(57)【要約】【課題】本発明により、保存安定性、溶解性、結晶性、並びに、取り扱い容易性に優れたマレイン酸塩を高純度、かつ、効率的（カラム精製を行うことなく）に提供する。【解決手段】式（３）で表される化合物を塩基存在下、式（４）で表される化合物と反応させることにより式（２）で表される化合物を取得し、得られた式（２）で表される化合物とアセトンおよび水とを混和することにより式（２）で表される化合物の結晶を析出させ、得られた式（２）で表される化合物の結晶をアセトンに溶解させることにより調製された式（２）で表される化合物のアセトン溶液にマレイン酸を添加することにより式（１）で表されるマレイン酸塩を取得することを含む、式（１）で表されるマレイン酸塩の製造方法。【選択図】図１
2012073508.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（３）
【化１】
2012073508.tif 000018
で表される化合物を塩基存在下、式（４）
【化２】
2012073508.tif 000019
で表される化合物と反応させることにより、式（２）
【化３】
2012073508.tif 000020
で表される化合物を取得し、
得られた前記式（２）で表される化合物とアセトンおよび水とを混和することにより前記式（２）で表される化合物の結晶を析出し、
得られた前記式（２）で表される化合物の結晶を直接若しくは乾燥後溶媒に溶解させることにより調製された前記式（２）で表される化合物の溶液にマレイン酸を添加することにより、式（１）
【化４】
2012073508.tif 000021
で表されるマレイン酸塩の結晶を取得することを含む、前記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。
【請求項２】
前記式（２）で表される化合物の溶液が、前記式（２）で表される化合物の結晶を乾燥後、溶媒に溶解させることにより調製され、
前記式（２）で表される化合物の結晶は、減圧乾燥、または水と二層に分離する溶媒に溶解後、遊離する水を除去し、濃縮することにより乾燥される、請求項１に記載の前記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．５°）として、１５．４°に特徴的なピークを有する、式（２）
【化５】
2012073508.tif 000022
で表される化合物の結晶。
【請求項４】
式（２）
【化６】
2012073508.tif 000023
で表される化合物とアセトン及び水とを混和して析出させることにより得ることができる結晶。
【請求項５】
請求項２または３に記載の結晶を直接若しくは乾燥後溶媒に溶解することにより式（２）
【化７】
2012073508.tif 000024
で表される化合物の溶液を調製し、
得られた前記式（２）で表される化合物の溶液にマレイン酸を添加することにより、式（１）
【化８】
2012073508.tif 000025
で表されるマレイン酸塩の結晶を取得することを含む、前記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。
【請求項６】
前記式（２）で表される化合物の溶液が、前記式（２）で表される化合物の結晶を乾燥後、溶媒に溶解させることにより調製され、
前記式（２）で表される化合物の結晶は、減圧乾燥、または水と二層に分離する溶媒に溶解後、遊離する水を除去し、濃縮することにより乾燥される、請求項５に記載の前記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン誘導体の湿潤結晶を使用したマレイン酸塩の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト好中球エラスターゼは、感染症又は炎症性疾患の場合に出現する好中球の顆粒から放出されるセリンヒドロラーゼの一種である。好中球エラスターゼは、エラスチン、コラーゲン、プロテオグリカン、フィブロネクチン又は肺、軟骨、血管壁、皮膚のような生体内の結合組織の間質を構成する他のタンパク質を加水分解する酵素である。更に、好中球エラスターゼが他のタンパク質又は細胞に作用することも明らかにされた。【０００３】
生体において、好中球エラスターゼのようなセリンヒドロラーゼは生体のホメオスタシスを維持する。また、セリンヒドロラーゼの活性は、α１-プロテアーゼインヒビター、α２-マクログロブリン又は分泌型白血球プロテアーゼインヒビターのような内在性タンパク質性インヒビターによって制御される。しかしながら、好中球エラスターゼと内在性インヒビター間の平衡が、炎症部位における好中球エラスターゼの過剰な放出、あるいはインヒビターレベルの低下によって失われた場合、好中球エラスターゼ活性の制御を維持することができず、組織が損なわれる。【０００４】
セリンヒドロラーゼが関与する疾患としては、肺気腫、急性呼吸窮迫症候群、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、特発性間質性肺炎(IIP)、嚢胞性肺線維症、慢性間質性肺炎、慢性気管支炎、慢性気道感染、びまん性汎細気管支炎、気管支拡張症、喘息、膵臓炎、腎炎、肝不全、慢性関節リウマチ、関節硬化腫、骨関節炎、乾癬、歯周炎、アテローム性動脈硬化症、臓器移植に対する拒絶反応、早期破水、水疱症、ショック、敗血症、全身性エリテマトーデス(SLE)、クローン病、播種性毛細血管内凝固症候群(DIC)、虚血-再灌流後の組織損傷、角膜瘢痕組織の形成、脊髄炎等が挙げられ、これら疾患の治療薬としてセリンヒドロラーゼ阻害剤の開発が期待される。
優れたセリンヒドロラーゼ阻害剤としては、ベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン誘導体の報告がある（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００８／０３６３７９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１に記載のベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン誘導体は、セリンヒドロラーゼ阻害活性には優れているものの、長期保存時に安定性が低いなど、製造原体として医薬品を製造する上からはさらに物性的に優れた化合物が望まれた。そして、本発明者らは、優れた原薬安定性、溶解性および結晶性を有する化合物として、ベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン誘導体のマレイン酸塩を見出した（国際出願番号PCT/JP2010/005786）。
該マレイン酸塩は、フリー体（化合物（２））を経由して製造することができる。しかし、これまで得られたフリー体は、アモルファス状固体であり、カラム精製とカラム精製後のフリー体溶液の濃縮が必須であるため、工業的製造方法として好ましいものではなかった。さらに、フリー体溶液の濃縮物は、ガラス状の固形物であるため、製造上様々な課題（製造コスト、再精製、保管、運搬、および秤量など）を有していた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで発明者は、ベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン誘導体のマレイン酸塩の工業的製造方法を確立する目的で鋭意努力した結果、ベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン誘導体のフリー体がアセトン−水中で結晶化し、湿潤結晶として得られること、並びにフリー体の湿潤結晶から簡便な操作でベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン誘導体のマレイン酸塩が結晶化することを見出し、本発明を完成させた。【０００８】
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
１）  式（３）
【化１】
2012073508.tif 000003
で表される化合物を塩基存在下、式（４）
【化２】
2012073508.tif 000004
で表される化合物と反応させることにより、式（２）
【化３】
2012073508.tif 000005
で表される化合物を取得し、
得られた上記式（２）で表される化合物とアセトンおよび水とを混和することにより、上記式（２）で表される化合物の結晶を析出させ、
得られた上記式（２）で表される化合物の結晶を直接、若しくは乾燥後溶媒に溶解させることにより調製された上記式（２）で表される化合物の溶液にマレイン酸を添加することにより、式（１）
【化４】
2012073508.tif 000006
で表されるマレイン酸塩の結晶を取得することを含む、上記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。【０００９】
２）  １）の方法において、上記式（２）で表される化合物の溶液が、上記式（２）で表される化合物の結晶を乾燥後、溶媒に溶解させることにより調製され、
上記式（２）で表される化合物の結晶は、減圧乾燥、または水と二層に分離する溶媒に溶解後、遊離する水を除去し、濃縮することにより乾燥される、上記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。【００１０】
３）  粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ±０．５°）として、１５．４°に特徴的なピークを有する、式（２）
【化５】
2012073508.tif 000007
で表される化合物の結晶。【００１１】
４）  式（２）
【化６】
2012073508.tif 000008
で表される化合物とアセトンおよび水とを混和して析出させることにより得ることができる結晶。【００１２】
５）  ３）または４）記載の結晶を直接、若しくは乾燥後溶媒に溶解することにより式（２）
【化７】
2012073508.tif 000009
で表される化合物の溶液を調製し、
得られた上記式（２）で表される化合物の溶液にマレイン酸を添加することにより、式（１）
【化８】
2012073508.tif 000010
で表されるマレイン酸塩の結晶を取得することを含む、上記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。【００１３】
６）  ５）の方法において、上記式（２）で表される化合物の溶液が、上記式（２）で表される化合物の結晶を乾燥後、溶媒に溶解させることにより調製され、
上記式（２）で表される化合物の結晶は、減圧乾燥、または水と二層に分離する溶媒に溶解後、遊離する水を除去し、濃縮することにより乾燥される、上記式（１）で表されるマレイン酸塩の結晶の製造方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、優れた安定性、溶解性および結晶性を有する原薬である式（１）で表される化合物を、高純度、かつ、効率的（カラム精製を行うことなく）に提供することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】化合物（２）の結晶（試験例１）の、粉末Ｘ線回折図形である。縦軸は、強度[ｃｐｓ]を示し、横軸は回折角（２θ）[°]を示す。
【図２】化合物（２）のアモルファスである乾燥品（試験例２）の、粉末Ｘ線回折図形である。なお、縦軸は、強度[ｃｐｓ]を示し、横軸は回折角（２θ）[°]を示す。
【図３】化合物（２）の結晶（試験例３）の、粉末Ｘ線回折図形である。縦軸は、強度[ｃｐｓ]を示し、横軸は回折角（２θ）[°]を示す。
【図４】化合物（２）のアモルファスである乾燥品（試験例３）の、粉末Ｘ線回折図形である。縦軸は、強度[ｃｐｓ]を示し、横軸は回折角（２θ）[°]を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、式（２）で表される化合物（以下、化合物（２）と略すこともある）の結晶を経由することを特徴とする、式（１）で表されるマレイン酸塩（以下、化合物（１）と略すこともある）の結晶の製造方法である。
【００１７】
本発明の製造方法の目的物である化合物（１）は、  ２−［２−（（Ｓ）−３−ジメチルアミノピロリジン−１−イル）ピリジン−３−イル］−５−エチル−７−メトキシ−４Ｈ−ベンズ［ｄ］［１，３］オキサジン−４−オン・マレイン酸塩であり、優れた溶解性、安定性、および特定の条件下において優れた結晶性を有する。さらに、化合物（１）は、付着水を有せず、吸湿・放湿により重量が増減しないため取り扱い性にも優れる。
一方、化合物（１）の製造中間体である化合物（２）は、これまでガラス状固形物として得られていたため、カラム精製が必須であった。しかし、本発明者により、化合物（２）が特定の条件下において結晶化することが見出された。本発明者により見出された化合物（２）の結晶は、銅放射線を用いて測定したとき、例えば図１のように、回折角（２θ±０．５°）として８．０２°、１２．０°、１５．４°、２４．２°、および２４．７°にピークを有する粉末Ｘ線回折図形を示す。特に、当該結晶は、回折角（２θ±０．５°）として１５．４°に、他の結晶と識別可能である特徴的な粉末Ｘ線回折ピークを有する。化合物（２）の結晶は、アモルファスに比べて、結晶状態、結晶の性状および安定性において優れた物性を有する。
【００１８】
化合物（２）は、例えば、式（３）で表される化合物（以下、化合物（３）と略すこともある）を塩基存在下で、式（４）で表される化合物（（以下、化合物（４）と略すこともある））と反応させることにより得ることができる。本反応において使用する塩基としては、特に限定はないが、トリエチルアミンなど低級アルキルアミンが好ましい。使用する溶媒としては、反応に関与しない溶媒であれば、特に限定はないが、ジメチルホルムアミドなど親水性溶媒が挙げられる。また、溶媒の使用量は、特に限定はないが、反応が円滑に進むため、式（３）で表される化合物に対し溶媒を５〜１５倍量用いることが好ましく、７倍量がさらに好ましい。本反応は、特に限定はないが、反応が円滑に進むため、１０〜４０℃において反応させることが好ましく、３０℃がさらに好ましい。なお、例えば本明細書において化合物に対して溶媒を１０倍量用いるとは、化合物１ｇに対して溶媒を１０ｍＬ用いることを意味する。
【００１９】
上記方法により製造した化合物（２）と、アセトンおよび水とを混和させることにより、化合物（２）の結晶を析出させることができる。
当該混和は、例えば化合物（３）と化合物（４）との反応により生成された化合物（２）が含まれている反応液とアセトンおよび水を混和させるか、又はWO2008/036379に記載の化合物（２）のカラム精製品のアセトン溶液と水を混和させることで行うことができる。この時、アセトンは例えば式（３）で表される化合物に対し５〜１５倍量を用いることができるが、９倍量が好ましい。結晶化させる水は例えば式（３）で表される化合物に対し１５〜３５倍量を用いることができるが、２５倍量が好ましい。
アセトンおよび水は、例えば０〜３０℃で反応液と混和することができるが、１０℃が好ましい。
得られた化合物（２）の結晶は、次反応である化合物（１）を生成するための反応に用いることができる。ここで、得られた化合物（２）の結晶は、例えばろ取により上述のアセトンおよび水が混和された反応液から分離された後、そのまま（直接）あるいは乾燥後、次反応に使用することもできる。また、化合物（２）の結晶を湿潤状態において保存し、保存後に、化合物（２）の結晶を直接または乾燥して次反応に用いることもできる。
本明細書において、直接とは、化合物（２）の結晶に対して乾燥処理を行わないことをいう。
なお、化合物（２）の湿潤結晶を安定に保存させるためには、当該湿潤結晶中、水を３０〜７０ｗ／ｗ％、さらに好ましくは４０〜６０ｗ／ｗ％含有することが好ましい。
また、得られた結晶は、さらにアセトンと水で再結晶することにより、より化学純度の高い結晶を得ることも可能である。この時、再結晶に用いるアセトンは、乾燥させた化合物（２）に対し、例えば１０〜２０倍量を用いることができるが、１５倍量が好ましい。結晶化させる水は乾燥させた化合物（２）に対し２０〜４０倍量を用いることができるが、３０倍量が好ましい。
【００２０】
化合物（１）は、化合物（２）、マレイン酸、および化合物（２）が溶解する溶媒を用いて製造することができる。具体的には、化合物（２）の溶液にマレイン酸を添加することにより、化合物（１）を製造することができる。この際、化合物（2）の溶液は、上述の化合物（２）とアセトンおよび水との混和により得られた化合物（２）の結晶を、直接または乾燥後に溶媒に溶解させることにより調製することができる。このうち、化合物（２）の結晶を乾燥後に上記溶媒に溶解することが好ましい。ここで、乾燥とは、減圧乾燥のみならず、水と二層に分離する溶媒（例えば、酢酸エチル、トルエン、塩化メチレン、クロロホルムなど）に上述の化合物（２）とアセトンおよび水との混和により得られた化合物（２）の結晶を溶解後、遊離する水を除去し、濃縮するものも含む。また、遊離した水を除去した後の濃縮は、例えば、無水硫酸ナトリウムなどの乾燥剤を用いて乾燥させてから濃縮するか、あるいは乾燥剤を用いずにそのまま当該溶液を濃縮することにより行うようにしてもよい。
当該製造において用いられる溶媒としては、アセトニトリル、酢酸エチル、アセトン、テトラヒドロフラン、などの非プロトン性有機溶媒が望ましい。特に、アセトンがより望ましい。化合物（１）が晶析した結晶性固体の懸濁液には、さらに希釈溶媒を加えてもよい。希釈溶媒としては、酢酸エチル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、またはジイソプロピルエーテルが望ましい。特に、酢酸エチル、ｔ−ブチルメチルエーテル、またはジイソプロピルエーテルがより望ましい。
【００２１】
得られた化合物（１）は、さらに適当な溶媒を用いて再結晶することができる。再結晶に用いる溶媒としては、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、１，２−ジメトキシエタン、酢酸エチル、水を単独又は混合して用いることができるが、アセトン−水混合溶媒が望ましい。結晶を析出するために加える希釈溶媒としては、ジイソプロピルエーテル、酢酸エチル、またはｔ−ブチルメチルエーテルが挙げられる。
【００２２】
以下、実施例および試験例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例および試験例によって限定されるものではない。
実施例１  化合物(2)の湿潤結晶の合成方法
【００２３】
【化９】
2012073508.tif 000011
【００２４】
化合物(3)(10.0 g)にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(65 mL)及びトリエチルアミン(11.1 mL)を加え、懸濁液とした。当該懸濁液に、冷却撹拌下、化合物(4)(5.14 g)を滴下した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(5 mL)で洗い込み、内温8〜17℃で2時間撹拌した後、室温で一夜放置し、均一な反応液(87.7 g)を得た。
反応液の半量(43.8 g)を冷却撹拌し、アセトン(35 mL)を加え内温9℃に冷却した。常水(175 mL)を内温9〜22℃で反応液とアセトンの混液にゆっくり滴下して結晶を析出させ、その後、内温7〜13℃で1時間20分撹拌した。析出結晶をろ取し、アセトン(10 mL)と常水(40 mL)の混液で析出結晶を洗浄して、白色粉末及び塊として化合物(2)の湿潤結晶(9.55 g)を得た。
実施例２  化合物(2)の湿潤結晶を経由した化合物(1)の合成方法
【００２５】
【化１０】
2012073508.tif 000012
【００２６】
化合物(3)(10.0 g)とトリエチルアミン(4.72 g)をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(65.0 mL)に撹拌下懸濁させ、化合物(3)の懸濁液とした。当該懸濁液に、内温28〜30℃で化合物(4)(4.56 g)を滴下した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(5.00 mL)で容器を洗い込み、化合物(3)と化合物(4)の反応液を内温30℃で2時間撹拌した。当該反応液を冷却し、内温9℃でアセトン(90.0 mL)を加え、次いで常水(250 mL)を当該反応液とアセトンの混液にゆっくり滴下して化合物(2)を晶析させ、内温8〜13℃で30分間撹拌した。析出結晶をろ取し、アセトン(10.0 mL)と常水(100 mL)の混液で析出結晶を洗浄後、白色塊として化合物(2)の湿潤結晶(26.6 g)を得た。
得られた化合物(2)の湿潤結晶(26.6 g)を酢酸エチル(200 mL)に溶解後、有機層を分取して減圧濃縮し、さらに得られた濃縮物に酢酸エチル(200 mL)を加え溶解した後、減圧濃縮して黄色油状物として化合物(2)の濃縮物(13.7 g)を得た。
得られた化合物(2)の濃縮物(13.7 g)をアセトン(230 mL)に溶解し、化合物(2)の溶液とした。加熱撹拌下、当該溶液に内温36〜37℃でマレイン酸(3.87 g)のアセトン(50.0 mL)溶液を滴下して化合物(1)を晶析させ、アセトン(20.0 mL)で容器を洗い込み、その後、ジイソプロピルエーテル(300 mL)を滴下した。次いで、化合物(1)の懸濁液を内温45〜46℃で10分間加熱撹拌した後、冷却し、内温7〜15℃で30分間撹拌した。析出結晶をろ取し、ジイソプロピルエーテル(40.0 mL)とアセトン(40.0 mL)の混液で析出結晶を洗浄後、得られた化合物(1)の粗結晶湿潤品(14.2 g)を50℃で送風乾燥して、白色粉末及び塊として化合物(1)の粗結晶(13.4 g)を得た。
得られた化合物(1)の粗結晶(10.0 g)にアセトン(200 mL)と精製水(10.0 mL)を加え加熱撹拌下、溶解した。得られた化合物(1)溶液をろ過し、アセトン(30.0 mL)と精製水(1.50 mL)の混液で容器を洗い込み、ろ液を加熱撹拌した。当該ろ液に内温43〜45℃でジイソプロピルエーテル(250 mL)を滴下して晶析させ、その後、内温43〜46℃で10分間撹拌した後、冷却し、内温6〜15℃で30分間撹拌した。析出結晶をろ取し、ジイソプロピルエーテル(40.0 mL)とアセトン(40.0 mL)の混液で析出結晶を洗浄後、得られた化合物(1)の湿潤結晶(9.28 g)を50℃で送風乾燥して、白色粉末及び塊として化合物(1)(8.80 g)を収率69.5%で得た。
融点(熱板法)：157〜163℃．
元素分析計算値 C22H26N4O3・C4H4O4 (MW：510.54)：C，61.17%；H，5.92%；N，10.97%．元素分析実測値：C，61.09%；H，5.91%；N，10.95%．
ESI(posi)-MS m/z：395[(C22H26N4O3 + H)+]．
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：1.22(3H,t,J = 7.6 Hz),2.02-2.12(1H,m),2.29-2.36(1H,m),2.78(6H,s),3.07-3.20(2H,m),3.44-3.53(2H,m),3.68(1H,dd,J = 11.5 Hz,7.3 Hz),3.76(1H,dd,J = 11.5 Hz,6.8 Hz),3.83-3.96(1H,m),3.92(3H,s),6.03(2H,s),6.91(1H,dd,J = 7.8 Hz,4.9 Hz),7.02(1H,d,J = 2.4 Hz),7.04(1H,d,J = 2.4 Hz),8.05(1H,dd,J = 7.6 Hz,2.0 Hz),8.34(1H,dd,J = 4.6 Hz,1.7 Hz).
実施例３  化合物(2)の再結晶精製品を用いた化合物(1)の合成方法
【００２７】
【化１１】
2012073508.tif 000013
【００２８】
化合物(3)(10.0 g)とトリエチルアミン(4.72 g)をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(65.0 mL)に撹拌下懸濁させ、化合物(3)の懸濁液とした。当該懸濁液に内温28〜31℃で化合物(4)(4.56 g)を滴下した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(5.00 mL)で容器を洗い込み、化合物(3)と化合物(4)の反応液を内温30℃で2時間撹拌した。当該反応液を冷却し、内温7〜8℃でアセトン(90.0 mL)を加え、次いで常水(250 mL)をゆっくり滴下して化合物(2)を晶析させ、内温7〜10℃で30分間撹拌した。析出結晶をろ取し、アセトン(10.0 mL)と常水(100 mL)の混液で析出結晶を洗浄後、白色塊として化合物(2)の粗結晶湿潤品(25.8 g)を得た。
得られた化合物(2)の粗結晶湿潤品(25.8 g)にアセトン(200 mL)を加え撹拌下溶解し、冷却した。得られた化合物(2)のアセトン溶液に内温8〜13℃で常水(400 mL)をゆっくり滴下して化合物(2)を晶析させ、その後、内温8〜9℃で30分間撹拌した。析出結晶をろ取し、アセトン(10.0 mL)と常水(100 mL)の混液で析出結晶を洗浄後、白色塊として化合物(2)の再結晶湿潤品(26.1 g)を得た。
得られた化合物(2)の再結晶湿潤品(26.1 g)を酢酸エチル(200 mL)に溶解後、有機層を分取して減圧濃縮し、さらに得られた濃縮物に酢酸エチル(200 mL)を加え溶解した後、減圧濃縮し黄色油状物として化合物(2)の濃縮物(12.5 g)を得た。
得られた化合物(2)の濃縮物(12.5 g)をアセトン(230 mL)に溶解し、化合物(2)の溶液とした。当該溶液に、加熱撹拌下、内温36℃でマレイン酸(3.87g)のアセトン(50.0 mL)溶液を滴下して化合物(1)を晶析させた。アセトン(20.0 mL)で容器を洗い込み、その後，ジイソプロピルエーテル(300 mL)を滴下した。次いで、化合物(1)の懸濁液を、内温45〜47℃で10分間加熱撹拌した後、冷却し、内温8〜15℃で30分間撹拌した。析出結晶をろ取し、ジイソプロピルエーテル(40.0 mL)とアセトン(40.0 mL)の混液で析出結晶を洗浄後、得られた化合物(1)の粗結晶湿潤品(15.2 g)を50℃で送風乾燥して、白色粉末及び塊として化合物(1)の粗結晶(12.7 g)を得た。
得られた化合物(1)の粗結晶(10.0 g)にアセトン(200 mL)と精製水(10.0 mL)を加え加熱撹拌下、溶解した。得られた化合物(1)溶液をろ過し、アセトン(30.0 mL)と精製水(1.50 mL)の混液で容器を洗い込み、ろ液を加熱撹拌した。当該ろ液に内温43〜45℃でジイソプロピルエーテル(250 mL)を滴下して化合物(1)を晶析させ、その後、内温44〜45℃で10分間撹拌した後、冷却し、内温6〜15℃で30分間撹拌した。析出結晶をろ取し、ジイソプロピルエーテル(40.0 mL)とアセトン(40.0 mL)の混液で析出結晶を洗浄後、得られた化合物(1)の湿潤結晶(9.31 g)を50℃で送風乾燥して、白色粉末及び塊として化合物(1)(8.83 g)を収率65.9%で得た。
融点(熱板法)：164〜165℃．
元素分析計算値 C22H26N4O3・C4H4O4 (MW：510.54)：C，61.17%；H，5.92%；N，10.97%．元素分析実測値：C，61.07%；H，5.87%；N，10.96%．
ESI(posi)-MS m/z：395[(C22H26N4O3 + H)+]．
1H-NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ：1.22(3H,t,J = 7.3 Hz),2.02-2.12(1H,m),2.29-2.36(1H,m),2.78(6H,s),3.09-3.18(2H,m),3.45-3.52(2H,m),3.68(1H,dd,J = 11.7 Hz,7.3 Hz),3.76(1H,dd,J = 11.7 Hz,7.1 Hz),3.83-3.95(1H,m),3.92(3H,s),6.03(2H,s),6.91(1H,dd,J = 7.6 Hz,4.6 Hz),7.02(1H,d,J = 2.7 Hz),7.04(1H,d,J = 2.7 Hz),8.05(1H,dd,J = 7.8 Hz,2.0 Hz),8.34(1H,dd,J = 4.6 Hz,2.0 Hz).
実施例４  化合物(1)からの化合物(2)の湿潤結晶の製造方法
【００２９】
【化１２】
2012073508.tif 000014
【００３０】
出願番号PCT/JP2010/005786に記載の化合物(1)の結晶(20.0 g、高融点結晶と低融点結晶の混合物)に酢酸エチル(300 mL)及び炭酸水素ナトリウム(20.0 g)と常水(300 mL)の溶液を順次加え、内温16〜17℃で撹拌下、化合物(1)を溶解した。この化合物(1)の溶液を内温13〜18℃で20分間撹拌して、化合物(2)とした後、化合物(2)を含む有機層を分取し、得られた有機層を炭酸水素ナトリウム(6.00 g)と常水(100 mL)の溶液で洗浄した。得られた有機層に無水硫酸ナトリウム(30.0 g)を加え撹拌後、一夜放置して化合物(2)の溶液を乾燥した。不溶物をろ過して除き、酢酸エチル(20.0 mL)で不溶物を洗浄後、洗浄液をろ液に合一した。ろ液を減圧濃縮し黄色油状物として化合物(2)(17.7 g)を得た。
得られた化合物(2)(17.7 g)にアセトン(177 mL)を加え溶解した。化合物(2)の溶液に、撹拌下、常水(472 mL)を内温17〜33℃でゆっくり滴下して化合物（２）を晶析させ、その後、内温8〜15℃で30分間冷却撹拌した。析出結晶をろ取し、アセトン(11.8 mL)と常水(59.0 mL)の混液で析出結晶を洗浄して、帯黄白色塊として化合物(2)の湿潤結晶(32.7 g)を得た。
参考例１  化合物(2)の湿潤結晶の乾燥方法
実施例４により得られた化合物(2)の湿潤結晶を室温下で減圧乾燥し、淡黄色粉末として化合物(2)の乾燥品(14.6 g)を収率93.4%で得た。
融点(熱板法)：48℃よりガラス転移
水分(カールフィッシャー)：1.32%
1H-NMR(CDCl3)δ：1.30(3H,t,J = 7.6 Hz),1.80-1.88(1H,m),2.08-2.15(1H,m),2.25(6H,s),2.72-2.80(1H,m),3.15-3.28(2H,m),3.43-3.56(3H,m),3.66(1H,dt,J = 6.6 Hz,10.7 Hz),3.92(3H,s),6.72(1H,dd,J = 7.8 Hz,4.9 Hz),6.88(1H,d,J = 2.7 Hz),6.95(1H,d,J = 2.7 Hz),8.00(1H,dd,J = 7.8 Hz,2.0 Hz),8.30(1H,dd,J = 4.9 Hz,2.0 Hz).
ESI-MS(posi) m/z：395(M+1)+
元素分析  Calcd for C22H26N4O3：C,66.99；H,6.64；N,14.20. Found：C,65.89；H,6.66；N,13.96.
試験例１  化合物(2)の湿潤結晶のX線回折
【００３１】
化合物(2)の湿潤結晶(実施例１)の粉末X線回折の結果を図１に示した。粉末X線回折の結果より、湿潤結晶は結晶性の粉末及び塊であることが確認された。なお、粉末X線回折の測定条件を以下に示す。
粉末X線回折：
検体をガラス製の平板試料ホルダーの充填部に充填し、理学電機ＲＩＮＴ２２００型粉末X線回折装置を用いて検体の粉末X線回折を測定した。
測定条件
管電流：36 mA
管電圧：40 kV
走査速度：毎分2°
波長：1.5405Å(Kα1)，1.5443Å(Kα2)，1.3922Å(Kβ1)
発散スリット：1°
受光スリット：0.15 mm
散乱スリット：1°
対陰極：銅
走査範囲：5〜40°
試験例２  化合物(2)湿潤結晶の乾燥後の粉末X線回折
【００３２】
化合物(2)の湿潤結晶(実施例１)を試験例１で用いた平板試料ホルダーに充填し、シリカゲル(青)デシケーター中で乾燥させて化合物(2)の乾燥品とし、その後、粉末X線回折を試験例１の方法で測定したところ、図２に示すようなアモルファスの回折パターンが観測された。
試験例３  化合物(2)の安定性試験(粉末X線回折)
【００３３】
化合物(2)湿潤結晶(実施例１)および乾燥品（参考例１）をそれぞれ、褐色ビンに入れて密栓し、25℃でそれぞれ２週間及び４週間保管した。保管後の各検体の粉末X線回折を試験例１の方法で測定した結果を、図３、４に示した。化合物(2)の乾燥品は完全なアモルファスとなっていたが、化合物(2)の湿潤結晶は結晶状態に変化はみられなかった。
試験例４  化合物(2)の安定性試験(性状)
【００３４】
化合物(2)の湿潤結晶(実施例１)および乾燥品(参考例１)をそれぞれ、褐色ビンに入れて密栓し、25〜40℃でそれぞれ２週間および４週間保管した。保管後、各検体の性状を確認した。乾燥品は、３０℃保管後３日目にガラス状の塊に変化していた。
化合物(2)の乾燥品（参考例１）の性状
【００３５】
【表１】
2012073508.tif 000015
【００３６】
化合物(2)の湿潤結晶（実施例１）の性状
【００３７】
【表２】
2012073508.tif 000016
【００３８】
化合物（２）の乾燥品は、３０℃条件下において保存した場合、ガラス状固形物となり、取り扱いにくい。一方、湿潤結晶については、３０℃条件下で保存しても白色粉末の状態を維持できるので、その後の運搬、秤量、反応仕込みが容易である。
試験例５
【００３９】
実施例２および実施例３により製造した化合物（２）および化合物（１）の化学純度を以下のHPLC条件により測定した。
HPLC測定方法：
HPLCカラム：InertsilODS-3V(4.6 mmID × 150 mm, 粒子径 5 μm)
測定波長：240 nm
カラム温度：35℃
流量：1.0 mL/分
移動相A：1-オクタンスルホン酸ナトリウム(1.08g)を薄めたリン酸(1 → 1000)に溶かし1000mLとした液
ここで、薄めたリン酸(1 → 1000)とは、リン酸１ｍＬを水に溶解し１０００ｍＬとした意味である。
移動相B：液体クロマトグラフィー用アセトニトリル
送液条件
【００４０】
【表３】
2012073508.tif 000017
【００４１】
いずれの実施例においても、得られた化合物（２）および化合物（１）は99％以上の化学純度を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明により、保存安定性、溶解性、結晶性、並びに、取り扱い容易性に優れたマレイン酸塩を高純度、かつ、効率的（カラム精製を行うことなく）に提供することが可能となった。
【図１】
2012073508.tif 000026
【図２】
2012073508.tif 000027
【図３】
2012073508.tif 000028
【図４】
2012073508.tif 000029
【国際調査報告】
2012073508.tif 000030
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