(57)【要約】      （修正有）【課題】糖尿病性腎症に対する治療において、透析にいたるまでの時間を長く確保する、或いは、透析導入にいたるのを抑制することのできる薬剤及び前記薬剤の投与方法の提供。【解決手段】ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）を１日あたりの投与量として１０ｇ以上１００ｇ以下で含む、ヒトに対して単期間用いるための糖尿病性腎症治療薬。前記単期間は５日以上２週間以下の期間であることが好ましく、前記治療薬は点滴投与されることが好ましい。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトに対しニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）を有効成分として１日あたり１０ｇ以上１００ｇ以下で含み、
単期間用いられることを特徴とする糖尿病性腎症の治療薬。
【請求項２】
前記単期間とは、
５日以上２週間以下の期間であることを特徴とする請求項１に記載の糖尿病性腎症の治療薬。
【請求項３】
投与を点滴によって行うことを特徴とする請求項１、又は２に記載の糖尿病性腎症の治療薬。
【請求項４】
前記糖尿病性腎症が早期の糖尿病性腎症であることを特徴とする請求項１〜３いずれか１項記載の糖尿病性腎症の治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病性腎症の治療薬に関する。特に、早期糖尿病腎症の進行を抑制する医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病性腎症は、糖尿病により血糖値の高い状態が長期間続くことにより、全身の動脈硬化が進行し併発すると言われている。また、糖尿病による高血糖やグルコース代謝が改善しても、一度腎症が発症すると腎症自体の改善は難しく、糖尿病性腎症が進行すると、透析や移植などの腎代替療法に移行することになる。日本透析医学会の調査によれば、透析導入患者の原疾患は、糖尿病性腎症が最も多く約４４％にのぼると言われている。そのため、糖尿病性腎症が進行しないように早期に介入することが必要である。
【０００３】
また、腎機能低下によって、心筋梗塞などの心臓血管合併症を合併しやすくなると言われおり、生命予後に悪影響があることも知られている。さらに、腎症を発症していると禁忌となる薬剤もあることから、自覚症状のほとんどない早期に治療を行い、進行を抑制することが重要である。
【０００４】
糖尿病性腎症の原因となる糖尿病は、高カロリー食、高脂肪食、運動不足などの生活習慣に加え、遺伝的要因など、種々の要因により発症すると考えられている。糖尿病は、インスリン分泌量やインスリンの効果が低下し、インスリンの作用不足が起こり発症する疾患である。糖尿病性患者の９５％以上が２型と言われており、その治療は厳密な食事制限を行うこと、投薬としてはピグアナイド薬、チアゾリジン薬、スルホニル尿素薬、αグルコシダーゼ阻害薬、グリニド薬、ＤＰＰ４阻害薬、ＳＧＬＴ２阻害薬などの内服薬やインスリン、ＧＬＰ−１製剤などの注射薬である。
【０００５】
しかしながら、ピグアナイド系治療薬は、腎機能が低下している場合にはアシドーシスを起こし致死となる副作用があり、チアゾリジン薬は、浮腫、心不全、膀胱癌発生リスクがある。スルホニル尿素薬は、低血糖リスクや飲み続けると膵臓が疲弊し効果を喪失する。αグルコシダーゼ阻害薬は消化器症状、グリニド薬は低血糖、ＤＰＰ４阻害薬は水疱性類天疱瘡発症リスク、ＳＧＬＴ２阻害薬は尿路感染症を引き起こすなどの恐れがあるため、飲み方に注意を必要とする。また、注射治療では、継続的な自己注射や血糖測定が必要であり、高齢者や手の不自由な患者では使用しにくい。すなわち、いずれの治療薬も長期にわたって毎日服用、注射する必要があるにもかかわらず、問題があることが指摘されている。糖尿病性腎症の原因である糖尿病の治療には上述のように問題が多く、そのため透析患者が年々増加しているのが現状である。
【０００６】
近年、ＮＡＤ（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ  ａｄｅｎｉｎｅ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）代謝経路が糖尿病や肥満、アルツハイマー病など様々な疾患に関与することが明らかにされてきている。ＮＡＤは、細胞内において、種々の酵素の補酵素として働く重要な代謝産物であり、ＮＡＤ代謝経路は古くから研究されている。さらに、ＮＡＤ合成経路の中間代謝物であるニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ：ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）投与が、上記疾患に対して有効であることが基礎研究において示されている（非特許文献１）。
【０００７】
上述のように、ＮＡＤ代謝経路が糖尿病の発症に関与することが報告されてきており、高脂肪食や加齢によって発症する２型糖尿病の原因としてＮＡＤ＋の減少が共通の機構として考えられている。また、ＮＡＤ代謝経路の中間産物であるＮＭＮ投与が、糖尿病に対して効果があることも報告されている（非特許文献２）。高脂肪食によって誘導される２型糖尿病モデルマウスに５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙでＮＭＮを７−１０日間連続して腹腔内投与すると、顕著なインスリン抵抗性の改善が見られることが報告されている。すなわち、ＮＭＮ投与によって、糖尿病における血糖値の改善が認められる。しかし、非特許文献２で使用されている加齢糖尿病、高脂肪食マウスは、糖尿病性腎症を来たしにくく、糖尿病性腎症を目的とした実験には通常使用されないモデルマウスである。そのため非特許文献２では、血糖値の改善については検討しているものの、糖尿病性腎症の改善については言及していない。
【０００８】
また、腎疾患の治療にＮＭＮを投与することの報告もある。非特許文献３には、シスプラチンによる急性腎不全モデルマウスに対し、ＮＭＮを急性期に投与することによって、効果が得られることが開示されている。しかしながら、シスプラチンによって誘導される腎障害は、腎近位尿細管細胞を中心として障害を起こすものであり、糖尿病性腎症とは腎症の種類が大きく異なる疾患である。
【０００９】
非特許文献４には、ストレプトゾトシンによって誘導した糖尿病性腎症ラットモデルにＮＭＮを投与し、ＮＦ−κＢ  ｐ６５、Ｓｉｒｔ１、ビメンチンの発現をｍＲＮＡ量によって解析を行った結果が開示されている。しかし、非特許文献４は、腎線維化についての研究論文であり、糖尿病性腎症の臨床所見であるアルブミン尿、腎機能については検討されていない。非特許文献４において解析を行っているモデルは、ストレプトゾトシンによるインスリン分泌減少を機序とする１型糖尿病モデルであり、インスリン抵抗性を主体とした２型糖尿病モデルとは臨床経過・腎病理が異なる。日本では、糖尿病患者の９５％が２型糖尿病であることを考えると、２型糖尿病での検討が必要である。
【００１０】
これら文献には、ＮＭＮ投与による糖尿病や腎症のモデルに対して効果があることが示されている。しかし、いずれの文献に開示されている方法も、早急な対策が望まれる２型糖尿病に起因する糖尿病性腎症の治療法とはならない。本発明者らは、糖尿病性腎症において、ＮＭＮの投与時期、投与量等を検討し、単回投与によって、投与後長期にわたり腎症の進行を抑制し、腎機能を維持し得ることを見出し、本発明を完成した。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Poddar, S. K. et al., Biomolecules, 2019, 9,34;doi:10.3390/biom9010034.
【非特許文献２】Yoshino, J., et al., Cell Metab., 2011, 14:528-536.
【非特許文献３】Guan, Y. et al., J. Am. Soc. Nephrol., 2017, Vol.28(8), pp.2337-2352.
【非特許文献４】Chen, Y. et al., Exp. Ther. Med., 2017, Vol.14(5), pp.4181-4193.
【非特許文献５】Li, J. et al., Science， 2017，Vol.355, pp.1312-1317., doi:10.1126/science.aad8242.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、糖尿病性腎症の治療薬を提供することを課題とする。特に、糖尿病性腎症早期に治療を行い、透析にいたるまでの時間を長く確保する、あるいは、透析導入にいたるのを抑制することのできる薬剤、及び投与方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は糖尿病性腎症の治療薬に関する。
（１）ヒトに対しニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）を有効成分として１日あたり１０ｇ以上１００ｇ以下で含み、単期間用いられることを特徴とする糖尿病性腎症の治療薬。
（２）前記単期間とは、５日以上２週間以下の期間であることを特徴とする請求項１に記載の糖尿病性腎症の治療薬。
（３）投与を点滴によって行うことを特徴とする請求項１、又は２に記載の糖尿病性腎症の治療薬。
（４）前記糖尿病性腎症が早期の糖尿病性腎症であることを特徴とする請求項１〜３いずれか１項記載の糖尿病性腎症の治療薬。
【発明の効果】
【００１４】
本発明では、慢性疾患である糖尿病性腎症の早期に単回ＮＭＮ投与を先行的に行うことで、投与終了後も長期にわたり、臨床的な疾患改善効果を持続的に認めたという点で非常な意義がある。上述のように、ＮＭＮを腎症に投与した例は存在するものの、急性腎不全モデルに対する検討や、１型糖尿病による糖尿病性腎症かつ糖尿病発症後時間経過したモデル動物を用いた検討である。大部分の糖尿病性腎症患者が２型糖尿病に由来することを考えると、本発明の治療薬は多くの患者に対して効果を奏するものと考えられる。
【００１５】
糖尿病性腎症早期に、短期間ＮＭＮを投与することにより、投与終了直後より糖尿病性腎症の改善・進行抑制が認められるだけでなく、その効果が投与終了後長期にわたって維持される。単回の投与で済むことは、患者の治療における負担を減らすことができるだけではなく、医療経済的にも大きなメリットとなる。また、糖尿病性腎症は、高齢の患者が多いことから、長期にわたり治療を継続することは服薬コンプライアンスの面でも問題が生じていた。単回の投与で治療を完了できることは、服薬コンプライアンスの問題も減じることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】糖尿病性腎症モデルを用いたＮＭＮの効果の検討結果を示す図。（Ａ）は、実験のスケジュールを、（Ｂ）は糖尿病マーカーであるＨｂＡ１ｃを、（Ｃ）は糖尿病性腎症のマーカーである尿アルブミンクレアチニン比（ＡＣＲ）の解析結果を示すグラフである。図中、ｄｂｍはヘテロマウスに生理食塩水を投与した群、ｄｂｄｂはホモマウスに生理食塩水を投与した群、ＮＭＮはホモマウスにＮＭＮを投与した群の値を示す。
【図２】糖尿病性腎症モデルを用いたＮＭＮの腎組織における効果を免疫組織化学染色、電子顕微鏡観察によって解析した結果を示す図。（Ａ）はＳｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ、（Ｂ）はＣｌａｕｄｉｎ−１、（Ｃ）はＳｉｒｔ１の免疫組織化学染色像を示す。（Ｄ）は糸球体上皮細胞足突起を示す電子顕微鏡写真像である。
【図３】濃度を変えてＮＭＮ投与の効果を検討した結果を示す図。（Ａ）は、実験のスケジュールを、（Ｂ）は糖尿病マーカーＨｂＡ１ｃを、（Ｃ）は糖尿病性腎症のマーカーＡＣＲの解析結果を示すグラフである。図中、ｄｂｍはヘテロマウスに生理食塩水を投与した群、ｄｂｄｂはホモマウスに生理食塩水を投与した群、ＮＭＮ１００、ＮＭＮ３００、ＮＭＮ５００はホモマウスに、夫々１００、３００、５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙでＮＭＮを投与した群の値を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下に詳細に述べるが、本発明ではマウスモデルを用いてＮＭＮの効果を検討している。ヒトへの投与量は、マウスモデルを用いた結果から、ヒト等価用量を算出すればよい。以下で述べるように、マウスを用いた実験からは、ＮＭＮ投与量１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙでは効果が認められないが、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上の用量では有意な効果が認められている。また、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙとＡＣＲ値の抑制に用量に応じた効果が確認できたことを考えると、２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与でもＡＣＲ値を減少させる効果が得られるものと考えられる。したがって、マウスでは２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上の用量で投与すれば、効果を得られるものと考えられる。これはヒト等価用量に換算すると、１０ｇ／ｄａｙ（ヒト体重を５０ｋｇとして換算）となる。
【００１８】
また、投与量増加に伴って、より強い効果が得られていることから、投与量はＮＭＮによる副作用が生じない範囲であればよい。現時点ではＮＭＮ投与に関する副作用の報告はなく、今後の報告を待つことになるが、マウスモデルでの使用において５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで投与しても問題はなかったことから、ヒトでも２５ｇ／ｄａｙの用量で使用すれば強い効果が期待できる。また、ＮＭＮ２０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量でマウスに８日間投与した研究が報告されていることから（非特許文献５）、少なくとも２０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのヒト等価用量である１００ｇ／ｄａｙ程度であればヒトに投与できると考えられる。
【００１９】
さらに、マウスモデルを用いた実験では、糖尿病性腎症の早期に２週間連続投与を行っているが、高用量のＮＭＮをより短期間投与することによっても治療効果を得ることができると考えられる。例えば、マウスで十分効果が得られた５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上の用量を、より短期間、例えば１週間程度の投与で効果を得ることができると考えられる。
【００２０】
また、本明細書で単回投与とは、一定期間の連続投与をいう。具体的には、５日間から２週間程度連続して投与することをいう。また、ここで連続投与というのは、１週間に２日程度の休薬期間を設ける場合も含まれる。ＮＭＮの代謝速度を考えると、投与後速やかに代謝し、血中等に一定濃度が維持されるとは考えにくい。したがって、投与期間中に数日の休薬日を設けても効果に違いは生じないものと考えられる。
【００２１】
糖尿病腎症の早期とは、自覚症状がほとんどない時期を指し、糖尿病性腎症の病期分類における第１期（腎症前記）、第２期（早期腎症期）をいう。この時期に治療を行い、腎症をコントロールすることができれば、さほど制限を受けずに日常生活を送ることができる。また、第３期以降であっても、腎組織に不可逆的な変化が生じていない限り効果があると考えられ、ＮＭＮが腎症の進行抑制を行い得ること、重篤な副作用が生じにくいと考えられることから、病期が進んだ段階であってもＮＭＮによる治療を行う意義があるものと考えられる。
【００２２】
マウスを用いた実験では、腹腔内投与を行っているが、ヒトに投与する場合には、１０ｇ／ｄａｙ以上の量を投与する必要があることから、点滴による投与が好ましいが、内服など通常治療に用いられる投与方法をとることができる。
【００２３】
また、ここではＮＭＮの結果のみを示しているが、ＮＡＤ代謝経路の分子であるニコチンアミドリボシド（ＮＲ：ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ  ｒｉｂｏｓｉｄｅ）を投与しても、体内でＮＭＮに変換されることから、効果を有する可能性が高い。以下、データを示しながら、詳細に説明する。
【実施例】
【００２４】
［実施例１］ＮＭＮ投与の持続的効果
ヒトの肥満型糖尿病に類似した症状を発現するインスリン非依存型（２型）糖尿病モデルマウスであるｄｂマウスを用いて実験を行った。ヘテロ個体（ｄｂ／ｍ）、ホモ個体（ｄｂ／ｄｂ）オスを日本クレアより得て、実験を行った。マウスは、以下の条件で飼育した。
飼育条件：２０℃、湿度６５％、午前８時より１２時間点灯、午後８時より１２時間消灯、餌は自由食給餌。
【００２５】
ホモ個体では、８週齢から明らかな肥満と血糖値の上昇が認められ、糖尿病の発症が確認できるようになる。ホモ個体には５００ｍｇ／ｋｇの用量でＮＭＮ、あるいはＮＭＮの溶媒である生理食塩水のみを各群１２匹のマウスに、８週齢から１０週齢まで１４日間連続で腹腔内投与を行った。また、コントロールとして糖尿病を発症しないヘテロ個体（ｄｂ／ｍ）にも、同様に８週齢から１０週齢まで１４日間連続で生理食塩水を投与した。投与終了直後の１０週齢、投与終了１４週後にあたる２４週齢、投与終了２０週後にあたる３０週齢のマウスについて、糖尿病のマーカーであるＨｂＡ１ｃ、腎症のマーカーであるＡＣＲの解析を行った（図１（Ａ））。
【００２６】
ＨｂＡ１ｃはＡ１ｃ  Ｎｏｗ（ＰＴＳ  Ｄｉａｇｎｏｔｉｃｓ社）によって測定を行った（図１（Ｂ））。＊印はヘテロマウス（ｄｂ／ｍ）に対して、有意差（ｐ＜０．０５）があることを示している。１０週齢、２４週齢、３０週齢、いずれの時点においても、ホモ個体では、ＮＭＮ投与の有無にかかわらず、ＨｂＡ１ｃの明らかな上昇が確認され、糖尿病であることを示している。また、ここではデータを示さないが、ＮＭＮ投与直後の１０週齢であっても随時血糖値の減少も見られなかった。ＮＭＮ投与が糖尿病を抑制するという報告もあるが、８週齢から１０週齢までの１４日間５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量でＮＭＮを投与しても明らかなＨｂＡ１ｃ、随時血糖値の減少は見られなかった。なお、ＨｂＡ１ｃは糖尿病のマーカーであるが、測定時点より過去１〜１．５ヶ月間の平均血糖値を反映しており、長期での血糖値の減少も認めていないと考えられる。
【００２７】
これに対し、腎症のマーカーである尿アルブミンクレアチニン比ＡＣＲは、ＮＭＮ投与群と生理食塩水投与群間で明らかな差が認められた（図１（Ｃ））。*印はヘテロマウスに対して有意差があることを示し、＃はホモマウスのＮＭＮ投与群、生理食塩水投与群間で有意差があることを示している。１０週齢（ＮＭＮ投与終了直後）、２４週齢（ＮＭＮ投与終了後１４週後）、３０週齢（ＮＭＮ投与終了後２０週後）、いずれの時点においても、ホモマウスはＮＭＮ投与の有無にかかわらず、ＡＣＲの顕著な増加が認められる。しかしながら、ＮＭＮ投与群では、ＡＣＲの上昇が、生理食塩水投与群に比べ明らかに抑制されている。ＮＭＮ投与群と生理食塩水投与群間のＡＣＲ値の差は、ＮＭＮ投与が１０週齢で終了しているにもかかわらず、２４週齢、３０週齢と時間が経過するにしたがって、大きく開いている。これは、糖尿病性腎症の早期にＮＭＮを単回投与することにより、糖尿病に対しての効果はないものの、早期の糖尿病性腎症に対しては持続的な効果を有することを示している。特に、ＮＭＮ投与２０週後である３０週齢において、ＡＣＲの顕著な上昇抑制効果が認められたことは、臨床的に大きな意義がある。
【００２８】
［実施例２］組織学的解析
次に、ＮＭＮ投与による組織学的な変化について解析を行った。実施例１と同様にして、ＮＭＮを投与、解析を行った。図２に示すのは、２４週齢の結果である。
【００２９】
免疫組織化学解析は、Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ、Ｃｌａｕｄｉｎ−１、Ｓｉｒｔ１について解析を行った。定法に従って組織をホルマリンで固定後、パラフィン切片を作製する。その後、脱パラフィン、抗原賦活化処理、内在性ＰＯＤ不活化処理を行う。ブロッキング後、一次抗体を反応させた。一次抗体として、抗Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ抗体（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ社）、抗Ｃｌａｕｄｉｎ−１抗体（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ社）、抗Ｓｉｒｔ１抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用い、二次抗体として抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を用い、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣキット（Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）を用いて発色させた。また、細胞核をヘマトキシリンにより染色し、対比染色を行った後に、封入した。
【００３０】
Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎは、正常ではポドサイト（腎糸球体上皮細胞）で発現が見られるアクチン結合タンパク質であり、糖尿性腎症では減少することが知られている。生理食塩水投与を行った糖尿病性腎症を発症しないヘテロマウス（図２中、ｄｂ／ｍと記載。）と、ＮＭＮ投与を行ったホモマウス（図２中、ＮＭＮと記載。）は、Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎの存在を示す茶色の発色がほぼ同等に強く見られる。これに対し、生理食塩水投与を行ったホモマウス（図２中、ｄｎ／ｄｂと記載。）では、発色の顕著な減少が認められ、Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ発現が減少していることを示している（図２（Ａ））。
【００３１】
Ｃｌaｕｄｉｎ−１は、正常ではポドサイトに発現が認められないタンパク質であり、糖尿病性腎症により異所性に発現する接着分子である。Ｃｌaｕｄｉｎ−１の発現強度は、生理食塩水投与を行ったｄｂホモマウスが最も強く、ＮＭＮ投与を行ったｄｂホモマウス、生理食塩水投与を行ったｄｂヘテロマウスの順に低かった（図２（Ｂ））。Ｃｌaｕｄｉｎ−１の発現は、ＡＣＲ値によって示される糖尿病性腎症の発症と強く相関する結果が得られた。
【００３２】
Ｓｉｒｔ１は、ＮＡＤ依存性脱アセチル化酵素であり、糖尿病性腎症を発症すると減少することが知られている。Ｓｉｒｔ１の発現は、生理食塩水投与を行ったｄｂホモマウスではほとんど認められず、ＮＭＮ投与を行ったｄｂホモマウス、生理食塩水投与を行ったｄｂヘテロマウスの順に発現強度が高くなっているのが観察された（図２（Ｃ））。Ｓｉｒｔ１は、ＡＣＲ値によって示される糖尿病性腎症の発症と強く相関する結果が得られた。いずれの免疫組織化学解析の結果も、ＮＭＮ投与により糖尿病性腎症の進行が抑制されていることを示すものである。
【００３３】
次に電子顕微鏡によって、糸球体上皮細胞足突起の観察を行った。電子顕微鏡試料は組織をパラホルムアルデヒドで固定後、１％四酸化オスミウム液で固定、脱水しエポキシ樹脂で包埋した。その後、超薄切、電子染色後観察を行なった。糸球体上皮細胞足突起は、糖尿病性腎症を発症すると消失する腎症の障害の所見の一つである。生理食塩水投与を行ったｄｂホモマウスでは、ほとんど足突起が消失しているのが観察されたのに対し、ＮＭＮ投与を行ったｄｂホモマウスでは、コントロールであるヘテロマウスに比べて足突起の消失が若干認められる程度に過ぎなかった（図２（Ｄ））。電子顕微鏡観察によっても、ＮＭＮ投与により糖尿病性腎症の進行が抑制されていることが認められた。
【００３４】
［実施例３］ＮＭＮ投与量の検討
ＮＭＮ投与量について検討を行った。投与期間は、実施例１、２と同様に、８週齢から１０週齢の１４日間の連続投与と、投与直後の１０週齢、投与１４週後の２４週齢で解析を行った（図３（Ａ））。１日投与量は、１００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇの３つの異なる投与量として、各群１０匹でＨｂＡ１ｃ、ＡＣＲを解析した。図３（Ｂ）、（Ｃ）は、２４週齢、すなわち投与１４週後の解析結果を示している。
【００３５】
ヘテロマウス（ｄｂ／ｍ）では、ＨｂＡ１ｃ値が低く、糖尿病を発症していないことを示す。これに対し、ホモマウス（ｄｂ／ｄｂ）では、ＨｂＡ１ｃ値が高く糖尿病発症が認められる。実施例１で示した結果と同様に、ＮＭＮ投与によってもＨｂＡ１ｃ値は変わらず高値を示し、いずれの投与量でもＮＭＮ投与による糖尿病の発症の抑制は認められなかった（図３（Ｂ））。なお、図中＊印は、ヘテロマウス（ｄｂ／ｍ）に対して有意差があることを示す。
【００３６】
一方、糖尿病性腎症のマーカーであるＡＣＲは、ホモマウスにＮＭＮを１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで投与した場合には抑制が認められないものの、３００、５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで投与した場合には、明らかな減少が認められ、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量であっても、糖尿病性腎症の進行を抑制する効果があることが認められた。なお、図中＊印は、ヘテロマウス（ｄｂ／ｍ）に対して、＋はＮＭＮを３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで投与した群に対して有意差があることを示している。
【００３７】
ＮＭＮを１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで投与した群ではＡＣＲ値の減少が見られないが、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群は、非投与群、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群に対し、有意にＡＣＲ値の抑制が認められた。３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与で非投与群に対して、有意にアルブミン尿の減量が維持されていること、各用量におけるＡＣＲ値の変化から、おそらく２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの投与量でもアルブミン尿の減量が見込めるものと考えられる。したがって、ヒトの１日あたりの用量に換算する場合も、マウスで得られた２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上という値をもとに換算すればよい。
【００３８】
これまでの糖尿病改善の研究は、解析直前までＮＭＮ投与を行なっており、本発明の疾患早期における一時的投与により投与終了後長期にわたり効果を継続するという投与方法とは大きく異なる。また、腎疾患に関しても従来の報告は、尿細管を主座とする急性腎不全と１型糖尿病による進行した糖尿病性腎症であり、糖尿病患者の大多数を占める２型糖尿病による腎症早期を対象とした腎疾患モデルを用いた研究ではない。糖尿病性腎症早期に治療することができれば、糖尿病性腎症の発症や身体的、精神的、時間的、経済的負担の大きな末期腎不全への進行を抑制することができ、患者にとっては非常にメリットがある。
【００３９】
以上、ＮＭＮ投与後長期にわたって、ＨｂＡ１ｃには有意な変化が認められないが、早期の糖尿病腎症の段階で投与することによって、アルブミン尿が維持されることを示した。これらの結果から、ヒトにおいても糖尿病性腎症の早期に単回集中的にＮＭＮを投与することによって、糖尿病性腎症の進行を抑制、あるいは停止することができると考えられる。糖尿病性腎症の進行を抑制することができれば、透析に移行する患者を減らすことができるため、患者のＱＯＬを維持することができるだけではなく、医療経済的にも非常に有用な投与方法であると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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