(57)【要約】【課題】本発明は、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）及び／又は内因性エリスロポエチン（ＥＰＯ）の調節に使用できる、及び／又はより良好な薬力学／薬物動態特性を有する化合物及び該化合物を含む組成物を提供する。【解決手段】本発明は、置換ヘテロアリール化合物、該化合物を含む組成物およびその使用を提供する。本発明は、式（Ｉ）で表されるヘテロアリール化合物、またはその結晶形、薬学的に許容される塩、プロドラッグ、立体異性体、水和物もしくは溶媒和物を開示する。本発明に開示されているヘテロアリール化合物および該化合物を含む組成物は、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）及び／又は内因性エリスロポエチン（ＥＰＯ）の調節に用いられ、且つより良好な薬物動態パラメータを有し、化合物の動物体内における薬物濃度を高め、薬物の有効性と安全性を改善することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表されるヘテロアリール化合物またはその薬学的に許容される塩である、置換ヘテロアリール化合物。
【化１】
2020019817.tif 000018
式（Ｉ）中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は、それぞれ独立して、水素又は重水素であり；
Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、それぞれ独立して、水素であり；
追加の条件は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３の少なくとも１つが重水素である。
【請求項２】
Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、水素である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、それぞれ独立して、水素である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、それぞれ独立して、水素である、請求項２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２は、重水素である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
前記の化合物は、以下の化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化２】
2020019817.tif 000019
【請求項７】
薬学的に許容される担体と、請求項１〜６のいずれか１項に記載の置換ヘテロアリール化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項８】
慢性疾患貧血、グルコース耐性不良および／または腎臓病に関連する貧血、および癌性貧血または血球に関連する疾患を予防および治療する薬物の調製に用いることへの、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬技術分野に関し、特に置換ヘテロアリール化合物および該化合物を含む組成物、ならびに低酸素誘導因子（ＨＩＦ）サブユニットの安定性を調節すること、及びインビトロとインビボで内因性エリスロポエチンを増加させることができる方法および化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
低酸素誘導因子（ＨＩＦ）は、細胞酸素濃度によって変化する遺伝子発現の変化を調節する塩基性ヘリックス−ループ−ヘリックス（ｂＨＬＨ）ＰＡＳ（Ｐｅｒ／Ａｒｎｔ／Ｓｉｍ）転写アクチベーターである。ＨＩＦは、一つの酸素により調節されるαサブユニット（ＨＩＦα）及び一つの構成的に発現されるβサブユニット（ＨＩＦβ）からなるヘテロ二量体であって、芳香族炭化水素受容体核内輸送体（ＡＲＮＴ）としても知られている。酸素添加（ノルモキシア）細胞において、ＨＩＦαサブユニットは、フォンヒッペル・リンダウ腫瘍抑制蛋白（ｐＶＨＬ）Ｅ３リガーゼ複合体のユビキチン化に関連する機構によって急速に分解される。低酸素条件下では、ＨＩＦαは分解せず、且つ活性ＨＩＦα／β複合体は細胞核内に蓄積し、さらに、解糖酵素、グルコース輸送タンパク質（ＧＬＵＴ）−１、エリスロポエチン（ＥＰＯ）および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などのいくつかの遺伝子の発現を活性化させる（非特許文献１）。
【０００３】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、ＨＩＦαに伴って産生する天然に存在するホルモンであり、酸素を運んで全身を貫通する赤血球の産生を刺激する。ＥＰＯは、一般的に腎臓から分泌され、また、酸素減少（低酸素）の条件下で内因性ＥＰＯが増加する。すべてのタイプの貧血の特徴は、血液の酸素運搬能力が低下すること、及びこれに伴って皮膚と粘膜の蒼白、衰弱、めまい、疲れやすい、眠気などの類似の身体症状と徴候を有し、生活の質が低下することにある。重症貧血状態の被験者は呼吸困難および心臓奇形を示した。貧血は、通常、血液中の赤血球やヘモグロビンの欠乏に関与する。
【０００４】
局所虚血と酸素欠乏疾患は発病と死亡の主な原因である。心臓血管疾患は毎年少なくとも１５００万人の死亡をもたらし、世界の３０％の死亡の原因となる。多種の心臓血管疾患の中に、虚血性心疾患と脳血管疾患は約１７％の死亡を引き起こす。毎年、１３０万人の非致死性急性心筋梗塞の症例が報告され、１００，０００人あたり約３００人の発症率を構成している。一方、年間５００万の米国人が静脈血栓症に罹患し、且つ約６００，０００の症例が肺塞栓症を引き起こすと推定されている。肺塞栓症患者の約３分の１が最終的に死亡し、肺塞栓症が米国人の３番目に多い死因となる。
【０００５】
現在、局所虚血と酸素欠乏疾患の治療は、症状の緩和および病原性疾患の治療に集中している。例えば、心筋梗塞の治療には、疼痛を抑え、心臓負荷を軽減するためのニトログリセリンおよび鎮痛薬がある。病状を安定させるために、ジゴキシン（ｄｉｇｏｘｉｎ）、利尿薬、アムリノン（ａｍｒｉｎｏｎｅ）、β−遮断剤、脂質低下薬、及びアンジオテンシン変換酵素阻害薬などの他の薬物が使用されるが、これらの療法のいずれも、局所虚血と酸素欠乏による組織損傷に直接作用することはできない。
現在の治療および組換えＥＰＯの生産と使用には不足があるため、例えば、貧血、糖尿病、潰瘍、腎不全、癌、感染症、透析、手術、化学療法に関連する貧血、及び局所虚血と酸素欠乏に関連する病症などのエリスロポエチン関連病症、例えば、動脈閉塞性疾患、狭心症、腸梗塞、肺梗塞、脳局所虚血、及び心筋梗塞などの疾患の治療に有効な化合物が依然として求められている。また、例えば、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、肺塞栓症およびその類似の肺臓疾患による局所虚血に起因する組織破壊を効果的に予防できる化合物が求められている。つまり、この技術には、ＨＩＦ及び／又は内因性エリスロポエチンを調節し、貧血、局所虚血と酸素欠乏を含むＨＩＦ関連疾患とＥＰＯ関連疾患の治療及び予防に使用できる方法と化合物が求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｍａｘｗｅｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９９，３９９，２７１−２７５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記の課題に鑑み、本発明は、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）及び／又は内因性エリスロポエチン（ＥＰＯ）の調節に使用できる、及び／又はより良好な薬力学／薬物動態特性を有する化合物及び該化合物を含む組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
これについて、本発明で採用される技術手段は以下の通りである。
本発明の目的は、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）及び／又は内因性エリスロポエチン（ＥＰＯ）の調節に使用できる、及び／又はより良好な薬力学／薬物動態特性を有する新規タイプの化合物を提供することにある。
【０００９】
本発明の第１の態様は、式（Ｉ）で表される化合物またはその結晶形、薬学的に許容される塩、水和物または溶媒和物を提供する。
【００１０】
【化１】
2020019817.tif 000002
【００１１】
式（Ｉ）中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は、それぞれ独立して、水素、重水素またはハロゲンであり；
追加の条件は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３の少なくとも１つが重水素、または重水素に置換されたものである。
別の好ましい実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、重水素または水素である。
別の好ましい実施形態では、Ｒ１、Ｒ２は、重水素である。
別の好ましい実施形態では、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立して、重水素または水素である。
別の好ましい実施形態では、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して、重水素または水素である。
別の好ましい実施形態では、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、それぞれ独立して、重水素または水素である。
別の好ましい実施形態では、前記した化合物は、以下の化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択されるが、これらに限定されない。
【００１２】
【化２】
2020019817.tif 000003
【００１３】
【化３】
2020019817.tif 000004
【発明の効果】
【００１４】
従来技術と比較して、本発明の有益な効果は、本発明の化合物が低酸素誘導因子（ＨＩＦ）及び／又は内因性エリスロポエチン（ＥＰＯ）の調節に使用できることである。重水素化という技術により、生体における化合物の代謝を変化させ、化合物がより良好な薬物動態パラメータ特性を有させる。この場合、投与量を変更し、長時間作用型製剤として、適用性を改善することができる。重水素による化合物中の水素原子の置換では、重水素の同位体効果によって、動物の体内における化合物の薬物濃度を増加させ、薬物の有効性を向上させることができる。また、重水素による化合物中の水素原子の置換では、特定の代謝生成物が阻害されることにより、化合物の安全性を増加させることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
別の好ましい実施形態では、重水素は、重水素に置換された位置における重水素同位体含有量が少なくとも天然重水素同位体含有量（０．０１５％）より多く、好ましくは３０％超、より好ましくは５０％超、さらにより好ましくは７５％超、さらにより好ましくは９５％超、さらにより好ましくは９９％超である。
【００１６】
具体的には、本発明において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３の重水素に置換された各位置における重水素同位体の含有量は、少なくとも５％であり、好ましくは１０％超、より好ましくは１５％超、より好ましくは２０％超、より好ましくは２５％超、より好ましくは３０％超、より好ましくは３５％超、より好ましくは４０％超、より好ましくは４５％超、より好ましくは５０％超、より好ましくは５５％超、より好ましくは６０％超、より好ましくは６５％超、より好ましくは７０％超、より好ましくは７５％超、より好ましくは８０％超、より好ましくは８５％超、より好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超、より好ましくは９９％超である。
【００１７】
別の好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３の少なくとも１個のＲが重水素を含み、好ましくは２個のＲ、より好ましくは３個のＲ、より好ましくは４個のＲ、より好ましくは５個のＲ、より好ましくは６個のＲ、より好ましくは７個のＲ、より好ましくは８個のＲ、より好ましくは９個のＲ、より好ましくは１０個のＲ、より好ましくは１１個のＲ、より好ましくは１２個のＲ、より好ましくは１３個のＲが重水素を含む。
【００１８】
別の好ましい実施形態では、前記の化合物が重水素化されていない化合物を含まない。
【００１９】
本発明の第２の態様では、薬学的に許容される担体と、本発明の第１の態様に記載した前記の化合物、またはその結晶形、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物とを混合して、医薬組成物となる工程を含む医薬組成物の調製方法を提供する。
【００２０】
本発明の第３の態様では、薬学的に許容される担体及び本発明の第１の態様に記載した前記の化合物、またはその結晶形、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を含む医薬組成物を提供する。
【００２１】
本発明の医薬組成物に用いる薬学的に許容される担体としては、任意の流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、呈味増強剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、崩壊剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒又は乳化剤を含むが、これらに限定されるものではない。
【００２２】
本発明の医薬組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、軟膏剤、乳剤、懸濁剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア、及びエアゾールなどの固体、半固体、液体又は気体の製剤として調製することができる。
【００２３】
本発明の医薬組成物の典型的な投与経路としては、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、経腸投与、または局所投与、経皮投与、吸入投与、非経口投与、舌下投与、膣内投与、鼻腔内投与、眼内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与が挙げられるが、経口投与または注射投与が好ましい。
【００２４】
本発明の医薬組成物は、通用の混合法、溶解法、造粒法、糖衣錠剤を製造する方法、細粉砕法、乳化法、凍結乾燥法などの当業者に公知の方法により製造することができる。
【００２５】
本発明の範囲内において、本発明の上述した各技術特徴と、以下（例えば、実施形態）のように具体的に説明する各技術特徴とを互いに組み合わせて、新規または好適な技術手段を構成することができることを理解すべきである。ここで、その詳細を省略する。
【００２６】
本発明において、特に説明のない限り、「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを指す。より好ましくは、ハロゲン原子がＦ、ＣｌおよびＢｒから選択される。
【００２７】
本発明において、特に説明のない限り、「重水素化」とは、化合物または官能基における水素の１個以上が重水素に置換されていることを意味し、重水素化は一置換、二置換、多置換または完全置換であっても良い。「１つ以上の重水素化」および「１回以上の重水素化」という用語は、同じ意味で使用される。
【００２８】
本発明において、特に説明のない限り、「非重水素化された化合物」とは、重水素原子の割合が天然重水素同位体の含有量（０．０１５％）より多くない化合物を指す。
【００２９】
また、本発明は同位体標識化合物を含み、ここで元の化合物を開示することに相当する。本発明の化合物の同位体の例として、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素および塩素の同位体が挙げられる。本発明の化合物、またはエナンチオマー、ジアステレオマー、異性体、または薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、上記の化合物の同位体や他の同位体原子を含むものは、すべて本発明の範囲内にある。例えば、放射性同位体である３Ｈおよび１４Ｃも本発明の特定の同位体標識化合物の中に含み、それは薬物および基質の組織分布実験に有用である。トリチウム（即ち３Ｈ）と炭素１４（即ち１４Ｃ）は、調製および検出が比較的に容易であるため、同位体の第１候補である。同位体標識化合物は、通常の方法で非同位体試薬の代わりに、容易に入手可能な同位体標識試薬を使用することにより、実施例に示すプロトコルに従って調製される。
【００３０】
本発明において、薬学的に許容される塩としては、無機塩および有機塩がある。一種類の好ましい塩は、本発明の化合物と酸で形成された塩である。塩の形成に適した酸として、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、ピクリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などの有機酸；及び、プロリン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。別の一種類の好ましい塩は、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩或いはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩或いはカルシウム塩）、アンモニウム塩（例えば、メチルアミン塩、エチルアミン塩、プロピルアミン塩、ジメチルアミン塩、トリメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、エチレンジアミン塩、ヒドロキシエチルアミン塩、ジヒドロキシエチルアミン塩、トリドロキシアミン塩、及びモルホリン、ピペラジン、リジンからそれぞれ形成されたアミン塩などの低級アルカノールアンモニウム塩および他の薬学的に許容されるアミン塩）などの本発明の化合物をアルカリで形成された塩である。
【００３１】
「溶媒和物」という用語とは、本発明の化合物が溶媒分子と配位して特定の割合で形成した錯体を指す。「水和物」とは、本発明の化合物が水と配位して形成した錯体を指す。
【００３２】
本発明は、ＨＩＦαのヒドロキシル化を抑制することによりＨＩＦを安定化させ、ＨＩＦ制御遺伝子の発現を活性化するＨＩＦ及び／又はＥＰＯの調節方法を提供する。この方法はまた、貧血、局所虚血、酸素欠乏などのＨＩＦ及び／又はＥＰＯに関連する疾患の予防、前治療又は治療にも適用することができる。
【００３３】
局所虚血と酸素欠乏は、ＨＩＦに関連する２つの病態であり、心筋梗塞、局所肝虚血、局所腎虚血、脳卒中、末梢血管障害疾患、潰瘍、火傷、慢性創傷、肺塞栓、虚血−再灌流障害（例えば、手術や臓器移植に関連する虚血−再灌流障害など）などが挙げるが、これらに限定されない。
【００３４】
本発明の一実施態様は、複数の局所虚血および酸素欠乏の病態を治療するための方法を提供し、特に本明細書に記載の化合物を使用する方法を提供する。一実施形態において、本発明の方法は、局所虚血又は酸素欠乏の後に投与される場合、治療上のメリットをもたらす。例えば、心筋梗塞の後に、本発明の方法は、発症率や死亡率を劇的に低下させ、心臓の構造と機能を著しく改善する。一方、肝毒性−局所虚血性障害の後に投与される場合、本発明の方法は、肝機能を改善する。酸素欠乏は、肝臓疾患の重要な構成要素であり、特にエタノールなどの肝毒性化合物に関連する慢性肝疾患において重要な構成要素である。また、アルコール性肝疾患において、例えば、一酸化窒素合成酵素やグルコース輸送体１などのＨＩＦαによって誘導される遺伝子発現は向上することが知られている。
【００３５】
そこで、本発明は、治療に有効な量の化合物又はその医薬的に許容される塩を単独で被験者に投与すること、或いは医薬的に許容される賦形剤と組み合わせて被験者に投与することを含む、局所虚血又は酸素欠乏に関連する病態を治療する方法を提供する。一実施形態において、前記の化合物は、例えば、心筋梗塞、肺塞栓症、腸梗塞、虚血性脳卒中および腎虚血−再灌流障害のような局所虚血病態の直後に投与される。別の実施形態において、前記の化合物は、例えば、心臓性肝硬変、黄斑変性、肺塞栓、急性呼吸不全、新生児呼吸窮迫症候群、及びうっ血性心不全などの慢性局所虚血の発生に関連する病態と診断された患者に投与される。
【００３６】
本発明の別の実施形態において、本明細書に記載の化合物を用いて、例えば、アテローム性動脈硬化症高リスク個体などの局所虚血または酸素欠乏を発症するリスクがある患者を治療する方法を提供する。アテローム性動脈硬化症の危険因子としては、例えば、高脂血症、喫煙、高血圧、糖尿病、高インスリン血症、および腹部肥満などがある。そこで、本発明は、治療に有効な量の化合物又はその医薬的に許容される塩を単独で所望の患者に投与すること、或いは医薬的に許容される賦形剤と組み合わせて所望の患者に投与することを含む、局所虚血性組織の損傷を予防する方法を提供する。一実施形態において、前記の化合物は、例えば、高血圧、糖尿病、動脈閉塞性疾患、慢性静脈不全、レイノー病、慢性皮膚潰瘍、硬化症、うっ血性心不全、および全身性硬化症などの素因性病態に基づいて投与される。
【００３７】
一つの特定の実施形態において、この方法は、損傷組織、創傷、および潰瘍における血管形成及び／又は肉芽組織形成を増加させるために用いられる。例えば、本発明の化合物は、創傷治癒において肉芽組織形成を効果的に刺激することを示している。肉芽組織には、新たに形成された漏出性の血管と、フィブリノゲンや血漿フィブロネクチン結合タンパク質などの一時的な血漿タンパク質基質とが含まれる。炎症細胞、血小板、および活性化された内皮からの増殖因子の放出は、肉芽組織における線維芽細胞と内皮細胞の遊走と増殖を刺激する。血管形成や神経刺激が減少すると、潰瘍が発生する。本発明の方法は肉芽組織の形成を効果的に促進する。そして、本発明は、例えば、梗塞による組織損傷、外傷や損傷による創傷、何らかの症状（例えば、糖尿病）による慢性創傷や潰瘍を有する患者を治療する方法を提供する。該方法は、治療に有効な量の化合物又はその医薬的に許容される塩を単独で所望の患者に投与すること、或いは医薬的に許容される賦形剤と組み合せて所望の患者に投与することを含む。
【００３８】
また、本発明の別の実施態様は、局所虚血または酸素欠乏に関与する組織損傷の発生を低減または予防するために、前記の化合物を用いて被験者に前治療を行う方法を提供する。本発明の方法は、局所虚血または酸素欠乏に関与する病態の直前に投与される場合に、治療上のメリットをもたらす。例えば、心筋梗塞を誘導する前に本発明の方法を適用することは、心臓の構造と機能が統計学的に有意に改善されたことを示している。一方、虚血−再灌流障害の直前と虚血−再灌流障害の中に直ちに投与される場合、本発明の方法は治療上のメリットをもたらし、腎不全に関連する診断パラメータを著しく減少させる。
【００３９】
そこで、本発明は、被験者に前治療を行って局所虚血又は酸素欠乏に関与する組織損傷を低減又は予防させる方法を提供する。該方法は、治療に有効な量の化合物又はその医薬的に許容される塩を単独で、或いは医薬的に許容される賦形剤と組み合わせて、心筋梗塞などの局所虚血症の病歴を有する患者、もしくは狭心症などの差し迫った局所虚血症状を有する患者に投与することを含む。別の実施形態において、例えば、全身麻酔下または一時的に高地で働いている個体に、局所虚血の可能性を示唆する物理パラメータに基づいて前記の化合物を投与することができる。さらに、別の実施形態では、前記の化合物は、臓器移植において、臓器ドナーに前治療を行うこと、又は受容体に移植する前に体から除去された臓器を維持するために使用される。
【００４０】
以前の研究は、本発明の方法で使用する一部の化合物が、プロコラーゲン−プロリル４−ヒドロキシラーゼの有効な阻害剤であることを示した。梗塞や創傷の初期回復は、壊死領域に結合組織を沈着させることが必要であると認識されたが、本発明は瘢痕形成の治療に対して副作用を示さないことを明らかにした。そして、本発明の特定の化合物が低酸素による組織損傷と繊維化への治療と予防に対して提供するメリットに基づいて、本発明は、同時反応性繊維化に関与する局所虚血または酸素欠乏（例えば、心筋梗塞とそれに伴ううっ血性心不全）などの局所虚血または酸素欠乏に関連する病態を治療または予防する「二重治療」法を含む。該方法は、同じ特異性又は異なる特異性を有する２−ケトグルタル酸ジオキシゲナーゼ（例えば、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ及びプロコラーゲン−プロリル４−ヒドロキシラーゼ）の１種以上を抑制する化合物を使用しても良い。或いは、該方法は、化合物の組み合わせを使用しても良い。該化合物の組み合わせにおける各化合物が２−ケトグルタル酸ジオキシゲナーゼの１種のみを特異的に阻害する（例えば、第１の化合物がＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼを特異的に阻害し、且つ第２の化合物がプロコラーゲン−プロリル４−ヒドロキシラーゼを特異的に阻害する）。
【００４１】
一実施形態において、本発明の化合物は、２−ケトグルタル酸ジオキシゲナーゼの１種以上を抑制する。一実施形態において、前記の化合物は、同じ特異性または異なる特異性を有する２−ケトグルタル酸ジオキシゲナーゼファミリーの少なくとも２つのメンバー（例えば、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ及びＨＩＦアスパラギニルヒドロキシラーゼ）を抑制する。別の実施形態において、前記の化合物は、２−ケトグルタル酸ジオキシゲナーゼの１種（例えば、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ）に対して特異性を有し、且つ他のファミリーメンバーに対してほとんど又は全く特異性を示さない。
【００４２】
前記の化合物は、他の種々の治療法と組み合せて投与することができる。一実施形態において、前記の化合物は、他の２−ケトグルタル酸ジオキシゲナーゼ阻害剤とともに投与され、ここで両方の化合物は２−ケトグルタル酸ジオキシゲナーゼファミリーのそれぞれのメンバーに対して異なる特異性を有する。前記の２種の化合物は、一方の化合物に対する比率で同時に投与することができる。所定の治療過程又は特定の被験者に適する比率の測定は、当業者の技術範囲内である。あるいは、２種の化合物は、例えば心筋梗塞の後などに、治療過程にわたって連続的に投与されてもよい。ある特定の実施形態において、１つの化合物はＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼの活性を特異的に阻害し、また、もう１つの化合物はプロコラーゲン−プロリル４−ヒドロキシラーゼの活性を特異的に阻害する。別の特定の実施形態において、１つの化合物はＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼの活性を特異的に阻害し、また、もう１つの化合物はＨＩＦアスパラギニルヒドロキシラーゼの活性を特異的に阻害する。別の実施形態において、前記の化合物は、ＡＣＥ阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、インヒビン、利尿薬、ジゴキシン、カルニチンなどの異なる作用パターンを有する他の治療剤と共に投与される。
【００４３】
本発明は、内因性エリスロポエチン（ＥＰＯ）を増加する方法を提供する。これらの方法は、例えば血漿などのインビボで適用しても良いし、又は、例えば馴化細胞培地などのインビトロで適用しても良い。さらに、本発明は、例えば貧血および神経障害に関連する病状を含むＥＰＯ関連病状の予防、前治療または治療のための、内因性ＥＰＯの含有量を増加させる方法を提供する。貧血に関連する病状には、例えば、急性または慢性腎臓疾患、糖尿病、癌、潰瘍、ウイルス感染（例えば、ＨＩＶ、細菌または寄生虫）、炎症などの病態を含む。貧血の病状には、例えば、放射線療法、化学療法、透析および手術を含む処置または治療に関する病態をさらに含む。また、貧血に関連する病状には、例えば、小球性貧血、低色素性貧血、再生不良性貧血などの病態に見られる異常なヘモグロビン及び／又は赤血球も含む。
【００４４】
本発明は、特定の治療または処置を受けている被験者における内因性ＥＰＯを予防または同時に増加させるために使用される。当該被験者は、例えば、アジドチミジン（ジドブジン）または他の逆転写酵素阻害剤で治療されているＨＩＶ陽性の貧血患者、シスプラチンを含むまたはシスプラチンを含まない循環化学療法を受けている貧血の癌患者、或いは手術を予定する貧血患者または非貧血患者である。また、内因性ＥＰＯを増加させる方法は、限定されるものではないが、脳卒中、外傷、癲癇、脊髄損傷および神経変性疾患を含む神経損傷または神経組織変性に関するＥＰＯ関連症状の予防、前治療または治療に使用することができる。
【００４５】
さらに、前記の方法は、外来輸血の必要性を低減すること、または手術前の血液保存を容易にするように、手術を予定する貧血患者または非貧血患者における内因性ＥＰＯの含有量を増加させるために使用される。通常、手術前の自己血輸血の後に生じる血液のヘマトクリットのわずかな減少は、内因性ＥＰＯまたは代償性赤血球生成の増加を刺激しない。ところが、内因性ＥＰＯの手術前の刺激は、赤血球の品質および自己血輸血の量を効果的に増加させながら、より高いヘマトクリットレベルを維持し、この方法は特に本明細書に包含される。一部の手術を受ける者、特に手術による出血が２リットルを超える個体では、本発明の方法を利用して、異なる由来の血液への曝露を減少することができる。
【００４６】
また、本発明の方法は、運動能力を高め、訓練能力を改善し、酸素調整を促進または強化するために使用される。例えば、アスリートは、この方法で訓練を促進することができ、また、兵士はこの方法で例えば持久力および忍耐力を改善することができる。
【００４７】
本発明の方法は、インビトロ治療における細胞を培養する培地中の内因性エリスロポエチンの含有量、及びインビボ治療における動物の血漿中の内因性エリスロポエチンの含有量を増加させることが示されている。腎臓は、体内のエリスロポエチンの主要な供給源であるが、適切な刺激を受けると、脳、肝臓および骨髄を含む他の器官は、エリスロポエチンを合成することができる。本発明の方法を用いることにより、脳、腎臓および肝臓を含む複数の身体器官における内因性エリスロポエチンの発現を増加させることができる。実際には、本発明の方法は、両腎切除術を受けた動物における内因性エリスロポエチンの含有量も増加させる。
【００４８】
本発明の方法は、腎機能が損なわれる場合においても、エリスロポエチンの含有量を増加できることを示している。本発明は、エリスロポエチンの産生機構に限定されるものではないが、腎不全において一般的に見られるエリスロポエチン分泌の減少は、腎組織における流動／灌流の増加による高酸素症に起因する。
【００４９】
一方、本発明の方法は、インビボ治療における動物のヘマトクリット及び血液ヘモグロビンのレベルを増加させる。本発明の方法において、化合物の使用によって生成された血漿ＥＰＯ、ヘマトクリット及び血液ヘモグロビンの増加は、投与量感受性を有するが、本発明の化合物の応答レベルを一定に制御するように投与方式を決定することができる。一方、本発明の化合物を用いた治療は、例えば、化学療法剤であるシスプラチンなどの毒性化合物によって誘発される貧血、または外傷、損傷、寄生虫或いは手術などの出血による貧血、などを治療することができる。
【００５０】
本発明の化合物で治療された動物では、ヘマトクリット及び血液ヘモグロビンが増加する前に、血液中を循環する幼若赤血球（網状赤血球）の百分率が増加する。したがって、本発明は、本発明の化合物の、動物の血液中の網状赤血球の含有量を増加させることにより無細胞の網状赤血球溶解物を生成する方法（例えば、Ｐｅｌｈａｍ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓｏｎ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７６，６７，２４７−２５６の記載）における使用を含む。本発明の化合物を用いて単独で治療するか、又はアセチルフェニルヒドラジンなどの他の化合物と組み合わせて治療することにより、動物（例えば、ウサギなど）における循環網状赤血球の含有量が増加する。
【実施例】
【００５１】
以下、本発明の式（Ｉ）で表される構造の化合物の調製方法をさらに具体的に説明するが、これらの具体的な方法は本発明を限定するものではない。また、本発明の化合物は、本明細書に記載された、又は当技術分野で公知された様々な合成方法を組み合わせることによって順調に調製することができ、そのような組み合わせは、当業者にとって明らかである。
【００５２】
調製プロセスにおいて、一般に、各反応は不活性溶媒の中に、室温〜還流温度（例えば、０℃〜１００℃、好ましくは０℃〜８０℃）で行われる。反応時間は、一般に、０．１〜６０時間で、好ましくは０．５〜２４時間である。
【００５３】
実施例１  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシン（化合物１１）の調製
【００５４】
【化４】
2020019817.tif 000005
【００５５】
工程１：４−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチル（化合物２）の合成
氷冷下、４−ブロモ−２−メチル安息香酸（５．００ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）のメタノール（６０ｍＬ）溶液に、塩化チオニル（５．５０ｍＬ、７０．００ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下完了後、反応液を還流させて５時間撹拌して反応させた。室温まで冷却し、反応液を減圧濃縮した。飽和炭酸水素ナトリウム溶液で濃縮液を中性に調整し、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮して淡黄色オイル４．３ｇを得た。収率は８１．１％であった。１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（δ／ｐｐｍ）  ７．７９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４５-７．３５（ｍ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），２．５８（ｓ，３Ｈ）。
【００５６】
工程２：２−メチル−４−フェノキシ安息香酸メチル（化合物３）の合成
窒素ガス保護下で、４−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチル（４．３０ｇ、１８．８０ｍｍｏｌ）、フェノール（１．９０ｇ、２０．００ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１８．４０ｇ、５６．４０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（７１６ｍｇ、３．７６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン（７７５ｍｇ、７．５２ｍｍｏｌ）の混合物に、１，４−ジオキサン（３０ｍｌ）を加え、反応液を１００℃で一晩撹拌し反応させた。室温まで冷却し、濾過し、減圧濃縮した。濃縮液を酢酸エチル（１００ｍｌ）と水（６０ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物３．６０ｇを得た。収率は７９．１％であった。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（δ／ｐｐｍ）  ７．９７-７．９３（ｍ，１Ｈ），７．４４-７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，４．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝８．５，０．９Ｈｚ，２Ｈ），６．８８-６．７９（ｍ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ）。
【００５７】
工程３：２−（ブロモメチル）−４−フェノキシ安息香酸メチル（化合物４）の合成
窒素ガス保護下で、２−メチル−４−フェノキシ安息香酸メチル（９．１０ｇ、３７．６０ｍｍｏｌ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、７．０２ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（１６０ｍＬ）溶液に、過酸化ベンゾイル（ＢＰＯ、６３８ｍｇ、２．６０ｍｍｏｌ）を加え、還流させて６時間撹拌して、反応させた。室温まで冷却し、ろ過して、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物１０．９ｇを得た。収率は９０．３％であった。
【００５８】
工程４：２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−フェノキシ安息香酸メチル（化合物５）の合成
室温で、２−（ブロモメチル）−４−フェノキシ安息香酸メチル（１４．９０ｍｇ、４６．００ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルグリシンメチル（１２．４０ｇ、５１．００ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１１８ｍＬ）溶液に、ヨウ化ナトリウム（１０．４０ｇ、６９．５０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（９．６０ｇ、６９．５０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させた。水（１００ｍＬ）を加えて反応をクエンチさせ、酢酸エチルで抽出し、水（１００ｍＬ）および飽和食塩水（１００ｍＬ×２）で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物１８．９ｇを得た。収率は８５．０％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４８４．１（Ｍ＋１）。
【００５９】
工程５：４−ヒドロキシ−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物６）の合成
氷冷下、２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−フェノキシ安息香酸メチル（１８．９０ｇ、３９．１０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（８２ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（１２．７０ｇ、２３４．６０ｍｍｏｌ）のメタノール（４０ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、反応液を室温で２時間攪拌した。減圧下でメタノールを除去し、水（５０ｍＬ）で濃縮液を希釈し、１Ｎ希塩酸でｐＨを約１０に調整した。酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出し、有機層を水（１００ｍＬ）および飽和食塩水（１００ｍＬ）でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して白色固体９．１ｇを得た。収率は７８．８％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２９６．１（Ｍ＋１）。
【００６０】
工程６：１−（（ジメチルアミノ）メチル）−４−ヒドロキシ−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物８）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（２．６０ｇ、８．８０ｍｍｏｌ）の酢酸（４ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルジアミノメタン（１．０８ｇ、１０．６０ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、反応を５５℃に昇温して６時間撹拌し反応させた。室温に冷却し、そのまま次の工程に用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５３．１（Ｍ＋１）。
【００６１】
工程７：１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物９）の合成
室温で、反応系の温度を５０℃以下に保つように、上記の反応に無水酢酸（２．５０ｇ、２４．６０ｍｍｏｌ）を徐々に滴下した。滴下完了後、反応液を１００℃に昇温し、一晩攪拌して反応させた。６０℃まで冷却し、水２０ｍＬを徐々に加え、室温に冷却し、固体を濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した。濾過ケーキを２０ｍＬのジクロロメタンおよび１０ｍＬの水に溶解し、５分間撹拌し、有機相を分離した。氷浴下で有機相にモルホリン（０．８０ｇ、８．８０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２時間撹拌して反応させた。反応液を減圧濃縮し、アセトン（２ｍＬ）およびメタノール（２ｍＬ）の混合溶媒に加え、氷浴で固体を析出させ、その固体をろ過し、メタノール（冷、１ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して白色固体１．８０ｇを得た。収率は５５．７％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３６７．１（Ｍ＋１）。
【００６２】
工程８：４−ヒドロキシ−１−メチル−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物１０）の合成
１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（１．３０ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）を無水酢酸エチル（２６ｍＬ）に溶解し、炭酸ナトリウム（１８６ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％、１７０ｍｇ）を加え、水素ガス雰囲気下で８０℃で反応液を一晩撹拌した。室温に冷却し、セライトで濾過し、濾液を減圧濃縮した。粗生成物をカラムで分離して白色固体６００ｍｇを得た。収率は５５．４％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３１０．１（Ｍ＋１）。
【００６３】
工程９：Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシン（化合物１１）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−１−メチル−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（１２０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）および重水素化グリシン−ｄ５（１００ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）の重水素化メタノール−ｄ４（３ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（２２０ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）を加え、反応液を封管に入れて１１０℃で一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、固体を濾過し、メタノール（冷、１０ｍＬ）で洗浄し、固体を乾燥させた。固体を５ｍＬの水に溶解し、酢酸エチル（５ｍＬ）で抽出した。水相を酢酸０．５ｍＬでｐＨを酸性に調節し、大量の固体を析出するまで室温で懸濁液を撹拌し、濾過した。水（３×１ｍＬ）、アセトン（冷、２×０．５ｍＬ）で濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥して米らしい白色固体６０ｍｇを得た。収率は４５．２％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５５．２（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３２（ｓ，１Ｈ），１２．８０（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｍ，３Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【００６４】
実施例２  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−ｄ−メチル−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］グリシン（化合物１３）の調製
【００６５】
【化５】
2020019817.tif 000006
【００６６】
工程１：４−ヒドロキシ−１−（ｄ−メチル）−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物１２）の合成
１−（（アセトキシメチル）メチル）−４−ヒドロキシ−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（２５０ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を無水酢酸エチル（５ｍｌ）に溶解し、炭酸ナトリウム（４０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（５０％  ｉｎ  Ｄ２Ｏ、３０ｍｇ）を加え、水素ガス雰囲気下で８０℃で反応液を一晩撹拌した。
室温に冷却し、セライトで濾過し、濾液を減圧濃縮した。粗生成物をカラムで分離して白色固体１３０ｍｇを得た。収率は６１．６％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３１１．１（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １１．５０（ｓ，１Ｈ），８．３４（ｍ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｍ，３Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），２．６３（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）。
【００６７】
工程２：Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−（ｄ−メチル）−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］グリシン（化合物１３）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−１−（メチル−ｄ）−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（１３０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびグリシン（９４．５ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）の重水素化メタノール（３ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（２２６．８ｍｇ、４．２０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を封管に入れて１１０℃で一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、固体を濾過し、メタノール（冷、１ｍＬ）で洗浄し、固体を乾燥させた。固体を３ｍＬの水に溶解し、酢酸エチル（３ｍＬ）で抽出した。水相を酢酸でｐＨを酸性に調節し、大量の固体を析出するまで室温で懸濁液を撹拌し、濾過した。水（３×１ｍＬ）、アセトン（冷、２×０．５ｍＬ）で濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥して白色固体２９ｍｇを得た。収率は１９．５％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５４．１（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）１３．３２（ｓ，１Ｈ），１２．７９（ｓ，１Ｈ），９．１１（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｍ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｍ，３Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．６９（ｓ，２Ｈ）。
【００６８】
実施例３  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ
）−３−イソキノリニル）カルボニル］グリシン（化合物２３）の調製
【００６９】
【化６】
2020019817.tif 000007
【００７０】
工程１：２，４，６−ｄ３−フェノール（化合物１５）の合成。
室温で、フェノール（２．８０ｇ、３０．３０ｍｍｏｌ）の重水（４４ｍＬ）溶液に、ＮａＯＤ（４０％でＤ２Ｏに溶解する、３．００ｇ、３０．００ｍｍｏｌ）を添加し、１８０℃で４５分間のマイクロ波反応を行った。室温に冷却し、ＨＣｌ（０．５Ｍ、６０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出し、飽和食塩水（５０ｍＬ）で有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物２．９ｇを得た。収率は１００％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝９６．１（Ｍ−１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（δ／ｐｐｍ）  ７．２６（ｓ，２Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ）。
【００７１】
工程２：２−メチル−４−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−安息香酸メチル（化合物
１６）の合成
窒素ガス保護下で、４−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチル（５．４０ｇ、２３．６０ｍｍｏｌ）、２，４，６−ｄ３−フェノール（２．３０ｇ、２３．６ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（２３．１ｇ、７０．８０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（ＣｕＩ、９００ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン（１．２０ｇ、１６．８０ｍｍｏｌ）の混合物に、１，４−ジオキサン（３７ｍｌ）を加え、反応液を１００℃で一晩撹拌し反応させた。室温まで冷却し、濾過し、減圧濃縮した。濃縮液を酢酸エチル（１００ｍｌ）と水（６０ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物３．４０ｇを得た。収率は５８．７％であった。
【００７２】
工程３：２−（ブロモメチル）−４−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−安息香酸メチル（化合物１７）の合成
窒素ガス保護下で、２−メチル−４−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−安息香酸メチル（３．４０ｇ、１４．１０ｍｍｏｌ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、２．３８ｇ、１３．４０ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（５８ｍＬ）溶液に、過酸化ベンゾイル（ＢＰＯ、１７０．８ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を加え、還流させて一晩撹拌して、反応させた。室温まで冷却し、ろ過して、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物２．９０ｇを得た。収率は６３．５％であった。
【００７３】
工程４：２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−安息香酸メチル（化合物１８）の合成
室温で、２−（ブロモメチル）−４−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−安息香酸メチル（２．９０ｍｇ、８．９５ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルグリシンメチル（２．４０ｇ、９．８５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２３ｍＬ）溶液に、ヨウ化ナトリウム（２．００ｇ、１３．４０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．８５ｇ、１３．４０ｍｍｏｌ）を加え、室温で６時間反応させた。水（５０ｍＬ）を加えて反応をクエンチさせ、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ×２）で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して黄色固体４．２０ｇを得た。収率は９６．４％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４８７．１（Ｍ＋１）。
【００７４】
工程５：４−ヒドロキシ−７−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物１９）の合成
氷冷下、２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−安息香酸メチル（４．２０ｇ、８．６０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１８ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（３．０２ｇ、５５．９０ｍｍｏｌ）のメタノール−ｄ（９ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、反応液を室温で２時間攪拌した。減圧下でメタノールを除去し、水（５０ｍＬ）で濃縮液を希釈し、１Ｎ希塩酸でｐＨを約１０に調整した。酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ）でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して白色固体２．５０ｇを得た。収率は９６．６％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２９９．１（Ｍ＋１）。
【００７５】
工程６：１−（（ジメチルアミノ）メチル）−４−ヒドロキシ−７−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物２０）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−７−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（２．００ｇ、６．７０ｍｍｏｌ）の酢酸（４ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルジアミノメタン（８３０ｍｇ、７．８０ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、反応を５５℃に昇温して６時間撹拌し反応させた。室温に冷却し、そのまま次の工程に用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５６．２（Ｍ＋１）。
【００７６】
工程７：１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物２１）の合成
室温で、反応系の温度を５０℃以下に保ちながら、上記の反応に無水酢酸（１．８０ｇ、１６．５０ｍｍｏｌ）を徐々に滴下した。滴下完了後、反応液を１００℃に昇温し、一晩攪拌して反応させた。６０℃まで冷却し、水２５ｍＬを徐々に加え、室温に冷却し、固体を濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した。濾過ケーキを２５ｍＬのジクロロメタンおよび１２ｍＬの水に溶解し、５分間撹拌し、有機相を分離した。氷浴下で有機相にモルホリン（０．９０ｇ）を添加し、反応物を２時間撹拌して反応させた。反応液を減圧濃縮し、アセトン（２ｍＬ）およびメタノール（２ｍＬ）の混合溶媒に加え、氷浴で固体を析出させ、その固体をろ過し、メタノール（冷、１ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して白色固体１．２０ｇを得た。収率は５５．９％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３７０．１（Ｍ＋１）。
【００７７】
工程８：４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（フェニル−２，４，６−ｄ３−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物２２）の合成
１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−（フェニル−２，４，６−ｄ３−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（３００ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を無水酢酸エチル（６ｍＬ）に溶解し、炭酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％、４５ｍｇ）を加え、水素ガス雰囲気下で８０℃で反応液を一晩撹拌した。室温に冷却し、セライトで濾過し、濾液を減圧濃縮した。粗生成物をカラムで分離して白色固体２２０ｍｇを得た。収率は８６．９０％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３１３．１（Ｍ＋１）。
【００７８】
工程９：Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（フェニル−２，４，６−ｄ３−オキシ）−３−イソキノリニル）カルボニル］−グリシン（化合物２３）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（フェニル−２，４，６−ｄ３−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（２２０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）および重水素化グリシン−ｄ５（１６９．２ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）の重水素化メタノール−ｄ（４．８ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（３８３．８ｍｇ、７．１０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を封管に入れて１１０℃で一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、固体を濾過し、メタノール（冷、３ｍＬ）で洗浄し、固体を乾燥させた。固体を３ｍＬの水に溶解し、酢酸エチル（３ｍＬ）で抽出した。水相は、酢酸でｐＨを酸性に調節し、大量の固体を析出するまで室温で懸濁液を撹拌し、濾過した。水（３×２ｍＬ）、アセトン（冷、２×２ｍＬ）で濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥して白色固体１２６ｍｇを得た。収率は４９．７％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５６．２（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３４（ｓ，１Ｈ），９．０７（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【００７９】
実施例４  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（ｄ５−フェノキシ）−３−イソ
キノリニル）カルボニル］グリシンの調製
【００８０】
【化７】
2020019817.tif 000008
【００８１】
工程１：ｄ５−フェノール（化合物２４）の合成。
室温で、フェノール（３．００ｇ、３１．９０ｍｍｏｌ）の重水（１００ｍＬ）溶液に５％のＰｔ／Ｃ（６００ｍｇ）を添加し、Ｈ２で反応系の空気を置換し、室温で封管で４８時間反応させた。セライトで濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出し、飽和食塩水で有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮して褐色油状物３．０ｇを得た。これを精製せずにそのまま次の工程に用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝９８．１（Ｍ−１）。
【００８２】
工程２：２−メチル−４−（ｄ５−フェノキシ）−安息香酸メチル（化合物２５）の合成
窒素ガス保護下で、４−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチル（７．６０ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）、ｄ５−フェノール（３．００ｇ、３０．３ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（２９．６ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（１．３０ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン（１．７０ｇ、１６．５０ｍｍｏｌ）の混合物に、１，４−ジオキサン（５０ｍｌ）を加え、反応液を１００℃で一晩撹拌し反応させた。室温まで冷却し、濾過し、減圧濃縮した。濃縮液を酢酸エチル（１００ｍｌ）と水（６０ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物４．３０ｇを得た。収率は６８．７％であった。
【００８３】
工程３：２−（ブロモメチル）−４−（フェニル−ｄ５−オキシ）−安息香酸メチル（化
合物２６）の合成
窒素ガス保護下で、２−メチル−４−（ｄ５−フェノキシ）−安息香酸メチル（４．３０ｇ、１７．５０ｍｍｏｌ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、３．２７ｇ、１８．３０ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（７５ｍＬ）溶液に、過酸化ベンゾイル（ＢＰＯ、２９６ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を加え、還流させて一晩撹拌して、反応させた。室温まで冷却し、ろ過して、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物４．１０ｇを得た。収率は７１．８％であった。
【００８４】
工程４：２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−（フェニル−ｄ５−オキシ）−安息香酸メチル（化合物２７）の合成
室温で、２−（ブロモメチル）−４−（フェニル−ｄ５−オキシ）−安息香酸メチル（４．１０ｇ、１２．６０ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルグリシンメチル（３．３７ｇ、１３．９０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３５ｍＬ）溶液に、ヨウ化ナトリウム（２．８０ｇ、１８．９０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．６０ｇ、１８．９０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩反応させた。水（５０ｍＬ）を加えて反応をクエンチさせ、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ×２）で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して黄色固体５．４ｇを得た。収率は８７．７％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４８９．１（Ｍ＋１）。
【００８５】
工程５：４−ヒドロキシ−７−（フェニル−ｄ５−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物２８）の合成
氷冷下、２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−（フェニル−ｄ５−オキシ）−安息香酸メチル（５．４０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（２３ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（３．９０ｇ、７１．９０ｍｍｏｌ）のメタノール（１１ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、反応液を室温で２時間攪拌した。減圧下でメタノールを除去し、水（５０ｍＬ）で濃縮液を希釈し、１Ｎ希塩酸でｐＨを約１０に調整した。酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ）でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して白色固体３．００ｇを得た。収率は９０．２％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３０１．１（Ｍ＋１）。
【００８６】
工程６：１−（（ジメチルアミノ）メチル）−４−ヒドロキシ−７−（フェニル−ｄ５−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物２９）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−７−（ｄ５−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（３．００ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）の酢酸（５ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルジアミノメタン（１．２３ｇ、１２．００ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、反応を５５℃に昇温して６時間撹拌し反応させた。室温に冷却し、そのまま次の工程に用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５８．１（Ｍ＋１）。
【００８７】
工程７：１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−（フェニル−ｄ５−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物３０）の合成
室温で、温度を５０℃以下に保ちながら上記の反応に無水酢酸（２．５０ｇ、２４．６０ｍｍｏｌ）を徐々に滴下した。滴下完了後、反応液を１００℃に昇温し、一晩攪拌して反応させた。６０℃まで冷却し、水２５ｍＬを徐々に加え、室温に冷却し、固体を濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した。濾過ケーキを２５ｍＬのジクロロメタンおよび１２ｍＬの水に溶解し、５分間撹拌し、有機相を分離した。氷浴下で有機相にモルホリン（０．９０ｇ）を添加し、２時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、アセトン（２ｍＬ）およびメタノール（２ｍＬ）の混合溶媒に加え、氷浴で固体を析出させ、その固体をろ過し、メタノール（冷、１ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して白色固体２．０８ｇを得た。収率は５５．９％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３７２．１（Ｍ＋１）。
【００８８】
工程８：４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（フェニル−ｄ５−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物３１）の合成
１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−（ｄ５−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（５００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を無水酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、炭酸ナトリウム（７５ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％、７５ｍｇ）を加え、水素ガス雰囲気下で８０℃で反応液を一晩撹拌した。室温に冷却し、セライトで濾過し、濾液を減圧濃縮した。粗生成物をカラムで分離して白色固体４００ｍｇを得た。収率は９４．７０％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３１５．１（Ｍ＋１）。
【００８９】
工程９：Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（ｄ５−フェノキシ）−３−イソキノリニル）カルボニル］−グリシン（化合物３２）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（フェニル−ｄ５−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（２００ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）および重水素化グリシン−ｄ５（１５４ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）の重水素化メタノール−ｄ（４．５ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（１．０５ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を封管に入れて１１０℃で一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、固体を濾過し、メタノール（冷、５ｍＬ）で洗浄し、固体を乾燥させた。固体を５ｍＬの水に溶解し、酢酸エチル（５ｍＬ）で抽出した。水相を酢酸でｐＨを酸性に調節し、大量の固体を析出するまで室温で懸濁液を撹拌し、濾過した。水（３×２ｍＬ）、アセトン（冷、２×２ｍＬ）で濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥して白色固体１５０ｍｇを得た。収率は６５．２％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５８．１（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３３（ｓ，１Ｈ），１２．８８（ｓ，１Ｈ），９．０８（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【００９０】
実施例５  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−（ｄ−メチル）−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシンの調製
【００９１】
【化８】
2020019817.tif 000009
【００９２】
室温で、４−ヒドロキシ−１−（ｄ−メチル）−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（１３０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）および重水素化ｄ５−グリシン（１０８ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）の重水素化メタノール−ｄ（３ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（２４３ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を封管に入れて１１０℃で一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、固体を濾過し、メタノール（冷、１ｍＬ）で洗浄し、固体を乾燥させた。固体を３ｍＬの水に溶解し、酢酸エチル（３ｍＬ）で抽出した。水相は、酢酸でｐＨを酸性に調節し、大量の固体を析出するまで室温で懸濁液を撹拌し、濾過した。水（３×１ｍＬ）、アセトン（冷、２×０．５ｍＬ）で濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥して米らしい白色固体６６ｍｇを得た。収率は４１．２％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５６．２（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３５（ｓ，１Ｈ），９．０７（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｍ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｍ，３Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．６９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）。
【００９３】
実施例６  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−（ｄ３−メチル）−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシン（化合物３６）の調製
【００９４】
【化９】
2020019817.tif 000010
【００９５】
工程１：Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］グリシン（化合物３５）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−１−メチル−７−フェノキシイソキノリニル−３−カルボン酸メチル（６００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）およびグリシン（４３７ｍｇ、５．８０ｍｍｏｌ）のメタノール（４ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（１．０５ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を封管に入れて１１０℃で一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、固体を濾過し、メタノール（冷、５ｍＬ）で洗浄し、固体を乾燥させた。固体を５ｍＬの水に溶解し、酢酸エチル（５ｍＬ）で抽出した。水相は、酢酸でｐＨを酸性に調節し、大量の固体を析出するまで室温で懸濁液を撹拌し、濾過した。水（３×２ｍＬ）、アセトン（冷、２×２ｍＬ）で濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥して白色固体１２５ｍｇを得た。収率は１８．３％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５３．１（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３１（ｓ，１Ｈ），９．０９（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．０３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【００９６】
工程２：Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−（ｄ３−メチル）−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシン（化合物３６）の合成
Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−フェノキシ−３−イソキノリニル）カルボニル］グリシン（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の重水（３ｍＬ）溶液に、４０％の重水酸化ナトリウムの重水溶液（０．２０ｍＬ）を加え、窒素ガス保護下、１４０℃、封管で８時間反応させた。室温に冷却し、系内を３Ｎ塩酸溶液で約ｐＨ４に調節し、酢酸エチル（２０ｍＬ×４）で抽出し、有機相を飽和食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮した。濃縮液を分取薄層クロマトグラフィーで分離して、灰色固体１５ｍｇを得た。収率は３０．０％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５８．２（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．４３（ｓ，１Ｈ），９．０１（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｍ，３Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）。
【００９７】
実施例７  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（３−ｄ−フェノキシ）−３−イソキノリニル）カルボニル］グリシン（化合物４６）の調製
【００９８】
【化１０】
2020019817.tif 000011
【００９９】
工程１：３−ｄ−フェノール（化合物３８）の合成。
室温で、ｍ−ブロモフェノール（３．５０ｇ、２０．００ｍｍｏｌ）の重水素化メタノール−ｄ（２０ｍＬ）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（５０％  ｉｎ  Ｄ２Ｏ、１．００ｇ）を添加し、Ｄ２で空気を置換し、重水素ガスバルーン下で一晩反応させた。セライトで濾過し、濾液を減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物２．８ｇを得た。収率は５２．０％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝９４．１（Ｍ−１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）（δ／ｐｐｍ）  ７．２６（ｓ，２Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ）。
【０１００】
工程２：２−メチル−４−（３−ｄ−フェノキシ）−安息香酸メチル（化合物３９）の合成
窒素ガス保護下で、４−ブロモ−２−メチル−安息香酸メチル（４．５０ｇ、１９．８０ｍｍｏｌ）、３−ｄ−フェノール（１．８０ｇ、１８．９０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１９．４０ｇ、５９．４ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（７５４ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン（８１５ｍｇ、７．９０ｍｍｏｌ）の混合物に、１，４−ジオキサン（３５ｍｌ）を加え、反応液を１００℃で一晩撹拌し反応させた。室温まで冷却し、濾過し、減圧濃縮した。濃縮液を酢酸エチル（１００ｍｌ）と水（６０ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物２．４４ｇを得た。収率は５８．９％であった。
【０１０１】
工程３：２−（ブロモメチル）−４−（３−ｄ−フェノキシ）−安息香酸メチル（化合物４０）の合成
窒素ガス保護下で、２−メチル−４−（フェニル−３−ｄ−オキシ）−安息香酸メチル（２．４０ｇ、１０．００ｍｍｏｌ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、１．８７ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（４３ｍＬ）溶液に、過酸化ベンゾイル（ＢＰＯ、１７０．８ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を加え、還流させて一晩撹拌して、反応させた。室温まで冷却し、ろ過して、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して褐色油状物２．００ｇを得た。収率は６２．１％であった。
【０１０２】
工程４：２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−（３−ｄ−フェノキシ）−安息香酸メチル（化合物４１）の合成
室温で、２−（ブロモメチル）−４−（３−ｄ−フェノキシ）−安息香酸メチル（２．００ｇ、６．２０ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルグリシンメチル（１．６６ｇ、６．８０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１６ｍＬ）溶液に、ヨウ化ナトリウム（１．３９ｇ、９．３０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．２８ｇ、９．３０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間反応させた。水（５０ｍＬ）を加えて反応をクエンチさせ、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ×２）で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮して黄色固体３．７０ｇを得た。精製せずに、そのまま次の工程に用いた。収率は１００．０％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝４８５．１（Ｍ＋１）。
【０１０３】
工程５：４−ヒドロキシ−７−（３−ｄ−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物４２）の合成
氷冷下、２−（（（Ｎ−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−４−メチルフェニル）スルホンアミド）メチル）−４−（３−ｄ−フェノキシ）−安息香酸メチル（３．７０ｇ、７．６０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１６ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（４．１０ｇ、７６．００ｍｍｏｌ）のメタノール−ｄ（８ｍＬ）溶液を滴下した。滴下完了後、反応液を室温で１時間攪拌した。減圧下でメタノールを除去し、水（５０ｍＬ）で濃縮液を希釈し、１Ｎ希塩酸でｐＨを約１０に調整した。酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、有機層を水（５０ｍＬ）および飽和食塩水（５０ｍＬ）でそれぞれ洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧濃縮し、濃縮液をカラムで分離して白色固体１．１０ｇを得た。二つ工程の収率は５９．９％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝２９７．１（Ｍ＋１）。
【０１０４】
工程６：１−（（ジメチルアミノ）メチル）−４−ヒドロキシ−７−（３−ｄ−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物４３）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−７−（フェニル−３−ｄ−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（１．１０ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）の酢酸（２ｍＬ）溶液に、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルジアミノメタン（４６０ｍｇ、４．５０ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、反応を５５℃に昇温して６時間撹拌し反応させた。室温に冷却し、そのまま次の工程に用いた。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５４．２（Ｍ＋１）。
【０１０５】
工程７：１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−（フェニル−３−ｄ−オキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物４４）の合成
室温で、反応系の温度を５０℃以下に保ちながら上記の反応に無水酢酸（１．１０ｇ、１０．４０ｍｍｏｌ）を徐々に滴下した。滴下完了後、反応液を１００℃に昇温し、一晩攪拌して反応させた。６０℃まで冷却し、水１０ｍＬを徐々に加え、室温に冷却し、固体を濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した。濾過ケーキを１０ｍＬのジクロロメタンおよび５ｍＬの水に溶解し、５分間撹拌し、有機相を分離した。氷浴下で有機相にモルホリン（３２２ｍｇ，３．７０ｍｍｏｌ）を添加し、２時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、アセトン（１ｍＬ）およびメタノール（１ｍＬ）の混合溶媒に加え、氷浴で固体を析出させ、その固体をろ過し、メタノール（冷、１ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して白色固体９２０ｍｇを得た。収率は６７．６％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３６８．１（Ｍ＋１）。
【０１０６】
工程８：４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（３−ｄ−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（化合物４５）の合成
１−（アセトキシメチル）−４−ヒドロキシ−７−（３−ｄ−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（９２０ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ）を無水酢酸エチル（１８ｍＬ）に溶解し、炭酸ナトリウム（１３２ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％、１４０ｍｇ）を加え、水素ガス雰囲気下で８０℃で反応液を一晩撹拌した。室温に冷却し、セライトで濾過し、濾液を減圧濃縮した。粗生成物をカラムで分離して白色固体５７０ｍｇを得た。収率は７３．５０％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３１１．１（Ｍ＋１）。
【０１０７】
工程９：Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（３−ｄ−フェノキシ）−３−イソキノリニル）カルボニル］グリシン（化合物４６）の合成
室温で、４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（３−ｄ−フェノキシ）−イソキノリニル−３−カルボン酸メチル（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびグリシン（１７０ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）の重水素化メタノール−ｄ（４．５ｍＬ）溶液に、ナトリウムメトキシド（３５１ｍｇ、６．５０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を封管に入れて１１０℃で一晩反応させた。反応液を室温に冷却し、固体を濾過し、メタノール（冷、３ｍＬ）で洗浄し、固体を乾燥させた。固体を２ｍＬの水に溶解し、酢酸エチル（３ｍＬ）で抽出した。水相は、酢酸でｐＨを酸性に調節し、大量の固体を析出するまで室温で懸濁液を撹拌し、濾過した。水（３×２ｍＬ）、アセトン（冷、２×１ｍＬ）で濾過ケーキを洗浄し、真空乾燥して白色固体１３７ｍｇを得た。収率は５９．６％であった。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５５．２（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３１（ｓ，１Ｈ），１２．８３（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５６−７．４４（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【０１０８】
実施例８  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（２，４，６−ｄ３−フェノキシ）−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシン（化合物４７）の調製
【０１０９】
【化１１】
2020019817.tif 000012
【０１１０】
グリシンの代わりに重水素化グリシンを用い、メタノールの代わりに重水素化メタノールを用いた以外は、実施例３と類似の合成方法により、最終生成物である化合物４７を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５８．４（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３４（ｓ，１Ｈ），９．０７（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【０１１１】
実施例９  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（ｄ５−フェノキシ）−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシン（化合物４８）の調製
【０１１２】
【化１２】
2020019817.tif 000013
【０１１３】
グリシンの代わりに重水素化グリシンを用い、メタノールの代わりに重水素化メタノールを用いた以外は、実施例４と類似の合成方法により、最終生成物である化合物４８を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３６０．１（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３３（ｓ，１Ｈ），１２．８８（ｓ，１Ｈ），９．０８（ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．２Ｈｚ，１Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【０１１４】
実施例１０  Ｎ−［（４−ヒドロキシ−１−メチル−７−（３−ｄ−フェノキシ）−３−イソキノリニル）カルボニル］−２，２−ｄ２−グリシン（化合物４９）の調製
【０１１５】
【化１３】
2020019817.tif 000014
【０１１６】
グリシンの代わりに重水素化グリシンを用い、メタノールの代わりに重水素化メタノールを用いた以外は、実施例７と類似の合成方法により、最終生成物である化合物４９を得た。ＬＣ−ＭＳ（ＡＰＣＩ）：ｍ／ｚ＝３５５．２（Ｍ＋１）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）（δ／ｐｐｍ）  １３．３１（ｓ，１Ｈ），１２．８３（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），７．５６−７．４４（ｍ，２Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ）。
【０１１７】
生物活性試験
代謝安定性評価
ミクロソーム実験：ヒト肝臓ミクロソーム：０．５ｍｇ／ｍＬ，Ｘｅｎｏｔｅｃｈ；ラット肝臓ミクロソーム：０．５ｍｇ／ｍＬ，Ｘｅｎｏｔｅｃｈ；補酵素（ＮＡＤＰＨ／ＮＡＤＨ）：１ｍＭ，Ｓｉｇｍａ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ；塩化マグネシウム：５ｍＭ、１００ｍＭのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）。
ストック溶液の調製：一定量の実施例１−７の化合物の粉末を正確に秤量し、それぞれＤＭＳＯで５ｍＭに溶解した。リン酸塩緩衝液（１００ｍＭ，ｐＨ７．４）の調製：予め用意した０．５Ｍのリン酸二水素カリウム１５０ｍＬと０．５Ｍのリン酸水素二カリウム溶液７００ｍＬとを混合し、更に０．５Ｍのリン酸水素二カリウム溶液で混合液のｐＨを７．４に調整し、使用前に超純水で５倍に希釈し、塩化マグネシウムを加えて、リン酸カリウム１００ｍＭ、塩化マグネシウム３．３ｍＭを含む、ｐＨが７．４であるリン酸塩緩衝液（１００ｍＭ）を得た。ＮＡＤＰＨ再生系溶液（６．５ｍＭのＮＡＤＰ、１６．５ｍＭのＧ−６−Ｐ、３Ｕ／ｍＬのＧ−６−ＰＤ、３．３ｍＭの塩化マグネシウムを含む）を調製し、使用前に湿った氷上に置いた。停止液の調製：５０ｎｇ／ｍＬの塩酸プロプラノロールと２００ｎｇ／ｍＬのトルブタミド（内部標準）を含むアセトニトリル溶液。２５０５７．５μＬのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）を５０ｍＬ遠心管に入れ、ヒト肝臓ミクロソーム８１２．５μＬをそれぞれ添加し、均一に混合して、タンパク質濃度が０．６２５ｍｇ／ｍＬである肝臓ミクロソーム希釈液を得た。２５０５７．５μＬのリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）を５０ｍＬ遠心管に入れ、ＳＤラット肝臓ミクロソーム８１２．５μＬをそれぞれ添加し、均一に混合して、タンパク質濃度が０．６２５ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソーム希釈液を得た。
【０１１８】
サンプルのインキュベーション：対応する化合物のストック溶液を、７０％アセトニトリルを含む水溶液でそれぞれ０．２５ｍＭに希釈し、作業溶液として用意した。３９８μＬのヒト肝臓ミクロソーム或いはラット肝臓ミクロソームの希釈液を９６ウェルインキュベーションプレート（Ｎ＝２）にそれぞれ加え、０．２５ｍＭの作業溶液２μＬにそれぞれ添加して均一に混合した。
【０１１９】
代謝安定性アッセイ：予め冷却した停止液３００μＬを９６ウェルディープウェルプレートの各ウェルに添加し、氷上に置いて停止プレートとした。９６ウェルインキュベーションプレートおよびＮＡＤＰＨ再生系を３７℃の水浴に置いて、１００ｒｐｍで振とうし、５分間プレインキュベートした。インキュベーションプレートの各ウェルから８０μＬのインキュベーション溶液を取出し、停止プレートに加え、均一に混合し、ＮＡＤＰＨ再生系溶液２０μＬを補充して０分間サンプルとした。インキュベーションプレートの各ウェルに８０μＬのＮＡＤＰＨ再生系溶液を更に添加し、反応を開始し、時間を計り始めた。対応する化合物の反応濃度は１μＭで、タンパク濃度は０．５ｍｇ／ｍＬである。反応の１０分間、３０分間、９０分間に、それぞれ１００μＬの反応液を採取し、停止プレートに加え、３分間ボルテックス操作を行い、反応を停止させた。５０００×ｇ、４℃の条件下で停止プレートを１０分間遠心分離した。予め１００μＬの蒸留水を入れた９６ウェルプレートに、１００μＬの上清を加え、均一に混合し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いてサンプルを分析した。
【０１２０】
データ分析：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムによって対応する化合物および内部標準のピーク面積を検出し、化合物と内部標準のピーク面積の比を算出した。時間に対する化合物残存量の百分率の自然対数をプロットすることによって、傾きを測定して、以下の式に従ってｔ１／２及びＣＬｉｎｔを計算した。ここで、Ｖ／Ｍは１／タンパク濃度に等しい。
【０１２１】
【数１】
2020019817.tif 000015
【０１２２】
実験結果を以下の表１に示す。ＦＧ４５９２（ＦＧ−４５９２は、米国の生物医薬品会社であるＦｉｂｒｏＧｅｎによって開発された後期臨床段階の経口化合物であり、慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）および末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）に関連する貧血に使用できる。）と比較して、本発明の化合物は、ヒト肝臓ミクロソームおよびラット肝臓ミクロソームの両方の実験において優れた代謝安定性を示す。
【０１２３】
【表１】
2020019817.tif 000016
【０１２４】
ラットの薬物動態実験
６匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（オス、７−８週齢、体重約２１０ｇ）を２グループに分け、各グループ３匹ずつ、経静脈または経口で単回投与量の化合物（経静脈３ｍｇ／ｋｇ、経口１０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、その薬物動態学の差異を比較した。
標準飼料でラットを飼育し、水を与えた。試験の１６時間前から絶食させた。薬剤をＰＥＧ４００およびジメチルスルホキシドで溶解した。投与した後の０．０８３時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間および２４時間の時点で眼窩採血を行った。
ラットにエーテルを吸入させて一時麻酔を行い、眼窩から３００μＬの血液サンプルを採取して試験管に入れた。試験管中には１％のヘパリン塩溶液３０μＬがある。使用前に、試験管を６０℃で一晩乾燥させた。最後の時点の血液サンプルの採取が完了した後、エーテルで麻酔した後にラットを殺処分した。
【０１２５】
血液サンプルを採取した直後に、穏やかに試験管を５回転倒させ、十分に混合し、氷上に置いた。血液サンプルを４℃、５０００ｒｐｍで５分間遠心分離して、赤血球と血漿を分離した。１００μＬの血漿をピペットで清潔なプラスチック遠心管に入れ、化合物の名称と時点を示した。分析まで血漿を−８０℃で保存した。血漿中の本発明の化合物濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定した。薬物動態パラメータは、異なる時点における各動物の血中濃度に基づいて計算した。
【０１２６】
実験結果を以下の表２に示す。対照化合物ＦＧ−４５９２と比較して、本発明の化合物１１、化合物３２、化合物４９の経口利用率が大幅に改善され、より優れた動物の体内の薬物動態を有し、より優れた薬力学および治療効果を有することが示された。
【０１２７】
【表２】
2020019817.tif 000017
【０１２８】
これらの実施例は本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではないことを理解すべきである。実施例における具体的な条件を記載しない実験方法は、通常、慣用の条件または製造業者の推奨条件に従う。特に説明のない限り、部および百分率は重量部および重量百分率である。
【０１２９】
上記の内容は、特定の好ましい実施形態を参照して本発明に対するさらなる詳細な説明であるが、本発明の実施形態がこれらの記載に限定されない。当業者にとって明らかであるように、本発明の精神から逸脱することなく様々な変更や修正を加えることができることは、すべてが本発明の保護範囲内にあるとみなされるべきである。
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月12日(2019.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）で表される化合物、その結晶形、その薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物。
【化１】
2020019817.tif 000020
式（Ｉ）中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は、それぞれ独立して、水素、重水素又はハロゲンであり；
Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つが重水素である。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２は、重水素である、請求項１に記載の化合物、その結晶形、その薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物。
【請求項３】
前記式（Ｉ）で表される化合物が、１〜１３個の重水素を含む、請求項１または２に記載の化合物、その結晶形、その薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物。
【請求項４】
前記の化合物は、以下の化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、その結晶形、その薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物。
【化２】
2020019817.tif 000021
【請求項５】
薬学的に許容される担体と、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、その結晶形、その薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物を含む、医薬組成物。
【請求項６】
慢性疾患貧血、グルコース耐性不良および／または腎臓病に関連する貧血、および癌性貧血または血球に関連する疾患を予防および治療する薬物の調製に用いることへの、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、その結晶形、その薬学的に許容される塩、水和物又は溶媒和物の使用。