(57)【要約】【目的】ツバキの抽出物を含有する、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤やフィラグリン産生促進剤を提供する。【構成】本発明のツバキの抽出物は、優れたマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果を有していた。ツバキの抽出物は、皮膚の老化予防といった美容分野だけでなく、老化による機能低下の抑制、ガンの予防、治療等といった医療分野にも利用でき、食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等への応用が期待される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツバキの抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
【請求項２】
ツバキの品種が、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の品種であることを特徴とする、請求項１に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
【請求項３】
ツバキの抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
【請求項４】
ツバキの品種が、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の品種であることを特徴とする、請求項３に記載のフィラグリン産生促進剤。
【請求項５】
ツバキの抽出物を含有することを特徴とするガン疾患、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎、老人性乾皮症及びアトピー性皮膚炎の予防改善用食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲンは、哺乳動物組織の約１／３を占める主要な構造タンパク質であり、軟骨、骨、腱、及び皮膚等の、多くのマトリックス組織の必須な成分である。ＭＭＰに属するコラゲナーゼ（ＭＭＰ−１）により一箇所を切断されると、通常の組織内では安定なコラーゲン分子は、変性して一本鎖のゼラチンとなり、他の様々なプロテアーゼにより分解されるようになる。その結果、マトリックス組織の構造の完全性が失われてしまう。
【０００３】
ＭＭＰに属するゼラチナーゼ（ＭＭＰ−２）は、線維芽細胞や内皮細胞、ガン細胞等が産生する酵素であり、コラーゲン、ゼラチン、エラスチン（動脈、腱、皮膚等の弾性組織の特殊成分をなす構造タンパク質）等の基質を分解する。従って、ゼラチナーゼに対して阻害活性を有する物質は、ガン組織における血管新生やガンの転移を抑制する効果が期待され、ガン疾患の予防、治療に有用であると考えられる。さらにＭＭＰの阻害はガン疾患のみならず、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等、ＭＭＰの亢進が原因で起こる各種疾患の予防、治療及び改善に有用である。
【０００４】
コラゲナーゼの阻害活性を有する素材として、例えば、カカオ豆皮であるカカオハスク抽出物（特許文献１）、バラ科オニイチゴ抽出物（特許文献２）、ラクトフェリン（特許文献３）等が提案されている。
【０００５】
角質層の保湿性に重要な役割を果たしているのがＮＭＦであることは古くから知られており、これまでＮＭＦ成分は保湿剤の開発に応用されてきた。角質層におけるＮＭＦの減少は、その保湿性を低下させ乾燥を招く。その結果として乾燥性のカユミが引き起こされる。近年、ＮＭＦの主体をなすアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒の主成分であるフィラグリンというタンパク質の分解により産生されることが明らかとなった（非特許文献１）。すなわち、表皮顆粒層において合成されたプロフィラグリンはケラトヒアリン顆粒に蓄積された後、顆粒層上層から角質層に至る過程で脱リン酸化、加水分解を経てフィラグリンに分解される。さらにフィラグリンは角質層上層に至る過程でアミノ酸に分解されＮＭＦの主体となる。一方、乾燥肌を呈する病態とフィラグリンに関する研究が進められ、老人性乾皮症やアトピー性皮膚炎等の角質層中ではアミノ酸が減少していることが知られているが、それらの皮膚ではフィラグリンの発現が低下していることが明らかにされている（非特許文献２）。したがって、角質層の保湿性維持の目的でＮＭＦの産生を高めるためにはケラチノサイトにおけるフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進が重要であると考えられるようになり、特許文献４、５等の植物成分を用いたフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進剤が報告されている。
【０００６】
一方で、ツバキの抽出物のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果については、知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平３−４４３３１号公報
【特許文献２】特開２００３−１３７８０１号公報
【特許文献３】特開平５−１８６３６８号公報
【特許文献４】特開２００１−２６１５６８号公報
【特許文献５】特開２００２−２０１１２５号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｓｃｏｔｔ Ｉ．Ｒ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，  Ｖｏｌ．７１９，  ｐｐ１１０−１１７，  １９８２
【非特許文献２】Ｓｅｇｕｃｈｉ Ｔ．，  Ａｒｃｈ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｒｅｓ，  Ｖｏｌ．２８８，  ｐｐ４４２−４４６，  １９９６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果等に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、ツバキの抽出物が、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果に優れていることを発見し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（５）からなる。
【００１２】
（１）ツバキの抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
（２）ツバキの品種が、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の品種であることを特徴とする、（１）に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
（３）ツバキの抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
（４）ツバキの品種が、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の品種であることを特徴とする、（３）に記載のフィラグリン産生促進剤。
（５）ツバキの抽出物を含有することを特徴とするガン疾患、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎、老人性乾皮症及びアトピー性皮膚炎の予防改善用食品組成物。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のツバキの抽出物は、優れたマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果を有しており、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品等の分野において貢献できるものである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下に、本発明について詳細に述べる。
【００１５】
本発明に用いるツバキの抽出物とは、ツバキ科ツバキ属のツバキ（学名：Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）から抽出したものである。使用部位としては、花、実、種子、茎、葉、根等の植物体の一部又は全草を使用することができるが、効果の面で種子を用いることが好ましい。種子は、そのまま用いることもできるが、抽出や搾油等により脱油した残渣を用いることが経済的であり、効果の面でも好ましい。
【００１６】
本発明に用いるツバキの品種としては、野生種であるヤブツバキ、ヤマツバキ等を含むカメリア  ジャポニカ  ヴァル  ジャポニカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、多雪地域に適応したオクツバキ、ハイツバキ、ユキツバキ等を含むカメリア  ジャポニカ  ヴァル  デクンベンス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ）、両者の中間型（ユキバタツバキ等）、リンゴツバキ、オオミツバキ、ヤクシマツバキ等を含む南方適応型のカメリア  ジャポニカ  ヴァル  マクロカルパ（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）が挙げられ、それらの交配種及び、それらとの近縁種との交配によって生じた園芸種も含まれる。たとえばＣａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａ系の園芸品種としては、赤ワビスケ、玉之浦、宵おけさ、佐渡ワビスケ、天倫寺月光、小泰子、胡蝶ワビスケ、紅ワビスケ、黄泉銀花、一子ワビスケ、香紫、三原雲龍、東海、はじらい、銀葉椿、花仙山、塩見白花、門の内、四ヶ村、大山白、加賀八朔、祐閑寺名月、野々市、雛鶴、谷間の鶴、幸作絞、加賀小絞、西王母等が挙げられ、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の園芸品種としては、オトメツバキ、阿賀の里、朝桜、荒磯、一楽、祝の盃、桂姫、北の洋、五知の娘、島千鳥、島の錦、寂光、雪宝山、田代、東洋の光、錦麒麟、日本髪、起の香、牡丹雪、松波、雪景色、雪小町、雪衣、陽春、小倉の里、白妙、太刀山、富樫白、初時雨、宝珠、本法寺、桃雀、雪明り、雪燈籠、加賀の鶴、八千代等が挙げられ、Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ系としては、熊谷、紅唐子が挙げられる。
【００１７】
その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良いし、低温抽出したものであっても良い。また、生のまま用いることも、乾燥して用いることもでき、目的によって使い分けることができる。
【００１８】
抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。
【００１９】
上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。
【００２０】
本発明の外用剤又は内用剤には、これらの効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分を含有することもできる。
【００２１】
本発明の剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、錠菓、飲料、ティーバッグ、スパイス等が挙げられる。
【００２２】
本発明に用いる上記抽出物の含有量は、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１〜５重量％がより好ましい。さらに、０．００５〜０．５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。５重量％を越えて含有した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。一方、内用の場合、投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人１人当たりの１日の量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ〜５ｇがより好ましい。さらに、１００ｍｇ〜１ｇが最も好ましい。
【００２３】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるツバキの抽出物の製造例、実験例及び処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。また、実施例に示す％とは重量％を示す。
【実施例１】
【００２４】
製造例１Ａ  熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓの種子の搾油残渣の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物３．２ｇを得た。
【００２５】
製造例２Ａ  熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａの種子の搾油残渣の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物３．７ｇを得た。
【００２６】
製造例３Ａ  熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓの葉の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物４．４ｇを得た。
【００２７】
製造例４Ａ  熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａの葉の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物４．５ｇを得た。
【００２８】
製造例１Ｂ  ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物２．６ｇを得た。
【００２９】
製造例２Ｂ  ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物１．８ｇを得た。
【００３０】
製造例３Ｂ  ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓの葉の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物２．４ｇを得た。
【００３１】
製造例４Ｂ  ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａの葉の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物２．３ｇを得た。
【００３２】
製造例１Ｃ  エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物１．４ｇを得た。
【００３３】
製造例２Ｃ  エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物０．５ｇを得た。
【００３４】
製造例３Ｃ  エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓの葉の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物１．０ｇを得た。
【００３５】
製造例４Ｃ  エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｊａｐｏｎｉｃａの葉の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物０．９ｇを得た。
【実施例２】
【００３６】
実験例１  フィラグリン産生促進試験
ＮＭＦ（天然保湿因子）の前駆物質であるフィラグリン産生への影響をフィラグリン遺伝子（ＦＬＧ）のｍＲＮＡ発現量を指標として評価した。すなわち、ケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を１２ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり２×１０４個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で３日間培養した。次に、各試料（最終濃度は表１に記載）を添加したＤＭＥＭ培養液にて、２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。
細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏ  Ｐｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（タカラバイオ）及びＳＹＢＲ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（ライフテクノロジー）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。
その他の操作は定められた方法に従い、ＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＦＬＧ発現量は、コントロールのＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＦＬＧ  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、ＦＬＧ用のプライマーは、以下に示したものを使用した。
【００３７】
ＦＬＧ用のプライマーセット
ＧＧＣＡＣＴＧＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＡＧＧ（配列番号１）
ＡＡＡＣＣＣＧＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡ（配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＧＣ（配列番号３）
ＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＴＧ（配列番号４）
【００３８】
これらの試験結果を表１に示した。その結果、本発明のツバキの抽出物、特にＣａｍｅｌｌｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  ｖａｒ  ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系ツバキに、強いフィラグリン産生促進効果が認められた。
【００３９】
【表１】
2020158424.tif 000002
【００４０】
実験例２  マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果
ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２  ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を６０ｍｍ  ｄｉｓｈに１×１０５個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２  ｍＲＮＡ発現量測定でも各試料（最終濃度は表２及び３に記載）を添加したＤＭＥＭ培養液にて、２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。
細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏ  Ｐｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（タカラバイオ）及びＳＹＢＲ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（ライフテクノロジー）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。
その他の操作は定められた方法に従い、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２  ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＭＭＰ発現抑制率は、コントロールのＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２  ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＭＭＰ−１及びＭＭＰ−２  ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
【００４１】
ＭＭＰ−１用のプライマーセット
ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣ（配列番号５）
ＴＧＡＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣ（配列番号６）
ＭＭＰ−２用のプライマーセット
ＣＣＧＴＣＧＣＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡ（配列番号７）
ＣＴＴＣＴＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＴＡＧＴＧＴＧＴＣＣＴＴ（配列番号８）
β―Ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号９）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号１０）
【００４２】
これらの実験結果を表２及び３に示した。その結果、本発明のツバキの抽出物にＭＭＰ発現抑制効果（ＭＭＰ阻害効果）が認められた。特に、ＭＭＰ−１阻害効果については、ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系のツバキは、水による抽出物の効果が高く、ｊａｐｏｎｉｃａ系のツバキは、エタノールによる抽出物の効果が高かった。
【００４３】
【表２】
2020158424.tif 000003
【００４４】
【表３】
2020158424.tif 000004
【実施例３】
【００４５】
処方例１  化粧水
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物                                            ０．２
２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
３．グリセリン                                                    ２．０
４．キサンタンガム                                                ０．０２
５．クエン酸                                                      ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                            ０．１
７．エタノール                                                    ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００４６】
処方例２  クリーム
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ｂの抽出物                                            ０．０１
２．スクワラン                                                    ５．５
３．オリーブ油                                                    ３．０
４．ステアリン酸                                                  ２．０
５．ミツロウ                                                      ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                                  ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ベヘニルアルコール                                            １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．５
１０．香料                                                          ０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２５
１２．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００４７】
処方例２において、製造例１Ｂの抽出物を製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物、製造例３Ａ、４Ａの等量混合抽出物及び製造例１Ｂ、２Ｂの等量混合抽出物に置き換えたものを、それぞれ処方例３、４及び５とした。
【００４８】
処方例６  乳液
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａ、３Ａの等量混合抽出物                              ０．１
２．スクワラン                                                    ５．０
３．オリーブ油                                                    ５．０
４．ホホバ油                                                      ５．０
５．セタノール                                                    １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                                    ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
９．香料                                                          ０．１
１０．プロピレングリコール                                          １．０
１１．グリセリン                                                    ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００４９】
処方例７  ゲル剤
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ｃの抽出物                                            ０．００１
２．エタノール                                                    ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）                ０．１
５．香料                                                          適量
６．１，３‐ブチレングリコール                                    ５．０
７．グリセリン                                                    ５．０
８．キサンタンガム                                                ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                                      ０．２
１０．水酸化カリウム                                                ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５と、成分６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００５０】
処方例８  パック
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物                                            ０．１
２．製造例１Ｂの抽出物                                            ０．１
３．ポリビニルアルコール                                        １２．０
４．エタノール                                                    ５．０
５．１，３‐ブチレングリコール                                    ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）                ０．５
８．クエン酸                                                      ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                            ０．３
１０．香料                                                          適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００５１】
処方例９  ファンデーション
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物                              １．０
２．ステアリン酸                                                  ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
５．セタノール                                                    １．０
６．液状ラノリン                                                  ２．０
７．流動パラフィン                                                ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                                      ６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム                          ０．１
１０．ベントナイト                                                  ０．５
１１．プロピレングリコール                                          ４．０
１２．トリエタノールアミン                                          １．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．２
１４．二酸化チタン                                                  ８．０
１５．タルク                                                        ４．０
１６．ベンガラ                                                      １．０
１７．黄酸化鉄                                                      ２．０
１８．香料                                                          適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０〜１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４〜１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００５２】
処方例１０  浴用剤
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物                                          ２．０
２．製造例１Ｂの抽出物                                          １．０
３．炭酸水素ナトリウム                                        ５０．０
４．黄色２０２号（１）                                            適量
５．香料                                                          適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６を均一に混合し製品とする。
【００５３】
処方例１１  軟膏
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ｂ、２Ｂの等量混合抽出物                              ０．５
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）              ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                                  １０．０
４．流動パラフィン                                                ５．０
５．セタノール                                                    ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
７．プロピレングリコール                                        １０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００５４】
処方例１２  散剤
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物                            ２０．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ３０．０
３．微結晶セルロース                                            ５０．０
［製造方法］成分１〜３を混合し、散剤とする。
【００５５】
処方例１３  錠剤
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物                                            ３．０
２．乾燥コーンスターチ                                          ２７．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム                        ２０．０
４．微結晶セルロース                                            ４０．０
５．ポリビニルピロリドン                                          ７．０
６．タルク                                                        ３．０
［製造方法］成分１〜４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【００５６】
処方例１４  錠菓
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物                              ０．５
２．乾燥コーンスターチ                                          ５０．０
３．エリスリトール                                              ４０．０
４．クエン酸                                                      ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                                          ３．０
６．香料                                                          適量
７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００５７】
処方例１５  飲料
処方                                                            含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物                                            ２．０
２．果糖ブドウ糖液糖                                            １２．５
３．クエン酸                                                      ０．１
４．香料                                                          ０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を混合し、飲料とする。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
以上のことから、本発明のツバキの抽出物は、優れたＭＭＰ阻害効果、フィラグリン産生促進効果を有していた。よって、本発明のツバキの抽出物は、皮膚の老化といった美容分野だけでなく、老化による機能低下の抑制、ガンの予防、治療等といった医療分野にも利用でき、食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等への応用が期待される。
【配列表】
2020158424000001.app