(57)【要約】      （修正有）【課題】ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を増強するための免疫抑制剤および治療用高分子を投与するための方法および関連する組成物の開示。【解決手段】（ｉ）免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体、および、（ｉｉ）治療用高分子、を対象に投与することによって、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合を増大させることを含む方法。ここで、治療用高分子は、免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体と投与前に同時処方されない。あるいは、免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体および治療用高分子は、対象に併用投与される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体、および、
（ｉｉ）治療用高分子
を対象に投与することによって、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合を増大させることを含む方法であって、ここで治療用高分子が、免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体と投与前に同時処方されない、前記方法。
【請求項２】
免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体および治療用高分子が、対象に併用投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
投与前に治療用高分子が合成ナノ担体と同時処方されないとき、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大された数または割合をもたらすことが以前に実証されたプロトコルに投与が従う、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
方法が、プロトコルを決定することをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
方法が、投与の前および／または後の対象におけるＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合を査定することをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大された数または割合が、投与前のＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍または６倍の増加である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
投与が、静脈内、腹腔内または皮下投与によるものである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
方法が、投与後のＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合の増加を記録することをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
免疫抑制剤が、スタチン、ｍＴＯＲインヒビター、ＴＧＦ−βシグナル剤、コルチコステロイド、ミトコンドリア機能のインヒビター、Ｐ３８インヒビター、ＮＦ−κβインヒビター、アデノシン受容体アゴニスト、プロスタグランジンＥ２アゴニスト、ホスホジエステラーゼ４インヒビター、ＨＤＡＣインヒビターまたはプロテアソームインヒビターを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ｍＴＯＲインヒビターが、ラパマイシンである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
治療用高分子が、治療用タンパク質または治療用ポリヌクレオチドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
治療用タンパク質が、タンパク質補強治療のタンパク質補充用である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
治療用タンパク質が、点滴可能または注射可能な治療用のタンパク質、酵素、酵素補助因子、ホルモン、血液または血液凝固因子、サイトカイン、インターフェロン、成長因子、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、または、ポンペ病に関連するタンパク質を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
点滴可能または注射可能な治療用のタンパク質が、トシリズマブ、アルファ−１アンチトリプシン、ヘマタイド、アルブインターフェロンアルファ−２ｂ、ルシン、テサモレリン、オクレリズマブ、ベリムマブ、ペグロチカーゼ、タリグルセラーゼアルファ、アガルシダーゼアルファまたはベラグルセラーゼアルファを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
酵素が、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼまたはリガーゼを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
酵素が、リソソーム蓄積障害のための酵素補充治療用の酵素を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
リソソーム蓄積障害のための補充治療用の酵素が、イミグルセラーゼ、ａ−ガラクトシダーゼＡ（ａ−ｇａｌＡ）、アガルシダーゼベータ、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）、アルグルコシダーゼアルファ、LUMIZYME、MYOZYME、アリールスルファターゼＢ、ラロニダーゼ、ALDURAZYME、イデュルスルファーゼ、ELAPRASE、アリールスルファターゼＢ、ペグロチカーゼ、ペグシチカーゼまたはNAGLAZYMEを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
サイトカインが、リンホカイン、インターロイキン、ケモカイン、タイプ１サイトカインまたはタイプ２サイトカインを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
血液または血液凝固因子が、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、組織因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第Ｘａ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン、フィブロネクチン、アンチトロンビンＩＩＩ、ヘパリン補助因子ＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関係プロテアーゼインヒビター（ＺＰＩ）、プラスミノーゲン、アルファ２−アンチプラスミン、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ２）、がんプロコアグラントまたはエポエチンアルファを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
合成ナノ担体に付着された免疫抑制剤の積載量が、合成ナノ担体にわたる平均で、０．１％と５０％との間である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
積載量が、０．１％と２０％との間である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
合成ナノ担体が、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性物質系エマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤ、ウイルス様粒子、または、ペプチドまたはタンパク質粒子を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
合成ナノ担体が、脂質ナノ粒子を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
合成ナノ担体が、リポソームを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
合成ナノ担体が、金属ナノ粒子を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
金属ナノ粒子が、金ナノ粒子を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
合成ナノ担体が、ポリマーナノ粒子を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
ポリマーナノ粒子が、非メトキシ末端のプルロニックポリマーであるポリマーを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、ポリエーテルに付着されたポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
ポリエステルが、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、および、ポリエーテルに付着されたポリエステルを含む、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
ポリエーテルが、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
合成ナノ担体の動的光散乱を使用して得られる粒子サイズ分布の平均値が、１００ｎｍよりも大きな径である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
径が、１５０ｎｍより大きい、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
径が、２００ｎｍより大きい、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
径が、２５０ｎｍより大きい、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
径が、３００ｎｍより大きい、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
合成ナノ担体のアスペクト比が、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７または１：１０よりも大きい、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、米国特許法第１１９条の下で、２０１３年５月３日出願の米国仮出願第６１／８１９５１７号、２０１３年９月２４日出願の同第６１／８８１８５１号、２０１３年９月２４日出願の同第６１／８８１９１３号、２０１３年９月２４日出願の同第６１／８８１９２１号、２０１３年１１月２１日出願の同第６１／９０７１７７号、２０１４年３月５日出願の同第６１／９４８３１３号、および２０１４年３月５日出願の同第６１／９４８３８４号の利益を主張するものであり、これらの各々の内容全体を参照によって本明細書に組み込む。
【０００２】
本発明の分野
本発明は、治療用高分子に特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を増強するための免疫抑制剤および治療用高分子を投与することに関する。本明細書で提供される方法および組成物は、寛容原性免疫応答の発達、特にＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生または発達への移行を可能とする。したがって、提供される方法および組成物は、治療用高分子の投与が望ましくない免疫応答をもたらし得る対象における寛容原性免疫応答を生成するために使用することができる。方法および組成物は、好ましくは、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増強から恩恵を受けるであろう対象のために使用される。
【背景技術】
【０００３】
本発明の背景
タンパク質または酵素補充治療などの治療処置は多くの場合、具体的な治療剤に対して望ましくない免疫応答をもたらす。かかる望ましくない免疫応答は、免疫抑制薬の使用を通じて低減され得る。しかし従来の免疫抑制薬は広域作用性である。加えて、免疫抑制を維持するために、免疫抑制薬物療法は、一般に、生涯の命題である。残念ながら、広域作用性の免疫抑制剤の使用は、腫瘍、感染、腎毒性および代謝障害などの重篤な副作用のリスクと関連する。したがって、新たな寛容原性療法が有益であろう。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の概要
一側面において、免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体および治療用高分子を対象に投与することにより、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞（治療用高分子に特異的なものなど）の数または割合（または比）を高めること、ここで治療用高分子が免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体と投与前に同時処方(co-formulated)されていない、を含む方法提供される。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤および治療用高分子に付着された合成ナノ担体は、対象に併用投与される。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、治療用高分子が、投与前に、合成ナノ担体と同時処方されないとき、投与は、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大した数または割合（または比）をもたらすことが以前に実証されたプロトコルに従う。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、方法はさらに、プロトコルを決定することを含む。
【０００５】
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、方法は、対象におけるＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）を投与の前および／または後に査定することをさらに含む。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大した数または割合（または比）は、投与前のＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合に比べて、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍または６倍の増加である。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、投与は、静脈内、腹腔内または皮下投与によるものである。
【０００６】
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、方法は、投与後のＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）の増大を記録することをさらに含む。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は、スタチン、ｍＴＯＲインヒビター、ＴＧＦ−βシグナル剤、コルチコステロイド、ミトコンドリア機能のインヒビター、Ｐ３８インヒビター、ＮＦ−κβインヒビター、アデノシン受容体アゴニスト、プロスタグランジンＥ２アゴニスト、ホスホジエステラーゼ４インヒビター、ＨＤＡＣインヒビターまたはプロテアソームインヒビターを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、ｍＴＯＲインヒビターはラパマイシンである。
【０００７】
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、治療用高分子は、治療用タンパク質または治療用ポリヌクレオチドである。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、治療用タンパク質は、タンパク質補強治療のタンパク質補充用である。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、治療用タンパク質は、点滴可能または注射可能な治療用タンパク質、酵素、酵素補助因子、ホルモン、血液または血液凝固因子、サイトカイン、インターフェロン、成長因子、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、または、ポンペ病に関連するタンパク質を含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、点滴可能または注射可能な治療用タンパク質は、トシリズマブ、アルファ−１アンチトリプシン、ヘマタイド、アルブインターフェロンアルファ−２ｂ、ルシン(Rhucin)、テサモレリン、オクレリズマブ、ベリムマブ、ペグロチカーゼ、タリグルセラーゼアルファ、アガルシダーゼアルファ、またはベラグルセラーゼアルファを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、酵素は、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼまたはリガーゼを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、酵素は、リソソーム蓄積障害のための酵素補充治療用の酵素を含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、リソソーム蓄積障害のための補充治療用の酵素は、イミグルセラーゼ、ａ−ガラクトシダーゼＡ（ａ−ｇａｌＡ）、アガルシダーゼベータ、酸性α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、アルグルコシダーゼアルファ、LUMIZYME、MYOZYME、アリールスルファターゼＢ、ラロニダーゼ、ALDURAZYME、イデュルスルファーゼ、ELAPRASE、アリールスルファターゼＢ、ペグロチカーゼ、ペグシチカーゼまたはNAGLAZYMEを含む。
【０００８】
本明細書で提供される方法のいずれか１の別の態様において、サイトカインは、リンホカイン、インターロイキン、ケモカイン、タイプ１サイトカインまたはタイプ２サイトカインを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、血液または血液凝固因子は、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、組織因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第Ｘａ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン、フィブロネクチン、アンチトロンビンＩＩＩ、ヘパリン補助因子ＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関係プロテアーゼインヒビター（ＺＰＩ）、プラスミノーゲン、アルファ２−アンチプラスミン、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ２）、がんプロコアグラントまたはエポエチンアルファを含む。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体に付着される免疫抑制剤の積載量(load)は、合成ナノ担体にわたる平均で、０．１％と５０％との間である。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、積載量は０．１％と２０％との間である。
【０００９】
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体は、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性物質系エマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤ、ウイルス様粒子、または、ペプチドまたはタンパク質粒子を含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体は、脂質ナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体はリポソームを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体は金属ナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、金属ナノ粒子は金ナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体はポリマーナノ粒子を含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、ポリマーナノ粒子は、非メトキシ末端のプルロニックポリマーであるポリマーを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、ポリマーナノ粒子は、ポリエステル、ポリエーテルに付着されたポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、ポリエステルは、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、ポリマーナノ粒子は、ポリエステル、および、ポリエーテルに付着されたポリエステルを含む。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、ポリエーテルは、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む。
【００１０】
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体の動的光散乱を使用して得られる粒子サイズ分布の平均値は、１００ｎｍよりも大きな径である。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、径は１５０ｎｍよりも大きい。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、径は２００ｎｍよりも大きい。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、径は２５０ｎｍよりも大きい。本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、径は３００ｎｍよりも大きい。
本明細書で提供される方法のいずれか１つの別の態様において、合成ナノ担体のアスペクト比は１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７、または１：１０よりも大きい。
【００１１】
別の側面において、本明細書で提供される組成物またはキットのいずれか１つの製造方法が提供される。一態様において、製造方法は、治療用高分子の用量または剤形を生成すること、および、免疫抑制剤の用量または剤形を生成することを含む。提供される製造方法のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤の用量または剤形を生成するステップは、免疫抑制剤を合成ナノ担体に付着させることを含む。提供される製造方法のいずれか１つの別の態様において、方法はさらに、免疫抑制剤の用量または剤形と治療用高分子の用量または剤形とを、キットにおいて組み合わせることを含む。本明細書で提供される製造方法のいずれか１つの別の態様において、治療用高分子は、免疫抑制剤と同時処方されない。
【００１２】
別の側面において、対象における、治療用高分子特異的なＣＤ４＋制御性Ｔ細胞などのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）を増大させるための医薬の製造のための本明細書で提供される組成物またはキットのいずれか１つの使用が提供される。一態様において、組成物またはキットは、同時処方されない免疫抑制剤および治療用高分子を含む。本明細書で提供される使用のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は合成ナノ担体に付着されている。
別の側面において、本明細書で提供される組成物のいずれか１つは、本明細書で提供される方法のいずれか１つにおける使用のために提供される。一態様において、該方法は、免疫抑制剤および治療用高分子を対象に投与すること、ここで治療用高分子は、投与前に免疫抑制剤と同時処方されない、を含む。別の態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体に付着されている。なお別の態様において、投与は併用投与である。
別の側面において、治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞などのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）を増強する代わりに、医薬を製造する方法が提供される。一態様において、医薬は、同時処方されない免疫抑制剤および治療用高分子を含む。本明細書で提供される製造方法のいずれか１つの別の態様において、免疫抑制剤は合成ナノ担体に付着されている。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
図の簡単な説明
【図１】図１は、示された処置の投与後のフローサイトメトリーによって査定したＣＤ４＋およびＣＤ２５＋Ｆｏｘ３ｐ＋（制御性Ｔ細胞）の割合を示す。
【図２】図２は、示された処置の投与後のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に対する抗体形成の低減を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の詳細な説明
本発明を詳細に説明する前に、発明は、具体的に例示された材料またはプロセスパラメータが当然変化し得るので、かかるものに限定されないということを理解すべきである。本明細書で使用する用語法は本発明の具体的な態様を記載するためのものにすぎず、本発明を記載するための代替的用語法の使用を限定することを意図しないということもまた理解されるべきである。
上記または下記のいずれにおいても本明細書で引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、全ての目的において、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００１５】
本明細書および添付のクレームで使用する場合、その内容が別途明確に指定していない限り、単数形の「a」、「an」および「the」は複数の言及物を包含する。例えば、「ポリマー(a polymer)」への言及は、２つまたは３つ以上のかかる分子の混合物または単一のポリマー種の異なる分子量の混合物を包含し、「合成ナノ担体」への言及は２つまたは３つ以上のかかる合成ナノ担体の混合物または複数のかかる合成ナノ担体を包含し、「ＲＮＡ分子」への言及は、２つまたは３つ以上のかかるＲＮＡ分子の混合物または複数のかかるＲＮＡ分子を包含し、「免疫抑制剤」への言及は、２つまたは３つ以上のかかる材料または複数のかかる免疫抑制剤分子を包含する、等。
本明細書で使用するとき、用語「含む(comprise)」、または「comprises」もしくは「comprising」などの変形形態は、いずれか列挙された完全体(integer)（例えば特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）または完全体の群（例えば複数の特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）の包含を表示すると読むべきであって、いずれか他の完全体または完全体の群の排除を表示すると読むべきではない。ゆえに、本明細書で使用するとき、用語「含む(comprising)」は包括的であり、追加の、列挙されない完全体または方法／プロセスステップを排除しない。
【００１６】
本明細書で提供される組成物および方法のいずれか１つのある態様において、「含む(comprising)」は「本質的にからなる(consisting essentially of)」または「からなる(consisting of)」で置換されてもよい。語句「本質的にからなる」は、明記された完全体（単数または複数）またはステップを、クレームされる発明の性質または機能に重大な影響を及ぼさないものと共に要するために、本明細書で使用される。本明細書で使用するとき、用語「からなる(consisting)」は、列挙された完全体（例えば特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）または完全体の群（例えば複数の特長、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップまたは限定）のみの存在を表示するために使用される。
【００１７】
Ａ．序文
前述したように、現在の従来の免疫抑制剤は広域作用性であり、一般に、免疫系の全体的な全身の下方制御をもたらす。本明細書で提供される方法および組成物は、より多くの標的化された免疫効果を可能にし、特に、驚くべきことに、治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞などのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生の増大を可能にする。治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大した数または割合（または比）は、記載された方法を実行することによって、または本明細書で提供される組成物を投与することによって達成することができることが見出された。したがって、かかる方法および組成物は、治療用高分子の投与に関連する望ましくない免疫応答の減少をもたらすことができ、および／または治療用高分子を用いた処置を必要とする対象のために有益であり得る。
本発明者らは、意外かつ驚くべきことに、上記の問題および制限は、本明細書に開示された発明を実施することによって克服できることを発見した。本発明は、以下の例に示される。
ここで、以下に本発明をより詳細に説明する。
【００１８】
Ｂ．定義
「投与すること」または「投与」または「投与する」は、薬理学的に有用なやり方で対象へ材料を提供することを意味する。該用語は、いくつかの態様において投与させること(Causing to be administered)を包含することが意図される。「投与させること」とは、他の当事者に材料を投与するよう直接的または間接的に、させること、促すこと、奨励すること、援助すること、誘導すること、または、指示することを意味する。
「有効量」は、対象への投与のための組成物または剤形の文脈において、対象における１つまたは２つ以上の望ましい免疫応答、例えば、治療用高分子特異的なものなどのＣＤ４＋制御性T細胞の産生または発達の増強などの寛容原性免疫応答の発生を生じさせる組成物または剤形の量をいう。したがって、いくつかの態様において、有効量は、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）の増加などの１つまたは２つ以上の所望の免疫応答を生成する、本明細書で提供される組成物の量である。有効量は、in vitroまたはin vivoの目的とすることができる。in vivoの目的のために、量は、臨床医が治療用高分子の投与の結果として望ましくない免疫応答が発生し得る対象のための臨床的有用性を有し得ると考えるだろうものになり得る。
【００１９】
有効量は、望ましくない免疫応答のレベルを低減させることに関与し得るが、いくつかの態様において、それは望ましくない免疫応答を完全に防止することに関与する。有効量はまた、望ましくない免疫応答が起こることを遅延させることにも関与し得る。有効量はまた、治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞などのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生または発達の増加をもたらす本明細書で提供される組成物の量であり得る。具体的には、産生または発達の増加は、かかる細胞の数または割合（または比）の増加であり得る。有効量は、所望の治療エンドポイントまたは所望の治療結果をもたらす量でもあり得る。有効量は好ましくは、対象において、治療用高分子などの抗原に対する寛容原性免疫応答をもたらす。上述のもののいずれかの達成は、ルーチンな方法によってモニタリングされ得る。
【００２０】
提供される組成物および方法のいずれか１つのいくつかの態様において、有効量は、望ましい免疫応答が少なくとも１週間、少なくとも２週間、または少なくとも１か月間、対象において存続する量である。提供される組成物および方法のいずれか１つの他の態様において、有効量は、測定可能な望ましい免疫応答、例えば（例えば特定の抗原に対する）免疫応答の測定可能な減少、を少なくとも１週間、少なくとも２週間、または少なくとも１か月間、生じさせる量である。
有効量は当然、医療従事者の知識と経験の範囲内で、処置されている具体的な対象；状態、疾患または障害の重篤性；年齢、体調、サイズおよび体重を包含する個々の患者パラメータ；処置の持続期間；（存在する場合）併用治療の特質；投与の具体的な経路および同種の因子に依存するであろう。これらの因子は当業者には周知であり、ルーチンな実験法程度のことで対処し得る。一般に好ましくは、最大用量、すなわち、健全な医療的判断に従う最も高い安全な用量を使用することである。しかしながら、患者はより少ない用量、または耐容用量を、医療的理由、心理学的理由、または事実上あらゆる他の理由で主張し得るということは、当業者には理解されよう。
【００２１】
一般に、本発明の組成物における免疫抑制剤および／または治療用高分子の用量は、免疫抑制剤および／または治療用高分子の量をいう。代替的に、用量は、免疫抑制剤および／または抗原の望ましい量を提供する合成ナノ担体の数に基づいて投与され得る。
「抗原特異的」は、抗原またはその一部分の存在によりもたらされるか、または、抗原を特異的に認識または結合する分子を発生させる、いずれかの免疫応答をいう。例えば、免疫応答が抗原特異的抗体産生である場合、抗原に特異的に結合する抗体が産生される。別の例として、免疫応答は、ＡＰＣによって提示されたときに、抗原を提示することが可能な治療用高分子の抗原提示細胞（ＡＰＣ）に結合するＣＤ４＋制御性Ｔ細胞であってもよい、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生である。
【００２２】
「免疫応答を査定すること」は、in vitroまたはin vivoでの免疫応答のレベル、存非、低減、増加等いずれかの測定または決定をいう。かかる測定または決定は、対象から得た１つまたは２つ以上のサンプルで行われ得る。かかる査定は、本明細書で提供されるか、またはそうでなければ、当該分野において知られている方法のいずれかで行われ得る。査定は、対象からのサンプル中などの治療用高分子に特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合を査定してもよい。
「付着する」または「付着されている」または「連結する」または「連結されている」（等）は、１つの実体（例えば部位）をもう１つと化学的に関連させることを意味する。いくつかの態様において、付着は共有結合性であり、それは付着が２つの実体間の共有結合の存在の文脈下で起こることを意味する。非共有結合性の態様において、非共有結合性付着は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせを包含するが、それらに限定されない非共有結合性相互作用により媒介される。ある態様において、カプセル化が付着の形態である。ある態様において、治療用高分子および免疫抑制剤は互いに付着されず、それは治療用高分子と免疫抑制剤とが一方をもう一方と化学的に関連させるように具体的に意図されたプロセスに供されないことを意味する。ある態様において、治療用高分子および／または免疫抑制剤は合成ナノ担体に付着されず、それは治療用高分子（および／または免疫抑制剤）と合成ナノ担体とが一方をもう一方と化学的に関連させるように具体的に意図されたプロセスに供されないことを意味する。
【００２３】
「平均」は、本明細書で使用するとき、特に注記しない限り算術平均値をいう。
「同時処方」は、示されている材料が、材料が密接に物理的に接触しているか、または共有結合または非共有結合で化学的に付着している、充填し終えた医薬剤形を製造するように処理されることを意味する。本明細書では、「同時処方しない」は、示された材料（例えば、治療用高分子および免疫抑制剤（または免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体））が、密接に物理的に接触しておらず、化学的に付着されていないことを意味する。いくつかの態様において、本明細書に記載のように治療用高分子および免疫抑制剤（または免疫抑制剤に付着された合成ナノ担体）は、対象への投与前に同時処方されない。
「組み合わせ」は、２つまたは３つ以上の材料および／または剤（本明細書において構成成分とも言う）に適用するとき、その２つまたは３つ以上の材料／剤が関連されている材料を定義することが意図される。構成成分は、例えば第１構成成分、第２構成成分、第３構成成分等、別個に識別され得る。本文脈における用語「組み合わされた」および「組み合わせること」はこれに従い解釈されるものとする。
【００２４】
組み合わせにおける２つまたは３つ以上の材料／剤の関連は、物理的であっても、非物理的であってもよい。物理的に関連された材料／剤の例としては、以下が挙げられる：
・２つまたは３つ以上の材料／剤を混和物中に（例えば同じ単位用量内に）含む組成物（例えば単位製剤）；
・２つまたは３つ以上の材料／剤が化学的／物理化学的に結び付けられた（例えば架橋、分子凝集または共通のビヒクル部位への結合）、材料を含む組成物；
・２つまたは３つ以上の材料／剤が化学的／物理化学的に共パッケージ化された(co-packaged)（例えば、脂質ベシクル、粒子（例えばマイクロまたはナノ粒子）または乳化液滴の上または内に配置された）、材料を含む組成物；
・２つまたは３つ以上の材料／剤が共パッケージ化また一括提供(co-presented)された（例えば、一連の単位用量の一部として）、医薬キット、医薬パックまたは患者用パック。
【００２５】
非物理的に関連され組み合わされた材料／剤の例としては、以下が挙げられる：
・２つまたは３つ以上の材料／剤の少なくとも１つを、その２つまたは３つ以上の材料／剤の物理的関連を形成するための、その少なくとも１つの化合物／剤の即席の関連のための使用説明書と一緒に含む、材料（例えば単位製剤）；
・２つまたは３つ以上の材料／剤の少なくとも１つを、その２つまたは３つ以上の材料／剤による組み合わせ治療のための使用説明書と一緒に含む、材料（例えば単位製剤）；
・２つまたは３つ以上の材料／剤の少なくとも１つを、その２つまたは３つ以上の材料／剤の他のもの（単数または複数）が投与された（または投与されている）患者集団に投与するための使用説明書と一緒に含む、材料；
・２つまたは３つ以上の材料／剤の少なくとも１つを、その２つまたは３つ以上の材料／剤の他のもの（単数または複数）と組み合わせて使用するように具体的に適合された量または形態で含む、材料。
【００２６】
本明細書で使用するとき、用語「組み合わせ治療」は、２つまたは３つ以上の材料／剤の組み合わせ（上記で定義）の使用を含む治療を定義することが意図される。ゆえに、本出願における「組み合わせ治療」、「組み合わせ」および材料／剤の「組み合わせた」使用への言及は、同じ全体的な処置レジメンの一部として投与される材料／剤をいう場合がある。したがって、２つまたは３つ以上の材料／剤の各々の薬量学は異なる場合があり、各々は同時に投与されてもよいし、異なる時刻に投与されてもよい。それゆえ、組み合わせの材料／剤は、逐次に（例えば、前または後に）または同時に、同じ医薬製剤において（即ち一緒に）または異なる医薬製剤において（すなわち別個に）のいずれかで、投与されてよいことが分かるであろう。同じ製剤において同時にとは、統一化製剤としてということであり、一方、異なる医薬製剤において同時には非統一化ということである。組み合わせ治療における２つまたは３つ以上の材料／剤の各々の薬量学は、投与経路に関しても異なっていてよい。
【００２７】
「併用（して）」は、２つまたは３つ以上の材料／剤を、時間的に相関された、好ましくは免疫応答におけるモジュレーションを提供するように時間的に充分に相関された、さらにより好ましくはその２つまたは３つ以上の材料／剤が組み合わせて投与される、やり方で、対象に投与することを意味する。ある態様において、併用投与は、明記された期間内、好ましくは１か月以内、より好ましくは１週間以内、なおより好ましくは１日以内、さらにより好ましくは１時間以内の、２つまたは３つ以上の材料／剤の投与を網羅し得る。ある態様において、材料／剤は繰り返し併用投与されてよく、すなわち、例において提供される併用投与などの、１回よりも多い機会における併用投与であってよい。
【００２８】
「決定すること」または「決定する」は事実関係を確かめることを意味する。決定することは、実験を行うことまたは予測を立てることを包含するがそれらに限定されない、数々の方式で遂行され得る。例として、免疫抑制剤または治療用高分子の用量は、試験用量で開始し、投与のための用量を決定するための公知のスケーリング技術（アロメトリックまたはアイソメトリックスケーリングなど）を使用することにより決定され得る。かかるものを使用して本明細書に提供されるプロトコルを決定もまたし得る。別の態様において、用量は対象において種々の用量を試験することによって、すなわち経験およびガイドデータに基づく直接実験を通して、決定されてもよい。ある態様において、「決定すること」または「決定する」は、「決定させること」を含む。「決定させること」は、実体に事実関係を確かめるように、させること、促すこと、奨励すること、援助すること、誘導することまたは指示すること、または、その実体と協力して行動することを意味し、直接もしくは間接的に、または明示的にもしくは黙示的に、を包含する。
【００２９】
「剤形」は、対象への投与に好適な媒体、担体、ビヒクルまたはデバイス中の薬理学的におよび／または免疫学的に活性な材料を意味する。本明細書で提供される組成物または用量のいずれか１つは、剤形中にあってよい。
「用量」は、所与の時間にわたり対象に投与するための薬理学的および／または免疫学的に活性な材料の具体的な分量(quantity)をいう。
「カプセル化する」は、合成ナノ担体内の物質の少なくとも一部分を封入することを意味する。いくつかの態様において、物質は合成ナノ担体内に完全に封入される。他の態様において、カプセル化される物質の大部分または全てが、合成ナノ担体の外部の局所環境に曝露されない。他の形態において、局所環境に曝露されるのが５０％、４０％、３０％、２０％、１０％または５％（重量／重量）を超えない。カプセル化は、吸収（吸収は、物質の大部分または全てを合成ナノ担体の表面上に置き、その物質を合成ナノ担体の外部の局所環境に曝した状態にする）とは区別される。
【００３０】
「ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合を強化すること」は、対象（単数）または対象（複数）からサンプルを採取し、次いで適切な試験方法を使用してサンプルを分析することによって決定されるとおり、対象（単数）または対象（複数）における前記細胞の（Ｔ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞の総数のような細胞の種類の総数などの）数または割合（または比）を増大させることをいう。いくつかの態様において、本明細書で提供される方法を実施すること、または本明細書に記載の組成物の投与に従うことにより、治療用高分子に特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の割合は、少なくとも２、３、４、５または６倍以上増加する。
【００３１】
ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘ３ｐ＋細胞として特徴付けることができる。ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合は、本明細書に記載のまたは当該分野において知られているいずれかの方法によって査定することができる。例えば、対象からの末梢血のサンプルを得、遺伝子発現、タンパク質の存在、および／または、ＣＤ２５、Ｆｏｘｐ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、ＣＣＲ５、ＣＴＬＡ４、ＣＤ１３４、ＣＤ３９および／またはＧＩＴＲを制限なしで含む、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞と関連する１つまたは２つ以上の分子の局在を評価することによって、対象の末梢血におけるＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を定量することができる。前記の分子のいずれかは、定量的ＲＴ-ＰＣＲ、ノーザンブロッティング、マイクロアレイ、蛍光in situハイブリダイゼーション、またはＲＮＡｓｅｑなどの転写分析によって評価することができる。タンパク質は、ウェスタンブロッティング、免疫蛍光顕微鏡、フローサイトメトリーまたはＥＬＩＳＡによって検出することができる。ＣＤ２５、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、ＣＣＲ５、ＣＴＬＡ４、ＣＤ１３４、ＣＤ３９および／またはＧＩＴＲなどの細胞表面分子は、フローサイトメトリー、細胞表面染色、免疫蛍光顕微鏡、ＥＬＩＳＡ法などによって評価することができる。
【００３２】
いくつかの態様において、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞は、アネルギー性表現型（例えば、ＴＣＲ刺激後の増殖の欠如）に基づいて検出される。いくつかの態様において、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞は、活性化誘導細胞死に対する抵抗性またはサイトカイン欠乏により誘導される死に対する感受性に基づいて同定される。いくつかの態様において、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞は、Ｆｏｘｐ３をコードする遺伝子のメチル化状態に基づいて同定することができる。例えば、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞において、Ｆｏｘｐ３遺伝子の一部は脱メチル化されることが見出されており、これは、ＰＣＲまたは他のＤＮＡ系の方法によるＤＮＡメチル化分析によって検出することができる。ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞は、ＩＬ−９、ＩＬ−１０またはＴＧＦ−βを含む免疫抑制サイトカインの産生に基づいてさらに同定または定量することができる。当該分野において知られているいずれかの方法、例えば、治療用高分子に由来する抗原を負荷した抗原提示細胞を用いてex vivoで細胞を刺激し、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の活性化を査定すること、または、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞のＴ細胞受容体を評価することによって、治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を同定し、定量することができる。治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）は、治療用高分子またはその抗原性部分の投与後に、活性化ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の１つまたは２つ以上の機能または活性を評価することによって間接的に定量することができる。
【００３３】
「発生させること」は、免疫応答などの作用（例えば寛容原性免疫応答）を、それ自体で直接的または間接的に起こさせることを意味する。
「対象を識別すること」は、対象を本明細書で提供される方法、組成物またはキットから効果が得られ得る対象として臨床医に認識せしめるいずれかの行動または行動のセットである。好ましくは、識別された対象は、治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生または発達など、増大されたＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生または発達を必要とする対象などの、本明細書で提供される寛容原性免疫応答を必要とするものである。行動または行動のセットは、それ自体の直接的なものであっても、または間接的なものであってもよい。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法はさらに、本明細書で提供される方法、組成物またはキットを必要としている対象を識別することを含む。
【００３４】
「免疫抑制剤」は、ＡＰＣに免疫抑制効果（例えば寛容原性効果）を持たせるか、または、Ｔ細胞またはＢ細胞が抑制されるようにする化合物を意味する。免疫抑制効果は一般に、望ましくない免疫応答を低減、阻害または防止するか、または、制御性免疫応答（例えばＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生または発達）などの望ましい免疫応答を促進する、サイトカインまたは他の因子のＡＰＣによる産生または発現をいう。ＡＰＣが、このＡＰＣによって提示される抗原を認識する免疫細胞に対して（免疫抑制効果の下）免疫抑制機能を獲得するとき、免疫抑制効果は、提示された抗原に特異的であると言われる。いかなる具体的な理論にも拘泥しないが、免疫抑制効果は、好ましくは抗原の存在下、免疫抑制剤がＡＰＣに送達されることの結果であると思われる。一態様において、免疫抑制剤は、１つまたは２つ以上の免疫エフェクター細胞においてＡＰＣに制御性表現型を促進させるものである。例えば制御性表現型は、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の産生、誘導、刺激または動員の阻害、抗原特異的抗体の産生の阻害、Ｔｒｅｇ細胞（例えばＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の産生、誘導、刺激または動員、等により特徴付けられ得る。これはＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の制御性表現型への転換の結果であり得る。これはまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞、マクロファージおよびｉＮＫＴ細胞などの他の免疫細胞におけるＦｏｘＰ３の誘導の結果でもあり得る。一態様において、免疫抑制剤は、抗原を処理した後のＡＰＣの応答に影響を与えるものである。別の態様において、免疫抑制剤は、抗原の処理に干渉するものではない。さらなる態様において、免疫抑制剤はアポトーシスシグナル分子ではない。別の態様において、免疫抑制剤はリン脂質ではない。
【００３５】
免疫抑制剤としては、スタチン；ラパマイシンまたはラパマイシン類縁体などのｍＴＯＲインヒビター；ＴＧＦ−βシグナル剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；トリコスタチンＡなどのヒストンデアセチラーゼインヒビター；コルチコステロイド；ロテノンなどのミトコンドリア機能のインヒビター；Ｐ３８インヒビター；６Ｂｉｏ、デキサメタゾン、ＴＣＰＡ−１、ＩＫＫ  ＶＩＩなどのＮＦ−κβインヒビター；アデノシン受容体アゴニスト；ミソプロストールなどのプロスタグランジンＥ２アゴニスト（ＰＧＥ２）；ロリプラムなどのホスホジエステラーゼ４インヒビター（ＰＤＥ４）などのホスホジエステラーゼインヒビター；プロテアソームインヒビター；キナーゼインヒビター；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカインインヒビター；サイトカイン受容体インヒビター；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；カルシニューリンインヒビター；ホスファターゼインヒビター；ＴＧＸ−２２１などのＰＩ３ＫＢインヒビター；３−メチルアデニンなどのオートファジーインヒビター；アリールハイドロカーボン受容体インヒビター；プロテアソームインヒビターＩ（ＰＳＩ）；およびＰ２Ｘ受容体ブロッカーなどの酸化ＡＴＰが挙げられるが、これらに限定されない。免疫抑制剤としてはまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、シクロスポリンＡなどのシクロスポリン、アリールハイドロカーボン受容体インヒビター、レスベラトロール、アザチオプリン（Ａｚａ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、ＦＫ５０６、サングリフェリンＡ、サルメテロール、マイコフェノレートモフェチル（ＭＭＦ）、アスピリンおよび他のＣＯＸインヒビター、ニフルミン酸、エストリオール、および、トリプトリドも挙げられる。ある態様において、免疫抑制剤は本明細書で提供される薬剤のいずれかを含んでいてもよい。
【００３６】
免疫抑制剤は、ＡＰＣに免疫抑制効果を直接提供する化合物であっても、免疫抑制効果を間接的に（すなわち投与後に何らかの方式で処理された後に）提供する化合物であってもよい。したがって、免疫抑制剤は、本明細書で提供される化合物のいずれかのプロドラッグ形態を包含する。
本明細書で提供される方法、組成物またはキットのいずれか１つのある態様において、本明細書で提供される免疫抑制剤は、合成ナノ担体に付着されている。好ましい態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体の構造を構成する材料に追加された要素である。例えば、合成ナノ担体が１つまたは２つ以上のポリマーで構成されている一態様において、免疫抑制剤は、１つまたは２つ以上のポリマーに追加されて付着された化合物である。別の例として、合成ナノ担体が１つまたは２つ以上の脂質で構成されている一態様において、免疫抑制剤はやはり、１つまたは２つ以上の脂質に追加されて付着された化合物である。合成ナノ担体の材料がまた、免疫抑制効果をももたらす場合などのある態様において、免疫抑制剤は、免疫抑制効果をもたらす合成ナノ担体の材料に追加されて存在する要素である。
【００３７】
他の例示的な免疫抑制剤としては、低分子薬物、天然製品、抗体（例えばＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ４に対する抗体）、生物製剤系薬物、炭水化物系薬物、ナノ粒子、リポソーム、ＲＮＡｉ、アンチセンス核酸、アプタマー、メトトレキサート、ＮＳＡＩＤ；フィンゴリモド；ナタリズマブ；アレムツズマブ；抗ＣＤ３；タクロリムス（ＦＫ５０６）；等が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる免疫抑制剤は当業者に知られており、本発明はこの点において限定されない。
本明細書で提供される方法、組成物またはキットのいずれか１つのある態様において、免疫抑制剤はナノ結晶性形態などの形態にあり、それにより免疫抑制剤自体の形態は粒子または粒子様である。ある態様において、こうした形態はウイルスまたは他の外来病原体を模擬している。多くの薬物はナノ化されており、こうした薬物の形態を生じさせるための適切な方法は当業者に知られているであろう。ナノ結晶性ラパマイシンなどの薬物ナノ結晶は当業者に知られている（Katteboinaa, et al. 2009, International Journal of PharmTech Resesarch; Vol. 1, No. 3; pp682-694）。本明細書で使用するとき、「薬物ナノ結晶」は、担体またはマトリックス材料を包含しない、薬物（例えば免疫抑制剤）の形態をいう。いくつかの態様において、薬物薬物ナノ結晶は、９０％、９５％、９８％または９９％、または、それ以上の薬物を含む。薬物ナノ結晶の生成方法としては、限定されないが、摩砕(milling)、高圧均質化、沈殿、噴霧乾燥、超臨界溶体急速膨張（RESS）、Nanoedge（登録商標）技術（Baxter Healthcare）およびNanocrystal Technology（商標）（Elan Corporation）が挙げられる。いくつかの態様において、薬物ナノ結晶の立体または静電安定性のために、界面活性物質または安定剤を使用してもよい。いくつかの態様において、免疫抑制剤のナノ結晶またはナノ結晶性形態は、免疫抑制剤、特に不溶性のまたは不安定な(labile)免疫抑制剤、の溶解性、安定性および／または生物学的利用能を増大させるために使用され得る。いくつかの態様において、治療用高分子のナノ結晶性形態の免疫抑制剤との併用投与は、治療用高分子に特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）の増大をもたらす。
【００３８】
合成ナノ担体に付着されるときの「積載量」は、合成ナノ担体全体における材料の総乾燥処方重量に基づく、合成ナノ担体に付着される免疫抑制剤および／または治療用高分子の量（重量／重量）である。一般に、かかる積載量は、合成ナノ担体の集団にわたる平均として算出される。一態様において、積載量は、合成ナノ担体にわたって平均して、０．１％と９９％との間である。別の態様において、積載量は、０．１％と５０％との間である。別の態様において、積載量は、０．１％と２０％との間である。さらなる態様において、積載量は０．１％と１０％との間である。なおさらなる態様において、積載量は１％と１０％との間である。なおさらなる態様において、積載量は７％と２０％との間である。さらに別の態様において、積載量は、合成ナノ担体の集団にわたって平均して、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％である。またさらなる態様において、積載量は、合成ナノ担体の集団にわたって平均して、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％または２０％である。上記の態様のいくつかの態様において、積載量は、合成ナノ担体の集団にわたって平均して、２５％を超えない。ある態様において、積載量は例に記載され得るとおりであるか、またはそうでなければ、当該分野において知られているように、算出される。
【００３９】
いくつかの態様において、免疫抑制剤の形態が、ナノ結晶性免疫抑制剤などの、それ自体粒子または粒子様であるとき、免疫抑制剤の積載量は粒子等における免疫抑制剤の量（重量／重量）である。かかる態様において、積載量は９７％、９８％、９９％またはそれ以上に届き得る。
「合成ナノ担体の最大寸法」は、合成ナノ担体のいずれかの軸に沿って測定されたナノ担体の最も長い寸法を意味する。「合成ナノ担体の最小寸法」は、合成ナノ担体のいずれかの軸に沿って測定された合成ナノ担体の最も小さい寸法を意味する。例えば、回転楕円状合成ナノ担体において、合成ナノ担体の最大および最小寸法は、実質的に同一であって、その径のサイズとなるであろう。同様に立方体様の合成ナノ担体において、合成ナノ担体の最小寸法は、その高さ、幅または長さのうち最小のものとなり、一方合成ナノ担体の最大寸法は、その高さ、幅または長さのうち最大のものとなろう。
【００４０】
一態様において、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍ以上である。一態様において、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、５μｍ以下である。好ましくは、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１１０ｎｍよりも大きく、より好ましくは１２０ｎｍよりも大きく、より好ましくは１３０ｎｍよりも大きく、より好ましくは１５０ｎｍよりもなお大きい。合成ナノ担体の最大寸法と最小寸法とのアスペクト比は、態様によって変化し得る。例えば、合成ナノ担体の最大寸法の最小寸法に対するアスペクト比は、１：１〜１，０００，０００：１、好ましくは１：１〜１００，０００：１、より好ましくは１：１〜１０，０００：１、より好ましくは１：１〜１０００：１、なおより好ましくは１：１〜１００：１、さらにより好ましくは１：１〜１０：１で変化し得る。好ましくは、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、３μｍ以下、より好ましくは２μｍ以下、より好ましくは１μｍ以下、より好ましくは８００ｎｍ以下、より好ましくは６００ｎｍ以下、なおより好ましくは５００ｎｍ以下である。
【００４１】
好ましい態様において、サンプル中の合成ナノ担体の総数に基づいてサンプル中の合成ナノ担体の少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍ以上、より好ましくは１２０ｎｍ以上、より好ましくは１３０ｎｍ以上、より好ましくは１４０ｎｍ以上、なおより好ましくは１５０ｎｍ以上である。合成ナノ担体寸法（例えば有効寸法）の測定は、いくつかの態様において、合成ナノ担体を液体（通常は水性）媒体中に懸濁し、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用する（例えばBrookhaven ZetaPALS機器を使用する）ことによって、得てもよい。例えば、合成ナノ担体の懸濁液は、水性緩衝剤から純水中に希釈されておよそ０．０１〜０．１ｍｇ／ｍＬの最終合成ナノ担体懸濁濃度を達成し得る。希釈懸濁液は、ＤＬＳ分析のために好適なキュベットの内部で直接調製されても、またはそれに移してもよい。次いでキュベットをＤＬＳ中に置き、制御された温度に平衡化し、次いで充分な時間スキャンして、媒体の粘度およびサンプルの屈折率に関する適切な入力に基づき、安定で再現可能な分布を獲得し得る。次いで有効径または分布の平均値を報告する。高アスペクト比または非回転楕円状の合成ナノ担体の有効サイズの決定は、より正確な測定を得るために電子顕微鏡などの拡大技術(augmentative techniques)を要する場合がある。合成ナノ担体の「寸法」または「サイズ」または「径」は、例えば動的光散乱を使用して得られる、粒子サイズ分布の平均値を意味する。
【００４２】
「非メトキシ末端のポリマー」は、メトキシ以外の部位で終端する少なくとも１つの末端部を有するポリマーを意味する。いくつかの態様において、ポリマーはメトキシ以外の部位で終端する少なくとも２つの末端部を有する。他の態様において、ポリマーはメトキシで終端する末端部を有さない。「非メトキシ末端のプルロニックポリマー」は、両末端部にメトキシを有する直鎖プルロニックポリマー以外のポリマーを意味する。本明細書で提供されるポリマーナノ粒子は、非メトキシ末端のポリマーまたは非メトキシ末端のプルロニックポリマーを含み得る。
「薬学的に許容し得る賦形剤」または「薬学的に許容し得る担体」は、組成物を処方するために薬理学的に活性な材料と一緒に使用される薬理学的に不活性な材料を意味する。薬学的に許容し得る賦形剤は、糖（例えばグルコース、ラクトース等）、抗菌剤などの保存剤、再構成助剤、着色剤、食塩水（リン酸緩衝化食塩水等）および緩衝剤を包含するが、これらに限定されない、当該分野において知られている種々の材料を含む。
【００４３】
「プロトコル」は、対象への投与のパターンを意味し、１つまたは２つ以上の物質の対象へのいずれかの投薬レジメンを包含する。プロトコルは要素（または変数）で構成され；ゆえにプロトコルは１つまたは２つ以上の要素を含む。プロトコルのかかる要素は、投薬量、投薬頻度、投与経路、投薬期間、投薬速度、投薬の間隔、上記のいずれかの組み合わせ、等を含み得る。いくつかの態様において、かかるプロトコルは、本発明の１つまたは２つ以上の組成物を１または２以上の試験対象に投与するために使用され得る。これらの試験対象における免疫応答は次いで、望ましい、または望ましいレベルの免疫応答または治療効果を発生させることにおいて、そのプロトコルが有効か否かを決定するために査定され得る。いずれかの治療効果および／または免疫効果はまた査定されてもよい。プロトコルの要素の１つまたは２つ以上が、非ヒト対象などの試験対象において予め実証された後、ヒトプロトコルに移行されてもよい。例えば、非ヒト対象において実証された投与量を、アロメトリックスケーリングまたは他のスケーリング方法などの確立された技術を使用してヒトプロトコルの要素としてスケーリングしてもよい。プロトコルが望ましい効果を有していたか否かは、本明細書で提供されるか、または、その他の当該分野において知られている方法のうちのいずれかを使用して決定され得る。例えば、サンプルは、具体的な免疫細胞、サイトカイン、抗体、等が低減されたか、発生されたか、活性化されたか否か、等を決定するために、本明細書で提供される組成物が具体的なプロトコルに従って投与された対象から得てもよい。
【００４４】
好ましい態様において、治療用高分子特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）が決定される。典型的なプロトコルは、投与前に治療用高分子が免疫抑制剤（合成ナノ担体に付着されていない免疫抑制剤）と同時処方されないとき、（１つまたは２つ以上の試験対象におけるプロトコルに従って投与前のＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合を比較して）ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大された数または割合（または比）をもたらすことが以前に実証されているものである。免疫細胞の存在および／または数を検出するための有用な方法としては、フローサイトメトリー法（例えばＦＡＣＳ）、ＥＬＩＳｐｏｔ、増殖応答、サイトカイン産生および免疫組織化学法が挙げられるが、これらに限定されない。免疫細胞マーカーの特異的染色のための抗体および他の結合剤は市販されている。かかるキットは典型的に、細胞の不均質な集団からの望ましい細胞集団のＦＡＣＳに基づく検出、分離および／または定量を可能にする、抗原のための染色試薬を包含する。ある態様において、本明細書で提供される数々の組成物が、プロトコルを含む要素の１つまたは２つ以上、または、全てまたは実質的に全てを使用して別の対象に投与される。いくつかの態様において、プロトコルは、治療用高分子特異的であるもの、および本明細書で提供される治療用高分子などの免疫抑制剤でＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の発達または産生をもたらすことが実証されている。
【００４５】
「提供すること」は、本発明を実行するために必要とされる物品もしくは物品のセットまたは方法を供給する、個人が行う行動または行動のセットを意味する。行動または行動のセットは、自身で直接的または間接的に取られ得る。
「対象を提供する」とは、臨床医に対象と接触させて本明細書で提供される組成物をその対象に投与させるか、または、本明細書で提供される方法をその対象において行わせる、いずれかの行動または行動のセットである。好ましくは、対象は、抗原特異的免疫寛容または治療用高分子特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大された産生または発達を必要としている対象である。行動または行動のセットは、自身で直接的または間接的に取られ得る。本明細書で提供される方法のいずれか１つの一態様において、方法はさらに対象を提供することを含む。
【００４６】
「記録すること」は、本明細書で提供される方法または組成物が、治療用高分子特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の増大された産生または発達を達成した、いずれかの書面によるか、または電子形態で、メモするか、またはかかるメモが行われるであろうと予期される活動を直接的または間接的に引き起こすことを意味する。いくつかの態様において、記録は、治療用高分子と組み合わされた免疫抑制剤が、本明細書で提供される方法に従って、またはその後のいくつかの点で対象に投与されるときに起こる。「書面の形態」は、本明細書で使用するとき、紙などの媒体上のいずれかの記録をいう。「電子形態」は、本明細書で使用するとき、電子媒体上のいずれかの記録をいう。
「対象」は、ヒトおよび霊長類などの温血動物；トリ；ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマおよびブタなどのペットまたは家畜；マウス、ラットおよびモルモットなどの実験動物；魚；爬虫類；動物園のおよび野生の動物；等を包含する動物を意味する。
「合成ナノ担体（単数または複数）」は、自然界には見られずサイズにおいて５ミクロン以下の少なくとも１つの寸法を所有する離散性の物体を意味する。アルブミンナノ粒子は一般に、合成ナノ担体として包含されるが、特定の態様において、合成ナノ担体はアルブミンナノ粒子を含まない。ある態様において、合成ナノ担体はキトサンを含まない。他の態様において、合成ナノ担体は脂質系ナノ粒子ではない。さらなる態様において、合成ナノ担体はリン脂質を含まない。
【００４７】
合成ナノ担体は、１つまたは複数の脂質系ナノ粒子（本明細書において脂質ナノ粒子ともいわれ、すなわちその構造を構成する材料の大部分が脂質であるナノ粒子）、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性物質系エマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤ、ウイルス様粒子（すなわち、主にウイルス構造タンパク質で構成されるが、感染性ではなくまたは感染性が低い粒子）、ペプチドまたはタンパク質系粒子（本明細書においてタンパク質粒子ともいわれ、すなわち、その構造を構成する材料の大部分がペプチドまたはタンパク質である粒子）（アルブミンナノ粒子など）および／または脂質ポリマーナノ粒子などのナノ材料の組み合わせを使用して開発されたナノ粒子であってよいが、これらに限定されない。合成ナノ担体は、回転楕円状、立方体様、ピラミッド状、楕円状、円筒状、ドーナツ状等を包含するが、これらに限定されない種々の異なる形状であり得る。本発明に従う合成ナノ担体は１つまたは２つ以上の表面を含む。
【００４８】
本発明の実行に使用するように適合され得る例示的な合成ナノ担体は、（１）米国特許第5,543,158号（Gref et al.）に開示された生分解性ナノ粒子、（２）公開された米国特許出願第20060002852号（Saltzman et al.）のポリマーナノ粒子、（３）公開された米国特許出願第20090028910号（DeSimone et al.）のリソグラフィーにより構築したナノ粒子、（４）国際出願公開第2009/051837号（von Andrian et al.）の開示、（５）公開された米国特許出願第2008/0145441号（Penades et al.）に開示されたナノ粒子、（６）公開された米国特許出願第20090226525号（de los Rios et al.）に開示されたタンパク質ナノ粒子、（７）公開された米国特許出願第20060222652号（Sebbel et al.）に開示されたウイルス様粒子、（８）公開された米国特許出願第20060251677号（Bachmann et al.）に開示された核酸付着ウイルス様粒子、（９）国際公開第2010047839A1号または同第2009106999A2号に開示されたウイルス様粒子、（１０）P. Paolicelli et al., "Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles", Nanomedicine. 5(6): 843-853（2010）に開示されたナノ沈殿ナノ粒子、（１１）米国特許公開第2002/0086049号に開示されたアポトーシス細胞、アポトーシス体、または、合成または半合成模倣物、または（１２）Look et al., "Nanogel-based delivery of mycophenolic acid ameliorates systemic lupus erythematosus in mice", J. Clinical Investigation 123(4): 1741-1749 (2013)に開示されたものを含む。ある態様において、合成ナノ担体は、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７よりも大きな、または１：１０よりも大きなアスペクト比を所有し得る。
【００４９】
約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明に従う合成ナノ担体は、補体を活性化するヒドロキシル基を有する表面を含まないか、または代替的に補体を活性化するヒドロキシル基ではない部位から本質的になる表面を含む。好ましい態様において、約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明に従う合成ナノ担体は、補体を実質的に活性化する表面を含まないか、または代替的に補体を実質的に活性化しない部位から本質的になる表面を含む。より好ましい態様において、約１００ｎｍ以下、好ましくは１００ｎｍ以下の最小寸法を有する本発明に従う合成ナノ担体は、補体を活性化する表面を含まないか、または代替的に補体を活性化しない部位から本質的になる表面を含む。ある態様において、合成ナノ担体は、ウイルス様粒子を排除する。ある態様において、合成ナノ担体は１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７よりも大きな、または１：１０よりも大きなアスペクト比を有し得る。
【００５０】
「治療用高分子」は、対象に投与されて治療効果を有し得るいずれかのタンパク質、炭水化物、脂質または核酸をいう。いくつかの態様において、対象への治療用高分子の投与は、望ましくない免疫応答をもたらし得る。本明細書で記載する場合、免疫抑制剤と併用した治療用高分子の投与は、それへの望ましくない免疫応答を低減させることなどにより、治療用高分子特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞などの産生または発達、および／または治療用高分子の治療有効性を向上させ得る。いくつかの態様において、治療用高分子は治療用ポリヌクレオチドまたは治療用タンパク質であり得る。
【００５１】
「治療用ポリヌクレオチド」は、対象に投与されて治療効果を有し得るいずれかのポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドに基づく治療を意味する。かかる治療は遺伝子サイレンシングを包含する。かかる治療のためのかかるコンストラクトの例は当該分野において知られており、ネイキッドＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ、修飾メッセンジャーＲＮＡおよびＲＮＡｉの形態を包含する）が挙げられるが、これらに限定されない。他の治療用ポリヌクレオチドの例は本明細書中に別記する。治療用ポリヌクレオチドは、細胞中、細胞上または細胞によって、産生されてもよいし、また細胞フリーの方法、または完全に合成によるin vitro法を使用して得てもよい。対象はそれゆえ、前述のいずれかによる処置を必要としているいずれかの対象を包含する。かかる対象には、前述のいずれかを受けるであろう対象が包含される。
【００５２】
「治療用タンパク質」は、対象に投与されて治療効果を有し得るいずれかのタンパク質またはタンパク質に基づく治療を意味する。かかる治療としては、タンパク質補充治療およびタンパク質補強治療が挙げられる。かかる療法にはまた、外因性または外来性のタンパク質の投与、抗体治療および細胞または細胞に基づく治療も包含される。治療用タンパク質としては、酵素、酵素補助因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカイン、成長因子、モノクローナル抗体、抗体−薬物複合体およびポリクローナル抗体が挙げられるが、これらに限定されない。他の治療用タンパク質の例は本明細書中で別記する。治療用タンパク質は、細胞中で、細胞上で、または細胞によって、産生されてもよく、かかる細胞から得られるか、または、かかる細胞の形態で投与されてもよい。ある態様において、治療用タンパク質は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、細菌細胞、植物細胞、トランスジェニック動物細胞、トランスジェニック植物細胞、等中で、これらの細胞上で、またはこれらの細胞によって産生される。治療用タンパク質は、かかる細胞中で遺伝子組換えにより産生されてもよい。治療用タンパク質は、ウイルスで形質転換した細胞中、該細胞上、または該細胞により産生されてもよい。対象はそれゆえ、前述のいずれかによる処置を必要とするいずれかの対象を包含する。かかる対象には前述のいずれかを受けるであろう対象が包含される。
【００５３】
「治療用高分子のＡＰＣ提示可能抗原」は、治療用高分子（すなわち、治療用高分子、または、治療用高分子に対する免疫応答（例えば抗治療用高分子特異的抗体の産生）を発生し得るその断片）と関連する抗原を意味する。一般に、治療用高分子の抗原提示細胞（ＡＰＣ）提示可能抗原は、免疫系（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞またはマクロファージを包含するが、それらに限定されない抗原提示細胞により提示されるものなどの免疫系の細胞）による認識のために提示され得る。治療用高分子のＡＰＣ提示可能抗原は、例えば、Ｔ細胞による認識のために提示され得る。かかる抗原は、クラスＩまたはクラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体分子（ＭＨＣ）に結合された抗原のエピトープの提示を介して、Ｔ細胞により認識されてＴ細胞中で免疫応答をトリガーし得る。治療用高分子のＡＰＣ提示可能抗原は一般に、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、リポタンパク質を包含するか、またはは、細胞中に、細胞上に、または細胞により含有または発現される。治療用高分子抗原は、いくつかの態様において、ＭＨＣクラスＩ拘束性エピトープおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを含む。好ましくは、治療用高分子に特異的な寛容原性免疫応答が、本明細書で提供される方法、組成物またはキットによりもたらされる。ある態様において、合成ナノ担体の集団は、加えられた治療用高分子のＡＰＣ提示可能抗原を含まず、このことは、合成ナノ担体の製造の間に、実質的な量の治療用高分子のＡＰＣ提示可能抗原が意図的に合成ナノ担体に加えられることはないということを意味する。
【００５４】
「望ましくない免疫応答」は、抗原への曝露によりもたらされ、本明細書で提供される疾患、障害または状態（またはそれらの徴候）を促進または悪化させるか、または、本明細書で提供される疾患、障害または状態の徴候であるいずれかの望ましくない免疫応答をいう。かかる免疫応答は一般に、対象の健康に悪影響を有するか、または、対象の健康に対する悪影響の徴候となる。
Ｃ．組成物
免疫抑制剤および治療用高分子に特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生または発達を増強するための治療用高分子の投与における使用のための組成物、ならびに関連する方法およびキットが本明細書で提供される。かかる組成物、キット、および方法は、治療用高分子治療を受けるだろうものなど、治療用高分子治療を必要とする対象に有用である。
種々多様な合成ナノ担体を本発明に従い使用し得る。いくつかの態様において、合成ナノ担体は、球状または回転楕円状である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は平坦または平板形状である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は立方体または立方体状である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は卵形または長円である。いくつかの態様において、合成ナノ担体は円筒、円錐またはピラミッドである。
【００５５】
いくつかの態様において、各合成ナノ担体が同様の性質を有するようにサイズまたは形状の点で比較的均一である合成ナノ担体の集団を使用することが望ましい。例えば、合成ナノ担体の総数に基づいて少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の合成ナノ担体は、合成ナノ担体の平均径または平均寸法の５％、１０％または２０％以内に入る最小寸法または最大寸法を有し得る。
合成ナノ担体は、中実または中空であってよく、１つまたは２つ以上の層を含み得る。いくつかの態様において、各層が、他の層（単数または複数）に対して、独自の組成物および独自の性質を有する。例を挙げると、合成ナノ担体は、コアが１つの層（例えばポリマーコア）でありシェルが第２の層（例えば脂質二分子層または脂質単分子層）であるコア／シェル構造を有していてもよい。合成ナノ担体は複数の異なる層を含んでいてもよい。
【００５６】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は任意で、１つまたは２つ以上の脂質を含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体はリポソームを含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は脂質二分子層を含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は脂質単分子層を含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体はミセルを含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は脂質層（例えば、脂質二分子層、脂質単分子層、等）に囲まれたポリマーマトリックスを含むコアを含んでいてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体は、脂質層（例えば、脂質二分子層、脂質単分子層、等）に囲まれた非ポリマーコア（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子、タンパク質、核酸、炭水化物、等）を含んでいてもよい。
他の態様において、合成ナノ担体は金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、等を含んでいてもよい。いくつかの態様において、非ポリマー合成ナノ担体は、金属原子（例えば金原子）の凝集体などの非ポリマー構成成分の凝集体である。
【００５７】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は任意で、１つまたは２つ以上の両親媒性の実体を含んでいてもよい。いくつかの態様において、両親媒性の実体は安定性が増大されているか、均一性が改善されているか、または、粘度が増大されている合成ナノ担体の生成を促進し得る。いくつかの態様において、両親媒性の実体は、脂質膜（例えば、脂質二分子層、脂質単分子層、等）の内部表面に関連され得る。当該分野において知られている多くの両親媒性の実体は、本発明に従う合成ナノ担体を作ることにおける使用に好適である。かかる両親媒性の実体としては、ホスホグリセリド；ホスファチジルコリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；ジオレイルオキシプロピルトリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；ジオレオイルホスファチジルコリン；コレステロール；コレステロールエステル；ジアシルグリセロール；ジアシルグリセロールスクシネート；ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサンデカノール；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの脂肪族アルコール；ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル；パルミチン酸またはオレイン酸などの表面活性脂肪酸；脂肪酸；脂肪酸モノグリセリド；脂肪酸ジグリセリド；脂肪酸アミド；ソルビタントリオレエート（Span（登録商標）85）グリココレート；ソルビタンモノラウレート（Span（登録商標）20）；ポリソルベート２０（Tween（登録商標）20）；ポリソルベート６０（Tween（登録商標）60）；ポリソルベート６５（Tween（登録商標）65）；ポリソルベート８０（Tween（登録商標）80）；ポリソルベート８５（Tween（登録商標）85）；
【００５８】
ポリオキシエチレンモノステアレート；サーファクチン；ポロキソマー(poloxomer)；ソルビタントリオレエートなどのソルビタン脂肪酸エステル；レシチン；リゾレシチン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリン；ホスファチジルエタノールアミン（ケファリン）；カルジオリピン；ホスファチジン酸；セレブロシド；ジセチルホスフェート；ジパルミトイルホスファチジルグリセロール；ステアリルアミン；ドデシルアミン；ヘキサデシルアミン；アセチルパルミテート；グリセロールリシノレエート；ヘキサデシルステアレート；イソプロピルミリステート；チロキサポール；ポリ（エチレングリコール）５０００−ホスファチジルエタノールアミン；ポリ（エチレングリコール）４００−モノステアレート；リン脂質；高い界面活性物質活性を有する合成および／または天然洗剤；デオキシコレート；シクロデキストリン；カオトロピック塩；イオンペア剤；および、これらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。両親媒性実体構成成分は、異なる両親媒性実体の混合物であってもよい。これが界面活性物質活性を有する物質の包括的ではない例示的なリストであるということを当業者は認識するであろう。いずれかの両親媒性実体を、本発明に従って使用される合成ナノ担体の生成に使用してよい。
【００５９】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は任意で、１つまたは２つ以上の炭水化物を含んでいてもよい。炭水化物は天然または合成であってもよい。炭水化物は誘導天然炭水化物であってもよい。特定の態様において、炭水化物は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セルビオース、マンノース、キシロース、アラビノース、グルコン酸、ガラクトン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラトサミンおよびノイラミン酸が挙げられるが、これらに限定されない単糖または二糖を含む。特定の態様において、炭水化物は、プルラン、セルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシセルロース（ＨＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、ヒドロキシエチルスターチ、カラギーナン、グリコン、アミロース、キトサン、Ν，Ο−カルボキシメチルキトサン、アルギンおよびアルギン酸、デンプン、キチン、イヌリン、こんにゃく、グルコマンナン、プスツラン、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードランおよびキサンタンが挙げられるが、これらに限定されない多糖である。ある態様において、合成ナノ担体は多糖などの炭水化物を含まない（または具体的に排除される）。特定の態様において、炭水化物は、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトールおよびラクチトールが挙げられるが、これらに限定されない糖アルコールなどの炭水化物誘導体を含んでいてもよい。
【００６０】
いくつかの態様において、合成ナノ担体は１つまたは２つ以上のポリマーを含み得る。いくつかの態様において、合成ナノ担体は、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである１つまたは２つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）が非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの全てが非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体は非メトキシ末端のポリマーである１つまたは２つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）が非メトキシ末端のポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの全てが非メトキシ末端のポリマーである。いくつかの態様において、合成ナノ担体はプルロニックポリマーを含まない１つまたは２つ以上のポリマーを含む。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）がプルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、合成ナノ担体を構成するポリマーの全てがプルロニックポリマーを含まない。いくつかの態様において、かかるポリマーは、コーティング層（例えば、リポソーム、脂質単分子層、ミセル、等）で囲まれていてもよい。いくつかの態様において、合成ナノ担体の種々の要素はポリマーに付着されていてもよい。
【００６１】
免疫抑制剤は、多くの方法のいずれかによって合成ナノ担体に付着され得る。一般に付着は、免疫抑制剤と合成ナノ担体との間の結合の結果であり得る。この結合は、免疫抑制剤が合成ナノ担体の表面に付着されおよび／または合成ナノ担体内に含有され（カプセル化され）ることをもたらし得る。しかしながら、いくつかの態様において、免疫抑制剤は、合成ナノ担体への結合ではなくむしろ合成ナノ担体の構造の結果として、合成ナノ担体によってカプセル化される。好ましい態様において、合成ナノ担体は、本明細書で提供されるポリマーを含み、免疫抑制剤はポリマーに付着される。
【００６２】
付着が免疫抑制剤と合成ナノ担体との間の結合の結果として起こるとき、付着は連結部位を介して起こり得る。連結部位は免疫抑制剤および／または治療用高分子がその部位を通して合成ナノ担体に結合されるいずれかの部位であり得る。かかる部位には、アミド結合またはエステル結合などの共有結合ならびに免疫抑制剤を合成ナノ担体に（共有結合的にまたは非共有結合的に）結合する別個の分子が包含される。かかる分子は、リンカー、または、ポリマーまたはそれらの単位を包含する。例えば、連結部位は、免疫抑制剤が静電的に結合する荷電ポリマーを含み得る。別の例として、連結部位は、それが共有結合的に結合するポリマーまたはその単位を含み得る。
好ましい態様において、合成ナノ担体は本明細書で提供されるポリマーを含む。これらの合成ナノ担体は完全にポリマー性であってもよく、ポリマーと他の材料との混合であってもよい。
【００６３】
いくつかの態様において、合成ナノ担体のポリマー同士が関連してポリマーマトリックスを形成する。これらの態様のうちのいくつかにおいて、免疫抑制剤などの構成成分はポリマーマトリックスの１つまたは２つ以上のポリマーと共有結合的に関連され得る。いくつかの態様において、共有結合的関連はリンカーによって媒介される。いくつかの態様において、構成成分は、ポリマーマトリックスの１つまたは２つ以上のポリマーと非共有結合的に関連され得る。例えば、いくつかの態様において、構成成分は、高分子マトリックス内にカプセル化され、それによって囲まれ、および／または、それの全体にわたって分散され得る。代替的または追加的に、構成成分は、ポリマーマトリックスの１つまたは２つ以上のポリマーと、疎水性の相互作用、電荷相互作用、ファンデルワールス力、等によって関連され得る。ポリマーマトリックスを形成するための多種多様なポリマーおよび方法は従来、知られている。
【００６４】
ポリマーは、天然または非天然（合成）ポリマーであり得る。ポリマーはホモポリマーまたは２つまたは３つ以上のモノマーを含むコポリマーであり得る。並びの点で、コポリマーはランダム、ブロックであっても、ランダムとブロックとの並びの組み合わせを含んでもよい。典型的には、本発明に従うポリマーは、有機ポリマーである。
いくつかの態様において、ポリマーは、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアミドまたはポリエーテル、または、これらの単位を含む。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）またはポリカプロラクトン、または、これらの単位を含む。いくつかの態様において、ポリマーは生分解性であることが好ましい。それゆえ、これらの態様において、ポリマーがポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位などのポリエーテルを含む場合、ポリマーは、生分解性となるように、ポリエーテルのブロックコポリマーおよび生分解性ポリマーを含むことが好ましい。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位などの、ポリエーテルまたはこれらの単位を、それだけでは含まない。
【００６５】
本発明で使用するのに好適なポリマーの他の例としては、ポリエチレン、ポリカーボネート（例えばポリ（１，３−ジオキサン−２オン））、ポリ酸無水物（例えばポリ（セバシン酸無水物））、ポリプロピルフマラート、ポリアミド（例えばポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリラクチド−ｃｏ−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酸（例えばポリ（β−ヒドロキシアルカノアート）））、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリラート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリ尿素、ポリスチレンおよびポリアミン、ポリリジン、ポリリジン−ＰＥＧ共重合体およびポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）−ＰＥＧ共重合体が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、本発明に従うポリマーは、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（１，３−ジオキサン−２オン））；ポリ酸無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））；ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール）；ポリウレタン；ポリメタクリラート；ポリアクリラート；およびポリシアノアクリラートを包含するが、これらに限定されない、米国医薬品局（ＦＤＡ）により21C.F.R.§177.2600の下でヒトにおける使用が認証されたポリマーを包含する。
【００６６】
いくつかの態様において、ポリマーは親水性であり得る。例えば、ポリマーは、アニオン性基（例えばホスファート基、スルファート基、カルボキシラート基）；カチオン性基（例えば四級アミン基）；または極性基（例えばヒドロキシル基、チオール基、アミン基）を含み得る。いくつかの態様において、親水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノ担体は、合成ナノ担体内に親水性環境を発生させる。いくつかの態様において、ポリマーは疎水性であり得る。いくつかの態様において、疎水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノ担体は、合成ナノ担体内に疎水性環境を発生させる。ポリマーの親水性または疎水性の選択は、合成ナノ担体内に組み込まれた（例えば、付着された）材料の特質に影響を有し得る。
【００６７】
いくつかの態様において、ポリマーは１つまたは２つ以上の部位および／または官能基で修飾され得る。種々の部位または官能基を本発明に従い使用し得る。いくつかの態様において、ポリマーはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で、炭水化物で、および／または、多糖から誘導された非環式ポリアセタールで、修飾され得る（Papisov, 2001、ACS Symposium Series, 786:301）。特定の態様は、米国特許第5543158号（Gref et al.）または国際公開第2009/051837号（Von Andrian et al.）の一般的教示を使用してなされ得る。
いくつかの態様において、ポリマーは脂質または脂肪酸基で修飾され得る。いくつかの態様において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸またはリグノセリン酸の１つまたは２つ以上であり得る。いくつかの態様において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ−リノール酸、ガンマ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルシン酸の１つまたは２つ以上であり得る。
【００６８】
いくつかの態様において、ポリマーは、本明細書において集合的に「ＰＬＧＡ」と呼ばれる、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）などの、乳酸およびグリコール酸単位を含むコポリマー；および本明細書において「ＰＧＡ」と呼ばれるグリコール酸単位を含むホモポリマー；および本明細書において集合的に「ＰＬＡ」と呼ばれるポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチドおよびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチドなどの乳酸単位を含むホモポリマー、を包含するポリエステルであってもよい。いくつかの態様において、例示的なポリエステルとしては、例えば、ポリヒドロキシ酸；ＰＥＧコポリマーおよびラクチドとグリコリドとのコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＧＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーおよびこれらの誘導体）が挙げられる。いくつかの態様において、ポリエステルは、例えば、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）−ＰＥＧコポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］およびこれらの誘導体を包含する。
【００６９】
いくつかの態様において、ポリマーはＰＬＧＡである。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸との生体適合性かつ生分解性のコポリマーであり、乳酸：グリコール酸の比によってＰＬＧＡの種々の形態が特徴付けられる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸またはＤ，Ｌ−乳酸であり得る。ＰＬＧＡの分解速度は乳酸：グリコール酸比を変えることによって調節され得る。いくつかの態様において、本発明に従い使用されるＰＬＧＡは、およそ８５：１５、およそ７５：２５、およそ６０：４０、およそ５０：５０、およそ４０：６０、およそ２５：７５、または、およそ１５：８５の乳酸：グリコール酸比によって特徴付けられる。
【００７０】
いくつかの態様において、ポリマーは１つまたは２つ以上のアクリルポリマーであってもよい。特定の態様において、アクリルポリマーは、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸のコポリマー、メチルメタクリラートコポリマー、エトキシエチルメタクリラート、シアノエチルメタクリラート、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（無水メタクリル酸）、メチルメタクリラート、ポリメタクリラート、ポリ（メチルメタクリラート）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、グリシジルメタクリラートコポリマー、ポリシアノアクリラートおよび上記のポリマーの１つまたは２つ以上を含む組み合わせを包含する。アクリルポリマーは、四級アンモニウム基の含有量の低いアクリルおよびメタクリル酸エステルの十分にポリマー化されたコポリマーを含み得る。
【００７１】
いくつかの態様において、ポリマーはカチオン性ポリマーであり得る。一般にカチオン性ポリマーは、核酸の負に荷電されたストランドを濃縮および／または保護する能力がある。ポリ（リジン）（Zauner et al., 1998、Adv. Drug Del. Rev., 30:97; Kabanov et al., 1995, Bioconjugate Chem., 6:7）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ；Boussif et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1995, 92:7297）およびポリ（アミドアミン）デンドリマー（Kukowska-Latallo et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 93:4897; Tang et al., 1996, Bioconjugate Chem., 7:703; Haensler et al., 1993, Bioconjugate Chem., 4:372）などのアミン含有ポリマーは、生理学的なｐＨで正に荷電されて核酸とイオン対を形成する。ある態様において、合成ナノ担体はカチオン性ポリマーを含まなくてもよい（または排除してもよい）。
【００７２】
いくつかの態様において、ポリマーはカチオン性の側鎖を持つ生分解性ポリエステル（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Barrera et al., 1993, J, Am. Chem. Soc., 115: 11010; Kwon et al., 1989, Macromolecules, 22:3250; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633; Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）であり得る。これらのポリエステルの例としては、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）（Barrera et al., 1993, J. Am. Chem. Soc., 115: 11010）、ポリ（セリンエステル）（Zhou et al., 1990, Macromolecules, 23:3399）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）およびポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Putnam et al., 1999, Macromolecules, 32:3658; Lim et al., 1999, J. Am. Chem. Soc., 121:5633）が挙げられる。
【００７３】
これらのおよび他のポリマーの特性およびそれらの調製方法は当該分野において周知である（例えば、米国特許第6,123,727号；5,804,178号；5,770,417号；5,736,372号；5,716,404号；6,095,148号；5,837,752号；5,902,599号；5,696,175号；5,514,378号；5,512,600号；5,399,665号；5,019,379号；5,010,167号；4,806,621号；4,638,045号;および4,946,929号；Wang et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:9480; Lim et al., 2001, J. Am. Chem. Soc., 123:2460; Langer, 2000, Acc. Chem. Res., 33:94; Langer, 1999, J. Control. Release, 62:7; Uhrich et al., 1999, Chem. Rev., 99:3181参照）。より一般には、特定の好適なポリマーを合成するための種々の方法が、Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Amines and Ammonium Salts, Ed. by Goethals, Pergamon Press, 1980; Principles of Polymerization by Odian, John Wiley & Sons, Fourth Edition, 2004; Contemporary Polymer Chemistry by Allcock et al., Prentice-Hall, 1981; Deming et al., 1997, Nature, 390:386；および米国特許第6,506,577号、同第6,632,922号、同第6,686,446号および同第6,818,732号に記載されている。
【００７４】
いくつかの態様において、ポリマーは直鎖状または分枝状ポリマーであり得る。いくつかの態様において、ポリマーはデンドリマーであり得る。いくつかの態様において、ポリマーは実質的に、互いに架橋されていてよい。いくつかの態様において、ポリマーは実質的に架橋を含まなくてよい。いくつかの態様において、ポリマーは架橋ステップを経験せずに本発明に従い使用され得る。合成ナノ担体は、ブロックコポリマー、グラフトコポリマー、前述のおよび他のポリマーのいずれかのブレンド、混合物および／または付加物を含み得ることをさらに理解すべきである。本明細書中に列挙されるポリマーは、本発明に従い使用され得る包括的でない例示的なポリマーのリストを表すものであることを当業者は認識するであろう。
【００７５】
いくつかの態様において、合成ナノ担体はポリマー構成成分を含まない。いくつかの態様において、合成ナノ担体は金属粒子、量子ドット、セラミック粒子等を含み得る。いくつかの態様において、非ポリマー合成ナノ担体は、金属原子（例えば金原子）の凝集体などの非ポリマー構成成分の凝集体である。
本発明に従う組成物は、免疫抑制剤などの要素を、保存剤、緩衝剤、食塩水またはリン酸緩衝化食塩水などの薬学的に許容し得る賦形剤と組み合わせて含み得る。組成物は、有用な剤形に到達するように従来の医薬製造および配合技術を使用して作られ得る。ある態様において、免疫抑制剤を含むものなどの組成物は、保存剤と一緒に注射用の滅菌食塩水溶液に懸濁される。
ある態様において、担体として合成ナノ担体を調製するとき、合成ナノ担体に構成成分を付着する方法が有用であり得る。構成成分が小さな分子である場合、合成ナノ担体の組み立ての前にその構成成分をポリマーに付着することが有利である場合がある。ある態様において、構成成分をポリマーに付着し、次いでこのポリマー複合体を合成ナノ担体の構築に使用するというよりはむしろ、それらの表面基の使用を通して構成成分を合成ナノ担体に付着させるために使用される表面基を有する合成ナノ担体を調製することも有利である場合がある。
【００７６】
特定の態様において、付着は共有結合性リンカーであり得る。ある態様において、本発明に従う免疫抑制剤は、ナノ担体の表面のアジド基とアルキン基を含有する免疫抑制剤との１，３−双極子環状付加反応により、または、ナノ担体の表面のアルキンとアジド基を含有する免疫抑制剤との１，３−双極子環状付加反応により、形成される、１，２，３−トリアゾールリンカーを介して外部表面に共有結合的に付着され得る。かかる環状付加反応は好ましくは、好適なＣｕ（Ｉ）リガンドと、Ｃｕ（ＩＩ）化合物を触媒活性なＣｕ（Ｉ）化合物に還元するための還元剤と共に、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下で行われる。このＣｕ（Ｉ）触媒アジド−アルキン環状付加（ＣｕＡＡＣ）はまた、クリック反応といわれることもある。
【００７７】
加えて、共有結合的連結は、アミドリンカー、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、ヒドラゾンリンカー、ヒドラジドリンカー、イミンまたはオキシムリンカー、尿素またはチオ尿素リンカー、アミジンリンカー、アミンリンカーおよびスルホンアミドリンカーを含む共有結合性リンカーを含み得る。
アミドリンカーは、免疫抑制剤などの一方の構成成分上のアミンとナノ担体などの第２の構成成分のカルボン酸基との間のアミド結合を介して形成される。リンカー中のアミド結合は、好適に保護されたアミノ酸および活性化されたカルボン酸（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性化エステルなど）との従来のアミド結合形成反応のいずれかを使用して作られ得る。
【００７８】
ジスルフィドリンカーは、例としてＲ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２の形態の２つの硫黄原子間のジスルフィド（Ｓ−Ｓ）結合の形成を介して作られ得る。ジスルフィド結合は、チオール／メルカプタン基（−ＳＨ）を含有する構成成分とポリマーまたはナノ担体上の別の活性化チオール基との、または、チオール／メルカプタン基を含有するナノ担体と活性化チオール基を含有する構成成分との、チオール交換によって形成され得る。
【００７９】
トリアゾールリンカー、具体的には、下記の形態
【化１】
2020015741.tif 000002
（式中Ｒ１およびＲ２が、いずれかの化学的実体であり得る）の１，２，３−トリアゾールは、ナノ担体などの第１構成成分に付着されたアジドの、免疫抑制剤などの第２構成成分に付着された末端アルキンとの１，３−双極子環状付加反応により作られる。１，３−双極子環状付加反応は、触媒の有無で、好ましくはＣｕ（Ｉ）触媒を使用して、行われ、これにより２つの構成成分が１，２，３−トリアゾール官能性を通してつながれる。この化学は、Sharpless et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41(14), 2596, (2002) および Meldal, et al, Chem. Rev., 2008, 108(8), 2952-3015により詳細に記載され、「クリック」反応またはＣｕＡＡＣと呼ばれることも多い。
【００８０】
ある態様において、ポリマー鎖の末端にアジドまたはアルキン基を含有するポリマーが調製される。このポリマーは次いで、複数のアルキンまたはアジド基がナノ担体の表面上に位置するような様式で合成ナノ担体を調製するのに使用される。代替的に、合成ナノ担体は、別の経路により調製され、その後にアルキンまたはアジド基で官能化されてもよい。構成成分は、アルキン（ポリマーがアジドを含有する場合）またはアジド（ポリマーがアルキンを含有する場合）基のどちらかの存在により調製される。構成成分は次に、触媒の有無で１，３−双極子環状付加反応を介してナノ担体と反応され、これにより１，４−二置換１，２，３−トリアゾールリンカーを通して構成成分が粒子に共有結合的に付着される。
【００８１】
チオエーテルリンカーは、例としてＲ１−Ｓ−Ｒ２の形態の硫黄−炭素（チオエーテル）結合の形成によって作られる。チオエーテルは、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン（−ＳＨ）基の、第２構成成分上のハロゲン化物またはエポキシドなどのアルキル化基によるアルキル化によって作られる。チオエーテルリンカーはまた、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン基の、マイケル受容体としてマレイミド基またはビニルスルホン基を含有する第２の構成成分上の電子不足アルケン基へのマイケル付加によっても形成され得る。別の方式において、チオエーテルリンカーは、１つの構成成分上のチオール／メルカプタン基と、第２構成成分上のアルケン基とのラジカルチオール−エン反応により調製され得る。
【００８２】
ヒドラゾンリンカーは、１つの構成成分上のヒドラジド基と、第２構成成分上のアルデヒド／ケトン基との反応によって作られる。
ヒドラジドリンカーは、１つの構成成分上のヒドラジン基と第２構成成分上のカルボン酸基との反応により形成される。かかる反応は一般に、カルボン酸が活性化試薬で活性化される場合のアミド結合の形成と同様の化学を使用して行われる。
イミンまたはオキシムリンカーは、１つの構成成分上のアミンまたはＮ−アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基と、第２構成成分上のアルデヒドまたはケトン基との反応により形成される。
【００８３】
尿素またはチオ尿素リンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のイソシアネートまたはチオイソシアネート基との反応により調製される。
アミジンリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のイミドエステル基との反応により調製される。
アミンリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のハロゲン化物、エポキシドまたはスルホナートエステル基などのアルキル化基とのアルキル化反応により作られる。代替的に、アミンリンカーはまた、１つの構成成分上のアミン基と第２の構成成分上のアルデヒドまたはケトン基との、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの好適な還元試薬を使用した還元アミノ化により作られてもよい。
【００８４】
スルホアミドリンカーは、１つの構成成分上のアミン基と、第２構成成分上のスルホニルハライド（スルホニルクロリド等）基との反応によって作られてもよい。
スルホンリンカーは、求核基のビニルスルホンへのマイケル付加により作られる。ビニルスルホンまたは求核基のいずれかは、ナノ担体の表面上にあってもよいし、構成成分に付着されていてもよい。
構成成分はまた、非共有結合性複合化法を介してナノ担体に複合化されていてもよい。例えば、負に荷電された免疫抑制剤は、静電吸着を通して正に荷電されたナノ担体に複合化されてもよい。金属リガンドを含有する構成成分はまた、金属−リガンド錯体を介して金属錯体を含有するナノ担体に複合化されてもよい。
【００８５】
ある態様において、構成成分は、合成ナノ担体の組み立ての前に、ポリマー、例えばポリ乳酸−ブロック−ポリエチレングリコールに付着されてもよいし、合成ナノ担体がその表面上に反応性のまたは活性化可能な基を有するように形成されてもよい。後者の場合、構成成分は、合成ナノ担体の表面によって提示される付着化学と適合可能な基を有するように調製されてもよい。他の態様において、ぺプチド構成成分は、好適なリンカーを使用してＶＬＰまたはリポソームに付着されてもよい。リンカーは、２つの分子同士を連結し得る化合物または試薬である。一態様において、リンカーは、Hermanson 2008に記載のホモ二官能性またはヘテロ二官能性試薬であってもよい。例えば、表面上にカルボキシル基を含有するＶＬＰまたはリポソーム合成ナノ担体を、ＥＤＣの存在下でホモ二官能性リンカー、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で処置してＡＤＨリンカーを有する対応する合成ナノ担体を形成し得る。結果としてもたらされるＡＤＨにつながれた合成ナノ担体は次いで、ナノ担体上のＡＤＨリンカーの他の端部を介して酸基を含有するペプチド構成成分と複合化されて対応するＶＬＰまたはリポソームペプチド複合体を生成する。
【００８６】
利用可能な複合化方法の詳細な記載に関しては、Hermanson G T "Bioconjugate Techniques", 2nd Edition Published by Academic Press, Inc., 2008を参照のこと。共有結合性の付着に加えて、構成成分は、予め形成された合成ナノ担体への吸着によって付着されてもよいし、合成ナノ担体形成中のカプセル化によって付着されてもよい。
【００８７】
本明細書で提供されるいずれかの免疫抑制剤は、提供される方法または組成物において使用され得、いくつかの態様においては、合成ナノ担体に付着されてもよい。免疫抑制剤としては、スタチン；ラパマイシンまたはラパマイシン類縁体などのｍＴＯＲインヒビター；ＴＧＦ−βシグナル剤；ＴＧＦ−β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）インヒビター；コルチコステロイド；ロテノンなどのミトコンドリア機能のインヒビター；Ｐ３８インヒビター；ＮＦ−κβインヒビター；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼ４インヒビターなどのホスホジエステラーゼインヒビター；プロテアソームインヒビター；キナーゼインヒビター；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；グルココルチコイド；レチノイド；サイトカインインヒビター；サイトカイン受容体インヒビター；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼインヒビター；カルシニューリンインヒビター；ホスファターゼインヒビターおよび酸化ＡＴＰが挙げられるがこれらに限定されない。免疫抑制剤としてはまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、シクロスポリンＡ、アリールハイドロカーボン受容体インヒビター、レスベラトロール、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アスピリン、ニフルミン酸、エストリオール、トリポリド、インターロイキン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１０）、シクロスポリンＡ、サイトカインまたはサイトカイン受容体を標的とするｓｉＲＮＡ、等が挙げられる。
【００８８】
スタチンの例としては、アトルバスタチン（LIPITOR（登録商標）、TORVAST（登録商標））、セリバスタチン、フルバスタチン（LESCOL（登録商標）、LESCOL（登録商標）XL）、ロバスタチン（MEVACOR（登録商標）、ALTOCOR（登録商標）、ALTOPREV（登録商標））、メバスタチン（COMPACTIN（登録商標））、ピタバスタチン（LIVALO（登録商標）、PIAVA（登録商標））、ロスバスタチン（PRAVACHOL（登録商標）、SELEKTINE（登録商標）、LIPOSTAT（登録商標））、ロスバスタチン（CRESTOR（登録商標））およびシンバスタチン（ZOCOR（登録商標）、LIPEX（登録商標））が挙げられる。
ｍＴＯＲインヒビターの例としては、ラパマイシンおよびその類縁体（例えば、CCL-779、RAD001、AP23573、Ｃ２０−メタリルラパマイシン（C20-Marap）、Ｃ１６−（Ｓ）−ブチルスルホンアミドラパマイシン（C16-BSrap）、Ｃ１６−（Ｓ）−３−メチルインドールラパマイシン（C16-iRap）（Bayle et al., Chemistry & Biology 2006, 13:99-107））、AZD8055、BEZ235（NVP-BEZ235）、クリソファン酸（クリソファノール）、デフォロリムス（MK-8669）、エベロリムス（RAD0001）、KU-0063794、PI-103、PP242、テムシロリムスおよびWYE-354（Selleck、Houston、TX、USAから入手可能）が挙げられる。
【００８９】
ＴＧＦ−βシグナル剤の例としては、ＴＧＦ−βリガンド（例えば、アクチビンＡ、ＧＤＦ１、ＧＤＦ１１、骨形態形成タンパク質、ノーダル、ＴＧＦ−β）およびそれらの受容体（例えば、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ１Ｃ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＴＧＦβＲＩ、ＴＧＦβＲＩＩ）、Ｒ−ＳＭＡＤＳ／ｃｏ−ＳＭＡＤＳ（例えば、ＳＭＡＤ１、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ５、ＳＭＡＤ８）およびリガンドインヒビター（例えば、フォリスタチン、ノギン、コルジン、DAN、レフティ、LTBP1、THBS1、デコリン）が挙げられる。
ミトコンドリア機能のインヒビターの例としては、アトラクチロシド（ジカリウム塩）、ボングクレキック酸（トリアンモニウム塩）、カルボニルシアニドｍ−クロロフェニルヒドラゾン、カロボキシアトラクチロシド（例えばアトラクチリス属から）、ＣＧＰ−３７１５７、（−）−デグエリン（例えばMundulea sericeaから）、F16、ヘキソキナーゼＩＩＶＤＡＣ結合ドメインペプチド、オリゴマイシン、ロテノン、Ru360、SFK1およびバリノマイシン（例えばStreptomuces fulvissimusから）（EMD4Biosciences, USA）が挙げられる。
【００９０】
Ｐ３８インヒビターの例としては、SB-203580（４−（４−フルオロフェニル）−２−（４−メチルスルフィニルフェニル）−５−（４−ピリジル）１Ｈ−イミダゾール）、SB-239063（トランス−１−（４ヒドロキシシクロヘキシル）−４−（フルオロフェニル）−５−（２−メトキシ−ピリミジン−４−イル）イミダゾール）、SB-220025（５−（２アミノ−４−ピリミジニル）−４−（４−フルオロフェニル）−１−（４−ピペリジニル）イミダゾール））およびARRY-797が挙げられる。
ＮＦ（例えば、ΝΚ−κβ）インヒビターの例としては、IFRD1、２−（１，８−ナフチリジン−２−イル）−フェノール、５−アミノサリチル酸、BAY11-7082、BAY11-7085、CAPE（カフェイン酸フェネチルエステル）、ジエチルマレエート、ＩＫＫ−２インヒビターＩＶ、IMD0354、ラクタシスチン、MG-132［Ｚ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＣＨＯ］、ＮＦκＢ活性化インヒビターＩＩＩ、ＮＦ−κＢ活性化インヒビターＩＩ、JSH-23、パルテノリド、フェニルアルシンオキシド（ＰＡＯ）、PPM-18、ピロリジンジチオカルバミン酸アンモニウム塩、QNZ、RO106-9920、ロカグラミド、ロカグラミドＡＬ、ロカグラミドＣ、ロカグラミドＩ、ロカグラミドＪ、ロカグラオール、(R)-MG-132、サリチル酸ナトリウム、トリプトリド（PG490）およびウェデロラクトンが挙げられる。
【００９１】
アデノシン受容体アゴニストの例としては、CGS-21680およびATL-146eが挙げられる。
プロスタグランジンＥ２アゴニストの例としては、Ｅ−プロスタノイド２およびＥ−プロスタノイド４が挙げられる。
ホスホジエステラーゼインヒビター（非選択的および選択的インヒビター）の例としては、カフェイン、アミノフィリン、ＩＢＭＸ（３−イソブチル−１−メチルキサンチン）、パラキサンチン、ペントキシフィリン、テオブロミン、テオフィリン、メチル化キサンチン、ビンポセチン、ＥＨＮＡ（エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン）、アナグレリド、エノキシモン（PERFAN（商標））、ミルリノン、レボシメンダン（levosimendon）、メセンブリン、イブジラスト、ピクラミラスト、ルテオリン、ドロタベリン、ロフルミラスト（DAXAS（商標）、DALIRESP（商標））、シルデナフィル（REVATION（登録商標）、VIAGRA（登録商標））、タダラフィル（ADCIRCA（登録商標）、CIALIS（登録商標））、バルデナフィル（LEVITRA（登録商標）、STAXYN（登録商標））、ウデナフィル、アバナフィル、イカリイン、４−メチルピペラジンおよびピラゾロピリミジン−７−１が挙げられる。
【００９２】
プロテアソームインヒビターの例としては、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、エピガロカテキン−３−ガラートおよびサリノスポラミドＡが挙げられる。
キナーゼインヒビターの例としては、ベバシズマブ、BIBW2992、セツキシマブ（ERBITUX（登録商標））、イマチニブ（GLEEVEC（登録商標））、トラスツズマブ（HERCEPTIN（登録商標））、ゲフィチニブ（IRESSA（登録商標））、ラニビズマブ（LUCENTIS（登録商標））、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パニツムマブ、バンデタニブ、E7080、パゾパニブおよびムブリチニブが挙げられる。
【００９３】
グルココルチコイドの例としては、ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、コルチゾンアセタート、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、フルドロコルチゾンアセテート、デオキシコルチコステロンアセテート（ＤＯＣＡ）およびアルドステロンが挙げられる。
レチノイドの例としては、レチノール、レチナール、トレチノイン（レチノイン酸、RETIN-A（登録商標））、イソトレチノイン（ACCUTANE（登録商標）、AMNESTEEM（登録商標）、CLARAVIS（登録商標）、SOTRET（登録商標））、アリトレチノイン（PANRETIN（登録商標））、エトレチナート（TEGISON（商標））およびその代謝産物アシトレチン（SORIATANE（登録商標））、タザロテン（TAZORAC（登録商標）、AVAGE（登録商標）、ZORAC（登録商標））、ベキサロテン（TARGRETIN（登録商標））およびアダパレン（DIFFERIN（登録商標））が挙げられる。
【００９４】
サイトカインインヒビターの例としては、IL1ra、ＩＬ１受容体アンタゴニスト、IGFBP、TNF-BF、ウロモジュリン、アルファ−２−マクログロブリン、シクロスポリンＡ、ペンタミジンおよびペントキシフィリン（PENTOPAK（登録商標）、PENTOXIL（登録商標）、TRENTAL（登録商標））が挙げられる。
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アンタゴニストの例としては、GW9662、ＰＰＡＲγアンタゴニストＩＩＩ、G335およびT0070907（EMD4Biosciences、USA）が挙げられる。
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体アゴニストの例としては、ピオグリタゾン、シグリタゾン、クロフィブレート、GW1929、GW7647、L-165,041、LY171883、ＰＰＡＲγアクチベーター、Fmoc-Leu、トログリタゾンおよびWY-14643（EMD4Biosciences、USA）が挙げられる。
【００９５】
ヒストンデアセチラーゼインヒビターの例としては、トリコスタチンＡ、環状テトラペプチド（トラポキシンＢなど）およびデプシペプチドなどのヒドロキサム酸（またはヒドロキサメート）、ベンズアミド、求電子性ケトン、酪酸フェニルおよびバルプロ酸などの脂肪族酸化合物、ボリノスタット（SAHA）、ベリノスタット（PXD101）、LAQ824およびパノビノスタット（LBH589）などのヒドロキサム酸、エンチノスタット（MS-275）、CI994およびモセチノスタット（MGCD0103）などのベンズアミド、ニコチンアミド、ＮＡＤの誘導体、ジヒドロクマリン、ナフトピラノンおよび２−ヒドロキシナフアルデヒド(hydroxynaphaldehyde)が挙げられる。
【００９６】
カルシニューリンインヒビターの例としては、シクロスポリン、ピメクロリムス、ボクロスポリンおよびタクロリムスが挙げられる。
ホスファターゼインヒビターの例としては、BN82002ヒドロクロリド、CP-91149、カリクリンＡ、カンタリジン酸、カンタリジン、サイパーメスリン、エチル−３，４−デホスタチン、フォストリエシンナトリウム塩、MAZ51、メチル−３，４−デホスタチン、NSC95397、ノルカンタリジン、prorocentrum concavumからのオカダ酸アンモニウム塩、オカダ酸、オカダ酸カリウム塩、オカダ酸ナトリウム塩、フェニルアルシンオキシド、種々のホスファートインヒビター混液、タンパク質ホスファターゼ１Ｃ、タンパク質ホスファターゼ２Ａインヒビタータンパク質、タンパク質ホスファターゼ２Ａ１、タンパク質ホスファターゼ２Ａ２およびオルトバナジン酸ナトリウムが挙げられる。
【００９７】
本明細書で提供される方法、組成物またはキットのいずれか１つのいくつかの態様において、本明細書に記載される治療用高分子もまた合成ナノ担体に付着されている。他の態様において、治療用高分子はいずれの合成ナノ担体にも付着されていない。これらの場面のいずれかのいくつかの態様において、治療用高分子は、治療用高分子そのものまたはそれらの断片または誘導体の形態で送達され得る。
治療用高分子は、治療用タンパク質または治療用ポリヌクレオチドを包含し得る。治療用タンパク質としては、点滴可能な治療用のタンパク質、酵素、酵素補助因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカインおよびインターフェロン、成長因子、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（例えば補充治療として対象に投与されるもの）およびポンペ病に関連するタンパク質（例えば酸性グルコシダーゼアルファ、ｒｈＧＡＡ（例えばミオザイムおよびルミザイム（Genzyme））が挙げられるが、これらに限定されない。治療用タンパク質はまた、血液凝固カスケードに関与するタンパク質も包含する。治療用タンパク質としては、第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｖ因子、フォン・ヴィレブランド因子、フォン・ヘルデブラント因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター、インスリン、成長ホルモン、エリスロポエチンアルファ、ＶＥＧＦ、トロンボポエチン、リゾチーム、アンチトロンビン等が挙げられるが、これらに限定されない。治療用タンパク質はまた、レプチンおよびアディポネクチンなどのアディポカインも包含する。治療用タンパク質の他の例は以下に記載し、および本明細書中に別記するとおりである。
【００９８】
リソソーム蓄積障害を有する対象の酵素補充治療に使用される治療用タンパク質の例としては、ゴーシェ病の処置のためのイミグルセラーゼ（例えばCEREZYME（商標））、ファブリー病の処置のためのａ−ガラクトシダーゼＡ（ａ−ｇａｌＡ）（例えば、アガルシダーゼベータ、FABRYZYME（商標））、ポンペ病の処置のための酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）（例えば、酸性グルコシダーゼアルファ、LUMIZYME（商標）、MYOZYME（商標））、ムコ多糖症の処置のためのアリールスルファターゼＢ（例えば、ラロニダーゼ、ALDURAZYME（商標）、イデュルスルファーゼ、ELAPRASE（商標）、アリールスルファターゼＢ、NAGLAZYME（商標））、ペグロチカーゼ（KRYSTEXXA）およびペグシチカーゼが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
酵素の例としては、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、ウリカーゼ、グリコシダーゼ、アスパラギナーゼ、ウリカーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ヘパリナーゼ、ヘパラナーゼ、リジンおよびリガーゼが挙げられる。
治療用タンパク質はまた、いずれかの細菌性の、真菌性の、またはウイルス性の供給源から単離されるか、または誘導された酵素、毒素、または、他のタンパク質またはペプチドを包含してもよい。
【０１００】
ホルモンの例としては、メラトニン（Ｎ−アセチル−５−メトキシトリプトアミン）、セロトニン、チロキシン（またはテトラヨードチロニン）（甲状腺ホルモン）、トリヨードチロニン（甲状腺ホルモン）、エピネフリン（またはアドレナリン）、ノルエピネフリン（またはノルアドレナリン）、ドーパミン（またはプロラクチン阻害ホルモン）、抗ミュラー管ホルモン（またはミュラー管阻害因子またはホルモン）、アディポネクチン、副腎皮質刺激ホルモン（またはコルチコトロピン）、アンジオテンシノーゲンおよびアンジオテンシン、抗利尿性ホルモン（またはバソプレシン、アルギニンバソプレシン）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（またはアトリオペプチン）、カルシトニン、コレシストキニン、コルチコトロピン放出ホルモン、エリスロポエチン、卵胞刺激ホルモン、ガストリン、グレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）、ＧＩＰ、ゴナドトロピン放出ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒト胎盤性ラクトゲン、成長ホルモン、インヒビン、インスリン、インスリン様成長因子（またはソマトメジン）、レプチン、黄体形成ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、オレキシン、オキシトシン、副甲状腺ホルモン、プロラクチン、レラキシン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、甲状腺刺激ホルモン（またはチロトロピン）、チロトロピン放出ホルモン、コルチゾール、アルドステロン、テストステロン、デヒドロエピアンドロステロン、アンドロステンジオン、ジヒドロテストステロン、エストラジオール、エストロン、エストリオール、プロゲステロン、カルシトリオール（１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）、カルシジオール（２５−ヒドロキシビタミンＤ３）、プロスタグランジン、ロイコトリエン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、プロラクチン放出ホルモン、リポトロピン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、神経ペプチドＹ、ヒスタミン、エンドセリン、膵ポリペプチド、レニンおよびエンケファリンが挙げられる。
【０１０１】
血液または血液凝固因子の例としては、第Ｉ因子（フィブリノゲン）、第ＩＩ因子（プロトロンビン）、組織因子、第Ｖ因子（プロアクセレリン、不安定因子）、第ＶＩＩ因子（安定因子またはプロコンベルチン）、第ＶＩＩＩ因子（抗血友病性グロブリン）、第ＩＸ因子（クリスマス因子または血漿トロンボプラスチン構成成分）、第Ｘ因子（スチュアート・プローワー因子）、第Ｘａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子（ハーゲマン因子）、第ＸＩＩＩ因子（フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィレブランド因子、プレカリクレイン（フレッチャー因子）、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）（フィッツジェラルド因子）、フィブロネクチン、フィブリン、トロンビン、アンチトロンビンＩＩＩ、ヘパリン補助因子ＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関係プロテアーゼインヒビター（ＺＰＩ）、プラスミノーゲン、アルファ２−アンチプラスミン、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ２）、がんプロコアグラントまたはエポエチンアルファ（Epogen、Procrit）が挙げられる。
サイトカインの例としては、リンホカイン、インターロイキンおよびケモカイン、ＩＦＮ−γなどのタイプ１サイトカイン、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−４、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３などのタイプ２サイトカインが挙げられる。
【０１０２】
成長因子の例としては、アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンジオポエチン（Ａｎｇ）、自己分泌型細胞運動刺激因子、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、増殖分化因子−９（ＧＤＦ９）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、肝がん由来増殖因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、マイグレーション刺激因子、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、神経成長因子（ＮＧＦ）および他のニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、Ｗｎｔシグナル経路、胎盤増殖因子（Ｐ１ＧＦ）、（ウシ胎児ソマトトロピン）（ＦＢＳ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−７が挙げられる。
【０１０３】
モノクローナル抗体の例としては、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴル(Alacizumab pegol)、ＡＬＤ、アレムツズマブ、アルツモマブペンテテート(Altumomab pentetate)、アナツモマブマフェナトックス(Anatumomab mafenatox)、アンルキンズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、アポリズマブ、アルシツモマブ、アセリズマブ(Aselizumab)、アトリズマブ（トシリズマブ）、アトロリムマブ(Atorolimumab)、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ(Bectumomab)、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ビシロマブ、ビバツズマブメルタンシン(Bivatuzumab mertansine)、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カプロマブペンデチド、カツマキソマブ、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、シタツズマブボガトクス(Citatuzumab bogatox)、シクスツムマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コナツムマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダラツムマブ、デノスマブ、デツモマブ、ドルリモマブアリトクス(Dorlimomab aritox)、ドルリキシズマブ(Dorlixizumab)、エクロメキシマブ(Ecromeximab)、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ(Efungumab)、エロツズマブ、エルシリモマブ(Elsilimomab)、エンリモマブペゴル、エピツモマブシツキセタン(Epitumomab cituxetan)、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ(Ertumaxomab)、エタラシズマブ、エクスビビルマブ(Exbivirumab)、
【０１０４】
ファノレソマブ、ファラリモマブ(Faralimomab)、ファルレツズマブ、フェルビズマブ(Felvizumab)、フェザキヌマブ、フィジツムマブ(Figitumumab)、フォントリズマブ、フォラビルマブ(Foravirumab)、フレソリムマブ(Fresolimumab)、ガリキシマブ、ガンテネルマブ、ガンビリモマブ、ゲムツマブオゾガマイシン、GC1008、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブベドチン(Glembatumumab vedotin)、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ(Gomiliximab)、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イゴボマブ(Igovomab)、イムシロマブ、インフリキシマブ、インテツムマブ(Intetumumab)、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、イラツムマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ(Lemalesomab)、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ(Libivirumab)、リンツズマブ、ロボツズマブメルタンシン(Lorvotuzumab mertansine)、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マスリモマブ(Maslimomab)、マツズマブ、メポリズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ(Minretumomab)、ミツモマブ、モロリムマブ(Morolimumab)、モタビズマブ、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトクス(Nacolomab tafenatox)、ナプツモマブエスタフェナトクス(Naptumomab estafenatox)、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ（Nerelimomab）、ニモツズマブ、ノフェツモマブメルペンタン(Nofetumomab merpentan)、オクレリズマブ、オデュリモマブ(Odulimomab)、オファツムマブ、オララツマブ(Olaratumab)、オマリズマブ、オポルツズマブモナトクス(Oportuzumab monatox)、オレゴボマブ、オテリキシズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パノバクマブ、パスコリズマブ(Pascolizumab)、ペムツモマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、
【０１０５】
ペンツモマブ(Pintumomab)、プリリキシマブ、プリツムマブ(Pritumumab)、ラフィビルマブ(Rafivirumab)、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ(Robatumumab)、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サツモマブペンデチド(Satumomab pendetide)、セビルマブ(Sevirumab)、シブロツズマブ(Sibrotuzumab)、シファリムマブ、シルツキシマブ、シプリズマブ、ソラネズマブ、ソネプシズマブ(Sonepcizumab)、ソンツズマブ(Sontuzumab)、スタムルマブ、スレソマブ、タカツズマブテトラキセタン(Tacatuzumab tetraxetan)、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブペプトクス(Taplitumomab paptox)、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス(Telimomab aritox)、テナツモマブ(Tenatumomab)、テネリキシマブ、テプリズマブ、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、トシリズマブ（アトリズマブ）、トラリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ(Tuvirumab)、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バパリキシマブ(Vapaliximab)、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ジラリムマブ(Ziralimumab)およびズリモマブアリタオクス(Zolimomab aritox)が挙げられる。モノクローナル抗体はさらに、抗ＴＮＦ−α抗体を包含する。
【０１０６】
点滴治療または注射可能治療用タンパク質の例としては、例えば、トシリツマブ（Roche/Actemra（登録商標））、アルファ−１アンチトリプシン（Kamada/AAT）、ヘマタイド（登録商標）（AffymaxおよびTakeda、合成ペプチド）、アルブインターフェロンアルファ−２ｂ（Novartis/Zalbin（商標））、ルシン（登録商標）（Pharming Group、Ｃ１インヒビター補充治療）、テサモレリン（Theratechnologies/Egrifta、合成成長ホルモン放出因子）、オクレリズマブ（Genentech、RocheおよびBiogen）、ベリムバブ（GlaxoSmithKline/Benlysta（登録商標））、ペグロチカーゼ（Savient Pharmaceuticals/Krystexxa（商標））、ペグシチカーゼ、タリグルセラーゼアルファ（Protalix/Uplyso）、アガルシダーゼアルファ（Shire/Replagal（登録商標））、ベラグルセラーゼアルファ（Shire）およびキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）が挙げられる。
追加の治療用タンパク質としては、例えば、Ｆｃ融合タンパク質などの遺伝子操作タンパク質、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ナノボディ、抗原結合タンパク質、抗体フラグメントおよび抗体薬物複合体などのタンパク質複合体が挙げられる。
【０１０７】
治療用ポリヌクレオチドとしては、ペガプタニブ（マクゲン、ペグ化された抗ＶＥＧＦアプタマー）などの核酸アプタマー、アンチセンスポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド（例えば、抗ウイルス薬物フォミビルセン(Fomivirsen)またはミポメルセン、コレステロール値を低減させるためにアポリポタンパク質ＢのためのメッセンジャーＲＮＡを標的にするアンチセンス治療剤）などのアンチセンス治療剤；低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（例えば、ＲＮＡｉを極めて高い効力で媒介する２５〜３０塩基対の非対称二重鎖ＲＮＡである、ダイサー基質ｓｉＲＮＡ分子（ＤｓｉＲＮＡ））；または米国特許出願第2013/0115272号（Fougerolles et al.）および公開された米国特許出願第2012/0251618号（Schrum et al.）に開示されたもののような修飾型メッセンジャーＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の側面に従って有用な追加の治療用高分子は、当業者には明らかであり、本発明はこの点において限定されない。
【０１０８】
いくつかの態様において、治療用高分子または免疫抑制剤などの構成成分は、単離されていてもよい。「単離されている」は、その本来の環境から分離されて、その同定または使用を許すのに充分な分量で存在する要素である。これは例えば、その要素が、（ｉ）発現クローニングによって選択的に産生され得るか、または（ｉｉ）クロマトグラフィーまたは電気泳動によって精製され得るということを意味する。単離された要素は、実質的に純粋であってもよいが、純粋である必要はない。単離された要素は医薬調製物中で薬学的に許容し得る賦形剤と混和されてもよいので、要素は、調製物にごくわずかな重量割合で含まれてもよい。要素はそれでもなお、生体系において関連され得る物質から分離された、すなわち、他の脂質またはタンパク質から単離されたという点で単離されている。本明細書で提供される要素のいずれも、単離されて組成物に包含されても、単離された形態で方法において使用されてもよい。
【０１０９】
Ｄ．組成物を作りおよび使用する方法ならびに関係する方法
本発明のある側面は、本明細書で提供される投与の方法のためのプロトコルを決定することに関する。プロトコルは、治療用高分子および免疫抑制剤の投与の頻度、用量および他の側面を変更し、その後にかかる変更に基づいて、治療用高分子特異的なものなどのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）、および／またはいずれかの望ましいまたは望ましくない免疫応答を査定することによって、決定され得る。本発明の実行のための好ましいプロトコルは、治療用高分子特異的ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞などのＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の数または割合（または比）を増大させる。
【０１１０】
合成ナノ担体は当該分野において知られている種々多様な方法を使用して調製され得る。例えば、合成ナノ担体は、ナノ沈殿、流体チャンネルを使用するフローフォーカシング、噴霧乾燥、シングルおよびダブルエマルション溶媒蒸留、溶媒抽出、相分離、ミリング、マイクロエマルション手順、ミクロ加工、ナノ加工、犠牲層、単純および複合コアセルベーションなどの方法、および、当業者に周知の他の方法によって形成され得る。代替的または追加的に、単分散半伝導体または伝導性、磁性、有機および他のナノ材料のための水性および有機溶媒合成が記載されている（Pellegrino et al., 2005, Small, 1 :48; Murray et al., 2000, Ann. Rev. Mat. Sci., 30:545; Trindade et al., 2001, Chem. Mat., 13:3843）。追加の方法が文献に記載されている（例えば、Doubrow, Ed., "Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy," CRC Press, Boca Raton, 1992; Mathiowitz et al., 1987, J. Control. Release, 5: 13; Mathiowitz et al., 1987, Reactive Polymers, 6:275; Mathiowitz et al., 1988, J. Appl. Polymer Sci., 35:755；米国特許第5578325号および6007845号；P. Paolicelli et al., "Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles" Nanomedicine. 5(6): 843-853 (2010)を参照）。
【０１１１】
必要に応じて、C. Astete et al., "Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles" J. Biomater. Sci. Polymer Edn, Vol. 17, No. 3, pp. 247-289 (2006); K. Avgoustakis "Pegylated Poly(Lactide) and Poly(Lactide-Co-Glycolide) Nanoparticles: Preparation, Properties and Possible Applications in Drug Delivery" Current Drug Delivery 1: 321-333 (2004); C. Reis et al., "Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles" Nanomedicine 2:8-21 (2006); P. Paolicelli et al., "Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles" Nanomedicine. 5(6):843-853 (2010)が挙げられるが、これらに限定されない種々の方法を使用して、種々の材料を合成ナノ担体中にカプセル化してもよい。材料を合成ナノ担体中にカプセル化するのに好適な、米国特許第6,632,671号（Unger、2003年10月14日発行）に開示された方法を包含するが、これらに限定されない他の方法を使用してもよい。
【０１１２】
特定の態様において、合成ナノ担体は、ナノ沈殿プロセスまたは噴霧乾燥によって調製される。合成ナノ担体の調製に使用される条件は、望ましいサイズまたは特性（例えば、疎水性、親水性、外部形態学、「粘着性」、形状、等）の粒子を産出するために変え得る。合成ナノ担体の調製方法および使用される条件（例えば、溶媒、温度、濃度、空気流量、等）は、合成ナノ担体に付着すべき材料および／またはポリマーマトリックスの組成に依存し得る。
上記の方法のいずれかによって調製される合成ナノ担体が望ましい範囲を外れるサイズ範囲を有する場合、合成ナノ担体は、例えば、篩いを使用して分粒されてもよい。
【０１１３】
合成ナノ担体の要素（すなわち構成成分）は、例えば、１つまたは２つ以上の共有結合によって合成ナノ担体全面的に付着されてもよいし、１つまたは２つ以上のリンカーを使用して付着されてもよい。合成ナノ担体を官能化する追加の方法は、公開された米国特許出願第2006/0002852号（Saltzman et al.）、公開された米国特許出願第2009/0028910号（DeSimone et al）または公開された国際特許出願WO/2008/127532Al（Murthy et al.）から適合されてもよい。
代替的または追加的に、合成ナノ担体は、直接的に、または非共有結合的相互作用を介して間接的に、構成成分に付着されてよい。非共有結合的な態様において、非共有結合的付着は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせを包含するが、それらに限定されない、非共有結合的相互作用により媒介される。かかる付着は、合成ナノ担体の外部表面または内部表面上に配列されてもよい。ある態様において、カプセル化および／または吸収が付着の形態である。ある態様において、合成ナノ担体は、同じビヒクルまたは送達系中で混和することによって抗原と組み合わされてもよい。
【０１１４】
本明細書で提供される組成物は、無機または有機緩衝剤（例えば、リン酸、カルボン酸、酢酸またはクエン酸のナトリウムまたはカリウム塩）およびｐＨ調節剤（例えば、塩酸、水酸化ナトリウムまたはカリウム、クエン酸または酢酸の塩、アミノ酸およびそれらの塩）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、アルファ−トコフェロール）、界面活性物質（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン９−１０ノニルフェノール、デオキシコール酸ナトリウム）、溶解および／または冷凍／凍結乾燥安定剤(cryo/lyo stabilizer)（例えば、スクロース、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、浸透圧調節剤（例えば、塩または糖）、抗菌剤（例えば、安息香酸、フェノール、ゲンタマイシン）、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロゾン(polydimethylsilozone)、保存剤（例えば、チメロサール、２−フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ）、高分子安定剤および粘度調節剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー４８８、カルボキシメチルセルロース）ならびに共溶媒（例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール）を含んでいてもよい。
【０１１５】
本発明に従う組成物は、薬学的に許容し得る賦形剤を含んでもよい。組成物は、有用な剤形に到達するように従来の医薬製造および配合技術を使用して作られ得る。本発明の実行における使用に好適な技術は、Handbook of Industrial Mixing: Science and Practice, Edited by Edward L. Paul, Victor A. Atiemo-Obeng, and Suzanne M. Kresta, 2004 John Wiley & Sons, Inc.; and Pharmaceutics: The Science of Dosage Form Design, 2nd Ed. Edited by M. E. Auten, 2001, Churchill Livingstoneに見出され得る。ある態様において、組成物は保存剤と一緒に注射用滅菌食塩水溶液中に懸濁される。
本発明の組成物はいずれかの好適な様式で作り得、本発明は本明細書に記載される方法を使用して生成され得る組成物になんら限定されないということを理解すべきである。適切な製造方法の選択は、関連している具体的な部位の性質に対する注意を要する場合がある。
【０１１６】
いくつかの態様において、組成物は、滅菌条件下で製造されるか、または最終的に滅菌される。このことは、結果としてもたらされる組成物が滅菌され、および非感染性であることを確実にし得、こうして非滅菌の組成物と比較したとき安全性を改善する。このことは、とりわけ組成物を受ける対象が免疫欠如を有する、感染症を患う、および／または、感染されやすいときには、価値のある安全対策を提供する。いくつかの態様において、組成物は凍結乾燥されて、製剤戦略に依存して懸濁液中で、または凍結乾燥粉末として、活性を失うことなく長期間保管されてもよい。
【０１１７】
本発明に従う投与は、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、経粘膜、経皮(transdermal)、経皮(transcutaneous)または皮内経路を包含するが、これらに限定されない種々の経路によってよい。好ましい態様において、投与は皮下経路の投与を介する。本明細書で参照される組成物は、従来の方法を使用して、投与、いくつかの態様において併用投与のために製造され、および調製され得る。
本発明の組成物は、本明細書中に別記した有効量などの有効量で投与され得る。剤形の用量は、本発明に従い、変化する量の免疫抑制剤および／または治療用高分子を含有してよい。剤形中に存在する免疫抑制剤および／または治療用高分子の量は、治療用高分子および／または免疫抑制剤の特質、遂行されるべき治療効果ならびに他のかかるパラメータに従い変化されられ得る。ある態様において、剤形中に存在すべき免疫抑制剤および／または治療用高分子の最適な治療量を確立するために、用量範囲の研究を行い得る。ある態様において、免疫抑制剤および／または治療用高分子は、対象への投与の際、治療用高分子に対する寛容原性免疫応答を発生するのに有効な量で剤形中に存在する。好ましい態様において、免疫抑制剤および／または治療用高分子は、対象に併用投与されるときなど、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の産生または発達を増強させる有効量で剤形中に存在する。対象における従来の用量範囲の研究および技術を使用して、望ましい免疫応答を発生させるのに有効な免疫抑制剤および／または治療用高分子の量を決定することが可能であり得る。剤形は、種々の頻度で投与され得る。
【０１１８】
いくつかの態様において、合成ナノ担体に付着されたものなどの免疫抑制剤と治療用高分子との投与は、例えば治療用高分子のその後のさらなる投与の前に、行われる。
本開示の別の側面はキットに関する。いくつかの態様において、キットは、いくつかの態様において合成ナノ担体に付着されている、免疫抑制剤、および治療用高分子を含む。免疫抑制剤および治療用高分子は、キットにおいて別個の容器内に含有され得る。いくつかの態様において、容器はバイアルまたはアンプルである。いくつかの態様において、治療用高分子または免疫抑制剤は、容器とは別の溶液内に含有されて、治療用高分子または免疫抑制剤がその後の時点で容器に加えられるようになされていてもよい。好ましい態様において、治療用高分子は、投与前に免疫抑制剤とともに同時処方されない。いくつかの態様において、治療用高分子または免疫抑制剤は、それぞれ別の容器中に凍結乾燥された形態であって、それらがその後の時点で再構成されるようになされていてもよい。いくつかの態様において、キットはさらに、再構成、混合、投与、等のための使用説明書を含む。いくつかの態様において、使用説明書は本明細書に記載された方法の記載を包含する。使用説明書は、例えば印刷されたインサートまたはラベルのような、いずれか好適な形態であってよい。いくつかの態様において、キットはさらに、１つまたは２つ以上のシリンジまたは免疫抑制剤および治療用高分子を投与するための他の手段を含む。
【０１１９】
例
例１：ポリマー−ラパマイシン複合体を含有するポリマーナノ担体（予言的）
ＰＬＧＡ−ラパマイシン複合体の調製：
酸末端基を有するＰＬＧＡポリマー（7525 DLG1A、酸価０．４６ｍｍｏｌ／ｇで、Lakeshore Biomaterials；５ｇ、２．３ｍｍｏｌ、１．０当量）を３０ｍＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解する。Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．２当量、２．８ｍｍｏｌ、０．５７ｇ）を加え、続いてラパマイシン（１．０当量、２．３ｍｍｏｌ、２．１ｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２．０当量、４．６ｍｍｏｌ、０．５６ｇ）を添加する。混合物を２日間ｒｔで撹拌する。次いで混合物をろ過し、不溶性ジシクロヘキシル尿素を除去する。ろ液を約１０ｍＬの体積まで濃縮し、１００ｍＬのイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）に添加し、ＰＬＧＡ−ラパマイシン複合体を沈殿させる。ＩＰＡ層が除去され、次いでポリマーを５０ｍＬのＩＰＡおよび５０ｍＬのメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で洗浄する。次いでポリマーを、２日間３５℃の真空下で乾燥させ、ＰＬＧＡ−ラパマイシンを白色固体（約６．５ｇ）として得る。
【０１２０】
以下のようにＰＬＧＡ−ラパマイシンを含むナノ担体を調製する：
以下のようにナノ担体形成のための溶液を調製する：
溶液１：塩化メチレン中の１００ｍｇ／ｍｌのＰＬＧＡ−ラパマイシン。溶液を、純粋な塩化メチレン中にＰＬＧＡ−ラパマイシンを溶解することにより調製する。溶液２：塩化メチレン中の１００ｍｇ／ｍｌのＰＬＡ−ＰＥＧ。溶液を、純粋な塩化メチレン中にＰＬＡ−ＰＥＧを溶解することにより調製する。溶液３：１００ｍＭのｐＨ８のリン酸緩衝液中の５０ｍｇ／ｍＬのポリビニルアルコール。
一次油中水エマルションをまず調製する。Ｗ１／Ｏ１は、小型圧力チューブ内に溶液１（０．７５ｍＬ）および溶液２（０．２５ｍｌ）を組み合わせ、Branson Digital Sonifier 250を使用して４０秒間５０％の振幅で超音波処理することによって調製する。Ｗ１／Ｏ１／Ｗ２エマルションを７０ｍＭのｐＨ８のリン酸緩衝溶液（３０ｍｌ）を含有するビーカーに加え、室温で２時間撹拌し、塩化メチレンを蒸発させ、ナノ担体を形成させる。ナノ担体の一部は、ナノ担体の懸濁液を遠心分離管に移し、７５６００×ｇで３５分間４℃で遠心分離し、上清を除去し、リン酸緩衝生理食塩水でペレットを再懸濁することによって洗浄する。洗浄手順を繰り返し、約１０ｍｇ／ｍＬのナノ担体の最終分散のためにペレットをリン酸緩衝生理食塩水に再懸濁する。
【０１２１】
例２：ラパマイシンを含有する金ナノ担体（ＡｕＮＣ）の調製（予言的）
ＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシンの調製：
乾燥ＤＭＦ中のＰＥＧ酸ジスルフィド（１．０当量）、ラパマイシン（２．０〜２．５当量）、ＤＣＣ（２．５当量）およびＤＭＡＰ（３．０当量）の溶液を室温で終夜撹拌する。不溶性ジシクロヘキシル尿素をろ過により除去し、ろ液をイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）に添加し、ＰＥＧ−ジスルフィド−ジ−ラパマイシンエステルを沈殿させ、ＩＰＡで洗浄し、乾燥させる。次いでポリマーをＤＭＦ中のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩で処理し、ＰＥＧジスルフィドをチオールＰＥＧラパマイシンエステル（ＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシン）へ還元させる。得られたポリマーを、ＩＰＡから沈殿により回収し、上記のとおり乾燥させ、Ｈ  ＮＭＲおよびＧＰＣにより分析する。
【０１２２】
金ＮＣ（ＡｕＮＣ）の形成：
１ｍＭのＨＡｕＣｌ４の５００ｍＬの水溶液を、コンデンサーを備えた１Ｌの丸底フラスコ中で激しく撹拌しながら１０分間加熱還流する。次いで４０ｍＭのクエン酸三ナトリウムの５０ｍＬの溶液を急速に撹拌溶液に添加する。得られた深いワインレッドの溶液を２５〜３０分間還流で保持し、熱を回収し、溶液を室温に冷却する。次いで溶液を０．８μｍのメンブレンフィルターでろ過してＡｕＮＣ溶液を得る。ＡｕＮＣは、可視分光法および透過電子顕微鏡を使用することによって特徴付けられる。ＡｕＮＣは約２０ｎｍの径があり、５２０ｎｍで吸収ピークを有するクエン酸によってキャップされる。
【０１２３】
ＡｕＮＣとＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシンとの複合体：
ＨＳ−ＰＥＧ−ラパマイシン（１０ｍＭのｐＨ９．０の炭酸緩衝液中で１０μΜ）１５０μｌの溶液を径２０ｎｍのクエン酸でキャップした金ナノ担体（１．１６ｎＭ）１ｍＬに加え、金に対するチオールのモル比を２５００：１とする。混合物を、１時間、アルゴン下、室温で撹拌し、チオールを金ナノ担体上のクエン酸と完全に交換する。次いで、表面上でＰＥＧ−ラパマイシンを有するＡｕＮＣを３０分間１２０００ｇで遠心分離により精製する。上清を傾瀉し、次いでＡｕＮＣ−Ｓ−ＰＥＧ−ラパマイシンを含有するペレットは、１×ＰＢＳ緩衝液で洗浄したペレットである。精製された金−ＰＥＧ−ラパマイシンナノ担体は、次いでさらなる分析やバイオアッセイのために好適な緩衝液中に再懸濁する。
【０１２４】
例３：付着イブプロフェンを有するメソポーラスシリカナノ粒子（予言的）
メソポーラスＳｉＯ２ナノ粒子コアを、ゾル−ゲルプロセスを介して作製する。ヘキサデシルトリメチル−アンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）（０．５ｇ）を脱イオン水（５００ｍＬ）に溶解し、次いで２ＭのＮａＯＨ水溶液（３．５ｍＬ）をＣＴＡＢ溶液に加える。溶液を３０分間攪拌し、次いで、テトラエトキシシラン（ＴＥＯＳ）（２．５ｍＬ）を溶液に加える。得られたゲルを８０℃の温度で３ｈ撹拌する。形成した白色沈殿物をろ過によって捕捉し、その後は脱イオン水で洗浄し、室温で乾燥させる。次いで残りの界面活性物質をＨＣｌのエタノール溶液中に終夜懸濁することによって粒子から抽出する。粒子をエタノールで洗浄し、遠心分離し、超音波処理下で再分散する。この洗浄手順をさらに２回繰り返す。
次いでＳｉＯ２のナノ粒子を、（３−アミノプロピル）トリエトキシシラン（ＡＰＴＭＳ）を使用してアミノ基で官能化する。これを行うために、粒子をエタノール（３０ｍＬ）に懸濁させ、ＡＰＴＭＳ（５０μＬ）を懸濁液に加える。懸濁液を室温で２ｈ静置し、次いで定期的にエタノールを添加することにより体積を一定に保ちながら、４ｈボイルする。残りの反応物は、遠心分離および純粋なエタノール中での再分散の洗浄の５サイクルによって除去する。
【０１２５】
別の反応では、１〜４ｎｍの径の金種が作成される。この反応で使用される全ての水をまず脱イオン化し、次いでガラスから蒸留する。水（４５．５ｍＬ）を１００ｍＬの丸底フラスコに加える。撹拌しながら、０．２ＭのＮａＯＨ水溶液（１．５ｍＬ）を加え、その後テトラキス（ヒドロキシメチル）ホスホニウムクロリド（ＴＨＰＣ）（１．０ｍＬ）の１％水溶液を加える。ＴＨＰＣ溶液の添加から２分後、少なくとも１５ｍｉｎエージングされた塩化金酸の１０ｍｇ／ｍＬの水溶液（２ｍＬ）を加える。金種を水に対して透析によって精製する。
コア−シェルナノ担体を形成するために、上記形成されたアミノ官能化ＳｉＯ２ナノ粒子をまず室温で２ｈ、金種と混合する。金装飾のＳｉＯ２粒子を、遠心分離によって収集し、塩化金酸および炭酸水素カリウムの水溶液と混合して金のシェルを形成させる。次いで粒子を遠心分離および水中の再分散によって洗浄する。イブプロフェンは、７２ｈ、イブプロフェンナトリウムの溶液（１ｍｇ／Ｌ）で粒子を懸濁させることによって積載する。フリーのイブプロフェンを遠心分離および水中の再分散によって粒子から洗浄する。
【０１２６】
例４：シクロスポリンＡを含有するリポソーム（予言的）
リポソームを、薄膜水和を用いて形成する。１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）（３２μｍｏｌ）、コレステロール（３２μｍｏｌ）およびシクロスポリンＡ（６．４μｍｏｌ）を、純粋なクロロホルム（３ｍＬ）に溶解する。この脂質溶液を、５０ｍＬ丸底フラスコに加え、溶媒を６０℃の温度で、ロータリーエバポレーターで蒸発させる。次いでフラスコを窒素ガスでフラッシュし、残りの溶媒を除去する。リン酸緩衝生理食塩水（２ｍＬ）および５つのガラスビーズをフラスコに加え、脂質膜を１時間６０℃で振とうすることにより水和させ、懸濁液を形成させる。懸濁液を小型圧力チューブに移し、各パルス間に３０ｓの遅延で３０ｓパルスの４サイクル、６０℃で超音波処理する。次いで懸濁液を２ｈ室温で静置し、完全に水和させる。リポソームを遠心分離し、次いで新鮮なリン酸緩衝生理食塩水に再懸濁することによって洗浄する。
【０１２７】
例５：ラパマイシンを含有する合成ナノ担体
材料
ラパマイシンはTSZ CHEM（185 Wilson Street, Framingham, MA 01702）から購入した（製品カタログ# R1017）。７６％ラクチドおよび２４％グリコリド含有量ならびに固有粘度０．６９ｄＬ／ｇのＰＬＧＡをSurModics Pharmaceuticals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード7525 DLG 7A）。およそ５，０００ＤａのＰＥＧブロックおよびおよそ４０，０００ＤａのＰＬＡブロックを有するＰＬＡ−ＰＥＧブロックコポリマーをSurModics Pharmaceuticals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード100 DL mPEG 5000 5CE）。ポリビニルアルコール（８５〜８９％加水分解）はEMD Chemicalsから購入した（製品番号1.41350.1001）。
方法
以下のとおりに溶液を調製した：
溶液１：塩化メチレン中、７５ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡおよび２５ｍｇ／ｍＬのＰＬＡ−ＰＥＧ。この溶液は、純粋な塩化メチレン中にＰＬＧＡおよびＰＬＡ−ＰＥＧを溶解することにより調製した。
溶液２：ラパマイシン、塩化メチレン中１００ｍｇ／ｍＬ。この溶液は、純粋な塩化メチレン中にラパマイシンを溶解することにより調製した。
溶液３：ポリビニルアルコール、１００ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝剤中５０ｍｇ／ｍＬ。
【０１２８】
水中油エマルションを使用してナノ担体を調製した。溶液１（１ｍＬ）、溶液２（０．１ｍＬ）および溶液３（３ｍＬ）を小圧力管中で組み合わせて、Branson Digital Sonifier 250を使用して３０％振幅で６０秒間超音波処理することによってＯ／Ｗエマルションを調製した。このＯ／Ｗエマルションを７０ｍＭのｐＨ８リン酸緩衝溶液（３０ｍＬ）を含有するビーカーに加えて室温で２時間撹拌し、塩化メチレンを蒸発させてナノ担体を形成させた。ナノ担体懸濁液を遠心分離管に移して７５，６００×ｇおよび４℃で３５ｍｉｎ遠心分離し、上清を除去して、リン酸緩衝化食塩水中にペレットを再懸濁することによって、ナノ担体の一部分を洗浄した。洗浄手順を繰り返し、約１０ｍｇ／ｍＬの最終ナノ担体分散液となるようにペレットをリン酸緩衝化食塩水中に再懸濁した。
【０１２９】
ナノ担体のサイズは動的光散乱によって決定した。ナノ担体中のラパマイシンの量はＨＰＬＣ分析によって決定した。懸濁液１ｍＬ当たりの総乾燥ナノ担体質量は比重測定法により決定した。
【表１】
2020015741.tif 000003
【０１３０】
例６：GSK1059615を含有する合成ナノ担体
材料
GSK1059615は、MedChem Express（11 Deer Park Drive, Suite 102D Monmouth Junction, NJ 08852）から購入した（製品コードHY- 12036）。ラクチド：グリコリド比１：１および固有粘度０．２４ｄＬ／ｇのＰＬＧＡを、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード5050 DLG 2.5A）。およそ５，０００Ｄａのメチルエーテル末端ＰＥＧブロックおよび０．２６ＤＬ／ｇの全体的な固有粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅブロックコポリマーを、Lakeshore Biomaterials（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211）から購入した（製品コード100 DL mPEG 5000 5K-E）。Cellgro Phosphate-buffered saline 1X pH 7.4（ＰＢＳ１×）は、Corning（9345 Discovery Blvd. Manassas, VA 20109）から購入した（製品コード21-040-CV）。
【０１３１】
方法
以下のとおりに溶液を調製した：
溶液1：ＰＬＧＡ（１２５ｍｇ）およびＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（１２５ｍｇ）を１０ｍＬのアセトンに溶解した。溶液２：GSK1059615を、１ｍＬのＮ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）中１０ｍｇで調製した。
溶液１（４ｍＬ）および溶液２（０．２５ｍＬ）を小ガラス圧力管中で組み合わせ、この混合物を、２０ｍＬの超純水を含有する２５０ｍＬの丸底フラスコに撹拌下、滴下して加えることにより、ナノ担体を調製した。このフラスコをロータリーエバポリーション装置に取り付け、減圧下アセトンを除去した。ナノ担体懸濁液を遠心分離管に移し、７５，６００ｒｃｆおよび４℃で５０分間遠心分離し、上清を除去し、ペレットをＰＢＳ１×中に再懸濁することによって、ナノ担体の一部分を洗浄した。洗浄手順を繰り返し、ペレットをＰＢＳ１×に再懸濁して、ポリマー基準で１０ｍｇ／ｍＬの公称濃度を有するナノ担体懸濁液を達成した。洗浄したナノ担体溶液を、次いでPallの１．２μｍＰＥＳメンブランシリンジフィルター（部品番号4656）を使用してろ過した。同一のナノ担体溶液を上記のとおりに調製し、ろ過ステップ後に最初のものと共に貯蔵した。この均質な懸濁液は、−２０℃で凍結して保管した。
【０１３２】
ナノ担体のサイズは動的光散乱により決定した。ナノ担体中のＧＳＫ１０５９６１５の量は３５１ｎｍにおけるＵＶ吸収により決定した。懸濁液１ｍＬ当たりの総乾燥ナノ担体質量は比重測定法により決定した。
【表２】
2020015741.tif 000004
【０１３３】
実施例７：合成ナノ担体を用いたＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の誘導
材料
ラパマイシンはTSZ CHEM（185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; 製品コードR1017）から購入した。３：１のラクチド：グリコリド比および０．７５ｄＬ／ｇの固有粘度を有するＰＬＧＡは、SurModics Pharmaceuticals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211; 製品コード7525 DLG 7A）から購入した。メチルエーテルで終了した約５，０００ＤａのＰＥＧブロックおよび０．５ＤＬ／ｇの全体の固有粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅのブロックコポリマーは、Lakeshore Biochemicals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211; 製品コード100 DL mPEG 5000 5CE）から購入した。EMPROVE（登録商標）ポリビニルアルコール４−８８、ＵＳＰ（８５〜８９％加水分解、３．４〜４．６ｍＰａ・ｓの粘度）は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027. 製品コード1.41350）から購入した。
【０１３４】
方法
以下のように溶液を調製した。
溶液１：塩化メチレン中の７５ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡ、２５ｍｇ／ｍＬのＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅ、および１２．５ｍｇ／ｍＬのラパマイシン。溶液は、純粋な塩化メチレン中のＰＬＧＡ、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅ、およびラパマイシンを溶解することにより調製した。溶液２：１００ｍＭのｐＨ８のリン酸緩衝液中に５０ｍｇ／ｍＬのポリビニルアルコール。
水中油エマルションを使用してナノ担体を調製した。Ｏ／Ｗエマルションを、小型圧力チューブ内の溶液１（１．０ｍＬ）および溶液２（３．０ｍｌ）を組み合わせ、Branson Digital Sonifier 250を使用して６０秒間、３０％の振幅で超音波処理することによって調製した。Ｏ／Ｗエマルションを７０ｍＭのｐＨ８のリン酸緩衝液を含有するビーカーに加え、室温で２時間撹拌し、塩化メチレンを蒸発させ、ナノ担体を形成させた。ナノ担体の一部を、ナノ担体の懸濁液を遠心分離管に移し、７５，６００×ｇで５０分間４℃で遠心分離し、上清を除去し、リン酸緩衝生理食塩水でペレットを再懸濁することによって洗浄した。洗浄手順を繰り返した後、ペレットを、約１０ｍｇ／ｍＬの最終ナノ担体の分散のためにリン酸緩衝生理食塩水に再懸濁した。
【０１３５】
ナノ担体のサイズは、動的光散乱によって決定した。ナノ担体におけるラパマイシンの量は、ＨＰＬＣ分析によって決定した。懸濁液１ｍｌ当たりの総乾燥ナノ担体の質量を比重測定法により決定した。
【表３】
2020015741.tif 000005
合成ナノ担体に付着された免疫抑制剤のＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の発達における効果をモニタリングし決定するために、ＣＤ４＋Ｔ細胞を、磁気活性化細胞ソーティング（ＭＡＣＳ）によるネガティブ選択を使用することによってトランスジェニックマウス株ＯＴＩＩから精製した。ＯＴＩＩマウスは、ニワトリオボアルブミンペプチドＯＶＡ３２３〜３３９に特異的なＴ細胞受容体を発現する。単離後、４×１０６個のＣＤ４＋ＯＴＩＩ細胞を、汎白血球マーカーＣＤ４５．１（Ptprca）をコンジェニックに発現するＳＪＬマウスに移植した（SJL-Prprca/BoyAiTac）。レシピエント動物は、未処置のまま（ＰＢＳ注射）か、またはラパマイシン含有ナノ担体単独（ＮＰ［ラパ］）、フリーＯＶＡ３２３〜３３９ペプチド（ｆＯＰＩＩ．３２３）またはラパマイシン含有ナノ担体とＯＶＡ３２３〜３３９ペプチドとの両方の組み合わせを後肢の皮下に注射することによって第１日および第５日に処置した。
【０１３６】
示された処置の第２の投与から５日後の第１０日、動物を屠殺し、注射部位を排出する膝窩リンパ節を採取し、発達の状態を分析し、フローサイトメトリーによってＳＪＬマウスに移入されたＣＤ４＋ＯＴＩＩ細胞を定量化した。
図１に示すように、未処置（ＰＢＳ）であるか、またはラパマイシン含有ナノ担体（ＮＰ［ラパ］）のみを受けた動物は、抗ＣＤ２５抗体および抗Ｆｏｘｐ３抗体で染色することによって特徴付けられる制御性Ｔ細胞の表現型（ＣＤ２５＋Ｆｏｘ３ｐ＋）を獲得した検出不可能なレベルのＯＴＩＩ細胞をいくつか有した。フリーＯＶＡペプチド（ｆＯＰＩＩ．３２３）の投与は、ＣＤ２５＋Ｆｏｘ３ｐ＋細胞の割合において検出可能であるが統計的に有意でない増加をもたらした。対照的に、ラパマイシン含有ナノ担体のＯＶＡペプチドとの併用投与は、ＣＤ２５＋Ｆｏｘ３ｐ＋細胞の強固な集団をもたらし、この組み合わせ処置が、移植されたＣＤ４＋ＯＴＩＩの大部分を誘導し、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）へと発達させることを示した。
これらの結果は、本明細書で提供される免疫抑制剤が、抗原と併用投与されたとき、抗原に特異的なＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の割合の増大などの制御性免疫応答の形成を誘導し得ることを示す。
【０１３７】
実施例８：抗ＰＥＧ免疫応答の評価
材料
ラパマイシンはTSZ CHEM（185 Wilson Street, Framingham, MA 01702; 製品コードR1017）から購入した。３：１のラクチド：グリコリド比および０．７５ｄＬ／ｇの固有粘度を有するＰＬＧＡは、SurModics Pharmaceuticals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211; 製品コード7525 DLG 7A）から購入した。メチルエーテルで終了した約５，０００ＤａのＰＥＧブロックおよび０．５ＤＬ／ｇの全体の固有粘度を有するＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅのブロックコポリマーは、Lakeshore Biochemicals（756 Tom Martin Drive, Birmingham, AL 35211; 製品コード100 DL mPEG 5000 5CE）から購入した。EMPROVE（登録商標）ポリビニルアルコール４−８８、ＵＳＰ（８５〜８９％加水分解、３．４〜４．６ｍＰａ・ｓの粘度）は、EMD Chemicals Inc.（480 South Democrat Road Gibbstown, NJ 08027. 製品コード1.41350）から購入した。
【０１３８】
方法
以下のように溶液を調製した：
溶液１：塩化メチレン中の７５ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡ、２５ｍｇ／ｍＬのＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅ、および１２．５ｍｇ／ｍＬのラパマイシン。溶液は、純粋な塩化メチレン中のＰＬＧＡ、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＯＭｅ、およびラパマイシンを溶解することにより調製した。溶液２：１００ｍＭのｐＨ８のリン酸緩衝液中に５０ｍｇ／ｍＬのポリビニルアルコール。
水中油エマルションを使用してナノ担体を調製した。Ｏ／Ｗエマルションを、小型圧力チューブ内の溶液１（１．０ｍＬ）および溶液２（３．０ｍｌ）を組み合わせ、Branson Digital Sonifier 250を使用して６０秒間、３０％の振幅で超音波処理することによって調製した。Ｏ／Ｗエマルションを７０ｍＭのｐＨ８のリン酸緩衝液を含有するビーカーに加え、室温で２時間撹拌し、塩化メチレンを蒸発させ、ナノ担体を形成させた。ナノ担体の一部を、ナノ担体の懸濁液を遠心分離管に移し、７５，６００×ｇで、５０分間４℃で遠心分離し、上清を除去し、リン酸緩衝生理食塩水でペレットを再懸濁することによって洗浄した。洗浄手順を繰り返した後、ペレットを、約１０ｍｇ／ｍＬの最終ナノ担体の分散のためにリン酸緩衝生理食塩水に再懸濁した。
【０１３９】
ナノ担体のサイズは、動的光散乱によって決定した。ナノ担体におけるラパマイシンの量は、ＨＰＬＣ分析によって決定した。懸濁液１ｍｌ当たりの総乾燥ナノ担体の質量を比重測定法により決定した。
【表４】
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Ｃ５７ＢＬ／６同齢（５〜６週間）雌に、２５０μｇのキーホールリンペットヘモシアニンおよびポリエチレングリコールの複合体（ＫＬＨ−ＰＥＧ）を尾静脈内に毎週ｉ．ｖ．注射し（第０、７、１４、２１、２８、３５、４２、４９日）、最初の５回の注射（ＮＰ［ラパ］、５０μｇのラパマイシン含有量）については０．４７ｍｇのラパマイシン含有ナノ担体も合わせるか、または合わせないで注射した（第０、７、１４、２１、２８日）。次の３回の注射は、同じ量でただＫＬＨ−ＰＥＧからなった。ＰＥＧに対するＩｇＭ抗体応答は、これらの動物の血液中で毎週モニタリングした（第１２、２０、３４、４０、４７、５４日）。
【０１４０】
図２に示すように、同じ溶液中のＫＬＨ−ＰＥＧをｉ．ｖ．併用投与された合成ナノ担体の５用量は、ＰＥＧに対する抗体形成を防止するのに有効だった。これらの結果は、ＰＥＧ化タンパク質と併用投与されたラパマイシン含有ナノ担体が、ＰＥＧに対する抗体形成を低減または防止できることを示す。したがって、本明細書で提供される処置の方法の使用は、ペグ化治療用タンパク質などの治療用タンパク質に対する望ましくない免疫応答を低減するために使用できる。データはまた、かかる効果を達成するための投与スケジュールを実証する。
【０１４１】
実施例９：合成ナノ担体を使用した第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの増大（予言的）
パイロット試験は、第ＶＩＩＩ因子および投与前に同時処方されない合成ナノ担体とともに、可溶性の第ＶＩＩＩ因子を使用して、非ヒト霊長類の対象および実施例１の合成ナノ担体において行われる。５０の非ヒト霊長類の対象は、５つのアーム：プラセボ、次いで用量範囲のために選択された合成ナノ担体の４用量レベル、に無作為に割り当てられる。用量範囲は、第ＶＩＩＩ因子に特異的であろうＣＤ４＋Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞）の最適な増大を選択するように確立される。第０日において、各活性アームの対象は全て、合成ナノ担体の用量を皮下に投与され、合成ナノ担体の用量の２４時間以内に、第ＶＩＩＩ因子の標準注入用量の注入を得る。２週間後、各動物は、可溶性の第ＶＩＩＩ因子の標準用量で負荷され、第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの数または割合は、標準的な技術を使用して測定される。第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの有意な増大を示す４つの活性アーム間から合成ナノ担体の最低用量を試験用量として選択する。
合成ナノ担体の試験用量は、次いで非比例的にヒト対象への投与のためにスケーリングされ、可溶性の第ＶＩＩＩ因子の標準用量で使用される合成ナノ担体の投与用量レベルの範囲を決定するために、ヒト臨床試験において使用される。ここでも、第ＶＩＩＩ因子および合成ナノ担体は、投与前に同時処方されない。合成ナノ担体および第ＶＩＩＩ因子の同時処方されない投与用量は、次いで通常の臨床実践のために利用可能なものとなる。
【０１４２】
実施例１０：合成浸透圧ポンプを使用した第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの増大（予言的）
パイロット試験は、第ＶＩＩＩ因子を、可溶性の第ＶＩＩＩ因子および浸透圧ポンプ（例６に従い一般に調製されるが、例６のGSK1059615をラパマイシンで置き換える）を使用して、非ヒト霊長類対象において実施され、可溶性の第ＶＩＩＩ因子および浸透圧ポンプは投与前に同時処方されない。５０の非ヒト霊長類の対象は、５つのアーム：プラセボ、次いで浸透圧ポンプによって送達され、範囲用量のために選択されるGSK1059615の４用量レベル、に無作為に割り当てられる。用量範囲は、第ＶＩＩＩ因子特異的であろうＣＤ４＋Ｔｒｅｇの最適な増大を選択するように確立される。第０日において、各活性アームの対象はすべて、合成ナノ担体の用量を皮下投与され、合成ナノ担体用量の２４時間以内に第ＶＩＩＩ因子の標準注入用量の注入を得る。２週間後、各動物は、可溶性の第ＶＩＩＩ因子の標準用量で負荷され、第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの数または割合は、標準的な技術を使用して測定される。第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの中で有意な増大を示す４つの活性アーム間からの浸透圧ポンプによって送達されるGSK1059615の最低用量は、試験用量として選択される。
【０１４３】
浸透圧ポンプによって送達されるGSK1059615の試験用量は、次いで非比例的にヒト対象への投与のためにスケーリングされ、可溶性の第ＶＩＩＩ因子の標準用量で使用される浸透圧ポンプによって送達されるGSK1059615の投与用量レベルの範囲を決定するために、ヒト臨床試験において使用される。ここでも、第ＶＩＩＩ因子および浸透圧ポンプは、投与前に同時処方されない。浸透圧ポンプによって送達されるGSK1059615および第ＶＩＩＩ因子の同時処方されない投与用量は、次いで通常の臨床実践のために利用可能なものとなる。
【０１４４】
実施例１１：治療用ポリヌクレオチドを使用した特定のＣＤ４＋Ｔｒｅｇの増大（予言的）
パイロット試験を、アスパラギナーゼｍｍＲＮＡ（一般に米国特許出願第2013/0115272号（Fougerolles et al.）（「ｍｍＲＮＡ」）に従って調製する）および例１の合成ナノ担体を使用して非ヒト霊長類対象において実施し、ｍｍＲＮＡおよび合成ナノ担体は投与前に同時処方されない。５０の非ヒト霊長類対象を無作為に５つのアーム：プラセボ、次いで用量範囲について選択される４つの用量の合成ナノ担体に割り当てる。用量範囲はｍｍＲＮＡ特異的であろうＣＤ４＋Ｔｒｅｇの最適な増大を選択するように確立される。第０日において、各活性アームの対象は全て、合成ナノ担体の用量を皮下投与され、合成ナノ担体用量の２４時間以内に第ＶＩＩＩ因子の標準注入用量の注入を得る。２週間後、各動物をｍｍＲＮＡの標準用量で負荷し、ｍｍＲＮＡ特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの数または割合は、標準的な技術を使用して測定される。ｍｍＲＮＡ特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの中で有意な増大を示す４つの活性アーム間からの合成ナノ担体の最低用量は、試験用量として選択される。
【０１４５】
合成ナノ担体の試験用量は、次いで非比例的にヒト対象への投与のためにスケーリングされ、ヒト臨床試験で使用されて標準用量レベルのｍｍＲＮＡとともに使用される合成ナノ担体の投与用量の範囲を決定する。ここでも、ｍｍＲＮＡと合成ナノ担体は、投与前に同時処方されない。合成ナノ担体およびｍｍＲＮＡの同時処方されない投与用量は、次いで通常の臨床実践のために利用可能なものとなる。
【０１４６】
実施例１２：抗ＰＥＧ免疫応答の評価（予言的）
Ｃ５７ＢＬ／６同齢（５〜６週間）雌に、２５０μｇのキーホールリンペットヘモシアニンおよびポリエチレングリコールの複合体（ＫＬＨ−ＰＥＧ）を尾静脈内に毎週ｉ．ｖ．注射し（第０、７、１４、２１、２８、３５、４２、４９日）、最初の５回の注射については（第０、７、１４、２１、２８日）、０．４７ｍｇのナノ結晶性ラパマイシンも合わせるか、または合わせないで注射した。次の３回の注射は、同じ量でただＫＬＨ−ＰＥＧからなる。ＰＥＧに対するＩｇＭ抗体応答は、これらの動物の血液中で毎週モニタリングした（第１２、２０、３４、４０、４７、５４日）。
ＫＬＨ−ＰＥＧ（ナノ結晶性ラパマイシンなし）のみを受ける動物と比較して、ＫＬＨ−ＰＥＧと併用してナノ結晶性ラパマイシンの用量を受ける動物において、ＫＬＨ特異的ＩｇＭ抗体の力価の低減は、ラパマイシンのナノ結晶性形態が、ＰＥＧ化タンパク質と併用投与したとき、抗体の形成を低減または防止することができることを示す。
【０１４７】
実施例１３：合成ナノ担体を使用した第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの増大（予言的）
パイロット試験は、可溶性の第ＶＩＩＩ因子およびナノ結晶性ラパマイシンを使用して、非ヒト霊長類対象に行われ、第ＶＩＩＩ因子およびナノ結晶性ラパマイシンは投与前に同時処方されない。５０の非ヒト霊長類の対象を無作為に５つのアーム：プラセボ、次いで用量範囲のために選択されたナノ結晶性ラパマイシンの４つの用量レベル、に割り当てられる。用量範囲は、第ＶＩＩＩ因子に特異的であろうＣＤ４＋Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞）の最適な増大を選択するように確立される。第０日において、各活性アームの対象はすべて、ナノ結晶性ラパマイシンの用量を皮下投与され、ナノ結晶性ラパマイシン用量の２４時間以内に第ＶＩＩＩ因子の標準注入用量の注入を得る。２週間後、各動物は、可溶性の第ＶＩＩＩ因子の標準用量で負荷され、第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの数または割合は、標準的な技術を使用して測定される。第ＶＩＩＩ因子特異的ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの中で有意な増大を示す４つの活性アーム間からナノ結晶性ラパマイシンの最低用量は、試験用量として選択される。
【０１４８】
ナノ結晶性ラパマイシンの試験用量は、次いで非比例的にヒト対象への投与のためにスケーリングされ、ヒトの臨床試験で使用され、可溶性の第ＶＩＩＩ因子の標準用量で使用されるナノ結晶性ラパマイシンの投与用量レベルの範囲を決定する。ここでも、第ＶＩＩＩ因子およびナノ結晶性ラパマイシンは、投与前に同時処方されない。ナノ結晶性ラパマイシンおよび第ＶＩＩＩ因子の同時処方されない投与用量は、次いで通常の臨床実践のために利用可能なものとなる。
【図１】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年9月25日(2019.9.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【外国語明細書】
2020015741000001.pdf