(57)【要約】【課題】  アミロイド線維形成を阻害する成分を簡易に提供する。【解決手段】  ＢＡＣＥ２（βセクレターゼ２）は、アルツハイマー病患者の脳に見られるアミロイド斑の主成分であるアミロイドβペプチドの産生に関与する。天然物から得られる成分に着目し、ＢＡＣＥ２の活性を阻害する成分を探索したところ、ひしの実抽出物及びアマノリ抽出物がその効果を有した。これらがアミロイド線維形成の阻害剤としてアルツハイマー病の治療薬などに期待できることを見出した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ひしの実抽出物及びアマノリ抽出物から選択される少なくとも１種の抽出物を有効成分とするＢＡＣＥ２活性阻害剤。
【請求項２】
ひしの実抽出物及びアマノリ抽出物から選択される少なくとも１種の抽出物を有効成分とするアミロイド線維形成阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＢＡＣＥ２活性阻害剤及びアミロイド線維形成阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイドβペプチド（「Ａβ」）は、アルツハイマー病患者の脳に見られるアミロイド斑の主成分として、アルツハイマー病に重要な関与をする36〜43アミノ酸のペプチドを表す。このペプチドはアミロイド前駆体タンパク質（amyloid precursor protein：ＡＰＰ）に由来し、それはβセクレターゼ（β-secretase）およびγセクレターゼ（γ-secretase）によって切断されてＡβを生じる。 Ａβ分子は凝集して、いくつかの形態で存在し得る柔軟な可溶性オリゴマーを形成する。ある種のミスフォールドオリゴマーは他のＡβ分子もまたミスフォールドオリゴマー形態をとるように誘導し、プリオン感染に似た連鎖反応を引き起こすと考えられている。このオリゴマーは神経細胞に毒性がある。
【０００３】
Ａβが関係する病態の例として、アルツハイマー病のほか、限定されないが、ダウン症候群、痴呆症、脳アミロイドアンギオパチー、βアミロイド血管症、遺伝性脳出血が挙げられる。
【０００４】
ＢＡＣＥ２（beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 2）は、膜貫通型アスパラギン酸プロテアーゼファミリーに属するタンパク質である。βセクレターゼ２やメマプシン（Memapsin）としても知られている。ＢＡＣＥ１と約７５％の相同性を有し、ＢＡＣＥ１と同様にＡＰＰをβ部位で切断し、Ａβを産生する。膵臓と脳組織で高度に発現するＢＡＣＥ１とは異なり、ＢＡＣＥ２は多くの末梢組織で高度に発現することが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平０７−２４２５２３号公報
【特許文献２】特開２０００−２１２０５６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、アミロイド線維形成を阻害する成分を簡易に提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ＢＡＣＥ２の発現が全身で認められており、これを阻害することでアミロイド線維形成を阻害し、様々な疾患に適用できると考えた。
【０００８】
また、天然物から得られる成分に着目し、ＢＡＣＥ２の活性を阻害する成分を探索したところ、ひしの実抽出物及びアマノリ抽出物がその効果を有し、アミロイド線維形成阻害作用を有することを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、ひしの実抽出物及びアマノリ抽出物から選択される少なくとも１種の抽出物を有効成分とするセクレターゼ阻害剤であり、これによりアミロイド線維形成を阻害する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、セクレターゼを阻害し、アミロイド線維形成阻害が期待される成分を簡易に提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ひしの実抽出物（実施例−１）のＢＡＣＥ２活性阻害作用（確認試験−１）を示す図である。
【００１２】
【図２】アマノリ抽出物（実施例−２）のＢＡＣＥ２活性阻害作用（確認試験−１）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、ひしの実抽出物及びアマノリ抽出物のＢＡＣＥ２活性阻害作用により、アミロイド線維形成を阻害することに関する。
【００１４】
ひしの実は、てんにんか目ひし科ヒシ属の学名をＴｒａｐａ  ｎａｔａｎｓ  Ｌ．と称し、通常ひしと呼ばれる植物の果実を乾燥したものである。ひしは日本、朝鮮半島、中国などの温帯から亜熱帯に分布し、池や沼にはえる一年草で、実は食用になる。用途としては滋養強壮、解熱剤として用いられており、特願平４−１２９８２２号では、美白、肌荒れ防止用途について出願している。
【００１５】
海苔は、紅藻亜門・ウシケノリ綱・ウシケノリ目・ウシケノリ科・アマノリ属のアサクサノリ、スサビノリ（Ｐｙｒｏｐｉａ  ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）、ウップルイノリ（Ｐｙｒｏｐｉａ  ｐｓｅｕｄｏｌｉｎｅａｒｉｓ）を主として、広く日本各地や韓国で養殖されている。
勿論、食用が中心であるが、さらに高度に利用が図られ一部、日焼け防止剤や美白剤に利用されている。（特許文献１、２）
【００１６】
ひしの実及びアマノリを、抽出効率を考え、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。
乾燥は天日で行ってもよいし、乾燥機を用いてもよい。
【００１７】
前記抽出に用いる溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を用いる。
親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜６の多価アルコールなどが挙げられる。
【００１８】
水と親水性有機溶媒との混合液を使用する場合には、親水性有機溶媒が低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜１５質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜２０質量部添加することが好ましい。
【００１９】
抽出に使用する溶媒の量は、原料となる植物（海藻）に対して望ましくは５〜１００倍量程度、さらに望ましくは１０〜５０倍量程度が良い。さらに抽出効率を上げるため、抽出溶媒中で撹拌やホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
尚、抽出操作は１回のみの操作に限定されるものではない。抽出後の残渣に再度新鮮な溶媒を添加し、抽出操作を施すこともできるし、抽出溶媒を複数回抽出原料に接触させることも可能である。
【００２０】
必要ならば、その効果に影響のない範囲で更に脱臭、脱色等の精製処理を加えても良く、エバポレーターのような減圧濃縮装置や加熱による溶媒除去などにより、濃縮することもできる。
また、この抽出物を合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０やセファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐ等）やデキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）、限外濾過等を用いてさらに精製することも可能である。
【実施例】
【００２１】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００２２】
実施例−１
ひしの実抽出物は、ひしの実（乾燥品）を１０ｇに５０％エタノール水溶液３００ｍＬを加えて時々撹拌しつつ５日間放置した。これを濾過後凍結乾燥した。
【００２３】
実施例−２
アマノリ抽出物は、紅藻ウシケノリ科アマノリ属に属する海藻の粉砕物２０ｇに水１０００ｍＬを加え、ミキサーで粉砕した。これをガーゼで残査を濾して、更に濾紙で濾過を行った。この濾液を活性炭６０ｇを充填したカラムに導通して、更にカラムを水で洗浄した後、水／エタノール混液（１：１ｖ／ｖ）で溶出を行い、この溶出画分を濃縮、凍結乾燥した。
【００２４】
確認試験−１
SensoLyte 520 ＢＡＣＥ２（β-Secretase-2） Activity Assay Kit “Fluorimetric“（AnaSpec社）を使用して検討を行った。試験は、プロトコルに従い、試験品とＢＡＣＥ２、付属のAssay-bufferを混合し、３７℃で加温しながら、蛍光プレートリーダーにてEx/Em=490/580nmの蛍光強度を測定した。
【００２５】
確認試験−１より、ひしの実抽出物及びアマノリ抽出物についてＢＡＣＥ２の活性阻害が確認できた。結果を図１及び図２に示した。
【図１】
2020158476.tif 000002
【図２】
2020158476.tif 000003