(57)【要約】      （修正有）【課題】代謝障害の予防または処置のための方法の提供。【解決手段】任意選択的に第二薬剤と併用して、末梢の及び／または肝臓のグルコース利用を増加させ、それによりインスリン抵抗性に関連する疾患及び障害を予防または処置する方法、抗ＣＧＲＰ抗体を投与する方法。任意選択的に第二薬剤と併用して、末梢の及び／または肝臓のグルコース利用を増加させるための投与に好適であり、それによりインスリン抵抗性に関連する疾患及び障害を予防または処置する、抗ＣＧＲＰ抗体を含む組成物。【選択図】図１
2020158525.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象において末梢の及び／または肝臓のグルコース利用を増加させる方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
それを必要とする対象においてインスリン抵抗性を低減させる方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項３】
それを必要とする対象において肥満を処置する、予防する、または制御する方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項４】
それを必要とする対象において持続的な正常血糖を達成するための方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項５】
それを必要とする対象において除脂肪組織の体脂肪に対する比率を増加させるための方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項６】
２型糖尿病の発症及び／または肥満を処置するまたは遅らせる及び／または機能的な膵β細胞の損失を予防するのに有効である、請求項１〜５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項７】
外因性インスリンを投与する必要性が遅延される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が前糖尿病と診断されているまたは２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈する、請求項１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９】
前記対象が、閉経前、閉経期前後、閉経期または閉経後である、請求項１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１０】
前記対象が、１００ｍｇ／ｄＬから１２５ｍｇ／ｄｌ間の空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース溶液を経口摂取した２時間後に１４０ｍｇ／ｄＬから１９９ｍｇ／ｄＬ間の血糖値；及び／または５．７パーセントから６．４パーセント間の糖化ヘモグロビンを含む、前糖尿病の１つまたは複数の症状を呈する、請求項１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１１】
前記対象が、１２５ｍｇ／ｄｌを超える空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース溶液を経口摂取した２時間後に少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血糖値；及び／または少なくとも６．５パーセントの糖化ヘモグロビンを含む、糖尿病の１つまたは複数の症状を呈する、請求項１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１２】
前記対象が、２型糖尿病の家族歴；以前に２型糖尿病と診断された１または複数の親または同胞；脂質異常症；少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血中総トリグリセリドレベル；３５ｍｇ／ｄＬ未満の血中高密度リポタンパク質；肥満；２５ｋｇ／ｍ２を超える肥満度指数；妊娠糖尿病の病歴；９ｌｂｓを超える出生時体重の乳児を以前に出産；高血圧；少な
くとも１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧；少なくとも９０ｍｍＨｇの拡張期血圧；少なくとも９９ｍｇ／ｄＬの空腹時血糖の以前の測定；血管疾患；多嚢胞性卵巣症候群；または黒色表皮腫を含む、２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈する、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が２型糖尿病と診断されている、請求項１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が、ＧＬＰ−１、エキセナチド−１、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、リラグルチド、エキセナチドＬＡＲ、ＤＰＰ−４拮抗薬、ＧＬＰ−１受容体作動薬、または別のＧＬＰ−１作動薬を用いた処置に不応性である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象に抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片以外の抗糖尿病薬または抗肥満薬を投与することをさらに含む、前述の請求項のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１６】
前記抗糖尿病薬または抗肥満薬が、アミリン、アミリン作動薬、スルホニル尿素薬、カルシトニン、グルカゴン、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、ガストリン阻害ペプチド（ＧＩＰ）、インクレチンペプチド、インスリン、ＳＧＬＴ２阻害薬、グルコース再吸収阻害薬、フェノフィブラート、フィブラート、抗グレリン抗体または抗体断片、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）−１（ＩＩＩｂ）、ＦＧＦＲ−１（ＩＩＩｃ）、抗体または抗体断片、及び／またはＦＧＦＲ−４（ＩＩＩｃ）、抗ＣＤ３８抗体または抗体断片、抗ＭＩＣ−１抗体、またはＭＩＣ−１結合断片、メトホルミンまたは前述の任意の組み合わせの１つまたは複数を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗糖尿病薬がメトホルミンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
体重減少を引き起こすのに有効である、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
当該投与される抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、インビボでインスリン分泌を有意に増加させない、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
当該投与される抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、膵炎の発生率または膵臓の炎症に伴うマーカーまたはサイトカインの発現を結果生じない、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が薬学的に許容され得るキャリアをさらに含む、前述の請求項のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２２】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が前記対象に約０．１から１００．０ｍｇ／レシピエント対象の体重のｋｇの投与量で投与される、前述の請求項のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２３】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片がヒト抗体である、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２４】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が非天然型である、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２５】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、非天然型の抗体断片である、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２６】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片がヒト化抗体である、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２７】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片がキメラ抗体である、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、インタクトなＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上の、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗ヒトＣＧＲＰ抗体と同一の直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）に特異的に結合する及び／または同一または重複する直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）への結合について競合する、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２９】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体内に含有される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または全６つのＣＤＲを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３；及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、インタクトなＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上の、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６と同一の直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）に特異的に結合する及び／または同一または重複する直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）への結合について競合する、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３３】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６に含有される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または好ましくは全６つのＣＤＲを含む、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３４】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列を有し、任意選択的に前記抗体が配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６に含
有される全６つのＣＤＲを含有する、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３５】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む、Ａｂ６を含む、請求項１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３６】
該抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、ヒト、キメラまたはヒト化抗体を含む、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
該抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、またはＩｇＮａｒまたは別の一価抗体断片を含む、前述の請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前述の請求項のいずれかに係る方法における使用に好適な組成物であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物及び抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片以外の抗糖尿病薬または抗肥満薬を含む、前記組成物。
【請求項３９】
該抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、請求項２８〜３１または３６〜３７のいずれか１つ、または好ましくは請求項３２〜３６のいずれか１つに従うものである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記抗糖尿病薬または抗肥満薬が、アミリン、アミリン作動薬、スルホニル尿素薬、カルシトニン、グルカゴン、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、ガストリン阻害ペプチド（ＧＩＰ）、インクレチンペプチド、インスリン、ＳＧＬＴ２阻害薬、グルコース再吸収阻害薬、フェノフィブラート、フィブラート、メトホルミン、抗グレリン抗体または抗体断片、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）−１（ＩＩＩｂ）、ＦＧＦＲ−１（ＩＩＩｃ）、抗体または抗体断片、及び／またはＦＧＦＲ−４（ＩＩＩｃ）、抗ＣＤ３８抗体または抗体断片、抗ＭＩＣ−１抗体またはＭＩＣ−１結合断片、または前述の任意の組み合わせの１つまたは複数を含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
該他の抗糖尿病薬または抗肥満薬がメトホルミンを含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４２】
末梢のグルコース利用を増加させる抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を同定する方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を対象に投与すること、前記対象における末梢のグルコース利用を測定すること、及び前記対象における末梢のグルコース利用を少なくとも１の対照対象における末梢のグルコース利用と比較することを含む、前記方法。
【請求項４３】
肝臓のグルコース利用を増加させる抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を同定する方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を対象に投与すること、前記対象における肝臓のグルコース利用を測定すること、及び前記対象における肝臓のグルコース利用を少なくとも１の対照対象における末梢のグルコース利用と比較することを含む、前記方法。
【請求項４４】
前記対象が、糖尿病のヒト、マウス、ラット、非ヒト霊長目、非ヒト動物モデルである、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４５】
糖尿病の前記非ヒト動物モデルが高脂肪食摂取ラット及びＺｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットから選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、前記対照対象と比べて末梢のグルコース利
用を少なくとも１０％、少なくとも２０％、または少なくとも５０％増加させる、請求項４２〜４５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４７】
前記少なくとも１の対照対象が、前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片の投与前の前記対象を含む、請求項４２〜４６のいずれか１つに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の開示
本出願は、そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年４月２２日に出願された、米国仮出願第６１／９８２，６１１号（代理人整理番号４３２５７．３００２号）及び２０１３年７月３日に出願された、米国仮出願第６１／８４２，７４５号（代理人整理番号４３２５７．３００１号）の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、ヒトカルシトニン遺伝子関連ペプチド（「ＣＧＲＰ」）に対する抗体及びその断片（Ｆａｂ断片を含む）に関し、それはＣＧＲＰに特異的に結合し、末梢組織におけるグルコース取り込み及び利用を促進する及び／または肝臓のグルコース産生を阻害する。主題の方法の例示的な実施形態は、機能的な膵β細胞を保存し得、それにより明らかな糖尿病への進行を遅らせる。本発明は、インスリン抵抗性（グルコース、炭水化物及び脂肪代謝の障害を含む）と関連する疾患及び障害についてスクリーニングする方法及び前記抗体またはその断片を投与することによってインスリン抵抗性と関連する疾患及び障害を予防するまたは処置する方法にも関する。
【０００３】
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出されており、その全体において参照により本明細書に組み込まれる生物学的配列表を含有する。２０１４年７月１日に作成された、前記ＡＳＣＩＩコピーは「４３２５７ｏ３０１３．ｔｘｔ」という名称であり、２０３，６７８バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００４】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、３７アミノ酸の長さの多機能性神経ペプチドとして産生される。ＣＧＲＰの２つの形態、すなわちＣＧＲＰ−α及びＣＧＲＰ−β形態がヒトにおいて存在し、両方は同様の活性を有する。ＣＧＲＰ−α及びＣＧＲＰ−βは、ヒトにおいて３個のアミノ酸で異なり、異なる遺伝子に由来する。ペプチドのＣＧＲＰファミリーは、それぞれ異なる受容体及び生物学的活性を有するが、アミリン、アドレノメデュリン、及びカルシトニンも含む。Ｄｏｏｄｓ，Ｈ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，２（９）：１２６１−６８（２００１）。ＣＧＲＰタンパク質ファミリー内で、全体の相同性は異なるが、推定上の受容体結合部位でのアミノ酸残基は保存される。例えば、ヒトＣＧＲＰ及びアミリンは、全体で４６％アミノ酸配列同一性を共にし、一方でヒトカルシトニン及びＣＧＲＰは１５％アミノ酸配列同一性を共にする。Ｗｉｍａｌａｗａｎｓａ，Ｓ．Ｊ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖ．１７（５）：５３３−５８５（１９９６）。
【０００５】
ＣＧＲＰの生物学的効果は、ＣＧＲＰ受容体（ＣＧＲＰ−Ｒ）を介して媒介され、それは受容体関連膜タンパク質（ＲＡＭＰ）と合わせて、７回膜貫通型成分からなる。ＣＧＲＰ−Ｒは、Ｇタンパク質を通したアデニル酸シクラーゼへの有効なカップリング及びｃＡＭＰの産生に必須である、受容体成分タンパク質（ＲＣＰ）の活性をさらに必要とする。Ｄｏｏｄｓ，Ｈ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，２（９）：１２６１−６８（２００１）。
【０００６】
ＣＧＲＰは、末梢及び中枢神経系の全体を通して見出され、心血管系、神経系及び内分泌系に影響する。ＣＧＲＰは、三叉神経などの組織から放出されると、それは髄膜内で神経ペプチドの逐次活性化及び放出をもたらし得、血管拡張、血管漏出、及びマスト細胞の分解によって特徴付けられる神経原性炎症を媒介する。Ｄｕｒｈａｍ，Ｐ．Ｌ．，Ｎｅｗ
Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３５０（１１）：１０７３−７５（２００４）。ＣＧＲＰは、
偏頭痛の発症において顕著な役割を果たすと考えられている。偏頭痛の頭痛期の間に、他の神経ペプチドを除いて、ＣＧＲＰの血漿濃度が頸静脈血中で上昇すると示されている。Ａｒｕｌｍｏｚｈｉ，Ｄ．Ｋ．，ら、Ｖａｓ．Ｐｈａｒｍａ．，４３：１７６−１８７（２００５）。さらに、ＣＧＲＰ拮抗作用は、偏頭痛の処置に有効であると示されている。（Ｏｌｅｓｅｎら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００４年３月１１日；３５０（１１）：１１０４−１０）。
【０００７】
神経組織に加えて、ＣＧＲＰ受容体は、心臓血管組織、副腎、下垂体、腎臓、膵臓、及び骨において同定されている。Ｗｉｍａｌａｗａｎｓａ，Ｓ．Ｊ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ
Ｒｅｖ．１７（５）：５３３−５８５（１９９６）。インビトロ研究において、ＣＧＲＰ及びアミリンの両方は単離された膵臓組織を使用してインスリン分泌を阻害し、用量依存的様式でインスリン刺激性のグリコーゲン合成率に反作用し、単離された肝細胞におけるインスリンの作用を遮断することが見出された（Ｇｏｍｅｚ−Ｆｏｉｘら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７６：６０７−６１０，１９９１）。さらに、Ｌｅｉｇｈｔｏｎ及びＣｏｏｐｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ，３３５（６１９１）：６３２−５，１９８８）は、ラットＣＧＲＰ−１が、インビトロで横紋ラットヒラメ筋における基礎及びインスリン刺激性のグリコーゲン合成率を阻害することを報告する。
【０００８】
グルコース恒常性は、ホルモングルカゴン及びグルコース利用及びホルモンインスリンによる組織への取り込みによりグリコーゲン合成とグリコーゲン分解のバランスをとることによって維持される。グルコースの存在は通常、骨格筋、筋細胞、脳及び脂肪細胞へのグルコースの輸送率を増加させるように機能するインスリン産生を刺激する。インスリンはまた、通常、脂肪細胞中の脂質分解を阻害する。前糖尿病または２型糖尿病の早期段階では、組織はインスリン抵抗性を発症するが、膵β細胞がインスリンのレベルを増大させて分泌することによって補う。最終的には、筋肉及び肝臓のインスリン抵抗性が増大するため、補うための膵β細胞の能力が消耗されるようになり、外因性インスリンが必要となる。
【０００９】
インスリン合成及びグルコース利用が損なわれた結果としてグルコース恒常性を厳密に制御することができなくなることは、深刻な代謝への影響及び健康への有害な影響を与え得る。最も一般的なのは、インスリン抵抗性及び２型糖尿病の診断につながる持続的な高血糖（高血糖症）の発症である。２０１１年には、米国で２０歳以上の２５，６００，０００人が糖尿病と診断され、そのうち９５％が２型糖尿病であった。（疾病予防管理センター。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆａｃｔ  Ｓｈｅｅｔ，２０１１。Ａｔｌａｎｔａ，ＧＡ：疾病予防管理センター、アメリカ合衆国保健福祉省；２０１１）。糖尿病のための医療費は、心臓発作、脳卒中、腎合併症及び神経障害のリスクの増加ゆえに、糖尿病でない人に対して平均して２倍高い。Ｉｍｐｅｒａｔｏｒｅら、Ａｍ  Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１６０（６）：５３１−５３９（２００４）。ＣＤＣは、著しい変化がなければ、２０５０年までに米国で３人に１人の成人が糖尿病を有し得ると予測している。Ｂｏｙｌｅら、Ｐｏｐｕｌ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｍｅｔｒ．８：２９（２０１０）。世界中で、２０１１年に糖尿病と診断された人の総数は３億６６００万人であると推定され、２０３０年までに５億５２００万人まで増大すると推定された。（国際糖尿病連合、ＩＤＦ糖尿病アトラス、第５版）。
【００１０】
グルコース代謝におけるＣＧＲＰの役割は、文献で明確に定義されていない。単離肝細胞における研究は、ＣＧＲＰ及びアミリンがインスリン刺激性のグリコーゲン合成率を阻害することを実証した。（Ｇｏｍｅｚ−Ｆｏｉｘら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７６：６０７−６１０，１９９１）。Ｂｅａｕｍｏｎｔら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｊｕｌ；１１５（５）：７１３−５（１９９５）は、ＣＧＲＰ受容体が、筋肉グルコース代謝の効果を媒介しないことを発見した。Ｔａｎａｋａら、Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉ
ｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ１２１：２８０−２８５（２０１３）は、ラットモデルにおいて抗ＣＧＲＰ抗体がインスリン分泌に小さな変化を伴って第１相インスリン分泌のわずかな延長を生み出すことを提唱したが、しかしながら、該研究は、結果を混乱させる可能性がある、該抗体が他のカルシトニンファミリーペプチドに対して交差反応性であるかどうかについて報告しなかった。最後に、既存の米国特許は、ＣＧＲＰはアミリン作動薬でありＣＧＲＰポリペプチド（ＣＧＲＰ拮抗薬とは反対）の投与は糖尿病を処置し得ると示して主張している（例えば、米国特許第５，６４１，７４４号及び５，１７５，１４５号を参照されたい）。
【発明の概要】
【００１１】
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において末梢の及び／または肝臓のグルコース利用を増加させる方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法を提供する。
【００１２】
一態様では、本開示は、それを必要とする対象においてインスリン抵抗性を低減させる方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法を提供する。
【００１３】
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において肥満を処置する、予防するまたは制御する方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法を提供する。
【００１４】
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において持続的な正常血糖を達成するための方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法を提供する。
【００１５】
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において、除脂肪組織の体脂肪に対する比率を増加させるための方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法を提供する。
【００１６】
主題の方法は、２型糖尿病の発症及び／または肥満を処置するまたは遅延させるのに有効であり得る。例えば、外因性インスリンを投与する必要性が遅延され得る。本方法は、膵β細胞の損失を予防するまたは遅延させるのに有効であり得る。例えば、理論により限定されることを意図せず、本方法はインスリン抵抗性のヒトまたは非ヒト動物の膵β細胞を休息させることを可能にし得、それにより機能的な膵β細胞の損失を防ぐと考えられる。
【００１７】
前記対象は、前糖尿病と診断されている可能性があるかまたは２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈し得る。
【００１８】
対象は、閉経前、閉経期前後、閉経期または閉経後であり得る。
【００１９】
対象は、１００ｍｇ／ｄＬから１２５ｍｇ／ｄｌ間の空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース溶液を経口摂取した２時間後に１４０ｍｇ／ｄＬから１９９ｍｇ／ｄＬ間の血糖値；及び／または５．７パーセントから６．４パーセント間の糖化ヘモグロビンなどの、前糖尿病の１つまたは複数の症状を呈し得る。
【００２０】
対象は、１２５ｍｇ／ｄｌを超える空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース
溶液を経口摂取した２時間後に少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血糖値；及び／または少なくとも６．５パーセントの糖化ヘモグロビンなどの、糖尿病の１つまたは複数の症状を呈し得る。
【００２１】
対象は、２型糖尿病の家族歴；以前に２型糖尿病と診断された１または複数の親または同胞；脂質異常症；少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血中総トリグリセリドレベル；３５ｍｇ／ｄＬ未満の血中高密度リポタンパク質；肥満；２５ｋｇ／ｍ２を超える肥満度指数；妊娠糖尿病の病歴；９ｌｂｓを超える出生時体重の乳児を以前に出産；高血圧；少なくとも１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧；少なくとも９０ｍｍＨｇの拡張期血圧；少なくとも９９ｍｇ／ｄＬの空腹時血糖の以前の測定；血管疾患；多嚢胞性卵巣症候群；または黒色表皮腫などの、２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈し得る。
【００２２】
対象は、２型糖尿病と診断されている可能性がある。
【００２３】
対象は、ＧＬＰ−１、エキセナチド−１、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、リラグルチド、エキセナチドＬＡＲ、ＤＰＰ−４拮抗薬、ＧＬＰ−１受容体作動薬、及び別のＧＬＰ−１作動薬からなる群より選択される少なくとも１つの化合物を用いた処置に不応性であり得るか、またはかかる化合物は該対象への投与が禁忌であり得る。
【００２４】
本方法は、前記対象に、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片以外の抗糖尿病薬または抗肥満薬を投与することをさらに含み得る。前記抗糖尿病薬または抗肥満薬は、アミリン、アミリン作動薬、スルホニル尿素薬、カルシトニン、グルカゴン、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤（ｂｉｌｅ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｓｔｒａｎｔ）、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、ガストリン阻害ペプチド（ＧＩＰ）、インクレチンペプチド、インスリン、ＳＧＬＴ２阻害薬、グルコース再吸収阻害薬、フェノフィブラート、フィブラート、抗グレリン抗体または抗体断片、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）−１（ＩＩＩｂ）、ＦＧＦＲ−１（ＩＩＩｃ）、抗体または抗体断片、及び／またはＦＧＦＲ−４（ＩＩＩｃ）、抗ＣＤ３８抗体または抗体断片、抗ＭＩＣ−１抗体、またはＭＩＣ−１結合断片、メトホルミンまたは前述の任意の組み合わせの１つまたは複数を含み得る。
【００２５】
例示的な実施形態では、前記抗糖尿病薬はメトホルミンである。
【００２６】
本方法は、体重減少を引き起こすのに有効であり得る。
【００２７】
投与される抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、インビボでインスリン分泌を有意に増加させない可能性がある、例えば、インビボで正常な生理学的レベルを超えるインスリン分泌を有意に増加させない可能性がある、または抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片の投与前のインスリン分泌のレベルと比較してインスリン分泌を有意に増加させない可能性がある。
【００２８】
投与される抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、膵炎における発生率または膵臓の炎症に伴うマーカーまたはサイトカインの発現の増加をもたらさない可能性がある。
【００２９】
前記組成物は、薬学的に許容され得るキャリアをさらに含み得る。
【００３０】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、前記対象に、約０．１から１００．０ｍｇ
／レシピエント対象の体重のｋｇの投与量で投与され得る。
【００３１】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、ヒト抗体であり得る。前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、非天然型であり得る。前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、非天然型の抗体断片であり得る。前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、ヒト化抗体またはその断片であり得る。前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、キメラ抗体であり得る。
【００３２】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、インタクトなＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上の、（ａ）配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；（ｂ）配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；（ｃ）配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；（ｄ）配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；（ｅ）配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；（ｆ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；（ｇ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；（ｈ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；（ｉ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；（ｊ）配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；（ｋ）配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；（ｌ）配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；（ｍ）配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び（ｎ）配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗ヒトＣＧＲＰ抗体と同一の直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る及び／または同一または重複する直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）への結合について競合し得る。
【００３３】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、（ａ）配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；（ｂ）配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；（ｃ）配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；（ｄ）配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；（ｅ）配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；（ｆ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；（ｇ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；（ｈ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；（ｉ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；（ｊ）配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；（ｋ）配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；（ｌ）配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；（ｍ）配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び（ｎ）配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体内に含有される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または全６つのＣＤＲを含み得る。
【００３４】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、（ａ）配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１（ｂ）配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；（ｃ）配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；（ｄ）配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；（ｅ）配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；（ｆ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；（ｇ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；（ｈ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；（ｉ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；（ｊ）配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；（ｋ）配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；（ｌ）配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；（ｍ）配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び（ｎ）配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨ
を含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列を有し得る。
【００３５】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、（ａ）配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；（ｂ）配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；（ｃ）配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；（ｄ）配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；（ｅ）配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；（ｆ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；（ｇ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；（ｈ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；（ｉ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；（ｊ）配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；（ｋ）配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；（ｌ）配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；（ｍ）配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３；及び（ｎ）配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体を含む。
【００３６】
抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、ヒト、キメラまたはヒト化抗体を含み得る。抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＩｇＮａｒ、またはＭｅｔＭａｂまたは別の一価抗体断片を含み得る。
【００３７】
別の態様では、本開示は、有効量の抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片及び抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片以外の抗糖尿病薬または抗肥満薬を備え得る、本明細書に記載された、例えば、先行する段落に列挙された方法における使用に好適な組成物を提供する。抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は本明細書に記載のもの、例えば、インタクトなＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上の、（ａ）配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；（ｂ）配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；（ｃ）配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；（ｄ）配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；（ｅ）配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；（ｆ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；（ｇ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；（ｈ）配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；（ｉ）配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；（ｊ）配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；（ｋ）配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；（ｌ）配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；（ｍ）配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び（ｎ）配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗ヒトＣＧＲＰ抗体と、同一の直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）に特異的に結合し得る、同一または重複する直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）への結合について競合し得る、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列を有し得る、または前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体を含み得るものである。
【００３８】
前記抗糖尿病薬または抗肥満薬は、アミリン、アミリン作動薬、スルホニル尿素薬、カルシトニン、グルカゴン、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、ガストリン阻害ペプチド（ＧＩＰ）、インクレチンペプチド、インスリン、ＳＧＬＴ２阻害薬、グルコース再吸収阻害薬、フェノフィブラート、フィブラート、メトホルミン、抗グレリン抗体または抗体断片、繊
維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）−１（ＩＩＩｂ）、ＦＧＦＲ−１（ＩＩＩｃ）、抗体または抗体断片、及び／またはＦＧＦＲ−４（ＩＩＩｃ）、抗ＣＤ３８抗体または抗体断片、抗ＭＩＣ−１抗体またはＭＩＣ−１結合断片、または前述の任意の組み合わせの１つまたは複数を含む。例えば、前記他の抗糖尿病薬または抗肥満薬は、メトホルミンを含み得る。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１Ａ〜Ｄ。処置前後の血中グルコース及び血漿インスリンレベル。結果は、平均±ＳＥＭとして表される。一元配置分散分析＋ダネットの事後検定を用いて、ビヒクルに対して＃＃ｐ＜０．０１。Ａ：血中グルコースを、摂食条件下で、処置前、ビヒクル、Ａｂ１４及びメトホルミンを用いた処置の１８時間後、ビヒクル及びＡｂ１４を用いた処置の４２時間後に測定した。Ｂ：血漿インスリンを、摂食条件下で、処置前、メトホルミンを用いた処置の１８時間後及び、ビヒクル及びＡＢ１４を用いた処置の４２時間後に測定した。Ｃ：ＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性指数＝グルコース（ｍＭ）×インスリン（μＵ／ｍＬ）／２２．５）を、処置前、メトホルミンを用いた処置の１８時間後及び、ビヒクル及びＡｂ１４を用いた処置の４２時間後に算出した。Ｄ：血中グルコースを、絶食条件下でクランプの直前に測定した（メトホルミンを用いた処置の２４時間後及びビヒクル及びＡｂ１４を用いた処置の４８時間後）。凡例：各群における最も左のバー、ビヒクル；各群における中間のバー、Ａｂ１４処置；各群における最も右のバー、メトホルミン処置。
【図２】図２Ａ〜Ｃ。クランプ処置中のグルコース注入率展開（Ａ）、定常状態間の血中グルコース平均（Ｂ）及びクランプ終了時の血漿インスリンレベル（Ｃ）。結果は、平均±ＳＥＭとして表される。Ａ：（二元配置分散分析とボンフェローニの事後検定を用いてビヒクルに対して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。図２Ａに関する凡例：上方ライン、メトホルミン処置；中間のライン、Ａｂ１４処置；下方ライン、ビヒクル処置（１８０分時点）。図２Ｂ〜２Ｃに対する凡例：各群における最も左のバー、ビヒクル；各群における中間のバー、Ａｂ１４処置；各群における最も右のバー、メトホルミン処置。
【図３】測定したグルコースフラックス。結果は、平均±ＳＥＭとして表される。一元配置分散分析とダネットの事後検定を用いて、ビヒクルに対して＃ｐ＜０．０５。６時間の空腹条件下でクランプを実施した。０．３Ｕ／Ｋｇ／時間のインスリン及び３Ｈ−グルコースを１８０分間灌流した。グルコース注入率、全身代謝回転、肝臓のグルコース産生（ＨＧＰ）、糖分解及びグリコーゲン合成の平均を、定常状態に対応する１４０から１８０分の間で算出した。凡例：各群における最も左のバー、ビヒクル；各群における中間のバー、Ａｂ１４処置；各群における最も右のバー、メトホルミン処置。
【図４】図４Ａ〜Ｃ。インビボでの組織特異的グルコース利用。結果は、平均±ＳＥＭとして表される。一元配置分散分析とダネットの事後検定を用いてビヒクルに対して＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１。Ａ：精巣上体白色脂肪組織（ＥＷＡＴ）、鼠径部白色脂肪組織（ＩＷＡＴ）、及び皮膚（陰性対照として）におけるグルコース利用。Ｂ：混合外側広筋（ＶＬ）及び糖分解長指伸筋（ＥＤＬ）におけるグルコース利用。Ｃ：酸化的ヒラメ筋及び心尖におけるグルコース利用。凡例：各群における最も左のバー、ビヒクル；各群における中間のバー、Ａｂ１４処置；各群における最も右のバー、メトホルミン処置。
【図５】高脂肪フルクトース食を与えられた動物または通常の飼料を与えられた対照動物についての継時的な平均体重。凡例：上方のライン、高脂肪高フルクトース食；下方のライン、対照飼料。
【図６】図５に示す動物群についての継時的な体重増加。上方のライン：高脂肪高フルクトース食；下方のライン：対照飼料。凡例：上方のライン、高脂肪高フルクトース食；下方のライン、対照飼料。
【図７】Ａｂ１４（１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇ）またはメトホルミンを用いた処置後の高脂肪食を与えられた動物、ならびにビヒクル処置された動物及び通常の飼料の与えられた対照動物についての継時的な体重増加。処置は０日目に投与した。グラフ上のラインは、７日目での最低から最高へ順番に：通常の飼料（ＮＣ）＋ビヒクル；高脂肪食（ＨＦＤ）＋メトホルミン；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋ビヒクル；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇである。
【図８Ａ】図８Ａ。図７に示す動物についての食物摂取量。グラフ上のラインは、７日目での最低から最高へ順番に：高脂肪食（ＨＦＤ）＋メトホルミン；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋ビヒクル；通常の飼料（ＮＣ）＋ビヒクルである。
【図８Ｂ】図８Ｂ。図７に示す動物についての累積食物摂取量。凡例：左から右へ順番にバーは：通常の飼料（ＮＣ）＋ビヒクル；高脂肪食（ＨＦＤ）＋ビヒクル；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋メトホルミンである。
【図９】Ａｂ１４（１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇ）またはメトホルミンを用いた処置後の高脂肪食を与えられた動物、ならびにビヒクル処置された動物及び通常の飼料の与えられた対照動物についての空腹時血糖。処置は０日目に投与した。凡例：左から右へ順番にバーは図８Ｂの通りである。
【図１０】Ａｂ１４（１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇ）またはメトホルミンを用いた処置後の高脂肪食を与えられた動物、ならびにビヒクル処置された動物及び通常の飼料の与えられた対照動物についての空腹時血漿インスリン。処置は０日目に投与した。凡例：左から右へ順番に各群のバーは図８Ｂの通りである。
【図１１】Ａｂ１４またはメトホルミンを用いた処置の１５日後に実施されたグルコースクランプ前及び最中の血漿インスリン（上方パネル）及びＣペプチド（下方左及び右パネル）。動物は処置前６週間にわたって高脂肪食を与えられた。凡例：左から右へ順番にバーは図８Ｂの通りである。
【図１２】Ａｂ１４（１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇ）またはメトホルミンを用いた処置後の高脂肪食を与えられた動物、ならびにビヒクル処置された動物及び通常の飼料の与えられた対照動物についてのＨＯＭＡ−ＩＲ。処置は０日目に投与した。凡例：左から右へ順番にバーは図８Ｂの通りである。
【図１３】Ａｂ１４またはメトホルミンを用いた１５日間の処置後、ならびにビヒクル処置された動物及び通常の飼料の与えられた対照動物に実施されたグルコースクランプについてのグルコース注入率。動物は処置前６週間にわたって高脂肪食を与えられた。グルコースクランプは、２つの異なるインスリン注入率で行った（５ｍＵ／ｋｇ／分、おおよそ７０〜１００分で定常状態に達した、及び１５ｍＵ／ｋｇ／分、おおよそ１７０〜２１０分で定常状態に達した。）。凡例：丸マーカー、通常の飼料；中程度の四角マーカー、高脂肪食（ＨＦＤ）＋ビヒクル；上向き三角、ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １０ｍｇ／ｋｇ；下向き三角、ＨＦＤ＋Ａｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇ；菱形、ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇ；大きい四角、ＨＦＤ＋メトホルミン。示すエラーバーは、平均プラスまたはマイナスＳＥＭである。
【図１４】図１３に示すグルコースクランプ試験の定常状態中の平均グルコース注入率。グルコース注入率を低高インスリン注入率（５ｍＵ／ｋｇ／分、おおよそ７０〜１００分で定常状態に達した、及び１５ｍＵ／ｋｇ／分、おおよそ１７０〜２１０分で定常状態に達した）について示した。各群におけるバーの順番は図８Ｂの通りである。
【図１５】図１３に示すグルコースクランプ試験中の平均グルコースフラックス。低い方の（５ｍＵ／ｋｇ／分）インスリン注入率、おおよそ７０〜１００分で定常状態に達した、について結果を示す。凡例：各群におけるバーは左から右へ順番に：高脂肪食（ＨＦＤ）＋ビヒクル；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇ；ＨＦＤ＋メトホルミンである。
【図１６】図１３に示すグルコースクランプ試験中の平均グルコースフラックス。高い方の（１５ｍＵ／ｋｇ／分）インスリン注入率、おおよそ１７０〜２１０分で定常状態に達した、について結果を示す。凡例：各群におけるバーの順番は図１５の通りである。
【図１７】雄スプラーグドーリーラットへの静脈内ボーラス注射後の抗ＣＧＲＰ抗体（具体的には、Ａｂ６）の平均毒物動態学プロファイル。継時的な血漿濃度を１６８時間（７日間）にわたって示し、これは以下の実施例において実施される週毎投薬を支持する。凡例：四角マーカー、Ａｂ１４  １０ｍｇ／ｋｇ／週；上向き三角マーカー、Ａｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇ／週；菱形マーカー、Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇ／週。
【図１８】図１８Ａ〜Ｄ。８週齢ＺＤＦラットにおける６時間空腹時のＨＯＭＡ−ＩＲ（Ａ）、血中グルコース（Ｂ）、血漿インスリン（Ｃ）及び体重（Ｄ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）。図１８Ａ〜Ｄのバーの順番（左から右）は：（１）ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦ除脂肪ラット；（２）ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；（３）Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ／週及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；（４）Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；（５）ビヒクル１及びメトホルミン（「ｍｅｔ」）２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラット；（６）ビヒクル１及びピオグリタゾン１０ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラット；（７）Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ／週及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラット；及び（８）Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラットである。
【図１９Ａ】図１９Ａ〜Ｂ。体重（Ａ）及び体重増加（Ｂ）経過観察。結果は平均±ＳＥＭとして表される。  ＄ｐ＜０．０５（図１９Ａ：８日目のピオグリタゾンで処置されたラット；２８日目のＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミンで処置されたラット；図１９Ｂ：２２日目及び２５日目のＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミンで処置されたラット）；＄＄ｐ＜０．０１（図１９Ｂ：２８日目のＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミンで処置されたラット）；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（図１９Ａ：１１〜２８日目間の全時点でのピオグリタゾンで処置されたラット；全時点でのビヒクルで処置されたＺＤＦ除脂肪ラット）（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）。
【図１９Ｂ】図１９Ａ〜Ｂ。体重（Ａ）及び体重増加（Ｂ）経過観察。結果は平均±ＳＥＭとして表される。  ＄ｐ＜０．０５（図１９Ａ：８日目のピオグリタゾンで処置されたラット；２８日目のＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミンで処置されたラット；図１９Ｂ：２２日目及び２５日目のＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミンで処置されたラット）；＄＄ｐ＜０．０１（図１９Ｂ：２８日目のＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミンで処置されたラット）；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（図１９Ａ：１１〜２８日目間の全時点でのピオグリタゾンで処置されたラット；全時点でのビヒクルで処置されたＺＤＦ除脂肪ラット）（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）。
【図２０Ａ】図２０Ａ〜Ｂ。食物摂取量経過観察（Ａ）及び累積食物消費量（Ｂ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２０Ｂのバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＄ｐ＜０．０５（図２０Ａ：２０及び２２日目のピオグリタゾンで処置されたラット）；＄＄ｐ＜０．０１（図２０Ａ：１５日目のピオグリタゾンで処置されたラット）；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（図２０ａ：全時点でのビヒクルで処置されたＺＤＦ除脂肪ラット）（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）  ＃＃ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）
【図２０Ｂ】図２０Ａ〜Ｂ。食物摂取量経過観察（Ａ）及び累積食物消費量（Ｂ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２０Ｂのバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＄ｐ＜０．０５（図２０Ａ：２０及び２２日目のピオグリタゾンで処置されたラット）；＄＄ｐ＜０．０１（図２０Ａ：１５日目のピオグリタゾンで処置されたラット）；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（図２０ａ：全時点でのビヒクルで処置されたＺＤＦ除脂肪ラット）（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）  ＃＃ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）
【図２１Ａ】図２１Ａ〜Ｄ。６時間（０日目）または一晩（１２、１９、２６日目）空腹条件下の血中グルコース（Ａ）、血漿インスリン（Ｂ）、ＨＯＭＡ−ＩＲ（Ｃ）及びＣペプチド（Ｄ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２１Ａ〜Ｄの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＋＋ｐ＜０．０１；対メトホルミン群及びＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２１Ｂ】図２１Ａ〜Ｄ。６時間（０日目）または一晩（１２、１９、２６日目）空腹条件下の血中グルコース（Ａ）、血漿インスリン（Ｂ）、ＨＯＭＡ−ＩＲ（Ｃ）及びＣペプチド（Ｄ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２１Ａ〜Ｄの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＋＋ｐ＜０．０１；対メトホルミン群及びＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２１Ｃ】図２１Ａ〜Ｄ。６時間（０日目）または一晩（１２、１９、２６日目）空腹条件下の血中グルコース（Ａ）、血漿インスリン（Ｂ）、ＨＯＭＡ−ＩＲ（Ｃ）及びＣペプチド（Ｄ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２１Ａ〜Ｄの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＋＋ｐ＜０．０１；対メトホルミン群及びＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２１Ｄ】図２１Ａ〜Ｄ。６時間（０日目）または一晩（１２、１９、２６日目）空腹条件下の血中グルコース（Ａ）、血漿インスリン（Ｂ）、ＨＯＭＡ−ＩＲ（Ｃ）及びＣペプチド（Ｄ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２１Ａ〜Ｄの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＋＋ｐ＜０．０１；対メトホルミン群及びＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２２】フルクトサミンレベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２２の各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊＊ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２３】ＨｂＡ１ｃレベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２３の各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；対Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄ｐ＜０．０１；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２４】図２４Ａ〜Ｂ。６時間（０日目）または一晩（１２、１９、２６日目）空腹条件下の血漿トリグリセリド（Ａ）及び遊離脂肪酸（Ｂ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２４Ａ〜Ｄの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；＋＋ｐ＜０．０１；＋＋＋ｐ＜０．００１対メトホルミン群またはＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄ｐ＜０．０１；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２５Ａ】図２５Ａ〜Ｃ。血漿総コレステロール（Ａ）、ＨＤＬ−コレステロール（Ｂ）及び非ＨＤＬ−コレステロール（Ｃ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２５Ａ〜Ｃの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃ｐ＜０．０１；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ダネットの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；＋＋ｐ＜０．０１対メトホルミン群またはＡｂ１４＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２５Ｂ】図２５Ａ〜Ｃ。血漿総コレステロール（Ａ）、ＨＤＬ−コレステロール（Ｂ）及び非ＨＤＬ−コレステロール（Ｃ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２５Ａ〜Ｃの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃ｐ＜０．０１；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ダネットの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；＋＋ｐ＜０．０１対メトホルミン群またはＡｂ１４＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２５Ｃ】図２５Ａ〜Ｃ。血漿総コレステロール（Ａ）、ＨＤＬ−コレステロール（Ｂ）及び非ＨＤＬ−コレステロール（Ｃ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２５Ａ〜Ｃの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃ｐ＜０．０１；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ダネットの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；＋＋ｐ＜０．０１対メトホルミン群またはＡｂ１４＋メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２６Ａ】図２６Ａ〜Ｃ。０日目と比較した血漿総コレステロール（Ａ）、ＨＤＬ−コレステロール（Ｂ）及び非ＨＤＬ−コレステロール（Ｃ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２６Ａ〜Ｃの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃ｐ＜０．０１；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（対応のないｔ検定）  ＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ダネットの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；対メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２６Ｂ】図２６Ａ〜Ｃ。０日目と比較した血漿総コレステロール（Ａ）、ＨＤＬ−コレステロール（Ｂ）及び非ＨＤＬ−コレステロール（Ｃ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２６Ａ〜Ｃの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃ｐ＜０．０１；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（対応のないｔ検定）  ＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ダネットの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；対メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２６Ｃ】図２６Ａ〜Ｃ。０日目と比較した血漿総コレステロール（Ａ）、ＨＤＬ−コレステロール（Ｂ）及び非ＨＤＬ−コレステロール（Ｃ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２６Ａ〜Ｃの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃ｐ＜０．０１；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（対応のないｔ検定）  ＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ダネットの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；対メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２７Ａ】図２７Ａ〜Ｃ。一晩空腹条件下の２６日目の経口ブドウ糖負荷試験（Ａ）、Ｔ０に測定された血中グルコースから算出した）曲線化面積（ＡＵＣ）（Ｂ）及びＴ０に対する相対値から算出した曲線化面積（ＡＵＣ）（Ｃ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２７Ｂ〜Ｃのバーの順番は、１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）（図２７Ａ：ビヒクル処置されたＺＤＦ除脂肪ラット及びピオグリタゾンで処置されたラットについて全時点が示される）。  ＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）
【図２７Ｂ】図２７Ａ〜Ｃ。一晩空腹条件下の２６日目の経口ブドウ糖負荷試験（Ａ）、Ｔ０に測定された血中グルコースから算出した）曲線化面積（ＡＵＣ）（Ｂ）及びＴ０に対する相対値から算出した曲線化面積（ＡＵＣ）（Ｃ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２７Ｂ〜Ｃのバーの順番は、１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）（図２７Ａ：ビヒクル処置されたＺＤＦ除脂肪ラット及びピオグリタゾンで処置されたラットについて全時点が示される）。  ＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）
【図２７Ｃ】図２７Ａ〜Ｃ。一晩空腹条件下の２６日目の経口ブドウ糖負荷試験（Ａ）、Ｔ０に測定された血中グルコースから算出した）曲線化面積（ＡＵＣ）（Ｂ）及びＴ０に対する相対値から算出した曲線化面積（ＡＵＣ）（Ｃ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２７Ｂ〜Ｃのバーの順番は、１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）（図２７Ａ：ビヒクル処置されたＺＤＦ除脂肪ラット及びピオグリタゾンで処置されたラットについて全時点が示される）。  ＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊＊＊ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）
【図２８】図２８Ａ〜Ｂ。２６日目の経口ブドウ糖負荷試験中の血漿インスリン（Ａ）及びＣペプチド（Ｂ）レベル。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２８Ａ〜Ｂの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５対ビヒクルＺＤＦ（クラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定）  ＄＄ｐ＜０．０１；＄＄＄ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図２９】図２９Ａ〜Ｂ。２６日目の経口ブドウ糖負荷試験中のＴ−６０の血漿インスリン（Ａ）及びＣペプチド（Ｂ）レベルからの相対発現。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図２９Ａ〜Ｂの各群におけるバーの順番は、図１８Ａ〜Ｄと同じである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ダネットの事後検定）  ＋ｐ＜０．０５；対メトホルミン群（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）  ＄ｐ＜０．０５；＄＄ｐ＜０．０１対ビヒクルＺＤＦ（二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定）
【図３０Ａ】図３０Ａ〜Ｃ。膵臓の内容：プロインスリン（Ａ）、インスリン（Ｂ）及びプロインスリン／インスリン比率（Ｃ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図３０Ａ〜Ｃのバーの順番（左から右）は：ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦ除脂肪ラット；ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；ビヒクル１及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラット；及びＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラットである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）
【図３０Ｂ】図３０Ａ〜Ｃ。膵臓の内容：プロインスリン（Ａ）、インスリン（Ｂ）及びプロインスリン／インスリン比率（Ｃ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図３０Ａ〜Ｃのバーの順番（左から右）は：ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦ除脂肪ラット；ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；ビヒクル１及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラット；及びＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラットである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）
【図３０Ｃ】図３０Ａ〜Ｃ。膵臓の内容：プロインスリン（Ａ）、インスリン（Ｂ）及びプロインスリン／インスリン比率（Ｃ）。結果は平均±ＳＥＭとして表される。図３０Ａ〜Ｃのバーの順番（左から右）は：ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦ除脂肪ラット；ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；ビヒクル１及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラット；及びＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラットである。  ＃ｐ＜０．０５；＃＃＃ｐ＜０．００１対ビヒクルＺＤＦ（マン・ホイットニー）  ＊ｐ＜０．０５対ビヒクルＺＤＦ（一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定）
【図３１】膵臓免疫組織化学的分析：インスリン標識定量化。図３１のバーの順番（左から右）は：ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦ除脂肪ラット；ビヒクル１及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びビヒクル２で処置されたＺＤＦラット；ビヒクル１及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラット；及びＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週及びメトホルミン２００ｍｇ／ｋｇ／日で処置されたＺＤＦラットである。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明者は、抗ＣＧＲＰ抗体が、メトホルミンと比較して、白色脂肪組織におけるグルコース利用率のいずれの明らかな増加も伴わずに周辺筋肉における有意に増加されたグルコース利用を産生することを発見した。さらには、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体は心臓におけるグルコース利用を増大させ、一方でメトホルミンは心臓におけるグルコース利用率の低減を生じた。加えて、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体は、メトホルミンの投与から得られる効果と同様に、肝臓のグルコース産生を阻害した。
【００４１】
強力な機能的拮抗薬である、抗ＣＧＲＰ抗体Ａｂ１４を、正常ラット（実施例１）において、メタボリック症候群を誘発するために高脂肪／高フルクトース食を６週間与えられていた高インスリン血症だが正常血糖の食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）ラット（実施例２）において、及び前糖尿病性の（高インスリン血症、正常血糖）状態から明らかな糖尿病の（低インスリン血症、高血糖）状態へと進行したＺｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラット（実施例３）において、インスリン感受性及び血糖コントロールに及ぼすその効果を決定するために正常な及び改変されたグルコース代謝の前臨床動物モデルにおいて評価した。
【００４２】
実施例１では、正常血糖、正常インスリン（ｎｏｒｍｏｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉｃ）であり、正常な全身及び組織特異的インスリン感受性を有する正常ラットの、全身インスリン感受性ならびに特定の組織のインスリン感受性に及ぼすその効果を決定するために、高インスリン血症−正常血糖クランプ試験を、Ａｂ１４を用いて実施した。Ａｂ１４を、単回１００ｍｇ／ｋｇ投与として正常ラットに高インスリン血症−正常血糖クランプ処置の４
８時間前に静脈内投与した。クランプ処置の直前に測定された血漿グルコース及びインスリンレベルの評価からの結果は、Ａｂ１４が血漿グルコースレベルを変えることなく、ビヒクルで処置された対照と比較して血漿インスリンレベルを低下させたことを示した。結果得られたＨＯＭＡ−ＩＲにおける低下は、全身インスリン感受性における改善を示した。
【００４３】
高インスリン血症−正常血糖クランプ処置は、ＣＧＲＰ拮抗作用による全身インスリン感受性におけるこの改善を確かにし、定常状態では、グルコース注入率及び全身グルコース代謝回転（利用）率の両方がビヒクル処置された対象と比較して上昇した。一定のインスリン注入を用いたグルコース注入率及び全身グルコース代謝回転の増加は、全身インスリン感受性の増加を示した。
【００４４】
グルコース注入率及び全身グルコース代謝における増加と一致して、糖分解及びグリコーゲン合成のための肝臓のグルコース利用はビヒクルで処置された対照と比較してＡｂ１４によって増加し、肝臓のグルコース産生は低下した。これらの観察は、新規の肝臓のグルコース産生を阻害すると同時に、エネルギー産生及び貯蔵のためにより多く供給される内部に取り入れたグルコースの肝臓利用の増加をもたらす、ＣＧＲＰ拮抗作用による肝臓のインスリン感受性の増加を示す。
【００４５】
ＣＧＲＰ拮抗作用は、糖分解ならびに酸化的骨格筋（糖分解＋酸化の混合を示す外側広筋；糖分解を示す長指伸筋、及び酸化を示すヒラメ筋）におけるグルコース利用も増加させた。グルコース利用のもっとも大きな増加は、混合代謝外側広筋で生じた。これらの観察は、ＣＧＲＰ拮抗作用によって引き起こされる骨格筋インスリン感受性の増加を示す。ＣＧＲＰ拮抗作用は、心臓のグルコース利用も増加させた。対照的に、内臓または皮下脂肪デポにおけるグルコース利用率は影響を受けず、このことはＣＧＲＰ拮抗作用が白色脂肪組織におけるインスリンを実質的に増加させなかったことを示す。
【００４６】
上述のように、本試験において使用する動物は、正常な全身及び組織特異的インスリン感受性を有する正常血糖ラットとし、これらの動物においてインスリン感受性の改善を与えることは、実証がより難しい。それゆえ、本試験において評価された個々のエンドポイントにおける改善のいくつかが統計学的な有意性に達しなかったとしても、それらがしたものと同じ方向への傾向を示した観察は、検出力（ｓｔｕｄｙ  ｐｏｗｅｒ）の増大によって追加の測定パラメータが統計学的有意性に達することが可能になり得ることを示唆する。さらには、一般に実験動物において実施された高インスリン血症−正常血糖クランプ試験から臨床セッティングにて実施された高インスリン血症−正常血糖クランプ試験への結果の高度な翻訳があるため、これらの観察は、ヒトにおける全身及び組織特異的インスリン感受性を改善するＣＧＲＰ拮抗作用の可能性を示唆する。
【００４７】
実施例２では、インスリン抵抗性動物における肝臓及び末梢のインスリン感受性に及ぼすＡｂ１４の慢性投与によるＣＧＲＰ拮抗作用の効果を、高脂肪／高フルクトース食を長期与えることによって高インスリン血症でインスリン抵抗性だが高血糖でないよう作成されたマウスにおいて評価した。ラットに、６９％脂肪及び１４％フルクトースを含有する食餌を化合物投与の開始前に７週間与えてメタボリック症候群を誘発した。７週間の食餌処置期間の終わりに、ラットに高脂肪／高フルクトース食餌を受けさせ続け、加えて、Ａｂ１４を０ｍｇ／ｋｇ（ビヒクル）、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、または１００ｍｇ／ｋｇの用量で週１回２週間静脈内に与えた。
【００４８】
高脂肪食を与えたビヒクルで処置された対照群と比較したとき、ＣＧＲＰ拮抗作用は、食物消費量または体重に何の効果も与えず、これは下記で評価される追加のパラメータに及ぼすＣＧＲＰ拮抗作用の効果がカロリー制限または体重減少によるものではないことを
示す。
【００４９】
処置期間の終わりに、全ての用量のＡｂ１４は、ビヒクルで処置された対照と比較してＨＯＭＡ−ＩＲを低下させ、これは全身インスリン感受性における改善を示した。ＨＯＭＡ−ＩＲにおけるこの低下は、全ての用量のＡｂ１４で生じた、血漿インスリンレベルの低下に主に起因した。血漿インスリンにおける低下は、膵臓インスリン合成の副産物である血漿Ｃ−ペプチドが血漿インスリンにおける低下に並行して低下されたために、インスリン分解の増加よりむしろインスリン産生の低下によるものであった。血漿グルコースレベルはＡｂ１４の少ない方の２つの用量によって微かにのみ低下されたが、ビヒクルで処置された対照と比較して１００ｍｇ／ｋｇ用量のＡｂ１４によって実質的に低下された。
【００５０】
処置の最終日の直後、２段階の高インスリン血症−正常血糖クランプ処置を行い、まず生理学的量のインスリンの注入を用いて、次に、超生理学的インスリン濃度を用いた。全３つの用量のＡｂ１４は、生理学的及び超生理学的インスリン注入濃度の両方の後に、ビヒクルで処置された対照と比較して、定常状態グルコース注入率を増加させた。これは、全身インスリン感受性における改善と一致する。全３つの用量のＡｂ１４はまた、生理学的インスリン濃度の注入後に、ビヒクルで処置された対照と比較して、全身グルコース代謝回転（利用）率を増加させ、糖分解及びグリコーゲン合成のための肝臓のグルコース利用を増加させ、肝臓のグルコース産生を阻害した。これは、全身及び肝臓のインスリン感受性の両方における改善と一致する。肝臓のグルコース産生は、超生理学的インスリン濃度の注入後にも完全に予防された。
【００５１】
正常なラットにおけるＣＧＲＰ拮抗作用の急性効果（実施例１）と正常血糖、高インスリン血症、インスリン抵抗性ラットにおけるその慢性効果（実施例２）の間の類似性は、確立されたインスリン抵抗性を処置するために慢性的に機能するＣＧＲＰ拮抗作用の能力を示す。加えて、上述のように、一般に実験動物において実施された高インスリン血症−正常血糖クランプ試験から臨床セッティングにて実施された高インスリン血症−正常血糖クランプ試験への結果の高度な翻訳があるため、これらの観察は、ＣＧＲＰ拮抗作用が前糖尿病を有するまたはメタボリック症候群を有するインスリン抵抗性ヒトにおける全身及び組織特異的インスリン感受性を改善する可能性を示す。最後に、評価された最高用量においてのみであるが、これらの正常血糖動物における血漿グルコースレベルを低下させるＣＧＲＰ拮抗作用の能力は、ＣＧＲＰ拮抗作用が高血糖患者における血漿グルコースレベルも低下させる可能性を示唆する。
【００５２】
実施例３では、Ａｂ１４の慢性投与がグルコース制御に及ぼす効果を、前糖尿病性の（高インスリン血症、正常血糖）状態から明らかな糖尿病の（低インスリン血症、高血糖）状態へと進行しているＺＤＦラットにおいて評価した。これらの動物は、生後７週までに、高血糖をほとんどから全く伴わないが、彼らが抱えるインスリン抵抗性を補うための顕著な高インスリン血症によって特徴付けられる、前糖尿病を発症する。これは、生後１０〜１２週までに、膵β細胞不全の結果としての低インスリン血症及び顕著な高血糖によって特徴づけられる明らかな糖尿病へと急速に進行する。
【００５３】
生後８週で、ＺＤＦラットを、それらのＨＯＭＡ−ＩＲに従いスクリーニングし、Ａｂ１４を２０または６０ｍｇ／ｋｇで用いて週１回２８日間処置した。この動物モデルにおける血糖コントロールに及ぼすＣＧＲＰ拮抗薬Ａｂ１４の作用を評価することに加えて、市販薬メトホルミン（２００ｍｇ／ｋｇ／日）と組み合わせたＣＧＲＰ拮抗作用の効果も評価した。メトホルミン単独は、空腹時血中グルコースにおける上昇の部分的な予防、血漿インスリン及びＣ−ペプチドレベルにおける低下の部分的な予防、膵臓プロインスリンレベルにおける低下の完全な予防、膵臓インスリンレベルにおける低下の部分的な予防、及び膵島の空胞形成、過形成、及び線維化における低下を産生し、それの程度は高用量の
Ａｂ１４について上述されたそれと類似した。しかしながら、Ａｂ１４及びメトホルミンの組み合わせは、いずれの化合物単独よりも、実質的に大きな、空腹時血中グルコースにおける上昇、血漿インスリン及びＣ−ペプチドレベルにおける低下、膵臓プロインスリン及びインスリンレベルにおける低下、及び膵島線維化における低下の予防を産生した。これは、メトホルミンの効果が、Ａｂ１４などのＣＧＲＰ拮抗薬によって増強され得ることを示す。
【００５４】
加えて、Ａｂ１４及びメトホルミンの組み合わせは、２８日間の処置後にビヒクルで処置された対照と比較して、ＨｂＡ１ｃレベル（ヘモグロビン糖化のマーカー）における実質的な低下及びそれより少ない程度のフルクトサミンレベル（血漿アルブミン糖化のマーカー）におけるより低下をもたらした。これは、いずれかの薬剤単独よりもＡｂ１４＋メトホルミンの組み合わせによって産生される、血漿グルコースレベルのより大きな低下と一致する。これらの結果は、ＣＧＲＰ拮抗薬及びメトホルミンの併用が、高血糖が介在する糖尿病合併症に有利に影響することができることを示唆する。
【００５５】
同様に、高用量のＡｂ１４とメトホルミンの併用は、試験の２６日目に実施された経口ブドウ糖負荷試験（ｏＧＴＴ）中のグルコースボーラス投与後、ビヒクルで処置された動物と比較してグルコース可動域及びグルコースＡＵＣにおける改善を示した。さらには、試験の２６日目までにこれらの動物におけるβ細胞破壊がグルコース変化に応じてインスリン分泌を増加させる彼らの能力の点を超えて進行したため、ｏＧＴＴが２週間早くまたは完全なβ細胞破壊より前の時点で行われたとしたら、Ａｂ１４＋メトホルミンの併用を用いてグルコース可動域及びグルコースＡＵＣにおけるさらにより多くの実質的な改善を観察することができたことが予期された。
【００５６】
実施例３において使用されたＺＤＦラットは、インスリン抵抗性前糖尿病性の状態からほんの数週間の時間経過にわたって生じた完全なβ細胞破壊を伴う明らかな糖尿病へと急速に進行した、糖尿病進行の非常に重症なモデルである。これは、これらの動物において実証することが難しい疾患進行における化合物関連改善及びβ細胞保護を表す、疾患進行の変調を評価する機会を制限する。それゆえ、上記に概説したＣＧＲＰ拮抗薬Ａｂ１４による疾患進行の控えめな遅延の実証はいずれも、臨床における疾患進行にも影響する可能性を示唆する。加えて、ＣＧＲＰ拮抗作用とメトホルミンの併用を通して全体の処置有効性を改善する能力は、臨床における併用療法の有効性の改善も支持する。
【００５７】
本出願に表す実施例の結果は、ＣＧＲＰ拮抗作用が、全身インスリン感受性、肝臓のインスリン感受性、及び骨格筋インスリン感受性を改善する能力を有することを示す。これらの改善は、正常インスリン及び正常血糖であり正常なインスリン感受性を有する正常な動物、ならびに高インスリン血症だがまだ高血糖ではないインスリン抵抗性動物において急性的または慢性的に観察されることができる。これらの結果は、ＣＧＲＰ拮抗作用が、メタボリック症候群、前糖尿病、または他の前糖尿病性の症状を有する患者に存在するインスリン抵抗性を低減させ得、さらにＣＧＲＰ拮抗作用がこれらの疾患から明らかな糖尿病への進行を遅らせることができる可能性があることを示す。
【００５８】
加えて、ＣＧＲＰ拮抗薬Ａｂ１４の、膵臓インスリン分泌を低下させることによってインスリン抵抗性動物に存在する高インスリン血症を低下させる能力は、Ａｂ１４が、インスリン抵抗性動物の膵臓が休息することを可能にすることにより膵臓β細胞節約効果を有し得ることを示唆する。これは、臨床においてメタボリック症候群、前糖尿病、及び他の前糖尿病性の症状から明らかな糖尿病への進行をさらに遅延させ得る。
【００５９】
さらには、インスリン抵抗性で、高インスリン血症だが正常血糖であるラットにおける血漿グルコースレベルを低下させる、及びＺＤＦラットにおいて前糖尿病から明らかな糖
尿病への進行を遅らせる、及びインスリン産生を増加させる能力がほとんどからまったく残っていない明らかな糖尿病の動物における血漿グルコースレベルの低下を維持する、Ａｂ１４の能力は、ＣＧＲＰ拮抗作用が上記に概説した前糖尿病性の状態のみでなく明らかな糖尿病においても疾患進行に影響する能力を有し得ることを示す。
【００６０】
ゆえに、まとめると、これらの試験の結果は、Ａｂ１４などのＣＧＲＰ拮抗薬が、前糖尿病性の症状を有する患者及び明らかな糖尿病を発症しそうまたは明らかな糖尿病を有する患者における臨床セッティングにおいてインスリン抵抗性及びグルコース制御異常に有利に影響し得ることを明確に示す。
【００６１】
最後に、ＣＧＲＰ拮抗薬Ａｂ１４がＺＤＦラットにおいてメトホルミンの作用を増強する能力は、前糖尿病性の症状を有する患者、糖尿病を発症しそうな患者、及び明らかな糖尿病を有する患者の処置に関して、Ａｂ１４−メトホルミン併用療法が、Ａｂ１４またはメトホルミン単独のいずれかと比較してより優れた臨床有効性のものである可能性を有することを示唆する。
【００６２】
定義
記載される特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物の種または属、及び試薬は変更され得るため、本発明はそれらに限定されないことを理解されたい。本明細書において使用される用語は、特定の実施形態の説明のみを目的としており、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲の限定を意図しないことも理解されたい。本明細書で用いるとき、単数形は、別途文脈が明確に指示しない限り、複数形の指示物を含む。したがって、例えば、「細胞」への言及は複数のかかる細胞を含み、「タンパク質」への言及は１つまたは複数のタンパク質及び当業者に知られるその同等物を含む。本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、別途明確に指示されない限り、本発明が属する分野の当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。
【００６３】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）：本明細書で使用されるとき、ＣＧＲＰは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（カリフォルニア州サニーヴェール）及びＢａｃｈｅｍ（カリフォルニア州トーランス）から入手可能な以下のホモサピエンスＣＧＲＰ−α及びホモサピエンスＣＧＲＰ−βのアミノ酸配列を包含する。
【００６４】
ＣＧＲＰ−α：ＡＣＤＴＡＴＣＶＴＨＲＬＡＧＬＬＳＲＳＧＧＶＶＫＮＮＦＶＰＴＮＶＧＳＫＡＦ−ＮＨ２（配列番号２８１）、ここでＮ末端のフェニルアラニンはアミド化されている。別段の指示がある場合を除き、一般に「ＣＧＲＰ」への言及は典型的にＣＧＲＰ−αを指す。ＣＧＲＰ−αは、αＣＧＲＰまたはα−ＣＧＲＰとして互換可能に言及される。
【００６５】
ＣＧＲＰ−β：ＡＣＮＴＡＴＣＶＴＨＲＬＡＧＬＬＳＲＳＧＧＭＶＫＳＮＦＶＰＴＮＶＧＳＫＡＦ−ＮＨ２（配列番号２８２）、ここでＮ末端のフェニルアラニンはアミド化されており、それのみでなく、これらのＣＧＲＰアミノ酸配列の任意の膜結合型、ならびにこの配列の変異体（ｍｕｔｉｅｎｓ）、スプライスバリアント、アイソフォーム、オルソログ、ホモログ及びバリアントも包含する。ＣＧＲＰ−βは、βＣＧＲＰまたはβ−ＣＧＲＰとして互換可能に言及される。
【００６６】
正常血糖：本開示では、用語、正常血糖（ｎｏｒｍｏｇｌｙｃｅｍｉａ）または正常血糖（ｅｕｇｌｙｃｅｍｉａ）は、正常な血中グルコース濃度を有する状態を指す。ヒトにおける例示的な正常な血中グルコース濃度は、空腹時成人において７０ｍｇ／ｄｌから９９ｍｇ／ｄｌであり、食後の成人において７０ｍｇ／ｄｌから１４０ｍｇ／ｄｌである。持続的な正常血糖は、例えば、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも１週間、少
なくとも２週間、少なくとも１ヶ月、またはより長い、大規模な期間にわたる正常血糖の維持を指す。
【００６７】
接合可能（ｍａｔｉｎｇ  ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ）な酵母種：本発明では、これは培養物で増殖させることができる任意の二倍体または四倍体酵母を広く包含することが意図される。かかる酵母種は、一倍体、二倍体、または他の倍数体形態で存在し得る。所定の倍数性の細胞は、適切な条件下で、その形態で無限の世代にわたり増殖し得る。二倍体細胞はさらに胞子を形成して一倍体細胞を形成することもできる。連続接合の結果、二倍体株のさらなる接合または融合を通して四倍体株を得ることができる。本発明は、一倍体酵母の使用、ならびに、例えば、接合またはスフェロプラスト融合により生じた二倍体酵母細胞または他の倍数体酵母細胞の使用を企図する。
【００６８】
本発明の一実施形態では、接合可能な酵母はサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ）科のメンバーであり、それにはアルキオジマ属（Ａｒｘｉｏｚｙｍａ）、アスコボトリオジマ属（Ａｓｃｏｂｏｔｒｙｏｚｙｍａ）、シテロミセス属（Ｃｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓ）、デバリオミセス属（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）、デッケラ属（Ｄｅｋｋｅｒａ）、エレモテシウム属（Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍ）、イッサチェンキア属（Ｉｓｓａｔｃｈｅｎｋｉａ）、カザクスタニア属（Ｋａｚａｃｈｓｔａｎｉａ）、クルイヴェロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、コダマエア属（Ｋｏｄａｍａｅａ）、ロデロミセス属（Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ）、パキソレン属（Ｐａｃｈｙｓｏｌｅｎ）、ピキア属（ピキア）、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、サツルニスポラ属（Ｓａｔｕｒｎｉｓｐｏｒａ）、テトラピシスポラ属（Ｔｅｔｒａｐｉｓｉｓｐｏｒａ）、トルラスポラ属（Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ）、ウィリオプシス属（Ｗｉｌｌｉｏｐｓｉｓ）及びジゴサッカロミセス属（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）が含まれる。本発明において有用である可能性がある他の種類の酵母には、ヤロウィア属（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、ロドスポリジウム属（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、ハンセヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、フィロバシウム属（Ｆｉｌｏｂａｓｉｕｍ）、スポリジオボラス属（Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）、ブレラ属（Ｂｕｌｌｅｒａ）、ロイコスポリジウム属（Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、及びフィロバシデラ属（Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｅｌｌａ）が含まれる。
【００６９】
本発明のある実施形態では、接合可能な酵母はピキア属のメンバーである。本発明のさらなる実施形態では、ピキア属の接合可能な酵母は次の種のうちの１つである：ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、及びハンセヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）（ピキア・アングスタ（Ｐｉｃｈｉａ  ａｎｇｕｓｔａ））。本発明の例示的な実施形態では、ピキア属の接合可能な酵母はピキア・パストリス種である。
【００７０】
一倍体酵母細胞：正常なゲノム（染色体）補体の各遺伝子を１コピー有する細胞。
【００７１】
倍数体酵母細胞：正常なゲノム（染色体）補体を１コピーより多く有する細胞。
【００７２】
二倍体酵母細胞：正常なゲノム相補体の基本的に全遺伝子を２コピー（アレル）有する細胞であって、典型的には２つの一倍体細胞の融合（接合）プロセスにより形成される細胞。
【００７３】
四倍体酵母細胞：正常なゲノム相補体の基本的に全遺伝子を４コピー（アレル）有する細胞であって、典型的には２つの一倍体細胞の融合（接合）プロセスにより形成される細胞。四倍体は、２つ、３つ、４つ、またはそれより多い異なる発現カセットを有し得る。このような四倍体を、ホモ接合性ヘテロタリックのａ／ａ二倍体とα／α二倍体を選択的
に接合させることにより出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）において得ることができ、栄養要求性二倍体を得るための一倍体の連続接合によりピキア属において得ることができる。例えば、［ｍｅｔ  ｈｉｓ］一倍体を［ａｄｅ  ｈｉｓ］一倍体と接合させて二倍体［ｈｉｓ］を得ることができ；［ｍｅｔ  ａｒｇ］一倍体を［ａｄｅ  ａｒｇ］一倍体と接合させて二倍体［ａｒｇ］を得ることができ；次に二倍体［ｈｉｓ］を二倍体［ａｒｇ］と掛け合わせて四倍体の原栄養株を得る。二倍体細胞の利点と使用についての言及は、四倍体細胞にも当てはまり得ることは当業者に理解されるであろう。
【００７４】
酵母の接合：２つの一倍体酵母細胞が自然に融合して１つの二倍体酵母細胞を形成するプロセス。
【００７５】
減数分裂：二倍体酵母細胞が還元分裂を経て４つの一倍体胞子産物を形成するプロセス。各胞子は、その後出芽して一倍体の栄養生長する細胞株を形成し得る。
【００７６】
選択可能マーカー：選択可能マーカーは、例えば形質転換事象を通してその遺伝子を受容する細胞に対して成長表現型（物理的な成長特性）を付与する遺伝子または遺伝子断片である。選択可能マーカーは、その選択可能マーカー遺伝子を受容しない細胞が増殖できない条件下で、選択的増殖培地中でその細胞が生存及び増殖することを可能にする。選択可能マーカー遺伝子は一般にいくつかの種類に分類され、細胞に抗生物質または他の薬品への耐性、２つの温度感受性（「ｔｓ」）変異体が交雑されるとき、またはｔｓ変異体が形質転換されるときに温度への耐性を付与する遺伝子などのポジティブ選択可能マーカー遺伝子；生合成遺伝子であって、その遺伝子を持たない全ての細胞に必要とされる特定の栄養素を欠く培地で増殖する能力を細胞に付与する生合成遺伝子、または変異型生合成遺伝子であって、野生型遺伝子を持たない細胞に増殖不能性を付与する変異型生合成遺伝子などのネガティブ選択可能マーカー遺伝子；などを含む。好適なマーカーとしてはＺＥＯ；Ｇ４１８；ＬＹＳ３；ＭＥＴ１；ＭＥＴ３ａ；ＡＤＥ１；ＡＤＥ３；ＵＲＡ３などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
発現ベクター：これらのＤＮＡベクターは、標的宿主細胞内での外来タンパク質の発現のための操作を促進するエレメントを含む。好都合には、形質転換のためのＤＮＡの配列の操作及び産生は、まず、細菌宿主、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で実施され、通常、ベクターは細菌複製起点及び適切な細菌選択マーカーを含む、かかる操作を促進する配列を含む。選択マーカーは、選択培地における形質転換された宿主細胞の生存または増殖に必要なタンパク質をコードする。選択遺伝子を含有するベクターで形質転換されていない宿主細胞はその培地中で生存しない。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素に対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を相補するタンパク質、または（ｃ）複合培地から入手できない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。酵母の形質転換のための例示的なベクター及び方法は、例えば、Ｂｕｒｋｅ，Ｄ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｄ．，＆Ｓｔｅａｒｎｓ，Ｔ．（２０００）．「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ：Ａ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」．Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．：Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。
【００７８】
本発明の方法において使用される発現ベクターは、形質転換された酵母株を特定するための選択可能栄養要求性マーカーまたは薬品マーカーを含む、酵母特異的配列をさらに含むだろう。薬品マーカーは、酵母宿主細胞内でのベクターのコピー数を増幅するためにさらに使用され得る。
【００７９】
対象となるポリペプチドコード配列は、酵母細胞におけるポリペプチドの発現を提供する転写及び翻訳調節配列と操作可能に結合される。これらのベクター成分は以下の１つま
たは複数を含むが、これらに限定されるものではない：エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写停止配列。ポリペプチドの分泌のための配列、例えば、シグナル配列なども含み得る。発現ベクターは多くの場合、酵母ゲノムに組み入れられるため、酵母複製起点は任意である。本発明の一実施形態では、対象のポリペプチドは、酵母二倍体細胞からのポリペプチドの最適化された分泌を提供する配列に操作可能に結合されるかまたは融合される。
【００８０】
核酸は、別の核酸配列との機能的関係に置かれる場合に「操作可能に結合」される。例えば、シグナル配列のＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合に、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に結合され、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に操作可能に結合する。一般に、「操作可能に結合」したとは、結合されるＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーである場合は連続的かつリーディングフレーム中にあることを意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。結合は都合のよい制限部位でのライゲーションにより、あるいは当業者に公知のＰＣＲ／組換え方法（Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）により達成され得る。このような部位が存在しない場合、従来の実施法に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを使用する。
【００８１】
プロモーターは、それらが操作可能に結合された特定の核酸配列の転写及び翻訳を制御する、構造遺伝子（一般に約１００〜１０００ｂｐ内）の開始コドンの上流（５’）に位置する非翻訳配列である。このようなプロモーターはいくつかのクラス：誘導性プロモーター、構成的プロモーター、抑制性プロモーター（抑制因子の不在に応答して転写レベルを増加させる）に分けられる。誘導性プロモーターは、培養条件の何らかの変化、例えば栄養素の存在または不在や温度変化などに応答して、それらの制御下でＤＮＡからの増大したレベルの転写を開始することができる。
【００８２】
酵母プロモーター断片は、発現ベクターの相同的組換え及び酵母ゲノム内の同一部位への組み入れのための部位としても機能を果たし得る。あるいは、選択可能マーカーが相同的組換えのための部位として使用される。ピキア形質転換は、Ｃｒｅｇｇら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３３７６−３３８５、１９８５に記載されている。
【００８３】
ピキア由来の好適なプロモーターの例としては、ＡＯＸ１及びプロモーター（Ｃｒｅｇｇら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：１３１６−１３２３、（１９８９））；ＩＣＬ１プロモーター（Ｍｅｎｅｎｄｅｚら、Ｙｅａｓｔ２０（１３）：１０９７−１０８、（２００３））；グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼプロモーター（ＧＡＰ）（Ｗａｔｅｒｈａｍら、Ｇｅｎｅ１８６（１）：３７−４４（１９９７））；ＦＬＤ１プロモーター（Ｓｈｅｎら、Ｇｅｎｅ２１６（１）：９３−１０２（１９９８））が挙げられる。ＧＡＰプロモーターは強力な構成的プロモーターであり、ＡＯＸ及びＦＬＤ１プロモーターは誘導性プロモーターである。
【００８４】
他の酵母プロモーターとしては、ＡＤＨ１、アルコールデヒドロゲナーゼＩＩ、ＧＡＬ４、ＰＨＯ３、ＰＨＯ５、Ｐｙｋ及びそれら由来のキメラプロモーターが挙げられる。加えて、哺乳類、昆虫、植物、爬虫類、両生類、ウイルス及び鳥類プロモーターなどの非酵母プロモーターが本発明で使用され得る。最も典型的には、プロモーターは哺乳類プロモーター（発現した遺伝子に対して潜在的に内因性）を含むか、酵母系において効率的な転写を提供する酵母またはウイルスプロモーターを含むだろう。
【００８５】
対象のポリペプチドは、組換えによって、直接的だけでなく、異種性ポリペプチド、例えばシグナル配列または成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を
有する他のポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても産生され得る。一般に、シグナル配列はベクターの成分であるかまたはベクターに挿入されるポリペプチドコード配列の一部であり得る。宿主細胞内で利用可能な標準的経路の１つにより識別され処理される異種性シグナル配列が好ましくは選択される。出芽酵母のα因子プレプロシグナルは、ピキア・パストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ）由来の様々な組換えタンパク質の分泌に有効であることが証明されている。他の酵母シグナル配列としては、α接合因子シグナル配列、インベルターゼシグナル配列、及び他の分泌型酵母ポリペプチド由来のシグナル配列が挙げられる。加えて、これらのシグナルペプチド配列を操作して二倍体酵母発現系における分泌を増強させてもよい。対象となる他の分泌シグナルは、哺乳類シグナル配列も含み、これは分泌されるタンパク質に対して異種性であり得るか、また分泌されるタンパク質の天然の配列であってよい。シグナル配列にはプレペプチド配列が含まれ、場合によってはプロペプチド配列が含まれ得る。免疫グロブリン鎖上で見いだされるシグナル配列、例えばＫ２８プレプロ毒素配列、ＰＨＡ−Ｅ、ＦＡＣＥ、ヒトＭＣＰ−１、ヒト血清アルブミンシグナル配列、ヒトＩｇ重鎖、ヒトＩｇ軽鎖などを含む、多くのかかるシグナル配列は当該技術分野で公知である。例えば、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ１１（２）７５（１９９８）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ２（４）２５７（１９９８）を参照されたい。
【００８６】
転写は、転写活性化配列をベクターに挿入することにより増加し得る。これらの活性化因子は、通常約１０〜３００ｂｐのＤＮＡのシス作用性エレメントであり、プロモーターに作用してその転写を増加させる。転写エンハンサーは配向及び位置に比較的依存せず、イントロン内、ならびにコード配列自体内で、転写単位の５’側及び３’側に見出されている。エンハンサーをコード配列に対して５’または３’位で発現ベクター中にスプライシングすることができるが、好ましくはプロモーターから部位５’に位置する。
【００８７】
真核宿主細胞において使用される発現ベクターは、転写の停止及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含み得る。かかる配列は一般に、真核またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの非翻領域の翻訳終止コドンの３’側から入手可能である。これらの領域は、ｍＲＮＡの非翻訳部分のポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチドセグメントを含む。
【００８８】
上記の成分の１つまたは複数を含有する好適なベクターの構築は、標準的なライゲーション技術またはＰＣＲ／組換え法を採用する。単離されたプラスミドまたはＤＮＡ断片は、必要とされるプラスミドまたは組換え法によって生成するために望ましい形態で切断、調整、および再ライゲートされる。構築されたプラスミド中の正しい配列を確認する分析のために、ライゲーション混合物を使用して宿主細胞を形質転換し、適切な場合には成果を挙げた形質転換体を抗生物質耐性（例えば、アンピシリンまたはゼオシン）によって選択する。形質転換体由来のプラスミドを調整し、制限エンドヌクレアーゼ消化によって分析及び／または配列決定する。
【００８９】
断片の制限及びライゲーションの代替法として、ａｔｔ部位及び組換え酵素に基づく組換え法を使用して、ＤＮＡ配列をベクターに挿入してよい。このような方法は、例えば、Ｌａｎｄｙ  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５８：９１３−９４９（１９８９）に記載されており、当業者にも公知である。このような方法は、ラムダ及び大腸菌コード化組換えタンパク質の混合物が介在する分子間のＤＮＡ組換えを利用する。組換えは、相互作用ＤＮＡ分子上の特定の付着（ａｔｔ）部位間で生じる。ａｔｔ部位の記述については、Ｗｅｉｓｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｌａｎｄｙ（１９８３）「Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｇｅ  Ｌａｍｂｄａ，ｉｎ  Ｌａｍｂｄａ  ＩＩ」，Ｗｅｉｓｂｅｒｇ編．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ：Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）、ｐｐ．２１１−２５０を参照されたい。組換え後に、ａｔｔ部位が各親ベクターによって供与される配列から構成されるハイブリ
ッド配列となるように、組換え部位に隣接するＤＮＡセグメントが切り替えられる。組換えは、任意のトポロジーのＤＮＡ間で生じることができる。
【００９０】
対象の配列を適切なベクター内にライゲートする；特異的プライマーの使用を通してａｔｔＢ部位を含有するＰＣＲ産物を生成する；ａｔｔ部位を含む適切なベクターにクローニングされたｃＤＮＡライブラリーを生成する、などにより対象の配列内へとａｔｔ部位を導入し得る。
【００９１】
フォールディングとは、本明細書で用いるとき、アミノ酸残基間の相互作用が構造を安定化させるように作用する、ポリペプチド及びタンパク質の三次元構造を指す。構造の決定には非共有的相互作用が重要であるが、通常、対象となるタンパク質は２つのシステイン残基によって形成される分子内及び／または分子間共有ジスルフィド結合を有する。天然に存在するタンパク質及びポリペプチドまたはそれらの誘導体及び変異体に関して、適切なフォールディングは、典型的には最適な生物学的活性をもたらす配置であり、例えばリガンド結合、酵素活性などの活性に関するアッセイによって都合よくモニターすることができる。
【００９２】
場合によっては、例えば所望の産物が合成起源のものである場合、生物学的活性に基づくアッセイはあまり意味がない。かかる分子の適切なフォールディングは物理学的特性、エネルギー的考察、モデリング研究などに基づいて決定され得る。
【００９３】
発現宿主は、フォールディング及びジスルフィド結合形成を増強する１つまたは複数の酵素、すなわちフォルダーゼ、シャペロニンなどをコードする配列の導入によってさらに修飾することができる。かかる配列は、当該技術分野で公知のように、ベクター、マーカーなどを使用して、酵母宿主細胞において構成的または誘導的に発現され得る。好ましくは、所望の発現パターンに十分な転写調節エレメントを含む配列を、標的化法によって酵母ゲノムに安定して組み入れる。
【００９４】
例えば、真核ＰＤＩは、タンパク質システイン酸化及びジスルフィド結合異性化の効率的な触媒であるだけでなく、シャペロン活性も示す。ＰＤＩの共発現は、複数のジスルフィド結合を有する活性なタンパク質の産生を促進することができる。ＢＩＰ（免疫グロブリン重鎖結合タンパク質）、シクロフィリンなどの発現も興味深い。本発明の一実施形態では、一倍体の親株のそれぞれは、異なるフォールディング酵素を発現し、例えば、一方の株はＢＩＰを発現し得、他方の株はＰＤＩまたはそれらの組み合わせを発現し得る。
【００９５】
用語「所望のタンパク質」または「所望の抗体」は、交換可能に使用され、一般的に、標的、すなわちＣＧＲＰまたはキメラまたはヒト化抗体または本明細書中で記載されるようなそれら由来の結合部分に対して特異的な親抗体を指す。用語「抗体」は、エピトープとぴったり合い、エピトープを認識する特定の形状を有する任意のポリペプチド鎖含有分子構造を包含することが意図され、この場合、１つまたは複数の非共有的結合相互作用が分子構造とエピトープとの間の複合体を安定化させる。抗体分子の原型は免疫グロブリンであり、あらゆる供給源、例えばヒト、げっ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳類、ニワトリ、他の鳥類などに由来する全種類の免疫グロブリン、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤなどが「抗体」とみなされる。本発明に係る出発物質として有用な抗体の産生に好ましい供給源は、ウサギである。多くの抗体コード配列が記述されており、それ以外を当技術分野で公知の方法により生じてもよい。その例としては、キメラ抗体、ヒト抗体及び他の非ヒト哺乳類抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖｓなど）、キャメルボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ（サメ由来の単鎖抗体）、小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）、及びＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２などの抗体断片などが挙げられる。Ｓｔｒｅｌｔｓｏｖ  ＶＡら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ａ  ｓｈａｒｋ  ＩｇＮＡＲ  ａ
ｎｔｉｂｏｄｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｏｆ  ａｎ  ｅａｒｌｙ−ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｉｓｏｔｙｐｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．Ｎｏｖ；１４（１１）：２９０１−９（２００５）．Ｅｐｕｂ２００５年９月３０日；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＡＳら、Ａ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｔｈａｔ  ｕｎｄｅｒｇｏｅｓ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ
ｓｈａｒｋｓ，Ｎａｔｕｒｅ．３月９日；３７４（６５１８）：１６８−７３（１９９５）；Ｎｕｔｔａｌｌ  ＳＤら、Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｒｏｍ  ｗｏｂｂｅｇｏｎｇ  ｓｈａｒｋｓ，ａｎｄ  ｕｓｅ  ａｓ  ａ  ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｏｏｐ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ａｕｇ；３８（４）：３１３−２６（２００１）；Ｈａｍｅｒｓ−ＣａｓｔｅｒｍａｎＣら、Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｖｏｉｄ  ｏｆ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ．１９９３年６月３日；３６３（６４２８）：４４６−８；Ｇｉｌｌ  ＤＳら、Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｃａｆｆｏｌｄｓ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｄｅｃ；１７（６）：６５３−８（２００６）．Ｅｐｕｂ２００６年１０月１９日を参照されたい。
【００９６】
例えば、抗体または抗原結合断片は、遺伝子工学によって産生され得る。この技術では、他の方法と同様に、所望の抗原または免疫原に対し抗体産生細胞を感作させる。抗体産生細胞から単離されたメッセンジャーＲＮＡを鋳型として用いてＰＣＲ増幅法を使用してｃＤＮＡを作製する。最初の抗原特異性を保持している１つの重鎖遺伝子と１つの軽鎖遺伝子をそれぞれ含有するベクターのライブラリーを、増幅した免疫グロブリンｃＤＮＡの適切な切片を発現ベクターに挿入して作製する。重鎖遺伝子ライブラリーと軽鎖遺伝子ライブラリーを組み合わせることにより、コンビナトリアルライブラリーを構築する。こうして重鎖と軽鎖を共発現する（抗体分子のＦａｂ断片または抗原結合断片に類似する）クローンのライブラリーが得られる。これらの遺伝子を有するベクターを宿主細胞に共形質移入する。形質移入された宿主で抗体遺伝子合成が誘導されるとき、重鎖及び軽鎖タンパク質は自己組織化して、抗原または免疫原でのスクリーニングによって検出することができる活性な抗体を産生する。
【００９７】
対象となる抗体コード配列には、天然の配列によってコードされるもの、ならびに遺伝子コードの縮重のために、開示された核酸と配列が同一でない核酸、及びその変異体が含まれる。変異体ポリペプチドは、アミノ酸（「ａａ」）置換、付加または欠失を含み得る。アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換、あるいはグリコシル化部位を改変するため、または機能のために必要ではない１つまたは複数のシステイン残基の置換または欠失によるミスフォールディングを最小限にするためなど、非必須アミノ酸を除外する置換であり得る。変異体は、タンパク質の特定の領域（例えば、機能的ドメイン、触媒アミノ酸残基など）の増強された生物学的活性を保持または有するように設計されることができる。変異体はさらに、本明細書中で開示されたポリペプチドの断片、特に生物学的に活性な断片及び／または機能的ドメインに対応する断片も含む。クローンされた遺伝子のインビトロ突然変異生成のための技術は公知である。タンパク質分解に対するそれらの耐性を改善するため、または溶解特性を最適化するため、またはそれらを治療薬としてより好適にするために、通常の分子生物学的技術を使用して修飾されたポリペプチドも主題の発明に含まれる。
【００９８】
キメラ抗体は、１つの種の抗体産生細胞から得られる可変軽鎖及び重鎖領域（ＶＬ及びＶＨ）を別の種由来の定常軽鎖及び重鎖領域と組み合わせることによる組み換え手段によって作成され得る。典型的には、キメラ抗体は、主にヒトドメインを有する抗体を産生す
るために、げっ歯類またはウサギ可変領域及びヒト定常領域を利用する。かかるキメラ抗体の産生は当該技術分野で公知であり、そして標準的手段によって達成され得る（例えば、その全体において参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，６２４，６５９号で記載されているとおり）。本発明のキメラ抗体のヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４定常領域から選択され得ることがさらに企図される。
【００９９】
さらに多くのヒト様免疫グロブリンドメインを含有するようにヒト化抗体を操作し、動物由来の抗体の相補性決定領域のみを組み込む。これは、モノクローナル抗体の可変領域の超可変ループの配列を調査し、そしてそれらをヒト抗体鎖の構造に適合させることによって達成される。表面的には複雑であるが、プロセスは実際には簡単である。例えば、参照により全体的に本明細書中に組み込まれる、米国特許第６，１８７，２８７号を参照されたい。
【０１００】
全免疫グロブリン（またはそれらの組み換え型同等物）に加えて、エピトープ結合部位（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、または他の断片）を含む免疫グロブリン断片が合成され得る。「断片」、または最小免疫グロブリンは、組み換え免疫グロブリン技術を利用して設計され得る。例えば、本発明で使用するための「Ｆｖ」免疫グロブリンは、融合した可変軽鎖領域及び可変重鎖領域を合成することによって産生することができる。抗体の組み合わせ、例えば２つの異なるＦｖ特異性を含む二重特異抗体も興味深い。本発明の別の実施形態では、ＳＭＩＰ（小分子免疫薬）、キャメルボディ、ナノボディ、及びＩｇＮＡＲが免疫グロブリン断片に包含される。
【０１０１】
免疫グロブリン及びその断片は、翻訳後に修飾して、例えば化学的リンカーなどのエフェクター部分、蛍光色素、酵素、毒素、基質、生物発光物質、放射性物質、化学発光部分などの検出可能部分を付加し得るか、またはストレプトアビジン、アビジンまたはビオチンなどの特異的結合部分などを、本発明の方法及び組成物で利用し得る。さらなるエフェクター分子の例を以下に提供する。
【０１０２】
遺伝コードに従ったポリヌクレオチド配列の翻訳によってポリペプチド配列が得られる（すなわち、ポリヌクレオチド配列がポリペプチド配列を「コード」する）場合、ポリヌクレオチド配列はポリペプチド配列に「対応」し、２つの配列が同じポリペプチド配列をコードする場合、１つのポリヌクレオチド配列は別のポリヌクレオチド配列に「対応」する。
【０１０３】
ＤＮＡ構築物の「異種性」領域またはドメインは、更に大きなＤＮＡ分子の内部の識別可能なセグメントであって、自然界ではその更に大きなＤＮＡ分子に伴って見いだされないセグメントである。したがって、異種性領域が哺乳類遺伝子をコードする場合、遺伝子は通常、供給源生物のゲノムにおいて哺乳類ゲノムＤＮＡに隣接しないＤＮＡに隣接する。異種性領域の別の例は、コード配列自体が自然界で見出されない構築物である（例えば、ゲノムコード配列がイントロンを含むｃＤＮＡ、または天然の遺伝子と異なるコドンを有する合成配列）。対立遺伝子変異または自然発生的な突然変異事象は、本明細書中で定義されるＤＮＡの異種性領域を生じさせない。
【０１０４】
「コード配列」は、（遺伝コードを考慮して）タンパク質またはペプチド配列に対応するかまたはそれをコードするコドンのインフレーム配列である。２つのコード配列は、その配列またはそれらの相補配列が同じアミノ酸配列をコードする場合、互いに対応する。コード配列は、適切な調節配列と関連して転写され、ポリペプチドに翻訳され得る。ポリアデニル化シグナル及び転写停止配列は通常、コード配列に対して３’側に位置する。「プロモーター配列」は、細胞中のＲＮＡポリメラーゼを結合することができ、下流（３’方向）コード配列の転写を開始することができるＤＮＡ調節領域である。プロモーター配
列は、典型的にはコード配列の転写に影響を及ぼす調節分子（例えば、転写因子）の結合のためのさらなる部位を含有する。ＲＮＡポリメラーゼが細胞中のプロモーター配列を結合し、コード配列をｍＲＮＡに転写し、これが次にコード配列によってコードされるタンパク質に翻訳される場合、コード配列はプロモーター配列の「制御下」にあるか、またはプロモーターに「操作可能に結合」される。
【０１０５】
ベクターを使用して、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質などの外来物質を、生物または宿主細胞に導入する。典型的なベクターとしては、組み換えウイルス（ポリヌクレオチドに関して）及びリポソーム（ポリペプチドに関して）が挙げられる。「ＤＮＡベクター」は、別のポリヌクレオチドセグメントを付着させて、付着したセグメントの複製をもたらし得るプラスミド、ファージまたはコスミッドなどのレプリコンである。「発現ベクター」は、適切な宿主細胞によってポリペプチド合成を指示する調節配列を含有するＤＮＡベクターである。これは、通常、ＲＮＡポリメラーゼを結合し、ｍＲＮＡの転写を開始するプロモーター、ならびにｍＲＮＡのポリペプチド（複数可）への翻訳を指示するリボソーム結合部位及び開始シグナルを意味する。ポリヌクレオチド配列を発現ベクターに適切な部位で、正しいリーディングフレーム中で組み入れ、続いてベクターによって適切な宿主細胞を形質転換することで、前記ポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの産生が可能になる。
【０１０６】
ポリヌクレオチド配列の「増幅」は、特定の核酸配列の複数コピーのインビトロ産生である。増幅された配列は、通常、ＤＮＡの形態である。かかる増幅を実施するためのさまざまな技術が、Ｖａｎ  Ｂｒｕｎｔ（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．，８（４）：２９１−２９４（１９９０））による総説に記載されている。ポリメラーゼ連鎖反応またはＰＣＲは、核酸増幅のプロトタイプであり、本明細書におけるＰＣＲの使用は、他の好適な増幅技術の例とみなされるべきである。
【０１０７】
脊椎動物における抗体の一般構造は、現在、十分に理解されている（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９０：５（１９７１））。抗体は、分子量約２３，０００ダルトンの２本の同一の軽いポリペプチド鎖（「軽鎖」）、及び分子量５３，０００〜７０，０００の２本の同一の重い鎖（「重鎖」）からなる。４本の鎖は、ジスルフィド結合によって「Ｙ」字型に結合し、ここで、軽鎖が「Ｙ」字型の開口部分から始まる重鎖を囲む。「Ｙ」字型の「枝」部分はＦａｂ領域と呼ばれている。「Ｙ」字型の幹部分はＦｃ領域と呼ばれている。アミノ酸配列の配向は、「Ｙ」字型の頂点のＮ末端から各鎖の底部のＣ末端へと向かう。Ｎ末端は、それを惹起する抗原に対する特異性を有する可変領域を有し、約１００アミノ酸の長さであり、軽鎖と重鎖との間で若干の変動があり、また抗体ごとに若干変動がある。
【０１０８】
可変領域は、各鎖中で鎖の残りの長さに及び、抗体の特定のクラス内で抗体の特異性（すなわち、それを惹起する抗原）で変化しない定常領域に連結される。免疫グロブリン分子のクラスを決定する定常領域の５つの公知主要クラスがある（γ、μ、α、δ、及びε（ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン）重鎖定常領域に対応するＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）。定常領域またはクラスは、相補体の活性化（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第二版，ｐ．４１３−４３６，Ｈｏｌｔ，Ｒｉｎｅｈａｒｔ，Ｗｉｎｓｔｏｎ（１９７６））、及び他の細胞応答（Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｄ．Ｗ．ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｐｐ１−１８，Ｗ．Ｂ．Ｓａｎｄｅｒｓ（１９８０）；Ｋｏｈｌ，Ｓ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４８：１８７（１９８３））を含む抗体のその後のエフェクター機能を決定する；一方、可変領域はそれが反応する抗原を決定する。軽鎖は、κ（カッパ）またはλ（ラムダ）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかを用い
て調製することができる。軽鎖及び重鎖は互いに共有結合し、２本の重鎖の「テール」部分は、ハイブリドーマによるかまたはＢ細胞によるかのいずれかで免疫グロブリンが産生されるときに、共有ジスルフィド結合によって互いに結合される。
【０１０９】
表現「可変領域」または「ＶＲ」は、抗体を抗原に結合するのに直接関与する、抗体中の軽鎖及び重鎖の各対内のドメインを指す。各重鎖は１端で可変ドメイン（ＶＨ）と、それに続いて複数の定常ドメインを有し；各軽鎖は１端で可変ドメイン（ＶＬ）と、その他端で定常ドメインを有し；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第一定常ドメインと整列し、この軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列する。
【０１１０】
「相補性決定領域」、「超可変領域」、または「ＣＤＲ」という表現は、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域で見いだされる１つまたは複数の超可変または相補性決定領域（ＣＤＲ）を指す（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，（１９８７）を参照されたい）。これらの表現は、Ｋａｂａｔらによって定義される超可変領域（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”ＫａｂａｔＥ．ら、ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３）または抗体の３次元構造における超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６  ９０１−９１７（１９８７））を含む。各鎖中のＣＤＲは、フレームワーク領域によってごく近接して保持され、他の鎖からのＣＤＲとともに、抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲ内には、抗体−抗原相互作用においてＣＤＲによって使用される重要な接触残基を表す選択性決定領域（ＳＤＲ）として記載されている選択アミノ酸が存在する（Ｋａｓｈｍｉｒｉ，Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６：２５−３４（２００５））。
【０１１１】
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」という表現は、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域内の１つまたは複数のフレームワーク領域を指す（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，（１９８７）を参照されたい）。これらの表現には、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域内でＣＤＲ間に挿入されるアミノ酸配列領域が含まれる。
【０１１２】
ＣＧＲＰへの結合活性を有する抗ＣＧＲＰ抗体及びその結合断片
本発明の方法の例示的な実施形態は、抗ＣＧＲＰ抗体及びその断片を対象に投与することを含む。例示的な抗ＣＧＲＰ抗体及び断片は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１２／０２９４７９７号に記載され、追加の例示的な抗ＣＧＲＰ抗体が以下の段落に記載される。
【０１１３】
抗体Ａｂ１
【０１１４】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、キメラ抗体を含む：ＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１）。
【０１１５】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧ
ＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２）。
【０１１６】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、キメラ抗体をさらに含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＡＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３）。
【０１１７】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＡＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４）。
【０１１８】
本発明は、配列番号１の可変軽鎖配列または配列番号２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号５、配列番号６、及び配列番号７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号３の可変重鎖配列または配列番号４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、及び重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０１１９】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１または配列番号２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号３または配列番号４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０１２０】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１の可変軽鎖配列または配列番号２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号５、配列番号６、及び配列番号７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１２１】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号３の可変重鎖配列または配列番号４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のポリペプチド配
列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１２２】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、またはそれらからなる：配列番号１の可変軽鎖領域；配列番号３の可変重鎖領域；配列番号１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号５、配列番号６、及び配列番号７）；及び配列番号３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０）。
【０１２３】
本発明の特に好ましい実施形態では、キメラ抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号２及び配列番号４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１である。
【０１２４】
本発明のさらに好ましい実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ１に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１の可変軽鎖配列及び配列番号３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１及び／または配列番号３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０１２５】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０１２６】
抗体Ａｂ２
【０１２７】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１１）。
【０１２８】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２）。
【０１２９】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）。
【０１３０】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）。
【０１３１】
本発明は、配列番号１１の可変軽鎖配列または配列番号１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１５、配列番号１６、及び配列番号１７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号１３の可変重鎖配列または配列番号１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０１３２】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１１または配列番号１２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１３または配列番号１４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０１３３】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１１の可変軽鎖配列または配列番号１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１５、配列番号１６、及び配列番号１７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１３４】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１３の可変重鎖配列または配列番号１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１３５】
本発明は、本明細書に記載の抗体断片のうちの１つまたは複数を含む、抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、またはそれらからなる：配列番号１１の可変軽鎖領域；配列番号１３の可変重鎖領域；配列番号１１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１５、配列番号１６、及び配列番号１７）；及び配列番号１３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０）。
【０１３６】
本発明のある実施形態では、ヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号１２及び配列番号１４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ２である。
【０１３７】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそのＦａｂ断片からなる。抗体Ａｂ２に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１１の可変軽鎖配列及び配列番号１３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１１及び／または配列番号１３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０１３８】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ２の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ２などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０１３９】
抗体Ａｂ３
【０１４０】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２１）。
【０１４１】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＳＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２２）。
【０１４２】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）。
【０１４３】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＬＤＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＤＮＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＡＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶ
ＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２４）。
【０１４４】
本発明は、配列番号２１の可変軽鎖配列または配列番号２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号２３の可変重鎖配列または配列番号２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０１４５】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号２１または配列番号２２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号２３または配列番号２４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０１４６】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号２１の可変軽鎖配列または配列番号２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１４７】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号２３の可変重鎖配列または配列番号２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１４８】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、またはそれらからなる：配列番号２１の可変軽鎖領域；配列番号２３の可変重鎖領域；配列番号２１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７）；及び配列番号２３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０）。
【０１４９】
本発明のある実施形態では、キメラ抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号２２及び配列番号２４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ３である。
【０１５０】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ３に関して、Ｆａｂ断片は配列番号２１の可変軽鎖配列及び配列番号２３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号２１及
び／または配列番号２３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０１５１】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ３の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ３などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０１５２】
抗体Ａｂ４
【０１５３】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、キメラ抗体を含む：ＱＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＮＤＡＡＡＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号３１）。
【０１５４】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＮＤＡＡＡＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３２）。
【０１５５】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、キメラ抗体をさらに含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＳＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）。
【０１５６】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＳＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）。
【０１５７】
本発明は、配列番号３１の可変軽鎖配列または配列番号３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号３５、配列番号３６、及び配列番号３７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号３３の可変重鎖配列または配列番号３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対
応する配列番号３８、配列番号３９、及び配列番号４０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０１５８】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は配列番号３１または配列番号３２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は配列番号３３または配列番号３４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０１５９】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号３１の可変軽鎖配列または配列番号３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号３５、配列番号３６、及び配列番号３７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１６０】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号３３の可変重鎖配列または配列番号３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号３８、配列番号３９、及び配列番号４０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１６１】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号３１の可変軽鎖領域；配列番号３３の可変重鎖領域；配列番号３１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号３５、配列番号３６、及び配列番号３７）；及び配列番号３３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号３８、配列番号３９、及び配列番号４０）。
【０１６２】
本発明のある実施形態では、ヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号３２及び配列番号３４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ４である。
【０１６３】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ４に関して、Ｆａｂ断片は配列番号３１の可変軽鎖配列及び配列番号３３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号３１及び／または配列番号３３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０１６４】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ４の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ４などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０１６５】
抗体Ａｂ５
【０１６６】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４１）。
【０１６７】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４２）。
【０１６８】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４３）。
【０１６９】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４４）。
【０１７０】
本発明は、配列番号４１の可変軽鎖配列または配列番号４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号４５、配列番号４６、及び配列番号４７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号４３の可変重鎖配列または配列番号４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号５０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０１７１】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号４１または配列番号４２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号４３または配列番号４４のポリペプチド配列を含む、あるいはその
ポリペプチド配列からなる。
【０１７２】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号４１の可変軽鎖配列または配列番号４２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号４５、配列番号４６、及び配列番号４７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１７３】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号４３の可変重鎖配列または配列番号４４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号５０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１７４】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号４１の可変軽鎖領域；配列番号４３の可変重鎖領域；配列番号４１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号４５、配列番号４６、及び配列番号４７）；及び配列番号４３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号５０）。
【０１７５】
本発明のある実施形態では、キメラ抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号４２及び配列番号４４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ５である。
【０１７６】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ５に関して、Ｆａｂ断片は配列番号４１の可変軽鎖配列及び配列番号４３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号４１及び／または配列番号４３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０１７７】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ５の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ５などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０１７８】
抗体Ａｂ６
【０１７９】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５１）。
【０１８０】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＨＮＴＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧ
ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＴＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号５２）。
【０１８１】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）。
【０１８２】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＧＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＩＮＧＡＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＡＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５４）。
【０１８３】
本発明は、配列番号５１の可変軽鎖配列または配列番号５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、及び配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号５３の可変重鎖配列または配列番号５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、及び配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０１８４】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号５１または配列番号５２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号５３または配列番号５４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０１８５】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号５１の可変軽鎖配列または配列番号５２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号５５、配列番号５６、及び配列番号５７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１８６】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号５３の可変重鎖配列または配列番号５４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、
または超可変領域）に対応する配列番号５８、配列番号５９、及び配列番号６０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１８７】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号５１の可変軽鎖領域；配列番号５３の可変重鎖領域；配列番号５１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号５５、配列番号５６、及び配列番号５７）；及び配列番号５３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号５８、配列番号５９、及び配列番号６０）。
【０１８８】
本発明のある実施形態では、ヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号５２及び配列番号５４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ６である。
【０１８９】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ６に関して、Ｆａｂ断片は配列番号５１の可変軽鎖配列及び配列番号５３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号５１及び／または配列番号５３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０１９０】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ６の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ６などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０１９１】
抗体Ａｂ７
【０１９２】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、キメラ抗体を含む：ＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＮＹＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＴＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号６１）。
【０１９３】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＮＹＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＴＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号６２）。
【０１９４】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、キメラ抗体をさらに含む：ＱＥＱＬＫＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＳＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＮＨＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＶＧＩＮＧＲＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＲＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰ
ＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６３）。
【０１９５】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＥＱＬＫＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＳＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＮＨＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＶＧＩＮＧＲＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＲＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６４）。
【０１９６】
本発明は、配列番号６１の可変軽鎖配列または配列番号６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号６５、配列番号６６、及び配列番号６７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号６３の可変重鎖配列または配列番号６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号６８、配列番号６９、及び配列番号７０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０１９７】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号６１または配列番号６２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号６３または配列番号６４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０１９８】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号６１の可変軽鎖配列または配列番号６２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号６５、配列番号６６、及び配列番号６７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０１９９】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号６３の可変重鎖配列または配列番号６４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号６８、配列番号６９、及び配列番号７０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２００】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号６１の可変軽鎖領域；配列番号６３の可変重鎖領域；配列番号６１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号６５、配列番号６６、及び配列番号６７）；及び配列番号６３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号６８、配列番号
６９、及び配列番号７０）。
【０２０１】
本発明のある実施形態では、キメラ抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号６２及び配列番号６４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ７である。
【０２０２】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ７に関して、Ｆａｂ断片は配列番号６１の可変軽鎖配列及び配列番号６３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号６１及び／または配列番号６３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２０３】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ７の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ７などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２０４】
抗体Ａｂ８
【０２０５】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＮＹＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＴＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号７１）。
【０２０６】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＮＹＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＴＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７２）。
【０２０７】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＮＨＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＶＧＩＮＧＲＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）。
【０２０８】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＬＳＮＨＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＶＧＩＮＧＲＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶ
ＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７４）。
【０２０９】
本発明は、配列番号７１の可変軽鎖配列または配列番号７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号７５、配列番号７６、及び配列番号７７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号７３の可変重鎖配列または配列番号７４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０２１０】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号７１または配列番号７２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号７３または配列番号７４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０２１１】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号７１の可変軽鎖配列または配列番号７２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号７５、配列番号７６、及び配列番号７７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２１２】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号７３の可変重鎖配列または配列番号７４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２１３】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号７１の可変軽鎖領域；配列番号７３の可変重鎖領域；配列番号７１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号７５、配列番号７６、及び配列番号７７）；及び配列番号７３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０）。
【０２１４】
本発明のある実施形態では、ヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号７２及び配列番号７４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ８である。
【０２１５】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ８に関して、Ｆａｂ断片は配列番号７１の可変軽鎖配列及び配列番号７３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号７１及
び／または配列番号７３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２１６】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ８の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ８などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母（ｙｅａｓ）株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２１７】
抗体Ａｂ９
【０２１８】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、キメラ抗体を含む：ＱＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＲＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＲＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号８１）。
【０２１９】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＲＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＲＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号８２）。
【０２２０】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、キメラ抗体をさらに含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＧＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＳＰＧＲＧＬＥＷＩＧＶＩＧＳＤＧＫＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＲＭＡＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）。
【０２２１】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＧＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＳＰＧＲＧＬＥＷＩＧＶＩＧＳＤＧＫＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＲＭＡＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８４）。
【０２２２】
本発明は、配列番号８１の可変軽鎖配列または配列番号８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号８５、配列番号８６、及び配列番号８７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号８３の可変重鎖
配列または配列番号８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号８８、配列番号８９、及び配列番号９０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０２２３】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号８１または配列番号８２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号８３または配列番号８４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０２２４】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号８１の可変軽鎖配列または配列番号８２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号８５、配列番号８６、及び配列番号８７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２２５】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号８３の可変重鎖配列または配列番号８４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号８８、配列番号８９、及び配列番号９０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２２６】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号８１の可変軽鎖領域；配列番号８３の可変重鎖領域；配列番号８１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号８５、配列番号８６、及び配列番号８７）；及び配列番号８３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号８８、配列番号８９、及び配列番号９０）。
【０２２７】
本発明のある実施形態では、キメラ抗ＣＧＲＰ抗体は配列番号８２及び配列番号８４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ９、である。
【０２２８】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ９に関して、Ｆａｂ断片は配列番号８１の可変軽鎖配列及び配列番号８３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号８１及び／または配列番号８３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２２９】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ９の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ９などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２３０】
抗体Ａｂ１０
【０２３１】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＲＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９１）。
【０２３２】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＲＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９２）。
【０２３３】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＧＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＳＤＧＫＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９３）。
【０２３４】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＧＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＳＤＧＫＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９４）。
【０２３５】
本発明は、配列番号９１の可変軽鎖配列または配列番号９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号９５、配列番号９６、及び配列番号９７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号９３の可変重鎖配列または配列番号９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号９８、配列番号９９、及び配列番号１００のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０２３６】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号９１または配列番号９２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の
抗体断片は、配列番号９３または配列番号９４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０２３７】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号９１の可変軽鎖配列または配列番号９２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号９５、配列番号９６、及び配列番号９７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２３８】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号９３の可変重鎖配列または配列番号９４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号９８、配列番号９９、及び配列番号１００のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２３９】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号９１の可変軽鎖領域；配列番号９３の可変重鎖領域；配列番号９１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号９５、配列番号９６、及び配列番号９７）；及び配列番号９３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号９８、配列番号９９、及び配列番号１００）。
【０２４０】
本発明のある実施形態では、ヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号９２及び配列番号９４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１０である。
【０２４１】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ１０に関して、Ｆａｂ断片は配列番号９１の可変軽鎖配列及び配列番号９３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号９１及び／または配列番号９３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２４２】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ１０の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１０などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２４３】
抗体Ａｂ１１
【０２４４】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、キメラ抗体を含む：ＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＰＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＲＡＳＱＳＶＹＹＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１０１）。
【０２４５】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を
有する、キメラ抗体も含む：ＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＰＡＶＧＳＴＶＴＩＮＣＲＡＳＱＳＶＹＹＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０２）。
【０２４６】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、キメラ抗体をさらに含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＧＳＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＶＴＮＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＧＶＮＧＫＲＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）。
【０２４７】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＧＳＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＶＴＮＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＧＶＮＧＫＲＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０４）。
【０２４８】
本発明は、配列番号１０１の可変軽鎖配列または配列番号１０２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１０５、配列番号１０６、及び配列番号１０７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号１０３の可変重鎖配列または配列番号１０４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１０８、配列番号１０９、及び配列番号１１０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０２４９】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１０１または配列番号１０２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１０３または配列番号１０４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０２５０】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１０１の可変軽鎖配列または配列番号１０２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１０５、配列番号１０６、及び配列番号１０７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２５１】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１０３の可変重鎖配列または配列番号１０４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１０８、配列番号１０９、及び配列番号１１０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２５２】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号１０１の可変軽鎖領域；配列番号１０３の可変重鎖領域；配列番号１０１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１０５、配列番号１０６、及び配列番号１０７）；及び配列番号１０３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１０８、配列番号１０９、及び配列番号１１０）。
【０２５３】
本発明のある実施形態では、キメラ抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号１０２及び配列番号１０４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１１である。
【０２５４】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ１１に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１０１の可変軽鎖配列及び配列番号１０３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１０１及び／または配列番号１０３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２５５】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ１１の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１１などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２５６】
抗体Ａｂ１２
【０２５７】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＲＡＳＱＳＶＹＹＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１１１）。
【０２５８】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＲＡＳＱＳＶＹＹＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＮＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１２）。
【０２５９】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＶＴＮＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＶＮＧＫＲＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１３）。
【０２６０】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＤＶＴＮＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＶＮＧＫＲＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１４）。
【０２６１】
本発明は、配列番号１１１の可変軽鎖配列または配列番号１１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１１５、配列番号１１６、及び配列番号１１７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号１１３の可変重鎖配列または配列番号１１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１１８、配列番号１１９、及び配列番号１２０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０２６２】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１１１または配列番号１１２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１１３または配列番号１１４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０２６３】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１１１の可変軽鎖配列または配列番号１１２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１１５、配列番号１１６、及び配列番号１１７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２６４】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１１３の可変重鎖配列または配列番号１１４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１１８、配列番号１１９、及び配列番号１２０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２６５】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、
次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号１１１の可変軽鎖領域；配列番号１１３の可変重鎖領域；配列番号１１１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１１５、配列番号１１６、及び配列番号１１７）；及び配列番号１１３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１１８、配列番号１１９、及び配列番号１２０）。
【０２６６】
本発明のある実施形態では、ヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号１１２及び配列番号１１４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１２である。
【０２６７】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ１２に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１１１の可変軽鎖配列及び配列番号１１３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１１１及び／または配列番号１１３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２６８】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ１２の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１２などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２６９】
抗体Ａｂ１３
【０２７０】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、キメラ抗体を含む：ＡＩＶＭＴＱＴＰＳＳＫＳＶＰＶＧＤＴＶＴＩＮＣＱＡＳＥＳＬＹＮＮＮＡＬＡＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹＤＡＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＧＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＧＧＹＲＳＤＳＶＤＧＶＡＦＡＧＧＴＥＶＶＶＫＲ（配列番号１２１）。
【０２７１】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＡＩＶＭＴＱＴＰＳＳＫＳＶＰＶＧＤＴＶＴＩＮＣＱＡＳＥＳＬＹＮＮＮＡＬＡＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹＤＡＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＧＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＧＧＹＲＳＤＳＶＤＧＶＡＦＡＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２２）。
【０２７２】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、キメラ抗体をさらに含む：ＱＳＶＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＤＦＳＳＮＡＭＷＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＹＮＧＤＧＳＴＹＹＡＳＷＶＮＧＲＦＳＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＬＮＳＬＴＶＡＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＬＤＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２３）。
【０２７３】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、キメラ抗体も含む：ＱＳＶＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＥＧＳＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＤ
ＦＳＳＮＡＭＷＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＣＩＹＮＧＤＧＳＴＹＹＡＳＷＶＮＧＲＦＳＩＳＫＴＳＳＴＴＶＴＬＱＬＮＳＬＴＶＡＤＴＡＴＹＹＣＡＲＤＬＤＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２４）。
【０２７４】
本発明は、配列番号１２１の可変軽鎖配列または配列番号１２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１２５、配列番号１２６、及び配列番号１２７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号１２３の可変重鎖配列または配列番号１２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１２８、配列番号１２９、及び配列番号１３０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０２７５】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１２１または配列番号１２２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は、配列番号１２３または配列番号１２４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０２７６】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１２１の可変軽鎖配列または配列番号１２２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１２５、配列番号１２６、及び配列番号１２７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２７７】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１２３の可変重鎖配列または配列番号１２４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１２８、配列番号１２９、及び配列番号１３０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２７８】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号１２１の可変軽鎖領域；配列番号１２３の可変重鎖領域；配列番号１２１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１２５、配列番号１２６、及び配列番号１２７）；及び配列番号１２３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１２８、配列番号１２９、及び配列番号１３０）。
【０２７９】
本発明のある実施形態では、キメラ抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号１２２及び配列番号１２４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少な
くとも１つを有するＡｂ１３である。
【０２８０】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ１３に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１２１の可変軽鎖配列及び配列番号１２３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１２１及び／または配列番号１２３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２８１】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ１３の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１３などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２８２】
抗体Ａｂ１４
【０２８３】
一実施形態では、本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有する、ヒト化抗体を含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＲＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１３１）。
【０２８４】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む軽鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＱＶＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＮＣＱＡＳＱＮＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＱＬＩＹＳＴＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＬＧＳＹＤＣＳＲＧＤＣＦＶＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１３２）。
【０２８５】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変重鎖配列を有する、ヒト化抗体をさらに含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＧＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＳＤＧＫＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３３）。
【０２８６】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む重鎖配列を有する、ヒト化抗体も含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＩＧＬＳＳＹＹＭＱＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＧＳＤＧＫＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＴＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＡＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰ
ＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１３４）。
【０２８７】
本発明は、配列番号１３１の可変軽鎖配列または配列番号１３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１３５、配列番号１３６、及び配列番号１３７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、及び／または配列番号１３３の可変重鎖配列または配列番号１３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１３８、配列番号１３９、及び配列番号１４０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のＣＤＲ、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列及び軽鎖配列のうちの１つまたは複数の（全てを含む）組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
【０２８８】
本発明は、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片も企図する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体断片は配列番号１３１または配列番号１３２のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体断片は配列番号１３３または配列番号１３４のポリペプチド配列を含む、あるいはそのポリペプチド配列からなる。
【０２８９】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１３１の可変軽鎖配列または配列番号１３２の軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１３５、配列番号１３６、及び配列番号１３７のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２９０】
本発明のさらなる実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、配列番号１３３の可変重鎖配列または配列番号１３４の重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する配列番号１３８、配列番号１３９、及び配列番号１４０のポリペプチド配列のうちの１つまたは複数を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの１つまたは複数からなる。
【０２９１】
本発明は、本明細書に記載される抗体断片のうちの１つまたは複数を含む抗体断片も企図する。本発明の一実施形態では、ＣＧＲＰに対する結合特異性を有する抗体の断片は、次の抗体断片のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれより多く（全てを含む）を含む、あるいはそれらからなる：配列番号１３１の可変軽鎖領域；配列番号１３３の可変重鎖領域；配列番号１３１の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号１３５、配列番号１３６、及び配列番号１３７）；及び配列番号１３３の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号１３８、配列番号１３９、及び配列番号１４０）。
【０２９２】
本発明のある実施形態では、ヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、配列番号１３２及び配列番号１３４を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも１つを有するＡｂ１４である。
【０２９３】
本発明のさらなる実施形態では、抗体断片は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有するＦａｂ断片（抗原結合断片）を含む、あるいはそれからなる。抗体Ａｂ１４に関して、Ｆａｂ断片は配列番号１３１の可変軽鎖配列及び配列番号１３３の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を保持したままでの、前記Ｆａｂ中の配列番号１３１及び／または配列番号１３３への付加、欠失及びそれらの変異体をさらに企図する。
【０２９４】
本明細書において（下に）記載される本発明の一実施形態では、Ｆａｂ断片は、Ａｂ１４の酵素（例えば、パパイン）消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ａｂ１４などの抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＦａｂ断片は、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞（例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母）及び他の酵母株における発現により作製され得る。好適なピキア属の種にはピキア・パストリスが含まれるが、これに限定されない。
【０２９５】
別の実施形態では、抗体断片は、次の非限定の形態：Ｆａｂ抗体形態、Ｆａｂ’抗体形態、Ｆ（ａｂ’）２抗体形態、Ｆｖ及び単鎖Ｆｖ抗体形態のうちの１つまたは複数の形態で存在し得る。好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＧＲＰ抗体は、以下に示される配列を含むκ定常軽鎖配列をさらに含む：
【０２９６】
ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２８３）。
【０２９７】
別の好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＣＧＲＰ抗体は、以下に示される配列を含むγ−１定常重鎖ポリペプチド配列をさらに含む：
【０２９８】
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２８４）。
【０２９９】
別の実施形態では、本発明は、配列番号３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、または１３３から選択されるＶＨポリペプチド配列またはその変異体を含み、そして、配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、または１３１から選択されるＶＬポリペプチド配列またはその変異体をさらに含む単離抗ＣＧＲＰ抗体であって、前記ＶＨポリペプチドまたはＶＬポリペプチド中のフレームワーク残基（ＦＲ残基）のうちの１つまたは複数が別のアミノ酸残基で置換されており、ＣＧＲＰに特異的に結合する抗ＣＧＲＰ抗体がその結果生じる、単離抗ＣＧＲＰ抗体を企図する。本発明は、これらの抗体のヒト化形態及びキメラ形態を企図する。キメラ抗体は、ＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域、ＩｇＧ４定常領域、ＩｇＧ５定常領域、ＩｇＧ６定常領域、ＩｇＧ７定常領域、ＩｇＧ８定常領域、ＩｇＧ９定常領域、ＩｇＧ１０定常領域、ＩｇＧ１１定常領域、ＩｇＧ１２定常領域、ＩｇＧ１３定常領域、ＩｇＧ１４定常領域、ＩｇＧ１５定常領域、ＩｇＧ１６定常領域、ＩｇＧ１７定常領域、ＩｇＧ１８定常領域またはＩｇＧ１９定常領域に由来するＦｃを含み得る。
【０３００】
本発明の一実施形態では、該抗体またはＶＨポリペプチドまたはＶＬポリペプチドは、本明細書において言及されるヒト化処理の開始前に１つまたは複数のウサギＢ細胞集団に起源を発する、または１つまたは複数のウサギＢ細胞集団から選択される。
【０３０１】
本発明の別の実施形態では、抗ＣＧＲＰ抗体及びその断片は、ＣＧＲＰ−Ｒへの結合特異性を有しない。本発明のさらなる実施形態では、抗ＣＧＲＰ抗体及びその断片は、ＣＧＲＰのＣＧＲＰ−Ｒとの会合を阻害する。本発明の別の実施形態では、抗ＣＧＲＰ抗体及びその断片は、ＣＧＲＰのＣＧＲＰ−Ｒ及び／または追加のタンパク質及び／またはそれらのマルチマーとの会合を阻害する、及び／または、それらの生物学的効果を拮抗する。
【０３０２】
上述のように、抗体及びその断片を翻訳後に修飾して、化学リンカーなどのエフェクター部分、例えば蛍光性色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質及び化学発光部分などの検出可能部分、または、例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞傷害剤及び放射性物質などの機能部分を付加し得る。
【０３０３】
抗体またはその断片はまた、化学的に修飾されて、ポリペプチドの溶解性、安定性及び循環時間（インビボ半減期）の増加または免疫原性の低下などの追加の利点を提供し得る（米国特許第４，１７９，３３７号を参照されたい）。誘導体化のための化学部分は、ポリエチレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコール共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなどのような水溶性高分子から選択され得る。抗体及びその断片は、その分子内の無作為な位置、またはその分子内の所定の位置で修飾され得、１つ、２つ、３つ、またはより多くの結合化学部分を含み得る。
【０３０４】
高分子は任意の分子量でよく、分岐型でも非分岐型でもよい。ポリエチレングリコールについては、好ましい分子量は、使いやすさと製造しやすさのため、約１ｋＤａから約１００ｋＤａ（用語「約」は、ポリエチレングリコールの調製においては、規定の分子量よりもいくつかの分子は重く、いくつかの分子は軽いということを表している）間である。所望の治療プロファイル（例えば、所望の持続性放出の期間、もしあれば、生物活性に対する効果、使いやすさ、抗原性の程度またはその欠如、及び治療性タンパク質または類似体に対するポリエチレングリコールの他の公知の効果）に応じて他のサイズを使用してよい。例えば、ポリエチレングリコールは、約２００、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００、２０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、５５，０００、６０，０００、６５，０００、７０，０００、７５，０００、８０，０００、８５，０００、９０，０００、９５，０００、または１００，０００ｋＤａの平均分子量を有し得る。分岐型ポリエチレングリコールは、例えば、米国特許第５，６４３，５７５号、Ｍｏｒｐｕｒｇｏら、Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５６：５９−７２（１９９６）；Ｖｏｒｏｂｊｅｖら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ１８：２７４５−２７５０（１９９９）；及びＣａｌｉｃｅｔｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：６３８−６４６（１９９９）に記載されており、それらのそれぞれの開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０５】
当業者が利用することができる多数の結合方法が存在し、例えば、欧州特許第０４０１３８４号、参照により本明細書に組み込まれる（Ｇ−ＣＳＦへのＰＥＧの結合）を参照されたい。（トレシルクロリドを使用するＧＭ−ＣＳＦのＰＥＧ化を報告する）Ｍａｌｉｋら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−１０３５（１９９２）も参照されたい。例えば、ポリエチレングリコールは、遊離アミノ基または遊離カルボキシル基などの反応性基を介してアミノ酸残基を通して共有結合され得る。反応性基は、活性型ポリエチレン
グリコール分子が結合され得る基である。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基には、リシン残基及びＮ末端アミノ酸残基が含まれ得る。遊離カルボキシル基を有するアミノ酸残基には、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基及びＣ末端アミノ酸残基が含まれ得る。スルフヒドリル基もポリエチレングリコール分子を結合するための反応性基として用いられ得る。Ｎ末端またはリシン基での結合など、アミノ基での結合が治療目的にとって好ましい。
【０３０６】
上で示唆されているように、ポリエチレングリコールは、多数のアミノ酸残基のうちのいずれかへの結合を介してタンパク質に結合され得る。例えば、ポリエチレングリコールは、リシン残基、ヒスチジン残基、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、またはシステイン残基への共有結合を介してポリペプチドに結合されることができる。１つまたは複数の反応化学を用いてポリエチレングリコールを特定のアミノ酸残基（例えば、リシン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはシステイン）に、または複数の種類のアミノ酸残基（例えば、リシン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン及びそれらの組合せ）に結合し得る。
【０３０７】
あるいは、抗体またはその断片は、アルブミン（組換えヒト血清アルブミンまたはその断片または変異体（例えば、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、欧州特許第０  ４１３  ６２２号、及び１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号を参照されたく、それらはその全体において参照により本明細書に組み込まれる）を含むが、これらに限定されない）またはトランスフェリンまたはフェリチンなどの他の循環血中タンパク質との融合を介して増加したインビボ半減期を有し得る。好ましい実施形態では、本発明のポリペプチド及び／または抗体（それらの断片または変異体を含む）は、成熟型のヒト血清アルブミン（すなわち、その全体において参照により本明細書に組み込まれる、欧州特許第０  ３２２  ０９４号の図１及び図２に示されるヒト血清アルブミンのアミノ酸１〜５８５）と融合される。本発明の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドも本発明に包含される。
【０３０８】
検出可能部分に関して、さらに例示的な酵素には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ及びルシフェラーゼが含まれるが、これらに限定されない。さらに例示的な蛍光性物質には、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリン及びダンシルクロリドが含まれるが、これらに限定されない。さらに例示的な化学発光部分には、ルミノールが含まれるが、これに限定されない。さらに例示的な生物発光物質には、ルシフェリン及びイクオリンが含まれるが、これらに限定されない。さらに例示的な放射性物質にはヨウ素１２５（１２５Ｉ）、炭素１４（１４Ｃ）、イオウ３５（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）及びリン３２（３２Ｐ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０３０９】
機能部分に関して、例示的な細胞傷害剤には、メトトレキサート、アミノプテリン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルダカルバジン；メクロレタミン、チオテパクロラムブチル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１−メチルニトロソウレア、シクロホスファミド、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ−ジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）、シスプラチン、カルボプラチン（パラプラチン）などのアルキル化剤；ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン及びビサントレンを含むアントラサイクリン類；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリケアマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ）を含む抗生物質；及び、ビン
カアルカロイド、ビンクリスチン及びビンブラスチンなどの抗有糸分裂剤が含まれるが、これらに限定されない。他の細胞傷害剤には、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、エトポシド、テニポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’−（ＤＤＤ））、インターフェロン、及びこれらの細胞傷害剤の混合物が含まれる。
【０３１０】
さらなる細胞傷害剤には、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン及びブレオマイシンなどの化学療法剤が含まれるが、これらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素及び緑膿菌毒素などの植物及び細菌に由来する毒性酵素をヒト化抗体またはキメラ抗体、またはそれらの結合断片、にコンジュゲートして細胞種特異的殺滅剤を作製し得る（Ｙｏｕｌｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４５３９（１９８０）、Ｋｒｏｌｉｃｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：５４１９（１９８０））。
【０３１１】
他の細胞傷害剤には、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇにより米国特許第６，６５３，１０４号に記載される細胞傷害性リボヌクレアーゼが含まれる。本発明の実施形態は、α粒子またはβ粒子を放射する放射性核種が、複合体形成剤を使用して、または使用せずに抗体またはその結合断片に安定的に連結されている放射性免疫複合体にも関する。かかる放射性核種には、リン−３２（３２Ｐ）、スカンジウム−４７（４７Ｓｃ）、銅−６７（６７Ｃｕ）、ガリウム−６７（６７Ｇａ）、イットリウム−８８（８８Ｙ）、イットリウム−９０（９０Ｙ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素−１３１（１３１Ｉ）、サマリウム−１５３（１５３Ｓｍ）、ルテチウム−１７７（１７７Ｌｕ）、レニウム−１８６（１８６Ｒｅ）またはレニウム−１８８（１８８Ｒｅ）などのβ放射体、及びアスタチン−２１１（２１１Ａｔ）、鉛−２１２（２１２Ｐｂ）、ビスマス−２１２（２１２Ｂｉ）または−２１３（２１３Ｂｉ）またはアクチニウム−２２５（２２５Ａｃ）などのα放射体が含まれる。
【０３１２】
抗体またはその結合断片を検出可能部分などにコンジュゲートするための方法、例えば、Ｈｕｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ１４４：９４５（１９６２）；Ｄａｖｉｄら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１３：１０１４（１９７４）、Ｐａｉｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９（１９８１）、及びＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７（１９８２）によって記載される方法などは当技術分野において周知である。
【０３１３】
本明細書に記載される実施形態は、本明細書に記載される抗体、抗体断片、ディアボディ、ＳＭＩＰ、キャメルボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ、ポリペプチド、可変領域及びＣＤＲと実質的に相同である変異体及び同等物をさらに含む。これらは、例えば、保存的置換型変異（すなわち、１つまたは複数のアミノ酸の類似のアミノ酸による置換）を含有し得る。例えば、保存的置換は、同一の一般的分類内での１つのアミノ酸の別のアミノ酸での置換、例えば、１つの酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸での置換、１つの塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸での置換、または１つの中性アミノ酸の別の中性アミノ酸による置換を指す。保存的アミノ酸置換によって意図されることは、当技術分野において周知である。
【０３１４】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体断片、可変領域及びＣＤＲのポリペプチド配列のうちの任意の１つまたは複数に対して少なくとも９０％またはそれを超える配列相同性を有するポリペプチド配列を企図する。より好ましくは、本発明は、本明細書に記載される抗体断片、可変領域及びＣＤＲのポリペプチド配列のうちの任意の１つまたは複数に対して、少なくとも９５％またはそれを超える配列相同性、さらにより好ましくは少なくとも９８％またはそれを超える配列相同性、及びより一層好ましくは少なくとも９９％またはそれを超える配列相同性を有するポリペプチド配列を企図する。核酸配列及びアミノ酸配列間の相同性を決定するための方法は、当業者に周知である。
【０３１５】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗体断片、可変領域及びＣＤＲの上に列挙したポリペプチド相同物であって、抗ＣＧＲＰ活性をさらに有する相同物をさらに企図する。抗ＣＧＲＰ活性の非限定的な例は、本明細書に記載されている。
【０３１６】
別の実施形態では、本発明は、任意の前述の配列を結合する抗イディオタイプ抗体の作製と使用をさらに企図する。例示的な実施形態では、かかる抗イディオタイプ抗体は、抗ＣＧＲＰ抗体の効果を調節する、低下させる、または中和するために、抗ＣＧＲＰ抗体を受けたことがある対象に投与されることができる。かかる抗イディオタイプ抗体は、抗ＣＧＲＰ抗体の存在を特徴とする自己免疫疾患の処置にも有用であり得る。かかる抗イディオタイプ抗体のさらなる使用例は、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体の検出のための使用であり、例えば、対象の血液または他の体液の中に存在する抗ＣＧＲＰ抗体のレベルをモニターするための使用である。
【０３１７】
本発明は、本明細書に記載される任意の他のポリヌクレオチド配列と置換される本明細書に記載される任意のポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列を含む抗ＣＧＲＰ抗体も企図する。例えば、限定されないが、本発明は、本明細書に記載される任意の可変軽鎖配列及び可変重鎖配列の組合せを含む抗体を企図し、本明細書に記載される任意のＣＤＲ配列による本明細書に記載される任意の他のＣＤＲ配列の置換により生じる抗体をさらに企図する。
【０３１８】
本発明のさらなる例示的な実施形態
別の実施形態では、本発明は、インタクトなヒトＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上にある、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３またはＡｂ１４から選択される抗ヒトＣＧＲＰ抗体と同一の直鎖状または立体的エピトープ（複数可）に特異的に結合する及び／または同一の直鎖状または立体的エピトープ（複数可）への結合について競合する１つまたは複数の抗ヒトＣＧＲＰ抗体またはその抗体断片を企図する。前記１つまたは複数の抗ヒトＣＧＲＰ抗体またはその抗体断片は、非天然型の抗体、例えばヒト化抗体またはキメラ抗体、非天然型の抗体断片、タグまたは標識を組み込んだ抗体などであってよい。好ましい実施形態では、該抗ヒトＣＧＲＰ抗体またはその断片は、インタクトなヒトＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上にある、Ａｂ３、Ａｂ６、Ａｂ１３またはＡｂ１４と同一の直鎖状または立体的エピトープ（複数可）に特異的に結合する及び／または同一の直鎖状または立体的エピトープ（複数可）への結合について競合する。
【０３１９】
本発明の好ましい実施形態は、ＣＧＲＰへの結合特異性を有し、ＣＧＲＰのＣＧＲＰ受容体への結合により仲介される生物学的活性を阻害するキメラ抗体またはヒト化抗体及びそれらの断片（Ｆａｂ断片を含む）を対象とする。本発明のある実施形態では、そのキメラ抗ＣＧＲＰ抗体またはヒト化抗ＣＧＲＰ抗体は、Ａｂ３、Ａｂ６、Ａｂ１３、またはＡｂ１４から選択される。
【０３２０】
本発明の別の実施形態では、抗ヒトＣＧＲＰ抗体は、インタクトなＣＧＲＰポリペプチ
ドまたはその断片上にある、Ａｂ３、Ａｂ６、Ａｂ１３またはＡｂ１４が特異的に結合するエピトープと同一の直鎖状または立体的エピトープであって、天然ヒトＣＧＲＰポリペプチドの全長にわたる重複する直鎖状ペプチド断片を使用するエピトープマッピングによって確定されるエピトープに特異的に結合する抗体である。
【０３２１】
本発明は、Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、Ａｂ９、Ａｂ１０、Ａｂ１１、Ａｂ１２、Ａｂ１３またはＡｂ１４から選択される抗ＣＧＲＰ抗体を含むが、これに限定されない、本明細書において開示される抗体または抗体断片と同一のＣＧＲＰエピトープと結合する、及び／またはＣＧＲＰへの結合について抗ＣＧＲＰ抗体と競合する抗ＣＧＲＰ抗体も対象とする。
【０３２２】
別の実施形態では、本発明は、３、１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、９３、１０３、１１３、１２３、または１３３から選択されるＶＨポリペプチド配列またはその変異体に含有されるＣＤＲのうちの１つまたは複数、及び／または１、１１、２１、３１、４１、５１、６１、７１、８１、９１、１０１、１１１、１２１、または１３１から選択されるＶＬポリペプチド配列またはその変異体に含有されるＣＤＲのうちの１つまたは複数を含む単離抗ＣＧＲＰ抗体または抗体断片も対象とする。
【０３２３】
本発明は、上で論じられている１つまたは複数の抗ヒトＣＧＲＰ抗体が、アグリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）されているか、またはグリコシル化されている場合はマンノース残基のみを含有し；エフェクター機能、半減期、タンパク質分解及び／またはグリコシル化を変化させるように修飾されているＦｃ領域を含有し；ヒト抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体またはキメラ抗体であり；ウサギ（親）抗ヒトＣＧＲＰ抗体に由来するヒト化抗体であることをさらに企図する。
【０３２４】
本発明は、１つまたは複数の抗ヒトＣＧＲＰ抗体であって、前記抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域のそれぞれの中にあるフレームワーク領域（ＦＲ）が非修飾型のヒトＦＲであるか、または軽鎖可変領域または重鎖可変領域内の１つまたは複数のヒトＦＲ残基が親ウサギ抗体の対応するＦＲ残基で置換されることにより修飾されているヒトＦＲである、及び、前記ヒトＦＲが、ヒト生殖系列抗体配列のライブラリーに含まれる他のヒト生殖系列抗体配列と比べて、対応するウサギ可変重鎖領域または可変軽鎖領域に対する高レベルの相同性に基づいてそのライブラリーから選択されたヒト可変重鎖抗体配列及び可変軽鎖抗体配列より得られたものである、抗ヒトＣＧＲＰ抗体をさらに企図する。
【０３２５】
本発明の一実施形態では、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または断片は、ＣＧＲＰ発現ヒト細胞及び／または循環可溶性ＣＧＲＰ分子にインビボで特異的に結合し、それにはＣＧＲＰを発現する細胞と関連がある疾患を有する患者のヒト細胞上に発現するＣＧＲＰまたはそのヒト細胞によって発現されるＣＧＲＰが含まれる。
【０３２６】
本発明は、検出可能標識または治療薬に直接的または間接的に付着されている抗ヒトＣＧＲＰ抗体または断片をさらに企図する。
【０３２７】
本発明は、上記の抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片の発現をもたらす、酵母好適性コドンまたはヒト好適性コドンを含むものあるいはそれらからなるものを含む１つまたは複数の核酸配列も企図する。本発明は、前記核酸配列（複数可）を含むベクター（プラスミドベクターまたは組換えウイルスベクターを含む）も企図する。本発明は、上記の抗体の少なくとも１つを発現する、哺乳類細胞、酵母細胞、細菌細胞及び昆虫細胞を含む宿主細胞または組換え宿主細胞も企図する。好ましい実施形態では、宿主細胞は酵母細胞である。さらに好ましい実施形態では、酵母細胞は二倍体酵母細胞である。例示的な実施形態では、酵母細胞はピキア酵母である。
【０３２８】
本発明は、ＣＧＲＰ発現細胞に関連する疾患または病状を有する患者に本明細書に記載される治療有効量の少なくとも１つの抗ヒトＣＧＲＰ抗体または断片を投与することを含む処置の方法も企図する。本発明は、その処置方法が本明細書において開示される２つ以上の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片の投与を必然的に含み得ることも企図する。１つよりも多い抗体が患者に投与される場合、複数の抗体を同時または共に投与してよく、または、それらをずらして投与してよい。
【０３２９】
本発明の抗ＣＧＲＰ抗体及びＣＧＲＰに対する結合特異性を有するその断片の抗ＣＧＲＰ活性を、ＣＧＲＰへのそれらの結合力またはそれらの親和性によっても記載し得る。本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体及びＣＧＲＰに対する結合特異性を有するその断片は、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、または１０−１３Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）でＣＧＲＰに結合する。好ましくは、抗ＣＧＲＰ抗体及びその断片は、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ以下の解離定数でＣＧＲＰに結合する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体及びＣＧＲＰに対する結合特異性を有するその断片は、直鎖状ＣＧＲＰエピトープまたは立体的ＣＧＲＰエピトープに結合する。
【０３３０】
本発明の別の実施形態では、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体及びＣＧＲＰに対する結合特異性を有するその断片の抗ＣＧＲＰ活性は、１０−４Ｓ−１、５×１０−５Ｓ−１、１０−５Ｓ−１、５×１０−６Ｓ−１、１０−６Ｓ−１、５×１０−７Ｓ−１、または１０−７Ｓ−１以下の解離速度でＣＧＲＰに結合する。
【０３３１】
本発明のさらなる実施形態では、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体及びＣＧＲＰに対する結合特異性を有するその断片の抗ＣＧＲＰ活性は、ＣＧＲＰに関連する疾患及び障害の症状を予防、改善、または軽減することにより、あるいはその疾患及び障害を処置することにより抗ＣＧＲＰ活性を呈する。ＣＧＲＰに関連する疾患及び障害の非限定的な例は、本明細書に記載される。
【０３３２】
抗ＣＧＲＰ抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
【０３３３】
例示的な実施形態では、抗ＣＧＲＰ抗体は、本明細書に含有される生物学的配列表に記載のポリヌクレオチド配列、または当業者によって容易に同定され得る他のコードするポリヌクレオチドによってコードされ得る。その例としては、配列番号１４１のポリヌクレオチド（配列番号１のポリペプチドをコードする）、配列番号１４２のポリヌクレオチド（配列番号２のポリペプチドをコードする）、配列番号１４３のポリヌクレオチド（配列番号３のポリペプチドをコードする）、配列番号１４４のポリヌクレオチド（配列番号４のポリペプチドをコードする）、配列番号１５１のポリヌクレオチド（配列番号１１のポリペプチドをコードする）、配列番号１５２のポリヌクレオチド（配列番号１２のポリペプチドをコードする）、配列番号１５３のポリヌクレオチド（配列番号１３のポリペプチドをコードする）、配列番号１５４のポリヌクレオチド（配列番号１４のポリペプチドをコードする）、配列番号１６１のポリヌクレオチド（配列番号２１のポリペプチドをコードする）、配列番号１６２のポリヌクレオチド（配列番号２２のポリペプチドをコードする）、配列番号１６３のポリヌクレオチド（配列番号２３のポリペプチドをコードする）、配列番号１６４のポリヌクレオチド（配列番号２４のポリペプチドをコードする）、配列番号１７１のポリヌクレオチド（配列番号３１のポリペプチドをコードする）、配列番号１７２のポリヌクレオチド（配列番号３２のポリペプチドをコードする）、配列番号１７３のポリヌクレオチド（配列番号３３のポリペプチドをコードする）、配列番号１７４
のポリヌクレオチド（配列番号３４のポリペプチドをコードする）、配列番号１８１のポリヌクレオチド（配列番号４１のポリペプチドをコードする）、配列番号１８２のポリヌクレオチド（配列番号４２のポリペプチドをコードする）、配列番号１８３のポリヌクレオチド（配列番号４３のポリペプチドをコードする）、配列番号１８４のポリヌクレオチド（配列番号４４のポリペプチドをコードする）、配列番号１９１のポリヌクレオチド（配列番号５１のポリペプチドをコードする）、配列番号１９２のポリヌクレオチド（配列番号５２のポリペプチドをコードする）、配列番号１９３のポリヌクレオチド（配列番号５３のポリペプチドをコードする）、配列番号１９４のポリヌクレオチド（配列番号５４のポリペプチドをコードする）、配列番号２０１のポリヌクレオチド（配列番号６１のポリペプチドをコードする）、配列番号２０２のポリヌクレオチド（配列番号６２のポリペプチドをコードする）、配列番号２０３のポリヌクレオチド（配列番号６３のポリペプチドをコードする）、配列番号２０４のポリヌクレオチド（配列番号６４のポリペプチドをコードする）、配列番号２１１のポリヌクレオチド（配列番号７１のポリペプチドをコードする）、配列番号２１２のポリヌクレオチド（配列番号７２のポリペプチドをコードする）、配列番号２１３のポリヌクレオチド（配列番号７３のポリペプチドをコードする）、配列番号２１４のポリヌクレオチド（配列番号７４のポリペプチドをコードする）、配列番号２２１のポリヌクレオチド（配列番号８１のポリペプチドをコードする）、配列番号２２２のポリヌクレオチド（配列番号８２のポリペプチドをコードする）、配列番号２２３のポリヌクレオチド（配列番号８３のポリペプチドをコードする）、配列番号２２４のポリヌクレオチド（配列番号８４のポリペプチドをコードする）、配列番号２３１のポリヌクレオチド（配列番号９１のポリペプチドをコードする）、配列番号２３２のポリヌクレオチド（配列番号９２のポリペプチドをコードする）、配列番号２３３のポリヌクレオチド（配列番号９３のポリペプチドをコードする）、配列番号２３４のポリヌクレオチド（配列番号９４のポリペプチドをコードする）、配列番号２４１のポリヌクレオチド（配列番号１０１のポリペプチドをコードする）、配列番号２４２のポリヌクレオチド（配列番号１０２のポリペプチドをコードする）、配列番号２４３のポリヌクレオチド（配列番号１０３のポリペプチドをコードする）、配列番号２４４のポリヌクレオチド（配列番号１０４のポリペプチドをコードする）、配列番号２５１のポリヌクレオチド（配列番号１１１のポリペプチドをコードする）、配列番号２５２のポリヌクレオチド（配列番号１１２のポリペプチドをコードする）、配列番号２５３のポリヌクレオチド（配列番号１１３のポリペプチドをコードする）、配列番号２５４のポリヌクレオチド（配列番号１１４のポリペプチドをコードする）、配列番号２６１のポリヌクレオチド（配列番号１２１のポリペプチドをコードする）、配列番号２６２のポリヌクレオチド（配列番号１２２のポリペプチドをコードする）、配列番号２６３のポリヌクレオチド（配列番号１２３のポリペプチドをコードする）、配列番号２６４のポリヌクレオチド（配列番号１２４のポリペプチドをコードする）、配列番号２７１のポリヌクレオチド（配列番号１３１のポリペプチドをコードする）、配列番号２７２のポリヌクレオチド（配列番号１３２のポリペプチドをコードする）、配列番号２７３のポリヌクレオチド（配列番号１３３のポリペプチドをコードする）、または配列番号２７４のポリヌクレオチド（配列番号１３４のポリペプチドをコードする）が挙げられる。
【０３３４】
Ｂ細胞のスクリーニング及び単離
【０３３５】
一実施形態では、本発明は、少なくとも１つのＣＧＲＰ抗原特異的細胞を単離するために使用され得る抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団の調製及び単離を企図しており、そのＣＧＲＰ抗原特異的細胞は、ＣＧＲＰに対するモノクローナル抗体（所望のＣＧＲＰ抗原に特異的である）またはかかる抗体に対応する核酸配列の作製に使用されることができる。抗原特異的Ｂ細胞の前記クローン集団を調製及び単離する方法は、例えば、Ｃａｒｖａｌｈｏ−Ｊｅｎｓｅｎらの米国特許公開第２００７／０２６９８６８号に教示されており、その開示は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。抗原特異的Ｂ細胞の
前記クローン集団を調製及び単離する方法は、本明細書中の実施例においても教示される。サイズまたは密度によって細胞集団を「濃縮する」方法は当技術分野において公知である。例えば、米国特許第５，６２７，０５２号を参照されたい。これらのステップは、抗原特異性による細胞集団の濃縮に加えて使用され得る。
【０３３６】
抗体のヒト化方法
【０３３７】
別の実施形態では、本発明は、抗体の重鎖及び軽鎖をヒト化するための方法を企図する。抗ＣＧＲＰ抗体に適用され得る、抗体の重鎖及び軽鎖をヒト化するための方法は、例えば、Ｏｌｓｏｎらの米国特許出願公開第２００９／００２２６５９号及びＧａｒｃｉａ−Ｍａｒｔｉｎｅｚらの米国特許第７，９３５，３４０号に教示されており、それらのそれぞれの開示はそれらの全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０３３８】
スクリーニングアッセイ
【０３３９】
本発明は、ＣＧＲＰ関連疾患または障害の症状を呈する患者におけるＣＧＲＰに関連する疾患または障害の同定において支援するように設計されたスクリーニングアッセイも含む。例えば、本発明は、対象におけるインスリン不感受性（抵抗性）またはグルコース利用を検出するアッセイを含む。前記対象は、任意選択的に空腹状態または食後状態であり得る。
【０３４０】
本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＣＧＲＰ結合断片を使用して、ＣＧＲＰに関連する疾患または障害の症状を呈する患者から取得した生体試料中のＣＧＲＰの存在を検出する。ＣＧＲＰが存在すること、または同等の生体試料中の疾患前ＣＧＲＰレベルと比較してそのレベルが上昇していることは、ＣＧＲＰに関連する疾患または障害の診断において有益であり得る。
【０３４１】
本発明の別の実施形態は、本明細書に明記するＣＧＲＰ関連疾患または障害の症状を呈する患者におけるＣＧＲＰに関連する疾患または障害の診断を支援するための診断アッセイまたはスクリーニングアッセイを提供し、このアッセイは、翻訳後に改変された抗ＣＧＲＰ抗体またはその結合断片を使用して、前記患者からの生体試料中のＣＧＲＰ発現のレベルをアッセイすることを含む。抗ＣＧＲＰ抗体またはその結合断片を翻訳後に改変して、本開示で上述したような検出可能部分を含み得る。
【０３４２】
生体試料中のＣＧＲＰレベルは、本明細書に記載の改変された抗ＣＧＲＰ抗体またはその結合断片を使用すること、及び標準のＣＧＲＰレベル（例えば、正常な生体試料中のレベル）と生体試料中のＣＧＲＰレベルを比較することで決定され得る。熟練した臨床医であれば、正常な生体試料間に若干の変動が存在することを理解し、結果を評価するときにそれを考慮に入れるであろう。本発明の一実施形態では、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体を使用して、ＣＧＲＰ発現レベルと特定のグルコース代謝の障害のステージとを相関させ得る。例えば、循環ＣＧＲＰのレベルとグルコースレベル及び／またはインスリンレベルを相関させることは、インスリン不感受性、または高血糖のレベルを確立することを可能にするだろう。インスリン感受性は、例えば、その全体において参照により本明細書に組み込まれるＭｕｎｉｙａｐｐａら、（Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ２９４：Ｅ１５−Ｅ２６、２００８）に記載のような、当該分野で公知の方法を使用して対象においてさらに測定され得る。簡潔には、インスリン感受性は、高インスリン血症正常血糖グルコースクランプ、インスリン分泌抑制試験、ＱＵＩＣＫＩ、ＨＯＭＡ、１／インスリン、またはＭａｔｕｓｄａ  ｉｎｄｅｘを含む種々の方法を用いて測定されてよい。臨床的に規定されたステージの糖尿病の発症または前糖尿病に対応するＣＧＲＰ発現の範囲を確立するために、当業者であれば多くの対象においてＣＧＲＰを測定するこ
とができるだろう。
【０３４３】
上記のアッセイは、疾患または障害のモニタリングにおいても有用であり得る。この場合、ＣＧＲＰ関連疾患または障害を有すると考えられる患者からの生体試料において得られたＣＧＲＰレベルを、同一患者から以前に得た生体試料中のＣＧＲＰレベルと比較することにより、前記患者のＣＧＲＰレベルが、例えば処置レジメンによって変化したかどうかを確認する。当業者であれば、患者のＣＧＲＰを様々な時間間隔で測定することにより、グルコースを代謝する個々の能力に対する障害の進行が決定され得ることを理解するであろう。
【０３４４】
本発明は、インビボで画像化する方法にも関し、この方法は、ＣＧＲＰを発現する細胞の存在を検出するものであり、診断有効量の診断組成物を投与することを含む。前記検出は、糖尿病を発症するリスクを有する患者または糖尿病についての有効な処置プロトコルを設計するための計画レジメンの一部として有用であることができる。
【０３４５】
一実施形態では、本発明の方法は、インスリン抵抗性、インスリン分泌の障害または高血糖などのグルコース代謝の障害を処置するために、本明細書に開示の抗ＣＧＲＰ抗体と組み合わせて使用される１つまたは複数の組成物を含む。特に対象となるのは、例えば、スルホニル尿素薬、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤、インスリン、サイトカイン療法、遺伝子療法、及び抗体療法の１つまたは複数、ならびに抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片である。ビグアナイドの例としては：メトホルミン、例えばＧｌｕｃｏｐｈａｇｅ及びＧｌｕｃｏｐｈａｇｅ  ＸＲ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ／Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｆｏｒｔａｍｅｔ（Ｗａｔｓｏｎ）、Ｇｌｕｍｅｔｚａ（Ｂｉｏｖａｉｌ／Ｄｅｐｏｍｅｄ／Ｓａｎｔａｒｕｓ）、及び後発医薬品が挙げられる。スルホニル尿素薬の例としては、グリメピリド、例えばＡｍａｒｙｌ（Ｓａｎｏｆｉ）及び後発医薬品；グリピジド、例えばＧｌｕｃｏｔｒｏｌ及びＧｌｕｃｏｔｒｏｌ  ＸＬ（Ｐｆｉｚｅｒ）及び後発医薬品；グリブリド／グリベンクラミド、例えばＤｉａｂｅｔａ（Ｓａｎｏｆｉ）、Ｍｉｃｒｏｎａｓｅ／Ｇｌｙｎａｓｅ（Ｐｆｉｚｅｒ）及び後発医薬品；メトホルミン＋グリブリド、例えばＧｌｕｃｏｖａｎｃｅ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｓｕｇｕａｎ  Ｍ（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＧｌｉｃｏＲｅｓｔ、ＧｌｕｃｏＮｏｒｍ（Ａｂｉｏｇｅｎ）、Ｂｉ−Ｅｕｇｌｕｃｏｎ（Ｒｏｃｈｅ）及び後発医薬品；メトホルミン＋グリピジド、例えばＭｅｔａｇｌｉｐ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、及び後発医薬品が挙げられる。ＰＰＡＲ−γ作動薬の例としては：ロシグリタゾン、例えばＡｖａｎｄｉａ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ピオグリタゾン、例えばＡｃｔｏｓ（武田薬品工業）及び後発医薬品；ロシグリタゾン＋メトホルミン、例えばＡｖａｎｄａｍｅｔ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ピオグリタゾン＋メトホルミン、例えばＡｃｔｏｐｌｕｓ  Ｍｅｔ  ＸＲ（武田薬品工業）；ピオグリタゾン＋グリメピリド、例えばＡｖａｎｄａｒｙｌ／Ａｖａｇｌｉｍ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ピオグリタゾン＋グリメピリド、例えばＤｕｅｔａｃｔ／Ｔａｎｄｅｍａｃｔ／Ｓｏｎｉａｓ（武田薬品工業）が挙げられる。ＧＬＰ−１受容体作動薬の例としては：エキセナチド、例えばＢｙｅｔｔａ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；リラグルチド、例えばＶｉｃｔｏｚａ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）；エキセナチドＬＡＲ、例えばＢｙｄｕｒｅｏｎ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）が挙げられる。ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶまたはＤＰＰ４）阻害薬の例としては：シタグリプチン、例えばＪａｎｕｖｉａ、Ｍｅｒｃｋ；ビルダグリプチン、例えばＧａｌｖｕｓ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；サクサグリプチン、例えばＯｎｇｌｙｚａ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ／Ａｓｔ���ａＺｅｎｅｃａ）；アログリプチン、例えばＮｅｓｉｎａ
（武田薬品工業／Ｆｕｒｉｅｘ）；リナグリプチン、例えばＴｒａｚｅｎｔａ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ／Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）；テネリグリプチン、例えばＴｅｎｅｌｉａ（田辺三菱製薬／第一三共）；シタグリプチン＋メトホルミン、例えばＪａｎｕｍｅｔ（Ｍｅｒｃｋ）及びＪａｎｕｍｅｔ  ＸＲ（Ｍｅｒｃｋ）；シタグリプチン＋シンバスタチン、例えばＪｕｖｉＳｙｎｃ（Ｍｅｒｃｋ）；ビルダグリプチン＋メトホルミン、例えばＥｕｒｃｒｅａｓ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；サクサグリプチン＋メトホルミン、例えばＫｏｍｂｉｇｌｙｚｅ／Ｋｏｍｂｉｇｌｙｚｅ  ＸＲ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）；アログリプチン＋ピオグリタゾン、例えばＬｉｏｖｅｌ（武田薬品工業／Ｆｕｒｉｅｘ）；リナグリプチン＋メトホルミン、例えばＪｅｎｔａｄｕｅｔｏ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ／Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）が挙げられる。メグリチニドの例としては：レパグリニド、例えばＧｌｕｃｏＮｏｒｍ／Ｐｒａｎｄｉｎ／ＮｏｖｏＮｏｒｍ（第一三共／Ｆｏｕｒｎｉｅｒ  Ｐｈａｒｍａ／Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）；ナテグリニド、例えばＳｔａｒｌｉｘ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｆａｓｔｉｃ（第一三共）、Ｓｔａｒｓｉｓ（アステラス製薬）及び後発医薬品；ミチグリニド、例えばＧｌｕｆａｓｔ（キッセイ薬品工業／武田薬品工業）が挙げられる。α−グルコシダーゼ阻害薬の例としては：アカルボース、例えばＰｒｅｃｏｓｅ／Ｇｌｕｃｏｂａｙ（Ｂａｙｅｒ）及び後発医薬品；ミグリトール、例えばＧｌｙｓｅｔ（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｄｉａｓｔａｂｏｌ（Ｓａｎｏｆｉ）、Ｓｅｉｂｕｌｅ（三和化学研究所）及び後発医薬品；ボグリボース、例えばＢａｓｅｎ（武田薬品工業）及び後発医薬品が挙げられる。胆汁酸吸着剤の例としては：コレセベラム、例えばＣｈｏｌｅｓｔａｇｅｌ（Ｓａｎｏｆｉ）、Ｗｅｌｃｈｏｌ（第一三共）が挙げられる。ドーパミンＤ２受容体作動薬の例としては、ブロモクリプチン、例えばＣｙｃｌｏｓｅｔ（Ｓａｎｔａｒｕｓ）が挙げられる。アミリン類似体の例としては、プラムリンチド、例えばＳｙｍｌｉｎ（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）が挙げられる。超速効型インスリンの例としては：インスリンリスプロ、例えばＨｕｍａｌｏｇ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）；インスリンアスパルト、例えばＮｏｖｏＬｏｇ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、ＮｏｖｏＲａｐｉｄ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、インスリングルリジン、例えばＡｐｉｄｒａ（Ｓａｎｏｆｉ）が挙げられる。レギュラーヒトインスリンの例としては：Ｈｕｍｕｌｉｎ／Ｕｍｕｌｉｎｅ  Ｒａｐｉｄｅ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、Ｎｏｖｏｌｉｎ  Ｒ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、Ａｃｔｒａｐｉｄ（Ｓａｎｏｆｉ）が挙げられる。中間型インスリンの例としては：Ｈｕｍｕｌｉｎ  Ｎ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、Ｎｏｖｏｌｉｎ  Ｎ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）が挙げられる。持効型インスリンとしては：インスリングラルギン、例えばＬａｎｔｕｓ（Ｓａｎｏｆｉ）及びインスリンデテミール、例えばＬｅｖｅｍｉｒ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）が挙げられる。
【０３４６】
本発明は、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体とＣＧＲＰの結合を検出するためのキットをさらに提供する。具体的には、本発明の抗ＣＧＲＰ抗体またはその免疫反応性断片と特異的に反応するＣＧＲＰの存在を検出するために、キットが使用され得る。キットには、基質に結合した抗体、抗原と反応する二次抗体、及び二次抗体と抗原の反応を検出するための試薬も含まれ得る。このようなキットはＥＬＩＳＡキットであってよく、適宜、基質、一次抗体及び二次抗体を含むことができ、検出可能部分、酵素基質、呈色試薬などの任意の他の必要な試薬、例えば本明細書に記載の試薬を含むことができる。診断キットは、免疫ブロットキットの形態であってもよい。診断キットは、化学発光キット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、メリーランド州ゲイサーズバーグ）の形態であってもよい。診断キットは、ランタニド系検出キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、カリフォルニア州サンノゼ）であってもよい。
【０３４７】
熟練した臨床医であれば、生体試料には、血清、血漿、尿、唾液、粘液、胸水、滑液及び髄液が含まれるが、これらに限定されないことを理解するであろう。
【０３４８】
ＣＧＲＰに関連する疾患及び障害の症状を改善または軽減する方法、またはＣＧＲＰに関連する疾患及び障害を処置または予防する方法
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片は、ＣＧＲＰに関連する疾患及び障害の症状の改善または軽減、またはＣＧＲＰに関連する疾患及び障害の処置または予防に有用である。本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片ならびに組み合わせは、ＣＧＲＰに関連する疾患及び障害の処置を必要とする患者に治療有効量で、以下でより詳しく述べる医薬組成物の形で投与することもできる。
【０３４９】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片は、グルコース耐性の障害、インスリン抵抗性（不感受性）、インスリン分泌の障害、脂肪毒性、高血糖、糖尿病の結果としての膵β細胞不全、前糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、または妊娠糖尿病の症状の改善または軽減、またはこれらの処置または予防に有用である。
【０３５０】
例示的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片は、糖尿病を発症するリスクを有する個体、例えば前糖尿病と診断された個体に投与され得る。理論により限定されることを意図せず、インスリン感受性を回復することによって、主題の抗ＣＧＲＰ抗体が糖尿病への進行を遅延させるまたは予防することが可能であり得ると考えられる。
【０３５１】
さらなる例示的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片は、別の処置、例えば、メトホルミン、ピオグリタゾン、スルホニル尿素薬、グリニド、ピオグリタゾンなどの経口チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）、エキセナチドなどのグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）作動薬、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サクサグリプチン、アログリプチン、リナグリプチン、またはテネリグリプチンなどのＤＰＰ４阻害薬、またはメトホルミン及びピオグリタゾン、メトホルミン及びスルホニル尿素薬、メトホルミン及びグリニド、メトホルミン及びＴＺＤ、メトホルミン及びピオグリタゾン、メトホルミン及びＧＬＰ−１作動薬、メトホルミン及びエキセナチド、シタグリプチン及びメトホルミン、シタグリプチン及びシンバスタチン、ビルダグリプチン及びメトホルミン、サクサグリプチン及びメトホルミン、アログリプチン及びピオグリタゾン、またはリナグリプチン及びメトホルミンなどの併用療法を用いた処置の投与では正常血糖を達成しなかった患者に投与され得る。
【０３５２】
さらなる例示的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片は、肥満の予防または処置のため、例えば少なくとも２５の肥満度指数を有する個体に投与される。理論により限定されることを意図せず、主題の抗ＣＧＲＰ抗体は末梢の及び／または肝臓のグルコース利用を増大させ得、それにより代謝率を増加させ、体重減少に寄与すると考えられる。前記抗ＣＧＲＰ抗体は、オルリスタット、リモナバン、シブトラミン、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ、食欲を低下させる３６個のアミノ酸ペプチド）、ＰＹＹ類似体、ＣＢ−１拮抗薬、リモナバン、レプチン、レプチン類似体、またはフェンテルミンなどの別の抗肥満薬と組み合わせて投与されてよい。
【０３５３】
投与
本発明の一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはその断片、ならびに前記抗体または抗体断片の組み合わせは、対象レシピエントの体重１ｋｇあたり約０．１から１００．０ｍｇの濃度で対象に投与される。本発明のある実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＣＧＲＰ結合断片、ならびに前記抗体または抗体断片の組み合わせは、対象レシピエントの体重１ｋｇあたり約０．４ｍｇの濃度で対象に投与される。本発明の別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＣＧＲＰ結合断片、ならびに前記抗体または抗体断片の組み合わせは、２６週間またはそれより短い期間に１回、例えば１６週間またはそれより短い期間に１回、８週間またはそれより短
い期間に１回、４週間またはそれより短い期間に１回、２週間またはそれより短い期間に１回、１週間またはそれより短い期間に１回、または１日またはそれより短い期間に１回で、対象レシピエントに投与される。
【０３５４】
Ｆａｂ断片は、２週間またはそれより短い期間に１回、１週間またはそれより短い期間に１回、１日またはそれより短い期間に１回、１日に複数回、及び／または数時間ごとに投与され得る。本発明の一実施形態では、患者は、１日あたり０．１ｍｇ／ｋｇから４０ｍｇ／ｋｇのＦａｂ断片を、１日１〜６回の分割量で、または所望の結果を得るのに有効な徐放形態で投与される。
【０３５５】
所与の患者に投与する抗体またはＦａｂの濃度は、２つ前の段落にて上記の例示的な投与濃度より高いか低い場合があることが理解されたい。
【０３５６】
当業者であれば、例えば本発明の開示内容及びＧｏｏｄｍａｎ，Ｌ．Ｓ．，Ｇｉｌｍａｎ，Ａ．，Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｌ．Ｌ．，Ｌａｚｏ，Ｊ．Ｓ．，＆Ｐａｒｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．（２００６）．Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ；Ｈｏｗｌａｎｄ，Ｒ．Ｄ．，Ｍｙｃｅｋ，Ｍ．Ｊ．，Ｈａｒｖｅｙ，Ｒ．Ａ．，Ｃｈａｍｐｅ，Ｐ．Ｃ．，＆Ｍｙｃｅｋ，Ｍ．Ｊ．（２００６）．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ’ｓ  ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ；及びＧｏｌａｎ，Ｄ．Ｅ．（２００８）．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇ
ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，［ｅｔｃ．］：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓの教示内容に従った、通常の実験を通じて、投与の有効量及び頻度を決定できるであろう。
【０３５７】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＣＧＲＰ結合断片、ならびに前記抗体または抗体断片の組み合わせは、医薬製剤の形で対象に投与される。
【０３５８】
「医薬組成物」とは、哺乳類への投与に好適な化学組成物または生物学的組成物を指す。このような組成物は、頬、皮膚上、硬膜外、吸引、動脈内、心臓内、脳室内、皮内、筋肉内、鼻腔内、眼内、腹腔内、脊髄内、髄腔内、静脈内、経口、非経口、浣腸または坐剤による直腸内、皮下、真皮下、舌下、経皮、及び経粘膜を含むがこれらに限定されない多数の経路のうちの１つまたは複数を介する投与用として、特異的に製剤化され得る。加えて、投与は注射剤、粉末、液体、ゲル、液滴、または他の投与手段により生じることができる。
【０３５９】
本発明の一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＧＲＰ抗体またはそのＣＧＲＰ結合断片、ならびに前記抗体または抗体断片の組み合わせを、任意選択的に１つまたは複数の活性薬剤と組み合わせて投与してもよい。このような活性薬剤の例としては、鎮痛剤、抗ヒスタミン剤、解熱剤、抗炎症剤、抗生物質製剤、抗ウイルス剤、及び抗サイトカイン剤が挙げられる。活性薬剤には、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＢＡＦＦ、ＣＸＣＬ１３、ＩＰ−１０、ＶＥＧＦ、ＥＰＯ、ＥＧＦ、ＨＲＧ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ヘプシジンのアゴニスト、アンタゴニスト、及び調節物質が含まれ、これらの物質には、これらの物質のいずれかに対して反応する抗体、及びこれらの物質の受容体のいずれかに対して反応する抗体が含まれる。また、活性薬剤には、２−アリールプロピオン酸類、アセクロフェナク、アセメタシン、アセチルサリチル酸（アスピリン）、アルクロフェナク、ア
ルミノプロフェン、アモキシプリン（Ａｍｏｘｉｐｒｉｎ）、アンピロン、アリールアルカン酸類、アザプロパゾン、ベノリラート（Ｂｅｎｏｒｙｌａｔｅ／Ｂｅｎｏｒｉｌａｔｅ）、ベノキサプロフェン、ブロムフェナク、カルプロフェン、セレコキシブ、サリチル酸コリンマグネシウム、クロフェゾン、ＣＯＸ−２阻害剤、デクスイブプロフェン、デクスケトプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、ドロキシカム、エテンザミド、エトドラク、エトリコキシブ、ファイスラミン（Ｆａｉｓｌａｍｉｎｅ）、フェナム酸類、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェナム酸、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イブプロキサム、インドメタシン、インドプロフェン、ケブゾン、ケトプロフェン、ケトロラク、ロルノキシカム、ロキソプロフェン、ルミラコキシブ、サリチル酸マグネシウム、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メタミゾール、サリチル酸メチル、モフェブタゾン、ナブメトン、ナプロキセン、Ｎ−アリールアントラニル酸類、神経成長因子（ＮＧＦ）、オキサメタシン、オキサプロジン、オキシカム類、オキシフェンブタゾン、パレコキシブ、フェナゾン、フェニルブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、ピルプロフェン、プロフェン類、プログルメタシン、ピラゾリジン誘導体、ロフェコキシブ、サリチルサリチル酸、サリチルアミド、サリチル酸類、サブスタンスＰ、スルフィンピラゾン、スリンダク、スプロフェン、テノキシカム、チアプロフェン酸、トルフェナム酸、トルメチン、及びバルデコキシブも含まれるが、これらに限定されない。
【０３６０】
抗ヒスタミン剤は、ヒスタミンの作用に対抗する、または細胞（例えばマスト細胞）からのその放出に対抗する任意の化合物であることができる。抗ヒスタミン剤には、アクリバスチン、アステミゾール、アザタジン、アゼラスチン、ベタタスチン（ｂｅｔａｔａｓｔｉｎｅ）、ブロムフェニラミン、ブクリジン、セチリジン、セチリジン類似体、クロルフェニラミン、クレマスチン、ＣＳ５６０、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デクスクロルフェニラミン、エバスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン、ＨＳＲ６０９、ヒドロキシジン、レボカバスチン、ロラチジン、メトスコポラミン、ミゾラスチン、ノルアステミゾール、フェニンダミン、プロメタジン、ピリラミン、テルフェナジン、及びトラニラストが含まれるが、これらに限定されない。
【０３６１】
抗生物質には、アミカシン、アミノグリコシド類、アモキシシリン、アンピシリン、アンサマイシン類、アルスフェナミン、アジスロマイシン、アズロシリン、アズトレオナム、バシトラシン、カルバセフェム、カルバペネム類、カルベニシリン、セファクロール、セファドロキシル、セファレキシン、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｈｉｎ）、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｉｎ）、セファマンドール、セファゾリン、セフジニル、セフジトレン、セフェピム、セフィキシム、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフォキシチン、セフポドキシム、セフプロジル、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトビプロール、セフトリアキソン、セフロキシム、セファロスポリン類、クロラムフェニコール、シラスタチン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、クロキサシリン、コリスチン、コトリモキサゾール、ダルホプリスチン、デメクロサイクリン、ジクロキサシリン、ジリスロマイシン、ドリペネム、ドキシサイクリン、エノキサシン、エルタペネム、エリスロマイシン、エタンブトール、フルクロキサシリン、ホスホマイシン、フラゾリドン、フシジン酸、ガチフロキサシン、ゲルダナマイシン、ゲンタマイシン、グリコペプチド類、ハービマイシン、イミペネム、イソニアジド、カナマイシン、レボフロキサシン、リンコマイシン、リネゾリド、ロメフロキサシン、ロラカルベフ、マクロライド類、マフェニド、メロペネム、メチシリン、メトロニダゾール、メズロシリン、ミノサイクリン、モノバクタム類、モキシフロキサシン、ムピロシン、ナフシリン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ニトロフラントイン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキサシリン、オキシテトラサイクリン、パロモマイシン、ペニシリン、ペニシリン類、ピペラシリン、プラテンシマイシン、ポリミキシンＢ、ポリペプチド類、プロントジル、ピラジナミド、キノロン類、キヌプリスチン、リファンピシン、リファンピン、ロキシ
スロマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、スルホンアミド類、テイコプラニン、テリスロマイシン、テトラサイクリン、テトラサイクリン類、チカルシリン、チニダゾール、トブラマイシン、トリメトプリム、トリメトプリムスルファメトキサゾール、トロレアンドマイシン、トロバフロキサシン、及びバンコマイシンが含まれるが、これらに限定されない。
【０３６２】
活性薬剤には、アルドステロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、副腎皮質ステロイド剤、コルチゾール、酢酸コルチゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、グルココルチコイド類、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ステロイド剤、及びトリアムシノロンも含まれる。これらの活性薬剤の任意の好適な組み合わせも企図される。
【０３６３】
「医薬賦形剤」または「薬学的に許容され得る賦形剤」とは、通常は液体であり、その中に活性治療薬が製剤化される担体である。本発明の一実施形態では、活性治療薬は、本明細書に記載のヒト化抗体、またはその１つまたは複数の断片である。一般に、賦形剤は、製剤に対していずれの薬理学的活性も与えないが、化学的及び／または生物学的な安定性及び放出特性を提供し得る。例示的な製剤は、例えば、参照により組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１９版，Ｇｒｅｎｎａｒｏ，Ａ．編，１９９５に記載されている。
【０３６４】
本明細書で用いる「薬学的に許容され得る担体」または「賦形剤」は、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒、皮膜剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤を含む。一実施形態では、担体は非経口投与に好適である。あるいは、担体は、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、または舌下投与に適することができる。薬学的に許容され得る担体には、無菌の水溶液または分散剤、及び無菌の注射剤または分散剤を即時調製するための無菌粉末が含まれる。薬剤的活性物質へのかかる媒体及び薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除き、本発明の医薬組成物においてそれを使用することが企図される。補助的な活性化合物も組成物に組み込むことができる。
【０３６５】
一般的に、医薬組成物は、製造及び保管の条件下で無菌及び安定でなければならない。本発明は、医薬組成物が凍結乾燥した形態で存在することを企図する。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高薬物濃度に好適な他の秩序構造の形で製剤化することができる。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、及びその好適な混合物を含有した溶媒または分散媒であることができる。本発明は、医薬組成物中に安定剤を含めることをさらに企図する。例えば、分散剤の場合には必要な粒径を維持することにより、及び界面活性剤を使用することにより、適切な流動性を維持することができる。
【０３６６】
多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどのポロアルコール、または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。モノステアリン酸塩及びゼラチンなどの薬剤を含むことにより、注射用組成物の吸収を持続させることができる。さらには、アルカリ性ポリペプチドを、例えば持続放出ポリマーを含む組成物において、徐放性製剤に製剤化することができる。活性化合物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの、急速な放出から化合物を保護するだろう担体を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、及びポリ乳酸・ポリグリコール酸コポリマー（ＰＬＧ）などの、生物分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を調製するための多くの方法が、当業者に周知である。
【０３６７】
列記されている実施形態の各々について、様々な剤形で化合物を投与することができる。当業者に周知の任意の生物学的に許容可能な剤形及びその組み合わせが企図される。このような剤形の例として、再構成可能な散剤、エリキシル剤、液剤、溶剤、懸濁液、乳剤、散剤、顆粒剤、粒子、微小粒子、分散性顆粒剤、カシェ、吸入剤、エアロゾル吸入剤、パッチ、粒子吸入剤、インプラント、デポーインプラント、注射剤（皮下、筋肉内、静脈内、皮内を含む）、注入液、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６８】
本発明の上記に例示する各種実施形態の説明は、網羅的であるという意図はなく、本発明を精密な開示形態に限定する意図もない。本発明の具体的な実施形態及び実施例は、例示目的で本明細書に記載されているが、種々の同等の修正は、関連する分野の当業者が認識する通り本発明の範囲内で可能である。本明細書で提供する本発明の教示内容を、上記の例以外の他の目的に適用することができる。
【０３６９】
上記の詳細な説明に鑑みて、これらの変更及び他の変更を本発明になすことができる。概して、以下の請求項において、使用される用語は、本明細書及び請求項で開示される具体的な実施形態に本発明を限定するものと解釈すべきではない。したがって、本発明は本開示に限定されるのでなく、本発明の範囲は、以下の請求項によって全面的に決定されるものである。
【０３７０】
本発明は、上記の説明及び実施例に具体的に記載されている方法以外の方法で実施され得る。上記の教示内容を鑑みて、本発明の多くの修正及び変更が可能であり、ゆえにこれらの修正及び変更は、添付の請求項の範囲内である。
【０３７１】
抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団を取得するための方法に関連するある特定の教示が、２００６年５月１９日に出願された米国仮特許出願第６０／８０１，４１２号に開示されており、その開示内容はその全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７２】
ウサギ由来モノクローナル抗体のヒト化、及び抗原結合親和性を維持するための好ましい配列修飾に関連するある特定の教示が、２００８年５月２１日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４４２１号（名称「Ｎｏｖｅｌ  Ｒａｂｂｉｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｒａｂｂｉｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」の国際公開ＷＯ／２００８／１４４７５７号に対応する）に開示されており、その開示内容はその全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７３】
接合可能な酵母を用いた抗体またはその断片の作製に関連するある特定の教示、及び対応する方法が、２００６年５月８日に出願された米国特許出願第１１／４２９，０５３号（米国特許出願公開第２００６／０２７００４５号）に開示されており、その開示内容はその全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７４】
ある特定のＣＧＲＰ抗体ポリヌクレオチド及びポリペプチドが本特許出願に添付の配列表で開示されており、前記配列表の開示内容はその全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７５】
発明の背景技術、詳細な説明、及び実施例で引用される各文書（特許、特許出願、論文、抄録、マニュアル、書籍、またはその他の開示を含む）の全開示は、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７６】
以下の実施例は、主題の発明の作成方法及び使用方法の完全な開示と説明を当業者に提供するために提示されるものであり、本発明とみなされるものの範囲を限定することを意図しない。使用する数字（例えば量、温度、濃度など）に関して正確を期すよう努力しているが、いくらかの実験誤差及び偏差は許容されるべきである。別段の指示がない限り、割合は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度単位であり、圧力は大気圧時または近大気圧時の圧力である。
【０３７７】
実施例
実施例１
【０３７８】
正常なラットをＡｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇ（静脈内経路を介して、クランプ処置の４８時間前に単回投与）を用いて処置し、メトホルミン  ５００ｍｇ／ｋｇ（傾向経路を介して、クランプ処置の２４時間前及び４時間前に２投与）と効果を比較した。この実施例において使用された抗体は、配列番号１３２及び１３４の軽鎖ポリペプチド及び重鎖ポリペプチドからなる。
【０３７９】
血中グルコースを摂食条件下で処置前、メトホルミン及びＡｂ１４を用いた処置の１８時間後、及びＡｂ１４を用いた処置の４２時間後に測定した。これらの条件下では２つの化合物は血中グルコースに影響しなかった。血中グルコースを、絶食条件下で、クランプの直前に測定し、メトホルミンのみが有意な低減効果を有した（１７％）。処置前及びメトホルミンを用いた処置の１８時間後及びＡｂ１４を用いた処置の４２時間後に摂食条件下で測定された血漿インスリンは、２つの化合物によって微かに低減され、ならびにインスリン抵抗性指数ＨＯＭＡ−ＩＲも微かに低減された（有意でない）。
【０３８０】
血漿試料を、クランプ処置の直前、処置の４８時間後にＡｂ１４で処置された動物から取得し、Ａｂ１４濃度を決定した。この分析の結果により、クランプ処置を受けたラットにおいてＡｂ１４の６４２から７９７μｇ／ｍＬの範囲の全身曝露を確認した。
【０３８１】
全身インスリン感受性に及ぼす効果を評価するため、クランプ処置を０．３Ｕ／ｋｇ／時間のインスリン及び３Ｈ−グルコースを用いて実施した。ラットを１８０分間の灌流前に６時間絶食させた。定常状態は、１４０分間の注入後に達し、グルコース注入率（ＧＩＲ）、全身グルコース代謝回転（ＧＴＯ）、肝臓のグルコース産生（ＨＧＰ）、糖分解、及びグリコーゲン合成の平均は、１４０分から１８０分で算出された。クランプの終了時の１時間前に１４−Ｃ−２−デオキシグルコースをボーラス投与して、組織特異的グルコース利用を測定した。想定通り、メトホルミンは、糖分解及びグリコーゲン合成を増加させることによりＧＩＲ（２７％増加）及びＧＴＯ（３０％増加）を有意に増加させた。メトホルミンは、混合外側広筋（ＶＬ、４９％増加  ｐ＜０．０５）、糖分解糖分解系の長指伸筋（ＥＤＬ、１９％増加、ＮＳ）におけるグルコース利用を増加させ、心臓（−３９％、ｐ＜０．０１）におけるグルコース利用を低減させ、これはおそらく心筋の脂肪酸酸化（ｏｘｉｄａｔｉｏｎ１）の刺激のためと思われる。Ａｂ１４は、ＧＩＲ及びＧＴＯ（ＮＳ）を増加させる傾向にあり、ＶＬ（７０％増加、ｐ＜０．０１）、ＥＤＬ（２６％増加、ＮＳ）、及び酸化的ヒラメ筋（２７％増加、ＮＳ）におけるグルコース利用に対してメトホルミンよりも強い効果を有した。また心臓におけるグルコース利用も増加させる傾向にあった（２１％増加、ＮＳ）。メトホルミンと同様、Ａｂ１４は白色脂肪組織（深部及び皮下）におけるグルコース利用率に影響しなかった。
【０３８２】
結論として、Ａｂ１４は、筋肉（ＶＬ）におけるグルコース利用率に有意な効果を伴い、急性処置後の正常なラットにおいて全身グルコース利用を改善する良好な傾向を有した。
【０３８３】
方法
【０３８４】
雄スプラーグドーリーラットを、実験段階の全期間を通して収容ケージ（１５００ｃｍ２×２１ｃｍ）に収容した。動物のケージ敷料は週に１回交換した。順化期間中は３〜４匹の群で収容し、それから手術後クランプ処置まで個々に収容した。１２時間明暗サイクル（午前８：００に消灯）、２２±２℃及び相対湿度５５±１０％。標準飼料（ＲＭ１（Ｅ）８０１４９２、ＳＤＳ）及び水道水は自由摂取とした。
【０３８５】
２週間の順化期間の後、ラットを麻酔（イソフルラン）し、カテーテルを大腿静脈内に実装した。回復期間はクランプ処置の前５〜６日間経過した。
【０３８６】
血中グルコース（ＢＧ）を、午前７：３０から８：００（消灯の直前）の間に尾の先端から血糖測定器を用いて測定し、直後に採血（ＥＤＴＡ上）を実施して血漿インスリンを測定した。下記の表は条件を示す：
【表１】
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【０３８７】
血漿試料を、インスリン測定（ＥＬＩＳＡ法を使用）まで−８０℃に保った。
【０３８８】
血液の試料（約２００μＬ）を、クランプ処置の直前に、第２群各動物について取得し、血漿（約６０μＬ）へと処理し、後でメソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）ＥＬＩＳＡプラットフォームを活用してＡｂ１４濃度を決定するために−８０℃に維持した。
【０３８９】
ビヒクル及びＡｂ１４を、静脈内経路でクランプ処置のＴ０の４８時間前（クランプ２日前の午後０２：００）に投与した。
【０３９０】
メトホルミンを、経口経路でクランプ処置のＴ０の２４時間前及び４時間前（クランプ前日の午後０２：００及びクランプ当日の午前１０：００）に投与した。
【０３９１】
ラットをクランプの開始前に６時間絶食させた（採血の直後、約８時間後で）。
【０３９２】
高インスリン血症−正常血糖クランプを、３Ｈ−グルコースをトレーサーとして使用し、０．３Ｕ／ｋｇ／時間のインスリンを午後２：００（Ｔ０）から午後５：００（Ｔ＋３時間）まで注入して、実施した。グルコース溶液を並行して注入し、注入率を定常状態（約１００＋／−１０ｍｇ／ｄＬ）に達するように調整した。血中グルコースを１０分毎に血糖測定器を使用して尾の先端から測定した。最後の時間（定常状態）に、血液を尾の先端から採取（１０μＬ）し、以下のパラメータを評価した：グルコース注入率；全身グルコース利用率；肝臓のグルコース産生率；全身グリコーゲン及び糖分解率。
【０３９３】
個々の組織のグルコース利用率を決定するため、ラット１匹あたり１００μＣｉのデオキシ−Ｄ−グルコース２−１４Ｃ（１４Ｃ−２−ＤＯＧ）のボーラス注射を、大腿静脈を通してＤ−［３−３Ｈ］−グルコース注入の終了の６０分前に実施した。注射の０、５、１０、１５、２０、２５、３０、４５、及び６０分後に尾静脈の先端から得られた１０μＬ滴の血液において血漿１４Ｃ−２−ＤＯＧ消失及びグルコース濃度を決定した。実験の終了時に、外側広筋（ＶＬ）、長指伸筋（ＥＤＬ）及びヒラメ筋、精巣上体白色脂肪組織及び鼠径部白色脂肪組織、心尖、及び皮膚（陰性対照として）を解剖し、瞬間冷凍して−８０℃に保った。各組織の小片を１Ｍ  ＮａＯＨに溶解し、次いで１Ｍ  ＨＣｌを用いて中和した。Ｄ−２−１４Ｃデオキシグルコース６−リン酸。Ｄ−２−１４Ｃデオキシグルコースを、水酸化亜鉛（０．３Ｍ）溶液または過塩素酸溶液（６％）の使用により、差次的に沈殿させた。両方の放射能含有量を測定してｎｇ／ｍｇ／分として表されるグルコース取り込みを評価した。
【０３９４】
血漿インスリンレベルをクランプの終了時に測定した。
【０３９５】
ＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して統計分析を行った。ヒストグラムを一元配置分散分析とダネットの事後検定を使用して分析し、曲線を二元配置分散分析とボンフェローニの事後検定を使用して分析した。ｐ値が＜０．０５であるときに差異は有意であるとされた。ＮＳ：有意でない。
【０３９６】
結果及び考察
【０３９７】
血中グルコース及びインスリン測定。摂食条件下で、血糖値は、Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇを用いた処置の４２時間後及びメトホルミンメトホルミン  ５００ｍｇ／ｋｇを用いた処置の１８時間後にビヒクル群と比較して影響を受けなかった（図１Ａ）。同時に、Ａｂ１４及びメトホルミンは、血漿インスリンレベルをそれぞれ１１％及び１８％低減させた（有意でない、図１Ｂ）。次いで、インスリン抵抗性指数であるＨＯＭＡ−ＩＲは、同様の様式でビヒクル群と比較して低減された（図１Ｃ）。一方で、６時間の空腹条件下で、メトホルミンは、処置の３０時間後に、血中グルコースを有意に低減（１７％低減）させた（図１Ｄ）。
【０３９８】
全身グルコースフラックス。高インスリン血症正常血糖クランプを、６時間空腹条件下で、Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇの単回投与の４８時間後、及びメトホルミン  ５００ｍｇ／ｋｇの最後の投与の４時間後に実施した。
【０３９９】
メトホルミンは、ビヒクル群と比較して注入の開始６０分後からＧＩＲ展開を有意に増加させた。Ａｂ１４は、注入の大体１３０分後にＧＩＲ展開を増加させる傾向を有した（図２Ａ）。
【０４００】
全ての群において１４０分からグルコース注入率はプラトーに達した。血糖値はこの定常状態の間、全ての群において同様であった（図２Ｂ）。クランプ終了時の血漿インスリンレベルも、全ての群において同様であった（図２Ｃ）。クランプ終了時に達した血漿インスリンレベルは、摂食条件下で測定されたものとほぼ同一であり、つまり高インスリン血症を得るために使用されたインスリンの用量は生理学的であった。
【０４０１】
次いで、グルコースフラックスを、注入の１４０分〜１８０分で算出した（図３）。Ａｂ１４及びメトホルミンは、グルコース注入率をそれぞれ１８％（ＮＳ）及び２７％（ｐ＜０．０５）増加させ、ならびにグルコース代謝回転をそれぞれ１８％（ＮＳ）及び３０％（ｐ＜０．０５）増加させた。肝臓のグルコース産生は、３つの群において超生理学的
用量のインスリンにより完全に阻害された。Ａｂ１４は、糖分解率に影響しなかったが、一方でメトホルミンは糖分解率を４３％（ＮＳ）増加させた。Ａｂ１４は、メトホルミンと同様にグリコーゲン合成率を２３％（ＮＳ）増加させた。
【０４０２】
個々の組織のグルコース利用率もまた、Ｄ−［３−３Ｈ］−グルコース注入の終了の６０分前に導入した、大腿静脈を通すラット１匹あたり１００μＣｉのデオキシ−Ｄ−グルコース２−１４Ｃ（１４Ｃ−２−ＤＯＧ）のボーラス注射を使用して決定した。両方の放射能含有量を測定して、ｎｇ／ｍｇ／分として表されるグルコース取り込みを評価した。図４Ａ〜Ｃに示すように、メトホルミンは、混合外側広筋（ＶＬ、４９％増加  ｐ＜０．０５）、糖分解糖分解系の長指伸筋（ＥＤＬ、１９％増加  ＮＳ）におけるグルコース利用を増加させ、心臓におけるグルコース利用を低減させた（−３９％、ｐ＜０．０１）。これは、心筋の脂肪酸酸化の刺激のためであると考えられるメトホルミンの既知の効果である。Ａｂ１４は、グルコース注入率及び全身グルコース代謝回転（ＮＳ）を増加させる傾向にあり、ＶＬ（７０％増加、ｐ＜０．０１）、ＥＤＬ（２６％増加、ＮＳ）、及び酸化的ヒラメ筋（２７％増加、ＮＳ）におけるグルコース利用対してメトホルミンより強い効果を有した。Ａｂ１４は心臓（２１％増加、ＮＳ）におけるグルコース利用も増加させる傾向にある。メトホルミンと同様、Ａｂ１４は、白色脂肪組織（深部及び皮下）におけるグルコース利用率に影響しなかった。
【０４０３】
Ａｂ１４血漿濃度分析。クランプ処置を受けた第２群の動物についてのＡｂ１４血漿濃度は、６４２から７９７μｇ／ｍＬの範囲であり、最大４８時間までの全身曝露を支持した。
【０４０４】
結論。Ａｂ１４を用いた急性処置は、血漿インスリンを微かに低減させ、グリコーゲン合成及び筋肉グルコース利用を増加させることにより、全身グルコース利用を増加させる傾向にあった。
【０４０５】
実施例２
【０４０６】
この実施例は、インスリン抵抗性のラットモデルインスリン感受性を改善するＡｂ１４の能力を評価する。このモデルでは、ラットに高脂肪（６９％）及び高フルクトース（１４％）食（ＨＦＤ）を６週間にわたって与えて耐糖能障害を誘発し、通常の飼料を与えられた対照動物と比較して有意に増加するようになった血漿インスリンレベル及び微かに増加するようになった糖血（ｇｌｙｃａｅｍｉａ）を伴う。この実施例において使用された抗体は、配列番号１３２及び１３４の軽鎖ポリペプチド及び重鎖ポリペプチドからなる。
【０４０７】
６週間ＨＦＤを与えられたラットを、Ａｂ１４を用いて２週間処置し、２段階の高インスリン血症正常血糖クランプを実施してインスリン感受性を評価した。生理学的用量のインスリンを第一段階中に使用し、薬理学的用量のインスリンを第二段階中に使用して、これら２つの条件下で、それぞれ末梢の及び肝臓のインスリン感受性の効果を評価した。
【０４０８】
概要
【０４０９】
６週間のＨＦＤの後、ラットをその耐糖能障害（経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）中のＡＵＣ算出）及びそのＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性指数）に従って処置群に無作為化した。ＨＦＤラットを、１０、３０及び１００ｍｇ／ｋｇ／週のＡｂ１４を用いて１５日間処置（静脈内、１週空けて２回投与）、または２００ｍｇ／ｋｇ／日のメトホルミンを飲料水にいれて毎日１５日間処置した。
【０４１０】
体重及び食物消費量を処置の１０日まで週に３回測定した。ＨＯＭＡ−ＩＲを１０日目
及び１５日目に測定した。２段階のクランプ（５ｍＵ／ｋｇ／分、次いで１５ｍＵ／ｋｇ／分のインスリン）を１５日目または１６日目に実施した。グルコース代謝回転（ＧＴＯ）を、クランプ処置中に３Ｈ−グルコーストレーサーを注入して評価した。
【０４１１】
本試験の終了時に、通常の飼料を与えられた対照ラットと比較したとき、ＨＦＤラットは体重、空腹時血中グルコース、血漿インスリン、及びＣペプチドにおいて有意な増加を、ならびに２段階の高インスリン血症正常血糖クランプ中にグルコース注入率（ＧＩＲ）において有意な低減を呈することが観察された。
【０４１２】
ＨＦＤ＋ビヒクル対照群と比較したとき、Ａｂ１４の処置は、体重または食物消費量に効果を与えなかったが、一方でメトホルミン群は、両方のパラメータにおいて有意に低減した。
【０４１３】
１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４は、１５日間の処置後（空腹時血糖ならびに血漿インスリンを低減させることによって）ＨＯＭＡ−ＩＲを有意に低減（３８％低減）させた。メトホルミンは、１５日目でＨＯＭＡ−ＩＲに対して有意でない（ｎｓ）低減効果を示した。Ｃ−ペプチドもまた、Ａｂ１４処置によって有意に低減された（１０ｍｇ／ｋｇで３０％低減及び１００ｍｇ／ｋｇで２９％低減）。
【０４１４】
クランプの第一段階では、ＨＦＤビヒクル対照群と比較したとき、Ａｂ１４処置群においてＧＩＲの増加（ｎｓ）が観察され、一方でメトホルミンは、ＧＩＲに対して大きさにおいて相対的に少ない増加効果を有した。クランプの第二段階では、３０または１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４及びメトホルミン処置は、ＧＩＲを有意に増加させた（それぞれ、３６％、２８％、及び２７％増加）。
【０４１５】
クランプ処置の第一段階では、３０ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４は、ＨＦＤビヒクル対照群と比較したときＧＴＯを増加させる傾向（１７％増加、ｎｓ）がある。３０ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４は、両方のクランプ段階中に、糖分解及びグリコーゲン合成に対して微かな増加効果（ｎｓ）を有した。
【０４１６】
肝臓のグルコース産生（ＨＧＰ）は、クランプの第一段階中にＡｂ１４またはメトホルミン処置によって有意ではないが微かに（１１〜２０％）低減した。第二段階では、ＨＧＰは、ＨＦＤビヒクル対照群と比較して、１０ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４によって有意でなく（７８％）低減し、ＨＧＰは３０または１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４及びメトホルミンによって完全に阻害された。
【０４１７】
結論として、ＨＦＤラットモデルにおいてＡｂ１４を用いた静脈内投与後に（主に肝臓の）インスリン抵抗性の改善が観察された。
【０４１８】
方法
【０４１９】
８２匹のスプラーグドーリーラット（試験開始時に８週齢、平均体重約２５０グラム）を実験段階の全期間を通して収容ケージ（９０４ｃｍ２×２３ｃｍ）に収容した。動物のケージ敷料は週に３回交換した。順化、ＨＦＤ及び処置期間中は２〜３匹の群で収容した。それから、ラットを手術後クランプ処置まで個々に収容した。ラットを１２時間明暗サイクル（午前８：００に消灯）、２２±２℃に維持された飼育温度及び相対湿度５５±１０％で収容した。少なくとも５日間の順化期間を、ＨＦＤ摂食の開始前に提供した。順化段階中、標準食（ＲＭ１（Ｅ）８０１４９２、ＳＤＳ）及び水道水を自由摂取とした。
【０４２０】
順化段階の後、実験全期間を通して、１０匹のラットに通常の飼料（ＮＣ）を与え、一
方で７２匹のラットにはＨＦＤ（ＲＤ１、ＳＡＦＥ）を与えた。
【０４２１】
高脂肪食組成は以下の通りである（Ｋｃａｌ％）：タンパク質：１７．３％；炭水化物（フルクトース）：１４％；脂肪（ラード）：６８．７％；コレステロール１．６５％、コール酸０．６５％。
【０４２２】
６週間ＨＦＤ食を与えた後、ラットを６時間絶食させ、グルコース耐性試験を行った。最低ＡＵＣ（約１７％）を表すラットは本試験から除外した。残りのラットを、次いでそのＡＵＣ（グルコース耐性指数）及びＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性指数）に従って異なる群に無作為に割り振った。
【０４２３】
Ａｂ１４（１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇ）及びビヒクルを、週１回静脈内経路を介して（尾静脈を介して、イソフルラン麻酔下）、午前に、処置の１日目及び８日目に投与した。
【０４２４】
メトホルミン（２００ｍｇ／ｋｇ／日）を、クランプ処置まで約２週間にわたり飲料水に入れて投与した。メトホルミンで処置されたラットは、１日目及び８日目にはビヒクルを用いて（尾静脈を介して）処置された。
【０４２５】
検査群は以下の通りである：
【０４２６】
第１群：ＮＣ＋ビヒクル静脈内（ｎ＝１０）
【０４２７】
第２群：ＨＦＤ＋ビヒクル静脈内（ｎ＝１０）
【０４２８】
第３群：ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １０ｍｇ／ｋｇ静脈内（ｎ＝１０）
【０４２９】
第４群：ＨＦＤ＋Ａｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇ静脈内（ｎ＝１０）
【０４３０】
第５群：ＨＦＤ＋Ａｂ１４  １００ｍｇ／ｋｇ静脈内（ｎ＝１０）
【０４３１】
第６群：ＨＦＤ＋メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ（飲料水中）＋ビヒクル静脈内（ｎ＝１０）
【０４３２】
ＨＦＤ食餌の最後の週では、スクリーニングの前に、水消費量を週３回測定して水道水中のメトホルミン希釈を評価した。
【０４３３】
６週間の通常の飼料及びＨＦＤの後、８２匹のラットを午前８：００から午後２：００まで（６時間）絶食させた。グルコースを午後２：００（ｔ０）にボーラス投与（２．５ｇ／ｋｇ）した。血中グルコースを、ｔ−３０、０、１５、３０、６０、９０、１２０、１５０分に（血糖測定器を使用して、尾の先端から採取した一滴の血液中で）測定した。血液を尾の先端から（ＥＤＴＡ上に４０μＬ）ｔ−３０に採取して血漿インスリンを測定した（ＥＬＩＳＡ法）。
【０４３４】
曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。最高ＡＵＣを表す１２匹のＨＦＤ食餌ラットは、耐糖能障害の度合いが低いと考えられ、本試験から除外された。６０匹の残りのラットを均一なＡＵＣ、ＨＯＭＡ−ＩＲ、及び体重に従って６つの群に無作為に割り振った。
【０４３５】
ＨＦＤの最初の６週間、体重を週１回測定した。処置の最初の１０日間、体重を週３回測定した。食物消費量は、４８時間または７２時間にわたって、処置の直前及び手術処置
（１１日目）までの処置期間中に週３回測定した。
【０４３６】
処置の開始（ＯＧＴＴ当日）前及び処置の１０日目に、全てのラットを午前８：００から絶食させた。午後１：３０に、血液を尾の先端から採取した（ＥＤＴＡ上に４０μＬ）。血液グルコース（血糖測定器を使用）及び血漿インスリン（ＥＬＩＳＡ法）を測定した。
【０４３７】
１１日目に、ラットを麻酔（イソフルラン）し、大腿静脈にカテーテルを埋め込んだ。回復期間はクランプ処置の前に４日間経過した。
【０４３８】
クランプ当日の朝、ラットを６時間（午前８：００から午後２：００まで）絶食させた。血液の試料（約１６０μＬ、ＥＤＴＡ上）を、クランプ処置の直前（約午後１：００ｐｍ）に、第３、４、５、６群の各マウスの尾の先端から採取し、血漿（約６０μＬ）へと処理し、Ａｂ１４濃度の評価まで−８０℃で維持した。対照及びメトホルミン群は抗体濃度について分析していないが、第１、２、７群のラットから同様の量の血液を採取（及び破棄）した。
【０４３９】
１５日目または１６日目に、２段階高インスリン血症−正常血糖クランプを、３Ｈ−グルコースをトレーサーとして使用し（通常の飼料群を除く）、５ｍＵ／ｋｇ／分のインスリンを午後２：００（Ｔ０）から午後４：００（Ｔ＋２ｈ）まで注入し、その後１５ｍＵ／ｋｇ／分のインスリンを午後４：００から午後５：３０（ｔ＋３．５ｈ）まで注入して実施した。グルコース溶液を並行して注入し、注入率は定常状態（１００＋／−１０ｍｇ／ｄＬ）に達するように調節された。血中グルコースを１０分毎に血糖測定器を使用して尾の先端から測定した。血液を各ステップの定常状態の間に尾の先端から定期的に採取した（１０μＬ）。
【０４４０】
以下のパラメータを評価した：グルコース注入率（全群）；全身グルコース利用率（通常の飼料群以外）；肝臓のグルコース産生率（通常の飼料群以外）；全身グリコーゲン及び糖分解率（通常の飼料群以外）。
【０４４１】
さらには、通常の飼料群を除いて、クランプ実験の終了の１時間前に、１４Ｃ−２ＤＯＧのボーラス注射を実施し、以下の組織の試料をクランプの終了時に採取し、さらなる評価のために保持した：
【０４４２】
外側広筋（ＶＬ）；長指伸筋（ＥＤＬ）；ヒラメ筋  心尖；精巣上体白色脂肪組織  鼠径部白色脂肪組織  皮膚（負の対照）。
【０４４３】
血漿インスリン及びＣペプチドレベルを、注入開始の直前（約Ｔ−３０）、段階１の定常状態の終了時（Ｔ２時間）、及び段階２の定常状態の終わり（Ｔ３．５時間）で測定した。これについては、尾の先端からの採血を実施した（約１００μＬ、ＥＤＴＡ上）。
【０４４４】
統計解析を、ＧｒａｐｈＰａｄ  ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して実施した。曲線を二元配置分散分析とボンフェローニの事後検定を使用して分析した。ヒストグラムを、ｔ検定を使用して分析してＨＦＤ＋ビヒクル対照群及び通常の飼料＋ビヒクル対照群を比較した。ヒストグラムはＡＮＯＶＡを使用して分析した。差異は、ｐ値が＜０．０５であった場合に有意であると考えられた。ＮＳ：有意でない。
【０４４５】
結果
【０４４６】
動物モデル及びスクリーニング。８週齢のラットに、フルクトースが濃縮された高脂肪
食（ＨＦＤ、６９％脂肪及び１６％フルクトース）を処置の開始前に７週間与えた。体重は、ＨＦＤ群において５２２±５ｇであり、対して通常の飼料を与えられた対照群では４４８±１３ｇであった。次いで、体重の増加が１６％あった（ＨＦＤ下で４２日目のｔ検定でｐ＜０．００１（図５））。７週間後、体重は、ＨＦＤ集団において１８７±３ｇ増加し、対して通常の飼料を与えられた対照群において１５８±９ｇ増加した（４２日目のｔ検定でｐ＜０．００１、図６）。
【０４４７】
ＨＦＤの７週目では、経口ブドウ糖負荷試験を実施してＨＦＤ集団の耐糖能障害を評価した。血糖値はＨＦＤ集団においてグルコース投与の１５０分後まで高いままであった（図示されず）。Ｔ０に対して算出されたＡＵＣは、対照飼料を与えられたラットと比較してＨＦＤラットにおいて有意に高かった（９％）（図示されず）。
【０４４８】
ＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性指数）を、ＯＧＴＴのｔ−３０で算出した。高ＡＵＣ及び高ＨＯＭＡ−ＩＲを表すラットを６つの群に無作為に割り振った。対照飼料を与えられた群と比較して、ＨＦＤ群においてＡＵＣは高く（約９％、図示されず）、ならびにＨＯＭＡ−ＩＲも高く（３４％、図示されず）、体重も高かった（約１７％、ｐ＜０．００１、図７）。
【０４４９】
体重及び食物摂取量経過観察。体重を処置の１０日間経過観察した。Ａｂ１４処置は体重に効果を有さなかった。対照飼料を与えられたラットの体重は、ＨＦＤビヒクルラットよりも有意に低いままだった（図７）。処置の２日目以降からの体重増加を、Ａｂ１４（３０ｍｇ／ｋｇ）は微かに低減させ（ｎｓ）、メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇは有意に低減させた。
【０４５０】
食物消費量は、想定通り対照飼料を与えられた群よりもＨＦＤビヒクル群において低かった。Ａｂ１４処置は、経過観察した食物摂取量（図８Ａ）または累積食物摂取量（図８Ｂ、図示されず）に効果を有さなかった。メトホルミンは、累積食物消費量を有意に低減（２５％低減）させた。手術処置の前の動物の絶食により、９日目と１０日目の間の食物消費量測定を中断した。
【０４５１】
生化学的パラメータ。対照飼料を与えられた群と比較したとき、ＨＦＤビヒクル群における空腹時血糖は、０日目、１０日目、１５日目にそれぞれ５％（ｎｓ）、１１％（ｎｓ）、及び２０％（ｐ＜０．００１）増加した。Ａｂ１４またはメトホルミンを用いた処置は１０日目には効果を有さなかった。１００ｍｇ／ｋｇでＡｂ１４を用いた処置は、ＨＦＤビヒクル群と比較したとき、１５日目の空腹時血糖に有意な低減効果を有した（図９）。
【０４５２】
空腹時血漿インスリンは、対照飼料を与えられた群と比較してＨＦＤビヒクル群において０日目、１０日目、１５日目でそれぞれ３３％（ｎｓ）、４９％（ｎｓ）及び６７％（ｐ＜０．０１）増加した。Ａｂ１４処置は１０日目で効果を有さなかったが、メトホルミンは血漿インスリンを３７％（ｎｓ）低減させた。１０、３０または１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４処置は、１５日間の処置後、血漿インスリンをそれぞれ２６％、１６％、または１８％（ｎｓ）低減させ、メトホルミンは血漿インスリンを１１％低減させた（ｎｓ、図１０）。
【０４５３】
想定通り、１５日目の血漿Ｃ−ペプチドレベルプロファイルは、血漿インスリンレベルに類似したが、効果はより顕著で変動が少なかった。Ｃ−ペプチドは、対照飼料を与えられた群と比較してＨＦＤビヒクル群において有意に増加（６７％増加）した。１０、３０または１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４処置は、Ｃ−ペプチドレベルをそれぞれ３０％（ｐ＜０．０５）、２３％（ｎｓ）、及び２９％（ｐ＜０．０５）低減させ、メトホルミンは
Ｃ−ペプチドを１３％（ｎｓ）低減させた（図１１、下方左パネル）。
【０４５４】
インスリン抵抗性の指数であるＨＯＭＡ−ＩＲは、対照飼料を与えられた群と比較してＨＦＤビヒクル群において０日目に３６％（ｎｓ）、１０日目に４２％（ｎｓ）及び１５日目に９８％（ｐ＜０．０１）増加した。ＨＦＤビヒクルと比較して、Ａｂ１４は１０日間の処置後に効果を有さなかったが、メトホルミンは３６％の低減効果（ｎｓ）を有した。１５日間の処置後、１０、３０または１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４処置は、ＨＯＭＡ−ＩＲをそれぞれ３３％（ｎｓ）、１７％（ｎｓ）及び３８％（ｐ＜０．０５）低減させ、メトホルミンはＨＯＭＡ−ＩＲを１８％低減させる傾向にあった（ｎｓ、図１２）。
【０４５５】
高インスリンクランプ。図１３は、２段階高インスリンクランプ中の継時的なグルコース注入率（ＧＩＲ）を示す。第一段階（５ｍＵ／ｋｇ／分のインスリン）では、肝臓のグルコース産生（ＨＧＰ）は不完全に阻害され、肝臓のグルコース産生が阻害されたとき第二段階（１５ｍＵ／ｋｇ／分のインスリン）中よりもグルコース注入率（ＧＩＲ）は低かった。
【０４５６】
対照飼料を与えられた群のＧＩＲは、クランプの両段階でＨＦＤビヒクル群よりも高く、ＨＦＤラットが８〜９週間の食餌後にインスリン抵抗性表現型を有したことを確かにした。メトホルミンは、第一クランプ段階中はＧＩＲに効果を有さなかったが、ＧＩＲプラトーはＡｂ１４処置群の方が微かに高かった（ｎｓ）。全ての処置群において、第二クランプ段階中にＨＦＤビヒクル群よりも高いＧＩＲプラトーが観察され、メトホルミン及び３０または１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４については有意差が観察された（図１３）。統計学的有意性は、二元配置分散分析とボンフェローニの事後検定をＨＦＤに対して使用して評価された。第一クランプ段階では、ＧＩＲは、５０分及び６０分の時点で通常の飼料対照、ビヒクル処置ラットについてのみ有意に異なった（それぞれｐ＜０．０１及びｐ＜０．０５）。第二クランプ段階では、ＧＩＲは、３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ１４で処置されたＨＦＤラットについて１６０〜２１０分の時点で（１６０分の時点でｐ＜０．０５及び１７０〜２１０分の時点でｐ＜０．０１）、１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ１４で処置されたＨＦＤラットについて１７０〜２１０分の時点で（１９０分時点でｐ＜０．０１及び１７０〜１８０分及び２００〜２１０分の時点についてはｐ＜０．０５）、メトホルミンで処置されたＨＦＤラットについて１７０〜２１０分の時点で（１８０分及び１９０分時点でｐ＜０．０１、及び１７０分及び２００〜２１０分の時点でｐ＜０．０５）有意に異なった。
【０４５７】
ＧＩＲ平均を各プラトーについて算出した（図１４）。ＧＩＲは、対照飼料を与えられた群と比較してＨＦＤビヒクル群において有意に低減し、第一段階及び第二段階中にそれぞれ３２％（ｐ＜０．０５）及び１７％（ｐ＜０．０１）低減した。１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ１４は、ＧＩＲを、第一段階中に増加させ（ｎｓ）（それぞれ２６％、３７％、及び２９％増加）、メトホルミンも１１％増加させる効果（ｎｓ）を有した。第二段階では、ＨＦＤビヒクル群と比較して全ての処置がＧＩＲを増加させた：１０、３０、または１００ｍｇ／ｋｇのＡｂ１４は、それぞれ１９％（ｎｓ）、３６％（ｐ＜０．０１）、及び２８％（ｐ＜０．０５）、メトホルミンは２７％（ｐ＜０．０５）増加させた。
【０４５８】
２つのクランプ段階中の血中グルコース平均は、想定通り正常血糖状態に対応した。第一段階中は対照飼料を与えられた群とＨＦＤビヒクル群との間に有意差があったが、糖血は正常な範囲のままであり、生物学的な状態は両群において同一であった（図１４）。
【０４５９】
血漿インスリンをクランプ処置中に測定した。想定通り、インスリンレベルは２つのクランプ段階の終了時に全群間で同様であった。第一クランプ段階では、インスリン濃度はおおよそ１４０μＵ／ｍＬであり、摂食状態で予期される生理学的なレベルであった。第
二クランプ段階後のインスリン濃度はおおよそ４９０μＵ／ｍＬであり、それは薬理学的なレベルであった（図１１、上方のパネル）。
【０４６０】
Ｃ−ペプチドも、クランプ処置中に測定した（図１１、下方右パネル）。正常血糖状態中は、β細胞によるインスリン分泌が阻害され、血漿Ｃ−ペプチドレベルはそれゆえ低く、解釈可能ではなかった。
【０４６１】
３Ｈ−グルコースを、全てのＨＦＤ群においてクランプ処置中にインスリンと共に注入した（対照飼料を与えられた群では行わなかった）。全身グルコースフラックスを次いで算出した。第一クランプ段階では、グルコース代謝回転（ＧＴＯ）は全群において同様であったが、３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ１４は、ＨＦＤビヒクル群と比較してＧＴＯを増加させる傾向にあった（１７％、ｎｓ）。糖分解及びグリコーゲン合成は、３０ｍｇ／ｋｇのＡｂ１４で処置した後、それぞれ１５％及び１６％増加する傾向にあった（ｎｓ、図１５）。
【０４６２】
第二クランプ段階では、ＧＴＯ、糖分解、及びグリコーゲン合成は全ての処置群において同様であり、ＨＦＤビヒクル群と比較してＡｂ１４  ３０ｍｇ／ｋｇで処置された群においてグリコーゲン合成の微かな増加（１０％、ｎｓ）が観察された。３０ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４（ｐ＜０．０５）及び１００ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４（ｎｓ）はＨＧＰを完全に阻害し、メトホルミンもＨＧＰを完全に阻害した（ｎｓ）。１０ｍｇ／ｋｇでのＡｂ１４処置はＨＧＰを７８％低減させた（ｎｓ、図１６）。
【０４６３】
結論。Ａｂ１４を用いた処置は、ＨＦＤラットモデルにおいて空腹時血糖ならびに血症インスリンレベルを低減させることによりＨＯＭＡ−ＩＲを低減させた。さらには、肝臓インスリン感受性は、Ａｂ１４によって顕著に改善され、一方で全身末梢のインスリン感受性に及ぼす効果は明確には観察されなかった。想定通り、メトホルミン処置も肝臓インスリン感受性を改善した。
【０４６４】
実施例３
【０４６５】
この実施例は、Ａｂ１４が、糖尿病のラットモデル、Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットのモデルにおけるグルコース代謝及び血糖コントロールに与える効果を評価する。Ａｂ１４の慢性投与がグルコース制御に与える効果を、前糖尿病性の（高インスリン血症、正常血糖）状態から明らかな糖尿病の（低インスリン血症、高血糖）状態へと進行しているＺＤＦラットにおいて評価した。これらの動物は、生後７週までに、高血糖をほとんどから全く伴わないが、彼らが抱えるインスリン抵抗性を補うための顕著な高インスリン血症によって特徴付けられる、前糖尿病を発症している。これは、生後１０〜１２週までに、膵β細胞不全の結果としての低インスリン血症及び顕著な高血糖によって特徴づけられる明らかな糖尿病へと急速に進行する。この実施例において使用される抗体は、配列番号１３２及び１３４の軽鎖ポリペプチド及び重鎖ポリペプチドからなる。
【０４６６】
方法
【０４６７】
８１匹のＺＤＦ  ｆａ／ｆａラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、フランス）及び１０匹の除脂肪ＺＤＦ？／＋ラット（対照）を１〜２匹の群で通常の１２時間照明サイクル（午後８時に消灯）、２２±２℃及び相対湿度５０±１０％の、換気されて充実した（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）収容ケージに収容した。ラットは、到着時７週齢であり、試験開始の前１週間にわたって順化された。ラットに、ＺＤＦラット用の標準食（Ｐｕｒｉｎａ５００８、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を与え、水道水は自由摂取とした。全ての動物を、本試験の全期間を通して、体調不良の任意のサイン、処置に対
する副作用、または罹患性について少なくとも１日１回モニターした。
【０４６８】
８週齢の雄ＺＤＦ  ｆａ／ｆａラットは、高インスリン血症で軽度の糖尿病であった。この状態での血中グルコース及びインスリンレベルが多様であるため、ＺＤＦラットをそのＨＯＭＡ−ＩＲに従ってスクリーニングし、選択した。
【０４６９】
Ａｂ１４で処置された群については、抗体を週１回、１日目、８日目、１５日目、及び２２日目に尾静脈を介して、２つの異なる用量で、つまり２０ｍｇ／ｋｇ／週（第３群及び第７群）または６０ｍｇ／ｋｇ／週（第４群及び第８群）で投与した（静脈内、５ｍＬ／ｋｇ）。全ての他の群は、週１回ビヒクル１で処置した（静脈内、５ｍＬ／ｋｇ）。静脈内処置は、イソフルラン麻酔下で１日目、８日目、１５日目、及び２２日目の朝に実施した。投与の量を、最近の体重に従って個々に適用した。
【０４７０】
メトホルミン（Ｍｅｔ）及びピオグリタゾン（ＰＩＯ）を２８日間にわたって１日１回、経口経路（経口、５ｍＬ／ｋｇ）を介して午前８：００から１０：００の間に投与し、これは、ＯＧＴＴの当日または静脈内処置の後を例外とし、いくつかの経口処置は午前１０：００以降に完了された。第５、７、及び８群は、２００ｍｇ／ｋｇ／日のメトホルミンで処置し、第６群は１０ｍｇ／ｋｇ／日のピオグリタゾンで処置した。全ての他の群は、毎日ビヒクル２（経口、５ｍＬ／ｋｇ）で２８日間処置した。最近の体重を使用して、各群における平均投与量を算出した。
【０４７１】
検査群を以下の表にまとめる。Ｍｅｔ：メトホルミン。
【表２】
2020158525.tif 000004
【０４７２】
１週間の順化期間の後、全てのラットの体重をはかり、６時間絶食させた（午前約８：００から午後約２：００）。午後約２：００に、血液を尾の先端から採取した（約１５０μＬ、ＥＤＴＡ）。血中グルコース（血糖測定器）及び血漿インスリン（ＥＬＩＳＡ）を測定し、ＨＯＭＡ−ＩＲ（インスリン抵抗性指数）を算出した。ＨＯＭＡ−ＩＲ極値を表
す１１匹のＺＤＦ  ｆａ／ｆａラットを、本試験から除外したが、本試験終了時の血漿採取のために２８日間収容し続けた。次いで、７０匹の残りのラットを、そのＨＯＭＡ−ＩＲ及び体重に従って７つの処置群に無作為に割り振った。除脂肪ラットを全て第１群に保持し、ビヒクルのみで処置した。
【０４７３】
４週間の処置中は体重を週２回測定した。
【０４７４】
食物消費量をスクリーニング手順の直前に測定し、それから処置の最初の３週間は、週２回２４時間にわたって測定した。食物消費量はＯＧＴＴの週（第４週）には週１回測定した。
【０４７５】
絶食（０日目の午前８：００から午後２：００までの６時間、及び１２日目、１９日目、及び２６日目の午後約６：００から午前約８：００まで一晩）を各採血の前に実施した。血液を尾の先端から、０日目の午後約２：００（スクリーニング前、１５０μＬ、カリウムＥＤＴＡ）、及び１２日目（１１０μＬ、カリウムＥＤＴＡ）、１９日目（１５０μＬ、カリウムＥＤＴＡ）及び２６日目（１１０μＬ、カリウムＥＤＴＡ）の投薬の前の午前約８：００に採取した。
【０４７６】
空腹時血糖（血糖測定器）を０日目、１２日目、１９日目、及び２６日目に測定した。空腹時血漿インスリン、ペプチド−Ｃ（ＥＬＩＳＡ法）、遊離脂肪酸、トリグリセリド、総コレステロール（比色法）、及びＨＤＬ−コレステロール（リンタングステン酸塩沈殿、比色法）を０日目、及び１２日目、１９日目及び２６日目の投薬の前に測定した。非ＨＤＬ−コレステロールを総コレステロールからＨＤＬ−コレステロールを引いて算出した。フルクトサミンを０日目、１９日目及び２８日目に測定した。ＨｂＡ１ｃ（ＤＣＡ２０００）を０日目及び２８日目に測定した。
【０４７７】
経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を以下のように実施した。２５日目に、ラットを午後約６：００に絶食させ、経口ブドウ糖負荷試験を翌日（２６日目）に実施した。午前約８：００（Ｔ−６０）に、採血（１１０μＬ、ＥＤＴＡ）を生化学的なパラメータ測定のために実施した。１時間後（午前約９：００）に、経口グルコースをボーラス投与した（１．５ｇ／ｋｇ）（Ｔ０）。血中グルコースを（血糖測定器または高糖血の場合には比色法）、Ｔ−６０、Ｔ０、Ｔ１５、Ｔ３０、Ｔ６０、Ｔ９０、Ｔ１２０、及びＴ１８０分に測定した。曲線下面積（ＡＵＣ）を、Ｔ０で測定された血中グルコース値に基づいて算出した。血漿インスリン及びＣ−ペプチドをＴ−６０、Ｔ１５（約４０μＬの血液、ＥＤＴＡ）、及びＴ３０分（約４０μＬの血液、ＥＤＴＡ）に測定した（ＥＬＩＳＡ法）。
【０４７８】
２時間の食餌制限（午前８：００から午前１０：００）の後、本試験からの８０匹のラットをイソフルランで２８日目に麻酔した。Ａｂ１４の血漿濃度を決定するために血液を採取した（腹静脈から約３０００μＬ、Ｋ２−ＥＤＴＡ上）。血漿（約２００μＬの３アリコート）を検査まで−８０℃に保った。次いで膵臓組織を切除した。ラットを腹静脈及び大動脈の切開により安楽死させた。
【０４７９】
各膵臓を、２つの部分（縦方向カット）に分割した。一片を病理組織学的処理のために１０％ホルマリン溶液中で固定した。膵臓の他片は、瞬間凍結してインスリン及びプロインスリンレベルの決定のために−８０℃に保った。
【０４８０】
本試験から除外された１１匹のＺＤＦ  ｆａ／ｆａラットを２８日間収容した後で屠殺した。ラットはイソフルランで麻酔された。血液を腹静脈から採取した（カリウムＥＤＴＡ上で最大容量）。血漿試料（各１ｍｌの２アリコート）をさらなる検査のために凍結した。ラットを腹静脈及び大動脈の切開により安楽死させた。
【０４８１】
各膵臓試料を酸性緩衝液中で均質化し、インスリン及びプロインスリン含有率をＥＬＩＳＡキットを使用して以下の群において測定した。
【０４８２】
第１群：除脂肪ラット＋ビヒクル（ｎ＝１０）
【０４８３】
第２群：ＺＤＦラット＋ビヒクル（ｎ＝１０）
【０４８４】
第４群：ＺＤＦラット＋Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週（ｎ＝１０）
【０４８５】
第５群：ＺＤＦラット＋メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ／日（ｎ＝１０）
【０４８６】
第８群：ＺＤＦラット＋Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ／日（ｎ＝１０）
【０４８７】
各膵臓試料を、最大２４〜４８時間の間、４％ホルマリン中で固定した；ホルマリンの容量は、適切な固定を確かにするために試料の容量よりも５〜１０倍高くした。４８時間後、試料を７０％エタノールに入れた。試料を次いで、以下の群における組織学的処理のためにパラフィンに含めた。
【０４８８】
第１群：除脂肪ラット＋ビヒクル（ｎ＝１０）
【０４８９】
第２群：ＺＤＦラット＋ビヒクル（ｎ＝１０）
【０４９０】
第４群：ＺＤＦラット＋Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週（ｎ＝１０）
【０４９１】
第５群：ＺＤＦラット＋メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ／日（ｎ＝１０）
【０４９２】
第８群：ＺＤＦラット＋Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ／週＋メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ／日（ｎ＝１０）
【０４９３】
ランゲルハンス島を描写した後、表面及びインスリン標識の強度を、標識領域（茶色）及び非標識（青）領域の画像解析により定量化した。
【０４９４】
ビヒクルＺＤＦラット及び除脂肪ラットの平均を、フィッシャー検定が変数における有意差を示さなかったときに、スチューデント検定を使用して比較した。そうでない場合、ノンパラメトリックなマン・ホイットニー検定を使用した。
【０４９５】
処置されたＺＤＦラットの平均を一元配置分散分析＋ダネットの事後検定を使用してビヒクルＺＤＦラットと比較した。バートレットの検定が変数における有意差を示した場合には、ノンパラメトリックなクラスカル−ウォリス＋ダンの事後検定を使用した。
【０４９６】
Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ単独の平均を、一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定を使用して、メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ単独またはＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇとの併用と比較した。
【０４９７】
Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ単独の平均を、一元配置分散分析＋ニューマン−コイルス事後検定を使用して、メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ単独またはＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇとの併用と比較した。
【０４９８】
曲線を、二元配置分散分析＋ボンフェローニの事後検定を使用して分析した。
【０４９９】
ラットは全てまたはほぼ全てパラメータが外れ値である場合に除外された。この結果、４匹のラットが除外され、それぞれ異なる群のラットだった。
【０５００】
結果
【０５０１】
８週齢のＺＤＦラットでは想定通り、ＨＯＭＡ−ＩＲは除脂肪ラットと比較して強く増加した（約１１１対３．５、図１８Ａ）。ＺＤＦラットは軽度に高血糖（約１８０対１１３ｍｇ／ｄＬ、図１８Ｂ）であり、高インスリン血症（約２５０対１２．６μＵ／ｍＬ、図１８Ｃ）であった。体重はＺＤＦラットにおいて微かに増加した（図１８Ｄ）。
【０５０２】
除脂肪ラットと比較して、ＺＤＦラットの体重は全処置期間にわたって高いままであった（図１９Ａ）。一方で、体重増加は除脂肪ラットとＺＤＦラット間で同様であった（図１９Ｂ）。
【０５０３】
ピオグリタゾンはＺＤＦビヒクルラットと比較して処置の８日目から体重を有意に増加させ、体重増加は処置の終了時には３倍高かった（図１９Ａ及びＢ）。全ての他の薬物処置は、ビヒクルＺＤＦラットと比較して体重に有意な効果を有さなかった。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇの併用は、処置の２２日目から体重増加を有意に増加させた（図１９Ｂ）。
【０５０４】
食物摂取量は、除脂肪ラットと比較してビヒクルＺＤＦラットにおいて約２倍増加した（１３日目に有意）。ピオグリタゾンで処置されたラットは、ＺＤＦビヒクルラットと比較して食物消費量がより高い傾向を示した（１５日目、２０日目及び２２日目に有意、図２０Ａ）。累積食物摂取量は除脂肪群と比較してビヒクルＺＤＦ群において９４％（ｐ＜０．０１）、及びビヒクルＺＤＦ群と比較してピオグリタゾン群において１４％（ＮＳ、図２０Ｂ）増加した。他の処置は、ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、食物摂取量に効果を有さなかった。
【０５０５】
空腹時血糖は、６時間絶食後または一晩絶食後のいずれにおいても除脂肪ラットでは２６日間の処置中正常な範囲のままであった（図２１Ａ）。これは正常なインスリンレベルと相関した（図２１Ｂ）。ビヒクルＺＤＦラットでは、一晩絶食時の血糖は１２日目（１０週齢）に３６２±３２ｍｇ／ｄＬに達し、処置の終了時まで除脂肪ラットより有意に高いままであった（図２１Ａ）。これは１２日目、１９日目、及び２６日目に測定された、血漿インスリンレベルの低減（除脂肪ラットに対して４９．２±６．７、４１．２±４．８、及び３６．６±２．７μＵ／ｍＬ−ｐ＜０．００１、図２１Ｂ）及び血漿Ｃ−ペプチドレベルの低減（除脂肪ラットに対して、２８１３±２４９、２４７２±１９５、２１５６±１６５ｐＭ−＜ｐ＜０．００１）と相関した（図２１Ｄ）。除脂肪ラット及びビヒクルＺＤＦラットにおけるＨＯＭＡ−ＩＲの展開は、血中グルコース及び血漿インスリンレベルにおける変化を反映した（図２１Ｃ）。
【０５０６】
ピオグリタゾンは、１２日間の処置から一晩絶食時の血糖値を正常なレベルへと有意に低減させた（ｐ＜０．００１、図２１Ａ）。両方の用量でＡｂ１４は血中グルコースを１２日、１９日または２６日間の処置後に約１５％低減させた（ｎ．ｓ、図２１Ａ）。Ａｂ１４と比較して、メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇは、１２日目に同様の効果を有したが、この効果は１９日目及び２６日目にはされなかった。ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、１２日目に血中グルコースを微かに低減させ（１２％、ｎｓ）、１９日目及び２６日目には効果を示さなかった（図２１Ａ）。対照的に、メトホルミンとＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇの併用は１２日目
に血糖値を有意に低下させた（３８％、ｐ＜０．０１対ビヒクルで処置されたＺＤＦラット）。統計学的に有意ではないが、血液減少は１９日目及び２６日目にまだ観察された（それぞれ２２％及び２７％、図２１Ａ）。
【０５０７】
ピオグリタゾンは、ビヒクルＺＤＦラットと比較して１２日目、１９日目、及び２６日目に血漿インスリン及びＣ−ペプチドレベルに効果を示さないために、インスリン分泌に保護的効果を有さないものと思われる（図２１Ｂ及びＤ）。ゆえに、血糖値の低下は、ピオグリタゾンのインスリン感作効果に関し、ピオグリタゾンは、ビヒクルＺＤＦラットと比較してＨＯＭＡ−ＩＲを１２日目、１９日目及び２６日目にそれぞれ６７％、６２％及び５４％低下させた。（図２１Ｃ）。
【０５０８】
ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇは、１２日目、１９日目及び２６日目の血漿インスリン及びＣ−ペプチドレベル、ならびにＨＯＭＡ−ＩＲを変化させなかった（図２１Ｂ〜Ｄ）。一方で、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは１２日目、１９日目及び２６日目に血漿インスリンレベルをそれぞれ７４％、２１％及び１９％増加させた（ｎｓ対ビヒクルＺＤＦラット、図２１Ｂ）。
【０５０９】
Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは、血漿Ｃ−ペプチドレベルを１２日目に１０％（ｎｓ）増加させ、１９日目及び２６日目には効果を有さなかった（図２１Ｄ）。
【０５１０】
ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、メトホルミンは、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿インスリンレベルをそれぞれ７９％、５５％及び４８％増加させた（ｎｓ、図２１Ｂ）。メトホルミンは、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿Ｃ−ペプチドレベルをそれぞれ２３％、２１％、及び９％増加させた（ＮＳ対ビヒクルで処置されたＺＤＦラット、図２１Ｄ）。
【０５１１】
ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿インスリンレベルを倍増させた（ＮＳ、図２１Ｂ）。Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿Ｃ−ペプチドレベルをそれぞれ２１％、２３％及び２５％増加させた（ＮＳ、図２１Ｄ）。
【０５１２】
ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿インスリンレベルを有意に増加させ、それぞれ２．５倍、２．３倍及び２．７倍に増加させた。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、血漿Ｃ−ペプチドレベルを１２日目から有意に増加させ、４５％（１２日目）、４８％（１９日目）、及び５２％（２６日目）増加させた（ｐ＜０．０５対ビヒクルで処置されたＺＤＦラット、図２１Ｄ）。
【０５１３】
インスリン分泌が継時的に低下したこのモデルでは、ＨＯＭＡ−ＩＲの増加はインスリン分泌の増加を反映した。ゆえに、ＨＯＭＡ−ＩＲの増加は、ビヒクルＺＤＦ群と比較して、メトホルミン単独またはＡｂ１４との併用処置群において観察され、この増加は１２日目、１９日目及び２６日目に維持された（図２１Ｃ）。
【０５１４】
除脂肪ラットと比較して、フルクトサミンは、８週齢のビヒクルで処置されたＺＤＦラットにおいて有意に高かった（６６％）（１４４±２に対して２０８±６μＭ、ｐ＜０．００１）。フルクトサミンレベルは、処置期間中、除脂肪ラットでは同様の範囲のままであったが、ビヒクルＺＤＦラットでは１９日（２５３±５μＭ、ｐ＜０．００１）及び２８日（２３４±６μＭ、ｐ＜０．００１）間の処置後に増加した（図２２）。想定通り、ピオグリタゾンは、フルクトサミンレベルを１９日目から有意に低下させた（１９日目に
は３０％、及び２８日目には２５％、ｐ＜０．００１）。Ａｂ１４  ２０及び６０ｍｇ／ｋｇは、フルクトサミンレベルに効果を有さなかった。ビヒクルで処置されたラットと比較して、メトホルミンは、１９日目（６％低下、ｎｓ）においてのみフルクトサミンレベルが低くなる傾向を示した。ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、１９日目と２８日目にそれぞれ１０％と８％フルクトサミンレベルを低くする有意でない傾向を示した。同様に、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、２８日目にフルクトサミンレベルを低くする（９％）有意でない傾向を示した。（図２２）。
【０５１５】
除脂肪ラットと比較して、ＨｂＡ１ｃは８週齢のＺＤＦラットにおいてより高かった（３．１±０．０４％に対して４．３±０．１％）が、これらの値は正常な範囲内であった。
【０５１６】
１２週齢のＺＤＦラットでは、ＨｂＡ１ｃは、２８日目に８．８±０．２％の病理学的な値に達した（ｐ＜０．００１  ＺＤＦ対除脂肪ラット、図２３）。ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、Ａｂ１４  ２０及び６０ｍｇ／ｋｇは、２８日間の処置後ＨｂＡ１ｃレベルに効果を有さなかった。２８日間の処置後、ピオグリタゾン及びメトホルミンはＨｂＡ１ｃを有意に低減させ、それぞれ４４％及び１５％低減させた（図２３）。メトホルミンとＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇとの併用及びメトホルミンと６０ｍｇ／ｋｇとの併用はＨｂＡ１ｃを有意に低下させ、それぞれ１１％及び１９％低下させた（図２３）。
【０５１７】
除脂肪ラットと比較して、血漿トリグリセリドレベルは、８週齢のＺＤＦラットにおいて強く増加された（約０．７ｍＭに対して約８ｍＭ、図２４Ａ）。
【０５１８】
ビヒクルと比較して、ピオグリタゾンは、血漿トリグリセリドレベルを処置の１２日目から強く低減させた。Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇは、１２日目及び１９日目に血漿トリグリセリドレベルを微かに低減させ（それぞれ１５％及び７％、ｎｓ）、２６日目には効果を有さなかった。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿トリグリセリドレベルを微かに低減させ、それぞれ１４％、９％及び１２％低減させた（ｎｓ）。メトホルミンは、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿トリグリセリドレベルをそれぞれ２６％、４０％、及び４９％増加させた（１９日目から有意）。メトホルミン＋Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇの併用は、ビヒクルＺＤＦ群と比較して１９日目及び２６日目に血漿トリグリセリドを高くする傾向（それぞれ１３％及び２３％、ｎｓ）を示した。メトホルミン＋Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇの併用は、１２日目、１９日目及び２６日目に血漿トリグリセリドを高くする傾向（それぞれ９％、４８％及び４３％、１９日目から有意、図２４Ａ）を示した。
【０５１９】
６時間の絶食の後、血漿遊離脂肪酸レベルは、除脂肪ラットよりも８週齢のＺＤＦラットにおいて高かった（約０．５９ｍＭに対して約０．８５ｍＭ）。一晩絶食（最大脂肪分解条件）の後、遊離脂肪酸レベルは、１０週及び１１週で同様であった（約１．３ｍＭ）。処置の１２週目で、より低くなる遊離脂肪酸レベルで示されるように、除脂肪ラットと比較して、ＺＤＦラットの脂肪分解能力が低減した（１．３８±０．０３に対して１．０５±０．０６ｍＭ、図２４Ｂ）。ビヒクルＺＤＦラットと比較して、ピオグリタゾンで処置されたラットは、１２日目に３５％（ｐ＜０．００１）、１９日目に１７％（ｎｓ）及び２６日目に３０％（ｐ＜０．０５）低い血漿遊離脂肪酸レベルを示した。Ａｂ１４  ２０及び６０ｍｇ／ｋｇは効果を有さなかった。メトホルミンは、ビヒクルＺＤＦラットと比較した時、遊離脂肪酸レベルを１２日目、１９日目及び２６日目に１４％、２５％及び８％増加させたが、有意ではなかった。メトホルミン単独またはＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇとの併用の効果は同様であった。一方で、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇと併用した時、メ
トホルミンは、ビヒクルＺＤＦ群と比較したとき１９日においてのみ増加効果を示した（２０％増加、ＮＳ、図２４Ｂ）。
【０５２０】
除脂肪ラットと比較して、血漿総コレステロール及びＨＤＬ−コレステロールレベルは８週齢のＺＤＦラットにおいてより高く、その後４週間にわたって徐々に増加した（図２５Ａ〜Ｂ、図２６Ａ〜Ｂ）。血漿非−ＨＤＬコレステロールレベルは、生後８週目では除脂肪ラット及びＺＤＦラットで同様であったが、１０週目から除脂肪ラットに対してＺＤＦラットにおいて継時的に増加した（図２５Ｃ及び図２６Ｃ）。０日目のＺＤＦ群間で総コレステロール及びＨＤＬ−コレステロールにおいて有意差があったため（図２５）、結果を０日目からの相対値で表した（図２６）。図２６Ａに示すように、ピオグリタゾンは継時的な血漿総コレステロールレベルの増加を防ぐ傾向があった。Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ及びメトホルミンは効果を示さなかった。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは、ビヒクルＺＤＦ群と比較して、総コレステロールを１２日目、１９日目、及び２６日目にそれぞれ８％、１４％、及び１５％増加させた。メトホルミンと併用したとき、ビヒクルＺＤＦ群と比較して、Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇは、総コレステロールを１２日目及び２６日目にそれぞれ１５％及び１０％増加させ、一方でＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは総コレステロールを１２日目、１９日目及び２６日目にそれぞれ２４％、２１％及び１３％増加させた。ビヒクルと比較して、ピオグリタゾンは血漿ＨＤＬ−コレステロールを１２日目、１９日目、２６日目にそれぞれ３８％、１７％及び１９％増加させた。メトホルミン単独は効果を有さなかった。Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ及び６０ｍｇ／ｋｇの単独、またはそれらのメトホルミンとの併用は、血漿ＨＤＬ−コレステロールレベルを１２日、１９日、２６日間の処置後、１１％から２２％増加させた。血漿非ＨＤＬ−コレステロールレベル（図２６Ｃ）は、１２日間の処置後全てのＺＤＦ群において同様であった。ビヒクルと比較して、Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ、メトホルミン（単独またはＡｂ１４と併用）は、非ＨＤＬ−コレステロールレベルに効果を有さなかった。ピオグリタゾンのみが、血漿非ＨＤＬ−コレステロールレベルを有意に低減し、１９日目及び２６日目にそれぞれ４９％及び４７％低減させた。
【０５２１】
経口ブドウ糖負荷試験は、２６日間の処置後に実施した。ビヒクルで処置された除脂肪ラットと比較して、血糖値はグルコース負荷の前後で、ビヒクルで処置されたＺＤＦラットにおいて想定通り高かった（図２７Ａ）。ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、ピオグリタゾンで処置されたＺＤＦラットのみが、全時点で有意に低下した血糖値を示した。ビヒクルと比較して、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ及びメトホルミンの併用は、ｔ−６０分で血糖値を低下させる傾向にあり（図２７Ａ）、一方で他の薬物処置は有意な効果を示さなかった。除脂肪ラットと比較して、血中グルコース曲線下化面積（ＡＵＣ）は、ビヒクルで処置されたＺＤＦラットにおいて有意に増加され、３．７倍に増加された。ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較して、ピオグリタゾンで処置されたラットは、血中グルコースＡＵＣにおいて有意な５４％の低下を示した。Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ及びメトホルミン（単独または２０ｍｇ／ｋｇまたは６０ｍｇ／ｋｇのＡｂ１４との併用）は、ＡＵＣの有意でない低下を示した（それぞれ、７％、１１％、６％、７％及び１７％）。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ＋メトホルミンの併用は、ＡＵＣの低下においてＡｂ１４またはメトホルミン単独と比較して微かにより効果的であった（図２７Ｂ）。
【０５２２】
血漿インスリン及びＣ−ペプチドレベルを、グルコース負荷の１５分後及び３０分後に測定した。濃度対時間プロファイルは、インスリン及びＣ−ペプチドの両方について類似した。インスリン及びＣ−ペプチドレベルは、ビヒクル、Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ及びＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ処置群間で類似し、メトホルミン及びピオグリタゾン処置群において微かに増加し、メトホルミンと組み合わせたＡｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ及びＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇで処置された群において用量依存的様式でより増加した（図２８Ａ〜
Ｂ）。グルコース負荷に応答するインスリンまたはＣ−ペプチド分泌能力を、Ｔ−６０分から算出した相対値で結果を表すことによって評価した。想定通り、ビヒクルＺＤＦラットは、除脂肪ラットと比較して、グルコース負荷に応答してインスリン及びＣ−ペプチドを分泌するその能力を有意に喪失した。（図２９Ａ〜Ｂ）。ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較したとき、ピオグリタゾンで処置されたラットは、インスリン分泌をＴ１５及びＴ３０分の時点でそれぞれ２０％（ｐ＜０．０５）及び５％増加させた。全ての他の処置はＴ１５時点でインスリン分泌に効果を有さなかった。メトホルミンは、インスリン分泌をＴ３０の時点で２６％低減させた（ｐ＜０．０１）。Ａｂ１４  ２０ｍｇ／ｋｇ単独は、Ｔ３０時点で効果を有さず、メトホルミンと併用してインスリン分泌を低減させる傾向（１４％、ｎｓ）を示した。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ単独またはメトホルミンとの併用は、インスリン分泌を低減させる傾向を示し、それぞれ１９％及び１８％低減させた（図２９Ａ）。除脂肪ラットと比較して、グルコース負荷に応答するＣ−ペプチド分泌（図２９Ｂ）は、ビヒクルで処置されたＺＤＦラットにおいて有意に低下し、Ｔ１５及びＴ３０の時点で約４０％低下した。ビヒクルで処置されたＺＤＦラットと比較した時、ピオグリタゾンのみが、Ｃ−ペプチド分泌を有意に増加させ、Ｔ１５及びＴ３０の時点でそれぞれ２１％及び２２％増加させた。
【０５２３】
想定通り、膵臓プロインスリン（図３０Ａ）及びインスリン（図３０Ｂ）レベルは、除脂肪ラットと比較して１２週齢のＺＤＦラットにおいて有意に低かった。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ及びメトホルミンは、プロインスリンの低下を完全に予防し、メトホルミンと組み合わせたＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは、プロインスリンレベルを有意に増加させた（ｐ＜０．０５対ビヒクル）（図３０Ａ）。Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは、膵臓インスリンレベルを微かに増加させ、メトホルミンまたはメトホルミンと組み合わせたＡｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇは、インスリンレベルを有意に増加させた（ｐ＜０．０５対ビヒクル）（図３０Ｂ）。除脂肪ラットと比較して、プロインスリン／インスリン比率はＺＤＦラットにおいて有意に増加したが、薬物処置で変化は観察されなかった（図３０Ｃ）。
【０５２４】
ビヒクル、Ａｂ１４、メトホルミンまたはＡｂ１４／メトホルミン併用のいずれかで処置された除脂肪またはＺＤＦラットの膵臓の顕微鏡的変化に焦点をあてた本試験において毒性の証拠は報告されなかった。
【０５２５】
膵島過形成に対応する、限局性から多巣性の大／巨大な膵島（複数可）及び膵島線維症の発生率及び重症度がより高いことがビヒクル対照を与えられたＺＤＦラットにおいて認められた（表１及び表２）。
【０５２６】
表１．病理組織学的（Ｈｉｓｔｏｐｈａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ）所見の発生率。全ての処置群は、別段の指示がない限りＺＤＦラットとした。Ｍｅｔ．：メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ／日。
【表３−１】
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【表３−２】
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【０５２７】
表２．病理組織学的分析：基本的所見の群平均スコア。別段の指示がない限り、全処置群はＺＤＦラットとした。Ｍｅｔ．：メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ／日。
【表４−１】
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【表４−２】
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【０５２８】
除脂肪ラットと比較して、ビヒクルで処置されたＺＤＦラットは、微かな膵島細胞の空胞化を有し、膵島線維症の発生率及び重症度が増加した。全ての薬物処置、Ａｂ１４  ６０ｍｇ／ｋｇ、メトホルミン、またはＡｂ１４とメトホルミンの併用で、空胞化及び膵島線維症の重症度における低減に向かう一致した傾向があった。これらの効果は、Ａｂ１４とメトホルミンが併用された時により明白だった。
【０５２９】
想定通り、免疫組織化学によって測定された膵臓インスリンは、ＺＤＦラットにおいてインスリン標識の低下を示した。インスリン含有率測定から観察されるように（図３０Ｂ）、薬物処置は、このインスリン標識低下を微かに予防し、Ａｂ１４とメトホルミンが組み合わされたときにより良好な効果を示した（図３１）。
【０５３０】
考察
【０５３１】
著しいインスリン抵抗性であり重度の高インスリン血症であるが軽度にのみ高血糖である８週齢のＺＤＦラットに、Ａｂ１４を静脈内に０ｍｇ／ｋｇ（ビヒクル）、２０ｍｇ／ｋｇ、または６０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回４週間与えた。この期間中、ビヒクルで処置された対照は、本試験の１２日目までに明らかな糖尿病へと進行して重度の低インスリン血症及び著しい高血糖であり、これは生後１０週までの完全な膵β細胞不全と矛盾しない。これは、その両方が実質的に低下した膵臓インスリン及びプロインスリンレベルの直接測定によって、及びこれまた劇的に低下した膵臓インスリン標識の免疫組織化学的評価を通して、本試験の終了時に確認された。加えて、本試験の終了時に行われた組織学的分析はまた、これらの動物における膵島空胞化、膵島過形成（大／巨大膵島（複数可））、及び膵島線維症の発生率及び重症度の増加を実証し、これは糖尿病膵島の病理と一致した。
【０５３２】
それに対し、本試験の１２日目でのビヒクルで処置された対照における空腹時血糖の上昇は、両用量のＡｂ１４によって部分的に予防され、この部分的予防は本試験の１９日目及び２６日目にも観察された。加えて、高用量のＡｂ１４はまた、本試験の１２日目にビヒクルで処置された対照において観察された血漿インスリン及びＣ−ペプチドレベルの低下を部分的に予防した。この部分的予防は、より少ない程度ではあるが、本試験の１９日目及び２６日目でも観察され、これは疾患進行（膵β細胞不全）のわずかな遅延を示し、化合物による部分的な膵臓β細胞保護を示唆する。実際に、高用量のＡｂ１４は、膵臓組織を本試験終了時（２８日目）に得たときにビヒクルで処置された対照において観察された膵臓プロインスリンレベルの低下も完全に予防し、直接的にまたは免疫組織化学的な分析を通して測定されたとき、膵臓インスリンレベルの低下も部分的に予防した。さらには、Ａｂ１４は、本試験終了時の組織学的評価の際にビヒクルで処置された動物において認められた膵島空胞化、膵島線維症、及び膵島過形成を一貫して低減し、これは糖尿病の膵島病理への好ましい影響をさらに示す。
【０５３３】
実施例２において実証されるように、ビヒクルで処置された対照群と比較したとき、Ａｂ１４は、食物消費量または体重に効果を有さず、これは上記で評価されたパラメータに及ぼすＡｂ１４の効果は、カロリー制限または体重減少の結果でないことを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
2020158525.tif 000020
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３１】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月15日(2020.7.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象において、肥満に伴う状態またはリスクを予防または制御するための医薬組成物であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含み、
ここで前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、
ａ．配列番号５１のＶＬ及び配列番号５３のＶＨを含むＡｂ６；
ｂ．配列番号１のＶＬ及び配列番号３のＶＨを含むＡｂ１；
ｃ．配列番号１１のＶＬ及び配列番号１３のＶＨを含むＡｂ２；
ｄ．配列番号２１のＶＬ及び配列番号２３のＶＨを含むＡｂ３；
ｅ．配列番号３１のＶＬ及び配列番号３３のＶＨを含むＡｂ４；
ｆ．配列番号４１のＶＬ及び配列番号４３のＶＨを含むＡｂ５；
ｇ．配列番号６１のＶＬ及び配列番号６３のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号７１のＶＬ及び配列番号７３のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号８１のＶＬ及び配列番号８３のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号９１のＶＬ及び配列番号９３のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号１０１のＶＬ及び配列番号１０３のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号１１１のＶＬ及び配列番号１１３のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１２１のＶＬ及び配列番号１２３のＶＨを含むＡｂ１３；及び
ｎ．配列番号１３１のＶＬ及び配列番号１３３のＶＨを含むＡｂ１４
からなる群より選択される抗ヒトＣＧＲＰ抗体に含まれる全６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、
ＨＤＬコレステロールを増加させる、前記医薬組成物。
【請求項２】
対象が肥満であり、ＨＤＬコレステロールを増加させ、それにより肥満に伴う状態またはリスクを予防または軽減する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
それを必要とする対象において、体脂肪を減少させるための医薬組成物であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含み、
ここで前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片は、
ａ．配列番号５１のＶＬ及び配列番号５３のＶＨを含むＡｂ６；
ｂ．配列番号１のＶＬ及び配列番号３のＶＨを含むＡｂ１；
ｃ．配列番号１１のＶＬ及び配列番号１３のＶＨを含むＡｂ２；
ｄ．配列番号２１のＶＬ及び配列番号２３のＶＨを含むＡｂ３；
ｅ．配列番号３１のＶＬ及び配列番号３３のＶＨを含むＡｂ４；
ｆ．配列番号４１のＶＬ及び配列番号４３のＶＨを含むＡｂ５；
ｇ．配列番号６１のＶＬ及び配列番号６３のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号７１のＶＬ及び配列番号７３のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号８１のＶＬ及び配列番号８３のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号９１のＶＬ及び配列番号９３のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号１０１のＶＬ及び配列番号１０３のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号１１１のＶＬ及び配列番号１１３のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１２１のＶＬ及び配列番号１２３のＶＨを含むＡｂ１３；及び
ｎ．配列番号１３１のＶＬ及び配列番号１３３のＶＨを含むＡｂ１４
からなる群より選択される抗ヒトＣＧＲＰ抗体に含まれる全６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、
トリグリセリドを減少させ、それにより体脂肪を減少させる、前記医薬組成物。
【請求項４】
前記対象が、
（ｉ）前糖尿病と診断されているまたは２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈する；
（ｉｉ）閉経前、閉経期前後、閉経期または閉経後である；
（ｉｉｉ）１００ｍｇ／ｄＬから１２５ｍｇ／ｄｌ間の空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース溶液を経口摂取した２時間後に１４０ｍｇ／ｄＬから１９９ｍｇ／ｄＬ間の血糖値；及び／または５．７パーセントから６．４パーセント間の糖化ヘモグロビンを含む、前糖尿病の１つまたは複数の症状を呈する；
（ｉｖ）１２５ｍｇ／ｄｌを超える空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース溶液を経口摂取した２時間後に少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血糖値；及び／または少なくとも６．５パーセントの糖化ヘモグロビンを含む、糖尿病の１つまたは複数の症状を呈する、；
（ｖ）２型糖尿病の家族歴；以前に２型糖尿病と診断された１または複数の親または同胞；脂質異常症；少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血中総トリグリセリドレベル；３５ｍｇ／ｄＬ未満の血中高密度リポタンパク質；肥満；２５ｋｇ／ｍ２を超える肥満度指数；妊娠糖尿病の病歴；９ｌｂｓを超える出生時体重の乳児を以前に出産；高血圧；少なくとも１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧；少なくとも９０ｍｍＨｇの拡張期血圧；少なくとも９９ｍｇ／ｄＬの空腹時血糖の以前の測定；血管疾患；多嚢胞性卵巣症候群；または黒色表皮腫を含む、２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈する；
（ｖｉ）２型糖尿病と診断されている；
（ｖｉｉ）２型糖尿病と診断されており、かつ、ＧＬＰ−１、エキセナチド−１、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、リラグルチド、エキセナチドＬＡＲ、ＤＰＰ−４拮抗薬、ＧＬＰ−１受容体作動薬、または別のＧＬＰ−１作動薬を用いた処置に不応性である；
請求項１〜３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１つに記載の医薬組成物であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片以外の抗糖尿病薬または抗肥満薬との組合せで使用するためのものであり、ここで、
（ｉ）前記抗糖尿病薬または抗肥満薬は、アミリン、アミリン作動薬、スルホニル尿素薬、カルシトニン、グルカゴン、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、ガストリン阻害ペプチド（ＧＩＰ）、インクレチンペプチド、インスリン、ＳＧＬＴ２阻害薬、グルコース再吸収阻害薬、フェノフィブラート、フィブラート、抗グレリン抗体または抗体断片、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）−１（ＩＩＩｂ）、ＦＧＦＲ−１（ＩＩＩｃ）、抗体または抗体断片、及び／またはＦＧＦＲ−４（ＩＩＩｃ）、抗ＣＤ３８抗体または抗体断片、抗ＭＩＣ−１抗体、またはＭＩＣ−１結合断片、または前述の任意の組み合わせの１つまたは複数を含み；または
（ｉｉ）前記抗糖尿病薬はメトホルミンである；
前記医薬組成物。
【請求項６】
薬学的に許容され得るキャリアをさらに含む、請求項１〜５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が前記対象に約０．１から１００．０ｍｇ／レシピエント対象の体重のｋｇの投与量で投与される、請求項１〜６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、ヒト抗体である；非天然型である；非天然型の抗体断片である；ヒト化抗体である；または、キメラ抗体である；請求項１〜７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
【請求項９】
（Ｉ）前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
（ｉ）ａ．配列番号５１のＶＬ及び配列番号５３のＶＨを含むＡｂ６；
ｂ．配列番号１のＶＬ及び配列番号３のＶＨを含むＡｂ１；
ｃ．配列番号１１のＶＬ及び配列番号１３のＶＨを含むＡｂ２；
ｄ．配列番号２１のＶＬ及び配列番号２３のＶＨを含むＡｂ３；
ｅ．配列番号３１のＶＬ及び配列番号３３のＶＨを含むＡｂ４；
ｆ．配列番号４１のＶＬ及び配列番号４３のＶＨを含むＡｂ５；
ｇ．配列番号６１のＶＬ及び配列番号６３のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号７１のＶＬ及び配列番号７３のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号８１のＶＬ及び配列番号８３のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号９１のＶＬ及び配列番号９３のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号１０１のＶＬ及び配列番号１０３のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号１１１のＶＬ及び配列番号１１３のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１２１のＶＬ及び配列番号１２３のＶＨを含むＡｂ１３；及び
ｎ．配列番号１３１のＶＬ及び配列番号１３３のＶＨを含むＡｂ１４
からなる群より選択される抗体に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列を有する；または
（ｉｉ）前記ａ〜ｎからなる群より選択される抗体を含む；
（ＩＩ）前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
（ｉ）ヒト、キメラもしくはヒト化抗体；または
（ｉｉ）Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖまたは別の一価抗体断片
を含む；
（ＩＩＩ）前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体が、エフェクター機能、半減期、タンパク質分解、および／またはグリコシル化を変化させるように修飾されているＦｃ領域を含む；
（ＩＶ）前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、アグリコシル化されているか、またはグリコシル化されている場合はマンノース残基のみを含む；
（Ｖ）前記（Ｉ）または（ＩＩ）の抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５１のＶＬおよび配列番号５３のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６に含有される全６つのＣＤＲを含む；
（ＶＩ）前記（Ｉ）または（ＩＩ）の抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５１のＶＬおよび配列番号５３のＶＨを含む；
（ＶＩＩ）前記（Ｉ）または（ＩＩ）の抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５２の軽鎖および配列番号５４の重鎖を含む；
（ＶＩＩＩ）前記（Ｉ）または（Ｖ）の抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、ピキア・パストリスまたはＣＨＯ細胞において発現させたものである；または
（ＩＸ）（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の任意の組み合わせである、
請求項１〜８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５３３】
実施例２において実証されるように、ビヒクルで処置された対照群と比較したとき、Ａｂ１４は、食物消費量または体重に効果を有さず、これは上記で評価されたパラメータに及ぼすＡｂ１４の効果は、カロリー制限または体重減少の結果でないことを示す。
発明の態様
［態様１］それを必要とする対象において末梢の及び／または肝臓のグルコース利用を増加させる方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［態様２］それを必要とする対象においてインスリン抵抗性を低減させる方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［態様３］それを必要とする対象において肥満を処置する、予防する、または制御する方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［態様４］それを必要とする対象において持続的な正常血糖を達成するための方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［態様５］それを必要とする対象において除脂肪組織の体脂肪に対する比率を増加させるための方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［態様６］２型糖尿病の発症及び／または肥満を処置するまたは遅らせる及び／または機能的な膵β細胞の損失を予防するのに有効である、態様１〜５のいずれか１つに記載の方法。
［態様７］外因性インスリンを投与する必要性が遅延される、態様６に記載の方法。
［態様８］前記対象が前糖尿病と診断されているまたは２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈する、態様１〜７のいずれか１つに記載の方法。
［態様９］前記対象が、閉経前、閉経期前後、閉経期または閉経後である、態様１〜７のいずれか１つに記載の方法。
［態様１０］前記対象が、１００ｍｇ／ｄＬから１２５ｍｇ／ｄｌ間の空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース溶液を経口摂取した２時間後に１４０ｍｇ／ｄＬから１９９ｍｇ／ｄＬ間の血糖値；及び／または５．７パーセントから６．４パーセント間の糖化ヘモグロビンを含む、前糖尿病の１つまたは複数の症状を呈する、態様１〜７のいずれか１つに記載の方法。
［態様１１］前記対象が、１２５ｍｇ／ｄｌを超える空腹時血糖値；７５グラムのグルコース溶液または７５グラムの最大量までの１．７５グラムのグルコース／体重のキログラムのグルコース溶液を経口摂取した２時間後に少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血糖値；及び／または少なくとも６．５パーセントの糖化ヘモグロビンを含む、糖尿病の１つまたは複数の症状を呈する、態様１〜７のいずれか１つに記載の方法。
［態様１２］前記対象が、２型糖尿病の家族歴；以前に２型糖尿病と診断された１または複数の親または同胞；脂質異常症；少なくとも２００ｍｇ／ｄＬの血中総トリグリセリドレベル；３５ｍｇ／ｄＬ未満の血中高密度リポタンパク質；肥満；２５ｋｇ／ｍ２を超える肥満度指数；妊娠糖尿病の病歴；９ｌｂｓを超える出生時体重の乳児を以前に出産；高血圧；少なくとも１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧；少なくとも９０ｍｍＨｇの拡張期血圧；少なくとも９９ｍｇ／ｄＬの空腹時血糖の以前の測定；血管疾患；多嚢胞性卵巣症候群；または黒色表皮腫を含む、２型糖尿病の発症についての１つまたは複数のリスク因子を呈する、態様８に記載の方法。
［態様１３］前記対象が２型糖尿病と診断されている、態様１〜７のいずれか１つに記載の方法。
［態様１４］前記対象が、ＧＬＰ−１、エキセナチド−１、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、リラグルチド、エキセナチドＬＡＲ、ＤＰＰ−４拮抗薬、ＧＬＰ−１受容体作動薬、または別のＧＬＰ−１作動薬を用いた処置に不応性である、態様１３に記載の方法。
［態様１５］前記対象に抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片以外の抗糖尿病薬または抗肥満薬を投与することをさらに含む、前述の態様のいずれか１つに記載の方法。
［態様１６］前記抗糖尿病薬または抗肥満薬が、アミリン、アミリン作動薬、スルホニル尿素薬、カルシトニン、グルカゴン、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、ガストリン阻害ペプチド（ＧＩＰ）、インクレチンペプチド、インスリン、ＳＧＬＴ２阻害薬、グルコース再吸収阻害薬、フェノフィブラート、フィブラート、抗グレリン抗体または抗体断片、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）−１（ＩＩＩｂ）、ＦＧＦＲ−１（ＩＩＩｃ）、抗体または抗体断片、及び／またはＦＧＦＲ−４（ＩＩＩｃ）、抗ＣＤ３８抗体または抗体断片、抗ＭＩＣ−１抗体、またはＭＩＣ−１結合断片、メトホルミンまたは前述の任意の組み合わせの１つまたは複数を含む、態様１５に記載の方法。
［態様１７］前記抗糖尿病薬がメトホルミンである、態様１５に記載の方法。
［態様１８］体重減少を引き起こすのに有効である、前述の態様のいずれかに記載の方法。
［態様１９］当該投与される抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、インビボでインスリン分泌を有意に増加させない、前述の態様のいずれかに記載の方法。
［態様２０］当該投与される抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、膵炎の発生率または膵臓の炎症に伴うマーカーまたはサイトカインの発現を結果生じない、前述の態様のいずれかに記載の方法。
［態様２１］前記組成物が薬学的に許容され得るキャリアをさらに含む、前述の態様のいずれか１つに記載の方法。
［態様２２］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が前記対象に約０．１から１００．０ｍｇ／レシピエント対象の体重のｋｇの投与量で投与される、前述の態様のいずれか１つに記載の方法。
［態様２３］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片がヒト抗体である、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様２４］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が非天然型である、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様２５］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、非天然型の抗体断片である、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様２６］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片がヒト化抗体である、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様２７］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片がキメラ抗体である、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様２８］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、インタクトなＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上の、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗ヒトＣＧＲＰ抗体と同一の直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）に特異的に結合する及び／または同一または重複する直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）への結合について競合する、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様２９］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体内に含有される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または全６つのＣＤＲを含む、態様２８に記載の方法。
［態様３０］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列を有する、態様２８に記載の方法。
［態様３１］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、
ａ．配列番号２のＶＬ及び配列番号４のＶＨを含むＡｂ１；
ｂ．配列番号１２のＶＬ及び配列番号１４のＶＨを含むＡｂ２；
ｃ．配列番号２２のＶＬ及び配列番号２４のＶＨを含むＡｂ３；
ｄ．配列番号３２のＶＬ及び配列番号３４のＶＨを含むＡｂ４；
ｅ．配列番号４２のＶＬ及び配列番号４４のＶＨを含むＡｂ５；
ｆ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ６；
ｇ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ７；
ｈ．配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含むＡｂ８；
ｉ．配列番号６２のＶＬ及び配列番号６４のＶＨを含むＡｂ９；
ｊ．配列番号７２のＶＬ及び配列番号７４のＶＨを含むＡｂ１０；
ｋ．配列番号８２のＶＬ及び配列番号８４のＶＨを含むＡｂ１１；
ｌ．配列番号９２のＶＬ及び配列番号９４のＶＨを含むＡｂ１２；
ｍ．配列番号１０２のＶＬ及び配列番号１０４のＶＨを含むＡｂ１３；及び
ｎ．配列番号１１２のＶＬ及び配列番号１１４のＶＨを含むＡｂ１４からなる群より選択される抗体を含む、態様２８に記載の方法。
［態様３２］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、インタクトなＣＧＲＰポリペプチドまたはその断片上の、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６と同一の直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）に特異的に結合する及び／または同一または重複する直鎖状または立体的なエピトープ（複数可）への結合について競合する、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様３３］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６に含有される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または好ましくは全６つのＣＤＲを含む、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様３４］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチド配列を有し、任意選択的に前記抗体が配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む抗ヒトＣＧＲＰ抗体Ａｂ６に含有される全６つのＣＤＲを含有する、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様３５］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、配列番号５２のＶＬ及び配列番号５４のＶＨを含む、Ａｂ６を含む、態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
［態様３６］該抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、ヒト、キメラまたはヒト化抗体を含む、前述の態様のいずれかに記載の方法。
［態様３７］該抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’２、ｓｃＦｖ、またはＩｇＮａｒまたは別の一価抗体断片を含む、前述の態様のいずれかに記載の方法。
［態様３８］前述の態様のいずれかに係る方法における使用に好適な組成物であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を含む有効量の組成物及び抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片以外の抗糖尿病薬または抗肥満薬を含む、前記組成物。
［態様３９］該抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、態様２８〜３１または３６〜３７のいずれか１つ、または好ましくは態様３２〜３６のいずれか１つに従うものである、態様３８に記載の組成物。
［態様４０］前記抗糖尿病薬または抗肥満薬が、アミリン、アミリン作動薬、スルホニル尿素薬、カルシトニン、グルカゴン、ＰＰＡＲ−γ作動薬、ＧＰＬ−１受容体作動薬、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、アミリン類似体、ビグアナイド、ドーパミンＤ２受容体作動薬、メグリチニド、α−グルコシダーゼ阻害薬、抗脂質異常症の胆汁酸吸着剤、エキセンディン、エキセンディン類似体、エキセンディン作動薬、ガストリン阻害ペプチド（ＧＩＰ）、インクレチンペプチド、インスリン、ＳＧＬＴ２阻害薬、グルコース再吸収阻害薬、フェノフィブラート、フィブラート、メトホルミン、抗グレリン抗体または抗体断片、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）−１（ＩＩＩｂ）、ＦＧＦＲ−１（ＩＩＩｃ）、抗体または抗体断片、及び／またはＦＧＦＲ−４（ＩＩＩｃ）、抗ＣＤ３８抗体または抗体断片、抗ＭＩＣ−１抗体またはＭＩＣ−１結合断片、または前述の任意の組み合わせの１つまたは複数を含む、態様３９に記載の組成物。
［態様４１］該他の抗糖尿病薬または抗肥満薬がメトホルミンを含む、態様３９に記載の組成物。
［態様４２］末梢のグルコース利用を増加させる抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を同定する方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を対象に投与すること、前記対象における末梢のグルコース利用を測定すること、及び前記対象における末梢のグルコース利用を少なくとも１の対照対象における末梢のグルコース利用と比較することを含む、前記方法。
［態様４３］肝臓のグルコース利用を増加させる抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を同定する方法であって、抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片を対象に投与すること、前記対象における肝臓のグルコース利用を測定すること、及び前記対象における肝臓のグルコース利用を少なくとも１の対照対象における末梢のグルコース利用と比較することを含む、前記方法。
［態様４４］前記対象が、糖尿病のヒト、マウス、ラット、非ヒト霊長目、非ヒト動物モデルである、態様４２または４３に記載の方法。
［態様４５］糖尿病の前記非ヒト動物モデルが高脂肪食摂取ラット及びＺｕｃｋｅｒ糖尿病肥満（ＺＤＦ）ラットから選択される、態様４４に記載の方法。
［態様４６］前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片が、前記対照対象と比べて末梢のグルコース利用を少なくとも１０％、少なくとも２０％、または少なくとも５０％増加させる、態様４２〜４５のいずれか１つに記載の方法。
［態様４７］前記少なくとも１の対照対象が、前記抗ヒトＣＧＲＰ抗体または抗体断片の投与前の前記対象を含む、態様４２〜４６のいずれか１つに記載の方法。
【外国語明細書】
2020158525000001.pdf