(57)【要約】【課題】サイトカイン産生を誘導する、新規修飾環状ジヌクレオチド化合物（「ＣＤＮ」）、およびその薬学的に許容される塩を提供する。【解決手段】式（Ｉ）の化合物（式中、塩基1および塩基2は、請求項１の通り定義される）は、ＳＴＩＮＧのモジュレーターである。2020203887.tif 000033【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2020203887.tif 000032
（式中、
塩基1および塩基2は、それらのＮ9窒素原子を介して結合した、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、およびヒポキサンチンからなる群から独立して選択される）
またはその塩。
【請求項２】
塩基1および塩基2が、アデニンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
塩基1が、アデニンであり、塩基2が、グアニンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
塩基1が、グアニンであり、塩基2が、アデニンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
塩基1が、アデニンであり、塩基2が、ヒポキサンチンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物の実質的に純粋な（Ｓｐ，Ｓｐ）、（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）、もしくは（Ｒｐ，Ｓｐ）立体異性体、またはその塩。
【請求項７】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物の薬学的に許容される塩。
【請求項８】
１つまたは複数の請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物。
【請求項９】
請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物を含む、ワクチン。
【請求項１０】
１つまたは複数の請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および１つまたは複数の追加の治療剤を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物。
【請求項１１】
１つの請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物、および１つまたは複数の追加の治療剤を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
医薬として使用するための、請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
ワクチンアジュバントとしての、請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
それを必要とする患者における、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、感染性疾患またはがんの処置のための方法であって、１つまたは複数の請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物が患者に投与されることを特徴とする、方法。
【請求項１５】
ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、感染性疾患またはがんの処置のための方法であって、１つまたは複数の請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物が患者に投与されることを特徴とする方法において使用するための、請求項１から７までのいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サイトカイン産生を誘導する、式（Ｉ）の新規修飾環状ジヌクレオチド化合物（「ＣＤＮ」）、およびその薬学的に許容される塩に関する。これらの修飾ＣＤＮは、その両方がプリン核酸塩基およびホスホロチオエート部分を含む、１つの３’，５’−連結ロックド核酸（ＬＮＡ）および２’−モノフッ素化３’，５’−連結ヌクレオチドから構成される。加えて、本発明は、前記化合物を含む医薬組成物および組合せに関し、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）に関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患の処置のための方法におけるそれらの使用に関する。特に、本発明の医薬組成物は、炎症、アレルギー性および自己免疫性の疾患、感染性疾患、がんの治療に適しており、ワクチンアジュバントとして適している。
【背景技術】
【０００２】
免疫系の役割は、病原体および悪性細胞から身体を保護することである。しかし、ウイルスおよびがん細胞は、免疫系を回避する方法を見つけ出す。したがって、免疫療法の目的は、病原性侵入物またはがん細胞に対して、免疫系のある特定の細胞型において、抗原特異的免疫応答を開始させるか、または既存の応答を再活性化することである。
【０００３】
免疫系は、自然免疫系および適応免疫系の２つの支流に大まかに分類することができるいくつかの特化された系統からなる。免疫反応が成功するには、両方の支流からの系統が協調して作用しなければならない。自然免疫系の主な役割は、適応系と異なり、抗原特異的および持続的ではない、病原体または悪性細胞に対する迅速な免疫応答を具備することである。病原体または形質転換細胞を直接的に殺傷することに加えて、自然免疫系はまた、適応免疫系を活性化し、その後、誘導する。樹状細胞などの抗原提示細胞は、リンパ組織中でＴ細胞に対するペプチド−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）複合体の形態の抗原を捕捉し、提示する。この抗原提示は、ある特定のサイトカインの分泌と一緒になって、抗原特異的エフェクターＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞の活性化および分化をもたらす。抗原提示細胞および他の細胞型によるＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）産生は、Ｉ型ＩＦＮの欠乏の結果としてウイルス感染または腫瘍細胞に対するＴ細胞依存性免疫応答の低減が生じる場合、Ｔ細胞の活性化における重要なイベントであると考えられる（Zitvogel et al, Nature Reviews Immunology 15, 405 - 414, 2015）。他方で、がん治療中のＩ型ＩＦＮシグネチャーの存在は、腫瘍浸潤Ｔ細胞数の増加および潜在的に良好な臨床結果と関連する（Sistigu et al, Nature Medicine 20, 1301 - 1309, 2014）。
マウスにおける最近の研究は、腫瘍微小環境におけるＩ型ＩＦＮの効率的な分泌、およびがん細胞に対するＴ細胞依存性免疫応答の誘導が、インターフェロン遺伝子のアダプタータンパク質刺激因子（ＳＴＩＮＧ、これはＴｍｅｍ１７３、ＭＰＹＳ、ＭＩＴＡ、ＥＲＩＳとしても公知である）の存在に依存することを示している（Woo et al, Immunity 41, 5, 830 - 842, 2014; Corrales et al, Cell Reports 11, 1018 - 1030, 2015; Deng et al, Immunity 41, 5, 843 - 852, 2014）。Ｉ型ＩＦＮの存在の重要性は、ＳＴＩＮＧの欠失の結果として腫瘍微小環境におけるＩ型ＩＦＮレベルの低減、およびいくつかのマウス腫瘍モデルにおける抗腫瘍効果の低減が生じた事実により強調された。他方で、ＳＴＩＮＧの特異的活性化の結果、がん細胞に対する抗原特異的Ｔ細胞免疫応答の改善がもたらされた。
【０００４】
ＳＴＩＮＧは、核酸センサーのファミリーに属し、サイトゾルＤＮＡシグナル伝達のためのアダプターである。その基礎状態において、ＳＴＩＮＧは、ＥＲに固定されたそのＮ末端ドメインおよびサイトゾルに存在するＣ末端ドメインを有する二量体として存在する。タンパク質環状ＧＭＰ−ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ）により生成される環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）は、ＳＴＩＮＧの天然リガンドである（Ablasser et al, Nature 498, 380 - 384, 2013）。ＳＴＩＮＧに対するＣＤＮの結合は、ＴＡＮＫ結合キナーゼ（ＴＢＫ１）およびインターフェロン調節因子３（ＩＲＦ３）の結合および活性化、ならびにＥＲから核周囲のエンドソームへの再局在化を可能にする、コンホメーション変化を誘導する（Liu et al, Science 347, Issue 6227, 2630-1 - 2630-14, 2015）。ＴＢＫ１による転写因子ＩＲＦ３およびＮＦ−ｋＢのリン酸化の結果、Ｉ型ＩＦＮを含む複数のサイトカインの発現が生じる。
ウイルス感染およびがん治療を含む、数種の悪性腫瘍におけるＩ型ＩＦＮの重要性を考慮すると、ＳＴＩＮＧの特異的活性化を可能にする戦略は治療的に重要である。
国際公開第２０１４／０９３９３６号は、２つのプリン核酸塩基および２つの標準的な３’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する、環状ジヌクレオチド化合物について記載する。
【０００５】
米国特許第７，７０９，４５８号は、２つのプリン核酸塩基および２つの標準的な３’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、がん細胞増殖を阻害するか、またはがん細胞アポトーシス、特に対称性細菌性ＣＤＮ  ｃ−ジ−ＧＭＰを増加させるために使用することができる、環状ジヌクレオチド化合物について記載する。
米国特許第７，５９２，３２６号は、２つのプリン核酸塩基および２つの標準的な３’，５’ホスホジエステル部分、特に対称性細菌性ＣＤＮ  ｃ−ジ−ＧＭＰを特徴とする、免疫賦活性環状ジヌクレオチド化合物について記載する。
【０００６】
国際公開第２０１６／０９６１７４号および国際公開第２０１６／１４５１０２号は、２つのプリン核酸塩基および２つの標準的な３’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する、環状ジヌクレオチド化合物について記載する。
Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 5631-5634は、対称性細菌性ＣＤＮ  ｃ−ジ−ＧＭＰの免疫賦活性モノ−およびビス−ホスホロチオエート類似体について記載する。
国際公開第２０１４／１８９８０５号は、２つのプリン核酸塩基および少なくとも１つの非標準的な２’，５’ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧ依存性サイトカイン産生を誘導する、環状ジヌクレオチド化合物について記載する。
【０００７】
国際公開第２０１５／１８５５６５号は、２つのプリン核酸塩基、リボーステトラヒドロフラン環の代わりの１つまたは２つのシクロペンタン、および１つの非標準的な２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧをモジュレートする、環状ジヌクレオチド化合物について記載する。
国際公開第２０１６／１２０３０５号は、２つのプリン核酸塩基、２’−ＯＨが２’−Ｆで置き換えられている１つのリボース部分、および１つの非標準的な２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とし、ＳＴＩＮＧをモジュレートする、環状ジヌクレオチド化合物について記載する。
【０００８】
米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８９号、国際公開第２０１４／０９９８２４号、国際公開第２０１５／０１７６５２号、Cell 154, 748-762 (2013)、およびMolecular Cell 51, 226-235 (2013)は、２つのプリン核酸塩基、１つの標準的な３’，５’および１つの非標準的な２’，５’ホスホジエステル部分を特徴とする、環状ジヌクレオチド２’３’−ｃＧＡＭＰ（環状［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］）について記載する。非標準的に連結された２’３’−ｃＧＡＭＰは、標準的に連結された３’３’−ｃＧＡＭＰまたは対称性細菌性ｃ−ジ−ＧＭＰよりも高い親和性でヒトＳＴＩＮＧに結合し、Ｉ型インターフェロン産生を誘導する。
２’，５’−２’，５’または２’，５’−３’，５’結合性を有するさらなる環状ジヌクレオチドが、それぞれ国際公開第２０１７／０２７６４５号および国際公開第２０１７／０２７６４６号にＳＴＩＮＧアゴニストとして開示されている。
【発明の概要】
【０００９】
第１の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物
【化１】
2020203887.tif 000002
（式中、
塩基1および塩基2は、それらのＮ9窒素原子を介して結合した、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、およびヒポキサンチンからなる群から独立して選択されるプリン核酸塩基である）
そのアイソフォーム、互変異性体、立体異性体、代謝産物、プロドラッグ、溶媒和物、水和物、および塩に関する。
第２の態様において、本発明は、１つまたは複数の上記もしくは下記で定義されている通りの式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物に関する。
【００１０】
第３の態様において、本発明は、１つまたは複数の上記もしくは下記で定義されている通りの式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および１つまたは複数の追加の治療剤を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物に関する。
第４の態様において、本発明は、医薬として使用するための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩に関する。
第５の態様において、本発明は、ワクチンアジュバントとしての、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００１１】
第６の態様において、本発明は、それを必要とする患者における、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、感染性疾患またはがんの処置のための方法に関する。
また、本発明は、それを必要とする患者における、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、感染性疾患またはがんの処置のための医薬の製造における、前記阻害剤の１つまたは複数の使用に関する。
【００１２】
また、本発明は、それを必要とする患者における、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための、特に炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、感染性疾患またはがんの処置のための方法において使用するための、上記もしくは下記で定義されている通りの式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
本発明の他の態様は、上述および以下の記載および例から直接当業者に明らかになるであろう。
一般的な用語および定義
本明細書で具体的に定義されない用語は、本開示および文脈に照らして当業者によりこれらに与えられる意味が与えられるべきである。しかし、本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、以下の用語は示される意味を有し、以下の慣例が順守される。
用語「本発明による化合物」、「式（Ｉ）の化合物」、「本発明の化合物」などは、本発明による式（Ｉ）の化合物を意味し、これには、それらの互変異性体、立体異性体およびその混合物およびその塩、特にその薬学的に許容される塩、ならびにこのような互変異性体、立体異性体およびその塩の溶媒和物および水和物を含む、このような化合物の溶媒和物および水和物が含まれる。
【００１３】
特に指定がない限り、本明細書および添付の特許請求の範囲全体を通じて、所与の化学式または化学名は、その互変異性体および全ての立体異性体、光学異性体および幾何異性体（例えばエナンチオマー、ジアステレオマー、Ｅ／Ｚ異性体など）およびラセミ体、ならびに別個のエナンチオマーの異なる比率の混合物、ジアステレオマーの混合物、またはこのような異性体およびエナンチオマーが存在する前述の形態のうちのいずれかの混合物、ならびにその薬学的に許容される塩を含む塩、ならびに例えば遊離化合物の溶媒和物または該化合物の塩の溶媒和物を含む水和物などのその溶媒和物を包含するものとする。
本発明の化合物が化学名の形態で、および式として表される場合で、何らかの矛盾がある場合には、式が優先するものとする。
アスタリスクは、定義されている通りのコア分子につながる結合を示すために下位式で使用され得る。
【００１４】
用語「実質的に純粋な」は、式（Ｉ）の化合物に関して本明細書で使用される場合、リン原子に関して他の可能性のあるジアステレオマーに対して少なくとも純度７５％である１つの（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｒｐ，Ｓｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）または（Ｓｐ，Ｓｐ）ジアステレオマーを指す。好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）の実質的に純粋な化合物は、少なくとも純度８５％、少なくとも純度９０％、少なくとも純度９５％、少なくとも純度９７％、または少なくとも純度９９％である。
【００１５】
用語「保護基」は、本明細書で使用される場合、別段の定義がない限り、酸素、窒素もしくはリン原子のさらなる反応を防止するためか、または他の目的のために、酸素、窒素またはリン原子に結合される化学官能基を指す。多種多様な保護基が有機合成の当業者に公知であり、例えば"Protective Groups in Organic Synthesis" by T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Third Edition, 1999に記載されている。
用語「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに適しており、かつ妥当な利益／リスク比に相応な、化合物、物質、組成物および／または剤形を指すために本明細書で使用される。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物がその酸または塩基の塩を作製することにより修飾されている、開示化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、限定するものではないが、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩；ホスホジエステルまたはホスホロチオエート部分などの酸性残基のアルカリ塩、アンモニウム塩または有機塩などが挙げられる。
用語「モジュレートされる」または「モジュレートすること」または「モジュレートする」は、本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、１つまたは複数の本発明の化合物によるＳＴＩＮＧ経路の活性化を指し、この場合、本発明の化合物はＳＴＩＮＧアゴニストを表す。
用語「処置」および「処置すること」は、本明細書で使用される場合、治療的、すなわち治癒的および／または緩和的、ならびに防止的、すなわち予防的な処置を両方とも包含する。
【００１７】
治療的処置は、前記状態のうちの１つまたは複数を明白な急性または慢性の形態ですでに発生させている患者の処置を指す。治療的処置は、具体的な適応症の症状を軽減するための対症的処置であってもよく、あるいは適応症の状態を逆転もしくは部分的に逆転させるための、または疾患の進行を停止もしくは遅延させるための原因的処置であってもよい。また、治療的処置は、一定期間にわたる処置ならびに長期治療を包含する。
防止的処置（「防止」、「予防的処置」）は、前記状態のうちの１つまたは複数が発生するリスクがある患者の処置であって、前記リスクを低減させるための、疾患の臨床的発症前の処置を指す。
【００１８】
用語「処置」および「処置すること」は、症状もしくは合併症の発症を防止するか、もしくは遅延させるため、および疾患、状態もしくは障害の発生を防止するか、もしくは遅延させるための、ならびに／または疾患、状態もしくは障害を除去もしくは制御するため、および疾患、状態もしくは障害に関連する症状もしくは合併症を軽減するための、１つまたは複数の活性化合物の投与を含む。
用語「治療有効量」は、（ｉ）特定の疾患もしくは状態を処置もしくは防止するか、（ｉｉ）特定の疾患もしくは状態の１つまたは複数の症状を減弱、寛解させるか、もしくは除去するか、または（ｉｉｉ）本明細書に記載されている特定の疾患もしくは状態の１つまたは複数の症状の発症を防止するか、もしくは遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。
本発明が、処置を必要とする患者に言及する場合、それは、主に哺乳動物、特にヒトにおける処置に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の化合物
本発明の一態様において、式（Ｉ）の修飾ＣＤＮは、
【化２】
2020203887.tif 000003
（式中、塩基1および塩基2は、上記および下記の通りに定義される）
ヒトＳＴＩＮＧに対する良好な結合親和性、および異なるヒトＳＴＩＮＧ対立遺伝子を有する細胞における良好な活性を示し、これらにより低用量で薬理学的効果を達成することができることが見出された。
したがって、上記もしくは下記で定義されている通りの式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置において有用であると期待される。
【００２０】
したがって、本発明の一態様によれば、式（Ｉ）の化合物
【化３】
2020203887.tif 000004
（式中、塩基1および塩基2は、上記または下記の通りに定義される）
ならびにそのアイソフォーム、互変異性体、立体異性体、代謝産物、プロドラッグ、溶媒和物、水和物、および塩、特に無機または有機塩基とのその生理学的に許容される塩が提供される。
置換基、塩基1および塩基2のいくつかの好ましい意味は、下記に示される。これらの定義のいずれかおよび各々は、互いに組み合わせてもよい。
【００２１】
一実施形態によれば、塩基1は、それらのＮ9窒素原子を介して結合した、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、およびヒポキサンチンからなる群から選択される。
別の実施形態によれば、塩基1は、それらのＮ9窒素原子を介して結合した、アデニンおよびグアニンからなる群から選択される。
別の実施形態によれば、塩基1は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、プリンである。
別の実施形態によれば、塩基1は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、アデニンである。
別の実施形態によれば、塩基1は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、グアニンである。
別の実施形態によれば、塩基1は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、キサンチンである。
別の実施形態によれば、塩基1は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、ヒポキサンチンである。
【００２２】
一実施形態によれば、塩基2は、それらのＮ9窒素原子を介して結合した、プリン、アデニン、グアニン、キサンチン、およびヒポキサンチンからなる群から選択される。
別の実施形態によれば、塩基2は、それらのＮ9窒素原子を介して結合した、アデニン、グアニンおよびヒポキサンチンからなる群から選択される。
別の実施形態によれば、塩基2は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、プリンである。
別の実施形態によれば、塩基2は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、アデニンである。
別の実施形態によれば、塩基2は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、グアニンである。
別の実施形態によれば、塩基2は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、キサンチンである。
別の実施形態によれば、塩基2は、そのＮ9窒素原子を介して結合した、ヒポキサンチンである。
【００２３】
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、化合物（Ｉ−１）である。
【化４】
2020203887.tif 000005
【００２４】
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、化合物（Ｉ−２）である。
【化５】
2020203887.tif 000006
【００２５】
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、化合物（Ｉ−３）である。
【化６】
2020203887.tif 000007
【００２６】
別の実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は、化合物（Ｉ−４）である。
【化７】
2020203887.tif 000008
【００２７】
本発明の化合物は、ＲｐまたはＳｐ配置のいずれかを有するキラルリン原子を有する。式（Ｉ）、（Ｉ−１）、（Ｉ−２）、（Ｉ−３）、および（Ｉ−４）の化合物の全ての立体異性体は、実質的に純粋な形態で、またはその混合物としてのいずれかで、本発明により網羅される。実質的に純粋な（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｒｐ，Ｓｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）または（Ｓｐ，Ｓｐ）立体異性体としての一般式（Ｉ）、（Ｉ−１）、（Ｉ−２）、（Ｉ−３）、および（Ｉ−４）の化合物が好ましい。
【００２８】
調製
本発明による化合物およびそれらの中間体は、当業者に公知で、有機合成の文献に記載されている合成の方法を使用して得ることができる。好ましくは、化合物は、特に実験セクションに記載されている通り、下記でより完全に説明される調製の方法に類似して得られる。場合によっては、反応スキームの実施において採用したシーケンスを変化させてもよい。当業者に公知であるが、本明細書で詳細に記載していないこれらの反応の変形を使用してもよい。本発明による化合物を調製するための一般的プロセスは、以下の方法論を研究すれば当業者には明らかになるであろう。出発化合物は、市販されているか、または文献もしくは本明細書に記載されている方法により調製することができるか、または類似もしくは同様の様式で調製することができる。反応を実施する前に、出発化合物における任意の対応する官能基を、従来の保護基を使用して保護してもよい。これらの保護基は、当業者によく知られている方法を使用して、反応シーケンス内の適切な段階で再度開裂することができる。
本明細書で開示されるＣＤＮは、以下で詳細に記載されている通りに、または当業者に公知の他の方法により調製することができる。これらのスキームは決して限定的ではないこと、本発明の精神から逸脱することなく詳細を変更できることは当業者に理解されるであろう。
【００２９】
ＣＤＮは、Chem. Rev. 113, 7354-7401 (2013)、Org. Lett., 12, 3269-3271 (2010)、Tetrahedron 49, 1115-1132 (1993)、国際公開第２０１７／０２４７６４５号、国際公開第２０１７／０２７６４６号、国際公開第２０１４／１８９８０５号、国際公開第２０１６／０９６１７４号、国際公開第２０１５／１８５５６５号、国際公開第２０１６／１４５１０２号または国際公開第２０１６／１２０３０５号およびそれらに引用されている参考文献に記載されている方法により得てもよい。
本発明の別の態様によれば、式（Ｉ）の化合物およびその塩は、下記に記載される方法論により調製することができる。
【００３０】
当業者は、式（Ｉ）における２つのホスホロチオエート部分がそれぞれＲ配置（ＲP）またはＳ配置（ＳP）で存在し得ることを認識するであろう。下記に記載される方法論は、当業者に公知の方法により、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別結晶、例えば合成の異なる段階における適切な溶媒系およびカラムを用いるＨＰＬＣにより分離することができる、リン原子に関する４つまでのジアステレオマーをもたらし得る。場合によっては、例えば１つの硫化ステップがジアステレオ選択的に進行する場合、下記に記載される方法論は、合成の異なる段階における当業者に公知のクロマトグラフィー法または結晶化法により分離することができる２つのジアステレオマーのみを優先的にもたらし得る。
上述の通り、式（Ｉ）の化合物は、当業者に公知の方法により、塩に、特に医薬用途のために薬学的に許容される塩に変換することができる。
【００３１】
本発明による化合物はまた、以下の例に記載される方法を使用して有利に得られるものでもあり、これらの方法はこの目的のために文献からの当業者に公知の方法と組み合わせてもよい。
以下の調製の方法内で明確に指定されない置換基は、発明の概要下で上述した定義を網羅するものと理解される。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物は、
【化８】
2020203887.tif 000009
式（ＩＩ−１）または（ＩＩ−２）の化合物
【００３３】
【化９】
2020203887.tif 000010
（式中、
Ｒ1は、ベンゾイルなどの適切な保護基を有するＮＨを示し、Ｒ2は、Ｈを示すか（「保護アデニン」）、または
Ｒ1は、ＯＨを示し、Ｒ2.は、イソ−ブチリルもしくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミジニルなどの適切な保護基を有するＮＨを示すか（「保護グアニン」）、または
Ｒ1およびＲ2は、両方ともＯＨを示すか（「キサンチン」）、または
Ｒ1は、ＯＨを示し、Ｒ2.は、Ｈを示すか（「ヒポキサンチン」）、または
Ｒ1およびＲ2は、両方ともＨを示すか（「プリン」）
のいずれかであり；
式中、
Ｒ3は、ベンゾイルなどの適切な保護基を有するＮＨを示し、Ｒ4は、Ｈを示すか（「保護アデニン」）、または
Ｒ3は、ＯＨを示し、Ｒ4.は、イソ−ブチリルもしくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミジニルなどの適切な保護基を有するＮＨを示すか（「保護グアニン」）のいずれかであり、または
Ｒ3およびＲ4は、両方ともＯＨを示すか（「キサンチン」）、または
Ｒ3は、ＯＨを示し、Ｒ4.は、Ｈを示すか（「ヒポキサンチン」）、または
Ｒ3およびＲ4は、両方ともＨを示すか（「プリン」）
のいずれかである）
の脱保護により調製することができる。
【００３４】
例えば、式（ＩＩ−１）または（ＩＩ−２）の化合物を、適切な混合物、例えばメタノールまたはエタノール中のメチルアミンまたはアンモニア水溶液に溶解し、適切な温度、例えば２０〜６０℃で、適切な時間、例えば１〜２４時間撹拌する。
【００３５】
式（ＩＩ−１）の化合物は、式（ＩＩＩ−１）の化合物
【化１０】
2020203887.tif 000011
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4は、上記の通りに定義される）
の環化およびその後の硫化により調製することができる。
【００３６】
例えば、式（ＩＩＩ−１）の化合物を、適切な溶媒、例えばピリジン、またはピリジンおよびジクロロメタンの混合物に溶解し、適切なカップリング試薬、例えば２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）、クロロリン酸ジフェニル、塩化ピバロイルまたはアダマントイルクロリドで処理し、適切な温度、例えば−５０℃〜２０℃で、適切な時間、例えば０．１〜２時間撹拌する。環化反応物を、適切な硫化試薬、例えば３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オンまたは元素状硫黄による処理によりクエンチし、適切な温度、例えば−５０℃〜２０℃で、適切な時間、例えば０．１〜２時間撹拌する。
【００３７】
類似の様式で、式（ＩＩ−２）の化合物は、式（ＩＩＩ−２）の化合物
【化１１】
2020203887.tif 000012
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4は、上記の通りに定義される）
の環化およびその後の硫化により調製することができる。
【００３８】
式（ＩＩＩ−１）の化合物は、式（ＩＶ−１）の化合物と式（Ｖ−１）の化合物とのカップリング
【化１２】
2020203887.tif 000013
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4は、上記の通りに定義される）
により調製することができる。
【００３９】
例えば、式（Ｖ−１）の化合物を、適切な溶媒、例えばアセトニトリルに溶解し、適切な溶媒、例えばアセトニトリルに溶解した式（ＩＶ−１）の化合物の溶液で処理し、適切なカップリング試薬、例えばテトラゾール、Ａｃｔｉｖａｔｏｒ４２（登録商標）（活性化剤溶液、アセトニトリル中５−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−テトラゾールを含有）、ジクロロ酢酸ピリジニウムまたはトリフルオロ酢酸ピリジニウム（または混合物カップリング試薬）の存在下で処理してもよく、適切な温度、例えば０〜２０℃で、適切な時間、例えば０．１〜２時間撹拌する。カップリング反応物を、適切な硫化試薬、例えば、３−（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−３−チオン（ＤＤＴＴ）またはフェニルアセチルジスルフィド（ＰＡＤＳ）または３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１，１−ジオキシド（Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬）による処理によりクエンチし、適切な温度、例えば０〜２０℃で、適切な時間、例えば０．１〜２時間撹拌する。溶媒を蒸発させた後、残留物を、適切な溶媒、例えばジクロロメタンおよび水の混合物に溶解し、適切な試薬、例えばジクロロ酢酸で処理し、適切な温度、例えば０〜２０℃で、適切な時間、例えば０．１〜１時間撹拌する。
【００４０】
式（ＩＩＩ−２）の化合物は、式（ＩＶ−２）の化合物と式（Ｖ−２）の化合物とのカップリング
【００４１】
【化１３】
2020203887.tif 000014
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、およびＲ4は、上記の通りに定義される）
により類似の様式で調製することができる。
式（ＩＶ−１）の化合物は、上記で定義されている通りの式（Ｖ−２）の化合物の反応により調製することができる。
【００４２】
例えば、市販の式（Ｖ−２）の化合物を、適切な混合物、例えばアセトニトリル含有水に溶解し、トリフルオロ酢酸ピリジニウムで処理し、適切な温度、例えば０〜２０℃で、適切な時間、例えば１〜３０分間撹拌する。次いで、ｔｅｒｔ−ブチルアミンを添加し、混合物を、適切な温度、例えば０〜２０℃で、適切な時間、例えば、０．１〜１時間撹拌する。生成物を、溶媒の蒸発により単離し、次いで適切な溶媒、例えばジクロロメタン含有水に溶解し、ジクロロ酢酸で処理し、適切な温度、例えば０〜２０℃で、適切な時間、例えば０．１〜１時間撹拌する。
一般式Ｉの化合物、またはその合成中間体は、自体公知の方法、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別結晶を使用して、それらの異なる物理化学的特性を利用することにより、それらのジアステレオマーに分割することができる。
本発明による化合物はまた、以下の例に記載される方法を使用して有利に得られるものでもあり、これらの方法はこの目的のために文献からの当業者に公知の方法と組み合わせてもよい。
【００４３】
本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を、水中で、またはエーテル、酢酸エチル、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アセトンもしくはアセトニトリル、もしくはそれらの混合物のような有機希釈剤中で、十分な量の適切な塩基と反応させることにより調製することができる。代替的に、酢酸トリエチルアンモニウム、ギ酸トリエチルアンモニウム、酢酸アンモニウムまたは炭酸水素アンモニウムの水溶液などの「揮発性緩衝液」を使用する、本発明の化合物（遊離酸または塩形態）の逆相クロマトグラフィーにより、凍結乾燥／フリーズドライ後に本発明の化合物をそれぞれトリエチルアンモニウムまたはアンモニウム塩として得る。代替的に、塩は、イオン交換により、例えば本発明の化合物（遊離酸または塩形態）の水溶液を陽イオン交換体で処理することにより調製することができる。
【００４４】
薬理学的活性
本発明による化合物は、ヒトＳＴＩＮＧに対して良好な結合親和性を示す。結合親和性は、例えば、Nat. Chem. Biol. 10, 1043-1048 (2014)に記載されている通りのシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ベース競合結合アッセイにより決定することができる。代替的に、結合親和性は、例えば、Molecular Cell 51, 226-235 (2013)に記載されている通りの等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）により決定することができる。代替的に、結合親和性は、例えば、国際公開第２０１６／１４５１０２号に記載されている通りの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により決定することができる。代替的に、結合親和性は、例えば、以下に記載される通りの示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）により決定することができる。
本発明による化合物は、良好な細胞活性を示す。インビトロサイトカイン誘導は、以下に記載される通り、レポーター細胞株において、例えばＴＨＰ１細胞において測定することができる。ヒトＳＴＩＮＧは、少なくとも５つの公知の変異体（ＷＴ、ＨＡＱ、ＲＥＦ／２３２Ｈ、ＡＱ、Ｑ／２９３Ｑ）で存在する。ヒトＳＴＩＮＧ変異体上で異なるＣＤＮの活性を試験するために、ＴＨＰ１−ＳＴＩＮＧ  ＫＯ細胞を、異なるＳＴＩＮＧ変異体をコードするベクターで安定的に形質導入することができる。さらに、インビトロサイトカイン誘導は、ヒト一次ＰＢＭＣまたはヒト樹状細胞において測定することができる。
【００４５】
本発明による化合物は、例えば、ＴＨＰ１細胞、Ｃａｌｕ−３細胞またはヒト肝細胞を用いるインビトロ細胞アッセイにおいて良好な安定性を示す。さらに、本発明による化合物は、良好な薬物動態学的（ＰＫ）特性を示す。ＰＫ特性は、前臨床動物種、例えばマウス、ラット、ハムスター、イヌ、モルモット、ミニブタ、カニクイザル、アカゲザルにおいて決定することができる。化合物のＰＫ特性は、例えば、以下のパラメーターにより記載することができる：E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1st ed, 2008)に記載されている通り、平均滞留時間（ＭＲＴ）、排出半減期（ｔ1/2、すなわち、薬物の濃度がその元の値の半分に達するのに要する時間）、分布容積（ＶD、すなわち、薬物が分布する見かけの容積）、曲線下面積（ＡＵＣ、すなわち、単回投与後の濃度時間曲線の積分）、クリアランス（ＣＬ、すなわち、単位時間当たりの、薬物が除かれた血漿の容積）。さらに、本発明による化合物は、例えば、腫瘍内適用後のマウスＭＣ３８、Ｂ１６、４Ｔ１、Ｃｏｌｏｎ２６、ＥＭＴ６腫瘍モデルにおいて良好なインビボ薬理学的活性を示す。
【００４６】
良好な細胞活性、および／または良好なＰＫ特性と組み合わせた、ヒトＳＴＩＮＧに対する良好な結合親和性により、薬理学的効果に対する用量をより低くできる可能性がある。より低い用量には、患者に生じる副作用が潜在的により少なく、薬物製品の生産コストがより低いという、より低い「薬物負荷（ｄｒｕｇ  ｌｏａｄ）」または「薬物負担（ｄｒｕｇ  ｂｕｒｄｅｎ）」（親薬物およびその代謝産物）の利点がある。同様に、ヒトＳＴＩＮＧの変異体に対する強力な活性は、固定用量が投与される場合、単一ヌクレオチド多型を有する患者における所望の薬理学的応答を誘導する機会を最大化するので、有利である。
ヒトＳＴＩＮＧに対する本発明の化合物の結合は、以下のアッセイを使用して実証することができる。
【００４７】
示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）
材料：
Ｈａｒｄ−Ｓｈｅｌｌ（登録商標）ＰＣＲプレート３８４ウェル薄壁（カタログ番号ＨＳＰ３８０５Ｒ、ＢＩＯ−ＲＡＤ）
ＰＣＲプレート用Ｍｉｃｒｏｓｅａｌ（登録商標）「Ｂ」接着シール（カタログ番号ＭＳＢ−１００１、ＢＩＯ−ＲＡＤ）
ＤＭＳＯ中ＳＹＰＲＯ橙色溶液（ＳＩＧＭＡカタログ番号Ｓ５６９２−５００ＵＬ）、濃度「５０００×」
機器：リーダー：ＣＦＸ３８４リアルタイムシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）
ピペッティングロボット：ＨａｍｉｌｔｏｎＳｔａｒｌｅｔ
アッセイ緩衝液：２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ７．５
標的タンパク質：ヒトＳＴＩＮＧ（ｈＳＴＩＮＧ、残基１５５−３４１、Ｎ−末端Ｈｉｓ８−タグおよびＴＥＶ−切断部位を有する野生型配列、ＭＷ：２３６０１．５Ｄａ）
タンパク質ストック溶液：アッセイ緩衝液中のｃ＝３０９μＭストック溶液
試験化合物の最終アッセイ濃度：１００μＭ、３μＭ標的タンパク質、「５×」ＳＹＰＲ橙色
【００４８】
アッセイ手順：
１）化合物ストック溶液およびその希釈液を、アッセイ緩衝液中で調製した。
２）５μｌの蛍光染料ストック溶液（５０００×ＳＹＰＲＯ橙色）を、５０μｌの標的タンパク質（３０９μＭ）および９４５μｌの緩衝液と混合した。
３）２μｌのこのタンパク質−染料−混合物（２５×ＳＹＰＲＯ橙色および１５μＭタンパク質）を、８μｌの化合物溶液に添加した。最終容量は１０μＬとした。
４）ある特定のウェル位置を負の対照として使用した。
５）プレートを二重測定のために調製し、１０００ｇで２分間遠心分離した。
６）測定において、０．５℃の１６０サイクルを使用した（温度ランプ１５秒／サイクル、１５℃〜９５℃）。
データ解析：解離曲線をＢｉｏ−Ｒａｄ  ＣＦＸマネージャーにおいて処理した。ピーク型は「負」に設定した。例１．１、２．１、３．１および４．１の場合、少なくとも２つのＴｍ測定値の平均をとった。Ｔｍ（「熱シフト」）の変化を表１に示す。
【表１】
2020203887.tif 000015
【００４９】
驚くべきことに、本発明による化合物が、ＬＮＡ部分がリボース部分で置き換えられている類似体と比較して有意に改善された結合を示すこと、例えばＬＮＡ例１．１、２．１、３．１および４．１が、国際公開第２０１６／１４５１０２号におけるリボース例５／化合物２３（「３’３’−ＲＲ−（２’Ｆ−Ｇ）（Ａ）」）と比較して有意により大きな熱シフト、すなわち改善された結合を示すことが見出された。上記示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）アッセイにおける本発明による化合物の改善された結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイにおいても確認された。
本発明の化合物の細胞活性は、以下のインビトロＴＨＰ１アッセイを使用して実証することができる。
インビトロサイトカイン誘導
本発明による化合物のサイトカイン誘導活性は、ＴＨＰ１レポーター細胞株を使用することにより実証されている。
【００５０】
ＴＨＰ１細胞で発現したＳＴＩＮＧタンパク質の活性化の結果、インターフェロン産生が増加する。インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）−誘導性ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーター構築物の安定的な組み込みにより、機能性インターフェロンシグナル伝達経路をモニターすることができる。Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ社のＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）比色酵素アッセイおよび適切な光学密度（ＯＤ）リーダーを使用して、ＳＥＡＰの活性を検出および定量化することができる。この技術は、ＳＴＩＮＧタンパク質の薬理学的修飾を特徴付けるために使用され得る。
【００５１】
ＳＥＡＰ活性の測定は、ヒトＳＴＩＮＧタンパク質およびＩＲＦ−誘導性ＳＥＡＰレポーター構築物を安定的に発現するＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞において行った。細胞は、３７°、湿度９５％および５％ＣＯ2のインキュベーター内で、１０％ウシ胎児血清、５０μｇ／ｍｌペニシリン−ストレプトマイシン、１００μｇ／ｍｌ  Ｚｅｏｃｉｎ、および１００μｇ／ｍｌ  Ｎｏｒｍｏｃｉｎとともに、ＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖のために培養した。アッセイ対応細胞を凍結ストックとして貯蔵した。
【００５２】
アッセイのための調製において、細胞をＺｅｏｃｉｎ−／Ｎｏｒｍｏｃｉｎ−非含有培地中に解凍し、１ウェル当たり１５０００細胞／１５μＬの密度でアッセイプレートに分配した。化合物を、５０％ＤＭＳＯ水溶液中の８点または１６点連続希釈、および培地中への最終希釈ステップにより調製して、アッセイにおける０．５％の最終ＤＭＳＯ濃度を確実なものにした。５μＬの希釈化合物と５μＬ培地をプレートに添加し、続いて３７℃で２４時間インキュベートした。
【００５３】
アッセイの日に、１ウェル当たり７５μｌのＱｕａｎｔｉ−Ｂｌｕｅ試薬をプレートの全てのウェルに添加し、プレートを３７℃でさらに３０分間インキュベートした。６２０ｎｍにおけるＯＤを、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で測定した。
ＥＣ50値およびＨｉｌｌ勾配は、６２０ｎＭにおけるＯＤを使用し、Ｍｅｇａｌａｂソフトウェア（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）を用いて、８点または１６点４パラメーター非線形曲線フィッティングから導出した。表２を参照されたい。
【表２】
2020203887.tif 000016
【００５４】
環状ジヌクレオチドに対する応答に影響を及ぼし得る、いくつかの単一ヌクレオチド多型が、ヒトＳＴＩＮＧ遺伝子において同定されている。本発明の化合物の活性を決定するために、異なるヒトＳＴＩＮＧ変異体を発現するＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧレポーター細胞株が生成された。それを行うために、内在性ヒトＳＴＩＮＧを、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９システムを使用して最初に欠失させ、ＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞を、ＳＴＩＮＧ遺伝子を標的とするオールインワンＣＲＩＳＰＲプラスミド（Ｓｉｇｍａ社から購入、形質導入の成功のためのレポーター遺伝子としてｇＲＮＡおよびＧＦＰをコードする）で電気穿孔した。次いで、ＧＦＰ陽性細胞を、トランスフェクションの２４時間後に選別し、増殖させた。次いで、細胞を半固体メトセル培地中に分散して、単一細胞クローン単離を可能にした。次いで、クローンを、Ｑｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅレポーターアッセイを使用して、ｃＧＡＭＰ応答性についてスクリーニングした。その後、非応答性クローンを、ウエスタンブロッティングおよびＳＴＩＮＧ遺伝子座の配列決定により、ＳＴＩＮＧ喪失について分析した。
【００５５】
ヒトＳＴＩＮＧ変異体の過剰発現については、確認されたＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ  ｈＳＴＩＮＧ  ＫＯクローンを、ｈＳＴＩＮＧの対立遺伝子変異体（ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ）をコードする個々のレトロウイルスプラスミド（ＭＳＣＶ−ｉｒｅｓ−ＧＦＰ−Ｂｌａｓｔｉ）でそれぞれ形質導入した。形質導入された細胞をＧＦＰ蛍光の異なるレベルごとに選別し、ＳＴＩＮＧ対立遺伝子発現をウエスタンブロットにより分析した。親非修飾ＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞株からの内在性ＳＴＩＮＧレベルに匹敵するレベルで異所性ＳＴＩＮＧタンパク質（ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ）を発現する集団を選択し、化合物を特徴付けるために使用した。驚くべきことに、本発明による化合物が、上記変異体細胞株の５つ全てにおいて非常に強力な細胞活性を示すこと、例えば例２．１、３．１および４．１が、ＷＴ、ＨＡＱ、Ｒ２３２Ｈ、ＡＱおよびＲ２９３Ｑ変異体細胞株において、≦１μＭのＥＣ50値をそれぞれ示すことが見出され、顕著な変異体差／選択性がないことが示された。ヒトＳＴＩＮＧが欠失したＴＨＰ１細胞株では活性が観察されなかったので、観察された細胞活性はＳＴＩＮＧ依存性である。
本発明の化合物の細胞安定性は次の通り決定した：化合物を細胞培養培地（１０％ＦＣＳ、１％非必須アミノ酸および１％ピルベートを補充したＭＥＭ）に溶解して、１０μＭの最終濃度とし、ヒト肺上皮細胞株Ｃａｌｕ−３（２４ウェルプレート中６００００細胞／ウェル）とともに最長２４時間インキュベートした。細胞培養上清の試料を１、６、２４時間の時点で採取し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより定量化した。
【００５６】
処置の方法
本発明の別の態様において、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが治療的に有益である疾患または状態の処置に有用であり得ることが見出された。さらに、それらの活性のため、本発明の化合物はワクチンアジュバントとして適している。
ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患および状態は、限定するものではないが、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、例えばアレルギー性鼻炎もしくは喘息、感染性疾患またはがんを包含する。
自己免疫性疾患には、限定するものではないが、全身性紅斑性狼瘡（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｍａｔｏｓｕｓ）、乾癬、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、皮膚筋炎およびシェーグレン症候群（ＳＳ）が含まれる。
【００５７】
炎症は、外傷に対する血管、細胞および神経の応答の群を表す。炎症は、組織内への単球、好中球および顆粒球などの炎症性細胞の移動として特徴付けることができる。これは、通常、内皮障壁機能の低下、および組織内に入る浮腫と関連する。炎症は、急性または慢性のいずれかとして分類することができる。急性炎症は、有害な刺激に対する身体の初期応答であり、血液から傷害組織内への血漿および白血球の移動の増加により達成される。生化学的事象のカスケードは、局所血管系、免疫系、および傷害組織内の様々な細胞を関与させながら、炎症性応答を伝播および成熟させる。慢性炎症として公知の長期炎症は、炎症部位に存在する細胞の型の漸進的なシフトにつながり、炎症プロセスからの同時に起こる組織の破壊および治癒により特徴付けられる。
【００５８】
感染に対する免疫応答の一部として、または外傷に対する急性応答として起こる場合、炎症は、有益となり得、通常は自己制限的である。しかし、炎症は、様々な条件下で有害となり得る。これには感染性因子に対する応答における過度の炎症の生成が含まれ、これは著しい臓器損傷および死亡につながることがある（例えば、敗血症の状況）。さらに、慢性炎症は一般に有害であり、多数の慢性疾患の根源であり、重度および不可逆性の損傷を組織に引き起こす。このような状況において、免疫応答は、多くの場合、自己組織に対して向けられるが（自己免疫）、外来実体に対する慢性応答もまた、自己組織に対するバイスタンダー損傷につながる可能性がある。したがって、抗炎症療法の目的は、この炎症を低減させること、自己免疫が存在する場合にこれを阻害すること、および生理学的プロセスまたは治癒および組織修復の進展を可能にすることである。
本発明の化合物は、以下に例示する通り、筋骨格炎症、血管炎症、神経炎症、消化器系炎症、眼の炎症、生殖器系の炎症、および他の炎症を含む、身体の任意の組織および臓器の炎症を処置するために使用することができる。
【００５９】
筋骨格炎症は、筋骨格系の任意の炎症状態、特に手、手首、肘、肩、顎、脊椎、首、臀部、膝、足首、および足の関節を含む、骨格関節に影響を及ぼす状態、ならびに腱など、筋肉を骨につなげる組織に影響を及ぼす状態を指す。本発明の化合物で処置され得る筋骨格炎症の例としては、関節炎（例えば、変形性関節症、リューマチ性関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、急性および慢性感染性関節炎、痛風および偽痛風に関連する関節炎、ならびに若年性特発性関節炎を含む）、腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑液包炎、結合組織炎（線維筋痛症）、上顆炎、筋炎、および骨炎（例えば、ページェット病、恥骨炎、および嚢胞性線維性骨炎を含む）が挙げられる。眼の炎症は、眼瞼を含む眼の任意の構造の炎症を指す。本発明の化合物で処置され得る眼の炎症の例としては、眼瞼炎、眼瞼皮膚弛緩症、結膜炎、涙腺炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ドライアイ）、強膜炎、睫毛乱生症、およびブドウ膜炎が挙げられる。本発明の化合物で処置され得る神経系の炎症の例としては、脳炎、ギラン−バレー症候群、髄膜炎、神経性筋強直症、ナルコレプシー、多発性硬化症、脊髄炎および統合失調症が挙げられる。
本発明の化合物で処置され得る血管系またはリンパ系の炎症の例としては、関節硬化症、関節炎、静脈炎、血管炎、およびリンパ管炎が挙げられる。
本発明の化合物で処置され得る消化器系の炎症状態の例としては、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、全腸炎、胃炎、胃腸炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎などの）、回腸炎、および直腸炎が挙げられる。
本発明の化合物で処置され得る生殖器系の炎症状態の例としては、子宮頸管炎、絨毛羊膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、臍炎、卵巣炎、睾丸炎、卵管炎、卵管卵巣膿瘍、尿道炎、腟炎、外陰炎、および外陰部痛が挙げられる。
【００６０】
薬剤は、炎症性要素を有する自己免疫状態を処置するために使用することができる。このような状態には、急性播種性全身性脱毛症（ａｃｕｔｅ  ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  ａｌｏｐｅｃｉａ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌｉｓｅ）、ベーチェット病、シャガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、脳脊髄炎、強直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、クローン病、１型糖尿病、巨細胞性動脈炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン−バレー症候群、橋本病、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、川崎病、紅斑性狼瘡、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発性動脈炎、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、結節性多発性動脈炎、多発性筋痛、リューマチ性関節炎、ライター症候群、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、温式自己免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎、および白斑が含まれる。
【００６１】
薬剤は、炎症性要素を有するＴ細胞媒介性過敏性疾患を処置するために使用することができる。このような状態には、接触過敏症、接触皮膚炎（ツタウルシによるものを含む）、蕁麻疹、皮膚のアレルギー、呼吸器のアレルギー（枯草熱、アレルギー性鼻炎）およびグルテン過敏性腸症（セリアック病）が含まれる。
【００６２】
薬剤で処置され得る他の炎症状態には、例えば、虫垂炎、皮膚炎、皮膚筋炎、心内膜炎、結合組織炎、歯肉炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、心筋炎、腎炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎（ｐｅｒｃａｒｄｉｔｉｓ）、腹膜炎（ｐｅｒｉｔｏｎｏｉｔｉｓ）、咽頭炎、胸膜炎、間質性肺炎、前立腺炎（ｐｒｏｓｔａｔｉｓｔｉｓ）、腎盂腎炎、および口内炎（ｓｔｏｍａｔｉｓｉ）、移植片拒絶（臓器、例えば腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓（例えば、膵島細胞）、骨髄、角膜、小腸、皮膚同種異系移植片、皮膚同種移植片、および心臓弁異種移植片（ｈｅａｒｔ  ｖａｌｖｅ  ｘｅｎｇｒａｆｔｓ）、血清病（ｓｅｗｒｕｍ  ｓｉｃｋｎｅｓｓ）、および移植片対宿主疾患を含む）、急性膵炎、慢性膵炎、急性呼吸窮迫症候群、セザリー症候群（Ｓｅｘａｒｙ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、先天性副腎過形成（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ａｄｒｅｎａｌ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉｓ）、非化膿性甲状腺炎、がんに関連する高カルシウム血症、天疱瘡、水疱性疱疹状皮膚炎、重度多形紅斑、剥離性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性または通年性アレルギー性鼻炎、気管支喘息、接触皮膚炎、アトピー性皮膚炎（ａｓｔｏｐｉｃ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、薬物過敏性反応、アレルギー性結膜炎、角膜炎、眼部帯状疱疹、虹彩炎および虹彩毛様体炎（ｏｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）、脈絡網膜炎、視神経炎、症候性サルコイドーシス、激性または播種性肺結核化学療法、成人における特発性血小板減少性紫斑病、成人における続発性血小板減少症、後天性（自己免疫性（ａｕｔｒｏｉｍｍｉｎｅ））溶血性貧血（ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃ  ａｎｅｍｉａ）、成人における白血病およびリンパ腫、小児の急性白血病、限局性腸炎、自己免疫性血管炎、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、固形臓器移植拒絶、敗血症が含まれる。好ましい処置には、移植拒絶、リューマチ性関節炎、乾癬性関節炎、多発性硬化症、１型糖尿病、喘息、炎症性腸疾患、全身性紅斑性狼瘡（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｉｓ）、乾癬、慢性肺疾患、および感染状態に伴う炎症（例えば、敗血症）の処置が含まれる。
【００６３】
一態様において、本発明の化合物を使用して処置される疾患または状態は、がんである。式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が、潜在的に有益な抗腫瘍効果を有する可能性がある、がん疾患および状態の例としては、限定するものではないが、肺、骨、膵臓、皮膚、頭部、頚部、子宮、卵巣、胃、結腸、乳房、卵巣、食道、小腸、腸、内分泌系、甲状腺、副甲状腺、副腎、尿道、前立腺、陰茎、精巣、尿管、膀胱、腎臓もしくは肝臓のがん；尿路上皮がん；直腸がん；肛門領域のがん；卵管、子宮内膜、子宮頸部、膣、外陰部、腎盂、腎細胞の癌腫；軟部組織の肉腫；粘液腫；横紋筋腫；線維腫；脂肪腫；奇形腫；胆管がん；肝芽腫；血管肉腫；血管腫（ｈｅｍａｇｉｏｍａ）；肝細胞がん；線維肉腫；軟骨肉腫；骨髄腫；慢性もしくは急性白血病；リンパ球性リンパ腫；原発性ＣＮＳリンパ腫；ＣＮＳの新生物；脊髄軸腫瘍；扁平上皮がん；滑膜肉腫；悪性胸膜中皮腫；脳幹神経膠腫；下垂体腺腫；気管支腺腫；軟骨性過誤腫（ｃｈｏｎｄｒｏｍａｔｏｕｓ  ｈａｎｌａｒｔｏｍａ）；中皮腫（ｉｎｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ）；ホジキン病、または前述のがんのうちの１つまたは複数の組合せが挙げられる。
本発明による化合物で処置され得る好ましいがんは、皮膚、肺、肝臓、結腸、脳、乳房、卵巣、前立腺がん、膵臓、腎臓、胃、頭部、頚部、皮膚および尿路上皮がん、ならびにリンパ腫および白血病である。
新たな化合物は、上述の疾患の防止、短期または長期の処置のために使用され得るが、手術、放射線療法、または例えば細胞増殖抑制性もしくは細胞毒性物質、細胞増殖阻害剤、抗血管新生物質、ステロイドもしくは抗体などの他の「最新技術の」化合物と組み合わせて使用してもよい。
【００６４】
アジュバントとしてのそれらの役割では、ある特定の実施形態において、本発明の化合物および組成物は、ワクチンを使用する治療的または予防的戦略におけるアジュバントとして使用することができる。したがって、本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはそのプロドラッグもしくは薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の所定の抗原に対する免疫応答を刺激するように選択された１つまたは複数のワクチンと一緒に使用され得る。本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはそのプロドラッグもしくは薬学的に許容される塩は、このようなワクチンと一緒に、またはこのようなワクチンに加えて提供され得る。
【００６５】
このようなワクチンは、目的の抗原、精製抗原、生ウイルスを含む不活化もしくは弱毒化された細菌もしくはウイルス、または、抗原を発現および／もしくは分泌するように組換え操作された細菌性送達ベクター、抗原を負荷されるか、もしくは抗原をコードする核酸を含む組成物でトランスフェクトされた細胞を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）ベクター、リポソーム抗原送達ビヒクル、または抗原をコードする裸の核酸ベクターを含み得る。このリストは、限定を意味するものではない。例として、このようなワクチンは、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ３、ＩＬ−１２ｐ７０、ＦＬＴ−３リガンド、サイトカインのうちの１つまたは複数を発現および分泌する不活化腫瘍細胞も含み得る。
１日当たりの適用可能な一般式（Ｉ）の化合物の用量範囲は、通常、体重１ｋｇ当たり０．００００１〜１０ｍｇであり、例えば患者の体重１ｋｇ当たり０．００００１〜１ｍｇである。各投与量単位は、好都合には、０．００１〜１０００ｍｇ、例えば０．００１〜１００ｍｇを含有し得る。
当然ながら、実際の治療有効量または治療投与量は、患者の年齢および体重、投与の経路ならびに疾患の重症度などの当業者に公知の要因に依存する。いずれの場合も、化合物または組成物は、治療有効量を患者特有の状態に基づいて送達できる投与量および様式で投与することになる。
【００６６】
本発明による、１つまたは複数の追加の治療剤との任意の組合せを含む化合物、組成物は、粘膜（例えば経口、舌下、経膣、経鼻、頸部等）、腫瘍内、腫瘍周囲、経皮、吸引、または非経口（例えば皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、くも膜下腔内および硬膜外投与）経路により投与され得る。可能な投与方法の中では、腫瘍内、腫瘍周囲、皮下または静脈内投与が好ましい。
本発明の化合物は、ヒトＳＴＩＮＧに対する良好な結合親和性、良好な細胞活性、すなわち異なるヒトＳＴＩＮＧ対立遺伝子を有する細胞における良好な細胞活性、細胞アッセイにおける良好な安定性などのいくつかの利点を示す。
【００６７】
したがって、さらなる態様において、本発明は、インビトロおよび／またはインビボでＳＴＩＮＧ依存様式でのサイトカイン産生を誘導し、治療における使用のための、すなわち医薬としての使用のための適切な薬理学的および薬物動態学的特性を有する、その薬学的に許容される塩を含む新たな式（Ｉ）の化合物を提供する。
さらなる態様において、本発明は、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための方法において使用するための、その薬学的に許容される塩を含む新たな式（Ｉ）の化合物を提供する。
さらなる態様において、本発明は、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、例えばアレルギー性鼻炎もしくは喘息の処置のための、感染性疾患の、もしくはがんの処置のための、またはワクチンアジュバントとしての使用のための、新たな式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
別の態様において、本発明は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の処置において使用するための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００６８】
さらなる態様において、本発明は、炎症、アレルギー性または自己免疫性の疾患、例えばアレルギー性鼻炎または喘息の処置における使用のための、感染性疾患の、またはがんの処置のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
したがって、本発明は、医薬としての式（Ｉ）の化合物に関する。
さらに、本発明は、患者における、好ましくはヒトにおけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための方法における、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
さらに、本発明は、炎症、アレルギー性または自己免疫性の疾患、例えばアレルギー性鼻炎または喘息の処置のための、感染性疾患の、またはがんの処置のための方法における、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００６９】
さらに別の態様において、本発明は、哺乳動物におけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための方法であって、このような処置を必要とする患者、好ましくはヒトに、本発明の化合物または医薬組成物の治療有効量を投与するステップを含む、方法に関する。
さらなる態様において、本発明は、対象におけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための方法であって、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００７０】
さらなる態様において、本発明は、それを必要とする患者における、炎症、アレルギー性または自己免疫性の疾患、例えばアレルギー性鼻炎または喘息の処置のための、感染性疾患の、またはがんの処置のための方法であって、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を患者に投与することを含む、方法を提供する。
関連の態様において、本発明は、個体における免疫応答を誘導する、刺激する、または補助する方法に関する。これらの方法は、本発明の実質的に純粋なＣＤＮ、またはそのプロドラッグもしくは薬学的に許容される塩を個体に投与することを含む。
さらなる態様において、本発明は、疾患の処置または防止のための、抗原または抗原組成物を含む免疫原性組成物の製造のための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００７１】
さらなる態様において、本発明は、疾患を処置または防止する方法であって、疾患に罹患しているか、または罹患しやすいヒト対象に、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む免疫原性組成物を投与することを含む、方法を提供する。
さらなる態様において、本発明は、疾患の処置または防止において使用するための、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、ワクチン組成物を提供する。
さらなる態様において、本発明は、疾患の処置または防止のための、抗原または抗原組成物を含むワクチン組成物の製造のための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
さらなる態様において、本発明は、疾患を処置または防止する方法であって、疾患に罹患しているか、または罹患しやすいヒト対象に、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含むワクチン組成物を投与することを含む、方法を提供する。
医薬組成物
本発明の別の態様において、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための前記阻害剤の治療有効量の投与に適した、上述の化合物の医薬組成物を製剤化し得ることが見出された。
【００７２】
本開示の目的のために、医薬組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する製剤中で、非−非経口での、非経口での、吸引スプレーによる、局所での、または直腸からのものを含む、様々な手段により投与することができる。本発明の化合物の腫瘍内（直接、腫瘍塊内への）または腫瘍周囲（腫瘍塊の周りへの）投与は、局所的に浸潤するＤＣを直接活性化するか、腫瘍細胞アポトーシスを直接促進するか、または腫瘍細胞を細胞毒性剤に感作し得る。
【００７３】
本開示の医薬組成物は、無菌の注射可能な水性または油性の懸濁液などの、無菌の注射可能な調製物の形態であってもよい。この懸濁液は、上述または後述の適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、公知の技術に従って製剤化することができる。無菌の注射可能な調製物はまた、１，３−ブタン−ジオール中溶液などの、非毒性の非経口的に許容される希釈剤もしくは溶媒中の無菌の注射可能な溶液もしくは懸濁液であってもよく、または凍結乾燥粉末として調製してもよい。使用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒体として従来通りに使用され得る。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む、任意の刺激のない不揮発性油を使用することができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸は、注射可能物の調製において同様に使用され得る。
【００７４】
口内への局所投与に適した製剤には、香味基剤、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ剤；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤中に活性成分を含むパステル剤；ならびに適切な液体担体中に活性成分を含む洗口剤が含まれる。
膣投与に適した製剤は、活性成分に加えて、当技術分野で適切であることが知られているような担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として提供され得る。
【００７５】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤と、製剤を意図されるレシピエントの血液に対して等張にする溶質とを含有し得る水性および非水性の等張無菌注射溶液；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性の無菌懸濁液が含まれる。製剤は、単回用量または複数回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアルに入れて提供することができ、使用の直前に無菌の液状担体、例えば注入用の水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵することができる。注射溶液および懸濁液は、先に記載した種類の無菌の散剤、顆粒剤および錠剤から調製してもよい。
したがって、本発明の別の態様によれば、１つまたは複数の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物が提供される。
さらに、本発明は、患者における、好ましくはヒトにおけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための、本発明による医薬組成物の使用に関する。
【００７６】
本発明の第２の態様の一実施形態によれば、ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための方法において使用するための、１つまたは複数の上述の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物が提供される。
別の実施形態によれば、１つまたは複数の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、ワクチンが提供される。
さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、ワクチンアジュバントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、免疫原性組成物を提供する。
さらなる態様において、本発明は、疾患の処置または防止において使用するための、抗原または抗原組成物および式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、免疫原性組成物を提供する。
別の実施形態によれば、１つまたは複数の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および１つまたは複数の追加の治療剤を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物が提供される。好ましくは、この組成物は、１つの式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、および１つまたは複数の追加の治療剤を含む。
【００７７】
併用療法
本発明の化合物は、適切な免疫応答を誘導する、修飾する、または刺激するのに十分な量で、それら自体で使用してもよく、または薬学的に許容される賦形剤と組み合わせてもよい。免疫応答は、限定することなく、特異的免疫応答、非特異的免疫応答、特異的および非特異的応答の両方、自然応答、一次免疫応答、適応免疫、二次免疫応答、記憶免疫応答、免疫細胞活性化、免疫細胞増殖、免疫細胞分化、ならびにサイトカイン発現を含み得る。ある特定の実施形態において、本明細書に記載されている化合物およびその組成物は、１つまたは複数の所定の抗原に対する免疫応答を刺激するように意図されたワクチン；アジュバント；ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１経路アンタゴニスト、脂質、リポソーム、化学療法剤、免疫モジュレート細胞株等を含む、１つまたは複数の追加の組成物と組み合わせて投与される。
【００７８】
本明細書に記載されている化合物およびその組成物は、追加の治療的または予防的な組成物またはモダリティの前、後および／または同時に投与することができる。これらには、限定することなく、Ｂ７共刺激分子、インターロイキン−２、インターフェロン−ｇ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＯＸ−４０／ＯＸ−４０リガンド、ＣＤ４０／ＣＤ４０リガンド、サルグラモスチム、レバミソール、ワクシニアウイルス、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、リポソーム、ミョウバン、フロイント完全または不完全アジュバント、解毒エンドトキシン、鉱物油、界面活性物質、例えばリポレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、および油または炭化水素エマルジョンが含まれる。抗体応答に対して細胞溶解性Ｔ細胞応答を優先的に刺激するＴ細胞免疫応答を誘導する担体が好ましいが、両方の型の応答を刺激するものも使用することができる。薬剤がポリペプチドである場合、ポリペプチド自体、またはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを投与することができる。担体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または樹状細胞などの細胞であり得る。抗原提示細胞には、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞などの細胞型が含まれる。他のプロフェッショナル抗原提示細胞には、単球、辺縁帯クッパー細胞、小膠細胞、ランゲルハンス細胞、指状嵌入樹状細胞、濾胞樹状細胞、およびＴ細胞が含まれる。通性抗原提示細胞も使用することができる。通性抗原提示細胞の例としては、星状膠細胞、濾胞細胞、内皮および線維芽細胞が挙げられる。担体は、ポリペプチドを発現するように、またはワクチン接種された個体の細胞内で後に発現されるポリヌクレオチドを送達するように形質転換される細菌細胞であり得る。水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムなどのアジュバントを添加して、ワクチンが免疫応答を誘発、増強、または延長する能力を高めることができる。記載の組成物と別個に、または組み合わせて使用される、リポタンパク質、ＬＰＳ、モノホスホリルリピドＡ、リポテイコ酸、イミキモド、レシキモド、加えて、ポリＩ：Ｃなどのレチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）アゴニストを含む、サイトカイン、ケモカイン、ならびにＣｐＧのような細菌の核酸配列、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）９アゴニストおよびＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９に対する追加のアゴニストなどの、追加の物質もまた、潜在的なアジュバントである。アジュバントの他の代表例としては、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）およびコリネバクテリウム・パルブム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）の樹皮から精製される均質なサポニンを含む合成アジュバントＱＳ−２１が挙げられる（McCune et al., Cancer, 1979; 43:1619）。
【００７９】
追加の治療剤との同時投与のための方法は、当技術分野で周知である（Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA）。一般に、同時投与または一緒での投与は、薬剤を同時にまたは異なる時点で投与することができる場合に、対象を２つ以上の薬剤で処置することを示す。例えば、このような薬剤は、単一の対象に別個の投与として送達することができるが、これは、本質的に同じ時点であっても異なる時点であってもよいし、投与の同じ経路によるものであっても異なる経路によるものであってもよい。このような薬剤は、それらが投与の同じ経路により同じ時点で投与されるように、単一の対象に同じ投与（例えば、同じ製剤）で送達することができる。
本発明の化合物のアジュバント特性のため、それらの使用は、他のワクチン、アジュバント、抗原、抗体および免疫モジュレーターを含む他の治療的モダリティと組み合わせることもできる。以下に例を挙げる。
【００８０】
アジュバント
本明細書に記載されている本発明の化合物およびその組成物に加えて、本発明の組成物または方法は、それらの性質のため、標的腫瘍細胞に存在するがん抗原に応答する免疫系を刺激、またはそうでなければ利用するように作用することができる１つまたは複数の追加の物質をさらに含み得る。このようなアジュバントには、限定するものではないが、脂質、リポソーム、自然免疫性を誘導する不活化細菌（例えば、不活化または弱毒化リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ））、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、（ＮＯＤ）様受容体（ＮＬＲ）、レチノイン酸誘導性遺伝子ベース（ＲＩＧ）−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、Ｃ型レクチン受容体（ＣＬＲ）および／または病原体関連分子パターン（「ＰＡＭＰＳ」）を介して自然免疫活性化を媒介する組成物が含まれる。ＰＡＭＰの例としては、リポタンパク質、リポポリペプチド、ペプチドグリカン、ザイモサン、リポ多糖、ナイセリアポーリン、フラジェリン、プロフィリン（ｐｒｏｆｉｌｌｉｎ）、ガラクトセラミド、ムラミルジペプチドが挙げられる。ペプチドグリカン、リポタンパク質、およびリポテイコ酸は、グラム陽性の細胞壁構成成分である。リポ多糖は、ほとんどの細菌により発現され、ＭＰＬが１つの例である。フラジェリンは、病原性および共生の細菌により分泌される細菌鞭毛の構造構成成分を指す。ガラクトシルセラミドは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性化剤である。ムラミルジペプチドは、全ての細菌に共通の生理活性ペプチドグリカンモチーフである。
【００８１】
免疫チェックポイント阻害剤
本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニスト、ＰＤ−１経路アンタゴニスト、Ｔｉｍ−３経路アンタゴニスト、Ｖｉｓｔａ経路アンタゴニスト、ＢＴＬＡ経路アンタゴニスト、ＬＡＧ−３経路アンタゴニスト、またはＴＩＧＩＴ経路アンタゴニストからなる群から選択される免疫チェックポイント阻害剤などの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｔｉｍ−３抗体、抗Ｖｉｓｔａ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、または抗ＴＩＧＩＴ抗体からなる群から選択される。
【００８２】
本発明の化合物は、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するために使用される。ＣＴＬＡ−４は、適応免疫応答の重要な負の調節因子であると考えられる。活性化Ｔ細胞は、ＣＤ２８よりも高い親和性で抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６に結合し、それによりＴ細胞刺激、ＩＬ−２遺伝子発現およびＴ細胞増殖を阻害するＣＴＬＡ−４を上方制御する。ＣＴＬＡ４遮断の抗腫瘍効果は、結腸がん、転移性前立腺がん、および転移性メラノーマのマウスモデルにおいて観察されている。一部の実施形態において、ＣＴＬＡ−４経路アンタゴニスト（ａｎｔｏｇｏｎｉｓｔ）は、トレメリムマブおよびイピリムマブからなる群から選択される抗ＣＴＬＡ−４抗体分子である。
【００８３】
イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０としても公知であるＣＴＬＡ−４抗体、ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９）およびトレメリムマブ（以前はチシリムマブとして公知であったＩｇＧ２モノクローナル抗体、ＣＰ−６７５，２０６）は、ヒトＣＴＬＡ４に結合し、ＣＤ８０およびＣＤ８６とのその相互作用を防止するヒト化モノクローナル抗体である。同様の戦略により標的化され得る他の負の免疫調節因子には、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター、トランスフォーミング成長因子β、インターロイキン−１０、ならびに血管内皮成長因子が含まれる。
【００８４】
一部の実施形態において、本発明の化合物は、抗ＣＴＬＡ−４抗体および抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて使用することができる。一実施形態において、組合せは、例えば本明細書に記載されている通りの抗ＰＤ−１抗体分子、および抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブを含む。使用できる例示的な用量としては、約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体分子の用量、および約３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブの用量が挙げられる。
【００８５】
本発明の化合物は、ＰＤ−１経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するために使用される。ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞上で発現される適応免疫応答の別の負の調節因子である。ＰＤ−１はＢ７−Ｈ１およびＢ７−ＤＣに結合し、ＰＤ−１の関与がＴ細胞活性化を抑制する。抗腫瘍効果が、ＰＤ−１経路遮断で実証されている。抗ＰＤ−１抗体分子（例えばニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（商標））、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標））、およびピディリズマブ）、およびＡＭＰ−２２４が、本発明において用途を見出すことができるＰＤ−１経路遮断剤の例であることが文献において報告されている。一部の実施形態において、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ニボルマブ、ペンブロリズマブまたはピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体分子である。
一部の実施形態において、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合するＰＤ−ＬｌまたはＰＤ−Ｌ２の細胞外またはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ；例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号および国際公開第２０１１／０６６３４２号に開示されている）であり、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１との間の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。
【００８６】
一部の実施形態において、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤である。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。一部の実施形態において、抗ＰＤ−Ｌｌ阻害剤は、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８Ｃ、またはＭＤＸ−１１０５から選択される。一部の実施形態において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＳＢ００１０７１８Ｃである。ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ａ０９−２４６−２とも呼ばれる；Ｍｅｒｃｋ  Ｓｅｒｏｎｏ）は、ＰＤ−Ｌ１に結合するモノクローナル抗体である。
本発明の化合物は、ＴＩＭ−３経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するために使用される。一部の実施形態において、ＴＩＭ−３経路アンタゴニストは、抗ＴＩＭ−３抗体である。一部の実施形態において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、２０１５年８月６日に公開された「Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof」と題された米国特許出願公開第２０１５／０２１８２７４号に開示されている。
【００８７】
本発明の化合物は、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するために使用される。一部の実施形態において、ＬＡＧ−３経路アンタゴニストは、抗ＬＡＧ−３抗体である。一部の実施形態において、抗ＬＡＧ−３抗体分子は、２０１５年３月１３日に出願された「Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof」と題された米国特許出願公開第２０１５／０２５９４２０号に開示されている。
Ｔ細胞受容体アゴニスト
本発明の化合物は、Ｔ細胞受容体アゴニスト、例えば、ＣＤ２８アゴニスト、ＯＸ４０アゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、ＣＤ１３７アゴニスト、ＣＤ２７アゴニストまたはＨＶＥＭアゴニストと組み合わせて使用することができる。
本発明の化合物は、ＣＤ２７アゴニストと組み合わせて使用することができる。例示的なＣＤ２７アゴニストとしては、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／００４３６７号に記載されている通りの抗ＣＤ２７アゴニスト抗体が挙げられる。
【００８８】
本発明の化合物は、ＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、組合せは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍を処置するために使用される。例示的なＧＩＴＲアゴニストとしては、例えば、ＧＩＴＲ融合タンパク質および抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体）が挙げられる。
【００８９】
ＴＬＲアゴニスト
本発明の化合物は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストと組み合わせて使用することができる。用語「Ｔｏｌｌ様受容体」（または「ＴＬＲ」）は、本明細書で使用される場合、微生物生成物を感知する、および／または適応免疫応答を開始する、Ｔｏｌｌ様受容体タンパク質ファミリーのメンバーまたはその断片を指す。一実施形態において、ＴＬＲは、樹状細胞（ＤＣ）を活性化する。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、微生物病原体を認識する自然免疫系のセンサーとして当初は同定されたパターン認識受容体のファミリーである。ＴＬＲは、ロイシンリッチリピートのエクトドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ＴＩＲ（Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１Ｒ）ドメインを含有する保存膜貫通分子のファミリーを含む。ＴＬＲは、「ＰＡＭＰ」（病原体関連分子パターン）と多くの場合に呼ばれる、微生物中の明確な構造を認識する。ＴＬＲに対するリガンド結合は、炎症および免疫に関与する因子の産生を誘導する細胞内シグナル伝達経路のカスケードを引き起こす。
【００９０】
当技術分野で公知であり、本発明において用途が見出されるＴＬＲアゴニストとしては、限定するものではないが、以下が挙げられる。
Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＴＬＲ−１／２アゴニスト；
ＣＦＡ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＭＡＬＰ２、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ＦＳＬ−１、ＴＬＲ−２アゴニスト；
Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ＴＬＲ−２アゴニスト；
ポリリボイノシン酸（ｐｏｌｙｒｉｂｏｓｉｎｉｃ）：ポリリボシチジル酸（ｐｏｌｙｒｉｂｏｃｙｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ）（ポリＩ：Ｃ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリアデノシン−ポリウリジル酸（ポリＡＵ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；
ポリ−Ｌ−リジンおよびカルボキシメチルセルロースで安定化させたポリイノシン酸−ポリシチジル酸（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））、ＴＬＲ−３アゴニスト；
モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、ＴＬＲ−４アゴニスト；
ＬＰＳ、ＴＬＲ−４アゴニスト；
細菌フラジェリン、ＴＬＲ−５アゴニスト；
シアリル−Ｔｎ（ＳＴｎ）、複数のヒトがん細胞上のＭＵＣ１ムチンと関連する炭水化物およびＴＬＲ−４アゴニスト；
イミキモド、ＴＬＲ−７アゴニスト；
レシキモド、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；
ロキソリビン、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；ならびに
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧ−ＯＤＮ）、ＴＬＲ−９アゴニスト。
【００９１】
それらのアジュバント特性のため、ＴＬＲアゴニストは、他のワクチン、アジュバントおよび／または免疫モジュレーターと組み合わせて使用することが好ましく、様々な組合せで組み合わせてもよい。したがって、ある特定の実施形態において、ＳＴＩＮＧに結合し、ＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化を誘導するモノ−またはジ−ＦＣＤＮ化合物、ならびに本明細書に記載されている通りの、樹状細胞の誘導、動員および／または成熟を刺激する１つまたは複数のサイトカインを発現および分泌する不活化腫瘍細胞を、治療目的で１つまたは複数のＴＬＲアゴニストと一緒に投与することができる。
【００９２】
抗体療法
本発明の化合物は、治療用抗体と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態において、治療用抗体の作用機序は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。ＡＤＣＣは、免疫系のエフェクター細胞が、膜表面抗原に特異的抗体が結合している標的細胞を能動的に溶解する、細胞介在性免疫防御の機序である。これは、抗体が、体液性免疫応答の一部として、感染を制限し封じ込めるように作用することができる機序のうちの１つである。古典的なＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞により媒介され、マクロファージ、好中球および好酸球もまた、ＡＤＣＣを媒介することができる。ＡＤＣＣは、腫瘍に対する、トラスツズマブおよびリツキシマブを含む治療用モノクローナル抗体の重要な作用機序である。本発明の化合物は、ＡＤＣＣを増強するように作用し得る。
【００９３】
以下は、本発明の化合物と一緒に使用され得る抗体の例示的なリストである。
ムロモナブ−ＣＤ３、インフリキシマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、イブリツモマブ、トシツモマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、Ｌｙｍ−１  イピリムマブ、ビタキシン、ベバシズマブおよびアブシキシマブ。
本発明の化合物と組み合わせて使用され得る追加の治療用抗体には、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＥＧＦＲ２および／もしくはＥＧＦＲ４阻害剤、Ｍ−ＣＳＦ阻害剤、抗ＡＰＲＩＬ抗体、または抗ＳＩＲＰもしくは抗ＣＤ４７抗体が含まれる。
【００９４】
化学療法剤
本明細書に記載の方法の追加の実施形態において、本発明の化合物は、化学療法剤（例えば、小分子医薬化合物）と組み合わせて使用される。したがって、本方法は、対象に１つまたは複数の化学療法剤の有効量を追加処置または併用処置として投与することをさらに含む。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の化学療法剤は、酢酸アビラテロン、アルトレタミン、無水ビンブラスチン、アウリスタチン、ベキサロテン、ビカルタミド、ＢＭＳ１８４４７６、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、ブレオマイシン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル（ｐｒｏｌｙ）−１−Ｌプロリン−ｔブチルアミド、カケクチン、セマドチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−８’−ノルビン−カロイコブラスチン、ドセタキソール、ドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）、シクロホスファミド、カルボプラチン、カルムスチン、シスプラチン、クリプトフィシン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン  ドラスタチン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エトポシド、５−フルオロウラシル、フィナステリド、フルタミド、ヒドロキシ尿素およびヒドロキシ尿素タキサン、イホスファミド、リアロゾール、ロニダミン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、エンザルタミド、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、メルファラン、イセチオン酸ミボブリン、リゾキシン、セルテネフ、ストレプトゾシン、マイトマイシン、メトトレキサート、タキサン、ニルタミド、オナプリストン、パクリタキセル、プレドニムスチン、プロカルバジン、ＲＰＲ１０９８８１、エストラムスチンリン酸エステル（ｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、タモキシフェン、タソネルミン、タキソール、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン硫酸塩、ならびにビンフルニンからなる群から選択される。
【００９５】
追加の実施形態において、本明細書に記載の方法、本発明の化合物は、本明細書中の方法に記載されている通りの適応症を処置するための化学療法剤および／または追加の薬剤と組み合わせて使用される。一部の実施形態において、本発明の化合物は、ソトラスタウリン、ニロチニブ、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルフェニル）−Ｎ−エチル−４−（４−（モルホリノメチル）フェニル）イソキサゾール−３−カルボキサミド、ダクトリシブ、８−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−ピペラジン−１−イル−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン、３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシフェニル）−１−（６−（（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）ピリミジン−４−イル）−１−メチル尿素、ブパルリシブ、８−（２，６−ジフルオロ−３，５−ジメトキシフェニル）−Ｎ−（４−（（ジメチルアミノ）メチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）キノキサリン−５−カルボキサミド、（Ｓ）−Ｎ１−（４−メチル−５−（２−（１，１，１−トリフルオロ−２−メチルプロパン−２−イル）ピリジン−４−イル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１，２−ジカルボキサミド、（Ｓ）−１−（４−クロロフェニル）−７−イソプロポキシ−６−メトキシ−２−（４−（メチル−（（（１ｒ，４Ｓ）−４−（４−メチル−３−オキソピペラジン−１−イル）シクロヘキシル）メチル）アミノ）フェニル）−１，２−ジヒドロイソキノリン−３（４Ｈ）−オン、デフェラシロクス、レトロゾール、（４Ｓ，５Ｒ）−３−（２’−アミノ−２−モルホリノ−４’−（トリフルオロメチル）−［４，５’−ビピリミジン］−６−イル）−４−（ヒドロキシメチル）−５−メチルオキサゾリジン−２−オン、（Ｓ）−５−（５−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）−６−（４−クロロフェニル）−２−（２，４−ジメトキシピリミジン−５−イル）−１−イソプロピル−５，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｄ］イミダゾール−４（１Ｈ）−オン、４−（（２−（（（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル）アミノ）ベンゾ［ｄ］チアゾール−６−イル）オキシ）−Ｎ−メチルピコリン−アミド、イマチニブメシル酸塩、２−フルオロ−Ｎ−メチル−４−（７−（キノリン−６−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］［１，２，４］トリアジン−２−イル）ベンズアミド、ルキソリチニブ、パノビノスタット、オシロドロスタット、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−フルオロベンゾイル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド、（Ｓ）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロヘキシル−２−（（Ｓ）−２−（４−（４−フルオロベンゾイル）チアゾール−２−イル）ピロリジン−１−イル）−２−オキソエチル）−２−（メチルアミノ）プロパンアミド、ソニデギブリン酸塩、セリチニブ、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、Ｎ−（４−（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル）ピリジン−３−イル）−６−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド、２−（２’，３−ジメチル−［２，４’−ビピリジン］−５−イル）−Ｎ−（５−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２−イル）アセトアミド、エンコラフェニブ、７−シクロペンチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−（（５−（（１Ｒ，６Ｓ）−９−メチル−４−オキソ−３，９−ジアザビシクロ［４．２．１］−ノナン−３−イル）ピリジン−２−イル）アミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−カルボキサミド、ビニム−チニブ、ミドスタウリン、エベロリムス、１−メチル−５−（（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イル）オキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール２−アミン、パシレオチドジアスパルテート、ドビチニブ、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド、Ｎ６−（２−イソプロポキシ−５−メチル−４−（１−メチルピペリジン−４−イル）フェニル）−Ｎ４−（２−（イソプロピルスルホニル）−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン、３−（４−（４−（（５−クロロ−４−（（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ）ピリミジン−２−イル）アミノ）−５−フルオロ−２−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル）チエタン１，１−ジオキシド、５−クロロ−Ｎ２−（２−フルオロ−５−メチル−４−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）ピペリジン−４−イル）フェニル）−Ｎ４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン、５−クロロ−Ｎ２−（４−（１−エチルピペリジン−４−イル）−２−フルオロ−５−メチルフェニル）−Ｎ４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン、バルスポダール、およびコハク酸バタラニブからなる群から選択される１つまたは複数の薬剤と組み合わせて使用される。
【００９６】
他の実施形態において、本発明の化合物は、ＰＫＣ阻害剤、ＢＣＲ−ＡＢＬ阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＰＩ３Ｋおよび／もしくはｍＴＯＲの阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、シトクロムＰ４５０の阻害剤（例えば、ＣＹＰ１７阻害剤）、ＨＤＭ２阻害剤、アロマターゼ阻害剤、ｐ５３および／もしくはｐ５３／Ｍｄｍ２相互作用の阻害剤、またはＣＳＦ−１Ｒチロシンキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用することができる。
【００９７】
適切な調製物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、坐剤、液剤−特に注射用液剤（ｓ．ｃ．、ｉ．ｖ．、ｉ．ｍ．）および注入剤−エリキシル剤、乳剤または分散性散剤が挙げられる。薬学的に活性な化合物の含有量は、組成物全体の０．１〜９０質量％、好ましくは０．５〜５０質量％の範囲にあるべきであり、すなわち以下で指定される投与量範囲を達成するのに十分である量であるべきである。指定された用量は、必要に応じて、１日数回与えられてもよい。
上述の組み合わせパートナーについての投与量は、通常、一般に推奨される最低用量の１／５から一般に推奨される用量の１／１までである。
【００９８】
さらに別の態様において、本発明は、患者におけるＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態を処置するための方法であって、このような処置を必要とする患者、好ましくはヒトに、本発明の化合物の治療有効量を、上記の１つまたは複数の追加の治療剤の治療有効量と組み合わせて投与するステップを含む、方法に関する。
追加の治療剤と組み合わせた本発明による化合物の使用は、同時に行ってもよいし、または時間をずらして行ってもよい。
本発明による化合物および１つまたは複数の追加の治療剤は、両方とも１つの製剤に一緒に存在してもよいし、または２つの同一もしくは異なる製剤に、例えばいわゆるパーツのキットとして別々に存在してもよい。
したがって、さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つのさらなる治療剤を含む、組合せを提供する。
本発明のさらなる目的は、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、ならびに少なくとも１つのさらなる治療剤および１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物を提供することである。
さらなる態様において、本発明は、治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つのさらなる治療剤を含む、組合せを提供する。
さらなる態様において、本発明は、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の処置において使用するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つのさらなる治療剤を含む、組合せを提供する。
さらなる態様において、本発明は、炎症、アレルギー性および自己免疫性の疾患、感染性疾患、ならびにがんの処置において使用するための、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つのさらなる治療剤を含む、組合せを提供する。
【００９９】
さらなる態様において、本発明は、患者における、ＳＴＩＮＧのモジュレーションが有益である疾患または状態の処置の方法であって、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つのさらなる治療剤を含む組合せの治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。
さらなる態様において、本発明は、患者における、炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、感染性疾患またはがんの処置の方法であって、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、および少なくとも１つのさらなる治療剤を含む組合せの治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０１００】
当然ながら、実際の薬学的有効量または治療投与量は、患者の年齢および体重、投与の経路ならびに疾患の重症度などの当業者に公知の要因に依存する。いずれの場合も、組合せは、薬学的有効量を患者特有の状態に基づいて送達できる投与量および様式で投与することになる。
別の態様において、本発明は、本発明による化合物ならびに１つまたは複数の上記および下記の追加の治療剤を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物に関する。
本発明の他の特徴および利点は、例として本発明の原理を例証する、以下のさらに詳述される例から明らかになるであろう。
例および実験データ
以下の例は、本発明の例証の目的のためだけのものであって、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【０１０１】
以下の略語は上記および下記で使用される。
【表３】
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一般的技術所見
用語「周囲温度」および「室温」は、互換的に使用され、約２０℃、例えば１５〜２５℃の温度を示す。
【０１０２】
原則として、1Ｈ  ＮＭＲスペクトルおよび／または質量スペクトルは、本発明による化合物のものを得た。別段の記載がない限り、全てのクロマトグラフィー操作は室温で行った。環状ジヌクレオチド合成中、溶媒の蒸発は、典型的には、３５℃を越えない水浴温度の減圧下での回転蒸発により行った。さらに、環状ジヌクレオチド合成中、反応は、典型的には、窒素またはアルゴン下で行った。
【０１０３】
ヒトＳＴＩＮＧとの複合体における例１．１（例１．２と比較してヒトＳＴＩＮＧへの結合が改善されている）および例２．１（例２．２と比較してヒトＳＴＩＮＧへの結合が改善されている）のＸ線構造は、両方のリン原子がＲｐ配置を有することを示唆する。したがって、類似の様式で、例３．１（他の例３ジアステレオマーと比較してヒトＳＴＩＮＧへの結合が改善されている）および例４．１（例４．２と比較してヒトＳＴＩＮＧへの結合が改善されている）も、両方のリン原子におけるＲｐ配置を特徴とすると考えられる。
【０１０４】
Ａ）分析方法
ＬＣ−ＭＳ分析：
方法名：システムＡ
ＨＰＬＣ−システム：ＶＷＲ／日立：Ｌ−２１３０ポンプ；ＶＷＲ／日立：Ｌ−２２００オートサンプラー；ＶＷＲ／日立：Ｌ−２３００カラムオーブン；ＶＷＲ／日立：Ｌ−２４５０ダイオードアレイ検出器；Ａｇｉｌｅｎｔ：ＯｐｅｎＬａｂ
ＭＳ−システム：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ  ＬＣ６０００分光計
カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００−５Ｃ8、５μｍ、５０ｍｍ×３ｍｍ。
流速：０．４ｍＬ／分、３５℃、ＵＶ検出範囲：２２０〜３００ｎｍ
質量スペクトル：負および正のＥＳＩを使用して質量分析計で記録した
溶媒：Ａ：アセトニトリル
Ｂ：水
Ｃ：水中２０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3（ｐＨ５．５）
勾配：時間    Ａ％    Ｂ％    Ｃ％
０      ２      ９３    ５
２０    ６０    ３５    ５
２３    ９５    ０      ５
２４    ２      ９３    ５
３０    ２      ９３    ５
試料調製：試料（２μＬ〜２０μＬ）を８７．５μＬのアセトニトリルおよび２６２．５μＬの水に溶解し、注入容量２μＬ〜５μＬとした。
【０１０５】
方法名：Ｚ０１１＿Ｓ０３
装置説明：ＤＡ−およびＭＳ−検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＣ１８＿３．０×３０ｍｍ、２．５μｍ
カラム製造業者：Ｗａｔｅｒｓ
説明：
勾配／溶媒  溶媒％［Ｈ2Ｏ    溶媒％［アセトニトリル］  流速［ｍＬ／分］  Ｔ[℃]
時間［分］  ０．１％ＮＨ4ＯＨ］
０．０      ９７．０          ３．０                    ２．２          ６０．０
０．２      ９７．０          ３．０                    ２．２          ６０．０
１．２      ０．０            １００．０                ２．２          ６０．０
１．２５    ０．０            １００．０                ３．０          ６０．０
１．４      ０．０            １００．０                ３．０          ６０．０
【０１０６】
方法名：Ｚ０１７＿Ｓ０４
装置説明：ＤＡ−およびＭＳ−検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００
カラム：ＳｔａｂｌｅＢｏｎｄ  Ｃ１８＿３．０×３０ｍｍ、１．８μｍ
カラム製造業者：Ａｇｉｌｅｎｔ
説明：
勾配／溶媒    溶媒％      溶媒％［アセトニトリル］    流速［ｍＬ／分］    Ｔ[℃]
時間［分］    ［Ｈ2Ｏ  ０．１％ＴＦＡ］
０．０        ９７．０    ３．０                      ２．２            ６０．０
０．２        ９７．０    ３．０                      ２．２            ６０．０
１．２        ０．０      １００．０                  ２．２            ６０．０
１．２５      ０．０      １００．０                  ３．０            ６０．０
１．４        ０．０      １００．０                  ３．０            ６０．０
【０１０７】
方法名：Ｚ０１８＿Ｓ０４
装置説明：ＤＡ−およびＭＳ−検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００
カラム：Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８＿３．０×３０ｍｍ、２．５μｍ
カラム製造業者：Ｗａｔｅｒｓ
説明：
勾配／溶媒    溶媒％      溶媒％［アセトニトリル］    流速［ｍＬ／分］    Ｔ[℃]
時間［分］    ［Ｈ2Ｏ  ０．１％ＴＦＡ］
０．０        ９７．０    ３．０                      ２．２            ６０．０
０．２        ９７．０    ３．０                      ２．２            ６０．０
１．２        ０．０      １００．０                  ２．２            ６０．０
１．２５      ０．０      １００．０                  ３．０            ６０．０
１．４        ０．０      １００．０                  ３．０            ６０．０
【０１０８】
方法名：Ｚ０３５＿００１
装置説明：ＤＡ−およびＭＳ−検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００
カラム：Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｔ３、４．６×５０ｍｍ、３μｍ
カラム製造業者：Ｗａｔｅｒｓ
説明：
勾配／溶媒  溶媒％［Ｈ2Ｏ    溶媒％［アセトニトリル］  流速［ｍＬ／分］  Ｔ[℃]
時間［分］  ０．０２ｍｏｌ／Ｌ  ＴＥＡＦ］
０．０      ９８．０          ２．０                    １．０          ２５．０
３．０      ９８．０          ２．０                    １．０          ２５．０
１２．０    ８０．０          ２０．０                  １．０          ２５．０
１４．０    ０．０            １００．０                １．０          ２５．０
１６．０    ０．０            １００．０                １．０          ２５．０
【０１０９】
分析ＨＰＬＣ−構成：
方法名：構成Ａ（勾配ＨＰＬＣ）
ＶＷＲ／日立：Ｌ−２１３０ポンプ；ＶＷＲ／日立：Ｌ−２２００オートサンプラー；ＶＷＲ／日立：Ｌ−２３５０カラムオーブン（３０℃に設定）；ＶＷＲ／日立：Ｌ−２４００可変波長ＵＶ／Ｖｉｓ検出器；ＥＺＣｈｒｏｍソフトウェアバージョン３．３．１ＳＰ１。
ＹＭＣ＊ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ  １２ｎｍ（１０μｍ；２５０×４ｍｍ）チャネルＡ＝水中２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）；チャネルＢ＝１００％アセトニトリル、２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）。勾配：０分１００％Ａ；３０分１００％Ｂ；４０分１００％Ｂ、３０℃；流速：１．０ｍＬ／分；ＵＶ２６２ｎｍ；
【０１１０】
ＮＭＲ分光法：
核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：1Ｈスペクトルについて、化学シフトは、ＤＭＳＯ溶媒シグナル（２．５０ｐｐｍ）を基準とし、または、Ｄ2Ｏにおける測定について、ＤＳＳ（４，４−ジメチル−４−シラペンタン−１−スルホン酸）を基準とした。31Ｐ  ＮＭＲスペクトルは、1Ｈ／31Ｐの絶対周波数の比較により間接的に参照した（Ｂｒｕｋｅｒ  ＢｉｏＳｐｉｎ  ＧｍｂＨ、ソフトウェア：ＴｏｐＳｐｉｎ、ａｕプログラム：ｘｓｉ）。全ての31Ｐ  ＮＭＲスペクトルは、プロトンデカップリングを用いて記録した。
【０１１１】
Ｂ）中間体の合成
中間体１．１
５’−ＯＨ−２’−Ｆ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン
【化１４】
2020203887.tif 000018
５’−ＤＭＴｒ−２’−Ｆ−３’−ＣＥＰ−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓから入手、０．６５４ｇ、０．７４７ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１０ｍＬ）および水（０．０３３ｍＬ、１．５０ｍｍｏｌ、２当量）に室温で溶解した。トリフルオロ酢酸ピリジニウム（０．１７３ｇ、０．８９６ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加し、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。その後、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１０ｍＬ、９５．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、無水アセトニトリル（２５ｍＬ）に再溶解し、減圧下で蒸発させた。残留物をジクロロメタン（２５ｍＬ）および水（０．１３４ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ、１０当量）に溶解した。ジクロロメタン（２５ｍＬ）中のジクロロ酢酸（０．５５５ｍＬ、６．７３ｍｍｏｌ、９当量）を添加し、得られた橙色溶液を室温で１０分間撹拌した。ピリジン（１．３１ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ、１８当量）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。
反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体１．１の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：ｔRet４．２２分；ＥＳＩ−ＭＳ：４３８［Ｍ＋Ｈ］+
溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を無水アセトニトリル（４×１５ｍＬ）と共沸させた。最後の蒸発手順の間に、溶液を濃縮して約４ｍＬの最終共沸混合物を得た。得られた中間体１．１の無水溶液を、直ちに次の反応シーケンスで使用した。
【０１１２】
中間体１．２
線状二量体  ５’−ＯＨ−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン
【化１５】
2020203887.tif 000019
５’−ＤＭＴｒ−３’−ＣＥＰ−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン（Ｅｘｉｑｏｎから入手、０．９９８ｇ、１．２７ｍｍｏｌ、１．７当量）を、無水アセトニトリル（４×１５ｍＬ）と共沸させた。最後の蒸発手順の間に、溶液を濃縮して約４ｍＬの最終共沸混合物を得た。得られた溶液を、約４ｍＬの無水アセトニトリルに溶解した中間体１．１（最大理論量：０．７４７ｍｍｏｌ）に室温で添加した。反応混合物を室温で２０分間撹拌した。（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−メチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾリン−３−チオン（ＤＤＴＴ）（０．２０３ｇ、０．８２３ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。揮発物を減圧下で蒸発させ、残留物をジクロロメタン（２５ｍＬ）および水（０．１３４ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ、１０当量）に溶解した。ジクロロメタン（２５ｍＬ）中のジクロロ酢酸（１．１１ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ、１８当量）を添加し、橙色溶液を室温で２０分間撹拌した。ピリジン（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。
反応混合物のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体１．２の存在をジアステレオマーの混合物として確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：各ジアステレオマーについてｔRet８．３２、８．５３分；ＥＳＩ−ＭＳ：９５２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１１３】
フラスコに栓をし、慎重に密封し、−７０℃で１６時間貯蔵した。混合物を減圧下で蒸発させ、残留物を減圧下で無水ピリジン（２×２０ｍＬ）と共蒸発させた。さらなる４０ｍＬの無水ピリジンを添加し、残留物を減圧下で濃縮して約２０ｍＬの総容量とした。得られた中間体１．２の無水溶液を、直ちに次の反応シーケンスで使用した。
【０１１４】
中間体１．３
環状二量体  ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化１６】
2020203887.tif 000020
２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）（０．４８３ｇ、２．６２ｍｍｏｌ、３．５当量）を、約２０ｍＬの総容量の無水ピリジン中の粗中間体１．２（最大理論量：０．７４７ｍｍｏｌ）に添加した。得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。水（０．４７０ｍＬ、２６．１ｍｍｏｌ、３５当量）および３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン（０．１８９ｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、撹拌を室温で続けた。３０分後、反応混合物を１５０ｍＬの水中の炭酸水素ナトリウム（４．５００ｇ、５３．６ｍｍｏｌ）の溶液に注ぎ入れ、室温で５分間振盪し、続いて酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルの混合物（１５０ｍＬ、１：１）を添加した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×８０ｍＬ、１：１）でさらに抽出した。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで脱水し、続いて溶媒を減圧下で蒸発させ、１００ｍＬの無水トルエンと共蒸発させた。残った残留物を真空中でさらに乾燥させた。粗生成物を分取フラッシュクロマトグラフィー（１６０ｇのシリカゲル、ジクロロメタン中０〜１６．７％ＭｅＯＨの勾配）により精製して、中間体１．３をジアステレオマーの粗混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：各ジアステレオマーについてｔRet＝９．９１、１０．０８分；ＥＳＩ−ＭＳ：９６６［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１１５】
中間体２．１
５’−ＯＨ−３’−Ｈ−ホスホネート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン
【化１７】
2020203887.tif 000021
【０１１６】
中間体２．１は、５’−ＤＭＴｒ−３’−ＣＥＰ−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン（「ＬＮＡ−Ａアミダイト」、ＥＱ−００６３−１０００、Ｅｘｉｑｏｎから入手）から出発して、中間体１．１について記載した様式と類似の様式で調製した。粗生成物のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体２．１の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１７＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．６２分；ＥＳＩ−ＭＳ：４４８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１１７】
中間体２．２
線状二量体  ５’−ＯＨ−２’−Ｆ−Ｎ2−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−３’−Ｈ−ホスホネート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン
【化１８】
2020203887.tif 000022
【０１１８】
５’−ＤＭＴｒ−２’−Ｆ−３’−ＣＥＰ−Ｎ2−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン（ＡＢＣＲ  ＡＢ３５０７９３、１．８５ｇ、２．１６ｍｍｏｌ、１．３当量）を、無水アセトニトリル（２×１０ｍＬ）と共沸させた。残留物を無水アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、減圧下で約５ｍＬまで濃縮した。１０個のモレキュラーシーブ（３Å）を添加し、得られた混合物を、約３ｍＬの無水アセトニトリルに溶解した中間体２．１（最大理論量：１．６５ｍｍｏｌ）に室温で添加した。反応混合物を室温で４２分間撹拌した。（（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−メチリデン）アミノ）−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾリン−３−チオン（ＤＤＴＴ）（３８１ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。揮発物を真空中で蒸発させ、残留物をジクロロメタン（２０ｍＬ）および水（０．２９９ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ、１０当量）に溶解した。ジクロロメタン中ジクロロ酢酸（６％、２０ｍＬ）を添加し、得られた橙色溶液を室温で１０分間撹拌した。その後、ピリジン（１５ｍＬ）を添加し、反応混合物を真空中で蒸発させた。
【０１１９】
粗生成物のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体２．２の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１１＿Ｓ０３）：ｔRet＝０．６０分；ＥＳＩ−ＭＳ：９３４［Ｍ＋Ｈ］+
【０１２０】
中間体２．３
環状二量体  ２’−Ｆ−Ｎ2−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化１９】
2020203887.tif 000023
【０１２１】
粗中間体２．２（最大理論量：１．６５ｍｍｏｌ）をピリジン（３６ｍＬ）に溶解し、溶液を真空中で約２０ｍＬまで濃縮した。２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン２−オキシド（ＤＭＯＣＰ）（１１３４ｍｇ、６．１５ｍｍｏｌ、３．７当量）を添加し、得られた混合物を室温で１５分間撹拌した。水（１．０３ｍＬ、５７．１ｍｍｏｌ、３４当量）および３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン（４２８ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、撹拌を室温で続けた。５分後、反応混合物を１４０ｍＬの水中の炭酸水素ナトリウム（４．００ｇ、４７．６ｍｍｏｌ）の溶液に注ぎ入れ、室温で５分間撹拌し、続いて酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルの混合物（１４０ｍＬ、１：１）を添加した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル／メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１：１）でさらに抽出し、ジクロロメタンで数回さらに抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで脱水し、揮発物を真空中で除去した。
【０１２２】
残った残留物を最少量のジクロロメタンに溶解し、分取フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：勾配１００／０→７０／３０）により精製した。画分をＨＰＬＣ−ＭＳにより分析した。生成物を含有する画分を合わせ、溶媒を真空中で除去して、中間体２．３をジアステレオマーの粗混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１７＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．８６〜０．８８分；ＥＳＩ−ＭＳ：９４８［Ｍ＋Ｈ］+
【０１２３】
中間体３．１
線状二量体  ５’−ＯＨ−ＬＮＡ−Ｎ2−ｄｍｆ−グアノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−３’−Ｈ−ホスホネート−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン
【化２０】
2020203887.tif 000024
【０１２４】
中間体１．１（６００ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａｃｔｉｖａｔｏｒ４２の溶液（アセトニトリル中０．１Ｍ、２４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ、２．１当量）を添加した。数分後、５’−ＤＭＴｒ−３’−ＣＥＰ−ＬＮＡ−Ｎ2−ｄｍｆ−グアノシン−（「ＬＮＡ−Ｇ（ｄｍｆ）−アミダイト」、ＥＱ−００８２−１０００、Ｅｘｉｑｏｎから入手、１．６９ｇ、１．９８ｍｍｏｌ、１．７当量）を添加し、混合物を室温で４５分間撹拌した。ピリジン（１０ｍＬ）中のフェニルアセチルジスルフィド（「ＰＡＤＳ」、７１０ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ、２．０当量）の溶液を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。揮発物を真空中で蒸発させ、残留物をアセトニトリルと２回共沸させた。残留物をジクロロメタン（１４ｍＬ）および水（０．２１ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ、１０当量）に溶解した。ジクロロメタン中ジクロロ酢酸（６％、１．１４ｍＬ）を添加し、得られた橙色溶液を室温で２０分間撹拌した。その後、ピリジン（８ｍＬ）およびメタノール（８ｍＬ）の混合物を添加し、反応混合物を真空中で蒸発させた。残った残留物を最少量のジクロロメタンに溶解し、分取フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：勾配９５／５→０／１００）により精製した。画分をＨＰＬＣ−ＭＳにより分析した。生成物を含有する画分を合わせ、溶媒を真空中で除去して、粗中間体３．１を得た。
粗物質のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体３．１の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１７＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．７１分；ＥＳＩ−ＭＳ：９１９［Ｍ＋Ｈ］+
【０１２５】
中間体３．２
環状二量体  ＬＮＡ−Ｎ2−ｄｍｆ−グアノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【０１２６】
【化２１】
2020203887.tif 000025
【０１２７】
粗中間体３．１（最大理論量：０．１０９ｍｍｏｌ）をピリジンと２回共沸させ、ピリジン（４ｍＬ）に溶解した。塩化ピバロイル（０．０５０ｍＬ、０．４１ｍｍｏｌ、３．７当量）を添加し、得られた混合物を室温で４５分間撹拌した。元素状硫黄（１２ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、３．５当量）を添加し、撹拌を室温で４５分間続けた。揮発物を真空中で蒸発させ、残留物をトルエンと２回共沸させた。残った残留物をアセトニトリルで摩砕し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、真空中で乾燥させて、中間体３．２をジアステレオマーの粗混合物として得た。
物質のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体３．２の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１７＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．７８分；ＥＳＩ−ＭＳ：９３３［Ｍ＋Ｈ］+
【０１２８】
中間体４．１
線状二量体  ５’−ＯＨ−２’−Ｆ−２’−デオキシイノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−３’−Ｈ−ホスホネート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン
【化２２】
2020203887.tif 000026
【０１２９】
５’−ＤＭＴｒ−２’−Ｆ−３’−ＣＥＰ−２’−デオキシイノシン（ＭＦＣＤ２２３７４０６８、Ａｓｔａｔｅｃｈ、２ｇ、２．５９ｍｍｏｌ、１．７当量）を無水アセトニトリル（３×１５ｍＬ）と共沸させた。最後の蒸発手順の間に、溶液を濃縮して約５ｍＬの最終共沸混合物を得た。得られた溶液を、約５ｍＬの無水アセトニトリルに溶解した中間体２．１（最大理論量：１．５３ｍｍｏｌ）に室温で添加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌した。中間体４．１の調製のためのさらなる操作を、中間体１．２について記載した様式と類似の様式で行った。
粗物質のＬＣ−ＭＳ分析により、中間体４．１の存在を確認した。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：ｔRet７．６７分；ＥＳＩ−ＭＳ：８４９［Ｍ＋Ｈ］
【０１３０】
フラスコに栓をし、慎重に密封し、−７０℃で１６時間貯蔵した。混合物を減圧下で蒸発させ、残留物を減圧下で無水ピリジン（２×２０ｍＬ）と共蒸発させた。さらなる４０ｍＬの無水ピリジンを添加し、残留物を減圧下で濃縮して約２０ｍＬの総容量とした。得られた中間体４．１の無水溶液を、直ちに次の反応シーケンスで使用した。
【０１３１】
中間体４．２
環状二量体  ２’−Ｆ−２’−デオキシイノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート
【化２３】
2020203887.tif 000027
中間体４．２の合成を、中間体１．３について記載した様式と類似の様式で行った。粗反応混合物を２００ｍＬの水中の炭酸水素ナトリウム（６．７ｇ、７９．８ｍｍｏｌ）の溶液に注ぎ入れ、室温で５分間振盪した。この間に、生成物を含有する沈殿物が形成され、これを濾過により分離した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を濾液に添加し、有機相を分離した。水相を酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で３回さらに抽出した。合わせた有機相を無水硫酸マグネシウムで脱水し、続いて溶媒を減圧下で蒸発させた。初期の生成物含有沈殿物を添加し、続いて２００ｍＬの無水トルエンとの最後の共蒸発を行った。これらの操作の完了後、粗物質を真空中でさらに乾燥させた。粗物質を分取フラッシュクロマトグラフィー（１６０ｇのシリカゲル、ＤＣＭ中０〜１６．７％ＭｅＯＨの勾配）により精製して、粗中間体４．２をジアステレオマーの混合物として得た。
ＬＣ−ＭＳ（システムＡ）：各ジアステレオマーについてｔRet＝９．１４分、９．２８分；ＥＳＩ−ＭＳ：８６３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１３２】
Ｃ）本発明による化合物の合成
（例１．１および例１．２）
環状（ＬＮＡ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）
【化２４】
2020203887.tif 000028
【０１３３】
無水エタノール中３３％メチルアミン（１５０ｍＬ）を、粗環状二量体  ＬＮＡ−Ｎ6−Ｂｚ−アデノシン−（３’→５’）−シアノエチル−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−Ｎ6−Ｂｚ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート（中間体１．３；０．３６ｇ）に添加し、得られた溶液を室温で４時間撹拌した。全ての揮発物を減圧下で蒸発させ、残った残留物を真空中で乾燥させた。１２５ｍＬの水を添加し、得られた懸濁液を室温で超音波浴に入れた。１５分後、この懸濁液を１００ｍＬのクロロホルムに注ぎ入れ、有機相を分離した。この抽出をクロロホルム（２×１００ｍＬ）でさらに２回繰り返した。合わせた有機相を１００ｍＬの水で抽出し、合わせた生成物含有水相を０．４５μｍ  Ｒｏｔｉｌａｂｏ（登録商標）−ＣＭＥ−シリンジフィルター（外径：３３ｍｍ）で濾過した。生成物溶液を水で２４５ｍＬまで希釈し、２Ｍ塩化ナトリウムで予め再生して水で洗浄したＱ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ陰イオン交換カラム（４０〜１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｃｌ-型にかけた。カラムを、水（２カラム容量）、続いて１６．７カラム容量にわたる水中の０〜１Ｍ重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＢ、ｐＨ７）の勾配、続いて８．３カラム容量にわたる２Ｍ  ＴＥＡＢ、ｐＨ７でのステップ勾配で洗浄した（検出波長２５４ｎｍ）。例１．１および例１．２を、約０．６Ｍ  ＴＥＡＢ〜約２．０Ｍ  ＴＥＡＢで溶出した。生成物を含有する画分を減圧下で慎重に濃縮した。
【０１３４】
例１．１（第２の溶出）および例１．２（第１の溶出）の分離を、半分取逆相ＨＰＬＣ精製の繰り返しにより達成した。生成物溶液を、水中の１０％アセトニトリル、２０ｍＭギ酸トリエチルアンモニウム（ｔｒｉｅｔｈｙａｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｏｒｍａｔｅ）（ＴＥＡＦ、ｐＨ６．８）で予め平衡化したＹＭＣ＊ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ  １２ｎｍカラム（１０μｍ；２５０×１６ｍｍ；約５０ｍＬ）にかけた。溶出を、水中の１０％、１２％および１６％アセトニトリル、２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）のステップ勾配で行った。
【０１３５】
例１．１、ナトリウム塩（「第２の溶出ジアステレオマー」）の調製
例１．１、ＴＥＡ塩の脱塩を、分取逆相中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）により行った。生成物溶液（約５０ｍＬ）を、水で予め平衡化したＭｅｒｃｋ  ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ−１８カラム（１５〜２５μｍ；４５０×２５ｍｍ；約２２０ｍＬ）にかけた。カラムを水で洗浄して、過剰のＴＥＡＦ緩衝液を除去した。その後、水中２％２−プロパノールを使用して、脱塩例１．１を溶出した。生成物を含有する画分を減圧下で部分的に濃縮し、その後、２Ｍ塩化ナトリウムで予め再生して水で洗浄したＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ陽イオン交換カラム（４５〜１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｎａ+型にかけた。カラムは、ＵＶ吸光度がもはや検出できなくなるまで（検出波長２５４ｎｍ）、水で洗浄した。生成物を含有する画分を減圧下で慎重に蒸発させ、さらに真空中で乾燥させて、例１．１をナトリウム塩として得た。
ＨＰＬＣ（構成Ａ）：ｔRet＝１０．５１分；ＥＳＩ−ＭＳ：７０５［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．５（ｓ、１Ｐ）、５５．０（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
例１．２、ナトリウム塩（「第１の溶出ジアステレオマー」）の調製
例１．２、ＴＥＡ塩のトリエチルアンモニウムからナトリウムへの脱塩および塩変化は、例１．１、ＴＥＡ塩について記載した様式と同様の様式で行った。
ＨＰＬＣ（構成Ａ）：ｔRet＝９．２５分；ＥＳＩ−ＭＳ：７０５［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．８（ｓ、１Ｐ）、５５．７（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
【０１３６】
（例２．１および例２．２）
環状（ＬＮＡ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−２’−デオキシグアノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）、ナトリウム塩
【化２５】
2020203887.tif 000029
中間体２．３（１３００ｍｇ、最大理論量：１．３７ｍｍｏｌ）に、エタノール中メチルアミンの３３％溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。揮発物を真空中で除去した。残留物をアセトニトリルで摩砕し、濾過し、アセトニトリルで洗浄し、真空中で乾燥させた。残留物を分取ＨＰＬＣ（Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８；２０ｍＭ  ＮＨ4ＯＡｃ水溶液／アセトニトリル＝９８／２→７０／３０）により精製した。生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥した。このようにして２つのジアステレオマーを得、これらを分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｎｕｓ；２０ｍＭギ酸トリエチルアンモニウム水溶液／アセトニトリル＝９８／２→７０／３０）によりさらに精製した。純粋な、生成物を含有する画分を合わせ、２回凍結乾燥した。２つのジアステレオマーのトリエチルアンモニウム塩を、それぞれ、１ｍＬの水に溶解し、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｓｐｉｎカラム（２５０ｍｇのＢＴ  ＡＧ  ５０Ｗ−２樹脂１００〜２００メッシュ水素型で充填し、３ｍＬの１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液で調整し、その後、水で洗浄して中性にした）に流し、水で溶出し、生成物を含有する画分を凍結乾燥することにより、それぞれのナトリウム塩に変換した。
【０１３７】
例２．１（「第２の溶出ジアステレオマー」）：
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０３５＿００１）：ｔRet＝１０．７３分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．６０分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．７（ｓ、２Ｐ）ｐｐｍ。
【０１３８】
例２．２（「第１の溶出ジアステレオマー」）：
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０３５＿００１）：ｔRet＝９．０９分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８＿Ｓ０４）：ｔRet＝０．３９分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．７（ｓ、１Ｐ）；５５．０（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
【０１３９】
（例３．１、例３．２、例３．３および例３．４）
環状（ＬＮＡ−グアノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−２’−デオキシアデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）、ナトリウム塩
【化２６】
2020203887.tif 000030
中間体３．２（３３０ｍｇ、最大理論量：０．３５ｍｍｏｌ）に、エタノール中メチルアミンの３３％溶液（１６ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。揮発物を真空中で除去した。残留物をアセトニトリルで摩砕し、濾過し、アセトニトリルで洗浄し、真空中で乾燥させた。残留物を分取ＨＰＬＣ（Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｃ１８；２０ｍＭ  ＮＨ4ＯＡｃ水溶液／アセトニトリル、勾配９８／２→８０／２０）により精製した。純粋な、生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥した。このようにして、４つのジアステレオマーを単離することができた。４つのジアステレオマーのトリエチルアンモニウム塩を、それぞれ、１ｍＬの水に溶解し、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｓｐｉｎカラム（２５０ｍｇのＢＴ  ＡＧ  ５０Ｗ−２樹脂１００〜２００メッシュ水素型で充填し、１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液で調整し、その後、水で洗浄して中性にした）に流し、水で溶出し、生成物を含有する画分を凍結乾燥することにより、それぞれのナトリウム塩に変換した。
【０１４０】
例３．１（「第４の溶出ジアステレオマー」）：
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８Ｓ０４）：ｔRet＝０．６０分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０３５＿００１）：ｔRet＝１１．０５分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．４（ｓ、１Ｐ）、５４．７（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
【０１４１】
例３．２（「第３の溶出ジアステレオマー」）：
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８Ｓ０４）：ｔRet＝０．４２分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０３５＿００１）：ｔRet＝９．６２分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．４（ｓ、２Ｐ）ｐｐｍ。
【０１４２】
例３．３（「第２の溶出ジアステレオマー」）：
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８Ｓ０４）：ｔRet＝０．２６分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０３５＿００１）：ｔRet＝８．７６分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．８（ｓ、１Ｐ）、５５．９（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
【０１４３】
例３．４（「第１の溶出ジアステレオマー」）：
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０１８Ｓ０４）：ｔRet＝０．１６分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
ＬＣ−ＭＳ（Ｚ０３５＿００１）：ｔRet＝８．０６分；ＥＳＩ−ＭＳ：７２１［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．８（ｓ、１Ｐ）、５６．０（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
【０１４４】
（例４．１および例４．２）
環状（ＬＮＡ−アデノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート−２’−Ｆ−２’−デオキシイノシン−（３’→５’）−ホスホロチオエート）、ナトリウム塩
【化２７】
2020203887.tif 000031
２５０ｍＬの無水エタノール中３３％メチルアミンを粗中間体４．２（０．４３ｇ）に添加し、得られた溶液を室温で５時間撹拌した。全ての揮発物を減圧下で蒸発させ、残留物を真空中でさらに乾燥させて、例４．１および例４．２を含有する粗混合物を得た。２５０ｍＬの水を添加し、得られた懸濁液を室温で超音波浴に入れた。１５分後、この懸濁液を１２５ｍＬのクロロホルムに注ぎ入れ、有機相を分離した。この抽出をクロロホルム（２×１２５ｍＬ）でさらに２回繰り返した。合わせた有機相を１５０ｍＬの水で抽出し、合わせた生成物含有水相を０．４５μｍ再生セルロース（ＲＣ）フィルター（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、外径：５０ｍｍ）で濾過して、微粒子成分を除去した。生成物溶液を水で１１００ｍＬまで希釈し、２Ｍ塩化ナトリウムで予め再生して水で洗浄したＱ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ陰イオン交換カラム（４０〜１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｃｌ-型にかけた。カラムを、水（２カラム容量）、続いて１６．７カラム容量にわたる水中の０〜１Ｍ重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＢ、ｐＨ７）の勾配、続いて４．２カラム容量にわたる１Ｍ  ＴＥＡＢ、ｐＨ７で洗浄した（検出波長２５４ｎｍ）。例４．１および例４．２を、約０．４Ｍ  ＴＥＡＢ〜約０．８Ｍ  ＴＥＡＢで溶出した。生成物を含有する画分を減圧下で慎重に濃縮した。
【０１４５】
例４．１（第２の溶出）および例４．２（第１の溶出）の分離を、分取逆相中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）により達成した。生成物溶液（約６５ｍＬ）を、水中１００ｍＭギ酸トリエチルアンモニウム（ｔｒｉｅｔｈｙａｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｏｒｍａｔｅ）（ＴＥＡＦ）で予め平衡化したＭｅｒｃｋ  ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ−１８カラム（１５〜２５μｍ；４３５×２５ｍｍ；約２１５ｍＬ）にかけた。溶出を、水中の２％、３％および４％２−プロパノール、２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）のステップ勾配で行った。生成物を含有する画分を減圧下で慎重に濃縮した。
【０１４６】
例４．１および例４．２のさらなる精製を、半分取逆相ＨＰＬＣ精製の繰り返しにより達成した。生成物溶液を、水中の９〜１２％アセトニトリル、２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）で予め平衡化したＹＭＣ＊ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ  １２ｎｍカラム（１０μｍ；２５０×１６ｍｍ；約５０ｍＬ）にかけた。溶出を、水中の９％および１２％アセトニトリル、２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）のステップ勾配（例４．２）、または水中の１２％アセトニトリル、２０ｍＭ  ＴＥＡＦ（ｐＨ６．８）（例４．１）で行った。生成物を含有する画分を減圧下で慎重に濃縮した。
【０１４７】
例４．１、ナトリウム塩（「第２の溶出ジアステレオマー」）の調製
例４．１、ＴＥＡ塩の脱塩を、分取逆相中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）により行った。生成物溶液（約１５ｍＬ）を、水で予め平衡化したＭｅｒｃｋ  ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ（登録商標）ＲＰ−１８カラム（１５〜２５μｍ；４５０×２５ｍｍ；約２２０ｍＬ）にかけた。カラムを水で洗浄して、過剰のＴＥＡＦ緩衝液を除去した。その後、水中２％２−プロパノールを使用して、脱塩例２．１を溶出した。生成物を含有する画分を減圧下で部分的に濃縮し、その後、２Ｍ塩化ナトリウムで予め再生して水で洗浄したＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ陽イオン交換カラム（４５〜１６５μｍ；１２５×３５ｍｍ；約１２０ｍＬ）Ｎａ+型にかけた。カラムは、ＵＶ吸光度がもはや検出できなくなるまで（検出波長２５４ｎｍ）、水で洗浄した。生成物を含有する画分を減圧下で慎重に蒸発させ、さらに真空中で乾燥させて、例４．１をナトリウム塩として得た。
ＨＰＬＣ（構成Ａ、ＵＶ２５０ｎｍ）：ｔRet＝１０．４３分；ＥＳＩ−ＭＳ：７０６［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．４（ｓ、１Ｐ）、５４．９（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
【０１４８】
例４．２、ナトリウム塩（「第１の溶出ジアステレオマー」）の調製
例４．２、ＴＥＡ塩のＴＥＡからナトリウムへの脱塩および塩変化は、例４．１、ＴＥＡ塩について記載した様式と同様の様式で行った。
ＨＰＬＣ（構成Ａ、ＵＶ２５０ｎｍ）：ｔRet＝９．３７分；ＥＳＩ−ＭＳ：７０６［Ｍ＋Ｈ］+
31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ、３０３Ｋ）：δ５４．４（ｓ、１Ｐ）、５４．９（ｓ、１Ｐ）ｐｐｍ。
【手続補正書】
【提出日】令和2年9月23日(2020.9.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ-１）の化合物
2020203887.tif 000034
【請求項２】
式（Ｉ-２）の化合物
2020203887.tif 000035
【請求項３】
式（Ｉ-３）の化合物
2020203887.tif 000036
【請求項４】
式（Ｉ-４）の化合物
2020203887.tif 000037
【請求項５】
実質的に純粋な（Ｓｐ，Ｓｐ）、（Ｒｐ，Ｒｐ）、（Ｓｐ，Ｒｐ）、もしくは（Ｒｐ，Ｓｐ）立体異性体である請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
薬学的に許容される塩である請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の１つまたは複数の化合物を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物。
【請求項８】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物を含む、ワクチン。
【請求項９】
１つまたは複数の請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物、および１つまたは複数の追加の治療剤を含み、１つまたは複数の不活性担体および／または希釈剤を一緒に含んでもよい、医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の１つの化合物、および１つまたは複数の追加の治療剤を含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ワクチンの製造におけるワクチンアジュバントとしての、請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
ＳＴＩＮＧに関連するか、またはこれによりモジュレートされる疾患または状態の処置のための請求項７，９及び１０のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項１３】
炎症、アレルギー性もしくは自己免疫性の疾患、感染性疾患またはがんの処置のための請求項１２に記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2020203887000001.pdf