(57)【要約】【課題】筋機能低下を抑制又は回復させることができる、新規な筋機能低下の抑制又は回復用組成物、筋量減少を抑制又は回復させることができる、新規な筋量減少の抑制又は回復用組成物、及び、筋質低下を抑制又は回復させることができる、新規な筋質低下の抑制又は回復用組成物を提供すること。【解決手段】Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する筋機能低下の抑制又は回復用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する筋機能低下の抑制又は回復用組成物。
【請求項２】
筋機能低下が、加齢による筋機能低下である請求項１に記載の筋機能低下の抑制又は回復用組成物。
【請求項３】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する筋量減少の抑制又は回復用組成物。
【請求項４】
筋量減少が、加齢による筋量減少である請求項３に記載の筋量減少の抑制又は回復用組成物。
【請求項５】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する筋質低下の抑制又は回復用組成物。
【請求項６】
筋質低下が、加齢による筋質低下である請求項５に記載の筋質低下の抑制又は回復用組成物。
【請求項７】
筋質低下が、筋細胞間の接着の低下である請求項５又は６に記載の筋質低下の抑制又は回復用組成物。
【請求項８】
前記Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、下記（ａ）〜（ｃ）のいずれかのペプチドである請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
（ａ）Ｘ１−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（Ｘ１は、存在しないか、又は、配列番号１に示されるアミノ酸配列のｎ１〜５８番目（ｎ１は、１〜５８のいずれかの整数を表す）のアミノ酸配列を表す）で示されるアミノ酸配列からなるペプチド
（ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１〜５８番目の領域中に１〜９個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチド
（ｃ）前記（ｂ）のペプチドの部分配列からなるペプチドであって、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド
【請求項９】
前記Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、Ｘ２−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（Ｘ２は、存在しないか、又は、配列番号２に示されるアミノ酸配列のｎ２〜１８番目（ｎ２は、１〜１８のいずれかの整数を表す）のアミノ酸配列を表す）で示されるアミノ酸配列からなるペプチドである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ又はＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるペプチドである請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
経口用組成物である請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、筋機能低下の抑制又は回復用組成物に関する。また、本発明は、筋量減少の抑制又は回復用組成物、筋質低下の抑制又は回復用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本のような人口構成における高齢者比率が高い国では、健康寿命の延長や日常生活の質（ＱＯＬ）の向上が課題となっている。健康寿命の短縮の要因の一つとして、加齢に伴う筋量（筋肉量）や筋質（筋肉の質）の低下が挙げられる。筋量や筋質の低下は筋機能の低下の原因となり、転倒リスク上昇、怪我、長期臥床等を招く。怪我、病気等によって高齢者の活動量が減少すると、筋機能が更に低下するという悪循環を招く。
【０００３】
また、交通手段の発達等による運動不足や、手術後、病気の療養等において長期間安静が必要とされる場合等にも、筋機能が低下する。治癒後により早く日常生活に復帰するためには、筋機能低下を抑制することが望まれる。
【０００４】
筋機能低下を抑制又は回復するためには、筋量や筋質の低下を抑制又は回復することが重要であり、そのための手段の一つとして、リハビリテーション等の運動療法が行われている。一方、栄養学的観点からも筋量等を改善し得る成分の研究が行われている。特許文献１には、少なくとも１種のチロシン化合物、並びにロイシン及びイソロイシンからなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸、を有効成分とする筋量改善剤が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１６−１４００７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、筋機能低下を抑制又は回復させることができる、新規な筋機能低下の抑制又は回復用組成物を提供することを目的とする。また、本発明は、筋量減少を抑制又は回復させることができる、新規な筋量減少の抑制又は回復用組成物を提供することを目的とする。また本発明は、筋質低下を抑制又は回復させることができる、新規な筋質低下の抑制又は回復用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究したところ、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓ（ヒスチジン−リジン）のアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩が、筋量減少や筋質低下を抑制又は回復させる作用を有し、筋機能の低下を抑制又は回復させるために有用であることを見出した。
【０００８】
すなわち本発明は、以下の筋機能低下の抑制又は回復用組成物、筋量減少の抑制又は回復用組成物、筋質低下の抑制又は回復用組成物を提供する。
〔１〕Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する筋機能低下の抑制又は回復用組成物。
〔２〕筋機能低下が、加齢による筋機能低下である上記〔１〕に記載の筋機能低下の抑制又は回復用組成物。
〔３〕Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する筋量減少の抑制又は回復用組成物。
〔４〕筋量減少が、加齢による筋量減少である上記〔３〕に記載の筋量減少の抑制又は回復用組成物。
〔５〕Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する筋質低下の抑制又は回復用組成物。
〔６〕筋質低下が、加齢による筋質低下である上記〔５〕に記載の筋質低下の抑制又は回復用組成物。
〔７〕筋質低下が、筋細胞間の接着の低下である上記〔５〕又は〔６〕に記載の筋質低下の抑制又は回復用組成物。
〔８〕上記Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、下記（ａ）〜（ｃ）のいずれかのペプチドである上記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の組成物。
（ａ）Ｘ１−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（Ｘ１は、存在しないか、又は、配列番号１に示されるアミノ酸配列のｎ１〜５８番目（ｎ１は、１〜５８のいずれかの整数を表す）のアミノ酸配列を表す）で示されるアミノ酸配列からなるペプチド
（ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１〜５８番目の領域中に１〜９個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチド
（ｃ）上記（ｂ）のペプチドの部分配列からなるペプチドであって、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド
〔９〕上記Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、Ｘ２−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（Ｘ２は、存在しないか、又は、配列番号２に示されるアミノ酸配列のｎ２〜１８番目（ｎ２は、１〜１８のいずれかの整数を表す）のアミノ酸配列を表す）で示されるアミノ酸配列からなるペプチドである、上記〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の組成物。
〔１０〕上記Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ又はＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるペプチドである上記〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の組成物。
〔１１〕経口用組成物である上記〔１〕〜〔１０〕のいずれかに記載の組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、筋機能低下を抑制又は回復させることができる、新規な筋機能低下の抑制又は回復用組成物が提供される。また、本発明によれば、筋量減少を抑制又は回復させることができる、新規な筋量減少の抑制又は回復用組成物が提供される。本発明によれば、筋質低下を抑制又は回復させることができる、新規な筋質低下の抑制又は回復用組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａ〜Ｅは、ＨＥ染色したラットの骨格筋の顕微鏡写真である（スケールバー：５０μｍ）。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物は、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する。
本発明の筋量減少の抑制又は回復用組成物は、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する。
本発明の筋質低下の抑制又は回復用組成物は、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を有効成分として含有する。
【００１２】
本明細書中、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドを、ＨＫ含有ペプチドとも記載する。ＨＫ含有ペプチド又はその塩は、１種用いてもよく、２種以上を使用してもよい。
ペプチドの塩としては、薬理学的に許容される塩であれば特に限定されず、酸性塩及び塩基性塩のいずれであってもよい。酸性塩として、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩；酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩等の有機酸塩等が挙げられる。塩基性塩として、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられる。
【００１３】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドのアミノ酸残基数は、例えば、２〜１００であってよい。Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、Ｈｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列からなるペプチドであってもよい。
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドとして、下記（ａ）〜（ｃ）のペプチドが好ましい。
（ａ）Ｘ１−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（Ｘ１は、存在しないか、又は、配列番号１に示されるアミノ酸配列のｎ１〜５８番目（ｎ１は、１〜５８のいずれかの整数を表す）のアミノ酸配列を表す）で示されるアミノ酸配列からなるペプチド
（ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１〜５８番目の領域中に１〜９個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチド
（ｃ）上記（ｂ）のペプチドの部分配列からなるペプチドであって、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド
配列番号１に示すアミノ酸配列は、ジャージー種の牛のβ−ラクトグロブリンＣのアミノ末端から１〜６０番目のアミノ酸配列である。
【００１４】
本明細書中、アミノ酸配列において、１〜９個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたとは、同一配列中の任意かつ１〜９のアミノ酸配列中の位置において、１〜９個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加があることを意味し、欠失、置換及び付加のうち２以上が同時に生じていてもよい。
【００１５】
上記（ｂ）のペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列において、１〜５８番目の領域中に好ましくは１〜８個（より好ましくは１〜７個、１〜６個、１〜５個又は１〜４個、さらに好ましくは１〜３個、１〜２個又は１個）のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加された配列からなる。
上記（ｃ）のペプチドは、上記（ｂ）に記載のペプチドの部分配列からなり、かつ、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドである。
【００１６】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドとして、上記（ａ）のペプチドがより好ましい。
一態様において、（ａ）のペプチドとして、Ｘ２−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（Ｘ２は、存在しないか、又は、配列番号２に示されるアミノ酸配列のｎ２〜１８番目（ｎ２は、１〜１８のいずれかの整数を表す）のアミノ酸配列を表す）で示されるアミノ酸配列からなるペプチドが好ましい。配列番号２に示すアミノ酸配列は、配列番号１に示すアミノ酸配列の４１〜６０番目のアミノ酸配列（（ａ）のペプチドにおいて、ｎ１が４１〜５８のいずれかの整数を表すペプチド）である。
【００１７】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドとして、Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるペプチドがさらに好ましい。これらのペプチド又はその塩は、筋機能低下の抑制又は回復作用、筋量減少の抑制又は回復作用、筋質低下の抑制又は回復作用の観点から好ましい。Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩として、Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ若しくはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその塩がさらに好ましく、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列からなるペプチド又はその塩が特に好ましい。
【００１８】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の製造方法は特に限定されない。ＨＫ含有ペプチドは、例えば、公知のペプチド合成方法によって製造することができる。化学合成によってＨＫ含有ペプチドを得る場合は、固相法又は液相法のいずれの方法でも合成することができる。合成によって得られたペプチドは、逆相高速液体クロマトグラフィー、イオン交換樹脂、ハイポーラスポリマー樹脂を用いたクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等を用いた通常の精製方法で精製することができる。また、例えば、Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ及び配列番号３に示されるアミノ酸配列（Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ）は、ジャージー種の牛の乳に含まれるβ−ラクトグロブリンＣに含まれる配列であり、β−ラクトグロブリンＣを酵素等で分解することによって製造することもできる。Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドは、微生物を用いて生合成することもできる。微生物を用いて生合成する場合は、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドをコードする遺伝子を導入した発現ベクターを作製して、該発現ベクターを宿主微生物に導入して形質転換体を得る。形質転換体を培養し、培養物からＣ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチドを精製することができる。宿主微生物は特に限定されず、例えば、大腸菌、酵母等を使用することができる。培養物からの分離精製は、通常の精製方法で行うことができる。
ペプチドの塩は、当該分野で公知の任意の方法により、当業者によって容易に調製され得る。
【００１９】
本明細書において、筋機能低下の抑制又は回復は、筋機能の低下を抑制すること又は低下した筋機能を回復させることを指す。筋機能は、筋力、弾性力、持久力などを含む概念である。筋機能低下は、加齢による筋機能低下であってよい。
筋量減少の抑制又は回復は、筋量の減少を抑制すること又は減少した筋量を回復させることを指す。筋量減少の抑制は、筋量増加を含む概念である。筋量減少は、加齢による筋量減少であってよい。
筋質低下の抑制又は回復は、筋質（筋肉の状態）の低下を抑制すること又は低下した筋質を回復させることを指す。筋質低下は、加齢による筋質低下であってよい。筋質低下として、筋細胞間の接着の低下等が挙げられる。筋細胞間の接着が低下すると、筋機能が低下する。
筋細胞間の接着の低下の抑制又は回復は、筋細胞間の接着の低下を抑制すること又は低下した筋細胞間の接着を回復させることを指す。筋細胞間の接着の低下の抑制は、筋細胞間の接着の強化を含む概念である。
ヒト等の動物の筋量は、例えば、マイクロＰＥＴ／ＣＴ（陽電子（ポジトロン）放射断層撮影／コンピュータ断層撮影、ＩＮＶＥＯＮ、シーメンス、米国）により測定することができる。
【００２０】
後記の実施例に示されるように、若齢のラットと比較して、老齢ラットでは、骨格筋における筋細胞間の接着が低下していた。老齢ラットにＣ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を摂取させると、コントロールの老齢ラットと比較して筋細胞が増加し、筋細胞間の接着が強固になっていることが示唆された。また、Ｈｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を摂取させたラットは、摂取させなかったラットと比較して、骨格筋量が多かった。したがってＣ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩は、筋量減少の抑制又は回復に有用である。また、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩は、筋細胞間の接着低下を抑制又は回復させたことから、筋質低下の抑制又は回復のために有用である。筋量減少の抑制又は回復や、筋質低下の抑制又は回復により、筋機能低下の抑制又は回復が可能となる。一態様において、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩は、筋量減少及び／又は筋質低下を抑制又は回復させることにより、筋機能低下を抑制又は回復させるために好適に使用され得る。
【００２１】
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩は、筋機能低下の抑制又は回復のため、筋量減少の抑制又は回復のため、筋質低下の抑制又は回復のために有用である。Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩は、骨格筋の筋機能低下の抑制又は回復のため、骨格筋の筋量減少の抑制又は回復のため、骨格筋の筋質低下の抑制又は回復のために有用である。本発明の一態様において、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩は、加齢による筋機能低下の抑制又は回復のため、加齢による筋量減少の抑制又は回復のため、加齢による筋質低下の抑制又は回復のために好適に使用される。
上記のペプチド又はその塩の使用は、治療的使用であってもよく、非治療的使用であってもよい。「非治療的」とは、医療行為、すなわち手術、治療又は診断を含まない概念である。
【００２２】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物、筋量減少の抑制又は回復用組成物及び筋質低下の抑制又は回復用組成物を、以下ではまとめて筋機能低下の抑制又は回復用組成物等ともいう。
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、例えば、飲食品（飲食品組成物）、医薬品（医薬組成物）、飼料（飼料組成物）等の形態で提供することができるが、これらに限定されるものではない。本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、それ自体が飲食品、医薬品、飼料等であってもよく、これらに使用される添加剤等の製剤、素材であってもよい。一態様において、本発明の効果をより充分に発揮できる観点から、筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、経口用組成物であることが好ましく、飲食品又は経口用医薬品であることがより好ましく、飲食品であることがさらに好ましい。
【００２３】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、本発明の効果を損なわない限り、有効成分として使用されるＨＫ含有ペプチド又はその塩の他に、任意の添加剤、任意の成分を含有することができる。これらの添加剤及び成分としては、一般的に飲食品、医薬品、飼料等に使用可能なものが使用できる。
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、一例として、剤の形態で提供することができるが、本形態に限定されるものではない。当該剤をそのまま組成物として、又は、当該剤を含む組成物として提供することもできる。
【００２４】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を飲食品とする場合、ＨＫ含有ペプチド又はその塩に、飲食品に使用可能な成分（例えば、飲食品素材、必要に応じて使用される食品添加物等）を配合して、種々の飲食品とすることができる。飲食品は特に限定されず、例えば、一般的な飲食品、健康食品、これらの原料等が挙げられる。飲食品の形態も特に限定されず、固形状、半流動状、流動状などを挙げることができる。飲食品は、錠剤、被覆錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、丸薬、カプセル剤、ドライシロップ剤、チュアブル剤等の経口用固形製剤；内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の各種製剤形態とすることもできる。
【００２５】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を医薬品とする場合、ＨＫ含有ペプチド又はその塩に、薬理学的に許容される賦形剤等を配合して、各種剤形の医薬品とすることができる。医薬品の投与形態は特に限定されず、経口投与でもよく、非経口投与でもよい。本発明の効果をより充分に得る観点から、医薬品の投与形態は、経口投与が好ましい。医薬品の剤形は、投与形態に適した剤形とすればよい。経口用医薬品の剤形として、例えば、錠剤、被覆錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、丸薬、カプセル剤、ドライシロップ剤、チュアブル剤等の経口用固形製剤；内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤が挙げられる。非経口投与用医薬の剤形として、注射剤、点滴剤、軟膏剤、ローション剤、貼付剤、坐剤、経鼻剤、経肺剤（吸入剤）等が挙げられる。医薬品は、非ヒト動物用医薬であってもよい。
【００２６】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を飼料とする場合、ＨＫ含有ペプチド又はその塩に、飼料に使用可能な成分を配合して飼料とすることができる。飼料としては、例えば、ウシ、ブタ、ニワトリ、ヒツジ、ウマ等に用いる家畜用飼料；ウサギ、モルモット、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料；イヌ、ネコ、小鳥等に用いるペットフードなどが挙げられる。
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を、飲食品、医薬品、飼料等とする場合、その製造方法は特に限定されない。例えば、有効成分として使用されるＨＫ含有ペプチド又はその塩を用いて、一般的な方法により製造することができる。
【００２７】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等中のＨＫ含有ペプチド又はその塩の含有量は特に限定されず、その形態等に応じて適宜設定することができる。例えば、筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を飲食品、医薬品、飼料等とする場合、いずれの形態の場合でも、ＨＫ含有ペプチド又はその塩の総含有量（ＨＫ含有ペプチド及びその塩の合計含有量）が、例えば、組成物中に０．００１重量％以上であってよく、０．０１重量％以上が好ましく、また、９０重量％以下であってよく、８０重量％以下が好ましい。一態様において、ＨＫ含有ペプチド又はその塩の総含有量は、筋機能低下の抑制又は回復用組成物等中に、例えば、０．００１〜９０重量％であってよく、好ましくは０．０１〜８０重量％とすることができる。
【００２８】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、その形態に応じた適当な方法で投与又は摂取することができ、好ましくは経口で投与又は摂取される。
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等の摂取量（投与量ということもできる）は特に限定されず、筋量減少の抑制又は回復効果、筋質低下の抑制又は回復効果、筋機能低下の抑制又は回復効果が得られるような量（有効量）であればよく、投与形態、投与方法等に応じて適宜設定すればよい。一態様において、ヒト（成人）を対象に経口で投与する又は摂取させる場合、ＨＫ含有ペプチド又はその塩の総摂取量（ＨＫ含有ペプチド及びその塩の合計摂取量）は、ＨＫ含有ペプチドのＣ末端のＨｉｓ−Ｌｙｓの重量に換算して、例えば、１日あたり体重５０ｋｇで、０．１ｍｇ以上が好ましく、１．０ｍｇ以上がより好ましく、２．５ｍｇ以上がさらに好ましく、１０ｍｇ以上が特に好ましく、また、２．５ｇ以下が好ましく、１０００ｍｇ以下がより好ましく、５００ｍｇ以下がさらに好ましく、１００ｍｇ以下が特に好ましい。一態様において、ヒト（成人）の場合のＨＫ含有ペプチド又はその塩の総摂取量は、１日あたり体重５０ｋｇで、ＨＫ含有ペプチドのＣ末端のＨｉｓ−Ｌｙｓの重量に換算して、０．１ｍｇ〜２．５ｇが好ましく、１．０〜１０００ｍｇがより好ましく、２．５〜５００ｍｇがさらに好ましく、１０〜５００ｍｇがさらにより好ましく、１０〜１００ｍｇが特に好ましい。上記量を、例えば１日１回で又は複数回（例えば、２〜３回）に分けて経口投与又は摂取させることが好ましい。ＨＫ含有ペプチド又はその塩の摂取量が上記範囲となるように、本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を対象に投与する又は摂取させることが好ましい。本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、ヒトに、体重５０ｋｇあたり、１日あたり上記量のＨＫ含有ペプチド又はその塩を投与する又は摂取させるための経口用組成物であってよい。
【００２９】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、継続して摂取（投与）されるものであることが好ましい。ＨＫ含有ペプチド又はその塩は、継続的に摂取されることによって、筋機能低下の抑制又は回復効果、筋量減少の抑制又は回復効果、筋質低下の抑制又は回復効果が高まる。本発明の一実施態様において、筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、２週間以上継続して摂取されることが好ましく、４週間以上継続して摂取されることがより好ましい。
【００３０】
ＨＫ含有ペプチド又はその塩は、上記のように筋機能低下の抑制又は回復作用、筋量減少の抑制又は回復作用、筋質低下の抑制又は回復作用を有する。このためにＨＫ含有ペプチド又はその塩は、筋機能低下、筋量減少又は筋質低下に起因する状態又は疾患を予防又は改善するために有用である。
筋機能低下、筋量減少又は筋質低下に起因する状態又は疾患として、サルコペニア、寝たきり、転倒、疲労感、ＱＯＬの低下等が挙げられる。一態様において、本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、上記の状態又は疾患の予防又は改善のために使用することができる。予防は、発症の防止、発症の遅延、発症率の低下を包含する。改善は、症状の軽快、症状の進行抑制、症状の治癒を包含する。
【００３１】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を投与又は摂取させる対象（以下、単に投与対象ともいう）は、ヒト、ヒト以外の動物が好ましく、ヒト又は非ヒト哺乳動物がより好ましく、ヒトがさらに好ましい。非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ラット、マウス、サル等が挙げられる。また、筋機能低下の抑制又は回復用組成物等の投与対象として、筋機能低下の抑制又は回復を必要又は希望とする対象、筋量減少の抑制又は回復を必要又は希望する対象、筋質低下の抑制又は回復を必要又は希望する対象が好ましい。例えば、上記の筋機能低下、筋量減少又は筋質低下に起因する状態又は疾患の予防又は改善を希望する対象等が挙げられる。
筋機能、筋量、筋質は加齢により低下することから、本発明における好ましい投与対象の一例として、加齢による筋機能、筋量又は筋質の低下の抑制又は回復を必要又は希望する対象が挙げられる。一態様において、投与対象として、高齢者が好ましい。
【００３２】
本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等には、包装、容器又は説明書に用途、有効成分の種類、上述した効果、使用方法（例えば、摂取方法、投与方法）等の１又は２以上を表示してもよい。本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等には、筋機能低下、筋量減少、筋質低下を抑制又は回復させる作用、又は、この作用に基づく作用を有する旨の表示が付されていてもよい。
【００３３】
一態様において、本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等には、「歩行能力(機能)の維持」、「歩行機能の維持」、「筋肉量の維持」、「筋肉量の改善」、「筋力の低下抑制」「筋肉を作る力をサポート」等の１又は２以上の表示が付されていてもよい。本発明の一実施態様において、本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等は、上記の機能の表示が付された飲食品であることが好ましい。また上記表示は、上記の機能を得るために用いる旨の表示であってもよい。
【００３４】
本発明は、以下の方法も包含する。
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を、対象に投与することを含む、筋機能低下を抑制又は回復させる方法。
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を、対象に投与することを含む、筋量減少を抑制又は回復させる方法。
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩を対象に投与することを含む、筋質低下を抑制又は回復させる方法。
Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド（ＨＫ含有ペプチド）又はその塩、投与対象、投与方法、投与量及びそれらの好ましい態様等は、上述した筋機能低下の抑制又は回復用組成物等と同じである。ＨＫ含有ペプチド又はその塩の投与量は、筋機能低下の抑制又は回復作用、筋量減少の抑制又は回復作用、筋質低下の抑制又は回復作用が得られる量、すなわち有効量であればよく、特に限定されない。例えば上述した摂取量を投与することが好ましい。ＨＫ含有ペプチド又はその塩は、そのまま投与してもよいし、ＨＫ含有ペプチド又はその塩を含有する組成物として投与してもよい。例えば、上述した本発明の筋機能低下の抑制又は回復用組成物等を投与することができる。本発明によれば、筋量減少、筋質低下を抑制又は回復させることができる。また、筋機能低下を抑制又は回復させることができる。また、筋機能低下、筋量減少又は筋質低下に起因する状態又は疾患を予防又は改善することが可能となる。上記方法は、治療的な方法であってもよく、非治療的な方法であってもよい。一態様において、筋機能低下は、加齢による筋機能低下であってよい。筋量減少は、加齢による筋量減少であってよい。筋質低下は、加齢による筋質低下であってよい。
【００３５】
本発明は、以下の使用も包含する。
筋機能低下を抑制又は回復させるための、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の使用。
筋量減少を抑制又は回復させるための、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の使用。
筋質低下を抑制又は回復させるための、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の使用。
上記の使用は、ヒト又は非ヒト動物における使用であり、好ましくはヒトにおける使用である。使用は、治療的使用であってもよく、非治療的使用であってもよい。ＨＫ含有ペプチド又はその塩、対象、投与方法、投与量及びそれらの好ましい態様等は、上述した筋機能低下の抑制又は回復用組成物等におけるものと同じである。
【００３６】
本発明は、筋機能低下の抑制又は回復用組成物を製造するための、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の使用；筋量減少の抑制又は回復用組成物を製造するための、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の使用；筋質低下の抑制又は回復用組成物を製造するための、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列を含むペプチド又はその塩の使用も包含する。筋機能低下の抑制又は回復用組成物、筋量減少の抑制又は回復用組成物、筋質低下の抑制又は回復用組成物及びこれらの好ましい態様等は、上記と同じである。
【実施例】
【００３７】
以下、本発明をより具体的に説明する実施例を示す。なお、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００３８】
一連の動物実験は、動物愛護管理法他関連法令を遵守し、社内及び学内動物実験委員会の審査を経て機関の長が承認した計画に基づき実施した。
【００３９】
＜実施例１＞
実験方法
１．実験動物
老齢ラットは、ウィスター系雄ラットを（日本エスエルシー株式会社）５ケ月齢で購入し、１７ケ月齢で実験に供した。若齢ラットは、２ケ月齢で購入し、３ケ月齢で使用した。
【００４０】
２．被験物質
以下の被験物質を使用した。
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるテトラペプチドの酢酸塩（以下、ＬＬＨＫという）
Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列からなるトリペプチドの酢酸塩（以下、ＬＨＫという）
Ｈｉｓ−Ｌｙｓのアミノ酸配列からなるジペプチドの塩（以下、ＨＫという）
ＬＬＨＫ（酢酸塩）、ＬＨＫ（酢酸塩）の合成は、株式会社ペプチド研究所（箕面市）に依頼した。
【００４１】
３．被験物質の飲用
ＬＬＨＫは３０ｍｇ／３０ｍＬ、ＬＨＫは２３ｍｇ／３０ｍＬ、ＨＫは１６ｍｇ／３０ｍＬとなるように水道水に溶解させてラットに飲用させた。ＨＫ水溶液中のＨｉｓ−Ｌｙｓ濃度は、１２ｍｇ／３０ｍＬであった。
１７ケ月齢ラットに、水道水（水飲用群、老齢コントロール）、ＬＬＨＫ（ＬＬＨＫ飲用群）、ＬＨＫ（ＬＨＫ飲用群）又はＨＫ（ＨＫ飲用群）をアドリブに飲用させて、１ケ月間飼育した（各群ｎ＝２）。３ケ月齢ラット（若齢コントロール）には水道水を飲用させて、１ケ月間飼育した（ｎ＝２）。なおこの実験中、被験物質（ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫ）飲用群、水飲用群（コントロール）及び若齢コントロール群には、いずれも同じ固形飼料（商品名ＭＦ、オリエンタル酵母（株）製）を自由に摂取させた。ラットは、１日に上記の被験物質水溶液を約２２ｍＬ摂取した。
上記の飼育後（実験終了後）、各群のラットの体重を測定した。その後、下記の試験を行った。
【００４２】
４．筋重量の測定及び組織像解析
ＬＬＨＫ飲用群、ＨＫ飲用群及び若齢コントロール群については、ラットの骨格筋（ヒラメ筋）を摘出し、直ちに１０％  中性緩衝ホルムアルデヒド溶液（ナカライテスク株式会社製）で固定後、５ｍｍの切片を作製した。ヘマトキシレンとエオジンで染色（ＨＥ染色）後、光学顕微鏡（オリンパス株式会社製、ＢＸ５３）で観察した（倍率１０×２０）。
水飲用群及びＬＨＫ飲用群については、ラットの骨格筋（ヒラメ筋）を摘出し、直ちに重量を測定した。重量測定後、上記と同じ方法で骨格筋を固定して、光学顕微鏡で観察した。
【００４３】
５．マイクロアレイ解析
摘出した骨格筋を、直ちにＲＮＡ  ｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ，  ＵＳＡ）に入れ、ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ精製は、ＲＮｅａｓｙ  Ｆｉｂｒｏｕｓ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ  ＧｍｂＨ，  Ｈｉｌｄｅｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）とＱＩＡｃｕｂｅ（Ｑｉａｇｅｎ  ＧｍｂＨ）を用いて行った。ＲＮＡの純度をＮａｎｏＤｒｏｐ  １０００  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．，  Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，  ＤＥ，  ＵＳＡ）とＡｇｉｌｅｎｔ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）を用いて確かめた後、Ｏｎｅ−Ｃｏｌｏｒ  Ｌｏｗ  Ｉｎｐｕｔ  Ｑｕｉｃｋ  Ａｍｐ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，  Ｃａ，  ＵＳＡ）を用いてラベル化したｃＲＮＡを合成し、フラグメント化した。ＳｕｒｅＰｒｉｎｔ  Ｇ３  Ｒａｔ  ＧＥ  ｖｅｒ  ２．０（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と２５４５ＡＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｖｅｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で６５℃で１７時間ハイブリダイズした。本Ａｒｒａｙは、約３０，０００個の遺伝子が解析できる。解析には、ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ＧＸ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １４．９（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いた。
【００４４】
（結果）
得られた値は、平均値±標準誤差で示した。有意差検定は、Ｅｘｃｅｌの分析ツールを用いて、ｔ検定（等分散を仮定した２標本による検定、ｐ値、片側検定）により行った、水飲用群（老齢コントロール）に対する検定結果である（＊＊：ｐ＜０．０１）。
【００４５】
１．体重への被験物質の影響
実験開始前、及び、被験物質（ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫ）又は水を１ケ月飲用後（実験終了後）のラットの体重を表１に示す。体重は、水飲用群（老齢コントロール）、ＬＬＨＫ飲用群、ＬＨＫ飲用群、ＨＫ飲用群のいずれも、老化とともに減少する傾向にあるが、群間で有意の差はなかった（表１）。
【００４６】
【表１】
2020176103.tif 000002
【００４７】
２．骨格筋の組織像への被験物質の影響
図１Ａ〜Ｅは、ＨＥ染色したラットの骨格筋の顕微鏡写真である（スケールバー：５０μｍ）。図１Ａ〜Ｅは、Ａが若齢コントロール（水飲用）、Ｂが老齢コントロール（水飲用）、ＣがＬＬＨＫを飲用したラット、ＤがＬＨＫを飲用したラット、ＥがＨＫを飲用したラットである。若齢動物では、筋細胞がきれいに束をなしている（図１Ａ）。しかし、水飲用の老齢動物では、筋細胞間の結合が崩れバラバラになっていた（図１Ｂ）。ＬＬＨＫを飲用（図１Ｃ）、ＬＨＫを飲用（図１Ｄ）、ＨＫを飲用（図１Ｅ）させると、筋細胞は結合力を回復して塊状になり、若齢動物の像（図１Ａ）に近づいた。
【００４８】
３．筋重量への被験物質の影響
ＬＨＫ又は水を１ケ月飲用後（実験終了後）のラットのヒラメ筋の重量を表２に示す。ＬＨＫ飲用群では、水飲用群（老齢コントロール）と比較して筋重量が有意に重かった（＊＊：ｐ＜０．０１、ｎ＝２）。
【００４９】
【表２】
2020176103.tif 000003
【００５０】
４．骨格筋の遺伝子発現への被験物質の影響
ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫの飲用で水飲用より１．５倍以上上昇した遺伝子と、若齢コントロールの方が老齢コントロールより高かった遺伝子を分析した。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫの飲用により、１１３９個のｅｎｔｉｔｉｅｓが共通する遺伝子として上昇していた。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫの飲用で水飲用より１．５倍以上低下した遺伝子と、若齢コントロールの方が老齢コントロールより低かった遺伝子については、１２８９個のｅｎｔｉｔｉｅｓが共通する遺伝子として低下していた。
【００５１】
機能別に、遺伝子を検討した(表３〜８)。
表３〜８のカラムＡはＬＬＨＫ飲用老齢動物（ＬＬＨＫ飲用群）の遺伝子発現量（ＯＬＬＨＫ）を水飲用老齢動物（老齢コントロール）の遺伝子発現量（ＯＣ）で割った値（ＯＬＬＨＫ／ＯＣ）である。カラムＢはＬＨＫ飲用老齢動物（ＬＨＫ飲用群）の遺伝子発現量（ＯＬＨＫ）を水飲用老齢動物の遺伝子発現量（ＯＣ）で割った値（ＯＬＨＫ／ＯＣ）である。カラムＣはＨＫ飲用老齢動物（ＨＫ飲用群）の遺伝子発現量（ＯＨＫ）を水飲用老齢動物の遺伝子発現量（ＯＣ）で割った値（ＯＨＫ／ＯＣ）である。カラムＤは水飲用若齢動物（若齢コントロール）の遺伝子発現量（ＹＣ）を水飲用老齢動物の遺伝子発現量（ＯＣ）で割った値（ＹＣ／ＯＣ）である。
後記の表３〜５及び７〜８において、カラムＡ、Ｂ及びＣに示す値の中で、カラムＤ（ＹＣ／ＯＣ）の値に最も近いものに下線を付した。この下線を付した数値は、各群の中で、その遺伝子発現が、若齢コントロールの遺伝子発現に最も近いことを意味する。表３〜５及び７〜８に示す結果では、ＬＨＫを飲用した動物の遺伝子発現が若齢動物の遺伝子発現に最も近かった。
【００５２】
表３に、筋肉の発達を促す（筋量増加を促進する）遺伝子の発現を調べた結果を示す。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫにより、筋肉の発達を促す遺伝子として、インシュリン様成長因子の遺伝子（Ｉｇｆ１）、インシュリン様成長因子結合タンパク質の遺伝子（Ｉｇｆ２ｂｐ２、Ｉｇｆｂｐ６、Ｉｇｆｂｐ４）、インシュリン様成長因子受容体の遺伝子（Ｉｇｆ１ｒ）、転写延長因子（Ｔｃｅａｎｃ２）や細胞膜の裏打ちタンパク質であるアンキリン４４（Ａｎｋｄｒ４４）などの発現が上昇した。
【００５３】
【表３】
2020176103.tif 000004
【００５４】
表４に、細胞接着に関連する遺伝子の発現を調べた結果を示す。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫにより、細胞接着に関連する遺伝子として、ネクチンの遺伝子（Ｎｅｃｔｉｎ３、Ｆｎｄｃ１）、ヒアルロン酸受容体の遺伝子（Ｃｄ４４）、インテグリンの遺伝子（Ｉｔｇａ２、Ｉｔｇａ３、Ｉｔｇｂ１、Ｉｔｇｂ７、Ｉｔｆｇ２）、カドヘリンの遺伝子（Ｃａｄ４、Ｐｃｄｈａ５、Ｐｃｄｈ１７）などの発現が上昇した。
【００５５】
【表４】
2020176103.tif 000005
【００５６】
表５に、筋修復に関与する遺伝子の発現を調べた結果を示す。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫにより、細胞修復に関与する遺伝子として、ケモカインリガンドの遺伝子（Ｃｃｌ７、Ｃｘｃｌ９、Ｃｘｃｌ１６）、カテニン（Ｃｔｎｎｂｉｐ１、Ｃｔｎｎａ２）などの発現が上昇した。
【００５７】
【表５】
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【００５８】
表６に、骨格筋細胞への分化を促す遺伝子の発現を調べた結果を示す。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫにより、骨格筋細胞への分化を促す遺伝子としてＰａｘ３の発現が上昇した。骨格筋細胞への分化を促す遺伝子の発現量が多いほど、骨格筋への分化が促進され、骨格筋量が増加する。
【００５９】
【表６】
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【００６０】
表７に、細胞マトリックスのリモデリングに関与する遺伝子の発現を調べた結果を示す。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫにより、細胞マトリックスのリモデリングに関与する遺伝子として、ＣＴＧＦ、Ｄｃｎの発現が上昇した。
【００６１】
【表７】
2020176103.tif 000008
【００６２】
表８に、骨格筋の成長を促す遺伝子の発現を調べた結果を示す。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ又はＨＫにより、骨格筋の成長を促す遺伝子として成長因子遺伝子（Ｌｔｂｐ１、Ｔｇｆｂ２、Ｔｇｆｂｉ、Ｌｔｂｐ４）などの発現が上昇していた。
【００６３】
【表８】
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【００６４】
図１に示す結果は、ＬＬＨＫ、ＬＨＫ、ＨＫは、老齢で細胞接着が悪くなりバラバラになった細胞の接着を高め、形態形成を促進したことを示している。図１Ｂでは筋細胞間の接着が緩く、１個の筋小束中の細胞数が図１Ａに比し減っているのに対し、図１Ｃ〜Ｅ（特に図１Ｃ及び図１Ｄ）では筋細胞間の接着が強くなり、１個の筋小束中の細胞数が図１Ｂより増えた。筋細胞間の接着が強化されると、筋機能が向上する。ＬＬＨＫ、ＬＨＫ、ＨＫが細胞の接着性や形態形成を高めることは、表３〜８に示す細胞接着や筋修復（ｍｕｓｃｌｅ  ｒｅｐａｉｒｉｎｇ）関連の遺伝子発現の高まりによるものと考えられる。例えば表４に示すように、ＬＨＫ、ＬＨＫ、ＨＫによって筋細胞接着に関わる遺伝子の発現が上昇している。ＬＨＫ、ＬＨＫ、ＨＫによる筋細胞間の接着の強化は、これらの遺伝子発現に起因すると考えられる。また表２に示されるように、ＬＨＫを飲用したラットでは、飲用しないラットと比較して筋重量が有意に重かった。
【００６５】
表３に見られるように、ＬＬＨＫ、ＬＨＫ、ＨＫの飲用は、種々のインシュリン様成長因子の遺伝子（Ｉｇｆ）発現、インスリン様成長因子結合タンパク質の遺伝子、インスリン様成長因子受容体遺伝子の遺伝子を上昇させた。インスリン様成長因子が、筋量を上昇させるという報告は多くある。例えば、インシュリン／インシュリン様成長因子は、ＰＩ（３）Ｋ／Ａｋｔシグナル伝達系を活性化して筋肉タンパク質の合成を高めたり、筋管を太くしたりする（Ｒｏｍｍｅｌ  Ｃ．  Ｅｔ  ａｌ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３：１００９−１０１３，２００１）。
また、表５に示すように、ＬＬＨＫ、ＬＨＫ、ＨＫにより、カテニン（Ｃｔｎｎａ２）の発現が上昇した。カテニンはカドヘリンと複合体を形成し、カドヘリンの細胞接着因子としての機能発揮に必須であるほか、転写制御因子としての機能も有る（Ｖａｌｅｎｔａ  Ｔ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ３１（１２）：２７１４−３６，２０１２．）。これらの結果から、Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ若しくはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその塩の飲用は、筋量減少の抑制又は回復に有効であるといえる。また、上記ペプチド又はその塩の飲用は、筋質低下の抑制又は回復に有効であるといえる。従って上記ペプチド又はその塩は、サルコペニア（加齢性筋力減少症）等に有効である。
【００６６】
Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ又はＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）のアミノ酸配列からなるペプチド等のＨＫ含有ペプチド又はその塩が骨格筋の老性組織変化や老性機能低下の修復に有効であることが判明した。
また、上記のように、ＨＫ含有ペプチド又はその塩は、筋細胞間の接着を強化する作用がある。近年、培養による人工肉製造の研究が盛んであり、ＨＫ含有ペプチド又はその塩の添加により人工肉形成促進効果も期待できる。特に、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ又はその塩はバラバラの肉細胞を肉塊にする力を持つ可能性が高い動物由来の肉に頼らず、工場等で人工肉を作る場合に、Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ等のＨＫ含有ペプチド又はその塩は食料供給の重要なツールの一つになることも考えられる。
【図１】
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【配列表】
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