(57)【要約】【課題】血液検査により、簡便に原発性胆汁性胆管炎を検出することを補助する方法を提供すること。【解決手段】原発性胆汁性胆管炎の検出を補助する方法は、生体から分離された被検血液試料中の、LDL-TG、RLP-C、LDL-TG/LDL-C、sd LDL-C、LDL-C/sd LDL-C、LDL-TG/sd LDL-C、総TG及び総TG/総CHOから成る群より選ばれる少なくとも１種を測定することを含む。LDL-TG量を指標とする場合、健常者よりもLDL-TG量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す。【選択図】図７
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体から分離された被検血液試料中の、LDL-TG、RLP-C、LDL-TG/LDL-C、sdLDL-C、LDL-C/sdLDL-C、LDL-TG/sdLDL-C、総TG及び総TG/総CHOから成る群より選ばれる少なくとも１種を測定することを含む、原発性胆汁性胆管炎の検出を補助する方法。
【請求項２】
LDL-TG量を指標とし、健常者よりもLDL-TG量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【請求項３】
RLP-C量を指標とし、健常者よりもRLP-C量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【請求項４】
LDL-TG/LDL-C比を指標とし、健常者よりもLDL-TG/LDL-C比が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【請求項５】
sdLDL-C量を指標とし、健常者よりもsdLDL-C量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【請求項６】
LDL-C/sdLDL-C比を指標とし、健常者よりもLDL-C/sdLDL-C比が低いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【請求項７】
LDL-TG/sdLDL-C比を指標とし、健常者よりもLDL-TG/sdLDL-C比が低いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【請求項８】
総TG量を指標とし、健常者よりも総TG量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【請求項９】
総TG/総CHO比を指標とし、健常者よりも総TG/総CHO比が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液検査により、原発性胆汁性胆管炎の検出を補助する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、原発性胆汁性胆管炎(PBC)は組織学的所見や、血液所見で慢性の胆汁うっ滞所見（ALP, γ-GTP の上昇）や抗ミトコンドリア抗体（AMA）陽性所見で診断されていたが、その診断方法は複雑であった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Gershwin ME, et al. Molecular biology of the 2-oxo-acid dehydrogenase complexes and anti-mitochondrial antibodies. Prog Liver Dis 10:47-61, 1992.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、血液検査により、簡便にPBCを検出することを補助する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、生体から分離された被検血液試料中の、LDL-TG、RLP-C、LDL-TG/LDL-C、sd LDL-C、LDL-C/sd LDL-C、LDL-TG/sd LDL-C、総TG及び総TG/総CHOから成る群より選ばれる少なくとも１種を指標としてPBCを検出することを補助することが可能であることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、以下のものを提供する。
（１）生体から分離された被検血液試料中の、LDL-TG、RLP-C、LDL-TG/LDL-C、sd LDL-C、LDL-C/sd LDL-C、LDL-TG/sd LDL-C、総TG及び総TG/総CHOから成る群より選ばれる少なくとも１種を測定することを含む、原発性胆汁性胆管炎の検出を補助する方法。
（２）LDL-TG量を指標とし、健常者よりもLDL-TG量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
（３）RLP-C量を指標とし、健常者よりもRLP-C量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
（４）LDL-TG/LDL-C比を指標とし、健常者よりもLDL-TG/LDL-C比が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
（５）sd LDL-C量を指標とし、健常者よりもsd LDL-C量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
（６）LDL-C/sd LDL-C比を指標とし、健常者よりもLDL-C/sd LDL-C比が低いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
（７）LDL-TG/sd LDL-C比を指標とし、健常者よりもLDL-TG/sd LDL-C比が低いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
（８）総TG量を指標とし、健常者よりも総TG量が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
（９）総TG/総CHO比を指標とし、健常者よりも総TG/総CHO比が高いことが、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いことを示す、（１）記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】下記比較例１で得られた結果を示す図である。
【図２】下記比較例２で得られた結果を示す図である。
【図３】下記比較例３で得られた結果を示す図である。
【図４】下記比較例４で得られた結果を示す図である。
【図５】下記比較例５で得られた結果を示す図である。
【図６】下記実施例１で得られた結果を示す図である。
【図７】下記実施例２で得られた結果を示す図である。
【図８】下記実施例３で得られた結果を示す図である。
【図９】下記実施例４で得られた結果を示す図である。
【図１０】下記実施例５で得られた結果を示す図である。
【図１１】下記実施例６で得られた結果を示す図である。
【図１２】下記実施例７で得られた結果を示す図である。
【図１３】下記実施例８で得られた結果を示す図である。
【図１４】下記比較例６で得られた結果を示す図である。
【図１５】下記比較例７で得られた結果を示す図である。
【図１６】下記比較例８で得られた結果を示す図である。
【図１７】下記実施例９で得られた結果を示す図である。
【図１８】下記実施例１０で得られた結果を示す図である。
【図１９】下記実施例１１で得られた結果を示す図である。
【図２０】下記実施例１２で得られた結果を示す図である。
【図２１】下記実施例１３で得られた結果を示す図である。
【図２２】下記実施例１４で得られた結果を示す図である。
【図２３】下記実施例１５で得られた結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明において、「TG」はトリグリセライド（中性脂肪ともいう）、「LDL-TG」は低密度リポ蛋白質中のトリグリセライド、「sd LDL-C」は小粒子低密度リポ蛋白質中のコレステロール、「RLP-C」はレムナント様リポ蛋白質中のコレステロール、「LDL-C」は、低密度リポ蛋白質中のコレステロール、「CHO」はコレステロールを意味する。なお、これらの略号は、血中脂質の分野において通常用いられている略号である。
【０００９】
血液試料としては、全血、血清又は血漿を用いることができる。
【００１０】
血液試料中の総TG、LDL-TG、sd LDL-C、RLP-C、LDL-C及び総CHOは、周知の方法により測定することができ、下記実施例にも測定方法が具体的に記載されている。
【００１１】
本発明において、総TG量を指標とする場合、健常者よりも総TG量が高いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、50〜158mg/dL範囲内であり、好ましくは96.0mg/dLの±20%の範囲内であり、最適値は96.0mg/dLであり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。なお、「カットオフ値」は、この値以上又は以下であれば、原発性胆汁性胆管炎である可能性が高いと判定する値である。統計学的処理として、カットオフ値の最適値はROC曲線の解析を行い、Youden's indexによって算出した。
【００１２】
本発明において、LDL-TG量を指標とする場合、健常者よりもLDL-TG量が高いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、10.0〜20.5mg/dLの範囲内であり、好ましくは12.7mg/dL±20%の範囲内であり、最適値は12.7mg/dLであり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。
【００１３】
本発明において、sd LDL-C量を指標とする場合、健常者よりもsd LDL-C量が高いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、12.4〜43.9mg/dLの範囲内であり、好ましくは21.2mg/dLの±20%の範囲内であり、最適値は21.2mg/dLであり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。
【００１４】
本発明において、RLP-C量を指標とする場合、健常者よりもRLP-C量が高いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、1.4〜3.7mg/dLの範囲内であり、好ましくは2.7mg/dL±20%の範囲内であり、最適値は2.7mg/dLであり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。
【００１５】
本発明において、LDL-TG/LDL-C比を指標とする場合、健常者よりもLDL-TG/LDL-C比が高いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、0.104〜0.193の範囲内であり、好ましくは0.134±20%の範囲内であり、最適値は0.134であり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。
【００１６】
本発明において、総TG/総CHO比を指標とする場合、健常者よりも総TG/総CHO比が高いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、0.229〜1.171の範囲内であり、好ましくは0.523±20%の範囲内であり、最適値は0.523であり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。
【００１７】
本発明において、LDL-C/sd LDL-C比を指標とする場合、健常者よりもLDL-C/sdLDL-C比が低いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、2.67〜7.04の範囲内であり、好ましくは5.16±20%の範囲内であり、最適値は5.16であり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。
【００１８】
本発明において、LDL-TG/sd LDL-C比を指標とする場合、健常者よりもLDL-TG/sd LDL-C比が低いことが、PBCである可能性が高いことを示す。判定に用いるカットオフ値は、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた範囲で適宜設定でき、例えば、1.12〜3.04の範囲内であり、好ましくは1.74±20%の範囲内であり、最適値は1.74であり、かつ、本発明を使用する者が求める感度、特異度に応じた値に設定することができる。
【００１９】
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００２０】
なお、下記実施例又は比較例において採用した、各脂質の具体的な測定方法は次のとおりであった。
１．総TGの測定方法
総TG量は臨床検査の場で用いられている自動分析装置を用いてトリグリセリド測定用試薬であるTG-EX「生研」（酵素法）（デンカ生研社製）により測定した。
【００２１】
２．LDL-TGの測定方法
LDL-TG量は臨床検査の場で用いられている自動分析装置を用いてＬＤＬ−トリグリセライド測定用試薬であるＬＤＬＴＧ−ＥＸ“ＳＥＩＫＥＮ”（デンカ生研社製）により測定した。
【００２２】
３．sd LDL-Cの測定方法
sd LDL-C量は自動分析装置を用いてsd LDL-コレステロール測定用試薬であるsd LDL-EX「生研」（デンカ生研社製）により測定した。
【００２３】
４．RLP-Cの測定方法
RLP-C量は自動分析装置を用いてRLP-コレステロール測定用試薬により測定した。RLP-コレステロール測定用試薬は、以下の参考文献に記載の方法で調製した。
（参考文献）Hirao Y, Nakajima K, Machida T, Murakami M, Ito Y. Development of a Novel Homogeneous Assay for Remnant Lipoprotein Particle Cholesterol. The Journal of Applied Laboratory Medicine 2018;03:26-36
【００２４】
５．LDL-Cの測定方法
LDL-C量は臨床検査の場で用いられている自動分析装置を用いてLDL-コレステロール測定用試薬である自動分析用試薬「生研」LDL-EX(N)（直接法）（デンカ生研社製）により測定した。
【００２５】
６．総CHOの測定方法
総CHO量は臨床検査の場で用いられている自動分析装置を用いてコレステロール測定用試薬である自動分析用試薬「生研」T-CHO(S)（酵素法）（デンカ生研社製）により測定した。
【００２６】
また、2群間の比較は、Shapiro-Wilkの検定でノンパラメトリックだった場合にWilcoxon-Mann-Whitney検定を行い、パラメトリックだった場合に等分散検定を行った上でStudentのt検定もしくはWelchのt検定を行った。
【００２７】
比較例１（LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のLDL-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-C量に差はなかった。
【００２８】
比較例２（HDL3-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のHDL3-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図２に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてHDL3-C量に差はなかった。
【００２９】
比較例３（総CHO）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のT-CHO量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図３に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてT-CHO量が高い傾向を示したが、統計学的有意差は認められなかった。
【００３０】
比較例４（HDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のHDL-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図４に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてHDL-C量が高い傾向を示したが、統計学的有意差は認められなかった。
【００３１】
比較例５（HDL2-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のHDL2-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図５に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてHDL2-C量が高い傾向を示したが、統計学的有意差は認められなかった。
【００３２】
実施例１（総TG）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中の総TG量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図６に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べて総TG量が統計学的に有意に高かった（p<0.0001）。
【００３３】
実施例２（LDL-TG）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のLDL-TG量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図７に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-TG量が統計学的に有意に高かった（p<0.0001）。
【００３４】
実施例３（sd LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のsd LDL-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図８に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてsd LDL-C量が統計学的に有意に高かった（p<0.001）。
【００３５】
実施例４（RLP-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のRLP-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図９に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてRLP-C量が統計学的に有意に高かった（p<0.0001）。
【００３６】
実施例５（LDL-TG/LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のLDL-TG量とLDL-C量を測定してLDL-TG／LDL-C比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１０に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-TG/LDL-C比が統計学的に有意に高かった（p<0.0001）。
【００３７】
実施例６（総TG/総CHO）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中の総TG量と総CHO量を測定して総TG／総CHO比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１１に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べて総TG/総CHO比が統計学的に有意に高かった（p<0.0005）。
【００３８】
実施例７（LDL-C/sd LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のLDL-C量とsd LDL-C量を測定してLDL-C/sd LDL-C比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１２に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-C/sd LDL-C比が統計学的に有意に低かった（p<0.0001）。
【００３９】
実施例８（LDL-TG/sd LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）48名、PBC患者48名からなる全96名の集団から採取した血液中のLDL-TG量とsd LDL-C量を測定してLDL-TG/sd LDL-C比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１３に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-TG/sd LDL-C比が統計学的に有意に低かった（p<0.005）。
【００４０】
比較例６（総CHO）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中の総CHO量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１４に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べて総CHO量に差はなかった。
【００４１】
比較例７（HDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中のHDL-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１５に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてHDL-C量に差はなかった。
【００４２】
比較例８（HDL2-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中のHDL2-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１６に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてHDL2-C量に差はなかった。
【００４３】
実施例９（総TG）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中の総TG量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１７に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べて総TG量が統計学的に有意に高かった（p<0.005）。
【００４４】
実施例１０（LDL-TG）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中のLDL-TG量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１８に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-TG量が統計学的に有意に高かった（p<0.0001）。
【００４５】
実施例１１（RLP-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中のRLP-C量を測定し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図１９に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてRLP-C量が統計学的に有意に高かった（p<0.0005）。
【００４６】
実施例１２（LDL-TG/LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中のLDL-TG量とLDL-C量を測定してLDL-TG／LDL-C比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図２０に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-TG/LDL-C量が統計学的に有意に高かった（p<0.0001）。
【００４７】
実施例１３（総TG/T-CHO）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中の総TG量と総CHO量を測定して総TG／総CHO比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図２１に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べて総TG/総CHO量が有意に高かった（p<0.005）。
【００４８】
実施例１４（LDL-C/sd LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中のLDL-C量とsd LDL-C量を測定してLDL-C/sd LDL-C比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図２２に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-C/sd LDL-C比が統計学的に有意に低かった（p<0.005）。
【００４９】
実施例１５（LDL-TG/sd LDL-C）
対応のない、健常者（図においてHealthと表記）27名、PBC患者25名からなる全52名の集団から採取した血液中のLDL-TG量とsd LDL-C量を測定してLDL-TG/sd LDL-C比を算出し、それぞれの群を比較した。比較したグラフを図２３に示す。その結果、PBC患者群は、健常者群と比べてLDL-TG/sd LDL-C比が統計学的に有意に低かった（p<0.01）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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