(57)【要約】【課題】Ｃ１エステラーゼ阻害因子融合タンパク質及びその使用の提供。【解決手段】本発明は、特に、補体関連型疾患、詳細には予防的及び／または維持療法を必要とする慢性疾患を治療する方法及び組成物を提供する。１つの態様において、天然の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨよりも長い半減期を有するＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質が提供される。いくつかの実施形態において、本発明による方法は、補体関連型疾患を患っている、または患いやすい個体に、有効量の組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を、この補体補体関連型疾患の少なくとも１つの症状もしくは特徴が、強度、重篤度、または頻度において、予防及び／または減少されるように、投与することを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年１０月３１日出願の、米国仮出願番号第６２／０７３６５７号の優先権を主張し、その開示は、そのまま全体が本明細書により参照により援用される。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ１阻害因子（Ｃ１−ＩＮＨ）は、Ｃ１エステラーゼ阻害因子としても知られるが、セルピンタンパク質スーパーファミリーの最大メンバーである。Ｃ１−ＩＮＨは、重度にグリコシル化されたセリンプロテイナーゼ阻害因子であり、主な機能として、補体系の自発活性化を阻害する。Ｃ１−ＩＮＨは、補体カスケード系を調節し、接触（カリクレイン・キニン）増幅カスケードの調節で重要な役割を果たし、凝固系及び線維素溶解系の調節に関与している。Ｋａｒｎａｕｋｈｏｖａ，  Ｅ．，  Ｃ１−Ｅｓｔｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｄｉｓ，
１：  １１３  （２０１３）。
【０００３】
対象におけるＣ１−ＩＮＨの機能不全及び／または欠乏は、Ｃ１−ＩＮＨが補体系の活性化を阻害できなくなることから、様々な自己免疫疾患に関連するとされてきた。そのような疾患の例として、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）があるが、これは、予測不能かつ再発性の炎症発作を特徴とする、稀ではあるが、生命を危うくする可能性のある障害である。ＨＡＥ発作の症状として、自発的に生じる、または軽度外傷により引き起こされる、顔面、口、及び／または気道の腫脹が挙げられる。そのような腫脹は、身体のどの部位でも起こり得る。場合によっては、ＨＡＥは、Ｃ１阻害因子の血漿レベルの低さと関連するが、他の場合では、このタンパク質は、正常または増加した量で循環しているが、機能不全になっている。炎症のエピソードに加えて、ＨＡＥは、より重篤な、または生命を危うくする症候、例えば、自己免疫疾患または紅斑性狼瘡なども引き起こす可能性がある。
【０００４】
ヒト血漿由来Ｃ１エステラーゼ阻害因子であるＣＩＮＲＹＺＥ（登録商標）は、ＨＡＥの急性発作の予防的使用及び治療用に承認されている。ベリナート（登録商標）（同じく血漿由来ヒトＣ１−ＩＮＨ、ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）は、急性ＨＡＥ発作の治療を適応症とする。ヒト血漿由来Ｃ１エステラーゼ阻害因子の供給は、献血及び血漿提供の利用可能性に束縛される。遺伝子改変ウサギで発現する組換えＣ１−ＩＮＨであるルコネスト（登録商標）（コネスタットアルファ、Ｐｈａｒｍｉｎｇ  Ｎ．Ｖ．）は、急性ＨＡＥ発作の治療に適応したＩＶ投与用の薬である。しかしながら、ルコネスト（登録商標）はウサギで作られるため、そのグリコシル化特性は、ヒト血漿由来Ｃ１−ＩＮＨのものと異なっている。その結果、ルコネストは、約２．４〜２．７時間という極端に短い半減期を有する。ルコネスト（登録商標）ＦＤＡラベル及び処方情報を参照。
【０００５】
したがって、様々なＣ１エステラーゼ関連型症候の治療用の改善されたＣ１エステラーゼ阻害因子が、当該分野では今なお必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｋａｒｎａｕｋｈｏｖａ，  Ｅ．，  Ｃ１−Ｅｓｔｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｄｉｓ，  １：  １１３  （２０１３）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、特に、様々な補体関連型障害の治療に効果的に使用することができ、かつ費用効率の高い様式で製造することができる、改善された、長時間作用性組換えＣ１エステラーゼ阻害因子を提供する。
【０００８】
詳細には、本発明は、ルコネスト（登録商標）よりも長い半減期を示すＣ１エステラーゼ阻害因子融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、本発明のＣ１阻害因子融合タンパク質は、血漿由来Ｃ１−ＩＮＨに匹敵する、またはそれより長い半減期を示す。例えば、本発明者らは、本発明によるある特定の例示Ｃ１阻害因子融合タンパク質が、少なくとも４日間という長い血清中半減期を有することを実証した。組換えＣ１阻害因子の長い血清中半減期は、優れたｉｎ  ｖｉｖｏ有効性につながるとともに、好ましい投薬レジメン及び投与経路を可能にすると考えられる。ある特定の実施形態において、本発明のＣ１阻害因子融合タンパク質は、所望の効力（例えば、予防）を達成しつつも、承認済みのＣ１阻害因子よりも少ない頻度で皮下投与することができる。そのうえ、本発明のＣ１阻害因子融合タンパク質は、宿主細胞中で組換え技術により産生させることができるので、本開示のＣ１阻害因子融合タンパク質は、血液供給に依存せず、感染病原体感染の危険性がなく、製造費用が高くない。本発明のＣ１阻害因子融合タンパク質は、宿主細胞中で組換え技術により産生されるので、それらは、製造及び最終製品において、ヒト血液、ヒト血液成分（例えば血漿）、または動物乳から精製された製品よりも高い一貫性を提供する。そのうえ、本明細書中提供されるＣ１阻害因子融合タンパク質は、動物の年齢及び／または成長度、乳産生、動物の疾病などをはじめとする畜産の留意事項に依存しないが、こうした留意事項は全て、ウサギで発現するＣ１−ＩＮＨでは、その品質及び量（例えば、グリコシル化特性、発現タンパク質の不均一性など）の両方に影響する可能性がある。このように、本発明は、費用効率が高くかつ信頼できる組換えＣ１エステラーゼ阻害因子製造法、及びより安全でより効果的な、ＨＡＥ及び他の補体関連型障害の治療法を提供する。本発明の他の特長、目的、及び利点は、以下の詳細な説明で明らかとなる。しかし、当然のことながら、詳細な説明は、本発明の実施形態を示すものであるものの、例示として提供されるにすぎず、限定するものではない。本発明の範囲内にある様々な変更及び改変が、詳細な説明から、当業者に明らかとなるだろう。
【０００９】
１つの態様において、本発明は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１を有する全長ヒトＣ１阻害因子と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号２と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号２と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００１２】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドのＮ末端と結合している。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインである。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドのＮ末端と結合している。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに由来する。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、配列番号３と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号３のヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号３のヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号３のヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号３のヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号３のヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号３と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｌ２３４Ａ変異を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｌ２３５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｌ２３４Ａ変異及びＬ２３５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｌ２３４Ａ変異またはＬ２３５Ａ変異を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質の半減期を延長する１つまたは複数の変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインの変異は、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、及び／またはＡｓｎ４３４に対応する１つまたは複数の位置から選択される１つまたは複数の変異を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｈ４３３Ｋ変異を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｎ４３４Ｆ変異を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｈ４３３Ｋ変異及びＮ４３４Ｆ変異を含む。いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｈ４３３Ｋ変異またはＮ４３４Ｆ変異を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号６と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号６と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号６と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号６と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号６と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号６と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号７と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号７と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号７と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号７と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号７と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号７と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号８と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号８と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号８と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号８と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号８と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号８と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８のいずれか１つと少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８のいずれか１つとと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８のいずれか１つと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８のいずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８のいずれか１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８のいずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８のいずれか１つと比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２１】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドのＮ末端と結合している。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインである。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドのＮ末端と結合している。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインに由来する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、配列番号９と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号９のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号９のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号９のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号９のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号９のヒトＩｇＧ４のＦｃドメインと同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号９と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、本発明に適したＦｃドメインは、Ｓ２４１Ｐ変異を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１０と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１０と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１０と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１０と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１０と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１０と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１０と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１１と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１１と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１１と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１１と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１１と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１２と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１２と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１２と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１２と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１２と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１２と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１３と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１３と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１３と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１３と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１３と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１３と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１３と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１４と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１４と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１４と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１４と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１４と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１４と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１４と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１５と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１５と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１５と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１５と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１５と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１５と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１６と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１６と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１６と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１６と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１６と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質は、配列番号１６と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００３０】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドとＦｃドメインの間にリンカーを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、３〜１００のアミノ酸を含むペプチドである。
【００３１】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＦｃＲＮと結合する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、Ｃ１エステラーゼ活性を阻害する。
【００３２】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＡＤＣＣ活性を低下させるまたは排除する変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＡＤＣＣ活性を低下させるまたは排除する１つまたは複数の変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＣＤＣ活性を低下させるまたは排除する変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＣＤＣ活性を低下させるまたは排除する１つまたは複数の変異を含む。
【００３３】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦｃγＲ結合を減少させるまたは排除する変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦｃγＲ結合を減少させるまたは排除する１つまたは複数の変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦｃγＲエフェクター機能を低下させるまたは排除する変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦｃγＲエフェクター機能を低下させるまたは排除する１つまたは複数の変異を含む。
【００３４】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｃ１ｑ結合を減少させるまたは排除する変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｃ１ｑ結合を減少させるまたは排除する１つまたは複数の変異を含む。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、Ｃ１ｑ結合を減少させるまたは排除する変異は、Ｆｃドメイン中にある。
【００３５】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、Ｃ１ｒ及び／またはＣ１ｓプロテアーゼ活性を、阻害及び／または不活性化する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、赤血球の溶解を阻害する。
【００３６】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、血漿由来ヒトＣ１阻害因子よりも長い半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも４日間の半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも５日間の半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも６日間の半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも７日間の半減期を有する。
【００３７】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、約１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、２日間、２．５日間、３日間、３．５日間、４日間、４．５日間、５日間、５．５日間、６日間、６．５日間、７日間、７．５日間、８日間、８．５日間、９日間、９．５日間、または１０日間の、あるいはそれより長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、０．５〜１０日間、１日間〜１０日間、１日間〜９日間、１日間〜８日間、１日間〜７日間、１日間〜６日間、１日間〜５日間、１日間〜４日間、１日間〜３日間、２日間〜１０日間、２日間〜９日間、２日間〜８日間、２日間〜７日間、２日間〜６日間、２日間〜５日間、２日間〜４日間、２日間〜３日間、２．５日間〜１０日間、２．５日間〜９日間、２．５日間〜８日間、２．５日間〜７日間、２．５日間〜６日間、２．５日間〜５日間、２．５日間〜４日間、３日間〜１０日間、３日間〜９日間、３日間〜８日間、３日間〜７日間、３日間〜６日間、３日間〜５日間、３日間〜４日間、３．５日間〜１０日間、３．５日間〜９日間、３．５日間〜８日間、３．５日間〜７日間、３．５日間〜６日間、３．５日間〜５日間、３．５日間〜４日間、４日間〜１０日間、４日間〜９日間、４日間〜８日間、４日間〜７日間、４日間〜６日間、４日間〜５日間、４．５日間〜１０日間、４．５日間〜９日間、４．５日間〜８日間、４．５日間〜７日間、４．５日間〜６日間、４．５日間〜５日間、５日間〜１０日間、５日間〜９日間、５日間〜８日間、５日間〜７日間、５日間〜６日間、５．５日間〜１０日間、５．５日間〜９日間、５．５日間〜８日間、５．５日間〜７日間、５．５日間〜６日間、６日間〜１０日間、７日間〜１０日間、８日間〜１０日間、９日間〜１０日間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。
【００３８】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、一価である。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体である。
【００３９】
１つの態様において、本発明は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１を有する全長ヒトＣ１阻害因子と少なくとも少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。施形態によっては、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２の全長ヒトＣ１阻害因子タンパク質と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４１】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、アルブミンは、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドのＮ末端と結合している。いくつかの実施形態において、アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの１つまたは複数のドメインを含む。いくつかの実施形態において、アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンのＤ３ドメインを含む。いくつかの実施形態において、アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンに由来する。いくつかの実施形態において、アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンである。
【００４２】
いくつかの実施形態において、本発明に適したアルブミンポリペプチドは、配列番号２０と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２０のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２０のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２０のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２０のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２０のヒトアルブミンポリペプチドと同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２０と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明に適したアルブミンポリペプチドは、配列番号１７と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７のヒトアルブミンポリペプチドと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７のヒトアルブミンポリペプチドと同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４４】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号１８と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１８と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１８と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１８と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１８と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１８と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４５】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号１９と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１９と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１９と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１９と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１９と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１９と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４６】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号２１と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２１と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２１と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２１と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２１と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２１と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４７】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号２２と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２２と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２２と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２２と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２２と同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号２２と比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４８】
いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２いずれか１つと少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２いずれか１つと少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２いずれか１つと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２いずれか１つと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２いずれか１つと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２いずれか１つと同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２いずれか１つと比較して１つまたは複数の切断、欠失、変異、または挿入を含む。
【００４９】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＦｃＲＮと結合する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、Ｃ１エステラーゼ活性を阻害する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、Ｃ１ｒ及び／またはＣ１ｓプロテアーゼ活性を阻害及び／または不活性化する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで赤血球の溶解を阻害する。
【００５０】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドとアルブミンポリペプチドの間にリンカーを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、３〜１００のアミノ酸を含むペプチドである。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列番号２７の配列を含む。
【００５１】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、アルブミンポリペプチドは、４６４Ｈｉｓ、５１０Ｈｉｓ、５３５Ｈｉｓ、及び／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される１つまたは複数の変異を含まない。
【００５２】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、血漿由来ヒトＣ１阻害因子より長い半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも４日間の半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも５日間の半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも６日間の半減期を有する。ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、少なくとも７日間の半減期を有する。
【００５３】
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態において、融合タンパク質は、約１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、２日間、２．５日間、３日間、３．５日間、４日間、４．５日間、５日間、５．５日間、６日間、６．５日間、７日間、７．５日間、８日間、８．５日間、９日間、９．５日間、または１０日間の、あるいはそれよりも長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、０．５〜１０日間、１日間〜１０日間、１日間〜９日間、１日間〜８日間、１日間〜７日間、１日間〜６日間、１日間〜５日間、１日間〜４日間、１日間〜３日間、２日間〜１０日間、２日間〜９日間、２日間〜８日間、２日間〜７日間、２日間〜６日間、２日間〜５日間、２日間〜４日間、２日間〜３日間、２．５日間〜１０日間、２．５日間〜９日間、２．５日間〜８日間、２．５日間〜７日間、２．５日間〜６日間、２．５日間〜５日間、２．５日間〜４日間、３日間〜１０日間、３日間〜９日間、３日間〜８日間、３日間〜７日間、３日間〜６日間、３日間〜５日間、３日間〜４日間、３．５日間〜１０日間、３．５日間〜９日間、３．５日間〜８日間、３．５日間〜７日間、３．５日間〜６日間、３．５日間〜５日間、３．５日間〜４日間、４日間〜１０日間、４日間〜９日間、４日間〜８日間、４日間〜７日間、４日間〜６日間、４日間〜５日間、４．５日間〜１０日間、４．５日間〜９日間、４．５日間〜８日間、４．５日間〜７日間、４．５日間〜６日間、４．５日間〜５日間、５日間〜１０日間、５日間〜９日間、５日間〜８日間、５日間〜７日間、５日間〜６日間、５．５日間〜１０日間、５．５日間〜９日間、５．５日間〜８日間、５．５日間〜７日間、５．５日間〜６日間、６日間〜１０日間、７日間〜１０日間、８日間〜１０日間、９日間〜１０日間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。
【００５４】
１つの態様において、本発明は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質をコードする核酸を提供する。別の態様において、本発明は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質をコードする核酸を提供する。
【００５５】
１つの態様において、本発明は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質をコードする核酸を含む細胞を提供する。別の態様において、本発明は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質をコードする核酸を含む細胞を提供する。
【００５６】
いくつかの実施形態において、細胞は、哺乳類細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳類細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態において、哺乳類細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のグリコシル化が修飾されるように改変されている。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のグリコシル化が、改変されていない同細胞と比べて、修飾されるように改変されている。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のグリコシル化が、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のグリコシル化が、改変されていない同細胞と比べて、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のシアリル化が修飾されるように改変されている。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のシアリル化が、改変されていない同細胞と比べて、修飾されるように改変されている。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のシアリル化が、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている。いくつかの実施形態において、細胞は、その細胞が発現するタンパク質のシアリル化が、改変されていない同細胞と比べて、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている。
【００５７】
１つの態様において、本発明は、融合タンパク質の製造方法を提供し、本方法は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質をコードする核酸を含む細胞を培養または栽培するステップを含む。１つの態様において、本発明は、融合タンパク質の製造方法を提供し、本方法は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質をコードする核酸を含む細胞を培養または栽培するステップを含む。
【００５８】
別の態様において、本発明は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質であって、グリコシル化が、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている細胞により発現及び産生される融合タンパク質を提供する。別の態様において、本発明は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質であって、シアリル化が、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている細胞により発現及び産生される融合タンパク質を提供する。別の態様において、本発明は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質であって、グリコシル化が、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている細胞により発現及び産生される融合タンパク質を提供する。別の態様において、本発明は、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質であって、シアリル化が、向上、改善、増加、及び／またはヒト化されるように改変されている細胞により発現及び産生される融合タンパク質を提供する。
【００５９】
別の態様において、本発明は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質、及び薬学上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。別の態様において、本発明は、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質、及び薬学上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００６０】
１つの態様において、本発明は、補体関連型障害の治療方法を提供し、本方法は、治療を必要とする対象に、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びＦｃドメインを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質、及び薬学上許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む。１つの態様において、本発明は、補体関連型障害の治療方法を提供し、本方法は、治療を必要とする対象に、本明細書中開示される、ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド及びアルブミンポリペプチドを含む融合タンパク質のうちいずれか１種の融合タンパク質、及び薬学上許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む。
【００６１】
いくつかの実施形態において、治療を必要とする対象は、補体関連型障害を患っている。いくつかの実施形態において、補体関連型障害は、遺伝性血管性浮腫、抗体関連型拒絶、視神経脊髄炎スペクトラム疾患、外傷性脳損傷、脊椎損傷、虚血性脳傷害、火傷、中毒性表皮壊死症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、脳卒中、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチーから選択される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
以下：
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド；及び
Ｆｃドメイン
を含む、融合タンパク質。
（項目２）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１を有する全長ヒトＣ１阻害因子と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目３）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目４）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１と比較して切り詰められている、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目５）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４に記載の融合タンパク質。
（項目６）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目４に記載の融合タンパク質。
（項目７）
前記Ｆｃドメインは、前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドのＮ末端と結合している、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目８）
前記Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインである、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目９）
前記Ｆｃドメインは、配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目８に記載の融合タンパク質。
（項目１０）
前記Ｆｃドメインは、Ｌ２３４Ａ及び／またはＬ２３５Ａ変異を含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目１１）
前記Ｆｃドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む、項目１０に記載の融合タンパク質。
（項目１２）
前記Ｆｃドメインは、前記融合タンパク質の半減期を延長する１つまたは複数の変異を含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目１３）
前記１つまたは複数の変異は、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、及び／またはＡｓｎ４３４に対応する１つまたは複数の位置から選択される、項目１２に記載の融合タンパク質。
（項目１４）
前記１つまたは複数の変異は、Ｈ４３３Ｋ及び／またはＮ４３４Ｆから選択される、項目１２に記載の融合タンパク質。
（項目１５）
前記Ｆｃドメインは、配列番号５〜８のいずれか１つと少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１２から１４のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目１６）
前記Ｆｃドメインは、配列番号５〜８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、項目１４に記載の融合タンパク質。
（項目１７）
前記Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ４のＦｃに由来する、項目１から７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目１８）
前記Ｆｃドメインは、配列番号９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１７に記載の融合タンパク質。
（項目１９）
前記Ｆｃドメインは、Ｓ２４１Ｐ変異を含む、項目１８に記載の融合タンパク質。
（項目２０）
前記Ｆｃドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、項目１９に記載の融合タンパク質。
（項目２１）
配列番号１１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目２２）
配列番号１２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目２３）
配列番号１３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目２４）
配列番号１４と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目２５）
配列番号１５と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目２６）
配列番号１６と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目２７）
配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、または配列番号１６から選択されるアミノ酸配列を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目２８）
前記Ｆｃドメインは、ＡＤＣＣ活性を低下させる、または排除する変異を含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目２９）
前記Ｆｃドメインは、ＣＤＣ活性を低下させる、または排除する変異を含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３０）
前記Ｆｃドメインは、ＦｃγＲ結合を低下させる、または排除する変異を含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３１）
前記Ｆｃドメインは、ＦｃγＲエフェクター機能を低下させる、または排除する変異を含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３２）
前記組換えヒトＣ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質は、Ｃ１ｑ結合を低下させる、または排除する変異を含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３３）
Ｃ１ｑ結合を低下させる、または排除する前記変異は、前記Ｆｃドメイン中にある、項目３２に記載の融合タンパク質。
（項目３４）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドと前記Ｆｃドメインの間にリンカーをさらに含む、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３５）
前記リンカーは、３〜１００のアミノ酸を含むペプチドである、項目３４に記載の融合タンパク質。
（項目３６）
前記融合タンパク質は、Ｃ１ｒ及び／またはＣ１ｓプロテアーゼ活性を阻害及び／または不活性化する、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３７）
前記融合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで赤血球の溶解を阻害する、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３８）
前記融合タンパク質は、血漿由来ヒトＣ１阻害因子よりも長い半減期を有する、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３９）
前記融合タンパク質は、少なくとも４日間の半減期を有する、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４０）
前記融合タンパク質は、少なくとも５日間の半減期を有する、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４１）
前記融合タンパク質は、少なくとも６日間の半減期を有する、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４２）
前記融合タンパク質は、少なくとも７日間の半減期を有する、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４３）
前記融合タンパク質は、一価である、先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４４）
前記融合タンパク質は、二量体である、項目１から４２のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４５）
以下：
ヒトＣ１阻害因子ポリペプチド；及び
アルブミンポリペプチド
を含む、融合タンパク質。
（項目４６）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１を有する全長ヒトＣ１阻害因子と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４５に記載の融合タンパク質。
（項目４７）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１を含む、項目４６に記載の融合タンパク質。
（項目４８）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号１と比較して切り詰められている、項目４５から４７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４９）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４８に記載の融合タンパク質。
（項目５０）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目４９に記載の融合タンパク質。
（項目５１）
前記アルブミンは、前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドのＮ末端と結合している、項目４５から５０のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目５２）
前記アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの１つまたは複数のドメインを含む、項目４５から５１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目５３）
前記アルブミンポリペプチドは、ヒト血清アルブミンのＤ３ドメインを含む、項目５２に記載の融合タンパク質。
（項目５４）
前記アルブミンポリペプチドは、配列番号２０と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目５３に記載の融合タンパク質。
（項目５５）
前記アルブミンポリペプチドは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、項目５４に記載の融合タンパク質。
（項目５６）
前記アルブミンポリペプチドは、配列番号１７と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４５から５２のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目５７）
前記アルブミンポリペプチドは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、項目５６に記載の融合タンパク質。
（項目５８）
配列番号１８と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４５から５７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目５９）
配列番号１９と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４５から５７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６０）
配列番号２１と少なくとも少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４５から５７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６１）
配列番号２２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目４５から５７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６２）
配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、または配列番号２２から選択されるアミノ酸配列を含む、項目４４から５６のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６３）
前記融合タンパク質は、ＦｃＲＮと結合する、項目４５から６２のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６４）
前記融合タンパク質は、Ｃ１エステラーゼ活性を阻害する、項目４５から６３のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６５）
前記融合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで赤血球の溶解を阻害する、項目４５から６４のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６６）
前記ヒトＣ１阻害因子ポリペプチドと前記アルブミンポリペプチドの間にリンカーをさらに含む、項目４５から６５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目６７）
前記リンカーは、３〜１００のアミノ酸を含むペプチドである、項目６６に記載の融合タンパク質。
（項目６８）
前記リンカーは、配列ＧＧＧを含む、項目６７に記載の融合タンパク質。
（項目６９）
前記リンカーは、配列番号２７の配列を含む、項目６７に記載の融合タンパク質。
（項目７０）
前記アルブミンポリペプチドは、４６４Ｈｉｓ、５１０Ｈｉｓ、５３５Ｈｉｓ、及びそれらの組み合わせからなる群より選択される１つまたは複数の変異を含まない、項目４５から６９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目７１）
前記融合タンパク質は、血漿由来ヒトＣ１阻害因子よりも長い半減期を有する、項目４５から７０のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目７２）
前記融合タンパク質は、少なくとも４日間の半減期を有する、項目４５から７１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目７３）
前記融合タンパク質は、少なくとも５日間の半減期を有する、項目４５から７１のいずれか１項に記載の組換えヒトＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質。
（項目７４）
前記融合タンパク質は、少なくとも６日間の半減期を有する、項目４５から７１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目７５）
前記融合タンパク質は、少なくとも７日間の半減期を有する、項目４５から７１のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目７６）
先行項目のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードする、核酸。
（項目７７）
項目７６に記載の核酸を含む、細胞。
（項目７８）
哺乳類細胞である、項目７７に記載の細胞。
（項目７９）
前記哺乳類細胞は、ヒト細胞である、項目７８に記載の細胞。
（項目８０）
前記哺乳類細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）である、項目７８に記載の細胞。
（項目８１）
前記細胞は、グリコシル化を修飾するように改変されている、項目７７から８０のいずれか１項に記載の細胞。
（項目８２）
前記細胞は、シアリル化を改善するように改変されている、項目８１に記載の細胞。
（項目８３）
融合タンパク質の製造方法であって、項目７７から８２のいずれか１項に記載の細胞を培養するステップを含む、前記方法。
（項目８４）
シアリル化を改善するように改変された細胞により産生される、項目１から７５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
（項目８５）
項目１から７５及び８４のいずれか１項に記載の融合タンパク質ならびに薬学上許容される担体を含む、医薬組成物。
（項目８６）
補体関連型障害の治療方法であって、治療を必要としている対象に、項目８５に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
（請求項８７）
前記補体関連型障害は、遺伝性血管性浮腫、抗体関連型拒絶、視神経脊髄炎スペクトラム疾患、外傷性脳損傷、脊椎損傷、虚血性脳傷害、火傷、中毒性表皮壊死症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、脳卒中、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチーから選択される、項目８６に記載の方法。
【００６２】
図面は、例示のみを目的とし、それらに限定することを目的としない。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１ＡはＣ１−ＩＮＨの模式図である。右から左に向かって、３つのドメインは、シグナルペプチド、Ｎ末端（Ｎ末端ドメインとも称する）、及びセルピンドメインである。Ｎ結合型グリカンは、先頭に菱形のついた長い垂直線として示されており、Ｏ結合型グリカンは、短い垂直線として示される。図１Ｂは、例示の二量体Ｃ１−ＩＮＨＦｃ融合タンパク質の模式図である。Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド部分は、長方形で示されており、Ｆｃ部分は、卵型区分で示されている。図１Ｃは例示の単量体Ｃ１−ＩＮＨＦｃ融合タンパク質の模式図である。
【図２】図２Ａ〜２Ｄは、例示のＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質の模式図である。図２Ａは、全長Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド（影をつけた長方形として示す）と融合したＬＡＬＡ変異を持つＩｇＧ１  Ｆｃを表す。図２Ｂは、切断型Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド（影をつけた長方形として示す）と融合したＬＡＬＡ変異を持つＩｇＧ１  Ｆｃを表す。図２Ｃは、全長Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド（影をつけた長方形として示す）と融合したＳ２４１Ｐ変異を持つＩｇＧ４  Ｆｃを表す。図２Ｄは、切断型Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド（影をつけた長方形として示す）と融合したＳ２４１Ｐ変異を持つＩｇＧ４  Ｆｃを表す。
【図３】全長Ｃ１−ＩＮＨヒトＦｃ（ｈＦｃ）ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質の例示のタンパク質Ａ精製の結果を示す。グラフは、精製プロセス中の融合タンパク質の捕捉及び溶出中のＵＶ２８０ｎｍ、ＵＶ２６０ｎｍ、濃度、及びｐＨ測定結果を時間の経過とともに示す。
【図４】以下の４つの例示のＦｃ融合構築物の精製中に収集されたタンパク質濃度及び全タンパク質のチャートである：全長（ＦＬ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質；切断型（Ｔｒ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質；全長（ＦＬ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ（ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ）融合タンパク質；切断型（Ｔｒ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ（ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ）融合タンパク質。
【図５】全長（ＦＬ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質；切断型（Ｔｒ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質；全長（ＦＬ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ（ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ）融合タンパク質；切断型（Ｔｒ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ（ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ）融合タンパク質の精製試料で検出されたエンドトキシンの量を示すチャートである。
【図６】ｈＦｃ  ＩｇＧ１−Ｃ１−ＩＮＨ融合物、ｈＦｃ  ＬＡＬＡ  ＩｇＧ１−Ｃ１−ＩＮＨ融合物、及びｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ−Ｃ１−ＩＮＨ融合物、組換えヒトＣ１−ＩＮＨ（ｒｈＣ１−ＩＮＨ）（１０８０細胞で発現させる）、ならびに陽性対照としてのＩｇＧ１  Ｆｃ−ヒトフォリスタチン（ｈＦｃ  ＩｇＧ１−ｈＦｓｔ−ＸＴＥＮ）融合物及び陰性対照としてのヒトフォリスタチン−Ｘｔｅｎ（ｈＦｓｔ−ＸＴＥＮ）融合物の例示Ｃ１ｑ結合ＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図７】例示の融合構築物のＦｃγＲ１への細胞外ドメインとの結合を測定するのに利用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ビアコア捕捉アプローチの模式図である。
【図８】例示エフェクターデッドＦｃ融合構築物：全長（ＦＬ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質；切断型（Ｔｒ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質；全長（ＦＬ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ（ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ）融合タンパク質；切断型（Ｔｒ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ（ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ）融合タンパク質のＳＰＲ分析の結果を示す。血漿由来Ｃ１−ＩＮＨを、陽性対照として含めた。
【図９】図９Ａ及び図９Ｂは、Ｃ１ｓによる比色測定用ペプチド切断の阻害についてエフェクターデッド構築物の能力を測定するアッセイの結果を示す。図９Ａは、例示エフェクターデッド構築物のそれぞれについて質量分析で計算した分子量を用いて試験した、構築物のそれぞれについての力価測定曲線を示す。図９Ｂは、例示エフェクターデッド構築物のそれぞれについてゲルで見積もった分子量を用いて試験した、構築物のそれぞれについての力価測定曲線を示す。
【図１０】図１０Ａは、補体代替経路（ＡＰＣ）の活性化を測定する溶血アッセイの図式概観を示す。図１０Ｂは、補体の古典経路の活性化を測定する溶血アッセイの図式概観を示す。
【図１１】図１１Ａ、図１１Ｂ、及び図１１Ｃは、補体の代替経路の活性化を測定する溶血アッセイの結果を示す。図１１Ａは、切断型（Ｔｒ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質、全長（ＦＬ）Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ融合タンパク質、血漿由来Ｃ１−ＩＮＨ製剤、及びＣａｌＢｉｏｃｈｅｍの市販の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨの比較で結果を示す。吸光度の読み取り値を、試験したタンパク質の濃度での対照に対するパーセンテージとしてプロットする。図１１Ｂは、各試料について集められた生データのプロットを示す。図１１Ｃは、対照で行ったアッセイのプロットを示す。
【図１２】血漿由来Ｃ１阻害因子及びＨＴ１０８０発現組換えＣ１−ＩＮＨの２種の製剤と比較した、エフェクターデッド融合構築物のウサギＰＫ試験の例示の結果を示す。血漿由来Ｃ１−ＩＮＨのＩＶ投与は、単相性血清中濃度時間特性を示す。
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｆは、生成した例示のアルブミン融合構築物の模式図である。図１３Ａは、Ｃ１−ＩＮＨと融合したヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の模式図である。図１３Ｂは、ＧＧＧリンカーを介してＣ１−ＩＮＨと連結されたＨＳＡの模式図である。図１３Ｃは、（ＧＧＧＧＳ）２リンカーを介してＣ１−ＩＮＨと連結されたＨＳＡの模式図である。図１３Ｄは、Ｃ１−ＩＮＨと融合したＨＳＡのＤ３ドメインの模式図である。図１３Ｅは、ＧＧＧリンカーを介してＣ１−ＩＮＨと連結されたＨＳＡのＤ３ドメインの模式図である。図１３Ｆは、（ＧＧＧＧＳ）２リンカーを介してＣ１−ＩＮＨと連結されたＨＳＡのＤ３ドメインの模式図である。
【図１４】Ｃ１ｓによる比色測定用ペプチド切断の阻害について、いくつかの例示アルブミンＣ１−ＩＮＨ融合構築物の能力を測定するアッセイの結果を示し、比較のため血漿由来Ｃ１−ＩＮＨ及びＨＴ１０８０発現組換えＣ１−ＩＮＨが含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
定義
本発明をより理解しやすくする目的で、ある特定の用語を最初に以下で定義する。以下の用語及び他の用語についてのさらなる定義は、明細書全体を通じて記載される。
【００６５】
動物：本明細書中使用される場合、「動物」という用語は、動物界の任意の成員を示す。いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発達段階にあるヒトを示す。いくつかの実施形態において、「動物」は、任意の発達段階にある非ヒト動物を示す。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳類である（例えば、齧歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、及び／またはブタ）。いくつかの実施形態において、動物として、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫類、及び／または蠕虫が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、遺伝子組換え動物、遺伝子操作された動物、及び／またはクローン体の場合がある。
【００６６】
およそまたは約：本出願中使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、同等なものとして使用される。本出願中使用される数字はどれでも、約／およその有無に関わらず、関連分野の当業者により認められるあらゆる通常のゆらぎを包含するものとする。本明細書中使用される場合、「およそ」または「約」という用語は、注目対象の１つまたは複数の数値に適用される場合、記載される参照値と同様である値を示す。ある特定の実施形態において、「およそ」または「約」という用語は、特に記載がない限り、またはいずれにしろ文脈から明らかでない限り（そのような値が、可能な値の１００％を超える場合を除く）、記載される参照値のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以内に含まれる範囲の値を示す。
【００６７】
生物学的利用度：本明細書中使用される場合、「生物学的利用度」という用語は、概して、投与された用量のうち対象の血流に到達するパーセンテージを示す。
【００６８】
生物学的に活性な：本明細書中使用される場合、「生物学的に活性な」という表現は、生命系、特に生命体において活性を有する任意の作用剤の特性を示す。例えば、生命体に投与した場合に、その生命体に生物学的効果をもたらす作用剤は、生物学的に活性であると見なされる。ペプチドが生物学的に活性である特定の実施形態において、そのペプチドの少なくとも１つの生物活性を共有するそのペプチドの一部分は、大抵、「生物学的に活性な」部分と称される。
【００６９】
担体または希釈剤：本明細書中使用される場合、「担体」及び「希釈剤」という用語は、医薬配合物の製造に有用な薬学上許容される（例えば、ヒトへの投与に関して安全かつ無毒である）担体または希釈物質を示す。希釈剤の例として、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンガー溶液、またはブドウ糖溶液が挙げられる。
【００７０】
Ｃ１阻害因子またはＣ１エステラーゼ阻害因子またはＣ１−ＩＮＨ：本明細書中使用される場合、「Ｃ１阻害因子」または「Ｃ１エステラーゼ阻害因子」または「Ｃ１−ＩＮＨ」という用語は、全て同義で使用することができ、特に記載がない限り、任意の、野生型、または実質的にＣ１−ＩＮＨ生物活性を保持する修飾型Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド（例えば、アミノ酸変異、欠失、挿入、及び／または融合タンパク質を持つＣ１−ＩＮＨタンパク質）を示す。Ｃ１−ＩＮＨは、組換え技術により細胞で発現させることができる。ある特定の実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨは、哺乳類細胞、好ましくはＣＨＯ細胞またはヒト細胞で発現する。
【００７１】
機能的等価物または機能的誘導体：本明細書中使用される場合、「機能的等価物」または「機能的誘導体」という用語は、アミノ酸配列の機能的誘導体の文脈では、元来の配列のものと実質的に同様な生物活性（機能的または構造的いずれか）を保持する分子を表す。機能的誘導体または機能的等価物は、天然の誘導体の場合もあり、または合成で製造される。機能的誘導体の例として、１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠失、または付加を有するが、ただしタンパク質の生物活性は保存されている、アミノ酸配列が挙げられる。置換アミノ酸は、望ましくは、置換されるアミノ酸のものと同様な化学物理性質を有する。望ましい同様な化学物理性質として、電荷、嵩高さ、疎水性、親水性などの類似性が挙げられる。
【００７２】
融合タンパク質：本明細書中使用される場合、「融合タンパク質」または「キメラタンパク質」という用語は、２種以上の元来は別々のタンパク質、またはそれらの一部分を連結することにより作成されたタンパク質を示す。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、各タンパク質の間に存在することになる。
【００７３】
半減期：本明細書中使用される場合、「半減期」という用語は、タンパク質濃度または活性などの量が、ある期間の初めに測定されたその量の値の半分に落ちるのに要する時間である。
【００７４】
遺伝性血管性浮腫またはＨＡＥ：本明細書中使用される場合、「遺伝性血管性浮腫」または「ＨＡＥ」という用語は、予測不能かつ再発性の炎症性発作を特徴とする血液障害を示す。ＨＡＥは、典型的には、Ｃ１−ＩＮＨ欠乏と関連し、この欠乏は、低レベルのＣ１−ＩＮＨまたは活性が損なわれたもしくは低下したＣ１−ＩＮＨの結果である場合がある。症状として、顔面、四肢、生殖器、胃腸管、及び上気道など、身体のあらゆる部位で起こり得る腫脹が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
改善する、増加する、または減少する：本明細書中使用される場合、「改善する」、「増加する」、または「減少する」という用語、あるいは文法上等価な語は、ベースライン測定、例えば同一個体での本明細書中記載される治療の開始前の測定、または本明細書中記載される治療を行わない対照となる対象（または複数の対照となる対象）での測定に対する相対的な値を示す。「対照となる対象」とは、治療される対象と同じ型の疾患を患っており、治療される対象とおよそ同年齢である、対象である。
【００７６】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：本明細書中使用される場合、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」という用語は、多細胞生命体内ではなく、人工環境、例えば、試験管または反応容器中、細胞培養物中などで起こる事象を示す。
【００７７】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ：本明細書中使用される場合、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」という用語は、多細胞生命体内、例えばヒト及び非ヒト動物内などで起こる事象を示す。細胞系システムの文脈では、この用語は、生細胞内（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏシステムとは反対に）で起こる事象を示すのに使用される場合がある。
【００７８】
リンカー：本明細書中使用される場合、「リンカー」という用語は、融合タンパク質では、天然タンパク質の特定位置で出現するもの以外のアミノ酸配列を示し、概して、柔軟であるように、または２つのタンパク質部分の間に、構造、例えばα螺旋を挿入するように設計される。リンカーは、スペーサーとも称する。リンカーまたはスペーサーは、典型的には、それ自身に生物学的機能を有さない。
【００７９】
ポリペプチド：「ポリペプチド」という用語は、本明細書中使用される場合、ペプチド結合を介して互いに連結したアミノ酸の連続鎖を示す。この用語は、任意の長さのアミノ酸鎖を示すのに使用されるが、当業者には理解されるように、この用語は長さのある鎖に限定されず、ペプチド結合を介して互いに連結した２つのアミノ酸を含む最小限の鎖も示すことができる。当業者に既知であるとおり、ポリペプチドは、プロセシング及び／または修飾される場合がある。本明細書中使用される場合、「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は同義で使用される。
【００８０】
予防する：本明細書中使用される場合、「予防する」または「予防」という用語は、疾患、障害、及び／または症状の発生に関連して使用される場合、疾患、障害、及び／または症状の発症の危険性を低下させることを示す。「危険性」の定義を参照。
【００８１】
タンパク質：「タンパク質」という用語は、本明細書中使用される場合、孤立単位として機能する１つまたは複数のポリペプチドを示す。単独のポリペプチドが孤立した機能性単位であり、孤立した機能性単位を形成する目的で他のポリペプチドとの永続的または一時的な物理的会合を必要としないならば、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は同義で用いられる場合がある。孤立した機能性単位が、互いに物理的に会合した複数のポリペプチドで構成されるならば、「タンパク質」という用語は、物理的にカップリングし、孤立した機能性単位として一緒になって機能する複数ポリペプチドを示す。
【００８２】
危険性：文脈から理解されるとおり、疾患、障害、及び／または症状の「危険性」は、特定の個体が疾患、障害、及び／または症状（例えば、筋ジストロフィー）を発症する可能性を含む。いくつかの実施形態において、危険性は、パーセンテージで表される。いくつかの実施形態において、危険性は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０から上限１００％までである。いくつかの実施形態において、危険性は、参照試料または参照試料群に関連する危険性にと比較した危険性として表される。いくつかの実施形態において、参照試料または参照試料群は、疾患、障害、症状、及び／または事象（例えば、筋ジストロフィー）の既知の危険性を有する。いくつかの実施形態において、参照試料または参照試料群は、特定の個体に匹敵する個体に由来する。いくつかの実施形態において、相対危険性は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上である。
【００８３】
対象：本明細書中使用される場合、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、または霊長類）を示す。ヒトは、出生前及び出生後形を含む。多くの実施形態において、対象はヒトである。対象は、患者であることが可能であり、患者は、疾患の診断または治療のため医療提供者を訪れるヒトを示す。「対象」という用語は、本明細書中、「個体」または「患者」と同義で使用される。対象は、疾患または障害を患っていることもでき、または疾患または障害になりやすいが、その疾患または障害の症状を表していてもいなくてもよい。
【００８４】
実質的に：本明細書中使用される場合、「実質的に」という用語は、注目対象の特性または性質の全部または全部に近い範囲または度合いを表す定量的状態を示す。生物学分野の当業者なら理解するように、生物学的及び化学的現象は、皆無ではないにせよ、完了する及び／または完全の域に到達する、あるいは完全にそうなるまたは全くそうならないという結果は稀である。したがって、「実質的に」という用語は、本明細書中、多くの生物学的及び化学的現象に固有の潜在的な完全性の欠如を捉えるために使用される。
【００８５】
実質的相同性：「実質的相同性」という表現は、本明細書中、アミノ酸配列または核酸配列間の比較を示すのに使用される。当業者には理解されるように、２つの配列が対応する位置に相同な残基を有するならば、それらは一般に「実質的に相同」であると見なされる。相同な残基は、同一残基の場合がある。あるいは、相同な残基は、同一残基ではないが、適切に類似した構造及び／または機能特性を持つ場合がある。例えば、当業者には周知のとおり、ある特定のアミノ酸は、大抵、「疎水性」または「親水性」アミノ酸として、及び／または「極性」または「非極性」の側鎖を持つことで分類される。１つのアミノ酸を同じ型の別のアミノ酸で置換することは、「相同性」置換と見なされる場合が多い。
【００８６】
当該分野で周知のとおり、アミノ酸配列または核酸配列は、様々なアルゴリズムのいずれかを用いて比較することができ、そのようなアルゴリズムとして、市販のコンピュータープログラムで入手可能なもの、例えば、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴが挙げられる。そのようなプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂａｓｉｃ
ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１５（３）：４０３−４１０，  １９９０；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ
ａｌ．，  ‘‘Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：  ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ’’，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２，  １９９７；  Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｗｉｌｅｙ，  １９９８；及びＭｉｓｅｎｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  （ｅｄｓ．），  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １３２），  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９９に記載されている。上記のプログラムは、相同な配列の特定だけでなく、大抵、相同性の度合いの表示も提供する。いくつかの実施形態において、２つの配列は、それらの対応する残基のうち少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上が、関連する一続きの残基の並びにわたって相同であるならば、実質的に相同であると見なされる。いくつかの実施形態において、関連する一続きの並びは、完全配列である。いくつかの実施形態において、関連する一続きの並びは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、またはそれ以上の残基である。
【００８７】
実質的同一性：「実質的同一性」という語句は、本明細書中、アミノ酸配列または核酸配列間の比較を示すのに使用される。当業者には理解されるように、２つの配列が対応する位置に同一の残基を有するならば、それらは一般に「実質的に同一」であると見なされる。当該分野で周知のとおり、アミノ酸配列または核酸配列は、様々なアルゴリズムのいずれかを用いて比較することができ、そのようなアルゴリズムとして、市販のコンピュータープログラムで入手可能なもの、例えば、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴが挙げられる。そのようなプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１５（３）：４０３−４１０，  １９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ
ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２，  １９９７；  Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｗｉｌｅｙ，  １９９８；及びＭｉｓｅｎｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  （ｅｄｓ．），  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １３２），  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９９に記載されている。上記のプログラムは、同一配列の同定だけでなく、大抵、同一性の度合いの表示も提供する。いくつかの実施形態において、２つの配列は、それらの対応する残基のうち少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上が、関連する一続きの残基の並びにわたって同一であるならば、実質的に同一であると見なされる。いくつかの実施形態において、関連する一続きの並びは、完全配列である。いくつかの実施形態において、関連する一続きの並びは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、またはそれ以上の残基である。
【００８８】
患っている：疾患、障害、及び／または症状を「患っている」個体は、その疾患、障害、及び／または症状であると診断されている、またはその疾患、障害、及び／または症状の１つまたは複数の症状を示す。
【００８９】
なりやすい：疾患、障害、及び／または症状に「なりやすい」個体は、疾患、障害、及び／または症状であるとまだ診断されていない。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または症状になりやすい個体は、その疾患、障害、及び／または症状の症状を表していない場合がある。いくつかの実施形態において、疾患、障害、症状、または事象（例えば、ＤＭＤ）になりやすい個体は、以下の１つまたは複数を特徴とし得る：（１）疾患、障害、及び／または症状の発症と関連する遺伝子変異；（２）疾患、障害、及び／または症状の発症と関連する遺伝子多型；（３）疾患、障害、及び／または症状と関連するタンパク質の発現及び／または活性の上昇及び／または低下；（４）疾患、障害、症状、及び／または事象の発症と関連する習慣及び／または生活様式（５）移植を受けた、受ける予定である、または必要としている。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または症状になりやすい個体は、疾患、障害、及び／または症状を発症することになる。いくつかの実施形態において、疾患、障害、及び／または症状になりやすい個体は、疾患、障害、及び／または症状を発症しないことになる。
【００９０】
治療上有効量：本明細書中使用される場合、治療薬の「治療上有効量」という用語は、疾患、障害、及び／または症状を患っている、またはそれらになりやすい対象に投与した場合に、疾患、障害、及び／または症状の症状（複数可）を、治療する、診断する、予防する、及び／またはその発生を遅らせるのに十分な量を意味する。当業者には理解されるように、治療上有効量は、典型的には、少なくとも１つの単位用量を含む投薬レジメンを介して投与される。
【００９１】
治療する：本明細書中使用される場合、「治療する」、「治療」、または「治療している」という用語は、特定の疾患、障害、及び／または症状の症状または特徴の１つまたは複数を、部分的または完全に、軽減する、寛解させる、緩和する、阻害する、予防する、その発生を遅らせる、その重篤度を低下させる、及び／またはその発生率を低下させるために用いられる任意の方法を示す。治療は、疾患に関連する病理の発生の危険性を低下させる目的で、疾患の徴候を表していない、及び／または疾患の初期徴候のみを表す対象に投与される場合がある
【００９２】
ある特定の実施形態の詳細な説明
本発明は、特に、タンパク質療法としてのＣ１−ＩＮＨに基づいた、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）をはじめとする補体関連型障害を治療する方法及び組成物を提供する。
【００９３】
融合の目的は、半減期の延長である。その結果、投薬頻度が低下し、予防効果が上昇する。
【００９４】
本発明の様々な態様を、以下の節で詳細に説明する。節の使用は、本発明を制限することを意味しない。各節は、本発明のどの態様にも適用することができる。本出願において、「または」の使用は、特に記載がない限り、「及び／または」を意味する。本明細書中記載される当該分野の全ての開示は、そのまま全体が参照により援用される。
【００９５】
Ｃ１−ＩＮＨ
ヒトＣ１−ＩＮＨは、広範囲に渡る阻害的及び非阻害的な生物学的活性を持つ重要な抗炎症性血漿タンパク質である。配列相同性、そのＣ末端ドメインの構造、及びプロテアーゼ阻害の機構により、ヒトＣ１−ＩＮＨは、血漿プロテアーゼ阻害因子の最大クラスであるセルピンスーパーファミリーに属する。このスーパーファミリーは、抗トロンビン、α１−プロテイナーゼ阻害因子、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子、及び多種多様な生理学的系を調節する多くの他の構造上類似したタンパク質も含む。Ｃ１−ＩＮＨは、補体系、キニン生成の接触系、及び固有凝固経路におけるプロテアーゼの阻害因子である。Ｃａｉ，  Ｓ．  ＆  Ｄａｖｉｓ，  Ａ．  Ｅ．，  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ１  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  Ｓｅｌｅｃｔｉｎｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ−Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｄｈｅｓｉｏｎ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  １７１：４７８６−４７９１  （２００３）。具体的には、Ｃ１−ＩＮＨは、補体系のＣ１ｒ及びＣ１ｓを阻害することが示されている。Ｃ１−ＩＮＨは、凝固第ＸＩ因子及び凝固第ＸＩＩ因子、ならびにカリクレイン及び組織型プラスミノーゲン活性化因子及びプラスミンをはじめとする凝固及び線維素溶解系の他のセリンプロテアーゼの主要レギュレーターでもある。
【００９６】
Ｃ１−ＩＮＨの血漿中含有量の低さまたはその機能不全は、補体カスケード及び接触血漿カスケード両方の活性化をもたらし、同じく他の系にも影響を及ぼす場合がある。Ｃ１−ＩＮＨ血漿中含有量が５５μｇ／ｍＬ（正常値の約２５％）未満のレベルに低下すると、Ｃ１の自発的活性化が誘導されることが示されている。
【００９７】
Ｃ１−ＩＮＨの構造を模式的に表したものを、図１Ａに示す。シグナルペプチド、Ｎ末端ドメイン、及びセルピンドメインが示されている。Ｃ１−ＩＮＨは、２２アミノ酸シグナルペプチドは、分泌に必要であり、Ｃ１−ＩＮＨタンパク質の残部から切断される。Ｃ１−ＩＮＨは、２つのドメインを有する：３６５のアミノ酸を有するＣ末端ドメイン、これは、典型的なセルピンドメインである、及び１１３のアミノ酸を有するＮ末端ドメインである。タンパク質は、ドメイン間を接続する２つのジスルフィド架橋により安定化されている。これらのジスルフィド架橋は、Ｎ末端ドメインのＣｙｓ１０１とＣ末端（セルピン）ドメインのＣｙｓ４０６が形成するジスルフィド結合及びＮ末端ドメインのＣｙｓ１０８とＣ末端ドメインのＣｙｓ１８３が形成するジスルフィド結合により形成される。セルピンドメインは、Ｃ１−ＩＮＨのプロテアーゼ活性を担っている。Ｐ１−Ｐ１’は、Ａｒｇ４４４−Ｔｈｒ４４５被切断結合を表す。
【００９８】
グリコシル化タンパク質の重量の２６％超は、炭水化物である。グリカンは、ヒトＣ１−ＩＮＨ全体に不均等に分布している。Ｎ末端は、重度にグリコシル化されており、３つのＮ結合型（菱形の先頭を持つ長い垂直線で示す）及び少なくとも７つのＯ結合型（短い垂直線で示す）炭水化物基を有する。３つのＮ結合型グリカンは、セルピンドメインのアスパラギン残基、Ａｓｎ２１６、Ａｓｎ２３１、及びＡｓｎ３３０に結合している（菱形の先頭を持つ長い垂直線で示す）。例外的に長く重度にグリコシル化されたＮ末端ドメインの機能的役割は依然として不明であるものの、これは、タンパク質の構造的安定性、認識、エンドトキシン及びセレクチンに対する親和性、ならびにクリアランスに必須である可能性がある。炭水化物部分の固有不均一性は、全Ｃ１−ＩＮＨの不均一性に大きく寄与し、血漿由来Ｃ１−ＩＮＨの性質を模倣する組換えＣ１−ＩＮＨの製造がなぜ困難であるかという理由の１つになっている。
【００９９】
本明細書中使用される場合、本発明に適したＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、任意の野生型及び実質的にＣ１−ＩＮＨ生物活性を保持する修飾型Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド（例えば、アミノ酸の変異、欠失、切断、及び／または挿入を有するＣ１−ＩＮＨタンパク質）を含む。典型的には、Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、遺伝子組換え技術を用いて製造される。
【０１００】
典型的には、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、約１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、２日間、２．５日間、３日間、３．５日間、４日間、４．５日間、５日間、５．５日間、６日間、６．５日間、７日間、７．５日間、８日間、８．５日間、９日間、９．５日間、または１０日間の、あるいはそれより長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、０．５〜１０日間、１日間〜１０日間、１日間〜９日間、１日間〜８日間、１日間〜７日間、１日間〜６日間、１日間〜５日間、１日間〜４日間、１日間〜３日間、２日間〜１０日間、２日間〜９日間、２日間〜８日間、２日間〜７日間、２日間〜６日間、２日間〜５日間、２日間〜４日間、２日間〜３日間、２．５日間〜１０日間、２．５日間〜９日間、２．５日間〜８日間、２．５日間〜７日間、２．５日間〜６日間、２．５日間〜５日間、２．５日間〜４日間、３日間〜１０日間、３日間〜９日間、３日間〜８日間、３日間〜７日間、３日間〜６日間、３日間〜５日間、３日間〜４日間、３．５日間〜１０日間、３．５日間〜９日間、３．５日間〜８日間、３．５日間〜７日間、３．５日間〜６日間、３．５日間〜５日間、３．５日間〜４日間、４日間〜１０日間、４日間〜９日間、４日間〜８日間、４日間〜７日間、４日間〜６日間、４日間〜５日間、４．５日間〜１０日間、４．５日間〜９日間、４．５日間〜８日間、４．５日間〜７日間、４．５日間〜６日間、４．５日間〜５日間、５日間〜１０日間、５日間〜９日間、５日間〜８日間、５日間〜７日間、５日間〜６日間、５．５日間〜１０日間、５．５日間〜９日間、５．５日間〜８日間、５．５日間〜７日間、５．５日間〜６日間、６日間〜１０日間、７日間〜１０日間、８日間〜１０日間、９日間〜１０日間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。
【０１０１】
典型的には、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、約４日間、４．５日間、５日間、５．５日間、６日間、６．５日間、７日間、７．５日間、８日間、８．５日間、９日間、９．５日間、または１０日間の、あるいはそれより長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、４日間〜９日間、４日間〜８日間、４日間〜７日間、４日間〜６日間、４日間〜５日間、４．５日間〜１０日間、４．５日間〜９日間、４．５日間〜８日間、４．５日間〜７日間、４．５日間〜６日間、４．５日間〜５日間、５日間〜１０日間、５日間〜９日間、５日間〜８日間、５日間〜７日間、５日間〜６日間、５．５日間〜１０日間、５．５日間〜９日間、５．５日間〜８日間、５．５日間〜７日間、５．５日間〜６日間、６日間〜１０日間、７日間〜１０日間、８日間〜１０日間、９日間〜１０日間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、野生型ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質（アミノ酸１〜４７８）（アミノ酸１〜９７を角括弧で括ってある）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
［ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１）。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、野生型ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質（アミノ酸９８−４７８）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２）。
【０１０４】
本明細書中開示されるとおり、配列番号１は、ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質の標準アミノ酸配列を表す。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドは、配列番号２などの切断型Ｃ１−ＩＮＨの場合がある。いくつかの実施形態において、適切な組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、野生型または天然のタンパク質の相同体または類似体の場合がある。例えば、ヒト野生型または天然のＣ１−ＩＮＨポリペプチドの相同体または類似体は、実質的にＣ１−ＩＮＨタンパク質活性を保持しながらも、野生型または天然のＣ１−ＩＮＨタンパク質（例えば、配列番号１）と比較して、１つまたは複数のアミノ酸またはドメインの置換、欠失、及び／または挿入を有する場合がある。すなわち、いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質（配列番号１）と実質的に相同である。いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、配列番号１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上に相同であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質（配列番号１）と実質的に同一である。いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、配列番号１と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上に同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１０５】
ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質の相同体または類似体は、当業者に既知のポリペプチド配列変更方法、例えばそのような方法をまとめた参照文献で見られるものなどに従って調製することができる。当業者には理解されるように、２つの配列が対応する位置に相同な残基を有するならば、それらは一般に「実質的に相同」であると見なされる。相同な残基は、同一残基の場合がある。あるいは、相同な残基は、同一残基ではないが、適切に類似した構造及び／または機能特性を持つ場合がある。例えば、当業者には周知のとおり、ある特定のアミノ酸は、大抵、「疎水性」または「親水性」アミノ酸として、及び／または「極性」または「非極性」の側鎖を持つことで分類される。１つのアミノ酸を同じ型の別のアミノ酸で置換することは、「相同性」置換と見なされる場合が多い。いくつかの実施形態において、アミノ酸の保存的置換には、以下の群内のアミノ酸同士で行われる置換が含まれる：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；及び（ｇ）Ｅ、Ｄ。いくつかの実施形態において、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換が行われるタンパク質の相対的な電荷または大きさ特性を変更しないアミノ酸置換を示す。
【０１０６】
当該分野で周知のとおり、アミノ酸配列または核酸配列は、様々なアルゴリズムのいずれかを用いて比較することができ、そのようなアルゴリズムとして、市販のコンピュータープログラムで入手可能なもの、例えば、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴが挙げられる。そのようなプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂａｓｉｃ
ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２１５（３）：４０３−４１０，  １９９０；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  ｅｔ
ａｌ．，  ‘‘Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：  ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ’’，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２，  １９９７；  Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｗｉｌｅｙ，  １９９８；及びＭｉｓｅｎｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  （ｅｄｓ．），  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  （Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １３２），  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９９に記載されている。上記のプログラムは、相同配列の同定だけでなく、典型的には、相同性の度合いの表示も提供する。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、野生型ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質と比較して、１つまたは複数のアミノ酸欠失、挿入、または置換を有する。例えば、適切な組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、配列番号２のポリペプチドなどのように切り詰められている場合がある。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、切断型野生型ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質（アミノ酸９８−４７８）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一のアミノ酸配列を含む：
ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２）。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドは、配列番号２などの、実質的にＣ１−ＩＮＨタンパク質活性は保持したままの切断型Ｃ１−ＩＮＨの場合がある。すなわち、いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質（配列番号２）と実質的に相同である。いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、配列番号２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の相同性があるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、ヒトＣ１−ＩＮＨタンパク質（配列番号２）と実質的に同一である。いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドは、配列番号２と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性があるアミノ酸配列を有する。
【０１１０】
本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、Ｃ１−ＩＮＨドメインと別のドメインまたは部分との融合タンパク質であり、別のドメインまたは部分は、典型的には、Ｃ１−ＩＮＨの治療効果を、例えば、Ｃ１−ＩＮＨタンパク質の半減期、安定性、効力、及び／または送達を向上または増加させることにより、あるいは免疫原性、クリアランス、もしくは毒性を低下または排除することにより、促進することができるものである。Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質に適したそのようなドメインまたは部分として、Ｆｃドメイン及びアルブミンドメインが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１１】
Ｆｃドメイン
いくつかの実施形態において、適切なＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、ＦｃＲｎ受容体と結合するＦｃドメインまたはその一部分を含む。限定ではなく例として、適切なＦｃドメインは、ＩｇＧなどの免疫グロブリンサブクラスに由来する場合がある。いくつかの実施形態において、適切なＦｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来する。いくつかの実施形態において、適切なＦｃドメインは、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥに由来する。特に適切なＦｃドメインとして、ヒト抗体またはヒト化抗体に由来するものが挙げられる。いくつかの実施形態において、適切なＦｃドメインは、修飾されたＦｃ部分、例えば修飾されたヒトＦｃ部分などである。
【０１１２】
Ａ．ＩｇＧ１
Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質は、図１Ａに示すとおり、二量体として存在する場合がある。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、野生型ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３）。
【０１１４】
ｉ．ＬＡＬＡ
野生型ＩｇＧ１は、補体カスケード活性化のレベルが低く、補体関連型障害を患っている患者にとってはいずれにしろ望ましくない場合がある。補体活性化及び抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性を低下させまたは排除するエフェクターデッド構築物のためのＩｇＧ選択が重要になる場合がある。適切なＦｃドメインとして、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの変異を持つＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）が挙げられる。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、ＬＡＬＡ変異を有するヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（変異した残基を角括弧で括ってある）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ［ＡＡ］ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４）。
【０１１６】
ｉｉ．ＮＨａｎｃｅ
ＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体の結合を改善することで血清中半減期の延長をもたらすことも企図されている。したがって、いくつかの実施形態において、適切なＦｃドメインは、ＦｃＲｎとの結合の改善を招く１つまたは複数のアミノ酸変異を有する。ＦｃＲｎとの結合の改善をもたらすＦｃドメイン内の様々な変異が、当該分野で既知であり、本発明の実施に適応的ル。いくつかの実施形態において、適切なＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１のＴｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｕ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、及び／またはＡｓｎ４３４に対応する１つまたは複数の位置で１つまたは複数の変異を有する。
【０１１７】
例えば、適切なＦｃドメインは、Ｈ４３３Ｋ（Ｈｉｓ４３３Ｌｙｓ）及び／またはＮ４３４Ｆ（Ａｓｎ４３４Ｐｈｅ）の変異を有する場合がある。限定ではなく例として、適切なＦｃドメインは、Ｈ４３３Ｋ（Ｈｉｓ４３３Ｌｙｓ）及びＮ４３４Ｆ（Ａｓｎ４３４Ｐｈｅ）（Ｎｈａｎｃｅ）という変異を有する場合がある。Ｆｃドメインに入れることが可能なさらなるアミノ酸置換として、例えば、米国特許第６，２７７，３７５号；同第８，０１２，４７６号；及び同第８，１６３，８８１号に記載されるものが挙げられ、これらの特許は本明細書中参照として援用される。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、Ｎｈａｎｃｅ変異を有するヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（変異した残基を角括弧で括ってある）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬ［ＫＦ］ＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５）。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、ＬＡＬＡ及びＮｈａｎｃｅ変異の両方を有するヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（変異した残基を角括弧で括ってある）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ［ＡＡ］ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬ［ＫＦ］ＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６）。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、シグナルペプチドを持ちかつＮｈａｎｃｅ変異を有するヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（シグナルペプチド及び変異した残基を角括弧で括ってある）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ］ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬ［ＫＦ］ＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７）。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、シグナルペプチドを持ちかつＬＡＬＡ及びＮｈａｎｃｅ変異の両方を有するヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（変異した残基を角括弧で括ってある）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ］ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ［ＡＡ］ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬ［ＫＦ］ＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８）。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、野生型ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインと少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９）。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、本発明に適切なＦｃドメインは、Ｓ２４１Ｐ変異を有するヒトＩｇＧ４のＦｃドメイン（変異した残基を角括弧で括ってある）と少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰ［Ｐ］ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１０）。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、適切なＦｃドメインは、配列番号３、配列番号４、または配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０と、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の相同性または同一性を持つアミノ酸配列を含む。
【０１２５】
Ｂ．ＩｇＧ４
いくつかの実施形態において、エフェクターデッドＦｃ融合タンパク質のためのＩｇＧ４  ＩｇＧ選択が、ＨＡＥにおいて重要である（補体活性化及びＡＤＣＣを排除する）。具体的には、ＩｇＧ４は、補体活性化が野生型ＩｇＧ１よりも低いことが報告されている。天然のＩｇＧ４の発現は、様々な大きさの構築物の混合物をもたらす。それに従い、先行技術に基づいて、ＩｇＧ４のＳ２４１Ｐ変異体が示す二量体構造の向上した安定性及び維持を理由に、本計画では、ＩｇＧ４のＳ２４１Ｐを選択した。
【０１２６】
本発明によるヒトＩｇＧ４コアヒンジ領域配列は、ＫａｂａｔのとおりのＥＵ番号付けに従って、好ましくはＳ２２８Ｐ置換を有する。この置換は、Ｋａｂａｔら（１９８７  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ．）に従ってＳ２４１Ｐとも称されている。この置換は、ヒンジ領域のコアの配列を、野生型ＩｇＧ１またはＩｇＧ２アイソタイプ抗体のものと同じにする効果を有する。ＩｇＧ４アイソタイプ抗体に関して、この置換は、ＩｇＧ４抗体の同種型の産生をもたらし、したがって、異種二量体性ＩｇＧ４抗体の産生を招くことが多い重鎖の解離及び再会合を無効にする。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４は、高濃度で安定であることが好ましい。
【０１２７】
Ｃ．Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質の例
特定の実施形態において、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド、Ｆｃドメインを含み、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドは、野生型ヒトＣ１−ＩＮＨポリペプチド（配列番号１）または切断型Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド（配列番号２）と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドとＦｃドメインを結びつけるリンカーが存在する。いくつかの実施形態において、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、約０．５〜１０日間（例えば、約０．５〜５．５日間、約０．５〜５日間、約１〜５日間、約１．５〜５日間、約１．５〜４．５日間、約１．５〜４．０日間、約１．５〜３．５日間、約１．５〜３日間、約１．５〜２．５日間、約２〜６日間、約２〜５．５日間、約２〜５日間、約２〜４．５日間、約２〜４日間、約２〜３．５日間、約２〜３日間）の範囲のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。いくつかの実施形態において、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、約２〜１０日間の範囲（例えば、約２．５〜１０日間、約３〜１０日間、約３．５〜１０日間、約４〜１０日間、約４．５〜１０日間、約５〜１０日間、約３〜８日間、約３．５〜８日間、約４〜８日間、約４．５〜８日間、約５〜８日間、約３〜６日間、約３．５〜６日間、約４〜６日間、約４．５〜６日間、約５〜６日間の範囲）のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。
【０１２８】
典型的には、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、約１２時間、１８時間、２４時間、３６時間、２日間、２．５日間、３日間、３．５日間、４日間、４．５日間、５日間、５．５日間、６日間、６．５日間、７日間、７．５日間、８日間、８．５日間、９日間、９．５日間、または１０日間の、あるいはそれより長いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、０．５〜１０日間、１日間〜１０日間、１日間〜９日間、１日間〜８日間、１日間〜７日間、１日間〜６日間、１日間〜５日間、１日間〜４日間、１日間〜３日間、２日間〜１０日間、２日間〜９日間、２日間〜８日間、２日間〜７日間、２日間〜６日間、２日間〜５日間、２日間〜４日間、２日間〜３日間、２．５日間〜１０日間、２．５日間〜９日間、２．５日間〜８日間、２．５日間〜７日間、２．５日間〜６日間、２．５日間〜５日間、２．５日間〜４日間、３日間〜１０日間、３日間〜９日間、３日間〜８日間、３日間〜７日間、３日間〜６日間、３日間〜５日間、３日間〜４日間、３．５日間〜１０日間、３．５日間〜９日間、３．５日間〜８日間、３．５日間〜７日間、３．５日間〜６日間、３．５日間〜５日間、３．５日間〜４日間、４日間〜１０日間、４日間〜９日間、４日間〜８日間、４日間〜７日間、４日間〜６日間、４日間〜５日間、４．５日間〜１０日間、４．５日間〜９日間、４．５日間〜８日間、４．５日間〜７日間、４．５日間〜６日間、４．５日間〜５日間、５日間〜１０日間、５日間〜９日間、５日間〜８日間、５日間〜７日間、５日間〜６日間、５．５日間〜１０日間、５．５日間〜９日間、５．５日間〜８日間、５．５日間〜７日間、５．５日間〜６日間、６日間〜１０日間、７日間〜１０日間、８日間〜１０日間、９日間〜１０日間のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する。
【０１２９】
ある特定の実施形態において、図２Ａ及び図２Ｂに示すとおり、Ｆｃ部分は、全長（１〜４７８アミノ酸）ならびに切断型（９８〜４７８）Ｃ１阻害因子のＮ末端領域と直接融合している場合がある。限定ではなく例として、適切なＣ１−ＩＮＨＦｃ融合タンパク質は、以下に示すアミノ酸配列を有する場合がある：
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１１）
または
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１２）
または
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１３）
または
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１４）
または
［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号３２）
または
［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号３３）
または
［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１５）
または
［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１６）。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、適切な組換えＣ１−ＩＮＨＦｃ融合タンパク質は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号３２、または配列番号３３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の相同性または同一性があるアミノ酸配列を有する。
【０１３１】
Ｃ１−ＩＮＨ−Ｆｃ融合タンパク質が同種二量体性または単量体性配置を含む様々な立体配置で提供される場合があることが企図される。例えば、適切な同種二量体性配置は、融合パートナーのＣ末端（例えば、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド＋リンカー）が両方のＦｃポリペプチド鎖のＮ末端と結合しているように設計される場合がある。適切な単量体配置は、融合バートナーのＣ末端（例えば、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド＋リンカー）が１つのＦｃ二量体と融合しているように設計される場合がある。
【０１３２】
単量体（本明細書中、一価とも称する）型は、ある特定の用途及び投与経路、例えば、皮下投与に好ましい場合がある。単量体性配置は、立体障害を低下させ、半減期を延長する場合があり、及び／または生物学的利用度を上昇させる場合がある。
【０１３３】
一価型は、Ｃ１−ＩＮＨＦｃ融合構築物にも好ましい場合がある。なぜなら、Ｃ１−ＩＮＨは、自殺する阻害因子だからである。Ｃ１−ＩＮＨは、自殺する阻害因子であるため、二量体性Ｆｃ融合物の１本のＣ１−ＩＮＨ「腕」が結合すると、たとえ２本目の腕が未結合のままの事象においても、結合したＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質のクリアランス速度が上昇することになる。
【０１３４】
Ｆｃ融合タンパク質の利点は、単量体性及び二量体性の両方において、Ｆｃ発現がＣ１−ＩＮＨ単独の発現よりも高いレベルで起こることがわかったことである。二量体性Ｃ１−ＩＮＨＦｃ構築物と組換えＣ１−ＩＮＨを比較した活性分析は、同様なＣ１ｑ結合活性があることを示している。リンカーを入れることについても試験され、Ｆｃ−Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質がその標的と結合する能力に影響しないことがわかった。
【０１３５】
単量体性抗体融合タンパク質の作成方法として、例えば、ＰＣＴ公開番号第ＷＯ２０１１／０６３３４８；ＷＯ２０１２／０２００９６；ＷＯ２０１３／１３８６４３；ＷＯ２０１４０８７２９９；Ｄｕｍｏｎｔ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｍｅｒｉｃ  Ｆｃ  Ｆｕｓｉｏｎｓ：  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎｄ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  Ｂｉｏｄｒｕｇｓ，  ２０（３）：  １５１−１６０  （２００６）；  Ｉｓｈｉｎｏ，  Ｔ．ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｏｌｄｉｎｇ：  Ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｍｏｄａｌｉｔｙ  ｂｙ  Ｎ−Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａ  Ｍｏｎｏｍｅｒｉｃ  Ｆｃ  Ｄｏｍａｉｎ，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２８８：１６５２９−１６５３７（２０１３）に記載されるものが挙げられ、これらの開示は、本明細書中参照として援用される。
【０１３６】
一価Ｃ１阻害因子は、Ｆｃ−Ｃ１を含有するプラスミドを用い、Ｆｃのみを発現するプラスミドとともに同時形質移入することにより作ることができる。また、一価Ｃ１阻害因子は、一方のプロモーターはＦｃ−Ｃ１を産生し他方のプロモーターはＦｃのみを産生する二重プロモータープラスミドを用いて作ることができる。一価Ｆｃは、二重特異性技術を用いて作ることもでき、この場合、Ｆｃのヒンジ領域の特定アミノ酸が、Ｆｃ領域に安定性を与えるように変異している（例えばノブと穴技術または一価Ｃ１の形成を駆動する他の安定化変異）。
【０１３７】
本明細書中使用される場合、本明細書中特定される参照タンパク質配列（例えば、参照Ｃ１−ＩＮＨタンパク質配列）に関して「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要であれば、ギャップを導入して配列同一性の最大パーセントを達成し、配列同一性の一部としてどのような保存的置換も考慮から除外した後の、参照配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的での整列は、当該分野の技術内にある様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公開されているコンピューターソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者なら、比較する配列の全長にわたって、最大整列を達成するのに必要なあらゆるアルゴリズムを含む、整列測定用の適切なパラメーターを決定することができる。好ましくは、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２ソフトウェアを用いて、アミノ酸配列同一性を決定する（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２６６，  ４６０−４８０（１９９６）；ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｗｕｓｔｌ／ｅｄｕ／ｂｌａｓｔ／ＲＥＡＤＭＥ．ｈｔｍｌ）。ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２は、複数のサーチパラメーターを使用するが、それらのほとんどは初期設定値に設定される。調節可能なパラメーターは、以下の値に設定される：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワールド閾値（Ｔ）＝１１。ＨＳＰスコア（Ｓ）及びＨＳＰＳ２パラメーターは、動的値であり、特定配列の組成に応じて、プログラム自身によって確立されるが、しかしながら、最小値は調節可能であり、上記に示すとおりに設定される。
【０１３８】
アルブミンドメイン
アルブミンは、血液の血清タンパク質の約半分を占める、可溶性の単量体タンパク質である。アルブミンは、ステロイド、脂肪酸、及び甲状腺ホルモンの担体タンパク質として主に機能し、細胞外液体積の安定化で役割を果たす。アルブミンは、分子量６６，５００の球状未グリコシル化血清タンパク質を有する。アルブミンは、肝臓で、Ｎ末端ペプチドを有するプレプロアルブミンとして合成され、Ｎ末端ペプチドは新生タンパク質が粗面小胞体から放出される前に除去される。生成物であるプロアルブミンは、次いでゴルジ小胞中で切断されて、分泌型アルブミンを生成する。
【０１３９】
アルブミンは、３つの相同なドメイン（Ｉ〜ＩＩＩ）で出来ており、ドメインはそれぞれ、２つのサブドメイン（Ａ及びＢ）で構成される。リガンドがヒト血清アルブミンと結合するための主要な領域は、サブドメインＩＩＡ及びＩＩＩＡのキャビティに位置し、これらのキャビティは、大部分が疎水性かつ正電荷を帯びた残基で形成されており、同様な化学性質を示す。ヒト血清アルブミンは、５８５のアミノ酸を有し、分子質量が６６，５００Ｄａである。アミノ酸は、３５のシステインを含むが、それらのうち１つを残してあとは全て、１７の安定ジスルフィド結合の形成に関与する。
【０１４０】
アルブミンは、１９日間という長い血清中半減期を有する。ＦｃＲｎが、アルブミンの長い血清中半減期を制御する。ＦｃＲｎは、アルブミンに加えて、ＩｇＧとも結合する二重結合受容体であり、両方のタンパク質を細胞内分解から保護する。アルブミン分子のＣ末端ドメインは、ＦｃＲｎとの結合に重要であることが示されている。ドメインＩＩＩＢの欠失または４６４Ｈｉｓ、５１０Ｈｉｓ、及び５３５Ｈｉｓの変異は、ＦｃＲｎ結合をほぼ完全に消滅させる。
【０１４１】
本発明のアルブミン融合タンパク質は単量体である。いくつかの実施形態において、この特長は、単量体性Ｆｃ融合物の実施形態に関して上に記載した理由により、二量体性Ｆｃ融合物の実施形態に勝る利点となる場合がある。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、本発明に適したアルブミンポリペプチドは、野生型ヒト血清アルブミンと少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号１７）。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、本発明に適したアルブミンポリペプチドは、野生型ヒト血清アルブミンのＤ３ドメインと少なくとも５０％（例えば、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）同一であるアミノ酸配列を含む：
ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ（配列番号２０）。
【０１４４】
リンカーまたはスペーサー
Ｃ１−ＩＮＨドメインは、Ｆｃドメインまたはアルブミンドメインと、直接連結していても間接的に連結していてもよい。いくつかの実施形態において、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドとＦｃドメインをつなぐリンカーまたはスペーサーを含有する。いくつかの実施形態において、適切な組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドとアルブミンポリペプチドをつなぐリンカーまたはスペーサーを含有する。アミノ酸リンカーまたはスペーサーは、概して、２つのタンパク質部分間で、柔軟であるように、またはアルファ螺旋などの構造を与えるように設計される。リンカーまたはスペーサーは、相対的に短くても、長くなってもよい。典型的には、リンカーまたはスペーサーは、例えば、３〜１００（例えば、５〜１００、１０〜１００、２０〜１００、３０〜１００、４０〜１００、５０〜１００、６０〜１００、７０〜１００、８０〜１００、９０〜１００、５〜５５、１０〜５０、１０〜４５、１０〜４０、１０〜３５、１０〜３０、１０〜２５、１０〜２０）アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態において、リンカーまたはスペーサーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００アミノ酸長に等しいか、それより長い。典型的には、リンカーは長い方が、立体障害が小さくなる場合がある。いくつかの実施形態において、リンカーは、グリシン残基とセリン残基の混合物を含むことになる。いくつかの実施形態において、リンカーは、さらに、トレオニン、プロリン、及び／またはアラニン残基を含む場合がある。すなわち、いくつかの実施形態において、リンカーは、１０〜１００、１０〜９０、１０〜８０、１０〜７０、１０〜６０、１０〜５０、１０〜４０、１０〜３０、１０〜２０、１０〜１５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、または９５のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、ＡＬＥＶＬＦＱＧＰからなるリンカーではない。
【０１４５】
限定ではなく例として、本発明に適したリンカーまたはスペーサーとして、ＧＧＧリンカー及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（（ＧＧＧＧＳ）２リンカー、配列番号２７）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧ及び／または配列番号２７の配列を含む。
【０１４６】
他の適切なリンカーとして、［ＧＡＰ］ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧ［ＧＡＰ］（ＧＡＧリンカー、配列番号３４）；［ＧＡＰ］ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧ［ＧＡＰ］ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧ［ＧＡＰ］（ＧＡＧ２リンカー、配列番号３５）；及び［ＧＡＰ］ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧ［ＧＡＰ］ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧ［ＧＡＰ］ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧ［ＧＡＰ］（ＧＡＧ３リンカー、配列番号３６）が挙げられる。
【０１４７】
適切なリンカーまたはスペーサーは、上記の例示リンカー、例えば、ＧＧＧリンカー、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（（ＧＧＧＧＳ）２リンカー、配列番号２７）、ＧＡＧリンカー（配列番号３４）、ＧＡＧ２リンカー（配列番号３５）、またはＧＡＧ３リンカー（配列番号３６）と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の相同性または同一性があるアミノ酸配列を有するものも含む。いくつかの実施形態で使用するのに適したさらなるリンカーは、２０１２年３月２日出願のＵＳ２０１２／０２３２０２１に見つけることができ、この開示は、そのまま全体が、本明細書により参照として援用される。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドがその同族リガンド（例えば、Ｃ１ｓなど）のいずれかと結合する能力に実質的に影響を及ぼすことなくＣ１−ＩＮＨポリペプチドとアルブミンドメインを会合させるものとして提供される。いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｃ１−ＩＮＨペプチドとその同族リガンドの１つまたは複数との結合が、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド単独と比べて変化していないように提供される。いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｃ１−ＩＮＨペプチドとその同族リガンドの１つまたは複数との結合が、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド単独と比べて減少または低下していないように提供される。
【０１４９】
組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質の製造
本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、任意の利用可能な手段で製造することができる。例えば、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質をコードする核酸を発現するように改変された宿主細胞系を用いて、遺伝子組換え技術により製造することができる。あるいはまたはこれに加えて、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、内在性遺伝子の活性化により製造することができる。あるいはまたはこれに加えて、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、化学合成により、部分的にまたは完全に調製することができる。
【０１５０】
タンパク質を遺伝子組換え技術により製造する場合、任意の発現系を使用することができる。ほんの数例を挙げるとして、既知の発現系として、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、卵、バキュロウイルス、植物、酵母菌、または哺乳類細胞が挙げられる。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、本発明に適した組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、哺乳類細胞で産生される。本発明に従って使用可能な哺乳類細胞の限定ではなく例として、ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫細胞株（ＮＳＯ／ｌ、ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ：８５１１０５０３）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６、ＣｒｕＣｅｌｌ、Ｌｅｉｄｅｎ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）；ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓ＣＶ１細胞株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）；ヒト胚性腎臓細胞株（浮遊培養での増殖用にサブクローン化されたＨＥＫ２９３細胞または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．，  ３６：５９，  １９７７）；ヒト線維肉腫細胞株（例えば、ＨＴ１０８０）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ２１、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞＋／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，
Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ７７：４２１６，  １９８０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，  Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．，
２３：２４３−２５１，  １９８０）；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１  ５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ
１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳癌（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．  Ｙ．  Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．，  ３８３：４４−６８，  １９８２）；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝細胞腫細胞株（Ｈｅｐ  Ｇ２）が挙げられる。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、本発明は、ヒト細胞から産生された組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、ＣＨＯ細胞またはＨＴ１０８０細胞から産生された組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を提供する。
【０１５３】
典型的には、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を発現するように改変された細胞は、本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質をコードする導入遺伝子を含む場合がある。当然のことながら、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質をコードする核酸は、制御配列、遺伝子制御配列、プロモーター、非コード配列、及び／または組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質の発現に適切な他の配列を含む場合がある。典型的には、翻訳領域は、これらの核酸構成要素の１つまたは複数と作動可能に連結されている。
【０１５４】
導入遺伝子の翻訳領域は、特定の細胞型にとってコドン利用が最適化されるように、１つまたは複数のサイレント変異を含む場合がある。例えば、Ｃ１−ＩＮＨ融合導入遺伝子のコドンは、脊椎動物細胞での発現に最適化されている場合がある。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨ融合導入遺伝子のコドンは、哺乳類細胞での発現に最適化されている場合がある。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨ融合導入遺伝子のコドンは、ヒト細胞での発現に最適化されている場合がある。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨ融合導入遺伝子のコドンは、ＣＨＯ細胞での発現に最適化されている場合がある。
【０１５５】
Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸
いくつかの実施形態において、本明細書中の様々な実施形態で記載されるＣ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質などの注目対象の組換え遺伝子（本明細書中、導入遺伝子と称する）をコードする核酸配列を含む核酸分子が提供される。いくつかの実施形態において、導入遺伝子をコードする核酸は、コードされたＣ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質の発現が増加するように修飾されている場合があり、そのような修飾は、コドン最適化とも称する。例えば、導入遺伝子をコードする核酸は、コード配列の翻訳領域を改変することにより修飾することができる。本明細書中使用される場合、「翻訳領域」という用語は、「ＯＲＦ」と同義であり、タンパク質、またはタンパク質の一部分をコードすることが潜在的に可能である任意のヌクレオチド配列を意味する。翻訳領域は、通常、開始コドン（例えば、標準コードで、ＲＮＡ分子についてＡＵＧ及びＤＮＡ分子のＡＴＧで表される）で始まり、終止コドン（例えば、標準コードで、ＲＮＡ分子についてＵＡＡ、ＵＧＡ、またはＵＡＧ、及びＤＮＡ分子のＴＡＡ、ＴＧＡ、またはＴＡＧで表される）で翻訳領域が終わるまで、コドントリプレットで読まれる。本明細書中使用される場合、「コドン」という用語は、タンパク質合成中に特定のアミノ酸を指定する、核酸分子中の３つのヌクレオチドの配列を意味し；トリプレットまたはコドントリプレットとも呼ばれる。例えば、標準遺伝コードの６４の可能なコドンのうち、２つのコドン、ＧＡＡ及びＧＡＧは、アミノ酸グルタミンをコードするが、一方、ＡＡＡ及びＡＡＧというコドンは、アミノ酸リシンを指定する。標準遺伝コードにおいて、３つのコドンが終止コドンであり、これらはアミノ酸を指定しない。本明細書中使用される場合、「同義コドン」という用語は、１種類のアミノ酸をコードするありとあらゆるコドンを意味する。メチオニン及びトリプトファンを除けば、アミノ酸は、２〜６の同義コドンでコードされる。例えば、標準遺伝コードにおいて、アミノ酸アラニンをコードする４つの同義コドンは、ＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、及びＧＣＵであり、グルタミンを指定する２つの同義コドンは、ＧＡＡ及びＧＡＧであり、リシンをコードする２つの同義コドンは、ＡＡＡ及びＡＡＧである。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質の翻訳領域をコードする核酸は、標準的なコドン最適化方法を用いて修飾される場合がある。コドン最適化のための様々な商業アルゴリズムが利用可能であり、本発明を実施するために使用することができる。典型的には、コドン最適化は、コードされるアミノ酸配列を変更しない。いくつかの実施形態において、コドン最適化は、置換、欠失、または挿入などのアミノ酸改変を招く場合がある。典型的には、そのようなアミノ酸改変は、タンパク質活性を実質的に改変しない。
例示核酸配列は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、または配列番号３３と少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性または相同性があるアミノ酸配列を有するＣ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及びＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、ヌクレオチド変化は、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質を発現させるために選択した特定の異種細胞において見られる内在コドン利用法と一致させる目的で、翻訳領域内の同義コドンを改変する場合がある。あるいはまたはこれに加えて、ヌクレオチド変化は、異種宿主細胞に存在する内在核酸配列で見られる翻訳領域の平均Ｇ＋Ｃ含有量とより良く一致させるために、翻訳領域内のＧ＋Ｃ含有量を改変させる場合がある。ヌクレオチド変化は、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質またはＣ１阻害因子アルブミン融合配列内で見られる、ポリモノヌクレオチド領域または内部制御もしくは構造部位も改変する場合がある。したがって、様々な修飾または最適化ヌクレオチド配列が想定されており、そのような配列として、制限なく、原核細胞；酵母菌細胞；昆虫細胞；及び哺乳類細胞においてＣ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質の発現の増加をもたらす核酸配列が含まれる。
【０１５８】
典型的には、修飾された核酸は、アミノ酸配列改変の有無に関わらず、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする。アミノ酸改変がある場合、そのような改変は、典型的には、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質活性を実質的に低下させない。いくつかの実施形態において、そのような改変は、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質活性を上昇及び／または向上させる。活性は、以下の列挙されるパラメーターを示す場合があるが、これらに限定されない：長くなった半減期、宿主細胞によるタンパク質発現の増加／上昇、発現したタンパク質の安定性上昇、発現したタンパク質の溶解性上昇、発現したタンパク質の凝集減少、発現したタンパク質の製剤設計の単純化、発現したタンパク質の精製の単純化、発現したタンパク質のｐＨ変化に対する耐性の上昇、発現したタンパク質の高及び低ｐＨ条件に対する耐性能力の上昇、高濃度での製剤に適切であるタンパク質が発現すること。
【０１５９】
発現ベクター
本出願中記載されるとおりのＣ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列は、宿主細胞での増殖または発現に適切なベクターに分子としてクローン導入する（挿入する）ことができる。本発明を実施するために多様な発現ベクターを使用することができ、そのようなベクターとして、制限なく、原核生物発現ベクター；酵母菌発現ベクター；昆虫発現ベクター、及び哺乳類発現ベクターを挙げることができる。本発明に適したベクターの例として、ウイルス系ベクター（例えば、ＡＡＶ系ベクター、レトロウイルス系ベクター、プラスミド系ベクター）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸配列を、適切なベクターに挿入することができる。いくつかの実施形態において、Ｃ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列を、適切なベクターに挿入することができる。典型的には、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列は、様々な制御配列または配列と作動可能に連結している。
【０１６０】
制御配列またはエレメント
様々な制御配列またはエレメントを、本発明に適した発現ベクターに組み込むことができる。制御配列またはエレメントの例として、プロモーター、エンハンサー、リプレッサーまたは阻害因子、５’非翻訳（または非コード）配列、イントロン、３’非翻訳（または非コード）配列が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６１】
本明細書中使用される場合、「プロモーター」または「プロモーター配列」は、細胞中で、ＲＮＡポリメラーゼと結合する（例えば、直接あるいは他のプロモーター結合タンパク質または物質を通じて）ことができかつコード配列の転写を開始させることができるＤＮＡ制御領域である。プロモーター配列は、一般に、その３’末端で転写開始部位により結合し、どのようなレベルでも転写を開始するのに必要な塩基またはエレメントを最小個数で含むところまで上流に向かって（５’方向に）延びる。プロモーターは、エンハンサー配列及びリプレッサー配列をはじめとする発現制御配列と、または発現させようとする核酸と、作動可能に会合しているまたは作動可能に連結している場合がある。いくつかの実施形態において、プロモーターは、誘導性の場合がある。いくつかの実施形態において、誘導性プロモーターは、一方向性または双方向性の場合がある。いくつかの実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーターの場合がある。いくつかの実施形態において、プロモーターは、ハイブリッドプロモーターが可能であり、このプロモーターでは、転写制御領域を含む配列は、ある配列源から得られており、転写開始領域を含む配列は、第二の配列源から得られている。導入遺伝子内で制御配列をコード配列と連結するシステムは、当該分野で周知である（一般的な分子生物学及び組換えＤＮＡ技法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｆｒｉｔｓｃｈ，  ａｎｄ  Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，
Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＮＹ，  １９８９に記載されており、これは本明細書中参照として援用される）。様々な増殖及び誘導条件下で、様々な宿主細胞で発現させるための、導入遺伝子を挿入するのに適した市販のベクターも、当該分野で周知である。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、哺乳類宿主細胞中での導入遺伝子の発現を制御するのに特定のプロモーターが使用される場合があり、そのようなプロモーターとして、例えば、ＳＲα−プロモーター（Ｔａｋｅｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃ．  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏ．  ８：４６６−４７２  （１９８８））、ヒトＣＭＶ最初期プロモーター（Ｂｏｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  ４１：５２１−５３０  （１９８５）；
Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅ  ４５：１０１−１０５  （１９８６））、ヒトＣＭＶプロモーター、ヒトＣＭＶ５プロモーター、マウスＣＭＶ最初期プロモーター、ＥＦ１−α−プロモーター、肝臓特異的発現用ハイブリッドＣＭＶプロモーター（例えば、ＣＭＶ最初期プロモーターと、ヒトα−１−抗トリプシン（ＨＡＴ）またはアルブミン（ＨＡＬ）プロモーターいずれかの転写プロモーター配列とを結合させることにより作られる）、または肝細胞腫特異的発現用プロモーター（例えば、ヒトアルブミン（ＨＡＬ；約１０００ｂｐ）またはヒトα−１−抗トリプシン（ＨＡＴ、約２０００ｂｐ）いずれかの転写プロモーターエレメントを、ヒトα−１−ミクログロブリン及びビクニン前駆遺伝子（ＡＭＢＰ）の１４５長エンハンサー配列と組み合わせる；ＨＡＬ−ＡＭＢＰ及びＨＡＴ−ＡＭＢＰ）；ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｎｏｉｓｔ  ａｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ２９０：３０４−３１０  （１９８１））、オルギア・シュードツガタ（Ｏｒｇｙｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ）最初期プロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗａｇｎｅｒ  ａｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７８：１４４１−１４４５  （１９８１））；またはメタロチオネイン遺伝子の制御配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ２９６：３９−４２  （１９８２））があるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、哺乳類プロモーターは、構成的プロモーターであり、例えば、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＴＲ）プロモーター、アデノシンデアミナーゼプロモーター、ピルビン酸キナーゼプロモーター、ベータ−アクチンプロモーター、ならびに当業者に既知の他の構成的プロモーターなどであるが、これらに限定されない。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、導入遺伝子の発現を制御するために特定のプロモーターを使用する場合があり、原核生物宿主細胞中でのそのようなプロモーターとして、例えば、β−ラクタマーゼプロモーター（Ｖｉｌｌａ−Ｋｏｍａｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７５：３７２７−３７３１  （１９７８））；ｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８０：２１−２５  （１９８３））；Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、Ｍ１３プロモーター、またはＭ１６プロモーターがあるが、これらに限定されず；酵母菌宿主細胞でのそのようなプロモーターとして、例えば、ＧＡＬ１、ＧＡＬ４、もしくはＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ（アルコールデヒドロゲナーゼ）プロモーター、ＰＧＫ（ホスホグリセロールキナーゼ）プロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＩＩＩ（ＴＤＨ３）プロモーター、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＩＩ（ＴＤＨ２）プロモーター、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＩ（ＴＤＨ１）プロモーター、ピルビン酸キナーゼ（ＰＹＫ）、エノラーゼ（ＥＮＯ）、またはトリオースリン酸イソメラーゼ（ＴＰＩ）があるが、これらに限定されない。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、プロモーターは、ウイルスプロモーターの場合があり、それらの多くは、哺乳類細胞を含む複数の宿主細胞型で導入遺伝子の発現を制御することができる。真核生物細胞中でのコード配列の恒常的発現を駆動することが示されているウイルスプロモーターとして、例えば、サルウイルスプロモーター、単純ヘルペスウイルスプロモーター、パピローマウイルスプロモーター、アデノウイルスプロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス及び他のレトロウイルスの末端反復配列（ＬＴＲ）、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター、ならびに当業者に既知の他のウイルスプロモーターが挙げられる。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、発現ベクターの遺伝子制御エレメントは、それぞれ転写及び翻訳の開始に関与する５’非転写配列及び５’非翻訳配列、例えば、ＴＡＴＡボックス、キャップ配列、ＣＡＡＴ配列、Ｋｏｚａｋ配列なども含む場合がある。エンハンサーエレメントは、発現させようとするポリペプチドまたはタンパク質の発現レベルを上昇させるために、任意選択で使用することができる。哺乳類細胞で機能することが示されているエンハンサーエレメントの例として、Ｄｉｊｋｅｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  （１９８５）  ４：  ７６１に記載されるとおりのＳＶ４０初期遺伝子エンハンサー、及びＧｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．
ＵＳＡ  （１９８２ｂ）  ７９：６７７７に記載されるとおりのラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の末端反復配列（ＬＴＲ）由来のエンハンサー／プロモーター、及びＢｏｓｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  （１９８５）  ４１：５２１に記載されるとおりのヒトサイトメガロウイルスが挙げられる。発現ベクターの遺伝子制御エレメントは、それぞれ転写及び翻訳の終止に関与する３’非転写配列及び３’非翻訳配列、例えば、プロモーターから転写されたｍＲＮＡの３’末端の安定化及びプロセシングのためのポリポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなども含む場合がある。ポリＡシグナルとして、例えば、ウサギベータグロビンポリＡシグナル、ウシ成長ホルモンポリＡシグナル、ニワトリベータグロビンターミネーター／ポリＡシグナル、またはＳＶ４０後期ポリＡ領域が挙げられる。
【０１６６】
選択マーカー
発現ベクターは、好ましくは、しかし任意選択で、少なくとも１つの選択マーカーを含むことになる。いくつかの実施形態において、選択マーカーは、宿主細胞に細胞毒性化学物質及び／または薬物の存在下で増殖する場合に生存能力を維持する能力を付与する、１つまたは複数の遺伝子制御エレメントと作動可能に連結した耐性遺伝子をコードする核酸配列である。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、宿主細胞内の発現ベクターの保持を維持するために使用する場合がある。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、発現ベクター内の導入遺伝子配列の修飾（すなわちメチル化）及び／またはサイレンシングを防ぐために使用する場合がある。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、宿主細胞内のベクターのエピソーム発現を維持するために使用される。いくつかの実施形態において、選択作用剤は、導入遺伝子配列が宿主細胞ゲノム中へ安定して組み込まれるのを促進するために使用される。いくつかの実施形態において、作用剤及び／または耐性遺伝子として、真核生物宿主細胞についてはメトトレキセート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，６３４，６６５号；同第４，６５６，１３４号；同第４，９５６，２８８号；同第５，１４９，６３６号；同第５，１７９，０１７号、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ゼオマイシン、ミコフェノール酸、またはグルタミンシンセターゼ（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号；同第５，７７０，３５９号；同第５，８２７，７３９号）；原核生物宿主細胞についてはテトラサイクリン、アンピシリン、カナマイシン、またはクロラムフェニコール；及び酵母菌宿主細胞についてはＵＲＡ３、ＬＥＵ２、ＨＩＳ３、ＬＹＳ２、ＨＩＳ４、ＡＤＥ８、ＣＵＰ１、またはＴＲＰ１を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１６７】
発現ベクターは、宿主細胞に、形質移入、形質転換、または形質導入することができる。本明細書中使用される場合、「形質移入」、「形質転換」、及び「形質導入」という用語は全て、外来核酸配列を宿主細胞に導入することを示す。いくつかの実施形態において、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクターは、同時に、宿主細胞に、形質移入、形質転換、または形質導入される。いくつかの実施形態において、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び／またはａＣ１阻害因子アルブミン融合タンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクターは、順次、宿主細胞に、形質移入、形質転換、または形質導入される。例えば、Ｃ１阻害因子融合タンパク質をコードするベクターを、最初に、宿主細胞に、形質移入、形質転換、または形質導入し、続いて、発現したＣ１阻害因子融合タンパク質のグリコシル化を向上させる、好ましくはシアリル化の増加により向上させる、１つまたは複数のタンパク質をコードするベクターを形質移入、形質転換、または形質導入する場合があるし、その逆もまた同様である。
【０１６８】
当該分野で周知である形質転換、形質移入、及び形質導入方法の例として、リポソーム送達、すなわち、リポフェクタミン（商標）（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）Ｈａｗｌｅｙ−Ｎｅｌｓｏｎ法、Ｆｏｃｕｓ  １５：７３  （１１９３）、電気穿孔法、Ｇｒａｈａｍ及びｖａｎ  ｄｅｒ  ＥｒｂのＣａＰＯ４送達法、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，  ５２：４５６−４５７
（１９７８）、ＤＥＡＥ−デキストラン介在送達、微量注入、遺伝子銃粒子送達、ポリブレン介在送達、カチオン介在脂質送達、形質導入、ならびにウイルス感染、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルスアデノ随伴ウイルス、及びバキュロウイルス（昆虫細胞）などが挙げられる。細胞宿主形質転換の一般的な態様は、例えば、Ａｘｅｌの米国特許第４，３９９，２１６号；Ｓａｍｂｒｏｏｋ、既出、第１−４章及び１６−１８章；Ａｕｓｕｂｅｌ、既出、第１、９、１３、１５、及び１６章などに記載されている。哺乳類細胞を形質転換する様々な技法については、Ｋｅｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （１９８９）、Ｋｅｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  １８５：５２７−５３７  （１９９０）、及びＭａｎｓｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３６：３４８−３５２  （１９８８）を参照。
【０１６９】
発現ベクターは、いったん細胞内に導入されると、ゲノムに安定的に組み込まれる、または染色体外構築物として存在することができる。ベクターは、増幅される場合もあり、複数のコピーが存在するまたはゲノムに組み込まれる場合がある。いくつかの実施形態において、本発明の細胞は、Ｃ１阻害因子融合タンパク質をコードする核酸のコピーを１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはそれ以上含有する場合がある。いくつかの実施形態において、本発明の細胞は、Ｃ１阻害因子融合タンパク質をコードする核酸のコピーを１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはそれ以上含有する場合がある。いくつかの実施形態において、本発明の細胞は、Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質及び発現したＣ１阻害因子融合タンパク質のグリコシル化を向上させる、好ましくはシアリル化の増加により向上させる、１つまたは複数のタンパク質の両方をコードする核酸のコピーを複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、またはそれ以上）含有する場合がある。シアリル化も、本明細書中に記載される様々な方法を通じて操作することができる。特定の理論に固執するつもりはないが、シアリル化の減少は、開示される構築物のヘパリン結合の増加と関連しており、それによりＣ１−ＩＮＨ結合部位が標的と結合するのを防ぐことがわかった。ヘパリン結合はまた、クリアランス速度を上昇させるリソソーム内への内部移行の可能性も高める。
【０１７０】
宿主細胞
本明細書中使用される場合、「宿主細胞」という用語は、組換えＣ１阻害因子融合タンパク質を製造するのに使用することができる細胞を示す。詳細には、宿主細胞は、組換えＣ１阻害因子融合タンパク質を大規模で製造するのに適している。適切な宿主細胞は、様々な生命体に由来するものが可能であり、そのような生命体として、哺乳類、植物、鳥類（例えば、鳥系統）、昆虫、酵母菌、及び細菌が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、哺乳類細胞である。いくつかの実施形態において、適切な宿主細胞は、発現した組換えＣ１阻害因子融合タンパク質のグリコシル化特性を改善するように操作されている。本発明のいくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドは、天然の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨの類似部分と同じまたは同様なグリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドは、天然の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨと少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％等価なグリカンを有する。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質のグリコシル化特性は、ヒト化グリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、天然の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨと比較して増加したシアリル化を有する。
【０１７１】
グリコシル化特性の改善は、グリコシル化特性のシアリル化及び／またはヒト化の増加を指すす場合があり、例えば、改変細胞中でのＣ１−ＩＮＨポリペプチドを含む組換えＣ１阻害因子融合タンパク質の発現増加、それにより非改変細胞で発現されるＣ１−ＩＮＨポリペプチドよりも天然のヒトＣ１−ＩＮＨにより近いグリコシル化特性をもたらすことを示す場合がある。改善は、ルコネストと比較してＣ１−ＩＮＨ融合物のグリコシル化特性を、上昇、向上、及び／または最適化することを指す場合もある。
【０１７２】
タンパク質のグリコシル化特性を変更、制御、操作、改善、向上、及び／または最適化する様々な方法が当該分野で既知である。最適化可能なグリコシル化特性の特徴として、グリカン残基の個数、グリカン残基結合位置、グリカン結合様式（例えば、結合の種類）、グリカン結合プロセス、及びタンパク質またはポリペプチドと結合したグリカン残基の同一性が挙げられる。本発明の融合タンパク質の任意の部分のグリコシル化特性が、グリコシル化最適化の適切な標的として企図される。グリコシル化が最適化される可能性がある本発明の融合タンパク質の部分として、本明細書中開示される、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチド、Ｆｃドメイン、アルブミンポリペプチド、及び／またはリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。グリコシル化特性を制御するこれらの方法、ならびに当業者が今後発見して、本開示に照らして本発明の融合タンパク質のグリコシル化の最適化に有用性があるとわかる他の方法が、企図される。本発明のＣ１−ＩＮＨタンパク質及びポリペプチドのグリコシル化特性を変更、制御、操作、改善、向上、及び／または最適化する方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ、及びｉｎ  ｖｉｖｏでの方法を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、発現したタンパク質またはポリペプチドのグリコシル化特性は、発現したタンパク質またはポリペプチドの翻訳後修飾及び／または化学修飾を通じて改変される。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、翻訳後修飾及び／または化学修飾が行われたＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、この翻訳後修飾及び／または化学修飾が行われなかった同一配列を有するＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質と比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたグリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、翻訳後修飾及び／または化学修飾が行われたＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、この翻訳後修飾及び／または化学修飾が行われなかった同一配列を有するＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質と比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたシアリル化特性を有する。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、グリコシル化を向上するように改変された細胞株から発現されるＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、グリコシル化を向上するように操作されていない同一細胞株から発現される同一配列を有するＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質と比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたグリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、シアリル化を向上するように改変された細胞株から発現されるＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、シアリル化を向上するように操作されていない同一細胞株から発現される同一配列を有するＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質と比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたシアリル化特性を有する。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、グリコシル化を向上する条件下で培養された細胞株細胞株から発現されるＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、グリコシル化を向上する条件下で培養された細胞株から発現される同一配列を有するＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質と比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたグリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、シアリル化を向上する条件下で培養された細胞株細胞株から発現されるＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、シアリル化を向上する条件下で培養された細胞株から発現される同一配列を有するＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質と比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたシアリル化特性を有する。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、ルコネストと比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたグリコシル化特性を有する。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、ヒト血漿由来Ｃ１−ＩＮＨと比較して、変更、改善、向上、ヒト化、及び／または最適化されたグリコシル化特性を有する。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、細胞培養条件は、所望のグリコシル化特性を有するタンパク質の発現を達成するように操作される。そうした細胞培養条件として、培養の長さをはじめとする産生及び培養プロセスの制御、培養培地への添加物、グリコシル化の増加を介したグリコシル化を向上させる遺伝子の同時発現、及び／またはグリカン分解に関連する酵素（例えば、シアリラダーゼ（ｓｉａｌｙｌａｄａｓｅ））をノックアウトする、そのような酵素の発現を防ぐ、そのような酵素を不活性化する、もしくはそのような酵素を破壊するように細胞を操作することが挙げられる。グリコシル化を操作する適切な方法として、例えば、米国特許第５，０４７，３３５号；同第５，０９６，８１６号；同第５，７０５，３６４号；同第７，６４５，６０９号；同第８，２７３，７２３号；同第８，５２４，４７７号；同第８，６１７，８７８号；同第８，８７１，７２３号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００６／１０６３４８；ＷＯ２００７／０９５５０６；ＷＯ２００８／０２５８５６；ＷＯ２０１０／００７２１４；ＷＯ２０１０／０９９３９４；及びＷＯ２０１３／０９３７６０に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの開示は、本明細書中参照により援用される。
【０１７９】
宿主細胞及び形質移入された宿主細胞の特定クローンの選択も、グリコシル化の向上に使用される場合がある。グリコシル化を向上する他の方法として、所望のグリコシル化特性を有するタンパク質またはポリペプチドを濃縮する精製プロセスの開発が挙げられる。
【０１８０】
タンパク質のシアリル化特性を操作する様々な方法が、当該分野で既知である。これらの方法、ならびに今後発見される他の方法が、本発明により企図される。本発明のＣ１−ＩＮＨタンパク質及びポリペプチドのシアリル化特性を操作する方法として、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕ、及びｉｎ  ｖｉｖｏでの方法が挙げられる。いくつかの実施形態において、発現したタンパク質またはポリペプチドのシアリル化特性は、発現したタンパク質またはポリペプチドの発現後化学修飾を通じて改変される。いくつかの実施形態において、細胞培養条件が、所望のシアリル化特性を有するタンパク質の発現を達成するように操作される。そうした細胞培養条件として、培養の長さをはじめとする産生及び培養プロセスの制御、培養培地への添加物、及び／またはシアリル化を向上させる遺伝子の同時発現が挙げられる。宿主細胞及び形質移入された宿主細胞の特定クローンの選択も、シアリル化の向上に使用される場合がある。シアリル化を向上する他の方法として、所望のシアリル化特性を有するタンパク質またはポリペプチドを濃縮する精製プロセスの開発が挙げられる。
【０１８１】
シアリル化も、本明細書中記載される様々な方法を通じて、操作することができる。特定の理論に固執するつもりはないが、シアリル化の減少は、開示される構築物のヘパリン結合の増加と関連しており、それによりＣ１−ＩＮＨ結合部位が標的と結合するのを防ぐことがわかった。ヘパリン結合はまた、クリアランス速度を上昇させるリソソーム内への内部移行の可能性も高める。
【０１８２】
哺乳類細胞株
細胞培養の影響を受けやすく、ポリペプチド発現の影響を受けやすい任意の哺乳類細胞または細胞型が、本発明に従って宿主細胞として使用され得る。本発明に従って使用され得る哺乳類細胞の限定ではなく例として、ヒト胚性腎臓２９３細胞（ＨＥＫ２９３）、ＨｅＬａ細胞；ＢＡＬＢ／ｃマウス骨髄腫細胞株（ＮＳＯ／ｌ、ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ：８５１１０５０３）；ヒト網膜芽細胞（ＰＥＲ．Ｃ６（ＣｒｕＣｅｌｌ、Ｌｅｉｄｅｎ、Ｔｈｅ
Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ））；ＳＶ４０で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１細胞株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚性腎臓細胞株（２９３細胞または浮遊培養での増殖用にサブクローン化された２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．
Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．，  ３６：５９  （１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞＋／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ７７：４２１６  （１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，  Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．，  ２３：２４３−２５１  （１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１  ５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳癌（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ３８３：４４−６８
（１９８２））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝細胞腫系統（Ｈｅｐ  Ｇ２）が挙げられる。いくつかの実施形態において、適切な哺乳類細胞は、エンドソーム酸性化欠損細胞ではない。
【０１８３】
また、ポリペプチドまたはタンパク質を発現する多数の市販の及び市販ではないハイブリドーマ細胞株を、本発明に従って利用することができる。当業者には理解されるように、ハイブリドーマ細胞株は、栄養所要量が異なる可能性があり、及び／または最適な増殖及びポリペプチドまたはタンパク質発現のために異なる培養条件を必要とする可能性があり、必要に応じて条件を修飾することができる。
【０１８４】
非哺乳類細胞株
細胞培養の影響を受けやすく、ポリペプチド発現の影響を受けやすい任意の非哺乳類由来細胞または細胞型が、本発明に従って宿主細胞として使用され得る。本発明に従って使用され得る非哺乳類宿主細胞及び細胞株の限定ではなく例として、酵母菌については、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ
ａｎｇｕｓｔａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、及びＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ；昆虫については、Ｓｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉｓ  ｎｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｇｏｓｔｅｒ、及びＭａｎｄｕｃａ
ｓｅｘｔａ；ならびに細菌については、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｎｎｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ；ならびに両生類由来のＸｅｎｏｐｕｓ  Ｌａｅｖｉｓに由来する細胞及び細胞株が挙げられる。
【０１８５】
接着培養対浮遊培養の培養適合性
ある特定の実施形態において、宿主細胞は、ある特定の優先特質または細胞培養に選択された特定条件下での増殖に基づいて、細胞株を生成するように選択される。当業者には理解されるように、そのような特質は、確立された細胞株（すなわち、特性決定済みの市販されている細胞株）の既知の特徴及び／または形質に基づいて、または実験による評価を通じて、確定される場合がある。いくつかの実施形態において、細胞株は、その株が持つ支持細胞層で増殖する能力によって選択される場合がある。いくつかの実施形態において、細胞株は、その株が持つ浮遊液で増殖する能力によって選択される場合がある。いくつかの実施形態において、細胞株は、その株が持つ接着細胞単層として増殖する能力によって選択される場合がある。いくつかの実施形態において、そのような細胞は、任意の組織培養容器または適切な接着基質で処理された任意の容器とともに使用することができる。いくつかの実施形態において、適切な接着基質は、コラーゲン（例えばコラーゲンＩ、ＩＩ、ＩＩ、またはＩＶ）、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、ＢＤマトリゲル（商標）、基底膜マトリクス、デルマタン硫酸プロテオグリカン、ポリ−Ｄ−リシン及び／またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態において、接着宿主細胞は、浮遊液で増殖させるための特定増殖条件下で選択及び修飾される場合がある。接着細胞を浮遊液で増殖させるために修飾するそのような方法は、当該分野で既知である。例えば、時間をかけて、増殖培地から動物血清を徐々に除去することにより、細胞を浮遊培養で増殖するように調整することができる。
【０１８６】
細胞株の選択及び評価
本発明に従って、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を発現するように改変された細胞は、商業的に実行可能な規模で組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を産生する能力について選択される。詳細には、本発明による遺伝子改変細胞は、高レベルで及び／または高い酵素活性を持って、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を産生することができる。いくつかの実施形態において、所望の細胞は、細胞培養条件下（例えば、標準的な大規模浮遊液または接着培養条件）で培養されるようになると、約５ピコグラム／細胞／日またはそれを超える（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ピコグラム／細胞／日を超超える）量でＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を産生することができる。いくつかの実施形態において、所望の細胞は、細胞培養条件下（例えば、標準的な大規模浮遊液または接着培養条件）で培養されるようになると、約５〜１００ピコグラム／細胞／日（例えば、約５〜９０ピコグラム／細胞／日、約５〜８０ピコグラム／細胞／日、約５〜７０ピコグラム／細胞／日、約５〜６０ピコグラム／細胞／日、約５〜５０ピコグラム／細胞／日、約５〜４０ピコグラム／細胞／日、約５〜３０ピコグラム／細胞／日、約１０〜９０ピコグラム／細胞／日、約１０〜８０ピコグラム／細胞／日、約１０〜７０ピコグラム／細胞／日、約１０〜６０ピコグラム／細胞／日、約１０〜５０ピコグラム／細胞／日、約１０〜４０ピコグラム／細胞／日、約１０〜３０ピコグラム／細胞／日、約２０〜９０ピコグラム／細胞／日、約２０〜８０ピコグラム／細胞／日、約２０〜７０ピコグラム／細胞／日、約２０〜６０ピコグラム／細胞／日、約２０〜５０ピコグラム／細胞／日、約２０〜４０ピコグラム／細胞／日、約２０〜３０ピコグラム／細胞／日）の範囲の量でＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を産生することができる。
【０１８７】
Ｃ１−ＩＮＨの半減期は、グリコシル化特性により影響を受ける場合がある。上記のとおり、本発明の細胞は、発現したＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質のグリコシル化特性を改善するように改変される場合がある。例えば、ルコネスト（登録商標）（Ｐｈａｒｍｉｎｇ
Ｎ．Ｖ．）は、血漿由来ヒトＣ１−ＩＮＨほどシアリル化されない及び／または血漿由来ヒトＣ１−ＩＮＨとは異なるシアリル化分布を有する組換えＣ１−ＩＮＨポリペプチドであるが、これは、血漿由来ヒトＣ１−ＩＮＨよりも短い半減期を有することが示されている。Ｄａｖｉｓ，  Ｂ．  ＆  Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｃｏｎｅｓｔａｔ  ａｌｆａ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  ａｔｔａｃｋｓ，  Ｔｈｅｒ  Ｃｌｉｎ  Ｒｉｓｋ  Ｍａｎａｇ．  ７：  ２６５−２７３
（２０１１）；  Ｋｏｌｅｓ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｌａｃｔａｔｉｏｎ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｎ−ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  Ｃ１  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｍｉｌｋ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｒａｂｂｉｔｓ，  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，  １４（１１）：９７９−９８６  （２００４）；
Ｋｏｌｅｓ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ−  ａｎｄ  Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  Ｃ１  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｉｌｋ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｒａｂｂｉｔｓ，  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，  １４（１）：５１−６４  （２００４）。
【０１８８】
細胞培養培地及び条件
本発明による遺伝子改変細胞を用いて組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を産生させるのに、様々な細胞培養培地及び条件を使用することができる。例えば、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、血清含有培地でも無血清培地でも産生させることができる。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、無血清培地で産生される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、動物質を含まない培地、すなわち動物由来成分が入っていない培地で産生される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、化学的限定培地で産生される。本明細書中使用される場合、「化学的限定栄養培地」という用語は、実質的に全ての化学成分が既知である培地を示す。いくつかの実施形態において、化学的限定栄養培地は、動物由来成分、例えば血清、血清由来タンパク質（例えば、アルブミンまたはフェチュイン）、及び他の成分などを含まない。場合によっては、化学的限定培地は、１種または複数のタンパク質（例えば、タンパク質成長因子またはサイトカイン）を含む。場合によっては、化学的限定栄養培地は、１種または複数のタンパク質加水分解産物を含む。他の場合では、化学的限定栄養培地は、無タンパク質培地、すなわち、タンパク質も、加水分解産物も、未知の組成の成分も含まない、無血清培地である。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、化学的限定培地は、１種または複数の動物由来成分が補充されている場合がある。そのような動物由来成分として、ウシ胎仔血清、ウマ血清、ヤギ血清、ロバ血清、ヒト血清、及びアルブミンなどの血清由来タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミンまたはヒト血清アルブミン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
大規模で組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパクを産生させるために様々な細胞培養条件を用いることができ、そのような条件として、ローラーボトル培養、バイオリアクターバッチ培養、灌流培養、及びバイオリアクター供給バッチ培養が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、浮遊液で培養された細胞により産生される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、接着細胞により産生される。いくつかの実施形態において、灌流培養を用いて、発現したタンパク質のグリコシル化を制御する。灌流培養の方法の例として、例えば、米国特許第６，５２８，２８６号及びＰＣＴ公開番号ＷＯ１９９６／０３９４８８Ａ１に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されず、これらの開示は、本明細書中参照として援用される。
【０１９１】
細胞培地及び培養条件の例を、実施例の節で説明する。実施例は、限定することを意図しない。
【０１９２】
発現したＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質の精製
本明細書中記載される様々な方法に従って産生されたＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を精製または単離するのに、様々な方法を使用することができる。いくつかの実施形態において、発現したＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、培地に分泌され、したがって、精製プロセスの第一ステップとして、細胞及び他の固形分を、例えば、遠心または濾過により、除去する場合がある。あるいはまたはこれに加えて、発現したＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、宿主細胞の表面に結合している。この実施形態では、ポリペプチドまたはタンパク質を発現する宿主細胞を、精製のため溶解させる。哺乳類宿主細胞の溶解は、当業者に周知の任意の数の手段により達成することができ、そのような手段として、ガラスビーズによる物理的破壊、及び高ｐＨ条件への曝露が挙げられる。
【０１９３】
Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、標準的な方法でまたはタンパク質の精製に利用可能な任意の他の技法で単離及び精製することができ、標準的な方法として、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、サイズ排除、及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー）、ゲル濾過、遠心分離、または溶解度差、エタノール沈殿、が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｓｃｏｐｅｓ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８７；  Ｈｉｇｇｉｎｓ，  Ｓ．  Ｊ．  ａｎｄ  Ｈａｍｅｓ，  Ｂ．  Ｄ．  （ｅｄｓ．），  Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９９；及びＤｅｕｔｓｃｈｅｒ，  Ｍ．  Ｐ．，  Ｓｉｍｏｎ，  Ｍ．  Ｉ．，  Ａｂｅｌｓｏｎ，  Ｊ．  Ｎ．  （ｅｄｓ．），  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  Ｓｅｒｉｅｓ，  Ｖｏｌ  １８２），  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９７を参照、これらは全て本明細書中参照として援用される）。特に免疫親和性クロマトグラフィーについては、タンパク質は、そのタンパク質に対して産生された抗体を含み固定支持体に固定された親和性カラムにそのタンパク質を結合させることにより、単離することができる。あるいは、インフルエンザコート配列、ポリヒスチジン、またはグルタチオンＳトランスフェラーゼなどの親和性タグを、標準の組換え技法によりタンパク質に結合させて、適切な親和性カラムに通すことにより、容易に精製することができる。精製プロセス中のポリペプチドまたはタンパク質の分解を減少または排除する目的で、フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ロイペプチン、ペプスタチン、またはアプロチニンなどのプロテアーゼ阻害因子を、任意のまたは全ての段階で添加することができる。発現したポリペプチドまたはタンパク質を単離及び精製する目的で細胞を溶解させなければならない場合に、プロテアーゼ阻害因子は、特に望ましい。
【０１９４】
ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ  Ｆｃ全長Ｃ１阻害因子のタンパク質ＡでのＨＰ精製を図３に示す。タンパク質Ａでの融合タンパク質の捕捉は、小規模では成功したが、規模を拡大すると、凝集が観察された。特定の理論に固執するつもりはないが、溶出に必要な低ｐＨが、凝集を引き起こしてＣ１−ＩＮＨを不活性化したようであった。いくつかの実施形態において、精製は、低ｐＨステップを含まない。いくつかの実施形態において、タンパク質を低ｐＨで安定させる目的で、融合タンパク質を変異させる。他の実施形態において、添加物を用いて、低ｐＨ溶出ステップの間、Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質を凝集から保護する。さらに他の実施形態において、非タンパク質Ａ樹脂を用いて、タンパク質を精製する。
【０１９５】
Ｃ１−ＩＮＨ  Ｆｃ融合タンパク質のタンパク質Ａでの精製に関連する問題を回避する精製方法の例を、以下の実施例の節に記載する。精製に適した樹脂として、アニオン交換樹脂、アルブミン親和性樹脂、Ｃ１阻害因子親和性樹脂、及びタンパク質Ａ樹脂が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ｐＨを下げることを必要としない精製方法が好ましい。いくつかの実施形態において、溶出のために酸性ｐＨを必要としない精製方法が好ましい。他の実施形態において、凝集を防ぐ安定剤が使用される。いくつかの実施形態において、ｐＨを下げることを必要とする方法において、凝集を防ぐ安定剤が使用される。適切な安定剤の限定ではなく例として、ＥＤＴＡが挙げられる。
【０１９６】
本発明のＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質の精製に適した方法として、例えば、米国特許第５，２７６，１４１号；同第ＵＳ７３８４７５４号；同第８，８０２，８１６号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１２１０７５７２；及びＷＯ２０１３００９５２６が挙げられるが、これらに限定されず、これらの開示は、本明細書中参照により援用される。
【０１９７】
医薬組成物
本発明はさらに、本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質及び生理学的に許容される担体または賦形剤を含有する医薬組成物を提供する。担体及び組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、滅菌されていることが可能である。配合は、投与様式に適合していなければならない。
【０１９８】
適切な薬学上許容される担体として、水、塩溶液（例えば、ＮａＣｌ）、生理食塩水、緩衝生理食塩水、アルコール、グリセロール、エタノール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、炭水化物、例えばラクトース、アミロース、またはデンプンなど、糖類、例えばマンニトール、スクロース、または他のものなど、ブドウ糖、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。医薬調製物は、所望であれば、活性化合物と有害な反応を起こすこともなくそれらの活性に干渉することもない助剤（例えば、滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響させるための塩、緩衝剤、着色剤、香味剤、及び／または芳香物質など）と混合することができる。好適な実施形態において、静脈内投与に適した水溶性担体が使用される。
【０１９９】
適切な医薬組成物または薬剤は、所望であれば、少量の湿潤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有することができる。組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性配合物、または粉剤が可能である。組成物は、従来の結合剤及びトリグリセリドなどの担体を用いて、坐剤として製剤することもできる。経口配合物は、標準の担体、例えば、医薬品品質のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含むことができる。
【０２００】
医薬組成物または薬剤は、ヒトへの投与に適合させた医薬組成物として、定法の手順に従って製剤することができる。例えば、いくつかの実施形態において、静脈内投与用組成物は、典型的には、滅菌等張性水性緩衝液に溶解させた溶液である。必要な場合は、組成物に、可溶化剤及び注射部位での疼痛を和らげるための局所麻酔剤も含ませることができる。一般に、成分は、別々に、または単位剤形で一緒に混合されてのいずれかで供給され、単位剤形は、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの容器に気密式に密閉された凍結乾燥による乾燥粉末または無水濃縮物などである。組成物が輸液で投与される場合、組成物は、医薬品品質の滅菌水、生理食塩水、またはブドウ糖／水の入った輸液ボトルを用いて分注することができる。組成物が注射で投与される場合、投与前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを用意することができる。
【０２０１】
本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、中性または塩の形で製剤することができる。薬学上許容される塩として、遊離アミノ基で形成されるもの、例えば塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの、ならびに遊離カルボキシル基で形成されるもの、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものが挙げられる。
【０２０２】
好適な配合物は、５０ｍＭのＮａＰＯ４（ｐＨ７．２）、５０ｍＭのソルビトール、及び１５０ｍＭのグリシンを含む。製剤は、液体でもよいし、凍結乾燥されて、投与前に再構築されてもよい。
【０２０３】
投与経路
本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質（または本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を含有する組成物もしくは薬剤）は、任意の適切な経路で投与される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、全身投与される。全身投与は、静脈内、皮内、頭蓋内、くも膜下腔内、吸入、経皮（外用）、眼内、筋肉内、皮下、筋肉内、経口、及び／または経粘膜投与が可能である。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、皮下投与される。本明細書中使用される場合、「皮下組織」という用語は、皮膚のすぐ真下にある緩い不規則な結合組織の層と定義される。例えば、皮下投与は、大腿部、腹部、臀部、または肩甲部をはじめとする領域（これらに限定されない）に組成物を注射することにより、行うことができる。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、経口投与される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、頭蓋内投与される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、くも膜下腔内投与される。所望であれば、複数の経路を同時に利用することができる。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、くも膜下腔内投与で対象に投与される。本明細書中使用される場合、「くも膜下腔内投与」または「くも膜下腔内注射」という用語は、脊柱管（脊椎周囲のくも膜下腔内空間）に注射することを意味する。様々な技法を使用することができ、そのような技法として、制限なく、頭蓋穿孔または大槽穿刺または腰椎穿刺を通じた側脳室注射などが挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明による「くも膜下腔内投与」または「くも膜下腔内送達」は、腰椎範囲または腰部を介したＩＴ投与または送達、すなわち、腰椎ＩＴ投与または送達を示す。本明細書中使用される場合、「腰部」または「腰椎範囲」という用語は、第三腰椎と第四腰椎の間の領域（腰）を示し、より包括的には、脊椎のＬ２−Ｓ１領域を示す。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、皮下（すなわち、皮膚の真下）投与で対象に投与される。そのような目的については、配合物は、シリンジを用いて注射することができる。しかしながら、配合物を投与する他の装置、例えば、注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（商標）及びＧｅｎｊｅｃｔ（商標）装置）；インジェクターペン（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）；無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）及びＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））；ならびに皮下パッチ送達系なども利用可能である。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、くも膜下腔内投与を、他の投与経路（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、非経口、経皮、または経粘膜（例えば、経口または経鼻）で）と併用する場合がある。
【０２０７】
本発明は、治療上有効量の本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物の単回投与ならびに複数回投与を企図する。組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、対象の症状（例えば、リソソーム貯蔵疾患）の性質、重篤度、及び範囲に応じて、定期間隔で投与することができる。いくつかの実施形態において、治療上有効量の組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質またはそれを含有する医薬組成物は、定期間隔で周期的に投与することができる（例えば、毎年１回、６ヶ月ごとに１回、５ヶ月ごとに１回、３ヶ月ごとに１回、２ヶ月ごと（２ヶ月ごとに１回）、毎月（１ヶ月に１回）、２週間ごと（２週間ごとに１回）、毎週、毎日、または連続して）。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、投与は、個体に局所的効果だけをもたらし、一方他の実施形態では、投与は、複数部分全体を通じて、個体に、例えば全身効果をもたらす。典型的には、投与は、１つまたは複数の標的組織に組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質の送達をもたらす。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、１つまたは複数の標的組織に送達され、そのような組織として、心臓、脳、皮膚、血液、脊椎、横紋筋（例えば、骨格筋）、平滑筋、腎臓、肝臓、肺、及び／または脾臓が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、心臓に送達される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、中枢神経系、特に脳及び／または脊椎に送達される。いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、三頭筋、前脛骨、ヒラメ筋、腓腹筋、二頭筋、僧帽筋、三角筋、四頭筋、及び／または横隔膜に送達される。
【０２０９】
剤形及び投薬レジメン
いくつかの実施形態において、組成物は、治療上有効量で及び／または特定の所望の結果と（例えば、補体関連型慢性疾患、例えばＨＡＥの予防と）関連する投薬レジメンに従って、投与される。
【０２１０】
本発明に従って投与されることになる特定の用量または量は、例えば、所望の結果の性質及び／または範囲、投与の経路及び／またはタイミングの特色、及び／または１つまたは複数の特徴（例えば、体重、年齢、生育歴、遺伝特徴、生活様式パラメーター、心臓欠陥の重篤度及び／または心臓欠陥の危険性のレベルなど、あるいはそれらの組み合わせ）に応じて、異なる場合がある。そのような用量または量は、当業者が決定することができる。いくつかの実施形態において、適切な用量または量は、標準的な臨床技法に従って決定される。あるいはまたはこれに加えて、いくつかの実施形態において、適切な用量または量は、投与するのに望ましいまたは最適な投薬範囲または量を同定する助けとなる１種または複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの使用を通じて決定される。
【０２１１】
様々な実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、治療上有効量で投与される。一般に、治療上有効量は、対象に有意義な利益（例えば、基礎疾患または症状の予防、治療、調節、治癒、阻止、及び／または寛解）をもたらすのに十分である。一般に、治療薬（例えば、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質）を必要としている対象に投与される治療薬の量は、対象の特徴に依存することになる。そのような特徴として、対象の症状、疾患重篤度、全体的な健康、年齢、性別、及び体重が挙げられる。当業者なら、これら及び他の関連要因に応じて適切な投薬量を容易に決定することができる。また、最適な投薬量範囲を特定するために、客観的及び主観的アッセイの両方を、任意選択で採用する場合がある。特定の実施形態のいくつかにおいて、投薬されることになる適切な用量または量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系に由来する用量反応曲線から外挿される場合がある。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、組成物は、医薬配合物として提供される。いくつかの実施形態において、医薬配合物は、ＨＡＥ発作の発生率または危険性を低下させることと関連した投薬レジメンに従って投与するための単位用量であるか、そのような量を含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を含む配合物は、単回用量として投与される。いくつかの実施形態において、本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を含む配合物は、定期間隔で投与される。「間隔」を開けての投与は、本明細書中使用される場合、治療上有効量が周期的（１回だけの投薬とは区別されるとおり）に投与されることを示す。間隔は、標準的な臨床技法により決定することができる。いくつかの実施形態において、本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を含む配合物は、２ヶ月に１回、毎月、毎月２回、３週間に１回、２週間に１回、毎週、週に２回、週に３回、毎日、１日２回、または６時間ごとに投与される。一個体に対する投与間隔は、固定された間隔である必要はなく、その個体の必要に応じて、時間とともに変化させることができる。
【０２１４】
治療上有効量は、一般に、複数の単位用量を含む場合がある投薬レジメンで投与される。どのような特定の治療タンパク質についても、治療上有効量（及び／または有効投薬レジメン内の適切な単位用量）は、例えば、投与経路、他の医薬作用剤との組み合わせに応じて、変わり得る。また、どのような特定の患者についても、特定の治療上有効量（及び／または単位用量）は、様々な要因に依存する可能性があり、そのような要因として、治療される障害及び障害の重篤度；採用された特定医薬作用剤の活性；採用された特定の組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別、及び食事；採用された特定融合タンパク質の投与の時間、投与経路、及び／または排出もしくは代謝速度；治療期間；ならびに医薬分野で周知の同様な要因が挙げられる。
【０２１５】
本明細書中使用される場合、「２ヶ月に１回」という用語は、２ヶ月あたり１回（すなわち、２ヶ月ごとに１回）の投与を意味し；「毎月」という用語は、１ヶ月あたり１回の投与を意味し；「３週間に１回」という用語は、３週間あたり１回（すなわち、３週間ごとに１回）の投与を意味し；「２週間に１回」という用語は、２週間あたり１回（すなわち、２週間ごとに１回）の投与を意味し；「毎週」という用語は、１週間あたり１回の投与を意味し；かつ「毎日」という用語は、１日あたり１回の投与を意味する。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を含む配合物は、定期間隔で無期限に投与される。いくつかの実施形態において、本明細書中記載される組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を含む配合物は、定期間隔で、定められた期間の間投与される。
【０２１７】
さらに当然のことながら、どのような特定の対象についても、特定の投薬レジメンが、個々の必要性及び酵素補充療法の投与を決めるまたは監督する専門家の判断に従って時間とともに調節されるべきであり、本明細書中記載される投薬範囲は、例示にすぎず、特許請求する発明の範囲または実行を制限することを意図しない。
【０２１８】
併用療法
いくつかの実施形態において、組換えＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質は、補体関連型疾患の治療に現在使用されている１種または複数の既知の治療薬（例えば、コルチコステロイド）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、既知の治療薬（複数可）は、その薬の標準または承認された投薬レジメン及び／または投薬計画に従って投与される。いくつかの実施形態において、既知の治療薬（複数可）は、その薬の標準または承認された投薬レジメン及び／または投薬計画と比較した場合に改変されているレジメンに従って投与される。いくつかの実施形態において、そのような改変レジメンは、１つまたは複数の単位用量の量が改変されている（例えば、減量または増量された）という点で、及び／または投薬の頻度が改変されている（例えば、単位用量間の１つまたは複数の間隔が延長されており、その結果、頻度が低下している、あるいは間隔が短縮されており、その結果、頻度が高くなる）という点で、標準または承認された投薬レジメンと異なっている。
【０２１９】
Ａ．障害
好適な実施形態は、慢性障害の治療である。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、本発明が提供する融合タンパク質は、補体関連型障害、例えば、ＮＭＯＳＤ  ＡＭＲ、及びＨＡＥ事象などに関連した急性発作に適切である。これらの発作は、長い場合も短い場合もある。いくつかの実施形態において、疾患または障害は慢性である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び方法は、予防的に使用される。本明細書中開示される組成物及び方法を使用して治療が可能な補体関連型疾患の例として、遺伝性血管性浮腫、抗体関連型拒絶、視神経脊髄炎スペクトラム疾患、外傷性脳損傷、脊椎損傷、虚血性脳傷害、火傷、中毒性表皮壊死症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病、脳卒中、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチーが挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例】
【０２２１】
本発明の他の特長、目的、及び利点は、以下の実施例で明らかとなる。しかし、当然ながら、実施例は、本発明の実施形態を示すものの、例示としてのみ提供されるものであり、限定するものではない。本発明の範囲内で様々な変更及び修飾が、実施例から当業者に明らかとなるだろう。
【０２２２】
実施例１．Ｆｃ融合タンパク質
この実施例は、様々な例示融合タンパク質構築物及びそのような融合タンパク質構築物の哺乳類細胞での一過性またはスケールアップ発現を例示する。以下に示すとおり、野生型または変異Ｆｃ部分を、全長（１〜４７８アミノ酸）または切断型（９８〜４７８アミノ酸）ヒトＣ１阻害因子と融合させる。
【０２２３】
Ａ．Ｆｃ−Ｃ１阻害因子融合発現構築物
Ｎ末端ＩｇＧ１  Ｆｃを持つ全長Ｃ１阻害因子の融合タンパク質を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分を角括弧で括ってある）：
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１１）。
【０２２４】
Ｎ末端ＩｇＧ１  Ｆｃを持つ切断型Ｃ１阻害因子の融合タンパク質を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分角括弧で括ってある）：
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１２）。
【０２２５】
Ｎ末端ＩｇＧ１  Ｆｃを持つ切断型Ｃ１阻害因子は、Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドの切り詰められた部分にあったセリン残基及びトレオニン残基が除去されていることから、大量の炭化水素部位を欠失している。これらのアミノ酸は、翻訳後プロセシングでグリコシル化されるＯＨ部分を有する。特定の理論に固執するつもりはないが、この炭化水素の除去は、アシアロ糖タンパク質受容体を介した分子クリアランスの可能性を低下させ、このことがＦｃ−Ｃ１阻害因子融合タンパク質の半減期を伸ばしている可能性がある。
【０２２６】
特定の理論に固執するつもりはないが、アシアロ糖タンパク質は、唯一のクリアランス機構ではない。他のグリカンの存在に基づく能動的クリアランス経路は他にも存在する。Ｆｃドメインは、複合体がエンドソームに内部移行しないかぎり、ＦｃＲＮ受容体と結合しない。エンドソーム内のｐＨの低下により、結合を起こすことが可能になる。いくつかの実施形態において、能動的クリアランスプロセスは、Ｃ１−ＩＮＨ融合構築物のグリコシル化特性が操作されていることにより、低下したり、遅くなったり、及び／または排除されたりする。これにより、受動的Ｆｃ再循環プロセスは、半減期の延長を実現することが可能になる。いくつかの実施形態において、切断型Ｃ１−ＩＮＨポリペプチドが好適である。切り詰めることで、能動的クリアランスに関連するグリコシル化部分が除去される場合がある。さらに、切断型は、大きさが小さくなるので、特に皮下投与される場合に、より多く吸収される可能性がある。
【０２２７】
ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ変異は、補体活性化及び野生型ＩｇＧ１  Ｆｃ配列で起こり得るＡＤＣＣを排除する。全長及び切断型Ｃ１−ＩＮＨ  ＩｇＧ１  Ｆｃエフェクターデッド構築物の両方を作成した。
【０２２８】
Ｎ末端ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ  Ｆｃを持つ全長Ｃ１阻害因子を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分を角括弧で括り、ＬＡＬＡ変異を二重括弧で括っている）：
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ《ＡＡ》ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１３）。
【０２２９】
Ｎ末端ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ  Ｆｃを持つ切断型Ｃ１阻害因子を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分を角括弧で括り、ＬＡＬＡ変異を二重括弧で括っている）：
［ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥ《ＡＡ》ＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１４）。
【０２３０】
Ｎ末端ＩｇＧ４  Ｆｃを持つ切断型Ｃ１阻害因子の融合タンパク質を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分を角括弧で括ってある）：［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号３２）。
【０２３１】
Ｎ末端ＩｇＧ４  Ｆｃを持つ切断型Ｃ１阻害因子の融合タンパク質を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分を角括弧で括ってある）：［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号３３）。
【０２３２】
Ｎ末端ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ  Ｆｃを持つ全長Ｃ１阻害因子を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分を角括弧で括り、Ｓ２４１Ｐ変異を二重括弧で括っている）：
［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰ《Ｐ》ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１５）。
【０２３３】
Ｎ末端ＩｇＧ４  Ｓ２４１Ｐ  Ｆｃを持つ切断型Ｃ１阻害因子を、上記の方法に従って作成した。これは以下のアミノ酸配列を有する（Ｆｃ部分を角括弧で括り、Ｓ２４１Ｐ変異を二重括弧で括っている）：
［ＥＳＫＹＧＰＰＣＰ《Ｐ》ＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１６）。
【０２３４】
Ｂ．Ｆｃ−Ｃ１阻害因子融合タンパク質の小規模一過性発現
ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−Ｆ細胞（ヒト胚性腎臓細胞浮遊液、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｒ７９０−０７）、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ−Ｓ細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞浮遊液、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｒ８００−０７）、及びＨＴ１０８０細胞を、様々なＣ１阻害因子融合プラスミド（Ｎ−ｈＦｃ、Ｎ−ｈＦｃＬＡＬＡ、及びＮ−ｈＦｃＩｇＧ４ｍ）で形質移入し、及び対照としてＤＮＡの形質移入を行わなかった。
【０２３５】
２９３−Ｆ細胞及びＣＨＯ−Ｓ細胞の形質移入は、２９３−ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１６４４７−５００）を用い、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎのプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎプロトコル公開番号ＭＡＮ０００７８１８  Ｒｅｖ．１．０、ｈｔｔｐｓ：／／ｔｏｏｌｓ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｓｆｓ／ｍａｎｕａｌｓ／ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ＿ＭＡＸ＿Ｒｅａｇｅｎｔ＿ｍａｎ．ｐｄｆで入手可能）に従って行った。形質移入後、２９３−Ｆ細胞は、無血清ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２３３８−０１８）に播種し、ＣＨＯ−Ｓ細胞は、無血清ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２６５１−０１４）に播種した。どちらも最終培養体積は３０ｍＬであった。
【０２３６】
同様に、ＨＴ１０８０細胞を、標準の形質移入プロトコル（３５０Ｖ、９６０ｕＦ、１２ｅ６個の細胞、３５μｇのＤＮＡ）を用いて形質移入した。
【０２３７】
条件培地（ＣＭ）を、形質移入の４日後及び７日後（再供給後３日間蓄積させる）に形質移入細胞培養物から採集した。融合タンパク質発現を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（８〜１６％ＴＧゲル、１５０Ｖで１．５時間）で評価し、クーマシーブルーで視覚化した。
【０２３８】
エフェクターデッド構築物の安定プールを生成させる目的で、ＨＴ１０８０を一過性形質移入された細胞を、１×１０６細胞／ｍＬで３７℃において播種した。２日間の回復後、細胞を、２５０μｇ／ｍＬのゼオシンを含む適切な化学限定（ＣＤ）培地に入れて、細胞が９５％生存度を示すまで２週間選別にかけた。融合タンパク質発現を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで評価し、クーマシーブルーで視覚化した。Ｃ１−ＩＮＨ  Ｆｃ融合構築物の発現は、Ｃ１−ＩＮＨアルブミン構築物の発現よりも多いことがわかった。
【０２３９】
Ｃ．ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−Ｆ細胞を用いてスケールアップした発現
ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−Ｆ細胞を、ＬＡＬＡ−Ｃ１阻害因子融合プラスミド（全長及び切断型Ｃ１の両方）ならびにＩｇＧ４ｍ−Ｃ１阻害因子融合プラスミド（全長及び切断型Ｃ１）で形質移入した。形質移入は、上記のとおり２９３−ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬を用いて行った。
【０２４０】
１Ｌ震蘯フラスコ中、３２０ｍＬの作業体積で、細胞を形質移入した。ＤＮＡ及びＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬の量を、上記の形質移入の形質移入体積３０ｍＬに比例させてスケールアップした。ＣＭを、形質移入４日後に、形質移入細胞から採集し、上記のとおり、発現をＳＤＳ−ＰＡＧＥで評価した。２回目の採集のため細胞を再供給した（形質移入７日後、３日のバッチ収集）。
【０２４１】
Ｃ．発現データのまとめ
全長Ｃ１阻害因子を持つＦｃ融合物は、天然の組換えＣ１よりも高いレベルで一貫して発現する。切断型Ｃ１阻害因子を持つＦｃ融合物は、天然の組換えＣ１阻害因子と同様に発現する。タンパク質の重大なクリッピングは、試験した構築物のどれに対しても、どの宿主細胞培養試料でも観察されなかった。
【０２４２】
ＨＥＫ２９３での一過性細胞発現は、試験したその他の細胞型と比べて顕著に増加した。Ｎ末端にＦｃ配列を配置すると、Ｃ末端の場合よりも発現が顕著に増加した。
【０２４３】
実施例２．Ｆｃ−Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質の特性決定
Ｆｃ−Ｃ１阻害因子融合タンパク質を特性決定するため、融合タンパク質を、最初に、タンパク質Ａカラムを含むプロセスを用いて精製した。例示の精製の結果を図３に示す。
【０２４４】
試料中のＣ１阻害因子融合組成物濃度及び検出された全タンパク質を図４に示す。１回の親和性カラム精製で高精製物質が得られた。上記の精製プロセスを用いて、優れたタンパク質収率が達成された。
【０２４５】
試料で検出されたＣ１阻害因子融合組成物エンドトキシン濃度を図５に示す。最終精製物ではエンドトキシンレベルが低いことがわかり、それらを医薬用途に極めて適するものとしていた。
【０２４６】
上に概要を述べた精製Ｆｃ融合タンパク質を、タンパク質純度、ＳＥＣ、熱安定性、ＦｃＲＮとの結合、Ｃ１ｑとの結合、及びＦｃｇＲ１との結合について分析した。
【０２４７】
ＰＫ分析用の試料は全て、ＲＰ  ＨＰＬＣにより９７％超の純度であった。
Ｃ１阻害因子融合タンパク質のサイズ排除クロマトグラフィーを、以下の例示条件下で行った：カラム：Ｔｏｓｏｈ  Ｇ３０００ｓｗｘｌ；移動相緩衝液：０．２Ｍのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８；流速：０．５ｍＬ／分
【０２４８】
試料を、体積４０μＬで注入した。測定した試料は、ＬＡＬＡ  Ｃ１阻害因子全長（ＦＬ）Ｒ１；ＬＡＬＡ  Ｃ１阻害因子切断型（ＴＲ）Ｒ１；ＩｇＧ４  Ｃ１阻害因子全長（ＦＬ）Ｒ１；ＩｇＧ４  Ｃ１阻害因子切断型（ＴＲ）Ｒ１；及び２０μＬのＢＳＡ対照の注入であった。
結果
【０２４９】
ＳＥＣ−ＭＡＬＳの例示結果を表１に示す。
【表１】
2020202841.tif 000002
【０２５０】
Ｃ１阻害因子融合タンパク質構築物の熱安定性を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）で査定した。
【０２５１】
Ａ．Ｆｃ融合タンパク質のＦｃＲＮとの結合及びＦｃエフェクター機能
Ｆｃ新生児受容体（ＦｃＲＮ）との結合は、分子の再循環を可能にし、Ｆｃ融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ血清中半減期の延長を招く。再循環は、分子が受動的に細胞に取り込まれてエンドソームのｐＨが下がることとして起こる。これにより、分子のＦｃ部分とＦｃＲＮの結合がもたらされる。ＦｃＲＮが再循環して細胞表面にもどると、ｐＨは中性になり、タンパク質は、再び血漿に放出される。
【０２５２】
ＦｃＲＮの細胞外ドメインとの結合を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、ビアコアシステムを用いて測定した。
【０２５３】
ＦｃＲｎを用いた直接の固定化は、以下の条件下、ＦｃＲｎを持つＣＭ５チップのアミンカップリングを介して達成した：
ＦｃＲｎ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃまたは自家製ＢＤ１）を、酢酸緩衝液ｐＨ５．０（Ｃａｔ＃ＢＲ−１００３−５１）に１０μｇ／ｍＬで希釈する。
流速：１０μｌ／分
最終カップリングシグナル３５４Ｒｕ
泳動緩衝液：ＰＢＳ−Ｐ＋、ｐＨを６．０にする
【０２５４】
結合動態試験を、以下のプロトコルを用いて行った。試料を、ＰＢＳ−Ｐ＋に希釈して、１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５、０ｎＭにした。パラメーターを以下のとおり設定した：
流速３０μＬ／分での会合３００秒及び解離６００秒
２５ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０で再生
【０２５５】
ＦｃＲｎを用いた例示結合動態データのまとめを表２に示す。
【表２】
2020202841.tif 000003
【０２５６】
Ｂ．Ｆｃ融合タンパク質のＣ１ｑへの結合の結合
野生型Ｆｃ分子は、本発明の目的にとっては望ましくない様々な量のエフェクター機能、例えば、補体カスケードを活性化する能力、ＡＤＣＣ活性、及び／または特定のＦｃ受容体と結合する能力を有する。本発明のＣ１−ＩＮＨ融合タンパク質を必要としている患者は補体関連型疾患を患っており、したがって、Ｆｃドメインに関連するエフェクター機能を低下させまたは排除することは、本発明の目的である。本明細書中開示されるＣ１−ＩＮＨ  Ｆｃ融合構築物は、好ましくは、エフェクター機能を低下させまたは排除する。Ｃ１−ＩＮＨ  Ｆｃ融合構築物は、好ましくは、補体活性化、ＡＤＣＣ、及び／またはＦｃγ受容体を減少または排除する。エフェクター機能は、Ｃ１ｑとの結合により、同じく、Ｆｃγ受容体との結合により測定することができる。
【０２５７】
Ｃ１ｑ結合ＥＬＩＳＡ
使用したＣ１ｑ結合ＥＬＩＳＡプロトコルは、以下のとおりであった：
・タンパク質をマキシソーププレートに塗布し、５０ｍＭの炭酸緩衝液、ｐＨ９．６、Ｏ／Ｎ中、４℃で、１００μｇ／ｍＬから０μｇ／ｍＬまで力価測定した
・ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．０５％ＴＷＥＥＮ−２０）で３回洗浄
・２μｇ／ｍＬのＣ１ｑ含有アッセイ緩衝液（ＰＢＳ／０．０５％ＴＷＥＥＮ−２０／０．１％魚類ゼラチン）を加え、室温で２時間インキュベートする
・ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．０５％ＴＷＥＥＮ−２０）で３回洗浄
・抗Ｃ１ｑ−ＨＲＰ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  ＰＡ１−８４３２４）を４μｇ／ｍＬで加え、室温で１時間インキュベートする
・ＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（ＰＢＳ／０．０５％ＴＷＥＥＮ−２０）で３回洗浄
・室温で１５分間のＴＭＢ
・ＯＤ４５０を読む
【０２５８】
ｈＦｃ、ｈＦｃＬＡＬＡ、及びＩｇＧ４ｍとＣ１−ＩＮＨとの融合物及びｒｈＣ１（血漿由来の市販品）阻害因子についての例示Ｃ１ｑ結合ＥＬＩＳＡ結果を、図６に示す。この図は、各試料中のタンパク質濃度に対するＯＤ４５０をプロットしたものである。試料は、ｈＦｃ  ＩｇＧ１−Ｃ１−ＩＮＨ、ｈＦｃ  ＬＡＬＡ  ＩｇＧ１−Ｃ１−ＩＮＨ、及びｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍ−Ｃ１−ＩＮＨ融合物、組換えヒトＣ１−ＩＮＨ（ｒｈＣ１−ＩＮＨ）（１０８０細胞で発現したもの）、ならびに陽性対照としてＩｇＧ１  Ｆｃ−ヒトフォリスタチン（ｈＦｃ  ＩｇＧ１−ｈＦｓｔ−ＸＴＥＮ）融合物及び陰性対照としてヒトフォリスタチン−Ｘｔｅｎ（ｈＦｓｔ−ＸＴＥＮ）融合物であった。
【０２５９】
Ｆｃ融合タンパク質のＦｃγＲ１との結合
ＦｃγＲ１の細胞外ドメインとの結合を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により、ビアコアシステムを用いて測定した。ビアコア捕捉アプローチを、図７に示す。アッセイの設定は以下のとおりであった：
ＨＢＳ−Ｐ＋を測定緩衝液として使用
ＣＭ５上の抗Ｈｉｓ（ＧＥ、抗Ｈｉｓキット）を１６０００Ｒｕまでカップリングさせる
【０２６０】
捕捉レベル
ＦｃγＲＩ（５μｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ）について、捕捉レベルは約３５０Ｒｕ
【０２６１】
試料調製
陽性対照：Ｎ−ｈＦｃ−Ｃ１−ＩＮＨを、ＨＢＳ−Ｐ＋緩衝液に希釈して、１２．５、６．２５、３．１７５、１．５９、及び０．７９ｎＭにする
他の試料（Ｎ−ｈＦｃＩｇＧ４ｍ−Ｃ１  Ｉｎｈ、Ｎ−ｈＦｃＩｇＧ４ｍ−Ｃ１−ＩＮＨ  Ｔｒ、Ｎ−ｈＦｃＬａｌａ−Ｃ１−ＩＮＨ、及びＮ−ｈＦｃｌａｌａ−Ｃ１−ＩＮＨ
Ｔｒ）は、ＨＢＳ−Ｐ＋緩衝液に希釈して、１００、５０、２５、１２．５、６．２５ｎＭにする。
【０２６２】
結合動態の設定：
捕捉：１０μｌ／ｍＬで１２秒の注入
捕捉安定化：３０秒
会合：流速３０μｌ／ｍＬで３００秒
解離：流速３０μｌ／ｍＬで６００秒
再生：１０ｍＭのリン酸、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．５を用いて３０μｌ／ｍＬで４０秒
【０２６３】
Ｃ１−ＩＮＨ構築物とＦｃγＲＩとの結合を示す例示データのまとめを、表３に示す。Ｎ−ｈＦｃＬａｌａ−Ｃ１−ＩＮＨは、ＦｃγＲＩと結合しなかった。Ｎ−ｈＦｃＩｇＧ４ｍ−Ｃ１−ＩＮＨ及びＮ−ｈＦｃＩｇＧ４ｍ−Ｃ１−ＩＮＨ  Ｔｒは、ＦｃγＲＩと結合したが、Ｎ−ｈＦｃ−Ｃ１−ＩＮＨよりも弱かった。ｈＦｃＬａｌａまたはｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍを持つ切断型Ｃ１−ＩＮＨ融合物は、ＦｃγＲＩとの結合親和性が上昇している。
【表３】
2020202841.tif 000004
【０２６４】
Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質のＣ１阻害因子活性
Ｃ１阻害因子は、多くの酵素の、凝固、接触、及び補体経路を阻害することができ、したがって、ＨＡＥ、ＡＭＲ、ＮＭＯＳＤ、及びＰＮＨなどの疾患の治療で有用である。
【０２６５】
Ｃ１−ＩＮＨは、自殺する阻害因子であり、このことは、Ｃ１−ＩＮＨが阻害プロセス中に不活性化されることを意味する。Ｃ１−ＩＮＨは、標的プロテアーゼと１：１の化学量論的複合体を形成し、続いて、全複合体がクリアランスを受ける。そうすると、Ｃ１−ＩＮＨは、他の酵素の阻害にもはや利用できなくなる。以下の実験は、２つの例示方法により、Ｃ１を阻害する能力について、Ｆｃ−Ｃ１阻害因子融合タンパク質を試験した。
【０２６６】
２つの例示ｉｎ  ｖｉｔｒｏアプローチを用いて、Ｃ１阻害因子のＣ１ｓ活性に対する阻害活性を試験した：Ｃ１ＳとＣ１阻害因子の複合体を、ＥＬＩＳＡを利用した方法（機能的ＥＬＩＳＡ）で測定−エフェクターデッド構築物に対してのみ使用、及びＣ１ｓの比色測定用基質を切断する能力の阻害を測定。２つのアッセイは、一致するデータをもたらした。
【０２６７】
Ｃ１ＳとＣ１阻害因子の複合体を測定する機能的ＥＬＩＳＡ
この方法は、図８のＰＫ試験用に作られたエフェクターデッドＦｃ構築物を試験するのに用いた。ＥＬＩＳＡプロトコルは以下のとおりであった：
・６０μＬの希釈Ｃ１−ＩＮＨ＋１２μＬのビオチン−Ｃ１ｓ
○室温で３０分間インキュベーション
・５０μＬの複合体をストレプトアビジンコーティングしたプレートに移す
○室温で１０分間インキュベーション、５回洗浄
・５０μＬの抗Ｃ１−ＩＮＨ−ＨＲＰを加える
○室温で６０分間インキュベーション、５回洗浄
・１００μＬのＴＭＢ基質を加える
○室温で１５分間インキュベーション、
・１００μＬの停止溶液（４％ＨＣｌ）を加える
・ＯＤ４５０で読む
【０２６８】
血漿由来Ｃ１−ＩＮＨ分子量（ＭＷ）を、ゲルで見積もったところ、約９３，０００Ｄａであった。この値を用いて、ＳＰＲ分析で用いたタンパク質の濃度を計算した。構築物の濃度は、質量分析を用いて決定されたとおりの各構築物の重量で計算した。ＦＬ  Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ及びＦＬ  Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍは、約２００，０００Ｄａの分子量を有する。Ｔｒ  Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ及びＴｒ  Ｃ１−ＩＮＨ  ｈＦｃ  ＩｇＧ４ｍは、約１６０，０００Ｄａの分子量を有する。
【０２６９】
複数の試験において、融合タンパク質は、天然のＣ１阻害因子よりも高いＣ１ｓ親和性を示した。切断型Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質も同様に、天然のＣ１阻害因子よりも高いＣ１ｓ親和性を示した。
【０２７０】
Ｃ１ｓの比色測定用基質を切断する能力の阻害
Ｃ１ｓ＋／−Ｃ１−ＩＮＨによる比色測定用ペプチドのＣ１ｓ切断を阻害する能力についてエフェクターデッド構築物が持つ能力を、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓのＣ１阻害因子用活性アッセイを用いて試験した。アッセイプロトコルは、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｈｕｍａｎ−ｓｅｒｐｉｎ−ｇ１−ｃ１−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−ｐｌａｓｍａ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｆ＿２４８８−ｐｉで見ることができる。
【０２７１】
１ウェルあたりの最終アッセイ条件：
・ｒｈＣ１ｓ：０．０１０μｇ（１．３３ｎＭ）
・ｈセルピンＧ１曲線：１００、５０、２５、５、２．５、１．２５、０．６２５、０．２、０．０４、及び０．０１ｎＭ
・基質：１００μＭ
・ＤＴＮＢ：１００μＭ
【０２７２】
活性アッセイ設定
２５μＬのＣ１阻害因子＋２５μＬのＣ１ｓ（２μｇ／ｍＬ）
室温で３０分間インキュベーション
複合体をアッセイ緩衝液で５倍に希釈
５０μＬの希釈Ｃ１−ＩＮＨ−Ｃ１ｓ複合体＋５０μＬの基質（５００ｕＭ）／反応体（２００ｕＭ）
室温で１５分間インキュベーション
ＯＤ４０５で読む
【０２７３】
アッセイで試験したエフェクターデッド構築物それぞれについての力価測定曲線を、図９Ａ及び図９Ｂに示すとおり、質量スペクトルまたは分子量のゲル概算を用いて計算した。全長融合タンパク質は、天然のＣ１阻害因子よりも高いＣ１ｓ親和性を示した。切断型Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質も同様に、天然のＣ１阻害因子よりも高いＣ１ｓ親和性を示した。
【０２７４】
溶血アッセイ
図１０Ａ及び図１０Ｂは、補体第二経路及び補体古典経路の溶血アッセイの図式的外観を示す。Ｓｅｅｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ，
２９６：１８７−１９８  （２００５）。図１１Ａ、図１１Ｂ、及び図１１Ｃは、血漿由来Ｃ１−ＩＮＨ、ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ  Ｆｃ切断型Ｃ１阻害因子、ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ全長Ｃ１阻害因子、及び血漿由来Ｃ１−ＩＮＨの２種の製剤が発揮する溶血活性、例えば、補体の第二経路の活性化度合いの比較を示す。融合タンパク質は、血漿由来Ｃ１阻害因子と同様に挙動した。
【０２７５】
Ｃ１阻害因子Ｆｃ融合タンパク質活性のまとめ
Ｆｃ−Ｃ１阻害因子融合タンパク質は全て、Ｃ１ｓ活性を阻害することができる。Ｆｃ融合タンパク質、特に、全長Ｃ１阻害因子融合タンパク質は、一貫して、血漿由来Ｃ１阻害因子よりも高い親和性でＣ１ｓを阻害する。全長及び切断型Ｃ１阻害因子融合タンパク質（例えばＦｃ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡを用いて作られたもの）の両方とも、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで赤血球の溶解を阻害することができる。
【０２７６】
Ｆｃ融合タンパク質のＩｎ  ｖｉｖｏでのＰＫ特性
図１２は、血漿由来Ｃ１阻害因子及び組換えＣ１−ＩＮＨと比較した、エフェクターデッド融合構築物のウサギＰＫ試験の例示結果を示す。ＩＶ投与された血漿由来Ｃ１−ＩＮＨは、単相性血清中濃度時間特性を示す。ＩＶ投与されたｒｈＣ１−ＩＮＨ−ＩｇＧ構築物は、二相性血清中濃度時間特性を示す。初期急速クリアランス相（約２時間）は、受容体介在性細胞取り込みを示していた。構築物は、第二のより遅いクリアランス相を示した。
【０２７７】
実施例３．アルブミン融合タンパク質
Ａ．アルブミン−Ｃ１阻害因子融合発現構築物
複数のアルブミンタンパク質構築物を生成させた。これらの構築物の模式図を図１３Ａ〜Ｆに示す。全長Ｃ１−ＩＮＨのＮ末端と直接連結した全長及び切断型Ｃ１−ＩＮＨのＮ末端と直接連結したアルブミンまたはアルブミンのＤ３ドメインを含む融合構築物発現ベクターを作った。全長Ｃ１−ＩＮＨのＮ末端と直接連結した全長及び切断型Ｃ１−ＩＮＨのＮ末端とリンカーを用いて連結したアルブミンまたはアルブミンのＤ３ドメインを含む融合構築物発現ベクターも作った。これらの構築物により発現する融合タンパク質のアミノ酸配列は、以下の配列を含むものであった：
【０２７８】
アルブミン全長Ｃ１−ＩＮＨ直接融合物（アルブミンドメインを角括弧で括ってある）：
［ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１８）。
【０２７９】
アルブミン切断型Ｃ１−ＩＮＨ直接融合物（アルブミンドメインを角括弧で括ってある）：
［ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号１９）。
【０２８０】
Ｄ３アルブミン全長Ｃ１−ＩＮＨ直接融合物（Ｄ３アルブミンドメインを角括弧で括ってある）：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２１）。
【０２８１】
Ｄ３アルブミン切断型Ｃ１−ＩＮＨ直接融合物（Ｄ３アルブミンドメインを角括弧で括ってある）：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２２）。
【０２８２】
アルブミン全長Ｃ１−ＩＮＨ  ＧＧＧリンカー融合物（アルブミンドメインを角括弧で括り、リンカーを二重括弧で括っている）：
［ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧ》ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２３）。
【０２８３】
アルブミン切断型Ｃ１−ＩＮＨ  ＧＧＧリンカー融合物（アルブミンドメインを角括弧で括り、リンカーを二重括弧で括っている）：
［ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧ》ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２４）。
【０２８４】
Ｄ３アルブミン全長Ｃ１−ＩＮＨ  ＧＧＧリンカー融合物（Ｄ３アルブミンドメインを角括弧で括り、リンカーを二重括弧で括っている）：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧ》ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２５）。
【０２８５】
Ｄ３アルブミン切断型Ｃ１−ＩＮＨ  ＧＧＧリンカー融合物（Ｄ３アルブミンドメインを角括弧で括り、リンカーを二重括弧で括っている）：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧ》ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２６）。
【０２８６】
アルブミン全長Ｃ１−ＩＮＨ（ＧＧＧＧＳ）２リンカー融合物（アルブミンドメインを角括弧で括ってある）：
［ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ》ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２８）。
【０２８７】
アルブミン切断型Ｃ１−ＩＮＨ（ＧＧＧＧＳ）２リンカー融合物（アルブミンドメインを角括弧で括り、リンカーを二重括弧で括っている）：
［ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＫＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ》ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号２９）。
【０２８８】
Ｄ３アルブミン全長Ｃ１−ＩＮＨ（ＧＧＧＧＳ）２リンカー融合物（Ｄ３アルブミンドメインを角括弧で括り、リンカーを二重括弧で括っている）：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ》ＮＰＮＡＴＳＳＳＳＱＤＰＥＳＬＱＤＲＧＥＧＫＶＡＴＴＶＩＳＫＭＬＦＶＥＰＩＬＥＶＳＳＬＰＴＴＮＳＴＴＮＳＡＴＫＩＴＡＮＴＴＤＥＰＴＴＱＰＴＴＥＰＴＴＱＰＴＩＱＰＴＱＰＴＴＱＬＰＴＤＳＰＴＱＰＴＴＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号３０）。
【０２８９】
Ｄ３アルブミン切断型Ｃ１−ＩＮＨ（ＧＧＧＧＳ）２リンカー融合物（Ｄ３アルブミンドメインを角括弧で括り、リンカーを二重括弧で括っている）：
［ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＲＡＡＬＧＬ］《ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ》ＧＳＦＣＰＧＰＶＴＬＣＳＤＬＥＳＨＳＴＥＡＶＬＧＤＡＬＶＤＦＳＬＫＬＹＨＡＦＳＡＭＫＫＶＥＴＮＭＡＦＳＰＦＳＩＡＳＬＬＴＱＶＬＬＧＡＧＥＮＴＫＴＮＬＥＳＩＬＳＹＰＫＤＦＴＣＶＨＱＡＬＫＧＦＴＴＫＧＶＴＳＶＳＱＩＦＨＳＰＤＬＡＩＲＤＴＦＶＮＡＳＲＴＬＹＳＳＳＰＲＶＬＳＮＮＳＤＡＮＬＥＬＩＮＴＷＶＡＫＮＴＮＮＫＩＳＲＬＬＤＳＬＰＳＤＴＲＬＶＬＬＮＡＩＹＬＳＡＫＷＫＴＴＦＤＰＫＫＴＲＭＥＰＦＨＦＫＮＳＶＩＫＶＰＭＭＮＳＫＫＹＰＶＡＨＦＩＤＱＴＬＫＡＫＶＧＱＬＱＬＳＨＮＬＳＬＶＩＬＶＰＱＮＬＫＨＲＬＥＤＭＥＱＡＬＳＰＳＶＦＫＡＩＭＥＫＬＥＭＳＫＦＱＰＴＬＬＴＬＰＲＩＫＶＴＴＳＱＤＭＬＳＩＭＥＫＬＥＦＦＤＦＳＹＤＬＮＬＣＧＬＴＥＤＰＤＬＱＶＳＡＭＱＨＱＴＶＬＥＬＴＥＴＧＶＥＡＡＡＡＳＡＩＳＶＡＲＴＬＬＶＦＥＶＱＱＰＦＬＦＶＬＷＤＱＱＨＫＦＰＶＦＭＧＲＶＹＤＰＲＡ（配列番号３１）。
【０２９０】
Ｂ．アルブミン融合タンパク質の発現
ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ−Ｓ細胞を、上記のとおり、これらの融合構築物発現ベクターで形質移入した。ＣＨＯ−ＧＳ安定プールを調製し、収集及び分析用ＣＭの生成に使用した。細胞を、２×１０６細胞／ｍＬで播種し、３３℃で４日間インキュベートした。グルタミンを３日目に補充した。
【０２９１】
条件培地（ＣＭ）を、形質移入４日後に形質移入細胞培養物から採集し、クーマシーゲルで泳動させて発現を評価した。４日目のバッチ採集物を、５０ｋＤａ  Ｖｉｖａｓｐｉｎ（登録商標）２０遠心濃縮機（Ｖｉｖａｐｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｉｎｃ．、カタログ番号ＶＳ２０３１）を用いて濃縮し、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔアルブミン親和性マトリクス（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１９１２９７０１Ｌ）を用いて精製した。溶離緩衝液は、２０ｍＭのトリスｐＨ７．４＋２ＭのＭｇＣｌ２）であった。試料を、クーマシーゲル上でＢＳＡと対比して測定して発現を評価した。
【０２９２】
この精製に基づく収率は、ＨＳＡ−Ｃ１−ＩＮＨについては約３．６ｍｇ／Ｌであり、Ｄ３−Ｃ１−ＩＮＨについては約１．６ｍｇ／Ｌであった。タンパク質は、Ｖｉｖａｓｐｉｎ（登録商標）５０ｋＤａを用いて約２ｍｇ／ｍＬに濃縮し、−２０℃で貯蔵した。精製したタンパク質を、一晩、Ｃ１−Ｉｎｈ配合緩衝液（５０ｍＭのトリスｐＨ７．２、５０ｍＭのソルビトール、１５０ｍＭのグリシン）へと透析し、濃縮した。
【０２９３】
タンパク質を、Ｃ１ｓ活性について調べた。データを図１４に示すが、この図は、比色測定用ペプチドのＣ１ｓ切断を阻害する能力について、いくつかの例示アルブミンＣ１−ＩＮＨ融合構築物を測定したアッセイの結果を表し、比較用の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨ及びＨＴ１０８０発現組換えＣ１−ＩＮＨが含まれる。
【０２９４】
タンパク質を、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ上で泳動させて、凝集について調べ、大きさを求めた。アッセイの例示パラメーターは以下のとおりであった：
カラム：Ｔｏｓｏｈ  Ｇ３０００ｓｗｘｌ
泳動相緩衝液：０．２Ｍのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８
流速：０．５ｍＬ／分
試料：
ＨＳＡ  Ｄ３  Ｃ１−ＩＮＨは３０μｇ注入
ＨＳＡ  Ｃ１−ＩＮＨは３５μｇ注入
ＢＳＡ対照は４０μｇ注入
Ｃ１−ＩＮＨ  ＩｇＧ１  ＬＡＬＡ  Ｆｃは３５μｇ注入
【０２９５】
ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定は、２９３  Ｃ１−ＩＮＨ試料用に開発したＳＥＣ方法を用いて、ＨＳＡ−Ｃ１−ＩＮＨ分子に対して用いた。巨大分子量の分子は、この方法ではＨＳＡ試料中に検出されなかった。
【０２９６】
次いで、Ｃ１阻害因子アルブミン融合タンパク質の動的光散乱（ＤＬＳ）分析を行った。ＨＳＡ及びＣ１−ＩＮＨ  Ｃ４６を、対照として用いた。全ての試料及び対照を、ＤＰＢＳ緩衝液に希釈して０．５ｍｇ／ｍＬとした。Ｃ１阻害因子アルブミン融合タンパク質の例示のＤＬＳ結果を表４に示す。
【表４】
2020202841.tif 000005
【０２９７】
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔヒトアルブミン親和性マトリクスを用いたＣＨＯ−ＧＳ  ＣＭからのＨＳＡ−Ｃ１−ＩＮＨならびにＨＳＡ＿Ｄ３−Ｃ１−ＩＮＨ両方の精製は、うまくいった。精製したタンパク質は、血漿由来Ｃ１−ＩＮＨに匹敵するＣ１ｓ活性を有していた。ＳＥＣ−ＭＡＬＳは単独のピークのみを示し、予想される大きさのＨＭＷ種はなかった。
【０２９８】
アルブミン−Ｃ１−ＩＮＨ＋／−リンカー構築物を発現する安定プールを生成させた。ＣＨＯ−ＧＳ  ＧＮＥ細胞を、電気穿孔法で取扱説明書に従い形質移入した。安定プールを選択し、７日バッチ採集物の産生を３３℃で行った。バッチ採集物は、発現用のクーマシーゲルで評価した。クーマシーの結果は、全長ＨＳＡ−Ｃ１−ＩＮＨ融合タンパク質がＨＳＡ＿Ｄ３融合物よりも少ない発現を示すことを示す。リンカー配列の付加について有意差は見られなかった。
【０２９９】
等価物及び範囲
当業者なら、定法にすぎない実験を使用して、本明細書中記載される本発明の特定の実施形態との多くの等価物が分かるだろうし、確認することができる。本発明の範囲は、上記の説明に限定されることを意図せず、そうではなくて、以下の請求項に記載されるとおりである：
【図１】
2020202841.tif 000006
【図２】
2020202841.tif 000007
【図３】
2020202841.tif 000008
【図４】
2020202841.tif 000009
【図５】
2020202841.tif 000010
【図６】
2020202841.tif 000011
【図７】
2020202841.tif 000012
【図８】
2020202841.tif 000013
【図９】
2020202841.tif 000014
【図１０】
2020202841.tif 000015
【図１１】
2020202841.tif 000016
【図１２】
2020202841.tif 000017
【図１３】
2020202841.tif 000018
【図１４】
2020202841.tif 000019
【配列表】
2020202841000001.app