ６９８６ＮおよびＭ１Ｍ６９７７Ｎ）は、それぞれ、４７．２ｐＭおよび３６６ｐＭのＩＣ５０値で、ビオチン−ｍＧＦＲα３−ＭＭＨをｍアルテミンおよびｍＲＥＴ−ｈＦｃ−６Ｈｉｓの両方で被覆したプレートへの結合から完全にブロックする能力を示した。
【表１２】
2020031662.tif 000013
【０２１９】
（実施例１２．細胞ベースのルシフェラーゼバイオアッセイ）
抗マウスＧＦＲα３抗体がマウスＧＦＲα３およびマウスＲＥＴの、そのリガンドマウスアルテミンによる活性化をｉｎ  ｖｉｔｒｏでブロックする能力を、細胞ベースのアッセイを使用して決定した。マウスＧＦＲα３（アクセッション番号ＡＡＨ６６２０２．１のアミノ酸１〜３９７）およびマウスＲＥＴ（アクセッション番号ＮＰ＿０３３０７６．２のアミノ酸１〜１１１５）の両方を安定して発現するように改変されたＨＥＫ２９３細胞を生成し、次いで、ＳＲＥ応答性ルシフェラーゼレポーター（ＳＲＥ−ｌｕｃ；  Ｓａｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ＣＣＳ−０１０Ｌ）で形質導入した（２９３／ｍＧＦＲα３／ｍＲＥＴ／ＳＲＥ−ｌｕｃ細胞）。
【０２２０】
２０，０００個の２９３／ｍＧＦＲα３／ｍＲＥＴ／ＳＲＥ−ｌｕｃ細胞を、０．５％
ＦＢＳを含むＯｐｔｉｍｅｍ（ＧＩＢＣＯ，  ＃３１９８５）の中でポリＤ−リジン被覆９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ，  ＃３５−４６２０）に播種し、次いで、３７℃において５％  ＣＯ２で一晩増殖させた。次いで、上記細胞を、３ｎＭ〜４４ｎＭの範囲に及ぶ抗マウスＧＦＲα３抗体の連続希釈物とともに、１時間室温においてインキュベートした。一定用量（１００ｐＭ）の、マウスアルテミン（Ｒ＆Ｄ，  ＃  １０８５−ＡＲ／ＣＦ）を、次いで上記細胞に添加し、さらに６時間インキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，  ＃Ｅ６０５１）を添加した後に、Ｖｉｃｔｏｒルミノメーター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で相対光単位（ＲＬＵ）として測定した。ＥＣ５０値およびＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍデータ分析ソフトウェアを使用して、１２点応答曲線に対して４パラメーターロジスティック方程式から計算した。
【０２２１】
表１３に示されるように、試験した両方の抗マウスＧＦＲα３抗体（Ｍ１Ｍ６９８６ＮおよびＭ１Ｍ６９７７Ｎ）は、それぞれ、約４４ｎＭおよび３ｎＭのＩＣ５０値で、２９３／ｍＧＦＲα３／ｍＲＥＴ／ＳＲＥ−ｌｕｃ細胞のマウスアルテミン依存性刺激を阻害する能力を示した。
【表１３】
2020031662.tif 000014
【０２２２】
（実施例１３、１４および１５：骨のがん疼痛および変形性関節症の疼痛の動物モデルにおける抗マウスＧＦＲα３抗体の効果）
本明細書で記載される抗体は、アルテミンのＧＰＩ結合α受容体であるＧＦＲα３に対する高親和性ヒト抗体である。ヒトＧＦＲα３に対するこれら抗体は、マウスＧＦＲα３と交差反応しないので、これら抗体でのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイは、マウスＧＦＲα３配列をヒトＧＦＲα３の配列で置換するように遺伝的に改変されたマウスでのみ行われうる。アルテミン感作カプサイシンの薬理学的阻害を使用して、これらＧＦＲα３ｈｕ／ｈｕマウスにおける初期のｉｎ  ｖｉｖｏ実験から、このｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて４種のヒト抗体の効力が明らかになった。効力データの生成を促進するために、マウスＧＦＲα３抗体を、上記ヒト抗体の代わりとして作用するように生成した。内因性ＧＦＲα３遺伝子の欠失についてホモ接合性であるＣ５７ＢＬ６／１２９Ｓｖミックス系統のマウスを、チャイニーズ・ハムスター卵巣細胞において発現された組換えマウスＧＦＲα３細胞外ドメインで免疫した。ＧＦＲα３に対する特異的免疫応答を、上記免疫したマウス由来の血清のイムノアッセイによって確認した。高い特異的免疫応答を示すマウスから脾臓を集め、抗体生成ハイブリドーマ細胞を、標準的なハイブリドーマ手順に倣って、上記単離した脾細胞とマウス骨髄腫細胞とを融合することによって生成した。ハイブリドーマ上清を、ＧＦＲα３への結合について、およびイムノアッセイ形式で固体表面に被覆したアルテミンもしくはアルテミン／ＲｅｔのいずれかへのＧＦＲα３の結合をブロックする上記上清の能力について、イムノアッセイでさらにスクリーニングした。上清をまた、それらが細胞ベースのバイオアッセイにおいて、上記ＧＦＲα３／Ｒｅｔ共受容体経路のアルテミン刺激をブロックする能力についてスクリーニングした。可変領域抗体配列を、抗体タンパク質が細胞ベースのアッセイにおいて強力なブロッキングを示した選択されたハイブリドーマクローンのＰＣＲ増幅によって得、これら配列を、マウスＩｇＧ１アイソタイプを伴う全長組換え抗マウスＧＦＲα３抗体を生成するために使用した。２種の抗体を、細胞ベースのアッセイにおいてその強力に阻害したアルテミンシグナル伝達をｉｎ  ｖｉｖｏ試験するために選択した。上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合イムノアッセイでは、抗体Ｍ１Ｍ６９８６Ｎは、固体表面に被覆したアルテミンもしくはアルテミン／Ｒｅｔの両方へのＧＦＲα３の結合をブロックした。上記抗体Ｍ１Ｍ６９８６Ｎは、ここでは直接ブロッカーと言われる。抗体Ｍ１Ｍ６９７７Ｎは、被覆したアルテミン／ＲｅｔへのＧＦＲα３の結合をブロックしたが、上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏイムノアッセイにおいてアルテミンのみへの結合をブロックしなかった。上記抗体Ｍ１Ｍ６９７７Ｎは、ここで間接ブロッカーと言われる。これら２種のマウス抗体Ｍ１Ｍ６９８６ＮおよびＭ１Ｍ６９７７Ｎを、アルテミン感作カプサイシン熱痛覚過敏モデル（実施例６に記載される）で試験するために選択した。なぜなら、これら２種の抗体は、効果的なヒト抗体に類似の結合プロフィールおよびブロッキングプロフィールを示したからである。これら２種の抗体を、これらが野生型マウスにおいて痛覚過敏症のアルテミン誘発性感作をｉｎ  ｖｉｖｏでブロックする能力についてスクリーニングした。それらのヒト抗体対応物と同様に、両方の抗体が、カプサイシン注射の３日後に、カプサイシン熱痛覚過敏症に対するアルテミンの感作効果を有意に阻害した（図１）。
【０２２３】
（実施例１３：骨のがん疼痛の線維肉腫モデル）
（方法論）
（被験体）
Ｃ５７Ｂｌ６バックグラウンド系統の成体雄性マウスを、約１２週齢で２回の線維肉腫実験のために使用した。この実験についての結果データを測定する実験者は、データ収集、編集および分析の全体を通じて動物の処置群に対して盲検で行った。
【０２２４】
（骨がんモデル）
骨のがん疼痛を誘発するために、上記マウスに麻酔をかけ、次いで、１．０×１０６  ＭＣ５７Ｇ線維肉腫細胞を大腿部内に注射した。これら細胞は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウス線維肉腫腫瘍株に由来する。腫瘍は、典型的には、骨の破壊が腫瘍移植後１４日目までに明らかになるほどにこのモデルで激しく増殖する。移植後７日目、１０日目および１４日目にＸ線写真を撮影して、腫瘍増殖および骨の破壊を確認した。骨の破壊を、０は破壊なしを表し、３は、腫瘍の領域における大腿骨の完全な破壊を表すものとして３点スケールでスコア付けした。
【０２２５】
（抗体処置）
各動物に、がん細胞移植の前日および７日目に再び投与した３０ｍｇ／ｋｇ  ｓ．ｃ．抗体注射を受けさせた。動物を２つもしくは３つの処置群のうちの１つに疑似無作為的に（ｐｓｅｕｄｏ−ｒａｎｄｏｍｌｙ）割り当てた：１）２回の別個の実験においてＭ２Ｍ１８０Ｎアイソタイプ（陰性）コントロール抗体、２）２回の別個の実験においてＭ１Ｍ６９７７Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体、または３）２回目の実験のみにおいてＭ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体。Ｍ１Ｍ６９８６は、アルテミンのＧＦＲα３との相互作用をブロックし、それによってアルテミンの作用の「直接」ブロッカーと考えられる。対照的に、Ｍ１Ｍ６９７７Ｎは、ＧＦＲα３／ＲＥＴ複合体を通じてアルテミンの作用を阻害し、従って、「間接」インヒビターと考えられる。
【０２２６】
（侵害受容の尺度）
骨腫瘍への侵害受容応答を、誘発性機械的（接触性）アロディニアについてはフォンフレイヘア（ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  Ｈａｉｒ）試験を、足で体重を支えようとしているかについては反応速度論的体重負荷（ＤＷＢ）試験を、および防御行動（ｇｕａｒｄｉｎｇ  ｂｅｈａｖｉｏｒ）を使用して測定した。フォンフレイ試験結果を、足を引っ込めるために必要な圧力のグラムとして表す。体重負荷結果を、同側足にかけられた体重の％として表す。防御行動を、２分間の期間に対して足を防御するのに費やした時間として表す。
【０２２７】
（結果）
（骨の破壊）
いずれの実験でも骨の破壊スコアに対して抗体処置の有意な効果はなく、このことは、上記抗体処置が骨がん自体の重篤度に対して影響を有しなかったことを示唆する（データは示さず）。
【０２２８】
（侵害受容行動）
第１の実験では、線維肉腫注射後にＧＦＲα３抗体処置をした接触性アロディニアにおいて統計的に有意な減少があり（Ｆ（１，２０）＝９．１８９、ｐ＝０．００７、図２Ａ）、第２の実験では、効力全体に対して統計的な傾向があった（Ｆ（２，２９）＝３．０６９、ｐ＜０．０６２、図２Ｂ）。個々の比較は、ときおり、第２の研究において有意性を達成した（図２Ｂ）。
【０２２９】
いずれの実験においても線維肉腫細胞の骨移植後１４日目に測定した同側の足への反応速度論的体重負荷に対するＧＦＲα３抗体の統計的に有意な効果はなかったが、第１の実験では、Ｍ１Ｍ６９７７Ｎ処置での効力に対して統計的傾向が明らかになった（ｔ（１０）＝２．０４７、ｐ＝０．０６８、図３Ａ；Ｆ（２，２８）＝１．５９８、ｐ＝０．２２０、図３Ｂ）。
【０２３０】
ＧＦＲα３抗体は、両方の線維肉腫実験において骨がんを移植した後に、足の防御を有意に減少させた（Ｆ（１，２０）＝１２．２７０、ｐ＝０．００２、図４Ａ；Ｆ（２，２９）＝３．５７６、ｐ＝０．０４１、図４Ｂ）。
【０２３１】
（結論）
抗マウスＧＦＲα３抗体での処置は、接触性アロディニアの防御およびフォンフレイ試験の評価によって測定した場合、この骨のがん疼痛モデルにおいて侵害受容性行動を有意に減少させた。さらに、１つの実験の体重負荷差異では、Ｍ１Ｍ６９７７Ｎ抗体の効力に対して統計的傾向があった。骨の破壊スコアは、抗マウスＧＦＲα３抗体を受容する群で異ならなかった。このことは、疼痛関連尺度における差異が、がんの重篤度における差異によって説明できなかったことを示唆する。従って、本発明者らのデータは、ＧＦＲα３に対する中和抗体が、骨のがん疼痛に対して有効であり得ることを示唆する。肉腫細胞は、骨での転移より原発性腫瘍がより頻度が高く、大部分の骨がんは、他の部位由来の原発性腫瘍の転移からくるので、これら抗体を乳（乳房）癌誘発性の骨がん疼痛のモデルでも試験した。骨へ転移することが見いだされた最も一般的な腫瘍の中に、乳房腫瘍および前立腺腫瘍がある。
【０２３２】
（実施例１４：骨のがん疼痛の乳癌モデル）
（方法論）
（被験体）
Ｂａｌｂ／ｃバックグラウンド系統の成体の雄性マウスを、約１２週齢で乳癌由来骨がん（ｍａｍｍａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｂｏｎｅ  ｃａｎｃｅｒ）実験に使用した。この実験の結果データを測定する実験者は、データ収集、編集、および分析全体を通じて、動物の処置群に対して盲検で行った。
【０２３３】
（骨がんモデル）
骨のがん疼痛を誘発するために、上記マウスに麻酔をかけ、次いで、１０，０００  ４Ｔ−１乳癌細胞を大腿部内に注射した。これら細胞は、Ｂａｌｂ／ｃ乳癌腫瘍株に由来する。腫瘍は、典型的には、注射後１８日目までに腫瘍が重篤になるほどにこのモデルにおいて激しく増殖する。移植後１０日目、１４日目および１９日目にＸ線写真を撮影して、腫瘍増殖および骨の破壊を確認した。骨の破壊を、０は破壊なしを表し、３は、腫瘍の領域における大腿骨の完全な破壊を表すものとして３点スケールでスコア付けした。
【０２３４】
（抗体処置）
各動物に、がん細胞移植の前日およびその後１週間につき２回投与した３０ｍｇ／ｋｇ
ｓ．ｃ．抗体注射を受けさせた。動物を３つの処置群のうちの１つに疑似無作為的に（ｐｓｅｕｄｏ−ｒａｎｄｏｍｌｙ）割り当てた：１）Ｍ２Ｍ１８０Ｎアイソタイプ（陰性）コントロール抗体、２）Ｍ１Ｍ６９７７Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体、もしくは３）Ｍ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体。Ｍ１Ｍ６９８６Ｎは、アルテミンのＧＦＲα３との相互作用をブロックし、それによって、アルテミンの作用の「直接」ブロッカーと考えられる。対照的に、Ｍ１Ｍ６９７７Ｎは、ＧＦＲα３／ＲＥＴ複合体を介してアルテミンの作用を阻害し、従って、「間接」インヒビターと考えられる。
【０２３５】
（侵害受容の尺度）
骨腫瘍への侵害受容応答を、誘発性機械的（接触性）アロディニアについてはフォンフレイヘア試験を、足で体重を支えようとしているかについては反応速度論的体重負荷（ＤＷＢ）試験を、および防御行動（ｇｕａｒｄｉｎｇ  ｂｅｈａｖｉｏｒ）を使用して測定した。フォンフレイ試験結果を、足を引っ込めるために必要な圧力のグラムとして表す。体重負荷結果を、同側足にかけられた体重の％として表す。防御行動を、２分間の期間にわたって足を防御するのに費やした時間として表す。
【０２３６】
（結果）
（骨の破壊）
このモデルでは、骨の破壊スコアに対して抗体処置の有意な効果はなかった。このことは、上記抗体処置が骨がん自体の重篤度に対して影響を有しなかったことを示唆する。
【０２３７】
（侵害受容行動）
癌の後にＧＦＲα３抗体処置をした接触性アロディニアにおいて統計的に有意な減少があった（Ｆ（２，２５）＝８．６２６、ｐ＝０．００１、図５）。
【０２３８】
同側足への反応速度論的体重負荷に対するＧＦＲα３抗体の統計的に有意な全体的な効果はなかったが、処置の全体的な効果は、統計学的傾向を達成し、Ｍ１Ｍ６９７７Ｎは、骨に癌細胞を移植して後１１日で、事後比較で有意な効果を達成した（Ａ）が、１８日では達成しなかった（Ｂ）。（１１日  Ｆ（２，２５）＝２．９３９、ｐ＝０．０７１、図６Ａ；１８日  Ｆ（２，２５）＝０．１４９、ｐ＝０．８６２、図６Ｂ）。
【０２３９】
ＧＦＲα３抗体は、このモデルにおいて骨がん移植後に足防御を有意に減少させた（Ｆ（２，２５）＝４．２２２、ｐ＝０．０２６、図７）。
【０２４０】
（結論）
抗マウスＧＦＲα３抗体での処置は、接触性アロディニアの防御およびフォンフレイ試験の評価によって測定したところ、この骨のがん疼痛モデルにおいて侵害受容性行動を有意に減少させた。さらに、１つの時点での体重負荷差異では、ＲＥＧＮ１９６７抗体の有効性が証明された。骨の破壊スコアは、抗マウスＧＦＲα３抗体を受容する群で異ならなかった。このことは、疼痛関連尺度における差異が、がんの重篤度における差異によって説明できなかったことを示唆する。従って、本発明者らのデータは、ＧＦＲα３に対する中和抗体が、転移した骨のがん疼痛のこのモデルにおける骨のがん疼痛に対して有効であり得ることを示唆する。
【０２４１】
（実施例１５．変形骨関節症の疼痛方法論の内側半月動揺（ＤＭＭ）モデル）
（被験体）
Ｃ５７Ｂｌ６バックグラウンド系統の成体の雄性マウスを、約１２週齢で開始するＤＭＭ実験のために使用した。この実験の結果データを測定する実験者は、データ収集、編集、および分析全体を通じて、動物の処置群に対して盲検で行った。
【０２４２】
（ＤＭＭモデル）
ＤＭＭモデルでは、一方の膝の内側半月を動揺させ、上記動物に１６週間にわたって疾患を発症させる。１６週間の期間の間に、動物は、接触性アロディニア、初期のヒト変形性関節症に似た損傷した膝における骨体積の増大および骨ミネラル含有量を発生させる。接触性アロディニアを、抗体処置を開始する１６週間前にフォンフレイ試験によって動物で確認した。
【０２４３】
（抗体処置）
各動物に、ＤＭＭ手術の１６週間後に開始して１週間に１回投与された３０ｍｇ／ｋｇ
ｓ．ｃ．抗体注射を受けさせた。動物を３つの処置群のうちの１つの疑似無作為的に割り当てた：１）Ｍ２Ｍ１８０Ｎアイソタイプ（陰性）コントロール抗体、２）Ｍ１Ｍ６９７７Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体、もしくは３）Ｍ１Ｍ６９８６Ｎ抗マウスＧＦＲα３抗体。Ｍ１Ｍ６９８６Ｎは、アルテミンのＧＦＲα３との相互作用をブロックし、それによって、アルテミンの作用の「直接」ブロッカーと考えられる。対照的に、Ｍ１Ｍ６９７７Ｎは、ＧＦＲα３／ＲＥＴ複合体を介してアルテミンの作用を阻害し、従って、「間接」インヒビターと考えられる。
【０２４４】
（侵害受容の尺度）
膝の病状への侵害受容応答を、誘発性機械的（接触性）アロディニアについてフォンフレイヘア試験を使用して測定した。
【０２４５】
（結果）
（侵害受容行動）
ＤＭＭの後にＧＦＲα３抗体処置をした接触性アロディニアにおいて統計的に有意な減少があった（Ｆ（２，２７）＝２１．６８、ｐ＝０．０００１、図８）。
【０２４６】
（結論）
マウスＧＦＲα３抗体での処置は、接触性アロディニアに対する統計的に有意な効果を有した。その結果、上記２種のＧＦＲα３抗体で処置した群が、１週間に１回の処置の開始の１４日後に始めてアイソタイプコントロールより少ないアロディニアを一貫して示した。これらデータは、ＧＦＲα３抗体が慢性ヒト変形性関節症疼痛に対して有効であるという可能性を示唆する。
【０２４７】
（実施例１６．抗ＧＦＲα３抗体の交差競合分析）
交差競合アッセイを、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ３８４バイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ．）を使用して、ヒトＧＦＲα３への結合について互いと競合するように抗体を選択する能力を評価するために行った。実験全体を、Ｏｃｔｅｔ  ＨＢＳＴ緩衝液（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％
ｖ／ｖ  サーファクタントＰ２０、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）中で、２５℃において流速１０００ｒｐｍで行った。２種の抗体が、Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを伴って発現させたビオチン化組換えヒトＧＦＲα３（ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ；配列番号３７０）上のそれらそれぞれのエピトープへの結合について互いと競合し得るか否かを評価するために、ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨの１０μｇ／ｍＬ溶液の中にチップを１分間浸漬することによって、約１．２ｎｍのビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨをストレプトアビジン被覆Ｏｃｔｅｔセンサーチップ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ  Ｉｎｃ，
＃  １８−５０１９）上に最初に捕捉した。次いで、上記抗原被覆センサーチップを、第１の抗ＧＦＲα３モノクローナル抗体の２５μｇ／ｍＬ溶液を含むウェルの中に４分間入れて、上記ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨ表面を飽和させた。次いで、上記センサーチップを、第２の抗ＧＦＲα３モノクローナル抗体の２５μｇ／ｍＬ溶液を含むウェルにその後浸漬した。上記センサーチップを、実験の各工程の間に、Ｏｃｔｅｔ  ＨＢＳＴ緩衝液中で洗浄した。リアルタイム結合応答を実験の経過の間にモニターし、あらゆる工程の最後での結合応答を、図９に示されるように記録した。第１の抗体と予め複合体化したビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨへのｍＡｂ−２結合の応答を比較し、異なる抗ＧＦＲα３モノクローナル抗体の競合／非競合挙動を決定した。
【０２４８】
図９に示されるように、黒字付きの濃い灰色のボックスは、自己競合に関する結合応答を表す。結合の順序とは無関係に、両方の方向で競合する抗体は、黒いボックスと白字で表される。別個の結合エピトープを示唆する抗体間で競合なしは、黒字つきの白いボックスで表される。
【０２４９】
９種の抗体（Ｈ４Ｈ２２３６Ｎ３、Ｈ４Ｈ２３４２Ｐ、Ｈ４Ｈ２２９５Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９４Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９１Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５７Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５５Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９６Ｓ、およびＨ４Ｈ２２４３Ｎ２）は、ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨへの結合について互いと２方向性に競合する。上記９種のうちの８種（Ｈ４Ｈ２２３６Ｎ３、Ｈ４Ｈ２３４２Ｐ、Ｈ４Ｈ２２９５Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９４Ｓ、Ｈ４Ｈ２２９１Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５７Ｓ、Ｈ４Ｈ２３５５Ｓ、およびＨ４Ｈ２２９６Ｓ）が、試験したいかなる他の抗ＧＦＲα３抗体とも競合しない一方で、Ｈ４Ｈ２２４３Ｎ２はまた、試験された２種のさらなる抗ＧＦＲα３抗体（Ｈ４Ｈ２２１２ＮおよびＨ４Ｈ２３５２Ｓ）と２方向性に競合する。Ｈ４Ｈ２２１２ＮおよびＨ４Ｈ２３５２Ｓは、ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨへの結合について互いと、およびＨ４Ｈ２２４３Ｎ２と２方向性に競合するが、その一方で、Ｈ４Ｈ２２１２Ｎは、試験したいかなる他の抗ＧＦＲα３抗体とも競合せず、Ｈ４Ｈ２３５２Ｓはまた、試験したさらなる抗ＧＦＲα３抗体（Ｈ４Ｈ２２９２Ｓ）と２方向性に競合する。試験した１種の抗ＧＦＲα３抗体であるＨ４Ｈ２３５０Ｐは、ビオチン−ｈＧＦＲα３−ｍｍＨへの結合について試験した抗ＧＦＲα３抗体のうちのいずれとも競合しない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【外国語明細書】
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