(57)【要約】      （修正有）【課題】既存の治療法の短所を克服した関節炎の治療法ないしは治療剤の提供。【解決手段】本発明は、サルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎の予防又は治療用薬学的組成物に関する。本発明によるサルガヒドロキノキサリンは、炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６又はＴＮＦ−αの活性を減少又は、抑制させる活性に優れ、関節炎動物モデルで関節炎を改善する効果に優れ、関節炎治療用組成物として有用に使用することができる。また、サルガヒドロキノキサリンは薬物の毒性及び副作用もないので、長期間服用時にも安心して使え、体内でも安定した効果がある。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サルガヒドロキノキサリン(sargahydroquinoic acid)を有効成分として含む関節炎の予防又は治療用薬学的組成物。
【請求項２】
前記サルガヒドロキノキサリンは、有機溶媒を用いてウスバノコギリモク抽出物から収得したものであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記有機溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン及びシクロヘキサンからなる群から選択されることを特徴とする請求項２記載の組成物。
【請求項４】
前記サルガヒドロキノキサリンは、炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６又はＴＮＦ−αの活性を減少又は、抑制することを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記関節炎は、退行性関節炎、リウマチ関節炎又はルプス(Ｌｕｐｕｓ)関節炎であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項６】
サルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎の予防又は改善用健康機能食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウスバノコギリモク抽出物から分離したサルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎予防又は治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
人体は、約２００個余りの関節からなる。関節とは、骨と骨をつなぐ部位である。関節は、骨と骨の間が滑らかに運動できるように、軟骨、関節包、滑膜、靭帯、腱、筋肉などで構成されており、動きによって発生する衝撃を吸収する役割をする。
【０００３】
このような関節に表れる炎症性疾患は、自己免疫が原因であるとされる慢性関節リウマチ、細菌感染による感染性関節炎、さまざまな原因によって関節の軟骨や骨に変性又は破壊が生じる変形性関節炎、結合組織の退行性変化によって可溶性代謝産物が関節周辺の結合組織内に結晶沈着する結晶性関節炎などに大きく区分される。
【０００４】
退行性関節炎、いわゆる骨関節炎は、関節を構成する軟骨細胞(ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ)に老化による退行が生じ、軟骨細胞で関節の基質物質である２型コーラゲン(ｔｙｐｅ II ｃｏｌｌａｇｅｎ)及びプロテオグリカンなどの合成が阻害され、かつインターロイキン１β(ｉｎｔｅｌｅｕｋｉｎ−１β)及び腫瘍壊死因子−α(ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ−α)等の炎症性サイトカインが生成されるにつれ、関節基質を分解する基質金属蛋白質分解酵素(ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ；ＭＭＰ)の合成及び活性が、関節細胞での増加により、また、関節組織の破壊により誘発される疾病である。
【０００５】
また、関節炎は、炎症性サイトカインによる一酸化窒素の生成と、生成された一酸化窒素による自己増殖のサイトカインの生成によりより多くのＭＭＰの合成が誘発され、関節基質の分解が促進されることによりより一層悪化する。これと同時に、炎症性サイトカインは、脂質代謝産物であるプロスタグランジンＥ２の生成を増加させて関節炎での炎症反応を誘発させる。
【０００６】
生体において、炎症反応は多様な生化学的な現象が関与しており、特に、免疫細胞によって産生される炎症反応に関連した多様な酵素によって反応が開始したり、調節される。具体的に、前記免疫細胞はヒスタミン(ｈｉｓｔａｍｉｎｅ)、一酸化窒素(ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ，ＮＯ)又はプロスタグランジンＥ２(ｐｒｏｓｔａｇｌａｄｉｎ Ｅ２, ＰＧＥ２)等の手助けを受け、血管を通じて損傷した部位へ移動し、炎症反応を開始する。前記損傷した部位へ移動した免疫細胞は、ＴＮＦ−α(ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ−α)、ＩＬ−１β(ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β)又はＩＬ−６(ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６)のようなサイトカイン(ｃｙｔｏｋｉｎｅ)や、ＭＩＰ−１,ＩＬ−８又はＭＣＰ−１等のようなケモカイン(ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ)を分泌して直接的な外部侵入物質を破壊したり、他の免疫細胞を集めて炎症反応を開始する。
【０００７】
前記炎症反応を引き起こすインターフェロン−γ(ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−γ)、リポタイコ酸(ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ  ａｃｉｄ)、ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ(ＬＰＳ)等の炎症誘発物質又は多様な炎症誘導サイトカインに露出した場合、ｉＮＯＳ(ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  Ｎｉｔｒｉｃ  Ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ)とＣＯＸ−２(ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２)が発現し、ＮＯとＰＧＥ２が過量に生成される。これらの数々の炎症開始因子(ｉＮＯＳ、ＣＯＸ−２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６等)は、活性化したＮＦ−κＢによって転写が促進され、これによってＮＯが必要以上に生成されるとショックによる血管拡張、炎症反応により誘発される組織損傷、ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ、神経組織の損傷などを引き起こす。
【０００８】
酸化窒素(Ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ；ＮＯ)は、ＮＯ合成酵素(ＮＯＳ)によってＬ−ａｒｇｉｎｉｎｅと分子状の酸素から作られる。哺乳動物には、三つの形態のＮＯＳが存在する；すなわち、ｎｅｕｒｏｎａｌ  ＮＯＳ (ｎＮＯＳ)、ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ＮＯＳ (ｅＮＯＳ)及びｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ＮＯＳ(ｉＮＯＳ)。ｎＮＯＳとｅＮＯＳは、神経細胞と内皮細胞で構成的に発現する。しかし、ｉＮＯＳは、誘導性であって、ＬＰＳや前駆炎症サイトカイン(ｃｙｔｏｋｉｎｅ)の露出によってマクロファージや単球細胞から作られる(Ｖａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４)。ｉＮＯＳに生成されたＮＯは、炎症や免疫反応を起こし、細胞に侵入した病原体の増殖抑制剤や細胞毒性物質で作用する。しかし、ｉＮＯＳの過剰発現によって生成された過剰のＮＯは、病理的な状態を惹起させると知られている(Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｐａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１)。細胞内で過剰のＮＯによる有害な効果は、それ自体で炎症媒介因子として作用するのみならず、ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅと反応し、ペルオキシ亜硝酸(ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ)を生成する。ペルオキシ亜硝酸は、蛋白質、脂肪、ＤＮＡのような細胞内分子の酸化的損傷を惹起させるばかりでなく、正常な遺伝子調節を変形させたりもする。したがって、多量のＮＯのみならず、ｉＮＯＳの過剰発現は数々の炎症性疾患に関連した病理的な状態と密接な関連がある(ＭａｃＭｉｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．,１９９７；Ｍａｅｄａ  ａｎｄ  Ａｋａｉｋｅ，１９９８)。
【０００９】
Ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ (ＮＦ−κＢ)は、細胞の成長はもちろん、免疫と急性炎症反応に主な役割をする(Ｌｉ  ａｎｄ  Ｖｅｒｍａ，２００２；Ｍａｋａｒｏｖ，２００１)。ＮＦ−κＢ活性化は、ｉＮＯＳと種々の前駆炎症性遺伝子の発現を促す(Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｍａｋａｒｏｖ，２００１)。ＮＦ−κＢの活性化経路は、ＬＰＳによってｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｋＢ (IκＢ)−αｋｉｎａｓｅの燐酸化に続き、IκＢ−αが燐酸化され、ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｅによって燐酸化されたIκＢ−αが分解されることによって遊離状態のＮＦ−ｋＢが核に移動され、炎症関連の遺伝子の発現を調節する(Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５)。もう一つのＮＦ−κＢの活性化は、ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅｓ (ＭＡＰＫｓ) (Ｇｕｈａ  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｍｎ，２００１)やｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ３−ｋｉｎａｓｅ (Ｐ１３Ｋ)／ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｂ (Ａｋｔ)経路(Ｓｈｅｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５)を通じて起きる。ＭＡＰＫｓには、ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ(ＥＲＫ),ｃ−Ｊｕｎ  ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ(ＪＮＫ)及びｐ３８  ＭＡＰＫがあり、これらはＮＦ−κＢ活性化を通じた炎症遺伝子の転写調節と関連がある(Ｂｈａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｋａｏ  ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｓｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０)。Ｐ１３ＫもまたＮＦ−κＢ活性化を通じた炎症性サイトカインの生成に関与している(Ｃｒｅｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｓｈｅｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５)。Ｐ１３Ｋ活性化は、ホスファチジルイノシトール(ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｉｄｅ)を燐酸化させてＡｋｔ蛋白質を活性化させる。活性化されたＰ１３Ｋ/Ａｋｔは、マクロファージの活性化に主要な役割をする(ＭａｃＭｉｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；Ｓｈｅｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５)。したがって、抗炎症剤を開発するため、ＮＫ−κＢの活性化を抑制したり、ＮＦ−κＢを活性化させるＭＡＰＫｓとＡｋｔの活性化を抑制したりする物質を探すことに多くの研究が進められている。
【００１０】
ＭＭＰsは、骨及び軟骨の基質構成要素を破壊する蛋白質分解酵素であって、炎症疾患状態の時、炎症性サイトカイン(ｃｙｔｏｋｉｎｅ)によって刺激を受けた軟骨組織で発現して活性が増加する。ＭＭＰsは、最小２１個の酵素を構成するが、ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ（ＭＭＰ−１,８,１３)、ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ (ＭＭＰ−３,１０,１１)、ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ (ＭＭＰ−２,９)とｍａｔｒｉｘ  ｔｙｐｅ−１ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ (ＭＭＰ−１４)の下位グループに細分化される。この中、ＭＭＰ−２とＭＭＰ−９は、ゼラチナーゼサブファミリー(ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ  ｓｕｂｆａｍｉｌｙ)であって、軟骨組織のコラーゲン分解に特に重要な酵素である。この二種類の酵素は、軟骨に多量存在する繊維性コラーゲンII及びａｇｇｒｅｃａｎを含む他の基質を分解する。
【００１１】
リウマチと退行性関節炎は、関節滑膜組織内への炎症細胞浸潤がその特徴であり、これはｃｈｅｍｏｋｉｎｅによって媒介される。関節炎の滑膜組織には、ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１ (ＭＣＰ−１)等のｃｈｅｍｏｋｉｎｅが発現して、これらは滑膜線維芽細胞(ｓｙｎｏｖｉａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ)等で生成されると知られている。関節炎によって生成された過剰のＭＣＰ−１は、炎症部位に単球細胞とマクロファージを誘導し、これら細胞を活性化することによって炎症性サイトカインの生成を促進し、炎症をより一層悪化させる役割をする。
【００１２】
リウマチと退行性関節炎の滑膜組織において、サイトカインによって血管内皮細胞からｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ １ (ＶＡＣＭ−１)、ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ １ (ＩＣＡＭ−１)とＥ−ｓｅｌｅｃｔｉｎなどのような癒着分子(ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ)発現を増加させて炎症細胞の浸潤を誘導する。過剰発現したＩＣＡＭ−１とＶＣＡＭ−１は、リウマチ性関節炎、退行性関節炎のような慢性炎症と関連がある。
【００１３】
リウマチと退行性関節炎は、慢性全身性炎症疾患であって、対称性、多発性の関節炎とこれに伴う関節の損傷及び変形が生じる疾患である。このような関節炎の治療を受けなかった場合には、経過が不良で関節機能の障害が表れ、さらに持続すれば関節機能の障害によって日常生活に支障をきたす。韓国内では全人口の約１％がリウマチ性関節炎に悩まされていると推定されるが、リウマチ性関節炎の発生率は男性より女性が３倍程高く、主に２０〜４０代に発生すると知られている。
【００１４】
リウマチ性関節炎の主な原因がだんだん明らかになってきており、遺伝的な要因と感染、ホルモンの異常などが原因因子として考えられている。このような原因因子によって「自己免疫」現象が生じるが、自己免疫とは、我々の体の免疫調節機能異常により慢性炎症が体の色々な部位で多発的、持続的に起きる現象のことである。
【００１５】
一方、前記関節炎の治療に使われる薬物は、炎症の減少、疾病進行の遅延、尿酸濃度の減少という主な作用機転を根拠に大別できるが、多くの神経関節炎治療薬物が炎症を減少させる作用をする。炎症は痛み、むくみ、熱感、発作、硬直を起こす病的過程であり、炎症を迅速に緩和させる薬物にはアスピリンをはじめとする非ステロイド性抗炎剤とコルチゾンをはじめとするステロイド性抗炎剤がある。
【００１６】
非ステロイド性抗炎剤は、痛みを和らげて神経関節をスムーズにして炎症を緩和させる効果があるが、胃腸障害が現れたり腹痛を誘発する場合もあるため、活動性消化性潰瘍や胃腸部位の出血歴のある人には使用が禁止される。ステロイド性抗炎剤は、その効果に比して体重の増加や高血圧などの副作用が深刻なため、退行性神経関節炎にはあまり使われない。
【００１７】
特に、ステロイド性抗炎剤は、疾患の原因治療とは全く無関係で、ただ単に痛みを一時的に和らげ、関節の過剰使用を誘導する素地があり、これは神経関節を破壊し、障害を悪化させる要因となるので、使用には注意を要する。
【００１８】
したがって、関節炎などの関節損傷に使われる従来の治療法は限定的な有効性を有し、明白な有毒性副作用を伴い、長期間の間、持続的に使うことができないので、その有効性が制限される。よって、既存の治療法が持つ短所を克服した新しい新規治療法ないしは治療剤が切実に要求されているのが実情である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】大韓民国登録特許第１０−１７４５３３８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
したがって、本発明者はウスバノコギリモク抽出物から分離したサルガヒドロキノキサリンが、関節炎の予防及び治療効果があることを見出し、本発明を完成した。
【００２１】
これにより、本発明はサルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎の予防又は治療用薬学的組成物及び機能性健康食品を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
前記のような本発明の目的を達成するため、本発明はサルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。
【００２３】
また、本発明はサルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎の予防又は改善用機能性健康食品を提供する。
【発明の効果】
【００２４】
本発明は、ウスバノコギリモク抽出物から分離したサルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎の予防又は治療用薬学的組成物に関するものであって、炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６又はＴＮＦ−αの活性を減少又は抑制させる活性に優れ、関節炎動物モデルで関節炎を改善する効果に優れ、関節炎治療用組成物として有用に使用することができる。
【００２５】
また、サルガヒドロキノキサリンは天然物質として細胞毒性が生じず、薬物の毒性及び副作用もないので、長期間服用した時にも安心して使うことができ、体内でも安定した効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】本発明のウスバノコギリモクの酒精抽出物からサルガヒドロキノキサリンを分離する過程を示す模式図である。
【図２】本発明のウスバノコギリモクの酒精抽出物から分離したサルガヒドロキノキサリンの純度を測定した結果を示す図である。
【図３】本発明のリウマチ関節炎実験動物モデルの作製過程を示す模式図である。
【図４】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、７週間の体重変化を確認した結果である。
【図５】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、肢の厚さの変化を確認した結果である。
【図６】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、６週目に実験動物を犠牲にした後、体重当たりの脾臓の重さを確認した結果である。
【図７】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、関節炎指数の変化を確認した結果である。
【図８】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、肉眼で関節炎程度を確認した結果である。
【図９】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、マイクロＣＴで撮影した肢の指を確認した結果である。
【図１０】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、マイクロＣＴで撮影した関節部分を確認した結果である。
【図１１】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、マイクロＣＴで撮影した関節を数値化した結果である。
【図１２】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、血清内炎症性サイトカインＴＮＦ−α生成抑制程度を確認した結果である。
【図１３】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、血清内炎症性サイトカインＩＬ−１β生成抑制程度を確認した結果である。
【図１４】本発明のサルガヒドロキノキサリンをリウマチ関節炎実験動物に投与した後、血清内炎症性サイトカインＩＬ−６生成抑制程度を確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、ウスバノコギリモク抽出物から分離したサルガヒドロキノキサリン(sargahydroquinoic acid)を有効成分として含む関節炎予防又は治療用薬学的組成物及び機能性健康食品に関する。
【００２８】
ウスバノコギリモクは、潮間帯から斬深帯にかけて生育する植物であって、１〜４ｍの多年生大型褐藻類である。根は直径４〜５ｃｍの円錐状であり、ゴムと同じで、年輪があり、茎は円周状で短く、多数分技して扁圧されている。また、幹の縁が薄く、縦に中助のように片側に隆起して、端で短い枝を出しており、幹葉は基部に向かっていて、端に２重の鋸歯があり、気胞は丸い形に近く、その頂端に冠葉又はトゲ状の突起がある。特に韓国の南海岸と済州（チェジュ）に生育すると知られており、脂質降下、血圧降下、放射性同位元素排出作用に対する機能を有していることで知られている。
【００２９】
前記サルガヒドロキノキサリンは、前記組成物内に１０ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、例えば、５０ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ、又は、１０ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの濃度で含まれることができる。
【００３０】
本発明で「関節炎」とは、退行性関節炎、リウマチ関節炎又はルプス(Ｌｕｐｕｓ)関節炎を含み、例えば、リウマチ関節炎又は退行性関節炎であることがある。本発明のサルガヒドロキノキサリンは、炎症性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６又はＴＮＦ−αの活性を減少又は抑制させて関節炎を改善させることができる。
【００３１】
本発明で「治療」とは、特に言及しない限り、前記用語が適用される疾患、病気、前記疾患又は病気の一つ以上の症状を逆転させたり、緩和させたり、その進行を抑制したり、又は予防したりすることを意味し、本願で用いられた前記治療との用語は、「治療する」が前記のように定義されるとき、治療する行為をいう。したがって、哺乳動物において関節炎の「治療」又は「治療療法」は、下記のうちの一つ以上を含むことができる：
(１)関節炎の発達を阻止させる、
(２)関節炎の拡散を予防する、
(３)関節炎を軽減させる、
(４)関節炎の再発を予防する及び
(５)関節炎の症状を緩和する(ｐａｌｌｉａｔｉｎｇ)
【００３２】
本発明によるウスバノコギリモク抽出物は、当業界に公知された抽出及び分離方法を使って天然から抽出及び分離して収得したものを用いることができ、本発明で定義された「抽出物」は、適切な溶媒を利用してウスバノコギリモクから抽出したものであり、例えば、ウスバノコギリモク粗抽出物、極性溶媒可溶抽出物又は非極性溶媒可溶抽出物を全部含むことができる。
【００３３】
前記ウスバノコギリモクから抽出物を抽出するための適切な溶媒としてはこれに限られないが、有機溶媒を使用することができ、例えば、メタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)、エタノール(ｅｔｈａｎｏｌ)、プロパノール(ｐｒｏｐａｎｏｌ)、イソプロパノール(ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ)、ブタノール(ｂｕｔａｎｏｌ)などを含む炭素数１〜４のアルコール、アセトン(ａｃｅｔｏｎｅ)、エーテル(ｅｔｈｅｒ)、ベンゼン(ｂｅｎｚｅｎｅ)、クロロホルム(ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ)、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ)、メチレンクロリド(ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ)、ヘキサン(ｈｅｘａｎｅ)及びシクロヘキサン(ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ)等の各種の溶媒を単独で又は混合して使用することができる。好ましくはエタノール(酒精)、ｎ−ヘキサン及びエチルアセテート溶媒を使用することができる。
【００３４】
抽出方法としては、熱水抽出法、冷浸抽出法、還流冷却抽出法、溶媒抽出法、水蒸気蒸留法、超音波抽出法、溶出法、圧搾法などのいずれかの方法を選択して使用することができる。また、目的とする抽出物は、追加で通常の画分工程を行うこともでき、通常の精製方法を利用して精製することもできる。本発明のウスバノコギリモク抽出物の製造方法には制限はなく、公知されているいかなる方法も利用することができる。
【００３５】
例えば、ウスバノコギリモク抽出物は、前記の溶媒抽出法で抽出された１次抽出物を、減圧蒸留及び凍結乾燥又は噴霧乾燥などのような追加的な過程によって粉末状態で製造することができる。また、前記１次抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)、薄層クロマトグラフィー(ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)、高性能液体クロマトグラフィー(ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)等のような多様なクロマトグラフィーを利用して追加で精製された画分を得ることもできる。
【００３６】
したがって、本発明においてサルガヒドロキノキサリンは抽出、画分又は精製の各段階で得られるすべての抽出液、画分及び精製物、それらの希薄液、濃縮液又は乾燥物を全て含む概念である。
【００３７】
本発明のサルガヒドロキノキサリンは、当業界に公知された抽出及び分離方法を使って天然から抽出及び分離して収得したものを用いることができる。例えば、サルガヒドロキノキサリンはウスバノコギリモク酒精抽出物からシリカカラムを通じて分離したものであり、全体分離物中の８０％以上がサルガヒドロキノキサリンを含む。
【００３８】
前記サルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む本発明の組成物は、薬剤学的組成物や食品組成物として使用することができる。
【００３９】
本発明の薬剤学的組成物は、前記有効成分以外に薬剤学的に適合し、生理学的に許される補助剤を使って製造することができ、前記補助剤として賦形剤、崩壊剤、甘美剤、結合剤、被覆錠、膨張剤、潤滑剤、又は香味剤などを使用することができる。
【００４０】
前記薬剤学的組成物は、投与のために前記に記載された有効成分の外に、追加で薬剤学的に許容可能な担体を１種以上含んで薬剤学的組成物で好ましく製剤化することができる。
【００４１】
前記薬剤学的組成物の剤形は、顆粒剤、散剤、錠剤、被覆錠、カプセル剤、坐剤、液剤、シロップ、しぼり汁、懸濁剤、乳剤、点滴剤又は注射可能な液剤などであってもよい。例えば、錠剤又はカプセル剤の形態に製剤化するのに、有効成分はエタノール、グリセロール、水などのような経口、無毒性の薬剤学的に許容可能な不活性担体と結合することことができる。また、所望又は必要に応じて、適した結合剤、潤滑剤、崩壊剤及び発色剤もまた、混合物に含まれることができる。適合した結合剤はこれに制限されるものではないが、澱粉、ゼラチン、グルコース又はベータ−ラクトースのような天然糖、とうもろこし甘美剤、アカシア、トラガカント又はオレイン酸ナトリウムのような天然及び合成ガム、ステアリン酸ナトリウム、マグネシウムステアレート、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどを含む。崩壊剤は、これに制限されるものではないが、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどを含む。液状溶液で製剤化される組成物において許容可能な薬剤学的担体としては、滅菌及び生体に適合したものであって、食塩水、滅菌水、点滴液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール及びこれら成分のうち１成分以上を混合して使用することができ、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など、他の通常の添加剤を添加することができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤及び潤滑剤を付加的に添加して水溶液、懸濁液、乳濁液などのような注射用剤形、丸薬、カプセル、顆粒又は精製で製剤化することができる。ひいては該当分野の適切な方法でＲｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ ＰＡに開示されている方法を利用して各疾患に応じて、又は成分に応じて好ましく製剤化することができる。
【００４２】
本発明のサルガヒドロキノキサリンは、組成物の総重量に対して、０．００１〜２０重量％含まれることができる。
【００４３】
本発明の組成物はまた、食品組成物であってもよく、本発明の食品組成物は、有効成分であるサルガヒドロキノキサリンを含有する外に、通常の食品組成物のように種々の香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有することができる。
【００４４】
上述の天然炭水化物の一例として、モノサカライド、例えば、葡萄糖、果糖など；単糖類、例えば、マルトース、スクロースなど；及び多糖類、例えば、デキストリン、シクロデキストリンなどのような、通常の糖、及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールである。上述の香味剤は、天然香味剤(タウマチン)、ステビア抽出物(例えば、レバウジオシドＡ、グリチルリチンなど)及び合成香味剤(サッカリン、アスパルタムなど)を有利に使用することができる。
【００４５】
本発明の食品組成物は、前記薬剤学的組成物と同様の方式で製剤化され、機能性食品として利用したり、各種食品に添加することができる。本発明の組成物を添加できる食品としては、例えば、飲料類、肉類、チョコレート、食品類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アメ類、アイスクリーム類、アルコール飲料類、ビタミン複合剤及び健康補助食品類などがある。
【００４６】
また、前記食品組成物は、有効成分であるウスバノコギリモク抽出物の他に種々の栄養剤、ビタミン、鉱物(電解質)、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び充填剤(チーズ、チョコレートなど)、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド性増粘剤、ｐｈ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使われる炭酸化剤などを含有することができる。その他に本発明の食品組成物は、天然果物ジュース及び果物ジュース飲料及び野菜飲料を製造するための果肉を含むことができる。
【００４７】
本発明の有効成分であるサルガヒドロキノキサリンは、天然物質であって、化学薬物のような副作用は殆どないので、関節炎の予防又は治療を目的に長期間服用する際にも安心して使用することができる。
【００４８】
本発明は、またサルガヒドロキノキサリンを有効成分として含む関節炎改善用健康機能食品を提供する。
【００４９】
本発明の健康機能食品は、関節炎改善を目的に、精製、カプセル、粉末、顆粒、液状、環状などの形態で製造及び加工することができる。
【００５０】
本発明において「健康機能食品」とは、健康機能食品に関する法律第６７２７号に基づく人体に有用な機能性を有する原料や成分を用いて製造及び加工した食品を指し、人体の構造及び機能に対して栄養素を調節したり生理学的作用などといった保健用途に有用な効果を得る目的で摂取することを意味する。
【００５１】
本発明の健康機能食品は、通常の食品添加物を含まれることができ、食品添加物としての適否は他の規定がない限り、食品医薬物安全庁に承認された食品添加物公典総則及び一般試験法などにより該当品目に関する規格及び基準により判定する。
【００５２】
前記「食品添加物公典」に収載された品目では例えば、ケトン類、グリシン、クエン酸カルシウム、ニコチン酸、ケイ皮酸などの化学的合成物；カキ色素、甘草抽出物、結晶セルロース、コウリャン色素、グアーガムなどの天然添加物；Ｌ−グルタミン酸ナトリウム製剤、麺類添加アルカリ剤、保存料製剤、タール色素製剤などの混合製剤類などが挙げられる。
【００５３】
例えば、精製形態の健康機能食品は、本発明の有効成分であるウスバノコギリモク抽出物を賦形剤、結合剤、崩壊剤及び他の添加剤と混合した混合物を通常の方法で顆粒化した後、滑沢剤などを入れて圧縮成形したり、前記混合物を直接圧縮成形することができる。また、前記錠剤形態の健康機能食品は、必要に応じて矯味剤などを含有することもできる。
【００５４】
カプセル形態の健康機能食品のうち、硬質カプセル剤は通常の硬質カプセルに本発明の有効成分であるウスバノコギリモク抽出物を賦形剤などの添加剤と混合した混合物を充填して製造することができ、軟質カプセル剤はウスバノコギリモク抽出物を賦形剤などの添加剤と混合した混合物をゼラチンのようなカプセル基剤に充填して製造することができる。前記軟質カプセル剤は、必要に応じてグリセリン又はソルビトールなどの可塑剤、着色剤、保存剤などを含有することができる。
【００５５】
環状の健康機能食品は、本発明の有効成分であるサルガヒドロキノキサリンと賦形剤、結合剤、崩壊剤などを混合した混合物を既に公知の方法で成形して組成することができ、必要に応じて白糖その他の剤皮剤で剤皮を施すことができ、又は澱粉、タルクのような物質で表面をコーティングすることもできる。
【００５６】
顆粒状の健康機能食品は、本発明の有効成分であるサルガヒドロキノキサリンと賦形剤、結合剤、崩壊剤などを混合した混合物を既に公知の方法で粒状に製造することができ、必要に応じて着香剤、矯味剤などを含有することができる。
【００５７】
前記健康機能食品は、飲料類、肉類、チョコレート、食品類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アメ類、アイスクリーム類、アルコール飲料類、ビタミン複合剤及び健康補助食品類などであっても良い。
【００５８】
また、本発明は哺乳動物にサルガヒドロキノキサリンを投与することを含む関節炎の予防又は治療方法を提供する。
【００５９】
ここで用いられた用語「哺乳動物」とは、治療、観察又は実験の対象である哺乳動物を指し、好ましくはヒトを指す。
【００６０】
ここで用いられた用語「治療上の有効量」とは、研究者、獣医師、医師又は、その他臨床によって考えられる組織系、動物又はヒトから、生物学的又は医学的反応を誘導する有効成分又は薬学的組成物の量を意味するもので、これは治療する疾患又は障害の症状の緩和を誘導する量を含む。本発明の有効成分に対する治療上の有効投与量及び投与回数は、所望する効果により変化することは当業者に自明なことである。したがって、投与される最適な投与量は、当業者によって容易に決定され得、疾患の種類、疾患の重症度、組成物に含まれた有効成分及び他の成分の含有量、剤形の種類、及び患者の年齢、体重、一般健康状態、性別及び食餌、投与時間、投与経路及び組成物の分泌率、治療期間、同時に用いられる薬物をはじめとする様々な因子に応じて調節されることができる。本発明の治療方法において、成人の場合、本発明のウスバノコギリモク抽出物を１日１回〜数回投与時、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの容量で投与することが好ましい。
【００６１】
本発明の治療方法において本発明のウスバノコギリモク抽出物を有効成分として含む組成物は、経口、直腸、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、胸骨内、経皮、局所、眼球内又は、皮内経路を通じて通常の方式で投与することができる。
【実施例】
【００６２】
以下、本発明を実施例に従ってより詳しく述べる。
下記の実施例は、単に本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例に制限されないということは当業界で通常の知識を有する者に自明なことであろう。
【００６３】
<実施例１>
サルガヒドロキノキサリン(ＳＨＱＡ)の分離
ウスバノコギリモク(Ｓ．ｓｅｒｒａｔｉｆｏｌｉｕｍ)は、韓国の統営（トンヨン）海岸で２０１７年５月に採取したものを使った。標本は釜慶大学生態学科の海草類分類学者(Ｃ．Ｇ．Ｃｈｏｉ)に確認を受けた。新鮮なウスバノコギリモクを自然乾燥させた後、後で抽出する前まで冷凍保管した。ウスバノコギリモクからサガハイドロクィノイクサンを分離する工程は、図１に示すとおりである。乾燥されたウスバノコギリモク(２．０ｋｇ)を２０倍量の水道水に２時間の間、浸漬した後、９５％ (ｖ／ｖ)エチルアルコール(８Ｌ/ｅａｃｈ)で６時間の間、７０℃で２回抽出した。抽出物を混合した後、ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｕｎｉｔ (５ｋＤａ)を用いて濾過した。濾過物を真空コントローラー(ＮＶＣ−２２００)及び冷却装置(ＣＡ−２６００)が備えられた回転式蒸発器(Ｅｙｅｌａ Ｎ−３０１０)で濃縮させた。抽出物を濃縮させる間、親油性画分の反復可溶化によって塩及び水溶性糖類が除去され、最終的にｍｅｒｏｔｅｒｐｅｎｏｉｄが豊富な画分(１６０ｇ)を収得した。抽出物の追加画分化のために、抽出物をＨ２Ｏ：エタノール(９：１，ｖ／ｖ)に懸濁し、ｎ−ヘキサン(１２０ｇ)、エチルアセテート、ｎ−ブタノール、及び水で分割した。分取量のｎ−ヘキサン画分をジクロロメタンに溶解させた後、シリカゲル(７０−２３０  ｍｅｓｈ， Ｍｅｒｃｋ)カラム(１０×１００ｃｍ)を利用してＣＨ２Ｃｌ２中の０．２％、２．０％及び５．０％メタノールの混合物で段階的に溶出させた。ＣＨ２Ｃｌ２中の０．２％メタノールで溶出された画分が最も強い抗炎症活性を見せており、高濃度のサルガヒドロキノキサリンを含有した。サルガヒドロキノキサリンを精製するためにシリカゲル画分２０ｇを２０ｍｌのメタノールに溶かしてｍｅｍｂｒａｎｅｆｉｌｔｅｒで濾過した後、２００ｕＬを注入し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８(２) (１５μｍ、２１．２ｍｍ × ２５０ｍｍ)カラムが装着されたＨＰＬＣで分離した。クロマトグラフィーの移動相ではメタノール(Ａ)と水(Ｂ)の混合溶媒を用い、流速は７ｍＬに設定した。クロマトグラフィー条件は、最初はＡ／Ｂ(８５／１５)〜Ａ／Ｂ(９５／５)濃度で３０分間、Ａ／Ｂ(９５／５)〜Ａ／Ｂ(１００／０)濃度で２分間の線形勾配及びＡ／Ｂ(１００／０)濃度で１０分間洗い流した後に、 Ａ／Ｂ(７８／２２)濃度で１０分間の再平衡化して構成した。クロマトグラフィーは、Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒで自動に試料を注入する方式で１００回実施し、大量のサルガヒドロキノキサリンを得た。大量で得たサルガヒドロキノキサリンの純度を高めるために同一機器でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８(２) (５μｍ、１０ｍｍ × ２５０ｍｍ)カラムを使った。クロマトグラフィー条件は、最初Ａ／Ｂ(７８／２２)〜Ａ／Ｂ(８７／１３)濃度で２０分間、Ａ／Ｂ(８７／１３)〜Ａ／Ｂ(１００／０)濃度で２分間の線形勾配及び Ａ／Ｂ(１００／０)濃度で６分間、洗い流した後にＡ／Ｂ(７８／２２)濃度で１０分間カラムを平衡化した。クロマトグラフィーは、Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒで自動に試料を注入する方式で実施し、より純度の高いサルガヒドロキノキサリンを得た。
【００６４】
サルガヒドロキノキサリン含有量の分析
シリカゲルカラムから分取量の０．２％メタノール画分をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ＲＰ−１８(２)カラム(３μｍ、３．０ × １５０ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ, Ｔｏｒｒｅｎｃｅ, ＡＣ, ＵＳＡ)が備えられたＨＰＬＣシステムで分離した。移動相は、メタノール中の０．１％ホルム酸(Ａ)及び水中の０．１％ホルム酸(Ｂ)からなる。ＨＰＬＣでサルガヒドロキノキサリンの純度を分析するため、溶出条件をＡ／Ｂ(７８／２２)〜Ａ／Ｂ(９５／５)濃度で８８分、Ａ／Ｂ(９５／５)〜Ａ／Ｂ(１００／０)濃度で２分間の線形勾配及びＡ／Ｂ(７８／２２)濃度で１０分間の再−平衡化で構成した。流動速度は、０．３４ｍＬ／ｍｉｎであり、注入体積は３μＬであった。サルガヒドロキノキサリンの純度は、約９５％以上測定された(図２)。
【００６５】
<実施例２>
サルガヒドロキノキサリンのリウマチ関節炎治療効果
８週齢の雄ＤＢＡ／１Ｊマウス(Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｉｎｃ．, Ｓｅｏｕｌ，Ｋｏｒｅａ)を温度(２５±２℃)、湿度(５５％)及び１２時間暗サイクルを維持する環境で１週間飼育した。すべての実験は、Ｋｏｒｅａｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈａｅｌｔｈ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ ｔｈｅ  Ｃａｒｅ ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓのガイドラインに従って行い、動物実験過程は釜慶大学の動物倫理委員会から承認を得た(２０１５-１２)。リウマチ関節炎を雄ＤＢＡ／１Ｊマウスに発症させた。II類型コラーゲンを同一体積の完全フロイントアジュバントにエマルジョン化させた(ＣＦＡ；２ｍｇ／ｍＬ)。０日に、ＤＢＡ／１Ｊマウスの尾下の部分に１００μgのＣＦＡを皮内注入して免疫化させた。２１日後、マウスの尾下の部分に同一体積の不完全フロイントアジュバントでエマルジョン化された１００μｇのＣＩI(ＩＦＡ；２ｍｇ／ｍＬ)を皮内注入してブースティングさせた。４２日にすべてのマウスをエーテルで麻酔させた後、犠牲にして血液(血しょうサンプル)、脾臓、肝及び関節組織を直ちに摘出して−８０℃で保管した。
【００６６】
ＣＩＡマウスのリウマチ関節炎へのサルガヒドロキノキサリン(ＳＨＱＡ)の効果を評価するために、ＤＢＡ／１Ｊマウスを無作為に４個のグループ(各グループ当たりｎ＝１０)に割り当てた：対照群(非処理グループ)、ＣＩＡ誘導された関節炎グループ、及びＣＩＡ誘導及びＳＨＱＡ−処理グループ、対照群及びＣＩＡグループ共々にＡＩＮ−７６Ａ精製された食餌を提供した。ＣＩＡ誘導及びＳＨＱＡ処理マウスには１０．０ｍｇ ＳＨＱＡ／ｋｇ及び４０ｍｇ ＳＨＱＡ／ｋｇをそれぞれ含有するＡＩＮ−７６Ａを提供した。すべてのマウスは４２日間、餌及び水に自由に接近することができた(図３)。
【００６７】
<２−１>サルガヒドロキノキサリン処理に伴う体重の変化測定
何の処理も施していない対照群、関節炎動物群(ＣＩＡ処理群)、関節炎実験動物に１０ｍｇと４０ｍｇのＳＨＱＡを処理した処理群を対象に７週まで毎週体重を測定したところ、グループ別の体重変化は有意的に見られなかった(図４)。
【００６８】
<２−２>サルガヒドロキノキサリン処理に伴う肢の厚さの変化測定
本発明者等は、ＳＨＱＡによるリウマチ関節炎治療効果を確認するために関節炎の指標となる肢の厚さ(ｐａｗ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ)の変化を測定した。
【００６９】
前記<２−１>のリウマチ関節炎が誘導された実験動物の作製過程中に２次皮下注射後、２５日間電子ｃａｌｉｐｅｒを用いて５日ごとにＳＨＱＡ処理による肢の厚さの変化を測定した。
【００７０】
その結果、関節炎が誘導された実験動物は炎症によって肢の厚さが増したのに対し、ＳＨＱＡ処理群の肢の厚さは関節炎誘導実験動物群に比べて有意的に厚さが減少したことを知ることができ、２５日後には対照群と同程度の厚さが見られたことを確認した(図５)。
【００７１】
<２−３>サルガヒドロキノキサリン処理による体重当たりの脾臓の重さ測定
本発明者等は、ＳＨＱＡがリウマチ関節炎を治療できるか否かを確認するために脾臓の重さを測定した。
【００７２】
脾臓は、人体免疫システムの主要な組織であって、相対的な重さはテストしようとするサンプルの免疫調整活性を評価するための予備指標としてよく用いられる。体重当たり脾臓の重さを測定した結果、関節炎が誘導された実験動物からは脾腫(脾臓が腫大した状態)が見られたが、本発明のＳＨＱＡを処理した群では脾腫が見られず、これはＳＨＱＡによる脾臓の拡張と免疫細胞の侵透性の抑制を確認することができた(図６)。
【００７３】
<２−４>サルガヒドロキノキサリン処理に伴う関節炎指数測定
本発明者等は、ＳＨＱＡのリウマチ関節炎治療効果を確認するために肉眼で関節炎指数を観察し、それぞれに対する関節炎指数は０〜４点と点数をつけて、非実験者５名によって測定された。
【００７４】
関節炎指数は、一匹当りそれぞれの肢に対する点数を合算して得た(最高点数＝１６点)。
−評価基準−
３９−２３
０点：何の症状なし
０．５点：一本の指が赤く腫れる
１点：２ 〜 ５本の指が赤く軽度の腫れ
２点：２ 〜 ５本の関節の赤さと中度の腫れ
３点：肢全体に赤さと腫れ
４点：減少した腫れと奇形
【００７５】
それぞれの処理群を対象にリウマチ関節炎評価点数を確認した結果、関節炎が誘導された実験動物群からは関節炎指数が高く表れたが、本発明のＳＨＱＡを処理した処理群からは関節炎評価指数が有意的に下がったことを知ることができる。
【００７６】
<２−５>サルガヒドロキノキサリン処理に伴う関節炎治療程度の肉眼観察
本発明者等は、ＳＨＱＡ処理に伴う関節炎治療程度を肉眼で観察した結果、関節炎が誘発された実験動物群からは後肢がひどく腫れ、紅斑症を見せた。しかし、本発明のＳＨＱＡを１０ｍｇ／ｋｇと４０ｍｇ／ｋｇで２５日間処理した処理群では腫れが減少し、紅斑症が緩和されたことを確認することができた(図８)。
【００７７】
<２−６>サルガヒドロキノキサリン処理に伴うマイクロＣＴ及び骨関連指数変化効果
関節のコンピュータ断層撮影は、ＳＫＹｓｃａｎ  １１７２ ｓｃａｎｎｅｒ (Ｂｒｕｋｅｒ，Ｂｅｌｇｕｉｍ，ＶＡ，ＵＳＡ)を用いて行った。３次元微細構造イメージデータは、ＣＴＡｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ(Ｂｒｕｋｅｒ，Ｂｅｌgｕｉｍ)を用いて構造的な指数を計算して再構成した。関節炎が誘発された実験動物群からは関節の亀裂が観察されたが、本発明のＳＨＱＡ １０ｍｇ／ｋｇと４０ｍｇ／ｋｇで２５日間処理した処理群とリプリノールで処理した群からは骨と関節の亀裂が観察されなかった(図９及び１０)。また、骨の健康度を示す指数である骨密度がＣＩＡ群に比べてＳＨＱＡとリプリノール群で向上され、骨の体積対比表面積も著しく低下した(図１１)。
【００７８】
<２−７>ウスバノコギリモク抽出物処理に伴う炎症性サイトカイン抑制効果
通常、リウマチ関節炎が進行すると、炎症部位に集まった活性化した免疫細胞により、インターロイキン(ＩＬ)とＰＧＥ２のような炎症媒介体(ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ)が関節と血液に放出されるが、特にＴＮＦ−α、ＩＬ−６,ＩＬ−１βは、リウマチ関節炎の疾病程度の有無を把握できる指標として使用され得る。
【００７９】
本発明者等は、実験動物の血液のうち前記炎症性サイトカイン発現程度を測定するため、ＥＬＳＡ ｋｉｔを用いて測定した結果、リウマチ関節炎が誘導された実験動物群からは炎症性サイトカインが急激に増加したが、本発明のＳＨＱＡを２５日間、処理した処理群ではＴＮＦ−α(図１２)、ＩＬ−１β(図１３)及びＩＬ−６(図１４)のような炎症性サイトカイン発現が有意的に抑制されることが分かった。
【００８０】
今まで本発明に対し、好ましい実施例を中心に見てきた。
本発明が属する技術分野において通常の知識を有する者は本発明が本発明の本質的な特性から外れない範囲で変形された形態で具現され得ることを理解できるだろう。したがって、開示された実施例は限定的な観点ではなく、説明的な観点から考慮されるべきである。本発明の範囲は先に述べた説明にはなく、特許請求範囲に表されており、それと同等の範囲内にあるすべての相違点は、本発明に含まれたものとして解釈されなければならない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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