(57)【要約】【課題】  優れた対酸化ストレス保護効果を奏することができ、優れた対酸化ストレス保護効果を奏する組成物を提供する。【解決手段】  対酸化ストレス保護組成物は、カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を有効成分とする。また、対酸化ストレス保護組成物の製造方法は、水相調製工程と、油相調製工程と、乳化組成物調製工程とを有し、所望により、ソフトカプセル封入工程を有する。さらに、対酸化ストレス保護組成物含有飲料の製造方法は、水相調製工程と、油相調製工程と、乳化組成物調製工程と、混合工程を有する。【選択図】  図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を有効成分とする、対酸化ストレス保護組成物。
【請求項２】
乳化剤として、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤を含有する、請求項１に記載の対酸化ストレス保護組成物；
（ａ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のショ糖脂肪酸エステルならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル、
（ｂ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１種以上のショ糖脂肪酸エステル、
（ｃ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル。
【請求項３】
乳化剤として、下記の（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）および（ｘ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤を含有する、請求項１に記載の対酸化ストレス保護組成物；
（ｄ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｅ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｆ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｇ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびテトラグリセリンモノオレイン酸エステル、
（ｈ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（ｉ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｊ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｋ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｌ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（ｍ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｎ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｏ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｐ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｑ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｒ）ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｓ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｔ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｕ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｖ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｗ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｘ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル。
【請求項４】
カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてデカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物を有効成分とする、対酸化ストレス保護組成物。
【請求項５】
カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてショ糖パルミチン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物を有効成分とする、対酸化ストレス保護組成物。
【請求項６】
アスタキサンチンがヘマトコッカス藻抽出物由来である、請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【請求項７】
器官および／または体液成分における対酸化ストレス保護組成物である、請求項１から請求項６のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【請求項８】
体液成分が血液成分である、請求項７に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【請求項９】
器官および／または血液成分が、膵臓、肝臓、骨格筋、血漿および血球からなる群より選択される１または２種以上である、請求項８に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【請求項１０】
飲食品組成物または医薬組成物である、請求項１から請求項９のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【請求項１１】
請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物を含有する飲料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対酸化ストレス保護組成物に関し、詳細には、カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を有効成分とする、対酸化ストレス保護組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化や循環器系疾患、炎症、代謝性疾患、消化器疾患、癌などの発症などに、酸化ストレスが直接的または間接的に広く関わっているとの報告がされている。酸化ストレスとは、分子状の酸素におけるエネルギー状態の変化により発生することが知られている過酸化水素やヒドロキシラジカルといった様々な活性酸素種（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｅｓ：ＲＯＳ）がもたらす、生体にとって有害な作用と、生体システムによる活性酸素種の解毒作用、活性酸素種によりもたらされた障害を修復する生体作用との間で均衡が崩れ、生体内において酸化力（ｐｒｏ−ｏｘｉｄａｎｔ）が抗酸化力（ａｎｔｉ−ｏｘｉｄａｎｔ）を上回った結果引き起こされる、生体にとって有害な作用のことをいい（非特許文献１）、例えばメラトニンを有効成分とする酸化ストレス抑制剤が提案されている（非特許文献２）。
【０００３】
一方、健康食品や医薬品、医薬部外品の分野で扱われる難溶性の生理活性成分の多くは、体内吸収性の面で課題を抱えている。近年、高機能性が着目されているカロテノイドもそのような体内吸収性の面で課題を抱える難溶性の生理活性成分であり、その体内吸収性を高めるために、通常は乳化組成物の形態で取り扱われている。乳化組成物には、油分に水と乳化剤とを加えた乳化型と、油分に乳化剤を添加した自己乳化型や予備乳化型があり、一般に、乳化型は素早く水に溶解するという性質を有していることから、飲料や化粧品などに利用されており、自己乳化型や予備乳化型は、水やグリセリン配合量に制限のあるソフトカプセル製剤（軟カプセル製剤）に利用されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｉｅｓ  Ｈ．，Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ：ｆｒｏｍ ｂａｓｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｏ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ ９１（３Ｃ）：３１Ｓ−３８Ｓ，１９９１
【０００５】
【非特許文献２】Ａｓｇａｒｉ  Ｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｍｅｌａｔｏｎｉｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｄ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｅｍｂｒｙｏｓ．Ｃｅｌｌ  Ｊ．１４，２０３−２０８，２０１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を有効成分とする対酸化ストレス保護組成物することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、鋭意研究の結果、カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物が、酸化ストレスに対する保護作用を奏することを見出し、下記の各発明を完成した。
【０００８】
（１）カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を有効成分とする、対酸化ストレス保護組成物。
【０００９】
（２）乳化剤として、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤を含有する、請求項１に記載の対酸化ストレス保護組成物；
（ａ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のショ糖脂肪酸エステルならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル、
（ｂ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１種以上のショ糖脂肪酸エステル、
（ｃ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル。
【００１０】
（３）乳化剤として、下記の（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）および（ｘ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤を含有する、（１）に記載の対酸化ストレス保護組成物；
（ｄ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｅ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｆ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｇ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびテトラグリセリンモノオレイン酸エステル、
（ｈ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（ｉ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｊ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｋ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｌ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（ｍ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｎ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｏ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｐ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｑ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｒ）ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｓ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｔ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｕ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｖ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｗ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｘ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル。
【００１１】
（４）カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてデカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物を有効成分とする、対酸化ストレス保護組成物。
【００１２】
（５）カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてショ糖パルミチン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物を有効成分とする、対酸化ストレス保護組成物。
【００１３】
（６）アスタキサンチンがヘマトコッカス藻抽出物由来である、（１）から（５）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【００１４】
（７）器官および／または体液成分における対酸化ストレス保護組成物である、（１）から（６）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【００１５】
（８）体液成分が血液成分である、（７）に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【００１６】
（９）器官および／または血液成分が、膵臓、肝臓、骨格筋、血漿および血球からなる群より選択される１または２種以上である、（８）に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【００１７】
（１０）飲食品組成物または医薬組成物である、（１）から（９）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物。
【００１８】
（１１）（１）から（１０）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物を含有する飲料。
【００１９】
（１２）（１）から（１０）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物を含有するソフトカプセル製剤。
【００２０】
（１３）カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物の、対酸化ストレス保護のための使用。
【００２１】
（１４）乳化剤として、下記の（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤を含有する、（１３）に記載の対酸化ストレス保護のための使用；
（Ａ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のショ糖脂肪酸エステルならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル、
（Ｂ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１種以上のショ糖脂肪酸エステル、
（Ｃ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル。
【００２２】
（１５）乳化剤として、下記の（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）、（Ｉ）、（Ｊ）、（Ｋ）、（Ｌ）、（Ｍ）、（Ｎ）、（Ｏ）、（Ｐ）、（Ｑ）、（Ｒ）、（Ｓ）、（Ｔ）、（Ｕ）、（Ｖ）、（Ｗ）および（Ｘ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤を含有する、（１２）に記載の対酸化ストレス保護のための使用；
（Ｄ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（Ｅ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（Ｆ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（Ｇ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびテトラグリセリンモノオレイン酸エステル、
（Ｈ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（Ｉ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（Ｊ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（Ｋ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（Ｌ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（Ｍ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（Ｎ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（Ｏ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（Ｐ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（Ｑ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（Ｒ）ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（Ｓ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（Ｔ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（Ｕ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（Ｖ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（Ｗ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（Ｘ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル。
【００２３】
（１６）カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてデカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物の、対酸化ストレス保護のための使用。
【００２４】
（１７）カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてショ糖パルミチン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物の、対酸化ストレス保護のための使用。
【００２５】
（１８）飲食品用途または医薬用途における、（１３）から（１７）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護のための使用。
【００２６】
（１９）飲料用途における、（１３）から（１８）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護のための使用。
【００２７】
（２０）カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を含有するソフトカプセル製剤の、対酸化ストレス保護のための使用。
【００２８】
（２１）水にショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のショ糖脂肪酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００２９】
（２２）水にショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１種以上のショ糖脂肪酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびに油脂を混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００３０】
（２３）水に、必要に応じて水溶性物質を混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
水または前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００３１】
（２４）水にショ糖ステアリン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００３２】
（２５）水にショ糖パルミチン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００３３】
（２６）水にショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のショ糖脂肪酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を水と混合する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物含有飲料の製造方法。
【００３４】
（２７）水にショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される２種以上のショ糖脂肪酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびに油脂を混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を水と混合する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物含有飲料の製造方法。
【００３５】
（２８）水に、必要に応じて水溶性物質を混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
水または前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を水と混合する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物含有飲料の製造方法。
【００３６】
（２９）水にショ糖ステアリン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を水と混合する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物含有飲料の製造方法。
【００３７】
（３０）水にショ糖パルミチン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を水と混合する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物含有飲料の製造方法。
【００３８】
（３１）水にショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のショ糖脂肪酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を含む内容物をソフトカプセル皮膜に封入する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００３９】
（３２）水にショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１種以上のショ糖脂肪酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびに油脂を混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を含む内容物をソフトカプセル皮膜に封入する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００４０】
（３３）水に、必要に応じて水溶性物質を混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
水または前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を含む内容物をソフトカプセル皮膜に封入する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００４１】
（３４）水にショ糖ステアリン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を含む内容物をソフトカプセル皮膜に封入する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００４２】
（３５）水にショ糖パルミチン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程と、
アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程と、そしてその後、
前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程と、そしてその後、
前記乳化組成物を含む内容物をソフトカプセル皮膜に封入する工程と
を有する、対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【００４３】
（３６）前記水相を調製する工程、前記油相を調製する工程、前記水相および前記油相を混合する工程、ならびに前記水相および前記油相を混合する工程の少なくともいずれかの工程においてアルコールを添加・混合する工程を有する、（２１）から（３５）のいずれか一項に記載の対酸化ストレス保護組成物の製造方法。
【発明の効果】
【００４４】
本発明に係る対酸化ストレス保護組成物によれば、優れた対酸化ストレス保護効果を奏することができ、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物の製造方法によれば、優れた対酸化ストレス保護効果を奏する組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスにおける各器官および各血液成分に蓄積したアスタキサンチン濃度を示す図である。図中、Ａ、ＢおよびＣは、それぞれＡ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスを示す。
【図２】Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスにおける各器官および各血液成分に蓄積したアスタキサンチン濃度を示す表である。表中、Ａ、ＢおよびＣは、それぞれＡ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスを示す。
【図３】Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスの膵臓における対酸化ストレス保護率を示す図である。図中、Ａ、ＢおよびＣは、それぞれＡ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスを示す。
【図４】Ｎ群、Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスの膵臓におけるＭＤＡ濃度および対酸化ストレス保護率を示す表である。表中、Ｎ、Ａ、ＢおよびＣは、それぞれＮ群、Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
以下、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物およびその製造方法について詳細に説明する。本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を有効成分とする。
【００４７】
酸化ストレスとは、上述の通り、分子状の酸素におけるエネルギー状態の変化により発生することが知られている過酸化水素やヒドロキシラジカルといった様々な活性酸素種（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｏｘｙｇｅｎ  Ｓｐｅｃｉｅｓ：ＲＯＳ）がもたらす、生体にとって有害な作用と、生体システムによる活性酸素種の解毒作用、活性酸素種によりもたらされた障害を修復する生体作用との間で均衡が崩れ、生体内において酸化力（ｐｒｏ−ｏｘｉｄａｎｔ）が抗酸化力（ａｎｔｉ−ｏｘｉｄａｎｔ）を上回った結果引き起こされる、生体にとって有害な作用のことをいう。老化や循環器系疾患、炎症、代謝性疾患、消化器疾患、癌などの発症などに、酸化ストレスが直接的または間接的に広く関わっているとの報告がされている。
【００４８】
酸化ストレスは、人工的にも引き起こすことができる。例えば、低分子鉄キレート化合物である鉄ニトリロ三酢酸を投与することにより、体内の器官や体液成分において酸化ストレスを引き起こすことができることが知られている。また、体内の器官や体液成分が酸化ストレスを受けているか否かやその度合いは、酸化ストレスマーカーの濃度や量を定量、測定することにより知ることができる。そのような酸化ストレスマーカーとしては、当業者によって、適宜選択可能な酸化ストレスマーカーを挙げることができるが、例えば、マロンジアルデヒド（Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ；ＭＤＡ）、４−ヒドロキシノネナール（４−Ｈｙｄｒｏｘｙｎｏｎｅｎａｌ：４−ＨＮＥ）、８−イソプロスタグランジンＦ２α（８−ｉｓｏ−Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｆ２α：８−ｉｓｏｐｒｏｓｔａｎｅ）、２−チオバルビツール酸反応性物質（２−ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ ａｃｉｄ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｓｕｂｓｔａｎ：ＴＢＡＲＳ）などの脂質過酸化系；８−ヒドロキシグアノシン（８−ｈｙｄｒｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ：８−ＯＨＧ）、８−ヒドロキシデオキシグアノシン（８−ｈｙｄｒｏｘｙｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ：８−ＯＨｄＧ）などのＤＮＡ／ＲＮＡ損傷系；タンパク質カルボニル（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｂｏｎｙｌ）、３−ニトロチロシン（３−Ｎｉｔｒｏｔｙｒｏｓｉｎｅ）、終末糖化産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＧＥｓ）、タンパク質過酸化物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＯＰＰ）などのタンパク質酸化／ニトロ化系；スーパーオキシドアニオンラジカル（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ａｎｉｏｎ Ｒａｄｉｃａｌ）、ヒドロキシルラジカル（Ｈｙｄｒｏｘｙｌ Ｒａｄｉｃａｌ）、過酸化水素（Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｐｅｒｏｘｉｄｅ）、一重項酸素（Ｓｉｎｇｌｅｔ Ｏｘｙｇｅｎ）などの活性酸素種（ＲＯＳ）系；カタラーゼ（Ｃａｔａｌａｓｅ）、グルタチオン（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）、スーパーオキシドジスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）などの抗酸化物質・抗酸化能系のものを挙げることができる。なお、本明細書において、酸化ストレスの程度を、脂質過酸化系の酸化ストレスマーカーであるマロンジアルデヒド（Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ；ＭＤＡ）の濃度により評価をしていることから、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、「脂質過酸化抑制組成物」と換言することができる。
【００４９】
次に、カロテノイドとは、テルペノイドの一種である一群の化合物群のことをいい、黄色ないし赤色の色素（カロテノイド色素）で、多数の共役二重結合を含む脂肪族または脂環式のポリエン類の総称である。
【００５０】
本発明に係る対酸化ストレス保護組成物が含有するカロテノイドは、少なくともアスタキサンチン（３，３’−ジヒドロキシ−β，β−カロテン−４，４’−ジオン）である。アスタキサンチンは、エビ、カニなどの甲殻類、サケ、タイなどの魚類、緑藻ヘマトコッカスなどの藻類、赤色酵母ファフィアなどの酵母類など、天然、特に海洋に広く分布する、食経験が豊かな赤色の色素である。アスタキサンチンは、ビタミンＥの約１，０００倍、β−カロテンの約４０倍もの強力な抗酸化作用を有することが知られており、酸化防止効果、抗炎症効果、皮膚老化防止効果、美白効果などの生体活性を有するとともに、黄色から赤色の範囲の顔料としても知られている。アスタキサンチンには、分子の両端に存在する環構造の３（３’）位の水酸基の立体配置により、３Ｓ，３’Ｓ体、３Ｓ，３’Ｒ体（メソ体）、３Ｒ，３’Ｒ体の三種の異性体が存在する。また、さらに分子中央の共役二重結合のシス、トランスの幾何異性体も存在する。例えば全トランス−、９−シス体と１３−シス体などがある。さらに、３（３’）位の水酸基は脂肪酸とエステル体を形成することができる。
【００５１】
また、アスタキサンチンは、突然変異原性が観察されず安全性が高い化合物であることが知られており、食品添加物として広く用いられている（高橋二郎ほか：ヘマトコッカス藻アスタキサンチンの毒性試験−Ａｍｅｓ試験、ラット単回投与毒性試験、ラット９０日反復経口投与毒性試験―臨床医薬，２０：８６７−８８１，２００４）。
【００５２】
本発明におけるアスタキサンチンには、アスタキサンチンの遊離体および／またはそのエステルなどの誘導体が含まれる。また、アスタキサンチンのエステルにはモノエステル体および／またはジエステル体が含まれる。例えば、ヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）から得られるアスタキサンチンは３Ｓ，３’Ｓ体で、脂肪酸が１個結合したモノエステル体が多く含まれていることが知られている（Ｒｅｎｓｔｒｏｍ，Ｂ．ｅｔ．ａｌ．，Ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  ｅｓｔｅｒｉｆｉｅｄ  ｃａｒｏｔｅｎｏｌｓ，Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂ，Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８１，６９，ｐ．６２５−６２７）。一方、オキアミから得られるアスタキサンチンは、脂肪酸が２個結合したジエステル体が多く含まれていることが知られている（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｋ．ｅｔ．ａｌ．，Ｔｈｅ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  ｐｉｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔａｒｃｔｉｃ  ｋｒｉｌｌ  Ｅｕｐｈａｕｓｉａ  ｓｕｐｅｒｂａ，Ｂｕｌｌ．Ｊａｐ．Ｓｏｓ．Ｓｃｉ．Ｆｉｓｈ．，１９８３，４９，ｐ．１４１１−１４１５）。
【００５３】
また、ファフィア・ロドジマ（Ｐｈａｆｆｉａ  Ｒｈｏｄｏｚｙｍａ）より得られるアスタキサンチンは、３Ｒ，３’Ｒ体（Ａｎｄｒｅｗｅｓ，Ａ．Ｇ．ｅｔ．ａｌ．，（３Ｒ，３’Ｒ）−Ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｙｅａｓｔ  Ｐｈａｆｆｉａ  ｒｈｏｄｏｚｙｍａ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．，１９７６，１５，ｐ．１００９−１０１１）であることが知られており、通常天然に見出される３Ｓ，３’Ｓ体と反対の構造を持っている。これは脂肪酸とエステルを形成していない非エステル体、すなわちフリー体として存在している（Ａｎｄｒｅｗｅｓ，Ａ．Ｇ．ｅｔ．ａｌ．，Ｃａｒｏｔｅｎｉｄｓ  ｏｆ  Ｐｈａｆｆｉａ  ｒｈｏｄｏｚｙｍａ，ａ  ｒｅｄ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｆｅｒｍｅｎｔｉｎｇ  ｙｅａｓｔ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．，１９７６，１５，ｐ．１００３−１００７）。
【００５４】
本発明において用いることのできるアスタキサンチンは、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、そのようなアスタキサンチンとしては、例えば、天然のアスタキサンチンの他、合成アスタキサンチンを挙げることができる。天然のアスタキサンチンとしては、例えば、ヘマトコッカスなどの藻類；ファフィアなどの酵母類；エビ、オキアミ、カニなどの甲殻類；イカ、タコなどの頭足類；種々の魚介類；アドニスなどの植物類；Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．Ｎ８１１０６、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ ｓｐ．ＳＤ２１２、Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＰＣ６などのバクテリア類；Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｓｐ．ＫＡＮＭＯＮＫＡＺ−１１２９などの放線菌；Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｙｍ ｓｐ．ＫＨ１０５などのラビリンチュラ類；アスタキサンチン産生遺伝子組み換え生物体；などから得られるアスタキサンチン含有抽出物そのもの、およびそのアスタキサンチン含有抽出物から適宜精製されたアスタキサンチンを挙げることができ、好ましくはヘマトコッカスなどの微細藻類から抽出される微細藻類抽出物由来のアスタキサンチン、より好ましくはヘマトコッカス藻から抽出されるヘマトコッカス藻抽出物由来のアスタキサンチンである。また、合成アスタキサンチンとしては、例えば、ＡｓｔａＳａｎａ（ＤＳＭ社）、Ｌｕｃａｎｔｉｎ Ｐｉｎｋ（登録商標）（ＢＡＳＦ社）などを挙げることができる。また、天然由来の他のカロテノイドを化学的に変換して得た合成アスタキサンチンとしては、例えば、ＡｓｔａＭａｒｉｎｅ（ＰＩＶＥＧ社）などを挙げることができる。
【００５５】
天然のアスタキサンチンが得られるヘマトコッカス藻としては、例えば、ヘマトコッカス・プルビアリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌｕｖｉａｌｉｓ）、ヘマトコッカス・ラキュストリス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｕｓｔｒｉｓ）、ヘマトコッカス・カペンシス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｐｅｎｓｉｓ）、ヘマトコッカス・ドロエバゲンシス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｅｒｏｅｂａｋｅｎｓｉｓ）、ヘマトコッカス・ジンバビエンシス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｉｍｂａｂｗｉｅｎｓｉｓ）などを挙げることができる。
【００５６】
これらヘマトコッカス緑藻類を培養する方法としては、異種微生物の混入・繁殖がなく、その他の夾雑物の混入が少ない密閉型の培養方法が好ましく、そのような培養方法としては、例えば、一部解放型のドーム形状、円錐形状又は円筒形状の培養装置と装置内で移動自在のガス吐出装置を有する培養基（国際公開第１９９９／０５０３８４号パンフレット）を用いて培養する方法の他、ヘマトコッカス藻類に乾燥ストレスを加えて藻類のシスト化を誘発し、そのシスト化した藻類の培養物からアスタキサンチンを採取する方法（特開平８−１０３２８８号公報）、密閉型の培養装置に光源を入れ内部から光を照射して培養する方法、平板状の培養槽やチューブ型の培養層を用いる方法を挙げることができる。
【００５７】
また、本発明において用いることのできるアスタキサンチンは、例えば、上述したヘマトコッカス藻を、必要に応じて、特開平５−０６８５８５号公報などに開示された方法に従い細胞壁を破砕して、アセトン、エーテル、クロロホルムおよびアルコール（エタノール、メタノールなど）などの有機溶剤や、超臨界状態の二酸化炭素などの抽出溶媒・溶剤を加えて抽出したアスタキサンチン含有抽出物、またはこのアスタキサンチン含有抽出物を必要に応じて適宜精製したものであってもよく、アスタキサンチン含有抽出物のアスタキサンチン含有量は、好ましくは３〜４０％（ｗ／ｗ）、より好ましくは３〜１２％（ｗ／ｗ）、さらに好ましくは５〜１０％（ｗ／ｗ）である。
【００５８】
また、本発明において用いることのできるアスタキサンチンとして、市販品を挙げることができる。そのような市販品としては、例えば、アスタリールオイル２００ＳＳ（ヘマトコッカス藻からの脂溶性抽出物であり、アスタキサンチンをフリー体換算で約２０％含有する）、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｌ１０、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｏｉｌ  ５０Ｆ、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｏｉｌ  ５０ＦＣ、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｏｉｌ  ５Ｆ、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｐ２ＡＦ、ＡｓｔａＴＲＯＬ−Ｘ、アスタリールオイル５０ＦＣ、アスタリールパウダー２０Ｆ、水溶性アスタリール液、アスタリールＷＳ液、アスタリール１０ＷＳ液、アスタリールＡＣＴ、アスタビータｅ、アスタビータスポーツ、アスタメイトなどのアスタリール、アスタビータおよびアスタメイトシリーズ（すべて登録商標；アスタリール社製、富士化学工業社製）；ＡＳＴＯＴＳ−Ｓ、ＡＳＴＯＴＳ−１０Ｏ、ＡＳＴＯＴＳ−ＥＣＳ、ＡＳＴＰＴＳ−２．０ＰＷ、ＡＳＴＯＴＳ−３．０ＭＢなどのＡＳＴＯＴＳシリーズ（ＡＳＴＯＴＳはすべて登録商標；富士フイルム社製）；ＢｉｏＡｓｔｉｎ（登録商標；サイアノテック  コーポレーション社）；Ａｓｔａｚｉｎｅ ＴＭ（ＢＧＧ Ｊａｐａｎ社製）；アスタキサンチンパウダー１．５％、アスタキサンチンパウダー２．５％、アスタキサンチンオイル５％、アスタキサンチンオイル１０％（バイオアクティブズジャパン社製）；アスタキサンチン（オリザ油化社）；サンアクティブＡＸ（登録商標；太陽化学社製）；ヘマトコッカスＷＳ３０（ヤエガキ発酵技研社製）；ＡｓｔａＭａｒｉｎｅ（ＰＩＶＥＧ社製）などを挙げることができる。
【００５９】
なお、アスタリール社製および富士化学工業社製のアスタリールオイル２００ＳＳ、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｏｉｌ  ５０ＦＣ、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｐ２ＡＦ、ＡｓｔａＴＲＯＬ−Ｘ、アスタリールオイル５０ＦＣおよびアスタリールパウダー２０Ｆは、それぞれ「ハラル認証」を受けており、アスタリール社製および富士化学工業社製のＡｓｔａＲｅａｌ  Ｏｉｌ  ５０ＦＣ、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｐ２ＡＦ、ＡｓｔａＴＲＯＬ−Ｘ、アスタリールオイル５０ＦＣおよびアスタリールパウダー２０Ｆは、それぞれ「コーシャ」認証を受けている。さらに、ＡｓｔａＲｅａｌ  Ｌ１０は、Ｎｏｎ−ＧＭＯ（非遺伝子組み換え認証）を受けている。
【００６０】
本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、アスタキサンチンを含有していれば、本発明の特徴を損なわない範囲において、アスタキサンチン以外のカロテノイドを含有してもよい。そのようなカロテノイドは、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、例えば、アスタキサンチンを除く炭化水素類（カロテン類）およびそれらの酸化アルコール誘導体類（キサントフィル類）などを挙げることができ、より具体的には、アクチニオエリスロール、ビキシン、カンタキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、β−８’−アポ−カロテナール（アポカロテナール）、β−１２’−アポ−カロテナール、α−カロテン、β−カロテン、カロテン（α−およびβ−カロテン類の混合物）、γ−カロテン、β−クリプトキサンチン、ルテイン、リコピン、ビオレリトリン、ゼアキサンチン、フコキサンチン、フィトエン、フィトフルエン、３，４，３’，４’−テトラデヒドロリコピン、トルレン、ジアポニューロスポレン、ジアポリコピン、ジアポリコピンジアール、スタフィロキサンチン、クロセチン、アドニルビン、アドニキサンチン、エキネノン、アステロイデノン、３−ヒドロキシエキネノンなどを挙げることができ、本発明においては、それらのうちヒドロキシル基またはカルボキシル基を含有するもののエステル類（脂肪酸エステル類）および配糖体もカロテノイドに含まれる。また、天然由来のものに限定されず、常法に従って得られるものであれば合成物も、本発明におけるカロテノイドに含まれる。
【００６１】
これらのカロテノイドのうち、ルテイン、ゼアキサンチン、リコピン、β−カロテン、γ−カロテン、フィトフルエン、フィトエン、カンタキサンチン、β−クリプトキサンチン、カプサンチン、フコキサンチンおよびそれらの脂肪酸エステルからなる群より選択される１種以上が好ましい。
【００６２】
次に、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、下記の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤（ポリグリセリン脂肪酸エステルおよび／またはショ糖脂肪酸エステル）を含有する；
（ａ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のショ糖脂肪酸エステルならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１または２種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル、
（ｂ）ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステルからなる群より選択される１種以上のショ糖脂肪酸エステル、
（ｃ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステル。
【００６３】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、下記の（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｖ）、（ｗ）および（ｘ）の少なくともいずれかの組み合わせの乳化剤（ポリグリセリン脂肪酸エステルおよび／またはショ糖脂肪酸エステル）を含有する；
（ｄ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｅ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｆ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｇ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびテトラグリセリンモノオレイン酸エステル、
（ｈ）デカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（ｉ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｊ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｋ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｌ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル、
（ｍ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ステアリン酸エステル、
（ｎ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｏ）デカグリセリンデカオレイン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｐ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｑ）ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｒ）ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｓ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｔ）デカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｕ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｖ）テトラグリセリンモノオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル、
（ｗ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖パルミチン酸エステル、
（ｘ）デカグリセリンデカオレイン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル。
【００６４】
なお、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、本発明の特徴を損なわない範囲において、デカグリセリンモノラウリン酸エステル、テトラグリセリンモノオレイン酸エステルおよびデカグリセリンデカオレイン酸エステル以外のポリグリセリン脂肪酸エステルを乳化剤として含んでもよい。そのようなポリグリセリン脂肪酸エステルは、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、例えば、平均重合度が２以上のポリグリセリンと、例えば、クエン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、ペンタステアリン酸、モノイソステアリン酸、ジイソステアリン酸、ペンタイソステアリン酸およびペンタオレイン酸とのエステルなどであり、より具体的には、モノオレイン酸ヘキサグリセリン、モノステアリン酸ヘキサグリセリン、モノパルミチン酸ヘキサグリセリン、モノミリスチン酸ヘキサグリセリン、モノラウリン酸ヘキサグリセリン、モノオレイン酸デカグリセリン、モノステアリン酸デカグリセリン、モノパルミチン酸デカグリセリン、モノミリスチン酸デカグリセリン、モノラウリン酸デカグリセリン、クエン酸ステアリン酸グリセリン、ジステアリン酸デカグリセリン、モノミリスチン酸デカグリセリン、テトラグリセリンモノステアリン酸エステル、テトラグリセリントリステアリン酸エステル、ヘキサグリセリンモノオレイン酸エステル、ヘキサグリセリンモノラウリン酸エステル、ヘキサグリセリンモノミリスチン酸エステル、ヘキサグリセリンモノステアリン酸エステル、ヘキサグリセリントリステアリン酸エステル、ヘキサグリセリンモノパルミチン酸エステル、デカグリセリンモノミリスチン酸エステル、デカグリセリンモノステアリン酸エステル、デカグリセリンモノラウリン酸エステル、デカグリセリンモノパルミチン酸エステル、デカグリセリンジステアリン酸エステル、デカグリセリントリオレイン酸エステル、デカグリセリントリステアリン酸エステル、デカグリセリンペンタステアリン酸エステル、デカグリセリンモノイソステアリン酸エステル、デカグリセリンジイソステアリン酸エステル、デカグリセリンペンタイソステアリン酸エステル、デカグリセリンペンタオレイン酸エステルなどを挙げることができ、これらポリグリセリン脂肪酸エステルからなる群より選択される１種以上のポリグリセリン脂肪酸エステルを挙げることができる。
【００６５】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、本発明の特徴を損なわない範囲において、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステルおよびショ糖ラウリン酸エステル以外のショ糖脂肪酸エステルを乳化剤として含んでもよい。そのようなショ糖脂肪酸エステルは、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、親水性が高くて水分散性に優れたものが好ましく、例えば、ショ糖の水酸基の１つ以上に炭素数が６〜２２の脂肪酸がエステル結合したものを挙げることができ、より具体的には、ショ糖ミリスチン酸エステル、ショ糖オレイン酸エステル、ショ糖エルカ酸エステルなどを挙げることができ、これらショ糖脂肪酸エステルからなる群より選択される１種以上のショ糖脂肪酸エステルを挙げることができる。
【００６６】
さらに、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、上述したポリグリセリン脂肪酸エステルおよび／またはショ糖脂肪酸エステル以外の乳化剤を含んでもよい。そのような乳化剤は、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、例えば、従来から飲食品などに用いられる各種の乳化剤を挙げることができ、具体的には、脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸ジグリセリド、脂肪酸トリグリセリド、プロピレングリコール脂肪酸エステル、レシチン、化工でん粉、ソルビタン脂肪酸エステル、コハク酸脂肪酸エステル、キラヤ抽出物、アラビアガム、トラガントガム、グアーガム、カラヤガム、キサンタンガム、ペクチン、アルギン酸およびその塩類、カラギーナン、ゼラチン、カゼイン、サポニン、ステロールなどを挙げることができ、これら乳化剤からなる群より選択される１種以上の乳化剤を挙げることができる。
【００６７】
また、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてデカグリセリンモノラウリン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物を有効成分としてもよい。
【００６８】
また、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、カロテノイドおよび乳化剤を含有し、カロテノイドがアスタキサンチンであり、かつ、乳化剤としてショ糖パルミチン酸エステルおよびレシチンを含有する乳化組成物を有効成分としてもよい。
【００６９】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、アルコールを含んでもよい。そのようなアルコールは、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、例えば、低級アルコールや高級アルコール、多価アルコールを挙げることができ、より具体的には、一価アルコールとして、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、イソブチルアルコール、ｔ−ブチルアルコールなど；二価のアルコールとして、エチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、テトラメチレングリコール、２，３−ブチレングリコール、ペンタメチレングリコール、２−ブテン−１，４−ジオール、ヘキシレングリコール、オクチレングリコールなど；三価のアルコールとして、グリセリン、トリメチロールプロパンなど；四価のアルコールとして、１，２，６−ヘキサントリオールなどのペンタエリスリトールなど；五価のアルコールとして、キシリトールなど；六価のアルコールとして、ソルビトール、マンニトールなど；多価アルコール重合体として、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、ジグリセリン、ポリエチレングリコール、トリグリセリン、テトラグリセリン、ポリグリセリンなど；高級アルコールとして、バチルアルコール、セタノール、パルミトレイルアルコール、ヘプタデカノール、１−ヘプタデカノール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、エライジルアルコール、オレイルアルコール、リノレイルアルコール、エライドリノレイルアルコール、リノレニルアルコール、エライドリノレニルアルコール、リシノレイルアルコール、ノナデシルアルコール、アラキジルアルコール、ヘンエイコサノール、ベヘニルアルコール、エルシルアルコールなど；二価のアルコールアルキルエーテル類として、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、エチレングリコールモノフェニルエーテル、エチレングリコールモノヘキシルエーテル、エチレングリコールモノ２−メチルヘキシルエーテル、エチレングリコールイソアミルエーテル、エチレングリコールベンジルエーテル、エチレングリコールイソプロピルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエチルエーテル、トリエチレングリコールモノメチルエーテル、トリエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノブチルエーテル、プロピレングリコールイソプロピルエーテル、ジプロピレングリコールメチルエーテル、ジプロピレングリコールエチルエーテル、ジプロピレングリコールブチルエーテルなど；二価アルコールエーテルエステルとして、エチレングリコールモノメチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、エチレングリコールモノフェニルエーテルアセテート、エチレングリコールジアジベート、エチレングリコールジサクシネート、ジエチレングリコールモノエチルエーテルアセテート、ジエチレングリコールモノブチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノエチルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノプロピルエーテルアセテート、プロピレングリコールモノフェニルエーテルアセテートなど；グリセリンモノアルキルエーテル；糖アルコールとして、ソルビトール、マルチトール、マルトトリオース、マンニトール、ショ糖、エリトリトール、グルコース、フルクトース、デンプン分解糖、マルトース、キシリトース、デンプン分解糖還元アルコールなど；グリソリッド；テトラハイドロフルフリルアルコールなど、その他アルコールとして、ＰＯＥ−テトラハイドロフルフリルアルコール、ＰＯＰ−ブチルエーテル、ＰＯＰ・ＰＯＥ−ブチルエーテル、トリポリオキシプロピレングリセリンエーテル、ＰＯＰ−グリセリンエーテル、ＰＯＰ−グリセリンエーテルリン酸、ＰＯＰ・ＰＯＥ−ペンタンエリスリトールエーテルなどを挙げることができ、これらアルコールからなる群より選択される１以上のアルコールを含めることができるが、乳化剤の均一性を高めるものが好ましく、具体的には、メタノール、エタノールなどの一価アルコール、プロピレングリコールなどの二価アルコール、キシリトール、ソルビトール、ラクチトール、エリスリトールなどの糖アルコールがより好ましい。
【００７０】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、ミネラル類を含んでもよい。そのようなミネラル類は、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、例えば、有機酸塩や無機酸塩、化学合成品などに代表される食品添加物としての他、各種食品からの抽出エキスや酵母など、食品素材から由来して配合されたミネラル類を挙げることができ、より具体的には、カルシウム、リン、銅、亜鉛、マンガン、クロム、モリブデン、セレン、鉄、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、ヨウ素、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸カリウムなどを挙げることができ、これらミネラル類からなる群より選択される１以上のミネラル類を含めることができるが、亜鉛酵母や同酵母などの酵母由来のミネラル類が好ましい。
【００７１】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、ビタミン類を含んでもよい。そのようなビタミン類は、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、各種脂溶性ビタミン水溶性ビタミンを挙げることができ、具体的には、レチノール、レチナール、レチノイン酸などのビタミンＡ類およびその誘導体；エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロールなどのビタミンＤ類；トコフェロール、トコトリエノールなどのビタミンＥ類；フィロキノン、メナキノンなどのビタミンＫ類；チアミン塩酸塩などのビタミンＢ１類；リボフラビン、フラビンアデニンジヌクレオチドなどのビタミンＢ２類；ニコチン酸、ニコチン酸アミドなどのナイアシン類；パントテン酸、パントテン酸カルシウム、パントテニルアルコール（パンテノール）などのパントテン酸類；ピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミンなどのビタミンＢ６類；ビオチン、ビオシチンなどのビオチン類；葉酸などの葉酸類；シアノコバラミンなどのビタミンＢ１２類；アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、テトラ２−ヘキシルデカン酸アスコルビルなどのビタミンＣ類（アスコルビン酸およびその誘導体）；その他、カルニチン、フェルラ酸、オロット酸、γ−オリザノールなどのビタミン様作用因子；などを挙げることができ、これらビタミン類からなる群より選択される１以上のビタミン類を含めることができるが、ビタミンＣ類やビタミンＥ類が好ましい。
【００７２】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、脂溶性成分として油脂を含んでもよい。そのような油脂は、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、常温で液体の油脂、固体の油脂、またはそれらの混合物を挙げることができる。液体の油脂としては、例えばオリーブ油、ツバキ油、マカデミアナッツ油、ヒマシ油、アボガド油、月見草油、タートル油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリオクタン酸グリセリン、トリイソパルチミン酸グリセリン、サラダ油、サフラワー油（ベニバナ油）、パーム油、ココナッツ油、ピーナッツ油、アーモンド油、ヘーゼルナッツ油、ウォルナッツ油、グレープシード油などを挙げることができ、固体の油脂としては、牛脂、硬化牛脂、牛脚脂、牛骨脂、ミンク油、卵黄油、豚脂、馬脂、羊脂、硬化油、カカオ脂、ヤシ油、硬化ヤシ油、パーム油、パーム硬化油、モクロウ、モクロウ核油、硬化ヒマシ油などを挙げることができ、これら油脂からなる群より選択される１以上の油脂を含めることができる。
【００７３】
さらに、油脂としては、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）が好ましく用いられる。中鎖脂肪酸グリセリドとは、炭素数６から１２までの飽和脂肪酸、具体的にはカプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸のいずれかがグリセロールとエステル結合してなる脂質をあらわす。グリセロールとエステル結合するこれらの脂肪酸は１〜３個のいずれでもよく、これらの混合物であってもよい。すなわちモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドのいずれでもよく、これらの混合物であってもよい。不飽和脂肪酸の多いもの（オリーブ油やサフラワー油など）は室温で液体だが、飽和脂肪酸の多いもの（ココナッツ油やパーム油など）は固体となる。中鎖脂肪酸グリセリドは、例えば、前記パーム油やココナッツ油などに含まれることから、これらも好適に用いられる。アスタキサンチンを１８重量％以上のヘマトコッカス藻抽出物を用いる場合、上述の油脂を配合することによって、安定なミセルを形成させることができる。
【００７４】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、ラジカル捕捉剤を含んでもよい。ラジカル捕捉剤は、ラジカルの発生を抑えるとともに、生成したラジカルをできる限り速やかに捕捉し、連鎖反応を断つ役割を担う添加剤である（出典：「油化学便覧  第４版」、日本油化学会編  ２００１）。ラジカル捕捉剤としての機能を確認する直接的な方法としては、試薬と混合して、ラジカルを捕捉する様子を分光光度計やＥＳＲ（電子スピン共鳴装置）によって測定する方法が知られている。
【００７５】
ラジカル捕捉剤として使用できる化合物は、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、「抗酸化剤の理論と実際（梶本著、三書房  １９８４）」や、「酸化防止剤ハンドブック（猿渡他著、大成社  １９７６）」に記載の各種酸化防止剤のうち、ラジカル捕捉剤として機能するものであればよく、具体的には、フェノール性水酸基を有する化合物；ジフェニル−ｐ−フェニレンジアミンや４−アミノ−ｐ−ジフェニルアミンといったフェニレンジアミンなどのアミン系化合物；アスコルビン酸；エリソルビン酸の油溶化誘導体；などを挙げることができ、フェノール性水酸基を有する化合物として、グアヤク脂；ノルジヒドログアヤレチック酸（ＮＤＧＡ）；没食子酸プロピル、没食子酸ブチル、没食子酸オクチルなどの没食子酸エステル類；ＢＨＴ（ブチルヒドロキシトルエン）；ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソール）；ミックストコフェロールなどのトコフェロール類；ビスフェノール類などを挙げることができ、これらラジカル捕捉剤として使用できる化合物からなる群より選択される１以上の化合物を含めることができるが、トコフェロール類が好ましい。
【００７６】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、ポリオールを含んでもよい。そのようなポリオールは、本発明の特徴を損なわない範囲で選択可能であり、特に限定されないが、粘度調整機能のほか、水と油脂成分との界面張力を低下させ、界面を広がりやすくして安定な乳化組成物を形成しやすくするポリオールを挙げることができ、より具体的には、グリセリン、ジグリセリン、トリグリセリン、ポリグリセリン、３−メチル−１，３−ブタンジオール、１，３−ブチレングリコール、イソプレングリコール、ポリエチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、１，２−ヘキサンジオール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ペンタエリスリトール、ネオペンチルグリコール、マルチトール、還元水あめ、果糖、ブドウ糖、蔗糖、ラクチトール、パラチニット、エリスリトール、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、キシロース、グルコース、ラクトース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、イノシトール、ペンタエリスリトール、マルトトリオース、ソルビトール、ソルビタン、トレハロース、澱粉分解糖、澱粉分解糖還元アルコールなどの二価以上のアルコールを挙げることができ、これらポリオールは、単独で用いてもよく、複数種を組み合わせて用いてもよいが、グリセリン、ジグリセリン、プロピレングリコール、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ジプロピレングリコールおよびソルビタンから選択される１種以上が好ましく、少なくともグリセリンを含むことがより好ましい。
【００７７】
また、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は水を含有する場合がある。水は食品、医薬品、化粧品として用いられるものであれば特に限定されず、例えば、精製水、純水、イオン交換水、アルカリイオン水、深層水、波動水、天然水などを用いることができる。
【００７８】
さらに、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）は、本発明の特徴を損なわない範囲であれば、いかなる物質も含んでよく、例えば、ホスファチジン酸、ビスホスアチジン酸、レシチン（ホスファチジルコリン）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルメチルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセリン、ジホスファチジルグリセリン（カルジオリピン）などのグリセロリン脂質およびこれらに水素添加またはこれらをヒドロキシル化されたもの；リゾレシチン、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルグリセリン、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルメチルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン（リゾレシチン）、リゾホスファチジルセリンなどのリゾ化合物；大豆、トウモロコシ、落花生、ナタネ、麦などの植物由来のものや、卵黄、牛などの動物由来のものおよび大腸菌などの微生物など由来の各種レシチン；スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質（以上、リン脂質）；Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カリウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドなどのアスコルビン酸またはアスコルビン酸誘導体またはその塩；エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、エリソルビン酸カリウム、エリソルビン酸カルシウム、エリソルビン酸リン酸エステル、エリソルビン酸硫酸エステルなどのエリソルビン酸またはエリソルビン酸誘導体またはその塩；フラボノイド類（カテキン、アントシアニン、フラボン、イソフラボン、フラバン、フラバノン、ルチン、それらの配糖体など）、フェノール酸類（クロロゲン酸、エラグ酸、没食子酸、没食子酸プロピルなど）、リグナン類、クルクミン類、クマリン類などのポリフェノール類（以上、酸化防止剤）；その他、各種香料、甘味料、酸味料あるいは着色料などを含むことができ、これらを単独で用いてもよく、複数種を組み合わせて用いてもよい。
【００７９】
また、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物が含有する乳化組成物は、水中油（ｏ／ｗ）型、油中水（ｗ／ｏ）型のいずれであってもよい。水性媒体への分散性の向上および水に溶けやすいという観点から水中油型乳化物が好ましい。本発明の好ましい一態様において、乳化組成物全体１００重量部に対して、水の含有量が０．０１〜７重量部程度である。
【００８０】
次に、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、器官および／または体液成分における対酸化ストレス保護組成物である。本発明における器官としては、例えば、消化器系の器官、循環器系の器官、呼吸器系の器官、泌尿器系の器官、生殖器系の器官、内分泌器系の器官、感覚器系の器官、神経系の器官、運動器系の器官（骨、関節、靱帯、筋肉など）を挙げることができ、消化器系の器官としては、例えば、消化管、消化腺、付属器を挙げることができ、具体的には、壁、口腔部（口、咽頭、舌、唾液腺（耳下腺・舌下腺・顎下腺・唇腺・頬腺））、咽頭部、食道、胃、胃底腺、噴門腺、幽門腺、小腸（十二指腸、空腸、回腸）、リーベルキューン腸腺、十二指腸腺、大腸（盲腸、虫垂、結腸（上行結腸・横行結腸・下行結腸・Ｓ状結腸）、直腸）、肛門、肝臓、胆嚢、膵臓、腹膜などを挙げることができる。循環器系の器官としては、例えば、血管系（心臓、血管）、リンパ系（リンパ管、リンパ節、脾臓）、胸腺などを挙げることができる。呼吸器系の器官としては、例えば、鼻腔、咽頭・喉頭、気管、気管支、肺、胸郭などを挙げることができる。泌尿器系の器官としては、例えば、腎臓、尿管、膀胱、尿道、陰茎などを挙げることができる。生殖器系の器官としては、例えば、精巣（睾丸）、陰嚢、精巣上体、精管、射精管、尿道、陰茎、精嚢、前立腺、尿道球腺（カウパー腺）、卵巣、卵管（輸卵管）、子宮、膣、陰核、大陰唇、小陰唇、胎盤などを挙げることができる。内分泌器系の器官としては、例えば、下垂体、松果体、甲状腺、副甲状腺、副腎、性腺などを挙げることができる。感覚器系の器官としては、例えば、視覚器、聴覚器、嗅覚器、味覚器、触覚器、平衡覚や回転覚に関する感覚器を挙げることができ、具体的には、目（眼球）、耳、鼻、舌、皮膚、三半規管、筋紡錘などを挙げることができる。神経系の器官としては、例えば、中枢神経系と末梢神経系を挙げることができ、具体的には、脳、脊髄、各種末梢神経、神経線維束、神経細胞体などを挙げることができる。運動器系の器官としては、例えば、骨、関節、軟骨、骨格筋、腱、靭帯などを挙げることができる。
【００８１】
本発明における体液としては、例えば、血液、リンパ液、組織液（組織間液、細胞間液、間質液）、体腔液、漿膜腔液、胸水、腹水、心嚢液、脳脊髄液（髄液）、関節液（滑液）、眼房水（房水）などを挙げることができるが、消化液（唾液、胃液、胆汁、膵液、腸液）、汗、涙、鼻水、尿、精液、膣液、羊水、乳汁なども体液に含まれる場合がある。体液成分としては、例えば血液の場合は、血漿、赤血球、白血球、血小板などを挙げることができる。
【００８２】
なお、本発明における体液成分としては、血液成分が好ましく、本発明における器官および／または血液成分としては、膵臓、肝臓、骨格筋、血漿および血球からなる群より選択される１または２種以上が好ましい。
【００８３】
次に、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、対酸化ストレス保護飲食品組成物として提供することができる。飲食品組成物としては、そのまま、または飲食品中に含有させて、栄養補助飲食品、健康補助飲食品、栄養調整飲食品、保健機能飲食品、特定保健用飲食品、栄養機能飲食品、機能性表示飲食品、サプリメントなどとすることができる。
【００８４】
飲食品組成物としては、特に、飲料の形態が好ましい。本発明に係る対酸化ストレス保護組成物を飲料の形態とする場合、その飲料中の対酸化ストレス保護組成物の含有量は０．５ｍｇ％以上であることが好ましく、１．０ｍｇ％以上であることがより好ましく、１．５ｍｇ％以上であることがさらに好ましい。ここで、「ｍｇ％」とは、飲料１００ｇあたりの質量（単位＝ｍｇ）を指す。
【００８５】
飲料を調製するための他の成分としては、本発明の特徴を損なわない範囲で適宜選択可能であり、特に限定されないが、例えば、水、果糖ブドウ糖液糖、環状オリゴ糖、酸味料、増粘剤、イノシトール、香料、ナイアシン、酸化防止剤、ビタミン類、甘味料などを挙げることができる。また、酸味料としては、クエン酸、リンゴ酸、グルコン酸、酒石酸、或いはこれらの塩などを挙げることができる。また、増粘剤としては、ジェランガム、キサンタンガム、ペクチン、グアーガム、発酵セルロースなどの増粘多糖類を挙げることができる。また、甘味料としては、ショ糖、果糖、ブドウ糖、液糖などの糖類、はちみつ、スクラロース、アセスルファムカリウム、ソーマチン、アスパルテームなどの高甘味度甘味料を挙げることができる。また、酸化防止剤としては、ビタミンＣ、酵素処理ルチンなどを挙げることができる。また、ビタミン類としては、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＥなどを挙げることができる。なお、これらの成分は単独で、または組み合わされて使用することができる。
【００８６】
次に、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、医薬品組成物として提供することができ、種々の投与形態用に製剤化されたものを使用することができる。医薬品組成物の製剤形態としては、本発明の特徴を損なわない範囲で適宜選択可能であり、特に限定されないが、例えば、液剤、錠剤、顆粒剤、細粒、散剤、チュアブル剤等の経口剤、注射剤などの非経口剤など、通常の製剤形態が挙げられるが、経口剤であることが好ましい。上記製剤は本発明に係る対酸化ストレス保護組成物と、賦形剤等の製薬上許容される他の成分とを使用して、常法により調製することができる。
【００８７】
次に、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物の製造方法は、（ｉ）水と、ショ糖脂肪酸エステルと、その他必要に応じてその他の水溶性乳化剤やポリオール、水溶性ミネラル類、水溶性ビタミン類などの水溶性物質とを混合し溶解して水相を得る工程（水相調製工程）、（ｉｉ）アスタキサンチンと、ポリグリセリン脂肪酸エステルと、その他必要に応じてレシチンなどのその他の脂溶性乳化剤や油脂、アスタキサンチンを除くカロテノイド、ラジカル捕捉剤として使用できる化合物、脂溶性ミネラル類、脂溶性ビタミン類などの脂溶性物質とを混合し溶解して油相を得る工程（油相調製工程）、そしてその後（ｉｉｉ）前記水相と前記油相とを混合して混合液を得し、得られた混合液に対して乳化分散を行って乳化組成物を得る工程（乳化組成物調製工程）、さらには、所望により、（ｉｖ）乳化組成物を含む内容物をソフトカプセル皮膜に封入する工程（ソフトカプセル封入工程）の以上（ｉ）〜（ｉｖ）の工程を包含する。
【００８８】
なお、（ｉ）水相調製工程において、ショ糖脂肪酸エステルを用いない場合、（ｉ）水相工程調製は、水と、その他必要に応じてその他の水溶性乳化剤やポリオール、水溶性ミネラル類、水溶性ビタミン類などの水溶性物質とを混合し溶解して水相を得る工程となり、（ｉｉｉ）乳化組成物調製工程は、水または前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る工程となる。
【００８９】
一方、（ｉｉ）油相調製工程において、ポリグリセリン脂肪酸エステルを用いない場合、（ｉｉ）油相調製工程は、アスタキサンチンと、油脂と、その他必要に応じてレシチンなどのその他の脂溶性乳化剤、アスタキサンチンを除くカロテノイド、ラジカル捕捉剤として使用できる化合物、脂溶性ミネラル類、脂溶性ビタミン類などの脂溶性物質とを混合し溶解して油相を得る工程となる。
【００９０】
なお、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物の製造方法は、（ｉ）水相調製工程として、水にショ糖ステアリン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程、（ｉｉ）油相調製工程として、アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにデカグリセリンモノラウリン酸エステルおよびレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程、そしてその後、（ｉｉｉ）前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る乳化組成物調製工程とを有してもよい。
【００９１】
また、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物の製造方法は、（ｉ）水相調製工程として、水にショ糖パルミチン酸エステルを混合・溶解して水相を調製する工程、（ｉｉ）油相調製工程として、アスタキサンチンおよび／またはその誘導体、ならびにレシチンを混合・溶解して油相を調製する工程、そしてその後、（ｉｉｉ）前記水相および前記油相を混合して、乳化組成物を得る乳化組成物調製工程とを有してもよい。
【００９２】
（ｉｉｉ）乳化組成物調製工程における乳化分散では、例えば、スターラー、インペラー撹拌、ホモミキサー、連続流通式剪断装置など、通常の乳化装置を用いて乳化分散することができる。
【００９３】
本発明に係る対酸化ストレス保護組成物の製造方法は、所望により（ｉｖ）ソフトカプセル封入工程を包含してもよい。ソフトカプセル封入工程を包含する場合、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物は、本発明に係る乳化組成物を含む内容物をソフトカプセル皮膜に封入することによって得られ、本発明において、ソフトカプセル製剤と換言される場合がある。
【００９４】
本発明において、（ｉｖ）ソフトカプセル封入工程は、例えば、（１）カプセルの内容物およびソフトカプセル皮膜を形成する基材をそれぞれ調製する工程（内容物等調製工程）、（２）得られたソフトカプセル皮膜を形成する基材内に内容物を封入し、成形、乾燥して、中間体製剤を得る工程（成形工程）、（３）得られた中間体製剤を乾燥する工程（乾燥工程）、以上（１）〜（３）の工程を包含する態様を挙げることができる。
【００９５】
（１）の「内容物等調製工程」は、本発明に係る乳化組成物を含む内容物およびソフトカプセル皮膜を形成する基材をそれぞれ調製する工程であり、上述のとおりである。
【００９６】
（２）の「成形工程」は、ソフトカプセル皮膜を形成する基材を用いて形成された皮膜内に、本発明に係る乳化組成物を含む内容物を封入し、成形、乾燥して、中間体製剤を得る工程である。本発明において、ソフトカプセル皮膜を形成する基材への内容物の封入は、公知のソフトカプセル製剤の製造方法を適宜選択することができる。そのような方法としては、例えば、平板法、ロータリーダイ法を挙げることができる。
【００９７】
（３）の「乾燥工程」は、 成形工程において得られた中間体製剤を乾燥させる工程であり、当該工程を経ることによってソフトカプセル製剤が得られる。乾燥工程で用いられる乾燥手段は、公知の乾燥手段を適宜選択することができる。そのような手段としては、例えば、タンブラー乾燥機（回転ドラム式乾燥機）などの公知の乾燥機を用いる手段を挙げることができる。また、乾燥工程における温度や時間などの諸条件は、特に制限されるものではなく、カプセルの内容物およびソフトカプセル皮膜を形成する基材の種類により、適宜選択することができる。
【００９８】
本発明において、ソフトカプセル皮膜を形成する基材は、本発明の特徴を損なわない範囲で適宜選択可能であり、例えば、ゼラチン、酸性ゼラチン、アルカリ性ゼラチン、ペプタイドゼラチン、低分子ゼラチン、ゼラチン誘導体などのゼラチン類；寒天；ジェランガム；などを主成分とする基材を挙げることができる。ゼラチンをソフトカプセル皮膜の基材とする場合は、ゼラチン、可塑剤および水を含有するゼラチン皮膜液から調製される。 また、ソフトカプセル皮膜は、本発明の特徴を損なわない範囲で可塑剤を含んでいてもよく、そのような可塑剤としては、例えば、グリセリン；コーンシロップ、スクロース、フルクトース、ソルビトール、マンニトールなどの糖類；プロピレングルコール、ポリエチレングリコールなどのグリコール類；結晶セルロース、デンプン類、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロースなどの水不溶性セルロース；などを挙げることができ、これら可塑剤は、単独で用いてもよく、複数種を組み合わせて用いることもできる。
【００９９】
本発明において、ソフトカプセル製剤における内容物としては、ソフトカプセル製剤の全量に対して、本発明に係る乳化組成物を、０．０００１質量％〜９８質量％含むことができる。また、ソフトカプセル製剤の形状としては、特に限定されないが、例えば、楕円（ＯＶＡＬ）や長方形（ＯＢＬＯＮＧ）、球状（ＲＯＵＮＤ）などの形状を挙げることができ、これらの形状にするため、当業界で周知の手法や装置などを適宜適用することができる。
【０１００】
本発明において、ソフトカプセル製剤（内容物および／または皮膜）には、本発明の特徴を損なわない範囲で飲食品や医薬品の分野において通常用いられる添加成分を適宜配合することができ、例えば、色素や顔料などの着色料、香料、甘味料、矯味剤、矯臭剤、保存料、果汁、各種ビタミン類、動植物エキス類、アミノ酸類、ミネラル類、増粘剤、ｐＨ調製剤、防腐剤、崩壊剤、界面活性剤、有機酸などの添加成分から適宜選択し、配合することができる。
【０１０１】
次に、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物含有飲料の製造方法は、（ｉ）水と、ショ糖脂肪酸エステルと、その他必要に応じてその他の水溶性乳化剤やポリオール、水溶性ミネラル類、水溶性ビタミン類などの水溶性物質とを混合し溶解して水相を得る工程（水相調製工程）、（ｉｉ）アスタキサンチンと、ポリグリセリン脂肪酸エステルと、その他必要に応じてレシチンなどのその他の脂溶性乳化剤や油脂、アスタキサンチンを除くカロテノイド、ラジカル捕捉剤として使用できる化合物、脂溶性ミネラル類、脂溶性ビタミン類などの脂溶性物質とを混合し溶解して油相を得る工程（油相調製工程）、そしてその後（ｉｉｉ）前記水相と前記油相とを混合して混合液を得し、得られた混合液に対して乳化分散を行って乳化組成物を得る工程（乳化組成物調製工程）、そしてその後、（ｖ）前記乳化組成物を水と混合する工程（混合工程）の以上（ｉ）〜（ｉｉｉ）および（ｖ）の工程を包含する。なお、上述した構成と同一または対応・相当する構成については、再度の説明を省略する。
【０１０２】
（ｖ）混合工程では、乳化組成物調製工程において調製した乳化組成物を水と混合するが、水は食品、医薬品、化粧品として用いられるものであれば特に限定されず、例えば、精製水、純水、イオン交換水、アルカリイオン水、深層水、波動水、天然水などを用いることができ、また、前記乳化組成物との混合は、水溶液を用いてすることができる。
【実施例】
【０１０３】
以下、本発明に係る対酸化ストレス保護組成物およびその製造方法について、実施例に基づいて説明する。なお、本発明の技術的範囲は、これらの実施例によって示される実施態様に限定されない。
【０１０４】
《実施例１》アスタキサンチンの体内動態試験
本発明に係る乳化組成物を１回に限り経口投与した場合、アスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた場合およびアスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた後に本発明に係る乳化組成物を１回に限り経口投与した場合の、アスタキサンチンの体内における動態（各器官および各体液成分におけるアスタキサンチンの蓄積）を確認する試験を行った。
【０１０５】
［１−１］乳化組成物の調製
先ず、本発明に係る乳化組成物を下記の通り調製した。なお、本実施例に係る乳化組成物の調製において、「ヘマトコッカス藻色素２０％オイル」として「アスタリールオイル２００ＳＳ（ヘマトコッカス藻からの脂溶性抽出物であり、アスタキサンチンをフリー体換算で約２０％含有する。アスタキサンチン類含量２０．３％、アスタキサンチン類以外のカロテノイド含量３．２％、アシルグリセロール含量５９．５％；アスタリール社製）」を用い、「デカグリセリンモノラウリン酸エステル（モノラウリン酸デカグリセリル）」として「ＮＩＫＫＯＬ  ＤＥＣＡＧＬＹＮ  １−Ｌ（日光ケミカル社製）」を用い、「ショ糖ステアリン酸エステル」として「ＤＫエステルＳＳ（第一工業製薬社製）」を用いた。また、「レシチン」として「ＳＬＰ−ペーストＳＰレシチンペースト（レシチン含量６０％以上；辻製油社製）」を用い、「中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）」は「パーム油」を用いた。また、「高圧ホモジナイザー」は「Ｓｔａｒ  Ｂｕｒｓｔ  ＨＪＰ−２５００１型（スギノマシン社）」を用いた。
【０１０６】
グリセリン５８．５ｇを５０℃に加温し、これに、デカグリセリンモノラウリン酸エステル（モノラウリン酸デカグリセリル）３．０ｇと、ヘマトコッカス藻色素２０％オイル７．５ｇと、ＭＣＴ４．５ｇと、ミックストコフェロール０．５ｇと、レシチン６．０ｇとを加え、混合・溶解して油相を調製した。また、精製水１４．０ｇを５０℃に加温し、これにショ糖ステアリン酸エステル６．０ｇを加え、混合・溶解して水相を調製した。これら油相および水相を混合して乳化した後、高圧ホモジナイザーで高圧乳化を行い、乳化組成物を得た。得られた乳化組成物の処方を表１に示す。
【０１０７】
【表１】
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【０１０８】
［１−２］アスタキサンチン混餌の調製
ローデント用餌料（ＡＩＮ−９３Ｇ  Ｇｒｏｗｉｎｇ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ社）９９ｇにアスタリールパウダー２０Ｆ（アスタリール社）１ｇ を加えて、アスタキサンチンをフリー体換算で０．０２重量％を含有するアスタキサンチン混餌を調製した。
【０１０９】
［１−３］試験
８週齢のＩＣＲマウス（三協ラボサービス社）を３群に分け、Ａ群のマウスには、アスタキサンチンの投与量がフリー体換算で１．６ｍｇ／匹となるよう、［１−１］において調製した乳化組成物を１回に限り経口投与し、Ｂ群のマウスには、［１−２］において調製したアスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させ、Ｃ群のマウスには、［１−２］において調製したアスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた後、その４週目の最終日において、アスタキサンチンの投与量がフリー体換算で１．６ｍｇ／匹となるよう、［１−１］において調製した乳化組成物を１回に限り経口投与した。
【０１１０】
Ａ、ＢおよびＣ群それぞれのマウスにおける前記投与または自由摂取の３時間後にエーテルによる麻酔を行い、それぞれのＩＣＲマウスの心臓から全血を採取して絶命させ、直ちに膵臓、肝臓、骨格筋の各器官を採取した。一方、採取した血液は血漿と血球に分離した。アスタキサンチンの定量分析に供するまでの間、採取した膵臓、肝臓および骨格筋の各器官、ならびに血液から分離して得られた血漿および血球を−８０℃条件下において保存した。
【０１１１】
［１−４］採取した各器官および各血液成分に蓄積したアスタキサンチン濃度の定量
［１−３］において凍結保存しておいたＡ、ＢおよびＣ群それぞれのマウスの膵臓、肝臓、骨格筋、血漿および血球に蓄積したアスタキサンチンの濃度（アスタキサンチンフリー体）を、以下の方法で定量した。
【０１１２】
＜１−４−１＞血漿におけるアスタキサンチン濃度の定量
（１）サンプルの調製
［１−３］において凍結保存しておいたＡ、ＢおよびＣ群それぞれのマウスの血漿試料１００μＬに、Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ（ＢＨＴ；５０μｇ／ｍＬ）エタノール溶液５００μＬと、１００ｎｇ／ｍＬの内部標準（ｔｒａｎｓ−β−Ａｐｏ−８’−ｃａｒｏｔｅｎａｌ、１０８２９；Ｓｉｇｍａ社）アセトン溶液１００μＬを加え、ボルテックスミキサーで１５秒間激しく撹拌した後、ヘキサン５ｍＬを添加してさらにボルテックスミキサーで１５秒間激しく撹拌した。この撹拌工程を３回行った後、３５００ｒｐｍの回転条件下で１０分間遠心分離した。遠心分離して得られた上清４ｍＬを回収し、メッシュが０．４５μｍのメンブレンフィルターでろ過した。得られたろ液を遠心エバポレーターで濃縮したのち、アセトン１５０μＬに再溶解させることによりサンプルを得、逆相系ＨＰＬＣに供した。一方、１００ｎｇ／ｍＬのアスタキサンチン標準試薬（４６０−０３１−Ｍ２５０；Ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ、ＡＬＥＸＩＳ ＢＩＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ社）アセトン溶液と１００ｎｇ／ｍＬの内部標準（ｔｒａｎｓ−β−Ａｐｏ−８’−ｃａｒｏｔｅｎａｌ）を含むアセトン溶液を標準溶液として用い、同様に逆相系ＨＰＬＣに供して、得られたピーク面積比の比較によりアスタキサンチン濃度を求めた。
【０１１３】
（２）ＨＰＬＣ条件
ＨＰＬＣは島津ＬＣ２０Ａシリーズ（ポンプ：ＬＣ−２０ＡＤ、デガッサ：ＤＧＵ−２０Ａ５Ｒ、オートサンプラー：ＳＩＬ−２０ＡＣ、カラムオーブン：ＣＴＯ−２０ＡＣ、検出器：ＳＰＤ−２０ＡＶ、システムコントローラー：ＣＢＭ−２０Ａ）を、分析カラムはＹＭＣ−Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ（４．６×２５０ｍｍ、粒径５μｍ）をそれぞれ用いた。移動相はＡ液（メタノール）、Ｂ液（Ｔｅｒｔ−Ｂｕｔｙｌ ｍｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ）およびＣ液（１％リン酸水溶液）を用い、開始時にＡ液とＢ液の混合比が８１：１５（％比）、１５分でＢ液が３０％、２３分で８０％となるようにグラジエント溶出を行い、２７分までＢ液８０％の組成を維持したのち、２７．１分に開始時の混合比に戻し、３５分まで開始時の組成で溶出した。Ｃ液は常に４％の組成とし、カラムオーブンは２５℃とし、ＵＶ／ＶＩＳ検出器により検出波長４７０ｎｍで測定を行い、流量は１ｍＬ／分とした。
【０１１４】
＜１−４−２＞血球におけるアスタキサンチン濃度の定量
（１）サンプルの調製
［１−３］において凍結保存しておいたＡ、ＢおよびＣ群それぞれのマウスの血球試料は解凍後、蒸留水５００μＬを加え、ボルテックスミキサーで１０秒間激しく撹拌した。この撹拌工程を２回行った後、希釈した血球試料１００μＬに、Ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅ（ＢＨＴ；５０μｇ／ｍＬ）エタノール溶液５００μＬと、１００ｎｇ／ｍＬの内部標準（ｔｒａｎｓ−β−Ａｐｏ−８’−ｃａｒｏｔｅｎａｌ、１０８２９；Ｓｉｇｍａ社）アセトン溶液１００μＬを加え、ボルテックスミキサーで１５秒間激しく撹拌した後、ヘキサン５ｍＬを添加してさらにボルテックスミキサーで１５秒間激しく撹拌した。この撹拌工程を３回行った後、３５００ｒｐｍの回転条件下で１０分間遠心分離した。遠心分離して得られた上清４ｍＬを回収し、メッシュが０．４５μｍのメンブレンフィルターでろ過した。得られたろ液を遠心エバポレーターで濃縮したのち、アセトン１５０μＬに再溶解させることによりサンプルを得、逆相系ＨＰＬＣに供した。なお、アスタキサンチン濃度は、＜１−４−１＞（１）と同様に、標準溶液に対して定量した。
【０１１５】
（２）ＨＰＬＣ条件
ＨＰＬＣは、＜１−４−１＞（２）と同様の条件で測定を行った。
【０１１６】
＜１−４−３＞各器官におけるアスタキサンチン濃度の定量
（１）サンプルの調製
［１−３］において凍結保存しておいたＡ、ＢおよびＣ群それぞれのマウスの、膵臓、肝臓および骨格筋の各器官を、アセトンで２回抽出した後、抽出物を合わせてろ過し、溶液を蒸発させて残渣を得た。 得られた残渣をジエチルエーテル／ ｎ−ヘキサン（体積比が２：８）に溶解することによりサンプルを得、ＨＰＬＣ分析に供した。なお、アスタキサンチン濃度は、標準溶液に対して定量した。
【０１１７】
（２）ＨＰＬＣ条件
ＨＰＬＣは、Ｌ−６２００インテリジェントポンプ（日立社）、Ｌ−４２５０ ＵＶ−ＶＩＳ検出器（４５０ｎｍに設定；日立社）、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５ＳＬ−ＩＩカラム（４．６×２５０ｍｍ、粒径５μｍ；ナカライテスク社）を用いた。また、移動相はアセトン／ｎ−ヘキサン（体積比が２：８）を用い、流量は１ｍＬ／分とした。
【０１１８】
［１−５］結果
Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスにおけるアスタキサンチンの体内動態（各器官および各血液成分に蓄積したアスタキサンチン濃度）を図１および図２に示す。図１および図２に示すように、血漿、血球、肝臓および骨格筋に蓄積したアスタキサンチン濃度については、本発明に係る乳化組成物を１回に限り投与した場合（Ａ群のマウス）のアスタキサンチン濃度の値と、アスタキサンチンを４週間自由摂取させた場合（Ｂ群のマウス）のアスタキサンチン濃度の値との和の方が、アスタキサンチンを４週間自由摂取させた後に本発明に係る乳化組成物を１回に限り投与した場合（Ｃ群のマウス）のアスタキサンチン濃度の値よりも低い値を示したが、膵臓に蓄積したアスタキサンチン濃度については、本発明に係る乳化組成物を１回に限り投与した場合（Ａ群のマウス）のアスタキサンチン濃度の値と、アスタキサンチンを４週間自由摂取させた場合（Ｂ群のマウス）のアスタキサンチン濃度の値との和よりも、アスタキサンチンを４週間自由摂取させた後に本発明に係る乳化組成物を１回に限り投与した場合（Ｃ群のマウス）のアスタキサンチン濃度の値の方が高い値を示した。このことから、本発明に係る乳化組成物は、アスタキサンチンが蓄積した膵臓細胞内において、アスタキサンチンの蓄積性を高める効果を奏することが明らかとなり、「カロテノイドおよび乳化剤を含有し、かつ、カロテノイドがアスタキサンチンである乳化組成物を有効成分とする、アスタキサンチンが蓄積した膵臓細胞内におけるアスタキサンチン蓄積性向上組成物」であることが明らかとなった。
【０１１９】
《実施例２》乳化組成物が奏する酸化ストレスに対する保護効果の確認試験
本発明に係る乳化組成物を１回に限り経口投与した場合、アスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた場合およびアスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた後に本発明に係る乳化組成物を１回に限り経口投与した場合の、膵臓における酸化ストレスに対する保護効果を確認する試験を行った。
【０１２０】
［２−１］鉄ニトリロ三酢酸溶液の調製
４０．４ｍｇ／ｍＬの硝酸鉄（ＩＩＩ）九水和物（０９７−２８１２；富士フイルム和光純薬社）を含む１Ｎ 塩酸８．１ｍＬに１８．８ｍｇ／ｍＬのＮｉｔｒｉｌｏｔｒｉａｃｅｔｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ Ｓｏｌｔ（Ｎ０１００；東京化成社）を含む１Ｎ塩酸５ｍＬを加えた。これに炭酸水素ナトリウム（１９９−０５９８５；富士フイルム和光純薬社）を添加してｐＨを７．５に調製した後、蒸留水を加えることにより３倍に希釈し、鉄ニトリロ三酢酸（Ｆｅ−ＮＴＡ）溶液を調製した。
【０１２１】
［２−２］試験
８週齢のＩＣＲマウス（三協ラボサービス社）を４群に分け、あらかじめ何ら処置をしないＮ群のマウスには、［２−１］において調製したＦｅ−ＮＴＡ溶液を４．５ｍｇ鉄／ｋｇ・ＢＷとなるように腹腔内へ単回投与して酸化ストレスを誘導し、Ａ群のマウスには、アスタキサンチンの投与量がフリー体換算で１．６ｍｇ／匹となるよう、［１−１］において調製した乳化組成物を１回に限り経口投与した３時間後に、［２−１］において調製したＦｅ−ＮＴＡ溶液を４．５ｍｇ鉄／ｋｇ・ＢＷとなるように腹腔内へ単回投与して酸化ストレスを誘導し、Ｂ群のマウスには、［１−２］において調製したアスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた後に、［２−１］において調製したＦｅ−ＮＴＡ溶液を４．５ｍｇ鉄／ｋｇ・ＢＷとなるように腹腔内へ単回投与して酸化ストレスを誘導し、Ｃ群のマウスには、［１−２］において調製したアスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた後、その４週目の最終日において、アスタキサンチンの投与量がフリー体換算で１．６ｍｇ／匹となるよう、［１−１］において調製した乳化組成物を１回に限り経口投与し、その３時間後に、［２−１］において調製したＦｅ−ＮＴＡ溶液を４．５ｍｇ鉄／ｋｇ・ＢＷとなるように腹腔内へ単回投与して酸化ストレスを誘導した。
【０１２２】
Ｎ群、Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスへの、Ｆｅ−ＮＴＡの投与から１時間経過後にエーテルによる麻酔を行い、それぞれのＩＣＲマウスの心臓から全血を採取して絶命させ、直ちに膵臓を採取した。採取した膵臓が受けた酸化ストレスの程度を、酸化ストレスマーカーであるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の濃度により評価した。なお、採取した膵臓は、ＭＤＡの定量分析に供するまでの間、−８０℃条件下において保存した。
【０１２３】
［２−３］サンプルの調製
［２−２］において凍結保存しておいたＮ、Ａ、ＢおよびＣ群それぞれのマウスの膵臓を解凍後、ハサミで細断し、氷冷したＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）５００μＬを添加して氷冷しながらポリトロンホモジナイザー（ＰＯＬＹＴＲＯＮ（登録商標）ＰＴ １０−３５；ＧＴ−ＤＫＩＮＥＭＡＴＩＣＡ ＡＧ社）を用いてホモジナイズした。得られた懸濁液（ホモジネート）を４℃の温度条件下および１５０００ｒｐｍの回転条件下で１０分間遠心分離し、上清を得た。得られた上清を同条件下、遠心分離し上清を得、ＭＤＡ濃度の定量に供した。
【０１２４】
［２−４］ＭＤＡ濃度の定量
ＭＤＡ濃度の定量には、ＴＢＡＲＳ法を用いたＭＤＡ測定キット（ＫＭＤ−００８Ｗ；日研ザイル社）を使用し、当該キットに添付の仕様書に従って定量を行った。詳細には下記の手順に従った。すなわち、１．５ｍＬのチューブにＢＨＴ試薬を１０μＬ分注し、キャリブレーターまたは［２−２］において得られたサンプル（上清）を２５０μＬ添加し、さらに酸試薬およびＴＢＡ（２−ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ ａｃｉｄ）試薬を２５０μＬずつ添加して、ボルテックスミキサーを用いて撹拌した。続いて、６０℃の温度条件下で６０分間インキュベートした後、１００００×ｇの回転条件下で３分間遠心分離して上清を得た。得られた上清の４００〜７００ｎｍの吸光スペクトルを１ｎｍ間隔で測定し、得られた吸光スペクトルから３ｒｄ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ法（日研ザイルホームページ: ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｊａｉｃａ．ｃｏｍ／ｍｄａ＿ｋｉｔ＿ａｎａｌｙｓｉｓ．ｈｔｍｌ）によりＭＤＡ濃度を求めた。
【０１２５】
［２−５］結果
［２−４］で得られたＮ群、Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスの膵臓におけるＭＤＡ濃度に基づき、あらかじめ何ら処置をしないＮ群のマウスの膵臓におけるＭＤＡ濃度を１００％として、Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスの膵臓における対酸化ストレス保護率を次の算出式に従い算出した。その結果を図３および図４に示す。
【０１２６】
対酸化ストレス保護率（％）＝｛１−（Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスの膵臓におけるＭＤＡ濃度／Ｎ群のマウスの膵臓におけるＭＤＡ濃度）｝×１００
【０１２７】
Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスの膵臓における対酸化ストレス保護率を図３に、Ｎ群、Ａ群、Ｂ群およびＣ群それぞれのマウスの膵臓におけるＭＤＡ濃度および対酸化ストレス保護率を図４に示す。図３および図４に示すように、ＭＤＡ濃度は、Ｂ群のマウス（アスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた後に酸化ストレスを誘導）、Ａ群のマウス（本発明に係る乳化組成物を１回に限り経口投与した後に酸化ストレスを誘導）、Ｃ群のマウス（アスタキサンチン混餌を４週間自由摂取させた後に本発明に係る乳化組成物を１回に限り経口投与し、その後に酸化ストレスを誘導）の順に高値であり、従って対酸化ストレス保護率は、Ｃ群のマウス、Ａ群のマウス、Ｂ群のマウスの順に高値であった。このことから、本発明に係る乳化組成物を経口摂取すると、抗酸化作用を有するアスタキサンチンを日常において経口摂取していて、膵臓をはじめとする組織（各器官や各体液成分）に蓄積されている場合と比較しても、優れた酸化ストレスに対する保護効果を奏することが明らかとなり、抗酸化作用を有するアスタキサンチンを既に日常において経口摂取していて、膵臓をはじめとする組織（各器官や各体液成分）に蓄積されている状態において、本発明に係る乳化組成物を経口摂取した場合、本発明に係る乳化組成物を経口摂取する場合や、抗酸化作用を有するアスタキサンチンを日常において経口摂取していて、膵臓をはじめとする組織（各器官や各体液成分）に蓄積されている場合と比較しても、より優れた酸化ストレスに対する保護効果を奏することが明らかとなった。
【０１２８】
さらには、図１および図３に示すように、驚くべきことに、本発明に係る乳化組成物を経口摂取するだけでは、膵臓をはじめとする組織（各器官や各体液成分）へのアスタキサンチンの蓄積にはさほど貢献しないにもかかわらず、抗酸化作用を有するアスタキサンチンを日常において経口摂取していて、膵臓をはじめとする組織（各器官や各体液成分）に蓄積されている場合と比較して、極めて優れた酸化ストレスに対する保護効果を奏することが明らかとなり、アスタキサンチンの有する抗酸化作用に拘束されないことが明らかとなった。
【０１２９】
《実施例３》飲料の調製
実施例１［１−１］で調製した乳化組成物の含有量が１．５ｍｇ％となるように水と混合し、それに、果糖ブドウ糖液糖、環状オリゴ糖、酸味料、増粘剤、イノシトール、香料、ナイアシン、酸化防止剤、ビタミン類、甘味料を加えることにより、対酸化ストレス保護組成物含有飲料が得られる。
【０１３０】
《実施例４》ソフトカプセル製剤の調製
実施例１［１−１］で調製した乳化組成物５５ｇ、ジグリセリンラウリン酸エステル（リケマール Ｌ−７１−Ｄ；理研ビタミン社製）４０ｇ、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル５ｇを均一になるまで混合したものを、ソフトカプセルに充填機で充填することで、本発明に係る乳化組成物（本発明に係る対酸化ストレス保護組成物）配合ソフトカプセル製剤が得られる。得られたソフトカプセル製剤もまた本発明に係る対酸化ストレス保護組成物に包含され、酸化ストレスに対する保護のために使用することができることはいうまでもない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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