(57)【要約】      （修正有）【課題】新たな化学修飾により強度及び有効性が改善したアンチセンス化合物の提供。【解決手段】修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ特定の配列からなる配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項２】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１の核酸塩基３２９１〜３３１０、３２９０〜３３０９、３２８７〜３３０６、または３２９２〜３３１１内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号５４、５５、５６、または５７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項７】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１の核酸塩基３２９１〜３３１０、３２９０〜３３０９、３２８７〜３３０６、または３２９２〜３３１１内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号５４、５５、５６、または５７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項１０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、請求項３に記載の化合物。
【請求項１１】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号３に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項１２】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号３の核酸塩基１９２〜２１１、１９１〜２１０、１９３〜２１２、３６９〜３８８、３７０〜３８９、７８８〜８０７、７９０〜８０８、または２９５４〜２９７３内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号３に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、または６５の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、または６５に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、または６５に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１６】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号７に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項１７】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号７の標的開始部位５７８２５、５９９５６、６５９４０、６３５７７、７６２２４、７６２２９、６５９３８、７６２２５、６５９３８、６５９３９、９５５１３、または７６２２９に相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号７に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、または７７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、または７７に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、または７７に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号８に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項２２】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号９に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項２３】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号８の標的開始部位５４８または２２７に相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号８に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２４】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号９の標的開始部位８１３３、９８０４、７２７０、７２９５、７３１９、７３４４、７３６８、７３９２、７４１６、７４４０、１０７１８、７２６７、７２９２、７３１６、７３４１、７３６５、７３８９、または７４３７に相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号９に少
なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号７８、７９、８０、８１、８２、または８３の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項２１または２２に記載の化合物。
【請求項２６】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号７８、７９、８０、８１、８２、または８３に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号７８、７９、８０、８１、８２、または８３に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１０に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項２９】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項３０】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１２に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項３１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項２８〜３０に記載の化合物。
【請求項３２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、請求項２８〜３２に記載の化合物。
【請求項３３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、請求項２８〜３２に記載の化合物。
【請求項３４】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１４に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項３５】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１５に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項３６】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１６に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項３７】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１７に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
【請求項３８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、請求項３５〜３７に記載の化合物。
【請求項３９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、または１０１に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、請求項３５〜３７に記載の化合物。
【請求項４０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、または１０１に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、請求項３５〜３７に記載の化合物。
【請求項４１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾糖を含む、請求項１〜４０のいずれかに記載の化合物。
【請求項４２】
前記修飾糖が二環糖である、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
前記二環糖が、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、および４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）からなる群から選択される、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
前記修飾糖が２’−Ｏ−メトキシエチルである、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾核酸塩基を含む、請求項１〜４４のいずれかに記載の化合物。
【請求項４６】
前記修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、請求項４５に記載の化合物。
【請求項４７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが１７個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜４６のいずれかに記載の化合物。
【請求項４８】
前記修飾オリゴヌクレオチドが２０個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜４７のいずれかに記載の化合物。
【請求項４９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾糖を含む、請求項１〜４８のいずれかに記載の化合物。
【請求項５０】
前記修飾糖が二環糖である、請求項４９に記載の化合物。
【請求項５１】
前記二環糖が、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、および４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）からなる群から選択される、請求項５０に記載の化合物。
【請求項５２】
前記修飾糖が２’−Ｏ−メトキシエチルである、請求項４９に記載の化合物。
【請求項５３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾核酸塩基を含む、請求項１〜５２のいずれかに記載の化合物。
【請求項５４】
前記修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、請求項５３に記載の化合物。
【請求項５５】
前記化合物が一本鎖である、請求項１〜５４のいずれかに記載の化合物。
【請求項５６】
前記化合物が二本鎖である、請求項１〜５５のいずれかに記載の化合物。
【請求項５７】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜５６のいずれかに記載の化合物。
【請求項５８】
前記修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項５７に記載の化合物。
【請求項５９】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６０】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも２個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６１】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも３個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも４個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも５個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６４】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも６個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも７個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６６】
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合およびホスホロチオエートヌクレオシド間結合から選択される、請求項１〜６５のいずれかに記載の化合物。
【請求項６７】
前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含み、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１〜６６のいずれかに記載の化合物。
【請求項６８】
前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの５’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、請求項１〜６７のいずれかに記載の化合物。
【請求項６９】
前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの３’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、請求項１〜６８のいずれかに記載の化合物。
【請求項７０】
前記共役基が、正確に１個のリガンドを含む、請求項１〜６９のいずれかに記載の化合物。
【請求項７１】
前記共役基が、正確に２個のリガンドを含む、請求項１〜７０のいずれかに記載の化合物。
【請求項７２】
前記共役基が、３個以上のリガンドを含む、請求項１〜７１のいずれかに記載の化合物。
【請求項７３】
前記共役基が、正確に３個のリガンドを含む、請求項１〜７２のいずれかに記載の化合物。
【請求項７４】
各リガンドが、多糖、修飾多糖、糖、修飾多糖、マンノース、ガラクトース、マンノース誘導体、ガラクトース誘導体、Ｄ−マンノピラノース、Ｌ−マンノピラノース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−キシロフラノース、Ｌ−キシロフラノース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、α−Ｄ−マンノフラノース、β−Ｄ−マンノフラノース、α−Ｄ−マンノピラノース、β−Ｄ−マンノピラノース、α−Ｄ−グルコピラノース、β−Ｄ−グルコピラノース、α−Ｄ−グルコフラノース、β−Ｄ−グルコフラノース、α−Ｄ−フルクトフラノース、α−Ｄ−フルクトピラノース、α−Ｄ−ガラクトピラノース、β−Ｄ−ガラクトピラノース、α−Ｄ−ガラクトフラノース、β−Ｄ−ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、α−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、２−アミノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−１−カルボキシエチル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース、２−デオキシ−２−メチルアミノ−Ｌ−グルコピラノース、４，６−ジデオキシ−４−ホルムアミド−２，３−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−マンノピラノース、２−デオキシ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルコピラノース、Ｎ−グリコロイル−α−ノイラミン酸、５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース、メチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、４−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノース、エチル３，４，６，７−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−１，５−ジチオ−α−Ｄ−グルコ−ヘプトピラノシド、２，５−アンヒドロ−Ｄ−アロノニトリル、リボース、Ｄ−リボース、Ｄ−４−チオリボース、Ｌ−リボース、Ｌ−４−チオリボースの中から選択される、請求項１〜７３のいずれかに記載の化合物。
【請求項７５】
各リガンドがＮ−アセチルガラクトサミンである、請求項１〜７４のいずれかに記載の化合物。
【請求項７６】
前記共役基が、以下
【化１】
2020058370.tif 000479
を含む、請求項１〜７５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７７】
前記共役基が、以下
【化２】
2020058370.tif 000480
を含む、請求項１〜７６のいずれかに記載の化合物。
【請求項７８】
前記共役基が、以下
【化３】
2020058370.tif 000481
を含む、請求項１〜７７のいずれかに記載の化合物。
【請求項７９】
前記共役基が、以下
【化４】
2020058370.tif 000482
を含む、請求項１〜７８のいずれかに記載の化合物。
【請求項８０】
前記共役基が、以下
【化５】
2020058370.tif 000483
を含む、請求項１〜７９のいずれかに記載の化合物。
【請求項８１】
前記共役基が、少なくとも１個のリン結合基または中性結合基を含む、請求項１〜８０のいずれかに記載の化合物。
【請求項８２】
前記共役基が、以下
【化６】
2020058370.tif 000484
【化６−２】
2020058370.tif 000485
の中から選択される構造を含み、
式中、ｎが、１〜１２であり、
ｍが、１〜１２である、請求項１〜８１のいずれかに記載の化合物。
【請求項８３】
前記共役基が、以下
【化７】
2020058370.tif 000486
の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Ｌが、リン結合基または中性結合基のいずれかであり、
Ｚ１が、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
Ｒ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
各ｍ１が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１が、各テザーに対して０を超える、請求項１〜８２のいずれかに記載の化合物。
【請求項８４】
共役基が、以下
【化８】
2020058370.tif 000487
の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Ｚ２が、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ１が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１が、各テザーに対して０を超える、請求項１〜８３のいずれかに記載の化合物。
【請求項８５】
前記共役基が、以下
【化９】
2020058370.tif 000488
の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、ｎが、１〜１２であり、
ｍが、１〜１２である、請求項１〜８４のいずれかに記載の化合物。
【請求項８６】
前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドに共有結合される、請求項１〜８５のいずれかに記載の化合物。
【請求項８７】
前記化合物が、以下の式
【化１０】
2020058370.tif 000489
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜８６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８８】
前記化合物が、以下の式
【化１１】
2020058370.tif 000490
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
各ｎが、独立して、０または１であり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜８７のいずれかに記載の化合物。
【請求項８９】
前記化合物が、以下の式
【化１２】
2020058370.tif 000491
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜８８のいずれかに記載の化合物。
【請求項９０】
前記化合物が、以下の式
【化１３】
2020058370.tif 000492
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜８９のいずれかに記載の化合物。
【請求項９１】
前記化合物が、以下の式
【化１４】
2020058370.tif 000493
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜９０のいずれかに記載の化合物。
【請求項９２】
前記化合物が、以下の式
【化１５】
2020058370.tif 000494
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜９１のいずれかに記載の化合物。
【請求項９３】
前記化合物が、以下の式
【化１６】
2020058370.tif 000495
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜９２のいずれかに記載の化合物。
【請求項９４】
前記化合物が、以下の式
【化１７】
2020058370.tif 000496
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、請求項１〜９３のいずれかに記載の化合物。
【請求項９５】
前記共役リンカーが、以下
【化１８】
2020058370.tif 000497
の中から選択される構造を有し、
式中、各Ｌが、独立して、リン結合基または中性結合基であり、
各ｎが、独立して、１〜２０である、請求項１〜９４のいずれかに記載の化合物。
【請求項９６】
前記共役リンカーが、以下
【化１９】
2020058370.tif 000498
の中から選択される構造を有する、請求項１〜９５のいずれかに記載の化合物。
【請求項９７】
前記共役リンカーが、以下の構造
【化２０】
2020058370.tif 000499
を有する、請求項１〜９６のいずれかに記載の化合物。
【請求項９８】
前記共役リンカーが、以下
【化２１】
2020058370.tif 000500
の中から選択される構造を有する、請求項１〜９７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９９】
前記共役リンカーが、以下
【化２２】
2020058370.tif 000501
の中から選択される構造を有する、請求項１〜９８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１００】
前記共役リンカーが、以下
【化２３】
2020058370.tif 000502
の中から選択される構造を有する、請求項１〜９９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０１】
前記共役リンカーがピロリジンを含む、請求項１〜１００のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０２】
前記共役リンカーがピロリジンを含まない、請求項１〜１０１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０３】
前記共役リンカーがＰＥＧを含む、請求項１〜１０２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０４】
前記共役リンカーがアミドを含む、請求項１〜１０３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０５】
前記共役リンカーが少なくとも２個のアミドを含む、請求項１〜１０４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０６】
前記共役リンカーがアミドを含まない、請求項１〜１０５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０７】
前記共役リンカーがポリアミドを含む、請求項１〜１０６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０８】
前記共役リンカーがアミンを含む、請求項１〜１０７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０９】
前記共役リンカーが１個以上のジスルフィド結合を含む、請求項１〜１０８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１０】
前記共役リンカーがタンパク質結合部分を含む、請求項１〜１０９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１１】
前記タンパク質結合部分が脂質を含む、請求項１〜１１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１２】
前記タンパク質結合部分が、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ビタミン（例えば、葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム溶解成分、ステロイド（例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）、またはカチオン性脂質の中から選択される、請求項１〜１１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１３】
前記タンパク質結合部分が、Ｃ１６〜Ｃ２２長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンＥ、アダマンタン、または１−ペンタフルオロプロピルの中から選択される、請求項１〜１１２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１４】
前記共役リンカーが、以下
【化２４】
2020058370.tif 000503
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、ｐが、１〜６である、請求項１〜１１３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１５】
前記共役リンカーが、以下
【化２５】
2020058370.tif 000504
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、請求項１〜１１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１６】
前記共役リンカーが、以下
【化２６】
2020058370.tif 000505
の中から選択される構造を有する、請求項１〜１１５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１７】
前記共役リンカーが、以下
【化２７】
2020058370.tif 000506
の中から選択される構造を有し、
式中、ｎが、１〜２０である、請求項１〜１１６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１８】
前記共役リンカーが、以下
【化２８】
2020058370.tif 000507
の中から選択される構造を有する、請求項１〜１１７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１９】
前記共役リンカーが、以下
【化２９】
2020058370.tif 000508
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である、請求項１〜１１８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２０】
前記共役リンカーが、以下の構造
【化３０】
2020058370.tif 000509
を有する、請求項１〜１１９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２１】
前記分岐基が、以下の構造
【化３１】
2020058370.tif 000510
のうちの１つを有し、
式中、各Ａ１が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎが、独立して、１〜２０である、請求項１〜１２０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２２】
前記分岐基が、以下の構造
【化３２】
2020058370.tif 000511
のうちの１つを有し、
式中、各Ａ１が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎが、独立して、１〜２０である、請求項１〜１２１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２３】
前記分岐基が、以下の構造
【化３３】
2020058370.tif 000512
を有する、請求項１〜１２２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２４】
前記分岐基が、以下の構造
【化３４】
2020058370.tif 000513
を有する、請求項１〜１２３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２５】
前記分岐基が、以下の構造
【化３５】
2020058370.tif 000514
を有する、請求項１〜１２４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２６】
前記分岐基が、以下の構造
【化３６】
2020058370.tif 000515
を有する、請求項１〜１２５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２７】
前記分岐基がエーテルを含む、請求項１〜１２６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２８】
前記分岐基が、以下の構造
【化３７】
2020058370.tif 000516
を有し、
各ｎが、独立して、１〜２０であり、
ｍが、２〜６である、請求項１〜１２７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２９】
前記分岐基が、以下の構造
【化３８】
2020058370.tif 000517
を有する、請求項１〜１２８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３０】
前記分岐基が、以下の構造
【化３９】
2020058370.tif 000518
を有する、請求項１〜１２９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３１】
前記分岐基が、以下
【化４０】
2020058370.tif 000519
を含み、
式中、各ｊが、１〜３の整数であり、
各ｎが、１〜２０の整数である、請求項１〜１３０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３２】
前記分岐基が、以下
【化４１】
2020058370.tif 000520
を含む、請求項１〜１３１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３３】
各テザーが、以下
【化４２】
2020058370.tif 000521
の中から選択され、
式中、Ｌが、リン結合基および中性結合基から選択され、
Ｚ１が、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
Ｒ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
各ｍ１が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１が、各テザーに対して０を超える、請求項１〜１３２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３４】
各テザーが、以下
【化４３】
2020058370.tif 000522
の中から選択され、
式中、Ｚ２が、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ２が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ２が、各テザーに対して０を超える、請求項１〜１３３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３５】
各テザーが、以下
【化４４】
2020058370.tif 000523
の中から選択され、
式中、ｎが、１〜１２であり、
ｍが、１〜１２である、請求項１〜１３４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３６】
少なくとも１個のテザーがエチレングリコールを含む、請求項１〜１３５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３７】
少なくとも１個のテザーがアミドを含む、請求項１〜１３６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３８】
少なくとも１個のテザーがポリアミドを含む、請求項１〜１３７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３９】
少なくとも１個のテザーがアミンを含む、請求項１〜１３８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４０】
少なくとも２個のテザーが互いに異なる、請求項１〜１３９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４１】
前記テザーのすべてが互いに同一である、請求項１〜１４０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４２】
各テザーが、以下
【化４５】
2020058370.tif 000524
の中から選択され、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
各ｐが、１〜約６である、請求項１〜１４１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４３】
各テザーが、以下
【化４６】
2020058370.tif 000525
の中から選択される、請求項１〜１４２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４４】
各テザーが、以下の構造
【化４７】
2020058370.tif 000526
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、請求項１〜１４３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４５】
各テザーが、以下の構造
【化４８】
2020058370.tif 000527
を有する、請求項１〜１４４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４６】
前記テザーが、以下
【化４９】
2020058370.tif 000528
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である、請求項１〜１４５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４７】
前記テザーが、以下
【化５０】
2020058370.tif 000529
の中から選択される構造を有する、請求項１〜１４６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４８】
前記リガンドがガラクトースである、請求項１〜１４７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４９】
前記リガンドがマンノース−６−ホスフェートである、請求項１〜１４８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５０】
各リガンドが、以下
【化５１】
2020058370.tif 000530
の中から選択され、
式中、各Ｒ１が、ＯＨおよびＮＨＣＯＯＨから選択される、請求項１〜１４９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５１】
各リガンドが、以下
【化５２】
2020058370.tif 000531
の中から選択される、請求項１〜１５０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５２】
各リガンドが、以下の構造
【化５３】
2020058370.tif 000532
を有する、請求項１〜１５１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５３】
各リガンドが、以下の構造
【化５４】
2020058370.tif 000533
を有する、請求項１〜１５２のいずれかに記載の共役アンチセンス化合物。
【請求項１５４】
前記共役基が細胞標的部分を含む、請求項請求項１〜１５３のいずれかに記載の共役アンチセンス化合物。
【請求項１５５】
前記共役基が、以下の構造
【化５５】
2020058370.tif 000534
を有する細胞標的部分を含み、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、請求項１〜１５４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５６】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化５６】
2020058370.tif 000535
を有する、請求項１〜１５５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５７】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化５７】
2020058370.tif 000536
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、請求項１〜１５６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５８】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化５８】
2020058370.tif 000537
を有する、請求項１〜１５７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５９】
前記細胞標的部分が、以下
【化５９】
2020058370.tif 000538
を含む、請求項１〜１５８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６０】
前記細胞標的部分が、以下
【化６０】
2020058370.tif 000539
を含む、請求項１〜１５９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６１】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６１】
2020058370.tif 000540
を有する、請求項１〜１６０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６２】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６２】
2020058370.tif 000541
を有する、請求項１〜１６１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６３】
前記細胞標的部分が、以下
【化６３】
2020058370.tif 000542
を含む、請求項１〜１６２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６４】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６４】
2020058370.tif 000543
を有する、請求項１〜１６３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６５】
前記細胞標的部分が、以下
【化６５】
2020058370.tif 000544
を含む、請求項１〜１６４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６６】
前記細胞標的部分が、以下
【化６６】
2020058370.tif 000545
を含む、請求項１〜１６５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６７】
前記細胞標的部分が、以下
【化６７】
2020058370.tif 000546
を含む、請求項１〜１６６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６８】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６８】
2020058370.tif 000547
を有する、請求項１〜１６７のいずれかに記載の化合物。
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６９】
2020058370.tif 000548
を有する、請求項１〜１６８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６９】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７０】
2020058370.tif 000549
を有する、請求項１〜１６８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７０】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７１】
2020058370.tif 000550
を有する、請求項１〜１６９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７１】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７２】
2020058370.tif 000551
を有する、請求項１〜１７０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７２】
前記細胞標的部分が、以下
【化７３】
2020058370.tif 000552
を含む、請求項１〜１７１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７３】
前記細胞標的部分が、以下
【化７４】
2020058370.tif 000553
を含む、請求項１〜１７２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７４】
前記細胞標的部分が、以下
【化７５】
2020058370.tif 000554
を含む、請求項１〜１７３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７５】
前記細胞標的部分が、以下
【化７６】
2020058370.tif 000555
を含む、請求項１〜１７４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７６】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７７】
2020058370.tif 000556
を有する、請求項１〜１７５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７７】
前記細胞標的部分が、以下
【化７８】
2020058370.tif 000557
を含む、請求項１〜１７６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７８】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７９】
2020058370.tif 000558
を有する、請求項１〜１７７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７９】
前記細胞標的部分が、以下
【化８０】
2020058370.tif 000559
を含み、
式中、各Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、請求項１〜１７８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８０】
前記共役基が、以下
【化８１】
2020058370.tif 000560
を含み、
式中、各Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、請求項１〜１７９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８１】
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化８２】
2020058370.tif 000561
を有し、
式中、各Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、請求項１〜１８０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８２】
前記共役基が、以下
【化８３】
2020058370.tif 000562
を含む、請求項１〜１８１のいずれかのいずれかに記載の化合物。
【請求項１８３】
前記共役基が、以下
【化８４】
2020058370.tif 000563
を含む、請求項１〜１８２のいずれかのいずれかに記載の化合物。
【請求項１８４】
前記共役基が、以下
【化８５】
2020058370.tif 000564
を含む、請求項１〜１８３のいずれかのいずれかに記載の化合物。
【請求項１８５】
前記共役基が、以下
【化８６】
2020058370.tif 000565
を含む、請求項１〜１８４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８６】
前記共役基が、ホスホジエステル、アミド、またはエステルの中から選択される切断可能な部分を含む、請求項１〜１８５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８７】
前記共役基が、ホスホジエステル切断可能な部分を含む、請求項１〜１８６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８８】
前記共役基が、切断可能な部分を含まず、前記共役基が、前記共役基と前記オリゴヌクレオチドとの間にホスホロチオエート結合を含む、請求項１〜１８７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１８９】
前記共役基が、アミド切断可能な部分を含む、請求項１〜１８８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９０】
前記共役基が、エステル切断可能な部分を含む、請求項１〜１８９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９１】
前記化合物が、以下の構造
【化８７】
2020058370.tif 000566
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９２】
前記化合物が、以下の構造
【化８８】
2020058370.tif 000567
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９３】
前記化合物が、以下の構造
【化８９】
2020058370.tif 000568
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚが、Ｈまたは結合固体支持体であり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９４】
前記化合物が、以下の構造
【化９０】
2020058370.tif 000569
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚが、Ｈまたは結合固体支持体であり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９５】
前記化合物が、以下の構造
【化９１】
2020058370.tif 000570
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９６】
前記化合物が、以下の構造
【化９２】
2020058370.tif 000571
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９７】
前記化合物が、以下の構造
【化９３】
2020058370.tif 000572
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９８】
前記化合物が、以下の構造
【化９４】
2020058370.tif 000573
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９９】
前記化合物が、以下の構造
【化９５】
2020058370.tif 000574
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９８のいずれかに記載の化合物。
【請求項２００】
前記化合物が、以下の構造
【化９６】
2020058370.tif 000575
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜１９９のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０１】
前記化合物が、以下の構造
【化９７】
2020058370.tif 000576
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２００のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０２】
前記化合物が、以下の構造
【化９８】
2020058370.tif 000577
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２０１のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０３】
前記化合物が、以下の構造
【化９９】
2020058370.tif 000578
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２０２のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０４】
前記化合物が、以下の構造
【化１００】
2020058370.tif 000579
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２０３のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０５】
前記化合物が、以下の構造
【化１０１】
2020058370.tif 000580
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２０４のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０６】
前記共役基が、以下
【化１０２】
2020058370.tif 000581
を含み、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２０５のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０７】
前記共役基が、以下
【化１０３】
2020058370.tif 000582
を含み、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２０６のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０８】
前記共役基が、以下
【化１０４】
2020058370.tif 000583
を含み、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、請求項１〜２０７のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０９】
Ｂｘが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、またはシトシン、もしくは５−メチルシトシンの中から選択される、請求項１〜２０８のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１０】
Ｂｘがアデニンである、請求項１〜２０９のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１１】
Ｂｘがチミンである、請求項１〜２１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１２】
Ｑ１３がＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である、請求項１〜２１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１３】
Ｑ１３がＨである、請求項１〜２１２のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１４】
請求項１〜２１３のいずれかに記載の前記化合物またはその塩と、薬剤的に許容される担体または希釈剤のうちの少なくとも１つと、を含む、組成物。
【請求項２１５】
請求項１〜２１３のいずれかに記載の前記化合物を含む、プロドラッグ。
【請求項２１６】
請求項１〜２１５のいずれかに記載の前記化合物または組成物を動物に投与することを含む、方法。
【請求項２１７】
前記動物がヒトである、請求項２１６に記載の方法。
【請求項２１８】
前記化合物または組成物および第２の薬剤を共投与することを含む、請求項２１６に記載の方法。
【請求項２１９】
前記化合物または組成物および前記第２の薬剤が同時に投与される、請求項２１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
アンチセンス技術の背後にある原理は、アンチセンス化合物が標的核酸にハイブリダイズし、標的核酸の量、活性、および／または機能を調節することである。例えば、ある特定の事例において、アンチセンス化合物は、標的の転写または翻訳の変化をもたらす。発現のそのような調節は、例えば、標的ｍＲＮＡ分解または占有に基づく阻害によって達成され得る。分解によるＲＮＡ標的機能の調節の一例には、ＤＮＡ様アンチセンス化合物とのハイブリダイゼーション時の標的ＲＮＡのＲＮａｓｅ  Ｈに基づく分解がある。標的分解による遺伝子発現の調節のもう１つの例には、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）がある。ＲＮＡｉは、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を利用する機構を介したアンチセンス媒介性遺伝子サイレンシングを指す。ＲＮＡ標的機能の調節のさらなる例は、マイクロＲＮＡによって自然に用いられる機構等の占有に基づく機構によるものである。マイクロＲＮＡは、タンパク質コードＲＮＡの発現を制御する小非コードＲＮＡである。マイクロＲＮＡへのアンチセンス化合物の結合は、そのマイクロＲＮＡのそのメッセンジャーＲＮＡ標的への結合を防ぎ、それ故にマイクロＲＮＡの機能を妨げる。マイクロＲＮＡ模倣物は、生来のマイクロＲＮＡ機能を高めることができる。ある特定のアンチセンス化合物は、プレｍＲＮＡのスプライシングを変化させる。特異的機構にかかわらず、配列特異性は、標的の検証および遺伝子の機能化の手段、ならびに疾患の発病に関与する遺伝子の発現を選択的に調節する治療薬としてアンチセンス化合物を魅力的なものにする。
【０００２】
アンチセンス技術は、１つ以上の特異的な遺伝子産物の発現を調節するのに効果的な手段であり、それ故に、多くの治療的用途、診断的用途、および研究用途に一意的に有用であることが判明し得る。化学修飾ヌクレオシドは、アンチセンス化合物に組み込まれ、標的核酸のヌクレアーゼ耐性、薬物動態、または親和性等の１つ以上の特性を強化することができる。１９９８年、アンチセンス化合物であるＶｉｔｒａｖｅｎｅ（登録商標）（ホミビルセン、Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）によって開発されたもの）が、アメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）の販売許可を得た最初のアンチセンス薬物であり、現在、ＡＩＤＳ患者におけるサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）誘導性網膜炎の治療薬である。
【０００３】
新たな化学修飾は、アンチセンス化合物の強度および有効性を改善しており、経口送達の可能性を見出し、皮下投与を強化し、副作用の可能性を減少させ、患者の利便性の向上につながっている。アンチセンス化合物の強度を増加させる化学修飾は、低用量の投与を可能にし、毒性の可能性を減少させ、全体の治療費を削減する。分解に対する耐性を増加させる修飾は、体内からのより緩徐な排除をもたらし、投薬頻度の低下を可能にする。異なる種類の化学修飾を１個の化合物内で組み合わせて、化合物の有効性をさらに最適化することができる。
【発明の概要】
【０００４】
ある特定の実施形態において、本開示は、共役アンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、核酸転写物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、細胞を核酸転写物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させることを含む方法を提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させることと、細胞内の核酸転写物の量または活性を低減させることと、を含む方法を提供する。
【０００５】
アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ−Ｒ）が以前に説明されている。例えば、Ｐａ
ｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ｖｏｌ．１０２，Ｎｏ．４７，ｐｐ１７１２５−１７１２９（２００５）を参照されたい。そのような受容体は、肝臓細胞、具体的には、肝細胞上で発現する。さらに、３個のＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）リガンドのクラスターを含む化合物はＡＳＧＰ−Ｒに結合することができ、細胞内への化合物の取り込みをもたらすことが示されている。例えば、Ｋｈｏｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１６，９，ｐｐ５２１６−５２３１（Ｍａｙ  ２００８）を参照されたい。したがって、そのようなＧａｌＮＡｃクラスターを含む共役体を用いて、肝臓細胞、具体的には、肝細胞へのある特定の化合物の取り込みを促進している。例えば、ある特定のＧａｌＮＡｃ含有共役体が生体内で肝臓細胞における二本鎖ｓｉＲＮＡ化合物の活性を増加させることが示されている。そのような事例において、ＧａｌＮＡｃ含有共役体は、典型的には、ｓｉＲＮＡ二本鎖のセンス鎖に結合される。アンチセンス鎖が最終的に標的核酸とハイブリダイズする前にセンス鎖が処分されるため、共役体が活性を妨げるといった懸念はほとんどない。典型的には、共役体は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’末端に結合される。例えば、米国特許第８，１０６，０２２号を参照されたい。本明細書に記載のある特定の共役基は、以前に説明された共役基よりも活性であり、かつ／または合成し易い。
【０００６】
本発明のある特定の実施形態において、共役体は、プレｍＲＮＡ標的核酸のスプライシングを変化させるＲＮａｓｅ  Ｈベースのアンチセンス化合物およびアンチセンス化合物を含むが、これらに限定されない一本鎖アンチセンス化合物に結合される。そのような実施形態において、共役体は、利益（細胞内への取り込みの改善）を提供するのに十分な期間、アンチセンス化合物に結合したままであるべきであるが、切断されるか、またはさもなければスプライシングまたはスプライシング調節に関連した標的核酸へのハイブリダイゼーションおよびＲＮａｓｅ  Ｈまたは酵素との相互作用等の活性に必要なその後のステップを妨げないか、のいずれかであるべきである。このような特性のバランスは、ｓｉＲＮＡ化合物よりも一本鎖アンチセンス化合物状況下においてより重要であり、共役体は、単にセンス鎖に結合され得る。共役体を欠く同一のアンチセンス化合物と比較して、生体内で肝臓細胞における強度の改善を有する共役体一本鎖アンチセンス化合物が本明細書に開示される。これらの化合物の要求される特性バランスを考慮すると、そのような強度の改善は、驚くべきことである。
【０００７】
ある特定の実施形態において、本明細書における共役基は、切断可能な部分を含む。上述のように、機構によって束縛されることを望むことなく、共役体が、取り込みの強化を提供するのに十分長い期間、化合物に残存したままであるべきだが、その後、共役体の一部、または理想的には、共役体のすべてが切断されて、親化合物（例えば、アンチセンス化合物）をその最も活性な形態で放出することが望ましいことは論理的である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能なヌクレオシドである。そのような実施形態は、ホスホジエステル結合等の１個以上の切断可能な結合によってヌクレオシドを介して共役体の残り（クラスター）をアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させることによって、細胞内の内因性ヌクレアーゼをうまく利用する。ある特定の実施形態において、クラスターは、ホスホジエステル結合によって切断可能なヌクレオシドに結合される。ある特定の実施形態において、切断可能なヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンス化合物）に結合される。ある特定の実施形態において、共役基は、２個または３個の切断可能なヌクレオシドを含み得る。そのような実施形態において、そのような切断可能なヌクレオシドは、切断可能な結合（ホスホジエステル結合等）によって、互いに、アンチセンス化合物に、かつ／またはクラスターに連結される。本明細書におけるある特定の共役体は、切断可能なヌクレオシドを含まず、代わりに切断可能な結合を含む。オリゴヌクレオチドからの共役体の十分な切断が、細胞における切断に対して脆弱な少なくとも１個の結合（切断可能な結合）によって提供されることが示される。
【０００８】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、プロドラッグである。そのようなプロドラッグは、動物に投与され、最終的により活性な形態に代謝される。例えば、共役アンチセンス化合物は、切断されて、共役体のすべてまたは一部を除去し、共役体のすべてまたは一部を欠くアンチセンス化合物の活性（またはより活性な）形態をもたらす。
【０００９】
ある特定の実施形態において、共役体は、オリゴヌクレオチドの５’末端に結合される。ある特定のそのような５’共役体は、３’末端に結合される同様の共役基を有する対応物よりも効率的に切断される。ある特定の実施形態において、活性の改善は、切断の改善と相関し得る。ある特定の実施形態において、５’末端に共役体を含むオリゴヌクレオチドの有効性は、３’末端に共役体を含むオリゴヌクレオチドよりも高い（例えば、実施例５６、８１、８３、および８４を参照のこと）。さらに、５’結合は、より単純なオリゴヌクレオチド合成を可能にする。典型的には、オリゴヌクレオチドは、３’から５’の方向に固体支持体上で合成される。３’共役オリゴヌクレオチドを作製するために、典型的には、プレ共役３’ヌクレオシドを固体支持体に結合させ、その後、オリゴヌクレオチドを通常通りに構築する。しかしながら、その共役ヌクレオシドを固体支持体に結合させることは、合成を複雑にする。さらに、この手段を用いることにより、共役体は、次いでオリゴヌクレオチドの合成を通じて存在し、その後のステップ中で分解された状態になり得るか、または使用され得る反応物および試薬の種類を限定し得る。本明細書に記載の５’共役オリゴヌクレオチドの構造および技術を用いることにより、標準の自動化技術を用いてオリゴヌクレオチドを合成して、最終（最も５’側の）ヌクレオシドとの共役体を導入することができるか、またはオリゴヌクレオチドが固体支持体から切断された後にオリゴヌクレオチドを合成することができる。
【００１０】
当技術分野および本開示を考慮して、当業者であれば、本明細書の共役体および共役オリゴヌクレオチドのうちのいずれかを容易に作製することができる。さらに、本明細書に開示されるある特定のそのような共役体および共役オリゴヌクレオチドの合成は、以前に開示された共役体の合成よりも容易であり、かつ／またはわずかなステップしか必要とせず、それ故に安価であり、製造において利点を提供する。例えば、ある特定の共役基の合成は、以前に説明された共役基と比較して、より少ない合成ステップからなり、収率の増加をもたらす。実施例４６のＧａｌＮＡｃ３−１０および実施例４８のＧａｌＮＡｃ３−７等の共役基は、より多くの化学中間体の構築を必要とする米国特許第８，１０６，０２２号または米国特許第７，２６２，１７７号に記載される共役体等の以前に説明された共役体よりもはるかに単純である。したがって、本明細書に記載のこれらおよび他の共役体は、一本鎖オリゴヌクレオチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）のいずれかの鎖を含む任意のオリゴヌクレオチドと併せて用いる際に、以前に説明された化合物よりも有利である。
【００１１】
同様に、ＧａｌＮＡｃリガンドを１つまたは２つしか有しない共役基が本明細書に開示される。示されるように、そのような共役基は、アンチセンス化合物の活性を改善する。そのような化合物は、３個のＧａｌＮＡｃリガンドを含む共役体よりも調製が簡単である。１つまたは２個のＧａｌＮＡｃリガンドを含む共役基は、一本鎖オリゴヌクレオチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）のいずれかの鎖を含む任意のアンチセンス化合物に結合され得る。
【００１２】
ある特定の実施形態において、本明細書における共役体は、ある程度の耐容性を実質的に変化させない。例えば、共役アンチセンス化合物の免疫原性が非共役親化合物の免疫原性よりも低いことが本明細書に示される。強度が改善されるため、耐容性が同一のままである（または強度の増加と比較して耐容性がほんのわずか低下した場合でさえも同一のま
まである）実施形態は、改善された治療特性を有する。
【００１３】
ある特定の実施形態において、共役は、共役の不在下においてあまり魅力的ではない結果を有する方法でアンチセンス化合物を変化させることを可能にする。例えば、ある特定の実施形態において、完全なホスホロチオエートアンチセンス化合物の１個以上のホスホロチオエート結合をホスホジエステル結合に置換することで、ある程度の耐容性の改善をもたらす。例えば、ある特定の事例において、１個以上のホスホジエステルを有するそのようなアンチセンス化合物の免疫原性は、各結合がホスホロチオエート結合である同一の化合物の免疫原性よりも低い。しかしながら、ある特定の事例において、実施例２６に示されるように、１個以上のホスホロチオエート結合のホスホジエステル結合への同様な置換は、細胞取り込みの低下および／または強度の損失ももたらす。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役アンチセンス化合物は、完全なホスホロチオエート共役対応物と比較して、取り込みおよび強度をほとんどまたはまったく失うことなくそのような結合の変化に耐える。実際、ある特定の実施形態において、例えば、実施例４４、５７、５９、および８６において、共役体および少なくとも１個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドは、同様に同一の共役体を含む完全なホスホロチオエート対応物と比較した場合でも、生体内における強度の増加を実際に示す。さらに、共役が取り込み／強度の実質的な増加をもたらすため、その実質的な増加のわずかな損失は、耐容性の改善を達成するには許容範囲内であり得る。したがって、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、少なくとも１個のホスホジエステル結合を含む。
【００１４】
ある特定の実施形態において、本明細書におけるアンチセンス化合物の共役は、肝細胞における送達、取り込み、および活性の増大をもたらす。したがって、より多くの化合物が肝臓組織に送達される。しかしながら、ある特定の実施形態において、そのような送達の増大だけでは、全体の活性増大を明白にしない。ある特定のそのような実施形態において、より多くの化合物が肝細胞に入る。ある特定の実施形態において、そのような肝細胞取り込みの増大でさえも、全体の活性増大を明白にしない。そのような実施形態において、共役化合物の生産的な取り込みが増大する。例えば、実施例１０２に示されるように、ＧａｌＮＡｃ含有共役体のある特定の実施形態は、非実質細胞と比較して、肝細胞におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃縮を増大させる。この濃縮は、肝細胞において発現される遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチドに有益である。
【００１５】
ある特定の実施形態において、本明細書における共役アンチセンス化合物は、腎臓曝露の低下をもたらす。例えば、実施例２０に示されるように、ＧａｌＮＡｃ含有共役体のある特定の実施形態を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、腎臓において、ＧａｌＮＡｃ含有共役体を欠くアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度よりも低い。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が要求されない治療的指標において、腎臓への曝露は、腎毒性の危険性を有し、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、より迅速なクリアランスをもたらす。したがって、非腎臓標的の場合、腎臓内での蓄積は望ましくない。
【００１６】
ある特定の実施形態において、本開示は、以下の式によって表される共役アンチセンス化合物を提供し、
【化１】
2020058370.tif 000002
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能な部分であり、
Ｃは、共役リンカーであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１〜５の整数である。
【００１７】
本明細書における上述の図および同様の図において、分岐基「Ｄ」は、「ｑ」で示される（Ｅ〜Ｆ）基の数を収容するのに必要なだけ分岐を繰り返す。したがって、ｑ＝１の場合、式は、以下のものであり、
【化２】
2020058370.tif 000003
ｑ＝２の場合、式は、以下のものであり、
【化３】
2020058370.tif 000004
ｑ＝３の場合、式は、以下のものであり、
【化４】
2020058370.tif 000005
ｑ＝４の場合、式は、以下のものであり、
【化５】
2020058370.tif 000006
ｑ＝５の場合、式は、以下のものである。
【化６】
2020058370.tif 000007
【００１８】
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
【化７】
2020058370.tif 000008
【００１９】
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
【化８】
2020058370.tif 000009
【００２０】
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
【化９】
2020058370.tif 000010
【００２１】
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
【化１０】
2020058370.tif 000011
【００２２】
本開示は、以下の非限定的な番号付けされた実施形態を提供する。
【００２３】
実施形態１．前記テザーが、以下の中から選択される構造を有し、
【化１１】
2020058370.tif 000012
式中、各ｎが、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である、実施形態１１７９〜１１８２のうちのいずれかの共役アンチセンス化合物。
【００２４】
実施形態２．前記テザーが、以下の構造を有する、実施形態１１７９〜１１８２のうちのいずれかの共役アンチセンス化合物。
【化１２】
2020058370.tif 000013
【００２５】
実施形態３．前記リンカーが、以下の中から選択される構造を有する、実施形態１１７９〜１１８２または１６８８〜１６８９のうちのいずれかの共役アンチセンス化合物。
【化１３】
2020058370.tif 000014
【００２６】
実施形態４．前記リンカーが、以下の中から選択される構造を有し、
【化１４】
2020058370.tif 000015
式中、各ｎが、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である、実施形態１１７９〜１１８２または１６８８〜１６８９のうちのいずれかの共役アンチセンス化合物。
【００２７】
実施形態５．前記リンカーが、以下の構造を有する、実施形態１１７９〜１１８２または１６８８〜１６８９のいずれかの共役アンチセンス化合物。
【化１５】
2020058370.tif 000016
【００２８】
特定の変数のうちの２つ以上（例えば、２つ以上の「ｍ」または「ｎ」）を有する実施形態において、別途示されない限り、各々のそのような特定の変数は、独立して選択される。したがって、２つ以上のｎを有する構造の場合、各ｎは、独立して選択さるため、互いに同一であり得るか、同一であり得ない。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
前記一般的な説明および以下の詳細な説明は両方とも例示的かつ説明的であるのみであって、本開示を限定するものではないことを理解されたい。本明細書において、単数形の使用は、別途明確に記述されない限り、複数形を含む。本明細書で使用されるとき、「または（ｏｒ）」の使用は、別途記述されない限り、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。さらに、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」等の他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」等の用語は、別途明確に記述されない限り、１つのユニットを含む複数の要素および複数の成分と２つ以上のサブユニットを含む複数の要素および複数の成分の両方を包含する。
【００３０】
本明細書で使用される節の見出しは、構成目的のみのためであり、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。特許、特許出願、記事、書籍、および論文を含むが、これらに限定されない本出願において引用されるすべての文書または文書の一部は、参照によりそれらの全体があらゆる目的のために本明細書に明確に組み込まれる。
Ａ．定義
【００３１】
特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および製薬化学に関連して用いられる学名、ならびにそれらの手順および技法は、周知であり、当技術分野で一般に使用されるものである。標準の技法は、化学合成および化学分析において使用され得る。ある特定のそのような技法および手順は、例えば、“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ”Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓａｎｇｖｉ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，１９９４、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５、および“Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒ
ａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ、ならびにＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，”２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９において見出すことができ、これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本開示を通して参照されるすべての特許、出願、公開された出願、および他の出版物、ならびに他のデータは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【００３２】
別途示されない限り、以下の用語は、以下の意味を有する。
【００３３】
本明細書で使用されるとき、「２’−Ｆヌクレオシド」は、２’位にフッ素を含む糖を含むヌクレオシドを指す。別途示されない限り、２’−Ｆヌクレオシドにおけるフッ素は、（天然リボースのＯＨを置換する）リボ位に存在する。
【００３４】
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（２’−ＭＯＥおよび２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３とも称される）とは、フロシル環の２’位のＯ−メトキシ−エチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖は、修飾糖である。
【００３５】
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド」とは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖部分を含むヌクレオチドを意味する。
本明細書で使用されるとき、「２’−置換糖部分」とは、ＨまたはＯＨ以外の２’位に置換基を含むフラノシルを意味する。別途示されない限り、２’−置換糖部分は、二環式糖部分ではない（すなわち、２’−置換糖部分の２’−置換基は、フラノシル環の別の原子への橋を形成しない）。
【００３６】
「３’標的部位」とは、特定のアンチセンス化合物の最も３’側のヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００３７】
「５’標的部位」とは、特定のアンチセンス化合物の最も５’側のヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
【００３８】
「５−メチルシトシン」とは、５’位に結合したメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは、修飾核酸塩基である。
【００３９】
「約」とは、値の±１０％以内を意味する。例えば、「マーカーが約５０％増加し得る」と述べられている場合、マーカーが４５％〜５５％増加し得るという意味が含まれる。
【００４０】
「活性医薬品」とは、個体に投与されたときに治療的利益を提供する医薬組成物中の１つの物質または複数の物質を意味する。例えば、ある特定の実施形態において、ＰＴＰ１Ｂを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、活性医薬品である。
【００４１】
「活性標的領域」または「標的領域」とは、１つ以上の活性アンチセンス化合物が標的とされる領域を意味する。「活性アンチセンス化合物」とは、標的核酸レベルまたはタンパク質レベルを低下させるアンチセンス化合物を意味する。
【００４２】
「脂肪生成」とは、前脂肪細胞由来の脂肪細胞の発生を意味する。「脂質生成」とは、脂肪変性または脂肪浸潤のいずれかの脂肪の生成または形成を意味する。
【００４３】
「脂肪過多」または「肥満」とは、肥満状態であるか、または除脂肪体重との関連で過剰に多い体脂肪または脂肪組織の状態を指す。体脂肪の量は、全身の脂肪分布と脂肪組織
沈着物の大きさおよび質量の両方に対する懸念を含む。体脂肪分布は、皮下脂肪測定結果、ウエストとヒップの外周比、または超音波、コンピュータ断層撮影法、もしくは磁気共鳴映像法等の技法によって推定することができる。疾病管理予防センターによると、３０以上のボディマス指数（ＢＭＩ）を有する個体は、肥満であると見なされる。本明細書で使用されるとき、「肥満」という用語は、体内での脂肪組織の過剰蓄積の結果として身体的要件を超えて体脂肪が増加する状態を含む。「肥満」という用語には、以下の状態：成人発症肥満、食事性肥満、内因性または炎症性肥満、内分泌性肥満、家族性肥満、高インスリン血症性肥満、過形成性−肥大性肥満、性腺機能低下性肥満、甲状腺機能低下性肥満、終身性肥満、病的肥満、および外因性肥満が含まれるが、これらに限定されない。
【００４４】
「同時に投与される」とは、患者において２つの薬剤の薬理学的効果が同時に現れる任意の様式でのこれらの２つの薬剤の共投与を指す。同時投与は、これら両方の薬剤が、単一の医薬組成物で、同一の剤形で、または同一の投与経路によって投与されることを必要としない。これら両方の薬剤の効果が同時に現われなくてもよい。効果は、ある期間の重複しか必要とせず、共に広範囲に及ぶ必要はない。
【００４５】
「投与」とは、動物に薬剤を提供することを意味し、医療専門家による投与および自己投与を含むが、これらに限定されない。
【００４６】
「薬剤」とは、動物に投与したときに治療的利益を提供することができる活性物質を意味する。「第１の薬剤」とは、本明細書に提供される治療化合物を意味する。例えば、第１の薬剤は、ＰＴＰ１Ｂを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。「第２の薬剤」とは、本発明の第２の治療化合物（例えば、ＰＴＰ１Ｂを標的とする第２のアンチセンスオリゴヌクレオチド）および／または非ＰＴＰ１Ｂ治療化合物を意味する。
【００４７】
「改善」とは、関連疾患、障害、または状態の少なくとも１つの指標、兆候、または症状の軽減を指す。指標の重症度は、当業者に既知の主観的または客観的尺度によって決定され得る。
【００４８】
「動物」とは、ヒト、またはマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、および非ヒト霊長類（サルおよびチンパンジーを含むが、これらに限定されない）を含むが、これらに限定されない非ヒト動物を指す。
【００４９】
「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因する任意の検出可能または測定可能な活性を意味する。ある特定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸またはそのような標的核酸によってコードされるタンパク質の量または発現の減少である。
【００５０】
「アンチセンス化合物」とは、水素結合により標的核酸へのハイブリダイゼーションを経ることのできるオリゴマー化合物を意味する。
【００５１】
「アンチセンス阻害」とは、アンチセンス化合物の不在下における標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下における標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルの低下を意味する。
【００５２】
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸の対応する領域またはセグメントへのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
【００５３】
「二環糖」とは、２個の非ジェミナル環原子の架橋により修飾されたフロシル環を意味
する。二環糖は、修飾糖である。
【００５４】
「二環式核酸」または「ＢＮＡ」とは、ヌクレオシドまたはヌクレオチドを指し、ヌクレオシドまたはヌクレオチドのフラノース部分は、フラノース環上で２個の炭素原子をつなぎ、それにより二環式環系を形成する橋を含む。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、「二環式糖部分」とは、４〜７員環の２個の原子をつないで第２の環を形成して、二環式構造をもたらす橋を含む４〜７員環（フラノシルを含むが、これに限定されない）を含む修飾糖部分を意味する。ある特定の実施形態において、４〜７員環は、糖環である。ある特定の実施形態において、４〜７員環は、フラノシルである。ある特定のそのような実施形態において、橋は、フラノシルの２’−炭素と４’−炭素とをつなぐ。
【００５６】
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」とは、アンチセンス化合物のいずれかの末端に組み込まれている化学的修飾を意味する。
【００５７】
「化学的にはっきりと異なる領域」とは、同一のアンチセンス化合物の別の領域とは何らかの点で化学的に異なるアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を有しないヌクレオチドを有する領域とは化学的にはっきりと異なる。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、「化学修飾」とは、天然に存在する対応物と比較した場合の化合物の化学的相違を意味する。オリゴヌクレオチド化学修飾は、ヌクレオシド修飾（糖部分修飾および核酸塩基修飾を含む）ならびにヌクレオシド間結合修飾を含む。オリゴヌクレオチドに関して、化学修飾は、核酸塩基配列においてのみ相違を含まない。
【００５９】
「キメラアンチセンス化合物」とは、少なくとも２つの化学的にはっきりと異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
【００６０】
「共投与」とは、個体への２つ以上の薬剤の投与を意味する。これらの２つ以上の薬剤は、単一の医薬組成物中に存在し得るか、または別個の医薬組成物中に存在し得る。これらの２つ以上の薬剤の各々は、同一または異なる投与経路で投与され得る。共投与は、並行投与または連続投与を包含する。
【００６１】
「コレステロール」は、すべての動物組織の細胞膜に見られるステロール分子である。コレステロールは、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を含むリポタンパク質による動物の血漿中に輸送されなければならない。「血漿コレステロール」とは、血漿または血清中に存在するすべてのリポタンパク質（ＶＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）エステル化および／または非エステル化コレステロールの合計を指す。
【００６２】
「コレステロール吸収阻害剤」とは、食事から得られる外因性コレステロールの吸収を阻害する薬剤を意味する。
【００６３】
「相補性」とは、第１の核酸および第２の核酸の核酸塩基間で対合する能力を意味する。
本明細書で使用されるとき、「拘束エチルヌクレオシド」または「ｃＥｔ」とは、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００６４】
「連続した核酸塩基」とは、互いに直接隣接した核酸塩基を意味する。
【００６５】
「デオキシリボヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの糖部分の２’位に水素を有するヌクレオチドを意味する。デオキシリボヌクレオチドは、様々な置換基のうちのいずれかで修飾され得る。
【００６６】
「真性糖尿病」または「糖尿病」は、不十分なレベルのインスリンまたはインスリン感受性の低下に起因する代謝障害および異常に高い血糖（高血糖症）を特徴とする症候群である。特徴的な症状は、高血糖値に起因した過剰な尿産生（多尿症）、排尿増加を補うための過剰な口渇および水分摂取の増加（多渇症）、視覚への高血糖の影響に起因した視界のぼやけ、原因不明の体重減少、および嗜眠である。
【００６７】
「糖尿病性脂質異常症」または「脂質異常症を伴う２型糖尿病」とは、２型糖尿病、ＨＤＬ−Ｃの減少、トリグリセリドの増加、および小さく高密度のＬＤＬ粒子の増加を特徴とする状態を意味する。
【００６８】
「希釈剤」とは、薬理学的活性を欠くが、薬剤的に必要であるか、または望ましい組成物中の成分を意味する。例えば、注入された組成物中の希釈剤は、液体、例えば、生理食塩水であり得る。
【００６９】
「脂質異常症」とは、脂質および／またはリポタンパク質の過剰産生または欠損を含む、脂質および／またはリポタンパク質代謝の障害を指す。脂質異常症は、コレステロール、およびトリグリセリド等の脂質、ならびに低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール等のリポタンパク質の増加により明らかになり得る。
【００７０】
「投薬単位」とは、医薬品が提供される形態、例えば、丸剤、錠剤、または当技術分野で既知の他の投薬単位を意味する。ある特定の実施形態において、投薬単位は、凍結乾燥されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。ある特定の実施形態において、投薬単位は、再構成されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【００７１】
「用量」とは、単回投与で提供されるか、または特定の期間に提供される医薬品の特定の量を意味する。ある特定の実施形態において、用量は、１、２、またはそれ以上のボーラス、錠剤、または注入で投与され得る。例えば、ある特定の実施形態において、皮下投与が所望される場合、所望の用量は、単回注入では容易に提供されない体積を必要とし、それ故に、２回以上注入して所望の用量を達成することができる。ある特定の実施形態において、医薬品は、輸液によって長期間にわたって、または連続して投与される。用量は、１時間、１日、１週間、または１ヶ月当たりの医薬品の量で提示され得る。
【００７２】
「有効な量」または「治療的に有効な量」とは、薬剤を必要とする個体において所望の生理学的結果をもたらすのに十分な活性医薬品の量を意味する。有効な量は、治療される個体の健康および身体状態、治療される個体の分類群、組成物の製剤、個体の病状の評価、ならびに他の関連因子によって個体間で異なり得る。
【００７３】
「完全に相補的な」または「１００％相補的な」とは、第１の核酸の核酸塩基配列の各核酸塩基が、第２の核酸の第２の核酸塩基配列中に相補的な核酸塩基を有することを意味する。ある特定の実施形態において、第１の核酸は、アンチセンス化合物であり、標的核酸は、第２の核酸である。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、「フラノシル」とは、４個の炭素原子と１個の酸素原子とを含む５員環を含む構造を意味する。
【００７５】
「ギャップマー」とは、ＲＮａｓｅ  Ｈ切断を支援する複数のヌクレオシドを有する内部領域が１個以上のヌクレオシドを有する外部領域間に位置付けられるキメラアンチセンス化合物を意味し、内部領域を含むこれらのヌクレオシドは、外部領域を含むヌクレオシドまたは複数のヌクレオシドとは化学的にはっきりと異なる。内部領域は、「ギャップセグメント」と称され得、外部領域は、「ウィングセグメント」と称され得る。
【００７６】
「ギャップが広がった（ｇａｐ−ｗｉｄｅｎｅｄ）」とは、１〜６個のヌクレオシドを有する５’ウィングセグメントと３’ウィングセグメントとの間に位置付けられ、かつそれに直接隣接した１２個以上の連続した２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。
【００７７】
「グルコース」とは、エネルギー源および炎症性中間体として細胞によって使用される単糖である。「血漿グルコース」とは、血漿中に存在するグルコースを指す。
【００７８】
「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤」とは、アトルバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、およびシンバスタチン等の酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害によって作用する薬剤を意味する。
【００７９】
「ハイブリダイゼーション」とは、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。ある特定の実施形態において、相補的核酸分子には、アンチセンス化合物および標的核酸が含まれる。
【００８０】
「脂質異常症（ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ）」または「脂質異常症（ｈｙｐｅｒｌｉｐｅｍｉａ）」は、血清脂質または循環（血漿）脂質の上昇を特徴とする状態である。この状態は、異常に高い脂肪濃度を示す。循環血液中の脂質画分は、コレステロール、低密度リポタンパク質、超低密度リポタンパク質、およびトリグリセリドである。
【００８１】
「高トリグリセリド血症」とは、トリグリセリドレベルの上昇を特徴とする状態を意味する。
【００８２】
「特定する」または「代謝性疾患を有する動物を選択する」とは、代謝性疾患または代謝性障害と診断された対象の特定または選択、あるいは代謝症候群、高血糖症、高トリグリセリド血症、高血圧症、インスリン抵抗性の増加、インスリン感受性の低下、標準以上の体重、および／もしくは標準以上の体脂肪含量、またはこれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されない代謝性疾患の任意の症状を有する対象の特定または選択を意味する。そのような特定は、血清または循環（血漿）血糖の測定、血清または循環（血漿）トリグリセリドの測定、血圧の測定、体脂肪含量の測定、体重の測定等の標準の臨床試験または評価を含むが、これらに限定されない任意の方法によって達成され得る。
【００８３】
「直接隣接した」とは、直接隣接した要素間にいかなる介在要素も存在しないことを意味する。
【００８４】
「個体」または「対象」または「動物」とは、治療または療法に選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００８５】
「発現または活性を阻害する」とは、ＲＮＡまたはタンパク質の発現または活性の減少または阻止を指し、必ずしも発現または活性の完全な排除を示すわけではない。
【００８６】
「インスリン抵抗性」とは、正常な量のインスリンが、脂肪、筋肉、および肝細胞から
正常なインスリン応答をもたらすには不十分である状態と定義される。脂肪細胞におけるインスリン抵抗性は、血漿中の遊離脂肪酸を上昇させる貯蔵されたトリグリセリドの加水分解をもたらす。筋肉におけるインスリン抵抗性がグルコース取り込みを減少させる一方で、肺におけるインスリン抵抗性は、グルコース貯蔵を減少させ、これら両方の影響は、血糖を上昇させる働きをする。インスリン抵抗性に起因したインスリンおよびグルコースの高血漿レベルは、多くの場合、代謝症候群および２型糖尿病に至る。
【００８７】
「インスリン感受性」は、個体がどの程度効果的にグルコースを処理するかの尺度である。高インスリン感受性を有する個体がグルコースを効果的に処理する一方で、低インスリン感受性を有する個体は、グルコースを効果的に処理しない。
【００８８】
「ヌクレオシド間結合」とは、ヌクレオシド間の化学結合を指す。
【００８９】
「静脈内投与」とは、静脈への投与を意味する。
【００９０】
「連結したヌクレオシド」とは、一緒に結合される隣接したヌクレオシドを意味する。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、「ロックド酸ヌクレオシド」または「ＬＮＡ」とは、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【００９２】
「脂質低下療法」または「脂質低下剤」とは、対象における１つ以上の脂質を減少させるために対象に提供される治療レジメンを意味する。ある特定の実施形態において、脂質低下療法は、対象におけるＡｐｏＢ、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｃ、ＩＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、小さく高密度のＬＤＬ粒子、およびＬｐ（ａ）のうちの１つ以上を減少させるために提供される。脂質低下療法の例には、スタチン、フィブラート、およびＭＴＰ阻害剤が挙げられる。
【００９３】
「主要危険因子」とは、特定の疾患または状態に対する高い危険性に寄与する因子を指す。ある特定の実施形態において、冠状動脈性心臓病の主要危険因子には、喫煙、高血圧、低ＨＤＬ−Ｃ、冠状動脈性心臓病の家族歴、年齢、および本明細書に開示される他の因子が含まれるが、これらに限定されない。
【００９４】
「代謝性疾患」または「代謝性障害」とは、代謝機能の変化または障害を特徴とする状態を指す。「代謝性」および「代謝」は、当技術分野で周知の用語であり、一般に、生きている生物内で生じるあらゆる種類の生化学的プロセスを含む。代謝性疾患または障害には、肥満、糖尿病、高血糖症、前糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、代謝症候群、インスリン抵抗性、糖尿病性脂質異常症、もしくは高トリグリセリド、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００９５】
「代謝症候群」とは、代謝由来の脂質および非脂質心血管危険因子のクラスタ化を特徴とする状態を意味する。ある特定の実施形態において、代謝症候群は、以下の因子：男性において１０２ｃｍを超え、女性において８８ｃｍを超えるウエスト周り；少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬの血清トリグリセリド；男性において４０ｍｇ／ｄＬ未満、女性において５０ｍｇ／ｄＬ未満のＨＤＬ−Ｃ；少なくとも１３０／８５ｍｍＨｇの血圧；および少なくとも１１０ｍｇ／ｄＬの空腹時グルコースのうちのいずれか３つの存在によって特定される。これらの決定因子は、臨床診療時に容易に測定され得る（ＪＡＭＡ，２００１，２８５：２４８６−２４９７）。
【００９６】
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」とは、第１の核酸の核酸塩基が第２の対応する核酸塩基または標的核酸と対合することができない場合を指す。
【００９７】
「混合型脂質異常症」とは、コレステロールの上昇およびトリグリセリドの上昇を特徴する状態を意味する。
【００９８】
「修飾ヌクレオシド間結合」とは、天然に存在するヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）の置換または任意の変化を指す。
【００９９】
「修飾核酸塩基」とは、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、またはウラシル以外の任意の核酸塩基を指す。「非修飾核酸塩基」とは、プリンが、アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）をベースとし、ピリミジンがチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）をベースとすることを意味する。
【０１００】
「修飾ヌクレオシド」とは、独立して、修飾糖部分または修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１０１】
「修飾ヌクレオチド」とは、独立して、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合、または修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」とは、独立して、修飾糖部分または修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１０２】
「修飾オリゴヌクレオチド」とは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１０３】
「修飾糖」とは、天然糖の置換または変化を指す。
【０１０４】
本明細書で使用されるとき、「修飾糖部分」とは、置換糖部分または糖代理物を意味する。
【０１０５】
本明細書で使用されるとき、「ＭＯＥ」とは、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３を意味する。
【０１０６】
「モチーフ」とは、アンチセンス化合物における化学的にはっきりと異なる領域のパターンを意味する。
【０１０７】
「ＭＴＰ阻害剤」とは、酵素であるミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質を阻害する薬剤を意味する。
【０１０８】
「天然に存在するヌクレオシド間結合」とは、３’から５’へのホスホジエステル結合を意味する。
【０１０９】
本明細書で使用されるとき、「天然に存在する糖部分」とは、天然に存在するＲＮＡに見られるリボフラノシルまたは天然に存在するＤＮＡに見られるデオキシリボフラノシルを意味する。
【０１１０】
「天然糖部分」とは、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖を意味する。
【０１１１】
「非アルコール脂肪肝疾患」または「ＮＡＦＬＤ」とは、過度のアルコール摂取（例えば、２０ｇ／日を超えるアルコール消費）に起因しない肝臓の脂肪炎症を特徴とする状態を意味する。ある特定の実施形態において、ＮＡＦＬＤは、インスリン抵抗性および代謝症候群に関連している。ＮＡＦＬＤは、肝細胞における単なるトリグリセリド蓄積（肝臓脂肪症）から、炎症を伴う肝臓脂肪症（脂肪性肝炎）、線維症、および肝硬変に及ぶ疾患
スペクトラムを包含する。
【０１１２】
「非アルコール性脂肪性肝炎」（ＮＡＳＨ）は、トリグリセリド沈着を超えたＮＡＦＬＤの進行によって生じる。壊死、炎症、および線維症を誘発することのできる「セカンドヒット（ｓｅｃｏｎｄ  ｈｉｔ）」は、ＮＡＳＨの発症に必要である。セカンドヒットの候補は、広義のカテゴリー：酸化ストレスの増加を引き起こす因子および炎症性サイトカインの発現を促進する因子に分類され得る。
【０１１３】
「核酸」とは、モノマーヌクレオチドからなる分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。核酸は、単一分子中にこれらの要素の組み合わせも含み得る。
【０１１４】
「核酸塩基」とは、別の核酸塩基と対合することができる複素環部分を意味する。本明細書で使用されるとき、「核酸塩基」とは、糖部分に連結されてオリゴヌクレオチドに組み込むことができるヌクレオシドを作成することができる原子団を意味し、この原子団は、別のオリゴヌクレオチドまたは核酸の相補的な天然に存在する核酸塩基と結合することができる。核酸塩基は、天然に存在し得るか、または修飾され得る。
「核酸塩基配列」とは、任意の糖、結合、または核酸塩基修飾から独立した連続した核酸塩基の順序を意味する。
【０１１５】
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド」とは、核酸塩基部分および糖部分を含む化合物を意味する。ヌクレオシドには、天然に存在するヌクレオシド（ＤＮＡおよびＲＮＡに見られるもの）ならびに修飾ヌクレオシドが含まれるが、これらに限定されない。ヌクレオシドは、ホスフェート部分に連結され得る。
【０１１６】
「ヌクレオシド模倣物」は、糖または糖と塩基を置換するために用いられる構造を含み、例えば、モルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、ビシクロ、またはトリシクロ糖模倣物、例えば、非フラノース糖単位を有するヌクレオシド模倣物等のオリゴマー化合物の１つ以上の位置での結合を必ずしも含むわけではない。
【０１１７】
「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。本明細書で使用されるとき、「ヌクレオチド」とは、ホスフェート結合基をさらに含むヌクレオシドを意味する。本明細書で使用されるとき、「連結したヌクレオシド」は、ホスフェート結合によって連結されてもされなくてもよく、それ故に、「連結したヌクレオチド」を含むが、これに限定されない。本明細書で使用されるとき、「連結したヌクレオシド」は、連続した配列において連結されるヌクレオシドである（すなわち、さらなるヌクレオシドは、連結される配列間に存在しない）。
【０１１８】
「ヌクレオチド模倣物」は、ヌクレオシドを置換するために用いられる構造と、例えば、ペプチド核酸またはモルホリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または他の非ホスホジエステル結合によって連結されたモルホリノ）等のオリゴマー化合物の１つ以上の位置での結合とを含む。
【０１１９】
「オリゴマー化合物」または「オリゴマー」とは、２つ以上のサブ構造を含み、かつ核酸分子の領域にハイブリダイズすることができるポリマー構造を指す。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、アンチセンス化合物である。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。ある特定の実施形態において、
オリゴマー化合物は、キメラオリゴヌクレオチドである。
【０１２０】
「オリゴヌクレオチド」とは、各々が互いに独立して修飾され得るか、または修飾され得ない連結したヌクレオシドのポリマーを意味する。
【０１２１】
「非経口投与」とは、注入または輸液を介する投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば、髄腔内もしくは脳室内投与が含まれる。投与は、連続投与、または長期投与、または短期投与、または間欠投与であり得る。
【０１２２】
「ペプチド」とは、アミド結合によって少なくとも２つのアミノ酸を連結することによって形成される分子を意味する。ペプチドは、ポリペプチドおよびタンパク質を指す。
【０１２３】
「医薬品」とは、個体に投与されたときに治療的利益を提供する物質を意味する。例えば、ある特定の実施形態において、ＰＴＰ１Ｂを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬品である。
【０１２４】
「医薬組成物」とは、個体への投与に好適な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、１つ以上の活性剤および滅菌水溶液を含み得る。
【０１２５】
「薬剤的に許容される担体」とは、オリゴヌクレオチドの構造を妨害しない媒体または希釈剤を意味する。ある特定のそのような担体は、医薬組成物を、例えば、対象による経口摂取のための丸剤、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、およびトローチ剤として製剤化することを可能にする。例えば、薬剤的に許容される担体は、滅菌水溶液であり得る。
【０１２６】
「薬剤的に許容される誘導体」は、本明細書に記載の化合物の薬剤的に許容される塩、共役体、プロドラッグ、または異性体を包含する。
【０１２７】
「薬剤的に許容される塩」とは、アンチセンス化合物の生理学的および薬剤的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物学的活性を保持し、かつそれに望ましくない毒物学的影響を与えない塩を意味する。
【０１２８】
「ホスホロチオエート結合」とは、ホスホジエステル結合が非架橋酸素原子のうちの１つを硫黄原子と置き換えることによって修飾されるヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。
【０１２９】
「部分」とは、定義された数の核酸の連続した（すなわち、連結した）核酸塩基を意味する。ある特定の実施形態において、部分は、標的核酸の連続した核酸塩基の定義された数である。ある特定の実施形態において、部分は、アンチセンス化合物の連続した核酸塩基の定義された数である。
【０１３０】
「予防する」とは、数分から無期限の期間、疾患、障害、もしくは状態の発病もしくは発症を遅延させるか、または未然に防ぐことを指す。予防は、疾患、障害、または状態の発症の危険性を低下させることも意味する。
【０１３１】
「プロドラッグ」とは、内因性酵素または他の化学物質もしくは条件の作用により体内またはその細胞内で活性形態に変換される不活性形態で調製される治療薬を意味する。
【０１３２】
「タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ」または「ＰＴＰ１Ｂ」（別名、ＰＴＰＮ１
；タンパク質チロシンホスファターゼ非受容体型１；ＰＴＰ−１Ｂ；ＲＫＰＴＰ）とは、ＰＴＰ１Ｂの任意の核酸またはタンパク質を意味する。
【０１３３】
「ＰＴＰ１Ｂ発現」とは、ＰＴＰ１Ｂをコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡのレベルまたはｍＲＮＡから翻訳されたタンパク質のレベルを意味する。ＰＴＰ１Ｂ発現は、ノーザンブロットまたはウエスタンブロット等の当技術分野で既知の方法によって決定され得る。
【０１３４】
「ＰＴＰ１Ｂ核酸」とは、ＰＴＰ１Ｂをコードする任意の核酸を意味する。例えば、ある特定の実施形態において、ＰＴＰ１Ｂ核酸は、ＰＴＰ１ＢをコードするＤＮＡ配列、ＰＴＰ１ＢをコードするＤＮＡ（イントロンおよびエキソンを含むゲノムＤＮＡを含む）から転写されるＲＮＡ配列、およびＰＴＰ１ＢをコードするｍＲＮＡ配列を含む。「ＰＴＰ１Ｂ  ｍＲＮＡ」とは、ＰＴＰ１Ｂタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【０１３５】
「副作用」とは、所望の作用以外の治療に起因する生理学的応答を意味する。ある特定の実施形態において、副作用には、注入部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝臓毒性、腎臓毒性、中枢神経系異常、ミオパシー、および倦怠感が含まれる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝臓毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝臓毒性または肝機能異常を示し得る。
【０１３６】
「一本鎖オリゴヌクレオチド」とは、相補鎖にハイブリダイズされないオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１３７】
「特異的にハイブリダイズ可能な」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間に所望の効果を引き起こすのに十分な程度の相補性を有する一方で、特異的結合が所望される条件下、すなわち、生体内アッセイおよび治療処置の場合における生理学的条件下で非標的核酸にほとんどまたはまったく影響を及ぼさないアンチセンス化合物を指す。
【０１３８】
「スタチン」とは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を阻害する薬剤を意味する。
【０１３９】
「皮下投与」とは、皮膚の直下への投与を意味する。
本明細書で使用されるとき、「糖部分」とは、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分または修飾糖部分を意味する。
【０１４０】
本明細書で使用されるとき、「置換糖部分」とは、天然に存在する糖部分ではないフラノシルを意味する。置換糖部分には、２’位、３’位、５’位、および／または４’位に置換基を含むフラノシルが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の置換糖部分は、二環式糖部分である。
【０１４１】
本明細書で使用されるとき、「糖代理物」という用語は、結果として生じるヌクレオシドサブユニットが一緒に結合し、かつ／または他のヌクレオシドに結合して、相補的なオリゴマー化合物にハイブリダイズすることができるオリゴマー化合物を形成することができるように、フラノシルを含まず、かつヌクレオシドの天然に存在する糖部分を置換することができる構造を意味する。そのような構造は、フラノシル（例えば、４、６、もしくは７員環）とは異なる数の原子、フラノシルの酸素の非酸素原子（例えば、炭素、硫黄、もしくは窒素）への置換、または原子の数の変化および酸素の置換の両方を含む環を含む。そのような構造はまた、置換糖部分（例えば、さらなる置換基を任意に含む６員炭素環式二環式糖代理物）について記載された置換に対応する置換も含み得る。糖代理物はまた、より複雑な糖置換物（例えば、ペプチド核酸の非環系）も含む。糖代理物には、モルフ
ォリノ、シクロヘキセニル、およびシクロヘキシトールが含まれるが、これらに限定されない。
【０１４２】
「標的とする」または「標的にする」とは、標的核酸に特異的にハイブリダイズし、かつ所望の効果を引き起こすアンチセンス化合物の設計および選択のプロセスを意味する。
【０１４３】
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、および「標的ＲＮＡ転写物」はすべて、アンチセンス化合物によって標的にすることができる核酸を指す。
【０１４４】
「標的セグメント」とは、アンチセンス化合物が標的とされる標的核酸のヌクレオチド配列を意味する。「５’標的部位」は、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」は、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
【０１４５】
「治療的に有効な量」とは、個体に治療的利益を提供する薬剤の量を意味する。
【０１４６】
「治療的なライフスタイルの変更」とは、脂肪（ｆａｔ）／脂肪（ａｄｉｐｏｓｅ）組織量および／またはコレステロールを低下させることを目的とした食事およびライフスタイルの変更を意味する。そのような変化は、心臓病を発症する危険性を低下させることができ、１日の総カロリー、総脂質、飽和脂肪、多価不飽和脂肪、一価不飽和脂肪、炭水化物、タンパク質、コレステロール、不溶性繊維の食事摂取量の推奨、ならびに身体的活動の推奨を含み得る。
【０１４７】
「トリグリセリド」または「ＴＧ」とは、３つの脂肪酸分子と結合されるグリセロールからなる脂質または中性脂肪を意味する。
【０１４８】
「２型糖尿病」（別名、「２型真性糖尿病」または「真性糖尿病２型（ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ，ｔｙｐｅ  ２）」であり、以前は「真性糖尿病２型（ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ｔｙｐｅ  ２）」、「非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」、「肥満関連糖尿病」、または「成人発症型糖尿病」と呼ばれていた）は、主にインスリン抵抗性、相対的インスリン欠損、および高血糖症を特徴とする代謝性障害である。
【０１４９】
「治療する」とは、医薬組成物を動物に投与して、疾患、障害、または状態の変更または改善を達成することを指す。
【０１５０】
本明細書で使用されるとき、「非修飾核酸塩基」または「天然に存在する核酸塩基」という用語は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然に存在する複素環式核酸塩基を意味し、プリンは、アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）をベースとし、ピリミジンは、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルＣを含む）、およびウラシル（Ｕ）をベースとする。
【０１５１】
「非修飾ヌクレオチド」とは、天然に存在する核酸塩基、糖部分、およびヌクレオシド間結合からなるヌクレオチドを意味する。ある特定の実施形態において、非修飾ヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわち、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【０１５２】
本明細書で使用されるとき、「２’−置換ヌクレオシド」とは、ＨまたはＯＨ以外の２’位に置換基を含むヌクレオシドを意味する。別途示されない限り、２’−置換ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドではない。
【０１５３】
本明細書で使用されるとき、「デオキシヌクレオシド」とは、天然に存在するデオキシ
リボヌクレオシド（ＤＮＡ）に見られる２’−Ｈフラノシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ある特定の実施形態において、２’−デオキシヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含み得るか、またはＲＮＡ核酸塩基（例えば、ウラシル）を含み得る。
【０１５４】
本明細書で使用されるとき、「オリゴヌクレオチド」とは、複数個の連結したヌクレオシドを含む化合物を意味する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１個以上の非修飾リボヌクレオシド（ＲＮＡ）および／または非修飾デオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）および／または１個以上の修飾ヌクレオシドを含む。
【０１５５】
本明細書で使用されるとき、「オリゴヌクレオシド」とは、ヌクレオシド間結合のうちのいずれもリン原子を含有しないオリゴヌクレオチドを意味する。本明細書で使用されるとき、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオシドを含む。
【０１５６】
本明細書で使用されるとき、「修飾オリゴヌクレオチド」とは、少なくとも１個の修飾ヌクレオシドおよび／または少なくとも１個の修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
【０１５７】
本明細書で使用されるとき、「結合」または「結合基」とは、２個以上の他の原子団を一緒に結合する原子団を意味する。
【０１５８】
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド間結合」とは、オリゴヌクレオチド中の隣接したヌクレオシド間の共有結合を意味する。
【０１５９】
本明細書で使用されるとき、「天然に存在するヌクレオシド間結合」とは、３’から５’へのホスホジエステル結合を意味する。
【０１６０】
本明細書で使用されるとき、「修飾ヌクレオシド間結合」とは、天然に存在するヌクレオシド間結合以外の任意のヌクレオシド間結合を意味する。
【０１６１】
本明細書で使用されるとき、「末端ヌクレオシド間結合」とは、オリゴヌクレオチドまたはその定義された領域の最後の２個のヌクレオシド間の結合を意味する。
【０１６２】
本明細書で使用されるとき、「リン結合基」とは、リン原子を含む結合基を意味する。リン結合基には、以下の式を有する基が含まれるが、これに限定されず、
【化１６】
2020058370.tif 000017
式中、
ＲａおよびＲｄは各々、独立して、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＮＨ、またはＮＪ１であり、Ｊ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒｂは、ＯまたはＳであり、
Ｒｃは、ＯＨ、ＳＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、または置換アミノであり、
Ｊ１は、Ｒｂが、ＯまたはＳである。
リン結合基には、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、ホスホラミデート、ホスホロチオアミデート、チオノアルキルホスホネート、ホスホトリエステル、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスフェートが
含まれるが、これらに限定されない。
【０１６３】
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド間リン結合基」とは、２個のヌクレオシドを直接結合するリン結合基を意味する。
【０１６４】
本明細書で使用されるとき、「非ヌクレオシド間リン結合基」とは、２個のヌクレオシドを直接結合しないリン結合基を意味する。ある特定の実施形態において、
【０１６５】
非ヌクレオシド間リン結合基は、ヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に結合させる。
【０１６６】
ある特定の実施形態において、
【０１６７】
非ヌクレオシド間リン結合基は、２個の基を結合するが、これらはいずれもヌクレオシドではない。
【０１６８】
本明細書で使用されるとき、「中性結合基」とは、荷電されていない結合基を意味する。中性結合基には、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ＭＭＩ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−）、アミド−３（−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−）、アミド−４（−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−）、ホルムアセタール（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−）、およびチオホルムアセタール（−Ｓ−ＣＨ２−Ｏ−）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、中性結合基には、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボン酸エステル、カルボキサミド、硫化物、スルホン酸エステル、およびアミドを含む非イオン性結合が含まれる（例えば、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ
Ｅｄｓ．ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０；Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ３
ａｎｄ  ４（ｐｐ．４０−６５）を参照されたい）。さらに、中性結合基は、混合されたＮ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２成分部分を含む非イオン性結合を含む。
【０１６９】
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド間中性結合基」とは、２個のヌクレオシドを直接結合する中性結合基を意味する。
【０１７０】
本明細書で使用されるとき、「非ヌクレオシド間中性結合基」とは、２個のヌクレオシドを直接結合しない中性結合基を意味する。ある特定の実施形態において、非ヌクレオシド間中性結合基は、ヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に結合させる。ある特定の実施形態において、非ヌクレオシド間中性結合基は、２個の基を結合するが、これらはいずれもヌクレオシドではない。
【０１７１】
本明細書で使用されるとき、「オリゴマー化合物」とは、２つ以上の下部構造を含む重合体構造を意味する。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、１個以上の共役基および／または末端基を含む。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドからなる。オリゴマー化合物はまた、天然に存在する核酸も含む。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、１個以上の連結した単量体サブユニットの骨格を含み、各連結した単量体サブユニットは、複素環式塩基部分に直接的または間接的に結合される。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物はまた、複素環式塩基部分に連結されない単量体サブユニットも含み得、それにより脱塩基部位を提供し得る。ある特定の実施形態において、単量体サブユニット、糖部分または代理物、および複素環式塩基部分を結び付ける結合は、独立して修飾され得る。ある特定の実施形態において、複素環式塩基を含み得るか、または含み得ない結合糖単位は、ペプチド核酸における単量体等の模倣物と置換され得る。
【０１７２】
本明細書で使用されるとき、「末端基」とは、オリゴヌクレオチドの３’末端もしくは５’末端のいずれか、またはこれら両方に結合される１個以上の原子を意味する。ある特定の実施形態において、末端基は、共役基である。ある特定の実施形態において、末端基は、１個以上の末端基ヌクレオシドを含む。
【０１７３】
本明細書で使用されるとき、「共役体」または「共役基」とは、オリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に結合される原子または原子団を意味する。概して、共役基は、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、および／またはクリアランス特性を含むが、これらに限定されない、それらが結合する化合物の１つ以上の特性を修飾する。
【０１７４】
本明細書で使用されるとき、共役基との関連での「共役リンカー」または「リンカー」とは、任意の原子または原子団を含む共役基の一部を意味し、（１）オリゴヌクレオチドを共役基の別の部分と共有結合させるか、または（２）共役基の２個以上の部分を共有結合させる。
【０１７５】
共役基は、本明細書においてラジカルとして示され、アンチセンスオリゴヌクレオチド等のオリゴマー化合物への共有結合を形成するための結合を提供する。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物における結合点は、オリゴマー化合物の３’末端ヌクレオシドの３’−ヒドロキシル基の３’−酸素原子である。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物における結合点は、オリゴマー化合物の５’末端ヌクレオシドの５’−ヒドロキシル基の５’−酸素原子である。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物への結合を形成するための結合は、切断可能な結合である。ある特定のそのような実施形態において、そのような切断可能な結合は、切断可能な部分のすべてまたは一部を構成する。
【０１７６】
ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分（例えば、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシド）およびＧａｌＮＡｃクラスター部分等の炭水化物クラスター部分を含む。そのような炭水化物クラスター部分は、標的部分と、任意に、共役リンカーを含む。ある特定の実施形態において、炭水化物クラスター部分は、リガンドの数および同一性によって特定される。例えば、ある特定の実施形態において、炭水化物クラスター部分は、３個のＧａｌＮＡｃ基を含み、「ＧａｌＮＡｃ３」と表記される。ある特定の実施形態において、炭水化物クラスター部分は、４個のＧａｌＮＡｃ基を含み、「ＧａｌＮＡｃ４」と表記される。特定の炭水化物クラスター部分（特異的テザー、分岐、および共役リンカー基を有する）は、本明細書に記載され、ローマ数字、続いて下付き文字「ａ」で表記される。したがって、「ＧａｌＮａｃ３−１ａ」は、３個のＧａｌＮａｃ基、ならびに特異的に特定されたテザー、分岐、および結合基を有する共役基の特定の炭水化物クラスター部分を指す。そのような炭水化物クラスター断片は、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシド等の切断可能な部分を介してオリゴマー化合物に結合される。
【０１７７】
本明細書で使用されるとき、「切断可能な部分」とは、生理学的条件下で分割され得る結合または基を意味する。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、リソソーム等の細胞または細胞内コンパートメント内で切断される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ヌクレアーゼ等の内因性酵素によって切断される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、１個、２個、３個、４個、または４個以上の切断可能な結合を有する原子団を含む。
【０１７８】
本明細書で使用されるとき、「切断可能な結合」とは、分割され得る任意の化学結合を意味する。ある特定の実施形態において、切断可能な結合は、アミド、ポリアミド、エス
テル、エーテル、ホスホジエステルの一方もしくは両方のエステル、リン酸エステル、カルバメート、ジスルフィド、またはペプチドの中から選択される。
【０１７９】
本明細書で使用されるとき、「炭水化物クラスター」とは、足場またはリンカー基に結合される１個以上の炭水化物残基を有する化合物を意味する（例えば、炭水化物共役クラスターの例として、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｔｏ  ａ  Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，”Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，（１４）：１８−２９、またはＲｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ−Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ  ｆｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ａｓｉａｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，（４７）：５７９８−５８０８を参照のこと）。
【０１８０】
本明細書で使用されるとき、「修飾炭水化物」とは、天然に存在する炭水化物と比較して、１つ以上の化学修飾を有する任意の炭水化物を意味する。
【０１８１】
本明細書で使用されるとき、「炭水化物誘導体」とは、出発物質または中間体として炭水化物を用いて合成され得る任意の化合物を意味する。
【０１８２】
本明細書で使用されるとき、「炭水化物」とは、天然に存在する炭水化物、修飾炭水化物、または炭水化物誘導体を意味する。
【０１８３】
本明細書で使用されるとき、「保護基」とは、当業者に既知の任意の化合物または保護基を意味する。保護基の非限定的な例は、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ
Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，ＩＳＢＮ  ０−４７１−６２３０１−６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋにおいて見出され得、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１８４】
本明細書で使用されるとき、「一本鎖」とは、その相補体にハイブリダイズされず、かつ安定した自己二本鎖を形成するのに十分な自己相補性を欠くオリゴマー化合物を意味する。
【０１８５】
本明細書で使用されるとき、「二本鎖」とは、互いにハイブリダイズされるオリゴマー化合物の対またはヘアピン構造を形成する単一の自己相補的なオリゴマー化合物を意味する。ある特定の実施形態において、二本鎖オリゴマー化合物は、第１および第２のオリゴマー化合物を含む。
【０１８６】
本明細書で使用されるとき、「アンチセンス化合物」とは、オリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる化合物を意味し、その少なくとも一部は、それがハイブリダイズすることができる標的核酸に相補的であり、少なくとも１つのアンチセンス活性をもたらす。
【０１８７】
本明細書で使用されるとき、「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因する任意の検出可能および／または測定可能な変化を意味する。ある特定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸転写物（例えば、ｍＲＮＡ）の量または活性の調節を含む。ある特定の実施形態において、アンチ
センス活性は、プレｍＲＮＡのスプライシングの調節を含む。
【０１８８】
本明細書で使用されるとき、「ＲＮａｓｅ  Ｈベースのアンチセンス化合物」とは、アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部が、アンチセンス化合物の標的核酸へのハイブリダイゼーションおよびその後のＲＮａｓｅ  Ｈによる標的核酸の切断に起因するアンチセンス化合物を意味する。
【０１８９】
本明細書で使用されるとき、「ＲＩＳＣベースのアンチセンス化合物」とは、アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部が、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に起因するアンチセンス化合物を意味する。
【０１９０】
本明細書で使用されるとき、「検出」または「測定」とは、検出または測定のための試験またはアッセイが実行されることを意味する。そのような検出および／または測定は、ゼロの値をもたらし得る。したがって、検出または測定のための試験が活性なし（ゼロの活性）の知見をもたらす場合、活性を検出または測定するステップは、それでもやはり実行されている。
【０１９１】
本明細書で使用されるとき、「検出可能および／または測定可能な活性」とは、ゼロではない統計的に有意な活性を意味する。
【０１９２】
本明細書で使用されるとき、「本質的に不変」とは、はるかに変化する別のパラメータと特に比較して、特定のパラメータに変化がほとんどまたは全くないことを意味する。ある特定の実施形態において、あるパラメータが５％未満変化するとき、そのパラメータは、本質的に不変である。ある特定の実施形態において、あるパラメータが２倍未満変化する場合、そのパラメータは、本質的に不変である一方で、別のパラメータは、少なくとも１０倍変化する。例えば、ある特定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸の量の変化である。ある特定のそのような実施形態において、非標的核酸の量の変化が標的核酸の量の変化よりもはるかに小さい場合、それは本質的に不変であるが、変化がゼロである必要はない。
【０１９３】
本明細書で使用されるとき、「発現」とは、遺伝子が最終的にタンパク質をもたらす工程を意味する。発現には、転写、転写後修飾（例えば、スプライシング、ポリアデニル化、５’−キャップの付加）、および翻訳が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９４】
本明細書で使用されるとき、「標的核酸」とは、アンチセンス化合物がハイブリダイズして所望のアンチセンス活性をもたらすよう意図される核酸分子を意味する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的条件下でハイブリダイゼーションを可能にするのに十分なそれらの標的核酸に対する相補性を有する。
【０１９５】
本明細書で使用されるとき、核酸塩基に関して「核酸塩基相補性」または「相補性」とは、別の核酸塩基と塩基対合することができる核酸塩基を意味する。例えば、ＤＮＡにおいて、アデニン（Ａ）は、チミン（Ｔ）に相補的である。例えば、ＲＮＡにおいて、アデニン（Ａ）は、ウラシル（Ｕ）に相補的である。ある特定の実施形態において、相補的核酸塩基とは、その標的核酸の核酸塩基と塩基対合することができるアンチセンス化合物の核酸塩基を意味する。例えば、アンチセンス化合物のある特定の位置の核酸塩基が、標的核酸のある特定の位置の核酸塩基と水素結合することができる場合、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の水素結合の位置は、その核酸塩基対において相補的であると見なされる。ある特定の修飾を含む核酸塩基は、対応する核酸塩基と対合する能力を維持し得、それ故に、依然として核酸塩基相補性を有することができる。
【０１９６】
本明細書で使用されるとき、核酸塩基に関して「非相補的な」とは、互いに水素結合を形成しない核酸塩基の対を意味する。
【０１９７】
本明細書で使用されるとき、オリゴマー化合物（例えば、連結したヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、または核酸）に関して「相補的な」とは、そのようなオリゴマー化合物またはそれらの領域が核酸塩基相補性を介して別のオリゴマー化合物またはそれらの領域にハイブリダイズする能力を意味する。相補的なオリゴマー化合物は、各ヌクレオシドで核酸塩基相補性を有する必要はない。むしろ、いくつかのミスマッチが許容される。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、核酸塩基の７０％で相補的である（７０％相補的である）。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、８０％相補的である。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、９０％相補的である。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、９５％相補的である。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、１００％相補的である。
【０１９８】
本明細書で使用されるとき、「ミスマッチ」とは、第１および第２のオリゴマー化合物が整列するときに、第２のオリゴマー化合物の対応する位置で核酸塩基と対合することができない第１のオリゴマー化合物の核酸塩基を意味する。第１および第２のオリゴマー化合物のいずれかまたは両方ともにオリゴヌクレオチドであり得る。
【０１９９】
本明細書で使用されるとき、「ハイブリダイゼーション」とは、相補的なオリゴマー化合物（例えば、アンチセンス化合物およびその標的核酸）の対合を意味する。特定の機構に限定されないが、最も一般的な対合機構には水素結合が含まれ、これは、相補的核酸塩基間のワトソン・クリック水素結合、フーグスティーン水素結合、または逆フーグスティーン水素結合であり得る。
【０２００】
本明細書で使用されるとき、「特異的にハイブリダイズする」とは、オリゴマー化合物が、ある核酸部位にハイブリダイズするよりも高い親和性で別の核酸部位にハイブリダイズする能力を意味する。
【０２０１】
本明細書で使用されるとき、オリゴヌクレオチドまたはその部分に関して「完全に相補的な」とは、オリゴヌクレオチドまたはその部分の各核酸塩基が、相補的な核酸またはその連続した部分の核酸塩基と対合することができることを意味する。したがって、完全に相補的な領域は、いずれの鎖でもミスマッチまたは非ハイブリダイズ核酸塩基を含まない。
【０２０２】
本明細書で使用されるとき、「パーセント相補性」とは、標的核酸の等長部分に相補的なオリゴマー化合物の核酸塩基の割合を意味する。パーセント相補性は、標的核酸の対応する位置の核酸塩基に相補的なオリゴマー化合物の核酸塩基の数をオリゴマー化合物の全長で割ることによって計算される。
【０２０３】
本明細書で使用されるとき、「パーセント同一性」とは、第１の核酸の核酸塩基の総数で割った、第２の核酸の対応する位置の核酸塩基と同一の（化学修飾から独立した）種類の第１の核酸の核酸塩基の数を意味する。
【０２０４】
本明細書で使用されるとき、「調節」とは、調節前の分子、機能、もしくは活性の量または質と比較した、分子、機能、もしくは活性の量または質の変化を意味する。例えば、調節は、遺伝子発現における増加（刺激もしくは誘導）または減少（阻害もしくは低減）のいずれかの変化を含む。さらなる例として、発現の調節は、調節の不在下における量と比較した、特定のスプライス変異体の絶対量または相対量の変化をもたらすプレｍＲＮＡ
処理のスプライス部位選択の変化を含み得る。
【０２０５】
本明細書で使用されるとき、「化学モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域における化学修飾のパターンを意味する。モチーフは、オリゴヌクレオチドのある特定のヌクレオシドおよび／またはある特定の結合基での修飾によって定義され得る。
【０２０６】
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシドモチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域におけるヌクレオシド修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドの結合は、修飾または非修飾であり得る。別途示されない限り、本明細書においてヌクレオシドのみを記載するモチーフは、ヌクレオシドモチーフであるよう意図される。したがって、そのような事例において、結合は限定されない。
【０２０７】
本明細書で使用されるとき、「糖モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域における糖修飾のパターンを意味する。
【０２０８】
本明細書で使用されるとき、「結合モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域における結合修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、修飾または非修飾であり得る。別途示されない限り、本明細書において結合のみを記載するモチーフは、結合モチーフであるよう意図される。したがって、そのような事例において、ヌクレオシドは限定されない。
【０２０９】
本明細書で使用されるとき、「核酸塩基修飾モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドに沿った核酸塩基への修飾のパターンを意味する。別途示されない限り、核酸塩基修飾モチーフは、核酸塩基配列から独立している。
【０２１０】
本明細書で使用されるとき、「配列モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその部分に沿って整列した核酸塩基のパターンを意味する。別途示されない限り、配列モチーフは、化学修飾から独立しており、それ故に、化学修飾なしを含む化学修飾の任意の組み合わせを有し得る。
【０２１１】
本明細書で使用されるとき、ヌクレオシドまたはある「種類」のヌクレオシドに関する「修飾の種類」とは、ヌクレオシドの化学修飾を意味し、修飾および非修飾ヌクレオシドを含む。したがって、別途示されない限り、「第１の種類の修飾を有するヌクレオシド」は、非修飾ヌクレオシドであり得る。
【０２１２】
本明細書で使用されるとき、「別々に修飾された」とは、修飾の不在を含む、互いに異なる化学修飾または化学置換基を意味する。したがって、例えば、ＭＯＥヌクレオシドおよび非修飾ＤＮＡヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシドが修飾されていなくても「別々に修飾される」。同様に、ＤＮＡおよびＲＮＡは、これら両方ともに天然に存在する非修飾ヌクレオシドであっても「別々に修飾される」。同一であるが、異なる核酸塩基を含むヌクレオシドは、別々に修飾されない。例えば、２’−ＯＭｅ修飾糖および非修飾アデニン核酸塩基を含むヌクレオシドと２’−ＯＭｅ修飾糖および非修飾チミン核酸塩基を含むヌクレオシドは、別々に修飾されない。
【０２１３】
本明細書で使用されるとき、「同一の種類の修飾」とは、修飾の不在を含む、互いに同一の修飾を指す。したがって、例えば、２個の非修飾ＤＮＡヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシドが修飾されていなくても「同一の種類の修飾」を有する。同一の種類の修飾を有するそのようなヌクレオシドは、異なる核酸塩基を含み得る。
【０２１４】
本明細書で使用されるとき、「別個の領域」とは、オリゴヌクレオチドの部分を意味し
、任意の隣接する部分の化学修飾または化学修飾のモチーフは、別個の領域が互いに区別されることを可能にする少なくとも１つの相違点を含む。
【０２１５】
本明細書で使用されるとき、「薬剤的に許容される担体または希釈剤」とは、動物への投与における使用に好適な任意の物質を意味する。ある特定の実施形態において、薬剤的に許容される担体または希釈剤は、滅菌生理食塩水である。ある特定の実施形態において、そのような滅菌生理食塩水は、医薬品グレードの生理食塩水である。
【０２１６】
本明細書で使用されるとき、「代謝性障害」という用語は、主に代謝（食物を分解してエネルギーを生成することに関連した一連の複雑な化学反応）の異常調節を特徴とする疾患または状態を意味する。
【０２１７】
本明細書で使用されるとき、「心血管障害」という用語は、主に心臓または血管の機能障害を特徴とする疾患または状態を意味する。
【０２１８】
本明細書で使用されるとき、「単環式または多環式環系」という用語は、単環式または多環式ラジカル環系から選択されるすべての環系を含むよう意図されており、前記環は、縮合または連結され、脂肪族、脂環式、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アリールアルキル、複素環式、ヘテロアリール、ヘテロ芳香族、およびヘテロアリールアルキルから個別に選択される単一環系および混合環系を含むよう意図される。そのような単環式および多環式構造は、各々が同一のレベルの飽和を有するか、または各々が独立して、完全に飽和、部分的に飽和、もしくは完全に不飽和を含む様々な程度の飽和を有する環を含有し得る。各環は、複素環式環、および例えばベンズイミダゾール等の混合モチーフに存在し得るＣ環原子のみを含む環を生じさせるために、Ｃ、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される環原子を含み得、１個の環は、炭素環原子のみを有し、縮合環は、２個の窒素原子を有する。単環式または多環式環系は、例えば、前記環のうちの１個に結合される２個の＝Ｏ基を有するフタルイミド等の置換基とさらに置換され得る。単環式または多環式環系は、環原子を介した直接結合、複数の環原子を介した縮合、置換基を介した結合、または二機能性結合部分を介した結合等の様々な戦略を用いて親分子に結合され得る。
【０２１９】
本明細書で使用されるとき、「プロドラッグ」とは、対象に投与されると、代謝して活性化合物またはより活性の化合物（例えば、薬物）を形成する化合物の不活性形態または活性の低い形態を意味する。
【０２２０】
本明細書で使用されるとき、「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」および「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｇｒｏｕｐ）」とは、指名された親化合物の原子または基を置換する原子または基を意味する。例えば、修飾ヌクレオシドの置換基は、天然に存在するヌクレオシドに見られる原子または基とは異なる任意の原子または基である（例えば、修飾された２’−置換基は、ＨまたはＯＨ以外のヌクレオシドの２’位の任意の原子または基である）。置換基は、保護されても保護されなくてもよい。ある特定の実施形態において、本開示の化合物は、親化合物の１つの位置または２つ以上の位置に置換基を有する。置換基は、他の置換基ともさらに置換され得、親化合物に直接結合され得るか、またはアルキル基もしくはヒドロカルビル基等の結合基を介して結合され得る。
【０２２１】
同様に、本明細書で使用されるとき、化学官能基に関する「置換基」とは、指名された官能基に通常存在する原子または原子団とは異なる原子または原子団を意味する。ある特定の実施形態において、置換基は、官能基の水素原子を置換する（例えば、ある特定の実施形態において、置換メチル基の置換基は、非置換メチル基の水素原子のうちの１個を置換する水素以外の原子または基である）。別途示されない限り、置換基としての使用に従順な基には、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル（−
Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、カルボキシル（−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒａａ）、脂肪族基、脂環式基、アルコキシ、置換オキシ（−Ｏ−Ｒ-ａａ）、アリール、アラルキル、複素環式ラジカル、ヘ
テロアリール、ヘテロアリールアルキル、アミノ（−Ｎ（Ｒ-ｂｂ）（Ｒｃｃ））、イミ
ノ（＝ＮＲｂｂ）、アミド（−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、アジド（−Ｎ３）、ニトロ（−ＮＯ２）、シアノ（−ＣＮ）、カルバミド（−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａａ）、ウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、チオウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、グアニジニル（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、アミジニル（−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）（Ｒａａ））、チオール（−ＳＲｂｂ）、スルフィニル（−Ｓ（Ｏ）Ｒｂｂ）、スルホニル（−Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）、およびスルホンアミジル（−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）が含まれるが、これらに限定されず、式中、各Ｒａａ、Ｒｂｂ、およびＲｃｃは、独立して、Ｈ、任意に連結された化学官能基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、脂肪族、アルコキシ、アシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、脂環式、複素環式、およびヘテロアリールアルキルを含むが、これらに限定されない好ましいリストを有するさらなる置換基である。本明細書に記載の化合物内の選択された置換基は、再帰的程度まで存在する。
【０２２２】
本明細書で使用されるとき、本明細書で使用される「アルキル」とは、最大２４個の炭素原子を含有する飽和直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｎ−ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル等が挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、典型的には、１〜約２４個の炭素原子、より典型的には、１〜約１２個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）を含み、１〜約６個の炭素原子がより好ましい。
【０２２３】
本明細書で使用されるとき、「アルケニル」とは、最大２４個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素鎖ラジカルを意味する。アルケニル基の例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、１，３−ブタジエン等のジエン等が挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、典型的には、２〜約２４個の炭素原子、より典型的には、２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６個の炭素原子がより好ましい。本明細書で使用されるアルケニル基は、１個以上のさらなる置換基を任意に含み得る。
【０２２４】
本明細書で使用されるとき、「アルキニル」とは、最大２４個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキニル基の例として、エチニル、１−プロピニル、１−ブチニル等が挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、典型的には、２〜約２４個の炭素原子、より典型的には、２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６個の炭素原子がより好ましい。本明細書で使用されるアルキニル基は、１個以上のさらなる置換基を任意に含み得る。
【０２２５】
本明細書で使用されるとき、「アシル」とは、有機酸からのヒドロキシル基の除去によって形成されたラジカルを意味し、一般式−Ｃ（Ｏ）−Ｘを有し、式中、Ｘは、典型的には、脂肪族、脂環式、または芳香族である。例として、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族ホスフェート、脂肪族ホスフェート等が挙げられる。本明細書で使用されるアシル基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
【０２２６】
本明細書で使用されるとき、「脂環式」とは、環式環系を意味し、前記環は、脂肪族で
ある。前記環系は、１個以上の環を含み得、少なくとも１個の環は、脂肪族である。好ましい脂環式基は、環内に約５〜約９個の炭素原子を有する環を含む。本明細書で使用される脂環式基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
【０２２７】
本明細書で使用されるとき、「脂肪族」とは、最大２４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味し、任意の２個の炭素原子の間の飽和は、一重、二重、または三重結合である。脂肪族基は、好ましくは、１〜約２４個の炭素原子、より典型的には、１〜約１２個の炭素原子を含有し、１〜約６個の炭素原子がより好ましい。脂肪族基の直鎖または分岐鎖は、窒素、酸素、硫黄、およびリンを含む１個以上のヘテロ原子で中断され得る。ヘテロ原子によって中断されるそのような脂肪族基には、ポリアルコキシ、例えば、ポリアルキレングリコール、ポリアミン、およびポリイミンが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される脂肪族基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
【０２２８】
本明細書で使用されるとき、「アルコキシ」とは、アルキル基と酸素原子との間に形成されたラジカルを意味し、前記酸素原子を用いて、アルコキシ基を親分子に結合させる。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ネオペントキシ、ｎ−ヘキソキシ等が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用されるアルコキシ基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
【０２２９】
本明細書で使用されるとき、「アミノアルキル」とは、アミノ置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキルラジカルを意味する。前記ラジカルのアルキル部分は、親分子と共有結合を形成する。アミノ基は、任意の位置に位置し得、アミノアルキル基は、アルキルおよび／またはアミノ部分のさらなる置換基で置換され得る。
【０２３０】
本明細書で使用されるとき、「アラルキル」および「アリールアルキル」とは、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルラジカルに共有結合される芳香族基を意味する。結果として生じるアラルキル（またはアリールアルキル）基のアルキルラジカル部分は、親分子と共有結合を形成する。例として、ベンジル、フェネチル等が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用されるアラルキル基は、ラジカル基を形成するアルキル、アリール、またはこれら両方の基に結合されるさらなる置換基を任意に含み得る。
【０２３１】
本明細書で使用されるとき、「アリール」および「芳香族」とは、１個以上の芳香族環を有する単環式または多環式炭素環式環系ラジカルを意味する。アリール基の例として、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル等が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいアリール環系は、１個以上の環内に約５〜約２０個の炭素原子を有する。本明細書で使用されるアリール基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
【０２３２】
本明細書で使用されるとき、「ハロ」および「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素から選択される原子を意味する。
【０２３３】
本明細書で使用されるとき、「ヘテロアリール」および「ヘテロ芳香族」とは、単環式もしくは多環式芳香族環、環系、または縮合環系を含むラジカルを意味し、前記環のうちの少なくとも１つは、芳香族であり、１個以上のヘテロ原子を含む。ヘテロアリールは、縮合環のうちの１個以上がヘテロ原子を含有しない系を含む縮合環系もまた含むよう意図される。ヘテロアリール基は、典型的には、硫黄、窒素、または酸素から選択される１個の環原子を含む。ヘテロアリール基の例として、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル
、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールラジカルは、親分子に直接結合され得るか、または脂肪族基もしくはヘテロ原子等の結合部分を介して結合され得る。本明細書で使用されるヘテロアリール基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
【０２３４】
本明細書で使用されるとき、「共役化合物」とは、共役基としての使用に好適な任意の原子、原子団、または結合原子団を意味する。ある特定の実施形態において、共役化合物は、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、および／またはクリアランス特性を含むが、これらに限定されない１つ以上の特性を有し得るか、または付与し得る。
【０２３５】
本明細書で使用されるとき、別途示されないか、または修正されない限り、「二本鎖」という用語は、互いにハイブリダイズされる２個の別個のオリゴマー化合物を指す。そのような二本鎖化合物は、一方もしくは両方の鎖（オーバーハング）の一方もしくは両方の末端に１個以上のヌクレオシドまたはハイブリダイズしていないヌクレオシドを有し得、かつ／または１個以上のハイブリダイズしていない内部ヌクレオシド（ミスマッチ）を有し得るが、但し、生理学的関連条件下でハイブリダイゼーションを維持するのに十分な相補性が存在することを条件とする。
Ｂ．ある特定の化合物
【０２３６】
ある特定の実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび共役体を含む共役アンチセンス化合物を提供する。
ａ．ある特定のアンチセンスオリゴヌクレオチド
【０２３７】
ある特定の実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、連結したヌクレオシドを含み、各ヌクレオシドは、糖部分および核酸塩基を含む。そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチドの構造は、化学的特徴（例えば、修飾および修飾パターン）ならびに核酸塩基配列（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列、同一性、および標的核酸の配列）の点から考慮され得る。
ｉ．ある特定の化学的特徴
【０２３８】
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾を含む。ある特定のそのような実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１個以上の修飾ヌクレオシドおよび／または修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは、修飾糖部分および／または修飾核酸塩基を含む。
１．ある特定の糖部分
【０２３９】
ある特定の実施形態において、本開示の化合物は、修飾糖部分を含む１個以上の修飾ヌクレオシドを含む。１個以上の糖修飾ヌクレオシドを含むそのような化合物は、天然に存在する糖部分を含むヌクレオシドのみを含むオリゴヌクレオチドと比較して、ヌクレアーゼ安定性の強化または標的核酸との結合親和性の増大等の望ましい特性を有し得る。ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、置換糖部分である。ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、糖代理物である。そのような糖代理物は、置換糖部分の置換に対応する１つ以上の置換を含み得る。
【０２４０】
ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、２’位および／または５’位の置換基を含むが、これらに限定されない１個以上の非架橋糖糖置換基を含む置換糖部分である。２’位に好適な糖置換基の例として、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３（「ＯＭｅ」または「Ｏ−
メチル」）、および２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３（「ＭＯＥ」）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、２’位の糖置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｏ−Ｃ１〜Ｃ１０置換アルキル、ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択され、式中、各ＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。５’位の糖置換基の例には、５’−メチル（ＲまたはＳ）、５’−ビニル、および５’−メトキシが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、置換糖は、２個以上の非架橋糖置換基、例えば、２’−Ｆ−５’−メチル糖部分を含む（さらなる５’，２’−ビス置換糖部分およびヌクレオシドについては、例えば、ＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００８／１０１１５７号を参照のこと）。
【０２４１】
２’−置換糖部分を含むヌクレオシドは、２’−置換ヌクレオシドと称される。ある特定の実施形態において、２’−置換ヌクレオシドは、ハロ、アリル、アミノ、アジド、ＳＨ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ、Ｓ、またはＮ（Ｒｍ）−アルキル；Ｏ、Ｓ、またはＮ（Ｒｍ）−アルケニル；Ｏ、Ｓ、またはＮ（Ｒｍ）−アルキニル；Ｏ−アルキレニル−Ｏ−アルキル、アルキニル、アラルキル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、Ｏ−アラルキル、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）；またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、式中、各ＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈ、アミノ保護基、または置換もしくは非置換換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。これらの２’−置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ（ＮＯ２）、チオール、チオアルコキシ（Ｓ−アルキル）、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、およびアルキニルから独立して選択される１個以上の置換基とさらに置換され得る。
【０２４２】
ある特定の実施形態において、２’−置換ヌクレオシドは、Ｆ、ＮＨ２、Ｎ３、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）３ＮＨ２、ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、およびＮ−置換アセトアミド（Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、式中、各ＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈ、アミノ保護基、または置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。
【０２４３】
ある特定の実施形態において、２’−置換ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２’−置換基を含む糖部分を含む。
【０２４４】
ある特定の実施形態において、２’−置換ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ３、およびＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される２’−置換基を含む糖部分を含む。
【０２４５】
ある特定の修飾糖部分は、第２の環を形成して二環式糖部分をもたらす架橋糖置換基を含む。ある特定のそのような実施形態において、二環式糖部分は、４’フラノース環原子と２’フラノース環原子との間に橋を含む。そのような４’から２’の糖置換基の例には、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−、または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−；４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）；および４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’；ならびにこれらの類似体（例えば、２００８年７月１５日に発行された米国特許第
７，３９９，８４５号を参照のこと）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’およびその類似体（例えば、２００９年１月８日に公開された国際公開第ＷＯ２００９／００６４７８号を参照のこと）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’およびその類似体（例えば、２００８年１２月１１日に公開された国際公開第ＷＯ２００８／１５０７２９号を参照のこと）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（例えば、２００４年９月２日に公開されたＵＳ２００４／０１７１５７０号を参照のこと）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’；ならびに４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−（式中、各Ｒが、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである）；４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（式中、Ｒが、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、または保護基である）（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号を参照のこと）；４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（例えば、Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４）；ならびに４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’およびその類似体（２００８年１２月８日に公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００８／１５４４０１号を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４６】
ある特定の実施形態において、そのような４’から２’の橋は、独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、および−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１〜４の結合基を含み、
式中、
ｘは、０、１、または２であり、
ｎは、１、２、３、または４であり、
各ＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、
各Ｊ１およびＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
【０２４７】
α
二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡと称される。二環式ヌクレオシドには、以下に示される、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ（ロックド核酸またはＬＮＡとも称される）、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも称される）、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、および（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡが含まれるが、これらに限定されず、
【化１７】
2020058370.tif 000018
式中、Ｂｘは、核酸塩基部分であり、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
【０２４８】
さらなる二環式糖部分は、当技術分野で既知であり、例えば、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６、Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ
ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０、Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８、Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２９（２６）８３６２−８３７９（Ｊｕｌ．４，２００７）、Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１−７、Ｏｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９−２４３、米国特許第７，０５３，２０７号、同第６，２６８，４９０号、同第６，７７０，７４８号、同第６，７９４，４９９号、同第７，０３４，１３３号、同第６，５２５，１９１号、同第６，６７０，４６１号、および同第７，３９９，８４５号、国際公開第ＷＯ２００４／１０６３５６号、同第ＷＯ１９９４／１４２２６号、同第ＷＯ２００５／０２１５７０号、および同第ＷＯ２００７／１３４１８１号、米国特許公開第ＵＳ２００４／０１７１５７０号、同第ＵＳ２００７／０２８７８３１号、および同第ＵＳ２００８／００３９６１８号、米国特許第１２／１２９，１５４号、同第６０／９８９，５７４号、同第６１／０２６，９９５号、同第６１／０２６，９９８号、同第６１／０５６，５６４号、同第６１／０８６，２３１号、同第６１／０９７，７８７号、および同第６１／０９９，８４４号、ならびにＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４号、および同第ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２号である
。
【０２４９】
ある特定の実施形態において、二環式糖部分およびそのような二環式糖部分を組み込むヌクレオシドは、異性体配置によってさらに定義される。例えば、４’−２’メチレン−オキシ橋を含むヌクレオシドは、α−Ｌ配置またはβ−Ｄ配置であり得る。以前に、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）二環式ヌクレオシドが、アンチセンス活性を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれている（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
【０２５０】
ある特定の実施形態において、置換糖部分は、１個以上の非架橋糖置換基および１個以上の架橋糖置換基（例えば、５’−置換および４’−２’架橋糖）を含む（２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００７／１３４１８１号（ＬＮＡが例えば５’−メチルまたは５’−ビニル基で置換されている）を参照のこと）。
【０２５１】
ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、糖代理物である。ある特定のそのような実施形態において、天然に存在する糖の酸素原子は、例えば、硫黄、炭素、または窒素原子で置換される。ある特定のそのような実施形態において、そのような修飾糖部分は、上述の架橋および／または非架橋置換基も含む。例えば、ある特定の糖代理物は、４’−硫黄原子ならびに２’位（例えば、２００５年６月１６日に公開された米国特許出願第ＵＳ２００５／０１３０９２３号を参照のこと）および／または５’位での置換を含む。さらなる例として、４’−２’橋を有する炭素環式二環式ヌクレオシドが記載されている（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３、およびＡｌｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０を参照のこと）。
【０２５２】
ある特定の実施形態において、糖代理物は、５個の原子以外を有する環を含む。例えば、ある特定の実施形態において、糖代理物は、モルフォリノを含む。モルフォリノ化合物およびオリゴマー化合物におけるそれらの使用は、多数の特許および公開論文（例えば、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３−４５１０、ならびに米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、および同第５，０３４，５０６号を参照のこと）で報告されている。本明細書で使用されるとき、「モルフォリノ」という用語は、以下の構造を有する糖代理物を意味する。
【化１８】
2020058370.tif 000019
【０２５３】
ある特定の実施形態において、モルフォリノは、例えば、上述のモルフォリノ構造由来の様々な置換基を付加または変更することによって修飾され得る。そのような糖代理物は、本明細書において「修飾モルフォリノ」と称される。
【０２５４】
別の例として、ある特定の実施形態において、糖代理物は、６員テトラヒドロピランを含む。そのようなテトラヒドロピランは、さらに修飾または置換され得る。そのような修飾テトラヒドロピランを含むヌクレオシドには、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール核酸（ＡＮＡ）、マニトール核酸（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ，ＣＪ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００２）１０：８４１−８５４を参照のこと）、フルオロＨ
ＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）、および以下の式ＶＩを有する化合物が含まれるが、これらに限定されず、
【化１９】
2020058370.tif 000020
式中、独立して、式ＶＩの前記少なくとも１個のテトラヒドロピランヌクレオシド類似体の各々について、
Ｂｘは、核酸塩基部分であり、
Ｔ３およびＴ４は各々、独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合させるヌクレオシド間結合基であるか、またはＴ３およびＴ４のうちの一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合させるヌクレオシド間結合基であり、Ｔ３およびＴ４のうちの他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、結合共役基、または５’もしくは３’−末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７は各々、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、または置換Ｃ２〜Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１およびＲ２の各々は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、およびＣＮの中から独立して選択され、式中、Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２、およびＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【０２５５】
ある特定の実施形態において、式ＶＩの修飾ＴＨＰヌクレオシドが提供され、式中、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７は各々、Ｈである。ある特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７のうちの少なくとも１つは、Ｈ以外である。ある特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、およびｑ７のうちの少なくとも１つは、メチルである。ある特定の実施形態において、式ＶＩのＴＨＰヌクレオシドが提供され、式中、Ｒ１およびＲ２のうちの一方がＦである。ある特定の実施形態において、Ｒ１がフルオロであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ１がメトキシであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ１がメトキシエトキシであり、Ｒ２がＨである。
【０２５６】
アンチセンス化合物への組み込みのためにヌクレオシドを修飾するために用いられ得る多くの他のビシクロおよびトリシクロ糖代理物環系も当技術分野で既知である（例えば、総説：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｊ．Ｃ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，１０，８４１−８５４を参照のこと）。
【０２５７】
２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについては、２００８年８月２１日に公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００８／１０１１５７号を参照のこと）、ならびにリボシル環酸素原子のＳとの置換および２’位でのさらなる置換（２００５年６月１６日に公開された米国特許出願第ＵＳ２００５−０１３０９２３号を参照のこと）、またはあるいは二環式核酸の５’−置換（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’二環式ヌクレオシドが５’位で５’−メチルまたは５’−ビニル基でさらに置換される、２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００７／１３４１８１号を参照のこと）等であるが、これらに限定されない修飾の組み合わせも提供される。炭素環式二環式ヌクレオシドのオリゴマー化および生化学的研究に加えて、それらの合成および調製も記載されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ
．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９を参照のこと）。
【０２５８】
ある特定の実施形態において、本開示は、修飾ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを提供する。これらの修飾ヌクレオチドは、修飾糖、修飾核酸塩基、および／または修飾結合を含み得る。特異的修飾は、結果として生じるオリゴヌクレオチドが望ましい特徴を有するように選択される。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１個以上のＲＮＡ様ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１個以上のＤＮＡ様ヌクレオチドを含む。
２．ある特定の核酸塩基修飾
【０２５９】
ある特定の実施形態において、本開示のヌクレオシドは、１個以上の非修飾核酸塩基を含む。ある特定の実施形態において、本開示のヌクレオシドは、１個以上の修飾核酸塩基を含む。
【０２６０】
ある特定の実施形態において、修飾核酸塩基は、本明細書で定義されるユニバーサル塩基、疎水性塩基、乱交雑塩基、サイズ拡大塩基、およびフッ素化塩基から選択される。５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、ならびにＮ−２、Ｎ−６、およびＯ−６置換プリンには、本明細書で定義される、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル；５−プロピニルシトシン；５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、２−プロピルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニル（−ＣoＣ−ＣＨ３）ウラシルならびにシトシンおよびピリミジン塩基の
他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルならびに他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に、５−ブロモ、５−トリフルオロメチルならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニン、３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニン、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、乱交雑塩基、サイズ拡大塩基、およびフッ素化塩基が含まれる。さらに、修飾核酸塩基には、三環式ピリミジン、例えば、フェノキサジンシチジン（［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾチアジン−２（３Ｈ）−オン）、Ｇ−クランプ、例えば、置換フェノキサジンシチジン（例えば、９−（２−アミノエトキシ）−Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−２−オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ−ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−オン）が含まれる。修飾核酸塩基には、プリンまたはピリミジン塩基が、他の複素環、例えば、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、および２−ピリドンに置換される塩基も含まれ得る。さらに、核酸塩基には、米国特許第３，６８７，８０８号に開示される塩基、Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  Ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．，Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９０，８５８−８５９に開示される塩基、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３によって開示される塩基、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄｓ．，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３，２７３−２８８
によって開示される塩基が含まれる。
【０２６１】
上述の修飾核酸塩基ならびに他の修飾核酸塩基のある特定の調製を教示する代表的な米国特許には、米国特許第３，６８７，８０８号、同第４，８４５，２０５号、同第５，１３０，３０２号、同第５，１３４，０６６号、同第５，１７５，２７３号、同第５，３６７，０６６号、同第５，４３２，２７２号、同第５，４５７，１８７号、同第５，４５９，２５５号、同第５，４８４，９０８号、同第５，５０２，１７７号、同第５，５２５，７１１号、同第５，５５２，５４０号、同第５，５８７，４６９号、同第５，５９４，１２１号、同第５，５９６，０９１号、同第５，６１４，６１７号、同第５，６４５，９８５号、同第５，６８１，９４１号、同第５，７５０，６９２号、同第５，７６３，５８８号、同第５，８３０，６５３号、および同第６，００５，０９６号が含まれるが、これらに限定されず、これらのある特定の特許は、本出願と共同所有されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
３．ある特定のヌクレオシド間結合
【０２６２】
ある特定の実施形態において、本開示は、連結したヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを提供する。そのような実施形態において、ヌクレオシドは、任意のヌクレオシド間結合を用いて一緒に連結され得る。ヌクレオシド間結合基の２つの主なクラスは、リン原子の存在または不在によって定義される。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル（ＰＯ）、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデート、およびホスホロチオエート（ＰＳ）を含むが、これらに限定されない。代表的な非リン含有ヌクレオシド間結合基は、メチレンメチルイミノ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−）、チオジエステル（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−）、チオノカルバメート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）（ＮＨ）−Ｓ−）、シロキサン（−Ｏ−Ｓｉ（Ｈ）２−Ｏ−）、およびＮ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３）−）を含むが、これらに限定されない。修飾結合は、天然ホスホジエステル結合と比較して、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を変化させる、典型的には、増加させるために用いられ得る。ある特定の実施形態において、キラル原子を有するヌクレオシド間結合は、ラセミ混合物として、または別個の鏡像異性体として調製され得る。代表的なキラル結合は、アルキルホスホネートおよびホスホロチオエートを含むが、これらに限定されない。リン含有および非リン含有ヌクレオシド間結合の調製方法は、当業者に周知である。
【０２６３】
本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の不斉中心を含有し、それ故に、絶対立体化学の点で、（Ｒ）もしくは（Ｓ）、糖アノマー等の場合、αもしくはβ、またはアミノ酸等の場合、（Ｄ）もしくは（Ｌ）と定義され得る、鏡像異性体、ジアステレオマー、および他の立体異性体配置を生じさせる。本明細書に提供されるアンチセンス化合物には、すべてのそのような考えられる異性体、ならびにそれらのラセミ形態および光学的に純粋な形態が含まれる。
【０２６４】
中性ヌクレオシド間結合には、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ＭＭＩ（３’−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−５’）、アミド−３（３’−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−５’）、アミド−４（（３’−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−５’）、ホルムアセタール（３’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−５’）、およびチオホルムアセタール（３’−Ｓ−ＣＨ２−Ｏ−５’）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、中性ヌクレオシド間結合には、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボン酸エステル、カルボキサミド、硫化物、スルホン酸エステル、およびアミドを含む非イオン性結合が含まれる（例えば、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｃｏｏｋ，Ｅｄｓ．，ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５８０；Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ３  ａｎｄ  ４，４０−６５を参照のこと）。さらに、中性ヌクレオシド間結合には、混合したＮ、Ｏ、
Ｓ、およびＣＨ２成分部分を含む非イオン性結合が含まれる。
４．ある特定のモチーフ
【０２６５】
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１個以上の修飾ヌクレオシド（例えば、修飾糖および／または修飾核酸塩基を含むヌクレオシド）ならびに／または１個以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。オリゴヌクレオチドにおけるそのような修飾のパターンは、本明細書においてモチーフと称される。ある特定の実施形態において、糖、核酸塩基、および結合モチーフは、互いに独立している。
ａ．ある特定の糖モチーフ
【０２６６】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、定義されたパターンまたは糖修飾モチーフでオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配置された１種類以上の修飾糖部分および／または天然に存在する糖部分を含む。そのようなモチーフは、本明細書で論じられる糖修飾および／または他の既知の糖修飾のうちのいずれかを含み得る。
【０２６７】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、２個の外部領域または「ウィング」および中央もしくは内部領域または「ギャップ」を含むギャップマー糖モチーフを有する領域を含むか、またはそれからなる。ギャップマー糖モチーフの３個の領域（５’−ウィング、ギャップ、および３’−ウィング）は、ヌクレオシドの連続した配列を形成し、これらのウィングの各々のヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部は、このギャップのヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部とは異なる。具体的には、少なくとも、ギャップに最も近い（５’−ウィングの最も３’側のヌクレオシドおよび３’−ウィングの最も５’側のヌクレオシド）各ウィングのヌクレオシドの糖部分が、隣接するギャップヌクレオシドの糖部分とは異なり、それ故に、ウィングとギャップとの間の境界を定義する。ある特定の実施形態において、ギャップ内の糖部分は、互いに同一である。ある特定の実施形態において、ギャップは、ギャップの１個以上の他のヌクレオシドの糖部分とは異なる糖部分を有する１個以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、２個のウィングの糖モチーフは、互いに同一である（対称性糖ギャップマー）。ある特定の実施形態において、５’−ウィングの糖モチーフは、３’−ウィングの糖モチーフとは異なる（不斉糖ギャップマー）。
ｉ．ある特定の５’−ウィング
【０２６８】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１〜８個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１〜７個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１〜６個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１〜５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、２〜５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、３〜５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、４または５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１〜４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１〜３個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１または２個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、２〜４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、２または３個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、３または４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、１個のヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャッ
プマーの５’−ウィングは、２個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、３個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、６個の連結したヌクレオシドからなる。
【０２６９】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも２個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも３個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも４個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、拘束エチルヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。
【０２７０】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、非二環式修飾ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−置換ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−ＯＭｅヌクレオシドである。
【０２７１】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個のリボヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングの各ヌクレオシドは、リボヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、５’−ウィングのヌクレオシドのうちの１個、２個以上、または各々は、ＲＮＡ様ヌクレオシドである。
【０２７２】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
【０２７３】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの５’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
ｉｉ．ある特定の３’−ウィング
【０２７４】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１〜８個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１〜７個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１〜６個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１〜５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、２〜５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、３〜５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、４または５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１〜４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１〜３個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１または２個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、２〜４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、２または３個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、３または４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、１個のヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、２個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、３個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、４個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、６個の連結したヌクレオシドからなる。
【０２７５】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、拘束エチルヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。
【０２７６】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも２個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態にお
いて、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも３個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも４個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、非二環式修飾ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−置換ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−ＯＭｅヌクレオシドである。
【０２７７】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のリボヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングの各ヌクレオシドは、リボヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、５’−ウィングのヌクレオシドのうちの１個、２個以上、または各々は、ＲＮＡ様ヌクレオシドである。
【０２７８】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
【０２７９】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
【０２８０】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシドおよび少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシドおよび少なくとも１個の
２’−ＯＭｅヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシドおよび少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
【０２８１】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシド、少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシド、少なくとも１個の非二環式修飾ヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
【０２８２】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシド、少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシド、少なくとも１個の２’−置換ヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
【０２８３】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシド、少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシド、少なくとも１個の２’−ＭＯＥヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
【０２８４】
ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の二環式ヌクレオシド、少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの３’−ウィングは、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオシド、少なくとも１個の２’−ＯＭｅヌクレオシド、および少なくとも１個の２’−デオキシヌクレオシドを含む。
ｉｉｉ．ある特定の中央領域（ギャップ）
【０２８５】
ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６〜２０個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６〜１５個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６〜１２個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６〜１０個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６〜９個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６〜８個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６または７個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャッ
プは、７〜１０個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、７〜９個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、７または８個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、８〜１０個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、８または９個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、６個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、７個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、８個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、９個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、１０個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、１１個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、１２個の連結したヌクレオシドからなる。
【０２８６】
ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップの各ヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップは、１個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップの各ヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドであるか、または「ＤＮＡ様」の修飾ヌクレオシドである。そのような実施形態において、「ＤＮＡ様」とは、ギャップマーおよびＲＮＡ分子を含む二本鎖がＲＮａｓｅ  Ｈを活性化することができるようにヌクレオシドがＤＮＡと同様の特徴を有することを意味する。例えば、ある特定の条件下で、２’−（ａｒａ）−Ｆは、ＲＮａｓｅ  Ｈの活性化を支援することが示されており、それ故に、ＤＮＡ様である。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップの１個以上のヌクレオシドは、２’−デオキシヌクレオシドではなく、ＤＮＡ様でもない。ある特定のそのような実施形態において、ギャップマーは、それでもやはり、ＲＮａｓｅ  Ｈの活性化を支援する（例えば、非ＤＮＡヌクレオシドの数または設置のおかげで）。
【０２８７】
ある特定の実施形態において、ギャップは、１個以上の修飾ヌクレオシドによって中断された一続きの非修飾２’−デオキシヌクレオシドを含み、それ故に、３個のサブ領域（２つの一続きの、１個以上の２’−デオキシヌクレオシドおよび一続きの１個以上の中断修飾ヌクレオシド）をもたらす。ある特定の実施形態において、いずれの一続きの非修飾２’−デオキシヌクレオシドも、５、６、または７個のヌクレオシドより短い。ある特定の実施形態において、そのような短い続きは、短いギャップ領域を用いることによって達成される。ある特定の実施形態において、短い一続きは、より長いギャップ領域を中断することによって達成される。
【０２８８】
ある特定の実施形態において、ギャップは、１個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、ｃＥｔ、ＦＨＮＡ、ＬＮＡ、および２−チオ−チミジンの中から選択される１個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、１個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、５’−Ｍｅおよび５’−（Ｒ）−Ｍｅの中から選択される５’−置換糖部分を含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、２個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、３個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、４個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、２個以上の修飾ヌクレオシドを含み、各修飾ヌクレオシドは同一である。ある特定の実施形態において、ギャップは、２個以上の修飾ヌクレオシドを含み、各修飾ヌクレオシドは異なる。
【０２８９】
ある特定の実施形態において、ギャップは、１個以上の修飾結合を含む。ある特定の実
施形態において、ギャップは、１個以上のメチルホスホネート結合を含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、２個以上の修飾結合を含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、１個以上の修飾結合および１個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、１個の修飾結合および１個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、２個の修飾結合および２個以上の修飾ヌクレオシドを含む。
ｂ．ある特定のヌクレオシド間結合モチーフ
【０２９０】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、定義されたパターンまたは修飾ヌクレオシド間結合モチーフでオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配置された修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、交互のヌクレオシド間結合モチーフを有する領域を含む。ある特定の実施形態において、本開示のオリゴヌクレオチドは、均一に修飾されたヌクレオシド間結合の領域を含む。ある特定のそのような実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって均一に連結された領域を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって均一に連結される。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルおよびホスホロチオエートから選択される。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルおよびホスホロチオエートから選択され、少なくとも１個のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートである。
【０２９１】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも７個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも９個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１１個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１３個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。
【０２９２】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも７個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも９個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１個の１２個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも１個のブロックを含む。ある特定のそのような実施形態において、少なくとも１個のそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端に位置する。ある特定のそのような実施形態において、少なくとも１個のそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端の３個のヌクレオシド内に位置する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１５個未満のホスホロ
チオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１４個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１３個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１２個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１１個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１０個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、９個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、８個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、７個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、６個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、５個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。
ｃ．ある特定の核酸塩基修飾モチーフ
【０２９３】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、定義されたパターンまたは核酸塩基修飾モチーフでオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配置された核酸塩基に対する化学修飾を含む。ある特定のそのような実施形態において、核酸塩基修飾は、ギャップモチーフで配置される。ある特定の実施形態において、核酸塩基修飾は、交互のモチーフで配置される。ある特定の実施形態において、各核酸塩基が修飾される。ある特定の実施形態において、核酸塩基のうちのいずれも化学修飾されない。
【０２９４】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、修飾核酸塩基のブロックを含む。ある特定のそのような実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端に存在する。ある特定の実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端の３個のヌクレオチド内に存在する。ある特定のそのような実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの５’末端に存在する。ある特定の実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの５’末端の３個のヌクレオチド内に存在する。
【０２９５】
ある特定の実施形態において、核酸塩基修飾は、オリゴヌクレオチドの特定の位置における天然塩基の機能である。例えば、ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各プリンまたは各ピリミジンが修飾される。ある特定の実施形態において、各アデニンが修飾される。ある特定の実施形態において、各グアニンが修飾される。ある特定の実施形態において、各チミンが修飾される。ある特定の実施形態において、各シトシンが修飾される。ある特定の実施形態において、各ウラシルが修飾される。
【０２９６】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドのシトシン部分のうちのいくつかもしくはすべてが５−メチルシトシン部分であるか、またはいずれも５−メチルシトシン部分ではない。本明細書において、５−メチルシトシンは、「修飾核酸塩基」ではない。したがって、別途示されない限り、非修飾核酸塩基は、５−メチルを有するシトシン残基および５−メチルを欠くシトシン残基の両方を含む。ある特定の実施形態において、すべてまたはいくつかのシトシン核酸塩基のメチル化状態が特定される。
【０２９７】
ある特定の実施形態において、核酸塩基に対する化学修飾は、ある特定の共役基の核酸塩基への結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各プリンまたは各ピリミジンは、共役基を含むように任意に修飾され得る。
ｄ．ある特定の全長
【０２９８】
ある特定の実施形態において、本開示は、様々な範囲の長さのうちのいずれかのオリゴ
ヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、Ｘ〜Ｙ個の連結したヌクレオシドからなり、ここで、Ｘは、その範囲の最小数のヌクレオシドを表し、Ｙは、その範囲の最大数のヌクレオシドを表す。ある特定のそのような実施形態において、ＸおよびＹは各々、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０から独立して選択されるが、但し、ＸがＹ以下であることを条件とする。例えば、ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、８〜９、８〜１０、８〜１１、８〜１２、８〜１３、８〜１４、８〜１５、８〜１６、８〜１７、８〜１８、８〜１９、８〜２０、８〜２１、８〜２２、８〜２３、８〜２４、８〜２５、８〜２６、８〜２７、８〜２８、８〜２９、８〜３０、９〜１０、９〜１１、９〜１２、９〜１３、９〜１４、９〜１５、９〜１６、９〜１７、９〜１８、９〜１９、９〜２０、９〜２１、９〜２２、９〜２３、９〜２４、９〜２５、９〜２６、９〜２７、９〜２８、９〜２９、９〜３０、１０〜１１、１０〜１２、１０〜１３、１０〜１４、１０〜１５、１０〜１６、１０〜１７、１０〜１８、１０〜１９、１０〜２０、１０〜２１、１０〜２２、１０〜２３、１０〜２４、１０〜２５、１０〜２６、１０〜２７、１０〜２８、１０〜２９、１０〜３０、１１〜１２、１１〜１３、１１〜１４、１１〜１５、１１〜１６、１１〜１７、１１〜１８、１１〜１９、１１〜２０、１１〜２１、１１〜２２、１１〜２３、１１〜２４、１１〜２５、１１〜２６、１１〜２７、１１〜２８、１１〜２９、１１〜３０、１２〜１３、１２〜１４、１２〜１５、１２〜１６、１２〜１７、１２〜１８、１２〜１９、１２〜２０、１２〜２１、１２〜２２、１２〜２３、１２〜２４、１２〜２５、１２〜２６、１２〜２７、１２〜２８、１２〜２９、１２〜３０、１３〜１４、１３〜１５、１３〜１６、１３〜１７、１３〜１８、１３〜１９、１３〜２０、１３〜２１、１３〜２２、１３〜２３、１３〜２４、１３〜２５、１３〜２６、１３〜２７、１３〜２８、１３〜２９、１３〜３０、１４〜１５、１４〜１６、１４〜１７、１４〜１８、１４〜１９、１４〜２０、１４〜２１、１４〜２２、１４〜２３、１４〜２４、１４〜２５、１４〜２６、１４〜２７、１４〜２８、１４〜２９、１４〜３０、１５〜１６、１５〜１７、１５〜１８、１５〜１９、１５〜２０、１５〜２１、１５〜２２、１５〜２３、１５〜２４、１５〜２５、１５〜２６、１５〜２７、１５〜２８、１５〜２９、１５〜３０、１６〜１７、１６〜１８、１６〜１９、１６〜２０、１６〜２１、１６〜２２、１６〜２３、１６〜２４、１６〜２５、１６〜２６、１６〜２７、１６〜２８、１６〜２９、１６〜３０、１７〜１８、１７〜１９、１７〜２０、１７〜２１、１７〜２２、１７〜２３、１７〜２４、１７〜２５、１７〜２６、１７〜２７、１７〜２８、１７〜２９、１７〜３０、１８〜１９、１８〜２０、１８〜２１、１８〜２２、１８〜２３、１８〜２４、１８〜２５、１８〜２６、１８〜２７、１８〜２８、１８〜２９、１８〜３０、１９〜２０、１９〜２１、１９〜２２、１９〜２３、１９〜２４、１９〜２５、１９〜２６、１９〜２９、１９〜２８、１９〜２９、１９〜３０、２０〜２１、２０〜２２、２０〜２３、２０〜２４、２０〜２５、２０〜２６、２０〜２７、２０〜２８、２０〜２９、２０〜３０、２１〜２２、２１〜２３、２１〜２４、２１〜２５、２１〜２６、２１〜２７、２１〜２８、２１〜２９、２１〜３０、２２〜２３、２２〜２４、２２〜２５、２２〜２６、２２〜２７、２２〜２８、２２〜２９、２２〜３０、２３〜２４、２３〜２５、２３〜２６、２３〜２７、２３〜２８、２３〜２９、２３〜３０、２４〜２５、２４〜２６、２４〜２７、２４〜２８、２４〜２９、２４〜３０、２５〜２６、２５〜２７、２５〜２８、２５〜２９、２５〜３０、２６〜２７、２６〜２８、２６〜２９、２６〜３０、２７〜２８、２７〜２９、２７〜３０、２８〜２９、２８〜３０、または２９〜３０個の連結したヌクレオシドからなり得る。ある範囲またはある特定の数にかかわらず、化合物のオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの数が限定される実施形態において、この化合物は、それでもやはり、さらなる他の置換基をさらに含み得る。例えば、８〜３０個のヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、３１個のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドを除外するが、別途示されない限り、そのようなオリゴヌクレオチドは、例えば、１
個以上の共役基、末端基、または他の置換基をさらに含み得る。
【０２９９】
さらに、オリゴヌクレオチドが全長範囲および特定の長さを有する領域によって説明され、かつそれらの領域の特定の長さの合計が全長範囲の上限未満である場合、オリゴヌクレオチドは、特定の領域の長さを超えてさらなるヌクレオシドを有し得るが、但し、ヌクレオシドの総数が全長範囲の上限を超えないことを条件とする。
５．ある特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドの化学的モチーフ
【０３００】
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの化学構造的特徴は、それらの糖モチーフ、ヌクレオシド間結合モチーフ、核酸塩基修飾モチーフ、および全長によって特徴付けられる。ある特定の実施形態において、そのようなパラメータは各々、互いに独立している。したがって、ギャップマー糖モチーフを有するオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾されても修飾されなくてもよく、糖修飾のギャップマー修飾パターンに従っても従わなくてもよい。したがって、糖ギャップマーのウィング領域内のヌクレオシド間結合は、互いに同一であるか、または異なり得、ギャップ領域のヌクレオシド間結合と同一であるか、または異なり得る。同様に、そのような糖ギャップマーオリゴヌクレオチドは、糖修飾のギャップマーパターンから独立して１個以上の修飾核酸塩基を含み得る。当業者であれば、そのようなモチーフが組み合わされて様々なオリゴヌクレオチドを作成し得ることを認識する。
【０３０１】
ある特定の実施形態において、ヌクレオシド間結合およびヌクレオシド修飾の選択は、互いに独立していない。
ｉ．ある特定の配列および標的
【０３０２】
ある特定の実施形態において、本発明は、標的核酸に相補的な配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。そのようなアンチセンス化合物は、標的核酸にハイブリダイズすることができ、少なくとも１つのアンチセンス活性をもたらす。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、１個以上の標的核酸に特異的にハイブリダイズする。ある特定の実施形態において、特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合物は、標的核酸に対して、ハイブリダイゼーションを可能にし、かつアンチセンス活性をもたらすのに十分な相補性と、任意の非標的に対して、特異的ハイブリダイゼーションが所望される条件下（例えば、生体内または治療的使用のために生理学的条件下、かつ生体外アッセイの場合、アッセイが実行される条件下）で非標的核酸配列への非特異的ハイブリダイゼーションを回避するか、または減少させるのに不十分な相補性とを有する領域を含む核酸塩基配列と、を有する。ある特定の実施形態において、標的および非標的が両方ともに標的配列を含むが、オリゴヌクレオチドは、標的と非標的との間で選択的である。そのような実施形態において、選択性は、一方の核酸分子と比較した他方の核酸分子の標的領域の相対近接性に起因し得る。
【０３０３】
ある特定の実施形態において、本開示は、オリゴヌクレオチドの全長にわたって標的核酸に完全に相補的なオリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸に９９％相補的である。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸に９５％相補的である。ある特定の実施形態において、そのようなオリゴヌクレオチドは、標的核酸に９０％相補的である。
【０３０４】
ある特定の実施形態において、そのようなオリゴヌクレオチドは、標的核酸に８５％相補的である。ある特定の実施形態において、そのようなオリゴヌクレオチドは、標的核酸に８０％相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸に完全に相補的であり、かつオリゴヌクレオチドの全長にわたって標的核酸に少なくとも
８０％相補的な領域を含む。ある特定のそのような実施形態において、完全な相補性の領域は、６〜１４核酸塩基長である。
【０３０５】
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイズ領域および末端領域を含む。ある特定のそのような実施形態において、ハイブリダイズ領域は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、標的核酸に完全に相補的である。ある特定の実施形態において、ハイブリダイズ領域は、標的核酸と比較して、１つのミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、ハイブリダイズ領域は、標的核酸と比較して、２つのミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、ハイブリダイズ領域は、標的核酸と比較して、３つのミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、末端領域は、１〜４個の末端ヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、末端ヌクレオシドは、３’末端に存在する。ある特定の実施形態において、末端ヌクレオシドのうちの１個以上は、標的核酸に相補的ではない。
【０３０６】
アンチセンス機構は、標的核酸とのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを伴う任意の機構を含み、このハイブリダイゼーションは、生物学的効果をもたらす。ある特定の実施形態において、そのようなハイブリダイゼーションは、例えば、標的核酸の翻訳、転写、またはスプライシングを伴う細胞機構の同時に起こる阻害または刺激による標的核酸分解または占有のいずれかをもたらす。
【０３０７】
標的ＲＮＡの分解を伴う一種のアンチセンス機構は、ＲＮａｓｅ  Ｈ媒介アンチセンスである。ＲＮａｓｅ  Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。「ＤＮＡ様」の一本鎖アンチセンス化合物が哺乳類細胞におけるＲＮａｓｅ  Ｈ活性を誘発することが当技術分野で既知である。したがって、ＲＮａｓｅ  Ｈの活性化は、ＲＮＡ標的の切断をもたらし、それにより遺伝子発現のＤＮＡ様オリゴヌクレオチド媒介阻害の効率を大幅に向上させる。
【０３０８】
ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、１個以上の切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、細胞標的部分（細胞標的基とも称される）を含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、分岐基を含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、１個以上のテザーを含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、炭水化物または炭水化物クラスターを含む。
ｉｉ．ある特定の切断可能な部分
【０３０９】
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能な結合である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分を含む。ある特定のそのような実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに結合する。ある特定のそのような実施形態において、切断可能な部分は、細胞標的部分に直接結合する。ある特定のそのような実施形態において、切断可能な部分は、共役リンカーに結合する。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスフェートまたはホスホジエステルを含む。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能なヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体である。ある特定の実施形態において、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体は、プリン、置換プリン、ピリミジン、または置換ピリミジンから選択される任意に保護された複素環式塩基を含む。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ウラシル、チミン、シトシン、４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、５−メチルシトシン、４−Ｎ−ベンゾイル−５−メチルシトシン、アデニン、６−Ｎ−ベンゾイルアデニン、グアニン、および２−Ｎ−イソブチリルグアニンから選択される任意に保護された複素環式塩基を含むヌクレオシ
ドである。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に結合され、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合によってリンカーに結合される２’−デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に結合され、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合によってリンカーに結合される２’−デオキシアデノシンである。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に結合され、かつホスホジエステル結合によってリンカーに結合される２’−デオキシアデノシンである。
【０３１０】
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’位に結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの２’位に結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合のいずれかによってリンカーに結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってリンカーに結合される。ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分を含まない。
【０３１１】
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、標的細胞によって内部に取り入れられた後にのみ、複合体が動物に投与された後に切断される。細胞内で切断可能な部分が切断され、それにより活性アンチセンスオリゴヌクレオチドを放出する。理論によって束縛されることを望むものではないが、切断可能な部分が細胞内で１個以上のヌクレアーゼによって切断されることが考えられる。ある特定の実施形態において、１個以上のヌクレアーゼは、切断可能な部分とリンカーとの間のホスホジエステル結合を切断する。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下の中から選択される構造を有し、
【化２０】
2020058370.tif 000021
式中、Ｂｘ、Ｂｘ１、Ｂｘ２、およびＢｘ３の各々は、独立して、複素環式塩基部分である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下の中から選択される構造を有する。
【化２１】
2020058370.tif 000022
ｉｉｉ．ある特定のリンカー
【０３１２】
ある特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含む。ある特定のそのような実施形態において、リンカーは、切断可能な部分に共有結合される。ある特定のそのような実施形態において、リンカーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。ある特定の実施形態において、リンカーは、細胞標的部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分への共有結合をさらに含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含み、タンパク質結合部分への共有結合もさらに含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、テザーリガンドの結合のために複数の位置を含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、テザーリガンドの結合のために複数の位置を含み、分岐基に結合されない。ある特定の実施形態において、リンカーは、１個以上の切断可能な結合をさらに含む。ある特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含まない。
【０３１３】
ある特定の実施形態において、リンカーは、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル（−Ｓ−）、およびヒドロキシルアミノ（−Ｏ−Ｎ（Ｈ）−）基から選択される基を含む少なくとも１個の線状基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、アルキル、アミド、およびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、アルキルおよびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、少なくとも１個のリン結合基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、少なくとも１個のホスホジエステル基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、少なくとも１個の中性結合基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分および切断可能な部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分およびアンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分、切断可能な部分、および固体支持体に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分、切断可能な部分、固体支持体、およびタンパク質結合部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、１個以上の切断可能な結合を含む。
【０３１４】
ある特定の実施形態において、リンカーは、足場基に共有結合される線状基を含む。ある特定の実施形態において、足場は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、およびヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。ある特定の実施形態において、足場は、アルキル、アミド、およびエーテル基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。ある特定の実施形態において、足場は、少なくとも１個の単環式または多環式環系を含む。ある特定の実施形態において、足場は、少なくとも２個の単環式または多環式環系を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分およびリンカーに共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分、リンカー、および固体支持体に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分、リンカ
ー、およびタンパク質結合部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分、リンカー、タンパク質結合部分、および固体支持体に共有結合される。ある特定の実施形態において、足場基は、１個以上の切断可能な結合を含む。
【０３１５】
ある特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分を含む。ある特定の実施形態において、タンパク質結合部分は、例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ビタミン（例えば、葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム溶解成分、ステロイド（例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）、またはカチオン性脂質を含むが、これらに限定されない脂質である。ある特定の実施形態において、タンパク質結合部分は、Ｃ１６〜Ｃ２２長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンＥ、アダマンタン、または１−ペンタフルオロプロピルである。
【０３１６】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化２２】
2020058370.tif 000023
式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、ｐは、１〜６である。
【０３１７】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化２３】
2020058370.tif 000024
式中、各ｎは、独立して、１〜２０である。
【０３１８】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化２４】
2020058370.tif 000025
式中、ｎは、１〜２０である。
【０３１９】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化２５】
2020058370.tif 000026
式中、各Ｌは、独立して、リン結合基または中性結合基であり、
各ｎは、独立して、１〜２０である。
【０３２０】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化２６】
2020058370.tif 000027
【化２６−２】
2020058370.tif 000028
【０３２１】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化２７】
2020058370.tif 000029
【０３２２】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化２８】
2020058370.tif 000030
【０３２３】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化２９】
2020058370.tif 000031
式中、ｎは、１〜２０である。
【０３２４】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化３０】
2020058370.tif 000032
【０３２５】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化３１】
2020058370.tif 000033
【０３２６】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化３２】
2020058370.tif 000034
【０３２７】
ある特定の実施形態において、共役リンカーは、以下の構造を有する。
【化３３】
2020058370.tif 000035
【０３２８】
ある特定の実施形態において、共役リンカーは、以下の構造を有する。
【化３４】
2020058370.tif 000036
【０３２９】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化３５】
2020058370.tif 000037
【０３３０】
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化３６】
2020058370.tif 000038
式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
ｉｖ．ある特定の細胞標的部分
【０３３１】
ある特定の実施形態において、共役基は、細胞標的部分を含む。ある特定のそのような
細胞標的部分は、アンチセンス化合物の細胞取り込みを増加させる。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、分岐基、１個以上のテザー、および１個以上のリガンドを含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、分岐基、１個以上のテザー、１個以上のリガンド、および１個以上の切断可能な結合を含む。
１．ある特定の分岐基
【０３３２】
ある特定の実施形態において、共役基は、分岐基および少なくとも２個のテザーリガンドを含む標的部分を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、共役リンカーを結合する。ある特定の実施形態において、分岐基は、切断可能な部分を結合する。ある特定の実施形態において、分岐基は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを結合する。ある特定の実施形態において、分岐基は、リンカーおよびテザーリガンドの各々に共有結合される。ある特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテルおよびヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、およびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、アルキルおよびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、単環式または多環式環系を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、１個以上の切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、分岐基を含まない。
【０３３３】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
【化３７】
2020058370.tif 000039
【化３７−２】
2020058370.tif 000040
式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、
ｊは、１〜３であり、
ｍは、２〜６である。
【０３３４】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
【化３８】
2020058370.tif 000041
式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、
ｍは、２〜６である。
【０３３５】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
【化３９】
2020058370.tif 000042
【０３３６】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
【化４０】
2020058370.tif 000043
式中、各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎは、独立して、１〜２０である。
【０３３７】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
【化４１】
2020058370.tif 000044
式中、各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎは、独立して、１〜２０である。
【０３３８】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
【化４２】
2020058370.tif 000045
式中、Ａ１は、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎは、独立して、１〜２０である。
【０３３９】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
【化４３】
2020058370.tif 000046
【０３４０】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
【化４４】
2020058370.tif 000047
【０３４１】
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
【化４５】
2020058370.tif 000048
２．ある特定のテザー
【０３４２】
ある特定の実施形態において、共役基は、分岐基に共有結合される１個以上のテザーを含む。ある特定の実施形態において、共役基は、結合基に共有結合される１個以上のテザーを含む。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、およびポリエチレングリコール基から
選択される１個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、置換アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、ホスホジエステルおよびポリエチレングリコール基から選択される１個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、エーテル、およびアミド基から選択される１個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、置換アルキル、ホスホジエステル、エーテル、およびアミド基から選択される１個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキルおよびホスホジエステルから選択される１個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１個のリン結合基または中性結合基を含む。
【０３４３】
ある特定の実施形態において、テザーは、１個以上の切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、ホスホジエステル基を介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、リン結合基または中性結合基を介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。
【０３４４】
ある特定の実施形態において、各テザーは、リガンドと分岐基との間に約８〜約２０の原子鎖長を含む。ある特定の実施形態において、各テザー基は、リガンドと分岐基との間に約１０〜約１８の原子鎖長を含む。ある特定の実施形態において、各テザー基は、約１３の原子鎖長を含む。
【０３４５】
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化４６】
2020058370.tif 000049
式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、
各ｐは、１〜約６である。
【０３４６】
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化４７】
2020058370.tif 000050
【０３４７】
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化４８】
2020058370.tif 000051
式中、各ｎは、独立して、１〜２０である。
【０３４８】
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化４９】
2020058370.tif 000052
式中、Ｌは、リン結合基または中性結合基のいずれかであり、
Ｚ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
各ｍ１は、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１は、各テザーに対して０を超える。
【０３４９】
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有する。
【化５０】
2020058370.tif 000053
【０３５０】
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化５１】
2020058370.tif 000054
式中、Ｚ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ１は、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１は、各テザーに対して０を超える。
【０３５１】
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
【化５２】
2020058370.tif 000055
式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
【０３５２】
ある特定の実施形態において、テザーは、リン結合基を含む。ある特定の実施形態において、テザーは、いかなるアミド結合も含まない。ある特定の実施形態において、テザーは、リン結合基を含み、いかなるアミド結合も含まない。
３．ある特定のリガンド
【０３５３】
ある特定の実施形態において、本開示は、各リガンドがテザーに共有結合されるリガンドを提供する。ある特定の実施形態において、各リガンドは、標的細胞において少なくとも１種類の受容体に対する親和性を有するように選択される。ある特定の実施形態において、哺乳類肝臓細胞の表面において少なくとも１種類の受容体に対する親和性を有するリガンドが選択される。ある特定の実施形態において、肝アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ−Ｒ）に対する親和性を有するリガンドが選択される。ある特定の実施形態において、各リガンドは、炭水化物である。ある特定の実施形態において、各リガンドは、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトースアミン、マンノース、グルコース、グルコサミン、およびフコースから独立して選択される。ある特定の実施形態において、各リガンドは、Ｎ−アセチルガラクトースアミン（ＧａｌＮＡｃ）である。ある特定の実施形態において、標的部分は、２〜６個のリガンドを含む。ある特定の実施形態において、標的部分は、３個のリガンドを含む。ある特定の実施形態において、標的部分は、３個のＮ−アセチルガラクトースアミンリガンドを含む。
【０３５４】
ある特定の実施形態において、リガンドは、炭水化物、炭水化物誘導体、修飾炭水化物、多価炭水化物クラスター、多糖、修飾多糖、または多糖誘導体である。ある特定の実施形態において、リガンドは、アミノ糖またはチオ糖である。例えば、アミノ糖は、当技術分野で既知の任意の数の化合物、例えば、グルコサミン、シアル酸、α−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノース（ＧａｌＮＡｃ）、２−アミノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−１−カルボキシエチル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（β−ムラミン酸）、２−デオキシ−２−メチルアミノ−Ｌ−グルコピラノース、４，６−ジデオキシ−４−ホルムアミド−２，３−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−マンノピラノース、２−デオキシ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルコピラノース、およびＮ−スルホ−Ｄ−グルコサミン、およびＮ−グリコロイル−α−ノイラミン酸から選択され得る。例えば、チオ糖は、５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース、メチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、４−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノース、およびエチル３，４，６，７−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−１，５−ジチオ−α−Ｄ−グルコ−ヘプトピラノシドからなる群から選択され得る。
【０３５５】
ある特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ−ＮＡｃ」は、文献内で一般にＮ−アセチルガラクトサミンと称される２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、「Ｎ−アセチルガラクトサミン」は、２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ−ＮＡｃ」は、２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ−ＮＡｃ」は、β形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノースおよびα形態：２−（アセチルアミノ
）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースの両方を含む、２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、β形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノースおよびα形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースはどちらも、同義に使用され得る。したがって、１つの形態が示される構造において、これらの構造は、他の形態も同様に含むよう意図される。例えば、α形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースの構造が示される場合、この構造は、他の形態も同様に含むよう意図される。ある特定の実施形態において、ある特定の好ましい実施形態において、β形態：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースが好ましい実施形態である。
【化５３】
2020058370.tif 000056
【化５４】
2020058370.tif 000057
【化５５】
2020058370.tif 000058
【０３５６】
ある特定の実施形態において、１個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有し、
【化５６】
2020058370.tif 000059
式中、各Ｒ１は、ＯＨおよびＮＨＣＯＯＨから選択される。
【０３５７】
ある特定の実施形態において、１個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有する。
【化５７】
2020058370.tif 000060
【０３５８】
ある特定の実施形態において、１個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有する。
【化５８】
2020058370.tif 000061
【０３５９】
ある特定の実施形態において、１個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有する。
【化５９】
2020058370.tif 000062
ｉ．ある特定の共役体
【０３６０】
ある特定の実施形態において、共役基は、上述の構造的特徴を含む。ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有し、
【化６０】
2020058370.tif 000063
式中、各ｎは、独立して、１〜２０である。
【０３６１】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６１】
2020058370.tif 000064
【０３６２】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有し、
【化６２】
2020058370.tif 000065
式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、
Ｚは、Ｈまたは結合固体支持体であり、
Ｑは、アンチセンス化合物であり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｂｘは、複素環式塩基部分である。
【０３６３】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６３】
2020058370.tif 000066
【０３６４】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６４】
2020058370.tif 000067
【０３６５】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６５】
2020058370.tif 000068
【０３６６】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６６】
2020058370.tif 000069
【０３６７】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６７】
2020058370.tif 000070
【０３６８】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６８】
2020058370.tif 000071
【０３６９】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化６９】
2020058370.tif 000072
【０３７０】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７０】
2020058370.tif 000073
【０３７１】
ある特定の実施形態において、共役体は、ピロリジンを含まない。
【０３７２】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７１】
2020058370.tif 000074
【０３７３】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７２】
2020058370.tif 000075
【０３７４】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７３】
2020058370.tif 000076
【０３７５】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７４】
2020058370.tif 000077
【０３７６】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７５】
2020058370.tif 000078
【０３７７】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７６】
2020058370.tif 000079
【０３７８】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７７】
2020058370.tif 000080
【０３７９】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７８】
2020058370.tif 000081
【０３８０】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化７９】
2020058370.tif 000082
【０３８１】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化８０】
2020058370.tif 000083
【０３８２】
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
【化８１】
2020058370.tif 000084
【０３８３】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８２】
2020058370.tif 000085
式中、Ｘは、６〜１１個の連続結合原子の置換または非置換テザーである。
【０３８４】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８３】
2020058370.tif 000086
式中、Ｘは、１０個の連続結合原子の置換または非置換テザーである。
【０３８５】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８４】
2020058370.tif 000087
式中、Ｘは、４〜１１個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、前記テザーは、正確に１個のアミド結合を含む。
【０３８６】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８５】
2020058370.tif 000088
式中、ＹおよびＺは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から独立して選択される。
【０３８７】
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８６】
2020058370.tif 000089
式中、ＹおよびＺは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは非置換アルキル基、または正確に１個のエーテルもしくは正確に２個のエーテル、アミド、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、もしくはホスホロチオエートを含む基から独立して選択される。
【０３８８】
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８７】
2020058370.tif 000090
式中、ＹおよびＺは、Ｃ１〜Ｃ１２置換または非置換アルキル基から独立して選択される。
【０３８９】
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８８】
2020058370.tif 000091
式中、ｍおよびｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、および１２から独立して選択される。
【０３９０】
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化８９】
2020058370.tif 000092
式中、ｍは、４、５、６、７、または８であり、ｎが、１、２、３、または４である。
【０３９１】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９０】
2020058370.tif 000093
式中、Ｘは、４〜１３個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、Ｘは、エーテル基を含まない。
【０３９２】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９１】
2020058370.tif 000094
式中、Ｘは、８個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、Ｘは、エーテル基を含まない。
【０３９３】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９２】
2020058370.tif 000095
式中、Ｘは、４〜１３個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、前記テザーは、正確に１個のアミド結合を含み、Ｘは、エーテル基を含まない。
【０３９４】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９３】
2020058370.tif 000096
式中、Ｘは、４〜１３個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、前記テザーは、アミド結合および置換または非置換Ｃ２〜Ｃ１１アルキル基からなる。
【０３９５】
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９４】
2020058370.tif 000097
式中、Ｙは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、またはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から選択される。
【０３９６】
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９５】
2020058370.tif 000098
式中、Ｙは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは非置換アルキル基、またはエーテル、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、もしくはホスホロチオエートを含む基から選択される。
【０３９７】
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９６】
2020058370.tif 000099
式中、Ｙは、Ｃ１〜Ｃ１２置換または非置換アルキル基から選択される。
【０３９８】
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９７】
2020058370.tif 000100
式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２である。ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
【化９８】
2020058370.tif 000101
式中、ｎは、４、５、６、７、または８である。
【０３９９】
ある特定の実施形態において、共役体は、ピロリジンを含まない。
ｂ．ある特定の共役アンチセンス化合物
【０４００】
ある特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
【化９９】
2020058370.tif 000102
【０４０１】
式中、
【０４０２】
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能な部分であり、
Ｃは、共役リンカーであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１〜５の整数である。
【０４０３】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
【化１００】
2020058370.tif 000103
【０４０４】
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｃは、共役リンカーであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である。
【０４０５】
ある特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも１個の切断可能な結合を含む。
【０４０６】
ある特定のそのような実施形態において、分岐基は、少なくとも１個の切断可能な結合を含む。
【０４０７】
ある特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１個の切断可能な結合を含む。
【０４０８】
ある特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。
【０４０９】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
【化１０１】
2020058370.tif 000104
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能な部分であり、
Ｃは、共役リンカーであり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１〜５の整数である。
【０４１０】
ある特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
【化１０２】
2020058370.tif 000105
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｃは、共役リンカーであり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１〜５の整数である。
【０４１１】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
【化１０３】
2020058370.tif 000106
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは、切断可能な部分であり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１〜５の整数である。
【０４１２】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
【化１０４】
2020058370.tif 000107
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｄは、分岐基であり、
各Ｅは、テザーであり、
各Ｆは、リガンドであり、
ｑは、１〜５の整数である。
【０４１３】
ある特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも１個の切断可能な結合を含む。
【０４１４】
ある特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１個の切断可能な結合を含む。
【０４１５】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の中から選択される構造を有する。
【化１０５】
2020058370.tif 000108
【０４１６】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の中から選択される構造を有する。
【化１０６】
2020058370.tif 000109
【０４１７】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の中から選択される構造を有する。
【化１０７】
2020058370.tif 000110
【０４１８】
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能な部分、ならびに他の修飾のある特定の調製を教示する代表的な米国特許、米国特許
出願公開物、および国際特許出願公開物には、米国特許第５，９９４，５１７号、同第６，３００，３１９号、同第６，６６０，７２０号、同第６，９０６，１８２号、同第７，２６２，１７７号、同第７，４９１，８０５号、同第８，１０６，０２２号、同第７，７２３，５０９号、同第２００６／０１４８７４０号、同第２０１１／０１２３５２０号、国際公開第ＷＯ２０１３／０３３２３０号、および同第ＷＯ２０１２／０３７２５４号が含まれるが、これらに限定されず、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４１９】
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能な部分、ならびに他の修飾のある特定の調製を教示する代表的な出版物には、ＢＩＥＳＳＥＮ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ｏｆ  ａ  Ｔｒｉａｎｔｅｎｎａｒｙ  Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ  ｗｉｔｈ  Ｈｉｇｈ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ａｇｅｎｔ”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１８４６−１８５２、ＢＩＥＳＳＥＮ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｉｇｈ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１５３８−１５４６、ＬＥＥ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｅｗ  ａｎｄ  ｍｏｒｅ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  ｇｌｙｃｏ−ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｆ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１１）１９：２４９４−２５００、ＲＥＮＳＥＮ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｐｐｅｒ  Ｓｉｚｅ  Ｌｉｍｉｔ  ｆｏｒ  Ｕｐｐｅｒ  Ｓｉｚｅ  Ｌｉｍｉｔ  ｆｏｒ  Ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ
Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｎ  Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）２７６（４０）：３７５７７−３７５８４、ＲＥＮＳＥＮ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ−Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ  ｆｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００４）４７：５７９８−５８０８、ＳＬＩＥＤＲＥＧＴ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｃ  Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）４２：６０９−６１８、およびＶａｌｅｎｔｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｌｙｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ  ｗｉｔｈ
ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３（２），７５９−７７０が含まれるが、これらに限定されず、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４２０】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ＲＮａｓｅ  Ｈベースのオリゴヌクレオチド（ギャップマー等）またはスプライス調節オリゴヌクレオチド（完全修飾オリゴヌクレオチド等）、および少なくとも１つ、２つ、または３個のＧａｌＮＡｃ基を含む任意の共役基を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の参考文献：Ｌｅｅ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ，１９７８，６７，５０９−５１
４、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，１９８２，２５７，９３９−９４５、Ｐａｖｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ，１９８３，２２，５３９−５４８、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９８４，２３，４２５５−４２６１、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ
Ｊ，１９８７，４，３１７−３２８、Ｔｏｙｏｋｕｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ，１９９０，３１，２６７３−２６７６、Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１５３８−１５４６、Ｖａｌｅｎｔｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３，７５９−７７０、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ，１９９７，３８，３４８７−３４９０、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，１９９７，８，７６２−７６５、Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ，２００１，１１，８２１−８２９、Ｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２００１，２７６，３７５７７−３７５８４、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，２００３，３６２，３８−４３、Ｗｅｓｔｅｒｌｉｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ  Ｊ，２００４，２１，２２７−２４１、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ，２００６，１６（１９），５１３２−５１３５、Ｍａｉｅｒｈｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００７，１５，７６６１−７６７６、Ｋｈｏｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００８，１６，５２１６−５２３１、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１１，１９，２４９４−２５００、Ｋｏｒｎｉｌｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｔ
Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１２，４２５，４３−４６、Ｐｕｊｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ，２０１２，５１，７４４５−７４４８、Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１８４６−１８５２、Ｓｌｉｅｄｒｅｇｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，１９９９，４２，６０９−６１８、Ｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００４，４７，５７９８−５８０８、Ｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ，２００６，２６，１６９−１７５、ｖａｎ  Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ，２００４，１１，４５７−４６４、Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ，２００４，１２６，１４０１３−１４０２２、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ，２０１２，７７，７５６４−７５７１、Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ，２０００，１４，１７８４−１７９２、Ｒａｊｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，１９９７，８，９３５−９４０、Ｄｕｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，２０００，３１３，２９７−３２１、Ｍａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，２００３，１４，１８−２９、Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ  Ｌｅｔｔ，２０１０，１２，５４１０−５４１３、Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ，２００２，１２，１０３−１２８、Ｍｅｒｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，１９９４，５，６１２−６２０、Ｔｏｍｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１３，２１，５２７５−５２８１、国際公開第ＷＯ１９９８／０１３３８１号、同第ＷＯ２０１１／０３８３５６号、同第ＷＯ１９９７／０４６０９８号、同第ＷＯ２００８／０９８７８８号、同第ＷＯ２００４／１０１６１９号、同第ＷＯ２０１２／０３７２５４号、同第ＷＯ２０１１／１２００５３号、同第ＷＯ２０１１／１００１３１号、同第ＷＯ２０１１／１６３１２１号、同第ＷＯ２０１２／１７７９４７号、同第ＷＯ２０１３／０３３２３０号、同第ＷＯ２０１３／０７５０３５号、同第ＷＯ２０１２／０８３１８５号、同第ＷＯ２０１２／０８３０４６号、同第ＷＯ２００９／０８２６０７号、同第ＷＯ２００９／１３４４８７号、同第ＷＯ２０１０／１４４７４０号、同第ＷＯ２０１０／１４８０１３号、同第ＷＯ１９９７／０２０５６３号、同第ＷＯ２０１０／０８８５３７号、同第ＷＯ２００２／０４３７７１号、同第ＷＯ２０１０／１２９７０９号、同第ＷＯ２０１２／０６８１８７号、同第ＷＯ２００９／１２６９３３号、同第ＷＯ２００４／０２４７５７号
、同第ＷＯ２０１０／０５４４０６号、同第ＷＯ２０１２／０８９３５２号、同第ＷＯ２０１２／０８９６０２号、同第ＷＯ２０１３／１６６１２１号、同第ＷＯ２０１３／１６５８１６号、米国特許第４，７５１，２１９号、同第８，５５２，１６３号、同第６，９０８，９０３号、同第７，２６２，１７７号、同第５，９９４，５１７号、同第６，３００，３１９号、同第８，１０６，０２２号、同第７，４９１，８０５号、同第７，４９１，８０５号、同第７，５８２，７４４号、同第８，１３７，６９５号、同第６，３８３，８１２号、同第６，５２５，０３１号、同第６，６６０，７２０号、同第７，７２３，５０９号、同第８，５４１，５４８号、同第８，３４４，１２５号、同第８，３１３，７７２号、同第８，３４９，３０８号、同第８，４５０，４６７号、同第８，５０１，９３０号、同第８，１５８，６０１号、同第７，２６２，１７７号、同第６，９０６，１８２号、同第６，６２０，９１６号、同第８，４３５，４９１号、同第８，４０４，８６２号、同第７，８５１，６１５；公開された米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／００９７２６４号、同第ＵＳ２０１１／００９７２６５号、同第ＵＳ２０１３／０００４４２７号、同第ＵＳ２００５／０１６４２３５号、同第ＵＳ２００６／０１４８７４０号、同第ＵＳ２００８／０２８１０４４号、同第ＵＳ２０１０／０２４０７３０号、同第ＵＳ２００３／０１１９７２４号、同第ＵＳ２００６／０１８３８８６号、同第ＵＳ２００８／０２０６８６９号、同第ＵＳ２０１１／０２６９８１４号、同第ＵＳ２００９／０２８６９７３号、同第ＵＳ２０１１／０２０７７９９号、同第ＵＳ２０１２／０１３６０４２号、同第ＵＳ２０１２／０１６５３９３号、同第ＵＳ２００８／０２８１０４１号、同第ＵＳ２００９／０２０３１３５号、同第ＵＳ２０１２／００３５１１５号、同第ＵＳ２０１２／００９５０７５号、同第ＵＳ２０１２／０１０１１４８号、同第ＵＳ２０１２／０１２８７６０号、同第ＵＳ２０１２／０１５７５０９号、同第ＵＳ２０１２／０２３０９３８号、同第ＵＳ２０１３／０１０９８１７号、同第ＵＳ２０１３／０１２１９５４号、同第ＵＳ２０１３／０１７８５１２号、同第ＵＳ２０１３／０２３６９６８号、同第ＵＳ２０１１／０１２３５２０号、同第ＵＳ２００３／００７７８２９号、同第ＵＳ２００８／０１０８８０１号、および同第ＵＳ２００９／０２０３１３２号のうちのいずれかにおいて見出される任意の共役基を含み、これらの各々は、参照によりその全体が組み込まれる。
Ｃ．ある特定の用途および特徴
【０４２１】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、生体内で標的ＲＮＡの強力な減少を示す。ある特定の実施形態において、非共役アンチセンス化合物は、腎臓に蓄積する。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、肝臓に蓄積する。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、良好な耐容性を示す。そのような特性は、共役アンチセンス化合物を、代謝性、心臓血管、および他の疾患、障害、または状態に関与する標的ＲＮＡを含むが、これらに限定されない多くの標的ＲＮＡの阻害に特に有用にする。したがって、肝臓組織を、そのような疾患、障害、または状態に関連したＲＮＡを標的にする共役アンチセンス化合物と接触させることによって、そのような疾患、障害、または状態を治療する方法が本明細書に提供される。したがって、本発明の共役アンチセンス化合物を用いて、様々な代謝性、心臓血管、および他の疾患、障害、または状態のうちのいずれかを改善するための方法も提供される。
【０４２２】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、特定の組織濃度で非共役対応物よりも強力である。いかなる理論または機構によって束縛されることを望むことなく、ある特定の実施形態において、共役体は、共役アンチセンス化合物がより効率的に細胞に入るか、またはより生産的に細胞に入ることを可能にし得る。例えば、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、その非共役対応物と比較して、より高い標的減少を示し得、共役アンチセンス化合物およびその非共役対応物は両方ともに、同一の濃度で組織に存在する。例えば、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、その非共役対応物と比較して、より高い標的減少を示し得、共役アンチセンス化合物およびその非共役対応物は両方ともに、同一の濃度で肝臓に存在する。
【０４２３】
オリゴヌクレオチドの生産的および非生産的な取り込みは、以前に論じられている（例えば、Ｇｅａｒｙ，Ｒ．Ｓ．，Ｅ．Ｗａｎｃｅｗｉｃｚ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）。“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｄｏｓｅ  ａｎｄ  Ｐｌａｓｍａ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ２’−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＰＴＥＮ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７８（３）：２８４−９１、およびＫｏｌｌｅｒ，Ｅ．，Ｔ．Ｍ．Ｖｉｎｃｅｎｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）。“Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ
ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ．”Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３９（１１）：４７９５−８０７を参照のこと）。本明細書に記載の共役基は、生産的な取り込みを改善し得る。
【０４２４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役基は、特定の種類の細胞または組織に対する共役アンチセンス化合物の親和性を増加させることによって強度をさらに改善し得る。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役基は、１個以上の細胞表面受容体による共役アンチセンス化合物の認識を増加させることによって強度をさらに改善し得る。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役基は、共役アンチセンス化合物のエンドサイトーシスを促進することによって強度をさらに改善し得る。
【０４２５】
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、共役アンチセンス化合物が細胞に入った後に共役体がアンチセンスオリゴヌクレオチドから切断されることを可能にすることによって強度をさらに改善し得る。したがって、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチドに必要な用量よりも低い用量で投与され得る。
【０４２６】
ホスホロチオエート結合は、以前にアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれている。そのようなホスホロチオエート結合は、ヌクレアーゼに耐性を示すため、オリゴヌクレオチドの安定性を改善する。さらに、ホスホロチオエート結合は、ある特定のタンパク質にも結合し、肝臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの蓄積をもたらす。より少ないホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、肝臓にあまり蓄積せず、腎臓により多く蓄積する（例えば、Ｇｅａｒｙ，Ｒ．，“Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ
Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ２’−Ｏ−（２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ）−Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｓ  ｉｎ  Ｒａｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．２９６，Ｎｏ．３，８９０−８９７、およびＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ２’−Ｏ−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ａ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．，ｅｄ．，２００８を参照のこと）。ある特定の実施形態において、より少ないホスホロチオエートヌクレオシド間結合およびより多くのホスホジエステルヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、肝臓にあまり蓄積せず、腎臓により多く蓄積する。肝臓における疾患を治療する際、これは、（１）薬物が所望の作用部位（肝臓）にあまり到達せず、（２）薬物が尿に流出し、（３）腎臓が比較的高い濃度の、腎臓に毒性をもたらし得る薬物に曝露される、といったいくつかの理由のため、望ましくない。したがって、肝臓疾患の場合、ホスホロチオエート結合は、重要な利益を提供する。
【０４２７】
しかしながら、ある特定の実施形態において、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合
によって均一に連結されたオリゴヌクレオチドの投与は、１つ以上の炎症誘発反応を誘導する（例えば、Ｊ  Ｌａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ．１９９６  Ｓｅｐ；１２８（３）：３２９−３８．“Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ  ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ”．Ｂｒａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたく、例えば、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ａ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １２，ｐａｇｅｓ  ３４２−３５１，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．，ｅｄ．，２００８も参照のこと）。ある特定の実施形態において、ヌクレオシド間結合の多くがホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの投与は、１つ以上の炎症誘発反応を誘導する。
【０４２８】
ある特定の実施形態において、炎症誘発作用の程度は、いくつかの可変物（例えば、骨格修飾、オフ標的作用、核酸塩基修飾、および／またはヌクレオシド修飾）に依存し得る（例えば、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
ａ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １２，ｐａｇｅｓ  ３４２−３５１，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．，ｅｄ．，２００８を参照されたい）。ある特定の実施形態において、炎症誘発作用の程度は、１つ以上の可変物を調整することによって軽減され得る。例えば、所与のオリゴヌクレオチドの炎症誘発作用の程度は、任意の数のホスホロチオエートヌクレオシド間結合をホスホジエステルヌクレオシド間結合に置き換え、それによりホスホロチオエートヌクレオシド間結合の総数を減少させることによって軽減され得る。
【０４２９】
ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合の数を減少させることが望ましく、そうすることで、安定性を失うことも、肝臓から腎臓への分布を変化させることもなく減少させることができる。例えば、ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合の数は、ホスホロチオエート結合をホスホジエステル結合に置き換えることによって減少され得る。そのような実施形態において、より少ないホスホロチオエート結合およびより多くのホスホジエステル結合を有するアンチセンス化合物は、より低い炎症誘発反応を誘導するか、全く誘導しない。より少ないホスホロチオエート結合およびより多くのホスホジエステル結合を有するアンチセンス化合物はより低い炎症誘発反応を誘導するが、より少ないホスホロチオエート結合およびより多くのホスホジエステル結合を有するアンチセンス化合物は、肝臓に蓄積せず、より多くのホスホロチオエート結合を有するアンチセンス化合物と比較して、同一または同様の用量で有効性がより低くあり得る。したがって、ある特定の実施形態において、複数のホスホジエステル結合および複数のホスホロチオエート結合を有するが、安定性および肝臓への良好な分布も有するアンチセンス化合物を設計することが望ましい。
【０４３０】
ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合のうちのいくつかが炎症誘発性の低いホスホジエステルヌクレオシド間結合と置き換えられる場合でも、共役アンチセンス化合物は、非共役対応物と比較して、肝臓により多く蓄積し、腎臓にはあまり蓄積しない。ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合のうちのいくつかが炎症誘発性の低いホスホジエステルヌクレオシド間結合と置き換えられる場合でも、共役アンチセンス化合物は、その非共役対応物と比較して、肝臓により多く蓄積し、その非共役対応物ほど尿に排泄されない。ある特定の実施形態において、共役体を使用することで、より強力でより良好な耐性のアンチセンス薬物を設計することが可能になる。実際には、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、非共役対応物よりも大きい治療指数を有する。これは、炎症誘発応答の危険性がより低く、かつ腎毒性の危険性もより低いため、共役アンチセンス化合物がより高い絶対用量で投与されることを可能にする。このより高い用量は、排除（代謝）が同様であると見込まれるため、低頻度で投薬されることを可能にする。さらに、上述のように、化合物がより強力であるため、治療活性を失うこと
なく次の投薬の前に濃度をより低くすることができ、さらに長い投薬間期間を可能にする。
【０４３１】
ある特定の実施形態において、いくつかのホスホロチオエート結合の包含がなお望ましい。例えば、末端結合がエキソヌクレアーゼに対して脆弱であるため、ある特定の実施形態において、これらの結合は、ホスホロチオエートまたは他の修飾結合である。２個のデオキシヌクレオシドを結合するヌクレオシド間結合がエンドヌクレアーゼに対して脆弱であるため、ある特定の実施形態において、これらのこれらの結合は、ホスホロチオエートまたは他の修飾結合である。デオキシヌクレオシドが結合デオキシヌクレオシドの５’側にある修飾ヌクレオシドとデオキシヌクレオシドとの間のヌクレオシド間結合がエンドヌクレアーゼに対して脆弱であるため、ある特定の実施形態において、これらのこれらの結合は、ホスホロチオエートまたは他の修飾結合である。修飾ヌクレオシドが結合の５’側にある、ある特定の種類の２個の修飾ヌクレオシド間、およびある特定の種類のデオキシヌクレオシドと修飾ヌクレオシドとの間のヌクレオシド間結合がヌクレアーゼ消化に十分に耐性を示すため、この結合は、ホスホジエステルであり得る。
【０４３２】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１６個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１４個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１３個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１２個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１１個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１０個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、９個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、８個未満のホスホロチオエート結合を含む。
【０４３３】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１個以上の共役基を含むアンチセンス化合物は、そのような１個以上の共役基を欠く親アンチセンス化合物と比較して、増加した活性および／または強度および／または耐容性を有する。したがって、ある特定の実施形態において、そのような共役基のオリゴヌクレオチドへの結合が望ましい。そのような共役基は、オリゴヌクレオチドの５’末端および／または３’末端に結合され得る。ある特定の事例において、５’末端での結合が合成的に望ましい。典型的には、オリゴヌクレオチドは、当技術分野で周知の技法を用いて、３’末端ヌクレオシドの固体支持体への結合および３’から５’までのヌクレオシドの連続カップリングによって合成される。したがって、共役基が３’末端で所望される場合、（１）共役基を３’末端ヌクレオシドに結合させ、オリゴヌクレオチドのその後の調製のために、その共役ヌクレオシドを固体支持体に結合させるか、または（２）合成後に、共役基を完全なオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオシドに結合させることができる。これらの手段のいずれもあまり効率的ではなく、それ故に、これらはいずれも費用のかかる手段である。具体的には、共役ヌクレオシドの固体支持体への結合は、本明細書の実施例において実証されるが、非効率的なプロセスである。ある特定の実施形態において、共役基を５’末端ヌクレオシドに結合させることは、３’末端での結合よりも合成的に容易である。特徴のはっきりした標準の反応を用いて、非共役３’末端ヌクレオシドを固体支持体に結合させ、このオリゴヌクレオチドを調製することができる。その後、最終カップリングステップで共役基を有する５’ヌクレ
オシドを結合させることのみを必要とする。ある特定の実施形態において、これは、３’−共役オリゴヌクレオチドを調製するために典型的に行われる共役ヌクレオシドの固体支持体への直接結合よりも効率的である。本明細書の実施例は、５’末端での結合を実証する。加えて、ある特定の共役基は、合成利点を有する。例えば、リン結合基を含むある特定の共役基は、以前に報告された共役基（例えば、国際公開第ＷＯ／２０１２／０３７２５４号）を含む他の共役基よりも合成的に単純であり、かつ効率的に調製される。
【０４３４】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、対象に投与される。そのような実施形態において、本明細書に記載の１個以上の共役基を含むアンチセンス化合物は、そのような１個以上の共役基を欠く親アンチセンス化合物と比較して、増加した活性および／または強度および／または耐容性を有する。機構によって束縛されることなく、共役基が、標的細胞または組織への分布、送達、および／または取り込みに役立つと考えられる。ある特定の実施形態において、標的細胞または組織に入ると、共役基のすべてまたは一部が切断されて、活性オリゴヌクレオチドを放出することが望ましい。ある特定の実施形態において、すべての共役基がオリゴヌクレオチドから切断される必要はない。例えば、実施例２０において、共役オリゴヌクレオチドをマウスに投与し、各々がオリゴヌクレオチドに残った共役基の異なる部分を含むいくつかの異なる化学種を検出した（表１０ａ）。この共役アンチセンス化合物は、良好な強度を示した（表１０）。したがって、ある特定の実施形態において、共役基の複数の部分的切断のそのような代謝物プロファイルは、活性／強度を妨げない。それにもかかわらず、ある特定の実施形態において、プロドラッグ（共役オリゴヌクレオチド）が単一の活性化合物を産出することが望ましい。ある特定の事例において、活性化合物の複数の形態が見出される場合、各形態の相対量および活性を決定する必要があり得る。ある特定の実施形態において、規制調査が要求される場合（例えば、ＵＳＦＤＡまたは対応物）、単一の（または主に単一の）活性種を有することが望ましい。ある特定のそのような実施形態において、そのような単一の活性種が共役基の任意の部分を欠くアンチセンスオリゴヌクレオチドであることが望ましい。ある特定の実施形態において、５’末端の共役基は、共役基の完全な代謝をもたらす可能性が高い。機構によって束縛されることなく、５’末端（例えば、５’ヌクレアーゼ）の代謝に関与する内因性酵素が３’対応物よりも活性／効率的であり得る。ある特定の実施形態において、これらの特定の共役基は、単一の活性種への代謝により従順である。ある特定の実施形態において、ある特定の共役基は、オリゴヌクレオチドへの代謝により従順である。
Ｄ．アンチセンス
【０４３５】
ある特定の実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、アンチセンス化合物である。そのような実施形態において、オリゴマー化合物は、標的核酸に相補的である。ある特定の実施形態において、標的核酸は、ＲＮＡである。ある特定の実施形態において、標的核酸は、非コードＲＮＡである。ある特定の実施形態において、標的核酸は、タンパク質をコードする。ある特定の実施形態において、標的核酸は、ｍＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、小非コードＲＮＡを含む非コードＲＮＡ、およびプロモーター指向性ＲＮＡから選択される。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、２個以上の標的核酸に少なくとも部分的に相補的である。例えば、本発明のオリゴマー化合物は、マイクロＲＮＡ模倣物であり、これは、典型的には、複数の標的に結合する。
【０４３６】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも７０％相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも８０％相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも９０％相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも９５％相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセン
ス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも９８％相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に１００％相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の全長にわたって、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％相補的である。
【０４３７】
アンチセンス機構は、オリゴマー化合物の標的核酸とのハイブリダイゼーションを伴う任意の機構を含み、このハイブリダイゼーションは、生物学的効果をもたらす。ある特定の実施形態において、そのようなハイブリダイゼーションは、例えば、標的核酸の、または標的核酸が別の方法で相互作用し得る核酸の翻訳、転写、またはポリアデニル化を伴う細胞機構の同時に起こる阻害または刺激により、標的核酸の分解または占有のいずれかをもたらす。
【０４３８】
標的ＲＮＡの分解を伴う一種のアンチセンス機構は、ＲＮａｓｅ  Ｈ媒介アンチセンスである。ＲＮａｓｅ  Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。「ＤＮＡ様」の一本鎖アンチセンス化合物が哺乳類細胞におけるＲＮａｓｅ  Ｈ活性を誘発することが当技術分野で既知である。したがって、ＲＮａｓｅ  Ｈの活性化は、ＲＮＡ標的の切断をもたらし、それにより遺伝子発現のＤＮＡ様オリゴヌクレオチド媒介阻害の効率を大幅に向上させる。
【０４３９】
アンチセンス機構には、ＲＩＳＣ経路を利用するＲＮＡｉ機構も含まれるが、これらに限定されない。そのようなＲＮＡｉ機構には、ｓｉＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、およびマイクロＲＮＡ機構が含まれるが、これらに限定されない。そのような機構は、マイクロＲＮＡ模倣物および／または抗マイクロＲＮＡの作成を含む。
【０４４０】
アンチセンス機構には、マイクロＲＮＡまたはｍＲＮＡ以外の非コードＲＮＡをハイブリダイズさせるか、または模倣する機構も含まれるが、これに限定されない。そのような非コードＲＮＡには、１個以上の核酸の転写または翻訳をもたらすプロモーター指向性ＲＮＡならびに短いＲＮＡおよび長いＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。
【０４４１】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ化合物である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役体を含むオリゴマーオリゴヌクレオチドは、ｓｓＲＮＡ化合物である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役体を含むオリゴヌクレオチドは、第２のオリゴマー化合物と対合されて、ｓｉＲＮＡを形成する。ある特定のそのような実施形態において、第２のオリゴマー化合物は、共役体も含む。ある特定の実施形態において、第２のオリゴマー化合物は、任意の修飾または非修飾核酸である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ化合物におけるアンチセンス鎖である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ化合物におけるセンス鎖である。共役オリゴマー化合物が二本鎖ｓｉＲｎＡである実施形態において、共役体は、センス鎖に、アンチセンス鎖に、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方に存在し得る。
Ｄ．標的核酸、領域、およびセグメント
【０４４２】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、任意の核酸を標的とする。ある特定の実施形態において、標的核酸は、臨床的に関連する標的タンパク質をコードする。そのような実施形態において、標的核酸の調節は、臨床的利益をもたらす。ある特定の標的核酸には、表１に例証される標的核酸が含まれるが、これらに限定されない。
【表１】
2020058370.tif 000111
【０４４３】
標的プロセスは、アンチセンス相互作用が生じて所望の効果が結果的に生じるように、通常、標的核酸内の少なくとも１個の標的領域、セグメント、または部位の決定を含む。
【０４４４】
ある特定の実施形態において、標的領域は、核酸の構造的に定義された領域である。例えば、ある特定のそのような実施形態において、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エキソン、イントロン、コーディング領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域、または他の定義された核酸領域もしくは標的セグメントを包含し得る。
【０４４５】
ある特定の実施形態において、標的セグメントは、共役アンチセンス化合物が標的とされる標的領域の少なくとも約８核酸塩基部分である。標的セグメントは、標的セグメントのうちの１個の５’末端から少なくとも８個の連続した核酸塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡ配列を含み得る（残りの核酸塩基は、標的セグメントの５’末端のすぐ上流で開始し、ＤＮＡまたはＲＮＡが約８〜約３０個の核酸塩基を含むまで続く連続した一続きの同一のＤＮＡまたはＲＮＡである）。標的セグメントは、標的セグメントのうちの１個の３’末端から少なくとも８個の連続した核酸塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡ配列によっても表される（残りの核酸塩基は、標的セグメントの３’末端のすぐ下流で開始し、ＤＮＡまたはＲＮＡが約８〜約３０個の核酸塩基を含むまで続く連続した一続きの同一のＤＮＡまたはＲＮＡである）。標的セグメントは、標的セグメントの配列の内部部分から少なくとも８
個の連続した核酸塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡ配列によっても表され、共役アンチセンス化合物が約８〜約３０個の核酸塩基を含むまでいずれかの方向または両方向に延在し得る。
【０４４６】
ある特定の実施形態において、表１に列記される核酸を標的にするアンチセンス化合物は、本明細書に記載されるように修飾され得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載の修飾糖部分、非修飾糖部分、または修飾および非修飾糖部分の混合物を有し得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載の修飾ヌクレオシド間結合、非修飾ヌクレオシド間結合、または修飾および非修飾ヌクレオシド間結合の混合物を有し得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載の修飾核酸塩基、非修飾核酸塩基、または修飾および非修飾核酸塩基の混合物を有し得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載のモチーフを有し得る。
【０４４７】
ある特定の実施形態において、表１に列記される核酸を標的にするアンチセンス化合物は、本明細書に記載されるように共役され得る。
１．タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ１Ｂ）
【０４４８】
タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ１Ｂ）は、ＰＴＰファミリーのメンバーであり（Ｂａｒｆｏｒｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９４．２６３：１３９７−１４０４）、細胞質酵素である（Ｎｅｅｌ  ａｎｄ  Ｔｏｎｋｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９７．９：１９３−２０４）。ＰＴＰ１Ｂは、遍在的（肝臓、筋肉、および脂肪等のインスリン代謝の主要な調節因子である組織を含む）に発現し（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １９９３．３：１−１５）、ＰＴＰ１Ｂは、主なＰＴＰ酵素である。
【０４４９】
ＰＴＰ１Ｂは、インスリンシグナル伝達の負の調節因子と見なされる。ＰＴＰ１Ｂは、インスリン受容体と相互作用してそれを脱リン酸化し、それ故に、インスリンシグナル伝達変換を減弱させ、潜在的に終了させる（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００．２７５：４３８３−４３８９）。インスリンシグナル伝達におけるＰＴＰ１Ｂの生理学的役割は、ノックアウトマウスモデルにおいて実証されている。ＰＴＰ１Ｂ遺伝子を欠くマウスは、インスリン耐性および肥満から保護された（Ｅｌｃｈｅｂｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９．２８３：１５４４−１５４８）。ＰＴＰ１Ｂ欠損マウスは、低脂肪症を有し、基礎代謝率および総エネルギー消費量を増加させ、食事性肥満から保護された。インスリン刺激によるグルコース取り込みが骨格筋で増加した一方で、脂肪組織は影響を受けないままであり、ＰＴＰ１Ｂ欠損マウスにおけるインスリン感受性の増加が組織特異的であるという証拠を提供した（Ｋｌａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０００．２０：５４７９−５４８９）。これらのマウスは、表現型的には、正常であり、食事性肥満にも耐性を示し、インスリン耐性であり、高脂肪食で著しく低いトリグリセリドレベルを有した。したがって、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、糖尿病性脂質異常症、または関連代謝性疾患に罹患している患者におけるＰＴＰ１Ｂの阻害が有益であった。
【０４５０】
ＰＴＰ１Ｂのアンチセンス阻害は、アンチセンス阻害剤が、化合物のタンパク質への競合的結合に依存せず、かつＰＴＰ１Ｂの発現を減少させることにより活性を直接阻害するという点において、従来の小分子阻害剤に優る特有の利点を提供する。アンチセンス技術は、ある特定の遺伝子産物の発現を減少させるための効果的な手段として浮上しており、それ故に、いくつかの治療的、診断的、および研究用途において、ＰＴＰ１Ｂの調節に比類なく有用であることを立証することができる。
【０４５１】
現在、代謝性障害の治療に対する許容される選択肢が不足している。したがって、そのような疾患および障害を治療するための化合物および方法を提供することが本明細書における目的である。
【０４５２】
特許、特許出願、記事、書籍、および論文を含むが、これらに限定されない本出願において引用されるすべての文書または文書の一部は、本明細書で論じられる文書の一部に対して、かつそれらの全体において参照により本明細書に明確に組み込まれる。
ＰＴＰ１Ｂ核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
【０４５３】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号ＮＭ＿００２８２７．２（配列番号１として本明細書に組み込まれる）またはヌクレオチド１４１７８０００〜１４２５６０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０１１３６２．９（配列番号２として本明細書に組み込まれる）の配列を有するＰＴＰ１Ｂ核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号１および／または２に少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０４５４】
ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５４の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５４の核酸塩基配列を含む。
【０４５５】
ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５５の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５５の核酸塩基配列を含む。
【０４５６】
ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５６の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５６の核酸塩基配列を含む。
【０４５７】
ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５７の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５７の核酸塩基配列を含む。
【表２】
2020058370.tif 000112
【０４５８】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  １４２０８２および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  １４２０８２は、以下の式：Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０４５９】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４０４１７３および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４０４１７３は、以下の式：Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０４６０】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４０９８２６および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４０９８２６は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、  
【０４６１】
式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０４６２】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４４６４３１および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４４６４３１は、以下の式：Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０４６３】
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ
る、米国第７，５６３，８８４号および国際公開第ＷＯ２００７／１３１２３７号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、米国第７，５６３，８８４号に開示される配列番号１７〜９６および２４４〜３８９のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００７／１３１２３７号の配列番号８８６〜１５５２のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国第７，５６３，８８４号および国際公開第ＷＯ２００７／１３１２３７号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、米国第７，５６３，８８４号および国際公開第ＷＯ２００７／１３１２３７号に開示される配列番号のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
ＰＴＰ１Ｂ治療指標
【０４６４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の共役医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝関連疾患を有する。
【０４６５】
以下の実施例に示されるように、本明細書に記載のＰＴＰ１Ｂを標的にする共役化合物は、代謝関連疾患（代謝症候群、真性糖尿病、インスリン抵抗性、糖尿病性脂質異常症、高トリグリセリド血症、肥満、および体重増加を含む）の生理学的症状の重症度を低下させることが示されている。ある特定の実験において、共役化合物は、血糖値を低下させ、例えば、動物は、症状を呈し続けたが、症状の重症度は、処理されていない動物と比較して低かった。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、糖尿病の症状を軽減するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、体重増加を抑制するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、高トリグリセリド血症を抑制するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。したがって、機能を回復させる以下に例示される共役化合物の能力は、疾患の症状が本明細書に記載の化合物での処理によって好転し得ることを示す。
【０４６６】
真性糖尿病は、多くの身体的および生理学的症状を特徴とする。２型糖尿病と関連した当業者に既知の任意の症状は、改善され得るか、さもなければ上記の方法で調節され得る。ある特定の実施形態において、症状は、グルコースレベルの増加、体重増加、頻尿、異常な喉の渇き、極度の空腹感、極度の疲労感、視覚のぼけ、頻発する感染症、四肢のうずきまたはしびれ、乾燥敏感肌、体重減少、回復の遅い痛み、および歯茎の腫れからなる群から選択される身体的症状である。
【０４６７】
ある特定の実施形態において、症状は、インスリン抵抗性の増加、グルコースレベルの増加、脂肪量の増加、代謝率の低下、グルコースクリアランスの低下、グルコース耐性の低下、インスリン感受性の低下、肝臓におけるインスリン感受性の低下、脂肪組織の大きさおよび重量の増加、体脂肪の増加、ならびに体重の増加からなる群から選択される生理学的症状である。
【０４６８】
Ｌｉｕ  ａｎｄ  Ｃｈｅｒｎｏｆｆは、ＰＴＰ１Ｂが上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦ
Ｒ）に結合し、かつその基質の役割を果たすことを示している（Ｌｉｕ  ａｎｄ  Ｃｈｅｒｎｏｆｆ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１９９７，３２７，１３９−１４５）。さらに、Ａ４３１ヒト表皮癌細胞において、ＰＴ１Ｂが、ＥＧＦの添加によって生成されたＨ２Ｏ２の存在によって不活性化されることが見出された。これらの研究は、ＰＴＰ１Ｂが細胞の酸化状態によって負に調節され得、これは、多くの場合、腫瘍形成中に調節解除されることを示す（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，２７３，１５３６６−１５３７２）。
【０４６９】
ＰＴＰ１Ｂの過剰発現は、悪性卵巣癌において実証されており、この相関関係は、関連成長因子受容体の発現の同時増加を伴った（Ｗｉｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．，１９９４，１７０，１１７７−１１８３）。
【０４７０】
ＰＴＰ１Ｂは、ｎｅｕ癌遺伝子によって誘導されたＮＩＨ３Ｔ３細胞（Ｂｒｏｗｎ−Ｓｈｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９２，５２，４７８−４８２）における形質転換、ならびにｖ−ｓｒｋ、ｖ−ｓｒｃ、およびｖ−ｒａｓによって誘導されたラット３Ｙ１線維芽細胞（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９８，１８，２５０−２５９）、およびｂｃｒ−ａｂｌによって誘導されたラット−１線維芽細胞（ＬａＭｏｎｔａｇｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９８，９５，１４０９４−１４０９９）における形質転換を抑制することが示されている。ＰＴＰ１Ｂが、ｂｃｒ−ａｂｌ癌タンパク質の阻害剤と同様の様式で慢性骨髄性白血病細胞株であるＫ５６２細胞の分化を促進することも示されている。これらの研究は、慢性骨髄性白血病の発病を制御するＰＴＰ１Ｂの果たし得る役割を説明する（ＬａＭｏｎｔａｇｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９８，９５，１４０９４−１４０９９）。
【０４７１】
したがって、過剰増殖性障害に伴う症状を改善するための方法を必要とする対象における過剰増殖性障害に伴う症状を改善するための方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、過剰増殖性障害は、癌である。ある特定の実施形態において、癌に伴う症状を改善するための方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、過剰増殖性障害に伴う症状の発症率を低下させるための方法が提供される。ある特定の実施形態において、癌に伴う症状の発症率を低下させるための方法が提供される。ある特定の実施形態において、過剰増殖性障害に伴う症状の重症度を低下させるための方法が提供される。ある特定の実施形態において、癌に伴う症状の重症度を低下させるための方法が提供される。そのような実施形態において、方法は、治療的に有効な量のＰＴＰ１Ｂ核酸を標的にする化合物をそれを必要とする個体に投与することを含む。
【０４７２】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の共役医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝関連疾患を有する。
【０４７３】
ある特定の実施形態において、ＰＴＰ１Ｂ核酸を標的にする共役アンチセンス化合物の投与は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって定義される範囲のＰＴＰ１Ｂ発現の減少をもたらす。
【０４７４】
ある特定の実施形態において、ＰＴＰ１Ｂを標的にする共役アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、代謝関連疾患に罹患しているか、またはそれにかかりやすい患者を治療するための薬剤の調製のために用いられる。
【０４７５】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法は、共役基と、配列番号５４〜５
７に記載の配列の本明細書に記載の連続した核酸塩基部分を有する修飾オリゴヌクレオチドとを含む化合物を投与することを含む。
【０４７６】
本明細書に記載の化合物のうちのいずれかを前記方法および使用において用いることができることが理解される。例えば、ある特定の実施形態において、前記方法および使用におけるＰＴＰ１Ｂ核酸を標的にする共役アンチセンス化合物には、配列番号５４〜５７のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物；配列番号５４〜５７のうちのいずれかの核酸塩基配列を含む配列番号１を標的にする共役アンチセンス化合物；ＩＳＩＳ  １４２０８２、ＩＳＩＳ  ４０４１７３、ＩＳＩＳ  ４０９８２６、もしくはＩＳＩＳ  ４４６４３１と、共役基とを含むか、またはそれらからなる化合物；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国第７，５６３，８８４号および国際公開第ＷＯ２００７／１３１２３７号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物；米国第７，５６３，８８４号に開示される配列番号１７〜９６および２４４〜３８９のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと本明細書に記載の共役基とを含む化合物；または国際公開第ＷＯ２００７／１３１２３７号に開示される配列番号８８６〜１５５２のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと本明細書に記載の共役基とを含む化合物が含まれ得るが、これらに限定されない。
２．ＦＧＦＲ４
【０４７７】
肥満は、長期にわたる代謝性疾患と見なされる。肥満に関連した重篤な医学的続発症がいくつか存在する。世界的に１０億人を超える個人が過体重であり、１億人が臨床的に肥満である。肥満関連疾患を治療する医療費は、米国だけでも１年に１，０００億ドルを超えると見積もられている。肥満を治療するための現在の方法には、行動修正、食生活、手術（胃形成術）、食欲刺激シグナルまたは栄養分（脂肪分）の吸収を阻止する医薬品の投与、および熱発生または脂肪代謝を増加させる薬剤の投与がある。これらの方法のいくつかは、それら患者の決意に依存し、侵襲性であり、または好ましくない副作用を有するといった欠点がある。肥満が制御される機構を理解することで、重要な治療情報を提供することができる。
【０４７８】
肥満は、多くの場合、インスリン抵抗性を伴い、これらが一緒になって２型糖尿病および心臓血管疾患を後に発症する危険因子を構成する。インスリン抵抗性は、２型糖尿病の発症よりもかなり前に生じ、インスリンが過剰産生されて、インスリン抵抗性を補い、かつ正常なグルコースレベルを維持する。膵臓が正常なグルコースレベルを維持するのに十分なインスリンを産生することができないため、２型糖尿病が結果として生じる。２型糖尿病の初期段階は、インスリンレベルの上昇を伴うが、疾患が進行するにつれて、膵臓は、インスリンを産生することができなくなり、結果的に血糖値の上昇をもたらし得る。糖尿病は、心臓疾患と発作の両方の重大な危険因子であり、失明および末期腎不全の主な原因である。
【０４７９】
糖尿病は、低下したインスリン産生もしくはインスリン抵抗性またはこれら両方に起因し得るインスリン作用不足に起因した高血糖症を特徴とする障害である。真性糖尿病は、世界中のかなりの数の人々が罹患している多遺伝子性障害である。これは、２つの種類に分けられる。Ｉ型糖尿病、またはインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）において、患者は、グルコース利用を調節するホルモンであるインスリンをほとんどまたはまったく産生しない。２型糖尿病、または非インスリン依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）において、患者は、多くの場合、糖尿病にかかっていない人と同一の血漿インスリンレベルを有するが、これらの患者は、グルコースのインスリン刺激作用に対する抵抗性と、主なインスリン感受性組織、すなわち、筋肉、肝臓、および脂肪組織における脂質代謝に対する抵抗性が発達しており、血漿インスリンレベルは、顕著なインスリン抵抗性を克服するには不十分である
。さらに、長期にわたる高血糖症に起因した糖毒性は、組織依存的インスリン抵抗性を誘導し（Ｎａｗａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，２７８，Ｅ５３５−５４３）、疾患を悪化させる。２型糖尿病は、すべての糖尿病症例の９０％を超える割合を占める。これは、高血糖症を特徴とする代謝性障害であり、二次的合併症、例えば、ニューロパシー、腎症、網膜症、高トリグリセリド血症、肥満、および一般に代謝症候群と称される他の心臓血管疾患の原因となる。
【０４８０】
代謝症候群は、心臓血管疾患および糖尿病の危険性を高める医学的障害の組み合わせである。高血圧、高トリグリセリド、ＨＤＬの低下、および肥満を含む症状は、一部の個体に同時に見られる傾向がある。代謝症候群は、（代謝）症候群Ｘ、インスリン抵抗性症候群、またはリーベン症候群等の様々な他の名称で知られている。
【０４８１】
糖尿病および肥満（現在は「糖尿肥満」と集合的に称されることもある）は、肥満が糖尿病の病態を悪化させることで知られており、かつ糖尿病患者の６０％以上が肥満であるという点において相関している。大半のヒト肥満は、インスリン抵抗性およびレプチン抵抗性を伴う。実際には、肥満が糖尿病自体よりもインスリン作用にさらに大きな影響を及ぼし得ることが示唆されている（Ｓｉｎｄｅｌｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｓ．，５１，８５−９１）。さらに、販売されている糖尿病の治療用のいくつかの化合物は、この疾患の治療には非常に好ましくない副作用である体重増加を引き起こすことで知られている。したがって、糖尿病と肥満の両方を治療する可能性を有する化合物は、現在の治療における著しい改善を提供するであろう。
【０４８２】
線維芽細胞増殖因子受容体４（別名、ＦＧＦ受容体−４、ＴＫＦ；線維芽細胞増殖因子受容体関連チロシンキナーゼ；ヒドロキシアリール−タンパク質キナーゼ；チロシルタンパク質キナーゼ；Ｆｇｆｒ４；ＦＧＦＲ−４；ＦＧＦＲ４；ＣＤ３３４、ＦＧＦＲ４＿ＨＵＭＡＮ、およびＪＴＫ２）は、酸性および／または塩基性線維芽細胞増殖因子に対して高親和性を有する（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ，４，９４−９８）。
【０４８３】
ＦＧＦＲが全身で広範囲に分布することが一般に示されているが、現在に至るまで、ＦＧＦＲ４は、数個の組織でしか見つけられていない。ヒトリンパ球およびマクロファージを含む試験された多くの種類の細胞および組織の中で、ＦＧＦＲ４が、肺およびいくつかの肺由来の腫瘍、ならびに肺組織に由来しない悪性腫瘍において発現することが見出された（Ｈｏｌｔｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，．８８，１０４１１−１０４１５）。ＦＧＦＲ４は、肝臓および脂肪組織において発現することも見出されている（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＣＥＭ，９０（２），１２２６−１２３２）。ＦＧＦＲ４は、ある特定の癌細胞株発現において発現することも見出されている（Ｂａｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６２，８４０−８４７）。
【０４８４】
さらに、ＦＧＦＲ４は、全身の脂質およびグルコース恒常性に関与することが示されている。正常食のＦＧＦＲ４欠損マウスは、高コレステロール血症に加えてインスリン抵抗性の増加を含む代謝症候群の特徴を呈した。ＦＧＦＲ４欠損は、同様に代謝症候群と相関性のあるある特定の肥満マウスモデルにおける高脂肪食誘発性脂肪肝を緩和することが示された。ＦＧＦＲ４、具体的には、ＦＧＦＲ４欠損マウスの肝細胞におけるＦＧＦＲ４の回復は、血漿脂質レベルを低下させ、高脂肪食誘発性脂肪肝を回復させたが、グルコース耐性およびインスリンに対する感受性を回復させることができなかった（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５６，２５０１−２５１０）。
【０４８５】
ＦＧＦＲ４のアンチセンス阻害は、アンチセンス阻害剤が、化合物のタンパク質への競合的結合に依存せず、かつＦＧＦＲ４の発現を減少させることにより活性を直接阻害する
という点において、従来の小分子阻害剤に勝る特有の利点を提供する。ＦＧＦＲ４アンチセンス阻害剤を教示する代表的な米国特許には、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２９２１４０号が含まれる。アンチセンス技術は、ある特定の遺伝子産物の発現を減少させるための効果的な手段として浮上しており、それ故に、いくつかの治療的、診断的、および研究用途において、ＦＧＦＲ４の調節に比類なく有用であることを立証することができる。
【０４８６】
現在、代謝性障害の治療に対する許容される選択肢が不足している。したがって、そのような疾患および障害を治療するための化合物および方法を提供することが本明細書における目的である。本発明は、ＦＧＦＲ４遺伝子発現の新規の非常に強力な阻害剤の発見に関する。
【０４８７】
特許、特許出願、記事、書籍、および論文を含むが、これらに限定されない本出願において引用されるすべての文書または文書の一部は、本明細書で論じられる文書の一部に対して、かつそれらの全体において参照により本明細書に明確に組み込まれる。
ＦＧＦＲ４核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
【０４８８】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿００２０１１．３（配列番号３として本明細書に組み込まれる）、ヌクレオシド２１３２３０１８〜２１３３５２１３から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０２３１３３．１１（配列番号４として本明細書に組み込まれる）；およびＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＡＢ２０９６３１．１（配列番号５として本明細書に組み込まれる）；およびＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０２２９６３．２（配列番号６として本明細書に組み込まれる）の配列を有するＦＧＦＲ４核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号３〜６を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号３〜６に少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０４８９】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５８〜６５のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号１２〜１９のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む。
【０４９０】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５８の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５９の核酸塩基配列を含む。
【０４９１】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５９の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号５９の核酸塩基配列を含む。
【０４９２】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６０の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６０の核酸塩基配列を含む。
【０４９３】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６１の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６１の核酸塩基配列を
含む。
【０４９４】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６２の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６２の核酸塩基配列を含む。
【０４９５】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６３の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６３の核酸塩基配列を含む。
【０４９６】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６４の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６４の核酸塩基配列を含む。
【０４９７】
ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６５の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６５の核酸塩基配列を含む。
【表３】
2020058370.tif 000113
【０４９８】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ２９９００５および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ２９９００５は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０４９９】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４６３５８８および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４６３５８８は、以下の式：Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａ
ｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５００】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４６３５８９および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４６３５８９は、以下の式：Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５０１】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４６３６９０および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４６３６９０は、以下の式：Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５０２】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４６３６９１および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４６３６９１は、以下の式：Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５０３】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４６３８３５および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４６３８３５は、以下の式：ｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５０４】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４６３８３７および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４６３８３７は、以下の式：ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５０５】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４６４２２５および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４６４２２５は、以下の式：ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５０６】
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００９／０４６１４１号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００９／０４６１４１号に開示される配列番号２１〜２４、２８、２９、３６、３８、３９、４３、４８、５１、５４〜５６、５８〜６０、６４〜６６、９２〜１６６のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯに開示される２００９／０４６１４１号に開示される配列番号２１〜２４、２８、２９、３６、３８、３９、４３、４８、５１、５４〜５６、５８〜６０、６４〜６６、９２〜１６６のうちのいずれかの好ましい標的セグメントに相補的な核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。前記参照される配列番号のうちのす
べての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
ＦＧＦＲ４治療指標
【０５０７】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝性疾患を有する。
【０５０８】
以下の実施例に示されるように、本明細書に記載のＦＧＦＲ４を標的にする共役化合物は、代謝性疾患（肥満または脂肪過多症、代謝症候群、真性糖尿病、インスリン抵抗性、糖尿病性脂質異常症、および高トリグリセリド血症を含む）の生理学的症状の重症度を低下させることが示されている。ある特定の実験において、共役化合物は、体重を減少させ、例えば、動物は、症状を呈し続けたが、症状の重症度は、処理されていない動物と比較して低かった。ある特定の実験において、共役化合物は、体脂肪を減少させ、例えば、動物は、症状を呈し続けたが、症状の重症度は、処理されていない動物と比較して低かった。ある特定の実験において、共役化合物は、脂肪組織を減少させ、例えば、動物は、症状を呈し続けたが、症状の重症度は、処理されていない動物と比較して低かった。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、肥満の症状を軽減するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、糖尿病の症状を軽減するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、体重増加を抑制するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、グルコースレベルを低下させるようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、脂肪酸酸化を増加させるようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。したがって、機能を回復させる以下に例示される共役化合物の能力は、疾患の症状が本明細書に記載の化合物での処理によって好転し得ることを示す。
【０５０９】
肥満は、多くの身体的および生理学的症状を特徴とする。肥満と関連した当業者に既知の任意の症状は、改善され得るか、さもなければ上記の方法で調節され得る。ある特定の実施形態において、症状は、脂肪組織質量または重量の増加、体重の増加、脂肪体重量の増加、カロリー摂取量とエネルギー消費の不均衡、体脂肪の増加、体質量の増加、３０以上のボディマス指数を有する、体格の増大、発汗増加、睡眠時無呼吸、睡眠障害、突然の身体活動への対処不能、嗜眠、背中および関節障害、息切れ増加、乳房領域脂肪過多、腹部サイズまたは脂肪の増加、極度の空腹感、または極度の疲労感からなる群から選択される身体的症状である。
【０５１０】
ある特定の実施形態において、症状は、高血圧、高血圧症、高コレステロールレベル、２型糖尿病、発作、心不全、心臓疾患、冠状動脈狭窄、女性における乳癌、胃食道逆流疾患、股および膝関節症、ならびに平均寿命の低下からなる群から選択される生理学的症状である。
【０５１１】
ある特定の実施形態において、身体的症状は、過剰な体重である。ある特定の実施形態において、症状は、過剰な脂肪量である。ある特定の実施形態において、症状は、３０以上のボディーマス指数である。ある特定の実施形態において、症状は、息切れである。ある特定の実施形態において、症状は、発汗増加である。ある特定の実施形態において、症状は、睡眠時無呼吸である。ある特定の実施形態において、症状は、睡眠障害である。ある特定の実施形態において、症状は、突然の身体活動への対処不能である。ある特定の実
施形態において、症状は、嗜眠である。ある特定の実施形態において、症状は、背中および関節障害である。
【０５１２】
ある特定の実施形態において、生理学的症状は、高血圧である。ある特定の実施形態において、症状は、高血圧症である。ある特定の実施形態において、症状は、高コレステロールレベルである。ある特定の実施形態において、症状は、２型糖尿病である。ある特定の実施形態において、症状は、発作である。ある特定の実施形態において、症状は、心不全である。ある特定の実施形態において、症状は、心臓疾患である。ある特定の実施形態において、症状は、冠状動脈狭窄である。ある特定の実施形態において、症状は、女性における乳癌である。ある特定の実施形態において、症状は、胃食道逆流疾患である。ある特定の実施形態において、症状は、股および膝関節症である。ある特定の実施形態において、症状は、平均寿命の低下である。
【０５１３】
真性糖尿病は、多くの身体的および生理学的症状を特徴とする。２型糖尿病と関連した当業者に既知の任意の症状は、改善され得るか、さもなければ上記の方法で調節され得る。ある特定の実施形態において、症状は、グルコースレベルの増加、体重増加、頻尿、異常な喉の渇き、極度の空腹感、極度の疲労感、視覚のぼけ、頻発する感染症、四肢のうずきまたはしびれ、乾燥敏感肌、体重減少、回復の遅い痛み、および歯茎の腫れからなる群から選択される身体的症状である。
【０５１４】
ある特定の実施形態において、症状は、インスリン抵抗性の増加、グルコースレベルの増加、脂肪量の増加、代謝率の低下、グルコースクリアランスの低下、グルコース耐性の低下、インスリン感受性の低下、肝臓におけるインスリン感受性の低下、脂肪組織の大きさおよび重量の増加、体脂肪の増加、ならびに体重の増加からなる群から選択される生理学的症状である。
【０５１５】
ある特定の実施形態において、身体的症状は、体重の増加である。ある特定の実施形態において、症状は、頻尿である。ある特定の実施形態において、症状は、異常な喉の渇きである。ある特定の実施形態において、症状は、極度の空腹感である。ある特定の実施形態において、症状は、極度の疲労感である。ある特定の実施形態において、症状は、視覚のぼけである。ある特定の実施形態において、症状は、頻発する感染症である。ある特定の実施形態において、症状は、四肢のうずきまたはしびれである。ある特定の実施形態において、症状は、乾燥敏感肌である。ある特定の実施形態において、症状は、体重減少である。ある特定の実施形態において、症状は、回復の遅い痛みである。ある特定の実施形態において、症状は、歯茎の腫れである。ある特定の実施形態において、症状は、インスリン抵抗性の増加である。ある特定の実施形態において、症状は、脂肪量の増加である。ある特定の実施形態において、症状は、代謝率の低下である。ある特定の実施形態において、症状は、グルコースクリアランスの低下である。ある特定の実施形態において、症状は、グルコース耐性の低下である。ある特定の実施形態において、症状は、インスリン感受性の低下である。ある特定の実施形態において、症状は、肝臓におけるインスリン感受性の低下である。ある特定の実施形態において、症状は、脂肪組織の大きさおよび重量の増加である。ある特定の実施形態において、症状は、体脂肪の増加である。ある特定の実施形態において、症状は、体重の増加である。
【０５１６】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝関連疾患を有する。
【０５１７】
ある特定の実施形態において、ＦＧＦＲ４核酸を標的にする共役アンチセンス化合物の投与は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、
６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって定義される範囲のＦＧＦＲ４発現の減少をもたらす。
【０５１８】
ある特定の実施形態において、ＦＧＦＲ４を標的にする共役アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、代謝性疾患に罹患しているか、またはそれにかかりやすい患者を治療するための薬剤の調製のために用いられる。
【０５１９】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法は、配列番号５８〜６５に記載の配列の本明細書に記載の連続した核酸塩基部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む共役化合物を投与することを含む。
【０５２０】
本明細書に記載の化合物のうちのいずれかを前記方法および使用において用いることができることが理解される。例えば、ある特定の実施形態において、前記方法および使用におけるＦＧＦＲ４核酸を標的にする共役アンチセンス化合物には、配列番号５８〜６５のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物；配列番号５８〜６５のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む配列番号３を標的にする共役アンチセンス化合物；ＩＳＩＳ  ２９９００５、ＩＳＩＳ  ４６３５８８、ＩＳＩＳ  ４６３５８９、ＩＳＩＳ  ４６３６９０、ＩＳＩＳ  ４６３６９１、ＩＳＩＳ  ４６３８３５、ＩＳＩＳ  ４６３８３７、またはＩＳＩＳ  ４６４２２５と、共役基とを含むか、またはそれらからなる化合物；参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００９／０４６１４１号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む化合物；国際公開第ＷＯ２００９／０４６１４１号に開示される配列番号配列番号２１〜２４、２８、２９、３６、３８、３９、４３、４８、５１、５４〜５６、５８〜６０、６４〜６６、９２〜１６６のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む化合物；または国際公開第ＷＯ２００９／０４６１４１号に開示される配列番号２１〜２４、２８、２９、３６、３８、３９、４３、４８、５１、５４〜５６、５８〜６０、６４〜６６、９２〜１６６のうちのいずれかの好ましい標的セグメントに相補的な核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む化合物が含まれ得るが、これらに限定されない。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
３．ＧＣＣＲ
【０５２１】
糖尿病は、インスリン分泌および／または作用障害を特徴とする慢性代謝性障害である。２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）において、インスリン抵抗性は、インスリンが糖新生酵素の活性を制御することを不能にし、多くの対象は、空腹時および食後に不適切なレベルの循環グルカゴン（ＧＣ）も呈する。グルカゴンは、膵島のα細胞から分泌され、肝臓におけるグルコース産生を調節することによりグルコース恒常性を制御する（Ｑｕｅｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００８．１９９：５−１９）。．
【０５２２】
グルカゴンは、グルココルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）の活性化により標的組織に対してその作用を発揮する。グルココルチコイド受容体は、受容体のクラスＢ  Ｇ−タンパク質共役型ファミリーのメンバーである６２ｋＤａのタンパク質である（Ｂｒｕｂａｋｅｒ
ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｃｅｐｔ．Ｃｈａｎｎｅｌｓ．２００２．８：１７９−８８）。ＧＣＣＲ活性化は、Ｇタンパク質（ＧｓαおよびＧｑ）によるシグナル変換につながり、それにより、Ｇｓαは、アデニル酸シクラーゼを活性化し、ｃＡＭＰ産生を引き起こし、タンパク質キナーゼＡのレベルの増加をもたらす。肝臓におけるＧＣＣＲシグナル伝達は、グリコーゲン生成の阻害に加えてグリコーゲン分解および糖新生の誘導により肝臓におけるグルコース産生の増加をもたらす（Ｊｉａｎｇ  ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００３．２８４：Ｅ６７１−Ｅ６７
８）。ＧＣＣＲは、心臓、腸平滑筋、腎臓、脳、および脂肪組織を含む肝臓外組織においても発現される（Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．１９９５．１６：１１６３−１１６６）。
【０５２３】
ＧＣＣＲ阻害剤の開発は、視床下部−下垂体副腎（ＨＰＡ）軸の活性化を含む全身ＧＣＣＲ阻害に関連した好ましくない副作用によって妨げられている。脳におけるＧＣＣＲ活性の阻害は、フィードバック調節による循環副腎皮質刺激ホルモンの増加につながり、その結果として副腎ステロイドの分泌増加につながる（Ｐｈｉｌｉｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．１９９１．１９：１−１７）。これは、次いで、無数の長期にわたるマイナスのステロイド関連副作用をもたらし得る。他の研究は、ＧＣＣＲの特定の不活性化が長時間の絶食時に低血糖をもたらしたことを実証している（Ｏｐｈｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｏｎｏｌ．２００４．１８：１３４６−１３５３）。
【０５２４】
前臨床モデルにおいて、ＧＣＣＲアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与が、ＣＮＳまたは副腎におけるＧＣＣＲ  ｍＲＮＡレベルに影響を及ぼすことなく、肝臓および脂肪組織における組織特異的蓄積およびＧＣＣＲ発現の減少をもたらすことが以前に実証されている（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／０７１０８０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０３５７５９号）。それ故に、ＧＣＣＲ  ｍＲＮＡ発現のアンチセンス阻害は、ＨＰＡ軸を活性化することなく高血糖症および脂質異常症を改善することが示されている。本発明は、ＧＣＣＲ発現を調節するための組成物および方法を提供する。ＧＣＣＲの発現を調節するためのアンチセンス化合物は、前記公開された特許出願に開示されている。しかしながら、さらなる改善された化合物が依然として必要とされている。本明細書に記載の化合物および治療方法は、ＧＣＣＲ関連障害に現在利用可能な治療選択肢に勝る有意な利点を提供する。
特許、特許出願、記事、書籍、および論文を含むが、これらに限定されない本出願において引用されるすべての文書または文書の一部は、本明細書で論じられる文書の一部に対して、かつそれらの全体において参照により本明細書に明確に組み込まれる。
ＧＣＣＲ核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
【０５２５】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ヌクレオチド３８１８０００〜３９８００００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０２９２８９．１０（配列番号７として本明細書に組み込まれる）の相補体の配列を有するＧＣＣＲ核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７に少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０５２６】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６６〜７７のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６６〜７７のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む。
【０５２７】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６６の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６６の核酸塩基配列を含む。
【０５２８】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６７の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６７の核酸塩基配列を
含む。
【０５２９】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６８の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６８の核酸塩基配列を含む。
【０５３０】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６９の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号６９の核酸塩基配列を含む。
【０５３１】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７０の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７０の核酸塩基配列を含む。
【０５３２】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７１の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７１の核酸塩基配列を含む。
【０５３３】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７２の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７２の核酸塩基配列を含む。
【０５３４】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７３の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７３の核酸塩基配列を含む。
【０５３５】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７４の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７４の核酸塩基配列を含む。
【０５３６】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７５の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７５の核酸塩基配列を含む。
【０５３７】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７６の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７６の核酸塩基配列を含む。
【０５３８】
ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７７の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７７の核酸塩基配列を
含む。
【表４】
2020058370.tif 000114
【０５３９】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０４７０および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２０４７０は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４０】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０４７６および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２０４７６は、以下の式：Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４１】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６１１５および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６１１５は、以下の式：Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ
Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４２】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６１３０および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６１３０は、以下の式：Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４３】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６１６８および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６１６８は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、  
【０５４４】
式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４５】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６１７２および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６１７２は、以下の式：ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ
Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４６】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６１８３および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６１８３は、以下の式：Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリ
ゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４７】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６２４６および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６２４６は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６２６１および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６２６１は、以下の式：Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４８】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６２６２および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６２６２は、以下の式：ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ
Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５４９】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６２６７および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６２６７は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ
Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、  
【０５５０】
式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５５１】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２６３２５および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４２６３２５は、以下の式：ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ
Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５５２】
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００５／０７１０８０号、同第ＷＯ２００７／０３５７５９号、または同第第ＷＯ２００７／１３６９８８号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００５／０７１０８０号に開示される配列番号３０〜２１６および３０６〜３１０のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００７／０３５７５９号に開示される配列番号２６〜１１３のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００７／１３６９８８号に開示される配列番号４１３〜４８５のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００５／０７１０８０号に開示される配列番号３０〜２１６および３０６〜３１０、国際公開第ＷＯ２００７／０３５７５９号に開示される配列番号２６〜１１３、ならびに国際公開第ＷＯ２００７／１３６９８８号に開示される配列番号４１３〜４８５のうちのいずれかの好ましい標的セグメントに相補的な核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
ＧＣＣＲ治療指標
【０５５３】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝関連疾患を有する。
【０５５４】
以下の実施例に示されるように、本明細書に記載のＧＣＣＲを標的にする共役化合物は
、代謝関連疾患（代謝症候群、真性糖尿病、インスリン抵抗性、糖尿病性脂質異常症、高トリグリセリド血症、肥満および体重増加を含む）の生理学的症状の重症度を低下させることが示されており、例えば、動物は、症状を呈し続けたが、症状の重症度は、処理されていない動物と比較して低かった。ある特定の実験において、共役化合物は、血糖値を低下させた。他の実験において、共役化合物は、糖尿病の症状を軽減させた。他の実験において、共役化合物は、体重増加を抑制する。他の実験において、共役化合物は、高トリグリセリド血症を抑制する。ある特定の実施形態において、共役化合物は、機能を回復させ、それ故に、本明細書に記載の化合物での治療による疾患の好転を示す。ある特定の実施形態において、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈する。
【０５５５】
真性糖尿病は、多くの身体的および生理学的兆候および／または症状を特徴とする。２型糖尿病と関連した当業者に既知の任意の症状は、改善され得るか、さもなければ上記の方法で調節され得る。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、グルコースレベルの増加、体重の増加、頻尿、異常な喉の渇き、極度の空腹感、極度の疲労感、視覚のぼけ、頻発する感染症、四肢のうずきまたはしびれ、乾燥敏感肌、体重減少、回復の遅い痛み、および歯茎の腫れ等の身体的症状である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、インスリン抵抗性の増加、グルコースレベルの増加、脂肪量の増加、代謝率の低下、グルコースクリアランスの低下、グルコース耐性の低下、インスリン感受性の低下、肝臓におけるインスリン感受性の低下、脂肪組織の大きさおよび重量の増加、体脂肪の増加、ならびに体重の増加等の生理学的症状である。
【０５５６】
ある特定の実施形態において、身体的兆候または症状は、グルコースレベルの増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、体重増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、頻尿である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、異常な喉の渇きである。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、極度の空腹感である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、極度の疲労感である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、視覚のぼけである。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、頻発する感染症である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、四肢のうずきまたはしびれである。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、乾燥敏感肌である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、体重減少である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、回復の遅い痛みである。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、歯茎の腫れである。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、インスリン抵抗性の増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、グルコースレベルの増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、脂肪量の増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、代謝率の低下である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、グルコースクリアランスの低下である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、グルコース耐性の低下である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、インスリン感受性の低下である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、肝臓におけるインスリン感受性の低下である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、脂肪組織の大きさおよび重量の増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、体脂肪の増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、体重の増加である。
【０５５７】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝関連疾患を有する。
【０５５８】
ある特定の実施形態において、ＧＣＣＲ核酸を標的にする共役アンチセンス化合物の投
与は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって定義される範囲のＧＣＣＲ発現の減少をもたらす。
【０５５９】
ある特定の実施形態において、ＧＣＣＲを標的にする共役アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、代謝関連疾患に罹患しているか、またはそれにかかりやすい患者を治療するための薬剤の調製のために用いられる。
【０５６０】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法は、配列番号６６〜７７に記載の配列の本明細書に記載の連続した核酸塩基部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む共役化合物を投与することを含む。
【０５６１】
本明細書に記載の化合物のうちのいずれかを前記方法および使用において用いることができることが理解される。例えば、ある特定の実施形態において、前記方法および使用におけるＧＣＣＲ核酸を標的にする共役アンチセンス化合物には、配列番号６６〜７７のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物；配列番号６６〜７７のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む配列番号７を標的にする共役アンチセンス化合物；ＩＳＩＳ  ４２０４７０、ＩＳＩＳ  ４２０４７６、ＩＳＩＳ  ４２６１１５、ＩＳＩＳ  ４２６１３０、ＩＳＩＳ  ４２６１６８、ＩＳＩＳ  ４２６１７２、ＩＳＩＳ  ４２６１８３、ＩＳＩＳ  ４２６２４６、ＩＳＩＳ  ４２６２６２、ＩＳＩＳ  ４２６２６７、またはＩＳＩＳ  ４２６３２５と、共役基とを含むか、またはそれらからなる化合物；参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２００５／０７１０８０号、同第ＷＯ２００７／０３５７５９号、または同第ＷＯ２００７／１３６９８８号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む化合物；国際公開第ＷＯ２００７／０３５７５９号に開示される配列番号２６〜１１３のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む化合物；国際公開第ＷＯ２００７／０３５７５９号に開示される配列番号２６〜１１３のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む化合物；または国際公開第ＷＯ２００７／１３６９８８号に開示される配列番号４１３〜４８５のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む化合物が含まれ得るが、これらに限定されない。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
４．ＧＣＧＲ
【０５６２】
インスリンおよびグルカゴンは、グルコース恒常性および代謝の調節に関与する２つの膵臓ホルモンである。グルカゴンは、膵島のα細胞から分泌され、肝臓におけるグルコース産生を調節することによりグルコース恒常性を制御する（Ｑｕｅｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００８．１９９：５−１９）。グルカゴンの主な機能は、インスリンの作用に対抗することである。
【０５６３】
グルコース代謝の調節不全は、インスリン分泌および／もしくは作用不全、または食後のグルカゴン抑制障害のいずれかによって引き起こされ得る（Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．１９９９．２７７：Ｅ２８３−Ｅ２９０）。糖尿病性対象における食後のグルカゴン分泌の抑制は、血糖を大幅に低下させことが示されており、グルカゴンが２型真性糖尿病を有する対象において見られる高血糖症に大きく寄与することを示唆する（Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２０００．８５：４０５３−４０５９）。
【０５６４】
２型糖尿病は、インスリン分泌および／または作用障害を特徴とし、多くの対象は、空
腹時および食後に不適切なレベルの循環グルカゴンも呈する。グルカゴン／インスリン比の増加は、２型糖尿病患者において見られる高血糖症の重要な決定因子である可能性が高い（Ｂａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．１９８７．３６：２７４−２８３）。Ｔ２ＤＭを有する対象における食後のグルカゴン分泌の抑制不足は、食後の高血糖症の発病にも重要な役割を果たす（Ｈｅｎｋｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．２００５．５４：１１６８−１１７３）。
【０５６５】
グルカゴンは、その受容体であるＧＣＧＲの活性化によって標的組織に作用する。グルカゴン受容体は、受容体のクラスＢ  Ｇ−タンパク質共役型ファミリーのメンバーである６２ｋＤａのタンパク質である（Ｂｒｕｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｃｅｐｔ．Ｃｈａｎｎｅｌｓ．２００２．８：１７９−８８）。ＧＣＧＲ活性化は、Ｇタンパク質（ＧｓαおよびＧｑ）によるシグナル変換につながり、それにより、Ｇｓαは、アデニル酸シクラーゼを活性化し、ｃＡＭＰ産生を引き起こし、タンパク質キナーゼＡのレベルの増加をもたらす。肝臓におけるＧＣＧＲシグナル伝達は、グリコーゲン生成の阻害に加えてグリコーゲン分解および糖新生の誘導により肝臓におけるグルコース産生の増加をもたらす（Ｊｉａｎｇ  ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００３．２８４：Ｅ６７１−Ｅ６７８）。ＧＣＧＲは、心臓、腸平滑筋、腎臓、脳、および脂肪組織を含む肝臓外組織においても発現される（Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ
ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．１９９５．１６：１１６３−１１６６）。
【０５６６】
ＧＣＧＲのアンチセンス阻害は、アンチセンス阻害剤が、化合物のタンパク質への競合的結合に依存せず、かつＧＣＧＲの発現を減少させることにより活性を直接阻害するという点において、従来の小分子阻害剤に勝る特有の利点を提供する。ＧＣＧＲアンチセンス阻害剤を教示する代表的な米国特許には、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第７，７５０，１４２号が含まれる。アンチセンス技術は、ある特定の遺伝子産物の発現を減少させるための効果的な手段として浮上しており、それ故に、いくつかの治療的、診断的、および研究用途において、ＧＣＧＲの調節に比類なく有用であることを立証することができる。
【０５６７】
現在、代謝性障害の治療に対する許容される選択肢が不足している。したがって、そのような疾患および障害を治療するための化合物および方法を提供することが本明細書における目的である。本発明は、ＧＣＧＲ遺伝子発現の新規の非常に強力な阻害剤の発見に関する。
【０５６８】
特許、特許出願、記事、書籍、および論文を含むが、これらに限定されない本出願において引用されるすべての文書または文書の一部は、本明細書で論じられる文書の一部に対して、かつそれらの全体において参照により本明細書に明確に組み込まれる。
ＧＣＧＲ核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
【０５６９】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０００１６０．３（配列番号８として本明細書に組み込まれる）またはヌクレオチド１６８６５０００〜１６８８５０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＷ＿９２６９１８．１（配列番号９として本明細書に組み込まれる）の配列を有するＧＣＧＲ核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号８および／または９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８および／または９に少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０５７０】
ある特定の実施形態において、配列番号８および／または９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７８〜８３のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号８および／または９を標的に
する共役アンチセンス化合物は、配列番号７８〜８３のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む。
【０５７１】
ある特定の実施形態において、配列番号８を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７８の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号８を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７８の核酸塩基配列を含む。
【０５７２】
ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７９の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号７９の核酸塩基配列を含む。
【０５７３】
ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８０の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８０の核酸塩基配列を含む。
【０５７４】
ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８１の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８１の核酸塩基配列を含む。
【０５７５】
ある特定の実施形態において、配列番号８および９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８２の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号８および９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８２の核酸塩基配列を含む。
【０５７６】
ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８３の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号９を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８３の核酸塩基配列を含む。
【表５】
2020058370.tif 000115
【０５７７】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ３２５５６８および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ３２５５６８は、以下の式：Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５７８】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ３９８４７１および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ３９８４７１は、以下の式：Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５７９】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４４８７６６および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４４８７６６は、以下の式：Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ
Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５８０】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４４９８８４および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４４９８８４は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ
Ｇｄｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５８１】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４５９０１４および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４５９０１４は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５８２】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４５９１５７および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４５９１５７は、以下の式：Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ
Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０５８３】
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国第７，７５０，１４２号、同第７，３９９，８５３号、国際公開第ＷＯ２００７／０３５７７１号、または同第ＷＯ２００７／１３４０１４号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、米国第７，７５０，１４２号に開示される配列番号２０〜３９９のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、米国第７，３９９，８５３号に開示される配列番号２０〜３９９のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００７／０３５７７１号に開示される配列番号２のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００７／１３４０１４号に開示される配列番号４８６〜６８０のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、米国第７，７５０，１４２号の配列番号２０〜３９９、米国第７，３９９，８５３号の配列番号２０〜３９９、国際公開第２００７／０３５７７１号の配列番号２、または国際公開第２００７／１３４０１４号の配列番号４８６〜６８０のうちのいずれかの好ましい標的セグメントに相補的な核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
ＧＣＧＲ治療指標
【０５８４】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝関連疾患を有する。
【０５８５】
以下の実施例に示されるように、本明細書に記載のＧＣＧＲを標的にする共役化合物は、代謝関連疾患（代謝症候群、真性糖尿病、インスリン抵抗性、糖尿病性脂質異常症、高トリグリセリド血症、肥満および体重増加を含む）の生理学的症状の重症度を低下させることが示されている。ある特定の実験において、共役化合物は、血糖値を低下させ、例えば、動物は、症状を呈し続けたが、症状の重症度は、処理されていない動物と比較して低かった。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、糖尿病の症状を軽減するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、体重増加を抑制するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い症状を呈した。しかしながら、他の実験において、共役化合物は、高トリグリセリド血症を抑制するようであり、例えば、長期間処理された動物は、化合物を短期間投与された動物よりも重症度の低い兆候および／または症状を呈した。したがって、機能を回復させる以下に例示される共役化合物の能力は、疾患の症状が本明細書に記載の化合物での処理によって好転し得ることを示す。
【０５８６】
真性糖尿病は、多くの身体的および生理学的兆候および／または症状を特徴とする。２型糖尿病と関連した当業者に既知の任意の症状は、改善され得るか、さもなければ上記の方法で調節され得る。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、グルコースレベルの増加、体重増加、頻尿、異常な喉の渇き、極度の空腹感、極度の疲労感、視覚のぼけ、頻発する感染症、四肢のうずきまたはしびれ、乾燥敏感肌、体重減少、回復の遅い痛み
、および歯茎の腫れ等の身体的症状または兆候である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、インスリン抵抗性の増加、グルコースレベルの増加、脂肪量の増加、代謝率の低下、グルコースクリアランスの低下、グルコース耐性の低下、インスリン感受性の低下、肝臓におけるインスリン感受性の低下、脂肪組織の大きさおよび重量の増加、体脂肪の増加、ならびに体重の増加からなる群から選択される生理学的症状または兆候である。
【０５８７】
ある特定の実施形態において、身体的症状または兆候は、グルコースレベルの増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、体重増加である。ある特定の実施形態において、症状は、頻尿である。ある特定の実施形態において、症状は、異常な喉の渇きである。ある特定の実施形態において、症状は、極度の空腹感である。ある特定の実施形態において、症状は、極度の疲労感である。ある特定の実施形態において、症状は、視覚のぼけである。ある特定の実施形態において、症状は、頻発する感染症である。ある特定の実施形態において、症状は、四肢のうずきまたはしびれである。ある特定の実施形態において、症状は、乾燥敏感肌である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、体重減少である。ある特定の実施形態において、症状は、回復の遅い痛みである。ある特定の実施形態において、症状は、歯茎の腫れである。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、インスリン抵抗性の増加である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、グルコースレベルの増加である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、脂肪量の増加である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、代謝率の低下である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、グルコースクリアランスの低下である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、グルコース耐性の低下である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、インスリン感受性の低下である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、肝臓におけるインスリン感受性の低下である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、脂肪組織の大きさおよび重量の増加である。ある特定の実施形態において、症状または兆候は、体脂肪の増加である。ある特定の実施形態において、兆候または症状は、体重の増加である。
【０５８８】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が提供される。ある特定の実施形態において、個体は、代謝関連疾患を有する。
【０５８９】
ある特定の実施形態において、ＧＣＧＲ核酸を標的にする共役アンチセンス化合物の投与は、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは９９％、またはこれらの値のいずれか２つによって定義される範囲のＧＣＧＲ発現の減少をもたらす。
【０５９０】
ある特定の実施形態において、ＧＣＧＲを標的にする共役アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、代謝関連疾患に罹患しているか、またはそれにかかりやすい患者を治療するための薬剤の調製のために用いられる。
【０５９１】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載の方法は、配列番号７８〜８３に記載の配列の本明細書に記載の連続した核酸塩基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む共役化合物を投与することを含む。
【０５９２】
本明細書に記載の化合物のうちのいずれかを前記方法および使用において用いることができることが理解される。例えば、ある特定の実施形態において、前記方法および使用におけるＧＣＧＲ核酸を標的にする共役アンチセンス化合物には、配列番号７８〜８３のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む配列番号８および／または９を標的にする共役アンチセンス化合物；配列番号７８〜８３のうちのいずれか１つ
の核酸塩基配列を含む配列番号８および／または９を標的にする共役アンチセンス化合物；ＩＳＩＳ  ３２５５６８、ＩＳＩＳ  ３９８４７１、ＩＳＩＳ  ４４８７６６、ＩＳＩＳ  ４４９８８４、ＩＳＩＳ  ４５９０１４、またはＩＳＩＳ  ４５９１５７と、共役基とを含むか、またはそれらからなる化合物；参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国第７，７５０，１４２号、同第７，３９９，８５３号、国際公開第ＷＯ２００７／０３５７７１号、または同第ＷＯ２００７／１３４０１４号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む化合物が含まれ得るが、これらに限定されない。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
４．４．凝固因子７
【０５９３】
循環系は、失血を防ぐ機構、ならびに不適切な血管内障害物に対抗する機構を必要とする。一般に、凝固は、可溶性フィブリノゲンの不溶性フィブリンゲルへの変換に至る反応のカスケードを含む。カスケードのステップは、不活性チモーゲンの活性化酵素への変換を伴う。その後、活性酵素は、カスケードにおける次のステップを触媒する。
凝固カスケード
【０５９４】
凝固カスケードは、２つの分岐：一次経路である組織因子経路（「外因性経路」とも称される）および接触活性化経路（「内因性経路」とも称される）を介して開始され得る。
【０５９５】
組織因子経路は、血管外細胞（周皮細胞、心筋細胞、平滑筋細胞、およびケラチン生成細胞）によって構成的に発現され、かつ炎症性サイトカインまたはエンドトキシンによる誘導時に血管単球および内皮細胞によって発現される細胞表面受容体組織因子（ＴＦ、第ＩＩＩ因子とも称される）によって開始され得る（Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ
Ｐａｔｈｏｌ  １９８９，１３４：１０８７−１０９７）。ＴＦは、凝固因子ＶＩＩａに対する高親和性細胞受容体、セリンプロテアーゼである。ＴＦの不在下で、ＶＩＩａは、非常に低い触媒活性を有し、アロステリック機構によってＶＩＩａを機能的にするには、ＴＦへの結合が必要である（Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９８９，１３４：１０８７−１０９７）。ＴＦ−ＶＩＩａ複合体は、第Ｘ因子を活性化して第Ｘａ因子にする。Ｘａは、次いで、その共同因子である第Ｖａ因子と会合してプロトロンビナーゼ複合体になり、これは、次いで、プロトロンビン（別名、第ＩＩ因子または第２因子）を活性化してトロンビン（別名、第ＩＩａ因子または第２ａ因子）にする。トロンビンは、血小板を活性化し、フィブリノゲンをフィブリンに変換し、第ＸＩＩＩ因子を活性化することによってフィブリン架橋を促進し、それ故に、ＴＦが血管外細胞に曝露される部位で安定したプラグを形成する。加えて、トロンビンは、第Ｖ因子および第ＶＩＩＩ因子を活性化することにより凝固カスケード応答を強化する。
【０５９６】
接触活性化経路は、第ＸＩＩ因子を活性化して第ＸＩＩａ因子にすることにより誘発される。第ＸＩＩａ因子は、第ＸＩ因子を第ＸＩａ因子に変換し、第ＸＩａ因子は、第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子に変換する。第ＩＸａ因子は、その共同因子である第ＶＩＩＩａ因子と会合して、第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換する。これらの２つの経路は、第Ｘａ因子が第Ｖａ因子と会合してプロトロンビン（第ＩＩ因子）を活性化してトロンビン（第ＩＩａ因子）にした時点で合流する。
凝固阻害
【０５９７】
少なくとも３つの機構、すなわち、活性化プロテインＣ作用、抗トロンビン作用、および組織因子経路阻害剤作用が凝固カスケードを食い止める。活性化プロテインＣは、共同因子である第Ｖａ因子および第ＶＩＩＩａ因子を分解するセリンプロテアーゼである。プロテインＣは、トロンボモジュリンとトロンビンによって活性化され、補酵素プロテインＳが機能するのに必要とされる。抗トロンビンは、セリンプロテアーゼを阻害するセリン
プロテアーゼ阻害剤（セルピン）：トロンビン、Ｘａ、ＸＩＩａ、ＸＩａ、およびＩＸａである。組織因子経路阻害剤は、ＸａとＴＦ−ＶＩＩａの複合体の作用を阻害する（Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ．１９９７；７：２３４−２３９）。
疾患
【０５９８】
血栓症は、血栓の病理学的発症であり、塞栓症は、血栓が身体の別の部分に移動して臓器機能を妨害するときに起こる。血栓塞栓症は、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、および発作等の状態を引き起こし得る。有意に、血栓塞栓症は、毎年２００万人を超える米国人が罹患する主な罹患要因である（Ａｄｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．１９９７；１０８：４３４−４９）。血栓症の大半の症例が、後天性の外因性問題、例えば、手術、癌、不動性に起因する一方で、いくつかの症例は、遺伝性素因、例えば、抗リン脂質症候群および常染色体優性状態、第Ｖ因子ライデンに起因する（Ｂｅｒｔｉｎａ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  １９９４；３６９：６４−６７）。
治療
【０５９９】
最も一般に使用される抗凝固剤であるワルファリン、ヘパリン、および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）はすべて、重大な欠点を有する。
【０６００】
ワルファリンは、典型的には、心房細動に罹患する患者を治療するために用いられる。この薬物は、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、および第Ｘ因子を含むビタミンＫ依存性凝固因子と相互作用する。抗凝固剤であるプロテインＣおよびＳは、ワルファリンによっても阻害される。ワルファリンを用いた薬物療法は、ワルファリンがアミオダロン等の心房細動を治療するために用いられる薬物を含む他の薬剤と相互作用するといった事実によってさらに複雑になる。ワルファリンを用いた療法が予測を困難にするため、患者は、いかなる異常出血の兆候をも検出するために注意深く監視されなければならない。
【０６０１】
トロンビンと第Ｘ因子を両方ともに阻害する抗トロンビンを活性化することによってヘパリンが機能する（Ｂｊｏｒｋ  Ｉ，Ｌｉｎｄａｈｌ  Ｕ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８２  ４８：１６１−１８２）。ヘパリンでの治療は、血栓症をもたらし得る血小板を血管内で凝集させる免疫学的反応を引き起こし得る。この副作用は、ヘパリン起因性血小板減少症（ＨＩＴ）として知られており、患者の監視を必要とする。ヘパリンでの長期にわたる治療は、骨粗しょう症ももたらし得る。ＬＭＷＨは、第２因子も阻害することができるが、未分画ヘパリン（ＵＦＨ）よりも程度が低い。ＬＭＷＨは、ＨＩＴの発症に関与している。
【０６０２】
したがって、現在の抗凝固剤は、予測可能性および特異性を欠き、それ故に、出血性合併症等の有害な副作用を予防するために注意深い患者の監視を必要とする。現在、内因性経路のみ、または外因性経路のみを標的とする抗凝固剤が存在しない。
【０６０３】
第ＶＩＩ因子を標的とするアンチセンス化合物は、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１３／１１９９７９号および同第ＷＯ２００９／０６１８５１号に以前に開示されている。患者における第ＶＩＩ因子を標的とするアンチセンス化合物の影響を評価するための臨床研究が現在進行中である。しかしながら、患者にさらなるより強力な治療選択肢を提供する必要性が依然として存在する。
第ＶＩＩ因子核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
【０６０４】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、配列番号１０として本明細書に組み込まれるヌクレオチド１２５５０００〜１２７３０００から切断されたＧＥＮＢ
ＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０２７１４０．６；配列番号１１として本明細書に組み込まれるＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０１９６１６．２；本明細書において配列番号１２と指定されるＤＢ１８４１４１．１；および本明細書において配列番号１３と指定されるヌクレオチド６９１０００〜７０６０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＷ＿００１１０４５０７．１の配列を有する第ＶＩＩ因子核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号１１に少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０６０５】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８４〜９２のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８４〜９２のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む。
【０６０６】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８４の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８４の核酸塩基配列を含む。
【０６０７】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８５の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８５の核酸塩基配列を含む。
【０６０８】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８６の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８６の核酸塩基配列を含む。
【０６０９】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８７の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８７の核酸塩基配列を含む。
【０６１０】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８８の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８８の核酸塩基配列を含む。
【０６１１】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８９の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号８９の核酸塩基配列を含む。
【０６１２】
ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９０の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９０の核酸塩基配列を含む。
【表６】
2020058370.tif 000116
【０６１３】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９１５および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４０７９３５は、以下の式：Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６１４】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ３０４２９９および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４７３５８９は、以下の式：Ｇｋｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｋｓ  Ａｄｓ  Ａｋｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｅｓ  Ｔｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、
式中、各核酸塩基は、以下に従って示され：
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６１５】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９２１および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ４９０２７９は、以下の式：ｍＣｅｓ  ｍＣｅｓ  
ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、
式中、各核酸塩基は、以下に従って示され：
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６１６】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９２２および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ５２９８０４は、以下の式：ｍＣｋｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｋｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｋｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６１７】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９５０および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ５３４７９６は、以下の式：Ａｅｓ  Ｇｋｓ  Ａｋｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｋｓ  Ｇｋｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６１８】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９５５および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ５４０１６２は、以下の式：Ｇｅｓ  Ａｅｓ  Ａｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ａｄｓ  Ｔｄｓ  Ｔｄｓ  Ｇｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｅｓ  ｍＣｅｓ  Ｔｅｓ  Ｇｅｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６１９】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９５７および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ５４０１７５は、以下の式：  Ｇｅｓ  Ｇｅｓ  Ａｋｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
各核酸塩基は、以下に従って示され：
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６２０】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９５９および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ５４０１８２は、以下の式：  Ａｅｓ  ｍＣｅｓ  Ａｋｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｋｓ  Ｇｋｓ  Ｇｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６２１】
ある特定の実施形態において、化合物は、ＩＳＩＳ  ４２０９５９および共役基を含むか、またはそれからなる。ＩＳＩＳ  ５４０１９１は、以下の式：  Ｇｅｓ  ｍＣｅｓ  ｍＣｋｓ  Ｔｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｄｓ  Ｇｄｓ  Ｇｄｓ  Ａｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  Ａｄｓ  ｍＣｄｓ  ｍＣｋｓ  ｍＣｋｓ  Ａｅを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Ａは、アデニンであり、
Ｔは、チミンであり、
Ｇは、グアニンであり、
ｍＣは、５−メチルシトシンであり、
各糖部分は、以下に従って示され：
ｋは、ｃＥｔであり、
ｄは、２’−デオキシリボースであり、
ｅは、２’−ＭＯＥであり、
各ヌクレオシド間結合は、以下に従って示される：
ｓは、ホスホロチオエートである。
【０６２２】
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１３／１１９９７９号および同第ＷＯ２００９／０６１８５１号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２０１３／１１９９７９号に開示される配列番号２１〜６５９のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２００９／０６１８５１号に開示される、配列番号４〜１５９および１６８〜６１１のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
第ＶＩＩ因子治療指標
【０６２３】
ある特定の実施形態において、療法において用いるための本明細書に記載の化合物および組成物が本明細書に提供される。
【０６２４】
ある特定の実施形態において、血栓塞栓性合併症を治療するか、予防するか、またはその進行を遅らせるために用いる本明細書に記載の共役アンチセンス化合物および組成物が本明細書に提供される。
【０６２５】
ある特定の実施形態において、過剰増殖性障害を治療するか、予防するか、またはその進行を遅らせるために用いる本明細書に記載の共役アンチセンス化合物および組成物が本明細書に提供される。
【０６２６】
ある特定の実施形態において、炎症性状態を治療するか、予防するか、またはその進行を遅らせるために用いる本明細書に記載の共役アンチセンス化合物および組成物が本明細書に提供される。
【０６２７】
ある特定の実施形態において、本発明は、第ＶＩＩ因子核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて対象における第ＶＩＩ因子の発現を調節するための方法を提供する。ある特定の実施形態において、第ＶＩＩ因子の発現が低下する。
【０６２８】
ある特定の実施形態において、本発明は、医薬組成物において第ＶＩＩ因子核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて対象を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態において、対象は、第ＶＩＩ因子関連疾患、障害、もしくは状態、またはその症状を有する。ある特定の実施形態において、第ＶＩＩ因子関連疾患、障害、または状態は、血栓塞栓性合併症、過剰増殖性障害、または炎症性状態である。
【０６２９】
ある特定の実施形態において、本発明は、第ＶＩＩ因子核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて薬剤を調製するための方法を提供する。
【０６３０】
ある特定の実施形態において、本発明は、療法において用いるための第ＶＩＩ因子核酸を標的にする共役アンチセンス化合物、またはその薬剤的に許容される塩を提供する。
【０６３１】
ある特定の実施形態は、第ＶＩＩ因子関連疾患、障害、もしくは状態、またはその症状の治療に用いるための第ＶＩＩ因子核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、第ＶＩＩ因子関連疾患、障害、または状態は、血栓塞栓性合併症、過剰増殖性障害、または炎症性状態である。
【０６３２】
ある特定の実施形態において、血栓塞栓性合併症を治療するか、予防するか、またはその進行を遅らせるために用いる本明細書に記載の共役アンチセンス化合物および組成物が本明細書に提供される。
【０６３３】
ある特定の実施形態において、過剰増殖性障害を治療するか、予防するか、またはその進行を遅らせるために用いる本明細書に記載の共役アンチセンス化合物および組成物が本明細書に提供される。
【０６３４】
ある特定の実施形態において、炎症性状態を治療するか、予防するか、またはその進行を遅らせるために用いる本明細書に記載の共役アンチセンス化合物および組成物が本明細書に提供される。
【０６３５】
本明細書に記載の化合物のうちのいずれかを前記方法および使用において用いることができることが理解される。例えば、ある特定の実施形態において、前記方法および使用における第ＶＩＩ因子核酸を標的にする共役アンチセンス化合物には、配列番号８４〜９２のうちのいずれか１つの配列の少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物；配列番号８４〜９２のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む配列番号１１を標的にする共役アンチセンス化合物；ＳＩＳ  ４０７９３５、ＩＳＩＳ  ４７３５８９、ＩＳＩＳ  ４９０２７９、ＩＳＩＳ  ５２９８０４、ＩＳＩＳ  ５３４７９６、ＩＳＩＳ  ５４０１６２、ＩＳＩＳ  ５４０１７５、ＩＳＩＳ  ５４０１８２、またはＩＳＩＳ  ５４０１９１と、共役基とを含むか、またはそれらからなる化合物Ｉ：参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１３／１１９９７９号および同第ＷＯ２００９／０６１８５１号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む化合物；国際公開第ＷＯ２０１３／１１９９７９号に開示される配列番号２１〜６５９のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む化合物；国際公開第ＷＯ２００９／０６１８５１号に開示される配列番号４−１５９および１６８−６１１のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む化合物が含まれ得るが、これらに限定されない。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
４．凝固因子１１
【０６３６】
循環系は、失血を防ぐ機構、ならびに不適切な血管内障害物に対抗する機構を必要とする。一般に、凝固は、可溶性フィブリノゲンの不溶性フィブリンゲルへの変換に至る反応のカスケードを含む。カスケードのステップは、不活性チモーゲンの活性化酵素への変換を伴う。その後、活性酵素は、カスケードにおける次のステップを触媒する。
凝固カスケード
【０６３７】
凝固カスケードは、２つの分岐：一次経路である組織因子経路（「外因性経路」とも称される）および接触活性化経路（「内因性経路」とも称される）を介して開始され得る。
【０６３８】
組織因子経路は、血管外細胞（周皮細胞、心筋細胞、平滑筋細胞、およびケラチン生成
細胞）によって構成的に発現され、かつ炎症性サイトカインまたはエンドトキシンによる誘導時に血管単球および内皮細胞によって発現される細胞表面受容体組織因子（ＴＦ、第ＩＩＩ因子とも称される）によって開始され得る（Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ
Ｐａｔｈｏｌ  １９８９，１３４：１０８７−１０９７）。ＴＦは、凝固因子ＶＩＩａに対する高親和性細胞受容体、セリンプロテアーゼである。ＴＦの不在下で、ＶＩＩａは、非常に低い触媒活性を有し、アロステリック機構によってＶＩＩａを機能的にするには、ＴＦへの結合が必要である（Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９８９，１３４：１０８７−１０９７）。ＴＦ−ＶＩＩａ複合体は、第Ｘ因子を活性化して第Ｘａ因子にする。Ｘａは、次いで、その共同因子である第Ｖａ因子と会合してプロトロンビナーゼ複合体になり、これは、次いで、プロトロンビン（別名、第ＩＩ因子または第２因子）を活性化してトロンビン（別名、第ＩＩａ因子または第２ａ因子）にする。トロンビンは、血小板を活性化し、フィブリノゲンをフィブリンに変換し、第ＸＩＩＩ因子を活性化することによってフィブリン架橋を促進し、それ故に、ＴＦが血管外細胞に曝露される部位で安定したプラグを形成する。加えて、トロンビンは、第Ｖ因子および第ＶＩＩＩ因子を活性化することにより凝固カスケード応答を強化する。
【０６３９】
接触活性化経路は、第ＸＩＩ因子を活性化して第ＸＩＩａ因子にすることにより誘発される。第ＸＩＩａ因子は、第ＸＩ因子を第ＸＩａ因子に変換し、第ＸＩａ因子は、第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子に変換する。第ＩＸａ因子は、その共同因子である第ＶＩＩＩａ因子と会合して、第Ｘ因子を第Ｘａ因子に変換する。これらの２つの経路は、第Ｘａ因子が第Ｖａ因子と会合してプロトロンビン（第ＩＩ因子）を活性化してトロンビン（第ＩＩａ因子）にした時点で合流する。
凝固阻害
【０６４０】
少なくとも３つの機構、すなわち、活性化プロテインＣ作用、抗トロンビン作用、および組織因子経路阻害剤作用が凝固カスケードを食い止める。活性化プロテインＣは、共同因子である第Ｖａ因子および第ＶＩＩＩａ因子を分解するセリンプロテアーゼである。プロテインＣは、トロンボモジュリンとトロンビンによって活性化され、補酵素プロテインＳが機能するのに必要とされる。抗トロンビンは、セリンプロテアーゼを阻害するセリンプロテアーゼ阻害剤（セルピン）：トロンビン、Ｘａ、ＸＩＩａ、ＸＩａ、およびＩＸａである。組織因子経路阻害剤は、ＸａとＴＦ−ＶＩＩａの複合体の作用を阻害する（Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ．１９９７；７：２３４−２３９）。
疾患
【０６４１】
血栓症は、血栓の病理学的発症であり、塞栓症は、血栓が身体の別の部分に移動して臓器機能を妨害するときに起こる。血栓塞栓症は、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、および発作等の状態を引き起こし得る。有意に、血栓塞栓症は、毎年２００万人を超える米国人が罹患する主な罹患要因である（Ａｄｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ
Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．１９９７；１０８：４３４−４９）。血栓症の大半の症例が、後天性の外因性問題、例えば、手術、癌、不動性に起因する一方で、いくつかの症例は、遺伝性素因、例えば、抗リン脂質症候群および常染色体優性状態、第Ｖ因子ライデンに起因する（Ｂｅｒｔｉｎａ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  １９９４；３６９：６４−６７）。
治療
【０６４２】
最も一般に使用される抗凝固剤であるワルファリン、ヘパリン、および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）はすべて、重大な欠点を有する。
【０６４３】
ワルファリンは、典型的には、心房細動に罹患する患者を治療するために用いられる。
この薬物は、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、および第Ｘ因子を含むビタミンＫ依存性凝固因子と相互作用する。抗凝固剤であるプロテインＣおよびＳは、ワルファリンによっても阻害される。ワルファリンを用いた薬物療法は、ワルファリンがアミオダロン等の心房細動を治療するために用いられる薬物を含む他の薬剤と相互作用するといった事実によってさらに複雑になる。ワルファリンを用いた療法が予測を困難にするため、患者は、いかなる異常出血の兆候をも検出するために注意深く監視されなければならない。
【０６４４】
トロンビンと第Ｘ因子を両方ともに阻害する抗トロンビンを活性化することによってヘパリンが機能する（Ｂｊｏｒｋ  Ｉ，Ｌｉｎｄａｈｌ  Ｕ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８２  ４８：１６１−１８２）。ヘパリンでの治療は、血栓症をもたらし得る血小板を血管内で凝集させる免疫学的反応を引き起こし得る。この副作用は、ヘパリン起因性血小板減少症（ＨＩＴ）として知られており、患者の監視を必要とする。ヘパリンでの長期にわたる治療は、骨粗しょう症ももたらし得る。ＬＭＷＨは、第２因子も阻害することができるが、未分画ヘパリン（ＵＦＨ）よりも程度が低い。ＬＭＷＨは、ＨＩＴの発症に関与している。
【０６４５】
したがって、現在の抗凝固剤は、予測可能性および特異性を欠き、それ故に、出血性合併症等の有害な副作用を予防するために注意深い患者の監視を必要とする。現在、内因性経路のみ、または外因性経路のみを標的とする抗凝固剤が存在しない。
【０６４６】
第ＸＩ因子を標的とするアンチセンス化合物は、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０／０４５５０９号および同第ＷＯ２０１０／１２１０７４号に以前に開示されている。患者における第ＸＩ因子を標的とするアンチセンス化合物の影響を評価するための臨床研究が現在進行中である。しかしながら、患者にさらなるより強力な治療選択肢を提供する必要性が依然として存在する。
第ＸＩ因子核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
【０６４７】
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０００１２８．３（配列番号１４として本明細書に組み込まれる）、１９５９８０００〜１９６２４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＴ＿０２２７９２．１７（配列番号１５として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＭ＿０２８０６６．１（配列番号１６として本明細書に組み込まれる）、エキソン１〜１５ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＷ＿００１１１８１６７．１（配列番号１７として本明細書に組み込まれる）の配列を有する第ＸＩ因子核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号２を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号２に少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０６４８】
ある特定の実施形態において、配列番号２を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号１２〜１９のうちのいずれか１つの少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号２を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号１２〜１９のうちのいずれか１つの核酸塩基配列を含む。
【０６４９】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９３の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９３の核酸塩基配列を含む。
【０６５０】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９４の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９４の核酸塩基配
列を含む。
【０６５１】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９５の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９５の核酸塩基配列を含む。
【０６５２】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９６の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９６の核酸塩基配列を含む。
【０６５３】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９７の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９７の核酸塩基配列を含む。
【０６５４】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９８の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９８の核酸塩基配列を含む。
【０６５５】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９９の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号９９の核酸塩基配列を含む。
【０６５６】
ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号１００の少なくとも８個の連続した核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号１４を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号１００の核酸塩基配列を含む。
【表７】
2020058370.tif 000117
【０６５７】
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ２０１０／０４５５０９号および同第ＷＯ２０１０／１２１０７４号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２０１０／０４５５０９号に開示される配列番号１５〜２７０のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第ＷＯ２０１０／１２１０７４号に開示される配列番号１５〜２７０のうちのいずれ
かの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載の共役基とを含む。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。

Ｅ．ある特定の医薬組成物
【０６５８】
ある特定の実施形態において、本開示は、１個以上のアンチセンス化合物を含む医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、そのような医薬組成物は、好適な薬剤的に許容される希釈剤または担体を含む。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、滅菌生理食塩溶液および１個以上のアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態において、そのような医薬組成物は、滅菌生理食塩溶液および１個以上のアンチセンス化合物からなる。ある特定の実施形態において、滅菌生理食塩水は、医薬品グレードの生理食塩水である。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、１個以上のアンチセンス化合物および滅菌水を含む。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、１個以上のアンチセンス化合物および滅菌水からなる。ある特定の実施形態において、滅菌生理食塩水は、医薬品グレードの水である。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、１個以上のアンチセンス化合物およびリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、１個以上のアンチセンス化合物および滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）からなる。ある特定の実施形態において、滅菌生理食塩水は、医薬品グレードのＰＢＳである。
【０６５９】
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、医薬組成物または製剤を調製するために薬剤的に許容される活性および／または不活性物質と混合され得る。組成物および医薬組成物を製剤化するための方法は、投与経路、疾患の程度、または投与される用量を含むが、これらに限定されないいくつかの基準に依存する。
【０６６０】
アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、任意の薬剤的に許容される塩、エステル、またはそのようなエステルの塩を包含する。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、ヒトを含む動物への投与時に、生物学的に活性な代謝物またはその残渣を（直接的または間接的に）提供することができる１個以上のオリゴヌクレオチドを含む。したがって、例えば、本開示は、アンチセンス化合物の薬剤的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬剤的に許容される塩、および他の生物学的等価物を対象とする。好適な薬剤的に許容される塩には、ナトリウム塩およびカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。
【０６６１】
プロドラッグは、体内で内因性ヌクレアーゼによって切断されて活性アンチセンスオリゴヌクレオチドを形成するオリゴヌクレオチドの一方または両方の末端におけるさらなるヌクレオシドの組み込みを含み得る。
【０６６２】
脂質部分は、様々な方法で核酸療法において用いられている。ある特定のそのような方法において、核酸は、カチオン性脂質と中性脂質の混合物から作られた事前形成されたリポソームまたはリポプレックスに導入される。ある特定の方法において、モノまたはポリカチオン性脂質とのＤＮＡ複合体は、中性脂質の存在なしで形成される。ある特定の実施形態において、脂質部分は、特定の細胞または組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態において、脂質部分は、脂肪組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態において、脂質部分は、筋肉組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。
【０６６３】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、１個以上の修飾オリゴヌクレオチドおよび１個以上の賦形剤を含む。ある特定のそのような実施形態におい
て、賦形剤は、水、食塩水、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、滑石、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンから選択される。
【０６６４】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、送達系を含む。送達系の例として、リポソームおよびエマルジョンが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の送達系は、疎水性化合物を含む医薬組成物を含むある特定の医薬組成物の調製に有用である。ある特定の実施形態において、ジメチルスルホキシド等のある特定の有機溶媒が用いられる。
【０６６５】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、特定の組織または細胞型に本開示の１個以上の医薬品を送達するように設計された１個以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある特定の実施形態において、医薬組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。
【０６６６】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、共溶媒系を含む。ある特定のそのような共溶媒系は、例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、および水相を含む。ある特定の実施形態において、そのような共溶媒系は、疎水性化合物に用いられる。そのような共溶媒系の非限定的な例にはＶＰＤ共溶媒系があり、これは、３ｗ／ｖ％のベンジルアルコール、８ｗ／ｖ％の非極性界面活性剤ポリソルベート８０（商標）、および６５ｗ／ｖ％のポリエチレングリコール３００を含む無水エタノールの溶液である。そのような共溶媒系の割合は、それらの溶解度および毒性特性を著しく変化させることなく大幅に変化し得る。さらに、共溶媒成分の同一性は変化し得、例えば、他の界面活性剤をポリソルベート８０（商標）の代わりに使用してもよく、ポリエチレングリコールの画分サイズは変化し得、他の生体適合性ポリマーは、ポリエチレングリコール、例えば、ポリビニルピロリドンに取って代わり得、他の糖または多糖は、デキストロースと置き換わり得る。
【０６６７】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、経口投与のために調製される。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、口腔投与のために調製される。
【０６６８】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、注入による投与（例えば、静脈内、皮下、筋肉内等）のために調製される。ある特定のそのような実施形態において、医薬組成物は、担体を含み、水溶液、例えば、水または生理学的に相溶性の緩衝液、例えば、ハンクス溶液、リンガー溶液、または生理学的生理食塩水緩衝液等の中で製剤化される。ある特定の実施形態において、他の成分（例えば、溶解に役立つか、または防腐剤の役目を果たす成分）が含まれる。ある特定の実施形態において、注入可能な懸濁液は、適切な液体担体、懸濁化剤等を用いて調製される。注入用のある特定の医薬組成物は、単位剤形で、例えば、アンプル単位で提供されるか、または多用量容器内に提供される。注入用のある特定の医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンであり、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散剤等の製剤化剤を含有し得る。注入用の医薬組成物における使用に好適なある特定の溶媒には、親油性溶媒および脂肪油、例えば、ゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド、およびリポソームが含まれるが、これらに限定されない。水性注入懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン等の懸濁液の粘度を増加させる物質を含有し得る。任意に、そのような懸濁液は、好適な安定剤または高度に濃縮された溶液の調製を可能にする医薬品の溶解度を増加させる薬剤も含有し得る。
【０６６９】
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、経粘膜投与のために調製される。ある特
定のそのような実施形態において、浸透する障壁に適切な浸透剤が製剤化において用いられる。そのような浸透剤は、一般に当技術分野で既知である。
【０６７０】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、治療的に効果的な量のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態において、治療的に効果的な量は、疾患の症状を防止するか、疾患の症状を軽減するか、もしくは疾患の症状を改善するか、または治療される対象の生存期間を延長させるのに十分な量である。治療的に効果的な量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０６７１】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される１個以上の修飾オリゴヌクレオチドは、プロドラッグとして製剤化される。ある特定の実施形態において、生体内投与時に、プロドラッグは、オリゴヌクレオチドの生物学的に、薬剤的に、または治療的により活性な形態に化学変換される。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも投与し易いため、有用である。例えば、ある特定の事例において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも生物学的に利用可能である（例えば、経口投与によって）。ある特定の事例において、プロドラッグは、対応する活性形態と比較して、改善された溶解度を有し得る。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも水溶性が低い。ある特定の事例において、そのようなプロドラッグは、水溶解度が移動性に害を及ぼす細胞膜にわたって優れた透過性を有する。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、エステルである。ある特定のそのような実施形態において、エステルは、投与時にカルボン酸に代謝的に加水分解される。ある特定の事例において、カルボン酸含有化合物は、対応する活性形態である。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、酸基に結合される短ペプチド（ポリアミノ酸）を含む。ある特定のそのような実施形態において、ペプチドは、投与時に切断されて、対応する活性形態を形成する。
【０６７２】
ある特定の実施形態において、本開示は、細胞内の標的核酸の量または活性を低減させる、組成物および方法を提供する。ある特定の実施形態において、細胞は、動物内に存在する。ある特定の実施形態において、動物は、哺乳動物である。ある特定の実施形態において、動物は、齧歯動物である。ある特定の実施形態において、動物は、霊長類である。ある特定の実施形態において、動物は、非ヒト霊長類である。ある特定の実施形態において、動物は、ヒトである。
【０６７３】
ある特定の実施形態において、本開示は、本開示のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を動物に投与する方法を提供する。好適な投与経路には、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、腸内投与、経腸投与、局所投与、坐薬投与、吸入による投与、髄腔内投与、脳室内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、眼内投与、腫瘍内投与、ならびに非経口（例えば、静脈内、筋肉内、髄内、および皮下）投与が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、薬学的髄腔内薬が投与されて、全身曝露ではなく局所曝露を達成する。例えば、医薬組成物は、所望の罹患部に（例えば、肝臓に）直接注入され得る。
参照による非限定的な開示および組み込み
【０６７４】
本明細書に記載のある特定の化合物、組成物、および方法がある特定の実施形態に従って具体的に記載されているが、以下の実施例は、本明細書に記載の化合物を例証する役目のみを果たし、それを限定するようには意図されていない。本出願に列挙される参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号等の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０６７５】
本出願に添付される配列表が必要に応じて各配列を「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれか一方と特定するが、実際には、それらの配列は、化学修飾の任意の組み合わせで修飾され得る。当業者であれば、修飾オリゴヌクレオチドを説明するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のそのような指定が、ある特定の事例において、任意であることを容易に認識
する。例えば、２’−ＯＨ糖部分およびチミン塩基を含むヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、修飾糖を有するＤＮＡ（ＤＮＡの天然２’−Ｈの場合、２’−ＯＨ）または修飾塩基を有するＲＮＡ（ＲＮＡの天然ウラシルの場合、チミン（メチル化ウラシル））と記載され得る。
【０６７６】
したがって、配列表中のものを含むが、これらに限定されない本明細書に提供される核酸配列は、修飾核酸塩基を有するそのような核酸を含むが、これらに限定されない天然または修飾ＲＮＡおよび／またはＤＮＡの任意の組み合わせを含有する核酸を包含するよう意図される。さらなる例であって制限するものではなく、核酸塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するオリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾にかかわらず、ＲＮＡ塩基、例えば、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するオリゴヌクレオチド、ならびに「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」等のいくつかのＤＮＡ塩基およびいくつかのＲＮＡ塩基を有するオリゴヌクレオチド、ならびに「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」等の他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含むそのような化合物を含むが、これらに限定されないそのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴヌクレオチドを包含し、式中、ｍｅＣは、５位にメチル基を含むシトシン塩基を示す。
【実施例】
【０６７７】
以下の実施例は、本開示のある特定の実施形態を例証するものであり、限定するものではない。さらに、特定の実施形態が提供される場合、本発明者らは、それらの特定の実施形態の一般的適用を企図している。例えば、特定のモチーフを有するオリゴヌクレオチドの開示は、そのモチーフまたは同様のモチーフを有するさらなるオリゴヌクレオチドへの合理的な支持を提供する。同様に、例えば、特定の高親和性修飾が特定の位置に出現する場合、同一の位置での他の高親和性修飾は、別途示されない限り、好適であると見なされる。
実施例１：ホスホラミダイト（化合物１、１ａ、および２）の調製のための一般的方法
【化１０８】
2020058370.tif 000118
【０６７８】
化合物１、１ａ、および２を、本明細書に記載される当技術分野で周知の手順通りに調製した（Ｓｅｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，２１（４），１１２２−１１２５，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，７５（５），１５６９−１５８１，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ，２００８，５２（１），５５３−５５４）、ならびに公開されたＰＣＴ国際出願（国際公開第ＷＯ２０１１／１１５８１８号、同第ＷＯ２０１０／０７７５７８号、同第ＷＯ２０１０／０３６６９８号、同第ＷＯ２００９／１４３３６９号、同第ＷＯ２００９／００６４７８、および同第ＷＯ２００７／０９００７１号）、ならびに米国特許第７，５６９，６８６号も参照のこと）。
実施例２：化合物７の調製
【化１０９】
2020058370.tif 000119
【０６７９】
化合物３（２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄガラクトピラノースまたはガラクトサミンペンタアセテート）は、市販のものである。化合物５を公開された手順（Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，３４，２６９２）に従って調製した。
実施例３：化合物１１の調製
【化１１０】
2020058370.tif 000120
【０６８０】
化合物８および９は、市販のものである。
実施例４：化合物１８の調製
【化１１１】
2020058370.tif 000121
【０６８１】
化合物１１を実施例３に例証される手順通りに調製した。化合物１４は、市販のものである。化合物１７を、Ｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００４，４７，５７９８−５８０８）によって報告された同様の手順を用いて調製した。
実施例５：化合物２３の調製
【化１１２】
2020058370.tif 000122
【０６８２】
化合物１９および２１は、市販のものである。
実施例６：化合物２４の調製
【化１１３】
2020058370.tif 000123
【０６８３】
化合物１８および２３を実施例４および５に例証される手順通りに調製した。
実施例７：化合物２５の調製
【化１１４】
2020058370.tif 000124
【０６８４】
化合物２４を実施例６に例証される手順通りに調製した。
実施例８：化合物２６の調製
【化１１５】
2020058370.tif 000125
【０６８５】
化合物２４を実施例６に例証される手順通りに調製する。
実施例９：３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含む共役ＡＳＯ（化合物２９）の一般的調製
【化１１６】
2020058370.tif 000126
【化１１７】
2020058370.tif 000127
【０６８６】
保護されたＧａｌＮＡｃ３−１は、以下の構造を有する。
【化１１８】
2020058370.tif 000128
【０６８７】
共役基ＧａｌＮＡｃ３−１のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ３−１ａは、以下の式を有する。
【化１１９】
2020058370.tif 000129
【０６８８】
固体支持体結合保護ＧａｌＮＡｃ３−１（化合物２５）を実施例７に例証される手順通りに調製した。３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含むオリゴマー化合物２９を、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準の手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト構築ブロック（化合物１および１ａ）を実施例１に例証される手順通りに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列および組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、本明細書に記載のギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって指示される既定の組成および塩基配列を有し得る。
実施例１０：５’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含む共役ＡＳＯ（化合物３４）の一般的調製
【化１２０】
2020058370.tif 000130
【化１２１】
2020058370.tif 000131
【０６８９】
Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ（商標）３０は、市販のものである。５’末端にＧａｌＮＡｃ３−１クラスターを含むオリゴマー化合物３４を、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準の手順を用いて調製する（Ｄｕｐｏｕｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅ
ｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト構築ブロック（化合物１および１ａ）を実施例１に例証される手順通りに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列および組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、本明細書に記載のギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって指示される既定の組成および塩基配列を有し得る。
実施例１１：化合物３９の調製
【化１２２】
2020058370.tif 000132
【化１２３】
2020058370.tif 000133
【０６９０】
化合物４、１３、および２３を実施例２、４、および５に例証される手順通りに調製した。化合物３５をＲｏｕｃｈａｕｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，１２，２３４６−２３５３に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例１２：化合物４０の調製
【化１２４】
2020058370.tif 000134
【０６９１】
化合物３８を実施例１１に例証される手順通りに調製する。
実施例１３：化合物４４の調製
【化１２５】
2020058370.tif 000135
【化１２６】
2020058370.tif 000136
【０６９２】
化合物２３および３６を実施例５および１１に例証される手順通りに調製する。化合物４１を、国際公開第ＷＯ２００９０８２６０７号に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例１４：化合物４５の調製
【化１２７】
2020058370.tif 000137
【０６９３】
化合物４３を実施例１３に例証される手順通りに調製する。
実施例１５：化合物４７の調製
【化１２８】
2020058370.tif 000138
【０６９４】
化合物４６は、市販のものである。
実施例１６：化合物５３の調製
【化１２９】
2020058370.tif 000139
【０６９５】
化合物４８および４９は、市販のものである。化合物１７および４７を実施例４および１５に例証される手順通りに調製する。
実施例１７：化合物５４の調製
【化１３０】
2020058370.tif 000140
【０６９６】
化合物５３を実施例１６に例証される手順通りに調製する。
実施例１８：化合物５５の調製
【化１３１】
2020058370.tif 000141
【０６９７】
化合物５３を実施例１６に例証される手順通りに調製する。
実施例１９：固相技法による３’位にＧａｌＮＡｃ３−１を含む共役ＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ  ６４７５３５、６４７５３６、および６５１９００の調製）
【０６９８】
別途明記されない限り、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬および溶液を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロックおよび固体支持体を、例えば、Ｔ、Ａ、Ｇ、およびｍＣ残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの０．１Ｍ溶液をb−Ｄ−２’−デオキシリ
ボヌクレオシドおよび２’−ＭＯＥに用いた。
【０６９９】
カラムに充填されたＧａｌＮＡｃ３−１を充填したＶＩＭＡＤ固体支持体（１１０μｍｏｌ／ｇ、Ｇｕｚａｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）におけるホスホラミダイトカップリング方法を用いて、ＡＳＯ合成を、ＡＢＩ  ３９４合成装置（１〜２μｍｏｌの規模）またはＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＡｅＫＴＡオリゴパイロット合成装置（４０〜２００μｍｏｌの規模）上で実行した。このカップリングステップについて、固体支持体の充填に対して４倍超過したホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイト縮合を１０分間行った。すべての他のステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の６％ジクロロ酢酸の溶液を用いて、ヌクレオチドの５’−ヒドロキシル基からジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基を除去した。カップリングステップ中、無水ＣＨ３ＣＮ中の４，５−ジシアノイミダゾール（０．７Ｍ）を活性剤として用いた。ホスホロチオエート結合を、３分間の接触時間で、１：１のピリジン／ＣＨ３ＣＮのキサンタンヒドリドの０．１Ｍ溶液との硫化によって導入した。６％の水を含有するＣＨ３ＣＮ中の２０％のｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて
、１２分間の接触時間で、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を得た。
【０７００】
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、４５分間の接触時間で、トリエチルアミンとアセトニトリルの１：１（ｖ／ｖ）の混合物を用いて脱保護した。固体支持体結合ＡＳＯをアンモニア水（２８〜３０重量％）中に懸濁し、５５℃で６時間加熱した。
【０７０１】
その後、非結合ＡＳＯを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強力なアニオン交換カラム上での高圧液体クロマトグラフィーによって精製した（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ
Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｏｕｒｃｅ  ３０Ｑ、３０μｍ、２．５４×８ｃｍ、Ａ＝３０％ＣＨ３ＣＮ水溶液中１００ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝Ａ中１．５Ｍ  ＮａＢｒ、６０分後０〜４０％のＢ、流量１４ｍＬ／分−１、λ＝２６０ｎｍ）。残渣を逆相カラム上でのＨＰＬＣにより脱塩して、固体支持体への初期充填に基づいて１５〜３０％の単離収率で所望のＡＳＯを得た。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣカップリングＭＳ分析によって特徴付けた。
【０７０２】
当技術分野で周知の標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて共役体を含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。
【０７０３】
これらの方法を用いて、ＡｐｏＣ  ＩＩＩを標的とする３個の別個のアンチセンス化合物を調製した。以下の表４に要約されるように、ＡｐｏＣ  ＩＩＩを標的とする３個のアンチセンス化合物の各々は、同一の核酸塩基配列を有し、ＩＳＩＳ  ３０４８０１は、すべてのホスホロチオエート結合を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーであり、ＩＳＩＳ  ６４７５３５は、ＧａｌＮＡｃ３−１をその３’末端で共役させたことを除いて、ＩＳＩＳ  ３０４８０１と同一であり、ＩＳＩＳ  ６４７５３６は、その化合物のある特定のヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合であることを除いて、ＩＳＩＳ  ６４７５３５と同一であった。表４にさらに要約されるように、ＳＲＢ−１を標的とする２個の別個のアンチセンス化合物を合成した。ＩＳＩＳ  ４４０７６２は、すべてのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する２−１０−２  ｃＥｔギャップマーであり、ＩＳＩＳ
６５１９００は、その３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含めたことを除いて、ＩＳＩＳ
４４０７６２と同一であった。
【表８】
2020058370.tif 000142
【０７０４】
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ
）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「ＧａｌＮＡｃ３−１」は、先に実施例９に示された構造を有する共役基を示す。ＧａｌＮＡｃ３−１が、ＡＳＯを共役体の残りに連結させる切断可能なアデノシンを含み、「ＧａｌＮＡｃ３−１ａ」と指定されることに留意されたい。上述の表でこの命名法を用いて、共役体の一部であるアデノシンを含む全核酸塩基配列を示す。したがって、上述の表において、「Ａｄｏ」を省略して「ＧａｌＮＡｃ３−１」で終了する配列を列記することもできる。下付き文字「ａ」を用いて切断可能なヌクレオシドまたは切断可能な部分を欠く共役基の部分を示すこの慣例をこれらの実施形態にわたって用いる。切断可能な部分を欠く共役基のこの部分は、本明細書において「クラスター」または「共役クラスター」または「ＧａｌＮＡｃ３クラスター」と称される。ある特定の事例において、これは、そのクラスターおよびその切断可能な部分を別々に提供することによって共役基を説明するのに好都合である。
実施例２０：ｈｕＡｐｏＣ  ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩの用量依存的アンチセンス阻害
【０７０５】
それぞれヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩを標的とし、かつ上に記載されるＩＳＩＳ  ３０４８０１およびＩＳＩＳ  ６４７５３５を別々に試験し、用量依存的試験において、ヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩを阻害するそれらの能力について評価した。
処理
【０７０６】
ヒトＡｐｏＣＩＩＩトランスジェニックマウスを１２時間の明暗周期で維持し、Ｔｅｋｌａｄ実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも７日間順化させた。ＡＳＯをＰＢＳ中に調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過して滅菌した。注入のためにＡＳＯを０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
【０７０７】
ヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ  ３０４８０１もしくは６４７５３５を、０．０８、０．２５、０．７５、２．２５、もしくは６．７５μｍｏｌ／ｋｇで、または対照としてＰＢＳを、週１回２週間、腹腔内注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終用量の投与から４８時間後に血液を各マウスから採取し、マウスを屠殺し、組織を収集した。
ＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ｍＲＮＡ分析
【０７０８】
標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、マウスの肝臓におけるＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に規準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡに対して相対的に決定した。以下の結果を、ＰＢＳ処理対照に規準化された各処理群のＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示し、「％ＰＢＳ」で表示する。各ＡＳＯの半数効果濃度（ＥＤ５０）も以下の表５に提示する。
【０７０９】
例証されるように、ＰＢＳ対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ＲＮＡを減少させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。
【表９】
2020058370.tif 000143
ＡｐｏＣ  ＩＩＩタンパク質分析（比濁アッセイ）
【０７１０】
２０１３年３月２９日の出版前にオンラインで公開されたＧｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）によって報告された手順を用いて、血漿ＡｐｏＣ  ＩＩＩタンパク質分析を決定した。
【０７１１】
マウスから単離した約１００μＬの血漿を、希釈することなく、Ｏｌｙｍｐｕｓ臨床分析器および市販の比濁ＡｐｏＣ  ＩＩＩアッセイ（Ｋａｍｉｙａ、カタログ番号ＫＡＩ−００６、Ｋａｍｉｙａ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いて分析した。アッセイプロトコルを供給業者が説明する通りに実行した。
【０７１２】
以下の表６に示されるように、ＰＢＳ対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がＡｐｏＣ  ＩＩＩタンパク質を減少させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。
【表１０】
2020058370.tif 000144
【０７１３】
血漿トリグリセリドおよびコレステロールを、Ｂｌｉｇｈ  ａｎｄ  Ｄｙｅｒの方法（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ．Ｇ．ａｎｄ  Ｄｙｅｒ，Ｗ．Ｊ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３７：９１１−９１７、１９５９）（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ  ａｎｄ  Ｄｙｅｒ，Ｗ，Ｃａｎ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，３７，９１１−９１７，１９５９）（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ  ａｎｄ  Ｄｙｅｒ，Ｗ，Ｃａｎ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，３７，９１１−９１７，１９５９）を用いて抽出し、Ｂｅｃｋｍａｎｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ臨床分析器および市販の試薬を用いて測定した。
【０７１４】
トリグリセリドレベルを、ＰＢＳを注入したマウスに対して相対的に測定し、「％ＰＢＳ」で表示する。結果を表７に提示する。例証されるように、両方のアンチセンス化合物がトリグリセリドレベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。
【表１１】
2020058370.tif 000145
【０７１５】
血漿試料をＨＰＬＣによって分析して、総コレステロールの量およびコレステロール（ＨＤＬおよびＬＤＬ）の異なる画分の量を決定した。結果を表８および９に提示する。例証されるように、両方のアンチセンス化合物が総コレステロールレベルを低下させ、ＬＤＬを低下させ、ＨＤＬを上昇させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。ＨＤＬレベルの増加およびＬＤＬレベルの減少は、ＡｐｏＣ  ＩＩＩのアンチセンス阻害の心臓血管の有益な影響である。
【表１２】
2020058370.tif 000146
【表１３】
2020058370.tif 000147
薬物動態分析（ＰＫ）
【０７１６】
ＡＳＯのＰＫも評価した。肝臓および腎臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。試料をＩＰ−ＨＰＬＣ−ＭＳを利用するＭＳＤ１で分析した。全長ＩＳＩＳ  ３０４８０１および６４７５３５の組織レベル（μｇ／ｇ）を測定し、結果を表１０に提供する。例証されるように、総全長アンチセンス化合物の肝臓濃度は、これら２個のアンチセンス化合物と同様であった。したがって、ＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物が肝臓でより活性であるが（上のＲＮＡおよびタンパク質データによって実証されるように）、肝臓内で著しく高い濃度では存在しない。実際には、計算されたＥＣ５０（表１０に提供される）は、共役化合物の強度の観察された増加が蓄積の増加に完全に起因するわけではないことを裏付ける。この結果は、共役体が、肝臓蓄積単独以外の機構によって、恐らくアンチセンス化合物の細胞への生産的な取り込みを改善することによって、強度を改善したことを示唆する。
【０７１７】
結果は、腎臓におけるＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物の濃度が、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠くアンチセンス化合物の濃度よりも低いことも示す。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が要求されない治療的指標において、腎臓への曝露は、腎毒性の危険性を有し、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、より迅速なクリアランスをもたら
す。したがって、非腎臓標的の場合、腎臓蓄積は望ましくない。これらのデータは、ＧａｌＮＡｃ３−１共役が腎臓蓄積を減少させることを示唆する。
【表１４】
2020058370.tif 000148
【０７１８】
ＩＳＩＳ  ６４７５３５の代謝物も特定し、それらの質量を高分解能質量分析によって確認した。観察された代謝物の切断部位および構造を以下に示す。標準の手順を用いて全長ＡＳＯの相対％を計算し、結果を表１０ａに提示する。ＩＳＩＳ  ６４７５３５の主な代謝物は、全共役体を欠く全長ＡＳＯ（すなわち、ＩＳＩＳ  ３０４８０１）であり、これは、以下に示される切断部位Ａでの切断に由来する。さらに、他の切断部位に由来するさらなる代謝物も観察された。これらの結果は、細胞内の酵素によって切断され得るか、またはサイトゾルの還元環境下で切断し得るか、またはエンドソームおよびリゾソーム内の酸性ｐＨに適応性のある、ＧａｌＮＡｃ３−１糖とＡＳＯとの間のエステル、ペプチド、ジスルフィド、ホスホラミデート、またはアシルヒドラゾン等の他の切断可能な結合の導入も有用であり得ることを示唆する。
【表１５】
2020058370.tif 000149
【化１３２】
2020058370.tif 000150
【化１３３】
2020058370.tif 000151
【化１３３−２】
2020058370.tif 000152
実施例２１：単回投与試験におけるヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩのアンチセンス阻害
【０７１９】
それぞれヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩを標的とし、かつ表４に記載されるＩＳＩＳ  ３０４８０１、６４７５３５、および６４７５３６を、単回投与試験において、ヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩを阻害するそれらの能力についてさらに評価した。
処理
【０７２０】
ヒトＡｐｏＣＩＩＩトランスジェニックマウスを１２時間の明暗周期に維持し、Ｔｅｋｌａｄ実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも７日間順化させた。ＡＳＯをＰＢＳ中に調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過して滅菌した。注入のためにＡＳＯを０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
【０７２１】
ヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ  ３０４８０１、６４７５３５、もしくは６４７５３６（上述のもの）、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、腹腔内注入した。処理群は、３匹の動物から成り、対照群は、４匹の動物から成った。治療前および最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。
【０７２２】
試料を収集し、分析して、肝臓におけるＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ｍＲＮＡおよびタンパク質レベル、血漿トリグリセリド、ならびにＨＤＬおよびＬＤＬ画分を含むコレステロールを決定し、上述（実施例２０）のように評価した。これらの分析からのデータを、以下の表１１〜１５に提示する。血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。ＡＬＴおよびＡＳＴレベルは、アンチセンス化合物がすべての投与量で良好な耐性であったことを示した。
【０７２３】
これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）と比較して、３’末端ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ６４７５３５および６４７５３６）の強度の改善を示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体およびいくつかのホスホジエステル結合を含むＩＳＩＳ  ６４７５３６は、同一の共役体を含むＩＳＩＳ  ６４７５３５と同程度に強力であり、ＡＳＯ内のすべてのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
【表１６】
2020058370.tif 000153
【表１７】
2020058370.tif 000154
【表１８】
2020058370.tif 000155
【表１９】
2020058370.tif 000156
【表２０】
2020058370.tif 000157
【０７２４】
これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体がアンチセンス化合物の強度を改善することを裏付ける。これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物の同等の強度も示し、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、混合結合（６個のホスホジエステル結合を有するＩＳＩＳ  ６４７５３６）および同一のアンチセンス化合物の完全なホスホロチオエートバージョン（ＩＳＩＳ  ６４７５３５）を有する。
【０７２５】
ホスホロチオエート結合は、アンチセンス化合物にいくつかの特性を提供する。例えば、これらは、ヌクレアーゼ消化に抵抗し、タンパク質に結合し、腎臓／尿ではなく肝臓における化合物の蓄積をもたらす。これらは、肝臓における兆候を治療する際に特に望ましい特性である。しかしながら、ホスホロチオエート結合は、炎症性応答とも関連している
。したがって、化合物におけるホスホロチオエート結合の数を減少させることにより、炎症の危険性の減少が見込まれるが、肝臓中の化合物の濃度も低下させ、腎臓および尿中の濃度を増加させ、ヌクレアーゼの存在下で安定性を低下させ、全体の強度を低下させる。これらの結果は、ある特定のホスホロチオエート結合がホスホジエステル結合に置換されたＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物が、肝臓における標的に対して、完全なホスホロチオエート結合を有する対応物と同程度に強力であることを示す。そのような化合物は、より炎症誘発性が低いと見込まれる（ＰＳの減少が炎症性効果の減少をもたらすことを示す実験を説明する実施例２４を参照のこと）。
実施例２２：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とするＧａｌＮＡｃ３−１共役修飾ＡＳＯの影響
【０７２６】
それぞれＳＲＢ−１を標的とし、かつ表４に記載されるＩＳＩＳ  ４４０７６２および６５１９００を、用量依存的試験において、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＳＲＢ−１を阻害するそれらの能力について評価した。
処理
【０７２７】
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ４４０７６２、６５１９００、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の４８時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に規準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡに対して相対的に決定した。以下の結果を、ＰＢＳ処理対照に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示し、「％ＰＢＳ」で表示する。
【０７２８】
表１６に例証されるように、両方のアンチセンス化合物がＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体（ＩＳＩＳ  ６５１９００）を含むアンチセンス化合物は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ４４０７６２）よりもはるかに強力であった。これらの結果は、異なる標的に相補的であり、かつ異なる化学修飾ヌクレオシドを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体の強度利益が観察されることを示し、この事例において、修飾ヌクレオシドは、拘束エチル糖部分（二環式糖部分）を含む。
【表２１】
2020058370.tif 000158
実施例２３：ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）アッセイプロトコル
【０７２９】
ＢＤ  Ｖａｕｔａｉｎｅｒ  ＣＰＴチューブ法を用いてｈＰＢＭＣアッセイを実行した。ＵＳ  ＨｅａｌｔｈＷｏｒｋｓ  ｃｌｉｎｉｃ（Ｆａｒａｄａｙ  ＆  Ｅｌ  Ｃａｍｉｎｏ  Ｒｅａｌ、Ｃａｒｌｓｂａｄ）においてインフォームドコンセントを得た志願ドナー由来の全血試料を得て、４〜１５個のＢＤ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  ＣＰＴ８ｍＬチューブ（ＶＷＲカタログ番号ＢＤ３６２７５３）内に収集した。ＰＢＭＣアッセイデータシートを用いて、各ドナーのＣＰＴチューブ内の開始合計全血量の近似値を記録した。
【０７３０】
血液試料を、チューブの８〜１０回の穏やかな反転による遠心分離の直前に再度混合した。ＣＰＴチューブを、水平（スイングアウト）ローター内で、室温（１８〜２５℃）で３０分間、ブレーキオフで１５００〜１８００ＲＣＦで遠心分離した（２７００ＲＰＭ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｌｌｅｇｒａ  ６Ｒ）。細胞を（Ｆｉｃｏｌｌとポリマーゲル層との間の）バフィーコート界面から回収し、５０ｍＬの滅菌円錐チューブに移し、最大５個のＣＰＴチューブ／５０ｍＬの円錐チューブ／ドナーをプールした。その後、細胞をＰＢＳ（Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋を含まない；ＧＩＢＣＯ）で２回洗浄した。チューブを最大５０ｍＬまで満たし、数回反転させて混合した。その後、試料を、室温で１５分間、３３０×ｇで遠心分離し（１２１５ＲＰＭ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｌｌｅｇｒａ  ６Ｒ）、ペレットを乱すことなくできるだけ多くの上澄みを吸引した。チューブを穏やかに回転させて細胞ペレットを取り除き、細胞をＲＰＭＩ＋１０％  ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（約１ｍＬ／１０ｍＬの開始全血量）中に再懸濁した。６０μＬの試料を、６００μＬのＶｅｒｓａＬｙｓｅ試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、カタログ番号Ａ０９７７７）を有する試料バイアル（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）にピペット注入し、１０〜１５秒間穏やかにボルテックスした。試料を室温で１０分間インキュベートさせ、係数前に再度混合した。ＰＢＭＣ細胞型を用いたＶｉｃｅｌｌ  ＸＲ細胞生存率分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で細胞懸濁液を計数した（１：１１の希釈係数を他のパラメータで保存した）。生細胞／ｍＬおよび生存率を記録した。細胞懸濁液をＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中で１×１０７生ＰＢＭＣ／ｍＬに希釈した。
【０７３１】
細胞を９６ウェル組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ  Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ）の５０μＬ／ウェル中に５×１０５でプレーティングした。ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中で希釈した２倍濃度のオリゴ／対照の５０μＬ／ウェルを実験テンプレートに従って添加した（合計１００μＬ／ウェル）。プレートを振盪器に設置し、約１分間混合させた。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、プレートを４００×ｇで１０分間遠心分離し、その後、ＭＳＤサイトカインアッセイ（すなわち、ヒトＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、およびＭＣＰ−１）のために上澄みを除去した。
実施例２４：ｈＰＢＭＣアッセイにおけるＧａｌＮＡｃ３−１共役ＡＳＯの炎症誘発作用の評価
【０７３２】
表１７に列記されるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、実施例２３に記載されるプロトコルを用いたｈＰＢＭＣアッセイにおいて炎症誘発作用について評価した。ＩＳＩＳ  ３５３５１２は、このアッセイにおいてＩＬ−６放出に対する高応答物として知られる内部標準物である。ｈＰＢＭＣを新鮮な志願ドナーから単離し、０、０．０１２８、０．０６４、０．３２、１．６、８、４０、および２００μｍ濃度のＡＳＯで処理した。
【０７３３】
ＩＬ−６のレベルを一次読み出しとして用いた。標準の手順を用いてＥＣ５０およびＥｍａｘを計算した。結果を２つのドナー由来のＥｍａｘ／ＥＣ５０の平均比率として表し、「Ｅｍａｘ／ＥＣ５０」で表示する。より低い比率は、炎症誘発応答の相対的減少を示し、より高い比率は、炎症誘発応答の相対的増加を示す。
【０７３４】
試験化合物に関して、炎症誘発性が最も低い化合物は、ＰＳ／ＰＯ結合ＡＳＯ（ＩＳＩ
Ｓ  ６１６４６８）であった。ＧａｌＮＡｃ３−１共役ＡＳＯ（ＩＳＩＳ  ６４７５３５）は、その非共役対応物（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）よりもわずかに炎症誘発性が低かった。これらの結果は、いくつかのＰＯ結合の組み込みが炎症誘発反応を減少させ、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体の添加が化合物の炎症誘発性を高めず、炎症誘発応答を減少させ得ることを示す。したがって、混合ＰＳ／ＰＯ結合およびＧａｌＮＡｃ３−１共役体の両方を含むアンチセンス化合物が、完全ＰＳ結合アンチセンス化合物（ＧａｌＮＡｃ３−１共役体の有無にかかわらず）と比較して、より低い炎症誘発応答をもたらすことが予想されるであろう。これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物、特に減少したＰＳ含有量を有するものの炎症誘発性がより低いことを示す。
【０７３５】
総合して、これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役化合物、特に減少したＰＳ含有量を有するものを、対応物であるＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠く完全ＰＳアンチセンス化合物よりも高い用量で投与することができることを示唆する。これらの化合物の半減期が実質的に異なることが予想されないため、そのようなより高い投与量は、結果として低頻度の投薬につながる。ＧａｌＮＡｃ３−１共役化合物がより強力であり（実施例２０〜２２を参照のこと）、化合物の濃度が所望のレベル未満に低下した時点で再投薬が必要であるため、実際には、そのような投与の頻度はさらに低く、そのような所望のレベルは、強度に基づく。
【表２２】
2020058370.tif 000159
【０７３６】
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「Ａｄｏ’−ＧａｌＮＡｃ３−１ａ」は、示されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に結合される、実施例９に示される構造ＧａｌＮＡｃ３−１を有する共役体を示す。
【表２３】
2020058370.tif 000160
実施例２５：生体外におけるヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩを標的とするＧａｌＮＡｃ３−１共役修飾ＡＳＯの影響
【０７３７】
上述のＩＳＩＳ  ３０４８０１および６４７５３５を生体外で試験した。トランスジェニックマウス由来の２５，０００細胞／ウェルの密度の初代肝細胞を、０．０３，０．０８、０．２４、０．７４、２．２２、６．６７、および２０μｍ濃度の修飾オリゴヌクレオチドで処理した。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定し、ｈＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルをＲＩＢＯＧＲＥＥＮで測定された全ＲＮＡ含有量に従って調整した。
【０７３８】
標準の方法を用いてＩＣ５０を計算し、結果を表１９に提示する。例証されるように、対照ＩＳＩＳ  ３０４８０１と比較して、同程度の強度がＩＳＩＳ  ６４７５３５で処理した細胞において観察された。
【表２４】
2020058370.tif 000161
【０７３９】
この実験において、生体内で観察されるＧａｌＮＡｃ３−１共役の大きな強度利益は、生体外では観察されなかった。生体外での初代肝細胞におけるその後の遊離取り込み実験は、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠くオリゴヌクレオチドと比較して、様々なＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの強度の増加を示した（実施例６０、８２、および９２を参照のこと）。
実施例２６：ＡｐｏＣ  ＩＩＩ  ＡＳＯ活性へのＰＯ／ＰＳ結合の影響
【０７４０】
ヒトＡｐｏＣ  ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ  ３０４８０１もしくはＩＳＩＳ  ６１６４６８（両方ともに上述のもの）またはＰＢＳ処理対照を、２５ｍｇ／ｋｇで週１回２週間、腹腔内注入した。処理群は、３匹の動物から成り、対照群は、４匹の動物から成った。治療前および最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。
【０７４１】
試料を収集し、分析して、上述のように肝臓におけるＡｐｏＣ  ＩＩＩタンパク質レベルを決定した（実施例２０）。これらの分析からのデータを、以下の表２０に提示する。
【０７４２】
これらの結果は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）と比較して、ウィングにＰＯ／ＰＳを有するアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ  ６１６４６８）の強度の減少を示す。
【表２５】
2020058370.tif 000162
実施例２７：化合物５６
【化１３４】
2020058370.tif 000163
【０７４３】
化合物５６は、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈから市販されているか、またはＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４によって報告された公開された手順に従って調製することができる。
【０７４４】
実施例２８：化合物６０の調製
【化１３５】
2020058370.tif 000164
【０７４５】
化合物４を実施例２に例証される手順通りに調製した。化合物５７は、市販のものである。化合物６０を構造分析で確認した。
【０７４６】
本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他の単保護された置換または非置換アルキルジオールを用いて既定の組成を有するホスホラミダイトを調製することができるため、化合物５７は、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。
実施例２９：化合物６３の調製
【化１３６】
2020058370.tif 000165
【０７４７】
化合物６１および６２を、Ｔｏｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，３，５６６−５７７、およびＪｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００７，６３（１９），３９８２−３９８８によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
【０７４８】
あるいは、化合物６３を、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．の科学文献および特許文献（Ｓｙｎｌｅｔｔ，２００３，１２，１８３８−１８４０）、ならびにＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．の公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００４０６３２０８号に報告される手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３０：化合物６３ｂの調製
【化１３７】
2020058370.tif 000166
【０７４９】
化合物６３ａを、Ｈａｎｅｓｓｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，７４（９），１７３１−１７３７によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３１：化合物６３ｄの調製
【化１３８】
2020058370.tif 000167
【０７５０】
化合物６３ｃを、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，９（５），４５１−４５３によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３２：化合物６７の調製
【化１３９】
2020058370.tif 000168
【０７５１】
実施例２に例証される手順通りに化合物６４を調製した。化合物６５を、Ｏｒ  ｅｔ  ａｌ．の公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００９００３００９号によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他の保護基を用いることができるため、化合物６５に用いた保護基は、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。
実施例３３：化合物７０の調製
【化１４０】
2020058370.tif 000169
【０７５２】
実施例２に例証される手順通りに化合物６４を調製した。化合物６８は、市販のものである。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他の保護基を用いることができるため、化合物６８に用いた保護基は、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。
実施例３４：化合物７５ａの調製
【化１４１】
2020058370.tif 000170
【０７５３】
化合物７５をＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４によって報告された公開された手順に従って調製する。
実施例３５：化合物７９の調製
【化１４２】
2020058370.tif 000171
【０７５４】
化合物７６をＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４によって報告された公開された手順に従って調製した。
実施例３６：化合物７９ａの調製
【化１４３】
2020058370.tif 000172
【０７５５】
化合物７７を実施例３５に例証される手順通りに調製する。
実施例３７：固体支持体による５’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含む共役オリゴマー化合物８２の調製のための一般的方法（方法Ｉ）
【化１４４】
2020058370.tif 000173
【化１４５】
2020058370.tif 000174
【０７５６】
ＧａｌＮＡｃ３−２は、以下の構造を有する。
【化１４６】
2020058370.tif 000175
【０７５７】
共役基ＧａｌＮＡｃ３−２のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−２ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ３−２ａは、以下の式を有する。
【化１４７】
2020058370.tif 000176
【０７５８】
ＶＩＭＡＤ結合オリゴマー化合物７９ｂを、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準の手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト化合物５６および６０を、それぞれ、実施例２７および２８にそれぞれ例証される手順通りに調製
した。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて、５’末端にホスホジエステル結合共役基を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、任意の既定の配列および組成を有する本明細書に記載のオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例３８：５’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むオリゴマー化合物８２の調製のための代替方法（方法ＩＩ）
【化１４８】
2020058370.tif 000177
【０７５９】
ＶＩＭＡＤ結合オリゴマー化合物７９ｂを、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準の手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ＧａｌＮＡｃ３−２クラスターホスホラミダイト（化合物７９）を実施例３５に例証される手順通りに調製した。この代替方法は、合成の最終ステップでのホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体のオリゴマー化合物への一段階導入を可能にする。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて５’末端にホスホジエステル共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に
添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、任意の既定の配列および組成を有する本明細書に記載のオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例３９：固体支持体による５’末端にＧａｌＮＡｃ３−３共役体（５’末端結合のためにＧａｌＮＡｃ３−１修飾されたもの）を含むオリゴマー化合物８３ｈの調製のための一般的方法
【化１４９】
2020058370.tif 000178
【化１５０】
2020058370.tif 000179
【０７６０】
化合物１８を実施例４に例証される手順通りに調製した。化合物８３ａおよび８３ｂは、市販のものである。ホスホジエステル結合ヘキシルアミンを含むオリゴマー化合物８３ｅを標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて調製した。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理することにより、５’−ＧａｌＮＡｃ３−３共役オリゴマー化合物（８３ｈ）を得た。
【０７６１】
ＧａｌＮＡｃ３−３は、以下の構造を有する。
【化１５１】
2020058370.tif 000180
【０７６２】
共役基ＧａｌＮＡｃ３−３のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−３ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、以下の式を有する。
【化１５２】
2020058370.tif 000181
実施例４０：固体支持体による３’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−４共役体を含むオリゴマー化合物８９の調製のための一般的方法
【化１５３】
2020058370.tif 000182
【化１５４】
2020058370.tif 000183
【０７６３】
ＧａｌＮＡｃ３−４は、以下の構造を有する。
【化１５４−２】
2020058370.tif 000184
【０７６４】
式中、ＣＭは、切断可能な部分である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下のものである：
【化１５５】
2020058370.tif 000185
【０７６５】
共役基ＧａｌＮＡｃ３−４のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−４ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ３−４ａは、以下の式を有する。
【化１５６】
2020058370.tif 000186
【０７６６】
保護されたＵｎｙｌｉｎｋｅｒ機能化固体支持体化合物３０は、市販のものである。化合物８４を、文献に報告される手順と同様の手順を用いて調製する（Ｓｈｃｈｅｐｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４、Ｓｈｃｈｅｐｉｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９９，２７，３０３５−３０４１、およびＨｏｒｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５，４８４２−４８４９を参照のこと）。
【０７６７】
ホスホラミダイト構築ブロック（化合物６０および７９ａ）を実施例２８および３６に例証される手順通りに調製する。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて、既定の配列および組成を有する３’末端にホスホジエステル結合共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、任意の既定の配列および組成を有する本明細書に記載のオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例４１：固相技法による５’位にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２（Ｂｘがアデニンである実施例３７を参照のこと）共役体を含むＡＳＯの調製のための一般的方法
（ＩＳＩＳ  ６６１１３４の調製）
【０７６８】
別途明記されない限り、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬および溶液を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロックおよび固体支持体を、例えば、Ｔ、Ａ、Ｇ、およびｍＣ残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。ホスホラミダイト化合物５６および６０を用いて、５’末端のホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を合成した。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの０．１Ｍ溶液をb−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドおよび２’−ＭＯＥに用いた。
【０７６９】
カラムに充填されたＶＩＭＡＤ固体支持体（１１０μｍｏｌ／ｇ、Ｇｕｚａｅｖ  ｅｔ
ａｌ．，２００３）におけるホスホラミダイトカップリング方法を用いて、ＡＳＯ合成を、ＡＢＩ  ３９４合成装置（１〜２μｍｏｌの規模）またはＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＡｅＫＴＡオリゴパイロット合成装置（４０〜２００μｍｏｌの規模）上で実行した。このカップリングステップについて、固体支持体の初期充填に対して４倍超過したホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイトカップリングを１０分間行った。すべての他のステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の６％ジクロロ酢酸の溶液を用いて、ヌクレオチドの５’−ヒドロキシル基からジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基を除去した。カップリングステップ中、無水ＣＨ３ＣＮ中の４，５−ジシアノイミダゾール（０．７Ｍ）を活性剤として用いた。ホスホロチオエート結合を、３分間の接触時間で、１：１のピリジン／ＣＨ３ＣＮのキサンタンヒドリドの０．１Ｍ溶液との硫化によって導入した。６％の水を含有するＣＨ３ＣＮ中の２０％のｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて、１２分間の接触時間で、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を得た。
【０７７０】
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、４５分間の接触時間で、トルエン中の２０％ジエチルアミン（ｖ／ｖ）を用いて脱保護した。固体支持体結合ＡＳＯをアンモニア水（２８〜３０重量％）中に懸濁し、５５℃で６時間加熱した。
その後、非結合ＡＳＯを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強力なアニオン交換カラム上での高圧液体クロマトグラフィーによって精製した（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｏｕｒｃｅ  ３０Ｑ、３０μｍ、２．５４×８ｃｍ、Ａ＝３０％ＣＨ３ＣＮ水溶液中１００ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝Ａ中１．５Ｍ  ＮａＢｒ、６０分後０〜４０％のＢ、流量１４ｍＬ／分−１、λ＝２６０ｎｍ）。残渣を逆相カラム上でのＨＰＬＣにより脱塩して、固体支持体への初期充填に基づいて１５〜３０％の単離収率で所望のＡＳＯを得た。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣカップリングＭＳ分析によって特徴付けた。
【表２６】
2020058370.tif 000187
【０７７１】
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。ＧａｌＮＡｃ３−２ａの構造は、実施例３７に示される。
実施例４２：固相技法による５’位にＧａｌＮＡｃ３−３共役体を含むＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ  ６６１１６６の調製）
【０７７２】
ＩＳＩＳ  ６６１１６６の合成を、実施例３９および４１に例証される手順と同様の手順を用いて実行した。
【０７７３】
ＩＳＩＳ  ６６１１６６は、５’位がＧａｌＮＡｃ３−３共役体を含む５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣカップリングＭＳ分析によって特徴付けた。
【表２７】
2020058370.tif 000188
【０７７４】
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「５’−ＧａｌＮＡｃ３−３ａ」の構造は、実施例３９に示される。
実施例４３：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする５’末端でのホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２の用量依存的試験（Ｂｘがアデニンである実施例３７および４１を参照のこと）
【０７７５】
５’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むＩＳＩＳ  ６６１１３４（実施例４１を参照のこと）を、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ  ４４０７６２および６５１９００（３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体、実施例９を参照のこと）を比較のために試験に含め、先の表４に記載する。
処理
【０７７６】
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ４４０７６２、６５１９００、６６１１３４、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に規準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡに対して相対的に決定した。以下の結果を、ＰＢＳ処理対照に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示し、「％ＰＢＳ」で表示する。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に提示する。
【０７７７】
表２２に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的
様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、５’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体（ＩＳＩＳ  ６６１１３４）または３’末端に連結されたＧａｌＮＡｃ３−１共役体（ＩＳＩＳ  ６５１９００）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ４４０７６２）と比較して、強度の大幅な改善を示した。さらに、５’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むＩＳＩＳ  ６６１１３４は、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むＩＳＩＳ  ６５１９００と比較して、等効力であった。
【表２８】
2020058370.tif 000189
【０７７８】
３’ＧａｌＮＡｃ３−１および５’ＧａｌＮＡｃ３−２の構造は、先の実施例９および３７に記載されている。
薬物動態分析（ＰＫ）
【０７７９】
高用量群（７ｍｇ／ｋｇ）のＡＳＯのＰＫを試験し、実施例２０に例証される様式と同一の様式で評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。６６１１３４（５’ＧａｌＮＡｃ３−２）およびＩＳＩＳ  ６５１９００（３’ＧａｌＮＡｃ３−１）の全長代謝物を特定し、これらの質量を高分解能質量分析によって確認した。結果は、５’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むＡＳＯ（ＩＳＩＳ
６６１１３４）に対して検出された主な代謝物が、ＩＳＩＳ  ４４０７６２であったことを示した（データ示されず）。検出可能なレベルでさらなる代謝物は観察されなかった。その対応物とは異なり、先の表１０ａに報告された代謝物と同様のさらなる代謝物が、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を有するＡＳＯ（ＩＳＩＳ  ６５１９００）で観察された。これらの結果は、ホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−１またはＧａｌＮＡｃ３−２共役体を有することで、それらの強度を損なうことなくＡＳＯのＰＫプロファイルを改善し得ることを示唆する。
実施例４４：ＳＲＢ−１を標的とする３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体（実施例９を参照のこと）を含むＡＳＯのアンチセンス阻害へのＰＯ／ＰＳ結合の影響
【０７８０】
それぞれＳＲＢ−１を標的とする３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むＩＳＩＳ
６５５８６１および６５５８６２を、単回投与試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１を阻害するそれらの能力について試験した。親非共役化合物ＩＳＩＳ  ３５３３８２を比較のために試験に含めた。
【０７８１】
ＡＳＯは５−１０−５ＭＯＥギャップマーであり、ギャップ領域は、１０個の２’−デオキシリボヌクレオシドを含み、各ウィング領域は、５個の２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを含む。ＡＳＯを先の実施例１９に例証される方法と同様の方法を用いて調製し、以下の表２３に示す。
【表２９】
2020058370.tif 000190
【０７８２】
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「ＧａｌＮＡｃ３−１」の構造は、実施例９に示される。
処理
【０７８３】
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ３５３３８２、６５５８６１、６５５８６２、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。治療前および最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に規準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡに対して相対的に決定した。以下の結果を、ＰＢＳ処理対照に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示し、「％ＰＢＳ」で表示する。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に報告する。
【０７８４】
表２４に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、ＰＢＳ処理対照と比較して、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６５５８６１および６５５８６２）は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ３５３３８２）と比較して、強度の大幅な改善を示した。さらに、混合ＰＳ／ＰＯ結合を有するＩＳＩＳ  ６５５８６２は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ  ６５５８６１）と比較して、強度の改善を示した。
【表３０】
2020058370.tif 000191
【０７８５】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。臓器重量も評価した。結果は、ＰＢＳ対照と比較して、ＡＳＯで処理したマウスにおいて、トランスアミナーゼレベル（表２５）の増加も臓器重量（データ示されず）の増加も観察されなかったことを示した。さらに、混合ＰＳ／ＰＯ結合を有するＡＳＯ（ＩＳＩＳ  ６５５８６２）は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ  ６５５８６１）と比較して、同様のトランスアミナーゼレベルを示した。
【表３１】
2020058370.tif 000192
実施例４５：ＰＦＰエステル（化合物１１０ａ）の調製
【化１５７】
2020058370.tif 000193
【化１５８】
2020058370.tif 000194
【０７８６】
化合物４（９．５ｇ、２８．８ｍｍｏｌｅ）を化合物１０３ａまたは１０３ｂ（３８ｍｍｏｌｅ）で個別に処理し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中のＴＭＳＯＴｆ（０．５当量）および分子篩で処理し、室温で１６時間撹拌した。この時点で、セライトを通して有機層を濾過し、その後、重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、８０％超の収率で化合物１０４ａおよび１０４ｂを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０７８７】
化合物１０４ａおよび１０４ｂを化合物１００ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、９０％超の収率で化合物１０５ａおよび１０５ｂを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０７８８】
化合物１０５ａおよび１０５ｂを化合物９０１ａ〜ｄと同一の条件下で化合物９０と個別に処理して、化合物１０６ａ（８０％）および１０６ｂ（２０％）を得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０７８９】
化合物１０６ａおよび１０６ｂを化合物９６ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、１０７ａ（６０％）および１０７ｂ（２０％）を得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０７９０】
化合物１０７ａおよび１０７ｂを化合物９７ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、４０〜６０％の収率で化合物１０８ａおよび１０８ｂを得た。ＬＣＭＳおよびプロ
トンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０７９１】
化合物１０８ａ（６０％）および１０８ｂ（４０％）を化合物１００ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、８０％超の収率で化合物１０９ａおよび１０９ｂを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０７９２】
化合物１０９ａを化合物１０１ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、３０〜６０％の収率で化合物１１０ａを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。あるいは、化合物１１０ｂを化合物１０９ｂから開始して同様の様式で調製することができる。
実施例４６：ＰＦＰエステル（オリゴヌクレオチド１１１）との共役のための一般的手順；ＩＳＩＳ  ６６６８８１（ＧａｌＮＡｃ３−１０）の調製
【０７９３】
標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて５’−ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを合成し、精製した。５’−ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを０．１Ｍ四ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．５、２００μＬ）中に溶解し、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中に溶解した３当量の選択されたＰＦＰエステル化ＧａｌＮＡｃ３クラスターを添加した。ＡＳＯ溶液への添加時にＰＦＰエステルが沈殿した場合、すべてのＰＦＰエステルが溶液中に存在するまでＤＭＳＯを添加した。室温で約１６時間混合した後、反応が完了した。結果として生じた溶液を水で希釈して１２ｍＬにし、その後、３０００Ｄａの質量カットオフでスピンフィルターに３０００ｒｐｍで沈降させた。このプロセスを２回繰り返して、小分子不純物を除去した。その後、この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で２．５時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって脱塩し、凍結乾燥させて、ＧａｌＮＡｃ３共役オリゴヌクレオチドを得た。
【化１５９】
2020058370.tif 000195
【０７９４】
オリゴヌクレオチド１１１をＧａｌＮＡｃ３−１０と共役する。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１０のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１０ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下のＧａｌＮＡｃ３−１０で合成されたオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６６６８８１）に示される−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１０（ＧａｌＮＡｃ３−１０ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１６０】
2020058370.tif 000196
【０７９５】
この一般的手順に従って、ＩＳＩＳ  ６６６８８１を調製した。標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて５’−ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６６０２５４）を合成し、精製した。ＩＳＩＳ  ６６０２５４（４０ｍｇ、５．２μｍｏｌ）を０．１Ｍ四ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．５、２００μＬ）中に溶解し、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中に溶解した３当量のＰＦＰエステル（化合物１１０ａ）を添加した。ＡＳＯ溶液への添加時にＰＦＰエステルが沈殿した場合、ＰＦＰエステルを完全に溶解するためにさらなるＤＭＳＯ（６００μＬ）が必要であった。室温で約１６時間混合した後、反応が完了した。この溶液を水で希釈して全体積１２ｍＬにし、３０００Ｄａの質量カットオフでスピンフィルターに３０００ｒｐｍで沈降させた。このプロセスを２回繰り返して、小分子不純物を除去した。この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で２．５時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって脱塩し、凍結乾燥させて、９０重量％の収率でＩＳＩＳ  ６６６８８１（４２ｍｇ、４．７μｍｏｌ）を得た。
【表３２】
2020058370.tif 000197
【０７９６】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
実施例４７：ＧａｌＮＡｃ３−８を含むオリゴヌクレオチド１０２の調製
【化１６１】
2020058370.tif 000198
【化１６２】
2020058370.tif 000199
【化１６３】
2020058370.tif 000200
【０７９７】
三酸９０（４ｇ、１４．４３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．３５ｍＬ、７２ｍｍｏｌｅ）中に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（８．９ｍＬ、５２ｍｍｏｌｅ）をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で３０分間撹拌させた。Ｂｏｃ−ジアミン９１ａまたは９１ｂ（６８．８７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．３５ｍＬ、７２ｍｍｏｌｅ）とともに添加し、反応物を室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、約８０％の収率で化合物９２ａおよび９２ｂを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０７９８】
化合物９２ａまたは９２ｂ（６．７ｍｍｏｌｅ）を２０ｍＬのジクロロメタンおよび２０ｍＬのトリフルオロ酢酸で、室温で１６時間処理した。結果として生じた溶液を蒸発させ、その後、メタノール中に溶解し、ＤＯＷＥＸ−ＯＨ樹脂で３０分間処理した。結果として生じた溶液を濾過し、減圧下で油に還元して、８５〜９０％の収率の化合物９３ａおよび９３ｂを得た。
【０７９９】
化合物７または６４（９．６ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（３．７ｇ、９．６ｍｍｏｌｅ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５ｍＬ）で１５分間処理した。これに、化合物９３ａまたは９３ｂ（３ｍｍｏｌｅ）のいずれかを添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー（５％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、２０〜４０％の収率で化合物９６ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０８００】
化合物９６ａ〜ｄ（０．７５ｍｍｏｌｅ）を、ラネーニッケル上で３時間、エタノール（７５ｍＬ）中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、エタノールを減圧下で除去して、８０〜９０％の収率で化合物９７ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０８０１】
化合物２３（０．３２ｇ、０．５３ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（０．２ｇ、０．５３ｍｍｏｌｅ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１９ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌｅ）で１５分間処理した。これに、化合物９７ａ〜ｄ（０．３８ｍｍｏｌｅ）を個別に添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、３０〜４０％の収率で化合物９８ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０８０２】
化合物９９（０．１７ｇ、０．７６ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（０．２９ｇ、０．７６ｍｍｏｌｅ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌｅ）で１５分間処理した。これに、化合物９７ａ〜ｄ（０．５１ｍｍｏｌｅ）を個別に添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下
で７５％超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー（５％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、４０〜６０％の収率で化合物１００ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０８０３】
化合物１００ａ〜ｄ（０．１６ｍｍｏｌｅ）を、１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ上で３時間、メタノール／酢酸エチル（１：１、５０ｍＬ）中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、有機物を減圧下で除去して、８０〜９０％の収率で化合物１０１ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【０８０４】
化合物１０１ａ〜ｄ（０．１５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）およびピリジン（０．０１６ｍＬ、０．２ｍｍｏｌｅ）中に個別に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（０．０３４ｍＬ、０．２ｍｍｏｌｅ）をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で３０分間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、約８０％の収率で化合物１０２ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳおよびプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
【化１６４】
2020058370.tif 000201
【０８０５】
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−８共役基を含むオリゴマー化合物１０２を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−８のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−８ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。好ましい一実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
【０８０６】
ＧａｌＮＡｃ３−８（ＧａｌＮＡｃ３−８ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１６５】
2020058370.tif 000202
実施例４８：ＧａｌＮＡｃ３−７を含むオリゴヌクレオチド１１９の調製
【化１６６】
2020058370.tif 000203
【化１６７】
2020058370.tif 000204
【０８０７】
文献（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５７９８−５８０８）に記載される手順に従って化合物１１２を合成した。
【０８０８】
化合物１１２（５ｇ、８．６ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（２２ｍＬ／２２ｍＬ）中に溶解した。炭素（０．５ｇ）上水酸化パラジウムを添加した。反応混合物を室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、そのパッドを１：１メタノール／酢酸エチルで洗浄した。濾液と洗浄物を合わせ、濃縮乾固させて、化合物１０５ａ（定量的）を得た。この構造を、ＬＣＭＳによって確認した。
【０８０９】
化合物１１３（１．２５ｇ、２．７ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３．２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（２．８ｍＬ、１６．２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１７ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物１０５ａ（３．７７ｇ、８．４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応物を室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、油を得た。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中１０〜２０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１４（１．４５ｇ、３０％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲ分析によって確認した。
【０８１０】
化合物１１４（１．４３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（４ｍＬ／４ｍＬ）中に溶解した。炭素（湿性、０．１４ｇ）上パラジウムを添加した。反応混合物を水素で洗い流し、室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール／酢酸エチル（１：１）で洗浄し
た。濾液と洗浄物を一緒に合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物１１５（定量的）を得た。この構造を、ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲ分析によって確認した。
【０８１１】
化合物８３ａ（０．１７ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３１ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．２６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、無水ＤＭＦ中の化合物１１５（１．２２ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応物を室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。有機層を濃縮乾固させ、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中３〜１５％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１６（０．８４ｇ、６１％）を得た。この構造を、ＬＣ  ＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲ分析によって確認した。
【化１６８】
2020058370.tif 000205
【０８１２】
化合物１１６（０．７４ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（５ｍＬ／５ｍＬ）中に溶解した。炭素（湿性、０．０７４ｇ）上パラジウムを添加した。反応混合物を水素で洗い流し、室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール／酢酸エチル（１：１）で洗浄した。濾液と洗浄物を一緒に合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物１１７（０．７３ｇ、９８％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲ分析によって確認した。
【０８１３】
化合物１１７（０．６３ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。この溶液に、Ｎ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（７０μＬ、０．４ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（７２μＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注いだ。この混合物をジクロロメタンで抽出し、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。このジクロロメタン溶液を濃縮乾固させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン中５〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１８（０．５１ｇ、７９％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ、ならびに１Ｈおよび１Ｈおよび１９Ｆ  ＮＭＲによって確認し
た。
【化１６９】
2020058370.tif 000206
【０８１４】
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−７共役基を含むオリゴマー化合物１１９を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−７のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−７ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
【０８１５】
ＧａｌＮＡｃ３−７（ＧａｌＮＡｃ３−７ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１７０】
2020058370.tif 000207
実施例４９：ＧａｌＮＡｃ３−５を含むオリゴヌクレオチド１３２の調製
【化１７１】
2020058370.tif 000208
【０８１６】
化合物１２０（１４．０１ｇ、４０ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（１４．０６ｇ、３７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）中に溶解した。トリエチルアミン（１１．２ｍＬ、８０．３５ｍｍｏｌ）を添加し、５分間撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物１２１（１０ｇ、ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。さらなるトリエチルアミン（４．５ｍＬ、３２．２８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴン雰囲気下で１８時間撹拌した。ＴＬＣ（１：１の酢酸エチル：ヘキサン；Ｒｆ＝０．４７）によって反応を監視した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）中に取り込み、１Ｍ  ＮａＨＳＯ４（３×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×１５０ｍＬ）、およびブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。乾燥剤を濾去し、有機層を回転蒸発によって濃縮した。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中３５〜５０％ＥｔＯＡｃを用いて溶出して、化合物１２２（１５．５０ｇ、７８．１３％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲ分析によって確認した。質量（ｍ／ｚ）５８９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０８１７】
水（２０ｍＬ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（９２．１５ｍｍｏｌ）の溶液を、メタノール（１５ｍＬ）中に溶解した冷却した化合物１２２の溶液（７．７５ｇ、１３．１６ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で４５分間撹拌し、ＴＬＣ（１：１のＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によって監視した。反応混合物を減圧下で濃縮して、半分の体積にした。残りの溶液を氷浴中で冷却して、濃縮ＨＣｌを添加して中和した。反応混合物を希釈し、ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。エマルジョンを形成し、一晩静置した後に取り除いた。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、化合物１２３（８．４２ｇ）を得た。残留塩は、過剰な質量の推定原因である。ＬＣＭＳは、この構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。Ｍ．Ｗ．計算値：５７４．３６、Ｍ．Ｗ．実測値：５７５．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【化１７２】
2020058370.tif 000209
【０８１８】
文献（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１１，１３３，９５８−９６３）に記載される手順に従って化合物１２６を合成した。
【化１７２−２】
2020058370.tif 000210
【化１７２−３】
2020058370.tif 000211
【０８１９】
化合物１２３（７．４１９ｇ、１２．９１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．４９ｇ、２５．８２ｍｍｏｌ）、および化合物１２６（６．３３ｇ、１６．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）中に溶解し、結果として生じた反応混合物を氷浴中で冷却した。これに、Ｎ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（４．４２ｍＬ、２５．８２ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（８．７ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）、続いて、Ｂｏｐカップリング試薬（１．１７ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。氷浴を除去し、溶液を室温まで温めた。１時間後に反応が完了し、ＴＬＣ（８９：１０：１のＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡＡ）によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解し、１Ｍ
ＮａＨＳＯ４（３×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×１００ｍＬ）、およびブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を５０％ヘキサン／ＥｔＯＡＣ：１００％ＥｔＯＡｃの勾配でのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色の発泡体として化合物１２７（９．４ｇ）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）７７８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０８２０】
トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）をジクロロメタン（１２ｍＬ）中の化合物１２７（１．５７ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下でトルエン（３０ｍＬ）と共蒸発乾固させた。得られた残渣をアセトニトリル（３０ｍＬ）およびトルエン（４０ｍＬ）と２回共蒸発させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物
１２８（１．６７ｇ）を得て、さらに精製することなく次のステップで使用した。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）４７８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０８２１】
丸底フラスコ内で、化合物７（０．４３ｇ、０．９６３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．３５ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（０．０３５ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を一緒に合わせ、減圧下で、Ｐ２Ｏ５上で４時間乾燥させ、その後、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。これに無水ＤＭＦ（０．２ｍＬ）およびＮ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ）中の化合物１２８（０．２０ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で、アルゴン雰囲気下で撹拌した。３０分間後に反応が完了し、ＬＣＭＳおよびＴＬＣ（７％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）中に溶解し、１Ｍ  ＮａＨＳＯ４（３×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×２０ｍＬ）、およびブライン（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジクロロメタン中５〜１５％ＭｅＯＨを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１２９（９６．６ｍｇ）を得た。ＬＣ  ＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、その構造と一致する。質量（ｍ／ｚ）８８３．４［Ｍ＋２Ｈ］＋。
【０８２２】
２０ｍＬのシンチレーションバイアル内で化合物１２９（０．０９ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）中に溶解した。これに、少量の１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０１５ｍｇ）を添加し、反応容器をＨ２ガスで洗い流した。反応混合物を室温で１８時間、Ｈ２雰囲気下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで洗浄した。濾液洗浄物を一緒にプールし、減圧下で濃縮して、化合物１３０（０．０８ｇ）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、その構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。質量（ｍ／ｚ）８３８．３［Ｍ＋２Ｈ］＋。
【０８２３】
１０ｍＬの先の尖った丸底フラスコに、化合物１３０（７５．８ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）、０．３７Ｍピリジン／ＤＭＦ（２００μＬ）、および撹拌棒を添加した。この溶液に、０．７Ｍトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル／ＤＭＦ（１００μＬ）を撹拌しながら滴加した。１時間後に反応が完了し、ＬＣ  ＭＳによって決定した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（約１０ｍＬ）中に溶解した。有機層をＮａＨＳＯ４（１Ｍ、１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、およびブライン（１０ｍＬ）にそれぞれ３回分配した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、化合物１３１（７７．７ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳは、この構造と一致した。さらに精製することなく使用した。質量（ｍ／ｚ）９２１．３［Ｍ＋２Ｈ］＋。
【化１７３】
2020058370.tif 000212
【０８２４】
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−５共役基を含むオリゴマー化合物１３２を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−５のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−５ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
【０８２５】
ＧａｌＮＡｃ３−５（ＧａｌＮＡｃ３−５ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１７４】
2020058370.tif 000213
実施例５０：ＧａｌＮＡｃ４−１１８を含むオリゴヌクレオチド１４４の調製
【化１７５】
2020058370.tif 000214
【化１７６】
2020058370.tif 000215
【０８２６】
化合物１３４の合成。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄフラスコに、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、およびアセトニトリルで洗浄したアミノメチルＶＩＭＡＤ樹脂（２．５ｇ、４５０μｍｏｌ／ｇ）を添加した。この樹脂は、アセトニトリル（４ｍＬ）中で膨潤した。２０（１．０ｍｍｏｌ、０．７４７ｇ）、ＴＢＴＵ（１．０ｍｍｏｌ、０．３２１ｇ）、アセトニトリル（５ｍＬ）、およびＤＩＥＡ（３．０ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ）を添加して、化合物１３３を１００ｍＬの丸底フラスコ内で事前に活性化した。この溶液を５分間撹拌させ、その後、振盪しながらＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄフラスコに添加した。懸濁液を３時間振盪させた。反応混合物を排出し、樹脂をアセトニトリル、ＤＭＦ、およびＤＣＭで洗浄した。ＤＣＭ中５００ｎｍ（消光係数＝７６０００）でＤＭＴカチオンの吸光度を測定することにより新たな樹脂充填を定量化し、２３８μｍｏｌ／ｇであると決定した。無水酢酸溶液中で１０分間３回懸濁することにより、この樹脂をキャップした。
【０８２７】
反復性Ｆｍｏｃベースの固相ペプチド合成方法を用いて、固体支持体結合化合物１４１を合成した。少量の固体支持体を回収し、アンモニア水（２８〜３０重量％）中に６時間懸濁した。切断された化合物をＬＣ−ＭＳによって分析し、観察された質量は、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）１０６３．８［Ｍ＋２Ｈ］＋。
【０８２８】
固相ペプチド合成方法を用いて、固体支持体結合化合物１４２を合成した。
【化１７７】
2020058370.tif 000216
【０８２９】
ＤＮＡ合成装置において標準の固相合成を用いて、固体支持体結合化合物１４３を合成した。
【０８３０】
固体支持体結合化合物１４３をアンモニア水（２８〜３０重量％）中に懸濁し、５５℃℃で１６時間加熱した。溶液を冷却し、固体支持体を濾過した。濾液を濃縮し、残渣を水中に溶解し、強アニオン交換カラム上でＨＰＬＣによって精製した。全長化合物１４４を含有する画分を一緒にプールし、脱塩した。結果として生じたＧａｌＮＡｃ４−１１共役オリゴマー化合物をＬＣ−ＭＳによって分析し、観察された質量は、その構造と一致した。
【０８３１】
共役基ＧａｌＮＡｃ４−１１のＧａｌＮＡｃ４クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ４−１１ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
【０８３２】
ＧａｌＮＡｃ４−１１（ＧａｌＮＡｃ４−１１ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化１７８】
2020058370.tif 000217
実施例５１：ＧａｌＮＡｃ３−６を含むオリゴヌクレオチド１５５の調製
【化１７８−２】
2020058370.tif 000218
【０８３３】
文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９５，２２９，５４−６０）に記載されるように、化合物１４６を合成した。
【化１７８−３】
2020058370.tif 000219
【０８３４】
化合物４（１５ｇ、４５．５５ｍｍｏｌ）および化合物３５ｂ（１４．３グラム、５７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）中に溶解した。活性化分子篩（４A、２ｇ、粉
末）を添加し、反応物を窒素雰囲気下で３０分間撹拌させた。ＴＭＳ−ＯＴｆを添加し（４．１ｍＬ、２２．７７ｍｍｏｌ）、反応物を室温で一晩撹拌させた。完了した時点で、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍＬ）および粉砕氷（約１５０ｇ）を注いで反応物を反応停止処理した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中２〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１２（（１６．５３ｇ、６３％）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、予想した化合物と一致した。
【０８３５】
化合物１１２（４．２７ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上水酸化パラジウム、４００ｍｇ）を添加し、この溶液を通して水素ガスを３０分間泡立てた。完了した時点で（ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２中１０％ＭｅＯＨ）およびＬＣＭＳ）、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１０５ａ（３．２８ｇ）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
【０８３６】
化合物１４７（２．３１ｇ、１１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、３．９ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）、続いて、ＨＢＴＵ（４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素下で約１５分間撹拌させた。これに、乾燥ＤＭＦ中の化合物１０５ａ（３．３ｇ、７．４ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、窒素雰囲気下で２時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップを得た。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２  中２〜５％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１４８（３．４４ｇ、７３％）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、予想した生成物と一致した。
【０８３７】
化合物１４８（３．３ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上水酸化パラジウム）を添加した（３５０ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間泡立てた。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）およびＬＣＭＳ）、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１４９（２．６ｇ）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。残渣を乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
【化１７９】
2020058370.tif 000220
【０８３８】
化合物１４６（０．６８ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。これに、ＤＩＥＡ（４５０μＬ、２．６ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＨＢＴＵ（１．９６ｇ、０．５．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１５分間、窒素下で撹拌させた。無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物１４９（２．６ｇ）の溶液を添加した。ＤＩＥＡを添加することにより（必要に応じて）、反応物のｐＨをｐＨ＝９〜１０に調整した。反応物を室温で２時間、窒素下で撹拌させた。完了した時点で、反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中２〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１５０（０．６２ｇ、２０％）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
【０８３９】
化合物１５０（０．６２ｇ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（５Ｌ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上水酸化パラジウム）を添加した（６０ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間泡立てた。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）およびＬＣＭＳ）、触媒を濾去した（シリンジチップＴｅｆｌｏｎフィルター、０．４５μｍ）。濾液を回
転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１５１（０．５７ｇ）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。この生成物を４ｍＬの乾燥ＤＭＦ中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
【化１８０】
2020058370.tif 000221
【０８４０】
化合物８３ａ（０．１１ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７５μＬ、１ｍｍｏｌ）およびＰＦＰ−ＴＦＡ（９０μＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を添加した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、その後３０分間かけて徐々にオレンジ色になった。ＴＬＣおよびＬＣＭＳによって反応の進行を監視した。完了した時点で（ＰＦＰエステルの形成）、ＤＭＦを中の化合物１５１（０．５７ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより（必要に応じて）、反応物のｐＨをｐＨ＝９〜１０に調整した。反応混合物を窒素下で約３０分間撹拌した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップを得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中２〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１５２（０．３５ｇ、５５％）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
【０８４１】
化合物１５２（０．３５ｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（
１０ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上水酸化パラジウム）を添加した（３５ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間泡立てた。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）およびＬＣＭＳ）、触媒を濾去した（シリンジチップＴｅｆｌｏｎフィルター、０．４５μｍ）。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１５３（０．３３ｇ、定量的）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。
【０８４２】
化合物１５３（０．３３ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を窒素下で撹拌しながら無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。これに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６５μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＰＦＰ−ＴＦＡ（３５μＬ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素下で約３０分間撹拌した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、徐々にオレンジ色になった。さらにＮ，−ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより、反応混合物のｐＨをｐＨ＝９〜１０で維持した。ＴＬＣおよびＬＣＭＳによって反応の進行を監視した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップを得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中２〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１５４（０．２９ｇ、７９％）を得た。ＬＣＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
【化１８１】
2020058370.tif 000222
【０８４３】
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−６共役基を含むオリゴマー化合物１５５を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−６のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−６ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
【０８４４】
ＧａｌＮＡｃ３−６（ＧａｌＮＡｃ３−６ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１８２】
2020058370.tif 000223
実施例５２：ＧａｌＮＡｃ３−９を含むオリゴヌクレオチド１６０の調製
【化１８３】
2020058370.tif 000224
【０８４５】
文献（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５７９８−５８０８）に記載される手順に従って化合物１５６を合成した。
【０８４６】
化合物１５６（１８．６０ｇ、２９．２８ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）中に溶解した。炭素（６．１５ｇ、１０重量％、充填（乾燥ベース）、マトリックス炭素粉末、湿式）上パラジウムを添加した。反応混合物を室温で１８時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで完全に洗浄した。合わせた濾液を洗浄し、濃縮乾固させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中５〜１０％メタノールで溶出して、化合物１５７（１４．２６ｇ、８９％）を得た。質量（ｍ／ｚ）５４４．１［Ｍ−Ｈ］−。
【０８４７】
化合物１５７（５ｇ、９．１７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中に溶解した。ＨＢＴＵ（３．６５ｇ、９．６１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１３．７３ｍＬ、７８．８１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、化合物４７（２．９６ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中５０％酢酸エチルで溶出して、化合物１５８（８．２５ｇ、７３．３％）を得た。この構造を、ＭＳおよび１Ｈ  ＮＭＲ分析によって確認した。
【０８４８】
化合物１５８（７．２ｇ、７．６１ｍｍｏｌ）を減圧下でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。乾
燥させた化合物を無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）中に溶解した。これに、１Ｈ−テトラゾール（０．４３ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルイミダゾール（０．３ｍＬ、３．８１ｍｍｏｌ）および２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（３．６５ｍＬ、１１．５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中５０〜９０％酢酸エチルで溶出して、化合物１５９（７．８２ｇ、８０．５％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳおよび３１Ｐ  ＮＭＲ分析によって確認した。
【化１８４】
2020058370.tif 000225
【０８４９】
共役基標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−９を含むオリゴマー化合物１６０を調製した。化合物１５９の３つの単位を固体支持体に、続いて、ヌクレオチドホスホラミダイトにカップリングした。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理して、化合物１６０を得た。共役基ＧａｌＮＡｃ３−９のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−９ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−９（ＧａｌＮＡｃ３−９ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化１８５】
2020058370.tif 000226
実施例５３：化合物１８（ＧａｌＮＡｃ３−１ａおよびＧａｌＮＡｃ３−３ａ）の調製のための代替手順
【化１８６】
2020058370.tif 000227
【０８５０】
ラクトン１６１をジアミノプロパン（３〜５当量）またはＭｏｎｏ−Ｂｏｃ保護ジアミノプロパン（１当量）と反応させて、アルコール１６２ａまたは１６２ｂを得た。非保護プロパンジアミンを上述の反応で用いた場合、過剰なジアミンを高真空下で蒸発させて除去し、ＣｂｚＣｌを用いて１６２ａ中の遊離アミノ基を保護して、カラムクロマトグラフィーによって精製した後に、白色の固体として１６２ｂを得た。アルコール１６２ｂをＴＭＳＯＴｆの存在下で化合物４とさらに反応させ１６３ａを得て、触媒水素化を用いてＣｂｚ基を除去することにより、これを１６３ｂに変換した。ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル１６４を、三酸１１３（実施例４８を参照のこと）をＤＭＦ（０．１〜０．５Ｍ）中のＰＦＰＴＦＡ（３．５当量）およびピリジン（３．５当量）と接触させることによって調製した。トリエステル１６４をアミン１６３ｂ（３〜４当量）およびＤＩＰＥＡ（３〜４当量）と直接反応させて、化合物１８を得た。上述の方法は、中間体精製を大幅に促進し、実施例４に記載される手順を用いて形成される副生成物の形成を最小限に抑える。
実施例５４：化合物１８（ＧａｌＮＡｃ３−１ａおよびＧａｌＮＡｃ３−３ａ）の調製のための代替手順
【化１８７】
2020058370.tif 000228
【０８５１】
先の実施例５３に概説される手順を用いて酸１１３からトリＰＦＰエステル１６４を調製し、モノＢｏｃ保護ジアミンと反応させて、本質的に定量的な収率で１６５を得た。Ｂｏｃ基を塩酸またはトリフルオロ酢酸で除去して、トリアミンを得て、これをＤＩＰＥＡ等の好適な塩基の存在下でＰＦＰ活性化酸１６６と反応させて、化合物１８を得た。
【０８５２】
ＤＭＦ中のＰＦＰＴＦＡ（１〜１．２当量）およびピリジン（１〜１．２当量）で処理することにより、ＰＦＰ保護Ｇａｌ−ＮＡｃ酸１６６を対応する酸から調製した。次いで、アセトニトリルおよび水中のＴＥＭＰＯ（０．２当量）およびＢＡＩＢを用いて酸化することにより、前駆酸を対応するアルコールから調製した。先の実施例４７に記載される条件を用いて１，６−ヘキサンジオール（または１，５−ペンタンジオールもしくは他のｎ値の他のジオール）（２〜４当量）およびＴＭＳＯＴｆと反応させることにより、前駆アルコールを糖中間体４から調製した。
実施例５５：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする３’−共役基または５’−共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３−１、３、８、および９の比較）
【０８５３】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ  ３５３３８２を標準物として含めた。様々なＧａｌＮＡｃ３共役基の各々を、ホスホジエステル結合２’−デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端または５’末端のいずれかに結合させた。
【表３３】
2020058370.tif 000229
【０８５４】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０８５５】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−９の構造は、先の実施例５２に示した。ＧａｌＮＡｃ３−３の構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−８の構造は、先の実施例４７に示した。
処理
【０８５６】
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ３５３３８２、６５５８６１、６６４０７８、６６１１６１、６６５００１、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０８５７】
表２７に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、３’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−１およびＧａｌＮＡｃ３−９共役体（ＩＳＩＳ  ６５５８６１およびＩＳＩＳ  ６６４０７８）ならびに５’末端に連結されたＧａｌＮＡｃ３−３およびＧａｌＮＡｃ３−８共役体（ＩＳＩＳ  ６６１１６１およびＩＳＩＳ  ６６５００１）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ３５３３８２）と比較して、強度の大幅な改善を示した。さらに、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−９共役体を含むＩＳＩＳ  ６６４０７８は、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むＩＳＩＳ  ６５５８６１と比較して、本質的に等効力であった。それぞれ、ＧａｌＮＡｃ３−３またはＧａｌＮＡｃ３−９を含む５’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ  ６６１１６１およびＩＳＩＳ  ６６５００１は、３’共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６５５８６１およびＩＳＩＳ  ６６４０７８）と比較して、強度を増加させた。
【表３４】
2020058370.tif 000230
【０８５８】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下の表に示す。
【表３５】
2020058370.tif 000231
実施例５６：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする３’−共役基または５’−共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３−１、２、３、５、６、７、および１０の比較）
【０８５９】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ  ３５３３８２を標準物として含めた。３’末端にＧａｌＮＡｃ３共役基を結合させたＩＳＩＳ  ６５５８６１を除いて、様々なＧａｌＮＡｃ３共役基の各々を、ホスホジエステル結合２’−デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に結合させた。
【表３６】
2020058370.tif 000232
【０８６０】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０８６１】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−２ａの構造は、先の実施例３７に示した。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−５ａの構造は、先の実施例４９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−６ａの構造は、先の実施例５１に示した。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、先の実施例４６に示した。
処理
【０８６２】
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ３５３３８２、６５５８６１、６６４５０７、６６１１６１、６６６２２４、６６６９６１、６６６９８１、６６６８８１、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０８６３】
表３０に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ３５３３８２）と比較して、強度の大幅な改善を示した。５’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、３’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して、強度のわずかな増加を示した。
【表３７】
2020058370.tif 000233
【０８６４】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下の表３１に示す。
【表３８】
2020058370.tif 000234
実施例５７：生体内におけるＡｐｏＣ  ＩＩＩを標的とする３’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの作用持続時間試験
【０８６５】
マウスに以下に示される用量を１回注入し、ＡｐｏＣ−ＩＩＩおよび血漿トリグリセリド（血漿ＴＧ）レベルを４２日間にわたって監視した。各群におけるヒトＡＰＯＣ−ＩＩＩを発現する３匹のトランスジェニックマウスを用いて、この試験を実行した。
【表３９】
2020058370.tif 000235
【０８６６】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０８６７】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。
【表４０】
2020058370.tif 000236
【０８６８】
上の表に見られるように、作用持続時間は、非共役オリゴヌクレオチドと比較して、３’−共役基の添加とともに増加した。共役完全ＰＳオリゴヌクレオチド６４７５３５と比較して、共役混合ＰＯ／ＰＳオリゴヌクレオチド６４７５３６の作用持続時間がさらに増加した。
実施例５８：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする３’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３−１およびＧａｌＮＡｃ４−１１の比較）
【０８６９】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ  ４４０７６２を非共役標準物として含めた。共役基の各々を、ホスホジエステル結合２’−デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端に結合させた。
【０８７０】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１１ａの構造ＧａｌＮＡｃは、先の実施例５０に示した。
処理
【０８７１】
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ４４０７６２、６５１９００、６６３７４８、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０８７２】
表３４に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。３’末端にホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−１およびＧａｌＮＡｃ４−１１共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６５１９００およびＩＳＩＳ  ６６３７４８）は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ４４０７６２）と比較して、強度の大幅な増加を示した。２個の共役オリゴヌクレオチド、ＧａｌＮＡｃ３−１およびＧａｌＮＡｃ４−１１は、等効力であった。
【表４１】
2020058370.tif 000237
【０８７３】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、-ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、
ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０８７４】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下の表３５に示す。
【表４２】
2020058370.tif 000238
実施例５９：生体内におけるＦＸＩを標的とするＧａｌＮＡｃ３−１共役ＡＳＯの影響
【０８７５】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験においてマウスにおけるＦＸＩのアンチセンス阻害について試験した。ＩＳＩＳ  ４０４０７１を非共役標準物として含めた。共役基の各々を、ホスホジエステル結合２’−デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端に結合させた。
【表４３】
2020058370.tif 000239
【０８７６】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０８７７】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。
処理
【０８７８】
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ４０４０７１、６５６１７２、６５６１７３、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で週２回３週間、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いて血漿ＦＸＩタンパク質レベルも測定した。ＰＢＳ処理対照に規準化する前に（ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）を用いて）ＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡに対して相対的に決定した。以下の結果を、各処理群のＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。データをＰＢＳ処理対
照に規準化し、「％ＰＢＳ」で表示する。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に提示する。
【表４４】
2020058370.tif 000240
【０８７９】
表３７に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルを低下させた。３’−ＧａｌＮＡｃ３−１共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ４０４０７１）と比較して、強度の大幅な増加を示した。ＰＳ結合のうちのいくつかをＰＯ（ＩＳＩＳ
６５６１７３）と置き換えることによって、これら２個の共役オリゴヌクレオチドの間で強度の増加がさらに提供された。
【０８８０】
表３７ａに例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＦＸＩタンパク質レベルを低下させた。３’−ＧａｌＮＡｃ３−１共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ４０４０７１）と比較して、強度の大幅な増加を示した。ＰＳ結合のうちのいくつかをＰＯ（ＩＳＩＳ  ６５６１７３）と置き換えることによって、これら２個の共役オリゴヌクレオチドの間で強度の増加がさらに提供された。
【表４５】
2020058370.tif 000241
【０８８１】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビン、総アルブミン、ＣＲＥ、およびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下
の表に示す。
【表４６】
2020058370.tif 000242
実施例６０：生体外におけるＳＲＢ−１を標的とする共役ＡＳＯの影響
【０８８２】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験において初代マウス肝細胞におけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。ＩＳＩＳ  ３５３３８２を非共役標準物として含めた。共役基の各々を、ホスホジエステル結合２’−デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端または５’末端に結合させた。
【表４７】
2020058370.tif 000243
【０８８３】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デ
オキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０８８４】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−８ａの構造は、先の実施例４７に示した。ＧａｌＮＡｃ３−９ａの構造は、先の実施例５２に示した。ＧａｌＮＡｃ３−６ａの構造は、先の実施例５１に示した。ＧａｌＮＡｃ３−２ａの構造は、先の実施例３７に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、先の実施例４６に示した。ＧａｌＮＡｃ３−５ａの構造は、先の実施例４９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
処理
【０８８５】
上に列記されるオリゴヌクレオチドを、２５，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、かつ０．０３、０．０８、０．２４、０．７４、２．２２、６．６７、または２０ｎＭの修飾オリゴヌクレオチドで処理した初代マウス肝細胞において生体外で試験した。約１６時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で測定された総ＲＮＡ含有量に従ってＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを調整した。
【０８８６】
標準の方法を用いてＩＣ５０を計算し、結果を表４０に提示する。結果は、オリゴヌクレオチドの細胞への進入を人工的に促進するために試薬も電気穿孔技法も用いない遊離取り込み条件下で、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ３５３３８２）よりも肝細胞において著しく強力であったことを示す。
【表４８】
2020058370.tif 000244
【０８８７】
ａ複数回の実行の平均。
実施例６１：ＧａｌＮＡｃ３−１２を含むオリゴマー化合物１７５の調製
【化１８８】
2020058370.tif 000245
【化１８９】
2020058370.tif 000246
【化１９０】
2020058370.tif 000247
【化１９１】
2020058370.tif 000248
【０８８８】
化合物１６９は、市販のものである。ベンジル（ペルフルオロフェニル）グルタレート
を化合物１７１に添加することによって化合物１７２を調製した。ＰＦＰ−ＴＦＡおよびＤＩＥＡをＤＭＦ中の５−（ベンジルオキシ）−５−オキソペンタン酸に添加することによって、ベンジル（ペルフルオロフェニル）グルタレートを調製した。実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１２共役基を含むオリゴマー化合物１７５を化合物１７４から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１２のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１２ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１２（ＧａｌＮＡｃ３−１２ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１９２】
2020058370.tif 000249
実施例６２：ＧａｌＮＡｃ３−１３を含むオリゴマー化合物１８０の調製
【化１９３】
2020058370.tif 000250
【化１９３−２】
2020058370.tif 000251
【化１９３−３】
2020058370.tif 000252
【０８８９】
実施例２に示される一般的手順を用いて、化合物１７６を調製した。実施例４９に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１３共役基を含むオリゴマー化合物１８０
を化合物１７７から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１３のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１３ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１３（ＧａｌＮＡｃ３−１３ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１９４】
2020058370.tif 000253
実施例６３：ＧａｌＮＡｃ３−１４を含むオリゴマー化合物１８８の調製
【化１９５】
2020058370.tif 000254
【化１９５−２】
2020058370.tif 000255
【０８９０】
化合物１８１および１８５は、市販のものである。実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１４共役基を含むオリゴマー化合物１８８を化合物１８７から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１４のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１４ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができ
る。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１４（ＧａｌＮＡｃ３−１４ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１９６】
2020058370.tif 000256
実施例６４：ＧａｌＮＡｃ３−１５を含むオリゴマー化合物１９７の調製
【化１９７】
2020058370.tif 000257
【化１９８】
2020058370.tif 000258
【０８９１】
化合物１８９は、市販のものである。実施例３１に示される一般的手順を用いて、化合物１９５を調製した。標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１５共役基を含むオリゴマー化合物１９７を化合物１９４および１９５から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１５のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１５ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１５（ＧａｌＮＡｃ３−１５ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化１９９】
2020058370.tif 000259
実施例６５：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする５’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３−３、１２、１３、１４、および１５の比較）
【０８９２】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ  ３５３３８２を標準物として含めた。ＧａｌＮＡｃ３共役基の各々を、ホスホジエステル結合２’−デオキシアデ
ノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に結合させた。
【表４９】
2020058370.tif 000260
【０８９３】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０８９４】
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１２ａの構造は、先の実施例６１に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、先の実施例６２に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１４ａの構造は、先の実施例６３に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１５ａの構造は、先の実施例６４に示した。
処理
【０８９５】
６〜８週齢のＣ５７ｂｌ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ３５３３８２、６６１１６１、６７１１４４、６７００６１、６７１２６１、６７１２６２、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回または２回、皮下注入した。２回投与されたマウスは、第１の投与の３日後に第２の投与を受けた。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０８９６】
表４２に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。単回用量を受けた動物と２回の用量を受けた動物との間で標的ノックダウンの著しい差は観察されなかった（ＩＳＩＳ  ３５３３８２の投与量３０および２×１５ｍｇ／ｋｇ、ならびにＩＳＩＳ  ６６１１６１の投与量５および２×２．５ｍｇ／ｋｇを参照のこと）。ホスホジエステル結合ＧａｌＮＡｃ３−３、１２、１３、１４、および１５共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ３３５３８２）と比較して、強度の大幅な増加を示した。
【表５０】
2020058370.tif 000261
【０８９７】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な差は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下の表４３に示す。
【表５１】
2020058370.tif 000262
実施例６６：５’−ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害への様々な切断可能な部分の影響
【０８９８】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。ＧａｌＮＡｃ３共役基の各々を、ホスホジエステルの連結したヌクレオシドの切断可能な部分（ＣＭ）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に結合させた。
【表５２−１】
2020058370.tif 000263
【表５２−２】
2020058370.tif 000264
【０８９９】
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０９００】
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、先の実施例６２に示した。
処理
【０９０１】
６〜８週齢のＣ５７ｂｌ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ  ６６１１６１、６７０６９９、６７０７００、６７０７０１、６７１１６５、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＦＸＩ  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０９０２】
表４５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的
様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。様々な切断可能な部分を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて、同様の強度を示した。
【表５３】
2020058370.tif 000265
【０９０３】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な差は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下の表４６に示す。
【表５４】
2020058370.tif 000266
実施例６７：ＧａｌＮＡｃ３−１６を含むオリゴマー化合物１９９の調製
【化２００】
2020058370.tif 000267
【０９０４】
実施例７および９に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１６共役基を含むオリゴマー化合物１９９を調製する。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１６のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１６ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１６（ＧａｌＮＡｃ３−１６ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化２０１】
2020058370.tif 000268
実施例６８：ＧａｌＮＡｃ３−１７を含むオリゴマー化合物２００の調製
【化２０２】
2020058370.tif 000269
【０９０５】
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１７共役基を含むオリゴマー化合物２００を調製した。ＧａｌＮＡｃ３−１７のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１７ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１７（ＧａｌＮＡｃ３−１７ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化２０３】
2020058370.tif 000270
実施例６９：ＧａｌＮＡｃ３−１８を含むオリゴマー化合物２０１の調製
【化２０４】
2020058370.tif 000271
【０９０６】
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１８共役基を含むオリゴマー化合物２０１を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１８のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１８ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１８（ＧａｌＮＡｃ３−１８ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化２０５】
2020058370.tif 000272
実施例７０：ＧａｌＮＡｃ３−１９を含むオリゴマー化合物２０４の調製
【化２０６】
2020058370.tif 000273
【０９０７】
実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１９共役基を含むオリゴマー化合物２０４を化合物６４から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１９のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−１９ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１９（ＧａｌＮＡｃ３−１９ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化２０７】
2020058370.tif 000274
実施例７１：ＧａｌＮＡｃ３−２０を含むオリゴマー化合物２１０の調製
【化２０８】
2020058370.tif 000275
【０９０８】
ＰＦＰ−ＴＦＡおよびＤＩＥＡを、トリフリン酸無水物を６−アミノヘキサン酸に添加することによって調製したアセトニトリル中の６−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）ヘキサン酸に添加することによって、化合物２０５を調製した。反応混合物を８０℃に加熱し、その後、室温まで下げた。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２０共役基を含むオリゴマー化合物２１０を化合物２０８から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−２０のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−２０ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−２０（ＧａｌＮＡｃ３−２０ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化２０９】
2020058370.tif 000276
実施例７２：ＧａｌＮＡｃ３−２１を含むオリゴマー化合物２１５の調製
【化２１０】
2020058370.tif 000277
【０９０９】
化合物２１１は、市販のものである。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２１共役基を含むオリゴマー化合物２１５を化合物２１３から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−２１のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−２１ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−２１（ＧａｌＮＡｃ３−２１ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化２１１】
2020058370.tif 000278
実施例７３：ＧａｌＮＡｃ３−２２を含むオリゴマー化合物２２１の調製
【化２１２】
2020058370.tif 000279
【化２１３】
2020058370.tif 000280
【０９１０】
ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリドを用いて、化合物２２０を化合物２１９から調製した。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２１共役基を含むオリゴマー化合物２２１を化合物２２０から調製する。共役基ＧａｌＮＡｃ３−２２のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−２２ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可
能な部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−２２（ＧａｌＮＡｃ３−２２ａ−ＣＭ−）の構造を以下に示す。
【化２１４】
2020058370.tif 000281
実施例７４：５’−ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害への様々な切断可能な部分の影響
【０９１１】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。ＧａｌＮＡｃ３共役基の各々を、それぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に結合させた。
【表５５】
2020058370.tif 000282
【０９１２】
すべての表において、大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチ
ルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
【０９１３】
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１７ａの構造は、先の実施例６８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１８ａの構造は、実施例６９に示した。
処理
【０９１４】
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ
Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表４７に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０９１５】
表４８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の強度を示し、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
【表５６】
2020058370.tif 000283
【０９１６】
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下の表４９に示す。
【表５７】
2020058370.tif 000284
実施例７５：５’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの薬物動態分析
【０９１７】
実施例６５、６６、および７４に記載される処理手順に従って得た肝臓試料を用いて、上の表４１、４４、および４７におけるＡＳＯのＰＫを評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出し、内部標準とともにＩＰ−ＨＰＬＣ−ＭＳによって分析した。適切なＵＶピークを統合することによってすべての代謝物の合わせた組織レベル（μｇ／ｇ）を測定し、適切な抽出イオンクロマトグラム（ＥＩＣ）を用いて、共役体（この場合、ＩＳＩＳ番号３５３３８２の「親」）を欠く全長ＡＳＯの組織レベルを測定した。
【表５８】
2020058370.tif 000285
【０９１８】
上の表５０における結果は、特にＧａｌＮＡｃ３共役基を有するオリゴヌクレオチドとＧａｌＮＡｃ３共役基を有しないオリゴヌクレオチドとの間の投薬の差を考慮に入れた場合、オリゴヌクレオチド投与の７２時間後に、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むオリゴヌクレオチドの肝臓組織レベルが、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含まない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ３５３３８２）の肝臓組織レベルよりも高かったことを示す。さらに、７２時間までに、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含む各オリゴヌクレオチドの４０〜９８％が親化合物に代謝され、ＧａｌＮＡｃ３共役基がオリゴヌクレオチドから切断されたことを示す。
実施例７６：ＧａｌＮＡｃ３−２３を含むオリゴマー化合物２３０の調製
【化２１５】
2020058370.tif 000286
【化２１６】
2020058370.tif 000287
【０９１９】
化合物２２２は、市販のものである。４４．４８ｍＬ（０．３３ｍｏｌ）の化合物２２２をピリジン（５００ｍＬ）中の塩化トシル（２５．３９ｇ、０．１３ｍｏｌ）で１６時間処理した。その後、反応物を蒸発させて油にし、ＥｔＯＡｃ中に溶解し、水、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。酢酸エチルを濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）、続いて、ＣＨ２Ｃｌ２中１０％メタノールで溶出して、無色の油として化合物２２３を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。１０ｇ（３２．８６ｍｍｏｌ）の１−トシルトリエチレングリコール（化合物２２３）を、ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（１０．６８ｇ、１６４．２８ｍｍｏｌ）で、室温で１７時間処理した。その後、反応混合物を水上に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させて、５．３ｇの化合物２２４（９２％）を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。１−アジドトリエチレングリコール（化合物２２４、５．５３ｇ、２３．６９ｍｍｏｌ）および化合物４（６ｇ、１８．２２ｍｍｏｌ）を、４Ａ分子篩（５ｇ）およびジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＴＭＳＯＴｆ（１．６５ｍＬ、９．１１ｍｍｏｌ）で、不活性雰囲気下で処理した。１４時間後、反応物を濾過して篩を除去し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中２〜４％メタノールの勾配で溶出して、化合物２２５を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２５（１１．９ｇ、２３．５９ｍｍｏｌ）をパールマン触媒上で、ＥｔＯＡｃ／メタノール（４：１、２５０ｍＬ）中で水素化した。８時間後、触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、化合物２２６を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。
【０９２０】
化合物２２７を生成するために、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のニトロメタントリスプロピオン酸（４．１７ｇ、１５．０４ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（１０．３ｍＬ、６０．１７ｍｍｏｌ）の溶液をペンタフルオロトリフルオロアセテート（９．０５ｍＬ、５２．６５ｍｍｏｌ）で液滴処理した。３０分間後、反応物を氷水上に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、その後、ヘプタンから再結晶化して、白色の固体として化合物２２７を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２７（１．５ｇ、１．９３ｍｍ
ｏｌ）および化合物２２６（３．７ｇ、７．７４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）中で、室温で２時間撹拌した。その後、反応物を蒸発乾固し、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中２〜１０％メタノールの勾配で溶出して、化合物２２８を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２８（１．７ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）中のラネーニッケル（約２ｇ、湿性）で、水素雰囲気下で処理した。１２時間後、触媒を濾去し、有機層を蒸発させて固体にし、これを次のステップで直接使用した。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。この固体（０．８７ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中のベンジルグルタル酸（０．１８ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（２７３．７μＬ、１．６ｍｍｏｌ）で処理した。１６時間後、ＤＭＦを減圧下で６５℃で除去して油にし、この油をジクロロメタン中に溶解した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を蒸発させた後、化合物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中２〜２０％メタノールの勾配で溶出して、カップリング生成物を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。ベンジルエステルをパールマン触媒で、水素雰囲気下で１時間脱保護した。その後、この触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、酸を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。酸（４８６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。ピリジン（５３．６１μＬ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をアルゴンでパージした。ペンタフルオロトリフルオロアセテート（４６．３９μＬ、０．４ｍｍｏｌ）を反応混合物に緩徐に添加した。反応物の色が淡黄色からワイン色に変化し、少しの煙を発し、この煙をアルゴン流で吹き飛ばした。反応物を室温で１時間撹拌させた（反応の完了をＬＣＭＳによって確認した）。この溶媒を減圧下（回転蒸発）で７０℃で除去した。残渣をＤＣＭで希釈し、１Ｎ  ＮａＨＳＯ４、ブライン、飽和重炭酸ナトリウム、および再度ブラインで洗浄した。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、黄色の脆性発泡体として２２５ｍｇの化合物２２９を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。
【０９２１】
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２３共役基を含むオリゴマー化合物２３０を化合物２２９から調製した。ＧａｌＮＡｃ３−２３共役基のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ３−２３ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ３−２３（ＧａｌＮＡｃ３−２３ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化２１７】
2020058370.tif 000288
実施例７７：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９２２】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
【表５９−１】
2020058370.tif 000289
【表５９−２】
2020058370.tif 000290
【０９２３】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−９ａは、実施例５２に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示し、ＧａｌＮＡｃ３−２０ａは、実施例７１に示し、ＧａｌＮＡｃ３−２３ａは、実施例７６に示した。
処理
【０９２４】
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ
Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）の各々に、表５１に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０９２５】
表５２に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。
【表６０】
2020058370.tif 000291
【０９２６】
標準のプロトコルを用いて、血清中の肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）も測定した。総ビリルビンおよびＢＵＮも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、およびＢＵＮ値を、以下の表５３に示す。
【表６１】
2020058370.tif 000292
実施例７８：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むアンギオテンシノーゲンを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９２７】
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験において正常血圧のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおけるアンギオテンシノーゲン（ＡＧＴ）のアンチセンス阻害について試験した。
【表６２】
2020058370.tif 000293
【０９２８】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。
処理
【０９２９】
６週齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの各々に、表５４に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にラットを屠殺した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡＧＴ  ｍＲＮＡレベルを決定した。全アンギオテンシノーゲンＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＪＰ２７４１２、ＩＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＯＮ）を用いて、１：２０，０００で希釈したＡＧＴ血漿タンパク質レベルを測定した。以下の結果を、ＰＢＳ対照に規準化された各処理群の肝臓におけるＡＧＴ
ｍＲＮＡレベルまたは血漿におけるＡＧＴタンパク質レベルの平均パーセントとして提示する。
【０９３０】
表５５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡＧＴ  ｍＲＮＡおよび血漿タンパク質レベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
【表６３】
2020058370.tif 000294
【０９３１】
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ならびに体重も測定した。結果を以下の表５６に示す。
【表６４】
2020058370.tif 000295
実施例７９：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡＰＯＣ−ＩＩＩを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
【０９３２】
以下の表５７に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
【表６５】
2020058370.tif 000296
【０９３３】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示した。
処理
【０９３４】
ヒトＡＰＯＣ−ＩＩＩを発現する６〜８週齢のトランスジェニックマウスの各々に、表５７に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、３匹の動物から成った。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後７２時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、および６週間時点のレベルを決定した。実施例２０に記載されるように、血漿トリグリセリドおよびＡＰＯＣ−ＩＩＩタンパク質レベルを測定した。以下の結果を、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿トリグリセリドおよびＡＰＯＣ−ＩＩＩレベルの平均パーセントとして提示し、親オリゴヌクレオチドの投与量がＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドの投与量の３倍であっ
たにもかかわらず、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドが共役基（ＩＳＩＳ  ３０４８０１）を有しない親オリゴヌクレオチドよりも長い作用持続時間を示したことを示す。
【表６６−１】
2020058370.tif 000297
【表６６−２】
2020058370.tif 000298
【表６６−３】
2020058370.tif 000299
実施例８０：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むα−１抗トリプシン（Ａ１ＡＴ）を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９３５】
表５９に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるＡ１ＡＴの用量依存的阻害試験において試験した。
【表６７】
2020058370.tif 000300
【０９３６】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示した。
処理
【０９３７】
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）の各々に、表５９に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡ１ＡＴ  ｍＲＮＡレベルを決定した。マウスα１−抗トリプシンＥＬＩＳＡ（カタログ番号４１−Ａ１ＡＭＳ−Ｅ０１、Ａｌｐｃｏ，Ｓａｌｅｍ，ＮＨ）を用いて、Ａ１ＡＴ血漿タンパク質レベルを決定した。以下の結果を、ＰＢＳ対照に規準化された各処理群の肝臓におけるＡ１ＡＴ  ｍＲＮＡおよび血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示する。
【０９３８】
表６０に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡ１ＡＴ  ｍＲＮＡおよびＡ１ＡＴ血漿タンパク質レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、親（ＩＳＩＳ  ４７６３６６）よりも著しく強力であった。
【表６８】
2020058370.tif 000301
【０９３９】
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼおよびＢＵＮレベルを測定した。体重および臓器重量も測定した。結果を以下の表６１に示す。体重を、ベースラインと比較した％として示す。臓器重量を、ＰＢＳ対照群と比較した体重の％として示す。
【表６９】
2020058370.tif 000302
実施例８１：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＡ１ＡＴを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
【０９４０】
表５９に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
【０９４１】
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスの各々に、表５９に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。投薬の前日に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後５、１２、１９、および２５日時点のレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａ１ＡＴタンパク質レベルを測定した（実施例８０を参照のこと）。以下の結果を、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿Ａ１ＡＴタンパク質レベルの平均パーセントとして提示する。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドがＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ  ４７６３６６）よりも強力であり、かつより長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、５’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６７８３８１、６７８３８２、６７８３８３、および６７８３８４）は、概して、３’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６５６３２６）よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
【表７０】
2020058370.tif 000303
実施例８２：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体外におけるアンチセンス阻害
【０９４２】
処理の２時間前に、初代マウス肝細胞を１５，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。表６３に列記されるオリゴヌクレオチドをウィリアムＥ培地に２、１０、５０、または２５０ｎＭで添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。オリゴヌクレオチド添加の１６時間後に細胞を溶解し、ＲＮｅａｓｅ  ３０００  ＢｉｏＲｏｂｏｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全ＲＮＡを精製した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。Ｐｒｉｓｍ  ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて、ＩＣ５０値を決定した。結果は、様々な異なるＧａｌＮＡｃ共役基および様々な異なる切断可能な部分を含むオリゴヌクレオチドが、生体外遊離取り込み実験において、ＧａｌＮＡｃ共役基を欠く親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ３５３３８２および６６６８４１）よりも著しく強力であることを示す。
【表７１−１】
2020058370.tif 000304
【表７１−２】
2020058370.tif 000305
【表７１−３】
2020058370.tif 000306
【０９４３】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−５ａは、実施例４９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−６ａは、実施例５１に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−８ａは、実施例４７に示し、ＧａｌＮＡｃ３−９ａは、実施例５２に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１２ａは、実施例６１に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１４ａは、実施例６３に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１５ａは、実施例６４に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１７ａは、実施例６８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１８ａは、実施例６９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示し、ＧａｌＮＡｃ３−２０ａは、実施例７１に示し、ＧａｌＮＡｃ３−２３ａは、実施例７６に示した。
実施例８３：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含む第ＸＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９４４】
以下の表６４に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける第ＸＩ因子の用量依存的阻害試験において試験した。
【表７２】
2020058370.tif 000307
【０９４５】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示した。
処理
【０９４６】
６〜８週齢のマウスの各々に、以下に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて肝臓における第ＸＩ因子ｍＲＮＡレベルを測定し、標準のプロトコルに従ってシクロフィリンに規準化した。肝臓トランスアミナーゼ、ＢＵＮ、およびビリルビンも測定した。以下の結果を、ＰＢＳ対照に規準化された各処理群の平均パーセントとして提示する。
【０９４７】
表６５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓における第ＸＩ因子ｍＲＮＡを低下させた。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含
むオリゴヌクレオチドが、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ  ４０４０７１）よりも強力であったことを示す。さらに、５’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６６３０８６、６７８３４７、６７８３４８、および６７８３４９）は、３’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６５６１７３）よりもさらに強力であった。
【表７３】
2020058370.tif 000308
実施例８４：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含む第ＸＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
【０９４８】
表６４に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
【０９４９】
６〜８週齢のマウスの各々に、表６４に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。投薬の前日に尾出血によって血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後３、１０、および１７日間時点のレベルを決定した。Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）の第ＸＩ因子捕捉およびビオチン化検出抗体（それぞれ、カタログ番号ＡＦ２４６０およびＢＡＦ２４６０）、ならびにＯｐｔＥＩＡ試薬セットＢ（カタログ番号５５０５３４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて、第ＸＩ因子血漿タンパク質レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。以下の結果を、ベースラインレベルに規準化された各処理群の第ＸＩ因子血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示する。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ
４０４０７１）よりも強力であり、より長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、５’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６６３０８６、６７８３４７、６７８３４８、および６７８３４９）は、３’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６５６１７３）よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
【表７４】
2020058370.tif 000309
実施例８５：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９５０】
表６３に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
処理
【０９５１】
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの各々に、表６３に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の４８時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果を、生理食塩水（対照）に規準化された各処理群の肝臓におけるＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。
【０９５２】
表６７および６８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。
【表７５】
2020058370.tif 000310
【表７６】
2020058370.tif 000311
【０９５３】
標準のプロトコルを用いて、肝臓トランスアミナーゼレベル、総ビリルビン、ＢＵＮ、および体重も測定した。各処理群の平均値を以下の表６９に示す。
【表７７】
2020058370.tif 000312
実施例８６：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９５４】
以下の表７０に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトＴＴＲ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）のアンチセンス阻害について試験した。
処理
【０９５５】
８週齢のＴＴＲトランスジェニックマウスの各々に、以下の表に列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはＰＢＳを、週１回３週間、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。この実験を通して様々な時点で尾出血を実行し、血漿ＴＴＲタンパク質、ＡＬＴ、およびＡＳＴレベルを測定し、表７２〜７４に報告した。動物を屠殺した後、血漿ＡＬＴ、ＡＳＴ、およびヒトＴＴＲレベルを測定し、体重、臓器重量、および肝臓におけるヒトＴＴＲ  ｍＲＮＡレベルも測定した。臨床分析器（ＡＵ４８０、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＣＡ）を用いて、ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるヒトＴＴＲ
ｍＲＮＡレベルを決定した。表７１〜７４に提示される結果は、各処理群の平均値である。ｍＲＮＡレベルは、ＰＢＳ群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのＰＢＳ群の平均値と比較した平均値である。体重は、個々の処理群それぞれを屠殺するまでのベースラインからの平均体重変化率である。示される臓器重量は、動物の体重に規準化されており、各処理群の平均規準化臓器重量を、ＰＢＳ群の平均
規準化臓器重量と比較して提示する。
【０９５６】
表７１〜７４において、「ＢＬ」は、第１の投与の直前に測定したベースラインを示す。表７１および７２に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＴＴＲ発現レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ  ４２０９１５）よりも強力であった。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドおよび混合ＰＳ／ＰＯヌクレオシド間結合は、ＧａｌＮＡｃ共役体および完全ＰＳ結合を含むオリゴヌクレオチドよりもさらに強力であった。
【表７８】
2020058370.tif 000313
【０９５７】
表７２の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−１の構造は、実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１９ａの構造は、実施例７０に示した。
【表７９】
2020058370.tif 000314
【表８０】
2020058370.tif 000315
【表８１】
2020058370.tif 000316
【表８２】
2020058370.tif 000317
実施例８７：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドの単回投与による生体内における作用持続時間
【０９５８】
ＩＳＩＳ番号４２０９１５および６６０２６１（表７０を参照のこと）を、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。ＩＳＩＳ番号４２０９１５、６８２８８３、および６８２８８５（表７０を参照のこと）も、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
【０９５９】
ヒトＴＴＲを発現する８週齢の雄トランスジェニックマウスの各々に、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４２０９１５または１３．５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６６０２６１を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。投薬前に尾出血を実行して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１０、１７、２４、および３９日目のレベルを決定した。実施例８６に記載されるように、血漿ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。以下の結果を、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿ＴＴＲレベルの平均パーセントとして提示する。
【表８３】
2020058370.tif 000318
処理
【０９６０】
ヒトＴＴＲを発現する雌トランスジェニックマウスの各々に、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４２０９１５、１０．０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６８２８８３、または１０．０ｍｇ／ｋｇの６８２８８５を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。投薬前に尾出血を実行して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１０、１７、２４、および３９日目のレベルを決定した。実施例８６に記載されるように、血漿ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。以下の結果を、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿ＴＴＲレベルの平均パーセントとして提示する。
【表８４】
2020058370.tif 000319
【０９６１】
表７５および７６における結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ４２０９１５）よりも強力であり、より長い作用持続時間を有することを示す。
実施例８８：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＭＮを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるスプライシング調節
【０９６２】
表７７に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるヒト運動ニューロン生存（ＳＭＮ）のスプライシング調節について試験した。
【表８５】
2020058370.tif 000320
【０９６３】
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。「Ｘ」は、Ｇｅｎｅ  Ｔｏｏｌｓ（Ｐｈｉｌｏｍａｔｈ，ＯＲ）によって生成された５’一次アミンを示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ｂは、以下に示されるリンカーの−ＮＨ−Ｃ６−Ｏ部分を欠くＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造を示す。
【化２１８】
2020058370.tif 000321
【０９６４】
ＩＳＩＳ番号７０３４２１および７０３４２２は、モルフォリノオリゴヌクレオチドであり、これら２個のオリゴヌクレオチドの各ヌクレオチドは、モルフォリノヌクレオチドである。
処理
【０９６５】
ヒトＳＭＮを発現する６週齢のトランスジェニックマウスに、表７８に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を１回皮下注入した。各処理群は、２匹の雄および２匹の雌から成った。投与の３日後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタ
イムＰＣＲを用いて、エキソン７を有する場合とエキソン７を有しない場合の肝臓におけるヒトＳＭＮ  ｍＲＮＡレベルを決定した。Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ試薬を用いて総ＲＮＡを測定した。ＳＭＮ  ｍＲＮＡレベルを総ｍＲＮＡに規準化し、生理食塩水処理群の平均にさらに規準化した。結果として生じたエキソン７を含むＳＭＮ  ｍＲＮＡとエキソン７を欠くＳＭＮ  ｍＲＮＡとの平均比を表７８に示す。結果は、スプライシングを調節し、かつＧａｌＮＡｃ共役体を含む完全修飾オリゴヌクレオチドが、ＧｌａＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも肝臓におけるスプライシングの変化に著しく強力であることを示す。さらに、この傾向は、２’−ＭＯＥおよびモルフォリノ修飾オリゴヌクレオチドを含む複数の化学修飾において維持される。
【表８６】
2020058370.tif 000322
実施例８９：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むアポリポタンパク質Ａ（Ａｐｏ（ａ））を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９６６】
以下の表７９に列記されるオリゴヌクレオチドを、トランスジェニックマウスにおけるＡｐｏ（ａ）の用量依存的阻害試験について試験した。
【表８７】
2020058370.tif 000323
【０９６７】
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。
処理
【０９６８】
８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）の各々に、表７９に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを
、以下に示される投与量で週１回、合計６回の投与で、皮下注入した。各処理群は、３〜４匹の動物から成った。第１の投与の前日に、かつ各投与後週１回、尾出血を実行して、血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを決定した。最終投与の２日後にマウスを屠殺した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡｐｏ（ａ）ｍＲＮＡレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いてＡｐｏ（ａ）血漿タンパク質レベルを決定し、肝臓トランスアミナーゼレベルを決定した。表８０におけるｍＲＮＡおよび血漿タンパク質の結果を、ＰＢＳ処理群と比較した処理群の平均パーセントとして提示する。血漿タンパク質レベルをＰＢＳ群のベースライン（ＢＬ）値にさらに規準化した。平均絶対トランスアミナーゼレベルおよび体重（ベースライン平均と比較した％）を表８１に報告する。
【０９６９】
表８０に例証されるように、オリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡｐｏ（ａ）ｍＲＮＡおよび血漿タンパク質レベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、より長い作用持続時間を有した。表８１に例証されるように、トランスアミナーゼレベルおよび体重はオリゴヌクレオチドの影響を受けず、オリゴヌクレオチドが良好な耐容性を示したことを示す。
【表８８】
2020058370.tif 000324
【表８９】
2020058370.tif 000325
実施例９０：ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９７０】
以下の表８２に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトＴＴＲ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）のアンチセンス阻害について試験した。
処理
【０９７１】
ＴＴＲトランスジェニックマウスの各々に、表８３に列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはＰＢＳを、週１回３週間、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。第１の投与の前に、尾出血を実行して、ベースライン（ＢＬ）での血漿ＴＴＲタンパク質レベルを決定した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。臨床分析器（ＡＵ４８０、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＣＡ）を用いて、ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるヒトＴＴＲ  ｍＲＮＡレベルを決定した。表８３に提示される結果は、各処理群の平均値である。ｍＲＮＡレベルは、ＰＢＳ群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのＰＢＳ群の平均値と比較した平均値である。「ＢＬ」は、第１の投与の直前に測定したベースラインを示す。表８３に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＴＴＲ発現レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ  ４２０９１５）よりも強力であり、ホスホジエステルまたはデオキシアデノシンの切断可能な部分を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠く親と比較して、強度の著しい改善を示した（ＩＳＩＳ番号６８２８８３および６６６９４３対４２０９１５、ならびに実施例８６および８７を参照のこと）。
【表９０】
2020058370.tif 000326
【０９７２】
表８２の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示した。
【表９１】
2020058370.tif 000327
実施例９１：非ヒト霊長類におけるＧａｌＮＡｃ３共役体を含む第ＶＩＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９７３】
以下の表８４に列記されるオリゴヌクレオチドを、無限用量増加試験（ｎｏｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ，ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ）においてサルにおける第ＶＩＩ因子のアンチセンス阻害について試験した。
処理
【０９７４】
処置した（ｎｏｎ−ｎａiｖｅ）サルの各々に、増加用量の表８４に列記されるオリゴ
ヌクレオチドまたはＰＢＳを、０、１５、および２９日目に皮下注入した。各処理群は、４匹の雄および１匹の雌から成った。第１の投与の前とその後の様々な時点で、血液採取を実行して、血漿第ＶＩＩ因子タンパク質レベルを決定した。ＥＬＩＳＡによって第ＶＩＩ因子タンパク質レベルを測定した。表８５に提示される結果は、第１の投与の直前に測定したベースライン（ＢＬ）でのＰＢＳ群の平均値と比較した各処理群の平均値である。表８５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で第ＶＩＩ因子の発現レベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、サルにおいてＧａｌＮＡｃ共役体を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
【表９２】
2020058370.tif 000328
【０９７５】
表８４の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示した。
【表９３】
2020058370.tif 000329
実施例９２：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡｐｏ−ＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる初代肝細胞におけるアンチセンス阻害
【０９７６】
初代マウス肝細胞を１５，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、マウスＡｐｏＣ−ＩＩＩを標的とする表８６に列記されるオリゴヌクレオチドを、０．４６、１．３７、４．１２、または１２．３５、３７．０４、１１１．１１、もしくは３３３．３３ｎＭまたは１．００μｍで添加した。オリゴヌクレオチドとともに２４時間インキュベートした後、細胞を溶解し、ＲＮｅａｓｙ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて総ＲＮＡを精製した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲおよびＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、ＡｐｏＣ−ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルを決定した。Ｐｒｉｓｍ  ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて、ＩＣ５０値を決定した。結果は、切断可能な部分がホスホジエステル結合デオキシアデノシンかホスホジエステル結合デオキシアデノシンかにかかわらず、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。
【表９４】
2020058370.tif 000330
【０９７７】
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示した。
実施例９３：混合ウィングおよび５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９７８】
表８７に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
【表９５】
2020058370.tif 000331
【０９７９】
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合（ＰＯ）を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。
処理
【０９８０】
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ
Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表８７に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに規準化した。結果を、生理食塩水対照群と比較した各処理群のＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示する。表８８
に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含み、かつ完全ｃＥｔまたは混合糖修飾のいずれかのウィングを有するギャップマーオリゴヌクレオチドは、共役体を欠き、かつ完全ｃＥｔ修飾ウィングを含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
【０９８１】
体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、およびＢＵＮも測定し、各処理群の平均値を表８８に示す。体重を、オリゴヌクレオチド投与の直前に測定したベースライン体重（％ＢＬ）と比較した平均体重率として示す。
【表９６】
2020058370.tif 000332
実施例９４：２’−糖修飾および５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９８２】
表８９に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
【表９７】
2020058370.tif 000333
【０９８３】
下付き文字「ｍ」は、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドを示す。完全な表の説明文については、実施例７４を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
処理
【０９８４】
実施例９３に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果を以下の表９０に示し、ＧａｌＮＡｃ共役体を含む２’−ＭＯＥ修飾オリゴヌクレオチドと２’−ＯＭｅ修飾オリゴヌクレオチドとが両方ともに、共役体を欠くそれぞれの親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、およびＢＵＮの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性であったことを示した。
【表９８】
2020058370.tif 000334
実施例９５：二環式ヌクレオシドおよび５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９８５】
表９１に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
【表９９】
2020058370.tif 000335
【０９８６】
下付き文字「ｇ」は、フルオロ−ＨＮＡヌクレオシドを示し、下付き文字「ｌ」は、２’−Ｏ−ＣＨ２−４’橋を含むロックドヌクレオシドを示す。他の省略形については、実施例７４の表の説明文を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
処理
【０９８７】
実施例９３に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果を以下の表９２に示し、ＧａｌＮＡｃ共役体および様々な二環式ヌクレオシド修飾を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠くが二環式ヌクレオシド修飾を含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体およびフルオロ−ＨＮＡ修飾を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠くがフルオロ−ＨＮＡ修飾を含む親よりも著しく強力であった。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、およびＢＵＮの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性であったことを示した。
【表１００】
2020058370.tif 000336
実施例９６：ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの血漿タンパク質結合
【０９８８】
ＡｐｏＣ−ＩＩＩを標的とする表５７に列記されるオリゴヌクレオチドおよびＡｐｏ（ａ）を標的とする表９３におけるオリゴヌクレオチドを限外濾過アッセイにおいて試験して、血漿タンパク質結合を評価した。
【表１０１】
2020058370.tif 000337
【０９８９】
表の説明文については、実施例７４を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
【０９９０】
Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−ＭＣ限外濾過ユニット（３０，０００ＮＭＷＬ、低結合再生セルロース膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を３００μＬの０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０で事前に条件付け、２０００ｇで１０分間遠心分離し、その後、Ｈ２Ｏ中３００μＬの３００μｇ／ｍＬ対照オリゴヌクレオチド溶液で事前に条件付け、２０００ｇで１６分間遠心分離した。これらの試験で用いる表５７および９３の各試験オリゴヌクレオチドのフィルターへの非特異的結合を評価するために、Ｈ２Ｏ中３００μＬの２５０ｎｇ／ｍＬオリゴヌクレオチド溶液（ｐＨ７．４）を事前に条件付けたフィルターに設置し、２０００ｇで１６分間遠心分離した。ＥＬＩＳＡアッセイによって濾過していない試料および濾過した試料を分析して、オリゴヌクレオチド濃度を決定した。３つの複製物を用いて各試料の平均濃度を得た。濾過していない試料と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿の不在下でフィルターによって回収されたオリゴヌクレオチドの割合（％回収）を決定する。
【０９９１】
薬物を使用していない健常なヒト志願者、カニクイザル、およびＣＤ−１マウス由来のＫ３−ＥＤＴＡ中に収集された凍結全血漿試料をＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ  ＬＬＣ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）から購入した。試験オリゴヌクレオチドを、２つの濃度（５μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬ）で血漿の１．２ｍＬの一定分量に添加した。各スパイクした血漿試料の一定分量（３００μＬ）を事前に条件付けられたフィルターユニット内に設置し、３７℃で３０分間インキュベートした直後に２０００ｇで１６分間遠心分離した。ＥＬＩＳＡによって、濾過してスパイクした血漿試料および濾過していないスパイクした血漿試料の一定分量を分析して、各試料中のオリゴヌクレオチドの濃度を決定した。１つの濃度毎に３つの複製物を用いて、各試料中の結合オリゴヌクレオチドおよび非結合オリゴヌクレオチドの平均割合を決定した。濾過していない試料の濃度と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿タンパク質に結合されていない血漿中のオリゴヌクレオチドの割合（％非結合）を決定する。各オリゴヌクレオチドの％非結合を％回収で割ることによって、最終非結合オリゴヌクレオチド値を非特異的結合に対して補正する。最終％非結合値を１００から差し引くことによって、最終％結合オリゴヌクレオチド値を決定する。各種の血漿において試験した２つの濃度のオリゴヌクレオチド（５μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬ）の結果を表９４に示す。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基が血漿タンパ
ク質結合に大きな影響を与えないことを示す。さらに、完全ＰＳヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドも混合ＰＯ／ＰＳ結合を有するオリゴヌクレオチドも血漿タンパク質に結合し、完全ＰＳ結合を有するオリゴヌクレオチドは、混合ＰＯ／ＰＳ結合を有するオリゴヌクレオチドよりも若干高い程度に血漿タンパク質に結合する。
【表１０２】
2020058370.tif 000338
実施例９７：ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むＴＴＲを標的とする修飾オリゴヌクレオチド
【０９９２】
ＧａｌＮＡｃ共役体を含む表９５に示されるオリゴヌクレオチドを、ＴＴＲを標的とするように設計した。
【表１０３】
2020058370.tif 000339
【０９９３】
表９５の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−１の構造は、実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１９ａの構造は、実施例７０に示した。
実施例９８：ｈＰＭＢＣアッセイにおけるＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの炎症誘発作用の評価
【０９９４】
表９６に列記されるオリゴヌクレオチドを、実施例２３および２４に記載されるようにｈＰＭＢＣアッセイにおいて炎症誘発作用について試験した（オリゴヌクレオチドの説明については、表１７、７０、８２、および９５を参照のこと）。ＩＳＩＳ  ３５３５１２は、正の対照として用いられる高応答物であり、他のオリゴヌクレオチドは、表７０、８２、および９５に記載されるものである。１人の志願ドナー由来の血液を用いて表９６に示される結果を得た。結果は、混合ＰＯ／ＰＳヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドが、完全ＰＳ結合を有する同一のオリゴヌクレオチドと比較して、著しく低い炎症誘発応答をもたらしたことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役基は、このアッセイにおいて大きく影響しなかった。
【表１０４】
2020058370.tif 000340
実施例９９：アシアロ糖タンパク質受容体に対するＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの結合親和性
【０９９５】
アシアロ糖タンパク質受容体に対する表９７に列記されるオリゴヌクレオチド（オリゴヌクレオチドの説明については、表６３を参照のこと）の結合親和性を、競合的受容体結合アッセイにおいて試験した。競合相手のリガンドであるα１−酸糖タンパク質（ＡＧＰ）を、５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）中で１Ｕノイラミニダーゼ−アガロースとともに３７℃で１６時間インキュベートし、シアル酸アッセイまたはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のいずれかで９０％を超える脱シアル化を確認した。Ａｔｓｍａ
ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．１９９１  Ｊａｎ；３２（１）：１７３−８１を参照のこと）の手順に従って、一塩化ヨウ素を用いてＡＧＰをヨウ素化した。この方法において、脱シアル化α１−酸糖タンパク質（ｄｅ−ＡＧＰ）を、１０ｍＭ塩化ヨウ素、Ｎａ１２５Ｉ、および０．２５Ｍ  ＮａＯＨ中の１Ｍグリシンに添加した。室温で１０分間インキュベートした後、３  ＫＤＭＷＣＯスピンカラムを利用してこの混合物を２回濃縮することによって、１２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰを遊離１２５Ｉから分離した。このタンパク質を、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＳＥＣ−３カラム（７．８×３００ｍｍ）およびβ−ＲＡＭカウンタを装備したＨＰＬＣシステムにおいて標識効率および純度について試験した。１２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰおよびＡＳＯを含有する様々なＧａｌＮＡｃクラスターを利用した競合実験を以下の通りに実行した。ヒトＨｅｐＧ２細胞（１０６細胞／ｍＬ）を、２ｍＬの適切な成長培地中の６ウェルプレートにプレーティングした。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、および１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充したＭＥＭ培地を用いた。細胞を、それぞれ、５％および１０％ＣＯ２で、３７℃で１６〜２０時間インキュベートした。実験前に細胞をＦＢＳを有しない培地で洗浄した。細胞を、２％ＦＢＳを有する適切な成長培地を含有する１ｍＬの競合混合物、１０−８Ｍ  １２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰ、および１０−１１〜１０−５Ｍの範囲の濃度のＡＳＯを含有するＧａｌＮＡｃクラスターとともに、３７℃で３０分間インキュベートした。１０−２Ｍ  ＧａｌＮＡｃ糖の存在下で非特異的結合を決定した。細胞をＦＢＳを有しない培地で２回洗浄して、非結合１２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰおよび競合相手であるＧａｌＮＡｃ  ＡＳＯを除去した。１％β−メルカプトエタノールを含有するＱｉａｇｅｎのＲＬＴ緩衝液を用いて、細胞を溶解した。１０分間の短時間凍結／解凍サイクル後に溶解物を丸底アッセイチューブに移し、γ−カウンタでアッセイした。非特異的結合を差し引いた後に、１２５Ｉタンパク質カウントを最も低いＧａｌＮＡｃ−ＡＳＯ濃度カウントの値で割った。非線形回帰アル
ゴリズムを用いた単一部位競合結合等式に従って阻害曲線を当てはめて、結合親和性（ＫＤ）を計算した。
【０９９６】
表９７における結果を５つの異なる日に実行した実験から得た。上付き文字「ａ」の付いたオリゴヌクレオチドの結果は、２つの異なる日に実行した実験の平均である。結果は、５’末端にＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがヒトＨｅｐＧ２細胞上のアシアロ糖タンパク質受容体に結合し、３’末端にＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドよりも１．５〜１６倍高い親和性を有することを示す。
【表１０５】
2020058370.tif 000341
実施例１００：生体内におけるＡｐｏ（ａ）を標的とするＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【０９９７】
以下の表９８ａに列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
【表１０６】
2020058370.tif 000342
【０９９８】
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。
処理
【０９９９】
ヒトＡｐｏ（ａ）を発現する雌トランスジェニックマウスの各々に、表９８ｂに列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはＰＢＳを、週１回、合計６回の投与で、皮下注入した。各処理群は、３匹の動物から成った。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のＡｐｏ（ａ）タンパク質のベースラインレベル、ならびに第１の投与後７２時間、１週間、および２週間時点のレベルを決定した。第１の投与後３週間、４週間、５週間、および６週間時点でさらに血液を採取する。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを測定した。表９８ｂにおける結果を、ベースラインレベル（％ＢＬ）に規準化された各処理群の血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルの平均パーセントとして提示し、結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがＡｐｏ（ａ）発現の強力な減少を示したことを示す。この強力な影響は、完全ＰＳヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドおよび混合ＰＯおよびＰＳ結合を含むオリゴヌクレオチドにおいて観察された。
【表１０７】
2020058370.tif 000343
実施例１０１：安定した部分を介して連結されたＧａｌＮＡｃクラスターを含むオリゴヌクレオチドによるアンチセンス阻害
【１０００】
表９９に列記されるオリゴヌクレオチドを生体内におけるマウスＡＰＯＣ−ＩＩＩ発現の阻害について試験した。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの各々に、表９９に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。ＩＳＩＳ  ４４０６７０で処理した各マウスは、２、６、２０、または６０ｍｇ／ｋｇの投与を受けた。ＩＳＩＳ  ６８０７７２または６９６８４７で処理した各マウスは、０．６、２、６、または２０ｍｇ／ｋｇを受けた。ＩＳＩＳ  ６９６８４７のＧａｌＮＡｃ共役基は、安定した部分（容易に切断可能なホスホジエステル含有結合の代わりにホスホロチオエート結合）を介して連結されている。投与の７２時間後に動物を屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＡＰＯＣ−ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＡＰＯＣ−ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに規準化した。結果を、生理食塩水対照群と比較した各処理群のＡＰＯＣ−ＩＩＩ  ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして表９９に提示する。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドが、共役基を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、切断可能な部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６８０７７２）は、安定した部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ６９６８４７）よりもさらに強力であった。
【表１０８】
2020058370.tif 000344
【１００１】
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。
実施例１０２：ＧａｌＮＡｃ共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの肝臓における分布
【１００２】
ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないＩＳＩＳ  ３５３３８２（表２３を参照のこと）およびＧａｌＮＡｃ共役体を含むＩＳＩＳ  ６５５８６１（表２３を参照のこと）の肝臓における分布を評価した。雄ｂａｌｂ／ｃマウスに、ＩＳＩＳ  ３５３３８２または６５５８６１を、表１００に列記される投与量で１回、皮下注入した。２匹の動物から成った１８ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ  ６５５８６１群を除いて、各処理群は、３匹の動物から成った。投与の４８時間後に動物を屠殺して、オリゴヌクレオチドの肝臓における分布を決定した。１細胞当たりのアンチセンスオリゴヌクレオチド分子の数を測定するために、ルテニウム（ＩＩ）トリス−ビピリジン標識（ＭＳＤ  ＴＡＧ、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を、アンチセンスオリゴヌクレオチドを検出するために用いるオリゴヌクレオチドプローブに共役させた。表１００に提示される結果は、１細胞当たり何百万ものオリゴヌクレオチド分子単位の各処理群のオリゴヌクレオチドの平均濃度である。結果は、等価用量で、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、全肝臓および肝細胞において、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも高い濃度で存在したことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、非実質肝臓細胞において、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも低い濃度で存在した。１細胞当たりの肝細胞および非実質肝臓細胞におけるＩＳＩＳ  ６５５８６１の濃度が同様であった一方で、肝臓は、約８０体積％肝細胞であった。したがって、肝臓内に存在するＩＳＩＳ  ６５５８６１オリゴヌクレオチドの大部分が肝細胞内に見られる一方で、肝臓内に存在するＩＳＩＳ  ３５３３８２オリゴヌクレオチドの大部分は、非実質肝臓細胞内に見られた。
【表１０９】
2020058370.tif 000345
実施例１０３：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡＰＯＣ−ＩＩＩを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
【１００３】
以下の表１０１に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
【表１１０】
2020058370.tif 000346
【１００４】
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示した。
処理
【１００５】
ヒトＡＰＯＣ−ＩＩＩを発現する雌トランスジェニックマウスの各々に、表１０１に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、３匹の動物から成った。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１４、２１、２８、３５、および４２日間のレベルを決定した。実施例２０に記載されるように、血漿トリグリセリドおよびＡＰＯＣ−ＩＩＩタンパク質レベルを測定した。表１０２における結果を、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿トリグリセリドおよびＡＰＯＣ−ＩＩＩレベルの平均パーセントとして提示する。実施例７９の表５８における結果と以下の表１０２における結果の比較は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合およびホスホロチオエートヌクレオシド間結合の両方を含むオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合のみを含む等価オリゴヌクレオチドよりも増加した作用持続
時間を示したことを示す。
【表１１１】
2020058370.tif 000347
実施例１０４：５’−ＧａｌＮＡｃ２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
【化２１９】
2020058370.tif 000348
【１００６】
化合物１２０は市販されており、化合物１２６の合成は実施例４９に記載されている。化合物１２０（１ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３９ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢｔ（１．６４ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．７５ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）を添加した。約５分後、アミノヘキサン酸ベンジルエステル（１．３６ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）をこの反応物に添加した。３時間後、反応混合物を１００ｍＬの１Ｍ  ＮａＨＳＯ４に注ぎ、２×５０ｍＬ酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、３×４０ｍＬ飽和ＮａＨＣＯ３および２倍ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。この生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥＡ：Ｈｅｘ＝１：１：１）によって精製して、化合物２３１を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２３１（１．３４ｇ、２．４３８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、トルエン（３×１０ｍＬ）と共蒸発させた。残渣を減圧下で乾燥させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物２３２を得た。化合物１６６の合成は、実施例５４に記載される。化合物１６６（３．３９ｇ、５．４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。化合物２３２（１．３ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の溶液をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．５５ｍＬ）を添加した。反応物を室温で３０分間撹拌し、その後、水（８０ｍＬ）に注ぎ、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×８０ｍＬ）、１Ｍ  ＮａＨＳＯ４（３×８０ｍＬ）、およびブライン（２×８０ｍＬ）で洗浄し、その後、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２３３を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２３３（０．５９ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）をメタノール（２．２ｍＬ）および酢酸エチル（２．２ｍＬ）中に溶解した。炭素上パラジウム（１０重量％Ｐｄ／Ｃ、湿性、０．０７ｇ）を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で３時間撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、濃縮して、カルボン酸を得た。カルボン酸（１．３２ｇ、１．１５ｍ
ｍｏｌ、クラスター遊離酸）をＤＭＦ（３．２ｍＬ）中に溶解した。これに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）およびＰＦＰＴＦＡ（０．３０ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で３０分間撹拌した後、反応混合物を水（４０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。上述のように標準の後処理を完了して、化合物２３４を得た。ＬＣＭＳおよびＮＭＲは、その構造と一致した。実施例４６に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド２３５を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ２−２４のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２−２４ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ２−２４（ＧａｌＮＡｃ２−２４ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化２２０】
2020058370.tif 000349
実施例１０５：ＧａｌＮＡｃ１−２５共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
【化２２１】
2020058370.tif 000350
【１００７】
化合物１６６の合成は、実施例５４に記載される。実施例４６に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド２３６を調製した。
【１００８】
あるいは、以下に示されるスキームを用いてオリゴヌクレオチド２３６を合成し、実施例１０に記載される手順を用いて、化合物２３８を用いてオリゴヌクレオチド２３６を形成した。
【化２２２】
2020058370.tif 000351
【１００９】
共役基ＧａｌＮＡｃ１−２５のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２５ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２５（ＧａｌＮＡｃ１−２５ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化２２３】
2020058370.tif 000352
実施例１０６：５’−ＧａｌＮＡｃ２または５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【１０１０】
表１０３および１０４に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
処理
【１０１１】
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、２、７、もしくは２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４４０７６２；または０．２、０．６、２、６、もしくは２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６８６２２１、６８６２２２、もしくは７０８５６１；または生理食塩水を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに規準化した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、用量依存的様式でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させ、ＥＤ５０結果を、表１０３および１０４に提示する。以前の研究において、三価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドが二価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、これは、次いで、一価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことが示されたが（例えば、Ｋｈｏｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１６，５２１６−５２３１（２００８）を参照のこと）、表１０３および１０４に示されるように、一価、二価、および三価ＧａｌＮＡｃクラスターを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、同様の強度でＳＲＢ−１  ｍＲＮＡレベルを低下させた。
【表１１２】
2020058370.tif 000353
【１０１２】
表の説明文については、実施例９３を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示し、ＧａｌＮＡｃ２−２４ａの構造は、実施例１０４に示した。
【表１１３】
2020058370.tif 000354
【１０１３】
表の説明文については、実施例９３を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ１−２５ａの構造は、実施例１０５に示した。
【１０１４】
実施例７５に記載される手順を用いて、表１０３および１０４における肝臓中のオリゴヌクレオチドの濃度も評価した。以下の表１０４ａおよび１０４ｂに示される結果は、肝臓組織のオリゴヌクレオチド（μｇ）／ｇ単位のＵＶによって測定された各処理群の平均総アンチセンスオリゴヌクレオチド組織レベルである。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがＧａｌＮＡｃ共役基を欠く同一の用量のオリゴヌクレオチドよりも著しく高いレベルで肝臓に蓄積したことを示す。さらに、それらのそれぞれの共役基に１、２、または３個のＧａｌＮＡｃリガンドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて同様のレベルで肝臓に蓄積した。上記のＫｈｏｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．の文献参照を考慮すると、これは意外な結果であり、上の表１０３および１０４に示される活性データと一致する。
【表１１４】
2020058370.tif 000355
【表１１５】
2020058370.tif 000356
実施例１０７：ＧａｌＮＡｃ１−２６またはＧａｌＮＡｃ１−２７共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
【化２２４】
2020058370.tif 000357
【１０１５】
ＤＭＦ中ＨＢＴＵおよびＤＩＥＡを用いて、オリゴヌクレオチド２３９を化合物４７（実施例１５を参照のこと）と酸６４（実施例３２を参照のこと）とのカップリングによって合成する。結果として生じたアミド含有化合物をホスフィチル化し、その後、実施例１０に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチドの５’末端に付加する。共役基ＧａｌＮＡｃ１−２６のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２６ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２６（ＧａｌＮＡｃ１−２６ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化２２５】
2020058370.tif 000358
【１０１６】
ＧａｌＮＡｃ１共役基をオリゴヌクレオチドの３’末端に付加するために、実施例７に記載される手順を用いて、化合物４７と６４の反応から形成されたアミドを固体支持体に付加する。その後、実施例９に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチド合成を完了して、オリゴヌクレオチド２４０を形成する。
【化２２６】
2020058370.tif 000359
【１０１７】
共役基ＧａｌＮＡｃ１−２７のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２７
ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２７（ＧａｌＮＡｃ１−２７ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化２２７】
2020058370.tif 000360
実施例１０８：生体内におけるＡｐｏ（ａ）を標的とするＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
【１０１８】
以下の表１０５に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける単回投与試験において試験した。
【表１１６】
2020058370.tif 000361
【１０１９】
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。
処理
【１０２０】
ヒトＡｐｏ（ａ）を発現する雄トランスジェニックマウスの各々に、表１０６に列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物から成った。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のＡｐｏ（ａ）タンパク質のベースラインレベルおよび第１の投与後の１週間時点のレベルを決定した。週１回約８週間、さらに血液を採取する。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを測定した。表１０６における結果を、ベースラインレベル（％ＢＬ）に規準化された各処理群の血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルの平均パーセントとして提示し、結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドがＡｐｏ（ａ）タンパク質の発現を低下させたことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドは、共役基を含まないオリゴヌクレ
オチドよりもさらに強力なＡｐｏ（ａ）発現の減少を示した。
【表１１７】
2020058370.tif 000362
実施例１０９：ＧａｌＮＡｃ１−２８またはＧａｌＮＡｃ１−２９共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
【化２２８】
2020058370.tif 000363
【１０２１】
オリゴヌクレオチド２４１を実施例７１に記載される手順と同様の手順を用いて合成して、ホスホラミダイト中間体を形成し、続いて、実施例１０に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチドを合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ１−２８のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２８ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２８（ＧａｌＮＡｃ１−２８ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化２２９】
2020058370.tif 000364
【１０２２】
ＧａｌＮＡｃ１共役基をオリゴヌクレオチドの３’末端に付加するために、実施例７１に記載される手順と同様の手順を用いてヒドロキシル中間体を形成し、その後、実施例７に記載される手順を用いてこれを固体支持体に付加する。その後、実施例９に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチド合成を完了させて、オリゴヌクレオチド２４２を形成する。
【化２３０】
2020058370.tif 000365
共役基ＧａｌＮＡｃ１−２９のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２９ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２９（ＧａｌＮＡｃ１−２９ａ−ＣＭ）の構造を以下に示す。
【化２３１】
2020058370.tif 000366
実施例１１０：ＧａｌＮＡｃ１−３０共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
【化２３２】
2020058370.tif 000367
【１０２３】
ＧａｌＮＡｃ１−３０共役基を含むオリゴヌクレオチド２４６（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ１−３０のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−３０ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、Ｙは、切断可能な部分の一部である。ある特定の実施形態において、Ｙは、安定した部分の一部であり、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ１−３０ａの構造を以下に示す。
【化２３３】
2020058370.tif 000368
実施例１１１：ＧａｌＮＡｃ２−３１またはＧａｌＮＡｃ２−３２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
【化２３４】
2020058370.tif 000369
【１０２４】
ＧａｌＮＡｃ２−３１共役基を含むオリゴヌクレオチド２５０（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ２−３１のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２−３１ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、切断可能な部分の一部である。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ２−３１ａの構造を以下に示す。
【化２３４−２】
2020058370.tif 000370
【１０２５】
ＧａｌＮＡｃ２−３２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成を以下に示す。
【化２３５】
2020058370.tif 000371
【１０２６】
ＧａｌＮＡｃ２−３２共役基を含むオリゴヌクレオチド２５２（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ２−３２のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２−３２ａ）を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、切断可能な部分の一部である。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ２−３２ａの構造を以下に示す。
【化２３６】
2020058370.tif 000372
実施例１１２：ＧａｌＮＡｃ１共役体を含む修飾オリゴヌクレオチド
【１０２７】
ＳＲＢ−１を標的とする表１０７のオリゴヌクレオチドをＧａｌＮＡｃ１共役基で合成して、ＧａｌＮＡｃリガンドを含有する共役基を含むオリゴヌクレオチドの強度をさらに試験した。
【表１１８】
2020058370.tif 000373
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様２］  前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１の核酸塩基３２９１〜３３１０、３２９０〜３３０９、３２８７〜３３０６、または３２９２〜３３１１内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、態様１に記載の化合物。
［態様３］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドか
らなり、かつ配列番号５４、５５、５６、または５７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様４］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、態様３に記載の化合物。
［態様５］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、態様３に記載の化合物。
［態様６］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様７］  前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１の核酸塩基３２９１〜３３１０、３２９０〜３３０９、３２８７〜３３０６、または３２９２〜３３１１内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、態様１に記載の化合物。
［態様８］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号５４、５５、５６、または５７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様１に記載の化合物。
［態様９］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、態様３に記載の化合物。
［態様１０］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５４、５５、５６、または５７に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、態様３に記載の化合物。
［態様１１］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号３に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様１２］  前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号３の核酸塩基１９２〜２１１、１９１〜２１０、１９３〜２１２、３６９〜３８８、３７０〜３８９、７８８〜８０７、７９０〜８０８、または２９５４〜２９７３内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号３に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、態様１１に記載の化合物。
［態様１３］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、または６５の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様１２に記載の化合物。
［態様１４］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、または６５に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、態様１２に記載の化合物。
［態様１５］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、または６５に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、態様１２に記載の化合物。
［態様１６］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号７に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様１７］  前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号７の標的開始部位５７８２５、５９９５６、６５９４０、６３５７７、７６２２４、７６２２９、６５９３８、７６２２５、６５９３８、６５９３９、９５５１３、または７６２２９に相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号７に少なくとも８５％、９０％、
９５％、または１００％相補的である、態様１６に記載の化合物。
［態様１８］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、または７７の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様１６に記載の化合物。
［態様１９］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、または７７に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、態様１８に記載の化合物。
［態様２０］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、または７７に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、態様１８に記載の化合物。
［態様２１］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号８に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様２２］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号９に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様２３］  前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号８の標的開始部位５４８または２２７に相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号８に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、態様２１に記載の化合物。
［態様２４］  前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号９の標的開始部位８１３３、９８０４、７２７０、７２９５、７３１９、７３４４、７３６８、７３９２、７４１６、７４４０、１０７１８、７２６７、７２９２、７３１６、７３４１、７３６５、７３８９、または７４３７に相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号９に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、態様２２に記載の化合物。
［態様２５］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号７８、７９、８０、８１、８２、または８３の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様２１または２２に記載の化合物。
［態様２６］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号７８、７９、８０、８１、８２、または８３に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、態様２５に記載の化合物。
［態様２７］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号７８、７９、８０、８１、８２、または８３に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、態様２５に記載の化合物。
［態様２８］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１０に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様２９］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１１に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様３０］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１２に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様３１］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシド
からなり、かつ配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様２８〜３０に記載の化合物。
［態様３２］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、態様２８〜３２に記載の化合物。
［態様３３］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、態様２８〜３２に記載の化合物。
［態様３４］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１４に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様３５］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１５に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様３６］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１６に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様３７］  修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号１７に少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
［態様３８］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、１０〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、または９２の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様３５〜３７に記載の化合物。
［態様３９］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、または１０１に記載の配列を含む核酸塩基配列を有する、態様３５〜３７に記載の化合物。
［態様４０］  前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、または１０１に記載の配列からなる核酸塩基配列を有する、態様３５〜３７に記載の化合物。
［態様４１］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾糖を含む、態様１〜４０のいずれかに記載の化合物。
［態様４２］  前記修飾糖が二環糖である、態様４１に記載の化合物。
［態様４３］  前記二環糖が、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、および４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）からなる群から選択される、  ［態様４２に記載の化合物。
［態様４４］  前記修飾糖が２’−Ｏ−メトキシエチルである、態様４２に記載の化合物。
［態様４５］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾核酸塩基を含む、態様１〜４４のいずれかに記載の化合物。
［態様４６］  前記修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、態様４５に記載の化合物。
［態様４７］  前記修飾オリゴヌクレオチドが１７個の連結したヌクレオシドからなる、態様１〜４６のいずれかに記載の化合物。
［態様４８］  前記修飾オリゴヌクレオチドが２０個の連結したヌクレオシドからなる
、態様１〜４７のいずれかに記載の化合物。
［態様４９］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾糖を含む、態様１〜４８のいずれかに記載の化合物。
［態様５０］  前記修飾糖が二環糖である、態様４９に記載の化合物。
［態様５１］  前記二環糖が、４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、および４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）からなる群から選択される、態様５０に記載の化合物。
［態様５２］  前記修飾糖が２’−Ｏ−メトキシエチルである、態様４９に記載の化合物。
［態様５３］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾核酸塩基を含む、態様１〜５２のいずれかに記載の化合物。
［態様５４］  前記修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、態様５３に記載の化合物。
［態様５５］  前記化合物が一本鎖である、態様１〜５４のいずれかに記載の化合物。
［態様５６］  前記化合物が二本鎖である、態様１〜５５のいずれかに記載の化合物。
［態様５７］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾ヌクレオシド間結合を含む、態様１〜５６のいずれかに記載の化合物。
［態様５８］  前記修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様５７に記載の化合物。
［態様５９］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様５７に記載の化合物。
［態様６０］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも２個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様５７に記載の化合物。
［態様６１］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも３個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様５７に記載の化合物。
［態様６２］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも４個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様５７に記載の化合物。
［態様６３］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも５個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様５７に記載の化合物。
［態様６４］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも６個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様５７に記載の化合物。
［態様６５］  前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも７個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様５７に記載の化合物。
［態様６６］  前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合およびホスホロチオエートヌクレオシド間結合から選択される、態様１〜６５のいずれかに記載の化合物。
［態様６７］  前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含み、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様１〜６６のいずれかに記載の化合物。
［態様６８］  前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの５’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、態様１〜６７のいずれかに記載の化合物。
［態様６９］  前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの３’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、態様１〜６８のいずれかに記載の化合物。
［態様７０］  前記共役基が、正確に１個のリガンドを含む、態様１〜６９のいずれかに記載の化合物。
［態様７１］  前記共役基が、正確に２個のリガンドを含む、態様１〜７０のいずれかに記載の化合物。
［態様７２］  前記共役基が、３個以上のリガンドを含む、態様１〜７１のいずれかに記載の化合物。
［態様７３］  前記共役基が、正確に３個のリガンドを含む、態様１〜７２のいずれか
に記載の化合物。
［態様７４］  各リガンドが、多糖、修飾多糖、糖、修飾多糖、マンノース、ガラクトース、マンノース誘導体、ガラクトース誘導体、Ｄ−マンノピラノース、Ｌ−マンノピラノース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−キシロフラノース、Ｌ−キシロフラノース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、α−Ｄ−マンノフラノース、β−Ｄ−マンノフラノース、α−Ｄ−マンノピラノース、β−Ｄ−マンノピラノース、α−Ｄ−グルコピラノース、β−Ｄ−グルコピラノース、α−Ｄ−グルコフラノース、β−Ｄ−グルコフラノース、α−Ｄ−フルクトフラノース、α−Ｄ−フルクトピラノース、α−Ｄ−ガラクトピラノース、β−Ｄ−ガラクトピラノース、α−Ｄ−ガラクトフラノース、β−Ｄ−ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、α−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、２−アミノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−１−カルボキシエチル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース、２−デオキシ−２−メチルアミノ−Ｌ−グルコピラノース、４，６−ジデオキシ−４−ホルムアミド−２，３−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−マンノピラノース、２−デオキシ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルコピラノース、Ｎ−グリコロイル−α−ノイラミン酸、５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース、メチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、４−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノース、エチル３，４，６，７−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−１，５−ジチオ−α−Ｄ−グルコ−ヘプトピラノシド、２，５−アンヒドロ−Ｄ−アロノニトリル、リボース、Ｄ−リボース、Ｄ−４−チオリボース、Ｌ−リボース、Ｌ−４−チオリボースの中から選択される、態様１〜７３のいずれかに記載の化合物。
［態様７５］  各リガンドがＮ−アセチルガラクトサミンである、態様１〜７４のいずれかに記載の化合物。
［態様７６］  前記共役基が、以下
【化１ａ】
2020058370.tif 000374
を含む、態様１〜７５のいずれかに記載の化合物。
［態様７７］  前記共役基が、以下
【化２ａ】
2020058370.tif 000375
を含む、態様１〜７６のいずれかに記載の化合物。
［態様７８］  前記共役基が、以下
【化３ａ】
2020058370.tif 000376
を含む、態様１〜７７のいずれかに記載の化合物。
［態様７９］  前記共役基が、以下
【化４ａ】
2020058370.tif 000377
を含む、態様１〜７８のいずれかに記載の化合物。
［態様８０］  前記共役基が、以下
【化５ａ】
2020058370.tif 000378
を含む、態様１〜７９のいずれかに記載の化合物。
［態様８１］  前記共役基が、少なくとも１個のリン結合基または中性結合基を含む、態様１〜８０のいずれかに記載の化合物。
［態様８２］  前記共役基が、以下
【化６ａ】
2020058370.tif 000379
【化６−２ａ】
2020058370.tif 000380
の中から選択される構造を含み、
式中、ｎが、１〜１２であり、
ｍが、１〜１２である、態様１〜８１のいずれかに記載の化合物。
［態様８３］  前記共役基が、以下
【化７ａ】
2020058370.tif 000381
の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Ｌが、リン結合基または中性結合基のいずれかであり、
Ｚ１が、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
Ｒ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
各ｍ１が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１が、各テザーに対して０を超える、態様１〜８２のいずれかに記載の化合物。
［態様８４］  共役基が、以下
【化８ａ】
2020058370.tif 000382
の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Ｚ２が、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ１が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１が、各テザーに対して０を超える、態様１〜８３のいずれかに記載の化合物。
［態様８５］  前記共役基が、以下
【化９ａ】
2020058370.tif 000383
の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、ｎが、１〜１２であり、
ｍが、１〜１２である、態様１〜８４のいずれかに記載の化合物。
［態様８６］  前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドに共有結合される、態様１〜８５のいずれかに記載の化合物。
［態様８７］  前記化合物が、以下の式
【化１０ａ】
2020058370.tif 000384
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜８６のいずれかに記載の化合物。
［態様８８］  前記化合物が、以下の式
【化１１ａ】
2020058370.tif 000385
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
各ｎが、独立して、０または１であり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜８７のいずれかに記載の化合物。
［態様８９］  前記化合物が、以下の式
【化１２ａ】
2020058370.tif 000386
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜８８のいずれかに記載の化合物。
［態様９０］  前記化合物が、以下の式
【化１３ａ】
2020058370.tif 000387
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜８９のいずれかに記載の化合物。
［態様９１］  前記化合物が、以下の式
【化１４ａ】
2020058370.tif 000388
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃが、前記共役リンカーであり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜９０のいずれかに記載の化合物。
［態様９２］  前記化合物が、以下の式
【化１５ａ】
2020058370.tif 000389
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜９１のいずれかに記載の化合物。
［態様９３］  前記化合物が、以下の式
【化１６ａ】
2020058370.tif 000390
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂが、前記切断可能な部分であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜９２のいずれかに記載の化合物。
［態様９４］  前記化合物が、以下の式
【化１７ａ】
2020058370.tif 000391
によって表される構造を有し、
式中、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｄが、前記分岐基であり、
各Ｅが、テザーであり、
各Ｆが、リガンドであり、
ｑが、１〜５の整数である、態様１〜９３のいずれかに記載の化合物。
［態様９５］  前記共役リンカーが、以下
【化１８ａ】
2020058370.tif 000392
の中から選択される構造を有し、
式中、各Ｌが、独立して、リン結合基または中性結合基であり、
各ｎが、独立して、１〜２０である、態様１〜９４のいずれかに記載の化合物。
［態様９６］  前記共役リンカーが、以下
【化１９ａ】
2020058370.tif 000393
の中から選択される構造を有する、態様１〜９５のいずれかに記載の化合物。
［態様９７］  前記共役リンカーが、以下の構造
【化２０ａ】
2020058370.tif 000394
を有する、態様１〜９６のいずれかに記載の化合物。
［態様９８］  前記共役リンカーが、以下
【化２１ａ】
2020058370.tif 000395
の中から選択される構造を有する、態様１〜９７のいずれかに記載の化合物。
［態様９９］  前記共役リンカーが、以下
【化２２ａ】
2020058370.tif 000396
の中から選択される構造を有する、態様１〜９８のいずれかに記載の化合物。
［態様１００］  前記共役リンカーが、以下
【化２３ａ】
2020058370.tif 000397
の中から選択される構造を有する、態様１〜９９のいずれかに記載の化合物。
［態様１０１］  前記共役リンカーがピロリジンを含む、態様１〜１００のいずれかに記載の化合物。
［態様１０２］  前記共役リンカーがピロリジンを含まない、態様１〜１０１のいずれかに記載の化合物。
［態様１０３］  前記共役リンカーがＰＥＧを含む、態様１〜１０２のいずれかに記載の化合物。
［態様１０４］  前記共役リンカーがアミドを含む、態様１〜１０３のいずれかに記載の化合物。
［態様１０５］  前記共役リンカーが少なくとも２個のアミドを含む、態様１〜１０４のいずれかに記載の化合物。
［態様１０６］  前記共役リンカーがアミドを含まない、態様１〜１０５のいずれかに記載の化合物。
［態様１０７］  前記共役リンカーがポリアミドを含む、態様１〜１０６のいずれかに記載の化合物。
［態様１０８］  前記共役リンカーがアミンを含む、態様１〜１０７のいずれかに記載の化合物。
［態様１０９］  前記共役リンカーが１個以上のジスルフィド結合を含む、態様１〜１０８のいずれかに記載の化合物。
［態様１１０］  前記共役リンカーがタンパク質結合部分を含む、態様１〜１０９のい
ずれかに記載の化合物。
［態様１１１］  前記タンパク質結合部分が脂質を含む、態様１〜１１０のいずれかに記載の化合物。
［態様１１２］  前記タンパク質結合部分が、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ビタミン（例えば、葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム溶解成分、ステロイド（例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）、またはカチオン性脂質の中から選択される、態様１〜１１１のいずれかに記載の化合物。
［態様１１３］  前記タンパク質結合部分が、Ｃ１６〜Ｃ２２長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンＥ、アダマンタン、または１−ペンタフルオロプロピルの中から選択される、態様１〜１１２のいずれかに記載の化合物。
［態様１１４］  前記共役リンカーが、以下
【化２４ａ】
2020058370.tif 000398
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、ｐが、１〜６である、態様１〜１１３のいずれかに記載の化合物。
［態様１１５］  前記共役リンカーが、以下
【化２５ａ】
2020058370.tif 000399
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、態様１〜１１４のいずれかに記載の化合物。
［態様１１６］  前記共役リンカーが、以下
【化２６ａ】
2020058370.tif 000400
の中から選択される構造を有する、態様１〜１１５のいずれかに記載の化合物。
［態様１１７］  前記共役リンカーが、以下
【化２７ａ】
2020058370.tif 000401
の中から選択される構造を有し、
式中、ｎが、１〜２０である、態様１〜１１６のいずれかに記載の化合物。
［態様１１８］  前記共役リンカーが、以下
【化２８ａ】
2020058370.tif 000402
の中から選択される構造を有する、態様１〜１１７のいずれかに記載の化合物。
［態様１１９］  前記共役リンカーが、以下
【化２９ａ】
2020058370.tif 000403
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である、態様１〜１
１８のいずれかに記載の化合物。
［態様１２０］  前記共役リンカーが、以下の構造
【化３０ａ】
2020058370.tif 000404
を有する、態様１〜１１９のいずれかに記載の化合物。
［態様１２１］  前記分岐基が、以下の構造
【化３１ａ】
2020058370.tif 000405
のうちの１つを有し、
式中、各Ａ１が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎが、独立して、１〜２０である、態様１〜１２０のいずれかに記載の化合物。
［態様１２２］  前記分岐基が、以下の構造
【化３２ａ】
2020058370.tif 000406
のうちの１つを有し、
式中、各Ａ１が、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎが、独立して、１〜２０である、態様１〜１２１のいずれかに記載の化合物。
［態様１２３］  前記分岐基が、以下の構造
【化３３ａ】
2020058370.tif 000407
を有する、態様１〜１２２のいずれかに記載の化合物。
［態様１２４］  前記分岐基が、以下の構造
【化３４ａ】
2020058370.tif 000408
を有する、態様１〜１２３のいずれかに記載の化合物。
［態様１２５］  前記分岐基が、以下の構造
【化３５ａ】
2020058370.tif 000409
を有する、態様１〜１２４のいずれかに記載の化合物。
［態様１２６］  前記分岐基が、以下の構造
【化３６ａ】
2020058370.tif 000410
を有する、態様１〜１２５のいずれかに記載の化合物。
［態様１２７］  前記分岐基がエーテルを含む、態様１〜１２６のいずれかに記載の化合物。
［態様１２８］  前記分岐基が、以下の構造
【化３７ａ】
2020058370.tif 000411
を有し、
各ｎが、独立して、１〜２０であり、
ｍが、２〜６である、態様１〜１２７のいずれかに記載の化合物。
［態様１２９］  前記分岐基が、以下の構造
【化３８ａ】
2020058370.tif 000412
を有する、態様１〜１２８のいずれかに記載の化合物。
［態様１３０］  前記分岐基が、以下の構造
【化３９ａ】
2020058370.tif 000413
を有する、態様１〜１２９のいずれかに記載の化合物。
［態様１３１］  前記分岐基が、以下
【化４０ａ】
2020058370.tif 000414
を含み、
式中、各ｊが、１〜３の整数であり、
各ｎが、１〜２０の整数である、態様１〜１３０のいずれかに記載の化合物。
［態様１３２］  前記分岐基が、以下
【化４１ａ】
2020058370.tif 000415
を含む、態様１〜１３１のいずれかに記載の化合物。
［態様１３３］  各テザーが、以下
【化４２ａ】
2020058370.tif 000416
の中から選択され、
式中、Ｌが、リン結合基および中性結合基から選択され、
Ｚ１が、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
Ｒ２が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
各ｍ１が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ１が、各テザーに対して０を超える、態様１〜１３２のいずれかに記載の化合物。
［態様１３４］  各テザーが、以下
【化４３ａ】
2020058370.tif 000417
の中から選択され、
式中、Ｚ２が、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ２が、独立して、０〜２０であり、少なくとも１つのｍ２が、各テザーに対して０を超える、態様１〜１３３のいずれかに記載の化合物。
［態様１３５］  各テザーが、以下
【化４４ａ】
2020058370.tif 000418
の中から選択され、
式中、ｎが、１〜１２であり、
ｍが、１〜１２である、態様１〜１３４のいずれかに記載の化合物。
［態様１３６］  少なくとも１個のテザーがエチレングリコールを含む、態様１〜１３５のいずれかに記載の化合物。
［態様１３７］  少なくとも１個のテザーがアミドを含む、態様１〜１３６のいずれかに記載の化合物。
［態様１３８］  少なくとも１個のテザーがポリアミドを含む、態様１〜１３７のいずれかに記載の化合物。
［態様１３９］  少なくとも１個のテザーがアミンを含む、態様１〜１３８のいずれかに記載の化合物。
［態様１４０］  少なくとも２個のテザーが互いに異なる、態様１〜１３９のいずれかに記載の化合物。
［態様１４１］  前記テザーのすべてが互いに同一である、態様１〜１４０のいずれかに記載の化合物。
［態様１４２］  各テザーが、以下
【化４５ａ】
2020058370.tif 000419
の中から選択され、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
各ｐが、１〜約６である、態様１〜１４１のいずれかに記載の化合物。
［態様１４３］  各テザーが、以下
【化４６ａ】
2020058370.tif 000420
の中から選択される、態様１〜１４２のいずれかに記載の化合物。
［態様１４４］  各テザーが、以下の構造
【化４７ａ】
2020058370.tif 000421
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、態様１〜１４３のいずれかに記載の化合物。
［態様１４５］  各テザーが、以下の構造
【化４８ａ】
2020058370.tif 000422
を有する、態様１〜１４４のいずれかに記載の化合物。
［態様１４６］  前記テザーが、以下
【化４９ａ】
2020058370.tif 000423
の中から選択される構造を有し、
式中、各ｎが、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である、態様１〜１４５のいずれかに記載の化合物。
［態様１４７］  前記テザーが、以下
【化５０ａ】
2020058370.tif 000424
の中から選択される構造を有する、態様１〜１４６のいずれかに記載の化合物。
［態様１４８］  前記リガンドがガラクトースである、態様１〜１４７のいずれかに記載の化合物。
［態様１４９］  前記リガンドがマンノース−６−ホスフェートである、態様１〜１４８のいずれかに記載の化合物。
［態様１５０］  各リガンドが、以下
【化５１ａ】
2020058370.tif 000425
の中から選択され、
式中、各Ｒ１が、ＯＨおよびＮＨＣＯＯＨから選択される、態様１〜１４９のいずれかに記載の化合物。
［態様１５１］  各リガンドが、以下
【化５２ａ】
2020058370.tif 000426
の中から選択される、態様１〜１５０のいずれかに記載の化合物。
［態様１５２］  各リガンドが、以下の構造
【化５３ａ】
2020058370.tif 000427
を有する、態様１〜１５１のいずれかに記載の化合物。
［態様１５３］  各リガンドが、以下の構造
【化５４ａ】
2020058370.tif 000428
を有する、態様１〜１５２のいずれかに記載の共役アンチセンス化合物。
［態様１５４］  前記共役基が細胞標的部分を含む、態様態様１〜１５３のいずれかに記載の共役アンチセンス化合物。
［態様１５５］  前記共役基が、以下の構造
【化５５ａ】
2020058370.tif 000429
を有する細胞標的部分を含み、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、態様１〜１５４のいずれかに記載の化合物。
［態様１５６］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化５６ａ】
2020058370.tif 000430
を有する、態様１〜１５５のいずれかに記載の化合物。
［態様１５７］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化５７ａ】
2020058370.tif 000431
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０である、態様１〜１５６のいずれかに記載の化合物。
［態様１５８］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化５８ａ】
2020058370.tif 000432
を有する、態様１〜１５７のいずれかに記載の化合物。
［態様１５９］  前記細胞標的部分が、以下
【化５９ａ】
2020058370.tif 000433
を含む、態様１〜１５８のいずれかに記載の化合物。
［態様１６０］  前記細胞標的部分が、以下
【化６０ａ】
2020058370.tif 000434
を含む、態様１〜１５９のいずれかに記載の化合物。
［態様１６１］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６１ａ】
2020058370.tif 000435
を有する、態様１〜１６０のいずれかに記載の化合物。
［態様１６２］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６２ａ】
2020058370.tif 000436
を有する、態様１〜１６１のいずれかに記載の化合物。
［態様１６３］  前記細胞標的部分が、以下
【化６３ａ】
2020058370.tif 000437
を含む、態様１〜１６２のいずれかに記載の化合物。
［態様１６４］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６４ａ】
2020058370.tif 000438
を有する、態様１〜１６３のいずれかに記載の化合物。
［態様１６５］  前記細胞標的部分が、以下
【化６５ａ】
2020058370.tif 000439
を含む、態様１〜１６４のいずれかに記載の化合物。
［態様１６６］  前記細胞標的部分が、以下
【化６６ａ】
2020058370.tif 000440
を含む、態様１〜１６５のいずれかに記載の化合物。
［態様１６７］  前記細胞標的部分が、以下
【化６７ａ】
2020058370.tif 000441
を含む、態様１〜１６６のいずれかに記載の化合物。
［態様１６８］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６８ａ】
2020058370.tif 000442
を有する、態様１〜１６７のいずれかに記載の化合物。
前記細胞標的部分が、以下の構造
【化６９ａ】
2020058370.tif 000443
を有する、態様１〜１６８のいずれかに記載の化合物。
［態様１６９］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７０ａ】
2020058370.tif 000444
を有する、態様１〜１６８のいずれかに記載の化合物。
［態様１７０］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７１ａ】
2020058370.tif 000445
を有する、態様１〜１６９のいずれかに記載の化合物。
［態様１７１］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７２ａ】
2020058370.tif 000446
を有する、態様１〜１７０のいずれかに記載の化合物。
［態様１７２］  前記細胞標的部分が、以下
【化７３ａ】
2020058370.tif 000447
を含む、態様１〜１７１のいずれかに記載の化合物。
［態様１７３］  前記細胞標的部分が、以下
【化７４ａ】
2020058370.tif 000448
を含む、態様１〜１７２のいずれかに記載の化合物。
［態様１７４］  前記細胞標的部分が、以下
【化７５ａ】
2020058370.tif 000449
を含む、態様１〜１７３のいずれかに記載の化合物。
［態様１７５］  前記細胞標的部分が、以下
【化７６ａ】
2020058370.tif 000450
を含む、態様１〜１７４のいずれかに記載の化合物。
［態様１７６］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７７ａ】
2020058370.tif 000451
を有する、態様１〜１７５のいずれかに記載の化合物。
［態様１７７］  前記細胞標的部分が、以下
【化７８ａ】
2020058370.tif 000452
を含む、態様１〜１７６のいずれかに記載の化合物。
［態様１７８］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化７９ａ】
2020058370.tif 000453
を有する、態様１〜１７７のいずれかに記載の化合物。
［態様１７９］  前記細胞標的部分が、以下
【化８０ａ】
2020058370.tif 000454
を含み、
式中、各Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様１〜１７８のいずれか
に記載の化合物。
［態様１８０］  前記共役基が、以下
【化８１ａ】
2020058370.tif 000455
を含み、
式中、各Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様１〜１７９のいずれかに記載の化合物。
［態様１８１］  前記細胞標的部分が、以下の構造
【化８２ａ】
2020058370.tif 000456
を有し、
式中、各Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様１〜１８０のいずれかに記載の化合物。
［態様１８２］  前記共役基が、以下
【化８３ａ】
2020058370.tif 000457
を含む、態様１〜１８１のいずれかのいずれかに記載の化合物。
［態様１８３］  前記共役基が、以下
【化８４ａ】
2020058370.tif 000458
を含む、態様１〜１８２のいずれかのいずれかに記載の化合物。
［態様１８４］  前記共役基が、以下
【化８５ａ】
2020058370.tif 000459
を含む、態様１〜１８３のいずれかのいずれかに記載の化合物。
［態様１８５］  前記共役基が、以下
【化８６ａ】
2020058370.tif 000460
を含む、態様１〜１８４のいずれかに記載の化合物。
［態様１８６］  前記共役基が、ホスホジエステル、アミド、またはエステルの中から選択される切断可能な部分を含む、態様１〜１８５のいずれかに記載の化合物。
［態様１８７］  前記共役基が、ホスホジエステル切断可能な部分を含む、態様１〜１８６のいずれかに記載の化合物。
［態様１８８］  前記共役基が、切断可能な部分を含まず、前記共役基が、前記共役基と前記オリゴヌクレオチドとの間にホスホロチオエート結合を含む、態様１〜１８７のいずれかに記載の化合物。
［態様１８９］  前記共役基が、アミド切断可能な部分を含む、態様１〜１８８のいずれかに記載の化合物。
［態様１９０］  前記共役基が、エステル切断可能な部分を含む、態様１〜１８９のいずれかに記載の化合物。
［態様１９１］  前記化合物が、以下の構造
【化８７ａ】
2020058370.tif 000461
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９０のいずれかに記載の化合物。
［態様１９２］  前記化合物が、以下の構造
【化８８ａ】
2020058370.tif 000462
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９１のいずれかに記載の化合物。
［態様１９３］  前記化合物が、以下の構造
【化８９ａ】
2020058370.tif 000463
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚが、Ｈまたは結合固体支持体であり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９２のいずれかに記載の化合物。
［態様１９４］  前記化合物が、以下の構造
【化９０ａ】
2020058370.tif 000464
を有し、
式中、各ｎが、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚが、Ｈまたは結合固体支持体であり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９３のいずれかに記載の化合物。
［態様１９５］  前記化合物が、以下の構造
【化９１ａ】
2020058370.tif 000465
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９４のいずれかに記載の化合物。
［態様１９６］  前記化合物が、以下の構造
【化９２ａ】
2020058370.tif 000466
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９５のいずれかに記載の化合物。
［態様１９７］  前記化合物が、以下の構造
【化９３ａ】
2020058370.tif 000467
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９６のいずれかに記載の化合物。
［態様１９８］  前記化合物が、以下の構造
【化９４ａ】
2020058370.tif 000468
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９７のいずれかに記載の化合物。
［態様１９９］  前記化合物が、以下の構造
【化９５ａ】
2020058370.tif 000469
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９８のいずれかに記載の化合物。
［態様２００］  前記化合物が、以下の構造
【化９６ａ】
2020058370.tif 000470
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜１９９のいずれかに記載の化合物。
［態様２０１］  前記化合物が、以下の構造
【化９７ａ】
2020058370.tif 000471
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２００のいずれかに記載の化合物。
［態様２０２］  前記化合物が、以下の構造
【化９８ａ】
2020058370.tif 000472
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２０１のいずれかに記載の化合物。
［態様２０３］  前記化合物が、以下の構造
【化９９ａ】
2020058370.tif 000473
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２０２のいずれかに記載の化合物。
［態様２０４］  前記化合物が、以下の構造
【化１００ａ】
2020058370.tif 000474
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２０３のいずれかに記載の化合物。
［態様２０５］  前記化合物が、以下の構造
【化１０１ａ】
2020058370.tif 000475
を有し、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２０４のいずれかに記載の化合物。
［態様２０６］  前記共役基が、以下
【化１０２ａ】
2020058370.tif 000476
を含み、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２０５のいずれかに記載の化合物。
［態様２０７］  前記共役基が、以下
【化１０３ａ】
2020058370.tif 000477
を含み、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２０６のいずれかに記載の化合物。
［態様２０８］  前記共役基が、以下
【化１０４ａ】
2020058370.tif 000478
を含み、
式中、Ｑ１３が、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂｘが、複素環式塩基部分である、態様１〜２０７のいずれかに記載の化合物。
［態様２０９］  Ｂｘが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、またはシトシン、もしくは５−メチルシトシンの中から選択される、態様１〜２０８のいずれかに記載の化合物。
［態様２１０］  Ｂｘがアデニンである、態様１〜２０９のいずれかに記載の化合物。
［態様２１１］  Ｂｘがチミンである、態様１〜２１０のいずれかに記載の化合物。
［態様２１２］  Ｑ１３がＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である、態様１〜２１１のいずれかに記載の化合物。
［態様２１３］  Ｑ１３がＨである、態様１〜２１２のいずれかに記載の化合物。
［態様２１４］  態様１〜２１３のいずれかに記載の前記化合物またはその塩と、薬剤的に許容される担体または希釈剤のうちの少なくとも１つと、を含む、組成物。
［態様２１５］  態様１〜２１３のいずれかに記載の前記化合物を含む、プロドラッグ。
［態様２１６］  態様１〜２１５のいずれかに記載の前記化合物または組成物を動物に投与することを含む、方法。
［態様２１７］  前記動物がヒトである、態様２１６に記載の方法。
［態様２１８］  前記化合物または組成物および第２の薬剤を共投与することを含む、態様２１６に記載の方法。
［態様２１９］  前記化合物または組成物および前記第２の薬剤が同時に投与される、態様２１８に記載の方法。
【配列表】
2020058370000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月25日(2019.12.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは配列番号７８、７９、８０、８２または８３の核酸塩基配列からなり、前記共役基は以下：
【化１】
2020058370.tif 000584
を含み、そして前記共役基は前記修飾オリゴヌクレオチドの５’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、前記化合物。
【請求項２】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾糖を含み、当該修飾糖は：
（ａ）４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；および４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）からなる群から選択される二環糖；または
（ｂ）２’−Ｏ−メトキシエチル；
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾核酸塩基を含む、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
当該修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が一本鎖である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が二本鎖である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個の修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
（ａ）前記修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である；および／または
（ｂ）前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む；
請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物であって、
（ａ）前記共役基が、以下：
【化２】
2020058370.tif 000585
｛式中、切断可能な部分（ＣＭ）は、生理学的条件下で分割され得る結合または基である｝を含む；
（ｂ）前記共役基が、以下：
【化３】
2020058370.tif 000586
を含む；および／または
（ｃ）前記化合物が、
【化４】
2020058370.tif 000587
｛式中、Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２-ＯＣＨ３であり；Ａは、修飾オリゴヌクレオチドであり；Ｂｘは、複素環式塩基部分である｝を含む、前記化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物またはその塩、および、薬剤的に許容される担体または希釈剤のうちの少なくとも１つ、を含む、組成物。
【請求項１１】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記共役基は以下：
【化５】
2020058370.tif 000588
を含み、そして前記修飾オリゴヌクレオチドは以下の式：
Ges mCes Ads mCds Tds Tds Tds Gds Tds Gds Gds Tds Gds mCds mCds Ads Ads Gds Ges mCe
（配列番号７８）
を有し；ここで、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、および
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、
前記化合物。
【請求項１２】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記共役基は以下：
【化６】
2020058370.tif 000589
を含み、そして前記修飾オリゴヌクレオチドは以下の式：
Tes mCes mCes Aes mCes Ads Gds Gds mCds mCds Ads mCds Ads Gds Gds Tes Ges Ges Ges mCe
（配列番号７９）
を有し；ここで、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、および
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、
前記化合物。
【請求項１３】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記共役基は以下：
【化７】
2020058370.tif 000590
を含み、そして前記修飾オリゴヌクレオチドは以下の式：
Ges mCes Aes Aes Ges Gds mCds Tds mCds Gds Gds Tds Tds Gds Gds Ges mCes Tes Tes mCe
（配列番号８０）
を有し；ここで、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、および
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、
前記化合物。
【請求項１４】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記共役基は以下：
【化８】
2020058370.tif 000591
を含み、そして前記修飾オリゴヌクレオチドは以下の式：
Ges Ges Ges mCds Ads Ads Tds Gds mCds Ads Gds Tds mCds mCes Tes Ges Ge
（配列番号８２）
を有し；ここで、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、および
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、
前記化合物。
【請求項１５】
修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記共役基は以下：
【化９】
2020058370.tif 000592
を含み、そして前記修飾オリゴヌクレオチドは以下の式：
Ges Ges Ges Tes Tes mCds mCds mCds Gds Ads Gds Gds Tds Gds mCds mCes mCes Aes Aes Tes Ge
（配列番号８３）
を有し；ここで、
Ａは、アデニンであり、
ｍＣは、５’−メチルシトシンであり、
Ｇは、グアニンであり、
Ｔは、チミンであり、
ｅは、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
ｄは、２’−デオキシヌクレオシドであり、および
ｓは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、
前記化合物。
【請求項１６】
請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の化合物であって、
（ａ）前記共役基が、以下：
【化１０】
2020058370.tif 000593
｛式中、切断可能な部分（ＣＭ）は、生理学的条件下で分割され得る結合または基である｝を含む；
（ｂ）前記共役基が、以下：
【化１１】
2020058370.tif 000594
を含む；および／または
（ｃ）前記化合物が、
【化１２】
2020058370.tif 000595
｛式中、Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２-ＯＣＨ３であり；Ａは、修飾オリゴヌクレオチドであり；Ｂｘは、複素環式塩基部分である｝を含む、前記化合物。
【請求項１７】
請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の化合物またはその塩と、薬剤的に許容される担体または希釈剤のうちの少なくとも１つと、を含む、組成物。