(57)【要約】【課題】本発明は運動によって誘発される筋損傷（運動誘発性筋損傷）または当該運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態を抑制するために使用される組成物、並びに運動誘発性筋損傷または当該運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態からの回復を促進するために使用される組成物を提供することを課題とする。【解決手段】本発明の組成物は、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とすることを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷を抑制するための組成物。
【請求項２】
ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷の回復を促進するための組成物。
【請求項３】
ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態を抑制するための組成物。
【請求項４】
ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態からの回復を促進するための組成物。
【請求項５】
前記筋不良状態が、筋機能低下、筋肉痛、筋肉で感じる倦怠感、筋肉のこり、及び筋肉の張りからなる群より選択される少なくとも１つの状態である、請求項３または４に記載する組成物。
【請求項６】
前記ＢＣＡＡジペプチドが、少なくともＩｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、及びＩｌｅ−Ｖａｌからなる群より選択されるいずれか少なくとも１つである請求項１〜５のいずれかに記載する組成物。
【請求項７】
ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物が、ＢＣＡＡジペプチド含有ホエイタンパク質加水分解物である請求項１〜６のいずれかに記載する組成物。
【請求項８】
哺乳類のための医薬品、医薬部外品、または飲食品である請求項１〜７のいずれかに記載する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は運動によって誘発される筋損傷を抑制するために使用される組成物、特に飲食品等としてヒトを始めとする哺乳類に簡便に用いられる組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、運動が有する健康増進効果やアンチエイジング効果が注目され、スポーツや筋力トレーニングなどの運動をする人口が増加している。一方で、過度な運動や不慣れな運動が筋肉の障害を引き起こすことも指摘されている。具体的には、伸張性収縮を伴う運動を行った場合、遅発性筋肉痛（非特許文献１）、筋力低下（非特許文献２）、及び可動域の減少（非特許文献３）が惹起されることが知られている。また、筋損傷を反映する血中マーカーであるクレアチンキナーゼ活性の上昇が見られることも報告されている（非特許文献４及び５）。
【０００３】
このように運動によって誘発される筋損傷（以下、これを「運動誘発性筋損傷」とも称する）は筋機能低下、筋肉疲労または筋肉痛の原因となり、逆に運動による健康増進効果やアンチエイジング効果を低減することにもなる。このため、従来より、運動誘発性筋損傷を抑制するか、またはその回復を促進する効果を有する成分の探索が行われている。こうした効果を有する成分としては、例えば、分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）（特許文献１）；カカオマス及び／またはその加工物（特許文献２）；カテキン類（特許文献３）、９種類のアミノ酸を特定の割合で含有する組成物（特許文献４）；ジュニパーベリー抽出物、ユッカ抽出物、バジル抽出物、マスタードオイル、紫トウモロコシ色素、トコフェロール類、及びクロロフィルから選ばれる一種以上（特許文献５）；乳清タンパク質または乳清タンパク質の加水分解物を含む調製物（但し、グルタミンまたは分岐鎖アミノ酸を含有しないもの）（特許文献６、非特許文献６）が知られている。
【０００４】
しかしながら、分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）ジペプチドがこうした効果を発揮することは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０００−２６２８９号公報
【特許文献２】特開２００６−２８２５７３号公報
【特許文献３】特開２０１０−１１１６０８号公報
【特許文献４】国際公開ＷＯ２０１３／０２１８９１号パンフレット
【特許文献５】特開２０１３−１００２７２号公報
【特許文献６】特表２００９−５３９８８３号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Med Sci Sports Exerc., 16:529-538, 1984.
【非特許文献２】Med Sci Sports Exerc., 24:512-520, 1992.
【非特許文献３】J Sci Med Sport 5(3):204-218, 2002.
【非特許文献４】Med Sci Sports Exerc., 24:512-520, 1992.
【非特許文献５】Int J Sports Med 13: 471-475, 1992．
【非特許文献６】J Sci Med Sport 13(1):178-181, 2010.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、運動誘発性筋損傷を抑制するまたは／及び運動誘発性筋損傷の回復を促進するために用いられる組成物を提供することを目的とする。さらに本発明は運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態（例えば筋機能低下、筋肉疲労または筋肉痛等）の発生を抑制するまたは／及び当該筋不良状態からの回復を促進するために用いられる組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討をしていたところ、ロイシン、イソロイシン及びバリンといった分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）から構成されるジペプチド（本発明ではこれを「ＢＣＡＡジペプチド」と称する）を含有するタンパク質加水分解物を摂取することで、運動によって生じる筋損傷（運動誘発性筋損傷）が有意に抑制されること、また筋損傷の抑制とともに、筋損傷からの回復も良好であることを見出した。また、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物のこうした効果は、加水分解する前のタンパク質や当該タンパク質を構成するアミノ酸含有組成物と比較して有意に高いことから、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物に特徴的に認められるものであることを確認した。
【０００９】
本発明はかかる知見に基づいてさらに研究を重ねて完成したものであり、下記の実施形態を有するものである。なお、本明細書において、前述の通り、分岐鎖アミノ酸は「ＢＣＡＡ」、分岐鎖アミノ酸から構成されるジペプチドは「ＢＣＡＡジペプチド」、また当該ジペプチドを構成するアミノ酸配列を、アミノ酸の三文字記号を用いて「Ｘｘｘ−Ｙｙｙ」として記載する。
【００１０】
（Ｉ）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする組成物
（Ｉ−１）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷を抑制するための組成物。
（Ｉ−２）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷の回復を促進するための組成物。
（Ｉ−３）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態を抑制するための組成物。
（Ｉ−４）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を有効成分とする、運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態からの回復を促進するための組成物。
（Ｉ−５）前記筋不良状態が、筋機能低下、筋肉痛、筋肉で感じる倦怠感、筋肉のこり、及び筋肉の張りからなる群より選択される少なくとも１つの状態である、（Ｉ−３）または（Ｉ−４）に記載する組成物。
（Ｉ−６）前記ＢＣＡＡジペプチドが、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、及びＩｌｅ−Ｖａｌからなる群より選択されるいずれか少なくとも１つである（Ｉ−１）〜（Ｉ−５）のいずれかに記載する組成物。
（Ｉ−７）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物が、ＢＣＡＡジペプチド含有ホエイタンパク質加水分解物である（Ｉ−１）〜（Ｉ−６）のいずれかに記載する組成物。
（Ｉ−８）哺乳類のための医薬品、医薬部外品、または飲食品である（Ｉ−１）〜（Ｉ−７）のいずれかに記載する組成物。
（Ｉ−９）前記飲食品が、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、乳幼児用調製粉乳、妊産婦若しくは授乳婦用粉乳、または運動誘発性筋損傷を抑制するまたは／及び運動誘発性筋損傷の回復を促進するために用いられる旨の表記を付した飲食物である、（Ｉ−８）に記載する組成物。
【００１１】
（ＩＩ）運動誘発性筋損傷の抑制方法または／及び回復促進方法、及びその応用
（ＩＩ−１）被験哺乳類にＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を摂取または投与することを特徴とする、運動誘発性筋損傷の抑制方法または／及び運動誘発性筋損傷からの回復促進方法。
（ＩＩ−２）被験哺乳類にＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を摂取または投与することを特徴とする、運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態の抑制方法または／及び筋不良状態からの回復促進方法。
（ＩＩ−３）前記筋不良状態が、筋機能低下、筋肉痛、筋肉で感じる倦怠感、筋肉のこり、及び筋肉の張りからなる群より選択される少なくとも１つの状態である、（ＩＩ−２）に記載する方法。
（ＩＩ−４）前記ＢＣＡＡジペプチドが、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、及びＩｌｅ−Ｖａｌからなる群より選択されるいずれか少なくとも１つである（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−３）のいずれかに記載する方法。
（ＩＩ−５）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物が、ＢＣＡＡジペプチド含有ホエイタンパク質加水分解物である（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−４）のいずれかに記載する方法。
（ＩＩ−６）被験哺乳類に対するＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の摂取または投与が、被験哺乳類の運動前、運動中及び運動後から選択される少なくとも１つの段階に、被験哺乳類に対して経口的に摂取または投与されるものである（ＩＩ−１）〜（ＩＩ−５）のいずれかに記載する方法。
【００１２】
（III）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の使用
（III−１）運動誘発性筋損傷を抑制するための、組成物の製造のための、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の使用。
（III−２）運動誘発性筋損傷の回復を促進するための、組成物の製造のための、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の使用。
（III−３）運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態を抑制するための、組成物の製造のための、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の使用。
（III−４）運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態からの回復を促進するための、組成物の製造のための、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の使用。
（III−５）前記筋不良状態が、筋機能低下、筋肉痛、筋肉で感じる倦怠感、筋肉のこり、及び筋肉の張りからなる群より選択される少なくとも１つの状態である、（III−３）または（III−４）に記載の使用。
（III−６）前記ＢＣＡＡジペプチドが、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、及びＩｌｅ−Ｖａｌからなる群より選択されるいずれか少なくとも１つである（III−１）〜（III−５）のいずれかに記載の使用。
（III−７）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物が、ＢＣＡＡジペプチド含有ホエイタンパク質加水分解物である（III−１）〜（III−６）のいずれかに記載の使用。
（III−８）組成物が、哺乳類のための医薬品、医薬部外品、または飲食品である（III−１）〜（III−７）のいずれかである、使用。
（III−９）前記飲食品が、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、乳幼児用調製粉乳、妊産婦若しくは授乳婦用粉乳、または運動誘発性筋損傷を抑制するまたは／及び運動誘発性筋損傷の回復を促進するために用いられる旨の表記を付した飲食物である、（III−８）に記載の使用。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、運動誘発性筋損傷抑制効果を有する組成物を提供することができる。また本発明によれば、運動誘発性筋損傷からの回復促進効果を有する組成物を提供することができる。さらに本発明によれば、運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態、具体的には筋機能低下（筋力低下を含む）、筋肉痛、筋肉で感じる倦怠感、筋肉のこり、及び筋肉の張りからなる群より選択される少なくとも１つの状態を抑制する効果を有する組成物を提供することができる。さらにまた本発明によれば、前記筋不良状態からの回復促進効果を有する組成物を提供することができる。
【００１４】
本発明の組成物の有効成分として用いるＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物は、長年食品の原料として用いられている乳ホエイタンパク質、カゼイン、大豆たん白質、小麦グルテン、または牛肉などのタンパク質の加水分解物である。このため、本発明の組成物は、長期間にわたって継続的に服用しても副作用の懸念がなく、安全性が高い点において有利である。特に乳ホエイタンパク質は、通常、ナチュラルチーズの製造過程のうち、原料乳の凝乳過程の後に排出され、廃棄されて産業廃棄物となるものである。本発明の組成物に有効成分として含まれるホエイタンパク質加水分解物（Whey Protein Hydrolysate：ＷＰＨ）は、この産業廃棄物となる乳ホエイタンパク質を再利用して原料とすることができることから、環境面や経済面においても本発明は有用であるといえる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】試験例１の結果を示す。被験動物（雌性Wisterラット）を（Ａ）ホエイタンパク質群（−黒四角−）、（Ｂ）ホエイペプチド群（−▲−）、（Ｃ）アミノ酸混合物群（−◇−）、及び（Ｄ）対照群（−○−）（各群：ｎ＝６）に分けて、運動負荷３０分前と運動負荷１時間後に各被験試料を経口投与した被験動物について、運動前日（Pre）と運動負荷から１日後（Day1）の筋力（％：mean±SEM）の推移を示した図である。図中、「a」と「b」の異符号間で有意差があることを示す（Tukey-Kramer検定）。
【図２】試験例２の結果を示す。被験動物（雌性Wisterラット）を（Ａ）ホエイペプチド群（−●−）と（Ｂ）対照群（−○−）（各群：ｎ＝７）に分けて、運動負荷３０分前と運動負荷１時間後に各被験試料を経口投与した被験動物について、運動前（Pre）、運動負荷から１日後（Day1）、及び運動負荷から２日後（Day2）の下肢筋力を比較した結果を示した図である。図中、「a」と「b」の異符号間で有意差があることを示す（Tukey-Kramer検定）。
【図３】試験例２の結果を示す。前記（Ａ）ホエイペプチド群と（Ｂ）対照群（各群：ｎ＝７）について、運動負荷から１日後（Day1）と運動負荷から３日後（Day3）の血清中の骨格筋トロポニンＩ（skm Tn-I）の濃度（ng/ml）を比較した結果を示す図である。図中、「＊」は対照群とホエイペプチド群との間で有意差があることを示す（Student t-test検定）。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（Ｉ）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物
本発明が対象とするＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物は、タンパク質を加水分解することで調製される分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）から構成されるジペプチド含有組成物である。以下、タンパク質加水分解物（Protein Hydrolysate）を「ＰＨ」と略称して、ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を「ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨ」とも称する。
【００１７】
分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）とは、構造上に分岐鎖を有するアミノ酸であり、具体的にはロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、及びバリン（Ｖａｌ）を挙げることができる。ＢＣＡＡから構成されるジペプチド（ＢＣＡＡジペプチド）としては、具体的には、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、及びＶａｌ−Ｉｌｅを挙げることができる。好ましくはＬｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、及びＶａｌ−Ｌｅｕである。本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、これらのＢＣＡＡジペプチドの１種または２種以上、好ましくは３種以上、より好ましくは５種以上、さらに好ましくは６種以上、特に好ましくは７種以上組み合わせて含有することができる。例えば、本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、及びＶａｌ−Ｌｅｕからなる群より選択されるいずれか少なくとも１つを含有するものであってもよい。なかでも好ましくは、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、及びＶａｌ−Ｌｅｕからなる群より選択されるいずれか少なくとも１つを含有するＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨであり、特に好ましくはＬｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、及びＶａｌ−Ｌｅｕのすべてを含むＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨである。
【００１８】
本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨに含まれるこれらのジペプチドは、ＬＣ／ＭＳやＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより測定することができる。具体的には、後述する製造例１に記載するＬＣ／ＭＳ法及びその条件を用いて測定することができる。例えば、本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、下記のＢＣＡＡジペプチドを、タンパク質含量１ｇあたり下記に示す割合で含むものであってもよい。
Ｉｌｅ−Ｌｅｕ：０．０５〜２５ｍｇ／ｇタンパク質、好適には０．０５〜２０ｍｇ／ｇタンパク質、より好適には０．１〜１５ｍｇ／ｇタンパク質、さらに好適には０．５〜１０ｍｇ／ｇタンパク質。
Ｖａｌ−Ｌｅｕ：０．０５〜５０ｍｇ／ｇタンパク質、好適には０．１〜５０ｍｇ／ｇタンパク質、より好適には０．５〜２５ｍｇ／ｇタンパク質、さらに好適には１〜２５ｍｇ／ｇタンパク質。
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ：０．０５〜５０ｍｇ／ｇタンパク質、好適には０．１〜２５ｍｇ／ｇタンパク質、より好適には０．１〜１５ｍｇ／ｇタンパク質、さらに好適には２〜１０ｍｇ／ｇタンパク質。
Ｉｌｅ−Ｉｌｅ：０．０１〜１０ｍｇ／ｇタンパク質、好適には０．０２〜５ｍｇ／ｇタンパク質、より好適には０．０１〜３ｍｇ／ｇタンパク質、さらに好適には０．１〜１ｍｇ／ｇタンパク質
Ｌｅｕ−Ｉｌｅ：０．０１〜１０ｍｇ／ｇタンパク質、好適には０．０１〜５ｍｇ／ｇタンパク質、より好適には０．０１〜３ｍｇ／ｇタンパク質、さらに好適には０．０１〜１ｍｇ／ｇタンパク質。
Ｌｅｕ−Ｖａｌ：０．０１〜１０ｍｇ／ｇタンパク質、好適には０．０１〜５ｍｇ／ｇタンパク質、より好適には０．０５〜３ｍｇ／ｇタンパク質
Ｉｌｅ−Ｖａｌ：０．０１〜１０ｍｇ／ｇタンパク質、好適には０．０５〜１０ｍｇ／ｇタンパク質、より好適には０．１〜５ｍｇ／ｇタンパク質、さらに好適には０．１〜３ｍｇ／ｇタンパク質。
【００１９】
ここで「タンパク質含量」とは、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨに含まれるアミノ酸、及びＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨに含まれるペプチドを構成するアミノ酸の総量を意味する。かかるタンパク質含量は、ケルダール法によって測定して算出することができる。実際に、ケルダール法の場合には、対象とするＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨに含まれる窒素を測定し、その値に、窒素−タンパク質換算係数（通常６．２５）を乗じて算出することができる。例えば、本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、タンパク質を加水分解することにより得られるものであることから、上記方法によって算出されるＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨのタンパク質含量は、加水分解前のタンパク質のタンパク質含量と理論上は同一になる。
【００２０】
本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、制限されないものの、ＢＣＡＡジペプチド総含有量あたりのＩｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、及びＬｅｕ−Ｌｅｕが占める割合が高いものであることが好ましい。具体的には、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨ中に含まれるＩｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、及びＬｅｕ−Ｌｅｕの割合（総量が占める割合）はＢＣＡＡジペプチド総含有量を１００％とした場合に、６０〜９５％の範囲、好ましくは７０〜９５％、より好ましくは８０〜９５％を例示することができる。一方、ＢＣＡＡジペプチド総含有量あたりのＩｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、及びＩｌｅ−Ｖａｌが占める割合（総量が占める割合）は、ＢＣＡＡジペプチド総含有量を１００％とした場合に、４０〜５％の範囲、好ましくは３０〜５％、より好ましくは２０〜５％を例示することができる。
【００２１】
こうしたＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、後述する製造例１に記載するように、動物または植物に由来する各種のタンパク質を原料としてその全部又は一部を加水分解して調製することができる。原料とする動物性タンパク質としては、乳由来タンパク質（例えば、カゼイン、乳清タンパク質（ホエイタンパク質）が含まれる）、卵由来タンパク質（例えば、卵白タンパク質が含まれる）、及び畜肉（牛肉、豚肉、鶏肉など）または魚介類由来タンパク質を例示することができる。また植物性タンパク質としては小麦由来タンパク質（例えば、グルテンなどが含まれる）、及び大豆由来タンパク質を挙げることができる。ＢＣＡＡの構成割合が多いことから、好ましくは動物性タンパク質である。より好ましくは乳由来タンパク質、特に好ましくは乳清タンパク質（ホエイタンパク質）である。
【００２２】
ホエイタンパク質は、乳からカゼインや脂肪を取り除いた液体部分である乳清（ホエイ）に含まれる球状タンパク質の混合物であり、α−ラクトアルブミン（α−Ｌａ）、β−ラクトグロブリン（β−Ｌｇ）、免疫グロブリン、ラクトフェリン、ウシ血清アルブミン等のタンパク質が含まれている。本発明において、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨの調製に原料として用いられるホエイタンパク質は、乳やホエイから精製されたホエイタンパク質（精製ホエイタンパク質）であってもよいし、また乳やホエイから分離された粗精製のホエイタンパク質（ホエイタンパク質含有物）であってもよい。さらにホエイタンパク質を含む飲食品やその原料（例えば、乳タンパク質以外に他成分を含む組成物など）を用いることもできる。当該飲食品やその原料はホエイタンパク質に加えてカゼインを含むものであってもよい。
【００２３】
上記精製ホエイタンパク質としては、例えば、α−ラクトアルブミン（α−Ｌａ）、β−ラクトグロブリン（β−Ｌｇ）、免疫グロブリン、ラクトフェリン、及びこれらを少なくとも一つ含むタンパク質の混合物等を挙げることができる。また上記粗精製のホエイタンパク質（ホエイタンパク質含有物）としては、牛乳から調製される、例えばホエイの原液（甘性ホエイ、酸ホエイなど）、その濃縮物、その乾燥物（ホエイ粉など）、その凍結物、及びこれらの還元物などを挙げることができる。また、これらには脱塩ホエイ、ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、及びこれらの還元物を含めることができる。また、ホエイタンパク質を含む飲食品またはその原料としては、例えば、生乳、殺菌乳（牛乳など）、脱脂乳、成分調整牛乳、加工乳、乳製品（濃縮乳、粉乳、練乳、発酵乳（ヨーグルトなど）、乳酸菌飲料、プロセスチーズ類、アイスクリーム類、クリーム類）及び乳タンパク質濃縮物（ＭＰＣ）、並びにそれらの濃縮物、それらの乾燥物、それらの凍結物などを挙げることができる。このとき、前記のホエイタンパク質を含んでいる原料や飲食品は、市販品を入手して用いてもよいし、自ら調製して用いてもよい。
【００２４】
本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、前述するタンパク質を１回以上加水分解することによって調製することができる。その手段及び／又は方法は特に制限されるものではない。加水分解は、公知の加水分解方法により実施することができるが、好ましくは、タンパク質分解酵素による加水分解方法を用いることができる。
【００２５】
タンパク質分解酵素は、ホエイタンパク質を加水分解して本発明の効果を発揮するＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを生成するものであれば、特に限定されるものではない。例えば国際公開第２００７／１２３２００号などの記載を参考にして、その種類や反応条件などは任意に設定することができる。例えば、バシラス属（Bacillus）又はアスペルギルス属（Aspergillus）に属する微生物由来のタンパク質分解酵素；パパイヤ由来のパパイン、パイナップル由来のブロメライン、キウイ由来のアクチニダインなどの植物由来のタンパク質分解酵素；パンクレアチン、トリプシン、ペプシン、キモトリプシンなどの動物由来のタンパク質分解酵素が挙げられる。これらは１種単独で、又は２種以上を任意に組み合わせて使用することができる。また、これらのタンパク質分解酵素は、市販品を用いることができる。市販品のタンパク質分解酵素は、例えば、プロテアーゼＭアマノ（アマノエンザイム社）、プロテアーゼＮアマノ（アマノエンザイム社）、プロテアーゼＰアマノ（アマノエンザイム社）、プロテアーゼＡアマノ（アマノエンザイム社）、トリプシン（ノボ社）、ペプシン（和光純薬社）、ウマミザイム（アマノエンザイム社）、フレーバザイム（ノボ社）などがあるが、これに制限されない。本発明の好ましい態様によれば、タンパク質を加水分解するために用いられるタンパク質分解酵素は、バシラス属由来タンパク質分解酵素、アスペルギルス属由来タンパク質分解酵素、トリプシン、ペプシン及びフレーバザイム（ノボ社）からなる群から選択される一種又は二種以上である。
【００２６】
本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、タンパク質を加水分解するタンパク質分解酵素を用いることにより、前述するＢＣＡＡジペプチドが豊富に含まれる加水分解物として調製することができる。例えば、ホエイタンパク質を始めとするタンパク質を加水分解してＩｌｅ−Ｌｅｕのジペプチドをより多く生成するには、ホエイタンパク質をバシラス属由来のプロテアーゼ及びアスペルギルス属由来のプロテアーゼを組み合わせて加水分解を行うことが好ましい。またホエイタンパク質を始めとするタンパク質を加水分解してＬｅｕ−ＬｅｕおよびＬｅｕ−Ｖａｌのジペプチドをより多く生成するには、ホエイタンパク質をペプシンで反応後、アスペルギルス属由来のプロテアーゼで反応させることが好ましい。さらに、ホエイタンパク質を始めとするタンパク質を加水分解してＶａｌ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、及びＬｅｕ−Ｉｌｅのジペプチドをより多く生成するには、ホエイタンパク質をアスペルギルス属由来のプロテアーゼを用いて加水分解することが好ましい。このようにタンパク質分解酵素は、その特性及び目的に応じて、適宜選択使用することができる。
【００２７】
タンパク質分解酵素によりタンパク質を加水分解し、所望のＢＣＡＡジペプチドを生成するための反応温度は、好ましくは２０〜８０℃、より好ましくは２５〜７５℃、さらに好ましくは３０〜７０℃、さらに好ましくは３５〜６５℃、さらに好ましくは４０〜６０℃、特に好ましくは４５〜５５℃である。反応温度が２０℃以上であれば、タンパク質分解酵素によりタンパク質を効率よく加水分解することができる。また、反応温度が８０℃以下であれば、タンパク質分解酵素の変性による失活を抑制することができる。当該反応温度は、使用するタンパク質加水分解酵素の至適温度に鑑み、一定の温度（１段階）に設定してもよいし、また２以上の異なる温度（２段階以上）に設定することもできる。２段階以上の反応温度を設定する場合には、その順番は任意である。
【００２８】
タンパク質加水分解酵素によりタンパク質を加水分解し、所望のＢＣＡＡジペプチドを生成するための反応時間は、制限されないものの、好ましくは２〜４８時間、より好ましくは２〜３６時間、さらに好ましくは２〜２４時間、さらに好ましくは２〜１８時間、さらに好ましくは２〜１４時間、さらに好ましくは４〜１２時間、さらに好ましくは６〜１０時間、特に好ましくは７〜９時間である。タンパク質分解酵素の反応時間を２時間以上とすることで、より多くのタンパク質を加水分解することができる。タンパク質を効率よく加水分解するうえでは、反応時間は４８時間以内に収めることが好ましい。なお、反応温度を２段階以上で設定する場合には、当該反応時間の範囲において、任意に２段階以上の反応温度を設定することができる。
【００２９】
タンパク質分解酵素によりタンパク質を加水分解し、所望のＢＣＡＡジペプチドを生成するためのタンパク質分解酵素の添加量は、本発明の効果を発揮するＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを生成することができれば、特に制限されない。例えば、タンパク質１００ｇに対して、好ましくは０．５〜１０ｇ、より好ましくは０．７〜５ｇ、さらに好ましくは０．８〜４ｇ、特に好ましくは１〜２ｇを挙げることができる。
【００３０】
タンパク質分解酵素によりタンパク質を加水分解し、所望のＢＣＡＡジペプチドを生成するための反応ｐＨは、使用するタンパク質分解酵素が反応するｐＨ範囲であることが望ましく、より好適にはその至適ｐＨまたはその近傍を挙げることができる。例えば、バシラス属由来のタンパク質分解酵素及びアスペルギルス属由来のタンパク質分解酵素を併用する場合には、好ましくはｐＨ５〜９、より好ましくはｐＨ５．５〜８．５、さらに好ましくはｐＨ６〜８、特に好ましくはｐＨ６．５〜７．５である。
【００３１】
当該反応ｐＨは、使用するタンパク質加水分解酵素の至適ｐＨに鑑み、一定のｐＨ条件（１段階）に設定してもよいし、また２以上の異なるｐＨ条件（２段階以上）に設定することもできる。２段階以上のｐＨ条件を設定する場合には、その順番は任意である。
【００３２】
本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨは、調製直後は、液状であるものの、その保存性を高めるために、各種の加工処理を施すことができる。かかる加工処理としては、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨが有する本発明の効果を損なわないことを限度として、例えば凍結、乾燥（噴霧乾燥、凍結乾燥）、濃縮、加熱殺菌（プレート式加熱殺菌、チューブ式加熱殺菌、バッチ式加熱殺菌、通電加熱殺菌、マイクロウエーブ波による加熱殺菌、レトルト加熱などの間接加熱殺菌、スチームインジェクション、スチームインフュージョンなどの直接加熱殺菌）、または非加熱殺菌（光照射殺菌、放射線照射殺菌、高電圧パルス殺菌）を例示することができる。中でも、保存安定性と取扱いの容易さから、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨに調製した後に乾燥（噴霧乾燥、凍結乾燥）処理して、乾燥固体形態としておくことが好ましい。
【００３３】
（II）ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを有効成分とする組成物
後記試験例２に示すように、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを含有する本発明の組成物（以下、単に「本発明組成物」とも称する）は、哺乳動物（ヒト及び非ヒト動物が含まれる）に摂取または投与することで、運動によって誘発される筋損傷（運動誘発性筋損傷）を抑制することができる（図３参照）。またその結果、後記試験例１に示すように運動誘発性筋損傷に起因して生じる筋力低下（筋機能低下）を始めとする筋不良化を抑制することができる（図１参照）。また後記試験例２に示すように本発明組成物を哺乳動物に摂取または投与することで、運動誘発性筋損傷に起因して生じる筋機能低下等の筋不良状態からの回復も速やかである（図２参照）。このため、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを含有する本発明の組成物は、運動誘発性筋損傷を抑制するための組成物として、また運動誘発性筋損傷に起因する筋不良化を抑制するための組成物として有用である。さらに本発明の組成物は、運動誘発性筋損傷からの回復を促進するための組成物として、また運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態からの回復を促進するための組成物として有用である。
【００３４】
本発明において「筋損傷」には、一過性／強度の運動負荷による、筋原線維や筋線維の周囲の結合組織の微細な損傷が含まれる。こうした筋損傷には、さらに損傷の修復過程で生じる炎症反応に起因する二次的損傷、例えば好中球などの炎症性細胞の浸潤、酵素反応による細胞の変性も含めることができる。
【００３５】
こうした筋損傷は、後記試験例２に示すように、血液中の骨格筋トロポニンＩ濃度から評価することができる。骨格筋トロポニンＩは筋肉の損傷により血中に放出されるタンパク質であり、これをバイオマーカーとして、血液中の骨格筋トロポニンＩ濃度を測定することで骨格筋損傷の有無やその程度を評価することができる。具体的には、血液中の骨格筋トロポニンＩ濃度が、安静時（運動前、つまり運動による筋損傷前）の濃度と比較して高い場合は、筋損傷が生じていると判断することができ、その濃度の高さに比例して損傷の程度が高いことを意味する。血液中の骨格筋トロポニンＩ濃度の測定は市販のトロポニンＩ定量キットを用いることで簡便に実施することができる。例えば、制限されないが、ライフ  ダイアグノスティック社のSkeletal Muscle Troponin-I ELISA Kitを挙げることができる。その他、筋損傷によって血中に放出することが知られている血清ミオグロビン、またはクレアチンホスホキナーゼの量を測定することで評価することもできる。また、定性的には筋損傷によって生じる筋肉痛も評価の対象とすることもできる。
【００３６】
本発明において「運動」とは、前述する筋損傷を誘発する運動を意味し、例えば不慣れな運動や久しぶりに行う運動、または、定期的な運動トレーニングのレベルを超える強い負荷の運動を行った場合には筋損傷を誘発しやすくなる。筋損傷を誘発する運動としては、特に伸張性（エクセントリック）筋収縮様式運動、またはそれを伴う運動を挙げることができる。ここで伸張性筋収縮様式運動とは、筋肉が引き伸ばされながら筋力を発揮する運動である。上記の限りにおいて特に制限されないものの、本発明の運動にはジョギング、ランニング、ダンス、水中運動（水泳を含む）、スケート、サイクリング、体操、ヨガ、ストレッチング、ウェイトトレーニング、加圧トレーニング、登山、クライミング、各種スポーツ(例えば、球技、バトミントン、バレエなど)を例示することができる。
【００３７】
本発明でいう「筋損傷の抑制」は、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを服用（投与、摂取）することで、服用しない場合と比較して、運動によって誘発される筋損傷（運動誘発性筋損傷）の程度が低いこと（運動誘発性筋損傷の発生が抑えられていること）を意味する。これは、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを服用した場合と服用しない場合とで、運動前後の上記血中バイオマーカーの濃度差を比較することで評価することができる。具体的には、服用した場合に服用しない場合よりも血中バイオマーカーの濃度上昇が抑制されている場合、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨの服用により運動誘発性筋損傷が抑制されたということができる。
【００３８】
本発明でいう「筋損傷の回復」は、運動によって誘発された筋損傷が、安静時（運動前、つまり運動による筋損傷前）の筋状態またはそれに近い状態に戻ることを意味する。具体的には上記血中バイオマーカーの濃度を測定し、それが安静時（運動前、つまり運動による筋損傷前）と同レベルまたはそれに近いレベルまでに戻るか否か、またその早さを評価することで判定することができる。これも、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを服用した場合と服用しない場合とで、運動後一定時間経過後の上記血中バイオマーカーの濃度を比較することで評価することができる。具体的には、服用した場合に服用しない場合よりも血中バイオマーカーの濃度が速やかに低下して安静レベルまで回復する場合、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨの服用により運動誘発性筋損傷の回復が促進されたということができる。
【００３９】
本発明において「筋不良」または「筋不良状態」とは、前述する筋損傷に起因して生じる筋肉（筋原線維や筋線維の周囲の結合組織を含む）の非正常な状態を意味する。例えば、筋肉に運動負荷が与えられることにより筋肉が損傷し、当該筋損傷に起因して筋肉の機能低下が生じた状態が含まれる。筋肉の機能低下には、筋力低下が含まれる。なお、ラットやマウスなどの被験動物の筋力は、後述する試験例１及び２に記載する方法により、例えば市販のラット足関節用筋力測定装置を用いて最大筋力を測定することで評価することができる。また「筋不良状態」には、筋損傷によって一過性の病的症状（例えば、筋肉痛、筋肉で感じる倦怠感、筋肉のこり、または筋肉の張り）が生じた状態も含まれる。
【００４０】
本発明でいう「筋不良状態の抑制」は、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを服用（投与、摂取）することで、服用しない場合と比較して、運動誘発性筋損傷によって生じる筋不良状態の程度が低いこと（筋不良化が抑えられていること）を意味する。これは、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを服用した場合と服用しない場合とで、運動前後の筋力差を比較することで評価することができる。具体的には、服用した場合に服用しない場合よりも筋力低下が抑制されている場合、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨの服用により運動誘発性筋損傷に起因する筋不良化が抑制されたということができる。なおこの評価は、筋肉痛などの病的症状を指標として行うこともできる。
【００４１】
本発明でいう「筋不良状態の回復」は、運動誘発性筋損傷に起因して生じた筋不良状態が、安静時（運動前、つまり運動による筋損傷前）の筋状態またはそれに近い状態に戻ることを意味し、具体的には筋力を測定し、それが安静時（運動前、つまり運動による筋損傷前）と同レベルまたはそれに近いレベルまでに戻るか否か、またその早さを評価することで判定することができる。これも、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを服用した場合と服用しない場合とで、運動後一定時間経過後の上記筋力を比較することで評価することができる。具体的には、服用した場合に服用しない場合よりも筋力が速やかに回復して安静レベルまで戻った場合、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨの服用により運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態の回復が促進されたということができる。この評価も、筋肉痛などの病的症状を指標として行うこともできる。
【００４２】
本発明において「服用、投与または摂取」には、哺乳動物（ヒト及び非ヒト動物が含まれる）の体内に入れる方法であればよく、制限されないものの、好ましくは経口投与または摂取、経腸投与、及び胃ろうなど、腸内で消化吸収される態様を例示することができ、対象とする哺乳動物の状態や用途により、適宜選択することができる。このため、本発明の組成物は、経口投与用または摂取用の形態、経腸投与用の形態、及び胃ろう用の形態を有しており、当該形態に調製することができる。好ましくは経口摂取であり、本発明の組成物は好適には経口摂取用の形態を有する。
【００４３】
本発明組成物は、哺乳類（ヒト及びヒトを除く哺乳動物）を対象とした医薬品、医薬部外品、または飲食品の形態に調製され、当該用途で使用することができる。好ましくは飲食品の形態に調製され、飲食品として用いられる。本発明組成物は、本発明の効果を発揮することを限度として、本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨに加えて、その他の原料、例えば可食性原料（例えば食品素材）または／及び可食性の添加物（例えば食品添加物や医薬品添加物）を添加することができる。例えば、本発明組成物に嗜好性を付与するために、甘味料（砂糖類、液糖類、果糖、麦芽糖、三温糖など）、糖アルコール（エリスリトールなど）、高感度甘味料（例えばステビア、ラカンカ、アスパルテーム、スクラロース、アセスルファムカリウムなど）、酸味料、香料、果汁、野菜汁、増粘多糖類、乳化剤、矯味剤、矯臭剤などを添加することができる。また、本発明組成物に追加の機能付与（栄養機能、生理機能）を目的に、ミネラル類（カルシウム、鉄、マンガン、マグネシウム、亜鉛など）、ビタミン類、機能性素材、プロバイオティクス乳酸菌などを添加して、本発明組成物とすることもできる。
【００４４】
本発明組成物が、医薬品または医薬部外品の形態に調製される場合、当該組成物は、制限されないものの、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、内服液剤、シロップ剤などの経口投与形態を有することができる。この場合、有効成分としてＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを配合する他、必要に応じて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、緩衝剤、安定化剤、着色剤、矯味剤、または矯臭剤などを配合して、上記の経口投与形態を有する医薬品または医薬部外品に調製することができる。
【００４５】
本発明組成物が飲食用途で使用されるものである場合、当該組成物は、制限されないものの、各種の飲食品の形態を有することができる。飲食品の形態としては、溶液、懸濁液、乳濁液、粉末、固体成形物など、経口摂取可能な形態であればよく、特に限定されない。具体的には、例えば、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁入り飲料、野菜入り飲料、豆乳入り飲料、乳入り飲料、乳飲料、粉末飲料、濃縮飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉などの小麦粉製品；飴、グミ、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、バー形状菓子、ゼリー、ジェル、和菓子、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、シリアルなどの農産加工品；冷蔵・冷凍食品などが挙げられる。好ましくは、飲食品は、乳入りの製品であり、より好ましくは乳飲料、乳酸菌飲料などの乳製品である。飲食品の形態には、いわゆるサプリメントや栄養補助食品のように、前記医薬品や医薬部外品と同様に、例えば錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤（粉末）、カプセル剤、内服液剤、シロップ剤などの製剤形態も含まれる。なお、これらの製剤形態の組成物は、そのまま、必要に応じて水等の飲みものと一緒に服用してもよいし、また、水や牛乳等の飲みものやスープまたはその他の総菜に溶解・分散して服用・摂取することもできる。
【００４６】
また、ヒトを対象とした飲食品には、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、機能性表示食品、特定保健用食品、病者用食品、乳幼児用調整粉乳、妊産婦もしくは授乳婦用粉乳のような分類のものも包含される。本発明の飲食品には「運動による筋損傷または／および筋不良状態を抑制する」、「運動による筋損傷または／および筋不良状態から保護する」、「運動による筋損傷または／および筋不良状態からの回復を促進する」などの旨の表示が付されてもよい。なお、上記「筋不良状態」という用語には、筋力低下、筋機能低下、筋肉痛、筋肉で感じる倦怠感、筋肉のこり、または筋肉の張りという意味も含まれる。
【００４７】
なお飲食品が非ヒト動物を対象とするものである場合、つまり本発明の組成物が非ヒト動物に対する飼料として使用される場合、対象とする非ヒト動物には、ラット、マウス、ウサギ、イヌ、サルなどの実験動物：牛、豚、鶏、及び馬などの家畜；競走馬、闘牛、闘犬等の競技用の動物；犬や猫等のペットが含まれる。飼料の製造には、本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨに加えて、必要に応じて、その他の原料（例えば肉類を含むタンパク質、穀物類、糠、粕、糖類、野菜、ビタミン類、またはミネラルなど）、または／及び添加剤（例えば、ゲル化剤、保済剤、ｐＨ調整剤、調味料、防腐剤、栄養補強剤等）を配合し、常法により飼料を加工製造することができる。
【００４８】
本発明の組成物は、市場での提供を目的として、容器入りの形態にすることができる。
容器入りの形態としては、本発明の組成物を固体状に調製し容器に充填した態様を挙げることができる。かかる固体状の形態としては、粉末及び顆粒を挙げることができる。この場合の容器としては紙、袋、箱、缶、ビンなど、公知のものを使用することができる。このときの容器の内容量は、特に制限はなく、例えば、１〜５０００ｇ、４〜１０００ｇ、４〜１００ｇ、４〜３０ｇなどが例示される。
【００４９】
また本発明の組成物は、市場での提供を目的として、容器入り飲料の形態にすることができる。ここで容器は、飲料が充填されてそのまま飲用することができる容器であればよく、紙容器、ソフトバック、ペットボトル、缶、ビンなど、公知のものを使用することができる。当該飲料は、上記粉末または顆粒を飲用水に分散溶解して調製することができる。容器の容量は、特に制限はなく、例えば、１〜５０００ｇ、５〜１０００ｇ、１０〜５００ｇなどが例示される。
【００５０】
本発明の一つの実施態様によれば、例えば、本発明の組成物では、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨのＢＣＡＡジペプチドの総量が一回投与（摂取）あたり、０．１ｇ以上（好ましくは１ｇ以上）となるように摂取（投与）させてもよい。好ましくは一回投与（摂取）あたりのＢＣＡＡジペプチドの総量が０．１〜４０ｇであり、より好ましくは０．１〜３０ｇ、さらに好ましくは１〜３０ｇ、特に好ましくは１〜２０ｇ、さらに好ましくは１〜１０ｇとなるように摂取（投与）させることができる。
【００５１】
「一回投与（摂取）量」とは、本発明の効果を必要とする状態の一回ごとの量を意味する。例えば、１日の所定時間に一連の運動（これを1回とカウントする）を行う場合、その運動前、運動中または／及び運動後に、投与または摂取する総量を意味する。
【００５２】
本発明の組成物を被験哺乳類（ヒトまたは非ヒト哺乳動物）に投与する（摂取させる）時期は、運動によって誘発される筋損傷を抑制しまたは／及びそれからの回復を促進する観点からは、運動の前、運動中または／及び運動後である。好ましくは運動前または／及び運動後１５分〜２４０分、より好ましくは運動前または／及び運動後３０分〜１８０分、さらに好ましくは運動前または／及び運動後４５分〜１３５分に摂取させることができる。また運動をしない場合は、任意の時期に投与する（摂取させる）ことができるが、食前や食間などの比較的空腹なときに投与（摂取）するほうが吸収されやすいため、より高い効果を得ることができる。
【００５３】
本発明の別の実施態様によれば、例えば、本発明の組成物は、一回投与（摂取）あたりの単位包装形態で提供してもよい。当該単位包装形態を有する本発明の組成物は、当該単位中に、前記ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを、一回投与（摂取）量としてＢＣＡＡジペプチド総量換算で０．１ｇ以上（好ましくは１ｇ以上）に調製したものが望ましい。また、一回投与（摂取）量としてＢＣＡＡジペプチド総量換算で４０ｇ以下（好ましくは３０ｇ以下）に調製したものが望ましい。つまり、単位包装当たりの本発明のＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨの含有量は、一回投与（摂取）量としてＢＣＡＡジペプチド総量換算で、０．１〜４０ｇ、好ましくは０．１〜３０ｇ、より好ましくは１〜３０ｇ、特に好ましくは１〜２０ｇ、さらに好ましくは１〜１０ｇとすることができる。ここで、「一回投与（摂取）あたりの単位包装形態」からなるとは、一回投与（摂取）あたりの量があらかじめ定められた形態のものであり、例えば、特定量を経口摂取し得る飲食品として、一般食品のみならず、飲料（ドリンク剤など）、健康補助食品、保健機能食品、サプリメントなどの形態を意味する。「一回投与（摂取）あたりの単位包装形態」では、例えば、液状の飲料、ゲル状・糊状・ゼリー、粉末状・顆粒状・カプセル状・ブロック状の固体状の食品などの場合には、金属缶、ガラスビン（ボトルなど）、プラスチック容器（ペットボトルなど）、パック、パウチ、フィルム容器、紙箱などの包装容器で特定量（用量）を規定できる形態、あるいは、一投与（摂取）あたりの量（用法、用量）を包装容器やホームページなどに表示すること、計量するための器具（スプーンなど）を容器に添付することで特定量を規定できる形態が挙げられる。本発明の組成物は、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを有効成分として用いるため、その原料となるタンパク質と比較して、加熱によるゲル化が少なく、このため、飲料、ゼリー等の製造工程において適した物性を維持することができる。また、本発明の組成物は、少量の摂取であっても本発明の効果を奏するため、一口サイズのブロック状や、一飲みで摂取できるミニ缶飲料など、どのような形態であっても、摂取・嚥下が容易であり、子供や高齢者にとっての利便性を向上することができる。
【００５４】
本発明の組成物は、複数の成分が配合された組成物の形態で提供することができる。本発明の組成物の形態は、本発明の効果を奏する限り特に限定されるものではないが、例えば、固体状（粉末状、顆粒状、カプセル状、ブロック状など）、半固体状、液状、ゲル状、糊状、ゼリー状、ペースト状などの形態をとることができ、好ましくは粉末状、顆粒状、ゼリー状である。組成物には、食品組成物及び医薬組成物が包含される。
【００５５】
本発明の別の面によれば、ＢＣＡＡジペプチド含有ＰＨを哺乳動物（ヒト又は非ヒト動物が含まれる）に摂取させるか、あるいは投与することを含んでなる、運動誘発性筋損傷抑制方法、運動誘発性筋損傷の回復を促進する方法、運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態の抑制方法、及び運動誘発性筋損傷に起因する筋不良状態からの回復方法が提供される。これらの方法は、前述する本発明の組成物についての記載内容に従って実施することができる
【００５６】
ここで、本発明の方法においては、哺乳類（ヒト及び非ヒト哺乳動物）並びにこれらに由来する試料（筋肉組織、筋肉細胞）における使用であってもよく、治療的使用と非治療的使用のいずれもが意図される。ここで、「非治療的」とはヒトを手術、治療又は診断する行為（すなわち、ヒトに対する医療行為）を含まないことを意味し、具体的には、医師又は医師の指示を受けた者がヒトに対して手術、治療又は診断を行う方法を含まないことを意味する。
【実施例】
【００５７】
以下、製造例及び実験例を挙げて、本発明をより詳細に説明する。但し、これらの製造例および実験例は、本発明の理解を容易するための説明に利用した一例であり、本発明はこれらによって何ら制限されるものではない。なお、特に言及しない限り、下記の製造例及び実験例は、室温（25±5℃）及び大気圧の条件で行った。また、被験試料中に含まれるタンパク質含量は、特に言及しない限り、ケルダール法を用いて測定した。
【００５８】
製造例１
（１）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物（乾燥粉末物）の製造
カゼイン、大豆タンパク質、小麦グルテン、乳ホエイタンパク質、および牛肉のそれぞれ５０ｇを水１Ｌに入れて分散させた。それぞれの分散液のｐＨを７．０に調整した後、５０℃に加熱し、保温した。これにバシラス属由来のプロテアーゼ（プロテアーゼＭアマノ、アマノエンザイム社）５００ｍｇとアスペルギルス属由来のプロテアーゼ（プロテアーゼＮアマノ、アマノエンザイム社）５００ｍｇを加え、８時間インキュベートし、その後９０℃で１０分間加熱することによりプロテアーゼを失活させた。斯くして得られた溶液を凍結乾燥することにより粉末状にした（粉末状タンパク質加水分解物）。
【００５９】
（２）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の分析
前記で得られた粉末状タンパク質加水分解物を、各々１０００倍容量（体積比）の０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液に溶解し、下記条件のＬＣ／ＭＳを用いて、ＢＣＡＡジペプチドであるＩｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、およびＩｌｅ−Ｖａｌの含量を定量した。
【００６０】
［ＬＣ条件］
カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ−３（１５ｍｍ×２ｍｍ）
移動相：Ａ液：０．０５％  ＴＦＡ水溶液
Ｂ液：０．０５％  ＴＦＡアセトニトリル溶液
グラジエント：移動相の通液開始から０分：Ａ液９７体積％及びＢ液３体積％
移動相の通液開始から４０分後：Ａ液８０体積％及びＢ液２０体積％
になるようにグラジエントをかけた。
カラム温度：３５℃
流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
【００６１】
［ＭＳ条件］
Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ：ＡＰＩ−ＥＳ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ＳＩＭ  ｉｏｎ：ｍ／ｚ  ２４５
Ｄｒｙｉｎｇ  ｇａｓ：１０Ｌ／ｍｉｎ  ａｔ  ３５０℃
Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ：２５ｐｓｉｇ
Ｆｒａｇｍｅｎｔｏｒ：３０Ｖ
ＥＭ  ｇａｉｎ：１
【００６２】
カゼイン、大豆タンパク質、小麦グルテン、乳ホエイタンパク質、および牛肉から調製された各粉末状タンパク質加水分解物中に含まれている各種ＢＣＡＡペプチドの量（ｍｇ／ｇタンパク質）を表１に示す。
【００６３】
【表１】
2020176100.tif 000002
【００６４】
製造例２
（１）ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物（乾燥粉末物）の製造
乳ホエイタンパク質５０ｇを水１Ｌに入れて溶解した。溶液を各種ｐＨに調整した後、下記（ａ）〜（ｍ）に示すように各種酵素５００ｍｇを加えて加水分解処理をした。その後９０℃で１０分間加熱することによりプロテアーゼを失活させた。斯くして得られた溶液を凍結乾燥することにより粉末状のタンパク質加水分解物を取得した。
【００６５】
（ａ）バシラス属由来のプロテアーゼ（プロテアーゼＭアマノ、アマノエンザイム社）を用いて、ｐＨ７及び５０℃の条件で８時間反応；
（ｂ）アスペルギルス属由来のプロテアーゼ（プロテアーゼＮアマノ、アマノエンザイム社）を用いて、ｐＨ７及び５０℃の条件で８時間反応；
（ｃ）トリプシン（ノボ社）を用いて、ｐＨ７及び３７℃の条件で８時間反応；
（ｄ）ペプシン（和光純薬）を用いて、ｐＨ２.５及び３７℃の条件で８時間反応；
（ｅ）フレーバザイム（ノボ社）を用いて、ｐＨ７及び５０℃の条件で６時間反応；
（ｆ）アスペルギルス属由来のプロテアーゼ（ウマミザイム、アマノエンザイム社）を用いて、ｐＨ７及び５０℃の条件で６時間反応；
（ｇ）アスペルギルス属由来のプロテアーゼ（プロテアーゼＡアマノ、アマノエンザイム社）を用いて、ｐＨ７及び５０℃の条件で６時間反応；
（ｈ）アスペルギルス属由来のプロテアーゼ（プロテアーゼＰアマノ、アマノエンザイム社）を用いて、ｐＨ７及び５０℃の条件で６時間反応；
（ｉ）上記（ａ）と（ｂ）をそれぞれ５００ｍｇずつ用いてｐＨ７及び５０℃の条件で８時間反応；
（ｊ）上記（ｃ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び３７℃の条件で４時間反応後、（ａ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び５０℃の条件で４時間反応；
（ｋ）上記（ｃ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び３７℃の条件で４時間反応後、（ｂ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び５０℃の条件で４時間反応；
（ｌ）上記（ｄ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び３７℃の条件で４時間反応後、（ａ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び５０℃の条件で４時間反応；
（ｍ）上記（ｄ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び３７℃の条件で４時間反応後、（ｂ）を５００ｍｇ用いてｐＨ７及び５０℃の条件で４時間反応。
【００６６】
上記方法で調製したタンパク質加水分解物について、製造例１と同様にＬＣ／ＭＳを用いて分析し、全てのタンパク質加水分解物中に、ＢＣＡＡジペプチドであるＩｌｅ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、およびＩｌｅ−Ｖａｌが含まれていることを確認した。（ｉ）の結果から、（ａ）のバシラス属由来のプロテアーゼと（ｂ）のアスペルギルス属由来のプロテアーゼとを組み合わせて反応させることでＩｌｅ−Ｌｅｕを多く含むタンパク質加水分解物が得られることが確認された。また、（ｂ）のアスペルギルス属由来のプロテアーゼで反応させることで、タンパク質加水分解物中のＶａｌ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ｌｅｕ−Ｉｌｅまたは／およびＩｌｅ−Ｖａｌの含有量を高めることができることが確認された。また（ｍ）の結果から、（ｄ）のペプシンで反応後、（ｂ）のアスペルギルス属由来のプロテアーゼで反応させることで、タンパク質加水分解物中のＬｅｕ−Ｌｅｕまたは／およびＬｅｕ−Ｖａｌの含有量を高めることができることが確認された。
【００６７】
試験例１
ラットを試験対象として運動誘発性筋損傷に対するＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物の抑制効果を評価した。
【００６８】
１．試験方法
（１）被験動物・飼育条件
被験動物と飼育条件を表２に示す。入荷時より通常飼料と水道水を自由摂取させ、１０日間の環境馴化後、試験を開始した。なお、試験にあたり、被験動物の運動前日の筋力値と体重が均等になるように、各群６匹ずつ、下記の４群に群分けした。
（Ａ）ホエイタンパク質群：ホエイタンパク質投与（投与容量10 mL/kg BW。各群同じ。）
（Ｂ）ホエイペプチド群：ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物投与
（Ｃ）アミノ酸混合物群：アミノ酸混合物投与
（Ｄ）対照群：上記に代えて超純水を投与
【００６９】
【表２】
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【００７０】
（２）被験試料
被験動物に投与する被験試料として、下記の３種の試料を用意した。
【００７１】
（ａ）ホエイタンパク質
ホエイたんぱく濃縮物（ＷＰＣ）を用いた。当該ホエイタンパク質中のタンパク質含量は７９．３ｇ／１００ｇであった（TATUA社・分析値）。表３に当該ホエイタンパク質を構成するアミノ酸組成比を示す。下記表に示すようにアミノ酸総量１００質量％中に含まれる分岐鎖アミノ酸（Leu、Ile、Val）の割合は２０．９質量％であった。投与容量１０ｍＬ／ｋｇ体重中のホエイタンパク質の質量（乾燥重量）が３．６ｇ／ｋｇ体重になるように、超純水に溶解したものを被験試料とした。
【００７２】
【表３】
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【００７３】
（ｂ）ホエイペプチド：ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物
ホエイペプチドとして、前記ホエイタンパク質を、製造例１に準じてプロテアーゼにより加水分解することで調製したホエイタンパク質加水分解物（乾燥粉末物）を用いた。当該ホエイペプチド中のタンパク質含量は７９．１ｇ／１００ｇであった。当該ホエイペプチドに含まれているＢＣＡＡジペプチドの含有量を表４に示す。当該ＢＣＡＡジペプチドの含有量は製造例１に記載するＬＣ／ＭＳ法に従って分析した値である。
【００７４】
【表４】
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前記の被験試料ホエイタンパク質とタンパク質含量を揃え、投与容量１０ｍＬ／ｋｇ体重中のホエイペプチドの質量（乾燥重量）が３．６ｇ／ｋｇ体重になるように、超純水に溶解したものを被験試料とした。
【００７５】
（ｃ）アミノ酸混合物
各種アミノ酸（和光純薬）を用いて、表３に示したホエイタンパク質のアミノ酸組成比からなるアミノ酸混合物を調製した。前記の被験試料ホエイタンパク質と窒素含量を揃え、投与容量１０ｍＬ／ｋｇ体重中のアミノ酸の総質量（乾燥重量）が３．２ｇ／ｋｇ体重になるように、超純水に溶解したものを被験試料とした。
【００７６】
（３）試験方法
被験動物（ラット）を馴化飼育後、４群（ｎ＝６）に分け、その翌日、各群のラットに試験試料を経口投与（投与容量１０ｍＬ／ｋｇ体重）した。そして当該経口投与の３０分後に下記の方法に従って強制的に運動負荷を行い、筋損傷を誘発させた（０日）。また運動負荷から１時間後に、再び試験試料を経口投与した（投与量は前記の通り）。運動負荷から１日後、全被験動物について下記の方法に従って下肢筋力を測定した。
【００７７】
［強制運動負荷］
ラットをイソフルラン麻酔下でラット足関節用筋力測定装置の固定台上にうつ伏せに寝かせた。右下肢の膝を圧迫固定し、足関節をフットプレートに固定した。ふくらはぎに皮膚電極を貼り、電気刺激（Duration:4 ms, interval:10 ms, train:150）開始直後にサーボモーターによりフットプレートを動かし、足関節を角速度１８０°／秒で５０度背屈させた。なお、ここで角速度は、時計回りの向きに単位時間（１秒）当りに変化させた角度の量である。このような強制的な運動負荷を２９秒に１回のペースで４０回繰り返した。
【００７８】
［筋力測定法］
ラットの下肢筋力の測定は、ラット足関節用筋力測定装置（ラット・マウス足関節用筋機能評価運動装置：バイオリサーチセンター株式会社）を用いて行った。ラットをイソフルラン麻酔下で、筋力測定装置の専用固定台上にうつ伏せに固定した。右下肢の膝を圧迫固定し、足関節角度90°となるようにフットプレートに固定した。右下肢のふくらはぎ内側部分およびアキレス腱直上部に皮膚電極（ビトロードV φ2 VS-12JS3：日本光電）を貼り、電気刺激（Duration 4 ms、Interval 10 ms(刺激周波数100Hz)、Train 100（刺激時間1 sec））を１回与え、最大筋力を測定した。筋力測定は計３回行い、最も高い筋力値を最大筋力として採用した。尚、２回目以降の筋力測定は、膝の圧迫固定からやり直して実施した。
【００７９】
データは平均値±標準誤差で表した。統計解析は統計ソフトStatLight 2000 (ユックムス株式会社)を用いた。群間の比較はTukey-Kramerの多重比較検定を行い、群内の比較はpaired t-testで検定を行い、有意水準は5%未満とした。
【００８０】
２．試験結果
運動負荷の前日（pre）から運動負荷から１日後（運動翌日）（Day1）までの筋力推移を図１に示す。なお、図１には運動負荷前日（Pre）の筋力を１００％とした場合の相対値（％）を示す。データは平均値±標準誤差で表した。統計解析は統計ソフトStatLight 2000 (ユックムス株式会社)を用いた。群間の比較はTukey-Kramerの多重比較検定を行い、群内の比較はpaired t-testで検定を行い、有意水準は５％未満とした（試験例２も同じ）。
【００８１】
図１から分かるように、対照群（−○−）の運動翌日（Day1）の筋力は、運動前（Pre）に比べて２０．７％も低下したのに対して、ホエイペプチド群（−▲−）の運動翌日の筋力は、運動前に比べて約４％の低下に留まっており、筋力の低下が有意に抑制されていることが確認された（p=0.0028：Tukey-Kramer)。一方、ホエイタンパク質群（−黒四角−）およびアミノ酸混合物群（−◇−）の運動翌日の筋力は、対照群の低下よりも抑制されていたものの（約10〜11％の低下）、対照群との間に有意な差は認められなかった。このことから、ホエイペプチド（ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物）は、ホエイタンパク質やアミノ酸に比べて、それを運動前または／及び運動後に経口摂取することで、運動による筋力低下を抑制する効果が高いことが確認された。
【００８２】
また後述する試験例２の結果から、運動による筋力低下は、運動負荷によって筋線維が損傷することに起因することが確認された。このことから、ホエイペプチド（ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物）の運動前または／及び運動後の経口摂取により運動によって生じる筋損傷が有意に抑制（軽減）されるものと考えられる。
【００８３】
試験例２
ホエイペプチドとして、ＢＣＡＡジペプチドを前述の表４に示す割合で含むＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物を用いて、試験例１と同様の方法にて、ラット（表２参照）を被験対象とした運動誘発性筋損傷に対する抑制効果を評価した。
当該ホエイペプチド中のタンパク質含量は７９．１ｇ／１００ｇであった。投与容量１０ｍＬ／ｋｇ体重中のホエイペプチドの質量（乾燥重量）が３．６ｇ／ｋｇ体重になるように、当該ホエイペプチドを超純水に溶解したものを被験試料とした。
【００８４】
（１）試験方法
被験動物（ラット）を馴化飼育後、体重および筋力を測定し、それらが均等になるように、下記の２群（n=7）に分けた。
（Ａ）ホエイペプチド群：ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物投与
（Ｂ）対照群：上記に代えて超純水を投与
【００８５】
［筋力測定］
翌日、各群に被験試料を経口投与し（投与容量１０ｍＬ／ｋｇ体重）、当該経口投与の３０分後に強制的に運動負荷を行い、筋損傷を誘発させた（０日）。運動負荷から１時間後に、再び試験試料を経口投与した。運動負荷から１日後及び２日後の２回、全被験動物の下肢筋力を測定した。
【００８６】
［血中マーカー］
筋損傷の指標（血中マーカー）として、運動後に血中に漏出してくる筋由来のタンパク：骨格筋トロポニンＩ（skm Tn-I）を測定した。具体的には、運動負荷から１日後の筋力測定前、及び運動負荷から３日後に、尾静脈より採血し、調製した血清（200μL）中に含まれる骨格筋トロポニンＩ（skm Tn-I）量を、Rat Skeletal Muscle Troponin-I ELISA Kit（Life Diagnostics）を用いて測定した。
【００８７】
（２）試験結果
［筋力測定法］
運動負荷前、運動負荷から１日後（運動翌日）（Day1）、及び運動負荷から２日後（運動２日後）（Day2）における筋力の経時的変化を図２に示す。なお、図２には運動負荷前日（Pre）の筋力を１００％とした場合の相対値（％）を示す。図２から分かるように、対照群（−○−）の運動翌日（Day1）の筋力は、運動前に比べて３０．６％も低下したのに対して、ホエイペプチド群（−●−）の運動翌日の筋力は、運動前に比べて１４．５％の低下に留まっており、筋力の低下が有意に抑制されていることが確認された（Day1:p=0.0191、Day2:p=0.0134：Tukey-Kramer）。さらにホエイペプチド群は、運動負荷から２日後（Day2）には、ほぼ筋力が回復しており、対照群と比較して筋力の回復も早いことが確認された（筋力回復促進）。
【００８８】
［血中マーカー］
ホエイペプチド群及び対照群の各々について、運動負荷から１日後（運動翌日）（Day1）及び３日後（Day3）に骨格筋トロポニンＩ（skm Tn-I）を測定した結果を図３に示す。図３に示すように、対照群では、運動翌日の血中skm Tn-I濃度は高く、運動負荷によって筋損傷が生じていることが確認された。これに対してホエイペプチド群については、運動翌日（Day1）から血中skm Tn-I濃度は低く、このことからホエイペプチド（ＢＣＡＡジペプチド含有タンパク質加水分解物）は、運動による筋線維の損傷を抑制していることが示唆された。特に、運動負荷から３日後（Day3）の血中skm Tn-I濃度について、Student t-test検定により、対照群とホエイペプチド群の間に有意な差が認められた（p=0.0426）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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