(57)【要約】【課題】ＧｖＨＤを防止し、同種ＨＣＴまたは同種ＢＭＴ患者の生存を向上させるための方法を提供する。【解決手段】本発明は、トール様受容体４（ＴＬＲ４）に特異的に結合する抗体を含む、抗トール様受容体４（ＴＬＲ４アンタゴニスト）を使用して、対宿主性移植片病（ＧｖＨＤ）の症状を阻害する、その進行を遅延させる、もしくはそれを別様に回復させる、ならびに／または例えば、幹細胞移植、骨髄移植もしくは他の幹細胞関連移植を受けた、および／もしくは受けている被験体を含む、移植された生物材料を受けている、受けた、および／もしくは受けるであろう被験体の生存を向上させる方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１３年１２月６日に出願された米国仮出願第６１／９１２，６１７号の利益を主張する。この出願の内容は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は一般に、トール様受容体４（ＴＬＲ−４）に特異的に結合する抗体を含む抗トール様受容体４（ＴＬＲ４アンタゴニスト）、治療剤として抗ＴＬＲ４アンタゴニストを使用する方法ならびに被験体における対宿主性移植片病（ＧｖＨＤ）の症状を処置する、阻害する、その進行を遅延させる、もしくはそれを別様に回復させる、ならびに／または幹細胞移植もしくは骨髄移植された被験体の生存を向上させる方法において抗ＴＬＲ４アンタゴニストを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
同種異系造血幹細胞移植（同種ＨＣＴ）および同種骨髄移植（ＢＭＴ）などの幹細胞移植は、ヒト血液がんのための治癒的療法である。不幸なことに、ドナー免疫細胞は、正常な宿主組織を非自己と考え、これらの組織に対する免疫攻撃を開始し、ＧｖＨＤの現象をもたらし得る。同種ＨＣＴおよび同種ＢＭＴの後のＧｖＨＤの軽減における進歩がなされてきたが、それは依然として主要な合併症であり、血液悪性疾患における療法のより幅広い適用を制限する。ＧｖＨＤは、ドナー免疫細胞がレシピエントの正常組織を攻撃する場合に生じる。重篤な組織損傷および死亡が、この疾患の結果である。
【０００４】
したがって、ＧｖＨＤを防止し、同種ＨＣＴまたは同種ＢＭＴ患者の生存を向上させるための方法の必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、トール様受容体４（ＴＬＲ４）に特異的に結合する抗体を含む、抗トール様受容体４（ＴＬＲ４アンタゴニスト）を使用して、対宿主性移植片病（ＧｖＨＤ）の症状を阻害する、その進行を遅延させる、もしくはそれを別様に回復させる、ならびに／または例えば、幹細胞移植、骨髄移植もしくは他の幹細胞関連移植を受けた、および／もしくは受けている被験体を含む、移植された生物材料を受けている、受けた、および／もしくは受けるであろう被験体の生存を向上させる方法を提供する。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは急性のものである。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは慢性のものである。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは、ＧｖＨＤのサブタイプならびに／または、非限定的な例として、特発性肺炎症候群（ＩＰＳ）、閉塞性細気管支炎（ＢＯＳ）、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｉｔｉｓ  ｏｂｌｉｔｅｒａｎｓ  ｏｒｇａｎｉｚｉｎｇ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）（ＢＯＯＰ）、急性膵炎、および／もしくは急性肝炎などの、ＧｖＨＤの副作用と関連するか、もしくは別段考えられる疾患である。
【０００６】
本発明は、被験体に、抗ＴＬＲ４アンタゴニストを投与することにより、ＧｖＨＤの症状を阻害する、その進行を遅延させる、もしくはそれを別様に回復させる、および／または骨髄移植被験体を含む、幹細胞移植された被験体の生存を向上させる方法を提供する。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは急性のものである。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは慢性のものである。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは、ＧｖＨＤのサブタイプならびに／または、非限定的な例として、ＩＰＳ、ＢＯＳ、ＢＯＯＰ、急性膵炎、および／もしくは急性肝炎などの、ＧｖＨＤの副作用と関連するか、もしくは別段考えられる疾患である。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片であるか、またはそれに由来する。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ペプチドベースのアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、核酸ベースのアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４の低分子阻害剤である。例えば、好適な低分子阻害剤は、非限定的な例として、ＴＡＫ−２４２（レサトルビド（ｒｅｓａｔｏｒｖｉｄ））および／またはＥ５５６４（エリトラン（Ｅｒｉｔｏｒａｎ））を含む。
【０００７】
一部の実施形態では、方法は、幹細胞関連生物材料、例えば、１つもしくは複数の幹細胞移植および／または１つもしくは複数の骨髄移植を埋め込まれた被験体に、１つまたは複数のさらなる用量の抗ＴＬＲ４アンタゴニストを投与する工程も含み、ここで、アンタゴニストは、ＧｖＨＤの症状を阻害する、その進行を遅延させる、もしくはそれを別様に回復させる、および／または移植された生物材料の生存を向上させるのに十分な量で被験体に投与される。さらなる用量の抗ＴＬＲ４アンタゴニストを、移植の前、移植の間、または移植の後に投与することができる。さらなる用量の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、同じ抗ＴＬＲ４アンタゴニストまたは異なる抗ＴＬＲ４アンタゴニストであってもよい。
【０００８】
本発明は、被験体に、トール様受容体４（ＴＬＲ４）ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片を投与することにより、ＧｖＨＤの症状を阻害する、その進行を遅延させる、もしくはそれを別様に回復させる、および／または骨髄移植被験体を含む、幹細胞移植された被験体の生存を向上させる方法を提供する。
【０００９】
一部の実施形態では、方法は、幹細胞関連生物材料、例えば、１つもしくは複数の幹細胞移植および／または１つもしくは複数の骨髄移植を埋め込まれた被験体に、１つまたは複数のさらなる用量の、ＴＬＲ４に特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片を投与する工程も含み、ここで、抗体は、ＧｖＨＤの症状を阻害する、その進行を遅延させる、もしくはそれを別様に回復させる、および／または移植された生物材料の生存を向上させるのに十分な量で被験体に投与される。さらなる用量の抗ＴＬＲ４抗体を、移植の前、移植の間、または移植の後に投与することができる。さらなる用量の抗ＴＬＲ４抗体は、同じ抗ＴＬＲ４抗体または異なる抗ＴＬＲ４抗体であってもよい。
【００１０】
本発明は、移植しようとする幹細胞関連生物材料、例えば、１つもしくは複数の幹細胞移植および／または１つもしくは複数の骨髄移植を、抗ＴＬＲ４アンタゴニストと接触させて、移植可能な組成物を生成すること、移植可能な組成物を、被験体における所望の位置に埋め込むこと、および被験体に、１つまたは複数のさらなる用量の抗ＴＬＲ４アンタゴニストを投与することによって、ＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させる方法であって、アンタゴニストが、ＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させるのに十分な量で投与される、方法を提供する。さらなる用量の抗ＴＬＲ４アンタゴニストを、移植の間に、移植の後に、またはその両方に投与することができる。さらなる用量の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、同じ抗ＴＬＲ４アンタゴニストまたは異なる抗ＴＬＲ４アンタゴニストであってもよい。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片であるか、またはそれに由来する。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ペプチドベースのアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、核酸ベースのアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４の低分子阻害剤である。
【００１１】
本発明は、移植しようとする幹細胞関連生物材料、例えば、１つもしくは複数の幹細胞移植および／または１つもしくは複数の骨髄移植を、トール様受容体４（ＴＬＲ４）ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片と接触させて、移植可能な組成物を生成すること、移植可能な組成物を、被験体における所望の位置に埋め込むこと、および被験体に、１つまたは複数のさらなる用量の、ＴＬＲ４に特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片を投与することによって、ＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させる方法であって、抗体が、ＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させるのに十分な量で投与される、方法を提供する。さらなる用量の抗ＴＬＲ４抗体を、移植の間に、移植の後に、またはその両方に投与することができる。さらなる用量の抗ＴＬＲ４抗体は、同じ抗ＴＬＲ４抗体または異なる抗ＴＬＲ４抗体であってもよい。
【００１２】
本発明はまた、被験体に、１つまたは複数の用量の抗ＴＬＲ４アンタゴニストを投与することによって、幹細胞関連生物材料の移植片を受けた、または受けるであろう被験体を処置する方法であって、アンタゴニストがＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させるのに十分な量で投与される、方法も提供する。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片である、またはそれに由来する。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ペプチドベースのアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、核酸ベースのアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４の低分子阻害剤である。
【００１３】
本発明はまた、被験体に、１つまたは複数の用量の、トール様受容体４（ＴＬＲ４）ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片を投与することによって幹細胞関連生物材料の移植片を受けた、または受けるであろう被験体を処置する方法であって、抗体がＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させるのに十分な量で投与される、方法も提供する。
【００１４】
一部の実施形態では、ＧｖＨＤは急性のものである。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは慢性のものである。一部の実施形態では、ＧｖＨＤは、ＧｖＨＤのサブタイプならびに／または非限定例として、ＩＰＳ、ＢＯＳ、ＢＯＯＰ、急性膵炎、および／もしくは急性肝炎などの、ＧｖＨＤの副作用と関連する、または別段考えられる疾患である。
【００１５】
一部の実施形態では、被験体は哺乳動物である。好ましい実施形態では、被験体はヒトである。
【００１６】
一部の実施形態では、移植しようとする幹細胞関連生物材料は、１つもしくは複数の細胞もしくは細胞型、１つもしくは複数の組織もしくは組織型、または臓器もしくはその一部である。例えば、移植しようとする生物材料は、同種異系生物材料である。
【００１７】
一部の実施形態では、移植しようとする生物材料は、骨髄細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、同種異系骨髄細胞である。
【００１８】
一部の実施形態では、移植しようとする生物材料は、造血幹細胞である。一部の実施形態では、造血幹細胞は、同種異系造血幹細胞である。
【００１９】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、生物材料が、例えば、非限定例として、高齢のレシピエントおよび／または非家族血縁ドナーからの移植材料を受けているレシピエントなどの、ＧｖＨＤに関して「高リスク」であることが知られる、または疑われる被験体に移植される前に、被験体に予防的に投与される。
【００２０】
一部の実施形態では、移植前に生物材料と接触させるために使用される抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、すなわち、第１の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、生物材料が移植される前、その間、および／またはその後に被験体に投与される抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、すなわち、第２の抗ＴＬＲ４アンタゴニストと同じである。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、同じ投与量で投与される。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、異なる投与量で投与される。
【００２１】
一部の実施形態では、移植前に生物材料と接触させるために使用される抗ＴＬＲ４抗体、すなわち、第１の抗ＴＬＲ４抗体は、生物材料が移植される前、その間、および／またはその後に被験体に投与される抗ＴＬＲ４抗体、すなわち、第２の抗ＴＬＲ４抗体と同じである。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４抗体は、同じ投与量で投与される。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４抗体は、異なる投与量で投与される。
【００２２】
一部の実施形態では、移植前に生物材料と接触させるために使用される抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、すなわち、第１の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、生物材料が移植される前、その間、および／またはその後に被験体に投与される抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、すなわち、第２の抗ＴＬＲ４アンタゴニストと異なる抗体である。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、同じ投与量で投与される。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、異なる投与量で投与される。
【００２３】
一部の実施形態では、移植前に生物材料と接触させるために使用される抗ＴＬＲ４抗体、すなわち、第１の抗ＴＬＲ４抗体は、生物材料が移植される前、その間、および／またはその後に被験体に投与される抗ＴＬＲ４抗体、すなわち、第２の抗ＴＬＲ４抗体と異なる抗体である。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４抗体は、同じ投与量で投与される。一部の実施形態では、第１および第２の抗ＴＬＲ４抗体は、異なる投与量で投与される。
【００２４】
幹細胞関連移植材料を受けている、それを受けた、および／またはそれを受けるであろう患者への、抗ＴＬＲ４抗体またはその断片を含む、抗ＴＬＲ４アンタゴニストの投与は、様々な実験または臨床目標のいずれかが達成される場合、成功であると考えられる。例えば、幹細胞関連移植材料を受けている、それを受けた、および／またはそれを受けるであろう患者への、抗ＴＬＲ４抗体またはその断片を含む、抗ＴＬＲ４アンタゴニストの投与は、ＧｖＨＤと関連する１つまたは複数の症状が緩和される、軽減される、阻害される、またはさらなる状態、すなわち、より悪い状態に進行しない場合、成功であると考えられる。幹細胞関連移植材料を受けている、それを受けた、および／またはそれを受けるであろう患者への、抗ＴＬＲ４抗体またはその断片を含む、抗ＴＬＲ４アンタゴニストの投与は、ＧｖＨＤと関連する１つまたは複数の症状が、ＧｖＨＤが寛解に入る、またはさらなる状態、すなわち、より悪い状態に進行しない場合、成功と考えられる場合、成功と考えられる。
【００２５】
急性および慢性ＧｖＨＤの症状は、軽度から重度の範囲である。通常は、移植後、最初の３ヶ月以内に起こる、急性ＧｖＨＤの症状は、非限定例として、腹部疼痛もしくは腹部疝痛、悪心、嘔吐、下痢、ドライアイもしくはチカチカ痛む目、黄疸、皮膚発疹、掻痒、および／または皮膚領域上の発赤を含む。通常は、移植後、３ヶ月を超えて始まる、慢性ＧｖＨＤの症状は、いくつかの例においては、生涯続くこともあり、非限定例として、ドライアイもしくは視力変化、口渇、口中の白斑（ｗｈｉｔｅ  ｐａｔｃｈ）、香辛料入り食品に対する過敏症、疲労、筋力低下、慢性疼痛、隆起した脱色した領域の皮膚発疹、ならびに皮膚拘縮（ｓｋｉｎ  ｔｉｇｈｔｅｎｉｎｇ）または肥厚、息切れ、膣の乾燥、および／または体重減少を含む。
【００２６】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、ＴＬＲ４に特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、１つまたは複数のさらなる薬剤と組み合わせて、移植の前、移植の間および／または移植の後に投与される。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、抗ＴＬＲ４抗体と、さらなる薬剤とは、同時に投与される。例えば、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、抗ＴＬＲ４抗体と、さらなる薬剤とを、単一の組成物中で製剤化するか、または２つもしくはそれ超の別々の組成物として投与することができる。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニスト、例えば、抗ＴＬＲ４抗体と、さらなる薬剤とは、逐次的に投与される。
【００２７】
一部の実施形態では、さらなる薬剤は、免疫抑制剤である。例えば、さらなる薬剤は、メトトレキセート、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、エベロリムス、コルチコステロイド、抗胸腺細胞グロブリン、インフリキシマブ、エタネルセプトおよびアダリムマブから選択される。さらなる薬剤は、免疫抑制効果を示す任意の化合物または他の分子を含んでもよい。
【００２８】
本明細書に提供される抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、受容体活性化およびその後の細胞内シグナル伝達誘導性ＴＬＲ４リガンド、例えば、ＬＰＳまたは本明細書に記載される任意の他のＴＬＲ４リガンドを遮断する、例えば、中和することができる。一部の実施形態では、抗体は、抗体またはその免疫学的に活性な断片である。一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、マウス、キメラ、ヒト化、完全ヒトモノクローナル抗体、ドメイン抗体、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、またはＦａｂ発現ライブラリーである。一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体はまた、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体に結合する。
【００２９】
一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、ヒトＴＬＲ４ポリペプチドに結合する。一部の実施形態では、ヒトＴＬＲ４ポリペプチドは、アミノ酸配列：
【００３０】
【化１】
2020019824.tif 000002
【００３１】
を含む。
【００３２】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、ＧＧＹＳＷＨ（配列番号１）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ  ＣＤＲ１）；ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；およびＫＤＰＳＤＡＦＰＹ（配列番号３）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号４）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ  ＣＤＲ１）領域；ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号５）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む。一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、重鎖可変アミノ酸配列
【００３３】
【化２】
2020019824.tif 000003
【００３４】
と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列、および軽鎖可変アミノ酸配列
【００３５】
【化３】
2020019824.tif 000004
【００３６】
と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＬＲ４に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片は、重鎖アミノ酸配列
【００３７】
【化４】
2020019824.tif 000005
【００３８】
と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列、および軽鎖アミノ酸配列
【００３９】
【化５】
2020019824.tif 000006
【００４０】
と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一であるアミノ酸配列をさらに含む。
【００４１】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、２００５年６月１４日に出願され、ＷＯ２００７／１１０６７８として公開されたＰＣＴ／ＩＢ２００５／００４２０６に記載の抗体であるか、またはそれに由来し、これらの文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００４２】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、２００８年５月１４日に出願され、ＷＯ２００９／１０１４７９として公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３９７８に記載の抗体であるか、またはそれに由来し、これらの文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００４３】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、例えば、Ｓｈｉｍａｚｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１８９巻：１７７７〜１７８２頁（１９９９年）；Ｎｉｊｈｕｉｓら、Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０巻（４号）：５５８〜６３頁（２００３年）；およびＰｉｖａｒｃｓｉら、Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍ．、１５巻（６号）：７２１〜７３０頁（２００３年）に記載されているＨＴＡ１２５として公知の抗ＴＬＲ４抗体であるか、またはそれに由来し、これらの文献のそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００４４】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、ドメイン抗体、例えば、２００９年５月１５日に出願され、ＷＯ２００９／１３８４８として公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５５９２６に記載のＴＬＲ４に結合するドメイン抗体などであるか、またはそれに由来し、これらの文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００４５】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の残基２８９〜３７５のヒトＴＬＲ４上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基３２８および３２９を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基３４９〜３５１を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基３６９〜３７１を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基３２８、３２９、３４９〜３５１および３６９〜３７１を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基２９３〜２９５を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基２９６および２９７を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基３１９〜３２１を含むエピトープに結合する。例えば、一部の実施形態では、抗体またはその免疫学的に活性な断片は、配列番号１１の少なくとも残基２９３〜２９５、２９６、２９７および３１９〜３２１を含むエピトープに結合する。
【００４６】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、２０１３年３月２９日に出願され、ＷＯ２０１３／１４９１１として公開された、ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３４５４３に記載された抗体であるか、またはそれに由来し、それらの内容は全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４７】
本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、本明細書に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ超同一である重鎖可変アミノ酸配列、および／または本明細書に示したアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ超同一である軽鎖可変アミノ酸を含む抗体も含む。
【００４８】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＬＲ４抗体は、例えば、Ｆｃ領域またはそのＦｃＲ結合性断片内で少なくとも１つの特異的アミノ酸置換も含み（例えば、ＩｇＧ定常ドメイン内でアミノ酸置換を有するポリペプチド）、その結果、改変抗体は、未改変抗体（ｕｎａｌｔｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）と比較して抗原への結合を保持しながら抗原依存性エフェクター機能の改変を誘発する。例えば、改変抗体（ａｌｔｅｒｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）は、炎症促進性メディエーター放出の防止を誘発する。好適な実施形態では、改変抗体は、ヒトであり、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。
【００４９】
本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、抗体のＦｃ部分の定常領域内の少なくとも１つのアミノ酸残基が改変された改変抗体を含む。例えば、Ｆｃ部分のＣＨ２ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸は、異なる残基、すなわち、アミノ酸置換によって置きかえられている。本明細書に記載の改変抗体では、残基３２５、３２６、および３２８に対応するアミノ酸残基の１つまたは複数は、未改変抗体と比較して異なる残基で置換されている。ガンマ重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスのものである（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ら、１９６９年；Ｋａｂａｔ，Ｅ，Ａ．、Ｔ．Ｔ．Ｗｕ、Ｈ．Ｍ．Ｐｅｒｒｙ、Ｋ．Ｓ．Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ、およびＣ．Ｆｏｅｌｌｅｒ．、１９９１年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、米国保健福祉省、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎ．９１−３２４２を参照）。好適な実施形態では、ガンマ重鎖定常領域のＥＵアミノ酸３２５位は、セリンで置換されており、ガンマ重鎖定常領域のＥＵアミノ酸３２８位は、フェニルアラニンで置換されており、その結果、改変されたヒトＩｇＧ１抗体のガンマ重鎖定常領域のＥＵ３２５〜３２８位は、アミノ酸配列ＳＫＡＦ（配列番号７６）を含む。
【００５０】
本発明による医薬組成物は、本発明の抗体および担体を含むことができる。これらの医薬組成物は、キット、例えば、診断キットなどの中に含めることができる。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
対宿主性移植片病（ＧｖＨＤ）を阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させる方法であって、
（ｉ）移植しようとする幹細胞関連生物材料を、トール様受容体４（ＴＬＲ４）ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片と接触させて、移植可能な組成物を生成する工程、および
（ｉｉ）前記被験体における望ましい位置に前記移植可能な組成物を埋め込む工程
を含む、方法。
（項目２）
ＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させる方法であって、
（ｉ）移植しようとする幹細胞関連生物材料を、トール様受容体４（ＴＬＲ４）ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片と接触させて、移植可能な組成物を生成する工程、
（ｉｉ）前記被験体における望ましい位置に前記移植可能な組成物を埋め込む工程；ならびに
（ｉｉｉ）前記被験体に、ＧｖＨＤを防止する、および／または前記ＧｖＨＤ被験体の生存を向上させるのに十分な量で投与される、１つまたは複数のさらなる用量の、ＴＬＲ４に特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片を投与する工程
を含む、方法。
（項目３）
幹細胞関連生物材料の移植を受けた、または受けるであろう被験体を処置する方法であって、前記被験体に、１つまたは複数の用量の、トール様受容体４（ＴＬＲ４）ポリペプチドに特異的に結合する抗体またはその免疫学的に活性な断片を投与する工程を含み、前記抗体が、ＧｖＨＤを防止する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させるのに十分な量で投与される、方法。
（項目４）
前記被験体がヒトである、項目１、２または３に記載の方法。
（項目５）
前記ＴＬＲ４ポリペプチドがヒトＴＬＲ４ポリペプチドである、項目１、２または３に記載の方法。
（項目６）
移植しようとする前記幹細胞関連生物材料が、１つもしくは複数の細胞もしくは細胞型、１つもしくは複数の組織もしくは組織型、または臓器もしくはその一部である、項目１、２または３に記載の方法。
（項目７）
移植しようとする前記生物材料が、同種異系生物材料である、項目１、２または３に記載の方法。
（項目８）
移植しようとする前記生物材料が、幹細胞である、項目１、２または３に記載の方法。
（項目９）
移植しようとする前記幹細胞が、骨髄由来幹細胞または造血幹細胞である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
移植しようとする骨髄由来幹細胞または造血幹細胞が、同種異系である、項目１、２または３に記載の方法。
（項目１１）
工程（ｉ）および（ｉｉｉ）におけるＴＬＲ４に特異的に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、同じ抗体または免疫学的に活性な断片である、項目２に記載の方法。
（項目１２）
工程（ｉ）におけるＴＬＲ４に特異的に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片と、工程（ｉｉｉ）におけるＴＬＲ４に特異的に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片とが、異なる抗体または免疫学的に活性な断片である、項目２に記載の方法。
（項目１３）
ＴＬＲ４に特異的に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、工程（ｉｉｉ）において、１つまたは複数のさらなる薬剤と組み合わせて投与される、項目２に記載の方法。
（項目１４）
ＴＬＲ４に特異的に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、１つまたは複数のさらなる薬剤と組み合わせて投与される、項目３に記載の方法。
（項目１５）
前記１つまたは複数のさらなる薬剤が、１つまたは複数の免疫抑制剤である、項目１３または１４に記載の方法。
（項目１６）
前記１つまたは複数のさらなる薬剤が、メトトレキセート、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、エベロリムス、コルチコステロイド、抗胸腺細胞グロブリン、インフリキシマブ、エタネルセプトおよびアダリムマブから選択される、項目１３または１４に記載の方法。
（項目１７）
ＴＬＲ４に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、モノクローナル抗体である、項目１、２または３に記載の方法。
（項目１８）
ＴＬＲ４に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、マウス、キメラ、ヒト化、完全ヒトモノクローナル抗体、ドメイン抗体、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’もしくはＦ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、またはＦａｂ発現ライブラリーである、項目１、２または３に記載の方法。
（項目１９）
ＴＬＲ４に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、ＧＧＹＳＷＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ  ＣＤＲ１）；ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；およびＫＤＰＳＤＡＦＰＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ  ＣＤＲ１）領域；ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む、項目１、２または３に記載の方法。
（項目２０）
ＴＬＲ４に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、重鎖可変アミノ酸配列
【化４４】
2020019824.tif 000007
、および軽鎖可変アミノ酸配列
【化４５】
2020019824.tif 000008
をさらに含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
ＴＬＲ４に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、重鎖アミノ酸配列
【化４６】
2020019824.tif 000009
、および軽鎖アミノ酸配列
【化４７】
2020019824.tif 000010
をさらに含む、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
ＴＬＲ４に結合する前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、ＨＴＡ１２５またはヒトＴＬＲ４に結合する別の商業的に入手可能な抗体である、項目１、２または３に記載の方法。
（項目２３）
前記抗体またはその免疫学的に活性な断片が、配列番号１１の残基２８９〜３７５のヒトＴＬＲ４上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する、項目１、２または３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、ＧｖＨＤのマウスモデルにおける動物の死に対する抗ＴＬＲ４処置の保護効果を記述するグラフである。統計を、アロ−アイソタイプ（ａｌｌｏ−ｉｓｏｔｙｐｅ）群に対するＬｏｇランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定を用いて実施した。
【図２Ａ】図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃは、ＧｖＨＤのマウスモデルにおける、個々のマウスの体重変化に対する抗ＴＬＲ４処置の効果を記述する一連のグラフである。なお、４２日目に、アイソタイプ対照で処置された１５匹のマウスのうちの３匹のみが、元の体重の８５％を超えていた（点線で印を付けた閾値）が、予防的および治療的抗ＴＬＲ４処置群の両方に由来する１５匹のマウスのうちの９匹がこの値を超えていた。
【図２Ｂ】図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃは、ＧｖＨＤのマウスモデルにおける、個々のマウスの体重変化に対する抗ＴＬＲ４処置の効果を記述する一連のグラフである。なお、４２日目に、アイソタイプ対照で処置された１５匹のマウスのうちの３匹のみが、元の体重の８５％を超えていた（点線で印を付けた閾値）が、予防的および治療的抗ＴＬＲ４処置群の両方に由来する１５匹のマウスのうちの９匹がこの値を超えていた。
【図２Ｃ】図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃは、ＧｖＨＤのマウスモデルにおける、個々のマウスの体重変化に対する抗ＴＬＲ４処置の効果を記述する一連のグラフである。なお、４２日目に、アイソタイプ対照で処置された１５匹のマウスのうちの３匹のみが、元の体重の８５％を超えていた（点線で印を付けた閾値）が、予防的および治療的抗ＴＬＲ４処置群の両方に由来する１５匹のマウスのうちの９匹がこの値を超えていた。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
発明の詳細な説明
本発明は、例えば、トール様受容体４、より具体的には、ヒトＴＬＲ４に特異的に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などの、トール様受容体４（ＴＬＲ４）に対するアンタゴニストを提供する。抗ＴＬＲ４抗体を含む、これらの抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させる方法において使用される。
【００５３】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４アンタゴニストは、ＴＬＲ４に結合する抗体およびその免疫学的に活性な断片である。抗ＴＬＲ４抗体は、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体に結合し、また、ＭＤ−２の存在とは関係なくＴＬＲ４にも結合する抗体を含む。
【００５４】
本発明のＴＬＲ４抗体は、例えば、以下に示した重鎖および軽鎖配列の組み合わせを有する抗体を含む。
【００５５】
例示的な本発明の抗体としては、例えば、２００５年６月１４日に出願され、ＷＯ２００７／１１０６７８として公開されたＰＣＴ／ＩＢ２００５／００４２０６に記載の抗ＴＬＲ４抗体、２００８年５月１４日に出願され、ＷＯ２００９／１０１４７９として公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３９７８に記載の抗ＴＬＲ４抗体、およびＨＴＡ１２５などの市販の抗体があり、これらの文献のそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００５６】
例示的な本発明の抗体としては、例えば、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ２複合体に結合し、ＭＤ−２の存在とは独立にＴＬＲ４にも結合する、ＮＩ−０１０１と本明細書で呼ばれる抗体がある。ＮＩ−０１０１（ｈｕ１５ｃ１）抗体の配列を、ＣＤＲ配列にＶＨおよびＶＬアミノ酸配列中で下線を引いて以下に示す：
【００５７】
【化６】
2020019824.tif 000011
【００５８】
【化７】
2020019824.tif 000012
【００５９】
ＮＩ−０１０１（ｈｕ１５ｃ１）抗体は、配列ＧＧＹＳＷＨ（配列番号１）、ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２）、およびＫＤＰＳＤＡＦＰＹ（配列番号３）を有するＶＨ  ＣＤＲ、ならびに配列ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号４）、ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号５）、およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）を有するＶＬ  ＣＤＲを含む。
【００６０】
抗ＴＬＲ４／ＭＤ２抗体の重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）領域のアミノ酸および核酸配列を以下に示す。Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９年、Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔら、１９９１年によって定義された相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、以下で下線を引いた、斜体のテキストで強調されている（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２巻：８７７〜８８３頁（１９８９年）；Ｋａｂａｔ，ＥＡら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５版、米国保健福祉省、米国政府印刷局（１９９１年）を参照）。
【００６１】
抗ＴＬＲ４抗体には、２００４年１２月１０日に出願された同時係属の米国出願１１／００９９３９、および２００４年６月１５日に出願された同１１／１５１９１６、ならびに２００４年１２月１０日に出願されたＷＯ０５／０６５０１５、および２００４年６月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２０９３０に記載の抗体が含まれ、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。いくつかの例示的な抗体としては、１８Ｈ１０、１６Ｇ７、１５Ｃ１、および７Ｅ３とこれらの中で呼ばれる抗体がある。
【００６２】
抗ＴＬＲ４抗体には、２００４年６月１５日に出願された同時係属の米国出願１１／１５１９１６（米国特許公開第ＵＳ２００８−００５０３６６Ａ１号）、および２００４年６月１５日に出願されたＰＣＴ／ＩＢ２００５／００４２０６（ＰＣＴ公開第ＷＯ０７／１１０６７８号）に記載の抗体が含まれ、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。いくつかの例示的な抗体の配列を以下に示す。
【００６３】
【化８】
2020019824.tif 000013
【００６４】
【化９】
2020019824.tif 000014
【００６５】
【化１０】
2020019824.tif 000015
【００６６】
抗ＴＬＲ４抗体には、２００８年５月１４日に出願されたＰＣＴ／ＩＢ２００８／００３９７８（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／１０１４７９号）に記載の抗体が含まれ、この文献の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。これらの抗ＴＬＲ４抗体は、ＣＤＲ３部分に１つまたは複数の変異を含むように改変されている。いくつかの例示的な抗体の配列を以下に示す。
【００６７】
【化１１】
2020019824.tif 000016
【００６８】
【化１２】
2020019824.tif 000017
【００６９】
【化１３】
2020019824.tif 000018
【００７０】
本発明の抗体は、ヒトＴＬＲ４および／もしくはヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体を介したシグナル伝達を妨害するか、または別様にアンタゴナイズする。一部の実施形態では、本発明の抗体は、カニクイザルＴＬＲ４および／またはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体にも結合する。一部の実施形態では、抗体は、以下の配列を有するヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する：
【００７１】
【化１４】
2020019824.tif 000019
【００７２】
本発明の抗体は、ヒトおよび／もしくはカニクイザルＴＬＲ４、ならびに／またはヒトおよび／もしくはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体を介したシグナル伝達を妨害するか、または別様にアンタゴナイズする。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１１（ヒトＴＬＲ４）および／または配列番号７７（カニクイザルＴＬＲ４）の残基２８９から３７５の間でヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。例えば、ＴＬＲ４抗体は、配列番号１１（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の残基３４９を含むエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、エピトープは、追加の残基、例えば、配列番号１１（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の少なくとも残基３２８および３２９；配列番号１１（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の少なくとも残基３５１；ならびに配列番号１１（ヒト）および／または配列番号７７（カニクイザル）の少なくとも残基３６９〜３７１、ならびにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される残基も含む。
【００７３】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、細胞表面上で発現されるヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体を認識するモノクローナル抗体であるか、またはそれに由来する。抗体は、ＴＬＲ４リガンド、例えば、ＬＰＳ、または本明細書に記載の任意の他のＴＬＲ４リガンドによって誘導される受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を遮断、例えば、中和することができる。本発明の抗体は、ヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体に結合し、かつＭＤ−２の存在とは独立にＴＬＲ４にも結合する抗体を含む。
【００７４】
一部の実施形態では、抗ＴＬＲ４抗体またはその免疫学的に活性な断片は、細胞表面上に発現されるヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体を介して、例えば、ＬＰＳによって誘導される受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を遮断することによって、シグナル伝達を妨害するか、または別様にアンタゴナイズする。これらの実施形態の例示的なモノクローナル抗体としては、１Ａ１、１Ａ６、１Ｂ１２、１Ｃ７、１Ｃ１０、１Ｃ１２、１Ｄ１０、１Ｅ１１、１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ、１Ｇ１２、１Ｅ１１．Ｃ１、１Ｅ１１．Ｃ２、１Ｅ１１．Ｃ３、１Ｅ１１．Ｃ４、１Ｅ１１．Ｃ５、１Ｅ１１．Ｃ６、１Ｅ１１．Ｅ１、１Ｅ１１．Ｅ２、１Ｅ１１．Ｅ３、１Ｅ１１．Ｅ４、１Ｅ１１．Ｅ５、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５がある。これらの抗体の配列を、以下に示す。
【００７５】
これらの抗体は、異なる特異性を有する。一部の抗体は、ヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４の両方、ならびに／またはヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体の両方に対する特異性を示し、これらは、ＬＰＳを介して受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を阻害することが示された。例えば、１Ｃ１２、１Ｅ１１、１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ、１Ｅ１１．Ｃ１、１Ｅ１１．Ｃ２、１Ｅ１１．Ｃ３、１Ｅ１１．Ｃ４、１Ｅ１１．Ｃ５、１Ｅ１１．Ｃ６、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ２、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５は、ヒトまたはカニクイザルＭＤ−２の存在とは独立にヒトおよびカニクイザルＴＬＲ４の両方に結合する。１Ａ１、１Ａ６、１Ｂ１２、１Ｃ７、１Ｃ１０、１Ｄ１０、および１Ｇ１２は、カニクイザルＭＤ−２の存在とは独立にカニクイザルＴＬＲ４のみに結合する。１Ｅ１１．Ｅ１、１Ｅ１１．Ｅ２、１Ｅ１１．Ｅ３、１Ｅ１１．Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｅ５は、ヒトＭＤ−２の存在とは独立にヒトＴＬＲ４のみに結合する。
【００７６】
一部の実施形態では、本発明は、トール様受容体４（ＴＬＲ４）に特異的に結合する単離抗体であって、配列番号１１の少なくとも残基３４９を含むエピトープ、および配列番号７７の少なくとも残基３４９を含むエピトープに結合する、単離抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列；およびＡＲＫＤＳＧ（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）ＰＹ（配列番号５７）（式中、Ｘ１は、Ｎ、Ｑ、Ｄ、またはＥであり、Ｘ２は、任意の疎水性アミノ酸であり、Ｘ３は、任意の疎水性アミノ酸である）の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む３つの相補決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖；ならびにＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）の可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列；ＹＡＳ（配列番号６９）の可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）の可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）アミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖を含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号１１および配列番号７７の少なくとも残基３２８および３２９をさらに含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号１１および配列番号７７の少なくとも残基３５１をさらに含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号１１および配列番号７７の残基３６９から３７１の間の１つまたは複数の残基をさらに含む。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号１１および配列番号７７の少なくとも残基３６９〜３７１をさらに含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１１および配列番号７７の少なくとも残基３２８、３２９、３４９、３５１、および３６９〜３７１を含むエピトープに特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵアミノ酸３２５位におけるガンマ重鎖定常領域内のアミノ酸置換およびＥＵアミノ酸３２８位におけるアミノ酸置換をさらに含む。一部の実施形態では、ＥＵアミノ酸３２５位で置換されているアミノ酸は、セリンであり、ＥＵアミノ酸３２８位で置換されているアミノ酸は、フェニルアラニンである。
【００７７】
一部の実施形態では、３つの重鎖ＣＤＲは、Ｇ（Ｆ／Ｙ）ＰＩ（Ｒ／Ｇ／Ｗ）（Ｙ／Ｆ／Ｇ）ＧＹＳ（配列番号４８）、ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＧＦＰＩＲＹＧＹＳ（配列番号５０）；ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号５１）；ＧＹＰＩＲＨＧＹＳ（配列番号５２）；ＧＦＰＩＧＱＧＹＳ（配列番号５３）；ＧＹＰＩＷＧＧＹＳ（配列番号５４）およびＧＹＰＩＧＧＧＹＳ（配列番号５５）からなる群より選択される可変重鎖相補性決定領域１（ＶＨ  ＣＤＲ１、本明細書ではＣＤＲＨ１とも呼ばれる）アミノ酸配列、ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）の可変重鎖相補性決定領域２（ＶＨ  ＣＤＲ２、本明細書ではＣＤＲＨ２とも呼ばれる）アミノ酸配列；ならびにＡＲＫＤＳＧ（Ｎ／Ｑ／Ｄ／Ｅ）Ｘ１Ｘ２ＰＹ（配列番号５７）（ここで、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立に任意の疎水性アミノ酸である）、ＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）；ＡＲＫＤＳＧＲＬＬＰＹ（配列番号５９）；ＡＲＫＤＳＧＫＷＬＰＹ（配列番号６０）；ＡＲＫＤＳＧＨＬＭＰＹ（配列番号６１）；ＡＲＫＤＳＧＨＮＹＰＹ（配列番号６２）；ＡＲＫＤＳＧＫＮＦＰＹ（配列番号６３）；ＡＲＫＤＳＧＱＬＦＰＹ（配列番号６４）；ＡＲＫＤＳＧＨＮＬＰＹ（配列番号６５）；ＡＲＫＤＳＧＤＹＦＰＹ（配列番号６６）およびＡＲＫＤＳＧＲＹＷＰＹ（配列番号６７）からなる群より選択される可変重鎖相補性決定領域３（ＶＨ  ＣＤＲ３、本明細書ではＣＤＲＨ３とも呼ばれる）アミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む。３つの軽鎖ＣＤＲは、ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）の可変軽鎖相補性決定領域１（ＶＬ  ＣＤＲ１、本明細書ではＣＤＲＬ１とも呼ばれる）アミノ酸配列；ＹＡＳ（配列番号６９）の可変軽鎖相補性決定領域２（ＶＬ  ＣＤＲ２、本明細書ではＣＤＲＬ２とも呼ばれる）アミノ酸配列；ならびにＱＱＧ（Ｙ／Ｎ）（Ｄ／Ｅ）（Ｆ／Ｙ）ＰＸＴ（配列番号７０）（ここで、Ｘは任意の疎水性アミノ酸である）、ＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）；ＱＱＧＮＤＦＰＶＴ（配列番号７１）；ＱＱＧＹＤＥＰＦＴ（配列番号７２）；ＱＱＧＹＤＦＰＬＴ（配列番号７３）；ＱＱＧＹＤＹＰＬＴ（配列番号７４）およびＱＱＧＹＥＦＰＬＴ（配列番号７５）からなる群より選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＶＬ  ＣＤＲ３、本明細書ではＣＤＲＬ３とも呼ばれる）アミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ超同一であるアミノ酸配列を含む。抗体は、ヒトおよびカニクイザルのＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体に、ヒトおよびカニクイザルのＭＤ−２と複合体形成していない場合のヒトおよびカニクイザルのＴＬＲ４に、ヒトのＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体に、ヒトのＭＤ−２と複合体形成していない場合のヒトのＴＬＲ４に、カニクイザルのＭＤ−２と複合体形成していない場合のカニクイザルのＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体またはカニクイザルのＴＬＲ４に結合する。
【００７８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１抗体である。以下に示したように、１Ｅ１１抗体は、配列番号７８に示した核酸配列によってコードされる重鎖可変領域（配列番号７９）、および配列番号８０に示した核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域（配列番号８１）を含む。
【００７９】
【化１５】
2020019824.tif 000020
【００８０】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８１】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ａ１抗体である。
【００８２】
【化１６】
2020019824.tif 000021
【００８３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ａ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＲＬＬＰＹ（配列番号５９）。１Ａ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ａ６抗体である。
【００８５】
【化１７】
2020019824.tif 000022
【００８６】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ａ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＫＷＬＰＹ（配列番号６０）。１Ａ６抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００８７】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｂ１２抗体である。
【００８８】
【化１８】
2020019824.tif 000023
【００８９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ａ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＨＬＭＰＹ（配列番号６１）。１Ｂ１２抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９０】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｃ７抗体である。
【００９１】
【化１９】
2020019824.tif 000024
【００９２】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｃ７抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＨＮＹＰＹ（配列番号６２）。１Ｃ７抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９３】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｃ１０抗体である。
【００９４】
【化２０】
2020019824.tif 000025
【００９５】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｃ１０抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＫＮＦＰＹ（配列番号６３）。１Ｃ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９６】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｃ１２抗体である。
【００９７】
【化２１】
2020019824.tif 000026
【００９８】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｃ１２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＱＬＦＰＹ（配列番号６４）。１Ｃ１２抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【００９９】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｄ１０抗体である。
【０１００】
【化２２】
2020019824.tif 000027
【０１０１】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｄ１０抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＨＮＬＰＹ（配列番号６５）。１Ｄ１０抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１０２】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体である。
【０１０３】
【化２３】
2020019824.tif 000028
【０１０４】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＤＹＦＰＹ（配列番号６６）。１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１０５】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｇ１２抗体である。
【０１０６】
【化２４】
2020019824.tif 000029
【０１０７】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｇ１２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＲＹＷＰＹ（配列番号６７）。１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１０８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ１抗体である。
【０１０９】
【化２５】
2020019824.tif 000030
【０１１０】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ｌＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＦＰＩＲＹＧＹＳ（配列番号５０）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１１１】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２抗体である。
【０１１２】
【化２６】
2020019824.tif 000031
【０１１３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号５１）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１１４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ３抗体である。
【０１１５】
【化２７】
2020019824.tif 000032
【０１１６】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＨＧＹＳ（配列番号５２）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１１７】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ４抗体である。
【０１１８】
【化２８】
2020019824.tif 000033
【０１１９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＦＰＩＧＱＧＹＳ（配列番号５３）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１２０】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ５抗体である。
【０１２１】
【化２９】
2020019824.tif 000034
【０１２２】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＷＧＧＹＳ（配列番号５４）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１２３】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ６抗体である。
【０１２４】
【化３０】
2020019824.tif 000035
【０１２５】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ６抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＧＧＧＹＳ（配列番号５５）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１．Ｃ１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号６）。
【０１２６】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ１抗体である。
【０１２７】
【化３１】
2020019824.tif 000036
【０１２８】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＮＤＦＰＶＴ（配列番号７１）。
【０１２９】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ２抗体である。
【０１３０】
【化３２】
2020019824.tif 000037
【０１３１】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ２抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＹＤＥＰＦＴ（配列番号７２）。
【０１３２】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ３抗体である。
【０１３３】
【化３３】
2020019824.tif 000038
【０１３４】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＹＤＦＰＬＴ（配列番号７３）。
【０１３５】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ４抗体である。
【０１３６】
【化３４】
2020019824.tif 000039
【０１３７】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＹＤＹＰＬＴ（配列番号７４）。
【０１３８】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｅ５抗体である。
【０１３９】
【化３５】
2020019824.tif 000040
【０１４０】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｅ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＳＩＴＧＧＹＳ（配列番号４９）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＹＥＦＰＬＴ（配列番号７５）。
【０１４１】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１抗体である。
【０１４２】
【化３６】
2020019824.tif 000041
【０１４３】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号５１）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＮＤＦＰＶＴ（配列番号７１）。
【０１４４】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３抗体である。
【０１４５】
【化３７】
2020019824.tif 000042
【０１４６】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．１Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号５１）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＹＤＦＰＬＴ（配列番号７３）。
【０１４７】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４抗体である。
【０１４８】
【化３８】
2020019824.tif 000043
【０１４９】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．１−Ａ．ｌ  Ｐ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号５１）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＹＤＹＰＬＴ（配列番号７４）。
【０１５０】
例示的なＴＬＲ４モノクローナル抗体は、本明細書に記載の１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５抗体である。
【０１５１】
【化３９】
2020019824.tif 000044
【０１５２】
相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、Ｍ．Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃによって定義された通りである（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、補遺４０、Ａｌ．Ｐ．ｌ−Ａ．ＩＰ．３７（２０００年）ＬＩＧＭ：２３０を参照）。１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５抗体の重鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＧＹＰＩＲＦＧＹＳ（配列番号５１）；ＩＨＹＳＧＹＴ（配列番号５６）；およびＡＲＫＤＳＧＮＹＦＰＹ（配列番号５８）。１Ｅ１１抗体の軽鎖ＣＤＲは、以下の配列を有する：ＱＳＩＳＤＨ（配列番号６８）；ＹＡＳ（配列番号６９）；およびＱＱＧＹＥＦＰＬＴ（配列番号７５）。
【０１５３】
一部の実施形態では、ＴＬＲ４抗体は、ＩｇＧアイソタイプの形式にされている。一部の実施形態では、ＴＬＲ４抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプの形式にされている。
【０１５４】
例示的なＩｇＧ１形式にされた抗体は、以下に示すように、配列番号１７８の重鎖配列および配列番号１７９の軽鎖配列を含むＩｇＧ１形式にされた１Ｅ１１抗体である：
【０１５５】
【化４０】
2020019824.tif 000045
【０１５６】
【化４１】
2020019824.tif 000046
【０１５７】
例示的なＩｇＧ１形式にされた抗体は、以下に示すように、配列番号１８２の重鎖配列および配列番号１８３の軽鎖配列を含むＩｇＧ１形式にされた１Ｅ１１．Ｃ１１抗体である：
【０１５８】
【化４２】
2020019824.tif 000047
【０１５９】
【化４３】
2020019824.tif 000048
【０１６０】
一部の実施形態では、本発明のＴＬＲ４抗体は、ヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体に特異的に結合し、この抗体は、配列番号１１（ヒト）および配列番号７７（カニクイザル）の残基３２５から３７４の間でヒトおよび／またはカニクイザルＴＬＲ４上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。代わりに、モノクローナル抗体は、１Ａ１、１Ａ６、１Ｂ１２、１Ｃ７、１Ｃ１０、１Ｃ１２、１Ｄ１０、１Ｅ１１、１Ｅ１１  Ｎ１０３Ｄ、１Ｇ１２、１Ｅ１１．Ｃ１、１Ｅ１１．Ｃ２、１Ｅ１１．Ｃ３、１Ｅ１１．Ｃ４、１Ｅ１１．Ｃ５、１Ｅ１１．Ｃ６、１Ｅ１１．Ｅ１、１Ｅ１１．Ｅ２、１Ｅ１１．Ｅ３、１Ｅ１１．Ｅ４、１Ｅ１１．Ｅ５、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ１、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ３、１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ４、および１Ｅ１１．Ｃ２Ｅ５と同じエピトープに結合する抗体である。
【０１６１】
本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメイン中で少なくともＥＵ３２５位のアミノ酸残基および少なくともＥＵ３２８位のアミノ酸残基が改変されている改変抗体を含む。例えば、少なくともＥＵ３２５位のアミノ酸残基がセリンで置換されており、少なくともＥＵ３２８位のアミノ酸残基がフェニルアラニンで置換されている。
【０１６２】
改変されたＦｃ部分を有するこれらの抗ＴＬＲ４抗体は、未改変抗体と比較して、改変されたエフェクター機能、例えば、改変されたＦｃ受容体活性を誘発する。例えば、ヒトＦｃ受容体は、ＣＤ３２Ａである。一部の実施形態では、これらの抗ＴＬＲ４抗体は、未改変抗体と比較して、ＣＤ３２Ａへのライゲーションに続く炎症促進性メディエーター放出の防止を誘発する。したがって、これらの抗ＴＬＲ４抗体は、標的抗原に結合する能力を保持しながら炎症促進性メディエーター放出の防止などの改変されたＦｃ受容体活性を誘発する。一部の実施形態では、これらの抗ＴＬＲ４抗体は、中和抗体であり、抗ＴＬＲ４抗体は、標的抗原の１つまたは複数の生物活性を中和する能力を保持しながら改変されたＦｃ受容体活性を誘発する。
【０１６３】
例えば、本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、ヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体に結合するモノクローナル抗体を含む。この受容体複合体は、リポ多糖（ＬＰＳ）、グラム陰性菌の外膜の主要成分によって活性化される。本発明の抗ＴＬＲ４抗体は、ＬＰＳを介した受容体活性化および後続の細胞内シグナル伝達を阻害する。したがって抗ＴＬＲ４抗体は、ＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体の活性化を中和する。特に、本発明は、細胞表面上に発現されるＴＬＲ４／ＭＤ−２受容体複合体を認識する抗ＴＬＲ４抗体を提供する。これらの抗ＴＬＲ４抗体は、ＬＰＳで誘導される、および他のＴＬＲ４リガンドで誘導される炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦα）産生を遮断する。さらに、本発明のいくつかの抗ＴＬＲ４抗体はまた、ＭＤ−２と複合体形成していないとき、ＴＬＲ４を認識する。改変抗体は、例えば、ヒト化抗体である。
【０１６４】
本発明のモノクローナル抗体（例えば、マウスモノクローナル、ヒト化抗体または完全ヒトモノクローナル抗体）は、ＴＬＲ４に特異的に結合する。また、本明細書に記載の抗体と同じエピトープに結合する抗体も本発明に含まれる。例えば、ＴＬＲ４および／またはＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体に特異的に結合する本発明の抗体は、ヒトＴＬＲ４（配列番号１１）上の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。
【０１６５】
当業者であれば、過度の実験を行うことなく、モノクローナル抗体（例えば、マウスモノクローナルまたはヒト化抗体）が、本明細書に記載のモノクローナル抗体と同じ特異性を有するかどうかを、前者が、後者がＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体に、またはＭＤ−２と複合体形成していない場合のＴＬＲ４に結合するのを防止するかどうかを確認することにより、決定することができることを認識するであろう。本発明のモノクローナル抗体による結合の低下により示されるように、試験されるモノクローナル抗体が本発明のモノクローナル抗体と競合する場合、２つのモノクローナル抗体は、同じか、または密接に関連するエピトープに結合する。モノクローナル抗体が本発明のモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定するための代替的な方法は、本発明のモノクローナル抗体を、ＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体または可溶性ＴＬＲ４タンパク質（通常、それと反応する）と共に予備インキュベートした後、試験されるモノクローナル抗体を添加して、試験されるモノクローナル抗体が、ＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体に結合する、またはＴＬＲ４およびＭＤ−２と複合体形成したＴＬＲ４に結合するその能力において阻害されるかどうかを決定することである。試験されるモノクローナル抗体が阻害される場合、十中八九、それは本発明のモノクローナル抗体と同じか、または機能的に等価なエピトープ特異性を有する。
【０１６６】
定義：
別段の定義のない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈によって別途必要とされない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴまたはポリヌクレオチド化学、ならびにハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法、ならびにこれらの技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準技法が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換について使用される（例えば、電気穿孔、リポフェクション）。酵素反応および精製技法は、製造者の仕様に従って、または当技術分野で一般に達成されるように、もしくは本明細書に記載するように実施される。上記の技法および手順は一般に、当技術分野で周知の従来法に従って、かつ本明細書全体にわたって引用され、論じられている様々な一般的でより具体的な参考文献に記載されているように実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに薬化学および製薬化学に関連して利用される命名法、ならびにこれらの実験室手順および技法は、当技術分野で周知であり、一般に使用されるものである。標準技法が、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、および送達、および患者の処置について使用される。
【０１６７】
本開示に従って使用される場合、以下の用語は、別段指摘されない限り、以下の意味を有すると理解されるべきである。
【０１６８】
本明細書で使用される用語「抗体」は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（それと免疫反応する）抗原結合部位を含有する分子を指す。「特異的に結合する」または「免疫反応する」または「免疫特異的に結合する」は、抗体が所望の抗原の１つもしくは複数の抗原決定基と反応し、他のポリペプチドとは反応しないか、またははるかにより低い親和性（Ｋｄ＞１０−６）で結合することを意味する。抗体は、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ドメイン抗体、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦａｂ発現ライブラリーを含む。
【０１６９】
基本的な抗体構造単位は、テトラマーを含むことが公知である。それぞれのテトラマーは、それぞれの対が１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）および１つの「重鎖」（約５０〜７０ｋＤａ）を有する、２つの同一のポリペプチド鎖対から構成される。それぞれの鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０個またはそれ超のアミノ酸の可変領域を含む。それぞれの鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域を規定する。一般に、ヒトから得られる抗体分子は、分子中に存在する重鎖の性質によって互いに異なる、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤクラスのいずれかと関連する。ある特定のクラスは、同様に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２その他などのサブクラスを有する。さらに、ヒトにおいては、軽鎖はカッパ鎖またはラムダ鎖であってもよい。
【０１７０】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、ユニークな軽鎖遺伝子産物とユニークな重鎖遺伝子産物とからなる抗体分子のただ１つの分子種を含有する抗体分子の集団を指す。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、集団中の全ての分子において同一である。ｍＡｂは、それに対するユニークな結合親和性を特徴とする抗原の特定のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含有する。
【０１７１】
用語「抗原結合部位」または「結合部分」は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗原結合部位は、重鎖（「Ｈ」）および軽鎖（「Ｌ」）のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基により形成される。「超可変領域」と呼ばれる、重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの高度に多様なストレッチが、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られるより保存された隣接ストレッチの間に置かれる。したがって、用語「ＦＲ」は、免疫グロブリン中の超可変領域の間に、およびそれに隣接して天然に見出されるアミノ酸配列を指す。抗体分子においては、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、三次元空間中で互いに関連して配置され、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合した抗原の三次元表面と相補的であり、重鎖および軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。それぞれのドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７年および１９９１年））、またはＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年）、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２巻：８７８〜８８３頁（１９８９年）の定義に従うものである。
【０１７２】
本明細書で使用される用語「エピトープ」は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖ、またはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、通常、特異的な三次元構造特徴、ならびに特異的電荷特徴を有する。例えば、抗体を、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端ペプチドに対して生じさせることができる。抗体は、解離定数が１μＭもしくはそれ未満、好ましくは１００ｎＭもしくはそれ未満、最も好ましくは１０ｎＭもしくはそれ未満である場合、抗原に特異的に結合すると言われる。
【０１７３】
本明細書で使用される用語「免疫学的結合」および「免疫学的結合特性」とは、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリン分子が特異的である抗原との間に生じる型の非共有的相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度、または親和性を、相互作用の解離定数（Ｋｄ）の観点で表すことができ、ここで、より小さいＫｄはより高い親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性を、当技術分野で周知の方法を使用して定量することができる。１つのそのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度を測定することを必要とし、ここで、これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向で速度に同等に影響する幾何学的パラメータに依存する。したがって、「結合速度（ｏｎ  ｒａｔｅ）定数」（Ｋｏｎ）と「解離速度（ｏｆｆ  ｒａｔｅ）定数」（Ｋｏｆｆ）の両方を、濃度ならびに会合および解離の実際の速度の算出により決定することができる（Ｎａｔｕｒｅ  ３６１巻：１８６〜８７頁（１９９３年）を参照されたい）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性と関連しない全てのパラメータの取り消しを可能にし、解離定数Ｋｄに等しい（一般に、Ｄａｖｉｅｓら（１９９０年）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５９巻：４３９〜４７３頁を参照されたい）。本発明の抗体は、放射性リガンド結合アッセイなどのアッセイまたは当業者には公知の同様のアッセイにより測定された場合、平衡結合定数（Ｋｄ）が１μＭもしくはそれ未満、好ましくは１００ｎＭもしくはそれ未満、より好ましくは１０ｎＭもしくはそれ未満、最も好ましくは１００ｐＭもしくはそれ未満から約１ｐＭであるとき、トール様受容体４（ＴＬＲ４）／ＭＤ−２複合体に、またはＭＤ−２と複合体形成していない場合のＴＬＲ４に特異的に結合すると言われる。
【０１７４】
本明細書で使用される用語「単離されたポリヌクレオチド」は、その起源の理由から、「単離されたポリヌクレオチド」が、（１）「単離されたポリヌクレオチド」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全部もしくは一部と会合していない、（２）それが天然に連結されないポリヌクレオチドに作動可能に連結される、または（３）より大きい配列の部分として天然に存在しない、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源またはそのいくつかの組み合わせのポリヌクレオチドを意味する。本発明によるポリヌクレオチドは、本明細書に示される重鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子、および本明細書に示される軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子を含む。
【０１７５】
本明細書で言及される用語「単離されたタンパク質」は、その起源、または誘導源の理由から、「単離されたタンパク質」が、（１）天然に見出されるタンパク質と会合していない、（２）同じ供給源に由来する他のタンパク質を含まない、例えば、海洋タンパク質を含まない、（３）異なる種に由来する細胞によって発現される、または（４）天然に存在しない、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡ、もしくは合成起源またはそのいくつかの組み合わせのタンパク質を意味する。
【０１７６】
一般的な用語として本明細書で使用される用語「ポリペプチド」は、ポリペプチド配列の天然タンパク質、断片、または類似体を指す。したがって、天然タンパク質断片、および類似体は、ポリペプチド属の種である。本発明によるポリペプチドは、本明細書に示される重鎖免疫グロブリン分子、および本明細書に示される軽鎖免疫グロブリン分子、ならびに重鎖免疫グロブリン分子と、カッパ軽鎖免疫グロブリン分子などの軽鎖免疫グロブリン分子とを含む組み合わせ、およびその逆により形成される抗体分子、ならびにその断片および類似体を含む。
【０１７７】
物体に適用される本明細書で使用される用語「天然に存在する」とは、ある物体を天然に見出すことができるという事実を指す。例えば、天然の供給源から単離することができる生物（ウイルスを含む）中に存在し、実験室またはその他において人によって意図的に改変されていないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
【０１７８】
本明細書で使用される用語「作動可能に連結される」とは、そのように記載される成分の位置が、それらがその意図される様式で機能することができる関係にあることを指す。コード配列に「作動可能に連結される」制御配列は、コード配列の発現が、制御配列と適合する条件下で達成されるようにライゲーションされる。
【０１７９】
本明細書で使用される用語「制御配列」とは、それらがライゲーションされるコード配列の発現およびプロセシングを行うのに必要とされるポリヌクレオチド配列を指す。そのような制御配列の性質は、原核生物においては宿主生物に応じて異なり、そのような制御配列は一般に、真核生物においてはプロモーター、リボソーム結合部位、および転写終結配列を含み、一般に、そのような制御配列は、プロモーターおよび転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、最小でも、その存在が発現およびプロセシングにとって必須である全ての成分を含むことが意図され、その存在が有利であるさらなる成分、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列を含んでもよい。本明細書で言及される用語「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドまたはいずれかの型のヌクレオチドの改変形態の、少なくとも１０塩基長の重合ホウ素含有ヌクレオチドを意味する。この用語は、一本鎖および二本鎖形態のＤＮＡを含む。
【０１８０】
本明細書で言及される用語「オリゴヌクレオチド」は、天然に存在する、および天然に存在しないオリゴヌクレオチド結合により一緒に連結された、天然に存在する、および改変されたヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に、２００塩基またはそれより少ない長さを含むポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、１０〜６０塩基長、最も好ましくは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基長である。オリゴヌクレオチドは通常、例えば、プローブに関しては一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築における使用のためには二本鎖であってもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
【０１８１】
本明細書で言及される用語「天然に存在するヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書で言及される用語「改変ヌクレオチド」は、改変または置換された糖基などを含むヌクレオチドを含む。本明細書で言及される用語「オリゴヌクレオチド結合」は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｒｌｏａｔｅ）、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、ホスホロンミデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｎｍｉｄａｔｅ）などのオリゴヌクレオチド結合を含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４巻：９０８１頁（１９８６年）、Ｓｔｅｃら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６巻：６０７７頁（１９８４年）、Ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６巻：３２０９頁（１９８８年）、Ｚｏｎら、Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６巻：５３９頁（１９９１年）、Ｚｏｎら、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、８７〜１０８頁（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（編）、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１年））、Ｓｔｅｃら、米国特許第５，１５１，５１０号、ＵｈｌｍａｎｎおよびＰｅｙｍａｎ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０巻：５４３頁（１９９０年）を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、所望される場合、検出のための標識を含んでもよい。
【０１８２】
以下の用語は、２つまたはそれ超のポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の配列関係を記述するために使用される：「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」および「実質的な同一性」。「参照配列」は、配列比較のための基礎として使用される規定の配列であり、参照配列は、例えば、配列表に与えられる完全長ｃＤＮＡもしくは遺伝子配列のセグメントとしての、より大きい配列のサブセットであってもよく、または完全なｃＤＮＡもしくは遺伝子配列を含んでもよい。一般に、参照配列は、少なくとも１８ヌクレオチド長または６アミノ酸長、頻繁には、少なくとも２４ヌクレオチド長または８アミノ酸長、およびしばしば、少なくとも４８ヌクレオチド長または１６アミノ酸長である。２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列はそれぞれ、（１）２つの分子間で類似する配列（すなわち、完全なポリヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の一部）を含む、および（２）２つのポリヌクレオチドもしくはアミノ酸配列の間で相違する配列をさらに含んでもよいため、２つ（またはそれ超）の分子間の配列比較は、典型的には、配列類似性の局部領域を同定および比較するための「比較ウィンドウ」にわたって２つの分子の配列を比較することにより実施される。本明細書で使用される「比較ウィンドウ」は、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を、少なくとも１８個の連続するヌクレオチドまたは６アミノ酸の配列の参照配列と比較することができ、比較ウィンドウ中のポリヌクレオチド配列の一部が、２つの配列の最適なアラインメントにわたって参照配列（付加も欠失も含まない）と比較した場合、２０パーセントまたはそれ未満の付加、欠失、置換など（すなわち、ギャップ）を含んでもよい、少なくとも１８個の連続するヌクレオチド位置または６アミノ酸の概念的セグメントを指す。比較ウィンドウを整列させるための配列の最適なアラインメントを、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２巻：４８２頁（１９８１年）の局所相同性アルゴリズムにより、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８巻：４４３頁（１９７０年）の相同性アラインメントアルゴリズムにより、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）  ８５巻：２４４４頁（１９８８年）の類似性検索法により、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ７．０（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）、Ｇｅｎｅｗｏｒｋｓ、もしくはＭａｃＶｅｃｔｏｒソフトウェアパッケージ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化された実装により、または目視により行うことができ、様々な方法により生成される最良のアラインメント（すなわち、比較ウィンドウにわたる最も高い相同性パーセンテージをもたらす）を選択する。
【０１８３】
用語「配列同一性」は、比較ウィンドウにわたって２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列が同一である（すなわち、ヌクレオチドずつ、または残基ずつの基準で）ことを意味する。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、比較ウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較すること、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＵもしくはＩ）または残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得ること、一致した位置の数を、比較ウィンドウ中の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除算すること、およびその結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることにより算出される。本明細書で使用される用語「実質的な同一性」は、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸が、少なくとも１８ヌクレオチド（６アミノ酸）の位置の比較ウィンドウにわたって、頻繁には、少なくとも２４〜４８ヌクレオチド（８〜１６アミノ酸）の位置のウィンドウにわたって、参照配列と比較して少なくとも８５パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５パーセントの配列同一性、より通常は、少なくとも９９パーセントの配列同一性を有する配列を含み、ここで配列同一性のパーセンテージが、参照配列を、比較ウィンドウにわたって参照配列の合計２０パーセントまたはそれ未満の欠失または付加を含んでもよい配列と比較することにより算出される、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の特徴を示す。参照配列は、より大きい配列のサブセットであってもよい。
【０１８４】
本明細書で使用される場合、２０種の従来のアミノ酸およびその省略形は、従来の使用に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  −  Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．ＧｏｌｕｂおよびＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ（編）、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ７  Ｍａｓｓ．（１９９１年））を参照されたい。２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−，α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、および他の非従来のアミノ酸などの非天然アミノ酸は、本発明のポリペプチドのための好適な成分であってもよい。非従来のアミノ酸の例としては、４ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、ならびに他の類似するアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で使用されるポリペプチドの表記において、標準的な使用および慣例によれば、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向である。
【０１８５】
同様に、別段特定しない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端は５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’への付加の方向は転写方向と呼ばれ、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写物の５’末端に対して５’にあるＤＮＡ鎖上の配列領域は「上流配列」と呼ばれ、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写物の３’末端に対して３’にあるＤＮＡ鎖上の配列領域は「下流配列」と呼ばれる。
【０１８６】
ポリペプチドに対して適用される場合、用語「実質的な同一性」は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップ重量を使用してＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムなどにより最適に整列された場合、少なくとも８０パーセントの配列同一性、好ましくは、少なくとも９０パーセントの配列同一性、より好ましくは、少なくとも９５パーセントの配列同一性、最も好ましくは、少なくとも９９パーセントの配列同一性を有することを意味する。
【０１８７】
好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
【０１８８】
保存的アミノ酸置換とは、類似する側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンである；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸群は、セリンおよびトレオニンである；アミド含有側鎖を有するアミノ酸群は、アスパラギンおよびグルタミンである；芳香族側鎖を有するアミノ酸群は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンである；塩基性側鎖を有するアミノ酸群は、リシン、アルギニン、およびヒスチジンである；ならびに硫黄含有側鎖を有するアミノ酸群は、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニンバリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。
【０１８９】
本明細書で考察される場合、アミノ酸配列における変化が少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、９０％、９５％、最も好ましくは、９９％を維持するという条件で、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列中の小さい変化が、本発明によって包含されることが企図される。特に、保存的アミノ酸置きかえが企図される。保存的置きかえは、その側鎖において関連するアミノ酸のファミリー内で起こるものである。遺伝的にコードされるアミノ酸は、一般に、ファミリーに分割される：（１）酸性アミノ酸はアスパラギン酸、グルタミン酸である；（２）塩基性アミノ酸はリシン、アルギニン、ヒスチジンである；（３）非極性アミノ酸はアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンである、および（４）非荷電極性アミノ酸はグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、セリン、およびトレオニンが挙げられる。疎水性アミノ酸としては、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが挙げられる。他のファミリーのアミノ酸としては、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリンおよびトレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギンおよびグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；ならびに（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンが挙げられる。例えば、ロイシンとイソロイシンもしくはバリン、アスパラギン酸とグルタミン酸、トレオニンとセリンとの単独の置きかえ、またはあるアミノ酸と構造的に関連するアミノ酸との類似する置きかえは、特に、置きかえがフレームワーク部位内のアミノ酸を含まない場合、得られる分子の結合または特性に対して大きな影響を有さないと合理的に予想される。アミノ酸変化が機能的ペプチドをもたらすかどうかを、ポリペプチド誘導体の比活性をアッセイすることにより容易に決定することができる。アッセイは、本明細書で詳細に説明される。当業者であれば、抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体を容易に調製することができる。断片または類似体の好ましいアミノおよびカルボキシ末端は、機能ドメインの境界の近くに存在する。構造ドメインおよび機能ドメインを、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データと、公共または私有配列データベースとの比較により同定することができる。好ましくは、コンピュータ比較方法を使用して、公知の構造および／または機能の他のタンパク質中に存在する配列モチーフまたは予測タンパク質コンフォメーションドメインを同定する。公知の三次元構造中に折り畳まれるタンパク質配列を同定するための方法は公知である。Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３巻：１６４頁（１９９１年）。したがって、前記の例は、当業者であれば、本発明に従って構造および機能ドメインを定義するために使用することができる配列モチーフおよび構���コンフォメーションを認識することができることを示している。
【０１９０】
好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させるもの、（２）酸化に対する感受性を低下させるもの、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させるもの、（４）結合親和性を変化させるもの、および（４）そのような類似体の他の物理化学的または機能的特性を付与するか、または改変するものである。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々な変異タンパク質を含んでもよい。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的アミノ酸置換）を、天然に存在する配列中、好ましくは、分子間接触を形成するドメインの外部のポリペプチドの部分中で作製することができる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化させるべきではない（例えば、置きかえアミノ酸は、親配列中に存在するヘリックスを破壊する、または親配列を特徴付ける他の型の二次構造を破壊する傾向があるべきではない）。当技術分野で認識されるポリペプチド二次および三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  （Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（編）、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４年））；  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  （Ｃ．ＢｒａｎｄｅｎおよびＪ．Ｔｏｏｚｅ（編）、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９１年））；およびＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５４巻：１０５頁（１９９１年）に記載されている。
【０１９１】
本明細書で使用される用語「ポリペプチド断片」とは、アミノ末端および／またはカルボキシ末端欠失を有するが、残りのアミノ酸配列が、例えば、完全長ｃＤＮＡ配列から推定される天然に存在する配列中の対応する位置と同一であるポリペプチドを指す。断片は、典型的には、少なくとも５、６、８または１０アミノ酸長、好ましくは、少なくとも１４アミノ酸長、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸長、通常は、少なくとも５０アミノ酸長、さらにより好ましくは、少なくとも７０アミノ酸長である。本明細書で使用される用語「類似体」は、推定アミノ酸配列の一部に対する実質的な同一性を有し、好適な結合条件下で、ＴＬＲ４／ＭＤ２複合体またはＴＬＲ４単独に対する特異的結合を有する、少なくとも２５アミノ酸のセグメントから構成されるポリペプチドを指す。典型的には、ポリペプチド類似体は、天然に存在する配列に関して保存的アミノ酸置換（または付加または欠失）を含む。類似体は、典型的には、少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも５０アミノ酸長またはそれより長く、しばしば、完全長の天然に存在するポリペプチドと同程度の長さであってもよい。
【０１９２】
ペプチド類似体は、鋳型ペプチドのものと類似する特性を有する非ペプチド薬物として製薬業界で一般的に使用されている。これらの型の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物質（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃｓ）」または「ペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ）」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ、Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５巻：２９頁（１９８６年）、ＶｅｂｅｒおよびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ３９２頁（１９８５年）；およびＥｖａｎｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０巻：１２２９頁（１９８７年）。そのような化合物は、コンピュータ分子モデリングの補助を使用して開発されることが多い。治療的に有用なペプチドと構造的に類似するペプチド模倣物質を使用して、同等の治療または予防効果をもたらすことができる。一般に、ペプチド模倣体は、ヒト抗体などの、パラダイムポリペプチド（ｐａｒａｄｉｇｍ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）（すなわち、生化学的特性または薬理的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似するが、当技術分野で周知の方法により、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ｃｉｓおよびｔｒａｎｓ）、−ＣＯＣＨ２−、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＳＯ−からなる群より選択される結合により任意選択で置きかえられる１つまたは複数のペプチド結合を有する。同じ型のＤ−アミノ酸によるコンセンサス配列の１つまたは複数のアミノ酸の体系的置換（例えば、Ｌ−リシンの代わりにＤ−リシン）を使用して、より安定なペプチドを生成することができる。さらに、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列変化を含む拘束されたペプチドを、当技術分野で公知の方法（ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１巻：３８７頁（１９９２年））により、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を付加することにより生成することができる。
【０１９３】
本明細書で使用される用語「薬剤」は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子、または生物材料から作られる抽出物を示す。
【０１９４】
本明細書で使用される用語「標識」または「標識された」とは、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込みまたは印を付けたアビジン（例えば、光学的もしくは熱量測定法により検出することができる蛍光マーカーもしくは酵素活性を含有するストレプトアビジン）により検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの取り込みを指す。ある特定の状況では、標識またはマーカーは、治療剤であってもよい。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法は、当技術分野で公知であり、使用することができる。ポリペプチドのための標識の例としては、限定されるものではないが、以下のものが挙げられる：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋わさびペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光物質、ビオチン群、第２のリポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体のための結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。一部の実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を軽減するために様々な長さのスペーサーアームにより結合される。本明細書で使用される用語「薬学的薬剤または薬物」とは、患者に対して適切に投与された場合、所望の治療効果を誘導することができる化学的化合物または組成物を指す。
【０１９５】
本明細書における他の化学用語は、Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．（編）、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  （１９８５年））により例示されるような、当技術分野における従来の使用に従って使用される。
【０１９６】
本明細書で使用される用語「抗新生物剤」とは、ヒトにおける新生物、特に、癌腫、肉腫、リンパ腫、または白血病などの、悪性（がん性）病変の発生または進行を阻害する機能特性を有する薬剤を指す。転移の阻害は、頻繁には、抗新生物剤の特性である。
【０１９７】
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」は、目的の種が、存在する優勢な種であり（すなわち、モル濃度基準で、それが組成物中の他のあらゆる個々の種よりも豊富である）、好ましくは、実質的に精製された画分は、目的の種が、存在する全ての高分子種の少なくとも約５０パーセント（モル濃度基準で）を構成する組成物であることを意味する。
【０１９８】
一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての高分子種の約８０パーセント超、より好ましくは、約８５％超、９０％超、９５％超、および９９％超を含む。最も好ましくは、目的の種は、組成物が単一の高分子種から本質的になる、本質的に均一まで精製される（従来の検出方法によって組成物中で夾雑物種を検出することができない）。
【０１９９】
用語「患者」は、ヒト被験体および獣医学的被験体を含む。
【０２００】
抗ＴＬＲ４抗体の使用
本発明による治療実体の投与は、改善された移行、送達、寛容性などをもたらすために製剤中に組み込まれる適当な担体、賦形剤、および他の薬剤とともに施されることになることが認識されるであろう。多数の適切な製剤を、すべての製薬化学者に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９７５年））、特にその中のＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる８７章に見つけることができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物がある。上記混合物のいずれも、本発明による処置および療法において適切であり得るが、ただし、製剤中の活性成分は、製剤化によって不活化されず、製剤は、生理学的に適合性であり、投与経路に対して耐容可能である。製薬化学者に周知の製剤、賦形剤、および担体に関する追加の情報について、Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ．」、Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３２巻（２号）：２１０〜８頁（２０００年）、Ｗａｎｇ  Ｗ．、「Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、２０３巻（１〜２号）：１〜６０頁（２０００年）、Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ、「Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−  ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ．」、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．、８９巻（８号）：９６７〜７８頁（２０００年）、Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．、５２巻：２３８〜３１１頁（１９９８年）、およびその中の引用も参照のこと。
【０２０１】
抗ＴＬＲ４抗体を含む、本発明の治療製剤は、ＧｖＨＤを阻害する、および／またはＧｖＨＤ被験体の生存を向上させるために使用される。
【０２０２】
処置の有効性は、ＧｖＨＤまたは他の移植関連障害を診断または処置するための任意の公知の方法と関連して決定される。ＧｖＨＤの阻害またはＧｖＨＤ被験体の生存の向上は、抗体が臨床利益を提供することを示す。
【０２０３】
抗ＴＬＲ４抗体は、医薬組成物の形態で投与される。このような組成物の調製に関わる原理および検討事項、ならびに成分の選択におけるガイダンスは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、１９版（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏら、編者）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．：１９９５年；Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，Ａｎｄ  Ｔｒｅｎｄｓ、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ、Ｐａ．、１９９４年；およびＰｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、４巻）、１９９１年、Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに提供されている。
【０２０４】
抗体断片が使用される場合、標的タンパク質の結合性ドメインに特異的に結合する最小の阻害断片が好適である。例えば、抗体の可変領域の配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成し、かつ／または組換えＤＮＡ技術によって生成することができる（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻：７８８９〜７８９３頁（１９９３年）を参照）。製剤は、処置されている特定の適応症のために必要な１種を超える活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものも含有することができる。代替としてまたは追加的に、組成物は、その機能を増強する薬剤、例えば、細胞傷害性剤、サイトカイン、化学療法剤、または増殖阻害剤などを含むことができる。このような分子は、意図される目的に有効である量で、組み合わせで適切に存在する。
【０２０５】
活性成分を、例えば、コアセルベーション技術により、もしくは界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に捕捉することもできる。
【０２０６】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの投与のために使用される製剤は、無菌である必要がある。これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。
【０２０７】
持続放出調製物を調製することができる。持続放出調製物の好適な例としては、マトリックスが造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態にある、抗体を含有する固形疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられる。持続放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは１００日を超える分子の放出を可能にするが、ある特定のヒドロゲルはより短い期間にわたってタンパク質を放出する。
【０２０８】
一部の実施形態では、抗体は、検出可能な標識を含有する。抗体は、ポリクローナル、またはより好ましくは、モノクローナルである。無傷抗体、またはその断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、もしくはＦ（ａｂ）２）が使用される。用語「標識された」は、プローブまたは抗体に関して、プローブまたは抗体への検出可能な物質のカップリング（すなわち、物理的連結）によるプローブまたは抗体の直接標識、および直接標識されている別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含するように意図されている。間接標識の例としては、蛍光標識二次抗体を使用する一次抗体の検出、およびＤＮＡプローブが蛍光標識ストレプトアビジンで検出され得るようなビオチンを用いたＤＮＡプローブの末端標識がある。用語「生物学的試料」は、被験体から単離された組織、細胞、および体液、ならびに被験体内に存在する組織、細胞、および流体を含むように意図されている。したがって、血液、および血清、血漿、またはリンパを含めた血液の画分または成分が、用語「生物学的試料」の使用の範囲内に含まれる。すなわち本発明の検出法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで生物学的試料中の検体ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出するのに使用することができる。例えば、検体ｍＲＮＡを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技法としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションがある。検体タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技法としては、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光検査がある。検体ゲノムＤＮＡを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技法としては、サザンハイブリダイゼーションがある。イムノアッセイを行うための手順は、例えば、「ＥＬＩＳＡ：  Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、４２巻、Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（編）、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、１９９５年；「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」、Ｅ．ＤｉａｍａｎｄｉｓおよびＴ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９６年；ならびに「Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」、Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８５年に記載されている。さらに、検体タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｖｏ技法には、被験体中に標識された抗検体タンパク質抗体を導入することが含まれる。例えば、抗体を放射性マーカーで標識することができ、被験体中のその存在および位置を標準的なイメージング技法によって検出することができる。
【０２０９】
医薬組成物
本発明の抗体または可溶性キメラポリペプチド（「活性化合物」とも本明細書で呼ばれる）、ならびにこれらの誘導体、断片、類似体、および同族体を、投与に適した医薬組成物中に組み込むことができる。このような組成物は典型的には、抗体または可溶性キメラポリペプチド、および薬学的に許容される担体を含む。本明細書において、用語「薬学的に許容される担体」は、医薬投与に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むように意図されている。適当な担体は、参照により本明細書に組み込まれている、当技術分野で標準的な参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。このような担体または希釈剤の好適な例としては、それらに限らないが、水、食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンがある。リポソーム、および固定油などの非水性ビヒクルも使用され得る。薬学的活性物質のためにこのような媒体および薬剤を使用することは、当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物中でのこれらの使用は、企図されている。補充的な活性化合物も組成物中に組み込むことができる。
【０２１０】
本発明の医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（すなわち、局所）、経粘膜、および直腸投与がある。非経口、皮内、または皮下適用に使用される溶液または懸濁物は、以下の成分を含み得る：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒など；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート化剤；緩衝液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩など、および張度を調整するための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースなど。ｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムなどで調整することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回用量バイアル中に封入することができる。
【０２１１】
注射使用に適した医薬組成物は、滅菌水溶液（水溶性である場合）または分散液、および滅菌注射用溶液または分散液を即席で調製するための滅菌粉末を含む。静脈内投与について、適当な担体としては、生理食塩水、静菌水（ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ  ｗａｔｅｒ）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）がある。すべての場合において、組成物は、滅菌状態でなければならず、容易なシリンジ通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動的であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびに適当なこれらの混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散液の場合において必要とされる粒径を維持することによって、かつ界面活性剤を使用することによって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合では、組成物中に等張剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ  ａｇｅｎｔ）、例えば、糖、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【０２１２】
滅菌注射用溶液は、必要に応じて上記に列挙した成分のうちの１種または組み合わせとともに、適切な溶媒中に必要量で活性化合物を組み込み、その後濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、基本分散媒および上記に列挙したものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合では、調製の方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、それにより活性成分と任意の追加の所望の成分の粉末が、これらの事前に滅菌濾過した溶液から生じる。
【０２１３】
経口組成物は一般に、不活性な希釈剤または食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入するか、または圧縮して錠剤にすることができる。経口治療投与の目的のために、活性化合物を賦形剤とともに組み込み、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、洗口液として使用するための流体担体を使用して調製することもでき、この場合、流体担体中の化合物は、経口的に適用され、ゆすがれ（ｓｗｉｓｈｅｄ）、吐き出されるかまたは嚥下される。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料を、組成物の一部として含めることができる。錠剤、ピル、カプセル、トローチなどは、以下の成分のいずれかまたは同様の性質の化合物を含有することができる：結合剤、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプンもしくはラクトース、崩壊剤、例えば、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、もしくはコーンスターチ；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）；コロイド二酸化ケイ素などの流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）；甘味剤、例えば、スクロースもしくはサッカリン；または矯味矯臭剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香味料。
【０２１４】
吸入による投与について、化合物は、適当な噴霧体、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサー、または噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０２１５】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものであり得る。経粘膜または経皮投与について、透過すべき障壁に適切な浸透剤が製剤中に使用される。このような浸透剤は、当技術分野で一般に公知であり、これらとしては、例えば、経粘膜投与について、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻用スプレーまたは坐剤を使用することによって達成することができる。経皮投与について、活性化合物は、当技術分野で一般に公知である軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、膏薬（ｓａｌｖｅ）、ゲル剤、またはクリーム剤に製剤化される。
【０２１６】
化合物は、坐剤（例えば、従来の坐剤基剤、例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどを用いて）、または直腸送達用貯留浣腸の形態でも調製することができる。
【０２１７】
一実施形態では、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含めた制御放出製剤など、体からの急速な排除から化合物を保護する担体とともに調製される。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などを使用することができる。このような製剤を調製するための方法は、当業者に明らかとなる。材料は、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから商業的に得ることもできる。リポソーム懸濁物（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を含む感染細胞を標的にしたリポソームを含めて）も、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、当業者に公知の方法に従って、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように調製することができる。
【０２１８】
投与の容易さおよび投与量の均一性のために投与量単位形態で経口または非経口組成物を製剤化することが特に有利である。投与量単位形態は、本明細書において、処置される被験体にとって単位投与量として適した物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体と関連して所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本発明の投与量単位形態の仕様は、活性化合物のユニークな特徴、および達成される特定の治療効果、および個体を処置するためにこのような活性化合物を調合する技術分野において固有の制限事項によって決定され、これらに直接依存する。
【０２１９】
医薬組成物は、投与のための指示書と一緒に、容器、パック、またはディスペンサー内に含めることができる。
【０２２０】
本発明を、以下の実施例においてさらに記載する。これらは、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定しない。
【実施例】
【０２２１】
本明細書に提供される実施例およびデータは、ＧｖＨＤの阻害およびＧｖＨＤ被験体の生存の向上におけるＴＬＲ４遮断の役割を評価するものである。簡単に述べると、Ｂ６Ｄ２Ｆ１およびＣ５７ＢＬ／６マウス（メス、８週齢）を致死的に照射し、同系（Ｂ６Ｄ２Ｆ１）または同種異系（Ｃ５７Ｂｌ／６）ドナーからの５×１０６個の骨髄由来細胞および６×１０６個の脾細胞を投与した。同種異系細胞を移植されたマウスを、１００ｍｇ／ｋｇの抗ＴＬＲ４モノクローナル抗体５Ｅ３、またはアイソタイプ対照で、予防的（−１、３、７、１４、２１、２８および３５日目）または治療的（７、１０、１４、２１、２８および３５日目）に静脈内的に処置した。体重（図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃ）ならびに生存（図１）を、０日目から出発して６週間にわたって毎週追跡した。生存データは、アイソタイプ対照で処置された群に由来する１５匹のマウスのうちの６匹のみが、同種移植後６週間生存することを実証した。対照的に、抗ＴＬＲ４予防処置群に由来する１５匹のマウスのうちの１１匹および抗ＴＬＲ４治療処置群に由来する１５匹のマウスのうちの１２匹が、同種移植後６週間生存した。生存率は、同種移植後６週間で、アイソタイプ対照群の４０％から、抗ＴＬＲ４予防群の７３％および抗ＴＬＲ４治療群の８０％まで向上した。これらの結果は、ＴＬＲ４遮断がＧｖＨＤを効率的に阻害し、ＧｖＨＤ被験体の生存を向上させることができることを実証している。
【０２２２】
本明細書に記載の試験は同種異系骨髄細胞を使用するが、材料、方法、および実施例は例示に過ぎず、限定を意図するものではない。
【０２２３】
５Ｅ３モノクローナル抗体の生成のための材料および方法：５Ｅ３モノクローナル抗体は、マウスＴＬＲ４に結合するモノクローナル抗体である（Ｄａｕｂｅｕｆら、「ＴＬＲ４／ＭＤ−２  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ａｆｆｏｒｄｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ」、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７９巻：６１０７〜６１１４頁（１９９７年）を参照されたい）。
【０２２４】
動物：Ｂ６Ｄ２Ｆ１およびＣ５７ＢＬ／６マウス（メス、８週齢）を、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、食餌および水に自由にアクセスさせて従来の施設で飼育した。全ての実験を、実験用動物の取り扱いおよび使用についての委員会により検閲および認可されたプロトコールの下で行った。
【０２２５】
マウス骨髄細胞の単離：ＲＰＭＩ１６４０＋２％ＦＢＳを含有する氷上の小さい皿（３５×１０ｍｍ）中に、ドナーＢ６Ｄ２Ｆ１およびＣ５７ＢＬ／６マウスからの大腿骨を入れる。２６Ｇ針を用いて１０ｍｌのＲＰＭＩ＋２％ＦＢＳで大腿骨を洗い流す。細胞をピペットで数回吸引および排出を行い、凝集体を分散させる。細胞を、滅菌４０μｍナイロン細胞ストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ  ３５２３４０）に通過させる。容量を培地で５０ｍｌにし、２０００ｒｐｍ（９００×ｇ）、１０ｍｉｎ、４℃で遠心分離する。細胞ペレットを５０ｍｌの無血清ＲＰＭＩで２回洗浄する。２０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、４℃で遠心分離する。細胞を２０ｍｌの培地中に再懸濁し、細胞を計数する。再度、遠心分離し、細胞を５×１０７個の細胞／ｍｌに再懸濁する。
【０２２６】
マウス脾細胞の単離：ＲＰＭＩ１６４０＋２％ＦＢＳを含有する氷上の小さい皿（３５×１０ｍｍ）中に、ドナーＢ６Ｄ２Ｆ１およびＣ５７ＢＬ／６マウスからの大腿骨を入れる。脾臓を、滅菌ワイヤーメッシュスクリーン（２００μｍのバー幅および３４０μｍのオープンスペース）に移動させる。１０ｍｌシリンジのプランジャを用いてスクリーンを通して脾臓をペトリ皿に穏やかに押し出す。３ｍｌのＲＰＭＩ１６４０＋２％ＦＢＳを用いてスクリーンをすすぐ。細胞懸濁物を遠心分離管に移し、遠心分離して細胞をペレット化させる。ＡＣＫ（塩化アンモニウム−カリウム）溶解バッファー（０．１ｍｌの充填された細胞あたり１ｍｌのＴｒｉｓ−ＮＨ４Ｃｌ）を使用して室温で２ｍｉｎ、赤血球を溶解させる。細胞を培地で３回洗浄し、細胞を計数し、６×１０７個の細胞／ｍｌに細胞を再懸濁する。
【０２２７】
同種骨髄移植：レシピエントＢ６Ｄ２Ｆ１メスマウスを個々の箱の中に固定し、ガンマ照射装置を使用して９分間にわたって投与される９００ｒａｄに曝露した。同じドナーマウス（同系についてはＢ６Ｄ２Ｆ１に由来する、および同種異系についてはＣ５７ＢＬ／６に由来する）からの単離された骨髄細胞および脾細胞を１：１の容量で混合し、２００μｌの細胞ミックス（５×１０６個の骨髄由来細胞および６×１０６個の脾細胞を含有する）を、照射されたレシピエントに投与した。
【０２２８】
モノクローナル抗体の投与：同種異系細胞（Ｃ５７ＢＬ／６由来）を移植されたＢ６Ｄ２Ｆ１マウスを、１００ｍｇ／ｋｇの抗ＴＬＲ４モノクローナル抗体５Ｅ３、またはアイソタイプ対照で、予防的（−１、３、７、１４、２１、２８および３５日目）または治療的（７、１０、１４、２１、２８および３５日目）に静脈内的（ｉ．ｖ．）に処置した。上記で特定された日および抗体の投与の直前に、抗体を室温で解凍し、ＰＢＳで希釈して、注射のための必要な抗体濃度を達成した。マウスに、２００μｌの抗体／ＰＢＳ溶液（ｉ．ｖ．）を注射した。体重および生存を、０日目から出発して６週にわたって毎週追跡した。
【０２２９】
統計分析：統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン５．０ｄを使用して実施した。生存曲線を、アイソタイプ対照で処置された同種移植群との比較においてＬｏｇランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定により分析した。ｐ値を、図面中に示した。
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて記載してきたが、上記の記載は、添付の特許請求の範囲の範囲によって定義される本発明の範囲を例示するように意図され、それを限定するように意図されていない。他の態様、利点、および改良は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【図１】
2020019824.tif 000049
【図２Ａ】
2020019824.tif 000050
【図２Ｂ】
2020019824.tif 000051
【図２Ｃ】
2020019824.tif 000052
【配列表】
2020019824000001.app
【外国語明細書】
2020019824000001.pdf