(57)【要約】      （修正有）【課題】被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する方法を提供する。【解決手段】以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含む方法により課題を解決する：（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに、被検者から得た抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、抗体の分離パターンに係るデータを得る工程；（ｃ）前記データを指標として、前記被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する工程。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いの検出方法であって、
以下の工程（ｃ）：
（ｃ）抗体の分離パターンに係るデータを指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する工程
を含み、
前記データが、抗体の分離パターンの特徴であり、
前記データが、以下の工程（ａ）および（ｂ）により得られたものである、方法：
（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに、前記被検者から得た抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；
（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、前記データを得る工程。
【請求項２】
前記工程（ｃ）の前に、前記工程（ａ）および（ｂ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程（ａ）の前に、前記カラムに平衡化液を添加して、該カラムを平衡化する工程を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記データの取得が、抗体の分離パターンを得る工程と、該分離パターンから前記特徴を抽出する工程を含む、請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記特徴が、ピーク面積及び／又はピーク高さである、請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記特徴が、ピーク面積％及び／又はピーク高さ％である、請求項１〜５の何れか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記特徴が、第１ピーク、第２ピーク、および第３ピークから選択される１種またはそれ以上のピークの特徴である、請求項１〜６の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記特徴が、第１ピークの特徴である、請求項１〜７の何れか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記工程（ｃ）が、前記データを、対照被検者から得た抗体の分離パターンに係るデータと比較する工程を含む、請求項１〜８の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記疾患が、がん、自己免疫疾患、感染症、アレルギー、炎症疾患、悪液質、および加齢関連疾患から選択される１種またはそれ以上の疾患である、請求項１〜９の何れか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患が、膵がん、胃がん、乳がん、大腸がん、腎がん、リウマチ、シェーグレン症候群、および膵炎から選択される１種またはそれ以上の疾患である、請求項１〜１０の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
Ｆｃ結合性タンパク質が、以下の（１）〜（４）のいずれかのポリペプチドである、請求項１〜１１の何れか１項に記載の方法：
（１）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも１７６番目のバリンがフェニルアラニンに置換されたポリペプチド；
（２）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも２７番目のバリンがグルタミン酸に、２９番目のフェニルアラニンがイソロイシンに、３５番目のチロシンがアスパラギンに、４８番目のグルタミンがアルギニンに、７５番目のフェニルアラニンがロイシンに、９２番目のアスパラギンがセリンに、１１７番目のバリンがグルタミン酸に、１２１番目のグルタミン酸がグリシンに、１７１番目のフェニルアラニンがセリンに、および１７６番目のバリンがフェニルアラニンに置換されたポリペプチド；
（３）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも２７番目のバリンがグルタミン酸に、２９番目のフェニルアラニンがイソロイシンに、３５番目のチロシンがアスパラギンに、４８番目のグルタミンがアルギニンに、７５番目のフェニルアラニンがロイシンに、９２番目のアスパラギンがセリンに、１１７番目のバリンがグルタミン酸に、１２１番目のグルタミン酸がグリシンに、および１７１番目のフェニルアラニンがセリンに置換されたポリペプチド；
（４）上記（１）〜（３）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列を含み、但し当該アミノ酸配列において、上記置換以外の位置において、１〜１０個のアミノ酸変異を含む、ポリペプチド。
【請求項１３】
２種またはそれ以上の抗体を含有する組成物であって、以下のＩからＩＸのうち２つ以上の項目に該当する組成物：
Ｉ．  Ｇ１Ｆａを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．４以下である；
ＩＩ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．２以下である；
ＩＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．０３以下である；
ＩＶ．  Ｇ１Ｆｂを有する抗体の含有量をＧ１Ｆａを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．５以上である；
Ｖ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以下である；
ＶＩ．  Ｇ２Ｆ＋ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以下である；
ＶＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．１２以下である；
ＶＩＩＩ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．２％以下である；
ＩＸ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋２ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．２％以下である。
【請求項１４】
２種またはそれ以上の抗体を含有する組成物であって、以下のＩからＩＸのうち２つ以上の項目に該当する組成物：
Ｉ．  Ｇ１Ｆａを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で１．８以上である；
ＩＩ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以上である；
ＩＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．０６以上である；
ＩＶ．  Ｇ１Ｆｂを有する抗体の含有量をＧ１Ｆａを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以下である；
Ｖ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で３．０以上である；
ＶＩ．  Ｇ２Ｆ＋ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以上である；
ＶＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以上である；
ＶＩＩＩ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で２％以上である；
ＩＸ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋２ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．６％以上である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体の分離方法およびその利用に関する。本発明は、具体的には、例えば、被検者から得た抗体を分離した際の分離パターンの特徴を指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ガンや免疫疾患等の治療に抗体を含む医薬品（抗体医薬品）が用いられている。抗体医薬品に用いる抗体は、遺伝子工学的手法により得られた、当該抗体を発現可能な細胞（たとえば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞等）を培養後、カラムクロマトグラフィー等を用いて高純度に精製し製造されている。しかし、近年の研究により、そのようにして製造される抗体は酸化、還元、異性化、糖鎖付加等の修飾を受けることで多様な分子の集合体となっていることが判明しており、薬効や安全性への影響が懸念されている。特に、抗体に結合している糖鎖構造は、抗体医薬品の活性、動態、および安全性に大きな影響を与えることが報告されており、詳細な糖鎖構造の解析が重要である（非特許文献１）。また、リウマチ等の疾患では、血液中の抗体に付加される糖鎖構造の変化が知られており（非特許文献２および３）、抗体に付加された糖鎖構造を分析することで疾患を診断できる可能性がある。
【０００３】
抗体医薬に用いる抗体の糖鎖構造を分析する方法として、糖鎖の切り出しを含むＬＣ−ＭＳ分析（特許文献１および特許文献２）が主に実施されている。しかしながら、前記分析方法では非常に煩雑な操作を伴い、多大な時間を要する。より簡便な抗体の分子構造の分析方法としては、クロマトグラフィーによる分析が挙げられる。具体的には、ゲルろ過クロマトグラフィーを用いて、抗体を分子量に基づき分離することで凝集体や分解物を分離および定量することが可能である。また、イオン交換クロマトグラフィーにより、抗体分子が有する電荷の違いを分離することができる。しかしながら前述したクロマトグラフィーによる分析では、糖鎖構造等の抗体分子の微小な構造変化を識別できないため、得られる分析結果は限定的であった。
【０００４】
一方、不溶性担体に固定化されたアフィニティーリガンドと抗体との親和性に基づく分析により抗体の性能を測定、判断することが可能であることが報告されている（特許文献３）。しかし、糖鎖構造の違いによる抗体の分離、特に糖鎖構造の違いによるヒト由来抗体の分離は行われていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１６−１９４５００号公報
【特許文献２】特開２０１６−０９９３０４号公報
【特許文献３】ＷＯ２０１３／１２０９２９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ，  ３４（２），  ８３−８８（２０１３）
【非特許文献２】Ｓｃｉｅｎｃｅ、３２０、３７３（２００８）
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ、７、１１２０５（２０１６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、抗体の分離方法を提供することを課題とする。本発明は、一態様において、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、Ｆｃ結合性タンパク質を利用することにより糖鎖構造の違いに基づき抗体を分離できること、および被検者から得た抗体をＦｃ結合性タンパク質を利用して分離した際の分離パターンの特徴を指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、以下の通り例示できる。
［１］
疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いの検出方法であって、
以下の工程（ｃ）：
（ｃ）抗体の分離パターンに係るデータを指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する工程
を含み、
前記データが、抗体の分離パターンの特徴であり、
前記データが、以下の工程（ａ）および（ｂ）により得られたものである、方法：
（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに、前記被検者から得た抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；
（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、前記データを得る工程。
［２］
前記工程（ｃ）の前に、前記工程（ａ）および（ｂ）を含む、前記方法。
［３］
前記工程（ａ）の前に、前記カラムに平衡化液を添加して、該カラムを平衡化する工程を含む、前記方法。
［４］
前記データの取得が、抗体の分離パターンを得る工程と、該分離パターンから前記特徴を抽出する工程を含む、前記方法。
［５］
前記特徴が、ピーク面積及び／又はピーク高さである、前記方法。
［６］
前記特徴が、ピーク面積％及び／又はピーク高さ％である、前記方法。
［７］
前記特徴が、第１ピーク、第２ピーク、および第３ピークから選択される１種またはそれ以上のピークの特徴である、前記方法。
［８］
前記特徴が、第１ピークの特徴である、前記方法。
［９］
前記工程（ｃ）が、前記データを、対照被検者から得た抗体の分離パターンに係るデータと比較する工程を含む、前記方法。
［１０］
前記疾患が、がん、自己免疫疾患、感染症、アレルギー、炎症疾患、悪液質、および加齢関連疾患から選択される１種またはそれ以上の疾患である、前記方法。
［１１］
前記疾患が、膵がん、胃がん、乳がん、大腸がん、腎がん、リウマチ、シェーグレン症候群、および膵炎から選択される１種またはそれ以上の疾患である、前記方法。
［１２］
Ｆｃ結合性タンパク質が、以下の（１）〜（４）のいずれかのポリペプチドである、前記方法：
（１）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも１７６番目のバリンがフェニルアラニンに置換されたポリペプチド；
（２）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも２７番目のバリンがグルタミン酸に、２９番目のフェニルアラニンがイソロイシンに、３５番目のチロシンがアスパラギンに、４８番目のグルタミンがアルギニンに、７５番目のフェニルアラニンがロイシンに、９２番目のアスパラギンがセリンに、１１７番目のバリンがグルタミン酸に、１２１番目のグルタミン酸がグリシンに、１７１番目のフェニルアラニンがセリンに、および１７６番目のバリンがフェニルアラニンに置換されたポリペプチド；
（３）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも２７番目のバリンがグルタミン酸に、２９番目のフェニルアラニンがイソロイシンに、３５番目のチロシンがアスパラギンに、４８番目のグルタミンがアルギニンに、７５番目のフェニルアラニンがロイシンに、９２番目のアスパラギンがセリンに、１１７番目のバリンがグルタミン酸に、１２１番目のグルタミン酸がグリシンに、および１７１番目のフェニルアラニンがセリンに置換されたポリペプチド；
（４）上記（１）〜（３）のいずれかのポリペプチドのアミノ酸配列を含み、但し当該アミノ酸配列において、上記置換以外の位置において、１〜１０個のアミノ酸変異を含む、ポリペプチド。
［１３］
２種またはそれ以上の抗体を含有する組成物であって、以下のＩからＩＸのうち２つ以上の項目に該当する組成物：
Ｉ．  Ｇ１Ｆａを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．４以下である；
ＩＩ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．２以下である；
ＩＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．０３以下である；
ＩＶ．  Ｇ１Ｆｂを有する抗体の含有量をＧ１Ｆａを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．５以上である；
Ｖ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以下である；
ＶＩ．  Ｇ２Ｆ＋ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以下である；
ＶＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．１２以下である；
ＶＩＩＩ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．２％以下である；
ＩＸ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋２ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．２％以下である。
［１４］
２種またはそれ以上の抗体を含有する組成物であって、以下のＩからＩＸのうち２つ以上の項目に該当する組成物：
Ｉ．  Ｇ１Ｆａを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で１．８以上である；
ＩＩ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以上である；
ＩＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．０６以上である；
ＩＶ．  Ｇ１Ｆｂを有する抗体の含有量をＧ１Ｆａを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以下である；
Ｖ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で３．０以上である；
ＶＩ．  Ｇ２Ｆ＋ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以上である；
ＶＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以上である；
ＶＩＩＩ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で２％以上である；
ＩＸ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋２ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．６％以上である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、糖鎖構造の違いに基づき抗体を分離できる。また、本発明の一態様によれば、抗体の分離パターンの特徴を指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】モノクローナル抗体をＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の分離パターンを示す図。
【図２】ヒト由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の分離パターンを示す図。
【図３】モノクローナル抗体をＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分離して分取した画分に含まれる抗体の糖鎖構造を示す図。
【図４】ヒト由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分離して分取した画分に含まれる抗体の糖鎖構造を示す図。
【図５】年齢の異なるヒト由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の分離パターンを示す図。
【図６】年齢の異なるヒト由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の第１ピーク面積％値のプロットを示す図。
【図７】がん患者由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の第１ピーク面積％値のプロットを示す図。
【図８】自己免疫疾患患者由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の第１ピーク面積％値のプロットを示す図。
【図９】がん患者由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の補正第１ピーク面積％値のプロットを示す図。
【図１０】膵がんおよび膵炎患者由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の補正第１ピーク面積％値および第３ピーク面積のプロットと膵がんおよび膵炎に対するＲＯＣ曲線を示す図。
【図１１】喫煙および非喫煙の健常者由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したカラムで分析した際の補正第１ピーク面積％値のプロットを示す図。
【図１２】年齢の異なるヒト由来ガンマグロブリンをＦｃ結合性タンパク質固定化ゲルを充填したＦｃＲ９＿ＦカラムもしくはＦｃＲ９＿Ｖカラムで分析した際の第１ピーク高さ％および第１ピーク面積％値のプロットを示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について詳細に説明する。
＜１＞方法
本発明は、Ｆｃ結合性タンパク質を利用して抗体を分離する方法を提供する。同方法を、「本発明の分離方法」ともいう。
【００１３】
本発明の分離方法は、具体的には、以下の工程（ａ）および（ｂ）を含む、抗体を分離する方法であってよい：
（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；
（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出する工程。
【００１４】
工程（ａ）および（ｂ）を、それぞれ、「吸着工程」および「溶出工程」ともいう。
【００１５】
本発明の分離方法により、分離された抗体が得られてよい。すなわち、本発明の分離方法の一態様は、Ｆｃ結合性タンパク質を利用して抗体を分離することにより分離された抗体を製造する方法であってもよい。すなわち、溶出工程の一態様は、担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、溶出された抗体を得る工程であってもよい。言い換えると、溶出工程の一態様は、担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出する工程と、溶出された抗体を得る工程を含んでいてもよい。同方法を、「本発明の抗体製造方法」ともいう。
【００１６】
本発明の抗体製造方法は、具体的には、以下の工程（ａ）および（ｂ）を含む、分離された抗体を製造する方法であってよい：
（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；
（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、溶出された抗体を得る工程。
【００１７】
本発明の分離方法により、抗体の分離パターンに係るデータが得られてよい。すなわち、本発明の分離方法の一態様は、Ｆｃ結合性タンパク質を利用して抗体を分離することにより抗体の分離パターンに係るデータを製造する方法であってもよい。すなわち、溶出工程の一態様は、担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、抗体の分離パターンに係るデータを得る工程であってもよい。言い換えると、溶出工程の一態様は、担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出する工程と、抗体の分離パターンに係るデータを得る工程を含んでいてもよい。同方法を、「本発明のデータ製造方法」ともいう。抗体の分離パターンに係るデータを、「分離データ」ともいう。「データの測定」、「データの取得」、および「データの製造」は、同義に用いられてよい。
【００１８】
本発明のデータ製造方法は、具体的には、以下の工程（ａ）および（ｂ）を含む、分離データを製造する方法であってよい：
（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；
（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、分離データを得る工程。
【００１９】
分離データを指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出することができる。すなわち、分離データは、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出するための指標として用いられるデータとみなしてよい。具体的には、被検者から得た抗体をＦｃ結合性タンパク質を利用して分離することにより得られる分離データを指標として、該被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出することができる。すなわち、本発明は、被検者から得た抗体をＦｃ結合性タンパク質を利用して分離することにより得られる分離データを指標として、該被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する方法を提供する。同方法を、「本発明の検出方法」ともいう。疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを総称して、「リスク」ともいう。「リスクの検出」、「リスクの評価」、および「リスクの判定」は、同義に用いられてよい。
【００２０】
本発明の検出方法は、具体的には、以下の工程（ｃ）を含む、疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いの検出方法であってよい：
（ｃ）分離データを指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する工程であって、前記データが、以下の工程（ａ）および（ｂ）により得られたものである工程：
（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに、前記被検者から得た抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；
（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、前記データを得る工程。
【００２１】
本発明の検出方法は、工程（ａ）および（ｂ）を含んでいてもよい。すなわち、本発明の検出方法は、より具体的には、以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いの検出方法であってもよい：
（ａ）Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに、被検者から得た抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程；
（ｂ）前記担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出し、分離データを得る工程；
（ｃ）前記データを指標として、前記被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出する工程。
【００２２】
工程（ｃ）を、「検出工程」ともいう。
【００２３】
これらの方法を総称して、「本発明の方法」ともいう。
＜吸着工程＞
吸着工程は、Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに抗体を含有する溶液を添加し、該抗体を該担体に吸着する工程である。
【００２４】
「抗体」とは、Ｆｃ領域を含む分子を意味する。抗体は、Ｆｃ領域からなるものであってもよく、Ｆｃ領域に加えて他の領域を含んでいてもよい。Ｆｃ領域としては、免疫グロブリンのＦｃ領域が挙げられる。抗体は、糖鎖が付加されていてよい。抗体は、例えば、少なくともそのＦｃ領域に糖鎖が付加されていてよい。抗体は、モノクローナル抗体であってもよく、ポリクローナル抗体であってもよい。抗体の由来は、特に制限されない。抗体は、単一の生物に由来するものであってもよく、２種またはそれ以上の生物の組み合わせに由来するものであってもよい。抗体は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはそれらのバリアント（例えばアミノ酸置換体）であってもよい。抗体としては、免疫グロブリンが挙げられる。免疫グロブリンとしては、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥが挙げられる。免疫グロブリンとしては、特に、ＩｇＧが挙げられる。ＩｇＧとしては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４が挙げられる。また、抗体としては、二重特異性抗体（バイスペシフィック抗体）、Ｆｃ領域と他のタンパク質との融合抗体、Ｆｃ領域と薬物との複合体（ＡＤＣ）等の人工的に構造改変した抗体も挙げられる。抗体は、例えば、抗体医薬であってもよい。抗体医薬としては、抗ＴＮＦ−α抗体であるインフリキシマブや抗ＩＬ−６抗体であるトシリズマブ、癌遺伝子ＨＥＲ２に対する抗体であるトラスツズマブが挙げられる。抗体は、例えば、ＣＨＯ細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ハイブリドーマ細胞等の生産細胞により生産できる。
【００２５】
糖鎖としては、図３および図４に記載の糖鎖構造が挙げられる。特に、抗体の分離に寄与し得る糖鎖としては、Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ０Ｆ＋ＧＮ、Ｇ１Ｆａ、Ｇ１Ｆｂ、Ｇ１Ｆ＋ＧＮ、Ｇ２、Ｇ２Ｆ、Ｇ１Ｆ＋ＳＡ、Ｇ２Ｆ＋ＳＡ、Ｇ２Ｆ＋２ＳＡ、Ｇ２Ｆ＋ＧＮ、Ｇ２＋ＳＡ、Ｇ２＋２ＳＡ、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３が挙げられる。
【００２６】
ヒト由来の抗体は、通常、シアル酸を有する抗体を含有する。ヒト由来の抗体におけるシアル酸を有する抗体の含有量は、例えば、抗体の総含有量に対して、重量比で、０．１〜２０％程度であり得る。ヒト由来の抗体においては、シアル酸が糖鎖末端に２つ結合することが多い。さらに、ヒト由来の抗体は、通常、バイセクティングＧｌｃＮＡｃ（表５における「＋ＧＮ」の表記）を、抗体の総含有量に対して、重量比で、１〜２０％程度含有し得る。一方、ハムスターおよびマウス由来の抗体には、通常、バイセクティングＧｌｃＮＡｃは存在せず、糖鎖末端のシアル酸結合数は０〜１個である。
【００２７】
吸着工程に供される抗体は、複数種類の抗体分子を含有する混合物であってよい。吸着工程に供される抗体は、具体的には、糖鎖構造の異なる複数種類の抗体分子を含有する混合物であってよい。吸着工程に供される抗体は、より具体的には、Ｆｃ領域に付加された糖鎖構造の異なる複数種類の抗体分子を含有する混合物であってよい。
【００２８】
リスクの検出を目的とする場合は、被検者から得た抗体を用いて本発明の方法を実施すればよい。
【００２９】
「被検者」とは、リスクの検出の対象とするヒト個体を意味する。ここでいう被検者を、後述する対照被検者と区別して、「標的被検者」ともいう。被検者は、それに由来する抗体試料を利用できるものであれば、すなわち、抗体試料を取得できるか、既に取得したものであれば、特に制限されない。被検者は、男性であってもよく、女性であってもよい。被検者は、子供、若者、中年、老人等、いずれの年代の個体であってもよい。被検者は、健常者であってもよく、そうでなくてもよい。
【００３０】
「抗体試料」とは、抗体を含有する試料を意味する。抗体試料としては、血液（全血）、希釈血液、血清、血漿、髄液、臍帯血、成分採血液等の血液試料；尿、唾液、精液、糞便、痰、羊水、腹水等の血液由来成分を含み得る試料；肝臓、肺、脾臓、腎臓、皮膚、腫瘍、リンパ節等の組織の断片（組織片）や細胞；それらから分離された抗体が挙げられる。抗体試料は、そのまま、あるいは適宜前処理に供してから、吸着工程に用いてよい。前処理は、例えば、定法により実施してよい。前処理としては、遠心分離やカラムによる精製が挙げられる。具体的には、例えば、ガンマグロブリンを精製して吸着工程に用いてもよい。抗体試料は、抗体を含有する溶液の形態で吸着工程に用いられる。すなわち、抗体試料は、適宜、抗体を含有する溶液の形態に調製して吸着工程に用いてよい。例えば、上記例示したような抗体試料またはその前処理物を、適宜、液体媒体で溶解、懸濁、分散、または溶媒交換等して、抗体を含有する溶液として吸着工程に用いてよい。そのような液体媒体については、例えば、後述する平衡化液についての記載を準用できる。液体媒体は、平衡化液と同一であってもよく、なくてもよい。
【００３１】
被検者から得た抗体についての記載は、他の抗体の利用にも準用できる。例えば、被検者から得た抗体以外の任意の抗体も、同様に、そのまま、あるいは適宜前処理に供してから、抗体を含有する溶液の形態で吸着工程に用いてよい。
【００３２】
「Ｆｃ結合性タンパク質」とは、抗体のＦｃ領域に対する結合能を有するタンパク質を意味する。Ｆｃ結合性タンパク質は、所望の抗体分離パターンが得られるものであれば、特に制限されない。抗体は、例えば、抗体の糖鎖構造（例えば、Ｆｃ領域の糖鎖構造）の違いに基づくＦｃ結合性タンパク質との親和性の違いに基づき、分離することができる。抗体とＦｃ結合性タンパク質の親和性（具体的には、抗体の糖鎖構造）は、例えば、抗体の薬効等の機能と相関し得る。また、抗体とＦｃ結合性タンパク質の親和性（具体的には、抗体の糖鎖構造）は、例えば、被検者におけるリスクと相関し得る。すなわち、Ｆｃ結合性タンパク質は、例えば、抗体のＦｃ領域に対する結合能を有し、かつ抗体の糖鎖構造（例えば、Ｆｃ領域の糖鎖構造）の違いを認識できるタンパク質であるのが好ましい。Ｆｃ結合性タンパク質としては、ヒトＦｃ結合性タンパク質が挙げられる。ヒトＦｃ結合性タンパク質としては、ヒトに見出されるＦｃ結合性タンパク質やそのバリアントが挙げられる。ヒトＦｃ結合性タンパク質として、具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａの細胞外領域のアミノ酸配列の全長配列または部分配列を含むタンパク質が挙げられる。ヒトＦｃγＲＩＩＩａの細胞外領域のアミノ酸配列としては、天然型ヒトＦｃγＲＩＩＩａの場合、配列番号１に記載のアミノ酸配列のうち１７番目のグリシンから１９２番目までのグルタミンまでの領域が挙げられる。ヒトＦｃγＲＩＩＩａの細胞外領域のアミノ酸配列の部分配列としては、ヒトＦｃγＲＩＩＩａの細胞外領域のうち、少なくともＦｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧのＦｃ領域）に結合する機能を発現し得る領域のアミノ酸配列が挙げられる。ヒトＦｃ結合性タンパク質の一例として、以下の（ｉ）や（ｉｉ）のポリペプチドが挙げられる。
（ｉ）配列番号１に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；
（ｉｉ）配列番号１に記載のアミノ酸配列のうち少なくとも１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、かつ前記アミノ酸残基において１つ以上のアミノ酸残基の置換、挿入、または欠失を含むポリペプチド。
【００３３】
前記（ｉｉ）の一態様としては、配列番号１に記載のアミノ酸配列のうち１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、かつ当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において以下の（１）から（４０）のうち少なくともいずれか１つのアミノ酸置換が生じている、ポリペプチド（特開２０１５−０８６２１６）が挙げられる。
（１）配列番号１の１８番目のメチオニンがアルギニンに置換
（２）配列番号１の２７番目のバリンがグルタミン酸に置換
（３）配列番号１の２９番目のフェニルアラニンがロイシンまたはセリンに置換
（４）配列番号１の３０番目のロイシンがグルタミンに置換
（５）配列番号１の３５番目のチロシンがアスパラギン酸、グリシン、リジン、ロイシン、アスパラギン、プロリン、セリン、スレオニン、またはヒスチジンに置換
（６）配列番号１の４６番目のリジンがイソロイシンまたはスレオニンに置換
（７）配列番号１の４８番目のグルタミンがヒスチジンまたはロイシンに置換
（８）配列番号１の５０番目のアラニンがヒスチジンに置換
（９）配列番号１の５１番目のチロシンがアスパラギン酸またはヒスチジンに置換
（１０）配列番号１の５４番目のグルタミン酸がアスパラギン酸またはグリシンに置換
（１１）配列番号１の５６番目のアスパラギンがスレオニンに置換
（１２）配列番号１の５９番目のグルタミンがアルギニンに置換
（１３）配列番号１の６１番目のフェニルアラニンがチロシンに置換
（１４）配列番号１の６４番目のグルタミン酸がアスパラギン酸に置換
（１５）配列番号１の６５番目のセリンがアルギニンに置換
（１６）配列番号１の７１番目のアラニンがアスパラギン酸に置換
（１７）配列番号１の７５番目のフェニルアラニンがロイシン、セリン、またはチロシンに置換
（１８）配列番号１の７７番目のアスパラギン酸がアスパラギンに置換
（１９）配列番号１の７８番目のアラニンがセリンに置換
（２０）配列番号１の８２番目のアスパラギン酸がグルタミン酸またはバリンに置換
（２１）配列番号１の９０番目のグルタミンがアルギニンに置換
（２２）配列番号１の９２番目のアスパラギンがセリンに置換
（２３）配列番号１の９３番目のロイシンがアルギニンまたはメチオニンに置換
（２４）配列番号１の９５番目のスレオニンがアラニンまたはセリンに置換
（２５）配列番号１の１１０番目のロイシンがグルタミンに置換
（２６）配列番号１の１１５番目のアルギニンがグルタミンに置換
（２７）配列番号１の１１６番目のトリプトファンがロイシンに置換
（２８）配列番号１の１１８番目のフェニルアラニンがチロシンに置換
（２９）配列番号１の１１９番目のリジンがグルタミン酸に置換
（３０）配列番号１の１２０番目のグルタミン酸がバリンに置換
（３１）配列番号１の１２１番目のグルタミン酸がアスパラギン酸またはグリシンに置換
（３２）配列番号１の１５１番目のフェニルアラニンがセリンまたはチロシンに置換
（３３）配列番号１の１５５番目のセリンがスレオニンに置換
（３４）配列番号１の１６３番目のスレオニンがセリンに置換
（３５）配列番号１の１６７番目のセリンがグリシンに置換
（３６）配列番号１の１６９番目のセリンがグリシンに置換
（３７）配列番号１の１７１番目のフェニルアラニンがチロシンに置換
（３８）配列番号１の１８０番目のアスパラギンがリジン、セリン、またはイソロイシンに置換
（３９）配列番号１の１８５番目のスレオニンがセリンに置換
（４０）配列番号１の１９２番目のグルタミンがリジンに置換
また、前記（ｉｉ）の別の態様としては、配列番号１に記載のアミノ酸配列のうち１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、かつ当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において以下の（４１）から（５７）のうち少なくともいずれか１つのアミノ酸置換が生じている、ポリペプチド（特開２０１６−１６９１９７）が挙げられる。
（４１）配列番号１の２９番目のフェニルアラニンがイソロイシンまたはロイシンに置換
（４２）配列番号１の３９番目のグルタミン酸がグリシンに置換
（４３）配列番号１の４８番目のグルタミンがアルギニンに置換
（４４）配列番号１の５１番目のチロシンがセリンに置換
（４５）配列番号１の６１番目のフェニルアラニンがチロシンに置換
（４６）配列番号１の７７番目のアスパラギン酸がグリシンに置換
（４７）配列番号１の８２番目のアスパラギン酸がグルタミン酸に置換
（４８）配列番号１の９０番目のグルタミンがアルギニンに置換
（４９）配列番号１の１１２番目のグルタミンがロイシンに置換
（５０）配列番号１の１１７番目のバリンがグルタミン酸に置換
（５１）配列番号１の１１９番目のリジンがアスパラギンまたはグルタミン酸に置換
（５２）配列番号１の１４０番目のスレオニンがイソロイシンに置換
（５３）配列番号１の１４２番目のロイシンがグルタミンに置換
（５４）配列番号１の１７１番目のフェニルアラニンがセリンに置換
（５５）配列番号１の１７５番目のロイシンがアルギニンに置換
（５６）配列番号１の１８０番目のアスパラギンがセリンに置換
（５７）配列番号１の１８８番目のイソロイシンがバリンに置換
また、前記（ｉｉ）のさらに別の態様としては、配列番号１に記載のアミノ酸配列のうち１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、かつ当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において以下の（５８）から（６１）のうち少なくともいずれか１つのアミノ酸置換が生じている、ポリペプチド（特開２０１６−１６９１９７）が挙げられる。
（５８）配列番号１の６６番目のロイシンがヒスチジンまたはアルギニンに置換
（５９）配列番号１の１４７番目のグリシンがアスパラギン酸に置換
（６０）配列番号１の１５８番目のチロシンがヒスチジンに置換
（６１）配列番号１の１７６番目のバリンがフェニルアラニンに置換
また、前記（ｉｉ）のさらに別の態様としては、配列番号１に記載のアミノ酸配列のうち１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、かつ当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において上記（１）から（６１）のうち少なくともいずれか１つのアミノ酸置換が生じている、ポリペプチドが挙げられる。
【００３４】
前記（ｉｉ）としては、特に、以下の（ｉｉ−１）〜（ｉｉ−３）のポリペプチドが挙げられる。
（ｉｉ−１）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも１７６番目のバリンがフェニルアラニンに置換されたポリペプチド；
（ｉｉ−２）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも２７番目のバリンがグルタミン酸に、２９番目のフェニルアラニンがイソロイシンに、３５番目のチロシンがアスパラギンに、４８番目のグルタミンがアルギニンに、７５番目のフェニルアラニンがロイシンに、９２番目のアスパラギンがセリンに、１１７番目のバリンがグルタミン酸に、１２１番目のグルタミン酸がグリシンに、１７１番目のフェニルアラニンがセリンに、および１７６番目のバリンがフェニルアラニンに置換されたポリペプチド；
（ｉｉ−３）配列番号１に記載のアミノ酸配列の１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基を含み、但し当該１７番目から１９２番目までのアミノ酸残基において、少なくとも２７番目のバリンがグルタミン酸に、２９番目のフェニルアラニンがイソロイシンに、３５番目のチロシンがアスパラギンに、４８番目のグルタミンがアルギニンに、７５番目のフェニルアラニンがロイシンに、９２番目のアスパラギンがセリンに、１１７番目のバリンがグルタミン酸に、１２１番目のグルタミン酸がグリシンに、および１７１番目のフェニルアラニンがセリンに置換されたポリペプチド。
【００３５】
Ｆｃ結合性タンパク質は、Ｆｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧのＦｃ領域）に結合する機能を有する限りにおいて、上記例示したＦｃ結合性タンパク質（例えば、前記（ｉ）または（ｉｉ）のポリペプチド）のアミノ酸配列において、「一または数個」のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）を含むポリペプチドであってもよい。「一または数個」とは、例えば、１〜５０個、好ましくは１〜４０個、より好ましくは１〜３０、更に好ましくは１〜２０個、特に好ましくは１〜１０個であってよい。「一または数個」のアミノ酸変異は、例えば、上記（１）から（６１）のアミノ酸置換から選択される上記例示したＦｃ結合性タンパク質が有するアミノ酸置換が保存されるように生じてよい。言い換えると、「一または数個」のアミノ酸変異は、例えば、上記（１）から（６１）のアミノ酸置換から選択される上記例示したＦｃ結合性タンパク質が有するアミノ酸置換以外の位置に生じてよい。
【００３６】
Ｆｃ結合性タンパク質は、Ｆｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧのＦｃ領域）に結合する機能を有する限りにおいて、上記例示したＦｃ結合性タンパク質（例えば、前記（ｉ）または（ｉｉ）のポリペプチド）のアミノ酸配列に対し高い相同性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであってもよい。「高い相同性」とは、７０％以上、８０％以上、９０％以上、または９５％以上の相同性を意味してよい。「相同性」とは、類似性（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ）または同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を意味してよい。「相同性」とは、特に、同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を意味してよい。アミノ酸配列の相同性は、ＢＬＡＳＴ等のアラインメントプログラムを利用して決定することができる。例えば、「アミノ酸配列の同一性」とは、ｂｌａｓｔｐを用いて算出されるアミノ酸配列間の同一性を意味してよく、具体的には、ｂｌａｓｔｐをデフォルトのパラメータで用いて算出されるアミノ酸配列間の同一性を意味してもよい。上記のような相同性の範囲でのアミノ酸配列の変化は、例えば、上記（１）から（６１）のアミノ酸置換から選択される上記例示したＦｃ結合性タンパク質が有するアミノ酸置換が保存されるように生じてよい。言い換えると、上記のような相同性の範囲でのアミノ酸配列の変化は、例えば、上記（１）から（６１）のアミノ酸置換から選択される上記例示したＦｃ結合性タンパク質が有するアミノ酸置換以外の位置に生じてよい。
【００３７】
Ｆｃ結合性タンパク質は、例えば、Ｆｃ結合性タンパク質をコードする遺伝子を有する宿主に同遺伝子を発現させることにより製造できる。Ｆｃ結合性タンパク質をコードする遺伝子は、例えば、クローニング、化学合成、変異導入、またはそれらの組み合わせにより取得できる。宿主は、Ｆｃ結合性タンパク質を発現できるものであれば、特に制限されない。宿主としては、動物細胞、昆虫細胞、微生物が挙げられる。動物細胞としては、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、Ｈｅｌａ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨＥＫ２９３細胞が挙げられる。昆虫細胞としては、Ｓｆ９、ＢＴＩ−ＴＮ−５Ｂ１−４が挙げられる。微生物としては、酵母や細菌が挙げられる。酵母としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ等のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属酵母、Ｐｉｃｈｉａ  Ｐａｓｔｏｒｉｓ等のＰｉｃｈｉａ属酵母、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ等のＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属酵母が挙げられる。細菌としては、エシェリヒア・コリ等のエシェリヒア属細菌が挙げられる。エシェリヒア・コリとしては、Ｗ３１１０株、ＪＭ１０９株、ＢＬ２１（ＤＥ３）株が挙げられる。また、Ｆｃ結合性タンパク質は、例えば、Ｆｃ結合性タンパク質をコードする遺伝子を無細胞タンパク質合成系で発現させることによっても製造できる。
【００３８】
「不溶性担体」とは、本発明の方法においてカラムに通液される液体（例えば、平衡化液や溶出液等の、抗体の吸着または溶出に用いる液体）に対して不溶性である担体を意味する。不溶性担体は、Ｆｃ結合性タンパク質を共有結合で固定化するための官能基（例えばヒドロキシ基）を備えていてよい。不溶性担体としては、ジルコニア、ゼオライト、シリカ、皮膜シリカ等の無機系物質に由来した担体、セルロース、アガロース、デキストラン等の天然有機高分子物質に由来した担体、ポリアクリル酸、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリメタクリレート、ビニルポリマー等の合成有機高分子物質に由来した担体が挙げられる。
【００３９】
Ｆｃ結合性タンパク質は、適宜、不溶性担体に固定化することができる。Ｆｃ結合性タンパク質は、例えば、不溶性担体に備わるＦｃ結合性タンパク質を共有結合で固定化するための官能基（例えばヒドロキシ基）を利用して、共有結合で不溶性担体に固定化することができる。例えば、不溶性担体が表面にヒドロキシ基を備える場合、活性化剤を用いて当該ヒドロキシ基からＦｃ結合性タンパク質と共有結合可能な活性化基を形成し、当該活性化基とＦｃ結合性タンパク質とを共有結合することができる。ヒドロキシ基に対する活性化剤の具体例として、エピクロロヒドリン（活性化基としてエポキシ基を形成）、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル（活性化基としてエポキシ基を形成）、トレシルクロリド（活性化基としてトレシル基を形成）、ビニルブロミド（活性化基としてビニル基を形成）が挙げられる。また、ヒドロキシ基をアミノ基やカルボキシル基等に変換した後、活性化剤を作用させて活性化することもできる。アミノ基やカルボキシル基等に対する活性化剤の具体例として、３−マレイミドプロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル（活性化基としてマレイミド基を形成）、１，１’−カルボニルジイミダゾール（活性化基としてカルボニルイミダゾール基を形成）、ハロゲン化酢酸（活性化基としてハロゲン化アセチル基を形成）が挙げられる。
【００４０】
Ｆｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムに抗体を含有する溶液を添加することにより、抗体を担体に吸着することができる。抗体を含有する溶液は、例えば、ポンプ等の送液手段を用いてカラムに添加することができる。液体をカラムに添加することを、「液体をカラムに送液する」ともいう。抗体を含有する溶液の添加量、液相の種類、液相の送液速度、カラム温度等の吸着工程の実施条件は、抗体が担体に吸着する限り、特に制限されない。吸着工程の実施条件は、抗体の種類、Ｆｃ結合性タンパク質の種類、不溶性担体の種類、カラムのスケール等の諸条件に応じて適宜設定できる。液相としては、後述する平衡化液が挙げられる。送液速度は、例えば、カラムの内径が４．６ｍｍの場合に、０．１ｍＬ／分〜１．５ｍＬ／分、０．２ｍＬ／分〜１．０ｍＬ／分、または０．４ｍＬ／分〜０．８ｍＬ／分であってよい。送液速度は、例えば、カラムの内径の２乗に比例するように設定してよい。カラム温度は、例えば、０〜５０℃であってよい。
【００４１】
抗体を含有する溶液をカラムに添加する前に、平衡化液を用いてカラムを平衡化してよい。すなわち、本発明の方法は、吸着工程の前に、カラムに平衡化液を添加し、カラムを平衡化する工程を含んでいてよい。平衡化液としては、水性緩衝液が挙げられる。平衡化液として、具体的には、ｐＨ４．０から６．９の弱酸性緩衝液が挙げられる。緩衝液の成分は、緩衝液のｐＨ等の諸条件に応じて適宜選択できる。緩衝液の成分としては、リン酸、酢酸、ギ酸、ＭＥＳ（２−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ＭＯＰＳ（３−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、クエン酸、コハク酸、グリシン、ピペラジンが挙げられる。
＜溶出工程＞
溶出工程は、担体に吸着した抗体を溶出液を用いて溶出する工程である。
【００４２】
すなわち、カラムに溶出液を添加することにより、担体に吸着した抗体を溶出することができる。溶出液の種類、溶出液の送液形式、液相の送液速度、カラム温度等の溶出工程の実施条件は、所望の態様で抗体が分離される限り、例えば、所望の分離データが得られる限り、特に制限されない。溶出工程の実施条件は、抗体の種類、Ｆｃ結合性タンパク質の種類、不溶性担体の種類、カラムのスケール等の諸条件に応じて適宜設定できる。溶出液としては、抗体とＦｃ結合性タンパク質との親和性を弱めるものを用いることができる。溶出液としては、溶出前の液相（例えば、平衡化液）よりもｐＨが低い水性緩衝液が挙げられる。溶出液として、具体的には、ｐＨ２．５から４．５の酸性緩衝液が挙げられる。例えば、溶出前の液相（例えば、平衡化液）がｐＨ４．０から６．９の弱酸性緩衝液である場合に、溶出液がｐＨ２．５から４．５の酸性緩衝液であってよい。緩衝液の成分は、緩衝液のｐＨ等の諸条件に応じて適宜選択できる。緩衝液の成分としては、リン酸、酢酸、ギ酸、ＭＥＳ（２−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ＭＯＰＳ（３−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、クエン酸、コハク酸、グリシン、ピペラジンが挙げられる。溶出液の送液形式は、例えば、グラジエントであってもよく、イソクラティックであってもよい。溶出液の送液形式は、特に、グラジエントであってよい。すなわち、溶出は、特に、液相中の溶出液の比率を増大させることにより実施されてよい。グラジエントは、例えば、リニアグラジエントであってもよく、ステップワイズグラジエントであってもよく、それらの組み合わせであってもよい。グラジエントは、具体的には、例えば、１０〜６０分、１５〜５０分、または２０〜４０分で液相中の溶出液の比率が０％（ｖ／ｖ）から１００％（ｖ／ｖ）に増大するように設定されてよい。送液速度は、例えば、カラムの内径が４．６ｍｍの場合に、０．１ｍＬ／分〜１．５ｍＬ／分、０．２ｍＬ／分〜１．０ｍＬ／分、または０．４ｍＬ／分〜０．８ｍＬ／分であってよい。送液速度は、例えば、カラムの内径の２乗に比例するように設定してよい。カラム温度は、例えば、０〜５０℃であってよい。
【００４３】
溶出工程により、分離された抗体が得られてよい。分離された抗体は、例えば、同抗体を含有する溶出画分として得られてよい。すなわち、分離された抗体を含有する溶出画分を分取することにより、分離された抗体が得られる。溶出画分は、例えば、常法により分取することができる。溶出画分は、具体的には、例えば、オートサンプラー等の自動フラクションコレクター等により分取することができる。さらに、分離された抗体を溶出画分から回収してもよい。分離された抗体は、例えば、常法により溶出画分から回収することができる。分離された抗体は、具体的には、例えば、タンパク質の分離精製に用いられる公知の方法により溶出画分から回収することができる。
【００４４】
溶出工程により、分離データ（すなわち、抗体の分離パターンに係るデータ）が得られてよい。分離データは、被検者におけるリスクを検出するための指標として用いることができるものであれば、すなわち、被検者におけるリスクと相関するものであれば、特に制限されない。分離データとしては、抗体の分離パターンの特徴が挙げられる。抗体の分離パターンの特徴を、単に、「特徴」ともいう。すなわち、分離データを得る工程は、例えば、抗体の分離パターンを得る工程と、抗体の分離パターンの特徴を抽出する（すなわち、抗体の分離パターンからその特徴を抽出する）工程を含んでいてもよい。抗体の分離パターンは、検出器により抗体を検出することにより得られる。検出器としては、ＵＶ検出器や質量検出器が挙げられる。抗体の分離パターンとしては、抗体の溶出時のクロマトグラムが挙げられる。特徴としては、抗体の分離パターンから得られる、被検者におけるリスクと相関するパラメータが挙げられる。特徴として、具体的には、溶出ピーク（すなわち、溶出した抗体のピーク）の特徴が挙げられる。溶出ピークの特徴として、具体的には、ピーク面積、ピーク溶出時間、ピーク幅、ピーク検出数、ピーク高さが挙げられる。ピーク面積やピーク高さ等の特徴の抽出の対象となる溶出ピークを、「対象ピーク」ともいう。溶出ピークの特徴としては、特に、ピーク面積やピーク高さが挙げられる。抗体の分離パターンは、そのまま、あるいは適宜、ベースラインの補正等の補正を実施してから、特徴の抽出に用いてよい。特徴は、絶対値であってもよく、相対値であってもよい。相対値としては、他の溶出ピーク（すなわち、対象ピーク以外のいずれかの溶出ピーク）の値に対する比率または差分や、全溶出ピーク（すなわち、対象ピークを含む全ての溶出ピーク）の値の合計に対する比率または差分が挙げられる。相対値としては、特に、他の溶出ピークの値に対する比率や、全溶出ピークの値の合計に対する比率が挙げられる。他の溶出ピークとしては、１つの溶出ピークを用いてもよく、２つまたはそれ以上の溶出ピークを組み合わせて用いてもよい。例えば、ピーク面積として、具体的には、ピーク面積％が挙げられる。「ピーク面積％」とは、全溶出ピークの面積の合計値に対する対象ピークの面積の比率（％）を意味する。また、例えば、ピーク高さとして、具体的には、ピーク高さ％が挙げられる。「ピーク高さ％」とは、全溶出ピークの高さの合計値に対する対象ピークの高さの比率（％）を意味する。特徴は、内部標準物質で得られたピークに基づく補正や被検者の性質に基づく補正等の、補正がなされていてもよい。例えば、特徴は、被検者の年齢に基づいて補正がなされていてもよい。すなわち、例えば、特徴が被検者の年齢に影響を受ける場合、抽出された特徴を被検者の年齢に基づいて補正してから、検出工程に用いてよい。被検者の年齢に基づいて補正された特徴は、例えば、加齢以外の症状についてのリスクの検出に利用でき得る。
【００４５】
対象ピークは、リスクの種類等の諸条件に応じて適宜選択できる。対象ピークとしては、第１〜第４ピークが挙げられる。対象ピークとしては、特に、第１ピーク、第２ピーク、第３ピークが挙げられる。対象ピークとして、さらに特には、第１ピークが挙げられる。第１ピークは、例えば、膵炎以外の症状についてのリスクの評価に好適に利用でき得る。第２ピークは、例えば、加齢についてのリスクの評価に好適に利用でき得る。第３ピークは、例えば、膵炎についてのリスクの評価に好適に利用でき得る。第３ピークは、具体的には、例えば、膵炎と膵がんの区別に好適に利用でき得る。対象ピークとしては、１つの溶出ピークを用いてもよく、２つまたはそれ以上の溶出ピークを組み合わせて用いてもよい。「第１〜第４ピーク」とは、それぞれ、特記しない限り、溶出の開始後（例えば、グラジエントの開始後）に１〜４番目に溶出するピークを意味してよい。なお、対象ピークは、特に、ピーク面積％が１％以上のものであってもよい。言い換えると、「第１〜第４ピーク」とは、特に、それぞれ、溶出の開始後に１〜４番目に溶出する、ピーク面積％が１％以上のピークを意味してもよい。また、「第１ピーク」とは、溶出工程をグラジエント溶出により実施する場合にあっては、例えば、液相のｐＨが５．４以下、５．２以下、５．０以下、または４．８以下になって最初に溶出するピークを意味してもよい。また、「第１ピーク」とは、溶出工程をグラジエント溶出により実施する場合にあっては、例えば、液相のｐＨが５．４〜４．４、５．２〜４．５、または５．０〜４．６である期間に溶出するピークを意味してもよい。なお、液相のｐＨは、溶出の開始前の液相（例えば、平衡化液）のｐＨがＸ、溶出液のｐＨがＹ、液相中の溶出液の比率がＺ％である場合、下記式（Ｉ）で算出されるものとする。また、ピークが溶出したｐＨは、カラムの容積等の流路の容積を考慮して、適宜補正されるものとする。
【００４６】
液相のｐＨ＝Ｘ−（（Ｘ−Ｙ）×Ｚ％）  ・・・  （Ｉ）
＜検出工程＞
検出工程は、分離データ（すなわち、抗体の分離パターンに係るデータ）を指標として、被検者におけるリスク（すなわち、疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合い）を検出する工程である。
【００４７】
疾患としては、免疫細胞の活性（例えば、損傷作用や貪食作用）に影響を受ける疾患が挙げられる。免疫細胞としては、ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージが挙げられる。
【００４８】
疾患として、具体的には、がん、自己免疫疾患、感染症、アレルギー、炎症疾患が挙げられる。これらの疾患は、いずれも、免疫細胞の活性に影響を受ける疾患であり得る。
【００４９】
がんとしては、脳腫瘍、乳がん、子宮体がん、子宮頚がん、卵巣がん、食道がん、胃がん、虫垂がん、大腸がん、肝がん、胆嚢がん、胆管がん、膵がん、副腎がん、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、中皮腫、頭頚部がん、腎がん、肺がん、骨肉腫、ユーイング肉腫、軟骨肉腫、前立腺がん、精巣腫瘍、腎細胞がん、膀胱がん、横紋筋肉腫、皮膚がん、肛門がんが挙げられる。がんとしては、特に、膵がん、胃がん、乳がん、大腸がん、腎がんが挙げられる。
【００５０】
自己免疫疾患としては、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、多発性硬化症、慢性胃炎、慢性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性胆管炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、原発性胆汁性胆管炎、自己免疫性膵炎、高安動脈炎、グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、巨赤芽球性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、バセドウ病、橋本病、原発性甲状腺機能低下症、特発性アジソン病、１型糖尿病、慢性円板状エリテマトーデス、限局性強皮症、天疱瘡、膿疱性乾癬、尋常性乾癬、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、円形脱毛症、尋常性白斑、サットン後天性遠心性白斑・サットン母斑、原田病、自己免疫性視神経症、自己免疫性内耳障害、特発性無精子症、習慣性流産、リウマチ、全身性エリテマトーデス、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、強皮症、シェーグレン症候群、ＩｇＧ４関連疾患、血管炎症候群、混合性結合組織病が挙げられる。自己免疫疾患としては、特に、リウマチやシェーグレン症候群が挙げられる。
【００５１】
感染症としては、細菌感染症、真菌感染症、寄生性原虫感染症、寄生性蠕虫感染症、ウイルス感染症が挙げられる。細菌感染症としては、レンサ球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、腸球菌、リステリア、髄膜炎菌、淋菌、病原性大腸菌、クレブシエラ、プロテウス、百日咳菌、緑膿菌、セラチア、シトロバクター、アシネトバクター、エンテロバクター、マイコプラズマ、クロストリジウム、リケッチア、クラミジア等の各種細菌による感染症；結核、非結核性抗酸菌症、コレラ、ペスト、ジフテリア、赤痢、猩紅熱、炭疽、梅毒、破傷風、ハンセン病、レジオネラ肺炎、レプトスピラ症、ライム病、野兎病、Ｑ熱が挙げられる。真菌感染症としては、アスペルギルス症、カンジダ症、クリプトコッカス症、白癬菌症、ヒストプラズマ症、ニューモシスチス肺炎（カリニ肺炎）が挙げられる。寄生性原虫感染症としては、アメーバ赤痢、マラリア、トキソプラズマ症、リーシュマニア症、クリプトスポリジウム症が挙げられる。寄生性蠕虫感染症としては、エキノコックス症、日本住血吸虫症、フィラリア症、回虫症、広節裂頭条虫症が挙げられる。ウイルス感染症としては、インフルエンザ、ウイルス性肝炎、ウイルス性髄膜炎、ウイルス性胃腸炎、ウイルス性結膜炎、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、成人Ｔ細胞白血病、エボラ出血熱、黄熱、風邪症候群、狂犬病、サイトメガロウイルス感染症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、進行性多巣性白質脳症、水痘・帯状疱疹、単純疱疹、手足口病、デング熱、日本脳炎、伝染性紅斑、伝染性単核球症、天然痘、風疹、急性灰白髄炎（ポリオ）、麻疹、咽頭結膜熱（プール熱）、マールブルグ出血熱、腎症候性出血熱、ラッサ熱、流行性耳下腺炎、ウエストナイル熱、ヘルパンギーナ、チクングニア熱が挙げられる。感染症は、例えば、日和見感染症であってもよい。
【００５２】
アレルギーとしては、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、結膜炎、気管支喘息、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、薬剤性溶血性貧血、顆粒球減少症、血小板減少症、グッドパスチャー症候群、血清病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、リウマチ、糸球体腎炎、過敏性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、接触性皮膚炎、アレルギー性脳炎、移植拒絶反応、結核性空洞、類上皮細胞性肉芽腫が挙げられる。
【００５３】
炎症疾患としては、炎症性サイトカインにより誘導される疾患が挙げられる。炎症性サイトカインとしては、ＩＬ−６やＴＮＦ−αが挙げられる。炎症疾患として、具体的には、脳炎、骨髄炎、髄膜炎、神経炎、眼の炎症（涙腺炎、強膜炎、上強膜炎、角膜炎、脈絡網膜炎、網膜炎、脈絡網膜炎、眼瞼炎、結膜炎、ぶどう膜炎、等）、耳の炎症（外耳炎、中耳炎、内耳炎、等）、乳腺炎、心炎（心内膜炎、心筋炎、心膜炎、等）、血管炎（動脈炎、静脈炎、毛細血管炎、等）、呼吸器の炎症（副鼻腔炎、鼻炎、咽頭炎、喉頭炎、気管炎、気管支炎、細気管支炎、肺炎、胸膜炎、縦隔炎、等）、口腔の炎症（口内炎、歯肉炎、歯肉口内炎、舌炎、扁桃炎、シラデン炎、耳下腺炎、口唇炎、歯髄炎、鼻炎、等）、消化器の炎症（食道炎、胃炎、胃腸炎、腸炎、小腸炎、大腸炎、十二指腸炎、回腸炎、虫垂炎、直腸炎、等）、皮膚炎、蜂巣炎、汗腺炎、関節炎、皮膚筋炎、筋炎、滑膜炎、腱炎、脂肪織炎、骨炎、骨髄炎、骨膜炎、腎炎、輸尿管炎、膀胱炎、尿管炎、卵巣炎、卵管炎、子宮内膜炎、子宮頸管炎、膣炎、外陰炎、精巣炎、精巣上体炎、前立腺炎、精嚢膀胱炎、亀頭炎、包皮炎、絨毛膜羊膜炎、臍帯炎、臍炎、肝炎、上行性胆管炎、胆嚢炎、膵炎、腹膜炎、下垂体炎、甲状腺炎、副甲状腺炎、副腎炎、リンパ管炎、リンパ節炎が挙げられる。炎症疾患としては、特に、膵炎が挙げられる。
【００５４】
疾患として、具体的には、悪液質や加齢関連疾患も挙げられる。加齢関連疾患としては、フレイル（虚弱）、サルコペニア、ロコモティブシンドロームが挙げられる。悪液質やこれらの加齢関連疾患は、いずれも、炎症疾患でもあり得る。
【００５５】
被検者におけるリスクの検出としては、被検者においてリスクがあるかないかの判定や、被検者においてリスクが高いか低いかの判定が挙げられる。
【００５６】
疾患の有無の検出としては、被検者が現在疾患を発症している可能性があるかないかの判定や、被検者が現在疾患を発症している可能性が高いか低いかの判定が挙げられる。また、疾患の発症リスクの検出としては、被検者が将来疾患を発症する可能性または発症した場合に重症化する可能性があるかないかの判定や、被検者が将来疾患を発症する可能性または発症した場合に重症化する可能性が高いか低いかの判定が挙げられる。また、疾患の進行度合いの検出としては、被検者における現在の疾患の進行度合い（例えば重症度）が大きいか小さいかの判定が挙げられる。また、加齢の進行度合いの検出としては、被検者における現在の加齢の進行度合い（例えば重症度）が大きいか小さいかの判定が挙げられる。
【００５７】
すなわち、「被検者においてリスクがある」とは、例えば、被検者が現在疾患を発症している可能性があること、被検者が将来疾患を発症する可能性があること、および／または被検者が将来疾患を発症した場合に重症化する可能性があることを意味してよい。「被検者においてリスクがない」とは、例えば、被検者が現在疾患を発症している可能性がないこと、被検者が将来疾患を発症する可能性がないこと、および／または被検者が将来疾患を発症した場合に重症化する可能性がないことを意味してよい。「被検者においてリスクが高い」とは、例えば、被検者が現在疾患を発症している可能性が高いこと、被検者が将来疾患を発症する可能性が高いこと、被検者が将来疾患を発症した場合に重症化する可能性が高いこと、被検者における現在の疾患の進行度合いが大きいこと、および／または被検者における現在の加齢の進行度合いが大きいことを意味してよい。「被検者においてリスクが低い」とは、例えば、被検者が現在疾患を発症している可能性が低いこと、被検者が将来疾患を発症する可能性が低いこと、被検者が将来疾患を発症した場合に重症化する可能性が低いこと、被検者における現在の疾患の進行度合いが小さいこと、および／または被検者における現在の加齢の進行度合いが小さいことを意味してよい。
【００５８】
検出工程は、例えば、分離データの値の高低（すなわち、分離データの値が高いか低いか）を指標として実施できる。分離データの値の高低は、例えば、分離データの値を所定の閾値と比較することにより決定できる。言い換えると、検出工程は、例えば、分離データの値を閾値と比較する工程を含んでいてよい。すなわち、「分離データの値が高い」とは、例えば、分離データの値が閾値を基準として高いことを意味してよい。「分離データの値が閾値を基準として高い」とは、例えば、分離データの値が閾値以上であること、分離データの値が閾値超であること、または分離データの値が閾値よりも統計学的に有意に高いことを意味してよい。「分離データの値が閾値を基準として高い」とは、具体的には、例えば、分離データの値が閾値の１．０１倍以上、１．０２倍以上、１．０３倍以上、１．０５倍以上、１．０７倍以上、１．１倍以上、１．２倍以上、１．３倍以上、１．５倍以上、１．７倍以上、２倍以上、２．５倍以上、または３倍以上であることを意味してもよい。また、「分離データの値が低い」とは、例えば、分離データの値が閾値を基準として低いことを意味してよい。「分離データの値が閾値を基準として低い」とは、例えば、分離データの値が閾値以下であること、分離データの値が閾値未満であること、または分離データの値が閾値よりも統計学的に有意に低いことを意味してよい。「分離データの値が閾値を基準として低い」とは、具体的には、例えば、分離データの値が閾値の０．９９倍以下、０．９８倍以下、０．９７倍以下、０．９５倍以下、０．９３倍以下、０．９倍以下、０．８５倍以下、０．８倍以下、０．７倍以下、０．６倍以下、０．５倍以下、０．４倍以下、または０．３倍以下であることを意味してもよい。
【００５９】
分離データの値は、例えば、閾値を基準に、危険範囲に区分されてよい。分離データの値は、例えば、閾値を基準に、非危険範囲に区分されてよい。分離データの値は、具体的には、例えば、閾値を基準に、危険範囲と非危険範囲とに区分されてもよい。「危険範囲」とは、分離データの値について、被検者においてリスクがある可能性が高い範囲を意味してよい。「非危険範囲」とは、分離データの値について、被検者においてリスクがない可能性が高い範囲を意味してよい。すなわち、分離データの値が危険範囲にあれば、被検者においてリスクがある、またはリスクが高いと判定してよい。一方、分離データの値が非危険範囲にあれば、被検者においてリスクがない、またはリスクが低いと判定してよい。
【００６０】
例えば、第１ピークおよび／または第２ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が高い場合に、被検者においてリスクがある、またはリスクが高いと判定してよい。具体的には、例えば、第１ピークおよび／または第２ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が閾値を基準として高い場合に被検者においてリスクがある、またはリスクが高いと判定してよい。この場合、閾値を基準として高いとみなされる範囲が危険範囲であってよい。より具体的には、例えば、第１ピーク面積％が、１４％以上、１５％以上、１６％以上、１７％以上、１８％以上、１９％以上、２０％以上、２１％以上、２２％以上、２３％以上、２４％以上、２５％以上、２６％以上、２７％以上、２８％以上、２９％以上、または３０％以上である場合に、被検者においてリスクがある、またはリスクが高いと判定してもよい。また、第１ピークおよび／または第２ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が高いほど、被検者においてリスクが高いと判定してもよい。
【００６１】
例えば、第１ピークおよび／または第２ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が低い場合に、被検者においてリスクがない、またはリスクが低いと判定してよい。具体的には、例えば、第１ピークおよび／または第２ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が閾値を基準として低い場合に被検者においてリスクがない、またはリスクが低いと判定してよい。この場合、閾値を基準として低いとみなされる範囲が非危険範囲であってよい。より具体的には、例えば、第１ピーク面積％が、２５％以下、２４％以下、２３％以下、２２％以下、２１％以下、２０％以下、１９％以下、１８％以下、１７％以下、１６％以下、１５％以下、１４％以下、１３％以下、１２％以下、１１％以下、１０％以下、または９％以下である場合に、被検者においてリスクがない、またはリスクが低いと判定してもよい。また、第１ピークおよび／または第２ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が低いほど、被検者においてリスクが低いと判定してもよい。
【００６２】
例えば、第３ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が低い場合に、被検者においてリスクがある、またはリスクが高いと判定してよい。具体的には、例えば、第３ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が閾値を基準として低い場合に被検者においてリスクがある、またはリスクが高いと判定してよい。この場合、閾値を基準として低いとみなされる範囲が危険範囲であってよい。また、第３ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が低いほど、被検者においてリスクが高いと判定してもよい。
【００６３】
例えば、第３ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が高い場合に、被検者においてリスクがない、またはリスクが低いと判定してよい。具体的には、例えば、第３ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が閾値を基準として高い場合に被検者においてリスクがない、またはリスクが低いと判定してよい。この場合、閾値を基準として高いとみなされる範囲が非危険範囲であってよい。また、第３ピークのピーク面積（例えば、ピーク面積％）および／またはピーク高さ（例えば、ピーク高さ％）の値が高いほど、被検者においてリスクが低いと判定してもよい。
【００６４】
第１ピークを対象ピークとする分離データを指標とする場合、リスクは、例えば、膵炎以外の症状についてのリスクから選択されてよい。第２ピークを対象ピークとする分離データを指標とする場合、リスクは、例えば、加齢についてのリスクから選択されてよい。第３ピークを対象ピークとする分離データを指標とする場合、リスクは、例えば、膵炎についてのリスクから選択されてよい。
【００６５】
なお、「或る分離データが或る基準を満たす（例えば、低いもしくは高い、または或る範囲にある）場合に被検者においてリスクがある、ない、高い、または低いと判定する」とは、少なくとも当該基準を満たす範囲において被検者においてリスクがある、ない、高い、または低いと判定されることを意味し、当該基準を満たさない範囲において被検者においてリスクが判定されることを要求しない。しかし、一態様においては、「或る分離データが或る基準を満たす（例えば、低いもしくは高い、または或る範囲にある）場合に被検者においてリスクがある、ない、高い、または低いと判定する」場合、当該基準を満たさない範囲において、それぞれ、被検者においてリスクがない、ある、低い、または高いと判定してもよい。
【００６６】
閾値は、例えば、分離データの種類や所望の判定精度等の諸条件に応じて、当業者が適宜設定することができる。閾値は、例えば、疾患や加齢等の判定対象の症状ごとに設定されてよい。閾値を決定する手段は、特に制限されない。閾値は、例えば、集団を２群に区分するためのデータ解析に利用される公知の手法に従って決定することができる。
【００６７】
閾値は、例えば、対照被検者から得た抗体試料の分離データの値に基づいて決定することができる。対照被検者から得た抗体試料の分離データを、「対照分離データ」ともいう。対照分離データは、閾値の決定に用いられることにより、検出工程に用いられてよい。対照分離データは、具体的には、閾値の決定に用いられることにより、分離データとの比較に用いられてよい。言い換えると、検出工程は、例えば、分離データを対照分離データと比較する工程を含んでいてよい。
【００６８】
対照被検者としては、陽性対照や陰性対照が挙げられる。「陽性対照」とは、リスクがある、または高いと判定され得る被検者を意味してよい。「陰性対照」とは、リスクがない、または低いと判定され得る被検者を意味してよい。陽性対照としては、上記例示したような疾患（特に、リスクの検出対象となる疾患と同一の疾患）に罹患している、または罹患したことがある個体や、加齢が進行した個体、それらの組み合わせの性質を有する個体が挙げられる。陰性対照としては、上記例示したような疾患（特に、リスクの検出対象となる疾患と同一の疾患）に罹患していない、または罹患したことがない個体や、加齢が進行していない個体、それらの組み合わせの性質を有する個体が挙げられる。閾値は、陽性対照について測定された分離データの値のみに基づいて決定してもよく、陰性対照について測定された分離データの値のみに基づいて決定してもよく、陽性対照と陰性対照の両方について測定された分離データの値に基づいて決定してもよい。閾値は、通常、陽性対照と陰性対照の両方について測定された分離データの値に基づいて決定してよい。陽性対照と陰性対照の人数は、リスクの判定が所望の精度で可能となる閾値が得られる限り、特に制限されない。陽性対照と陰性対照の人数は、それぞれ、１人であってもよく、２人またはそれ以上であってもよい。陽性対照と陰性対照の人数は、それぞれ、通常、複数名であってよい。陽性対照と陰性対照の人数は、それぞれ、例えば、５人以上、１０人以上、２０人以上、または５０人以上であってもよい。陽性対照と陰性対照の人数は、それぞれ、例えば、１００００人以下、１０００人以下、または１００人以下であってもよい。
【００６９】
陽性対照について測定された分離データの値のみに基づいて閾値を決定する場合には、例えば、陽性対照の複数個体で測定された分離データの値の上限から下限までの範囲から選択される値、例えば平均値、を閾値として設定してもよい。また、例えば、陽性対照の複数個体で測定された分離データの値の分布において、陽性対照の所定の割合が危険範囲に含まれるように閾値を決定してもよい。所定の割合とは、例えば、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または１００％であってよい。
【００７０】
陰性対照について測定された分離データの値のみに基づいて閾値を決定する場合には、例えば、陰性対照の複数個体で測定された分離データの値の上限から下限までの範囲から選択される値、例えば平均値、を閾値として設定してもよい。また、例えば、陰性対照の複数個体で測定された分離データの値の分布において、陰性対照の所定の割合が非危険範囲に含まれるように閾値を決定してもよい。所定の割合とは、例えば、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または１００％であってよい。
【００７１】
陽性対照について測定された分離データの値と陰性対照について測定された分離データの値の両方に基づいて閾値を決定する場合には、例えば、陽性対照の所定の割合が危険範囲に含まれ、且つ、陰性対照の所定の割合が非危険範囲に含まれるように閾値を決定してもよい。陽性対照の内の危険範囲に含まれるものの割合、および、陰性対照の内の非危険範囲に含まれるものの割合は、いずれも高い方が好ましい。これらの割合は、それぞれ、例えば、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または１００％であってよい。これらの割合の両方を高くすることが難しい場合は、例えば、本発明の方法による判定結果の利用目的等の諸条件に応じて、いずれかの割合が優先的に高くなるように閾値を設定してもよい。例えば、偽陰性率を下げるためには、陽性対照の内の危険範囲に含まれるものの割合が優先的に高くなるように閾値を設定してよい。
【００７２】
閾値の決定は、例えば、ソフトウェアを用いて実施してもよい。例えば、統計解析ソフトウェアを用い、陰性対照と陽性対照とを統計学的に最も適切に判別できるような閾値を決定してもよい。そのようなソフトウェアとしては、「Ｒ」等の統計解析ソフトウェアが挙げられる。
【００７３】
また、対照被検者としては、標的被検者自体も挙げられる。すなわち、例えば、被検者における分離データの変動を指標として、被検者におけるリスクを判定してもよい。「分離データの値が高い」ことには、分離データの値が増大した場合が包含されてよい。「分離データの値が増大した」とは、具体的には、分離データの値が過去の値と比較して増大したことを意味してよい。また、「分離データの値が低い」ことには、分離データの値が低下した場合が包含されてよい。「分離データの値が低下した」とは、具体的には、分離データの値が過去の値と比較して低下したことを意味してよい。すなわち、閾値としては、過去の値も挙げられる。「過去の値」とは、標的被検者から過去の或る時点で得た抗体試料の分離データの値を意味する。過去の或る時点における標的被検者は、例えば、陽性対照であってもよく、陰性対照であってもよい。
【００７４】
被検者における分離データの変動を指標とする場合、被検者におけるリスクの増減を判定してもよい。「リスクがある、または高い」ことには、リスクが増大した場合が包含されてよい。「リスクが増大した」とは、具体的には、リスクが過去の或る時点と比較して増大したことを意味してよい。また、「リスクがない、または低い」ことには、リスクが低下した場合が包含されてよい。「リスクが低下した」とは、具体的には、リスクが過去の或る時点と比較して低下したことを意味してよい。
【００７５】
なお、「或る分離データを得てリスクの検出の指標とする」とは、当該分離データの値そのものを得てリスクの検出の指標とする場合に限られず、当該分離データの値を反映する他の値を得て検出の指標とすることも包含される。例えば、溶出ピークが第１〜第４ピークからなる場合、「第１ピークのピーク面積％を得てリスクの検出の指標とする」とは、第１ピークのピーク面積％の値そのものを得てリスクの検出の指標とする場合に限られず、第２〜第４ピークのピーク面積％の合計値等の、第１ピークのピーク面積％の値を反映する他の値を得て検出の指標とすることも包含される。いずれの場合にも、リスクの検出に用いられる測定値や閾値等の数値は、分離データの種類に応じて、適宜補正して用いられる。例えば、溶出ピークが第１〜第４ピークからなる場合、第１ピークのピーク面積％の値をＸ、第２〜第４ピークのピーク面積％の合計値をＹとすると、「Ｘ＝１００％−Ｙ」の関係が成立する。よって、第１ピークのピーク面積％の値そのもの（すなわち、「Ｘ」）に代えて第２〜第４ピークのピーク面積％の合計値（すなわち、「Ｙ」）を検出の指標とする場合、「Ｘが或る基準を満たす（例えば、低いもしくは高い、または或る範囲にある）」とは、「Ｙの補正値（すなわち、「１００％−Ｙ」）が当該基準を満たす」と読み替えるものとする。
【００７６】
リスクの検出結果は、被検者に対してリスクを低減するための処置（以下、「リスク軽減処置」ともいう）を実施するかを決定するための指標として用いてもよい。言い換えると、本発明の検出方法を実施することにより、被検者に対してリスク軽減処置を実施するかを決定するための指標が得られる。すなわち、例えば、本発明の検出方法により被検者においてリスクがある、または高いと判定された場合に、被検者に対してリスク軽減処置を実施すると決定してよい。本発明の検出方法は、例えば、単独で、あるいは他の手段と組み合わせて、被検者に対してリスク軽減処置を実施するかを決定するための指標として用いてよい。例えば、本発明の検出方法により被検者においてリスクがある、または高いと判定された症状について、他の手段により確定診断を実施してから、被検者に対してリスク軽減処置を実施すると決定してもよい。リスク軽減処置は、医療行為であってもよく、非医療行為であってもよい。リスク軽減処置としては、上記例示したような疾患や加齢の予防や治療が挙げられる。すなわち、本発明は、例えば、疾患や加齢等の症状の予防または治療方法を提供してよい。予防または治療方法は、例えば、本発明の検出方法を実施する工程、および本発明の検出方法により被検者においてリスクがある、または高いと判定された場合に、被検者に対して予防または治療を実施する工程を含む、疾患や加齢等の症状の予防または治療方法であってよい。具体的には、本発明の検出方法により被検者においてリスクがある、または高いと判定された症状について予防または治療を実施してよい。予防または治療は、例えば、各症状についての一般的な手段（例えば、投薬や外科手術）により実施することができる。
【００７７】
以下、具体例について記載する。
【００７８】
本発明の方法により、例えば、被検者の抗体を特定の疾患や加齢等の症状についてのリスクに特徴的な糖鎖構造に基づいて分離して分離データを取得することができ、基準となる分離データとの比較することにより、簡便にそのようなリスクを検出することが可能となる。また、疾患に対する何らかの処置（投薬、手術等）の前及び／又は後において分離データを取得して、基準となる分離データと比較することにより、疾患の治療経過のモニタリングや当該処置に対する方針の決定が可能となる。基準となる分離データとしては、対照被検者の分離データが挙げられる。基準となる分離データとして、具体的には、同一被検者の別の時点（例えば、健常時や同一疾患を発症している時点）での分離データ、健常者の分離データ、同一疾患を発症している異なる患者の分離データ、前記処置に対して奏効性の違いが得られる２群もしくはそれ以上の群に分ける際の基準となる分離データが挙げられる。
【００７９】
例えば、健常者（モデル）の分離データをモデル分離データとし、被験者の分離データをモデル分離データと比較することによって、何らかの疾病を有するリスクや疾病を発症するリスク等のリスクを評価することが可能となる。さらに、モデルと被験者の分離データの差の要因となるピークの画分を分取することで、健常者（モデル）と被験者との抗体の糖鎖パターンの差が抽出できる。また、患者本人のある時点での分離データをモデル分離データとし、同一患者の別の時点での分離データとモデル分離データとを比較することで、当該患者の疾患のモニタリングを行うこともできる。なお、２つの異なる検体群を比較する場合、統計的確率（Ｐ値）を用いて２つの異なる検体群から得られた前記分離データの差が有意な差であるかを評価することができる。Ｐ値が小さくなると、前記評価結果は有意になるといわれており、Ｐ値が有意水準未満の場合、前記評価結果は統計的に有意な差があるといえる。有意水準は一般的に５％である。
【００８０】
特定の疾患に関係する糖鎖構造の特徴として、シアル酸の付加の有無や、シアル酸の付加量の違い等が挙げられる。特に、リウマチ患者では、抗体に付加したシアル酸およびガラクトースの量が減少することが知られており、Ｆｃ結合性タンパク質との相互作用の違いにより、シアル酸やガラクトースの有無や含有量、および健常人との違いを簡便に評価することが可能である。さらに、本発明の方法によれば、個々の糖鎖構造を特定することなくＦｃ結合性という機能に基づいた糖鎖構造の総体として抗体を分離することができる。すなわち、本発明の方法によれば、シアル酸およびガラクトースの結合量と疾患との既知の相関では解明されていない糖鎖構造全体としてのＦｃ結合性という機能を基に分離データとして特徴を抽出できるため、精度高く疾患の有無や疾患の発症リスク等のリスクを評価することができる。
【００８１】
ＩｇＧに結合する糖鎖の種類が、抗体を産生するＢ細胞によって一部制御されており、非特許文献（Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｐｒｏｔｅｏｍ．、１０、Ｍ１１０．００４６５５（２０１１））によれば、サイトカインにより糖鎖修飾が変化することが報告されているため、当該サイトカインの分泌をＩｇＧに結合する糖鎖のパターンに基づき評価することもできる。サイトカインは細胞から放出される物質であり、様々な疾患と関連性がある。例えば、老化に伴いＩＬ−６やＴＮＦ−αといった炎症性サイトカインの分泌が増え、フレイル（虚弱）やサルコペニアといった運動や認知機能の低下に繋がることが知られており、本発明の方法によれば、これらの加齢関連疾患の発症リスクを評価することも可能となる。また、悪性腫瘍に関連して放出される炎症性サイトカインは、がん患者の体重減少といった衰弱状態（悪液質）の原因となるため、本発明の方法は、悪液質を評価する上でも有用な方法となる。
【００８２】
本発明によるＦｃ結合性タンパク質に対する抗体の親和性の強さは、当該抗体が結合した結合性物質に対する損傷もしくは貪食作用を持つナチュラルキラー細胞および単球、マクロファージ等の免疫細胞の活性に影響を与えるため、当該親和性の違いを検出することで、ナチュラルキラー細胞および単球、マクロファージによる損傷もしくは貪食作用に影響を受ける疾患の発症リスクを評価することが可能となる。当該疾患としては、がん、自己免疫疾患、感染症、アレルギー、炎症疾患が挙げられる。感染症としては、日和見感染症が挙げられる。日和見感染症とは健康な状態では感染症を起こさないような病原体が原因で発症する感染症である。病原体としては、ウイルス、細菌、真菌、原虫が挙げられる。また、ワクチン接種や罹患によって獲得した抗体の免疫細胞に対する活性化への効果も、Ｆｃ結合性タンパク質に対する抗体の親和性の強さから評価することが可能である。当該獲得した抗体の血液中の量を測定する他に、当該抗体のＦｃ結合性タンパク質に対する親和性の強さを測定することで、感染症に対する発症のリスクを精度よく予測することもできる。
＜２＞抗体混合物
本発明は、特定の組成の抗体混合物を提供する。同混合物を、本発明の抗体混合物ともいう。本発明の抗体混合物は、例えば、本発明の抗体製造方法により製造できる。本発明の抗体混合物は、例えば、抗体を含有する溶出画分として製造できる。
【００８３】
本発明の抗体混合物としては、２種またはそれ以上の抗体を含有する組成物であって、以下のＩからＩＸのうち２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、または９つ）の項目に該当するものが挙げられる：
Ｉ．  Ｇ１Ｆａを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．４以下である；
ＩＩ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．２以下である；
ＩＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．０３以下である；
ＩＶ．  Ｇ１Ｆｂを有する抗体の含有量をＧ１Ｆａを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．５以上である；
Ｖ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以下である；
ＶＩ．  Ｇ２Ｆ＋ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以下である；
ＶＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．１２以下である；
ＶＩＩＩ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．２％以下である；
ＩＸ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋２ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．２％以下である。
【００８４】
本発明の抗体混合物としては、２種またはそれ以上の抗体を含有する組成物であって、以下のＩからＩＸのうち２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、または９つ）の項目に該当するものも挙げられる：
Ｉ．  Ｇ１Ｆａを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で１．８以上である；
ＩＩ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以上である；
ＩＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ０Ｆを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．０６以上である；
ＩＶ．  Ｇ１Ｆｂを有する抗体の含有量をＧ１Ｆａを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以下である；
Ｖ．  Ｇ２Ｆを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で３．０以上である；
ＶＩ．  Ｇ２Ｆ＋ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．６以上である；
ＶＩＩ．  Ｇ２Ｆ＋２ＳＡを有する抗体の含有量をＧ１Ｆｂを有する抗体の含有量で割った値が重量比で０．３以上である；
ＶＩＩＩ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で２％以上である；
ＩＸ．  抗体の総含有量に対するＧ２＋２ＳＡを有する抗体の含有量の比率が重量比で０．６％以上である。
【００８５】
上記項目における糖鎖構造の表記は、図３および図４に記載の通りである。
【００８６】
本発明の抗体混合物の用途は、特に制限されない。本発明の抗体混合物は、例えば、診断用途に利用できる。診断用途としては、被検者におけるリスク（すなわち、疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合い）の検出が挙げられる。すなわち、本発明の抗体混合物が被検者から得た抗体を本発明の分離方法等により分離して得られたものである場合、本発明の抗体混合物を得た際の抗体の分離パターンに係るデータを指標として、被検者におけるリスクを検出することができる。また、本発明の抗体混合物における糖鎖構造のパターンを指標として、被検者におけるリスクを検出してもよい。
【実施例】
【００８７】
以下、非限定的な実施例を参照して本発明をより具体的に説明する。
【００８８】
Ｆｃ結合性タンパク質固定化ゲルの調製
実施例１  ＦｃＲ９のＶａｌ１７６アミノ酸置換体の作製
ＷＯ２０１５／１９９１５４号に記載の方法で作製したＦｃＲ９（配列番号２）に対し、Ｆｃ結合性タンパク質の１７６番目のバリン（配列番号１に記載のアミノ酸番号で１７６番目のＶａｌ）をフェニルアラニンに置換したＦｃ結合性タンパク質を作製した。具体的にはＦｃＲ９をコードするポリヌクレオチド（配列番号３）を含むプラスミドｐＥＴ−ＦｃＲ９（ＷＯ２０１５／１９９１５４号）に対し、ＰＣＲを用いてアミノ酸の置換を行ない、ＦｃＲ９のうちＶａｌ１７６をフェニルアラニンに置換したＦｃ結合性タンパク質を作製した。
【００８９】
なおＦｃＲ９（配列番号２）は、配列番号４に示す野生型ＦｃγＲＩＩＩ細胞外領域を含むＦｃ結合性タンパク質において、４３番目のＶａｌをＧｌｕに（配列番号１では２７番目に相当）、４５番目のＰｈｅをＩｌｅに（配列番号１では２９番目に相当）、５１番目のＴｙｒをＡｓｎに（配列番号１では３５番目に相当）、６４番目のＧｌｎをＡｒｇに（配列番号１では４８番目に相当）、９１番目のＰｈｅをＬｅｕに（配列番号１では７５番目に相当）、１０８番目のＡｓｎをＳｅｒに（配列番号１では９２番目に相当）、１３３番目のＶａｌをＧｌｕに（配列番号１では１１７番目に相当）、１３７番目のＧｌｕをＧｌｙに（配列番号１では１２１番目に相当）および１８７番目のＰｈｅをＳｅｒに（配列番号１では１７１番目に相当）アミノ酸置換したＦｃ結合性タンパク質である。
【００９０】
以下、各Ｆｃ結合性タンパク質の作製方法を詳細に説明する。
（１）Ｆｃ結合性タンパク質の１７６番目のバリン（配列番号１に記載のアミノ酸番号で１７６番目のＶａｌ）をフェニルアラニンへ置換するため、ＷＯ２０１５／１９９１５４号に記載の方法で作製したＦｃＲ９（配列番号２）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３）を含むプラスミドｐＥＴ−ＦｃＲ９（ＷＯ２０１５／１９９１５４号記載）を鋳型とし、配列番号５（５‘−ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧ−３’）および配列番号６（５’−ＣＡＴＴＴＴＴＧＣＴＧＣＣＧＡＡＣＡＧＣＣＣＡＣＧＧＣＡＧＧ−３’）に記載の配列からなるオリゴプライマーを用い表１に示す組成と同様の反応液を調製後、当該反応液を９５℃で２分間熱処理し、９５℃で３０秒間の第１ステップ、５０℃で３０秒間の第２ステップ、７２℃で９０秒間の第３ステップを１サイクルとする反応を３０サイクル行ない、最後に７２℃で７分間熱処理することでＰＣＲを行なった。得られたＰＣＲ産物をＶ１７６ｐ１とした。
【００９１】
【表１】
2020118664.tif 000003
【００９２】
（２）ＷＯ２０１５／１９９１５４号に記載の方法で作製したＦｃＲ９（配列番号２）をコードするポリヌクレオチド（配列番号３）を含むプラスミドｐＥＴ−ＦｃＲ９（ＷＯ２０１５／１９９１５４号記載）を鋳型とし、配列番号７（５‘−ＴＡＴＧＣＴＡＧＴＴＡＴＴＧＣＴＣＡＧ−３’）および配列番号８（５’−ｃｃｔｇｃｃｇｔｇｇｇｃｔｇＴＴＣＧＧＣＡＧＣＡＡＡＡＡＴＧ−３’）に記載の配列からなるオリゴプライマーを用い表１に示す組成と同様の反応液を調製後、当該反応液を９５℃で２分間熱処理し、９５℃で３０秒間の第１ステップ、５０℃で３０秒間の第２ステップ、７２℃で９０秒間の第３ステップを１サイクルとする反応を３０サイクル行ない、最後に７２℃で７分間熱処理することでＰＣＲを行なった。得られたＰＣＲ産物をＶ１７６ｐ２とした。
（３）（１）および（２）で得られた２種類のＰＣＲ産物（Ｖ１７６ｐ１、Ｖ１７６ｐ２）を混合し、表２に示す組成の反応液を調製した。当該反応液を９８℃で５分間熱処理後、９８℃で１０秒間の第１ステップ、５５℃で５秒間の第２ステップ、７２℃で１分間の第３ステップを１サイクルとする反応を５サイクル行なうＰＣＲを行ない、Ｖ１７６ｐ１とＶ１７６ｐ２を連結したＰＣＲ産物Ｖ１７６ｐを得た。
【００９３】
【表２】
2020118664.tif 000004
【００９４】
（４）（３）で得られたＰＣＲ産物Ｖ１７６ｐを鋳型とし、配列番号５および７に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドをＰＣＲプライマーとしてＰＣＲを行なった。ＰＣＲは、表３に示す組成の反応液を調製後、当該反応液を９８℃で５分間熱処理し、９８℃で１０秒間の第１ステップ、５５℃で５秒間の第２ステップ、７２℃で１分間の第３ステップを１サイクルとする反応を３０サイクル行なった。これによりＦｃ結合性タンパク質（ＦｃＲ９）の１７６番目のアミノ酸がフェニルアラニンに置換されたＦｃ結合性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを得た。得られたポリヌクレオチドをＶ１７６ｐ３とした。
【００９５】
【表３】
2020118664.tif 000005
【００９６】
（５）（４）で得られたポリヌクレオチドを精製後、制限酵素ＮｃｏＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化し、あらかじめ制限酵素ＮｃｏＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化した発現ベクターｐＥＴＭａｌＥ（特開２０１１−２０６０４６号公報）にライゲーションし、これを用いて大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株（ニッポンジーン製）を形質転換した。
（６）得られた形質転換体を５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを添加したＬＢ培地で培養した。回収した菌体（形質転換体）からプラスミドを抽出した。
（７）得られたプラスミドのヒトＦｃγＲＩＩＩａをコードするポリヌクレオチドおよびその周辺の領域について、チェーンターミネータ法に基づくＢｉｇＤｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  ｖ３．１  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｋｉｔ（ライフテクノロジーズ製）を用いてサイクルシークエンス反応に供し、全自動ＤＮＡシークエンサーＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ３１３０  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ライフテクノロジーズ製）にてヌクレオチド配列を解析した。なお当該解析の際、配列番号５（５’−ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧ−３’）または配列番号７（５’−ＴＡＴＧＣＴＡＧＴＴＡＴＴＧＣＴＣＡＧ−３’）に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドをシークエンス用プライマーとして使用した。配列解析の結果、Ｆｃ結合性タンパク質ＦｃＲ９のＶａｌ１７６がＰｈｅに置換されたＦｃ結合性タンパク質（配列番号９）を発現する形質転換体を得た。
【００９７】
実施例２  システインタグを付加したＦｃ結合性タンパク質（ＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓ）の作製
（１）実施例１で作製した配列番号９に記載のアミノ酸配列をコードする配列番号１０に記載のポリヌクレオチドを含んだ発現ベクターｐＥＴ−ＦｃＲ９＿Ｆを鋳型としてＰＣＲを実施した。当該ＰＣＲにおけるプライマーは、配列番号１１（５’−ＴＡＧＣＣＡＴＧＧＧＣＡＴＧＣＧＴＡＣＣＧＡＡＧＡＴＣＴＧＣＣＧＡＡＡＧＣ−３’）および配列番号１２（５’−ＣＣＣＡＡＧＣＴＴＡＴＣＣＧＣＡＧＧＴＡＴＣＧＴＴＧＣＧＧＣＡＣＣＣＴＴＧＧＧＴＡＡＴＧＧＴＡＡＴＡＴＴＣＡＣＧＧＴＣＴＣＧＣＴＧＣ−３’）に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドを用いた。ＰＣＲは、表３に示す組成の反応液を調製後、当該反応液を９８℃で５分熱処理し、９８℃で１０秒間の第１ステップ、５５℃で５秒間の第２ステップ、７２℃で１分間の第３ステップを１サイクルとする反応を３０サイクル繰り返すことで実施した。
（２）（１）で得られたポリヌクレオチドを精製し、制限酵素ＮｃｏＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化後、あらかじめ制限酵素ＮｃｏＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化したＷＯ２０１５／１９９１５４号に記載の方法で作製の発現ベクターｐＴｒｃ−ＰｅｌＢＶ３にライゲーションし、当該ライゲーション産物を用いて大腸菌Ｗ３１１０株を形質転換した。
（３）得られた形質転換体を１００μｇ／ｍＬのカルベニシリンを含むＬＢ培地にて培養後、ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  ｋｉｔ（キアゲン製）を用いて、発現ベクターｐＴｒｃ−ＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓを得た。
（４）ｐＴｒｃ−ＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓのヌクレオチド配列の解析を、配列番号１３（５’−ＴＧＴＧＧＴＡＴＧＧＣＴＧＴＧＣＡＧＧ−３’）または配列番号１４（５’−ＴＣＧＧＣＡＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＴＧ−３’）に記載の配列からなるオリゴヌクレオチドをシーケンス用プライマーに使用した以外は、実施例１（７）と同様の方法で行なった。  発現ベクターｐＴｒｃ−ＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓで発現されるポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号１５に、当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列を配列番号１６にそれぞれ示す。なお配列番号１５において、１番目のメチオニン（Ｍｅｔ）から２２番目のアラニン（Ａｌａ）までが改良ＰｅｌＢシグナルペプチドであり、２４番目のグリシン（Ｇｌｙ）から１９９番目のグルタミン（Ｇｌｎ）までがＦｃ結合性タンパク質のアミノ酸配列（配列番号１の１７番目から１９２番目までの領域に相当）、２００番目のグリシン（Ｇｌｙ）から２０７番目のグリシン（Ｇｌｙ）までがシステインタグ配列である。
【００９８】
実施例３  ＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓの調製
（１）実施例２で作製したＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓを発現する形質転換体を２Ｌのバッフルフラスコに入った１００μｇ／ｍＬのカルベニシリンを含む４００ｍＬの２ＹＴ液体培地（ペプトン１６ｇ／Ｌ、酵母エキス１０ｇ／Ｌ、塩化ナトリウム５ｇ／Ｌ）に接種し、３７℃で一晩、好気的に振とう培養することで前培養を行なった。
（２）グルコース１０ｇ／Ｌ、酵母エキス２０ｇ／Ｌ、リン酸三ナトリウム十二水和物３ｇ／Ｌ、リン酸水素二ナトリウム十二水和物９ｇ／Ｌ、塩化アンモニウム１ｇ／Ｌおよびカルベニシリン１００ｍｇ／Ｌを含む液体培地１．８Ｌに、（１）の培養液１８０ｍＬを接種し、３Ｌ発酵槽（バイオット製）を用いて本培養を行なった。温度３０℃、ｐＨ６．９から７．１、通気量１ＶＶＭ、溶存酸素濃度３０％飽和濃度の条件に設定し、本培養を開始した。ｐＨの制御には酸として５０％リン酸、アルカリとして１４％アンモニア水をそれぞれ使用し、溶存酸素の制御は撹拌速度を変化させることで制御し、撹拌回転数は下限５００ｒｐｍ、上限１０００ｒｐｍに設定した。培養開始後、グルコース濃度が測定できなくなった時点で、流加培地（グルコース２４８．９ｇ／Ｌ、酵母エキス８３．３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム七水和物７．２ｇ／Ｌ）を溶存酸素（ＤＯ）により制御しながら加えた。
（３）菌体量の目安として６００ｎｍの吸光度（ＯＤ６００ｎｍ）が約１５０に達したところで培養温度を２５℃に下げ、設定温度に到達したことを確認した後、終濃度が０．５ｍＭになるようＩＰＴＧを添加し、引き続き２５℃で培養を継続した。
（４）培養開始から約４８時間後に培養を停止し、培養液を４℃で８０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離により菌体を回収した。
（５）回収した菌体を２０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に５ｍＬ／１ｇ（菌体）となるように懸濁し、超音波発生装置（インソネーター２０１Ｍ（商品名）、久保田商事製）を用いて、４℃で約１０分間、約１５０Ｗの出力で菌体を破砕した。菌体破砕液は４℃で２０分間、８０００ｒｐｍの遠心分離を２回行ない、上清を回収した。
（６）（５）で得られた上清を、あらかじめ２０ｍＭのリン酸緩衝液（８ｍＭリン酸二水素ナトリウム、１２ｍＭリン酸水素二ナトリウム）（ｐＨ７．０）で平衡化した１４０ｍＬのＴＯＹＯＰＥＡＲＬ  ＣＭ−６５０Ｍ（東ソー製）を充填したＶＬ３２×２５０カラム（メルクミリポア製）に流速５ｍＬ／分でアプライした。平衡化に用いた緩衝液で洗浄後、０．５Ｍの塩化ナトリウムを含む２０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で溶出した。
（７）（６）で得られた溶出液を、あらかじめ１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む２０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）で平衡化したＩｇＧセファロース（ＧＥヘルスケア製）９０ｍＬを充填したＸＫ２６／２０カラム（ＧＥヘルスケア製）にアプライした。平衡化に用いた緩衝液で洗浄後、０．１Ｍのグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）で溶出した。なお溶出液は、溶出液量の１／４量の１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を加えることでｐＨを中性付近に戻した。
【００９９】
前記精製により、高純度のＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓを約２０ｍｇ得た。
実施例４  Ｆｃ結合性タンパク質（ＦｃＲ９＿Ｆ）固定化ゲルの作製と抗体の分離
（１）２ｍＬの分離剤用親水性ビニルポリマー（東ソー製：液体クロマトグラフィー用充填剤）の表面の水酸基をヨードアセチル基で活性化後、実施例３で調製したＦｃＲ９＿Ｆ＿Ｃｙｓを４ｍｇ反応させることにより、ＦｃＲ９＿Ｆ固定化ゲルを得た。
（２）（１）で作製したＦｃＲ９＿Ｆ固定化ゲル１．２ｍＬをφ４．６ｍｍ×７５ｍｍのステンレスカラムに充填してＦｃＲ９＿Ｆカラムを作製した。
（３）（２）で作製したＦｃＲ９＿Ｆカラムを高速液体クロマトグラフィー装置（東ソー製）に接続し、５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む２０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）の平衡化緩衝液で平衡化した。
（４）ＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ）（ｐＨ７．４）で１．０ｍｇ／ｍＬに希釈したモノクローナル抗体（リツキサン、全薬工業製、マウスとヒトのキメラ抗体）を流速０．６ｍＬ／ｍｉｎにて５μＬ添加した。
（５）流速０．６ｍＬ／ｍｉｎのまま平衡化緩衝液で２分洗浄後、１０ｍＭのグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）によるｐＨグラジエント（２８分で１０ｍＭのグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）が１００％となるグラジエント）で吸着したモノクローナル抗体を溶出した。
【０１００】
結果（溶出パターン）を図１に示す。モノクローナル抗体はＦｃ結合性タンパク質と相互作用するため、ゲルろ過クロマトグラフィーのような単一のピークではなく、複数のピークに分離された。溶出時間の早い１番目のピークをピークＡとし、溶出時間の遅い３番目のピークをピークＢとした。
【０１０１】
実施例５  Ｆｃ結合性タンパク質（ＦｃＲ９＿Ｆ）固定化ゲルを用いたヒト由来抗体の分離
抗体として、ヒト由来ガンマグロブリン製剤（化学及血清療法研究所製）を用いた以外は実施例４と同様に実施し、ヒト由来ガンマグロブリン製剤の分離パターンを図２に示した。実施例４のモノクローナル抗体（リツキサン）の分離結果（図１）とは異なる分離パターンを得た。
【０１０２】
また、ヒト由来抗体に特徴的な分離ピークである、図２におけるピークＣおよびピークＤを繰返し分取することで、各分画に含まれるヒト由来抗体を分取した。
【０１０３】
実施例６  モノクローナル抗体の糖鎖構造解析
実施例４で分離したピークＡ、およびピークＢ画分に含まれる抗体が有する糖鎖の構造解析を、特開２０１６−１６９１９７号記載の方法と同様な方法で実施した。結果を図３および表４に示した。Ｍａｎはマンノースを表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミン、Ｇａｌはガラクトース、Ｆｕｃはフコース、ＮｅｕＡｃはＮ−アセチルノイラミン酸を表す。
【０１０４】
【表４】
2020118664.tif 000006
【０１０５】
実施例７  ヒト由来抗体の糖鎖構造解析
実施例５で分取したピークＣおよびピークＤの画分に含まれる抗体が有する糖鎖の構造解析を実施例６と同様に実施し、ピークＣおよびピークＤの画分に含まれる抗体の有する糖鎖構造解析の結果を図４および表５に示した。
【０１０６】
【表５】
2020118664.tif 000007
【０１０７】
実施例６および実施例７の結果から、Ｆｃ結合性タンパク質を固定化したゲルを充填したＦｃＲカラムを用いることで、ガラクトースの有無が抗体の分離に寄与していること（表３のＧ０Ｆに関するピークＡとＢの組成割合の比較、同様にＧ１ＦおよびＧ２Ｆの比較。略号ＧとＦの間の数字はガラクトースの数を表す）、また同様にシアル酸の有無で抗体を分離していることが明らかとなった。さらに、図３と図４の比較から、ヒト由来ガンマグロブリンは、市販抗体医薬品であるマウスキメラ抗体のリツキサンとは異なり、ヒト特有の糖鎖構造を持つことが明らかとなった。これらのヒト特有糖鎖構造のなかでも、シアル酸の付加した糖鎖構造を持つ抗体は、特定の疾患の指標と成り得ることから、本発明の方法を利用することで、疾患の簡便な測定や、健常人との比較による異常の早期発見、罹患患者の予後管理等が可能となる。
【０１０８】
実施例８  Ｆｃ結合性タンパク質（ＦｃＲ９＿Ｆ）固定化ゲルを用いた年齢の異なるヒト由来抗体の分離
（１）インフォームドコンセントを得た健常者から血液を採取した。健常者の年齢および性別を以下に示す。
（Ａ検体）３６歳、女性
（Ｂ検体）４４歳、女性
（Ｃ検体）５５歳、女性
（２）（１）で採取した血液を遠心することで得た血清を、ＰｒｏｔｅｉｎＧが固相上に固定化されたガンマグロブリンＧ精製キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、ガンマグロブリンを精製した。
（３）（２）で得られたガンマグロブリンを用いて、溶出条件として、流速０．６ｍＬ／ｍｉｎのまま平衡化緩衝液で５分洗浄後、１０ｍＭのグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）によるｐＨグラジエント（３０分で１０ｍＭのグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ３．０）が１００％となるグラジエント）で吸着したガンマグロブリンを溶出した他は、実施例４と同様の方法でガンマグロブリンの分離パターンを得た。
（４）（３）で得られた分離パターンを、ｐＨグラジエントをかけ始めてから溶出時間の早いピーク順に、第１ピーク、第２ピーク、第３ピーク、第４ピークと定義し、当該第３ピークの検出値を１として正規化した。
【０１０９】
実施例８の結果を図５に示す。Ａ検体と比較して、Ｂ検体およびＣ検体の順に年齢が増加するに従って、早く溶出されるガンマグロブリンの割合が増えていることがわかる。特にＡ検体およびＢ検体と比較してＣ検体では第１ピークおよび第２ピークのピーク面積％が増大していることがわかる。溶出時間の長いガンマグロブリンの割合が多いということは、当該ガンマグロブリンのナチュラルキラー細胞および単球、マクロファージに対する結合能が高いことを意味しており、当該細胞の活性化を促進できる。一方、溶出時間の短いガンマグロブリンの割合が多い場合は、前記細胞の活性化が十分得られず、前記細胞の活性に影響を受ける疾患の発症リスクが高まる。このような疾患としては、例えばウイルスや細菌等による感染症やがん、アレルギー、炎症疾患等が挙げられる。実施例８のガンマグロブリンの分離パターンの変動から、当該発症リスクは年齢の増加により高まることがわかる。
【０１１０】
実施例９  Ｆｃ結合性タンパク質固定化ゲルを用いた年齢の異なるヒト由来抗体の分離
（１）インフォームドコンセントを得た健常者から血液を採取した。健常者の年齢層および検体数を以下に示す。
１８−２９歳：２３検体
３０−３９歳：２１検体
４０−４９歳：２１検体
５０−５９歳：２４検体
６０−７５歳：１５検体
（２）（１）で採取した血液を遠心することで得た血清をＰＢＳで１０倍希釈した後、０．２μｍ径のフィルター（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）に通すことで測定サンプルを調製した。
（３）（２）で得られた測定サンプルを流速０．６ｍＬ／ｍｉｎにて１０μＬ添加した他は、実施例８（３）と同様な方法でガンマグロブリンの分離パターンを得た。
（４）（３）で得られた分離パターンを、ｐＨグラジエントをかけ始めてから溶出時間の早いピーク順に、第１ピーク、第２ピーク、第３ピーク、第４ピークと定義し、当該第１ピークの面積値をｐＨグラジエントをかけ始めてからかけ終わるまでの全体の面積値で除することで得た値を第１ピーク面積％とした。
【０１１１】
実施例９の結果を図６に示す。５０歳未満の検体と比較して、５０歳代の検体および６０歳以上の検体の順に年齢が増加するに従って、第１ピーク面積％の値が有意に上がったことから、早く溶出されるガンマグロブリンの割合が増えていくことがわかる。また、５０歳未満の検体においても、第１ピーク面積％の値が高い検体も低い割合ながら存在することもわかる。この結果は、集団として評価した場合、加齢に従って免疫活性が低下することを意味しており、また個々人として評価した場合、若年層においても免疫活性が低下し得ることを示している。
【０１１２】
実施例１０  がん患者由来のガンマグロブリン分離
インフォームドコンセントを得た健常者および膵がん、胃がん、乳がん患者から採取した血液を用いた他は、実施例９と同様な方法でガンマグロブリンを分離し、第１ピーク面積％を求めた。
【０１１３】
実施例１１  自己免疫疾患患者由来のガンマグロブリン分離
インフォームドコンセントを得たリウマチ、シェーグレン症候群患者から採取した血液を用いた他は、実施例９と同様な方法でガンマグロブリンを分離し、第１ピーク面積％を求めた。
【０１１４】
実施例１０、１１の結果をそれぞれ図７、８に示す。健常者の検体と比較して、膵がん（図７のパネルａ）、胃がん（図７のパネルｂ）、乳がん（図７のパネルｃ）、リウマチ（図８のパネルａ）、シェーグレン症候群（図８のパネルｂ）の患者では第１ピーク面積％の値が有意に上がった。またがん疾患においては病期によっても第１ピーク面積％の値が上がることがわかった。なお前記病期とは、国際対がん連合（ＵＩＣＣ）により定められた病期分類によるものである。この結果は、がん疾患および自己免疫疾患患者ではＦｃ結合性タンパク質に関与する免疫活性が低下していることを意味しており、特にがん疾患において第１ピーク面積％が顕著に上がっていることから免疫活性が大きく低下していることがわかる。がん疾患もしくは自己免疫疾患において、前記免疫活性の低下が発症する要因であるか、もしくは発症により前記免疫活性が低下したと考えられる。健常者と検体の第１ピーク面積％の値が疾患検体との間で異なることから、疾患の診断に用いることが可能であり、またがん疾患において病期によっても第１ピーク面積％の値が変化することから、がんの進行性や悪性度の評価に用いることもできる。
【０１１５】
実施例１２  年齢で補正したがん患者由来のガンマグロブリン分離評価
（１）インフォームドコンセントを得た腎がん、大腸がん患者から採取した血液を用いた他は、実施例９と同様な方法でガンマグロブリンを分離し、第１ピーク面積％を求めた。
（２）実施例９の健常者検体の測定で得た第１ピーク面積％と年齢との相関曲線を多項式近似により求め、検体の各年齢を当該相関曲線の当該式に導入することにより導かれる値を補正値として算出した。
（３）（２）より算出した値を、実施例９の健常者、実施例１０の膵がん、および（１）により求めた第１ピーク面積％から減ずることで、補正第１ピーク面積％を求めた。
【０１１６】
実施例１２の結果を図９に示す。加齢に伴い増加する第１ピーク面積％を補正することで得た補正第１ピーク面積％を基に健常者の検体と、膵がん、腎がん、大腸がんとを比較すると、健常者と比較して有意に補正第１ピーク面積％が増加した。補正を行っていない第１ピーク面積％を基に健常者の検体と、膵がんとを比較した実施例１０で見られた第１ピーク面積％の有意な増加と同様に、補正第１ピーク面積％でも増加が確認されたことから、年齢を加味した補正を行っても健常者とがん患者でＩｇＧ分離パターンの違いが確認できることがわかる。
【０１１７】
実施例１３  膵がんおよび膵炎患者由来のガンマグロブリン分離評価
（１）インフォームドコンセントを得た膵がん、膵炎患者から採取した血液を用いた他は、実施例９（２）および（３）と同様な方法でガンマグロブリンを分離した。
（２）（１）で得られた分離パターンを、ｐＨグラジエントをかけ始めてから溶出時間の早いピーク順に、第１ピーク、第２ピーク、第３ピークと定義し、当該第１ピークの面積値をｐＨグラジエントをかけ始めてからかけ終わるまでの全体の面積値で除することで得た値を第１ピーク面積％とし、実施例１２（２）および（３）と同様な方法で補正第１ピーク面積％を求め、さらに第３ピークの面積も求めた。
【０１１８】
実施例１３の結果を図１０に示す。図１０のパネル（ａ）では膵がん患者検体と比較して、膵炎の患者では補正第１ピーク面積％の値が有意に低下した。また、実施例１２の健常者検体と比較すると、膵炎患者の補正第１ピーク面積％はほぼ同じ値となり、健常者が膵炎になるだけでは補正第１ピーク面積％の値は変化しないことがわかる。補正第１ピーク面積％で膵がんと膵炎の識別性をＲＯＣ曲線によるＡＵＣの値で評価すると０．８３となった。一方、図１０のパネル（ｂ）では第３ピーク面積で比較すると、膵がん患者検体と比較して、膵炎の患者では値が有意に増加した。第３ピーク面積で膵がんと膵炎の識別性をＲＯＣ曲線によるＡＵＣの値で評価すると１．００となり、補正第１ピーク面積％による評価より膵臓の病変を識別する際に悪性腫瘍であるか否かを精度よく見分けることが可能である。
実施例１４  喫煙・非喫煙健常者由来のガンマグロブリン分離評価
インフォームドコンセントを得た喫煙および非喫煙の健常者から採取した血液を用いた他は、実施例１２と同様な方法でガンマグロブリンを分離し、補正第１ピーク面積％を求めた。
【０１１９】
実施例１４の結果を図１１に示す。非喫煙の健常者と比較して、喫煙している健常者では補正第１ピーク面積％の値が有意に増加した。補正第１ピーク面積％の値の増加は、実施例１２からがん患者から検出される傾向と同一であり、喫煙することでがんへの罹患リスクを高めていることがわかる。
実施例１５  異なるＦｃ結合性タンパク質（ＦｃＲ９＿ＦもしくはＦｃＲ９＿Ｖ）固定化ゲル用いた年齢の異なるヒト由来抗体の分離
（１）発現されるポリペプチドのアミノ酸配列を配列番号１７に、当該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列を配列番号１８にそれぞれ示す発現ベクターを用いた他は、実施例３と同様な方法を用いてシステインタグを付加したＦｃ結合性タンパク質（ＦｃＲ９＿Ｖ＿Ｃｙｓ）を調製した。
（２）（１）で調製したＦｃ結合性タンパク質を用いた他は、実施例４（１）から（２）と同様な方法で、ＦｃＲ９＿Ｖカラムを作製した。
（３）インフォームドコンセントを得た健常者から血液を採取した。健常者の年齢および性別を以下に示す。
（健常者Ａ）２１歳、男性
（健常者Ｂ）２６歳、男性
（健常者Ｃ）３６歳、男性
（健常者Ｄ）４７歳、男性
（４）カラムとしてＦｃＲ９＿ＦカラムまたはＦｃＲ９＿Ｖカラムを用いた他は、実施例８（２）および（３）と同様の方法でガンマグロブリンの分離パターンを得た。
（５）（４）で得られた分離パターンを、ｐＨグラジエントをかけ始めてから溶出時間の早いピーク順に、第１ピーク、第２ピーク、第３ピークと定義し、当該第１ピークの面積値をｐＨグラジエントをかけ始めてからかけ終わるまでの全体の面積値で除することで得た値を第１ピーク面積％とした。さらに、当該第１ピークの高さを各ピークの高さの合計値で除することで得た値を第１ピーク高さ％とした。
【０１２０】
実施例１５の結果を図１２に示す。図１２のパネル（ａ）では、ＦｃＲ９＿ＦカラムまたはＦｃＲ９＿Ｖカラムで測定した健常者検体の測定値を示す図である。当該図から、加齢に伴い第１ピーク高さ％の値が増加していくことがわかり、さらにアミノ酸配列の異なる２種のＦｃ結合性タンパク質を固定化した不溶性担体を充填したカラムを用いても、加齢に伴い第１ピーク高さ％が増加していく同一の傾向が得られた。この結果は、限定されたアミノ酸配列でなくともＦｃ結合性タンパク質であれば、疾患、疾患の発症リスク及び／又は疾患の進行度合い、加齢の進行度合いを検出することが可能であることがわかる。さらに、図１２のパネル（ｂ）では、ＦｃＲ９＿Ｖカラムで測定した健常者検体の測定値として、第１ピーク面積％と第１ピーク高さ％をそれぞれ示す。当該面積％および当該高さ％をそれぞれ比較すると、どちらも加齢に伴い値が増加しており、どちらの値を用いても正確に評価可能であることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【０１２１】
本発明によれば、糖鎖構造の違いに基づき抗体を分離できる。また、本発明の一態様によれば、抗体の分離パターンの特徴を指標として、被検者における疾患の有無、疾患の発症リスク、疾患の進行度合い、及び／又は加齢の進行度合いを検出できる。
【図１】
2020118664.tif 000008
【図２】
2020118664.tif 000009
【図３】
2020118664.tif 000010
【図４】
2020118664.tif 000011
【図５】
2020118664.tif 000012
【図６】
2020118664.tif 000013
【図７】
2020118664.tif 000014
【図８】
2020118664.tif 000015
【図９】
2020118664.tif 000016
【図１０】
2020118664.tif 000017
【図１１】
2020118664.tif 000018
【図１２】
2020118664.tif 000019
【配列表】
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