(57)【要約】【課題】乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現を簡便に予測する技術を提供する。【解決手段】乳癌患者由来の乳癌細胞におけるエストロゲンレセプターの発現を検出することを含み、エストロゲンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の予測方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳癌患者由来の乳癌細胞におけるエストロゲンレセプターの発現を検出することを含み、エストロゲンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の予測方法。
【請求項２】
乳癌患者由来の乳癌細胞におけるプロゲステロンレセプターの発現を検出することを更に含み、プロゲステロンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、請求項１に記載の予測方法。
【請求項３】
乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＨｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２（ＨＥＲ２）の発現を検出することを更に含み、ＨＥＲ２の発現が陽性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、請求項１又は２に記載の予測方法。
【請求項４】
エストロゲンレセプターの検出試薬を含む、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現予測用キット。
【請求項５】
プロゲステロンレセプターの検出試薬を更に含む、請求項４に記載の乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現予測用キット。
【請求項６】
ＨＥＲ２の検出試薬を更に含む、請求項４又は５に記載の乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現予測用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の予測方法及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
発明者らは、癌精巣抗原の一種であるＫｉｔａ−Ｋｙｕｓｈｕ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−１（ＫＫ−ＬＣ−１）タンパク質について詳細な解析を進めてきた。癌精巣抗原とは、癌細胞と、精巣・卵巣等の生殖系細胞以外では発現が認められないタンパク質の総称である（例えば、非特許文献１を参照）。
【０００３】
ところで、エストロゲンレセプター、プロゲステロンレセプター、Ｈｕｍａｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２（ＨＥＲ２）の全てが陰性である乳癌はトリプルネガティブ乳癌と呼ばれている。トリプルネガティブ乳癌の患者には、ホルモン療法や抗ＨＥＲ２療法による治療が有効でなく、その治療は困難であるといわれている。
【０００４】
しかしながら、トリプルネガティブ乳癌由来の乳癌細胞は、ＫＫ−ＬＣ−１を発現していることが報告され、２０１７年には、ＫＫ−ＬＣ−１を発現する癌に対する免疫応答の有効性が報告された。このような状況のもと、トリプルネガティブ乳癌の治療にＫＫ−ＬＣ−１を標的とした癌免疫療法を適用することが検討されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Fukuyama T et al., Identification of a new cancer/germline gene, KK-LC-1, encoding an antigen recognized by autologous CTL induced on human lung adenocarcinoma. Cancer Res. 66(9), 4922-4928, 2006.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
治療対象の癌由来の癌細胞において、ＫＫ−ＬＣ−１が発現していれば、ＫＫ−ＬＣ−１を標的とした癌免疫療法を適用することができる。ＫＫ−ＬＣ−１を標的とした癌免疫療法をより広範な癌患者に適用することができれば、癌の治療方法の選択肢が広がり好ましい。したがって、例えば、トリプルネガティブ乳癌以外の乳癌細胞においても、ＫＫ−ＬＣ−１の発現を簡便に予測できると有用である。そこで、本発明は、トリプルネガティブ乳癌以外の乳癌由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現を簡便に予測する技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下の態様を含む。
［１］乳癌患者由来の乳癌細胞におけるエストロゲンレセプターの発現を検出することを含み、エストロゲンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の予測方法。
［２］乳癌患者由来の乳癌細胞におけるプロゲステロンレセプターの発現を検出することを更に含み、プロゲステロンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、［１］に記載の予測方法。
［３］乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＨＥＲ２の発現を検出することを更に含み、ＨＥＲ２の発現が陽性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、［１］又は［２］に記載の予測方法。
［４］エストロゲンレセプターの検出試薬を含む、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現予測用キット。
［５］プロゲステロンレセプターの検出試薬を更に含む、［４］に記載の乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現予測用キット。
［６］ＨＥＲ２の検出試薬を更に含む、［４］又は［５］に記載の乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現予測用キット。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現を簡便に予測する技術を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
［乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の予測方法］
１実施形態において、本発明は、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるエストロゲンレセプターの発現を検出することを含み、エストロゲンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の予測方法を提供する。
【００１０】
実施例において後述するように、本実施形態の予測方法により、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現を簡便に予測することができる。具体的には、エストロゲンレセプターの発現が陰性である乳癌細胞はＫＫ−ＬＣ−１を発現しており、ＫＫ−ＬＣ−１を標的とした癌免疫療法を適用することができると判断することができる。
【００１１】
乳癌患者由来の乳癌細胞としては、例えば、診断のために採取された生検試料由来の乳癌細胞、手術により摘出された乳癌組織に由来する乳癌細胞等が挙げられる。
【００１２】
乳癌細胞における、エストロゲンレセプターの発現の検出は、遺伝子レベルで行ってもよいし、タンパク質レベルで行ってもよい。遺伝子レベルでの検出方法は特に限定されず、例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いる方法、ＤＮＡマイクロアレイを用いる方法等により行うことができる。また、タンパク質レベルでの検出方法も特に限定されず、例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウエスタンブロッティング法、フローストリップ法、免疫染色等により行うことができる。
【００１３】
また、乳癌の診断において、乳癌細胞における、エストロゲンレセプター、プロゲステロンレセプター、ＨＥＲ２の発現が既に調べられている場合が多い。このような場合には、新たな検査を行わなくても、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現を予測し、ＫＫ−ＬＣ−１を標的とした癌免疫療法を適用できるか否かを判断することができる。
【００１４】
実施例において後述するように、発明者らは、トリプルネガティブ乳癌以外の乳癌細胞においてもＫＫ−ＬＣ−１が発現していることを明らかにした。この結果、ＫＫ−ＬＣ−１を標的とした癌免疫療法を適用することができる乳癌患者の範囲が拡大された。
【００１５】
本実施形態の予測方法は、乳癌細胞におけるプロゲステロンレセプターの発現を検出することを更に含み、エストロゲンレセプターの発現が陰性であり、プロゲステロンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示すものであってもよい。この場合、プロゲステロンレセプターの発現の検出は、上述したエストロゲンレセプターの発現の検出と同様であり、遺伝子レベル検出してもよいし、タンパク質レベルで検出してもよい。
【００１６】
本実施形態の予測方法は、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＨＥＲ２の発現を検出することを更に含み、エストロゲンレセプターの発現が陰性であり、プロゲステロンレセプターの発現が陰性であり、ＨＥＲ２の発現が陽性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示すものであってもよい。この場合、ＨＥＲ２の発現の検出は、上述したエストロゲンレセプターの発現の検出と同様であり、遺伝子レベル検出してもよいし、タンパク質レベルで検出してもよい。
【００１７】
［キット］
１実施形態において、本発明は、エストロゲンレセプターの検出試薬を含む、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現予測用キットを提供する。実施例において後述するように、本実施形態のキットにより、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現を簡便に予測することができる。
【００１８】
本実施形態のキットにおいて、エストロゲンレセプターの検出試薬は、エストロゲンレセプターを遺伝子レベル検出する試薬であってもよいし、タンパク質レベルで検出する試薬であってもよい。エストロゲンレセプターを遺伝子レベルで検出する試薬としては、例えば、エストロゲンレセプターのｍＲＮＡを検出するためのプライマーセット、エストロゲンレセプターのｍＲＮＡがハイブリダイズするプローブが固定化されたＤＮＡマイクロアレイ等が挙げられる。また、エストロゲンレセプターをタンパク質レベルで検出する試薬としては、例えば、エストロゲンレセプターに対する抗体等が挙げられる。
【００１９】
本実施形態のキットは、プロゲステロンレセプターの検出試薬を更に含んでいてもよい。また、本実施形態のキットは、ＨＥＲ２の検出試薬を更に含んでいてもよい。プロゲステロンレセプターの検出試薬、ＨＥＲ２の検出試薬も、エストロゲンレセプターの検出試薬と同様であり、遺伝子レベル検出する試薬であってもよいし、タンパク質レベルで検出する試薬であってもよい。
【００２０】
［その他の実施形態］
１実施形態において、本発明は、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるエストロゲンレセプターの発現を検出することを含み、エストロゲンレセプターの発現が陰性であった場合に、前記患者にＫＫ−ＬＣ−１を標的とした癌免疫療法を適用する、乳癌の治療方法を提供する。
【００２１】
本実施形態の治療方法においては、乳癌細胞におけるエストロゲンレセプターの発現が陰性であることが、前記乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現することを示す。したがって、本実施形態の治療方法により、乳癌を効率よく治療することができる。
【実施例】
【００２２】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２３】
［実験例１］
５１例の癌患者由来の乳癌細胞について、エストロゲンレセプターの発現、プロゲステロンレセプターの発現、ＨＥＲ２の発現、及び、ＫＫ−ＬＣ−１の発現をそれぞれ検出した。ＫＫ−ＬＣ−１の発現は、遺伝子レベル及びタンパク質レベルの双方で検出した。
【００２４】
エストロゲンレセプターの発現の検出は次のようにして行った。まず、手術により摘出した患者の乳癌組織をパラホルムアルデヒド固定してパラフィン包埋した。続いて、パラフィン包埋ブロックを薄切し、乳癌組織の薄切切片標本を作製した。続いて、作製した薄切切片標本を抗エストロゲンレセプターモノクローナル抗体（クローン「１Ｄ５」、ニチレイバイオサイエンス社）を用いて免疫染色し、エストロゲンレセプターの発現を検出した。
【００２５】
また、プロゲステロンレセプターの発現の検出は、患者由来の乳癌組織の薄切切片標本を抗プロゲステロンレセプターモノクローナル抗体（クローン「Ａ９６２１Ａ」、ニチレイバイオサイエンス社）を用いて免疫染色することにより行った。
【００２６】
また、ＨＥＲ２の発現の検出は、患者由来の乳癌組織の薄切切片標本を抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（クローン「ＳＶ２−６１γ」、ニチレイバイオサイエンス社）を用いて免疫染色することにより行った。
【００２７】
また、ＫＫ−ＬＣ−１の遺伝子レベルでの発現の検出は次のようにして行った。まず、患者由来の乳癌細胞から全ＲＮＡを調製し、ｃＤＮＡを調製した。続いて、調製したｃＤＮＡを鋳型として、配列番号１に示すセンスプライマー及び配列番号２に示すアンチセンスプライマーを用いて、４０サイクルのＰＣＲを行った。続いて、ＰＣＲ後の産物をアガロース電気泳動により展開し、３４２ｂｐの増幅産物の有無を判定した。判定結果から、乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現の有無を判断した。
【００２８】
また、ＫＫ−ＬＣ−１のタンパク質レベルでの発現の検出は、患者由来の乳癌組織の薄切切片標本を、発明者らが作製した抗ＫＫ−ＬＣ−１モノクローナル抗体（クローン「３４Ｂ３」）を用いて免疫染色することにより行った。
【００２９】
下記表１〜４に、実験結果を示す。表１は、エストロゲンレセプターとＫＫ−ＬＣ−１の発現の検出結果をまとめた結果である。表１中、「ＥＲ＋」はエストロゲンレセプターの発現が陽性であったことを示し、「ＥＲ−」はエストロゲンレセプターの発現が陰性であったことを示す。
【００３０】
また、「ＫＫ−ＬＣ−１  ｍＲＮＡ」の欄には、ＫＫ−ＬＣ−１の発現を遺伝子レベルで検出した結果、陽性であった症例数を示す。カッコ内の数値は、それぞれ、エストロゲンレセプター陽性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、エストロゲンレセプター陰性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、及び全症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）を示す。
【００３１】
また、「ＫＫ−ＬＣ−１タンパク質」の欄には、ＫＫ−ＬＣ−１の発現をタンパク質レベルで検出した結果、陽性であった症例数を示す。カッコ内の数値は、それぞれ、エストロゲンレセプター陽性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、エストロゲンレセプター陰性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、及び全症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）を示す。また、「＊＊」は、フィッシャーの正確確率検定により算出したｐ値を示す。
【００３２】
その結果、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるエストロゲンレセプターの発現が陰性であれば、当該乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現すると予測できることが明らかとなった。また、ＫＫ−ＬＣ−１の発現の検出感度は、遺伝子レベルで検出した場合よりもタンパク質レベルで検出した場合に高い傾向が認められた。エストロゲンレセプター陰性の乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１陽性であることは今回発明者らが新たに見出したことである。
【００３３】
【表１】
2020024156.tif 000002
【００３４】
表２は、プロゲステロンレセプターとＫＫ−ＬＣ−１の発現の検出結果をまとめた結果である。表２中、「ＰＲ＋」はプロゲステロンレセプターの発現が陽性であったことを示し、「ＰＲ−」はプロゲステロンレセプターの発現が陰性であったことを示す。
【００３５】
また、「ＫＫ−ＬＣ−１  ｍＲＮＡ」の欄には、ＫＫ−ＬＣ−１の発現を遺伝子レベルで検出した結果、陽性であった症例数を示す。カッコ内の数値は、それぞれ、プロゲステロンレセプター陽性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、プロゲステロンレセプター陰性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、及び全症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）を示す。
【００３６】
また、「ＫＫ−ＬＣ−１タンパク質」の欄には、ＫＫ−ＬＣ−１の発現をタンパク質レベルで検出した結果、陽性であった症例数を示す。カッコ内の数値は、それぞれ、プロゲステロンレセプター陽性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、プロゲステロンレセプター陰性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、及び全症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）を示す。また、「＊」は、フィッシャーの正確確率検定により算出したｐ値を示す。
【００３７】
その結果、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるプロゲステロンレセプターの発現が陰性であれば、当該乳癌細胞がＫＫ−ＬＣ−１を発現すると予測できることが明らかとなった。
【００３８】
【表２】
2020024156.tif 000003
【００３９】
表３は、ＨＥＲ２とＫＫ−ＬＣ−１の発現の検出結果をまとめた結果である。表３中、「ＨＥＲ２＋」はＨＥＲ２の発現が陽性であったことを示し、「ＨＥＲ２−」はＨＥＲ２の発現が陰性であったことを示す。
【００４０】
また、「ＫＫ−ＬＣ−１  ｍＲＮＡ」の欄には、ＫＫ−ＬＣ−１の発現を遺伝子レベルで検出した結果、陽性であった症例数を示す。カッコ内の数値は、それぞれ、ＨＥＲ２陽性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、ＨＥＲ２陰性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、及び全症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）を示す。
【００４１】
また、「ＫＫ−ＬＣ−１タンパク質」の欄には、ＫＫ−ＬＣ−１の発現をタンパク質レベルで検出した結果、陽性であった症例数を示す。カッコ内の数値は、それぞれ、ＨＥＲ２陽性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、ＨＥＲ２陰性症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）、及び全症例におけるＫＫ−ＬＣ−１陽性症例の割合（％）を示す。
【００４２】
【表３】
2020024156.tif 000004
【００４３】
下記表４は、表１〜３の結果を更にまとめたものである。表４中、「ＥＲ＋」はエストロゲンレセプターの発現が陽性であったことを示し、「ＥＲ−」はエストロゲンレセプターの発現が陰性であったことを示す。また、「ＰＲ＋」はプロゲステロンレセプターの発現が陽性であったことを示し、「ＰＲ−」はプロゲステロンレセプターの発現が陰性であったことを示す。また、「ＨＥＲ２＋」はＨＥＲ２の発現が陽性であったことを示し、「ＨＥＲ２−」はＨＥＲ２の発現が陰性であったことを示す。例えば、「ＥＲ＋ＰＲ−ＨＥＲ２−」は、エストロゲンレセプターの発現が陽性であり、プロゲステロンレセプターの発現が陰性であり、ＨＥＲ２の発現が陰性であったことを示す。
【００４４】
【表４】
2020024156.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明によれば、乳癌患者由来の乳癌細胞におけるＫＫ−ＬＣ−１の発現を簡便に予測する技術を提供することができる。
【配列表】
2020024156000001.app