(57)【要約】      （修正有）【課題】簡便かつ効率的にタウリンを検出する方法の提供。【解決手段】（ａ）被検試料を含む培地で硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌を培養する工程、および（ｂ）当該大腸菌の増殖を検出する工程、を含み、当該大腸菌が増殖した場合、被検試料中にタウリンが存在することが示される方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中のタウリンを検出する方法であって、
（ａ）被検試料を含む培地で硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌を培養する工程、および
（ｂ）当該大腸菌の増殖を検出する工程、を含み、
当該大腸菌が増殖した場合、被検試料中にタウリンが存在することが示される方法。
【請求項２】
生物におけるタウリン生産を検出する方法であって、
（ａ）被検生物の抽出物または分泌物を含む培地で、硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌を培養する工程、および
（ｂ）当該大腸菌の増殖を検出する工程、を含み、
当該大腸菌が増殖した場合、被検生物がタウリンを生産することが示される方法。
【請求項３】
硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子がｃｙｓＮ遺伝子である、請求項１または２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、大腸菌の増殖を指標として、試料中のタウリンを検出する方法および生物のタウリン生産を検出する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
タウリン（２−アミノエタンスルホン酸）は、分子量１２５．１５の単純な化学構造をもつ含硫アミノ酸であり、胆汁酸の抱合、浸透圧調節作用、抗酸化作用、神経伝達物質様作用などきわめて多岐にわたる生理作用が報告されている（非特許文献１）。このようなタウリンの特性から、医薬品や飼料としての合成タウリンの使用の他、食品や食品添加物としての天然タウリンの使用が行われているが、合成タウリンと比較して天然タウリンは極めて高価であり、より安価での天然タウリンの提供が強く求められている。
【０００３】
天然タウリンを量産するためには、その最初のステップとして、タウリンの生産性が高い生物を同定することが重要である。現在、生物におけるタウリン生産の検出は、高速液体クロマトグラフィーを利用した自動アミノ酸分析器を利用して行うことが一般的となっている。例えば、自然界から新規の微生物を採取して、タウリン生産を行っているか否かを確認するためには、採取した微生物を一定濃度まで培養して、高速液体クロマトグラフィーによる測定が行われている。しかしながら、高速液体クロマトグラフィーを利用する方法は、精度の高さという利点はあるものの、大量のスクリーニングには不向きである。このため、簡便かつ効率的にタウリンを検出し、タウリン生産性の高い生物をハイスループットでスクリーニングしうる系の構築が求められていた。
【０００４】
ところで、タウリンは、微生物において広く利用されており（非特許文献２〜４）、大腸菌においても、タウリンは、容易に資化されることが知られている（非特許文献５）。そして、１９９６年〜２０００年の間、タウリンを含むアルキルスルホン酸の資化のための大腸菌の代謝経路が集中的に研究され、環境中の硫酸イオンの枯渇により大腸菌のタウリン資化に関わる遺伝子群の発現が誘導されることや、これら遺伝子発現の制御において大腸菌は硫酸イオンを直接感知するのではなく、硫酸アデニルトランスフェラーゼの作用により硫酸イオンが変換されて生成されるアデノシン−５’−ホスホ硫酸を感知していることが報告されている（非特許文献６〜１４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】薩  秀夫、タウリンの多彩な生理作用と動態、化学と生物  ４５４：２７３−２８１  （２００７）
【非特許文献２】Ｋｏｎｄｏ  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６９：６２１−６２３  （１９７１）
【非特許文献３】Ｓｅｉｔｚ  ＡＰ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ３７５  １５９：４４０−４４４  （１９９３）
【非特許文献４】Ｃｈｉｅｎ  Ｃ−Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １２９：１８９−１９３  （１９９５）
【非特許文献５】Ｕｒｉａ−Ｎｉｃｋｅｌｓｅｎ  ＭＲ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｇｅｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  １３９：２０３−２０８  （１９９３）
【非特許文献６】ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｌｏｅｇ  ＪＲ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  ３８３  １７８：５４３８−５４４６  （１９９６）
【非特許文献７】ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｌｏｅｇ  ＪＲ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  １７９：７６７１−７６７８．  ３８８  （１９９７）
【非特許文献８】ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐｌｏｅｇ  ＪＲ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：２９３５８−２９３６５  （１９９９）
【非特許文献９】Ｅｉｃｈｈｏｒｎ  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２：２３０３１−２３０３６．  ３９５  （１９９７）
【非特許文献１０】Ｅｉｃｈｈｏｒｎ  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：２６６３９−２６６４６  （１９９９）
【非特許文献１１】Ｅｉｃｈｈｏｒｎ  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  １８２：２６８７−２６９５  （２０００）
【非特許文献１２】Ｅｉｃｈｈｏｒｎ  Ｅ．  ＆  Ｌｅｉｓｉｎｇｅｒ  Ｔ．  ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  ２０５：２７１−２７５  （２００１）
【非特許文献１３】Ｉｗａｎｉｃｋａ−Ｎｏｗｉｃｋａ  Ｒ  ＆  Ｈｒｙｎｉｅｗｉｃｚ  ＭＭ．  Ｇｅｎｅ  １６６：１１−１７  （１９９５）
【非特許文献１４】Ｂｙｋｏｗｓｋｉ  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ４３：１３４７−１３５８  （２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記従来技術が有する問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、簡便かつ効率的にタウリンを検出する方法を提供することにある。また、本発明は、このような検出法を利用して、生物のタウリン生産を簡便かつ効率的に検出する方法を提供することをも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、前記目的を達成すべく、まず、大腸菌が栄養源としてタウリンを資化していることに着目し、培地中にタウリンが存在する場合に大腸菌が増殖し、存在しない場合に大腸菌が増殖しない系の構築を試みた。上記の通り、大腸菌は、環境中の硫酸イオンの存在を、硫酸イオンから変換されて生成されるアデノシン−５’−ホスホ硫酸を指標として感知し、当該分子が不足していない状況下では、タウリンの資化が行われないという特性を有する。そこで、本発明者らは、構想した系に用いる大腸菌として、硫酸イオンからアデノシン−５’−ホスホ硫酸への変換を触媒する硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子を欠損させた大腸菌株を採用することとした。
【０００８】
そして、当該大腸菌株につき、硫酸イオン存在下において、培地中のタウリンとその増殖との関係を検証した結果、当該大腸菌株は、硫酸イオンの存在下でもタウリンを資化して増殖できることが判明した。しかも、飽和濃度になるまで、培地中のタウリン濃度依存的な増殖曲線を示した。一方、硫酸イオンの存在下でもタウリンが存在しない場合は、増殖することができなかった。
【０００９】
以上から、本発明者らは、硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌の増殖を指標として、硫酸イオンの存在下でも、培地中のタウリンを簡便かつ効率的に検出することが可能であることを見出した。さらに、本発明者らは、この検出系において、培地中に添加する試料として生物の抽出物や分泌物を用いれば、当該生物のタウリン生産を簡便かつ効率的に検出することができ、これによりタウリン生産性の高い生物のハイスループットスクリーニングが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明は、より詳しくは、以下を提供するものである。
【００１１】
［１］試料中のタウリンを検出する方法であって、
（ａ）被検試料を含む培地で硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌を培養する工程、および
（ｂ）当該大腸菌の増殖を検出する工程、を含み、
当該大腸菌が増殖した場合、被検試料中にタウリンが存在することが示される方法。
【００１２】
［２］生物におけるタウリン生産を検出する方法であって、
（ａ）被検生物の抽出物または分泌物を含む培地で、硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌を培養する工程、および
（ｂ）当該大腸菌の増殖を検出する工程、を含み、
当該大腸菌が増殖した場合、被検生物がタウリンを生産することが示される方法。
【００１３】
［３］硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子がｃｙｓＮ遺伝子である、［１］または［２］に記載の方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、培地に硫酸イオンが存在する場合（例えば、硫酸塩の形態の抗生物質が添加されている場合）でも、大腸菌の増殖を指標として、培地中のタウリンを検出することが可能となる。また、培地に添加する試料として、生物の抽出物や分泌物を用いれば、生物のタウリン生産を検出することも可能となる。本発明における大腸菌の検出においては、飽和濃度になるまで、その増殖過程（増殖曲線）が培地中のタウリン濃度に依存的な特徴を示す。さらに、大腸菌の増殖の検出には、例えば、濁度計などの汎用機器を利用することができる。従って、本発明によれば、バイオアッセイにより、簡便かつ効率的に、試料中のタウリンの検出や、生物のタウリン生産の検出を行うことが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】大腸菌ｃｙｓＮ欠損株の増殖曲線を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、試料中のタウリンを検出する方法を提供する。本発明の方法は、被検試料を含む培地で硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌を培養する工程（工程（ａ））、および当該大腸菌の増殖を検出する工程（工程（ｂ））を含む。
【００１７】
本発明の検出法に用いる「被検試料」としては、特に制限はなく、タウリンの存在を検出したい所望の試料を用いることができる。
【００１８】
大腸菌において機能を抑制する「硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子」は、硫酸イオンをアデノシン−５’−ホスホ硫酸に変換する酵素をコードする遺伝子である。硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子には、硫酸アデニルトランスフェラーゼの２つのサブユニット（ｃｙｓＤおよびｃｙｓＮ）をコードする遺伝子が含まれるが、本発明においては、いずれか一方の遺伝子または双方の遺伝子の機能が抑制された大腸菌を用いることができる。なお、ｃｙｓＤタンパク質の典型的なアミノ酸配列を配列番号：２に、当該タンパク質をコードするゲノムＤＮＡの典型的な塩基配列を配列番号：１に示す（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＩＤｓ：ＥＧ１０１８６（ＥｃｏＣｙｃ）、ｂ２７５２、ＥＣＫ２７４７、Ｐ２１１５６（ＵｎｉＰｒｏｔ））。また、ｃｙｓＮタンパク質の典型的なアミノ酸配列を配列番号：４に、当該タンパク質をコードするゲノムＤＮＡの典型的な塩基配列を配列番号：３に示す（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ＩＤｓ：ＥＧ１０１９４（ＥｃｏＣｙｃ）、ｂ２７５１、ＥＣＫ２７４６、Ｐ２３８４５（ＵｎｉＰｒｏｔ））。
【００１９】
上記大腸菌においては、タウリンの資化を阻害しない限り、硫酸イオンの資化に関わる硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能の抑制に加えて、その他の含硫物質（例えば、チオ硫酸イオン、システイン、メチオニン、グルタチオンなど）の資化に関わる遺伝子の機能の抑制を行ってもよい。このような遺伝子としては、例えば、ｃｙｓＰＴＷＡ（ｔｈｉｏｓｕｌｆａｔｅ／ｓｕｌｆａｔｅ  ＡＢＣ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒを構成する４つの遺伝子）（Ｓｉｒｋｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  １７７：  ４１３４−４１３６  （１９９５））、ｓｂｐ（ｓｕｌｆａｔｅ／ｔｈｉｏｓｕｌｆａｔｅ  ＡＢＣ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｐｅｒｉｐｌａｓｍｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｈｅｌｌｉｎｇａ  ＨＷ  ＆  Ｅｖａｎｓ  ＰＲ  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １４９：３６３−７３  （１９８５））、ｔｃｙＪＬＮおよびｔｃｙＰ（ｃｙｓｔｉｎｅ／ｃｙｓｔｅｉｎｅ  ＡＢＣ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒを構成する４つの遺伝子）（Ｂｅｒｇｅｒ  ＥＡ  ａｎｄ  Ｈｅｐｐｅｌ  ＬＡ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２４７：７６８４−７６９４  （１９７２））、ｍｅｔＮＩＱ（Ｌ−ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ／Ｄ−ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ  ＡＢＣ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒを構成する３つの遺伝子）（Ｍｅｒｌｉｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  １８４：５５１３−５５１７  （２００２））、ｇｓｉＡＢＣＤ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  ＡＢＣ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒを構成する４つの遺伝子）（Ｓｕｚｕｋｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．  １８７：５８６１−５８６７  （２００５））、ｓｓｕＡＢＣ（ａｌｉｐｈａｔｉｃ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ  ＡＢＣ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒを構成する３つの遺伝子）（非特許文献１１）などが挙げられる。
【００２０】
大腸菌における「遺伝子の機能の抑制」は、遺伝子の欠損（一部もしくは全部）、転写の抑制、翻訳の抑制、翻訳されたタンパク質の活性の抑制のいずれによって達成されてもよいが、好ましくは、遺伝子の欠損である。
【００２１】
上記遺伝子の機能の抑制は、公知の手法で行うことができる。遺伝子の欠損は、例えば、相同組換えにより、上記遺伝子領域に外来ＤＮＡを導入すること（ノックアウト）により行うことができる。また、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９）、ＴＡＬＥＮｓ、ＺＦＮｓ、ＰＰＲなどのゲノム編集系により、上記遺伝子領域を欠損させることもできる。さらに、染色体へトランスポゾンがランダムに挿入されたライブラリーから、目的とする遺伝子領域を欠損した株を選抜することもできる。また、本発明においては、既存の遺伝子欠損株を利用してもよい。一方、転写の抑制や翻訳の抑制は、例えば、アンチセンスＲＮＡやリボザイムにより行うことができ、翻訳されたタンパク質の活性の抑制は、例えば、低分子阻害剤やアプタマーにより行うことができる。
【００２２】
本発明の検出法に用いる「培地」としては、当該培地のみでは上記大腸菌が増殖できないが、当該培地に添加された被検試料にタウリンが存在する場合に、上記大腸菌が増殖しうる培地であれば、特に制限はない。本発明においては、硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能の抑制により硫酸イオンを資化できない大腸菌を用いることから、当該培地には、硫酸イオンが含まれていてもよい。従って、培地には、例えば、硫酸塩の形態の抗生物質（例えば、カナマイシン硫酸塩）を添加することも可能である。培地は、液体培地であっても、固形培地であってもよい。具体的な培地としては、例えば、Ｍ９最少培地（Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ，  Ｆｒｉｔｓｃｈ  ＥＦ，  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：  ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ  （ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ）  （１９８２））、Ｍ６３最小培地（Ｐａｒｄｅｅ  ＡＢ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １（２），  １６５−１７８  （１９５９））、Ｄａｖｉｓ最小培地（Ｄａｖｉｓ  ＢＤ  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ３５（１）：１−１０  （１９４９））を用いることができるが、これらに制限されない。なお、固形培地である寒天培地に使用される寒天には硫酸イオンが含まれるが、本発明に用いることが可能である。
【００２３】
大腸菌の培養条件としては、上記大腸菌が培地中で増殖しうる条件であればよく、当業者であれば、大腸菌の種類や用いる培地などに合わせて、培養温度、空気の添加の有無、酸素の濃度、二酸化炭素の濃度、培地のｐＨ、培養の際の振盪速度培養時間、湿度などを適宜調整し、設定することができる。培養温度は、通常２５℃〜４０℃であり、大腸菌の増殖速度を最大にし易いという観点から、好ましくは約３７℃である。また、大腸菌を培養する培地のｐＨは、通常、６．８〜７．４である。振盪培養を行う場合、その振盪速度は、通常、１８０〜３００ｒｐｍである。
【００２４】
培養期間は、大腸菌の増殖が確認できる期間であれば、特に制限はない。培地中の大腸菌の増殖過程は、誘導期、対数増殖期、定常期を経るが、本発明においては、大腸菌の増殖を検出するために、少なくとも対数増殖期に入るまでは培養を行い、好ましくは定常期に入るまで培養を行う。なお、上記培養を行う前に、タウリンを単一硫黄源にした培地で大腸菌の前培養を行うなどの工夫を行うことにより、上記の誘導期を短縮することが可能である。
【００２５】
大腸菌の増殖の検出は、例えば、濁度計などの汎用機器を利用して行うことができる。また、例えば、大腸菌に特徴的なＤＮＡを定量ＰＣＲ法などで増幅することによって検出することもできる。
【００２６】
以上の結果、大腸菌の増殖が検出された場合、被検試料中にタウリンの存在が認められると判定され、増殖が検出されない場合、被検試料中にタウリンの存在が認められないと判定される。被検試料中のタウリン濃度に応じて、大腸菌の増殖過程（増殖曲線）が異なることから、本発明においては、被検試料中のタウリンの存在の有無のみならず、存在の程度（濃度）を判定することも可能である。この判定においては、例えば、増殖が定常期に入った際の培地中の大腸菌の濃度、対数増殖期における大腸菌の増殖速度（対数増殖期の増殖曲線の傾きの程度）などを利用することができ、当該大腸菌の濃度や増殖速度が高ければ、試料中のタウリン濃度が高いと判定される。この判定においては、標準試料（様々な濃度のタウリンが含まれる試料）で同様に培養を行った結果との比較を利用することができる。
【００２７】
上記本発明の検出法において、被検試料として、生物の抽出物や分泌物を用いれば、生物におけるタウリン生産を検出することが可能である、従って、本発明は、生物におけるタウリン生産を検出する方法であって、被検生物の抽出物または分泌物を含む培地で、硫酸アデニルトランスフェラーゼ遺伝子の機能が抑制された大腸菌を培養する工程（工程（ａ））、および当該大腸菌の増殖を検出する工程（工程（ｂ））を含む方法を提供する。
【００２８】
「被検生物」としては、特に制限はなく、タウリン生産を検出したい所望の生物を用いることができ、例えば、単細胞性藻類、多細胞性藻類（海藻類など）、昆虫、魚介類、鳥類、爬虫類、両生類、哺乳類などが挙げられる。「抽出物または分泌物」としては、例えば、これら生物から得られる抽出液や分泌物を含む溶液、それらの濃縮液もしくは希釈液、それらを乾燥して得られる乾燥物などを用いることができる。
【００２９】
被検生物の抽出物や分泌物を含む培地で上記大腸菌を培養して、その増殖を検出した結果、大腸菌の増殖が検出された場合、被検生物においてタウリン生産が認められると判定され、増殖が検出されない場合、被検生物においてタウリン生産が認められないと判定される。被検生物のタウリン生産の程度（直接的には、抽出物や分泌物におけるタウリン濃度）に応じて、大腸菌の増殖過程が異なることから、本発明においては、被検生物のタウリン生産の有無のみならず、生産の程度も判定することが可能である。この判定においては、例えば、増殖が定常期に入った際の培地中の大腸菌の濃度、対数増殖期における大腸菌の増殖速度（対数増殖期の増殖曲線の傾きの程度）などを利用することができ、当該大腸菌の濃度や増殖速度が高ければ、被検生物におけるタウリン生産の程度（直接的には、抽出物におけるタウリン濃度）が高いと判定される。この判定においては、標準試料（様々な濃度のタウリンが含まれる試料）で同様に培養を行った結果との比較を利用することができる。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３１】
［実施例１］
ｃｙｓＮ遺伝子がカナマイシン耐性遺伝子の挿入によって破壊された大腸菌ＣＧＳＣ１０１４０（ＪＷ２７２１−１）株（Ｔｈｅ  Ｃｏｌｉ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｓｔｏｃｋ  Ｃｅｎｔｅｒ：米国エール大学）を、３７℃で一晩、ＬＢ培地にて前培養した。次いで、前培養した培養物０．５μＬを、以下の組成（表１）からなる改変Ｍ９最小培地（５ｍＬ）に接種し、３７℃で好気的に振とう培養した。
【００３２】
【表１】
2020005604.tif 000002
【００３３】
その結果を図１に示す。大腸菌ｃｙｓＮ欠損株は、１ｍＭの硫酸イオンを含む改変Ｍ９最小培地において、タウリンがない場合、増殖しないことが判明した。これは、ｃｙｓＮ遺伝子のみの欠損で硫酸イオンの利用を完全に遮断できることを意味する。一方、タウリンを最終濃度６２．５〜５００μＭで添加すると、１ｍＭの硫酸イオンが存在するにも関わらず、良好な増殖を示した。ＯＤ値（濁度）の最大値は０．８〜０．９であり、これらは野生型菌株の値と大差はない。この程度のＯＤ値があれば、目視でも大腸菌の増殖が確認できる。タウリンの添加量を減少させると、それに応じてＯＤ値の最大値も減少したが、調査した範囲では、タウリンの添加量が７．８μＭでも大腸菌の増殖が確認できた。
【００３４】
なお、本実施例では、誘導期（増殖の立ち上がりまでの時間）は約３０時間であったが、これはタウリンの資化関連遺伝子群の発現が誘導性であるためと考えられる。使用するｃｙｓＮ欠損株の前培養において、あらかじめタウリンを単一硫黄源にするなどの工夫を行うことにより、誘導期を短縮することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
以上説明したように、本発明によれば、バイオアッセイにより、簡便かつ効率的に、培地中のタウリンの検出や、生物のタウリン生産の検出を行うことが可能となる。従って、本発明は、研究分野のみならず、医療分野、食品分野、水産養殖業分野などのタウリンを利用する応用分野に広く貢献しうるものである。
【図１】
2020005604.tif 000003
【配列表】
2020005604000001.app