(57)【要約】【課題】本発明は、エボカルセトの生体内での持続的な放出を可能とするエボカルセト誘導体を提供することを課題とする。【解決手段】式１：【化１】2020045318.tif 000098［式中、  Ｚは、カルボキシル基若しくはその塩を有する多糖類の残基、又はカルボキシル基若しくはその塩を有するポリアミノ酸の残基であり、  Ｌは、リンカーであり、  Ｄは、エボカルセトの残基であり、  ｎは、正の整数である］で表されるエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１：
【化１】
2020045318.tif 000093
［式中、
Ｚは、カルボキシル基若しくはその塩を有する多糖類の残基、又はカルボキシル基若しくはその塩を有するポリアミノ酸の残基であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ｄは、エボカルセトの残基であり、
ｎは、正の整数である］
で表されるエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｚが、カルボキシル基又はその塩を有する多糖類の残基である、請求項１に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
カルボキシル基又はその塩を有する多糖類が、カルボキシメチルデキストラン又はその塩である、請求項２に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
カルボキシメチルデキストラン又はその塩の分子量が、１０，０００〜１６０，０００である、請求項３に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｚが、カルボキシル基又はその塩を有するポリアミノ酸の残基である、請求項１に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
カルボキシル基又はその塩を有するポリアミノ酸が、ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体である、請求項５に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
ポリグルタミン酸又はその塩の誘導体が、側鎖として、−（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2ＯＨを有する、請求項６に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体の分子量が、１０，０００〜１３０，０００である、請求項６又は７に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
ｎが、１〜４０の整数である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｌが、エボカルセトのカルボキシル基と、生体内で切断される結合を形成している、請求項１〜９のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｌが、多糖類のカルボキシル基若しくはその塩又はポリアミノ酸のカルボキシル基若しくはその塩と、生体内で切断される結合を形成している、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
生体内で切断される結合が、アミド結合又はエステル結合である、請求項１０又は１１に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
Ｌが、アルキレンオキシ部分又はポリアルキレンオキシ部分を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
Ｌが、シクロアルキレン部分又はヘテロシクロアルキレン部分を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
Ｚに対するＬの結合部位と、Ｄに対するＬの結合部位とを結ぶ原子の最小の数が３〜５０である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
Ｌの分子量が、５０〜５００である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
Ｌが、
Ｌ１：
【化２】
2020045318.tif 000094
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ1は、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ1は、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ1は、正の整数であり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
Ｌ２：
【化３】
2020045318.tif 000095
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
ｒ2aは、０〜４の整数であり、
ｒ2bは、０〜４の整数であり、
ｒ2a及びｒ2bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｙ2は、ＣＲ又はＳ（＝Ｏ）であり、
Ｒは、Ｈ又はアルキルであり
直線と破線とからなる結合は、単結合又は二重結合であり、
Ａ2は、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ2は、０又は１であり、
Ｘ2は、Ｏ、Ｎ又はＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
Ｌ３：
【化４】
2020045318.tif 000096
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ3aは、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ3aは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ3は、正の整数であり、
Ａ3bは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｒ3aは、０〜４の整数であり、
ｒ3bは、０〜４の整数であり、
ｒ3a及びｒ3bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｘ3bは、ＣＲ、Ｓ（＝Ｏ）又はＮであり、
Ｒは、Ｈ又はアルキルであり、
直線と破線とからなる結合は、単結合又は二重結合であり、
Ｘ3cは、存在しないか、又はＯ、Ｎ若しくはＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す
（ただし、Ｘ3cが存在しない場合、Ｘ3bはＮである）］
又は
Ｌ４：
【化５】
2020045318.tif 000097
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ4aは、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ4aは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ4は、正の整数であり、
Ａ4bは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｒ4aは、０〜４の整数であり、
ｒ4bは、０〜４の整数であり、
ｒ4a及びｒ4bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｘ4bは、Ｏ又はＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
で表される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
副甲状腺機能亢進症を治療するための、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
副甲状腺機能亢進症が、二次性副甲状腺機能亢進症である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
副甲状腺機能亢進症が、原発性副甲状腺機能亢進症である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
注射剤の形態である、請求項１８〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
１週間に１回投与される、請求項２２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エボカルセト誘導体、及びエボカルセト誘導体を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）は、骨吸収を誘導して血中カルシウム（Ｃａ）を増加させる生理的機能を有し、血中Ｃａの恒常性を保つ役割を担っている。ＰＴＨの分泌亢進が慢性的に持続すると、骨からの持続的なＣａ溶出によって血中Ｃａ濃度が上昇し、代謝異常が生じる。このため、ＰＴＨの合成及び分泌は、細胞外カルシウムイオン（Ｃａ2+）濃度を感知するＣａ感受性受容体（ＣａＳＲ）を介したシグナル伝達によって厳密に制御されている。ＣａＳＲを活性化させる化合物は、血中ＰＴＨ濃度を低下させることにより、副甲状腺機能亢進症に対して効果を示すことが期待されている（特許文献１及び非特許文献１〜５）。
【０００３】
ＣａＳＲを活性化させる化合物としては、以下の４−（３Ｓ−（１Ｒ−（１−ナフチル）エチルアミノ）ピロリジン−１−イル）フェニル酢酸（以下、「エボカルセト」という。）が知られている（特許文献１）。
【化１】
2020045318.tif 000002
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５／１１５９７５号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Nature, 366: p.575-580, 1993
【非特許文献２】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95: p.4040-4045，1998
【非特許文献３】Annu. Rev. Nutr., 20: p.507-533, 2000
【非特許文献４】The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 32: p.789-804, 2000
【非特許文献５】Curr. Opin. Nephrol. Hypertens., 9; p.123-132, 2000
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、エボカルセトの生体内での持続的な放出を可能とするエボカルセト誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等が鋭意検討した結果、エボカルセトを多糖類又はポリアミノ酸と結合させることにより、エボカルセトが生体内で持続的に放出されることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
本発明は以下の実施形態を含む。
［１］
式１：
【化２】
2020045318.tif 000003
［式中、
Ｚは、カルボキシル基若しくはその塩を有する多糖類の残基、又はカルボキシル基若しくはその塩を有するポリアミノ酸の残基であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ｄは、エボカルセトの残基であり、
ｎは、正の整数である］
で表されるエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［２］
Ｚが、カルボキシル基又はその塩を有する多糖類の残基である、［１］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［３］
カルボキシル基又はその塩を有する多糖類が、カルボキシメチルデキストラン又はその塩である、［２］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［４］
カルボキシメチルデキストラン又はその塩の分子量が、１０，０００〜１６０，０００である、［３］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［５］
Ｚが、カルボキシル基又はその塩を有するポリアミノ酸の残基である、［１］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［６］
カルボキシル基又はその塩を有するポリアミノ酸が、ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体である、［５］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［７］
ポリグルタミン酸又はその塩の誘導体が、側鎖として、−（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2ＯＨを有する、［６］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［８］
ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体の分子量が、１０，０００〜１３０，０００である、［６］又は［７］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［９］
ｎが、１〜４０の整数である、［１］〜［８］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１０］
Ｌが、エボカルセトのカルボキシル基と、生体内で切断される結合を形成している、［１］〜［９］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１１］
Ｌが、多糖類のカルボキシル基若しくはその塩又はポリアミノ酸のカルボキシル基若しくはその塩と、生体内で切断される結合を形成している、［１］〜［１０］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１２］
生体内で切断される結合が、アミド結合又はエステル結合である、［１０］又は［１１］に記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１３］
Ｌが、アルキレンオキシ部分又はポリアルキレンオキシ部分を含む、［１］〜［１２］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１４］
Ｌが、シクロアルキレン部分又はヘテロシクロアルキレン部分を含む、［１］〜［１３］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１５］
Ｚに対するＬの結合部位と、Ｄに対するＬの結合部位とを結ぶ原子の最小の数が３〜５０である、［１］〜［１４］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１６］
Ｌの分子量が、５０〜５００である、［１］〜［１５］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１７］
Ｌが、
Ｌ１：
【化３】
2020045318.tif 000004
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ1は、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ1は、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ1は、正の整数であり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
Ｌ２：
【化４】
2020045318.tif 000005
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
ｒ2aは、０〜４の整数であり、
ｒ2bは、０〜４の整数であり、
ｒ2a及びｒ2bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｙ2は、ＣＲ又はＳ（＝Ｏ）であり、
Ｒは、Ｈ又はアルキルであり
直線と破線とからなる結合は、単結合又は二重結合であり、
Ａ2は、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ2は、０又は１であり、
Ｘ2は、Ｏ、Ｎ又はＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
Ｌ３：
【化５】
2020045318.tif 000006
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ3aは、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ3aは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ3は、正の整数であり、
Ａ3bは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｒ3aは、０〜４の整数であり、
ｒ3bは、０〜４の整数であり、
ｒ3a及びｒ3bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｘ3bは、ＣＲ、Ｓ（＝Ｏ）又はＮであり、
Ｒは、Ｈ又はアルキルであり、
直線と破線とからなる結合は、単結合又は二重結合であり、
Ｘ3cは、存在しないか、又はＯ、Ｎ若しくはＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す
（ただし、Ｘ3cが存在しない場合、Ｘ3bはＮである）］
又は
Ｌ４：
【化６】
2020045318.tif 000007
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ4aは、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ4aは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ4は、正の整数であり、
Ａ4bは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｒ4aは、０〜４の整数であり、
ｒ4bは、０〜４の整数であり、
ｒ4a及びｒ4bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｘ4bは、Ｏ又はＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
で表される、［１］〜［１６］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１８］
［１］〜［１７］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
［１９］
副甲状腺機能亢進症を治療するための、［１８］に記載の医薬組成物。
［２０］
副甲状腺機能亢進症が、二次性副甲状腺機能亢進症である、［１９］に記載の医薬組成物。
［２１］
副甲状腺機能亢進症が、原発性副甲状腺機能亢進症である、［１９］に記載の医薬組成物。
［２２］
注射剤の形態である、［１８］〜［２１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２３］
１週間に１回投与される、［２２］に記載の医薬組成物。
【０００９】
本発明は、以下の実施形態を更に含む。
[１Ａ]
副甲状腺機能亢進症の治療に使用するための、［１］〜［１７］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１Ｂ］
副甲状腺機能亢進症を治療する方法であって、その必要のある患者に治療有効量の［１］〜［１７］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。
［１Ｃ］
副甲状腺機能亢進症を治療するための、［１］〜［１７］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩の使用。
［１Ｄ］
副甲状腺機能亢進症の治療用医薬の製造における、［１］〜［１７］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩の使用。
［１Ｅ］
副甲状腺機能亢進症の治療用医薬の製造に使用するための、［１］〜［１７］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩。
［１Ｆ］
［１］〜［１７］のいずれかに記載のエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩及び使用説明書を含む、副甲状腺機能亢進症の治療に使用するためのキット。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、エボカルセトの生体内での持続的な放出を可能とするエボカルセト誘導体を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
＜エボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩＞
本発明の一実施形態は、式１：
【化７】
2020045318.tif 000008
［式中、
Ｚは、カルボキシル基若しくはその塩を有する多糖類の残基、又はカルボキシル基若しくはその塩を有するポリアミノ酸の残基であり、
Ｌは、リンカーであり、
Ｄは、エボカルセトの残基であり、
ｎは、正の整数である］
で表されるエボカルセト誘導体又はその薬学的に許容される塩に関する。以下、エボカルセト誘導体と記載する場合には、便宜上、その薬学的に許容される塩も含まれるものとする。
【００１２】
多糖類の残基とは、式１に組み込まれている多糖類の部分を意味する。ポリアミノ酸の残基とは、式１に組み込まれているポリアミノ酸の部分を意味する。エボカルセトの残基とは、式１に組み込まれているエボカルセトの部分を意味する。
【００１３】
本実施形態に係るエボカルセト誘導体は、多糖類又はポリアミノ酸を有することにより、エボカルセトを生体内で持続的に放出することができる。
【００１４】
式１におけるＺは、好ましくはカルボキシル基又はその塩を有する多糖類の残基である。カルボキシル基の塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）等が挙げられる。
【００１５】
カルボキシル基又はその塩を有する多糖類は、好ましくはカルボキシメチルデキストラン又はその塩である。カルボキシメチルデキストランの塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）等が挙げられる。カルボキシメチルデキストランは、生体内で分解されて低分子となることから、人工透析によって除去できるとの利点を有する。
【００１６】
カルボキシメチルデキストラン又はその塩は、以下の構成単位：
【化８】
2020045318.tif 000009
［式中、Ｒ1は、それぞれ独立して、水素、又はカルボキシメチル基（ＣＨ2ＣＯＯＨ）若しくはその塩である］
を有することが好ましい。
【００１７】
カルボキシメチルデキストラン又はその塩のカルボキシル基又はその塩は、リンカーを介して、エボカルセトと結合することができる。そのため、カルボキシメチルデキストラン又はその塩は、複数のカルボキシル基又はその塩を有する場合、複数のエボカルセトと結合することができる。すなわち、１分子のエボカルセト誘導体が、複数のエボカルセト残基を保持することができる。
【００１８】
Ｒ1がカルボキシメチル基又はその塩である割合は、好ましくは１〜３０％であり、より好ましくは２〜１５％であり、更に好ましくは３〜７％である。Ｒ1がカルボキシメチル基又はその塩である割合は、中和滴定によって測定することができる。具体的には、特許第５２６５１２４号の段落［００３３］に記載の方法で測定することができる。
【００１９】
カルボキシメチルデキストラン又はその塩の分子量は、好ましくは１０，０００〜１６０，０００であり、より好ましくは３０，０００〜１３０，０００であり、更に好ましくは５０，０００〜１００，０００であり、特に好ましくは６０，０００〜８０，０００である。なお、カルボキシメチルデキストラン又はその塩の分子量は重量平均分子量である。カルボキシメチルデキストラン又はその塩の分子量が上記の範囲内であることにより、適正な量のエボカルセトが生体内で持続的に放出されることが期待できる。カルボキシメチルデキストラン又はその塩の分子量は、ゲルろ過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法によって測定することができる。具体的には、S.Mori, H.G.Barth, “Size Exclusion Chromatography”, Springer (1999)に記載の方法で測定することができる。
【００２０】
式１におけるＺは、好ましくはカルボキシル基又はその塩を有するポリアミノ酸の残基である。カルボキシル基の塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）等が挙げられる。
【００２１】
カルボキシル基又はその塩を有するポリアミノ酸は、好ましくはポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体である。ポリグルタミン酸の塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）等が挙げられる。ポリグルタミン酸又はその塩の誘導体としては、例えば、側鎖として、−（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2ＯＨを有するもの等が挙げられる。ポリグルタミン酸は、生体内で分解されて低分子となることから、人工透析によって除去できるとの利点を有する。
【００２２】
ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体は、以下の構成単位：
【化９】
2020045318.tif 000010
［式中、Ｒ2は、カルボキシル基若しくはその塩、又はＣＯＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2ＯＨである］
を有することが好ましい。なお、上記の構成単位における−（ＣＨ2）2Ｒ2部分が、ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体の側鎖である。
【００２３】
ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体のカルボキシル基又はその塩は、リンカーを介して、エボカルセトと結合することができる。そのため、ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体は、複数のカルボキシル基又はその塩を有する場合、複数のエボカルセトと結合することができる。すなわち、１分子のエボカルセト誘導体が、複数のエボカルセト残基を保持することができる。
【００２４】
エボカルセトは、ポリグルタミン酸又はその塩の誘導体の側鎖［−（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2ＯＨ］に直接結合していてもよい。この場合、側鎖における［−ＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2Ｏ−］部分がリンカーと見なされる。
【００２５】
ポリグルタミン酸又はその塩の誘導体において、Ｒ2がＣＯＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2ＯＨである割合は、好ましくは４０〜１００％である。Ｒ2がＣＯＮＨ（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2ＯＨである割合は、1Ｈ−ＮＭＲによって測定することができる。なお、ポリグルタミン酸又はその塩は、エボカルセト誘導体を形成した後に、誘導体化されてもよい。
【００２６】
ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体の分子量は、好ましくは１０，０００〜１３０，０００である。なお、ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体の分子量は、数平均分子量である。ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体の分子量が上記の範囲内であることにより、適正な量のエボカルセトが生体内で持続的に放出されることが期待できる。ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体の分子量は、1Ｈ−ＮＭＲによって測定することができる。具体的には、ポリグルタミン酸、その塩、又はそれらの誘導体のＮ末端におけるＮＨ2が結合する炭素上のＨの数と、上記の構成単位におけるα位のＨの数とを比較することにより、構成単位の数を算出し、分子量を計算することができる。
【００２７】
式１におけるｎは、好ましくは１〜４０であり、より好ましくは５〜３０であり、更に好ましくは１０〜２０である。ｎが上記の範囲内であることにより、適正な量のエボカルセトが生体内で持続的に放出されることが期待できる。ｎは、エボカルセト誘導体をエボカルセトに分解し、その吸光度を測定することによって決定することができる。具体的には以下の実施例に記載の方法により決定することができる。
【００２８】
式１におけるＬは、エボカルセトのカルボキシル基と、生体内で切断される結合を形成しているリンカーであることが好ましい。このような結合様式で、エボカルセトの残基とリンカーとが結合されていることにより、エボカルセトが生体内で持続的に放出される。
【００２９】
式１におけるＬは、多糖類のカルボキシル基若しくはその塩又はポリアミノ酸のカルボキシル基若しくはその塩と、生体内で切断される結合を形成しているリンカーであることが好ましい。
【００３０】
生体内で切断される結合としては、例えば、加水分解によって切断される結合が挙げられる。具体的な結合としては、例えば、アミド結合、エステル結合等が挙げられる。本明細書におけるエステル結合は、「Ｏ−Ｃ（Ｏ）」結合を意味する。本明細書におけるアミド結合は、「Ｎ−Ｃ（Ｏ）」結合を意味する。以下の結合は、本明細書においてアミド結合に包含される。なお、波線を付した部位は水素以外の原子に結合していることを意味する。
【化１０】
2020045318.tif 000011
【００３１】
式１におけるＬは、アルキレンオキシ部分又はポリアルキレンオキシ部分を含むことが好ましい。アルキレンオキシ部分とは、Ｌに含まれるアルキレンオキシ構造を意味する。ポリアルキレンオキシ部分とは、Ｌに含まれるポリアルキレンオキシ構造を意味する。Ｌがアルキレンオキシ部分又はポリアルキレンオキシ部分を含むことにより、嵩高い多糖類又はポリアミノ酸の残基とエボカルセトの残基との間の距離が長くなり、エボカルセトの放出が促進されることが期待される。
【００３２】
アルキレンオキシ部分は、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキレンオキシ部分であり、より好ましくはＣ2〜Ｃ5アルキレンオキシ部分であり、更に好ましくエチレンオキシ部分である。
【００３３】
ポリアルキレンオキシ部分は、好ましくはポリＣ1〜Ｃ6アルキレンオキシ部分であり、より好ましくはポリＣ2〜Ｃ5アルキレンオキシ部分であり、更に好ましくポリエチレンオキシ部分である。ポリアルキレンオキシ部分におけるアルキレンオキシ単位の数は、好ましくは２〜１２であり、より好ましくは２〜８であり、更に好ましくは２〜６である。
【００３４】
式１におけるＬは、シクロアルキレン部分又はヘテロシクロアルキレン部分を含むことが好ましい。シクロアルキレン部分とは、Ｌに含まれるシクロアルキレン構造を意味する。ヘテロシクロアルキレン部分とは、Ｌに含まれるヘテロシクロアルキレン構造を意味する。
【００３５】
シクロアルキレン部分及びヘテロシクロアルキレン部分は、好ましくは４〜８員環であり、より好ましくは４〜６員環であり、更に好ましくは６員環である。ヘテロシクロアルキレン部分は、環員原子として、１〜４個のヘテロ原子を有することが好ましく、１〜３個のヘテロ原子を有することがより好ましく、１又は２個のヘテロ原子を有することが更に好ましい。ヘテロ原子としては、例えば、窒素原子、硫黄原子、酸素原子等が挙げられる。特に限定するものではないが、ヘテロシクロアルキレン部分は、環員原子のヘテロ原子として、１個の窒素原子、２個の窒素原子、又は１個の窒素原子及び１個の硫黄原子を有することが好ましい。硫黄原子は酸化されて、Ｓ（＝Ｏ）の状態となっていてもよい。
【００３６】
ヘテロシクロアルキレン部分としては、例えば、ピぺリジン環、ピペラジン環、ピロリジン環、ピラゾリジン環、アゼチジン環、チオモルホリン環、チアゾリジン環、モルホリン環等が挙げられる。ヘテロシクロアルキレン部分が、環員原子として硫黄原子を含む場合、当該硫黄原子は酸化されて、Ｓ（＝Ｏ）の状態となっていてもよい。
【００３７】
式１におけるＺに対するＬの結合部位と、Ｄに対するＬの結合部位とを結ぶ原子の最小の数（「Ｚ−Ｄ距離」ともいう。）は、好ましくは３〜５０であり、より好ましくは４〜４０であり、更に好ましくは５〜３０である。
【００３８】
式１におけるＬの分子量は、好ましくは５０〜５００であり、より好ましくは２００〜４５０であり、更に好ましくは３００〜４００である。
【００３９】
式１におけるＬは、Ｌ１：
【化１１】
2020045318.tif 000012
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ1は、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ1は、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ1は、正の整数であり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
で表されることが好ましい。
アルキレンに対する置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ6アルキル等が挙げられる。
【００４０】
Ｌ１において、Ｘ1は、好ましくはＮＨである。
Ｌ１において、Ａ1は、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキレンであり、より好ましくはＣ2〜Ｃ5アルキレンであり、更に好ましくエチレンである。
Ｌ１において、ｍ1は、好ましくは１〜１２であり、より好ましくは１〜８であり、更に好ましくは２〜６である。
【００４１】
式１におけるＬは、Ｌ２：
【化１２】
2020045318.tif 000013
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
ｒ2aは、０〜４の整数であり、
ｒ2bは、０〜４の整数であり、
ｒ2a及びｒ2bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｙ2は、ＣＲ又はＳ（＝Ｏ）であり、
Ｒは、Ｈ又はアルキル（例えば、Ｃ1〜Ｃ3アルキル）であり
直線と破線とからなる結合は、単結合又は二重結合であり、
Ａ2は、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ2は、０又は１であり、
Ｘ2は、Ｏ、Ｎ又はＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
で表されることが好ましい。
アルキレンに対する置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ6アルキル等が挙げられる。
【００４２】
Ｌ２において、ｒ2aは、好ましくは２である。
Ｌ２において、ｒ2bは、好ましくは２である。
Ｌ２において、ｒ2a及びｒ2bは、好ましくは合計で４である。
Ｌ２において、好ましくは、Ｙ2はＳ（＝Ｏ）であり、直線と破線とからなる結合は二重結合であり、ｍ2は０であり、Ｘ2はＮである。
Ｌ２において、好ましくは、Ｙ2はＣＨであり、直線と破線とからなる結合は単結合であり、Ａ2はメチレンであり、ｍ2は０又は１であり、Ｘ2はＯである。
【００４３】
式１におけるＬは、Ｌ３：
【化１３】
2020045318.tif 000014
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ3aは、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ3aは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ3は、正の整数であり、
Ａ3bは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｒ3aは、０〜４の整数であり、
ｒ3bは、０〜４の整数であり、
ｒ3a及びｒ3bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｘ3bは、ＣＲ、Ｓ（＝Ｏ）又はＮであり、
Ｒは、Ｈ又はアルキル（例えば、Ｃ1〜Ｃ3アルキル）であり、
直線と破線とからなる結合は、単結合又は二重結合であり、
Ｘ3cは、存在しないか、又はＯ、Ｎ若しくはＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す
（ただし、Ｘ3cが存在しない場合、Ｘ3bはＮである）］
で表されることが好ましい。
アルキレンに対する置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ6アルキル等が挙げられる。
【００４４】
Ｌ３において、Ｘ3aは、好ましくはＮＨである。
Ｌ３において、Ａ3aは、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキレンであり、より好ましくはＣ2〜Ｃ4アルキレンであり、更に好ましくエチレンである。
Ｌ３において、ｍ3は、好ましくは１〜１２であり、より好ましくは２〜８であり、更に好ましくは２〜６である。
Ｌ３において、Ａ3bは、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキレンであり、より好ましくはＣ2〜Ｃ4アルキレンであり、更に好ましくエチレンである。
Ｌ３において、ｒ3aは、好ましくは２である。
Ｌ３において、ｒ3bは、好ましくは２である。
Ｌ３において、ｒ3a及びｒ3bは、好ましくは合計で４である。
Ｌ３において、好ましくは、Ｘ3bはＣＨ又はＣＣＨ3であり、直線と破線とからなる結合は単結合であり、Ｘ3cはＯである。
Ｌ３において、好ましくは、Ｘ3bはＳ（＝Ｏ）であり、直線と破線とからなる結合は二重結合であり、Ｘ3cはＮである。
【００４５】
式１におけるＬは、Ｌ４：
【化１４】
2020045318.tif 000015
［式中、
破線は、Ｚとの結合部位を示し、
Ｘ4aは、Ｏ又はＮＨであり、
Ａ4aは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｍ4は、正の整数であり、
Ａ4bは、置換されていてもよいアルキレンであり、
ｒ4aは、０〜４の整数であり、
ｒ4bは、０〜４の整数であり、
ｒ4a及びｒ4bは、合計で２〜４の整数であり、
Ｘ4bは、Ｏ又はＮＨであり、
波線は、Ｄとの結合部位を示す］
で表されることが好ましい。
アルキレンに対する置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ6アルキル等が挙げられる。
【００４６】
Ｌ４において、Ｘ4aは、好ましくはＮＨである。
Ｌ４において、Ａ4aは、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキレンであり、より好ましくはＣ2〜Ｃ4アルキレンであり、更に好ましくエチレンである。
Ｌ４において、ｍ4は、好ましくは１〜１２であり、より好ましくは２〜８であり、更に好ましくは２〜６である。
Ｌ４において、Ａ4bは、好ましくはＣ1〜Ｃ6アルキレンであり、より好ましくはＣ2〜Ｃ4アルキレンであり、更に好ましくエチレンである。
Ｌ４において、ｒ4aは、好ましくは２である。
Ｌ４において、ｒ4bは、好ましくは２である。
Ｌ４において、ｒ4a及びｒ4bは、好ましくは合計で４である。
Ｌ４において、Ｘ4bは、好ましくはＮＨである。
【００４７】
式１におけるＤは、エボカルセトの残基である。エボカルセトの残基は、好ましくは以下の構造を有する。
【化１５】
2020045318.tif 000016
［式中、波線は、Ｌとの結合部位を示す］
【００４８】
「薬理学的に許容される塩」としては、例えば、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等が挙げられる。
酸付加塩としては、例えば、無機酸塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩）、有機酸塩（例えば、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩）等が挙げられる。
金属塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩）、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられる。
アンモニウム塩としては、例えば、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等が挙げられる。
有機アミン付加塩としては、例えば、モルホリン塩、ピペリジン塩等が挙げられる。
アミノ酸付加塩としては、例えば、リジン塩、グリシン塩、フェニルアラニン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等が挙げられる
【００４９】
本実施形態に係るエボカルセト誘導体は、その溶媒和物も包含する。溶媒和物を形成する溶媒は、薬学的に許容される溶媒であれば特に限定されない。薬学的に許容される溶媒としては、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、酢酸エチル等が挙げられる。
【００５０】
本実施形態に係るエボカルセト誘導体に結晶多形が存在する場合、当該エボカルセト誘導体は、全ての結晶形態の化合物を包含する。本実施形態に係るエボカルセト誘導体が非晶質形態で存在し得る場合、当該エボカルセト誘導体は、非晶質形態の化合物も包含する。
【００５１】
本実施形態に係るエボカルセト誘導体に立体異性体が存在する場合、当該エボカルセト誘導体は、個々の全ての立体異性体及びそれらの混合物を包含する。立体異性体としては、例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、シス−トランス異性体等が挙げられる。
【００５２】
本実施形態に係るエボカルセト誘導体は、その一部が同位体で標識されている化合物も包含する。同位体としては、例えば、2Ｈ、3Ｈ、11Ｃ、14Ｃ、35Ｓ等が挙げられる。
【００５３】
＜製造方法＞
本実施形態に係るエボカルセト誘導体は、公知の方法を利用して製造することができる。以下、本実施形態に係るエボカルセト誘導体の代表的な製造方法について説明するが、以下の製造方法に限定されるものではなく、目的の化合物の構造に基づいて原料、工程等を適宜変更することができる。
【００５４】
［スキーム１］
【化１６】
2020045318.tif 000017
（スキーム１において、Ｘ1、Ａ1、及びｍ1は上記のとおりであり、ＰＧは保護基であり、Ｚ’−ＣＯＯＨは多糖類又はポリアミノ酸である。）
【００５５】
（工程１−１）
工程１−１では、化合物（１ａ）と化合物（１ｂ）とを反応させて、化合物（１ｃ）を得る。化合物（１ａ）は、市販品でもよいし、公知の方法（例えば、US2015/0166518、11-12頁）を利用して製造してもよい。化合物（１ｂ）は、国際公開第２０１５／０３４０３１号に記載の方法に従って製造することができる。
【００５６】
工程１−１では、溶媒中おいて縮合剤及び塩基の存在下で、反応を行うことが好ましい。
【００５７】
工程１−１における溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、トルエン、酢酸エチル、アセトニトリル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジオキサン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ピリジン、水等が挙げられる。
【００５８】
工程１−１における縮合剤としては、例えば、１，３−ジシクロヘキサンカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩（ＥＤＣ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ヨウ化２−クロロ−１−メチルピリジニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）、（１−シアノ−２−エトキシ−２−オキソエチリデンアミノオキシジメチルアミノ−モルホリノ−カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＣＯＭＵ）、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウム＝クロリドｎ水和物（ＤＭＴ−ＭＭ）等が挙げられる。
【００５９】
工程１−１における塩基としては、例えば、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）等が挙げられる。
【００６０】
（工程１−２）
工程１−２では、化合物（１ｃ）の保護基を除去して、化合物（１ｄ）を得る。保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基等が挙げられる。保護基は、公知の方法（例えば、例えば、Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons Inc.（1999）に記載の方法）を利用して除去することができる。
【００６１】
（工程１−３）
工程１−３では、化合物（１ｄ）を化合物（１ｅ）と反応させて、化合物（１ｆ）を得る。化合物（１ｅ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。工程１−３では、溶媒中おいて縮合剤の存在下で、反応を行うことが好ましい。
【００６２】
工程１−３における溶媒及び縮合剤としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００６３】
［スキーム２］
【化１７】
2020045318.tif 000018
（スキーム２において、ｒ2a、ｒ2b、Ｙ2、直線と破線とからなる結合、Ａ2、ｍ2、及びＸ2は上記のとおりであり、ＰＧは保護基であり、Ｚ’−ＣＯＯＨは多糖類又はポリアミノ酸である。）
【００６４】
（工程２−１）
工程２−１では、化合物（２ａ）と化合物（２ｂ）とを反応させて、化合物（２ｃ）を得る。化合物（２ａ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。化合物（２ｂ）は、国際公開第２０１５／０３４０３１号に記載の方法に従って製造することができる。
【００６５】
工程２−１では、溶媒中において縮合剤及び塩基の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程２−１における溶媒、縮合剤、及び塩基としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００６６】
（工程２−２）
工程２−２では、化合物（２ｃ）の保護基を除去して、化合物（２ｄ）を得る。保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基等が挙げられる。保護基は、公知の方法（例えば、例えば、Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons Inc.（1999）に記載の方法）を利用して除去することができる。
【００６７】
（工程２−３）
工程２−３では、化合物（２ｄ）を化合物（２ｅ）と反応させて、化合物（２ｆ）を得る。化合物（２ｅ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。
【００６８】
工程２−３では、溶媒中おいて縮合剤の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程２−３における溶媒及び縮合剤としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００６９】
［スキーム３］
【化１８】
2020045318.tif 000019
（スキーム３において、Ｘ3a、Ａ3a、ｍ3、Ａ3b、ｒ3a、ｒ3b、Ｘ3b、直線と破線とからなる結合、及びＸ3cは上記のとおりであり、ＰＧは保護基であり、Ｚ’−ＣＯＯＨは多糖類又はポリアミノ酸である。）
【００７０】
（工程３−１）
工程３−１では、化合物（３ａ）と化合物（３ｂ）とを反応させて、化合物（３ｃ）を得る。化合物（３ａ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。化合物（３ｂ）は、国際公開第２０１５／０３４０３１号に記載の方法に従って製造することができる。
【００７１】
工程３−１では、溶媒中おいて縮合剤及び塩基の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程３−１における溶媒、縮合剤、及び塩基としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００７２】
（工程３−２）
工程３−２では、化合物（３ｃ）の保護基を除去して、化合物（３ｄ）を得る。保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基等が挙げられる。保護基は、公知の方法（例えば、例えば、Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons Inc.（1999）に記載の方法）を利用して除去することができる。
【００７３】
（工程３−３）
工程３−３では、化合物（３ｄ）と化合物（３ｅ）とを反応させて、化合物（３ｆ）を得る。化合物（３ｅ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。
【００７４】
工程３−３では、溶媒中おいて縮合剤及び塩基の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程３−３における溶媒、縮合剤、及び塩基としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００７５】
（工程３−４）
工程３−４では、化合物（３ｆ）の保護基を除去して、化合物（３ｇ）を得る。保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基等が挙げられる。保護基は、公知の方法（例えば、例えば、Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons Inc.（1999）に記載の方法）を利用して除去することができる。
【００７６】
（工程３−５）
工程３−５では、化合物（３ｇ）を化合物（３ｈ）と反応させて、化合物（３ｉ）を得る。化合物（３ｈ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。
【００７７】
工程３−５では、溶媒中おいて縮合剤の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程３−５における溶媒及び縮合剤としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００７８】
［スキーム４］
【化１９】
2020045318.tif 000020
（スキーム４において、Ｘ4a、Ａ4a、ｍ4、Ａ4b、ｒ4a、ｒ4b、及びＸ4bは上記のとおりであり、ＰＧは保護基であり、Ｚ’−ＣＯＯＨは多糖類又はポリアミノ酸である。）
【００７９】
（工程４−１）
工程４−１では、化合物（４ａ）と化合物（４ｂ）とを反応させて、化合物（４ｃ）を得る。化合物（４ａ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。化合物（４ｂ）は、国際公開第２０１５／０３４０３１号に記載の方法に従って製造することができる。
【００８０】
工程４−１では、溶媒中おいて縮合剤及び塩基の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程４−１における溶媒、縮合剤、及び塩基としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００８１】
（工程４−２）
工程４−２では、化合物（４ｃ）の保護基を除去して、化合物（４ｄ）を得る。保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基等が挙げられる。保護基は、公知の方法（例えば、例えば、Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons Inc.（1999）に記載の方法）を利用して除去することができる。
【００８２】
（工程４−３）
工程４−３では、化合物（４ｄ）と化合物（４ｅ）とを反応させて、化合物（４ｆ）を得る。化合物（４ｅ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。
【００８３】
工程４−３では、溶媒中おいて縮合剤及び塩基の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程４−３における溶媒、縮合剤、及び塩基としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００８４】
（工程４−４）
工程４−４では、化合物（４ｆ）の保護基を除去して、化合物（４ｇ）を得る。保護基としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基等が挙げられる。保護基は、公知の方法（例えば、例えば、Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, T. W. Greene, John Wiley ＆ Sons Inc.（1999）に記載の方法）を利用して除去することができる。
【００８５】
（工程４−５）
工程４−５では、化合物（４ｇ）を化合物（４ｈ）と反応させて、化合物（４ｉ）を得る。化合物（４ｈ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。
【００８６】
工程４−５では、溶媒中おいて縮合剤の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程４−５における溶媒及び縮合剤としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００８７】
スキーム１〜４では、化合物１ｆ、２ｆ、３ｉ又は４ｉにおける多糖類又はポリアミノ酸の残基に残存するカルボキシル基を、例えば２−（２−アミノエトキシ）エタン−１−オールで修飾してもよい。本工程では、縮合剤の存在下で、化合物１ｆ、２ｆ、３ｉ又は４ｉを２−（２−アミノエトキシ）エタン−１−オールと反応させることが好ましい。本工程における縮合剤としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００８８】
［スキーム５］
【化２０】
2020045318.tif 000021
（スキーム５において、Ｚ’−ＣＯＯＨは多糖類又はポリアミノ酸である。）
【００８９】
（工程５−１）
工程５−１では、化合物（５ａ）と化合物（５ｂ）とを反応させて、化合物（５ｃ）を得る。化合物（５ａ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。化合物（５ｂ）は、市販品でもよいし、公知の方法を利用して製造してもよい。
【００９０】
工程５−１では、溶媒中おいて縮合剤の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程５−１における溶媒及び縮合剤としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００９１】
（工程５−２）
工程５−２では、化合物（５ｃ）と化合物（５ｄ）とを反応させて、化合物（５ｅ）を得る。化合物（５ｄ）は、国際公開第２０１５／０３４０３１号に記載の方法に従って製造することができる。
【００９２】
工程５−２では、溶媒中おいて縮合剤及び塩基の存在下で、反応を行うことが好ましい。工程５−２における溶媒、縮合剤、及び塩基としては、例えば、工程１−１において記載したもの等が挙げられる。
【００９３】
＜医薬組成物＞
本発明の一実施形態は、上記のエボカルセト誘導体を含む、医薬組成物に関する。本実施形態に係る医薬組成物は、エボカルセト誘導体に加えて、任意成分を更に含んでいてもよい。任意成分としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、光沢化剤等が挙げられる。
【００９４】
本実施形態に係る医薬組成物が対象とする疾患としては、例えば、副甲状腺機能亢進症（例えば、原発性副甲状腺機能亢進症、二次性副甲状腺機能亢進症）、副甲状腺癌、副甲状腺摘出術不能の原発性副甲状腺機能亢進症における高カルシウム血症、又は副甲状腺摘出手術後に再発の原発性副甲状腺機能亢進症における高カルシウム血症等が挙げられる。特に限定するものではないが、本実施形態に係る医薬組成物は、二次性副甲状腺機能亢進症を主な対象とする。
【００９５】
本実施形態に係る医薬組成物は、固体製剤及び液体製剤のいずれでもよい。本実施形態に係る医薬組成物は、経口製剤及び非経口製剤のいずれでもよい。特に限定するものではないが、本実施形態に係る医薬組成物は、注射剤であることが好ましい。
【００９６】
本実施形態に係る医薬組成物は、エボカルセトを生体内で持続的に放出することができるため、その投与回数を減らすことができる。本実施形態に係る医薬組成物の投与方法としては、例えば、３日〜３週間に一回投与、５日〜２週間に一回投与、１週間に一回投与等が挙げられる。
【実施例】
【００９７】
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれに限定されるものではない。
【００９８】
＜純度分析＞
エボカルセト誘導体の純度をHPLCによって分析した。分析条件は以下に示すとおりである。
【００９９】
（分析条件A）
使用機器：Waters alliance
使用カラム：XBridge Protein SEC, 450Å(3.5μm 7.8 x 30mm) → XBridge Protein SEC, 450Å(3.5μm 7.8 x 150mm) → XBridge Protein SEC, 200Å(3.5μm 7.8x150mm)
温度：室温
送液条件：2% アセトニトリル / 0.05% TFA aq.
分析時間：50分
流速：0.6 mL/min
検出波長：254 nm
【０１００】
（分析条件B）
使用機器：日立L-2000シリーズ
使用カラム：XBridge Protein SEC, 450Å(3.5μm 7.8 x 30mm)
温度：40℃
送液条件：2% アセトニトリル / 0.05% TFA aq.
分析時間：8分
流速：0.6 mL/min
検出波長：254 nm
【０１０１】
（分析条件C）
使用機器：日立L-2000シリーズ
使用カラム：XBridge Shield RP18 (2.5μm 3.0x50mm) 
温度：40℃
送液条件：0.05%TFA/アセトニトリル
分析時間：10分
流速：1.7 mL/min
検出波長：254 nm
【０１０２】
（分析条件D）
使用機器：waters e2695
使用カラム：XBridge C18 (3.5μm 4.6x50mm) 
温度：40℃
送液条件：0.05%TFA/アセトニトリル
分析時間：4.5分
流速：1.7 mL/min
検出波長：254 nm
【０１０３】
（分析条件E）
使用機器：waters e2695
使用カラム：XBridge C18 (3.5μm 4.6x50mm) 
温度：40℃
送液条件：0.05%TFA/アセトニトリル
分析時間：10分
流速：1.7 mL/min
検出波長：254 nm
【０１０４】
＜加水分解による定量実験＞
（検量線の作成）
エボカルセト23.5mgをメタノール200mlに溶解し、溶液A-1を作成した。さらに溶液A-1をメタノールで10倍、100倍に希釈した溶液A-2、A-3を作成した。続いてo-ターフェニル23.3mgをメタノール200mlに溶解し、溶液Bを作成した。続いて溶液A-1 2mlと溶液B 2mlを混合したサンプル1、溶液A-2 2mlと溶液B 2mlを混合したサンプル2、溶液A-3 2mlと溶液B 2mlを混合したサンプル3を用い、検量線を作成した。
（分析）
エボカルセト誘導体をメタノール200μl、および4 mol/LのNaOH水溶液200μlに溶解させ、終夜撹拌することにより加水分解を行うことで、エボカルセトを完全に遊離させた。この溶液を水-メタノール混合溶媒を用いて10mlにメスアップした。メスアップした溶液2mlと、o-ターフェニルのメタノール溶液2mL (23.3mg/200mlで調製したものを利用)を混合し、分析用サンプルを調製した。この分析用サンプルをHPLCで分析し、上記検量線を用いて含量を算出した。
【０１０５】
＜参考例1＞
国際公開第２０１５／０３４０３１号（第２０〜２４頁）に記載の方法に従って、エボカルセトを合成した。
【０１０６】
以下の構造式に含まれるCMD 20K、CMD 40K、CMD 70K、及びCMD 150Kはそれぞれ、分子量が20,000、40,000、70,000、及び150,000のカルボキシメチルデキストランの残基を表し、PGA 15K、PGA 30K、PGA 45K、PGA 60K、及びPGA 120Kはそれぞれ、分子量が15,000、30,000、45,000、60,000、及び120,000のポリグルタミン酸の残基を表す。
【０１０７】
＜参考例2＞
【化２１】
2020045318.tif 000022
市販の1-アミノ-4-メチルペンタン-2-オール 塩酸塩（100 mg, 0.651 mmol）をアセトニトリル（4 mL）に溶解し、二炭酸ジ-tert-ブチル（0.166 mL, 0.716 mmol）、TEA（0.272 mL, 1.95 mmol）を加え、20時間撹拌した。反応混合物に飽和重曹水、酢酸エチルを加え、Presep（登録商標; けいそう土、顆粒状タイプM, 4.5 g/25 mL）を通してろ過し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン/酢酸エチル=50/50）で精製し、tert-ブチル (2-ヒドロキシ-4-メチルペンチル)カルバメート（143 mg, 収率quant.）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 4.94 (br s, 1H), 3.83-3.73 (m, 1H), 3.35-3.25 (m, 1H), 3.05-2.93 (m, 1H), 2.27-2.21 (br m, 1H), 1.84-1.71 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.43-1.34 (m, 1H), 1.28-1.16 (m, 1H), 0.96-0.89 (m, 6H).
【０１０８】
＜実施例1：化合物CMD-1の合成＞
（工程1）
【化２２】
2020045318.tif 000023
参考例1で得られたエボカルセト（527 mg, 1.41 mmol）をDCM（4 mL）に懸濁し、tert-ブチル 1-イミノ-1λ6-チオモルホリン-4-カルボキシレート 1-オキシド（0.22 g, 0.938 mmol）、EDC（360 mg, 1.87 mmol）、DMAP（23 mg, 0.188 mmol）を加えて終夜撹拌した。反応溶液を直接シリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム/メタノール=96/4）で精製し、tert-ブチル 1-((2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)イミノ)-1λ6-チオモルホリン-4-カルボキシラート 1-オキシド（329 mg, 59%）を白色アモルファスとして得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 8.22 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.88 (1H, t, J = 4.8 Hz), 7.76 (1H, d, J = 8.6 Hz), 7.70 (1H, d, J = 7.2 Hz), 7.49 (3H, td, J = 9.1, 5.1 Hz), 7.13 (2H, d, J = 8.2 Hz), 6.44 (2H, d, J = 8.6 Hz), 4.80 (1H, d, J = 6.8 Hz), 4.02 (2H, br), 3.60 (2H, s), 3.52 (4H, t, J = 11.3 Hz), 3.44-3.37 (3H, m), 3.19 (1H, t, J = 8.4 Hz), 3.08 (3H, dt, J = 15.9, 5.7 Hz), 2.16 (1H, t, J = 10.6 Hz), 1.89 (1H, dd, J = 12.0, 7.5 Hz), 1.52 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.45 (9H, s).
ESI/MS m/z : 591[M+H]+
【０１０９】
（工程2）
【化２３】
2020045318.tif 000024
工程1の生成物（0.13 g, 0.22 mmol）をDCM（0.8 mL）に溶解し、トリフルオロ酢酸（0.8 mL）を加えて30分撹拌した。反応混合物をトルエンで希釈し、減圧濃縮した後、飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮し、2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（85.9 mg, 収率80%）を白色アモルファスとして得た。これを、粗生成物として、そのまま次の反応に用いた。
1H-NMR (CDCl3) δ: 8.23 (1H, d, J = 9.4 Hz), 7.88 (1H, dd, J = 6.3, 3.1 Hz), 7.76 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.70 (1H, d, J = 6.7 Hz), 7.49 (3H, td, J = 9.1, 5.4 Hz), 7.14 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.44 (2H, d, J = 8.5 Hz), 4.80 (1H, q, J = 6.4 Hz), 3.65 (2H, d, J = 13.0 Hz), 3.53 (2H, s), 3.40 (3H, dt, J = 17.1, 5.6 Hz), 3.29 (2H, dd, J = 8.5, 5.4 Hz), 3.18 (1H, dd, J = 16.6, 7.2 Hz), 3.14-3.04 (5H, m), 2.18 (1H, dd, J = 11.7, 6.3 Hz), 1.89 (1H, dd, J = 12.1, 7.2 Hz), 1.52 (4H, d, J = 6.3 Hz).
ESI/MS m/z : 491[M+H]+
【０１１０】
（工程3）
【化２４】
2020045318.tif 000025
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 20、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（208 mg）をDMF/水=3/2（5 mL）に溶解し、DMT-MM（600 mg, 2.17 mmmol）および工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（19.5 mg, 0.04 mmol）を加え、終夜撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析内液を凍結乾燥することで、化合物CMD-1（158 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度98.89%（分析条件D; RT:1.8-2.4 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-1のエボカルセト含量が4.95wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-1あたり4.1分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１１】
＜実施例2：化合物CMD-2の合成＞
【化２５】
2020045318.tif 000026
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 40、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（500 mg）をアセトニトリル/水=1/1（15 mL）に溶解し、DMT-MM（600 mg, 2.17 mmmol）および実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（50 mg, 0.102 mmol）を加え、終夜撹拌した。反応混合物に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析内液を凍結乾燥することで、化合物CMD-2（501 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度98.17%（分析条件D; RT:1.3-2.2 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-2のエボカルセト含量が4.36wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-2あたり6.5分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１２】
＜実施例3：化合物CMD-3の合成＞
【化２６】
2020045318.tif 000027
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（208 mg）をDMF/水=3/2（5 mL）に溶解し、DMT-MM（600 mg, 2.17 mmmol）および実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（50 mg, 0.102 mmol）を加え、終夜撹拌した。反応混合物にイソプロパノールを加え、析出物を濾取し、イソプロパノール、酢酸エチルで洗浄した。濾物を乾燥させ、化合物CMD-3（184 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件E; RT:2.5-4.8 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-3のエボカルセト含量が5.34wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-3あたり12.5分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１３】
＜実施例4：化合物CMD-4の合成＞
【化２７】
2020045318.tif 000028
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 150、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（208 mg）をDMF/水=3/2（5 mL）に溶解し、DMT-MM（600 mg, 2.17 mmmol）および実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（19.5 mg, 0.04 mmol）を加え、終夜撹拌した。反応混合物にイソプロパノールを加え、析出物を濾取し、イソプロパノール、酢酸エチルで洗浄した。濾物を乾燥させ、化合物CMD-4（168 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件E; RT:2.5-4.9 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-4のエボカルセト含量が5.86wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-4あたり28.2分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１４】
＜実施例5：化合物CMD-5の合成＞
【化２８】
2020045318.tif 000029
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 40、 carboxymethyl content = 13.4%、Carbosynth社）（500 mg）を水（5 mL）に溶解し、DMT-MM（1500 mg, 5.42 mmmol）および実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（45mg, 0.091 mmol）のDMF溶液（3.5ml）を加え、終夜撹拌した。反応混合物にイソプロパノールを加え、析出物を濾取し、イソプロパノール、酢酸エチルで洗浄した。濾物を飽和重曹水に溶解し、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析内液を凍結乾燥することで、化合物CMD-5（358 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.3-2.5 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-5のエボカルセト含量が3.6wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-5あたり4.5分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１５】
＜実施例6：化合物CMD-6の合成＞
【化２９】
2020045318.tif 000030
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 40、 carboxymethyl content = 13.4%、Carbosynth社）（500 mg）をアセトニトリル/水=1:1（12 mL）に溶解し、DMT-MM（900 mg, 3.25 mmmol）および実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（45mg, 0.091 mmol）を加え、終夜撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、得られた粗生成物に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析内液を凍結乾燥することで、化合物CMD-6（215 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度90.82%（分析条件D; RT:1.5-2.5 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-6のエボカルセト含量が7.52wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-6あたり9.8分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１６】
＜実施例7：化合物CMD-7の合成＞
【化３０】
2020045318.tif 000031
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 13.4%、Carbosynth社）（500 mg）をDMF/水=3:2（12.5 mL）に溶解し、DMT-MM（1500 mg, 5.42 mmmol）および実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（35mg, 0.071 mmol）を加え、終夜撹拌した。反応混合物にイソプロパノールを加え、析出物を濾取し、イソプロパノール、酢酸エチルで洗浄した。濾物を飽和重曹水に溶解し、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析内液を凍結乾燥することで、化合物CMD-7（365 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.6-3 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-7のエボカルセト含量が4.87wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-7あたり12.4分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１７】
＜実施例8：化合物CMD-8の合成＞
【化３１】
2020045318.tif 000032
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 13.4%、Carbosynth社）（500 mg）をアセトニトニル/水=1/1（20 mL）に溶解し、DMT-MM（341 mg, 1.23 mmmol）および実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（83.0 mg, 0.169 mmol）を加え、19時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、凍結乾燥した。得られた粗生成物に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析膜内の不溶物をろ過し、ろ液を凍結乾燥することで、化合物CMD-8（383 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度87%（分析条件A; RT:17-25 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-8のエボカルセト含量が11.86wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-8あたり33.4分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１１８】
＜実施例9：化合物CMD-9の合成＞
（工程1）
【化３２】
2020045318.tif 000033
参考例1で得られたエボカルセト（1000 mg, 2.67 mmol）をDCM（10 mL）に懸濁し、tert-ブチル 4-（ヒドロキシメチル）ピペリジン-1-カルボキシレート（862 mg, 4.01 mmol）、EDC（1024 mg, 5.34 mmol）、DMAP（33 mg, 0.267 mmol）を加えて2時間撹拌した。反応溶液を直接シリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム/メタノール=1/0, 97/3）で精製し、tert-ブチル 4-((2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセトキシ)メチル)ピペリジン-1-カルボキシレート（1670mg, quant.）を得た。
ESI/MS m/z : 572[M+H]+
【０１１９】
（工程2）
【化３３】
2020045318.tif 000034
工程1の生成物（1.67 g, 2.92 mmol）をDCM（8 mL）に溶解し、トリフルオロ酢酸（8 mL）を加えて1時間撹拌した。反応混合物をトルエンで希釈し、減圧濃縮した後、飽和重曹水を加え、クロロホルムで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮しピペリジン-4-イルメチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（1.02 g, 収率74%）を粗成生物として得、これをそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 472[M+H]+
【０１２０】
（工程3）
【化３４】
2020045318.tif 000035
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（500 mg）をアセトニトニル/水=1/1（20 mL）に溶解し、DMT-MM（341 mg, 1.23 mmmol）および工程2で得られたピペリジン-4-イルメチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（44.0 mg, 0.00920 mmol）を加え、15時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、凍結乾燥した。得られた粗生成物に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析膜内の不溶物をろ過し、ろ液を凍結乾燥することで、化合物CMD-9（414 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度95%（分析条件A; RT:10-20 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-9のエボカルセト含量が3.62wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-9あたり8.2分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１２１】
＜実施例10：化合物CMD-10の合成＞
（工程1）
【化３５】
2020045318.tif 000036
参考例1で得られたエボカルセト（1193 mg, 5.93 mmol）をDCM（10 mL）に懸濁し、tert-ブチル 4-ヒドロキシピペリジン-1-カルボキシレート（1480 mg, 3.95 mmol）、EDC（1136 mg, 5.93 mmol）、DMAP（48 mg, 0.395 mmol）を加えて終夜撹拌した。反応溶液を直接シリカゲルクロマトグラフィー（ヘプタン/酢酸エチル=1/0, 7/3）で精製し、tert-ブチル 4-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセトキシ)ピペリジン-1-カルボキシレート（1736mg, 79%）を得た。
ESI/MS m/z : 558[M+H]+
【０１２２】
（工程2）
【化３６】
2020045318.tif 000037
工程1の生成物（1.74 g, 3.11 mmol）をDCM（4 mL）に溶解し、トリフルオロ酢酸（4 mL）を加えて2時間撹拌した。反応混合物をトルエンで希釈し、減圧濃縮した後、飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮しピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（1.89 g）を粗生成物として得、これをそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 458[M+H]+
【０１２３】
（工程3）
【化３７】
2020045318.tif 000038
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（500 mg）をアセトニトニル/水=1/1（20 mL）に溶解し、DMT-MM（341 mg, 1.23 mmmol）および工程2で得られたピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（42.0 mg, 0.00920 mmol）を加え、16時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、凍結乾燥した。得られた粗生成物に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析膜内の不溶物をろ過し、ろ液を凍結乾燥することで、化合物CMD-10（405 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度94%（分析条件A; RT:10-20 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-10のエボカルセト含量が4.13wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-10あたり9.4分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１２４】
＜実施例11：化合物CMD-11の合成＞
（工程1）
【化３８】
2020045318.tif 000039
参考例1で得られたエボカルセト（500 mg, 1.34 mmol）をDCM（6 mL）に溶解し、EDC（384 mg, 2.00 mmol）、N-Boc-アミノエトキシ-エトキシ-エトキシ-エタノール（470 mg, 1.60  mmol）、DMAP（49.0 mg, 0.401 mmol）、TEA（0.279 mL, 2.00 mmol）を加え、17時間撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル=20/80)で精製し、2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14-テトラオキサ-5-アザヘキサデカン-16-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（1.10 g, 収率127%）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.26-8.18 (m, 1H), 7.92-7.85 (m, 1H), 7.77 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.54-7.45 (m, 3H), 7.10 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.43 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.06 (br s, 1H), 4.80 (q, J = 6.3 Hz, 1H), 4.25-4.20 (m, 2H), 3.71-3.66 (m, 2H), 3.65-3.58 (m, 8H), 3.56-3.49 (m, 4H), 3.47-3.35 (m, 3H), 3.35-3.27 (m, 2H), 3.22-3.14 (m, 1H), 3.11-3.03 (br m, 1H), 2.23-2.13 (m, 1H), 1.96-1.84 (m, 1H), 1.53 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.44 (s, 9H).
ESI/MS m/z : 650[M+H]+
（工程2）
【化３９】
2020045318.tif 000040
工程1で得られた2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14-テトラオキサ-5-アザヘキサデカン-16-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（170 mg, 0.262 mmol）をDCM（2 mL）に溶解し、TFA（2 mL）を加え、30分撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、得られた粗生成物2-(2-(2-(2-アミノエトキシ)エトキシ)エトキシ)エチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテートをそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 550[M+H]+
【０１２５】
（工程3）
【化４０】
2020045318.tif 000041
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（1.00 g）をアセトニトニル/水=1/1（40 mL）に溶解し、DMT-MM（681 mg, 2.46 mmmol）および工程2で得られた2-(2-(2-(2-アミノエトキシ)エトキシ)エトキシ)エチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（135 mg, 0.246 mmol）を加え、24時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、凍結乾燥した。得られた粗生成物に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer, MWCO 10k, 70 mL）を用い、外液を水にて透析を行った。透析膜内の懸濁液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥した。得られた白色固体を0.1%TFA水溶液で希釈し、マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過デバイス オメガメンブレン（分子量カットオフ 10k、ポール社製）を用いて限外ろ過（5000 xg、15 ℃）により、0.1%TFA水溶液へ溶媒交換した。得られた高分子量画分に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行い脱塩した。透析膜内の水溶液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥することで、化合物CMD-11（707 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度99%（分析条件B; RT:1.5-2.5 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-11のエボカルセト含量が5.39wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-11あたり12.7分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１２６】
＜実施例12：化合物CMD-12の合成＞
（工程1）
【化４１】
2020045318.tif 000042
参考例1で得られたエボカルセト（500 mg, 1.34 mmol）をDCM（6 mL）に溶解し、EDC（384 mg, 2.00 mmol）、2-(2-Boc-アミノエトキシ)エタノール（329 mg, 1.60  mmol）、DMAP（49.0 mg, 0.401 mmol）、TEA（0.279 mL, 2.00 mmol）を加え、8時間撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル=20/80)で精製し、2-(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)エトキシ)エチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（721 mg, 収率96%）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.25-8.19 (m, 1H), 7.91-7.85 (m, 1H), 7.76 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.54-7.45 (m, 3H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 4.90 (br s, 1H), 4.80 (q, J = 6.3 Hz, 1H), 4.24-4.18 (m, 2H), 3.67-3.59 (m, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.51-3.35 (m, 5H), 3.32-3.25 (m, 2H), 3.23-3.14 (m, 1H), 3.11-3.03 (br m, 1H), 2.23-2.12 (m, 1H), 1.96-1.84 (m, 1H), 1.52 (d, J =
ESI/MS m/z : 562[M+H]+
【０１２７】
（工程2）
【化４２】
2020045318.tif 000043
工程1で得られた2-(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)エトキシ)エチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（100 mg, 0.178 mmol）をDCM（1 mL）に溶解し、TFA（1 mL）を加え、30分撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、得られた粗生成物2-(2-アミノエトキシ)エチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテートをそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 462[M+H]+
【０１２８】
（工程3）
【化４３】
2020045318.tif 000044
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（600 mg）をアセトニトニル/水=1/1（24 mL）に溶解し、DMT-MM（409 mg, 1.48 mmmol）および工程2で得られた2-(2-アミノエトキシ)エチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（82.0 mg, 0.177 mmol）を加え、24時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析膜内の懸濁液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥した。得られた白色固体を0.1%TFA水溶液で希釈し、マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過デバイス オメガメンブレン（分子量カットオフ 10k、ポール社製）を用いて限外ろ過（5000 xg、15 ℃）により、0.1%TFA水溶液へ溶媒交換した。得られた高分子量画分に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行い脱塩した。透析膜内の水溶液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥することで、化合物CMD-12（393 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度99%（分析条件B; RT:1.4-2.4 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-12のエボカルセト含量が6.51wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-12あたり15.4分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１２９】
＜実施例13：化合物CMD-13の合成＞
（工程1）
【化４４】
2020045318.tif 000045
参考例1で得られたエボカルセト（500 mg, 1.34 mmol）をDCM（6 mL）に溶解し、EDC（384 mg, 2.00 mmol）、5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-1-ペンタノール（326 mg, 1.60  mmol）、DMAP（49.0 mg, 0.401 mmol）、TEA（0.279 mL, 2.00 mmol）を加え、8時間撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル=20/80)で精製し、5-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)ペンチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（793 mg, 収率106%）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.26-8.19 (m, 1H), 7.91-7.86 (m, 1H), 7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.53-7.45 (m, 3H), 7.10 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 4.80 (q, J = 6.3 Hz, 1H), 4.51 (br s, 1H), 4.08-4.01 (m, 2H), 3.48 (s, 2H), 3.46-3.35 (m, 3H), 3.14-3.00 (m, 4H), 2.23-2.12 (m, 1H), 1.95-1.83 (m, 1H), 1.66-1.38 (m, 16H), 1.37-1.27 (m, 2H).
ESI/MS m/z : 560[M+H]+
【０１３０】
（工程2）
【化４５】
2020045318.tif 000046
工程1で得られた5-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)ペンチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（90 mg, 0.161 mmol）をDCM（1 mL）に溶解し、TFA（1 mL）を加え、30分撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、得られた粗生成物5-アミノペンチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテートをそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 460[M+H]+
【０１３１】
（工程3）
【化４６】
2020045318.tif 000047
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（600 mg）をアセトニトニル/水=1/1（24 mL）に溶解し、DMT-MM（409 mg, 1.48 mmmol）および工程2で得られた2-(2-アミノエトキシ)エチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（68.0 mg, 0.148 mmol）を加え、23時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析膜内の懸濁液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥した。得られた白色固体を0.1%TFA水溶液で希釈し、マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過デバイス オメガメンブレン（分子量カットオフ 10k、ポール社製）を用いて限外ろ過（5000 xg、15 ℃）により、0.1%TFA水溶液へ溶媒交換した。得られた高分子量画分に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、MWCO 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行い脱塩した。透析膜内の水溶液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥することで、化合物CMD-13（376 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度99%（分析条件B; RT:1.3-2.4 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-13のエボカルセト含量が3.76wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-13あたり8.6分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１３２】
＜実施例14：化合物CMD-14の合成＞
（工程１）
【化４７】
2020045318.tif 000048
実施例10の工程2で得られるピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（300 mg, 0.656 mmol）をDCM（6 mL）に溶解し、EDC（189 mg, 0.983 mmol）、15-(Boc-アミノ)-4,7,10,13-テトラオキサペンタデカノイックアシッド（287 mg, 0.787  mmol）、DMAP（24.0 mg, 0.197 mmol）を加え、10時間撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル=20/80→クロロホルム/メタノール=90/10)で精製し、1-(2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-オイル)ピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（416 mg, 収率79%）を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.25-8.20 (m, 1H), 7.91-7.86 (m, 1H), 7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.54-7.45 (m, 3H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.43 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.09 (br s, 1H), 5.00-4.93 (m, 1H), 4.80 (q, J = 6.3 Hz, 1H), 3.82-3.75 (m, 2H), 3.74-3.26 (m, 25H), 3.23-3.15 (m, 1H), 3.10-3.04 (br m, 1H), 2.68-2.57 (m, 2H), 2.24-2.13 (m, 1H), 1.96-1.74 (m, 3H), 1.66-1.57 (m, 2H), 1.53 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.44 (s, 9H).
ESI/MS m/z : 805[M+H]+
【０１３３】
（工程２）
【化４８】
2020045318.tif 000049
工程1で得られた1-(2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-オイル)ピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（120 mg, 0.149 mmol）をDCM（1 mL）に溶解し、TFA（1 mL）を加え、2時間撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、得られた粗生成物1-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)ピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテートをそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 705[M+H]+
【０１３４】
（工程３）
【化４９】
2020045318.tif 000050
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（600 mg）をアセトニトニル/水=1/1（24 mL）に溶解し、DMT-MM（409 mg, 1.48 mmmol）および工程2で得られた1-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)ピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（104 mg, 0.148 mmol）を加え、24時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行った。透析膜内の懸濁液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥した。得られた白色固体を0.1%TFA水溶液で希釈し、マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過デバイス オメガメンブレン（分子量カットオフ 10k、ポール社製）を用いて限外ろ過（5000 xg、15 ℃）により、0.1%TFA水溶液へ溶媒交換した。得られた高分子量画分に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行い脱塩した。透析膜内の水溶液をメンブレンフィルター（0.2 μm）でろ過し、ろ液を凍結乾燥することで、化合物CMD-14（334 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度95%（分析条件B; RT:1.8-2.8 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-14のエボカルセト含量が5.22wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-14あたり12.6分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１３５】
＜実施例15：化合物CMD-15の合成＞
（工程１）
【化５０】
2020045318.tif 000051
実施例1の工程2で得られる2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（150 mg, 0.306 mmol）をDCM（2 mL）に溶解し、EDC（88 mg, 0.459 mmol）、15-(Boc-アミノ)-4,7,10,13-テトラオキサペンタデカノイックアシッド（134 mg, 0.367  mmol）、DMAP（7.5 mg, 0.061 mmol）、トリエチルアミン（85μl, 0.611 mmol）を加え、終夜撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を逆相HPLCで精製し、tert-ブチル (15-(1-((2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)イミノ)-1-オキシド-1l6-チオモルホリノ)-15-オキソ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデシル)カーバメート（202 mg, 収率79%）を得た。
Exact Mass: 837.43
ESI/MS m/z : 837[M+H]+
【０１３６】
（工程２）
【化５１】
2020045318.tif 000052
工程1で得られたtert-ブチル (15-(1-((2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)イミノ)-1-オキシド-1l6-チオモルホリノ)-15-オキソ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデシル)カーバメート（200 mg, 0.239 mmol）をDCM（2 mL）に溶解し、TFA（2 mL）を加え、0.5時間撹拌した。トルエンで希釈した後、溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水で洗浄後、さらにクロロホルム：メタノール=9:1で抽出し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、得られた粗生成物N-(4-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)-1-オキシド-1l6-チオモルホリン-1-イリデン)-2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセタミド（137mg）を、そのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 738[M+H]+
【０１３７】
（工程３）
【化５２】
2020045318.tif 000053
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（600 mg）をアセトニトニル/水=1/1（36 mL）に溶解し、DMT-MM（504 mg, 1.82 mmmol）および工程2で得られたN-(4-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)-1-オキシド-1l6-チオモルホリン-1-イリデン)-2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセタミド（134 mg, 0.182 mmol）を加え、終夜撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、凍結乾燥した。粗成生物を0.1% TFA水溶液に溶解し、不溶物を濾別した後、ろ液を限外濾過により精製した。得られた高分子量画分に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行い脱塩した。透析膜内の水溶液を凍結乾燥することで、化合物CMD-15（403 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.5-2.2 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-15のエボカルセト含量が4.26wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-15あたり10.1分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１３８】
＜実施例16：化合物CMD-16の合成＞
（工程１）
【化５３】
2020045318.tif 000054
実施例1の工程2で得られる2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（150 mg, 0.306 mmol）をDCM（2 mL）に溶解し、EDC（88 mg, 0.459 mmol）、2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11-トリオキサ-5-アザテトラデカン-14-オイックアシッド（102 mg, 0.367  mmol）、DMAP（7.5 mg, 0.061 mmol）、トリエチルアミン（85μl, 0.611 mmol）を加え、終夜撹拌した。溶媒を留去して得られた粗生成物を逆相HPLCで精製し、tert-ブチル (2-(2-(3-(1-((2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)イミノ)-1-オキシド-1l6-チオモルホリノ)-3-オキソプロポキシ)エトキシ)エチル)-l2-アザンカルボキシレート（161 mg, 収率70%）を得た。
ESI/MS m/z : 837[M+H]+
【０１３９】
（工程２）
【化５４】
2020045318.tif 000055
工程1で得られたtert-ブチル (2-(2-(3-(1-((2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)イミノ)-1-オキシド-1l6-チオモルホリノ)-3-オキソプロポキシ)エトキシ)エチル)-l2-アザンカルボキシレート（160 mg, 0.213 mmol）をDCM（2 mL）に溶解し、TFA（2 mL）を加え、0.5時間撹拌した。トルエンで希釈した後、溶媒を留去して得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解し、飽和重曹水で洗浄後、さらにクロロホルム:メタノール=9:1で抽出し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、N-(4-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)-1-オキシド-1l6-チオモルホリン-1-イリデン)-2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセタミド（101mg）を粗成生物として得、これをそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 650[M+H]+
【０１４０】
（工程３）
【化５５】
2020045318.tif 000056
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社）（625 mg）をアセトニトニル/水=1/1（36 mL）に溶解し、DMT-MM（426 mg, 1.54 mmmol）および工程2で得られたN-(4-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)-1-オキシド-1l6-チオモルホリン-1-イリデン)-2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセタミド（100 mg, 0.154 mmol）を加え、終夜撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、凍結乾燥した。粗成生物を0.1% TFA水溶液に溶解し、不溶物を濾別した後、ろ液を限外濾過により精製した。得られた高分子量画分に飽和重曹水を加え、透析膜（Slide-a-Lyzer、分子量カットオフ 10k、サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を用い、外液を水にて透析を行い脱塩した。透析膜内の水溶液を凍結乾燥することで、化合物CMD-16（513 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.2-2.2 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-16のエボカルセト含量が4.81wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-16あたり11.4分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１４１】
＜実施例17：化合物CMD-17の合成＞
（工程1）
【化５６】
2020045318.tif 000057
参考例1で得られたエボカルセト（500 mg, 1.34 mmol）をDCM（4.5 mL）に溶解し、EDC塩酸塩（384 mg, 2.00 mmol）、tertブチル 3-ヒドロキシアゼチジン-1-カルボキシレート（231 mg, 1.34 mmol）、4-ジメチルアミノピリジン（DMAP）（48.9 mg, 0.401 mmol）、トリエチルアミン（279 μL, 2.00 mmol）を加え、終夜撹拌した。EDC塩酸塩（128 mg, 0.668 mmol）を追加し、３時間撹拌した。溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘプタン/酢酸エチル=100/0, 50/50）で精製し、tertブチル 3-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセトキシ）アゼチジン-1-カルボキシレート（638 mg、収率90%）を無色の泡状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.16-8.25 (1H, m), 7.83-7.92 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.69 (1H, d, J = 7.2 Hz), 7.45-7.54 (3H, m), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.44 (2H, d, J = 9.2 Hz), 4.19 (2H, ddd,J = 10.4, 6.8, 0.8 Hz), 3.86 (2H, dd, J = 10.8, 4.4 Hz), 3.52 (2H, s), 3.36-3.45 (3H, m), 3.19 (1H, q, J = 9.2 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 8.8, 5.6 Hz), 2.21-2.24 (1H, m), 1.89 (1H, dt, J = 19.6, 8.0 Hz), 1.52 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.43 (9H, s).
【０１４２】
（工程2）
【化５７】
2020045318.tif 000058
工程1で得られたtertブチル 3-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセトキシ）アゼチジン-1-カルボキシレート（625 mg, 1.18 mmol)をDCM（5 mL）に溶解した。溶液にTFA（5 mL）を加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮した後、飽和重曹水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮乾固した。得られたアゼチジン-3-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテートはそのまま次の反応に用いた。
【０１４３】
（工程3）
【化５８】
2020045318.tif 000059
工程2で得られたアゼチジン-3-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（485 mg, 1.13 mmol）と2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-オイック酸（619 mg, 1.70 mmol）をDCM（4 mL）に溶解し、EDC塩酸塩（443 mg, 2.26 mmol）、DMAP（41.0 mg, 0.339 mmol）、トリエチルアミン（0.630 mL, 4.52 mmol）を加え、終夜撹拌した。溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム/メタノール=100/0, 92/8）で精製し、1-(2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-オイル)アゼチジン-3-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（546 mg、2工程収率62%）を黄色の油状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.17-8.25 (1H, m), 7.84-7.95 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.69 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.45-7.60 (3H, m), 7.08 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.44 (2H, d, J = 8.4 Hz), 5.12-5.19 (1H, m), 5.01-5.12 (1H, bs), 4.80 (1H, dd, J = 13.6, 6.4 Hz), 4.41-4.47 (1H, m), 4.28 (1H, dd, J = 11.6, 7.2 Hz), 4.04 (1H, dd, J = 9.2, 4.4 Hz), 3.93 (1H, dd, J = 11.2, 4.0 Hz), 3.74 (2H, dt, J = 7.2, 1.2 Hz), 3.57-3.70 (14H, m), 3.49-3.56 (4H, m), 3.25-3.34 (3H, m), 3.35-3.46 (2H, m), 3.19 (1H, dd, J = 17.2, 7.6 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 8.8, 5.2 Hz), 2.13-2.24 (1H, m), 2.30-2.41 (1H, m), 1.85-1.94 (1H, m), 1.52 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.44 (9H, s).
ESI/MS m/z : 778 [M+H]+
【０１４４】
（工程4）
【化５９】
2020045318.tif 000060
工程3で得られた1-(2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-オイル)アゼチジン-3-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（407 mg, 0.524 mmol）をDCM（2 mL）に溶解し、TFA（2 mL）を加えて、室温で30分撹拌した。反応混合物を減圧濃縮した後、飽和重曹水を加え、クロロホルムで抽出した。得られたクロロホルム相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮乾固した。得られた組成生物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム/メタノール=100/0, 85/15）で精製し、1-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)アゼチジン-3-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（203 mg, 57%）を黄色の油状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.22 (1H, d. J = 9.2 Hz), 7.87-7.94 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.71 (1H, d, J = 7.2 Hz), 7.45-7.60 (3H, m), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.45 (2H, d, J = 8.8 Hz), 5.12-5.21 (1H, m), 5.01-5.12 (1H, bs), 4.81 (1H, dd, J = 13.2, 6.4 Hz), 4.45 (1H, dd, J = 10.4, 6.8 Hz), 4.30 (1H, dd, J = 10.4, 6.8 Hz), 4.03 (1H, dd, J = 10.0, 4.0 Hz), 3.92 (1H, dd, J = 10.8, 3.6 Hz), 3.80 (2H, t, J = 5.6 Hz), 3.57-3.77 (14H, m), 3.53 (2H, s), 3.36-3.47 (3H, m), 3.05-3.24 (4H, m), 3.19 (1H, dd, J = 10.8, 7.6 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 8.8, 5.2 Hz), 2.30-2.47 (2H, m), 2.13-2.23 (1H, m), 1.85-1.96 (1H, m), 1.52 (3H, d, J = 6.4 Hz).
ESI/MS m/z : 678 [M+H]+
【０１４５】
（工程5）
【化６０】
2020045318.tif 000061
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社, 714 mg）を水/アセトニトリル混合溶媒（1/1, 24 mL）に懸濁し、DMT-MM（487 mg, 1.76 mmol）を加えて室温で終夜撹拌した。工程4で得られた1-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オイル)アゼチジン-3-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（119 mg, 0.176 mmol）をアセトニトリル（1 mL）に溶解して反応溶液に加え、さらに水（1 mL）加えた後、終夜撹拌した。反応溶液からアセトニトリルを留去し、飽和重曹水を加えた。得られた溶液を分子量閾値10000の透析用半透膜カセット（サーモフィッシャーサイエンティフィック社から購入）に移し、純水中で一晩透析精製した。得られた溶液を凍結乾燥した。得られた白色固体を0.1% TFA水溶液に溶解し、分子量閾値10000のフィルターを用いた限外濾過精製を行った。得られた溶液を凍結乾燥した。得られた白色固体を飽和重曹水に溶解し、分子量閾値10000の透析用半透膜カセットを用いて純水中で一晩透析精製した。得られた溶液を凍結乾燥した。得られた白色固体を再度0.1% TFA水溶液に溶解し、分子量閾値10000のフィルターを用いた限外濾過精製を行った。得られた溶液を凍結乾燥し、CMD-17（235 mg）を白色固体として得た。生成物のHPLC分析の結果、純度96%（分析条件D; RT:1.15-2.75 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-17のエボカルセト含量が1.0wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-17あたり2.2分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１４６】
＜実施例18：化合物CMD-18の合成＞
（工程1）
【化６１】
2020045318.tif 000062
エボカルセト（500 mg, 1.34 mmol）、DCM（4.5 mL）、EDC塩酸塩（384 mg, 2.00 mmol）、tertブチル (トランス-4-ヒドロキシシクロヘキシル)カルバメート（345 mg, 1.60 mmol）、DMAP（48.9 mg, 0.401 mmol）、トリエチルアミン（279 μL, 2.00 mmol）を用いて、実施例17の工程1と同様の方法によって4-((tertブトキシカルボニル)アミノ)シクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（666 mg、収率87%）を黄色の油状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.19-8.24 (1H, m), 7.87-7.92 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.70 (1H, d, J = 7.2 Hz), 7.45-7.53 (3H, m), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.43 (2H, d, J = 8.8 Hz), 4.80 (1H, dd, J = 13.2 Hz, 6.4 Hz), 4.60-4.70 (1H, m), 4.38 (1H, bd, J = 7.2 Hz), 3.35-3.51 (6H, m), 3.18 (1H, dd, J = 16.8, 7.6 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 8.8, 5.6 Hz), 2.13-2.23 (1H, m), 1.84-2.04 (5H, m), 1.51 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.38-1.49 (11H, m), 1.13-1.25 (2H, m).
ESI/MS m/z : 573 [M+H]+
【０１４７】
（工程2）
【化６２】
2020045318.tif 000063
工程1で得られた4-((tertブトキシカルボニル)アミノ)シクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（666 mg, 1.17 mmol)、TFA (5 mL)、DCM（5 mL）を用いて、実施例17の工程2と同様の方法を実施した。得られた4-アミノシクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート (549 mg, quant.)はそのまま次の反応に用いた。
【０１４８】
（工程3）
【化６３】
2020045318.tif 000064
工程2で得られた4-アミノシクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート(549 mg, 0.960 mmol)、2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-オイック酸（456 mg, 1.25 mmol）、EDC塩酸塩（331 mg, 1.73 mmol）、DMAP（35.2 mg, 0.288 mmol）、トリエチルアミン（0.402 mL, 2.88 mmol）、DCM (5 mL)を用いて、実施例17の工程3と同様の方法で4-(2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-アミド)シクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート (1.08 g, quant.)を黄色の油状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.19-8.24 (1H, m), 7.85-7.92 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.70 (1H, d, J = 7.2 Hz), 7.45-7.53 (3H, m), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.43 (2H, d, J = 8.8 Hz) 6.36 (1H, d, J = 8.4 Hz), 5.11 (1H, s), 4.80 (1H, dd, J = 13.6 Hz, 7.2 Hz), 4.60-4.70 (1H, m), 4.38 (1H, bd, J = 7.2 Hz), 3.67-3.87 (4H, m), 3.57-3.67 (12H, m), 3.48-3.56 (2H, m), 3.46 (2H, s), 3.36-3.45 (6H, m), 3.25-3.35 (2H, m), 3.19 (1H, dd, J = 16.8, 7.2 Hz), 3.07 (1H, dd, J = 8.8, 5.6 Hz), 2.44 (2H, t, J = 6.0 Hz), 2.13-2.23 (1H, m), 1.84-2.04 (5H, m), 1.52 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.38-1.49 (11H, m), 1.13-1.25 (2H, m).
【０１４９】
（工程4）
【化６４】
2020045318.tif 000065
工程3で得られた4-(2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-アミド)シクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート (786 mg, 0.960 mmol)、DCM (4 mL)、TFA (4 mL)を用いて、実施例17の工程4と同様の方法によって4-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド)シクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート (681 mg, 収率99%)を黄色の油状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.18-8.25 (1H, m), 7.85-7.92 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.70 (1H, d, J = 6.4 Hz), 7.45-7.53 (3H, m), 7.09 (2H, d, J = 8.8 Hz),6.72 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.43 (2H, d, J = 8.8 Hz), 5.11 (1H, s), 4.80 (1H, dd, J = 13.2 Hz, 6.4 Hz), 4.62-4.72 (1H, m), 3.69-3.87 (4H, m), 3.58-3.69 (14H, m), 3.45 (2H, s), 3.37-3.44 (3H, m), 3.25-3.35 (2H, m), 3.18 (1H, dd, J = 17.2, 8.0 Hz), 3.06 (1H, dd, J = 8.8, 5.6 Hz), 2.94 (2H, t, J = 4.8 Hz), 2.45 (2H, t, J = 6.0 Hz), 2.13-2.23 (1H, m), 1.84-2.02 (5H, m), 1.52 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.38-1.50 (2H, m), 1.20-1.33 (2H, m).
ESI/MS m/z : 720 [M+H]+
【０１５０】
（工程5）
【化６５】
2020045318.tif 000066
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社, 633 mg）、水/アセトニトリル混合溶媒（1/1, 25 mL）、DMT-MM（431 mg, 1.56 mmol）、工程4で得られた4-(1-アミノ-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-アミド)シクロヘキシル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（112 mg, 0.156 mmol）を用いて、実施例17の工程5と同様の方法で化合物CMD-18（144 mg）を白色固体として得た。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.3-2.5 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-18のエボカルセト含量が3.4wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-18あたり7.9分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１５１】
＜実施例19：化合物CMD-19の合成＞
（工程1）
【化６６】
2020045318.tif 000067
エボカルセト（500 mg, 1.34 mmol）、DCM（4.5 mL）、EDC塩酸塩（384 mg, 2.00 mmol）、tertブチル ピペラジン-1-カルボキシレート（298 mg, 1.60 mmol）、DMAP（48.9 mg, 0.401 mmol）、トリエチルアミン（279 μL, 2.00 mmol）を用いて、実施例17の工程1と同様の方法によってtertブチル 4-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)ピペラジン-1-カルボキシレート（683 mg、収率94%）を黄色の固体として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.20-8.28 (1H, m), 8.86-8.93 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.70 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.45-7.55 (3H, m), 7.05 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.43 (2H, d, J = 8.8 Hz), 4.80 (1H, q, J = 6.8 Hz), 3.63 (2H, s), 3.55-3.62 (2H, bs), 3.30-3.49 (7H, m), 3.13-3.23 (3H, m), 3.06 (1H, dd, J = 9.2,5.6 Hz), 2.13-2.25 (1H, m), 1.90 (1H, dt, J = 19.6, 7.2 Hz), 1.52 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.43 (9H, s).
ESI/MS m/z : 544 [M+H]+
【０１５２】
（工程2）
【化６７】
2020045318.tif 000068
工程1で得られたtertブチル 4-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)ピペラジン-1-カルボキシレート（683 mg, 1.26 mmol)、TFA (5 mL)、DCM（5 mL）を用いて、実施例17の工程2と同様の方法を実施した。得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-1-(ピペラジン-1-イル)エタン-1-オン (687 mg, quant.)はそのまま次の反応に用いた。
【０１５３】
（工程3）
【化６８】
2020045318.tif 000069
工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-1-(ピペラジン-1-イル)エタン-1-オン (557 mg, 1.26 mmol)、2,2-ジメチル-4-オキソ-3,8,11,14,17-ペンタオキサ-5-アザイコサン-20-オイック酸（598 mg, 1.64 mmol）、EDC塩酸塩（434 mg, 2.26 mmol）、DMAP（46.0 mg, 0.377 mmol）、トリエチルアミン（0.526 mL, 3.77 mmol）、DCM (5 mL)を用いて、実施例17の工程3と同様の方法でtertブチル (15-(4-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)ピペラジン-1-イル)-15-オキソ-3,6,9,12-テトラオキサペンダデシル)カルバメート (1.09 g, quant.)を黄色の油状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.20-8.28 (1H, m), 8.87-8.92 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.70 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.46-7.54 (3H, m), 7.05 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.42 (2H, d, J = 8.8 Hz),5.10 (1H, bs), 4.80 (1H, q, J = 7.2 Hz), 3.72-3.80 (2H, m), 3.58-3.67 (16H, m), 3.50-3.57 (3H, m), 3.28-3.49 (10H, m), 3.13-3.23 (2H, m), 3.02-3.08 (1H, m), 2.61 (1H, t, J = 6.8 Hz), 2.55 (1H, t, J = 7.2 Hz), 2.13-2.23 (1H, m), 1.85-1.95 (1H, m), 1.52 (3H, d, J = 6.8 Hz), 1.44 (9H, s).
【０１５４】
（工程4）
【化６９】
2020045318.tif 000070
工程3で得られたtertブチル (15-(4-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)ピペラジン-1-イル)-15-オキソ-3,6,9,12-テトラオキサペンダデシル)カルバメート (994 mg, 1.26 mmol)をDCM (4 mL)に溶解し、TFA (4 mL)を加えた。２時間撹拌した後、濃縮し、飽和重曹水で中和した。中和した溶液をクロロホルムで分液した。得られたクロロホルム相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去することで1-アミノ-15-(4-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)ピペラジン-1-)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オン (851 mg, 収率98%)を黄色の油状物質として得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.20-8.28 (1H, m), 8.87-8.92 (1H, m), 7.76 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.70 (1H, d, J = 6.8 Hz), 7.46-7.54 (3H, m), 7.05 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.42 (2H, d, J = 8.8 Hz),5.10 (1H, bs), 4.80 (1H, q, J = 7.2 Hz), 3.72-3.80 (2H, m), 3.58-3.67 (16H, m), 3.50-3.57 (3H, m), 3.28-3.49 (10H, m), 3.13-3.23 (2H, m), 3.02-3.08 (1H, m), 2.61 (1H, t, J = 6.8 Hz), 2.55 (1H, t, J = 7.2 Hz), 2.13-2.23 (1H, m), 1.85-1.95 (1H, m), 1.52 (3H, d, J = 6.8 Hz).
ESI/MS m/z : 691 [M+H]+
【０１５５】
（工程5）
【化７０】
2020045318.tif 000071
カルボキシメチルデキストランナトリウム塩（Carboxymethyl-dextran 70、 carboxymethyl content = 4.9%、Carbosynth社, 707 mg）を水/アセトニトリル混合溶媒（1/1, 24 mL）に懸濁し、DMT-MM（481 mg, 1.74 mmol）を加えて室温で終夜撹拌した。工程4で得られた1-アミノ-15-(4-(2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセチル)ピペラジン-1-)-3,6,9,12-テトラオキサペンタデカン-15-オン（120 mg, 0.174 mmol）をアセトニトリル（1 mL）に溶解して反応溶液に加え、さらに水（1 mL）加えた後、終夜撹拌した。反応溶液からアセトニトリルを留去し、飽和重曹水を加えた。得られた溶液を分子量閾値10000の透析用半透膜カセット（サーモフィッシャーサイエンティフィック社から購入）に移し、純水中で一晩透析精製した。得られた溶液を凍結乾燥した。得られた白色固体を0.1% TFA水溶液に溶解し、分子量閾値10000のフィルターを用いた限外濾過精製を行った。得られた溶液を凍結乾燥した。得られた白色固体を飽和重曹水に溶解し、分子量閾値10000の透析用半透膜カセットを用いて純水中で一晩透析精製した。得られた溶液を凍結乾燥し、CMD-19（235 mg）を白色固体として得た。生成物のHPLC分析の結果、純度95.6%（分析条件D; RT:1.4-2.7 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物CMD-19のエボカルセト含量が3.4wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のCMD-19あたり7.9分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１５６】
＜実施例２０：化合物PGA-1の合成＞
【化７１】
2020045318.tif 000072
実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（99 mg, 0.201 mmol）をアセトニトリル:水＝1:1（4 ml）に溶解し、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE10、average MW 15000、Alamanda Polymers社）（100 mg）、およびDMT-MM（84 mg, 0.302 mmol）を加え、終夜撹拌した。溶媒を一定量留去した後、飽和重曹水を加え、限外濾過（分子量カットオフ3k）によって精製した。高分子量画分を凍結乾燥させ、化合物PGA-1（167 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度97.80%（分析条件D; RT:2.3-3.7 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-1のエボカルセト含量が43.32wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-1あたり39.9分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１５７】
＜実施例２１：化合物PGA-2の合成＞
【化７２】
2020045318.tif 000073
実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（98 mg, 0.2 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE20、average MW 30000、Alamanda Polymers社）（100 mg）、およびDMT-MM（83 mg, 0.3 mmol）を用い、実施例２０と同様の手法にて化合物PGA-2（151 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度98.43%（分析条件D; RT:2.3-3.7 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-2のエボカルセト含量が41.35wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-2あたり72.4分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１５８】
＜実施例２２：化合物PGA-3の合成＞
【化７３】
2020045318.tif 000074
実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（98 mg, 0.2 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE30、average MW 45000、Alamanda Polymers社）（100 mg）、およびDMT-MM（83 mg, 0.3 mmol）を用い、実施例２０と同様の手法にて化合物PGA-3（173 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度94.47%（分析条件D; RT:2.2-3.7 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-3のエボカルセト含量が33.8wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-3あたり77.9分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１５９】
＜実施例２３：化合物PGA-4の合成＞
【化７４】
2020045318.tif 000075
実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（98 mg, 0.2 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE40、average MW 60000、Alamanda Polymers社）（100 mg）、およびDMT-MM（83 mg, 0.3 mmol）を用い、実施例２０と同様の手法にて化合物PGA-4（173 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.9-3.7 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-4のエボカルセト含量が36.8wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-4あたり113.7分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６０】
＜実施例２４：化合物PGA-5の合成＞
【化７５】
2020045318.tif 000076
実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（98 mg, 0.2 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE80、average MW 120000、Alamanda Polymers社）（100 mg）、およびDMT-MM（83 mg, 0.3 mmol）を用い、実施例２０と同様の手法にて化合物PGA-5（173 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度98.88%（分析条件D; RT:2.3-4 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-5のエボカルセト含量が33.37%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-5あたり194.8分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６１】
＜実施例２５：化合物PGA-6の合成＞
【化７６】
2020045318.tif 000077
実施例10の工程2で得られたピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（98 mg, 0.2 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE30、average MW 45000、Alamanda Polymers社）（100 mg）、およびDMT-MM（85 mg, 0.306 mmol）を用い、実施例２０と同様の手法にて化合物PGA-6（162 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度97.81%（分析条件D; RT:2.2-2.7 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-6のエボカルセト含量が32.2wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-6あたり68.1分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６２】
＜実施例２６：化合物PGA-7の合成＞
（工程1）
【化７７】
2020045318.tif 000078
参考例1で得られたエボカルセト（100 mg, 0.267 mmol）をDCM（2 mL）に溶解し、参考例2で得られたtert-ブチル (2-ヒドロキシ-4-メチルペンチル)カルバメート（70.0 mg, 0.320 mmol）、EDC（77.0 mg, 0.401 mmol）、DMAP（9.80 mg, 0.080 mmol）、TEA（0.0570 mL, 0.0800 mmol）を加え、16時間撹拌した。反応混合物に飽和重曹水、酢酸エチルを加え、Presep（登録商標; けいそう土、顆粒状タイプM, 4.5 g/25 mL）を通してろ過し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル=70/30)で精製し、1-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ-4-メチルペンタン-2-イル 2-(4-((S)-3-((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（137 mg, 89%）を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.25-8.20 (m, 1H), 7.91-7.86 (m, 1H), 7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54-7.45 (m, 3H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.02-4.94 (m, 1H), 4.80 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.58-4.51 (br m, 1H), 3.48 (s, 2H), 3.46-3.35 (m, 3H), 3.34-3.26 (m, 1H), 3.23-3.03 (m, 3H), 2.23-2.13 (m, 1H), 1.95-1.83 (m, 1H), 1.52 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.47-1.39 (m, 9H), 1.33-1.22 (m, 3H), 0.96-0.82 (m, 6H).
ESI/MS m/z : 575[M+H]+
【０１６３】
（工程2）
【化７８】
2020045318.tif 000079
工程1で得られた1-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ-4-メチルペンタン-2-イル 2-(4-((S)-3-((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（120 mg, 0.209 mmol）を4規定 塩酸-酢酸エチル溶液（2 mL）に懸濁し、1時間撹拌した。その後、2規定 塩酸-エタノール溶液（2 mL）を加え、さらに2時間撹拌した。減圧下溶媒を留去し、得られた粗生成物1-アミノ-4-メチルペンタン-2-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート 塩酸塩をそのまま次の反応に用いた。
ESI/MS m/z : 474[M+H]+
【０１６４】
（工程3）
【化７９】
2020045318.tif 000080
工程2で得られたピペリジン-4-イルメチル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート 塩酸塩（103 mg, 0.201 mmol）をアセトニトニル/水=1/1（4 mL）に溶解し、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE30、average MW 45000、Alamanda Polymers社）（100 mg）、DMT-MM（83.0 mg, 0.301 mmmol）及びTEA（0.167 mL, 1.20 mmol）を加え、14時間撹拌した。減圧下一定量の溶媒を留去した後、飽和重曹水を加え、マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過デバイス オメガメンブレン（分子量カットオフ 10k、ポール社製）を用いて限外ろ過（5000 xg、15 ℃）により、水溶液へ溶媒交換した。得られた高分子量画分の上澄み液に水を加え、凍結乾燥した。得られた白色固体を50%エタノールで希釈し、マイクロセップ アドバンス 遠心ろ過デバイス オメガメンブレン（分子量カットオフ 10k、ポール社製）を用いて限外ろ過（5000 xg、15 ℃）により、50%エタノールへ溶媒交換した。得られた高分子量画分のエタノールを留去した後、凍結乾燥し、化合物PGA-7（85 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度98%（分析条件C; RT:5.0-7.0 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-7のエボカルセト含量が19.95wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-7あたり35.2分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６５】
＜実施例２７：化合物PGA-8の合成＞
【化８０】
2020045318.tif 000081
実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（65 mg, 0.133 mmol）をDMF:水＝1:1（4 ml）に溶解し、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE30、average MW 45000、Alamanda Polymers社）（200 mg）、およびDMT-MM（92 mg, 0.331 mmol）を加え、終夜撹拌した。続いて、DMT-MM（330 mg, 1.192 mmol）および2-(2-アミノエトキシ)エタン-1-オール（63 mg, 0.596 mmol）を加え、終夜撹拌した。反応混合物を水で希釈した後、限外濾過で精製し、凍結乾燥して化合物PGA-8（235 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.6-3.0 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-8のエボカルセト含量が12.02wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-8あたり23.0分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６６】
＜実施例２８：化合物PGA-9の合成＞
【化８１】
2020045318.tif 000082
実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（65 mg, 0.133 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE30、average MW 45000、Alamanda Polymers社）（200 mg）、およびDMT-MM（92 mg, 0.331 mmol）、並びにDMT-MM（660 mg, 2.385 mmol）および2-(2-アミノエトキシ)エタン-1-オール（125 mg, 1.193mmol）を用い、実施例２７と同様の手法にて化合物PGA-9（236 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.6-3.5 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-9のエボカルセト含量が7.85wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-9あたり17.0分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６７】
＜実施例２９：化合物PGA-10の合成＞
【化８２】
2020045318.tif 000083
溶媒をDMFからアセトニトリルに変更し、実施例1の工程2で得られた2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)-N-(1-オキシド-1λ6-チオモルホリン-1-イリデン)アセタミド（65 mg, 0.133 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE40、average MW 60000、Alamanda Polymers社）（200 mg）、およびDMT-MM（92 mg, 0.331 mmol）、並びにDMT-MM（659 mg, 2.383 mmol）および2-(2-アミノエトキシ)エタン-1-オール（125 mg, 1.193mmol）を用い、実施例２７と同様の手法にて化合物PGA-10（223 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度99.66%（分析条件D; RT:1.6-3.5 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-10のエボカルセト含量が9.07 wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-10あたり27.7分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６８】
＜実施例３０：化合物PGA-11の合成＞
【化８３】
2020045318.tif 000084
溶媒をDMFからアセトニトリルに変更し、実施例10の工程2で得られたピペリジン-4-イル 2-(4-((S)-3-(((R)-1-(ナフタレン-1-イル)エチル)アミノ)ピロリジン-1-イル)フェニル)アセテート（62 mg, 0.133 mmol）、ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE40、average MW 60000、Alamanda Polymers社）（200 mg）、およびDMT-MM（92 mg, 0.331 mmol）、並びにDMT-MM（659 mg, 2.383 mmol）および2-(2-アミノエトキシ)エタン-1-オール（125 mg, 1.193mmol）を用い、実施例２７と同様の手法にて化合物PGA-11（223 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度99.72%（分析条件D; RT:1.6-3.5 min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-11のエボカルセト含量が5.89 wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-11あたり17.1分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１６９】
＜実施例３１：化合物PGA-12の合成＞
（工程1）
【化８４】
2020045318.tif 000085
ポリグルタミン酸ナトリウム塩（PLE40、average MW 60000、Alamanda Polymers社）（400 mg）を水（10ml）に溶解し、DMT-MM（2.93 g, 10.59mmol）および2-(2-アミノエトキシ)エタン-1-オール（557 mg, 5.3mmol）を加え、週末撹拌した。透析により精製し、凍結乾燥することでポリグルタミン酸誘導体（499 mg）を得た。
【０１７０】
（工程２）
【化８５】
2020045318.tif 000086
エボカルセト（35 mg, 0.093 mmol）をDMF（1 ml）に溶解し、トリエチルアミン（26 μl, 0.185 mmol）、EDC（35 mg, 0.185 mmol）を加えた。この溶液を、工程1で得られたポリグルタミン酸誘導体（200 mg）のDMF溶液（2  ml）に滴下し、さらにDMAP（23 mg, 0.185 mmol）を加え終夜撹拌した。反応混合物を水で希釈し、限外濾過で精製した後、凍結乾燥することで化合物PGA-12（140 mg）を取得した。生成物のHPLC分析の結果、純度100%（分析条件D; RT:1.6-3.5min）だった。加水分解による定量実験から、化合物PGA-12のエボカルセト含量が12.1wt%であることが示された。この含有量は、平均して、1分子のPGA-12あたり34.9分子のエボカルセトが含まれていることを意味する。
【０１７１】
実施例１〜３１において製造したエボカルセト誘導体を表１及び２に示す。
【表１】
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【表２】
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【０１７２】
＜試験例１：カニクイザルに静脈内投与した時の薬物動態評価＞
生理食塩水に溶解（エボカルセトとして0.5 mg/mL）した化合物を雄性カニクイザル（Nafovanny、年齢3-6歳）に静脈内投与した（投与量：エボカルセトとして1 mg/kg、各群n=2）。投与直前、投与後0.25、1、4、8、24、48、96及び168時間にヘパリン処理したシリンジを用いて血液（約500 μL）を採取し、遠心分離後血漿を得た。血漿試料に内標準物質を含むアセトニトリル（50 ng/mL エボカルセト重水素標識体。エボカルセト重水素標識体は対応する原料を用いて公知の方法により合成した。）及び0.1%ギ酸を加えて撹拌後、遠心分離（5000×g、4℃、5分）した。その上清50 μLを採取し、0.1%ギ酸100 μLを添加し測定試料とした。測定試料中のエボカルセト濃度はLC/MS/MSを用いて測定した。また、エボカルセトの血漿中薬物動態パラメータ（最大血漿中濃度Cmax、消失半減期t1/2、血漿中濃度時間曲線下面積AUC0-t、AUC0-∞）をノンコンパートメントモデル解析により算出した。結果を表５に示す。表５の結果によれば、本発明のエボカルセト誘導体はエボカルセトの持続的な血漿中放出を示した。
【０１７３】
LC/MS/MSを用いたエボカルセト定量方法を以下に示す。
（機器）
・ポンプ：ACQUITY Binary Solvent Manager (Waters)
・オートサンプラー：ACQUITY Sample Manager FTN (Waters)
・MS/MS：API4000QTRAPまたはAPI6500QTRAP (ABSCIEX)
・Analystバージョン：Analyst 1.5またはAnalyst 1.6.2
（液体クロマトグラム条件）
・移動相A：0.1%ギ酸
・移動相B：0.1%ギ酸含有アセトニトリル
・流速：0.25 mL/min
・グラジエント：表３に示す。
【表３】
2020045318.tif 000090
【０１７４】
・分析カラム：ACQUITY UPLC BEH C18 (1.7μm, 2.1 mmI.D.×150 mm) (Waters)
・プレカラム：VanGuard Pre-Column BEH C18 (1.7μm, 2.1 mmI.D.×5 mm) (Waters )
・カラム温度：30℃
・注入量：5〜10μL
【０１７５】
（質量分析条件）
・イオン化法：Electrospray ionization（ESI）、positive
・検出法：Multiple reaction monitoring（MRM）
・ソース温度：500℃
・イオンスプレー電位：5500 V
・ネブライザーガス：20
・カーテンガス：15
・コリジョンガス：12
【０１７６】
【表４】
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【０１７７】
【表５】
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