(57)【要約】【課題】ウイルスを含有する溶液を効率的に濃縮する方法を提供する。【解決手段】粒径が１７ｎｍ以上１５０ｎｍ以下であるウイルス粒子含有溶液を、以下の（ａ）から（ｃ）を満たす平均孔径を有する微多孔膜によりタンジェンシャルろ過する工程を含む、ウイルス粒子含有溶液を濃縮する方法；（ａ）１５ｎｍ以上、（ｂ）前記ウイルス粒子の粒径の１０%より大、及び（ｃ）前記ウイルス粒子の粒径よりも小さい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒径が１７ｎｍ以上１５０ｎｍ以下であるウイルス粒子を含有する溶液を、以下の（ａ）から（ｃ）を満たす平均孔径を有する微多孔膜によりタンジェンシャルろ過する工程を含む、ウイルス粒子を含有する溶液を濃縮する方法；
（ａ）１５ｎｍ以上、
（ｂ）前記ウイルス粒子の粒径の１０%より大、及び
（ｃ）前記ウイルス粒子の粒径よりも小さい。
【請求項２】
前記ウイルス粒子がエンベロープウルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記エンベロープウイルスがレトロウイルスである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記レトロウイルスがレンチウイルスである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ウイルス粒子がノンエンベロープウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ノンエンベロープウイルスがパルボウイルスである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記パルボウイルスがアデノ随伴ウイルスである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ウイルス粒子がウイルスベクターである、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記タンジェンシャルフローろ過が交互タンジェンシャルフローろ過である、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記微多孔膜の材料が、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリフッ化ビニリデン、セルロース、又はセルロース誘導体を含む、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記微多孔膜が、開孔率が大きい粗大層と、開孔率が小さい緻密層を有する、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記微多孔膜が、ろ過上流部位に前記粗大層を有し、ろ過下流部位に前記緻密層を有し、ろ過下流部位に向かって前記開孔率が小さくなる傾斜型非対称構造を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法により得られる、ウイルス含有濃縮溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルスを含有する溶液を濃縮する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞のリプログラミングや分化誘導において、誘導因子を含むウイルスベクター用いてトランスフェクションが行われ、細胞に誘導因子が導入される（例えば、特許文献１参照。）。ウイルスベクターを製造する際には、ウイルスを含有する溶液を効率的に濃縮することが望まれる。また、ワクチンを製造する際（例えば、特許文献２参照。）にも、ウイルスを含有する溶液を効率的に濃縮することが望まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１４−２３７６６１号公報
【特許文献２】特開２０１２−５０３４８９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従来のウイルスを含有する溶液を濃縮する方法は、濃縮速度が遅いという問題がある。また、従来のウイルスを含有する溶液を濃縮する方法は、濃縮に使用するフィルターが詰まりやすく、圧力が急激に上昇するという問題がある。そこで、本発明は、ウイルスを含有する溶液を効率的に濃縮する方法を提供することを課題の一つとする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の態様によれば、粒径が１７ｎｍ以上１５０ｎｍ以下であるウイルス粒子を含有する溶液を、以下の（ａ）から（ｃ）を満たす平均孔径を有する微多孔膜によりタンジェンシャルろ過する工程を含む、ウイルス粒子を含有する溶液を濃縮する方法が提供される。
（ａ）１５ｎｍ以上、
（ｂ）ウイルス粒子の粒径の１０%より大、及び
（ｃ）ウイルス粒子の粒径よりも小さい。
【０００６】
上記の方法において、ウイルス粒子がエンベロープウイルスであってもよい。
【０００７】
上記の方法において、エンベロープウイルスがレトロウイルスであってもよい。
【０００８】
上記の方法において、レトロウイルスがレンチウイルスであってもよい。
【０００９】
上記の方法において、ウイルス粒子がノンエンベロープウイルスであってもよい。
【００１０】
上記の方法において、ノンエンベロープウイルスがパルボウイルスであってもよい。
【００１１】
上記の方法において、パルボウイルスがアデノ随伴ウイルスであってもよい。
【００１２】
上記の方法において、ウイルス粒子がウイルスベクターであってもよい。
【００１３】
上記の方法において、タンジェンシャルフローろ過が交互タンジェンシャルフローろ過であってもよい。
【００１４】
上記の方法において、微多孔膜の材料が、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリフッ化ビニリデン、セルロース、又はセルロース誘導体を含んでいてもよい。
【００１５】
上記の方法において、微多孔膜が、開孔率が大きい粗大層と、開孔率が小さい緻密層を有していてもよい。
【００１６】
上記の方法において、微多孔膜が、ろ過上流部位に粗大層を有し、ろ過下流部位に緻密層を有し、ろ過下流部位に向かって開孔率が小さくなる傾斜型非対称構造を有していてもよい。
【００１７】
また、本発明の態様によれば、ウイルス粒子を含有する溶液を濃縮する方法により得られる、ウイルス含有濃縮溶液が提供される。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、ウイルスを含有する溶液を効率的に濃縮する方法を提供可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】実施形態に係るタンジェンシャルフローろ過を実施するためのシステムを示す模式図である。
【図２】実施形態に係る交互タンジェンシャルフローろ過を実施するためのシステムを示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。なお以下の示す実施形態は、この発明の技術的思想を具体化するための装置や方法を例示するものであって、この発明の技術的思想は構成部材や手順の組み合わせ等を下記のものに特定するものではない。この発明の技術的思想は、特許請求の範囲において種々の変更を加えることができる。
【００２１】
本実施形態に係るウイルス粒子を含有する溶液を濃縮する方法は、粒径が１７ｎｍ以上１５０ｎｍ以下であるウイルス粒子を含有する溶液を、以下の（ａ）から（ｃ）の条件を満たす平均孔径を有する微多孔膜によりタンジェンシャルろ過する工程を含む。
（ａ）１５ｎｍ以上、
（ｂ）ウイルス粒子の粒径の１０%より大、及び
（ｃ）ウイルス粒子の粒径よりも小さい。
【００２２】
ウイルスは、ＤＮＡ又はＲＮＡをゲノムとして有し、宿主細胞内で複製する。ゲノムを構成する核酸の種類が、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡのいずれであるか、また線状であるか環状であるか等は、ウイルス種によって異なる。またゲノムが二つ以上のセグメントから構成されているウイルス種もある。
【００２３】
環状二本鎖ＤＮＡの場合、ウイルス粒子内の完全なＤＮＡ分子はＩ型と呼ばれるねじれ構造をとっている。その一方のＤＮＡ鎖が一箇所切断されると、ＩＩ型と呼ばれるねじれのない開環構造を示す。両鎖が切断されて線状になったものはＩｌｌ型と呼ばれる。
【００２４】
複数の異なるＲＮＡ分子一組をゲノムとするウイルスに、レオウイルス、インフルエンザウイルス、ブニヤウイルス、アレナウイルスなどがある。
【００２５】
レトロウイルスの場合、同一のＲＮＡ分子二つが逆向きに会合した二量体がウイルス粒子に存在する。線状一本鎖ＤＮＡをゲノムとするパルポウイルスには、別々のウイルス粒子が互いに相補的なプラス鎖とマイナス鎖のＤＮＡを有するアデノ随伴ウイルスがある。Ｂ型肝炎ウイルスのゲノムは一部分が一本鎖で残りの部分が二本鎖の環状ＤＮＡである。ゲノムが一本鎖ＲＮＡの場合、ｍＲＮＡと同一の塩基配列を有するものをプラス（＋）鎖、相補的塩基配列を有するものをマイナス（−）鎖と呼ぶ。（−）鎖ゲノムＲＮＡは、初めにウイルス粒子に存在するＲＮＡ依存性ＲＮＡシンテターゼによって転写される。ガンウイルスでは多くの場合、ウイルスのゲノム又はその一部分のＤＮＡへの組込みが起こる。
【００２６】
アデノウイルス、ポリオウイルスや口蹄疫ウイルスなどのピコルナウイルスでは、ゲノムの核酸分子の末端にタンパク質が共有結合している。ゲノム両末端に同一塩基配列が同じ向き（レトロウイルス、ヘルペスウイルスなど）あるいは逆向き（アデノウイルスな
ど）に存在する場合や、両末端にある反復配列がゲノム内部にもある場合（ヘルペスウイルス）がある。
【００２７】
ウイルス粒子は、ビリオンとも呼ばれる。ウイルス粒子は、中心部に核酸あるいはコアと呼ばれる核タンパク質複合体を備え、そのまわりにキャプシドと呼ばれるタンパク質構造体を備える。ウイルスを包むエンベロープを有するウイルスをエンベロープウイルスと呼び、ウイルスを包むエンベロープを有しないウイルスをノンエンベロープウイルスと呼ぶ。
【００２８】
エンベロープウイルスの例としてレトロウイルスが挙げられる。レトロウイルスはＲＮＡ型腫蕩ウイルスであり、ＲＮＡウイルスの中で遺伝子ＲＮＡをＤＮＡに変換する生活環をもつウイルスである。レトロウイルスにおいて、粒子内に逆転写酵素が存在し、またこの酵素に対する遺伝子がウイルスゲノム上に存在している。レトロウイルスは、逆転写酵素により複製過程で自身のゲノムＲＮＡを鋳型としてｃＤＮＡを合成し、宿主のゲノムＤＮＡにそれを挿入することで感染を成立させる。レトロウイルスは、細胞膜と同じ脂質二重膜を外側にもつ球型のウイルスであり、電子顕微鏡による形態によりＡ型、Ｂ型、Ｃ型、及びＤ型に分けられる。
【００２９】
レトロウイルスの例としては、マウス白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、マウス乳癌ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、藤浪肉腫ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、ＦＢＲマウス骨肉腫ウイルス、モロニーマウス肉腫ウイルス、アベルソンマウス白血病ウイルス、トリ骨髄球腫症ウイルス−２９、及びトリ赤芽球症ウイルスが挙げられる。
【００３０】
レトロウイルスは、ウイルスの構成に最小限必要な因子のみをもつシンプルレトロウイルスと、それ以外にも特徴的な因子をいくつか保持している複雑レトロウイルスと、に分類される。複雑レトロウイルスをレンチウイルスという。レンチウイルスの例として、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス、ビスナ／マエディウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス、ウマ伝染性貧血ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、及びウシ免疫不全ウイルスが挙げられる。
【００３１】
レンチウイルスではないレトロウイルスは、非分裂細胞及び分裂が遅い細胞、例えば筋肉、脳、肺及び肝臓組織を構成する細胞に感染することができない。これに対し、レンチウイルスは、分裂細胞及び非分裂細胞のどちらにも感染する能力を有する。
【００３２】
レトロウイルスゲノム及びレンチウイルスゲノムの基本構造は、５′ＬＴＲ及び３′ＬＴＲなどの多くの共通の特徴を有する。５′ＬＴＲ及び３′ＬＴＲの間又は内部には、ゲノムのパッケージングを可能にするパッケージングシグナル、プライマー結合部位、宿主細胞ゲノム内への組込みを可能にする組込み部位、並びにパッケージング成分をコードするｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子が位置する。レンチウイルスは、組み込まれたプロウイルスのＲＮＡ転写物が、感染した細胞の核から細胞質へと効率的に輸送されることを可能にするｒｅｖ及びＲＲＥ配列等を有する。
【００３３】
ノンエンベロープウイルスの例としては、パルボウイルスが挙げられる。パルボウイルスは、動物ＤＮＡウイルスの科のーつであり、最小の動物ウイルスである。宿主が脊椎動物のパルボウイルス属とアデノ随伴ウイルス属、宿主が昆虫のデンソウイルス属の三つの属がある。ゲノムは一本鎖ＤＮＡである。パルボウイルス属では（−）鎖のみがウイルス粒子に含まれ、ＤＮＡの両末端には二本鎖から成るヘアピン構造がある。
【００３４】
アデノ随伴ウイルスは、アデノサテライトウイルスともいい、ＡＡＶと略す。ＡＡＶは、パルボウイルスＢ属に分類される。ウイルス遺伝子は直線状一本鎖ＤＮＡである。ウイルス粒子は（＋）のＤＮＡ鎖をもつものと（一）のＤＮＡ鎖をもつものがほぼ等量ある。（＋）鎖と（−）鎖は相補的で、ＤＮＡをウイルス粒子から抽出すると（＋）と（−）の二本鎖ＤＮＡを形成する。ＡＡＶは、自己増殖能の欠けた欠損性ウイルスであり、増殖はアデノウイルスに依存している。ヘルペスウイルスもＡＡＶの増殖を部分的に助ける。
【００３５】
細胞に吸着したウイルスは、自らのゲノムを細胞内に送り込み、細胞がもつ転写翻訳機構を利用してゲノムを複製し増殖する。遺伝子操作により複製及び増殖能を欠損させたウイルス（増殖力欠損株）や、複製及び増殖能の一部を保持したウイルスに、外来遺伝子を組み込み、効率的に目的の遺伝子を細胞へ導入し発現させる能力を利用したものをウイルスベクターという。本実施形態において、ウイルス粒子は、ウイルスベクターを含む。
【００３６】
ウイルスベクターは、上述したような様々なウイルスから作製可能である。例えば、レトロウイルスベクターは、レトロウイルスから作製される。レトロウイルスベクターは、目的ヌクレオチドを細胞に導入することができる。レトロウイルスベクターが細胞内に入ると、レトロウイルスベクターのＲＮＡゲノムがＤＮＡに逆転写され、細胞のＤＮＡに組み込まれる。
【００３７】
本実施形態に係る方法で濃縮される溶液に含まれるウイルス粒子の粒径は、１７ｎｍ以上、１８ｎｍ以上、１９ｎｍ以上、２０ｎｍ以上、２５ｎｍ以上、３０ｎｍ以上、３５ｎｍ以上、４０ｎｍ以上、４５ｎｍ以上、５０ｎｍ以上、５５ｎｍ以上、６０ｎｍ以上、６５ｎｍ以上、７０ｎｍ以上、７５ｎｍ以上、あるいは８０ｎｍ以上である。また、ウイルス粒子の粒径は、１５０ｎｍ以下、１４０ｎｍ以下、１３０ｎｍ以下、１２０ｎｍ以下、１１０ｎｍ以下、１００ｎｍ以下、９０ｎｍ以下、８０ｎｍ以下、７０ｎｍ以下、６０ｎｍ以下、５０ｎｍ以下、４０ｎｍ以下、３０ｎｍ以下、あるいは２６ｎｍ以下である。例えば、ウイルス粒子を含有する溶液の一部を採取し、採取した溶液に含まれる複数のウイルス粒子の個々の大きさを電子顕微鏡で計測し、計測されたウイルス粒子の大きさの分布の下側５％を除外して得られる最小値を、ウイルス粒子の粒径として用いることができる。あるいは、ウイルス粒子の製品が存在する場合、製品のカタログ又は取り扱い説明書等に記載されているウイルスの大きさの分布における最小値を、ウイルス粒子の粒径として用いることもできる。
【００３８】
ウイルスの粒子の粒径は、電子顕微鏡でウイルス粒子を撮影し、画像処理によってその大きさを算出することができる。電子顕微鏡観察のための前処理方法は、一般的に行われている、アルデヒド固定、脱水、樹脂包埋、切片作成、及び染色により行うことができる（K. SANO et.al.(2007) Bulletin of the Osaka Medical College 53（2）pp.107-114.、T. Hongo-Hirasaki et. al. (2011) Biotechnol. Prog.,Vol.27, No.1, pp.162-169.等）。電子顕微鏡でウイルス粒子を粒子数１００〜２００個撮影し、画像処理ソフト(Image-Pro Plus、MEDIA CYBERNETICS社)で各粒子の面積を求め、この面積が真円の面積であると仮定して各ウイルス粒子の直径を算出する。これらウイルス粒子径の値から、ウイルス粒子径のヒストグラムを作成できる。誤判定を除く観点から、ヒストグラム上下各５％を除外する。こうして求められたヒストグラムの最小値を本発明におけるウイルス粒子の粒径として使用することができる。
【００３９】
本実施形態に係る方法で使用される微多孔膜はナノフィルターとも呼ばれる。微多孔膜の平均孔径の下限は、（ａ）１５ｎｍ以上という条件、及び（ｂ）濃縮される溶液に含まれるウイルス粒子の粒径の１０%より大であるという条件のうち、大きいほうの条件を満たす大きさである。例えば、ウイルス粒子の粒径の１０%が１５ｎｍ未満である場合は、微多孔膜の平均孔径の下限は１５ｎｍである。例えば、ウイルス粒子の粒径の１０%が１５ｎｍより大である場合は、微多孔膜の平均孔径の下限はウイルス粒子の粒径の１０%である。
【００４０】
微多孔膜の平均孔径の下限は、（ｂ）の条件において、濃縮される溶液に含まれるウイルス粒子の粒径の１５%以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、あるいは７５％以上であってもよい。
【００４１】
微多孔膜の平均孔径の下限が上記（ａ）及び（ｂ）の条件を満たすことにより、ウイルス粒子を含む溶液を濃縮する際の微多孔膜の詰まりを抑制し、濃縮速度の低下を抑制することが可能である。また、微多孔膜の平均孔径の下限が上記（ａ）及び（ｂ）の条件を満たすことにより、ウイルス粒子を含む溶液を濃縮する際に、（ａ）１５ｎｍ以上という条件、及び（ｂ）濃縮される溶液に含まれるウイルス粒子の粒径の１０%より大であるという条件のうち、大きいほうの条件を満たす大きさ未満の、ウイルス粒子を含む溶液中に存在するウイルス粒子以外の不純物を除去することが可能である。
【００４２】
微多孔膜の平均孔径の上限は、（ｃ）ウイルス粒子の粒径よりも小さいという条件を満たす。微多孔膜の平均孔径の上限は、例えば、ウイルス粒子の粒径の９５％以下、９０％以下、８５％以下、あるいは８０％以下である。これにより、ウイルス粒子を含む溶液を濃縮する際に、ウイルス粒子の損失を抑制可能である。
【００４３】
微多孔膜の平均孔径としては、微多孔膜がセルロース膜である場合は平均透水孔径を使用することができる。また、微多孔膜がポリフッ化ビニリデンやポリエーテルスルホンを含む合成高分子膜である場合、微多孔膜が有する緻密層における平均孔径を使用することができる。緻密層とは、微多孔膜がウイルス除去膜として使用された場合に、ウイルスを捕捉可能な程度に小さい孔径を有している領域である。ウイルスを捕捉する位置は、実際のウイルスサイズに対応する粒子（例えば金コロイド等）を微多孔膜を用いて濾過し、その位置を測定することで確認することができる。さらに、微多孔膜の公称孔径を使用することができる場合もある。公称孔径は、微多孔膜の製品のカタログ又は取り扱い説明書等に記載されている孔径を使用することができる。
【００４４】
微多孔膜の形状は、例えば、中空糸膜、平膜、プリーツ膜、あるいはスパイラル膜である。微多孔膜は、複数の膜を重ね合わせた複合膜であってもよい。微多孔膜において濃縮されるべき溶液が供給される側を、一次側という。微多孔膜内部を透過した透過液が流れ出る側を、二次側という。微多孔膜が中空糸膜である場合、例えば、中空糸膜の中空部の内周面が一次側表面にされ、中空糸膜の外周面が二次側表面にされる。
【００４５】
微多孔膜の材料としては、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、セルロース、及びセルロース誘導体、並びにこれらの組み合わせから選択される少なくとも一つが挙げられる。セルロースの例としては、銅アンモニア法再生セルロース等の再生セルロース、天然セルロース、及び酢酸セルロースが挙げられる。
【００４６】
微多孔膜の材料としては、熱可塑性樹脂も使用可能である。熱可塑性樹脂の例としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ４−メチル１−ペンテン等のポリオレフィン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレンテレナフタレート、ポリブチレンナフタレート、ポリシクロヘキシレンジメチレンテレフタレート等のポリエステル、ナイロン６、ナイロン６６、ナイロン６１０、ナイロン６１２、ナイロン１１、ナイロン１２、ナイロン４６等のポリアミド、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、エチレン／テトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポレフェニレンエーテル、及びポリアセタール等が挙げられる。
【００４７】
ポリフッ化ビニリデンの例としては、フッ化ビニリデン（ＶＤＦ）のホモ重合体、並びにヘキサフルオロプロピレン（ＨＦＰ）、ペンタフルオロプロピレン（ＰＦＰ）、テトラフルオロエチレン（ＴＦＥ）、クロロトリフルオロエチレン（ＣＴＦＥ）、及びパーフルオロメチルビニルエーテル（ＰＦＭＶＥ）のモノマー群から選んだ１種又は２種のモノマーとフッ化ビニリデン（ＶＤＦ）との共重合体が挙げられる。
【００４８】
微多孔膜の材料が熱可塑性樹脂である場合、グラフト重合法によって疎水性の微多孔膜の表面に親水性官能基を導入することが好ましい。グラフト重合法とは、電離性放射線や化学反応等の手段によって高分子微多孔膜にラジカルを生成させ、そのラジカルを開始点として、微多孔膜の表面にモノマーをグラフト重合させる反応である。モノマーとしては、親水性ビニルモノマーが挙げられる。親水性ビニルモノマーの例としては、ヒドロキシプロピルアクリレート、ヒドロキシブチルアクリレート等のヒドロキシル基を有する、又はその前駆体となる官能基を有するビニルモノマー、ビニルピロリドン等のアミド結合を有するビニルモノマー、アクリルアミド等のアミノ基を有するビニルモノマー、ポリエチレングリコールモノアクリレート等のポリエチレングリコール鎖を有するビニルモノマー、メタクリル酸トリエチルアンモニウムエチル等のアニオン交換基を有するビニルモノマー、メタクリル酸スルホプロピル等のカチオン交換基を有するビニルモノマー等が挙げられる。
【００４９】
微多孔膜は、疎水性高分子と、非水溶性の親水性高分子と、を備えていてもよい。疎水性高分子の例としては、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリイミド、ポリエステル、ポリケトン、ＰＶＤＦ、ポリメチルメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリスルホン系高分子が挙げられる。
【００５０】
非水溶性の親水性高分子の例としては、上述したようなビニル系ポリマーが挙げられる。あるいは、非水溶性の親水性高分子の例としては、多糖類であるセルロース等や、その誘導体であるセルローストリアセテート等が挙げられる。また、多糖類又はその誘導体として、ヒドロキシアルキルセルロース等が架橋処理されたものも含まれる。
【００５１】
非水溶性の親水性高分子は、ポリエチレングリコール及びその誘導体であってもよく、エチレングリコールと疎水性モノマーとのブロック共重合体、エチレングリコールと、プロピレングリコール、又はエチルベンジルグリコール等とのランダム共重合体、あるいはブロック共重合体であってもよい。また、ポリエチレングリコール及び共重合体の片末端又は両末端が疎水基で置換され、非水溶化されていてもよい。
【００５２】
非水溶性の親水性高分子としては、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート、ジヒドロキシエチルメタクリレートのホモポリマー、あるいは３−スルホプロピルメタクリルオキシエチルジメチルアンモニウムベタイン、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン、１−カルボキシジメチルメタクリロイルオキシエチルメタンアンモニウム等の親水性モノマーと、ブチルメタクリレート、エチルヘキシルメタクリレートの疎水性モノマーとのランダム共重合体が好ましい。
【００５３】
微多孔膜の平均孔径は、微多孔膜が例えばセルロース膜である場合、平均透水孔径を算出することにより求めることができる。平均透水孔径は、例えば特開平４−３７１２２１号公報に記載の方法で算出することができる。具体的には、例えば１０本の中空糸膜を束ね、１本毎の有効長さが１６ｃｍになるようにモジュールを作成する。このモジュールの一端を閉じ、反対の多端から２００ｍｍＨｇの圧力をかけ、温度３７℃の水を通す。このとき、この中空糸膜モジュールを通して出てくる水の量を透水量として測定する。そして以下の式（１）より平均孔径２ｒを算出する。
２ｒ＝２Ｋw×｛（Ｖ・ｄ・μ）／（ｐ・Ａ・Ｐr）｝1/2      （１）
２ｒ  ；平均孔径（ｎｍ）
Ｋw  ；定数（２．０）
Ｖ    ；透水量（ｍｌ／ｍｉｎ）
ｄ    ；中空糸膜の膜厚（μｍ）
μ    ；水の粘度（ｃｐ）
ｐ    ；圧力差（ｍｍＨｇ）
Ａ    ；膜面積（ｃｍ２  ）
Ｐr  ；空孔率（％）
【００５４】
また、微多孔膜の孔径は、例えば電子顕微鏡で測定することができる場合もある。例えば、微多孔膜を、アクリル樹脂等の高分子の樹脂に包埋する。包埋した微多孔膜を、膜横断面が見えるように、薄く切り出して切片を作成する。切り出した膜横断面を、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）で撮影し、撮影した写真を画像処理解析する。この時、膜横断面を厚み方向に分割して、分割領域毎に孔径（Ｄpi）と孔の数（Δｎi）を求める。ここで、孔径とは、走査型電子顕微鏡写真で読み取れる孔を真円に換算した場合の直径である。
【００５５】
微多孔膜の平均孔径Ｄpｇは、例えば以下の式（２）を用いて求められる。
Ｄpg＝ΣΔｎiＤpi／Ｎ      （２）
ここで、Ｄpiは孔径（ｎｍ）、Δｎiは孔径Ｄpiの孔の数、Ｎは全孔数を指す。
【００５６】
また、微多孔膜が例えば合成高分子膜である場合、微多孔膜が有する緻密層における平均孔径を使用することができる。例えば、微多孔膜がポリフッ化ビニリデンを含む合成高分子膜である場合、微多孔膜は、開孔率が大きい粗大層と、開孔率が小さい緻密層と、を有していてもよい。例えば、微多孔膜は、ろ過上流部位に粗大層を有し、ろ過下流部位に緻密層を有し、ろ過下流部位に向かって開孔率が小さくなる傾斜型非対称構造を有していてもよい。これにより、微多孔膜の詰まりを抑制することが可能である。粗大層と緻密層は一体化していることが好ましい。粗大層と緻密層が一体化しているとは、微多孔膜の製造時に粗大層と緻密層が、同時に形成されることをいう。
【００５７】
空孔率及び開孔率は、いずれも微多孔膜における空隙部分の容積比率に対応するもので基本概念は同じであるが、空孔率は、膜の断面積及び長さから求めた見かけ体積と膜の質量及び膜素材の真密度から求めた数値であるのに対し、開孔率は、膜の断面において、膜断面に対する空隙部分が占める面積比率であって、膜断面の電子顕微鏡写真の画像解析から求められる。開孔率は、膜厚方向に一定の厚み毎に測定され、膜厚方向の空隙部分の容積比率の変化を調べるために用いられ、測定の精度から厚み１μｍ毎に測定する。膜断面はイオンビーム法（例えばＢＩＢ法）を用いて作成することができる。
【００５８】
具体的には、開孔率は、微多孔膜の膜表面に垂直な方向の断面構造の観察結果を厚み方向に厚み１μｍ毎に分割し、画像処理解析によって各分割領域において求めた開孔率をある一定の膜厚領域で平均した開孔率であり、膜厚全体の平均開孔率は各分割領域において求めた開孔率を膜厚全体で平均して求めた開孔率である。
【００５９】
粗大層は、膜表面に隣接して存在する開孔率の大きい層であり、好ましくは（Ａ）開孔率が膜厚全体の平均開孔率＋２．０％以上の層（以下、（Ａ）の粗大層という）であり、より好ましくは＋２．５％以上の層であり、特に好ましくは＋３．０％以上の層である。粗大層の開孔率の上限は、膜厚全体の平均開孔率＋３０％以下が好ましく、より好ましくは膜厚全体の平均開孔率＋２５％以下、特に好ましくは平均開孔率２０％以下である。
【００６０】
また、粗大層は、膜表面から緻密層に向かって開孔率が連続的に減少する傾斜構造であることが好ましい。
【００６１】
粗大層は、開孔率が膜厚全体の平均開孔率＋５．０％以上である層を含むことが好ましく、膜厚全体の平均開孔率＋８．０％以上の層を含むことが更に好ましい。開孔率の最大値を有する層は、膜表面に存在するか、或いは膜表面近傍に存在することが好ましい。
【００６２】
また、微多孔膜においては、粗大層が隣接する膜表面の平均孔径は、少なくともバブルポイント法で求めた最大孔径の２倍以上であることが好ましく、より好ましくは、バブルポイント法で求めた最大孔径の３倍以上である。
【００６３】
緻密層は、開孔率が小さい層であり、好ましくは（Ｂ）開孔率が、膜厚全体の平均開孔率＋２．０％未満であって、かつ（膜厚全体の平均開孔率＋２．０％未満の層の開孔率の平均値）±２．０％（両端を含む）の範囲内にある層（以下、（Ｂ）の緻密層という）である。緻密層の開孔率が、（膜厚全体の平均開孔率＋２．０％未満の層の開孔率の平均値）±２．０％（両端を含む）の範囲内にあるということは、緻密層が比較的均質な構造を持っていることを意味する。
【００６４】
微多孔膜において、上記の（Ａ）の粗大層及び（Ｂ）の緻密層のいずれにも属さない中間的領域が存在してもよい。中間的領域とは、開孔率が膜厚全体の平均開孔率＋２．０％未満であるが、［膜厚全体の平均開孔率＋２．０％未満の層の開孔率の平均値］±２．０％（両端を含む）の範囲内に入らない層に対応する。このような層は、例えば、（Ａ）の粗大層と（Ｂ）の緻密層の境界部分に存在する。
【００６５】
微多孔膜がポリフッ化ビニリデンを含む合成高分子膜である場合、上記（Ｂ）の緻密層における平均孔径を本実施形態における平均孔径として使用することができる。
【００６６】
また、微多孔膜がポリエーテルスルホンを含む合成高分子膜である場合、微多孔膜が有する緻密層と粗大層は、膜断面を走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により撮影することにより決定されてもよい。膜断面はイオンビーム法（例えばＢＩＢ法）を用いて作成することができる。例えば、撮影倍率を５０，０００倍に設定し、膜断面の任意の部位において膜厚方向に対して水平に視野を設定する。設定した一視野での撮像後、膜厚方向に対して水平に撮像視野を移動し、次の視野を撮像する。この撮影操作を繰り返し、隙間なく膜断面の写真を撮影し、得られた写真を結合することで一枚の膜断面写真を得る。この断面写真において、（膜厚方向に対して垂直方向に２μｍ）×（膜厚方向の濾過下流面から濾過上流面側に向かって１μｍ）の範囲における視野平均孔径を濾過下流面から濾過上流面側に向かって１μｍ毎に算出する。視野平均孔径が５０ｎｍ以下の視野を緻密層と定義し、平均孔径が５０ｎｍ超の視野を粗大層と定義する。上記緻密層の膜厚方向の各視野における視野平均孔径の平均を本実施形態の平均孔径として使用することができる。
【００６７】
平均孔径は、画像解析を用いた方法で算出することができる。例えば、ＭｅｄｉａＣｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ社製Ｉｍａｇｅ−ｐｒｏ  ｐｌｕｓを用いて空孔部と実部の二値化処理を行う。明度を基準に空孔部と実部を識別し、識別できなかった部分やノイズをフリーハンドツールで補正する。空孔部の輪郭となるエッジ部分や、空孔部の奥に観察される多孔構造は空孔部として識別する。二値化処理の後、空孔／１個の面積値を真円と仮定し、孔径を算出する。全ての孔毎に孔径の算出を実施し、１μｍ×２μｍの範囲毎に視野平均孔径を算出していく。なお、視野の端部で途切れた空孔部についてもカウントしてもよい。
【００６８】
緻密層から粗大層への境界において、式（３）で定義される傾斜指数ＩSが、０．５以上１２．０以下であってもよい。
ＩS＝ＤC−ＤD・・・（３）
ここで、ＤCは上記境界部分の粗大層の視野平均孔径を指し、ＤDは上記境界部分の緻密層の視野平均孔径を指す。
【００６９】
微多孔膜の断面において、一次側から二次側に向けて、孔径は、減少した後増加に転じてもよい。これにより、微多孔膜の詰まりを抑制することが可能である。このように、一次側から二次側に向けて孔径が減少した後増加に転じる微多孔膜の構造を評価する際には、金コロイドを用いてもよい。金コロイドは、ナノメートルオーダーの直径を有しながら光を透過させないことから、視覚的に検出することが容易である。そのため、例えば、金コロイドを含有する溶液を微多孔膜でろ過した後、微多孔膜の断面における、金コロイドを捕捉した微多孔膜の金コロイド捕捉部位の相対的な輝度を測定することにより、微多孔膜の特性を評価することが可能である。
【００７０】
微多孔膜について、一次側の表面から微多孔膜に直径３０ｎｍの金コロイドを含有する溶液を供給して微多孔膜で金コロイドを捕捉し、微多孔膜の断面において輝度を測定するとき、輝度の変位のスペクトルの面積値の標準偏差を輝度の変位のスペクトルの面積値の平均値で除した値は、例えば、０．０１以上０．３０以下である。この値は、微多孔膜における金コロイドの捕捉量の変動係数を示している。
【００７１】
微多孔膜について、上記の変動係数を示す値は、０．０１以上０．３０以下、０．０１以上０．２９以下、０．０１以上０．２８以下、０．０１以上０．２７以下、０．０１以上０．２６以下、あるいは０．０１以上０．２５以下であってもよい。
【００７２】
上記の変動係数は、例えば以下の方法により測定される。金コロイド溶液をろ過した後の微多孔膜から切片を切り出し、切片の断面において金コロイドによって染まった部分の複数箇所の輝度プロファイルを、光学顕微鏡で測定する。金コロイドは光を吸収するため、輝度の変位は、金コロイドの捕捉量に依存する。なお、必要に応じて、輝度プロファイルからバックグランドノイズを除去してもよい。その後、横軸に膜厚、縦軸に輝度の変位を有するグラフを作成し、グラフに現れた輝度の変位のスペクトルの面積を算出する。さらに、複数箇所における輝度の変位のスペクトルの面積の標準偏差を、複数箇所における輝度の変位のスペクトルの面積の平均で除した値を、微多孔膜における金コロイド捕捉部位の金コロイドの捕捉量の変動係数を示す値として算出する。
【００７３】
湿潤状態の微多孔膜の断面において、直径３０ｎｍ以上４０ｎｍ以下の金コロイドを捕捉する部位の厚さは、１７．０μｍ以上２０．０μｍ以下、１７．５μｍ以上１９．８μｍ以下、あるいは１８．０μｍ以上１９．６μｍ以下である。
【００７４】
直径３０ｎｍ、直径４０ｎｍ、及び直径５０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位は、例えば以下の方法により測定される。直径３０ｎｍ、４０ｎｍ、及び５０ｎｍの金コロイド溶液のそれぞれをろ過した微多孔膜から切片を切り出す。切片の断面において金コロイドによって染まった部分複数箇所の輝度プロファイルを、光学顕微鏡で測定する。ここで、膜厚方向において、微多孔膜の一次側の表面から、金コロイド捕捉部位の最も一次側の表面に近い部分までの第１の距離ａを測定する。また、膜厚方向において、微多孔膜の一次側の表面から、金コロイド捕捉部位の最も二次側の表面に近い部分までの第２の距離ｂを測定する。
【００７５】
次に、複数箇所のそれぞれにおいて、第１の距離ａを湿潤した微多孔膜の膜厚ｃで除して百分率で表した値Ａ（＝ａ／ｃの百分率表示）を算出し、複数箇所における値Ａの平均値を第１の到達度として算出する。また、複数箇所のそれぞれにおいて、第２の距離ｂを湿潤した微多孔膜の膜厚ｃで除して百分率で表した値Ｂ（＝ｂ／ｃの百分率表示）を算出し、複数箇所における値Ｂの平均値を第２の到達度として算出する。
【００７６】
さらに、下記（４）式に示すように、直径３０ｎｍの金コロイドをろ過した微多孔膜における第２の到達度の平均値Ｂ30と、直径４０ｎｍの金コロイドをろ過した微多孔膜における第１の到達度の平均値Ａ40と、の差に、直径３０ｎｍの金コロイドをろ過した湿潤した微多孔膜の膜厚の平均値Ｃ30と直径４０ｎｍの金コロイドをろ過し、湿潤した微多孔膜の膜厚の平均値Ｃ40の平均値ＣAVEを乗じた値を、直径３０ｎｍの金コロイド及び直径４０ｎｍの金コロイドを流通させた時に、微多孔膜の断面において、直径３０ｎｍ以上４０ｎｍ以下の金コロイドが捕捉される部位の厚さＴとして算出する。
Ｔ＝（Ｂ30−Ａ40）×ＣAVE      （４）
【００７７】
なお、上記の方法では、直径３０ｎｍ以上直径４０ｎｍ以下の金コロイド捕捉部位を、直径４０ｎｍの金コロイドをろ過した微多孔膜における第１の到達位置と、直径３０ｎｍの金コロイドをろ過した微多孔膜における第２の到達位置と、の間の領域の厚みとして求めているが、誤差の範囲を除いて、直径３０ｎｍ以上直径４０ｎｍ以下の金コロイドであれば、上記の範囲に捕捉されることを確認している。
【００７８】
直径５０ｎｍの金コロイドを含有する溶液を微多孔膜でろ過した場合、湿潤状態の微多孔膜の断面において、直径５０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位は、光学顕微鏡で測定すると、例えば、一次側の表面１から膜厚の５％以上３５％以下、あるいは６％以上３０％以下のところにある。
【００７９】
なお、一次側の表面から、膜厚の５％未満、又は、３５％より遠い領域に、直径５０ｎｍの金コロイドの少量が捕捉される場合であっても、光学顕微鏡による観察で、定数（２５５）から測定した輝度プロファイルを引いた輝度の変位について、そのスペクトルの絶対値が、スペクトルの絶対値の最大値の１０％以下の場合は、当該領域における金コロイドの捕捉は誤差の範囲内とみなすことができる。したがって、この場合、直径５０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位は、一次側の表面から膜厚の５％以上３５％以下のところにあるものとみなしうる。
【００８０】
直径４０ｎｍの金コロイドを含有する溶液を微多孔膜でろ過した場合、湿潤状態の微多孔膜の断面において、直径４０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位は、光学顕微鏡で測定すると、例えば、一次側の表面から膜厚の８％以上５０％以下、あるいは９％以上４０％以下のところにある。
【００８１】
なお、直径５０ｎｍの金コロイドの場合と同様に、一次側の表面から膜厚の８％未満、又は、５０％より遠い領域で、金コロイドが観察されたとしても、光学顕微鏡による観察で、定数（２５５）から測定した輝度プロファイルを引いた輝度の変位について、そのスペクトルの絶対値が、スペクトルの絶対値の最大値の１０％以下の場合は、誤差の範囲内とみなしうる。
【００８２】
直径３０ｎｍの金コロイドを含有する溶液を微多孔膜でろ過した場合、湿潤状態の微多孔膜の断面において、直径３０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位は、光学顕微鏡で測定すると、例えば、一次側の表面から膜厚の１０％以上８０％以下、あるいは１５％以上７０％以下である。
【００８３】
なお、直径５０ｎｍ、４０ｎｍの金コロイドの場合と同様に、一次側の表面から膜厚の１０％未満、又は、８０％より遠い領域で、金コロイドが観察されたとしても、光学顕微鏡による観察で、定数（２５５）から測定した輝度プロファイルを引いた輝度の変位について、スペクトルの絶対値の最大値の１０％以下の場合は誤差の範囲内とみなしうる。
【００８４】
金コロイドを一次側の表面から二次側の表面にかけて膜厚方向に通液した際、金コロイドが捕捉される部位は、膜構造によって、厚み方向に連続的に形成される場合と断続的に形成される場合がある。実施の形態に係る微多孔膜では、一次側の表面の内側から二次側の表面内側にかけて、直径５０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位が、連続的に形成されることが好ましく、直径４０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位が、連続的に形成されることが好ましく、直径３０ｎｍの金コロイドが捕捉される部位が、連続的に形成されることが好ましい。通液方向に対して金コロイドが捕捉される部位が途切れることなく連続に形成されると、目詰まりが生じにくくなる。
【００８５】
直径５０ｎｍ、４０ｎｍ及び３０ｎｍの金コロイドの捕捉位置の測定については、あくまで、膜に捕捉された金コロイドについて、測定を行う。したがって、膜に捕捉されず、膜を透過した金コロイドについては測定しない。つまり、膜に透過させた金コロイドの全てについて捕捉位置を測定するのではなく、膜に捕捉された金コロイドについて、その膜上の捕捉位置を測定する。
【００８６】
直径２０ｎｍの金コロイドを含有する溶液を微多孔膜でろ過する場合、微多孔膜の断面には直径２０ｎｍの金コロイドは、ほぼ捕捉されない。このことは、光学顕微鏡（Ｂｉｏｚｅｒｏ、ＢＺ８１００、キーエンス社製）を用いた観察で、輝度のスペクトルを有意な値として検出できないことから確認できる。
【００８７】
本実施形態に係る微多孔膜は、例えば、国際公開第２００１／０１４０４７号、国際公開第２００４／０３５１８０号、国際公開第２０１５／１５６４０３号、国際公開第２０１６／０３１８３４号あるいは国際公開第２０１７／１７０８７４号に記載された方法で製造可能である。
【００８８】
タンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）とは、微多孔膜一次側表面において、溶液を微多孔膜一次側表面と平行な方向に流すろ過法である。タンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）法は、交互タンジェンシャルフローろ過（ＡＴＦ）法を含む。本実施形態において、単にタンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）法という場合は、図１に示すように、微多孔膜１０の一次側表面において、ウイルス粒子を含有する濃縮されるべき溶液を一方向に流すろ過法を指す場合がある。交互タンジェンシャルフローろ過（ＡＴＦ）法とは、図２に示すように、微多孔膜１０の一次側表面において、ウイルス粒子を含有する濃縮されるべき溶液を往復するように流すろ過法を指す。
【００８９】
微多孔膜１０が中空糸膜であり、ろ過方法がタンジェンシャルフローろ過方法の場合、図１に示すように、微多孔膜１０の中空部の一方の開口から他方の開口への一方向に、ウイルス粒子を含む濃縮されるべき溶液が流される。ウイルス粒子を含む溶液は、例えば、溶液槽２０からポンプ４０によって微多孔膜１０の中空部に供給される。微多孔膜１０の中空部を通過し、濃縮されたウイルス粒子を含む溶液は、溶液槽２０に戻される。微多孔膜１０の一次側から二次側に透過した、ウイルスを含まない透過液は、透過液槽３０で回収される。
【００９０】
微多孔膜１０が中空糸膜であり、交互タンジェンシャルフローろ過の場合、図２に示すように、微多孔膜１０の中空部を往復するように、ウイルス粒子を含む濃縮されるべき溶液が流される。ウイルス粒子を含む溶液は、例えば、溶液槽２０からポンプ４０によって流路を介して微多孔膜１０の中空部に供給される。微多孔膜１０の中空部を往復し、濃縮されたウイルス粒子を含む溶液は、往路と同じ流路を介して溶液槽２０に戻される。
【００９１】
交互タンジェンシャルフローろ過においては、溶液槽から微多孔膜へ濃縮されるべき溶液を送る送液手段と、微多孔膜内部を透過せず、微多孔膜の一次側表面を通過した溶液を溶液槽へ戻す送液手段と、を共通化することができるため、送液手段を削減可能である。
【００９２】
本実施形態においては、ウイルス粒子を含有する溶液を微多孔膜によりタンジェンシャルろ過することにより、微多孔膜の一次側表面にウイルス粒子が留まることが抑制されるため、微多孔膜の詰まりを抑制することが可能である。また、ウイルス粒子を含有する溶液を微多孔膜により交互タンジェンシャルろ過することにより、微多孔膜の詰まりをより抑制することが可能である。
【実施例】
【００９３】
（実施例１）
粒径８０ｎｍの牛ウイルス性下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）（ＶＲ−１４２２、ＡＴＣＣ社製、カタログ記載粒径８０〜１００ｎｍ）を購入する。ヒト血漿由来静注用免疫グロブリン製剤（ＩＶＩＧ）を０．１％含む０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液に、ＢＶＤＶを１０3  ＴＣＩＤ50／ｍＬとなるようスパイクし、ＢＶＤＶを含有する溶液を得る。得られたＢＶＤＶを含有する溶液を、表１に記載の各微多孔膜と、ペリスタポンプと、を用いて、膜間差圧１００ｋＰａ以下で定速タンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）し、膜面積に対して１Ｌ／ｍ2の溶液を１０分の１量に濃縮（１０倍濃縮）、又は５分の１量に濃縮（５倍濃縮）する。
【００９４】
１０倍又は５倍濃縮されるまでのろ過時間及び圧力変化を計測する。また、濃縮前後のウイルス感染価を測定する。
【００９５】
（実施例２）
ヒト血漿由来静注用免疫グロブリン製剤（ＩＶＩＧ）を０．１％含む０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液の代わりに、ウシアルブミンを０．１％含む０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液を使用する以外は、実施例１と同様の方法により評価を行う。
【００９６】
（実施例３）
ヒト血漿由来静注用免疫グロブリン製剤（ＩＶＩＧ）を０．１％含む０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液の代わりに、０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液を使用する以外は実施例１と同様の方法により評価を行う。
【表１】
2020121299.tif 000002
【００９７】
（１）〜（５）の微多孔膜は、国際公開第２００１／０１４０４７号、国際公開第２００４／０３５１８０号、国際公開第２０１５／１５６４０３号、国際公開第２０１６／０３１８３４号、又は国際公開第２０１７／１７０８７４号に記載された方法を参考に製造することができる。特に（４）の微多孔膜は、国際公開第２０１６／０３１８３４号の実施例１に記載の方法に準じて製造された微多孔膜である。また、（３）及び（４）の微多孔膜は、いずれも抗体を通過させ得る大きさの平均孔径を有する。
【００９８】
なお、５０ｎｍ微多孔膜、７５ｎｍ微多孔膜（プラノバ（登録商標）７５Ｎ）についても、実施例１〜３に記載の方法で濃縮前後のウイルス感染価を測定することができる。
【００９９】
（比較例１）
表１に記載の膜及びウイルス懸濁液の代わりに、表２に記載の膜及びウイルス懸濁液を使用する以外は実施例１と同様の方法により評価を行う。
【０１００】
（比較例２）
ヒト血漿由来静注用免疫グロブリン製剤（ＩＶＩＧ）を０．１％含む０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液の代わりに、ウシアルブミンを０．１％含む０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液を使用する以外は、比較例１と同様の方法により評価を行う。
【０１０１】
（比較例３）
ヒト血漿由来静注用免疫グロブリン製剤（ＩＶＩＧ）を０．１％含む０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液の代わりに、０．１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ水溶液又はＰＢＳ緩衝液を使用する以外は実施例１と同様の方法により評価を行う。
【表２】
2020121299.tif 000003
【０１０２】
（６）の３０ｋＤａ分画限外ろ過膜（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）ＸＬ、ミリポア社製）の平均孔径は３ｎｍ以上５ｎｍ以下である。（７）の５０ｋＤａ分画限外ろ過膜（Ｐｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）ＸＬ、ミリポア社製）の平均孔径は５ｎｍ以上７ｎｍ以下である。
【図１】
2020121299.tif 000004
【図２】
2020121299.tif 000005