(57)【要約】【課題】治療効果により優れる皮膚治療剤を提供する。【解決手段】シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛を含有し、上記塩化水酸化亜鉛が球状である、皮膚治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛を含有し、前記塩化水酸化亜鉛が球状である、皮膚治療剤。
【請求項２】
前記塩化水酸化亜鉛の近似円差分値が１０以下である、請求項１に記載の皮膚治療剤。
【請求項３】
前記塩化水酸化亜鉛は、溶出試験後のＺｎ２＋イオン溶出量が５〜１２０ｐｐｍであり、溶出試験後のｐＨが７．０以上８．３未満である、請求項１または２に記載の皮膚治療剤。
【請求項４】
骨膜直上にまで及ぶ壊死からなる褥瘡に適用される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の皮膚治療剤。
【請求項５】
表皮を経て真皮に至る皮膚創傷または皮膚荒れに適用される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の皮膚治療剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の皮膚治療剤と、皮膚の一部を被覆する被覆材と、を有する医療機器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚治療剤および医療機器に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛を含有する皮膚治療剤が知られている（特許文献１を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２０１６／１９９９０５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、治療効果により優れる皮膚治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、鋭意検討した結果、下記構成を採用することにより、上記目的が達成されることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、以下の［１］〜［６］を提供する。
［１］シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛を含有し、上記塩化水酸化亜鉛が球状である、皮膚治療剤。
［２］上記塩化水酸化亜鉛の近似円差分値が１０以下である、請求項１に記載の皮膚治療剤。
［３］上記塩化水酸化亜鉛は、溶出試験後のＺｎ２＋イオン溶出量が５〜１２０ｐｐｍであり、溶出試験後のｐＨが７．０以上８．３未満である、請求項１または２に記載の皮膚治療剤。
［４］骨膜直上にまで及ぶ壊死からなる褥瘡に適用される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の皮膚治療剤。
［５］表皮を経て真皮に至る皮膚創傷または皮膚荒れに適用される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の皮膚治療剤。
［６］請求項１〜５のいずれか１項に記載の皮膚治療剤と、皮膚の一部を被覆する被覆材と、を有する医療機器。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、治療効果により優れる皮膚治療剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】実施例１のシモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛のＸＲＤパターンを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
［皮膚治療剤］
本発明の皮膚治療剤（以下、単に「本発明の治療剤」ともいう）は、シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛（以下、単に「塩化水酸化亜鉛」ともいう）を含有し、この塩化水酸化亜鉛が球状である、皮膚治療剤である。
【０００９】
本発明の治療剤は、治療効果により優れる。より詳細には、皮膚創傷および皮膚荒れに対する治療効果のみならず、褥瘡（いわゆる床ずれ）に対する治療効果にも優れる。
【００１０】
本発明の治療剤に含有される塩化水酸化亜鉛が、皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡に、亜鉛イオン等を適切に供給することにより、細胞遊走を促進し、コラーゲン蓄積を増大し、皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡の治癒を促進できると考えられる。
【００１１】
皮膚（生体組織）内に粒子を移植または貼付した場合、粒子表面の形状を問わず、生体は粒子を異物として認識する。
このとき、凹凸表面または鋭く尖った表面を持つ粒子を正常皮膚に摺り合わせると、表皮の肥厚を生じる。これは、過度の刺激に対する皮膚の防御反応の１つである。
これに対して、丸く滑らかな表面を持つ（すなわち、球状である）粒子は、低刺激であり、肥厚を生じくい。慢性的炎症になりにくく、炎症性浸潤が現れにくいため、組織修復しやすい。皮膚創傷および皮膚荒れに対する治療効果のみならず、褥瘡に対する治療効果にも優れると考えられる。
【００１２】
なお、球状であるとは、後述する近似円差分値が１０以下であることを意味する。後述するように、近似円差分値は、粒子とその近似円との差を表す数値である。このため、近似円差分値が０に近いほど、球状であることを意味する。
【００１３】
＜シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛＞
シモンコーライトは、Ｚｎ５（ＯＨ）８Ｃｌ２、または、Ｚｎ５（ＯＨ）８Ｃｌ２・５Ｈ２Ｏ）で表される。
このようなシモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛は、下記式（１）で表される塩化水酸化亜鉛であることが好ましい。このとき、ＺｎとＣｌとのモル比（Ｚｎ／Ｃｌ）は、２．０〜４．０が好ましい。
Ｚｎ４〜６Ｃｌ１〜３（ＯＨ）７〜８・ｎＨ２Ｏ      （１）
ただし、式（１）中、ｎは、０〜６であり、１〜６が好ましい。
【００１４】
塩化水酸化亜鉛に含まれるシモンコーライトの量は、６０質量％以上が好ましく、８０質量％以上がより好ましく、９５質量％以上が更に好ましい。
【００１５】
《近似円差分値》
本発明の治療剤に含有される塩化水酸化亜鉛の近似円差分値は、治療効果が更に優れるという理由から、１０以下が好ましく、７以下がより好ましい。
【００１６】
近似円差分値は、次のように求める。まず、走査型電子顕微鏡を用いて、１０００倍の倍率で試料を観察して画像を得る。得られた画像中の粒子について、画像解析ソフトウェアＷｉｎＲＯＯＦ２０１５（三谷商事社製）を用いて、近似円を計測する。近似円と元の粒子との差を、３６０度の放射状の線上にて比較し、凹側の絶対値と凸側の絶対値との合計値を算出する。任意の粒子１００個におけるこの合計値の平均値を、近似円差分値とする。
【００１７】
《溶出試験後の特性》
シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛は、溶出試験後のＺｎ２＋イオン溶出量が０．５〜１２０ｐｐｍであることが好ましく、溶出試験後のｐＨが７．０以上８．３未満であることが好ましい。なお、「ｐｐｍ」は、特に断りの無い限り、「質量ｐｐｍ」を意味する。
溶出試験後のＺｎ２＋イオン溶出量は、１０ｐｐｍ以上がより好ましく、２０ｐｐｍ以上が更に好ましく、一方、８０ｐｐｍ以下がより好ましく、５０ｐｐｍ以下が更に好ましい。
溶出試験後のｐＨは、７．１以上がより好ましく、７．２以上が更に好ましく、一方、８．０以下がより好ましく、７．８以下が更に好ましい。
【００１８】
溶出試験後の特性は、次のように求める。
まず、シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛を、３７℃の生理食塩水中で、回転子を用いて５００ｒｐｍで３時間攪拌する。生理食塩水中におけるシモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛の濃度は２０ｇ／Ｌとする。これが溶出試験である。
溶出試験後（つまり、３時間の攪拌後）、生理食塩水中に溶出したＺｎ２＋イオン量（単位：ｐｐｍ）を、ＩＣＰ発光分析装置（島津製作所社製、ＩＣＰＥ−９０００）を用いて測定する。測定して得られる値が、シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛の溶出試験後のＺｎ２＋イオン溶出量である。
また、溶出試験後の生理食塩水のｐＨを測定し、得られる値を、シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛の溶出試験後のｐＨとする。
【００１９】
＜その他の成分＞
本発明の治療剤は、必要な場合は、製薬学上許容される担体（以下、単に「担体」という）を更に含有してもよい。
担体としては、例えば、有機溶媒、無機溶媒などの溶媒が挙げられ、その具体例としては、水、生理食塩水、アルコール、多価アルコール、これらの混合物などが挙げられる。
本発明の治療剤が担体として溶媒を含有する場合、更に、本発明の治療剤に増粘剤等を加え、本発明の治療剤をゲル状、ペースト状に加工して取り扱い性を向上させてもよい。
そのほかに、担体としては、例えば、特許文献１の段落［００２０］〜［００２３］に記載された担体を使用できる。
【００２０】
本発明の治療剤には、実際の用途に応じて、その他の添加剤を含有させてもよい。
その他の添加剤としては、特に限定されないが、例えば、保湿剤、酸化防止剤、防腐剤、消炎剤、美白剤、血行促進剤、抗脂漏剤、増粘剤、ｐＨ調整剤などが挙げられ、その具体例としては、特許文献１の段落［００２４］〜［００２７］に記載された成分が挙げられる。
【００２１】
＜用途＞
本発明の治療剤は、皮膚創傷または皮膚荒れ（表皮を経て真皮に至る皮膚創傷または皮膚荒れ）に適用できる。また、本発明の治療剤は、褥瘡（骨膜直上にまで及ぶ壊死からなる褥瘡）にも適用できる。
このとき、本発明の治療剤は、皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡に直接塗布されてもよいし、皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡の周辺の皮膚に塗布されてもよい。
本発明の治療剤の形態は、生理食塩水などの担体を溶媒として含む液剤の形態であってもよいし、溶媒（担体）を含まない粉体の形態であってもよい。皮膚創傷等が浸出液で潤っている場合は、粉体の形態で使用できる。更に、両者の中間である増粘した形態またはゲル化した形態であってもよい。
なお、本発明の治療剤は、例えば、医薬組成物の添加物、化粧品の添加物として用いることもできる。
【００２２】
本発明の治療剤は、褥瘡や重篤な創傷または肌荒ればかりではなく、大小の種々の傷または肌荒れに対して、治療効果があり、広く傷薬として使用できる。
創傷治癒に対する機序から、本発明の治療剤は、以下の疾患に適用できると推定される。すなわち、天疱瘡、表皮水泡症、膿疱性感染、スティーブンス・ジョンソン症候群、中毒性表皮壊死症、全身性強皮症、先天性魚鱗癬、類天疱瘡、クローン病などの疾患に適用できると推定される。更に、各種アレルギー反応による皮膚炎に対する保護治癒にも効果的であると考えられる。
また、様々な難治性潰瘍への適用も考えられる。例えば、外傷、糖尿病、放射線照射、動脈硬化、膠原病などによる皮膚潰瘍が挙げられる。
【００２３】
［皮膚治療剤の製造方法］
本発明の治療剤を製造する方法は、例えば、球状である塩化水酸化亜鉛を得て、これに、必要に応じて、担体などを組み合わせればよい。
球状である塩化水酸化亜鉛は、以下に説明するように、まず、沈殿物生成反応によりシモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛を得て、その後、得られた塩化水酸化亜鉛を、球状メディアを用いた粉砕により球状にする方法により得ることが好ましい。
【００２４】
＜沈殿物生成反応＞
シモンコーライトを含む塩化水酸化亜鉛は、亜鉛源、塩素源およびアルカリを用いた沈殿物生成反応（アルカリ沈殿法）により得ることが好ましい。
亜鉛源としては、例えば、硫酸亜鉛（ＺｎＳＯ４）、塩化亜鉛（ＺｎＣｌ２）、酢酸亜鉛（Ｚｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２）、硝酸亜鉛（Ｚｎ（ＮＯ３）２）などが挙げられ、塩化亜鉛が好ましい。
塩素源としては、例えば、塩酸（ＨＣｌ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ）が挙げられ、塩化アンモニウムが好ましい。
アルカリとしては、アンモニア（ＮＨ３）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）などが挙げられ、水酸化ナトリウムが好ましい。
亜鉛源、塩素源およびアルカリは、水溶液の態様で用いられることが好ましい。
【００２５】
沈殿物生成反応においては、具体的には、例えば、亜鉛源の水溶液（酸性の水溶液）を塩素源の水溶液に滴下し、この滴下中、塩素源の水溶液にアルカリの水溶液を送液して塩素源の水溶液のｐＨを一定の範囲に維持し、亜鉛源の水溶液の滴下が終了した後、１０〜３０時間の撹拌（撹拌養生）を行ない、沈殿物を含む反応液を得ることが好ましい。
ｐＨは、６．０以上８．５以下が好ましく、６．０以上７．５未満がより好ましい。すなわち、Ｚｎ２＋イオン、Ｃｌ−イオンおよびＯＨ−イオンの反応により沈殿物を得るが、ｐＨが上記範囲に制御された反応場で得られた沈殿物を用いることが好ましい。
亜鉛源および塩素源における亜鉛と塩素とのモル比（亜鉛：塩素）は、５：２にすることが好ましい。
亜鉛源の水溶液の濃度は、０．０５ｍｏｌ／Ｌ以上が好ましく、０．１ｍｏｌ／Ｌ以上がより好ましい。一方、１０ｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、５ｍｏｌ／Ｌ以下がより好ましく、３ｍｏｌ／Ｌ以下が更に好ましい。
塩素源の水溶液の濃度は、０．０５ｍｏｌ／Ｌ以上が好ましく、０．１ｍｏｌ／Ｌ以上がより好ましい。一方、１０ｍｏｌ／Ｌ以下が好ましく、５ｍｏｌ／Ｌ以下がより好ましく、３ｍｏｌ／Ｌ以下が更に好ましい。
反応温度は、５〜４０℃が好ましく、１０〜３０℃が好ましい。
【００２６】
沈殿物生成反応後、例えば、沈殿物を含む反応液を吸引濾過または遠心分離することにより固液分離し、得られた沈殿物を純水または蒸留水を用いて洗浄し、次いで真空乾燥する。これにより、塩化水酸化亜鉛が得られる。
なお、得られた塩化水酸化亜鉛は、未反応物（原料）、反応副生物、原料から混入する不純物などを含み得る。
【００２７】
＜球状メディアを用いた粉砕＞
次に、得られた塩化水酸化亜鉛を粉砕して球状にする。このとき、例えば、球状メディア（ボール、ビーズなど）を用いて粉砕できる。すなわち、球状メディアを用いる粉砕機（ボールミル、ビーズミルなど）により粉砕できる。
上述した沈殿物生成反応により得られたまま（粉砕前）の塩化水酸化亜鉛は、例えば板状（板状結晶）であるが、球状メディアを用いた粉砕により、板状結晶が割れるだけでなく、板状結晶が磨り減り、凝集して、球状物が得られると考えられる。
【００２８】
球状メディアを用いた粉砕の好適な条件は、以下のとおりである。以下の条件は、例えば、粉砕機としてボールミルを用いた場合の条件である。
球状メディアの材質としては、特に限定されず、例えば、ジルコニア等のセラミックが挙げられる。
球状メディアの直径は、１〜１０ｍｍが好ましく、１〜５ｍｍがより好ましい。
球状メディア１００質量部に対して、粉砕させる塩化水酸化亜鉛の量は、１〜６０質量部が好ましく、５〜５０質量部がより好ましい。
バッチ処理の場合、粉砕時間は、１〜７２時間が好ましく、１０〜４０時間がより好ましい。
【００２９】
所望の球状が得られる限り、球状メディアを用いた粉砕の条件は、上記条件に限定されない。球状メディアを用いる粉砕機としては、例えば、ボールミルおよびビーズミルが挙げられ、そのほか、球状メディアの揺動、振動、攪拌、回転などを利用して粉砕を行なう粉砕機を適宜使用できる。
【００３０】
［医療機器］
本発明の医療機器は、上述した本発明の治療剤と、皮膚の一部を被覆する被覆材と、を有する。
皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡は、乾燥環境下で治癒させる場合と、湿潤環境下で治癒させる場合とがある。
乾燥環境下で治癒させる場合、通常は、皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡を、ガーゼ、包帯、通気性フィルムなどの通気性の良い被覆材で覆い保護する。
一方、湿潤環境下で治癒させる場合、皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡を閉鎖環境に保持する被覆材を用い、適切な湿潤環境を維持できる。
【００３１】
皮膚創傷、皮膚荒れまたは褥瘡を閉鎖環境に保持する被覆材としては、特に限定されないが、例えば、ポリウレタンフィルム・ドレッシング材、ハイドロコロイド・ドレッシング材、ポリウレタンフォーム・ドレッシング材、アルギン酸塩被覆材、ハイドロジェル・ドレッシング材、ハイドロポリマー、セルロースフィルム、および、シルクフィルムからなる群から選ばれる少なくとも１種の被覆材が挙げられる。これらの被覆材の具体例としては、特許文献１の段落［００３１］〜［００３７］に記載された被覆材が挙げられる。
【００３２】
本発明の治療剤と被覆材とを一体化する場合、例えば、本発明の治療剤を、被覆材に塗布したり、含有させたり、付着させたりする。
一方、本発明の治療剤と被覆材とは、一体化させなくてもよい。この場合、本発明の医療機器は、本発明の治療剤と被覆材とを組み合わせた医療セットと言える。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例を用いて本発明を具体的に説明する。ただし、本発明は、以下の実施例に限定されない。
【００３４】
＜実施例１＞
反応容器内に０．０８ｍｏｌ／Ｌの塩化アンモニウム水溶液（５００ｍＬ）を調製した。これとは別に、０．１ｍｏｌ／Ｌの塩化亜鉛水溶液（１０００ｍＬ）を準備した。更に、ｐＨ調整液として、３０質量％の水酸化ナトリウム水溶液を準備した。
反応容器内の塩化アンモニウム水溶液を回転子によって撹拌しつつ、塩化アンモニウム水溶液にｐＨコントローラを装入した。このｐＨコントローラによってオンオフ制御されるポンプを用いて、塩化亜鉛水溶液および水酸化ナトリウム水溶液を、塩化アンモニウム水溶液に滴下した。滴下中、塩化アンモニウム水溶液をｐＨ６．５に維持した。塩化亜鉛水溶液を全て滴下した後、更に１６時間の攪拌を行ない、養生した。反応温度（滴下、養生の際の環境温度）は、２５℃とした。こうして、沈殿物を含む反応液を得た。
得られた反応液を、遠心分離によって固液分離した。得られた固体（沈殿物）に対して、水洗および遠心分離を３回繰り返すことにより、洗浄を施した。洗浄した沈殿物を、真空乾燥することにより、塩化水酸化亜鉛の粉末を得た。
得られた塩化水酸化亜鉛の粉末を、ボールミル（入江商会社製、卓上型ボールミル「Ｖ−１ＭＬ」）を用いて、粉砕した。より詳細には、直径５ｍｍのジルコニアボールを球状メディアとした。球状メディア５００ｇに対して、塩化水酸化亜鉛の粉末５０ｇを用い、３０時間粉砕し、粉砕粉を得た。
【００３５】
実施例１で得られた塩化水酸化亜鉛の粉末について、粉砕前および粉砕後に、ＸＲＤ装置（Ｂｒｕｋｅｒ社製、Ｄ８ＡＤＶＡＮＣＥ）を用いて、ＸＲＤ測定した。このＸＲＤ測定の結果を、図１に示す。
図１のＸＲＤパターンを見ると、粉砕前には、シモンコーライトを現すピークが認められる。粉砕後においても、シモンコーライトを現すピークが維持されていることが認められる。
【００３６】
＜実施例２＞
まず、実施例１と同様にして、塩化水酸化亜鉛の粉末を得た。
次いで、得られた塩化水酸化亜鉛の粉末を、ボールミルに代えて、ビーズミル（アシザワ・ファインテック社製、ドライスターＳＤＡ１）を用いて粉砕した。より詳細には、直径３ｍｍのジルコニアビーズを粉砕メディアとした。粉砕メディアの充填率を５０％とし、塩化水酸化亜鉛を、１．０ｋｇ／ｈの供給量でビーズミルに供給して粉砕し、粉砕粉を得た。
【００３７】
＜比較例１＞
まず、実施例１と同様にして、塩化水酸化亜鉛の粉末を得た。
次いで、得られた塩化水酸化亜鉛の粉末を、ボールミルに代えて、Ａ−Ｏ−ＪＥＴ型のジェットミル（セイシン企業社製）を用いて粉砕した。より詳細には、得られた塩化水酸化亜鉛の粉末１０ｇを、１２ｇ／ｈの供給量でジェットミルに供給し、０．７ＭＰａの圧力にて粉砕し、粉砕粉を得た。パス回数は、１回とした。
【００３８】
＜比較例２＞
パス回数を２回にした以外は比較例１と同様の条件にて、ジェットミルを用いて塩化水酸化亜鉛の粉末を粉砕し、粉砕粉を得た。
【００３９】
＜比較例３＞
実施例１と同様にして、塩化水酸化亜鉛の粉末を得た。比較例３では、得られた粉末を粉砕せずに、そのまま用いた。
比較例３は、特許文献１の段落［００３９］に記載された製造例１に相当する。
【００４０】
＜溶出試験後の特性＞
実施例１〜２および比較例１〜３の塩化水酸化亜鉛の粉末（実施例１〜２および比較例１〜２は、粉砕前および粉砕後）について、上述した方法により、溶出試験後のＺｎ２＋イオン溶出量およびｐＨを求めた。結果を下記表１に示す。
【００４１】
＜近似円差分値＞
実施例１〜２および比較例１〜３の塩化水酸化亜鉛の粉末（実施例１〜２および比較例１〜２は粉砕後の粉末）について、上述した方法により、近似円差分値を測定した。結果を下記表１に示す。
【００４２】
【表１】
2020111572.tif 000002
【００４３】
上記表１を見ると、粉砕によって、溶出試験後のｐＨが低下し、かつ、溶出試験後のＺｎ２＋イオン溶出量が増加した。粉砕方法の違いによる大きな差は見られなかった。
【００４４】
なお、近似円差分値について、比較例３のデータは、実施例１〜２および比較例１〜２の粉砕前のデータに相当する。
上記表１を見ると、実施例１〜２では、球状メディアを用いた粉砕によって、近似円差分値が大きく低下していることが分かった。
【００４５】
＜評価＞
約５００ｇのＳＤラットに、２％セデラック（キシラジン）を、０．２ｍＬ／５００ｇで筋肉注射により投与して、ラットを鎮静させた。セボフルレン吸入麻酔薬を２％で用いて、ラットを全身麻酔した。ラットの腹側部に、キシロカイン（リドカイン＋２％アドレナリン）を投与して局部麻酔し、その後、表皮から皮下組織に至る直径１０ｍｍの全層欠損創を形成した。
【００４６】
形成した全層欠損創に、実施例１〜２および比較例１〜３の粉末を、それぞれ、０．０１ｇ塗布した。更に、塗布部位を、被覆材であるハイドロコロイド・ドレッシング材（デュオアクティブ）で被覆した。ここで、塗布量を０．０１ｇに揃えたのは、ラボ事前評価でのＺｎ２＋イオン溶出量より、全層欠損創の容積に占める粉末の容積を揃え、新組織形成における空間条件を優先したためである。
【００４７】
粉末を塗布してから２周間後および４週間後、被覆材を剥離して、塗布部位を、以下のように、顕微鏡を用いて観察した。
まず、塗布部位を、ラットからトリミング（切除）し、これを試料とした。次いで、試料を、ホルマリンを用いて固定し、脱脂（キシレンに２４時間浸漬）し、その後、脱水した。脱水は、次のように行なった。まず、試料を、７０％エタノールに１２時間浸漬し、その後、エタノールを揮発除去した。次いで、８０％エタノール、９０％エタノールおよび９５．５％エタノールをそれぞれ用いて、同様に、各３０分ずつ脱水した。その後、キシレンを用いて試料を２回洗浄した。
脱水の後、試料を、パラフィンを用いて包埋し、顕微鏡観察用の切片を作成した。作成した切片について、ヘマトキシリン・エオシン（Ｈ−Ｅ）染色およびマッソン・トリクローム（Ｍ−Ｔ）染色をした。Ｈ−Ｅ染色は、細胞種の観察用の染色である。Ｍ−Ｔ染色は、コラーゲン線維の観察用の染色である。染色後の切片をプレパラートに封入し、顕微鏡を用いて観察した。
【００４８】
顕微鏡を用いた観察により、２週間後および４週間後における創傷治癒の状態を、以下の項目で評価した。評価結果を下記表２に示す。以下の評価は、相対評価である。
【００４９】
《創傷治癒段階》
創傷治癒の進行状況の評価である。創傷治癒段階は、「止血期」→「炎症期」→「増殖期」→「成熟期」の順に進行する。観察される細胞種および新生血管数の増加傾向から、創傷治癒段階を判定し、下記表２に記載した。
【００５０】
《コラーゲン太さ》
コラーゲン繊維の太さが、健全な皮膚細胞におけるそれと比較して、同程度である場合は「◎」を、やや細い場合は「○」を、細い場合は「△」を、かなり細い場合は「×」を、下記表２に記載した。「◎」と「○」との間の場合は「◎○」を記載した。
【００５１】
《コラーゲン配向性》
太いコラーゲン繊維が一方向に延びている様子を観察した。コラーゲン繊維の配向性が、健全な皮膚細胞におけるそれと比較して、同程度である場合は「◎」を、やや劣る場合は「○」を、かなり劣る場合は「△」を、乱雑である場合は「×」を、下記表２に記載した。「◎」と「○」との間の場合は「◎○」を記載した。
【００５２】
《毛球》
毛球の形成が顕著に認められる場合は「◎」を、毛球の形成が認められる場合は「○」を、毛球の形成は認められない場合は「×」を、下記表２に記載した。「◎」と「○」との間の場合は「◎○」を記載した。
【００５３】
《肉芽》
肉芽の形成が顕著に認められる場合は「◎」を、肉芽の形成が認められる場合は「○」を、肉芽の形成がわずかである場合は「○△」を、下記表２に記載した。「◎」と「○」との間の場合は「◎○」を記載した。
【００５４】
【表２】
2020111572.tif 000003
【００５５】
＜評価結果のまとめ＞
上記表２に示す結果から明らかなように、比較例１〜３と比較して、実施例１〜２は、創傷治癒の進行が早いことが分かった。
実施例１〜２は、４週後には、健全な皮膚細胞と同程度のコラーゲン線維が再生しており、毛球および肉芽の形成が顕著に認められた。
実施例１〜２の塩化水酸化亜鉛の粉末は、近似円差分値が小さい（つまり、球状に近い）ことから、生体への刺激が少ないためと考えられる。
このような効果は、塩化水酸化亜鉛の近似円差分値がより小さい実施例１の方が、実施例２よりも顕著に認められた。
【図１】
2020111572.tif 000004