(57)【要約】      （修正有）【課題】癌の治療のためにそれを必要とする被検体に投与するための、併用療法の方法を提供する。【解決手段】ヒトヒストンメチルトランスフェラーゼＥＺＨ２の阻害剤と、１つまたは複数の他の治療剤、特にプレドニゾンなどの抗癌剤とを含む組成物を用いる、併用療法。【選択図】図２Ａ−２Ｂ
2020045350.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする患者において癌を治療するための方法であって、治療有効量のＥＺＨ
２阻害剤および治療有効量の標準治療剤を投与することを含む方法。
【請求項２】
それを必要とする患者において癌を治療するための方法であって、ＥＺＨ２阻害剤およ
び標準治療剤を含む併用の治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項３】
それを必要とする患者において癌を治療するための方法であって、ＥＺＨ２阻害剤およ
び標準治療剤を含む組成物の治療有効量を投与することを含む方法。
【請求項４】
前記癌が非ホジキンリンパ腫である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記非ホジキンリンパ腫が、ＤＬＢＣＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）またはＧ
ＣＢ（胚中心Ｂ細胞様）リンパ腫である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記癌がＥＺＨ２野生型癌である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記癌がＨ３Ｋ２７でのトリメチル化の増加を特徴とする、請求項１〜３のいずれか一
項に記載の方法。
【請求項８】
前記リンパ腫がＥＺＨ２突然変異型リンパ腫である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記ＥＺＨ２突然変異型リンパ腫が、Ｙ６４６、Ａ６８２またはＡ６９２の突然変異を
有する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌がＥＺＨ２阻害剤抵抗性または難治性癌である、請求項１〜３のいずれか一項に
記載の方法。
【請求項１１】
前記標準治療剤が、Ｒ−ＣＨＯＰ構成成分、ＢＣＬ阻害剤、またはＢＣＲ阻害剤からな
る群から選択される１つまたは複数の化合物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載
の方法。
【請求項１２】
前記Ｒ−ＣＨＯＰが、グルココルチコステロイド受容体アゴニストである、請求項１１
に記載の方法。
【請求項１３】
前記グルココルチコステロイド受容体アゴニストがプレドニゾロンまたはデキサメタゾ
ンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ドキソルビシンがＲ−ＣＨＯＰから省略されている、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＢＣＬ阻害剤が、ナビトクラックス、オバトクラックスまたはＡＢＴ−１９９であ
る、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＢＣＲ阻害剤が、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達カスケードの阻害剤で
ある、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＢＣＲ阻害剤が、リツキシマブ、ＭＫ−２２０６、イデラリシブ、トラメチニブ、
タマタニブ、エベロリムス、ベルケイド、またはイブルチニブである、請求項１１に記載
の方法。
【請求項１８】
前記ＥＺＨ２阻害剤が下記式：
【化１】
2020045350.tif 000027
を有する化合物４４またはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜１７のいずれか
一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＥＺＨ２阻害剤および標準治療剤が、同時にまたは逐次的に投与される、請求項１
８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＥＺＨ２阻害剤が、標準治療剤の投与前に投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも１つの遺伝子が前記患者においてアップレギュレートされている、請求項１
８に記載の方法。
【請求項２２】
前記遺伝子が、セストリン、ＴＮＦおよびＧＩＬＺからなる群から選択される、請求項
２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記遺伝子がグルココルチコイド標的遺伝子である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
遺伝子のアップレギュレーションが、請求項１に記載のＥＺＨ２阻害剤の治療有効量を
決定または調節するために使用される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
遺伝子のアップレギュレーションが、請求項１の標準治療剤の治療有効量を決定または
調節するために使用される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の治療方法に対する患者を選択する方法であって、前記患者が、セスト
リン、ＴＮＦおよびＧＩＬＺからなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現プ
ロファイルに基づいて選択される方法。
【請求項２７】
前記患者が、セストリン、ＴＮＦまたはＧＩＬＺの発現をアップレギュレートしている
、請求項１〜３のいずれか一項に記載の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１３年１２月６日に出願された米国仮特許出願第６１／９１３，０６３
号明細書、２０１４年１月３１日に出願された米国仮特許出願第６１／９３４，３８８号
明細書、および２０１４年５月１３日に出願された米国仮特許出願第６１／９２２，８８
１号明細書の優先権および利益を主張するものであり、これらの仮特許出願の各々の内容
全体を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
本発明は、ヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）のモノからトリメチル化を触媒
するＰＲＣ２複合体の触媒サブユニットであるヒトヒストンメチルトランスフェラーゼＥ
ＺＨ２の阻害剤、および１つまたは複数の他の治療剤、特に抗癌剤を含む組成物、ならび
に癌を治療するための併用療法の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌の併用療法治療は、複数の手段により疾患を攻撃する利点が一部認知されているため
、より一般的になりつつある。多くの有効な併用療法治療が過去数十年間にわたり確認さ
れてきているが、癌に起因する毎年の死亡者数が継続して多いことを考慮すると、抗癌治
療に使用するための有効な治療レジメンを突き止める必要性が依然として存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、化合物４４（ＥＰＺ−６４３８、Ｅ７４３８としても知られる）
【化１】
2020045350.tif 000003
などのＥＺＨ２阻害剤が、現行の標準治療を含む種々の薬剤と併用すると、ＥＺＨ２突然
変異の状態にかかわらず、特定の癌の治療に極めて有効であるという発見に少なくとも部
分的に基づいている。ある種の実施形態では、癌はリンパ腫である。ある種の実施形態で
は、癌は、胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）起原の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはびまん性
大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。ある種の実施形態では、リンパ腫はＥＺ
Ｈ２突然変異型リンパ腫である。ある種の実施形態では、リンパ腫はＥＺＨ２非突然変異
型リンパ腫またはＥＺＨ２野生型リンパ腫である。本発明はまた、化合物４４などのＥＺ
Ｈ２阻害剤とプレドニゾン、プレドニゾロンまたはデキサメタゾンなどのグルココルチコ
イド受容体アゴニスト（ＧＲａｇ）が協同して、癌における治療活性を劇的に増強すると
いう発見に基づいている。化合物４４とプレドニゾロンの併用により、突然変異を有する
ＧＣＢ  ＮＨＬ細胞のみからすべてのＧＣＢ  ＮＨＬ細胞に、ＥＺＨ２阻害に感受性とな
る細胞の範囲が拡大される。
【０００５】
一態様では、本発明は、それを必要とする患者において癌を治療するための方法であっ
て、治療有効量のＥＺＨ２阻害剤および治療有効量の標準治療剤を投与することを含む方
法を対象とする。
【０００６】
別の態様では、本発明は、それを必要とする患者において癌を治療するための方法であ
って、ＥＺＨ２阻害剤および標準治療剤を含む併用の治療有効量を投与することを含む方
法を対象とする。
【０００７】
本発明の別の態様は、それを必要とする患者において癌を治療するための方法であって
、ＥＺＨ２阻害剤および標準治療剤を含む治療有効量の組成物を投与することを含む方法
を対象とする。
【０００８】
ある実施形態では、ＥＺＨ２突然変異型リンパ腫は、Ｙ６４６、Ａ６８２、またはＡ６
９２の突然変異である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、標準治療剤は、Ｒ−ＣＨＯＰ構成成分、ＢＣＬ阻害剤、およ
びＢＣＲ阻害剤からなる群から選択される１つまたは複数の化合物である。
【００１０】
いくつかの実施形態では、Ｒ−ＣＨＯＰは、ＣＨＯＰのＧＲａｇ構成成分であるプレド
ニゾロンまたはデキサメタゾンである。
【００１１】
いくつかの実施形態では、Ｒ−ＣＨＯＰはグルココルチコステロイド受容体アゴニスト
である。ある種の実施形態では、グルココルチコステロイド受容体アゴニストは、プレド
ニゾロンまたはデキサメタゾンである。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ドキソルビシンは、Ｒ−ＣＨＯＰから省略される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＢＣＬ阻害剤は、ナビトクラックス、オバトクラックスまた
はＡＢＴ−１９である。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＢＣＲ阻害剤は、リツキシマブ、ＡＫＴ阻害剤ＭＫ−２２０
６、イデラリシブ、トラメチニブ、タマタニブ（ｔａｍａｔａｎｉｂ）、エベロリムスま
たはイブルチニブである。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ＢＣＲ阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達
カスケード阻害剤である。
【００１６】
いくつかの実施形態では、ＢＣＲ阻害剤は、リツキシマブ、ＭＫ−２２０６、イデラリ
シブ、トラメチニブ、タマタニブ、エベロリムス、ベルケイドまたはイブルチニブである
。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤および標準治療剤は、同時にまたは逐次的に
投与される。他の実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は、標準治療剤の投与前に投与される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの遺伝子が、患者においてアップレギュレー
トされている。ある種の実施形態では、アップレギュレートされた遺伝子は、セストリン
、ＴＮＦおよびＧＩＬＺからなる群から選択される。他の実施形態では、アップレギュレ
ートされた遺伝子は、グルココルチコイド標的遺伝子である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、遺伝子のアップレギュレーションは、ＥＺＨ２阻害剤および
標準治療剤の治療有効量を決定または調節するために使用される。
【００２０】
別の態様では、本発明は、治療のための患者を選択する方法であって、患者が、セスト
リン、ＴＮＦおよびＧＩＬＺからなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現プ
ロファイルに基づいて選択される方法を対象とする。
【００２１】
一態様では、本発明は、それを必要とする患者において癌を治療するための方法であっ
て、治療有効量のＥＺＨ２阻害剤および治療有効量の標準治療剤を投与することを含み、
患者がセストリン、ＴＮＦまたはＧＩＬＺの発現をアップレギュレートしている方法を対
象とする。
【００２２】
いくつかの実施形態では、癌は、ＥＺＨ２阻害剤抵抗性または難治性癌である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、癌は、Ｈ３Ｋ２７におけるトリメチル化の増加を特徴とする
。
【００２４】
本発明の一態様は、ＥＺＨ２阻害剤と、ＥＺＨ２突然変異を有する細胞を含む、ＥＺＨ
２阻害剤抵抗性または難治性突然変異細胞の非感受性を元に戻すＧＲａｇとの併用を対象
とする。
【００２５】
ある種の実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は、化合物４４またはその薬学的に許容される
塩もしくは溶媒和物、および１つまたは複数の他の治療剤である。
【００２６】
本発明の他の特徴と利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになる
であろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ−１Ｆ】突然変異型ＥＺＨ２胚中心Ｂ細胞リンパ腫細胞株における、ＣＨＯＰ構成成分と化合物４４（Ｃｐｄ４４）による併用有益性を実証する一連のＦａ−ＣＩプロットである。化合物４４とドキソルビシンは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞では相乗的に作用し（図１Ａ）、ＳＵ−ＤＨＬ−１０細胞では相加効果をもたらす（図１Ｄ）。併用有益性は、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞（図１Ｃ）およびＳＵ−ＤＨＬ−１０細胞（図１Ｆ）において、マホスファミドで観察される。併用有益性はまた、両方のＥＺＨ２  Ｙ６４６突然変異細胞株：ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞（図１Ｂ）およびＳＵ−ＤＨＬ−１０細胞（図１Ｅ）において、ビンクリスチンで観察される。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２では、用量は、ドキソルビシンに対して０．１６〜２０ｎＭ、ビンクリスチンに対して０．０４〜５ｎＭ、マホスファミドに対して０．１５６〜１０μＭ、化合物４４に対して１５〜１０００ｎＭの範囲であった。ＳＵ−ＤＨＬ−１０細胞では、用量は、ドキソルビシンに対して０．５〜６０ｎＭ、ビンクリスチンに対して０．０１６〜２ｎＭ、マホスファミドに対して０．１５６〜１０μＭ、および化合物４４に対して１．５６〜１００ｎＭの範囲であった。細胞は、前処理モデルＡに従って処理し、データはＣａｌｃｕｓｙｎソフトウェアで分析した。
【図２Ａ−２Ｄ】ＥＺＨ２突然変異型リンパ腫株において、グルココルチコイドアゴニストが化合物４４（Ｃｐｄ４４）の効力を増強することを実証する一連のプロットである。化合物４４の効力は、グルココルチコイドアゴニストと併用すると、劇的に増大する。前処理モデルＡに従って、２つのＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ突然変異型ＤＬＢＣＬ株にプレドニゾロン（図２Ａ、２Ｃ）またはデキサメタゾン（図２Ｂ、２Ｄ）を加えると、化合物４４のＩＣ５０が用量依存的にシフトする。用量は、両方の細胞株において、プレドニゾロンに対して１５ｎＭ〜１０００ｎＭ、デキサメタゾンに対して１．５ｎＭ〜１００ｎＭの範囲であった。化合物４４の用量は、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞では１５〜１０００ｎＭの範囲、ＳＵ−ＤＨＬ−１０細胞では１．５〜１００ｎＭの範囲であった。
【図３Ａ−３Ｄ】ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２  ＥＺＨ２突然変異型（図３Ａ、３Ｂ）および野生型（図３Ｃ、３Ｄ）ＧＣＢリンパ腫細胞株それぞれにおける、プレドニゾロンまたはデキサメタゾンと化合物４４（Ｃｐｄ４４）の併用の有益性を実証する一連の用量応答プロットである。化合物４４の用量は１５．６〜１０００ｎＭの範囲、プレドニゾロンの用量は７．８〜１０００ｎＭの範囲、デキサメタゾンの用量は０．８〜１００ｎＭの範囲であった（図３Ａおよび３Ｂ）。化合物４４の効力は、ＥＺＨ２突然変異型ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞において、プレドニゾロンまたはデキサメタゾンにより増大した（図３Ｃおよび３Ｄ）。化合物４４は、ＤＯＨＨ２  ＥＺＨ２野生型細胞において単剤として抗増殖効果を示さないため、プレドニゾロンまたはデキサメタゾンの効力シフトを測定した。プレドニゾロンまたはデキサメタゾンの効力は、ＤＯＨＨ２細胞において、化合物４４の添加で増大した。
【図４】化合物４４（Ｃｐｄ４４）／グルココルチコイドアゴニストの併用により、ＥＺＨ２阻害剤に抵抗性の細胞株におけるＥＺＨ２阻害剤（ＥＺＨ２ｉ）非感受性が克服されることを実証する要約表である。全体的に、プレドニゾロンと化合物４４の併用により、ＥＺＨ２ｉ感受性細胞株だけでなく、試験したすべてのＧＣＢ細胞株において感受性が増大する。ＲＬ細胞を除いて、プレドニゾロンによるプレインキュベーション後の化合物４４が有効ではないので、薬物添加の順序が重要である。
【図５Ａ−５Ｂ】化合物４４（Ｃｐｄ４４）と他の標的療法の併用によりＥＺＨ２突然変異型リンパ腫細胞株で観察された極めて強力な相乗作用を示す２つのプロットである。化合物４４をＢＣＬ２阻害剤ナビトクラックスと併用すると（図５Ａ）、またｍＴＯＲ阻害剤エベロリムスと併用すると（図５Ｂ）、極めて強力な相乗作用が観察される。ナビトクラックスに対する用量範囲は０．１６〜１０μＭ、エベロリムスに対しては０．０４〜５ｎＭ、化合物４４に対しては３１〜２０００ｎＭである。これらのデータは、前処理モデルＡで作成し、Ｃａｌｃｕｓｙｎソフトウェアで分析した。
【図６】化合物４４（Ｃｐｄ４４）と種々の薬物および／または薬物療法の併用からの結果の要約表である。化合物４４との併用有益性は、ＥＺＨ２突然変異型リンパ腫株において、試験したすべての薬物で得られた。グルココルチコイドアゴニストは、ＥＺＨ２野生型および突然変異型ＧＣＢリンパ腫株について、併用有益性を示した。
【図７Ａ−７Ｃ】化合物４４（Ｃｐｄ４４）−ＣＨＯＰ併用が、いくつかのＥＺＨ２突然変異型リンパ腫異種移植モデルにおいて、単剤に比較して抗腫瘍活性の増強を示すことを実証する一連のプロットである。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ）異種移植片を、方法に記載するように、化合物４４、ＣＨＯＰ、またその併用で２８日間治療した（図７Ａ）。平均腫瘍体積±ＳＥＭをプロットする。１５０ｍｇ／ｋｇ  ＴＩＤおよび２２５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤでの化合物４４の用量は両方とも、ビヒクル単独よりも腫瘍増殖阻害が統計的に顕著であった（＊ｐ値＜０．０５）。２２５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤでの化合物４４にＣＨＯＰを加えた治療により、いずれの単剤のみよりも大きな腫瘍退縮が得られた（＊＊＊ビヒクルに対してｐ値＜０．００１）。統計は反復測定分散分析により算出した。ＳＵ−ＤＨＬ６（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｎ）異種移植片を、方法に記載するように、化合物４４、ＣＨＯＰ、またはその併用で２８日間処理した（図７Ｂ）。平均腫瘍体積±ＳＥＭを上部パネルにプロットする。ＣＨＯＰまたは単剤の化合物４４単独では腫瘍増殖に影響がなかったが、２２５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤでの化合物４４にＣＨＯＰを加えて治療すると、２８日の治療期間中、腫瘍増殖の退縮がもたらされ、さらに投薬中止の３２日後でも腫瘍増殖遅延が維持された（＊ｐ値＜０．０００１）。６０日に達する生存曲線（下部パネル）により、化合物４４とＣＨＯＰの併用で治療した動物における有意な腫瘍増殖遅延が示される（＊＊ｐ値＜０．０５）。統計は両側ｔ検定により算出した。ＳＵＤＨＬ−１０（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ）異種移植片は、方法に記載するように、化合物４４、ＣＯＰ（ドキソルビシン構成成分を含まないＳＯＣ）、またはその併用で２８日間治療した（図７Ｃ）。平均腫瘍体積±ＳＥＭを上部パネルにプロットする。腫瘍増殖遅延試験における６０日に達するパーセント生存率を中央パネルにプロットする（注意：５００ｍｇ／ｋｇおよび２５０ｍｇ／ｋｇ＋ＣＯＰの生存曲線は重なっている）。平均腫瘍重量を下部パネルで比較しているが、群間で腫瘍重量に有意な差があることが示される（＊ｐ値＜０．０５、＊＊ｐ値＜０．０１、＊＊＊＊ｐ値＜０．０００１）。
【図８Ａ−８Ｃ】種々の細胞株を、化合物４４、プレドニゾロン、化合物４４とプレドニゾロンの併用、またはＤＭＳＯで処理した場合における、グルココルチコイド標的遺伝子セストリン１（ＳＥＳＮ１、図８Ａ）、ＴＮＦ（図８Ｂ）、およびＧＩＬＺ（図８Ｃ）の発現レベルの変化を示すパネルである。図８Ａ〜８Ｃで示すように、化合物４４またはプレドニゾロン単独に比較して、セストリン１、ＴＮＦ、およびＧＩＬＺの発現レベルの増大が併用処理後に観察された。
【図９Ａ−９Ｄ】全体的なＨ３Ｋ２７のアセチル化およびトリメチル化がプレドニゾロンまたは併用処理により影響されないことを示すパネルである。用量漸増のプレドニゾロン、化合物４４（Ｃｐｄ４４）、一定用量のプレドニゾロンと化合物４４の併用で４日間、細胞を処理した。酸抽出したヒストンを、Ｈ３Ｋ２７Ｍｅ３レベルについてＥＬＩＳＡにより分析した（図９Ａ）（プレドニゾロン単独、左パネル；化合物４４／プレドニゾロン併用、右パネル、ＩＣ５０値を各グラフに挿入）。プレドニゾロン処理の場合、用量依存的な変化がこの化合物で観察されなかったので、Ｈ３Ｋ２７Ｍｅ３値を棒グラフとして表す。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞（図９Ｂ）、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞（図９Ｃ）またはＲＬ細胞（図９Ｄ）を、用量漸増のプレドニゾロン、化合物４４、または一定用量のプレドニゾロンと化合物４４の併用で４日間処理した。酸抽出したヒストンを、Ｈ３Ｋ２７アセチル化レベルについて、ウエスタンブロットにより分析した。
【図１０】化合物４４またはプレドニゾロンによる単剤処理は、ＳＭＡＲＣＢ１タンパク質レベルに影響がないことを示すウエスタンブロットである。
【図１１Ａ−１１Ｆ】図１１Ａおよび１１Ｄは、化合物４４とエベロリムスの併用有益性を実証するＦａ−ＣＩプロットである。図１１Ｂおよび１１Ｅは、化合物４４、エベロリムス、化合物４４とエベロリムスの併用またはＤＭＳＯで処理したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞におけるアポトーシスを示すパネルである。図１１Ｃおよび１１Ｆは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の両方において、化合物４４単独に比較して、併用処理後に観察された細胞周期のＧ１期の変化を示すプロットである。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の両方において、化合物４４とエベロリムスの併用で強力な相乗効果が観察された（図１１Ａ、１１Ｄ）。
【図１２Ａ−１２Ｆ】図１２Ａおよび１２Ｄは、化合物４４とイブルチニブの併用有益性を実証するＦａ−ＣＩプロットである。図１２Ｂおよび１２Ｅは、化合物４４、イブルチニブ、化合物４４とイブルチニブの併用またはＤＭＳＯで処理したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞におけるアポトーシスを示すパネルである。図１２Ｃおよび１２Ｆは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の両方において、化合物４４単独に比較して、併用処理後に観察された細胞周期のＧ１期の変化を示すプロットである。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の両方において、化合物４４とイブルチニブの併用で強力な相乗効果が観察された（図１２Ａ、１２Ｄ）。
【図１３Ａ−１３Ｉ】図１３Ａ、１３Ｄおよび１３Ｇは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞において、化合物４４とＭＫ−２２０６の併用有益性を示すＦａ−ＣＩプロットである。図１３Ｂ、１３Ｅおよび１３Ｈは、化合物４４、ＭＫ−２２０６、化合物４４とＭＫ−２２０６の併用またはＤＭＳＯで処理したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞におけるアポトーシスを示すパネルである。図１３Ｃ、１３Ｆおよび１３Ｉは、３種の細胞株において、化合物４４単独に比較して、併用処理後に観察された細胞周期のＧ１期の変化を示すプロットである。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞において、化合物４４とＭＫ−２２０６の併用で強力な相乗効果が観察された（図１３Ａ、１３Ｄおよび１３Ｇ）。
【図１４Ａ−１４Ｃ】ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞を、化合物４４、イブルチニブ、ＭＫ−２２０６、化合物４４とイブルチニブの併用または化合物４４とＭＫ−２２０６の併用で処理した場合における、ＥＧＲ１、ＦＯＳ、ＴＣＬ１、ＡＩＣＤＡおよびＧＪＡ１の遺伝子発現の変化を示す棒グラフである。ＥＧＲ１（４０倍）およびＦＯＳ（４倍）のダウンレギュレーション、ならびにＡＩＣＤＡ（３倍）、ＴＣＬ１Ａ（５倍）およびＧＪＡ１（３倍）のアップレギュレーションが、単剤単独の処理で観察されたものよりも、化合物４４と第２の薬剤の併用で顕著に観察された（図１４Ａ〜１４Ｃ）。
【図１５】びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の生物学に関係するシグナル伝達経路、およびシグナル伝達経路内の種々の化学療法剤の標的を示す図である。
【図１６Ａ−１６Ｆ】図１６Ａおよび１６Ｄは、化合物４４、エベロリムス、化合物４４とエベロリムスの併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の処理後に観察された細胞周期のＧ１期の変化を示すプロットである。図１６Ｂおよび１６Ｅは、化合物４４、エベロリムス、化合物４４とエベロリムスの併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の処理後に観察された細胞周期のＳ期の変化を示すプロットである。図１６Ｃおよび１６Ｆは、化合物４４、エベロリムス、化合物４４とエベロリムスの併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の処理後に観察された細胞周期のＧ２／Ｍ期の変化を示すプロットである。細胞周期のＧ１、ＳおよびＧ２／Ｍ期それぞれにおける細胞の相乗的な減少が、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞に対する併用処理後４８時間に見られる（図１６Ｄ〜１６Ｆ）。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を単剤または併用で処理した場合には、細胞周期のｓｕｂ−Ｇ１期の変化は観察されなかった（図１６Ａ）。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を併用で処理した場合には、細胞周期のＳ期およびＧ２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な時間依存的減少が観察された（図１６Ｂ、１６Ｃ）。
【図１７Ａ−１７Ｆ】図１７Ａおよび１７Ｄは、化合物４４、イブルチニブ、化合物４４とイブルチニブの併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の処理後に観察された細胞周期のＧ１期の変化を示すプロットである。図１７Ｂおよび１７Ｅは、化合物４４、イブルチニブ、化合物４４とイブルチニブの併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の処理後に観察された細胞周期のＳ期の変化を示すプロットである。図１７Ｃおよび１７Ｆは、化合物４４、イブルチニブ、化合物４４とイブルチニブの併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の処理後に観察された細胞周期のＧ２／Ｍ期の変化を示すプロットである。図１７Ａ〜１７Ｆは、単剤としての化合物４４またはイブルチニブに比較して、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の併用処理後２４時間における、細胞周期のＧ１、Ｓ、Ｇ２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な減少を示す。
【図１８Ａ−１８Ｉ】図１８Ａ、１８Ｄおよび１８Ｇは、化合物４４、ＭＫ−２２０６、化合物４４とＭＫ−２２０６の併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の処理後に観察された細胞周期のＧ１期の変化を示すプロットである。図１８Ｂ、１８Ｅおよび１８Ｈは、化合物４４、ＭＫ−２２０６、化合物４４とＭＫ−２２０６の併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の処理後に観察された細胞周期のＳ期の変化を示すプロットである。図１８Ｃ、１８Ｆおよび１８Ｉは、化合物４４、ＭＫ−２２０６、化合物４４とＭＫ−２２０６の併用およびＤＭＳＯによる、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の処理後に観察された細胞周期のＧ２／Ｍ期の変化を示すプロットである。図１８Ａ〜１８Ｉは、単剤としての化合物４４またはＭＫ−２２０６に比較して、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およびＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の併用処理後、細胞周期のＧ１、Ｓ、Ｇ２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な減少を示す。
【図１９】化合物４４、プレドニゾロン、化合物４４とプレドニゾロンの併用またはＤＭＳＯで処理したＥＺＨ２野生型（ＯＣＩ−ＬＹ１９、ＤＯＨＨ２）、ＥＺＨ２  Ｙ６４６感受性（ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＳＵＤＨＬ１０）、およびＥＺＨ２  Ｙ６４６抵抗性（ＲＬ、ＳＵＤＨＬ）細胞株について、ＤＭＳＯ対照に対して規準化したグルココルチコイド受容体の発現レベルの変化を示す棒グラフである。倍率変化値は、ΔΔＣｔ法ならびに参照遺伝子としてＡＣＴＢ、Ｂ２ＭおよびＧＡＰＤＨを使用して定量した。結果に示すように、グルココルチコイド受容体の発現レベルは、併用において、細胞株の間で共通して影響を受けなかった。
【図２０Ａ−２０Ｃ】異種移植片を有するマウスにおいて、ＣＨＯＰレジームから１つまたはすべての化学療法構成成分を省略する効果を示すプロットである。図２０Ａは、化合物４４、ＣＯＰ（ドキソルビシン構成成分を含まない化学療法）またはそれらの併用で２８日間処理した、ＳＵＤＨＬ１０（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ）異種移植片を有するマウスにおける腫瘍重量の変化を示すプロットである。図２０Ｂは、２用量の化合物４４、プレドニゾンまたはそれらの併用で２８日間処理した、ＳＵＤＨＬ１０（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ）異種移植片を有するマウスにおける腫瘍体積の変化を示すプロットである。図２０Ｃは、化合物４４、プレドニゾンまたはそれらの併用で処理した、ＳＵＤＨＬ１０（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ）異種移植片を有するマウスにおける体重の変化を示すプロットである（図２０Ｂを参照のこと）。最大耐用量の化合物４４または化合物４４／ＣＯＰ併用を投与したマウスは、６０日目に１００％の生存を示し、併用群は、化合物４４の最大耐用量を含む、他のすべての治療群と比べ最小の２８日目腫瘍重量を示した（図２０Ａ）。プレドニゾン単独投薬では、何ら顕著な抗腫瘍効果を誘導しなかった（図２０Ｂ）。以前の研究と一致して、化合物４４の投薬は、部分的な応答のみをもたらしたが、２サイクルのプレドニゾンレジメンとではない、プレドニゾンと化合物４４の併用投薬は、高用量の化合物４４単独で達成される可能な最大退縮を誘導した。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、化合物４４が、現行の標準治療を含む種々の薬剤と併用すると、ＥＺＨ２突
然変異の状態にかかわらず、特定の癌の治療に有効であるという発見に少なくとも部分的
に基づいている。ある種の実施形態では、癌はリンパ腫である。ある種の実施形態では、
癌は、胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）起原の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）またはびまん性大細
胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。ある種の実施形態では、リンパ腫はＥＺＨ２
突然変異型リンパ腫である。ある種の実施形態では、リンパ腫はＥＺＨ２非突然変異型リ
ンパ腫またはＥＺＨ２野生型リンパ腫である。
【００２９】
本発明のある種の態様では、ＥＺＨ２阻害剤は、下記式：
【化２】
2020045350.tif 000004
を有する化合物４４（ＥＰＺ−６４３８、Ｅ７４３８としても知られる）またはその薬学
的に許容される塩である。
【００３０】
本発明は、ＥＺＨ２ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と他の抗癌剤を併用して
特定の腫瘍を治療すると、ＥＺＨ２ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤および抗癌
剤単独による腫瘍治療によって達成される結果よりも優れた結果を得ることができるとい
う発見に基づいている。したがって、本発明は、ＥＺＨ２ヒストンメチルトランスフェラ
ーゼ阻害剤および１つまたは複数の他の治療剤を含む組成物、ならびにその過程がヒスト
ンまたは他のタンパク質のメチル化状態の調節により影響を受け得る疾患、たとえば癌を
治療するためのその使用方法を提供する。ある種の実施形態では、本発明は、化合物４４
およびプレドニゾンを含む組成物を特徴とする。本発明はまた、癌、たとえば、濾胞性リ
ンパ腫（ＦＬ）およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＣＬＢＬ）を治療するための
、ＥＺＨ２ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤と１つまたは複数の治療剤、たとえ
ば化合物４４とプレドニゾンを含む併用療法のための方法を含む。具体的には、本発明の
方法は、癌の治療もしくは予防または癌細胞増殖の阻害に有用である。
【００３１】
本発明の態様は、突然変異型ＥＺＨ２を発現する被検体に、治療有効量のＥＺＨ２阻害
剤および１つまたは複数の他の治療剤を投与することにより、被検体の癌または前癌性状
態の症状を治療または緩和するための方法に関する。本発明の突然変異型ＥＺＨ２は、突
然変異型ＥＺＨ２ポリペプチドまたは突然変異型ＥＺＨ２ポリペプチドをコードする核酸
配列を指す。ある種の実施形態では、突然変異型ＥＺＨ２は、その基質ポケットドメイン
に１つまたは複数の突然変異を含む。
【００３２】
本発明の別の態様は、突然変異型ＥＺＨ２または野生型ＥＺＨ２を発現する被検体に、
治療有効量のＥＺＨ２阻害剤および１つまたは複数の他の治療剤を投与することにより、
被検体の癌または前癌性状態の症状を治療または緩和するための方法に関する。本発明の
突然変異型ＥＺＨ２は、突然変異型ＥＺＨ２ポリペプチドまたは突然変異型ＥＺＨ２ポリ
ペプチドをコードする核酸配列を指す。ある種の実施形態では、突然変異型ＥＺＨ２は、
その基質ポケットドメインに１つまたは複数の突然変異を含む。
【００３３】
別の態様では、本発明は、突然変異型ＥＺＨ２または野生型ＥＺＨ２を発現する被検体
に、治療有効量のＥＺＨ２阻害剤、たとえば化合物４４、および１つまたは複数のグルコ
コルチコイド受容体アゴニスト、たとえばプレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾ
ン（ＧＲａｇ）を投与することにより、被検体の癌または前癌性状態の症状を治療または
緩和するための方法に関する。本発明の突然変異型ＥＺＨ２は、突然変異型ＥＺＨ２ポリ
ペプチドまたは突然変異型ＥＺＨ２ポリペプチドをコードする核酸配列を指す。ある種の
実施形態では、突然変異型ＥＺＨ２は、その基質ポケットドメインに１つまたは複数の突
然変異を含む。
【００３４】
ヒトＥＺＨ２核酸およびポリペプチドは以前に記載されている。たとえば、Ｃｈｅｎ  
ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３８：３０−７［７４６アミノ酸］；Ｓｗ
ｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ１５９１０［７４６アミノ酸；］；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号
ＮＭ＿００４４５６およびＮＰ＿００４４４７（アイソフォームａ［７５１アミノ酸］）
；ならびにＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１５２９９８およびＮＰ＿６９４５４３（アイ
ソフォームｂ［７０７アミノ酸］）を参照されたい。これらのそれぞれは、その内容全体
を参照により本明細書に援用する。
【００３５】
本出願の目的のために、ヒトＥＺＨ２のアミノ酸残基Ｙ６４１は、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏ
ｔ受託番号Ｑ１５９１０のＹ６４１であるかまたはそれに対応するチロシン残基を指すこ
とを理解されたい。
【００３６】
さらに、本出願の目的のために、ヒトＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体、および同等にＥ
ＺＨ２のＹ６４１突然変異体は、野生型ヒトＥＺＨ２のＹ６４１に対応するアミノ酸残基
がチロシン以外のアミノ酸残基により置換されているヒトＥＺＨ２を指すことを理解され
たい。
【００３７】
ある種の実施形態では、Ｒ−ＣＨＯＰは、ＣＨＯＰのＧＲａｇ構成成分であるプレドニ
ゾロンまたはデキサメタゾンである。ある種の実施形態では、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シ
グナル伝達経路阻害剤は、リツキシマブ、ＡＫＴ阻害剤ＭＫ−２２０６、イデラリシブ、
トラメチニブ、タマタニブ、エベロリムスまたはイブルチニブである。
【００３８】
本発明は、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴ−ｍＴＯＲ  ＢＣＲシグナル伝達経路の阻害剤、たとえば
、イデラリシブ、ＭＫ−２２０６およびエベロリムスが、化合物４４と併用すると、ＷＳ
Ｕ−ＤＬＣＬ２細胞株およびＳＵ−ＤＨＬ−１０細胞株において、極めて強力な相乗作用
を誘導したという発見に部分的に基づいている。本発明はまた、化合物４４と、Ｂ細胞受
容体経路の阻害剤、たとえばイブルチニブおよびタマタニブとの併用が、両方の突然変異
細胞株において、極めて強力な相乗作用を示したという発見に部分的に基づいている。あ
る種の実施形態では、ＢＣＬ受容体阻害剤は、ナボチクラックス（ｎａｖｏｔｉｃｌａｘ
）またはＡＢＴ−１９９である。
【００３９】
いくつかの実施形態では、癌は、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リン
パ腫または非ホジキンリンパ腫胚中心Ｂ細胞である。
【００４０】
いくつかの実施形態では、標準治療剤は、Ｒ−ＣＨＯＰ、ＢＣＬ阻害剤およびＢＣＲ阻
害剤からなる群から選択される１つまたは複数の化合物である。
【００４１】
いくつかの実施形態では、Ｒ−ＣＨＯＰは、ＣＨＯＰのＧＲａｇ構成成分であるプレド
ニゾロンまたはデキサメタゾンである。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ＢＣＲ阻害剤は、リツキシマブ、ＡＫＴ阻害剤ＭＫ−２２０
６、イデラリシブ、トラメチニブ、タマタニブ、エベロリムスまたはイブルチニブである
。
【００４３】
いくつかの実施形態では、癌はＥＺＨ２突然変異癌である。
【００４４】
いくつかの実施形態では、癌はＥＺＨ２阻害剤抵抗性または難治性癌である。
【００４５】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体のアミノ酸配列は、チロシン以外のア
ミノ酸残基による、野生型ヒトＥＺＨ２のＹ６４１に対応する１個のアミノ酸残基の置換
のみが野生型ヒトＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。
【００４６】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトＥＺＨ
２のＹ６４１に対応する１個のアミノ酸残基のフェニルアラニン（Ｆ）への置換のみが野
生型ヒトＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実施形態によるＥＺＨ２のＹ６４１突然
変異体は、Ｙ６４１Ｆ突然変異体または同等にＹ６４１Ｆと本明細書で称される。
【００４７】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトＥＺＨ
２のＹ６４１に対応する１個のアミノ酸残基のヒスチジン（Ｈ）への置換のみが野生型ヒ
トＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実施形態によるＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体
は、Ｙ６４１Ｈ突然変異体または同等にＹ６４１Ｈと本明細書で称される。
【００４８】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトＥＺＨ
２のＹ６４１に対応する１個のアミノ酸残基のアスパラギン（Ｎ）への置換のみが野生型
ヒトＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実施形態によるＥＺＨ２のＹ６４１突然変異
体は、Ｙ６４１Ｎ突然変異体または同等にＹ６４１Ｎと本明細書で称される。
【００４９】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトＥＺＨ
２のＹ６４１に対応する１個のアミノ酸残基のセリン（Ｓ）への置換のみが野生型ヒトＥ
ＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実施形態によるＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体は、
Ｙ６４１Ｓ突然変異体または同等にＹ６４１Ｓと本明細書で称される。
【００５０】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトＥＺＨ
２のＹ６４１に対応する１個のアミノ酸残基のシステイン（Ｃ）への置換のみが野生型ヒ
トＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実施形態によるＥＺＨ２のＹ６４１突然変異体
は、Ｙ６４１Ｃ突然変異体または同等にＹ６４１Ｃと本明細書で称される。
【００５１】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＡ６７７突然変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトＥＺＨ
２のＡ６７７に対応する１個のアミノ酸残基の非アラニンアミノ酸、好ましくはグリシン
（Ｇ）への置換のみが野生型ヒトＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実施形態による
ＥＺＨ２のＡ６７７突然変異体は、Ａ６７７突然変異体、および好ましくはＡ６７７Ｇ突
然変異体または同等にＡ６７７Ｇと本明細書で称される。Ａ６７７は、Ａ６８２とも称さ
れる。
【００５２】
一実施形態では、ＥＺＨ２のＡ６８７突然変異体のアミノ酸配列は、野生型ヒトＥＺＨ
２のＡ６８７に対応する１個のアミノ酸残基の非アラニンアミノ酸、好ましくはバリン（
Ｖ）への置換のみが野生型ヒトＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実施形態によるＥ
ＺＨ２のＡ６８７突然変異体は、Ａ６８７突然変異体、および好ましくはＡ６８７Ｖ突然
変異体または同等にＡ６８７Ｖと本明細書で称される。Ａ６８７は、Ａ６９２とも称され
る。
【００５３】
一実施形態では、ＥＺＨ２の突然変異体のアミノ酸配列は、その基質ポケットドメイン
の１つまたは複数のアミノ酸残基が野生型ヒトＥＺＨ２のアミノ酸配列と異なる。この実
施形態によるＥＺＨ２の突然変異体は、本明細書でＥＺＨ２突然変異体と称される。
【００５４】
他の例示的な置換アミノ酸突然変異には、アミノ酸位置６７７、６８７または６４１で
の置換、たとえば、以下に限定されるものではないが、アミノ酸位置６７７での野生型残
基アラニン（Ａ）のグリシン（Ｇ）への置換（Ａ６７７Ｇ）；アミノ酸位置６８７での野
生型残基アラニン（Ａ）のバリン（Ｖ）への置換（Ａ６８７Ｖ）；アミノ酸位置６４１で
の野生型残基チロシン（Ｙ）のフェニルアラニン（Ｆ）への置換（Ｙ６４１Ｆ）；アミノ
酸位置６４１での野生型残基チロシン（Ｙ）のヒスチジン（Ｈ）への置換（Ｙ６４１Ｈ）
；アミノ酸位置６４１での野生型残基チロシン（Ｙ）のアスパラギン（Ｎ）への置換（Ｙ
６４１Ｎ）；アミノ酸位置６４１での野生型残基チロシン（Ｙ）のセリン（Ｓ）への置換
（Ｙ６４１Ｓ）；またはアミノ酸位置６４１での野生型残基チロシン（Ｙ）のシステイン
（Ｃ）への置換（Ｙ６４１Ｃ）が含まれる。Ｙ６４１は、Ｙ６４６とも称される。
【００５５】
ＥＺＨ２に対してヘテロ接合性の細胞は、野生型酵素によるＨ３−Ｋ２７ｍｅ１の効率
的な形成、および突然変異型酵素形態による、この前駆細胞種のＨ３−Ｋ２７ｍｅ２およ
び特にＨ３−Ｋ２７ｍｅ３への効率的なその後の移行により、悪性形質を示すと予測され
る。
【００５６】
本発明の別の態様は、被検体において、Ｈ３−Ｋ２７のトリメチル化Ｈ３−Ｋ２７への
変換を阻害するための方法である。阻害としては、被検体における、非メチル化Ｈ３−Ｋ
２７のモノメチル化Ｈ３−Ｋ２７への変換、モノメチル化Ｈ３−Ｋ２７のジメチル化Ｈ３
−Ｋ２７への変換、ジメチル化Ｈ３−Ｋ２７のトリメチル化Ｈ３−Ｋ２７への変換、また
はたとえば、モノメチル化Ｈ３−Ｋ２７のジメチル化Ｈ３−Ｋ２７への変換およびジメチ
ル化Ｈ３−Ｋ２７のトリメチル化Ｈ３−Ｋ２７への変換を含むそれらの任意の組合せの阻
害を挙げることができる。本明細書で使用する場合、非メチル化Ｈ３−Ｋ２７は、メチル
基がリジン２７のアミノ基に共有結合していないヒストンＨ３を指す。本明細書で使用す
る場合、モノメチル化Ｈ３−Ｋ２７は、１個のメチル基がリジン２７のアミノ基に共有結
合しているヒストンＨ３を指す。モノメチル化Ｈ３−Ｋ２７は、本明細書でＨ３−Ｋ２７
ｍｅ１とも称される。本明細書で使用する場合、ジメチル化Ｈ３−Ｋ２７は、２個のメチ
ル基がリジン２７のアミノ基に共有結合しているヒストンＨ３を指す。ジメチル化Ｈ３−
Ｋ２７は、本明細書でＨ３−Ｋ２７ｍｅ２とも称される。本明細書で使用する場合、トリ
メチル化Ｈ３−Ｋ２７は、３個のメチル基がリジン２７のアミノ基に共有結合しているヒ
ストンＨ３を指す。トリメチル化Ｈ３−Ｋ２７は、本明細書でＨ３−Ｋ２７ｍｅ３とも称
される。本発明の組成物は、化合物４４および１つまたは複数の他の治療剤を含む。本発
明の化合物および組成物は、同時に、逐次的に、または交互に投与するのに適した１つも
しくは複数の他の治療剤または治療法との併用療法の一部として投与するのに適している
。本発明の方法に適した他の化合物は、その内容全体を参照により本明細書に援用する米
国特許出願公開第２０１２０２６４７３４号明細書に記載されている。
【００５７】
本発明のある種の態様では、ＥＺＨ２の阻害剤は、野生型ＥＺＨ２のヒストンメチルト
ランスフェラーゼ活性を阻害するよりも効率的に突然変異型ＥＺＨ２のヒストンメチルト
ランスフェラーゼ活性を阻害する場合に、突然変異型ＥＺＨ２のヒストンメチルトランス
フェラーゼ活性を「選択的に阻害する」。たとえば、一実施形態では、選択的阻害剤は、
野生型ＥＺＨ２に対するＩＣ５０よりも少なくとも４０パーセント低い、突然変異型ＥＺ
Ｈ２に対するＩＣ５０を有する。一実施形態では、選択的阻害剤は、野生型ＥＺＨ２に対
するＩＣ５０よりも少なくとも５０パーセント低い、突然変異型ＥＺＨ２に対するＩＣ５
０を有する。一実施形態では、選択的阻害剤は、野生型ＥＺＨ２に対するＩＣ５０よりも
少なくとも６０パーセント低い、突然変異型ＥＺＨ２に対するＩＣ５０を有する。一実施
形態では、選択的阻害剤は、野生型ＥＺＨ２に対するＩＣ５０よりも少なくとも７０パー
セント低い、突然変異型ＥＺＨ２に対するＩＣ５０を有する。一実施形態では、選択的阻
害剤は、野生型ＥＺＨ２に対するＩＣ５０よりも少なくとも８０パーセント低い、突然変
異型ＥＺＨ２に対するＩＣ５０を有する。一実施形態では、選択的阻害剤は、野生型ＥＺ
Ｈ２に対するＩＣ５０よりも少なくとも９０パーセント低い、突然変異型ＥＺＨ２に対す
るＩＣ５０を有する。
【００５８】
本発明のある種の態様では、阻害剤は、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ２のＨ３−Ｋ２７ｍｅ３への
変換を阻害する。一実施形態では、阻害剤は、Ｈ３−Ｋ２７のトリメチル化を阻害すると
言われる。Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１のＨ３−Ｋ２７ｍｅ２への変換がＨ３−Ｋ２７ｍｅ２のＨ
３−Ｋ２７ｍｅ３への変換に先行するので、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１のＨ３−Ｋ２７ｍｅ２へ
の変換の阻害剤は、当然、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ２のＨ３−Ｋ２７ｍｅ３への変換も阻害する
、すなわち、Ｈ３−Ｋ２７のトリメチル化を阻害する。阻害剤は、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１の
Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ２への変換を阻害することなく、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ２のＨ３−Ｋ２７ｍ
ｅ３への変換を阻害することも可能である。このタイプの阻害も、Ｈ３−Ｋ２７のジメチ
ル化の阻害がないにもかかわらず、Ｈ３−Ｋ２７のトリメチル化の阻害をもたらすことに
なる。
【００５９】
一実施形態では、阻害剤は、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１のＨ３−Ｋ２７ｍｅ２への変換および
Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ２のＨ３−Ｋ２７ｍｅ３への変換を阻害する。そのような阻害剤は、Ｈ
３−Ｋ２７ｍｅ１のＨ３−Ｋ２７ｍｅ２への変換のみを直接阻害する場合がある。あるい
は、そのような阻害剤は、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１のＨ３−Ｋ２７ｍｅ２への変換およびＨ３
−Ｋ２７ｍｅ２のＨ３−Ｋ２７ｍｅ３への変換の両方を直接阻害する場合がある。
【００６０】
本発明のある種の態様では、阻害剤化合物はヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を
阻害する。ヒストンメチルトランスフェラーゼ活性の阻害は、任意の好適な方法を使用し
て検出することができる。阻害は、たとえば、ヒストンメチルトランスフェラーゼ活性の
速度から、またはヒストンメチルトランスフェラーゼ活性の生成物により、測定すること
ができる。
【００６１】
阻害は、適切な対照に比較して測定可能な阻害である。一実施形態では、阻害は、適切
な対照に比較して少なくとも１０パーセントの阻害である。すなわち、阻害剤存在下での
酵素活性の速度または生成物の量は、阻害剤非存在下での対応する速度または量の９０パ
ーセント以下である。種々の他の実施形態では、阻害は、適切な対照に比較して、少なく
とも２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０または９５パーセン
トの阻害である。一実施形態では、阻害は、適切な対照に比較して少なくとも９９パーセ
ントの阻害である。すなわち、阻害剤存在下での酵素活性の速度または生成物の量は、阻
害剤非存在下での対応する速度または量の１パーセント以下である。
【００６２】
本発明の組成物は、ＥＺＨ２阻害剤もしくは化合物４４またはその薬学的に許容される
塩と、１つもしくは複数の他の治療剤またはその薬学的に許容される塩とを含む。本発明
は、ＥＺＨ２阻害剤もしくは化合物４４またはその薬学的に許容される塩と、１つもしく
は複数の治療剤またはその薬学的に許容される塩とを、共通の製剤または別々の製剤とし
て投与することを提供し、製剤の投与は、同時、逐次的、または交互である。ある種の実
施形態では、他の治療剤は、本発明の組成物により治療されている疾患または状態を治療
するのに有用であるとして、当該技術分野で認識されている薬剤であり得る。他の実施形
態では、他の治療剤は、本発明の組成物により治療されている疾患または状態を治療する
のに有用であるとして、当該技術分野で認識されていない薬剤であり得る。一態様では、
他の治療剤は、本発明の組成物に有益な性状を付与する薬剤（たとえば、組成物の粘性に
影響を与える薬剤）であり得る。本発明の組成物に対する有益な性状としては、これに限
定されるものではないが、ＥＺＨ２阻害剤または化合物４４と１つまたは複数の他の治療
剤との併用から生じる薬物動態的または薬力学的共同作用が挙げられる。たとえば、１つ
または複数の他の治療剤は、抗癌剤または化学療法剤であり得る。たとえば、１つまたは
複数の他の治療剤は、グルココルチコイドであり得る。たとえば、１つまたは複数の他の
治療剤は、プレドニゾン、プレドニゾロン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキ
ソルビシン、マホスファミド、シスプラチン、ＡｒａＣ、エベロリムス、デシタビン、デ
キサメタゾン、またはそれらの機能的なアナログ、誘導体、プロドラッグおよび代謝産物
から選択することができる。別の態様では、他の治療剤は、プレドニゾンまたはその活性
代謝物であるプレドニゾロンであり得る。
【００６３】
以下に示す治療剤は、例示を目的とするものであり、限定を意図するものではない。本
発明は、以下のリストから選択される少なくとも１つの他の治療剤を含む。本発明は、本
発明の組成物がその目的とする機能を発揮することができるように、２つ以上の他の治療
剤、たとえば、２つ、３つ、４つまたは５つの他の治療剤を含むことができる。
【００６４】
別の実施形態では、他の治療剤は、アルキル化剤；抗生物質；代謝拮抗剤；解毒剤；イ
ンターフェロン；ポリクローナルまたはモノクローナル抗体；ＥＧＦＲ阻害剤；ＨＥＲ２
阻害剤；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；ホルモン；有糸分裂阻害剤；ＭＴＯＲ阻害剤；
多標的キナーゼ阻害剤；セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；
ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤；タキサンまたはタキサン誘導体、アロマターゼ阻害剤、ア
ントラサイクリン、微小管標的薬、トポイソメラーゼ毒性薬、分子標的または酵素（たと
えば、キナーゼまたはタンパク質メチルトランスフェラーゼ）の阻害剤、シチジンアナロ
グ薬、あるいはｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／ｄｏｃｒｏｏｔ／ｃｄｇ／ｃｄｇ＿０．
ａｓｐに収載されている任意の化学療法剤、抗新生物剤または抗増殖剤を含む群から選択
される化学療法剤（抗新生物剤または抗増殖剤とも呼ばれる）である。
【００６５】
本発明は、疾患または癌の治療を必要とする被検体に、ＥＺＨ２阻害剤もしくは化合物
４４またはその薬学的に許容される塩と１つまたは複数の他の治療剤とを含む組成物を投
与する併用療法のための方法を提供する。この併用療法はまた、増殖を阻害するかまたは
細胞死を誘導するために、癌細胞に対して施すことができる。一態様では、化合物４４ま
たはその薬学的に許容される塩は、化合物４４またはその薬学的に許容される塩と１つま
たは複数の他の治療剤とを含む本発明の組成物の投与後に投与される。一態様では、化合
物４４またはその薬学的に許容される塩は、化合物４４またはその薬学的に許容される塩
と１つまたは複数の他の治療剤とを含む本発明の組成物の投与前に投与される。一態様で
は、化合物４４またはその薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の治療剤の投与後に
投与され、そのため、他の治療剤は、単一の組成物または２つ以上の組成物で投与され、
たとえば、同時に、逐次的にまたは交互に投与される。一態様では、化合物４４またはそ
の薬学的に許容される塩は、１つまたは複数の治療剤の投与前に投与され、そのため、他
の治療剤は、単一の組成物または２つ以上の組成物で投与され、たとえば、同時に、逐次
的にまたは交互に投与される。
【００６６】
一実施形態では、本発明の組成物は、化合物４４またはその薬学的に許容される塩と、
１つまたは複数の抗癌剤、たとえば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ヒドロキシダウノ
ルビシン、オンコビンおよびプレドニゾンもしくはプレドニゾロン）またはＲ−ＣＨＯＰ
（リツキシマブ、シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン、オンコビン、プレド
ニゾンもしくはプレドニゾロン）とを含む。一実施形態では、本発明の組成物は、化合物
４４またはその薬学的に許容される塩とプレドニゾンまたはプレドニゾロンとを含む。本
発明の方法は、化合物４４の化合物またはその薬学的に許容される塩と抗癌剤とを投与す
る併用療法を含み、ここで、抗癌剤はＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＨＯＰ、プレドニゾンまたはプレ
ドニゾロンである。
【００６７】
ある種の実施形態では、「ＥＺＨ２阻害剤と標準治療剤とを含む併用」とは、共通製剤
化されていない治療剤の投与を包含することを意図するものである。
【００６８】
ある種の実施形態では、「併用療法」は、各治療剤が異なる時点で投与される、これら
の治療剤の逐次的な投与、ならびにこれらの治療剤またはこれらの治療剤の少なくとも２
つの同時または実質的に同時の投与を包含することを意図する。同時投与は、たとえば、
固定比率の各治療剤を含有する単一カプセル剤または治療剤の各々についての複数の単一
カプセル剤を被検体に投与することによって達成することができる。各治療剤の逐次的ま
たは実質的に同時の投与は、以下に限定されるものではないが、経口経路、静注経路、筋
肉内経路および粘膜組織による直接吸収を含む、任意の適切な経路により達成することが
できる。治療剤は、同じ経路によりまたは異なる経路により投与することができる。たと
えば、選択された併用の最初の治療剤は静脈内注射により投与することができ、一方他の
治療剤は経口投与することができる。あるいは、たとえば、治療剤をすべて経口投与する
ことも、または静脈内注射により投与することもできる。治療剤はまた交互に投与しても
よい。
【００６９】
本発明のある種の実施形態では、本発明で注目する併用療法は、疾患または癌の治療に
おいて相乗効果をもたらし得るものである。「相乗効果」は、治療剤の併用の効力が単独
投与されたいずれの薬剤の効果の合計よりも大きい場合として定義される。相乗効果はま
た、化合物または他の治療剤のいずれについても単剤として投与することによって達成す
ることができない効果でもあり得る。相乗効果には、以下に限定されるものではないが、
腫瘍サイズの縮小、腫瘍増殖の阻害または被検体の生存期間の延長による癌治療の効果が
含まれる。相乗効果にはまた、癌細胞生存率の低下、癌細胞死の誘導および癌細胞増殖の
阻害または遅延も含まれ得る。
【００７０】
本発明のある種の実施形態では、「併用療法」はまた、他の生物学的に活性な成分およ
び非薬物療法（たとえば、外科手術または放射線治療）とのさらなる併用における、上記
の治療剤の投与も包含する。併用療法が非薬物治療をさらに含む場合、治療剤の併用と非
薬物治療との共同作用からの有益な効果が達成される限り、非薬物治療は任意の好適な時
期に行うことができる。たとえば、適合する症例では、非薬物治療が治療剤の投与のため
におそらく数日間または数週間も一時的に中断される場合でも依然として有益な効果が達
成される。
【００７１】
別の態様では、本発明の組成物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物は
放射線療法と併用して投与することができる。放射線療法はまた、本発明の組成物および
複数薬剤療法の一部として本明細書に記載の他の化学療法剤と併用して施すことができる
。
【００７２】
併用療法は、各々が別々に製剤化され投与される２つ以上の薬剤、たとえば、化合物４
４および１つまたは複数の他の治療剤を投与することにより、あるいは単一製剤中の２つ
以上の薬剤を投与することにより達成することができる。他の併用も併用療法に包含され
る。たとえば、２つの薬剤を一緒に製剤化し、第３の薬剤を含有する別の製剤と併用して
投与することができる。併用療法における２つ以上の薬剤は、同時に投与することができ
るが、そうである必要はない。たとえば、第１の薬剤（または薬剤の併用）の投与を、分
、時、日または週の単位で第２の薬剤（または薬剤の併用）の投与に先行させることがで
きる。したがって、２つ以上の薬剤を、互いの数分以内に、または互いの１、２、３、６
、９、１２、１５、１８もしくは２４時間以内に、または互いの１、２、３、４、５、６
、７、８、９、１０、１２、１４日以内に、または互いの２、３、４、５、６、７、８、
９もしくは１０週以内に投与することができる。いくつかの場合では、さらに長い間隔が
可能である。多くの場合では、併用療法で使用される２つ以上の薬剤は、同時に患者の体
内に存在することが望ましいが、そうである必要はない。
【００７３】
本発明はまた、本明細書に記載の疾患または状態を治療または予防する用量で、薬学的
に好適なキャリアまたは賦形剤と混合された、化合物４４またはその薬学的に許容される
塩と本明細書に開示された１つまたは複数の他の治療剤とを含む医薬組成物を提供する。
本発明の医薬組成物はまた、他の治療剤または治療手段と併用して、同時に、逐次的にま
たは交互に投与することができる。
【００７４】
本発明の組成物の混合物もまた、単一混合物としてまたは好適な製剤化された医薬組成
物で患者に投与することができる。たとえば、本発明の一態様は、治療有効用量のＥＺＨ
２阻害剤もしくは化合物４４またはその薬学的に許容される塩、水和物、エナンチオマー
または立体異性体；１つまたは複数の他の治療剤、および薬学的に許容される希釈剤また
は担体を含む医薬組成物に関する。
【００７５】
「医薬組成物」は、被検体への投与に好適な形態で本発明の化合物を含む製剤である。
化合物４４および本明細書に記載の１つまたは複数の他の治療剤は各々、個々にまたは活
性成分の任意の組合せで複数の医薬組成物に製剤化することができる。したがって、１つ
または複数の投与経路を各医薬組成物の剤形に基づいて適切に選ぶことができる。あるい
は、化合物４４および本明細書に記載の１つまたは複数の他の治療剤は、１つの医薬組成
物として製剤化することができる。
【００７６】
一実施形態では、医薬組成物はバルクまたは単位剤形である。単位剤形は、たとえば、
カプセル、ＩＶバッグ、錠剤、エアロゾル吸入器の単一ポンプまたはバイアルなど種々の
形態のいずれかである。単位用量の組成物における活性成分（たとえば、開示された化合
物またはその塩、水和物、溶媒和物または異性体の製剤）の量は有効量であり、関連する
個々の治療に応じて変化する。当業者であれば、患者の年齢および状態によって投薬量を
日常的に変える必要があることもあることを理解するであろう。投薬量はまた投与経路に
よって異なる。経口、経肺、直腸、非経口、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入
、口腔内、舌下、胸膜内、髄腔内、鼻腔内および同種のものなど種々の経路を意図してい
る。本発明の化合物の局所投与または経皮投与用の剤形として、散剤、スプレー剤、軟膏
剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶液剤、パッチ剤および吸入薬が
挙げられる。一実施形態では、活性化合物は、滅菌条件下で薬学的に許容されるキャリア
と、必要とされる任意の防腐剤、バッファーまたは噴霧剤と混合される。
【００７７】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という語句とは、化合物、アニオン
、カチオン、材料、組成物、キャリアおよび／または剤形が、適切な医学的判断の範囲内
において、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を回避し
つつ、合理的なベネフィット／リスク比に見合ってヒトおよび動物の組織と接触させて使
用するのに好適であることをいう。
【００７８】
「薬学的に許容される賦形剤」は、医薬組成物の調製に有用であり、かつ一般に安全で
無毒性であり、生物学的にもあるいは他の点でも望ましい賦形剤を意味し、動物用途のほ
か、ヒトの医薬用途に許容可能な賦形剤を含む。本明細書および特許請求の範囲に使用さ
れる「薬学的に許容される賦形剤」は、そうした賦形剤の１種および２種以上の両方を含
む。
【００７９】
本発明の医薬組成物は、その目的の投与経路に適合するように製剤化される。投与経路
の例として、非経口投与、たとえば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与（たと
えば、吸入）、経皮投与（局所）、および経粘膜投与が挙げられる。非経口用途、皮内用
途または皮下用途に使用される溶液または懸濁液として、以下の成分：無菌希釈液、たと
えば食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコ
ールまたは他の合成溶媒；抗菌薬、たとえばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；
酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート化剤、たとえ
ばエチレンジアミン四酢酸；バッファー、たとえばアセテート、シトレートまたはホスフ
ェート、および張度調整剤、たとえば塩化ナトリウムまたはブドウ糖を挙げることができ
る。ｐＨは、酸または塩基、たとえば塩酸または水酸化ナトリウムで調整することができ
る。非経口調製物は、ガラスもしくはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリ
ンジまたはマルチドーズバイアルに封入してもよい。
【００８０】
本発明の組成物は、化学療法治療に現在使用されるよく知られた方法の多くで被検体に
投与することができる。たとえば、癌の治療では、本発明の化合物を腫瘍に直接注射して
も、血流中もしくは体腔に注射しても、あるいは経口投与しても、あるいはパッチを用い
て経皮適用してもよい。選択される用量は効果的な治療となるのに十分であるが、許容で
きない副作用を引き起こすほど高くないようにすべきである。病状の状況（たとえば、癌
、前癌および同種のもの）および患者の健康については好ましくは、治療中および治療後
相当期間、詳細にモニターすべきである。
【００８１】
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用する場合、特定された疾患または状態を
治療、軽減または予防する、あるいは検出可能な治療効果または阻害効果を示す医薬剤の
量をいう。効果は、当該技術分野において公知の任意のアッセイ方法により検出すること
ができる。被検体の正確な有効量は、被検体の体重、大きさおよび健康；その状態の性質
および程度；ならびに投与のために選択した治療法または治療法の併用によって異なる。
ある状況に対する治療有効量は、臨床医の技能および判断の範囲内にある通常の実験によ
り決定することができる。好ましい態様では、治療対象の疾患または状態は癌である。別
の態様では、治療対象の疾患または状態は細胞増殖性障害である。
【００８２】
ある種の実施形態では、併用で使用される各医薬剤の治療有効量は、各薬剤単独による
単独療法に比較して併用で使用される場合低くなる。そのように治療有効量が低くなると
、治療レジメンの毒性が低くなり得るであろう。
【００８３】
いずれの化合物でも、治療有効量は、たとえば、腫瘍性細胞の細胞培養アッセイ、また
は動物モデル、通常ラット、マウス、ウサギ、イヌもしくはブタを用いて最初に推定する
ことができる。動物モデルはさらに、適切な濃度範囲および投与経路を判定するのに使用
してもよい。次いでこうした情報を使用して、ヒトの投与に有用な用量および経路を判定
することができる。治療／予防有効性および毒性は、細胞培養または実験動物を対象とし
た標準的な薬学的手順、たとえば、ＥＤ５０（集団の５０％で治療効果のある用量）およ
びＬＤ５０（集団の５０％致死用量）により判定することができる。毒性効果と治療効果
との間の用量比は治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比で表すことができる。好ましい
のは、大きな治療係数を示す医薬組成物である。投薬量は、利用する剤形、患者の感受性
および投与経路によってこの範囲内で変わってもよい。
【００８４】
投薬量および投与は、十分なレベルの活性剤を与えるか、または所望の効果を維持する
ように調整される。考慮に入れてもよい因子として、病状の重症度、被検体の一般的な健
康状態、被検体の年齢、体重および性別、食事、投与の時間および頻度、薬剤併用、反応
感受性、ならびに治療に対する忍容性／反応が挙げられる。長時間作用性医薬組成物は、
特定の製剤の半減期およびクリアランス速度によって３〜４日毎、毎週あるいは２週に１
回投与してもよい。
【００８５】
本発明の活性化合物を含む医薬組成物は、一般に知られた方法で、たとえば、従来の混
合プロセス、溶解プロセス、造粒プロセス、糖衣錠製造プロセス、研和プロセス、乳化プ
ロセス、カプセル化プロセス、封入プロセスまたは凍結乾燥プロセスによって製造するこ
とができる。医薬組成物は、活性化合物を薬学的に使用することができる調製物に加工し
やすくする賦形剤および／または助剤を含む、１種もしくは複数種の薬学的に許容される
キャリアを用いて従来の方法で製剤化してもよい。言うまでもなく、適切な製剤は選択さ
れた投与経路によって異なる。
【００８６】
注射用途に好適な医薬組成物は、無菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および必
要に応じて調製される無菌注射用溶液または分散液用の無菌粉末を含む。静脈内投与では
、好適なキャリアとして、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（Ｂ
ＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が
挙げられる。すべての場合において、組成物は無菌でなければならず、シリンジ操作が容
易である程度の流動性があるべきである。組成物は、製造および保存条件下で安定でなけ
ればならず、細菌および真菌などの混入微生物の作用を防止しなければならない。キャリ
アは、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレング
リコールおよび液体ポリエチレングリコールならびに同種のもの）およびこれらの好適な
混合物を含む溶媒または分散媒であってもよい。適切な流動性は、たとえば、レシチンな
どのコーティングの使用により、分散液の場合には、必要とされる粒度の維持により、お
よび界面活性剤の使用により維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌
剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン
酸、チメロサールおよび同種のものの使用により達成することができる。多くの場合、組
成物中に等張剤、たとえば、糖、多価アルコール、たとえばマニトールおよびソルビトー
ル、ならびに塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の吸収の持続化は、組
成物に吸収を遅らせる薬、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含
ませることにより行うことができる。
【００８７】
無菌注射溶液は、必要量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した１つの成分また
は成分の組み合わせと共に適切な溶媒に加え、続いて濾過滅菌を行うことにより調製する
ことができる。一般に、分散液は、基本的な分散媒および上記に列挙したものから必要と
される他の成分を含む無菌ビヒクルに活性化合物を加えることにより調製される。無菌注
射溶液の調製用の無菌粉末の場合、調製方法は真空乾燥およびフリーズドライであり、こ
れにより活性成分と任意の所望の追加成分との、前もって滅菌濾過した溶液から、活性成
分と任意の所望の追加成分との粉末が得られる。
【００８８】
経口組成物は一般に、不活性希釈剤または食用の薬学的に許容されるキャリアを含む。
経口組成物はゼラチンカプセルに封入しても、あるいは錠剤に圧縮してもよい。経口治療
投与の目的上、活性化合物を賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態
で使用してもよい。経口組成物はさらに、洗口剤として使用される液体キャリアを用いて
調製してもよく、液体キャリア中の化合物は経口適用し、すすいで吐き出すかまたは飲み
込む。薬学的に適合する結合剤および／または補助剤を組成物の一部として含めてもよい
。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤および同種のものは、性質の類似した以下の成分
または化合物：バインダー、たとえば微結晶性セルロース、トラガントゴムまたはゼラチ
ン；賦形剤、たとえばデンプンまたはラクトース、崩壊剤、たとえばアルギン酸、Ｐｒｉ
ｍｏｇｅｌまたはコーンスターチ；滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウムまたはＳ
ｔｅｒｏｔｅｓ；流動促進剤、たとえばコロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、たとえばスク
ロースまたはサッカリン；または着香剤、たとえばペパーミント、サリチル酸メチルまた
はオレンジ香味料のいずれかを含んでもよい。
【００８９】
吸入による投与では、化合物は、好適な噴射剤、たとえば、二酸化炭素などのガスを含
む加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからエアロゾルスプレーの形態
で送達される。
【００９０】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものでもよい。経粘膜または経皮投与で
は、透過対象のバリアに適した浸透剤を製剤に使用する。こうした浸透剤は一般に当該技
術分野において公知であり、たとえば、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁酸塩および
フシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用により達成
することができる。経皮投与では、活性化合物を一般に当該技術分野において公知の軟膏
、膏薬、ゲルまたはクリームに製剤する。
【００９１】
活性化合物は、化合物の身体からの急速な排除を防ぐ薬学的に許容されるキャリア、た
とえばインプラントおよびマイクロカプセル化送達系などの放出制御製剤と共に調製して
もよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオル
トエステルおよびポリ乳酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用してもよい。こうし
た製剤を調製するための方法は、当業者に明らかであろう。こうした材料はさらに、Ａｌ
ｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎ
ｃ．から市販品として入手することができる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対する
モノクローナル抗体を用いて感染細胞を標的としたリポソームを含む）も、薬学的に許容
されるキャリアとして使用することができる。これらは、たとえば米国特許第４，５２２
，８１１号明細書に記載されているような当業者に公知の方法に従い調製することができ
る。
【００９２】
投与のしやすさおよび投薬量の均一性のため、経口または非経口組成物を投薬単位剤形
で製剤化すると特に有利である。投薬単位剤形とは、本明細書で使用する場合、単位投薬
量として治療対象の被検体に適した物理的に分離した単位をいい、各単位は、必要とされ
る薬学的キャリアと共に、所望の治療効果を発揮するように計算された所定量の活性化合
物を含む。本発明の投薬単位剤形の規格は、活性化合物の特有の特徴および達成されるべ
き個々の治療効果により決定され、それらに直接左右される。
【００９３】
治療用途では、本明細書に記載のＥＺＨ２阻害剤化合物、本明細書に記載の他の治療剤
、化合物４４と１つもしくは複数の他の治療剤とを含む組成物または本発明に従い使用さ
れる医薬組成物の投薬量は、選択した投薬量に影響を与える数ある要因の中でも、薬剤、
レシピエント患者の年齢、体重および臨床状態、ならびに治療を行う臨床医または開業医
の経験および判断によって異なる。一般に、用量は、腫瘍の増殖を遅延させる、そして好
ましくは退縮させる、さらに好ましくは癌を完全に退縮させるのに十分であるべきである
。投薬量は、単回投与、分割投与または連続投与で約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５００
０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。好ましい態様では、投薬量は約１ｍｇ／ｋｇ／
日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。一態様では、用量は約０．１ｍｇ
／日〜約５０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約２５ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約１０ｇ／
日；約０．１ｍｇ〜約３ｇ／日；または約０．１ｍｇ〜約１ｇ／日の範囲であってもよい
（投与はｋｇ単位の患者の体重、ｍ２単位の体表面積および年齢に応じて調整してもよい
）。医薬剤の有効量は、臨床医または他の適格な観察者により認められる改善が客観的に
特定できる量である。たとえば、患者の腫瘍の退縮は、腫瘍の直径を基準に測定してもよ
い。腫瘍の直径の減少は退縮を示す。退縮はさらに、治療を中止した後に再発する腫瘍が
ないことによっても示される。本明細書で使用する場合、「投薬量効果的方法」という用
語は、活性化合物の量が被検体または細胞で所望の生物学的作用を発揮することをいう。
【００９４】
医薬組成物は、投与説明書と共に容器、パックまたはディスペンサーに含めてもよい。
【００９５】
本発明の組成物はさらに塩を形成することができる。本発明の組成物は、分子当たり２
つ以上の塩、たとえば、モノ−、ジ−、トリ−を形成することができる。こうした形態も
すべて、特許請求の範囲に記載されている発明の範囲内にあることを意図している。
【００９６】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物がその酸性塩または
塩基性塩を作ることにより修飾された本発明の化合物の誘導体をいう。薬学的に許容され
る塩の例として、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸
性残基のアルカリ塩または有機塩、および同種のものがあるが、これに限定されるもので
はない。薬学的に許容される塩は、たとえば、無毒性無機酸または有機酸から形成された
親化合物の従来の無毒性塩または第四級アンモニウム塩を含む。たとえば、そうした従来
の無毒性塩として、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、酢酸、
アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸、クエン酸、エデト酸、
エタンジスルホン酸、１，２−エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコ
ン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコリアルサニル酸、ヘキシルレゾルシン酸、ヒ
ドラバム酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフ
トエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リン
ゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、パントテ
ン酸、フェニル酢酸、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステア
リン酸、サブ酢酸（ｓｕｂａｃｅｔｉｃ）、コハク酸、スルファミン酸、スルファニル酸
、硫酸、タンニン酸、酒石酸、トルエンスルホン酸および一般に存在するアミン酸、たと
えば、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、アルギニン等から選択される無機酸およ
び有機酸から得られるものがあるが、これに限定されるものではない。
【００９７】
薬学的に許容される塩の他の例として、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ピ
ルビン酸、マロン酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、４−クロロ
ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファー
スルホン酸、４−メチルビシクロ−［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸
、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ムコン酸および同種
のものが挙げられる。本発明はさらに、親化合物に存在する酸性プロトンが金属イオン、
たとえば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、またはアルミニウムイオンに置き
換えられている場合、あるいは有機塩基、たとえばエタノールアミン、ジエタノールアミ
ン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンおよび同種のものと配
位している場合に形成される塩を包含する。
【００９８】
薬学的に許容される塩への言及にはすべて、同じ塩の溶媒付加体（溶媒和物）が含まれ
ることを理解すべきである。
【００９９】
組成物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、経口投与、経鼻投与、経
皮投与、経肺投与、吸入投与、口腔内投与、舌下投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投
与、静脈内投与、直腸内投与、胸膜内投与、髄腔内投与および非経口投与される。一実施
形態では、化合物は経口投与される。当業者であれば、特定の投与経路の利点を認識する
であろう。
【０１００】
化合物を利用する投与レジメンは、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および医学的
状態；治療対象の状態の重症度；投与経路；患者の腎機能および肝機能；ならびに利用さ
れる個々の化合物またはその塩など種々の因子に従い選択される。通常の知識を有する医
師または獣医師であれば、当該状態の進行を予防、防止または停止するのに必要な薬剤の
有効量を容易に判定し、処方することができる。
【０１０１】
開示した本発明の化合物の製剤および投与のための技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ｔｈ
ｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ 
ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９
９５）で確認することができる。一実施形態では、本明細書に記載の化合物およびその薬
学的に許容される塩は、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈薬と組み合わせて医薬調
製物に使用される。好適な薬学的に許容されるキャリアとして、不活性な固体充填剤また
は希釈薬、および無菌水溶液または有機溶液が挙げられる。本化合物は、本明細書に記載
の範囲の所望の投薬量を与えるのに十分な量でそうした医薬組成物中に存在する。
【０１０２】
本明細書に使用されるパーセンテージおよび比率はすべて、他に記載がない限り、重量
による。本発明の他の特徴と利点は様々な例から明らかである。提示した例は、本発明を
実施する際に有用な様々な要素および方法を説明するものである。こうした例は、特許請
求の範囲に記載されている発明を限定するものではない。本開示に基づき、当業者であれ
ば、本発明を実施するのに有用な他の要素および方法を特定し、利用することができる。
【０１０３】
本発明は、ヒストンまたは他のタンパク質のメチル化状態の調節により、その過程がヒ
ストンまたは他のタンパク質のメチル化状態の調節により影響を受け得る状態および疾患
を治療するための組成物および方法であって、前記メチル化状態が、ＥＺＨ２の活性によ
り少なくとも部分的に媒介される組成物および方法を提供する。ヒストンのメチル化状態
の調節の結果、メチル化により活性化される標的遺伝子および／またはメチル化により抑
制される標的遺伝子の発現レベルが影響され得る。この方法は、そうした治療を必要とす
る被検体に、治療有効量の本発明の組成物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶
媒和物を投与することを含む。
【０１０４】
異常なヒストンメチル化が特定の癌および前癌性状態に関連することが見出されている
という事実に少なくとも基づいて、被検体の突然変異型ＥＺＨ２を有する癌または前癌性
状態を治療するための方法は、それを必要とする被験体に、メチル化を阻害する治療有効
量の化合物を投与することを含む。一実施形態では、被検体の癌または前癌性状態を治療
するための方法は、それを必要とする被験体に、非メチル化Ｈ３−Ｋ２７のモノメチル化
Ｈ３−Ｋ２７（Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１）への変換を阻害する治療有効量の化合物を投与する
ことを含む。一実施形態では、被検体の癌または前癌性状態を治療するための方法は、そ
れを必要とする被験体に、モノメチル化Ｈ３−Ｋ２７（Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１）のジメチル
化Ｈ３−Ｋ２７（Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ２）への変換を阻害する治療有効量の化合物を投与す
ることを含む。一実施形態では、被検体の癌または前癌性状態を治療するための方法は、
それを必要とする被験体に、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ２のトリメチル化Ｈ３−Ｋ２７（Ｈ３−Ｋ
２７ｍｅ３）への変換を阻害する治療有効量の化合物を投与することを含む。一実施形態
では、被検体の癌または前癌性状態を治療するための方法は、それを必要とする被験体に
、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ１のＨ３−Ｋ２７ｍｅ２への変換およびＨ３−Ｋ２７ｍｅ２のＨ３−
Ｋ２７ｍｅ３への変換の両方を阻害する治療有効量の化合物を投与することを含む。細胞
のヒストンまたはタンパク質のメチル化レベルが全体的に増大することなく、メチル化の
疾患特異的な増大が、重要なゲノム遺伝子座で生じ得ることに注目することは重要である
。たとえば、重要な疾患関連遺伝子の異常な過剰メチル化が全体的なヒストンまたはタン
パク質の低メチル化の背景に反して生じることが可能である。
【０１０５】
メチル化のモジュレーターは、一般に、細胞増殖の調節のために使用することができる
。たとえば、場合によっては、過剰な増殖は、メチル化を低下させる薬剤により低減する
ことができるのに対して、不十分な増殖は、メチル化を増大させる薬剤により刺激するこ
とができる。したがって、治療することができる疾患には、良性の細胞増殖および悪性の
細胞増殖（癌）など過剰増殖の疾患が含まれる。
【０１０６】
ＥＺＨ２介在性のタンパク質メチル化が役割を果たす障害として、癌、細胞増殖性障害
または前癌性状態があり得る。本発明はさらに、癌の治療に有用な薬物の調製のための、
そのような治療を必要とする被検体に対する本発明の組成物またはその薬学的に許容され
る塩、溶媒和物の使用を提供することができる。治療することができる例示的な癌として
、リンパ腫、たとえば、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）およびびまん性大
細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、たとえば、ＧＣＢリンパ腫を挙げることができる
。
【０１０７】
一般に、メチル化モジュレーターである化合物は、一般に、細胞増殖の調節のために使
用することができる。たとえば、場合によっては、過剰な増殖は、メチル化を低下させる
薬剤により低減することができるのに対して、不十分な増殖は、メチル化を増大させる薬
剤により刺激することができる。したがって、本発明の化合物により治療することができ
る疾患には、良性の細胞増殖および悪性の細胞増殖など過剰増殖の疾患が含まれる。
【０１０８】
本明細書で使用する場合、「それを必要とする被検体」は、ＥＺＨ２在性のタンパク質
メチル化が役割を果たす障害を有する被検体、または一般集団と比較してそうした障害を
発症するリスクが高い被検体をいう。それを必要とする被検体は、前癌性状態を有してい
てもよい。好ましくは、それを必要とする被検体は癌を有する。「被検体」には哺乳動物
が含まれる。哺乳動物は、たとえば、任意の哺乳動物、たとえばヒト、霊長類、トリ、マ
ウス、ラット、イヌ、ネコ、雌ウシ、ウマ、ヤギ、ラクダ、ヒツジまたはブタであっても
よい。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０１０９】
本発明の被検体は、癌または前癌性状態と診断されているか、それらの症状を有するか
、またはそれらを発症するリスクのある任意のヒト被検体を含む。本発明の被験体は、突
然変異型ＥＺＨ２を発現する任意のヒト被検体を含む。たとえば、突然変異型ＥＺＨ２は
１つまたは複数の突然変異を含み、突然変異は、置換、点突然変異、ナンセンス突然変異
、ミスセンス突然変異、欠失もしくは挿入、または本明細書に記載の任意の他のＥＺＨ２
突然変異である。
【０１１０】
それを必要とする被験体は難治性または抵抗性癌を有することがある。「難治性または
抵抗性癌」は、治療に反応しない癌を意味する。癌は治療の初期に抵抗性がある場合も、
または治療中に抵抗性になる場合もある。いくつかの実施形態では、それを必要とする被
検体は、直近の療法による寛解後に癌が再発している。いくつかの実施形態では、それを
必要とする被検体は、癌治療に有効な既知の療法をすべて受けて無効であった。いくつか
の実施形態では、それを必要とする被検体は少なくとも１つの先行療法を受けていた。あ
る種の実施形態では、先行療法は単独療法である。ある種の実施形態では、先行療法は併
用療法である。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、それを必要とする被検体は、以前の療法の結果として二次癌
を有することがある。「二次癌」は、以前の発癌療法、たとえば化学療法によりあるいは
その結果として発生する癌を意味する。
【０１１２】
被検体はまた、ＥＺＨ２ヒストンメチルトランスフェラーゼ阻害剤または他の任意の治
療剤に対して抵抗性を示すことがある。
【０１１３】
本発明はまた、癌を有する被検体に対する併用療法を選択する方法を特徴とする。この
方法は、被検体由来のサンプルにおいて、本明細書に記載の１つまたは複数のＥＺＨ２突
然変異を検出するステップ；および１つまたは複数のＥＺＨ２突然変異の存在に基づいて
、癌を治療するための併用療法を選択するステップを含む。一実施形態では、この療法は
、被検体に本発明の組成物を投与することを含む。一実施形態では、この方法は、治療有
効量の本発明の組成物を被検体に投与することをさらに含む。ＥＺＨ２突然変異は、当該
技術分野で公知の任意の好適な方法を使用して検出することができる。さらに多くの方法
が、その内容全体を参照により本明細書に援用する米国特許出願公開第２０１３００４０
９０６号明細書に記載されている。
【０１１４】
本明細書に記載の方法および使用は、被検体への本発明の組成物（たとえば、化合物４
４またはその薬学的に許容される塩と１つまたは複数の治療剤とを含む組成物）の投与前
および／または投与後に、それを必要とする被検体に由来するサンプル中に、本明細書に
記載の１つまたは複数のＥＺＨ２突然変異を検出するステップを含むことができる。試験
サンプル中に本明細書に記載の１つまたは複数のＥＺＨ２突然変異が存在すると、被検体
が本発明の併用療法に感受性であることが示される。
【０１１５】
本発明は、被検体における本明細書に記載の１つまたは複数のＥＺＨ２突然変異の遺伝
子スクリーニングにより、被検体のための個別化医療、治療および／または癌管理を提供
する。たとえば、本発明は、併用療法に対する被検体の反応性を判定して、被検体が併用
療法に感受性がある場合、被検体に本発明の組成物を投与することにより、それを必要と
する被検体の癌の症状または前癌性状態を治療または緩和するための方法を提供する。反
応性は、被検体からサンプルを採取し、本明細書に記載の１つまたは複数のＥＺＨ２突然
変異を検出することにより判定し、そうした本明細書に記載の１つまたは複数のＥＺＨ２
突然変異が存在すると、被検体は本発明の組成物に感受性があることが示される。被検体
の反応性が判定されたならば、治療有効量の組成物、たとえば、化合物４４またはその薬
学的に許容される塩と１つまたは複数の治療剤とを含む組成物を投与することができる。
組成物の治療有効量は、当業者が判定することができる。
【０１１６】
本明細書で使用する場合、「反応性」という用語は、「反応性のある」、「感受性のあ
る」および「感受性」と同義であり、本発明の組成物を投与されたときに被検体が治療反
応を示す、たとえば、被検体の腫瘍細胞または腫瘍組織がアポトーシスおよび／もしくは
壊死を起こし、かつ／または成長、分裂もしくは増殖の低下を示すことを意味する。この
用語はまた、被検体が、本発明の組成物を投与されたときに一般集団と比較して、治療反
応を示す、たとえば、被検体の腫瘍細胞または腫瘍組織がアポトーシスおよび／もしくは
壊死を起こし、かつ／または成長、分裂もしくは増殖の低下を示す確率が高くなることま
たは高いことを意味する。
【０１１７】
「サンプル」は、被検体から得られた任意の生物学的サンプルを意味し、以下に限定さ
れるものではないが、細胞、組織サンプル、体液（粘液、血液、血漿、血清、尿、唾液お
よび精液があるが、これに限定されるものではない）、腫瘍細胞および腫瘍組織がある。
好ましくは、サンプルは、骨髄、末梢血細胞、血液、血漿および血清から選択される。サ
ンプルは、治療または検査中の被検体から得てもよい。あるいはサンプルは、当該技術分
野における通常の業務に従い医師が採取してもよい。
【０１１８】
本明細書で使用する場合、「細胞増殖性障害」という用語は、細胞の制御不能な増殖も
しくは異常な増殖、または制御不能かつ異常な増殖により、癌性であることもあればそう
でない場合もある望ましくない状態または疾患が発症し得る状態をいう。本発明の例示的
な細胞増殖性障害は、細胞分裂が無秩序である種々の状態を包含する。例示的な細胞増殖
性障害として、新生物、良性腫瘍、悪性腫瘍、前癌性状態、ｉｎ  ｓｉｔｕ腫瘍、被包性
腫瘍、転移性腫瘍、液性腫瘍、充実性腫瘍、免疫学的腫瘍、血液系腫瘍、癌、癌腫、白血
病、リンパ腫、肉腫および急速に分裂する細胞があるが、これに限定されるものではない
。「急速に分裂する細胞」という用語は、本明細書で使用する場合、同じ組織内の隣接す
るまたは並列する細胞において予想または観察される速度を上回るまたはそれより大きな
速度で分裂する任意の細胞と定義される。
細胞増殖性障害は前癌または前癌性状態を含む。細胞増殖性障害は癌を含む。好ましく
は、本明細書に規定される方法は癌の症状を治療または緩和するために使用される。「癌
」という用語は、充実性腫瘍のほか、血液腫瘍および／または悪性腫瘍を含む。「前癌細
胞」または「前癌性細胞」は、前癌または前癌性状態である細胞増殖性障害を発現してい
る細胞である。「癌細胞」または「癌性細胞」は、癌である細胞増殖性障害を発現してい
る細胞である。任意の再現可能な測定手段を用いて、癌細胞または前癌性細胞を同定する
ことができる。癌細胞または前癌性細胞は、組織サンプル（たとえば、生検標本）の組織
学的分類またはグレード分類により同定してもよい。癌細胞または前癌性細胞は、適切な
分子マーカーの使用により同定してもよい。
【０１１９】
治療できる癌は、ＤＮＡサイトメトリー、フローサイトメトリーまたはイメージサイト
メトリーにより評価してもよい。治療できる癌は、細胞の１０％、２０％、３０％、４０
％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が細胞分裂の合成期（たとえば、細胞
分裂のＳ期）にあるものとして型別にしてもよい。治療できる癌は、Ｓ期割合が低いまた
はＳ期割合が高いものとして型別にしてもよい。
【０１２０】
本明細書で使用する場合、「正常な細胞」は、「細胞増殖性障害」の一部として分類で
きない細胞である。正常な細胞には、望ましくない状態または疾患の発症に至る可能性が
ある制御不能な増殖もしくは異常な増殖、または制御不能かつ異常な増殖が見られない。
好ましくは、正常な細胞は、正常に機能する細胞周期チェックポイント制御機構を有する
。
【０１２１】
本明細書で使用する場合、「細胞を接触させること」とは、化合物または他の組成物が
細胞と直接接触している、あるいは細胞に所望の生物学的作用を起こすのに十分に接近し
ている状態をいう。
【０１２２】
本明細書で使用する場合、「候補化合物」とは、その化合物が細胞、組織、系、動物ま
たはヒトにおいて研究者または臨床医が求めている所望の生物学的または医学的反応を惹
起する可能性が高いかどうかを判定するため、１つまたは複数のインビトロまたはインビ
ボでの生物学的アッセイで試験したことがあるあるいは試験する予定の本発明の化合物、
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物をいう。候補化合物は、本発明の化合
物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、代謝物、多形もしくは溶媒和物で
ある。生物学的または医学的反応は、癌の治療であってもよい。生物学的または医学的反
応は、細胞増殖性障害の治療または予防であってもよい。インビトロまたはインビボでの
生物学的アッセイとして、以下に限定されるものではないが、酵素活性アッセイ、電気泳
動移動度シフトアッセイ、レポーター遺伝子アッセイ、インビトロ細胞生存率アッセイお
よび本明細書に記載のアッセイを挙げることができる。
【０１２３】
本明細書で使用する場合、「治療すること」または「治療する」は、疾患、状態または
障害の対処を目的とした患者の管理およびケアをいい、疾患、状態もしくは障害の症状ま
たは合併症を緩和するため、あるいは疾患、状態もしくは障害を除去するため本発明の化
合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む。
【０１２４】
本発明の組成物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物はまた、疾患、状
態または障害を予防するために使用してもよい。本明細書で使用する場合、「予防するこ
と」または「予防する」は、疾患、状態もしくは障害の症状または合併症の発症を減少ま
たは除去することをいう。
【０１２５】
本明細書で使用する場合、「緩和する」という用語は、障害の徴候または症状の重症度
を低下させるプロセスを記載することを意図している。重要な点として、徴候または症状
は、除去することなく緩和することができる。好ましい実施形態では、本発明の医薬組成
物を投与すると徴候または症状が除去されるが、しかしながら、除去は必須ではない。効
果的な投薬量は徴候または症状の重症度を低下させると予想される。たとえば、複数の部
位で起こり得る癌などの障害の徴候または症状は、複数の部位の少なくとも１つで癌の重
症度が低下すると緩和される。
【０１２６】
本明細書で使用する場合、「重症度」という用語は、癌が前癌性または良性状態から悪
性状態に変化する可能性を記載することを意図している。あるいは、またはさらに、重症
度は、たとえば、ＴＮＭ方式（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  Ａｇａｉｎｓ
ｔ  Ｃａｎｃｅｒ（ＵＩＣＣ）およびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅ
ｅ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ（ＡＪＣＣ）により認められた）により、あるいは他の当該技術
分野において承認されている方法により癌の病期を記載することを意図している。癌の病
期とは、原発腫瘍の位置、腫瘍の大きさ、腫瘍数およびリンパ節転移（癌のリンパ節への
広がり）などの因子に基づく癌の程度または重症度をいう。あるいは、またはさらに、重
症度は、当該技術分野において承認されている方法により腫瘍グレードを記載することを
意図している（米国国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ
ｅ）、ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照されたい）。腫瘍グレードは、癌細胞が顕微
鏡下でどのように異常に見えるか、そして腫瘍がいかに急速に増殖し広がる傾向があるか
という観点から癌細胞を分類するのに使用するシステムである。腫瘍グレードを判定する
際は、細胞の構造および増殖パターンなど多くの因子が考慮される。腫瘍グレードの判定
に使用される具体的な因子は、各癌型によって異なる。重症度はまた、腫瘍細胞が同じ組
織型の正常な細胞にどの程度類似しているかを示す、分化とも呼ばれる組織学的グレード
もいう（米国国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ｗ
ｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖを参照されたい）。さらに、重症度は、腫瘍細胞の核の大き
さおよび形状と、分裂している腫瘍細胞の割合とを示す核グレードについてもいう（米国
国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ｗｗｗ．ｃａｎ
ｃｅｒ．ｇｏｖを参照されたい）。
【０１２７】
本発明の別の態様では、重症度は、腫瘍が増殖因子をどの程度分泌したか、細胞外マト
リックスをどの程度分解したか、どの程度血管新生化したか、隣接した組織への接着をど
の程度失ったか、あるいはどの程度転移したかをいう。さらに重症度は、原発腫瘍が転移
した部位の数も示す。最後に、重症度は、様々な型および部位の腫瘍の治療のしにくさを
含む。たとえば、手術不能な腫瘍、複数の器官に到達しやすい癌（血液系および免疫系の
腫瘍）、および伝統的な治療に最も抵抗性があるものが、最も重度と見なされる。これら
の状況において、被検体の平均余命の延長および／または疼痛の低下、癌性細胞の比率の
低下または細胞が１つの系に限定されること、ならびに癌の病期／腫瘍グレード／組織学
的グレード／核グレードの改善は、癌の徴候または症状の緩和と見なされる。
【０１２８】
本明細書で使用する場合、「症状」という用語は、疾患、疾病、障害または体内に適切
でないものがあることの兆しと定義される。症状は、症状を経験している個体が感じある
いは気付くものであるが、他人は容易に気付くことができない。他人は、非医療専門家と
定義される。
【０１２９】
本明細書で使用する場合、「徴候」という用語も、体内に適切でないものがあることの
兆しと定義される。ただし、徴候は、医師、看護師または他の医療専門家により確認する
ことができるものと定義される。
【０１３０】
癌は、ほとんどすべての徴候または症状を引き起こし得る疾患群である。徴候および症
状は、癌がどこにあるか、癌の大きさ、および癌が近くの器官または構造にどの程度影響
を与えるかによって異なる。癌が広がる（転移する）場合、症状は体の様々な部分で現れ
ることがある。
【０１３１】
癌を治療すると、腫瘍の大きさが小さくなることがある。腫瘍の大きさが小さくなるこ
とは、「腫瘍退縮」という場合もある。好ましくは、治療後、腫瘍の大きさは、治療前の
その大きさと比較して５％以上縮小し；一層好ましくは、腫瘍の大きさは１０％以上縮小
し；一層好ましくは２０％以上縮小し；一層好ましくは３０％以上縮小し；一層好ましく
は４０％以上縮小し；なお一層好ましくは、５０％以上縮小し；最も好ましくは、７５％
超縮小する。腫瘍の大きさは、任意の再現可能な測定手段により測定することができる。
腫瘍の大きさは、腫瘍の直径として測定してもよい。
【０１３２】
癌を治療すると、腫瘍容積が縮小することがある。好ましくは、治療後、腫瘍容積は、
治療前のその大きさと比較して５％以上縮小し；一層好ましくは、腫瘍容積は１０％以上
縮小し；一層好ましくは２０％以上縮小し；一層好ましくは３０％以上縮小し；一層好ま
しくは４０％以上縮小し；なお一層好ましくは５０％以上縮小し；最も好ましくは７５％
超縮小する。腫瘍容積は、任意の再現可能な測定手段により測定することができる。
【０１３３】
癌を治療すると、腫瘍の数が減少する。好ましくは、治療後、腫瘍数は、治療前の数と
比較して５％以上減少し；一層好ましくは、腫瘍数は１０％以上減少し；一層好ましくは
２０％以上減少し；一層好ましくは３０％以上減少し；一層好ましくは４０％以上減少し
；なお一層好ましくは５０％以上減少し；最も好ましくは７５％超減少する。腫瘍の数は
、任意の再現可能な測定手段により測定することができる。腫瘍の数は、肉眼または特定
の倍率で観察できる腫瘍をカウントすることにより測定することができる。好ましくは、
特定の倍率は２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍または５０倍である。
【０１３４】
癌を治療すると、原発腫瘍部位から離れた他の組織または器官における転移病変の数が
減少することがある。好ましくは、治療後、転移病変の数は、治療前の数と比較して５％
以上減少し；一層好ましくは、転移病変の数は１０％以上減少し；一層好ましくは２０％
以上減少し；一層好ましくは３０％以上減少し；一層好ましくは４０％以上減少し；なお
一層好ましくは５０％以上減少し；最も好ましくは７５％超減少する。転移病変の数は、
任意の再現可能な測定手段により測定することができる。転移病変の数は、肉眼または特
定の倍率で観察できる転移病変をカウントすることにより測定することができる。好まし
くは、特定の倍率は２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍または５０倍である。
【０１３５】
癌を治療すると、治療した被検体の集団の平均生存期間が、キャリアを単独投与した集
団と比較して延長されることがある。好ましくは、平均生存期間は３０日を超えて；一層
好ましくは６０日を超えて；一層好ましくは９０日を超えて；最も好ましくは１２０日を
超えて延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な手段により測定する
ことができる。集団の平均生存期間の延長は、たとえば、集団について活性化合物による
治療の開始後の平均生存期間を計算することにより測定してもよい。集団の平均生存期間
の延長はまた、たとえば、集団について活性化合物による初回治療の終了後の平均生存期
間を計算することにより測定してもよい。
【０１３６】
癌を治療すると、治療した被検体の集団の平均生存期間が、未治療被検体の集団と比較
して延長されることがある。好ましくは、平均生存期間は３０日を超えて；一層好ましく
は６０日を超えて；一層好ましくは９０日を超えて；最も好ましくは１２０日を超えて延
長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な手段により測定することがで
きる。集団の平均生存期間の延長は、たとえば、集団について活性化合物による治療の開
始後の平均生存期間を計算することにより測定してもよい。集団の平均生存期間の延長は
また、たとえば、集団について活性化合物による初回治療の終了後の平均生存期間を計算
することにより測定してもよい。
【０１３７】
癌を治療すると、治療した被検体の集団の平均生存期間が、本発明の化合物、またはそ
の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物ではない薬剤による単独療法を受けた集団と比
較して延長されることがある。好ましくは、平均生存期間は３０日を超えて；一層好まし
くは６０日を超えて；一層好ましくは９０日を超えて；最も好ましくは１２０日を超えて
延長される。集団の平均生存期間の延長は、任意の再現可能な手段により測定することが
できる。集団の平均生存期間の延長は、たとえば、集団について活性化合物による治療の
開始後の平均生存期間を計算することにより測定してもよい。集団の平均生存期間の延長
はまた、たとえば、集団について活性化合物による初回治療の終了後の平均生存期間を計
算することにより測定してもよい。
【０１３８】
癌を治療すると、治療した被検体の集団の死亡率がキャリアを単独投与した集団と比較
して低下することがある。癌を治療すると、治療した被検体の集団の死亡率が未治療集団
と比較して低下することがある。癌を治療すると、治療した被検体の集団の死亡率が、本
発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物ではない薬剤による単
独療法を受けた集団と比較して低下することがある。好ましくは、死亡率は２％超；一層
好ましくは５％超；一層好ましくは１０％超；最も好ましくは２５％超低下する。治療し
た被検体の集団の死亡率の低下は、任意の再現可能な手段により測定することができる。
集団の死亡率の低下は、たとえば、集団について活性化合物による治療の開始後の単位時
間当たりの疾患関連死亡の平均数を計算することにより測定してもよい。集団の死亡率の
低下はまた、たとえば、集団について活性化合物による初回治療の終了後の単位時間当た
りの疾患関連死亡の平均数を計算することにより測定してもよい。
【０１３９】
癌を治療すると、腫瘍の成長率が低下することがある。好ましくは、治療後、腫瘍の成
長率は治療前の数と比較して少なくとも５％低下し；一層好ましくは、腫瘍の成長率は少
なくとも１０％低下し；一層好ましくは少なくとも２０％低下し；一層好ましくは少なく
とも３０％低下し；一層好ましくは少なくとも４０％低下し；一層好ましくは少なくとも
５０％低下し；なお一層好ましくは少なくとも５０％低下し；最も好ましくは少なくとも
７５％低下する。腫瘍の成長率は、任意の再現可能な測定手段により測定することができ
る。腫瘍の成長率は、単位時間当たり腫瘍直径の変化により測定してもよい。
【０１４０】
癌を治療すると、腫瘍の再増殖が抑制されることがある。好ましくは、治療後、腫瘍の
再増殖は５％未満であり；一層好ましくは、腫瘍の再増殖は１０％未満であり；一層好ま
しくは２０％未満であり；一層好ましくは３０％未満であり；一層好ましくは４０％未満
であり；一層好ましくは５０％未満であり；なお一層好ましくは５０％未満であり；最も
好ましくは７５％未満である。腫瘍の再増殖は、任意の再現可能な測定手段により測定す
ることができる。腫瘍の再増殖は、たとえば、以前の腫瘍縮小後に、治療後生じた腫瘍の
直径の増加を測定することにより測定してもよい。腫瘍の再増殖の抑制は、治療を中止し
た後に腫瘍が再発しないことにより示される。
【０１４１】
細胞増殖性障害を治療または予防すると、細胞増殖率が低下することがある。好ましく
は、治療後、細胞増殖率は少なくとも５％低下し；一層好ましくは少なくとも１０％低下
し；一層好ましくは少なくとも２０％低下し；一層好ましくは少なくとも３０％低下し；
一層好ましくは少なくとも４０％低下し；一層好ましくは少なくとも５０％低下し；なお
一層好ましくは少なくとも５０％低下し；最も好ましくは少なくとも７５％低下する。細
胞増殖率は、任意の再現可能な測定手段により測定することができる。細胞増殖率は、た
とえば、組織サンプルにおいて単位時間当たりに分裂している細胞数を測定することによ
り測定してもよい。
【０１４２】
細胞増殖性障害を治療または予防すると、増殖している細胞の比率が低下することがあ
る。好ましくは、治療後、増殖している細胞の比率は少なくとも５％；一層好ましくは少
なくとも１０％；一層好ましくは少なくとも２０％；一層好ましくは少なくとも３０％；
一層好ましくは少なくとも４０％；一層好ましくは少なくとも５０％；なお一層好ましく
は少なくとも５０％；最も好ましくは少なくとも７５％低下する。増殖している細胞の比
率は、任意の再現可能な測定手段により測定することができる。好ましくは、増殖してい
る細胞の比率は、たとえば組織サンプルにおいて分裂している細胞数を非分裂細胞の数と
比較して定量することにより測定される。増殖している細胞の比率は、分裂指数と等価で
あり得る。
【０１４３】
細胞増殖性障害を治療または予防すると、細胞の増殖部位または領域の大きさが小さく
なることがある。好ましくは、治療後、細胞の増殖部位または領域の大きさは、治療前の
その大きさと比較して少なくとも５％縮小し；一層好ましくは少なくとも１０％縮小し；
一層好ましくは少なくとも２０％縮小し；一層好ましくは少なくとも３０％縮小し；一層
好ましくは少なくとも４０％縮小し；一層好ましくは少なくとも５０％縮小し；なお一層
好ましくは少なくとも５０％縮小し；最も好ましくは少なくとも７５％縮小する。細胞の
増殖部位または領域の大きさは、任意の再現可能な測定手段により測定することができる
。細胞の増殖部位または領域の大きさは、細胞の増殖部位または領域の直径または幅とし
て測定してもよい。
【０１４４】
細胞増殖性障害を治療または予防すると、異常な外観もしくは形態を有する細胞の数ま
たは比率が低下することがある。好ましくは、治療後、異常な形態を有する細胞数は、治
療前のその大きさと比較して少なくとも５％減少し；一層好ましくは少なくとも１０％減
少し；一層好ましくは少なくとも２０％減少し；一層好ましくは少なくとも３０％減少し
；一層好ましくは少なくとも４０％減少し；一層好ましくは少なくとも５０％減少し；な
お一層好ましくは少なくとも５０％減少し；最も好ましくは少なくとも７５％減少する。
異常な細胞外観または形態は、任意の再現可能な測定手段により測定することができる。
異常な細胞形態は、たとえば倒立型培養顕微鏡を用いて顕微鏡観察により測定してもよい
。異常な細胞形態は、核異型の形をとることがある。
【０１４５】
本明細書で使用する場合、「選択的に」という用語は、ある集団において別の集団より
高頻度で起こる傾向があることを意味する。比較される集団は細胞集団であってもよい。
好ましくは、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、癌
または前癌性細胞に選択的に作用するが、正常な細胞には作用しない。好ましくは、本発
明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、ある分子標的（たと
えば、標的タンパク質メチルトランスフェラーゼ）を調節するが、別の分子標的（たとえ
ば、非標的タンパク質メチルトランスフェラーゼ）をあまり調節しないように選択的に作
用する。本発明はまた、酵素、たとえばタンパク質メチルトランスフェラーゼの活性を選
択的に阻害するための方法を提供する。好ましくは、あるイベントが集団Ｂと比較して集
団Ａで２倍を超える高い頻度で起こる場合、そのイベントは、集団Ｂに対して集団Ａにお
いて選択的に起こる。あるイベントが集団Ａで５倍を超える高い頻度で起こる場合、その
イベントは選択的に起こる。あるイベントが集団Ｂと比較して集団Ａで１０倍を超える高
い頻度で；一層好ましくは５０倍を超える；なお一層好ましくは１００倍を超える；最も
好ましくは１０００倍を超える高い頻度で、集団Ａで起こる場合、そのイベントは選択的
に起こる。たとえば、細胞死は、正常な細胞と比較して癌細胞で２倍を超える頻度で起こ
る場合、癌細胞で選択的に起こるといえると考えられる。
【０１４６】
本発明の組成物、たとえば、化合物４４またはその薬学的に許容される塩および１つま
たは複数の他の治療剤、たとえばプレドニゾンは、分子標的（たとえば、標的タンパク質
メチルトランスフェラーゼ）の活性を調節することができる。調節とは、分子標的の活性
を刺激または阻害することをいう。好ましくは、本発明の化合物またはその薬学的に許容
される塩もしくは溶媒和物が、前記化合物が存在しないこと以外は同じ条件下の分子標的
の活性と比較して分子標的の活性を少なくとも２倍刺激または阻害する場合、その化合物
は分子標的の活性を調節する。一層好ましくは、本発明の化合物またはその薬学的に許容
される塩もしくは溶媒和物が、前記化合物が存在しないこと以外は同じ条件下の分子標的
の活性と比較して分子標的の活性を少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０
倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍刺激または阻害する場合、その化合物は分子
標的の活性を調節する。分子標的の活性は、任意の再現可能な手段により測定することが
できる。分子標的の活性はインビトロで測定しても、あるいはインビボで測定してもよい
。たとえば、分子標的の活性は酵素活性アッセイまたはＤＮＡ結合アッセイによりインビ
トロで測定してもよいし、あるいは、分子標的の活性はレポーター遺伝子の発現をアッセ
イすることによりインビボで測定してもよい。
【０１４７】
本発明の組成物は、化合物の添加により分子標的の活性が、前記化合物が存在しないこ
と以外は同じ条件下の分子標的の活性と比較して１０％を超えて刺激または阻害されない
場合、分子標的の活性をあまり調節しない。
【０１４８】
本明細書で使用する場合、「アイソザイム選択的」という用語は、酵素の第２のアイソ
フォームと比較して酵素の第１のアイソフォームの優先的な阻害または刺激（たとえば、
タンパク質メチルトランスフェラーゼアイソザイムβと比較してタンパク質メチルトラン
スフェラーゼアイソザイムαの優先的な阻害または刺激）を意味する。好ましくは、本発
明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、生物学的作用を得る
のに必要な投薬量で最低４倍の差、好ましくは１０倍の差、一層好ましくは５０倍の差を
示す。好ましくは、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物
は、阻害範囲にわたりこの差を示し、この差の例としてＩＣ５０、すなわち、目的の分子
標的の５０％阻害が挙げられる。
【０１４９】
本発明の組成物を細胞またはそれを必要とする被検体に投与すると、目的のタンパク質
メチルトランスフェラーゼの活性が調節（すなわち、刺激または阻害）され得る。
【０１５０】
本発明の化合物、たとえば、化合物４４または薬学的に許容される塩と１つまたは複数
の他の治療剤、たとえばプレドニゾンとを含む組成物を、細胞またはそれを必要とする被
検体に投与すると、細胞内標的（たとえば、基質）の活性が調節（すなわち、刺激または
阻害）される。本発明の化合物を用いて、以下に限定されるものではないが、タンパク質
メチルトラスフェラーゼなどいくつかの細胞内標的を調節することができる。
【０１５１】
活性化とは、組成物（たとえば、タンパク質または核酸）を所望の生物学的機能を発揮
するのに好適な状態に置くことをいう。活性化することができる組成物はまた、不活性状
態も有する。活性化組成物は、阻害性の生物学的機能または刺激性の生物学的機能を有し
ても、あるいはその両方を有してもよい。上昇とは、組成物（たとえば、タンパク質また
は核酸）の所望の生物活性の増加をいう。上昇は、組成物の濃度の増加により起きてもよ
い。
【０１５２】
本明細書で使用する場合、「細胞周期チェックポイント経路」とは、細胞周期チェック
ポイントの調節に関わる生化学的経路をいう。細胞周期チェックポイント経路は、細胞周
期チェックポイントを含む１つまたは複数の機能に対して刺激作用もしくは阻害作用を有
しても、あるいはその両方を有してもよい。細胞周期チェックポイント経路は、少なくと
も２つの組成物、好ましくはタンパク質からなり、そのどちらも細胞周期チェックポイン
トの調節に寄与する。細胞周期チェックポイント経路は、細胞周期チェックポイント経路
の１つまたは複数のメンバーの活性化により活性化され得る。好ましくは、細胞周期チェ
ックポイント経路は生化学的シグナル伝達経路である。
【０１５３】
本明細書で使用する場合、「細胞周期チェックポイント制御因子」とは、細胞周期チェ
ックポイントの調節において少なくともある程度機能し得る組成物をいう。細胞周期チェ
ックポイント制御因子は、細胞周期チェックポイントを含む１つまたは複数の機能に対し
て刺激作用もしくは阻害作用を有しても、あるいはその両方を有してもよい。細胞周期チ
ェックポイント制御因子はタンパク質でも、あるいはタンパク質でなくてもよい。
【０１５４】
癌または細胞増殖性障害を治療すると、細胞死が起こることがあり、好ましくは細胞死
により、ある集団で細胞の数が少なくとも１０％減少する。一層好ましくは、細胞死は、
少なくとも２０％の減少；一層好ましくは少なくとも３０％の減少；一層好ましくは少な
くとも４０％の減少；一層好ましくは少なくとも５０％の減少；最も好ましくは少なくと
も７５％の減少を意味する。集団における細胞数は、任意の再現可能な手段により測定す
ることができる。集団における細胞数は、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）、免疫蛍
光顕微鏡および光学顕微鏡により測定してもよい。細胞死を測定する方法は、Ｌｉ  ｅｔ
ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１００（５）：２６７
４−８，２００３に示される通りである。一態様では、細胞死はアポトーシスにより起こ
る。
【０１５５】
好ましくは、本発明の組成物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有
効量は、正常な細胞に対してあまり細胞毒性を示さない。治療有効量の化合物の投与によ
り細胞死が正常な細胞の１０％より多く誘導されない場合、治療有効量の化合物は正常な
細胞に対してあまり細胞毒性を示さない。治療有効量の化合物の投与により細胞死が正常
な細胞の１０％より多く誘導されない場合、治療有効量の化合物は正常な細胞の生存率に
あまり影響を与えない。一態様では、細胞死はアポトーシスにより起こる。
【０１５６】
本発明の組成物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と細胞を接触させ
ると、癌細胞の細胞死を選択的に誘導または活性化することがある。それを必要とする被
検体に本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与すると
、癌細胞の細胞死を選択的に誘導または活性化することがある。本発明の組成物、または
その薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と細胞を接触させると、細胞増殖性障害に冒
された１つまたは複数の細胞の細胞死を選択的に誘導することがある。好ましくは、それ
を必要とする被検体に本発明の組成物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和
物を投与すると、細胞増殖性障害に冒された１つまたは複数の細胞の細胞死が選択的に誘
導される。
【０１５７】
本発明は、それを必要とする被験体に、本発明の組成物、またはその薬学的に許容され
る塩もしくは溶媒和物を投与することにより、癌を治療または予防する方法であって、本
発明の組成物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与すると、以下の
１つまたは複数：細胞周期の１つまたは複数の期（たとえば、Ｇ１、Ｇ１／Ｓ、Ｇ２／Ｍ
）への細胞の蓄積、または細胞老化の誘導、または腫瘍細胞分化の促進による癌細胞増殖
の防止；正常細胞において相当量の細胞死を起こすことのない、細胞毒性、ネクローシス
またはアポトーシスによる癌細胞の細胞死の促進、動物における治療係数が少なくとも２
の抗腫瘍活性がもたらされる方法に関する。本明細書で使用する場合、「治療係数」は最
大耐量を有効用量で除した値である。
【０１５８】
当業者は、本明細書で考察した公知の技術または等価な技術の詳細な説明に関する一般
的な参考文献を参照してもよい。そうした文献として、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，
Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊ
ｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００５）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅ
ｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎ
ｕａｌ（３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２０００）；Ｃｏｌｉ
ｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．；Ｅｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌ
ｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．；Ｆｉｎｇｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１９７５），Ｒｅｍｉ
ｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９０）
が挙げられる。さらにこれらの文献は、本発明の態様の製造または使用の際に参照しても
よいことは、言うまでもない。
【実施例】
【０１５９】
実施例１．
ＥＺＨ２阻害剤とグルココルチコイドとの相乗的な抗腫瘍活性
その内容全体を参照により本明細書に援用する米国特許第８，４１０，０８８号明細書
に記載されるように、化合物４４を合成した。
【０１６０】
化合物４４（Ｃｐｄ４４）をＣＨＯＰのグルココルチコイド受容体アゴニスト（ＧＲａ
ｇ）プレドニゾロンまたは他のＧＲａｇ、たとえばデキサメタゾンとまさに併用した場合
に、劇的な相乗作用が観察された。ＣＨＯＰと併用した場合、化合物４４の抗増殖効果は
大幅に増強されるが、この相乗作用の大部分は、ＣＨＯＰのＧＲａｇ構成成分であるプレ
ドニゾロン（プレドニゾンの活性代謝物）に帰着させることができる。注目すべきことに
は、化合物４４とプレドニゾロンの併用により、突然変異を有するＧＣＢ  ＮＨＬ細胞の
みからすべてのＧＣＢ  ＮＨＬ細胞に、ＥＺＨ２阻害に感受性となる細胞の範囲が拡大さ
れる。
【０１６１】
２種のＥＺＨ２突然変異型細胞株、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＳＵ−ＤＨＬ１０を、化
合物４４で４日間前処理し、次いで、さらに３日間、化合物４４と個々のＣＨＯＰとの組
合せで併用処理した（４＋３モデル）。マホスファミド（シクロホスファミドのアナログ
）、ドキソルビシンおよびビンクリスチンはすべて、それ自体で突然変異細胞株の濃度依
存的増殖阻害を示した。したがって、化合物４４と併用したこれらの薬物については併用
指数（ＣＩ、Ｃａｌｃｕｓｙｎソフトウェアを使用して算出した）を得た。しかしながら
、これらの細胞株は、プレドニゾロン（プレドニゾンの活性代謝物）単独に感受性を示さ
なかった。したがって、この場合には、ＣＩを判定することができず、その代りにプレド
ニゾロンの濃度反応曲線で見られた化合物４４のＩＣ５０のシフトに基づいて、効力の増
強を算出した。
【０１６２】
化合物４４とマホスファミドの併用は、両方のＥＺＨ２突然変異型細胞株において、全
体を通して相加的な併用有益性をもたらした（図１Ｃ、１Ｆ）。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞
では、化合物４４とドキソルビシンの併用は、４＋３モデルにおいて相乗的に作用したが
（図１Ａ）、ＳＵ−ＤＨＬ１０細胞ではこの併用は相加であった（図１Ｄ）。さらに化合
物４４とビンクリスチンの併用は、両方のＥＺＨ２突然変異型細胞株で相加性を示した（
図１Ｂ、１Ｅ）。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞をプレドニゾロンと化合物４４の併用で処理す
ると、化合物４４について、効力増大方向への９倍シフトが観察された。異なるＧＲａｇ
であるデキサメタゾンとの処理では、化合物４４のＩＣ５０はさらに大きな１７倍のシフ
トになった（図２Ａ、２Ｂ）。化合物４４についての効力シフトの同様な傾向は、ＳＵ−
ＤＨＬ１０細胞でも観察された（図２Ｃ、２Ｄ）。
【０１６３】
化合物４４とＣＨＯＰの併用効果が、野生型ＥＺＨ２リンパ腫細胞株を化合物４４に感
受性にさせ得るが否かを検討した。化合物４４単独処理では、ＥＺＨ２野生型リンパ腫株
に増殖阻害を誘導しないので、個々のＣＨＯＰ構成成分の濃度反応曲線に基づいて、効力
シフトを算出した。試験した４種のＣＨＯＰ構成成分のうち、ＧＲａｇと化合物４４の併
用のみが、野生型ＧＣＢリンパ腫細胞株において効力シフトをもたらした。
【０１６４】
次に、化合物４４とＣＨＯＰの併用効果が、ＥＺＨ２突然変異型および野生型細胞株で
あるＷＳＵ−ＤＬＣＬ２  ＥＺＨ２突然変異型（図３Ａ、３Ｂ）およびＤＯＨＨ２  ＥＺ
Ｈ２野生型（図３Ｃ、３Ｄ）ＧＣＢリンパ腫細胞株を化合物４４に感受性にさせ得るか否
かを検討した。プレドニゾロンと化合物４４の併用によりＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を処理
すると、化合物４４の活性が増強され（図３Ａ）、化合物４４のＩＣ５０が最大で１／２
４に減少した。異なるＧＲａｇであるデキサメタゾンとの処理では、化合物４４のＩＣ５
０はさらに大きく１／３０に減少した（図３Ｂ）。プレドニゾロンについて１μＭおよび
デキサメタゾンについて１００ｎＭの生物学的に適切な濃度では、効力増強はそれぞれ７
倍および１５倍であった。化合物４４は、ＤＯＨＨ２  ＥＺＨ２野生型細胞において単剤
として抗増殖効果を示さないため（図３Ｃ、３Ｄ）、プレドニゾロンまたはデキサメタゾ
ンの効力シフトを測定した。興味深いことには、化合物４４を野生型ＧＣＢリンパ腫細胞
株（ＤＯＨＨ２）で試験した場合、ＣＨＯＰのＧＲａｇ構成成分のみが、化合物４４の存
在下で効力増強を示した（図３Ｃ、３Ｄ）。ＤＯＨＨ２細胞において、プレドニゾロンま
たはデキサメタゾンの効力は、化合物４４の添加で増大した（図３Ｃ、３Ｄ）。
【０１６５】
ＥＺＨ２野生型および突然変異型ＧＣＢリンパ腫細胞株において、いずれの単剤に比較
しても、ＧＲａｇとＥＺＨ２ｉの併用のみが劇的な抗増殖効果の増強を誘導したことを考
慮して、化合物の処理期間および／または添加順序が感受性に影響を及ぼすか否かを判定
した。また、細胞株パネルを、ＥＺＨ２野生型、ＥＺＨ２突然変異型、化合物４４感受性
、およびＥＺＨ２突然変異型、化合物４４非感受性の細胞株を含むように拡張した（以前
にＭｃＣａｂｅらにより報告されたもの、および未公開内部データ）。これまでの４＋３
モデルでは、効力シフトは、化合物４４（ＥＺＨ２  Ｙ６４６（Ｙ６４１としても知られ
る）感受性細胞株において）またはプレドニゾロン（ＥＺＨ２野生型細胞株において）の
曝露のいずれかに基づくものであった。この実験セットについては、一定濃度のプレドニ
ゾロンにおける化合物４４のＩＣ５０シフトを使用して、４＋３モデル、４日間もしくは
７日間の併用処理、または４日間のプレドニゾロン前処理＋３日間の併用処理のいずれか
で処理した細胞株における併用有益性を判定した。ＥＺＨ２突然変異型化合物４４感受性
細胞株を４日間併用処理すると、化合物４４のＩＣ５０が１／３０〜１／６０に低下する
ことが観察され、４＋３処理スケジュールと同様な傾向が示された（表１）。同様の結果
は、７日間併用処理および４＋３モデルでも観察された（表１）。ＥＺＨ２野生型ＧＣＢ
細胞株では、４日後では測定可能な化合物４４のＩＣ５０が得られないにもかかわらず、
両方の細胞株において、プレドニゾロンとの併用処理の４日後では、増殖の低下および測
定可能な化合物４４のＩＣ５０が示された（表１）。ＥＺＨ２野生型ＧＣＢ細胞は、４＋
３モデルおよび／または７日間併用処理スケジュールにも反応した（表１）。印象的なこ
とには、ＥＺＨ２突然変異型化合物４４非感受性細胞株は、これも４日間処理後に測定可
能な化合物４４のＩＣ５０を示さないが、４日間併用処理により増殖の低下を示し、４＋
３処理スケジュールによる併用および７日間併用処理に一層大きく反応した（表１）。細
胞をプレドニゾロンで前処理し、次いで化合物４４とプレドニゾロンで併用処理した場合
には、細胞株の１つしか併用有益性を示さず、薬物添加の順序が相乗作用にとって重要で
あることが示唆された（表１）。
【０１６６】
【表１】
2020045350.tif 000005
【０１６７】
これらの細胞株における、化合物４４とＧＲａｇの観察された併用有益性の原因となる
可能な機序を評価するために、本出願者らは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＯＣＩ−ＬＹ１
９細胞およびＲＬ細胞において、プレドニゾロン処理が、単独または化合物４４との併用
による４日間処理後にＨ３Ｋ２７の全体的なメチル化およびアセチル化に影響を及ぼすか
否かを判定した（２つの独立した実験）。単剤プレドニゾロンは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細
胞またはＲＬ細胞では、Ｈ３Ｋ２７Ｍｅ３レベルに影響を及ぼさなかったが、ＯＣＩ−Ｌ
Ｙ１９細胞では、高用量でＨ３Ｋ２７Ｍｅ３レベルを増大させた（図９Ａ）。プレドニゾ
ロン非感受性のＥＺＨ２突然変異体株と対照的に、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞がプレドニゾロ
ンに高感受性であるため、プレドニゾロン用量を低くすることがＯＣＹ−ＬＹ１９細胞の
処理に必要であった。いずれの細胞株においても、プレドニゾロンを含めても、Ｈ３Ｋ２
７Ｍｅ３阻害に対する化合物４４のＩＣ５０に変化はなかった（図９Ａ）。同様に、全体
的なＨ３Ｋ２７アセチル化レベルも、プレドニゾロン単独または化合物４４とプレドニゾ
ロンの併用により影響を受けなかった（図９Ｂ、９Ｃおよび９Ｄ）。
【０１６８】
Ｈ３Ｋ２７アセチル化またはトリメチル化の全体的なレベルが影響を受けないことが見
出されたので、ＧＲシグナル伝達経路の転写調節を検討した。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、
ＳＵ−ＤＨＬ１０細胞、ＲＬ細胞、ＳＵ−ＤＨＬ４細胞、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞およびＤ
ＯＨＨ２細胞を、単一濃度の化合物４４、プレドニゾロンまたはそれらの併用で４日間処
理し、グルココルチコイドシグナル伝達ＰＣＲアレイを使用して遺伝子発現を分析した（
表４）。全体的に、すべての細胞株において、プレドニゾロンおよび併用処理の両方によ
り、より多数の遺伝子がダウンレギュレートされ、遺伝子発現の活性化因子および抑制因
子の両方としてのＧＲの役割が示された。ここで、ＧＲの活性化機能に焦点を合わせ、併
用処理により細胞株パネルの中で相乗的なアップレギュレーションを示す３種の遺伝子に
ついて記載する。ｍＴＯＲシグナル伝達（ｒｅｆ）を阻害する推定上の腫瘍サプレッサー
であるセストリン（ＳＥＳＮ１）を、併用療法により４種のＥＺＨ２突然変異型細胞株の
間で共通して相乗的にアップレギュレートされる遺伝子として同定したが、ＥＺＨ２野生
型細胞株ではそうではなかった（図８Ａおよび表２）。ＴＮＦ発現は、２種のＥＺＨ２突
然変異型化合物４４非感受性細胞株の一方（ＳＵＤＨＬ４）においてまさに相乗的にアッ
プレギュレートされ、他方のＥＺＨ２突然変異型化合物４４非感受性細胞株（ＲＬ）に対
する傾向も同じ結果を示した（図８Ｂおよび表２）。ＴＳＣ２２Ｄ３／ＧＩＬＺの発現は
、プレドニゾロンによりすべての細胞株でアップレギュレートされるが、ＥＺＨ２突然変
異型化合物４４感受性細胞では併用処理によりまさに相乗的に増強される（図８Ｃおよび
表２）。
【０１６９】
【表２】
2020045350.tif 000006
【０１７０】
ＥＺＨ２野生型（すなわち、ＯＣＩ−ＬＹ１９、ＤＯＨＨ２）、ＥＺＨ２  Ｙ６４６感
受性（すなわち、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＳＵＤＨＬ１０）、およびＥＺＨ２  Ｙ６４６抵
抗性（すなわち、ＲＬ、ＳＵＤＨＬ４）細胞株について、ＤＭＳＯ対照に規準化したグル
ココルチコイド受容体の発現レベルを、表示の化合物４４、プレドニゾロン、化合物４４
とプレドニゾロンの併用またはＤＭＳＯによる処理後に測定した（２つの生物学的レプリ
ケート、詳細については、方法材料および方法セクション５を参照のこと）。結果に示す
ように、グルココルチコイド受容体の発現レベルは、併用において、細胞株の間で共通し
て影響を受けなかった。（図１９）倍率変化値は、ΔΔＣｔ法ならびに参照遺伝子として
ＡＣＴＢ、Ｂ２ＭおよびＧＡＰＤＨを使用して定量した。
【０１７１】
次いで、２つのさらなる異種移植片試験でＣＨＯＰレジームから１つまたはすべての化
学療法構成成分を省略する効果を検討した。ＳＵＤＨＬ１０（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ）異
種移植片を有するマウスを、化合物４４、ＣＯＰ（ドキソルビシン構成成分を含まない化
学療法）またはそれらの併用で２８日間処理した（図２０Ａ）。２８日目に安楽死させた
８／１６匹のマウスの平均腫瘍重量を比較し、群間で腫瘍重量に有意差があることが示さ
れた（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；両側ｔ検定）。
最大耐用量の化合物４４または化合物４４／ＣＯＰ併用を投与したマウスは、６０日目に
１００％の生存を示し、併用群は、化合物４４の最大耐用量を含む、他のすべての治療群
と統計的に差がある（ｐ＜０．０５）、最小の２８日目腫瘍重量を示した（図２０Ａ）。
【０１７２】
次いで、本出願者らは、２用量の化合物４４または２つの異なるスケジュールのプレド
ニゾン（Ｐｒｅｄ−１＝１〜５日目および２２〜２６日目に０．１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ
×５のプレドニゾン；Ｐｒｅｄ−２＝０．１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ×２８のプレドニゾン
）と共に、ＳＵＤＨＬ１０異種移植片モデルにおいて、化合物４４とプレドニゾンの２８
日間併用投与を検討した。インビトロのデータから示唆されるように、プレドニゾン単独
投与では、何ら有意な抗腫瘍効果が誘導されなかった（図２０Ｂ）。以前の研究と一致し
て、化合物４４の１２５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ（毎日２回）投薬は、部分的な応答のみをも
たらしたが、２サイクルのプレドニゾンとではなく、０．１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤのプレ
ドニゾンと化合物４４の併用投薬は、高用量の化合物４４単独で達成される可能な最大退
縮を誘導した。投与したすべてのマウスの体重を、図２０Ｃに示す。
【０１７３】
方法に記載のように、ＳＵＤＨＬ１０（ＥＺＨ２  Ｙ６４６Ｆ）異種移植片を有するマ
ウスを、化合物４４、ＣＯＰ（ドキソルビシン構成成分を含まない化学療法）、またはそ
れらの併用で２８日間処理した。２８日目に安楽死させた８／１６匹のマウスの平均腫瘍
重量を比較すると、群間で腫瘍重量に有意差があることが示された（＊ｐ＜０．０５、＊
＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；両側ｔ検定）。Ｂ）ＳＵＤＨＬ１０（ＥＺ
Ｈ２  Ｙ６４６Ｆ）異種移植片を有するマウスを、２用量の化合物４４または２つの異な
るスケジュールのプレドニゾン（Ｐｒｅｄ−１＝１〜５日目および２２〜２６日目に０．
１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ×５のプレドニゾン；Ｐｒｅｄ−２＝０．１５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩ
Ｄ×２８のプレドニゾン）で２８日間処理した。両方の化合物はまた、示されるように併
用で投与された。平均腫瘍体積±ＳＥＭ（ｎ＝１０）を上部パネルにプロットする。ＥＰ
Ｚ−６４３８を投与された群はすべて、統計的に有意な腫瘍増殖の退縮を示すが（ｐ＜０
．０１、少なくともビヒクルまたは両方のスケジュールのプレドニゾン単剤に対して；反
復測定分散分析、Ｄｕｎｎｅｔｔ事後検定）、プレドニゾン単剤は、ビヒクルに比較して
、何ら有意な抗腫瘍効果を誘発しなかった。
【０１７４】
【表３】
2020045350.tif 000007
【０１７５】
最後に、腫瘍増殖阻害を３つの異なるＥＺＨ２突然変異型リンパ腫異種移植片モデルで
評価した。皮下にリンパ腫異種移植片を有するＳＣＩＤマウスまたはヌードマウスに、化
合物４４とＣＨＯＰまたはＣＯＰ（ドキソルビシンを含まないＣＨＯＰ）のいずれかの化
学療法を併用投薬し、単剤治療と比較した。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２異種移植片を有するマウ
スでは、腫瘍増殖阻害は、使用されたすべての化合物４４の用量およびスケジュールで達
成され、ＣＨＯＰ化学療法単独よりも良好であった（図７Ａ）。さらに、化合物４４およ
びＣＨＯＰの併用療法は、強固な抗腫瘍反応、およびいずれの単剤単独よりも（ＣＨＯＰ
および化合物４４それぞれについて４５％および７１％）有意に良好な（ｐ＜０．００１
）腫瘍増殖阻害（９３％）を誘導した。すべての単回治療は耐容性があった；第１サイク
ル後に化合物４４／ＣＨＯＰ併用群に軽微な体重減少（１１．３％）があったが、その後
次のサイクル前にはマウスは回復した。
【０１７６】
ＳＵ−ＤＨＬ６異種移植片モデルでは、ＥＺＨ２阻害剤ＧＳＫ５０３を使用した、Ｂｅ
ｇｕｅｌｉｎらにより以前に公表された結果とは対照的に、有意な腫瘍増殖阻害は、ＣＨ
ＯＰ単独または化合物４４で観察されなかった（図７Ｂ、上部パネル）。印象的なことに
は、化合物４４／ＣＨＯＰの併用は腫瘍退縮をもたらした。投薬を２８日目に中止し、腫
瘍増殖遅延について６０日目に達するまで観察した場合、この併用により、５８％のマウ
スに腫瘍がない状態の生存がもたらされた（図７Ｂ、下部パネル）。
【０１７７】
ＣＨＯＰのドキソルビシン構成成分は、その心毒性のため、生涯累積投薬許容限度が５
５０ｍｇ／ｍ２未満になる。したがって、この構成成分を排除した化合物４４／化学療法
レジメンの併用有益性を検討した。第３の試験では、ＳＵ−ＤＨＬ１０異種移植片を有す
るマウスを、用量漸増の化合物４４（ＢＩＤ）、ドキソルビシン不含化学療法レジメン（
ＣＯＰ）、またはＣＯＰと化合物４４の併用で２８日間治療した。化合物４４のすべての
用量およびＣＯＰについて、腫瘍増殖阻害が観察された（図７Ｃ、上部パネル）。２６６
ｍｇ／ｋｇ、５３２ｍｇ／ｋｇおよびＣＯＰ／化合物４４併用の治療は、反復測定分散分
析およびＤｕｎｎｅｔｔ事後検定により評価すると、ビヒクルとは統計的に差がある（ｐ
＞０．００１）退縮をもたらし、化合物４４／ＣＯＰ併用群が最良総合効果を示した。２
８日間投薬後、腫瘍量が最小のマウス亜群（１群当たり８匹のマウス）は、腫瘍増殖遅延
エンドポイントの間、さらに投薬されなくとも生存し続けた。化合物４４で治療されたマ
ウスについては、明白な用量依存的腫瘍増殖遅延の有益性があったが、ＣＯＰで治療され
た腫瘍は、化合物４４で治療されたものよりも速く進行した（図７Ｃ、中央パネル）。最
大耐用量の化合物４４または化合物４４／ＣＯＰ併用で治療されたマウスは、６０日目に
１００％の生存を示し、併用群は、化合物４４の最大耐用量を含む、他のすべての治療群
と統計的に差がある（ｐ＞０．０５）、最小の最終腫瘍重量を示した（図７Ｃ、下部パネ
ル）。
【０１７８】
Ｂ細胞ＮＨＬのための標準治療は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリス
チンおよびプレドニゾロンで構成される併用化学療法レジメンである。４０〜５０％の完
全寛解率を達成することができる一方、相当な割合の患者が再発し、３年全生存率はわず
か約３０％である。再発したリンパ腫は、広範囲の抗癌剤に対して抵抗性を示すことがあ
り、これは、これらの高悪性度の悪性腫瘍を管理するという、クリニックに厳しい課題を
提起する。リンパ腫の薬物抵抗性の獲得は、腫瘍細胞の遺伝的多様性および不安定性によ
り部分的に促進される。したがって、化学療法抵抗性のＮＨＬの治療に成功するには、Ｂ
細胞ＮＨＬの種々のサブタイプに特異的な複数の経路を標的にする薬物の合理的な併用が
必要になる。たとえば、活性化Ｂ細胞タイプのリンパ腫では、ＮＦｋＢ経路の構成的な活
性化が療法抵抗性に関係しており、いくつかの新規の標的療法が、このサブタイプでは有
望であることが示されている。
【０１７９】
ポリコームなどのエピジェネティックなエフェクターも癌細胞化学療法抵抗性に関係し
ている。ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）の触媒サブユニットであるＥＺＨ２は、胚
中心由来Ｂ細胞リンパ腫における重要な腫瘍形成駆動因子である。これらのより原始的な
Ｂ細胞悪性腫瘍、特に、触媒活性が変化したＥＺＨ２突然変異体を発現する変異体は、増
殖および生存のためにＥＺＨ２を必要とする。前臨床試験の結果によると、そのような遺
伝的に明確な癌の治療のためにＥＺＨ２触媒阻害剤が極めて有望であると予測され、ＥＺ
Ｈ２阻害剤は化学療法抵抗性を低減する可能性もある。本明細書で示すデータから、臨床
段階のＥＺＨ２阻害剤である化合物４４は、相加作用から相乗作用に至る範囲の種々の程
度に、ＣＨＯＰの構成成分との併用有益性が示される。これらの併用効果は、具体的には
胚中心起原のリンパ腫で見出され、シクロホスファミド、ドキソルビシンおよびビンクリ
スチンの場合には、ＥＺＨ２変異体を有する細胞に限定された。さらに、化合物４４をＣ
ＨＯＰとインビボで併用投薬した場合に、リンパ腫細胞致死作用における顕著な相乗作用
も見出された。これは、いずれの単剤も何ら顕著な抗腫瘍活性を示さなかったが、併用で
はマウスの５０％超で長期の退縮が誘導されたＳＵ−ＤＨＬ６異種移植片モデルで特に間
違いのないものであった。これから、ＥＺＨ２突然変異型リンパ腫の化学療法抵抗性にお
ける活性亢進のＥＺＨ２の潜在的な重要性が再確認される。ＣＨＯＰ構成成分の中で、プ
レドニゾンとの化合物４４の併用が最も強力な抗増殖活性を誘導し、この併用はまた、Ｅ
ＺＨ２の突然変異の状態にかかわらず、非感受性のＧＣＢリンパ腫細胞株をＥＺＨ２阻害
に感受性にさせることができる可能性がある。さらに、化合物４４およびプレドニゾロン
が一緒にまたは順序特定の方法で投薬される場合、この併用有益性はより明らかになり；
こうして、ＥＺＨ２阻害剤で細胞をプライミングした後、ＧＲアゴニストにより処理する
と、特に効果的であることが判明した。この驚くべき発見は、クリニックでのＥＺＨ２阻
害剤の適用にとって潜在的に重要な意味を有する。第１に、広く使用されるＧＲａｇは、
薬物誘導アレルギー反応を予防するために、また疼痛、悪心および嘔吐を緩和するために
、抗腫瘍薬と併用投与されることが多く、造血悪性腫瘍にアポトーシスを誘導するその能
力のために、この癌の治療に極めて重要である。他のＣＨＯＰ構成成分に比較して、ＧＲ
ａｇは重篤な有害作用の誘導が最小である。さらに、ＳＵ−ＤＨＬ１０異種移植片モデル
におけるデータから示唆されるように、化合物４４との併用有益性を保持しながら、ＣＨ
ＯＰレジームからドキソルビシンを排除する見込みがあれば、ドキソルビシンの用量制限
的な心臓毒性の副作用を患者に与えずに済ますことができる可能性がある。最後に、前臨
床試験から、単剤ＥＺＨ２阻害剤が、ＥＺＨ２突然変異体を有するリンパ腫のみに顕著な
細胞致死を誘導することが示されており、このリンパ腫は、未だ対処されてなく臨床的必
要性が高い、ある割合（２０％）のＧＣＢリンパ腫患者を象徴する。この結果から、ＧＲ
ａｇ／ＥＺＨ２阻害剤の併用が、すべての胚中心由来Ｂ細胞リンパ腫において臨床的有用
性を有し得ることが示される。
【０１８０】
グルココルチコイド結合ＧＲ分子は核に移行し、細胞環境に応じて、転写活性化因子ま
たは抑制因子のいずれかとして作用することができる。ＧＲは、生産的な相互作用のため
にヌクレオソームを常時サンプリングすることが示唆されており、クロマチン修飾酵素の
目的は、ＧＲ、そのコファクターおよび基本転写機構のＤＮＡへの到達を制御することで
ある。他の試験から、ＧＲはすでに存在する開いたクロマチン領域に結合することが多く
、所与の細胞型のクロマチン構造は、ＧＲが組織特異的な様式で作用することができるよ
うに、組織化されることが示される。ＧＲ結合部位への到達可能性は、ＡＴＰ依存性クロ
マチンリモデリングによりさらに高められ、ＳＷＩ／ＳＮＦ複合体がこの活性で重要な役
割を果たす。特定の理論または特定の作用機序に拘束されたくはないが、ＥＺＨ２媒介の
Ｈ３Ｋ２７の過剰トリメチル化により誘導される異常なクロマチン抑制により、そうでな
ければ到達可能なＧＲ結合部位の一部がブロックされ、正常なＧＲ媒介遺伝子誘導または
抑制が干渉され得ることが考えられる。実際、すべてのＥＺＨ２突然変異型リンパ腫細胞
株は、ＧＲａｇ処理に非感受性であるが、ＥＺＨ２野生型細胞では、濃度依存的な細胞致
死作用が観察される。プレドニゾロンで前処理し、次いで化合物４４で処理すると、試験
したほとんどすべての細胞株で相乗作用を誘導することができず、ＥＺＨ２阻害剤が誘導
するクロマチンリモデリングがＧＲ作用の増強の律速段階である可能性が指摘される。さ
らに、ＰＲＣ２は、ＳＷＩ／ＳＮＦ機能と拮抗することが知られており、ＳＷＩ／ＳＮＦ
複合体のコアサブユニット−ＳＭＡＲＣＡ４、ＡＲＩＤ１ＡおよびＩＮＩ１−は、急性リ
ンパ芽球Ｔ細胞白血病におけるプレドニゾロン抵抗性に関連している。ＩＮＩ１減少とＥ
ＺＨ２過剰活性化の関連性がラブドイド腫瘍で確立されているので、ＳＷＩ／ＳＮＦ機能
が亢進した後にＧＲのその結合部位への到達可能性を大きくする可能性のある、全体的な
ＩＮＩ１タンパク質レベルが、化合物４４またはプレドニゾロンに曝露された種々のリン
パ腫細胞で増大するか否かを検討した。
【０１８１】
ＧＲ経路遺伝子発現アレイにより、数種類のＧＣＢリンパ腫細胞（ＥＺＨ２野生型およ
び突然変異体型の両方）を化合物４４、プレドニゾロンまたはそれらの併用で処理した後
に、遺伝子発現が増大することも低下することも明らかになり、ＧＲの二重機能が確認さ
れた。すべてのＥＺＨ２突然変異型リンパ腫細胞において併用により相乗的にアップレギ
ュレートされた唯一の遺伝子は、ＤＮＡ損傷および酸化ストレスに対する細胞応答で機能
を有するＴＰ５３腫瘍サプレッサーであるＳＥＳＮ１であった。セストリンは、ＡＭＰ活
性化プロテインキナーゼを活性化し、その結果ｍＴＯＲ経路の阻害をもたらすことにより
細胞増殖を阻害する。したがって、ＳＥＳＮ１媒介のｍＴＯＲ経路阻害は、化合物４４処
理後にＥＺＨ２突然変異型リンパ腫細胞にＧＲａｇ感受性を再導入する重要な機序になる
可能性がある。
【０１８２】
反対に、ＧＲａｇ／化合物４４の併用処理は、ＥＺＨ２阻害剤処理に抵抗性であると報
告されているＥＺＨ２変異型リンパ腫細胞株（ＲＬ、ＳＵ−ＤＨＬ４）に細胞致死を誘導
することもできる可能性がある。ＳＥＳＮ１は、これらの細胞株においても併用処理で誘
導されるが、強力な炎症性サイトカインであるＴＮＦのさらなる相乗的なアップレギュレ
ーションがＲＬ細胞およびＳＵ−ＤＨＬ４細胞で特異的に観察された。ＴＮＦおよびグル
ココルチコイドは通常拮抗的に作用するので、この観察は驚くべきことのように見える。
ＴＮＦは、その受容体ＴＮＦＲ−１を介してアポトーシスを誘導することができるが、主
としてＮＦｋＢ経路を通して生存シグナルを伝達する能力も有する。したがって、化合物
４４／プレドニゾロンの併用により誘導されるＴＮＦ発現の増大は、ＮＦｋＢ媒介転写の
ＧＲアゴニスト抑制の文脈において、アポトーシス方向にＴＮＦ作用をシフトさせる可能
性がある。しかしながら、この機序が、化合物４４非感受性ＥＺＨ２突然変異型細胞に相
乗的な細胞致死をもたらす理由は明らかではない。ＧＲａｇ抵抗性におけるＮＦｋＢ経路
の負の調節因子の異常な抑制が重要である可能性およびそれを媒介するＥＺＨ２に役割が
ある可能性は、ＧＩＬＺが、併用により、６細胞株のうちの２細胞株で相乗的にアップレ
ギュレートされるという観察によりさらに支持される。
【０１８３】
方法
培地スループットアッセイ
リンパ腫細胞を、フラスコに播種し（ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＤＯＨＨ２について５
０，０００細胞／ｍＬ、ＳＵ−ＤＨＬ１０について１０，０００細胞／ｍＬ、Ｔｏｌｅｄ
ｏについて１００，０００細胞／ｍＬ）、Ｔｏｌｅｄｏアッセイのために、７用量の化合
物４４またはＤＭＳＯで、４日間または６日間前処理した。次いで、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２
、ＤＯＨＨ２について５０，０００細胞／ｍＬ、ＳＵ−ＤＨＬ−１０について３０，００
０細胞／ｍＬに細胞を再分割し、ＨＰ  Ｄ３００デジタルディスペンサー（Ｔｅｃａｎ）
を使用して、化合物４４と目的の化合物で併用処理した。両方の薬物を段階的に２倍希釈
し、プレートにわたり対角線上に一定の比となるマトリックスで混合し、最終的なＤＭＳ
Ｏ含量を０．１１％（ｖ／ｖ）とした。３日間の併用処理後（Ｔｏｌｅｄｏアッセイにつ
いては５日間）、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用し
て、ＡＴＰ含量により細胞生存率を測定し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５マイクロプレー
トリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してルミネセンスを検出した
。
【０１８４】
相乗作用の定量化は、薬物併用に関するＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法を使用して行った
（参考文献１）。併用指数（ＣＩ）式は、相加作用（ＣＩ＝１）、相乗作用（ＣＩ＜１）
および拮抗作用（ＣＩ＞１）に関する定量的定義を提供する。この式は、一定比の薬物併
用からの分割効果（Ｆａ）を使用してＣＩ値を決定する。得られた（Ｆａ−ＣＩ）プロッ
トには、９５％信頼区間で囲まれた、算出ＣＩ値が示される。これらのＦａ−ＣＩプロッ
トは、ウィンドウズ（登録商標）ソフトウェアのＣａｌｃｕｓｙｎを使用して作成される
（参考文献２）。信頼区間線も１未満である、１未満のＣＩ値は統計的に有意な相乗作用
を示す。
【０１８５】
一方の薬物のみが５０％を超える阻害を示す薬物併用の場合には、効力シフトを判定し
た。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して用量応答をプロットし、５０％または６０
％の阻害濃度を用量応答曲線から内挿した。用量応答に対する信頼区間が重ならなかった
場合、効力シフトは有意であると見なされた。
【０１８６】
細胞株、化合物および処理の概要
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２、ＳＵ−ＤＨＬ１０、ＲＬ、ＳＵ−ＤＨＬ４、ＯＣＩ−ＬＹ１９お
よびＤＯＨＨ２は、以前に記載のものである（ＮａｔＣｈｅｍＢｉｏ  ２０１２）。併用
試験については、本出願者らの懸濁細胞における増殖アッセイの修正版を、以前に記載の
ように使用した（Ｄａｉｇｌｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｌ  Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．２０，
１．Ｐｇ．５３−６５（２０１１）；Ｄａｉｇｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２１
，１３，２５３３−２５４１（２０１３））。手短に言えば、０日目に、４日間にわたる
直線的な対数増殖期を保証するような初期密度で、９６ウェルプレートに三つ組で細胞を
播種した。化合物４４の用量曲線（１μＭの最大用量で開始する）、プレドニゾンの４日
間ＩＣ５０の１／１０の濃度のプレドニゾロン（カタログ番号および製造業者）の単一用
量、または化合物４４とプレドニゾンの併用で細胞を処理した。４日目に、ｇｕａｖａ  
ｅａｓｙＣｙｔｅフローサイトメーターにおいて、Ｖｉａｃｏｕｎｔ試薬を使用して細胞
をカウントし、さらなる３日間のために、生細胞数を用いて最初の密度に細胞を再播種し
た。化合物４４で前処理した細胞には、化合物４４のみを継続して施すか、または化合物
４４とプレドニゾロン（一定用量）の併用を施し；プレドニゾロンで前処理した細胞には
、プレドニゾロンを継続的に施すか、またはプレドニゾロンと化合物４４の併用を施し；
４日間併用処理した細胞には、７日間を通して併用処理を継続した。
【０１８７】
異種移植片試験
この試験における動物の取り扱い、世話および治療に関する手順はすべて、Ａｓｓｏｃ
ｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  
ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）の手引きに従い
、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉ
ｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ｏｆ  ＣＲＬ  Ｐｉｅｄｍｏｎｔ  ａｎｄ  Ｓｈａｎｇｈａｉ  
ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒにより承認されたガイドラインに従って行なった。ＷＳＵ−ＤＬ
ＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ６細胞またはＳＵ−ＤＨＬ１０細胞を対数増殖期中期に回収し
、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を５０％含むＰＢＳ中に
再懸濁し、免疫無防備状態のマウスに注射した。各マウスに、１×１０７細胞（０．２ｍ
Ｌの細胞浮遊液）を右側腹部の皮下に注入し、腫瘍が所定のサイズに到達したならば、種
々の用量の化合物４４を最大２８日間種々のスケジュールで経口投与し、かつ／またはＣ
ＨＯＰ／ＣＯＰを以下のスケジュールで投与した：シクロホスファミドを腹腔内（ｉ．ｐ
．）投与し、ドキソルビシンおよびビンクリスチンを各々ボーラス尾静脈注射（ｉ．ｖ．
）で投与し；各々を、ＳＵ−ＤＨＬ６試験では１日目および８日目に、またＷＳＵ−ＤＬ
ＣＬ２およびＳＵ−ＤＨＬ１０の試験では１日目および２２日目に、１日１回投与した。
プレドニゾンを、ＳＵ−ＤＨＬ６試験では１日目および８日目に開始し（（ｑｄ×５）×
２、１日目、８日目）、またＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＳＵ−ＤＨＬ１０の試験では１日
目および２２日目に開始する（（ｑｄ×５）×２、１日目、２２日目）、５日間毎日投与
の２サイクルでｐ．ｏ．投与した。各用量は、０．２ｍＬ／２０ｇマウスの容量（１０ｍ
Ｌ／ｋｇ）で送達し、最後に記録した個々の動物の体重に対して調節した。腫瘍測定およ
び体重を、すべての試験について、１週に２回、２８日間収集した。ＳＵ−ＤＨＬ１０お
よびＳＵ−ＤＨＬ６の試験における腫瘍増殖遅延を判定するために、その新生物が２００
０ｍｍ３のエンドポイント体積に到達したときか、または試験の最終日（６０日目）のい
ずれか最初に来た方で、各試験動物を安楽死させた。
【０１８８】
定量的ＰＣＲ
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ１０細胞、ＲＬ細胞、ＳＵ−ＤＨＬ４細胞、Ｏ
ＣＩ−ＬＹ１９細胞およびＤＯＨＨ２細胞を、ＤＭＳＯ、１μＭの化合物４４（ＳＵ−Ｄ
ＨＬ１０は１００ｎＭの化合物４４で処理）、４日間ＩＣ５０の１／１０濃度のプレドニ
ゾロン用量、または薬物の併用で４日間並行して処理した。細胞を回収し、ＲＮｅａｓｙ
Ｐｌｕｓ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ；７４１３４）を使用して、細胞ペレット
から全ｍＲＮＡを抽出した。ＲＴ２  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎ
ｇ  ＰＣＲアレイ（Ｑｉａｇｅｎ；ＰＡＨＳ−１５４ＺＥ−４）のために、ＲＴ２  Ｆｉ
ｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ；３３０４０１）によりｃＤＮＡを作製し
た。ＲＴ２  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＲＯＸ  ｑＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ（Ｑｉａｇ
ｅｎ；３３０５２１）と共にＶｉｉＡ  ７  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ
ｓ［Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＡＢ）］を使用して、アレイＲＴ−ＰＣＲ
を行った。遺伝子発現をアレイのＢ２Ｍに規準化し、ΔΔＣｔ法を使用してＤＭＳＯに比
較した倍率変化を算出した。アレイデータを検証するために、ＴａｑＭａｎプローブベー
スのｑＰＣＲを、ＴａｑＭａｎ  Ｆａｓｔ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（
ＡＢ；４４４４９６４）ならびにセストリン（ＡＢ；Ｈｓ００９０２７８７＿ｍ１）およ
びＴＮＦ（ＡＢ；Ｈｓ０１１１３６２４＿ｍ１）に対するＴａｑＭａｎプライマー／プロ
ーブセットを使用して行った。倍率変化をＲＰＬＰＯ（ＡＢ；４３３３７６１Ｆ）に対し
て規準化して、上記のように算出した。
【０１８９】
ＥＬＩＳＡ
上記のように、ヒストンを腫瘍サンプルから抽出した。ヒストンをコーティング緩衝液
（ＰＢＳ＋０．０５％ＢＳＡ）中、当量濃度で調製して、０．５ｎｇ／μｌサンプルを得
、サンプルまたは標準物質１００μｌを、２個の９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅ
ｒｍｏ  Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｍｍｕｌｏｎ  ４ＨＢＸ  ＃３８８５）に二つ組で加
えた。プレートを密封し、４℃で一晩インキュベートした。翌日、Ｂｉｏ  Ｔｅｋプレー
ト洗浄機上、３００μｌ／ウェルのＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％ツイーン２０；１０×
ＰＢＳＴ、ＫＰＬ＃５１−１４−０２）でプレートを３回洗浄した。プレートを３００μ
ｌ／ウェルの希釈剤（ＰＢＳ＋２％ＢＳＡ＋０．０５％ツイーン２０）でブロックし、室
温で２時間インキュベートし、ＰＢＳＴで３回洗浄した。すべての抗体を希釈剤で希釈し
た。１００μｌ／ウェルの抗Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３（ＣＳＴ＃９７３３、５０％グリセロール
ストック１：１，０００）または抗全Ｈ３（Ａｂｃａｍ  ａｂ１７９１、５０％グリセロ
ール１：１０，０００）を各プレートに加えた。プレートを室温で９０分間インキュベー
トし、ＰＢＳＴで３回洗浄した。１００μｌ／ウェルの抗Ｒｂ−ＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｃｅｌ
ｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７０７４）をＨ３Ｋ２７Ｍｅ３プレー
トに１：２，０００で、またＨ３プレートに１：６，０００で加え、室温で９０分間イン
キュベートした。プレートをＰＢＳＴで４回洗浄した。検出のために、１００μｌ／ウェ
ルのＴＭＢ基質（ＢｉｏＦｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，＃ＴＭＢＳ）を加え、プレー
トを室温で５分間、暗所でインキュベートした。１００μｌ／ウェルの１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４
で反応を停止させた。４５０ｎｍでの吸光度をＳｐｅｃｔａＭａｘ  Ｍ５マイクロプレー
トリーダーで読み取った。
【０１９０】
【表４ａ】
2020045350.tif 000008
【０１９１】
2020045350.tif 000009
【０１９２】
【表４ｂ】
2020045350.tif 000010
【０１９３】
2020045350.tif 000011
【０１９４】
2020045350.tif 000012
【０１９５】
【表４ｃ】
2020045350.tif 000013
【０１９６】
2020045350.tif 000014
【０１９７】
2020045350.tif 000015
【０１９８】
【表４ｄ】
2020045350.tif 000016
【０１９９】
2020045350.tif 000017
【０２００】
2020045350.tif 000018
【０２０１】
【表４ｅ】
2020045350.tif 000019
【０２０２】
2020045350.tif 000020
【０２０３】
2020045350.tif 000021
【０２０４】
【表４ｆ】
2020045350.tif 000022
【０２０５】
2020045350.tif 000023
【０２０６】
2020045350.tif 000024
【０２０７】
実施例２．
化合物４４とエベロリムスは相乗的に作用して、ＥＺＨ２突然変異型ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２
細胞のＧ１期における細胞周期停止および野生型ＥＺＨ２  ＳＵ−ＤＨ−Ｌ５細胞のアポ
トーシスを増強する
図１１のパネルＢおよびＥでは、各点は、初期および後期アポトーシスにゲートされた
細胞のパーセントの平均を表す（アネキシンＶ陽性、平均±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝３）。パネル
ＣおよびＦでは、進行曲線上の点は、ＤＮＡ含量によりゲートされた細胞の平均パーセン
トを表す（ＰＩ陽性、平均±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝２）。パネルＡでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細
胞を、４００：１の一定比にて、化合物４４とエベロリムスの併用で処理した。併用によ
り、０．３４〜０．００３のＣＩ値を有する、極めて強力な相乗作用が誘導されることが
示された。パネルＢでは、化合物４４（５００ｎＭ）、エベロリムス（５ｎＭ）または同
濃度の併用で処理したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞におけるアポトーシスレベルを評価した。
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞においてアポトーシスの増大は見られなかった。パネルＣでは、
細胞周期のＧ１期の顕著な増大が、化合物４４単独に比較して、併用処理後に観察された
。パネルＤでは、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞を、４０００：３の一定比にて、併用で処理した
。併用により、０．１３５〜０．００８のＣＩ値を有する極めて強力な相乗作用が誘導さ
れることが示された。パネルＥでは、化合物４４単独に比較して、併用処理（５００ｎＭ
の化合物４４、０．７５ｎＭのエベロリムス）後に、アネキシン陽性細胞の顕著な増大が
観察された（ｐ＜０．０００１）。パネルＦでは、細胞周期のｓｕｂ−Ｇ１期の顕著な増
大が併用処理後に観察された。
【０２０８】
実施例３
化合物４４とイブルチニブは相乗的に作用して、ＥＺＨ２突然変異型ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２
細胞および野生型ＥＺＨ２  ＳＵ−ＤＨ−Ｌ５細胞のアポトーシスを増強する
図１２のパネルＢおよびＥでは、各点は、初期および後期アポトーシスにゲートされた
細胞のパーセントの平均を表す（アネキシンＶ陽性、平均±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝３）。パネル
ＣおよびＦでは、進行曲線上の点は、ＤＮＡ含量によりゲートされた細胞の平均パーセン
トを表す（ＰＩ陽性、平均±Ｓ．Ｄ．、ｎ＝２）。パネルＡでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細
胞を、４：５の一定比にて、化合物４４とイブルチニブの併用で処理した。これらの薬剤
の併用により、０．３９〜０．１４の間のＣＩ値を有する強力な相乗作用が示される。パ
ネルＢでは、化合物４４（５００ｎＭ）、イブロチニブ（６２５ｎＭ）または併用で処理
したＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞におけるアポトーシスレベルを評価した。この併用により、
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞におけるアポトーシスの相乗的な時間依存的増大が示された。パ
ネルＣでは、細胞周期分析により、併用処理後に急激に増大する、Ｇ１期にあるＷＳＵ−
ＤＬＣＬ２細胞のパーセントの時間依存的増大が示された。パネルＤでは、ＳＵ−ＤＨＬ
−５細胞を、化合物４４：イブルチニブの１：５の一定比で処理した。併用により、０．
２２２〜０．００２のＣＩ値を有する、極めて強力な相乗作用が誘導された。パネルＥで
は、化合物４４単独に比較して、化合物４４（１０００ｎＭ）とイブルチニブ（２５００
ｎＭ）による併用処理後に、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞のアネキシン陽性染色が相乗的かつ時
間依存的に増大する（ｐ＜０．０００１）。パネルＦでは、併用で処理したＳＵ−ＤＨＬ
−５細胞の細胞周期分析により、各薬剤単独に比較して、併用処理後のｓｕｂ−Ｇ１集団
中の細胞の増加が明らかになった。
【０２０９】
実施例４
化合物４４とＭＫ−２２０６は相乗的に作用して、ＥＺＨ２突然変異型ＷＳＵ−ＤＬＣＬ
２細胞および野生型ＥＺＨ２（ＳＵ−ＤＨ−Ｌ５およびＯＣＩ−ＬＹ−１９）細胞のアポ
トーシスを増強する
図１３のパネルＡでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を、４：１の一定比にて、化合物４４
とＭＫ−２２０６の併用で処理した。Ｆａ−ＣＩプロットにより、０．７７〜０．００５
の間のＣＩ値を有する極めて強力な相乗作用が示される。パネルＢでは、化合物４４（２
０００ｎＭ）とＭＫ−２２０６（４００ｎＭ）で併用処理すると、アネキシン陽性ＷＳＵ
−ＤＬＣＬ２細胞のパーセントが時間依存的に増大する。パネルＣでは、細胞周期分析に
より、化合物４４単独に比較して、併用処理の１日後に急激に増大する、Ｇ１期にあるＷ
ＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞のパーセントの増大が明らかになった（ｐ＜０．０００１）。パネ
ルＤでは、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞を、化合物４４とＭＫ−２２０６の２：１の一定比で処
理した。併用により、０．２７６〜０．００１のＣＩ値を有する、極めて強力な相乗作用
が誘導された。パネルＥでは、ＳＵ−ＤＨＬ−５のアポトーシスレベルの評価により、化
合物４４単独に比較して、併用処理（５００ｎＭの化合物４４と２５０ｎＭのＭＫ−２２
０６）の２４時間後に、アネキシン陽性細胞の増加が明らかになった（ｐ＜０．０００１
）。パネルＦでは、併用で処理したＳＵ−ＤＨＬ−５細胞の細胞周期分析により、薬剤個
々による処理に比較して、ｓｕｂ−Ｇ１集団中の細胞のパーセントの増大が示された。パ
ネルＧでは、７１．４の１／α値を有する、ＯＣＩ−ＬＹ１９細胞における強力な相乗作
用が、化合物４４とＭＫ−２２０６の併用治療により観察された。パネルＨでは、化合物
４４単独に比較して、併用（１０００ｎＭの化合物４４と２５００ｎＭのＭＫ−２２０６
）で処理した場合に、アポトーシスの時間依存的な増大が示された（ｐ＜０．０００１）
。パネルＩでは、併用で治療したＯＣＩ−ＬＹ１９細胞の細胞周期分析により、細胞周期
のｓｕｂ−Ｇ１期にある細胞の時間依存的な増加が明らかになった（ｐ＜０．０００１）
。
【０２１０】
実施例５
化合物４４とＢＣＲ経路阻害剤の併用による標的遺伝子の調節
図１４のパネルＡでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞において、化合物４４とイブルチニブ
の併用によるＥＧＲ１（４０倍）およびＦＯＳ（４倍）のダウンレギュレーションを単剤
と比較する。パネルＢでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞において、化合物４４とＭＫ−２２
０６の併用によるＡＩＣＤＡ（３倍）およびＴＣＬ１Ａ（５倍）のアップレギュレーショ
ンを単剤と比較する。パネルＣでは、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞において、化合物４４とイブ
ルチニブの併用によるＧＪＡ１（３倍）のアップレギュレーションを単剤と比較する。統
計解析の値は、二つ組または三つ組の平均±ＳＤである。ｔ検定、＊Ｐ＜０．０５、＊＊
Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【０２１１】
実施例６
胚中心Ｂ細胞株における、ＥＺＨ２阻害と、ＢＣＲシグナル伝達経路の調節、ＢＣＬ２阻
害およびＧＲアゴニズムとの間の相乗的な相互作用
ＤＬＢＣＬ生物学に関係するシグナル伝達経路のキープレーヤーに関して、いくつかの
相乗的な組合せがこの試験で明らかになった（図１５を参照のこと）。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ
／ｍＴＯＲシグナル伝達カスケードのノード、ＭＡＰＫカスケードのＭＥＫ１／２、ＳＹ
ＫおよびＢＴＫなどのＢ細胞受容体経路のノードを標的にする阻害剤は、ＥＺＰ−６４３
８と併用すると極めて強力な相乗作用を示し、ＥＺＨ２阻害の影響を、突然変異型ＥＺＨ
２を有するＧＣＢ細胞株から野生型サブタイプのものにまで拡大する。ＢＣＬ−２ファミ
リーのタンパク質の阻害剤であるオバトクラックス、ナビトクラックスおよびＡＢＴ−１
９９は、化合物４４と併用すると相乗的な抗増殖活性を示した。グルココルチコイド受容
体アゴニストであるプレドニゾロンおよびデキサメタゾンは、突然変異細胞株におけるＥ
ＺＨ２阻害の劇的な増強を示し、ＥＺＨ２ｉに対して野生型を感受性にする。Ｒ−ＣＨＯ
Ｐにおいて化学療法薬と組み合わせる抗体であるリツキシマブは、ｃｄ−２０を標的にし
て、突然変異細胞株においてインビトロの抗増殖効果の増強を誘発する。
【０２１２】
実施例７
化合物４４とエベロリムスは相乗的に作用して、突然変異型ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞のＳ
およびＧ２／Ｍ期ならびに野生型ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞のＧ１、Ｓ、およびＧ２／Ｍ期に
ある細胞集団を減少させる
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞（データ
を示さず）を、化合物４４（ＷＳＵおよびＳＵ−ＤＨＬ−５に対して５００ｎＭ）で前処
理した後、化合物４４とエベロリムス（ＷＳＵ：５ｎＭ、ＳＵ−ＤＨＬ−５：０．７５ｎ
Ｍ）の組合せで併用処理した。図１６のパネルＡでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を単剤ま
たは併用で処理した場合に、細胞周期のｓｕｂ−Ｇ１期の変化は見られない。パネルＢお
よびＣでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を併用で処理した場合に、細胞周期のＳ期およびＧ
２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な時間依存的減少が見られる。パネルＤ、ＥおよびＦで
は、細胞周期のＧ１、ＳおよびＧ２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な減少が、ＳＵ−ＤＨ
Ｌ−５細胞に対する併用処理後４８時間に見られる。
【０２１３】
実施例８
化合物４４とイブルチニブは相乗的に作用して、突然変異型ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞およ
び野生型ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞のＧ１、ＳおよびＧ２／Ｍ期にある細胞集団を減少させる
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞（データ
を示さず）を、化合物４４（ＷＳＵ：５００ｎＭ、ＳＵ−ＤＨＬ−５：１０００ｎＭ）で
前処理した後、化合物４４とイブルチニブ（ＷＳＵ：６２５ｎＭ、ＳＵ−ＤＨＬ−５：２
５００ｎＭ）の組合せで併用処理した。図１７のパネルＡ、ＢおよびＣでは、細胞周期の
Ｇ１、ＳおよびＧ２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な減少が、単剤としての化合物４４ま
たはイブルチニブに比較して、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞の併用処理後２４時間に見られる
。パネルＤ、ＥおよびＦでは、細胞周期のＧ１、Ｓ、およびＧ２／Ｍ期それぞれの細胞の
相乗的な時間依存的減少が、単剤としての化合物４４またはイブルチニブに比較して、Ｓ
Ｕ−ＤＨＬ−５の併用処理後に見られる。
【０２１４】
実施例９
化合物４４とＭＫ−２２０６は相乗的に作用して、突然変異型ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞な
らびに野生型ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞のＧ１、ＳおよびＧ２／
Ｍ期にある細胞集団を減少させる
ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞、ＳＵ−ＤＨＬ−５細胞およびＯＣＩ−ＬＹ１９細胞を、化合
物４４（それぞれ２０００ｎＭ、５００ｎＭおよび１０００ｎＭ）で前処理した後、化合
物４４とＭＫ−２２０６（それぞれ４００ｎＭ、２５０ｎＭおよび２５００ｎＭ）の組合
せで併用処理した。図１８のパネルＡでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞をＭＫ−２２０６と
の併用で処理した場合、細胞周期のＧ１期の相乗的な時間依存的減少が見られる。パネル
ＢおよびＣでは、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞を併用で処理した場合、細胞周期のＳおよびＧ
２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な減少が見られる。パネルＤ、ＥおよびＦでは、細胞周
期のＧ１、ＳおよびＧ２／Ｍ期それぞれの細胞の相乗的な減少が、単剤に比較して、ＳＵ
−ＤＨＬ−５細胞の併用処理後４８時間に見られる。パネルＧ、ＨおよびＩでは、ＯＣＩ
−ＬＹ１９細胞を併用で処理した場合、細胞周期のＧ１、ＳおよびＧ２／Ｍ期それぞれの
細胞の相乗的な時間依存的減少が見られる。
【０２１５】
個々のＳＯＣまたは野生型およびＥＺＨ２突然変異体を有するＤＬＢＣＬ細胞株に対す
る他の選択された薬剤と化合物４４の併用を使用する増殖試験の結果を表５に示す。
【０２１６】
【表５】
2020045350.tif 000025
【０２１７】
増殖アッセイで使用した化合物の効力および各細胞株で使用した用量を表６に示す。
【０２１８】
【表６】
2020045350.tif 000026
【０２１９】
参照による援用
本明細書に引用する刊行物および特許文書はすべて、そうした刊行物または文書を本明
細書に援用するために具体的に個々に示しているかのように本明細書に援用する。刊行物
および特許文書の引用は、いずれかが適当な従来技術であること認めることを意図するも
のではなく、その内容または日付について何ら承認することにならない。これまで本発明
を書面による記載により説明してきたが、当業者であれば、本発明を種々の実施形態で実
施することができること、および前述の記載および下記の例は説明を目的としたものであ
り、以下の特許請求の範囲の限定を目的としたものでないことを認識するであろう。
【０２２０】
均等物
本発明は、その精神または本質的な特徴を逸脱することなく他の特定の形態で実施する
ことができる。したがって、前述の実施形態は、あらゆる点で本明細書に記載の本発明に
関する限定ではなく、例示と見なすべきである。このため本発明の範囲は、明細書本文で
はなく添付の特許請求の範囲により示され、特許請求の範囲の均等範囲に属するすべての
変更をすべてその範囲内に包含することを意図している。
【図１Ａ−１Ｆ】
2020045350.tif 000028
【図２Ａ−２Ｂ】
2020045350.tif 000029
【図２Ｃ−２Ｄ】
2020045350.tif 000030
【図３Ａ−３Ｂ】
2020045350.tif 000031
【図３Ｃ−３Ｄ】
2020045350.tif 000032
【図４】
2020045350.tif 000033
【図５Ａ−５Ｂ】
2020045350.tif 000034
【図６】
2020045350.tif 000035
【図７Ａ−７Ｂ】
2020045350.tif 000036
【図７Ｃ】
2020045350.tif 000037
【図８Ａ−８Ｃ】
2020045350.tif 000038
【図９Ａ】
2020045350.tif 000039
【図９Ｂ】
2020045350.tif 000040
【図９Ｃ】
2020045350.tif 000041
【図９Ｄ】
2020045350.tif 000042
【図１０】
2020045350.tif 000043
【図１１Ａ−１１Ｆ】
2020045350.tif 000044
【図１２Ａ−１２Ｆ】
2020045350.tif 000045
【図１３Ａ−１３Ｆ】
2020045350.tif 000046
【図１３Ｇ−１３Ｉ】
2020045350.tif 000047
【図１４Ａ−１４Ｃ】
2020045350.tif 000048
【図１５】
2020045350.tif 000049
【図１６Ａ−１６Ｆ】
2020045350.tif 000050
【図１７Ａ−１７Ｆ】
2020045350.tif 000051
【図１８Ａ−１８Ｆ】
2020045350.tif 000052
【図１８Ｇ−１８Ｉ】
2020045350.tif 000053
【図１９】
2020045350.tif 000054
【図２０Ａ−２０Ｃ】
2020045350.tif 000055
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月13日(2019.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする患者において癌を治療するための方法であって、治療有効量のＥＺＨ
２阻害剤および治療有効量の標準治療剤を投与することを含む方法。