(57)【要約】      （修正有）【課題】抗ＣＬＬ−１抗体及び免疫複合体ならびにそれらの使用方法の提供。【解決手段】単離モノクローナル抗ＣＬＬ−１抗体であって、特定の配列のアミノ酸を含むエピトープ及び／または重複エピトープに結合しかつ他の異なる配列を含むエピトープには結合しない抗体、該抗体をコードする単離核酸、該抗体と細胞傷害性薬剤とを含む免疫複合体ならびにそれらの使用方法。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離モノクローナル抗ＣＬＬ−１抗体であって、配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープ及び／または重複エピトープに結合し、かつ配列番号５０及び／または配列番号５１を含むエピトープには結合しない、前記抗体。
【請求項２】
前記エピトープが、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＣＬＬ−１に結合する単離抗体であって、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項４】
配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項９】
ａ）配列番号３３の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号４６の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、または
ｄ）配列番号４８の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
ＣＬＬ−１に結合する単離抗体であって、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、前記抗体。
【請求項１１】
（ａ）配列番号３８の配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号３７の配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
以下の特徴：
ａ）組み換えヒトＣＬＬ−１に結合する、
ｂ）組み換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する、
ｃ）ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｄ）カニクイザルＰＢＭＣの表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｅ）癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｆ）ＡＭＬ癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｇ）ＨＬ−６０細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｈ）ＥＯＬ−１細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する、
ｉ）Ｋ２４４Ｑ突然変異を含むＣＬＬ−１に結合する、
ｊ）配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープ及び／もしくは重複エピトープに結合する、
ｋ）配列番号５０及び／もしくは配列番号５１を含むエピトープには結合しない、
ｌ）ヒトＣＬＬ−１結合に関してＲ＆Ｄクローン６８７３１７抗体と競合する、
ｍ）１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満のＫｄで内因性ヒトＣＬＬ−１に結合する、
ｎ）１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満のＫｄで組み換えヒトＣＬＬ−１に結合する、かつ／または
ｏ）１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、もしくは３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、もしくは１ｎＭ未満のＫｄで組み換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する、のうちの１つ以上を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３】
１つ以上の操作された遊離システインアミノ酸残基を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記１つ以上の操作された遊離システインアミノ酸残基が、前記軽鎖内に位置する、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１５】
前記１つ以上の操作された遊離システインアミノ酸残基が、前記重鎖内に位置する、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１６】
モノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
ヒトまたはキメラ抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
ＣＬＬ−１に結合する抗体断片である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
先行請求項のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離核酸。
【請求項２１】
請求項１９に記載の核酸を含む、宿主細胞。
【請求項２２】
前記抗体が産生されるように、請求項２１に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体の産生方法。
【請求項２３】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体と、細胞傷害性薬剤と、を含む、免疫複合体。
【請求項２４】
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
（ａ）Ａｂが、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体であり、
（ｂ）Ｌが、リンカーであり、
（ｃ）Ｄが、細胞傷害性薬剤であり、前記細胞傷害性薬剤が、薬物であり、
（ｄ）ｐが、１〜８の範囲である、免疫複合体。
【請求項２５】
前記細胞傷害性薬剤が、マイタンシノイド、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される、請求項２３または２４に記載の免疫複合体。
【請求項２６】
Ｄが、式Ａ：
2020203901.tif 000074
のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、点線が、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３との間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２が独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、及びＣＯＲから選択され、任意にハロまたはジハロからさらに選択され、ＲＤが独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
Ｒ６及びＲ９が独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ′、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ７が独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ′、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｑが独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、
Ｒ１１が、ＨもしくはＲのいずれかであるか、またはＱがＯである場合にはＳＯ３Ｍであり、式中、Ｍが金属陽イオンであり、
Ｒ及びＲ′がそれぞれ独立して、任意に置換されるＣ１〜８アルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクリル、及びＣ５〜２０アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ′との関連で、Ｒ及びＲ′が、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、及びＲ１７が、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″が、Ｃ３〜１２アルキレン基であり、その鎖が、任意に置換される１つ以上のヘテロ原子及び／または芳香族環によって分断され得、
Ｘ及びＸ′が独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮ（Ｈ）から選択される、請求項２４に記載の免疫複合体。
【請求項２７】
Ｄが、構造：
2020203901.tif 000075
を有し、式中、ｎが、０または１である、請求項２６に記載の免疫複合体。
【請求項２８】
Ｄが、構造：
2020203901.tif 000076
から選択される構造を有する、請求項２７に記載の免疫複合体。
【請求項２９】
Ｄが、ネモルビシン誘導体である、請求項２４に記載の免疫複合体。
【請求項３０】
Ｄが、構造：
2020203901.tif 000077
を有する、請求項２９に記載の免疫複合体。
【請求項３１】
Ｌが、プロテアーゼによって切断可能である、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項３２】
Ｌが、酸不安定性である、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項３３】
Ｌが、ヒドラゾンを含む、請求項３２に記載の免疫複合体。
【請求項３４】
構造：
2020203901.tif 000078
を有する、請求項２８に記載の免疫複合体。
【請求項３５】
ｐが、２〜５の範囲である、請求項２４〜３４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
【請求項３６】
請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の免疫複合体と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的製剤。
【請求項３７】
追加の治療剤をさらに含む、請求項３６に記載の薬学的製剤。
【請求項３８】
ＣＬＬ−１陽性癌を有する個体の治療方法であって、有効量の、請求項２４〜３５のいずれか一項に記載の免疫複合体、または請求項３６に記載の薬学的製剤を前記個体に投与することを含む、前記方法。
【請求項３９】
前記ＣＬＬ−１陽性癌が、ＡＭＬである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
追加の治療剤を前記個体に投与することをさらに含む、請求項３８または請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＣＬＬ−１陽性細胞の増殖の阻害方法であって、前記細胞を、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の免疫複合体に、前記細胞の表面上のＣＬＬ−１への前記免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって前記細胞の増殖を阻害することを含む、前記方法。
【請求項４２】
前記細胞が、ＡＭＬ癌細胞である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
標識にコンジュゲートされる、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４４】
前記標識が、陽電子放出体である、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４５】
前記陽電子放出体が、８９Ｚｒである、請求項４４に記載の抗体。
【請求項４６】
生体試料中のヒトＣＬＬ−１の検出方法であって、前記生体試料を、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体と、自然発生ヒトＣＬＬ−１への前記抗ＣＬＬ−１抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、前記生体試料中で、前記抗ＣＬＬ−１抗体と自然発生ヒトＣＬＬ−１との間の複合体が形成されるかどうかを検出することと、を含む、前記方法。
【請求項４７】
前記生体試料が、ＡＭＬ癌試料である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ＣＬＬ−１陽性癌の検出方法であって、（ｉ）標識された抗ＣＬＬ−１抗体を、ＣＬＬ−１陽性癌を有するか、またはそれを有することが疑われる対象に投与することであって、前記標識された抗ＣＬＬ−１抗体が、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗ＣＬＬ−１抗体を含む、投与することと、（ｉｉ）前記対象において前記標識された抗ＣＬＬ−１抗体を検出することであって、前記標識された抗ＣＬＬ−１抗体の検出が、前記対象におけるＣＬＬ−１陽性癌を示す、検出することと、を含む、前記方法。
【請求項４９】
前記標識された抗ＣＬＬ−１抗体が、陽電子放出体にコンジュゲートされた抗ＣＬＬ−１抗体を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記陽電子放出体が、８９Ｚｒである、請求項４９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本特許出願は、２０１４年９月１２日出願の米国特許仮出願第６２／０４９８７６号の優先権を主張し、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出され、かつその全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。本ＡＳＣＩＩのコピーは、２０１５年８月３１日に作成され、Ｐ３２３１４−ＷＯ＿ＳＬ＿ｔｘｔ．ｔｘｔという名称であり、４２，６９７バイトの大きさである。
【０００３】
本発明は、抗ＣＬＬ−１抗体及び免疫複合体、ならびにそれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
ＣＬＬ−１（ＣＬＥＣ１２Ａ、ＭＩＣＬ、及びＤＣＡＬ２とも称される）は、Ｃ型レクチン／Ｃ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬ／ＣＴＬＤ）スーパーファミリーのメンバーをコードする。このファミリーのメンバーは、共通のタンパク質折り畳みを共有し、細胞接着、細胞間シグナル伝達、糖タンパク質ターンオーバー、ならびに炎症及び免疫応答における役割等の多様な機能を有する。ＣＬＬ−１は、単一のＣ型レクチン様ドメイン（カルシウムまたは糖のどちらにも結合しないことが予測される）、茎領域、膜貫通ドメイン、及びＩＴＩＭモチーフを含有する短細胞質尾部を含む、ＩＩ型膜貫通受容体に対して示されている。さらに、ＣＬＬ−１は、正常な末梢血及び骨髄（ＢＭ）中の単球及び顆粒球上に存在し、非血液学的組織中には存在しない。ＣＬＬ−１はまた、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞上にも発現される。具体的には、ＣＬＬ−１は、ＣＤ３４陽性（ＣＤ３４＋）ＡＭＬにおいてＣＤ３４＋ＣＤ３８−ＡＭＬ細胞の画分上に発現される白血病幹細胞（ＬＳＣ）関連表面抗原である。
【０００５】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）に基づく療法は、癌の重要な治療モダリティとなっている。白血病は、血液、骨髄、脾臓、及びリンパ節中の悪性細胞の接近可能性、ならびに抗原標的の特定を可能にする造血分化の種々の系列及びステージの十分に定義された免疫表現型のため、このアプローチに非常に適している。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に関する研究の大部分は、ＣＤ３３に焦点を置いてきた。しかしながら、コンジュゲートされていない抗ＣＤ３３ｍＡｂリンツズマブによる応答は、少量の単剤及びＡＭＬに対する活性を有し、従来の化学療法と組み合わせた際に場合の２つの無作為治験において患者の予後を改善できなかった。
【０００６】
当該技術分野において、癌等のＣＬＬ−１関連病態の診断及び治療用の、ＣＬＬ−１を含むＡＭＬを標的とする安全で有効な薬剤が必要とされている。本発明はその必要性を満たし、また他の便益を提供する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、抗ＣＬＬ−１抗体及び免疫複合体、ならびにそれらの使用方法を提供する。
【０００８】
本明細書において、単離モノクローナル抗ＣＬＬ−１抗体であって、配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープ及び／または重複エピトープに結合し、かつ配列番号５０及び／または配列番号５１を含むエピトープには結合しない、抗体が提供される。いくつかの実施形態において、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号４９のアミノ酸からなるか、またはそれから本質的になるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、該エピトープは、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される。
【０００９】
本明細書において、ＣＬＬ−１に結合する単離抗体であって、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、抗体がさらに提供される。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号３３の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号４６の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域、または（ｄ）配列番号４８の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号４８の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、配列番号３４の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３２の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００１１】
本明細書において、ＣＬＬ−１に結合する単離抗体であって、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３と、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３と、を含む、抗体も提供される。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号３８の配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号３７の配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【００１２】
本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、組み換えヒトＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、組み換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、カニクイザルＰＢＭＣの表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＡＭＬ癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＨＬ−６０細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＥＯＬ−１細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、Ｋ２４４Ｑ突然変異（Ｋ２４４Ｑを有する配列番号１）を含むＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープ及び／または重複エピトープに結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、配列番号５０及び／または配列番号５１を含むエピトープには結合しない。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ヒトＣＬＬ−１結合に関してＲ＆Ｄシステムクローン６８７３１７抗体と競合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満のＫｄで内因性ヒトＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満のＫｄで組み換えヒトＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫｄで組み換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する。
【００１３】
本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、１つ以上の操作された遊離システインアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の操作された遊離システインアミノ酸残基は、軽鎖内に位置する。いくつかの実施形態において、軽鎖内の１つ以上の操作された遊離システインアミノ残基は、Ｋａｂａｔ付番に従うＶ２０５Ｃを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖内の１つ以上の操作された遊離システインアミノ残基は、Ｋａｂａｔ付番に従うＫ１４９Ｃを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の操作された遊離システインアミノ酸残基は、重鎖内に位置する。いくつかの実施形態において、重鎖内の１つ以上の操作された遊離システインアミノ残基は、ＥＵ付番に従うＡ１１８Ｃを含む。いくつかの実施形態において、重鎖内の１つ以上の操作された遊離システインアミノ残基は、ＥＵ付番に従うＳ４００Ｃを含む。
【００１４】
本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、モノクローナル抗体である。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ヒトまたはキメラ抗体である。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＣＬＬ−１に結合する抗体断片である。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、またはＩｇＧ２ｂ抗体である。
【００１５】
さらに、本明細書において、本明細書に記載される抗体をコードする単離核酸が提供される。また、本明細書において、本明細書に記載される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞が提供される。本明細書において、抗体の産生方法であって、本明細書に記載される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、該抗体が産生されるように培養することを含む、方法も提供される。
【００１６】
本明細書において、本明細書に記載される抗体と細胞傷害性薬剤とを含む免疫複合体が提供される。具体的には、本明細書において、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有する免疫複合体が提供され、式中、
（ａ）Ａｂが、本明細書に記載される抗体であり、
（ｂ）Ｌが、リンカーであり、
（ｃ）Ｄが、細胞傷害性薬剤であり、前記細胞傷害性薬剤が、薬物であり、
（ｄ）ｐが、１〜８の範囲である。
【００１７】
本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、細胞傷害性薬剤は、マイタンシノイド、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される。本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｄは、式Ａ：
2020203901.tif 000003
のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、点線が、Ｃ１とＣ２またはＣ２とＣ３との間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２が独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、及びＣＯＲから選択され、任意にハロまたはジハロからさらに選択され、ＲＤが独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
Ｒ６及びＲ９が独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ′、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ７が独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ′、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｑが独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、
Ｒ１１が、ＨもしくはＲのいずれかであるか、またはＱがＯである場合にはＳＯ３Ｍであり、式中、Ｍが金属陽イオンであり、
Ｒ及びＲ′がそれぞれ独立して、任意に置換されるＣ１〜８アルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクリル、及びＣ５〜２０アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ′との関連で、Ｒ及びＲ′が、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、及びＲ１７が、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″が、Ｃ３〜１２アルキレン基であり、その鎖が、任意に置換される１つ以上のヘテロ原子及び／または芳香族環によって分断され得、
Ｘ及びＸ′が独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮ（Ｈ）から選択される。
【００１８】
本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｄは、構造：
2020203901.tif 000004
を有し、式中、ｎが、０または１である。
【００１９】
本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｄは、構造：
2020203901.tif 000005
を有する。
【００２０】
本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｄは、ネモルビシン誘導体である。本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｄは、構造：
2020203901.tif 000006
を有する。
【００２１】
本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｌは、プロテアーゼによって切断可能である。本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｌは、酸不安定性である。本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｌは、ヒドラゾンを含む。
【００２２】
本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、本免疫複合体は、構造：
2020203901.tif 000007
を有する。
【００２３】
本免疫複合体のいずれかのいくつかの実施形態では、ｐは、２〜５の範囲である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、薬学的製剤が提供される。いくつかの実施形態において、薬学的製剤は、本明細書に記載される免疫複合体と薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施形態において、本薬学的製剤は、追加の治療剤を含む。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、アントラサイクリンである。いくつかの実施形態において、アントラサイクリンは、ダウノルビシンまたはイダルビシンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、シタラビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、クラドリビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、フルダラビンまたはトポテカンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、５−アザシチジンまたはデシタビンである。
【００２５】
いくつかの実施形態において、治療方法が提供される。いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌の治療方法が提供される。いくつかの実施形態において、治療方法は、有効量の、本明細書に記載される免疫複合体または本明細書に記載される薬学的製剤を個体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、癌は、癌である。いくつかの実施形態において、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び／または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。いくつかの実施形態において、癌は、ＣＬＬ−１陽性である。いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌は、ＡＭＬである。いくつかの実施形態において、本方法は、追加の治療剤を個体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、アントラサイクリンである。いくつかの実施形態において、アントラサイクリンは、ダウノルビシンまたはイダルビシンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、シタラビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、クラドリビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、フルダラビンまたはトポテカンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、５−アザシチジンまたはデシタビンである。
【００２６】
本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、対象に、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性細胞の増殖の阻害方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、細胞を、本明細書に記載される免疫複合体に、細胞の表面上のＣＬＬ−１への該免疫複合体の結合を許容する条件下で曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。いくつかの実施形態において、細胞は、ＡＭＬ癌細胞である。
【００２８】
いくつかの実施形態において、生体試料中のヒトＣＬＬ−１の検出方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、生体試料を、抗ＣＬＬ−１抗体と、自然発生ヒトＣＬＬ−１への抗ＣＬＬ−１抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、生体試料中で、抗ＣＬＬ−１抗体と自然発生ヒトＣＬＬ−１との間の複合体が形成されるかどうかを検出することを含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、本明細書に記載される抗体である。いくつかの実施形態において、生体試料は、ＡＭＬ癌試料である。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌の検出のための方法が提供される。いくつかのかかる実施形態において、方法は、（ｉ）標識された抗ＣＬＬ−１抗体を、ＣＬＬ−１陽性癌を有するか、またはそれを有することが疑われる対象に投与することと（ｉｉ）該対象において該標識された抗ＣＬＬ−１抗体を検出することであって、該標識された抗ＣＬＬ−１抗体の検出が、該対象におけるＣＬＬ−１陽性癌を示す、検出することと、を含む。いくつかの実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、本明細書に記載される抗体である。いくつかのかかる実施形態において、標識された抗ＣＬＬ−１抗体は、陽電子放出体にコンジュゲートされた抗ＣＬＬ−１抗体を含む。いくつかの実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１Ａ】マウス（ｍ）６Ｅ７、ｍ２１Ｃ９、ｍ２０Ｂ１、及びｍ２８Ｈ１２の軽鎖可変領域配列（Ａ）及び重鎖可変領域配列（Ｂ）のアラインメントを示す。
【図１Ｂ】マウス（ｍ）６Ｅ７、ｍ２１Ｃ９、ｍ２０Ｂ１、及びｍ２８Ｈ１２の軽鎖可変領域配列（Ａ）及び重鎖可変領域配列（Ｂ）のアラインメントを示す。
【図２Ａ】Ｋ１Ｈ１、ｍ６Ｅ７、ヒト化（ｈ）６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ、及びｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ．Ａ５４の軽鎖可変領域配列（Ａ）及び重鎖可変領域配列（Ｂ）のアラインメントを示す。
【図２Ｂ】Ｋ１Ｈ１、ｍ６Ｅ７、ヒト化（ｈ）６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ、及びｈ６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ．Ａ５４の軽鎖可変領域配列（Ａ）及び重鎖可変領域配列（Ｂ）のアラインメントを示す。
【図３Ａ】Ｋ１Ｈ１、ｍ２１Ｃ９、及びｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３の軽鎖可変領域配列（Ａ）及び重鎖可変領域配列（Ｂ）のアラインメントを示す。
【図３Ｂ】Ｋ１Ｈ１、ｍ２１Ｃ９、及びｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３の軽鎖可変領域配列（Ａ）及び重鎖可変領域配列（Ｂ）のアラインメントを示す。
【図４】ＥＯＬ−１異種移植片モデルにおける、１０μｇ／ｍ２でのＥＵ付番（Ａ１１８Ｃ）に従うアミノ酸残基１１８においてシステイン操作された重鎖を介してＰＮＵにコンジュゲートされたｃｈ２１Ｃ９、ｃｈ３Ｈ１０、ｃｈ２８Ｈ１２、ｃｈ２０Ｂ１、及びｃｈ６Ｅ７による治療時の、経時的な腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。
【図５】ＨＬ−６０異種移植片モデルにおける、１０μｇ／ｍ２でのＥＵ付番（Ａ１１８Ｃ）に従うアミノ酸残基１１８においてシステイン操作された重鎖を介してＰＮＵにコンジュゲートされたｃｈ２１Ｃ９、ｃｈ３Ｈ１０、ｃｈ２８Ｈ１２、ｃｈ２０Ｂ１、及びｃｈ６Ｅ７による治療時の、経時的な腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。
【図６】ＨＬ−６０異種移植片モデルにおける、１０μｇ／ｍ２または２０μｇ／ｍ２での、ＰＢＤ（ＳＧ３４）にコンジュゲートされたＥＵ付番（Ａ１１８Ｃ）に従うアミノ酸残基１１８においてシステイン操作された重鎖またはＫａｂａｔ付番（Ｋ１４９Ｃ）に従うアミノ酸残基番号１４９においてシステイン操作された軽鎖を伴う、ヒト化抗体６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅまたは２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３による治療時の経時的な腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。
【図７】ＨＬ−６０異種移植片モデルにおける、５μｇ／ｍ２、１０μｇ／ｍ２、または２０μｇ／ｍ２での、ＰＢＤ（ＳＧ３４）にコンジュゲートされたＫａｂａｔ付番（Ｋ１４９Ｃ）に従うアミノ酸残基番号１４９においてシステイン操作された軽鎖を伴う、ヒト化抗体６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅまたは６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＮ５４Ａによる治療時の、経時的な腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
Ｉ．定義
本明細書では、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義される、ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免役グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークの配列は、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００３２】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、非共有性相互作用の合計の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的説明及び例示的な実施形態が、以下に記載される。
【００３３】
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ以上の変化を有し、かかる変化によって抗原に対する抗体の親和性を改善する、抗体を指す。
【００３４】
「抗ＣＬＬ−１抗体」及び「ＣＬＬ−１に結合する抗体」という用語は、抗体が、ＣＬＬ−１を標的とする際に診断剤及び／または治療剤として有用であるように、ＣＬＬ−１に十分な親和性で結合可能である抗体を指す。一実施形態において、無関係の非ＣＬＬ−１タンパク質に抗ＣＬＬ−１抗体が結合する程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定されるときに、ＣＬＬ−１への抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態において、ＣＬＬ−１に結合する抗体は、１μＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、５ｎｍ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、異なる種由来のＣＬＬ−１の間で保存されるＣＬＬ−１のエピトープに結合する。
【００３５】
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
【００３６】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、線状抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
「癌」及び「癌性」という用語は、細胞成長／増殖の未制御によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を指すか、または説明する。癌の例には、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性骨髄増殖性障害、血小板性白血病、前駆体Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ）、前駆体Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（ｐｒｅＴ−ＡＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、肥満細胞疾患、肥満細胞性白血病、肥満細胞肉腫、骨髄性肉腫、リンパ性白血病、及び未分化白血病が含まれる。いくつかの実施形態において、癌は、骨髄性白血病である。いくつかの実施形態において、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。
【００３８】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来し、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００３９】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要な抗体クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちの数個は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免役グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００４０】
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害するもしくは阻止する、かつ／または細胞死もしくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤もしくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）、成長阻害剤、核酸分解酵素等の酵素及びそれらの断片、抗生物質、細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または変異形を含む）等の毒素、ならびに以下に記載される種々の抗腫瘍または抗癌薬剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００４１】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００４２】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」は、所望の治療的または予防的結果を達成するために必要である、一定期間にわって投与する投薬量の有効な量を指す。
【００４３】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。いくつかの実施形態において、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位は、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される。
【００４４】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異形Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ付番方式に従う。
【００４５】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で出現する。
【００４６】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように互換的に使用される。
【００４７】
「ＣＬＬ−１のグリコシル化型」という用語は、炭水化物残基の付加によって翻訳後修飾されている、ＣＬＬ−１の自然発生型を指す。
【００４８】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫の核酸含量は親細胞と完全に同一でない場合があるが、突然変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
【００４９】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
【００５０】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免役グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位集団である。一実施形態において、ＶＬについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団ＩＩＩである。
【００５１】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、そのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、そのＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化型」は、ヒト化を経た抗体を指す。
【００５２】
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が高度に変化する、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般に、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、このうち３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ＨＶＲは一般に、超可変ループに由来するかつ／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が最も高く、及び／または抗原認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である、「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）。別途指定されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って付番される。
【００５３】
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むが、これらに限定されない１個以上の異種性分子（複数可）にコンジュゲートされる抗体である。
【００５４】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
【００５５】
「単離抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％超または９９％超の純度まで精製される。抗体の純度評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００５６】
「単離核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸には、核酸分子を通常含有する細胞内に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００５７】
「抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１個以上の核酸分子を指し、それには単一のベクターまたは別個のベクターにおけるかかる核酸分子（複数可）が含まれ、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
【００５８】
本明細書で使用される「ＣＬＬ−１」という用語は、細胞内のＣＬＬ−１前駆体タンパク質の処理からもたらされる任意の天然の成熟ＣＬＬ−１を指す。この用語には、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来のＣＬＬ−１が含まれる。この用語はまた、ＣＬＬ−１の自然発生変異形、例えば、スプライス変異形または対立遺伝子変異形を包含する。例示的なヒトＣＬＬ−１タンパク質配列のアミノ酸配列は、配列番号１に示される。いくつかの実施形態において、ヒトＣＬＬ−１タンパク質配列は、Ｋ２４４Ｑ  ＳＮＰ（配列番号１、式中、Ｋ２４４はＱである）を含む。例示的な細胞外ドメインのアミノ酸配列は、配列番号２のアミノ酸である。例示的なＣ型レクチン様ドメイン（ＣＴＬＤ）のアミノ酸配列は、配列番号３のアミノ酸である。例示的なカニクイザルＣＬＬ−１タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号４に示される。
【００５９】
「ＣＬＬ−１陽性癌」という用語は、その表面上でＣＬＬ−１を発現する細胞を含む癌を指す。いくつかの実施形態において、細胞表面上のＣＬＬ−１の発現は、例えば、免疫組織化学、ＦＡＣＳ等の方法においてＣＬＬ−１に対する抗体を使用して決定される。代替的に、ＣＬＬ−１  ｍＲＮＡ発現は、細胞表面上のＣＬＬ−１発現と相関すると考えられ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法によって決定され得る。
【００６０】
「ＣＬＬ−１陽性細胞」という用語は、その表面上でＣＬＬ−１を発現する細胞を指す。
【００６１】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、想定される変異形抗体は例外であり、かかる変異形は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載される。
【００６２】
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。
【００６３】
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然発生免役グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つに割り付けられ得る。
【００６４】
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、治療剤製品のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【００６５】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、配列同一性最大パーセントを得るのに必要な場合はギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の部分として考慮せずに、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内の種々の方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較されている配列の完全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするために適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書では、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述され、ソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９に提出されており、米国著作権番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であるか、またはソースコードから編集されてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するために編集すべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更されない。
【００６６】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が用いられる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比したある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、次のように算出される。
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％と等しくはならないことが理解されよう。特に別途定めのない限り、本明細書で使用される全てのアミノ酸配列同一性％値は、直前の段落に記載されるように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００６７】
「薬学的製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない調製物を指す。
【００６８】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
本明細書で使用されるとき、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形形態）は、治療されている個体の自然経過を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に行うことができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、病状の寛解または緩和、及緩解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅らせるか、または疾患の進行を減速させる。
【００７０】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学化合物を指す。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン、及びピポスルファン等のアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオオホスホルアミド、及びトリメチロメラミンを含む、エチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；β−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン：クロランブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン等のニトロソウレア；エネジイン抗生物質等の抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγ１Ｉ及びカリケアミシンωＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）参照）；ＣＤＰ３２３、経口α−４インテグリン阻害剤；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連色素タンパクエンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及��デオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗物質；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプリン、トリメトレキサート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）等の葉酸補給剤；アセグラトン；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフオルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタイシン及びアンサミトシン等のマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジン；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特にＴ−２トキシン、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ（ｒｏｒｉｄｉｎ  Ａ）、及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チ���テパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥＴＭ）、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６−チオグアニン；メルカトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン等の白金剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリン重合化の微小管形成を防止するビンカ；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む、レチノイン酸等のレチノイド；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））等のビスホスホネート；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞の増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）等；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン等のワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標），Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、生体沈殿阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））等のＢｃｌ−２阻害剤；ピキサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（下記の定義を参照）；チロシンキナーゼ阻害剤；ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））等のセリン−トレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファーニブ（ＳＣＨ  ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）等のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；及び上記のいずれかの薬学的に許容���れる塩、酸、または誘導体；ならびにシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの組み合わせ療法の略語であるＣＨＯＰ等の、上記の２つ以上の組み合わせ；ならびに５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮＴＭ）による治療レジメンの略語である、ＦＯＬＦＯＸが挙げられる。
【００７１】
本明細書に定義される化学療法剤は、「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」が含まれ、これは、癌の成長を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する。それらは、それら自体がホルモンであってもよく、限定されないが、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及びＳＥＲＭ３等の選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）を含む、混合アゴニスト／アンタゴニストプロフィールを有する抗エストロゲン剤；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））、及びＥＭ８００（かかる薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）の二量体化を遮断する、ＤＮＡ結合を阻害する、ＥＲターンオーバーを増加させる、かつ／またはＥＲレベルを抑制する場合がある）等のアゴニスト特性を有しない純粋な抗エストロゲン剤；アロマターゼ阻害剤（フォルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））等のステロイドアロマターゼ阻害剤を含む）、ならびにアナストラゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアミノグルテチミド等の非ステロイドアロマターゼ阻害剤が含まれ、また他のアロマターゼ阻害剤には、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾール；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、ならびにトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む、黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロン等のプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリン等のエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、全トランス型レチノイン酸、及びフェンレチニド等のアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗黄体ホルモン；エストロゲン受容体下方調節剤（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミド等の抗アンドロゲン；及び上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせが含まれる。
【００７２】
本明細書で使用される、補助療法に関する「免疫抑制剤」という用語は、本明細書で治療されている哺乳動物の免疫系を抑制またはマスクするように作用する物質を指す。これには、サイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方調節もしくは抑制する、またはＭＨＣ抗原をマスクする物質が含まれるであろう。かかる薬剤の例には、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号参照）；非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビル、タクロリムス、グルココルチコイド、例えば、コルチゾールもしくはアルドステロン等、抗炎症剤、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、またはロイコトリエン受容体アンタゴニスト等；アザチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）等のプリンアンタゴニスト；シクロホスファミド等のアルキル化剤；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（これは、米国特許第４，１２０，６４９号に記載される通り、ＭＨＣ抗原をマスクする）；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣ断片に関する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；コルチコステロイドまたはグルココルチコステロイドまたはグルココルチコイド類似体等のステロイド、例えば、プレドニゾン、ＳＯＬＵ−ＭＥＤＲＯＬ（登録商標）メチルプレドニゾロンナトリウムコハク酸塩を含むメチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン；メトトレキサート（経口または皮下）等のジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤；クロロキン及びヒドロキシクロロキン等の抗マラリア剤；スルファサラジン；レフルノミド；抗インターフェロン−α、−β、または−γ抗体、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α抗体（インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））またはアダリムマブ）、抗ＴＮＦ−α免疫接着体（エタネルセプト）、抗ＴＮＦ−β抗体、抗インターロイキン−２（ＩＬ−２）抗体及び抗ＩＬ−２受容体抗体、ならびに抗インターロイキン−６（ＩＬ−６）受容体抗体及びアンタゴニスト（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）（トシリズマブ）等）を含む、サイトカインまたはサイトカイン受容体抗体；抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体を含む抗ＬＦＡ−１抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含有する可溶性ペプチド（ＷＯ９０／０８１８７、１９９０年７月２６日公開）；ストレプトキナーゼ；形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；クロランブシル；デオキシスペルグアリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体断片（Ｏｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ９０／１１２９４；Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）；及びＷＯ９１／０１１３３）；ＢＡＦＦ抗体及びＢＲ３抗体及びｚＴＮＦ４アンタゴニスト等のＢＡＦＦアンタゴニスト（概説については、Ｍａｃｋａｙ  ａｎｄ  Ｍａｃｋａｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：１１３−５（２００２）を参照、また下記の定義も参照されたい）；ＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドに対するブロッキング抗体を含む、抗ＣＤ４０受容体または抗ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）等のＴ細胞ヘルパーシグナルと干渉する生物学的薬剤（例えば、Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６１：１３２８−３０（１９９３）；Ｍｏｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４：１４７０−８０（１９９５））及びＣＴＬＡ４−Ｉｇ（Ｆｉｎｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６５：１２２５−７（１９９４））；ならびにＴ１０Ｂ９等のＴ細胞受容体抗体（ＥＰ  ３４０、１０９）が挙げられる。本明細書のいくつかの好ましい免疫抑制剤には、シクロホスファミド、クロランブシル、アザチオプリン、レフルノミド、ＭＭＦ、またはメトトレキサートが挙げられる。
【００７３】
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１軸結合パートナーの、その結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用を阻害して、ＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全を取り除き、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞殺傷）を復元または強化するような結果をもたらす分子を指す。本明細書で使用されるとき、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれる。
【００７４】
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させる、ブロッキングする、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、その結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１の、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、免疫接着体、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用から得られるシグナル伝達を減少させる、ブロッキングする、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によって媒介されるか、またはそれを介した負の共刺激シグナルを低減し、ＰＤ−１を介するシグナル伝達を媒介して、機能不全Ｔ細胞をより機能不全性が低いものにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を強化する）。いくつかの実施形態において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）である。別の具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の具体的な態様において、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４である。
【００７５】
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１、Ｂ７−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させる、ブロッキングする、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１及び／またはＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、免疫接着体、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−Ｌ１の、ＰＤ−１、Ｂ７−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させる、ブロッキングする、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によって媒介されるか、またはそれを介した負の共刺激シグナルを低減し、ＰＤ−Ｌ１を介するシグナル伝達を媒介して、機能不全Ｔ細胞をより機能不全性が低いものにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を強化する）。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。さらに別の具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａである。さらに別の具体的な態様において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＥＤＩ４７３６である。
【００７６】
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２の、ＰＤ−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させる、ブロッキングする、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する分子を指す。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２の、その結合パートナーのうちの１つ以上への結合阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、免疫接着体、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−Ｌ２の、ＰＤ−１等のその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少させる、ブロッキングする、阻害する、無効化する、またはそれに干渉する他の分子が挙げられる。一実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によって媒介されるか、またはそれを介した負の共刺激シグナルを低減して、機能不全Ｔ細胞をより機能不全性が低いものにする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を強化する）。いくつかの実施形態において、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、免疫接着体である。
【００７７】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい。）抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、特定の抗原に結合する抗体を単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００７８】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖することが可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター及び導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を導くことが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００７９】
「アルキル」は、ノルマル、第二級、第三級、または環式炭素原子を含有するＣ１〜Ｃ１８炭化水素である。例として、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３がある。
【００８０】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分岐、飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニル、及び−ｎ−デシルが含まれるが、これらに限定されず、分岐Ｃ１〜Ｃ８アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ８アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１−ブチニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ８アルキル基は、非置換であり得るか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない１つ以上の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【００８１】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ１２アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分岐、飽和または不飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基は、非置換であり得るか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない１つ以上の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【００８２】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐、飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、及び−ｎ−ヘキシルが含まれるが、これらに限定されず、分岐Ｃ１〜Ｃ６アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、及び２−メチルブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ６アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、及び３−ヘキシルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ６アルキル基は、非置換であり得るか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基について上述されるように、１つ以上の基で置換され得る。
【００８３】
本明細書で使用される「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐、飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチルが含まれるが、これらに限定されず、分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１〜Ｃ４アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ１〜Ｃ４アルキル基は、非置換であり得るか、またはＣ１〜Ｃ８アルキル基について上述されるように、１つ以上の基で置換され得る。
【００８４】
「アルコキシ」は、酸素に単一結合されたアルキル基である。例示的なアルコキシ基としては、メトキシ（−ＯＣＨ３）及びエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が含まれるが、これらに限定されない。「Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ」は、１〜５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、非置換であり得るか、またはアルキル基について上述されるように、１つ以上の基で置換され得る。
【００８５】
「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有するノルマル、第二級、第三級、または環式炭素原子を含有するＣ２〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）、及び５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が含まれるが、これらに限定されない。「Ｃ２〜Ｃ８アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する２〜８個のノルマル、第二級、第三級、または環式炭素原子を含有する炭化水素である。
【００８６】
「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有するノルマル、第二級、第三級、または環式炭素原子を含有するＣ２〜Ｃ１８炭化水素である。例としては、アセチレン（−Ｃ≡ＣＨ）及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が含まれるが、これらに限定されない。「Ｃ２〜Ｃ８アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する２〜８個のノルマル、第二級、第三級、または環式炭素原子を含有する炭化水素である。
【００８７】
「アルキレン」は、１〜１８個の炭素原子の飽和、分岐もしくは直鎖、または環式炭化水素ラジカルを指し、親アルカンの同じ、または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる２つの一価ラジカル中心を有する。典型的なアルキレンラジカルとしては、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等が含まれるが、これらに限定されない。
【００８８】
「Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１〜１０−の直鎖飽和炭化水素基である。Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンの例には、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン（ｈｅｐｔｙｌｅｎｅ）、オクチレン、ノニレン、及びデカレン（ｄｅｃａｌｅｎｅ）が挙げられる。
【００８９】
「アルケニレン」は、２〜１８個の炭素原子の不飽和、分岐もしくは直鎖、または環式炭化水素ラジカルを指し、親アルケンの同じ、または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる２つの一価ラジカル中心を有する。典型的なアルケニレンラジカルとしては、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が含まれるが、これに限定されない。
【００９０】
「アルキニレン」は、２〜１８個の炭素原子の不飽和、分岐もしくは直鎖、または環式炭化水素ラジカルを指し、親アルキンの同じ、または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる２つの一価ラジカル中心を有する。典型的なアルキニレンラジカルとしては、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、及び４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９１】
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが含まれるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基または複素環式芳香族基は、非置換であり得るか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない１つ以上の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【００９２】
「Ｃ５〜Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜２０個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５〜Ｃ２０アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ５〜Ｃ２０アリール基は、アリール基について上述されるように置換され得るか、または非置換であり得る。「Ｃ５〜Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５〜Ｃ１４アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ５〜Ｃ１４アリール基は、アリール基について上述されるように置換され得るか、または非置換であり得る。
【００９３】
「アリーレン」は、２つの共有結合を有し、以下の構造に示されるように、オルト、メタ、またはパラ構成であり得るアリール基であり、
2020203901.tif 000008
式中、フェニル基は、非置換であり得るか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大４個の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【００９４】
「アリールアルキル」は、炭素原子に結合された水素原子のうちの１個、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子がアリールラジカルで置換される、非環式アルキルラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基としては、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエタン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イル等が含まれるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含むアルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、アリール部分は、５〜１４個の炭素原子である。
【００９５】
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子に結合された水素原子のうちの１個、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子がヘテロアリールラジカルで置換される、非環式アルキルラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチル等が含まれるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、またはアルキニル基を含むアルキル部分は、１〜６個の炭素原子である、ヘテロアリール部分が、５〜１４個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７環員（２〜６個の炭素原子）を有する単環、または７〜１０環員（４〜９個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。
【００９６】
「置換アルキル」、「置換アリール」、及び「置換アリールアルキル」は、それぞれアルキル、アリール、及びアリールアルキルを意味し、１つ以上の水素原子は、それぞれ独立して置換基で置換される。典型的な置換基としては、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ−３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が含まれるが、これらに限定されず、式中、各Ｘは独立して、ハロゲン、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり、各Ｒは独立して、−Ｈ、Ｃ２〜Ｃ１８アルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ３〜Ｃ１４複素環、保護基、またはプロドラッグ部分である。上述されるアルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン基もまた、同様に置換され得る。
【００９７】
「ヘテロアリール」及び「複素環」は、１個以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、及び硫黄である環系を指す。複素環ラジカルは、３〜２０個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。複素環は、３〜７環員（２〜６個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する単環、または７〜１０環員（４〜９個の炭素原子、ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系であり得る。
【００９８】
例示的な複素環は、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．，″Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ″（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）の特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章、及び第９章、″Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ″（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０〜現在）の特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、及び第２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載される。
【００９９】
例示的な複素環には、例として、ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、酸化硫黄テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサンチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソキゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソキサゾリル、オキシンドリル、ベンゾキサゾリニル、及びイサチノイルが含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
例えば、限定されないが、炭素結合した複素環は、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位で結合される。さらにより典型的には、炭素結合した複素環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルが挙げられる。
【０１０１】
例えば、限定されないが、窒素結合した複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾ−ルまたはβ−カルボリンの９位で結合される。さらにより典型的には、窒素結合した複素環としては、１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、及び１−ピペリジニルが挙げられる。
【０１０２】
「Ｃ３〜Ｃ８複素環」は、芳香族または非芳香族Ｃ３〜Ｃ８炭素環を指し、環炭素原子のうちの１〜４個が独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮからなる群からのヘテロ原子で置換される。Ｃ３〜Ｃ８複素環の代表例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、及びテトラゾリルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ３〜Ｃ８複素環は、非置換であり得るか、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大７個の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１０３】
「Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ」は、上で定義されるＣ３〜Ｃ８複素環基を指し、この複素環基の水素原子のうちの１個が結合で置換される。Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロは、非置換であり得るか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大６個の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１０４】
「Ｃ３〜Ｃ２０複素環」は、芳香族または非芳香族Ｃ３〜Ｃ８炭素環を指し、環炭素原子のうちの１〜４個が独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮからなる群からのヘテロ原子で置換される。Ｃ３〜Ｃ２０複素環は、非置換であり得るか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない最大７個の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１０５】
「Ｃ３〜Ｃ２０ヘテロシクロ」は、上で定義されるＣ３〜Ｃ２０複素環基を指し、この複素環基の水素原子のうちの１個が結合で置換される。
【０１０６】
「炭素環」は、単環として３〜７個の炭素原子、または二環として７〜１２個の炭素原子を有する飽和または不飽和環を意味する。単環式炭素環は、３〜６個の環原子、さらにより典型的には５または６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系として配列された７〜１２個の環原子、またはビシクロ［５，６］または［６，６］系として配列された９または１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペント−１−エニル、１−シクロペント−２−エニル、１−シクロペント−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキシ−１−エニル、１−シクロヘキシ−２−エニル、１−シクロヘキシ−３−エニル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。
【０１０７】
「Ｃ３〜Ｃ８炭素環」は、３員、４員、５員、６員、７員、または８員の飽和または不飽和非芳香族炭素環式環である。代表的なＣ３〜Ｃ８炭素環としては、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル、及び−シクロオクタジエニルが含まれるが、これらに限定されない。Ｃ３〜Ｃ８炭素環基は、非置換であり得るか、または−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮを含むが、これらに限定されない１つ以上の基で置換され得、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
【０１０８】
「Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ」は、上で定義されるＣ３〜Ｃ８炭素環基を指し、この炭素環基の水素原子のうちの１個が結合で置換される。
【０１０９】
「リンカー」は、共有結合、または抗体を薬物部分に共有結合させる原子の鎖を含む、化学部分を指す。様々な実施形態において、リンカーは、二価ラジカル、例えば、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル、−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）、及びアルキルアミン（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位、ならびにコハク酸塩、スクシンアミド、ジグリコール酸塩、マロン酸塩、及びカプロアミドを含む二酸エステル及びアミド等の部分を含む。様々な実施形態において、リンカーは、１つ以上のアミノ酸残基、例えば、バリン、フェニルアラニン、リシン、及びホモリシンを含み得る。
【０１１０】
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わせできない（ｎｏｎ−ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｉｌｉｔｙ）特性を有する分子を指し、一方で「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合わせできる（ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓａｂｉｌｉｔｙ）分子を指す。
【０１１１】
「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置に関して異なる、化合物を指す。
【０１１２】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル性の中心を有し、それらの分子が互いの鏡像でない、立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法及びクロマトグラフィー等の高分解能分析手順の下で分離されてもよい。
【０１１３】
「鏡像異性体」は、互いに重ね合わせできない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
【０１１４】
本明細書で使用される立体化学的な定義及び慣例は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ  （１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性形態で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表すように使用される。接頭辞ｄ及びｌまたは（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の徴候を表記するために用いられ、このうち（−）またはｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、鏡像異性体とも称され得、かかる異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、それらは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性が存在していない場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２つの鏡像異性体種の等モル混合物を指す。
【０１１５】
「脱離基」は、別の官能基によって置換され得る官能基を指す。ある特定の脱離基は、当該技術分野で周知であり、例としては、ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフル酸塩）、及びトリフルオロメチルスルホン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１６】
「保護基」という用語は、特定の官能性を、化合物上の他の官能基を反応させながら、ブロッキングするまたは保護するために一般的に用いられる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物中のアミノ官能性をブロッキングするまたは保護する、アミノ基に結合した置換基である。好適なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｅｎｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ｆｍｏｃ）が含まれるが、これらに限定されない。保護基の一般的な説明及びそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１、またはより新しい版を参照されたい。
【０１１７】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、部分的に、ＣＬＬ−１に結合する抗体及びかかる抗体を含む免疫複合体に基づく。本発明の抗体及び免疫複合体は、例えば、ＣＬＬ−１陽性癌の診断または治療に有用である。
【０１１８】
本発明は、抗ＣＬＬ−１抗体及び免疫複合体、ならびにそれらの使用方法を提供する。
【０１１９】
本明細書において、単離モノクローナル抗ＣＬＬ−１抗体であって、配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープ及び／または重複エピトープに結合し、かつ配列番号５０及び／または配列番号５１を含むエピトープには結合しない、抗体が提供される。いくつかの実施形態において、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号４９のアミノ酸からなるか、またはそれから本質的になるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、該エピトープは、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定される。いくつかの実施形態において、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定されるエピチオプは、約１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３．０超のうちのいずれかの、［抗原の速度定数］／［抗原と抗体複合体の速度定数］の比を有する。いくつかの実施形態において、ヒドロキシルラジカルフットプリント法によって決定されるエピチオプは、約２．０超の［抗原の速度定数］／［抗原と抗体複合体の速度定数］の比を有する。
【０１２０】
ヒドロキシルラジカルフットプリント法は、実施例に記載されるように実施され得る。例えば、試料は、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにおいて、Ｘ２８ｃ  Ｂｅａｍ  ｌｉｎｅを使用して０、１０、１５、及び２０ミリ秒（ｍｓ）の間隔でヒドロキシルラジカルに曝露される。標識された試料は、ＰＮＧａｓｅ  Ｆを使用して脱グリコシル化され得る。試料は、アセトン中でトリクロロ酢酸を使用して沈殿され、ＬＣ−ＭＳ分析が行われ得る。次に試料を、還元化してアルキル化し、トリプシンを使用して消化した後、液体クロマトグラフィーを高解像度質量分析（ＬＣ−ＭＳ）と併用して行うことができる。ＭＳデータは、ＰｒｏｔＭａｐＭＳを使用して分析されて、各ペプチドの用量応答プロットをもたらし得る。遊離抗原の結果が、複合体型の各々と比較され得る。Ｓｗｉｓｓ−Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して抗原の相同性ベースモデルが生成され得、３つの複合体の各々に関して溶媒保護領域がマッピングされ得る。選択イオンクロマトグラム（ＳＩＣ）が抽出され、（特定のｍ／ｚの）ペプチドイオンの未酸化形及び全ての酸化形に関して統合され得る。これらのピーク面積値は、用量応答（ＤＲ）プロットの形式で反応速度を特徴付けるために使用され得、それは、ヒドロキシルラジカル曝露の関数としてインタクトなペプチドの損失を測定する。複合体内の溶媒保護領域は、遊離抗原とは対照的に段階的な酸化反応を経て、酸化の速度の比（速度定数、ＲＣと呼ばれる）の差は、エピトープの場所をハイライトするように機能し得る。
【０１２１】
本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、組み換えヒトＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、組み換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、カニクイザルＰＢＭＣの表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＡＭＬ癌細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＨＬ−６０細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ＥＯＬ−１細胞の表面上の内因性ＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、Ｋ２４４Ｑ突然変異（Ｋ２４４Ｑを有する配列番号１）を含むＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、配列番号４９のアミノ酸を含むエピトープ及び／または重複エピトープに結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、配列番号５０及び／または配列番号５１を含むエピトープには結合しない。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、ヒトＣＬＬ−１結合に関してＲ＆Ｄシステムクローン６８７３１７抗体と競合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満のＫｄで内因性ヒトＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満のＫｄで組み換えヒトＣＬＬ−１に結合する。本抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、本抗体は、１０ｎＭ未満、７ｎＭ未満、５ｎＭ未満、または３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満のＫｄで組み換えカニクイザルＣＬＬ−１に結合する。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、抗体の特徴は、下記の実施例において本明細書に記載されるように決定される。
【０１２３】
抗体６Ｅ７及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。
【０１２４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。
【０１２５】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２６】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
【０１２７】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２８】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の突然変異のいずれかを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１２９】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３１、配列番号３３、及び／または配列番号３４のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。
【０１３０】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、配列番号３０及び／または配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３０及び／または配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３０及び／または配列番号３２内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３０及び／または配列番号３２内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３０及び／または配列番号３２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
【０１３１】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１３２】
一実施形態において、本抗体は、配列番号３１及び配列番号３０それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、本抗体は、配列番号３３及び配列番号３２それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、本抗体は、配列番号３４及び配列番号３３それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、本抗体は、配列番号４６及び配列番号３３それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、本抗体は、配列番号４８及び配列番号３３それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１３３】
さらなる態様において、本明細書において、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３４、配列番号４６、及び／または配列番号４８のＶＨ配列、ならびに配列番号３０及び／または配列番号３２のＶＬ配列をそれぞれ含む抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１３４】
本明細書において、図２Ａに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図２Ｂに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態において、本抗体は、図２Ａに示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、ならびにＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ、及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、図２Ｂに示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、ならびにＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ、及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１３５】
本発明のさらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１３６】
抗体２０Ｂ１及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。
【０１３７】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３８】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３９】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
【０１４０】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４１】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の突然変異のいずれかを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１４２】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１４３】
一実施形態において、本抗体は、配列番号３６及び配列番号３５それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１４４】
さらなる態様において、本明細書において、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号３６のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列をそれぞれ含む抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１４５】
本明細書において、図１Ａに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図１Ｂに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含む抗体が提供される。
【０１４６】
本発明のさらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１４７】
抗体２１Ｃ９及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。
【０１４８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１４９】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５０】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
【０１５１】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１５２】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の突然変異のいずれかを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１５３】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３８及び／または配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３８及び／または配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３８及び／または配列番号４０内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３８及び／または配列番号４０内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３８及び／または配列番号４０のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
【０１５４】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、配列番号３７及び／または配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３７及び／または配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＣＬＬ−１抗体は、ＣＬＬ−１に結合する能力を保持する。ある特定の実施形態において、合計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号３７及び／または配列番号３９内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、合計１〜５個のアミノ酸が、配列番号３７及び／または配列番号３９内で置換、挿入、及び／または欠失された。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。任意に、本抗ＣＬＬ−１抗体は、配列番号３７及び／または配列番号３９のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１、２、または３つのＨＶＲを含む。
【０１５５】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１５６】
一実施形態において、本抗体は、配列番号３８及び配列番号３７それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、本抗体は、配列番号４０及び配列番号３９それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１５７】
さらなる態様において、本明細書において、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号３８及び／または配列番号４０のＶＨ配列、ならびに配列番号３７及び／または配列番号３９のＶＬ配列をそれぞれ含む抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１５８】
本明細書において、図３Ａに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図３Ｂに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態において、本抗体は、図３Ａに示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、ならびにＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ、及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、図３Ｂに示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、ならびにＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ、及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１５９】
本発明のさらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１６０】
抗体２８Ｈ１２及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＣＬＬ−１抗体を提供する。
【０１６１】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、本抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６２】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６３】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
【０１６４】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６５】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、上記の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の突然変異のいずれかを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１６６】
別の態様において、抗ＣＬＬ−１抗体が提供され、該抗体は、上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
【０１６７】
一実施形態において、本抗体は、配列番号４２及び配列番号４１それぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１６８】
さらなる態様において、本明細書において、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号４２のＶＨ配列及び配列番号４１のＶＬ配列をそれぞれ含む抗ＣＬＬ−１抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１６９】
本明細書において、図１Ａに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ、及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインと、図１Ｂに示されるＫａｂａｔ付番に従うＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ、及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインと、を含む抗体が提供される。
【０１７０】
本発明のさらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗ＣＬＬ−１抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１７１】
さらなる態様において、上記の実施形態のいずれかによる抗ＣＬＬ−１抗体は、以下に記載される特長のうちのいずれかを、単独でまたは組み合わせて組み込むことができる。
【０１７２】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有し、任意に、１０−１３Ｍ以上である（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）。
【０１７３】
一実施形態において、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原と共に行われる、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、次のアッセイで説明されるように測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。Ｂｉｏｌ．アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）含有５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）で一晩コーティングし、その後、２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳにより、室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一貫する）。目的のＦａｂを次いで一晩インキュベートするが、確実に平衡に到達するように、インキュベーションはより長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。次いで溶液を除去し、プレートを、０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））含有ＰＢＳで８回洗浄する。プレートが乾燥したとき、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）γ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）により１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定する。
【０１７４】
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００、ＢＡＩＣＯＲＥ（登録商標）−Ｔ２００、またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラスモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔に述べると、供給業者の指示に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）により活性化する。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌまで（約０．２μＭ）希釈し、かつ／またはＨＢＳ−Ｐ（０．０１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２０）で希釈した後、５μｌ／分及び／または３０μｌ／分の流速で注入して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応の基をブロッキングする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。オン速度が、上記表面プラスモン共鳴アッセイによって、１０６  Ｍ−１  ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌キュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
【０１７５】
２．抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加した、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１７６】
ダイアボディは、二価性または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ（Ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）及びテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）もまた、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。
【０１７７】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部分、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部分を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
【０１７８】
抗体断片は、本明細書に記載される、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、及び組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、種々の技法によって作製することができる。
【０１７９】
３．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載される。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類に由来する可変領域）、及びヒト定常領域を含む。さらなる実施例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された、「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合断片が含まれる。
【０１８０】
ある特定の実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、かつＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。また、ヒト化抗体は任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元するまたは改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１８１】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、また例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植について説明する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」について説明する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」について説明する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）、及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチについて説明する）にさらに記載されている。
【０１８２】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「最良適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞株フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８３】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の種々の技法を使用して生成され得る。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載される。
【０１８４】
ヒト抗体は、免疫原を、抗原投与に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に投与することによって、調製されてもよい。かかる動物は典型的に、内因性免役グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、または動物の染色体中に無作為に組み込まれる、ヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免役グロブリン遺伝子座は一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。また、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について説明する）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術について説明する）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について説明する）、ならびに米国特許出願公開第２００７／００６１９００号（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術について説明する）も参照されたい。かかる動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾されてもよい。
【０１８５】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載される。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について説明する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて説明する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ（Ｔｒｉｏｍａ）技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９３７−２００５（２７）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，（２７）（３）：１８５−９１２００５にも記載される。
【０１８６】
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成されてもよい。かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わされてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、以下に記載される。
【０１８７】
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、コンビナトリアルライブラリを、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離されてもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、かかるライブラリを、所望の結合特性を保有する抗体についてスクリーニングするための、多様な方法が当該技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説され、またさらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載される。Ａｃａｄ．
【０１８８】
ある特定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、それを次いで、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的に、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてまたはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫された源のライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、広範な非自己抗原また自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、無作為配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつｉｎ  ｖｉｔｒｏで再配列を達成することによって、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリについて説明する特許公開には、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０１８９】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０１９０】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、ＣＬＬ−１に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、ＣＬＬ−１に対するものであり、他方は、ＣＤ３に対するものである。例えば、米国特許第５，８２１，３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ＣＬＬ−１の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬剤を、ＣＬＬ−１を発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原結合部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である（二重特異性抗体等）。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、１つの同一分子内の２つのエピトープに結合してもよい（分子内結合）。例えば、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、同一ＣＬＬ−１分子上の２つの異なるエピトープに結合してもよい。ある特定の実施形態において、多重特異性抗体が結合する２つの異なるエピトープは、通常、１つの単一特性抗体、例えば、従来の抗体等、または１つの免疫グロブリン単一可変ドメインによって同時に結合されないエピトープである。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、２つの別個の分子内に位置するエピトープに結合してもよい（分子間結合）。例えば、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、あるＣＬＬ−１分子上のあるエピトープに結合してもよく、多重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、異なるＣＬＬ−１分子上の別のエピトープに結合してもよく、それによって、２つの分子を架橋してもよい。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（二重特異性抗体等）の抗原結合ドメインは、２つのＶＨ／ＶＬユニットを含み、第１のＶＨ／ＶＬユニットは、第１のエピトープに結合し、第２のＶＨ／ＶＬユニットは、第２のエピトープに結合し、各ＶＨ／ＶＬユニットは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。かかる多重特異性抗体には、限定されないが、完全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、及び抗体断片（Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ及びトリアボディ、共有結合または非共有結合された抗体断片等）が含まれる。重鎖可変領域の少なくとも一部分及び／または軽鎖可変領域の少なくとも一部分をさらに含むＶＨ／ＶＬ単位は、「アーム」または「ヘミマー」または「半抗体」とも称され得る。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、第２のヘミマーと分子内ジスルフィド結合が形成されることを可能にするのに十分な重鎖可変領域の部分を含む。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、例えば、相補的ホール突然変異またはノブ突然変異を含む第２のヘミマーまたは半抗体とのヘテロ二量体化を可能にする、ノブ突然変異またはホール突然変異を含む。ノブ突然変異及びホール突然変異が、以下でさらに考察される。
【０１９３】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり得る。本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、１つの分子上の２つの異なるエピトープに結合可能であるか、または２つの異なる分子上のエピトープに結合可能である抗原結合ドメインを含む、多重特異性抗体を指す。本明細書において、二重特異性抗体はまた、「デュアル特異性（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）」を有するもの、または「デュアル特異性である（ｄｕａｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」とも称される場合がある。例示的な二重特異性抗体は、ＣＬＬ−１及び任意の他の抗原の両方に結合し得る。ある特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、ＣＬＬ−１に対するものであり、他方は、ＣＤ３に対するものである。例えば、米国特許第５，８２１，３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、同一ＣＬＬ−１分子の２つの異なるエピトープに結合し得る。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、２つの異なるＣＬＬ−１分子の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体をまた使用して、細胞傷害性薬剤を、ＣＬＬ−１を発現する細胞に限局させてもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０１９４】
多重特異性抗体の作製のための技法には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、ＷＯ２００９／０８９００４、ＵＳ２００９／０１８２１２７、ＵＳ２０１１／０２８７００９、Ｍａｒｖｉｎ  ａｎｄ  Ｚｈｕ，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９−６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．，２６：１−９を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される「ノブ・イン・ホール」または「ＫｎＨ」技術という用語は、突起（ノブ）を１つのポリペプチドに、かつ空洞（ホール）を他のポリペプチドに、それらが相互作用する界面で導入することによって、２つのポリペプチドをｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで一緒に対合することを導く技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合界面、ＣＬ：ＣＨ１界面、またはＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９、ＵＳ２００７／０１７８５５２、ＷＯ９６／０２７０１１、ＷＯ９８／０５０４３１、及びＺｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６：７８１−７８８を参照されたい）。いくつかの実施形態において、ＫｎＨは、多重特異性抗体の製造中に２つの異なる重鎖を一緒に対合させる。例えば、Ｆｃ領域内にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に結合された単一可変ドメインをさらに含み得るか、または同様のもしくは異なる軽鎖可変ドメインと対合する異なる重鎖可変ドメインをさらに含み得る。ＫｎＨ技術を使用して、２つの異なる受容体細胞外ドメインを一緒に、または異なる標的認識配列を含む（例えば、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、及び他のＦｃ融合を含む）、任意の他のポリペプチド配列を対合することもできる。
【０１９５】
本明細書で使用される「ノブ突然変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、突起（ノブ）をポリペプチドに導入する突然変異を指す。いくつかの実施形態において、他のポリペプチドには、ホール突然変異を有する。
【０１９６】
本明細書で使用される「ホール突然変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、空洞（ホール）をポリペプチドに導入する突然変異を指す。いくつかの実施形態において、他のポリペプチドは、ノブ突然変異を有する。
【０１９７】
簡単な非限定的論考が以下に提供される。
【０１９８】
「突起」は、第１のポリペプチドの界面からから突出し、したがってヘテロ多量体を安定化させるように、隣接した界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）における代償性空洞内に位置付け可能であり、それにより例えば、ホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成が有利になる、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。突起は、元の界面に存在し得るか、または合成的に（例えば、界面をコードする核酸を変更することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸は、突起をコードするように変更される。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面内の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸は、元のアミノ酸残基よりも大きい側鎖体積を有する少なくとも１つの「インポート」アミノ酸残基をコードする核酸で置換される。複数の元の残基及び対応するインポート残基が存在し得ることが理解されるであろう。様々なアミノ残基の側鎖体積は、例えば、ＵＳ２０１１／０２８７００９の表１に示される。「突起」を導入する突然変異は、「ノブ突然変異」と称され得る。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、突起の形成のためのインポート残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される、自然発生するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、インポート残基は、トリプトファンまたはチロシンである。いくつかの実施形態において、突起の形成のための元の残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニン、またはバリン等の小さい側鎖体積を有する。
【０２００】
「空洞」は、第２のポリペプチドの界面から陥没する少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指し、したがって、第１のポリペプチドの隣接界面上の対応する突起を収容する。空洞は、元の界面に存在し得るか、または合成的に（例えば、界面をコードする核酸を変更することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸は、空洞をコードするように変更される。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面内の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸は、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「インポート」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置換される。複数の元の残基及び対応するインポート残基が存在し得ることが理解されるであろう。いくつかの実施形態において、空洞の形成のためのインポート残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される、自然発生するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、インポート残基は、セリン、アラニン、またはトレオニンである。いくつかの実施形態において、空洞の形成のための元の残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファン等の大きい側鎖体積を有する。「空洞」を導入する突然変異は、「ホール突然変異」と称され得る。
【０２０１】
突起が空洞内で「位置付け可能」であることは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドそれぞれの界面上の突起及び空洞の空間位置、ならびに突起及び空洞のサイズが、界面における第１及び第２のポリペプチドの正常な会合を著しく妨害することなく突起が空洞内に位置し得るようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐ等の突起は、典型的に界面の軸から垂直に延出せず、好ましい構造を有せず、対応する空洞を有する突起のアラインメントは、場合によっては、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるもの等の３次元構造に基づいて、突起／空洞の対をモデル化することに依存する。これは、当該技術分野において広く許容される技法を使用して達成され得る。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含む。
【０２０４】
多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、ならびに例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体を調製することによって、作製されてもよい。
【０２０５】
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」または「二重可変（ｄｕａｌ−ｖａｒｉａｂｌｅ）ドメイン免疫グロブリン」（ＤＶＤ）を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１、及びＷｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７）を参照されたい）。本明細書における抗体または断片にはまた、ＣＬＬ−１及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｎｇ）Ｆａｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０２０６】
７．抗体変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異形は、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、またはペプチド合成によって、調製されてもよい。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／またはそこへの残基の挿入、及び／または抗体のアミノ酸配列内での残基の置換が含まれる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを作製して、最終構築物に到達することができるが、但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
【０２０７】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換型突然変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例となる置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、生成物が、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされてもよい。
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アミノ酸は、次の一般的な側鎖特性に従って分類されてもよい。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２０８】
非保存的置換には、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うことになる。
【０２０９】
置換型変異形の１つの種類は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１個以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる研究のために選択される、結果として生じる変異形（複数可）は、親抗体と比較して、ある特定の生物学的特性の修飾（例えば、改善）（例えば、改善された親和性の改善、低下した免疫原性）を有することになり、かつ／または親抗体のある特定の生物学的特性を実質的に保持することになる。例示的な置換型変異形は、例えば、本明細書に記載されるもの等のファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、好都合に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１個以上のＨＶＲ残基が突然変異させられ、変異形抗体がファージ上で提示されて、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２１０】
変化（例えば、置換）をＨＶＲにおいて行って、例えば、抗体親和性を改善してもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行われてもよく、結果として生じる変異形ＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、かつそこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載される。親和性成熟のいくつかの実施形態において、多様性が、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指定突然変異生成）のうちのいずれかによって、成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリが作成される。次いで、ライブラリは、所望の親和性を有する任意の抗体変異形を特定するために、スクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６個の残基）が無作為化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異生成またはモデリングを使用して、具体的に特定されてもよい。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、標的とされることが多い。
【０２１１】
ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、かかる変化が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変化（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われてもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側のものであってもよい。以上に提供される変異形ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態において、各ＨＶＲは、不変であるか、または１つ以下、２つ以下、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
【０２１２】
突然変異生成のための標的とされ得る、抗体の残基または領域の特定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載される、「アラニンスキャニング変異生成」と呼ばれるものである。この方法において、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）のうちのある残基または基が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の場所に導入されてもよい。代替的に、または追加的に、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定される。かかる接触残基及び隣接する残基は、置換の候補として標的とされるか、または排除されてもよい。変異形をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定してもよい。
【０２１３】
アミノ酸配列挿入には、１個の残基〜１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは多数のアミノ酸残基の配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｃｅ）挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型変異形には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端もしくはＣ末端への融合が含まれる。
【０２１４】
ｂ）グリコシル化変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体を、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化させる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作成されるか、または除去されるように、アミノ酸配列を変化させることによって、好都合に行われてもよい。
【０２１５】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物が変化し得る。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、一般にＮ−結合によって、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖類には、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の特性が改善された抗体変異形を作成するために行われてもよい。
【０２１６】
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的にまたは間接的に）結合されるフコースを欠いた炭水化物構造を有する、抗体変異形が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計と比較した、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を算出することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体での配列変異が小規模であることに起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置する場合がある。かかるフコシル化変異形では、ＡＤＣＣ機能が改善され得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異形に関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（Ａｄａｍｓら）（特に実施例１１））、及びα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０２１７】
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖類がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分されたオリゴ糖類を有する抗体変異形がさらに提供される。かかる抗体変異形では、フコシル化が低減され、かつ／またはＡＤＣＣ機能が改善され得る。かかる抗体変異形の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載される。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類において少なくとも１個のガラクトース残基を有する、抗体変異形もまた提供される。かかる抗体変異形では、ＣＤＣ機能が改善され得る。かかる抗体変異形は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載される。
【０２１８】
ｃ）Ｆｃ領域変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域変異形を生成してもよい。Ｆｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含んでもよい。
【０２１９】
ある特定の実施形態において、本発明は、いくつかのエフェクター機能を保有するが、全てのエフェクター機能は保有するわけではなく、それにより、ｉｎ  ｖｉｖｏの抗体の半減期が重要であるが、なおもある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等）が不必要であるかまたは有害である場合の適用に対する望ましい候補となる、抗体変異形を企図する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏの細胞傷害性アッセイを実行して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、抗体が確実に、ＦｃγＲ結合を欠く（よって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）がＦｃＲｎ結合能力を保持するように、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページ、表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載される。代替的に、非放射性アッセイ法が用いられてもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替的に、または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるもの等の動物モデルにおいて、評価されてもよい。また、Ｃ１ｑ結合アッセイをまた行って、抗体がＣ１ｑに結合不可能であり、したがってＣＤＣ活性を欠いていることを確認してもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １��３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、新生児Ｆｃ受容体へのＩｇＧ結合を増加させるために、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ部分に導入されてもよい。ある特定の実施形態において、本抗体は、ＥＵ付番に従う以下の３つの突然変異、すなわちＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ（「ＹＴＥ突然変異」を含む（米国特許第８，６９７，６５０号、Ｄａｌｌ′Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい）。ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体がその同族抗原に結合する能力に影響を及ぼさない。ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して３倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して２倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して４倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して少なくとも５倍増加させる。いくつかの実施形態において、ＹＴＥ突然変異は、抗体の血清半減期を、天然（すなわち、非ＹＴＥ突然変異体）抗体と比較して少なくとも１０倍増加させる。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたい。またＤａｌｌ′Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０２２１】
ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異体は、抗体の抗体依存的細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性を調節する手段を提供する。ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異体は、ヒト抗原を対象とするヒト化ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性を調節する手段を提供する。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたい。またＤａｌｌ′Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０２２２】
ある特定の実施形態において、ＹＴＥ突然変異体は、血清半減期、組織分布、及び抗体活性（例えば、ＩｇＧ抗体のＡＤＣＣ活性）の同時調節を可能にする。例えば、米国特許第８，６９７，６５０号を参照されたい。またＤａｌｌ′Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１（３３）：２３５１４−２３５２４（２００６）も参照されたい。
【０２２３】
エフェクター機能が低下した抗体には、ＥＵ付番に従うＦｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６、７３７、０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、ＥＵ付番に従うアラニンへの残基２６５及び２９７の置換（すなわち、ＥＵ付番に従うＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ）を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、ＥＵ付番に従うアミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる（米国特許第７，３３２，５８１号）。ある特定の実施形態において、Ｆｃ突然変異体は、以下の２つのアミノ酸置換、すなわちＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａを含む。ある特定の実施形態において、Ｆｃ突然変異体は、以下の２つのアミノ酸置換、すなわちＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａからなる。
【０２２４】
ある特定の実施形態において、野生型ヒトＦｃ領域の３２９位（ＥＵ付番）（Ｐ３２９）におけるプロリンは、グリシンもしくはアルギニン、またはＦｃのＰ３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｗ８７及びＷ１１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面内でプロリンサンドイッチを破壊するのに十分に大きいアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ  ４０６，２６７−２７３（２０  Ｊｕｌｙ  ２０００））。さらなる実施形態において、Ｆｃ変異形内の少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓであり、さらに別の実施形態において、該少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅである。これらは全て、ＥＵ付番に従うものである（米国特許第８，９６９，５２６号、参照によりその全体が組み込まれる）。
【０２２５】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＦｃ変異形を含み、このポリペプチドは、グリシンで置換されたヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＰ３２９を有し、Ｆｃ変異形は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、またはヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基は、ＥＵ付番に従って付番される（米国特許第８，９６９，５２６号、参照によりその全体が組み込まれる）。ある特定の実施形態において、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ（ＥＵ付番）置換を含むポリペプチドでは、野生型ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含むポリペプチドによりＡＤＣＣが少なくともその２０％に下方調節される場合、及び／またはＡＤＣＰが下方調節される場合は、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡに対する親和性の低下が示される（米国特許第８，９６９，５２６号、参照によりその全体が組み込まれる）。
【０２２６】
特定の実施形態において、野生型ヒトＦｃポリペプチドのＦｃ変異形を含むポリペプチドは、三重突然変異、ＥＵ付番（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）に従いＰｒｏ３２９、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ位にアミノ酸置換を含む（米国特許第８，９６９，５２６号、参照によりその全体が組み込まれる）。特定の実施形態において、ポリペプチドは、以下のアミノ酸置換、すなわち、ＥＵ付番に従いＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａを含む。
【０２２７】
ＦｃＲへ結合が改善されたまたは減少したある特定の抗体変異形が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２号、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい。）
【０２２８】
ある特定の実施形態において、抗体変異形は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／または３３４位（ＥＵ付番）における置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の改変（改善または減少のいずれか）をもたらす改変が、Ｆｃ領域においてなされる。
【０２３０】
母体ＩｇＧの胎児への移入に関与する、半減期が増加しかつ新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載される。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異形には、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、ＥＵ付番に従うＦｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７、３７１、８２６号）を有するものが含まれる。また、Ｆｃ領域変異形の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０２３１】
ｄ）システイン操作された抗体変異形
ある特定の実施形態において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換された残基は、抗体の採取可能な部位で発生する。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基は、抗体の利用可能な部位に位置付けられ、それを使用して、抗体を、薬物部分またはリンカー−薬物中間体等の他の部分にコンジュゲートして、本明細書にさらに記載される、免疫複合体を作成してもよい。ある特定の実施形態において、次の残基、すなわち軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１４０（ＥＵ付番）、重鎖のＬ１７４（ＥＵ付番）、重鎖のＹ３７３（ＥＵ付番）、軽鎖のＫ１４９（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）のうちの任意の１個以上が、システインで置換されてもよい。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１４０Ｃ（ＥＵ付番）システイン置換を含む。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＬＣ−Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔ付番）システイン置換を含む。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、ＨＣ−Ａ１１８Ｃ（ＥＵ付番）システイン置換を含む。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成されてもよい。
【０２３２】
ある特定の実施形態において、本抗体は、以下の重鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2020203901.tif 000010
【０２３３】
ある特定の実施形態において、抗体は、以下の軽鎖システイン置換のうちの１つを含む。
2020203901.tif 000011
【０２３４】
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、かつ容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐していても非分岐であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は、様々であってもよく、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善対象の抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法において使用されるかどうか等を含むが、これらに限定されない考慮に基づいて決定することができる。
【０２３５】
別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態において、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１１６００−１１６０５（２００５））である。Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞を害さないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅させる温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。
【０２３６】
Ｂ．組み換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組み換え法及び組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態において、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体の作製方法が提供され、本方法は、上記抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
【０２３７】
抗ＣＬＬ−１抗体の組み換え産生のために、例えば、上述のもの等の、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離されて配列決定され得る。
【０２３８】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生されてもよい。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、大腸菌における抗体断片の発現について説明するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離されてもよく、またさらに精製されてもよい。
【０２３９】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、それによって部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０２４０】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０２４１】
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について説明している）を参照されたい。
【０２４２】
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝癌細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ  ５細胞、及びＦＳ４細胞がある。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０２４３】
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体は、それらの物理／化学特性及び／または生物活性について、当該技術分野で既知の種々のアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けられてもよい。
【０２４４】
一態様において、本発明の抗体は、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、またはウェスタンブロット等の既知の方法によって試験される。
【０２４５】
別の態様において、競合アッセイを使用して、ＣＬＬ−１への結合について本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定してもよい。ある特定の実施形態において、かかる競合抗体は、本明細書に記載される抗体によって結合される、同じエピトープ（例えば、直線状または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
【０２４６】
例示的な競合アッセイにおいて、固定化されたＣＬＬ−１は、ＣＬＬ−１に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）、及びＣＬＬ−１への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＣＬＬ−１が、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＣＬＬ−１への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体が除去され、固定化されたＣＬＬ−１に関連する標識の量が測定される。固定化されたＣＬＬ−１に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＣＬＬ−１への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２４７】
Ｄ．免疫複合体
本発明はまた、化学療法剤もしくは化学療法薬、成長阻害性薬剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性物質複合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））等の、１つ以上の細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされる、本明細書における抗ＣＬＬ−１抗体を含む免疫複合体も提供する。
【０２４８】
免疫複合体によって、腫瘍への薬物部分の送達を標的とすることが可能となり、いくつかの実施形態においては、コンジュゲートされていない薬物を全身投与することにより、正常な細胞にとって許容できないもレベルの毒性がもたされ得る場合に、その中の細胞内蓄積が可能となる（Ｐｏｌａｋｉｓ  Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５：３８２−３８７）。
【０２４９】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、強力な細胞傷害性薬物の標的を抗原発現腫瘍細胞にして（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ９：９８２−１００４）、それによって、有効性を最大化してオフターゲット毒性を最小化することにより治療指数を増強することで、抗体及び細胞傷害性薬物の両方の特性を併せ持つ標的化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｅｎｔｅｒ  Ｐ．Ｄ．（２００８）Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９、Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８−１０７。
【０２５０】
本発明のＡＤＣ化合物には、抗癌活性を有するものが含まれる。いくつかの実施形態において、ＡＤＣ化合物には、薬物部分にコンジュゲートされた、すなわち、共有結合された抗体が含まれる。いくつかの実施形態において、本抗体は、リンカーによって薬物部分に共有結合される。本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、有効用量の薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性、すなわちより低い効果的用量が、達成され得る。
【０２５１】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞傷害性効果または細胞静止効果を有する任意の化合物、部分、または基を含んでもよい。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合またはインターカレーション、ならびにＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成、及び／またはトポイソメラーゼの阻害を含むが、これらに限定されない機序によって、それらの細胞傷害性効果及び細胞静止効果を付与し得る。例示的な薬物部分には、マイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン及びその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、ならびに細胞傷害活性を有するそれらの立体異性体、イソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅｓ）、類似体、及び誘導体が含まれるが、これらに限定されない。かかる免疫複合体の非限定的な例が、以下でさらに詳細に考察される。
【０２５２】
１．例示的な抗体−薬物複合体
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物の例示的な実施形態は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、及びＡｂをＤに結合させるリンカー部分（Ｌ）を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、リジン及び／またはシステイン等の１個以上のアミノ酸残基によって、リンカー部分（Ｌ）に結合される。
【０２５３】
例示的なＡＤＣは、式Ｉ：
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐＩ
を有し、式中、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、抗体にコンジュゲートされ得る薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって限定される。いくつかの実施形態において、遊離システイン残基は、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。式Ｉの例示的なＡＤＣには、１、２、３、または４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が含まれるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３−１３８）。いくつかの実施形態において、１個以上の遊離システイン残基が、操作を使用することなく、抗体においてすでに存在しており、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物にコンジュゲートしてもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、１個以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体のコンジュゲート前に還元条件に曝露される。
【０２５４】
ａ）例示的なリンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１個以上の薬物部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結させて、式Ｉの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を形成させるために使用することができる、二機能性または多機能性部分である。いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、薬物に及び抗体に共有結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して調製することができる。例えば、いくつかの実施形態において、抗体の（Ａｂ）システインチオールは、リンカーの反応性官能基または薬物−リンカー中間体との結合を形成して、ＡＤＣを作製することができる。
【０２５５】
一態様において、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成することが可能である官能性を有する。かかる反応性官能基の非限定的な例には、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、コハク酸イミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル等の活性化エステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアン酸塩、及びイソチオシアン酸塩が含まれる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ  ａｌ（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １５（４）：７６５−７７３の７６６ページにおけるコンジュゲート方法、及びその中の実施例を参照されたい。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することが可能である官能性を有する。かかる求電子基の例には、アルデヒド基及びケトンカルボニル基が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子が、抗体上の求電子基と反応して抗体単位との共有結合を形成することができる。かかる反応性官能基の非限定的な例には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、及びアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。
【０２５７】
リンカーは、１つ以上のリンカー構成要素を含んでもよい。例示的なリンカー構成要素には、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−コハク酸イミジル４−（４−ピリジルチオ）ペンタン酸塩（「ＳＰＰ」）、及び２−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボン酸塩（「ＭＣＣ」）が含まれる。種々のリンカー構成要素が当該技術分野で知られており、このうちのいくつかが以下に記載される。
【０２５８】
リンカーは、薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。切断可能なリンカーの非限定的な例には、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）、米国公開特許第５２０８０２０号）が含まれる。
【０２５９】
ある特定の実施形態において、リンカーは、次の式ＩＩ：
2020203901.tif 000012
を有し、式中、Ａは、「ストレッチャー（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）単位」であり、ａは、０〜１の整数であり、Ｗは、「アミノ酸単位」であり、ｗは、０〜１２の整数であり、Ｙは「スペーサ単位」であり、ｙは、０、０、または２であり、Ａｂ、Ｄ、及びｐは上記式Ｉで定義されるものである。かかるリンカーの例示的な実施形態は、米国特許第７，４９８，２９８号に記載され、それは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、抗体を別のリンカー構成要素にまたは薬物部分に連結させる「ストレッチャー単位」を含む。ストレッチャー単位の比限定的な例が以下に示される（ここで波線は、抗体、薬物、または追加のリンカー構成要素への共有結合の部位を示す）。
2020203901.tif 000013
【０２６１】
いくつかの実施形態において、リンカーは、ＷＯ２０１５／０９５２２７、ＷＯ２０１５／０９５１２４、またはＷＯ２０１５／０９５２２３に記載されるもの等のペプチド模倣体リンカーであってもよく、これらの文書は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、「アミノ酸単位」を含む。いくつかのかかる実施形態において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによって、リソソーム酵素等の細胞内プロテアーゼへの曝露時に免疫複合体から薬物が容易に放出される（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４）。例示的なアミノ酸単位には、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドが含まれるが、これらに限定されない。例示的なジペプチドには、バリン−シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋまたはｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、及びＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が含まれるが、これらに限定されない。例示的なトリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれるが、これらに限定されない。アミノ酸単位は、自然発生アミノ酸残基、及び／または微量アミノ酸、及び／またはシトルリン等の非自然発生アミノ酸類似体を含んでもよい。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、及びＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断のために設計して最適化することができる。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、リンカー構成要素は、直接、またはストレッチャー単位及び／もしくはアミノ酸単位によって、抗体を薬物部分に連結する、「スペーサ」単位を含む。スペーサ単位は、「自己犠牲型（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」または「非自己犠牲型」であり得る。「非自己犠牲型」スペーサ単位は、ＡＤＣの切断時にスペーサ単位の一部または全てが薬物部分に結合した状態に保持されているものである。非自己犠牲型スペーサ単位の例としては、グリシンスペーサ単位及びグリシン−グリシンスペーサ単位が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞関連プロテアーゼによる、グリシン−グリシンスペーサ単位を含有するＡＤＣの酵素的切断によって、ＡＤＣの残りの部分からグリシン−グリシン−薬物部分が放出する。いくつかのかかる実施形態において、グリシン−グリシン−薬物部分に対して、腫瘍細胞内で加水分解ステップを行い、その結果グリシン−グリシンスペーサ単位を薬物部分から切断する。
【０２６４】
「自己犠牲型」スペーサ単位は、薬物部分の放出を可能にする。ある特定の実施形態において、リンカーのスペーサ単位は、ｐ−アミノベンジル単位を含む。いくつかのかかる実施形態において、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合によってアミノ酸単位に結合し、カルバミン酸塩、メチルカルバミン酸塩、または炭酸塩が、ベンジルアルコールと薬物との間に作製される（Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００５）１５：１０８７−１１０３）。いくつかの実施形態において、スペーサ単位は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。いくつかの実施形態において、自己犠牲型リンカーを含むＡＤＣは、構造：
2020203901.tif 000014
を有し、式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ、または−シアノであり、ｍは、０〜４範囲の整数であり、ｐは、１〜約２０の範囲である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４の範囲である。
【０２６５】
自己犠牲型スペーサの他の例としては、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体等の、ＰＡＢ基と電子的に同様である芳香族化合物（米国特許第７，３７５，０７８号、Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）及びオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、置換及び非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ  ｅｔ  ａｌ（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、ならびに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）等の、アミド結合加水分解時に環化を経るスペーサを使用することができる。グリシン残基のα−炭素への薬物の結合は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自己犠牲型スペーサの別の例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、リンカーＬは、分岐する多機能性リンカー部分を介して１超の薬物部分が抗体に共有結合するめの樹状型リンカーであり得る（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２２１３−２２１５、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７６１−１７６８）。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関連する、薬物対抗体のモル比、すなわち、負荷を増加させることができる。したがって、抗体が１個のみの反応性システインチオール基を有する場合、多数の薬物部分が、樹状リンカーを介して結合され得る。
【０２６７】
リンカーの非限定的な例は、式ＩのＡＤＣの関連において以下に示される：
2020203901.tif 000015
【０２６８】
ＡＤＣのさらなる非限定的例には、次の構造：
2020203901.tif 000016
（式中、Ｘは、
2020203901.tif 000017
であり、Ｙは、
2020203901.tif 000018
各Ｒは独立して、ＨまたはＣ１-〜Ｃ６アルキルであり、ｎは、６〜１２である）が含まれる。
【０２６９】
典型的に、ペプチド型リンカーは、２つ以上のアミノ酸及び／またはペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌｕｂｋｅ（１９６５）″Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ  ７６−１３６，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、リンカーは、溶解性及び／または反応性を調節する基で置換される。非限定的な例として、スルホン酸塩（−ＳＯ３−）またはアンモニウム等の荷電置換基は、リンカー試薬の水溶性を増加させ、抗体及び／もしくは薬物部分とのリンカー試薬のカップリング反応を促進し得るか、またはＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、ＤとのＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）とのカップリング反応、もしくはＡｂとのＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）とのカップリング反応を促進し得る。いくつかの実施形態において、リンカーの一部分が抗体にカップリングされ、リンカーの一部分が薬物にカップリングされ、次いでＡｂ−（リンカー部分）ａが薬物−（リンカー部分）ｂにカップリングされて、式ＩのＡＤＣが形成される。いくつかのかかる実施形態において、本抗体は、１つを超える薬物が式ＩのＡＤＣにおいて抗体にカップリングされるように、１つを超える（リンカー部分）ａ置換基を含む。
【０２７１】
本発明の化合物は、次のリンカー試薬、すなわちビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）コハク酸イミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］コハク酸イミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、コハク酸イミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロン酸塩）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、コハク酸イミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸塩（ＳＢＡＰ）、コハク酸イミジルヨード酢酸塩（ＳＩＡ）、コハク酸イミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、Ｎ−コハク酸イミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、Ｎ−コハク酸イミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸塩（ＳＰＰ）、コハク酸イミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、コハク酸イミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸塩（ＳＭＰＢ）、コハク酸イミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサン酸塩］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにコハク酸イミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩（ＳＶＳＢ）で、また次のビス−マレイミド試薬、すなわちジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（以下に示される）、及びＢＭ（ＰＥＧ）３（以下に示される）、イミドエステルの二機能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムンゾイル等）−エチレンジアミン）、ジイソシアン酸塩（トルエン２，６−ジイソシアン酸塩等）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）で調製されるＡＤＣを明示的に企図するが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ビス−マレイミド試薬は、抗体内のシステインのチオール基の、チオール含有薬物部分、リンカー、またはリンカー−薬物中間体への結合を可能にする。チオール基と反応性である他の官能基には、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアン酸塩、及びイソチオシアン酸塩が含まれるが、これらに限定されない。
2020203901.tif 000019
【０２７２】
ある特定の有用なリンカー試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）等の、種々の商業的供給源から得るか、または当該技術分野において、例えば、Ｔｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ  ６７：１８６６−１８７２、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０、Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：５３５２−５３５５、Ｆｒｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６、ＵＳ６２１４３４５、ＷＯ０２／０８８１７２、ＵＳ２００３１３０１８９、ＵＳ２００３０９６７４３、ＷＯ０３／０２６５７７、ＷＯ０３／０４３５８３、及びＷＯ０４／０３２８２８に記載される手順に従って合成することができる。
【０２７３】
炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体にコンジュゲートさせるための、例示的なキレート剤である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。
【０２７４】
ｂ）例示的な薬物部分
（１）マイタイシン及びマイタンシノイド
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、１つ以上のマイタンシノイド分子にコンジュゲートされた抗体を含む。マイタンシノイドは、マイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合化を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。マイタンシンは、東アフリカ低木メイテナス・セラタ（ｅａｓｔ  Ａｆｒｉｃａｎ  ｓｈｒｕｂ  Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。その後、ある特定のマイクローブもまた、マイタンシノール及びＣ−３マイタンシノールエステル等のマイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成マイタンシノイドは、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号、同第４，２４８，８７０号、同第４，２５６，７４６号、同第４，２６０，６０８号、同第４，２６５，８１４号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３０８，２６８号、同第４，３０８，２６９号、同第４，３０９，４２８号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３１７，８２１号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４２４，２１９号、同第４，４５０，２５４号、同第４，３６２，６６３号、及び同第４，３７１，５３３号に開示されている。
【０２７５】
マイタンシノイド薬物部分は、（ｉ）発酵または化学修飾または発酵生成物の誘導体化による調製に比較的利用しやすく、（ｉｉ）非ジスルフィドリンカーによる抗体へのコンジュゲートに好適な官能基との誘導体化に適しており、（ｉｉｉ）血漿中で安定しており、かつ（ｉｖ）様々な腫瘍細胞株に対して有効であるため、抗体−薬物複合体中の魅力的な薬物部分である。
【０２７６】
マイタンシノイド薬物部分としての使用に好適なある特定のマイタンシノイドは、当該技術分野において既知であり、既知の方法に従って天然源から単離され得るか、または遺伝子操作技法を使用して産生され得る（例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ（２００２）ＰＮＡＳ  ９９：７９６８−７９７３を参照されたい）。マイタンシノイドは、既知の方法に従って合成的に調製されてもよい。
【０２７７】
例示的なマイタンシノイド薬物部分としては、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサマイトシンＰ２の水素化リチウムアルミニウム還元によって調製されるもの）、Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号及び同第４３０７０１６号）（例えば、ストレプトミセスもしくはアクチノミセスを使用する脱メチル化、またはＬＡＨを使用する脱塩素化によって調製されるもの）、及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）（例えば、塩化アシルを使用するアシル化によって調製されるもの）等の修飾された芳香族環を有するもの、ならびに芳香族環の他の位置に修飾を有するものが含まれるが、これらに限定されない。
【０２７８】
例示的なマイタンシノイド薬物部分としてはまた、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９）（例えば、マイタンシノールと、Ｈ２ＳもしくはＰ２Ｓ５との反応によって調製されるもの）、Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）、Ｃ−１４−ヒドロキシメチルもしくはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨもしくはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）から調製されるもの）、Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトミセスによるマイタンシノールの変換によって調製されるもの）、Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号及び同第４３１５９２９号）（例えば、トレウィア・ヌドロフローラ（Ｔｒｅｗｉａ  ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離されるもの）、Ｃ−１８−Ｎ−ジメチル（米国特許第４３６２６６３号及び同第４３２２３４８号）（例えば、ストレプトミセスによるマイタンシノールの脱メチル化によって調製されるもの）、ならびに４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（例えば、マイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製されるもの）等の修飾を有するものが挙げられる。
【０２７９】
マイタンシノイド化合物上の多くの位置は、結合位置として有用である。例えば、エステル結合は、従来のカップリング技法を使用するヒドロキシル基との反応によって形成され得る。いくつかの実施形態において、この反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位で起こり得る。いくつかの実施形態において、結合は、マイタンシノールまたはマイタンシノール類似体のＣ−３位で形成される。
【０２８０】
マイタンシノイド薬物部分としては、構造：
2020203901.tif 000020
を有するものが挙げられ、式中、波線は、マイタンシノイド薬物部分の硫黄原子がＡＤＣのリンカーに対する共有結合を示す。各Ｒは独立して、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり得る。アミド基を硫黄原子に結合させるアルキレン鎖は、メタニル、エタニル、またはプロピルであり得、すなわち、ｍは、１、２、または３である（ＵＳ６３３４１０、ＵＳ５２０８０２０、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３）。
【０２８１】
マイタンシノイド薬物部分の全ての立体異性体は、本発明のＡＤＣ、すなわち、キラル炭素におけるＲ及びＳ構成の任意の組み合わせに対して企図される（ＵＳ７２７６４９７、ＵＳ６９１３７４８、ＵＳ６４４１１６３、ＵＳ６３３４１０（ＲＥ３９１５１）、ＵＳ５２０８０２０、Ｗｉｄｄｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９：４３９２−４４０８、これは参照により全体が組み込まれる）。いくつかの実施形態において、マイタンシノイド薬物部分は、以下の立体化学を有する。
2020203901.tif 000021
【０２８２】
マイタンシノイド薬物部分の例示的な実施形態としては、構造：
2020203901.tif 000022
を有するＤＭ１、ＤＭ３、及びＤＭ４が含まれるが、これらに限定されず、式中、波線は、薬物の硫黄原子の、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
【０２８３】
他の例示的なマイタンシノイド抗体−薬物複合体は、以下の構造及び省略形を有する（式中、Ａｂは抗体であり、ｐは１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｐは１〜１０であるか、ｐは１〜７であるか、ｐは１〜５であるか、またはｐは１〜４である）。
2020203901.tif 000023
【０２８４】
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを介して抗体のチオール基に結合される例示的な抗体−薬物複合体は、構造及び省略形：
2020203901.tif 000024
を有し、式中、Ａｂは抗体であり、ｎは０、１、または２であり、ｐは１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｐは１〜１０であるか、ｐは１〜７であるか、ｐは１〜５であるか、またはｐは１〜４である。
【０２８５】
マイタンシノイドを含有する免疫複合体、その作製方法、及びそれらの治療的使用は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号及び同第５，４１６，０６４号、ＵＳ２００５／０２７６８１２Ａ１、ならびに欧州特許第ＥＰ０４２５２３５Ｂ１号に開示され、それらの開示は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）、及びＣｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）も参照されたい。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、抗体−マイタンシノイド複合体は、抗体またはマイタンシノイド分子のいずれかの生物活性を著しく減少させることなく、抗体をマイタンシノイド分子に化学的に結合させることによって調製されてもよい。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい（その開示は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、抗体分子１個当たり平均３〜４個のマイタンシノイド分子がコンジュゲートされたＡＤＣは、抗体の機能または可溶性に悪影響を及ぼすことなく、標的細胞の細胞傷害性を増強することにおいて有効性を示した。場合によっては、毒素／抗体の１つの分子でさえも、裸の抗体を使用するより細胞傷害性を増強することが予想される。
【０２８７】
抗体−マイタンシノイド複合体を作製するための例示的な結合基としては、例えば、本明細書に記載されるもの、及び米国特許第５２０８０２０号、欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）、ＵＳ２００５／０２７６８１２Ａ１、及びＵＳ２００５／０１６９９３Ａ１に開示されるものが挙げられ、それらの開示は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０２８８】
（２）オーリスタチン及びドラスタチン
薬物部分は、ドラスタチン、オーリスタチン、ならびにそれらの類似体及び誘導体を含む（ＵＳ５６３５４８３、ＵＳ５７８０５８８、ＵＳ５７６７２３７、ＵＳ６１２４４３１）。オーリスタチンは、海生軟体動物化合物ドラスタチン−１０の誘導体である。いかなる特定の理論によっても拘束されることを意図しないが、ドラスタチン及びオーリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解、ならびに核分裂及び細胞分裂を干渉し（Ｗｏｙｋｅ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗癌活性（米国特許第５６６３１４９）及び抗菌活性（Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５）を有する。ドラスタチン／オーリスタチン薬物部分は、ペプチド薬物部分のＮ（アミノ）末端またはＣ（カルボキシル）末端を介して抗体に結合され得る（ＷＯ０２／０８８１７２、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１（７）：７７８−７８４、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０２（４）：１４５８−１４６５）。
【０２８９】
例示的なオーリスタチン実施形態としては、ＵＳ７４９８２９８及びＵＳ７６５９２４１に開示されるＮ末端結合されたモノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦが挙げられ、それらの開示は、参照にその全体が明示的に組み込まれ、
2020203901.tif 000025
式中、ＤＥ及びＤＦの破線は、抗体または抗体−リンカー成分への共有結合部位を示し、独立して各位置において、
Ｒ２が、Ｈ及びＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ３が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環、及びＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ４が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環、及びＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ５が、Ｈ及びメチルから選択されるか、
またはＲ４及びＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、式中、Ｒａ及びＲｂが独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びＣ３〜Ｃ８炭素環から選択され、ｎが、２、３、４、５、及び６から選択され、
Ｒ６が、Ｈ及びＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ７が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環、及びＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され、
各Ｒ８が独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、及びＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）から選択され、
Ｒ９が、Ｈ及びＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ１０が、アリールまたはＣ３〜Ｃ８複素環から選択され、
Ｚが、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、式中、Ｒ１２が、Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１１が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３〜Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、または−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され、
ｍが、１〜１０００の範囲の整数であり、
Ｒ１３が、Ｃ２〜Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１４が、ＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり、
それぞれ存在するＲ１５が独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、または−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり、
それぞれ存在するＲ１６が独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１８が、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）、及び−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）から選択され、
ｎが、０〜６の範囲の整数である。
【０２９０】
一実施形態において、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ７は独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は、−Ｈまたはメチルである。例示的な実施形態において、Ｒ３及びＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ５は、−Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルである。
【０２９１】
さらに別の実施形態において、Ｒ２及びＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ９は、−Ｈである。
【０２９２】
さらに別の実施形態において、それぞれ存在するＲ８は、−ＯＣＨ３である。
【０２９３】
例示的な実施形態において、Ｒ３及びＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ２及びＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ５は、−Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ−ブチルであり、それぞれ存在するＲ８は、−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は、−Ｈである。
【０２９４】
一実施形態において、Ｚは、−Ｏ−または−ＮＨ−である。
【０２９５】
一実施形態において、Ｒ１０は、アリールである。
【０２９６】
例示的な実施形態において、Ｒ１０は、−フェニルである。
【０２９７】
例示的な実施形態において、Ｚが−Ｏ−である場合、Ｒ１１は、−Ｈ、メチル、またはｔ−ブチルである。
【０２９８】
一実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５が、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６が、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
【０２９９】
別の実施形態において、Ｚが−ＮＨである場合、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
【０３００】
式ＤＥの例示的なオーリスタチン実施形態は、ＭＭＡＥであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
2020203901.tif 000026
【０３０１】
式ＤＦの例示的なオーリスタチン実施形態は、ＭＭＡＦであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
2020203901.tif 000027
【０３０２】
他の例示的な実施形態としては、ペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（ＷＯ２００７／００８８４８）及びペンタペプチド薬物部分のＣ末端にフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（ＷＯ２００７／００８６０３号）が挙げられる。
【０３０３】
ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦ及び様々なリンカー成分を含む式ＩのＡＤＣの実施形態の非限定的な例には、以下の構造及び省略形を有する（式中、「Ａｂ」は、抗体であり、ｐは、１〜約８であり、「Ｖａｌ−Ｃｉｔ」は、バリン−シトルリンジペプチドであり、「Ｓ」は、硫黄原子である。
2020203901.tif 000028
【０３０４】
ＭＭＡＦ及び様々なリンカー成分を含む式ＩのＡＤＣの実施形態の非限定的な例としては、さらにＡｂ−ＭＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びＡｂ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦが挙げられる。タンパク質分解的に切断可能でないリンカーによって抗体に結合されたＭＭＡＦを含む免疫複合体は、タンパク質的に切断可能なリンカーによって抗体に結合されたＭＭＡＦを含む免疫複合体に相当する活性を有することが示された（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４）。いくつかのかかる実施形態において、薬物放出は、細胞内の抗体分解によって引き起こされると考えられる。
【０３０５】
典型的に、ペプチド型薬物部分は、２つ以上のアミノ酸及び／またはペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｌｕｂｋｅ（１９６５）“Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ  ７６−１３６，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）。オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、いくつかの実施形態において、ＵＳ７４９８２９８、ＵＳ５６３５４８３、ＵＳ５７８０５８８、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３：２４３−２７７、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５、Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１  ５：８５９−８６３、及びＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１（７）：７７８−７８４の方法に従って調製されてもよい。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、ＭＭＡＥ等の式ＤＥ、及びＭＭＡＦ等の式ＤＦのオーリスタチン／ドラスタチン薬物部分、薬物−リンカー中間体、ならびにそれらの誘導体、例えば、ＭＣ−ＭＭＡＦ、ＭＣ−ＭＭＡＥ、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、及びＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ等は、ＵＳ７４９８２９８、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４、及びＤｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：７７８−７８４に記載される方法を使用して調製され得、次に対象の抗体にコンジュゲートされ得る。
【０３０７】
（３）カリケアミシン
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、１つ以上のカリケアミシン分子にコンジュゲートされた抗体を含む。カリケアミシンファミリーの抗生物質、及びそれらの類似体は、ピコモル以下の濃度で二重鎖ＤＮＡ切断を生成することができる（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２、Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８）。カリケアミシンは、細胞内作用部位を有するが、ある特定の例では、血漿膜を容易に横断しない。したがって、いくつかの実施形態において、抗体媒介性内在化によるこれらの薬剤の細胞取り込みによって、それらの細胞傷害性効果を大幅に増強され得る。カリケアミシン薬物部分を有する抗体−薬物複合体を調製する方法の非限定的な例は、例えば、ＵＳ５７１２３７４、ＵＳ５７１４５８６、ＵＳ５７３９１１６、及びＵＳ５７６７２８５に記載される。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、抗体にコンジュゲートされるカリケアミシン薬物部分は、式：
2020203901.tif 000029
を有し、式中、Ｘが、ＢｒまたはＩであり、Ｌが、リンカーであり、Ｒが、水素、Ｃ１〜６アルキル、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１〜６アルキルであり、Ｒａが水素またはＣ１〜６アルキルである。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｂｒであり、Ｒａは、水素であり、Ｒは、イソプロピルである。
【０３１０】
他の実施形態において、Ｘは、Ｂｒであり、Ｒａは、水素であり、Ｒは、エチルである。
【０３１１】
他の実施形態において、Ｘは、Ｉであり、Ｒａは、水素であり、Ｒは、イソプロピルである。
【０３１２】
他の実施形態において、Ｘは、Ｉであり、Ｒａは、水素であり、Ｒは、エチルである。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｂｒであり、Ｒａは、水素であり、Ｒは、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３１４】
他の実施形態において、Ｘは、Ｉであり、Ｒａは、水素であり、Ｒは、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３１５】
他の実施形態において、Ｘは、Ｉであり、Ｒａは、エチルであり、Ｒは、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３１６】
他の実施形態において、Ｘは、Ｂｒであり、Ｒａは、エチルであり、Ｒは、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０３１７】
（４）ピロロベンゾジアゼピン
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。いくつかの実施形態において、ＰＤＢ二量体は、特定のＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然生成物アントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９１−５７９３）。それ以来、三環式ＰＢＤ足場の二量体を含む、自然発生及び類似体の両方のいくつかのＰＢＤが、報告されてきている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５（ＵＳ６８８４７９９、ＵＳ７０４９３１１、ＵＳ７０６７５１１、ＵＳ７２６５１０５、ＵＳ７５１１０３２、ＵＳ７５２８１２６、ＵＳ７５５７０９９）。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図せずに、二量体構造が、Ｂ型ＤＮＡの副溝との等螺旋性（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）に適切な三次元形状を付与し、それによって結合部位において滑り嵌めがもたらされると考えられている（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７）。Ｃ２アリール置換基を有する二量体ＰＢＤ化合物は、細胞傷害性薬剤として有用であることが示されてきた（Ｈａｒｔｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ  （２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７０（１７）：６８４９−６８５８、Ａｎｔｏｎｏｗ（２０１０）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５３（７）：２９２７−２９４１、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ  （２００９）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９（２２）：６４６３−６４６６）。
【０３１８】
いくつかの実施形態において、ＰＢＤ化合物は、それらをＮ１０位において、ｉｎ  ｖｉｖｏで除去可能である窒素保護基で保護することによって、プロドラッグとして用いることができる（ＷＯ００／１２５０７、ＷＯ２００５／０２３８１４号）。
【０３１９】
ＰＢＤ二量体は、抗体にコンジュゲートされており、結果として生じるＡＤＣは、抗癌特性を有することが示されてきた（ＵＳ２０１０／０２０３００７）。ＰＢＤ二量体上の結合部位の非限定的な例には、５員のピロロ環、ＰＢＤ単位の間のテザー、及びＮ１０−Ｃ１１イミン基が含まれる（ＷＯ２００９／０１６５１６、ＵＳ２００９／３０４７１０、ＵＳ２０１０／０４７２５７、ＵＳ２００９／０３６４３１、ＵＳ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ２０１１／１３０５９８）。
【０３２０】
ＡＤＣのＰＢＤ二量体構成要素の非限定的な例は、式Ａ：
2020203901.tif 000030
のもの、ならびにその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
点線は、Ｃ１とＣ２との間またはＣ２とＣ３の間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２が独立して、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、及びＣＯＲから選択され、任意にハロまたはジハロからさらに選択され、ＲＤが独立して、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
Ｒ６及びＲ９が独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ′、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ７が独立して、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ′、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｑが独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮＨから選択され、
Ｒ１１が、ＨもしくはＲのいずれかであるか、またはＱがＯである場合にはＳＯ３Ｍであり、式中、Ｍが金属陽イオンであり、
Ｒ及びＲ′がそれぞれ独立して、任意に置換されるＣ１〜８アルキル、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ３〜８ヘテロシクリル、Ｃ３〜２０ヘテロシクリル、及びＣ５〜２０アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ′との関連で、Ｒ及びＲ′が、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、及びＲ１７が、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ″は、Ｃ３〜１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ、及び／または芳香族環、例えば、ベンゼンまたはピリジンによって分断され得、それらの環は、任意に置換されており、
Ｘ及びＸ′が独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮ（Ｈ）から選択される。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、Ｒ及びＲ′はそれぞれ独立して、任意に置換されるＣ１〜１２アルキル、Ｃ３〜２０複素環、及びＣ５〜２０アリール基から選択され、任意に基ＮＲＲ′との関連で、Ｒ及びＲ′は、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４員、５員、６員、または７員の複素環式環を形成する。
【０３２２】
いくつかの実施形態において、Ｒ９及びＲ１９は、Ｈである。
【０３２３】
いくつかの実施形態において、Ｒ６及びＲ１６は、Ｈである。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、Ｒ７及びＲ１７は両方とも、ＯＲ７Ａであり、式中、Ｒ７Ａは、任意に置換されるＣ１−４アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ７Ａは、Ｍｅである。いくつかの実施形態において、Ｒ７Ａは、Ｃｈ２Ｐｈであり、式中、Ｐｈは、フェニル基である。
【０３２５】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｏである。
【０３２６】
いくつかの実施形態において、Ｒ１１は、Ｈである。
【０３２７】
いくつかの実施形態において、各単量体単位においてＣ２とＣ３との間に二重結合が存在する。
【０３２８】
いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は独立して、Ｈ及びＲから選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は独立して、Ｒである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は独立して、任意に置換されるＣ５−２０アリールまたはＣ５−７アリールまたはＣ８−１０アリールである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は独立して、任意に置換されるフェニル、チエニル、ナプチル（ｎａｐｔｈｙｌ）、ピリジル、キノリニル、またはイソキノリニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は独立して、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ−ＲＤ、及び＝Ｃ（ＲＤ）２から選択される。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２はそれぞれ、＝ＣＨ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２はそれぞれＨである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２はそれぞれ＝Ｏである。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２はそれぞれ＝ＣＦ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２及び／またはＲ１２は独立して、＝Ｃ（ＲＤ）２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２及び／またはＲ１２は独立して、＝ＣＨ−ＲＤである。
【０３２９】
いくつかの実施形態において、Ｒ２及び／またはＲ１２が＝ＣＨ−ＲＤであるとき、各基は独立して、以下に示される立体配置のいずれかを有し得る。
2020203901.tif 000031
【０３３０】
いくつかの実施形態において、＝ＣＨ−ＲＤは、立体配置（Ｉ）にある。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、Ｒ″は、Ｃ３アルキレン基またはＣ５アルキレン基である。
【０３３２】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｉ）：
2020203901.tif 000032
を有し、式中、ｎが、０または１である。
【０３３３】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩ）：
2020203901.tif 000033
を有し、式中、ｎが、０または１である。
【０３３４】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩＩ）：
2020203901.tif 000034
の構造を有し、式中、ＲＥ及びＲＥ”は、それぞれ独立して、ＨまたはＲＤから選択され、式中、ＲＤは、上記のように定義され、
を有し、式中、ｎが、０または１である。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、ｎは、０である。いくつかの実施形態において、ｎは、１である。いくつかの実施形態において、ＲＥ及び／またはＲＥ”は、Ｈである。いくつかの実施形態において、ＲＥ及びＲＥ”は、Ｈである。いくつかの実施形態において、ＲＥ及び／またはＲＥ”は、ＲＤであり、式中、ＲＤは、任意に置換されるＣ１〜１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＲＥ及び／またはＲＥ”は、ＲＤであり、式中、ＲＤは、メチルである。
【０３３６】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＶ）：
2020203901.tif 000035
の構造を有し、式中、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、任意に置換されるＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じであっても異なってもよく、
を有し、式中、ｎが、０または１である。
【０３３７】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｖ）：
2020203901.tif 000036
の構造を有し、式中、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、任意に置換されるＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じであっても異なってもよく、
を有し、式中、ｎが、０または１である。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、任意に置換されるフェニル、フラニル、チオフェニル、及びピリジルから選択される。いくつかの実施形態において、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、任意に置換されるフェニルである。いくつかの実施形態において、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、任意に置換されるチエン−２−イルまたはチエン−３−イルである。いくつかの実施形態において、Ａｒ１及びＡｒ２はそれぞれ独立して、任意に置換されるキノリニルまたはイソキノリニルである。キノリニルまたはイソキノリニル基は、任意の利用可能な環の位置を介して、ＰＢＤコアに結合されてもよい。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル、及びキノリン−８−イルであり得る。いくつかの実施形態において、キノリニルは、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルから選択される。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル、及びイソキノリン−８−イルであり得る。いくつかの実施形態において、イソキノリニルは、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルから選択される。
【０３３９】
ＡＤＣのＰＢＤ二量体構成要素のさらなる非限定的な例は、式Ｂ：
2020203901.tif 000037
のもの、ならびにその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
ＯＨに接続された波線は、ＳまたはＲ配置を示し、
ＲＶ１及びＲＶ２は独立して、Ｈ、メチル、エチル、及びフェニル（このフェニルは、特に４位において、フルオロで任意に置換されてもよい）、Ｃ５−６ヘテロシクリルから選択され、式中、ＲＶ１及びＲＶ２は、同じであっても異なってもよく、
ｎは、０または１である。
【０３４０】
いくつかの実施形態において、ＲＶ１及びＲＶ２は独立して、Ｈ、フェニル、及び４−フルオロフェニルから選択される。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、リンカーは、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位、またはＡ環を連結するテザー単位を含む、ＰＢＤ二量体薬物部分の種々の部位のうちの１つにおいて結合されてもよい（下の構造Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を参照されたい）。
【０３４２】
ＡＤＣのＰＢＤ二量体構成要素の非限定的な例には、次の式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）が含まれる。
2020203901.tif 000038
【０３４３】
式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）は、それらのＮ１０−Ｃ１１イミン型で示される。例示的なＰＢＤ薬物部分にはまた、以下の表に示される、カルビノールアミン及び保護されたカルビノールアミン型も含まれる。
2020203901.tif 000039
（式中、
Ｘは、ＣＨ２（ｎ＝１〜５）、Ｎ、またはＯであり、
Ｚ及びＺ’は独立して、ＯＲ及びＮＲ２から選択され、式中、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級、または第三級アルキル鎖であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２及びＲ’２はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（置換アリールを含む）、Ｃ５−２０ヘテロアリール基、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ、及び−ＳＨから選択され、いくつかの実施形態において、アルキル、アルケニル、及びアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ３及びＲ’３は独立して、Ｈ、ＯＲ、ＮＨＲ、及びＮＲ２から選択され、式中、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級、または第三級アルキル鎖であり、
Ｒ４及びＲ’４は独立して、Ｈ、Ｍｅ、及びＯＭｅから選択され、
Ｒ５は、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、Ｃ５〜２０アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルによって置換されたアリールを含む）、及びＣ５〜２０ヘテロアリール基から選択され、いくつかの実施形態において、アルキル、アルケニル、及びアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または保護基（アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、またはバリン−シトルリン−ＰＡＢ等の自己犠牲単位を含む部分等）であり、
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、または保護基であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、Ｒ’２、Ｒ５、またはＲ１２のうちの１つの水素、またはＡ環の間の−ＯＣＨ２ＣＨ２（Ｘ）ｎＣＨ２ＣＨ２Ｏ−スペーサの水素は、ＡＤＣのリンカーに接続された結合と置き換えられている）。
【０３４４】
ＡＤＣの例示的なＰＤＢ二量体部分には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない（波線は、リンカーへの共有結合の部位を示す）。
2020203901.tif 000040
【０３４５】
ＰＢＤ二量体を含むＡＤＣの実施形態の非限定的な例は、次の構造を有する。
2020203901.tif 000041
式中、
ｎは、０〜１２である。いくつかの実施形態において、ｎは、２〜１０である。いくつかの実施形態において、ｎは、４〜８である。いくつかの実施形態において、ｎは、４、５、６、７、及び８から選択される。
【０３４６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、ピリジン脱離基を含むリンカー−薬物中間体を、硫黄原子を介して抗体のシステインチオールにコンジュゲートして、ジスルフィド結合を形成することによって作製され得る。さらに、いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、ピリジン環が１つ以上のニトロ基で置換されているチオピリジル脱離基を含むリンカー−薬物中間体をコンジュゲートすることによって作製され得る。いくつかの実施形態において、ピリジル環は、−ＮＯ２で一置換される。いくつかの実施形態において、−ＮＯ２一置換は、ジスルフィドに対してパラである。いくつかの実施形態において、ＰＢＤ二量体は、Ｎ１０位を介して接続される。例えば、ＰＢＤ二量体を含む非限定的な例示的なＡＤＣは、モノメチルエチルピリジルジスルフィド、Ｎ１０結合されたＰＢＤリンカー中間体（以下に示される）を、抗体にコンジュゲートすることによって作製され得る。
2020203901.tif 000042
【０３４７】
ＰＢＤ二量体−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ及びＰＢＤ二量体−Ｐｈｅ−ホモＬｙｓ−ＰＡＢ−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能であるのに対して、ＰＢＤ二量体−マレイミド−アセタールのリンカーは、酸不安定性である。
【０３４８】
ＰＢＤ二量体、及びＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、当該技術分野で既知の方法に従って調製されてもよい。例えば、ＷＯ２００９／０１６５１６、ＵＳ２００９／３０４７１０、ＵＳ２０１０／０４７２５７、ＵＳ２００９／０３６４３１、ＵＳ２０１１／０２５６１５７、ＷＯ２０１１／１３０５９８、ＷＯ２０１３／０５５９８７を参照されたい。
【０３４９】
（５）アントラサイクリン
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、アントラサイクリンを含む。アントラサイクリンは、細胞傷害性活性を示す抗生物質化合物である。いかなる特定の理論によっても拘束されることを意図しないが、試験では、アントラサイクリンが、１）薬物分子の、細胞のＤＮＡへのインターカレーションによってＤＮＡ依存的核酸合成を阻害すること、２）次に細胞巨大分子と反応して細胞への損傷を引き起こすフリーラジカルの薬物による産生、及び／または３）薬物分子と細胞膜との相互作用を含む、多くの異なる機序によって、細胞を死滅させるように動作し得ることを示した（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，″Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  Ａｎｄ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｏｆ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ″ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ，″Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｄａｍａｇｅ″ｉｄ．ａｔ  ｐｐ．９７−１０２を参照されたい）。それらは細胞傷害性であるため、潜在的アントラサイクリンは、白血病、乳癌、肺癌、卵巣腺癌、及び肉腫等の多くの癌の治療に使用されてきた（例えば、Ｐ．Ｈ−Ｗｉｅｒｎｉｋ，ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  Ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｐ１１を参照されたい）。
【０３５０】
アントラサイクリンの非限定的な例としては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、及びそれらの誘導体が挙げられる。ダウノルビシン及びドキソルビシンの免疫複合体及びプロドラッグが調製され、試験されてきた（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３、ＥＰ０３２８１４７、ＵＳ６６３０５７９）。抗体−薬物複合体ＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原ルイス−Ｙと特異的に反応し、Ｉ相及びＩＩ相試験において評価された（Ｓａｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １８：２２８２−２２９２、Ａｊａｎｉ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．６：７８−８１、Ｔｏｌｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １７：４７８−４８４）。
【０３５１】
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの有力な代謝物（または誘導体）である（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１（４）：１６０８−１６１７）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノ上に２−メトキシモルホリノ基を有するドキソルビシンの半合成類似体であり、臨床評価中であり（Ｇｒａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．１７：１３３、Ｒｉｐａｍｏｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ６５：７０３）（肝細胞癌についてのＩＩ相／ＩＩＩ相治験を含む（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ（２００３））、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２２，Ａｂｓ１４４８、Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４：１ｓｔ  Ｅｄ，Ａｂｓ  ４６４９、Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｊｏｕｒ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２４：１４１１６）。
【０３５２】
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含むＡＤＣの非限定的な例は、式Ｉａ：
2020203901.tif 000043
に示され、式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ基、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ１及びＺは一緒に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、Ｒ１及びＲ２の両方がメトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０３５４】
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含むＡＤＣのさらに非限定的な例は、式Ｉｂ：
2020203901.tif 000044
に示され、式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、またはメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ５アルコキシ基、またはその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ２及びＺは一緒に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１〜約２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、Ｒ１及びＲ２の両方がメトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０３５６】
いくつかの実施形態において、ネモルビシン含有ＡＤＣのネモルビシン成分は、ＰＮＵ−１５９６８２である。いくつかのそのような実施形態において、ＡＤＣの薬物部分は、以下の構造：
2020203901.tif 000045
のうちの１つを有し得、式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す。
【０３５７】
ＰＮＵ−１５９６８２を含むアントラサイクリンは、いくつかの結合部位、及び本明細書に記載されるリンカーを含む種々のリンカー（ＵＳ２０１１／００７６２８７、ＷＯ２００９／０９９７４１、ＵＳ２０１０／００３４８３７、ＷＯ２０１０／００９１２４）を介して抗体にコンジュゲートされ得る。
【０３５８】
ネモルビシン及びリンカーを含む例示的なＡＤＣとしては、
2020203901.tif 000046
2020203901.tif 000047
が含まれるが、これらに限定されず、式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキル、及び
2020203901.tif 000048
から選択される。
【０３５９】
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは、酸不安定性である一方で、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサ−Ａｂ、及びＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサ（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である。
【０３６０】
（６）１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）二量体薬物部分
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）を含む。５−アミノ−１−（クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（アミノＣＢＩ）クラスのＤＮＡ小溝アルキル化剤は、有力な細胞傷害性薬剤であり（Ａｔｗｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４２：３４００）、癌療法のために設計された多くのクラスのプロドラッグ中のエフェクター単位として利用されてきた。これらは、抗体複合体（Ｊｅｆｆｒｅｙ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４８：１３４４）、ニトロベンジルカルバメートに基づく遺伝子療法のためのプロドラッグ（Ｈａｙ，ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６：２４５６）、及び低酸素活性化プロドラッグとしての対応するニトロ−ＣＢＩ誘導体（Ｔｅｒｃｅｌ，ｅｔ  ａｌ（２０１１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．，５０：２６０６−２６０９）を含んでいた。ＣＢＩ及びピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）ファルマコフォアは、アルキル鎖によって一緒に結合された（Ｔｅｒｃｅｌ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  ４６：２１３２−２１５１）。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（ＣＢＩ）二量体（ＷＯ２０１５／０２３３５５）を含む。いくつかのかかる実施形態において、二量体は、ヘテロ二量体であり、その二量体の半分がＣＢＩ部分であり、二量体のもう半分がＰＢＤ部分である。
【０３６２】
いくつかの実施形態において、ＣＢＩ二量体は、式：
2020203901.tif 000049
を有し、式中、
Ｒ１が、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、またはＬへの結合から選択され、
Ｒ２が、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、またはＬへの結合から選択され、
Ｒａ及びＲｂが独立して、Ｈ及び１つ以上のＦで任意に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルから選択されるか、またはＲａ及びＲｂは、５員または６員複素環基を形成し、
Ｔが、Ｃ３〜Ｃ１２アルキレン、Ｙ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）−Ｙ−（Ｃ１〜Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２〜Ｃ６アルケニレン）−Ｙ−（Ｃ２〜Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２〜Ｃ６アルキニレン）−Ｙ−（Ｃ２〜Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、
式中、Ｙが独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、
アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールが独立してかつ任意に、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１〜Ｃ６アルキルで置換され、式中、アルキルが、１つ以上のＦで任意に置換されるか、
またはアルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールが独立してかつ任意に、Ｌへの結合で置換され、
Ｄ′が、
2020203901.tif 000050
から選択される薬物部分であり、式中、波線が、Ｔへの結合部位を示し、
Ｘ１及びＸ２が独立して、Ｏ及びＮＲ３から選択され、式中、Ｒ３が、Ｈ、及び１つ以上のＦで任意に置換されるＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｒ４が、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、またはリンカー（Ｌ）への結合であり、式中、Ｒが、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、またはベンジルであり、
Ｒ５が、Ｈ、またはＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項２７に記載の免疫複合体。
【０３６３】
（６）アマトキシン
いくつかの実施形態において、免疫複合体は、１つ以上のアマトキシン分子にコンジュゲートされた抗体を含む。アマトキシンは、８個のアミノ酸からなる環状ペプチドである。それらは、タマゴテングダケ（Ａｍａｎｉｔａ  ｐｈａｌｌｏｉｄｅ）マッシュルームから単離され得るか、または合成的に調製され得る。アマトキシンは、哺乳動物細胞のＤＮＡ依存的ＲＮＡポリメラーゼＩＩを特異的に阻害し、それにより影響を受ける細胞の転写及びタンパク質生合成も阻害する。細胞内の転写の阻害により、成長及び増殖が停止する。例えば、Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＪＮＣＩ  １０４：１−１３（２０１２）、ＷＯ２０１０１１５６２９、ＷＯ２０１２０４１５０４、ＷＯ２０１２１１９７８７、ＷＯ２０１４０４３４０３、ＷＯ２０１４１３５２８２、及びＷＯ２０１２１１９７８７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。いくつかの実施形態において、１つ以上のアマトキシン分子は、１つ以上のα−アマニチン分子である。
【０３６４】
（７）他の薬物部分
薬物部分は、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１、Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０：１０２５−１０２８、Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１）、ならびに、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンシンタンパク質、アメリカヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンが含まれるが、これらに限定されない酵素的活性毒素及びその断片も含む。例えば、ＷＯ９３／２１２３２を参照されたい。
【０３６５】
薬物部分は、核酸分解活性を有する化合物も含む（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ）。
【０３６６】
ある特定の実施形態において、免疫複合体は、放射活性が高い原子を含み得る。種々の放射活性アイソトープは、放射性複合抗体の産生に使用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射活性アイソトープが挙げられる。いくつかの実施形態において、免疫複合体が検出に使用される場合、シンチグラフィー試験のための放射活性原子、例えば、Ｔｃ９９もしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）撮像（磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）としても知られる）のためのスピン標識、例えば、ジルコニウム−８９、ヨード−１２３、ヨード−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガネーゼ、または鉄を含み得る。ジルコニウム−８９は、様々な金属キレート剤に複合体化され得、例えば、ＰＥＴ撮像のために抗体にコンジュゲートされ得る（ＷＯ２０１１／０５６９８３号）。
【０３６７】
放射標識または他の標識が、既知の方法で免疫複合体に組み込まれてもよい。例えば、ペプチドは、例えば、１つ以上のフッ素−１９原子を１つ以上の水素の代わりに含む好適なアミノ酸前駆体を使用して、生合成され得るか、または化学的に合成され得る。いくつかの実施形態において、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、及びＩｎ１１１等の標識は、抗体内のシステイン残基を介して結合され得る。いくつかの実施形態において、イットリウム−９０は、抗体のリシン残基を介して結合され得る。いくつかの実施形態において、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９−５７を使用して、ヨード−１２３を組み込むことができる。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９）では、ある特定の他の方法を説明する。
【０３６８】
ある特定の実施形態において、免疫複合体は、プロドラッグ活性酵素にコンジュゲートされた抗体を含み得る。いくつかのかかる実施形態において、プロドラッグ活性酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照されたい）を、抗癌薬等の活性薬物に変換する。かかる免疫複合体は、いくつかの実施形態において、抗体依存的酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体にコンジュゲートされ得る酵素としては、リン酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアルカリホスファターゼ、硫酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なアリールスルファターゼ、非傷害性５−フルオロシトシンを抗癌薬、５−フルオロウラシルに変換するために有用なシトシンデアミナーゼ、ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（例えば、カテプシンＢ及びＬ）等のプロテアーゼ、Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するために有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ、グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するために有用なβ−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ等の炭水化物切断酵素、β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するために有用なβ−ラクタマーゼ、ならびにそれらのアミン窒素において、フェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するために有用なペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼ等のペニシリンアミダーゼが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、酵素は、当該技術分野において周知の組み換えＤＮＡ技法によって抗体に共有結合され得る。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照されたい。
【０３６９】
ｃ）薬物負荷
薬物負荷は、式Ｉの分子における１抗体当たりの薬物部分の平均数である、ｐによって表される。薬物負荷は、１抗体当たり１〜２０個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式ＩのＡＤＣは、１〜２０個の範囲の薬物部分とコンジュゲートされた抗体の集団を含む。複合反応からＡＤＣを調製する際の１抗体当たりの薬物部分の平均数は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣ等の従来の手段によって特徴付けられてもよい。また、ｐの単位でのＡＤＣの定量分布が決定されてもよい。いくつかの事例において、ｐがある特定の値である同種のＡＤＣを、他の薬物負荷を有するＡＤＣから分離し、精製し、かつ特徴付けることは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動等の手段によって達成されてもよい。
【０３７０】
いくつかの抗体−薬物複合体では、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定され得る。例えば、上記のある特定の例示的な実施形態のように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみもしくは数個のシステインチオール基を有し得るか、または、１個のみもしくは数個の反応性が十分なチオール基を有し得、それによって、リンカーが結合され得る。ある特定の実施形態において、薬物負荷がより高くなると、例えば、ｐが５超になると、ある特定の抗体−薬物複合体は凝集し、不溶性となり、毒性となるか、または細胞透過性が喪失し得る。ある特定の実施形態において、ＡＤＣの平均薬物負荷は、１〜約８、すなわち約２〜約６、または約３〜約５の範囲である。実際、ある特定のＡＤＣでは、１抗体当たりの薬物部分の最適な比率は、８未満であり得、また約２〜約５であり得ることが示されてきた（ＵＳ７４９８２９８）。
【０３７１】
ある特定の実施形態において、理論上の最大数よりも少ない薬物部分が、複合反応中に抗体にコンジュゲートされる。抗体は、以下に考察されるように、例えば、薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しないリジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、薬物部分に連結し得る多くの遊離及び反応性システインチオール基を含有せず、実際、抗体におけるほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態において、抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤により、部分または完全還元条件下で還元されて、反応性システインチオール基が生成され得る。ある特定の実施形態において、本抗体は、リジンまたはシステイン等の反応性求核基を明らかにするために、変性条件に置かれる。
【０３７２】
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、異なる方式で、ならびに例えば、（ｉ）抗体と比較して比するモル過剰の薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬を限定すること、（ｉｉ）複合反応時間または温度を限定すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分または限定的還元条件によって制御されてもよい。
【０３７３】
１個を超える求核基が薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応する場合、結果として生じる生成物は、抗体に結合する１個以上の薬物部分が分布するＡＤＣ化合物の混合物であることを理解されたい。１抗体当たりの平均数薬物は、抗体及び薬物に特異的である二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出されてもよい。個々のＡＤＣ分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離されてもよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ  ｅｔ  ａｌ（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １９（７）：２９９−３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４を参照されたい）。ある特定の実施形態において、単一の負荷値を有する同種のＡＤＣが、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合混合物から単離されてもよい。
表Ａの抗体薬物複合体５１〜５８は、ＷＯ２０１３／０５５９８７、ＷＯ２０１５／０２３３５５、ＷＯ２０１０／００９１２４、ＷＯ２０１５／０９５２２７の手順に従って、薬物部分をリンカー試薬とカップリングすることによって調製され、また本明細書に記載される、システイン操作された抗体を含む抗ＣＬＬ１抗体のいずれかとコンジュゲートされ得る。特定の抗体−薬物複合体は、表Ｂに示される。
2020203901.tif 000051
2020203901.tif 000052
【０３７４】
追加の例示的な抗体薬物複合体には、
2020203901.tif 000053
2020203901.tif 000054
が含まれる。
【０３７５】
単純化のために、上記の構造及びＡＤＣ５１〜５８の構造は、抗体に結合した１つのリンカー−薬物基のみを示していることに留意されたい。上述の通り、１つを超えるリンカー−薬物基が抗体に結合され得る。
2020203901.tif 000055
ＤＡＲ＝薬物／抗体比平均
Ａ１１８Ｃ（ＥＵ付番）＝Ａ１２１Ｃ（連続的付番）＝Ａ１１４Ｃ（Ｋａｂａｔ付番）
野生型（「ＷＴ」）、システイン操作された突然変異抗体（「チオ」）、軽鎖（「ＬＣ」）、重鎖（「ＨＣ」）、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジル（「ＰＡＢ」）、及びｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢＣ」）
【０３７６】
ｄ）免疫複合体を調製するある特定の方法
式ＩのＡＤＣは、（１）抗体の求核基と二価リンカー試薬とを反応させて共有結合によってＡｂ−Ｌを形成し、続いて薬物部分Ｄと反応させることと、（２）薬物部分の求核基と二価リンカー試薬とを反応させて、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて抗体の求核基と反応させることとを含む、当業者に既知の有機化学反応、条件、及び試薬を用いるいくつかの経路によって調製されてもよい。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製するための例示的な方法は、ＵＳ７４９８２９８に記載され、それは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０３７７】
抗体上の求核基には、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、及び（ｉｖ）抗体がグリコシル化される糖ヒドロキシルまたはアミノ基が含まれるが、これらに限定されない。アミン、チオール、及びヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート（ｈａｌｏｆｏｒｍａｔｅ）、及び酸ハロゲン化物等の活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキル及びベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含む、リンカー部分及びリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能である。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体は、完全にまたは部分的に還元されるように、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤での処理によって、リンカー試薬とのコンジュゲートに対して反応し得る。したがって、各システイン架橋は、理論上、２つの反応性のチオール求核剤を形成することになる。追加の求核基は、リジン残基の修飾によって、例えば、リジン残基と２−イミノチオラン（トラウト試薬（Ｔｒａｕｔ’ｓ  ｒｅａｇｅｎｔ））とを反応させて、アミンをチオールへと変換させることによって抗体中に導入することができる。反応性のチオール基もまた、１個、２個、３個、４個、またはそれ以上のシステイン残基を導入することによって（例えば、１個以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異形抗体を調製することによって）抗体中に導入され得る。
【０３７８】
本発明の抗体−薬物複合体はまた、アルデヒドまたはケトンカルボニル基等の抗体上の求電子基と、リンカー試薬または薬物上の求核基との間の反応によって産生されてもよい。リンカー試薬上の有用な求核基には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、及びアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、抗体は、リンカー試薬または薬物上の求核置換基と反応可することができる求電子部分を導入するように修飾される。別の実施形態において、グリコシル化抗体の糖を、例えば、過ヨウ素酸塩酸化試薬で酸化させて、リンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド基またはケトン基を形成してもよい。結果として生じるイミンシッフ塩基群は、安定した結合を形成し得るか、または例えば、水素化ホウ素試薬によって還元されて、安定したアミン結合を形成し得る。一実施形態において、グリコシル化された抗体の炭水化物部分と、ガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとを反応させると、抗体において、薬物上の適切な基と反応することができるカルボニル（アルデヒド及びケトン）基がもたらされ得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）。別の実施形態において、Ｎ末端セリンまたはスレオニン残基を含有する抗体は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応し、それによって第１のアミノ酸の代わりにアルデヒドが産生され得る（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ  ＆  Ｓｔｒｏｈ、（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６、米国公開特許第５３６２８５２号）。かかるアルデヒドと、薬物部分またはリンカー求核剤とを反応させることができる。
【０３７９】
薬物部分上の例示的な求核基には、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、及び酸ハロゲン化物等の活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキル及びベンジルハロゲン化物、ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含む、リンカー部分及びリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能なアミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、及びアリールヒドラジド基が含まれるが、これらに限定されない。
【０３８０】
ＡＤＣを調製するために使用され得るクロスリンカー試薬の非限定的な例は、本明細書において、「例示的なリンカー」と題される節に記載される。かかるクロスリンカー試薬を使用して、タンパク質性部分及び化学部分を含む２つの部分を連結する方法は、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態において、抗体及び細胞傷害性薬剤を含む融合タンパク質は、例えば、組み換え技法またはペプチド合成によって作製されてもよい。組み換えＤＮＡ分子は、互いに隣接しているか、または複合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって隔離されている、複合体の抗体及び細胞傷害性部分をコードする領域を含んでもよい。
【０３８１】
なおも別の実施形態において、抗体は、腫瘍の事前標的化（ｐｒｅ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）において利用するために「受容体」（ストレプトアビジン等）に複合されてもよく、その腫瘍の事前標的化において抗体−受容体複合体が、患者に投与され、続いて除去剤を使用した血液循環からの非結合複合体の除去、次いで細胞傷害性薬剤（例えば、薬物または放射性ヌクレオチド）に複合されている「リガンド」（例えば、アビジン）の投与が行われる。
【０３８２】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体のいずれかは、生体試料中のＣＬＬ−１の存在の検出に有用である。本明細書で使用される「検出すること」という用語は、定量または定性検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞または組織（例えば、癌性であるかまたは癌性である可能性がある、リンパ球、リンパ芽球、単球、骨髄単球、及びこれらの混合物等のリンパ組織を含む、生検材料）を含む。
【０３８３】
一実施形態において、診断または検出の方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。さらなる態様において、生体試料中のＣＬＬ−１の存在の検出方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、生体試料を、本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体と、ＣＬＬ−１への抗ＣＬＬ−１抗体の結合を許容する条件下で接触させることと、複合体が、生体試料中で、抗ＣＬＬ−１抗体とＣＬＬ−１との間の複合体が形成されるかどうかを検出することを含む。かかる方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であっても、ｉｎ  ｖｉｖｏ方法であってもよい。一実施形態において、例えば、ＣＬＬ−１が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＣＬＬ−１抗体を使用して、抗ＣＬＬ−１抗体での治療に適格な対象を選択する。さらなる実施形態において、生体試料は、細胞または組織である。
【０３８４】
さらなる実施形態において、抗ＣＬＬ−１抗体は、例えば、癌を診断する、癌の予後を判定するもしくは癌を病期分類する、癌の適切な治療過程を決定する、または治療法に対する癌の反応を監視する目的でｉｎ  ｖｉｖｏで使用されて、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ画像法によって、対象におけるＣＬＬ−１陽性癌を検出する。ｉｎ  ｖｉｖｏ検出のための当該技術分野で既知の１つの方法は、例えば、ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２：１３７９−１３８９（２００７）及びＶｅｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載される、イムノ−陽電子放射断層撮影（イムノ−ＰＥＴ）である。かかる実施形態において、対象におけるＣＬＬ−１陽性癌の検出のための方法が提供され、本方法は、標識された抗ＣＬＬ−１抗体を、ＣＬＬ−１陽性癌を有するかまたはそれを有することが疑われる対象に投与することと、対象において標識された抗ＣＬＬ−１抗体を検出することと、を含み、その標識された抗ＣＬＬ−１抗体の検出は、対象におけるＣＬＬ−１陽性癌を示す。かかる実施形態のある特定のものにおいて、標識された抗ＣＬＬ−１抗体は、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉ等の陽電子放出体にコンジュゲートされる抗ＣＬＬ−１抗体を含む。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【０３８５】
さらなる実施形態において、診断または検出方法は、基質に固定化された第１の抗ＣＬＬ−１抗体を、ＣＬＬ−１の存在について試験されるべき生体試料と接触させることと、その基質を第２の抗ＣＬＬ−１抗体に曝露することと、その第２の抗ＣＬＬ−１が、生体試料中で、第１の抗ＣＬＬ−１抗体とＣＬＬ−１との間の複合体に結合されるかどうかを検出することを含む。基質は、任意の支持培地、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、及び他の基質であってもよい。ある特定の実施形態において、生体試料は、細胞または組織を含む。ある特定の実施形態において、第１または第２の抗ＣＬＬ−１抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかである。
【０３８６】
上記の実施形態のいずれかに従って診断または検出され得る例示的な障害には、ＣＬＬ−１陽性癌、例えば、ＣＬＬ−１陽性ＡＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＣＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＭＤＳ、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄単球性白血病、ＣＬＬ−１陽性ＡＰＬ、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄増殖性障害、ＣＬＬ−１陽性血小板性白血病、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅＴ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性多発性骨髄腫、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞疾患、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞性白血病、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞肉腫、ＣＬＬ−１陽性骨髄性肉腫、ＣＬＬ−１陽性リンパ性白血病、及びＣＬＬ−１陽性未分化白血病等が含まれる。いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌は、「０」超の抗ＣＬＬ−１免疫組織化学（ＩＨＣ）またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受ける癌であり、それは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下での、９０％超の腫瘍細胞の非常に弱い染色または無染色に対応する。別の実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌は、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で定義されるように、１＋、２＋、または３＋レベルでＣＬＬ−１を発現する。いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌は、ＣＬＬ−１  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従ってＣＬＬ−１を発現する癌である。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０３８７】
ある特定の実施形態において、標識された抗ＣＬＬ−１抗体が提供される。標識には、直接検出される標識（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識等）または部分、及び例えば、酵素反応または分子相互作用によって間接的に検出される酵素またはリガンド等の部分が含まれるが、これらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体等のフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、標識は、陽電子放出体である。陽電子放出体には、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
【０３８８】
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載される抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体または免疫複合体と、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））とを混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量及び濃度で、レシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム等、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール等）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免役グロブリン等のタンパク質、ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート薬剤、ショ糖、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の、介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号、同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
【０３８９】
例示的な凍結乾燥抗体または免疫複合体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体または免疫複合体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液が含まれる。
【０３９０】
本明細書における製剤はまた、必要に応じて、治療されている特定の適応症に対する１つを超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。
【０３９１】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製される、マイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）中またはマクロエマルション中のヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に封入されてもよい。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示される。
【０３９２】
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例としては、抗体または免疫複合体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０３９３】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与のために使用されるべき製剤は、一般に滅菌されている。無菌状態は、例えば、無菌濾過膜を介する濾過によって、容易に達成され得る。
【０３９４】
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体のいずれも、例えば、治療方法等の方法において使用され得る。
【０３９５】
一態様において、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体は、ＣＬＬ−１陽性細胞の増殖の阻害方法において使用され、本方法は、細胞を、細胞の表面上のＣＬＬ−１への抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体の結合を許容する条件下で、抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体に曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む。ある特定の実施形態において、本方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法またはｉｎ  ｖｉｖｏ方法である。さらなる実施形態において、細胞は、リンパ球、リンパ芽球、単球、または骨髄単球細胞である。さらなる実施形態において、細胞は、単球、顆粒球、及び／または単球／顆粒球系列の前駆細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、ＦＬＴ３遺伝子内縦列反復の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞は、ＭＬＬ−ＡＦ９融合遺伝子（例えば、ＭＬＬ−ＡＦ９転座）の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞は、染色体１１ｑ２３転座の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞は、転座ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）の存在について陽性について陽性である。
【０３９６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを使用してアッセイされてもよい。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生存細胞の数を決定する。Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照されたい。アッセイは、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）に適した９６ウェルまたは３８４ウェル形式で行われてもよい。Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順には、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これにより、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応によって生み出される発光シグナルの生成がもたらされる。発光シグナルは、培養物中に存在する生存細胞の数に直接比例する、存在するＡＴＰの量に比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
【０３９７】
別の態様において、薬として使用するための抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体が提供される。さらなる態様において、治療方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌の治療において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＬＬ−１陽性癌を有する個体を治療方法において使用するための抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体を提供し、本方法は、個体に有効量の抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、以下に記載される有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
【０３９８】
さらなる態様において、本発明は、薬の製造または調製における、抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体の使用を提供する。一実施形態において、薬は、ＣＬＬ−１陽性癌の治療のためのものである。さらなる実施形態において、薬は、ＣＬＬ−１陽性癌の治療方法において使用するためのものであり、本方法は、ＣＬＬ−１陽性癌を有する個体に有効量の薬を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、例えば、以下に記載される有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
【０３９９】
さらなる態様において、本発明は、ＣＬＬ−１陽性癌の治療のための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、かかるＣＬＬ−１陽性癌有する個体に、有効量の抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、癌は、ＡＭＬである。１つのかかる実施形態において、本方法は、個体に、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することをさらに含む。
【０４００】
上記の実施形態のいずれかによるＣＬＬ−１陽性癌は、例えば、ＣＬＬ−１陽性ＡＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＣＭＬ、ＣＬＬ−１陽性骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＬ）、ＣＬＬ−１陽性ＡＰＬ、ＣＬＬ−１陽性慢性骨髄増殖性障害、ＣＬＬ−１陽性血小板性白血病、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅ−Ｂ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性ｐｒｅＴ−ＡＬＬ、ＣＬＬ−１陽性多発性骨髄腫、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞疾患、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞性白血病、ＣＬＬ−１陽性肥満細胞肉腫、ＣＬＬ−１陽性骨髄性肉腫、ＣＬＬ−１陽性リンパ性白血病、及びＣＬＬ−１陽性未分化白血病であり得る。いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌は、「０」超の抗ＣＬＬ−１免疫組織化学（ＩＨＣ）またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受ける癌であり、それは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下での、９０％超の腫瘍細胞の非常に弱い染色または無染色に対応する。別の実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌は、実施例Ｂにおいて本明細書に記載される条件下で定義されるように、１＋、２＋、または３＋レベルでＣＬＬ−１を発現する。いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性癌は、ＣＬＬ−１  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従ってＣＬＬ−１を発現する癌である。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０４０１】
いくつかの実施形態において、上記の実施形態のいずれかによる細胞増殖性障害は、例えば、ＡＭＬ、ＣＭＬ、及び／またはＭＤＳであり得る。いくつかの実施形態において、ＣＬＬ−１陽性細胞増殖性障害は、ＣＬＬ−１陽性ＡＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＣＭＬ、ＣＬＬ−１陽性ＭＤＳである。いくつかの実施形態において、ＡＭＬは、ＡＭＬサブタイプ１、ＡＭＬサブタイプ２、ＡＭＬサブタイプ３、ＡＭＬサブタイプ４、ＡＭＬサブタイプ５、ＡＭＬサブタイプ６、及びＡＭＬサブタイプ７のうちの１つ以上である。いくつかの実施形態において、ＡＭＬは、ＡＭＬサブタイプ３（急性前骨髄球性白血病、ＡＰＭＬ）である。いくつかの実施形態において、ＡＭＬは、ＡＭＬサブタイプ１、ＡＭＬサブタイプ２、ＡＭＬサブタイプ４、ＡＭＬサブタイプ５、ＡＭＬサブタイプ６、及びＡＭＬサブタイプ７のうちの１つ以上であり、かつＡＭＬサブタイプ３ではない。
【０４０２】
いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＦＬＴ３、ヌクレオフォスミン（ＮＰＭ１）、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質α（Ｃ／ＥＢＰα）（ＣＥＢＰＡ）、及び／またはｃ−ＫＩＴにおける突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＦＬＴ３遺伝子内縦列反復の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＦＬＴ３チロシンキナーゼドメイン点突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、イソクエン酸脱水素酵素１及び／または２（ＩＤＨ１及び／またはＩＤＨ２）における突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ３Ａ（ＤＮＭＴ３Ａ）における突然変異の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、（ａ）ＮＰＭ１及びＦＬＴ３における突然変異、（ｂ）野生型ＮＰＭ１及び突然変異ＦＬＴ３、ならびに／または（ｃ）野生型ＮＰＭ１及びＦＬＴ３の存在についてＮＫ−ＡＭＬ陽性である。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ｔ（１５；１７）、ｔ（８；２１）、ｉｎｖ（１６）、ｔ（１６；１６）、ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）、ｔ（６；９）（ｐ２３；ｑ３４）、ｉｎｖ（３）（ｑ２１  ｑ２６．２）、ｉｎｖ（３；３）（ｑ２１；ｑ２６．２）、ｔ（１；２２）（ｐ１３；ｑ１３）、ｔ（８；２１）（ｑ２２；ｑ２２）、ｉｎｖ（１６）（ｐ１３；１ｑ２２）、ｔ（１６；１６）（ｐ１３．１；ｑ２２）、及び／またはｔ（１５；１７）（ｑ２２；ｑ１２）のうちの１つ以上等の陽性細胞遺伝学的異常である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、ＭＬＬ−ＡＦ９融合遺伝子（例えば、ＭＬＬ−ＡＦ９転座）の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）は、染色体１１ｑ２３転座の存在について陽性である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌）は、転座ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｑ２３）の存在について陽性である細胞増殖性障害（例えば、ＣＬＬ−１陽性癌及び／またはＡＭＬ）である。
【０４０４】
上の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０４０５】
さらなる態様において、本発明は、例えば、上記の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体のいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施形態において、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体のいずれかと薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態において、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＣＬＬ−１抗体または免疫複合体のいずれかと、例えば、以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
【０４０６】
本発明の抗体または免疫複合体は、治療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体または免疫複合体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、アントラサイクリンである。いくつかの実施形態において、アントラサイクリンは、ダウノルビシンまたはイダルビシンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、シタラビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、クラドリビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、フルダラビンまたはトポテカンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、５−アザシチジンまたはデシタビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ＡＴＲＡ（全トランス型レチノイン酸）である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、三酸化ヒ素である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ヒドロキシ尿素である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、エトポシドである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ミトキサントロンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、クロファラビンである。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ヒドロキシ尿素である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、キザルチニブ等のＦＬＴ３阻害剤である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ＩＤＨ２阻害剤である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ＣＨＫ１阻害剤である。いくつかの実施形態において、追加の治療剤は、ボラセルチブ等のＰｌｋ阻害剤である。
【０４０７】
本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、追加の治療薬は、ＢＣＬ２阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＢＣＬ２阻害剤は、ベナトクラックス（ｖｅｎａｔｏｃｌａｘ）である。
【０４０８】
本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、追加の治療剤は、後成的修飾剤（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）である。いくつかの実施形態において、後成的修飾剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態において、後成的修飾剤は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼＩ阻害剤である。いくつかの実施形態において、後成的修飾剤は、ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態において、後成的修飾剤は、ＢＥＴ阻害剤である。いくつかの実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、第１のブロモドメイン（ＢＤ１）を選択的に標的とする。いくつかの実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、第２のブロモドメイン（ＢＤ２）を選択的に標的とする。いくつかの実施形態において、ＢＥＴ阻害剤は、ＧＳＫ１２１０１５１Ａ、ＧＳＫ５２５７６２、ＯＴＸ−０１、ＴＥＮ−０１０、ＣＰＩ−２０３、及びＣＰＩ−０６１０のうちの１つ以上である。
【０４０９】
いくつかの実施形態において、本方法は、追加の療法をさらに含んでもよい。追加の療法は、放射線療法、手術、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述のものの組み合わせであってもよい。追加の療法は、アジュバントまたはネオアジュバント療法の形式であってもよい。いくつかの実施形態において、追加の療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移剤の投与である。いくつかの実施形態において、追加の療法は、副作用制限剤（例えば、制嘔吐剤等の治療の副作用の発生及び／または重症度を低減することを意図された薬剤）の投与である。いくつかの実施形態において、追加の療法は、放射線療法である。いくつかの実施形態において、追加の療法は、手術である。いくつかの実施形態において、追加の療法は、放射線療法と手術の組み合わせである。いくつかの実施形態において、追加の療法は、γ線照射である。いくつかの実施形態において、追加の療法は、幹細胞移植である。いくつかの実施形態において、追加の療法は、上述の治療剤のうちの１つ以上の別個の投与であってもよい。
【０４１０】
本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、追加の療法は、癌免疫療法を含む。本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストを含む。本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−１結合アンタゴニストを含む。本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストを含む。本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、ＣＴＬＡ−４阻害を含む。本方法のいずれかのいくつかの実施形態では、癌免疫療法は、免疫アゴニストを含む。
【０４１１】
上述のかかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び個別投与を包含するが、この場合、本発明の抗体または免疫複合体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前に、それと同時に、かつ／またはその後に行われ得る。本発明の抗体または免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０４１２】
本発明の抗体または免疫複合体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口投与、肺内投与、及び鼻腔内投与、ならびに局所治療で所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、任意の好適な経路によるもの、例えば、注射によるものであってよく、例えば、投与が短時間であるか慢性的であるかに部分的に応じて、静脈内または皮下注射等によるものであってよい。単回または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０４１３】
本発明の抗体または免疫複合体は、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、投薬され、かつ投与されることになる。これに関連して考慮する要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に既知の他の要因が含まれる。必然的にではなく任意に、抗体または免疫複合体は、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤と共に製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫複合体の量、障害または治療の種類、及び以上で考察された他の要因によって決定される。これらは、一般に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％で、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０４１４】
疾患の予防または治療のために、本発明の抗体または免疫複合体の適切な投薬量は（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）、治療対象の疾患の種類、抗体または免疫複合体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体または免疫複合体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、患者の病歴、抗体または免疫複合体への反応、ならびに主治医の裁量によって決定されることになる。抗体または免疫複合体は、患者に、１回で、または一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によるものであれ、連続注入によるものであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または免疫複合体が、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日間またはそれより長い日数にわたる反復投与では、病態に応じて、治療は一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続される。抗体または免疫複合体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内となる。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の１つ以上の用量が患者に投与されてもよい。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週または３週間毎に（例えば、約２〜約２０回、または例えば、約６回用量の抗体を患者に投与するように）投与されてもよい。初回よりも高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用な場合がある。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。
【０４１５】
上記製剤または治療方法のいずれも、本発明の免疫複合体と抗ＣＬＬ−１抗体との両方を使用して行われ得ることが理解される。
【０４１６】
Ｈ．製品
本発明の別の態様において、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な物質を含有する製品が提供される。本製品は、容器と、その容器上の、またはそれと関連したラベルもしくは添付文書とを含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の多様な材料から形成され得る。容器は、それ自体で、または別の組成物と組み合わせて障害の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保有し、無菌アクセスポート（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアルであってもよい）を有してもよい。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、本発明の抗体または免疫複合体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が選定した病態を治療するために使用されることを表示する。さらに、製品は、（ａ）組成物がその中に含有された第１の容器（この組成物は本発明の抗体または免疫複合体を含む）、及び（ｂ）組成物がその中に含有された第２の容器（この組成物はさらなる細胞傷害性薬剤または治療剤を含む）を含んでもよい。本発明のこの実施形態の製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを表示する、添付文書をさらに含んでもよい。代替的に、または追加的に、製品は、注入用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、またはデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的な観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【０４１７】
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。以上に提供される一般的説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
【０４１８】
実施例１
Ａ．モノクローナル抗体生成
ヒト（ｈｕ）及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＬＬ−１に対するモノクローナル抗体を、以下の手順を使用して、動物を、哺乳動物発現系内で発現されたＮ末端Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）に融合した組み換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ、６５−２６５ｈｕＣＬＬ−１及び６５−２６５ｃｙｎｏＣＬＬ−１のアミノ酸）で免疫付与することによって生成した。ｈｕＣＬＬ１  ＥＣＤタンパク質（アミノ酸６５−２６５）は、２９％のマイナー対立遺伝子頻度（ＭＡＦ）を有するＳＮＰ、ＡＡＡ（Ｌｙｓ，Ｋ）２４４−＞ＣＡＡ（ＧＬＮ，Ｑ）を含んだ。
【０４１９】
陽性クローンを拡大し、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳによってｈｕＣＬＬ−１及びｃｙｎｏＣＬＬ−１への結合について再スクリーニングした。組み換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１を発現する安定した細胞株及び急性骨髄性白血病腫瘍細胞株上に発現された腫瘍由来ＣＬＬ−１による蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）によって、強く反応した５つのクローン、すなわちｍ３Ｈ１０、ｍ６Ｅ７、ｍ２０Ｂ１、ｍ２１Ｃ９、及びｍ２８Ｈ１２を特定した。マウス重及び軽可変ドメインのアミノ酸配列のアラインメントが、図１Ａ及びＢに示される。ｍ３Ｈ１０及びｍ２１Ｃ９は、同じ重鎖及び軽鎖ＣＤＲを共有し、ｍ２１Ｃ９重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列のみが、図１に示される。
【０４２０】
Ｂ．種交差反応性及び結合親和性
モノクローナル抗体を試験して、それらがｃｙｎｏＣＬＬ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ｈｕＣＬＬ−１タンパク質ＥＣＤに対して８５．０７％同一であり、８７．３５％類似である）と交差反応するかどうかを決定した。キメラ抗ＣＬＬ−１ヒトＩｇＧを、ＣＭ５センサーチップ上にコーティングしたマウス抗ヒトＩｇＧによって捕捉した。動態測定のために、ヒトまたはｃｙｎｏＣＬＬ−１の３倍段階希釈液（４．１ｎＭ〜１０００ｎＭ）を、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中に注入した。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを使用して算出した。平衡解離定数（ＫＤ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。下の表２は、５つの抗体（ｍ３Ｈ１０、ｍ６Ｅ７、ｍ２０Ｂ１、ｍ２１Ｃ９、及びｍ２８Ｈ１２）のキメラバージョンが、組み換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１の両方を認識したことを示し、ｈｕ及びｃｙｎｏ−ＣＬＬ−１による相互作用の動態に関する詳細を提供する。ｃｙｎｏＣＬＬ−１に対する交差反応性のさらなる確認を、カニクイザル（モーリシャス起源）由来の血液のＦＡＣＳ分析によって行った（データは示されていない）。
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【０４２１】
標準的手順（Ｈｏｌｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１２０５−１２１０（１９９２））に従ってＳｃａｔｃｈａｒｄ分析を実施して、ｃｈ６Ｅ７及びｃｈ２１Ｃ９を含む抗体の相対結合親和性を決定した。
【０４２２】
抗ＣＬＬ−１抗体を、間接Ｉｏｄｏｇｅｎ法を使用して［Ｉ１２５］標識した［Ｉ１２５］標識された抗ＣＬＬ−１抗体を、ＮＡＰ−５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用したゲル濾過によって遊離１２５Ｉ−Ｎａから精製し、精製したヨウ素化抗ＣＬＬ−１抗体は、８〜１０ｍmＣｉ／mｍｇの特異性活性の範囲を有した。固定された濃度の［Ｉ１２５］標識された抗体と減少する濃度の段階希釈した未標識抗体とを含有する５０mＬ体積の競合アッセイ混合物を、９６ウェルプレート内に定置した。組み換えｈｕもしくはｃｙｎｏＣＬＬ−１を安定して発現するＨＥＫ２９３ＡＤ細胞、または内因性ＣＬＬ−１を発現するＨＬ−６０腫瘍細胞を、５％ＣＯ°２中において３７℃で成長培地内にて培養した。Ｓｉｇｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを使用して細胞をフラスコから分離し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、３００ｍＭヒトＩｇＧ、及び０．１％アジ化ナトリウムを有するＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）からなる結合緩衝液で洗浄した。洗浄した細胞を、０．２ｍＬの結合緩衝液中に１００，０００個の細胞の密度で９６ウェルプレートに添加した。各ウェル内の［Ｉ１２５］標識された抗体の最終濃度は、約２５０ｐＭであった。競合アッセイにおける未標識抗体の最終濃度は、１０回の２倍希釈ステップを介した１０００ｎＭ〜緩衝液のみのアッセイの０ｎＭの範囲であった。競合アッセイを、３通り行った。競合アッセイを、室温で２時間インキュベーションした。２時間のインキュベーションの後、競合アッセイをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎフィルタープレート（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）に移し、結合緩衝液で４回洗浄して、結合していない（ｆｒｅｅ  ｆｒｏｍ  ｂｏｕｎｄ）［Ｉ１２５］標識された抗体を分離した。フィルターをＷａｌｌａｃ  Ｗｉｚａｒｄ  １４７０γカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）上で計数した。Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂａｒｄの適合アルゴリズムを使用して抗体の結合親和性を決定する（Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｂａｒｄ  １９８０）、ＮｅｗＬｉｇａｎｄソフトウェア（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を使用して、結合データを評価した。
【０４２３】
表は３、ＨＥＫ２９３ＡＤ  ＣＬＬ−１安定細胞によって発現された組み換えｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１に対する、ならびにＨＬ−６０細胞に対する親和性（０．４５〜１．２ｎＭのｋＤ範囲）を示す。
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【０４２４】
Ｃ．モノクローナル抗体エピトープ分類
細胞ベース競合結合ＦＡＣＳアッセイを使用して、エピトープ分類も決定した。ＨＬ−６０細胞を、５０〜１００倍過剰の未標識競合抗体と共に、または伴わずにプレインキュベーションションし、次に直接標識された検出抗体で染色した。検出抗体からのシグナルの低減は、未標識競合抗体が、検出抗体と同じまたは類似のＣＬＬ−１上の領域に結合することを示す。これは、検出物質（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）と競合物質（ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ）との両方に同じ抗体が使用される場合に発生する。異なる未標識抗体による検出物質シグナルのブロッキングが存在しないとき、未標識抗体は、ＣＬＬ−１内の異なる領域に結合している。
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【０４２５】
表４は、ＣＬＬ−１に対する抗体のエピトープ分類を示す。ｃｈ６Ｅ７及びｃｈ２１Ｃ９はＲ＆Ｄシステム−ＰＥ（クローン６８７３１７）と結合するが、ｃｈ２０Ｂ１及びｃｈ２８Ｈ１２は結合しない。Ｒ＆Ｄシステムはまた、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅクローンＨＢ３をブロッキングしたが、ｃｈ６Ｅ７及びｃｈ２１Ｃ９は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅクローンＨＢ３結合をブロッキングすることができなかった。ｃｈ２０Ｂ１及びｃｈ２８Ｈ１２は、任意の他の抗体と競合することができず、各抗体が別個のエピトープに結合することを示唆している。全ての抗体は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓクローン５０Ｃ１と競合することができず、同様にそれが別個のエピトープに結合することを示唆している。
【０４２６】
Ｄ．抗ＣＬＬ−１抗体のヒト化
モノクローナル抗体６Ｅ７及び２１Ｃ９を、下に記載されるようにヒト化した。残基番号は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に従う。
【０４２７】
６Ｅ７及び２１Ｃ９のヒト化中に構築された変異形を、ＩｇＧの形態で評価した。マウス６Ｅ７及び２１Ｃ９のＶＬ及びＶＨドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨ下位集団Ｉ（ＶＨＩ）コンセンサス配列と整列させた。マウス抗体の超可変領域を、ＶＬＫＩ及びＶＨＩアクセプターフレームワークに操作した。具体的には、ｍｕ６Ｅ７及びｍｕ２１Ｃ９  ＶＬドメインから、２４〜３４位（Ｌ１）、５０〜５６位（Ｌ２）、及び８９〜９７位（Ｌ３）を、ＶＬＫＩに移植し、ｍｕ６Ｅ７及びｍｕ２１Ｃ９  ＶＨドメインから、２６〜３５位（Ｈ１）、５０〜６５位（Ｈ２）、及び９３〜１０２位（Ｈ３）を、ＶＨＩに移植した。
【０４２８】
このセッションにおける抗体の結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００  Ｆｏｒｍａｔによって決定した。簡潔に述べると、供給業者の指示に従って、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）リサーチグレードＣＭ５チップを、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）試薬により活性化した。ヤギ抗ヒトＦｃＩｇＧをチップにカップリングして、各フローセルにおいておよそ１０，０００応答単位（ＲＵ）を達成した。未反応のカップリング基を、１Ｍのエタノールアミンでブロッキングした。動態測定のために、抗体を捕捉して、およそ３００ＲＵを達成した。ヒトＣＬＬ−１の３倍段階希釈液を、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．００５％の界面活性剤Ｐ２０）中に、３０μｌ／分の流速で２５℃にて注入した。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ第２．０版）を使用して算出した。平衡解離定数（Ｋｄ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出した。
【０４２９】
ＣＤＲ移植ヒト化６Ｅ７抗体の結合親和性を、キメラ６Ｅ７と比較した。ＣＤＲ移植ヒト化６Ｅ７抗体の追加の変異形を作製して、ＣＬＬ−１への結合に対する他のバーニア位置の寄与を評価した。６Ｅ７に関して、初めに４つの追加の軽鎖（Ｌ１：ＣＤＲ移植＋（Ｌ４、Ｌ４８、及びＫ４９）、Ｌ２：ＣＤＲ移植＋Ｌ４、Ｌ３：ＣＤＲ移植＋Ｋ４９、及びＬ４：ＣＤＲ移植＋Ｋ４９）、及び５つの追加の重鎖（Ｈ１：ＣＤＲ移植＋（Ａ６７、Ｌ６９、Ｖ７１、Ｋ７３）、Ｈ２：ＣＤＲ移植＋Ａ６７、Ｈ３：ＣＤＲ移植＋Ｌ６９、Ｈ４：ＣＤＲ移植＋Ｖ７１、及びＨ５：ＣＤＲ移植＋Ｋ７３）。軽鎖上のＫ４９は、重要なマウスバーニア残基であり、突然変異分析に基づき、重鎖上のＬ６９及びＶ７１は、重要なマウスバーニア残基であると決定された（データは示されて位いない）。キメラ６Ｅ７は９．５９Ｅ−１０ＭのＫＤで結合し、一方ＣＤＲ移植＋Ｋ４９（ＬＣ）＋（Ａ６７、Ｌ６９、Ｖ７１、Ｋ７３（ＨＣ））、ＣＤＲ移植＋Ｋ４９（ＬＣ）＋（Ｌ６９、Ｖ７１（ＨＣ））は、それぞれ１．４０Ｅ−９Ｍ、及び１．３７Ｅ−９ＭのＫＤで結合した。
【０４３０】
ＣＤＲ移植ヒト化２１Ｃ９抗体の結合親和性を、キメラ２１Ｃ９抗体と比較した。ＣＤＲ移植ヒト化２１Ｃ９抗体の追加の変異形を作製して、ＣＬＬ−１への結合に対する他のバーニア位置の寄与を評価した。２１Ｃ９に関して、初めに３つの追加の軽鎖（Ｌ１：ＣＤＲ移植＋（Ｆ３６及びＳ４３）、Ｌ２：ＣＤＲ移植＋Ｆ３６、Ｌ３：ＣＤＲ移植＋Ｓ４３）、及び５つの追加の重鎖（Ｈ１：ＣＤＲ移植＋（Ａ６７、Ｌ６９、Ｖ７１、Ｋ７３）、Ｈ２：ＣＤＲ移植＋Ａ６７、Ｈ３：ＣＤＲ移植＋Ｌ６９、Ｈ４：ＣＤＲ移植＋Ｖ７１、及びＨ５：ＣＤＲ移植＋Ｋ７３）。軽鎖上のＦ３６は、重要なマウスバーニア残基であった。キメラ２１Ｃ９は、８．６１５Ｅ−９ＭのＫＤで結合し、一方ＣＤＲ移植＋（Ｆ３６及びＳ４３（ＬＣ））＋Ｌ６９（ＨＣ）及びＣＤＲ移植＋Ｆ３６（ＬＣ）＋Ｌ６９（ＨＣ）は、それぞれ１．０５３Ｅ−８Ｍ及び９．７８５−９ＭのＫＤで結合した。重鎖上のＬ６９は、重要なマウスバーニア残基であると決定された。
【０４３１】
ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ及び２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３を、ｃｙｎｏ結合アッセイでｃｙｎｏＣＬＬ−１をｈｕＣＬＬ−１と置き換えたことを除き、ヒト及びｃｙｎｏＣＬＬ−１に結合するそれらの能力について上述の通りに試験した。ヒト化抗体の結合特性は、下の表５に示される。ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅの結合親和性は、ＨＬ−６０、ＥＯＬ−１、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、及び２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ０．３４、０．２９、０．２２、及び０．３５Ｋｄ（ｎＭ）であった。ヒト化２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３の結合親和性は、ＨＬ−６０、ＥＯＬ−１、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、及び２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ１．３、０．７４、２．４、及び３．６Ｋｄ（ｎＭ）であった。
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【０４３２】
ヒト化抗体６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ及び２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３を、熱応力下（４０℃、ｐＨ５．５、２週間）及び２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）塩酸塩（ＡＡＰＨ）分析で試験した試料に熱応力付与して、生成物の保存期間にわたる安定性を模倣した。試料を、２０ｍＭのＨｉｓ  Ａｃｅｔａｔｅ、２４０ｍＭのスクロース、ｐＨ５．５へと緩衝液交換し、１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。１ｍＬの試料に４０℃で２週間応力付与し、２番目を対照として−７０℃で保管した。次に、トリプシンを使用して両試料を消化して、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）−質量分析（ＭＳ）分析を使用して分析され得るペプチドを作成した。試料中の各ペプチドについて、ＬＣからの保持時間、ならびに高解像度精密質量及びペプチドイオン断片化情報（アミノ酸配列情報）を、ＭＳにおいて取得した。抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）を、＋−１０ｐｐｍのウィンドウにおけるデータセットから関心のペプチド（天然及び修飾ペプチドイオン）について行い、ピークを統合して、面積を決定した。各試料について、（修飾ペプチドの面積）を（修飾ペプチドの面積＋天然ペプチドの面積）で除し、１００を乗ずることにより、修飾の相対パーセンテージを算出した。
【０４３３】
６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ及びｈ２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３のどちらも、ＤＲ−Ｈ２内にＮ５４Ｇ５５を有し、これは、脱アミノ化の影響を受けやすい（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅに関して、ｔ０＝１３．２％及びｔ２ｗｋ  １４．５％、ｒ０＝１１％及びｔ２ｗｋ＝１１．９％）。両抗体のＮ５４変異形を試験して、潜在的な脱アミノ化がｈｕ及びｃｙｎｏＣＬＬ−１への結合に影響を及ぼすことなく低減され得るかどうかを決定した。表６を参照されたい。
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【０４３４】
ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ  ＣＤＲ−Ｈ２  Ｎ５４抗体変異形について、Ａ５４は、Ｎ５４に最も類似した許容される結合特徴を有した。ヒト化２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３  ＣＤＲ−Ｈ２  Ｎ５４抗体変異形について、全ての変異形は、ｏｆｆ速度（１０〜３０倍）においてｈｕＣＬＬ−１に対して、及びｏｎ速度（６０〜５００倍）においてｃｙｎｏＣＬＬ−１に対して、親和性の低下を示した。ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅの結合親和性は、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１、ＨＬ−６０、及びＥＯＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ０．６７、０．６８、０．６、及び０．２５  Ｋｄ（ｎＭ）であった。ヒト化６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＮ５４Ａの結合親和性は、２９３ＡＤ／ｃｙｎｏＣＬＬ１、２９３ＡＤ／ｈｕＣＬＬ−１、ＨＬ−６０、及びＥＯＬ−１細胞を使用してＳｃａｔｃｈａｒｄによって決定したときに、それぞれ０．９、０．８９、０．６４、及び０．３２Ｋｄ（ｎＭ）であった。ヒト化６Ｅ７及び２１Ｃ９抗体の重及び軽可変ドメインアミノ酸配列のアラインメントは、それぞれ、図２Ａ〜Ｂ及び図３Ａ〜Ｂに示される。
【０４３５】
Ｅ．エピトープマッピング
ＣＬＬ−１の結合エピトープを決定するために、（ａ）遊離抗原ＣＬＬ−１及び（ｂ）３つの異なる抗原−ｍＡｂ複合体の試験を、ヒドロキシルラジカルフットプリント（ＨＲＦ）技法を使用して実施した。試料を、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙにおいて、Ｘ２８ｃ  Ｂｅａｍラインを使用して０、１０、１５、及び２０ミリ秒（ｍｓ）の間隔でヒドロキシルラジカルに曝露した。標識された試料を、ＰＮＧａｓｅ  Ｆを使用して脱グリコシル化させた。実験プロトコルを最適化するために、脱グリコシル化試料に対してパイロット実験を初めに行った。ＭＳを使用したパイロット調査は、試料が著しい量のポリマー汚染を含有することを示し、追加の洗浄が必要であることを明らかにした。ポリマー汚染を取り除くために、アセトン中トリクロロ酢酸を使用して試料を沈殿させ、ＬＣ−ＭＳ分析を行った。沈殿ステップは成功し、ＭＳにおけるポリマー汚染シグナルは著しく弱まった。洗浄した試料を、還元化してアルキル化し、トリプシンを使用して消化した後、液体クロマトグラフィーを高解像度質量分析（ＬＣ−ＭＳ）と併用して行った。ＭＳデータを、ＰｒｏｔＭａｐＭＳを使用して分析し、各ペプチドの用量応答プロットを得た。遊離抗原の結果を、複合体型の各々と比較した。Ｓｗｉｓｓ−Ｍｏｄｅｌソフトウェアを使用して抗原の相同性ベースモデルを生成し、３つの複合体の各々に関して溶媒保護領域をマッピングした。
【０４３６】
トリプシンマッピングを使用して得た全体の配列包括度は、９０．０５％であった。欠けている領域は主に、４残基よりも短い長さのトリプシンペプチドからなり、これは、ＬＣカラム上でのその弱い保持特性のため、検出が本来困難であり得る。ＨＲＦ処理は、タンデム質量分析データから特定された特定の質量シフトをもたらす安定した側鎖酸化修飾を導入する。選択イオンクロマトグラム（ＳＩＣ）を抽出し、（特定のｍ／ｚの）ペプチドイオンの未酸化形及び全ての酸化形に関して統合した。これらのピーク面積値を使用して、用量応答（ＤＲ）プロットの形式で反応速度を特徴付けた。これは、ヒドロキシルラジカル曝露の関数としてインタクトなペプチドの損失を測定する。複合体内の溶媒保護領域は、遊離抗原とは対照的に段階的な酸化反応を経る。酸化の速度の差（速度定数、ＲＣと呼ばれる）は、エピトープの場所をハイライトするように機能し得る。
【０４３７】
ＰｒｏｔＭａｐＭＳを使用してＭＳデータを処理し、各ペプチドのＲＣ値を得た。最終的な結果は、表１に示される。ペプチドの場所及び対応する配列は、１列目及び２列目に示される。３列目は、複合体１（６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４抗体及びＣＬＬ−１抗原）の保護比、ＰＲ（＝ＲＣ抗原／ＲＣ複合体）を示す。同様に、４及び５列目は、複合体２（Ｋａｂａｔ付番に従うＫ１４９（Ｋ１４９Ｃ）におけるシステイン残基を含む軽鎖で操作された２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３抗体及びＣＬＬ−１抗原）及び複合体３（Ｒ＆Ｄシステムモノクローナル抗ＣＬＬ１抗体（クローン６８７３１７）及びＣＬＬ−１抗原）の対応する保護比を示す。特定の所与のペプチドのＰＲ値が１未満である場合、対応する領域は、複合体形成中に導入される構造的変化のために溶媒露出度の増加を経た。１に近いＰＲ値は、その領域の溶媒露出度が変化していないままであることを示し、１超のＰＲは、対応する領域が複合体形成の関数として溶媒からの保護を示すことを示唆する。各複合体に関してペプチドの大部分のＰＲ値が１に近く、対応する領域の溶媒露出度の最小の変化を示している。ペプチド１４２〜１５８は、３つ全ての抗体について最も高いＰＲ値を常に示し、著しい領域の保護を示唆している。ペプチド１４２〜１５８の保護に加えて、Ｒ＆Ｄシステムモノクローナル抗ＣＬＬ１抗体（クローン６８７３１７）は、６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡＧ及び２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３とは異なり、重複ペプチド１０３〜１１６及び１０５〜１１６によって示される通り、領域１０３〜１１６の著しい保護も示した。
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【０４３８】
Ｆ．抗ＣＬＬ−１抗体の内在化
ＡＤＣ標的の１つの望ましい属性は、抗体を、細胞内で分解区画に内在化する能力である。抗ＣＬＬ−１抗体が結合時に内在化されるかどうかを決定するために、ＨＬ−６０またはＨＬ−６０細胞を、ＲＰＭＩ培地内で０．３ｍｇ／ｍｌのｈＩｇＧと共に３７℃で２時間プレインキュベーションションして、ＦｃＲへの非特異的結合を低減した後、細胞培養物で処理した４ウェルチャンバスライド（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）内に播種した。１μｇ／ｍＬの最終濃度でＤｙｌｉｇｈｔ４８８に直接コンジュゲートされた抗体を、ｈＩｇＧでブロッキングした細胞と共に、暗所で３０分間、氷上にてインキュベーションした。細胞を即座に撮像して膜染色（Ｔ０）を示し、その後Ｌｅｉｃａ  ＳＰ５共焦点顕微鏡を用いて３７℃で１０時間にわたってタイムラプス撮影した。代表的な例のｃｈ２１Ｃ９は、ＨＬ−６０細胞によって３０分以内に迅速に内在化される（データは示されていない）。リソソームに対するｃｈ２１Ｃ９の限局化を、標的細胞を殺傷する抗体薬物複合体の能力を測定するｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞ベースアッセイを使用して確認した。
【０４３９】
Ｇ．抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体の産生
抗体を大量に産生する場合、抗体は、ＣＨＯ細胞内で産生された。ＶＬ及びＶＨをコードするベクターを、ＣＨＯ細胞中にトランスフェクトし、ＩｇＧを、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって細胞培養培地から精製した。
【０４４０】
抗ＣＬＬ−１抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を、抗体ｃｈ２１Ｃ９、ｃｈ３Ｈ１０、ｃｈ２８Ｈ１２、ｃｈ２０Ｂ１、ｃｈ６Ｅ７、６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ、６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４、２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３を、リンカーを介してＰＢＤ及びＰＮＵ誘導体にコンジュゲートすることによって産生した。
【０４４１】
最初に単離されるため、抗体中の操作されたシステイン残基は、細胞チオール（例えば、グルタチオン）との混合ジスルフィドとして存在し、そのためコンジュゲートには使用不可能である。これらの抗体の部分還元（例えば、ＤＴＴによる）、精製、及びデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）での再酸化により、例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：９２５−９３２及びＵＳ２０１１／０３０１３３４で以前に説明されたように、コンジュゲートに使用可能な遊離システインスルフィドリル基を有する抗体がもたらされる。簡潔に述べると、抗体を薬物−リンカー部分と組み合わせて、抗体の遊離システイン残基に薬物−リンカー部分をコンジュゲートすることを可能にした。数時間、ＡＤＣを精製した。
【０４４２】
Ｈ．ＨＬ−６０及びＥＯＬ−１ヒト急性骨髄性白血病細胞株異種移植片モデルにおける抗ＣＬＬ−１抗体薬物複合体の有効性
抗ＣＬＬ−１  ＡＤＣの有効性を、ヒト急性骨髄性白血病異種移植片モデル、ＨＬ−６０（ＡＭＬサブタイプＭ２）及びＥＯＬ−１（ＡＭＬサブタイプＭ４ａ）を使用して調査した。これらのどちらも、それらの遺伝学及び分子異常の結果として中程度〜不良な予後に関連する。雌Ｃ．Ｂ−１７  ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）を各々、ＨＬ−６０またはＥＯＬ−１の５００万個の細胞で隣接領域に皮下接種した。異種移植片腫瘍が１００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に到達したとき（０日目と称される）に、動物を各々７〜１０匹のマウスの群に無作為に分け、ＡＤＣの単回静脈内注射を施した。ＡＤＣの投与のおよそ４時間に、動物に過剰量（３０ｍｇ／ｋｇ）の抗ｇＤ対照抗体を腹腔内投薬して、腫瘍細胞上の想定される非特異的抗体結合部位をブロッキングした。マウスの腫瘍及び体重を、試験を通して週１〜２回測定した。体重損失がそれらの出発体重の２０％を超えたとき、マウスを即座に安楽死させた。腫瘍が３０００ｍｍ３に到達するか、または切迫した潰瘍化の兆候を示す前に、全ての動物を安楽死させた。抗体の存在を、注射後１、７、及び１４日目にＰＫ採血により確認した。
【０４４３】
図４に示されるように、ＥＵ付番に従う重鎖アミノ酸１１８（Ａ１１８Ｃ）における遊離システインを介してＰＮＵ薬物部分：
2020203901.tif 000062
にコンジュゲートされたｃｈ２１Ｃ９、ｃｈ２８Ｈ１２、ｃｈ２０Ｂ１、ｃｈ６Ｅ７、及びｃｈ３Ｈ１０は、ＥＯＬ−１腫瘍体積を著しく低減させ、一方ｃｈ２０Ｂ１は、腫瘍体積を適度に低減させ、ｃｈ２８Ｈ１２は、効果がほとんどなかった。図５に示されるように、ＨＬ−６０を使用して同様の結果が見られた。
【０４４４】
ヒト化抗体、６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅ及び２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３を、システイン操作された異なるコンジュゲート部位を介して、種々の用量（１０及び２０μｇ／ｍ２）でＰＢＤ誘導体（ＳＧ３４）にコンジュゲートした。抗体は、ＥＵ付番に従う重鎖アミノ酸１１８（Ａ１１８Ｃ）またはＫａｂａｔ付番に従う軽鎖アミノ酸１４９（Ｋ１４９Ｃ）において、操作された遊離システインを含んだ。抗体−薬物複合体の構造は、下記に示される：
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図６に示されるように、ＨＬ−６０異種移植片モデルにおいて、６Ｅ７Ｌ４Ｈ１ｅかまたは２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３かのいずれかを含む軽鎖Ｋ１４９Ｃシステイン操作された免疫複合体は、６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅかまたは２１Ｃ９．Ｌ２Ｈ３かのいずれかを含む重鎖Ａ１１８Ｃシステイン操作された免疫複合体よりも腫瘍体積の大きな低減を示した。
【０４４５】
潜在的な脱アミノ化部位６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅＡ５４を除去するために、腫瘍体積を低減する能力を６Ｅ７．Ｌ４Ｈ１ｅと操作された変異形との間でも比較して、抗体の活性及び結合が保持されたかどうかを決定した。図７に示されるように、６Ｅ７Ｌ４Ｈ１ｅ及び６Ｅ７のどちらも、ＨＬ−６０異種移植片モデルにおいて腫瘍体積を著しく低減させた。
【０４４６】
実施例２  （表Ａ）に例示される抗体薬物複合体を作製するために使用されるリンカー−薬物（ＬＤ）中間体の合成
ＡＤＣ−５１：（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（ＭＳ（ＥＳＩ）：８７５［Ｍ＋Ｈ］＋）のリンカー−薬物中間体を、ＷＯ２０１３／０５５９８７の手順によって調製した。
2020203901.tif 000064
【０４４７】
塩化スルフリル（２．３５ｍＬの１．０ＭのＤＣＭ溶液、２．３５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下で、０℃（氷／アセトン）にて５−ニトロピリジン−２−チオール（３３４ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭの撹拌懸濁液（７．５ｍＬ）に滴下した。反応混合物は黄色の懸濁液から黄色の溶液となり、それを、室温に加温し、次に２時間撹拌した後、溶媒を真空内蒸発により除去して、黄色の固体を得た。固体をＤＣＭ（１５ｍＬ）中で再溶解し、アルゴン雰囲気下で０℃にて、（Ｒ）−２−メルカプトプロパン−１−オル（２１３ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（７．５ｍＬ）で滴下処理した。反応混合物を室温に加温し、２０時間撹拌し、この時点でＬＣ／ＭＳによる分析は、保持時間１．４１分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ２４７（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％相対強度）における実質的な生成物形成を示した。沈殿物を濾過により除去し、濾液を真空内で蒸発させてオレンジ色の固体を得て、それを、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）で処理し、水酸化アンモニウム溶液で塩基性化した。混合物をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出し、組み合わせた抽出物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空内で蒸発させて、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１％増分の勾配溶離：１００％ＤＣＭから９８：２のｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製により、（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オルを油として得た（１１１ｍｇ、２１％収率）。
【０４４８】
トリホスゲン（４８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロパン−１−オル（１１１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及びピリジン（３４μＬ、３３．５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を含む乾燥ＤＣＭの撹拌溶液（５ｍＬ）に添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下で４５分間撹拌し、その後、溶媒を真空内蒸発により除去して、（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピルカルボノクロリデートを黄色のフィルムとして得た。生成物は、精製または分析することなく、次のステップで用いた。
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【０４４９】
（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピルカルボノクロリデート（約１３９ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（５ｍＬ）を、ＷＯ２０１３／０５５９８７の実施例１の手順により作製したジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（ペンタン−１，５−ジイルビス（オキシ））ビス（６−（（２Ｒ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンシクロペンタン−１−カルボニル）−４−メトキシ−３，１−フェニレン））ジカルバメート５１ａ（４３０ｍｇ、約０．４５ｍｍｏｌ）とピリジン（４０μＬ、３９ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ撹拌溶液（１２ｍＬ）に室温で滴下した。反応混合物をアルゴン雰囲気下で２．５時間撹拌し、この時点で、ＬＣ／ＭＳによる分析は、保持時間２．４２分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ１２２６（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約２０％相対強度）、１２４８（［Ｍ＋Ｎａ］＋．、約６０％相対強度）における実質的な生成物形成を示した。混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、ＳｉＯ２で処理し、溶媒を真空内蒸発により除去した。結果として生じた残基を、フラッシュクロマトグラフィー（１０％増分の勾配溶離：８０：２０のｖ／ｖのヘキサン／ＥｔＯＡｃから７０：３０のｖ／ｖのヘキサン／ＥｔＯＡｃ）により精製して、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（５−（４−（（Ｓ）−２−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシ−５−（（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）ペンチル）オキシ）−４−メトキシフェニル）カルバメート５１ｂを黄色の発泡体として（４１９ｍｇ、７６％収率）得た。（ＭＳ（ＥＳＩ）：１２２４［Ｍ＋Ｈ］＋）
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【０４５０】
氷酢酸（２４ｍＬ）を、ＴＢＳ−保護５１ｂ（４１９ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）及びＨ２Ｏ（８ｍＬ）の撹拌溶液に添加した。反応混合物を１６時間撹拌し、この時点で、ＬＣ／ＭＳによる分析は、保持時間１．８２分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ９９７（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％相対強度）、１０１９（［Ｍ＋Ｎａ］＋．、約４５％相対強度）において観察された所望の生成物による反応の完了を示した。反応混合物を、ＮａＨＣＯ３（４００ｍＬ）の冷却した（０〜５℃）飽和溶液に滴下した。中性溶液を室温に加温し、ＥｔＯＡｃ（４×１００ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機層をＨ２Ｏ（８０ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空内で蒸発させて、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１％増分の勾配溶離：１００％ＤＣＭから９８：２のｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製により、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−５−（（５−（４−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチレンピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシ−５−（（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）ペンチル）オキシ）−４−メトキシフェニル）カルバメート５１ｃを帯黄色の発泡体として得た（３４１ｍｇ、１００％収率）。（ＭＳ（ＥＳＩ）：９９５［Ｍ＋Ｈ］＋）。
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【０４５１】
無水ＤＭＳＯ（１０７μＬ、１８８ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（７．５ｍＬ）を、アルゴン雰囲気下で、−４５℃（ドライアイス／ＣＨ３ＣＮ）にて塩化オキサリル（４１０μＬの２．０ＭのＤＣＭ溶液、０．８２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（７．５ｍＬ）撹拌溶液に滴下した。−４５℃で１５分間撹拌した後、反応混合物を５１ｃ（３４１ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）溶液で滴下処理した。−４５℃でさらに１時間撹拌した後、反応混合物を、ＴＥＡ（４７６μＬ、３４２ｍｇ、３．４２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（７．５ｍＬ）溶液で滴下処理した。反応混合物を１．５時間にわたり室温に加温し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、次に飽和ＮＨ４Ｃｌ（１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（１５ｍＬ）、塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空内で蒸発させて、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（０．４％増分の勾配溶：１００％ＤＣＭから９８．４：１．６のｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製により、ｔｅｒｔ−ブチル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−８−（（５−（（（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−１０−（（（Ｒ）−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロポキシ）カルボニル）−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ｈｅｘａｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート５１ｄを帯黄色の発泡体として得た（２２７ｍｇ、６７％収率）：ＬＣ／ＭＳ保持時間１．６９分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ９９３（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約８０％相対強度）、１０１５（［Ｍ＋Ｎａ］＋．、約２０％相対強度）。
【０４５２】
９５：５のｖ／ｖのＴＦＡ／Ｈ２Ｏの溶液（４ｍＬ）を、５１ｄ（２１６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の粗試料に０℃（氷／アセトン）で添加した。０℃で３０分間攪拌した後、ＬＣ／ＭＳ、所望の生成物ピーク保持時間１．６０分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ８７５（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％相対強度）により判断して、反応が完了したと見なした。反応混合物を低温に維持し、ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）の冷却した飽和水溶液に滴下した。混合物をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機層を、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空内で蒸発させて、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（０．４％増分の勾配溶離：１００％ＣＨＣｌ３から９８．４：１．６のｖ／ｖのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ）による精製により、ＬＤ−５１を黄色の発泡体として得た（１２７ｍｇ、６６％収率）：ＬＣ／ＭＳ（１５分間実行）、保持時間６．１８分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ８７５（［Ｍ＋Ｈ］＋．，約１００％相対強度）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ９．２１（ｓ，１Ｈ）、８．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、７．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）、７．４９（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｓ，１Ｈ）、６．７９（ｓ，１Ｈ）、６．７４（ｓ，１Ｈ）、５．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４，９．８Ｈｚ）、５．２２−５．１０（ｍ，４Ｈ）、４．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ）、４．３３−４．２５（ｍ，４Ｈ）、４．１５−３．９８（ｍ，５Ｈ）、３．９５−３．８０（ｍ，７Ｈ）、３．６８−３．５９（ｍ，１Ｈ）、３．２０−３．０７（ｍ，２Ｈ）、２．９９−２．８７（ｍ，２Ｈ）、２．７６−２．６８（ｍ，２Ｈ）、１．９９−１．８３（ｍ，４Ｈ）、１．７２−１．５７（ｍ，２Ｈ）、１．１９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０４５３】
ＡＤＣ−５２：２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル（２，５−ビス（（Ｅ）−３−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−イル）−３−オキソプロプ−１−エン−１−イル）フェニル）カルバメート（ＭＳ（ＥＳＩ）：１０９８［Ｍ＋Ｈ］＋）のリンカー−薬物中間体を、ＷＯ２０１５／０２３３５５の手順によって調製した。ＬＤ−５３：（Ｓ）−１−（クロロメチル）−３−（（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−３−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−イル）−３−オキソプロプ−１−エン−１−イル）−２−（２−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エトキシ）エトキシ）フェニル）アクリロイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルリン酸二水素（ＭＳ（ＥＳＩ）：９９４［Ｍ＋Ｈ］＋）を、ＷＯ２０１５／０２３３５５の手順によって調製した。
【０４５４】
ＡＤＣ−５４：（Ｒ）−２−（（３−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル（１１Ｓ，１１ａＳ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−８−（（５−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）ペンチル）オキシ）−２−メチレン−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（ＭＳ（ＥＳＩ）：８７６［Ｍ＋Ｈ］＋）のリンカー−薬物中間体を、ＷＯ２０１３／０５５９８７の手順によって調製した。
【０４５５】
ＡＤＣ−５５：４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル）エタン−１，２−ジイルビス（メチルカルバメート）のリンカー−薬物中間体。
【０４５６】
ＵＳ８３８９６９７号の実施例３に従い、ＷＯ１９９８／０２４４６、及びＵＳ８４７０９８４の実施例１に報告されるように調製されたＰＮＵ−１５９６８２（１５．３ｍｇ、０．０２０３８ｍｍｏｌ）を含む３ｍＬのメタノール及び２ｍＬのＨ２Ｏの溶液に、ＮａＩＯ４（５．１ｍｇ、０．０２３８ｍｍｏｌ）を含む１ｍＬのＨ２Ｏの溶液を添加した。出発物質が検出不可能になるまで、反応混合物を室温で３時間撹拌した（ＴＬＣ及びＨＰＬＣ分析）。溶媒を減圧下で除去し、赤色の粗固体（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−｛［（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］［１，３］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル］オキシ｝−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボン酸５５ａ（ＭＳ（ＥＳＩ）：６２８［Ｍ＋Ｈ］＋）を、ＷＯ２０１０／００９１２４の手順によりＬＤ−５５（ＭＳ（ＥＳＩ）：１３５５［Ｍ＋Ｈ］＋）に変換した。
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【０４５７】
ＡＤＣ−５６のリンカー−薬物中間体：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド（ＭＳ（ＥＳＩ）：８４２［Ｍ＋Ｈ］＋）を、ＷＯ２０１３／０５５９８７の手順によって調製した。
【０４５８】
ＡＤＣ−５７のリンカー−薬物中間体：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド（ＭＳ（ＥＳＩ）：８５６［Ｍ＋Ｈ］＋）を、ＵＳ８３８９６９７の手順によって調製した。
【０４５９】
ＡＤＣ−５８のリンカー−薬物中間体：（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−Ｎ−（２−メチル−２−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）プロピル）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド（ＭＳ（（ＥＳＩ）：８７０［Ｍ＋Ｈ］＋）を、ＵＳ８３８９６９７号の手順によって調製した。
【０４６０】
上述の発明は、明確な理解を目的として、例示説明及び例により、ある程度詳細に記載されたが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
2020203901.tif 000082
【図３Ａ】
2020203901.tif 000083
【図３Ｂ】
2020203901.tif 000084
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年9月4日(2020.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
発明の詳細な説明に記載の発明。
【外国語明細書】
2020203901000001.pdf