(57)【要約】      （修正有）【課題】ＰＰＡＲに対して優れた活性化作用を有するＰＰＡＲ活性化剤の提供。【解決手段】海藻又は海藻抽出物を有効成分とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）活性化組成物。生活習慣病又はメタボリックシンドロームの予防又は改善用、並びに、インスリン抵抗性症候群、アルツハイマー病、炎症性疾患又は認知機能障害の予防又は改善用のＰＰＡＲ活性化組成物。インスリン抵抗性症候群は、II型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症、動脈硬化症又は心疾患である。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
海藻又は海藻抽出物を有効成分とすることを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（以下「ＰＰＡＲ」という）活性化組成物。
【請求項２】
生活習慣病又はメタボリックシンドロームの予防又は改善用の請求項１に記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【請求項３】
インスリン抵抗性症候群、アルツハイマー病、炎症性疾患又は認知機能障害の予防又は改善用の請求項１に記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【請求項４】
インスリン抵抗性症候群が、II型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症、動脈硬化症又は心疾患であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物を含む飲食品。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物を含む医薬用組成物。
【請求項７】
海藻が海藻加工物、乾燥物又は粉末であることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【請求項８】
海藻が紅藻類ツノマタ、褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリから選ばれる一種であることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【請求項９】
海藻が紅藻類ツノマタであり、ＰＰＡＲがＰＰＡＲγであることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【請求項１０】
海藻が褐藻類ワカメであり、ＰＰＡＲがＰＰＡＲβ／δであることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【請求項１１】
海藻が褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリのいずれかであり、ＰＰＡＲがＰＰＡＲαであることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＰＡＲ（Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体）は、核内受容体型の転写調節因子として機能するタンパク質である。
ＰＰＡＲにはペルオキシソームの増殖を通して血中トリグリセリド濃度の低下を導く作用を有するα型、脂肪組織に分布して脂肪細胞分化などに関与する他、インスリン抵抗性改善の標的分子であるγ型、骨格筋のエネルギー消費が増大することにより抹消組織中の脂肪蓄積を抑制する作用を有するβ／δ型の３種類のサブタイプが知られている。
【０００３】
ＰＰＡＲγは２つのアイソフォームが存在し、アイソフォームにより発現部位が異なる。γ１は脂肪細胞、マクロファージの他に、心臓、腎臓、結腸、筋肉などの組織で発現しているが、γ２の発現は、脂肪細胞のみに限定されている。
ＰＰＡＲγは倹約遺伝子（ｔｈｒｉｆｔｙ  ｇｅｎｅ）としての役割を担い脂肪細胞の分化に関わっているだけでなくリポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）やＣＤ３６などを誘導することにより、脂肪酸の取り込みを促進して中性脂肪として貯蔵する機能を有している。
従って、この活性化は脂肪細胞分化を促進すること、血中グルコースを活発に取り込む脂肪細胞の数を増やして血糖値を下げること、インスリン非感受性の肥大化脂肪細胞の過形成を抑えること、インスリンに対して高い感受性をもった小型脂肪細胞を増加させて血糖値を低下させること、アディポネクチン生成量を上昇させること、血中脂質（特に、トリグリセリド）を低下させること、エネルギー消費に関わるＵＣＰ−２の脂肪細胞における発現を亢進させること、血管構成細胞の機能を制御することなどが知られている（非特許文献１、特許文献１）。
このため、ＰＰＡＲγ活性化剤は、脂質代謝異常の改善、糖代謝異常の改善に有用であり、インスリン抵抗性、II型糖尿病、高脂血症、高血圧症、動脈硬化症、肥満などの生活習慣病などの予防及び／又は改善剤として有効である。
また、炎症に関するＴＮＦαの脂肪細胞におけるＰＰＡＲγによる産生阻害、マクロファージにおけるＰＰＡＲγのＮＦ−κＢを介したアポトーシス誘導への関与、ＭＭＰ−９の活性阻止、ＮＯ産生抑制などに関与することで、その活性化剤は炎症性腸疾患などの炎症に対する予防・治療効果を有することが期待されている。
さらに最近では、ＰＰＡＲγがアミロイドβの代謝に関与することが報告され、その活性化剤がアルツハイマー病の予防・治療効果を有する可能性も示唆されている（非特許文献１、２）。
ＰＰＡＲγ活性化剤は糖尿病などの生活習慣病や各種疾患に対して予防・改善効果が期待できることから、多くの医薬品が開発され、ピオグリタゾン（Ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）やロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）は、II型糖尿病の治療薬として利用されている（非特許文献３）。
また、顕著な活性を有さずとも、副作用を回避できれば長期の摂取が可能となることからＰＰＡＲγの活性化作用を有する食品や植物由来の天然物が探索され、次のような化合物が発見されている。
多価不飽和脂肪酸であるエイコサペンタエン酸、脂肪酸の代謝物である９−ＨＯＤＥ、１３−ＨＯＤＥ（非特許文献２、４）、ヨモギ由来成分であるカフェ酸、クロロゲン酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸、４，５−ジカフェオイルキナ酸及びクロロゲニン酸メチル（特許文献２）、ウコン由来成分であるクルクミン酸（特許文献３）、モノアシルグリセロール（特許文献４）などが報告されている。
【０００４】
ＰＰＡＲβ／δは脳、小腸、骨格筋、脾臓、マクロファージや脂肪組織など、多くの組織にほぼ普遍的に発現している。ＰＰＡＲβ／δ（別名：ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ１、ＦＡＡＲ）は、１９９２年にクローニングされて以来、長らく機能が明らかにされていなかった。しかし近年、遺伝子改変動物を用いた研究やＰＰＡＲβ／δ選択的な作動薬の開発などにより様々な生理機能を持つことが明らかになってきた。
ＰＰＡＲβ／δは骨格筋の脂肪酸取り込み、輸送、酸化、および脱共役タンパク質といった脂肪酸代謝を調節する因子であることがわかっている。また、ＰＰＡＲβ／δのアゴニストは高脂肪食負荷及び遺伝的に肥満を呈するマウスモデルにおいて、抗肥満及びインスリン抵抗性改善効果を発揮することが明らかとなっている。
従って、ＰＰＡＲβ／δのアゴニストは脂肪酸の取り込み・輸送、ミトコンドリア脂肪酸β酸化系酵素や脱共役タンパク質など、一連の脂肪酸代謝関連遺伝子の発現を誘導する。
また、ＰＰＡＲβ／δアゴニストはグルコース酸化の律速反応を触媒するピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体（ＰＤＣ）のαサブユニットをリン酸化することによってＰＤＣの活性を抑制するピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ４（ＰＤＫ４）を誘導し、脂肪酸の酸化を優先的に促進させることが示唆されている。（非特許文献５）。
このため、ＰＰＡＲβ／δ活性化剤は、脂質代謝異常の改善、糖代謝異常の改善に有用であり、インスリン抵抗性、II型糖尿病、高脂血症、高血圧症、動脈硬化症、肥満などの生活習慣病などの予防及び／又は改善剤として有効である。
また、ＰＰＡＲβ／δの選択的な作動薬であるＧＷ５０１５１６をヒトに１２週間投与すると、心疾患の発症頻度を引き上げる要因の一つである小型高密度ＬＤＬの血中濃度が低下することや、心血管保護作用を有するａｐｏＡ２の血中濃度が上昇することが認められている。このことから、ＰＰＡＲβ／δの活性化は、心血管保護に有効であることが報告されている（非特許文献６）。
さらに最近では、マウスにＧＷ５０１５１６を１週間投与することにより、海馬の神経新生が促進されて空間記憶能力が改善すること（非特許文献７）、ＧＷ５０１５１６と同じくＰＰＡＲβ／δの選択的アゴニストであるＧＷ０７４２をパーキンソン病モデルラットに予め投与すると、神経保護作用により認知機能障害を軽減できることが報告されている（非特許文献８）。
このように、ＰＰＡＲβ／δの活性化剤は動脈硬化の予防又は改善剤、肥満の予防又は改善剤、インスリン抵抗性の予防又は改善剤、脂肪酸酸化活性化剤、体脂肪燃焼促進剤、脂質異常症の予防又は改善剤、脂肪肝予防又は改善剤、心血管保護剤、認知機能改善剤として有効であると考えられる。
ＰＰＡＲβ／δ活性化剤は糖尿病などの生活習慣病や各種疾患に対して予防・改善効果が期待できることから、ＧＷ５０１５１６やＧＷ０７４２、Ｌ−１６５０４１などが医薬品として、鋭意研究がなされている。
また、顕著な活性を有さずとも、副作用を回避できれば長期の摂取が可能となることからＰＰＡＲβ／δの活性化作用を有する食品や植物由来の天然物が探索され、次のような化合物が発見されている。
ギニアショウガ又はその抽出物（特許文献５）、醤油粕又はその抽出物（特許文献６）、腐乳（特許文献７）、甜茶、行者ニンニク、ナツメ、サフラン、サジン、オリーブ抽出物、ハチミツ（特許文献８）などが報告されている。
【０００５】
ＰＰＡＲαは肝臓、腎臓、心臓、骨格筋、褐色脂肪組織など臓器・組織に多く発現しており、主に脂質代謝に関連する種々の遺伝子の発現を正や負に制御し、ペルオキシソーム増殖を惹起するフィブラート系薬剤や可塑剤などの多種多様の化学物質により活性化される核内受容体として最初にクローニングされたサブタイプである。
最近、このＰＰＡＲαが飢餓状態でのエネルギー獲得受容体（ｔｈｒｉｆｔｙ  ｇｅｎｅ：節約遺伝子）としての機能を有することが明らかとなっている。このＰＰＡＲαは活性化されると脂肪酸のβ酸化を亢進することから脂質代謝異常を基盤に発症する生活習慣病に対する医薬品創製の分子ターゲットとなっており、内因性のリガンド（アゴニスト）としてリノール酸やリノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）などの多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、８−ｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ（８−ＨＥＴＥ）などのアラキドン酸由来物質、ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ４）などのエイコサノイドが知られており、また、外因性のアゴニストとして、フェノフィブラート、ベザフィブラート、クロフィブラートなどのフィブラート系薬剤が既に上市されている。しかしながら、より優れたＰＰＡＲαを活性化させる成分の探索が今なお精力的に行われている（特許文献９）。また、天然由来のＰＰＡＲα活性化剤としてドナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）の粉末（特許文献１０）、モリンガエキス（特許文献１１）、大豆由来の醗酵物（特許文献７）、トマト、ナス等のナス科植物（特許文献１２）、アカシア樹皮の抽出物（特許文献１３）などが挙げられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００７／００４００６号
【特許文献２】特開２００３−３４６３６号公報
【特許文献３】特開２００３−１２８５３９号公報
【特許文献４】特開２００１−３５４５５８号公報
【特許文献５】特開２０１４−１９６４８号公報
【特許文献６】特開２００９−２４２３８２号公報
【特許文献７】特開２０１２−１７１９２４号公報
【特許文献８】特開２０１０−１０６００１号公報
【特許文献９】特開２０１６−７４６１８号公報
【特許文献１０】特開２０１８−０３５２００号公報
【特許文献１１】特開２０１７−２１７００６号公報
【特許文献１２】特開２０１１−１８４４１１号公報
【特許文献１３】特開２００９−２０３２０９号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｌｅｈｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ  １２３，  ９９３−９９９，  ２００５
【非特許文献２】ｄ’Ａｂｒａｍｏ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ，  ３９１，  ６９３−６９８，  ２００５
【非特許文献３】Ｓｔｅｖｅｎ  Ｍ．  Ｗａｔｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ４３，  １８０９−１８１７，  ２００２
【非特許文献４】Ｗｉｌｌｓｏｎ−ＴＭ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ４３，  ５２７−５５０，  ２０００
【非特許文献５】日本薬理学会誌（Ｆｏｌｉａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｊｐｎ．）、１２８、２２５−２３０，  ２００６
【非特許文献６】Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ．  Ｖａｓｃ．  Ｂｉｏｌ．，  Ｖｏｌ．３２，  ２２８９−２２９４，  ２０１２
【非特許文献７】Ｌｅａｒｎ  Ｍｅｍ．，  Ｖｏｌ．１８，  １０３−１０７，  ２０１１
【非特許文献８】Ｃｕｒｒ．  Ｎｅｕｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．，  Ｖｏｌ．１１，  １１４−１２４，  ２０１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ＰＰＡＲに対して優れた活性化作用を有するＰＰＡＲ活性化剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
１．海藻又は海藻抽出物を有効成分とすることを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（以下「ＰＰＡＲ」という）活性化組成物。
２.生活習慣病又はメタボリックシンドロームの予防又は改善用の１．に記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
３.インスリン抵抗性症候群、アルツハイマー病、炎症性疾患又は認知機能障害の予防又は改善用の１．に記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
４.インスリン抵抗性症候群が、II型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症、動脈硬化症又は心疾患であることを特徴とする１．〜３．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
５.１．〜４．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物を含む飲食品。
６.１．〜４．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物を含む医薬用組成物。
７.海藻が海藻加工物、乾燥物又は粉末であることを特徴とする１．〜６．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
８.海藻が紅藻類ツノマタ、褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリから選ばれる一種であることを特徴とする１．〜７．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
９.海藻が紅藻類ツノマタであり、ＰＰＡＲがＰＰＡＲγであることを特徴とする１．〜８．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
１０.海藻が褐藻類ワカメであり、ＰＰＡＲがＰＰＡＲβ／δであることを特徴とする１．〜８．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
１１.海藻が褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリのいずれかであり、ＰＰＡＲがＰＰＡＲαであることを特徴とする１．〜８．のいずれかに記載のＰＰＡＲ活性化組成物。
【００１０】
紅藻類ツノマタに着目すると、特に、ＰＰＡＲγ活性化に寄与することを解明し、その解決手段として次の提案をすることができる。
１．紅藻類ツノマタを含有することを特徴とするＰＰＡＲγ活性化組成物。
２．生活習慣病の予防又は改善剤である上記１．に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物。
３．インスリン抵抗性症候群又はアルツハイマー病又は炎症性疾患から成る１種又は２種以上から成る予防又は改善剤である上記１．に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物。
４．インスリン抵抗性症候群がII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症又は動脈硬化症である上記２．に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物。
５．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物を含有する飲食品。
６．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物を含有する医薬用組成物。
【００１１】
褐藻類のわかめに着目すると、特に、ＰＰＡＲβ／δ活性化に寄与することを解明し、その解決手段として次の提案をすることができる。
１．褐藻類ワカメの乾燥物又は抽出物を含有することを特徴とするＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
２．生活習慣病又はメタボリックシンドロームの予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
３．インスリン抵抗性症候群又はパーキンソン病又は認知機能障害から成る１種又は２種以上から成る予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
４．インスリン抵抗性症候群がII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、心疾患である、上記２．に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
５．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を含有する飲食品。
６．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を含有する医薬用組成物。
【００１２】
褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリに着目すると、特に、ＰＰＡＲα活性化に寄与することを解明し、その解決手段として次の提案をすることができる。
１．褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリの乾燥物又は抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするＰＰＡＲα活性化組成物。
２．生活習慣病の予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲα活性化組成物。
３．内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）の予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲα活性化組成物。
４．生活習慣病がインスリン抵抗性、II型糖尿病、脂質代謝異常、高血圧、内臓脂肪型肥満又は脂肪肝である、上記２．に記載のＰＰＡＲα活性化組成物。
５．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲα活性化組成物を含有する飲食品。
６．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲα活性化組成物を含有する医薬用組成物。
【発明の効果】
【００１３】
１．海藻及び海藻抽出物を有効成分とするＰＰＡＲに対して優れた活性化作用を有するＰＰＡＲ活性化組成物を開発することができた。
２．特に、海藻は、紅藻類ツノマタ、褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリであり、その抽出物に優れたＰＰＡＲ活性化作用があることが確認できた。
３．ＰＰＡＲ活性化組成物は、これらの海藻の乾燥物、抽出物、これらを含有する飲食品、医薬組成物として、安全な天然海藻由来組成物である。剤型は、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、液剤など多様であり、サプリメント、医療食、生活習慣病用機能性飲食品、動物用飼料などに適している。
４．ＰＰＡＲ活性化組成物を含む薬剤や飲食品、機能性飲食品は、生活習慣病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性症候群、アルツハイマー病、炎症性疾患、認知機能障害や、II型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）、動脈硬化症又は心疾患としてあらわれるインスリン抵抗性症候群などの予防又は改善に寄与することができる。
【００１４】
５．特に、紅藻類ツノマタには次の効果がある。
（１）紅藻類であるツノマタの抽出物は、特に、ＰＰＡＲγの活性化作用がある。
（２）紅藻類であるツノマタ抽出物由来のＰＰＡＲγ活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新規な機能性食品や動物用飼料に展開できる。
（３）天然由来であるツノマタは、従来から食経験もあることから、ＰＰＡＲγ活性化作用を有する安全な飲食品又は医薬用組成物を提供することができる。動物用飼料としても利用できる。
（４）ツノマタ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲγ活性化組成物は、強いＰＰＡＲγ活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【００１５】
６．特に、褐藻類ワカメには次の効果がある。
（１）褐藻類であるワカメの溶媒抽出物には、特に、ＰＰＡＲβ／δの活性化作用を示す。
（２）褐藻類であるワカメ抽出物由来のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新規な機能性食品や動物用飼料として利用することができる。
（３）天然由来であるワカメは、従来から食経験もあることから、ＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有する安全な飲食品又は医薬用組成物である。動物用飼料としても利用できる。
（４）ワカメ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、強いＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【００１６】
７．特に、褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリには次の効果がある。
（１）褐藻類であるワカメ又はヒジキ、紅藻類であるフノリ又はトサカノリの溶媒抽出物がＰＰＡＲαの活性化作用を示す。
（２）褐藻類であるワカメ又はヒジキ、紅藻類であるフノリ又はトサカノリ抽出物由来のＰＰＡＲα活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新規な機能性飲食品として利用できる。
（３）天然由来であるワカメやヒジキ、フノリ、トサカノリは、従来から食経験もあることから、ＰＰＡＲα活性化作用を有する安全な飲食品又は医薬用組成物である。動物用飼料としても利用できる。
（４）ワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲα活性化組成物は、強いＰＰＡＲα活性化作用を有することから、インスリン抵抗性、II型糖尿病、脂質代謝異常、高血圧、内臓脂肪型肥満又は脂肪肝などの生活習慣病の予防又は改善、内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】各種の海藻抽出物が発揮するＰＰＡＲγアゴニスト活性に関するファーストスクリーニング結果を示す図。
【図２】図１の結果を踏まえ、活性の認められた試料、細胞障害が認められた試料（ツノマタ、トサカノリ（青）、トサカノリ（赤））について、さらに詳細な活性評価（×０．１、０．０５、０．０１及び×１、０．５、０．１）の濃度にて再試験を行った結果を示す図。
【図３】各種の海藻抽出物が発揮するＰＰＡＲβ／δアゴニスト活性に関するファーストスクリーニング結果を示す図。
【図４】図３に示す結果に基づくＰＰＡＲβ／δアゴニスト活性に関するセカンドスクリーニングの結果を示す図。
【図５】各種の海藻抽出物が発揮するＰＰＡＲαアゴニスト活性に関するファーストスクリーニング結果を示す図。
【図６】図５に示す結果に基づくＰＰＡＲαアゴニスト活性に関するセカンドスクリーニングの結果１を示す図。
【図７】図５に示す結果に基づくＰＰＡＲαアゴニスト活性に関するセカンドスクリーニングの結果２を示す図。
【図８】図５に示す結果に基づくＰＰＡＲαアゴニスト活性に関するセカンドスクリーニングの結果３を示す図。
【図９】ワカメ（胞子葉部）の活性試験の結果を示す図。
【００１８】
［実施態様］
本発明は、海藻類に起因するＰＰＡＲに対して優れた活性化作用を有するＰＰＡＲ活性化組成物を見出したものである。
ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体：ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）には、３つのサブタイプ（α、γ、β／δ）が同定されている。
本発明は、ＰＰＡＲ活性化組成物が、海藻が紅藻類ツノマタ、褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリに含まれていることを確認している。これらのＰＰＡＲ活性化組成物は、３つのサブタイプにも活性作用を示す。
これらのＰＰＡＲ活性化組成物は、従来より飲食されていた海藻由来であり、安全性が高い。
【００１９】
本発明のＰＰＡＲ活性化組成物は、飲食品、機能性飲食品、医薬剤に利用でき、生活習慣病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性症候群、アルツハイマー病、炎症性疾患、認知機能障害や、II型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症、動脈硬化症又は心疾患としてあらわれるインスリン抵抗性症候群などの予防又は改善作用に寄与することができる。
飲食品、機能性飲食品、医薬剤として適用できる剤型は、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、液剤など多様であり、サプリメント、医療食、生活習慣病用機能性飲食品があげられる。また、食品用の機能性添加剤としても利用することができる。
【００２０】
特に、紅藻類であるツノマタの抽出物は、強いＰＰＡＲγの活性化作用が確認されたので、実施態様１として示す。
また、褐藻類であるワカメの溶媒抽出物には、強いＰＰＡＲβ／δの活性化作用が確認されたので、実施態様２として示す。
さらに、褐藻類であるワカメ又はヒジキ、紅藻類であるフノリ又はトサカノリの溶媒抽出物は、強いＰＰＡＲαの活性化作用が確認されたので、実施態様３として示す。
【００２１】
［実施態様１］
本実施態様では、飲食品又は医薬用組成物として利用可能なＰＰＡＲγ活性化作用を有する新たな天然物を見出すことを目的とする。
【００２２】
［紅藻類ツノマタに着目した発明の構成］
本発明者らは、上記の課題に対して鋭意研究を重ねた結果、紅藻類であるツノマタの抽出物が強いＰＰＡＲγの活性化作用を有することを見出し、次のように活用できる態様を提案する。
すなわち、本実施態様は次の構成を主構成とする。
１．紅藻類ツノマタを含有することを特徴とするＰＰＡＲγ活性化組成物。
２．生活習慣病の予防又は改善剤である上記１．に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物。
３．インスリン抵抗性症候群又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善剤である上記１．に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物。
４．インスリン抵抗性症候群がII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症又は動脈硬化症である上記２．に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物。
５．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物を含有する飲食品。
６．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲγ活性化組成物を含有する医薬用組成物。
【００２３】
［本実施態様の効果］
紅藻類であるツノマタの溶媒抽出物がＰＰＡＲγの活性化作用を示すことは、新規に提起する作用機序である。
紅藻類であるツノマタ抽出物由来のＰＰＡＲγ活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新規な機能性食品である。
また、天然由来であるツノマタは、従来から食経験もあることから、安全性の高いＰＰＡＲγ活性化作用を有する飲食品又は医薬用組成物を提供することができる。
本発明のツノマタ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲγ活性化組成物は、強いＰＰＡＲγ活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【００２４】
［実施するための形態］
以下に、実施の形態について説明する。
本発明のツノマタ抽出物のＰＰＡＲγ活性化作用は、陽性対象品であるトログリタゾン（別名：ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ、ＣＡＳ：９７３２２−８７−７）と比べて同程度又はそれ以上の作用を有していることが確認され、本発明は新規な海藻由来のＰＰＡＲγ活性化組成物である。
本発明のツノマタ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲγ活性化組成物は、強いＰＰＡＲγ活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
このような作用機序が期待できるツノマタ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲγ活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新たな機能性食品又は医薬品を提供するものである。
本実施形態のＰＰＡＲγ活性化組成物は、ツノマタの乾燥物又は抽出物を有効成分として含有する。
ここで、本実施形態において「乾燥物」とは、上記海藻を天日で、あるいは熱風を利用して人工乾燥したもののことで、それらを粉砕機などで粉砕した粉末も含む。また「抽出物」には、上記海藻を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物の何れもが含まれる。
【００２５】
［ツノマタ抽出物の製造］
本実施形態において、ツノマタ抽出物を製造するために使用する抽出原料は、ツノマタ（学名：Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｏｃｅｌｌａｔｕｓ）である。
ツノマタ（角叉；Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｏｃｅｌｌａｔｕｓ）は、スギノリ目スギノリ科の紅藻である。本州から九州にかけて分布し、潮間帯下部の環境下で生育している。大きさは高さ１５〜２０ｃｍで、体は厚みのある膜質で幅広く、叉状に数回枝分かれして扇形になる。枝は緑が巻き込んだり、ねじれることが多い。生殖器官は藻体全体にできる。色は暗紅色や黄緑色など変異が多い。煮溶かしたものを冷やして固め、海藻こんにゃくにする。
本明細書中で「ツノマタ」とは、スギノリ目スギノリ科のイボツノマタ（疣角叉；Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｓ）、マルバツノマタ（丸葉角叉；Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｎｉｐｐｏｎｉｃｕｓ）、オオバツノマタ（大葉角叉；Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｇｉｇａｎｔｅｕｓ）、コトジツノマタ（琴柱角叉；Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｅｌａｔｕｓ）を含むが、ツノマタ（Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｏｃｅｌｌａｔｕｓ）を使用するのが、より好ましい。
また、本明細書中で「ツノマタ」とはツノマタの体全体をいい、葉片、葉状部、中肋、茎状部、仮根を含む。
【００２６】
ツノマタ抽出物に含有されるＰＰＡＲγ活性化作用を有する物質の詳細は不明であるが、海藻の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、上記海藻からこの作用を有する抽出物を得ることができる。
例えば、上記ツノマタを乾燥した後、そのまま又は粉砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行っても良いし、通常使用される乾燥機を用いて行っても良い。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用しても良い。脱脂等の前処理を行うことにより、上記海藻の極性溶媒による抽出処理を効率良く行うことができる。
【００２７】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒などが挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、海洋深層水などのほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調製することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合物を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後に濾過をして抽出残渣を除去することにより、抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得たれる。
【００２９】
なお、上述のようにして得られた抽出液はそのままでもＰＰＡＲγ活性化組成物の有効成分として使用することが可能であるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
また、上記海藻からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲での脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、サプリメント等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも事実上支障はない。
【００３０】
「ＰＰＡＲγ活性化組成物」
以上のようにして得られるツノマタ由来成分は、優れたＰＰＡＲγ活性化作用を有している。本発明のツノマタ抽出物のＰＰＡＲγ活性化作用は、陽性対象品であるトログリタゾンと比べて同程度又はそれ以上の作用を有していることから、この作用を利用して、ＰＰＡＲγ活性化組成物の有効成分として用いることができる。
【００３１】
このようなＰＰＡＲγ活性化組成物は、飲食品、医薬用組成物等に配合され得る。
ツノマタ抽出物を含むＰＰＡＲγ活性化組成物は、飲食品及び医薬組成物の素材として用いられ得る。ツノマタ抽出物を含むＰＰＡＲγ活性化組成物は、飲食品（例えば、経口用サプリメントのような健康食品）及び医薬用組成物（例えば、経口用の錠剤、カプセル剤）に含有することができる。これらの飲食品及び医薬用組成物は、特に、例えば、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善のために用いられ得る。
【００３２】
飲食品は、ツノマタ抽出物を含むＰＰＡＲγ活性化組成物の他、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、マルチトール、ソルビトール、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、アミノ酸類、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料、保存料などをさらに適宜含有し得る。このような飲食品は、用途に応じて、粉末、顆粒、カプセル、錠、シロップ、懸濁液などの形態に成形され得、飴などにも加工され得る。飲食品（例えば、経口用サプリメント）の製造は、当業者が通常用いる方法によって行われ得る。飲食品へのＰＰＡＲγ活性化組成物の配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。飲食品全量に対してＰＰＡＲγ活性化組成物を、０．１〜１００質量％、より好ましくは１０〜８０質量％（抽出物基準）で含有し得る。
ＰＰＡＲγ活性化組成物又は飲食品組成物は、そのまま摂取することができ、水などの溶媒に溶かす又は懸濁させるなどしても摂取することができる。ＰＰＡＲγ活性化組成物は、食事の前後、又は食間に経口摂取することができる。ＰＰＡＲγ活性化組成物又は飲食品組成物を飲食品に添加して、飲食することもできる。
ＰＰＡＲγ活性化組成物又は飲食品組成物が添加された食品としては、例えば、在宅用糖尿病食、流動食、病者用食品（糖尿病食調製用組み合わせ食品など）、特定保健用食品、ダイエット食品、又は炭水化物を主成分とする飲食品が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３３】
具体的な食品形態としては、例えば、米飯製品、麦製品、野菜製品、乳製品、清涼飲料などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
ＰＰＡＲγ活性化組成物又は飲食品組成物の飲食品への添加又は加工は、当業者が通常用いる方法によって行われ得、配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。人間以外の動物、例えば、家畜又はペット用（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サル等）の飼料への添加も可能である。
【００３４】
本実施形態のＰＰＡＲγ活性化組成物は、優れたＰＰＡＲγ活性化作用を有するとともに安全性にも優れているため、例えば、医薬用組成物として配合するのに好適である。本発明のＰＰＡＲγ活性化組成物は錠剤などの形態にして、これを医薬用組成物として利用することができる。
また、本発明の医薬用組成物は、本発明のＰＰＡＲγ活性化剤以外の添加物又は薬学的に許容可能な担体を含んでも良い。このような添加物又は薬学的に許容可能な担体としては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、緩衝材、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、溶剤、増粘剤、粘液溶解剤、湿潤剤、防腐剤などが挙げられる。
本発明の医薬用組成物の形態は特に制限されるものではないが、経口剤又は非経口剤の何れであってもよい。経口剤としては顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、チンキ剤、ゼリー剤などが挙げられる。非経口剤としては注射剤、点滴剤、軟膏剤、点鼻剤、坐剤などが挙げられる。
【００３５】
本発明の医薬用組成物の投与量は、特に限定されるものではないが、例えば、本発明の医薬用組成物を経口投与する場合、成人１日当たりのツノマタ抽出物の摂取量が０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲となるような投与量とすることができる。また、本発明の医薬用組成物を非経口的に投与する場合が０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重となるような含有量とすることができる。
【００３６】
以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００３７】
［実施態様１の実施例１］
（海藻抽出物の調製）
２３種類の海藻（キリンサイ、マフノリ、ヒジキ、ワカメ（葉部）、ワカメ（茎部）、ツノマタ（黄）、モズク、トサカノリ（青）、トサカノリ（白）、ワカメ（胞子葉部）、ツノマタ（青）、ツノマタ（赤）、トサカノリ（赤）、マツノリ、ホソバノトサカモドキ、アサクサノリ、スギノリ（赤）、フノリ、スギノリ（緑）、コンブ、クロメ、ウップルイノリ、オゴノリ）それぞれ３ｇをコーヒーミルで粉砕し、５０ｍＬ容プラスチックチューブに採集した。次いで、プラスチックチューブに３０ｍＬのメタノールを加え、１５分、３回、超音波抽出を行った。プラスチックチューブを１５，０００ｒ．ｐ．ｍで５分間遠心分離を行った後、上清を減圧濃縮をおこなうことにより、各種海藻抽出物を得た。得られた各種海藻抽出物に６００μＬのｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ）に溶解し、活性評価溶液として、以下の試験に供した。
【００３８】
（ＰＰＡＲγ活性化作用試験）
〈ＣＯＳ−１細胞の形質転換〉
ＣＯＳ−１細胞（Ａｆｒｉｃａｎ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍｏｎｋｅｙの腎線維芽細胞）をトリプシン処理により回収し、１，０００ｒ．ｐ．ｍ、４℃で３分間遠心分離し上清を除去、２ｍＬの培地で細胞を分散して６０ｍｍ培養シャーレ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に５×１０５細胞／穴の密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２存在下にて２４時間培養した。形質転換には、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を使用した。
１．５ｍＬ容チューブにＢｕｆｆｅｒ  ＥＣを１５０μＬ、ｐＰＰＡＲｓ−Ｇａｌ４  ０．２５μｇ、ｐＧａｌ４−Ｌｕｃ  １μｇ、ｐＳＥＡＰ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｖｅｃｔｏｒ  １μｇ、最後にＥｎｈａｎｃｅｒ  １８μＬを加え、ｖｏｒｔｅｘミキサーで１秒間攪拌した。２５℃で２分間放置した後、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅを２５μＬ加え、ｖｏｒｔｅｘミキサーで１０秒間攪拌し、２５℃で５分間放置した。この間に、６０ｍｍ培養シャーレの培地を除去し、４ｍＬの新鮮培地に交換した。その後、１．５ｍＬ容チューブに培地１ｍＬを加え、２回のピペッティング後、６０ｍｍ培養シャーレに全量を滴下し、３７℃、５％ＣＯ２存在下にて１６時間培養した。
【００３９】
〈ＣＯＳ−１細胞への被検試料添加〉
形質転換したＣＯＳ−１細胞をトリプシン処理により回収し、１，０００ｒ．ｐ．ｍ、４℃で３分間遠心分離後上清を除去し、８．５ｍＬの培地に懸濁して９６穴ｍｕｌｔｉ  ｗｅｌｌ  ｗｈｉｔｅ  ｐｌａｔｅ（ＮＵＮＣ社製）に０．８×１０４細胞／穴（１２５μＬ／穴）の密度で播種し、３７℃、５％  ＣＯ２存在下にて１〜２時間培養した。その後、被検試料（各種海藻抽出物）を１．２５μＬ／穴添加し、穏やかに攪拌して３７℃、５％  ＣＯ２存在下にて２４時間培養した。
【００４０】
〈試薬の調製〉
Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液：６０ｍＭ  Ｔｒｉｃｉｎｅ−ＮａＯＨ  （ｐＨ７．８）、１６ｍＭ  （ＣＨ３ＣＯＯ）２Ｍｇ、０．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  Ｓｕｒｆａｃｔ−Ａｍｐｓ  Ｘ−１００  （Ｔｈｅｒｍｏ社製）、０．５ｍＭ  Ｄ−Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｓａｌｔ  （ナカライテスク社製）、１．５ｍＭ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ５’−ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＳＩＧＭＡ社製）、０．５ｍＭ  Ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  （ＳＩＧＭＡ社製）、０．１ｍＭ  β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌを超純水で調製し、１０ｍＬ程度ずつ分注して使用直前まで−２０℃に保存した。
・１×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ：使用直前に５×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒを、水を用いて希釈した。５×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒは、ＮａＣｌ  ４．３８ｇ、Ｔｒｉｓ  ２．４２ｇを９０ｍＬの超純水で溶解した後、１２Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨ７．２に調整し、使用直前まで４℃に保存した。
・Ａｓｓａｙ  ｂｕｆｆｅｒ：Ｌ−ｈｏｍｏａｒｇｉｎｉｎｅ塩酸塩  （Ｃ７Ｈ１６Ｎ４Ｏ２−ＨＣｌ）  ０．９ｇ、  ＭｇＣｌ２  ０．０４ｇを超純水１５８  ｍＬに溶解し、ｄｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ４２  ｍＬを加えた。１２Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨ９．８に調整し、使用直前まで４℃に保存した。
・ＭＵＰ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ：１  ｘ  Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２．７  μＬ／穴、  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ７  μＬ／穴，  １０  ｘ  ＭＵＰ  ０．３  μＬ／ｗｅｌｌを使用直前に混合した。１０  ｘ  ＭＵＰは、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  （ＭＵＰ）  ２．５６  ｍｇを１  ｘ  Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  １０００  μＬで溶解し、使用直前まで−２０℃にて保存した。
【００４１】
〈Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性の測定〉
被検試料添加から２４時間後、培地を２５μＬ／穴回収し、新たな９６穴ｍｕｌｔｉ  ｗｅｌｌ  ｗｈｉｔｅ  ｐｌａｔｅに移した。その後、残りの１００μＬ／穴に、３７℃にて融解したｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液を１００μＬ／穴添加し、暗所にて３５分反応させた後、発光強度を測定した。
【００４２】
〈Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  （ＳＥＡＰ）  活性の測定〉
回収した培地に、１×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２５μＬ／穴を添加し、セロハンテープで蓋をした後、穏やかに攪拌し、６５℃、３０分間、インキュベーションした。その後、４℃にて５分間冷却し、Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ９０μＬ／穴を添加して穏やかに攪拌した。暗所にて２５℃、６０分間反応させた後、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｅｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅに基づく蛍光強度（Ｅｘ＝３６０ｎｍ、Ｅｍ＝４６０ｎｍ）を測定した。
なお、ＰＰＡＲγのアゴニスト活性に比例する発光強度を、ＳＥＡＰ活性にて補正を行うことにより、ＰＰＡＲγアゴニスト活性を評価した。
【００４３】
結果を図１〜図２に示す。
［図１］
図１は、各種の海藻の抽出物を用いたＰＰＡＲγアゴニスト活性に関するファーストスクリーニングの結果である。細胞障害活性試験の結果を鑑み、ＰＰＡＲγアゴニスト活性の評価をした。各試料それぞれ異なる濃度にて活性を評価した（図１）。コントロール物質として、Ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅを用いた。
図２は、図１の結果を踏まえ、活性の認められた試料、細胞障害が認められた試料（ツノマタ、トサカノリ（青）、トサカノリ（赤））について、さらに詳細な活性評価（×０．１、０．０５、０．０１及び×１、０．５、０．１）の濃度にて再試験を行った結果を示す。
図１〜図２に示すように、本発明のツノマタ抽出物のＰＰＡＲγ活性化作用は、陽性対象品であるトログリタゾンと比べて同程度又はそれ以上の作用を有している。
【００４４】
［実施態様１の実施例２］
（錠剤の製造）
実施例１で得たツノマタ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
ツノマタ抽出物配合錠剤
（組成）                                （配合：重量％）
ツノマタ抽出物                          ２４
乳糖                                    ６３
コーンスターチ                          １２
グアーガム                                １
【００４５】
［実施態様１の実施例３］
（ジュースの製造）
実施例１で得たツノマタ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
ツノマタ抽出物含有ジュース
（組成）                                （配合：重量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁                    ５．０
果糖ブドウ糖液糖                        １１．０
クエン酸                                  ０．２
Ｌ−アスコルビン酸                        ０．０２
香料                                      ０．２
色素                                      ０．１
ツノマタ抽出物                            ０．２
水                                      ８３．２８
【００４６】
［実施態様１の効果］
本発明のツノマタ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲγ活性化組成物は、強いＰＰＡＲγの活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【００４７】
［実施態様２］
［実施態様２が解決しようとする課題］
本実施態様は、飲食品又は医薬用組成物として利用可能なＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有する新たな天然物を見出すことを目的とする。
【００４８】
［実施態様２が提供する解決手段］
本発明者らは、上記の課題に対して鋭意研究を重ねた結果、褐藻類であるワカメの抽出物が強いＰＰＡＲβ／δの活性化作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、次の構成を主構成とする。
１．褐藻類ワカメの乾燥物又は抽出物を含有することを特徴とするＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
２．生活習慣病又はメタボリックシンドロームの予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
３．インスリン抵抗性症候群又はパーキンソン病又は認知機能障害から成る１種又は２種以上から成る予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
４．インスリン抵抗性症候群がII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、心疾患である、上記２．に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物。
５．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を含有する飲食品。
６．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を含有する医薬用組成物。
【００４９】
［実施態様２の効果］
褐藻類であるワカメの溶媒抽出物がＰＰＡＲβ／δの活性化作用を示すことは、新規に提起する作用機序である。
褐藻類であるワカメ抽出物由来のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新規な機能性食品である。
また、天然由来であるワカメは、従来から食経験もあることから、安全性の高いＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有する飲食品又は医薬用組成物を提供することができる。
ワカメ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、強いＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【００５０】
［発明を実施するための形態］
以下に、本実施態様２の実施の形態について説明する。
ワカメ抽出物のＰＰＡＲβ／δ活性化作用は、陽性対象品であるＧＷ０７４２（ＣＡＳ：３１７３１８−８４−６）と比べて同程度又はそれ以上の作用を有していることが確認され、これは新規な海藻由来のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物である。
ワカメ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、強いＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
このような作用機序が期待できるワカメ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新たな機能性食品又は医薬品を提供するものである。
本実施形態のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、ワカメの乾燥物又は抽出物を有効成分として含有する。
【００５１】
ここで、本実施形態において「乾燥物」とは、上記海藻を天日で、あるいは熱風を利用して人工乾燥したもののことで、それらを粉砕機などで粉砕した粉末も含む。また「抽出物」には、上記海藻を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物の何れもが含まれる。
【００５２】
［ワカメ抽出物の製造］
本実施形態において、ワカメ抽出物を製造するために使用する抽出原料は、ワカメ（学名：Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）である。
ワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ；若布）は、コンブ目チガイソ科の褐藻である。北海道北東部や南日本の一部を除く北海道から九州にかけて広く分布しており、低潮線から潮下帯の環境下で生育する。大きさは高さ０．５〜２ｍ、体は薄い膜質で、中肋と縁に切れ込みのある葉形になる。中肋から続く茎には、生長するとひだ状の胞子葉（めかぶ）ができる。地形や環境によって葉部の切れ込みや厚さなどに形態差があり、ナンブワカメ（北方型）やナルトワカメ（南方型）などの品種も認められている。色は褐色で、手触りはやや柔らかくて滑らか。日本と朝鮮半島に分布し、近年はフランス、オーストラリアのタスマニア島、ニュージーランドなどに帰化し、移入種として問題になっている一方で、養殖も行われている。
本明細書中で「ワカメ」とは、コンブ目チガイソ科のアオワカメ（青若布；Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｅｔｅｒｓｅｎｉａｎａ）、ヒロメ（広布；Ｕｎｄａｒｉａ  ｕｎｄａｒｉｏｉｄｅｓ）、チガイソ（千賀磯；Ａｌａｒｉａ  ｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａ）、アイヌワカメ（あいぬ若布；Ａｌａｒｉａ  ｐｒａｅｌｏｎｇａ）を含むが、ワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）を使用するのが、より好ましい。
また、本明細書中で「ワカメ」とはワカメの体全体をいい、葉片、葉状部、中肋、茎状部、仮根を含むが、葉部を使用するのが、より好ましい。
【００５３】
ワカメ抽出物に含有されるＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有する物質の詳細は不明であるが、海藻の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、上記海藻からこの作用を有する抽出物を得ることができる。
例えば、上記ワカメを乾燥した後、そのまま又は粉砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行っても良いし、通常使用される乾燥機を用いて行っても良い。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用しても良い。脱脂等の前処理を行うことにより、上記海藻の極性溶媒による抽出処理を効率良く行うことができる。
【００５４】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒などが挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、海洋深層水などのほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００５５】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調製することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合物を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００５６】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後に濾過をして抽出残渣を除去することにより、抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００５７】
なお、上述のようにして得られた抽出液はそのままでもＰＰＡＲβ／δ活性化組成物の有効成分として使用することが可能であるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
また、上記海藻からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲での脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、サプリメント等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも事実上支障はない。
【００５８】
「ＰＰＡＲβ／δ活性化組成物」
以上のようにして得られるワカメ由来成分は、優れたＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有している。図３〜４に示すように、本発明のワカメ抽出物のＰＰＡＲβ／δ活性化作用は、陽性対象品であるＧＷ０７４２と比べて同程度又はそれ以上の作用を有していることから、この作用を利用して、ＰＰＡＲβ／δ活性化組成物の有効成分として用いることができる。
このようなＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、飲食品、医薬用組成物等に配合され得る。
【００５９】
ワカメ抽出物を含むＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、飲食品及び医薬組成物の素材として用いられ得る。ワカメ抽出物を含むＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、飲食品組成物（例えば、経口用サプリメントのような健康食品）及び医薬用組成物（例えば、経口用の錠剤、カプセル剤）に含有することができる。これらの飲食品組成物及び医薬用組成物は、特に、例えば、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、又はパーキンソン病又は認知機能障害の予防又は改善のために用いられ得る。
【００６０】
飲食品は、ワカメ抽出物を含むＰＰＡＲβ／δ活性化組成物の他、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、マルチトール、ソルビトール、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、アミノ酸類、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料、保存料などをさらに適宜含有し得る。このような飲食品は、用途に応じて、粉末、顆粒、カプセル、錠、シロップ、懸濁液などの形態に成形され得、飴などにも加工され得る。飲食品組成物（例えば、経口用サプリメント）の製造は、当業者が通常用いる方法によって行われ得る。飲食品へのＰＰＡＲβ／δ活性化組成物の配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。飲食品は、飲食品組成物全量に対してＰＰＡＲβ／δ活性化組成物を、０．１〜１００質量％、より好ましくは１０〜８０質量％（抽出物基準）で含有し得る。
【００６１】
ＰＰＡＲβ／δ活性化組成物又は飲食品組成物は、そのまま摂取することができ、水などの溶媒に溶かす又は懸濁させるなどしても摂取することができる。ＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、食事の前後、又は食間に経口摂取することができる。ＰＰＡＲβ／δ活性化組成物又は飲食品組成物を飲食品に添加して、飲食することもできる。
ＰＰＡＲβ／δ活性化組成物又は飲食品組成物が添加された食品としては、例えば、在宅用糖尿病食、流動食、病者用食品（糖尿病食調製用組み合わせ食品など）、特定保健用食品、ダイエット食品、又は炭水化物を主成分とする飲食品が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
具体的な食品形態としては、例えば、米飯製品、麦製品、野菜製品、乳製品、清涼飲料などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
ＰＰＡＲβ／δ活性化組成物又は飲食品組成物の飲食品への添加又は加工は、当業者が通常用いる方法によって行われ得、配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。人間以外の動物、例えば、家畜又はペット用（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サル等）の飼料への添加も可能である。
【００６２】
本実施形態のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、優れたＰＰＡＲβ／δ活性化作用を有するとともに安全性にも優れているため、例えば、医薬用組成物として配合するのに好適である。本発明のＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は錠剤などの形態にして、これを医薬用組成物として利用することができる。
また、本実施形態の医薬用組成物は、本実施形態のＰＰＡＲβ／δ活性化剤以外の添加物又は薬学的に許容可能な担体を含んでも良い。このような添加物又は薬学的に許容可能な担体としては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、緩衝材、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、溶剤、増粘剤、粘液溶解剤、湿潤剤、防腐剤などが挙げられる。
医薬用組成物の形態は特に制限されるものではないが、経口剤又は非経口剤の何れであってもよい。経口剤としては顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、チンキ剤、ゼリー剤などが挙げられる。非経口剤としては注射剤、点滴剤、軟膏剤、点鼻剤、坐剤などが挙げられる。
【００６３】
医薬用組成物の投与量は、特に限定されるものではないが、例えば、医薬用組成物を経口投与する場合、成人１日当たりのワカメ抽出物の摂取量が０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲となるような投与量とすることができる。また、医薬用組成物を非経口的に投与する場合が０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重となるような含有量とすることができる。
【００６４】
以下、本実施形態２の実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００６５】
［実施形態２の実施例１］
（海藻抽出物の調製）
２３種類の海藻（キリンサイ、マフノリ、ヒジキ、ワカメ（葉部）、ワカメ（茎部）、ツノマタ（黄）、モズク、トサカノリ（青）、トサカノリ（白）、ワカメ（胞子葉部）、ツノマタ（青）、ツノマタ（赤）、トサカノリ（赤）、マツノリ、ホソバノトサカモドキ、アサクサノリ、スギノリ（赤）、フノリ、スギノリ（緑）、コンブ、クロメ、ウップルイノリ、オゴノリ）それぞれ３ｇをコーヒーミルで粉砕し、５０ｍＬ容プラスチックチューブに採集した。次いで、プラスチックチューブに３０ｍＬのメタノールを加え、１５分、３回、超音波抽出を行った。プラスチックチューブを１５，０００ｒ．ｐ．ｍで５分間遠心分離を行った後、上清を減圧濃縮をおこなうことにより、各種海藻抽出物を得た。得られた各種海藻抽出物を６００μＬのｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ）に溶解し、活性評価溶液として、以下の試験に供した。
【００６６】
（ＰＰＡＲβ／δ活性化作用試験）
〈ＣＯＳ−１細胞の形質転換〉
ＣＯＳ−１細胞（Ａｆｒｉｃａｎ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍｏｎｋｅｙの腎線維芽細胞）をトリプシン処理により回収し、１，０００ｒ．ｐ．ｍ、４℃で３分間遠心分離し上清を除去、２ｍＬの培地で細胞を分散して６０ｍｍ培養シャーレ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に５×１０５細胞／穴の密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２存在下にて２４時間培養した。形質転換には、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を使用した。
１．５ｍＬ容チューブにＢｕｆｆｅｒ  ＥＣを１５０μＬ、ｐＰＰＡＲｓ−Ｇａｌ４  ０．２５μｇ、ｐＧａｌ４−Ｌｕｃ  １μｇ、ｐＳＥＡＰ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｖｅｃｔｏｒ  １μｇ、最後にＥｎｈａｎｃｅｒ  １８μＬを加え、ｖｏｒｔｅｘミキサーで１秒間攪拌した。２５℃で２分間放置した後、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅを２５μＬ加え、ｖｏｒｔｅｘミキサーで１０秒間攪拌し、２５℃で５分間放置した。この間に、６０ｍｍ培養シャーレの培地を除去し、４ｍＬの新鮮培地に交換した。その後、１．５ｍＬチューブに培地１ｍＬを加え、２回のピペッティング後、６０ｍｍ培養シャーレに全量を滴下し、３７℃、５％ＣＯ２存在下にて１６時間培養した。
【００６７】
〈ＣＯＳ−１細胞への被検試料添加〉
形質転換したＣＯＳ−１細胞をトリプシン処理により回収し、１，０００ｒ．ｐ．ｍ、４℃で３分間遠心分離後上清を除去し、８．５ｍＬの培地に懸濁して９６穴ｍｕｌｔｉ  ｗｅｌｌ  ｗｈｉｔｅ  ｐｌａｔｅ（ＮＵＮＣ社製）に０．８×１０４細胞／穴（１２５μＬ／穴）の密度で播種し、３７℃、５％  ＣＯ２存在下にて１〜２時間培養した。その後、被検試料（各種海藻抽出物）を１．２５μＬ／穴添加し、穏やかに攪拌して３７℃、５％  ＣＯ２存在下にて２４時間培養した。
【００６８】
〈試薬の調製〉
・Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液：６０ｍＭ  Ｔｒｉｃｉｎｅ−ＮａＯＨ  （ｐＨ７．８）、１６ｍＭ  （ＣＨ３ＣＯＯ）２Ｍｇ、０．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  Ｓｕｒｆａｃｔ−Ａｍｐｓ  Ｘ−１００  （Ｔｈｅｒｍｏ社製）、０．５ｍＭ  Ｄ−Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｓａｌｔ  （ナカライテスク社製）、１．５ｍＭ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ５’−ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＳＩＧＭＡ社製）、０．５ｍＭ  Ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  （ＳＩＧＭＡ社製）、０．１ｍＭ  β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌを超純水で調製し、１０ｍＬ程度ずつ分注して使用直前まで−２０℃に保存した。
・１×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ：使用直前に５×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒを、水を用いて希釈した。５×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒは、ＮａＣｌ  ４．３８ｇ、Ｔｒｉｓ  ２．４２ｇを９０ｍＬの超純水で溶解した後、１２Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨ７．２に調整し、使用直前まで４℃に保存した。
・Ａｓｓａｙ  ｂｕｆｆｅｒ：Ｌ−ｈｏｍｏａｒｇｉｎｉｎｅ塩酸塩  （Ｃ７Ｈ１６Ｎ４Ｏ２−ＨＣｌ）  ０．９  ｇ、  ＭｇＣｌ２  ０．０４  ｇを超純水１５８  ｍＬに溶解し、ｄｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ４２  ｍＬを加えた。１２Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨ９．８に調整し、使用直前まで４℃に保存した。
・ＭＵＰ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ：１  ｘ  Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２．７  μＬ／穴、  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ７  μＬ／穴、  １０  ｘ  ＭＵＰ  ０．３  μＬ／ｗｅｌｌを使用直前に混合した。１０  ｘ  ＭＵＰは、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  （ＭＵＰ）  ２．５６  ｍｇを１  ｘ  Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  １０００  μＬで溶解し、使用直前まで−２０℃にて保存した。
【００６９】
〈Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性の測定〉
被検試料添加から２４時間後、培地を２５μＬ／穴回収し、新たな９６穴ｍｕｌｔｉ  ｗｅｌｌ  ｗｈｉｔｅ  ｐｌａｔｅに移した。その後、残りの１００μＬ／穴に、３７℃にて融解したｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液を１００μＬ／穴添加し、暗所にて３５分反応させた後、発光強度を測定した。
【００７０】
〈Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  （ＳＥＡＰ）  活性の測定〉
回収した培地に、１×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２５μＬ／穴を添加し、セロハンテープで蓋をした後、穏やかに攪拌し、６５℃、３０分間、インキュベーションした。その後、４℃にて５分間冷却し、Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ９０μＬ／穴を添加して穏やかに攪拌した。暗所にて２５℃、６０分間反応させた後、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｅｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅに基づく蛍光強度（Ｅｘ＝３６０ｎｍ、Ｅｍ＝４６０ｎｍ）を測定した。
なお、ＰＰＡＲβ／δのアゴニスト活性に比例する発光強度を、ＳＥＡＰ活性にて補正を行うことにより、ＰＰＡＲβ／δアゴニスト活性を評価した。
【００７１】
結果を図３、４に示す。
図３はＰＰＡＲβ／δアゴニスト活性に関するファーストスクリーニングの結果である。細胞障害活性試験の結果を鑑み、ＰＰＡＲβ／δアゴニスト活性の評価をした。各試料それぞれ異なる濃度にて活性を評価した（図３）。コントロール物質として、ＧＷ０７４２を用いた。
図４は、図３に示す結果に基づいて、  ＰＰＡＲβ／δアゴニスト活性を再試験した結果である。図３の結果を踏まえ、活性の認められた試料、細胞障害が認められた試料（キリンサイ、ヒジキ、ワカメ（葉部）、ツノマタ（黄）、トサカノリ（青）、ツノマタ（青）、ツノマタ（赤）、トサカノリ（赤）、ホソバノトサカモドキ）について、さらに詳細な活性評価（×０．１、０．０５、０．０１及び×１．０、０．５、０．１）を行った（図４）。
図３、４に示すように、本実施態様２のワカメ抽出物のＰＰＡＲβ／δ活性化作用は、陽性対象品であるＧＷ０７４２と比べて同程度又はそれ以上の作用を有している。また、ヒジキと比較しても、ワカメ抽出物のそれは、同程度又はそれ以上の作用を有している。
【００７２】
［実施態様２の実施例２］
（錠剤の製造）
実施例１で得たワカメ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
ワカメ抽出物配合錠剤
（組成）                                （配合：重量％）
ワカメ抽出物                            ２４
乳糖                                    ６３
コーンスターチ                          １２
グアーガム                                １
【００７３】
［実施態様２の実施例３］
（ジュースの製造）
実施例１で得たワカメ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
ワカメ抽出物含有ジュース
（組成）                                （配合：重量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁                    ５．０
果糖ブドウ糖液糖                        １１．０
クエン酸                                  ０．２
Ｌ−アスコルビン酸                        ０．０２
香料                                      ０．２
色素                                      ０．１
ワカメ抽出物                              ０．２
水                                      ８３．２８
【００７４】
［実施態様２の効果］
本発明のワカメ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲβ／δ活性化組成物は、強いＰＰＡＲβ／δの活性化作用を有することから、インスリン抵抗性症候群であるII型糖尿病、高インスリン血症、脂質代謝異常、高血圧、肥満症（特に、内臓脂肪型肥満）又は動脈硬化症、又はアルツハイマー病又は炎症性疾患の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【００７５】
［実施態様３］
［本実施態様の課題］
本実施態様は、飲食品又は医薬用組成物として利用可能なＰＰＡＲα活性化作用を有する新たな天然物を見出すことを目的とする。
【００７６】
［課題を解決するための手段］  
本発明者らは、上記の課題に対して鋭意研究を重ねた結果、褐藻類であるワカメ、ヒジキ、紅藻類であるフノリ、トサカノリの抽出物が、強いＰＰＡＲαの活性化作用を有することを見出した。
すなわち、本実施態様は、次の構成を主構成とする。
１．褐藻類ワカメ、褐藻類ヒジキ、紅藻類フノリ、紅藻類トサカノリの乾燥物又は抽出物から選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするＰＰＡＲα活性化組成物。
２．生活習慣病の予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲα活性化組成物。
３．内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）の予防又は改善剤である、上記１．に記載のＰＰＡＲα活性化組成物。
４．生活習慣病がインスリン抵抗性、II型糖尿病、脂質代謝異常、高血圧、内臓脂肪型肥満又は脂肪肝である、上記２．に記載のＰＰＡＲα活性化組成物。
５．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲα活性化組成物を含有する飲食品。
６．上記１．〜４．の何れか１に記載のＰＰＡＲα活性化組成物を含有する医薬用組成物。
【００７７】
［本実施態様の効果］
褐藻類であるワカメ又はヒジキ、紅藻類であるフノリ又はトサカノリの溶媒抽出物がＰＰＡＲαの活性化作用を示すことは、新規に提起する作用機序である。
褐藻類であるワカメ又はヒジキ、紅藻類であるフノリ又はトサカノリ抽出物由来のＰＰＡＲα活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新規な機能性食品である。
また、天然由来であるワカメやヒジキ、フノリ、トサカノリは、従来から食経験もあることから、安全性の高いＰＰＡＲα活性化作用を有する飲食品又は医薬用組成物を提供することができる。
ワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲα活性化組成物は、強いＰＰＡＲα活性化作用を有することから、インスリン抵抗性、II型糖尿病、脂質代謝異常、高血圧、内臓脂肪型肥満又は脂肪肝などの生活習慣病の予防又は改善、内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【００７８】
［発明を実施するための形態］
以下に、本実施態様の形態について説明する。
ワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物のＰＰＡＲα活性化作用は、陽性対象品であるＷＹ１４６４３（別名：Ｐｉｒｉｎｉｘｉｃ  ａｃｉｄ、ＣＡＳ：５０８９２−２３−４）と比べて同程度又はそれ以上の作用を有していることが確認された。これは新規な海藻由来のＰＰＡＲα活性化組成物である。
ワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲα活性化組成物は、強いＰＰＡＲα活性化作用を有することから、インスリン抵抗性、II型糖尿病、脂質代謝異常、高血圧、内臓脂肪型肥満又は脂肪肝などの生活習慣病の予防又は改善、内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
このような作用機序が期待できるワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲα活性化組成物を含む飲食品又は医薬用組成物は、新たな機能性食品又は医薬品を提供するものである。
【００７９】
本実施形態のＰＰＡＲα活性化組成物は、ワカメの乾燥物又は抽出物、又はヒジキの乾燥物又は抽出物、フノリの乾燥物又は抽出物、トサカノリの乾燥物又は抽出物を有効成分として含有する。
ここで、本実施形態において「乾燥物」とは、上記海藻を天日で、あるいは熱風を利用して人工乾燥したもののことで、それらを粉砕機などで粉砕した粉末も含む。また「抽出物」には、上記海藻を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物の何れもが含まれる。
【００８０】
［ワカメ抽出物、ヒジキ抽出物、フノリ抽出物及びトサカノリ抽出物の製造］
本実施形態において、ワカメ抽出物、ヒジキ抽出物、フノリ抽出物及びトサカノリ抽出物を製造するために使用する抽出原料は、ワカメ（学名：Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）、ヒジキ（学名：Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ）、マフノリ（学名：Ｇｌｏｉｏｐｅｌｔｉｓ  ｔｅｎａｘ）、トサカノリ（学名：Ｍｅｒｉｓｔｏｔｈｅｃａ  ｐａｐｕｌｏｓａ）である。
【００８１】
ワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ；若布）は、コンブ目チガイソ科の褐藻である。北海道北東部や南日本の一部を除く北海道から九州にかけて広く分布しており、低潮線から潮下帯の環境下で生育する。大きさは高さ０．５〜２ｍ、体は薄い膜質で、中肋と縁に切れ込みのある葉形になる。中肋から続く茎には、生長するとひだ状の胞子葉（めかぶ）ができる。地球や環境によって葉部の切れ込みや厚さなどに形態差があり、ナンブワカメ（北方型）やナルトワカメ（南方型）などの品種も認められている。色は褐色で、手触りはやや柔らかくて滑らか。日本と朝鮮半島に分布し、近年はフランス、オーストラリアのタスマニア島、ニュージーランドなどに帰化し、移入種として問題になっている一方で、養殖も行われている。
本明細書中で「ワカメ」とは、コンブ目チガイソ科のアオワカメ（青若布；Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｅｔｅｒｓｅｎｉａｎａ）、ヒロメ（広布；Ｕｎｄａｒｉａ  ｕｎｄａｒｉｏｉｄｅｓ）、チガイソ（千賀磯；Ａｌａｒｉａ  ｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａ）、アイヌワカメ（あいぬ若布；Ａｌａｒｉａ  ｐｒａｅｌｏｎｇａ）を含むが、ワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）を使用するのが、より好ましい。
【００８２】
ヒジキ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ；鹿尾菜、海鹿毛）は、ヒバマタ目ホンダワラ科の褐藻である。日本北海道南部、本州（海岸北部を除く）から九州、南西諸島に分布しており、潮間帯下部の環境下に生息しており、コンブやワカメと並んで重要な食用海藻の１つ。大きさは高さ２０〜１００ｃｍで、体は円柱状で、岩上を匍匐する繊維状の根から主枝を伸ばす。葉と小枝は同じで多肉質。主枝からは枝が段々に１か所からまとまって出ることが多い。芽生えの頃には幅広く縁に鋸歯のある葉が出る。また太平洋側とは異なり、日本海側のものでは上部の葉も扁平で幅が広くなることがある。小枝の一部は膨らんで中空の気泡状になる。早春から春にかけて潮間帯下部を埋め尽くすように繁茂する。夏には枝の部分は消失するが、繊維状の根は数年間残って翌春にまた枝を伸ばす。色は緑褐色や黄褐色で、乾燥した黒いものしか見たことがない人は、驚くことが多い。
本明細書中で「ヒジキ」とは、ヒバマタ目ホンダワラ科のヤツマタモク（八ツ股藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｐａｔｅｎｓ）、カラクサモク（唐草藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄｕｍ）、ヨレモク（撚れ藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｓｉｌｉｑｕａｓｔｒｕｍ）、ノコギリモク（鋸藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｍａｃｒｏｃａｒｐｕｍ）、オオバノコギリモク（大葉鋸藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｇｉｇａｎｔｅｉｆｏｌｉｕｍ）、コブクロモク（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｃｒｉｓｐｉｆｏｌｉｕｍ）、フシスジモク（節筋藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｃｏｎｆｕｓｕｍ）、トゲモク（棘藻屑；Ｓａｒｄａｓｓｕｍ  ｍｉｃｒａｃａｎｔｈｕｍ）、イソモク（磯藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｅｍｉｐｈｙｌｌｕｍ）、ホンダワラ（馬尾藻、神馬藻、本俵；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｌｖｅｌｌｕｍ）、マメタワラ（豆俵；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｐｉｌｕｌｉｆｅｒｕｍ）、タマハハキモク（玉箒藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｍｕｔｉｃｕｍ）、ナラサモ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｎｉｇｒｉｆｏｌｉｕｍ）、タマナシモク（玉無し藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｎｉｐｐｏｎｉｃｕｍ）、フタエモク（二重藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｄｕｐｌｉｃａｔｕｍ）アカモク（赤藻屑；Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ）、ヤバネモク（矢羽根藻屑；Ｈｏｒｍｏｐｈｙｓａ  ｃｕｎｅｉｆｏｒｍｉｓ）、ジョロモク（女郎藻屑；Ｍｙａｇｒｏｐｓｉｓ  ｍｙａｇｒｏｉｄｅｓ）、ウガノモク（うがの藻屑；Ｃｙｓｔｏｓｅｉｒａ  ｈａｋｏｄａｔｅｎｓｉｓ）、スギモク（杉藻屑；Ｃｏｃｃｏｐｈｏｒａ  ｌａｎｇｓｄｏｒｆｉｉ）、ラッパモク（喇叭藻屑；Ｔｕｒｂｉｎａｒｉａ  ｏｒｎａｔａ）を含むが、ヒジキ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ）を使用するのが、より好ましい。
【００８３】
マフノリ（真布海苔；Ｇｌｏｉｏｐｅｌｔｉｓ  ｔｅｎａｘ）は、スギノリ目フノリ科の紅藻である。本州太平洋岸中〜南部、四国、九州、瀬戸内海、本州日本海南部に分布し、潮間帯上部から下部に生息している。大きさは高さ１０〜２０ｃｍで、体は円柱状かやや扁平で、叉状に枝分かれして伸び、先は細くなる。フクロフノリによく似ているが、中実で分岐部はくびれない。また、フクロフノリよりもやや下側の場所に生え、分布はより南に偏る。色は暗紅紫色で、手触りはやや硬い。本種は糊原料とされるフノリ類の中でも、特に上質とされている。
フノリ抽出物を製造するために使用する抽出原料はマフノリだけに限ったものではなく、同じスギノリ目フノリ科の褐藻であるフクロフノリ（袋布海苔；Ｇｌｏｉｏｐｅｌｔｉｓ  ｆｕｒｃａｔａ）、ハナフノリ（花布海苔；Ｇｌｏｉｏｐｅｌｔｉｓ  ｃｏｍｐｌａｎａｔａ）でも良い。
【００８４】
トサカノリ（鶏冠海苔；Ｍｅｒｉｓｔｏｔｈｅｃａ  ｐａｐｕｌｏｓａ）は、スギノリ目ミリン科の紅藻である。本州太平洋岸中〜南部、伊豆諸島、九州、瀬戸内海、南西諸島に分布し、低潮線下から潮下帯の環境下で生育している。大きさは高さ２０〜３０ｃｍで、体はやや厚みのある膜質で、叉状に枝分かれして全体は扇状や掌状になる。若い個体は全縁だが、やがて縁からは長さの異なる小枝を多数出す。名前は枝の形をニワトリの鶏冠に見立てたもの。色は鮮やかな紅色。手触りは弾力がある。よく打ち上げられる食用海藻としても知られるが、天然資源は減少しており、環境省版レッドリストの準絶滅危惧種に指定されている。
本明細書中で「トサカノリ」とは、スギノリ目ミリン科のミリン（Ｓｏｌｉｅｒｉａ  ｐａｃｉｆｉｃａ）、トゲキリンサイ（棘麒麟菜；Ｅｕｃｈｅｕｍａ  ｓｅｒｒａ）を含むが、トサカノリ（Ｍｅｒｉｓｔｏｔｈｅｃａ  ｐａｐｕｌｏｓａ）を使用するのが、より好ましい。
【００８５】
本明細書中で「ワカメ」又は「ヒジキ」、「フノリ」、「トサカノリ」とはワカメ又はヒジキ、フノリ、トサカノリの体全体をいい、葉片、葉状部、中肋、茎状部、仮根を含む。
【００８６】
ワカメ抽出物、ヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物のそれぞれに含有されるＰＰＡＲα活性化作用を有する物質の詳細は不明であるが、海藻の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、上記海藻からこの作用を有する抽出物を得ることができる。
例えば、上記海藻を乾燥した後、そのまま又は粉砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行っても良いし、通常使用される乾燥機を用いて行っても良い。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用しても良い。脱脂等の前処理を行うことにより、上記海藻の極性溶媒による抽出処理を効率良く行うことができる。
【００８７】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒などが挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、海洋深層水などのほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００８８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調製することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合物を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００８９】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後に濾過をして抽出残渣を除去することにより、抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００９０】
なお、上述のようにして得られた抽出液はそのままでもＰＰＡＲα活性化組成物の有効成分として使用することが可能であるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
また、上記海藻からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲での脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、サプリメント等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも事実上支障はない。
【００９１】
「ＰＰＡＲα活性化組成物」
以上のようにして得られる各海藻由来成分は、優れたＰＰＡＲα活性化作用を有している。図５〜８に示すように、本発明のワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出液のＰＰＡＲα活性化作用は、陽性対象品であるＷＹ１４６４３と比べて同程度又はそれ以上の作用を有していることから、この作用を利用して、ＰＰＡＲα活性化組成物の有効成分として用いることができる。
このようなＰＰＡＲα活性化組成物は、飲食品、医薬用組成物等に配合され得る。
【００９２】
ワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を含むＰＰＡＲα活性化組成物は、飲食品及び医薬組成物の素材として用いられ得る。ワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を含むＰＰＡＲα活性化組成物は、飲食品組成物（例えば、経口用サプリメントのような健康食品）及び医薬用組成物（例えば、経口用の錠剤、カプセル剤）に含有することができる。これらの飲食品組成物及び医薬用組成物は、特に、例えば、インスリン抵抗性、II型糖尿病、脂質代謝異常、高血圧、内臓脂肪型肥満又は脂肪肝などの生活習慣病の予防又は改善、内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）の予防又は改善のために用いられ得る。
【００９３】
飲食品は、ワカメ抽出物又はヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を含むＰＰＡＲα活性化組成物の他、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、マルチトール、ソルビトール、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、アミノ酸類、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料、保存料などをさらに適宜含有し得る。このような飲食品は、用途に応じて、粉末、顆粒、カプセル、錠、シロップ、懸濁液などの形態に成形され得、飴などにも加工され得る。飲食品組成物（例えば、経口用サプリメント）の製造は、当業者が通常用いる方法によって行われ得る。飲食品へのＰＰＡＲα活性化組成物の配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。飲食品は、飲食品組成物全量に対してＰＰＡＲα活性化組成物を、０．１〜１００質量％、より好ましくは１０〜８０質量％（抽出物基準）で含有し得る。
【００９４】
ＰＰＡＲα活性化組成物又は飲食品組成物は、そのまま摂取することができ、水などの溶媒に溶かす又は懸濁させるなどしても摂取することができる。ＰＰＡＲα活性化組成物は、食事の前後、又は食間に経口摂取することができる。ＰＰＡＲα活性化組成物又は飲食品組成物を飲食品に添加して、飲食することもできる。
ＰＰＡＲα活性化組成物又は飲食品組成物が添加された食品としては、例えば、在宅用糖尿病食、流動食、病者用食品（糖尿病食調製用組み合わせ食品など）、特定保健用食品、ダイエット食品、又は炭水化物を主成分とする飲食品が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
具体的な食品形態としては、例えば、米飯製品、麦製品、野菜製品、乳製品、清涼飲料などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００９５】
ＰＰＡＲα活性化組成物又は飲食品組成物の飲食品への添加又は加工は、当業者が通常用いる方法によって行われ得、配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。人間以外の動物、例えば、家畜又はペット用（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サル等）の飼料への添加も可能である。
【００９６】
本実施形態のＰＰＡＲα活性化組成物は、優れたＰＰＡＲα活性化作用を有するとともに安全性にも優れているため、例えば、医薬用組成物として配合するのに好適である。本発明のＰＰＡＲα活性化組成物は錠剤などの形態にして、これを医薬用組成物として利用することができる。
【００９７】
また、本発明の医薬用組成物は、本発明のＰＰＡＲα活性化剤以外の添加物又は薬学的に許容可能な担体を含んでも良い。このような添加物又は薬学的に許容可能な担体としては、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、緩衝材、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、溶剤、増粘剤、粘液溶解剤、湿潤剤、防腐剤などが挙げられる。
【００９８】
医薬用組成物の形態は特に制限されるものではないが、経口剤又は非経口剤の何れであってもよい。経口剤としては顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、チンキ剤、ゼリー剤などが挙げられる。非経口剤としては注射剤、点滴剤、軟膏剤、点鼻剤、坐剤などが挙げられる。
医薬用組成物の投与量は、特に限定されるものではないが、例えば、医薬用組成物を経口投与する場合、成人１日当たりのワカメ抽出物の摂取量が０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲となるような投与量とすることができる。また、本発明の医薬用組成物を非経口的に投与する場合が０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重となるような含有量とすることができる。
以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００９９】
［実施形態３の実施例１］
（海藻抽出物の調製）
２３種類の海藻（キリンサイ、マフノリ、ヒジキ、ワカメ（葉部）、ワカメ（茎部）、ツノマタ（黄）、モズク、トサカノリ（青）、トサカノリ（白）、ワカメ（胞子葉部）、ツノマタ（青）、ツノマタ（赤）、トサカノリ（赤）、マツノリ、ホソバノトサカモドキ、アサクサノリ、スギノリ（赤）、フノリ、スギノリ（緑）、コンブ、クロメ、ウップルイノリ、オゴノリ）それぞれ３ｇをコーヒーミルで粉砕し、５０ｍＬ容プラスチックチューブに採集した。次いで、プラスチックチューブに３０ｍＬのメタノールを加え、１５分、３回、超音波抽出を行った。プラスチックチューブを１５，０００ｒ．ｐ．ｍで５分間遠心分離を行った後、上清を減圧濃縮をおこなうことにより、各種海藻抽出物を得た。得られた各種海藻抽出物を６００μＬのｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ（ＤＭＳＯ）に溶解し、活性評価溶液として、以下の試験に供した。
【０１００】
（ＰＰＡＲα活性化作用試験）
〈ＣＯＳ−１細胞の形質転換〉
ＣＯＳ−１細胞（Ａｆｒｉｃａｎ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍｏｎｋｅｙの腎線維芽細胞）をトリプシン処理により回収し、１，０００ｒ．ｐ．ｍ、４℃で３分間遠心分離し上清を除去、２ｍＬの培地で細胞を分散して６０ｍｍ培養シャーレ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に５×１０５細胞／穴の密度で播種した後、３７℃、５％ＣＯ２存在下にて２４時間培養した。形質転換には、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を使用した。
１．５ｍＬ容チューブにＢｕｆｆｅｒ  ＥＣを１５０μＬ、ｐＰＰＡＲｓ−Ｇａｌ４  ０．２５μｇ、ｐＧａｌ４−Ｌｕｃ  １μｇ、ｐＳＥＡＰ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｖｅｃｔｏｒ  １μｇ、最後にＥｎｈａｎｃｅｒ  １８μＬを加え、ｖｏｒｔｅｘミキサーで１秒間攪拌した。２５℃で２分間放置した後、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅを２５μＬ加え、ｖｏｒｔｅｘミキサーで１０秒間攪拌し、２５℃で５分間放置した。この間に、６０ｍｍ培養シャーレの培地を除去し、４ｍＬの新鮮培地に交換した。その後、１．５ｍＬチューブに培地１ｍＬを加え、２回のピペッティング後、６０ｍｍ培養シャーレに全量を滴下し、３７℃、５％ＣＯ２存在下にて１６時間培養した。
【０１０１】
〈ＣＯＳ−１細胞への被検試料添加〉
形質転換したＣＯＳ−１細胞をトリプシン処理により回収し、１，０００ｒ．ｐ．ｍ、４℃で３分間遠心分離後上清を除去し、８．５ｍＬの培地に懸濁して９６穴ｍｕｌｔｉ  ｗｅｌｌ  ｗｈｉｔｅ  ｐｌａｔｅ（ＮＵＮＣ社製）に０．８×１０４細胞／穴（１２５μＬ／穴）の密度で播種し、３７℃、５％  ＣＯ２存在下にて１〜２時間培養した。その後、被検試料（各種海藻抽出物）を１．２５μＬ／穴添加し、穏やかに攪拌して３７℃、５％  ＣＯ２存在下にて２４時間培養した。
【０１０２】
〈試薬の調製〉
Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液：６０ｍＭ  Ｔｒｉｃｉｎｅ−ＮａＯＨ  （ｐＨ７．８）、１６ｍＭ  （ＣＨ３ＣＯＯ）２Ｍｇ、０．４ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％  Ｓｕｒｆａｃｔ−Ａｍｐｓ  Ｘ−１００  （Ｔｈｅｒｍｏ社製）、０．５ｍＭ  Ｄ−Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｓａｌｔ  （ナカライテスク社製）、１．５ｍＭ  Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ５’−ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＳＩＧＭＡ社製）、０．５ｍＭ  Ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  （ＳＩＧＭＡ社製）、０．１ｍＭ  β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌを超純水で調製し、１０ｍＬ程度ずつ分注して使用直前まで−２０℃に保存した。
１×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ：使用直前に５×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒを、水を用いて希釈した。５×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒは、ＮａＣｌ  ４．３８ｇ、Ｔｒｉｓ  ２．４２ｇを９０ｍＬの超純水で溶解した後、１２Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨ７．２に調整し、使用直前まで４℃に保存した。
Ａｓｓａｙ  ｂｕｆｆｅｒ：Ｌ−ｈｏｍｏａｒｇｉｎｉｎｅ塩酸塩  （Ｃ７Ｈ１６Ｎ４Ｏ２−ＨＣｌ）  ０．９ｇ、  ＭｇＣｌ２  ０．０４ｇを超純水１５８  ｍＬに溶解し、ｄｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ４２  ｍＬを加えた。１２Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨ９．８に調整し、使用直前まで４℃に保存した。
ＭＵＰ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ：１  ｘ  Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２．７  μＬ／穴、  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ７  μＬ／穴、  １０  ｘ  ＭＵＰ  ０．３  μＬ／ｗｅｌｌを使用直前に混合した。１０  ｘ  ＭＵＰは、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  （ＭＵＰ）  ２．５６  ｍｇを１  ｘ  Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  １０００  μＬで溶解し、使用直前まで−２０℃にて保存した。
【０１０３】
〈Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性の測定〉
被検試料添加から２４時間後、培地を２５μＬ／穴回収し、新たな９６穴ｍｕｌｔｉ  ｗｅｌｌ  ｗｈｉｔｅ  ｐｌａｔｅに移した。その後、残りの１００μＬ／穴に、３７℃にて融解したｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液を１００μＬ／穴添加し、暗所にて３５分反応させた後、発光強度を測定した。
【０１０４】
〈Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  （ＳＥＡＰ）  活性の測定〉
回収した培地に、１×Ｄｉｌｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２５μＬ／穴を添加し、セロハンテープで蓋をした後、穏やかに攪拌し、６５℃、３０分間、インキュベーションした。その後、４℃にて５分間冷却し、Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ９０μＬ／穴を添加して穏やかに攪拌した。暗所にて２５℃、６０分間反応させた後、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｅｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅに基づく蛍光強度（Ｅｘ＝３６０ｎｍ、Ｅｍ＝４６０ｎｍ）を測定した。
なお、ＰＰＡＲαのアゴニスト活性に比例する発光強度を、ＳＥＡＰ活性にて補正を行うことにより、ＰＰＡＲαアゴニスト活性を評価した。
【０１０５】
結果を図５〜図９に示す。
図５はＰＰＡＲαアゴニスト活性に関するファーストスクリーニングの結果を示している。
ＰＰＡＲαアゴニスト活性の評価（ファーストスクリーニング）は、各試料それぞれ同じ濃度にて、活性を評価した。コントロール物質として、ＷＹ１４６４３を用いた。
図５に示すように、コントロール物質であるＷＹ１４６４３より高い活性（見かけ上）を示すエキスとして、ヒジキ、ワカメ（葉部）、ワカメ（茎部）、トサカノリ（白）、ツノマタ（赤）、トサカノリ（赤）、アサクサノリに認められた。しかしながら、トサカノリ（青）、メカブ（ワカメ茎部）、クロメ、オゴノリに、細胞障害活性が認められた。
そこで、ファーストスクリーニングの結果を踏まえ、活性の認められた試料、細胞障害が認められた試料について、０．１倍、０．０５倍、０．０１倍又は１倍、０．２５倍、０．０６倍の濃度にて、再度実験を行った。その結果を、図６〜図８に示す。
【０１０６】
図６〜図８に示すように、フノリ、トサカノリ（青）、ワカメ（胞子葉部）、マフノリに、強い活性が認められた。特に、ワカメ（胞子葉部）は、非常に強い活性を示した。
特に活性の強かったワカメの胞子葉部についてさらに詳細に検討したところ、図９に示すように、原液を２００倍に希釈しても、比較的高い活性が存在していた。
以上、図５〜図９に示すように、本発明のワカメ抽出物及びヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物のＰＰＡＲα活性化作用は、陽性対象品であるＷＹ１４６４３と比べて同程度又はそれ以上の作用を有している。
【０１０７】
［実施態様３の実施例２］
（錠剤の製造）
実施例１で得たワカメ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
ワカメ抽出物配合錠剤
（組成）                                （配合：重量％）
ワカメ抽出物                            ２４
乳糖                                    ６３
コーンスターチ                          １２
グアーガム                                １
【０１０８】
［実施態様３の実施例３］
実施例１で得たフノリ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
フノリ抽出物配合錠剤
（組成）                                （配合：重量％）
フノリ抽出物                            ２０
マルトース                              ６５
デキストリン                            １４
キサンタンガム                            １
【０１０９】
［実施態様３の実施例４］
（ジュースの製造）
実施例１で得たヒジキ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
ヒジキ抽出物含有ジュース
（組成）                                （配合：重量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁                    ５．０
果糖ブドウ糖液糖                        １１．０
クエン酸                                  ０．２
Ｌ−アスコルビン酸                        ０．０２
香料                                      ０．２
色素                                      ０．１
ヒジキ抽出物                              ０．２
水                                      ８３．２８
【０１１０】
［実施態様３の実施例５］
実施例１で得たトサカノリ抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
トサカノリ抽出物含有ジュース
（組成）                                （配合：重量％）
冷凍ぶどう果汁                          ６７．０
果糖ブドウ糖液糖                          ９．０
砂糖                                      ２．０
酸味料                                  １０．０
香料                                      ２．０
トサカノリ抽出物                        １０．０
【０１１１】
［実施態様３の効果］
本実施態様のワカメ抽出物及びヒジキ抽出物、フノリ抽出物、トサカノリ抽出物を有効成分とするＰＰＡＲα活性化組成物は、強いＰＰＡＲαの活性化作用を有することから、インスリン抵抗性、II型糖尿病、脂質代謝異常、高血圧、内臓脂肪型肥満又は脂肪肝などの生活習慣病の予防又は改善、内臓脂肪症候群（メタボリックシンドローム）の予防又は改善に、大きく寄与し得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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