(57)【要約】【課題】微生物感染の防止及び治療の提供。【解決手段】微生物感染（バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染等）の防止及び治療のための組成物が記載される。組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む。酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である。物質は、非純化天然物質、または酵素のための精製基質を含む物質であり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
図面に記載の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物感染、特に、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止及び治療に関する。本発明の方法は、慢性的な創傷（慢性的な皮膚創傷及び熱傷等）の治療に特に有用である。本発明は、バイオフィルムの形成を防止もしくは阻害するための、または既存のバイオフィルムの増殖もしくは播種を防止もしくは阻害するためのインビトロの方法にも関する。本発明は、微生物感染の防止または治療のために使用され得る、組成物、混合物、デバイス、キット及び創傷ドレッシング材にも関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性的な創傷は、時宜を得た様式での典型的な治癒プロセスを介して予想されるように進行しない創傷である。慢性的な創傷は、３週間を超えて存在する創傷、または、解剖学的及び機能的な全体性を産生するように秩序正しく時宜を得たプロセスを介して進行しないか、もしくは修復プロセスを介して持続的及び機能的な結果を確立せずに進行する、創傷、として定義された（Ｌａｚａｒｕｓ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９４；１３０（４）：４８９−４９３）。
【０００３】
慢性的な創傷は重要な健康問題である（Ｃｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｕｌｃｅｒｓ  ２０１３、Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ４８７０２４）。米国における慢性的な創傷の管理及び治療に関連する医療費は、１年で２００億ドルを上回ることが報告されている。治癒不全創傷の治療及び管理は困難である。従来、基本的な創傷ケアは、外科的デブリードマン、手動の洗浄、保湿ドレッシング材、ならびに局所及び／または全身の抗微生物療法からなっていた。創傷治癒の科学における並はずれた進歩があったが、慢性的な創傷の罹患率及び出現率ならびにそれらに関連する合併症は増え続けている。
【０００４】
慢性的な創傷中での細菌性バイオフィルムの存在及び複雑性は、治癒不全創傷の重要な態様として最近認識されている。細菌性バイオフィルムは、多菌性生物体（細菌性、真菌及びおそらくウイルス性）の固着したコロニーであり、それは多くの場合共生性である。これらのバイオフィルムコロニーは、保護被覆を産生して宿主防御からコロニーを保護する。バイオフィルムに特有のこの保護物質の特徴は動的なことであり、その構成要素の産生は、創傷床中の敵対する環境（局所用抗生物質の存在等）が引き金となっていると思われる。バイオフィルムは、炎症細胞の治癒態様を阻害する生存及び防衛の機構を有し、抗生物質（局所用及び全身性）及び他の治療法に耐性があり、新しいバイオフィルム増殖を促進する細胞間コミュニケーション経路（菌体数感知）を開始し、難治性の治癒不全創傷をもたらすことが示された。
【０００５】
細菌性バイオフィルムは、表面へ付着または表面界面で形成され、自身で分泌した細胞外高分子物質（ＥＰＳ）中に包埋された複雑なコミュニティーとして組織化される、凝集細菌として特徴づけられる。これらの動的細菌集団は、単一の細菌種もしくは真菌種から優先的になり得るか、または、より一般的には、連続的に変化している複数の多様性のある種を含有する多菌性であり得る。
【０００６】
すべてのバイオフィルムは、それらの所在位置にかかわらず、複数の一般的な特色を共有する。これらには、細菌細胞を一緒に保持する細胞外高分子マトリックスの合成、ならびに自由生活または「浮遊性」細胞によって示される耐性と比較して、宿主防御及び抗微生物剤による殺傷への耐性の増加が含まれる。バイオフィルムコロニーに固有の保護的性質は、大部分のバイオフィルムに関連する感染の撲滅を困難または不可能にする。
【０００７】
バイオフィルムの発達は３つの別個のステージへと分けることができ（Ｋａｐｌａｎ，Ｊ  Ｄｅｎｔ  Ｒｅｓ８９（３）２０１０：２０５−２１８）、それらは、細胞が表面へ付着すること、細胞が固着したバイオフィルムコロニーへと増殖すること、及びコロニーからの細胞が周囲の媒質の中へ離脱すること、である。細菌細胞と表面との間の最初の可逆的相互作用は、非特異的なＬｉｆｓｈｉｔｚ−ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗａａｌｓ力、ルイス酸／塩基間力、及び静電力によって媒介される。この一時的な付着は、細菌細胞表面または細胞付属器官（線毛及び線毛等）上に位置する宿主特異的及び組織特異的なアドへジンによって強化される。これは、細菌細胞が表面へ不可逆的に付着することをもたらす。
【０００８】
バイオフィルム発達の第２のステージは、細菌が表面上で増倍すること、及び同時に細胞外高分子マトリックスが合成されること、を包含する。マトリックスは、塊中の細菌細胞を一緒に保持し、下にある表面へ細菌塊を堅固に付着させる。高分子バイオフィルムマトリックス構成要素のうちのいくつかの例には、グルカンポリサッカライド、タンパク性線毛、及び細胞外の二本鎖ＤＮＡが含まれる。バイオフィルムコロニーのための構造的な「スキャフォールド」の提供に加えて、マトリックスは、拡散障壁として働くことによって、または抗微生物剤へ直接結合し、バイオフィルム細胞へのそれらのアクセスを防止することによって、のいずれかで、バイオフィルム媒介性抗微生物剤耐性にも寄与する。
【０００９】
表面上での細菌細胞の継続的な増殖は、何百ミクロンで周囲媒質の中へ外向きに突出する柱型及びマッシュルーム型の塊に集まった何百万もの緊密にパックされた細胞を含有する、成熟バイオフィルムコロニーの発達を引き起こす。これらの構造は、原始的な循環系として働く液体で満たされたチャンネルが散在し、バルク液体相と栄養素及び老廃物の交換を許容する。加えて、バイオフィルム細胞の塊は、多くの場合細胞を欠いている仕切られた内部空間を含有する。したがって、成熟バイオフィルムコロニーは複雑で高度に分化した構造である。ｐＨ、酸素濃度、栄養利用可能性、及び細胞密度で異なる多数の微小環境が、バイオフィルムコロニー内で存在する。これは、コロニーの異なる部分中に位置する細胞の中で、代謝及び繁殖の活動において多くの不均一性をもたらす。コロニーの内部に位置する代謝的に不活性な細胞は、活発に増殖する細胞を標的とする抗微生物剤の作用に耐性であり得る。
【００１０】
バイオフィルム発達の最終段階は、環境の中へのバイオフィルムコロニーからの細胞の離脱及びそれらの分散（「播種」）である。これは、生物学的分散、細菌生存、及び疾患伝染に寄与する、バイオフィルムのライフサイクルの必須ステージである。バイオフィルム発達の他のステージのように、分散は、多数の環境シグナル、シグナル伝達経路、及びエフェクターを包含する複雑なプロセスであり得る。バイオフィルム分散の単一のメカニズムがすべての細菌によって利用されるのではない。
【００１１】
バイオフィルムは、歯（プラーク）、心内膜、胃腸及び尿生殖器の粘膜、ならびに鼻上皮が含まれる身体の様々な表面に加えて、外来物（整形外科用人工装具及び侵襲的カテーテル等）上で同定された。
【００１２】
バイオフィルムが、慢性的な皮膚創傷における創傷治癒が損なわれることと強く関連することを示唆するエビデンスがある。創傷バイオフィルムは慢性的な炎症性応答の引き金となり、バイオフィルムの周囲の好中球及びマクロファージの蓄積をもたらす。好中球及びマクロファージは、バイオフィルム及び周囲の組織に影響を与える高レベルの活性酸素種（ＲＯＳ）を分泌する。炎症細胞は、バイオフィルムと影響を受けた組織との間の付着の分解を支援することができる高レベルのプロテアーゼ（マトリックスメタロプロテイナーゼ及びエラスターゼ）も分泌し、組織からバイオフィルムを移動させる。しかしながら、ＲＯＳ及びプロテアーゼは、正常な周囲の組織、タンパク質、免疫細胞及び組織細胞を損傷する能力も有し、治癒を遅延させる。
【００１３】
脆弱な組織において、バイオフィルムは、患者の免疫系、抗生物質、またはデブリードマンによって殺傷される前に、付着し保護的コミュニティーを形成する浮遊細菌によって生成される。免疫系を損なうかまたは抗生薬の有効性を低減させる複数の条件は、創傷中のバイオフィルムの発達及び蔓延を助長する。これらには、組織の虚血または壊死、栄養上の欠乏または支障、及び身体の免疫機能を損なう併発症（ＨＩＶ、糖尿病、大きな身体外傷、放射線治療、または免疫抑制剤による治療等）が含まれる。
【００１４】
バイオフィルムによって用いられるプロセスが、細菌が宿主細胞に付着し、宿主の細胞経路を再編成するタンパク質を注入することを可能にする分子メカニズムを含むことが示唆された。いくつかの細菌種については、注入された細菌タンパク質は、宿主の細胞骨格を再編成し、移動及び有糸分裂を防止し、アポトーシスを阻害する。細菌がバイオフィルムを形成し始めるにつれて、分子メカニズムは、他の細菌を誘引して持続可能な多菌性系を形成することができる。バイオフィルムコロニーは、多数の細菌種を表わす拡張された多様性のある遺伝子プールを持つと考えられる。長期的なバイオフィルム生存は、多くの場合バイオフィルムの遺伝的多様性に直接関連し、治療に対して難治性となる慢性的な感染をもたらす。細菌性バイオフィルムの生存は、宿主への付着を確実にする遺伝子発現、脱落を防止し局所炎症を引き起こす宿主の細胞老化、及びバイオフィルムコロニーを養う創傷床中の血漿の産生の刺激を要求する。
【００１５】
バイオフィルムを形成する能力を有する微生物は、バイオフィルムの病巣及び組織化を指令する菌体数感知分子も持つ。分子の指令された分泌及びバイオフィルム中のコロニーの組織化は、栄養素及び他の必須分子の利用可能性を最大化する一方で、老廃物、競争者の毒素、及びバイオフィルム上の他の環境危険要素の対立する効果を最小限にする。多菌性バイオフィルムは、おそらく、経路を調節することができ、双方向シグナリングも遂行することができる、菌体数感知分子を取り込む。バイオフィルム生物体は、多くの菌体数感知経路を感知及びコミュニケーションする能力を有している。
【００１６】
バイオフィルムは多数の防御を有し、治療への耐性を持つことができ、抗生物質の有効性を限定する。抗生物質及び防腐剤は単一の細菌を非常に容易に死滅させるが、バイオフィルム障壁は、大部分の抗生物質及び防腐剤が特に創傷マトリックスの中心に向かって細菌に到達することを阻止する。創傷バイオフィルムは、抗体、抗生物質、消毒剤、及びファゴサイトーシス性の炎症細胞への耐性がある。
【００１７】
それゆえ、特に慢性的な創傷（慢性的な皮膚創傷及び熱傷等）中の、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染を防止及び治療するのに効果的な治療法を提供する必要性がある。
【００１８】
慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）は、１２週を超える間持続する副鼻腔症状をともなう鼻及び副鼻腔の粘膜炎症によって特徴づけられる一般的な障害である。最も単純化された分類により、ＣＲＳは、鼻ポリープを有する患者（ＣＲＳｗＮＰ）及び鼻ポリープのない患者（ＣＲＳｓＮＰ）へと分けられる。ＣＲＳは有意な身体損傷、患者の生活の質への悪影響、及び健康管理支出を引き起こす。ＣＲＳの医薬療法は、極めて重要な付加的役割を演じる手術と共に、重要な戦略である。
【００１９】
ＣＲＳにおける原因病原体として微生物の役割は明らかではないが、微生物感染及びバイオフィルムはＣＲＳの伝播に寄与し得る。Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、西洋諸国におけるＣＲＳ患者中で同定される最も一般的な細菌性病原体である。コアグラーゼ陰性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ及び嫌気性グラム陰性細菌も、一般にＣＲＳ患者から培養される。手術後の患者において、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属の種は優位である。細菌性バイオフィルム（それは対照中に概して存在しない）は、３０％〜１００％の間で変動する報告率でＣＲＳｓＮＰ患者及びＣＲＳｗＮＰ患者の両方から回収された。
【００２０】
ＣＲＳの標準的な管理はない。治療戦略は、様々なＣＲＳサブクラスの多様性のある病因に基づいて異なる。様々な全身性及び局所用の療法剤が一般的に用いられる。これらには、コルチコステロイド、抗微生物物質、及び免疫修飾医薬物が含まれる。ＣＲＳは慢性疾患であるので、長期間にわたる全身性薬剤の使用に関連する懸念がある。コルチコステロイド及び抗生物質の長期的な使用は、有害作用、薬物相互作用、及び抗微生物物質耐性を引き起こし得る。副鼻腔に直接送達される局所療法の発達は、代替の治療戦略を生み出した。今や多くの療法剤は、様々な送達方法（潅注、噴霧及びエアロゾル等）によって副鼻腔の中へ送達することができる。
それゆえ、ＣＲＳを防止及び治療するのに、特にＣＲＳと関連するバイオフィルムまたはバイオフィルムを形成することができる微生物を防止及び治療するのに、効果的な治療法を提供する必要性もある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｌａｚａｒｕｓ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９４；１３０（４）：４８９−４９３
【非特許文献２】Ｃｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｕｌｃｅｒｓ  ２０１３、Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ４８７０２４
【非特許文献３】Ｋａｐｌａｎ，Ｊ  Ｄｅｎｔ  Ｒｅｓ８９（３）２０１０：２０５−２１８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本出願人は、微生物感染の部位で過酸化水素を放出することができる組成物が、バイオフィルムの形成の防止または阻害に、及び既存のバイオフィルムの増殖または播種の防止または阻害に、特に効果的であることを見出した。本出願人は、かかる組成物が、バイオフィルムの形成、ならびに熱傷及び他の慢性的な創傷の細菌によって産生された既存のバイオフィルムの増殖または播種に対して効果的であり、複数の商業的に入手可能な創傷ドレッシング材より優れていることを見出した。
【００２３】
本発明によれば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止または治療における使用のための、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該組成物が提供される。
【００２４】
本発明によれば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止または治療における使用のための医薬品の製造における、抗微生物活性を生成するための組成物の使用であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該使用も提供される。
【００２５】
本発明によれば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染を防止または治療する方法であって、該方法が、効果的な量の抗微生物活性を生成するための組成物を感染の部位へ投与することを含み、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該方法も提供される。
【００２６】
本発明によれば、バイオフィルムの形成を防止または阻害するインビトロの方法であって、該方法が、効果的な量の組成物をバイオフィルムを形成することができる微生物と接触させることを含み、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該方法も提供される。
【００２７】
本発明によれば、既存のバイオフィルムの増殖または播種を防止または阻害するインビトロの方法であって、該方法が、効果的な量の組成物を既存のバイオフィルムと接触させることを含み、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該方法が更に提供される。
【００２８】
以下の実施例は、バイオフィルムの存在及び量の検出のために（クリスタルバイオレットを使用して）、及びバイオフィルムの形成またはバイオフィルムの増殖もしくは播種が防止または阻害されたかどうかを決定するために、微生物がバイオフィルムを形成することができるかどうかを試験するのに使用することができるインビトロの方法を記載する。
【００２９】
組成物は、バイオフィルムの増殖もしくは播種を防止もしくは阻害することができるか、または微生物によるバイオフィルムの形成を防止もしくは阻害することができる。
【００３０】
微生物感染は、慢性的な微生物感染、例えば３週間を超えて、例えば１か月を超えて、または２もしくは３か月を超えて、または１年の間の存在している感染であり得る。
【００３１】
微生物感染は、創傷感染（皮膚創傷感染または熱傷創傷感染等）であり得る。
【００３２】
任意の組織の完全性が損なわれる場合（例えば皮膚破壊、筋肉断裂、熱傷、または骨折）、創傷が起こる。創傷は、行為（外傷）または外科的手順によって、感染性疾患によって、または基礎疾患によって引き起こされ得る。
【００３３】
微生物感染は、慢性的な創傷、例えば３週間を超えて存在する創傷、または、解剖学的及び機能的な全体性を産生するように秩序正しく時宜を得たプロセスを介して進行しないか、もしくは修復プロセスを介して持続的及び機能的な結果を確立せずに進行する、創傷中に存在し得る（Ｌａｚａｒｕｓ  ｅｔ  ａｌ，Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９４；１３０（４）：４８９−４９３）。
【００３４】
慢性的な創傷には、熱傷、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍、及び圧迫潰瘍が含まれる。微生物感染は、バイオフィルムを形成することができる細菌（好ましくはグラム陰性細菌）を含み得る。
【００３５】
バイオフィルムは以下の細菌種のうちの任意のものを含み得るか、または、バイオフィルムを形成することができる微生物は以下の細菌種のうちの任意のものであり得る。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ。
【００３６】
本出願人は、本発明の組成物が、ＣＲＳ関連バイオフィルム、特にＣＲＳ関連Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓバイオフィルム（メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）バイオフィルム、またはメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）バイオフィルム）の治療にも効果的であることを見出した。
【００３７】
１２週間以上存続する特異的な副鼻腔症状が経鼻内視鏡またはＸ線学的画像化によって確認される場合、すなわち、以下の：粘液膿の排出、鼻づまり、顔面の疼痛／圧迫感／肥大、嗅覚減少、のうちの２つ以上が１２週間以上の継続期間である；及び、以下の：内視鏡検査（膿、粘膜浮腫またはポリープ）；副鼻腔の炎症を示す画像、のうちの１つまたは複数の客観的な尺度による炎症がある場合、ＣＲＳが診断される（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ２０１３：６，１−１４）。
【００３８】
したがって、微生物感染は、副鼻腔感染（ＣＲＳ、特にＣＲＳ関連バイオフィルム等）であり得る。
【００３９】
副鼻腔またはＣＲＳの微生物感染は、以下の種：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属；Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属；Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属のうちの任意の細菌を含み得る。バイオフィルムは以下の細菌種のうちの任意のものを含み得るか、または、バイオフィルムを形成することができる微生物は以下の細菌種のうちの任意のものであり得る。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属；Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属；Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属。
【００４０】
本明細書において記載される組成物を使用して、クリティカルコロナイゼーションが起こっている創傷を治療することができる。多くの場合、「クリティカルコロナイゼーションが起こっている」という用語は、細菌が創傷に負に影響を与え始め、それらの存在の徴候を示し始める臨界点に到達した創傷を指すものとして使用される。クリティカルコロナイゼーションが起こっている創傷は、バイオフィルムの存在を示し得る。１０５生物体／グラム組織を超える細菌負荷は、多くの場合創傷治癒の妨げとして認められている（Ｓｉｄｄｉｑｕｉ  ＡＲ，Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ＪＭ（２０１０）Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｗｏｕｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｉｅｓ．Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ２８：５１９−２６；Ｅｄｍｏｎｄｓ，Ｍ．，＆  Ｆｏｓｔｅｒ，Ａ．（２００４）．Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ
ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｆｏｏｔ．Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ，１８７（５Ａ），２５Ｓ−２８Ｓ）。
【００４１】
それゆえ、本発明によれば、１０５生物体／グラム組織を超える細菌負荷を有する創傷の治療における使用のための、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該組成物が提供される。
【００４２】
本発明によれば、１０５生物体／グラム組織を超える細菌負荷を有する創傷の治療における使用のための医薬品の製造における、抗微生物活性を生成するための組成物の使用であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該使用も提供される。
【００４３】
本発明によれば、１０５生物体／グラム組織を超えるものを有する創傷を治療する方法であって、該方法が、効果的な量の抗微生物活性を生成するための組成物を創傷へ投与することを含み、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、該方法も提供される。
【００４４】
本発明に記載の使用のための組成物の酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性（「基質変換活性」と本明細書において称される）への追加である（すなわち人間の介入の結果として添加される）。
【００４５】
組成物は、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、貯蔵安定性組成物であり得る。組成物は、抗微生物活性を生成するための貯蔵安定性組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と；該酵素のための基質を含む物質とを含み；該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、該組成物であり得る。
【００４６】
組成物は、抗微生物活性を生成するための貯蔵安定性組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；カタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む物質とを含み；該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、該組成物であり得る。
【００４７】
十分な水の存在下において、貯蔵安定性組成物の酵素は、基質を変換し過酸化水素を放出することができる。過酸化水素は様々な異なる微生物に対して効果的であることが公知である。したがって、抗微生物活性は、本発明の貯蔵安定性組成物の希釈に後続して生成される。
【００４８】
貯蔵安定性組成物が使用されるならば、これは、投与の部位に存在する液体によって（例えば創傷からの滲出液によって）希釈され、投与部位で過酸化水素の放出を導くことができる。
【００４９】
カタラーゼは、過酸化水素が水及び酸素へ分解されることを触媒する酵素である。カタラーゼ活性を欠損する物質の使用は、異なる源からの、または同じ源からの異なる採取からの、類似物質の間で、この活性量において変動がないことを意味する。これは、かかる物質から生成することができる抗微生物活性における変動を低減させる。あるいは、物質がカタラーゼ活性を含み、物質を酵素と接触させる前に物質中のカタラーゼ活性を不活性化することが可能でないかまたは所望されないならば、次いで、物質から生成することができる過酸化水素に対するカタラーゼ活性の効果が低減されるように、十分な酵素が使用され得る。これも、物質から生成することができる抗微生物活性における変動を低減させる。いくつかの実施形態において、物質はカタラーゼ活性を欠損し得る。
【００５０】
カタラーゼは多くの植物及び動物中に存在する。カタラーゼ活性は物質の加工もしくは抽出の間に除去されるか、または組成物中の物質の使用の前に不活性化され得る。カタラーゼ活性は、例えば低温殺菌によって熱不活性化され得る。カタラーゼ活性の熱不活性化に適切な温度は、好ましくは少なくとも６０℃、７０℃、または８０℃で少なくとも２分間である。
【００５１】
「貯蔵安定性」という用語は、少なくとも数日間、好適には少なくとも１週間、または少なくとも１もしくは２か月間周囲温度で組成物を保存できる一方で、組成物の希釈に後続して抗微生物活性を生成する能力を保持することを意味するものとして、本明細書において使用される。保存温度は、３７℃未満、好ましくは２０〜２５℃であり得る。好ましくは、組成物は光への曝露から離して保存される。
【００５２】
過酸化水素は、周囲温度で一般的には不安定である。本発明に記載の使用のための貯蔵安定性組成物中での十分な遊離水の欠損は、酵素が基質を変換して過酸化水素を放出することを防止し、したがって周囲温度で長期間、組成物の安定性を維持することを支援する。酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水がなければ、本発明に記載の使用のための貯蔵安定性組成物は若干の水を含むことができる。好適な量の水は組成物の正確な構成要素に依存して変動するだろう。しかしながら、典型的には、本発明に記載の使用のための貯蔵安定性組成物は、２０％未満の全水分含有量（例えば１０％〜１９％、水）を含む。
【００５３】
過酸化水素は、組成物中に存在する基質の量及び酵素の活性に依存して、組成物の希釈に後続する持続した期間で放出され得る。組成物中の基質の量及び／または酵素の活性が、組成物の希釈に後続して、短い期間で比較的高いレベルの過酸化水素の放出またはより長い期間でより低いレベルの過酸化水素の放出を提供するように、選択できることが認識されるだろう。好適には、組成物は、組成物の希釈に後続して、少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間の期間での過酸化水素の持続放出を提供する。好適には、組成物は、組成物の希釈に後続して、少なくとも２４時間の期間で２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルでの過酸化水素の持続放出を提供する。
【００５４】
本発明の組成物、または本発明に記載の使用のための組成物は、少なくとも２４時間、より好ましくは４８時間の期間で少なくとも０．１、０．５、１または１．５ｍｍｏｌ／リットルの過酸化水素の持続放出を提供するのに、十分な酵素及び基質を含み得る。
【００５５】
本発明に記載の使用のための組成物中に存在する酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性（「基質変換活性」として本明細書において称される）への追加である（すなわち、組成物は物質及び添加された酵素を含む）。いくつかの実施形態において、物質中の基質変換活性はなくてもよい。
【００５６】
組成物の希釈に後続して、基質を変換し必要に応じて過酸化水素を形成するのに、本発明に記載の使用のための貯蔵安定性組成物中に存在する十分な酵素があるべきであることが認識されるだろう。
【００５７】
十分な水の存在下における本発明に記載の使用のための貯蔵安定性組成物による過酸化水素の生成の重要性を考慮して、組成物は添加されたペルオキシダーゼを含有するべきでないことが認識されるだろう。
【００５８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物または本発明における使用のための組成物は、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含有し得る。組成物は水溶性混合物であり得る。いくつかの実施形態において、かかる組成物は過酸化水素を長期間産生することができる。例えば、組成物は、少なくとも１年、好ましくは少なくとも３年間、本明細書において記載されたレベルの過酸化水素（例えば少なくとも０．１、０．５、１または１．５ｍｍｏｌ／リットルの過酸化水素）を産生することができる。酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を有するいくつかの組成物において、産生された過酸化水素のレベルは経時的に低減し得る。これは真菌による基質の発酵から生じ得る。発酵は、過酸化水素産生のために利用可能な基質の量を低減し得る。いくつかの実施形態において、発酵は、任意の真菌が組成物が入ることを防止する容器または小袋中で組成物を密閉すること及び次いで組成物中の真菌を死滅させるように組成物を処理することによって、低減させることができる。例えば、これはγ線照射によって達成することができる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、酵素は、精製酵素である。「精製酵素」という用語には酵素調製物が含まれ、その中では酵素が産生されたときにもともと存在する不純物のうちの少なくともいくつかから酵素が分離されているものとして、本明細書において使用される。好ましくは、除去または低減された不純物には、除去または低減されなければ、酵素が基質を変換して過酸化水素を放出する能力を妨害するものが含まれる。
【００６０】
酵素が基質を変換して過酸化水素を放出することができれば、精製酵素が高レベルの純度であることは必ずしも必要であるかまたは所望されるとは限らないだろう。いくつかの状況において、比較的粗製の酵素調製物を使用することが所望され得る。好適な純度レベルの例には、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の純粋が含まれる。
【００６１】
しかしながら、酵素が産生されたときにもともと存在し得る任意のカタラーゼの量を低減することが好まれる。酵素は組換え手段または非組換え手段によって産生され、組換え酵素または非組換え酵素であり得る。酵素は、微生物源から、好ましくは遺伝的に修飾されていない微生物から、精製することができる。
【００６２】
組成物の意図された使用に依存して、酵素の純度のレベルは必要に応じて選択され得る。例えば、組成物が医療使用を意図するならば、医療グレードまたは医療デバイスのグレードの純度を使用するべきである。
【００６３】
いくつかの実施形態において、酵素はオキシドレダクターゼ酵素である。基質を変換して過酸化水素を放出することができるオキシドレダクターゼ酵素の例には、グルコースオキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、グリコール酸オキシダーゼ、及びアミノ酸オキシダーゼが含まれる。これらのオキシドレダクターゼ酵素に対応する基質は、それぞれＤ−グルコース、ヘキソース、コレステロール、Ｄ−ガラクトース、ピラノース、コリン、ピルベート、グリコール酸塩、及びアミノ酸である。
【００６４】
１つまたは複数のオキシドレダクターゼ酵素及びオキシドレダクターゼ酵素のための１つまたは複数の基質の混合物は、本発明に記載の使用のための組成物中に存在することができる。
【００６５】
オキシドレダクターゼ酵素はグルコースオキシダーゼであり得、基質はＤ−グルコースであり得る。
【００６６】
物質は酵素のための基質を含む任意の物質であり得る。いくつかの実施形態において、物質はカタラーゼ活性を欠損する。物質は非純化物質であり得る。「非純化」という用語は、純粋な形状へ加工されていない物質を指すものとして本明細書において使用される。非純化物質は、例えば乾燥または沸騰によって濃縮され得る物質を含む。
【００６７】
物質は、天然源からの１つまたは複数の基質を含むことができる（本明細書において「天然物質」と称される）。天然物質の例には、植物源からの物質（樹液、根、花蜜、花、種子、果実、葉、または芽からのものが含まれる）が含まれる。物質は非純化天然物質であり得る。
【００６８】
好適には、物質は、以下の基質：Ｄ−グルコース、ヘキソース、コレステロール、Ｄ−ガラクトース、ピラノース、コリン、ピルビン酸塩、グリコール酸塩、またはアミノ酸のうちの１つまたは複数を含む。
【００６９】
物質は糖物質であり得る。「糖物質」という用語は、１つまたは複数の糖を含む任意の物質を意味するものとして本明細書において使用される。「糖」という用語は、一般式Ｃｍ（Ｈ２Ｏ）ｎにより炭水化物を指すものとして本明細書において使用される。好ましい糖質には、単糖（Ｄ−グルコース、ヘキソース、またはＤ−ガラクトース等）が含まれる。糖物質は、天然源からの１つまたは複数の糖（本明細書において「天然糖物質」と称される）を含むことができる。天然糖物質は非純化天然糖物質であり得る。非純化天然糖物質は、天然糖産物であり得る（または天然糖産物に由来し得る）。いくつかの実施形態において、非純化天然糖産物は蜂蜜である。いくつかの実施形態において、蜂蜜はカタラーゼ活性を除去または不活性化するように処理された蜂蜜である。
【００７０】
上で論じられるように、物質はそれ自体、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素活性（「基質変換活性」と称される）を好ましくは欠損し得る。物質からの基質変換活性の非存在は、異なる源からの、または同じ源からの異なる採取からの、類似物質の間で、この活性の量において変動がないという利点を有する。これは、かかる物質から生成することができる抗微生物活性における変動を更に低減させる。次いで基質変換活性は物質と接触する酵素によってのみ提供され、したがって組成物中に存在する基質変換活性の量は制御することができる。
【００７１】
基質変換活性は物質の加工もしくは抽出の間に除去されるか、または本発明に記載の使用のための組成物中の物質の使用の前に不活性化され得る。基質変換活性は、熱不活性化によって（例えば低温殺菌によって）不活性化され得る。基質変換活性の熱不活性化に適切な温度は、少なくとも８０℃で好ましくは少なくとも２分間である。熱不活性化の利点は、カタラーゼ活性及び基質変換活性の両方が単一の熱不活性化ステップで不活性化できるということである。
【００７２】
本発明のいくつかの実施形態において、物質は、加工、抽出、または純化された物質（すなわち不純物または望まれない元素が加工によって除去された物質）である。好ましくは、除去または低減された不純物には、除去または低減されなければ、酵素が基質を変換して過酸化水素を放出する能力を妨害するものが含まれる。
【００７３】
本発明のいくつかの実施形態において、物質は酵素のための精製基質を含む。「精製基質」という用語には基質調製物が含まれ、その中では基質が得られるかまたは産生されたときに存在する不純物のうちの少なくともいくつかから基質が分離されているものとして、本明細書において使用される。精製基質は、天然源から得られるかまたは合成的に産生され得る。精製基質は、加工、抽出、または純化された基質（すなわち不純物または望まれない元素が加工によって除去された基質）である。
【００７４】
酵素が基質を変換して過酸化水素を放出することができれば、精製基質が高レベルの純度であることは必ずしも必要であるかまたは所望されるとは限らないだろう。いくつかの状況において、比較的粗製の基質調製物を使用することが所望され得る。好適な純度レベルの例には、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％純粋であることが含まれる。しかしながら、いくつかの実施形態において、精製基質は、医療グレード、医療デバイスグレード、または医薬グレードの基質であることが所望され得る。
【００７５】
特定の実施形態において、精製基質は、精製糖物質であるかまたは精製糖物質を含む。精製糖物質は、天然源から得られるか（例えば加工、抽出、または純化された天然糖物質）、または合成的に産生され得る。精製糖物質は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％純粋であり得る。精製糖物質は、医療グレード、医療デバイスグレード、または医薬グレードの糖物質であり得る。精製糖物質は、１つまたは複数の精製糖物質（例えば精製されたＤ−グルコース、ヘキソース、またはＤ−ガラクトース）を含み得る。例えば、精製糖物質は、医療グレード、医療デバイスグレード、または医薬グレードのＤ−グルコース、ヘキソース、またはＤ−ガラクトースであり得る。
【００７６】
特定の実施形態において、酵素及び基質は精製され、例えば精製グルコースオキシダーゼ及び精製Ｄ−グルコース、好適には、医療グレード、医療デバイスグレード、または医薬グレードのグルコースオキシダーゼ及びＤ−グルコースである。
【００７７】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための精製基質を含む物質とを含む、該組成物も提供される。組成物の酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性（「基質変換活性」と本明細書において称される）への追加である（すなわち人間の介入の結果として添加される）。
【００７８】
組成物は、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、貯蔵安定性組成物であり得る。組成物は、抗微生物活性を生成するための貯蔵安定性組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質とを含み；該酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、該組成物であり得る。
【００７９】
組成物は、抗微生物活性を生成するための貯蔵安定性組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；カタラーゼ活性を欠損し該酵素のための精製基質を含む物質とを含み；該酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、該組成物であり得る。
【００８０】
十分な水の存在下において、貯蔵安定性組成物の酵素は、基質を変換し過酸化水素を放出することができる。
【００８１】
本発明によれば、本発明の組成物及び薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物も提供される。
【００８２】
本発明によれば、医薬品としての使用のための本発明の組成物も提供される。
【００８３】
本発明によれば、微生物感染（例えばバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染）の防止または治療における使用のための本発明の組成物が更に提供される。従って、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止または治療における使用のための組成物であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための精製基質を含む物質とを含み、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該組成物が提供され得る。
【００８４】
本発明によれば、微生物感染（例えばバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染）の防止または治療のための医薬品の製造における本発明の組成物の使用も提供される。従って、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止または治療のための医薬品の製造における組成物の使用であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための精製基質を含む物質とを含み、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該使用が提供され得る。
【００８５】
本発明は、微生物感染（例えばバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染）を防止または治療する方法であって、効果的な量の本発明の組成物を感染の部位へ投与することを含む、該方法も提供する。従って、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止または治療する方法であって、該方法が、効果的な量の本発明の組成物を感染の部位へ投与することを含み、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための精製基質を含む物質とを含み、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該方法が提供され得る。
【００８６】
本発明に記載の使用のための貯蔵安定性組成物は、抗微生物剤を含み得る。例えば、酵素による基質の変換のための条件下で水溶液中の物質と酵素を接触させ、次いで酵素による基質の変換を可能にするには不十分な遊離水があるレベルへその水分含有量を低減させるように組成物を乾燥することによって、貯蔵安定性組成物が形成されるならば、過酸化水素は存在し得る。好ましくは、しかしながら、貯蔵安定性抗微生物組成物は検出可能な過酸化水素を含まない。かかる組成物は、例えば酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水の非存在下において基質と酵素を接触させることによって、形成され得る。本発明の貯蔵安定性組成物中に存在し得る他の抗微生物剤の例には、抗生剤、抗ウイルス剤、または抗真菌剤が含まれる。
【００８７】
組成物は、医療グレードもしくは医療デバイスのグレード組成物、または医薬グレード組成物であり得る。
【００８８】
各々の組成物の構成要素は、天然物質であり得る（すなわち各々の構成要素は天然源に由来するかまたはそれから精製される）。天然成分のみを含有する本発明に記載の使用のための組成物は、薬物ベースの抗微生物製剤に対する魅力的な代替物を提供する。
【００８９】
有利には、物質は蜂蜜である。蜂蜜は医療グレードまたは医療デバイスグレードの蜂蜜であり得る。いくつかの実施形態において、蜂蜜は、蜂蜜中にもともと存在するカタラーゼ活性を除去または不活性化するように処理された蜂蜜である。本発明の実施形態によれば、物質は低温殺菌された蜂蜜であり、酵素はグルコースオキシダーゼである。いくつかの実施形態によれば、物質は、医療グレードまたは医療デバイスグレードの蜂蜜であり、酵素は、医療グレードまたは医療デバイスグレードの酵素、好適にはグルコースオキシダーゼである。
【００９０】
蜂蜜は、花からの花蜜を使用してミツバチによって作製された天然産物である。それは糖の飽和溶液または過飽和溶液である。蜂蜜は、Ｃｏｄｅｘ  Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ国際食品規格中で、「植物の花蜜から、または植物の生部分の分泌物もしくは植物の生部分上で植物を吸汁する昆虫の排泄物から、ミツバチによって産生される天然の甘味物質であって、ミツバチが収集し、ミツバチが持つ特異的物質と組み合わせることによって変質させ、蓄積し、脱水し、保存し、巣板の中で放置して円熟及び成熟させたもの」と定義される（Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｃｏｄｅｘ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｆｏｒ  Ｈｏｎｅｙ，２００１）。
【００９１】
花蜜は、典型的にはおよそ１４％の単糖（ｗ／ｗ）、１％のフェノール化合物、及び８５％の水を含む。フェノール化合物は、蜂蜜に味覚、芳香及び色を与える。巣箱の温暖な条件（典型的には３６℃）において、花蜜は非常に迅速に発酵するだろう。これを防止するために、花蜜は、外役蜂の唾腺及び下咽頭腺からの酵素を含有する分泌物と混合される。巣箱中で、花蜜はミツバチからミツバチへ渡され、巣箱の巣房中で保存される前により多くの分泌物が添加される。存在する酵素の量は、ミツバチの年齢、食餌及び生理的ステージ（ミツバチが外役者である場合その腺はより多くの消化酵素を産生する）、コロニーの強さ、巣箱の温度、ならびに花蜜流動性及びその糖度により変動する。
【００９２】
ミツバチによって花蜜へ添加される酵素には、ジアスターゼ（デンプンをデキストリン及び糖へ変換することを触媒する）、インベルターゼ（ショ糖をフルクトース及びグルコースへ変換することを触媒する）、及びグルコースオキシダーゼ（グルコースを過酸化水素及びグルコン酸へ変換することを触媒する）が含まれる。低用量の過酸化水素は、花蜜を迅速に発酵させる酵母の増殖を防止する。ミツバチが花蜜を次第に乾燥して蜂蜜を形成するので、グルコン酸は蜂蜜を酸性（ｐＨ３．５〜４．５の間）にする。水は蜂蜜中の糖分子へ効果的に取り込まれ、更なる化学反応に利用可能ではない。蜂蜜中の「遊離」水の量は水分活性（ａｗ）として測定される。蜂蜜において見出されるａｗの範囲は０．４７〜０．７０であり、０．５６２及び０．５８９の平均値であると報告されている（ＲＣＩＥＧＧ，Ｍ；ＢＬＡＮＣ，Ｂ，１９８１，Ｔｈｅ  ｗａｔｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ
ｈｏｎｅｙ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｕｇａｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌ−Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔ  ｕｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ  １４：１−６）。円熟した蜂蜜のａｗは低すぎるので任意の種の増殖を支援せず、水分含有量が１７．１％未満であるならば発酵は起こらない（Ｍｏｌａｎ，Ｐ．Ｃ．（１９９２）．Ｔｈｅ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｈｏｎｅｙ：１．Ｔｈｅ
ｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｂｅｅ  Ｗｏｒｌｄ，７３（１），５−２８）。蜂蜜の酸性度及び遊離水の欠損は発酵の更なるリスクを防止し、グルコースオキシダーゼの作動を停止する。蜂蜜は、花蜜を起源とする変動量のカタラーゼも含有する。
【００９３】
花蜂蜜の典型的な化学組成物は以下のとおりである。
【表１】
2020158526.tif 000002
【００９４】
さらに、微量の花粉（それは蜂蜜の植物学的起原を同定するために使用することができる）に加えて、酵素のインベルターゼ、ジアスターゼ、カタラーゼ、及びグルコースオキシダーゼが存在する。植物化学物質構成要素も存在する。これは変動するが、蜂蜜の源に依存して典型的には最大約１％である。
【００９５】
一旦希釈されたならば、天然ハチミツ中に存在するグルコースオキシダーゼは、希釈された蜂蜜中のグルコース基質を変換して過酸化水素を放出することができる。しかしながら、蜂蜜の含有物における（特にグルコースオキシダーゼ活性、グルコース、及びカタラーゼ活性の含有量における）変動は、異なる源、または同じ源からの蜂蜜の異なる採取からの蜂蜜が、それらの抗微生物有効性において非常に変動し得ることを意味する。
【００９６】
本発明の実施形態によれば、蜂蜜は低温殺菌され得る。蜂蜜の低温殺菌は、蜂蜜中に存在するカタラーゼ活性及びグルコースオキシダーゼ活性を不活性化する。随意に、低温殺菌した蜂蜜を濾過して、収穫後の蜂蜜中に存在し得る任意の粒子（ワックス粒子及びミツバチの羽等）を除去することができる。本発明の貯蔵安定性組成物を形成するために、添加されたグルコースオキシダーゼを不活性化せずに蜂蜜がグルコースオキシダーゼと混合されることを促進するように十分に液体状のままである温度（好適には３５〜４０℃）へ、低温殺菌した蜂蜜が一旦冷却されたならば、グルコースオキシダーゼを低温殺菌した蜂蜜と接触させる。
【００９７】
蜂蜜は、カタラーゼ活性の熱不活性化のために十分な温度で低温殺菌され得る。好適な最低温度は６０℃〜８０℃である。この温度は好ましくは少なくとも２分間維持されるべきである。
【００９８】
加熱蜂蜜の副産物がＨＭＦ（ヒドロキシメチルフルフラール；それは蜂蜜における熱及び保管の変化の指標として使用される）の形成であるので、加熱プロセスの制御は重要であり得る。ＨＭＦは、酸の存在下においてフルクトースの分解によって形成される。加熱は、この反応のスピードを増加させる。スピードの増加は、加熱の増加により指数関数的である。蜂蜜を４０℃超えて１度上昇させるごとに（正常な巣箱周囲温度に近い）、ＨＭＦは迅速に増加する。ＨＭＦは有害産物ではない。ジャム、糖蜜、ゴールデンシロップなどは、蜂蜜の１０〜１００倍のＨＭＦのレベルを有し得る。しかしながら、ＨＭＦレベルは蜂蜜の分解の指標として使用され、Ｃｏｄｅｘ  Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ  Ｓｔａｎｄａｒｄ下で、４０ｍｇ／ｌが食卓用蜂蜜についてのＥＵにおける最大許容レベルである。
【００９９】
ＨＭＦの集積を防止するために、蜂蜜をカタラーゼを不活性化する温度レベルへ迅速に上昇させ、次いで蜂蜜を熱交換機を使用して最大４０〜４５℃の温度に迅速に下げることが、好ましい。
【０１００】
この好ましい実施形態のプロセスの間に水は添加されず、そのため、もたらされた組成物は、グルコースオキシダーゼが存在するグルコースを変換して過酸化水素を放出することを可能にするのに十分な遊離水を含まない。貯蔵安定性組成物は、以下のもの：低温殺菌した蜂蜜及び添加されたグルコースオキシダーゼを含む。存在する検出可能な過酸化水素はない。組成物は少なくとも数日間周囲温度で保存することができる。
【０１０１】
本発明の他の実施形態において、蜂蜜は低温殺菌されなくてもよい。
【０１０２】
いくつかの好ましい実施形態によれば、蜂蜜（低温殺菌または非低温殺菌）はクリーム状蜂蜜である。クリーム状蜂蜜は、結晶化を制御するように加工された蜂蜜である。クリーム状蜂蜜は多数の小さな結晶を含有し、それは、未加工の蜂蜜中で起こり得るより大きな結晶の形成を防止する。クリーム状蜂蜜を製造する方法は、米国特許第１，９８７，８９３号中で記載された。このプロセスにおいて、最初に生の蜂蜜を低温殺菌し、次いで事前に加工したクリーム状蜂蜜を低温殺菌した蜂蜜に添加して、１０％のクリーム状蜂蜜及び９０％の低温殺菌した蜂蜜の混合物を産生する。次いで１４℃の管理された温度でその混合物を休ませる。この方法は、約１週間でクリーム状蜂蜜のバッチを産生する。シードバッチは、正常な蜂蜜を結晶させ、結晶を所望されるサイズに粉砕することによって作製することができる。大スケール生産者はパドルの使用によってこのプロセスを修飾して、１４℃で混合物を保持しながら蜂蜜混合物を撹拌する。代替のクリーム化法において、蜂蜜を代わりに３７℃へ徐々に暖めて、低温殺菌ステップを省くことができる。
【０１０３】
本発明の他の実施形態において、蜂蜜（低温殺菌または非低温殺菌）は非クリーム化蜂蜜である。例えば、蜂蜜は、低温殺菌した非クリーム化蜂蜜であり得る。
【０１０４】
グルコースオキシダーゼは、医療用適用のための医療グレードまたは医療デバイスグレードである、精製天然グルコースオキシダーゼ調製物であり得る。貯蔵安定性組成物の希釈に後続する過酸化水素の所望される産生速度に依存して、グルコースオキシダーゼの活性は選択され得る。複数のグルコースオキシダーゼ調製物は商業的に入手可能である（グルコースオキシダーゼはＣＡＳ：９００１−３７−０の参照によって同定される）。非遺伝子組み換え生物からのグルコースオキシダーゼのための一般的な微生物源には、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ａｍａｇａｓａｋｉｅｎｓｅ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｖａｒｉａｂｉｌｅ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍの選択された株が含まれる。ＧＭＯ  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒからの医療デバイスグレードのグルコースオキシダーゼは、活性２４０ｉｕ／ｍｇでＢｉｏｚｙｍｅ  ＵＫから入手可能である。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒからの食品規格のグルコースオキシダーゼは、活性１５，０００ユニット／ｇでＢＩＯ−ＣＡＴ  ＩＮＣから入手可能である。非遺伝子操作グルコースオキシダーゼは、活性１２，０００／ｇでＢＩＯ−ＣＡＴ  ＩＮＣから入手可能である。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ（ＧＯ３Ｂ２）からのグルコースオキシダーゼは、活性３６０ユニット／ｍｇでＢＢＩ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄから入手可能である。混入物：αアミラーゼは０．０５％以下、サッカラーゼは０．０５％以下、マルターゼは０．０５％以下、及びＧＯ／Ｃａｔは２０００以上である。
【０１０５】
酵素活性（例えばグルコースオキシダーゼ活性）は、例えば１〜４００ＩＵ／ｍｇ、または１〜３００のＩＵ／ｍｇ、例えば２５０〜２８０ＩＵ／ｍｇの範囲であり得る。使用される酵素の量はおそらく複数の因子に依存し、それらには、組成物の所望される使用、物質中に存在する任意のカタラーゼ活性の量、物質中に存在する基質の量、過酸化水素放出の所望されるレベル、及び過酸化水素放出について所望される時間の長さが含まれる。好適な量の酵素は、異なる量の酵素についての過酸化水素放出の程度を決定するために、必要であるならばウェル拡散アッセイを使用して、当業者によって容易に決定することができる。好適な量の酵素（グルコースオキシダーゼ等）は、組成物の０．０００１％〜０．５％ｗ／ｗであり得る。使用される酵素の量は、選択されたフェノールスタンダード（例えば１０％、２０％、または３０％のフェノールスタンダード）に等価な抗微生物活性を生成するための組成物を産生するように、選択され得る。
【０１０６】
本発明に記載の使用のための組成物、特に物質が蜂蜜（例えば非低温殺菌蜂蜜）であり、酵素が蜂蜜中のＤ−グルコースを変換して過酸化水素を放出するできるグルコースオキシダーゼである、組成物は、１グラムの組成物あたり少なくとも１ユニット及び好ましくは最大１５００ユニットのグルコースオキシダーゼを含み得る。グルコースオキシダーゼは、物質中に天然に存在し得る任意のグルコースオキシダーゼ活性への追加である（すなわち人間の介入の結果として添加される）。
【０１０７】
「ユニット」は、ｐＨ７．０で摂氏２５度で毎分１マイクロモルのグルコースの酸化を引き起こす酵素の量として本明細書において定義される。
【０１０８】
本出願人は、単純に組成物中に存在するグルコースオキシダーゼ活性の量を増加させることによって、本発明に記載の使用のための組成物の抗微生物有効性が増加され得ることを見出した。
【０１０９】
本発明のいくつかの実施形態において、本発明に記載の使用のための組成物は、１グラムの組成物あたり１５ユニットを超える、例えば少なくとも３０ユニット、少なくとも５０ユニット、または少なくとも１００ユニット、及び好適には６８５ユニット未満、例えば１００〜５００ユニットのグルコースオキシダーゼを含む。かかる組成物は、１グラムの組成物あたり最大１５ユニットのグルコースオキシダーゼを備えた組成物よりも優れた抗微生物特性を有することが見出された。特に、かかる組成物は、広範囲の微生物（ＭＳＳＡ、ＭＲＳＡ、Ａ群及びＢ群の連鎖球菌、腸球菌、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＥＳＢＬ、Ｓｅｒｒ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ  Ａｍｐ  Ｃ、Ｋｌｅｂ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、及びＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓが含まれる）に対する有効性が増加した。
【０１１０】
本発明の他の実施形態において、本発明に記載の使用のための組成物は、１グラムの組成物あたり少なくとも５００ユニット、例えば５００〜１０００ユニット、または６８５〜１０００ユニットのグルコースオキシダーゼを含む。かかる組成物は、より優れた抗微生物特性を有することが見出された。特に、かかる組成物は、広範囲の微生物（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、ＭＳＳＡ、ＭＲＳＡ、Ａ群及びＢ群の連鎖球菌、腸球菌、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＥＳＢＬ、Ｓｅｒｒ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ
Ａｍｐ  Ｃ、Ｋｌｅｂ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、及びＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓが含まれる）に対する有効性が更に増加した。
【０１１１】
低温殺菌プロセスは蜂蜜中に存在する任意の酵素活性を不活性化し、したがって、異なる源からの低温殺菌した蜂蜜または同じ源からの異なる採取の蜂蜜の間で、カタラーゼ及び基質変換の活性における変動はない。基質変換活性の量は、定義された酵素の量及び活性を備えた精製グルコースオキシダーゼ調製物の添加によって制御することができる。したがって、異なるタイプ及び採取の蜂蜜の間の抗微生物特性における固有の変動は大幅に低減され、低い抗微生物有効性を備えた蜂蜜の抗微生物特性は改善される。
【０１１２】
創傷治癒適用のために、本発明に記載の使用のための組成物は、ヘルスケア提供者によって決定される適切な頻度で投与することができる。好適には、本発明に記載の使用のための組成物は、少なくとも数日毎に、例えば毎週、しかし好ましくは毎日または１日おきに投与することができる。
【０１１３】
本発明に記載の使用のための組成物の投与される量は、多くの因子（組成物の抗微生物特性の力価、及び組成物の他の創傷治癒特性等）に、創傷のサイズに、ならびに治療される被験体の年齢及び条件に依存するだろう。しかしながら、多くの適用のために、各々の投与は、２〜１００ｇ、または５〜１００ｇ、好ましくは１０〜５０ｇの本発明に記載の使用のための組成物を含むことが予想される。
【０１１４】
本発明の好ましい実施形態によれば、本発明に記載の使用のための組成物は滅菌される。滅菌組成物は、好ましくは医療用適用（創傷治癒等）のために使用される。
【０１１５】
本発明に記載の使用のための組成物は、任意の好適な手段によって滅菌され得る。本出願人は、本発明に記載の使用のための組成物が、γ線照射への曝露による滅菌後にグルコースオキシダーゼ活性（及びそれゆえ希釈に際して過酸化水素を放出する能力）を保持することを見出した。好適なレベルのγ線照射は、１０〜７０ｋＧｙ、好ましくは２５〜７０ｋＧｙ、より好ましくは３５〜７０ｋＧｙである。
【０１１６】
オゾンが、創傷治癒における使用のための蜂蜜ベースの製品の滅菌のために米国ＦＤＡによって認可されていないので、本発明に記載の使用のための組成物は、好ましくはオゾン処理によって滅菌されておらず、オゾン、またはオゾン処理による滅菌を受けた任意の構成要素を含まない。特に、本発明に記載の使用のための組成物は、オゾン処理蜂蜜またはオゾン化油を含むべきでない。
【０１１７】
本発明に記載の医療使用に好ましい組成物は、滅菌済みの一回使用の組成物である。
【０１１８】
光への曝露を避けて保存される本発明に記載の使用のための滅菌組成物は、少なくとも６か月間安定性を保持することが予想される。例えば、かかる組成物は、高密度ポリエチレン／低密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ／ＬＤＰＥ）チューブまたはポリエステル−アルミニウム−ポリエチレン（ＰＥＴ／ＡＩ／ＰＥ）小袋中でパッケージングされ得る。
【０１１９】
本発明に記載の使用のための組成物は、好ましくは医療グレードまたは医療デバイスグレードの組成物である。好ましくは、非純化天然物質は、蜂蜜、好適には医療グレードまたは医療デバイスグレードの蜂蜜である。
【０１２０】
好ましくは、本発明に記載の使用のための組成物は、クリーム状蜂蜜、より好ましくはクリーム状非低温殺菌蜂蜜を含む。大きな結晶の存在または数がクリーム化プロセスによって最小限にされるので、かかる組成物は容易に局所投与することができる。
【０１２１】
本発明に記載の使用のための蜂蜜を含む組成物については、組成物が滅菌されるならば、低温殺菌した蜂蜜を組成物中で使用する必要性がないことが認識されるだろう。代わりに非低温殺菌蜂蜜（好ましくはクリーム状蜂蜜）または他の非純化天然物質を使用することは、好ましいかもしれない。いくつかの実施形態において、本発明に記載の使用のための組成物は、非低温殺菌蜂蜜及び添加された精製グルコースオキシダーゼを含む。
【０１２２】
したがって、本発明に記載の使用のための抗微生物活性を生成するための貯蔵安定性組成物は、非低温殺菌蜂蜜、及び十分な遊離水の存在下において蜂蜜中のＤ−グルコースを変換して過酸化水素を放出することができる添加された精製グルコースオキシダーゼを含むことができ、該組成物は、グルコースオキシダーゼによるＤ−グルコースの変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない。
【０１２３】
かかる組成物は、１グラムの組成物あたり少なくとも１ユニット及び例えば最大１５００ユニットのグルコースオキシダーゼを含み得る。好適には、かかる組成物は、１グラムの組成物あたり１５ユニットを超えるグルコースオキシダーゼ、例えば１グラムの組成物あたり少なくとも１００ユニットもしくは１００〜５００ユニットのグルコースオキシダーゼ、または１グラムの組成物あたり少なくとも５００ユニットもしくは５００〜１０００ユニットのグルコースオキシダーゼを含む。
【０１２４】
かかる組成物の蜂蜜はクリーム状非低温殺菌蜂蜜を含み得る。
【０１２５】
本発明に記載の使用のための組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物であり得る。
【０１２６】
本発明に記載の使用のための組成物は、ドレッシング材と共に提供され得る。好適なドレッシング材には、ガーゼ、包帯、ティッシュ、フィルム、ゲル、泡、親水コロイド、アルギン酸塩、ハイドロゲル、またはポリサッカライドのペースト、顆粒もしくはビーズが含まれる。組成物は、創傷ドレッシング材マトリックス（コラーゲンまたはコラーゲン−グリコサミノグリカンマトリックス等）と一緒に存在し得る。
【０１２７】
組成物は、固体調製物または半固体調製物の形状であり得る。固体調製物または半固体調製物の例には、カプセル、ペレット、ゲルキャップ、粉末、ハイドロゲル、ピル、小丸薬、または小球が含まれる。あるいは、組成物は、液体調製物の形状であり得る。液体調製物の例には、シロップ、ペースト、噴霧剤、ドロップ、軟膏、クリーム、ローション、油、塗布剤、またはゲルが含まれる。典型的なゲルには、アルコール性ゲル（イソプロパノールゲル、エタノールゲルまたはプロパノールゲル等）、またはハイドロゲルが含まれる。
【０１２８】
本発明に記載の使用のための組成物は、ヒトまたは動物の被験体への投与に好適な形状であり得る。好適な形状には、局所投与または経口投与に適合した形状が含まれる。局所投与に好適な形状には、局所軟膏、クリーム、ローション、油、塗布剤、液体、ゲル、または溶解可能なストリップが含まれる。経口投与に好適な形状には、カプセル、ペレット、ゲルキャップ、ピル、小丸薬、小球、ロゼンジ、デンタルフロス、練り歯磨き、口内洗浄液、溶解可能なフィルムストリップが含まれる。貯蔵安定性組成物が使用されるならば、これは、投与の部位で存在する液体によって（例えば経口投与については唾液によって、または創傷からの滲出液によって）希釈され、投与部位での過酸化水素の放出を導くことができる。
【０１２９】
抗微生物活性を生成する能力を提供することが所望される場合には、本発明に記載の使用のための組成物は、少なくとも１つの好適な抗微生物物質もしくは免疫刺激構成要素、賦形剤もしくはアジュバント、または他の好適な構成要素と共に存在し得る。好ましくは、しかしながら、組成物は抗生物質を含まない。
【０１３０】
本発明に記載の使用に好適な組成物の例は「Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ」である。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは非低温殺菌蜂蜜であり、精製グルコースオキシダーゼを添加した。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの異なる３つの調製物を、異なる抗微生物有効性で作製した。
【０１３１】
ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：０．１％（ｗ／ｗ）の添加されたグルコースオキシダーゼを備えた非低温殺菌蜂蜜。使用される酵素は、ＢＩＯ−ＣＡＴ，ＩＮＣからの、活性１５，０００ユニット／ｇのＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒからの食品グレードのグルコースオキシダーゼであった。ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの密封した小袋を、１１／６−１４．２ｋＧｙの標的線量でγ線照射した。
【０１３２】
ＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：０．１％（ｗ／ｗ）の添加されたグルコースオキシダーゼを備えた非低温殺菌蜂蜜。使用される酵素は、ＢＢＩ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄからの、活性２７４ユニット／ｍｇのＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒからのグルコースオキシダーゼ（ＧＯ３Ｂ２）であった。ユニット定義：ｐＨ７．０で摂氏２５度で毎分１マイクロモルのグルコースの酸化を引き起こす酵素の量。混入物：αアミラーゼは０．０５％以下、サッカラーゼは０．０５％以下、マルターゼは０．０５％以下、及びＧＯ／Ｃａｔは２０００以上である。
【０１３３】
ＳＨ３  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：０．２５％（ｗ／ｗ）の添加されたグルコースオキシダーゼを備えた非低温殺菌蜂蜜。使用される酵素は、ＢＢＩ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄからの、活性２７４ユニット／ｍｇのグルコースオキシダーゼ（ＧＯ３Ｂ２）であった。
【０１３４】
したがって、ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは１グラムの組成物あたり１５ユニットのグルコースオキシダーゼを含有し、ＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは１グラムの組成物あたり２７４ユニットのグルコースオキシダーゼを含有し、ＳＨ３  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは１グラムの組成物あたり６８５ユニットのグルコースオキシダーゼを含有する。
【０１３５】
本発明の組成物は、例えば鼻洗剤の一部としてＣＲＳ等の副鼻腔感染の治療に使用することができる。
【０１３６】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む物質と；塩とを含む、抗微生物活性を生成するための組成物が提供される。
【０１３７】
あるいは、塩はキット中で組成物の他のものとは分離して提供することができる。したがって、本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含む、抗微生物活性を生成するための組成物；及び分離して塩を含むキットも提供される。キットは、例えばキットの構成要素の混合、及び微生物感染を治療する使用のための説明書を更に含み得る。
【０１３８】
組成物、またはキットの組成物は、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない形状で提供され得る。例えば、組成物は２０％未満の水（例えば１０〜１９％の水）を含むことができる。かかる組成物（以下「乾燥」形状の組成物と称される）は、水と混合した場合、鼻洗剤としての使用に好適である。
【０１３９】
塩は乾燥形状または水溶液で提供され得る。塩は塩化ナトリウムを含み得る。
【０１４０】
乾燥形状の組成物は、例えば１：２〜５：１または２：３〜３：２の比で抗微生物活性を生成するための組成物対塩を含み得る。
【０１４１】
組成物は、例えば重量で１〜９９％、１〜８０％、１〜７０％、１〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％の抗微生物活性を生成するための組成物を含み得る。
【０１４２】
組成物は、例えば重量で１〜９９％、１〜８０％、１〜７０％、１〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％の塩を含み得る。
【０１４３】
組成物、キット、または混合物は、例えば生理的ｐＨの近く（好適にはｐＨ７．３〜７．５）に溶液のｐＨを調整する緩衝剤（重炭酸ナトリウム等）を更に含み得る。
【０１４４】
組成物は、例えば重量で１〜９９％、１〜８０％、１〜７０％、１〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％の緩衝剤を含み得る。
【０１４５】
組成物は水溶性混合物として提供され得る。水溶性混合物は等張性混合物または高張性混合物であり得る。水溶性混合物は、例えば０．１〜２０％ｗ／ｖの塩、好適には０．２５〜１０％、０．２５〜１０％、０．２５〜５％、０．２５〜３％、０．５〜１０％、０．５〜５％、または０．５〜３％、例えば０．９％ｗ／ｖの塩を含み得る。水溶性混合物は、例えば１〜３００％、１〜２５０％、１〜２００％、１〜１５０％、１〜１００％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％ｗ／ｖの抗微生物活性を生成するための組成物を含み得る。水溶性混合物は、例えば１０〜３００％、１０〜２５０％、１０〜２００％、１０〜１５０％、１０〜１００％、１０〜５０％、１０〜４０％、１０〜３０％、または１０〜２０％ｗ／ｖの抗微生物活性を生成するための組成物を含み得る。水溶性混合物は、例えば５０〜３００％、５０〜２５０％、５０〜２００％、５０〜１５０％、または５０〜１００％ｗ／ｖの抗微生物活性を生成するための組成物を含み得る。水溶性混合物は、例えば０．１〜２０％、０．１〜１０％、０．１〜５％、０．１〜１％ｗ／ｖの重炭酸ナトリウムを含み得る。
【０１４６】
本発明の組成物、キット、または混合物、特に塩を含むものを、鼻洗剤として使用して、例えば、鼻の微生物感染、副鼻腔炎、鼻炎、ＣＲＳ、鼻アレルギー、風邪もしくはインフルエンザの症状、鬱血、または乾燥を防止または治療することができる。組成物、キット、または混合物を使用して、微生物感染（例えばバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染）を防止または治療することができる。バイオフィルムを含む微生物感染は鼻の微生物感染であり得るか、またはバイオフィルムを形成することができる微生物は鼻の微生物感染の一部であり得る。
【０１４７】
鼻洗剤として本発明の組成物または混合物を使用するために、口を開けたままにして呼吸しながら、それを１つの鼻孔の中へ注ぎ、重力を補助として使用して他の鼻孔を介して流れ出させる。あるいは、陽圧のいくつかの形状を適用してリンスを促進することができる。例えば、呼吸するため及び液体が喉を伝って鼻を吸い込むことを防止するために、すべての時間で口を開けたままにしながら、随意に鼻孔に適合する特殊なチップを備えた、柔軟なプラスチックで作製されたボトルを絞って、副鼻腔を介する混合物の流動の陽圧をかけることができる。電気モーター駆動ポンプを利用する潅注マシンも利用可能である。圧力を適用するいくつかの鼻洗浄システムは、使用した塩水溶液が鼻腔の中へ戻って流れるのを防止するために抗逆流弁を有する。
【０１４８】
本発明の組成物または混合物は、ネティポット（鼻洗剤の投与に使用される容器）中で提供され得る。ネティポットは、典型的には金属、ガラス、セラミックまたはプラスチックで作製される。それらは頭部の位置決めと共に重力に依存し、外側の副鼻腔をリンスするために実践が反復される。典型的には、それらは底部の近くに接合された吐水口を有し、時には反対側に取っ手がある。
【０１４９】
本発明によれば、副鼻腔感染（ＣＲＳ等）を防止または治療する方法であって、効果的な量の本発明の組成物または混合物をかかる防止または治療を必要とする被験体へ投与することを含む、該方法も提供される。
【０１５０】
本発明の組成物または混合物を肺へ投与して、肺組織中の微生物感染（例えばバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染）を防止または治療することもできる。例えば、本発明の組成物または混合物を肺へ投与して、結核を防止もしくは治療するか、または嚢胞性線維症（ＣＦ）と関連する微生物感染を防止もしくは治療することができる。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓは結核の原因病原体である。本発明の組成物または混合物を使用して、呼吸器感染、例えば呼吸器疾患（ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、気管支拡張症、または喘息等）、またはＨＩＶ／ＡＩＤＳと関連する呼吸器感染、または末期の疾患と関連する呼吸器感染を患う被験体における呼吸器感染を、防止または治療することができる。
【０１５１】
ＣＦについての遺伝的根拠は、ヨーロッパを祖先とする白人集団中で優位に見出される、十分に特徴づけられ重篤な単一遺伝子性劣性疾患であり、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子中の突然変異から生じるということである。遺伝子欠損は患者についての無数の医学的問題をもたらすが、疾患の重要な臨床像はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる慢性的な肺感染である。ＣＦにおける慢性的な肺感染の病因の一態様は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａがバイオフィルムとして増殖する能力である。最終的に、ＣＦに罹患する患者のうちの８０〜９５％は、慢性的な細菌感染及び合併する気道炎症がもたらす呼吸不全で死亡する。嚢胞性線維症と関連する他の微生物感染には、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ及びＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅが含まれる（Ｌｙｃｚａｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ａｐｒ．２００２，ｐ．１９４−２２２）。
【０１５２】
本発明の組成物を使用して、嚢胞性線維症に罹患する患者における微生物感染（特にバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、嚢胞性線維症に罹患する患者における微生物感染）を防止または治療することができる。感染は肺感染であり得る。例えば、本発明の組成物を使用して、嚢胞性線維症に罹患する被験体における肺のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染を防止または治療することができる。
【０１５３】
本発明によれば、微生物による肺感染を防止または治療する方法であって、効果的な量の本発明の組成物をかかる防止または治療を必要とする被験体へ投与することを含む、該方法も提供される。
【０１５４】
気管支拡張症は、慢性咳嗽、過剰な喀痰産生、細菌のコロナイゼーション、及び再発性急性感染によって特徴づけられる、気道の持続的な拡張及び肥厚である。それは、肺の全体にわたって広まっている（びまん性）か、またはより局在（巣状）しているかもしれない。それは気道の慢性炎症によって引き起こされ、多数の疾患と関連するかまたはそれらによって引き起こされる。それは肺感染後、特に小児期において、基礎疾患（免疫不全及び嚢胞性線維症等）と関連して発症し得る。
【０１５５】
気管支拡張症は、以下の型へと形態学的に分類することができる（３つのすべての型は同じ患者中に存在し得る）。
円柱状気管支拡張症：気管支は拡大し円柱状である；
結節状気管支拡張症：気管支は不規則であり、拡張及び狭窄の領域がある；
嚢状または嚢胞状：拡張した気管支は嚢胞のクラスターを形成する。これは気管支拡張症のうちで最も重度の型であり、嚢胞性線維症に罹患する患者においてしばしば見出される。
【０１５６】
罹患した気道は炎症を起こし、容易に破綻する。気流及び分泌物の排出の不全があり、肺中で多量の粘液の蓄積を引き起こす。粘液は細菌を収集し、常習的で頻繁に重篤な下気道感染症を起こしやすい。
【０１５７】
気管支拡張症と関連する気道感染には、以下の細菌：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、非結核性マイコバクテリウムによって引き起こされる感染が含まれる。
【０１５８】
気管支拡張症の重症度はかつては産生された喀痰の体積に従って分類されたが、現在、これはコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン上の放射線学的外観を使用することにより大部分は取って代わられた。
【０１５９】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、慢性気管支炎、肺気腫、またはその両方に罹患する人々についての包括的用語である。ＣＯＰＤにより、肺への気流は制限される。ＣＯＰＤは、通常喫煙によって引き起こされる。症状は咳嗽及び呼吸困難を含む。急性及び慢性の下気道感染が増加した頻度で起こる。これらの感染がＣＯＰＤに罹患する患者の臨床経過に大きく寄与するので、それらはＣＯＰＤにおける重要な併発症を構成する。腸内細菌科細菌、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓは、ＣＯＰＤ増悪に関与する。様々な微生物病原体はＣＯＰＤにおける慢性感染に関与していた。これらには、典型的な細菌（分類不可能なＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ等）、非定型細菌（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ等）、ウイルス（アデノウイルス及びおそらく呼吸器合胞体ウイルス等）、及び真菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ
ｊｉｒｏｖｅｃｉ）が含まれる。
【０１６０】
ＨＩＶ陽性患者またはＡＩＤＳ患者において観察される最も一般的な日和見感染性の肺疾患のうちのいくつかは、カリニ肺炎、結核（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる）、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍコンプレックス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅコンプレックス（ＭＡＩＣ））、真菌感染（カンジダ症またはコクシジオイデス症等）、ならびにウイルス性肺炎及び細菌性肺炎（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅによって引き起こされる細菌性肺炎等）である。
【０１６１】
本発明の組成物は、感染、特に以下の微生物：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（非結核性ミコバクテリウム）；腸内細菌科細菌；Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ；アデノウイルス；呼吸器合胞体ウイルス；Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ；カリニ肺炎；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅコンプレックス（ＭＡＩＣ）；カンジダ；Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓのうちの任意のものによっても引き起こされる呼吸器感染の防止または治療のために使用することができる。
【０１６２】
本発明の組成物を使用して下部生殖管感染を治療することができる。例えば、本発明の組成物を局所的に適用してかかる感染を治療することができる。かかる感染の例には細菌性膣炎及び一般的な細菌性帯下が含まれる。本発明の組成物は挿入デバイス（タンポン等）に適用され得る。
【０１６３】
本発明の組成物を使用して、カルバペネム耐性腸内細菌科細菌（ＣＲＥ）またはカルバペネマーゼ産生腸内細菌科細菌（ＣＰＥ）を含む感染を治療することができる。
【０１６４】
本発明の組成物は、患者の鼻腔もしくは副鼻腔へ組成物を噴霧、注入、吸入、または適用することによって投与または適用することができる。組成物は、外部からまたは内部で患者へ投与または適用することができる。
【０１６５】
本発明の組成物は、肺の中への組成物の送達のための、吸入器（例えば用量測定式吸入器、乾燥粉末吸入器、ネブライザー）中に、または鼻吸入器中に提供され得る。
【０１６６】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための組成物であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；ポリマーとを含み、該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該組成物も提供される。随意に、組成物は更に塩を含み得る。組成物が塩を更に含むならば、随意に組成物は緩衝剤（重炭酸ナトリウム等）を更に含み得る。
【０１６７】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質と；ポリマーとを含む、該組成物が更に提供される。酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である（すなわち人間の介入の結果として添加される）。随意に、組成物は更に塩を含み得る。組成物が塩を更に含むならば、随意に組成物は緩衝剤（重炭酸ナトリウム等）を更に含み得る。
【０１６８】
特定の実施形態において、精製基質は、精製糖物質であるかまたは精製糖物質を含む。上述のように、精製糖物質は、天然源から得られるか（例えば加工、抽出、または純化された天然糖物質）、または合成的に産生され得る。精製糖物質は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％純粋であり得る。精製糖物質は、医療グレード、医療デバイスグレード、または医薬グレードの糖物質であり得る。精製糖物質は、１つまたは複数の精製糖物質（例えば精製Ｄ−グルコース、ヘキソース、またはＤ−ガラクトース）を含み得る。例えば、精製糖物質は、医療グレード、医療デバイスグレード、または医薬グレードのＤ−グルコース、ヘキソース、またはＤ−ガラクトースであり得る。特定の実施形態において、酵素及び基質は精製され、例えば精製グルコースオキシダーゼ及び精製Ｄ−グルコース、好適には、医療グレード、医療デバイスグレード、または医薬グレードのグルコースオキシダーゼ及びＤ−グルコースである。
【０１６９】
組成物は噴霧可能または霧化可能な組成物であり得る。例えば、組成物は噴霧または霧化を許容するレオロジー特性を有し得る。
【０１７０】
組成物は注入可能組成物であり得る。例えば、組成物はシリンジを介する適用を許容するレオロジー特性を有し得る。
【０１７１】
組成物へのポリマーの添加なしに、非純化天然物質（蜂蜜等）は、効果的な噴霧または注入を許容するのに必須のレオロジー特性を有していないかもしれない。例えば、非純化天然物質は粘度がありすぎるかもしれない。
【０１７２】
組成物中のポリマーは、任意の医学的に許容されるポリマー（任意のＦｏｏｄ  ａｎｄ
Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ認可（ＦＤＡ認可）ポリマー等）であり得る。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、ポリマーは合成ポリマーであり得る。いくつかの実施形態において、ポリマーは天然ポリマーである。
【０１７４】
随意に、ポリマーは水溶性である。ポリマーは、有機溶媒または非水性溶媒中で可溶性であり得る。ポリマーは、水性溶媒及び非水性溶媒の混合物中で可溶性であり得る。ポリマーは、生物分解性または生物侵食性であり得る。ポリマーはコポリマーであり得る。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、ポリマーは、ポリエチレンオキシド（またはポリエチレングリコール）、ポリビニルアルコール、及びポリビニルピロリドンから選択される。
【０１７６】
他のポリマーには、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトン、またはポリマー性界面活性剤が含まれ得る。別の好適なポリマーはホスフィノ−カルボン酸（ＰＣＡ）であり得る。
【０１７７】
更なるポリマーには、セルロース（ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース等の誘導体が含まれる）等のポリサッカライド、アルギン酸塩、ゼラチン、またはシクロデキストリンが含まれ得る。好適なポリマーには、キトサンまたはヒアルロン酸も含まれ得る。
【０１７８】
組成物は、重量で最大５０％、２５％、１０％または５％のポリマーを含み得る。例えば、組成物は、重量で０．５〜３％のポリマーを含み得る。随意に、ポリマーは重量で組成物の０．５〜５０％であり得る。組成物は、重量で最大３０％、２０％または１０％の非純化天然物質を含み得る。
【０１７９】
組成物は、ポリマー溶液を、非純化天然物質、または精製基質を含む物質と混合することによって形成され得る。例えば、ポリマー溶液は、重量で最大５０％、２５％、１０％または５％のポリマーを含み得る。組成物は、ポリマー溶液を、非純化天然物質、または精製基質を含む物質と、９０％：１０％〜６０％：４０％の重量比（ポリマー溶液：非純化天然物質、またはポリマー：精製基質を含む物質）で、混合することによって形成され得る。例えば、組成物は、重量で８０％のポリマー溶液及び重量で２０％の非純化天然物質、または精製基質を含む物質の混合物から形成することができる。
【０１８０】
好ましくは、組成物は貯蔵安定性組成物である。いくつかの実施形態において、組成物は、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない。いくつかの実施形態において、溶液または組成物は、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含む。
【０１８１】
本発明の貯蔵安定性組成物は抗微生物剤を含み得る。例えば、酵素による基質の変換のための条件下で水溶液中の物質と酵素を接触させ、次いで酵素による基質の変換を可能にするには不十分な遊離水があるレベルへその水分含有量を低減させるように組成物を乾燥することによって、貯蔵安定性組成物が形成されるならば、過酸化水素は存在し得る。好ましくは、しかしながら、貯蔵安定性組成物は検出可能な過酸化水素を含まない。組成物は過酸化水素を実質的に含有しないと言ってもよい。かかる組成物は、例えば酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水の非存在下において基質と酵素を接触させることによって、形成され得る。本発明の貯蔵安定性組成物中に存在し得る他の抗微生物剤の例には、抗生剤、抗ウイルス剤、または抗真菌剤が含まれる。
【０１８２】
組成物は非水性溶媒を含み得る。
【０１８３】
組成物の粘度は、組成物の所望される適用に応じて調整され得る。例えば、粘度は、組成物中のポリマーのタイプ及び／もしくは量の変動によって、または組成物の溶媒含有量の調整によって、調整され得る。
【０１８４】
組成物はゲルであり得る。好ましくは、組成物は液体である。
【０１８５】
本発明によれば、組成物を患者へ送達するためのデバイスであって、該デバイスが組成物を含み、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；ポリマーとを含み、該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該デバイスも提供される。
【０１８６】
本発明によれば、組成物を患者へ送達するためのデバイスであって、該デバイスが組成物を含み、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質と；ポリマーとを含み、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該デバイスも提供される。
【０１８７】
デバイスは、噴霧または霧化するデバイス（ポンプ作用式噴霧またはエアロゾル式噴霧等）であり得る。デバイスは、肺の中への組成物の送達のための、吸入器（例えば用量測定式吸入器、乾燥粉末吸入器、ネブライザー）、または鼻吸入器であり得る。
【０１８８】
ネブライザーは、液体を吸入に好適なエアロゾル小滴に転換するデバイスである。ネブライザーは、酸素、圧縮したエアまたは超音波の力を使用して医薬物溶液を破壊し、治療法用量のエアロゾル粒子を肺へ直接送達する。様々なネブライザーは利用可能である。ネブライザーは、圧縮気体（ジェットネブライザー）によって、または超音波振動結晶（超音波ネブライザー）によって駆動することができる。
【０１８９】
５〜１０分で溶液から十分に小さな粒子を産生するために、通常少なくとも６Ｌ／分の気体流動率が必要である。超音波ネブライザーは、迅速に振動する圧電性結晶を使用してエアロゾル粒子を産生する。超音波ネブライザーマシンは大抵の場合より小さくより静かである。
【０１９０】
多くのネブライザーは、処方薬用量のわずか１０％しか肺へ送達しない。薬物のほとんどは、内部装置上で捕らえられるか、または吐出の間に浪費される。薬物送達の効率は、ネブライザーチャンバーのタイプ及び体積、ならびに駆動される流動率に依存する。いくつかのチャンバーはリザーバー及び弁システムを有して、吸気の間の粒子送達の効率を増加させ、排気の間の環境的な損失を低減させる。呼吸に支援されたオープンベントシステムは薬物送達を改善するが、適切な呼気流量を有する患者に依存する。フェイスマスクまたはマウスピースをエアロゾル粒子の投与のために使用することができる。
【０１９１】
ネブライザーは多くの呼吸器疾患の治療のために使用される。ネブライザー使用についての適応症には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪の管理及び長期的な治療、嚢胞性線維症、気管支拡張症、喘息、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの管理、ならびに緩和ケアにおける症状軽減が含まれる。
【０１９２】
本発明のネブライザー用組成物を使用して、呼吸器疾患（ＣＯＰＤ、嚢胞性線維症、気管支拡張症、または喘息等）、またはＨＩＶ／ＡＩＤＳと関連する呼吸器感染、または末期の疾患と関連する呼吸器感染を患う被験体における、微生物感染（例えばバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染）を、防止または治療することができる。
【０１９３】
デバイスは、外部使用のため（患者の皮膚への組成物の適用のため等）のものであり得る。
【０１９４】
デバイスは、患者への内部適用のためのものであり得る。例えば、デバイスは、患者の気道への組成物の投与ための吸入器またはネブライザーであり得る。デバイスは圧注器であり得る。デバイスは、患者の中へ組成物を注入するためのデバイス（シリンジ等）であり得る。
【０１９５】
本発明によれば、ｉ）基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質とポリマーとを含む組成物であって、該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該組成物；及びｉｉ）組成物を患者へ送達するためのデバイス、を含む、キットが提供される。組成物は、デバイスから分離され得る。
【０１９６】
本発明によれば、ｉ）基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための精製基質を含む物質とポリマーとを含む組成物であって、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該組成物；及びｉｉ）組成物を患者へ送達するためのデバイス、を含む、キットも提供される。組成物は、デバイスから分離され得る。
【０１９７】
組成物は、予防的適用のため、または微生物感染と関連する病態の治療のためのものであり得る。
【０１９８】
例えば、手術前の皮膚滅菌のための予防的噴霧が提供され得る。かかる噴霧は低粘度の組成物を含み得る。適用された場合に、組成物は非粘着性であり得る。噴霧は、反応性酸素の層流を皮膚へ送達することを可能にし得る。層流は、長期間にわたって反応性酸素を送達し続けることができ、それは外科的切開前の皮膚を滅菌することができ、外科的手順の間に及びその後に予防的保護を提供することができる。
【０１９９】
吸入のための霧化噴霧が提供され得る。吸入のための霧化噴霧を使用して患者の気道における感染を治療することができる。霧化噴霧は、低粘度の組成物を要求され得る。
【０２００】
噴霧を使用して、ドレッシング材を適用する前に熱傷または創傷組織へ適用することができる。これはより粘度のある組成物を要求し得る。
【０２０１】
手術後に噴霧を内部で患者へ適用して、器官感染及び敗血症を防止することができる。これはより粘度のある組成物を要求し得る。
【０２０２】
組成物はデバイス（圧注器等）により使用される前に水により希釈され得る。
【０２０３】
好ましくは、組成物は実質的に均質である。
【０２０４】
本発明によれば、組成物を患者へ適用または投与する方法であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；ポリマーとを含み、該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該方法が、該組成物を噴霧すること、該組成物を注入すること、該組成物を吸入すること、または該組成物を患者の鼻腔もしくは副鼻腔へ適用することを含む、該方法が提供される。
【０２０５】
本発明によれば、組成物を患者へ適用または投与する方法であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質と；ポリマーとを含み、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該方法が、該組成物を噴霧すること、該組成物を注入すること、該組成物を吸入すること、または該組成物を患者の鼻腔もしくは副鼻腔へ適用することを含む、該方法も提供される。
【０２０６】
本発明によれば、医薬品としての使用のための組成物であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；ポリマーとを含み、該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該組成物が提供される。
【０２０７】
本発明によれば、医薬品としての使用のための組成物であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質と；ポリマーとを含み、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該組成物も提供される。組成物は、患者の鼻腔または副鼻腔へ組成物を噴霧、注入、吸入、または適用することによって投与または適用することができる。組成物は、外部からまたは内部で患者へ投与または適用することができる。
【０２０８】
組成物は、患者の鼻腔または副鼻腔へ組成物を噴霧、注入、吸入、または適用することによって投与または適用することができる。組成物は、外部からまたは内部で患者へ投与または適用することができる。
【０２０９】
本発明の組成物は滅菌され得る。組成物は、任意の好適な方法によって、例えば上記のようなγ線照射への曝露によって滅菌され得る。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、組成物（特に非純化天然物質及びポリマーを含む本発明の組成物）は、以下のもの：
水性噴霧
活性のある蜂蜜    １０ｇ
Ｔｒｉｔｏｎ  ＣＦ    ０．１ｇ
マルトデキストリンまたはトウモロコシデンプン    １ｇ
（「活性のある蜂蜜」は添加されたグルコースオキシダーゼを備えた蜂蜜である）
を含有する２５ｍｌのプラスチックボトル
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、組成物（特に非純化天然物質及びポリマーを含む本発明の組成物）は、以下のもの：
非水性噴霧
活性のある蜂蜜    ７０％
プロピレングリコール    ３０％
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、組成物（特に非純化天然物質及びポリマーを含む本発明の組成物）は、以下のもの：
粉末
活性のある蜂蜜
マルトデキストリン
イブプロフェン
結晶セルロース（ＣＭＣ）
ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、組成物（特に非純化天然物質及びポリマーを含む本発明の組成物）は、以下のもの：
アルコール性ゲル
カルボポール９４０    ０．３％
トリエタノールアミン  ０．４％（ｐＨ及び安定性制御のために必要とされる）
活性のある蜂蜜（５＋）    ６５％
エタノール    ２５．０％
水    適量
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２１４】
好ましい実施形態において、組成物（特に非純化天然物質及びポリマーを含む本発明の組成物）は、以下のもの：
真菌性の爪の治療
発泡体のウェル中に活性のある蜂蜜（５＋）を備えたプラスター
ヒドロキシプロピルセルロース
グリセロール
イソプロピルアルコール
クエン酸
一水塩
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、組成物（特に非純化天然物質及びポリマーを含む本発明の組成物）は、以下のもの：
クリーム
蜂蜜    １５％
カルボマー    ２．６３％
ジメチコン    ０．１３％
スルホコハク酸ラウリル二ナトリウム    ０．０５％
エデト酸二ナトリウム    ０．１３％
グリセロール    ５．２６％
コロイド状水和シリカ    ０．３３％
ポロキサマー    ０．２６％
水酸化ナトリウム    ０．４１％
精製水    ８５．０３％
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、組成物（特に非純化天然物質及びポリマーを含む本発明の組成物）は、以下のもの：マルトデキストリン、結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、カルボマー、ポラキソマー（ｐｏｌａｘｏｍｅｒ）、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボポール９４０のうちの１つまたは複数を含まない。
【０２１７】
本発明によれば、抗微生物性活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質とを含み；該酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、貯蔵安定性組成物であり、該組成物の希釈に後続して、少なくとも２４時間の期間で２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、該組成物も提供される。
【０２１８】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質とを含む、水性混合物であって；少なくとも２４時間の期間で２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、該混合物が更に提供される。
【０２１９】
組成物または混合物は、少なくとも２４時間の期間で少なくとも０．１ｍｍｏｌ／リットルの過酸化水素の持続放出を提供するのに、十分な酵素及び基質を含み得る。組成物または混合物は塩を更に含み得る。
【０２２０】
本発明によれば、医薬品としての使用のための本発明の組成物または混合物も提供される。
【０２２１】
本発明は、微生物感染の防止または治療で使用される本発明の組成物または混合物も提供する。
【０２２２】
本発明によれば、微生物感染の防止または治療のための医薬品の製造における本発明の組成物または混合物の使用が更に提供される。
【０２２３】
本発明は、微生物感染を防止または治療する方法であって、効果的な量の本発明の組成物または混合物を感染の部位へ投与することを含む、該方法を更に提供する。
【０２２４】
微生物感染には、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物が含まれ得る。
【０２２５】
米国において１００人につき約１人でＭＲＳＡによるコロナイゼーションがある（すなわち身体中または身体上に生物体を有するが、感染を引き起こさない）と推定され、これらの人々は他の人へＭＲＳＡ細菌を伝播し得る。ＭＲＳＡによるコロナイゼーションのある人々についての別の用語は「キャリア」であり、人が身体中または身体上に生物体を保有し、他の人へ生物体を移行させることができ、その人が続いて感染するようになり得ることを意味する。キャリアがＭＲＳＡ生物体をかくまうのに一般的な場所は鼻である。
【０２２６】
ムピロシン（バクトロバン）は、グラム陽性細菌（ＭＲＳＡが含まれる）に対して効果的であり、現在デコロナイゼーションレジームの一部として使用される局所用抗菌治療である。しかしながら、最近のエビデンスは、ムピロシンへＭＲＳＡの耐性が増加していることを指摘する（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ．２００７；４５（５）：５４１−５４７；Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．２００９；４９（６）：９３５−９４１）。
【０２２７】
本発明の組成物もしくは混合物、または本発明に記載の使用のための組成物を、上で定義されるように使用して、例えば、ＭＲＳＡ陽性被験体（ＭＲＳＡキャリア（特に鼻のキャリア）、またはＭＲＳＡ感染性創傷のある外科患者等）において、ＭＲＳＡをデコロナイゼーションする局所用抗ＭＲＳＡ治療として、ＭＲＳＡのコロナイゼーションまたは感染を防止または治療することができる。
【０２２８】
したがって、本発明によれば、ＭＲＳＡのコロナイゼーションまたは感染の防止または治療における使用のために、本発明の組成物もしくは混合物、または本発明に記載の使用のための組成物が提供される。
【０２２９】
本発明によれば、ＭＲＳＡのコロナイゼーションまたは感染の防止または治療のための医薬品の製造における、本発明の組成物もしくは混合物、または本発明に記載の使用のための組成物の使用も提供される。
【０２３０】
本発明によれば、ＭＲＳＡのコロナイゼーションまたは感染を防止または治療する方法であって、効果的な量の、本発明の組成物もしくは混合物、または本発明に記載の使用のための組成物をかかる防止または治療を必要とする被験体へ投与することを含む、該方法が更に提供される。
【０２３１】
組成物、または本発明に記載の使用のための組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含み得る。いくつかの実施形態において、酵素は上で定義されるように精製酵素であり得る。あるいは、または追加で、物質は、加工、抽出、または純化された物質であり得るか、または、上で定義されるように、基質は非純化物質（非純化天然基質等）であり得るか、もしくは精製基質を含み得る。
【０２３２】
本発明の組成物の酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性（「基質変換活性」と本明細書において称される）への追加である（すなわち人間の介入の結果として添加される）。組成物は、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、貯蔵安定性組成物であり得る。
【０２３３】
本発明の組成物は、水溶性容器（小袋またはパウチ等）内で含有され得る。従って、本発明の組成物を封入または含有する水溶性容器が提供され得る。有利には、これは、測定された量の溶媒（水または食塩水等）の添加によって、特定の治療法上の適用のための正確な量の組成物が送達されることを可能にすることができる。例えば、水溶性小袋中に含有される本発明の組成物を使用して、鼻洗剤溶液またはネブライザー用もしくは霧化される溶液を形成することができる。結果的に、組成物を含有する可溶性小袋を水性溶媒と接触させることにより、本発明の水性混合物の形成をもたらすことができる。水性混合物は、酵素が基質を変換して過酸化水素を産生することを可能にするのに十分な遊離水を含有し得る。
【０２３４】
水溶性小袋は、好ましくは医療グレード材料から製造される。小袋は３８℃の水中で溶解可能であり得る。好ましくは、水溶性小袋は、非毒性で抗帯電であり、紫外線光による分解へ耐性があり、気体、油及び油脂による分解へ耐性がある。一例において、可溶性小袋はポリマーまたはプラスチック材料（ポリビニルアルコール等）から製造され得る。
【０２３５】
水溶性小袋中に含有される本発明の組成物は、以下の病態：鼻の病態（副鼻腔炎及び鼻副鼻腔炎等）；気道感染（上気道感染（例えば扁桃腺炎、喉頭炎及び副鼻腔炎）または下気道感染（例えば気管支炎、肺炎、毛細気管支炎及び結核）等）；慢性閉塞性肺疾患；及び嚢胞性線維症のうちの１つまたは複数の治療に有用であり得る。
【０２３６】
本発明の組成物、及び障壁または層として機能し得る水溶性材料を含む、創傷ドレッシング材が提供され得る。水溶性材料は、組成物と接触または近接し得る。本発明の組成物は、水溶性材料によって封入またはその内側に含有され得る。水溶性材料は、このようにして小袋、パウチまたは封入物を形成し得る。組成物は水溶性材料の層の間に配置することができる。水溶性材料は医療グレード材料から製造することができる。水溶性材料は３８℃の水中で溶解可能であり得る。好ましくは、水溶性材料は、非毒性で抗帯電であり、紫外線光による分解へ耐性があり、気体、油及び油脂による分解へ耐性がある。一例において、水溶性材料はポリマーまたはプラスチック材料（ポリビニルアルコール等）から製造され得る。使用に際して、ドレッシング材を創傷へ適用し、それにより水溶性材料は創傷滲出液中に溶解し、本発明の組成物が創傷に接触すること及び反応性酸素を創傷へ送達することを可能にする。有利には、反応性酸素の測定可能で正確な用量は、このようにして創傷へ送達することができる。水溶性材料は、創傷ドレッシング材からの組成物の放出を制御することができる。
【０２３７】
水溶性材料及び組成物は、従来の無菌性の創傷ドレッシング材の表面へ付着させることができる。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物、または本発明で使用される組成物が、特に低い水分含有量を有することは有利である。このような事例は、例えば、組成物が水溶性の容器または小袋内で含有される場合であり得る。水分含有量が高すぎるならば、水溶性容器中で短時間でのみ組成物を含有することが可能であろう。したがって、水分含有量の低減はより長い保管期間を可能にし得る。例えば、３年のシェルフライフが特に所望される。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、重量で１２％以下の水が組成物中にある。他の実施形態において、重量で１０％以下の水が組成物中にある。いくつかの実施形態において、重量で５％以下または場合によっては重量で３％の水が組成物中にある。いくつかの実施形態において、低減させた水分含有量を備えた組成物は液体形状である。いくつかの実施形態において、組成物は固体形状である。好適な固体形状には、粉末、フレークまたは顆粒が含まれる。他の形状にはロゼンジまたは錠剤が含まれる。いくつかの実施形態において、組成物はペーストである。ペーストは、例えば周囲温度または室温（例えば２０〜２６℃）で容易に流動しなくてもよいが、それは柔軟な及び／または可鍛性の稠度を有し得る。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、組成物は乾燥蜂蜜または乾燥された蜂蜜を含み得る。乾燥蜂蜜または乾燥された蜂蜜産物は商業的に入手可能であり、典型的には噴霧乾燥、凍結乾燥、または減圧乾燥等のプロセスによって得られる。したがって、低減させた水分含有量を備えた本発明の組成物は、かかるプロセスを使用して製造することができる。本発明の組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素を、該酵素のための基質を含む物質（例えば非純化天然物質（蜂蜜等））へ添加することによって、得られるかまたは得ることができ、そこで該物質は乾燥されており、１２％以下、１０％以下、５％以下、または３％以下の水（重量で）を含む。あるいは、酵素を物質へ添加することができ、もたらされた組成物は乾燥される。物質へ添加された場合、酵素は乾燥形状または乾燥された形状であり得る。例えば、酵素は凍結乾燥され得る。酵素は、１２％以下、１０％以下、５％以下、または３％以下の水（重量で）を含有し得る。好ましくは、酵素が乾燥形状または乾燥された形状であるならば、５％未満の水（重量で）を含有する。
【０２４１】
添加物を添加して、乾燥プロセスを促進するかまたは乾燥された組成物の特性を改善することができる。例えば、乾燥された蜂蜜産物は、加工添加物が含まれていなければ、固まるかまたは凝集する傾向を有する。好適な添加物には、加工補助剤、乾燥補助剤、増量剤または固化防止剤が含まれる。添加物には、デンプン、粉乳、ステアリン酸カルシウム、ふすまデキストリン、レシチン、及び大豆粉が含まれ得る。乾燥された蜂蜜製剤は、典型的には５０％、６５％、７０％以上の蜂蜜（重量で）を含有する。したがって製剤の残りは好適な添加物を含むことができる。好ましい実施形態において、乾燥プロセスを促進するかまたは組成物の特性を改善するために添加された添加物はない。
【０２４２】
結果的に、本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む物質とを含む組成物であって、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、１２％以下、１０％以下、５％以下、または３％以下の水（重量で）を含む、該組成物が提供される。組成物は、本明細書において記載されるように更に定義することができる。例えば、酵素はグルコースオキシダーゼであり得、物質は非純化天然物質（蜂蜜等）であり得るかまたは精製基質（グルコース等）であり得る。組成物は、凍結乾燥によって得られるかまたは得ることができる。次いで、組成物は、微生物感染及び他の医学的病態の治療において、本明細書において記載されるように使用することができる。例えば、組成物を使用して、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染を治療することができる。微生物感染または医学的病態を治療するために、組成物を最初に水へ添加して、水溶液を形成することができる。水の添加は過酸化水素産生を開始し得る。
【０２４３】
本発明によれば、組成物を乾燥することを含む方法であって、該組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質とを含み、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該方法が提供され得る。組成物は、噴霧乾燥、凍結乾燥、または減圧乾燥によって乾燥することができる。乾燥することは、組成物中の水分含有量を、１２％以下、１０％以下、５以下％、または３％以下の水（重量で）へ低減させることができる。
【０２４４】
あるいは、酵素のための基質を含む乾燥した物質へ酵素を添加することを含む方法が、提供され得る。あるいは、方法は、ｉ）乾燥することが、１２％以下、１０％以下、５以下％、または３％以下の水（重量で）を有する物質をもたらすように、酵素のための基質を含む物質を乾燥することと；ｉｉ）該酵素を乾燥した物質へ添加し、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であることと、を含み得る。物質は、噴霧乾燥、凍結乾燥、または減圧乾燥によって乾燥することができる。物質へ添加された酵素は、乾燥形または状乾燥された形状であり得る。
【０２４５】
本発明の組成物または混合物は、特異的なレベルまたは濃度で過酸化水素の持続放出を提供するのに、十分な酵素及び基質を含み得る。例えば、本発明の組成物もしくは混合物、または本発明における使用のための組成物もしくは混合物は、少なくとも２ｐｐｍ、少なくとも５ｐｐｍ、少なくとも１０ｐｐｍ、少なくとも２０ｐｐｍ、または少なくとも５０ｐｐｍの濃度で過酸化水素の持続放出を提供し得る。好ましい実施形態において、レベルは少なくとも２ｐｐｍであり得る。いくつかの実施形態において、濃度は、多くとも５００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、２０ｐｐｍ、または１０ｐｐｍであり得る。好ましい実施形態において、レベルは５０ｐｐｍ以下であり得る。より好ましい実施形態において、レベルは２０ｐｐｍ以下であり得る。さらにより好ましい実施形態において、レベルは１０ｐｐｍ以下であり得る。例えば、濃度は、１０〜５００ｐｐｍ、２０〜２００ｐｐｍまたは５０〜１００ｐｐｍ、２〜５０ｐｐｍ、２〜２０ｐｐｍまたは５〜１０ｐｐｍであり得る。組成物が、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まないならば（例えば組成物が乾燥組成物または乾燥された組成物であるならば）、それが水によって希釈され、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水がある時点でのみ、過酸化水素産生は起こり得る。したがって水の添加は過酸化水素産生を開始し得る。組成物または混合物は、少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、または少なくとも４日間の過酸化水素の持続放出を提供し得る。好ましくは、過酸化水素のレベルは少なくとも４日間持続する。好ましい実施形態において、過酸化水素のレベルは、１０〜５００ｐｐｍで、少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、または少なくとも４日間持続する。他の実施形態において、過酸化水素のレベルは、５０〜１００ｐｐｍで、少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、または少なくとも４日間持続する。他の実施形態において、過酸化水素のレベルは、２〜５０ｐｐｍで、少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、または少なくとも４日間持続する。他の実施形態において、過酸化水素のレベルは、５〜１０ｐｐｍで、少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、または少なくとも４日間持続する。
【０２４６】
本発明の組成物、または本発明で使用される組成物は、非水性溶媒を含み得る。組成物が非純化天然物質（蜂蜜等）を含むならば、これは特に有利であり得る。例えば蜂蜜は高粘度を有し粘着性であり、それは特定の製品による取り扱い及び送達を困難にし得る。貯蔵安定性組成物が所望されるならば、水性溶媒の添加によって粘度を減少させることは可能ではないかもしれない。蜂蜜の粘度は非水性溶媒の使用によって低減させることができる。
【０２４７】
非水性溶媒中での溶液の形成によって、組成物中の物質はより容易に加工可能でより低粘着性になり得る。したがってかかる溶液は基材（織物基材等）の上へコートされ、それにより創傷ドレッシング材の構成要素を提供することができる。さらに、より低粘度の組成物は噴霧可能であり得る。
【０２４８】
従って、本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質と非水性溶媒とを含む抗微生物活性を生成するための組成物が提供される。
【０２４９】
非水性溶媒を含む組成物において、物質は、本明細書において記載されるような、非純化天然物質（蜂蜜等）または酵素のための精製基質を含む物質であり得る。
【０２５０】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と非水性溶媒とを含む、該組成物が提供される。
【０２５１】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための精製基質を含む物質と非水性溶媒とを含む、該組成物が提供される。
【０２５２】
本発明によれば、１０５生物体／グラム組織を超える細菌負荷を有する創傷の治療における使用のための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と該酵素のための基質を含む物質と非水性溶媒とを含む、該組成物が提供される。
【０２５３】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む物質と；塩と；非水性溶媒とを含む、抗微生物活性を生成するための組成物が提供される。
【０２５４】
非水性溶媒を含む組成物は、本明細書において記載されるようなポリマーを含み得る。
【０２５５】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む非純化天然物質と、ポリマーと；非水性溶媒とを含む、該組成物が提供される。
【０２５６】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質と；ポリマーと；非水性溶媒とを含む、該組成物が提供される。
【０２５７】
非水性溶媒を含む組成物は、本明細書において記載されるように、酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、貯蔵安定性組成物であり得る。
【０２５８】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための貯蔵安定性組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と；該酵素のための基質を含む物質と；非水性溶媒とを含み、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、該組成物が提供される。
【０２５９】
非水性溶媒を含む組成物において、物質は本明細書において記載されるようなカタラーゼ活性を欠損し得る。
【０２６０】
本発明によれば、抗微生物活性を生成するための貯蔵安定性組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；カタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む物質と；非水性溶媒とを含み、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、該組成物が提供される。
【０２６１】
非水性溶媒を含む組成物は、本明細書において記載されるように、ある期間の過酸化水素の持続放出を提供し得る。例えば、組成物は、おそらく組成物の希釈に後続して、少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間過酸化水素の持続放出を提供し得る。好適には、組成物は、組成物の希釈に後続して、少なくとも２４時間の期間で２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルで過酸化水素の持続放出を提供する。
【０２６２】
非水性溶媒を含む組成物は、少なくとも２４時間、より好ましくは４８時間の期間で少なくとも０．１、０．５、１または１．５ｍｍｏｌ／リットルの過酸化水素の持続放出を提供するのに、十分な酵素及び基質を含み得る。
【０２６３】
本発明によれば、抗微生物性活性を生成するための組成物であって、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための精製基質を含む物質と；非水性溶媒とを含み、該酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、貯蔵安定性組成物であり、該組成物の希釈に後続して、少なくとも２４時間の期間で２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、該組成物が提供される。
【０２６４】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む物質と；非水性溶媒とを含む組成物であって、該酵素が、該物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、１２％以下、１０％以下、５％以下、または３％以下の水（重量で）を含む、該組成物が提供される。
【０２６５】
非水性溶媒を含む組成物において、酵素は、物質中に存在し得る、基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性（「基質変換活性」と本明細書において称される）への追加である（すなわち人間の介入の結果として添加される）。非水性溶媒を含む組成物は、本明細書において記載されるような精製酵素を含み得る。
【０２６６】
本発明によれば、医薬品としての使用のための非水性溶媒を含む組成物も提供される。例えば、本発明のかかる組成物は、本明細書において記載される任意の疾患もしくは病態を治療するために使用され得るか、またはそれらを治療する方法において使用され得る。いくつかの実施形態において、非水性溶媒を含む本発明の組成物は、微生物感染（バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含むもの等）の防止または治療において使われるためのものであり得る。
【０２６７】
非水性溶媒を含む本発明の組成物において、非水性溶媒は、エタノール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、エチレングリコール、またはプロピレングリコールを含み得る。好ましくは、非水性溶媒は、グリセロールであるかまたはグリセロールを含む。グリセロールは保湿剤として作用することができ、したがってグリセロールを含む組成物は乾燥皮膚を軟化または湿らせることを支援することができる。
【０２６８】
様々な非水性溶媒についての溶解度パラメーター及び粘度パラメーターを、以下の表中で示す。
【表２】
2020158526.tif 000003
【表３】
2020158526.tif 000004
【０２６９】
好ましい実施形態において、非水性溶媒は、以下の表中の例示的な非水性溶媒の範囲内の溶解度パラメーターを有するように選択され得る。例えば、δｔ／ＭＰａ１／２は２６〜５０（２６．５〜４７．８等）であり得る。δｄ／ＭＰａ１／２は１５〜１９（１５．６〜１８．１等）であり得る。δｐ／ＭＰａ１／２は８〜１６（８．８〜１６等）であり得る。δｈ／ＭＰａ１／２は１０〜４５（１０．２〜４２．３等）であり得る。
【０２７０】
所望される粘度に依存して、非水性溶媒は選択され得る。例えば、より高い粘度が所望されるならば、グリセロールが好まれるだろう。
【０２７１】
非水性溶媒を含む組成物の好ましい実施形態において、組成物は、重量で少なくとも１０％の非水性溶媒を含み得る。他の実施形態において、組成物は、重量で少なくとも２０％の非水性溶媒を含み得る。他の実施形態において、組成物は、重量で少なくとも２５％の非水性溶媒を含み得る。他の実施形態において、組成物は、重量で少なくとも５０％の非水性溶媒を含み得る。いくつかの実施形態において、組成物は、重量で少なくとも７５％の非水性溶媒を含み得る。水性溶媒の量は組成物の意図された適用に依存して変動し得る。例えば、噴霧可能組成物、または抗菌ワイプによる使用のための組成物は、組成物がより低い粘度を有するように、より高いレベルの非水性溶媒を含み得る。いくつかの実施形態において、組成物中の非水性溶媒の量は、重量で５０〜９０％であり得る。
【０２７２】
いくつかの適用のために、より低い量の非水性溶媒を含む組成物（創傷ドレッシング材の形成における使用のための組成物等）を有することが、所望され得る。それゆえ、いくつかの組成物は、最大量の非水性溶媒を含み得る。組成物中の非水性溶媒の最大量は、重量で５０％以下であり得る。いくつかの実施形態において、組成物中の非水性溶媒の量は、重量で１〜５０、５〜５０、または１０〜５０％であり得る。
【０２７３】
非水性溶媒を含む本発明の組成物において、組成物は蜂蜜を含み得る。組成物が蜂蜜を含有するならば、蜂蜜の量は重量で少なくとも２０％であり得る。いくつかの実施形態において、蜂蜜は重量で少なくとも２５％の量で存在し得る。いくつかの実施形態において、蜂蜜は重量で少なくとも５０％の量で存在し得る。いくつかの実施形態において、蜂蜜は重量で少なくとも７５％の量で存在し得る。いくつかの実施形態において、組成物中の蜂蜜の量は、重量で５０％以下であり得る。いくつかの実施形態において、組成物中の蜂蜜の量は、重量で２５％以下であり得る。いくつかの実施形態において、蜂蜜は組成物中で５０〜９０％の量で存在し得る。いくつかの実施形態において、組成物中の蜂蜜は、重量で１〜５０、５〜５０、または１０〜５０％の量で存在し得る。
【０２７４】
組成物を使用して基材（織物等）をコートする予定であるならば、組成物の重量は、好ましくは基材の１平方メートルあたり少なくとも１００ｇである。他の実施形態において、組成物の重量は、基質の１平方メートルあたり少なくとも２００ｇであり得る。他の実施形態において、組成物の重量は、基質の１平方メートルあたり少なくとも３００ｇであり得る。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、非水性溶媒を含む組成物はポリマーを実質的に含まず、例えば重量で１％、０．５％、０．１％、または０．０１％未満のポリマーである。
【０２７６】
好ましい実施形態において、非水性溶媒を含む本発明の組成物は、以下のもの：
ｉ）アルコール性ゲル
カルボポール９４０    ０．３％
トリエタノールアミン    ０．４％（ｐＨ及び安定性制御のために必要とされる）
活性のある蜂蜜    ６５％
エタノール    ２５．０％
水    適量
（「活性のある蜂蜜」は添加されたグルコースオキシダーゼを備えた蜂蜜である）
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２７７】
好ましい実施形態において、非水性溶媒を含む本発明の組成物は、以下のもの：
ｉｉ）非水性噴霧
活性のある蜂蜜    ７０％
プロピレングリコール    ３０％
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２７８】
好ましい実施形態において、非水性溶媒を含む本発明の組成物は、以下のもの：
ｉｉｉ）真菌性の爪の治療
発泡体のウェル中に活性のある蜂蜜を備えたプラスター
ヒドロキシプロピルセルロース
グリセロール
イソプロピルアルコール
クエン酸
一水塩
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２７９】
好ましい実施形態において、非水性溶媒を含む本発明の組成物は、以下のもの：
ｉｖ）喉噴霧
蜂蜜及びグリセロール（好ましくは５〜２０％の蜂蜜を含む）ではないか、またはそれらを含まない。
【０２８０】
好ましい実施形態において、非水性溶媒を含む本発明の組成物は、以下のもの：
ｖ）クリーム
蜂蜜    １５％
カルボマー    ２．６３％
ジメチコン    ０．１３％
スルホコハク酸ラウリル二ナトリウム    ０．０５％
エデト酸二ナトリウム    ０．１３％
グリセロール    ５．２６％
コロイド状水和シリカ    ０．３３％
ポロキサマー    ０．２６％
水酸化ナトリウム    ０．４１％
精製水    ８５．０３％
ｖｉ）粉末
活性のある蜂蜜
マルトデキストリン
イブプロフェン
結晶セルロース（ＣＭＣ）
ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）
ではないか、またはそれらを含まない。
【０２８１】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、上記の組成物（ｉ）〜（ｖｉ）のうちの任意の１つまたは任意の組み合わせを除外し得る。特に、本発明の組成物は、上記の（ｉ）；もしくは（ｉｉ）；もしくは（ｉｉｉ）；もしくは（ｉｖ）；（ｖ）；もしくは（ｖｉ）の組成物を除外し得るか；または、本発明の組成物は、上記の組成物の以下の組み合わせ：（ｉ）及び（ｉｉ）；（ｉ）及び（ｉｉｉ）；（ｉ）及び（ｉｖ）；（ｉ）及び（ｖ）；（ｉ）及び（ｖｉ）；（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）；（ｉｉ）及び（ｉｖ）；（ｉｉ）及び（ｖ）；（ｉｉ）及び（ｖｉ）；（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）；（ｉｉｉ）及び（ｖ）；（ｉｉｉ）及び（ｖｉ）；（ｉｖ）及び（ｖ）；（ｉｖ）及び（ｖｉ）；もしくは（ｖｉ）及び（ｖ）；または（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）；（ｉ）、（ｉｖ）及び（ｖｉ）；（ｉ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖｉ）；もしくは（ｉｉｉ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）及び（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；もしくは（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）及び（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；もしくは（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）及び（ｖｉ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）及び（ｖｉ）のうちの任意のものを除外し得る。
【０２８２】
非水性溶媒を含む組成物の具体的な実施例は、実施例２３中で記載される。
【０２８３】
本発明の実施形態は、添付の図面を参照して、単なる例として下に記載される。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止または治療における使用のための、抗微生物活性を生成するための組成物であって、該組成物が、貯蔵安定性組成物であり、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該組成物。
（項目２）
バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染の防止または治療における使用のための医薬品の製造における、抗微生物活性を生成するための組成物の使用であって、該組成物が、貯蔵安定性組成物であり、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該使用。
（項目３）
前記組成物が、バイオフィルムの増殖もしくは播種を防止もしくは阻害するか、または微生物によるバイオフィルムの形成を防止もしくは阻害する、項目１または２のいずれか一項に記載の使用。
（項目４）
前記物質が非純化天然糖物質である、先行項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目５）
前記糖物質が蜂蜜である、項目４に記載の使用。
（項目６）
前記蜂蜜が、非低温殺菌蜂蜜、好ましくはクリーム状非低温殺菌蜂蜜である、項目５に記載の使用。
（項目７）
前記酵素がオキシドレダクターゼ酵素である、先行項目のいずれか一項に記載の使用。（項目８）
前記オキシドレダクターゼ酵素がグルコースオキシダーゼである、項目７に記載の使用。
（項目９）
前記組成物が滅菌組成物である、先行項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１０）
前記微生物感染が慢性的な微生物感染である、先行項目のいずれか一項に記載の使用。（項目１１）
前記微生物感染が、創傷感染、好ましくは慢性的な創傷感染である、先行項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１２）
前記創傷感染が皮膚創傷感染または熱傷創傷感染である、項目１１に記載の使用。
（項目１３）
前記微生物感染が、バイオフィルムを形成することができる細菌、好ましくはグラム陰性細菌を含む、先行項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１４）
前記バイオフィルムが以下の細菌種：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、もしくはメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）のうちの任意のものを含むか、または、前記微生物が以下の細菌種：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、もしくはメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）のうちの任意のものである、先行項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１５）
前記微生物感染が副鼻腔感染症（慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳ）等）である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
（項目１６）
前記微生物感染が、微生物性肺感染（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染等）または嚢胞性線維症に罹患する被験体におけるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
（項目１７）
バイオフィルムの形成を防止または阻害するインビトロの方法であって、該方法が、効果的な量の抗微生物性活性を生成するための組成物をバイオフィルムを形成することができる微生物と接触させることを含み、該組成物が、貯蔵安定性組成物であり、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該方法。
（項目１８）
バイオフィルムの増殖または播種を防止または阻害するインビトロの方法であって、該方法が、効果的な量の抗微生物性活性を生成するための組成物をバイオフィルムと接触させることを含み、該組成物が、貯蔵安定性組成物であり、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該方法。
（項目１９）
バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、微生物感染を防止または治療する方法であって、該方法が、効果的な量の抗微生物活性を生成するための組成物を感染の部位へ投与することを含み、該組成物が、貯蔵安定性組成物であり、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該方法。
（項目２０）
抗微生物性活性を生成するための組成物であって、該組成物が、貯蔵安定性組成物であり、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；及び
塩；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該組成物。
（項目２１）
抗微生物性活性を生成するための組成物を含むキットであって、該組成物が、貯蔵安定性組成物であり、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；及び分離して、
塩；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該キット。
（項目２２）
水性混合物であって、該混合物が、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と、及び
塩を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、
該混合物。
（項目２３）
前記塩が塩化ナトリウムを含む、項目２０に記載の組成物、項目２１に記載のキット、または項目２２に記載の混合物。
（項目２４）
緩衝剤（重炭酸ナトリウム等）を更に含む、項目２０に記載の組成物、項目２１に記載のキット、または項目２２に記載の混合物。
（項目２５）
滅菌された、項目２０〜２４のいずれか一項に記載の組成物、キット、または混合物。（項目２６）
医薬品として使用される、項目２０に記載の組成物、または項目２２に記載の混合物。（項目２７）
副鼻腔感染症（ＣＲＳ等）の防止または治療における使用のための、項目２０に記載の組成物、または項目２２に記載の混合物。
（項目２８）
副鼻腔感染症（ＣＲＳ等）の防止または治療のための医薬品の製造における、項目２０に記載の組成物、または項目２２に記載の混合物の使用。
（項目２９）
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；該酵素のための基質を含む非純化天然物質と、ポリマーとを含む組成物であって、該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加である、該組成物。
（項目３０）
噴霧可能または霧化可能な組成物である、項目２９に記載の組成物。
（項目３１）
前記ポリマーが、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール及びポリビニルピロリドンから選択される、項目２９または項目３０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３２）
患者へ組成物を送達するためのデバイスであって、項目２９〜３１のいずれか一項において定義される通りの組成物を含む、該デバイス。
（項目３３）
噴霧または霧化するデバイスである、項目３２に記載のデバイス。
（項目３４）
ｉ）項目２９〜３１のいずれか一項において定義される通りの組成物と；ｉｉ）組成物を患者へ送達するためのデバイスとを含む、キット。
（項目３５）
組成物を患者へ適用または投与する方法であって、該組成物が、項目２９〜３１のいずれか一項において定義される通りであり、該方法が、該組成物を噴霧すること、該組成物を注入すること、該組成物を吸入すること、または該組成物を患者の気道へ適用することを含む、該方法。
（項目３６）
医薬品として使用される組成物であって、項目２９〜３１のいずれか一項において定義される通りの組成物。
（項目３７）
前記組成物が、組成物を患者の気道へ噴霧、注入、吸入、または適用することによって、投与または適用される、項目３６に記載の使用のための組成物。
（項目３８）
抗微生物性活性を生成するための組成物であって、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；
該酵素のための精製基質を含む物質とを含み；
該酵素による基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、貯蔵安定性組成物であり、該組成物の希釈に後続して、少なくとも２４時間の期間で２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、
該組成物。
（項目３９）
水性混合物であって、該混合物が、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素と；
該酵素のための精製基質を含む物質とを含み；
該組成物が、少なくとも２４時間の期間で２ｍｍｏｌ／リットル未満のレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、
該混合物。
（項目４０）
少なくとも２４時間の期間で少なくとも０．１ｍｍｏｌ／リットルの過酸化水素の持続放出を提供するのに、十分な酵素及び基質を含む、項目３８に記載の組成物、または項目３９に記載の混合物。
（項目４１）
塩を更に含む、項目３８〜４０のいずれか一項に記載の組成物または混合物。
（項目４２）
医薬品としての使用のための、項目３８〜４１のいずれか一項に記載の組成物または混合物。
（項目４３）
微生物感染の防止または治療における使用のための、項目３８〜４１のいずれか一項に記載の組成物または混合物。
（項目４４）
微生物感染の防止または治療のための医薬品の製造における、項目３８〜４１のいずれか一項に記載の組成物または混合物の使用。
（項目４５）
項目３８〜４１のいずれか一項に記載の効果的な量の組成物または混合物を感染の部位へ投与することを含む、微生物感染を防止または治療する方法。
（項目４６）
前記微生物感染が、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、項目４３もしくは４４のいずれか一項に記載の使用、または項目４５に記載の方法。
（項目４７）
ＭＲＳＡのコロナイゼーションまたは感染の防止または治療における使用のための、項目２０もしくは２９〜３１のいずれか一項に記載の組成物、項目２２に記載の混合物、項目３８〜４１のいずれか一項に記載の組成物もしくは混合物、または貯蔵安定性組成物であって、該貯蔵安定性組成物が、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該組成物、該混合物、該組成物もしくは該混合物、または該貯蔵安定性組成物。
（項目４８）
ＭＲＳＡのコロナイゼーションまたは感染の防止または治療のための医薬品の製造における、項目２０もしくは２９〜３１のいずれか一項に記載の組成物、項目２２に記載の混合物、項目３８〜４１のいずれか一項に記載の組成物もしくは混合物、または貯蔵安定性組成物の使用であって、該貯蔵安定性組成物が、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該使用。
（項目４９）
ＭＲＳＡのコロナイゼーションまたは感染を防止または治療する方法であって、該方法が、効果的な量の、項目２０もしくは２９〜３１のいずれか一項に記載の組成物、項目２２に記載の混合物、項目３８〜４１のいずれか一項に記載の組成物もしくは混合物、または
貯蔵安定性組成物をかかる防止または治療を必要とする被験体へ投与することを含み、
該貯蔵安定性組成物が、
基質を変換して過酸化水素を放出することができる精製酵素と該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；または
基質を変換して過酸化水素を放出することができる酵素とカタラーゼ活性を欠損し該酵素のための基質を含む非純化天然物質と；
を含み、
該酵素が、該非純化天然物質中に存在し得る、該基質を変換して過酸化水素を放出することができる任意の酵素活性への追加であり、該組成物が、該酵素による該基質の変換を可能にするのに十分な遊離水を含まない、
該方法。
（項目５０）
水溶性小袋内に含有される、項目２０、２３〜２５、２９〜３１、３８または４０〜４１のいずれか一項において定義される通りの組成物。
（項目５１）
項目２０、２３〜２５、２９〜３１、３８または４０〜４１のいずれか一項において定義される通りの組成物と；組成物を封入する水溶性層とを含む創傷ドレッシング材。
（項目５２）
任意の検出可能な過酸化水素を含まない、項目２０、２３〜２５、２９〜３１、３８または４０〜４１のいずれか一項において定義される通りの組成物。
（項目５３）
前記組成物が水溶性小袋内に含有される、項目１〜１９、２１、２６〜２８、３２〜３７、または４２〜４９のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、またはデバイス。
（項目５４）
前記組成物が該組成物を封入する水溶性層を備えた創傷ドレッシング材中で提供される、項目１〜１９、２１、２６〜２８、３２〜３７、または４２〜４９のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、またはデバイス。
（項目５５）
前記組成物が検出可能な過酸化水素を含まない、項目１〜１９、２１、２６〜２８、３２〜３７、４２〜４９、５１、５３、または５４のいずれかに記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目５６）
前記組成物が１２％以下の水（重量で）を含む、項目１〜２１、２３〜３８、または４０〜５５のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目５７）
前記組成物が１０％以下の水（重量で）を含む、項目１〜２１、２３〜３８、または４０〜５５のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目５８）
前記組成物が５％以下の水（重量で）を含む、項目１〜２１、２３〜３８、または４０〜５５のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目５９）
前記組成物が３％以下の水（重量で）を含む、項目１〜２１、２３〜３８、または４０〜５５のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目６０）
前記組成物が、加工補助剤、乾燥補助剤、増量剤及び／または固化防止剤を含む、項目５６〜５９のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目６１）
前記組成物が乾燥することによって得られるかまたは得ることができる、項目５６〜６０のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目６２）
前記乾燥することが、凍結乾燥、減圧乾燥、または噴霧乾燥を含む、項目６１に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目６３）
固体形状における、項目５６〜６２のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目６４）
前記固体形状が、粉末、フレーク、顆粒、ロゼンジ、または錠剤である、項目６３に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、または創傷ドレッシング材。
（項目６５）
前記組成物または混合物が、少なくとも１時間、１２時間、２４時間、２日間、または４日間の期間で、１０〜５００ｐｐｍのレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、先行項目のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目６６）
前記組成物または混合物が、少なくとも１時間、１２時間、２４時間、２日間、または４日間の期間で、５０〜１００ｐｐｍのレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、項目６５に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目６７）
前記組成物または混合物が、少なくとも１時間、１２時間、２４時間、２日間、または４日間の期間で、２〜５０ｐｐｍのレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、項目１〜６４のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目６８）
前記組成物または混合物が、少なくとも１時間、１２時間、２４時間、２日間、または４日間の期間で、５〜１０ｐｐｍのレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、項目６７に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目６９）
前記組成物または混合物が非水性溶媒を含む、先行項目のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７０）
前記非水性溶媒が、エタノール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、エチレングリコール、及びプロピレングリコールからなる群から選択される、項目６９に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７１）
前記非水性溶媒がグリセロールである、項目７０に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７２）
前記非水性溶媒が、組成物または混合物の重量で少なくとも１０％である、項目６９〜７１のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７３）
前記非水性溶媒が、組成物または混合物の重量で少なくとも２０％である、項目６９〜７１のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７４）
前記非水性溶媒が、組成物または混合物の重量で少なくとも５０％である、項目６９〜７１のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７５）
前記非水性溶媒が、組成物または混合物の重量で少なくとも７５％である、項目６９〜７１のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７６）
前記非水性溶媒が、組成物または混合物の重量で５０％以下である、項目６９〜７５のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７７）
前記非水性溶媒が、組成物または混合物の重量で１〜５０％である、項目６９〜７１のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７８）
前記非水性溶媒が、組成物または混合物の重量で５０〜９０％である、項目６９〜７１のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目７９）
前記組成物または混合物の前記物質が蜂蜜であるかまたは蜂蜜を含む、項目６９〜７８のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目８０）
前記組成物または混合物の前記物質が蜂蜜であり、該蜂蜜が重量で少なくとも２５％の量で存在する、項目６９〜７８のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目８１）
前記組成物または混合物の前記物質が蜂蜜であり、該蜂蜜が重量で少なくとも５０％の量で存在する、項目６９〜７８のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目８２）
前記組成物または混合物の前記物質が蜂蜜であり、該蜂蜜が重量で少なくとも７５％の量で存在する、項目６９〜７４または７６〜７７のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目８３）
前記組成物または混合物の前記物質が蜂蜜であり、該蜂蜜が重量で１〜５０％の量で存在する、項目６９〜７８のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
（項目８４）
前記組成物または混合物の前記物質が蜂蜜であり、該蜂蜜が重量で５０〜９０％の量で存在する、項目６９〜７４または７６〜７７のいずれか一項に記載の、使用、キット、方法、組成物、デバイス、混合物、または創傷ドレッシング材。
【図面の簡単な説明】
【０２８４】
【図１Ａ】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株ＰＡ０１、及び臨床的な熱傷からの分離株１０５４によるバイオフィルムの形成に対する、無溶媒ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの効果を示す。
【図１Ｂ】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株ＰＡ０１、及び臨床的な熱傷からの分離株１０５４によるバイオフィルムの形成に対する、ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの連続希釈の効果を示す。
【図１Ｃ】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ対照株ＡＹＥ、及びＡＣＩクローンＮＣＴＣ＿１３４２０（Ｃ５９）によるバイオフィルムの形成に対する、無溶媒ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの効果を示す。
【図１Ｄ】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ対照株ＡＹＥ、及びＡＣＩクローンＮＣＴＣ＿１３４２０（Ｃ５９）によるバイオフィルムの形成に対する、ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの連続希釈の効果を示す。
【図２Ａ】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株ＰＡ０１、及び臨床的な熱傷からの分離株１０５４によるバイオフィルムの形成に対する、無溶媒マヌカハニーの効果を示す。
【図２Ｂ】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ対照株ＡＹＥ、及びＡＣＩクローンＮＣＴＣ＿１３４２０（Ｃ５９）によるバイオフィルムの形成に対する、無溶媒マヌカハニーの効果を示す。
【図２Ｃ】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株ＰＡ０１、及び臨床的な熱傷からの分離株１０５４（図２Ｃの上部）、またはＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ対照株ＡＹＥ、及びＡＣＩクローンＮＣＴＣ＿１３４２０（Ｃ５９）（図２Ｃの下部）によるバイオフィルムの形成に対する、マヌカハニーの連続希釈の効果を示す。
【図３Ａ】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ株ＰＡ０１、及び臨床的な熱傷からの分離株１０５４によるバイオフィルムの形成に対する、ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３の  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの無溶媒及び連続希釈の効果を示す。
【図３Ｂ】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ対照株ＡＹＥ、及びＡＣＩクローンＮＣＴＣ＿１３４２０（Ｃ５９）によるバイオフィルムの形成に対する、ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３の  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの無溶媒及び連続希釈の効果を示す。
【図４】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＳ＿１５８６）のバイオフィルム産生分離株によるバイオフィルム形成に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３、ならびにマヌカハニー（ＭＨ）の効果を示す。
【図５】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡ＿６７４９）のバイオフィルム産生分離株によるバイオフィルム形成に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３、ならびにマヌカハニー（ＭＨ）の効果を示す。
【図６】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＡＣＩ＿１９６０６）のバイオフィルム産生分離株によるバイオフィルム形成に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３、ならびにマヌカハニー（ＭＨ）の効果を示す。
【図７】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＡＣＩ＿Ｃ６０）のバイオフィルム産生分離株によるバイオフィルム形成に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３、ならびにマヌカハニー（ＭＨ）の効果を示す。
【図８】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＡＣＩ＿Ｃ５９によって産生された前形成されたバイオフィルムの播種の防止または低減に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３調製物、ならびにマヌカハニー（ＭＨ）の効果を示す。
【図９】Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ  ＡＣＩ＿ＡＹＥによって産生された前形成されたバイオフィルムの播種の防止または低減に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３調製物、ならびにマヌカハニー（ＭＨ）の効果を示す。
【図１０】非活性化されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＤＥ）、マヌカハニー（ＭＨ：「Ｃｏｍｖｉｔａ  Ｍａｎｕｋａｃａｒｅ  １８＋」）、酢酸（ＡＡ）、ならびに複数の商業的に入手可能な創傷ドレッシング材及び創傷用クリームと比較した、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（対照株ＰＡ０１）によるバイオフィルム形成の防止に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３調製物の効果を示す。
【図１１】非活性化されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＤＥ）、マヌカハニー（ＭＨ：「Ｃｏｍｖｉｔａ  Ｍａｎｕｋａｃａｒｅ  １８＋」）、酢酸（ＡＡ）、ならびに複数の商業的に入手可能な創傷ドレッシング材及び創傷用クリームと比較した、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（対照株ＡＹＥ）によるバイオフィルム形成の防止に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３調製物の効果を示す。
【図１２】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＶＩＭ陽性）及びＣＲＥ  Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの多剤耐性（ＭＤＲ）バイオフィルム産生分離株、ならびにＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｉｉの２つのバイオフィルム産生分離株（ＡＣＩ＿Ｃ６０（１）、ＡＣＩ＿Ｃ６０（２））によるバイオフィルム形成に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物ＳＨ１及びマヌカハニー（ＭＨ）の効果を示す。
【図１３】Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの最小阻止濃度（ＭＩＣ）を決定するための、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの異なる濃度での慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳ）関連Ｓ．ａｕｒｅｕｓ浮遊集団のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ処理の効果を示す。各々の処理条件についての第１のカラムは、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）分離株の結果を表わし、次の４つのカラムは、異なるメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）分離株の結果を表わす。
【図１４】Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を決定するための、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの有効濃度による、浮遊性のメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）またはメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）が継代培養されたチョコレート血液寒天培地プレートの写真を示す。
【図１５】Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの異なる濃度でのＣＲＳ関連Ｓ．ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ処理の効果を示す。＊＊ｐ＝０．００２。
【図１６Ａ】Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３の異なる過酸化水素産生率を示す。
【図１６Ｂ】Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２、及びＳＨ３における、フェノール活性と最大過酸化水素活性との間の関係性を示す。
【図１７】取り付けたネブライザーフェイスマスクタブを備えたＳａｌｔｅｒ呼吸器ネブライザーの写真を示す。リザーバーは、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ及び食塩水の液化混合物を含有する。
【図１８】Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓにより接種し、５、１５、２０、または３０分間ネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙと接触させたペーパーディスクと共に培養した血液寒天培地プレートの写真を示す。
【図１９】Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの異なる濃度でのＣＲＳ関連Ｓ．ａｕｒｅｕｓのバイオフィルム（ＭＳＳＡ）のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ処理の効果を示す。
【図２０】図２０Ａ：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに慢性的に感染した長年の虚血性潰瘍の写真。図２０Ｂ：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる７日間の治療後の同じ潰瘍の写真。
【図２１】図２１Ａ：小児のＭＲＳＡ創傷感染の写真。図２１Ｂ：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる１０日間の治療後の同じ創傷感染の写真。
【図２２】図２２Ａ：ＣＡ  ＭＲＳＡ表在性感染の写真。図２２Ｂ：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる５日間の治療後の同じ感染の写真。図２２Ｃ：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる１０日間の治療後の同じ感染の写真。
【図２３】Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの細胞毒性活性についてのアッセイの結果を示す。
【図２４】乾燥されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ顆粒による過酸化水素産生、及び水中で溶解して溶液を形成した、乾燥されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを示す。
【図２５】様々な時間的な期間（４日間まで）後の図２４のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの溶液による過酸化水素産生を示す。
【発明を実施するための形態】
【０２８５】
［実施例］
以下の実施例は、重要なバイオフィルムを形成する熱傷病原体に対する、本発明に記載の使用のための組成物（Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ）のインビトロの抗菌活性の決定を記載する。
【実施例】
【０２８６】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）は、実験室試験及び臨床の現場の両方において、広範囲の浮遊性のグラム陽性細菌及びグラム陰性細菌に対する非常に強力な阻害活性及び殺傷活性が今までに実証されてきた。帝王切開の創傷への予防的適用で、耐性生物体の撲滅ならびにコロナイゼーション及び感染の率の低減が実証されている。
【０２８７】
抗微生物物質耐性を取り巻く世界的関心、及びバイオフィルムによってもたらされる難題を考慮して、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉのバイオフィルムを形成する分離株に対するＳＨの３つの異なる製剤（ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３）のインビトロの抗菌活性を調査して、ｉ）バイオフィルムの形成を防止すること及びｉｉ）前形成されたバイオフィルムの播種を撲滅または防止することができるかどうかを評価する。
【０２８８】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ製剤ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３の抗バイオフィルム形成特性は、２つのバイオフィルムアッセイを使用して、標準的なマヌカハニーに対して調査及び比較された。これらは、ＳＨの「最小バイオフィルム阻害濃度」（ＭＢＩＣ）及び「最小バイオフィルム撲滅濃度」（ＭＢＥＣ）のインビトロの測定を可能にした。追加実験を実行して、広範囲にわたる商業的なドレッシング材（２０％の蜂蜜を含有するもの（Ｌ−Ｍｅｓｉｔｒａｎ  ｎｅｔ）が含まれる）へ、ＳＨの抗バイオフィルム形成活性を比較した。
【０２８９】
実施例１
マヌカハニーと比較した、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによるバイオフィルム形成の防止
この実施例は、第１の実験（実験１）（それはＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ１）及びマヌカハニー（ＭＨ）の効果を比較する）、及び第２の実験（実験２）（それはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（対照株ＰＡ０１、及び臨床的な熱傷からの分離株１０５４）及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（対照株ＡＹＥ、及びＵＫ  ＡＣＩクローンＮＣＴＣ＿１３４２０（Ｃ５９））のバイオフィルム産生分離株による、バイオフィルム形成に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの３つの異なる力価調製物（ＳＨ１、ＳＨ２、及びＳＨ３）の効果を比較する）を記載する。
【０２９０】
方法
各々の無溶媒蜂蜜サンプルについて、蜂蜜の１白金耳量を、９６ウェルのマイクロタイタープレートのウェル中の１００μｌ水の中へ配置した。希釈された蜂蜜サンプルについては、およそ２．５ｍｌの蜂蜜を６ｍｌの水と共に普遍的に配置した。次いでこの混合物のうちの３ｍｌを１：２０４８まで連続的に希釈した。１００μｌの各々の連続希釈を、９６ウェルのプレートの異なるウェルへ添加した。
【０２９１】
分離株の一晩の培養物をＭｕｌｌｅｒ−ｈｉｎｔｏｎブロス中で０．１のＯＤ６００へ希釈した。１００μｌの希釈された一晩の培養物を、各々の無溶媒蜂蜜サンプルまたは希釈された蜂蜜サンプルのウェルへ添加した。各々の陽性対照ウェルは、１００μｌの希釈された一晩の培養物及び１００μｌの水を含有していた。各々の陰性対照ウェルは、２００μｌのブロスまたは２００μｌの無溶媒蜂蜜サンプルを含有していた。
【０２９２】
プレートを３３℃（創傷温度）で７２時間インキュベーションして、バイオフィルム形成を促進した。次いでプレートをクリスタルバイオレット色素（それは死バイオフィルム及び生バイオフィルムへ結合する）を使用して顕色させ、７０％のエタノールを使用する色素の可溶化後に、可視化した。
【０２９３】
次いで分光光度計を使用して可溶化した色素の光学的密度（ＯＤ）を評価した。ＯＤ読み取りは、取り込まれたクリスタルバイオレットの量に対応する。より高いＯＤ読み取りは、黒っぽいウェル及びより多い量のバイオフィルムを表わす。次いでＯＤ読み取りをプロットしてグラフを作製した。
【０２９４】
結果
結果を図１〜３中で示し、表（それは各々の株／分離株について最小バイオフィルム阻害濃度（ＭＢＩＣ）を記録する（カットオフとして０．３のＯＤを使用する））中で以下に要約した。
【表４】
2020158526.tif 000005
【０２９５】
結果から、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１は、無溶媒でまたは１：２の希釈で使用した場合にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓのバイオフィルム形成を防止し、無溶媒でまたは１：２もしくは１：４希釈で使用した場合にＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒのバイオフィルム形成を防止したことが示される。
【０２９６】
マヌカハニーは、無溶媒で使用した場合にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓバイオフィルム産生に対する散発的な効果があったが、無溶媒または１：２希釈で使用した場合にＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒのバイオフィルム形成を防止した。
【０２９７】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ２及びＳＨ３もＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒのバイオフィルム形成も防止したが、ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙよりも低い濃度で防止することができた。
【０２９８】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒのバイオフィルム形成を阻害するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ２及びＳＨ３の能力において、有意差はほとんどないと思われた。
【０２９９】
Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒによるバイオフィルム形成は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓのバイオフィルム形成よりも、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ及びマヌカハニー治療へより感受性があると思われた。
【０３００】
結論
これらの結果から、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙがバイオフィルムのバイオフィルム形成を防止することができ、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ２及びＳＨ３がＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１よりも低い濃度でバイオフィルム形成を防止することができるという結論が下された。各々のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物はマヌカハニーよりも低い濃度でバイオフィルム形成を防止することができた。
【０３０１】
実施例２
マヌカハニーと比較した、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの異なる力価調製物によるバイオフィルム形成の防止
この実施例は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＳ＿１５８６］及びＰＳ＿６７４９）及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＡＣＩ＿Ｃ６０及びＡＣＩ＿１９６０６）のバイオフィルムを産生する分離株によるバイオフィルム形成に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１（ＳＨ１）、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ２（ＳＨ２）、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ３（ＳＨ３）、及びマヌカハニー（ＭＨ）の効果を記載する。
【０３０２】
方法
各々の蜂蜜を３７℃のインキュベーター中に３０分間配置した。次いでおよそ３ｍｌの蜂蜜を普遍的に配置し、３ｍｌの滅菌水を添加した。次いでこの混合物を強くボルテックスで撹拌し、１：４０９６まで連続的に希釈した。
【０３０３】
各々の分離株の１００μｌの希釈された一晩の培養物を、９６ウェルのマイクロタイタープレート中の希釈された１００μｌの蜂蜜へ添加し、３３℃（創傷温度）で７２時間インキュベーションして、バイオフィルム形成を促進した。
【０３０４】
次いでプレートをクリスタルバイオレット色素を使用して顕色させ、７０％のエタノールを使用する色素の可溶化後に、可視化した。
【０３０５】
次いで分光光度計を使用して可溶化した色素の光学的密度（ＯＤ）を評価した。ＯＤ読み取りは、取り込まれたクリスタルバイオレットの量に対応する。より高いＯＤ読み取りは、黒っぽいウェル及びより多い量のバイオフィルムを表わす。次いでＯＤ読み取りをプロットしてグラフを作製した。
【０３０６】
結果
結果を図４〜７中で示し、以下の表（それは各々の分離株について最小バイオフィルム阻害濃度（ＭＢＩＣ）を記録する（カットオフとして０．３のＯＤを使用する））中に要約した。
【表５】
2020158526.tif 000006
【０３０７】
分離株のいくつかについて、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙまたはマヌカハニーのより高い濃度及びより低い濃度でのバイオフィルム形成と比較して、バイオフィルム形成の促進が特定の濃度で観察される。この効果は、他の殺生物剤により時々観察されていた。それはバイオフィルム形成の促進を引き起こす、殺生物剤の「ストレス」のためであると考えられる。
【０３０８】
結論
これらの結果から、各々のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物（ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３）が各々の試験された分離株のバイオフィルムの形成を防止することができたという結論が下された。ＳＨ２及びＳＨ３  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物は、Ｓ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙよりも低い濃度で防止することができた。
【０３０９】
試験された分離株のバイオフィルム形成の防止のために最適のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物は、ＳＨ２であった。ＳＨ２の１：６４の希釈は、試験された各々の分離株のバイオフィルム形成を防止することができた。
【０３１０】
試験された各々の力価のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物（ＳＨ１、ＳＨ２、及びＳＨ３）は、一般的にはマヌカハニーよりも低い濃度でバイオフィルム形成を防止することができた。
【０３１１】
実施例３
前形成されたバイオフィルム播種のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる防止
この実施例は、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉの２つの分離株（ＡＣＩ＿ＡＹＥ及びＡＣＩ＿Ｃ５９）によって産生された前形成されたバイオフィルムの播種の防止または低減に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３調製物、ならびにマヌカハニー（ＭＨ）の効果を記載する。
【０３１２】
方法
Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（ＡＣＩ＿ＡＹＥまたはＡＣＩ＿Ｃ５９）の２００μｌの連続的に希釈された一晩の培養物を、９６ウェルのマイクロタイタープレートの各々のウェルへ添加した。各々のウェルが「ペグ」（その上でバイオフィルムを形成できる）を含有するように、ＰＣＲペグプレートをマイクロタイタープレートの上部に配置した。次いで９６ウェルのプレートを３３℃で７２時間インキュベーションして、バイオフィルムの増殖を促進した。
【０３１３】
７２時間後に、ペグを洗浄し、次いで試験剤（Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙまたはマヌカハニー）、またはブロス単独（対照のため）を含有するウェルを備えた更なる９６ウェルのプレートの中へ配置した。２４時間後に、ペグを洗浄し、次いで滅菌ブロスを含有する別の９６ウェルのプレートの中へ配置し、一晩インキュベーションした。ブロスのＯＤは、分光光度計を使用して翌日評価した（上述の実施例１及び２中で記載されるように）。濁っているブロスは高ＯＤを有し、バイオフィルムの播種が成功したことを表わす。
【０３１４】
最終的に、ペグにクリスタルバイオレットアッセイを行って（実施例１及び２中で記載されるように）、バイオフィルムが最初の場所のペグ上に存在していたことを証明した。
【０３１５】
結果
結果を図８及び９中で示す。
【０３１６】
これらの図において、Ｙ軸は、ブロスのＯＤ及びそれゆえ播種の量を表わす。予想されるように、多量のバイオフィルム播種は各々の陽性対照で観察され、最小のバックグラウンド濁度は各々の陰性対照で観察された。バイオフィルムはすべてのペグ上で存在した。結果から、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの最小バイオフィルム撲滅濃度（ＭＢＥＣ）の決定が可能になる。
【０３１７】
ＳＨ１：播種の低減は、両方の分離株について、ＳＨ１の１：１６の希釈まで観察された。若干の濁度は１：２の希釈で観察された。これは、これらの試験ウェルのうちのいくつかプレートの隅であり、それゆえ洗浄することがより困難であることに起因するアーチファクトであり得ると考えられる。若干の濁度が１：８の希釈でも観察された。やはり、これは、おそらくこれらの試験ウェルがプレート上の陽性対照の隣りにあったので、アーチファクトであったと考えられる。
【０３１８】
ＳＨ２：播種の低減は、両方の分離株について、１：２〜１：３２／１：６４の希釈で観察された。ＳＨ１と同様に、若干の濁度は１：２の希釈で観察された。これは、これらの試験ウェルのうちのいくつかプレートの隅であり、それゆえ洗浄することがより困難であることに起因するだろう。
【０３１９】
ＳＨ３：播種の低減は、両方の分離株について、１：２〜１：３２／１：６４の希釈で観察された。ＳＨ１及びＳＨ２と同様に、若干の濁度は１：２の希釈で観察された。これは、これらの試験ウェルのうちのいくつかはプレートの隅であり、それゆえ洗浄することがより困難であることに起因するだろう。
【０３２０】
ＭＨ：播種の低減は、１：２〜１：１６／１：３２の希釈で観察された。
【０３２１】
結論
これらの結果から、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは前形成されたバイオフィルムの播種を防止または低減したことが確認される。ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙのＳＨ２及びＳＨ３の調製物は、ＳＨ１調製物よりも低い濃度でバイオフィルム播種を防止または低減することができたが、ＳＨ２調製物とＳＨ３調製物との間で有効性においてほとんど差がないように思われた。ＳＨ２及びＳＨ３の調製物は、バイオフィルム播種の低減においてマヌカハニーよりもわずかに強力であると思われた。
【０３２２】
実施例４
商業的に入手可能な創傷ドレッシング材と比較した、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによるバイオフィルム形成の防止
この実施例は、非活性化されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＤＥ）、マヌカハニー（ＭＨ：「Ｃｏｍｖｉｔａ  Ｍａｎｕｋａｃａｒｅ  １８＋」）、酢酸（ＡＡ）、ならびに複数の商業的に入手可能な創傷ドレッシング材及び創傷クリームと比較した、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（対照株ＰＡ０１）及びＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ（対照株ＡＹＥ）によるバイオフィルム形成の防止に対する、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３調製物の効果を記載する。
【０３２３】
方法
分離株の一晩の培養物をＭｕｌｌｅｒ−ｈｉｎｔｏｎブロス中で０．１のＯＤ６００へ希釈した。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＳＨ１、ＳＨ２及びＳＨ３、非活性化Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＤＥ）、ならびにマヌカハニー（ＭＨ：「Ｃｏｍｖｉｔａ  Ｍａｎｕｋａｃａｒｅ  １８＋」）を、１：２〜１：２５６（希釈液として水を使用して）の連続希釈で試験した。１ｍｌの蜂蜜を、希釈された分離株培養物を備えた各々のウェル中に配置した。
【０３２４】
１ｃｍ２の各々の以下の商業的に入手可能なドレッシング材：Ｍｅｐｉｌｅｘ  Ａｇ；Ｕｒｇｏｔｕｌ  Ａｇ；Ａｃｔｉｃｏａｔ（Ａｇ）；Ｕｒｇｏｔｕｌ（抗微生物剤なし）；Ｍｅｓｉｔｒａｎ  Ｎｅｔ（蜂蜜ベースのドレッシング材）；Ｐｏｌｙｍｅｍ（微生物剤なし）を、１ｍｌの水及び１ｍｌの希釈された分離株培養へ添加した。
【０３２５】
商業的に入手可能なクリームＴｒｉｍｏｖａｔｅ及びＦｌａｍａｚｉｎｅ（皮膚感染の治療のために使用される）も試験した。酢酸も５％から０．０４％まで試験した。
【０３２６】
プレートを３３℃（創傷温度）で７２時間インキュベーションして、バイオフィルム形成を促進した。次いでプレートをクリスタルバイオレット色素を使用して顕色させ、７０％のエタノールを使用する色素の可溶化後に、可視化した。
【０３２７】
次いで分光光度計を使用して可溶化した色素の光学的密度（ＯＤ）を評価した。ＯＤ読み取りは、取り込まれたクリスタルバイオレットの量に対応する。より高いＯＤ読み取りは、黒っぽいウェル及びより多い量のバイオフィルムを表わす。次いでＯＤ読み取りをプロットしてグラフを作製した。
【０３２８】
結果
結果を図１０及び１１中で示す。
【０３２９】
結果から、Ａｃｔｉｃｏａｔドレッシング材及びＭｅｐｉｌｅｘ  Ａｇドレッシング材（及びより少ない程度でＵｒｇｏｔｅｌ  ｓｉｌｖｅｒ）は、Ｆｌａｍａｚｉｎｅクリームでのように、両方の株のバイオフィルム形成の防止に効果的であったことが示される。Ｕｒｇｏｔｕｌドレッシング材及びＰｏｌｙｍｅｍドレッシング材、ならびにＭｅｓｉｔｒａｎ  ｎｅｔ（商業的な蜂蜜ベースのドレッシング材）、ならびにＴｒｉｍｏｖａｔｅクリームは、バイオフィルム形成の防止において効果的であるとは思われなかった。
【０３３０】
酢酸は、０．３１％（ＡＹＥ）及び０．１％（ＰＡ０１）までバイオフィルム形成の防止に効果的であった。
【０３３１】
すべての試験されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙｓは、少なくとも１：２及び１：４の希釈で、及びいくつかはより低い濃度（例えばＳＨ２は１：６４希釈でＡＹＥに対して効果的だった）で、両方の株のバイオフィルム形成の防止に効果的であった。
【０３３２】
ＳＨ２及びＳＨ３  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙｓは、ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙよりも低い濃度でバイオフィルム形成の防止により効果的であり、各々のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ調製物はマヌカハニーよりも低い濃度でより効果的であった（例えば各々についての１：８希釈物の効果を参照）。マヌカハニーは、１：２から１：４の希釈までバイオフィルム形成の防止に効果的であった。
【０３３３】
結果から、非活性化されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＤＥ）がバイオフィルム形成の防止に効果的であったことも示された。しかしながら、ＤＥ蜂蜜が過酸化水素活性について試験された場合に、若干の過酸化水素活性を保持することが見出され、したがって完全に不活性化されたようには思われなかった。
【０３３４】
結論
これらの結果から、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが、バイオフィルム形成の防止において、複数の商業的に入手可能な創傷ドレッシング材に匹敵し、Ｍｅｓｉｔｒａｎ  ｎｅｔ（商業的な蜂蜜ベースのドレッシング材）よりも効果的であったという結論が下された。
【０３３５】
上記の実施例において、Ａ．ｂａｕｍａｎｉｉの４つの分離株及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの３つを試験し、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、用量依存的様式ですべての分離株のバイオフィルム形成を防止することができた。Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉの前形成されたバイオフィルムを、すべてのＳＨ製剤へ追加で２４時間曝露した。バイオフィルムの播種の低減は、試験された両方の株について観察され、やはり用量依存的だった。
【０３３６】
ドレッシング材実験（実施例４）により、ＳＨは試験された８つの商業的なクリーム及びドレッシング材のうちの３つよりもバイオフィルム防止に、同様またはそれ以上に効果的であることが明らかにされた。さらに、このインビトロの試験において、ＳＨは、Ａ．ｂａｕｍａｎｉｉ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの単一分離株のバイオフィルム形成の防止にＬ−Ｍｅｓｉｔｒａｎ  ｎｅｔよりも効果的であった。
【０３３７】
これらの結果は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが、熱傷の中心的なグラム陰性の病原体に対する強力な抗バイオフィルム形成活性、及び試験された大多数の商業的なドレッシング材を上回る活性を有することを示す。この組成物は抗生物質の代わりに使用することができ、抗生耐性が増加している時代において、不適切な抗生物質使用の低減を支援することができる。
【０３３８】
実施例５
マヌカハニーと比較した、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによるバイオフィルム形成の阻害
この実施例は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＶＩＭ陽性）及びＣＲＥ  Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの多剤耐性（ＭＤＲ）バイオフィルム産生分離株、ならびにＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｉｉの２つの異なるバイオフィルム産生分離株によるバイオフィルム形成に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ１（ＳＨ１）及びマヌカハニー（ＭＨ）の効果を試験する実験を記載する。
【０３３９】
方法
分離株をＳＨ１またはＭＨの異なる濃度で培養し、実施例２において記載されるものに類似する方法によって、ＭＢＩＣ計算を行った。
【０３４０】
結果
結果を図１２中で示す。これらの結果から、ＳＨ１が分離株の各々のバイオフィルム形成を防止できたことが示される。ＳＨ１は、ＭＨよりも低い濃度で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＶＩＭ陽性）及びＣＲＥ  Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａのＭＤＲバイオフィルム産生分離株のバイオフィルム形成を防止することができた。
【０３４１】
実施例６
ＣＲＳ関連Ｓ．ａｕｒｅｕｓ浮遊集団のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ処理
ＣＲＳ関連Ｓ．ａｕｒｅｕｓ浮遊集団の異なる分離株について、９６ウェルのプレートベースの吸光度アッセイを使用して、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの最小阻止濃度（ＭＩＣ）を決定した。試験された分離株は、１つのメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）分離株、及び４つのメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）分離株（３つのポリープ分離株及び１つの粘膜分離株）であった。試験されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ濃度は、１８０ｇ／Ｌ、２２５、２７０、３１５、３６０、４０５、４５０、４９５、５４０、７２０、及び９００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙであった。１８時間後に吸光度をＯＤ５９５で測定した。
【０３４２】
結果を図１３中で示す。これらの結果から、浮遊ＭＲＳＡについてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙのＭＩＣが５４０ｇ／Ｌであり、浮遊ＭＳＳＡについてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙのＭＩＣは７２０ｇ／Ｌであったことが示される。
【０３４３】
ＭＲＳＡ及びＭＳＳＡの分離株を、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの有効濃度（３６０、４０５、４５０、４９５、５４０、７２０、９００ｇ／Ｌ）を備えたチョコレート血液寒天培地プレートの上に継代培養して、ＭＲＳＡ及びＭＳＳＡについてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を決定した。プレートの写真を図１４中で示す。これらの写真から、浮遊ＭＲＳＡについてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙのＭＢＣが７２０ｇ／Ｌであり、浮遊ＭＳＳＡについてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙのＭＢＣは９００ｇ／Ｌであったことが示される。
【０３４４】
実施例７
ＣＲＳ関連Ｓ．ａｕｒｅｕｓバイオフィルムのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ処理
ＭＲＳＡ分離株を、ポリスチレン製の６ウェルのプレート中での静置培養によって中期対数増殖期まで増殖させた。６ウェルのプレートに接種し、低栄養培地を補足し、４８時間培養した（２４時間後に新鮮培地を交換して）。バイオフィルムを洗浄して浮遊集団を除去し、５００ｇ／Ｌ及び１，０００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙにより１８時間処理した。処理及び浮遊集団を除去し、バイオフィルムを再懸濁した。ＯＤ６００での吸光度を測定して全体的なバイオマス（細胞性材料及び細胞外材料を含む）を決定した。コロニー形成単位計数のためにバイオフィルムをチョコレート血液寒天培地プレートの上で培養して、処理後のバイオフィルム中に残存する生存細胞のパーセンテージを決定した。
【０３４５】
結果を図１５中で示す。これらの結果から、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙによるＣＲＳ関連ＭＲＳＡバイオフィルムの処理は、用量依存的様式でバイオフィルムバイオマスを低減し、処理なしのバイオフィルムバイオマスと比較して、５００ｇ／ＬののＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙでバイオマスはおよそ２分の１まで低減し、１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙでバイオマスはおよそ３分の２まで低減したことが示される。バイオフィルム中に残存する生存細胞の数も劇的に低減し、５００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙで生存細胞のパーセンテージは０．５％へ低減し、１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙで生存細胞のパーセンテージは０．１３％へ低減した。
【０３４６】
実施例８
噴霧可能組成物
重量で１％のポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、重量で７９％の脱イオン水、及び重量で２０％のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを含有する組成物を、ポンプ作動噴霧デバイスへ添加した。
【０３４７】
噴霧デバイスを使用して、過酸化水素試験ストリップの上へ組成物を噴霧した。試験ストリップから、組成物中の過酸化水素の存在が指摘された。
【０３４８】
５か月後に、過酸化水素試験ストリップへの噴霧によって、噴霧物が過酸化水素を生成する能力について再試験した。試験ストリップから、組成物中の過酸化水素の存在が指摘された。
【０３４９】
実施例９
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗微生物活性
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）、及びＡｐｉｓ  ｍｅｌｌｉｆｅｒａ（ミツバチ）によって作られた２つのプロトタイプの修飾された蜂蜜の、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＩＭＢ  ９５１８）に対する抗微生物活性を試験した。サンプルからの過酸化水素の産生のレベルを変化させる能力について、多くの修飾されたタイプのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙも検査した。
【０３５０】
方法：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓの標準株に対するバイオアッセイ方法を使用して、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）を、２つの修飾された蜂蜜（プロトタイプ１（ＰＴ１）及びプロトタイプ２（ＰＴ２））と比較した。追加研究により、これらの調製物からの過酸化水素の生成率を研究した。
【０３５１】
結果：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗微生物活性は、大部分は過酸化水素産生に起因することが示された。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの修飾によって、２つのより強力な蜂蜜プロトタイプは、２〜３倍高い抗菌活性、及び最大１０倍高い過酸化物活性を生成することが示された。
【０３５２】
結論：Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、優れた抗微生物活性を示す創傷防腐ドレッシング材である。２つの更なる蜂蜜プロトタイプが、過酸化物活性の実証された増加に起因して促進される可能性がある抗微生物活性を有することが示された。
【０３５３】
方法
１．バイオアッセイ法による蜂蜜の活性の決定
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（Ｓ）及び２つの修飾された蜂蜜（プロトタイプ１（ＰＴ１）及びプロトタイプ２（ＰＴ２））の抗菌活性を、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＩＭＢ  ９５１８）を使用して測定し、％フェノール換算値として表現した。値は、３日間で反復された、試験された３つのサンプル重複測定からの平均を計算したものである。
【０３５４】
アッセイ方法。使用されるアガーウェル拡散法は、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ
Ｄａｉｒｙ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（１９８２）［Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ：Ｂｅｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｃｏｕｎｃｉｌ；１９８２．中のＢｅｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｃｏｕｎｃｉｌ：Ｐｒｏｐｏｓｅｄ  ｓｔａｎｄａｒｄ
ｆｏｒ  ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｎ  ｐｅｒｏｘｉｄｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｆ  ｈｏｎｅｙ．］中で記載される阻害物質のためのパンチプレートアッセイから適合させた。
【０３５５】
接種物調製。ブランク及び希釈液として滅菌栄養ブロス、ならびに１ｃｍの経路を備えたキュベットを使用して、一晩の培養物の５４０ｎｍで測定された吸光度を０．５へ調整した。
【０３５６】
アッセイプレート調製。０．５の吸光度へ調整した１００μｌの体積の培養物を使用して１５０ｍｌの栄養寒天に播種し、アッセイプレートを作製した。アガーを旋回して完全に混合し、水平面上に配置された大きなペトリディッシュの中へ注いだ。アガーが凝固すると直ちに、翌日に使用する前に、上下逆さまでプレートを一晩配置した。アッセイのために、これらの播種したプレートを４℃から取り出し、室温で１５分間放置しておき、その後アガーの表面の中へ７．０ｍｍの直径のウェルを切り開いた。２５０μｌの試験材料（サンプルまたはスタンダード）を各々のウェルの中へ配置した。
【０３５７】
カタラーゼ溶液。２００ｍｇ／ｍｌの蒸留水中のウシ肝臓からのカタラーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｃ９３２２、２９００ユニット／ｍｇ）の溶液を、毎日間新鮮に調製した。
【０３５８】
サンプル調製。４ｍｌの蒸留水へ４ｇのサンプルを普遍的に添加することによって一次サンプル溶液を調製し、３７℃に３０分間配置して混合を支援した。二次的な溶液を調製するために、２ｍｌの一次サンプル溶液を２ｍｌの蒸留水へ普遍的に添加し、全活性試験のために混合し、２ｍｌの一次サンプル溶液を２ｍｌのカタラーゼ溶液へ添加し、非過酸化物活性のために混合した。
【０３５９】
フェノールスタンダードの調製。スタンダード（ｗ／ｖ）の１０％、３０％、５０％のフェノールを、水中でのフェノールの溶解によって調製した。フェノールスタンダードを使用の前に暗所で室温にし、試験ウェルへの添加の前に完全に混合した。各々のスタンダードを、試験する３つのウェル中に三重で配置した。スタンダードを４℃で維持し、有効期限日は１か月であった。
【０３６０】
サンプル及びスタンダードの適用。すべてのサンプル及びスタンダードを、各々の３つのウェルへの２５０μｌの添加によって三重試験した。
【０３６１】
プレートのインキュベーション。サンプルの適用後に、プレートを３７℃でおよそ１８時間インキュベーションした。ウェルの直径（７．０ｍｍ）を含む阻害ゾーンの直径を記録した。
【０３６２】
サンプルの抗菌活性の計算。各々のフェノールスタンダードの周囲の透明ゾーンの平均直径を計算し２乗した。スタンダードのグラフは、透明ゾーンの平均直径の２乗に対して％フェノールをプロットした。線形回帰を使用して最良適合直線を得て、そしてこの直線の等式を使用して、透明ゾーンの直径の平均測定値の２乗から各々の希釈された蜂蜜サンプルの活性を計算した。希釈を考慮して（Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの密度を１．３５ｇ／ｍｌであると想定する）、この計数に４．６９倍を掛け、次いでサンプルの活性をフェノール濃度（％ｗ／ｖ）換算値として表現した。
【０３６３】
全活性：すべての活性（過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）に起因する活性が含まれる）。
【０３６４】
非過酸化物活性：Ｈ２Ｏ２はカタラーゼ酵素によるサンプルの処理によって除去される。
【０３６５】
２．Ｈ２Ｏ２方法による蜂蜜活性の決定
Ｍｅｒｃｋｏｑｕａｎｔ（登録商標）１．１００１１．及び１．１００８１．を使用して、活性を測定した。
【０３６６】
過酸化物試験キット。濃度をｍｇ／ＬのＨ２Ｏ２換算値として表現した。
【０３６７】
サンプルを精製水により１：１０で希釈した。５分間のインキュベーション後に、すべてのサンプルを、１２時間の期間にわたって１時間毎に、後続して２４時間及び４８時間のタイムポイントでＨ２Ｏ２産生について測定した。
【０３６８】
決定の方法。ペルオキシダーゼは過酸化物から有機レドックス指示薬へ酸素を移行し、次いでそれは青色の有色の酸化産物に転換される。試験ストリップの反応ゾーンを色スケールのフィールドと目視比較することによって、過酸化物濃度を半定量的に測定する。試験ストリップの反応ゾーンをＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙサンプルの中へ１秒間沈め、過剰な液体をストリップから吸収紙タオルの上へ流れ出させ、１５秒（Ｃａｔ．Ｎｏ．１１００１１）、５秒（Ｃａｔ．Ｎｏ．１１００８１）後に、反応ゾーン中で形成された色の決定は、色フィールドスケールとより正確に一致させることによった。
【０３６９】
結果
１．活性のレーティング
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ単独と比較して、蜂蜜サンプルの修飾によって産生された抗微生物活性は、ＰＴ１及びＰＴ２によるフェノール活性において、それぞれ２倍及びほぼ３倍の増加をもたらした。３つのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）のサンプル及び２つの修飾されたプロトタイプ（ＰＴ１及びＰＴ２）についての結果を、以下の表中に示す。
【０３７０】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ＳＨ）及び２つの修飾されたプロトタイプ（ＰＴ１及びＰＴ２）の過酸化物及び非過酸化物のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＩＭＢ  ９５１８）に対する抗菌活性を示す表。
【表６】
2020158526.tif 000007
【０３７１】
２．Ｈ２Ｏ２方法による蜂蜜活性の決定
プロトタイプ修飾物は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの最大７〜１０倍の過酸化水素活性を生成することが観察される。３つのサンプルについての結果を図１６Ａ中に示す。３つの蜂蜜プロトタイプの各々についての過酸化水素アウトプットの最大レベルをとり、全フェノール活性に対してこれをプロットすることによって、直線関係が観察される（図１６Ｂ）。
【０３７２】
考察
この研究からの結果は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ及び２つの修飾されたプロトタイプ（ＰＴ１及びＰＴ２）の主要な抗微生物活性が過酸化水素に基因することを示す。これは、様々な花源からの特定の他の蜂蜜に類似する知見である。しかしながら、従来の研究とは異なり、サンプルからの過酸化水素の利用可能性を促進することができ、１２時間で、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ単独についての値のそれぞれ７倍及び１０倍である。３つの蜂蜜プロトタイプからの、抗微生物活性と過酸化水素の最大アウトプットとの間に強い直線関係がある。
【０３７３】
この過酸化物活性は、急性または慢性的な創傷へ適用して創傷感染を治療または防止する創傷ドレッシング材に理想的に適している強力な抗微生物活性を提供する。少量のカタラーゼが創傷中に存在し、男性のカタラーゼの血清レベルは５０ｋＵ／ｌとして報告されたが、治癒期創傷中のカタラーゼ活性は創傷後第１週の間に実際に減少し、カタラーゼの活性レベルは創傷後２週間でもとのレベルへ回復することが示されている。したがって、カタラーゼのかかる濃度は、外から適用されるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙまたは２つの修飾されたプロトタイプ（ＰＴ１及びＰＴ２）により観察される抗微生物活性に恐らく極端に影響を及ぼさない。
【０３７４】
抗微生物創傷ドレッシング材についての理想的な特徴は、有効性、毒性の欠損、使用容易性、患者及び臨床医の許容性、ならびに金額に見合う価値である。過酸化水素は効果的な抗微生物物質であり、殺生物剤として、栄養型細菌、酵母及び胞子に対する強力な活性のために既に使用されている。それは細胞構成要素の化学的酸化を介してその抗菌効果を産生する。
【０３７５】
過酸化水素のヒトへの毒性は濃度依存的であり、ある研究は、抗微生物毒性及びヒトへの毒性についての濃度差が重複し得ると主張した。これとは対照的に、蜂蜜の特定の調製物は、その時点でドレッシング材が多量にあるということではなく、低濃度の過酸化水素をかかる毒性なしに創傷へ連続的に経時的に供給することによる、効果的な抗微生物剤であることが示された。実際、生理的レベルの過酸化水素が哺乳類細胞へ適用されるところでは、生物学的応答の刺激及び特異的な生化学プロセスの活性化がこれらの細胞中に存在するという説得力のあるエビデンスがある。
【０３７６】
明らかに、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ及び２つの修飾されたプロトタイプ（ＰＴ１及びＰＴ２）は、少なくとも２４時間にわたって効果的な過酸化水素放出を提供する抗微生物ドレッシング材である。
【０３７７】
結論
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ及び２つの修飾されたプロトタイプ（ＰＴ１及びＰＴ２）はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓの標準株に対する強力な抗微生物活性を有することが示された。これらの抗微生物活性は過酸化水素に起因することが示されている。活性はスケールアップ可能であり、過酸化水素活性に関して記載することができる。これらの修飾された蜂蜜は、効果的且つ非毒性の投与することが容易なドレッシング材を提供する。
【０３７８】
実施例１０
ネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ
この実施例は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙのネブライザー用化、及びネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗菌効果を記載する。
【０３７９】
ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの１つの１０ｇの小袋を４ｍｌの滅菌された０．９％の塩類溶液中に溶解し、ウォーターバス中で暖めて蜂蜜を液化した。したがって、液化した溶液は２５０％のＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを含有していた。液化された蜂蜜を、ネブライザーフェイスマスクタブの医薬品リザーバー中に配置した。これを標準的なＳａｌｔｅｒ呼吸器ネブライザーへ連結し、スイッチを入れた。蜂蜜の匂い及び味がするネブライザー用蒸気をネブライザーによって産生した（図１７Ａを参照）。ボランティアは、病的影響なしにネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを吸入した。
【０３８０】
ネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗菌効果をＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓの株に対して査定した。吸収紙ディスクを、１０３〜１０４ｃｆｕ／ｍｌの濃度へ調製したＳ．ａｕｒｅｕｓにより接種した。ディスクをチューブ中に配置した（気管支を模倣する）。ネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを、５、１５、２０、または３０分間ペーパーディスクの上に通過させた。次いでディスクを血液寒天培地プレート上で培養して生存コロニー形成単位の数を決定した。ネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙと接触させなかったＳ．ａｕｒｅｕｓを接種した対照ディスクも培養した。
【０３８１】
血液寒天培地プレートの写真を図１８中に示す。各々のプレートについてのコロニー形成単位（ｃｆｕ／ｍｌ）の数を、図１７Ｂ中のプロットにおいて示し、各々の曝露時間後のｃｆｕ／ｍｌの概数を以下の表中で記録する。
【表７】
2020158526.tif 000008
【０３８２】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが容易にネブライザー用にできることが結論付けられた。ネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、１名のボランティアにおいて有害作用は観察されずに、吸入に安全だと思われる。ネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは有意な抗微生物活性を有し、模倣された気道モデル中で細菌負荷を１０００倍で減少させる。
【０３８３】
呼吸器疾患の治療のためのインビボのネブライザー用Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの有効性
重篤な気管支拡張症に罹患する患者はＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓによる気道中のコロナイゼーションがあった。ネブライザー用ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（上記のように調製された）を２か月間毎日投与することによって、患者を治療した。患者の喀痰サンプルの分析によって示されるように、治療は患者の気道中のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを消去した。
【０３８４】
実施例１１
ＣＲＳ関連Ｓ．ａｕｒｅｕｓバイオフィルムのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ処理
上の実施例７中で記載されるように、ＭＳＳＡ静的バイオフィルムをインビトロで増殖させ、次いでＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙにより処理した。結果を図１９中で示す。これらの結果から、処理なしのバイオフィルムバイオマスと比較して、５００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙによるＣＲＳ関連ＭＳＳＡバイオフィルムの処理はバイオフィルムバイオマスを低減させるとは思われなかったが、１０００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる処理はおよそ２分の１までバイオフィルムバイオマスを低減したことが示される。バイオフィルム中に残存する生存細胞の数も劇的に低減し、５００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙで生存細胞のパーセンテージは７８％から２２％まで低減し、１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙで生存細胞のパーセンテージは９４％から６％まで低減した。
【０３８５】
実施例６、７及び１１の結果から、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが浮遊型と及びバイオフィルム型のＭＲＳＡ及びＭＳＳＡに対して強力な殺菌性及び阻害的効果を有することが実証される。
【０３８６】
実施例１２
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに慢性的に感染した虚血性潰瘍のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ治療
末梢血管疾患に罹患した７７歳の男性は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに慢性感染した長年の虚血性潰瘍を発症していた（図２０（Ａ）を参照）。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる７日間の処理後に、有意な臨床的改善が観察された（図２０（Ｂ））。
【０３８７】
実施例１３
局所用抗ＭＲＳＡ治療としてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの使用
世界保健機関（ＷＨＯ）の抗微生物物質耐性の世界的なサーベイランスに関する２０１４年の報告は、世界が臨界点に到達したことを明らかにした。現在院内感染の５例中の１例は、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）に起因する。英国保健省のＭＲＳＡ菌血症の年次報告（２０１４〜２０１５年）により、８７４例の市中獲得型症例及び３４９例の院内感染のケースが報告された。選択的手術の遅延、入院の延長、及び長期的な抗生物質治療を引き起こすので、国民健康サービス（ＮＨＳ）に対する影響は重要である。
【０３８８】
ムピロシン（バクトロバン）は、デコロナイゼーションレジームの一部として現在使用される、グラム陽性細菌（ＭＲＳＡが含まれる）に対して効果的な局所用抗菌治療である。しかしながら、最近のエビデンスはムピロシンへのＭＲＳＡの耐性の増加を指摘する。
【０３８９】
目的
１．インビトロの設定においてＭＲＳＡ分離株に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ対ムピロシンの有効性を比較すること。
２．ＭＲＳＡ陽性の臨床被験体における新規のＭＲＳＡデコロナイゼーション療法としてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの使用の実行可能性を検討する、小規模な原理証明臨床研究を遂行すること。
【０３９０】
方法論
臨床被験体の組入れ及び表現型分析：
ＭＲＳＡキャリアとしての前評価スクリーニングの結果として同定された患者は、研究の中へ組入れられるだろう。
【０３９１】
試料取得、ＭＲＳＡの単離、及びインビトロの細菌解析：
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗微生物活性は、浮遊性及びバイオフィルム性のＭＲＳＡの表現型に対してインビトロで評価されるだろう。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの殺菌性及び阻害機能は現在の標準的治療（ムピロシン）と比較されるだろう。
【０３９２】
原理証明臨床研究：
小規模な原理証明臨床研究を遂行して、鼻腔における新規のＭＲＳＡデコロナイゼーション療法としてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの使用の実行可能性を査定するだろう。
【０３９３】
この研究からの結果は、ＭＲＳＡの鼻のキャリア及びＭＲＳＡ感染性創傷に罹患する外科患者における局所療法としてのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの使用を可能にするだろう。
【０３９４】
実施例１４
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによる治療への１１４の慢性的な創傷の臨床応答
【表８】
2020158526.tif 000009
【表９】
2020158526.tif 000010
【０３９５】
実施例１５
小児のＭＲＳＡ創傷感染
図２１は、１０日間にわたるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙによるＭＲＳＡ創傷感染の治療効果を示す。
【０３９６】
実施例１６
ＣＡ  ＭＲＳＡ表在性感染
図２２は、５日間及び１０日間にわたるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙによるＣＡ  ＭＲＳＡ感染の治療効果を示す。
【０３９７】
実施例１７
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの抗ウイルス活性
ＳＨ１またはＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを単純性疱疹ウィルス（ＨＳＶ）と混合し（５０□ｇ蜂蜜及び５０□ｌウイルス）、３７℃で１時間インキュベーションした。次いで希釈系列（１０−２、１０−３、１０−４、１０−５）を混合物から作製し、希釈物をプラーク低減アッセイにおいて使用した。蜂蜜なしまたは対照蜂蜜ありの対照も行った。各々の希釈について形成されたウイルスプラークの数を記録した。結果を以下の表中に示す。
【表１０】
2020158526.tif 000011
【０３９８】
これらの結果から、ＳＨ１及びＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが両方の実験においてＨＳＶに対して強く殺ウイルス性であったことが示される。
【０３９９】
実施例１８
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙの細胞毒性活性
ＳＨ１またはＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（５０μｇの蜂蜜を１０−２、１０−３、１０−４、１０−５で希釈した）を、細胞上で２日間インキュベーションした。生細胞の数及び細胞の全数をカウントした（パーセンテージ生存率＝生／全×１００）。結果を以下の表及び図２３中に示す。
【０４００】
これらの結果から、ＳＨ１  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが１０−２の希釈で細胞毒性であり、１０−３及び１０−４の希釈で細胞静止性であり、ＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙが１０−２、１０−３及び１０−４の希釈で細胞静止性であったことが示される。ＳＨ１及びＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは１０−５の希釈で細胞毒性及び細胞静止性ではなかった。
【０４０１】
実施例１７及び１８における結果から、殺ウイルス性であるが細胞毒性または細胞静止性ではない用量でＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを投与できるという結論が下される。
【表１１】
2020158526.tif 000012
【０４０２】
実施例１９
乾燥されたＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ
乾燥された蜂蜜顆粒（Ｋ２４２８９）は、Ｋａｎｅｇｒａｄｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｓｔｅｖｅｎａｇｅ、英国）によって供給された。乾燥された蜂蜜顆粒は真空乾燥によって産生され、脱脂粉乳と共に蜂蜜固体を含有していた。水分含有量は３％未満であった。
【０４０３】
乾燥された蜂蜜顆粒は、ＳＨ１及びＳＨ２のレベルでグルコースオキシダーゼを添加することによって活性化された（上を参照）。
【０４０４】
図２４（左側）は、過酸化水素指標ストリップによって検出されるように、活性化された乾燥された蜂蜜顆粒への水の添加は、５０〜１００ｐｐｍの間の過酸化水素の迅速な産生を引き起こすことを、実証する。
【０４０５】
図２４（右側）は、３０ｇの滅菌温水（およそ３５℃の）への２ｇの活性化された乾燥された蜂蜜顆粒の添加の結果を実証する。活性化された蜂蜜顆粒は皮膜形成なしに容易に溶解した。４日間後でさえ、顆粒は完全に溶解したままであったので、沈降はなかった。
【０４０６】
図２５は、溶解された活性のある蜂蜜の活性が長期間にわたって保持されたことを実証する。上部列（左側から右側へ）：０時間；３０分間；６０分間；９０分間。下部列（左側から右側へ）：６時間、１６．５時間；４日間。４日後に、過酸化水素のレベルは５０〜１００ｐｐｍの間で一定のままであった。このことは、グルコースオキシダーゼが活性のあるままであり、長期間にわたって過酸化水素を産生するのに存在する十分なグルコースがあったことを示す。
【０４０７】
実施例２０
水性Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ組成物の安定性
サンプルを、以下の組成物：
ＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：重量で２０％
ＰＶＡ：重量で５％
水：重量で７５％
により２０１４年１１月９日に調製した。
【０４０８】
過酸化水素試験ストリップを使用して２０１５年１０月１６日にサンプルを試験し、３０〜５０ｐｐｍの間のレベルで過酸化水素を依然として産生していることが見出された。
【０４０９】
ＳＨ２  Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを１：１５（Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ：水、重量で）の比で水と混合することによって、サンプルを２０１５年９月１４日に調製した。過酸化水素試験ストリップを使用して２０１５年１０月１６日にサンプルを試験し、３０〜５０ｐｐｍのレベルで過酸化水素を依然として産生していることが見出された。
【０４１０】
実施例２１
下部生殖管感染の局所治療のためのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの使用
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを使用して、標準的治療へ応答性でなかった持続的な帯下を治療した。症状は、様々な病因（例えば細菌性膣炎及び一般的な細菌性帯下）による帯下であった。
【０４１１】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙによりコートしたタンポンを膣の中へ挿入し、２４時間ごとに置き換えた。治療法転帰は良好であり、有害作用の報告はなかった。
【０４１２】
実施例２２
ＣＰＥの治療へのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの使用
患者はインドで壊死性筋膜炎と診察されたが、足の軟組織感染を発症していた。これは、抗生物質に加えて死細胞の広範囲なデブリードマンを要求した。手術後に、患者は、デブリードされた創傷において、ＣＰＥ（カルバペネマーゼ産生腸内細菌科細菌）によるコロナイゼーションがあることが見出された。患者の隔離が要求され、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙにより治療され、それは生物体を消去した。
【０４１３】
実施例２３
非水性溶媒を含む組成物
サンプル１
軽量の水流交絡織物（１平方メートルあたり４０ｇ）
２５％ｗ／ｗの蜂蜜／グリセリン溶液によるコート
１平方メートルあたり１００ｇの、織物上のコーティング重量
示唆される適用：創傷ドレッシング材における吸収性織物。
サンプル２
軽量の水流交絡織物（１平方メートルあたり４０ｇ）
７５％ｗ／ｗの蜂蜜／グリセリン溶液によるコート
１平方メートルあたり１００ｇの、織物上のコーティング重量
示唆される適用：創傷ドレッシング材における吸収性織物。
サンプル３
軽量の水流交絡織物（１平方メートルあたり４０ｇ）
２５％ｗ／ｗの蜂蜜／グリセリン溶液によるコート
１平方メートルあたり３００ｇの、織物上のコーティング重量
示唆される適用：抗細菌性ワイプ。
サンプル４
軽量の水流交絡織物（１平方メートルあたり４０ｇ）
７５％ｗ／ｗの蜂蜜／グリセリン溶液によるコート
１平方メートルあたり３００ｇの、織物上のコーティング重量
示唆される適用：抗細菌性ワイプ。
サンプル５
紙様織物（１平方メートルあたり４２ｇ）
２５％ｗ／ｗの蜂蜜／グリセリン溶液によるコート
１平方メートルあたり１００ｇの、織物上のコーティング重量
示唆される適用：抗細菌性ワイプ。
サンプル６
２５％ｗ／ｗの蜂蜜／グリセリン溶液によりコートされたＢｏｏｔｓ創傷ドレッシング材１平方メートルあたり４００ｇの、織物上のコーティング重量。
サンプル７
２５％ｗ／ｗの蜂蜜／グリセリン溶液によりコートされた吸収性パッドを備えたＢｏｏｔｓ接着性創傷ドレッシング材
１平方メートルあたり１５０ｇの、織物上のコーティング重量。
サンプル８
軽量の水流交絡織物（１平方メートルあたり４０ｇ）
２５％ｗ／ｗのＳｕｇｉｈｏｎｅｙ／グリセリン溶液によるコート
１平方メートルあたり１００ｇの、織物上のコーティング重量
示唆される適用：創傷ドレッシング材における吸収性織物。
サンプル９
軽量の水流交絡織物（１平方メートルあたり４０ｇ）
２５％ｗ／ｗのＳｕｇｉｈｏｎｅｙ／グリセリン溶液によるコート
１平方メートルあたり３００ｇの、織物上のコーティング重量
示唆される適用：創傷ドレッシング材における吸収性織物。
【図１Ａ】
2020158526.tif 000013
【図１Ｂ】
2020158526.tif 000014
【図１Ｃ】
2020158526.tif 000015
【図１Ｄ】
2020158526.tif 000016
【図２Ａ】
2020158526.tif 000017
【図２Ｂ】
2020158526.tif 000018
【図２Ｃ】
2020158526.tif 000019
【図３Ａ】
2020158526.tif 000020
【図３Ｂ】
2020158526.tif 000021
【図４】
2020158526.tif 000022
【図５】
2020158526.tif 000023
【図６】
2020158526.tif 000024
【図７】
2020158526.tif 000025
【図８】
2020158526.tif 000026
【図９】
2020158526.tif 000027
【図１０】
2020158526.tif 000028
【図１１】
2020158526.tif 000029
【図１２】
2020158526.tif 000030
【図１３】
2020158526.tif 000031
【図１４】
2020158526.tif 000032
【図１５】
2020158526.tif 000033
【図１６Ａ】
2020158526.tif 000034
【図１６Ｂ】
2020158526.tif 000035
【図１７】
2020158526.tif 000036
【図１８】
2020158526.tif 000037
【図１９】
2020158526.tif 000038
【図２０】
2020158526.tif 000039
【図２１】
2020158526.tif 000040
【図２２】
2020158526.tif 000041
【図２３】
2020158526.tif 000042
【図２４】
2020158526.tif 000043
【図２５】
2020158526.tif 000044
【外国語明細書】
2020158526000001.pdf