(57)【要約】      （修正有）【課題】非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する遺伝子改変型非ヒト動物を提供する。また、非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物の作製方法、ならびに非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物の使用方法も提供する。【解決手段】遺伝子改変型非ヒト動物であって、前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、かつＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列を有し、前記ヒトＳＩＲＰα及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記遺伝子改変型非ヒト動物。【選択図】図７Ａ
2020202853.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変型非ヒト動物であって、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、かつＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列
を有し、前記ヒトＳＩＲＰα及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２】
前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、請求項１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項３】
前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、請求項２に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項４】
前記非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む、請求項３に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項５】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、請求項４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項６】
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、請求項４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項７】
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、請求項４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項８】
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項９】
前記機能性断片が、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、請求項８に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１０】
前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１１】
前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、請求項１０に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１２】
前記非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む、請求項１１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１３】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、請求項１２に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１４】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、請求項１２に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１５】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、請求項１２に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１６】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１７】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１８】
免疫不全である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１９】
Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、請求項１８に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２０】
ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、請求項１８または１９に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２１】
哺乳類である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２２】
前記哺乳類がげっ歯類である、請求項２１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２３】
前記げっ歯類がマウスである、請求項２２に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２４】
ヒト造血細胞の生着を有する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２５】
ヒト病原体による感染を有する、請求項２４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２６】
前記ヒト病原体が、Ｔ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導および／または標的化する、請求項２５に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２７】
前記ヒト病原体が、ヒト腸に感染する病原体である、請求項２５に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２８】
前記ヒト病原体がヒトロタウイルスである、請求項２７に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２９】
前記病原体がヒト肺に感染する、請求項２５に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項３０】
前記ヒト病原体がインフルエンザウイルスである、請求項２９に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項３１】
ＳＩＲＰα遺伝子プロモーター配列に作動可能に連結された、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を、第一の非ヒト動物のゲノムに導入する工程、
ＩＬ−１５プロモーター配列に作動可能に連結された、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を、第二の非ヒト動物のゲノムに導入する工程、ならびに
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列及び前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を保有し、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質及び前記ヒトＳＩＰＲαタンパク質を発現する、第三の非ヒト動物を作製する工程
を含む、ヒトＩＬ−１５タンパク質及びヒトＳＩＲＰαタンパク質を発現する非ヒト動物の作製方法。
【請求項３２】
前記導入工程が、ヒトＩＬ−１５またはヒトＳＩＲＰαをコードする前記核酸を保有する多能性幹細胞から非ヒト動物を作製することを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記第一の動物が前記第二の動物とは異なる動物であり、前記第三の動物を作製する前記工程が、前記第一及び前記第二の動物を交配することを含む、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記第一の動物と前記第二の動物が同一であり、前記第一の動物のゲノムに導入する前記工程が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列と第一の多能性幹細胞を接触させて第二の多能性幹細胞を取得することを含み、前記第二の動物のゲノムに導入する前記工程が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列と前記第二の多能性幹細胞を接触させて第三の多能性幹細胞を取得することを含み、かつ前記第三の非ヒト動物を前記第三の多能性幹細胞から作製する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記多能性幹細胞が、ＥＳ細胞またはｉＰＳ細胞である、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記多能性幹細胞がＲａｇ２を欠損している、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記多能性幹細胞がＩＬ２ｒｇを欠損している、請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記第三の非ヒト動物が、Ｒａｇ２及びＩＬ２ｒｇの一方または両方を欠損している、請求項３１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＩＬ−１５プロモーター配列が、ヒトＩＬ−１５プロモーター配列である、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＩＬ−１５プロモーター配列が、内在性非ヒト動物ＩＬ−１５プロモーター配列である、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記組み込みが、前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子の置換をもたらす、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、請求項３１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
請求項３１〜４２のいずれか一項に記載の方法によって作製した前記遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト造血細胞を含む細胞の集団を移植する工程を含む、ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変型非ヒト動物への生着方法。
【請求項４４】
前記移植工程が、尾静脈への注射、胎仔肝臓への注射、または後眼窩への注射を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記遺伝子改変型非ヒト動物に、移植前に致死量未満の放射線照射を行う、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ヒト造血細胞がＣＤ３４＋細胞である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ヒト造血細胞が、胎児肝臓、成人骨髄、または臍帯血由来である、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト造血細胞を含む細胞の集団を移植する工程を含む、ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変型非ヒト動物への生着方法。
【請求項４９】
遺伝子改変型非ヒト動物を含む動物生着モデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、かつＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物の小腸及びパイエル板内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、前記動物生着モデル。
【請求項５０】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体による感染を有する、請求項４８に記載のモデル。
【請求項５１】
ヒト病原体が腸内病原体である、請求項４９に記載のモデル。
【請求項５２】
前記腸内病原体が、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヒトロタウイルス、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ノーウォークウイルス、サルモネラ・エンテリカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ）、シゲラ・フレックスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、及びヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）から選択される、請求項５０に記載のモデル。
【請求項５３】
遺伝子改変型非ヒト動物を含む動物生着モデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物の肺内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、前記動物生着モデル。
【請求項５４】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体による感染を有する、請求項５３に記載のモデル。
【請求項５５】
前記ヒト病原体が肺病原体である、請求項５４に記載のモデル。
【請求項５６】
前記肺病原体が、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、ＳＡＲＳコロナウイルス、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、インフルエンザウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ）、コロナウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びアスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）から選択される、請求項５５に記載のモデル。
【請求項５７】
遺伝子改変型非ヒト動物に薬剤を投与する工程であって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、ならびに
（ｉｖ）ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー細胞を活性化、誘導および／または標的化する病原体による感染
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与する工程、ならびに
前記病原体に感染した非ヒト動物の前記病原体の量を前記薬剤が減少させるかどうかを判定する工程
を含む、ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導、および／または標的化する病原体による感染を阻害する薬剤の同定方法。
【請求項５８】
遺伝子改変型非ヒト動物に候補治療抗体または抗原結合タンパク質を投与する工程であって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与する工程、ならびに
前記遺伝子改変型非ヒト動物内の標的細胞に対するＮＫ細胞の抗体依存性細胞傷害性を前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質が活性化するかどうかを判定する工程
を含む、ＮＫ細胞を介した標的細胞の死滅における候補治療抗体または抗原結合タンパク質の有効性の判定方法。
【請求項５９】
前記標的細胞が、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記標的細胞が腫瘍細胞である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記腫瘍細胞がＢ細胞リンパ腫細胞である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
遺伝子改変型非ヒト動物を含む、ＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害性のモデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、内在性免疫系を欠損しているとともに、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、（ｉｉ）ヒトリンパ球を保有し、ならびに（ｉｉｉ）腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞からなる群から選択される標的細胞を保有する、
前記モデル。
【請求項６３】
前記標的細胞が腫瘍細胞である、請求項６２に記載のモデル。
【請求項６４】
前記腫瘍細胞がＢ細胞リンパ腫細胞である、請求項６３に記載のモデル。
【請求項６５】
外来性候補治療抗体または抗原結合タンパク質を含む、請求項６３または６４に記載のモデル。
【請求項６６】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記遺伝子改変型非ヒト動物の小腸及びパイエル板内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、請求項６２〜６５のいずれか一項に記載のモデル。
【請求項６７】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記遺伝子改変型非ヒト動物の肺内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、請求項６２〜６６のいずれか一項に記載のモデル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本願は、２０１５年４月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／１４６，９３８号、２０１５年４月１６日に出願された同第６２／１４８，６６７号、及び２０１６年１月２７日に出願された同第６２／２８７，８４２号の利益を主張するものであり、これらの各々の開示は、その全体を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、遺伝子改変型非ヒト動物の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
緒言
ヒト化マウスなどの遺伝子改変型非ヒト動物は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのヒト疾患のモデリング及び研究を可能にし、そのため、翻訳研究において大きな期待が寄せられている。過去１０年間で、ヒト免疫細胞をマウス体内で適切に発生及び機能させるために不可欠なヒト遺伝子を遺伝的に挿入することにより、ヒト化マウスの開発は大幅な進歩を遂げた。しかしながら、いくつかの制約が、翻訳研究におけるヒト化マウスの有用性を依然として制限している。特に、ヒトＴ細胞の発生及び生存は最適なものではない。
【０００４】
骨髄−肝臓−胸腺（ＢＬＴ）モデルは、ＮＳ／ＮＳＧ−ＢＬＴマウスにおける腸管Ｔ細胞の再構成を改善することを示しているが（Ｄｅｎｔｏｎ  ＰＷ，Ｎｏｃｈｉ  Ｔ，Ｌｉｍ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１２；５：５５５−５６６（非特許文献１），Ｎｏｃｈｉ  Ｔ，Ｄｅｎｔｏｎ  ＰＷ，Ｗａｈｌ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１３；３：１８７４−１８８４（非特許文献２））、これらのマウスは、移植片対宿主病を発症することが示されており、その結果、複数の組織において免疫細胞の大規模な浸潤が起こる（Ｇｒｅｅｎｂｌａｔｔ  ＭＢ，Ｖｒｂａｎａｃ  Ｖ，Ｔｉｖｅｙ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１２；７：ｅ４４６６４（非特許文献３））。したがって、現在のヒト化マウスモデルは、依然としてヒトＴ細胞を適切に発生及び機能させるのに十分ではない。特に、ヒト組織常在性記憶Ｔ細胞が存在しないことが、ヒト化マウスを前臨床的ツールとして用いてＨＩＶなどの病原体に対する持続的な粘膜免疫を誘導するためのより効率的な免疫戦略を開発、試験する上での妨げとなっている。
【０００５】
ヒト組織常在性Ｔ細胞の発生及び生存をよりよく理解し、持続的なＴ細胞依存性粘膜免疫を誘導する新規免疫化戦略を試験するためのモデルを提供するために、ヒト組織常在性Ｔ細胞を発生させる遺伝子改変型非ヒト動物を取得することは有用であると考えられる。このようなマウスモデルはまた、ヒト組織常在性免疫細胞と腸内微生物叢との相互作用、例えば、微生物叢が小腸及び結腸においてヒト免疫細胞の発生及び生存をどのように形成し得るかを研究するために用いることもできる。
【０００６】
さらに、ヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の発生及び機能に関する非ヒト動物モデルが、当該技術分野で必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｄｅｎｔｏｎ  ＰＷ，Ｎｏｃｈｉ  Ｔ，Ｌｉｍ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１２；５：５５５−５６６
【非特許文献２】Ｎｏｃｈｉ  Ｔ，Ｄｅｎｔｏｎ  ＰＷ，Ｗａｈｌ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１３；３：１８７４−１８８４
【非特許文献３】Ｇｒｅｅｎｂｌａｔｔ  ＭＢ，Ｖｒｂａｎａｃ  Ｖ，Ｔｉｖｅｙ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１２；７：ｅ４４６６４
【発明の概要】
【０００８】
概要
非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する遺伝子改変型非ヒト動物を提供する。また、非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物の作製方法、ならびに非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物の使用方法も提供する。これらの動物及び方法は、例えば、ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の発生及び機能のモデル化、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞へのヒト病原体感染のモデル化、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を活性化、誘導および／または標的化する病原体による感染を阻害する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、例えば健康または疾患の状態にあるヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞の発生および／または機能を調節する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞に対して毒性である薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞に対する毒性物質の毒性効果を予防、緩和、または逆転させる薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、候補Ｔ細胞誘導性ワクチンのｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ならびにＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）プロセスの活性化による腫瘍増殖および／または感染を阻害する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングにおいてなど、当該技術分野において多くの利用が見込まれる。
【０００９】
第一の態様において、本開示は、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、及び遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、を保有する遺伝子改変型非ヒト動物であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記遺伝子改変型非ヒト動物を提供する。
【００１０】
ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターであり得る。例えば、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターであり得る。ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである場合、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含み得る。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００１１】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する。
【００１２】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質は、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である。そのような実施形態の１つでは、機能性断片は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメイン、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２の少なくともアミノ酸２８〜３６２を含む細胞外ドメインを有する。
【００１３】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００１４】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する。
【００１５】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質は、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である。
【００１６】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は免疫不全である。例えば、一実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する。別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウト、またはＲａｇ２遺伝子ノックアウトとＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトの両方を有する。
【００１７】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、非ヒト動物は哺乳類である。そのような実施形態の１つでは、哺乳類は、げっ歯類、例えばマウスである。
【００１８】
第一の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト造血細胞の生着を有する。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒト病原体による感染を有する。一実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒト病原体による感染を有し、ヒト病原体は、Ｔ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導、および／または標的化する。別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物はヒト病原体による感染を有し、そのヒト病原体は、ヒトの腸に影響を与える（例えば感染によって）病原体である。そのような実施形態の１つでは、ヒト病原体はヒトロタウイルスである。別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物はヒト病原体による感染を有し、その病原体はヒトの肺に影響を及ぼす（例えば感染によって）。そのような実施形態の１つでは、ヒト病原体はインフルエンザウイルスである。別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物はヒト病原体による感染を有し、その病原体はヒト肝臓に影響を及ぼす（例えば感染によって）。さらに別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒト造血細胞、及び腫瘍、例えばヒト腫瘍、例えば移植ヒト腫瘍の生着を有する。
【００１９】
第二の態様では、本開示は、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、ならびにヒト造血細胞の生着、を保有する遺伝子改変型非ヒト動物を含むｉｎ  ｖｉｖｏモデルを提供し、ここで、遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト動物の小腸及びパイエル板にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する。
【００２０】
第二の態様の一実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体、例えば腸の病原体による感染を有する。そのような実施形態の１つでは、腸の病原体は、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヒトロタウイルス、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ノーウォークウイルス、サルモネラ・エンテリカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ）、シゲラ・フレックスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、及びヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）から選択される。
【００２１】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。そのような別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００２２】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード化及び非コード化配列を有する。
【００２３】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質は、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である。そのような実施形態の１つでは、機能性断片は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメイン、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を含む細胞外ドメインを有する。
【００２４】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００２５】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する。
【００２６】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質は、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である。
【００２７】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は免疫不全である。例えば、一実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する。別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウト、またはＲａｇ２遺伝子ノックアウトとＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトの両方を有する。
【００２８】
第二の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、非ヒト動物は哺乳類である。そのような実施形態の１つでは、哺乳類は、げっ歯類、例えばマウスである。
【００２９】
第三の態様では、本開示は、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、ならびにヒト造血細胞の生着、を有する遺伝子改変型非ヒト動物を含むｉｎ  ｖｉｖｏモデルを提供し、ここで、遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト動物の肺内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する。
【００３０】
第三の態様の一実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体、例えば肺病原体による感染を有する。そのような実施形態の１つでは、肺病原体は、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、ＳＡＲＳコロナウイルス、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、インフルエンザウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ）、コロナウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びアスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）から選択される。
【００３１】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００３２】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する。
【００３３】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質は、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である。そのような実施形態の１つでは、機能性断片は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメイン、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２の少なくともアミノ酸２８〜３６２を含む細胞外ドメインを有する。
【００３４】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。
【００３５】
一実施形態において、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座の非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００３６】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する。
【００３７】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質は、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である。
【００３８】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は免疫不全である。例えば、一実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する。別の実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウト、またはＲａｇ２遺伝子ノックアウトとＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトの両方を有する。
【００３９】
第三の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、非ヒト動物は、哺乳類である。そのような実施形態の１つでは、哺乳類は、げっ歯類、例えばマウスである。
【００４０】
第四の態様では、本開示は、候補Ｔ細胞誘導ワクチンの有効性の判定方法を提供し、この方法は、遺伝子改変型非ヒト動物に候補Ｔ細胞誘導ワクチンを投与することを含み、ここで、遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、（ｉ）遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、及び（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、前記方法はまた、遺伝子改変型非ヒト動物にヒト病原体でチャレンジし、候補Ｔ細胞誘導ワクチンが、遺伝子改変型非ヒト動物内でＴ細胞を介した免疫応答を誘導するかどうかを判定することを含む。
【００４１】
第四の態様の一実施形態において、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００４２】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する。
【００４３】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質は、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である。そのような実施形態の１つでは、機能性断片は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメイン、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２の少なくともアミノ酸２８〜３６２を含む細胞外ドメインを有する。
【００４４】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００４５】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する。
【００４６】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質は、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である。
【００４７】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する。
【００４８】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する。
【００４９】
第四の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は、げっ歯類などの哺乳類、例えばマウスである。
【００５０】
第五の態様において、本開示は、ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導、および／または標的化する病原体による感染を阻害する薬剤の同定方法を提供し、この方法は、遺伝子改変型非ヒト動物に薬剤を投与することを含み、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、（ｉ）遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、ならびに（ｉｖ）ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー細胞を活性化、誘導および／または標的化する病原体による感染、を有し、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、前記方法はまた、病原体に感染した非ヒト動物内の病原体の量を前記薬剤が減少させるかどうかを判定することを含む。
【００５１】
第五の態様の一実施形態において、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００５２】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する。
【００５３】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＳＩＲＰαタンパク質は、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である。そのような実施形態の１つでは、機能性断片は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメイン、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を含む細胞外ドメインを有する。
【００５４】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。そのような実施形態の１つでは、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。一実施形態では、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターであり、遺伝子改変型非ヒト動物は、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内のＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む。そのような実施形態の１つでは、遺伝子改変型非ヒト動物はマウスであり、ヌル変異は少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である。別のそのような実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である。
【００５５】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する。
【００５６】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質は、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である。
【００５７】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記の実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する。
【００５８】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記の実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する。
【００５９】
第五の態様の別の実施形態、またはその上記の実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物は、げっ歯類などの哺乳類、例えばマウスである。
【００６０】
第六の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５タンパク質及びヒトＳＩＲＰαタンパク質を発現する非ヒト動物の作製方法を提供し、この方法は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーター配列に作動可能に連結する核酸配列を第一の非ヒト動物のゲノムに導入し、ヒトＳＩＰＲαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰαプロモーター配列に作動可能に連結する核酸配列を第二の非ヒト動物のゲノムに導入し、ならびにヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列及びヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を保有する第三の非ヒト動物を作製することを含み、ここで第三の非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質及びヒトＳＩＰＲαタンパク質を発現する。
【００６１】
第六の態様の一実施形態では、導入するステップは、ヒトＩＬ−１５またはヒトＳＩＲＰαをコードする核酸を保有する多能性幹細胞から非ヒト動物を生成することを含む。
【００６２】
第六の態様の別の実施形態、またはその上の実施形態のさらなる実施形態では、第一の動物は第二の動物とは異なる動物であり、第三の動物を作製する工程は、第一及び第二の動物を交配することを含む。
【００６３】
第六の態様の別の実施形態では、第一の動物と第二の動物は同一であり、第一の動物ゲノムに導入する工程は、第一の多能性幹細胞を、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列に接触させ、第二の多能性幹細胞を得ることを含み、第二の動物ゲノムに導入する工程は、第二の多能性幹細胞を、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列に接触させ、第三の多能性幹細胞を得ることを含み、及び第三の非ヒト動物は、第三の多能性幹細胞から作製する。
【００６４】
第六の態様の別のバージョンでは、本開示は、ヒトＩＬ−１５タンパク質及びヒトＳＩＲＰαタンパク質を発現する非ヒト動物の作製方法を提供し、この方法は、ヒトＳＩＰＲαタンパク質をコードし、ＳＩＰＲα遺伝子プロモーター配列に作動可能に連結する核酸配列を、第一の非ヒト動物のゲノムに導入し、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５プロモーター配列に作動可能に連結する核酸配列を、第二の非ヒト動物のゲノムに導入し、ならびに、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列及びヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を保有する第三の非ヒト動物を作製することを含み、ここで第三の非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５タンパク質及びヒトＳＩＰＲαタンパク質を発現する。
【００６５】
第六の態様のさらに別の実施形態では、第一の動物と第二の動物は同一であり、第一の動物ゲノムに導入する工程は、第一の多能性幹細胞を、ヒトＳＩＲＰαをコードする核酸配列に接触させ、第二の多能性幹細胞を得ることを含み、第二の動物ゲノムに導入する工程は、第二の多能性幹細胞を、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列に接触させ、第三の多能性幹細胞を得ることを含み、及び第三の非ヒト動物は、第三の多能性幹細胞から作製する。
【００６６】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、多能性幹細胞は、ＥＳ細胞またはｉＰＳ細胞である。
【００６７】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、多能性幹細胞は、Ｒａｇ２を欠損している。
【００６８】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、多能性幹細胞は、ＩＬ２ｒｇを欠損している。
【００６９】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、第三の非ヒト動物は、Ｒａｇ２及びＩＬ２ｒｇの一方または両方を欠損している。
【００７０】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＩＬ−１５プロモーター配列は、ヒトＩＬ−１５プロモーター配列である。
【００７１】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ＩＬ−１５プロモーター配列は、内在性非ヒト動物ＩＬ−１５プロモーター配列である。
【００７２】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、組み込みの結果として、非ヒトＩＬ−１５遺伝子座内の非ヒトＩＬ−１５遺伝子の置換が生じる。
【００７３】
第六の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する。
【００７４】
第七の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変型非ヒト動物への生着方法を提供し、この方法は、第六の態様またはその任意の実施形態による方法で作製した遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト造血細胞を含む細胞集団を移植することを含む。そのような実施形態の１つでは、移植は、尾静脈注射、胎仔肝注射、または後眼窩注射を含む。
【００７５】
第七の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、遺伝子改変型非ヒト動物に対し、移植前に致死量未満の照射を行う。
【００７６】
第七の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒト造血細胞は、ＣＤ３４＋細胞である。
【００７７】
第七の態様の別の実施形態、またはその上記実施形態のいずれかのさらなる実施形態において、ヒト造血細胞は、胎児肝臓、成人骨髄、または臍帯血由来である。
【００７８】
第八の態様では、本開示は、標的細胞を死滅させる際の候補治療抗体または抗原結合タンパク質の有効性の判定方法を提供し、この方法は、候補治療抗体または抗原結合タンパク質を遺伝子改変型非ヒト動物に投与することを含み、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、（ｉ）遺伝子改変型非ヒト動物ゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト動物ゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、及び（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、前記方法はまた、遺伝子改変型非ヒト動物内の標的細胞に対するＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害性を、候補治療抗体または抗原結合タンパク質が調節するかどうかを判定することを含む。
【００７９】
第九の態様では、本開示は、標的細胞を死滅させる際の候補治療抗体または抗原結合タンパク質の有効性の判定方法を提供し、この方法は、遺伝子改変型非ヒト動物からＮＫ細胞を単離することを含み、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、（ｉ）遺伝子改変型非ヒト動物ゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト動物ゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、及び（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、前記方法はまた、候補治療抗体または抗原結合タンパク質及び標的細胞に単離ＮＫ細胞を接触させ、ならびに単離ＮＫ細胞の、標的細胞に対する抗体または抗原結合タンパク質依存性細胞溶解活性を測定することを含む。
【００８０】
第十の態様では、本開示は、標的細胞を死滅させる際の有効性を改善するための候補治療抗体または抗原結合タンパク質のスクリーニング方法を提供し、この方法は、候補治療抗体または抗原結合タンパク質を、遺伝子改変型非ヒト動物に投与することを含み、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、（ｉ）遺伝子改変型非ヒト動物ゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト動物ゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、及び（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、前記方法はまた、候補治療抗体または抗原結合タンパク質が、遺伝子改変型非ヒト動物内の標的細胞を死滅させる際の有効性に改善を示すかどうかを判定することを含む。
【００８１】
第八、第九及び第十の態様のいずれか１つの実施形態において、標的細胞は、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞のうちの１つ以上である。
[本発明1001]
遺伝子改変型非ヒト動物であって、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−15タンパク質をコードし、かつＩＬ−15遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列
を有し、前記ヒトＳＩＲＰα及び前記ヒトＩＬ−15タンパク質を発現する、前記遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1002]
前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、本発明1001の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1003]
前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、本発明1002の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1004]
前記非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む、本発明1003の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1005]
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン2〜4の欠失である、本発明1004の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1006]
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、本発明1004の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1007]
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、本発明1004の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1008]
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である、本発明1001〜1007のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1009]
前記機能性断片が、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、本発明1008の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1010]
前記ＩＬ−15遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＩＬ−15遺伝子プロモーターである、本発明1001〜1009のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1011]
前記ＩＬ−15遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＩＬ−15遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−15遺伝子プロモーターである、本発明1010の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1012]
前記非ヒト動物ＩＬ−15遺伝子座内の非ヒトＩＬ−15遺伝子にヌル変異を含む、本発明1011の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1013]
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−15エキソン5〜8の欠失である、本発明1012の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1014]
前記ヒトＩＬ−15タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、本発明1012の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1015]
前記ヒトＩＬ−15タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、本発明1012の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1016]
前記ヒトＩＬ−15タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−15ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−15ゲノム非コード配列を有する、本発明1001〜1015のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1017]
前記ヒトＩＬ−15タンパク質が、全長ヒトＩＬ−15タンパク質の機能性断片である、本発明1001〜1016のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1018]
免疫不全である、本発明1001〜1017のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1019]
Ｒａｇ2遺伝子ノックアウトを有する、本発明1018の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1020]
ＩＬ2ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、本発明1018または1019の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1021]
哺乳類である、本発明1001〜1020のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1022]
前記哺乳類がげっ歯類である、本発明1021の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1023]
前記げっ歯類がマウスである、本発明1022の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1024]
ヒト造血細胞の生着を有する、本発明1001〜1023のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1025]
ヒト病原体による感染を有する、本発明1024の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1026]
前記ヒト病原体が、Ｔ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導および／または標的化する、本発明1025の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1027]
前記ヒト病原体が、ヒト腸に感染する病原体である、本発明1025の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1028]
前記ヒト病原体がヒトロタウイルスである、本発明1027の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1029]
前記病原体がヒト肺に感染する、本発明1025の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1030]
前記ヒト病原体がインフルエンザウイルスである、本発明1029の遺伝子改変型非ヒト動物。
[本発明1031]
ＳＩＲＰα遺伝子プロモーター配列に作動可能に連結された、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を、第一の非ヒト動物のゲノムに導入する工程、
ＩＬ−15プロモーター配列に作動可能に連結された、ヒトＩＬ−15タンパク質をコードする核酸配列を、第二の非ヒト動物のゲノムに導入する工程、ならびに
前記ヒトＩＬ−15タンパク質をコードする前記核酸配列及び前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を保有し、前記ヒトＩＬ−15タンパク質及び前記ヒトＳＩＰＲαタンパク質を発現する、第三の非ヒト動物を作製する工程
を含む、ヒトＩＬ−15タンパク質及びヒトＳＩＲＰαタンパク質を発現する非ヒト動物の作製方法。
[本発明1032]
前記導入工程が、ヒトＩＬ−15またはヒトＳＩＲＰαをコードする前記核酸を保有する多能性幹細胞から非ヒト動物を作製することを含む、本発明1031の方法。
[本発明1033]
前記第一の動物が前記第二の動物とは異なる動物であり、前記第三の動物を作製する前記工程が、前記第一及び前記第二の動物を交配することを含む、本発明1031または1032の方法。
[本発明1034]
前記第一の動物と前記第二の動物が同一であり、前記第一の動物のゲノムに導入する前記工程が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列と第一の多能性幹細胞を接触させて第二の多能性幹細胞を取得することを含み、前記第二の動物のゲノムに導入する前記工程が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列と前記第二の多能性幹細胞を接触させて第三の多能性幹細胞を取得することを含み、かつ前記第三の非ヒト動物を前記第三の多能性幹細胞から作製する、本発明1031の方法。
[本発明1035]
前記多能性幹細胞が、ＥＳ細胞またはｉＰＳ細胞である、本発明1031〜1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
前記多能性幹細胞がＲａｇ2を欠損している、本発明1031〜1034のいずれかの方法。
[本発明1037]
前記多能性幹細胞がＩＬ2ｒｇを欠損している、本発明1031〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
前記第三の非ヒト動物が、Ｒａｇ2及びＩＬ2ｒｇの一方または両方を欠損している、本発明1031〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
前記ＩＬ−15プロモーター配列が、ヒトＩＬ−15プロモーター配列である、本発明1031〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記ＩＬ−15プロモーター配列が、内在性非ヒト動物ＩＬ−15プロモーター配列である、本発明1031〜1038のいずれかの方法。
[本発明1041]
前記組み込みが、前記非ヒトＩＬ−15遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−15遺伝子の置換をもたらす、本発明1031〜1038のいずれかの方法。
[本発明1042]
前記ヒトＩＬ−15タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−15ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−15ゲノム非コード配列を有する、本発明1031〜1041のいずれかの方法。
[本発明1043]
本発明1031〜1042のいずれかの方法によって作製した前記遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト造血細胞を含む細胞の集団を移植する工程を含む、ヒトＩＬ−15タンパク質を発現する遺伝子改変型非ヒト動物への生着方法。
[本発明1044]
前記移植工程が、尾静脈への注射、胎仔肝臓への注射、または後眼窩への注射を含む、本発明1043の方法。
[本発明1045]
前記遺伝子改変型非ヒト動物に、移植前に致死量未満の放射線照射を行う、本発明1043または1044の方法。
[本発明1046]
前記ヒト造血細胞がＣＤ34＋細胞である、本発明1043〜1045のいずれかの方法。
[本発明1047]
前記ヒト造血細胞が、胎児肝臓、成人骨髄、または臍帯血由来である、本発明1043〜1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
本発明1018〜1023のいずれかの遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト造血細胞を含む細胞の集団を移植する工程を含む、ヒトＩＬ−15タンパク質を発現する遺伝子改変型非ヒト動物への生着方法。
[本発明1049]
遺伝子改変型非ヒト動物を含む動物生着モデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−15タンパク質をコードし、かつＩＬ−15遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−15タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物の小腸及びパイエル板内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、前記動物生着モデル。
[本発明1050]
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体による感染を有する、本発明1048のモデル。
[本発明1051]
ヒト病原体が腸内病原体である、本発明1049のモデル。
[本発明1052]
前記腸内病原体が、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヒトロタウイルス、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ノーウォークウイルス、サルモネラ・エンテリカ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ）、シゲラ・フレックスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ソネイ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）、及びヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）から選択される、本発明1050のモデル。
[本発明1053]
遺伝子改変型非ヒト動物を含む動物生着モデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−15タンパク質をコードし、ＩＬ−15遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−15タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物の肺内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、前記動物生着モデル。
[本発明1054]
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体による感染を有する、本発明1053のモデル。
[本発明1055]
前記ヒト病原体が肺病原体である、本発明1054のモデル。
[本発明1056]
前記肺病原体が、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、ＳＡＲＳコロナウイルス、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、インフルエンザウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ）、コロナウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びアスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）から選択される、本発明1055のモデル。
[本発明1057]
遺伝子改変型非ヒト動物に薬剤を投与する工程であって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−15タンパク質をコードし、ＩＬ−15遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、ならびに
（ｉｖ）ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー細胞を活性化、誘導および／または標的化する病原体による感染
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−15タンパク質を発現する、前記投与する工程、ならびに
前記病原体に感染した非ヒト動物の前記病原体の量を前記薬剤が減少させるかどうかを判定する工程
を含む、ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導、および／または標的化する病原体による感染を阻害する薬剤の同定方法。
[本発明1058]
遺伝子改変型非ヒト動物に候補治療抗体または抗原結合タンパク質を投与する工程であって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−15タンパク質をコードし、ＩＬ−15遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−15タンパク質を発現する、前記投与する工程、ならびに
前記遺伝子改変型非ヒト動物内の標的細胞に対するＮＫ細胞の抗体依存性細胞傷害性を前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質が活性化するかどうかを判定する工程
を含む、ＮＫ細胞を介した標的細胞の死滅における候補治療抗体または抗原結合タンパク質の有効性の判定方法。
[本発明1059]
前記標的細胞が、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞からなる群から選択される、本発明1058の方法。
[本発明1060]
前記標的細胞が腫瘍細胞である、本発明1059の方法。
[本発明1061]
前記腫瘍細胞がＢ細胞リンパ腫細胞である、本発明1060の方法。
[本発明1062]
遺伝子改変型非ヒト動物を含む、ＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害性のモデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、内在性免疫系を欠損しているとともに、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−15タンパク質をコードし、ＩＬ−15遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着
を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−15タンパク質を発現し、（ｉｉ）ヒトリンパ球を保有し、ならびに（ｉｉｉ）腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞からなる群から選択される標的細胞を保有する、
前記モデル。
[本発明1063]
前記標的細胞が腫瘍細胞である、本発明1062のモデル。
[本発明1064]
前記腫瘍細胞がＢ細胞リンパ腫細胞である、本発明1063のモデル。
[本発明1065]
外来性候補治療抗体または抗原結合タンパク質を含む、本発明1063または1064のモデル。
[本発明1066]
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記遺伝子改変型非ヒト動物の小腸及びパイエル板内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、本発明1062〜1065のいずれかのモデル。
[本発明1067]
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記遺伝子改変型非ヒト動物の肺内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、本発明1062〜1066のいずれかのモデル。
【００８２】
特許または出願ファイルは、カラー制作した少なくとも１つの図面を含む。請求及び必要な手数料の納付がある場合には、カラー図面（複数可）を含む本特許または特許出願公開の写しが、特許局より提供される。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】ヒトＳＩＲＰα配列によるマウスＳＩＲＰα遺伝子の置換の模式図を提供する。上段は、エキソン１〜８の相対位置を示すマウスＳＩＲＰα遺伝子座を示す。下段は、ヒトエキソン２〜４を有する最終的な標的化対立遺伝子を示す模式図を提供する。コードするキメラタンパク質は、マウスＳＩＲＰαタンパク質の細胞内部分に融合させた野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質のアミノ酸２８〜３６２に対応する細胞外領域を有する。斜め縞状の形状部分は、挿入されたヒト配列を表す。
【図２】マウス２において達成するマウスＩＬ−１５遺伝子を標的としたゲノム置換を示す模式図を提供する。中抜きの形状部分は、挿入されたヒト配列を表す。
【図３Ａ】非生着ＳＲＧ（ヒトＳＩＲＰα、Ｒａｇ  ＫＯ、ＩＬ−２ｒｇ  ＫＯ）及びＳＲＧ−１５（ヒトＳＩＲＰα、Ｒａｇ  ＫＯ、ＩＬ−２ｒｇ  ＫＯ、ヒトＩＬ−１５（マウス１）マウスの様々な組織におけるｈＩＬ−１５遺伝子発現を示すグラフを提供する。Ｙ軸はハウスキーピング遺伝子Ｈｐｒｔに対するｈＩＬ−１５  ｍＲＮＡのレベルを示す。
【図３Ｂ】非生着ＲＧ（Ｒａｇ  ＫＯ、ＩＬ−２ｒｇ  ＫＯ）及び非生着ＳＲＧ−１５（ヒトＳＩＲＰα、Ｒａｇ  ＫＯ、ＩＬ−２ｒｇ  ＫＯ、ヒトＩＬ−１５）マウス（図中、マウス＃１及びマウス＃２）の様々な組織におけるヒトｈＩＬ−１５遺伝子発現を示すグラフを提供する。
【図４】ポリ（Ｉ：Ｃ）をチャレンジした後のＳＲＧ、ＳＲＧ  ＩＬ−１５ｈ／ｍ（マウス２）及びＳＲＧ  ＩＬ−１５ｈ／ｈ（マウス２）マウスにおけるヒトＩＬ−１５タンパク質の血清レベルを示す。
【図５Ａ】生着後１２〜１４週目のＮＳＧ、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血液中のヒト造血細胞の効率的な生着を示すグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）を用いて統計解析を行った。
【図５Ｂ】生着後１４週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）の骨髄、脾臓、リンパ節、肝臓及び肺におけるヒトＣＤ４５＋細胞数を示すグラフを提供する。
【図６Ａ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス１）における骨髄（ＢＭ）、肝臓、及び肺内でのヒトＴ及びＮＫ細胞の出現頻度を示すプロットを提供する。
【図６Ｂ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス１）における様々な組織内でのヒトＮＫ細胞出現頻度を示すグラフを提供する。
【図６Ｃ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の肝臓内でのヒトＮＫ細胞の成熟を示すプロット及びグラフを提供する。
【図６Ｄ】ヒトＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞が、ＳＲＧ−１５マウスの脾臓において高レベルのヒトキラー細胞抑制受容体を発現することを示すプロットを提供する。
【図７Ａ】生着後１０〜１２週目のＮＳＧ、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血液中におけるヒトＮＫ細胞の出現頻度を示すグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）を用いて統計解析を行った。
【図７Ｂ】ＳＲＧ、ＳＲＧ−１５ｈ／ｍ、及びＳＲＧ−１５ｈ／ｈの生着後１４週目の脾臓におけるヒトＮＫｐ４６＋細胞の割合を示すグラフである。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）を用いて統計解析を行った。
【図７Ｃ】生着後１４週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血液、脾臓（ＳＰ）、肝臓及び肺におけるヒトＮＫ細胞の出現頻度を示すプロットを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）を用いて統計解析を行った。
【図７Ｄ】生着後１４週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの脾臓（ＳＰ）、肝臓及び肺におけるヒトＮＫ細胞の出現頻度を示すグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）を用いて統計解析を行った。
【図８】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスにおける血液中のヒトＴ細胞及びＮＫ細胞分布（ヒトＣＤ４５＋細胞（造血細胞）及びＮＫｐ４６＋細胞（ＮＫ細胞）にゲーティングした）を示すプロット（左）、ならびに生着させたＳＲＧ−１５マウスの血液中における、ｈＣＤ４５＋細胞のうち、ＮＫｐ４６＋細胞であるものの割合を示すグラフ（右）を提供する。
【図９Ａ】脾臓内でのＮＫ細胞及びＴ細胞の分布を示すプロット、ならびにＣＤ３４＋  ｈｕＨＳＣを生着させたＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の脾臓におけるＮＫｐ４６＋細胞の割合及び数を、ＣＤ３４＋  ｈｕＨＳＣを生着させたＳＲＧマウスと比較して示すグラフを提供する。
【図９Ｂ】生着後１０〜１２週目のＮＳＧ（ｎ＝５）、ＳＲＧ（ｎ＝１９）及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウス（ｎ＝３９）の血液中のヒト免疫細胞組成を示すグラフを提供する。
【図９Ｃ】生着後１４週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの胸腺におけるヒトＣＤ４５＋細胞数を示す。
【図９Ｄ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの胸腺におけるｈＣＤ４５＋細胞の代表的なフローサイトメトリープロットを提供する。
【図９Ｅ】生着後１４週目のＳＲＧ（ｎ＝８）及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウス（ｎ＝４）の胸腺におけるｈＣＤ４５＋細胞の組成を示すグラフである。
【図１０Ａ】生着後７週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血液及び脾臓におけるＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−及びＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞サブセットの出現頻度を示すプロットを提供する。
【図１０Ｂ】生着後７週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血液及び脾臓におけるＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−及びＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞サブセットの出現頻度を示すグラフを提供する。
【図１０Ｃ】ヒト及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）におけるＮＫ細胞サブセットにおけるキラー抑制受容体（ＫＩＲ）の発現を示すプロット及びグラフを提供する。
【図１１】ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の血液中のＣＤ１６＋対ＣＤ１６−ＮＫ細胞の分布を、ＰＢＭＣ試料と比較して示す２つのプロット（上段左及び上段右）を提供する。また、ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）またはＰＢＭＣ由来試料から採取したいずれかの血液中におけるＣＤ１６＋対ＣＤ１６−のＮＫｐ４６＋細胞の割合を示すグラフ（下段）を提供する。
【図１２】生着後７週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの骨髄におけるヒトＮＫ細胞の発生を示すグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）を用いて統計解析を行った。
【図１３Ａ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス１）における様々な組織内でのヒトＴ細胞出現頻度を示すグラフを提供する。（Ｋ／μｌ＝１０００細胞／μｌ）。
【図１３Ｂ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の血液及び肝臓内でのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞表現型を示すプロット及びグラフを提供する。
【図１４Ａ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスの肺ＣＤ８＋Ｔ細胞における組織常在マーカーＣＤ６９の発現を示すプロット及びグラフを提供する。
【図１４Ｂ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスの肝臓ＣＤ８＋Ｔ細胞における組織常在マーカーＣＤ６９の発現を示すプロット及びグラフを提供する。
【図１５Ａ】生着後１６週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの脾臓、肺及び肝臓内でのｈＣＤ３＋Ｔ細胞の出現頻度を示すグラフを提供する。
【図１５Ｂ】生着後１６週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの脾臓、肺及び肝臓内でのＣＤ４／ＣＤ８比を示すグラフを提供する。
【図１６Ａ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスの結腸内でのヒト粘膜固有層リンパ球（ＬＰＬ）の出現頻度を示すプロットを提供する。
【図１６Ｂ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスの結腸内でのヒト粘膜固有層リンパ球（ＬＰＬ）の出現頻度を示すグラフを提供する。
【図１７Ａ】図１７Ｂ〜１７Ｃと共に、１６週齢のＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の小腸内でのヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）の効率的な生着を示す。図１７Ａは、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスのＩＥＬ画分内のヒトＣＤ４５＋細胞及びＣＤ８＋  Ｔ細胞を示すプロット及びグラフを提供する。
【図１７Ｂ】１６週齢のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスの小腸内でのｈＣＤ４５の免疫組織化学染色の画像を提供する。
【図１７Ｃ】ＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の脾臓及び小腸内でのヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型特性を示すプロットを提供する。
【図１８Ａ】生着後１６週目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスのＩＥＬ画分内のマウス及びヒトＣＤ４５＋細胞を示す代表的なＦＡＣＳプロットを提供する。
【図１８Ｂ】ＳＲＧの小腸におけるヒトＩＥＬの数をＳＲＧ−１５（マウス２）マウスと比較して、及びＳＲＧの大腸におけるヒトＬＰＬの数をＳＲＧ−１５（マウス２）マウスと比較して示すグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊＊＊ｐ＜０．００１）を用いて統計解析を行った。
【図１８Ｃ】ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の小腸内でのｈＣＤ３＋細胞の組成を示すプロットを提供する。８匹のＳＲＧ−１５マウス（マウス２）のうちの１つの代表的なＦＡＣＳプロット。
【図１８Ｄ】ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の脾臓及び小腸内でのｈＣＤ３＋  ｈＣＤ８＋  Ｔ細胞の表現型特性を示すグラフを提供する。
【図１８Ｅ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの小腸内でのｈＣＤ８の免疫組織化学染色の画像を提供する。矢印はｈＣＤ８＋ＩＥＬを示す。画像は、１群あたり３匹のマウスの代表例である。
【図１９Ａ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウスの上皮内リンパ球集団におけるｈＣＤ４５＋細胞の分布及び数、ならびにＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの上皮内リンパ球集団におけるｈＣＤ４５＋細胞集団におけるＮＫ細胞及びＴ細胞の相対百分率を示すプロット及びグラフを提供する。
【図１９Ｂ】ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の上皮内リンパ球におけるＣＤ１６＋及びＣＤ１６−  ＮＫ細胞の分布及び割合を、血液及び脾臓と比較して示すプロット及びグラフを提供する。
【図１９Ｃ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスにおけるヒトＩＥＬ及びヒト粘膜固有層リンパ球（ＬＰＬ）の分布及び数を示すプロット及びグラフを提供する。
【図２０Ａ】ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）において主にｈＣＤ４５＋細胞を含む認識可能なパイエル板の存在を示すプロット及びグラフを提供する。
【図２０Ｂ】ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）において主にｈＣＤ４５＋細胞を含む認識可能なパイエル板の存在を示すプロット及びグラフを提供する。
【図２１Ａ】腸内細菌叢の配列決定のための共収容（cohousing）及び糞便試料採取のタイムラインを提供する。
【図２１Ｂ】非生着及び生着ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスの腸内でのマウス細菌の相対存在量を示す図を提供する。
【図２２】ＳＲＧ−１５マウスにおけるヒト組織常在性Ｔ細胞の機能的関連性を示す。より具体的には、急性ロタウイルス感染を取り除く上でのヒトＩＥＬの機能的関連性を示すグラフを提供する。
【図２３Ａ】ヒト（ｎ＝２０）及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）（ｎ＝９）におけるＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−及びＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞サブセットの４２のパラメータのＣｙＴＯＦに基づく分析を示すＶｉＳＮＥプロットを提供する。各ドットは単一の細胞を表す。
【図２３Ｂ】ヒト（ｎ＝２０）及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）（ｎ＝９）におけるＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−ＮＫ細胞上の８つの選択マーカーの発現強度を示すＶｉＳＮＥプロットを提供する。
【図２３Ｃ】ヒト（ｎ＝２０）及びＳＲＧ−１５マウス（ｎ＝９）におけるＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞上の８つの選択マーカーの発現強度を示すＶｉＳＮＥプロットである。
【図２４Ａ】ポリＩＣ注射の前及び後でのＣＤ６９＋である血中ＮＫ細胞の割合を、ＳＲＧとＳＲＧ−１５（マウス２）マウスとで比較して示すグラフを提供する。
【図２４Ｂ】ポリＩ：ＣまたはヒトＩＬ−１２ｐ７０によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激後のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）に由来するＮＫ細胞のＩＦＮγ産生を示すグラフを提供する。マウス由来ＮＫ細胞と健常ヒトＰＢＭＣ由来ＮＫ細胞とを比較する。すべての試料をＮＫ数で正規化している。
【図２４Ｃ】ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウス由来脾臓ＮＫ細胞の、ＨＬＡクラスＩ欠損Ｋ５６２細胞（左）または抗ＣＤ２０抗体の非存在下（上段右）もしくは存在下（下段右）でのＲａｊｉ細胞のいずれかに対する細胞溶解能を示すグラフを提供する。ＳＲＧ−１５＃１及びＳＲＧ−１５＃２は、ＳＲＧ−１５（マウス２）同腹仔由来の２つの異なるＮＫ細胞調製物を表す。
【図２５Ａ】ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）中のヒトＮＫ細胞が、リツキシマブ（ＲＴＸ）処置後に腫瘍増殖を阻害することを示すグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊＊＊ｐ＜０．００１）を用いて統計解析を行った。
【図２５Ｂ】未処置（ｎ＝５）及びＲＴＸ処置ＳＲＧ−１５マウス（ｎ＝１）のヒト腫瘍異種移植片におけるヒトＮＫ細胞及びＴ細胞の出現頻度を示すプロット及びグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊＊＊ｐ＜０．００１）を用いて統計解析を行った。
【図２５Ｃ】未処置（ｎ＝２）及びＲＴＸ処置ＳＲＧ−１５マウス（ｎ＝１）の血液及び腫瘍におけるヒトＮＫ細胞サブセットを示すプロット及びグラフを提供する。すべてのデータを、平均±ｓ．ｅ．ｍとして示す。独立両側マン・ホイットニーＵ検定（＊＊＊ｐ＜０．００１）を用いて統計解析を行った。
【発明を実施するための形態】
【００８４】
詳細な説明
本発明の方法及び組成物を記載する前に、本発明は、記載する特定の方法または組成物に限定するものではなく、したがって様々に変更し得ることを理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書中で使用する用語は、単に特定の形態を説明するためのものであって、限定することを意図するものではないことも理解されたい。
【００８５】
他に特段の定義がない限り、本明細書中で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。本明細書中に記載するものと同様または均等な任意の方法及び物質を本発明の実施または試験に用いることができるが、ここでは特定の方法及び物質について記載する。本明細書中で言及するすべての刊行物は、それに関連するものとして刊行物を引用している方法および／または物質を開示及び記載するために、参照により本明細書に援用する。矛盾が生じる場合には、本開示が、援用する刊行物の任意の開示に優先することを理解されたい。
【００８６】
本開示を読む上で当業者には明らかなように、本明細書に記載し、図示する個々の実施形態の各々は、別個の構成要素及び特徴を有し、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、これらを他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離し、またはそれと結合してもよい。記載する任意の方法は、引用する事象の順序で、または論理的に可能な他の順序で実施することができる。
【００８７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確な指示のない限り、複数の指示対象を包含することに注意しなければならない。したがって、例えば、「細胞」への言及は複数個のそのような細胞を含み、「タンパク質」への言及は、当業者に公知の１つ以上のタンパク質及びその均等物への言及を含む、などである。
【００８８】
本明細書で論じる刊行物は、本願の出願日前のそれらの開示に対してのみ提供する。本明細書中のいかなるものも、本発明がそのような刊行物に先行する資格がないことを認めるものとして解釈するものではない。
【００８９】
非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する遺伝子改変型非ヒト動物を提供する。また、非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物の作製方法、ならびに非ヒト動物ゲノムからヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５を発現する非ヒト動物の使用方法を提供する。これらの動物及び方法は、例えば、ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の発生及び機能のモデル化、ヒト病原体感染、例えば特定組織のヒト病原体感染、例えばヒト腸、肺または肝臓への病原体感染のモデル化、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞のヒト病原体感染のモデル化、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を活性化、誘導および／または標的化する病原体による感染を阻害する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、例えば健康または疾患の状態にあるヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞の発生および／または機能を調節する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞に対して毒性である薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞に対する毒性物質の毒性効果を予防、緩和、または逆転させる薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、候補Ｔ細胞誘導性ワクチンのｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ならびにＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）プロセスの活性化による腫瘍増殖および／または感染を阻害する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングにおいてなど、当該技術分野において多くの利用が見込まれる。
【００９０】
ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物
本開示のいくつかの態様において、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物を提供する。ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物または「ＳＩＲＰα非ヒト動物」とは、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を保有する非ヒト動物を意味する。本明細書中で使用する場合、「ヒトＳＩＲＰαタンパク質」とは、野生型（または天然）ヒトＳＩＲＰαタンパク質または野生型（または天然）ヒトＳＩＲＰαタンパク質の変異体であり、これらは野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の１つ以上のシグナル伝達および／または受容体機能を保持している。本明細書中で使用する場合、用語「変異体」とは、単離したヒトポリペプチドもしくは核酸配列の自然発生による遺伝的突然変異体、または組換えにより調製したヒトポリペプチドもしくは核酸配列のバリエーションのいずれかを定義するものであり、その各々は、対応する野生型ヒト核酸またはポリペプチド配列との比較において１つ以上の突然変異を含む。例えば、そのような突然変異は、１つ以上のアミノ酸置換、付加、および／または欠失であり得る。用語「変異体」には、ヒトホモログ及びオルソログも含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の変異型ポリペプチドは、野生型ヒトポリペプチドに対して７０％以上の同一性、例えば、７５％、８０％、または８５％もしくはそれ以上の同一性、例えば、野生型ヒトポリペプチドに対して９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する。
【００９１】
２つの配列間の同一性の割合は、当該技術分野における任意の簡便な技術、例えば、公的に入手可能なソフトウェアを用いた配列アライメントを使用して決定してもよい。突然変異は、部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲによる突然変異誘発、定向進化などの標準的な分子生物学技術を用いて導入することができる。当業者であれば、アミノ酸配列を変更することなく１つ以上の核酸置換を導入することができ、ヒトタンパク質の機能特性を変えることなく１つ以上のアミノ酸変異を導入できることを認識するであろう。
【００９２】
保存的アミノ酸置換をヒトタンパク質中に生成して、ヒトタンパク質変異体を作製することができる。保存的アミノ酸置換とは、当該分野で認知の、１つのアミノ酸から同様の特性を有する別のアミノ酸への置換を意味する。例えば、各アミノ酸を、以下の特性：電気陽性、電気陰性、脂肪族、芳香族、極性、疎水性及び親水性のうちの１つ以上を有するものとして言及してもよい。保存的置換とは、特定の構造的または機能的特徴を有する１つのアミノ酸を、同じ特性を有する別のアミノ酸に置換することである。酸性アミノ酸として、アスパラギン酸、グルタミン酸、塩基性アミノ酸として、ヒスチジン、リジン、アルギニン、脂肪族アミノ酸として、イソロイシン、ロイシン及びバリン、芳香族アミノ酸として、フェニルアラニン、グリシン、チロシン及びトリプトファン、極性アミノ酸として、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン及びチロシン、疎水性アミノ酸として、アラニン、システイン、フェニルアラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、バリン及びトリプトファンが挙げられ、ならびに保存的置換は、各群内におけるアミノ酸同士の置換を包含する。また、アミノ酸を相対サイズの点で言及してもよく、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グリシン、アスパラギン、プロリン、スレオニン、セリン、バリンは、いずれも通常、小サイズとみなされる。
【００９３】
ヒト変異体は、合成アミノ酸類似体、アミノ酸誘導体および／または非標準アミノ酸を含み得るものであって、例えば、限定するものではないが、実例として、αアミノ酪酸、シトルリン、カナバニン、シアノアラニン、ジアミノ酪酸、ジアミノピメリン酸、ジヒドロキシフェニルアラニン、ジエンコール酸、ホモアルギニン、ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、ノルバリン、３−ホスホセリン、ホモセリン、５−ヒドロキシトリプトファン、１−メチルヒスチジン、メチルヒスチジン、及びオルニチンが挙げられる。
【００９４】
ヒト変異体は、通常、野生型ヒトタンパク質をコードする核酸と高い同一性を有する核酸によってコードされる。ヒト変異体をコードする核酸の相補体は、野生型ヒトタンパク質をコードする核酸と高ストリンジェンシー条件下で特異的にハイブリダイズする。ヒト変異体をコードする核酸は、周知の方法を用いて単離または組換えもしくは合成により生成することができる。また、用語「ヒトＳＩＲＰαタンパク質」は、野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の１つ以上のシグナル伝達および／または受容体機能を保持する野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質（またはその変異体）の断片、例えば、ヒトＳＩＲＰαタンパク質の細胞外ドメインを包含する。
【００９５】
また、用語「ヒトＳＩＲＰαタンパク質」は、野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質（またはその変異体）の１つ以上の断片を有するとともに野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の１つ以上のシグナル伝達および／または受容体機能を保持する融合タンパク質、すなわちキメラタンパク質を包含する。野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質（またはその変異体）の１つ以上の断片を、例えば１つ以上の非ヒトペプチドまたはポリペプチドと組み合わせて含む融合タンパク質は、本明細書ではヒト化ＳＩＲＰαタンパク質と呼ぶ場合もある。したがって、例えば、野生型マウスＳＩＲＰαタンパク質のシグナル伝達ドメインと融合した野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の細胞外ドメインのアミノ酸配列を有するタンパク質は、「ヒトＳＩＲＰαタンパク質」という用語に包含される。
【００９６】
いくつかの例において、本開示によるヒトＳＩＲＰαタンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２に対し、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【００９７】
したがって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαタンパク質、例えば野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質、野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の変異体、野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の１つ以上のシグナル伝達および／または受容体機能を保持する野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質（もしくはその変異体）の断片、または野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質（もしくはその変異体）の１つ以上の断片を有するとともに野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質の１つ以上のシグナル伝達および／または受容体機能を保持する融合タンパク質、すなわちキメラタンパク質、のコード配列を有するポリヌクレオチドである。
【００９８】
ＳＩＲＰα（ヒトにおいて「シグナル調節タンパク質α」及び「ＣＤ１７２Ａ」としても知られている）はシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）ファミリーのメンバーであり、また免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。ＳＩＲＰαは、免疫不全マウスにおける細胞生着を改善することが示されている（Ｓｔｒｏｗｉｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２０１１；１０８：１３２１８−１３２２３）。野生型ヒトＳＩＲＰαのポリペプチド配列及び野生型ヒトＳＩＲＰαをコードする核酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０４００２２．１（変異体１）、ＮＭ＿００１０４００２３．１（変異体２）、及びＮＭ＿０８０７９２．２（変異体３）に見出し得る。ＳＩＲＰα遺伝子は、少なくともチンパンジー、アカゲザル、イヌ、ウシ、マウス、ラット、及びニワトリにおいて保存されている。野生型ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードするゲノム遺伝子座は、染色体２０のヒトゲノム、ＮＣ＿００００２０．１１（１８９４１１７−１９３９８９６）に見出し得る。タンパク質配列は、この遺伝子座のエキソン１〜８によってコードされる。したがって、いくつかの実施形態では、ヒトＳＩＲＰαのコード配列を含む核酸配列は、ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエキソン１〜８の１つ以上を含む。いくつかの例では、核酸配列はまた、ヒトＳＩＲＰαのゲノム遺伝子座の態様、例えばイントロン、３’および／または５’非翻訳配列（ＵＴＲ）を含む。いくつかの例では、核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαゲノム遺伝子座の全領域を含む。いくつかの例では、核酸配列は、ヒトＳＩＲＰαゲノム遺伝子座のエキソン２〜４を含む。
【００９９】
本願のヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物では、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列は、ＳＩＲＰα遺伝子の１つ以上の調節配列、例えば、非ヒト動物のＳＩＲＰα遺伝子の調節配列に作動可能に連結する。非ヒト動物、例えばマウスのＳＩＲＰα調節配列は、非ヒト動物ＳＩＲＰαの発現を調節する非ヒト動物ＳＩＲＰαゲノム遺伝子座の配列、例えば５’調節配列、例えばＳＩＲＰαプロモーター、ＳＩＲＰα５’非翻訳領域（ＵＴＲ）など、３’調節配列、例えば３’ＵＴＲ、及びエンハンサーなどである。
【０１００】
「プロモーター」または「プロモーター配列」とは、細胞内でＲＮＡポリメラーゼに結合し、下流（３’方向）のコード配列の転写を開始することができるＤＮＡ調節領域を指す。プロモーター配列は、その３’末端で転写開始部位に結合し、バックグラウンドを上回る検出可能なレベルで転写を開始するのに必要な最小数の塩基またはエレメントを含むために上流（５’方向）側に延在する。プロモーター配列内には、転写開始部位、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合を担うタンパク質結合ドメインが見出される。真核生物プロモーターはしばしば「ＴＡＴＡ」ボックス及び「ＣＡＴ」ボックスを含むが、必ずしも含まない場合もある。本開示が特に関心を寄せるのは、ＤＮＡ調節エレメント、例えばプロモーターであり、これらは、対応する内在性タンパク質について観察されるであろうものと同一の空間的及び時間的発現パターンで、すなわち同一の細胞及び組織ならびに同一の時間において、ヒトタンパク質の転写を促進する。
【０１０１】
マウスＳＩＲＰαは第２染色体、ＮＣ＿００００６８．７（１２９５９２６０６−１２９６３２２２８）上に位置し、マウスＳＩＲＰαコード配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００７５４７．４（アイソフォーム１）、ＮＭ＿００１１７７６４７．２（アイソフォーム２）、ＮＭ＿００１２９１０１９．１（アイソフォーム３）、ＮＭ＿００１２９１０２０．１（アイソフォーム３）、ＮＭ＿００１２９１０２１．１（アイソフォーム４）、ＮＭ＿００１２９１０２２．１（アイソフォーム５）に見出し得る。マウスＳＩＲＰαの調節配列は、当該技術分野において十分に定義されており、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ法を用いて、例えば、ワールドワイドウェブのＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｒｏｗｓｅｒ上で上記Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号を参照することによって、または当該技術分野において記載されているような実験方法によって、容易に同定し得る。いくつかの例では、例えば、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列がマウスＳＩＲＰαゲノム遺伝子座に位置する場合、ヒトＳＩＲＰαコード配列に作動可能に連結する調節配列は、マウスゲノムに対して内在性、すなわち天然型であって、すなわち、それらは、ヒト核酸配列の組み込みを行う前からマウスゲノムに存在していたものである。
【０１０２】
いくつかの例では、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物、例えばマウスを、ヒトＳＩＲＰαタンパク質（上記の断片を含む）をコードするヒト核酸配列、すなわち「ヒトＳＩＲＰα核酸配列」または「ヒトＳＩＲＰα配列」の、ゲノムへのランダムな組み込みまたは挿入によって生成する。通常、そのような実施形態において、ゲノム中のヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列の位置は明らかではない。他の例では、ゲノムへのヒトＳＩＲＰα核酸配列の標的化した組み込みまたは挿入、例えば相同組換えによって、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物を生成する。相同組換えでは、ポリヌクレオチドを宿主ゲノムの標的遺伝子座に挿入する一方で、同時に、宿主ゲノム物質、例えば５０塩基対（ｂｐ）以上、１００ｂｐ以上、２００ｂｐ以上、５００ｂｐ以上、１ｋＢ以上、２ｋＢ以上、５ｋＢ以上、１０ｋＢ以上、１５ｋＢ以上、２０ｋＢ以上、または５０ｋＢ以上のゲノム物質を標的遺伝子座から除去する。したがって、例えば、ヒトＳＩＲＰα核酸配列をマウスＳＩＲＰα遺伝子座に標的化することによって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を保有するヒト化ＳＩＲＰαマウスを作製する場合、ＳＩＲＰα遺伝子座のマウス配列の一部または全部、例えばエキソンおよび／またはイントロンを、ヒトＳＩＲＰα核酸配列で置換してもよい。そのようないくつかの例では、ヒトＳＩＲＰα核酸配列をマウスＳＩＲＰα遺伝子座内に組み込み、それによって、マウスＳＩＲＰα遺伝子座内の天然の、すなわち内在性の調節配列によってヒトＳＩＲＰα配列の発現を調節する。換言すれば、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列が作動可能に連結する調節配列（複数可）は、マウスＳＩＲＰα遺伝子座内の天然のＳＩＲＰα調節配列である。
【０１０３】
いくつかの例では、ヒトＳＩＲＰα配列の組み込みは、ヒトＳＩＲＰα配列が組み込まれた遺伝子の転写に影響を与えない。例えば、ヒトＳＩＲＰα配列をインテインとしてコード配列に組み込む場合、またはヒトＳＩＲＰα配列が２Ａペプチドを含む場合、ヒトＳＩＲＰα配列は、ヒトＳＩＲＰα配列が組み込まれた遺伝子と同時に転写及び翻訳される。他の例では、ヒトＳＩＲＰα配列の組み込みは、ヒトＳＩＲＰα配列が組み込まれた遺伝子の転写を阻害する。例えば、相同組換えによるヒトＳＩＲＰα配列の組み込みの際に、組み込み先の遺伝子座のコード配列の一部または全部を除去し、代わってヒトＳＩＲＰα配列を転写させてもよい。そのようないくつかの例では、ヒトＳＩＲＰα配列の組み込みの結果として、ヌル変異、したがってヌル対立遺伝子が生成する。ヌル対立遺伝子とは、その遺伝子の正常な機能を完全に欠損した、遺伝子の突然変異体コピーである。これは、分子レベルでの遺伝子産物（タンパク質、ＲＮＡ）が完全に存在しないか、または機能しない遺伝子産物が発現した結果であり得る。表現型レベルでは、ヌル対立遺伝子は全遺伝子座の欠失と区別できない。
【０１０４】
いくつかの例では、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物、例えばマウスは、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする１コピーの核酸配列を保有する。例えば、非ヒト動物は、核酸配列についてヘテロ接合性であってもよい。換言すれば、遺伝子座にある１つの対立遺伝子は前記核酸配列を含み、もう１つは内在性対立遺伝子である。例えば、上記のように、いくつかの例では、ヒトＳＩＲＰα核酸配列を非ヒト動物、例えばマウスのＳＩＲＰα遺伝子座に組み込み、それによって非ヒト動物ＳＩＲＰαにヌル対立遺伝子を生成する。そのようないくつかの実施形態では、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、ヒトＳＩＲＰαをコードする核酸配列に関してヘテロ接合性であってもよく、すなわち、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、非ヒト動物ＳＩＲＰαに１つのヌル対立遺伝子（前記核酸配列を有する対立遺伝子）及び１つの内在性ＳＩＲＰα対立遺伝子（野生型またはそれ以外）を保有する。換言すれば、非ヒト動物はＳＩＲＰαｈ／ｍ非ヒト動物であり、ここで、「ｈ」はヒト配列を有する対立遺伝子を表し、「ｍ」は内在性対立遺伝子を表す。他の例では、ヒト化ＳＩＲＰαは、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を２コピー含む。例えば、非ヒト動物、例えばマウスは、前記核酸配列に関してホモ接合性であってもよく、すなわち、二倍体ゲノム中の遺伝子座の両方の対立遺伝子が前記核酸配列を有し、すなわち、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、非ヒト動物ＳＩＲＰαに２つのヌル対立遺伝子（前記核酸配列を有する対立遺伝子）を保有する。換言すれば、非ヒト動物は、ＳＩＲＰαｈ／ｈ非ヒト動物である。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物、例えばマウスは、他の遺伝子改変を有する。いくつかの実施形態では、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、免疫無防備状態の動物である。例えば、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、Ｒａｇ２遺伝子（「組換え活性化遺伝子２」、そのマウス遺伝子のコード配列はＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００９０２０．３に見出し得る）に少なくとも１つのヌル対立遺伝子を保有する場合がある。いくつかの実施形態では、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、Ｒａｇ２に２つのヌル対立遺伝子を保有する。換言すれば、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、Ｒａｇ２に関してホモ接合性のヌルである。別の例として、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、ＩＬ２ｒｇ遺伝子（「インターロイキン２受容体γ」、共通γ鎖またはγＣとしても知られ、そのマウス遺伝子のコード配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１３５６３．３に見出し得る）に少なくとも１つのヌル対立遺伝子を保有する。いくつかの実施形態では、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、ＩＬ２ｒｇに２つのヌル対立遺伝子を保有する。換言すれば、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物はＩＬ２ｒｇに関してホモ接合性のヌル、すなわちＩＬ２ｒｇ−／−（または、マウスのようにＩＬ２ｒｇ遺伝子がＸ染色体上に位置する場合、ＩＬ２ｒｇＹ／−）である。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰα非ヒト動物は、Ｒａｇ２及びＩＬ２ｒｇの両方にヌル対立遺伝子を保有し、すなわち、それはＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇ−／−（または、マウスのようにＩＬ２ｒｇ遺伝子がＸ染色体上に位置する場合、Ｒａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−）である。他の遺伝子改変もまた企図される。例えば、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、造血細胞及び免疫系の発生および／または機能に関連する他の遺伝子における改変、例えば、１つ以上の他の非ヒト動物遺伝子を、ヒトオルソログをコードする核酸配列で置換することを含み得る。これに加えて、またはこれに代えて、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物は、他の細胞及び組織の発生および／または機能に関連する遺伝子、例えばヒトの障害もしくは疾患関連遺伝子、または非ヒト動物、例えばマウスにおける改変の場合には、ヒトの障害及び疾患のモデルを提供する遺伝子に改変を含み得る。
【０１０６】
ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物
本開示のいくつかの態様では、ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物を提供する。ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物、または「ＩＬ−１５非ヒト動物」とは、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を保有する非ヒト動物を意味する。本明細書中で使用する場合、「ヒトＩＬ−１５タンパク質」とは、野生型（または天然）ヒトＩＬ−１５タンパク質または野生型（または天然）ヒトＩＬ−１５タンパク質の変異体であって、野生型（または天然）ヒトＩＬ−１５タンパク質の１つ以上のシグナル伝達機能を保持している、例えば、ヒトＩＬ−１５受容体を刺激する（または受容体を介してシグナル伝達する）ことができ、および／またはヒトＩＬ−１５受容体のヒトＩＬ−１５受容体αサブユニットに結合することができ、および／またはＩＬ−２Ｒβ／ＩＬ−１５Ｒβ及び共通γ鎖（γｃ）に結合することができるタンパク質を意味する。用語「ヒトＩＬ−１５タンパク質」はまた、野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質の１つ以上のシグナル伝達機能を保持している、例えば、ヒトＩＬ−１５受容体を刺激する（またはそれを介してシグナル伝達する）ことができ、および／またはヒトＩＬ−１５受容体のヒトＩＬ−１５受容体αサブユニットに結合することができ、および／またはＩＬ−２Ｒβ／ＩＬ−１５Ｒβ及び共通γ鎖（γｃ）に結合することができる野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質（またはその変異体）の断片も包含する。
【０１０７】
用語「ヒトＩＬ−１５タンパク質」はまた、例えば上記のような、野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質（またはその変異体）の１つ以上の断片を含むとともに野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質の１つ以上のシグナル伝達機能を保持する融合タンパク質、すなわちキメラタンパク質も包含する。野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質（またはその変異体）の１つ以上の断片を含む融合タンパク質は、本明細書中ではヒト化ＩＬ−１５タンパク質と呼ぶ場合もある。
【０１０８】
したがって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ヒトＩＬ−１５タンパク質、すなわち、例えば上記のような、野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質、野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質の変異体、野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質の１つ以上のシグナル伝達機能を保持する野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質（もしくはその変異体）の断片、または野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質（もしくはその変異体）の１つ以上の断片を含むとともに野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質の１つ以上のシグナル伝達機能を保持する融合タンパク質、すなわちキメラタンパク質、のコード配列を含むポリペプチドである。
【０１０９】
ＩＬ−１５（「インターロイキン１５」としても知られる）は、Ｔリンパ球の増殖を刺激するサイトカインである。野生型ヒトＩＬ−１５のポリペプチド配列及び野生型ヒトＩＬ−１５をコードする核酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００５８５．４、ＮＰ＿０００５７６．１（アイソフォーム１）、ＮＭ＿１７２１７５．２、ＮＰ＿７５１９１５．１（アイソフォーム２）に見出し得る。野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードするゲノム遺伝子座は、染色体４、ＮＣ＿０００００４．１２（１４１６３６５９６−１４１７３３９８７）のヒトゲノムに見出し得る。ヒトＩＬ−１５遺伝子座は８個のエキソンを含み、エキソン３〜８はコーディングエキソンである。そのようなものとして、いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−１５のコード配列を有する核酸配列は、ヒトＩＬ−１５遺伝子のエキソン３〜８（すなわち、コーディングエキソン１〜６、図２参照）の１つ以上を含む。例えば、以下のエキソン使用の組合せ、エキソン１−２−３−４−５−６−７−８、エキソン１−３−４−５−６−７−８またはエキソン１−３−４−（選択的エキソン５）−５−６−７−８）によって産生される様々なＩＬ−１５  ｍＲＮＡアイソフォームが同定されている。いくつかの例では、前記核酸配列はまた、ヒトＩＬ−１５のゲノム遺伝子座、例えばイントロン、３’および／または５’非翻訳配列（ＵＴＲ）の態様を含む。いくつかの例では、前記核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノム遺伝子座の全領域を含む。いくつかの例では、前記核酸配列は、ヒトＩＬ−１５ゲノム遺伝子座のエキソン５〜８（すなわち、コーディングエキソン３〜６）を含む。
【０１１０】
いくつかの例では、本開示によるヒトＩＬ−１５タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１に対し、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【０１１１】
本願のヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物において、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列は、ＩＬ−１５遺伝子の１つ以上の調節配列、例えば、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子の調節配列に作動可能に連結する。非ヒト動物、例えばマウスのＩＬ−１５調節配列は、非ヒト動物ＩＬ−１５発現を調節する非ヒト動物ＩＬ−１５ゲノム遺伝子座の調節配列、例えば、５’調節配列、例えば、ＩＬ−１５プロモーター、ＩＬ−１５の５’非翻訳領域（ＵＴＲ）など、３’調節配列、例えば３’ＵＴＲ、及びエンハンサーなどである。マウスＩＬ−１５は、染色体８、ＮＣ＿００００７４．６（８２３３１６２４−８２４０３２２７、相補体）に位置し、マウスＩＬ−１５コード配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００８３５７．２（変異体１）、ＮＭ＿００１２５４７４７．１（変異体２）に見出し得る。マウスＩＬ−１５の調節配列は、当該技術分野において十分に定義されており、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ法を用いて、例えばワールドワイドウェブｇｅｎｏｍｅ．ｕｃｓｃ．ｅｄｕのＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｒｏｗｓｅｒ上で、上記Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号を参照することによって、または当該技術分野において記載されているような実験方法によって、容易に同定し得る。いくつかの例では、例えば、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列がマウスＩＬ−１５ゲノム遺伝子座に位置する場合、ヒトＩＬ−１５コード配列に作動可能に連結する調節配列は、マウスゲノムに内在性の、すなわち天然の、すなわち、それらはヒト核酸配列の組み込みを行う前からマウスゲノムに存在していたものである。
【０１１２】
いくつかの例では、ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスを、ヒトＩＬ−１５タンパク質（上記の断片を含む）をコードするヒト核酸配列、すなわち、「ヒトＩＬ−１５核酸配列」または「ヒトＩＬ−１５配列」の、ゲノムへのランダムな組み込みまたは挿入によって生成する。通常、そのような実施形態において、ゲノム中のヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列の位置は明らかではない。他の例では、ゲノムへのヒトＩＬ−１５核酸配列の標的化した組み込みまたは挿入、例えば相同組換えによって、ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物を生成する。相同組換えでは、ポリヌクレオチドを宿主ゲノムの標的遺伝子座に挿入する一方で、同時に、宿主ゲノム物質、例えば５０塩基対（ｂｐ）以上、１００ｂｐ以上、２００ｂｐ以上、５００ｂｐ以上、１ｋＢ以上、２ｋＢ以上、５ｋＢ以上、１０ｋＢ以上、１５ｋＢ以上、２０ｋＢ以上、または５０ｋＢ以上のゲノム物質を標的遺伝子座から除去する。したがって、例えば、ヒトＩＬ−１５核酸配列をマウスＩＬ−１５遺伝子座に標的化することによって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を保有するヒト化ＩＬ−１５マウスを作製する場合、ＩＬ−１５遺伝子座内のマウス配列の一部または全部、例えばエキソンおよび／またはイントロンを、ヒトＩＬ−１５核酸配列で置換してもよい。そのようないくつかの例では、ヒトＩＬ−１５核酸配列をマウスＩＬ−１５遺伝子座内に組み込み、それによって、マウスＩＬ−１５遺伝子座内の天然の、すなわち内在性の調節配列によってヒトＩＬ−１５配列の発現を調節する。換言すれば、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列が作動可能に連結する調節配列（複数可）は、マウスＩＬ−１５遺伝子座内の天然のＩＬ−１５調節配列である。
【０１１３】
いくつかの例では、ヒトＩＬ−１５配列の組み込みは、ヒトＩＬ−１５配列が組み込まれた遺伝子の転写に影響を与えない。例えば、ヒトＩＬ−１５配列をインテインとしてコード配列に組み込む場合、またはヒトＩＬ−１５配列が２Ａペプチドを含む場合、ヒトＩＬ−１５配列は、ヒトＩＬ−１５配列が組み込まれた遺伝子と同時に転写及び翻訳される。他の例では、ヒトＩＬ−１５配列の組み込みは、ヒトＩＬ−１５配列が組み込まれた遺伝子の転写を阻害する。例えば、相同組換えによるヒトＩＬ−１５配列の組み込みの際に、組み込み先の遺伝子座のコード配列の一部または全部を除去し、代わってヒトＩＬ−１５配列を転写させてもよい。そのようないくつかの例では、ヒトＩＬ−１５配列の組み込みの結果として、ヌル変異、したがってヌル対立遺伝子が生成する。ヌル対立遺伝子とは、その遺伝子の正常な機能を完全に欠損した、遺伝子の突然変異体コピーである。これは、分子レベルでの遺伝子産物（タンパク質、ＲＮＡ）が完全に存在しないか、または機能しない遺伝子産物が発現した結果であり得る。表現型レベルでは、ヌル対立遺伝子は全遺伝子座の欠失と区別できない。
【０１１４】
いくつかの例では、ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスは、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする１コピーの核酸配列を保有する。例えば、非ヒト動物は、核酸配列に関してヘテロ接合性であってもよい。換言すれば、遺伝子座にある１つの対立遺伝子は前記核酸配列を含み、もう１つは内在性対立遺伝子である。例えば、上記のように、いくつかの例では、ヒトＩＬ−１５核酸配列を非ヒト動物、例えばマウスのＩＬ−１５遺伝子座に組み込み、それによって非ヒト動物ＩＬ−１５にヌル対立遺伝子を生成する。そのようないくつかの実施形態では、ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物は、ヒトＩＬ−１５をコードする核酸配列に関してヘテロ接合性であってもよく、すなわち、ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物は、非ヒト動物ＩＬ−１５に１つのヌル対立遺伝子（前記核酸配列を有する対立遺伝子）及び１つの内在性ＩＬ−１５対立遺伝子（野生型またはそれ以外）を保有する。換言すれば、非ヒト動物はＩＬ−１５ｈ／ｍ非ヒト動物であり、ここで、「ｈ」はヒト配列を有する対立遺伝子を表し、「ｍ」は内在性対立遺伝子を表す。他の例では、ヒト化ＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を２コピー含む。例えば、非ヒト動物、例えばマウスは、前記核酸配列に関してホモ接合性であってもよく、すなわち、二倍体ゲノム中の遺伝子座の両方の対立遺伝子が前記核酸配列を有し、すなわち、ヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物は、非ヒト動物ＩＬ−１５に２つのヌル対立遺伝子（前記核酸配列を有する対立遺伝子）を保有する。換言すれば、非ヒト動物は、ＩＬ−１５ｈ／ｈ非ヒト動物である。
【０１１５】
ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物
上記のようなヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物を、上記と同種のヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物と交雑することにより、ヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現する遺伝子改変非ヒト動物を産生することができる。いくつかの実施形態では、そのような遺伝子改変型非ヒト動物は、例えばＲａｇ２及びＩＬ２ｒｇの一方または両方にヌル対立遺伝子を有する結果として、内在性免疫系を欠損している、例えば免疫無防備状態の動物である。例えば、いくつかの実施形態では、本開示による非ヒト動物は、Ｒａｇ２−／−および／またはＩＬ２ｒｇ−／−（または、マウスのようにＩＬ２ｒｇ遺伝子がＸ染色体上に位置する場合には、Ｒａｇ２−／−および／またはＩＬ２ｒｇＹ／−）である。いくつかの実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスを提供し、ここで、遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ＳＩＲＰαｈ／ｍＩＬ−１５ｈ／ｍＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−、ＳＩＲＰαｈ／ｈＩＬ−１５ｈ／ｍＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−、またはＳＩＲＰαｈ／ｍＩＬ−１５ｈ／ｈＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−である。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、及び遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、を保有し、ここでヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスを提供する。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。そのようないくつかの実施形態では、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである。別の実施形態では、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターはヒトＳＩＲＰαプロモーターである。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。そのようないくつかの実施形態では、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターは、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである。別の実施形態では、ＩＬ−１５プロモーターはヒトＩＬ−１５プロモーターである。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変型非ヒト動物は、肝臓、肺、骨髄（ＢＭ）、小腸（ＳＩ）及び結腸においてヒトＩＬ−１５  ｍＲＮＡを発現する。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ヒトＳＩＲＰαのみを発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスに比べて、ヒト造血細胞、例えばＣＤ４５＋細胞の生着後に、より高い割合及び数のヒトＴ細胞及びＮＫ細胞を呈する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、血液及び脾臓において、より高い割合及び数のＮＫ細胞を呈する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ヒト造血細胞、例えばＣＤ４５＋細胞の生着後に、血液、脾臓及び肝臓内において、ヒトＮＫ細胞サブセットＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−及びＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋の両方を保有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ヒト対象から採取したＰＢＭＣ中のＣＤ１６＋ＮＫ細胞対ＣＤ１６−ＮＫ細胞の分布と同様の、血中でのＣＤ１６＋ＮＫ細胞対ＣＤ１６−ＮＫ細胞の分布を示す。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、遺伝子改変型非ヒト動物の肝臓内に、より高いＣＤ１６及びＣＤ５６発現レベルを示すＮＫ細胞を保有しており、このことは、ヒトＳＩＲＰαのみを発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスに比べて、ヒト造血細胞、例えばＣＤ４５＋細胞の生着後において、ＮＫ細胞の成熟度が高いことを示している。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現し、ヒト造血細胞、例えばＣＤ４５＋細胞を生着させた遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ＣＤ１５８発現細胞をより高い割合で含むＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞集団とともに、明確な発現レベルのキラー阻害性受容体を呈するＮＫ細胞を脾臓内に保有し、これはヒト血中でのＮＫ細胞サブセットで見出されるものと同様である。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、ヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現し、ヒト造血細胞、例えばＣＤ４５＋細胞を生着させた遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ヒトＳＩＲＰαのみを発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスに比べて、上皮内リンパ球集団において、より高い出現頻度のヒトＣＤ４５＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞を呈する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、ヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現し、ヒト造血細胞を生着させた遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ＩＥＬにおいては、ＣＤ１６−ＮＫ細胞に匹敵するＣＤ１６＋ＮＫ細胞の分布を、及び血液及び脾臓内においては、ＣＤ１６−ＮＫ細胞よりも多くのＣＤ１６＋ＮＫ細胞の分布を示し、これは正常なヒトの生理機能を反映したものである。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、ヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現し、ヒト造血細胞、例えばＣＤ４５＋細胞を生着させた遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ヒトＳＩＲＰαのみを発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスに比べて、肺内に、より多数のヒトＴ細胞を呈する。そのようないくつかの実施形態では、そのような遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ヒトＳＩＲＰαのみを発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスに比べて、肺内ヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞上にＣＤ６９をより高レベルに発現する。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、ヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現し、ヒト造血細胞、例えばＣＤ４５＋細胞を生着させた遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、ヒトＳＩＲＰαのみを発現する遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスに比べて、肝臓内のヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞上に、高レベルのＣＤ６９の発現を示す。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のように、ヒトＳＩＲＰα及びヒトＩＬ−１５の両方を発現し、ヒト造血細胞を生着させた遺伝子改変型非ヒト動物、例えばマウスは、認識可能なパイエル板を呈し、それらは主にヒトＣＤ４５＋である。
【０１２７】
任意の非ヒト哺乳類動物を、本開示に従って遺伝子改変してもよい。非限定的な例として、実験動物、飼育動物、家畜など、例えばマウス、げっ歯類、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、非ヒト霊長類など、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、モルモット、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、及び当該分野で周知の他のトランスジェニック動物種、特に哺乳動物種などの種が挙げられる。他の実施形態では、非ヒト動物は、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、キジ、またはヤマウズラのようなキジ目の分類、例えば、アヒル、ガチョウ、またはハクチョウなどのガンカモ目の分類、例えば、ハトまたはコバトなどのハト目の分類のトリであってもよい。様々な実施形態において、本発明の遺伝子改変型動物は、マウス、ラットまたはウサギである。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、非ヒト動物は哺乳類である。いくつかのそのような実施形態では、非ヒト動物は、例えば、トビネズミ上科（Ｄｉｐｏｄｏｉｄｅａ）またはネズミ上科（Ｍｕｒｏｉｄｅａ）の小さな哺乳類である。一実施形態では、遺伝子改変動物はげっ歯類である。一実施形態では、げっ歯類は、マウス、ラット、及びハムスターから選択される。一実施形態では、げっ歯類は、ネズミ上科から選択される。一実施形態では、遺伝子改変型動物は、ヨルマウス科（Ｃａｌｏｍｙｓｃｉｄａｅ）（例えば、マウス様ハムスター）、キヌゲネズミ科（Ｃｒｉｃｅｔｉｄａｅ）（例えば、ハムスター、新世界ラット及びマウス、ハタネズミ）、ネズミ科（Ｍｕｒｉｄａｅ）（真性マウス及びラット、スナネズミ、トゲマウス、タテガミネズミ）、アシナガマウス科（Ｎｅｓｏｍｙｉｄａｅ）（キノボリマウス、イワマウス、ハダカオネズミ、マダガスカルラット及びマウス）、トゲヤマネ科（Ｐｌａｔａｃａｎｔｈｏｍｙｉｄａｅ）（例えば、トゲヤマネ）、及びメクラネズミ科（Ｓｐａｌａｃｉｄａｅ）（例えば、デバネズミ、タケネズミ、及びモグラネズミ）から選択される科に由来する。具体的な実施形態では、遺伝子改変げっ歯類は真性マウスまたはラット（ネズミ科）、スナネズミ、トゲマウス、及びタテガミネズミから選択される。
【０１２９】
一実施形態では、本発明の遺伝子改変型非ヒト動物はラットである。そのような実施形態の１つでは、ラットは、ウィスターラット、ＬＥＡ株、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ株、Ｆｉｓｃｈｅｒ株、Ｆ３４４、Ｆ６、及びＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉから選択される。別の実施形態では、ラット株は、ウィスター、ＬＥＡ、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ、Ｆｉｓｃｈｅｒ、Ｆ３４４、Ｆ６、及びＤａｒｋ  Ａｇｏｕｔｉからなる群から選択される２種以上の株の混合株である。
【０１３０】
別の実施形態では、本発明の遺伝子改変型非ヒト動物は、マウス、例えば、Ｃ５７ＢＬ株のマウス（例えばＣ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、Ｃ５７ＢＬ／Ｏｌａ、など）、１２９系株のマウス（例えば、１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば、１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓｌ／ＳｖＩｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２）、ＢＡＬＢ株のマウス、例えば、ＢＡＬＢ／ｃ、などである。例えば、Ｆｅｓｔｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  １０：８３６参照、また、Ａｕｅｒｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｈｉｍｅｒａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  １２９／ＳｖＥｖ−ａｎｄ  Ｃ５７ＢＬ／６−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓも参照のこと）。別の実施形態では、マウスは上記株の混合株である。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、本発明の遺伝子改変型非ヒト動物は、免疫不全でもある。「免疫不全」とは、動物の天然または内在性の免疫系の１つ以上の態様に欠損を有することであり、例えば、動物は、機能性の宿主免疫細胞の１つ以上のタイプ、例えば、非ヒトＢ細胞の数および／または機能、非ヒトＴ細胞の数および／または機能、非ヒトＮＫ細胞の数および／または機能などを欠損している。
【０１３２】
本発明の動物において免疫不全を達成するための１つの方法は、致死量未満の放射線照射である。例えば、遺伝子改変型マウスの新生仔に、致死量未満の、例えば４時間間隔で２×２００ｃＧｙの放射線照射を行うことができる。あるいは、当該分野で公知の多数の遺伝子変異のいずれか１つによって、免疫不全症を達成してもよく、そのいずれかを、単独でまたは組み合わせて、本開示の遺伝子改変型非ヒト動物に仕込むか、または本開示の遺伝子改変を導入し得る幹細胞の供給源として用いてもよい。非限定的な例として、ＩＬ２ｒｇ遺伝子突然変異に関連し、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（＋）ＮＫ（−）を特徴とするＸ連鎖ＳＣＩＤ、Ｊａｋ３遺伝子突然変異に関連し、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（＋）ＮＫ（−）を特徴とする常染色体劣性ＳＣＩＤ、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（−）ＮＫ（−）を特徴とするＡＤＡ遺伝子突然変異、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（＋）ＮＫ（＋）を特徴とするＩＬ−７Ｒα鎖突然変異、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（＋）ＮＫ（＋）を特徴とするＣＤ３δまたはε突然変異、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（−）ＮＫ（＋）を特徴とするＲＡＧ１及びＲＡＧ２突然変異、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（−）ＮＫ（＋）を特徴とするアルテミス遺伝子突然変異、リンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（＋）ＮＫ（＋）を特徴とするＣＤ４５遺伝子突然変異、及びリンパ球表現型Ｔ（−）Ｂ（−）を特徴とするＰｒｋｄｃｓｃｉｄ突然変異が挙げられる。このように、いくつかの実施形態では、遺伝子改変型免疫不全非ヒト動物は、ＩＬ２受容体γ鎖（Ｉ１２ｒｇｙ／−）欠損、Ｊａｋ３欠損、ＡＤＡ欠損、ＩＬ７Ｒ欠損、ＣＤ３欠損、ＲＡＧ１および／またはＲＡＧ２欠損、アルテミス欠損、ＣＤ４５欠損ならびにＰｒｋｄｃ欠損から選択される１つ以上の欠損を有する。免疫不全のこれら及び他の動物モデルは、当業者には周知であり、そのいずれかを用いて本開示の免疫不全動物を作製してもよい。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本発明による遺伝子改変型非ヒト動物を、ヒト造血細胞のレシピエントとして用い、生着させたヒト造血細胞からヒト免疫細胞を発生させることができる。このように、本発明のいくつかの態様では、本発明の遺伝子改変型動物は、ヒト造血細胞を生着させた遺伝子改変型の免疫不全非ヒト動物である。
【０１３４】
ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物への生着
上述のように、本発明のいくつかの態様では、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウス、例えばＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウス、または致死量未満の放射線を照射したｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウスに、細胞を生着、すなわち移植する。細胞は、有糸分裂細胞または有糸分裂後細胞であってもよく、多能性幹細胞、例えばＥＳ細胞、ｉＰＳ細胞、及び胚生殖細胞、ならびに体細胞、例えば、線維芽細胞、造血細胞、ニューロン、筋細胞、骨細胞、血管内皮細胞、腸細胞など、及びその系統制限された前駆細胞及び前駆体細胞、などの関心対象の細胞を含む。特に関心対象の細胞集団として、造血幹細胞または造血前駆細胞を含む細胞集団が挙げられ、これらは、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物の造血系、例えば末梢血白血球、胎仔肝細胞、胎仔骨、胎仔胸腺、胎仔リンパ節、血管化皮膚、動脈セグメント、及び精製した造血幹細胞、例えば動員したＨＳＣまたは臍帯血ＨＳＣ、に寄与するか、またはそれらを再構成する。
【０１３５】
当該技術分野で周知であるか、または本明細書に記載の、ヒト造血細胞、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）および／または造血幹細胞・前駆細胞（ＨＳＰＣ）の任意の供給源を、本開示の遺伝子改変型免疫不全非ヒト動物に移植してもよい。当該技術分野で周知のヒト造血細胞の１つの適切な供給源は、ヒト臍帯血細胞、特にＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）細胞である。ヒト造血細胞の別の供給源は、ヒト胎児肝臓である。別の供給源はヒトの骨髄である。また、例えば当該分野で公知の方法による体細胞の脱分化によって産生する誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）及び誘導造血幹細胞（ｉＨＳＣ）も包含する。
【０１３６】
細胞は、任意の哺乳動物種、例えば、マウス、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、霊長類、ヒトなどに由来するものであってもよい。細胞は確立された細胞株由来であってもよく、または初代細胞であってもよく、ここで、「初代細胞」、「初代細胞株」及び「初代培養物」は、本明細書中で同じ意味で用いられ、対象由来であって、その培養物が、限られた継代数、すなわち分裂回数で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖できる細胞及び細胞培養物を指す。例えば、初代培養物は、０回、１回、２回、４回、５回、１０回、または１５回の継代を経た可能性があるが、まだ危機段階に至るほど十分な時間を経てはいない培養物である。通常、本発明の初代細胞株は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて１０継代未満で維持する。
【０１３７】
細胞が初代細胞である場合、それらを、任意の簡便な方法によって個体から採取してもよい。例えば、細胞、例えば血液細胞、例えば白血球を、アフェレーシス、白血球除去、密度勾配分離などによって採取してもよい。別の例として、細胞、例えば、皮膚、筋肉、骨髄、脾臓、肝臓、膵臓、肺、腸、胃の組織などを、生検によって採取してもよい。適切な溶液を、採取した細胞の分散または懸濁のために使用してもよい。そのような溶液は、一般的に、低濃度、通常５〜２５ｍＭの許容可能な緩衝液と共に、ウシ胎仔血清または他の天然発生因子を簡便に補充した平衡塩類溶液、例えば、生理食塩水、ＰＢＳ、ハンクス平衡塩類溶液などである。簡便な緩衝液として、ＨＥＰＥＳ、リン酸緩衝液、乳酸緩衝液などが挙げられる。
【０１３８】
いくつかの例では、細胞の異種集団をヒト化非ヒト動物、例えばマウスに移植する。他の例では、特定のタイプの細胞、例えば前駆細胞、例えば造血前駆細胞を富化した細胞の集団を、ヒト化非ヒト動物、例えばマウスに生着させる。関心対象の細胞集団の富化を、任意の簡便な分離技術によって行ってもよい。例えば、培養法によって目的の細胞を富化してもよい。そのような培養法では、通常、特定の増殖因子及び栄養素を培養物に添加し、ある細胞集団の生存および／または増殖を他の細胞集団以上に促進する。生存および／または増殖に影響を及ぼす他の培養条件として、接着基質または非接着基質上での増殖、特定の期間の培養などが挙げられる。このような培養条件は、当該技術分野で周知である。別の例として、関心対象の細胞を、親和性分離技術によって初期集団から目的の細胞を分離することによって富化してもよい。親和性分離技術として、親和性試薬で被覆した磁気ビーズを用いる磁気分離、親和性クロマトグラフィー、例えばプレートなどの固体マトリックスに結合させた親和性試薬、親和性試薬に結合させるか、または親和性試薬と併用する細胞傷害性薬剤、例えば補体及び細胞毒による「パンニング」、または他の簡便な技術が挙げられる。正確な分離を提供する技術として、複数のカラーチャネル、低角度及び鈍角の光散乱検出チャネル、インピーダンスチャネルなどの、様々な程度の精巧さを有し得る蛍光活性化細胞分取器が挙げられる。細胞は、細胞死に関連する色素（例えばヨウ化プロピジウム）を用いて、死細胞に対して選択を行ってもよい。関心対象の細胞の生存能力にとって過度に有害でない任意の技術を用いてもよい。
【０１３９】
例えば、親和性分離技術を用いて、関心対象の細胞上で発現していないマーカーを特異的に認識し選択的に結合する親和性試薬を集団に接触させることによって、移植のための関心対象の細胞ではない細胞を、集団から枯渇させる。例えば、造血前駆細胞集団を富化するために、成熟造血細胞マーカーを発現する細胞を枯渇させてもよい。これに加えて、またはこれに代えて、造血前駆細胞に関連するマーカー、例えばＣＤ３４、ＣＤ１３３などを特異的に認識し選択的に結合する親和性試薬を集団に接触させることによって、陽性選択及び分離を行ってもよい。「選択的に結合する」とは、分子が他の分子よりも関心対象の標的に優先的に結合するか、または標的に対してより大きな親和性で結合することを意味する。例えば、抗体は、特異的なエピトープを含む分子に結合し、無関係なエピトープには結合しない。いくつかの実施形態では、親和性試薬は、抗体、すなわちＣＤ３４、ＣＤ１３３などに特異的な抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、親和性試薬は、ＣＤ３４、ＣＤ１３３などに対する特異的受容体またはリガンド、例えばペプチドリガンド及び受容体、エフェクター及び受容体分子、ＣＤ３４、ＣＤ１３３などに特異的なＴ細胞受容体などであってもよい。いくつかの実施形態では、関心対象のマーカーに特異的な複数の親和性試薬を使用してもよい。
【０１４０】
親和性試薬として使用する抗体及びＴ細胞受容体は、モノクローナルまたはポリクローナルであってよく、また、トランスジェニック動物、免疫動物、不死化ヒトまたは動物Ｂ細胞、抗体またはＴ細胞受容体をコードするＤＮＡベクターを形質移入した細胞などによって産生してもよい。抗体の調製の詳細及びそれらを特異的結合メンバーとして使用することに対する適合性は、当業者には周知である。特に興味深いのは、標識した抗体を親和性試薬として用いることである。これらの抗体は、分離に使用するための標識物質に簡便に複合体化できる。標識物質として、直接的な分離を可能にする磁気ビーズ、アビジンまたはストレプトアビジンを支持体に結合させて除去可能なビオチン、蛍光活性化細胞分取器と共に使用可能な蛍光色素、などが挙げられ、特定の細胞型の分離を容易にすることができる。利用が見込まれる蛍光色素として、例えばフィコエリスリン及びアロフィコシアニンなどのフィコビリンタンパク質、フルオレセインならびにテキサスレッドが挙げられる。しばしば、各抗体を異なる蛍光色素で標識し、マーカーごとに個別に選別できるようにする。
【０１４１】
細胞の初期集団を親和性試薬（複数可）と接触させ、利用可能な細胞表面抗原に結合するのに十分な時間インキュベートする。インキュベーションは、通常少なくとも約５分間、及び通常約６０分間未満である。反応混合物中の抗体は十分な濃度であることが望ましく、そうすることによって、分離効率が抗体の不足によって制限されることがない。適切な濃度は、滴定によって決定するが、一般的には、細胞懸濁液の体積に対する抗体の希釈率が、約１：５０（すなわち、５０部の反応体積に対して１部の抗体）、約１：１００、約１：１５０、約１：２００、約１：２５０、約１：５００、約１：１０００、約１：２０００、または約１：５０００である。細胞を懸濁する培地は、細胞の生存能力を維持する任意の培地である。好ましい培地は、０．１〜０．５％のＢＳＡまたは１〜４％のヤギ血清を含有するリン酸緩衝食塩水である。様々な培地が市販されており、それらを細胞の性質に応じて使用してもよく、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ｄＭＥＭ）、ハンクス塩基性塩類溶液（ＨＢＳＳ）、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ｄＰＢＳ）、ＲＰＭＩ、イスコフ培地、５ｍＭ  ＥＤＴＡ含有ＰＢＳなどが挙げられ、これらに、ウシ胎仔血清、ＢＳＡ、ＨＳＡ、ヤギ血清などを補充することが多い。
【０１４２】
親和性試薬と接触させて標識する、集団中の細胞を、例えば上記の、または当該技術分野で公知の、任意の簡便な親和性分離技術によって選択する。分離後、分離した細胞を、細胞の生存能力を維持する任意の適切な培地中に収集してもよく、培地は、通常、収集チューブの底部に血清のクッションを有する。様々な培地が市販されており、それらを細胞の性質に応じて使用してもよく、例えば、ｄＭＥＭ、ＨＢＳＳ、ｄＰＢＳ、ＲＰＭＩ、イスコフ培地などが挙げられ、これらに、ウシ胎仔血清を補充することが多い。
【０１４３】
関心対象の細胞型、例えば造血細胞を高度に富化した組成物は、このようにして達成される。細胞は、細胞組成物の約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％またはそれ以上、富化した細胞組成物の約９５％またはそれ以上、及び好ましくは富化した細胞組成物の約９５％またはそれ以上である。換言すれば、組成物は、関心対象の細胞の、実質的に純粋な組成物である。
【０１４４】
ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物（例えば、マウス）に移植する細胞は、それらが異種細胞集団または富化した細胞集団である場合、直ちに移植してもよい。あるいは、細胞を液体窒素温度で凍結し、長期間保存してもよく、これを解凍して再利用することができる。そのような場合、細胞を、通常、当該分野で一般的に用いられる１０％ＤＭＳＯ、５０％血清、４０％緩衝化培地、またはそのような他の何らかの溶液中で凍結し、そのような凍結温度で細胞を保存し、及び凍結した培養細胞を解凍するための当該分野で一般的に公知の方法で解凍する。これに加えて、またはこれに代えて、細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで様々な培養条件下で培養してもよい。培養培地は、液体、または例えばアガー、メチルセルロースなどを含む半固体であってもよい。細胞集団は、例えば、通常はウシ胎仔血清（約５〜１０％）、Ｌ−グルタミン、チオール、特に２−メルカプトエタノール、ならびに抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンを補充したイスコフ改変ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０などの適切な栄養培地に簡便に懸濁してもよい。培養物には、細胞が応答するような増殖因子を含めてもよい。本明細書で定義する増殖因子とは、膜貫通受容体に対する特異的効果を介して、培養物またはインタクトな組織のいずれかで細胞の生存、増殖および／または分化を促進可能な分子である。増殖因子には、ポリペプチド及び非ポリペプチド因子が含まれる。
【０１４５】
ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスに移植する前に細胞を遺伝子改変し、例えば、選択可能または追跡可能なマーカーを提供し、細胞に遺伝的欠損を誘導し（例えば、疾患のモデル化のために）、遺伝的欠損を修復するか、または細胞内の遺伝子を異所的に発現させる（例えば、そのような改変が疾患の経過に影響を及ぼすかどうかを判定するために）ことなどを行ってもよい。適切なベクターによる形質移入もしくは形質導入、相同組換え、または他の適切な技術によって細胞を遺伝子改変し、それによって、関心対象の遺伝子を発現させるか、またはアンチセンスｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたはリボザイムを用いて、望ましくない遺伝子の発現をブロックしてもよい。核酸を標的細胞に導入するための様々な技術が当該技術分野で公知である。細胞を遺伝子改変したことを確かめるために、様々な技術を用いてもよい。細胞のゲノムを、制限酵素切断し、それを増幅し、または増幅せずに用いてもよい。ポリメラーゼ連鎖反応、ゲル電気泳動、制限酵素切断分析、サザン、ノーザン、及びウェスタンブロット、シークエンシング、などのいずれも用いてよい。本願で開示するこれら及び他の目的のための分子生物学及び細胞生化学における一般的方法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２００１）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  １９９９）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｂｏｌｌａｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  １９９６）、Ｎｏｎｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９９）、Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ（Ｋａｐｌｉｆｔ＆Ｌｏｅｗｙ  ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ（Ｉ．Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ  ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９７）、及びＣｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄｏｙｌｅ＆Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ  １９９８）のような標準的な教本に見出すことができ、これらの開示は、参照により本明細書に援用する。本開示において言及する試薬、クローニングベクター、及び遺伝子操作のためのキットは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ及びＣｌｏｎＴｅｃｈなどの商用ベンダーから入手可能である。
【０１４６】
例えば、肝臓内への注射、尾静脈への注射、後眼窩への注射などを含む任意の簡便な方法によって、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスに細胞を移植してもよい。一般的には、約０．５×１０５〜２×１０６個の多能性または前駆細胞、例えば、約１×１０５〜１×１０６細胞、または約２×１０５〜５×１０５細胞を移植する。いくつかの例では、非ヒト動物、例えばマウスに対し、致死量未満の放射線照射を行い、その後、ヒト細胞を移植する。換言すれば、非ヒト動物、例えばマウスを、例えば当該技術分野で周知の、致死量未満の線量の放射線に曝す。次いで、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスを、実験動物飼育条件下で、少なくとも１週間、例えば１週間以上、または２週間以上、時には４週間以上、及びいくつかの例では、６週間以上、例えば１０週間以上または１５週間以上維持し、生着させた細胞によって十分に免疫系が再構成できるようにする。
【０１４７】
ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウス、及びヒト造血細胞を生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウス、例えば、生着させたＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウス、ならびに必要に応じて他の遺伝子改変は、多くの応用に有用である。例えば、これらの非ヒト動物、例えばマウスは、ヒト免疫疾患及びヒト病原体をモデル化するための有用な系を提供する。例えば、本発明の非ヒト動物、例えばマウスは、例えば、ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の発生及び機能のモデル化、特定の組織および／または細胞のヒト病原体感染、例えば、腸または肺のヒト病原体感染、および／またはヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞のヒト病原体感染またはそれに対する応答のモデル化に有用である。そのような非ヒト動物はまた、病原体、例えば特定の組織または細胞型に影響を及ぼす（例えば、感染によって）病原体、例えば腸または肺のヒト病原体、例えばＴ細胞および／またはＮＫ細胞を活性化、誘導、および／または標的化するヒト病原体による感染を阻害する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、例えば健康または疾患の状態にあるヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞の発生および／または機能を調節する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞に対して毒性である薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞に対する毒性物質の毒性効果を予防、緩和、または逆転させる薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、候補Ｔ細胞誘導性ワクチンのｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニング、ならびにＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）プロセスの活性化による腫瘍増殖および／または感染を阻害する薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニングにおいても利用が見込まれる。
【０１４８】
本開示は、ヒト造血細胞を生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウス、例えば生着させたＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰαｈＩＬ−１５マウスが、組織常在性リンパ球、例えば、腸及び肺内で上皮内リンパ球を発生させることを示す予想外の結果を提供する。したがって、本開示は、そのような組織常在性リンパ球のモニタリング及び試験を可能にする、従来にはない動物モデルを提供する。そのような動物モデルは、腸および／または肺に影響を与える（例えば、感染によって）ヒト病原体に対する組織常在性リンパ球、例えばＴ細胞及びＮＫ細胞の免疫応答のモデル化、ならびにそのような病原体を標的化し、および／または組織常在性リンパ球応答を誘導または改善する治療薬及びワクチンのスクリーニングに特に有用である。さらに、これらの組織常在性リンパ球が存在することにより、セリアック病及びＩＢＤのような胃腸管に影響を及ぼすヒト免疫細胞駆動型自己免疫疾患をモデル化することもできる。
【０１４９】
したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列を保有する遺伝子改変型非ヒト動物を含むｉｎ  ｖｉｖｏモデルを提供する。遺伝子改変型非ヒト動物はまた、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列を保有する。最終的に、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒト造血細胞の生着を有し、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト腸内のヒト組織常在性リンパ球、例えば、上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する。そのようないくつかの実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト病原体、例えば腸に影響を及ぼす（例えば、感染によって）ヒト病原体を感染させる。
【０１５０】
腸に影響を及ぼす可能性のある（例えば、感染によって）ヒト病原体として、カンピロバクター・ジェジュニ、クロストリジウム・ディフィシル、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム、大腸菌、ヒトロタウイルス、リステリア・モノサイトゲネス、ノーウォークウイルス、サルモネラ・エンテリカ、シゲラ・フレックスネリ、シゲラ・ソネイ、志賀赤痢菌、ペスト菌、エルシニア・エンテロコリチカ、及びヘリコバクター・ピロリが挙げられるが、これらに限定するものではない。
【０１５１】
他の実施形態では、本開示は、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列を保有する遺伝子改変型非ヒト動物を含むｉｎ  ｖｉｖｏモデルを提供する。遺伝子改変型非ヒト動物はまた、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列を保有する。最終的に、遺伝子改変型非ヒト動物は、ヒト造血細胞の生着を有し、ここで遺伝子改変型非ヒト動物は、（ｉ）ヒトＳＩＲＰαタンパク質及びヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）遺伝子改変型非ヒト肺内のヒト組織常在性リンパ球、例えば、上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する。そのようないくつかの実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト病原体、例えば肺に影響を及ぼす（例えば、感染によって）ヒト病原体を感染させる。
【０１５２】
肺に影響を及ぼす可能性のある（例えば、感染によって）ヒト病原体として、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ヘモフィルス・インフルエンザ、ジフテリア菌、ＳＡＲＳコロナウイルス、百日咳菌、モラクセラ・カタラーリス、インフルエンザウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ）、コロナウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、肺炎連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、レジオネラ・ニューモフィラ、クレブシエラ・ニューモニエ、緑膿菌、肺炎マイコプラズマ、結核菌、クラミジア・ニューモニエ、ブラストミセス・デルマチチジス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、及びアスペルギルス・フミガーツスが挙げられるが、これらに限定するものではない。
【０１５３】
新規治療薬、新規ワクチン、及び治療薬とワクチンの有効性を試験する新規方法が必要である。効率的なヒトＴ細胞及びＮＫ細胞生着をサポートする非ヒト動物、例えばマウスは、特にヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞へ感染するヒト病原体に対する新規治療薬及び新規ワクチンの同定に有用であると考えられる。非ヒト動物内（血中または所定の組織内）のヒト病原体、例えばウイルスの量を推定抗ウイルス剤治療に応じて測定することによって、またはマウスに推定ワクチンを接種し、次いでヒト病原体、例えばＨＩＶの感染性投与に曝露し、及び推定ワクチン接種による感染性のいかなる変化も、ワクチン接種をしていないがＨＩＶに感染させた対照と比較して観察することによって、新規治療薬及び新規ワクチンを、そのような非ヒト動物、例えばマウスにおいて試験することができる。
【０１５４】
病原体感染のそのような非ヒト動物、例えばマウスモデルは、例えばヒトへの感染の進行をよりよく理解するための研究に有用である。このようなマウス感染モデルは、感染を予防または治療する候補薬剤を同定するための創薬においても有用である。
【０１５５】
本開示の生着させた遺伝子改変型動物は、ヒト病原体、例えばヒトＴ細胞および／またはＮＫ細胞を標的化するヒト病原体による感染を治療する薬剤を同定するための候補薬剤のスクリーニングでの利用が見込まれる。用語「治療する」、「治療」、「治療すること」などは、本明細書中では、一般的に所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを包含するように使用する。効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防するという点で予防的であってもよく、および／または、疾患および／または疾患に起因する有害作用を部分的または完全に治癒するという点で治療的であってもよい。本明細書で使用する「治療」とは、哺乳類における疾患の任意の治療を包含し、（ａ）疾患に罹患しやすいがまだ罹患しているとは診断されていない対象において疾患が生じることを予防するか、（ｂ）疾患を阻害、すなわちその発症を阻止するか、または（ｃ）疾患を緩和、すなわち疾患を退行させることを含む。
【０１５６】
用語「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」は、本明細書中では同じ意味で用いられ、診断、治療、または療法を所望する任意の哺乳類対象、特にヒトを含む。
【０１５７】
ヒト造血細胞を生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスは、また、ｉｎ  ｖｉｖｏでの他の所望の活性のための候補薬剤、例えば健康または疾患状態にあるヒトＴ細胞及びＮＫ細胞の発生および／または活性を調節（すなわち、促進または抑制）し、例えば新規治療薬を同定し、および／または免疫系の発達及び機能の分子的基礎のより良い理解を得ることが可能な薬剤、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞及びその前駆細胞に対して毒性である薬剤、ならびに、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及びそれらの前駆細胞に対する毒性物質の毒性効果を予防、緩和、または逆転させる薬剤、ＮＫ細胞依存性ＡＤＣＣプロセスなどを媒介する抗体または抗原結合タンパク質、などをスクリーニングするための有用な系を提供する。さらに別の例として、本明細書中に記載する遺伝子改変型マウスは、例えば、薬剤、例えば治療薬に対する個体の免疫系の応答性のスクリーニングのためのｉｎ  ｖｉｖｏプラットフォームを提供し、その薬剤に対する個体の応答性を予測することによって、疾患の治療に対する個体の応答性を予測するための有用な系を提供する。
【０１５８】
生物学的に活性な薬剤のスクリーニングアッセイにおいて、ヒト造血細胞を生着させ、及びいくつかの例ではヒト病原体に感染させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウス、例えば生着させたＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウスに対し、またはヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスへ生着させる細胞に対し、関心対象の候補薬剤を接触させ、１つ以上の出力パラメータをモニタリングすることによって、候補薬剤の効果を評価する。当該技術分野で周知の方法による、これらの出力パラメータ、例えば造血細胞の総数もしくは特定の造血細胞型の細胞の数は、細胞の生存率を、または、例えばＤＮＡ断片化の量、細胞の小疱形成の量、細胞表面上のホスファチジルセリンの量などは細胞のアポトーシス状態を反映している場合がある。これに代えて、またはこれに加えて、出力パラメータは、細胞の分化能、例えば、分化した細胞の割合及び分化した細胞の種類、例えば、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞を反映している場合がある。これに代えて、またはこれに加えて、出力パラメータは、細胞の機能、例えば、細胞が産生するサイトカイン及びケモカイン、チャレンジ部位を目指して血管外遊出する細胞の能力、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで他の細胞の活性を調節、すなわち促進または抑制する細胞の能力などを反映するものであってもよい。他の出力パラメータは、動物における病原体感染の程度、例えば非ヒト動物、例えばマウスなどにおける病原体の力価を反映するものであってもよい。
【０１５９】
パラメータは、望ましくはハイスループット系における細胞の定量可能な成分、特に正確な測定が可能な成分である。パラメータは、細胞表面決定因子、受容体、タンパク質またはその立体構造的もしくは翻訳後修飾体、脂質、炭水化物、有機または無機分子、核酸、例えばｍＲＮＡ、ＤＮＡなどを含む任意の細胞成分もしくは細胞産物、またはそのような細胞成分に由来する部分、またはそれらの組合せであり得る。ほとんどのパラメータは定量的な読み取り情報を提供するが、いくつかの例では、半定量的または定性的な結果が容認される。読み取り値は、単一の測定値を有してもよく、または平均値、中央値もしくは分散などを含んでいてもよい。特徴的な点として、複数の同じアッセイから各パラメータについて一定範囲のパラメータ読み取り値が得られる。変動性が予想され、試験パラメータセットの各々について、単一の値を提供するために使用する共通の統計的方法とともに、標準的な統計的方法を用いて一定範囲の値が得られる。
【０１６０】
スクリーニングのための関心対象の候補薬剤として、有機金属分子、無機分子、遺伝子配列、ワクチン、抗生物質または抗生物質としての特性を有している可能性のある他の薬剤、ペプチド、ポリペプチド、抗体、抗原結合タンパク質、ヒトで使用するために医薬品として承認されている薬剤などを含み得る、有機分子を主成分とする多数の化学的クラスの既知及び未知の化合物が挙げられる。本発明の重要な態様は、候補薬剤を評価することであり、これには毒性試験などが含まれる。
【０１６１】
候補薬剤は、構造的相互作用、特に水素結合に必要な官能基を含む有機分子を含み、一般的には少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシルまたはカルボキシル基を含み、しばしば少なくとも２つの官能化学基を含む。候補薬剤は、しばしば、上記の官能基の１つ以上で置換した環状炭素もしくは複素環構造および／または芳香族もしくは多環芳香族構造を含む。候補薬剤はまた、ペプチド、ポリヌクレオチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造類似体またはそれらの組合せを含む生体分子において見出される。候補薬剤は、薬理学的活性薬剤、遺伝的活性分子などを含む。関心対象の化合物として、化学療法剤、ホルモンまたはホルモン拮抗薬などが挙げられる。本発明に適した医薬剤の例は、“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，”Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９９６），Ｎｉｎｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎに記載されている。候補薬剤はまた、毒素、ならびに生物学兵器剤及び化学兵器剤も含み、例えば、Ｓｏｍａｎｉ，Ｓ．Ｍ．（Ｅｄ．），“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｗａｒｆａｒｅ  Ａｇｅｎｔｓ，”Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９２）参照。
【０１６２】
スクリーニングのため関心対象の候補薬剤として、核酸、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンス分子、もしくはｍｉＲＮＡをコードする核酸、またはポリペプチドをコードする核酸も挙げられる。標的細胞への核酸の移入に有用な多くのベクターが利用可能である。プラスミド、ミニサークルＤＮＡ、例えばサイトメガロウイルス、アデノウイルスなどのウイルス由来ベクターのようなエピソームとしてベクターを維持してもよく、または例えばＭＭＬＶ、ＨＩＶ−１、ＡＬＶなどのレトロウイルス由来ベクターを、相同組換えもしくはランダムインテグレーションを介して標的細胞ゲノムに組み込んでもよい。ベクターは、対象の細胞に直接提供してもよい。換言すれば、関心対象の核酸を含むベクターを多能性細胞に接触させ、それによって、ベクターを細胞に取り込ませる。
【０１６３】
細胞、例えば、培養中の細胞、または非ヒト動物、例えばマウス内の細胞を、核酸ベクターと接触させる電気穿孔法、塩化カルシウム形質移入法、及びリポフェクションなどの方法は、当該技術分野で周知である。あるいは、ウイルスを介して関心対象の核酸を細胞に提供してもよい。換言すれば、関心対象の核酸を保有するウイルス粒子を細胞に接触させる。レトロウイルス、例えばレンチウイルスは、本発明の方法に特に適している。一般的に用いるレトロウイルスベクターは「欠損」型、すなわち、増殖性感染に必要なウイルスタンパク質を産生することができない型である。むしろ、パッケージング細胞株内で増殖することが、ベクター複製に必要である。関心対象の核酸を保有するウイルス粒子を生成するために、前記核酸を含むレトロウイルス核酸をパッケージング細胞株によってウイルスキャプシドにパッケージングする。異なるパッケージング細胞株は、キャプシドに取り込まれる異なるエンベロープタンパク質を提供し、そのエンベロープタンパク質が、細胞のウイルス粒子の特異性を決定する。エンベロープタンパク質は、狭宿主性、広宿主性及び異種指向性の少なくとも３種からなる。狭宿主性エンベロープタンパク質、例えばＭＭＬＶと共にパッケージングしたレトロウイルスは、ほとんどのマウス及びラットの細胞型に感染することができ、ＢＯＳＣ２３などの狭宿主性パッケージング細胞株を用いて生成される（Ｐｅａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９０：８３９２−８３９６）。広宿主性エンベロープタンパク質を有するレトロウイルス、例えば、４０７０Ａ（Ｄａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ，上記参照）は、ヒト、イヌ及びマウスを含むほとんどの哺乳類細胞型に感染することができ、ＰＡ１２（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３１−４３７）、ＰＡ３１７（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：２８９５−２９０２）、ＧＲＩＰ（Ｄａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）ＰＮＡＳ  ８５：６４６０−６４６４）などの広宿主性パッケージング細胞株を用いて生成される。異種指向性エンベロープタンパク質、例えばＡＫＲ  ｅｎｖと共にパッケージングしたレトロウイルスは、マウス細胞を除くほとんどの哺乳類細胞型に感染することができる。適切なパッケージング細胞株を用いて、関心対象の細胞、いくつかの例では生着させた細胞、いくつかの例では宿主細胞、すなわちヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５を、パッケージングしたウイルス粒子によって確実に標的化してもよい。
【０１６４】
関心対象の核酸を対象の細胞に提供するために使用するベクターは、一般的に、関心対象の核酸の発現、すなわち転写活性化を駆動するための適切なプロモーターを含む。これは、遍在的に作用するプロモーター、例えばＣＭＶ−ｂ−アクチンプロモーター、または誘導性プロモーター、例えば特定の細胞集団において活性であるか、またはテトラサイクリンのような薬剤の存在に応答するプロモーターなどを含み得る。転写活性化により、標的細胞内における転写を、基底レベルよりも少なくとも約１０倍、少なくとも約１００倍、より一般的には少なくとも約１０００倍高めることを意図する。さらに、対象の細胞に再プログラミング因子を提供するために使用するベクターは、後で除去する必要がある遺伝子を有する場合があり、その除去は、例えば、Ｃｒｅ／Ｌｏｘのようなリコンビナーゼ系を用いて、または前記遺伝子を発現し、例えばヘルペスウイルスＴＫ、ｂｃｌ−ｘｓなどの選択的毒性を可能とする遺伝子を有することによって破壊される細胞を用いて行う。
【０１６５】
スクリーニングのための関心対象の候補薬剤には、ポリペプチドも含まれる。必要に応じて、そのようなポリペプチドを、産物の溶解度を高めるポリペプチドドメインに融合させてもよい。そのドメインは、規定のプロテアーゼ切断部位、例えば、ＴＥＶプロテアーゼによって切断されるＴＥＶ配列を介してポリペプチドに連結させてもよい。リンカーはまた、１つ以上の柔軟な配列、例えば１〜１０残基のグリシン残基を有してもよい。いくつかの実施形態では、例えば０．５〜２Ｍ尿素の存在下、溶解度を高めるポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチドの存在下などにおいて、産物の溶解度を維持する緩衝液中で、融合タンパク質の切断を実施する。関心対象のドメインには、エンドゾーム分解性ドメイン、例えば、インフルエンザＨＡドメイン、及び産生を補助する他のポリペプチド、例えばＩＦ２ドメイン、ＧＳＴドメイン、ＧＲＰＥドメインなどが含まれる。これに加えて、またはこれに代えて、そのようなポリペプチドを、安定性向上のために製剤化してもよい。例えば、ペプチドはＰＥＧ化されていてもよく、ここでポリエチレンオキシ基は血流中において寿命の延長をもたらす。ポリペプチドを別のポリペプチドに融合し、さらなる機能性を提供し、例えばｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性を高めてもよい。一般的に、そのような融合パートナーは、安定な血漿タンパク質であり、融合体として存在する場合、特に、そのような安定な血漿タンパク質が免疫グロブリン定常ドメインである場合、例えば、ポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ血漿半減期を延長し得る。ほとんどの場合において、安定な血漿タンパク質は、通常、多量体形態、例えば免疫グロブリンまたはリポタンパク質に見出され、そこでは、同一のまたは異なるポリペプチド鎖が、通常、ジスルフィドおよび／または非共有結合的に結合して集合多鎖ポリペプチドを形成しており、そのポリペプチドを含む本明細書の融合体は、安定な血漿タンパク質前駆体と実質的に同じ構造を有する多量体として産生され、使用される。これらの多量体は、それらが含むポリペプチド剤に関して均質であるか、またはそれらは複数のポリペプチド剤を含み得る。
【０１６６】
候補ポリペプチド剤は、真核細胞から産生してもよく、または原核細胞によって産生してもよい。例えば熱変性、ＤＴＴ還元などのアンフォールディングによってさらにそれを処理してもよく、当該分野で公知の方法を用いてさらにリフォールディングさせてもよい。一次配列を変化させない関心対象の修飾として、ポリペプチドの化学的誘導体化、例えばアシル化、アセチル化、カルボキシル化、アミド化などが挙げられる。また、例えばポリペプチドの合成及びプロセシング中か、または、例えば哺乳類のグリコシル化酵素もしくは脱グリコシル化酵素などのグリコシル化に影響を与える酵素にポリペプチドを曝露することによるさらなるプロセシング工程において、ポリペプチドのグリコシル化パターンを改変することによって行うグリコシル化修飾も挙げられる。リン酸化アミノ酸残基、例えばホスホチロシン、ホスホセリン、またはホスホスレオニンを含む配列もまた包含する。ポリペプチドは、通常の分子生物学的技術及び合成化学を用いて、タンパク質分解に対する耐性を改善するため、または溶解特性を最適化するため、またはそれらを治療剤としてより適切にするために修飾されている場合がある。そのようなポリペプチド類似体として、天然に存在するＬ−アミノ酸以外の残基、例えばＤ−アミノ酸または非天然合成アミノ酸を含むものが挙げられる。アミノ酸残基の一部または全部を、Ｄ−アミノ酸で置換してもよい。
【０１６７】
候補ポリペプチド剤は、当該分野で公知の従来の方法を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ合成によって調製してもよい。様々な市販の合成装置、例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｅｃｋｍａｎなどによる自動合成装置が利用可能である。合成装置を用いて、天然アミノ酸を非天然アミノ酸で置換してもよい。特定の配列及び調製様式は、便宜、経済性、必要とされる純度などに応じて決定する。あるいは、候補ポリペプチド剤を、組換え合成の従来の方法によって単離及び精製してもよい。発現宿主で溶解物を調製してもよく、溶解物は、ＨＰＬＣ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、または他の精製技術を使用して精製する。多くの場合、産物の調製方法及びその精製方法に関連する混入物との関連で、使用する組成物は、所望産物を、少なくとも２０重量％、より一般的には少なくとも約７５重量％、好ましくは少なくとも約９５重量％、及び治療目的のためには一般的に少なくとも約９９．５重量％含む。通常、これらの割合は、全タンパク質に基づいてのものである。
【０１６８】
いくつかの場合では、スクリーニングする候補ポリペプチド剤は、抗体または抗原結合タンパク質である。用語「抗体」または「抗体部分」は、エピトープに適合し、それを認識する特定の形状を有する任意のポリペプチド鎖含有分子構造を含むことを意図しており、ここでは、１つ以上の非共有結合相互作用が、分子構造とエピトープとの複合体を安定化させる。所与の構造及びその特異的エピトープの特異的または選択的適合は、しばしば「鍵と鍵穴」式の適合と呼ばれる。典型的な抗体分子は免疫グロブリンであり、すべての供給源、例えば、ヒト、げっ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳類、ニワトリ、他の鳥類などに由来するＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤなどのすべての種類の免疫グロブリンは、「抗体」であると考えられる。本発明で利用する抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれであってもよい。抗体は、一般的には、細胞を培養する培地中に提供する。抗体以外に関しても、抗原結合タンパク質は、同様に、関心対象の抗原に結合し、応答、例えば免疫学的反応を誘発するように設計されたポリペプチドを包含する。用語「抗原結合タンパク質」は、当該技術分野で公知の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’  Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、及びｓｃＦｖが挙げられる）も包含する。用語「抗体」及び「抗原結合タンパク質」はまた、他のタンパク質との融合タンパク質、一本鎖抗体、及び二重特異性抗体として発現するか、またはそれらと化学的に複合体化し得る１つ以上の免疫グロブリン鎖または断片を包含する。
【０１６９】
候補薬剤は、合成または天然化合物のライブラリーを含む広範囲の供給源から取得してもよい。例えば、無作為化したオリゴヌクレオチド及びオリゴペプチドを発現させることを含む、生体分子を含む多種多様な有機化合物のランダム及び定向性合成のための多数の手段が利用可能である。あるいは、細菌、真菌、植物及び動物抽出物の形態の天然化合物のライブラリーが入手可能であり、またはそれらは容易に製造される。さらに、天然または合成によって作製するライブラリー及び化合物は、従来の化学的、物理的及び生化学的手段によって容易に改変され、それらを用いてコンビナトリアルライブラリーを作製してもよい。公知の薬理学的薬剤を、アシル化、アルキル化、エステル化、アミド化などの定向性またはランダム化学修飾に供し、構造類似体を生成してもよい。
【０１７０】
少なくとも１つの、通常は複数の試料に、場合によっては薬剤を含まない試料と併用して、薬剤を投与することによって、生物学的活性について候補薬剤をスクリーニングする。薬剤に応答するパラメータの変化を測定し、結果を、参照培養物、例えば薬剤の存在下及び非存在下での培養物、他の薬剤を用いて得た培養物などと比較することによって評価する。スクリーニングを実施して毒性物質の効果を予防、緩和または逆転させる候補薬剤を同定する場合、一般的には毒性物質の存在下でスクリーニングを行い、決定すべき結果にとって最も適切な時点に毒性物質を添加する。例えば、候補薬剤の保護／予防能力を試験する場合、候補薬剤は、毒性物質の前に、候補薬剤と同時に、または候補薬剤による処置の後に添加してもよい。別の例として、毒性物質の作用を逆転させる候補薬剤の能力を試験する場合、候補薬剤による処置の後に候補薬剤を添加してもよい。上記のように、いくつかの例では、試料は、細胞を生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスであり、すなわち、細胞を生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスに、候補薬剤を供給する。いくつかの例では、試料は、生着させる細胞であり、すなわち移植前に、細胞に候補薬剤を供給する。
【０１７１】
候補薬剤を、非ヒト動物、例えばマウスに直接投与する場合、ペプチド、小分子及び核酸を投与するための当該技術分野で周知の多数の方法のいずれかによって薬剤を投与してもよい。例えば、薬剤を、経口、経粘膜、局所、皮内、または注射、例えば、腹腔内、皮下、筋肉内、静脈内、または頭蓋内注射などによって投与してもよい。薬剤は、緩衝液中に投与してもよく、または例えば、薬学的に許容可能な適切なビヒクルと組み合わせて、様々な製剤のいずれかに含ませてもよい。「薬学的に許容可能なビヒクル」は、連邦政府または州政府の規制当局によって承認されたか、または米国薬局方もしくはヒトなどの哺乳類での使用のために一般に認められている薬局方にリストされているビヒクルであってもよい。用語「ビヒクル」とは、希釈剤、アジュバント、賦形剤、または担体を指し、それを用いて、哺乳類に投与するために本発明の化合物を製剤化する。そのような医薬ビヒクルは、脂質、例えばリポソーム、例えばリポソームデンドリマー、石油、動物、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ごま油など植物または合成起源のもの、生理食塩水を含む水及び油などの液体、、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであり得る。さらに、補助剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色料を使用してもよい。医薬組成物は、錠剤、カプセル、散剤、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル、ミクロスフェア、及びエアロゾルのような、固体、半固体、液体または気体形態の製剤に製剤化してもよい。薬剤は、投与後に全身性であってもよく、または局所投与、壁内投与、もしくは移植部位に活性用量を保持するように作用するインプラントの使用によって、局在化させてもよい。活性薬剤は、即時活性用に製剤化してもよく、または徐放用に製剤化してもよい。いくつかの病態、特に中枢神経系の病態については、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するように薬剤を製剤化することが必要な場合がある。血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する薬剤送達のための１つの戦略は、マンニトールまたはロイコトリエンなどの浸透圧手段によるＢＢＢの破壊、またはブラジキニンなどの血管作用物質の使用による生化学的な破壊を伴う。組成物を血管内注射で投与する場合、ＢＢＢ破壊剤を薬剤と同時投与することができる。ＢＢＢを通過するための他の戦略は、カベオリン−１を介したトランスサイトーシス、グルコース及びアミノ酸キャリアなどのキャリアを介したトランスポーター、インスリンまたはトランスフェリンの、受容体を介したトランスサイトーシス、及びｐ−糖タンパク質などの能動流出トランスポーターを含む、内在性輸送系の使用を伴う。また、本発明において使用するための治療化合物に活性輸送部分を複合体化させて、血管の内皮壁を通過する輸送を促進してもよい。あるいは、ＢＢＢの裏側への薬剤の薬剤送達は、局所送達、例えば髄腔内送達、例えば、オンマイヤーレザバー（参照により本明細書に援用する米国特許第５，２２２，９８２号及び同第５，３８５，５８２号参照）によるか、例えばシリンジによる例えば硝子体内または頭蓋内へのボーラス注入によるか、例えばカニューレ挿入による例えば対流を伴う連続注入（例えば、参照により本明細書に援用する米国特許出願第２００７０２５４８４２号参照）によるか、または薬剤を可逆的に固定している器具の移植（例えば、参照により本明細書に援用する米国特許出願第２００８００８１０６４号及び同第２００９０１９６９０３号参照）によるものであってもよい。
【０１７２】
移植に先立って、薬剤（複数可）を細胞に供給する場合、薬剤は、培養中の細胞の培地に、溶液または容易に可溶な形態で簡便に添加できる。フロースルーシステムにおいて断続的または連続的な流動として薬剤を添加するか、あるいはさもなければ静的な溶液に大量の化合物を単独でまたは増分的に添加してもよい。フロースルーシステムでは、２つの流体を使用し、一方は生理学的に中性の溶液であり、他方は添加する試験化合物と同じ溶液である。第一の流体を細胞上に通し、次に第二の流体を細胞上に通す。単一の溶液を用いる方法では、細胞周囲の培地ボリュームに大量の試験化合物を加える。培地成分の全体濃度は、大量の添加によって、またはフロースルーの方法においては２つの溶液の間で、有意に変化すべきではない。
【０１７３】
異なる薬剤濃度での複数のアッセイを並列実行して、種々の濃度での様々に異なる応答を得てもよい。当該技術分野で周知のように、一般的には、１：１０または他の対数スケールでの希釈から生じる濃度範囲を用いて、薬剤の有効濃度を測定する。必要であれば、第二の一連の希釈液を用いて有効濃度をさらに精査してもよい。通常、これらの濃度のうちの１つは、陰性対照、すなわち、濃度がゼロであるか、または薬剤の検出レベル未満であるか、または表現型に検出可能な変化を与えない薬剤濃度未満である陰性対照として機能する。
【０１７４】
ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスの細胞の、候補薬剤に対する応答の分析を、薬剤による治療後の任意の時点で実施してもよい。例えば、候補薬剤と接触させてから１、２または３日後、場合により４、５または６日後、場合により８、９または１０日後、場合により１４日後、場合により２１日後、場合により２８日後、場合により１か月後またはそれ以上、例えば２か月、４か月、６か月またはそれ以上の後に細胞を分析してもよい。いくつかの実施形態では、分析は複数の時点での分析を含む。分析のための時点（複数可）の選択は、当業者であれば容易に理解するように、実施すべき分析の種類に応じたものとなる。
【０１７５】
分析は、細胞生存率、細胞増殖、細胞同一性、細胞形態、及び細胞機能を測定するための、本明細書に記載の、または当該技術分野で周知のパラメータのいずれかを、特にそれらが免疫系の細胞、例えばＴ細胞および／またはＮＫ細胞に関連し得るように測定することを含み得る。例えば、フローサイトメトリーを用いて、造血細胞の総数または特定の造血細胞型の細胞の数を測定してもよい。組織化学または免疫組織化学、例えば、ＤＮＡ断片化を測定するための末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）、または細胞表面上のホスファチジルセリンへのアネキシンＶ結合を検出するための免疫組織化学を実施して、細胞のアポトーシス状態を判定してもよい。フローサイトメトリーを用いて、分化した細胞及び分化した細胞型の割合を評価し、例えば、薬剤存在下での造血細胞の分化能力を判定してもよい。ＥＬＩＳＡ、ウェスタン及びノーザンブロットを実施して、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えば、マウスで発現するサイトカイン、ケモカイン、免疫グロブリンなどのレベルを測定し、生着させた細胞の機能を評価してもよい。免疫細胞の機能を試験するためのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ、ならびに糖尿病、自己免疫疾患、移植片対宿主病、ＡＭＤなどのような関心対象の特定の疾患または障害に関連するアッセイを実施してもよい。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃｏｉｃｏ，ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２０１２）及びＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ（Ｉ．Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ  ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９９７）を参照されたく、これらの開示は参照により本明細書に援用する。
【０１７６】
したがって、例えば、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えば、マウス、例えば、生着させたＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウスを、有効量のヒト病原体、すなわちマウスにおいて感染を引き起こすのに必要な量の病原体に曝露し、病原体がマウスに感染することを可能にし、薬剤の存在下での経時的な感染のパラメータを測定し、及びその測定値を、薬剤に曝露していない、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスでの測定値と比較することを含む、ヒト病原体に対する薬剤の効果の測定方法を提供する。選択された期間にわたっての薬剤の単回投与、または２回以上の投与後において、薬剤が、非ヒト動物、例えばマウスの血中または組織中の薬剤の量を少なくとも半分にまで減少させる場合、その薬剤は抗病原性薬剤であると判定される。
【０１７７】
別の例として、病原体分離株または関心対象の株が薬剤耐性、例えば多剤耐性であるかどうかの判定方法を提供する。これらの方法では、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウス、例えば生着させたＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウスを、有効量のヒト病原体、すなわち非ヒト動物、例えばマウスにおいて感染を引き起こすのに必要な量の病原体の単離株もしくは関心対象の株に曝露し、病原体が非ヒト動物に感染することを可能にし、感染のパラメータ、例えば、非ヒト動物の血中または組織中の分離株もしくは関心対象の株の力価、非ヒト動物内で感染を維持する分離株もしくは関心対象の株の能力、または薬剤の投与後のある時点での非ヒト動物内での単離株もしくは関心対象の株の再生能力、を薬剤の存在下で測定し、及び、その測定値を、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えば薬剤に曝露していない病原体に感染したマウスにおける測定値と比較する。関心対象の薬剤の例として、アモキシシリン、アンピシリン、セフォタキシム、セフトリアキソン、セフタジジム、クロラムフェニコール、シプロフロキサシン、コトリモキサゾール、エルタペネム、イミペネム、フルオロキノロン（例えば、シプロフロキサシン、ガチフロキサシン、オフロキサシン）、ストレプトマイシン、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、テトラサイクリン、及びそれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態では、薬剤または薬剤の組合せの投与は、感染単離株または関心対象の株への感染を発生させる曝露の少なくとも１週間、１０日、２週間、３週間、または４週間後に行う。
【０１７８】
さらに、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物（例えばマウス）及びヒト造血細胞を生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物（例えばマウス）、例えば生着させたＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウス、及び必要に応じて他の遺伝子改変を有する非ヒト動物は、ＮＫ細胞（例えばヒトＮＫ細胞）を介する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の研究に有用である。そのような動物はまた、様々な細胞（例えば、腫瘍もしくは感染細胞）または感染病原体を標的化し、そのような細胞または感染病原体を死滅させることに関与するＮＫ細胞経路を活性化するように設計した治療用薬剤候補、例えば抗原結合タンパク質または抗体の能力を試験するための有用なモデルである。
【０１７９】
モノクローナル抗体療法の根底にある機構の１つは、ＮＫ細胞Ｆｃ受容体ＣＤ１６（Ｆｃγ受容体ＩＩＩＡ）に結合することによるＮＫ細胞の活性化であることは広く知られている。ＡＤＣＣを改善するために、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する様々な公知のモノクローナル候補（例えばリツキシマブ）の親和性を増大させる試みがなされている（例えば、Ｂｏｗｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２００６；１０８：２６４８−２６５４、Ｇａｒｆｆ−Ｔａｖｅｒｎｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１１；２５：２０２−２０９）。本明細書に示すように、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５を生着させた非ヒト動物は、ＡＤＣＣを媒介可能なヒトＮＫ細胞を産生し、したがって、これらの動物は、ＡＤＣＣ機構を研究し、様々な治療候補をスクリーニングするための有用なｉｎ  ｖｉｖｏモデルを提示する。
【０１８０】
したがって、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物及びそこから単離した細胞、例えばヒトＮＫ細胞を、ヒト化非ヒト動物または細胞、例えばヒトＮＫ細胞における生着させた細胞型の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を向上させる薬剤を同定するために設計したスクリーニング法において、用いてもよい。例えば、適切な方法は、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物に薬剤を投与し、ヒト化非ヒト動物内の生着させた細胞型の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性に対するｉｎ  ｖｉｖｏでの薬剤の効果を測定することを含む。一実施形態では、そのような効果は、例えばヒト腫瘍の、例えば移植した腫瘍の、腫瘍死の増大をもたらす。別の実施形態では、そのような効果は、感染細胞、例えば、ウイルス感染細胞または細菌感染細胞の死滅を増大させる。さらに別の実施形態では、そのような効果は、細菌、真菌または寄生虫の死滅の増大をもたらす。様々な実施形態において、薬剤は、抗体または抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合タンパク質を、ヒト腫瘍細胞上に発現する抗原を標的化するように設計する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合タンパク質を、ウイルス感染細胞または細菌感染細胞で発現する抗原を標的化するように設計する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合タンパク質を、細菌、真菌、または寄生虫の抗原を標的化するように設計する。いくつかの実施形態では、ヒト細胞、例えばヒトＮＫ細胞を、生着させたヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物から単離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗体または抗原結合タンパク質などの薬剤、及び標的細胞（例えば腫瘍細胞）と接触させ、標的細胞の死滅を媒介する際の薬剤の有効性を測定するｉｎ  ｖｉｔｒｏ法を提供する。次いで、ヒト細胞、例えばヒトＮＫ細胞の細胞溶解活性に対する薬剤の効果を測定することができる。
【０１８１】
本発明のマウスの他の使用例を、本明細書の他の箇所に記載する。本開示に記載する遺伝子改変マウス及び生着させたマウスのさらなる応用は、本開示を読めば、当業者には明らかである。
【０１８２】
本発明の遺伝子改変型非ヒト動物の作製方法
本発明のいくつかの態様において、本開示の非ヒト動物の作製方法を提供する。本発明の方法を実施するにあたり、遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、及びＳＩＲＰα遺伝子プロモーター、例えば内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、ならびに遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、及びＩＬ−１５遺伝子プロモーター、例えば、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、を保有する非ヒト動物を生成する。
【０１８３】
ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰαプロモーターに作動可能に連結する核酸配列、および／またはヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５プロモーターに作動可能に連結する核酸配列、を保有する非ヒト動物の作製は、遺伝子改変型動物を作製するための任意の簡便な方法、例えば当該技術分野で公知であるか、または本明細書に記載する方法を用いて達成してもよい。
【０１８４】
例えば、ヒトＳＩＲＰαタンパク質またはヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸は、宿主細胞のゲノムへの挿入、及び非ヒト宿主細胞内でのヒトタンパク質の発現に適した形態で組換えベクターに組み込んでもよい。様々な実施形態において、組換えベクターは、上記のように、核酸からのｍＲＮＡ転写及びヒトタンパク質へのｍＲＮＡの翻訳を可能にする様式で、ヒトタンパク質をコードする核酸に作動可能に連結する１つ以上の調節配列を含む。ベクターの設計は、形質移入する宿主細胞の選択および／または発現するヒトタンパク質の量などの因子に依存する可能性があることが理解されるであろう。
【０１８５】
次いで、様々な方法のいずれかを用いて、動物細胞にヒト核酸配列を導入し、ヒト遺伝子を発現する遺伝子改変型動物を作製してもよい。そのような技術は、当該技術分野で周知であり、例えば、前核マイクロインジェクション、胚性幹細胞の形質転換、相同組換え及びノックイン技術が挙げられるが、これらに限定するものではない。利用可能な遺伝子改変動物の生成方法として、Ｓｕｎｄｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｉｃｈｉｋｉ（２００６，Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｍｉｃｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｈｏｆｋｅｒ  ａｎｄ  ｖａｎ  Ｄｅｕｒｓｅｎ（２００２，Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｊｏｙｎｅｒ（２０００，Ｇｅｎｅ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｔｕｒｋｓｅｎ（２００２，Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０７：１５０２２−１５０２６）、及びＧｉｂｓｏｎ（２００４，Ａ  Ｐｒｉｍｅｒ  ｏｆ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２ｎｄｅｄ．Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ：Ｓｉｎａｕｅｒ）、米国特許第６，５８６，２５１号、Ｒａｔｈｉｎａｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１，Ｂｌｏｏｄ  １１８：３１１９−２８）、Ｗｉｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０８：２３９０−２３９５）、Ｒｏｎｇｖａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０８：２３７８−８３）ならびにＶａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔ  ２１：６５２−６５９）が挙げられるが、これらに限定するものではない。
【０１８６】
例えば、本発明の遺伝子改変型動物は、ヒトタンパク質をコードする核酸を卵母細胞に、例えばマイクロインジェクションによって導入し、雌の家畜体内で卵母細胞を発生させることによって作製することができる。好ましい態様では、受精後の卵母細胞に核酸を注入する。受精後の卵母細胞は、過排卵させた雌から交配の翌日に採取し、これに発現構築物を注射することができる。注入後の卵母細胞を、一晩培養するか、または交尾後０．５日目の偽妊娠の雌の輸卵管に直接移植する。過排卵、卵母細胞の採取、発現構築物の注射及び胚移植の方法は、当該技術分野で周知であり、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ（２００２，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）に記載されている。ＤＮＡ分析（例えば、ＰＣＲ、サザンブロット、ＤＮＡ配列決定など）またはタンパク質分析（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなど）によって、導入した核酸の存在について、子孫を評価することができる。
【０１８７】
別の例として、ヒトタンパク質をコードする核酸配列を含む構築物を、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクションなどの周知の方法を用いて幹細胞（例えば、ＥＳ細胞またはｉＰＳ細胞）に形質移入してもよい。ＤＮＡ分析（例えば、ＰＣＲ、サザンブロット、ＤＮＡ配列決定など）またはタンパク質分析（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなど）によって、導入した核酸の存在について、細胞を評価することができる。次いで、発現構築物を組み込んだと判定された細胞を着床前胚に導入することができる。本発明の組成物及び方法に有用な、当該分野で公知の方法の詳細な説明については、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２，Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １１０：８１５−８２１）、米国特許第７，５７６，２５９号、米国特許第７，６５９，４４２号、米国特許第７，２９４，７５４号、及びＫｒａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０，Ｇｅｎｅｓｉｓ  ４８：３９４−３９９）参照。
【０１８８】
好ましい実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変型動物の作製方法は、実施例に記載する通り、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を用いて作製したターゲティング構築物を利用して、その構築物をＥＳ細胞に導入し、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を用いて標的ＥＳ細胞クローンをマウス胚に導入する。
【０１８９】
遺伝子改変型始祖動物を、遺伝子改変を保有する追加の動物と交配することができる。例えば、ヒト化ＳＩＲＰα非ヒト動物を、同種のヒト化ＩＬ−１５非ヒト動物と交配して、本明細書に記載のｈＳＩＲＰα−ｈＩＬ−１５非ヒト動物を産生することができる。本開示のヒトタンパク質（複数可）をコードする核酸を保有する遺伝子改変型動物を、ノックアウト動物、例えば、１つ以上のタンパク質を欠損している、例えばその遺伝子の１つ以上を発現していない非ヒト動物、例えばＲａｇ２欠損動物および／またはＩｌ２ｒｇ欠損動物とさらに交配することができる。
【０１９０】
上述のように、いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子改変型非ヒト動物は、免疫不全動物である。当該技術分野で周知の、または本明細書に記載の遺伝子改変型動物を生成するための任意の簡便な方法を用いて、免疫不全であり、１つ以上のヒトタンパク質、例えばｈＳＩＲＰαおよび／またはｈＩＬ−１５を保有する遺伝子改変型非ヒト動物を生成してもよい。例えば、遺伝子改変型免疫不全動物の生成は、ヒトタンパク質をコードする核酸を、変異ＳＣＩＤ遺伝子の対立遺伝子を保有する卵母細胞または幹細胞に導入することによって達成することができ、この対立遺伝子は、ホモ接合である場合に、上記及び本明細書の実施例に、より詳細に記載するような免疫不全を生じる。次に、改変した卵母細胞またはＥＳ細胞を用いて、例えば、本明細書に記載する当該分野で公知の方法を用いてマウスを生成し、交配させ、所望の遺伝子改変を有する免疫不全マウスを作製する。別の例として、遺伝子改変型非ヒト動物を免疫適格環境で作製し、ヘミ接合性またはホモ接合性の場合に免疫不全を生じる突然変異遺伝子の対立遺伝子を保有する動物と交雑し、その子孫を交配させて関心対象の少なくとも１つのヒトタンパク質を発現する免疫不全動物を作製することができる。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、遺伝子改変型非ヒト動物を、遺伝子改変型非ヒト動物に存在し得る内在性造血細胞を排除するように処置する。一実施形態では、処置は、遺伝子改変型非ヒト動物に放射線照射することを含む。特定の実施形態では、新生仔遺伝子改変マウス仔に致死量未満の放射線照射を行う。特定の実施形態では、新生仔に２×２００ｃＧｙの放射線を４時間間隔で照射する。
【０１９２】
本発明の様々な実施形態は、それらの細胞の実質的にすべてにヒト核酸を保有する遺伝子改変型動物、ならびにそれらの細胞のすべてではなく一部にヒト核酸を保有する遺伝子改変動物を提供する。いくつかの例、例えば標的化した組換えでは、１コピーのヒト核酸を遺伝子組換え動物のゲノムに組み込む。他の例、例えばランダムインテグレーションでは、互いに隣接するか、または離れたヒト核酸の複数のコピーを遺伝子改変動物のゲノムに組み込んでもよい。
【０１９３】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子改変型非ヒト動物は、対応する非ヒト動物プロモーターに作動可能に連結するヒトポリペプチドをコードする核酸を含むゲノムを保有する免疫不全動物であってもよく、ここで動物は、前記コードされたヒトポリペプチドを発現する。換言すれば、本発明の遺伝子改変型免疫不全非ヒト動物は、少なくとも１つのヒトポリペプチドをコードする核酸を含むゲノムを保有し、核酸は、対応する非ヒトプロモーター及びポリアデニル化シグナルに作動可能に連結し、動物は、前記コードされたヒトポリペプチドを発現する。
【０１９４】
試薬、器具及びキット
上記の方法の１つ以上を実施するための試薬、器具、及びそのキットもまた提供する。本発明の試薬、器具、及びそのキットは大幅に変更される場合がある。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、試薬またはキットは、本明細書に記載の方法で使用するための１つ以上の薬剤を含む。例えば、キットは、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウス、例えばＲａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−ｈＳＩＲＰα  ｈＩＬ−１５マウスを含み得る。このキットは、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスを交配するための試薬、例えばプライマーを、及びいくつかの例では、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスの遺伝子型決定のための試薬を含み得る。キットは、ヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスへの移植のためのヒト造血細胞の集団またはヒト造血前駆細胞の富化集団、またはヒト化ＳＩＲＰα−ＩＬ−１５非ヒト動物、例えばマウスへの移植のためのヒト由来の造血細胞の集団または造血細胞の富化集団を調製するための試薬を含み得る。他の試薬として、例えば候補薬剤、例えば、異なるタイプの造血細胞または分化した免疫細胞（例えばＴ細胞および／またはＮＫ細胞）に発現しているマーカーに特異的な１つ以上の抗体の存在下／非存在下での、造血細胞または分化した免疫細胞（例えば、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞）の生存能力および／または機能を測定するための試薬、または特定のサイトカイン、ケモカインなどを検出するための試薬が挙げられ得る。他の試薬として、培養培地、培養補充剤、マトリックス組成物などが挙げられ得る。
【０１９６】
上記の成分に加えて、本発明のキットは、本発明の方法を実施するための指示書をさらに含む。これらの指示書は、それらの１つ以上がキットに存在し得る様々な形態で本発明のキットに存在させてもよい。これらの指示書が存在し得る１つの形態は、キットのパッケージ内、パッケージの添付文書内などにおいて、適切な媒体または基材、例えば情報が印刷された一枚または複数枚の紙片上の印刷情報として存在する。さらに別の手段は、情報を記録したコンピュータ可読媒体、例えばディスク、ＣＤなどであろう。存在し得るさらに別の手段は、インターネットを介して遠隔地の情報にアクセスするために用いてもよいウェブサイトアドレスである。任意の簡便な手段をキットに存在させてもよい。
【０１９７】
本開示の例示的な非限定的態様
上記の本発明の実施形態を含む態様は、単独で、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態との組合せにおいて、有益であり得る。上述の記載を限定することなく、開示の特定の非限定的な態様を、１〜１６７の番号を付して以下に提供する。本開示を読む上で当業者には明らかなように、個々に番号を付す態様の各々を用いるか、または個々に番号を付す先行の、もしくは後に続く態様のいずれかと組み合わせてもよい。これは、すべてのそのような態様の組合せに対するサポートを提供することを意図したものであり、以下に明示的に提供する態様の組合せに限定するものではない。
１．遺伝子改変型非ヒト動物であって、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、を保有し、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記遺伝子改変型非ヒト動物。
【０１９８】
２．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０１９９】
３．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、２に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２００】
４．前記非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む、３に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０１】
５．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０２】
６．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に対してヘテロ接合性である、４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０３】
７．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に対してホモ接合性である、４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０４】
８．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する、１〜７のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０５】
９．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である、１〜８のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０６】
１０．前記機能性断片が、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、９に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０７】
１１．前記細胞外ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を含む、１０に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０８】
１２．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、１〜１１のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２０９】
１３．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、前記非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、１２に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１０】
１４．前記非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む、１３に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１１】
１５．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、１４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１２】
１６．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、１４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１３】
１７．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、１４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１４】
１８．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、１〜１７のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１５】
１９．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である、１〜１８のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１６】
２０．前記遺伝子改変型非ヒト動物が免疫不全である、１〜１９のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１７】
２１．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、２０に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１８】
２２．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、２０または２１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２１９】
２３．前記非ヒト動物が哺乳類である、１〜２２のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２０】
２４．前記哺乳類がげっ歯類である、２３に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２１】
２５．前記げっ歯類がマウスである、２４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２２】
２６．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト造血細胞の生着を有する、１〜２５のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２３】
２７．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体による感染を有する、２６に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２４】
２８．前記ヒト病原体が、Ｔ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導および／または標的化する、２７に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２５】
２９．前記ヒト病原体が、ヒト腸に感染する病原体である、２７に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２６】
３０．前記ヒト病原体がヒトロタウイルスである、２９に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２７】
３１．前記病原体がヒト肺に感染する、２７に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２８】
３２．前記ヒト病原体がインフルエンザウイルスである、３１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【０２２９】
３３．遺伝子改変型非ヒト動物を含む動物生着モデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物が、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物の小腸及びパイエル板内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、前記動物生着モデル。
【０２３０】
３４．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体による感染を有する、３３に記載のモデル。
【０２３１】
３５．前記ヒト病原体が腸内病原体である、３４に記載のモデル。
【０２３２】
３６．前記腸内病原体が、カンピロバクター・ジェジュニ、クロストリジウム・ディフィシル、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム、大腸菌、ヒトロタウイルス、リステリア・モノサイトゲネス、ノーウォークウイルス、サルモネラ・エンテリカ、シゲラ・フレックスネリ、シゲラ・ソネイ、志賀赤痢菌、ペスト菌、エルシニア・エンテロコリチカ、及びヘリコバクター・ピロリから選択される、３５に記載のモデル。
【０２３３】
３７．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、３３〜３６のいずれか一項に記載のモデル。
【０２３４】
３８．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、３７に記載のモデル。
【０２３５】
３９．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む、３８に記載のモデル。
【０２３６】
４０．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、３９に記載のモデル。
【０２３７】
４１．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、３９に記載のモデル。
【０２３８】
４２．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、３９に記載のモデル。
【０２３９】
４３．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する、３３〜４２のいずれか一項に記載のモデル。
【０２４０】
４４．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である、３３〜４３のいずれか一項に記載のモデル。
【０２４１】
４５．前記機能性断片が、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、４４に記載のモデル。
【０２４２】
４６．前記細胞外ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を有する、４５に記載のモデル。
【０２４３】
４７．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、３３〜４６のいずれか一項に記載のモデル。
【０２４４】
４８．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、４７に記載のモデル。
【０２４５】
４９．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む、４８に記載のモデル。
【０２４６】
５０．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、４９に記載のモデル。
【０２４７】
５１．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、４８に記載のモデル。
【０２４８】
５２．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、４８に記載のモデル。
【０２４９】
５３．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、３３〜５２のいずれか一項に記載のモデル。
【０２５０】
５４．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である、３３〜５３のいずれか一項に記載のモデル。
【０２５１】
５５．前記遺伝子改変型非ヒト動物が免疫不全である、３３〜５４のいずれか一項に記載のモデル。
【０２５２】
５６．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、５５に記載のモデル。
【０２５３】
５７．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、５５または５６に記載のモデル。
【０２５４】
５８．前記非ヒト動物が哺乳類である、３３〜５７のいずれか一項に記載のモデル。
【０２５５】
５９．前記哺乳類がげっ歯類である、５８に記載のモデル。
【０２５６】
６０．前記げっ歯類がマウスである、５９に記載のモデル。
【０２５７】
６１．遺伝子改変型非ヒト動物を含む動物生着モデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物が、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、ならびに（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物の肺内にヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、前記動物生着モデル。
【０２５８】
６２．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ヒト病原体による感染を有する、６１に記載のモデル。
【０２５９】
６３．前記ヒト病原体が肺病原体である、６２に記載のモデル。
【０２６０】
６４．前記肺病原体が、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ヘモフィルス・インフルエンザ、ジフテリア菌、ＳＡＲＳコロナウイルス、百日咳菌、モラクセラ・カタラーリス、インフルエンザウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ）、コロナウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、肺炎連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、レジオネラ・ニューモフィラ、クレブシエラ・ニューモニエ、緑膿菌、肺炎マイコプラズマ、結核菌、クラミジア・ニューモニエ、ブラストミセス・デルマチチジス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、及びアスペルギルス・フミガーツスから選択される、６３に記載のモデル。
【０２６１】
６５．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、６１〜６４のいずれか一項に記載のモデル。
【０２６２】
６６．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、６５に記載のモデル。
【０２６３】
６７．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む、６６に記載のモデル。
【０２６４】
６８．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、６７に記載のモデル。
【０２６５】
６９．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、６７に記載のモデル。
【０２６６】
７０．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、６７に記載のモデル。
【０２６７】
７１．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する、６１〜７０のいずれか一項に記載のモデル。
【０２６８】
７２．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である、６１〜７１のいずれか一項に記載のモデル。
【０２６９】
７３．前記機能性断片が、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、７２に記載のモデル。
【０２７０】
７４．前記細胞外ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を有する、７３に記載のモデル。
【０２７１】
７５．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、６１〜７４のいずれか一項に記載のモデル。
【０２７２】
７６．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、７５に記載のモデル。
【０２７３】
７７．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む、７６に記載のモデル。
【０２７４】
７８．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、７７に記載のモデル。
【０２７５】
７９．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、７７に記載のモデル。
【０２７６】
８０．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、７７に記載のモデル。
【０２７７】
８１．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、６１〜８０のいずれか一項に記載のモデル。
【０２７８】
８２．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である、６１〜８０のいずれか一項に記載のモデル。
【０２７９】
８３．前記遺伝子改変型非ヒト動物が免疫不全である、６１〜８２のいずれか一項に記載のモデル。
【０２８０】
８４．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、８３に記載のモデル。
【０２８１】
８５．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、８３または８４に記載のモデル。
【０２８２】
８６．前記非ヒト動物が哺乳類である、６１〜８５のいずれか一項に記載のモデル。
【０２８３】
８７．前記哺乳類がげっ歯類である、８６に記載のモデル。
【０２８４】
８８．前記げっ歯類がマウスである、８７に記載のモデル。
【０２８５】
８９．候補Ｔ細胞誘導性ワクチンの有効性の判定方法であって、前記方法が、
遺伝子改変型非ヒト動物に候補Ｔ細胞誘導性ワクチンを投与することであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与すること、
前記遺伝子改変型非ヒト動物にヒト病原体でチャレンジすること、ならびに
前記遺伝子改変型非ヒト動物内で前記候補Ｔ細胞誘導性ワクチンがＴ細胞を介した免疫応答を誘導するかどうかを判定すること、を含む、前記判定方法。
【０２８６】
９０．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、８９に記載の方法。
【０２８７】
９１．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、９０に記載の方法。
【０２８８】
９２．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む、９１に記載の方法。
【０２８９】
９３．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、９２に記載の方法。
【０２９０】
９４．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、９２に記載の方法。
【０２９１】
９５．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、９２に記載の方法。
【０２９２】
９６．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する、８９〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【０２９３】
９７．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である、８９〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【０２９４】
９８．前記機能性断片が、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、９７に記載の方法。
【０２９５】
９９．前記細胞外ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を有する、９８に記載の方法。
【０２９６】
１００．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、８９〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【０２９７】
１０１．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、１００に記載の方法。
【０２９８】
１０２．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む、１０１に記載の方法。
【０２９９】
１０３．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、１０２に記載の方法。
【０３００】
１０４．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、１０１に記載の方法。
【０３０１】
１０５．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、１０１に記載の方法。
【０３０２】
１０６．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、８９〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【０３０３】
１０７．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である、８９〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【０３０４】
１０８．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、８９〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【０３０５】
１０９．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、８９〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【０３０６】
１１０．前記遺伝子改変型非ヒト動物が哺乳類である、８９〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【０３０７】
１１１．前記哺乳類がげっ歯類である、１１０に記載の方法。
【０３０８】
１１２．前記げっ歯類がマウスである、１１１に記載の方法。
【０３０９】
１１３．ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導、および／または標的化する病原体による感染を阻害する薬剤の同定方法であって、前記方法が、
遺伝子改変型非ヒト動物に薬剤を投与することであって、
前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、ならびに
（ｉｖ）ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー細胞を活性化、誘導および／または標的化する病原体による感染、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与すること、ならびに
前記病原体に感染した非ヒト動物の前記病原体の量を前記薬剤が減少させるかどうかを判定すること、を含む、前記同定方法。
【０３１０】
１１４．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、１１３に記載の方法。
【０３１１】
１１５．前記ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記内在性非ヒトＳＩＲＰα遺伝子プロモーターである、１１４に記載の方法。
【０３１２】
１１６．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子座内の前記非ヒトＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を含む、１１５に記載の方法。
【０３１３】
１１７．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、１１６に記載の方法。
【０３１４】
１１８．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、１１６に記載の方法。
【０３１５】
１１９．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、１１６に記載の方法。
【０３１６】
１２０．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＳＩＲＰαゲノムコード配列及びヒトＳＩＲＰαゲノム非コード配列を有する、１１３〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【０３１７】
１２１．前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の機能性断片である、１１３〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【０３１８】
１２２．前記機能性断片が、ヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、１２１に記載の方法。
【０３１９】
１２３．前記細胞外ドメインが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を有する、１２２に記載の方法。
【０３２０】
１２４．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、１１３〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【０３２１】
１２５．前記ＩＬ−１５遺伝子プロモーターが、非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記内在性非ヒトＩＬ−１５遺伝子プロモーターである、１２４に記載の方法。
【０３２２】
１２６．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を含む、１２５に記載の方法。
【０３２３】
１２７．前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、１２６に記載の方法。
【０３２４】
１２８．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、１２５に記載の方法。
【０３２５】
１２９．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、１２５に記載の方法。
【０３２６】
１３０．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、１１３〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【０３２７】
１３１．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の機能性断片である、１１３〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
【０３２８】
１３２．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、１１３〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【０３２９】
１３３．前記遺伝子改変型非ヒト動物がＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、１１３〜１３２のいずれか一項に記載の方法。
【０３３０】
１３４．前記遺伝子改変型非ヒト動物が哺乳類である、１１３〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
【０３３１】
１３５．前記哺乳類がげっ歯類である、１３４に記載の方法。
【０３３２】
１３６．前記げっ歯類がマウスである、１３５に記載の方法。
【０３３３】
１３７．ヒトＩＬ−１５タンパク質及びヒトＳＩＲＰαタンパク質を発現する非ヒト動物の作製方法であって、
ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする核酸配列を、第一の非ヒト動物のゲノムに導入することであって、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記配列は、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーター配列に作動可能に連結する、前記導入すること、
ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする核酸配列を第二の非ヒト動物のゲノムに導入することであって、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記配列は、ＩＬ−１５プロモーター配列に作動可能に連結する、前記導入すること、ならびに
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列及び前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を保有する第三の非ヒト動物を作製することであって、前記第三の非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質及び前記ヒトＳＩＰＲαタンパク質を発現する、前記作製すること、を含む、前記作製方法。
【０３３４】
１３８．前記導入する工程が、ヒトＩＬ−１５またはヒトＳＩＲＰαをコードする前記核酸を保有する多能性幹細胞から非ヒト動物を生成することを含む、１３７に記載の方法。
【０３３５】
１３９．前記第一の動物が前記第二の動物とは異なる動物であり、前記第三の動物を作製する工程が、前記第一及び第二の動物を交配することを含む、１３７または１３８に記載の方法。
【０３３６】
１４０．前記第一の動物と前記第二の動物が同一であり、前記第一の動物のゲノムに導入する前記工程が、第一の多能性幹細胞を、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列と接触させて、第二の多能性幹細胞を取得することを含み、前記第二の動物のゲノムに導入する前記工程が、第二の多能性幹細胞を、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列と接触させて、第三の多能性幹細胞を取得することを含み、及び前記第三の非ヒト動物を、前記第三の多能性幹細胞から作製する、１３７に記載の方法。
【０３３７】
１４１．前記多能性幹細胞がＥＳ細胞またはｉＰＳ細胞である、１３７〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【０３３８】
１４２．前記多能性幹細胞がＲａｇ２を欠損している、１３７〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
【０３３９】
１４３．前記多能性幹細胞がＩＬ２ｒｇを欠損している、１３７〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
【０３４０】
１４４．前記第三の非ヒト動物が、Ｒａｇ２及びＩＬ２ｒｇの一方または両方を欠損している、１３７〜１４３のいずれか一項に記載の方法。
【０３４１】
１４５．前記ＩＬ−１５プロモーター配列がヒトＩＬ−１５プロモーター配列である、１３７〜１４４のいずれか一項に記載の方法。
【０３４２】
１４６．前記ＩＬ−１５プロモーター配列が、内在性非ヒト動物ＩＬ−１５プロモーター配列である、１３７〜１４４のいずれか一項に記載の方法。
【０３４３】
１４７．前記組み込みによって、非ヒトＩＬ−１５遺伝子座内の前記非ヒトＩＬ−１５遺伝子を置換する、１３７〜１４４のいずれか一項に記載の方法。
【０３４４】
１４８．前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、１３７〜１４７のいずれか一項に記載の方法。
【０３４５】
１４９．ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する遺伝子改変型非ヒト動物への生着方法であって、
１３７〜１４８のいずれか一項に記載の方法によって作製した前記遺伝子改変型非ヒト動物に、ヒト造血細胞を含む細胞の集団を移植することを含む、前記生着方法。
【０３４６】
１５０．前記移植が、尾静脈への注射、胎仔肝臓への注射、または後眼窩への注射を含む、１４９に記載の方法。
【０３４７】
１５１．前記遺伝子改変型非ヒト動物に対し、移植前に致死量未満の放射線照射を行う、１４９または１５０に記載の方法。
【０３４８】
１５２．前記ヒト造血細胞がＣＤ３４＋細胞である、１４９〜１５１のいずれか一項に記載の方法。
【０３４９】
１５３．前記ヒト造血細胞が、胎児肝臓、成人骨髄、または臍帯血由来である、１４９〜１５１のいずれか一項に記載の方法。
【０３５０】
１５４．標的細胞を死滅させる際の候補治療抗体または抗原結合タンパク質の有効性の判定方法であって、
遺伝子改変型非ヒト動物に、前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質を投与することであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与すること、ならびに
前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質が、前記遺伝子改変型非ヒト動物内の前記標的細胞に対するＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害性を調節するかどうかを判定すること、を含む、前記判定方法。
【０３５１】
１５５．標的細胞を死滅させる際の候補治療抗体または抗原結合タンパク質の有効性の判定方法であって、前記方法が、
遺伝子改変型非ヒト動物からＮＫ細胞を単離することであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記単離すること、
前記単離したＮＫ細胞を、前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質、及び前記標的細胞に接触させること、ならびに
前記標的細胞に対する前記単離したＮＫ細胞の前記抗体または前記抗原結合タンパク質依存性細胞溶解活性を測定すること、を含む、前記判定方法。
【０３５２】
１５６．標的細胞を死滅させる際の有効性の改善に関する候補治療抗体または抗原結合タンパク質のスクリーニング方法であって、
遺伝子改変型非ヒト動物に、前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質を投与することであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与すること、ならびに
前記遺伝子改変型非ヒト動物内で前記標的細胞を死滅させる際に、前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質が、有効性の改善を示すかどうかを判定すること、を含む、前記スクリーニング方法。
【０３５３】
１５７．前記標的細胞が、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞からなる群から選択される、１５４〜１５６のいずれか一項に記載の方法。
【０３５４】
１５８．標的細胞のＮＫ細胞を介した死滅における候補治療抗体または抗原結合タンパク質の有効性の判定方法であって、
遺伝子改変型非ヒト動物に、前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質を投与することであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
（ｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
（ｉｉ）前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物は、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与すること、ならびに
前記候補治療抗体または抗原結合タンパク質が、前記遺伝子改変型非ヒト動物における前記標的細胞に対するＮＫ細胞の抗体依存性細胞傷害性を調節する（例えば、活性化する）かどうかを判定すること、を含む、前記判定方法。
【０３５５】
１５９．前記標的細胞が、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞からなる群から選択される、１５８に記載の方法。
【０３５６】
１６０．前記標的細胞が腫瘍細胞である、請求項１５９に記載の方法。
【０３５７】
１６１．前記腫瘍細胞がＢ細胞リンパ腫細胞である、請求項１６０に記載の方法。
【０３５８】
１６２．遺伝子改変型非ヒト動物を含む、ＮＫ細胞を介した抗体依存性細胞傷害性のモデルであって、前記遺伝子改変型非ヒト動物は、内在性免疫系を欠損しているとともに、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、ＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、
前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれた核酸配列であって、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、ＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結する前記核酸配列、及び
ヒト造血細胞の生着、を有し、ここで前記遺伝子改変型非ヒト動物が、（ｉ）前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、（ｉｉ）ヒトリンパ球を保有し、ならびに（ｉｉｉ）腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、細菌感染細胞、細菌細胞、真菌細胞、及び寄生細胞からなる群から選択される標的細胞を保有する、前記モデル。
【０３５９】
１６３．前記標的細胞が腫瘍細胞である、請求項１６２に記載のモデル。
【０３６０】
１６４．前記腫瘍細胞がＢ細胞リンパ腫細胞である、請求項１６３に記載のモデル。
【０３６１】
１６５．前記モデルが、外来性候補治療抗体または抗原結合タンパク質を含む、請求項１６３または請求項１６４に記載のモデル。
【０３６２】
１６６．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記遺伝子改変型非ヒト動物の小腸及びパイエル板に、ヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、請求項１６２〜１６５のいずれか一項に記載のモデル。
【０３６３】
１６７．前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記遺伝子改変型非ヒト動物の肺に、ヒト上皮内リンパ球（ＩＥＬ）を保有する、請求項１６２〜１６６のいずれか一項に記載のモデル。
【実施例】
【０３６４】
以下の実施例は、本発明の製造方法及び使用方法についての完全な開示及び説明を当業者に提供するために提示するに過ぎず、発明者らが自らの発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではなく、また、以下の実験が、実施する実験のすべて、すなわちそれ以外に実験を行わないことを表すことを意図するものでもない。使用する数値（例えば、量、温度など）に関して正確さを保つように努めたが、ある程度の実験誤差及び偏差が考慮されるべきである。他に指示がない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。
【０３６５】
実施例１：ヒト化ＳＩＲＰα（ＳＲＧ）ノックインマウスの作製
マウスＳＩＲＰαプロモーターに作動可能に連結するヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを発現するヒトＳＩＲＰαノックインマウスを作製した（図１参照）。ヒトＳＩＲＰαは、少なくとも１０種の対立遺伝子形態で存在することが知られている。この特定の実施例においては、ヒトＳＩＲＰα変異型１を、マウス内在性ＳＩＲＰα遺伝子のヒト化に用いる。
【０３６６】
材料及び方法
遺伝子バックグラウンドＲａｇ２−／−Ｉｌ２ｒｇＹ／−１２９ｘＢａｌｂ／ｃ（Ｎ２）を有し、ヒトＳＩＲＰαをコードするノックインマウスの作製を、以下に詳細に記載するようなＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を用いて行った。特定の病原体のない条件下、及び飲料水中へのエンロフロキサシン（Ｂａｙｔｒｉｌ、０．２７ｍｇ／ｍＬ）連続処理の存在下で、マウスを維持した。
【０３６７】
ＳＩＲＰ（例えば、ＳＩＲＰα）遺伝子の細胞外領域のヒト化用の標的化ベクターを、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術を用いて構築した（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２−６５９参照）。
【０３６８】
簡潔に述べると、マウス細菌人工染色体（ＢＡＣ）クローンｂＭＱ−２６１Ｈ１４を改変し、内在性ＳＩＲＰα遺伝子のエキソン２〜４を含む配列を欠失させ、ヒトＢＡＣクローンＣＴＤ−３０３５Ｈ２１を用いて、ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエキソン２〜４を挿入した。内在性ＳＩＲＰα遺伝子のエキソン２〜４に対応するゲノムＤＮＡ（約８５５５ｂｐ）を、ＢＡＣクローンｂＭＱ−２６１Ｈ１４において、ＢＡＣクローンＣＴＤ−３０３５Ｈ２１由来のヒトＳＩＲＰα遺伝子のエキソン２〜４を含む約８５８１ｂｐのＤＮＡ断片で置換した。ＢＡＣクローンＣＴＤ−３０３５Ｈ２１に含まれるヒトＳＩＲＰα対立遺伝子の配列分析により、ヒト変異型１に対応する対立遺伝子を明らかにした。ＬｏｘＰ部位に隣接するネオマイシンカセットを、ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエキソン２〜４を含む約８５８１ｂｐのヒトＤＮＡ断片の末端に付加した（図１（下段））。
【０３６９】
マウスＢＡＣ  ＤＮＡのエキソン２及び４の５’及び３’の位置から、それぞれ上流及び下流の相同性アームを取得し、これを約８５８１ｂｐのヒト断片−ネオマイシンカセットに付加し、５’から３’方向に向かって順に、マウスＤＮＡの内在性ＳＩＲＰα遺伝子エキソン２の５’側の１９ｋｂを含む５’相同性アーム、ヒトＳＩＲＰαエキソン２〜４を含む約８５８１ｂｐのＤＮＡ断片、ｌｏｘＰ部位に隣接するネオマイシンカセット、及びマウスＤＮＡの内在性ＳＩＲＰα遺伝子エキソン４の３’側の２１ｋｂを含む３’相同性アーム、を備えた内在性ＳＩＲＰα遺伝子のヒト化用の最終標的化ベクターを作製した。標的化ベクターの標的化挿入により、マウスＳＩＲＰα遺伝子エキソン４と５の間の第５イントロンにネオマイシンカセットを配置した。標的化ベクターをＳｗａＩで消化して直鎖状にし、次に細菌細胞内での相同組換えにこれを用いて、マウスＳＩＲＰα遺伝子エキソン２〜４からヒトＳＩＲＰα遺伝子エキソン２〜４への標的化置換を達成した（図１（下段））。
【０３７０】
標的ＢＡＣ  ＤＮＡ（上記）を用いて、Ｒａｇ２−／−ＩＬ２ｒｇＹ／−マウスＥＳ細胞を電気穿孔し、ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエキソン２〜４を含むゲノム断片を用いて内在性マウスＳＩＲＰα遺伝子エキソン２〜４を置換した改変ＥＳ細胞を作製した。ヒトＳＩＲＰα遺伝子のエキソン２〜４を含むゲノム断片を保有する陽性ＥＳ細胞を、ＴＡＱＭＡＮ（商標）プローブ（Ｌｉｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓ，１９９８．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：４３−４８）を用いた定量ＰＣＲによって同定した。上流の挿入箇所にわたるヌクレオチド配列は下記の配列を有していたが、このことは、挿入箇所の上流の内在性マウス配列（下記の括弧内に含まれる）が、挿入箇所に存在するヒトＳＩＲＰαゲノム配列に連続的に連結していることを示している。
2020202853.tif 000003
ネオマイシンカセットの５’末端にある下流の挿入箇所にわたるヌクレオチド配列は下記の配列を有していたが、このことは、ヒトＳＩＲＰαゲノム配列が、挿入箇所の下流のカセット配列（下記の括弧内に示す配列であって、イタリック体で示すｌｏｘＰ配列を含む）に連続して続いていることを示している。
2020202853.tif 000004
ネオマイシンカセットの３’末端にある下流の挿入箇所にわたるヌクレオチド配列は、下記の配列を有していたが、このことは、カセット配列が、マウスゲノム配列の内在性ＳＩＲＰα遺伝子エキソン４（下記の括弧内に示す）の３’側に連続して続いていることを示している。
2020202853.tif 000005
次いで、陽性ＥＳ細胞クローンを、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法を用いた雌マウスへの移植に使用し（例えば、米国特許第７，２９４，７５４号及びＰｏｕｅｙｍｉｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．２００７，Ｆ０  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｍｉｃｅ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｆｕｌｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｄｏｎｏｒ  ｇｅｎｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ＥＳ  ｃｅｌｌｓ  ａｌｌｏｗｉｎｇ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５（１）：９１−９９参照）、マウス内在性ＳＩＲＰα遺伝子にヒトＳＩＲＰα遺伝子エキソン２〜４を挿入した子集団を生成した。
【０３７１】
上記の標的化ＥＳ細胞をドナーＥＳ細胞として使用し、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法（上記）によって８細胞期マウス胚に導入した。ヒトＳＩＲＰα遺伝子配列の存在を検出した対立遺伝子アッセイ（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．，上記）の変法を用いた遺伝子型同定により、ヒト化した内在性ＳＩＲＰα遺伝子エキソン２〜４を有するマウスを同定した。
【０３７２】
標的化ベクターによって導入する任意のｌｏｘ化ネオマイシンカセットで、例えばＥＳ細胞段階または胚内においては除去されないものを除去するために、ヒト化ＳＩＲＰα遺伝子構築物を有するマウス（すなわち、マウスＳＩＲＰα遺伝子にヒトＳＩＲＰαエキソン２〜４を含むマウス）をＣｒｅ欠損マウス株と交配することができる（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２００９／１１４４００号参照）。必要に応じて、ネオマイシンカセットをマウス内に保持させる。ホモ接合型Ｓｉｒｐαマウスを取得するために、ヘテロ接合体を交配する。
【０３７３】
結果
上記のマウスＳＩＲＰα遺伝子のヒト化バージョンをコードする核酸を保有するマウス（ＳＲＧマウス）は、ヒト化ＳＩＲＰαタンパク質の生理学的発現を示す（データは示さず）。これらのマウスはまた、脾臓、末梢リンパ節（ＬＮ）及び胸腺において、ＮＯＤ  ｓｃｉｄγ（ＮＳＧ）マウスと同等のヒト免疫細胞の生着を示す（データは示さず）。
【０３７４】
実施例２：ヒト化ＳＲＧ  ＩＬ−Ｉ５ｈ／ｈ（ＳＲＧ−１５）ノックインマウスの作製
サイトカインＩＬ−１５は、マウスＮＫ細胞の発生及び記憶ＣＤ８＋Ｔ細胞の分化及び維持にとって重要であることが示されている。動物モデルの文脈におけるヒト免疫細胞の発生、分化及び維持に対するヒトＩＬ−１５の影響を調べるために、以下に詳細に記載するように、ヒトＩＬ−１５ヒトＳＩＲＰαノックインマウスを作製した。図２は、ＩＬ−１５ノックイン構築物の模式図を示す。
【０３７５】
材料及び方法
ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）遺伝子工学技術を用いてマウスＥＳ細胞を改変し、内在性マウスＩＬ−１５遺伝子座において、マウスＩＬ−１５調節エレメントの制御下にあるマウスＩＬ−１５遺伝子配列を、ヒトＩＬ−１５遺伝子配列に置き換え、図２に示すようなヒト化遺伝子座を産生する。Ｒａｇ２−／−Ｉｌ２ｒｇＹ／−１２９ｘＢａｌｂ／ｃ遺伝子バックグラウンドを有し、ヒトＩｌ−１５を保有するノックインマウスを生成した。図２は、マウス遺伝子の５’非翻訳エキソン（エキソン１及び２）の上流（ＩＬ−１５遺伝子の転写の方向に関して）は示しておらず、図２のコーディングエキソン１（エキソン３）は、コーディングエキソンの上流の小さな非翻訳領域（中抜き）を示している。マウス１について以下に述べる点を除いて、図２の下段のヒト化で示すように、マウスコーディングエキソン１及び２（エキソン３及び４）が保持されていた一方で、マウスコーディングエキソン３〜６（エキソン５〜８）はヒトコーディングエキソン３〜６（エクソン５〜８）に置換されていた。下流の末端では、ヒトコーディングエキソン６（エキソン８）に続いて、終止コドン及びヒト３’−ＵＴＲが、さらにはヒト３’ＵＴＲの下流に見出されるヒト配列がそれに続く。選択目的のために、選択カセット（Ｃｒｅで除去するためにｌｏｘＰを導入した）を組み込んだ。図２のヒト化した遺伝子座は、完全にヒトのものである成熟ＩＬ−１５タンパク質を発現する。
【０３７６】
具体的には、標準的な細菌相同組換え（ＢＨＲ）技術（例えば上記のＶａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）参照）及びギャップ修復ＢＨＲを用いてＢＨＲを実施し、マウスＩＬ−１５遺伝子座へ標的化するためのヒトＩＬ−１５遺伝子配列を有する大型の標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）を構築した。クローニングしたカセットに、ＰＣＲ生成したホモロジーボックスを連結して直鎖断片を生成し、続いて連結産物をゲル上で単離し、標的の細菌人工染色体（ＢＡＣ）を有するＢＨＲコンピテント細菌への電気穿孔を行った。マウス配列の供給源としてマウスＢＡＣ  ＰＲＣＩ２３−２０３Ｐ７を使用し、ヒトＩＬ−１５遺伝子配列の供給源としてヒトＢＡＣ  ＲＰ１１−１０３Ｂ１２を使用する。選択工程の後、新規接合部にわたってＰＣＲ及び制限酵素分析により、正確に組換えが行われたクローンを同定する。相同性アームとヒトＩＬ−１５遺伝子配列を含むＬＴＶＥＣを作製した。
【０３７７】
マウスＩＬ−１５遺伝子（マウスＧｅｎｅＩＤ：１０３０１４、ＲｅｆＳｅｑ転写産物：ＮＭ＿００８３５７．２、アンサンブルｅＩＤ：１６１６８）を、欠失についてはゲノム座標ＧＲＣＭ３８：ｃｈ８：８２３３１１７３−８２３４３４７１（マイナス鎖）を、置換についてはゲノム座標ＧＲＣｈ３７：ｃｈ４：１４２６４２９２４−１４２６５５８１９（プラス鎖）を用いて改変する。マウス配列の１２２９９ヌクレオチドを、ヒト配列の１２８９６ヌクレオチドで置換した。上記のようなマウスＩＬ−１５配列の置換を、図２に図示する。
【０３７８】
ヒト化ＩＬ−１５遺伝子を含むＬＴＶＥＣは、上流でＭｌｕＩ部位に隣接する約１３ｋｂの上流マウス標的化アーム、及び下流でＡｓｃＩ部位に隣接する２７ｋｂの下流マウス標的化アームを有していた。電気穿孔のためにＬＴＶＥＣをＭｌｕＩ及びＡｓｃＩで直鎖状にした。
【０３７９】
ＬＴＶＥＣ構築後の、マウス／ヒト５’接合部及びヒト／マウス３’接合部にわたるＬＴＶＥＣヌクレオチド配列は、下記の表１に示す通りである。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４は、マウス配列とヒト配列との間の上流（ＩＬ−１５遺伝子の転写の方向に関して）接合部を示しており、示す配列は、大文字で表すマウス配列で始まり、続いて小文字で表すＡｓｉｓＩ制限部位、続いて大文字で表すヒトＩＬ−１５核酸配列である。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５は、大文字で表す下流のヒトＩＬ−１５コード及び非コード配列（ヒト３’ＵＴＲ太字イタリック体）、続いて小文字で表すＸｈｏＩ部位、続いてｌｏｘ部位（大文字、太字イタリック体）、続いて下流のｎｅｏ選択カセット（大文字）であり、これは２．６ｋｂ下流へ延びている（図示せず）。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６は、ｎｅｏ選択カセットの下流部分（大文字）とｌｏｘ部位（大文字と太字のイタリック体）との間の接合部を示す核酸配列であり、続いてＮｈｅＩ部位（小文字）、これに続いてヒト化した部分の下流のマウス配列（大文字）があり、選択カセットはさらに２．６ｋｂ上流に延びる。
【０３８０】
（表１）ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座の接合配列
2020202853.tif 000006
2020202853.tif 000007
【０３８１】
マウスＥＳ細胞にＬＴＶＥＣ構築物を電気穿孔し、選択培地上で増殖させ、これをドナーＥＳ細胞として用いて、図２に示すような内在性マウスＩＬ−１５遺伝子座にヒト配列への置換を有するヒト化ＩＬ−１５マウスを作製した。ＥＳ細胞の電気穿孔に続いて、天然対立遺伝子欠失アッセイ（例えば上記のＶａｌｅｎｚｕｅｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）参照）を実施し、標的化に起因する内在性ＩＬ−１５配列の欠失を検出する。
【０３８２】
正確に標的化したＥＳ細胞を、一過性Ｃｒｅ発現ベクターでさらに電気穿孔して、Ｎｅｏ薬物選択カセットを除去した。
【０３８３】
ヒト化ＩＬ−１５遺伝子座を有するドナーマウスＥＳ細胞を、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法（Ｐｏｕｅｙｍｉｒｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｆ０  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｍｉｃｅ  ｆｕｌｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｇｅｎｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ａｌｌｏｗｉｎｇ  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ａｎａｌｙｓｅｓ，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５：９１−９９）によって、初期マウス胚に導入した。異型接合マウスを取得し、ヘテロ接合体を交配してヒト化ＩＬ−１５に関するホモ接合体を取得した。２つのバージョンのヒト化ＩＬ−１５マウスを作製した（本明細書中において、マウス１及びマウス２と呼ぶ）。さらなる解析の後、マウス１バージョンはそのゲノムにエキソン重複を有することが判明した。マウス２においては、内在性マウスＩＬ−１５遺伝子座が、図２に示すようなヒト配列で置換されていた。
【０３８４】
ヒトＩＬ−１５  ｍＲＮＡレベルを以下のように測定した。７５００  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＳＹＢＲ（登録商標）ＦＡＳＴ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｑＰＣＲキット（ＫＡＰＡ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、逆転写（ＲＴ）−ｑＰＣＲを行った。Ｐｒｉｍｅｒ３ソフトウェアを用いて配列特異的オリゴヌクレオチドプライマーを設計し、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈによって合成を行った。以下のプライマーを使用した：マウスＨｐｒｔフォワード：
2020202853.tif 000008
、マウスＨｐｒｔリバース：
2020202853.tif 000009
、ヒトＩｌ１５フォワード：
2020202853.tif 000010
、ヒトＩｌ１５リバース：
2020202853.tif 000011
。閾値サイクル比較法を用いて相対発現値を計算し、マウスＨｐｒｔに対して正規化した。
【０３８５】
（１）いずれもＲａｇ２−／−Ｉｌ２ｒｇＹ／−バックグラウンドを有する、ヒトＳＩＲＰα置換を有するマウスと、ヒトＩＬ−１５置換を有するマウスとを交配することによって、または（２）Ｒａｇ２−／−Ｉｌ２ｒｇＹ／−バックグラウンドを有し、ヒトＳＩＲＰα置換を有するＥＳ細胞に、ヒトＩＬ−１５を有する大型の標的化ベクターを導入し（実施例１に記載）、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法を用いて、ヒトＩＬ−１５及びＳＩＲＰα遺伝子置換の両方ならびにＲａｇ２−／−Ｉｌ２ｒｇＹ／−を有するＥＳ細胞からマウスを作製することによって、ＳＲＧ−１５マウスを生成する。ヘテロ接合性マウスを交配してホモ接合体を取得する。
【０３８６】
結果
図３Ａ及び３Ｂに示すように、非生着ＳＲＧ−１５マウス１の肝臓、肺、骨髄（ＢＭ）、小腸（ＳＩ）及び結腸において、高レベルのヒトＩＬ−１５  ｍＲＮＡ発現が見出された。同様の高レベルのヒトＩＬ−１５  ｍＲＮＡが、非生着ＳＲＧ−１５マウス２の肝臓、肺及び小腸で見出された（図３Ｂ）。図４に示すように、ポリ（Ｉ：Ｃ）による刺激の際にも、内在性マウスエキソンからヒトエキソン５〜８へ置換されているＳＲＧ−１５マウス２の血清中には、高レベルのヒトＩＬ−１５タンパク質を検出することができた。
【０３８７】
実施例３：ＳＲＧ−１５マウスの生着
材料及び方法
ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウスに、以下に記載するように生着させる。誕生から３〜５日後の新生仔マウスに、１６０ｃＧｙの致死量未満の照射を麻酔なしで行い、休息のために母親に戻す。照射の４〜１２時間後に、これらの新生仔の肝臓内（ｉ．ｈ．）に２５μｌのＰＢＳ中のＣＤ３４＋  ｈｕＨＳＣを３０Ｇの針を用いて移植する。
【０３８８】
結果
免疫細胞発生に対するヒトＩＬ−１５の影響を評価するために、ＮＳＧ、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウスにおけるヒトＣＤ４５＋細胞の生着を比較した。ＮＳＧ、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血中のヒト造血細胞の効率的な生着は、図５Ａに示すように生着の１２〜１４週間後に認められた。生着後１４週間目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）のＢＭ、脾臓、ＬＮ、肝臓及び肺内のヒトＣＤ４５＋細胞数によって証明する生着を示す比較を図５Ｂに示す。
【０３８９】
マウス１では、ヒトＣＤ４５＋細胞生着に差異はなかったが、図６Ａ及び６Ｂに示すように、ＳＲＧ−１５マウスの様々な組織において、ＳＲＧマウスに比べてより高い割合及び数のヒトＮＫ細胞が見出された。ＩＬ−１５は、ＮＫ細胞の発生及び生存に重要であるばかりでなく、成熟にも重要である。図６Ｃに示すように、ＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の肝臓内のヒトＮＫ細胞は、ＣＤ１６及びＣＤ５６をより高レベルに発現しており、このことは、ＮＫ細胞成熟がＳＲＧマウスに比べてＳＲＧ−１５マウスにおいてより高度であることを示していた。ヒトＮＫ細胞サブセット、ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−及びＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋の両方が、図６Ｄ（脾臓）に示すように（及びデータは示さず）、ＳＲＧ−１５マウスの血液、脾臓及び肝臓に存在することが見出された。さらに、図６Ｄに示すように、ＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の脾臓における２つのヒトＮＫ細胞サブセットの分析により、それらのサブセットがキラー抑制受容体を明確な発現レベルで有するとともに、ＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞集団がＣＤ１５８発現細胞をより高い割合で含むことが明らかとなった。この結果は、ヒト血中のＮＫ細胞サブセットに見出される結果に似ている（データは示さず）。
【０３９０】
ＳＲＧ−１５マウス２については、図７Ａ〜７Ｄに示すように、リンパ系組織及び非リンパ系組織において、効率的なヒトＮＫ細胞生着が認められた。図７Ａ及び７Ｂは、それぞれ、血中及び脾臓内のＮＫ細胞の割合を示す。図７Ｃ及び７Ｄは、生着後１４週間目のＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血中、脾臓（ＳＰ）、肝臓及び肺内でのヒトＮＫ細胞の出現頻度を示す。異なる実験からのＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの血中及び脾臓内のＮＫ細胞分布及び割合を示すさらなるデータを、それぞれ図８及び９Ａに示す。ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の血中のｈＣＤ４５＋細胞のｈＮＫｐ４６断片の増加を図９Ｂに示す。図９Ｃ〜９Ｅは、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）マウスの胸腺におけるｈＣＤ４５＋細胞の相対数、分布及び組成を示す。
【０３９１】
ヒト及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）のＮＫ細胞サブセットの特徴付けを行った。図１０Ａ及び１０Ｂに示すように、ＳＲＧ−１５マウスの血中及び脾臓内では、ＳＲＧマウスに比べて、ｈＣＤ−５６ｂｒｉｇｈｔｈＣＤ１６−及びｈＣＤ５６ｄｉｍｈＣＤ１６＋の両方のレベルの上昇が認められた。ヒトと同様に、ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）のＮＫ細胞サブセットにキラー抑制受容体（ＫＩＲ）の発現が認められた（図１０Ｃ）。図１０Ｃは、ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔ  ＣＤ１６−ＮＫ細胞（各プロットの左ボックス）及びＣＤ５６ｄｉｍ  ＣＤ１６＋ＮＫ細胞（各プロットの右ボックス）を示す。下段のヒストグラムは、それらのサブセットにおけるＣＤ１５８発現を示す。ＳＲＧ−１５マウスのＮＫ細胞サブセット上のＣＤ１５８（ＫＩＲ２Ｄ）は、ヒトＰＢＭＣ由来ＮＫ細胞において観察されるものと同様である。
【０３９２】
ＳＲＧ−１５マウス血中のヒトＮＫ細胞分布を、２人の健康なヒトドナーから採取した血液中のヒトＮＫ細胞分布と比較した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅを介して２人の個別のドナーの軟膜（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ、Ｗｅｓｔｂｕｒｙ、ＮＹより入手）から単離し、その結果、生着させたＳＲＧ−１５マウスでは、ヒトドナー由来ＰＢＭＣよりも血中ＮＫ細胞の割合が高いことが観察されたものの、細胞傷害性（ＣＤ１６＋）ＮＫ細胞とＩＦＮ−ｇ産生（ＣＤ１６−）ＮＫ細胞との間には、生理学的に同等の分布が観察された（図１１）。
【０３９３】
最後に、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス２）の骨髄の分析結果は、ＳＲＧ−１５マウスにおけるヒトＮＫ細胞の発生が、ＳＲＧマウスに比べて高いことを示した（図１２）。
【０３９４】
ヒトＩＬ−１５がＳＲＧ−１５マウスにおけるヒトＴ細胞発生に及ぼす影響についても評価した。ＳＲＧ−１５（マウス１）マウスとＳＲＧマウスとの比較により、ヒトＩＬ−１５がＴ細胞の割合、数および／または比率に与える効果が、組織に応じて変化することが明らかとなった（図１３Ａ）。生着後１６週目のリンパ節のサイズ及び数は、ＳＲＧとＳＲＧ−１５マウスとの間で差異はなく、このことは、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５（マウス１）マウスのリンパ節内のヒトＴ細胞の数が同等であるという結果を確認するものであった（図１３Ａ）。図１３Ｂは、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の血中及び肝臓内のヒトＣＤ８＋Ｔ細胞表現型を示しており、ＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の血中及び肝臓内両方でのｈＣＤ６２Ｌ−細胞がＳＲＧマウスに比べて高いことを示している。ＳＲＧ−１５マウス（マウス１）のＴ細胞を特徴付けるさらなるデータをＳＲＧマウスと比較して図１４Ａ及び１４Ｂに示し、これらの図は、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウスの肺（１４Ａ）及び肝臓（１４Ｂ）のＣＤ８＋Ｔ細胞における組織常在性マーカーＣＤ６９の発現を示している。上記のデータは、ＳＲＧ−１５マウスにおけるエフェクター組織常在性Ｔ細胞の増加の証拠を提供する。
【０３９５】
マウス２については、図１５Ａ及び１５Ｂに示すように、脾臓、肺及び肝臓におけるｈＣＤ３＋Ｔ細胞の出現頻度を、生着後１６週目に、ＳＲＧマウスと比較して評価した。
【０３９６】
実施例４：ＳＲＧ−１５マウスにおけるヒト組織常在性リンパ球の発生
ＩＬ−１５は、腸及び肺の上皮細胞によって産生されることが示されており、ヒト組織常在性Ｔ細胞及びＮＫ細胞の発生及び生存に重要な役割を果たす可能性があることから、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウスにおいて、ヒト組織常在性Ｔ及びＮＫ細胞を分析した。
【０３９７】
材料及び方法
生後３〜５日の新生仔マウスに、１６０ｃＧｙの致死量未満の照射を麻酔なしで行い、休息のために母親に戻す。照射の４〜１２時間後に、これらの新生仔の肝臓内（ｉ．ｈ．）に、３０Ｇの針を用いて２５μｌのＰＢＳ中のＣＤ３４＋  ｈｕＨＳＣを移植する。
【０３９８】
結果
図１７Ａに示すように、定常状態にあるマウス１の小腸からの上皮内リンパ球集団の単離物は、ＳＲＧ−１５マウスにおけるヒトＣＤ４５＋細胞の出現頻度がＳＲＧマウスに比べて高いことを示した。図１７Ｂに示すように、免疫組織化学分析の結果は、ヒトＣＤ４５＋ＮＫ細胞がＳＲＧ−１５マウス（マウス１）の小腸の上皮細胞層に位置していた（図１７Ｂの矢印によって示すように）一方で、ＳＲＧマウスにおいては上皮内リンパ球がほとんど見出されなかったことを示した。ＳＲＧ−１５マウスのヒトＣＤ８＋ＩＥＬは、組織常在性Ｔ細胞の一般的なマーカーであるＣＤ６９に関して高発現を示した。ヒトＩＥＬとは対照的に（Ｓａｔｈａｌｉｙａｗａｌａ  Ｔ，Ｋｕｂｏｔａ  Ｍ，Ｙｕｄａｎｉｎ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１３；３８：１８７−１９７）、ＳＲＧ−１５マウスにおけるヒトＣＤ８＋ＩＥＬの部分集団のみが、組織常在性マーカーＣＤ１０３を発現していた（図１７Ｃ）。図１６Ａ及び１６Ｂに示すように、ＳＲＧマウスとＳＲＧ−１５マウスとの間で、定常状態の結腸における固有層細胞数の差がほとんどなかったことから、ＳＲＧ−１５マウス（マウス１）における増加したヒトＣＤ８＋ＩＥＬ表現型は特異的なものであった。図１３Ａに示すＳＲＧ−１５マウス１の肺内でのヒトＴ細胞数の増加に加えて、図１４Ａに示すように、ＳＲＧ−１５マウスの肺内のヒトＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９の発現が、ＳＲＧマウスに比べてより高いことも認められた。さらに、図１４Ｂは、ＳＲＧ−１５マウス１の肝臓内のＣＤ８＋Ｔ細胞が発現するｈＣＤ６９のレベルが、ＳＲＧマウスに比べてより高いことを示している。
【０３９９】
ＳＲＧ−１５を生着させたマウス１と同様に、ＳＲＧ−１５を生着させたマウス２では、ＦＡＣＳ分析によって、ＳＲＧ−１５マウスのＩＥＬ画分においてヒトＣＤ４５＋細胞の割合がＳＲＧマウスに比べて高いことが明らかになった（図１８Ａ）。さらに、ＳＲＧとＳＲＧ−１５（マウス２）マウスとの間でＬＰＬの数は有意に変化していなかったが、ＳＲＧマウスに比べてＳＲＧ−１５（マウス２）マウスにおいて有意なＩＥＬの増加が認められた（図１８Ｂ）。ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の小腸におけるｈＣＤ３＋細胞の組成を図１８Ｃに示し、その組成は、ｈＣＤ４＋細胞に比べてｈＣＤ８＋の割合がより高いことを示している。ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の脾臓及び小腸におけるｈＣＤ３＋  ｈＣＤ８＋  Ｔ細胞の表現型特性を図１８Ｄに示す。図１８Ｅに示すように、免疫組織化学分析の結果は、ヒトＣＤ８＋ＩＥＬがＳＲＧ−１５マウス（マウス２）の小腸の上皮細胞層に位置していた（図１８Ｅの矢印によって示すように）一方で、ＳＲＧマウスでは上皮内リンパ球がほとんど見出されなかったことを示した。
【０４００】
図１８Ａ及び図１８Ｂに関して上述したように、ＳＲＧ−１５を生着させたマウス２では、ＳＲＧマウスに比べて、より大きな腸管関連リンパ組織（ＧＡＬＴ）常在性上皮内ヒトリンパ球（ＩＥＬ）の再構成が観察された（図１９Ａ及び１９Ｃ）。興味深いことに、観察されたヒトリンパ球の大部分はヒトＮＫ細胞であった。正常ヒトＧＡＬＴ生理学で予想されたように、ＳＲＧ−１５マウス２の血中及び脾臓内のＮＫ細胞の大部分は細胞傷害性ＮＫ細胞（ＣＤ１６＋）であったが、その一方でＩＥＬでは、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞とＣＤ１６−ＮＫ細胞の分布は同等であった（図１９Ｂ）。生着させたＳＲＧとＳＲＧ−１５マウスとの間で粘膜固有層リンパ球の数に変化はなかった（図１９Ｃ）。生着させたＳＲＧ−１５マウス１とは異なり、生着させたＳＲＧ−１５マウス２では、より高い割合のヒトＣＤ３＋  ＣＤ８＋  ＩＥＬが、ヒトＣＤ１０３マーカーを発現していた。パイエル板はＳＲＧマウスにはまったく存在しなかったが、それらはＳＲＧ−１５マウス２に存在し、図２０Ａ及び２０Ｂに示すように、そこではヒトリンパ球が優勢であった。
【０４０１】
実施例５：ウイルス感染中のＳＲＧ−１５マウスにおけるヒト組織常在性Ｔ細胞の機能的役割の決定
ＳＲＧ−１５マウスにおける組織常在性Ｔ細胞が恒常性を維持している間に機能的関連性を有するかどうかを試験するために、ＳＲＧ−１５マウスにおけるヒトＣＤ８＋ＩＥＬの数の増加が、マウス腸内微生物叢の組成に特徴的な変化を誘導するかどうかを判定した。
【０４０２】
材料及び方法
誕生後３〜５日の新生仔マウスを、１６０ｃＧｙの致死量未満の照射を麻酔なしで行い、休息のために母親に戻す。照射の４〜１２時間後に、これらの新生仔の肝臓内（ｉ．ｈ．）に３０Ｇの針を用いて２５μｌのＰＢＳ中のＣＤ３４＋  ｈｕＨＳＣを移植する。
【０４０３】
生着の４週間後、ＳＲＧ−１５マウスをＳＲＧ及びドナーＢａｌｂ／ｃマウスと４週間共収容して、異なる株間の腸内微生物叢を等しくした。次いで、マウスを分離し、糞便試料を収集し、１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列決定によって分析した。図２１Ａは、腸内細菌叢配列決定のための共収容及び糞便試料採取のためのタイムラインを示す。
【０４０４】
結果
２１Ｂに示すように、マウス１に関して、結果は、共収容後の生着させたＳＲＧ−１５マウスとＳＲＧマウスとの間に有意な変化がないことを示し、このことはヒトＣＤ８＋ＩＥＬを発生させても、定常状態の間に大きな変化を誘発しないことを示している。さらなる実験を行い、急性ロタウイルス感染を除去するのに十分なＣＤ８＋ＩＥＬが、生着ＳＲＧ−１５マウスにおけるロタウイルス感染を除去できるかどうかを判定した。図２２に示すように、結果は、生着ＳＲＧ−１５マウスでは急性ロタウイルス感染を除去可能だが、生着させていないＳＲＧマウスでは除去できないことを示した。
【０４０５】
実施例６：ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）及びヒトにおけるＮＫ細胞サブセットの分析
ＳＲＧ−１５（マウス２）マウスにおけるＮＫ細胞サブセットを、様々な表現型マーカーについて特徴付けし、ヒトと比較した。
【０４０６】
材料及び方法
一般的にＹａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４１５（２０１４）１−５に記載されているように、Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔによるサイトメトリー（ＣｙＴＯＦ）を介して、ＮＫ細胞サブセットを検出し、ＶｉＳＮＥ（ｅｌ−ＡＤ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３  Ｊｕｎ；３１（６）：５４５−５２ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２５９４．Ｅｐｕｂ  ２０１３  Ｍａｙ  １９）を用いて分析した。
【０４０７】
結果
図２３Ａは、ヒト（ｎ＝２０）及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）（ｎ＝９）におけるＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−及びＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞サブセットの３３個のパラメータのＣｙＴＯＦに基づく分析を示すＶｉＳＮＥプロットを提供する。各ドットは単一の細胞を表す。
【０４０８】
図２３Ｂは、ヒト（ｎ＝２０）及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）（ｎ＝９）におけるＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６−ＮＫ細胞上の８つの選択マーカーの発現強度を示すＶｉＳＮＥプロットを提供する。
【０４０９】
図２３Ｃは、ヒト（ｎ＝２０）及びＳＲＧ−１５マウス（ｎ＝９）におけるＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞上の８つの選択マーカーの発現強度を示すＶｉＳＮＥプロットである。ヒトＮＫ細胞の３３種の重要な分子のこの多次元単一細胞分析は、ＳＲＧ−１５マウスにおいて発生するヒトＮＫ細胞が、健康な個体におけるヒトＮＫ細胞と極めて同等であることを示している。
【０４１０】
実施例７：ＳＲＧ−１５マウス由来ＮＫ細胞の細胞傷害性能力
材料及び方法
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＮＫ細胞傷害性を調べるために、ヒトＨＳＣ生着ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）から単離した脾臓ＮＫ細胞を、ヒトＩＬ−２で一晩処理した。翌日、ＮＫ細胞をＣＦＳＥ標識ＮＫ感受性Ｋ５６２標的細胞と共に、様々なエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）で培養した。５時間共培養した後、Ｋ５６２細胞による生存性色素Ｔｏｐｒｏ３取込みのＦＡＣＳ分析（Ｋ５６２を区別するためにＣＦＳＥ＋細胞にゲーティングし、次いでＴｏｐｒｏ３について陽性率を分析）によって、Ｋ５６２細胞の死滅を測定した。
【０４１１】
さらに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を調べるために、ヒトＨＳＣ生着ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウスから単離した脾臓ＮＫ細胞を、ヒトＩＬ−２で一晩処理した。翌日、ＮＫ細胞をＣＦＳＥ標識Ｒａｊｉ標的細胞と共に、様々なエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）で培養した。Ｒａｊｉ細胞を抗ＣＤ２０（リツキシマブ）または対照ＩｇＧで前処理した。５時間共培養した後、Ｒａｊｉ細胞による生存性色素Ｔｏｐｒｏ３取込みのＦＡＣＳ分析（ＣＦＳＥ＋細胞にゲーティングし、次いでＴｏｐｒｏ３について陽性率を分析）によって、Ｒａｊｉ細胞の死滅を測定した。
【０４１２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＮＫ細胞活性化を調べるために、ヒトＨＳＣ生着ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス（マウス２）に５０μｇポリＩＣを腹腔内注射した。マウスを（ポリＩＣ注射の前に）プレ採血し、ポリＩＣ注射の１８時間後にも行った。ポリＩＣ投与の前及び後における活性化マーカーＣＤ６９の発現について、ヒトＣＤ４５＋  ＮＫｐ４６＋（ＮＫ細胞）をＦＡＣＳによって分析した。
【０４１３】
結果
古典的なＮＫ細胞傷害性試験において、古典的なＮＫ標的ＨＬＡクラスＩ欠損Ｋ５６２細胞を、ＳＲＧまたはＳＲＧ−１５マウス（マウス２）由来活性化ＮＫ細胞によって死滅させた。図２４Ｃ（左）に示すように、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス由来脾臓ＮＫ細胞は、数に関して正規化した場合に、Ｋ５６２細胞と同等の細胞溶解能力を示した。
【０４１４】
ＮＫ細胞は、通常、Ｂ細胞白血病及びリンパ腫に対する抗ＣＤ２０抗体を介したＡＤＣＣを担う（例えば、Ｊ．Ｇｏｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ２００３；８８：１００２−１２参照）。ＳＲＧ−１５生着マウス由来ＮＫ細胞が抗ＣＤ２０を介したＡＤＣＣを促進する能力を示すために、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５マウス由来脾臓ＮＫ細胞を両方試験し、細胞数に関して正規化した場合に、これらが抗ＣＤ２０処理Ｒａｊｉ細胞に対して同等の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示すことを明らかにした（図２４Ｃ（右））。
【０４１５】
例えば、図８及び９に示すように、ＳＲＧ−１５動物の脾臓内及び血中の両方において、ＮＫ細胞の有意なアップレギュレーションが認められる。ＳＲＧ−１５マウスにおけるＮＫ細胞の活性化能力を、ポリＩＣ注射後のＣＤ６９マーカー活性化を測定することによって試験した。図２４Ａに示すように、活性化マーカーＣＤ６９に対して陽性のＮＫ細胞の割合は、ＳＲＧマウスに比べてＳＲＧ−１５マウスにおいて増加した。ＳＲＧ−１５  ＮＫ細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいては正規化条件下でＳＲＧ  ＮＫ細胞と同等のＡＤＣＣ媒介を示したことから、ＳＲＧ−１５  ＮＫ細胞がｉｎ  ｖｉｖｏにおいて高い活性化表現型を呈する能力を有し、ならびにＳＲＧ−１５マウス内で多数のＮＫ細胞を呈する能力を有することは、ＳＲＧ−１５マウスが、ヒトＮＫ細胞ＡＤＣＣを研究するのに適したｉｎ  ｖｉｖｏモデルであり得ることを示唆している。
【０４１６】
実施例８：ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５由来ＮＫ細胞によるＩＦＮγ産生
材料及び方法
ＳＲＧまたはＳＲＧ−１５マウス由来のプールした脾細胞（１群あたり３個の脾臓）からＮＫ細胞を単離し、ＮＫ細胞をＥａｓｙＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  ＮＫ濃縮キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１９０５５）を用いて単離した。
【０４１７】
ＮＫ細胞を健康なヒトＰＢＭＣからも単離した。ＮＫ細胞を、１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−２で一晩処理した。翌日、細胞を１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−１２ｐ７０もしくは２ｍｇ／ｍＬのポリＩ：Ｃで一晩刺激するか、または未処理のままとした。翌日、上清を回収し、ヒトＩＦＮｇ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＤＩＦ５０）を用いてＩＦＮｇレベルを評価した。ＮＫ細胞の純度を、ＦＡＣＳによって、及び個々のＮＫ細胞が産生するピコグラム（ｐｇ）量として正規化したＩＦＮｇレベルによって分析した。統計分析はＡＮＯＶＡ検定を用いて行った。
【０４１８】
結果
図２４Ｂに示すように、ＳＲＧ及びＳＲＧ−１５由来ＮＫ細胞は同程度にＩＦＮγを分泌するが、ＩＬ−１２ｐ７０処理を行う場合、ヒトＰＢＭＣ由来ＮＫ細胞に比べて分泌は少ない。
【０４１９】
実施例９：ヒトＮＫ細胞は、ＳＲＧ−１５マウスにおける腫瘍増殖を阻害する
ヒトＮＫ細胞が、ＳＲＧ−１５マウス（マウス２）におけるヒト腫瘍異種移植片に浸潤し、腫瘍増殖を阻害する能力について調べた。
【０４２０】
材料及び方法
リツキシマブを１日おきに腹腔内注射した（５００万個のＲａｊｉ細胞の皮下注射後１４日目に開始した）。腫瘍成長をキャリパーによる測定で評価し、体積を以下の式を用いて計算した：腫瘍体積＝０．５×（長さ×幅∧２）。２つの独立した実験からデータをプールした。独立両側マン・ホイットニーＵ検定を用いて、生着ありの未処理ＳＲＧ−１５と、生着ありのＲＴＸ処理ＳＲＧ−１５マウスとを比較する統計学的解析を行った（＊Ｐ＜０．０５）。
【０４２１】
皮下の腫瘍を粉砕し、コラゲナーゼＤを用いて消化した（１時間、３７Ｃ）。腫瘍細胞と免疫細胞を含む回収細胞をＬＳＲＩＩフローサイトメーターで分析した。
【０４２２】
結果
図２５Ａに示すように、ＳＲＧ−１５マウスのヒトＮＫ細胞は、リツキシマブ（ＲＴＸ）処理後に腫瘍増殖を阻害する。図２５Ｂは、未処理（ｎ＝５）及びＲＴＸ処理ＳＲＧ−１５マウス（ｎ＝１）のヒト腫瘍異種移植片におけるヒトＮＫ細胞及びＴ細胞の出現頻度を示す。図２５Ｃは、未処理（ｎ＝２）及びＲＴＸ処理ＳＲＧ−１５マウス（ｎ＝１）の血中及び腫瘍内のヒトＮＫ細胞サブセットを示す。
【０４２３】
実施例１０：上記の実施例に関連して利用する追加の材料及び方法
ヒトＣＤ３４＋細胞の単離及び注射。ヒトＣＤ３４＋細胞の単離及び注射は、例えば、Ｒｏｎｇｖａｕｘ  Ａ，Ｗｉｌｌｉｎｇｅｒ  Ｔ，Ｍａｒｔｉｎｅｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１４；３２：３６４−３７２に記載される方法に従って行った。
【０４２４】
ヒト細胞集団のフローサイトメトリー分析。ヒト細胞集団のフローサイトメトリー分析は、Ｓｔｒｏｗｉｇ  Ｔ，Ｒｏｎｇｖａｕｘ  Ａ，Ｒａｔｈｉｎａｍ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２０１１；１０８：１３２１８−１３２２３、及びＲｏｎｇｖａｕｘ  Ａ，Ｗｉｌｌｉｎｇｅｒ  Ｔ，Ｍａｒｔｉｎｅｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１４；３２：３６４−３７２に記載される方法に従って行った。
【０４２５】
組織学。組織を４％パラホルムアルデヒド中で一晩固定し、７０％エタノールに移し、パラフィンに包埋した。
【０４２６】
定量的ＲＴ−ＰＣＲ。定量的ＲＴ−ＰＣＲは、Ｒｏｎｇｖａｕｘ  Ａ，Ｗｉｌｌｉｎｇｅｒ  Ｔ，Ｍａｒｔｉｎｅｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２０１４；３２：３６４−３７２に記載される方法に従って行った。
【０４２７】
１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列決定。１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列決定は、Ｐａｌｍ  ＮＷ，ｄｅ  Ｚｏｅｔｅ  ＭＲ，Ｃｕｌｌｅｎ  ＴＷ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ２０１４；１５８：１０００−１０１０に記載される方法に従って行った。
【０４２８】
ウイルス感染。ロタウイルス及びインフルエンザウイルスを取得し、本発明の方法に用いた。
【０４２９】
統計解析。統計的有意性は、Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用し、独立両側スチューデントｔ検定を用いて行った。
【０４３０】
ＦＡＣＳ抗体は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ及びＢｉｏＬｅｇｅｎｄから取得した。
【０４３１】
上記は単に本発明の原理を説明するものに過ぎない。当業者であれば、本明細書中で明示的に記載または図示していないが、本発明の原理を具体化し、その精神及び範囲内に含まれる様々な構成を考案できることが理解されよう。さらに、本明細書中で言及するすべての実施例及び条件付の文言は、主として、本発明の原理、及び発明者らによる当該技術の促進に寄与する概念を理解する上で、読者を補助することを意図するものであって、そのような具体的に列挙する実施例及び条件のみに限定するものではないと解釈すべきである。さらに、本発明の原理、態様、及び実施形態、ならびにその具体的な実施例に言及する本明細書中のすべての記述は、その構造的及び機能的均等物のいずれもを包含することを意図する。さらに、そのような均等物は、現在公知の均等物及び将来開発される均等物のいずれもを、すなわち、構造に関わらず同等の機能を果たす任意の開発された要素を包含することが意図される。したがって、本発明の範囲は、本明細書中に示し、記載する例示的な実施形態のみに限定することを意図するものではない。むしろ、本発明の範囲及び精神は、添付の特許請求の範囲によって具体化される。
【０４３２】
追加的な配列情報
遺伝子座  ＮＭ＿００１０４００２２  ４２０１ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  霊長類  ２０１５年３月１５日
定義  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）、転写産物変異型１、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１０４００２２
バージョン番号  ＮＭ＿００１０４００２２．１  ＧＩ：９１１０５７６３
由来  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
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遺伝子座  ＮＭ＿００１０４００２３  ４１０９ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  霊長類  ２０１５年３月１５日
定義  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）、転写産物変異型２、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１０４００２３
バージョン番号  ＮＭ＿００１０４００２３．１  ＧＩ：９１１０５７６６
由来  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
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遺伝子座  ＮＭ＿０８０７９２  ３８６８ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  霊長類  ２０１５年３月１５日
定義  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）、転写産物変異型３、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿０８０７９２  ＮＭ＿００４６４８
バージョン番号  ＮＭ＿０８０７９２．２  ＧＩ：９１１０５７８６
由来  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
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遺伝子座  ＮＭ＿００７５４７  ４０３１ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  シグナル調節タンパク質α（Ｓｉｒｐａ）、転写産物変異型１、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００７５４７  ＮＭ＿０１１２０８
バージョン番号  ＮＭ＿００７５４７．４  ＧＩ：５９７０８４９３９
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
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遺伝子座  ＮＭ＿００１１７７６４７  ３３７７ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  シグナル調節タンパク質α（Ｓｉｒｐａ）、転写産物変異型３、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１１７７６４７
バージョン番号  ＮＭ＿００１１７７６４７．２  ＧＩ：５９７４３６９４９
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
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遺伝子座  ＮＭ＿００１２９１０１９  ４０４３ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  シグナル調節タンパク質α（Ｓｉｒｐａ）、転写産物変異型４、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１２９１０１９  ＸＭ＿００６４９８９８５
バージョン番号  ＮＭ＿００１２９１０１９．１  ＧＩ：５９７４３６８６８
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
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遺伝子座  ＮＭ＿００１２９１０２０  ３８４５ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  シグナル調節タンパク質α（Ｓｉｒｐａ）、転写産物変異型５、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１２９１０２０  ＸＭ＿００６４９８９８４
バージョン番号  ＮＭ＿００１２９１０２０．１  ＧＩ：５９７４３６９４５
キーワード  ＲｅｆＳｅｑ
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
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遺伝子座  ＮＭ＿００１２９１０２１  ３３８９ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  シグナル調節タンパク質α（Ｓｉｒｐａ）、転写産物変異型６、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１２９１０２１  ＸＭ＿００６４９８９８７
バージョン番号  ＮＭ＿００１２９１０２１．１  ＧＩ：５９７４３６９２０
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
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遺伝子座  ＮＭ＿００１２９１０２２  ３０２０ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  シグナル調節タンパク質α（Ｓｉｒｐａ）、転写産物変異型７、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１２９１０２２
バージョン番号  ＮＭ＿００１２９１０２２．１  ＧＩ：５９７４３６９６３
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
2020202853.tif 000054
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遺伝子座  ＮＭ＿００９０２０  ３３９３ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  組換え活性化遺伝子２（Ｒａｇ２）、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００９０２０
バージョン番号  ＮＭ＿００９０２０．３  ＧＩ：１４４２２７２３３
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
2020202853.tif 000059
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遺伝子座  ＮＭ＿０１３５６３  １６１２ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  インターロイキン２受容体γ鎖（Ｉｌ２ｒｇ）、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿０１３５６３
バージョン番号  ＮＭ＿０１３５６３．３  ＧＩ：１１８１２９７９９
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
2020202853.tif 000064
2020202853.tif 000065
2020202853.tif 000066
遺伝子座  ＮＭ＿０００５８５  ２０１２ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  霊長類  ２０１５年３月１５日
定義  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  インターロイキン１５（ＩＬ１５）、転写産物変異型３、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿０００５８５
バージョン番号  ＮＭ＿０００５８５．４  ＧＩ：３２３０９８３２７
由来  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
2020202853.tif 000067
2020202853.tif 000068
2020202853.tif 000069
2020202853.tif 000070
遺伝子座  ＮＭ＿１７２１７５  ２３３３ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  霊長類  ２０１５年３月１５日
定義  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  インターロイキン１５（ＩＬ１５）、転写産物変異型２、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿１７２１７５
バージョン番号  ＮＭ＿１７２１７５．２  ＧＩ：３２３０９８３２８
由来  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）
2020202853.tif 000071
2020202853.tif 000072
2020202853.tif 000073
2020202853.tif 000074
遺伝子座  ＮＭ＿００８３５７  １２９７ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  インターロイキン１５（Ｉｌ１５）、転写産物変異型１、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００８３５７
バージョン番号  ＮＭ＿００８３５７．２  ＧＩ：３６３０００９５９
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
2020202853.tif 000075
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遺伝子座  ＮＭ＿００１２５４７４７  １２８７ｂｐ  ｍＲＮＡ  直鎖  げっ歯類  ２０１５年２月１５日
定義  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  インターロイキン１５（Ｉｌ１５）、転写産物変異型２、ｍＲＮＡ
受託番号  ＮＭ＿００１２５４７４７
バージョン番号  ＮＭ＿００１２５４７４７．１  ＧＩ：３６３０００９８３
由来  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（イエハツカネズミ）
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年9月16日(2020.9.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載された発明。
【手続補正書】
【提出日】令和2年10月8日(2020.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変型非ヒト動物であって、
非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を有し；かつ前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列を含み、ならびに
非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を有し：かつ前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、かつＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列を含み、
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現し、内在性免疫系を欠損しており、かつ非ヒト動物が、哺乳類、げっ歯類、またはマウスである、前記遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、請求項１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項３】
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、請求項１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項４】
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、請求項１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項５】
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を含むヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の断片である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項６】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、請求項１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項７】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、請求項１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項８】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、請求項１に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項９】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１０】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質の１つ以上のシグナル伝達機能を保持している、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の断片である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１１】
Ｒａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１２】
ＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１３】
前記げっ歯類がマウスである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１４】
ヒト造血細胞の生着を有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１５】
ヒト病原体による感染を有する、請求項１４に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１６】
前記ヒト病原体が、Ｔ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導および／または標的化する、請求項１５に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１７】
前記ヒト病原体が、ヒト腸に感染する病原体である、請求項１５に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１８】
前記ヒト病原体がヒトロタウイルスである、請求項１７に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項１９】
前記病原体がヒト肺に感染する、請求項１５に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２０】
前記ヒト病原体がインフルエンザウイルスである、請求項１９に記載の遺伝子改変型非ヒト動物。
【請求項２１】
ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化、誘導、および／または標的化する病原体による感染を阻害する薬剤の同定方法であって、
遺伝子改変型非ヒト動物に薬剤を投与する工程であって、前記遺伝子改変型非ヒト動物が、内在性免疫系を欠損している哺乳類、げっ歯類、またはマウスであり、かつ：
（ｉ）非ヒト動物ＳＩＲＰα遺伝子にヌル変異を有し；かつ前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードし、かつＳＩＲＰα遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列を含み、
（ｉｉ）非ヒト動物ＩＬ−１５遺伝子にヌル変異を有し；かつ前記遺伝子改変型非ヒト動物のゲノムに組み込まれており、ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードし、かつＩＬ−１５遺伝子プロモーターに作動可能に連結している、核酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ヒト造血細胞の生着を有し、かつ
（ｉｖ）ヒトＴ細胞および／またはナチュラルキラー細胞を活性化、誘導および／または標的化する病原体による感染を有し、
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質及び前記ヒトＩＬ−１５タンパク質を発現する、前記投与する工程、ならびに
前記病原体に感染した非ヒト動物の前記病原体の量を前記薬剤が減少させるかどうかを判定する工程
を含む、前記方法。
【請求項２２】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＳＩＲＰαエキソン２〜４の欠失である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ヒトＳＩＲＰαタンパク質が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸２８〜３６２を含むヒトＳＩＲＰαの細胞外ドメインを含む、全長ヒトＳＩＲＰαタンパク質の断片である、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がマウスであり、かつ前記ヌル変異が少なくともマウスＩＬ−１５エキソン５〜８の欠失である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してヘテロ接合性である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記遺伝子改変型非ヒト動物が、前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列を有する対立遺伝子に関してホモ接合性である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質をコードする前記核酸配列が、ヒトＩＬ−１５ゲノムコード配列及びヒトＩＬ−１５ゲノム非コード配列を有する、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記ヒトＩＬ−１５タンパク質が、野生型ヒトＩＬ−１５タンパク質の１つ以上のシグナル伝達機能を保持している、全長ヒトＩＬ−１５タンパク質の断片である、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がＲａｇ２遺伝子ノックアウトを有する、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記遺伝子改変型非ヒト動物がＩＬ２ｒｇ遺伝子ノックアウトを有する、請求項２１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記げっ歯類がマウスである、請求項２１〜３２のいずれか一項に記載の方法。