(57)【要約】【課題】イソ吉草酸臭を抑制する物質の提供。【解決手段】アセチルセドレン、γ-メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、イソ吉草酸臭抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセチルセドレン、γ-メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、イソ吉草酸臭抑制剤。
【請求項２】
アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＯＲ５１Ｉ２又はそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体活性阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イソ吉草酸臭抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト等の哺乳動物においては、匂いは、鼻腔上部の嗅上皮に存在する嗅神経細胞上の嗅覚受容体に匂い分子が結合し、それに対する受容体の応答が中枢神経系へと伝達されることにより認識されている。ヒトの場合、嗅覚受容体は約４００個存在することが報告されており、これらをコードする遺伝子はヒトの全遺伝子の約２％にあたる。一般的に、嗅覚受容体と匂い分子は複数対複数の組み合わせで対応付けられている。すなわち、個々の嗅覚受容体は構造の類似した複数の匂い分子を異なる親和性で受容し、一方で、個々の匂い分子は複数の嗅覚受容体によって受容される。さらに、ある嗅覚受容体を活性化する匂い分子が、別の嗅覚受容体の活性化を阻害するアンタゴニストとして働くことも報告されている。これら複数の嗅覚受容体の応答の組み合わせが、個々の匂いの認識をもたらしている。
【０００３】
したがって、同じ匂い分子が存在する場合でも、同時に他の匂い分子が存在すると、当該他の匂い分子によって受容体応答が阻害され、最終的に認識される匂いが全く異なることがある。このような仕組みを嗅覚受容体のアンタゴニズムと呼ぶ。この受容体アンタゴニズムによる匂いの抑制は、香水や芳香剤等の別の匂いを付加することによる消臭と異なり、特定の悪臭の認識を特異的に失くしてしまうことができ、また芳香剤の匂いによる不快感が生じることもないという利点を有している。
【０００４】
イソ吉草酸は、汗や皮脂を原因とする体臭の原因物質の１つとして一般的に認識されている。嗅覚受容体アンタゴニズムの考え方に基づいたイソ吉草酸臭抑制剤がこれまでに開示されている。例えば、特許文献１、２には、フロルヒドラル等の香料物質が、イソ吉草酸に特異的に応答する嗅覚受容体の活性を抑制することでイソ吉草酸臭を抑制したことが開示されている。
【０００５】
一方で、体臭の原因物質は多様であり、それらの臭いを抑制するための様々な化合物又は組成物がこれまでに開示されている。特許文献３には、汗臭や腋臭などの酸臭に対して効果的にマスキング及び／又はハーモナージュすることができる体臭抑制香料組成物が開示されている。しかし当該組成物が標的とする体臭物質は特定構造のアルケニルカルボン酸である。
【０００６】
特許文献４には、下記ａ）〜ｅ）：ａ）Ｒ1ＯＲ2（式中、Ｒ1及びＲ2はエーテル酸素原子を介してのみ連結され、エーテルが150〜200の分子量を有するような脂肪族又は芳香族の基である）の１種以上のエーテルを０．２〜２０重量％；ｂ）下記式(1)（式(1)中、Ｒ3はケトンの分子量が170〜300であるような芳香族基である）の１種以上の芳香族メチルケトンを５〜５０重量％；ｃ）Ｒ4ＯＨ（式中、Ｒ4は場合により１つ以下のオレフィン系二重結合を含有し、場合により芳香族置換基を有し、アルコールの分子量が130〜180の範囲にあるような脂肪族基である）の１種以上のアルコールを５〜５０重量％；ｄ）ＣＨ3ＣＯ2Ｒ5の酢酸エステル及びＣ2Ｈ5ＣＯ2Ｒ5のプロピオン酸エステル（式中、基Ｒ5は場合により１つ以下のオレフィン系二重結合を有し、場合により芳香族置換基を有し、エステルの分子量が180〜210の範囲にあるような脂肪族基である）の１種以上のエステルを２〜４０重量％；及び、ｅ）下記式(2)（式(2)中、Ｒ6は場合により１つ以下のオレフィン系二重結合を含有し、場合により芳香族置換基を有し、サリチル酸エステルの分子量が190〜230の範囲にあるような脂肪族基である）の１種以上のサリチル酸エステルを２〜６０重量％、のうちの少なくとも４つにより、その少なくとも５０重量％が構成されている香料組成物が、体臭を減少できることが開示されている。特許文献５には、下記ｆ）〜ｈ）：ｆ）下記式(1)（式(1)中、Ｒ3はケトンの分子量が170〜300であるような芳香族基である）の１種以上の芳香族メチルケトンを少なくとも７重量％；ｇ）Ｒ4ＯＨのアルコール、ＣＨ3ＣＯ2Ｒ5の酢酸エステル及びＣ2Ｈ5ＣＯ2Ｒ5のプロピオン酸エステル（式中、Ｒ4は、任意に１以下のオレフィン性二重結合を有し、任意に芳香族置換基を有し、アルコールの分子量が130〜180になるような脂肪族基であり、Ｒ5は、任意に１以下のオレフィン性二重結合を有し、任意に芳香族置換基を有し、酢酸エステル又はプロピオン酸エステルの分子量が180〜210の範囲であるような脂肪族基である）から選ばれる１つ以上の成分を少なくとも５重量％；ならびに、ｈ）下記式(2)（式(2)中、Ｒ6は場合により１つ以下のオレフィン系二重結合を含有し、場合により芳香族置換基を有し、サリチル酸エステルの分子量が190〜230の範囲にあるような脂肪族基である）の１種以上のサリチル酸エステルを少なくとも３重量％、により、その少なくとも３０重量％が構成されている香料組成物が、脇臭抑制に使用できることが開示されている。
【０００７】
【化１】
2020111555.tif 000002
【０００８】
特許文献６には、下記式（I）（式（I）中、Ｒ１は水素又はメチル基であり、Ｒ２は水素、ヒドロキシル基もしくは−ＯＣＨ３基）のアセトフェノン誘導体又はその美容的又は薬学的に受容できる塩が、体臭や、キッチン、トイレ、煙から発生した悪臭を阻害又は減少させるために使用できることが開示されている。特許文献７には、特定の構造を有するラクトンを、遊離脂肪酸やアルデヒドの臭気のマスキングに用いることが開示されている。
【０００９】
【化２】
2020111555.tif 000003
【００１０】
特許文献８には、複数の香料からなる糞便臭モデルの臭いをマスキングする糞便臭抑制用フレグランスが開示されている。該糞便臭モデルにはイソ吉草酸が含まれているが、インドール、酪酸、スルフィド類等の他の複数の悪臭成分も含まれているため、該糞便臭モデルの臭いは、それら複数の悪臭が混ざり合って生じる変調した臭いである。特許文献９には、２５℃で４Ｐａ以下の蒸気圧を有する香料化合物を含む動物排泄物からの不快な臭気の中和剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２０１２−０５０４１１号公報
【特許文献２】特開２０１２−０５０７８１号公報
【特許文献３】特開２００４−２６２９００号公報
【特許文献４】特開平５−２５５６８９号公報
【特許文献５】国際公開公報第９４／２４９９９号公報
【特許文献６】国際公開公報第２０１６／００１２６３号
【特許文献７】国際公開公報第２０１５／０６２９９７号
【特許文献８】国際公開公報第２０１３／０１８８０５号
【特許文献９】国際公開公報第８７／００７１５２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、イソ吉草酸臭の抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
これまでに本発明者は、嗅覚受容体ＯＲ５１Ｉ２がイソ吉草酸臭に応答することを見出している（特許文献１）。さらに本発明者は、ＯＲ５１Ｉ２の応答を抑制し、嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制によりイソ吉草酸臭を抑制することができる物質を見出した。
【００１４】
したがって、本発明は、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、イソ吉草酸臭抑制剤を提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明により提供されるイソ吉草酸臭抑制剤は、嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制によりイソ吉草酸臭を抑制することができる。したがって、当該抑制剤によれば、従来の消臭剤又は芳香剤を用いる消臭方法において生じていた芳香剤の強い匂いに基づく不快感等の問題を生じることがなく、イソ吉草酸臭を消臭することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】種々の濃度のイソ吉草酸に対するＯＲ５１Ｉ２の応答（Ｆｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ）。データは平均値±ＳＥ（それぞれｎ＝３）。
【図２】ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストによる、ＯＲ５１Ｉ２のイソ吉草酸応答の抑制。Ａ：アセチルセドレン、Ｂ：γ−メチルイオノン、Ｃ：ガラクソリド。横軸はアンタゴニスト濃度、縦軸はイソ吉草酸応答強度（％）。データは平均値±ＳＥ（ｎ＝３−８）。
【図３】ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストによるイソ吉草酸臭抑制効果。左端のバーは基準サンプル（ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストなし）のイソ吉草酸臭強度を示す。データは平均値±ＳＥ（ｎ＝４）。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本明細書における「嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制」とは、目的の匂い分子と他の匂い分子をともに適用することにより、当該他の匂い分子によって目的の匂い分子に対する受容体応答を阻害し、結果的に個体に認識される匂い（悪臭を含む）を抑制する手段である。嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制は、同様に他の匂い分子を用いる手段であっても、芳香剤等の、目的の匂いを別の強い匂いによって打ち消す手段（いわゆる香りによるマスキング）とは区別される。嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制の一例は、アンタゴニスト等の嗅覚受容体の応答を阻害する物質を使用するケースである。特定の匂いをもたらす匂い分子の受容体にその応答を阻害する物質を適用すれば、当該受容体の当該匂い分子に対する応答が抑制されるため、最終的に個体に知覚される匂いを抑制することができる。
【００１８】
本明細書において「アンタゴニスト」とは、受容体に結合するが、受容体を活性化しないか、又はアゴニストに対する受容体の応答を抑制する（あるいは受容体活性を阻害する）物質をいう。
【００１９】
本明細書において、「嗅覚受容体ポリペプチド」とは、嗅覚受容体又はそれと同等の機能を有するポリペプチドをいい、嗅覚受容体と同等の機能を有するポリペプチドとは、嗅覚受容体と同様に、細胞膜上に発現することができ、匂い分子の結合によって活性化し、かつ活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる機能を有するポリペプチドをいう（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。
【００２０】
本明細書において、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列の同一性は、リップマン−パーソン法（Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５−４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ−Ｗｉｎ（Ｖｅｒ．５．１．１；ソフトウェア開発）のホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔ  ｓｉｚｅ  ｔｏ  ｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。
【００２１】
本明細書において、ヌクレオチド配列及びアミノ酸配列に関する「少なくとも８０％の同一性」とは、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性をいう。
【００２２】
嗅覚受容体ＯＲ５１Ｉ２は、ヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体であり、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：３９００６４として登録されている。ＯＲ５１Ｉ２は、配列番号１のヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドである。特許文献１、２に開示されているとおり、また図１に示すとおり、ＯＲ５１Ｉ２は、イソ吉草酸に対して濃度依存的に活性化するイソ吉草酸の受容体である。
【００２３】
したがって、嗅覚受容体ＯＲ５１Ｉ２の応答を抑制するＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストを、イソ吉草酸臭の抑制のために使用することができる。ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、嗅覚受容体アンタゴニズムによりイソ吉草酸によるＯＲ５１Ｉ２の活性化を抑制することで、個体のイソ吉草酸臭の認識に変化を生じさせ、結果として、イソ吉草酸臭を抑制することができる。
【００２４】
したがって、一態様において、本発明は、ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストを有効成分とする、イソ吉草酸臭抑制剤を提供する。本発明で使用されるＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストとしては、下記の化合物が挙げられる：
アセチルセドレン（メチルセドリルケトン；［１−［（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−２，６，６，８−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｔｒｉｃｙｃｌｏ［５．３．１．０1,5］ｕｎｄｅｃ−８−ｅｎ−９−ｙｌ］ｅｔｈａｎｏｎｅ）；
γ−メチルイオノン（α−ｉｓｏ−ｍｅｔｈｙｌｉｏｎｏｎｅ；３−ｍｅｔｈｙｌ−４−（２，６，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎ−１−ｙｌ）−３−ｂｕｔｅｎ−２−ｏｎｅ）；及び、
ガラクソリド（１，３，４，６，７，８−Ｈｅｘａｈｙｄｒｏ−４，６，６，７，８，８−ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔａ−ｇａｍｍａ−２−ｂｅｎｚｏｐｙｒａｎ）。
【００２５】
より詳細には、上記の化合物は、ＯＲ５１Ｉ２又はそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対するアンタゴニストである。本明細書において「ＯＲ５１Ｉ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチド」の例としては、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつイソ吉草酸に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドが挙げられる。ＯＲ５１Ｉ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドのさらなる例としては、ＯＲ５１Ｉ２と相同な、他の動物由来の嗅覚受容体が挙げられ、その好ましい例としては、イソ吉草酸に応答性を有する、ＯＲ５１Ｉ２と相同なマウス又はラット由来の嗅覚受容体ポリペプチドが挙げられる。
【００２６】
上記に挙げたＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストである化合物（以下、単にＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストともいう）は、これまで香料素材として知られていたが、ＯＲ５１Ｉ２に対するアンタゴニスト作用を有することや、イソ吉草酸臭を選択的に抑制する機能があることは知られていなかった。なおこれらのＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸臭を抑制する機能を有する一方で、香料素材として自身の香りを呈することができるので、イソ吉草酸臭の抑制剤として使用すると同時に香料としても使用することができる。
【００２７】
当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、いずれも市販のものを購入することができる。例えば、該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｌａｖｏｒｓ＆Ｆｒａｇｒａｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．などから入手することが可能である。あるいは、化学合成によって、該市販品と同一物質又はそれを含む組成物を製造することが可能である。
【００２８】
本発明のイソ吉草酸臭抑制剤は、上述のＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含有する。例えば、本発明のイソ吉草酸臭抑制剤の有効成分は、該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つ、例えばいずれか単独又はいずれか２つ以上の組み合わせであり得る。
【００２９】
一実施形態において、本発明のイソ吉草酸臭抑制剤は、該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つから本質的に構成され得る。別の一実施形態において、本発明のイソ吉草酸臭抑制剤は、該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストを有効成分とし、さらにその他の成分を含む、イソ吉草酸臭を抑制するための組成物である。好ましくは、本発明において該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストにより抑制される臭いは、インドール、酪酸、イソ吉草酸、及びスルフィド類を混合して得られる糞便臭モデルの臭いではない。
【００３０】
本発明の別の一態様において、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸臭を抑制するための有効成分として使用され得る。一実施形態において、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸臭を抑制するための化合物又は組成物に、イソ吉草酸臭を抑制するための有効成分として含有され得る。あるいは、該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸臭抑制剤の製造のため、あるいはイソ吉草酸臭を抑制するための化合物又は組成物の製造のために使用することができる。
【００３１】
上述した本発明のイソ吉草酸臭抑制剤、及びイソ吉草酸臭を抑制するための組成物は、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストに加えて、消臭効果を有する他の成分、又は消臭剤や防臭剤に使用される任意の成分を、その目的に応じて適宜含有していてもよい。該消臭効果を有する他の成分としては、公知の消臭剤が何れも使用できるが、例えば、植物の葉、葉柄、実、茎、根、樹皮等の各部位から抽出された消臭有効成分（例えば、緑茶抽出物）；乳酸、グルコン酸、コハク酸、グルタン酸、アジピン酸、リンゴ酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、イタコン酸、クエン酸、安息香酸、サリチル酸等の有機酸、各種アミノ酸およびこれらの塩、グリオキサール、酸化剤、フラボノイド類、カテキン類、ポリフェノール類；活性炭、ゼオライトなどの多孔性物質；シクロデキストリン類などの包接剤；光触媒；各種マスキング剤、等が挙げられる。ただし、本発明のイソ吉草酸臭抑制剤、及びイソ吉草酸臭を抑制するための組成物は、好ましくは、特許文献４に開示されるような上記ａ）〜ｅ）のうちの少なくとも４つを少なくとも５０重量％含む香料組成物、特許文献５に開示されるような上記ｆ）〜ｈ）を少なくとも３０重量％含む香料組成物、又は特許文献６に開示されるような特定の構造のアセトフェノン誘導体又はその美容的もしくは薬学的に受容できる塩を含まず、より好ましくはこれらのいずれも含まない。
【００３２】
当該消臭剤や防臭剤に使用される任意の成分の例としては、香料、粉末成分、液体油脂、固体油脂、ロウ、炭化水素、植物抽出物、漢方成分、高級アルコール類、低級アルコール類、エステル類、長鎖脂肪酸、界面活性剤（非イオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤等）、ステロール類、多価アルコール類、保湿剤、水溶性高分子化合物、増粘剤、皮膜剤、殺菌剤、防腐剤、紫外線吸収剤、保留剤、冷感剤、温感剤、刺激剤、金属イオン封鎖剤、糖分、アミノ酸類、有機アミン類、合成樹脂エマルジョン、ｐＨ調製剤、酸化防止剤、酸化防止助剤、油分、粉体、カプセル類、キレート剤、無機塩、有機塩色素、増粘剤、殺菌剤、防腐剤、防カビ剤、着色剤、消泡剤、増量剤、変調剤、有機酸、ポリマー、ポリマー分散剤、酵素、酵素安定剤、等が挙げられる。
【００３３】
一実施形態において、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸臭の抑制が所望されるあらゆる化合物又は組成物に対して、あるいはイソ吉草酸臭の抑制が所望されるあらゆる環境下において、又は該環境に含まれるあらゆる物品に対して、イソ吉草酸臭の抑制のための有効成分として使用され得る。あるいは、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸臭の抑制のための有効成分として、イソ吉草酸臭の抑制が所望される化合物又は組成物の製造のために使用することができる。
【００３４】
さらなる態様として、本発明は、イソ吉草酸臭と当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストとを共存させる工程を含む、イソ吉草酸臭の抑制方法を提供する。
【００３５】
本発明の方法の一実施形態においては、イソ吉草酸臭の存在下で、対象に、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つを適用することにより、該イソ吉草酸臭と該アンタゴニストとを共存させる。それによって、該対象のＯＲ５１Ｉ２と該アンタゴニストが結合して、イソ吉草酸による該対象のＯＲ５１Ｉ２の活性化が抑制されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制に基づいてイソ吉草酸臭が抑制される。
【００３６】
本発明の方法において、当該対象の例としては、イソ吉草酸臭の抑制を必要とする対象、好ましくは嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制に基づくイソ吉草酸臭の抑制を必要とする対象が挙げられる。該対象は、哺乳動物であれば特に限定されないが、好ましくはヒトである。
【００３７】
本発明の方法の別の一実施形態において、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸臭の発生する可能性のある環境下に予め適用される。それにより、該環境下でイソ吉草酸臭が発生した場合、該イソ吉草酸臭存在下で、該対象に該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストが適用されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによる匂い抑制に基づいてイソ吉草酸臭は抑制される。
【００３８】
本発明の方法の別の一実施形態において、当該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストは、イソ吉草酸を含有するか、又はその可能性のある化合物又は組成物に適用される。これによって、該アンタゴニストは、該化合物又は組成物に含まれるイソ吉草酸によるＯＲ５１Ｉ２の活性化を抑制し、該対象におけるイソ吉草酸臭の認識を抑制し、結果としてイソ吉草酸臭を抑制する。本実施形態における該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストの適用の例としては、該化合物又は組成物への該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストの噴霧、及び該ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストを予め含有する該化合物又は組成物の提供、などが挙げられる。
【００３９】
本発明の例示的実施形態として、さらに以下の組成物、製造方法、用途あるいは方法を本明細書に開示する。ただし、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
【００４０】
〔１〕アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、イソ吉草酸臭抑制剤。
〔２〕アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＯＲ５１Ｉ２又はそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体活性阻害剤。
〔３〕好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２が、配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、かつ
好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつイソ吉草酸に対する応答性を有するポリペプチドである、
〔２〕記載の阻害剤。
【００４１】
〔４〕イソ吉草酸臭抑制剤の製造のための、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
〔５〕ＯＲ５１Ｉ２又はそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体活性阻害剤の製造のための、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
〔６〕好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２が、配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、かつ
好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつイソ吉草酸に対する応答性を有するポリペプチドである、
〔５〕記載の使用。
【００４２】
〔７〕イソ吉草酸臭の抑制のための、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
〔８〕ＯＲ５１Ｉ２又はそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体活性阻害のための、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種の使用。
〔９〕好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２が、配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、かつ
好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつイソ吉草酸に対する応答性を有するポリペプチドである、
〔８〕記載の使用。
【００４３】
〔１０〕イソ吉草酸臭抑制方法であって、それを必要とする対象に、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を適用することを含む、方法。
〔１１〕ＯＲ５１Ｉ２又はそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体活性阻害方法であって、該ＯＲ５１Ｉ２又は該嗅覚受容体ポリペプチドに、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドからなる群より選択される少なくとも１種を適用することを含む、方法。
〔１２〕好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２が、配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、かつ
好ましくは、前記ＯＲ５１Ｉ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつイソ吉草酸に対する応答性を有するポリペプチドである、
〔１１〕記載の方法。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００４５】
試験物質
アセチルセドレン（メチルセドリルケトン；［１−［（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−２，６，６，８−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｔｒｉｃｙｃｌｏ［５．３．１．０1,5］ｕｎｄｅｃ−８−ｅｎ−９−ｙｌ］ｅｔｈａｎｏｎｅ）；（ＣＡＳ登録番号：３２３８８−５５−９；商品名：Ｖｅｒｔｏｆｉｘ；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｌａｖｏｒｓ＆Ｆｒａｇｒａｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）
γ−メチルイオノン（α−ｉｓｏ−ｍｅｔｈｙｌｉｏｎｏｎｅ；３−ｍｅｔｈｙｌ−４−（２，６，６−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎ−１−ｙｌ）−３−ｂｕｔｅｎ−２−ｏｎｅ）；（ＣＡＳ登録番号：１２７−５１−５）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｌａｖｏｒｓ＆Ｆｒａｇｒａｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）
ガラクソリド（１，３，４，６，７，８−Ｈｅｘａｈｙｄｒｏ−４，６，６，７，８，８−ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔａ−ｇａｍｍａ−２−ｂｅｎｚｏｐｙｒａｎ）（ＣＡＳ登録番号：１２２２−０５−５；商品名：Ｇａｌａｘｏｌｉｄｅ  ６５％  Ｉ．Ｐ．Ｍ．（ガラクソリド（６５％ミリスチン酸イソプロピル溶液））；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｌａｖｏｒｓ＆Ｆｒａｇｒａｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）
【００４６】
実施例１  イソ吉草酸受容体の同定
１）ＯＲ５１Ｉ２のクローニング
ＯＲ５１Ｉ２はＧｅｎＢａｎｋに登録されている配列情報を基に、ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  ｆｅｍａｌｅ（Ｇ１５２１：Ｐｒｏｍｅｇａ）を鋳型としたＰＣＲによりクローニングした。ＰＣＲにより増幅した遺伝子（配列番号１）をｐＥＮＴＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にマニュアルに従って組込み、ｐＥＮＴＲベクター上に存在するＮｏｔ  Ｉ、Ａｓｃ  Ｉサイトを利用して、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ−Ｒｈｏタグ配列の下流に作成したＮｏｔ  Ｉ、Ａｓｃ  Ｉサイトへと組換えた。
【００４７】
２）ｐＭＥ１８Ｓ−ｈＲＴＰ１Ｓベクターの作製
ｈｕｍａｎ  ＲＴＰ１遺伝子（ＭＨＳ１０１０−９２０５８６２：Ｏｐｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を鋳型としたＰＣＲにより、ｈＲＴＰ１Ｓ遺伝子（配列番号３）をクローニングした。ＰＣＲに用いるプライマーには、センス側にＥｃｏＲ  Ｉ、アンチセンス側にＸｈｏ  Ｉサイトを付加した。ＰＣＲ法により増幅したｈＲＴＰ１Ｓ遺伝子をｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲ  Ｉ、Ｘｈｏ  Ｉサイトへ組込んだ。
【００４８】
３）ＯＲ５１Ｉ２発現細胞の作製
ＯＲ５１Ｉ２を発現させたＨＥＫ２９３細胞を作製した。表１に示す組成の反応液を調製し、クリーンベンチ内で１５分間静置した。９６ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）の各ウェルに反応液５０μＬを添加し、次いでＨＥＫ２９３細胞（３×１０５細胞／ｃｍ２）を１００μＬ播種した。３７℃、５％ＣＯ２を保持したインキュベータ内で細胞を２４時間培養した。
【００４９】
【表１】
2020111555.tif 000004
【００５０】
４）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαｓと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。本実施例での悪臭物質に対する細胞の応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ−ＣＲＥ−ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ）を同時に細胞に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。３）の操作後、嗅覚受容体発現細胞の培養物から培地を取り除き、各ウェルにイソ吉草酸を含むＣＤ２９３培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を７５μＬずつ添加した（イソ吉草酸最終濃度０、３、１０、３０、１００、３００、及び１０００μＭ）。細胞をＣＯ２インキュベータ内で４時間培養し、ルシフェラーゼ遺伝子を細胞内で十分に発現させた。ルシフェラーゼの活性測定は、Ｄｕａｌ−ＧｌｏTMｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｓｓａｙ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて製品の操作マニュアルに従って行い、ホタルルシフェラーゼ由来の発光値をウミシイタケルシフェラーゼ由来の発光値で除した値［ｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ］を算出した。悪臭物質で刺激した細胞からの算出値を、悪臭物質刺激なしの細胞からの算出値で割った値をＦｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅとして求め、応答強度の指標とした。
【００５１】
５）結果
図１に示すように、ＯＲ５１Ｉ２発現細胞は、イソ吉草酸に対して濃度依存的に応答した。この結果から、ＯＲ５１Ｉ２がイソ吉草酸受容体であることが確認された。
【００５２】
実施例２  アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドによるＯＲ５１Ｉ２のイソ吉草酸応答抑制
実施例１と同様の手順に従って、ＯＲ５１Ｉ２発現ＨＥＫ２９３細胞のルシフェラーゼアッセイを行い、アセチルセドレン、γ-メチルイオノン及びガラクソリドによる受容体応答の抑制効果を評価した。ルシフェラーゼアッセイにおいては、悪臭物質として１ｍＭイソ吉草酸を用い、かつイソ吉草酸とともにアセチルセドレン、γ−メチルイオノン又はガラクソリドを細胞に添加した。アセチルセドレンの最終濃度は、３、１０、３０、１００μＭに、γ-メチルイオノン及びガラクソリドの最終濃度は、３、１０、３０、１００、３００μＭに調整した。イソ吉草酸の単独刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ（Ｘ）、イソ吉草酸刺激なしの細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ（Ｙ）、及びイソ吉草酸とアセチルセドレン、γ-メチルイオノン又はガラクソリドとの混合物での刺激で誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ（Ｚ）を算出した。下記式により、アセチルセドレン、γ-メチルイオノン又はガラクソリド存在下での受容体のイソ吉草酸応答の変化を、イソ吉草酸応答強度（％）として評価した。独立した実験を二連で複数回行い、各回の実験の平均値を得た。
イソ吉草酸応答強度（％）＝｛（Ｚ−Ｙ）／（Ｘ−Ｙ）｝×１００
【００５３】
結果を図２に示す。アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドのいずれも、濃度依存的にイソ吉草酸に対するＯＲ５１Ｉ２の応答を抑制した。以上の結果から、これら３つの化合物がＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストであることが確認された。
【００５４】
実施例３  ＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストのイソ吉草酸臭抑制能
実施例２で同定したＯＲ５１Ｉ２アンタゴニストであるアセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドについて、イソ吉草酸臭抑制能を官能試験により評価した。
【００５５】
イソ吉草酸、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドは、それぞれプロピレングリコールで１００倍に希釈した。ガラス瓶（柏洋硝子Ｎｏ．１１、容量１１０ｍＬ）に入れた綿球に、希釈したイソ吉草酸溶液のみを２０μＬ滴下して基準サンプルを調製した。同様のガラス瓶中の綿球に、イソ吉草酸溶液と、アセチルセドレン、γ−メチルイオノン又はガラクソリド溶液とをそれぞれ２０μＬ滴下して試験サンプルを調製した。基準サンプル及び試験サンプルは一晩室温で静置して匂い分子をガラス瓶中で充分揮発させた。官能試験はパネラー４名で行い、基準サンプルのイソ吉草酸臭の強さを５としたときの試験サンプルのイソ吉草酸臭の強さを０から１０（０．５刻み）の２０段階で評価した。
【００５６】
官能試験の結果を図３に示す。アセチルセドレン、γ−メチルイオノン及びガラクソリドは、いずれもイソ吉草酸臭を顕著に抑制した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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