(57)【要約】【課題】細胞を培養層から剥離する際に、細胞が剥離液に浸漬する時間にばらつきが生じることを抑制することができる多層培養容器を提供する。【解決手段】多層培養容器１は、境界面１０によって、底板２と平行な方向において、内部空間を一方側の培養空間１１と他方側のバッファ空間１２とに分けられている。また、多層培養容器１は、培養空間１１において底板２と平行な方向に沿って延び、培養空間１１を複数の培養層２１に分ける少なくとも１つの中間板５と、境界面１０において、底板２及び少なくとも１つの中間板５のそれぞれから天板３側に延びる壁部１３と、バッファ空間１２とそれぞれの培養層２１とを連通させる連通部１４と、天板３のバッファ空間１２に面する位置に形成された給排液口６と、を備えている。【選択図】図1
2020202784.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の培養層で細胞を培養可能な多層培養容器であって、
底板と、前記底板と対向する天板と、前記底板と前記天板とを繋ぐ複数の側壁と、を含む筐体と、
前記筐体の内部空間を、前記底板と平行な方向において、一方側の培養空間と他方側のバッファ空間とに分ける境界部と、
少なくとも前記培養空間において前記底板と平行な方向に沿って延び、前記培養空間を前記複数の培養層に分ける少なくとも１つの中間板と、
前記境界部において、前記底板及び前記少なくとも１つの中間板のそれぞれから前記天板側に延びる複数の壁部と、
前記複数の培養層のそれぞれを前記バッファ空間と連通させる、前記境界部に形成された複数の連通部と、
前記筐体のうち前記バッファ空間に面する位置に形成された給排液口と、
を備えることを特徴とする多層培養容器。
【請求項２】
前記底板に設けられた前記壁部の上端から前記他方側の側壁に向かって、前記天板側に傾斜しながら延びる傾斜板が設けられていることを特徴とする請求項１に記載の多層培養容器。
【請求項３】
前記少なくとも１つの中間板は、前記培養空間において前記境界部まで延びていることを特徴とする請求項１又は２に記載の多層培養容器。
【請求項４】
前記少なくとも１つの中間板は、前記培養空間及び前記バッファ空間の両方において前記底板と平行な方向に沿って延びることで、前記バッファ空間が複数のバッファ層に分けられており、
前記バッファ空間において前記中間板を貫通する貫通孔がさらに形成されていることを特徴とする請求項１又は２に記載の多層培養容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、複数の培養層で細胞を培養可能な多層培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞培養の方法にはいくつかの種類があるが、最も一般的な方法として、培養容器に細胞を接着させた状態で培養が行われる静置培養がある。具体的には、シャーレや培養フラスコなどの培養容器の底面に細胞を密着させ、培養容器の底面と側面とによって形成された培養層に培地を加え、所定の環境条件下において細胞培養が行われる。そして、培養が進行するにつれて、細胞は培養容器の底面に沿って増殖する。また、近年では、大量の細胞に対して静置培養を行うために、細胞が接着可能な複数の接着面を有し、複数の培養層が形成された多層培養容器が開発されている（図６を参照）。
【０００３】
静置培養において、増殖した細胞を新しい培養容器に移し替える継代や、培養が終了した細胞の回収を行う際には、剥離液によって細胞を接着面から剥離させる必要がある。特に、多層培養容器に対して細胞の剥離を行う場合、大量の剥離液が必要になるとともに、所定の手順によって、供給した剥離液を容器内部の各培養層に行き渡らせる必要がある。例えば、従来の多層培養容器２０１は、図６に示すように、底板２０２と天板２０３と側壁２０４とからなる直方体形状の筐体と、筐体の内部空間を複数の培養層２２１に分ける複数の中間板２０５と、多層培養容器２０１に液体の供給及び排出を行う給排液部２０６と、内部の気体を排出する排気口２０７とを有する。給排液部２０６は、天板２０３側が開口しており、天板２０３側から底板２０２側にかけて複数の中間板２０５を貫通する円筒形状であって、円筒側面には複数の培養層２２１のそれぞれと連通する複数の連通部２１４が形成されている。また、図６に示すように、給排液部２０６の開口部分は、天板２０３の角に配置されており、排気口２０７は、給排液部２０６の配置位置と隣り合う角に配置されている。従来の多層培養容器２０１に対して、剥離液３０を供給し、細胞を剥離させる手順について、図７を参照にしつつ、以下に説明する。なお、図７における斜線部分は、剥離液３０が存在している領域である。
【０００４】
まず、図７（ａ）に示すように、多層培養容器２０１を、給排液部２０６が下、排気口２０７が上となり、且つ、底板２０２が水平な載置面に対して垂直となるように置き（以下、第１姿勢）、多層培養容器２０１の内部の培地を給排液部２０６から排出する。続いて、多層培養容器２０１が第１姿勢の状態で、給排液部２０６から多層培養容器２０１の内部に所定量の剥離液３０を供給する。剥離液３０の供給後、図７（ｂ）に示すように、底板２０２が載置面に対して垂直を保ったまま、給排液部２０６及び排気口２０７が上になるように、多層培養容器２０１を置き直す（以下、第２姿勢）。これにより、剥離液３０が連通部２１４を介して各培養層２２１に略均等に流れ込む。次に、図７（ｃ）に示すように、底板２０２が載置面と接触し、給排液部２０６及び排気口２０７が上になるように多層培養容器２０１を置き直す（第３姿勢）。これにより、剥離液３０が底板２０２及び複数の中間板２０５に沿って均一に広がり、底板２０２及び複数の中間板２０５に接着している細胞全体が剥離液３０に浸漬する。そして、多層培養容器２０１を第３姿勢のまま所定時間放置することにより、細胞は底板２０２及び複数の中間板２０５から剥離する。最後に、図７（ｄ）に示すように、多層培養容器２０１を再び第１姿勢として、底板２０２及び複数の中間板２０５から剥離された細胞を給排液部２０６から排出する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
以上の手順によって、従来の多層培養容器２０１において、底板２０２及び複数の中間板２０５から剥離した細胞を回収することが可能となる。しかし、図７（ａ）に示すように、多層培養容器２０１を第１姿勢にし、剥離液３０を多層培養容器２０１に供給している間、剥離液３０は各培養層２２１に流れ込んでいる。このため、多層培養容器２０１が第１姿勢のときに、下に位置する側壁２０４付近の底板２０２及び中間板２０５に接着している細胞は、剥離液３０を供給する間中ずっと剥離液３０に浸漬する。一方で、多層培養容器２０１が第１姿勢のときに、上に位置する側壁２０４付近底板２０２及び中間板２０５に接着している細胞は、剥離液３０を供給している間、剥離液３０に浸漬することはない。容器内部に大量の剥離液を供給するには時間を要するため、従来の多層培養容器２０１では、場所によって細胞が剥離液に浸漬する時間にばらつきが生じてしまう。細胞の剥離液に浸漬する時間が長過ぎると、細胞を傷め、浸漬する時間が短過ぎると、細胞を培養層から剥離できない。
【０００６】
そこで、本発明の目的は、細胞を培養層から剥離する際に、細胞が剥離液に浸漬する時間にばらつきが生じることを抑制することができる多層培養容器を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明に係る多層培養容器は、複数の培養層で細胞を培養可能な多層培養容器であって、底板と、前記底板と対向する天板と、前記底板と前記天板とを繋ぐ複数の側壁と、を含む筐体と、前記筐体の内部空間を、前記底板と平行な方向において、一方側の培養空間と他方側のバッファ空間とに分ける境界部と、少なくとも前記培養空間において前記底板と平行な方向に沿って延び、前記培養空間を前記複数の培養層に分ける少なくとも１つの中間板と、前記境界部において、前記底板及び前記少なくとも１つの中間板のそれぞれから前記天板側に延びる複数の壁部と、前記複数の培養層のそれぞれを前記バッファ空間と連通させる、前記境界部に形成された複数の連通部と、前記筐体のうち前記バッファ空間に面する位置に形成された給排液口と、を備えることを特徴とする。
【０００８】
このような多層培養容器を用いれば、次のような手順で剥離液を各培養層に供給することができる。まず、他方側の側壁が下になるように、すなわち、バッファ空間が下になるように、多層培養容器を置く。続けて、給排液口から剥離液をバッファ空間に供給する。剥離液の供給後、他方側の側壁につながる何れかの側壁が下になるように、すなわち、底板及び中間板が水平方向に沿って並ぶように、多層培養容器を置き直す。すると、バッファ空間の内部の剥離液の一部が、複数の連通部を介して各培養層に略均等に流れ込む。次に、一方側の側壁が下になるように、すなわち、培養空間が下になるように、多層培養容器を置き直す。すると、バッファ空間内の剥離液の全てが、複数の連通部を介して各培養層に略均等に流れ込む。最後に、底板が下になるように多層培養容器を置けば、各培養層の剥離液が底板又は中間板に沿って均一に広がる。
【０００９】
このような手順によれば、剥離液を給排液口から供給している間は、剥離液はバッファ空間に流れ込み、各培養層に流れ込むことはない。また、剥離液の供給後、多層培養容器を２回置き直す際には、各培養層の一部領域にのみ剥離液が存在する状況となるが、このような置きなおし作業は短時間で済ませることができる。このため、場所によって、細胞の剥離液への浸漬時間が異なることによる影響は小さい。つまり、本発明によれば、剥離液の供給時に、剥離液を一時的に貯留するバッファ空間を設けることで、細胞が剥離液に浸漬する時間にばらつきが生じることを抑制することができる。
【００１０】
また、上記多層培養容器は、前記底板に設けられた前記壁部の上端から前記他方側の側壁に向かって、前記天板側に傾斜しながら延びる傾斜板が設けられていることが好ましい。
【００１１】
バッファ空間に貯留された剥離液は、その後、連通部を介して各培養層に流入する。このとき、底板に設けられた壁部がある場合、バッファ空間において壁部と底板と他方側の側面とに囲まれた部分に、剥離液の一部が残存してしまう。そこで、上記構成では、底板に設けられた壁部の上端から他方側の側壁に向かって、天板側に延びる傾斜板を設けている。これにより、バッファ空間に残存する剥離液は、底板を下にしたときに、傾斜板を伝って底板と中間板との間の培養層に流れ込むため、バッファ空間に残存する剥離液を減らすことができ、剥離液を無駄なく使用することができる。
【００１２】
また、上記多層培養容器において、前記少なくとも１つの中間板は、前記培養空間において前記境界部まで延びていることが好ましい。
【００１３】
従来の多層培養容器では、中間板によって各培養層同士が完全に隔てられている。このため、各培養層に剥離液を供給するためには、中間板を貫通する円筒形状であって、円筒側面に各培養層と連通する複数の連通部が形成されている給排液部を設ける必要があった。一方で、上記構成では、中間板は、一方側の培養空間において境界部まで延びており、他方側のバッファ空間には延びていない。つまり、バッファ空間は、中間板によって隔てられていない。そして、バッファ空間に供給された剥離液は、境界部に形成された連通部を介して各培養層に流れ込むことが可能である。したがって、上記構成によれば、各培養層に剥離液を供給するためには、筐体のバッファ空間に面する位置に、単に開口（給排液口）を形成すればよく、中間板を貫通する円筒形状の給排液部を形成する必要のある従来の多層培養容器と比べて、容易に製造することができる。
【００１４】
また、上記多層培養容器において、前記少なくとも１つの中間板は、前記培養空間及び前記バッファ空間の両方において前記底板と平行な方向に沿って延びることで、前記バッファ空間が複数のバッファ層に分けられており、前記バッファ空間において前記中間板を貫通する貫通孔がさらに形成されていることが好ましい。
【００１５】
上記構成では、他方側の側壁まで延びた中間板によって、バッファ空間が、各培養層に対応する複数のバッファ層に分けられている。また、中間板に貫通孔が形成されていることによって、それぞれのバッファ層同士の間で、液体又は気体が連通可能となる。このため、剥離液をバッファ空間に供給後、他方側の側壁につながる何れかの側壁が下になるように多層培養容器を置き直すと、剥離液の一部が各培養層に略均等に流れ込むとともに、剥離液の残りの一部は各バッファ層に略均等に分けられて、貯留された状態となる。この状態から、培養空間が下になるように多層培養容器を置き直すと、各バッファ層に略均等に貯留された剥離液の残りの一部が、連通部を介して各培養層に流れ込む。よって、剥離液の全てを、より均等に各培養層に供給することができる。
【発明の効果】
【００１６】
細胞を培養層から剥離する際に、細胞が剥離液に浸漬する時間にばらつきが生じることを抑制することができる多層培養容器を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の実施形態に係る多層培養容器を示した斜視図である。
【図２】図１におけるＡ−Ａ断面図である。
【図３】多層培養容器に剥離液を供給し、細胞を浸漬させる際の手順を説明する図である。
【図４】変形例に係る多層培養容器を示した斜視図である。
【図５】図４におけるＢ−Ｂ断面図である。
【図６】従来の多層培養容器を示した斜視図である。
【図７】従来の多層培養容器に剥離液の供給し、細胞を浸漬させる際の手順を説明する図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明の好適な実施の形態について、図面を参照しつつ説明する。
【００１９】
本実施形態に係る多層培養容器１は、複数の培養層で細胞を培養することが可能な直方体形状の培養容器である。多層培養容器１は、図１に示すように、底板２と、底板２と対向する天板３と、底板２と天板３とを繋ぐ４つの側壁４と、３つの中間板５と、給排液口６と、排気口７と、を含む。また、多層培養容器１の内部空間は、底板２と平行な方向（図１の左右方向）において、境界面（境界部）１０よりも一方側（図１の左側）の培養空間１１と、境界面１０よりも他方側（図１の右側）のバッファ空間１２とに分けられる。
【００２０】
底板２及び天板３は長方形形状の平板であり、底板２と天板３とは互いに対向している。また、底板２と天板３とは、４つの側壁４によって繋がっている。側壁４は、一方側の側壁４ａと、他方側の側壁４ｂと、側壁４ａと４ｂとにつながる側壁４ｃ及び４ｄとからなる。
【００２１】
中間板５は、培養空間１１において、底板２と平行な方向に沿って延び、側壁４ａ、４ｃ及び４ｄの内面と接している。また、３つの中間板５は、底板２と垂直な方向に沿って並んでいる。そして、底板２及び中間板５には、細胞が接着可能である。境界面１０において、底板２及び３つの中間板５のそれぞれから天板３側に延びる壁部１３が形成されている。そして、底板２と、中間板５と、側壁４ａ、４ｃ及び４ｄと、壁部１３とに囲まれた領域、２つの中間板５と、側壁４ａ、４ｃ及び４ｄと、壁部１３とに囲まれた領域、及び、中間板５と、天板３と、側壁４ａ、４ｃ及び４ｄと、壁部１３とに囲まれた領域が、それぞれ培養層２１となる。すなわち、本実施形態の多層培養容器１においては、４つの培養層２１が形成される。
【００２２】
また、それぞれの壁部１３の上端の全体と、中間板５又は天板３との間には、それぞれの培養層２１とバッファ空間１２とを連通させる連通部１４が形成されている。さらに、図２に示すように、底板２に形成された壁部１３の上端から他方側の側壁４ｂに向かって、天板３側に傾斜しながら延びる傾斜板１５が設けられている。
【００２３】
給排液口６は、多層培養容器１に液体の供給及び排出を行う開口部分であって、図１に示すように、天板３のバッファ空間１２に面する位置に形成されている。また、給排液口６は、例えば、円筒状に突出しており、蓋の取り付け及び取外しによって開閉が可能である。
【００２４】
排気口７は、多層培養容器１の内部の気体の排出を行う開口部分であって、天板３の培養空間１１に面する位置に形成されている。また、排気口７は、例えば、円筒状に突出しており、蓋の取り付け及び取外しによって開閉が可能である。また、給排液口６は、側壁４ｃから４ｄに向かう方向において、排気口７よりも側壁４ｃ側に形成されている。
【００２５】
続いて、以下に、本実施形態に係る多層培養容器１に対して、剥離液３０を供給し、細胞を剥離させる手順について図３を参照しつつ説明する。なお、図７に示す、従来の多層培養容器の姿勢と同様の姿勢については、同じ呼称を用いる。また、図３おける斜線部分は、剥離液３０が存在している領域である。
【００２６】
まず、側壁４ｂ又は４ｃが下になるようにして、多層培養容器１の内部の培地を、開状態とした給排液口６から排出する。続いて、図３（ａ）に示すように、側壁４ｂが下になるように、すなわち、バッファ空間１２が下になるように、多層培養容器１を置き（以下、貯留姿勢）、給排液口６から剥離液３０をバッファ空間１２に供給する。
【００２７】
剥離液３０の供給後、図３（ｂ）に示すように、側面４ｃが下になるように多層培養容器１を置き直す（第１姿勢）。これにより、バッファ空間１２の内部に貯留された剥離液３０の一部が、複数の連通部１４を介して各培養層２１に略均等に流れ込む。次に、図３（ｃ）に示すように、側壁４ａが下になるように、すなわち、培養空間１１が下になるように、多層培養容器１を置き直す（第２姿勢）。すると、バッファ空間１２内の剥離液３０の全てが、複数の連通部１４を介して各培養層２１に略均等に流れ込む。その後、図３（ｄ）に示すように、底板２が下になるように多層培養容器１を置くことで（第３姿勢）、各培養層の剥離液３０が底板２又は中間板５に沿って均一に広がる。多層培養容器１を第３姿勢のまま所定時間放置することにより、細胞は底板２及び中間板５から剥離する。そして、図３（ｅ）に示すように、側面４ｃを下にした第１姿勢、又は、バッファ空間１２を下にした貯留姿勢（図３（ａ）を参照）として、給排液口６から細胞を排出する。
【００２８】
本実施形態の多層培養容器１は、境界面１０によって、底板２と平行な方向において、内部空間を一方側の培養空間１１と他方側のバッファ空間１２とに分けられている。また、多層培養容器１は、底板２と平行な方向に沿って延び、培養空間１１を４つの培養層２１に分ける３つの中間板５と、境界面１０において、底板２及び３つの中間板５のそれぞれから天板３側に延びる壁部１３と、バッファ空間１２とそれぞれの培養層２１とを連通させる４つの連通部１４と、天板３のバッファ空間１２に面する位置に形成された給排液口６と、を備えている。
【００２９】
このような多層培養容器１を用いれば、次のような手順で剥離液３０を各培養層２１に供給することができる。まず、他方側の側壁４ｄが下になるように、すなわち、バッファ空間１２が下になるように、多層培養容器１を置く（貯留姿勢）。続けて、給排液口６から剥離液３０をバッファ空間１２に供給する。剥離液３０の供給後、側壁４ｃが下になるように、すなわち、底板２及び中間板５が水平方向に沿って並ぶように、多層培養容器１を置き直す（第１姿勢）。すると、バッファ空間１２の内部の剥離液３０の一部が、複数の連通部１４を介して各培養層２１に略均等に流れ込む。次に、側壁４ａが下になるように、すなわち、培養空間１１が下になるように、多層培養容器１を置き直す（第２姿勢）。すると、バッファ空間１２内の剥離液３０の全てが、複数の連通部１４を介して各培養層２１に略均等に流れ込む。最後に、底板２が下になるように多層培養容器１を置けば（第３姿勢）、各培養層２１の剥離液３０が底板２又は中間板５に沿って均一に広がる。このような手順によれば、剥離液３０を給排液口６から供給している間は、剥離液３０はバッファ空間１２に流れ込み、各培養層２１に流れ込むことはない。また、剥離液３０の供給後、多層培養容器１を第１姿勢と、第２姿勢とに、２回置き直す際には、各培養層２１の一部領域にのみ剥離液３０が存在する状況となるが、このような置きなおし作業は短時間で済ませることができる。このため、場所によって、細胞の剥離液３０への浸漬時間が異なることによる影響は小さい。つまり、本発明によれば、剥離液３０の供給時に、剥離液３０を一時的に貯留するバッファ空間１２を設けることで、細胞が剥離液３０に浸漬する時間にばらつきが生じることを抑制することができる。
【００３０】
本実施形態の多層培養容器１は、底板２に設けられた壁部１３の上端から側壁４ｄに向かって、天板３側に傾斜しながら延びる傾斜板１５が設けられている。バッファ空間１２に貯留された剥離液３０は、その後、連通部１４を介して各培養層２１に流入する。このとき、底板に設けられた壁部１３がある場合、バッファ空間１２において壁部１３と底板２と側面４ｄとに囲まれた部分に、剥離液３０の一部が残存してしまう。そこで、本実施形態では、底板２に設けられた壁部１３の上端から側壁４ｄに向かって、天板３側に延びる傾斜板１５を設けている。これにより、バッファ空間１２に残存する剥離液３０は、傾斜板１５を伝って底板２と中間板５との間の培養層２１に流れ込むため、バッファ空間１２に残存する剥離液３０を減らすことができ、剥離液３０を無駄なく使用することができる。
【００３１】
本実施形態の多層培養容器１において、３つの中間板５は、培養空間１１において境界面１０まで延びている。従来の多層培養容器２０１では、図６に示すように、中間板２０５によって各培養層２２１同士が完全に隔てられていた。このため、各培養層２２１に剥離液３０を供給するためには、中間板２０５を貫通する円筒形状であって、円筒側面に各培養層２２１と連通する複数の連通部２１４が形成されている給排液部２０６を設ける必要があった。一方で、本実施形態の多層培養容器１では、図１に示すように、中間板５は、一方側の培養空間１１において境界面１０まで延びており、他方側のバッファ空間１２には延びていない。つまり、バッファ空間１２は、中間板５によって隔てられていない。そして、バッファ空間１２に供給された剥離液３０は、境界面１０に形成された連通部１４を介して各培養層２１に流れ込むことが可能である。したがって、本実施形態の構成によれば、各培養層２１に剥離液３０を供給するためには、バッファ空間１２に面する位置に、単に開口（給排液口６）を形成すればよく、中間板２０５を貫通する円筒形状の給排液部２０６を形成する必要のある従来の多層培養容器２０１と比べて、容易に製造することができる。
【００３２】
以上、本発明の好適な実施の形態について説明したが、本発明は、これらの例に限られるものではなく、特許請求の範囲に記載した限りにおいて様々な変更が可能である。
【００３３】
上記実施形態では、中間板５は、培養空間１１において、底板２と平行な方向に沿って延び、側壁４ａ、４ｃ及び４ｄの内面と接している。しかしながら、中間板５は、培養空間１１及びバッファ空間１２の両方において、底板２と平行な方向に沿って延びていてもよい。例えば、変形例に係る多層培養容器１０１では、図４及び図５に示すように、３つの中間板１０５は、底板２と平行な方向に沿って延び、側壁４ａ、４ｂ、４ｃ及び４ｄの内面と接している。この場合、３つの中間板１０５には、バッファ空間１２においてそれぞれを貫通する貫通孔１６が形成されている。この構成によれば、図５に示すように、側壁４ｄまで延びた中間板１０５によって、バッファ空間１２が、４つの培養層２１に対応する４つのバッファ層２２に分けられている。また、中間板１０５に貫通孔１６が形成されていることによって、それぞれのバッファ層２２同士の間で、液体又は気体が連通可能となる。このため、剥離液３０をバッファ空間１２に供給後、側壁４ｃが下になるように多層培養容器を置き直す（第１姿勢）と、剥離液３０の一部が各培養層２１に略均等に流れ込むとともに、剥離液３０の残りの一部は各バッファ層２２に略均等に分けられて、貯留された状態となる。この状態から、培養空間１１が下になるように多層培養容器１０１を置き直すと（第２姿勢）、各バッファ層２２に略均等に貯留された剥離液３０の残りの一部が、連通部１４を介して各培養層２１に流れ込む。よって、剥離液３０の全てを、より均等に各培養層２１に供給することができる。
【００３４】
なお、上記変形例では、中間板１０５は、側壁４ｄの内面と接しているが、側壁４ｄの内面と接していなくてもよい。この場合、例えば、中間板１０５は、培養空間１２における境界面１０と側壁４ｄとの間の位置まで延びている。また、この場合は、中間板１０５と側壁４ｄとの間に隙間があるため、それぞれのバッファ層同士の間で液体又は気体を連通させるための貫通孔１６は不要である。
【００３５】
上記実施形態及び上記変形例では、３つの中間板が配置されているが、１つ又は２つでもよく、４つ以上でもよい。
【００３６】
また、上記実施形態では、壁部１３は、境界面１０において、底板２及び中間板５から天板３側に向かって、底板２及び中間板５と垂直な方向に延びている。しかしながら、壁部１３は、一方側又は他方側に傾いていてもよい。また、連通部１４は、それぞれの壁部１３の上端の一部と、中間板５又は天板３との間に形成されていてもよい。この場合、壁部１３の上端のうち、連通部１４が形成されていない部分は、中間板５又は天板３と接している。または、壁部１３の上端全体と、中間板５又は天板３とが接しており、連通部１４は、壁部１３の任意の位置に１つ又は複数形成されていてもよい。
【００３７】
上記実施形態では、給排液口６は、天板３のバッファ空間１２に面する位置に形成されている。しかしながら、給排液口６は、側壁４ｂ、４ｃ又は４ｄの、バッファ空間１２と面する位置に形成されていてもよい。
【００３８】
上記実施形態では、排気口７は、天板３の培養空間１１に面する位置に形成されている。しかしながら、排気口７は、側壁４ａ、４ｂ、４ｃ又は４ｄの、培養空間１１又はバッファ空間１２と面する位置に形成されてもよい。
【００３９】
上記実施形態では、剥離液を加えた多層培養容器１を、第３姿勢のまま所定時間放置することにより、細胞を底板２及び中間板５から剥離させている。しかしながら、例えば、第３姿勢で所定時間放置した後、多層培養容器１を軽く叩き、細胞を培養層から剥離させてもよい。これにより、単に所定時間放置する場合より、剥離させやすくなる。
【００４０】
上記実施形態では、底板２及び天板３は長方形形状である。しかしながら、底板２及び天板３は、台形形状でもよく、その他の多角形形状、楕円形状、又は、これらの複合からなる形状でもよい。
【符号の説明】
【００４１】
１、１０１  多層培養容器
２  底板
３  天板
４、２０４  側壁
５、１０５、２０５  中間板
６  給排液口
７  排気口
１０  境界面
１１  培養空間
１２  バッファ空間
１３  壁部
１４  連通部
１５  傾斜板
１６  貫通孔
２１、２２１  培養層
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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