(57)【要約】【課題】本発明は、不純物が少なくタンパク質含量の高い植物性タンパク質を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、乾物中の、タンパク質成分以外の物質の含有量が、合計で３０重量％以下である、ポテトタンパク質等の植物性タンパク質を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾物中の、タンパク質成分以外の物質の含有量が、合計で３０重量％以下である、植物性タンパク質。
【請求項２】
前記物質が、分子量が５，０００以下の物質である、請求項１に記載の植物性タンパク質。
【請求項３】
前記植物性タンパク質が、澱粉原料植物に由来する植物性タンパク質である、請求項１又は２に記載の植物性タンパク質。
【請求項４】
前記澱粉原料植物が根菜類植物である、請求項３に記載の植物性タンパク質。
【請求項５】
前記根菜類植物がイモ類である、請求項４に記載の植物性タンパク質。
【請求項６】
ジャガイモに由来するポテトタンパク質である、請求項５に記載の植物性タンパク質。
【請求項７】
乾物中のポテトグリコアルカロイドの含有量が合計で１００ｐｐｍ以下である、請求項６に記載の植物性タンパク質。
【請求項８】
乾物中の、メチオニン含有量が２％以上である、及び／又は、トリプトファン含有量が１％以上である、請求項６又は７に記載の植物性タンパク質。
【請求項９】
乾物中の前記物質の含有量が、合計で２０重量％以下である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の植物性タンパク質。
【請求項１０】
乾物中の前記物質の含有量が、合計で１０重量％以下である、請求項９に記載の植物性タンパク質。
【請求項１１】
乾物中の粗タンパク質含量が８７％以上である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の植物性タンパク質。
【請求項１２】
水中でのｐＨが４．０以上である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の植物性タンパク質。
【請求項１３】
乾物中の、１，５００以下の分子量の有機化合物の含有量が合計で１，０００ｐｐｍ以下である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の植物性タンパク質。
【請求項１４】
乾物中の粗脂肪含量が０．５％以下である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の植物性タンパク質。
【請求項１５】
乾物中の揮発性塩基性窒素が０．１０％以下である、及び／又は、乾物中のフィチン酸が０．１００％以下である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の植物性タンパク質。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の植物性タンパク質を含む、飼料組成物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の飼料組成物を水産動物に与えることを含む、水産動物の養殖方法。
【請求項１８】
前記水産動物が、ブリ、タイ、サーモン又はエビである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
植物性タンパク質の製造方法であって、
植物原料の搾汁を加熱して植物性タンパク質を凝集させる加熱工程と、
前記加熱工程後に凝集した前記植物性タンパク質を、酸水溶液及びアルコールから選択される１種以上で洗浄する洗浄工程と
を含む方法。
【請求項２０】
前記洗浄工程を、乾物中の粗タンパク質含量が８７％以上となるまで行うことを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記洗浄工程が、前記植物性タンパク質を酸水溶液で洗浄することを含み、
前記洗浄工程後に、前記植物性タンパク質の水中でのｐＨを４．０以上に調節するｐＨ調節工程を更に含む、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の方法により製造された植物性タンパク質。
【請求項２３】
請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の方法により製造された植物性タンパク質を含む、飼料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不純物の含量が低減された植物性タンパク質に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、水産用飼料等の飼料のタンパク質源としては、タンパク質含量の高さ、アミノ酸バランス、良好な消化・吸収性で増体にも貢献し得ることから最優良なタンパク質源の１つとされている魚粉（フィッシュミール）が用いられることが多い。
【０００３】
しかしながら、魚粉の生産量が世界的に年々減少し、飼料として、あるいは食品としての蛋白源枯渇が懸念されている。そうした中、人を含む動物が食べることができる高純度な植物性タンパク質が、持続可能な環境に優しいタンパク質源として期待されている。
【０００４】
植物性タンパク質又はそれを加水分解したペプチドにおいて低分子成分を低減した、純度の高い植物性タンパク質又はペプチドを調製する方法を開示する文献として特許文献１〜３が例示できる。
【０００５】
特許文献１には、植物性蛋白質を含有する原料を、生澱粉分解酵素で処理して澱粉を分解、除去し、この処理物を高アルカリ下で遊離アミノ酸を生成しにくいアルカリ性プロテアーゼで加水分解することにより、分子量２００〜４０００のペプチドを主成分とし、遊離アミノ酸含量が全アミノ酸に対して１％以下であるペプチド組成物を製造することが記載されている。
【０００６】
特許文献２には、じゃがいも等の植物の破砕物を溶媒で抽出し、その抽出物の水溶液を疎水性樹脂を充填したカラムに通すことにより、分子量１５０００〜３００００の低分子蛋白質を疎水性樹脂に吸着させ、これを溶出することを特徴とする低分子蛋白質の精製方法が記載されている。
【０００７】
特許文献３には、毒性を示すソラニンなどのグリコアルカロイドや、苦味の原因となるポリフェノールが低減された、良好な機能性を有するジャガイモタンパク質の製造方法として、ｐＨや温度を制御して沈殿を生じさせてタンパク質を分離する複数の工程により、約１４ｋＤ乃至９７ｋＤであって、その分子量分布の大部分が２０ｋＤ乃至６０ｋＤである中分子量を有するジャガイモタンパク質画分を製造する方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平７−２８４３６９号公報
【特許文献２】特開平６−１５７５９９号公報
【特許文献３】特表２０１０−５０７５９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従来の植物性タンパク質は、タンパク質含量の点で満足できないものでありなお改善の余地があった。
そこで本発明は、不純物が少なくタンパク質含量の高い植物性タンパク質を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、不純物が少なくタンパク質含量の高い植物性タンパク質の提供を目指して鋭意検討し本発明を完成するに至った。本発明は以下の発明を包含する。
（１）乾物中の、タンパク質成分以外の物質の含有量が、合計で３０重量％以下である、植物性タンパク質。
（２）前記物質が、分子量が５，０００以下の物質である、（１）に記載の植物性タンパク質。
（３）前記植物性タンパク質が、澱粉原料植物に由来する植物性タンパク質である、（１）又は（２）記載の植物性タンパク質。
（４）前記澱粉原料植物が根菜類植物である、（３）に記載の植物性タンパク質。
（５）前記根菜類植物がイモ類である、（４）に記載の植物性タンパク質。
（６）ジャガイモに由来するポテトタンパク質である、（５）に記載の植物性タンパク質。
（７）乾物中のポテトグリコアルカロイドの含有量が合計で１００ｐｐｍ以下である、（６）に記載の植物性タンパク質。
（８）乾物中の、メチオニン含有量が２％以上である、及び／又は、トリプトファン含有量が１％以上である、（６）又は（７）に記載の植物性タンパク質。
（９）乾物中の前記物質の含有量が、合計で２０重量％以下である、（１）〜（８）のいずれかに記載の植物性タンパク質。
（１０）乾物中の前記物質の含有量が、合計で１０重量％以下である、（９）に記載の植物性タンパク質。
（１１）乾物中の粗タンパク質含量が８７％以上である、（１）〜（１０）のいずれかに記載の植物性タンパク質。
（１２）水中でのｐＨが４．０以上である、（１）〜（１１）のいずれかに記載の植物性タンパク質。
（１３）乾物中の、１，５００以下の分子量の有機化合物の含有量が合計で１，０００ｐｐｍ以下である、（１）〜（１２）のいずれかに記載の植物性タンパク質。
（１４）乾物中の、粗脂肪含量が０．５％以下である、（１）〜（１３）のいずれかに記載の植物性タンパク質。
（１５）乾物中の揮発性塩基性窒素が０．１０％以下である、及び／又は、乾物中のフィチン酸が０．１００％以下である、（１）〜（１４）のいずれかに記載の植物性タンパク質。
【００１１】
（１６）（１）〜（１５）のいずれかに記載の植物性タンパク質を含む、飼料組成物。
（１７）（１６）に記載の飼料組成物を水産動物に与えることを含む、水産動物の養殖方法。
（１８）前記水産動物が、ブリ、タイ、サーモン又はエビである、（１７）に記載の方法。
【００１２】
（１９）植物性タンパク質の製造方法であって、
植物原料の搾汁を加熱して植物性タンパク質を凝集させる加熱工程と、
前記加熱工程後に凝集した前記植物性タンパク質を、酸水溶液及びアルコールから選択される１種以上で洗浄する洗浄工程と
を含む方法。
（２０）前記洗浄工程を、乾物中の粗タンパク質含量が８７％以上となるまで行うことを含む、（１９）に記載の方法。
（２１）前記洗浄工程が、前記植物性タンパク質を酸水溶液で洗浄することを含み、
前記洗浄工程後に、前記植物性タンパク質の水中でのｐＨを４．０以上に調節するｐＨ調節工程を更に含む、（１９）又は（２０）に記載の方法。
（２２）（１９）〜（２１）のいずれかに記載の方法により製造された植物性タンパク質。
（２３）（１９）〜（２１）のいずれかに記載の方法により製造された植物性タンパク質を含む、飼料組成物。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、不純物が少なくタンパク質含量の高い植物性タンパク質が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、実験１の養殖試験における、第１〜７日の日間乾燥摂餌率を経日変化として示すグラフである。
【図２】図２は、実験１の養殖試験における、日間乾燥摂餌率の７日間での平均値を示すグラフである
【図３】図３は、ＬＣ／ＴＯＦ−ＭＳにより得られたベースピーククロマトグラムを示す。（Ａ）はブランク試料を用いて得たベースピーククロマトグラムを示す。（Ｂ）は未洗浄ポテトタンパク質試料を用いて得たベースピーククロマトグラムを示す。（Ｃ）は酸洗浄４回ポテトタンパク質２試料を用いて得たベースピーククロマトグラムを示す。
【図４】図４に、ポテトタンパク質の、メタノール洗浄処理での洗浄回数とＰＧＡ除去効果との関係を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下本発明の好ましい実施形態について説明する。
【００１６】
＜用語＞
「ポテトグリコアルカロイド」とは、神経毒を持つステロイドアルカロイドの１種である。ジャガイモ中にはソラニン、チャコニンが存在する。
液体クロマトグラフ−飛行時間型質量分析計（ＬＣ／ＴＯＦＭＳ）は、液体クロマトカラムで分離精製した試料溶離液を噴霧して大気圧化でイオンを生成させ、試料イオンと溶離液イオンを分離し、試料イオンを電場によって加速、一定距離を飛行させ、その飛行時間を測定することで精密質量を測定する分析方法である。
【００１７】
＜植物性タンパク質＞
本発明の一以上の態様は、乾物中の、タンパク質成分以外の物質の含有量が、合計で３０重量％以下である、植物性タンパク質に関する。
【００１８】
本明細書において「植物性タンパク質」とは、植物に由来するタンパク質成分に加えて、水や他の不純物を含み得る組成物を指す。ここで「タンパク質成分」といったときは、通常は分子量１，５００以上、典型的には５，０００を超える分子量のポリペプチドを指す。タンパク質成分は適宜糖鎖等により化学修飾されたものであってもよい。タンパク質成分は天然状態のものに限らず変性したものであってもよい。本明細書において「タンパク質成分」は、平均分子量（好ましくは重量平均分子量）が２０，０００以上のものが好ましく、例えば２０，０００〜４０，０００であることができる。本明細書において「タンパク質成分」は、平均分子量（好ましくは重量平均分子量）が、７０，０００以上のものであってもよい。
【００１９】
本発明の植物性タンパク質は、タンパク質成分以外の不純物の含量が少ないため、動物による嗜好性が特に高く、動物に摂食させるためのタンパク質源として特に好適である。ここで「動物」とはヒトを含む動物であり、典型的には、水産動物、畜産動物である。水産動物の具体例は後述する通りである。
【００２０】
本発明の植物性タンパク質は、乾物中の、タンパク質成分以外の物質の含有量が、合計でより好ましくは２０重量％以下、更に好ましくは１０重量％以下、更に好ましくは９重量％以下、更に好ましくは８重量％以下である。このような植物性タンパク質は、タンパク質成分の含量が特に高く、動物による嗜好性が特に高く、動物に摂食させるためのタンパク質源として更に好ましい。
【００２１】
本明細書において植物性タンパク質とは、植物から分離されたタンパク質であれば特に限定されないが、好ましくは、澱粉原料植物に由来する植物性タンパク質や、大豆、菜種、パーム、エンドウマメ、ピーナッツ、ヤシ、コットン、ココナッツ、オリーブ、ヒマワリ、ビート又はゴマに由来する植物性タンパク質等が例示でき、澱粉原料植物に由来する植物性タンパク質、大豆に由来する植物性タンパク質、菜種に由来する植物性タンパク質が特に好ましい。澱粉原料植物としては、根菜類植物、穀類植物が例示でき、根菜類植物が特に好ましい。根菜類植物としては、ジャガイモ、サツマイモ等のイモ類植物が例示でき、ジャガイモが特に好ましい。穀類植物としては、トウモロコシ、小麦、エンバク、米等が例示でき、トウモロコシ、小麦が特に好ましい。
【００２２】
本明細書において「ポテト」とは、特に限定しない限り、ジャガイモを指す。ポテトタンパク質とはジャガイモから分離されたタンパク質である。ジャガイモ等の澱粉原料植物から澱粉を製造する際、副産物として、タンパク質を含む搾汁が生成する。従来、搾汁の用途は少なく廃棄されることが多かったが、腐敗しやすく悪臭の原因になるため廃棄処理が容易ではなかった。本発明は、澱粉原料植物の、タンパク質を含む搾汁を有効利用する観点からも有益である。
【００２３】
タンパク質成分以外の物質は、典型的には、分子量が５，０００以下の物質であり、好ましくは、分子量が１，５００以下の物質である。
【００２４】
本発明の植物性タンパク質は、好ましくは、燃焼法により測定したときの乾物中の粗タンパク質含量が、好ましくは８７％以上、より好ましくは８８％以上、より好ましくは８９％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９１％以上、より好ましくは９２％以上、より好ましくは９３％以上である。乾物中の粗タンパク質含量がこの範囲である本発明の植物性タンパク質は、タンパク質成分の含量が特に高い。また、乾物中の粗タンパク質含量がこの範囲である本発明の植物性タンパク質は、不純物が少ないため、動物による嗜好性が高く、動物に摂食させる用途（飼料等）のタンパク質源として好ましい。また、乾物中の粗タンパク質含量がこの範囲となるまで洗浄された本発明の植物性タンパク質は、動物による嗜好性に悪影響を与える成分が十分に除去されているため、動物による嗜好性が特に高い。
【００２５】
本発明の植物性タンパク質は、好ましくは、燃焼法により測定したときの粗タンパク質含量が、好ましくは８０％以上、より好ましくは８１％以上、より好ましくは８２％以上、より好ましくは８３％以上、より好ましくは８４％以上、より好ましくは８５％以上、より好ましくは８６％以上である。ここでいう粗タンパク質含量は、水を含む状態の植物性タンパク質全体に対する粗タンパク質重量比を指す。粗タンパク質含量がこの範囲である本発明の植物性タンパク質は、タンパク質成分の含量が特に高い。また、粗タンパク質含量がこの範囲である本発明の植物性タンパク質は、不純物が少ないため、動物による嗜好性が高く、動物に摂食させる用途（飼料等）のタンパク質源として好ましい。
【００２６】
本発明の植物性タンパク質は、水分含量が、好ましくは１５重量％以下、より好ましくは１０重量％以下、より好ましくは９重量％以下、より好ましくは８重量％以下である。
【００２７】
本発明の植物性タンパク質は水中でのｐＨが、好ましくは４．０以上、より好ましくは５．０以上、より好ましくは６．０以上、より好ましくは６．５以上、より好ましくは７．０以上である。水中でのｐＨがこの範囲にある本発明の植物性タンパク質は、動物による嗜好性が特に高い。本発明の植物性タンパク質の水中でのｐＨの上限は特に限定されないが、例えば１０．０以下であることができ、好ましくは９．０以下、より好ましくは８．５以下であることができる。なお、本発明の植物性タンパク質の「水中でのｐＨ」とは、本発明の植物性タンパク質を水に、植物性タンパク質４０ｇ（乾物重量）に対し水３６０ｇとなる割合で添加し十分に分散させて得た分散液のｐＨを指す。
【００２８】
本発明の植物性タンパク質は、特に好ましくは、乾物中の、１，５００以下の分子量の有機化合物の含有量が合計で１，０００ｐｐｍ以下である。このように、１，５００以下の分子量の有機化合物の含有量が少ない植物性タンパク質は、動物による嗜好性が特に高く、動物に摂食させる用途（飼料等）のタンパク質源として好ましい。ここで有機化合物とは炭素含有化合物を指し、ポテトグリコアルカロイドなどのステロイドアルカロイドや、青酸、脂肪酸、有機酸等を包含する。１，５００以下の分子量の有機化合物は、液体クトマトグラフ−飛行時間型質量分析計による分析で得られるベースピーククロマトグラムにおいてリテンションタイム１分から３２分及び３４分から６０分までにピークとして現れる物質を包含する。液体クロマトグラフ−飛行時間型質量分析計による分析は、実験３に記載の条件により行うことが好ましい。
【００２９】
本発明の植物性タンパク質は、乾物中の粗脂肪含量が、好ましくは０．５％以下、より好ましくは０．２％以下、より好ましくは０．１％以下である。
【００３０】
本発明の植物性タンパク質は、乾物中の揮発性塩基性窒素が好ましくは０．１０％以下、より好ましくは０．０８％以下、より好ましくは０．０５％以下であり、及び／又は、乾物中のフィチン酸が好ましくは０．１００％以下、より好ましくは０．０９５％以下、より好ましくは０．０９０％以下である。揮発性塩基性窒素の含量は、飼料分析基準：平成２０年１９消安第１４７２９号により測定することができる。フィチン酸の含量は、イオンクロマトグラフ法により測定することができる。揮発性塩基性窒素及び／又はフィチン酸の含量が上記範囲のタンパク質は、動物が好んで食べるため、飼料のタンパク質源として好ましい。
【００３１】
本発明の植物性タンパク質の特に好ましい実施形態は、ジャガイモに由来するポテトタンパク質である。本実施形態に係るポテトタンパク質は、燃焼法により測定したときの乾物中の粗タンパク質含量が、好ましくは８７％以上、より好ましくは８８％以上、より好ましくは８９％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９１％以上、より好ましくは９２％以上、より好ましくは９３％以上であるとき、動物による嗜好性が高く、動物に摂食させる用途（飼料等）のタンパク質源として特に好ましい。乾物中の粗タンパク質含量がこの範囲となるまで洗浄されたポテトタンパク質は、動物による嗜好性に悪影響を与える成分が十分に除去されているため、動物による嗜好性が特に高い。
【００３２】
本実施形態に係るポテトタンパク質は、より好ましくは、乾物中のポテトグリコアルカロイド（チャコニン及びソラニン）の含有量が合計で３００ｐｐｍ以下であり、より好ましくは１００ｐｐｍ以下であり、より好ましくは５０ｐｐｍ以下であり、より好ましくは３０ｐｐｍ以下であり、特に好ましくは１０ｐｐｍ以下である。この場合に、動物が特に好んで食べるため、飼料での利用に適する。
【００３３】
本実施形態に係るポテトタンパク質は、ポテトタンパク質の乾物中のメチオニン含有量が２％以上である、及び／又は、乾物中のトリプトファン含有量が１％以上であることが好ましい。この実施形態ではアミノ酸バランスが特に良好である。
【００３４】
本発明の植物性タンパク質は、植物原料からタンパク質を分離し、洗浄して不純物を除去することにより調製することができる。
【００３５】
植物原料から植物性タンパク質を分離する方法としては例えば以下の方法が挙げられる。
（１）植物原料の搾汁（ジャガイモの場合は「ポテトジュース」と呼ばれる）を加熱して、タンパク質を凝集させる加熱工程を行う。加熱温度、加熱時間は特に限定されない。加熱工程は電気、蒸気等を使用して行うことができる。
（２）ついで、必要に応じて、脱水機にて、凝集した植物性タンパク質を脱水する。
（３）更に、必要に応じて、乾燥機にて乾燥する。
【００３６】
植物性タンパク質を洗浄して不純物を除去する洗浄方法としては、植物性タンパク質を酸水溶液及びアルコールから選択される１種以上で洗浄する洗浄工程を含む方法が挙げられる。植物性タンパク質としては、前記加熱工程により凝集した植物性タンパク質が使用できる。
【００３７】
まず酸水溶液を用いる洗浄工程について説明する。
乾燥した又は未乾燥の植物性タンパク質を使用し、撹拌槽内で酸水溶液により洗浄する。
粒子が細かな方が、洗浄しやすい。
酸としては硫酸、塩酸、酢酸などが使用できる。
【００３８】
洗浄に用いる酸水溶液の量は特に限定されないが、植物性タンパク質に対して重量比で例えば１０倍以上、好ましくは２０倍以上、より好ましくは３０倍以上、より好ましくは３５倍以上の酸水溶液を合計で用いることができる。後述する通り、洗浄工程を複数回行う場合は、１回の洗浄工程において植物性タンパク質に対して重量比で例えば５倍以上、好ましくは８倍以上の酸水溶液を用いることができる。
【００３９】
酸水溶液はｐＨが０．５〜４ほどが好ましく、０．５以上３．５未満がより好ましく、０．５以上３．３以下がより好ましい。
撹拌中に反応し、ｐＨが上昇する場合は、酸水溶液を適宜追加する。
酸水溶液中での処理の時間は２〜１２時間程度が好ましい。温度は２０〜８０℃とすることができる。
酸水溶液中での処理後に脱水し、湿タンパク質を得る。
【００４０】
洗浄度を高めるには、酸水溶液中での処理を繰り返すことが好ましい。
酸水溶液を用いる洗浄工程の終了後に、植物性タンパク質の水中でのｐＨを好ましくは４．０以上、より好ましくは５．０以上、より好ましくは６．０以上、より好ましくは６．５以上、より好ましくは７．０以上となるようにｐＨを調節するｐＨ調節工程を行うことが好ましい。植物性タンパク質の水中でのｐＨの上限は特に限定されないが、例えば１０．０以下であることができ、好ましくは９．０以下、より好ましくは８．５以下であることができる。ｐＨの調節は、洗浄工程後の植物性タンパク質を、適量の水中に十分に分散させた分散液中に、苛性水等のアルカリ物質を適量添加することにより行うことができる。ｐＨ調節工程中にもｐＨが変動する場合は、適宜アルカリ物質を供給する。
【００４１】
洗浄工程の後、或いは、必要に応じて行うｐＨ調節工程の後に、脱水し、乾燥機にて乾燥することができる。乾燥の温度、時間は特に限定されず、目的とする水分量となるように適宜調節することができる。
乾燥後、必要に応じて適宜粉砕する。
【００４２】
次に、アルコールを用いる洗浄工程について説明する。
乾燥した、または未乾燥の植物性タンパク質を使用し、撹拌槽内でアルコールにて洗浄する。粒子が細かな方が、洗浄しやすい。アルコールとしてはメタノール、エタノールなどが好適に使用できる。
【００４３】
アルコールは、アルコールのみからなるものであってもよいし、アルコールの水溶液（アルコールと水との混合液）であってもよい。アルコールの水溶液としては、アルコールが５０重量％以上の濃度となるように水と混合したものが好ましい。
【００４４】
洗浄に用いるアルコールの量は特に限定されないが、植物性タンパク質に対して重量比で例えば１０倍以上、好ましくは２０倍以上、より好ましくは３０倍以上、より好ましくは５倍以上のアルコールを合計で用いることができる。後述する通り、洗浄工程を複数回行う場合は、１回の洗浄工程において植物性タンパク質に対して重量比で例えば５倍以上、好ましくは８倍以上のアルコールを用いることができる。
【００４５】
アルコールによる洗浄処理時間は２〜１２時間程度とすることが好ましい。温度は２０〜５０℃とすることが好ましい。
【００４６】
洗浄処理後に脱水し、湿タンパク質を得る。
洗浄度を高めるには、アルコール中での処理を繰り返すことが好ましい。
洗浄操作が終了後、水で水洗し、タンパク質中の残アルコール量を減らす。
脱水し、乾燥機にて乾燥することが好ましい。乾燥の温度、時間は特に限定されず、目的とする水分量となるように適宜調節することができる。
乾燥後、必要に応じて適宜粉砕する。
上記の洗浄方法は、ポテトタンパク質を洗浄する場合に特に好ましい。
【００４７】
＜植物性タンパク質の製造方法＞
本発明はまた、植物性タンパク質の製造方法であって、
植物原料の搾汁を加熱して植物性タンパク質を凝集させる加熱工程と、
前記加熱工程後に凝集した前記植物性タンパク質を、酸水溶液及びアルコールから選択される１種以上で洗浄する洗浄工程と
を含む方法に関する。
【００４８】
植物性タンパク質の製造方法の本実施形態によれば、粗タンパク質含量が特に高く、不純物含量の低い植物性タンパク質を得ることができるため好ましい。更に本発明者らは、驚くべきことに、植物性タンパク質の製造方法の本実施形態で得られた植物性タンパク質は、動物による嗜好性が特に高いことを見出した。この効果は後述する実験１において確認されている。
【００４９】
実験１での「未洗浄」試験区は、前記洗浄工程を行わずに得た未洗浄のポテトタンパク質５０％と、魚粉５０％とをタンパク質源として配合した飼料をブリに与えた試験区である。図１に示す通り、「未洗浄」試験区では、前記飼料のブリによる摂餌率が経時的に低下した。
【００５０】
一方、実験１での「酸洗浄１」及び「酸洗浄２」試験区は、前記洗浄工程を含む方法により製造されたポテトタンパク質５０％と、魚粉５０％とをタンパク質源として配合した飼料をブリに与えた試験区である。図１に示す通り、「酸洗浄１」及び「酸洗浄２」試験区では、前記飼料のブリによる摂餌率は経時的に低下することはなく、高く維持された。
【００５１】
また、実験１での「ＰＧＡ」試験区は、前記洗浄工程を含む方法により製造されたポテトタンパク質５０％と、魚粉５０％とをタンパク質源として配合し、更にチャコニン２５ｐｐｍとソラニン５０ｐｐｍを配合した飼料をブリに与えた試験区である。図１に示す通り、「ＰＧＡ」試験区では、前記飼料のブリによる摂餌率は経時的に低下することはなく、高く維持された。
【００５２】
従来、ポテトタンパク質中のＰＧＡが動物による嗜好性に悪影響を与えると考えられていた。このため、実験１での「酸洗浄１」及び「酸洗浄２」試験区での、「未洗浄」試験区と比較した嗜好性の高さは、前記洗浄工程によりポテトタンパク質中のＰＧＡ（ポテトグリコアルカロイド）が除去されたことに起因するようにも見える。ところが、「ＰＧＡ」試験区では、チャコニン２５ｐｐｍとソラニン５０ｐｐｍを添加し、ポテトタンパク質が含むＰＧＡと合わせて合計８５ｐｐｍのＰＧＡを含有する飼料を用いたにも関わらずブリによる嗜好性は低下しなかったことから、「酸洗浄１」及び「酸洗浄２」試験区での嗜好性の高さは、飼料中のＰＧＡ含量が低いことによるものではなく、前記洗浄工程によりポテトタンパク質中の嗜好性に悪影響を与えるＰＧＡ以外の成分が除去されたことによると推定される。すなわち、本実施形態に係る植物性タンパク質の製造方法によれば、前記加熱工程と前記洗浄工程という簡便な手段により、動物による嗜好性に悪影響を与える成分が除去された植物性タンパク質を製造することが可能である。
【００５３】
前記加熱工程では、ポテトタンパク質が熱凝固して凝集し、析出する。前記加熱工程における加熱温度、加熱時間は、植物性タンパク質を凝集させることができる温度、時間であれば特に限定されない。
【００５４】
前記加熱工程後、前記洗浄工程前に、凝集した植物性タンパク質を回収する回収工程を行ってもよい。前記回収工程は、特に限定されないが、前記加熱工程後の前記搾汁を乾燥して水分を除去して植物性タンパク質を含む固形分を回収することや、前記加熱工程後の前記搾汁をろ過又は遠心分離して植物性タンパク質を含む固形分を回収することにより行うことができる。前記回収工程で回収された植物性タンパク質は適宜乾燥することができる。
【００５５】
前記洗浄工程により、不純物を除去することができる。
前記洗浄工程が、前記植物性タンパク質を酸水溶液で洗浄することを含む実施形態では、前記洗浄工程後に、前記植物性タンパク質の水中でのｐＨを４．０以上に調節するｐＨ調節工程を更に含むことが好ましい。
前記洗浄工程に用いる酸水溶液、アルコールの好ましい実施形態、及び、それらを用いた洗浄方法の好ましい実施形態は既述の通りである。
【００５６】
本実施形態に係る植物性タンパク質の製造方法の前記洗浄工程は、植物性タンパク質の乾物中の粗タンパク質含量が、好ましくは８７％以上、より好ましくは８８％以上、より好ましくは８９％以上、より好ましくは９０％以上、より好ましくは９１％以上、より好ましくは９２％以上、より好ましくは９３％以上となるまで行うことが、動物による嗜好性に悪影響を与える成分を除去する観点から好ましい。また、本実施形態に係る植物性タンパク質の製造方法の前記洗浄工程は、植物性タンパク質の乾物中の、１，５００以下の分子量の有機化合物の含有量が合計で１，０００ｐｐｍ以下となるまで行うことが、動物による嗜好性に悪影響を与える成分を除去する観点から好ましい。
【００５７】
また、植物性タンパク質がポテトタンパク質である場合には、本実施形態に係る植物性タンパク質の製造方法の前記洗浄工程は、ポテトタンパク質の乾物中のポテトグリコアルカロイド（チャコニン及びソラニン）の含有量の合計量を指標として、それが好ましくは３００ｐｐｍ以下、より好ましくは１００ｐｐｍ以下、より好ましくは５０ｐｐｍ以下、より好ましくは３０ｐｐｍ以下、特に好ましくは１０ｐｐｍ以下となるまで行うことが好ましい。実験１の「ＰＧＡ」試験区で確認されている通り、ポテトグリコアルカロイド自体は動物による嗜好性に直接の悪影響を与えるものではないが、動物による嗜好性に悪影響を与える成分が洗浄工程により除去されていることの指標として、ポテトグリコアルカロイド量が低減されていることを測定することができる。
【００５８】
＜飼料組成物＞
上記の植物性タンパク質及びポテトタンパク質、並びに、上記の製造方法により製造された植物性タンパク質は、飼料組成物にタンパク質源として配合することができる。他のタンパク質源として魚粉を含んでいてもよいが、魚粉を含まないことが特に好ましい。
飼料組成物には飼料として許容される他の成分が更に含まれていてもよい。
【００５９】
本実施形態の飼料組成物を水産動物に与えることにより水産動物の養殖が可能である。ここで、水産動物としては特に限定されず、ブリ、タイ、サーモン、ヒラメ、トラフグ、カンパチ、シマアジ、ヒラマサ、ウナギ、コイ、フナ等の魚類、エビ、カニ等の甲殻類、スッポン、ミドリガメ等の主として水生爬虫類等が例示でき、好ましくは魚類又は甲殻類であり、特に好ましくはブリ、タイ、サーモン又はエビである。本実施形態の飼料組成物は水産動物による嗜好性が特に高いため、本実施形態の飼料組成物を飼料として用いることで、水産動物を効率的に養殖することが可能である。
【実施例】
【００６０】
＜実験１＞
ポテトタンパク質の異なる洗浄方法がブリの摂餌量に及ぼす影響
（目的）
新規にポテトタンパク質を用い、その嗜好性を評価する。
（方法）
以下の原料を用いて飼料を作製した。
（原料）
・酸洗浄４回ポテトタンパク質１
・未洗浄ポテトタンパク質
・酸洗浄４回ポテトタンパク質２
・魚粉（南米産）
「酸洗浄４回ポテトタンパク質１」、「酸洗浄４回ポテトタンパク質２」、「未洗浄ポテトタンパク質」のそれぞれの製造方法と、ＰＧＡ（ポテトグリコアルカロイド）含量、水分含量、粗タンパク質含量の測定方法及び結果は、後述する「実験２」に示した。
【００６１】
（試験区）
タンパク質源として、下記のものを用いた。カッコ内に、それぞれのタンパク質源を配合した飼料を用いた試験区の名を記載する。
１．魚粉５０％＋酸洗浄４回ポテトタンパク質１  ５０％（試験区名「酸洗浄１」）
２．魚粉５０％＋未洗浄ポテトタンパク質５０％（試験区名「未洗浄」）
３．魚粉５０％＋酸洗浄４回ポテトタンパク質２  ５０％（試験区名「酸洗浄２」）
４．魚粉５０％＋酸洗浄４回ポテトタンパク質２  ５０％＋ソラニン５０ｐｐｍ＋チャコニン２５ｐｐｍ（試験区名「ＰＧＡ」）
５．魚粉１００％（試験区名「ＦＭ」）
【００６２】
（試験区および試験飼料）
上記タンパク質源のいずれかと、他の原料とを、表１に示す割合で原料を配合して飼料を作製した。魚粉対照飼料（ＦＭ試験区）では、タンパク質源として魚粉を６０（ｇ／１００ｇ）添加した。他の試験区の飼料では、魚粉含量を３０（ｇ／１００ｇ）に削減して、代わりに魚粉と等重量のポテトタンパク質を加えた。ＰＧＡ（ポテトグリコアルカロイド＝チャコニン及びソラニン）試験区に関しては、飼料作製時に添加する水にソラニン及びチャコニンを懸濁して、乾燥重量あたりソラニン５０ｐｐｍ、チャコニン２５ｐｐｍとなるように混合した。
【００６３】
飼料の作製はペレッターや混合機を使用せず以下の手作業で行った。まず粉末原料をよく混合した後、魚油と水道水をそれぞれの添加後に混合した。水の添加量については試験飼料により若干異なる（後述する乾燥重量比となる量の水を乾燥重量１００ｇに対し添加した）。団子状になった飼料を、手でちぎって供試魚が摂餌する程度の大きさにした。作製した飼料は−３０℃で保存した。
【００６４】
【表１】
2020005606.tif 000003
【００６５】
（飼育方法）
飼育は高知県宇佐町にある高知大学の海洋生物研究総合施設で行った。ブリ稚魚（６９ｇ〜８０ｇ）を供試魚として、５つの２００Ｌ円形水槽に供試魚を４尾ずつ収容した。水温約２２℃の生海水（濾過をしない海水）を常時供給する流水による飼育で溶存酸素量６．５以上を維持した。魚を水槽に収容して、約１週間、全試験区について、ＦＭ試験区で用いる魚粉配合飼料で予備飼育して、水槽間の摂餌量にばらつきが無いことを確認してから各試験飼料を給餌する試験を開始した。試験飼料の給餌は毎日１回飽食するまで（魚が水槽の底に落ちた餌を瞬時に摂取しなくなるまで）給餌し、その時点までの給餌量を稚魚による１日間の摂餌量とした。結果は以下の式によって計算した日間乾燥摂餌率（％）で表した。
【００６６】
１尾あたりの１日間の摂餌量（乾燥ｇ）／開始時の平均体重（ｇ）×１００
なお飼料の摂餌量の湿重量から乾燥重量への換算は、水分添加量から乾燥重量比を算出して、それを摂餌量に乗じて求めた。
・例：水４５ｍｌ添加の場合の乾燥重量比は０．６９：算式：飼料原料１００ｇ／（飼料原料１００ｇ＋水添加量４５ｇ）＝０．６９
・各試験区で使用した試験飼料ごとの乾燥重量比：酸洗浄１（０．６９）、未洗浄（０．７１）、酸洗浄２（０．６９）、ＰＧＡ（０．６９）、ＦＭ（０．７１）
【００６７】
（結果）
各試験区における摂餌量の結果を以下の図表に示した。飼育７日間における１尾あたりの日間湿摂餌量を表２に、飼育７日間における１尾あたりの日間湿摂餌量を初期体重あたりで表した日間湿摂餌率を表３に、表３に示す日間湿摂餌率を乾燥飼料としての摂餌率に換算した日間乾燥摂餌率を表４にそれぞれ示した。表３では、第１〜７日の日間湿摂餌率の、７日間での平均値も示す。表４では、第１〜７日の日間乾燥摂餌率の、７日間での平均値も示す。図１は、表４に示す第１〜７日の日間乾燥摂餌率を経日変化として示すグラフである。図２は、表４に示す日間乾燥摂餌率の７日間での平均値を示すグラフである。
【００６８】
図１から、飼育開始時には全試験区とも活発に摂餌したが、未洗浄区（酸洗浄無しのポテトタンパク質配合飼料）では２日目から極端に摂餌率が低下してほとんど食べなくなった。一方他のいずれの飼料においても極端な摂餌率の落ち込みは無く、試験終了時まで活発に摂餌を続けていた。このことから今回使用した酸洗浄ポテトタンパク質１及び２は、魚粉と等量混合することで飼料への使用に支障がない嗜好性を持つことがわかった。すなわち、酸洗浄したポテトタンパク質を魚粉と等量配合したものをタンパク質源として配合した飼料は、魚粉のみをタンパク質源として配合した飼料と同等の嗜好性を示した。
【００６９】
酸洗浄４回ポテトタンパク質２を用いた酸洗浄２試験区での摂餌率は、酸洗浄４回ポテトタンパク質１を用いた酸洗浄１試験区での摂餌率よりも高かった。実験２に示す通り、酸洗浄４回ポテトタンパク質２でのＰＧＡ量は約１０ｐｐｍであるのに対し、酸洗浄４回ポテトタンパク質１でのＰＧＡ量は約２５ｐｐｍであることから、前者でＰＧＡ量が少ないことが、良好な摂餌率に寄与している可能性がある。
【００７０】
今回の試験ではＰＧＡによる嗜好性低下を確認するために、酸洗浄ポテトタンパク質にＰＧＡを添加したＰＧＡ試験区を設定した。図１及び２に示す摂餌率の結果を見る限り、ＰＧＡ試験区においても魚による嗜好性は低下しなかった。ただし酸洗浄しないポテトタンパク質を配合した飼料を用いた未洗浄試験区では極端な摂餌阻害がおきていることから（図１、２）、ポテトタンパク質の酸洗浄は重要であると言える。
【００７１】
【表２】
2020005606.tif 000004
【００７２】
【表３】
2020005606.tif 000005
【００７３】
【表４】
2020005606.tif 000006
【００７４】
＜実験２＞
（ポテトタンパク質の抽出）
実験１に用いた未洗浄ポテトタンパク質は、次の手順で製造した。
澱粉工場から得られた、ポテトジュースを使用した。
ポテトジュースを加熱して、ジュース中のポテトタンパク質を凝集させた。
脱水機にて、ポテトタンパク質を脱水した。
乾燥機にて乾燥した。
乾燥物を卓上の粉砕機（ミル）により粉砕して粉砕物を得た。
粉砕後のポテトタンパク質を「未洗浄ポテトタンパク質」として実験１に用いた。また、このポテトタンパク質を以下の手順で酸洗浄して、「酸洗浄４回ポテトタンパク質１」と「酸洗浄４回ポテトタンパク質２」を調製し実験１に用いた。
【００７５】
（ポテトタンパク質の酸洗浄）
前記工程で得た乾燥した未洗浄ポテトタンパク質を使用し、撹拌槽内で酸により洗浄した。
ポテトタンパク質は洗浄前に粉砕した。粉砕は、卓上粉砕機にて実施した。
容器にポテトタンパク質４０ｇを入れ、水を３６０ｇ添加し、濃度１０％の液を調製した。
撹拌しながら、硫酸を添加してｐＨ３〜３．５とした。温度は室温（２０〜３０℃）とした。硫酸は１０ｗｔ％以下の希硫酸を用いた。
酸添加後からすぐに、ｐＨが上がりはじめるため、随時酸を添加しｐＨ３〜３．５を維持するようにした。
約３時間撹拌し、ｐＨの挙動が定常状態であることを確認した。
撹拌を終了し、真空脱水を実施し、湿タンパク質を得た。
洗浄度を高めるため、ポテトタンパク質４０ｇの濃度１０％の液を調製する工程から湿タンパク質を得る工程までの洗浄操作を更に３回繰り返し、合計４回行った。
洗浄操作が終了後、ポテトタンパク質４０ｇ（乾物重量）を水３６０ｇに十分に分散させて得た分散液に５％以下の水酸化ナトリウム水溶液を適量添加して前記分散液のｐＨを７．０〜７．５に中和した。中和中にもｐＨが変動するため、適宜アルカリを供給した。
真空脱水し、乾燥機にて乾燥した。
乾燥物を卓上の粉砕機（ミル）により粉砕して粉砕物を得た。粉砕物を飼料テストに用いた。
同じ洗浄操作を異なる場所で異なる時期に行い、２つの酸洗浄ポテトタンパク質を得た。一方を「酸洗浄４回ポテトタンパク質１」、他方を「酸洗浄４回ポテトタンパク質２」とし、実験１に用いた。
【００７６】
（水分測定）
上記で調製されたポテトタンパク質の水分含量を、加熱乾燥質量測定方式の赤外水分計（株式会社ケツト科学研究所赤外線水分計ＦＤ−７２０）を用い１０５℃の温度条件により測定した（常圧加熱乾燥法）。「未洗浄ポテトタンパク質」の水分含量は９．５重量％、「酸洗浄４回ポテトタンパク質１」の水分含量は８．１重量％、「酸洗浄４回ポテトタンパク質２」の水分含量は８．３重量％であった。
【００７７】
（粗タンパク質、粗脂肪、粗繊維及び粗灰分の測定）
酸洗浄４回ポテトタンパク質２中の粗タンパク質及び粗脂肪を、一般財団法人日本食品分析センターに依頼し、粗タンパク質は燃焼法により、粗脂肪はジエチルエーテル法により、それぞれ測定したところ、粗タンパク質は８５．０％、粗脂肪は０．１％であった。窒素−タンパク質換算係数として６．２５を用いた。
酸洗浄４回ポテトタンパク質２の粗灰分を直接灰化法で測定したところ、０．８％であった。
酸洗浄４回ポテトタンパク質２の粗繊維を静置法で測定したところ、０．８％であった。
酸洗浄４回ポテトタンパク質２の可溶無窒素物（＝１００−（水分＋粗タンパク質＋粗脂肪＋粗繊維＋粗灰分））は５．０％であった。
酸洗浄４回ポテトタンパク質２の水分（８．３重量％）を控除した乾物中の粗タンパク質含量は９２．７％であった。日本標準飼料成分表（２００９年版）によると、一般的なポテトタンパク質の乾物中の粗タンパク質含量は８２．０％、魚粉粗タンパク質６５％の乾物中の粗タンパク質含量は７２．５％、大豆粕の乾物中の粗タンパク質含量は５１．１％であり、酸洗浄４回ポテトタンパク質２の乾物中の粗タンパク質含量９２．７％は、これらと比較して顕著に高い。
【００７８】
（ＰＧＡ含量の測定）
ＰＧＡ（ポテトグリコアルカロイド）含量の測定は以下の手順で行った。ＰＧＡとして、ソラニン及びチャコニンの量を測定した。
上記で得た酸洗浄４回ポテトタンパク質１、酸洗浄４回ポテトタンパク質２、未洗浄ポテトタンパク質を粉砕機にて微粉砕した。
１８０μｍ以下のメッシュにて篩分けし、篩下品を使用した。
各ポテトタンパク質３〜１０ｇに対し、８０％メタノール液を１０〜８０ｇ添加し、撹拌した。
ホモジナイザーにて１００００ｒｐｍで３分間せん断撹拌を実施し、ＰＧＡをメタノール水側へ抽出した。
液を回収し、遠心分離にて固液分離した。
液を回収し、フィルターにて不純物をろ過後、ＨＰＬＣ用バイアル瓶に収容した。
分析は、ＨＰＬＣにて実施した。ＨＰＬＣは以下の条件で行った。
カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８  ＡＲ−ＩＩ（４．６ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）ナカライテスク株式会社製
移動相：５５％アセトニトリル含有１０ｍＭリン酸ナトリウム水溶液０．９ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：２０２ｎｍ
注入量：２０μＬ
その結果、ソラニン及びチャコニンの含量は、酸洗浄４回ポテトタンパク質１では約２５ｐｐｍであり、酸洗浄４回ポテトタンパク質２では約１０ｐｐｍであった。また、別途測定した、未洗浄ポテトタンパク質でのソラニン及びチャコニンの含量は約３００ｐｐｍ（ｎ２平均）であった。
【００７９】
＜実験３＞
上記で得た未洗浄ポテトタンパク質及び酸洗浄４回ポテトタンパク質２を、以下の条件のＬＣ／ＴＯＦ−ＭＳにより分析した。この条件では、各サンプルに含まれる分子量約５０〜１５００の有機物（ＰＧＡを含む）が検出される。
【００８０】
【表５】
2020005606.tif 000007
【００８１】
（注入サンプルの調製）
注入サンプルは以下の手順で調製した。
分析試料約１００ｍｇをＰＰ製遠沈管に秤量し、７０％エタノール１０ｍＬを添加した。これを５０℃に加温した状態で、３２５ｒｐｍで６０分間振とう抽出した。抽出液を孔径０．２μｍのＰＴＦＥ製フィルターでろ過した。ろ液をＬＣ／ＴＯＦＭＳ測定試料とした。
ブランクとして、上記の操作を分析試料なしで行ったもの（ＰＰ製遠沈管に７０％エタノール１０ｍＬを添加して振とう）である。
【００８２】
（結果）
上記サンプルを用いて上記条件でのＬＣ／ＴＯＦ−ＭＳにより得られたベースピーククロマトグラムを、図３に示す。
図３中（Ａ）はブランク試料を用いて得たベースピーククロマトグラムを示す。
（Ｂ）は未洗浄ポテトタンパク質試料を用いて得たベースピーククロマトグラムを示す。
（Ｃ）は酸洗浄４回ポテトタンパク質２試料を用いて得たベースピーククロマトグラムを示す。
図３（Ｂ）に示す未洗浄ポテトタンパク質試料を用いて得たベースピーククロマトグラムにおいて検出されたピークは、ソラニン、チャコニン、脂肪酸、有機酸等であった。
一方、図３（Ｃ）に示す酸洗浄４回ポテトタンパク質２試料を用いて得たベースピーククロマトグラムでは、ソラニン、チャコニン、脂肪酸、有機酸等のピークは存在しておらず、酸洗浄によりこれらの成分が除去されていることが確認できた。
【００８３】
＜実験４＞
メタノール洗浄処理によるＰＧＡ除去
メタノール洗浄は以下の手順で行った。
乾燥した、または未乾燥のポテトタンパク質１０ｇを使用し、撹拌槽内にて９０ｇの８０％メタノール水溶液にて洗浄した。
洗浄処理時間は２〜１２時間程度とし、温度は２０〜５０℃とした。
洗浄処理後に脱水し、湿タンパク質を得た。
８０％メタノール水溶液中での処理を１〜４回行った。
洗浄操作が終了後、水で水洗し、蛋白中の残メタノール量を減らし、脱水し、乾燥機にて乾燥した。
乾燥後、必要に応じて適宜粉砕した。
上記で得られた、８０％メタノール水溶液による洗浄を１〜４回行ったポテトタンパク質中のソラニン及びチャコニンの量を、実験２に記載の手順により測定した。ポテトタンパク質１ｇあたりの、ソラニン及びチャコニンの合計量（μｇ）を、ｔ−ＰＧＡ量とした。結果を図４に示す。
【００８４】
＜実験５＞
実験２で調製した酸洗浄４回ポテトタンパク質２のアミノ酸組成を分析した。
アミノ酸のうち、アルギニン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン酸、セリン、スレオニン及びアスパラギン酸は、酸洗浄４回ポテトタンパク質２の試料を、０．０４％２−メルカプトエタノール含有２０％塩酸により１１０℃２４時間処理して加水分解したのち、ｐＨ２．２に調整して得た試験溶液をアミノ酸自動分析法により分析することで定量した。アミノ酸自動分析法の条件は以下の通りとした。
【００８５】
【表６】
2020005606.tif 000008
【００８６】
アミノ酸のうちシスチン及びメチオニンは、酸洗浄４回ポテトタンパク質２の試料に、過ギ酸溶液を添加して冷蔵庫内で１６時間酸化処理を行い、その後減圧濃縮し、濃縮物に２０％塩酸を加えて１３０〜１４０℃２０時間処理して加水分解したのち、ｐＨ２．２に調整して得た試験溶液をアミノ酸自動分析法により分析することで定量した。アミノ酸自動分析法の条件は以下の通りとした。
【００８７】
【表７】
2020005606.tif 000009
【００８８】
アミノ酸のうちトリプトファンは、酸洗浄４回ポテトタンパク質２の試料に、水酸化バリウム八水和物、水、チオジエチレングリコールを添加し、１１０℃１２時間処理して加水分解したのち、塩酸より中和し、更に水酸化ナトリウムにより微アルカリに調整して得た試験溶液を高速液体クロマトグラフ法により分析することで定量した。高速液体クロマトグラフ法の条件は以下の通りとした。
【００８９】
【表８】
2020005606.tif 000010
【００９０】
上記のアミノ酸分析の結果、酸洗浄４回ポテトタンパク質２の水分８．３％を控除した乾物中での各アミノ酸（アルギニン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン酸、シスチン、メチオニン、トリプトファン）の含有量は、いずれも１％以上であった。日本標準飼料成分表（２００９年版）によれば、一般的なポテトタンパク質では乾物中でのメチオニンが１．７４％、トリプトファンが０．４８％であり、これらのアミノ酸の含有量が相対的に低いのに対して、酸洗浄４回ポテトタンパク質２では乾物中のメチオニンが２．２２％、トリプトファンが１．４０％であった。また、日本標準飼料成分表（２００９年版）によれば、乾物中のシスチン（Ｃｙｓ−Ｃｙｓ）は魚粉粗タンパク質６５％で０．６５％、大豆粕で０．７８％であるのに対して、酸洗浄４回ポテトタンパク質２では１％以上であった。これらのことから、酸洗浄４回ポテトタンパク質２はアミノ酸をバランス良く含んでおり、飼料のタンパク質源として優れていることが確認された。
【００９１】
＜実験６＞
上記の実験２と同様の方法で得た、酸洗浄済みポテトタンパク質と、未洗浄のポテトタンパク質について、それぞれ、アフラトキシンＢ１、αソラニン、αチャコニン、ヒスタミン、揮発性塩基性窒素、及び、フィチン酸の含量を定量した。測定結果及び各成分の測定方法を以下に示す。
【００９２】
（酸洗浄済みポテトタンパク質）
アフラトキシンＢ１：検出せず（定量下限：０．００５ｍｇ／Ｋｇ）［高速液体クロマトグラフ法］
αソラニン：０．１ｍｇ／１００ｇ（定量下限：０．１ｍｇ／１００ｇ）［液体クロマトグラフ−質量分析法］
αチャコニン：０．１ｍｇ／１００ｇ（定量下限：０．３ｍｇ／１００ｇ）［液体クロマトグラフ−質量分析法］
ヒスタミン：検出せず（定量下限：０．５ｍｇ／１００ｇ）［高速液体クロマトグラフ法］
揮発性塩基性窒素：０．０４％（定量下限：０．０１％）［飼料分析基準：平成２０年１９消安第１４７２９号による］
フィチン酸：０．０８９６％［イオンクロマトグラフ法］
【００９３】
（未洗浄のポテトタンパク質）
アフラトキシンＢ１：検出せず（定量下限：０．００５ｍｇ／Ｋｇ）［高速液体クロマトグラフ法］
αソラニン：７９ｍｇ／１００ｇ（定量下限：０．１ｍｇ／１００ｇ）［液体クロマトグラフ−質量分析法］
αチャコニン：１００ｍｇ／１００ｇ（定量下限：０．３ｍｇ／１００ｇ）［液体クロマトグラフ−質量分析法］
ヒスタミン：検出せず（定量下限：０．５ｍｇ／１００ｇ）［高速液体クロマトグラフ法］
揮発性塩基性窒素：０．１３％（定量下限：０．０１％）［飼料分析基準：平成２０年１９消安第１４７２９号による］
フィチン酸：０．１０７％［イオンクロマトグラフ法］
【図１】
2020005606.tif 000011
【図２】
2020005606.tif 000012
【図３】
2020005606.tif 000013
【図４】
2020005606.tif 000014