(57)【要約】【課題】天然物由来であって、抗腫瘍剤の有効成分としても好適なｍＲＮＡ成熟阻害剤の提供。【解決手段】下記式（１）〜（６）のいずれかで表される化合物を有効成分とすることを特徴とする、ｍＲＮＡ成熟阻害剤。［化１］2020158465.tif 000005【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）〜（６）
【化１】
2020158465.tif 000004
のいずれかで表される化合物を有効成分とすることを特徴とする、ｍＲＮＡ成熟阻害剤。
【請求項２】
前記化合物が、焙煎コーヒー豆に由来する化合物である、請求項１に記載のｍＲＮＡ成熟阻害剤。
【請求項３】
腫瘍の治療又は再発予防に用いられる、請求項１又は２に記載のｍＲＮＡ成熟阻害剤。
【請求項４】
コーヒーの可溶性成分をメタノール抽出し、得られたメタノール抽出物から、液体クロマトグラフィーにより下記式（１）、（２）、又は（４）で表される化合物を含む画分を分取する、ｍＲＮＡ成熟阻害剤の製造方法。
【請求項５】
前記コーヒーの可溶性成分が、焙煎コーヒー豆の可溶性成分である、請求項４に記載のｍＲＮＡ成熟阻害剤の製造方法。
【請求項６】
請求項１又は２に記載のｍＲＮＡ成熟阻害剤を含有することを特徴とする、医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物由来で活性が高く、抗腫瘍剤の有効成分としても好適なｍＲＮＡ成熟阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本では、がんによる死亡が３人に１人となっている。特に高齢者は、染色体中にこれまでに蓄積された変異を多く含むために、細胞ががん化しやすい傾向がある。がんは、細胞の増殖異常によるものであるため、食品から細胞増殖を抑制する機能性化合物を積極的に摂取することによって、効果的にがんの発症を抑制できると期待できる。現代社会の多様化した生活環境から、このような機能性化合物は、食品だけでなくサプリメント等として摂取する視点も重要となっている。すなわち、抗腫瘍作用を有する生理活性化合物を、食品やサプリメント等から継続的に摂取する方法論を確立することは、超高齢化社会を迎えた日本において健康な長寿社会を築いていく上で極めて重要な社会課題となる。
【０００３】
従来、抗腫瘍剤としては、化学的合成品が主体であるが、これらは使用濃度の制限や副作用等の課題があり、天然に存在する安全性が高くかつ活性の強い抗腫瘍剤への要望が高まっている。今までに、食品や天然物から抗腫瘍成分の探索が数多くなされている。例えば、非特許文献１には、コーヒーのクロロゲン酸に肝細胞がん増殖抑制効果があることが記載されている。また、カテコール（非特許文献２）とカフェ酸メチル（非特許文献３）には抗腫瘍活性があることが報告されている。
【０００４】
一方で、ｍＲＮＡの成熟は、核内において、５’−キャッピング、スプライシング、３’ −エンドプロセッシング等の多段階の反応によりなされ、成熟ｍＲＮＡは、核外に運ばれる。成熟段階のいずれかが適切に行われず、ｍＲＮＡの成熟が阻害された場合には、核内に未成熟のｍＲＮＡが蓄積される。最近、ｍＲＮＡ成熟過程の阻害因子が、抗がん剤としての機能を期待されている。本発明者らは、抗腫瘍活性を持つ化合物の新たなスクリーニング系として、蛍光ラベルされたオリゴｄＴプローブを用いたＲＮＡ−ＦＩＳＨを利用し、ｍＲＮＡ成熟阻害活性を有する物質をスクリーニングするアッセイ系を開発した（非特許文献４参照。）。発明者らはまた、コーヒーの持つ寿命延長効果に着目し、コーヒー成分について、当該アッセイ系を用いたスクリーニングの結果、クロロゲン酸ラクトン類に強いｍＲＮＡ成熟阻害活性があることを明らかにした（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１７−１３２７６２号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Yagasaki，et al., Cytotechnology, 2000, vol.33, p.229-235.
【非特許文献２】村上浩紀ら，九州大學農學部學藝雜誌，1969，vol.24(1), p.13-17.
【非特許文献３】Inayama et al., Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1984, vol.32(3), p.1135-1141.
【非特許文献４】Fujita，et al., Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2012, vol.76(6), p.1248-1251.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献１に記載されているクロロゲン酸ラクトン類は、高いｍＲＮＡ成熟阻害活性を有するものの、より幅広く適用可能な成分が求められている。また、カテコール、カフェ酸メチル、カフェ酸エチル、及びフェルラ酸エチルは、抗腫瘍作用は見られるものの、そのメカニズムは未解明である。
【０００８】
本発明は、天然物由来であり、比較的安全性が高いことが期待でき、かつ充分な抗腫瘍活性を有する成分を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、新たに開発したｍＲＮＡ成熟阻害活性を有する物質をスクリーニングするアッセイ系を用いて、焙煎コーヒー豆の可溶性成分に対するスクリーニングを実施したところ、１−(５−Ｈｙｄｒｏｘｙ  ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ)ｅｔｈａｎｏｎｅ（アセチルピリジノール）、カテコール、及びカフェ酸メチルが強いｍＲＮＡ成熟阻害活性を有することを新たに見出した。更に、カテコール類縁体であるレソルシノールと、カフェ酸メチル関連物のカフェ酸エチル及びフェルラ酸エチルにｍＲＮＡ成熟阻害活性があることも見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
［１］  本発明の第一の態様に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤は、下記一般式（１）〜（６）のいずれかで表される化合物を有効成分とすることを特徴とする。
【００１１】
【化１】
2020158465.tif 000002
【００１２】
［２］  前記［１］のｍＲＮＡ成熟阻害剤としては、前記化合物が、焙煎コーヒー豆に由来する化合物であることが好ましい。
［３］  前記［１］又は［２］のｍＲＮＡ成熟阻害剤としては、腫瘍の治療又は再発予防に用いられることが好ましい。
［４］  本発明の第二の態様に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤の製造方法は、コーヒーの可溶性成分をメタノール抽出し、得られたメタノール抽出物から、液体クロマトグラフィーにより下記式（１）、（２）、又は（４）で表される化合物を含む画分を分取する。
［５］  前記［４］のｍＲＮＡ成熟阻害剤の製造方法としては、前記コーヒーの可溶性成分が、焙煎コーヒー豆の可溶性成分であることが好ましい。
［６］  本発明の第三の態様に係る医薬品は、前記［１］又は［２］のｍＲＮＡ成熟阻害剤を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１３】
アセチルピリジノール、カテコール、及びカフェ酸メチルは、高いｍＲＮＡ成熟阻害活性を備えることに加えて、天然にはコーヒーに含まれている成分であり、比較的安全に投与可能である。また、レソルシノール、カフェ酸エチル、及びフェルラ酸エチルは、植物に存在している、ｍＲＮＡ成熟阻害活性を備える化合物である。このため、本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤は、サプリメントや医薬品等の有効成分として好適であり、特に、腫瘍等のように細胞の過増殖が原因となる疾患に対する治療又は再発防止のための医薬品の有効成分として好適である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】実施例１における、インスタントコーヒーの分画精製のフローと各フラクションの回収量を示した図である。
【図２】実施例１における、アセチルピリジノール（標品）処理後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を示す。
【図３】実施例１における、カテコール（標品）処理後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を示す。
【図４】実施例１における、カフェ酸メチル（標品）処理後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を示す。
【図５】実施例２における、レソルシノール（標品）処理後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を示す。
【図６】実施例３における、カフェ酸関連化合物（標品）処理後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤は、アセチルピリジノール（下記式（１）で表される化合物）、カテコール（下記式（２）で表される化合物）、レソルシノール（下記式（３）で表される化合物）、カフェ酸メチル（下記式（４）で表される化合物）、カフェ酸エチル（下記式（５）で表される化合物）、及びフェルラ酸エチル（下記式（６）で表される化合物）のいずれかを有効成分とする。本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤は、これらの６種の化合物のうち、１種類のみを有効成分としてもよく、２種類以上を有効成分としてもよい。これらの６種の化合物は、細胞内に取り込まれた後、ｍＲＮＡの成熟工程のいずれかの段階を阻害し、タンパク質合成を阻害する。このｍＲＮＡ成熟阻害の結果、細胞増殖が抑制される。このため、本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤は、細胞の過増殖により引き起こされる疾患の治療や予防のための医薬品、特に、腫瘍の治療や再発防止のための医薬品の有効成分として好適である。
【００１６】
【化２】
2020158465.tif 000003
【００１７】
本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤は、有効成分である前記６種の化合物のうちの１種又は２種以上のみからなるものであってもよく、他の成分を含有するものであってもよい。当該他の成分としては、前記６種の化合物によるｍＲＮＡ成熟阻害作用を損なわないものであればよく、例えば、賦形剤、結合剤、流動性改良剤（固結防止剤）、安定剤、保存剤、ｐＨ調整剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、粘稠剤、矯味剤、甘味料、酸味料、香料、着色料等として用いられている各種物質を、所望の製品品質に応じて適宜含有させてもよい。
【００１８】
本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤の剤型は、特に限定されるものではなく、各種の剤型を適用できる。当該剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、スプレー剤、注射剤、坐剤、点眼剤、点鼻剤等が挙げられる。服用が容易であることから、本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤の剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等の経口投与に適したものが好ましい。
【００１９】
本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤の有効成分のうち、アセチルピリジノール、カテコール、及びカフェ酸メチルは、コーヒーに由来する成分、より詳細には、焙煎コーヒー豆に比較的多く含まれている可溶性成分（焙煎コーヒー豆の熱水抽出物に含まれる成分）であり、比較的安全に服用できる。また、レソルシノール、カフェ酸エチル、及びフェルラ酸エチルは、植物に存在している物質である。そこで、これらは、飲食品、飼料、化粧料、医薬品等の原料として好適であり、特に腫瘍の治療又は再発予防に用いられる医薬品やサプリメントの有効成分として有用である。例えば、本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤を配合させたサプリメントを継続的に摂取することにより、細胞増殖が抑制され、細胞の過増殖によって引き起こされる各種疾患（例えば、腫瘍など）の発症や再発リスクを低減できることが期待できる。
【００２０】
その他、本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤は、細胞のタンパク質発現のメカニズム解明のためのツールとしても好適である。
【００２１】
本発明に係るｍＲＮＡ成熟阻害剤の有効成分とする前記６種の化合物は、いずれも、天然物から抽出され粗精製されたものであってもよく、天然物から単一成分にまで精製されたものであってもよく、化学合成されたものであってもよい。アセチルピリジノール、カテコール、及びカフェ酸メチルは、例えば、コーヒーの可溶性成分をメタノール抽出し、得られたメタノール抽出物から、液体クロマトグラフィーによってこれらの化合物を含む画分（フラクション）を分取することによって精製して製造することができる。液体クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣ等の常法により行うことができる。原料とするコーヒーの可溶性成分としては、焙煎コーヒー豆の可溶性成分であることが好ましく、インスタントコーヒー粉末の原料となるような焙煎コーヒー豆の熱水抽出物がより好ましい。
【実施例】
【００２２】
次に、実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例等に限定されるものではない。
【００２３】
＜ｍＲＮＡ阻害活性の測定＞
以降の実験において、各化合物のｍＲＮＡ成熟阻害活性は、非特許文献４に記載されているＲＮＡ−ＦＩＳＨ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）を利用した方法に準じて行った。ＲＮＡ−ＦＩＳＨには、ヒト骨肉腫細胞から樹立された培養細胞株Ｕ２ＯＳ細胞を用いた。Ｕ２ＯＳ細胞は、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）中で、３７℃、５％二酸化炭素環境下で培養した。
【００２４】
具体的には、まず、５×１０４／ｍＬとなるように細胞を１２ウェルプレートのカバーグラス上に接種し、２４時間培養した。次いで、各ウェルに、活性を測定する対象の化合物のＤＭＳＯ溶液を添加し、さらに２４時間培養した。各ウェルに添加されるＤＭＳＯ量は等しくなるように調整し、ネガティブコントロールとして等量のＤＭＳＯを添加したウェルも、同様に２４時間培養した。また、ポジティブコントロールとして、ｍＲＮＡスプライシングに対する阻害活性を有するＧＥＸ１Ａを用い、ＧＥＸ１Ａ溶液（ＧＥＸ１Ａを３０ｎｇ／ｍＬとなるようにＤＭＳＯに溶解させた溶液）を各ウェルに添加して、同様に２４時間培養した。
【００２５】
培養後、カバーグラス上の培養細胞を１０％ホルムアルデヒドを含むＰＢＳ（リン酸生理食塩水）にて２０分間固定処理した後、０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を含むＰＢＳにて１０分間透過処理（透過性付与処理）を行った。続いて、当該細胞を、ＰＢＳにて１回当たり１０分間インキュベートする洗浄処理を３回行い、次いで２×ＳＣＣバッファー（２×クエン酸ナトリウム標準）にて５分間洗浄処理した。
【００２６】
洗浄後の細胞に対して、ＲＮＡ−ＦＩＳＨを行った。すなわち、加湿チャンバー内にて、細胞をoligo hybridization buffer (Ambion社製)により４２℃、１時間予備ハイブリダイズした後、２０ｐＭのＣｙ３ラベルされたオリゴｄＴ４５プローブを含むoligo hybridization buffer（Ambion社製）で４２℃、２４時間ハイブリダイズした。その後、２×ＳＣＣバッファーにて４２℃、２０分間洗浄した後、０．５×ＳＣＣバッファーにて１回、０．１×ＳＣＣバッファーにて１回、順次洗浄した。
【００２７】
さらに、洗浄後の細胞の核を、ＤＡＰＩ（4',6-diamidino-2-phenylindole）染色して可視化した後、核内と細胞全体のＣｙ３蛍光強度を画像解析ソフトウェアＩｍａｇｅＪ（imagej.nih.gov/ij/）を用いて測定し、細胞当たりのポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比（［核内のＣｙ３蛍光量］／［細胞全体のＣｙ３蛍光量］）を求めた。
【００２８】
［実施例１］
焙煎コーヒー豆の可溶性成分から、ｍＲＮＡ成熟阻害活性を有する化合物を単離し、同定した。焙煎コーヒー豆の可溶性成分としては、インスタントコーヒー（商品名：〈〈ブレンディ〉インスタントコーヒー〉、味の素ＡＧＦ社製）を用い、中圧カラムクロマトグラフィーを繰り返すことによる分画精製を行い、ｍＲＮＡ成熟阻害活性のある画分からｍＲＮＡ成熟阻害活性を備える化合物を同定した。中圧カラムクロマトグラフィーには、シリカゲル（Wakogel C-200、粒子サイズ７５〜１５０μｍ）を充填したカラムを用いた。インスタントコーヒーの分画精製のフローと各フラクションの回収量を図１に示す。最終的に６段階の精製で、３種類の単一の活性化合物を単離した。
【００２９】
具体的には、まず、インスタントコーヒー５００ｇをメタノール２．５Ｌと混合した後、濾過して固形分を除去することにより、インスタントコーヒーメタノール抽出物を得た。このインスタントコーヒーメタノール抽出物にｍＲＮＡ成熟阻害活性が確認されたため、酢酸エチルと水を混合した後、酢酸エチル層を回収した。この酢酸エチル層を蒸発乾固したところ、固形分が３５．６ｇであった。この酢酸エチル層固形分に対して、中圧カラムクロマトグラフィーにより分画し、各フラクションについてｍＲＮＡ成熟阻害活性を測定し、活性が確認されたフラクションを回収するという精製工程を６回繰り返した。最初の４回の精製工程における中圧カラムクロマトグラフィーはクロロホルムとメタノールのグラジエントを移動相とし、５回目はヘキサンと酢酸エチルのグラジエントを移動相とし、６回目は０．１質量％の酢酸水溶液とメタノールのグラジエントを移動相とした。
【００３０】
１回目の精製工程では、Ｆｒ．２（固形分１８．３１ｇ）に活性が観察された。そこで、このＦｒ.２に対して２回目の分画を行ったところ、得られたＦｒ．２−ａ〜Ｆｒ．２−ｄのうち、Ｆｒ.２−ａ（固形分０．２２６５ｇ）、Ｆｒ.２−ｃ３（固形分２．４４ｇ）、及びＦｒ.２−ｃ４（固形分１．４１ｇ）に顕著なｍＲＮＡ成熟阻害活性が見られた。Ｆｒ.２−ａの回収量が極めて少なかったことから、Ｆｒ．２−ｃ３とＦｒ．２−ｃ４を混合したものを、３回目の精製に供した。３回目の精製において、Ｆｒ.Ａ−１ａ〜Ｆｒ.Ａ−６のうち、Ｆｒ.Ａ−１ａ（固形分４．８ｍｇ）とＦｒ.Ａ−３（固形分２５２０．９ｍｇ）に顕著なｍＲＮＡ成熟阻害活性が見られた。Ｆｒ.Ａ−３では活性に濃度依存性が見られ、かつ回収量も多かったことから、Ｆｒ.Ａ−３を４回目の精製に供した。４回目の精製において、Ｆｒ．Ａ３−ａ〜Ｆｒ.Ａ３−ｄのうち、Ｆｒ．Ａ３−ｂ４（固形分１９９．２ｍｇ）、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５（固形分６７６．０ｍｇ）、Ｆｒ．Ａ３−ｃ（固形分６８１．６ｍｇ）に顕著なｍＲＮＡ成熟阻害活性が見られた。Ｆｒ．Ａ３−ｂ５は低濃度で最もｍＲＮＡ成熟阻害活性が見られたフラクションであったため、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５を５回目の精製に供した。
【００３１】
５回目の精製において、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ａ〜Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｆのうち、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｃ２（固形分１２．６ｍｇ）、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ１（固形分７７．１ｍｇ）、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ２（固形分５．２ｍｇ）、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３（固形分２２．７ｍｇ）、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｅ（固形分１９３．９ｍｇ）に顕著なｍＲＮＡ成熟阻害活性が見られた。ただし、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｃ２〜Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３では、これまでと同じ濃度（１５０μｇ/ｍＬ）で添加すると、細胞が死んでしまったため観察ができなかった。そこで、これらに関しては、低濃度（２５μｇ/ｍＬ）でｍＲＮＡ成熟阻害活性を測定した。また、ＵＶ２５４ｎｍの吸収ピークから、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｃ２とＦｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ１を合わせたピークは１つであった。しかし、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ１の方が、５μｇ／ｍＬ又は１０μｇ／ｍＬ添加時のｍＲＮＡ成熟阻害活性が強かったために 、より純度が高いと予想されたため、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ１を、１Ｈ−ＮＭＲと１３Ｃ−ＮＭＲとＬＣ−ＭＳによって解析した。標準品のＮＭＲの結果との比較により、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ１に含まれているｍＲＮＡ成熟阻害活性を備える物質は、カテコール（式（２））と同定された。
【００３２】
一方、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３は、ＵＶ２５４ｎｍの吸収ピークから、まだ複数の化合物が混在していると考えられたので、６回目の精製に供して更に精製を続けることとした。６回目の精製において、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−１〜Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−６のうち、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−２（固形分０．９ｍｇ）とＦｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−４（固形分０．８ｍｇ）に顕著なｍＲＮＡ成熟阻害活性が見られた。Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−４の方が、ｍＲＮＡ成熟阻害活性性が顕著であったものの、ＵＶ２５４ｎｍの小さいピークが多数存在しており多くの化合物が混在していたこと、回収量も０．８ｍｇしかなかったことから、これ以上精製を進めも化合物の特定は困難であると考えた。一方で、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−２は、低濃度（２０μｇ／ｍＬ）ではｍＲＮＡ成熟阻害活性はなかったものの、高濃度ではｍＲＮＡの核内蓄積を確認することができた。そこで、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−２とＦｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−４を１Ｈ−ＮＭＲとＬＣ−ＭＳを用いて解析した。その結果、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−４に含まれているｍＲＮＡ成熟阻害活性を備える物質は、カフェ酸メチル（式（４））であると同定された。また、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−４のＮＭＲスペクトルが、カフェ酸メチルの標品のスペクトルと一致していることも確認した。また、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−２に含まれているｍＲＮＡ成熟阻害活性を備える物質は、１−(５−Ｈｙｄｒｏｘｙ  ｐｙｒｉｄｉｎ−２−ｙｌ)ｅｔｈａｎｏｎｅ（アセチルピリジノール：式（１））と同定された。
【００３３】
ついで、同定されたアセチルピリジノール、カテコール、及びカフェ酸メチルの標品について、ｍＲＮＡ成熟阻害活性を測定した。アセチルピリジノール処理（１００μＭ、３００μＭ、６００μＭ）後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を図２に、カテコール処理（５０μＭ、１００μＭ、２５０μＭ）後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を図３に、カフェ酸メチル処理（１０μＭ、２５μＭ、５０μＭ）後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を図４に、それぞれ示す。
【００３４】
ＡＮＯＶＡ及びＤｕｎｎｅｔｔ検定を行ったところ、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比は、ネガティブコントロールであるＤＭＳＯを添加した細胞に比べて、アセチルピリジノール、カテコール、及びカフェ酸メチルを添加した細胞では有意差が見られ、核内のポリ（Ａ）＋ＲＮＡ量が有意に多くなっていた。つまり、アセチルピリジノール、カテコール、及びカフェ酸メチルは、ｍＲＮＡ成熟阻害活性を有していた。特に、カフェ酸メチル１０μｇ／ｍＬ（５０μＭ）添加時のｍＲＮＡ成熟阻害活性は、Ｆｒ．Ａ３−ｂ５−ｄ３−４を２０μｇ／ｍＬ添加時よりも顕著であった。
【００３５】
［実施例２］
カテコール関連物質及びカフェ酸関連物質について、実施例１と同様にしてｍＲＮＡ成熟阻害活性を測定した。被験化合物は、レソルシノール（５０μＭ、１００μＭ、２５０μＭ）、カフェ酸エチル（２００μＭ）、フェルラ酸メチル（２００μＭ）、フェルラ酸エチル（２００μＭ）、桂皮酸メチル（２００μＭ）、桂皮酸エチル（２００μＭ）、及びクマル酸メチル（２００μＭ）とした。
【００３６】
レソルシノール処理後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を図５に、カフェ酸関連物質処理後のポリ（Ａ）＋ＲＮＡの核内の局在比を調べた結果（ｎ＝２０）を図６に、それぞれ示す。２５０μＭ（２５μｇ／ｍＬ）のレソルシノール処理した細胞と、２００μＭのカフェ酸エチル処理した細胞と、２００μＭのフェルラ酸エチル処理した細胞に、有意なｍＲＮＡ成熟阻害活性が認められた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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